(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物：
【化１】
0005847362.tif 000041
〔式中、
環Ａは、以下の式で表される基：
【化２】
0005847362.tif 000042
Ｘは、水素原子、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル又はヒドロキシメチルであり；
Ｒ１は、以下の式で表される基：
【化３】
0005847362.tif 000043
（式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子又はＣ１−６アルキルであり；
ｍは、０、１又は２であり；
ただし、ｍが２であるとき、２つのＲ１ａ及びＲ１ｂは、それぞれ互いに異なっていてもよい。）；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、水酸基又はＣ１−６アルコキシであり；
Ｕは、以下の式で表される基：
【化４】
0005847362.tif 000044
（式中、
Ｒ３ａ及びＲ３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル又はＣ１−６アルコキシＣ１−６アルキルである。）；
Ｙは、０、１又は２であり；
ただし、Ｙが２であるとき、２つのＲ２は、互いに異なっていてもよい。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
式（Ｉａ）で表される、請求項１に記載の化合物：
【化５】
0005847362.tif 000045
〔式中、
環Ａ及びＸは、請求項１と同じ意味であり；
Ｒ１ｃ及びＲ１ｄは、それぞれ独立して、水素原子又はメチルであり；
Ｕ１は、以下の式で表される基：
【化６】
0005847362.tif 000046
（式中、
Ｒ３ｃ及びＲ３ｄは、それぞれ独立して、水素原子、メチル又はヒドロキシメチルである。）；
ｎは、０、１又は２であり；
ただし、ｎが２であるとき、２つのＲ１ｃ及びＲ１ｄは、それぞれ互いに異なっていてもよい。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
式（Ｉｂ）で表される、請求項２に記載の化合物：
【化７】
0005847362.tif 000047
〔式中、
Ｒ１ｃ及びＲ１ｄは請求項２と同じ意味である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
以下の式で表される化合物：
【化８】
0005847362.tif 000048
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項５】
以下の式で表される化合物：
【化９】
0005847362.tif 000049
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項６】
以下の式で表される化合物：
【化１０】
0005847362.tif 000050
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項７】
以下の式で表される化合物：
【化１１】
0005847362.tif 000051
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項８】
以下の式で表される化合物：
【化１２】
0005847362.tif 000052
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項９】
以下の式で表される化合物：
【化１３】
0005847362.tif 000053
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項１０】
以下の式で表される化合物：
【化１４】
0005847362.tif 000054
又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項１１】
請求項１〜１０の何れかに記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項１２】
抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品として有用なシクロヘキシルピリジン誘導体に関する。【０００２】
さらに詳しく述べれば、本発明は、サブスタンスＰ／ニューロキニン１（ＮＫ１）受容体拮抗作用を有し、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐（ＣＩＮＶ）等の予防又は治療薬として有用なシクロヘキシルピリジン誘導体又はその薬理学的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＩＮＶは、延髄外側網様体に存在する嘔吐中枢が刺激を受けることによって発現する。延髄の最後野及び孤束核にはＮＫ１受容体が存在し、ＮＫ１受容体は、嘔吐に強く関与していると考えられている。
抗悪性腫瘍剤の投与により、消化管に存在する腸クロム親和性（ＥＣ）細胞からのセロトニン分泌が亢進し、セロトニンが消化管の５−Hydroxytryptamine３（５−ＨＴ３）受容体を介して嘔吐中枢を直接刺激する。また、セロトニンが第４脳室最後野に存在する化学受容器引金帯（ＣＴＺ）を介して嘔吐中枢を刺激することにより、悪心及び嘔吐が発現する。サブスタンスＰは、セロトニンと同様、消化管のＥＣ細胞内に存在し、抗悪性腫瘍剤投与により分泌が促進される。近年、サブスタンスＰが、ＣＴＺに存在するＮＫ１受容体を介して、又は中枢神経系のＮＫ１受容体に結合することにより嘔吐を誘発することが明らかにされ、ＮＫ１受容体が制吐剤の開発ターゲットとして注目されている（非特許文献１）。【０００４】
アプレピタント（Aprepitant）は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として承認された、世界初の選択的ＮＫ１受容体拮抗剤である。アプレピタントの作用機序は、ＣＩＮＶの誘発経路の１つである、サブスタンスＰと中枢神経系ＮＫ１受容体の結合を選択的に阻害し、ＣＩＮＶを予防すると考えられている。アプレピタントは、ＣＩＮＶの予防薬として販売されている（非特許文献２）。【０００５】
アプレピタントは、チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）３Ａ４により代謝されることが知られている。また、アプレピタントは、ＣＹＰ３Ａ４に対する用量依存的阻害作用、ＣＹＰ３Ａ４の誘導作用及びＣＹＰ２Ｃ９の誘導作用を有していることも知られている。そのため、アプレピタントは、ＣＹＰ３Ａ４を阻害若しくは誘導する薬剤、又はＣＹＰ３Ａ４若しくはＣＹＰ２Ｃ９により代謝される薬剤と薬物間相互作用を起こす可能性がある。例えば、アプレピタントのＣＹＰ３Ａ４阻害作用によって、デキサメタゾンの代謝が阻害される場合があり、デキサメタゾンは、アプレピタントと併用する場合に用量調整が必要になるとする報告がある（非特許文献３）。
そのため、アプレピタントの使用には、アプレピタントのＣＹＰ３Ａ４阻害作用に基づく薬物間相互作用に十分な注意が必要である。【０００６】
以上のことから、ＣＩＮＶの予防又は治療において、薬物間相互作用が少ない新規なＮＫ１受容体拮抗剤が望まれている。【０００７】
Casopitant、Netupitant、Ezlopitant、Rolapitant、Vestipitant及びVofopitant等のＮＫ１受容体拮抗作用を有する化合物が知られている。
しかしながら、Casopitantは、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用及びそれに起因する薬物間相互作用を有することが報告されている（非特許文献４）。Casopitantは、米国及び欧州において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、申請後に開発が中止された。Netupitantは、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として開発中であるが、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用及びそれに起因する薬物間相互作用を有することが報告されている（非特許文献５）。Ezlopitantは、米国において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、その開発は中止された。Vofopitantは、欧州において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、その開発は中止された。
上記化合物には、開発中止されたものが多い。これらはいずれも市販に至っていない。【０００８】
ＮＫ１受容体拮抗作用を有すると主張されるピリジン誘導体が、特許文献１〜１６に記載されている。また、ピリジン誘導体のプロドラッグが、特許文献１７及び１８に記載されている。【０００９】
しかしながら、前記文献には、本願発明のシクロヘキシルピリジン誘導体は、記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６，４７９，４８３号明細書
【特許文献２】米国特許第６，７７０，６３７号明細書
【特許文献３】米国特許第７，９３９，５３３号明細書
【特許文献４】欧州特許第１，１０３，５４５号明細書
【特許文献５】米国特許第７，２１１，５７９号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２００６／００３０６００号明細書
【特許文献７】米国特許第６，５７６，７６２号明細書
【特許文献８】米国特許第６，２２５，３１６号明細書
【特許文献９】米国特許第７，６８３，０５６号明細書
【特許文献１０】米国特許第８，３４４，００５号明細書
【特許文献１１】国際公開第２０１１／０５４７７３号
【特許文献１２】米国特許出願公開第２００７／００７１８１３号明細書
【特許文献１３】米国特許出願公開第２００３／００８３３４５号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００３／０００４１５７号明細書
【特許文献１５】米国特許第６，８４９，６２４号明細書
【特許文献１６】米国特許第６，２９７，３７５号明細書
【特許文献１７】米国特許第６，５９３，４７２号明細書
【特許文献１８】米国特許第８，４２６，４５０号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】P. J. Heskethら、「European Journal of Cancer」、２００３年、第３９巻、ｐ．１０７４−１０８０
【非特許文献２】Toni M. Dandoら、「Drugs」、２００４年、第６４巻、第７号、ｐ．７７７−７９４
【非特許文献３】Jacqueline B. McCreaら、「CLINICAL PHARMACOLOGY & THERAPEUTICS」、２００３年、第７４巻、第１号、ｐ．１７−２４
【非特許文献４】Stefano Zamunerら、「British Journal of Clinical Pharmacology」、２０１０年、第７０巻、第４号、ｐ．５３７−５４６
【非特許文献５】Corinna Lanzarottiら「Support Care Cancer」、２０１３年、第２１巻、第１０号、ｐ．２７８３−２７９１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、ＮＫ１受容体拮抗作用を有し、アプレピタントに比べＣＹＰ３Ａ４の阻害作用が減弱された、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療に有用な新規化合物を提供することを課題とする。本発明は、好ましくは、中枢移行性及び薬効の持続性に優れた前記化合物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、下記式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩に関する。【００１４】
すなわち、本発明は、下記の〔１〕〜〔１２〕等に関する。
〔１〕式（Ｉ）で表される化合物：
【化１】
0005847362.tif 000002
〔式中、
環Ａは、以下の式で表される基：
【化２】
0005847362.tif 000003
Ｘは、水素原子、シアノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル又はヒドロキシメチルであり；
Ｒ１は、以下の式で表される基：
【化３】
0005847362.tif 000004
（式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、それぞれ独立して、水素原子、フッ素原子又はＣ１−６アルキルであり；
ｍは、０、１又は２であり；
ただし、ｍが２であるとき、２つのＲ１ａ及びＲ１ｂは、それぞれ互いに異なっていてもよい。）；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、水酸基又はＣ１−６アルコキシであり；
Ｕは、以下の式で表される基：
【化４】
0005847362.tif 000005
（式中、
Ｒ３ａ及びＲ３ｂは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル又はＣ１−６アルコキシＣ１−６アルキルである。）；
Ｙは、０、１又は２であり；
ただし、Ｙが２であるとき、２つのＲ２は、互いに異なっていてもよい。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔２〕式（Ｉａ）で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化５】
0005847362.tif 000006
〔式中、
環Ａ及びＸは、前記〔１〕と同じ意味であり；
Ｒ１ｃ及びＲ１ｄは、それぞれ独立して、水素原子又はメチルであり；
Ｕ１は、以下の式で表される基：
【化６】
0005847362.tif 000007
（式中、
Ｒ３ｃ及びＲ３ｄは、それぞれ独立して、水素原子、メチル又はヒドロキシメチルである。）；
ｎは、０、１又は２であり；
ただし、ｎが２であるとき、２つのＲ１ｃ及びＲ１ｄは、それぞれ互いに異なっていてもよい。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔３〕式（Ｉｂ）で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
【化７】
0005847362.tif 000008
〔式中、
Ｒ１ｃ及びＲ１ｄは前記〔２〕と同じ意味である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔４〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化８】
0005847362.tif 000009
又はその薬理学的に許容される塩。
〔５〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化９】
0005847362.tif 000010
又はその薬理学的に許容される塩。
〔６〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化１０】
0005847362.tif 000011
又はその薬理学的に許容される塩。
〔７〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化１１】
0005847362.tif 000012
又はその薬理学的に許容される塩。
〔８〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化１２】
0005847362.tif 000013
又はその薬理学的に許容される塩。
〔９〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化１３】
0005847362.tif 000014
又はその薬理学的に許容される塩。
〔１０〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
【化１４】
0005847362.tif 000015
又はその薬理学的に許容される塩。
〔１１〕前記〔１〕〜〔１０〕の何れかに記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
〔１２〕抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物である、前記〔１１〕に記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の化合物は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有する。また、本発明の化合物のＣＹＰ３Ａ４の阻害作用は、アプレピタントに比べ減弱されている。本発明の好ましい化合物は、中枢移行性に優れる。本発明のさらに好ましい化合物は、中枢移行性及び薬効の持続性に優れる。
したがって、本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】試験例６のシスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する作用を示す。図中、棒グラフは左から、急性期（Acute）の対照群（Control）、実施例１３の化合物０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与群（Ex. No. 13、0.01 mg/kg、 iv）、及び実施例１３の化合物０．１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与群（Ex. No. 13、0.1 mg/kg、 iv）の値、並びに遅発期（Delayed）の対照群、実施例１３の化合物０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与群、及び実施例１３の化合物０．１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与群の値をそれぞれ示す。縦軸は、レッチング及び嘔吐の発現回数（Retches + Vomits）（対照群３例の平均値＋標準誤差、０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与群３例の平均値＋標準誤差、及び０．１ｍｇ／ｋｇ静脈内投与群３例の平均値＋標準誤差）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施の形態についてより詳細に説明する。
【００１８】
本発明において、各用語は、特に断らない限り、以下の意味を有する。
【００１９】
「Ｃ１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状のアルキル基をいい、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等が挙げられる。
「Ｃ１−６アルコキシ」とは、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状のアルコキシ基をいい、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ等が挙げられる。
【００２０】
「ヒドロキシＣ１−６アルキル」とは、水酸基で置換されたＣ１−６アルキル基をいい、例えば、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシ−１，１−ジメチルメチル基、２−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル基、３−ヒドロキシプロピル基等が挙げられる。
「Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル」とは、上記Ｃ１−６アルコキシで置換されたＣ１−６アルキルをいう。
【００２１】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、１つ又はそれ以上の不斉炭素原子が存在する場合、本発明は、各々の不斉炭素原子がＲ配置の化合物、Ｓ配置の化合物及びそれらの任意の組み合わせの化合物も包含する。また、それらのラセミ化合物、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー及びジアステレオマー混合物も本発明の範囲に含まれる。本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、シス−トランス異性体が存在する場合、本発明は、そのシス−トランス異性体のいずれも包含する。
【００２２】
本発明において、立体化学の決定は、当技術分野で周知の方法で行うこともできる（例えば、「特論  ＮＭＲ立体化学」（講談社）、（２０１２年発行）、５９ページ参照）。
【００２３】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物は、必要に応じて常法に従い、その薬理学的に許容される塩にすることもできる。このような塩としては、酸付加塩又は塩基との塩を挙げることができる。
【００２４】
酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸との酸付加塩、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、プロピオン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、酪酸、シュウ酸、マロン酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、炭酸、安息香酸、グルタミン酸、アスパラギン酸等の有機酸との酸付加塩を挙げることができる。
【００２５】
塩基との塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等の無機塩基との塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピロリジン、アルギニン、リジン、コリン等の有機塩基との塩を挙げることができる。
【００２６】
本発明において、薬理学的に許容される塩には、水又はエタノール等の医薬品として許容される溶媒との溶媒和物も含まれる。
【００２７】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ１及びＲ２は、シクロヘキサン環上の置換基を表す。
【００２８】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物の一つの実施態様において、環上に置換基を有するシクロヘキサン環として、以下の式で表される基が挙げられる：
【００２９】
【化１５】
0005847362.tif 000016
式中、（＊）を付された結合はピリジン環との結合部位であり、Ｒ１及びＲ２は前記〔１〕と同じ意味である。
【００３０】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、以下の方法若しくはそれに準じた方法、又は文献記載の方法若しくはそれに準じた方法に従い、製造することができる。
【００３１】
スキーム１
【化１６】
0005847362.tif 000017
式中のＬ１及びＬ２は、それぞれ独立して塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基等の脱離基であり、環Ａ、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ及びＹは前記と同じ意味を持つ。
【００３２】
工程１（process 1）
化合物（２）と化合物（３）とを、不活性溶媒中、塩基及びパラジウム触媒存在下、カップリング反応を行い、化合物（４）を製造することもできる。
【００３３】
工程２（process 2）
化合物（４）と化合物（５）とを、不活性溶媒中、塩基存在下、縮合反応させることにより化合物（６）を製造することもできる。
【００３４】
工程３（process 3）
化合物（６）と化合物（７）とを、不活性溶媒中、塩基及びパラジウム触媒存在下、カップリング反応を行い、化合物（８）を製造することもできる。
不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、エタノール、水、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，６−ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。パラジウム触媒としては、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド  ジクロロメタン錯体（１：１）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）が挙げられる。反応温度は通常０℃から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。
上記カップリング反応は、マイクロウェーブ反応装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて行うこともできる。マイクロウェーブ反応装置を用いて反応を行う場合、使用する原料物質、溶媒、及び機種などにより異なるが、圧力範囲：１〜３０ｂａｒ、出力領域：１〜４００Ｗ、反応温度：室温〜３００℃、反応時間：１分〜１日間の条件下で反応を行うことができる。
なお、Ｒ１又はＲ２の官能基に保護基が必要な場合、保護基を導入し、上記カップリング反応を行うこともできる。
【００３５】
工程４（process 4）
化合物（８）のオレフィンを接触還元法などにより還元し、式（Ｉ）で表される化合物を製造することもできる。接触還元法は、例えば、化合物（８）を水素ガス雰囲気下、不活性溶媒中、触媒を用いることにより行うことができる。用いられる不活性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、酢酸が挙げられる。触媒としては、例えば、パラジウム炭素粉末、ロジウム炭素粉末、白金炭素粉末、バナジウムでドープされた白金炭素粉末が挙げられる。反応温度は通常室温から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。
【００３６】
なお、上記工程３において官能基に保護基を導入した場合、上記還元反応後に脱保護し、式（Ｉ）で表される化合物を製造することもできる。
スキーム２
【００３７】
【化１７】
0005847362.tif 000018
式中のＲ１、Ｒ２及びＹは前記と同じ意味を持つ。
【００３８】
工程５（process 5）
化合物（９）を不活性溶媒中、塩基存在下、トリフルオロメタンスルホン酸無水物と反応させ化合物（１０）を製造することもできる。不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，６−ルチジン、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。反応温度は通常０℃から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。
【００３９】
工程６（process 6）
化合物（１０）と化合物（１１）とを、不活性溶媒中、塩基及びパラジウム触媒存在下、カップリング反応を行い、化合物（７）を製造することもできる。不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、炭酸カリウム、酢酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，６−ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。パラジウム触媒としては、例えば、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド  ジクロロメタン錯体（１：１）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリドが挙げられる。反応温度は通常室温から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。
【００４０】
上記に示したスキームは、本発明の式（Ｉ）で表される化合物又はその製造中間体を製造する為の方法の例示である。上記スキームは、当業者の容易に理解され得るようなスキームへの様々な改変が可能である。
【００４１】
上記に示したスキームにおいて、官能基の種類により保護基が必要な場合は、常法に従い適宜導入及び除去の操作を組み合わせて実施をすることもできる。
【００４２】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物及びその製造中間体は、必要に応じて、当該技術分野の当業者にとって周知の単離及び精製手段である、溶媒抽出、晶析、再結晶、クロマトグラフィー、分取高速液体クロマトグラフィー等により、単離及び精製することもできる。
【００４３】
本発明の化合物は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有するので、ＮＫ１受容体が介在する種々の疾患の予防又は治療薬としても使用できる。例えば、本発明の化合物は、制吐剤として有用であり、特に抗悪性腫瘍剤（例えば、シスプラチン）投与に伴う消化器症状（例えば、悪心及び嘔吐）の予防薬として有用である。本発明の好ましい化合物は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う急性期の悪心及び嘔吐のみならず、抗悪性腫瘍剤投与に伴う遅発期の悪心及び嘔吐に対しても有用である。
【００４４】
また、一つの実施態様として、本発明の化合物は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有するので、例えば、術後の悪心及び嘔吐（ＰＯＮＶ）、放射線療法に伴う悪心及び嘔吐、モルヒネ誘発嘔吐、若しくは乗り物酔いの予防薬、又は統合失調症、社会不安障害、不安及びうつ病、アルコール依存症、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、咳嗽、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、掻痒症、疼痛、偏頭痛、耳鳴、前立腺肥大症、過活動膀胱、若しくは尿失禁の治療薬としても用いることもできる。
【００４５】
本発明の医薬組成物は、用法に応じ種々の剤型のものが使用される。このような剤型としては、例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤、注射剤、液剤、軟膏剤、坐剤、貼付剤を挙げることができ、経口又は非経口的に投与される。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及び少なくとも１つの医薬品添加物を用いて調製される。これら医薬組成物は、その剤型に応じ製剤学的に公知の手法により、適切な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等の医薬品添加物と適宜混合、希釈又は溶解することにより調製することもできる。
【００４７】
本発明の医薬組成物を予防又は治療に用いる場合、その有効成分である本発明の式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の投与量は、患者の年齢、性別、体重、疾患及び治療の程度等により適宜決定される。成人に対する投与量は、経口投与の場合、例えば、０．１〜１０００ｍｇ／日、０．１〜５００ｍｇ／日、０．１〜１００ｍｇ／日、又は０．１〜５０ｍｇ／日の範囲で定めることもでき、１日投与量を１回、２回、３回又は４回に分けて投与してもよい。また、非経口投与の場合、例えば、０．１〜１０００ｍｇ／日、０．１〜５００ｍｇ／日、０．１〜１００ｍｇ／日、又は０．１〜５０ｍｇ／日の範囲で定めることもでき、１日投与量を１回、２回、３回又は４回に分けて投与してもよい。
【００４８】
本発明の医薬組成物を抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物として用いる場合、抗悪性腫瘍剤の投与前に本薬を投与して用いることもできる。例えば、化学療法において、抗悪性腫瘍剤の投与直前〜１時間３０分前に本薬を患者に投与し、２日目以降は、午前中に投与して用いることもできる。
【００４９】
一つの実施態様として、本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩は、ＮＫ１受容体拮抗薬以外の他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。組み合わせて使用することができる他の薬剤としては、例えば、コルチコステロイド、５−ＨＴ３受容体拮抗型制吐剤の薬剤が挙げられる。
【００５０】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩と他の薬剤とを組み合わせて使用する場合、これらの有効成分を一緒に含有する製剤、又はこれらの有効成分の個々を別々に製剤化した製剤として投与することができる。別々に製剤化した場合、それらの製剤を別々に、又は同時に投与することができる。
【００５１】
また、本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩の投与量は、組み合わせて使用する他の薬剤の投与量に応じて、適宜減量してもよい。
【実施例】
【００５２】
本発明の内容を以下の参考例、実施例及び試験例でさらに詳細に説明するが、本発明はその内容に限定されるものでない。【００５３】
参考例１
４−（４，４，５，５−テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）シクロヘキサ−３−エンカルボン酸エチル
４−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチル（１．００ｇ）及び２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（１．３９ｇ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液に室温にてトリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．７４ｇ）を加え、室温にて１６時間撹拌した。不溶物をろ去し、ジクロロメタン（５ｍＬ）にて洗浄した。ろ液を減圧下濃縮し、残渣にジクロロメタン（５ｍＬ）を加え、不溶物をろ去し、ジクロロメタン（３ｍＬ）で洗浄した。ろ液を減圧下濃縮し、残渣にジクロロメタン（３ｍＬ）を加え、不溶物をろ去し、ジクロロメタン（２ｍＬ）で洗浄した。ろ液を減圧下留去し、４−トリフルオロメタンスルホニルオキシシクロヘキサ−３−エンカルボン酸エチル（１．５７ｇ）を得た。アルゴンガス雰囲気下、４−トリフルオロメタンスルホニルオキシシクロヘキサ−３−エンカルボン酸エチル（１．５７ｇ）、ビスピナコラートジボラン（１．３９ｇ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド  ジクロロメタン錯体（１：１）（０．１３ｇ）及び酢酸カリウム（１．５３ｇ）のジメチルスルホキシド（２６ｍＬ）懸濁液を、５０℃にて４．５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜８５／１５）で精製し、表題化合物（０．８４ｇ）を得た。【００５４】
参考例２〜７
参考例１と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例２〜７の化合物を合成した。【００５５】
参考例８
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
アルゴンガス雰囲気下、(６−クロロピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０ｇ）及びＮ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルエタン−１，２−ジアミン（７．７ｇ）のジエチルエーテル（１２０ｍＬ）溶液に−７８℃にてｎ−ブチルリチウム溶液（２．６５ｍｏｌ／Ｌ テトラヒドロフラン溶液、２５ｍＬ）を滴下した。混合物を−１０℃にて２時間撹拌後、−７８℃にてヨウ素（１１．４ｇ）のジエチルエーテル（４０ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて一日撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジエチルエーテルにて抽出した。有機層を１０％ピロ亜硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（２．５９ｇ）を得た。【００５６】
参考例９
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル  
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．５９ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．３２ｇ）を加え、室温で３０分間撹拌した。氷冷下、混合物にヨウ化メチル（２．６０ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜７０／３０）で精製し、表題化合物（２．６６ｇ）を得た。【００５７】
参考例１０
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）メチルアミン
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．６６ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に氷冷下、トリフルオロ酢酸（８．２３ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣に飽和炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（１．８９ｇ）を得た。【００５８】
参考例１１
［６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル］メチルアミン
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）メチルアミン（１．８９ｇ）、４−フルオロ−２−メチルフェニルボロン酸（１．３０ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合物に室温にて酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．１６ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．３７ｇ）及び炭酸ナトリウム（３．７３ｇ）を加え、９０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（１．５６ｇ）を得た。【００５９】
参考例１２
（６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル）メチルアミン
（６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル）メチルアミン（０．７０ｇ）、２−メチルフェニルボロン酸（０．４２ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）の混合物に室温にて酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．０５８ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．１４ｇ）及び炭酸ナトリウム（１．３８ｇ）を加え、９０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜７０／３０）で精製し、表題化合物（０．５４ｇ）を得た。【００６０】
参考例１３
６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−カルボニトリル
２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン（２．５０ｇ）のＮ−メチルピロリドン（２５ｍＬ）溶液に室温にてシアン化銅（Ｉ）（２．３２ｇ）を加え、１８０℃にて１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、酢酸エチル及び水を加え、不溶物をろ去した。ろ液を飽和食塩水にて洗浄し、水層を酢酸エチルにて再抽出した。合わせた有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜７０／３０）で精製し、表題化合物（０．９０ｇ）を得た。【００６１】
参考例１４
３−アミノ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル
６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−カルボニトリル（０．３２ｇ）及び濃塩酸（１．２ｍＬ）のエタノール（３．６ｍＬ）溶液に室温にて鉄粉（０．３４ｇ）を加え、３０分間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却後、飽和重曹水を加えて塩基性にした。反応混合物に酢酸エチルを加えた後、混合物をセライト（登録商標）を通してろ過した。ろ液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．２４ｇ）を得た。【００６２】
参考例１５
３−アミノ−４−ブロモ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル
３−アミノ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル（０．２４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）溶液に室温にてＮ−ブロモスクシンイミド（０．３７ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７５／２５〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．３０ｇ）を得た。【００６３】
参考例１６
３−アミノ−６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−カルボニトリル
３−アミノ−４−ブロモ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル（０．１５ｇ）、４−フルオロ−２−メチルフェニルボロン酸（０．０８ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０７ｇ）、炭酸ナトリウム（０．２０ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（３．２ｍＬ）及び水（０．８ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１００℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０〜０／１００）にて精製し、表題化合物（０．１４ｇ）を得た。【００６４】
参考例１７
３−ベンジルオキシ−２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオン酸
アルゴンガス雰囲気下、２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）プロピオン酸メチル（０．６０ｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に−７８℃にてリチウムジイソプロピルアミド溶液（１．０９ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン−ｎ−ヘキサン溶液、２ｍＬ）を滴下し、同温にて１５分間撹拌した。反応混合物に−７８℃にてベンジルクロロメチルエーテル（０．３４ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）溶液を加え、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜７０／３０）にて精製し、３−ベンジルオキシ−２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオン酸メチル（０．７８ｇ）を得た。得られた化合物（０．７８ｇ）のエタノール（３ｍＬ）溶液に室温にて５．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（３ｍＬ）を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．７７ｇ）を得た。【００６５】
参考例１８
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．６６ｇ）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．５６ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。アルゴンガス雰囲気下、[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]メチルアミン（０．５０ｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液に氷冷下、カリウムビス(トリメチルシリル)アミド溶液（０．５ｍｏｌ／Ｌトルエン溶液、５．０ｍＬ）を滴下し、室温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に上記残渣のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて２時間撹拌した。反応混合物に１．０ｍｏｌ／Ｌ重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（１．０３ｇ）を得た。【００６６】
参考例１９及び２０
参考例１８と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例１９及び２０の化合物を合成した。【００６７】
参考例２１
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]イソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．３１ｇ）のジクロロメタン溶液（２．６ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．２６ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。３−アミノ−６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−カルボニトリル（０．１４ｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に氷冷下、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液、１．１ｍＬ）を滴下し、同温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に上記残渣のテトラヒドロフラン（２．０ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて３０分間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（０．２１ｇ）を得た。【００６８】
参考例２２
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]イソブチルアミド（０．２１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．４ｍＬ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．０１８ｇ）を加え、同温で５分間撹拌した。氷冷下、反応混合物にヨウ化メチル（０．１１ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．０９ｇ）を得た。【００６９】
参考例２３
４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エンカルボン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０８ｇ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）シクロヘキサ−３−エンカルボン酸エチル（０．０８ｇ）、炭酸ナトリウム（０．０５ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（１．０ｍＬ）、水（０．２ｍＬ）及びエタノール（０．２ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜８０／２０）にて精製し、表題化合物（０．０３ｇ）を得た。【００７０】
参考例２４〜２６
参考例２３と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例２４〜２６の化合物を合成した。【００７１】
参考例２７
２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［６−（１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカ−７−エン−８−イル）−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．５３ｇ）、８−（４，４，５，５−テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカ−７−エン（０．２９ｇ）、炭酸ナトリウム（０．３２ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．１２ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（７．５ｍＬ）、水（１．５ｍＬ）及びエタノール（１．５ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）にて精製し、表題化合物（０．５２ｇ）を得た。【００７２】
参考例２８〜３０
参考例２３と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例２８〜３０の化合物を合成した。【００７３】
参考例３１
２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}−２−メチルプロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１１ｇ）、２−メチル−２−［４−（４，４，５，５−テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）シクロヘキサ−３−エニル］プロピオン酸エチル（０．１２ｇ）、炭酸ナトリウム（０．０６ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（１．５ｍＬ）、水（０．３ｍＬ）及びエタノール（０．３ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）にて精製し、表題化合物（０．１２ｇ）を得た。【００７４】
参考例３２
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}酢酸メチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（２．００ｇ）、［４−（４，４，５，５−テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）シクロヘキサ−３−エニル］酢酸メチル（１．２６ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．２２ｇ）、２．０ｍｏｌ／Ｌ炭酸ナトリウム水溶液（５．６ｍＬ）、１，２−ジメトキシエタン（２２．５ｍＬ）及びエタノール（５．６ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（２．１４ｇ）を得た。【００７５】
参考例３３
２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（１−メチル−３−オキソシクロヘキシル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド
ヨウ化銅（Ｉ）（０．０５ｇ）のジエチルエーテル（２ｍＬ）懸濁液に氷冷下、メチルリチウム溶液（１．１３ｍｏｌ／Ｌジエチルエーテル溶液、０．４５ｍＬ）を加え、同温にて１５分間撹拌した。反応混合物に氷冷下、２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１０ｇ）のジエチルエーテル（１ｍＬ）溶液を滴下し、室温で１時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．５０ｇ）を得た。【００７６】
参考例３４
{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−２−エニリデン}酢酸エチル
水素化ナトリウム（含有率６０％、０．０１２ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）懸濁液に氷冷下、ジエチルホスホノ酢酸エチル（０．０８ｇ）を加え、同温にて３０分間撹拌した。反応混合物に室温下、２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１０ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液を加え、同温にて終夜撹拌後、５０℃にて２４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（０．０５ｇ）を得た。【００７７】
参考例３５
参考例３４と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例３５の化合物を合成した。【００７８】
参考例３６
２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［６−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル）−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド
水素ガス雰囲気下、２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［６−（１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカ−７−エン−８−イル）−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．５２ｇ）及び１０％パラジウム−炭素（０．１０ｇ、ｗｅｔ）のメタノール（１０ｍＬ）懸濁液を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮して表題化合物（０．５０ｇ）を得た。【００７９】
参考例３７
２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（４−オキソシクロヘキシル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［６−（１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカ−８−イル）−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．５０ｇ）のアセトン溶液に室温下、１．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（３．０ｍＬ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）にて精製し、表題化合物（０．４１ｇ）を得た。【００８０】
参考例３８
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−１−ヒドロキシシクロヘキシル}酢酸エチル
アルゴンガス雰囲気下、酢酸エチル（０．０２１ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液に−７８℃にてリチウムジイソプロピルアミド溶液（１．０９ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン−ｎ−ヘキサン溶液、０．２０ｍＬ）を滴下し、同温にて２０分間撹拌した。反応混合物に−７８℃にて２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（４−オキソシクロヘキシル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１０ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液を加え、室温にて２時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）にて精製し、表題化合物（０．１０ｇ）を得た。【００８１】
参考例３９
２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシリデン}プロピオン酸エチル
水素化ナトリウム（含有率６０％、０．０１７ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）懸濁液に氷冷下、２−ホスホノプロピオン酸トリエチル（０．１１ｇ）を加え、同温にて３０分間撹拌した。反応混合物に室温下、２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（４−オキソシクロヘキシル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１４ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液を加え、５０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．１３ｇ）を得た。【００８２】
参考例４０
{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸エチル
水素ガス雰囲気下、{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−２−エニリデン}酢酸エチル（０．０３ｇ）及び１０％パラジウム−炭素（０．０１ｇ、ｗｅｔ）のメタノール（１ｍＬ）懸濁液を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。【００８３】
参考例４１
参考例４０と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例４１の化合物を合成した。【００８４】
参考例４２
２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}プロピオン酸エチル
水素ガス雰囲気下、２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシリデン}プロピオン酸エチル（０．１３ｇ）及び１０％パラジウム−炭素（０．０２５ｇ、ｗｅｔ）のメタノール（５ｍＬ）懸濁液を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮して表題化合物（０．１１ｇ）を得た。【００８５】
参考例４３
４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサンカルボン酸エチル
水素ガス雰囲気下、４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エンカルボン酸エチル（０．０３ｇ）及び１０％パラジウム−炭素（０．０１０ｇ、ｗｅｔ）のエタノール（１ｍＬ）懸濁液を室温にて１４時間撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７０／３０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。【００８６】
参考例４４〜４７
参考例４３と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例４４〜４７の化合物を合成した。【００８７】
参考例４８
{４−［５−{［３−ベンジルオキシ−２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}酢酸
{４−［５−{［３−ベンジルオキシ−２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}酢酸エチル（０．１１ｇ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、メタノール（０．５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）の混合物に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０３ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．４ｍＬ）を加えた後、溶媒を減圧下留去した。残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル／メタノール＝１００／０〜９０／１０）にて精製し、表題化合物（０．０５ｇ）を得た。【００８８】
参考例４９及び５０
ｔｒａｎｓ−２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}−２−メチルプロピオン酸エチル（参考例４９）、及びｃｉｓ−２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}−２−メチルプロピオン酸エチル（参考例５０）
水素ガス雰囲気下、２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}−２−メチルプロピオン酸エチル（０．１１ｇ）、１０％パラジウム−炭素（０．０３ｇ、ｗｅｔ）、メタノール（２ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１ｍＬ）の混合物を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）にて精製し、参考例４９の化合物（０．０５ｇ）及び参考例５０の化合物（０．０４ｇ）を得た。上記クロマトグラフィーにおいて、高極性側の化合物が参考例４９の化合物であり、低極性側の化合物が参考例５０の化合物であった。【００８９】
参考例５１
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸メチル
水素ガス雰囲気下、{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}酢酸メチル（２．１４ｇ）及び１０％パラジウム−炭素（E101 NE/W タイプ（EVONIK））（０．２１ｇ）のメタノール（９６ｍＬ）懸濁液を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（２．１３ｇ）を得た。【００９０】
参考例５２
｛４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−１−メチルシクロヘキシル}酢酸メチル
水素化ナトリウム（含有率６０％、０．０２０ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）懸濁液に氷冷下、ジメチルホスホノ酢酸メチル（０．０９ｇ）を加え、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に室温下、２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−Ｎ−［４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−６−（４−オキソシクロヘキシル）ピリジン−３−イル］−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１５ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液を加え、５０℃にて３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜３０／７０）にて精製し、{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシリデン}酢酸メチル（０．１５ｇ）を得た。
ヨウ化銅（Ｉ）（０．０５ｇ）のジエチルエーテル（０．４０ｍＬ）懸濁液に氷冷下、メチルリチウム溶液（１．１３ｍｏｌ／Ｌジエチルエーテル溶液、０．５０ｍＬ）を加え、同温にて１０分間撹拌後、溶媒を減圧下濃縮した。アルゴンガス雰囲気下、残渣に氷冷下、ジクロロメタン（０．４０ｍＬ）を加え５分間撹拌後、溶媒を減圧下濃縮した。残渣にジクロロメタン（０．４０ｍＬ）を加え、−７８℃に冷却した。混合物に塩化トリメチルシリル（０．０３ｇ）を加えた後、{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシリデン}酢酸メチル（０．０９ｇ）のジクロロメタン（１．０ｍＬ）溶液を滴下し、氷冷下にて１時間、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（０．０８ｇ）を得た。【００９１】
参考例５３
参考例１６と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例５３の化合物を合成した。【００９２】
参考例５４
参考例２１と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例５４の化合物を合成した。【００９３】
参考例５５
参考例２２と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例５５の化合物を合成した。【００９４】
参考例５６及び５７
参考例２３と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例５６及び５７の化合物を合成した。【００９５】
参考例５８及び５９
参考例４３と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例５８及び５９の化合物を合成した。【００９６】
参考例６０
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−１−オキシピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル（０．３７ｇ）のジクロロメタン溶液に氷冷下、メタクロロ過安息香酸（純度７０％、０．５５ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物を氷冷し、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４０／６０〜０／１００）にて精製し、表題化合物（０．３５ｇ）を得た。【００９７】
参考例６１
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−１−オキシピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル（０．２０ｇ）と塩化ホスホリル（０．６０ｍＬ）の混合物を１２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を氷冷し、水及びアンモニア水を加えてアルカリ性とした後、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．１６ｇ）を得た。【００９８】
参考例６２
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−メチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル（０．０４ｇ）、２，４，６−トリメチルシクロトリボロキサン（０．０１４ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．００７ｇ）、炭酸ナトリウム（０．０１６ｇ）及び１，２−ジメトキシエタン（２．９ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８０／２０〜２０／８０）にて精製し、表題化合物（０．０１９ｇ）を得た。【００９９】
参考例６３
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−ヒドロキシメチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−１−オキシピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル（０．１５ｇ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に室温にてトリメチルオキソニウムテトラフルオロボラート（０．０４ｇ）を加え、同温にて２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣にメタノール（２．０ｍＬ）を加えた。この混合物に６５℃にてペルオキソ二硫酸アンモニウム（０．０１ｇ）の水溶液（０．０２ｍＬ）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物に６５℃にてペルオキソ二硫酸アンモニウム（０．０１ｇ）の水溶液（０．０２ｍＬ）を加え、同温にて１３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、溶媒を減圧下濃縮した。残渣に炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物及び{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−ヒドロキシメチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸メチルの混合物（０．０６ｇ）を得た。【０１００】
実施例１
４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサンカルボン酸
４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサンカルボン酸エチル（０．０２２ｇ）、テトラヒドロフラン（０．３７５ｍＬ）、メタノール（０．３７５ｍＬ）及び水（０．１５０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．０１４ｇ）を加え、同温にて７２時間撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．１７０ｍＬ）及び水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０１８ｇ）を得た。【０１０１】
実施例２
３−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}プロピオン酸
３−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}プロピオン酸エチル（０．０１９ｇ）、テトラヒドロフラン（０．３７５ｍＬ）、メタノール（０．３７５ｍＬ）及び水（０．１５０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．０１２ｇ）を加え、同温にて６時間撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．１４０ｍＬ）及び水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０１７ｇ）を得た。【０１０２】
実施例３
{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸
{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸エチル（０．０２３ｇ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）及び水（０．２５ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００７ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝５０／５０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）にて精製し、表題化合物（０．００３ｇ）を得た。【０１０３】
実施例４
{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−３−メチルシクロヘキシル}酢酸
{３−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−３−メチルシクロヘキシル}酢酸エチル（０．０２２ｇ）、テトラヒドロフラン（０．４０ｍＬ）、メタノール（０．２０ｍＬ）及び水（０．２０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００６ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝５０／５０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）にて精製し、表題化合物（０．００７ｇ）を得た。【０１０４】
実施例５
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−３−ヒドロキシ−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸
水素ガス雰囲気下、{４−［５−{［３−ベンジルオキシ−２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキサ−３−エニル}酢酸（０．０４５ｇ）及び１０％パラジウム−炭素（０．０３ｇ、ｗｅｔ）のメタノール（１．５ｍＬ）懸濁液を室温にて５時間撹拌した。反応混合物に１０％パラジウム−炭素（０．０３ｇ、ｗｅｔ）を加え、水素ガス雰囲気下、室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）を通してろ過し、ろ液を減圧下濃縮して表題化合物（０．０４ｇ）を得た。【０１０５】
実施例６
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−１−ヒドロキシシクロヘキシル}酢酸
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−１−ヒドロキシシクロヘキシル}酢酸エチル（０．０５ｇ）、テトラヒドロフラン（１．００ｍＬ）、メタノール（０．５０ｍＬ）及び水（０．５０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．０１５ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．２０ｍＬ）を加え、溶媒を減圧下留去した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０４６ｇ）を得た。【０１０６】
実施例７
６−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］スピロ［２．５］オクタン−１−カルボン酸
６−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］スピロ［２．５］オクタン−１−カルボン酸エチル（０．０２０ｇ）、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．０９ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．６０ｍＬ）及びメタノール（０．３０ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１４０℃で１時間３０分撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝４０／６０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）にて精製し、表題化合物（０．００５ｇ）を得た。【０１０７】
実施例８
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−６−シアノ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−６−シアノ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸メチル（０．０１７ｇ）、テトラヒドロフラン（０．３０ｍＬ）、メタノール（０．１５ｍＬ）及び水（０．１５ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００５ｇ）を加え、同温にて２日間撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０〜０／１００）にて精製し、表題化合物（０．００８ｇ）を得た。【０１０８】
実施例９
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−オルト−トリルピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−オルト−トリルピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸メチル（０．０８ｇ）、テトラヒドロフラン（１．００ｍＬ）、メタノール（０．５０ｍＬ）及び水（０．５０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．０２１ｇ）を加え、同温にて３時間撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．２８ｍＬ）を加え、溶媒を減圧下留去した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０７１ｇ）を得た。【０１０９】
実施例１０
２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}プロピオン酸
２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}プロピオン酸エチル（０．１１ｇ）、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．５０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）及びメタノール（１．５０ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で１時間半撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、１．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．６０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．１０ｇ）を得た。【０１１０】
実施例１１
ｔｒａｎｓ−２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}−２−メチルプロピオン酸
ｔｒａｎｓ−２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}−２−メチルプロピオン酸エチル（０．０５４ｇ）、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．２５ｍＬ）及びメタノール（０．７５ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で１時間半撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍＬ）を加え、マイクロ波照射下、１４０℃で１時間半撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、１．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．６０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０２２ｇ）を得た。【０１１１】
実施例１２
ｃｉｓ−２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}−２−メチルプロピオン酸
ｃｉｓ−２−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}−２−メチルプロピオン酸エチル（０．０４４ｇ）、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．２０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．２０ｍＬ）及びメタノール（０．６０ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で１時間半撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、１．０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（０．２０ｍＬ）を加え、マイクロ波照射下、１４０℃で１時間半撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、１．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．５０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）にて精製し、表題化合物（０．０１４ｇ）を得た。【０１１２】
実施例１３及び１４
ｔｒａｎｓ−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸（実施例１３）、及びｃｉｓ−{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸（実施例１４）
（１）ｔｒａｎｓ体及びｃｉｓ体の混合物の合成
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸メチル（２．１３ｇ）のテトラヒドロフラン（３２ｍＬ）−メタノール（１６ｍＬ）−水（１６ｍＬ）混合溶液に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．４１ｇ）を加え、同温にて１７時間撹拌した。反応混合物に２．０ｍｏｌ／Ｌ塩酸（４．９ｍＬ）を加え、有機溶媒を減圧下留去した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、粗生成物（{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸のｔｒａｎｓ体及びｃｉｓ体の混合物）（２．０８ｇ）を得た。
（２）ｔｒａｎｓ体及びｃｉｓ体の分取
{４−［５−{［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ}−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］シクロヘキシル}酢酸のｔｒａｎｓ体及びｃｉｓ体の混合物（３６．６ｇ）を液体クロマトグラフィーで下記の条件にて分離し、実施例１３の化合物（１７．０ｇ）及び実施例１４の化合物（１６．２ｇ）をそれぞれ得た。
〔液体クロマトグラフィーによる分取条件〕
（Ａ）分取装置
装置名：Ｋ−Ｐｒｅｐ（株式会社京都クロマト）
（Ｂ）分取条件
カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）  ＩＡ；
サイズ ：５ｃｍＩ．Ｄ．×２５ｃｍＬ．；
粒子径：５μｍ
移動相 ：ｎ−ヘキサン／エタノール／酢酸＝８５／１５／０．１＜ｖ／ｖ／ｖ＞；
流速：３５ｍＬ／分；
温度：３０℃；
波長：２５４ｎｍ；
注入方法：ループ注入方式；
注入量 ：２０ｇ／Ｌの溶液を１０〜２０ｍＬ
（Ｃ）保持時間
実施例１３：約２１分、実施例１４：約１７分【０１１３】
また、実施例１３及び１４を下記の分析条件で、分析した。
〔液体クロマトグラフィーによる分析条件〕
（Ａ）評価システム
ポンプ ：ＬＣ−２０ＡＤ（島津製作所）；
検出器 ：ＳＰＤ−２０Ａ（島津製作所）；
オートサンプラー：ＳＩＬ−２０Ａ（島津製作所）
（Ｂ）分析条件
カラム ：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）  ＩＡ；
サイズ ：０．４６ｃｍＩ．Ｄ．×２５ｃｍＬ．；
移動相 ：ｎ−ヘキサン／エタノール／酢酸＝８５／１５／０．１＜ｖ／ｖ／ｖ＞；
流速：１．０ｍＬ／分；
温度：４０℃；
波長：２５４ｎｍ；
注入量 ：１０μＬ
（Ｃ）保持時間
実施例１３：６．１６４分、実施例１４：５．０１６分【０１１４】
実施例１５
{４−［５−｛［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ｝−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−１−メチルシクロヘキシル｝酢酸
｛４−［５−｛［２−（３，５−ビストリフルオロメチルフェニル）−２−メチルプロピオニル］メチルアミノ｝−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−イル］−１−メチルシクロヘキシル｝酢酸メチル（０．０７８ｇ）、テトラヒドロフラン（０．６０ｍＬ）、メタノール（０．３０ｍＬ）及び水（０．３０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．０２２ｇ）を加え、同温にて１時間、５０℃にて３時間撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝２０／８０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）にて精製し、表題化合物（０．０６９ｇ）を得た。【０１１５】
実施例１６
[４−(５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−シアノ−４−オルト−トリルピリジン−２−イル)シクロヘキシル]酢酸
[４−(５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−シアノ−４−オルト−トリルピリジン−２−イル)シクロヘキシル]酢酸エチル（０．０１８ｇ）、テトラヒドロフラン（０．４０ｍＬ）、メタノール（０．２０ｍＬ）及び水（０．２０ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００５ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０１６ｇ）を得た。【０１１６】
実施例１７
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル（０．０２０ｇ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）及び水（０．２５ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００５ｇ）を加え、同温にて２時間撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０１８ｇ）を得た。【０１１７】
実施例１８
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−メチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−メチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル（０．０１９ｇ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）及び水（０．２５ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００５ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０１８ｇ）を得た。【０１１８】
実施例１９
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−ヒドロキシメチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−ヒドロキシメチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸エチル及び{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−６−ヒドロキシメチルピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸メチルの混合物（０．０２５ｇ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）及び水（０．２５ｍＬ）の混合物に室温下、水酸化リチウム一水和物（０．００７ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．０２３ｇ）を得た。【０１１９】
実施例２０及び２１
ｔｒａｎｓ−{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸（実施例２０）及びｃｉｓ−{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸（実施例２１）
{４−[５−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−２−イル]シクロヘキシル}酢酸のｔｒａｎｓ体及びｃｉｓ体の混合物（実施例８）（０．１８ｇ）を液体クロマトグラフィーで下記の条件にて分離し、実施例２０の化合物（０．０３５ｇ）及び実施例２１の化合物（０．０３７ｇ）をそれぞれ得た。
〔液体クロマトグラフィーによる分取条件〕
（Ａ）分取装置
装置名：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＨＰＬＣ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｉｌｓｏｎ，Ｉｎｃ．）
（Ｂ）分取条件
カラム：ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ（登録商標）  Ｃ１８；
サイズ ：２０ｍｍＩ．Ｄ．×５０ｍｍＬ．；
粒子径：５μｍ
移動相 ：アセトニトリル／１０ｍＭ  酢酸アンモニウム水溶液＝４５／５５＜ｖ／ｖ＞；
流速：３０ｍＬ／分；
温度：室温；
波長：２２０ｎｍ
（Ｃ）保持時間
実施例２０：約１０．４分、実施例２１：約９分【０１２０】
また、実施例２０及び２１を下記の分析条件で、分析した。
〔液体クロマトグラフィーによる分析条件〕
（Ａ）評価システム
ポンプ ：ＬＣ−１０ＡＴ（島津製作所）；
検出器 ：ＳＰＤ−１０Ａ（島津製作所）；
オートサンプラー：ＳＩＬ−１０Ａ（島津製作所）
（Ｂ）分析条件
カラム ：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）  ＯＤＳ−３；
サイズ ：４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍＬ．；
移動相 ：アセトニトリル／１０ｍＭ  酢酸アンモニウム水溶液＝４０／６０〜８０／２０＜ｖ／ｖ＞；
流速：１．０ｍＬ／分；
温度：４０℃；
波長：２２５ｎｍ；
注入量 ：５μＬ
（Ｃ）保持時間
実施例２０：１６．７８６分、実施例２１：１７．２８６分【０１２１】
上記参考例１〜６３の化学構造式、並びに実施例１〜２１の化学構造式、及び物性値を表１〜１１に示す。表中の略号は、Ｒｅｆ．Ｎｏ．は参考例番号、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号、Ｓｔｒ．は化学構造式、Ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｄａｔａは物性値、１Ｈ−ＮＭＲは水素核核磁気共鳴スペクトル、ＤＭＳＯ−ｄ６はジメチルスルホキシド−ｄ６、ＣＤＣｌ３はクロロホルム−ｄ１をそれぞれ示す。また、ＭＳは質量分析を示し、ＥＳＩ_ＡＰＣＩはエレクトロスプレーイオン化法−大気圧化学イオン化法のマルチイオン化法により測定したことを示す。【０１２２】
【表１】
0005847362.tif 000019
【０１２３】
【表２】
0005847362.tif 000020
【０１２４】
【表３】
0005847362.tif 000021
【０１２５】
【表４】
0005847362.tif 000022
【０１２６】
【表５】
0005847362.tif 000023
【０１２７】
【表６】
0005847362.tif 000024
【０１２８】
【表７】
0005847362.tif 000025
【０１２９】
【表８】
0005847362.tif 000026
【０１３０】
【表９】
0005847362.tif 000027
【０１３１】
【表１０】
0005847362.tif 000028
【０１３２】
【表１１】
0005847362.tif 000029
【０１３３】
試験例１
ヒトＮＫ１受容体に対する親和性
（１）ヒトＮＫ１受容体発現ベクターの調製
ヒト成人正常組織由来脳ｃＤＮＡ（バイオチェイン）を鋳型として、配列番号１に示したフォワードプライマー、配列番号２に示したリバースプライマーを用いて、ＰＣＲ酵素ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ  Ｍａｘ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ又はＰｒｉｍｅＳＴＡＲ  ＧＸＬ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（登録商標、タカラバイオ）によりＰＣＲを実施した。増幅産物をＺｅｒｏ  Ｂｌｕｎｔ  ＰＣＲ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（登録商標、ライフテクノロジーズ）を用いてプラスミド（ｐＣＲ−ＢｌｕｎｔＩＩ−ＴＯＰＯ  （登録商標）、ライフテクノロジーズ）に組み込んだ。常法により、増幅産物が組み込まれたプラスミドを用いて大腸菌（ワンショットＴＯＰ１０コンピテントセル、ライフテクノロジーズ）を形質転換した。この大腸菌を５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含むＬＢ寒天培地にて１日培養した。培養後、コロニーを選択し、５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含むＬＢ培地にて培養した。培養後、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｐｒｅｐ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（バイオラッド）を用いてプラスミドを精製した。このプラスミドを制限酵素ＸｈｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で約２時間二重消化した後、１％アガロース電気泳動を行い、切断された断片をＴａＫａＲａ  ＲＩＣＯＣＨＩＰ（タカラバイオ）を用いて回収・精製した。別にベクター（ｐｃＤＮＡ３．１（−）（登録商標）、ライフテクノロジーズ）により形質転換された大腸菌からもプラスミドを精製し、制限酵素ＸｈｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で約２時間二重消化した後、１％アガロース電気泳動を行い、切断されたベクターをＴａＫａＲａ  ＲＩＣＯＣＨＩＰ（タカラバイオ）を用いて回収・精製した。ｐＣＲ−Ｂｌｕｎｔ−ＩＩから切断された断片と制限酵素処理されたｐｃＤＮＡ３．１（−）ベクターをＤＮＡ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ＜Ｍｉｇｈｔｙ  Ｍｉｘ＞（タカラバイオ）を用いてライゲーション反応を行った。ライゲーション後のプラスミドを用いて常法により、大腸菌（ワンショットＴＯＰ１０コンピテントセル、ライフテクノロジーズ）を形質転換した。この大腸菌を５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ寒天培地にて１日培養した。培養後、コロニーを選択し、５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地にて培養した後、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｐｒｅｐ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（バイオラッド）を用いてプラスミドを精製した。得られたプラスミドのタンパク質をコードする塩基配列（配列番号３）は、公知のデータベース（ＮＣＢＩ）に登録されているヒトタキキニン受容体１（ＴＡＣＲ１、ＮＫ１Ｒ）の塩基配列（ＮＭ＿００１０５８．３）と完全一致した。したがって、クローニングした遺伝子配列はヒトＮＫ１受容体の塩基配列であり、翻訳されるアミノ酸配列はヒトＮＫ１受容体であることが確認された。配列番号３に示した塩基配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１（−）（登録商標）を、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドとした。【０１３４】
（２）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の調製
（２−１）２９３Ｔ細胞の培養
２９３Ｔ細胞（理化学研究所）は抗生物質ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（ライステクノロジーズ、最終濃度：ペニシリンとして１００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ）及びウシ胎児血清（最終濃度：１０％）を添加したＤ−ＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）液体培地（低グルコース、Ｌ−グルタミン含有、和光純薬工業）を用いて、５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて培養した。
（２−２）２９３Ｔ細胞の継代
ほぼコンフルエントに達した細胞をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ、和光純薬工業）にて洗浄し、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ライステクノロジーズ）にて剥がし、上記液体培地にて懸濁した。懸濁した細胞をスプレットレシオが１：１０になるように上記液体培地で希釈し、培養した。
（２−３）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の準備
コンフルエントに達した細胞をＰＢＳにて洗浄し、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ライステクノロジーズ）にて剥がし、ウシ胎児血清（最終濃度：１０％）を添加したＤ−ＭＥＭ液体培地（低グルコース、Ｌ−グルタミン含有、和光純薬工業）に懸濁した。懸濁した細胞を上記液体培地で希釈し、ポリＤ−リジンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｃｏａｔ（登録商標）、日本ベクトン・ディッキンソン）の各ウェルに細胞数５ｘ１０４個／ウェル、液体培地量が１００μＬ／ウェルになるように調製し、播種した。播種後、その細胞を５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて約４〜５時間培養し、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入用細胞とした。
（２−４）ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドの２９３Ｔ細胞への導入
ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入のために、リポフェクタミン２０００（登録商標、ライフテクノロジーズ）を使用した。ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドを０．２μｇ／２５μＬ／ウェルになるようにＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ）にて希釈した。同時に、リポフェクタミン２０００（登録商標、ライフテクノロジーズ）を０．４μＬ／２５μＬ／ウェルになるようにＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ）にて希釈し、室温で５分間インキュベートした。５分後、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド／リポフェクタミン２０００の複合体形成のために、希釈したヒトＮＫ１受容体発現プラスミドと希釈したリポフェクタミン２０００とを混合し、室温で２０〜２５分間インキュベートした。インキュベーション後、複合体液を上記ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入用細胞に５０μＬ／ウェルずつ添加し、５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて約４８時間培養した。この４８時間培養後の細胞をヒトＮＫ１受容体発現細胞として各種アッセイに使用した。【０１３５】
（３）ヒトＮＫ１受容体結合親和性の測定
（３−１）ヒトＮＫ１受容体発現細胞からの膜画分の調製
ヒトＮＫ１受容体発現細胞を１７５ｃｍ２  培養フラスコ（日本ベクトン・ディッキンソン）内で作製した。ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドとリポフェクタミン２０００の複合体形成反応は上記２−４に記載の方法から培養面積の比率計算にてスケールアップして実施した。ヒトＮＫ１受容体発現細胞を膜画分調製用緩衝液（５０ｍＭトリス（和光純薬工業）、１２０ｍＭ塩化ナトリウム（和光純薬工業）、５ｍＭ塩化カリウム（和光純薬工業）、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（シグマ）、０．００２ｍｇ／ｍＬキモスタチン（ペプチド研究所）、０．０４ｍｇ／バシドラシン（和光純薬工業）、０．００５ｍｇ／ｍＬホスホラミドン（ペプチド研究所）、０．５ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオライド（和光純薬工業）、ｐＨ７．４）にて回収し、１，８８０ｇで１０分間遠心分離し、細胞沈査を膜画分調製用緩衝液に懸濁した。１回の凍結融解をした後、細胞をＤｏｕｎｃｅ型ホモジナイザー（氷冷下、１０００ｒｐｍ、２０回）を用いて破砕した。破砕した細胞懸濁液を２０，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、上清を捨て細胞沈査を得た。細胞沈査を膜画分調製用緩衝液に再懸濁後、Ｄｏｕｎｃｅ型ホモジナイザー（氷冷下、１０００ｒｐｍ、３０回）を用いて破砕し、細胞懸濁液を２０，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、上清を捨て細胞沈査を得た。同様の破砕と遠心分離操作を再度繰り返し、最終細胞沈査を得た。最終細胞沈査を受容体結合試験用緩衝液（５０ｍＭトリス（和光純薬工業）、３ｍＭ塩化マンガン（和光純薬工業）、０．００２ｍｇ／ｍＬキモスタチン（ペプチド研究所）、０．０４ｍｇ／バシドラシン（和光純薬工業）、０．０２％ウシ血清アルブミン（シグマ）、ｐＨ７．４）に懸濁し、ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ピアス）を用いてタンパク濃度を測定した。
（３−２）受容体結合試験
９６ウェルアッセイプレート（グライナー）に上記受容体結合試験用緩衝液２２．５μＬ／ウェルを分注し、８０倍濃度に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で調製した試験化合物ＤＭＳＯ溶液を２．５μＬ／ウェル（最終濃度：１ｎＭ〜１００ｎＭ）ずつ添加し、混合した。放射性標識リガンドは１２５Ｉ−サブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ，［１２５Ｉ］Ｔｙｒ８−、パーキンエルマー）を使用した。１２５Ｉ−サブスタンスＰを１２５ｐｍｏｌ／２５μＬ／ウェルになるように受容体結合試験用緩衝液で希釈し、９６ウェルアッセイプレートに添加し、混合した。ヒトＮＫ１受容体発現細胞から調製した膜画分は８〜１０μｇ／ウェルになるように受容体結合試験用緩衝液で希釈し、２７Ｇの注射針をスムーズに通過できるまで均一に懸濁し、１５０μＬ／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに添加し、室温で６０分間振盪しながらインキュベートした。０．３％ポリエチレンイミンで前処理したマルチスクリーン９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にて反応液を吸引濾過し、洗浄液（５０ｍＭトリス、０．０２％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）で４回洗浄することにより反応を終結させた。マイクロプレート底部を６０℃で乾燥させた後、マイクロシンチ２０（パーキンエルマー）を１００μＬ／ウェルで分注し、プレート上部をトップシールＡ（パーキンエルマー）にて密栓し、５〜１０分間振盪した後、トップカウントＮＸＴ（登録商標）（パーキンエルマー）にて放射活性を測定した。各ウェルの放射活性は、アプレピタント１０μＭ添加時の放射活性（非特異的結合）を差し引くことで算出した。１２５Ｉ−サブスタンスＰの結合率％  ＝  （試験化合物添加群の放射活性）／（媒体添加群の放射活性）×  １００を算出し、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて結合率％を試験化合物濃度に対してのプロットを直線近似し、５０％阻害濃度ＩＣ５０を算出した。これらの結果を表１２及び１３に示した。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を、ＩＣ５０（ｎＭ）は５０％阻害濃度をそれぞれ示す。
（４）結果【０１３６】
【表１２】
0005847362.tif 000030
【０１３７】
【表１３】
0005847362.tif 000031
表１２及び１３に示したように、本発明の化合物は、ヒトＮＫ１受容体に高い結合親和性を示すことが明らかとなった。【０１３８】
試験例２
ヒトＮＫ１受容体に対する阻害作用
（１）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の調製
試験例１の２−３と同様な方法にて作製した。【０１３９】
（２）細胞内カルシウム濃度上昇抑制作用の検討
ヒトＮＫ１受容体発現細胞を洗浄液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  （ＨＢＳＳ）  ｐＨ７．３）３００μL／ウェルで洗浄した。蛍光カルシウム指示薬（Ｆｌｕｏ−４  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ、ライフテクノロジーズ、０．４２ｍＭプロベネシド含有及び０．１％ウシ血清アルブミン含有：同製品プロトコールにて調製）１５０μL／ウェルで各ウェルに添加し、３７℃にて３０分間インキュベーター内でインキュベーションした。その後、８０倍濃度に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で調製した試験化合物ＤＭＳＯ溶液を２．５μＬ／ウェル（最終濃度：０．１、１、１０μＭ）ずつ添加し、混合後、さらに３７℃にて３０分間インキュベーター内でインキュベーションした。３０分後速やかに細胞内カルシウム濃度を測定した。
細胞内カルシウム濃度は、ＦＤＳＳ（登録商標）７０００（浜松ホトニクス）を用いて蛍光シグナルとして測定した。蛍光シグナルは読み込み開始から１０秒後にアッセイバッファー（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  （ＨＢＳＳ）  ｐＨ７．３、０．１％ウシ血清アルブミン含有）にて０．４μＭまたは４μＭに調製したサブスタンスＰ（ペプチド研究所）溶液を５０μＬ／ウェル（最終濃度：０．１または１μＭ）で自動添加し、１２０秒まで測定した。
媒体（ＤＭＳＯ）を添加した群の蛍光シグナルを１００％、サブスタンスＰ添加前の蛍光シグナルを０％とし、各試験化合物添加時の細胞内カルシウム濃度％を次式により算出した。
細胞内カルシウム濃度％  ＝  （試験化合物添加群の蛍光シグナル）／（媒体添加群の蛍光シグナル）×  １００
この細胞内カルシウム濃度％をサブスタンスＰのアゴニスト活性の残存活性（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｒｅｍａｉｎｉｎｇ：  ＳＰＲＲ）とした。これらの結果を表１４及び１５に示した。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＳＰＲＲ（％）はサブスタンスＰ濃度１μＭ、化合物濃度０．１μＭにおける結果を示す。
（３）結果【０１４０】
【表１４】
0005847362.tif 000032
【０１４１】
【表１５】
0005847362.tif 000033
表１４及び１５に示したように、本発明の化合物は、強力なヒトＮＫ１受容体拮抗作用を示すことが明らかとなった。【０１４２】
試験例３
ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用
評価濃度の１０００倍濃度の試験化合物のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製し、それを希釈して反応溶液を調製した。１ｎＭ〜２０μＭ  試験化合物、３．２ｍＭ塩化マグネシウム、０．２ｐｍｏｌ  Ｈｕｍａｎ  ＣＹＰ３Ａ４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、０．５ｍＭ還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、及び３μＭ  Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含むリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中で３７℃１０分間インキュベーションさせることで酵素反応を行った。反応液量は５０μＬ／ウェルで行った。３０分プレインキュベーション群は、基質であるＬｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡ溶液（１２．５μＬ／ウェル）を添加する前に、３７℃で３０分間インキュベーションを行った。酵素反応終了時に５０μＬ／ウェルのＬｕｃｉｆｅｒｉｎ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加して室温で２０分置いた後、ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ１０００（ＴＥＣＡＮ）で発光強度を測定した。試験化合物非添加群に対する酵素活性（％）を算出し、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて用量反応曲線を作成し、５０％の阻害を示す化合物濃度ＩＣ５０を算出した。比較例として、ＮＫ１受容体拮抗剤であるアプレピタントを同様に試験した。
上記の測定方法で、試験化合物の３０分プレインキュベーション群におけるＩＣ５０値を測定した結果を表１６及び１７に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＩＣ５０（μＭ）は５０％阻害濃度をそれぞれ示す。【０１４３】
【表１６】
0005847362.tif 000034
【０１４４】
【表１７】
0005847362.tif 000035
表１６及び１７に示したように、本発明の化合物のＣＹＰ３Ａ４の阻害活性は、アプレピタントに比べ減弱されていることが明らかとなった。そのため、本発明の化合物は、アプレピタントに比べＣＹＰ３Ａ４阻害作用に基づく薬物間相互作用が少ないことが期待される。【０１４５】
試験例４
フットタッピングに対する作用
（１）フットタッピングに対する作用
試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業）及び１６％蒸留水の混合物）に溶解して調製した。
雄性スナネズミ（日本エスエルシー）をイソフルランで麻酔後、試験化合物０．１ｍｇ／ｋｇを頸静脈より投与した。４時間後、イソフルラン麻酔下にて、頭部ブレグマの側方１ｍｍ、４．５ｍｍ深部にＮＫ１受容体アゴニストであるＧＲ７３６３２（５ｐｍｏｌ／５μｌ生理食塩水）を脳室内へ投与した。投与後、観察ケージにスナネズミを移動し、正向反射回復後３０分間のフットタッピングを起こしている時間を測定した。試験化合物のフットタッピングの抑制率（％）は次式により算出した。
フットタッピングの抑制率（％）＝｛１−（試験化合物投与のフットタッピング時間）／（溶媒投与のフットタッピング時間）｝×１００【０１４６】
（２）薬物濃度の測定
フットタッピング終了後、速やかにエーテル麻酔下開腹し、腹部大静脈より採血し、同時に脳を摘出した。液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いた定量分析により、血漿中及び脳内の試験化合物濃度を測定した。
（３）結果
上記の試験方法でフットタッピングに対する作用を測定した結果を表１８及び１９に示す。表中、Ex.No.は実施例番号を示し、Inhibition(%)はフットタッピングの抑制率、Conc.(nM)は脳内薬物濃度を示す。【０１４７】
【表１８】
0005847362.tif 000036
【０１４８】
【表１９】
0005847362.tif 000037
表１８及び１９に示したように、本発明の化合物は、中枢移行性を示し、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいても優れたＮＫ１受容体拮抗作用を発現した。【０１４９】
試験例５
フェレット薬物動態試験
（１）試験方法
静脈内投与のための試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業）及び１６％蒸留水の混合物）に溶解して調製した。経口投与液は懸濁液（０．５％メチルセルロース）を使用した。
イソフルラン麻酔下で雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物０．１ｍｇ／ｋｇを大腿静脈より静脈内投与した。経口投与の場合は、覚醒下にて試験化合物１ｍｇ／ｋｇを経口投与した。試験化合物投与後、前腕橈側皮静脈より経時的に採血を行い、投与後７日後まで採血した。血漿中の試験化合物濃度を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いた定量分析により測定した。
（２）結果
上記の試験方法でフェレット薬物動態試験を実施した結果を表２０及び表２１に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ｔ１／２、ＣＬｔｏｔ及びＶｓｓはそれぞれ静脈内投与における血漿中濃度に基づく半減期、全身クリアランス及び定常状態分布容積を示し、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ及びＢＡはそれぞれ経口投与における最高血漿中試験化合物濃度、投与後７日後までの血漿中試験化合物濃度−時間曲線下面積及びバイオアベイラビリティーを示す。【０１５０】
【表２０】
0005847362.tif 000038
【０１５１】
【表２１】
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表２０及び表２１に示したように、本発明の化合物は、低クリアランスで優れた経口吸収性を示した。【０１５２】
試験例６
シスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する作用
（１）試験方法
試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、及び４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業）及び１６％蒸留水の混合物）に溶解して調製した。対照群には、媒体のみを投与した。
イソフルラン麻酔下で雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇを頸静脈より静脈内投与した。投薬から１時間後に４０−５０℃に加温したシスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）の生理食塩水溶液を腹腔内へ投与した。シスプラチン投与直後から７２時間後までフェレットを観察し、レッチング（胃内容物の排出のない腹部の周期的収縮）及び嘔吐の発現回数を計測した。
（２）結果
結果を図１に示す。対照群では、急性期（シスプラチン投与後２４時間まで）及び遅発期（シスプラチン投与後２４時間以後７２時間まで）においてレッチング及び嘔吐の発現回数の増加が認められた。実施例１３の化合物静脈内投与群では、急性期及び遅発期においてレッチング及び嘔吐の発現回数の抑制が認められた。
本発明の化合物は、優れた薬効持続性、並びにシスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する抑制作用を示すことが明らかとなった。【０１５３】
試験例７
ｈＥＲＧ電流に対する評価
（１）試験方法
評価濃度（１０μＭ）の１０００倍濃度の試験化合物のジメチルスルホキシド （ＤＭＳＯ）溶液を調製し、それを希釈して最終適用濃度の溶液を調製した。ｈＥＲＧ電流の測定は、ｈＥＲＧチャネルを発現させたhuman embryonic kidney（ＨＥＫ）２９３細胞を播種したカバーガラスを灌流槽上に置いて灌流液を流し、パッチクランプシステムを用いたホールセル法にて行った。データ取得解析ソフトｐＣＬＡＭＰ９（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｉｎｃ．）のパルスプロトコル（保持電位：−８０ｍＶ、脱分極パルス：＋２０ｍＶ：１．９秒、再分極パルス：−５０ｍＶ：２秒、１５秒間隔で刺激）により生じるｈＥＲＧチャネル由来の電流変化を測定した。測定条件は、流速：約１．５ｍＬ／ｍｉｎ、温度：約３３℃とした。試験化合物適用直前及び適用１０分直後のそれぞれ２波形を解析し、統計解析した。試験化合物適用前の値を１００％として、その値からの変化率を求めた。
（２）結果
上記の方法で、試験化合物のｈＥＲＧ電流に対する評価を行った（結果を表２２に示す）。表中、Ex.No.は実施例番号を示し、変化率は平均値±標準誤差で示した。【０１５４】
【表２２】
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本発明の化合物はｈＥＲＧ電流に対して、媒体対照（０．１％ＤＭＳＯ）と比べて統計学的に有意な変動を示さなかった。
【産業上の利用可能性】
【０１５５】
本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有するので、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療薬として有用である。
【配列表フリーテキスト】
【０１５６】
＜配列表１＞
配列番号１は、配列番号３のＤＮＡを増幅するために使用されたフォワードプライマーの配列である。
＜配列表２＞
配列番号２は、配列番号３のＤＮＡを増幅するために使用されたリバースプライマーの配列である。
【要約】
本発明は、ＮＫ１受容体拮抗作用を有し、アプレピタントに比べＣＹＰ３Ａ４の阻害作用が減弱された、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療に有用な新規化合物を提供することを課題とする。すなわち、本発明は、下記式（I）で表される、シクロヘキシルピリジン誘導体、又はその薬理学的に許容される塩に関する。式中、環Ａは４−フルオロ−２−メチルフェニル等であり、Ｘは水素原子等であり、Ｒ１はカルボキシメチル等であり、Ｒ２はアルキル等であり、Ｙは０〜２等であり、Ｕは−Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣ（ＣＨ３）２−３，５−ビストリフルオロメチルフェニル等を表す。
式（Ｉ）：
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【図１】
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【配列表】
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