(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
心臓血管に選択的にホーミングする単離されたペプチドであって、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号：１）を含む１２残基未満の長さを有する、単離されたペプチド。
【請求項２】
１０残基未満の長さを有する、請求項１に記載の単離されたペプチド。
【請求項３】
９残基未満の長さを有する、請求項１に記載の単離されたペプチド。
【請求項４】
８残基未満の長さを有する、請求項１に記載の単離されたペプチド。
【請求項５】
７残基未満の長さを有する、請求項１に記載の単離されたペプチド。
【請求項６】
６残基未満の長さを有する、請求項１に記載の単離されたペプチド。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
アテローム性動脈硬化症およびその続発症は、西欧諸国においては疾患および死亡についての最も一般的であり重要な原因を構成しており、西欧諸国での死亡全体の５０％の割合を占めている。以下にさらに記載されるように、アテローム性動脈硬化症は、紛瘤の結果としての血管壁または動脈の肥厚および弾力性がないことによって生じる障害である。
【０００２】
正常な心臓においては、血管壁は結合組織の層で覆われている血管平滑筋細胞の中間層に対してきっちりと隣り合って並べられている内皮細胞の内層から構成される。内皮細胞の内層は、理想的にはシグナルを伝達するために血液と血管壁の間の界面に位置しており、内皮細胞は、血管緊張、凝固状態、細胞増殖、細胞死、および白血球の輸送のようなプロセスを調節する因子の生産を通じて、血管の恒常性のバランスを制御している。血管平滑筋細胞は、血管作用薬に反応して血管の収縮傾向を維持し、そしてサイトカインおよび他の成長因子を放出する。線維芽細胞と連動して、平滑筋細胞は、血管構造を決定する細胞外マトリックスタンパク質とプロテアーゼを生産する。閉塞性の血管疾患（その最も一般的な形態がアテローム性動脈硬化症である）は、脂質、炎症性細胞、血管平滑筋細胞、および細胞外マトリックスタンパク質の、内皮内層と中間層との間の血管内膜空間の中での異常な蓄積（プラーク形成）を特徴とする。
【０００３】
アテローム性動脈硬化症の治療では、一般的には、プラーク形成のプロセスが妨げられるか、停止させられるか、または後退させられるか、あるいは新しい血管の形成が刺激される。しかし、アテローム性動脈硬化症の処置のための薬剤または他の物質が冠動脈血管だけを標的とすることは稀である。より一般的には、全身的投与によって望ましくない副作用が生じ、これは例えば、全身のいたるところにまで生じる毒性の作用が原因である。例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）（内皮細胞の増殖を刺激する血管形成の鍵となる調節因子）は、新しい血管の形成を促進し、それによって、虚血組織への血流を増大させ、血管疾患を緩和する。しかし、ＶＥＧＦはまた、非特異的有糸分裂を促進する可能性があり、そして糖尿病性網膜症および特定の腫瘍のような血管形成によって駆動される疾患を増強する可能性もある。同様に、血管形成の刺激因子である線維芽細胞増殖因子の全身投与によっては、心臓組織に対するその特異性がないことが原因で、重症の副作用が生じる可能性がある。残念なことに、このような副作用（高血圧の症状の繰り返しを含む）によって、アテローム性動脈硬化症の処置についての既存のプロ血管形成治療の有用性は限られている。
【０００４】
血管の内層を作り上げる細胞として、内皮細胞は、薬剤または他の物質を循環させることによって思いがけず得られた最初の細胞型である。したがって、内皮細胞によって、心臓組織に対して治療用物質を選択的に指向させるための標的が提供される。薬剤または他の治療用物質の心臓血管に対するこのような選択的標的化によって、全身的な毒性または悪性形質転換のような望ましくない副作用のリスクが低くなるか、または排除されるであろう。心臓血管に対する治療用物質の選択的標的化によってはまた、それらの物質の高い局所濃度が得られ、これによって有効な処置に必要な投与量が減少する。
【０００５】
このように、インビボで心臓血管に対して選択的に結合する分子を同定する必要がある。このような分子は、心臓病および心臓血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）の処置のために心臓に対して治療薬を選択的に標的化させるために特に有用である。本発明はこの必要性を満たし、そして関連する利点を十分に提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明により、種々の単離されたペプチドおよびペプチド模倣物が提供される。これらは、例えば、本発明の結合体を構築することにおいて、または、ペプチド自体が生物学的活性を有している場合には、結合していない形態で、以下に記載されるような種々の心臓血管疾患の任意のものを処置するための治療薬として有用であり得る。したがって、本発明により、６０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）もしくはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。本発明により、さらに、６０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）もしくはそのペプチド模倣物、またはアミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）もしくはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０００７】
本発明により、さらに、アミノ酸配列ＧＲＫＳＫＴＶ（配列番号１４）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＣＸＧＲＫＳＫＴＶＺＣ（配列番号１５）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０００８】
本発明により、さらに、１５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０００９】
５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物もまた、本明細書中で提供される。
【００１０】
本発明により、さらに、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【００１１】
本発明により、さらに、アミノ酸配列ＲＮＳＷＫＰＮ（配列番号１６）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＣＸＲＮＳＷＫＰＮＺＣ（配列番号１７）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【００１２】
アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が、本明細書中でさらに提供される。
【００１３】
本発明により、また、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＲＳＴＲＡＮＰ（配列番号１８）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物も提供される。１つの実施形態においては、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物には、アミノ酸配列ＣＸＲＳＴＲＡＮＰＺＣ（配列番号１９）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）が含まれる。
【００１４】
本発明により、さらに、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＰＫＴＲＲＶＰ（配列番号２０）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物には、アミノ酸配列ＣＸＰＫＴＲＲＶＰＺＣ（配列番号２１）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）が含まれる。
【００１５】
さらに、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＳＧＭＡＲＴＫ（配列番号２２）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が、本明細書中で提供される。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＣＸＳＧＭＡＲＴＫＺＣ（配列番号２３）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【００１６】
以下による、心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法もまた、本明細書中で提供される：ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２またはその断片を、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。
【００１７】
さらに、以下による、心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が本発明によって提供される：受容体クローン９またはその断片を、受容体クローン９に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のレセプタークローン９結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、受容体クローン９に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。
【００１８】
本発明により、以下による、心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法もまた提供される：Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８またはその断片を、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。
【００１９】
さらに、以下による、心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が、本明細書中で提供される：ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質またはその断片を、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。
【００２０】
本発明により、さらに、以下による、心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が提供される：ｂｃ１０またはその断片を、ｂｃ１０に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のｂｃ１０結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ｂｃ１０に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。
【００２１】
抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法もまた、本明細書中で提供される。抗体またはその抗原結合断片は、心臓血管に選択的にホーミングして、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２２】
本発明により、さらに、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。ここでは、結合体は被験体に投与され、結合体には、心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号２７に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる、抗体または抗原結合断片に連結された部分が含まれる。
【００２３】
抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法もまた、本明細書中で提供される。抗体またはその抗原結合断片は、心臓血管に選択的にホーミングして、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２４】
さらに、抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。抗体またはその抗原結合断片は、心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号３３に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２５】
本発明により、さらに、抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。抗体またはその抗原結合断片は、心臓血管に選択的にホーミングして、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２６】
本発明により、心臓血管に選択的にホーミングして、システインリッチタンパク質２（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２；配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に対して連結させられた治療薬を含む結合体もまた提供される。ホーミング分子に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法もまた、本明細書中で提供される。ホーミング分子は心臓血管に選択的にホーミングして、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合し、それにより、この部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２７】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングして、受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が提供される。ホーミング分子に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法もまた、本明細書中で提供される。ホーミング分子は、心臓血管に選択的にホーミングして、受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合し、それにより、この部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２８】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングして、１つのＩｇ  ＩＬ−２レセプター関連タンパク質（Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８；配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が本明細書中で提供される。このような結合体は、例えば、ホーミング分子に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させるための本発明の方法において有用であり得る。ホーミング分子は、心臓血管に選択的にホーミングして、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合し、それにより、この部分を心臓血管に対して指向させる。
【００２９】
本発明により、また、心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号３３（不可欠な膜タンパク質ＣＩＩ−３（ＭｐｃＩＩ−３）に対して推定上の類似性を有しているタンパク質産物）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体も提供される。本発明により、さらに、ホーミング分子に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。ホーミング分子は、心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号３３に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる。
ホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体もまた、本明細書中で提供される。ホーミング分子は、心臓血管に選択的にホーミングして、マウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０；配列番号３５）に特異的に結合する。本発明により、さらに、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供され、これは、ホーミング分子に連結された部分を含む結合体が被験体に投与されることによる。ホーミング分子は、心臓血管に選択的にホーミングして、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合し、それによってこの部分を心臓血管に対して指向させる。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
６０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２）
ペプチドである、項目１に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３）
４０未満の残基の長さを有している、項目１に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４）
２０未満の残基の長さを有している、項目１に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５）
アミノ酸配列ＧＲＫＳＫＴＶ（配列番号１４）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目６）
ペプチドである、項目５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目７）
立体構造によって拘束されている、項目５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目８）
アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）を含む、項目５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目９）
１００未満の残基の長さを有している、項目５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１０）
６０未満の残基の長さを有している、項目５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１１）
２０未満の残基の長さを有している、項目５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１２）
アミノ酸配列ＣＸＧＲＫＳＫＴＶＺＣ（配列番号１５）またはそのペプチド模倣物を含み、
式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、そして
式中、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である、
単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１３）
１５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１４）
ペプチドである、項目１３に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１５）
１００残基未満の長さを有している、項目１３に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１６）
６０残基未満の長さを有している、項目１３に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１７）
２０残基未満の長さを有している、項目１３に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１８）
５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）もしくはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目１９）
ペプチドである、項目１８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２０）
４０残基未満の長さを有している、項目１８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２１）
２０残基未満の長さを有している、項目１８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２２）
４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２３）
ペプチドである、項目２２に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２４）
１００未満の残基の長さを有している、項目２２に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２５）
６０未満の残基の長さを有している、項目２２に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２６）
２０未満の残基の長さを有している、項目２２に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２７）
アミノ酸配列ＲＮＳＷＫＰＮ（配列番号１６）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２８）
ペプチドである、項目２７に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目２９）
立体構造によって拘束されている、項目２７に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３０）
アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）を含む、項目２７に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３１）
１００未満の残基の長さを有している、項目２７に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３２）
６０未満の残基の長さを有している、項目２７に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３３）
２０未満の残基の長さを有している、項目２７に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３４）
アミノ酸配列ＣＸＲＮＳＷＫＰＮＺＣ（配列番号１７）またはそのペプチド模倣物を含み、
式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、そして
式中、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である、
単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３５）
アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３６）
ペプチドである、項目３５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３７）
１００未満の残基の長さを有している、項目３５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３８）
６０未満の残基の長さを有している、項目３５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目３９）
２０未満の残基の長さを有している、項目３５に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４０）
４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＲＳＴＲＡＮＰ（配列番号１８）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４１）
ペプチドである、項目４０に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４２）
立体構造によって拘束されている、項目４０に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４３）
アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）を含む、項目４０に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４４）
１００未満の残基の長さを有している、項目４０に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４５）
６０未満の残基の長さを有している、項目４０に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４６）
２０未満の残基の長さを有している、項目４０に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４７）
アミノ酸配列ＣＸＲＳＴＲＡＮＰＺＣ（配列番号１９）またはそのペプチド模倣物を含み、
式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、そして
式中、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である、
単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４８）
４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＰＫＴＲＲＶＰ（配列番号２０）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目４９）
ペプチドである、項目４８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５０）
立体構造によって拘束されている、項目４８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５１）
アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）を含む、項目４８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５２）
１００未満の残基の長さを有している、項目４８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５３）
６０未満の残基の長さを有している、項目４８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５４）
２０未満の残基の長さを有している、項目４８に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５５）
アミノ酸配列ＣＸＰＫＴＲＲＶＰＺＣ（配列番号２１）またはそのペプチド模倣物を含み、
式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、そして
式中、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である、
単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５６）
４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＳＧＭＡＲＴＫ（配列番号２２）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５７）
ペプチドである、項目５６に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５８）
立体構造によって拘束されている、項目５６に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目５９）
アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）を含む、項目５６に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目６０）
１００未満の残基の長さを有している、項目５６に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目６１）
６０未満の残基の長さを有している、項目５６に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目６２）
２０未満の残基の長さを有している、項目５６に記載の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目６３）
ＣＸＳＧＭＡＲＴＫＺＣ（配列番号２３）またはそのペプチド模倣物を含み、
式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、そして
式中、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である、
単離されたペプチドまたはペプチド模倣物。
（項目６４）
心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法であって：
（ａ）ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２またはその断片を、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；
（ｂ）ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に対する分子の特異的結合をアッセイする工程；および
（ｃ）ライブラリーから１つ以上のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程
を含む、方法。
（項目６５）
工程（ａ）に、精製されたＨＬＰ／ＣＲＩＰまたはその断片を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
工程（ａ）に、細胞表面ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２またはその断片を発現する細胞を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目６４に記載の方法。
（項目６７）
前記ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２がヒトまたはマウスのＨＬＰ／ＣＲＩＰ２である、項目６４に記載の方法。
（項目６８）
ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２のＣＲＰＰＲ（配列番号１）結合断片またはＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）結合断片を、前記分子のライブラリーと接触させる工程を含む、項目６４に記載の方法。
（項目６９）
前記分子のライブラリーが、低分子、ペプチド、およびペプチド模倣物、または抗体およびその抗原結合断片のライブラリーである、項目６４に記載の方法。
（項目７０）
心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法であって：
（ａ）受容体クローン９またはその断片を、受容体クローン９に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；
（ｂ）受容体クローン９に対する分子の特異的結合をアッセイする工程；および
（ｃ）ライブラリーから１つ以上の受容体クローン９結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、受容体クローン９に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程を含む、方法。
（項目７１）
工程（ａ）に、精製された受容体クローン９またはその断片を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
工程（ａ）に、細胞表面受容体クローン９またはその断片を発現する細胞を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目７０に記載の方法。
（項目７３）
前記受容体クローン９がヒトまたはマウスの受容体クローン９である、項目７０に記載の方法。
（項目７４）
受容体クローン９の配列番号５結合断片または配列番号６結合断片を、前記分子のライブラリーと接触させる工程を含む、項目７０に記載の方法。
（項目７５）
前記分子のライブラリーが、低分子、ペプチド、およびペプチド模倣物、または抗体およびその抗原結合断片のライブラリーである、項目７０に記載の方法。
（項目７６）
心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法であって：
（ａ）Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８またはその断片を、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；
（ｂ）Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に対する分子の特異的結合をアッセイする工程；および
（ｃ）ライブラリーから１つ以上のＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程
を含む、方法。
（項目７７）
工程（ａ）に、精製されたＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８またはその断片を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
工程（ａ）に、細胞表面Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８またはその断片を発現する細胞を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目７６に記載の方法。
（項目７９）
前記Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８がヒトまたはマウスのＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８である、項目７６に記載の方法。
（項目８０）
前記マウスＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に配列番号２９が含まれている、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８の配列番号７結合断片、配列番号８結合断片、または配列番号９結合断片を、前記分子のライブラリーと接触させる工程を含む、項目７６に記載の方法。
（項目８２）
前記分子のライブラリーが、低分子、ペプチド、およびペプチド模倣物、または抗体およびその抗原結合断片のライブラリーである、項目７６に記載の方法。
（項目８３）
心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法であって：
（ａ）ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質またはその断片を、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；
（ｂ）ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に対する分子の特異的結合をアッセイする工程；および
（ｃ）ライブラリーから１つ以上のＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程を含む、方法。
（項目８４）
工程（ａ）に、精製されたＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質またはその断片を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
工程（ａ）に、細胞表面ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質またはその断片を発現する細胞を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目８３に記載の方法。
（項目８６）
前記ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質がヒトまたはマウスのＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質である、項目８３に記載の方法。
（項目８７）
前記マウスＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に配列番号３３が含まれている、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質の、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）結合断片を、前記分子のライブラリーと接触させる工程を含む、項目８３に記載の方法。
（項目８９）
前記分子のライブラリーが、低分子、ペプチド、およびペプチド模倣物、または抗体およびその抗原結合断片のライブラリーである、項目８３に記載の方法。
（項目９０）
心臓血管に選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法であって：
（ａ）ｂｃ１０またはその断片を、ｂｃ１０に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；
（ｂ）ｂｃ１０に対する分子の特異的結合をアッセイする工程；および
（ｃ）ライブラリーから１つ以上のｂｃ１０結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ｂｃ１０に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程を含む、方法。
（項目９１）
工程（ａ）に、精製されたｂｃ１０またはその断片を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
工程（ａ）に、細胞表面ｂｃ１０またはその断片を発現する細胞を、前記分子のライブラリーと接触させることが含まれる、項目９０に記載の方法。
（項目９３）
前記ｂｃ１０がヒトまたはマウスのｂｃ１０である、項目９０に記載の方法。
（項目９４）
前記マウスｂｃ１０に配列番号３５が含まれている、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
ｂｃ１０の配列番号１２結合断片または配列番号１３結合断片を、前記分子のライブラリーと接触させる工程を含む、項目９０に記載の方法。
（項目９６）
前記分子のライブラリーが、低分子、ペプチド、およびペプチド模倣物、または抗体およびその抗原結合断片のライブラリーである、項目９０に記載の方法。
（項目９７）
心臓血管に選択的にホーミングして、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、１つの部分を被験体の心臓血管に対して指向させる方法。
（項目９８）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
前記抗体が生物学的活性を有している、項目９７に記載の方法。
（項目１００）
前記部分が検出可能な部分である、項目９７に記載の方法。
（項目１０１）
前記部分が治療薬である、項目９７に記載の方法。
（項目１０２）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号２７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、１つの部分を被験体の心臓血管に対して指向させる方法。
（項目１０４）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目１０３に記載の方法。
（項目１０５）
前記抗体が生物学的活性を有している、項目１０３に記載の方法。
（項目１０６）
前記部分が検出可能な物質である、項目１０３に記載の方法。
（項目１０７）
前記部分が治療薬である、項目１０３に記載の方法。
（項目１０８）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
心臓血管に選択的にホーミングして、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法。
（項目１１０）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目１０９に記載の方法。
（項目１１１）
前記抗体が生物学的活性を有している、項目１０９に記載の方法。
（項目１１２）
前記部分が検出可能な物質である、項目１０９に記載の方法。
（項目１１３）
前記部分が治療薬である、項目１０９に記載の方法。
（項目１１４）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１１３に記載の方法。
（項目１１５）
心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、１つの部分を被験体の心臓血管に対して指向させる方法。
（項目１１６）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目１１５に記載の方法。
（項目１１７）
前記抗体が生物学的活性を有している、項目１１５に記載の方法。
（項目１１８）
前記部分が検出可能な物質である、項目１１５に記載の方法。
（項目１１９）
前記部分が治療薬である、項目１１５に記載の方法。
（項目１２０）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１１９に記載の方法。
（項目１２１）
心臓血管に選択的にホーミングして、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、１つの部分を被験体の心臓血管に対して指向させる方法。
（項目１２２）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目１２１に記載の方法。
（項目１２３）
前記抗体が生物学的活性を有している、項目１２１に記載の方法。
（項目１２４）
前記部分が検出可能な物質である、項目１２１に記載の方法。
（項目１２５）
前記部分が治療薬である、項目１２１に記載の方法。
（項目１２６）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１２５に記載の方法。
（項目１２７）
心臓血管に選択的にホーミングし、システインリッチタンパク質２（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２；配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む、結合体。
（項目１２８）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目１２７に記載の結合体。
（項目１２９）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目１２７に記載の結合体。
（項目１３０）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１２９に記載の結合体。
（項目１３１）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１３０に記載の結合体。
（項目１３２）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１のアミノ酸配列が含まれている、項目１３１に記載の結合体。
（項目１３３）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１２９に記載の結合体。
（項目１３４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号２のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１３３に記載の結合体。
（項目１３５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に配列番号２のアミノ酸配列が含まれている、項目１３４に記載の結合体。
（項目１３６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目１３３に記載の結合体。
（項目１３７）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目１２７に記載の結合体。
（項目１３８）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１２７、１３０、または１３３に記載の結合体。
（項目１３９）
前記治療薬が血管形成薬である、項目１３８に記載の結合体。
（項目１４０）
前記治療薬が抗血栓剤である、項目１３８に記載の結合体。
（項目１４１）
心臓血管に選択的にホーミングして、システインリッチタンパク質２（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２；配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法。
（項目１４２）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目１４１に記載の方法。
（項目１４３）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目１４１に記載の方法。
（項目１４４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１４３に記載の方法。
（項目１４５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１４４に記載の方法。
（項目１４６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１のアミノ酸配列が含まれている、項目１４５に記載の方法。
（項目１４７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１４３に記載の方法。
（項目１４８）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号２のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１４７に記載の方法。
（項目１４９）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に配列番号２のアミノ酸配列が含まれている、項目１４８に記載の方法。
（項目１５０）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目１４７に記載の方法。
（項目１５１）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目１４１に記載の方法。
（項目１５２）
前記部分が検出可能な部分である、項目１４１に記載の方法。
（項目１５３）
前記検出可能な部分が放射性核種または常磁性イオンである、項目１５２に記載の方法。
（項目１５４）
前記部分が治療薬である、項目１４１に記載の方法。
（項目１５５）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１５４に記載の方法。
（項目１５６）
心臓血管に選択的にホーミングし、１つのＩＬ−２受容体関連タンパク質（Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８；配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む、結合体。
（項目１５７）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目１５６に記載の結合体。
（項目１５８）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目１５６に記載の結合体。
（項目１５９）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１５８に記載の結合体。
（項目１６０）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号７のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１５９に記載の結合体。
（項目１６１）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号７のアミノ酸配列が含まれている、項目１６０に記載の結合体。
（項目１６２）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１５８に記載の結合体。
（項目１６３）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号８のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１６２に記載の結合体。
（項目１６４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号８のアミノ酸配列が含まれている、項目１６３に記載の結合体。
（項目１６５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目１６２に記載の結合体。
（項目１６６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物にアミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１５８に記載の結合体。
（項目１６７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号９のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１６６に記載の結合体。
（項目１６８）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号９のアミノ酸配列が含まれている、項目１６７に記載の結合体。
（項目１６９）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目１５６に記載の結合体。
（項目１７０）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１５６、１５９、１６２、または１６６に記載の結合体。
（項目１７１）
前記治療薬が血管形成薬である、項目１７０に記載の結合体。
（項目１７２）
前記治療薬が抗血栓剤である、項目１７０に記載の結合体。
（項目１７３）
心臓血管に選択的にホーミングして、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法。
（項目１７４）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目１７３に記載の方法。
（項目１７５）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目１７３に記載の方法。
（項目１７６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１７５に記載の方法。
（項目１７７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号７のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１７６に記載の方法。
（項目１７８）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号７のアミノ酸配列が含まれている、項目１７７に記載の方法。
（項目１７９）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１７５に記載の方法。
（項目１８０）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号８のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１７９に記載の方法。
（項目１８１）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に配列番号８のアミノ酸配列が含まれている、項目１８０に記載の方法。
（項目１８２）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目１７９に記載の方法。
（項目１８３）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１７５に記載の方法。
（項目１８４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号９のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１８３に記載の方法。
（項目１８５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に配列番号９のアミノ酸配列が含まれている、項目１８４に記載の方法。
（項目１８６）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目１７３に記載の方法。
（項目１８７）
前記部分が検出可能な部分である、項目１７３に記載の方法。
（項目１８８）
前記検出可能な部分が放射性核種または常磁性イオンである、項目１８７に記載の方法。
（項目１８９）
前記部分が治療薬である、項目１７３に記載の方法。
（項目１９０）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１８９に記載の方法。
（項目１９１）
心臓血管に選択的にホーミングし、配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む、結合体。
（項目１９２）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目１９１に記載の結合体。
（項目１９３）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目１９１に記載の結合体。
（項目１９４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目１９３に記載の結合体。
（項目１９５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１１のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目１９４に記載の結合体。
（項目１９６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１１のアミノ酸配列が含まれている、項目１９５に記載の結合体
（項目１９７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目１９４に記載の結合体。
（項目１９８）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目１９１に記載の結合体。
（項目１９９）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目１９１または１９４に記載の結合体。
（項目２００）
前記治療薬が血管形成薬である、項目１９９に記載の結合体。
（項目２０１）
前記治療薬が抗血栓剤である、項目１９９に記載の結合体。
（項目２０２）
心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法。
（項目２０３）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目２０２に記載の方法。
（項目２０４）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目２０２に記載の方法。
（項目２０５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目２０４に記載の方法。
（項目２０６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１１のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目２０５に記載の方法。
（項目２０７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１１のアミノ酸配列が含まれている、項目２０６に記載の方法。
（項目２０８）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目２０５に記載の方法。
（項目２０９）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目２０２に記載の方法。
（項目２１０）
前記部分が検出可能な部分である、項目２０２に記載の方法。
（項目２１１）
前記検出可能な部分が放射性核種または常磁性イオンである、項目２１０に記載の方法。
（項目２１２）
前記部分が治療薬である、項目２０２に記載の方法。
（項目２１３）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目２１２に記載の方法。
（項目２１４）
心臓血管に選択的にホーミングし、マウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０；配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む、結合体。
（項目２１５）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目２１４に記載の結合体。
（項目２１６）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目２１４に記載の結合体。
（項目２１７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目２１６に記載の結合体。
（項目２１８）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１２のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目２１７に記載の結合体。
（項目２１９）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１２のアミノ酸配列が含まれている、項目２１８に記載の結合体。
（項目２２０）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目２１７に記載の結合体。
（項目２２１）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目２１６に記載の結合体。
（項目２２２）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１３のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目２２１に記載の結合体。
（項目２２３）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１３のアミノ酸配列が含まれている、項目２２２に記載の結合体。
（項目２２４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目２２１に記載の結合体。
（項目２２５）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目２１４に記載の結合体。
（項目２２６）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目２１４、２１７、または２２１に記載の結合体。
（項目２２７）
前記治療薬が血管形成薬である、項目２２６に記載の結合体。
（項目２２８）
前記治療薬が抗血栓剤である、項目２２６に記載の結合体。
（項目２２９）
心臓血管に選択的にホーミングして、マウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０；配列３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結された部分を含む結合体を被験体に投与し、それによって前記部分を心臓血管に対して指向させる工程を含む、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法。
（項目２３０）
前記ホーミング分子が、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングする、項目２２９に記載の方法。
（項目２３１）
前記ホーミング分子がペプチドまたはペプチド模倣物である、項目２２９に記載の方法。
（項目２３２）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目２３１に記載の方法。
（項目２３３）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１２のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目２３２に記載の方法。
（項目２３４）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１２のアミノ酸配列が含まれている、項目２３３に記載の方法。
（項目２３５）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目２３２に記載の方法。
（項目２３６）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物が含まれている、項目２３１に記載の方法。
（項目２３７）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１３のアミノ酸配列またはそのペプチド模倣物が含まれている、項目２３６に記載の方法。
（項目２３８）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に、配列番号１３のアミノ酸配列が含まれている、項目２３７に記載の方法。
（項目２３９）
前記ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が立体構造によって拘束されている、項目２３６に記載の方法。
（項目２４０）
前記ホーミング分子が抗体またはその抗原結合断片である、項目２２９に記載の方法。
（項目２４１）
前記部分が検出可能な部分である、項目２２９に記載の方法。
（項目２４２）
前記検出可能な部分が放射性核種または常磁性イオンである、項目２４１に記載の方法。
（項目２４３）
前記部分が治療薬である、項目２２９に記載の方法。
（項目２４４）
前記治療薬が、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターからなる群より選択される、項目２４３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
提出された特許および特許出願には、カラーで描かれた少なくとも１つの図面が含まれ
ている。カラー図面を含むこの特許または特許出願刊行物のコピーは、要請と必要な手数
料の支払いによって、局から提供されるであろう。
【図１】図１は、細菌でのツーハイブリッド分析と組み合わせたエキソビボおよびインビボでのファージディスプレイによる、ホーミングペプチド／受容体対の同定を示す。（Ａ）同時に行われるホーミングペプチドの単離および受容体の同定の原理。ファージディスプレイペプチドライブラリーをマウスに注射し、循環させた；組織を回収し、その後、結合したファージを含む単細胞になるようにバラバラにした。結合していないファージを洗い流し、結合したファージを回収し、細菌の中で増殖させた。そしてこのプロセスを繰り返したか、またはペプチドをコードする挿入断片をＰＣＲによって増幅させ、細菌のツーハイブリッドシステムのおとりベクター成分の中につないだかのいずれかを行った。一旦、細菌の中に入ると、選択された組織にホーミングする能力について富化させたプールは、可能性のあるレセプターと相互作用することができ、その結果、カルベニシリン耐性が生じた。耐性クローンを２回目のスクリーニングのためのＸ−ｇａｌを含む寒天上にプレートした。標的挿入断片とおとりの挿入断片を増幅させ、カルベニシリン耐性であるＬａｃＺを発現する細胞から配列決定した。（Ｂ）抗ＣＤ３１磁気ビーズでの３回目のエキソビボ選択により、選択したプールはエキソビボで心臓細胞に対して、組み換え体ではないＴ７ファージよりも約２３０倍多く結合した。（Ｃ）インビボでの心臓へのホーミングについてさらに選択した場合には、エキソビボ／インビボで選択したプールは、心臓血管の中に、組み換え体ではない対照ファージよりも約１９０倍多く蓄積した。（Ｄ）最後のプールに由来するペプチドをコードする挿入断片をおとりベクターにサブクローニングし、細菌を、ペプチド−おとりベクターと標的ベクターの中の心臓のｃＤＮＡライブラリーの両方で形質転換した。形質転換した細菌を、５００μｇ／ｍｌのカルベニシリン上での増殖について選択した。（Ｅ）いくつかのクローンはまた、第２のマーカーであるＬａｃＺについてもポジティブであり、これは、Ｘ−ｇａｌを含むプレート上での青色の生産によって明らかであった。
【図２】図２は、個々のファージディスプレイペプチドが心臓に選択的にホーミングすることを示している。心臓内皮へのホーミングについての組み合わせスクリーニングによって同定した示したペプチドを、Ｔ７ファージの中に再構築し、静脈内注射によってマウスに別々に投与した。配列番号１０を除いて、心臓にホーミングするペプチドをディスプレイするファージは、組み換え体ではないファージと比較して、有意に心臓にホーミングした。さらに、ホーミングは、試験した主要な臓器の中でも心臓に特異的であった。最も高い特異性（３００倍を上回る）は、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージについて記録された。（Ａ）ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージは、心臓、腎臓、脳、筋肉、および肺にホーミングする。（Ｂ）ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）ファージは、心臓、腎臓、脳、筋肉、および肺にホーミングする。（Ｃ）ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）ファージは、心臓、腎臓、脳、筋肉、および肺にホーミングする。（Ｄ）ＣＬＩＤＬＨＶＭＣ（配列番号１０）ファージは、心臓、腎臓、脳、筋肉、および肺にホーミングする。（Ｅ）ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）ファージは、心臓、腎臓、脳、筋肉、および肺にホーミングする。（Ｆ）ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）ファージは、心臓、腎臓、脳、筋肉、および肺にホーミングする。
【図３】図３は、ファージがディスプレイする心臓ホーミングペプチドが心臓の中の血管内皮細胞のマーカーと一緒に局在化することを示している。ファージを、フルオレセインが結合させられたトマトレシチン（緑色）と共にマウスに静脈内注射し、そして心臓組織の切片を、ウサギ抗Ｔ７抗体と抗ウサギＡｌｅｘａ５９４（赤）で染色した。（Ａ）ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージの染色。（Ｂ）ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）ファージの染色。（Ｃ）ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）ファージの染色。（Ｄ）ＣＬＩＤＬＨＶＭＣ（配列番号１０）ファージの染色。（Ｅ）ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）ファージの染色。（Ｆ）ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）ファージの染色。矢印は、いくつかの代表的な二重ポジティブ血管（黄色）を示す。倍率は２００倍。
【図４】図４は、ファージがディスプレイする心臓ホーミングペプチドが同種受容体でトランスフェクトした細胞に特異的に結合することを示している。ツーハイブリッドスクリーニングで同定した心臓ホーミングペプチドについての推定の受容体（表１）を、トランスフェクトしたｃＤＮＡから２９３Ｔ細胞の中で発現させた。トランスフェクトした細胞を使用して、緩衝液中で、または対応するペプチド（１００ｍｇ／ｍｌ）をそれぞれ提示する合成ペプチドの存在下のいずれかで、関連する心臓ホーミングペプチドをディスプレイする同種ファージの結合を試験した。それぞれのファージは、空ベクターである対照（灰色の柱）でトランスフェクトした細胞よりも３００から５００倍多く、その推定の同種受容体（縞模様の入った柱）を発現する細胞に結合した。いずれの場合にも、トランスフェクトした細胞に対するファージの結合は、過剰の同種ペプチドとの競合によって阻害されたが（黒色の柱）、無関係な心臓ホーミングペプチドとの競合によっては阻害されなかった（白色の柱）。４種類のトランスフェクトした細胞株のそれぞれを、遊離のペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）、ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）およびＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）を用いてアッセイした。（Ａ）ＣＲＩＰ−２をトランスフェクトした細胞に対する同種ペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）を発現するファージの結合；（Ｂ）Ｓｉｇｉｒｒをトランスフェクトした細胞に対する同種ペプチドＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）を発現するファージの結合；（Ｃ）ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）をトランスフェクトした細胞に対する同種ペプチドＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）を発現するファージの結合；（Ｄ）ｂｃ１０をトランスフェクトした細胞に対する同種ペプチドＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）を発現するファージの結合。
【図５−１】図５は、心臓ホーミングペプチドの受容体が、ｍＲＮＡレベルで心臓の中で強く発現され、内皮細胞に局在化することを示している。（Ａ）心臓の中の同じｍＲＮＡのレベルの割合として表した、種々のマウスの心臓、肺、脾臓、腎臓、脳、および筋肉の中の４種類の受容体ｍＲＮＡについての実時間ＰＣＲの結果（２回の独立した実験による平均）。（Ｂ）分析の終わりに回収し、アガロースゲル電気泳動によって分析した実時間ＰＣＲの産物。ＳＴ＝１００ｂｐのＤＮＡラダー。（Ｃ）インサイチュハイブリダイゼーションによる受容体の局在化（赤色）。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０は全て、心臓の内皮細胞の中で強く発現されていた。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０  ｍＲＮＡもまた、心臓実質の中で強く発現されていた。肺の毛細血管は、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８およびＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質についてさらに明確にポジティブであり、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２およびｂｃ１０については、いくつかのシグナルが観察された。ポジティブ染色の証拠が、他の組織の中で時折見られた。倍率は２００倍。
【図５−２】図５は、心臓ホーミングペプチドの受容体が、ｍＲＮＡレベルで心臓の中で強く発現され、内皮細胞に局在化することを示している。（Ａ）心臓の中の同じｍＲＮＡのレベルの割合として表した、種々のマウスの心臓、肺、脾臓、腎臓、脳、および筋肉の中の４種類の受容体ｍＲＮＡについての実時間ＰＣＲの結果（２回の独立した実験による平均）。（Ｂ）分析の終わりに回収し、アガロースゲル電気泳動によって分析した実時間ＰＣＲの産物。ＳＴ＝１００ｂｐのＤＮＡラダー。（Ｃ）インサイチュハイブリダイゼーションによる受容体の局在化（赤色）。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０は全て、心臓の内皮細胞の中で強く発現されていた。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０  ｍＲＮＡもまた、心臓実質の中で強く発現されていた。肺の毛細血管は、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８およびＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質についてさらに明確にポジティブであり、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２およびｂｃ１０については、いくつかのシグナルが観察された。ポジティブ染色の証拠が、他の組織の中で時折見られた。倍率は２００倍。
【図６】図６は、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドと同種受容体ＣＲＩＰ２が、心臓血管の内皮細胞の中でＣＤ３１と一緒に局在化していることを示している。フルオレセイン結合ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドをマウスに静脈内注射し、そして内皮細胞マーカーＣＤ３１に対する抗体での染色のために、２時間後に組織を回収した。蛍光ペプチドは緑色で示され、一方、ＣＤ３１マーカーは赤色で示されている。（Ａ）心臓血管の中での配列番号１とＣＤ３１の共局在。（Ｂ）心内膜での配列番号１とＣＤ３１の共局在。（Ｃ）対照ペプチドは心臓では観察されない。（Ｄ）抗ＣＲＩＰ２抗体は心臓の内皮細胞を染色し（赤色）、これはＣＤ３１と一緒に局在化している。（Ｅ）抗ＣＲＩＰ２抗体は、心臓血管に注入されたＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドと一緒に局在化している。（Ｆ）抗ＣＲＩＰ２抗体は心内膜に注入されたＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドと一緒に局在化している。
【図７】図７は、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージが心臓細胞に結合すること、そして配列番号１をディスプレイするファージのホーミングが抗ＣＲＩＰ２抗体によってブロックされることを示している。ＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージを心臓から調製した細胞懸濁液とともにインキュベートした；ファージの結合を、種々の濃度の示した抗体またはペプチドの存在下で、またはそれらが存在しない条件で測定した。（Ａ）ニワトリ抗ＣＲＩＰ２抗体は、心臓細胞への配列番号１をディスプレイするファージの結合をブロックした；正常なＩｇＹをネガティブ対照として使用した。（Ｂ）遊離のＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドによる配列番号１をディスプレイするファージの結合の用量依存性の阻害と、２種類の無関係な心臓ホーミングペプチドによる阻害がないことにより、エキソビボでのファージ結合システムの特異性を確認した。（Ｃ）心臓へのＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージのインビボでのホーミングは、抗ＣＲＩＰ２抗体の同時注射によって阻害された。３回の独立した実験による平均と標準偏差を示す。
【図８】図８は、マウスのシステインリッチタンパク質２（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２）の（Ａ）ヌクレオチド配列（配列番号２４）と（Ｂ）アミノ酸配列（配列番号２５）を示している。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＮＭ＿０２４２２３。
【図９】図９は、受容体クローン９として同定されたマウスのＲＩＫＥＮ  ＥＳＴの（Ａ）ヌクレオチド配列（配列番号２６）と（Ｂ）アミノ酸配列（配列番号２７）を示している。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＢＣ０２６５３６。
【図１０】図１０は、マウスの１つのＩｇ  ＩＬ−２受容体関連タンパク質（Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８）の（Ａ）ヌクレオチド配列（配列番号２８）と（Ｂ）アミノ酸配列（配列番号２９）を示している。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＢＣ０１０８０６。
【図１１】図１１は、マウスの嗅神経ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号３０）を示している。これは、受容体クローン２７として同定されたタンパク質を含むグルタミンリッチ領域である。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＡＫ０３２２３９。
【図１２−１】図１２は、不可欠な膜タンパク質ＣＩＩ−３に対して類似性を有していると推定されるマウスのポリペプチド（ＭｐｃＩＩ−３）の（Ａ）ヌクレオチド配列（配列番号３２）と（Ｂ）アミノ酸配列（配列番号３３）を示している。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＡＫ０３２４５８。
【図１２−２】図１２は、不可欠な膜タンパク質ＣＩＩ−３に対して類似性を有していると推定されるマウスのポリペプチド（ＭｐｃＩＩ−３）の（Ａ）ヌクレオチド配列（配列番号３２）と（Ｂ）アミノ酸配列（配列番号３３）を示している。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＡＫ０３２４５８。
【図１３】図１３は、マウス膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０）の（Ａ）ヌクレオチド配列（配列番号３４）と（Ｂ）アミノ酸配列（配列番号３５）を示している。Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＢＣ０２６９３５。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明は、高い選択性で心臓血管にホーミングし、そして全身的に投与された治療薬または造影剤を心臓血管に選択的に標的化させるための結合体の形態において有用であり得る分子の同定に関する。治療薬のこのような選択的標的化によって、心臓血管に送達される薬剤の有効量が増大し、一方では、薬剤が他の臓器に対して有害な影響を生じる可能性が低下する。本発明はさらに、本発明のホーミング分子の同種受容体の同定に関する。以下にさらに開示されるように、これらの受容体は心臓の内皮細胞上で発現され、心臓血管に選択的にホーミングするペプチドまたは他の分子の特性を最適化するためのスクリーニングに有用であり得る。
【００３２】
実施例１において本明細書中で開示されるように、エキソビボおよびインビボでのファージ選択と、細菌でのツーハイブリッド分析の新規の組み合わせが、心臓血管に選択的にホーミングするペプチドを同定するため、およびこれらのペプチドの受容体として作用する内皮細胞の分子を同定するために使用された。マウスの心臓懸濁液と抗ＣＤ３１磁気ビーズを用いたエキソビボでのファージ選択の後、心臓へのホーミングについてのインビボ選択が行われ、これによって、心臓にホーミングするファージのプールが得られた。これは、組み換え体ではないファージと比較してほぼ２００倍増加した（図１Ａおよび１Ｂ）。さらに、図１Ｃに示されるように、エキソビボ／インビボで選択されたファージは、他の組織と比較すると心臓に優先的に局在化した；心臓での富化は、脳、腎臓、皮膚、および骨格筋の中での蓄積よりも２０から５０倍多かった。
【００３３】
心臓にホーミングするファージのプールを用いた細菌でのツーハイブリッド分析によって同定した２５個の推定される受容体クローンの大部分は、心筋で豊富に発現されるタンパク質であった。表１にまとめられるように、残りの６つのクローンは膜タンパク質または細胞表面タンパク質を提示し、これらは、ホーミングペプチドの推定される受容体であった。受容体クローン５と記載される最初のクローンは、心臓ＬＩＭ−タンパク質（ＨＬＰ）のカルボキシ末端にある９２個のアミノ酸（１１７位から２０８位の残基）を提示し、これはシステインリッチタンパク質２（ＣＲＩＰ２）とも呼ばれる。全長のマウスＨＬＰ／ＣＲＩＰ２の核酸配列とアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２４および２５として本明細書中に提供される（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＮＭ＿０２４２２３を参照のこと）。ツーハイブリッド分析によっては、この受容体に結合したいくつかの可能性のある心臓ホーミングペプチドが得られた。個々にアッセイされた場合には、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージは、組み換え体ではないファージと比較して３００倍を上回る選択性で心臓にホーミングし（図２Ａ）、そしてＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）ファージは、組み換え体ではないファージと比較して心臓へのホーミングにおいて約５０倍の選択性を示した。これらの結果は、ペプチドである配列番号１および配列番号２が心臓ホーミングペプチドであることを示しており、さらに、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２がこれらのペプチドのホーミングのための受容体としての役割を担っていることを示唆している。
【００３４】
本明細書中でさらに開示されるように、注釈がついていないＲＩＫＥＮ  ＥＳＴ（受容体クローン９）もまた、１つ以上の心臓ホーミングペプチドに結合する、膜タンパク質または細胞表面で発現されるタンパク質として同定された。受容体クローン９によって示されるＲＩＫＥＮ  ＥＳＴの全長のマウス核酸配列とアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２６および２７として本明細書中に提供される（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＢＣ０２６５３６を参照のこと）。ツーハイブリッド分析によって同定された３つの異なるペプチドのうち、２つのペプチドであるＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）とＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）は、ファージ上にディスプレイされると、心臓に対する選択的なホーミングを示した（図２Ｂ）。
【００３５】
本明細書中で開示される結果によって、さらに、ＳｉｇｉｒｒまたはＴＩＲ８（受容体クローン１５）と命名された１つのＩｇ  ＩＬ−１受容体関連タンパク質が、心臓ホーミングペプチドの受容体として同定された。全長のマウスＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８の核酸配列とアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２８および２９として本明細書中に提供される（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＢＣ０１０８０６を参照のこと）。表１にまとめられるように、ツーハイブリッド分析によってＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８への結合によって同定された３つのペプチドＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）、およびＲＧＳＳＳ（配列番号９）は、ファージ上にディスプレイされ、そしてインビボでアッセイされた場合には、２０から３０倍の心臓へのホーミングの選択性を示した（表１および図２Ｃを参照のこと）。
【００３６】
受容体クローン３６もまた心臓ホーミング受容体として本明細書中に開示される。これは、コハク酸デヒドロゲナーゼ複合体の一部であるミトコンドリア膜タンパク質である不可欠な膜タンパク質ＣＩＩ−３（ＭｐｃＩＩ−３）に対して類似性を有していると推定される、ＲＩＫＥＮ  Ｆａｎｔｏｍに由来する命名されていないタンパク質産物を提示する。このＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質の核酸配列とアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３２および３３として本明細書中に提供される（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ２６３２８２７４を参照のこと）。ツーハイブリッド分析により、ペプチドＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）がこの受容体に結合するとして同定され；配列番号１１をディスプレイするファージは、インビボで個々にアッセイされた場合には、約２０倍の選択性で心臓にホーミングした（表１および図２Ｅ）。本明細書中に開示されるさらなる結果は、マウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ１０（ｂｃ１０）（膀胱の中の前ガン状態の病変からガンが生じるとダウンレギュレートされる小さい膜タンパク質）が心臓ホーミング受容体としての役割を担うことができることを示している。同定された受容体クローン４６は、ｂｃ１０のマウスホモログの一部を提示する。全長のマウスｂｃ１０核酸とアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３４および３５として、本明細書中で提供される（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ２００７２４８３を参照のこと）。表１および図２Ｆに示されるように、クローン４６に結合した２つのペプチドＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）およびＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）を発現するファージは、それぞれ、心臓へのホーミングにおいて約６０倍および１０倍の選択性を示した。
【００３７】
本明細書中にさらに開示されるように、いくつかの心臓ホーミングペプチドが、インビボで心臓の内皮細胞に結合する能力について、およびそれらの推定される受容体に対する特異的結合について分析された。心臓ホーミングペプチドである配列番号１、配列番号５、配列番号７、配列番号１１、および配列番号１２をディスプレイするファージが、フルオレセインが結合させられたトマトレシチン、血管マーカーと共にマウスにそれぞれ別々に注射され、そしてファージの局在化が抗Ｔ７抗体を用いて観察された。図３ＡからＣ、Ｅ、およびＦに示されるように、配列１、５、７、１１、または１２をディスプレイするファージは、心臓の内皮細胞中に存在しており、他の組織には存在していなかった。一方、ペプチドである配列番号１０をディスプレイするネガティブ対照のファージは心臓にも、他の組織の中にも存在しなかった。これらの結果は、ファージがディスプレイするペプチドであるＣＲＰＰＲ（配列番号１）、ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）、ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）、またはＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）がインビボで心臓血管に局在化することを示している。加えて、実時間（ＲＴ）−ＰＣＲおよびインサイチュハイブリダイゼーション分析は、心臓ホーミングペプチドについての４種類の同種受容体であるＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０が心臓の内皮細胞の中で発現されることを示していた。これらの受容体はまた、アッセイした他の組織と比較して、心臓において優先的に発現されていた（図５を参照のこと）。心臓の内皮細胞の受容体ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０は心臓においてのみ発現されているのではないが、心臓でのそれらの優先的な発現によって、心臓の中の試験ファージを約２０から３００倍の選択性によって濃縮している、ホーミングペプチドが生じた。心臓へのホーミングにおけるこの２０から３００倍の選択性は、他の分子を用いて以前に観察された心臓へのホーミングと比較して明らかに増大している。
【００３８】
本明細書中にさらに開示されるように、同種ペプチドをディスプレイするファージが、全長の同種受容体をトランスフェクトした細胞に結合する能力についてアッセイされた。図４に示されるように、心臓ホーミングペプチドを発現するファージは、対照ファージよりも３００から５００倍多く、対応する同種受容体でトランスフェクトされた細胞に結合した。そしてファージの結合は、１００μｇ／ｍｌの同種ペプチドの存在下で阻害されたが、無関係なホーミングペプチドによっては阻害されなかった。これらの結果によって、心臓ホーミングペプチドであるＣＲＰＰＲ（配列番号１）は受容体ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に特異的に結合し；心臓ホーミングペプチドであるＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）は受容体Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合し；心臓ホーミングペプチドであるＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）はＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質受容体に特異的に結合し；そして心臓ホーミングペプチドであるＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）は受容体ｂｃ１０に特異的に結合することが確認された。
【００３９】
本明細書中で開示されるさらなる結果は、ペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）の、同種受容体ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２との共局在を明らかにしている。図６において本明細書中に示されるように、静脈内に注射されたＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドからの蛍光は、心臓血管と心内膜の両方の中で、血管マーカーＣＤ３１と広い範囲に一緒に局在化していた。一方、蛍光標識された対照ペプチドは心臓の中では検出されなかった。抗ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２抗体染色もまた、心臓血管と心内膜の中で、血管マーカー（図６）とペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１；図６Ｅおよび６Ｆ）と一緒に局在化していた。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２を有している心臓血管に対するＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージの結合の特異性は、遊離のＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドを用いた競合アッセイを使用して明らかにされた。遊離のＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドは、用量依存性の様式で、心臓由来の細胞懸濁液に対するＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージの結合をブロックした（図７ＡおよびＢ）。加えて、抗ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２抗体は、ファージと一緒に注射された場合には、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージのホーミングを阻害した（図７Ｃ）。これらの結果は、ペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）が、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２への特異的結合を通じて心臓血管に選択的にホーミングすることを実証している。
【００４０】
上記の知見に基づいて、本発明によって、心臓血管に選択的にホーミングして、システインリッチタンパク質２（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２；配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が提供される。このような結合体においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができ、そしてこれは、例えば、ペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。１つの実施形態においては、本発明の結合体には、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。別の実施形態においては、本発明の結合体には、アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。このようなホーミングペプチドまたはペプチド模倣物は、状況によっては、立体構造によって拘束される場合がある。
【００４１】
種々の治療薬が、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子が組み込まれている本発明の結合体において有用である。有用な治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた血管形成薬を含む結合体が提供される。別の実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた抗血栓剤を含む結合体が提供される。
【００４２】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が提供される。１つの実施形態においては、本発明の結合体には、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。別の実施形態においては、本発明の結合体には、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。任意の種々の治療薬が、心臓血管に選択的にホーミングし、そして受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子が組み込まれている本発明の結合体において有用である。有用な治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そして受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた血管形成薬を含む結合体が提供される。別の実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そして受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた抗血栓剤を含む結合体が提供される。
【００４３】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして１つのＩｇ  ＩＬ−２受容体関連タンパク質（Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８；配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が、本明細書中で提供される。限定ではない例として、このような結合体において有用なホーミング分子は、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。さらなる限定ではない例として、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合するホーミング分子は、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。
【００４４】
Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する種々のホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は本発明の結合体において有用であり、これには、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれるが、これに限定はされない。本発明に有用なホーミングペプチドおよびペプチド模倣物としては、さらに、アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むペプチドおよびペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない；このようなペプチドおよびペプチド模倣物は、立体構造によって拘束されている場合も、また拘束されていない場合もある。本発明に有用なさらなるホーミングペプチドおよびペプチド模倣物としては、アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むものが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００４５】
任意の種々の治療薬が、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体において有用である。本発明に有用な治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた血管形成薬を含む結合体が提供される。別の実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた抗血栓剤を含む結合体が提供される。
【００４６】
心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体もまた、本明細書中で提供される。１つの実施形態においては、本発明の結合体には、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングするホーミング分子が含まれる。別の実施形態においては、本発明の結合体には、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であるホーミング分子が含まれる。さらなる実施形態においては、本発明の結合体には、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。このようなホーミング分子は、状況によっては、立体構造によって拘束され得る。任意の種々の治療薬が本発明の結合体において有用であることが理解される。有用な治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定はされない。一例として、本発明の結合体には、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた血管形成薬が含まれ得る。別の例として、本発明の結合体には、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた抗血栓剤が含まれ得る。
【００４７】
心臓血管に選択的にホーミングし、そしてマウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０；配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体もまた、本明細書中で提供される。このような結合体においては、ホーミング分子は、組み換え体ではないファージと比較して、例えば、少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。ホーミング分子は、ペプチドまたはペプチド模倣物であり得るが、これらに限定はされない。ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が、本発明の結合体において有用であり得る。これには、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物が含まれるが、これらに限定はされない。ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する有用なホーミング分子としては、さらに、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。有用なホーミング分子としては、さらに、アミノ酸配列である配列番号１２または配列番号１３、あるいはそれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物の立体構造によって拘束された形態が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００４８】
当業者は、任意の種々の治療薬が本発明の結合体において有用であり得ることを理解している。治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、本発明の結合体には、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた血管形成薬が含まれる。別の実施形態においては、本発明の結合体には、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた抗血栓剤が含まれる。
【００４９】
特定の実施形態においては、本発明の結合体のペプチドまたはペプチド模倣物部分は定義された長さを有する。結合体のペプチドまたはペプチド模倣物部分は、多くても１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、または２０００残基の長さを有し得るが、これらに限定はされない。他の実施形態においては、結合体のペプチドまたはペプチド模倣物部分は、少なくとも５、１０、２０、３０、５０、１００、１５０、２００、２５０、または３００残基の長さを有する。用語「結合体のペプチドまたはペプチド模倣物部分」は、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物と、任意の連続するタンパク質、ペプチド、またはペプチド模倣物（例えば、治療用タンパク質またはプロアポトーシス性ペプチド）の中の残基の総数を意味すると理解される。
【００５０】
本明細書中で開示されるように、ペプチドである配列番号１および２は、心臓の内皮細胞上で発現され、他の組織においては同じ程度では発現されない標的「受容体」を認識する。本明細書中でＨＬＰ／ＣＲＩＰ２と呼ばれるこの標的受容体の内皮細胞および組織選択的発現は、ペプチドである配列番号１および２、ならびに関連ペプチドおよびペプチド模倣物、さらには、類似の結合特異性を有している他の分子の選択的ホーミング活性の根拠を構成する。これらの発見に基づくと、配列番号１および２とは構造的に無関係であるが、特異的ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２結合活性を有している分子もまた、心臓血管に対する選択的ホーミングの特徴を共有していることが明らかである。このような分子は、例えば、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２を発現する細胞（例えば、本明細書中に開示されるＨＬＰ／ＣＲＩＰ２でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞）に対して特異的に結合する、あるいは、そのような細胞に対する結合について配列番号１または２と競合する能力によって同定することができる。心臓血管に対する選択的ホーミングは、例えば、実施例２において本明細書中に記載されるように、容易に確認することができる。
【００５１】
したがって、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてシステインリッチタンパク質２（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２；配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子が提供される。１つの実施形態においては、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子は、抗体またはその抗原結合断片以外の分子である。さらなる実施形態においては、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子は、ペプチドまたはペプチド模倣物である。本明細書中で開示されるＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に結合する分子であるＣＲＰＰＲ（配列番号１）およびＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）に加えて、別の構造的に関係しているかまたは構造的には無関係であるホーミング分子の同定のためのスクリーニング方法もまた、本明細書において以下に提供される。
【００５２】
心臓血管に選択的にホーミングする分子の別の標的受容体もまた、本明細書中で同定されている。受容体クローン９（配列番号２７）は、心臓ホーミングペプチドである配列番号５および６に特異的に結合する受容体として同定されており、心臓血管に選択的にホーミングする、これらのペプチド、ならびに、別のペプチド、ペプチド模倣物、および類似の結合活性を有している他の分子の能力についての根拠を構成する。上記から、配列番号５または６とは構造的には関係がないが、特異的受容体クローン９（配列番号２７）結合活性を有している分子もまた、心臓血管に対する選択的ホーミングの特徴を有していることが明らかである。このようなホーミング分子は、受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するか、あるいは受容体クローン９（配列番号２７）に対する結合について配列番号５または６と競合する能力によって同定することができる。特異的結合は、精製された配列番号２７、または、例えば、配列番号２７をコードする核酸分子（例えば、配列番号２６）でトランスフェクトされた細胞を使用してアッセイすることができる。
【００５３】
上記に基づいて、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そして受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子が提供される。１つの実施形態においては、受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子は、抗体またはその抗原結合断片以外の分子である。さらなる実施形態においては、受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するホーミング分子は、ペプチドまたはペプチド模倣物である。受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合する例示的なペプチドおよびペプチド模倣物が本明細書中で開示され、そして心臓血管に選択的にホーミングして、受容体クローン９（配列番号２７）に特異的に結合するさらに別のホーミング分子の同定に適しているスクリーニング方法が以下に提供される。
【００５４】
本明細書中にさらに開示されるように、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号７、８、および９に特異的に結合するポリペプチド）の内皮細胞および心臓での選択的発現により、これらのペプチドおよび別のペプチド、ペプチド模倣物、ならびに類似する結合活性を有している他の分子の、心臓血管に選択的にホーミングする能力についての根拠が構成される。上記から、配列番号７、８、または９に対して構造的には関係していないが、特異的Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８結合活性を有している分子もまた、心臓血管に対する選択的ホーミングの特徴を共有していることが明らかである。このようなホーミング分子は、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合するか、またはＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に対する結合について配列番号７、８、もしくは９と競合する能力によって同定することができる。特異的結合は、精製されたＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、または例えば、細胞（例えば、以下の実施例に開示されるＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞）を使用してアッセイすることができる。
【００５５】
心臓ホーミング受容体としてのＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８の同定に基づいて、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子が提供される。１つの実施形態においては、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子は、抗体またはその抗原結合断片以外の分子である。さらなる実施形態においては、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子は、ペプチドまたはペプチド模倣物である。Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する例示的なペプチドおよびペプチド模倣物が本明細書中で開示される。さらに、心臓血管に選択的にホーミングして、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するさらに別のホーミング分子の日常的に行われている同定に適しているスクリーニング方法が、本明細書中で以下に提供される。
【００５６】
ペプチドＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）は、心臓の内皮細胞上で選択的に発現される別の標的「受容体」を認識する。ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）の内皮細胞および組織選択的発現により、ペプチドである配列番号１１、さらには関連ペプチド、ペプチド模倣物、および類似する結合特異性を有している他の分子が心臓血管に選択的にホーミングすることができる。このようなホーミング分子には、ペプチドである配列番号１１とは構造的には無関係であるが、これもまたＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質である配列番号３３に特異的に結合する分子が含まれる。上記を考慮すると、心臓血管に選択的にホーミングする別の分子を、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（精製されたＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質を含む）または細胞表面上にＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質を発現する細胞に特異的に結合する、またはそれらに対する結合について配列番号１１と競合するそれらの能力によって同定することができることは明らかである。
【００５７】
ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）が心臓ホーミング受容体であるという知見から、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子が提供される。１つの実施形態においては、配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子は、抗体またはその抗原結合断片以外の分子である。別の実施形態においては、配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子は、ペプチドまたはペプチド模倣物である。配列番号３３に特異的に結合する例示的なペプチドおよびペプチド模倣物が本明細書中で開示され、心臓血管に選択的にホーミングして、配列番号３３に特異的に結合するさらに別のホーミング分子の同定に適しているスクリーニング方法も本明細書中に開示される。
【００５８】
別の標的受容体であるｂｃ１０が、配列番号１２および１３の特異的結合活性によって本明細書中でさらに同定された。この受容体の内皮細胞および心臓での選択的発現は、ペプチドである配列番号１２および１３、さらには関連ペプチド、ペプチド模倣物、および類似する結合特異性を有している他の分子の選択的ホーミング活性の根拠を構成する。本明細書中に開示される知見に基づいて、当業者は、配列番号１２および１３とは構造的には無関係である分子もまた、それらがｂｃ１０に対する特異的結合の特徴を共有している場合には、心臓血管に選択的にホーミングできることを理解する。したがって、さらに別のホーミング分子を、標的受容体ｂｃ１０（これは、例えば、精製されたｂｃ１０、またはｂｃ１０を発現する細胞（例えば、ｂｃ１０でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞）の形態で提供され得る）に特異的に結合する、または標的受容体ｂｃ１０に対する結合について配列番号１２もしくは１３と競合する能力によって同定することができる。心臓血管への選択的ホーミングは、例えば、実施例２において本明細書中に記載されるように、容易に確認することができる。
【００５９】
ｂｃ１０がペプチドである配列番号１２および１３の同種受容体であることの発見に基づいて、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子が提供される。これは、抗体またはその抗原結合断片以外の分子である。別の実施形態においては、本発明により、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子が提供され、これは、ペプチドまたはペプチド模倣物である。ペプチドである配列番号１２および１３、ならびにその保存的変異体は、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する分子として本明細書中で開示される。加えて、他のホーミング分子（ホーミングペプチドおよびペプチド模倣物を含むがこれらに限定はされない）の同定に適しているスクリーニング方法が、さらに以下に開示される。
【００６０】
便宜上、本明細書中で同定された５つの標的受容体：ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０は、まとめて「心臓ホーミング受容体」と呼ばれる。
【００６１】
上記に示されるように、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングする種々のホーミング分子が提供される。本明細書中で使用される場合は、用語「分子」は、低分子薬剤のような高分子または非高分子有機化合物；ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくはオリゴヌクレオチドのような核酸分子；ペプチドまたはペプチド模倣物；あるいは、抗体もしくは成長因子受容体またはその断片（例えば、抗原結合ドメインを含む抗体のＦｖ、Ｆｄ、もしくはＦａｂ断片）のようなタンパク質を意味するように広く使用される。１つの実施形態においては、分子は抗体またはその抗原結合断片以外の有機化合物である。別の実施形態においては、分子はペプチドまたはペプチド模倣物である。
【００６２】
用語「ホーミング分子」は、本明細書中で使用される場合は、ほとんどの他の組織および血管よりも心臓血管に対してインビボで選択的に局在化する任意の分子を意味する。同様に、用語「ホーミングペプチド」または「ホーミングペプチド模倣物」は、ほとんどの他の組織および血管よりも心臓血管に対してインビボで選択的に局在化するペプチドまたはペプチド模倣物を意味する。
【００６３】
用語「選択的にホーミングする」は、分子に関して本明細書中で使用される場合は、ホーミング分子が、インビボで、ほとんどの他の組織および血管と比較して心臓血管に対して優先的に選択的に局在化することを意味する。選択的ホーミングは、一般的には、脳、肺、腎臓、および筋肉のような他の組織と比較して、心臓血管における少なくとも２倍多い局在化を特徴とする。ホーミング分子は、多くまたはほとんどの非腫瘍組織と比較して、心臓血管に対する５倍、１０倍、２０倍、またはそれ以上の優先的な局在化を特徴とし得る。ホーミング分子は、心臓血管への選択的ホーミングに加えて、心臓の外にある血管もしくは組織、または心臓の外にある細胞の小さい集団にも、一部ホーミングすることができることが理解される。
【００６４】
上記で議論されるように、本発明のホーミング分子は、本発明の心臓ホーミング受容体の１つに特異的に結合する。本明細書中で使用される場合は、用語「特異的に結合する」または「特異的に結合している」は、非特異的相互作用とは測定できる程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、対照分子（通常は、結合活性を有していない類似する構造の分子）の結合と比較して１つの分子の結合を決定することによって、測定することができる。特異的結合はまた、ホーミング分子が、同種受容体を発現しない細胞よりも、同種の心臓ホーミング受容体（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０）でトランスフェクトされた細胞に対して測定できる程度に高い親和性を有する場合にも同定することができる。測定できる程度の高い親和性は、例えば、対照細胞と比較して、同種受容体でトランスフェクトされた細胞に対する少なくとも１００倍、２００倍、３００倍、５００倍、またはそれ以上の増大であり得る。結合特異性はまた、例えば、既知の受容体結合分子を用いた競合阻害によっても確認することができる。
【００６５】
さらに、用語「特異的に結合している」には、本明細書中で使用される場合には、低い親和性の特異的結合および高い親和性の特異的結合の両方が含まれる。特異的結合は、例えば、少なくとも約１０−４ＭのＫｄを有している低い親和性のホーミング分子によって示され得る。例えば、心臓ホーミング受容体が２つ以上の結合部位を有している場合には、低い親和性を有しているホーミング分子は、心臓血管を標的化するために有用であり得る。特異的結合はまた、高い親和性のホーミング分子（例えば、少なくとも約１０−５ＭのＫｄを有しているホーミング分子）によって示される場合もある。このような分子は、例えば、少なくとも約１０−６Ｍ、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０−１０ＭのＫｄを有し得るか、あるいは、少なくとも約１０−１１Ｍもしくは約１０−１２Ｍ、あるいはそれ以上のＫｄを有する場合もある。低い親和性のホーミング分子と高い親和性のホーミング分子の両方が有用であり、本発明に含まれる。低い親和性のホーミング分子は、ウイルスおよび他の粒子を含む多価結合体（これに限定はされない）を標的化することにおいて有用であり得る。高い親和性のホーミング分子は、多価結合体および一価結合体（これらに限定はされない）を標的
化することにおいて有用である。
【００６６】
それぞれが心臓血管に選択的にホーミングする少なくとも２つのホーミング分子が組み込まれている多価結合体もまた、本明細書中で提供される。特定の実施形態においては、本発明の多価結合体には、少なくとも１０種類、または少なくとも１００種類のそのようなホーミング分子が含まれる。種々の治療薬が本発明の多価結合体に有用であり、これには、ファージ、および以下にさらに記載される他の治療薬が含まれるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、本発明により、それぞれが心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）、受容体クローン９（配列番号２７）、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）、またはｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する、少なくとも２つのホーミングペプチドまたはペプチド模倣物を含む多価結合体が提供される。別の実施形態においては、このような結合体には、それぞれが心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）、受容体クローン９（配列番号２７）、Ｓｉｇｉ
ｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）、またはｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する、少なくとも１０個のホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。なお別の実施形態においては、本発明の結合体には、それぞれが心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）、受容体クローン９（配列番号２７）、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）、またはｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する、少なくとも１００個のホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。
【００６７】
特異的な実施形態においては、本発明の多価結合体には、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）、受容体クローン９（配列番号２７）、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）、またはｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する、２個以上、３個以上、５個以上、１０個以上、２０個以上、３０個以上、４０個以上、５０個以上、１００個以上、２００個以上、３００個以上、４００個以上、５００個以上、または１００個以上のホーミング分子が含まれる。１つの実施形態においては、複数のホーミング分子が、同じ心臓ホーミング受容体に特異的に結合する。別の実施形態においては、複数のホーミング分子が同じアミノ酸配列を有している。さらなる実施形態においては、多価結合体には、同じではないアミノ酸配列を有している複数のホーミング分子が含まれる。複数のホーミング分子が組み込まれている本発明の多価結合体に有用な部分としては、ファージ；レトロウイルス；アデノウイルス；アデノ随伴ウイルス；および他のウイルス；細胞；リポソーム；ポリマーマトリックス；非ポリマーマトリックス、または金粒子のような粒子；マイクロデバイス；ナノデバイス；ならびにナノスケールの半導体材料が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００６８】
本発明の多価結合体には、例えば、それぞれが心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）、受容体クローン９（配列番号２７）、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）、またはｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する、少なくとも２つのホーミング分子に連結させられたリポソームまたは他のポリマーマトリックスが含まれ得る。所望される場合には、リポソームまたは他のポリマーマトリックスは、少なくとも１０個、または少なくとも１００個のこのようなホーミング分子に連結させることができる。このような多価結合体に有用であるホーミング分子には、例えば、配列番号１、２、７、８、９、１１、１２、もしくは１３、あるいは、そのような配列の保存的変異体またはペプチド模倣物が、別々に含まれ得る。例えば、リン脂質または他の脂質から構成されるリポソームは、作成および投与することが比較的簡単である、非毒性であり、生理学的に許容される、代謝可能な担体である（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８４）））。当業者は、本発明の多価結合体においては、リポソームまたは他のポリマーマトリックスにはさらに、所望される場合には、治療薬、抗血管形成薬、抗炎症薬、または免疫抑制剤（これらに限定はされない）のような別の成分も含まれ得ることを理解する。
【００６９】
本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患を処置する方法が提供される。本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。本発明の方法に有用な抗体としては、モノクローナル抗体および生物学的活性を有している抗体が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明の方法が心臓血管に対して１つの部分を指向させるために使用される場合は、この部分は、検出可能な部分または治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、またはウイルスベクターであるが、これらに限定はされない）であり得るが、これらに限定はされない。部分および心臓血管疾患については、本明細書中で以下にさらに記載される。
【００７０】
本発明により、また、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号２７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患の処置方法も提供される。本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号２７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。本発明のこのような方法においては、抗体は、モノクローナル抗体または生物学的活性を有している抗体であり得るが、これらに限定はされない。本発明の方法が心臓血管に対して１つの部分を指向させるために使用される場合は、この部分は、検出可能な部分または治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、またはウイルスベクターであるが、これらに限定はされない）であり得るが、これらに限定はされない。
【００７１】
本発明により、また、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患の処置方法も提供される。さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が、本明細書中で提供される。本発明の方法においては、抗体は、モノクローナル抗体または生物学的活性を有している抗体であり得るが、これらに限定はされない。上記で議論されるように、本発明の方法が心臓血管に対して１つの部分を指向させるために使用される場合は、この部分は、検出可能な部分または治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、またはウイルスベクターであるが、これらに限定はされない）であり得るが、これらに限定はされない。
【００７２】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患の処置方法が、本明細書中で提供される。心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法もまた、本明細書中によって提供される。本発明に有用な抗体としては、モノクローナル抗体および生物学的活性を有している抗体が挙げられるがこれらに限定はされない。心臓血管に対して１つの部分を指向させるための本発明の方法においては、この部分は、検出可能な部分または治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、またはウイルスベクターであるが、これらに限定はされない）であり得るが、これらに限定はされない。
【００７３】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患の処置方法が提供される。本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法もまた提供される。本発明の方法は、例えば、モノクローナル抗体または生物学的活性を有している抗体を用いて実行することができる。心臓血管に対して１つの部分を指向させるための本発明の方法においては、任意の種々の部分を、ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する抗体に連結させることができる。このような部分としては、さらに、検出可能な部分または治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクター）が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００７４】
本明細書中で使用される場合は、用語「抗体」はその最も広い意味で使用され、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、さらには、少なくとも約１×１０５Ｍ−１の心臓ホーミング受容体に対する結合活性を保持している抗体のポリペプチド断片が含まれる。当業者は、心臓血管に選択的にホーミングする抗体（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片を含むがこれらに限定されない）が、心臓ホーミング受容体に対する結合活性を保持し得、したがって、抗体の定義に含まれることを理解する。加えて、用語「抗体」には、本明細書中で使用される場合は、心臓ホーミング受容体に特異的に結合する、少なくとも１つのＶＨおよびＶＬドメインが通常は含まれている自然界には存在しない抗体ならびに断片（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、および単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））断片が含まれる。このような自然界には存在しない抗体は、固相ペプチド合成を使用して構築することも、組み換えによって生産することも、また、例えば、ファージディスプレイライブラリーもしくは他の組み合わせライブラリー（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（編）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第２版）Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）に記載されているように可変重鎖と軽鎖から構成されるもの）を、例えば、本明細書中で以下に記載されるアッセイを使用してスクリーニングすることによって得ることもできる。
【００７５】
心臓血管に選択的にホーミングする抗体はまた、例えば、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０融合タンパク質、あるいは、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０の一部をコードする合成ペプチドを免疫原として使用して調製することもできる。当業者は、精製されたヒト、マウス、または他のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０（これらは、例えば、配列番号２４、２６、２８、３２、および３４として本明細書中で開示される核酸配列、ならびに、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０の断片およびペプチド部分を使用して、組み換えによって生産することができる）は、心臓血管に選択的にホーミングする、抗ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２抗体、抗Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８抗体、抗ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質抗体、または抗ｂｃ１０抗体を惹起させるための免疫原として有用であり得る。免疫原として有用なＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０の断片としては、抗体を生産するように作用する断片が挙げられるが、これらに限定はされないことが理解される。当業者は、さらに、心臓ホーミング受容体の非免疫原性断片または合成ペプチドを、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）のような担体分子に対してハプテンを結合させることによって免疫原性とすることができることをさらに理解する。加えて、種々の他の担体分子と、担体分子にハプテンを結合させるための方法は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８）に記載されているように当該分野で周知である。
【００７６】
心臓血管に選択的にホーミングする分子の同定と、連結させられた治療薬を心臓血管に対して標的化させるそれらの能力に基づいて、本発明により、心臓血管に対して１つの部分を指向させるための方法と、心臓血管疾患を処置する方法が提供される。本発明により、例えば、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。本発明の方法においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができ、これは例えば、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。１つの実施形態においては、１つの部分を心臓血管に対して指向させるための本発明の方法は、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に依存する。別の実施形態においては、本発明の方法は、アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物に依存する。本発明に有用なホーミングペプチドまたはペプチド模倣物は、状況によっては、立体構造によって拘束される場合がある。さらに、任意の種々の部分が本発明の方法に有用であり、これには、放射性核種および蛍光分子のような検出可能な部分が含まれるが、これらに限定はされない。本発明に有用な部分にはさらに、治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクター）が含まれるが、これに限定はされない。
【００７７】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号２７に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。本発明の方法に有用なホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができ、これは、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。配列番号２７に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が、心臓血管に対して１つの部分を指向させるために有用であり得ることが理解される。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物；ならびに、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明に有用な部分としては、放射性核種および蛍光分子のような検出可能な部分、さらには、治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクター）が挙げられるが、これに限定はされない。
【００７８】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が、本明細書中で提供される。限定ではない例として、本発明の方法に有用なホーミング分子は、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。限定ではないさらなる例として、本発明の方法に有用なホーミング分子は、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。
【００７９】
Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が本発明の方法に有用であり、これには、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物；アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むペプチドおよびペプチド模倣物；ならびに、ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むペプチドおよびペプチド模倣物が含まれるが、これらに限定はされない。このようなホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は、直鎖状である場合も、環状である場合も、また、他の立体構造によって拘束されている場合もあるが、これらに限定はされない。さらに、任意の種々の部分が、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に依存する本発明の方法に有用であり得る。このような部分としては、放射性核種および蛍光分子のような検出可能な部分、さらには、治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクター）が挙げられるが、これに限定はされない。
【００８０】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。限定ではない例として、本発明の方法は、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングするホーミング分子を用いて、または、ペプチドもしくはペプチド模倣物であるホーミング分子を用いて行うことができる。１つの実施形態においては、本発明の方法は、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物を含む結合体を用いて行うことができる。このような方法においては、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物は、状況によっては、立体構造によって拘束される場合がある。任意の種々の部分が本発明の方法に有用であり得、これには、放射性核種および蛍光分子のような検出可能な部分、さらには、治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクター）が含まれるが、これに限定はされない。
【００８１】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた１つの部分を含む結合体が被験体に投与され、それによってこの部分が心臓血管に対して指向させられることによる、被験体の心臓血管に対して１つの部分を指向させる方法が提供される。本発明に有用なホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができ、そしてこれは、ペプチドもしくはペプチド模倣物であり得る。ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が本発明の方法に有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物、ならびに、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。このようなホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は、直鎖状として、環状として、または、他の場合には立体構造によって拘束された構造として有用であり得る。ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子が組み込まれている結合体に依存する本発明の方法は、任意の種々の部分を用いて行うことができる。有用な部分としては、放射性核種および蛍光分子のような検出可能な部分、さらには、治療薬（例えば、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクター）が挙げられるが、これに限定はされない。
【００８２】
本発明により、また、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患を処置する方法が提供される。本発明のこのような方法においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができ、そしてこれは、例えば、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が本発明の方法に有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物、ならびに、アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明に有用なホーミングペプチドまたはペプチド模倣物は、状況に応じて、立体構造によって拘束される場合がある。任意の種々の治療薬が、本発明の方法にしたがって心臓血管疾患を処置するために有用であり得る。治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これに限定はされない。
【００８３】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号２７に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患を処置する方法が、本明細書中で提供される。心臓血管疾患を処置するために有用なホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。配列番号２７に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が本発明の方法に有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物、ならびに、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられる。任意の種々の治療薬が、本発明の方法にしたがって心臓血管疾患を処置するために有用であり得る。このような治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これに限定はされない。
【００８４】
心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患を処置する方法もまた、本明細書中で提供される。本発明の方法においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が本発明の方法に有用であり、これには、ホーミングペプチドおよびペプチド模倣物が含まれるが、これらに限定はされない。このようなホーミング分子は、例えば、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているホーミングペプチドまたはペプチド模倣物；アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているホーミングペプチドまたはペプチド模倣物；ならびに、アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているペプチドおよびペプチド模倣物を有しているホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。心臓血管疾患の処置のための本発明の方法に有用なホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は、例えば、直鎖状である場合も、環状である場合も、または別の方法で立体構造によって拘束される場合もある。任意の種々の治療薬を、本発明の方法においてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させることができる。このような治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これに限定はされない。
【００８５】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患を処置する方法が提供される。限定ではない例として、このような方法は、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性でインビボで心臓にホーミングするホーミング分子を用いて、または、ペプチドもしくはペプチド模倣物であるホーミング分子を用いて、行うことができる。特定の実施形態においては、心臓血管疾患を処置するための本発明の方法は、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物を使用して行われる。本発明の方法に有用であり得る治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これに限定はされない。
【００８６】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてマウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０；配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた治療薬を含む結合体が被験体に投与されることによる、被験体の心臓血管疾患を処置する方法が提供される。本発明に有用なホーミング分子としては、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができるホーミング分子（例えば、ホーミングペプチドおよびペプチド模倣物であるが、これらに限定はされない）が挙げられるが、これらに限定はされない。ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が本発明の方法に従って心臓血管疾患を処置するために有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物、ならびに、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドおよびペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。上記で議論されるように、このようなホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は、状況に応じて、立体構造によって拘束される場合がある。本発明の方法での使用に適している治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、これに限定はされない。
【００８７】
以下でさらに議論されるように、本発明の結合体および方法は、任意の種々の心臓病および心臓血管疾患の処置に有用であり得る。このような心臓病および心臓血管疾患としては、冠動脈疾患（ＣＡＤ）；アテローム性動脈硬化症；血栓症；再狭窄；結節性多発性動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、高安動脈炎、川崎病、およびリケッチア症のような自己免疫性およびウイルス性脈管炎を含む脈管炎；アテローム硬化性動脈瘤；心筋肥大；先天性心疾患（ＣＨＤ）；虚血性心疾患、および狭心症；後天性心臓弁膜症／心内膜疾患；心筋炎を含む原発性心筋症；不整脈；ならびに移植拒絶が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明の方法にしたがって処置される心臓病および心臓血管疾患としては、さらに、代謝性の心筋症および心筋疾患（ｍｙｏｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）（例えば、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、および拘束型心筋症）、ならびに心臓移植が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明のホーミング分子に連結させられた治療薬は、心臓血管の中に高濃度で存在することができ、そしてさらに、心筋に蓄積することができる。したがって、本発明の結合体および方法は、これらの障害、および心臓血管または心筋の他の障害を処置するために有用である。
【００８８】
新しい心臓血管の形成（血管形成）を刺激する治療薬を使用する血管形成をベースとする治療は、本発明の方法にしたがう心臓血管疾患の治療に有用であり得る。血管形成剤は、慢性心筋虚血および急性心筋梗塞を含む虚血性心疾患（これらに限定はされない）の処置に有用であり得る（Ｗａｒｅ  ａｎｄ  Ｓｉｍｏｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．３：１５８−１６４（１９９７））。機械による血管再開通術の候補とはならない重症の血管系の疾患を有している多くの患者には、血管形成をベースとする治療が有効であり得、これには、バイパスするには小さすぎる血管の閉塞を有している患者、管路がない患者、および合併症が原因で外科手術の候補とはならない患者が含まれる。米国およびＥＵの３億１４００万の症例について、血管形成をベースとする治療が有効であり得ると計算されている（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ａｂｒａｍｓ，Ｇｅｎ．Ｅｎｇｉｎ．Ｎｅｗｓ  １８：１（１９８８））。したがって、心臓血管に選択的にホーミングする分子を血管形成剤に連結させることができ、これは患者に投与され、それによって血管形成が刺激され、心臓血管疾患が緩和される。
【００８９】
本発明に有用な血管形成剤はまた、自然界に存在している血管由来増殖因子またはサイトカイン（これは、内皮細胞の増殖または移動を刺激することにより血管形成を誘導または促進する）でもあり得る。本発明に有用な血管形成剤には、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のイソ型、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ（これには、ＶＥＧＦ１２１およびＶＥＧＦ１６５が含まれる）および複数の形態の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２の形態が含まれるが、これらに限定はされない）が含まれるが、これらに限定はされない（Ｒｕｅｌ  ａｎｄ  Ｓｅｌｌｋｅ，Ｓｅｍ．Ｔｈｏｒ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１５：２２２−２３５（２００３）。以下でさらに議論されるように、本発明の血管形成剤および他の治療薬は、タンパク質治療薬として、または遺伝子治療用ベクターを介する核酸治療薬として送達することができる。
【００９０】
ＶＥＧＦ−Ａ（これは、血管透過因子（ＶＰＦ）としてもさらに知られている）もまた、本発明に有用であり得る（Ｄｖｏｒａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４６：１０２９−１０３９（１９９５）；Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：６０３−６０６（１９９６）；Ｏｌｏｆｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：２５７６−２５８１（１９９６）；Ｊｏｕｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１５：２９０−２９８（１９９６）；およびＨａｒａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７０：Ｈ１７９１−１８０２（１９９６））。他のＶＥＧＦ（Ｂ、Ｃ、およびＤ）は、内皮細胞の透過性に影響を及ぼすことのない血管形成活性を有している。ＶＥＧＦをコードするプラスミドＤＮＡの投与により、ステント移植後の血栓形成と内膜肥厚の有意な減少が生じることが示されている（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２９：１３７１−１３７９（１９９７））。本発明に有用な血管形成剤としては、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発された、ｒｈＶＥＧＦと命名されているＶＥＧＦの組み換え体である１６５ｋＤＡのイソ型；ＶＥＧＦの１２１アミノ酸のイソ型をコードする核酸分子（ＢｉｏＢｙｐａｓｓ（登録商標）；ＧｅｎＶｅｃ／Ｐａｒｋｅ  Ｄａｖｉｓ）；ならびに、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、およびＶＥＧＦ−Ｄをコードする核酸が挙げられるが、これらに限定はされない。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ａｂｒａｍｓ，前出、１９９８を参照のこと。
【００９１】
本発明に有用な血管形成剤はまた、ＦＣＦ−１（酸性）、ＦＧＦ−２（塩基性）、ＦＧＦ−４、またはＦＧＦ−５のような、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーでもあり得る（Ｓｌａｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．１９：４３１−４４４（１９９５）；Ｆｏｌｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈｉｎｇ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１０９３１−１０９３４（１９９２））。本発明の結合体または方法において心臓血管に選択的のホーミングする分子に連結させられるＦＧＦは、例えば、ＦＩＢＬＡＳＴ（商標）（トラフェルミン）（Ｓｃｉｏｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）およびＷｙｅｔｈ  Ａｙｅｒｅｓｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｒａｄｎｏｒ，ＰＡ）よって開発されたＦＧＦ−２の組み換え体形態）、またはＧＥＮＥＲＸ（登録商標）、またはＦＧＦ−４をコードするアデノウイルス遺伝子治療ベクター（Ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）およびＳｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ａｂｒａｍｓ，前出，１９９８）によって開発された）であり得る。
【００９２】
本発明に有用な血管形成剤はまた、アンギオポエチン−１（内皮細胞特異的Ｔｉｅ２レセプターチロシンキナーゼを通じてシグナルを伝達する血管形成因子（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ８７：１１６１−１１６９（１９９６））でもあり得る。ＶＥＧＦと同様に、アンギオポエチン−１は正常な血管の発達に不可欠であり、その過剰発現によって血管形成の促進を導く（Ｓｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ８７：１１７１−１１８０（１９９６））。
【００９３】
本発明の結合体または方法に有用な治療薬はまた、血液因子（主に、細胞性の成分を取り込んだ血小板および繊維素）の凝集である血栓の形成を妨げる抗血栓剤でもあり得る。血栓の形成は、粥状斑の存在によって刺激され、急性の虚血性心疾患の症状の発現の主な原因である。本発明に有用な抗血栓剤は、ＩＩｂ／ＩＩＩａインテグリンの阻害因子（Ｃｏｌｌｅｒ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９２：２３７３（１９９５））；組織因子阻害因子；プラスミノーゲン活性化因子または抗血栓剤であり得るが、これに限定はされない。
【００９４】
免疫抑制剤もまた、例えば、心臓移植のレシピエントを処置するための、本発明の結合体および方法に有用であり得る。免疫抑制剤は長期にわたる予防的処置に有用であり得ると理解される。これは、臓器移植のレシピエントについて、通常、彼らの寿命を全うするために、または移植拒絶と一致する１つ以上の症状を示す患者を処置するために、または重篤な拒絶から救うための薬剤としての使用に必要である。本発明の結合体および方法に有用な免疫抑制剤としては、ステロイド（コルチコステロイドおよびプレドニソロンが含まれる）；カルシニューリン阻害因子（例えば、Ｐｒｏｇｒａｆ、Ｎｅｏｒａｌ（商標）、ラパミューン（Ｒａｐａｍｕｎｅ）、シクロスポリンＡ、および他のシクロスポリン）；抗増殖因子（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ、Ｉｍｕｒａｎ（アザチオプリン）、およびＣｅｒｔｉｃａｎ（登録商標）（エベロリムス）が含まれる）；ならびに治療用モノクローナル抗体（例えば、ＯＫＴ３、ＡＴＧＡＭ、サイモグロブリン、および抗胸腺細胞グロブリン、ジクルジマブ（ｄｉｃｌｕｚｉｍａｂ）、およびバシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）が含まれる）が挙げられるが、これらに限定はされない。これらおよび他の免疫抑制剤は本発明の結合体および方法においては、単独で、あるいは、別の免疫抑制剤または他の治療薬と組み合わせて有用であり得る。
【００９５】
抗炎症薬（これは炎症の症状の１つ以上を軽減する分子である）もまた、本発明の結合体および方法に有用である。このような抗炎症薬としては、ステロイド（コルチコステロイドおよび免疫グロブリンが含まれる）、ならびにシクロオキシゲナーゼ阻害因子および他の非ステロイド系抗炎症薬が挙げられるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、抗炎症薬は、ＡＧＩ−１０６７、コレステロールを低下させる抗炎症薬（ＡｔｈｅｒｏＧｅｎｉｃｓ；Ａｔｌａｎｔａ，ＡＬ）である。
【００９６】
抗不整脈薬もまた、例えば、心臓の不整脈（これは心臓の正常な周期的であり整然とした電気機械的な活動が破壊される障害である）を処置するための、本発明の結合体および方法に有用であり得る。したがって、本発明の結合体または方法においては、治療薬は、例えば、Ｖｕｋｍｉｒ，Ａｍ．Ｊ．Ｅｍｅｒ．Ｍｅｄ．１３：４５９−４７０（１９９５）；Ｇｒａｎｔ，ＰＡＣＥ  ２０：４３２−４４４（１９９７）；Ｍａｎｎ．Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｏｐｉｎ．１３：３２５−３４３（１９９５）；またはＬｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１３０：６３２−６４０（１９９５）に記載されている局所麻酔薬（クラスＩ剤（ｃｌａｓｓ  Ｉ  ａｇｅｎｔ）、交感神経アンタゴニスト（クラスＩＩ剤）、抗細動薬（クラスＩＩＩ剤）、カルシウムチャンネル薬（クラスＩＶ剤）、または陰イオンアンタゴニスト（クラスＶ剤）のような抗不整脈薬であり得る。速いナトリウムチャンネルアンタゴニストとして作用する局所麻酔剤（例えば、抗不整脈薬）である抗不整脈薬は、プロカインアミド、キニジン、またはジソピラミド；リドカイン、フェニトイン、トカイニド（ｔｏｃａｉｎｉｄｅ）、またはメキシレチン（ｍｅｘｉｌｅｔｉｎｅ）；あるいは、エンカイニド（ｅｎｃａｉｎｉｄｅ）；フレカイニド（ｆｌｅｃａｉｎｉｄｅ）；ロルカイニド（ｌｏｒｃａｉｎｉｄｅ）；プロパフェノン（ｐｒｏｐａｆｅｎｏｎ）（ＩＩＩ）、またはモリシジン（ｍｏｒｉｃｉｚｉｎｅ）（Ｖｕｋｍｉｒ，前出、１９９５）であり得るが、これらに限定はされない。抗不整脈薬はまた、交感神経アンタゴニスト（β−アドレナリン作用性アンタゴニスト）（例えば、プロプラノロール、エソモロール、メトプロロール、アテネラール、アセブトロールであるが、限定はされない）、または長い作用電位期間（ＡＰＤ）によって作用する抗細動薬（例えば、ブレチリウム、アミオダロン、ソタロール（ＩＩ）、またはＮ−アセチルプロカインアミド）でもあり得る（Ｖｕｋｍｉｒ，前出，１９９５）。本発明の結合体または方法において治療薬として有用であり得るさらなる抗不整脈薬としては、カルシウムチャンネル薬（例えば、ベラパミル、ジルチアゼム、およびベプリジル）および陰イオンアンタゴニスト（例えば、アリニジン（Ｖｕｋｍｉｒ，前出，１９９５）が挙げられるが、これらに限定はされない。当業者は、当該分野で公知であるこれらおよび他の抗不整脈薬が、本発明の結合体または方法において心臓の不整脈を処置するために有用な治療薬であり得ることを理解する。
【００９７】
カルシウムチャンネルブロッカー（ＣＢＢ）としても知られているカルシウムアンタゴニストは、多くの心臓血管疾患に有用な作用を有しており、平滑筋細胞の増殖および移動の強力な阻害因子として作用する。これらの治療薬をアテローム性動脈硬化症および他の心臓血管疾患の処置に有用にするさらなる特性としては、血管壁へのカルシウムの流入を阻害するそれらの能力；細胞外マトリックスの合成を減少させるそれらの能力；低密度リポタンパク質の取り込みおよび崩壊を促進するそれらの能力；酸化による修飾からリポタンパク質を保護するそれらの能力；内皮細胞機能を維持するそれらの能力；ならびに、血小板の活性化を阻害するそれらの能力が挙げられる。カルシウムアンタゴニストのうち、アムロジピン（ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）は、血管選択性を有している治療薬である（Ｍａｒｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．６２（補遣）：Ｓ１７−Ｓ２２（１９９７）；Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．６２（補遣）：Ｓ８５−Ｓ９０（１９９７））。本発明において有用な治療薬として作用することができる別のカルシウムアンタゴニストとしては、ニカルジピン、ニフェジピン、プロパノロール、二硝酸イソソルバイド、ジルチアゼム、およびイスラジピン（Ｎａｙｌｅｒ（編）Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ、１５７−２６０頁  Ｌｏｎｄｏｎ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）；Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．６２（補遣）：Ｓ９−Ｓ１５（１９９７））が挙げられるが、これらに限定はされない。ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰ濃度を上昇させる治療薬は、血管平滑筋細胞の応答性または増殖を低下させ、そして心臓血管に選択的にホーミングする分子に連結させられた場合に有用であり得る。このような治療薬としては、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害因子シロスタソール（ｃｉｌｏｓｔａｓｏｌ）および内皮細胞由来酸化窒素（ＮＯ）またはＮＯを生じる血管拡張剤が挙げられるが、なおもこれらに限定はされない。例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓ．Ｐｈａｒｍ．２０：９００−９０６（１９９２）；およびＣｏｒｎｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６７：Ｃ１４０５−１４１３（１９９４）を参照のこと。
【００９８】
本発明に有用な治療薬はまた、抗ウイルス剤または抗生物質である場合もある。多数の実験によって、心内膜炎、アテローム性動脈硬化症、および再狭窄の、特定の細菌感染およびウイルス感染（特に、サイトメガロウイルス、および肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））との関係が報告されている（Ｃｈｅｎｇ  ａｎｄ  Ｒｉｖｅｒａ，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  ３２：１３１０−１３１６（１９９８））。心臓移植患者またはアテローム性動脈硬化症を発症するリスクが高い他の患者における予防的使用のためには、患者には、ガンシクロビルのような抗ウイルス剤に連結させられた、心臓血管に選択的にホーミングする分子を含む結合体が投与され得る。本発明の結合体または方法に含めることができるさらなる抗ウイルス剤としては、リバビリン（ビラゾール、１−β−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシミド）および組み換え体であるヒト白血球ＩＦＮ−α  Ａ／Ｄ（Ｍａｔｓｕｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ７１：８３４−８３９（１９８５）；Ｍａｔｓｕｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．９：１３２０−１３２５（１９８７））が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００９９】
これらの結合体および方法は、アテローム性動脈硬化症（これは、その結果と組み合わせて、西欧諸国において疾患および死亡の最も一般的であり重要な原因を構成している）を処置するためにも有用であり得る。他の閉塞性の血管疾患と同様に、アテローム性動脈硬化症は、脂質、炎症性細胞、血管平滑筋細胞、および細胞外マトリックスタンパク質の、内皮内層と中間層との間の血管内膜空間の中での異常な蓄積（プラーク形成）を特徴とする。特に、内皮細胞の損傷によっては、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の内膜への侵入が可能となる。脂質は内膜中にあるマクロファージによって取り込まれ、酸化型ＬＤを取り込む受容体非依存性の経路によって、内膜マクロファージの中に脂質が過剰に蓄積する。マクロファージは内膜の中に脂質を放出し、そして増殖を刺激するサイトカインを分泌する。筋繊維芽細胞の特徴を有している内膜細胞は、コラーゲンを分泌し、これによって、場合によってはプラークの繊維化が生じる。病変が発達するにともなって、中膜の圧迫萎縮が生じ、弾性板が壊れる。さらなるコラーゲンの蓄積によっては、プラークに対して密度の高い繊維性被膜が形成され（繊維性脂質プラーク）、これには、遊離の脂質、さらには、マクロファージ中の脂質が含まれる。プラークの壊れやすい内皮細胞は多くの場合には潰瘍を生じ、これにより、血小板の凝集、および血栓症が生じる。血小板由来増殖因子のような増殖因子はさらに、細胞増殖を刺激することによってプラークを生じさせる。
【０１００】
血管内膜の平滑筋細胞の増殖促進により、筋内膜の過形成（ｍｙｏｉｎｔｉｍａｌ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）および血管狭窄が生じる。内膜新生において役割を担っている異常な細胞増殖は、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子−β１（ＴＧＦ−β１）、またはアンギオテンシンＩＩのような特異的な増殖因子によって生じ得る（Ｒｏｓｓ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５７：７９１（１９９５）；Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７７：４４５（１９９５）；およびＧｉｂｂｏｎｓ  ａｎｄ  Ｄｚａｕ，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３０：１４３１（１９９４））。
【０１０１】
心臓血管疾患（例えば、血管形成後の内膜過形成）を処置するための本発明の結合体および方法に有用な治療薬は、新内膜平滑筋細胞の増殖を制限することによって血管疾患を軽減または予防する、増殖阻害因子であり得る。例えば、ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｔｋ）遺伝子および全身性ガンシクロビルを、増殖中の細胞を死滅させ、内膜新生を制限するために使用することができる。１つの研究においては、ブタの大腿動脈が、ｔｋをコードするアデノウイルスベクターに感染させられ、そして、ガンシクロビルに暴露された後には、バルーン損傷後に見られる新内膜の肥厚が、５０〜８７％減少した（Ｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６５：７８１−７８４（１９９４）；Ｇｕｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：１０７３２−１０７３６（１９９４）；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１：１７２−１８１（１９９５）；およびＳｉｍａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９２：１−５０１（１９９５）もまた参照のこと）。したがって、本発明に有用な治療薬は細胞増殖抑制剤であり得、例えば、ガンシクロビルと組み合わせたチミジンキナーゼであり得るが、これに限定はされない。
【０１０２】
内膜新生を制限するためのさらなる治療薬もまた当該分野で公知であり、これには、細胞周期タンパク質およびガン原遺伝子を阻害する遺伝子が含まれる（Ｓｉｍａｒｉ  ａｎｄ  Ｎａｂｅｌ，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１：７７−８３（１９９６））。このような治療薬としては、腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３および網膜芽細胞腫）、ならびに、ｂｃｌ−ｘをコードする遺伝子、ｒａｓおよび一酸化窒素合成酵素の変異体形態が挙げられるが、これらに限定はされない。限定ではない例として、網膜芽細胞腫遺伝子産物（Ｒｂ）は、多くの哺乳動物細胞型において細胞増殖を阻害し、そして活性のあるＲｂをコードする組み換え体アデノウイルスの損傷を受けたラットの頚動脈およびブタの腸骨動脈への導入によっては、内膜新生が減少する（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６７：５１８−５２２（１９９４））。ｐ５３の遺伝子導入も、同様に、血管平滑筋細胞の増殖を阻害することが示されている（Ｙｏｎｅｍｉｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８２：１４７−１５６（１９９８）；Ｍｕｌｌｅｒ，Ｐｒｏｇ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓ．Ｄｉｓ．４０：１１７−１２８（１９９７）もまた参照のこと）。ドミナントネガティブであるｒａｓ変異体の直接の遺伝子導入によってもまた、ラットの頚動脈およびブタの腸骨動脈モデルにおいては、バルーン損傷後の内膜形成が阻害された（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６：２２６０−２２６８（１９９５））。ラットの頚動脈損傷モデルにおいては、一酸化窒素合成酵素の遺伝子導入によってもまた、内膜形成が制限された（ｖｏｎ  ｄｅｒ  Ｌｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：１１３７−１１４１（１９９５））。当業者は、細胞増殖抑制物質もまた、本発明の結合体または方法において治療薬として有用であり得ることを理解する。
【０１０３】
おとりオリゴヌクレオチド、または細胞性の標的（例えば、Ｅ２Ｆもしくは種々のサイクリンの１つ）に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドもまた、本発明の方法において新内膜の増殖を制限するために有用な治療薬であり得る（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８２：１０２３−１０２８（１９９８）；およびＭａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９６：１−４（１９９７））。増殖停止ホメオボックス遺伝子であるｇａｘ（これは、インビボでの血管の損傷の後に血管平滑筋細胞において迅速にダウンレギュレートされる）もまた、内膜過形成を阻害するために有用な治療薬であり得る（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１１：１６７４−１６８９（１９９７）；およびＳｋｏｐｉｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８０：４５２−４６２（１９９７））。本発明の結合体または方法において内膜過形成を制限することに有用であり得るさらなる治療薬もまた、当該分野で公知である（例えば、Ｌａｉｔｉｎｅｎ  ａｎｄ  Ｙｌa−Ｈｅｒｔｔｕａｌａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄ．９：４６５−４６９（１９９８）を参照のこと）。
【０１０４】
本発明の結合体または方法はまた、その後に血管形成術（バルーンが閉塞した血管に挿入され、その後、狭窄の領域を拡張させるために膨らませられる手順）が続けられ得る、内腔の直径の再度の狭窄である再狭窄を処置するためにも有用であり得る。再狭窄は、３ヶ月から６ヶ月の時間的経過で約３０から５０％の症例において生じ、これには、新内膜内の細胞性過形成、血管壁の中の血栓の組織、および血管の直径全体の収縮が含まれる。血管形成術によっては、通常は血管平滑筋の移動および増殖のパラクリン阻害因子を生じる、内皮細胞の血管が露出させられる。
【０１０５】
一酸化窒素の欠乏は、十分に機能しない血管緊張低下および接着性の増大に関係しており、そのことによって血管組織においてアテローム性動脈硬化症の病変が形成されやすくなる（Ｇｉｂｂｏｎｓ  ａｎｄ  Ｄｚａｕ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：６８９−６９３（１９９６））。本発明の結合体および方法に有用な治療薬としては、内皮細胞型の一酸化窒素（ＮＯ）合成酵素剤（これは、一酸化窒素合成酵素活性を高める物質である）が挙げられるが、これに限定はされない。一酸化窒素（ＮＯ）活性を高めるこのような治療薬としては、一酸化窒素合成酵素遺伝子、および一酸化窒素ドナー薬が挙げられるが、これらに限定はされない。内膜新生のラットモデルにおけるバルーン損傷後の血管への一酸化窒素合成酵素遺伝子のトランスフェクションによっては、一酸化窒素の生成と、細胞増殖、移動、内膜新生に必要なマトリックスの生産の実質的な阻害が生じた（ｖｏｎ  ｄｅｒ  Ｌｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，前出，１９９５）。臨床試験もまた、一酸化窒素ドナー薬を、一酸化窒素活性を増強するため、および再狭窄を処置するために使用できることを示している（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９０：４（１９９４））。
【０１０６】
本発明の結合体および方法はまた、鬱血性心不全（ＣＨＦ）を処置するために使用することもでき、これは、米国だけでもおよそ５００万人が罹患している障害である。鬱血性心不全は、心臓がアテローム性動脈硬化症または他の症状（例えば、高血圧、心筋梗塞、または心臓弁膜症）によって損傷した場合に生じる。心不全の心臓は十分な機能を果たすことができず、体液貯留、息切れ、および疲労が生じる。したがって、鬱血性心不全の処置については、心臓血管に選択的にホーミングする分子を、治療薬（例えば、組み換え体である可溶性ＴＮＦおとり受容体、Ｅｍｂｒｅｌ（登録商標）（Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．；Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）のようなＴＮＦ阻害因子であるがこれに限定はされない）に連結させることができる。
【０１０７】
エンドセリンは血管を収縮させるポリペプチドであり、また、鬱血性心不全において増加するポリペプチドでもある。したがって、心臓血管選択的にホーミングする本発明の分子を、エンドセリン阻害因子（例えば、低分子薬剤、ＴＢＣ１１２５１）である治療薬に連結させることができる。この薬剤（これは、Ｔｅｘａｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐ．，によって開発された）は、エンドセリンＡ受容体の結合を阻害し、そして平滑筋細胞の弛緩を促進する。ＴＢＣ１１２５１は、中度から重症の鬱血性心不全を有している患者において有意な改善をもたらす（Ｐｏｔｅｒａ，Ｇｅｎ．Ｅｎｇｉｎ．Ｎｅｗｓ  １８：１２（１９９８））。
【０１０８】
本発明の結合体または方法において使用される治療薬はまた、遺伝性の心疾患のための置換遺伝子治療ベクターでもあり得る。このような遺伝性疾患は、例えば、心筋の遺伝性疾患であり得、例えば、Ｘ染色体に連鎖した拡張型心筋症、肥大型心筋症、ＱＴ延長症候群、または、それについての疾患を引き起こす変異が同定されている別の疾患であり得る（Ｂｏｗｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓ．Ｒｅｓ．３５：４２２−４３０（１９９７））。１つの実施形態においては、本発明の結合体または方法は、所望される置換遺伝子産物をコードする核酸分子を含むアデノウイルス遺伝子治療用ベクターに連結させられた、心臓血管に選択的にホーミングする分子を用いて行われる。
【０１０９】
治療薬は、例えば、Ｈａｒａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：６２３−６３０（１９９４）に記載されているタンパク質として送達され得る。マイクロスフェア（例えば、それに対してｂＦＧＦのような血管新生因子がＳＯ３残基を介して可逆的に吸着させられている７μｍの直径のマイクロスフェア）もまた、心臓血管疾患の処置のためのマイクロスフェアを選択的に送達するために、心臓血管に選択的にホーミングする分子に連結させることができる。このようなマイクロスフェアは末梢の微小循環に留まり、全体的な流れを妨害することはなく、そして１週間かけてゆっくりと放出される（Ａｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：１５９−１６２（１９９８）；Ｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔａａｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：１３４（１９９８）もまた参照のこと）。生分解性マイクロスフェアの単回注射は、血管形成因子または他の治療薬を送達するために使用することができる。これらは、注射後１ヶ月または数ヶ月かけて放出され、薬剤の放出速度および期間は、ポリマーのタイプおよびマイクロスフェアの大きさのような要因によって制御される（Ｍａｕｌｄｉｎｇ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ６：１６７−１７６（１９８７）；Ｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔａｂｉｂｉ，３１５−３３９頁  Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ（編），Ｔｒｅａｔｉｓｅ  ｏｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２））。遺伝子治療用ベクターはまた、血管形成因子または他の治療薬をコードする核酸分子を送達するために、心臓血管に選択的にホーミングするホーミング分子に連結させることができる（例えば、Ｉｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎ
ｃｅｔ  ３４８：３７０−３７４（１９９６）；Ｇｉｏｒｄａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａ
ｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２：５３４−５３９（１９９６）を参照のこと）。
【０１１０】
本発明の方法において心臓病または心臓血管疾患を処置するための種々の適切な遺伝子治療方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｌ．４１：３９−４６（１９９７）を参照のこと）。限定ではない例として、ウイルスベクター（レトロウイルスベクターおよびアデノウイルスベクターが含まれる）は、心臓血管に選択的にホーミングする分子に連結させられた場合に、遺伝子の送達に有用であり得る。このような遺伝子治療用ベクターには、治療薬（例えば、ＶＥＧＦまたはＦＧＦのような血管形成因子であるが、これらに限定はされない）をコードする核酸分子が含まれ得る。ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、および他の血管形成因子の形態を用いる遺伝子治療は、例えば、Ｓｙｌｖｅｎ，Ｄｒｕｇ  ｏｆ  Ｔｏｄａｙ  ３８：８１９−８２７（２００２）；Ｓｙｍｅｓ，Ｊ．Ｃａｒｄ．Ｓｕｒｇ．１５：２８３−２９０（２０００）；およびＧｒｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．９２（補遣）：２４Ｎ−３１Ｎ（２００３）に記載されているように、当該分野では周知である。Ａｄ５ＦＧＦ−４と記載される、複製不能である血清型５アデノウイルス（ここでは、Ｅ１ＡおよびＥ１Ｂ遺伝子が、サイトメガロウイルスプロモーターの制御下にあるヒト線維芽細胞増殖因子−４（ＦＧＦ−４）遺伝子によって置き換えられている）を用いる血管形成遺伝子治療は、慢性安定狭心症のヒトにおいて、プラセボを対照とした試験において有用な効果を有していた（Ｇｒｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，前出，２００３）。Ｓｉｍａｒｉ  ａｎｄ  Ｎａｂｅｌ，前出，１９９６；およびＩｎｄｏｌｆｉ  ａｎｄ  Ｃｈｉａｒｉｅｌｌｏ，Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｉａ  ４３：３６５−３７３（１９９８）もまた参照のこと。したがって、１つの実施形態においては、本発明の方法は、治療用遺伝子産物を発現する複製欠損である組み換え体アデノウイルスベクターを利用する。
【０１１１】
上記を考慮すると、種々の治療薬が本発明の方法にしたがう心臓血管疾患の処置に有用であることが理解される。有用な治療薬としては、血管形成薬、抗血栓剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗不整脈薬、腫瘍壊死因子阻害剤、エンドセリン阻害剤、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗生物質、抗ウイルス剤、およびウイルスベクターが挙げられるが、なおもこれらに限定はされない。当業者は、これら、さらには別の公知の、もしくは他の治療薬が、本発明の結合体または方法に組み入れられた場合に、心臓血管に対して選択的に指向させられ得ることを理解する。さらに、医薬心臓病学（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ）の分野の当業者は、これら、および他の治療薬を、本発明の結合体および方法において別々に使用することができ、また、一緒に使用することもできることを理解する。さらに、本発明の結合体には、１つ以上のこのような治療薬が含まれ得、そしてさらに別の成分も、状況に応じて、本発明の結合体に含まれ得ることが理解される。一例として、いくつかの場合には、ホーミング分子と治療薬の間にオリゴペプチドスペーサーを利用することが所望され得る。例えば、Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｇａｒｎｅｔｔ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １０：１−９（１９９５）を参照のこと。
【０１１２】
種々の投与経路が本発明の方法に有用であることがさらに理解される。このような経路には、全身投与と局所投与が含まれ、経口投与、静脈内注射、腹腔内注射、筋肉注射、皮下注射、経皮拡散または電気泳動法、局所注射、および徐放送達デバイス（これには、生体内分解性またはレザーバーをベースとするインプラントのような局所埋め込み型徐放デバイスが含まれる）が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１１３】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた検出可能な部分を含む結合体が被験体に投与され、そして結合体が検出されることによる、被験体の心臓血管を画像化する方法が提供される。心臓血管を画像化するための本発明の方法においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができ、そしてこれは、例えば、ホーミングペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に特異的に結合する種々のホーミング分子が、本発明の方法にしたがって心臓血管を画像化するために有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物、ならびに、アミノ酸配列ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。様々な検出可能な部分が、本発明の上記の方法に有用であり、これには例えば、放射性核種および常磁性イオンが含まれる。
【０１１４】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号２７に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた検出可能な部分を含む結合体が被験体に投与され、そして結合体が検出されることによる、被験体の心臓血管を画像化する方法が、本明細書中で提供される。心臓血管を画像化するための本発明の方法においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。配列番号２７に特異的に結合する種々のホーミング分子が、本発明の方法にしたがって心臓血管を画像化するために有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物、あるいは、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物のような、ホーミングペプチドあるいはペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。様々な検出可能な部分が、心臓血管の画像化に有用であり、これには例えば、放射性核種および常磁性イオンが含まれる。
【０１１５】
本発明により、さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた検出可能な部分を含む結合体が被験体に投与され、そして結合体が検出されることによる、被験体の心臓血管を画像化する方法が提供される。本発明のこのような画像化方法においては、ホーミング分子は、例えば、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができる。さらに、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が、本発明の方法にしたがって心臓血管を画像化するために有用であり得る。このようなホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているホーミングペプチドまたはペプチド模倣物；アミノ酸配列ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているペプチドおよびペプチド模倣物；ならびに、アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明の画像化方法に有用なホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は、例えば、直鎖状である場合も、環状である場合も、また、別の方法で立体構造によって拘束されている場合もあることが認識される。画像化に有用な検出可能な部分としては、放射性核種および常磁性イオンが挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１１６】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして配列番号３３に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた検出可能な部分を含む結合体が被験体に投与され、そして結合体が検出されることによる、被験体の心臓血管を画像化する方法が、本明細書中で提供される。限定ではない例として、本発明の画像化方法は、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングするホーミング分子を用いて、または、ペプチドもしくはペプチド模倣物であるホーミング分子を用いて行うことができる。本発明の画像化方法に有用なホーミング分子としては、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を有しているもののようなホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられるが、これらに限定はされない。心臓血管の画像化のための本発明の方法は、任意の種々の検出可能な部分を用いて行うことができ、これには例えば、放射性核種および常磁性イオンが含まれる。
【０１１７】
また、心臓血管に選択的にホーミングし、そしてマウスの膀胱ガン関連タンパク質ホモログ（ｂｃ１０；配列番号３５）に特異的に結合するホーミング分子に連結させられた検出可能な部分を含む結合体が被験体に投与され、そして結合体が検出されることによる、被験体の心臓血管を画像化する方法もまた、本明細書中で提供される。本発明の方法にしたがう画像化に有用なホーミング分子としては、組み換え体ではないファージと比較して少なくとも５倍の選択性で、インビボで心臓にホーミングすることができるものが挙げられるが、これに限定はされない。ｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する任意の種々のホーミング分子が、本発明の方法にしたがって心臓血管を画像化するために有用であり得、これには、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物、あるいは、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むホーミングペプチドまたはペプチド模倣物が含まれる。本発明に有用なホーミングペプチドおよびペプチド模倣物は、直鎖状である場合も、環状である場合も、また、別の方法で立体構造によって拘束された形態である場合もある。上記のように、画像化に有用な検出可能な部分としては、放射性核種および常磁性イオンが挙げられるが、なおもこれらに限定はされない。
【０１１８】
本発明の画像化方法は検出可能な部分を利用する。本明細書中で使用される場合は、用語「検出可能な部分」は、インビボで投与することができ、その後、検出することができる任意の分子を意味する。本発明の結合体および画像化方法に有用な例示的な検出可能な部分としては、常磁性ビーズ、放射性核種、および蛍光分子が挙げられる。例示的な放射性核種としては、インジウム−１１１、テクネチウム−９９、炭素−１１、および炭素−１３が挙げられる。蛍光分子としては、フルオレセイン、アロフィコシアニン、フィコエリスリン、ローダミン、およびテキサスレッドが挙げられるが、これらに限定はされない。検出可能な部分がγ線を放射する放射性核種（例えば、インジウム−１１３、インジウム−１１５、またはテクネチウム−９９）である場合は、結合体は、被験体への投与後に固体シンチレーション検出器を使用して視覚化することができる。
【０１１９】
以下による、心臓血管に対して選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法もまた、本明細書中で提供される：ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２またはその断片を、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。細胞表面上にＨＬＰ／ＣＲＩＰ２を発現する細胞、さらには、精製されたＨＬＰ／ＣＲＩＰ２またはその断片は、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。限定ではない例として、自然界に存在している、組み換え体である、ヒト、マウス（配列番号２５）、および他の、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２の変異体およびホモログ、ならびにそれらの断片（例えば、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２のＣＲＰＰＲ（配列番号１）またはＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）結合断片であるが、これらに限定はされない）が、それらが精製されているか、または細胞表面上に発現されるかにはかかわらず、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。本発明の方法にしたがってスクリーニングされ得るライブラリーとしては、ペプチドおよびペプチド模倣物のライブラリー、低分子のライブラリー、ならびに、抗体およびその抗原結合断片のライブラリー（これには、合成抗体、単鎖抗体、または他の抗体ライブラリーが含まれる）が挙げられるが、これらに限定はされない。１つの実施形態においては、本発明の方法には、静脈内注射後に、ライブラリーの１つ以上の分離された分子の局在化をアッセイする工程がさらに含まれる。ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２の断片が全長のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２の代わりに利用される場合は、このような断片は、配列番号１または配列番号２に特異的に結合する断片であり得るが、これらに限定はされないことが理解される。
【０１２０】
任意の種々のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２ポリペプチドが、心臓血管に選択的にホーミングする分子を単離するための本発明の方法に有用であり得る。本明細書中で使用される場合は、用語「ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２」は、心臓血管において選択的に発現され、そして配列番号２５と少なくとも６０％のアミノ酸同一性を有しているポリペプチドを意味する。特定の実施形態においては、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２は、配列番号２５と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のアミノ酸同一性を有する。
【０１２１】
本発明により、さらに、以下による、心臓血管に対して選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が提供される：受容体クローン９またはその断片を、受容体クローン９に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上の受容体クローン９結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、受容体クローン９に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。本発明の方法は、細胞表面上に受容体クローン９を発現する細胞、さらには、精製された受容体クローン９またはその断片を用いて行われ得る。限定ではない例として、自然界に存在している、組み換え体である、ヒト、マウス（配列番号２７）、および他の、マウスの受容体クローン９（配列番号２７）の変異体およびホモログおよびそれらの断片（例えば、受容体クローン９の配列番号５および配列番号６結合断片であるが、これらに限定はされない）が、それらが精製されているか、または細胞表面上に発現されるかにはかかわらず、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。任意の種々のライブラリーが本発明の方法にしたがってスクリーニングされ得、これには、上記のライブラリーが含まれるが、これらに限定はされない。
【０１２２】
本明細書中で使用される場合は、用語「受容体クローン９」は、心臓血管において選択的に発現され、そして配列番号２７と少なくとも６０％のアミノ酸同一性を有しているポリペプチドを意味する。特定の実施形態においては、受容体クローン９は、配列番号２７と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のアミノ酸同一性を有する。
【０１２３】
本発明により、また、以下による、心臓血管に対して選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が提供される：Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８またはその断片を、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。細胞表面上にＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８を発現する細胞、さらには、精製されたＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８またはその断片が、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。限定ではない例として、自然界に存在している、組み換え体である、ヒト、マウス（配列番号２９）、および他の、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８の変異体および種ホモログ、ならびに、配列番号７または配列番号８結合断片（これらに限定はされない）のようなその断片が、それらが精製されているか、または細胞表面上に発現されるかにはかかわらず、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。さらに、上記に示されるように、任意の種々のライブラリーが本発明のスクリーニング方法に有用であり得ることが理解される。
【０１２４】
本明細書中で使用される場合は、用語「Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８」は、心臓血管において選択的に発現され、そして配列番号２９と少なくとも６０％のアミノ酸同一性を有しているポリペプチドを意味する。特定の実施形態においては、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８は、配列番号２９と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のアミノ酸同一性を有する。
【０１２５】
さらに、以下による、心臓血管に対して選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が、本明細書中で提供される：ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質またはその断片を、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。本発明のスクリーニング方法は、例えば、細胞表面上にＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質を発現する細胞を用いて、さらには、精製されたＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質またはその断片を用いて行われ得る。限定ではない例として、自然界に存在している、組み換え体である、ヒト、マウス（配列番号３３）、および他の、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質の変異体および種ホモログ、ならびに、配列番号３３の断片、またはヒトもしくは他のＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）結合断片が含まれるが、これに限定はされない）が、それらが精製されているか、または細胞表面上に発現されるかにはかかわらず、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。本発明の方法は、任意の種々のライブラリーをスクリーニングするために使用することができ、これは、例えば、ペプチドおよびペプチド模倣物のライブラリー、低分子のライブラリー、ならびに、抗体およびその抗原結合断片のライブラリー（これには、合成抗体、単鎖抗体、または他の抗体ライブラリーが含まれる）であるが、これらに限定はされない。
【０１２６】
本明細書中で使用される場合は、用語「ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質」は、心臓血管において選択的に発現され、そして配列番号３３と少なくとも６０％のアミノ酸同一性を有しているポリペプチドを意味する。特定の実施形態においては、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質は、配列番号３３と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のアミノ酸同一性を有する。
【０１２７】
本発明により、さらに、以下による、心臓血管に対して選択的にホーミングする１つ以上のホーミング分子を単離する方法が提供される：ｂｃ１０またはその断片を、ｂｃ１０に対する分子の特異的結合に適している条件下で分子のライブラリーと接触させる工程；特異的結合をアッセイする工程；およびライブラリーから１つ以上のｂｃ１０結合分子を分離し、それによって心臓血管に選択的にホーミングし、ｂｃ１０に特異的に結合する１つ以上のホーミング分子を単離する工程。細胞表面上にｂｃ１０を発現する細胞、さらには、精製されたｂｃ１０またはｂｃ１０の断片が、本発明のスクリーニング方法に有用である。限定ではない例として、自然界に存在している、組み換え体である、ヒト、マウス（配列番号３５）、さらには、ｂｃ１０の変異体および他の種ホモログ、ならびに、それらの断片（配列番号１２結合断片または配列番号１３結合断片が含まれるが、これらに限定はされない）が、それらが精製されているか、または細胞表面上に発現されるかにはかかわらず、本発明のスクリーニング方法に有用であり得る。本発明の方法は、上記で議論されたように、任意の種々のライブラリーをスクリーニングするために有用である。
【０１２８】
本明細書中で使用される場合は、用語「ｂｃ１０」は、心臓血管において選択的に発現され、そして配列番号３５と少なくとも６０％のアミノ酸同一性を有しているポリペプチドを意味する。特定の実施形態においては、ｂｃ１０は、配列番号３５と、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のアミノ酸同一性を有する。
【０１２９】
本発明により、さらに、種々の単離されたペプチドおよびペプチド模倣物が提供される。これらは、例えば、本発明の結合体を構築することにおいて、またはペプチド自体が生物学的活性を有している場合には、結合していない形態で、上記に記載されるような任意の心臓血管疾患または心筋症の処置のための治療薬として、有用であり得る。生物学的活性を有している他のホーミングペプチドは、例えば、Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２：８３−９０（２００２）およびＬａａｋｋｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：９３８１−９３８６（２００４）に記載されているように、当該分野で公知である。一例として、本発明により、６０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）もしくはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、６０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）を含む単離されたペプチドが提供される。アミノ酸配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）を含む本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、４０未満の残基の長さを有している場合があり、また、２０未満の残基の長さを有している場合もある。
【０１３０】
本発明により、さらに、アミノ酸配列ＧＲＫＳＫＴＶ（配列番号１４）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＧＲＫＳＫＴＶ（配列番号１４）を含む単離されたペプチドが提供される。本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、立体構造によって拘束される場合も、また、ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）を含む場合もある。さらなる実施形態においては、アミノ酸配列ＧＲＫＳＫＴＶ（配列番号１４）もしくはそのペプチド模倣物を含む単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有する。なおさらなる実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＣＸＧＲＫＳＫＴＶＺＣ（配列番号１５）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０１３１】
本発明により、さらに、１５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）、またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、１５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）を含む単離されたペプチドが提供される。アミノ酸配列ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）を含む本発明の単離されたペプチドおよびペプチド模倣物は、限定はされないが、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有し得る。
【０１３２】
また、５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）、またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が本明細書中で提供される。１つの実施形態においては、本発明により、５０未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）を含む単離されたペプチドが提供される。配列番号６のアミノ酸配列を含む本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、種々の長さを有し得、これには、４０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さが含まれるが、これらに限定はされない。
【０１３３】
本発明により、さらに、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）を含む単離されたペプチドが提供される。アミノ酸配列ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）を含む本発明のペプチドまたはペプチド模倣物は、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有し得るが、これらに限定はされない。
【０１３４】
さらに、アミノ酸配列ＲＮＳＷＫＰＮ（配列番号１６）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が、本発明によって提供される。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＲＮＳＷＫＰＮ（配列番号１６）を含む単離されたペプチドが提供される。限定ではない例として、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、立体構造によって拘束される場合も、また、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有し得る場合もある。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＣＸＲＮＳＷＫＰＮＺＣ（配列番号１７）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０１３５】
さらに、アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が、本明細書中で提供される。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＲＧＳＳＳ（配列番号９）を含む単離されたペプチドが提供される。さらなる実施形態においては、配列番号９のアミノ酸配列を含む本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有する。
【０１３６】
本発明により、また、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＲＳＴＲＡＮＰ（配列番号１８）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物も提供される。本発明により、例えば、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＲＳＴＲＡＮＰ（配列番号１８）を含む単離されたペプチドが提供される。限定ではない例として、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、立体構造によって拘束され得る。さらなる限定ではない例として、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物には、アミノ酸配列ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）が含まれ得る。本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、さらに、任意の種々の長さを有し得る。限定ではない例として、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有し得る。１つの実施形態においては、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物には、アミノ酸配列ＣＸＲＳＴＲＡＮＰＺＣ（配列番号１９）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）が含まれる。
【０１３７】
本発明によってさらに、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＰＫＴＲＲＶＰ（配列番号２０）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。１つの実施形態においては、本発明により、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＰＫＴＲＲＶＰ（配列番号２０）を含むペプチドが提供される。本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、立体構造によって拘束され得る場合も、また、アミノ酸配列ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）が含まれる場合もある。特定の実施形態においては、配列番号２０のアミノ酸配列を含む本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有する。さらなる実施形態においては、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物には、アミノ酸配列ＣＸＰＫＴＲＲＶＰＺＣ（配列番号２１）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）が含まれる。
【０１３８】
さらに、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＳＧＭＡＲＴＫ（配列番号２２）またはそのペプチド模倣物を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が本明細書中で提供される。１つの実施形態においては、本発明により、４００未満の残基の長さを有しており、アミノ酸配列ＳＧＭＡＲＴＫ（配列番号２２）を含むペプチドが提供される。別の実施形態においては、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、立体構造によって拘束される。さらなる実施形態においては、本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物には、アミノ酸配列ＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）が含まれる。本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、さらに、任意の種々の長さを有し得る。限定ではない例として、配列番号２２のアミノ酸配列を有している本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、１００未満の残基の長さ、６０未満の残基の長さ、または２０未満の残基の長さを有し得る。１つの実施形態においては、本発明により、アミノ酸配列ＣＸＳＧＭＡＲＴＫＺＣ（配列番号２３）またはそのペプチド模倣物（式中、Ｘ＝０から２０個の別々に選択される残基であり、Ｚ＝０から２０個の別々に選択される残基である）を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０１３９】
本発明のペプチドおよびペプチド模倣物は、単離された形態で提供される。本発明のペプチドまたはペプチド模倣物についての言及において本明細書中で使用される場合には、用語「単離された」は、細胞の中でペプチドまたはペプチド模倣物と通常会合しているか、または、ライブラリーもしくは粗調製物の中でペプチドまたはペプチド模倣物と会合している、ポリペプチド、脂質、核酸、および他の細胞性の物質のような物質の混入が比較的少ない形態の、ペプチドまたはペプチド模倣物を意味する。
【０１４０】
したがって、本発明によりペプチドおよびペプチド模倣物が提供され、これには、以下で議論されるように、立体構造により拘束されたペプチドおよびペプチド模倣物、二官能性のペプチドおよびペプチド模倣物、ならびに多価ペプチドおよびペプチド模倣物が含まれる。本明細書中で使用される場合は、用語「ペプチド」は、ペプチド、タンパク質、タンパク質の断片などを意味するように広い意味で使用される。用語「ペプチド模倣物」は、本明細書中で使用される場合は、構造に基づくペプチドの活性を有しているペプチド様分子を意味する。このようなペプチド模倣物としては、化学修飾されたペプチド、自然界には存在しないアミノ酸を含むペプチド様分子、およびペプトイドが挙げられ、これらは、ペプチド模倣物が由来するペプチドの選択的ホーミング活性のような活性を有している（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｒｏ，Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，「Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」Ｖｏｌ．１（Ｍ．Ｅ．Ｗｏｌｆｆ編；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９５）８０３−８６１頁を参照のこと）。
【０１４１】
種々のペプチド模倣物が当該分野で公知であり、例えば、拘束されたアミノ酸、ペプチドの二次構造を模倣する非ペプチド成分、またはアミド結合等量式を含むペプチド様分子を含むペプチド模倣物が、本発明に含まれる。拘束された自然界には存在しないアミノ酸を含むペプチド模倣物としては、例えば、α−メチル化アミノ酸；α，α−ジアルキルグリシン、またはα−アミノシクロアルカンカルボン酸；Ｎα−Ｃα環状アミノ酸；Ｎα−メチル化アミノ酸；β−またはγ−アミノシクロアルカンカルボン酸；α，β−不飽和アミノ酸；β，β−ジメチルまたはβ−メチルアミノ酸；β−置換−２，３−メタノアミノ酸；Ｎ−ＣδまたはＣα−Ｃδ環状アミノ酸；置換されたプロリンまたは別のアミノ酸模倣物が挙げられ得る。ペプチドの二次構造を模倣するペプチド模倣物には、例えば、非ペプチドβ−ターン模倣物；γ−ターン模倣物；βシート構造の模倣物；またはヘリックス構造の模倣物（それぞれが当該分野で公知である）が含まれ得る。ペプチド模倣物はまた、例えば、アミド結合等量式（例えば、ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ型の修飾）；アミド結合の還元；メチレンチオエーテルまたはメチレンスルフォキシド結合；メチレンエーテル結合；エチレン結合；チオアミド結合；トランス−オレフィンまたはフルオロオレフィン結合；１，５−２置換テトラゾール環；ケトメチレンまたはフルオロケトメチレン結合、あるいは別のアミド等量式を含む、ペプチド様分子でもあり得る。当業者は、これらおよび他のペプチド模倣物が、本明細書中で使用される用語「ペプチド模倣物」の意味に含まれることを理解する。
【０１４２】
ペプチド模倣物を同定するための方法は当該分野で周知であり、例えば、可能性のあるペプチド模倣物のライブラリーを含むデータベースのスクリーニングが挙げられる。例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅには、既知の結晶構造を有している３００，０００を超える化合物のコレクションが含まれる（Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ，３５：２３３１（１９７９））。この構造の寄託は、新しい結晶構造が決定されるたびにアップデートされ続け、適切な形状（例えば、本発明のペプチドと同じ形状）、ならびに、同族受容体と幾何学的相補性および化学的相補性の可能性を有している化合物についてスクリーニングすることができる。本発明のペプチドの結晶構造が入手できない場合には、構造を、例えば、プログラムＣＯＮＣＯＲＤ（Ｒｕｓｉｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．２９：２５１（１９８９））を使用して作成することができる。別のデータベースであるＡｖａｉｌａｂｌｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ  ＣＡ）には、約１００，０００の化合物が含まれており、これらは市販されており、本発明のペプチドの可能性のあるペプチド模倣物を同定するために、例えば、心臓血管に選択的にホーミングする活性を用いて検索することができる。
【０１４３】
以下に議論される、立体構造によって拘束されるペプチドおよびペプチド模倣物、二官能性ペプチドおよびペプチド模倣物、ならびに多価ペプチドおよびペプチド模倣物を含む本発明のペプチドおよびペプチド模倣物は、様々な長さを有し得る。本発明のペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、６残基未満、７残基未満、８残基未満、９残基未満、１０残基未満、１２残基未満、１５残基未満、２０残基未満、２５残基未満、３０残基未満、３５残基未満、４０残基未満、４５残基未満、５０残基未満、６０残基未満、７０残基未満、または８０残基未満の比較的短い長さを有し得る。本発明のペプチドまたはペプチド模倣物もまた、以下にさらに記載されるように、はるかに長い配列の状況においても有用であり得る。本明細書中で議論される場合は、用語「残基」は、アミノ酸またはそのアナログを意味する。例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドには、他のアミノ酸によって分断されていない連続している配列として特定のアミノ酸が含まれることが理解される。
【０１４４】
本発明の単離されたペプチドまたはペプチド模倣物は、環状である場合も、または別の方法で立体構造によって拘束される場合もあるが、これらに限定はされない。分子についての言及において本明細書中で使用される場合は、用語「立体構造によって拘束される」は、三次元構造が長時間の間１つの空間的配置で実質的に維持される、ペプチドまたはペプチド模倣物のような分子を意味する。立体構造によって拘束される分子は、高い親和性、代謝安定性、膜透過性、または可溶性のような改善された特性を有し得る。立体構造による拘束の方法は当該分野で周知であり、これには、環化が含まれるが限定はされない。
【０１４５】
ペプチドまたはペプチド模倣物についての言及において本明細書中で使用される場合は、用語「環状」は、２つの隣接していないアミノ酸またはアミノ酸アナログの間での分子内結合を含む構造を意味する。環化は、共有結合によって、または非共有結合によって行われ得る。分子内結合としては、骨格対骨格、側鎖対骨格、および側鎖対側鎖の結合が含まれるが、これらに限定はされない。環化の方法としては、隣接していないアミノ酸またはアミノ酸アナログの側鎖の間でのジスルフィド結合の形成；（例えば、１つのアミノ酸またはそのアナログの側鎖基とアミノ酸末端残基のＮ末端アミンとの間での）ラクタム結合の形成；および、リジノノルロイシンおよびジチロシン結合の形成が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０１４６】
本発明により、また、例えば、配列ＣＲＰＰＲ（配列番号１）、ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）、ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）、ＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）、ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）、ＲＧＳＳＳ（配列番号９）、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）、ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）、またはＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）の保存的変異体であるアミノ酸配列を含む単離されたペプチドまたはペプチド模倣物も提供される。特定の実施形態においては、本発明により、厳密に１つのアミノ酸が保存的置換されている配列番号１、２、５、６、７、８、９、１１、１２、または１３の保存的変異体であるアミノ酸配列を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。さらなる実施形態においては、本発明により、厳密に２つのアミノ酸が保存的置換されている配列番号１、２、５、６、７、８、９、１１、１２、または１３の保存的変異体であるアミノ酸配列を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。さらなる実施形態においては、本発明により、厳密に３個、４個、または５個のアミノ酸が保存的置換されている配列番号１、２、５、６、７、８、９、１１、１２、または１３の保存的変異体であるアミノ酸配列を含む、単離されたペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０１４７】
本明細書中で使用される場合は、「保存的変異体」は、第１のアミノ酸が、少なくとも１つの類似の生化学的特性（これは、例えば、類似する大きさ、電荷、疎水性、または水素結合能力であり得る）を有している第２のアミノ酸またはアミノ酸アナログによって置き換えられているアミノ酸配列である。例えば、第１の疎水性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、またはイソロイシンのような第２の（同じではない）疎水性アミノ酸、あるいはそれらのアナログで保存的置換され得る。同様に、第１の塩基性アミノ酸は、アルギニンまたはリジンのような第２の塩基性アミノ酸、あるいはそのアナログで保存的置換され得る。同じように、第１の酸性アミノ酸は、アスパラギン酸またはグルタミン酸のような第２の酸性アミノ酸、あるいはそのアナログで保存的置換され得る。また、フェニルアラニンのような芳香族アミノ酸は、第２の芳香族アミノ酸またはアミノ酸アナログ（例えば、チロシン）で保存的置換され得る。
【０１４８】
本明細書中に開示されるように、心臓血管に選択的にホーミングするペプチドまたはペプチド模倣物は、明らかに長い配列の状況においてホーミング活性を維持することができる。例えば、５マーのＣＲＰＰＲ（配列番号１）は、ファージコートタンパク質に融合させられた場合にもホーミングする能力を維持し、これによって、本発明のペプチドがより大きなタンパク質に組み込まれている場合にも選択的ホーミング活性を有し得ることが確認される。したがって、本発明により、異種タンパク質に融合させられた本発明のペプチドまたはペプチド模倣物を含むキメラタンパク質が提供される。特定の実施形態においては、本発明により、心臓血管に選択的にホーミングし、そして異種タンパク質に融合させられたＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、受容体クローン９、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、またはｂｃ１０に特異的に結合するホーミングペプチドまたはペプチド模倣物を含むキメラタンパク質が提供される。本発明に有用な異種タンパク質としては、抗体またはその抗原結合断片と同様に、治療活性を有しているタンパク質が挙げられるが、これに限定はされない。さらなる実施形態においては、本発明により、配列番号１、２、５、６、７、８、９、１１、１２、または１３のアミノ酸配列、またはこれらの配列の１つの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を含むペプチドまたはペプチド模倣物が異種タンパク質に融合させられているキメラタンパク質が提供される。用語「異種」は、本発明のペプチドまたはペプチド模倣物に融合させられたタンパク質についての言及において本明細書中で使用される場合は、融合させられたペプチドをコードする遺伝子以外の供給源に由来するタンパク質、または、融合させられたペプチド模倣物が由来する供給源に由来するタンパク質を意味する。本発明のキメラタンパク質は、種々の長さを有することができ、これには、１００残基まで、２００残基まで、３００残基まで、４００残基まで、５００残基まで、８００残基まで、１０００残基まで、または２０００残基までの長さが含まれ得るが、これらに限定はされない。
【０１４９】
さらに、心臓血管に選択的にホーミングし、そして異なる機能を有している第２のペプチドに融合させられたＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）、受容体クローン９（配列番号２７）、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質（配列番号３３）、またはｂｃ１０（配列番号３５）に特異的に結合する、ホーミングペプチドを含む二官能性ペプチドが本明細書中で提供される。このような二官能性ペプチドは、ペプチドの異なる部分によって与えられた少なくとも２つの機能を有し、例えば、選択的ホーミング活性に加えて、プロアポトーシス活性を示し得る。
【０１５０】
本発明により、さらに、それぞれがＨＬＰ／ＣＲＩＰ２（配列番号２５）に別々に結合する少なくとも２つのモチーフを含む、単離された多価ペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。このような多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列またはそれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも２つのモチーフを有し得る。多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列またはそれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、例えば、少なくとも３個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のこのようなモチーフを有し得る。特定の実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物の２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、または２０個の同じモチーフまたは同じではないモチーフを有する。別の実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、配列番号１のアミノ酸配列またはこの配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物からなる、同じモチーフが含まれる。なお別の実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、配列番号２のアミノ酸配列またはこの配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物からなる、同じモチーフが含まれる。なおさらなる実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、連続する複数のＨＬＰ／ＣＲＩＰ２結合モチーフが含まれ、これらは同じであっても、また同じではなくてもよい。
【０１５１】
また、それぞれが受容体クローン９（配列番号２７）に別々に結合する少なくとも２つのモチーフを含む単離された多価ペプチドまたはペプチド模倣物も、本明細書中で提供される。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列またはこれらの配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも２つのモチーフを有し得る。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列またはそれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも３個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のこのようなモチーフを含み得ることが理解される。特定の実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物の２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、または２０個の同じモチーフまたは同じではないモチーフを有する。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、例えば、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列またはこのような配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物からなる、同じモチーフが含まれ得る。さらなる実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、連続する複数の受容体クローン９（配列番号２７）結合モチーフが含まれ、これらは同じであっても、また同じではなくてもよい。
【０１５２】
本発明により、さらに、それぞれがＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）に別々に結合する少なくとも２つのモチーフを含む単離された多価ペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号７、８、もしくは９のアミノ酸配列またはこれらの配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも２つのモチーフを有し得る。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号７、８、もしくは９のアミノ酸配列またはそれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも３個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のこのようなモチーフを含み得ることが理解される。特定の実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、配列番号７、８、もしくは９のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物の２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、または２０個の同じモチーフまたは同じではないモチーフを有する。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、例えば、配列番号７、８、もしくは９のアミノ酸配列またはこのような配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物からなる、同じモチーフが含まれ得る。さらなる実施形態においては、多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、連続する複数のＳｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８（配列番号２９）結合モチーフが含まれ、これらは同じであっても、また同じではなくてもよい。
【０１５３】
さらに、それぞれが配列番号３３に別々に結合する少なくとも２つのモチーフを含む単離された多価ペプチドまたはペプチド模倣物が、本明細書中で提供される。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれがＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）のアミノ酸配列、またはこれらの保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも２つのモチーフを有し得る。限定ではない例として、本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、それぞれがＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも３個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のこのようなモチーフを含み得る。さらなる限定ではない例として、多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物の２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、または２０個の同じモチーフまたは同じではないモチーフを有し得る。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物にはまた、例えば、配列番号１１のアミノ酸配列、またはこのような配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物からなる、同じモチーフが含まれ得る。多価ペプチドまたはペプチド模倣物には、連続するか、または連続しない複数の配列番号３３結合モチーフが含まれる場合があり、これらは同じであっても、また同じではなくてもよいと理解される。
【０１５４】
それぞれがｂｃ１０（配列番号３５）に別々に結合する少なくとも２つのモチーフを含む単離された多価ペプチドまたはペプチド模倣物もまた、本発明によって提供される。（配列番号３５）結合モチーフは、連続している場合も、また、連続していない場合もあり、さらにこれらは同じである場合も、また、同じではない場合もある。本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、それぞれが配列番号１２もしくは配列番号１３のアミノ酸配列、またはこれらの配列の保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも２つのモチーフを有し得る。限定ではない例として、本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、それぞれが配列番号１２もしくは配列番号１３のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物を別々に含む、少なくとも３個、少なくとも５個、または少なくとも１０個のこのようなモチーフを含み得る。さらなる限定ではない例として、多価ペプチドまたはペプチド模倣物は、配列番号１２もしくは配列番号１３のアミノ酸配列、またはその保存的変異体もしくはペプチド模倣物の２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、または２０個の同じモチーフまたは同じではないモチーフを有し得る。１つの実施形態においては、本発明により、配列番号１２もしくは配列番号１３のアミノ酸配列、または配列番号１２もしくは配列番号１３の保存的変異体もしくはペプチド模倣物からなる同じモチーフを含む、本発明の多価ペプチドまたはペプチド模倣物が提供される。
【０１５５】
以下の実施例は、本発明を説明するように意図され、限定するようには意図されない。
【実施例】
【０１５６】
（実施例１）
心臓血管に選択的にホーミングするペプチドおよびホーミングペプチドの同種受容体の同定
本実施例では、ホーミングペプチドの同種受容体の同定のための細菌によるツーハイブリッドアッセイと組み合わせた、心臓血管に選択的にホーミングするペプチドの同定のための、エキソビボおよびインビボでのファージ選択の使用を記載する。
【０１５７】
心臓内皮細胞の富化のためのエキソビボでのファージ選択を、マウスの心臓組織から得た細胞懸濁物について、血管内皮細胞の単離のために抗ＣＤ３１磁気ビーズを使用して行った。組み換え体ではないファージと比較して、心臓細胞へのエキソビボでの結合において２３０倍の富化が、３回のエキソビボ選択後に観察された（図１Ｂ）。心臓へのホーミングについてのその後のインビボ選択によっては、インビボで心臓にホーミングするファージのプールが生じ、組み換え体ではないファージのホーミングと比較すると、およそ２００倍増加した。さらに、エキソビボ／インビボで選択したファージは、他の組織と比較して心臓に優先的に局在化した。図１Ｃに示すように、心臓での富化は、脳、腎臓、皮膚、および骨格筋の中でのファージの蓄積と比較して、２０から５０倍であった。
【０１５８】
心臓ホーミングペプチドの推定される受容体の単離を、以下のように行った。心臓ホーミングファージのペプチドをコードするＤＮＡ挿入断片をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅し；細菌のツーハイブリッドシステムの「おとりベクター」に導入した；そして、心臓ｃＤＮＡライブラリーをコードする標的ベクターとともに細菌に同時形質転換した。高いストリンジェンシーでのスクリーニングによって、おとり−標的相互作用の指標となるコロニーが、ポジティブ対照と匹敵する頻度で明らかになったが、コロニーの増殖は、２つのベクターのいずれかが存在しない場合には観察されなかった（図１Ｄ）。さらに、システムの漏れについての対照から、１００個のコロニーのうちの７５個がおそらくは擬陽性であるとして除外された（図１Ｅ）。
【０１５９】
２５個の残りの候補の受容体ｃＤＮＡに由来するインフレーム配列を、ＮＣＢＩの重複のないデータベースを使用して分析した。これらの２５個のクローンのうち、１９個は心筋において豊富に発現されるタンパク質（例えば、ミオシン、ミオグロブリン、フェリチン、およびオキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ）であった。残りの６つのクローン（これらは、表１にまとめるように、膜または細胞表面タンパク質を提示する）は、心臓ホーミング分子の推定の受容体である。これらの結果は、エキソビボ／インビオでのファージディスプレイと、細菌によるツーハイブリッド分析の併用によって、心臓ホーミングペプチドおよびそれらの同種受容体を迅速に同定できることを示している。
【０１６０】
エキソビボおよびインビボでのファージ選択を以下のように行った。Ｔ７Ｓｅｌｅｃｔ４１５−１ファージ（Ｎｏｖａｇｅｎ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）上に提示されるＮＮＫをコードするＣＸ７ライブラリーを、Ｌａａｋｋｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７５１−７５５（２００２）に記載されているように作成した。ファージ選択および検証は、Ｈｏｆｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓ  ｕｓｉｎｇ  ｐｈａｇｅ−ｄｉｓｐｌａｙｅｄ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，」Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｏｗｍａｎ（編）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕ．Ｋ．：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００４）に記載されているように行った。心臓細胞上での３回のエキソビボ選択の後、３回の選択をインビボで行った。エキソビボでの選択のために、細胞懸濁物液を、組織を分散させるために１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＩＡ（Ｓｉｇｍａ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用してマウスの心臓組織から調製した。細胞懸濁液を、５×１０１０プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＣＸ７Ｃライブラリーとともに４℃で一晩インキュベートし、その後、結合していないファージを除去するために洗浄した。磁気ビーズ（Ｍ４５０；Ｄｙｎａｌ；Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）および抗マウスＣＤ３１（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して、製造業者の説明書にしたがって血管内皮細胞を単離した。Ｈｏｆｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（前出），２００４に記載されているように、ＣＤ３１ポジティブ細胞の集団に結合したファージをレスキューし、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の中で増幅させた。
【０１６１】
インビボでのパンニングは以下のように行った。エキソビボで選択したファージのプール（５×１０９ｐ．ｆ．ｕ．）を、尾静脈からマウスに静脈内注射し、１０分間循環させ、その後、マウスに、結合していない静脈内のファージを除去するためにＤＭＥＭを左心室から慎重に潅流させた。心臓組織と対照組織（脳、腎臓、皮膚、および筋肉）を取り出し、Ｈｏｆｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（前出），２００４に記載されているようにファージを回収した。心臓から回収したファージをマウスに再度注射し、このサイクルを全部で３回繰り返した。組み換え体ではないファージを、それぞれの実験において対照として別のマウスに注射した。
【０１６２】
細菌でのツーハイブリッド実験のために、おとりプラスミドのライブラリーを、プライマー５’−ＴＣＡＧＧＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＧＧ−３’（配列番号３６；正方向プライマー）および５’−ＧＡＧＴＡＡＣＴＡＧＴＴＡＡＣＣ−３’（配列番号３１；逆方向プライマー）を使用する心臓ホーミングファージからのペプチドをコードするＤＮＡ挿入断片のＰＣＲ増幅によって構築した。ＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩとＸｈｏＩで消化し、おとりｐＢＴプラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）にサブクローニングして、「ｐＢＴ−ｈｐ」と命名したおとりの組み換え体ライブラリーを作成した。ｐＢＴ−ｈｐプラスミドをＸＬ１−Ｂｌｕｅ  ＭＲＦ’Ｋａｎコンピテント細胞に形質転換し、２μｌまたは５μｌの細胞を１００ｍｍのＬＢ−クロラムフェニコールプレートにプレートして、一次形質転換体の総数を決定した。残りの形質転換体をプールし、そして１５０ｍｍのＬＢ−クロラムフェニコールプレートにプレートした。配列決定を２０個のクローンについて行い、これらは適切なペプチドをコードする挿入断片を有していることを明らかにした。その後、プレートを擦り取って、細菌を回収した。増幅したライブラリーの大きさを決定するために２μｌおよび５μｌの回収したライブラリーをプレートした後、ｐＢＴ−ｈｐプラスミドのプールを、市販されているｍａｘｉｐｒｅｐ  ＤＮＡカラムを使用してプールした細菌から精製した。精製したＤＮＡを使用して、製造業者の説明書（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）にしたがってＢａｃｔｅｒｉｏＭａｔｃｈ（商標）Ｔｗｏ−Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍレポーター株コンピテント細胞を形質転換した。
【０１６３】
心臓ｃＤＮＡライブラリープラスミドを、マウスの心臓プラスミドｃＤＮＡライブラリーを含む２μｌの細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；＃９８２３０３）を２５ｍｌのＳＣＯ培地中に希釈し、その後、２５ｃｍ×２５ｃｍのＬＢ−テトラサイクリンプレート２５枚の上で細胞を分離することによって精製した。プレートを、３０℃で２４時間インキュベートし、その後、およそ５×１０６個の個々のクローンを回収し、続いてプラスミド精製した。
【０１６４】
細菌によるツーハイブリッド実験を、製造業者の説明書にしたがってＢａｃｔｅｒｉｏＭａｔｃｈ（商標）Ｔｗｏ−Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いて行った。簡単に説明すると、ｐＢＴ−ｈｐと心臓ｃＤＮＡライブラリープラスミドを、それぞれ５０ｎｇのプラスミドを使用して同時形質転換した。同時形質転換体のアリコート（１００μｌ）を選択用ＬＢプレート（５００μｇ／ｍｌのカルベニシリン）上にプレートし、３７℃で２０時間インキュベートし、その後、増殖についてプレートをスコアした。ハイブリッドタンパク質の対の間での相互作用が、ポジティブ対照であるＧａｌ４およびＧａｌ１１Ｐハイブリッドタンパク質について観察されたものと同じように、選択用プレート上での増殖によって示された。カルベニシリンプレートからの個々のポジティブクローンを、続いて、２回目のスクリーニングのためにＸ−ｇａｌプレート上に縞模様で接種した。１２時間から１４時間の細胞のインキュベーションの後、Ｘ−ｇａｌプレート上で暗青色を呈した細胞を選択した。これらを、ＬＢ−クロラムフェニコールまたはＫＢ−テトラサイクリン（標的およびおとりプラスミドのマーカー）の存在下で３０℃で一晩増殖させた。プラスミドＤＮＡを精製し、レポーター株を、推定のおとりプラスミドおよび標的プラスミドで再度形質転換した。選択プレート上で増殖を再現できたクローンをポジティブと確認した。おとりおよび標的の挿入断片をＰＣＲによって増幅し、その後、配列分析した。標的ベクターに由来する配列を重複のないマウスのゲノムのＢＬＡＳＴＮ検索において検索配列として使用した。
【０１６５】
（実施例２）
受容体−ペプチド対とペプチドの心臓ホーミング活性
本実施例では、心臓ホーミングペプチドを提示するペプチドのプールを用いた細菌でのツーハイブリッド分析により心臓ホーミングペプチドの推定の受容体として同定した、膜または細胞表面発現タンパク質を記載する。
【０１６６】
受容体クローン５
表１にまとめるように、受容体クローン５は、心臓ＬＩＭ−タンパク質（ＨＬＰ）のカルボキシ末端の９２個のアミノ酸を提示し、これは、システインリッチタンパク質２（ＣＲＩＰ２）およびＥＳＰ１とも呼ばれる。ＨＬＰは心臓血管の中で発現され（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖ．１１６：１８７−１９２（２００２））、Ｃｒｐ−１に対して相同性を有しているＬＩＭドメインを含むタンパク質である（Ｋａｒｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３１：１６７−１７６（１９９６）；およびｖａｎ  Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｃｅｌｌｓ  ８：６３１−６４４（２００３））。ＨＬＰクローンを用いたツーハイブリッド分析による５個のポジティブクローンのうち３個の同種ペプチドを同定した：ＣＲＰＰＲ（配列番号１）が２回示され、ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）は１回、そしてＣＧＮＱＶＤＳＲＣ（配列番号３）が２回示された。Ｔ７Ｓｅｌｅｃｔ４１５−１ディスプレイベクターへのこれらのペプチドのクローニングの後、これらを、静脈内注射後に心臓血管にホーミングするそれらの能力についてアッセイした。組み換え体ではないファージと比較すると、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）をディスプレイするファージは、心臓に対して３００倍高い選択性でホーミングした（図２Ａ）。表１にまとめるように、ＣＧＲＫＳＫＴＶＣ（配列番号２）をディスプレイするファージは、心臓へのホーミングにおいて約５０倍高い選択性を示したが、一方、ＣＧＮＱＶＤＳＲＣ（配列番号３）をディスプレイするファージについては有意な選択的ホーミングは観察されなかった。
【０１６７】
受容体クローン９
受容体クローン９もまた、１つ以上の心臓ホーミングペプチドに結合する膜タンパク質として同定された。表１に示すように、レセプタークローン９は、注釈がついていないＲＩＫＥＮ  ＥＳＴである。受容体クローン９を用いたツーハイブリッド分析によって同定した５個のクローンのうち、３個のペプチドＣＰＳＥＬＬＬＰ（配列番号４）、ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）、およびＣＰＫＲＰＲ（配列番号６）を同定した。後者の２つのペプチドは、心臓に対する選択的ホーミングを示したが、最初の１つは示さなかった（表１および図２Ｂ）。
【０１６８】
受容体クローン１５
受容体クローン１５は、ＳｉｇｉｒｒまたはＴＩＲ８と命名されている１つのＩｇ  ＩＬ−１受容体関連タンパク質である（Ｔｈｏｍａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １１：３８９−３９９（１９９９））。クローン１５に示されるタンパク質の一部には、Ｓｉｇｉｒｒの膜貫通ドメインと、さらには、約１９０個のアミノ酸のアミノ末端細胞外部分が含まれる。Ｓｉｇｉｒｒは、腎臓、肺、胃、および他の組織の上皮細胞で発現されることが知られている（Ｔｈｏｍａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，前出，１９９９；およびＰｏｌｅｎｔａｒｕｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．１４：２１１−２１８（２００３））が、心臓または内皮細胞での発現は報告されていない。表１にまとめるように、３つのペプチドを、ツーハイブリッド分析によってＳｉｇｉｒｒに結合するとして同定した。これらのペプチドＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＮＳＷＫＰＮＣ（配列番号８）、およびＲＧＳＳＳ（配列番号９）は、２０から３０倍の心臓へのホーミングの選択性を示した（表１および図２Ｃを参照のこと）。
【０１６９】
受容体クローン２７
受容体クローン２７は、嗅球ｃＤＮＡライブラリーから同定された、グルタミンリッチ領域を含むタンパク質との注釈が付けられる仮想タンパク質である。分析した５個のおとりクローンは全て、同じペプチドＣＬＩＤＬＨＶＭＣ（配列番号１０）をコードしており、これは、心臓に対する特異的なホーミングは示さなかった（表１および図２Ｄ）。
【０１７０】
受容体クローン３６
受容体クローン３６は、ＲＩＫＥＮ  Ｆａｎｔｏｍセットに由来する命名されていないタンパク質産物のコード配列全体を含む。この受容体は、コハク酸デヒドロゲナーゼ複合体の一部であるミトコンドリア膜タンパク質である、完全な膜タンパク質ＣＩＩ−３（ＭｐｃＩＩ−３）に対して類似であると推定される。クローン３６に対する結合活性によって同定した５個の配列決定したクローンのそれぞれは、同じペプチドＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号５）をコードしており、これは、約２０倍の心臓ホーミング選択性を示した（表１および図２Ｅ）。
【０１７１】
受容体クローン４６
受容体クローン４６は、小さい膜タンパク質であるヒトの膀胱ガン関連タンパク質１０（ｂｃ１０）のマウスホモログの一部である。これは、ガンが膀胱の中の前悪性の病変から生じるとダウンレギュレートされる（Ｇｒｏｍｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９８：５３９−５４６（２００２））。受容体クローン４６として単離された断片には、ｂｃ１０の推定される細胞外ドメインのカルボキシ末端の３２個のアミノ酸が含まれる。ツーハイブリッド分析により、受容体クローン４６に結合した２つのペプチド、ＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）およびＣＳＧＭＡＲＴＫＣ（配列番号１３）が同定された。これらは、それぞれ、約６０倍および１０倍の心臓ホーミング選択性を示した（表１および図２Ｆ）。
【０１７２】
まとめると、これらの結果は、インビボでのパンニングと組み合わせた細菌のツーハイブリッド分析が、臓器ホーミングペプチドとそれらの同種受容体の両方を同定するために有用であり得ることを示している。
【０１７３】
個々のファージクローンを、以下のように再構築した。選択されたおとりプラスミドに由来するペプチドをコードするオリゴヌクレオチドを合成し、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（ＰＮＫ；ＮＥＢ）で、３７℃で１時間リン酸化し、０．０８ｐｍｏｌ／μｌの濃度でアニーリングさせた。アニーリングした挿入断片を０．０４ｐｍｏｌ／μｌに希釈し、Ｔ７Ｓｅｌｅｃｔ  ４１５−１アーム（Ｎｏｖａｇｅｎ）にＴ４リガーゼで１６℃で一晩かけて連結させた。翌日、完全な組み換え体ファージを、製造業者によって記載されているように、連結反応物をパッケージング抽出物と混合することによって調製した。挿入断片を、配列決定によって確認し、個々のクローンを、上記の実施例１に記載したように、エキソビボおよびインビボでの試験のために増幅させた。
【０１７４】
（実施例３）
ファージによってディスプレイされた心臓ホーミングペプチドは心臓血管に局在化する
本実施例は、心臓血管に選択的にホーミングする開示するペプチドが、心臓血管によってインビボで発現される受容体に特異的に結合することを示す。
【０１７５】
Ａ．ファージによってディスプレイされた心臓ホーミングペプチドは血管マーカーと一
緒に局在化する
さらなる特性決定を、表１にまとめた倍数の選択性によって示された５つの最も有効なホーミングペプチドと、それらの推定の受容体について行った。これらのホーミングペプチドを、インビボで心臓内皮細胞に選択的に結合する能力について、そしてそれらの推定の受容体に対する特異的結合について分析した。それらの推定の受容体については、心臓内皮細胞での発現についても分析した。個々のファージがディスプレイする特定のホーミングペプチドを、血管マーカーであるフルオレセイン結合トマトレクチンと共に、マウスに個々に静脈内注射した。抗Ｔ７抗体を伴うファージの局在化は、ファージがディスプレイするペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）、ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）、ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）、またはＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）が心臓内皮細胞中に存在することを示した（図３ＡからＣ、Ｅ、およびＦ）。ＣＬＩＤＬＨＶＭＣ（配列番号１０）をディスプレイするファージをネガティブ対照とし（図３Ｄ）、そしてこれは、ファージ免疫染色によっても心臓には存在しなかった（図３Ｄ）。６つのファージはいずれも、同じ条件下では心臓以外の組織においては検出されなかった。
【０１７６】
これらの結果は、ファージがディスプレイするペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）、ＣＡＲＰＡＲ（配列番号５）、ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）、またはＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）がインビボで心臓血管に局在化することを示している。
【０１７７】
免疫組織化学を以下のように行った。ラットのモノクローナル抗マウスＣＤ３１（１：１００）は、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から入手し、ウサギポリクローナル抗Ｔ７ファージ（１：５００）およびニワトリ抗マウスＣＲＩＰ２  ＩｇＹ（１：１００）はＧｅｎＷａｙ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手した。二次抗体であるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８ヤギ抗ラットＩｇＧ（１：１０００）、およびＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５９４ヤギ抗ラットまたはウサギＩｇＧ（１：１０００）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）から入手した；二次抗体ＧＡＹＦＣ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５９４ヤギ抗ＩｇＹ  Ｆｃ（１：２５０）はＧｅｎＷａｙから入手した。凍結切片を、ブロッキング緩衝液（１×ＰＢＳ中の５％の正常なヤギ血清および０．５％のＢＳＡ）とともに１時間プレインキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄し、そして４℃で一晩、目的の一次抗体とともにインキュベートした。一晩のインキュベーションの後、二次抗体を添加し、室温で１時間インキュベートした。スライドをＰＢＳで３回洗浄し、ＤＡＰＩを備えたＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ  Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に取り付けた。血管を、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入したフルオレセイン（２００μｌのＰＢＳ中に１００μｇ）に結合させられたトマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）レクチンの静脈内注射によってさらに視覚化した。
【０１７８】
Ｂ．ホーミングペプチドはそれらの推定の同種受容体でトランスフェクトした細胞に結合する
４つの推定の心臓ホーミング受容体（ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、およびＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０）について全長のｃＤＮＡを構築し、２９３Ｔ細胞の中で発現させた。図４に示すように、４個の同種ペプチドをそれぞれディスプレイするファージは、対照ファージよりも３００倍から５００倍多く、その対応する推定受容体でトランスフェクトした細胞に結合した（小さな点をつけた棒）。加えて、ファージの結合は、１００μｇ／ｍｌの同種ペプチド（黒色の棒）の存在下で阻害されたが、無関係なホーミングペプチド（白色の棒）によっては阻害されなかった。これらの結果によって、ホーミングペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）は受容体ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に特異的に結合し；ホーミングペプチドＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）は受容体Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８に特異的に結合し；ホーミングペプチドＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）はＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質受容体に特異的に結合し；そしてホーミングペプチドＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）は受容体ｂｃ１０に特異的に結合することを確認した。
【０１７９】
受容体でのトランスフェクションおよびファージ結合アッセイは以下のように行った。２９３Ｔ細胞を、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２、Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０をコードする、ｐＭＨ６由来のプラスミド（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で、Ｆｕｇｅｎｅトランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用してトランスフェクトした。簡単に説明すると、１０μｇのプラスミドを、７００μｌの血清を含まないＤＭＥＭと３０μｌのＦｕｇｅｎｅトランスフェクション試薬と混合し、室温で１５分間インキュベートした。その後、混合物を細胞に添加した。４８時間後、細胞を、ＥＤＴＡを使用して培養皿から引き離し、ＰＢＳで１回洗浄した。ファージによってディスプレイされるＣＲＰＰＲ（配列番号１）、ＣＫＲＡＶＲ（配列番号７）、ＣＲＳＴＲＡＮＰＣ（配列番号１１）、またはＣＰＫＴＲＲＶＰＣ（配列番号１２）と、組み換え体ではない対照ファージ（１×１０９ｐ．ｆ．ｕ．）を、トランスフェクトした細胞とともに４℃で２時間インキュベートした。結合していないファージを、ＰＢＳ中の１％のＢＳＡでの５回の洗浄によって除去した。結合したファージを、細菌の添加によってレスキューし；結合効率を、上記のプラークアッセイによって決定した。
【０１８０】
競合アッセイ用のペプチドを、Ｔｈｅ  Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆａｃｉｌｉｔｙで、固相合成装置の中でＦｍｏｃ化学を使用して合成し、その後、ＨＰＬＣによって精製し、そして質量分析法によってそれらの実体を確認した。フルオレセイン結合ペプチドを、Ｗｅｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：１３００３−１３００８（２０００）に記載されているように合成した。競合アッセイを、細胞およびファージへの１００μｇのペプチドの添加によって行い、その後、４℃で２時間インキュベーションした。１％のＰＢＳでの５回の洗浄後、結合したファージをレスキューし、プラークアッセイによって定量した。
【０１８１】
Ｃ．受容体ｍＲＮＡは心臓内皮細胞中に存在する
心臓ホーミングペプチドの発現を、実時間ＰＣＲおよびインサイチュハイブリダイゼーションを使用して組織の中で実験した。実時間−ＰＣＲ分析（図５Ａ）は、配列番号１のペプチドの受容体である、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２が心臓で強く発現され、肺および脳では低いレベルで発現されることを示した。骨格筋を含むいくつかの他の組織は、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２  ｍＲＮＡについてはネガティブであった。他の心臓ホーミング受容体Ｓｉｇｉｒｒ／Ｔｉｒ８、ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質、およびｂｃ１０もまた、心臓で最も高く発現されており、他の組織では低いレベルで発現されていた（図５Ａ）。ＲＴ−ＰＣＲ分析の特異性を、融解曲線およびＤＮＡ配列分析と組み合わせたゲル電気泳動によって確認した（図５Ｂ）。
【０１８２】
インサイチュハイブリダイゼーションを使用して、ＲＴ−ＰＣＲ分析を確認し、そして目的の受容体が心臓および他の組織の内皮細胞上で発現されているかどうかを決定した。図５Ｃの第１列目に示すように、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２シグナルは、心臓全体に豊富に存在しており、血管発現パターンを示した（図５Ｃ、第１列目）。痕跡程度の発現がまた、肺と脳で観察されたが、腎臓では観察されなかった。インサイチュハイブリダイゼーションでは、肺でのＨＬＰ／ＣＲＩＰ２  ｍＲＮＡの発現が検出されたが、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージのホーミングは、この組織ではごくわずかしか検出されなかった（上記を参照のこと）。
【０１８３】
Ｓｉｇｉｒｒ／ＴＩＲ８のインサイチュハイブリダイゼーション分析によってもまた、ＲＴ−ＰＣＲの結果を確認した。シグナルは、心臓血管においては強く（図５、第２列目）、肺および腎臓では弱く、そして脳には存在しなかった。ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質ｍＲＮＡは、心臓全体に存在しており、心臓血管で最も顕著であった（図５、第３列目）。ＭｐｃＩＩ−３関連タンパク質ｍＲＮＡはまた、いくつかの肺血管にも存在していたが、脳と腎臓には存在しなかった。図５Ｃの最後の列にさらに示すように、ｂｃ１０  ｍＲＮＡは心臓血管に存在しており、さらに、一部の肺、腎臓、および筋肉の血管にも存在していたが、脳の血管には存在しなかった。まとめると、インサイチュハイブリダイゼーションの結果によって、ＲＴ−ＰＣＲの結果の多くが確認された：４つの心臓ホーミング受容体は心臓で最も多く発現される。さらに、４つの心臓ホーミング受容体のｍＲＮＡは、心臓内皮細胞に局在化しており、これは、肺血管に選択的にホーミングする開示したペプチドの局在化と一致する。
【０１８４】
非放射性インサイチュハイブリダイゼーションは、本質的には、Ｓｔ  Ｃｒｏｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８９：１１９７−１２０２（２０００）に記載されているように行った。簡単に説明すると、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）で標識したアンチセンスＲＮＡプローブを、アンチセンスプライマーの中に組み込んだＳＰ６プロモーターと、センスプライマーの中に組み込んだＴ７プロモーターを使用してＰＣＲ増幅によって作成した。インビトロでの転写を、ＤＩＧ  ＲＮＡ標識試薬とＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて行った。凍結した組織切片を４％のパラホルムアルデヒドで固定し、ペプシンで透過化し、ＲＮＡプローブ（２００ｎｇ／ｍｌ）とともに５５℃で一晩インキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）ウサギ抗ＤＩＧ抗体（ＤＡＫＯ；Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）を使用して、シグナルの増幅のためのＧｅｎＰｏｉｎｔキット（ＤＡＫＯ）を使用するＢｉｏｔｉｎ−Ｔｙｒａｍｉｄｅの沈着を触媒した。さらなる増幅を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）ウサギ抗ビオチン（ＤＡＫＯ）、ビオチン−チラミド（ｔｙｒａｍｉｄｅ）、およびアルカリホスファターゼ（ＡＰ）ウサギ抗ビオチン（ＤＡＫＯ）を添加することによって行った。シグナルを、ヘマトキシリンで対比染色した組織切片中のＡＰ基質であるＦａｓｔ  Ｒｅｄ  ＴＲ／Ｎａｐｔｈｏｌ  ＡＳ−ＭＸ（Ｓｉｇｍａ）を用いて検出した。
【０１８５】
実時間ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイは、原則としてＧａｌａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１１２８１−１１２９２（２００４）に記載されているように行った。簡単に説明すると、全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ；Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて目的の臓器から抽出し、ｃＤＮＡを、５０ｎｇの全ＲＮＡから、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して調製した。実時間ＰＣＲを、製造業者の説明書にしたがって、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ＳＹＢＲグリーンＤＮＡマスターミックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して行った。相対的な発現の分析のために、対照遺伝子であるグリセロアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）のレベルを、受容体の発現を正規化するために使用した。ＧＡＰＤＨによって正規化した心臓での発現を、それぞれの受容体について１００％と定義し、比較のための基準として使用した。実時間ＰＣＲの特異性を、各ＰＣＲ産物の融解曲線、ならびに、アガロースゲル電気泳動およびＤＮＡ配列分析によって確認した。
【０１８６】
（実施例４）
静脈内注射したＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドは心臓血管の中にＨＬＰ／ＣＲＩＰ２タンパク質と一緒に局在化する。
【０１８７】
本実施例は、そのペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）の、その同種受容体であるＨＬＰ／ＣＲＩＰ２との共局在を明らかにする
ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドの局在化を、抗ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２抗体を使用して、心臓でのＨＬＰ／ＣＲＩＰ２レセプターの発現と比較した。図６Ａおよび６Ｂに示すように、静脈内注射したＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドに由来する蛍光は、心臓血管および心内膜の両方において、血管マーカーであるＣＤ３１と広い範囲に一緒に局在化した。さらに、フルオレセインで標識された対照ペプチドは、心臓では検出されなかった（図６Ｃ）。抗ＨＬＰ−ＣＲＩＰ２染色もまた、心臓血管および心内膜において、ＣＤ３１およびペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）と一緒に局在化していた（図６Ｄから６Ｆ）。
【０１８８】
心臓血管に対するＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージの結合の特異性を、競合アッセイを使用してアッセイした。図７Ａおよび７Ｂに示すように、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ペプチドと抗ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２抗体の両方が、用量依存性の様式で、心臓に由来する細胞懸濁液に対するＣＲＰＰＲ（配列１）をディスプレイするファージの結合をブロックした。ネガティブ対照としての、２つの他の心臓ホーミングペプチドは、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）ファージの結合に影響を及ぼさなかった。さらに、一緒に注射した抗ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２抗体は、ＣＲＰＰＲ（配列番号１）−ファージ（図７Ｃ）のインビボでのホーミングを阻害した（図７Ｃ）。まとめると、これらの結果は、ペプチドＣＲＰＰＲ（配列番号１）が、ＨＬＰ／ＣＲＩＰ２に対する特異的結合を通じて、心臓血管に選択的にホーミングすることを示している。
【０１８９】
括弧書きまたは他の方法で上記に提供された全ての学術論文、参考文献、および特許の引用は、既発表であるかそうではないかにはかかわらず、それらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。
【０１９０】
本発明は、上記に提供される実施例を引用して記載されているが、種々の変更が、本発明の精神を逸脱することなく行われ得ることが理解されるはずである。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【０１９１】
【表１−１】
0005993413.tif 000002
【０１９２】
【表１−２】
0005993413.tif 000003
【０１９３】
【表１−３】
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【０１９４】
【表１−４】
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【０１９５】
【表１−５】
0005993413.tif 000006
【０１９６】
【表１−６】
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【０１９７】
【表１−７】
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【０１９８】
【表１−８】
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【０１９９】
【表１−９】
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【０２００】
【表１−１０】
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【０２０１】
【表１−１１】
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【０２０２】
【表１−１２】
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【０２０３】
【表１−１３】
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【０２０４】
【表１−１４】
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【０２０５】
【表１−１５】
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【０２０６】
【表１−１６】
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【０２０７】
【表１−１７】
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【０２０８】
【表１−１８】
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【０２０９】
【表１−１９】
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【０２１０】
【表１−２０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３】
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【配列表】
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