(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶを有する宿主動物を処置するための薬学的組成物であって、該組成物が、以下の式：
【化１１】
0006018206.tif 000023
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および必要に応じて、１つまたは複数の薬学的に許容されるキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含み、式中：
Ｒ１は、アリールカルボニルであって、ここでアリールは、単環式であり、ハロまたはアルキルで必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、アリールであって、ここでアリールは、単環式であり、ハロ、アルキル、またはアルコキシで必要に応じて置換されており、そしてＲ２はＣ−３にあり；
Ｒ３は、アリールメチルであって、ここでアリールは、単環式であり、ハロ、アルキル、またはアルコキシで必要に応じて置換されており；かつ
Ｒ４は、水素である、組成物。
【請求項２】
前記化合物中の環縮合の立体化学がシンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記化合物が以下の式：
【化１４】
0006018206.tif 000024
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記化合物が以下の式：
【化１３】
0006018206.tif 000025
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
Ｒ１が、必要に応じて置換されたアリールカルボニルであり、ここでアリールがフェニル、２−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジルまたは２−チエニルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
Ｒ１が、ベンゾイルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
Ｒ１が、３−ピコリノイルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
Ｒ２が、必要に応じて置換されたフェニルである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
Ｒ２が、ハロもしくはアルコキシ、またはそれらの組合せで置換されたフェニルである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｒ３が、ハロ置換ベンジルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｒ３が、必要に応じて置換されたベンジルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
Ｒ３が、フルオロベンジルまたはクロロベンジルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
ＨＩＶを処置するための、請求項１〜請求項１２のいずれか１項に記載の組成物であって、ここで前記宿主動物がヒトである、組成物。
【請求項１４】
ＨＩＶを有する宿主動物を処置するための医薬の製造における、請求項１〜請求項１２のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
前記化合物が以下の式：
【化１５】
0006018206.tif 000026
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記化合物が以下の式：
【化１６】
0006018206.tif 000027
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記化合物が以下の式：
【化１７】
0006018206.tif 000028
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記化合物が以下の式：
【化１８】
0006018206.tif 000029
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記化合物が以下の式：
【化１９】
0006018206.tif 000030
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記化合物が以下の式：
【化２０】
0006018206.tif 000031
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記化合物が以下の式：
【化２１】
0006018206.tif 000032
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本願は、２０１１年８月２４日に出願した米国仮出願第６１／５２６，９０８号に対する米国特許法第１１９条（Ｅ）項の下での優先権の利益を主張する。この引用した出願に示される開示は、米国特許商標庁に当初に提出したすべての情報を含め、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを通じてＡＳＣＩＩ形式で提出した配列表を含み、そしてこれによって、その全体として参考文献に組み込まれる。２０１２年８月２３日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１１９２２１＿ＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、そして２，９５３バイトの大きさである。
【０００３】
本明細書中で記載される本発明は、置換ペルヒドロピロロピリジン、およびウイルス感染症の処置におけるその使用方法に関連する。特に、本明細書中で記載される発明は、置換ペルヒドロピロロピリジン、およびＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、およびＡＩＤＳ関連疾患、およびＢＶＤＶ感染症の処置におけるその使用方法に関連する。
【背景技術】
【０００４】
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）（１）は、少なくとも部分的には、レトロウイルスヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）（２）によって引き起こされる疾患である。ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連疾患は、免疫系のゆるやかな低下を引き起こし、そしてＨＩＶ感染個体を、日和見感染症にかかりやすくし、そして腫瘍形成を起こしやすくし、最終的に死に至る。これらの疾患の現在の治療は、抗レトロウイルス治療を含み、それは一般的にＨＩＶプロテアーゼおよび逆転写酵素阻害薬のカクテルを含む。多くのＨＩＶ感染個体の全般的な健康および生活の質において、その治療は有意な改善を生じることが報告された。その回復はまた、ＨＩＶ関連罹患率および死亡率の顕著な低下と関連する（３）。そうであっても、ＨＩＶプロテアーゼおよび逆転写酵素阻害薬のカクテルは、ＨＩＶ感染の患者を治癒しないし、一旦その処置を停止すれば、ＡＩＤＳの再発を予防しない。治療をやめた患者は、救命処置から利益を得ないことが報告された。さらに、ＡＩＤＳ患者のかなりの部分に関して、治療不耐性、望ましくない副作用、他の感染症、および最も明白には薬物耐性ＨＩＶ株の発生を含む多くの要因のために、この処置は最適には及ばない結果しか達成しない（４）。ＡＩＤＳ、ＡＩＤＳ関連疾患、およびＨＩＶ感染症のさらなる処置に対する持続するニーズが存在する。
【０００５】
ウシウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）は、フラビウイルス科のメンバーでプラスセンス１本鎖のＲＮＡウイルスである。このウイルスによる感染は、ウシおよび他の反芻動物およびブタにおいて、重篤な粘膜疾患を引き起こす。ＢＶＤＶウシ感染症は、鼻、口、および胃腸の粘膜潰瘍によって特徴付けられ、それは持続的な唾液分泌、鼻汁、咳、および／または下痢を引き起こす。結果として、動物の間にウイルスが急速に広がる。そのウイルスはまた、仔牛の死産、持続感染となる、または成長の遅延を示す、そして／または重度の神経学的形成異常を示す。ＢＶＤＶの経済的な影響は大きいが、ある特定の感染は診断されないままである、または損失がそのウイルスのためであると認識されないため、そのレベルを正確に推定することは困難である。（例えば、非特許文献１（Ｂｕｃｋｗｏｌｄら、Ａｎｔｉｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３、６０、１）；非特許文献２（Ｆｉｎｋｉｅｌｓｚｔｅｉｎら、２０１０、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７、２９３３）を参照のこと；上記の出版物、および本明細書中で引用されるさらなる出版物はそれぞれ、本明細書中で参考文献に組み込まれる）。従って、有効な治療薬は、ＢＤＶＤの経済的影響を低減するために有用である。このフラビウイルス科の疾患の他のメンバーは、ウエストナイルウイルスおよびデング熱を含む。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｕｃｋｗｏｌｄら、Ａｎｔｉｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３、６０、１
【非特許文献２】Ｆｉｎｋｉｅｌｓｚｔｅｉｎら、２０１０、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７、２９３３
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書中で、ペルヒドロピロロピリジンは、活性な抗ＨＩＶ薬であることが発見された。本明細書中で、ペルヒドロピロロピリジンは、フラビウイルス科のウイルスおよび関連する疾患に対して活性であることも発見された。本明細書中で、ペルヒドロピロロピリジンは、活性な抗ＢＶＤＶ薬であることも発見された。
【０００８】
１つの例示的な実施態様において、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、およびＡＩＤＳ関連疾患の処置のために有用な、置換ペルヒドロピロロピリジンが、本明細書中で記載される。別の実施態様において、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、およびＡＩＤＳ関連疾患の処置のために有用な、置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物が、本明細書中で記載される。例示的に、その組成物は、１つまたは複数のキャリア、希釈剤、または賦形剤、またはその組み合わせを含む。
【０００９】
別の実施態様において、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、およびＡＩＤＳ関連疾患を処置するための方法が、本明細書中で記載され、ここでその方法は、置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物を投与するステップを含む。別の実施態様において、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、およびＡＩＤＳ関連疾患を有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物の使用が、本明細書中で記載される。
【００１０】
別の例示的な実施態様において、ＢＶＤＶ感染症の処置のために有用な置換ペルヒドロピロロピリジンが、本明細書中で記載される。別の実施態様において、ＢＶＤＶ感染症の処置のために有用な置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物が、本明細書中で記載される。例示的に、その組成物は、１つまたは複数のキャリア、希釈剤、または賦形剤、またはその組み合わせを含む。
【００１１】
別の実施態様において、ＢＶＤＶ感染症を処置するための方法が、本明細書中で記載され、ここでその方法は、置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物を投与するステップを含む。別の実施態様において、ＢＶＤＶ感染症を有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物の使用が、本明細書中で記載される。
【００１２】
別の例示的な実施態様において、ウエストナイルウイルス感染症の処置のために有用な置換ペルヒドロピロロピリジンが、本明細書中で記載される。別の実施態様において、ウエストナイルウイルス感染症の処置のために有用な置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物が、本明細書中で記載される。例示的に、その組成物は、１つまたは複数のキャリア、希釈剤、または賦形剤、またはその組み合わせを含む。
【００１３】
別の実施態様において、ウエストナイルウイルス感染症を処置するための方法が、本明細書中で記載され、ここでその方法は、置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物を投与するステップを含む。別の実施態様において、ウエストナイルウイルス感染症を有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物の使用が、本明細書中で記載される。
【００１４】
別の例示的な実施態様において、デング熱の処置のために有用な置換ペルヒドロピロロピリジンが、本明細書中で記載される。別の実施態様において、デング熱の処置のために有用な置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物が、本明細書中で記載される。例示的に、その組成物は、１つまたは複数のキャリア、希釈剤、または賦形剤、またはその組み合わせを含む。
【００１５】
別の実施態様において、デング熱を処置するための方法が、本明細書中で記載され、ここでその方法は、置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物を投与するステップを含む。別の実施態様において、デング熱を有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／または置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物の使用が、本明細書中で記載される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ＨＩＶ感染症もしくは関連疾患、またはフラビウイルス科のウイルスの感染症もしくは関連疾患、またはそれらの組合せを有する宿主動物を処置するための組成物であって、該組成物が、以下の式：
【化１１】
0006018206.tif 000002
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、式中：
Ｒ１は、アリールアルキルまたはアリールアシルであって、それらの各々は、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリールまたはアリールアルキルであって、それらの各々は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、アリールアルキルまたはアリールアシルであって、それらの各々は、必要に応じて置換されており；かつ
Ｒ４は、水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリールまたはアリールアルキルであって、それらの各々は、必要に応じて置換されている、組成物。
（項目２）
前記化合物中の環縮合の立体化学がシンである、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記化合物が以下の式：
【化１２】
0006018206.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記化合物が以下の式：
【化１３】
0006018206.tif 000004
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、項目１に記載の組成物。
（項目５）
Ｒ１が、必要に応じて置換されたアリールアシルである、項目１に記載の組成物。
（項目６）
Ｒ１が、必要に応じて置換されたアリールカルボニルである、項目１に記載の組成物。
（項目７）
Ｒ１が、必要に応じて置換されたベンゾイルである、項目１に記載の組成物。
（項目８）
Ｒ１が、ベンゾイルである、項目１に記載の組成物。
（項目９）
Ｒ１が、必要に応じて置換されたピコリノイルである、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
Ｒ１が、ピコリノイルである、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
Ｒ１が、３−ピコリノイルである、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
Ｒ２が、必要に応じて置換されたアリールである、項目１に記載の組成物。
（項目１３）
Ｒ２が、必要に応じて置換されたフェニルである、項目１に記載の組成物。
（項目１４）
Ｒ２が、ハロ、アルコキシ、またはそれらの組合せで置換されたフェニルである、項目１に記載の組成物。
（項目１５）
Ｒ２が、ハロフェニルである、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
Ｒ２が、アルコキシハロフェニルである、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
Ｒ２が、電子供与基で置換されたフェニルである、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
Ｒ２が、メトキシフェニルである、項目１に記載の組成物。
（項目１９）
Ｒ３が、必要に応じて置換されたアリールアルキルである、項目１に記載の組成物。
（項目２０）
Ｒ３が、必要に応じて置換されたアリールメチレンである、項目１に記載の組成物。
（項目２１）
Ｒ３が、必要に応じて置換されたベンジルである、項目１に記載の組成物。
（項目２２）
Ｒ３が、電子吸引基で置換されたベンジルである、項目１に記載の組成物。
（項目２３）
Ｒ３が、ハロ置換ベンジルである、項目１に記載の組成物。
（項目２４）
Ｒ３が、フルオロ、クロロまたはそれらの組合せで置換されたベンジルである、項目１に記載の組成物。
（項目２５）
Ｒ３が、フルオロベンジルである、項目１に記載の組成物。
（項目２６）
Ｒ３が、クロロベンジルである、項目１に記載の組成物。
（項目２７）
Ｒ４が、水素またはアルキルである、項目１に記載の組成物。
（項目２８）
Ｒ４が、水素である、項目１に記載の組成物。
（項目２９）
Ｒ２が、Ｃ−３にある、項目１に記載の組成物。
（項目３０）
ＨＩＶを処置するための、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３１）
前記宿主動物がヒトである、項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
ウエストナイルウイルスを処置するための、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３３）
デング熱を処置するための、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３４）
ＢＶＤＶを処置するための、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３５）
前記宿主動物がウシである、項目３５に記載の組成物。
（項目３６）
ＨＩＶを有する宿主動物を処置するための医薬の製造における、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
（項目３７）
ＨＩＶを有する宿主動物を処置するための方法であって、該方法は、治療有効量の、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を、単独で、または１つもしくは複数のキャリア、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せを含む組成物として、該宿主動物に投与する工程を包含する、方法。
（項目３８）
前記宿主動物がヒトである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
ＢＶＤＶを有する宿主動物を処置するための医薬の製造における、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
（項目４０）
ＢＶＤＶを有する宿主動物を処置するための方法であって、該方法は、治療有効量の、項目１〜項目２９のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を、単独で、または１つもしくは複数のキャリア、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せを含む組成物として、該宿主動物に投与する工程を包含する、方法。
（項目４１）
前記宿主動物がウシである、項目４０に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、ＨＩＶに感染した、ＩＬ−２およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）−刺激培養ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＨＩＶ複製に対する、実施例１の効果を示す。
【図２】図２は、ＩＬ−２およびＰＨＡ−刺激ＰＢＭＣの生存率に対する、５つの試験した置換ペルヒドロピロロピリジンの明らかな影響の欠如を示す。ＰＢＭＣを、置換ペルヒドロピロロピリジンと共に６日間インキュベートした。
【図３】図３は、３人の異なる同意したドナー由来の、ＨＩＶ感染ＩＬ−２およびＰＨＡ−刺激ＰＢＭＣにおけるｐ２４抗原レベルの、置換ペルヒドロピロロピリジンにより誘導された低減を示す。
【図４】図４は、実施例１が、各濃度で逆転写を有意に阻害することを示す。
【図５】図５は、実施例１が、各濃度でウイルスの組込みを有意に阻害することを示す。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｃは、実施例１が、各濃度でウイルスの転写を有意に阻害することを示す。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｃは、実施例１が、各濃度でウイルスの転写を有意に阻害することを示す。
【図６Ｃ】図６Ａ〜Ｃは、実施例１が、各濃度でウイルスの転写を有意に阻害することを示す。
【図７】図７は、ＢＶＤＶに対する実施例１の効力およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。
【図８】図８は、ＢＶＤＶに対する実施例４の効力およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。
【図９】図９は、ＢＶＤＶに対する実施例１０の効力およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。
【図１０】図１０は、ＢＶＤＶに対する実施例１０１の効力およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
詳細な説明
オクタヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジンを含む置換ペルヒドロピロロピリジンが、ＨＩＶ感染症および／またはＢＶＤＶ感染症などのウイルス疾患を処置するのに有用であることが、本明細書で発見された。理論に拘束されることなく、本明細書中で、置換ペルヒドロピロロピリジンは、感染細胞におけるウイルス量を減少させると考えられる。
【００１８】
本明細書中で使用される場合、「ペルヒドロピロロピリジン」という用語は、本明細書中で記載される式によって示される様々な実施態様と同様、一般的に親化合物および酸付加塩および／または塩基付加塩を含む、その薬学的に許容される塩を指すことが理解される。それに加えて、ペルヒドロピロロピリジンという用語は、本明細書中で記載されるような、化合物の様々なプロドラッグを含むことが理解される。
【００１９】
１つの実施態様において、ＨＩＶを有する患者または宿主動物を処置するための化合物、式Ｉの該化合物
【化１】
0006018206.tif 000005
またはその薬学的に許容される塩が本明細書中で記載され、式中：
Ｒ１はアリールアルキルまたはアリールアシルであり、それらのそれぞれは必要に応じて置換され；
Ｒ２は水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、それらのそれぞれは必要に応じて置換され；
Ｒ３はアリールアルキルまたはアリールアシルであり、それらのそれぞれは必要に応じて置換され；かつ
Ｒ４は水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、それらのそれぞれは必要に応じて置換される。
【００２０】
別の実施態様において、上記の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物が、本明細書中で記載される。
【００２１】
別の実施態様において、式Ｉの化合物の環縮合の立体化学はシン（ｓｙｎ）である。別の実施態様において、式Ｉの化合物の環縮合の立体化学は、以下の通りであり：
【化２】
0006018206.tif 000006
その薬学的に許容される塩を含む。別の実施態様において、式Ｉの化合物の環縮合およびＣ−３の立体化学は、以下の通りであり：
【化３】
0006018206.tif 000007
その薬学的に許容される塩を含む。別の実施態様において、式Ｉの化合物の環縮合の立体化学は、以下の通りであり：
【化４】
0006018206.tif 000008
その薬学的に許容される塩を含む。別の実施態様において、式Ｉの化合物の環縮合およびＣ−３の立体化学は、以下の通りであり：
【化５】
0006018206.tif 000009
その薬学的に許容される塩を含む。
【００２２】
別の実施態様において、本明細書中で記載される化合物の全ての立体化学的バリエーションを含む、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立に本明細書中の以下のものから選択される。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１は、必要に応じて置換されたアリールアシルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１は、必要に応じて置換されたアリールカルボニルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１は、必要に応じて置換されたベンゾイルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１は、ベンゾイルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１は、必要に応じて置換されたピコリノイルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ１は、ピコリノイルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ２は、必要に応じて置換されたアリールである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ２は、必要に応じて置換されたフェニルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ２は、ハロ、アルコキシ、またはその組み合わせで置換されたフェニルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ３は、必要に応じて置換されたアリールアルキルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ３は、必要に応じて置換されたアリールメチレンである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ３は、必要に応じて置換されたベンジルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ３は、電子吸引基で置換されたベンジルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ３は、ハロ置換ベンジルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ４は、ハロゲンまたはアルキルである。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ４は、水素である。別の実施態様において、本明細書中で記載される式Ｉの化合物の置換基Ｒ２は、Ｃ−３にある。
【００２３】
１つの実施態様において、１つまたは複数の置換ペルヒドロピロロピリジンを含む薬学的組成物が、本明細書中で記載される。その置換ペルヒドロピロロピリジンおよびそれらを含む薬学的組成物は、ＨＩＶ疾患の処置に有用である。別の実施態様において、その置換ペルヒドロピロロピリジンおよびそれらを含む薬学的組成物は、ＢＶＤＶ疾患の処置に有用である。
【００２４】
別の実施態様において、置換ペルヒドロピロロピリジンおよびそれらを含む薬学的組成物を、ウイルス感染症を処置するために使用する方法が、本明細書中で記載される。例示的に、これらの方法は、ウイルス感染症からの軽減の必要がある患者または宿主動物に、治療有効量の１つまたは複数の置換ペルヒドロピロロピリジンおよび／またはそれらを含む薬学的組成物を投与するステップを含む。１つのバリエーションにおいて、本明細書中で記載される方法はまた、ＨＩＶの処置に有用であることが公知である他の治療薬との共治療を含む。よって、本明細書中で記載される化合物、組成物、製剤、使用、および方法を、ＨＩＶ感染症の処置について公知である、１つまたは複数のそのような化合物または薬剤（ａｇｅｎｔ）と組み合わせ得る。よって、別の実施態様において、その共治療は、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物、および１つまたは複数の、ＨＩＶを含むウイルス感染症を処置するのに有用であることが公知である、公知の化合物または薬剤との共投与を含む。
【００２５】
別のバリエーションにおいて、本明細書中で記載される方法はまた、ＢＶＤＶ、ウエストナイルウイルス、およびデング熱を処置するのに有用であることが公知である他の治療薬との共治療を含む。よって、本明細書中で記載される化合物、組成物、製剤、使用、および方法を、ＢＶＤＶ、ウエストナイルウイルス、およびデング熱感染症の処置について公知である、１つまたは複数のそのような化合物または薬剤と組み合わせ得る。よって、別の実施態様において、その共治療は、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物、および１つまたは複数の、ＢＶＤＶ、ウエストナイルウイルス、およびデング熱を含むウイルス感染を処置するのに有用であることが公知である、公知の化合物または薬剤との共投与を含む。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、「アルキル」という用語は、炭素原子の鎖を含み、それは必要に応じて分岐している。本明細書中で使用される場合、「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、炭素原子の鎖を含み、それは必要に応じて分岐しており、そしてそれぞれ少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む。アルキニルはまた、１つまたは複数の二重結合を含み得ることも理解される。さらに、ある実施態様において、アルキルは有利に、Ｃ１−Ｃ２４、Ｃ１−Ｃ１２、Ｃ１−Ｃ８、Ｃ１−Ｃ６、およびＣ１−Ｃ４を含む、制限された長さのものであることが理解される。例示的に、Ｃ１−Ｃ８、Ｃ１−Ｃ６、およびＣ１−Ｃ４を含む、そのような特に制限された長さのアルキル基を、低級アルキルと呼び得る。さらに、ある実施態様において、アルケニルおよび／またはアルキニルはそれぞれ有利に、Ｃ２−Ｃ２４、Ｃ２−Ｃ１２、Ｃ２−Ｃ８、Ｃ２−Ｃ６、およびＣ２−Ｃ４を含む、制限された長さのものであり得ることが理解される。例示的に、Ｃ２−Ｃ８、Ｃ２−Ｃ６、およびＣ２−Ｃ４を含む、そのような特に制限された長さのアルケニル基および／またはアルキニル基を、低級アルケニルおよび／または低級アルキニルと呼び得る。より短いアルキル基、より短いアルケニル基、および／またはより短いアルキニル基は、化合物により低い親油性を付加し得、そしてよって、異なる薬物動態学的挙動を有し得ることが、本明細書中で認識される。例示的なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等であるが、これに限らない。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、「アルキレン」という用語は、二価の炭素原子鎖（ｄｉｖａｌｅｎｔ  ｃｈａｉｎ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｎ  ａｔｏｍｓ）を含み、それは必要に応じて分岐している。本明細書中で使用される場合、「アルケニレン」および「アルキニレン」という用語は、二価の炭素原子鎖を含み、それは必要に応じて分岐しており、そしてそれぞれ少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む。アルキニレンはまた、１つまたは複数の二重結合を含み得ることが理解される。さらに、ある実施態様において、アルキレンは有利に、Ｃ１−Ｃ２４、Ｃ１−Ｃ１２、Ｃ１−Ｃ８、Ｃ１−Ｃ６、およびＣ１−Ｃ４を含む、制限された長さのものであることが理解される。例示的に、Ｃ１−Ｃ８、Ｃ１−Ｃ６、およびＣ１−Ｃ４を含む、そのような特に制限された長さのアルキレン基を、低級アルキレンと呼び得る。さらに、ある実施態様において、アルケニレンおよび／またはアルキニレンはそれぞれ有利に、Ｃ２−Ｃ２４、Ｃ２−Ｃ１２、Ｃ２−Ｃ８、Ｃ２−Ｃ６、およびＣ２−Ｃ４を含む、制限された長さのものであり得ることが理解される。例示的に、Ｃ２−Ｃ８、Ｃ２−Ｃ６、およびＣ２−Ｃ４を含む、そのような特に制限された長さのアルケニレン基および／またはアルキニレン基を、低級アルケニレンおよび／または低級アルキニレンと呼び得る。より短いアルキレン基、より短いアルケニレン基、および／またはより短いアルキニレン基は、化合物により低い親油性を付加し得、そしてよって、異なる薬物動態学的挙動を有することが、本明細書中で認識される。例示的なアルキル（ａｌｋｙｌ）基は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソプロピレン、ｎ−ブチレン、イソブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ペンチレン、１，２−ペンチレン、１，３−ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン等であるが、これに限らない。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、炭素原子の鎖であって、必要に応じて分岐しており、少なくとも鎖の一部が環状である、炭素原子の鎖を含む。シクロアルキルアルキルは、シクロアルキルのサブセットであることが理解される。シクロアルキルは多環式であり得ることが理解される。例示的なシクロアルキルは、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、２−メチルシクロプロピル、シクロペンチルエタ−２−イル（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌｅｔｈ−２−ｙｌ）、アダマンチル等が挙げられるが、これに限らない。本明細書中で使用される場合、「シクロアルケニル」という用語は、炭素原子の鎖であって、必要に応じて分岐しており、そして少なくとも１つの二重結合を含み、少なくとも鎖の一部が環状である、炭素原子の鎖を含む。１つまたは複数の二重結合が、シクロアルケニルの環状部分、および／またはシクロアルケニルの非環状部分にあり得ることが理解される。シクロアルケニルアルキルおよびシクロアルキルアルケニルはそれぞれシクロアルケニルのサブセットであることが理解される。シクロアルキルは多環式であり得ることが理解される。例示的なシクロアルケニルとしては、シクロペンテニル、シクロヘキシルエテン−２−イル、シクロヘプテニルプロペニル等が挙げられるが、これに限らない。さらに、シクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルを形成する鎖は有利に、Ｃ３−Ｃ２４、Ｃ３−Ｃ１２、Ｃ３−Ｃ８、Ｃ３−Ｃ６、およびＣ５−Ｃ６を含む、制限された長さのものであることが理解される。それぞれシクロアルキルおよび／またはシクロアルケニルを形成する、より短いアルキル鎖および／またはより短いアルケニル鎖は、化合物により低い親油性を付加し得、そしてよって、異なる薬物動態学的挙動を有することが、本明細書中で認識される。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「ヘテロアルキル」という用語は、炭素および少なくとも１つのヘテロ原子の両方を含み、そして必要に応じて分岐している原子の鎖を含む。例示的なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄を含む。あるバリエーションにおいて、例示的なヘテロ原子はまた、リンおよびセレンを含む。本明細書中で使用される場合、ヘテロシクリルおよび複素環を含む「シクロヘテロアルキル」という用語は、ヘテロアルキルなどの、炭素および少なくとも１つのヘテロ原子の両方を含み、そして必要に応じて分岐しており、少なくともその鎖の一部が環状である原子の鎖を含む。例示的なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄を含む。あるバリエーションにおいて、例示的なヘテロ原子はまた、リンおよびセレンを含む。例示的なシクロヘテロアルキルとしては、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、モルフォリニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、キヌクリジニル等が挙げられるが、これに限らない。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「アリール」という用語は、単環式芳香族炭素環式基および多環式芳香族炭素環式基を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換され得る。本明細書中で記載される、例示的な芳香族炭素環式基としては、フェニル、ナフチル等が挙げられるがこれに限らない。本明細書中で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、芳香族複素環式基を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換され得る。例示的な芳香族複素環式基としては、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、テトラジニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル等が挙げられるがこれに限らない。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、「アミノ」という用語は、基であるＮＨ２、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノを含み、ここでジアルキルアミノの２つのアルキル基は、同じであっても異なってもよく、すなわちアルキルアルキルアミノであり得る。例示的に、アミノは、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ等を含む。それに加えて、アミノアルキルまたはアシルアミノのように、アミノが修飾する、またはアミノが別の用語によって修飾される場合、アミノという用語の上記のバリエーションがそこに含まれることが理解される。例示的に、アミノアルキルは、Ｈ２Ｎ−アルキル、メチルアミノアルキル、エチルアミノアルキル、ジメチルアミノアルキル、メチルエチルアミノアルキル等を含む。例示的に、アシルアミノは、アシルメチルアミノ、アシルエチルアミノ等を含む。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、「アミノおよびその誘導体」という用語は、本明細書中で記載されたようなアミノ、およびアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヘテロアルキルアミノ、ヘテロアルケニルアミノ、ヘテロアルキニルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルケニルアミノ、シクロヘテロアルキルアミノ、シクロヘテロアルケニルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、アリールアルケニルアミノ、アリールアルキニルアミノ、ヘテロアリールアミノ、ヘテロアリールアルキルアミノ、ヘテロアリールアルケニルアミノ、ヘテロアリールアルキニルアミノ、アシルアミノ等を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換され得る。「アミノ誘導体」という用語はまた、尿素、カルバミン酸等も含む。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「ヒドロキシおよびその誘導体」という用語は、ＯＨ、およびアルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ヘテロアルキルオキシ、ヘテロアルケニルオキシ、ヘテロアルキニルオキシ、シクロアルキルオキシ、シクロアルケニルオキシ、シクロヘテロアルキルオキシ、シクロヘテロアルケニルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アリールアルケニルオキシ、アリールアルキニルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルケニルオキシ、ヘテロアリールアルキニルオキシ、アシルオキシ等を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換される。「ヒドロキシ誘導体」という用語はまた、カルバメート等を含む。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、「チオおよびその誘導体」という用語は、ＳＨ、およびアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、ヘテロアルキルチオ、ヘテロアルケニルチオ、ヘテロアルキニルチオ、シクロアルキルチオ、シクロアルケニルチオ、シクロヘテロアルキルチオ、シクロヘテロアルケニルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ、アリールアルケニルチオ、アリールアルキニルチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールアルキルチオ、ヘテロアリールアルケニルチオ、ヘテロアリールアルキニルチオ、アシルチオ等を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換される。「チオ誘導体」という用語はまた、チオカルバメート等を含む。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、「アシル」という用語は、ホルミル、およびアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、ヘテロアルキルカルボニル、ヘテロアルケニルカルボニル、ヘテロアルキニルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルケニルカルボニル、シクロヘテロアルキルカルボニル、シクロヘテロアルケニルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールアルケニルカルボニル、アリールアルキニルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールアルキルカルボニル、ヘテロアリールアルケニルカルボニル、ヘテロアリールアルキニルカルボニル、アシルカルボニル等を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換される。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「カルボニルおよびその誘導体」という用語は、基であるＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（ＮＨ）およびその置換アミノ誘導体を含む。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「カルボン酸およびその誘導体」という用語は、基であるＣＯ２Ｈおよびその塩、およびそのエステルおよびアミド、およびＣＮを含む。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、「スルホニル」という用語は、アルキルスルホニル、アルケニルスルホニル、アルキニルスルホニル、ヘテロアルキルスルホニル、ヘテロアルケニルスルホニル、ヘテロアルキニルスルホニル、シクロアルキルスルホニル、シクロアルケニルスルホニル、シクロヘテロアルキルスルホニル、シクロヘテロアルケニルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、アリールアルケニルスルホニル、アリールアルキニルスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルケニルスルホニル、ヘテロアリールアルキニルスルホニル、アシルスルホニル等を含み、それらのそれぞれは必要に応じて置換される。
【００３９】
本明細書中で使用される「必要に応じて置換される」という用語は、必要に応じて置換されるラジカルにおける、水素原子の、他の官能基による置換を含む。そのような他の官能基としては、例示的に、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体等が挙げられるがこれに限らない。例示的に、アミノ、ヒドロキシル、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、および／またはスルホン酸のいずれも、必要に応じて置換される。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、「必要に応じて置換されたアリール」および「必要に応じて置換されたヘテロアリール」という用語は、必要に応じて置換されたアリールまたはヘテロアリールにおける、水素原子の、他の官能基による置換を含む。そのような他の官能基としては、例示的に、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体等が挙げられるがこれに限らない。例示的に、アミノ、ヒドロキシ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、および／またはスルホン酸のいずれも、必要に応じて置換される。
【００４１】
例示的な置換基としては、ラジカル−（ＣＨ２）ｘＺＸであって、ここでｘは０−６の整数であり、そしてＺＸは、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルカノイルオキシを含むアルカノイルオキシ、必要に応じて置換されたアロイルオキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルを含むアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシを含むアルコキシ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルを含むシクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルコキシを含むシクロアルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニルを含むアルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルを含むアルキニル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキルを含むハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルコキシを含むハロアルコキシ、Ｃ３−Ｃ８ハロシクロアルキルを含むハロシクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８ハロシクロアルコキシを含むハロシクロアルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、アルキルカルボニルアミノ、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アルキルカルボニルアミノ、アミノアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、Ｎ−（Ｃ１-Ｃ６アルキル）アルキルカルボニルアミノアルキル、シアノ、およびニトロから選択される；またはＺＸは、−ＣＯ２Ｒ４および−ＣＯＮＲ５Ｒ６から選択され、ここでＲ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立にそれぞれの存在において、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリール−Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択される、ラジカルが挙げられるがこれに限らない。
【００４２】
本明細書中で使用される「プロドラッグ」という用語は一般的に、生物学的システムに投与された場合に、１つまたは複数の自発的な化学反応、１つまたは複数の酵素触媒化学反応、および／または１つまたは複数の代謝化学反応、またはその組み合わせの結果として、生物学的に活性な化合物を生成するあらゆる化合物を指す。インビボにおいて、プロドラッグは、典型的には酵素（エステラーゼ、アミダーゼ、ホスファターゼ等のような）、単純な生物化学物質、またはインビボでの他のプロセスにより作用を受けて、より薬理学的に活性な薬物を放出または再生する。この活性化は、内因性の宿主酵素、またはプロドラッグの投与の前、後、またはその間に宿主に投与される非内因性酵素の作用によって起こり得る。プロドラッグ使用のさらなる詳細が、米国特許第５，６２７，１６５号；およびＰａｔｈａｌｋら、Ｅｎｚｙｍｉｃ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌ．Ｂｉｏｃａｔａｌ．７７５−７９７（２０００）において記載されている。プロドラッグは、標的化伝達、安全性、安定性等のような目標が達成されたらすぐに、有利にもとの薬物に変換され、続いてプロドラッグを形成する基の、放出された残りが迅速に排泄されることが認識される。
【００４３】
インビボで最終的に切断される基を、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＲ２などの、化合物に存在する１つまたは複数の官能基へ結合することによって、プロドラッグを本明細書中で記載された化合物から調製し得る。例示的なプロドラッグとしては、カルボン酸エステルが挙げられるがこれに限らず、ここでその基はアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキル、およびヒドロキシル、チオール、およびアミンのエステルであり、ここでその結合する基はアシル基、アルコキシカルボニル基、アミノカルボニル基、リン酸基または硫酸基である。活性エステルとも呼ばれる例示的なエステルとしては、１−インダニル、Ｎ−オキシスクシンイミド；アセトキシメチル、ピバロイルオキシメチル、β−アセトキシエチル、β−ピバロイルオキシエチル、１−（シクロヘキシルカルボニルオキシ）プロパ−１−イル、（１−アミノエチル）カルボニルオキシメチル等のようなアシルオキシアルキル基；エトキシカルボニルオキシメチル、α−エトキシカルボニルオキシエチル、β−エトキシカルボニルオキシエチル等のようなアルコキシカルボニルオキシアルキル基；ジメチルアミノメチル、ジメチルアミノエチル、ジエチルアミノメチル、ジエチルアミノエチル等のような、ジ低級アルキルアミノアルキル基を含むジアルキルアミノアルキル基；２−（イソブトキシカルボニル）ペンタ−２−エニル、２−（エトキシカルボニル）ブタ−２−エニル等のような、２−（アルコキシカルボニル）−２−アルケニル基；およびフタリジル、ジメトキシフタリジル等のようなラクトン基が挙げられるがこれに限らない。
【００４４】
さらなる例示的なプロドラッグは、本明細書中で記載される化合物の可溶性および／または安定性を増大させるために機能する、アミド基またはリン基などの化学的部分を含む。アミノ基に関するさらなる例示的なプロドラッグとしては、（Ｃ３−Ｃ２０）アルカノイル；ハロ−（Ｃ３−Ｃ２０）アルカノイル；（Ｃ３−Ｃ２０）アルケノイル；（Ｃ４−Ｃ７）シクロアルカノイル；（Ｃ３−Ｃ６）−シクロアルキル（Ｃ２−Ｃ１６）アルカノイル；未置換アロイル、またはそれぞれ必要に応じて１から３個のハロゲン原子のうち１つまたは複数でさらに置換された、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシから成る群から選択される、１から３つの置換基で置換されたアロイルなどの、必要に応じて置換されたアロイル；未置換であるか、またはハロゲン、それぞれ必要に応じて１から３つのハロゲン原子でさらに置換された、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシから成る群から選択される、１から３つの置換基で置換された、アリールラジカルまたはヘテロアリールラジカルなどの、必要に応じて置換されたアリール（Ｃ２−Ｃ１６）アルカノイルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリール（Ｃ２−Ｃ１６）アルカノイル；および未置換であるか、またはそれぞれ必要に応じて１から３個のハロゲン原子でさらに置換された、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシから成る群から選択される、１から３つの置換基で置換されたヘテロアリールラジカルなどの、ヘテロアリール部分にＯ、Ｓ、およびＮから選択される、１から３つのヘテロ原子、およびアルカノイル部分に２から１０個の炭素原子を有する、必要に応じて置換されたヘテロアリールアルカノイルが挙げられるがこれに限らない。例示された基（ｇｒｏｕｐ）は網羅的ではなく代表的なものであり、そして従来の過程によって調製し得る。
【００４５】
プロドラッグ自体は重要な生物学的活性を有さない可能性があるが、代わりにインビボにおける投与後に、１つまたは複数の自発的な化学反応、１つまたは複数の酵素触媒化学反応、および／または１つまたは複数の代謝化学反応、またはその組み合わせを受けて、生物学的に活性である、または生物学的に活性な化合物の前駆体である、本明細書中で記載される化合物を生じることが理解される。しかし、いくつかの場合において、プロドラッグが生物学的に活性であることが認識される。プロドラッグは、多くの場合、経口生物学的利用能、薬力学的半減期等の改善によって、薬物の効力または安全性を改善するよう働き得ることも認識される。プロドラッグはまた、単に望ましくない薬物の性質をマスクする、または薬物伝達を改善する基を含む、本明細書中で記載される化合物の誘導体を指す。例えば、本明細書中で記載される１つまたは複数の化合物は、低い経口薬物吸収、部位特異性の欠如、化学的不安定性、毒性、および低い患者受容性（不味さ、におい、注射部位の疼痛等）などのような、臨床薬物の適用における、薬理学的、薬学的、または薬物動態学的障壁になり得る、望ましくない性質を示し得、それを有利に阻害または最小限にする。本明細書中で、プロドラッグ、または可逆的な誘導体を用いる他の戦略は、薬物の臨床適用の最適化において有用であり得ることが認識される。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、「組成物」という用語は一般的に、特定の成分を特定の量で含むあらゆる産物、および特定の量の特定の成分の組み合わせから、直接または間接的に生じるあらゆる産物を指す。本明細書中で記載される組成物を、本明細書中で記載される単離化合物から、または本明細書中で記載される化合物の塩、溶液、水和物、溶媒和物、および他の形態から調製し得ることが理解される。組成物を、本明細書中で記載される化合物の、様々な無定形、非無定形、部分的結晶性、結晶性、および／または他の形態学的形態から調製し得ることも理解される。組成物を、本明細書中で記載される化合物の様々な水和物、および／または溶媒和物から調製し得ることも理解される。よって、本明細書中で記載される化合物を列挙するそのような薬学的組成物は、本明細書中で記載される化合物の様々な形態学的形態および／または溶媒和物または水和物形態のそれぞれ、またはそのあらゆる組み合わせを含むことが理解される。例示的に、組成物は、１つまたは複数のキャリア、希釈剤、および／または賦形剤を含み得る。本明細書中で記載される化合物、またはそれらを含む組成物を、本明細書中で記載される方法に適当な、あらゆる従来の剤形で、治療有効量で製剤化し得る。それらを含む、本明細書中で記載される化合物、またはそれらを含む組成物を、公知の手順を利用して、本明細書中で記載される方法について広く様々な従来の経路によって、および広く様々な剤形で投与し得る（一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２１版、２００５）を参照のこと）。
【００４７】
本明細書中で使用される「治療有効量」という用語は、組織系、動物またはヒトにおいて、研究者、獣医、医師、または他の臨床医が求める、処置する疾患または障害の症状の軽減を含む、生物学的または医薬的応答を引き出す、活性化合物または医薬品の量を指す。１つの局面において、治療有効量は、あらゆる医学的処置に適用できる、妥当な利益／危険比で、疾患または疾患の症状を処置または軽減し得る量である。しかし、本明細書中で記載される化合物および組成物の合計一日使用量は、確かな医学的判断の範囲内で、主治医が決定し得る。任意の特定の患者のための、特定の治療有効用量レベルは、処置する障害およびその障害の重症度；採用する特定の化合物の活性；採用する特定の組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別および食事；採用する特定の化合物の投与時間、投与経路、および排出速度；治療期間；採用する特定の化合物と組み合わせて、または同時に使用する薬物；および研究者、獣医、医師、または通常の技術の他の臨床医に周知の同様の因子を含む、様々な因子に依存する。
【００４８】
治療有効量は、単独療法または併用療法のいずれを指すかに関わらず、本明細書中で記載される１つまたは複数の化合物の投与中に起こり得る、あらゆる毒性、または他の望ましくない副作用に関連して有利に選択されることも認識される。さらに、本明細書中で記載される共治療は、そのような毒性、または他の望ましくない副作用を示す化合物の、より低い用量の投与を可能にし得、ここでそれらのより低い用量は、毒性の閾値より低く、または治療濃度域において、別途共治療の非存在下で投与される用量より低い。
【００４９】
本明細書中で記載される例示的な投与量および投薬プロトコールに加えて、本明細書中で記載される化合物のいずれか１つまたは化合物の混合物の有効量を、公知の技術を用いることによって、および／または同様の状況下で得られる結果を注視することによって、付き添う診断医または主治医が容易に決定し得る。有効な量または用量の決定において、ヒトを含む哺乳類の種、その大きさ、年齢、および全般的な健康、関与する特定の疾患または障害、その疾患または障害の程度または関与または重症度、個々の患者の応答、投与する特定の化合物、投与の方式、投与する調製物の生物学的利用能の特徴、選択する投薬レジメン（ｄｏｓｅ  ｒｅｇｉｍｅｎ）、併用薬物治療の使用、および他の関連する状況を含むがこれに限らない多くの因子を、付き添う診断医または主治医が考慮に入れる。
【００５０】
請求される組み合わせの各化合物の投与量は、投与方法、処置する状態、状態の重症度、その状態を処置するのかまたは予防するのか、および処置する人の年齢、体重および健康を含む、いくつかの因子に依存する。さらに、特定の患者についての薬理ゲノミクス（治療薬の薬物動態学的、薬力学的、または効力プロファイルに対する遺伝子型の影響）情報が、使用する投与量に影響を与え得る。
【００５１】
本明細書中で記載される方法において、共投与、または組み合わせの個々の成分を、あらゆる適当な手段によって、同時に（ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓｌｙ）、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、逐次的に、別々に、または単一の医薬製剤において投与し得ることが理解される。その共投与する化合物または組成物を別々の剤形で投与する場合、各化合物の１日当たりに投与する投与回数は、同じであっても異なってもよい。その化合物または組成物を、同じまたは異なる投与経路によって投与し得る。その化合物または組成物を、同時の、または交互のレジメンによって、治療の過程の間の同じまたは異なる時間に、分割した形態、または単一の形態で同時に投与し得る。
【００５２】
本明細書中で使用される「投与する」という用語は、本明細書中で記載される化合物および組成物を患者に導入する全ての手段を含み、経口（ｐｏ）、静脈内（ｉｖ）、筋肉内（ｉｍ）、皮下（ｓｃ）、経皮、吸入、口腔（ｂｕｃｃａｌ）、眼、舌下、膣、直腸等が挙げられるがこれに限らない。本明細書中で記載される化合物および組成物を、従来の無毒性の薬学的に許容されるキャリア、アジュバント、およびビヒクルを含む、単位剤形および／または製剤で投与し得る。
【００５３】
経口投与のための例示的な様式は、錠剤、カプセル、エリキシル、シロップ等を含む。
【００５４】
非経口投与のための例示的な経路は、静脈内、動脈内、腹腔内、硬膜外（ｅｐｉｄｕｒｉａｌ）、尿道内、胸骨内、筋肉内および皮下、およびあらゆる他の当該分野において認められている非経口投与の経路を含む。
【００５５】
本発明のいくつかの例示的な実施態様を、以下の列挙した条項によって記載する：
１．ＨＩＶもしくは関連疾患、ＢＶＤＶ、ウエストナイルウイルスもしくはデング熱もしくは他のフラビウイルス科のウイルスの感染症もしくは関連疾患、または前記の組合せを有する宿主動物を処置するための組成物であって、該組成物が、以下の式：
【化６】
0006018206.tif 000010
の化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、式中：
Ｒ１は、アリールアルキルまたはアリールアシルであって、それらの各々は、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリールまたはアリールアルキルであり、それらの各々は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、アリールアルキルまたはアリールアシルであり、それらの各々は、必要に応じて置換されており；かつ
Ｒ４は、水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリールまたはアリールアルキルであり、それらの各々は、必要に応じて置換されている、組成物。
２．前記化合物中の環縮合の立体化学がシンである、第１項に記載の組成物。
３．前記化合物が以下の式：
【化７】
0006018206.tif 000011
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、第１項に記載の組成物。
３Ａ．前記化合物が以下の式：
【化８】
0006018206.tif 000012
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、第１項に記載の組成物。
４．前記化合物が以下の式：
【化９】
0006018206.tif 000013
の化合物またはその薬学的に許容される塩である、第１項に記載の組成物。
４Ａ．前記化合物が以下の式：
【化１０】
0006018206.tif 000014
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、第１項に記載の組成物。
５．Ｒ１が、必要に応じて置換されたアリールアシルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
６．Ｒ１が、必要に応じて置換されたアリールカルボニルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
７．Ｒ１が、必要に応じて置換されたベンゾイルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
８．Ｒ１がベンゾイルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
９．Ｒ１が必要に応じて置換されたピコリノイルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
１０．Ｒ１がピコリノイルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
１１．Ｒ１が３−ピコリノイルである、第１項〜第５項のいずれか１項に記載の組成物。
１２．Ｒ２が必要に応じて置換されたアリールである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１３．Ｒ２が必要に応じて置換されたフェニルである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１４．Ｒ２がハロ、アルコキシまたはそれらの組合せで置換されたフェニルである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１５．Ｒ２がハロフェニルである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１６．Ｒ２がアルコキシフェニルである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１７．Ｒ２が電子供与基で置換されたフェニルである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１８．Ｒ２がメトキシフェニルである、第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の組成物。
１９．Ｒ３が必要に応じて置換されたアリールアルキルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２０．Ｒ３が必要に応じて置換されたアリールメチレンである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２１．Ｒ３が必要に応じて置換されたベンジルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２２．Ｒ３が電子吸引基で置換されたベンジルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２３．Ｒ３がハロ置換ベンジルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２４．Ｒ３がフルオロ、クロロ、またはそれらの組合せで置換されたベンジルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２５．Ｒ３がフルオロベンジルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２６．Ｒ３がクロロベンジルである、第１項〜第１８項のいずれか１項に記載の組成物。
２７．Ｒ４が水素またはアルキルである、第１項〜第２６項のいずれか１項に記載の組成物。
２８．Ｒ４が水素である、第１項〜第２６項のいずれか１項に記載の組成物。
２９．Ｒ２がＣ−３にある、第１項〜第２８項のいずれか１項に記載の組成物。
３０．ＨＩＶを処置するための、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の組成物。
３１．ウエストナイルウイルスを処置するための、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の組成物。
３２．デング熱を処置するための、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の組成物。
３３．前記宿主動物がヒトである、第３０項〜第３２項のいずれか１項に記載の組成物。
３４．ＢＶＤＶを処置するための、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の組成物。
３５．前記宿主動物がウシである、第３４項に記載の組成物。
３６．ＨＩＶを有する宿主動物を処置するための医薬の製造における、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の化合物の使用。
３７．ＨＩＶを有する宿主動物を処置するための方法であって、該方法は、治療有効量の、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を、単独で、または１つもしくは複数のキャリア、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せを含む組成物として、該宿主動物に投与する工程を包含する、方法。
３８．前記宿主動物がヒトである、第３７項に記載の方法。
３９．ＢＶＤＶを有する宿主動物を処置するための医薬の製造における、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の化合物の使用。
４０．ＢＶＤＶを有する宿主動物を処置するための方法であって、該方法は、治療有効量の、第１項〜第２９項のいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を、単独で、または１つもしくは複数のキャリア、希釈剤もしくは賦形剤またはそれらの組合せを含む組成物として、該宿主動物に投与する工程を包含する、方法。
４１．前記宿主動物がウシである、第４０項に記載の方法。
【００５６】
別の実施態様において、ＨＩＶ、ＡＩＤＳ、またはＡＩＤＳ関連疾患、またはその組み合わせを有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を使用することが、本明細書中で記載される。
【００５７】
別の実施態様において、ＨＩＶ、ＡＩＤＳ、またはＡＩＤＳ関連疾患、またはその組み合わせを有する患者または宿主動物を処置するための方法が本明細書中で記載され、その方法は、その患者または宿主動物に、治療有効量の１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を、単独で、または１つまたは複数のキャリア、希釈剤、または賦形剤、またはその組み合わせを有する組成物として投与するステップを含む。
【００５８】
別の実施態様において、フラビウイルス感染症または関連疾患を有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を使用することが、本明細書中で記載される。
【００５９】
別の実施態様において、ウエストナイルウイルスを有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を使用することが、本明細書中で記載される。
【００６０】
別の実施態様において、デング熱を有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を使用することが、本明細書中で記載される。
【００６１】
別の実施態様において、ＢＶＤＶを有する患者または宿主動物を処置するための医薬の製造において、１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を使用することが、本明細書中で記載される。
【００６２】
別の実施態様において、ＢＶＤＶを有する患者または宿主動物を処置するための方法が本明細書中で記載され、その方法は、その患者または宿主動物に、治療有効量の１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を、単独で、または１つまたは複数のキャリア、希釈剤、または賦形剤、またはその組み合わせを有する組成物として投与するステップを含む。
【００６３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４に関する上記の選択のそれぞれは、式Ｉの立体化学的実施態様のそれぞれに関して本明細書中で記載されることが理解される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４に関する上記の選択のそれぞれは、あらゆる可能な組み合わせにおいてお互いに組み合わせ得、それらのそれぞれは本発明のさらなる例示的な実施態様の記載を形成することがさらに理解される。例えば、１つのそのような組み合わせにおいて、式Ｉの立体化学的実施態様のいずれかを含む、式Ｉの化合物が本明細書中で記載され、ここでＲ１は必要に応じて置換されたアリールアシルであり、そしてＲ２は必要に応じて置換されたアリールである。別のそのような組み合わせにおいて、式Ｉの立体化学的実施態様のいずれかを含む、式Ｉの化合物が本明細書中で記載され、ここでＲ１は必要に応じて置換されたベンゾイルであり；Ｒ２は必要に応じて置換されたアリールであり；かつＲ３は必要に応じて置換されたアリールアルキルである。別のそのような組み合わせにおいて、式Ｉの立体化学的実施態様のいずれかを含む、式Ｉの化合物が本明細書中で記載され、ここでＲ１はベンゾイルであり；Ｒ２は必要に応じて置換されたアリールであり；Ｒ３は電子吸引基で置換されたベンジルであり；かつＲ４は水素である。
【００６４】
１つまたは複数の本明細書中で記載される化合物を用いて、ＨＩＶ、および／またはＢＶＤＶの１つまたは複数の影響を処置または軽減するための、本明細書中で記載される化合物、組成物、および方法を有効に使用することは、ネズミ、イヌ、ブタ、および非ヒト霊長類の疾患動物モデルなどの動物モデルに基づき得る。例えば、ヒトにおけるＨＩＶは、機能喪失、および／または症状の発生によって特徴付けられ得、それらのそれぞれはマウスなどの動物、および他の代理の試験動物において誘発し得ることが理解される。さらに、ウシにおけるＢＶＤＶは、機能喪失、および／または症状の発生によって特徴付けられ得、それらのそれぞれはマウスなどの代替の動物、および他の代理の試験動物において誘発し得ることが理解される。そのような動物モデルを使用して、本明細書中で記載される処置方法および薬学的組成物を評価することができ、かつ、本明細書中で記載される治療有効量を決定することができる。
【実施例】
【００６５】
以下の実施例は、本発明の特定の実施態様をさらに記載する；しかし、以下の実施例は、本発明を制限するとは決して解釈されるべきではない。
【００６６】
実施例。試験化合物。本明細書中で記載される置換ペルヒドロピロロピリジンを、従来の方法を用いて調製する、または商業的供給業者から得て（純度＞９０％）、そしてそのまま使用する。
【００６７】
実施例。試験化合物を、ＨＩＶ感染に関する従来のアッセイ、ＨＩＶプロテアーゼ活性に関する従来のアッセイ、およびＨＩＶ疾患の従来の動物モデルを用いて評価する。
【００６８】
実施例。血液の採取。ヘパリンでコーティングした１０ｍＬのＢＤ  Ｖａｃｃｕｔａｉｎｅｒ（＃３６７８７４）チューブを使用して、同意後に健康なドナーから血液を採取する。血液の１０ｍＬチューブあたり平均１０×１０６のＰＢＭＣを使用して、各ドナーから採取した血液の全量を決定する。
【００６９】
実施例。試験化合物の存在下で、ＩＬ−２およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）刺激培養ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の生存率に関する従来のアッセイを用いて、試験化合物を評価する。試験化合物を、ＨＩＶに感染したそのような細胞におけるＨＩＶ複製について従来のアッセイを用いて評価する。コントロール細胞生存率を、ＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ  カタログ＃Ｇ３５８２）のなどの比色（ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ）アッセイによって、およびＨＩＶ複製を、ＮＩＨによって供給されるＥＬＩＳＡキットを用いてＨＩＶカプシドｐ２４抗原（５）のレベルを測定することによって決定する。置換ペルヒドロピロロピリジンを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、そして２５μＭの最終濃度で使用する。増殖培地中の最終ＤＭＳＯ濃度は、０．５％である。アジドチミジン（ＡＺＴ）が、１μＭの最終濃度でポジティブコントロールとして働き、一方置換ペルヒドロピロロピリジンまたはＡＺＴの非存在下のＤＭＳＯが、ネガティブコントロールとして働く。
【００７０】
実施例。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の単離および刺激。置換ペルヒドロピロロピリジン処理後の細胞生存率アッセイおよびＰ２４レベル評価のために、１０ｍＬのヘパリンコーティングしたチューブ（ＢＤ  Ｖａｃｃｕｔａｉｎｅｒ  ＃３６７８７４）を用いて、健康な同意したドナーから血液を採取する。約１０７のＰＢＭＣを含む採取した血液を、５０ｍＬチューブ中で、等量の滅菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）と混合する。次いでその血液／ＰＢＳ混合物を、１０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ溶液（リンパ球分離媒体）上にゆっくりと重層し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離して、全血からＰＢＭＣ層を分離する。分離した層を維持するために、遠心分離をゆっくり停止する（ブレーキをかけない）。滅菌パスツールピペットを用いた吸引によって、ＰＢＭＣを５０ｍＬの遠心分離チューブから取り出し、そして１５ｍＬの遠心分離チューブに入れ、それにＰＢＳを加えてチューブを満たす。血小板を除去するために、そのチューブを２０００ｒｐｍで５分間遠心分離して（ブレーキをかける）新しく単離したＰＢＭＣをペレットにする。血小板を含む上清をデカントし、そしてＰＢＳを１５ｍＬの体積までそのチューブに加え、そして１４００ｒｐｍで５分間遠心分離し、その後上清をデカントし、そしてペレットを２０ユニット／ｍｌのＩＬ−２および４μｇ／ｍｌのＰＨＡを含む５ｍＬの増殖培地（ＲＰＭＩ−１６４０培地プラス１０％のウシ胎仔血清、１％のｌ−グルタミン、および１％のペニシリン／ストレプトマイシン）に懸濁し、そして加湿インキュベーターにおいて、３７℃および５％のＣＯ２で、Ｔ２５培養フラスコ中で１日間インキュベートする。
【００７１】
実施例。ＨＩＶ−１  ＢａｌによるＰＢＭＣの感染：ＨＩＶ−１  Ｂａｌ（ＮＩＨ  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）を、２ｎｇのウイルス／１０６細胞の濃度で、刺激したＰＢＭＣに加え、そして５％ＣＯ２、加湿インキュベーター中で、３７℃で５時間インキュベートした。次いで細胞を培地で３回洗浄した。ｐ２４アッセイのために、１条件あたり１０６細胞を、２０ユニット／ｍＬのＩＬ−２を含む１ｍＬのＲＰＭＩ完全培地に再懸濁した。細胞を未処理のままおいた、または１．２５μＭのＡＺＴ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）および１．２５μＭのビヒクルコントロール（ＤＭＳＯ）で処理した。ｐ２４アッセイのために、感染細胞および処理細胞を、次いで９６穴Ｕ底プレートに、２００μＬの体積の培地中２００，０００細胞を、４連で、３７℃で６日間、５％ＣＯ２の加湿インキュベーター中でまいた。ＲＮＡ単離および続くリアルタイムＰＣＲ研究のために、３×１０６の感染細胞および洗浄細胞を、２０ユニット／ｍＬのＩＬ−２を含むＲＰＭＩ完全培地に再懸濁し、そして上記で述べた適当な処理を行い、そして１２穴培養プレートにおいて１ｍＬの体積で、５％ＣＯ２加湿インキュベーター中、３７℃で１から３日間（ＨＩＶ複製サイクルの試験時点に依存して）培養した。
【００７２】
実施例。５つの置換ペルヒドロピロロピリジンによるＨＩＶ複製の阻害を、ＨＩＶ感染ＰＢＭＣにおいてＨＩＶカプシドタンパク質ｐ２４（６）のレベルに対するその効果をアッセイすることによって決定する。Ｐ２４の量を、ＳＡＩＣ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  ＡＩＤＳ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）試薬プログラムから得て、そして製造会社のプロトコールに従って行ったサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイキットを用いてアッセイする。そのキットは、コーティングしたプレート、標準物質、一次および二次抗体を含む。このＰ２４の決定に関して、ＰＢＭＣのＩＬ−２およびＰＨＡによる刺激の次の日、約１０６細胞を含む刺激したＰＢＭＣのサンプルを、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離する。その上清をデカントし、そしてＮＩＨ  ＡＩＤＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ａｎｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｒｏｇｒａｍによって提供される２ｎｇのＨＩＶ−Ｂａｌウイルスストックを、各ペレットに加え、そしてその細胞を増殖培地に全部で１ｍＬまで懸濁し、そして加湿インキュベーターにおいて３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートする。４時間後、細胞を５ｍＬの増殖培地で、２０００ｒｐｍで５分間、３回洗浄する。最終のペレットを、新しい増殖培地に再懸濁し、それに２０ユニット／ｍＬのＩＬ−２を加える。１ｍＬあたり約１０６細胞を含む、１ｍＬのＰＢＭＣ懸濁液のアリコートを、１．５ｍＬの微量遠心分離チューブに入れ、そして試験化学物質で処理する。各処理に関して、２００μＬ（約２×１０５細胞）の４つのアリコートを、それぞれＵ底９６穴プレートの別々のウェルに分配し、そして加湿インキュベーター中、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートする。
【００７３】
７日間インキュベートした後、各ウェルからの上清を、平底９６穴プレートに移し、そしてＤＩ−Ｈ２Ｏ中、１／１０容の１０％Ｔｒｉｔｏｎ−ｘ１００で、３７℃で１時間溶解する。試験プレートを、２００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄する。４０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、２．５ｎｇ／ｍＬ、１．２５ｎｇ／ｍＬ、０．６２５ｎｇ／ｍＬ、０．３１２５ｎｇ／ｍＬ、０．１５６３ｎｇ／ｍＬ、および０ｎｇ／ｍＬのｐ２４ライセートコントロールの、１００μＬの標準物質、およびＲＰＭＩ中１％  ＢＳＡ、０．２％  Ｔｗｅｅｎ２０で、１：１０に希釈した１００μＬの試験サンプルを、抗原でコーティングした９６穴プレートに加える。そのプレートを、３７℃で２時間インキュベートし、そして２００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄する。ＲＰＭＩ培地中１０％  ウシ胎仔血清、２％  正常マウス血清で、１：１５０に希釈した１００μＬの一次抗体溶液を、各ウェルに加え、そしてプレートを３７℃で１時間インキュベートする。２００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した後、ＲＰＭＩ培地中２％  正常マウス血清、５％  ＮＧＳ、０．０１％  Ｔｗｅｅｎ２０で１：５０に希釈した１００μＬの二次抗体を加える。そのプレートを３７℃で１時間インキュベートし、そして２００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄する。ＫＰＬキット（ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）で提供される、等体積の各成分溶液を混合することによって調製した１００μＬのＴＭＢを各ウェルに加え、そしてプレートを室温で、暗所で３０分間インキュベートする。１００μＬの１ＮのＮａＣｌを加えることによって反応を停止し、そして６５０ｎｍのバックグラウンドで、プレートリーダーを用いて４５０ｎｍでプレートを読む。４パラメーター分析を用いて、吸光度の読み取り値に基づいて標準曲線および濃度を計算する。
【００７４】
実施例。図３は、ＨＩＶに感染した、ＩＬ−２およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）−刺激培養ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＨＩＶ複製に対する、５つの例示的な置換ペルヒドロピロロピリジンの効果を示す。
【００７５】
実施例。図１は、用量の関数として、ＨＩＶに感染した、ＩＬ−２およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）−刺激培養ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＨＩＶ複製に対する実施例１の効果を示す。全ての結果は、４連で実施した、３つの独立した実験を示す；全ドナー（ｎ）＝３；ビヒクル（１．２５μＭ  ＤＭＳＯ）と比較して、＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．０００５。
【００７６】
ＰＢＭＣを、５時間感染させ、そして培地で３回洗浄した。次いでＰＢＭＣを、２μＭ、１０μＭ、および２５μＭの実施例１で処理した。感染の７日後にＨＩＶｐ２４を測定した。実施例１は、２５μＭにおいてＨＩＶｐ２４を阻害した。ＰＢＭＣを、２μＭ、１０μＭ、および２５μＭの実施例１で３日間処理した。ＭＴＳアッセイを、処理の３日後に行い、そして４９０ｎｍで読み取りを行った。細胞は、２５μＭの最も高い投与量（ｄｏｓａｇｅ）でも生存可能であった。
【００７７】
実施例。「ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ」（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ３５８２）によって、細胞生存率をアッセイし、それはフェナジンメトサルフェートの存在下で、ＭＴＳ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムを、４９０−５００ｎｍに最大吸光度を有するホルマザン産物に還元する細胞の能力を測定することによって、細胞の代謝活性を評価する（４）。このアッセイに関して、増殖培地１ｍＬ中の１０６の刺激ＰＢＭＣをそれぞれ、１．５ｍＬの微量遠心分離チューブにアリコートに分け、そして２５μＭの最終濃度の置換ペルヒドロピロロピリジンで処理する。コントロールは、置換ペルヒドロピロロピリジンの溶媒である、０．５％の最終濃度のＤＭＳＯのみで処理する。処理後、１００μＬの増殖培地中１０５のＰＢＭＣを、コントロールおよび置換ペルヒドロピロロピリジンのそれぞれに関して４連で、９６穴平底プレートのウェルにそれぞれ播種する。プレートを、加湿インキュベーター中で５％ＣＯ２処理を用いて、３７℃で６日間インキュベートした後、２０μＬのＭＴＳ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ３５８２）を各ウェルに加え、そしてプレートを、加湿インキュベーター中５％ＣＯ２を用いて３７℃で４時間インキュベートし、その時間に発生する色を、プレートリーダーにおいて４９０ｎｍにおける吸光度で読む。
【００７８】
実施例。図２は、ＩＬ−２およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）−刺激培養ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の生存率に対する、５つの例示的な置換ペルヒドロピロロピリジンの効果を示す。
【００７９】
実施例。ＨＩＶの侵入。ＨＩＶ侵入分析に関して、刺激ＰＢＭＣを、所望の濃度の試験化合物およびＡＺＴ（コントロール）で１時間および４時間前処理する。次いでＰＢＭＣを、ＨＩＶ−Ｂａｌ（１０６細胞あたり２ｎｇ／ｍＬ）で５時間感染させる。次いでその細胞を培地で洗浄し、そしてトリプシンで処理して結合したウイルスを除去する。その細胞をさらに２回洗浄し、そしてＲＮＥａｓｙ  ＭｉｎｉＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、ＲＮＡをサンプルから単離する。室温で１５分間、ＤＮａｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ）で処理してＤＮＡの混入を除去し、続いて７０℃で１０分間ＤＮａｓｅＩを変性させる。ｑＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡスーパーミックスを用いて、ｃＤＮＡの合成を行う。このｃＤＮＡを用いて、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを行って目的の標的遺伝子を定量化する。ＨＩＶ転写物を増幅するために、以下のプライマーを使用する：ＨＩＶ  ＬＴＲ、順方向5’-TCAAGTGAGTGCCCGGTT（配列番号１）および逆方向5’-AGCTCCGGTTTCTCTTTCGCT（配列番号２）およびＧＡＰＤＨ−順方向5’-TGACTTCAACAGCGACACCCACT（配列番号３）および逆方向5’-ACCACCCTGTTGCTGTAGCCAAAT（配列番号４）。ＧＡＤＰＨを、内因性コントロールとして使用する。実施例１はＨＩＶの侵入に対して影響を有さなかった。
【００８０】
実施例。ＨＩＶ逆転写アッセイ。本明細書中で記載される化合物は、２ＬＴＲサークル（２ＬＴＲ  ｃｉｒｃｌｅ）を阻害する。刺激ＰＢＭＣを、ＨＩＶ−Ｂａｌ（１０６細胞あたり２ｎｇ／ｍＬ）で５時間感染させる。次いでＰＢＭＣを、感染後７２時間、所望の濃度の化合物およびＡＺＴ（コントロール）で処理する。次いでその細胞を培地で３回洗浄し、そしてＤＮｅａｓｙ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、ゲノムＤＮＡをサンプルから調製する。リアルタイムＰＣＲ分析のために、以下のプライマーを使用して２ＬＴＲサークル（逆転写の副産物）を増幅する：順方向5’-AACTAGGGAACCCACTGCTTAAG（配列番号５）および逆方向5’-CCCACAAATCAAGGATATCTTGTC（配列番号６）。ＡＺＴ（１．２５μＭ、逆転写酵素阻害剤）は、ＨＩＶ逆転写を有意に阻害する。図４は、実施例１が各濃度で逆転写を有意に阻害し、そして逆転写レベルで阻害を開始しているようである。全ての結果は、行った２つの独立した実験を示す；ビヒクル（１．２５μＭ  ＤＭＳＯ）と比較して、＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．０００５。
【００８１】
実施例。ＨＩＶゲノムのＤＮＡ組み込み。本明細書中で記載される化合物は、ウイルスの組み込みにおいて阻害を示す。刺激ＰＢＭＣを、ＨＩＶ−Ｂａｌ（１０６細胞あたり２ｎｇ／ｍＬ）で５時間感染させる。次いでＰＢＭＣを、感染後７２時間、所望の濃度の化合物およびＡＺＴ（コントロール）で処理する。次いでその細胞を培地で３回洗浄する。ＤＮｅａｓｙ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、ゲノムＤＮＡをサンプルから調製する。ＡＬＵ−ＰＣＲ、続いてリアルタイムＰＣＲを行って、組み込まれたウイルスゲノムを定量化する。ＨＩＶ転写物を増幅するために以下のプライマーを使用する：ＨＩＶ  ＬＴＲ、順方向5’-TCAAGTGAGTGCCCGGTT（配列番号１）および逆方向5’-AGCTCCGGTTTCTCTTTCGCT（配列番号２）、およびＧＡＰＤＨ−順方向5’-TGACTTCAACAGCGACACCCACT（配列番号３）および逆方向5’-ACCACCCTGTTGCTGTAGCCAAAT（配列番号４）。ＧＡＤＰＨを内因性コントロールとして使用する。ＡＺＴ（１．２５μＭ、逆転写酵素阻害剤）は、ＨＩＶウイルスの組み込みを有意に阻害する。図５は、実施例１が各濃度でウイルスの組み込みを有意に阻害することを示す。全ての結果は、行った２つの独立した実験を示す；ビヒクル（１．２５μＭ  ＤＭＳＯ）と比較して、＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．０００５。
【００８２】
実施例。ＨＩＶの転写。化合物は、ウイルス転写レベルで阻害する。刺激ＰＢＭＣを、ＨＩＶ−Ｂａｌ（１０６細胞あたり２ｎｇ／ｍＬ）で４〜６時間感染させる。次いでＰＢＭＣを、感染後７２時間、所望の濃度の化合物およびＡＺＴ（コントロール）で処理する。次いでその細胞を培地で３回洗浄し、そしてＲＮＥａｓｙ  ＭｉｎｉＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、ゲノムＲＮＡをサンプルから調製する。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを行って、成熟ウイルスの初期転写物（Ｒｅｖ）および後期転写物（ＧａｇおよびＥｎｖ）を検出する。以下のプライマーを使用して、ＨＩＶ転写物を増幅する：Ｒｅｖ、順方向5’-TCCTTGGCACTTATCTGGGACGAT（配列番号７）および逆方向5’-TCCCAGAAGTTCCACAATCCTCGT（配列番号８）；Ｅｎｖ、順方向5’-ACGAGGATTGTGGAACTTCTGGGA（配列番号９）および逆方向5’-TGGCATTGAGCAAGCTAACAGCAC（配列番号１０）；Ｇａｇ、順方向5’-AGAGAAGGCTTTCAGCCCAGAAGT（配列番号１１）および逆方向5’-TGCACTGGATGCACTCTATCCCAT（配列番号１２）；ＧＡＰＤＨ、順方向5’-TGACTTCAACAGCGACACCCACT（配列番号３）および逆方向5’-ACCACCCTGTTGCTGTAGCCAAAT（配列番号４）。ＧＡＤＰＨを、内因性コントロールとして使用する。ＡＺＴ（１．２５μＭ、逆転写酵素阻害剤）は、ＨＩＶの転写を有意に阻害する。図６は、実施例１が各濃度でウイルスの転写を有意に阻害することを示す。全ての結果は、行った２つの独立した実験を示す；ビヒクル（１．２５μＭ  ＤＭＳＯ）と比較して、＊＊＊＝ｐ＜０．０００５。
【００８３】
実施例。抗ＢＶＤＶ効力に関するアッセイ。細胞：使い捨て細胞培養実験器具に単層として維持したウシ鼻甲介（ＢＴ）細胞を、抗ウイルス効力試験のために使用する。試験の前に、宿主細胞培養物を、９６穴細胞培養プレートにまき、そして播種の約４８時間後に使用する。８０〜９０％コンフルエンスの単層に達するまで細胞を培養する。増殖培地（ＧＭ）および維持培地（ＭＭ）は、Ｌ−グルタミン（ＡＴＣＣ＃３０−２００２）、１０％  ウマ血清、および培地中１００ユニットのペニシリンおよび１００μｇのストレプトマイシンの最終濃度でペニシリン／ストレプトマイシン（１ｍＬあたり１０，０００ユニットのペニシリンおよび１０，０００μｇのストレプトマイシン、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＃１５１４０−１２２または同様のもの）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を含む。
【００８４】
実施例。ＢＳＬＩ高力価ウイルスストック由来のウシウイルス性下痢症ウイルス株ＮＡＤＬを使用する。使用の前に、ストックウイルスのアリコートを−７０℃の冷凍庫から取り出し、そして解凍する。そのＢＶＤＶを、維持培地（ＭＭ）に希釈して、０．１の感染多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）（ＭＯＩ）を得る。
【００８５】
実施例。細胞変性（ＣＰＥ）アッセイ。ＣＰＥは、その増殖の結果として、ＢＶＤＶによって誘発される、ＢＴ組織培養における変性性変化を指す。ＢＴ細胞培養物を、ＰＢＳで洗浄し、そしてＭＭの１００μＬのアリコートを細胞に加え、そしてＣＯ２インキュベーターで２時間インキュベートする。インキュベートした後、ＭＭを除去する；細胞をＰＢＳで再び洗浄し、そして１００μＬの異なる濃度の試験化合物で覆う。そのプレートをＣＯ２インキュベーターで４８から７２時間インキュベートする。インキュベーションを終了してから、そのプレートを、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物、黄色テトラゾール（ＭＴＴ）アッセイを用いて、試験化合物が誘導するＣＰＥの阻害に関して評価する。このアッセイはＭＴＴを紫色のホルマザン色素に還元する酵素の活性を測定する、比色アッセイである。ＣＰＥを、倒立化合物顕微鏡（Ｉｎｖｅｒｔｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）を用いて確認する。図７は、ＢＶＤＶに対する実施例１の効力、およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。図８は、ＢＶＤＶに対する実施例４の効力、およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。図９は、ＢＶＤＶに対する実施例１０の効力およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。図１０は、ＢＶＤＶに対する実施例１０１の効力およびＢＴ細胞における明らかな細胞毒性の欠如を示す。以下の表において例示的なデータを示す。
【表１】
0006018206.tif 000015
【００８６】
ＣＰＥアッセイの前に、試験化合物を試験して、最も高い非細胞毒性濃度を決定する。細胞培養物をＰＢＳで洗浄し、１００μＬのＭＭで覆い、そして２時間インキュベートする。インキュベーション後、ＭＭを、異なる濃度の試験化合物のアリコート１００μＬで置き換える。細胞毒性試験は、ＤＭＳＯコントロールを含む（０．５％を超えない）。そのプレートをＣＯ２インキュベーターで４８から７２時間インキュベートする。ＭＴＴアッセイを用いて毒性を評価する。試験およびアッセイを、２連で２回行う。有意差を示す結果が、さらに２回繰り返される。
【００８７】
方法の実施例。試験化合物のＰＫパラメーターおよび動物の耐容性の評価のために、以下のプロトコールを使用する。そのプロトコールは、腹腔内（ＩＰ）注射によって１日１回、５ｍＬ／ｋｇの体積で投与される、それぞれの化合物についての３つの漸増投与レベルを含む。１４日間の処置過程にわたって、耐容性を決定する。試験動物は、５匹のマウスの３群を含む。５ｍＬ／ｋｇのビヒクルを注射する、５匹のマウスの１つのコントロール群も含む。そのマウス群は、ネズミＫＭＴマウスＴＭ（ｍｕｒｉｎｅ  ＫＭＴ  ｍｏｕｓｅＴＭ）などの、≧１２．０ｇの体重の範囲の、オスおよびメス両方の、３ヶ月齢のマウスを含む。８日目の朝、置換ペルヒドロピロロピリジンの血清濃度を測定するために、該化合物投与の直前（７日目の投与の２４時間後のトラフサンプル（ｔｒｏｕｇｈ  ｓａｍｐｌｅ））、および１５日目の朝（最終１４日目の投与の２４時間後のトラフサンプル）に、動物の中心尾動脈から血液サンプルを採取する。約１００μＬの容量をチューブに採取し、２〜８℃で凝固させ、遠心分離し、そして血清を血塊ペレットの上から取り出し、そして濃度測定の準備ができるまで−８０℃で凍結保存する。
【００８８】
実施例。ＭＴＳ（細胞生存率）アッセイ。試験化合物を、従来の細胞毒性アッセイにおいても評価する。非感染ＰＢＭＣおよび刺激ＰＢＭＣを、２００μＬの体積の培地中２００，０００細胞で、４連で、５％ＣＯ２、加湿インキュベーター中、３７℃で３日間９６穴平底プレートにまく。２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）をプレートの各ウェルに加え、そしてそのプレートを、５％ＣＯ２、加湿インキュベーターにおいて３７℃で３時間インキュベートする。次いでそのプレートを、４９０ｎｍにおいてプレートリーダーで読む。次いでその読み取り値を、コントロールと比較した生存率のパーセンテージとして測定する。それぞれの場合において、試験化合物は、５μＭで細胞毒性を示さなかった。細胞毒性の欠如は、ウイルス力価の低減における試験化合物の活性は、ウイルス性疾患に特異的であるという結論を支持することが認識される。
【００８９】
実施例。変異原性に関するマイクロエイムス試験。本明細書中で記載される化合物は、変異原性ではない。本明細書中で記載され、そしてこのアッセイで試験される化合物は、ラット肝臓ミクロソームにおいて、試験した最も高い濃度（５００μｇ／プレートの高さ）で変異原性を示さなかった。
【００９０】
実施例。哺乳類赤血球小核試験。マウス骨髄において小核多染性赤血球を誘導する能力によって測定される、本明細書中で記載される化合物の染色体異常誘発能力を評価した。報告によれば、オスＨｓｄ：ＩＣＲ（ＣＤ−１（登録商標））マウスなどのマウスが、規制の毒性試験および変異原性試験のための標準的な、および認められたげっ歯類種である。また報告によれば、経口の経管栄養および腹腔内投与経路を、哺乳類骨髄赤血球小核試験において、日常的に使用し、そして使用のために広く認められている。動物を、コンピューターが生成する無作為化プログラムを用いて、体重に基づいて層別化された群番号１から１０までに無作為化する。試験化合物およびネガティブコントロール（ビヒクル）を、腹腔内注射によって１回投与する。ポジティブコントロール（シクロホスファミド一水和物）を、経口の経管栄養によって１回投与する。毒性の徴候をいくらか誘発するが、投与後３日以内に死亡を誘発しない用量である最大耐量（ＭＴＤ）を投与する。用量の投与の約２４時間後（群１〜９における最初の３匹のマウス）および４８時間後（群１０のマウスを含む残りのマウス）、二酸化炭素窒息によって、動物を安楽死させる。安楽死の直後、大腿骨を露出し、膝のすぐ上を切断し、そして骨髄を、ウシ胎仔血清を含むシリンジに吸引し、そして処理する。典型的には、少なくとも２枚の骨髄スライドを、各動物から調製し、空気乾燥し、固定し、染色し、そして点数をつける。そのスライドを、メイ・グリュンワルド・ギムザ染色によって染色し、そして点数化過程に関与しない個人によってコード化され得る（盲検）。光学顕微鏡および中程度の倍率を用いて、細胞がよく広がり、そして染色されるように、許容可能な質の領域を選択する。多染性赤血球（ＰＣＥ；２０００／動物；１０，０００／用量群）を、小核の存在に関して点数化する。２０００ＰＣＥ／動物または１０，０００ＰＣＥ／群の評価が不可能である場合、その結果の評価は、数えた細胞の実際の数に基づき得る。全赤血球（ＥＣ）に対する多染性赤血球の割合も、１０００赤血球あたりで記録する（ＰＣＥ／ＥＣ比）。試験化合物処置動物における、全赤血球に対する多染性赤血球の割合は、コントロール値の２０％未満であってはならない。骨髄毒性の指標として、赤血球生成に対する試験化合物の効果を定量化するために、全赤血球に対する多染性赤血球の割合を、各動物および処置群に関して評価する。１００〜３００ｍｇ／ｋｇで試験した、本明細書中で記載される化合物は、染色体異常誘発性ではなく、かつ骨髄において小核多染性赤血球（ＭＰＣＥ）の誘導を引き起こさない。シクロホスファミド一水和物（ポジティブコントロール）は、４８時間の時点で小核多染性赤血球の発生の有意な増加（ｐ≦０．０５、Ｋａｓｔｅｎｂａｕｍ−Ｂｏｗｍａｎ  Ｔａｂｌｅｓ）およびいくらかの細胞毒性を誘発する。これらの結果は、骨髄赤血球生成細胞は、シクロホスファミド一水和物に曝露されること、および公知の染色体異常誘発物質であるこの化合物は、小核の形成を誘導し、かつ赤血球生成を阻害することを示す。
【００９１】
化合物の実施例１。以下の化合物が本明細書中で記載される：
【表２−１】
0006018206.tif 000016
【表２−２】
0006018206.tif 000017
【表２−３】
0006018206.tif 000018
【００９２】
化合物の実施例２。以下の化合物が本明細書中で記載される：
【表３−１】
0006018206.tif 000019
【表３−２】
0006018206.tif 000020
【表３−３】
0006018206.tif 000021
以下の出版物、および本明細書中で引用されるさらなる出版物はそれぞれ、本明細書中で参考文献に組み込まれる。
【表４】
0006018206.tif 000022
【図１】
0006018206.tif 000033
【図２】
0006018206.tif 000034
【図３】
0006018206.tif 000035
【図４】
0006018206.tif 000036
【図５】
0006018206.tif 000037
【図６Ａ】
0006018206.tif 000038
【図６Ｂ】
0006018206.tif 000039
【図６Ｃ】
0006018206.tif 000040
【図７】
0006018206.tif 000041
【図８】
0006018206.tif 000042
【図９】
0006018206.tif 000043
【図１０】
0006018206.tif 000044
【配列表】
0006018206000001.app