(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−（２−（３−（ｍＰＥＧ２０，０００）プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物３ａ）；
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−（２−（３−（４分岐ＰＥＧ２０，０００）プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物４ａ）；
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−（２−（３−（ｍＰＥＧ２０，０００）プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物３ｂ）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル４−（ｍＰＥＧ５，０００）ブタノエート（化合物５）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）アセテート（化合物８）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）−４−メチルペンタノエート（化合物９）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）−３−メチルブタノエート（化合物１０）；
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ２−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｎ７−（２−（３−（２−（ｍＰＥＧ２０，０００））プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２，７−ジカルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物３ｃ）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（２−（４分岐ＰＥＧ２０，０００）アセトアミド）プロパノエート（化合物１４）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（２−（４分岐ＰＥＧ２０，０００）アセトアミド）アセテート（化合物１５）；
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（４分岐ＰＥＧ２０，０００）カルボニルアミノ）−４−メチルペンタノエート（化合物１６）；
からなる群から選択される化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
（ｉ）請求項１に記載の化合物と、（ｉｉ）任意選択的に、薬学的に許容できる賦形剤とを含む組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、前記化合物が剤形で存在する組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の定めにより、２０１０年１２月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／４２６，８９３号の優先権の利益を主張するものであり、この米国仮特許出願の開示内容が、参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、（特に）化学修飾された形態の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤、デスエチルスニチニブを含み、この形態は、化学修飾のないデスエチルスニチニブに勝るいくつかの利点を有する。本明細書に記載される化学修飾された形態のデスエチルスニチニブは、（特に）創薬、薬物療法、生理学、有機化学および高分子化学の分野の用途に関し、および／またはそれらの分野の用途を有する。
【背景技術】
【０００３】
プロテインキナーゼ（「ＰＫ」）は、タンパク質中のチロシン、セリンおよびトレオニン残基上のヒドロキシ基のリン酸化を触媒する酵素である。これらのヒドロキシ基のリン酸化は、細胞の成長、分化および増殖に必要とされる。したがって、細胞の寿命の実質的に全ての局面が、正常なＰＫ活性に依存する。臨界正常（ｃｒｉｔｉｃａｌｉｔｙ  ｎｏｒｍａｌ）ＰＫ活性が、健康な細胞機能に影響することを考えると、異常なＰＫ活性が、乾癬などの比較的命にかかわらない疾病から膠芽細胞腫（脳腫瘍）などの非常に悪性の疾病に及ぶ、多くの疾患に関連していたことはおそらく意外なことではない。
【０００４】
分類の中でも特に、ＰＫは、細胞質プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）および膜貫通受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）という２つの種類に分類され得る。簡潔に述べると、ＲＴＫは、様々な生物学的活性を有する膜貫通受容体のファミリーを含む。ＲＴＫのＨＥＲ（ヒト上皮成長因子受容体）サブファミリーには、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４が含まれる。これらのＲＴＫは、タンパク質上のチロシン残基をリン酸化することができる細胞外グリコシル化リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内細胞質触媒ドメインからなる。
【０００５】
別のＲＴＫサブファミリーは、インスリン受容体（ＩＲ）、インスリン様成長因子Ｉ受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）およびインスリン受容体関連受容体（ＩＲＲ）からなる。ＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒは、インスリン、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩと相互作用して、細胞膜を通過し、かつチロシンキナーゼドメインを含む２つの完全に細胞外のグリコシル化αサブユニットおよび２つのβサブユニットのヘテロ四量体を形成する。
【０００６】
第３のＲＴＫサブファミリーは、「血小板由来成長因子受容体」（「ＰＤＧＦ−Ｒ」）群と呼ばれ、これは、ＰＤＧＦ−Ｒ−α、ＰＤＧＦ−Ｒ−β、ＣＳＦＩ−Ｒ、ｃ−ｋｉｔおよびｃ−ｆｍｓを含む。これらの受容体は、可変数の免疫グロブリン様ループおよび細胞内ドメインから構成されるグリコシル化細胞外ドメインからなり、ここで、チロシンキナーゼドメインは、無関係のアミノ酸配列によって中断される。
【０００７】
ＰＤＧＦ−Ｒサブファミリーとの類似性のため（ＰＤＧＦ−Ｒサブファミリーに包含されることがある）別の群は、胎児肝キナーゼ（「ｆｌｋ」）受容体サブファミリーである。この群は、キナーゼ挿入ドメイン−受容体胎児肝キナーゼ−１（ＫＤＲ／ＦＬＫ−１、ＶＥＧＦ−Ｒ２）、ｆｌｋ−１Ｒ、ｆｌｋ−４およびｆｍｓ−様チロシンキナーゼ１（ｆｌｔ−１）から構成されると考えられる。
【０００８】
チロシンキナーゼ成長因子受容体ファミリーのさらなる別のメンバーは、血管内皮成長因子（「ＶＥＧＦ」）受容体サブグループである。ＶＥＧＦは、ＰＤＧＦと類似しているが、生体内での異なる生物学的機能および標的細胞特異性を有する二量体糖タンパク質である。特に、ＶＥＧＦは、脈管形成および血管新生に重要な役割を果たすと現在考えられている。
【０００９】
スニチニブは、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）という商標名でＰｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．によって販売される複数標的化（ｍｕｌｔｉ−ｔａｒｇｅｔｅｄ）ＲＴＫである。化学的に、スニチニブの組織名は、「Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−５−［（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド」であり、その化学式が以下に示される。
【化１】
0006009457.tif 000002
【００１０】
生体内で、スニチニブは、（ＶＥＧＦＲ）およびＰＤＧＦ−Ｒを含む複数のＲＴＫを標的化することによって細胞内シグナル伝達を阻害する。ＰＤＧＲ−ＲおよびＶＥＧＦＲの両方は、腫瘍増殖および血管新生に関与し、これらの標的を阻害するスニチニブの能力は、癌細胞の死および腫瘍血管新生の減少をもたらし、それによって、腫瘍を縮小させる。スニチニブは、ＫＩＴ、ＲＥＴ、ＣＳＦ−１Ｒおよびｆｌｔ３などの他のＲＴＫも阻害するため、他の癌に罹患した患者の治療に臨床的に有用である可能性がある。
【００１１】
また、生体内で、スニチニブが代謝されて、スニチニブのデスエチルが形成され、これは、スニチニブと効力がほぼ等しく、以下の構造で表される：
【化２】
0006009457.tif 000003
【００１２】
しかしながら、スニチニブ（特に、等効力の代謝産物デスエチルスニチニブを生じる）による治療は、手足症候群、口内炎、および他の毒性を含め、欠点がないわけではない。
【００１３】
したがって、生体内でスニチニブと同じ薬理作用を発揮することができるが、副作用の面で改良された化合物を提供する必要性がある。本発明は、この必要性および／または他の必要性に対処しようとするものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の１つ以上の実施形態において、解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性の非ペプチドポリマーに共有結合されるスニチニブ残基を含む化合物が提供される。
【００１５】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化３】
0006009457.tif 000004
（式中：
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００１６】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化４】
0006009457.tif 000005
（式中：
ＰＧ１が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００１７】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化５】
0006009457.tif 000006
（式中：
ＰＧ２が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００１８】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化６】
0006009457.tif 000007
（式中：
ＰＧ３が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００１９】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化７】
0006009457.tif 000008
（式中：
ＰＧ４が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００２０】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化８】
0006009457.tif 000009
（式中：
ＰＧ５が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００２１】
本発明の１つ以上の実施形態において、（ｉ）解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性の非ペプチドポリマーに共有結合されるデスエチルスニチニブ残基を含む化合物と、任意選択的に、（ｉｉ）薬学的に許容できる賦形剤とを含む組成物が提供される。
【００２２】
本発明の１つ以上の実施形態において、剤形で存在する本明細書に記載される化合物を含む剤形が提供される。
【００２３】
本発明の１つ以上の実施形態において、水溶性の非ペプチドポリマーをデスエチルスニチニブに共有結合する工程を含む方法が提供される。
【００２４】
本発明の１つ以上の実施形態において、本明細書に記載される化合物を、それを必要とする哺乳類に投与する工程を含む方法が提供される。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性の非ペプチドポリマーに共有結合されるデスエチルスニチニブ残基を含む化合物。
（項目２）
式
【化１】
0006009457.tif 000010
（式中：
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）に包含される、項目１に記載の化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目３）
式
【化２】
0006009457.tif 000011
（式中：
ＰＧ１が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）に包含される化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目４）
式
【化３】
0006009457.tif 000012
（式中：
ＰＧ２が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）に包含される化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目５）
式
【化４】
0006009457.tif 000013
（式中：
ＰＧ３が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）に包含される化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目６）
式
【化５】
0006009457.tif 000014
（式中：
ＰＧ４が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）に包含される化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目７）
式
【化６】
0006009457.tif 000015
（式中：
ＰＧ５が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）に包含される化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目８）
前記解離可能な結合を含むスペーサ部分が、チオエーテル、カルバメート、エステル、カーボネート、尿素および酵素開裂可能なペプチド結合からなる群から選択される解離可能な結合を含む、項目１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
（項目９）
前記解離可能な結合を含むスペーサ部分が、式
〜［Ｘ１］ａ−Ｌｒ−［Ｘ２］ｂ〜  （式ＩＩＩ）
（式中：
（ａ）が、０または１のいずれかであり；
（ｂ）が、０または１のいずれかであり；
Ｘ１が、存在する場合、第１のスペーサであり；
Ｌｒが、解離可能な結合であり；
Ｘ２が、存在する場合、第２のスペーサである）に包含される、項目１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１０）
前記水溶性の非ペプチドポリマーが、ポリ（アルキレンオキシド）である、項目１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１１）
前記ポリ（アルキレンオキシド）が、ポリ（エチレンオキシド）である、項目１０に記載の化合物。
（項目１２）
前記水溶性の非ペプチドポリマーが直鎖状である、項目１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１３）
前記水溶性の非ペプチドポリマーが分枝鎖状である、項目１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１４）
式
【化７】
0006009457.tif 000016
（式中：
Ｒが、３〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり；
各Ｑが、リンカーであり；
各Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
各ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーであり；
ｑが、３〜約５０の正の整数である）に包含される、項目１３に記載の化合物、
およびその薬学的に許容できる塩。
（項目１５）
前記水溶性の非ペプチドポリマーが、２０００ダルトン未満の分子量を有する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１６）
水溶性の非ペプチドポリマーが、約１〜約３０個のモノマーを有する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１７）
前記水溶性の非ペプチドポリマーが、約１〜約１０個のモノマーを有する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１８）
前記水溶性の非ペプチドポリマーが、２０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１９）
前記水溶性ポリマー、非ペプチドポリマーが、アルコキシまたはヒドロキシ末端封止部分を含む、項目１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
（項目２０）
（ｉ）解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性の非ペプチドポリマーに共有結合されるデスエチルスニチニブ残基を含む化合物と、（ｉｉ）任意選択的に、薬学的に許容できる賦形剤とを含む組成物。
（項目２１）
解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性非ペプチドオリゴマーに共有結合されるデスエチルスニチニブ残基を含む化合物を含む組成物であって、前記化合物が剤形で存在する組成物。
（項目２２）
解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性非ペプチドオリゴマーに共有結合されるデスエチルスニチニブ残基を含む化合物を、それを必要とする被験体に投与する工程を含む治療方法。
【００２５】
本発明のコンジュゲート、組成物、方法などのさらなる実施形態は、以下の説明、実施例、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。上記および以下の説明から理解され得るように、本明細書に記載される各特徴およびあらゆる特徴、ならびにこのような特徴の２つ以上の各組合せおよびあらゆる組合せは、このような組合せに含まれる特徴が相互に矛盾していない限り、本開示の範囲内に含まれる。さらに、いずれかの特徴または特徴の組合せが、本発明のいずれかの実施形態から特に除外されることがある。本発明のさらなる態様および利点が、以下の説明および特許請求の範囲に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】実施例７により詳細に記載されるように、本発明［ｍＰＥＧ−５Ｋ−Ｌｅｕ−デスエチルスニチニブ（ＣＡＣＥ）］のコンジュゲートの計算および観察される濃度動態のプロットである。
【図２】実施例７により詳細に記載されるように、本発明［ｍＰＥＧ−５Ｋ−Ｌｅｕ−デスエチルスニチニブ（ＣＡＣＥ）］のコンジュゲートから放出されるデスエチルスニチニブの出現のプロットである。
【図３】実施例８にさらに記載されるように、血漿および腫瘍のそれぞれにおける対象の化合物についての平均デスエチルスニチニブ濃度／時間曲線のプロットである。
【図４】実施例８にさらに記載されるように、血漿および腫瘍のそれぞれにおける対象の化合物についての平均デスエチルスニチニブ濃度／時間曲線のプロットである。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本明細書において使用される際、単数形「ａ」「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上、特に明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。
【００２８】
本発明を説明し、権利請求する際、以下の専門用語が、以下に説明される定義にしたがって使用される。
【００２９】
「水溶性の非ペプチドポリマー」は、少なくとも３５％（重量基準）が室温で水に溶解可能、好ましくは７０％（重量基準）超、より好ましくは９５％（重量基準）超が室温で水に溶解可能なポリマーを示す。典型的に、「水溶性」ポリマーのろ過されていない水性製剤は、ろ過した後の同じ溶液によって透過される光の量の少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９５％を透過する。しかしながら、水溶性ポリマーは、少なくとも９５％（重量基準）が水に溶解可能または完全に水に溶解可能であることが最も好ましい。「非ペプチド」に関して、ポリマーは、３５％（重量基準）未満のアミノ酸残基を有する場合に非ペプチドである。
【００３０】
「モノマー」、「モノマーサブユニット」および「モノマー単位」という用語は、本明細書において同義的に使用され、ポリマーの基本構造単位の１つを指す。１つのホモポリマー（または複数のホモポリマー）の場合、単一の繰り返し構造単位がポリマーを形成する。コポリマーの場合、２つ以上の構造単位が、あるパターンでまたは不規則に繰り返されて、ポリマーが形成される。本発明に関連して使用される好ましいポリマーは、ホモポリマーである。水溶性の非ペプチドポリマーは、モノマーの鎖を形成するために連続して結合される１つ以上のモノマーを含む。ポリマーは、単一のモノマータイプから形成されても（すなわち、ホモポリマーであっても）または２つ以上のモノマータイプから形成されても（すなわち、コポリマーまたはトリポリマーであっても）よい。
【００３１】
「ポリマー」は、約２〜約２０００個以上のモノマーを有する分子である。本発明に使用するための具体的なポリマーとしては、以下にさらに詳細に説明される、直鎖状、分枝鎖状、または叉状（ｆｏｒｋｅｄ）などの様々な幾何学形状を有するものが挙げられる。
【００３２】
本明細書において使用される際の「ＰＥＧ」または「ポリエチレングリコール」は、任意の水溶性ポリ（エチレンオキシド）を包含することを意味する。特に示されない限り、「ＰＥＧポリマー」または任意のポリエチレングリコールは、実質的に全て（好ましくは全て）のモノマーサブユニットがエチレンオキシドサブユニットであるものであるが、ポリマーは、例えば、結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）のための明確な末端封止部分または官能基を含んでいてもよい。本発明に使用するためのＰＥＧポリマーは、末端酸素が例えば合成変換中に置換されたか否かに応じて、２つの以下の構造：「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−」または「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−１ＣＨ２ＣＨ２−」の一方を含むであろう。上記のように、ＰＥＧポリマーについて、変数（ｎ）は、約２〜２０００の範囲であり、全ＰＥＧの末端基および構造は変化し得る。ＰＥＧが、例えば、小分子薬剤に連結するための官能基、Ａをさらに含むとき、官能基は、ＰＥＧポリマーに共有結合されている場合、酸素−酸素結合（−Ｏ−Ｏ−、過酸化物結合）を形成しない。
【００３３】
「末端封止（ｅｎｄ−ｃａｐｐｅｄ）」または「末端封止（ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｃａｐｐｅｄ）」という用語は、末端封止部分を有するポリマーの末端または端点を指すために、本明細書において同義的に使用される。典型的に、必ずしもではないが、末端封止部分は、ヒドロキシまたはＣ１〜Ｃ２０アルコキシ基を含む。したがって、末端封止部分の例としては、アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシおよびベンジルオキシ）、ならびにアリール、ヘテロアリール、シクロ、ヘテロシクロなどが挙げられる。さらに、上記のそれぞれの飽和、不飽和、置換および非置換形態が想定される。さらに、末端封止基はまた、シランであり得る。末端封止基はまた、検出可能な標識を有利に含み得る。ポリマーが、検出可能な標識を含む末端封止基を有する場合、ポリマーおよび／またはポリマーが連結される対象の部分（例えば、活性剤）の量または位置は、好適な検出器を用いて測定することができる。このような標識としては、限定はされないが、蛍光物質（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｒ）、化学発光物質（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｒ）、酵素標識に使用される部分、比色部分（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｍｏｉｅｔｙ）（例えば、染料）、金属イオン、放射性部分などが挙げられる。好適な検出器としては、光度計、フィルム、分光計などが挙げられる。さらに、末端封止基は、標的部分を含んでいてもよい。
【００３４】
「標的部分」という用語は、本発明のコンジュゲートを標的領域に局在化するのを助ける、例えば、細胞内に入るか、または受容体を結合するのを助ける分子構造を指すために本明細書において使用される。好ましくは、標的部分は、ビタミン、抗体、抗原、受容体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、シアリルルイスＸ抗原、ヒアルロン酸、糖類、細胞特異的レクチン、ステロイドまたはステロイド誘導体、ＲＧＤペプチド、細胞表面受容体のリガンド、血清成分、または様々な細胞内もしくは細胞外受容体に対する組合せ分子を含む。標的部分は、脂質またはリン脂質も含み得る。例示的なリン脂質としては、限定はされないが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、およびホスファチジルエタノールアミンが挙げられる。これらの脂質は、ミセルまたはリポソームなどの形態であり得る。標的部分は、検出可能な標識をさらに含んでいてもよく、あるいは検出可能な標識が、標的部分として働き得る。コンジュゲートが検出可能な標識を含む標的基を有する場合、ポリマーおよび／またはポリマーが連結される部分（例えば、活性剤）の量および／または分布／位置は、好適な検出器を用いて測定することができる。このような標識としては、限定はされないが、蛍光物質、化学発光物質、酵素標識に使用される部分、比色部分（例えば、染料）、金属イオン、放射性部分、金粒子、量子ドットなどが挙げられる。
【００３５】
ポリマーの幾何学形状または全体構造に関連する「分枝鎖状」は、分岐点から延在する２つ以上のポリマー「分岐」を有するポリマーを指す。
【００３６】
ポリマーの幾何学形状または全体構造に関連する「叉状」は、（典型的に１個以上の原子を介して）分岐点から延在する２つ以上の官能基を有するポリマーを指す。
【００３７】
「分岐点」は、ポリマーが、線形構造から１つ以上の追加の分岐へと枝分かれまたは分岐する１個以上の原子を含む分岐点を指す。
【００３８】
「反応性」または「活性化」という用語は、有機合成の従来の条件下で容易にまたは実用的な速度で反応する官能基を指す。これは、反応しないかまたは反応するために強力な触媒または非実用的な反応条件を必要とする基（すなわち、「非反応性」または「不活性」基）と対照的である。
【００３９】
反応混合物中の分子上に存在する官能基に関連する「容易に反応しない」は、反応混合物中で所望の反応を生じるのに有効な条件下で概ね原形を保つ基を示す。
【００４０】
「保護基」は、特定の反応条件下で分子中の特定の化学的に反応性の官能基の反応を防止または阻止する部分である。保護基は、保護される化学的に反応性の基のタイプならびに用いられる反応条件および分子中のさらなる反応性基または保護基の存在に応じて変化し得る。保護され得る官能基としては、例として、カルボン酸基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボニル基などが挙げられる。カルボン酸のための代表的な保護基としては、エステル（ｐ−メトキシベンジルエステルなど）、アミドおよびヒドラジド；アミノ基については、カルバメート（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルなど）およびアミド；ヒドロキシル基については、エーテルおよびエステル；チオール基については、チオエーテルおよびチオエステル；カルボニル基については、アセタールおよびケタール；などが挙げられる。このような保護基は、当業者に周知であり、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９、およびそれに引用される参照文献に記載されている。
【００４１】
「保護された形態」の官能基は、保護基を有する官能基を指す。本明細書において使用される際の「官能基」という用語またはその何らかの同義語は、その保護された形態を包含する。
【００４２】
「解離可能な結合」は、生理的条件下で開裂する比較的不安定な結合である。例示的な解離可能な結合は、水と反応すると開裂する（すなわち、加水分解される）加水分解性結合である。結合が水中で加水分解する傾向は、２個の原子を連結する結合の一般的なタイプだけでなく、これらの原子に結合される置換基にも左右され得る。適切な加水分解に不安定なまたは弱い結合としては、限定はされないが、カルボン酸エステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、オリゴヌクレオチド、チオエステル、およびカーボネートが挙げられる。特定の官能基は、加水分解以外のプロセスによって化学的に分解され得る原子を有する。このカテゴリーの例示的な解離可能な結合には、特定のカルバメートおよびＦｍｏｃ誘導体が含まれる。適切に結合されたこれらの種類の官能基を含有する特定の分子は、塩基の作用により化学分解（解離）を起こし得る。このような場合、「解離」は、ｐＨのより高い値でまたは塩基性部分（例えばヒスチジン）を含有する生体分子の作用によって起こり得る。別の例示的な解離可能な結合は、酵素的に解離可能な結合である。「酵素的に解離可能な結合」は、１つ以上の酵素によって開裂される結合を意味する。
【００４３】
「安定した」結合（ｌｉｎｋａｇｅまたはｂｏｎｄ）は、水中で実質的に安定した化学結合、すなわち、長期間にわたってかなりの程度まで生理的条件下で加水分解しない化学結合を指す。加水分解に安定した結合の例としては、限定はされないが、以下のものが挙げられる：（例えば、脂肪族鎖中の）炭素−炭素結合および以下の官能型：エーテル、アミド、ウレタン、アミンなどの特殊でない形態。一般に、安定した結合は、生理的条件下で１日当たり約１〜２％未満の加水分解率を示すものである。代表的な化学結合の加水分解率は、ほとんどの標準的な化学のテキストに見ることができる。
【００４４】
「実質的に」または「本質的に」は、ほぼ全体的にまたは完全に、例えば、９５％以上、より好ましくは９７％以上、一層より好ましくは９８％以上、さらにより好ましくは９９％以上、さらに一層より好ましくは９９．９％以上を意味し、ある所与の量の９９．９９％以上が最も好ましい。
【００４５】
「アルキル」は、長さが約１〜２０個の原子の範囲である炭化水素鎖を指す。このような炭化水素鎖は、必ずしもではないが、好ましくは飽和しており、分枝鎖状または直鎖状であり得る。例示的なアルキル基としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチル−１−ブチル、イソプロピル、３−メチル−１−ペンチルなどが挙げられる。本明細書において使用される際の「アルキル」は、３個以上の炭素原子が言及される場合、シクロアルキルを含む。「アルケニル」基は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する２〜２０個の炭素原子のアルキルである。
【００４６】
「置換アルキル」または「置換Ｃｑ〜ｒアルキル」（ここで、ｑおよびｒが、アルキル基に含まれる炭素原子の範囲を特定する整数である）という用語は、１つ、２つまたは３つのハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ７アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチルなど）、Ｃ１〜Ｃ７アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ７アシルオキシ、Ｃ３〜Ｃ７複素環、アミノ、フェノキシ、ニトロ、カルボキシ、アシル、シアノによって置換される上記のアルキル基を示す。置換アルキル基は、同じ置換基でまたは異なる置換基で、１回、２回または３回置換され得る。
【００４７】
「低級アルキル」は、１〜７個の炭素原子を含有するアルキル基を指し、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルによって例示されるように、直鎖状または分枝鎖状であり得る。「低級アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する２〜６個の炭素原子の低級アルキル基を指す。
【００４８】
「非干渉置換基」は、分子中に存在する場合、分子中に含まれる他の官能基と典型的に非反応性である基である。
【００４９】
「アルコキシ」は、−Ｏ−Ｒ基を指し、ここで、Ｒが、アルキルまたは置換アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ２０アルキル（例えば、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシなど）、好ましくはＣ１〜Ｃ７である。本発明の趣旨では、アルコキシ基は、アリール置換基が少なくとも１つのアルキル基に付随する場合、アリール置換基も含み得る（例えばベンジルオキシ）。これは、「アリールアルコキシ」置換基とも呼ばれる。
【００５０】
「薬学的に許容できる賦形剤」または「薬学的に許容できる担体」は、本発明の組成物中に含まれ得る成分であって、患者に対する著しい有害な毒性効果を生じない成分を指す。
【００５１】
「アリール」という用語は、最大で１４個の炭素原子を有する芳香族基を意味する。アリール基としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フェナントレニル、ナフタレニルなどが挙げられる。「置換フェニル」および「置換アリール」は、それぞれ、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、アルコキシ（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ）、ベンジルオキシ、カルボキシ、アリールなどから選択される１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの（例えば、１〜２つ、１〜３つまたは１〜４つの置換基）で置換されるフェニル基およびアリール基を示す。
【００５２】
「薬理学的に有効な量」、「生理学的に有効な量」、および「治療に有効な量」は、血流または標的組織中に所望のレベルの活性剤および／またはコンジュゲートを提供するのに必要とされる本明細書に記載される化合物の量を意味するために本明細書において同義的に使用される。正確な量は、多くの要因、例えば、特定の活性剤、組成物の成分および物理的特性、対象とする患者集団、患者の問題（ｐａｔｉｅｎｔ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ）に応じて決まり、本明細書に提供される情報および関連文献において入手可能な情報に基づいて、当業者によって容易に決定され得る。
【００５３】
本明細書に記載される塩基性反応物または酸性反応物には、任意の定義（すなわちブレンステッド、ルイスなど）で塩基性または酸性の性質を有する、中性の反応物、荷電した反応物、およびその任意の対応する塩形態が含まれる。
【００５４】
「患者」という用語は、本明細書に記載されるコンジュゲートの投与によって予防または治療され得る病態に罹患しているかまたは罹患しやすい生物を指し、ヒトおよび動物の両方を含む。
【００５５】
「任意選択の」または「任意選択的に」は、説明が、状況が起こる場合および起こらない場合を含むように、後に記載される状況が、起こり得るが必ずしも起こる必要がないことを意味する。
【００５６】
上に示されるように、本発明は、（特に）解離可能な結合を含むスペーサ部分を介して水溶性の非ペプチドポリマーに共有結合されるデスエチルスニチニブ残基を含む化合物に関する。患者への投与の後、デスエチルスニチニブ残基と水溶性の非ペプチドポリマーとの間の解離可能な結合が開裂する。化合物中の解離可能な結合に応じて、デスエチルスニチニブまたは比較的小さい分子断片（または「タグ」）を有するデスエチルスニチニブが、開裂の後、解離される。
【００５７】
デスエチルスニチニブ残基は、薬剤スニチニブの残基であり、ポリマー−スニチニブコンジュゲートにおけるデスエチルスニチニブに対応する部分を指す。
【００５８】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化９】
0006009457.tif 000017
（式中：
ＰＧ１が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００５９】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化１０】
0006009457.tif 000018
（式中：
ＰＧ２が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００６０】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化１１】
0006009457.tif 000019
（式中：
ＰＧ３が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００６１】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化１２】
0006009457.tif 000020
（式中：
ＰＧ４が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００６２】
本発明の１つ以上の実施形態において、以下の構造：
【化１３】
0006009457.tif 000021
（式中：
ＰＧ５が、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）を有する化合物、
およびその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００６３】
本発明の好ましい例示的な化合物が、以下の構造：
【化１４】
0006009457.tif 000022
（式中：
Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーである）
およびその薬学的に許容できる塩に包含される。
【００６４】
解離可能な結合を含むスペーサ部分、「Ｘｒ」
デスエチルスニチニブ（または比較的小さい分子断片を有するデスエチルスニチニブ）の解離を生じさせるために、本発明の化合物は、デスエチルスニチニブ残基と水溶性の非ペプチドポリマーとの間に解離可能な結合を含むスペーサ部分を含む。したがって、解離可能な結合は、患者への投与の後、生体内で開裂するものでなければならない。これに関して、解離可能な結合は、当業者に知られている。さらに、所与の結合が、本明細書に提供される化合物と関連して解離可能な結合として働くことができるかどうかは、実験（例えば、提供される解離可能な結合を有する化合物を患者に投与し、例えば、クロマトグラフ法によって、定期的に得た血液試料を開裂の兆候について試験することによる）によって試験することができる。
【００６５】
本明細書に提供される化合物と関連して使用するための解離可能な結合には、アミン基またはアミド基と結合されると、化学作用または酵素作用によって開裂（解離）する官能基が含まれる。したがって、アミンおよびアミドのための保護基の一部として使用されることが多いこのような基が、本発明における結合の候補である。例示的な解離可能な結合としては、限定はされないが、チオエーテル、カルバメート、エステル、カーボネート、尿素および酵素開裂可能なペプチド結合が挙げられる。チオエーテル、カルバメート、エステル、カーボネートおよび尿素結合は、（例えば、エステルが、エステラーゼによって開裂されるかどうかにかかわらず、エステルが、本明細書において解離可能な結合として働き得る、酵素配位がある場合またはない場合の）β−脱離反応によって開裂し得る。インビトロでのβ−脱離反応の速度が、多くの場合、媒体のｐＨによって制御される一方、生体内で解離を加速するための塩基として働き得る生体分子中の多くの塩基性化学種（例えば、プロトン受容体）がある。関与する塩基が化学的能力で作用しているかもしれないが、これを酵素過程とみなしてもよい。同様に、加水分解を引き起こすかまたは加速するように働き得る生体内の生体分子中の多くの酸性化学種（例えば、プロトン供与体）がある。
【００６６】
酵素開裂可能なペプチド結合に関して、スペーサ部分は、対象とする患者集団中に存在する酵素のための基質であることが知られている一連のアミノ酸を含み得る。このように、患者に投与すると、本発明の酵素開裂可能なペプチド結合を含む化合物は、酵素的開裂によって酵素開裂可能なペプチド結合を開裂し、それによって、デスエチルスニチニブ（または比較的小さい分子断片を有するデスエチルスニチニブ）を解離する。所与の患者集団中で酵素的開裂を受けるペプチド結合の例が、記載されており（例えば、米国特許出願公開第２００５／００７９１５５号明細書を参照）、実験的に測定され得る。
【００６７】
本発明の１つ以上の実施形態において、解離可能な結合を含むスペーサ部分、「Ｘｒ」は、以下の構造を取ることができる：
〜［Ｘ１］ａ−Ｌｒ−［Ｘ２］ｂ〜  （式ＩＩＩ）
（式中：
（ａ）が、０または１のいずれかであり；
（ｂ）が、０または１のいずれかであり；
Ｘ１が、存在する場合、第１のスペーサであり；
Ｌｒが、解離可能な結合であり；
Ｘ２が、存在する場合、第２のスペーサである。
【００６８】
（ａ）および（ｂ）の両方が０である式ＩＩＩの場合、解離可能な結合を含むスペーサ部分が、解離可能な結合のみから構成されることが理解されよう。すなわち、解離可能な結合を含むスペーサ部分は、解離可能な結合のみを含み、デスエチルスニチニブ残基と水溶性の非ペプチドポリマーとの間に他の原子は存在しない。それにもかかわらず、解離可能な結合は、結合が分解するように活性化する周囲の原子に依存することがあり、この原理は、当該技術分野において周知である。
【００６９】
（ａ）および（ｂ）の両方が１である式ＩＩＩの場合、解離可能な結合を含むスペーサ部分が、解離可能な結合を構成するもの以外の１個以上のさらなる原子を含有することが理解されよう。解離可能な結合に隣接し得る非限定的な例示的なスペーサ（例えば、Ｘ１およびＸ２）としては、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｓ−、−ＯＣ（Ｓ）Ｓ−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ２−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ＣＨ２−、−ＯＣ（Ｏ）−ＣＨ２−、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ，ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、−Ｃ（Ｓ）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、二価シクロアルキル基、−Ｎ（Ｒ６）−が挙げられ、Ｒ６が、Ｈまたはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリールおよび置換アリールからなる群から選択される有機基である。さらなるスペーサとしては、アシルアミノ、アシル、アリールオキシ、１個以上５個以下の炭素原子を含有するアルキレン架橋、アルキルアミノ、約２個以上４個以下の炭素原子を有するジアルキルアミノ、ピペリジノ、ピロリジノ、Ｎ−（低級アルキル）−２−ピペリジル、モルホリノ、１−ピペリジニル、４−（低級アルキル）−１−ピペリジニル、４−（ヒドロキシル−低級アルキル）−１−ピペリジニル、４−（メトキシ−低級アルキル）−１−ピペリジニル、フルオレニル、およびグアニジンが挙げられる。しかしながら、本発明の趣旨では、原子の群は、ポリマーセグメントに直接隣接している場合はスペーサとみなされず、この原子の群は、群がポリマー鎖の単なる延長であるようにポリマーのモノマーと同じである。
【００７０】
存在する場合、スペーサは、必ずしもではないが典型的に、直鎖状の性質である。さらに、スペーサは、必ずしもではないが典型的に、加水分解に対して安定しており、および／または酵素的に安定している。本発明の１つ以上の実施形態において、スペーサは、存在する場合、約１２個未満の原子（例えば、約１０個未満の原子、約８個未満の原子、および約５個未満の原子）の鎖長を有する。特定のスペーサの長さの決定に関して、本明細書における長さは、置換基を考慮せずに、単一の鎖中の原子の数として定義される。例えば、この、Ｒポリマー−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ’薬剤などの尿素結合は、３個の原子の鎖長
【化１５】
0006009457.tif 000023
を有するとみなされる。
【００７１】
水溶性非ペプチドポリマー、「ＰＯＬＹ」
本発明の化合物は、水溶性の非ペプチドポリマーを含む。幅広いポリマーを使用することができ、本発明は、使用されるタイプ（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリオキサゾリンなど）、サイズ（例えば、２〜４０００個のモノマーのサイズ）および幾何学形状（例えば、直鎖状、分枝鎖状、多分岐型など）に関して限定されない。
【００７２】
タイプに関して、水溶性の非ペプチドポリマーは、一連の繰り返しモノマーとして理解することができ、モノマーのタイプにより、水溶性の非ペプチドポリマーのタイプが決定される。例示的なモノマーとしては、限定はされないが：エチレンオキシドまたはプロピレンオキシドなどのアルキレンオキシド；ビニルアルコール、１−プロペノールまたは２−プロペノールなどのオレフィンアルコール；ビニルピロリドン；ヒドロキシアルキルメタクリルアミドおよびヒドロキシアルキルメタクリレート（ここで、それぞれ、アルキルが好ましくはメチルである）；乳酸またはグリコール酸などのα−ヒドロキシ酸；ホスファゼン、オキサゾリン、単糖類などの炭水化物、マンニトールなどのアルジトール；およびＮ−アクリロイルモルホリンからなる群が挙げられる。１つ以上の実施形態において、水溶性の非ペプチドポリマーは、この群から選択される２つのモノマー種のコポリマーであり、または、より好ましくは、この群から選択される１つのモノマー種のホモポリマーである。コポリマーに関して、コオリゴマー中の２つのモノマー種は、同じモノマー種、例えば、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドなどの２つのアルキレンオキシドのものであり得る。
【００７３】
サイズに関して、水溶性の非ペプチドポリマーは、比較的小さくてもよく、または水溶性の非ペプチドポリマーは、比較的大きくてもよい。
【００７４】
比較的小さい水溶性の非ペプチドポリマーが存在するそれらの実施形態において、分子量の例示的な値としては：約２０００ダルトン未満；約１５００ダルトン未満；約１４５０ダルトン未満；約１４００ダルトン未満；約１３５０ダルトン未満；約１３００ダルトン未満；約１２５０ダルトン未満；約１２００ダルトン未満；約１１５０ダルトン未満；約１１００ダルトン未満；約１０５０ダルトン未満；約１０００ダルトン未満；約９５０ダルトン未満；約９００ダルトン未満；約８５０ダルトン未満；約８００ダルトン未満；約７５０ダルトン未満；約７００ダルトン未満；約６５０ダルトン未満；約６００ダルトン未満；約５５０ダルトン未満；約５００ダルトン未満；約４５０ダルトン未満；約４００ダルトン未満；約３５０ダルトン未満；約３００ダルトン未満；約２５０ダルトン未満；約２００ダルトン未満；および約１００ダルトン未満が挙げられる。比較的小さい水溶性の非ペプチドポリマーの例示的な範囲としては、約１００〜約１４００ダルトン；約１００〜約１２００ダルトン；約１００〜約８００ダルトン；約１００〜約５００ダルトン；約１００〜約４００ダルトン；約２００〜約５００ダルトン；約２００〜約４００ダルトン；約７５〜１０００ダルトン；および約７５〜約７５０ダルトンが挙げられる。
【００７５】
比較的小さい水溶性の非ペプチドポリマーの場合、中に含まれるモノマーの数は、典型的に、以下の範囲：１個以上約３０個以下；約２〜約２５個；約２〜約２０個；約２〜約１５個；約２〜約１２個；約２〜約１０個のうちの１つ以上に含まれる。場合によっては、ポリマー（および対応するコンジュゲート）中の一連のモノマーの数は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のうちの１つである。さらなる実施形態において、ポリマー（および対応するコンジュゲート）は、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個のモノマーを含有する。さらに他の実施形態において、ポリマー（および対応するコンジュゲート）は、一連の２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個または３０個のモノマーを有する。したがって、例えば、水溶性の非ペプチドポリマーが、ＣＨ３−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−を含む場合、「ｎ」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０であり得、以下の範囲：約１〜約２５；約１〜約２０；約１〜約１５；約１〜約１２；約１〜約１０のうちの１つ以上に含まれ得る整数である。
【００７６】
水溶性の非ペプチドポリマーが、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個のモノマーを有する場合、これらの値は、それぞれ約７５、１１９、１６３、２０７、２５１、２９５、３３９、３８３、４２７、および４７１ダルトンの分子量を有するメトキシ末端封止されたポリ（エチレンオキシド）に相当する。ポリマーが、１１個、１２個、１３個、１４個、または１５個のモノマーを有する場合、これらの値は、それぞれ約５１５、５５９、６０３、６４７、および６９１ダルトンに相当する分子量を有するメトキシ末端封止されたポリ（エチレンオキシド）に相当する。
【００７７】
化合物中の水溶性の非ペプチドポリマーの分子量が比較的大きい（例えば、２，０００ダルトンを超える）場合、分子量は、２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの範囲内に含まれ得る。しかしながら、例示的な範囲としては、約３，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲；約５，０００ダルトン〜約１１０，０００ダルトンの範囲；５，０００ダルトン超〜約１００，０００ダルトンの範囲、約６，０００ダルトン〜約９０，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、１０，０００ダルトン超〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約５３，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約２９，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約３５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、および約４０，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲の分子量が挙げられる。
【００７８】
比較的大きい水溶性の非ペプチドポリマーの例示的な分子量としては、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約２０，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、および約７５，０００ダルトンが挙げられる。上記のいずれかの総分子量を有する、分枝鎖状形態の水溶性の非ペプチドポリマー（例えば、２つの２０，０００ダルトンのポリマーから構成される分枝鎖状の４０，０００ダルトンの水溶性ポリマー）および多分岐型の水溶性の非ペプチドポリマー（例えば、４つの１０，０００ダルトンのポリマーから構成される４分岐の４０，０００ダルトンの水溶性ポリマー）も使用され得る。
【００７９】
したがって、比較的小さいかまたは大きい水溶性の非ペプチドポリマーのいずれが使用されるかにかかわらず、水溶性の非ペプチドポリマーがポリ（エチレンオキシド）である場合、ポリマーは、いくつかの（ＯＣＨ２ＣＨ２）モノマー［または、どのようにＰＥＧが定義されるかに応じて、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）モノマー］を含むであろう。本明細書全体を通して使用される際の、繰り返し単位の数は、「（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ」中の添え字「ｎ」によって特定される。したがって、（ｎ）の値は、典型的に、以下の範囲：２〜約３４００、約１００〜約２３００、約１００〜約２２７０、約１３６〜約２０５０、約２２５〜約１９３０、約４５０〜約１９３０、約１２００〜約１９３０、約５６８〜約２７２７、約６６０〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約９０９〜約２７３０、および約１，２００〜約１，９００のうちの１つ以上に含まれる。分子量が公知である任意の所与のポリマーの場合、ポリマーの総重量平均分子量を、繰り返しモノマーの分子量で除算することによって、繰り返し単位の数（すなわち、「ｎ」）を求めることができる。
【００８０】
幾何学形状に関して、任意の幾何学形状（例えば、直鎖状、分枝鎖状、多分岐型）を、本発明のコンジュゲートに関連して使用することができ、本発明は、これに関して限定されない。
【００８１】
直鎖状の水溶性の非ペプチドポリマーに関して、典型的に、必ずしもではないが、直鎖状の水溶性の非ペプチドポリマーは、解離可能な結合を含むスペーサ部分に結合されていない末端において実質的に不活性の基で（例えば、メチル基またはメトキシ基で）末端封止される。しかしながら、１つ以上の実施形態において、直鎖状の水溶性の非ペプチドポリマーを有する本発明の化合物は、実質的に不活性の基で末端封止されず、その代わりに官能基を有する。このような実施形態において、直鎖状の水溶性の非ペプチドポリマーにより、２つのスニチニブ残基が結合された本発明の化合物が得られる。このような実施形態の別の形態において、直鎖状の水溶性の非ペプチドポリマーにより、単一のスニチニブ残基および異なる部分（例えば、標的部分）の残基を有する本発明の化合物が得られる。
【００８２】
分枝鎖状の水溶性の非ペプチドポリマーに関して、これらのポリマーは、典型的に、スペーサを介して、官能基（結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）の前）またはスニチニブ残基のいずれかに結合される、分岐点を介して結合された、２つの識別可能な末端封止された水溶性の非ペプチドポリマーを含有する。例示的な分枝鎖状形態の水溶性の非ペプチドポリマーは、本明細書に、ならびに国際公開第２００５／１０７８１５号パンフレット、国際公開第２００５／１０８４６３号パンフレット、米国特許第５，９３２，４６２号明細書および同第７，０２６，４４０号明細書、および米国特許出願公開第２００５／０００９９８８号明細書に記載されている。利点の中でも特に、（２つの識別可能な水溶性の非ペプチドポリマーの存在を所与として）分枝鎖状水溶性の非ペプチドポリマーには、例えば、単一の水溶性の非ペプチドポリマーを有する直鎖状ポリマーと比較してより優れたポリマーの性質を提供する可能性がある。
【００８３】
本明細書において使用される際、「水溶性の非ペプチドポリマー」（例えば、「ＰＯＬＹ」）への言及は、２つ以上の識別可能な水溶性の非ペプチドポリマーを特定できるとしても、分枝鎖状および多分岐形態を含むものとみなされる。
【００８４】
多分岐型の水溶性の非ペプチドポリマーに関して、これらのポリマーは、典型的に、３つ以上の識別可能な水溶性の非ペプチドポリマーを含有し、これらの非ペプチドポリマーはそれぞれ、対象の部分に共有結合する能力を有し、かつそれぞれが典型的に中央コア部分（例えば、ポリオールの残基）に結合される。利点の中でも特に、（薬剤に共有結合する各分岐の能力を所与として）多分岐型の水溶性の非ペプチドポリマーには、例えば、単一の薬剤が結合された直鎖状ポリマーと比較してより優れた薬剤の性質を提供する可能性がある。
【００８５】
本発明の化合物を合成するための方法
本明細書に記載される化合物は、様々な方法で調製することができ、本発明は、これに関して限定されない。
【００８６】
１つ以上の実施形態において、本発明の化合物は、水溶性の非ペプチドポリマーを市販のデスエチルスニチニブに共有結合する工程を含む方法によって調製される。
【００８７】
水溶性の非ペプチドポリマーに関して、このようなポリマーは、１つ以上の反応性基を有し、それによって、デスエチルスニチニブへの共有結合を容易にするのに適した試薬を提供する形態で市販品として得られる。この形態で、水溶性の非ペプチドポリマーは、従来、ポリマー試薬と呼ばれることがある。ポリマー試薬の商業的供給源としては、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓ（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ  ＵＳＡ）、ＳｕｎＢｉｏ  ＰＥＧ−Ｓｈｏｐ（ＳｕｎＢｉｏ  ＵＳＡ，Ｏｒｉｎｄａ，ＣＡ）、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ（Ａｌｌｅｎ，ＴＸ）、およびＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｈｉｔｅ  Ｐｌａｉｎｓ，ＮＹ）が挙げられる。慣例的な実験を用いて、当業者は、本発明の化合物を調製するためのサイズ、幾何学形状、および反応性基などを有するポリマー試薬を特定することができる。例えば、一連の各メンバーの特徴（例えば、水溶性の非ペプチドポリマーのサイズ、反応性基のタイプ、結合が解離する能力など）が異なる一連の化合物を調製し、次に、一連のメンバーの１つを患者に投与した後、血液および／または尿の試料の定期的な検出および定量化（例えば、クロマトグラフ法を用いて）を行うことが可能である。一連の各メンバーが、同様の方法で、薬剤未投与患者に投与され、定量化される。一連の各メンバーを試験したら、結果を検討して、どの特徴が所望の効果を有する化合物を提供したかを決定することができる。
【００８８】
デスエチルスニチニブへのポリマー試薬の共有結合は、典型的に、結合条件（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）下で行われ、この条件は、ポリマー試薬の反応性基と、デスエチルスニチニブの好ましい部位、すなわち「末端アミン」との共有結合を可能にする、温度、ｐＨ、時間および溶媒の条件下で、デスエチルスニチニブをポリマー試薬（多くの場合、デスエチルスニチニブと比べてモル過剰のポリマー試薬）と組み合わせることを含む。参照のため、デスエチルスニチニブの末端アミンは、以下に示される。
【化１６】
0006009457.tif 000024
１つ以上の実施形態において、使用されるポリマー試薬は、（ｉ）ポリマー試薬の反応性基が、デスエチルスニチニブの末端アミンにおいて共有結合を形成し、（ｉｉ）ポリマー試薬が、（例えば、共有結合される前に）解離可能な結合を含むかまたは解離可能な結合（例えば、デスエチルスニチニブへの共有結合の後に解離可能な結合を含むように選択される。
【００８９】
反応性基を有する所与のポリマー試薬と、デスエチルスニチニブの末端アミンとの間の例示的な結合条件は、本明細書に提供される開示に基づいて、および関連する文献の文脈において、当業者に知られている。例えば、Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９９７）を参照されたい。
【００９０】
例示的な直鎖状ポリマー試薬（それらのポリマー試薬用の例示的な結合条件とともに）は、それから形成される解離可能な結合を含む化合物とともに、表１に示される。
【００９１】
【表１】
0006009457.tif 000025
【００９２】
【表２】
0006009457.tif 000026
【００９３】
【表３】
0006009457.tif 000027
【００９４】
【表４】
0006009457.tif 000028
【００９５】
例示的な分枝鎖状ポリマー試薬（それらのポリマー試薬用の例示的な結合条件とともに）は、それから形成される解離可能な結合を含む化合物とともに、表２に示される。表２に記載される分枝鎖状ポリマー試薬は、米国特許出願公開第２００５／０００９９８８号明細書および同第２００６／０２９３４９９号明細書に記載されるように調製され得る。
【００９６】
【表５】
0006009457.tif 000029
【００９７】
【表６】
0006009457.tif 000030
【００９８】
本発明の化合物の例示的な多分岐形態は、式：
【化１７】
0006009457.tif 000031
（式中：
Ｒが、３〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり；
各Ｑが、リンカー（１つ以上の実施形態において、加水分解に安定なリンカー）であり；
各Ｘｒが、解離可能な結合を含むスペーサ部分であり；
各ＰＯＬＹが、水溶性の非ペプチドポリマーであり；
ｑが、３〜約５０の正の整数（例えば、４）である）
およびその薬学的に許容できる塩に包含される構造を有する。
【００９９】
不完全な転化、１００％未満の収率、および化学合成中に通常起こる他の不可避な複雑な要因のために、例示的な「４分岐ＰＥＧ」化合物を含む例示的な組成物は、４分岐化合物を含む組成物として特徴付けることができ、ここで、組成物中の４分岐化合物の少なくとも９０％が：
（ｉ）下式に包含される構造を有し、
Ｃ−［ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２−Ｔｅｒｍ］４、
式中、
ｎが、それぞれ、５〜１５０（例えば、約１１３）の値を有する整数であり、
Ｔｅｒｍが、それぞれ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、
【化１８】
0006009457.tif 000032
、および−ＮＨ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｓｕｎからなる群から選択され、ここで、Ｓｕｎが、スニチニブまたはデスエチルスニチニブの残基であり；
（ｉｉ）組成物中の４分岐化合物の少なくとも９０％の各Ｔｅｒｍについて、少なくとも９０％がＳｕｎである。
【０１００】
上記の構造（すなわち、「式Ｉ−Ｃ、多分岐」）によって想定されるように、化合物は、「ｑ」個、すなわち、３〜約５０の数の分岐を有する。分岐の例示的な数は、３、４、５、６、７、９、および１０を含む。１つ以上の実施形態において、本発明の化合物は、多分岐ポリマー試薬から調製され、そして、多分岐ポリマー試薬は、多分岐のコア分子に基づく多分岐ポリマーから調製される。
【０１０１】
例えば、一手法では、多分岐ポリマーが、多分岐コア分子の各末端上にポリマーを効果的に「成長させる」ことによって多分岐コア分子から調製され得る。非限定的な例として、エトキシ化反応によってポリマー分岐をポリオール（例えば、ペンタエリトリトール、ジグリセロールなど）へと合成することが可能である。別の例示的な手法では、多分岐ポリマーが、多分岐コア分子の各末端上に水溶性の非ペプチドポリマーを結合することによって多分岐コア分子から調製され得る。両方の手法の原理が、文献および例えば、米国特許第７，０２６，４４０号明細書に記載されている。しかしながら、本発明は、取られる特定の手法に関して限定されない。
【０１０２】
１つ以上の実施形態において、多分岐ポリマーと関連して使用されるポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基、「Ｒ」は、約３〜約１５０個の炭素原子（例えば、３、４、５、６、７、８、９、および１０個などの約３〜約５０個の炭素原子）を有する有機基含有部分である。残基は、もう１つのヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、またはＮ）を含有してもよい。さらに、残基は直鎖状であり得る。場合によっては、残基は環状であり得る。
【０１０３】
上述されるように、本明細書に提供される多分岐型の化合物の分枝の基盤を形成する、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基、「Ｒ」は、（水溶性の非ペプチドポリマーを含有する多分岐構造中に組み込まれる前に）対応するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンに由来していた。１つ以上の実施形態において、対応するポリオール、ポリチオール、またはポリアミンは、ポリマー結合に利用可能なそれぞれ少なくとも３つのヒドロキシル基、チオール基、またはアミノ基を有する。「ポリオール」は、３つ以上のヒドロキシル基を含む分子である。「ポリチオール」は、３つ以上のチオール基を含む分子である。「ポリアミン」は、３つ以上のアミノ基を含む分子である。
【０１０４】
１つ以上の実施形態において、ポリオール、ポリアミンまたはポリチオールは、典型的に、それぞれ３〜約１０個（すなわち、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のヒドロキシル基、アミノ基またはチオール基、好ましくはそれぞれ３〜約８個（すなわち、３、４、５、６、７、または８個）のヒドロキシル基、アミノ基またはチオール基などの、それぞれ３〜約２５個のヒドロキシル基、またはアミノ基またはチオール基を含有する。１つ以上の実施形態において、各ヒドロキシル基、チオール基、またはアミノ基の間の原子の数は変化するが、各ヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基の間に、炭素原子などの約１〜約２０個（例えば、１〜約５個）の長さの介在原子が典型的である。介在コア原子および長さに言及する際、−ＣＨ２−は、１個の介在原子の長さを有するものとみなされ、−ＣＨ２ＣＨ２−は、２個の原子の長さを有するものとみなされるなどである。
【０１０５】
例示的なポリオールおよびポリアミン（そのための対応する残基が、本明細書に提供される化合物中に存在し得る）は、それぞれ（基）−（ＯＨ）ｑ構造および（基）−（ＮＨ２）ｑ構造を有し、ここで、（基）が、有機物含有基に相当し、ｑが、３〜約５０の正の整数である。式Ｉ−Ｃ、多分岐において、変数「Ｑ」は、Ｒと一緒になると、典型的に、本明細書に記載されるコア有機基の残基を表すことに留意されたい。すなわち、特に名前によってポリオール、ポリチオールおよびポリマーアミンを表す場合、これらの分子は、水溶性ポリマー含有構造中に組み込まれる前のそれらの形態で言及される。そのため、例えば、式Ｉ−Ｃ、多分岐（式中、Ｒが、ポリオール、ペンタエリトリトール［Ｃ（ＣＨ２ＯＨ）４］の残基である）の化合物では、残基「Ｒ」は、炭素（すなわち、「Ｃ」）を含み、「Ｑ」と一緒に「Ｃ（ＣＨ２Ｏ−）４」を表す。
【０１０６】
例示的なポリオールとしては、例えば、トリヒドロキシアルカン、テトラヒドロキシアルカン、ポリヒドロキシアルキルエーテル、ポリヒドロキシアルキルポリエーテルなどを含む、１〜１０個の炭素原子および３〜１０個のヒドロキシル基を有する脂肪族ポリオールが挙げられる。脂環式ポリオールとしては、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、キシリトール、ケブラキトール、トレイトール、アラビトール、エリトリトール、アドニトール、ズルシトール、ファコース（ｆａｃｏｓｅ）、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、ソルボース、マンノース、ピラノース、アルトロース、タロース、タガトース、ピラノシド、スクロース、ラクトース、マルトースなどの、直鎖状または閉環型糖類および糖アルコールが挙げられる。脂肪族ポリオールのさらなる例としては、グルコース、リボース、マンノース、ガラクトース、および関連する立体異性体の誘導体が挙げられる。１，１，１−トリス（４−ヒドロキシフェニル）エタンなどの１，１，１−トリス（４’−ヒドロキシフェニル）アルカン、２，６−ビス（ヒドロキシアルキル）クレゾールなどの芳香族ポリオールも使用され得る。使用され得る他のコアポリオールとしては、ポリヒドロキシクラウンエーテル、シクロデキストリン、デキストリンおよび他の炭水化物（例えば、単糖類、オリゴ糖類、および多糖類、でんぷんおよびアミラーゼ）が挙げられる。
【０１０７】
例示的なポリオールとしては、グリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリトリトール、ジペンタエリトリトール、トリペンタエリトリトール、グリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリトリトール、ジペンタエリトリトール、トリペンタエリトリトールのエトキシ化形態が挙げられる。また、好ましいのは、ソルビトールなどの還元糖およびジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロールなどのグリセロールオリゴマーである。２１分岐ポリマーが、２１個の利用可能なヒドロキシル基を有するヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを用いて合成され得る。さらに、２４個のヒドロキシル基の平均を有するポリグリセロールも、例示的なポリオールに含まれる。
【０１０８】
例示的なポリアミンとしては、ジエチレントリアミン、Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリメチルジエチレントリアミン、ペンタメチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ペンタエチレンヘキサミン、ジプロピレントリアミン、トリプロピレンテトラミン、ビス−（３−アミノプロピル）−アミン、ビス−（３−アミノプロピル）−メチルアミン、およびＮ，Ｎ−ジメチル−ジプロピレン−トリアミンなどの脂肪族ポリアミンが挙げられる。本発明に使用され得る天然のポリアミンとしては、プトレシン、スペルミジン、およびスペルミンが挙げられる。本発明に使用するのに適した多くの好適なペンタミン、テトラミン、オリゴアミン、およびペンタミジン類似体が、参照により本明細書に援用されるＢａｃｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，４６（１）：５５−６１に記載されている。
【０１０９】
以下に提供されるのは、ポリオールの残基に対応する例示的な構造である［各構造が、対応するヒドロキシル基に由来する酸素原子（「Ｏ」）によって示されるが、各「Ｏ」は、それぞれポリチオールまたはポリアミンの対応する残基を示すために硫黄（「Ｓ」）またはＮＨで置換され得る）。以下に示される残基は、「Ｒ」および「Ｑ」に対応する際、式Ｉ−Ｃ、多分岐の化合物に関して理解されるであろうことに留意されたい。いずれにせよ、以下に示される例示的な構造のいずれかに基づくコンジュゲートは、本発明の一部として含まれる。
【化１９】
0006009457.tif 000033
式中、ｍが、０〜４０［例えば、０〜１０、例えば、０〜５（すなわち、０、１、２、３、４、５）］の正の整数である。
【０１１０】
上記のポリオール、ポリチオールおよびポリアミンなどに基づいて（例えば、本発明の化合物を調製するための多分岐ポリマー試薬として使用される）水溶性非ペプチド含有多分岐ポリマーは、国際公開第２００７／０９８４６６号パンフレット、国際公開第２０１０／０１９２３３号パンフレットおよび米国特許第７，７４４，８６１号明細書に記載されている。これらの参照文献および他の参照文献には、このような多分岐ポリマーを調製するための方法を記載されている。
【０１１１】
リンカー、Ｑは、式Ｉ−Ｃによって表される化合物中の各水溶性の非ペプチドポリマー、ＰＯＬＹに、３〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基、「Ｒ」を結合する働きをする。これに関して、本発明は、使用される特定のリンカーに限定されない。１つ以上の実施形態において、残基、「Ｒ」と、水溶性の非ペプチドポリマー、ＰＯＬＹとの間のリンカーは、加水分解に安定なリンカー）である。
【０１１２】
本発明の１つ以上の実施形態において、リンカー、Ｑは、本発明の化合物を調製するのに用いられる多分岐ポリマーを形成するのに使用される手法に影響される。例えば、ヒドロキシル、チオールまたはアミンに対して反応性の官能基を有する水溶性の非ペプチドポリマーが、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンのそれぞれと反応される場合、リンカー、Ｑは、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの末端と、水溶性の非ペプチドポリマー、ＰＯＬＹの繰り返しモノマーの開始点との間で形成される結合を組み込む１個以上の原子を含み得る。（得られるリンカーとともに）これに関する例示的な連結化学が、文献および、例えば、Ｗｏｎｇ（１９９１）“Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ”，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，ａｎｄ  Ｂｒｉｎｋｌｅｙ（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．３：２０１３に記載されている。
【０１１３】
式Ｉ−Ｃ、多分岐の化合物の１つ以上の実施形態において、Ｑは、Ｏ、またはＳなどの少なくとも１個のヘテロ原子、またはＮＨを含有し、ここで、Ｑ中のＲに近位の原子は、Ｒと一緒になると、典型的に、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの有機基含有コアの残基を表す。一般に、リンカー、Ｑは、１〜約１０個の原子（例えば、１〜約５個の原子）を含有する。リンカー、Ｑは、典型的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０からなる群から選択される数の原子を含有する。例示的なＱとしては、Ｏ、Ｓ、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−が挙げられる。
【０１１４】
式Ｉ−Ｃ、多分岐のそれぞれの残りの変数には、水溶性の非ペプチドポリマー、ＰＯＬＹおよび解離可能な結合を含むスペーサ部分が含まれ、その両方が既に記載されている。しかしながら、式Ｉ−Ｃ、多分岐に包含される化合物に関して、水溶性の非ペプチドポリマー（例えば、各ＰＯＬＹ）の典型的な分子量としては：約２００、約２５０、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１，０００、約１，５００、約２，０００、約３，０００、約４，０００、約５，０００、約６，０００、約７，０００、約７，５００、約８，０００、約９，０００、約１０，０００、約１２，０００、約１５，０００、約１７，５００、約１８，０００、約１９，０００および約２０，０００ダルトンが挙げられる。
【０１１５】
化合物の有用性および試験
動物モデル（げっ歯類およびイヌ）を用いて、経口薬剤輸送を試験することができる。さらに、非生体内の方法は、げっ歯類の反転腸切除組織およびＣａｃｏ−２細胞単層組織−培養モデルを必要とする。これらのモデルは、経口薬剤バイオアベイラビリティを予測する（それによって、本発明の所与の化合物が経口投与できるかどうかの指標を提供する）のに有用である。
【０１１６】
結合活性を試験するために、化合物が、受容体へのインビトロ結合試験を用いて、これらの受容体を発現する様々な細胞株を用いて試験され得る。当業者に公知のインビトロ結合試験が、対象の受容体に対する結合を試験するのに使用され得る。
【０１１７】
以下のアッセイが、プロテインキナーゼに対する化合物の活性および効果のレベルを測定するのに使用され得る。アッセイは、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着サンドイッチアッセイ）形式で行われる［Ｖｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０），“Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ”，Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｄ  ｅｄ．，Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ｐｐ．３５９−３７１］。基本手順は以下のとおりである：化合物を、所定の期間にわたって、天然にまたは組み換えによって試験キナーゼを発現する細胞に導入し、その後、試験キナーゼが受容体である場合、受容体を活性化することが知られているリガンドを加える。細胞を溶解させ、溶解物を、酵素のリン酸化反応の基質を認識する特定の抗体が予め塗布されたＥＬＩＳＡプレートのウェルに移す。細胞溶解物の基質でない成分を洗い流し、基質におけるリン酸化の量を、試験化合物と接触しなかった対照細胞と比較してホスホチロシンを特異的に認識する抗体を用いて検出する。同様のアッセイが、当該技術分野において周知の技術を用いて、任意のプロテインキナーゼのための同じライン（ｌｉｎｅ）に沿って設計され得る。
【０１１８】
これらの基本的な手法を用いて、ＧＳＴ−Ｆｌｋ１、ｐｙｋ２、ＰＹＫ２、ＦＧＦＲ−１Ｒ、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＨＥＲ−２、ＣＤＫ２、およびＩＧＦ−１を含む、８０を超えるプロテインキナーゼを試験することができる。
【０１１９】
本発明の化合物は、癌阻害可能性を決定するために癌の動物モデルにおいて試験され得る。例示的なモデルは、異種移植片に基づくアッセイである。このアッセイでは、ヒト腫瘍が無胸腺マウス（例えば、Ｂａｌｂ／ｃ、ｎｕ／ｎｕ）中で異種移植片として成長する能力が、ヒト腫瘍の治療法に対する生物学的反応を調べるための有用な生体内モデルを提供する。無胸腺マウス中へのヒト腫瘍の最初に成功した異種移植［Ｒｙｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９６９）Ａｃｔａ  Ｐａｔｈｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｓｃａｎｄ．７７：７５８−７６０］以来、多くの様々なヒト腫瘍細胞株（例えば、乳房、肺、泌尿生殖器、胃腸、頭頸部、膠芽細胞腫、骨、および悪性黒色腫）が、ヌードマウス中に移植され、首尾よく成長されてきた。
【０１２０】
実験において提供される手法に加えて、以下のアッセイが、本発明の様々な化合物の活性、特異性（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）および効果のレベルを測定するのに使用され得る。細胞／触媒アッセイ、細胞／生物学的アッセイおよび生体内アッセイの３つの一般的なタイプのアッセイが、化合物を評価するのに有用である。細胞／触媒アッセイの目的は、チロシンキナーゼが細胞中の公知の基質においてチロシンをリン酸化する能力に対する化合物の効果を測定することである。細胞／生物学的アッセイの目的は、細胞中のチロシンキナーゼによって刺激される生物学的応答に対する化合物の効果を測定することである。生体内アッセイの目的は、癌などの特定の疾患の動物モデルにおける化合物の効果を測定することである。
【０１２１】
皮下異種移植片実験に適した細胞株としては、Ｃ６細胞（神経膠腫、ＡＴＣＣ  ＃ＣＣＬ  １０７）、Ａ３７５細胞（黒色腫、ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ  １６１９）、Ａ４３１細胞（類表皮癌、ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ  １５５５）、Ｃａｌｕ  ６細胞（肺、ＡＴＣＣ  ＃ＨＴＢ  ５６）、ＰＣ３細胞（前立腺、ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ  １４３５）、ＳＫＯＶ３ＴＰ５細胞ならびにＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＩＧＦ−１Ｒまたは任意の他のキナーゼを過剰発現するように遺伝子組み換えされたＮＩＨ  ３Ｔ３線維芽細胞が挙げられる。以下のプロトコルが、異種移植片実験を行うのに使用され得る。
【０１２２】
雌の無胸腺マウス（ＢＡＬＢ／ｃ、ｎｕ／ｎｕ）を、Ａｌｐｈａ−ｄｒｉ床敷を備えたマイクロアイソレータケージ中で無菌室条件下に保つ。それらのマウスに、滅菌したげっ歯類用食餌（ｒｏｄｅｎｔ  ｃｈｏｗ）および水を自由に与える。
【０１２３】
細胞株を、適切な媒体［例えば、ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０、またはＨａｍ’ｓ  Ｆ１２および５％〜１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および２ｍＭのグルタミン（ＧＬＮ）］中で成長させる。全ての細胞を、３７℃で９０〜９５％の空気および５〜１０％のＣＯ２の高湿度雰囲気中で成長させる。全ての細胞株を、週２回定期的に継代培養したところ、Ｍｙｃｏｔｅｃｔ方法（Ｇｉｂｃｏ）によって測定した際にマイコプラズマに対して陰性である。
【０１２４】
０．０５％のトリプシン−ＥＤＴＡを用いてコンフルエントな状態もしくはコンフルエントに近い状態で細胞を採取し、１０分間にわたって４５０×ｇでペレット化する。ペレットを、滅菌ＰＢＳまたは媒体（ＦＢＳを含まない）中で特定の濃度になるまで再懸濁させ、細胞を、マウス（１群当たり８〜１０匹のマウス、２〜１０×１０６個の細胞／動物）の後側の横腹（ｈｉｎｄｆｌａｎｋ）に移植する。腫瘍成長を、ノギス（ｖｅｎｉｅｒ  ｃａｌｉｐｅｒ）を用いて３〜６週間にわたって測定する。腫瘍体積を、長さ×幅×高さの積として計算する。Ｐ値を、スチューデントのｔ検定を用いて計算する。５０〜１００μＬの賦形剤（ＤＭＳＯ、またはＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）中の試験化合物を、移植後１日目に一般に開始する様々な濃度における腹腔内注射によって送達することができる。
【０１２５】
本発明の化合物を、それ自体でまたは薬学的に許容できる塩の形態で投与してもよく、本明細書における本発明の化合物へのいずれの言及も、薬学的に許容できる塩を含むことを意図している。使用される場合、本明細書に記載される化合物の塩は、薬理学的にかつ薬学的に許容可能であるべきであるが、薬学的に許容できない塩が、遊離活性化合物またはその薬学的に許容できる塩を調製するのに好都合に使用されることがあり、本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的にかつ薬学的に許容できる塩は、文献に詳述される標準的な方法を用いて、化合物と有機酸または無機酸との反応によって調製することができる。有用な塩の例としては、限定はされないが、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸などから調製されるものが挙げられる。また、薬学的に許容できる塩は、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類塩として調製することができる。
【０１２６】
本発明の化合物は、１つ以上のキラル中心を含んでいてもよく、各キラル中心につき、本発明は、各光学異性体ならびに光学的に活性な形態、例えば、単一の光学的に活性な鏡像異性体の任意の組合せまたは比率、あるいは鏡像異性体（例えば、非ラセミ（ｓｃａｌｅｍｉｃ）およびラセミ混合物）の任意の組合せまたは比率を想定している。さらに、小分子薬剤は、１つ以上の幾何異性体を有していてもよい。幾何異性体に関して、組成物が、単一の幾何異性体または２つ以上の幾何異性体の混合物を含み得る。
【０１２７】
本発明は、医薬賦形剤と組み合わせて本明細書に提供される化合物を含む医薬製剤も含む。一般に、化合物自体は、固体形態（例えば、沈殿物）であり、これは、固体または液体形態のいずれかであり得る好適な医薬賦形剤と組み合わされ得る。
【０１２８】
例示的な賦形剤としては、限定はされないが、炭水化物、無機塩、抗菌剤、酸化防止剤、界面活性剤、緩衝液、酸、塩基、およびそれらの組合せからなる群から選択されるものが挙げられる。
【０１２９】
糖、アルジトール、アルドン酸などの誘導体化された糖、エステル化された糖、および／または糖ポリマーなどの炭水化物が、賦形剤として存在し得る。具体的な炭水化物賦形剤としては、例えば：フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖類；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖類；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、でんぷんなどの多糖類；およびマンニトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール、ミオイノシトールなどのアルジトールが挙げられる。
【０１３０】
賦形剤としては、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、およびそれらの組合せなどの無機塩または緩衝液も挙げられる。
【０１３１】
製剤は、微生物増殖を防止または抑制するための抗菌剤も含み得る。本発明に適した抗菌剤の非限定的な例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、およびそれらの組合せが挙げられる。
【０１３２】
酸化防止剤が、同様に製剤中に存在し得る。酸化防止剤は、酸化を防止し、それによって、コンジュゲートまたは製剤の他の成分の劣化を防止するのに使用される。本発明に使用するのに適した酸化防止剤としては、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、およびそれらの組合せが挙げられる。
【０１３３】
界面活性剤が、賦形剤として存在してもよい。例示的な界面活性剤としては：「Ｔｗｅｅｎ  ２０」および「Ｔｗｅｅｎ  ８０」などのポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）、およびＦ６８およびＦ８８（両方ともＢＡＳＦ，Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ，ＮＪから入手可能である）などのプルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）；ソルビタンエステル；レシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンなどのリン脂質、脂肪酸および脂肪酸エステルなどの脂質；コレステロールなどのステロイド；ならびにＥＤＴＡ、亜鉛および他のこのような好適なカチオンなどのキレート剤が挙げられる。
【０１３４】
薬学的に許容できる塩または塩基が、製剤中に賦形剤として存在してもよい。使用され得る酸の非限定的な例としては、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、およびそれらの組合せからなる群から選択される酸が挙げられる。好適な塩基の例としては、限定はされないが、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、およびそれらの組合せからなる群から選択される塩基が挙げられる。
【０１３５】
組成物中のコンジュゲートの量は、いくつかの要因に応じて変化するが、組成物が単位用量容器中に貯蔵されるとき、最適に治療に有効な用量であろう。治療に有効な用量は、どの量が臨床的に望ましいエンドポイントを生じるかを決定するために増加する量のコンジュゲートを繰り返し投与することによって実験的に決定することができる。
【０１３６】
組成物中の任意の個々の賦形剤の量は、賦形剤の活性および組成物の具体的な必要性に応じて変化する。任意の個々の賦形剤の最適量は、慣例的な実験によって、すなわち様々な量の賦形剤（少ない量から多い量まで及ぶ）を含有する組成物を調製し、安定性および他のパラメータを調べて、次に、それほど副作用がなく最適な性能が得られる範囲を決定することによって決定される。
【０１３７】
しかしながら、一般に、賦形剤は、約１重量％〜約９９重量％、好ましくは約５重量％〜９８重量％、より好ましくは約１５〜９５重量％の賦形剤の量で組成物中に存在し、３０重量％未満の濃度が最も好ましい。
【０１３８】
他の賦形剤とともにこれらの上記の医薬賦形剤および医薬組成物に関する一般的な教示が、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５），ｔｈｅ  “Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８）、およびＫｉｂｂｅ，Ａ．Ｈ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２０００に記載されている。
【０１３９】
医薬組成物は、いくつもの形態を取ることができ、本発明は、これに関して限定されない。例示的な製剤は、最も好ましくは、錠剤、カプレット、カプセル剤、ゲルカプセル、トローチ、分散体、懸濁液、液剤、エリキシル剤、シロップ、舐剤、経皮貼布剤、スプレー、坐薬、および粉剤などの経口投与に適した形態である。
【０１４０】
経口剤形が、経口で有効なコンジュゲートに好ましく、錠剤、カプレット、カプセル剤、ゲルカプセル、懸濁液、液剤、エリキシル剤、およびシロップを含み、任意選択的に封入される複数の顆粒、ビーズ、粉剤またはペレットも含み得る。このような剤形は、医薬製剤の分野の当業者に公知であり、関連するテキストに記載されている従来の方法を用いて調製される。
【０１４１】
例えば、錠剤およびカプレットは、標準的な錠剤加工手順および機器を用いて製造され得る。本明細書に記載されるコンジュゲートを含有する錠剤またはカプレットを製造するとき、直接圧縮および造粒技術が好ましい。コンジュゲートに加えて、錠剤およびカプレットは、一般に、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、充填剤、安定剤、界面活性剤、着色剤、流動剤（ｆｌｏｗ  ａｇｅｎｔ）などの不活性な薬学的に許容できる担体材料を含有するであろう。結合剤は、錠剤に凝集性の品質を与え、ひいては錠剤の原形を確実に保つのに使用される。好適な結合剤材料としては、限定はされないが、でんぷん（コーンスターチおよびアルファでんぷんを含む）、ゼラチン、糖類（スクロース、グルコース、デキストロースおよびラクトースを含む）、ポリエチレングリコール、ワックス、ならびに天然および合成ゴム、例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、セルロースポリマー（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、微結晶性セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなどを含む）、およびＶｅｅｇｕｍが挙げられる。潤滑剤が、錠剤の製造を容易にし、粉末の流れを促進し、圧力が低下されたときの粒子のキャッピング（ｃａｐｐｉｎｇ）（すなわち、粒子の破損）を防止するのに使用される。有用な潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびステアリン酸である。崩壊剤は、錠剤の崩壊を容易にするのに使用され、一般に、でんぷん、粘土、セルロース、アルギン、ゴム、または架橋されたポリマーである。充填剤としては、例えば、二酸化ケイ素、二酸化チタン、アルミナ、タルク、カオリン、粉末セルロース、および微結晶性セルロースなどの材料、ならびにマンニトール、尿素、スクロース、ラクトース、デキストロース、塩化ナトリウム、およびソルビトールなどの可溶性材料が挙げられる。当該技術分野において周知の安定剤が、例として酸化反応を含む薬剤分解反応を阻害するかまたは遅らせるのに使用される。
【０１４２】
カプセル剤も好ましい経口剤形であり、その場合、コンジュゲート含有組成物は、液体またはゲル（例えば、ゲルカプセルの場合）または固体（顆粒、ビーズ、粉剤またはペレットなどの粒子状物質を含む）の形態で封入され得る。好適なカプセル剤は、硬カプセル剤および軟カプセル剤を含み、一般に、ゼラチン、でんぷん、またはセルロース系材料で作製される。ツーピースの硬ゼラチンカプセル剤が、ゼラチンバンドなどで封止されるのが好ましい。
【０１４３】
（粉剤またはケーキの形態であり得る凍結乾燥物または沈殿物としての）実質的に乾燥した形態の非経口製剤、ならびに液体であり、かつ乾燥形態の非経口製剤を再構成する工程を必要とする注射用に調製された製剤が含まれる。注射の前に固体組成物を再構成するのに適した希釈剤の例としては、注射用静菌水、水中５％のデキストロース、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水、およびそれらの組合せが挙げられる。
【０１４４】
場合によっては、非経口投与向けの組成物は、通常滅菌されて非水性溶液、懸濁液、またはエマルジョンの形態を取り得る。非水性溶媒または媒体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油およびトウモロコシ油などの植物油、ゼラチン、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。
【０１４５】
本明細書に記載される非経口製剤は、保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などの補助剤も含有し得る。製剤は、滅菌剤の組み込み、細菌保持フィルタ（ｂａｃｔｅｒｉａ−ｒｅｔａｉｎｉｎｇ  ｆｉｌｔｅｒ）によるろ過、放射線、または熱によって滅菌される。
【０１４６】
本発明の化合物は、従来の経皮貼布剤または他の経皮的送達系を用いて皮膚を通して投与することもでき、ここで、コンジュゲートは、皮膚に装着される薬剤送達デバイスとして働く積層構造中に含まれる。このような構造において、コンジュゲートは、層、または上側裏打ち層の下にある「槽（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）」に含まれる。積層構造は、単一の槽を含んでいてもよく、または複数の槽を含んでいてもよい。
【０１４７】
本発明の化合物は、直腸投与用の坐薬へと製剤化することもできる。坐薬に関して、化合物は、ココアバター（カカオ脂）、ポリエチレングリコール、グリセリンゼラチン、脂肪酸、およびそれらの組合せなどの賦形剤（例えば、室温において固体のままであるが、体温において軟化し、溶融し、または溶解する賦形剤）である坐薬基材と混合される。坐薬は、例えば、以下の工程（必ずしも示される順序で行われるわけではない）：坐薬基材を溶融して溶融物を形成する工程と；（坐薬基材の溶融の前または後に）化合物を組み込む工程と；溶融物を型に注ぎ込む工程と；溶融物を冷却して（例えば、溶融物を入れた型を室温環境において）、それによって、坐薬を形成する工程と；坐薬を型から取り出す工程とを行うことによって製造することができる。
【０１４８】
本発明のある実施形態において、本発明の化合物を含む組成物は、好適な送達媒体中にさらに組み込まれてもよい。このような送達媒体は、化合物の制御放出および／または連続的放出を提供することができ、標的部分としても働き得る。送達媒体の非限定的な例としては、補助剤、合成補助剤、マイクロカプセル、微小粒子、リポソーム、および酵母細胞壁粒子が挙げられる。酵母細胞壁は、タンパク質成分、グルカン、またはマンナンの層を選択的に除去するために様々に処理されてもよく、全グルカン粒子（ＷＧＰ）、酵母β−グルカンマンナン粒子（ＹＧＭＰ）、酵母グルカン粒子（ＹＧＰ）、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）酵母細胞粒子（ＹＣＰ）と呼ばれる。Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）およびロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）種などの酵母細胞が好ましいが；任意の酵母細胞が使用されてもよい。これらの酵母細胞は、流体力学的体積について異なる特性を示し、それらの中身を放出し得る標的器官も異なる。これらの粒子の製造および特性決定の方法が、米国特許第５，７４１，４９５号明細書、同第４，８１０，６４６号明細書、同第４，９９２，５４０号明細書、同第５，０２８，７０３号明細書、同第５，６０７，６７７号明細書および米国特許出願公開第２００５／０２８１７８１号明細書および同第２００８／００４４４３８号明細書に記載されている。
【０１４９】
本発明は、本明細書に提供される本発明の化合物を、本化合物による治療に対応する病態に罹患した患者に投与するための方法も提供する。本方法は、（好ましくは、医薬製剤の一部として提供される）治療に有効な量の化合物を一般に経口で投与する工程を含む。経肺投与、経鼻投与、口腔投与、直腸投与、舌下投与、経皮投与、および非経口投与などの他の投与形態も考えられる。本明細書において使用される際の「非経口」という用語には、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、心臓内、髄腔内、および筋肉内注射、ならびに点滴注入が含まれる。
【０１５０】
非経口投与が用いられる場合、上述されるものよりいくらか大きいオリゴマーを用いる必要もあり得、分子量は、約５００〜３０Ｋダルトンの範囲である（例えば、約５００、１０００、２０００、２５００、３０００、５０００、７５００、１００００、１５０００、２００００、２５０００、３００００またはさらにそれ以上の分子量を有する）。
【０１５１】
本発明の１つ以上の実施形態において、特にヒト患者における、異常なプロテインキナーゼ活性、特に、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、非受容体プロテインチロシンキナーゼ（ＣＴＫ）およびセリン／トレオニンプロテインキナーゼ（ＳＴＫ）によって媒介される疾病を治療する方法に関する方法が提供され、この方法は、本明細書に記載される本発明の化合物を含む医薬組成物を前記患者に投与する工程を含む。このような疾病としては、例として、限定はされないが、癌、糖尿病、肝硬変、アテローム性動脈硬化症などの心血管疾患、血管新生、自己免疫疾患および腎疾患などの免疫疾患が挙げられる。
【０１５２】
本発明の１つ以上の実施形態において、本発明は、異常なＰＫ活性によって媒介される疾病の治療に有用な薬剤の調製における、本明細書に記載される本発明の化合物の使用に関する。
【０１５３】
投与される実際の用量は、被験体の年齢、体重、および全身状態ならびに治療される病態の重症度、医療専門家の判断、および投与されるコンジュゲートに応じて変化するであろう。治療に有効な量が、当業者に公知であり、および／または関連した参照テキストおよび文献に記載されている。一般に、治療に有効な量は、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲、好ましくは０．０１ｍｇ／日〜７５０ｍｇ／日の用量、より好ましくは０．１０ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日の用量であろう。
【０１５４】
本発明の任意の所与の化合物（この場合も、好ましくは、医薬製剤の一部として提供される）の単位剤形は、臨床医の判断、患者の要求などに応じて様々な投薬スケジュールで投与され得る。具体的な投薬スケジュールは、当業者に知られており、または常法を用いて実験的に決定され得る。例示的な投薬スケジュールとしては、限定はされないが、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、週３回、週２回、週１回、月２回、月１回、およびそれらの任意の組合せの投与が挙げられる。臨床的エンドポイントを達成した後、組成物の投与を停止する。
【０１５５】
本発明が、その好ましい特定の実施形態とともに記載されてきたが、上記の説明ならびに以下の実施例が、本発明の範囲を例示するものであり、限定するものではないことが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の態様、利点および変更は、本発明が関する技術分野の当業者に明らかであろう。
【０１５６】
本明細書に引用される全ての論文、書籍、特許、特許公報および他の刊行物は、全体が参照により援用される。本明細書の教示と、参照により援用される技術との間に矛盾が生じた場合、本明細書の教示の意味が優先されるものとする。
【実施例】
【０１５７】
実験
本発明が、特定の好ましい実施形態および特定の実施形態とともに記載されてきたが、上記の説明ならびに以下の実施例が、本発明の範囲を例示するものであり、限定するものではないことが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の態様、利点および変更は、本発明が関する技術分野の当業者に明らかであろう。
【０１５８】
特に示されない限り、添付の実施例において言及される全ての非ＰＥＧ化学試薬は市販のものであり、および／または文献に記載される当該技術分野において公知の技術を用いて調製することができる。
【０１５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（核磁気共鳴）データを、ＮＭＲ分光計によって生成した（特に示されない限り、約１２．８ｐｐｍを超えるＮＭＲデータは、収集しなかった）。
【０１６０】
実施例１
２−アミノエチル−ＦＭＯＣ結合ＰＥＧ−デスエチルスニチニブコンジュゲートの合成
この実施例では、以下の概略図に表される反応スキームによって示される手法にしたがった。
【化２０】
0006009457.tif 000034
【０１６１】
リンカー（上記の概略図中の「リンカーａ」）を調製する際、以下の概略図に表される以下の反応スキームにしたがった。
【化２１】
0006009457.tif 000035
【０１６２】
方法Ａ（「Ｍ−Ａ」）：
９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（化合物Ｉ）の合成：
２５０ｍＬの丸底フラスコに、ジエチレングリコール（７０ｍＬ）中の９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（９．８２ｇ、４３．８ｍｍｏｌ）を加えて、黄色の懸濁液を得た。水酸化ナトリウム（６．１ｇ、１．５ｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（水中８０％、７．５ｍＬ、１８７ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を、油浴中１２０℃で撹拌しながら加熱した。黄色の固体が存在したため、さらなるジエチレングリコール（１５０ｍＬ）を加えた。温度を１６５℃まで上昇させた。２時間後、反応混合物を室温に冷まし、一晩静置した。約１２時間後、脱イオン水（２００ｍＬ）を反応混合物に加え、全ての固体を溶解させた。透明の黄色の溶液を、１２０℃で加熱し、濃塩酸を用いてｐＨ２まで酸性化した。沈殿した黄色の固体をろ過し、脱イオン水（７００ｍＬ）で洗浄した。湿潤固体を、０．２ＭのＮａＯＨ（５００ｍＬ）に再溶解させ、６０℃で加熱した。溶液を、濃塩酸を用いてｐＨ２まで酸性化した。黄色の固体をろ過し、脱イオン水（５００ｍＬ）で洗浄した。五酸化リンを存在させた状態で、生成物を減圧下に置いた。収量：７．１ｇ（７７％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は８．６分間であり、３２０ｎｍで９９％を超える純度であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．１（ｓ，１Ｈ，−ＣＨ）；８．０（ｍ，３Ｈ，３−ＣＨ）；７．６（ｄ，１Ｈ，−ＣＨ）；７．４（ｍ，２Ｈ，２−ＣＨ）；４．０（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２）。
【０１６３】
方法Ｂ（「Ｍ−Ｂ」）：
９−ホルミル−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（化合物ＩＩ）の合成：
２５０ｍＬの丸底フラスコに、無水ジメチルスルホキシド（８６ｍＬ）中の９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（４．２４ｇ、２０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。ギ酸エチル（２６．５ｍＬ、３２６ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１８．５ｇ、１６５ｍｍｏｌ）を加えた。ガス発生が観察され、溶液の色は、褐色がかった黒色であった。４０分後、脱イオン水（２００ｍＬ）を反応混合物にゆっくりと加えた。濃塩酸を、ｐＨが約２になるまで加えた。生成物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を、５％の塩化ナトリウム（６×２００ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。溶液を蒸発乾固させた。収量：４．９６ｇ（１００％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は６．６および７．３分間（２つの形態のホルミル基）であり、３２０ｎｍで９９％を超える純度であった。
【０１６４】
方法Ｃ（「Ｍ−Ｃ」）：
９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（化合物ＩＩＩ）の合成：
２５０ｍＬの丸底フラスコに、水素化ホウ素ナトリウム（８．０２ｇ、２１２ｍｍｏｌ）および脱イオン水（５９ｍＬ、窒素ガスで予めスパージしたもの）を加えた。溶液を氷浴に入れて冷却した。低温の水素化ホウ素ナトリウム溶液を、９−ホルミル−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（４．９６ｇ、２０．８２ｍｍｏｌ）を入れた２５０ｍＬの丸底フラスコにゆっくりと加えた。反応物を１５分間にわたって０℃に維持し、次に、室温になるまで放置した。室温で１時間後、反応溶液を氷浴中で急冷した。脱イオン水（２００ｍＬ）およびメタノール（２００ｍＬ）を加えた。反応混合物を低温に維持しながら、濃塩酸を、ｐＨが約２になるまでゆっくりと加えた（低温の目的は、水性塩基性条件において高温により起こり得るフルベンの形成を回避することである）。生成物を、酢酸エチル（４００、１００ｍＬ）で抽出した。抽出物を組み合わせて、５％の塩化ナトリウム（２００ｍＬ×２）で洗浄した。酢酸エチル抽出物を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過し、蒸発乾固させた。生成物を減圧下に置いて、残留溶媒を除去した。収量：４．９１ｇ（９８％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は３．６分間であり、３２０ｎｍで９９％を超える純度であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．２（ｓ，１Ｈ，−ＣＨ）；８．０（ｍ，３Ｈ，３−ＣＨ）；７．７（ｄ，１Ｈ，−ＣＨ）；７．５（ｍ，２Ｈ，２−ＣＨ）；４．１（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．９、３．７（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）。
【０１６５】
方法Ｄ（「Ｍ−Ｄ」）：
ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート（化合物ＩＶ）の合成：
１００ｍＬの丸底フラスコに、９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（２．４２４ｇ、１０．０９ｍｍｏｌ）および無水ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）を加えた。ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノエチルカルバメート（２．４３５ｇ、１４．４７ｍｍｏｌ）、無水ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．４５９ｇ、１０．８０ｍｍｏｌ）およびＮ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン塩酸塩（２．４４ｇ、１２．７３ｍｍｏｌ）を加えた。無水ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を加えて、丸底フラスコの壁をすすいだ。２４時間後、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を反応混合物に加えた。溶液を、０．１Ｍの塩酸／５％の塩化ナトリウム（３×１５０ｍＬ）および５％の塩化ナトリウム（１５０ｍＬ）の溶液で洗浄した。酢酸エチル抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で蒸発させた。生成物を真空下に置いて、乾燥させた。収量：３．７９ｇ（９８％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は６．７分間であり、３００ｎｍで９９％を超える純度であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．１（ｓ，１Ｈ，−ＣＨ）；７．８（ｍ，３Ｈ，３−ＣＨ）；７．７（ｄ，１Ｈ，−ＣＨ）；７．４（ｍ，２Ｈ，２−ＣＨ）；４．１（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２）；４．０（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ）；３．６（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）；３．４（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）；１．４（ｓ，９Ｈ，−（ＣＨ３）３）。
【０１６６】
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル９−（（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキシレート（化合物１ａ）の合成：
５００ｍＬの丸底フラスコに、無水アセトニトリル（２２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート（３．５ｇ、９．１５ｍｍｏｌ）を加えた。ジ（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）カーボネート、６６．７重量％（４．２８ｇ、９．６４ｍｍｏｌ）を、無水アセトニトリル（４５ｍＬ）とともに反応溶液に加えた。無水ピリジン（２．２２ｍＬ、２７．４ｍｍｏｌ）を加えた。約２時間後、さらなるジ（１Ｈベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）カーボネート、６６．７重量％（０．８４ｇ、１．８９１ｍｍｏｌ）を加えた。生成物を単離した。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；２８０ｎｍで９１％の純度で、２．３７分間であった。反応溶液（１２０ｍＬ）の一部を蒸発乾固させ、無水ＴＨＦ（２３０ｍＬ）に再溶解させて、化合物１ａを調製した。
【０１６７】
（Ｚ）−Ｎ−（２−（エチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド二塩酸塩（Ｎ−デスエチルスニチニブ）の合成：
５０ｍＬの丸底フラスコに、無水ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の（Ｚ）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１２０．８ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）を加えた。ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノエチル（エチル）カルバメート）（１５８．１ｍｇ、０．８４０ミリモル）、無水ヒドロキシベンゾトリアゾール（５６．７ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）およびＮ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン塩酸塩（１４１．０ｍｇ、０．７３６ｍｍｏｌ）を加えた。２４時間の時点で、Ｎ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン塩酸塩（１４．３ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）。３１時間の全反応時間の後、脱イオン水（３０ｍＬ）を反応混合物に加えた。生成物を、ジクロロメタン（６０ｍＬ）で１回抽出した。ジクロロメタン抽出物を、０．１Ｍの塩酸（３０、６０、６０ｍＬ）で３回洗浄した。次に、ジクロロメタン抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を蒸発させ、生成物を減圧下に置いて、乾燥させた。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は１１．５分間であり、３７０ｎｍで９９％を超える純度であった。ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノエチル（エチル）カルバメートまたは他のニンヒドリン陽性不純物の証拠は、ＴＬＣによって示されなかった。固体（１５８．４ｍｇ、８４％の収率）を、無水メタノール（１０ｍＬ）に３５℃で溶解させた。完全に溶解させてから、１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｍの塩酸を反応溶液に加えた。１時間後、溶媒を減圧下で蒸発させた。乾燥した生成物を無水アセトニトリルに懸濁させ、蒸留して、再度乾固させた。収量：約１４９ｍｇ（理論的収量）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は２．５分間であり、３７０ｎｍで９９％を超える純度であった。
【０１６８】
（Ｚ）−（ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物１ａ）の合成：
２Ｌのフラスコに、ＴＨＦ（７５０ｍＬ）および１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ：１０．７５）（５００ｍＬ）とともに、（Ｚ）−Ｎ−（２−（エチルアミノ）エチル）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド二塩酸塩（Ｎ−デスエチルスニチニブ）（１．５１ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）を加えた。水（２５０ｍＬ）中の飽和した塩化ナトリウムを加えた。混合した後、ＴＨＦ層を除去し、硫酸マグネシウム（７５ｇ）で乾燥させた。溶液をろ過し、蒸発乾固させた。化合物１の遊離塩基形態の収量は１．３４ｇであった。フラスコに、無水ＴＨＦ（２３０ｍＬ）中の２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル９−（（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキシレート（リンカーａ））（２．０ｇ、３．６８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）を加えて、全ての材料を完全に溶解させた。約１８時間後、反応混合物をろ過した。ろ液を、Ｎ−デスエチルスニチニブ遊離塩基（２９２．４ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、３３ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ：１０．７５）−ＴＨＦ混合物に予め溶解させたもの）の別の部分と反応させた。４時間の時点で、粗製溶液を蒸発乾固させた。生成物を、無水メタノール（５０、３０、３０ｍＬ）を用いて研和（ｔｒｉｔｕｒａｔｅ）した。固体を無水メタノール（３０ｍＬ）で洗浄した。生成物を減圧下に置いて、乾燥させた。収量：１．５５ｇ（５４．１％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は１２．３分間であり、３７０ｎｍで９８．５％の純度であった。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ４３Ｈ４７ＦＮ６Ｏ７］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝７７９．９、実測値Ｍ＋Ｈ＝７７９．３）。
【０１６９】
（Ｚ）−（Ｎ−（２−アミノエチル）−９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド塩酸塩）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート二塩酸塩（化合物２ａ）の合成：
丸底フラスコに、ジオキサン（１４０ｍＬ）中の（Ｚ）−（ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物１ａ）（８０１．４ｍｇ、１．０２９ｍｍｏｌ）を加えた。ジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（１４０ｍＬ）の溶液を加えた。１．５時間後、反応溶媒を減圧下で蒸発させた。固体を、１，４ジオキサン（６０ｍＬ）を用いて懸濁させ、再度蒸発させた。溶媒を蒸発乾固させた。収量：約９５０ｍｇ。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は９．９７分間であり、３７０ｎｍで９６．７％の純度であった。より小さい規模（５．６ｍｇ）で同じ条件下で行われる別の実験から提供されるＬＣ−ＭＳデータ。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ３８Ｈ３９ＦＮ６Ｏ５］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝６７９．３、実測値Ｍ＋Ｈ＝６７９．３）。
【０１７０】
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−（２−（３−（ｍＰＥＧ２０，０００）プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物３ａ）の合成
１０ｍＬの丸底フラスコに、（Ｚ）−（Ｎ−（２−アミノエチル）−９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド塩酸塩）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート二塩酸塩（化合物２ａ）（４．８３ｍｇ、６．４２μｍｏｌ）を加えた。固体を、無水テトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）および１，４ジオキサン（０．２ｍＬ）に溶解させた。ｍＰＥＧ−ＳＰＡ  ２０Ｋ（１００．４ｍｇ、５．０２μｍｏｌ）を加えた。無水アセトニトリル（０．２ｍＬ）を加えて、ＰＥＧを溶解させた。ＰＥＧを溶解させた後、トリエチルアミン（５．２μＬ、０．０３７ｍｍｏｌ）を加えた。１時間の時点で、反応溶媒を、乾燥した固体になるまで減圧下で蒸発させた。生成物を、無水アセトニトリル（０．５ｍＬ）に再溶解させ、無水ＩＰＡ（合計８ｍＬ）をゆっくりと加えることによって沈殿させた。生成物を、無水ＩＰＡ（５０ｍＬ）およびジエチルエーテルで洗浄した。残留溶媒を減圧下で蒸発させた。収量は、７５ｍｇの黄色の粉末（７５％の収率）であった。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は、デスエチルスニチニブ（化合物１）で２．５分間および生成物で１０．７分間であった。緩衝液加水分解を行って、デスエチルスニチニブ（１００ｍＭのホスフェート、３７℃）の放出を監視した：ｐＨ７．５で３６日間、ｐＨ８．５で３．６日間。
【０１７１】
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−（２−（３−（４分岐ＰＥＧ２０，０００）プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物４ａ）の合成：
丸底フラスコに、４分岐ＰＥＧ−ＳＣＭ  ２０Ｋ（２．８０ｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）および無水アセトニトリル（４０ｍＬ）を加えた。（Ｚ）−（Ｎ−（２−アミノエチル）−９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド塩酸塩）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート二塩酸塩（化合物２ａ）（６４７．２ｍｇ、０．６７２ｍｍｏｌ）を加えた。ジイソプロピルエチルアミン（０．８３８ｍＬ、４．８０ｍｍｏｌ）を加えた。１時間の時点で、さらなるジイソプロピルエチルアミン（０．１７２ｍＬ、０．９８５ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後の時点で、反応溶液を、無水エチルエーテル（７００ｍＬ、ＢＨＴ入り）に加えた。固体を、無水イソプロパノール（５００ｍＬ、ＢＨＴ入り）およびジエチルエーテル（ＢＨＴ入り）で洗浄した。生成物を、無水ジクロロメタン（５ｍＬ）に再溶解させ、無水ＩＰＡ（２００ｍＬ、ＢＨＴ入り）をゆっくりと加えることによって沈殿させた。生成物を、無水ＩＰＡ（２×６０ｍＬ、ＢＨＴ入り）およびジエチルエーテル（６０ｍＬ、ＢＨＴ入り）で洗浄した。残留溶媒を減圧下で蒸発させた。収量は、２．３８ｇの黄色の粉末（約７１％の収率）であった。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；生成物についての保持時間は１１．５分間であり、３７０ｎｍで９７．６％の純度であった。１Ｈ−ＨＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２）：δ（ｐｐｍ）０．８〜１．４（１２Ｈ，ｔ，ＣＨ３）；２．０〜２．８（２４Ｈ，ｓ，ＣＨ３）；３．５（Ｈ，ｓ，ＰＥＧ主鎖）；４．０（８Ｈ，ｓ，−ＣＨ２）；６．２〜８．６（ＡＲ、ＮＨ）；１３．６（４Ｈ，ｄ，ＮＨ）。
【０１７２】
実施例２
４−アミノエチル−ＦＭＯＣ結合ＰＥＧ−デスエチルスニチニブコンジュゲートの合成
この実施例では、以下の概略図に表される反応スキームによって示される手法にしたがった。
【化２２】
0006009457.tif 000036
リンカー（「リンカーｂ」）を調製する際、以下の概略図に表される以下の反応スキームにしたがった。
【化２３】
0006009457.tif 000037
【０１７３】
９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（化合物Ｖ）の合成：
９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（３５．５ｇ、１５８ｍｍｏｌ）を、９−オキソ−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸の代わりに用いたことを除いて、実施例１の方法Ａに記載されるように合成を行った。収量：３０．６ｇ（９２％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は７．２分間であり、３００ｎｍで９９％を超える純度であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．３〜７．３（Ａｒ，６Ｈ，６−ＣＨ）；４．０（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ２）；７．７（ｄ，１Ｈ，−ＣＨ）；７．５（ｍ，２Ｈ，２−ＣＨ）；４．１（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．９，３．７（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）。
【０１７４】
９−ホルミル−９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（化合物ＶＩ）の合成：
９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（１０．１７ｇ、４８．４ｍｍｏｌ）を、９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸の代わりに用いたことを除いて、実施例１の方法Ｂに記載されるように合成を行った。収量：１５．５ｇ（約１００％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は３．５分間（分裂ピークが２つの形態のホルミルを示す）であり、３２０ｎｍで９９％を超える純度であった。
【０１７５】
９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（化合物ＶＩＩ）の合成：
９−ホルミル−９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（１１．５ｇ、４８．３ｍｏｌ）を、９−ホルミル−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸の代わりに用いたことを除いて、実施例１の方法Ｃに記載されるように合成を行った。収量：１１．４ｇ（９８％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は１．９分間であり、３００ｎｍで９９％の純度であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．３〜７．４（Ａｒ，６Ｈ，６−ＣＨ）；４．１（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．７９、３．８２（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）。
【０１７６】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチルカルバメート（化合物ＶＩＩＩ）の合成：
９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボン酸（３．１５ｇ、１２．４６ｍｏｌ）を、９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸の代わりに用いたことを除いて、実施例１の方法Ｄに記載されるように合成を行った。収量：４．８ｇ（７７％）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は２．７分間（また、異なるグラジエントでは３．４分間）であり、２８０ｎｍで９０％の純度であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．５（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ）；７．８〜７．３（Ａｒ，７Ｈ，７−ＣＨ）；６．９（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ）；５．１（ｔ，１Ｈ，−ＯＨ）４．１（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２）；４．０（ｍ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．４（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）；３．２（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）；１．４（ｓ，９Ｈ，−（ＣＨ３）３）。
【０１７７】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチルカルバメート（リンカーｂ）の合成：
５０ｍＬの丸底フラスコに、１０ｍＬの無水アセトニトリルおよび１，４ジオキサン（３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチルカルバメート（０．２３２０ｇ、０．６０７ｍｍｏｌ）を加えた。ジ（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）カーボネート、６６．７重量％（１１９ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を、無水アセトニトリル（１．６ｍＬ）とともに反応溶液に加えた。無水ピリジン（１５０μＬ、１．８５５ｍｍｏｌ）を加えた。２．５時間後、さらなるジ（１Ｈベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）カーボネート、６６．７重量％（８５．１ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）を加えた。約３時間後、反応溶液を単離し、−２０℃で貯蔵した。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は４．４分間であり、２８０ｎｍで８５％の純度であった。
【０１７８】
（Ｚ）−（ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチルカルバメート）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメートの合成：
５０ｍＬの丸底フラスコに、Ｎ−デスエチルスニチニブ（５６．４ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）およびリンカーｂ（３．２８７ｍＬの２８３．８ｍｇ／１４．６ｍＬのアセトニトリル−ジオキサン溶液、６３．８９ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）を加えた。トリエチルアミン（８２μＬ、０．５８８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５ｍＬ）で希釈した。１時間後、反応混合物を−２０℃に冷却した。翌日、溶媒を蒸発させ、乾燥材料を、テトラヒドロフラン（２７ｍＬ）および１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ８．５）（９ｍＬ）に溶解させた。溶液は透明のオレンジ色であった。溶液に、リンカーｂ（４．５ｍＬの２８３．８ｍｇ／１４．６ｍＬのアセトニトリル−ジオキサン溶液、８４．４７ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液の温度を、３７℃まで上昇させた。２．５時間後、飽和した塩化ナトリウム（８０ｍＬ）を反応混合物に加えた。ＴＨＦ層を除去し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過し、ろ液を蒸発させた。粗生成物を、無水アセトニトリル（８ｍＬ）に部分的に溶解させ、−２０℃で２日間貯蔵した。上清を除去し、残りの固体を、低温の無水アセトニトリル（３×３ｍＬ）を用いて研和した。生成物を蒸発乾固させた。収量：約６０ｍｇ（６５％）オレンジ色の固体）。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は５．４分間であり、３７０ｎｍで９５％の純度であった。
【０１７９】
（Ｚ）−（４−（２−アミノエチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルエチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート二塩酸塩（化合物２ｂ）の合成：
１０ｍＬの丸底フラスコに、ジオキサン（５．０ｍＬ）中の（Ｚ）−（ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチルカルバメート）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（６０ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）を加えた。ジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（１０ｍＬ）の溶液を加えた。１．５時間後、反応溶媒を減圧下で蒸発させた。理論的収量：約６３．５ｍｇ。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は３．５分間であり、３７０ｎｍで９５％の純度であった。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ３８Ｈ３９ＦＮ６Ｏ５］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝６７９．３、実測値Ｍ＋Ｈ＝６７９．３）。
【０１８０】
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ−（２−（３−（ｍＰＥＧ２０，０００）プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−４−カルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物３ｂ）の合成：
１０ｍＬの丸底フラスコに、化合物２ｂ（９．６ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。固体を、無水アセトニトリル（０．３７ｍＬ）および１，４ジオキサン（０．３７ｍＬ）に懸濁させた。ｍＰＥＧ−ＳＰＡ  ２０Ｋ（１８１．３ｍｇ、９．０７μｍｏｌ）を加えた。ＰＥＧを溶解させた後、トリエチルアミン（９．２４μＬ、０．０６６ｍｍｏｌ）を加えた。１時間の時点で、生成物を、無水ＩＰＡ（１０ｍＬ）をゆっくりと加えることによって沈殿させた。固体を、無水ＩＰＡ（２５〜３０ｍＬ）で洗浄し、次に、ジエチルエーテルで洗浄した。残留溶媒を減圧下で蒸発させた。収量は、約１２０ｍｇの黄色の粉末であった。生成物を、５０ｍＬの丸底フラスコに移した。さらなる化合物２ｂ（６．９ｍｇ、９．１８μｍｏｌ）を加えた。無水アセトニトリル（０．２５ｍＬ）および無水１，４ジオキサン（０．２５ｍＬ）および無水ピリジン（２．２μＬ、０．０２７ｍｍｏｌ）を加えた。試薬が完全に溶解しなかったため、トリエチルアミン（６μＬ、０．０４３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液は透明のオレンジ色であった。４５分後、生成物を、無水ＩＰＡ（約１０ｍＬ）をゆっくりと加えることによって沈殿させた。固体を、無水ＩＰＡ（約２５〜３０ｍＬ）で洗浄し、次に、ジエチルエーテルで洗浄した。残留溶媒を減圧下で蒸発させた。収量は、約６８ｍｇ（５７％）の黄色の粉末であった。ＨＰＬＣ分析を、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを適用するＣ１８において行い；保持時間は、デスエチルスニチニブ（化合物１）で２．５分間および生成物で１０．７分間であった。緩衝液加水分解を行って、デスエチルスニチニブ（１００ｍＭのホスフェート、３７℃）の放出を監視した：ｐＨ７．５で２２日間、ｐＨ８．５で１．４日間。
【０１８１】
実施例３
ｍＰＥＧ−ＢＡ−デスエチルスニチニブ（化合物５）の合成
【化２４】
0006009457.tif 000038
ｔｅｒｔ−ブチル２−（エチルアミノ）エチルカルバメート（化合物１）の合成：
丸底フラスコ中で、Ｎ−エチルエチレンジアミン（８．８２ｇ）を、２００ｍｌの無水ＴＨＦに溶解させ、溶液を、０〜５℃に冷却し、６０ｍｌのＴＨＦに溶解された二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６．５４ｇ）を、１時間の間に加えた。混合物を、室温で一晩撹拌した。次に、溶媒を蒸留して取り除き、残渣を飽和ＮａＣｌ溶液（６０ｍｌ）に溶解させ、生成物を、ジクロロメタン（３×６０ｍｌ）で抽出した。抽出物を、飽和ＮａＣｌ溶液（６０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。次に、溶媒を、減圧下で蒸留して取り除き、得られた生成物を、ヘキサンから再結晶させたところ、３．２ｇの所望の生成物が得られた。
【０１８２】
１−クロロエチルエチル（２−（Ｂｏｃ−アミノ）エチル）カルバメート（化合物２）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物１（ｔ−Ｂｏｃ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３；１．５０ｇ）を、無水ジクロロメタン（６０ｍｌ）に溶解させ、溶液を、０〜５℃に冷却した。トリエチルアミン（ＴＥＡ、１．２ｍｌ）を加えた後、クロロギ酸１−クロロエチル（０．７９ｍｌ）を加え、混合物を、室温で３時間撹拌した。次に、混合物を、ＮａＨ２ＰＯ４の０．１Ｍの溶液（５０ｍｌおよび３０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。次に、溶媒を、減圧下で蒸留したところ、２．１５ｇの所望の生成物が得られた。
【０１８３】
１−（エチル（２−（Ｂｏｃ−アミノ）エチル）カルバモイルオキシ）エチル４−（ｍＰＥＧ５，０００）ブタノエート（化合物３）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物２（０．５０ｇ）を、１０ｍｌの無水ジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解させ、メトキシ−ポリ（エチレングリコール）−ブタン酸（ＭＷ５，０００）（１．７ｇ）を加えた後、ＴＥＡ（０．１４２ｍｌ）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下で、室温で一晩撹拌した。溶媒の部分を、減圧下で蒸留して取り除き、生成物を、イソプロピルアルコールとエチルエーテルとの混合物を用いて沈殿させ、イオン交換クロマトグラフィーによって精製したところ、ＨＰＬＣによって測定される９９．０％の純度を有する０．８４ｇの所望の生成物が得られた。
【０１８４】
１−（（２−アミノエチル）（エチル）カルバモイルオキシ）エチル４−（ｍＰＥＧ５，０００）ブタノエートトリフルオロアセテート（化合物４）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物３（０．８４ｇ）を、トリフルオロ酢酸とジクロロメタンとの混合物（１：１、２０ｍｌ）に溶解させ、溶液を、室温で１時間撹拌した。溶媒を、減圧下で蒸留して取り除き、得られた生成物を、エチルエーテル（３０ｍｌ）を用いて沈殿させたところ、０．７９ｇの所望の生成物が得られた。
【０１８５】
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル４−（ｍＰＥＧ５，０００）ブタノエート（化合物５）の合成：
丸底フラスコ中で、（Ｚ）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（０．０１８ｇ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、０．０８１ｇ）を、２ｍｌの無水ＤＭＦに溶解させた。ＴＥＡ（０．０２２ｍｌ）を加えた後、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、０．０６２ｍｌ）を加えた。次に、１ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解された化合物４（０．２ｇ）を加え、混合物を、窒素雰囲気下で、室温で一晩撹拌した。溶媒を、減圧下で蒸留して取り除き、残渣を、イソプロピルアルコールとエチルエーテルとの混合物（３：７、３０ｍｌ）を用いて沈殿させたところ、乾燥後に、所望の生成物（０．１７５ｇ）が、ＨＰＬＣによって測定される約９５％の純度を有する白色の固体として得られた。
【０１８６】
実施例４
ｍＰＥＧ−Ｇｌｙ−デスエチルスニチニブ（化合物８）の合成
【化２５】
0006009457.tif 000039
ｍＰＥＧ（５Ｋ）−グリシンの合成：
メトキシ（ポリエチレングリコール）−ベンゾトリアゾリルカーボネート（ＭＷ５，０００）（５．０ｇ）を、５０ｍｌの０．１Ｎのホウ酸緩衝液（ｐＨ９．０）に溶解されたグリシン（０．７５ｇ）の溶液にゆっくりと加えた。混合物を、室温で３時間撹拌した。次に、５％のＨ３ＰＯ４を用いてｐＨを２．０に調整し、生成物をジクロロメタンで抽出した。抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、溶媒を、減圧下で蒸留したところ、ＨＰＬＣによって測定される９９．３％の純度を有するメトキシ（ポリエチレングリコール）−グリシン（「ｍＰＥＧ（５Ｋ）−グリシン」）（４．３ｇ）が得られた。
【０１８７】
１−（エチル（２−（Ｂｏｃ−アミノ）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）アセテート（化合物６）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物２（実施例３に記載される手順にしたがって調製される）（０．４ｇ）を、無水ジクロロメタン（５ｍｌ）に溶解させた。次に、無水ジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解されたｍＰＥＧ（５Ｋ）−グリシン（１．３５ｇ）を加えた後、ＴＥＡ（０．１２ｍｌ）を加えた。混合物を、窒素雰囲気下で、室温で２日間撹拌した。溶媒を、減圧下で蒸留して取り除き、生成物を、イソプロピルアルコール（８０ｍｌ）を用いて沈殿させた。沈殿物を、真空ろ過によって収集し、真空下で乾燥させたところ、ＨＰＬＣによって測定される９６％の純度を有する所望の生成物（１．３１ｇ）が得られた。
【０１８８】
１−（（２−アミノエチル）（エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）アセテートトリフルオロアセテート（化合物７）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物６（１．３ｇ）を、トリフルオロ酢酸とジクロロメタンとの混合物（１：１、２０ｍｌ）に溶解させ、溶液を、室温で１時間撹拌した。溶媒を、減圧下で蒸留して取り除き、得られた生成物を、エチルエーテル（１００ｍｌ）を用いて沈殿させた。収量：１．２０ｇ。
【０１８９】
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）アセテート（化合物８）の合成：
丸底フラスコ中で、（Ｚ）−５−（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（０．０１８ｇ）およびＨＯＢＴ（０．００８ｇ）を、２ｍｌの無水ＤＭＦに溶解させた。次に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ、０．０３８ｇ）を加えた後、化合物７（０．２ｇ）、無水ジクロロメタン（２ｍｌ）、およびＴＥＡ（０．０１７ｍｌ）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下で、室温で一晩撹拌した。溶媒を、減圧下で蒸留し、生成物を、エチルエーテル（３０ｍｌ）を用いて沈殿させ、ジクロロメタン（５ｍｌ）に再溶解させ、イソプロピルアルコール（５０ｍｌ）を用いて沈殿させた。沈殿物をろ過して取り出し、減圧下で乾燥させたところ、所望の生成物（「ｍＰＥＧ−Ｇｌｙ−デスエチルスニチニブ」）（０．１２５ｇ）が得られた。
【０１９０】
実施例５
ｍＰＥＧ−Ｌｅｕ−デスエチルスニチニブ（化合物９）の合成
【化２６】
0006009457.tif 000040
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）−４−メチルペンタノエート（化合物９）の合成：
ロイシンをグリシンの代わりに使用したことを除いて、実施例４に使用される手法と同様の方法で、ｍＰＥＧ−Ｌｅｕ−デスエチルスニチニブを調製した。
【０１９１】
実施例６
ｍＰＥＧ−Ｖａｌ−デスエチルスニチニブ（化合物１０）の合成
【化２７】
0006009457.tif 000041
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（ｍＰＥＧ５，０００）カルボニルアミノ）−３−メチルブタノエート（化合物１０）の合成：
バリンをグリシンの代わりに使用したことを除いて、実施例４に使用される手法と同様の方法で、ｍＰＥＧ−Ｖａｌ−デスエチルスニチニブを調製した。
【０１９２】
実施例７
ＰＥＧコンジュゲートからのデスエチルスニチニブの放出の試験
ポリマーコンジュゲートからの薬剤放出を測定するために実験を行った。データが、表３に表形式で示される。ポリマーコンジュゲートの減衰（図１）および薬剤の経時的な増加（図２）を示すデータの典型的なプロットが含まれる。
【０１９３】
【表７】
0006009457.tif 000042
【０１９４】
実施例８
生体内放出速度および腫瘍集積性
８〜１２週齢の雌のＮＣｒ  ｎｕ／ｎｕマウスの横腹に、０％のＭａｔｒｉｇｅｌ中の５×１０６個のＨＣＴ１１６結腸直腸癌細胞を皮下注射した。５００ｍｍ３の腫瘍のサイズに達したら、マウスを、４０ｍｇ／ｋｇのスニチニブＮＫＴ１１０１２（経口）または４０ｍｇ／ｋｇのデスエチルスニチニブ当量の実施例１（化合物４ａ）、実施例８（化合物１２）、実施例９および実施例１０のいずれかで処置した（尾静脈から経静脈投与）。血液および腫瘍試料を、投与後の６、１２、２４、４８、７２、１２０および１６８時間の時点で採取して、血漿および腫瘍デスエチルスニチニブ濃度を測定した。
【０１９５】
データが図３に示され、図中、対象の化合物の投与後のデスエチルスニチニブの平均血漿濃度が、一連の時点について示される。図４を見ると、対象の化合物の投与後のデスエチルスニチニブの腫瘍濃度が、一連の時点について示される。
【０１９６】
実施例９
２−ｍＰＥＧ３−７−アミノエチル−ＦＭＯＣ結合ＰＥＧ−デスエチルスニチニブコンジュゲートの合成
【化２８】
0006009457.tif 000043
９−（ヒドロキシメチル）−７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（化合物ＩＸ）の合成：
１００ｍＬの丸底フラスコに、２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エタンアミン（ｍＰＥＧ３−ＮＨ２、７０１ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（１２．５ｍＬ）とともに加えて、透明な溶液を得た。無水ジメチルホルムアミド（１２．５ｍＬ）中の９−（ヒドロキシメチル）−９Ｈ−フルオレン−２，７−ジカルボン酸（５００．４ｍｇ、１．７６０ｍｍｏｌ）および１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−オール（５００．４ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（３８９．１ｍｇ、１．８８６ｍｍｏｌ）を反応溶液に加えた。１８時間の時点で、溶液をろ過し、油になるまで蒸発させた。メタノール（１０ｍＬ）を加えて、油を溶解させた。溶液をろ過した。ろ液を、減圧下で油になるまで蒸発させた。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノールグラジエントプログラムを用いたＢｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈシリカカラムで精製した。生成物画分を組み合わせて、減圧下で蒸発させた。収量：４００ｍｇ（４２％）。ＨＰＬＣ分析では、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを用いたＣ１８カラムを用い；保持時間は５．７７分間であり、３２０ｎｍで９１％の純度であった。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ２３Ｈ２７ＮＯ７］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝４３０．２、実測値Ｍ＋Ｈ＝４３０．２）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．６（ｔ，１Ｈ，−ＮＨ）；８．３〜７．９（Ａｒ，６Ｈ，６−ＣＨ）；５．１（ｔ，１Ｈ，−ＯＨ）；４．１（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．９〜３．８（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）。生成物は、ＨＯＢＴを含有しており、これは、ＮＭＲスペクトルおよびＨＰＬＣクロマトグラムで観察された。
【０１９７】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート（化合物Ｘ）の合成：
丸底フラスコ中で、９−（ヒドロキシメチル）−７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボン酸（化合物ＩＸ）（３５９．０ｍｇ、０．７０２ｍｍｏｌ）を、無水ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解させた。溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノエチルカルバメート（１６８．５ｍｇ、１．０５２ｍｍｏｌ）およびＮ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン塩酸塩（２５２．６ｍｇ、１．３１８ｍｍｏｌ）を加えた。無水ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）を用いて、丸底フラスコの壁をすすいだ。２４時間の時点で、溶液を−２０℃で貯蔵した。１５時間後、反応溶液を室温に温め、ジクロロメタン（１２５ｍＬ）を加えた。溶液を、０．１ＭのＨＣｌ（３×１２５ｍＬ）で洗浄し、５％の塩化ナトリウム（１２５ｍＬ）で最終洗浄を行った。ジクロロメタン抽出物を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発乾固させた。収量：３２３ｍｇ（８０％）（無水アセトニトリル（５．１５ｍＬ）および無水１，４−ジオキサン（３．１５ｍＬ）に３２３ｍｇを溶解させることによって調製されたストック溶液−濃度：３８．９２ｍｇ／ｍＬ溶液）。ＨＰＬＣ分析では、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを用いたＣ１８カラムを用い；保持時間は３．０分間であり、３２０ｎｍで９０％の純度であった。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ３０Ｈ４１Ｎ３Ｏ８］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝５７２．３、実測値Ｍ＋Ｈ＝５７２．３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ２Ｃｌ２、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．１〜７．９（Ａｒ，６Ｈ，６−ＣＨ）；７．３（ｓ，１Ｈ，−ＮＨ）；７．０（５．１ｓ，１Ｈ，−ＮＨ）；４．２（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２）；４．０（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．７〜３．６（ｍ，１０Ｈ，ＰＥＧからの−ＣＨ２）；３．５５（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）；３．５（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）；３．４（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２）、３．２（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ３）、１．４（ｓ，９Ｈ，−（ＣＨ３）３）。
【０１９８】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）−７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート（リンカーｃ）の合成：
ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート（Ｘ）（アセトニトリル：ジオキサン中の溶液のｍＬ当たり３８．９２ｍｇを４．５ｍＬ、１７５．１ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコに加えた。溶液に、ジ（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）カーボネート、６６．７重量％（１７５ｍｇ、０．３９４ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（７８μＬ、０．９６４ｍｍｏｌ）を加えた。４時間後、ジ（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）カーボネート、６６．７重量％（４０ｍｇ、４５ｍｇ；０．０９０ｍｍｏｌ、０．１０１ｍｍｏｌ）をさらに２回加えた後、反応溶液を、減圧下で蒸発乾固させた。ＨＰＬＣ分析では、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを用いたＣ１８カラムを用い；保持時間は３．６分間であり、３２０ｎｍで約７５％の純度であった。
【化２９】
0006009457.tif 000044
【０１９９】
（Ｚ）−（ｔｅｒｔ−ブチル２−（９−（ヒドロキシメチル）−７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバモイル）−９Ｈ−フルオレン−２−カルボキサミド）エチルカルバメート）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物１ｃ）の合成：
１００ｍＬの丸底フラスコ中で、リンカーｃ（２２４ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を、無水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解させた。溶液に、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ：８．５）（３．５ｍＬ）およびＮ−デスエチルスニチニブ（１０９．８５ｍｇ、０．２４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応温度を、４２℃まで上昇させた）。３．５時間の時点で、飽和した塩化ナトリウムを反応混合物に加えた。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）層を収集した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を、水性抽出物に再度加えて、さらなる生成物を回収した。収集したＴＨＦ層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過し、蒸発乾固させた。蒸発後にフラスコ中に水が存在し、それをピペットで除去した。最終的な生成物を、メタノール滴定を用いてさらに精製し、減圧下に置いた。収量：３０ｍｇ（１３％）。ＨＰＬＣ分析では、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを用いたＣ１８カラムを用い；保持時間は４．５分間であり、３７０ｎｍで９７％の純度であった。（メタノール中−２０℃で２０時間）貯蔵した試料に対してＬＣ−ＭＳによる分析を行った［Ｃ５１Ｈ６２ＦＮ７Ｏ１１］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝９６８．５、実測値Ｍ＋Ｈ＝９６８．４。
【０２００】
（Ｚ）−（Ｎ２−（２−アミノエチル）−９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ７−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２，７−ジカルボキサミド塩酸塩）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物２ｃ）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物１ｃ（２７．８ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を、無水１，４ジオキサン（２．５ｍＬ）およびジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（２．５ｍＬ）に懸濁させた。無水メタノール（１．０ｍＬ）を加えて、固体を溶解させ、透明な溶液を得た。１時間後、反応溶媒を減圧下で蒸発させた。固体を、１，４ジオキサンを用いて懸濁させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。収量：約２７ｍｇ（理論的収量）。ＨＰＬＣ分析では、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを用いたＣ１８カラムを用い；保持時間は３．２分間であり、３７０ｎｍで９７％の純度であった。
【０２０１】
（Ｚ）−（９−（ヒドロキシメチル）−Ｎ２−（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｎ７−（２−（３−（２−（ｍＰＥＧ２０，０００））プロパンアミド）エチル）−９Ｈ−フルオレン−２，７−ジカルボキサミド）エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物３ｃ）の合成：
１０ｍＬの丸底フラスコ中で、化合物２ｃ（７．４ｍｇ、７．６９μｍｏｌ）を、無水ジオキサン（０．５ｍＬ）および無水アセトニトリル（０．５ｍＬ）に懸濁させた。ｍＰＥＧ−ＳＰＡ  ２０Ｋ（１００．０ｍｇ、５．０μｍｏｌ）を加えた。ＰＥＧを溶解させた後、トリエチルアミン（７．２μＬ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間の時点で、無水アセトニトリル（０．５ｍＬ）および無水メタノール（０．３ｍＬ）を加えた。合計２時間の反応時間の時点で、生成物を、０．２５％のリン酸を含有する無水ＩＰＡをゆっくりと加えることによって沈殿させた。生成物を、無水ＩＰＡで洗浄し、次に、ジエチルエーテルで洗浄した。残留溶媒を減圧下で蒸発させた。収量：５８ｍｇ（５８％）の黄色の粉末。ＨＰＬＣ分析では、０．１％のＴＦＡとともにアセトニトリルグラジエントを用いたＣ１８カラムを用い；保持時間は、デスエチルスニチニブで２．５分間および生成物で１０．７分間であり、３２０ｎｍで４１％の純度であった。緩衝液加水分解を行って、デスエチルスニチニブ（１００ｍＭのホスフェート、３７℃）の放出を監視した：ｐＨ７．５で１１日間、ｐＨ８．５で１．７日間。
【０２０２】
実施例１０
４分岐ＰＥＧ−Ａｌａ−デスエチルスニチニブ（化合物１４）の合成
【化３０】
0006009457.tif 000045
（Ｚ）−１−クロロエチルエチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバメート（化合物１１）の合成：
丸底フラスコ中で、デスエチルスニチニブ塩酸塩（１．５ｇ；０．００３６９ｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１５０ｍｌ）に溶解させた。次に、トリエチルアミン（ＴＥＡ；１．５４ｍｌ；０．０１１０６ｍｏｌ）を加え、混合物を氷浴において冷却した。２０ｍｌの無水ＴＨＦに溶解されたクロロギ酸１−クロロエチル（０．８０３ｍｌ；０．００７３７ｍｏｌ）を、０〜５℃でゆっくりと加えた。混合物を、室温で６０分間撹拌し、次に、溶媒を、６０℃で、減圧下で乾燥するまで蒸留して取り除いた。粗生成物を、ジクロロメタン（５００ｍｌ）に溶解させ、０．１ＭのＮａＨ２ＰＯ４（１５０ｍｌ×２）およびＮａＣｌの飽和溶液（１５０ｍｌ）で洗浄した。溶液を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、溶媒を、減圧下で乾燥するまで蒸留して取り除いた。ＲＰ  ＨＰＬＣによって測定される生成物（化合物１１）の純度は８７％であった。
【０２０３】
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノエート（化合物１２）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物１１（１．７６ｇ；０．００３６９ｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍｌ）と無水ジクロロメタン（２０ｍｌ）との混合物に溶解させた。ｔ−Ｂｏｃ−アラニン（３．４９ｇ；０．０１８４５ｍｏｌ）を加えた後、ＴＥＡ（１．５４ｍｌ；０．０１１０７ｍｏｌ）を加えた。混合物を、窒素雰囲気下で、室温で２日間撹拌した。溶媒を、減圧下で、５５℃で蒸留して取り除いた。残渣を、ジクロロメタン（５００ｍｌ）に溶解させ、０．１ＭのＮａＨ２ＰＯ４（１００ｍｌ×５）で洗浄した。溶液を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、溶媒を、減圧下で蒸留して取り除いた。ＲＰ  ＨＰＬＣによって測定される粗生成物の純度は６２％であった。ジクロロメタン−メタノールの混合物（９４：６）を溶離剤として用いたシリカゲルクロマトグラフィーによって生成物を精製したところ、ＲＰ  ＨＰＬＣによって測定される９７．３％の純度を有する所望の化合物１２（０．４２６ｇ）が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．７（ｄ，１Ｈ，−ＮＨ）；７．３２（ｓ，１Ｈ，−ＣＨ）；７．１８（ｄ，１Ｈ，−ＣＨ）；６．８４（ｍ，３Ｈ，３−ＣＨ）；６．５７（ｍ，１Ｈ，−ＮＨ）；５．０４（ｄ，１Ｈ，−ＮＨ）；４．２７（ｍ  １Ｈ，−ＣＨ）；３．３４〜３．６５（ｍ  ６Ｈ，３−ＣＨ２）；２．５０（ｓ，３Ｈ，−ＣＨ３）；２．４５（ｓ，３Ｈ，−ＣＨ３）；１．５３（ｄ，３Ｈ，−ＣＨ３）；１．４４〜１．３３（ｍ，１２Ｈ，４−ＣＨ３）；１．１８（ｔ，３Ｈ，−ＣＨ３）。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ３１Ｈ４０ＦＮ５Ｏ８］＋予測値Ｍ＋Ｈ＝６３０、実測値Ｍ＋Ｈ＝６３０．３）。
【０２０４】
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−アミノプロパノエートＴＦＡ塩）（化合物１３）の合成：
化合物１２（０．４２６ｇ）を、ジクロロメタン（２０ｍｌ）とトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）との混合物に溶解させ、溶液を室温で１時間撹拌した。溶媒を、減圧下で蒸留して取り除き、湿潤生成物を、一晩真空下で乾燥させたところ、ＲＰ  ＨＰＬＣによって測定される９５．９％の純度を有する所望の化合物１３が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．３４（ｍ，３Ｈ，−ＮＨ２；−ＮＨ）；７．７７〜７．７０（ｍ，３Ｈ，２Ｈ−ＮＨ，１Ｈ−ＣＨ）；６．９５〜６．７８（ｍ，３Ｈ，３−ＣＨ）；４．２５（ｍ，１Ｈ，−ＣＨ）；３．３９〜３．２８（ｍ，６Ｈ，３−ＣＨ２）；２．４３（ｓ３Ｈ，−ＣＨ３）；２．４１（ｓ，３Ｈ，−ＣＨ３）；１．５０〜１．４４（ｍ，３Ｈ，−ＣＨ３）；１．４０〜１．３２（ｍ，３Ｈ，−ＣＨ３）；１．１１〜１．０７（ｍ，３Ｈ，−ＣＨ３）。ＬＣ−ＭＳによる分析（［Ｃ２６Ｈ３２ＦＮ５Ｏ６］予測値Ｍ＝５２９．２３、実測値Ｍ＝５２９）。
【０２０５】
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（２−（４分岐ＰＥＧ２０，０００）アセトアミド）プロパノエート（化合物１４）の合成：
丸底フラスコ中で、化合物１３（０．３２２ｇ；０．０００５００ｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解させ、次に、無水ジクロロメタン（１２ｍｌ）を加えた後、４分岐ＰＥＧ（２０Ｋ）−酢酸、スクシンイミジルエステル（４分岐ＰＥＧ（２０Ｋ）−ＳＣＭ；２．１７ｇ；０．０００１０９ｍｏｌ）を加えた。次に、ジクロロメタン（２ｍｌ）に溶解されたＴＥＡ（０．２４３ｍｌ；０．００２７９３ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、室温で３時間撹拌した。ジクロロメタンを、減圧下で蒸留して取り除き、生成物を、エチルエーテル（８０ｍｌ）を用いて沈殿させた。生成物をろ過して取り出し、真空下で乾燥させた。次に、それをジクロロメタン（２ｍｌ）に溶解させ、イソプロピルアルコールを用いて沈殿させ、真空下で乾燥させたところ、２．０８ｇの固体生成物が得られた。ＮＭＲ分析により、所望の化合物の構造を確認したところ、４分岐ＰＥＧ末端基の８８．５％がデスエチルスニチニブで置換されていたことも示された。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．３（ｄ，４Ｈ，−ＮＨ）；７．４３（ｓ，４Ｈ，−ＣＨ）；７．２２（ｄ，４Ｈ，−ＣＨ）；６．８５（ｍ，１２Ｈ，３−ＣＨ）；６．５４（ｍ，４Ｈ，−ＮＨ）；４．５４〜４．３５（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ）；３．８５〜３．４９（ｍ，ＰＥＧ）；２．５７（ｓ，１２Ｈ，−ＣＨ３）；２．４９（ｓ，１２Ｈ，−ＣＨ３）；１．５３（ｄ，１２Ｈ，−ＣＨ３）；１．４４〜１．２９（ｍ，１２Ｈ，−ＣＨ３）；１．１６（ｔ，１２Ｈ，−ＣＨ３）。
【０２０６】
実施例１１
４分岐ＰＥＧ−Ｇｌｙ−デスエチルスニチニブ（化合物１５）の合成
【化３１】
0006009457.tif 000046
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（２−（４分岐ＰＥＧ２０，０００）アセトアミド）アセテート（化合物１５）の合成：
ｔ−Ｂｏｃ−グリシンをｔ−Ｂｏｃ−アラニンの代わりに使用したことを除いて、実施例１０に使用される手法と同様の方法で、４分岐ＰＥＧ−Ｇｌｙ−デスエチルスニチニブを行った。ＮＭＲ分析により、所望の化合物の構造を確認したところ、４分岐ＰＥＧ末端基の９５．２％がデスエチルスニチニブで置換されていたことも示された。
【０２０７】
実施例１２
４分岐ＰＥＧ−Ｌｅｕ−デスエチルスニチニブ（化合物１６）の合成
【化３２】
0006009457.tif 000047
（Ｚ）−１−（エチル（２−（５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド）エチル）カルバモイルオキシ）エチル２−（（４分岐ＰＥＧ２０，０００）カルボニルアミノ）−４−メチルペンタノエート（化合物１６）の合成：
ｔ−Ｂｏｃ−ロイシンをｔ−Ｂｏｃ−アラニンの代わりに使用したことを除いて、実施例１０に使用される手法と同様の方法で、４分岐ＰＥＧ−Ｌｅｕ−デスエチルスニチニブを調製した。ＮＭＲ分析により、所望の化合物の構造を確認したところ、４分岐ＰＥＧ末端基の７８．３％がデスエチルスニチニブで置換されていたことも示された。
【図１】
0006009457.tif 000048
【図２】
0006009457.tif 000049
【図３】
0006009457.tif 000050
【図４】
0006009457.tif 000051