(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己免疫疾患又は炎症疾患を処置するための、ＣＤ３７に特異的に結合する精製ヒト化抗体又はその抗原結合性断片を含む組成物であって、前記ヒト化抗体またはその断片は、以下：
（ａ）配列番号４に示される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）ＣＤＲ１配列、配列番号５に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号６に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号２８に示される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ＣＤＲ１配列、配列番号２９に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号３０に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｂ）配列番号１０に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号１１に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号１２に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号３４に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号３５に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号３６に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｃ）配列番号１３に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号１４に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号１５に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号３７に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号４０に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号３９に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｄ）配列番号１６に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号１７に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号１８に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号４１に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号４２に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号４３に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｅ）配列番号１９に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号２０に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号２１に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号４４に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号４７に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号４６に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；並びに
（ｆ）配列番号２２に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号２３に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号２４に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号４８に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号５１に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号５０に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列
からなる群より選択されるポリペプチド配列を含む、組成物。
【請求項２】
非癌性Ｂ細胞を枯渇させるための、ＣＤ３７に特異的に結合する精製ヒト化抗体又はその抗原結合性断片を含む組成物であって、前記ヒト化抗体またはその断片は、以下：
（ａ）配列番号４に示される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）ＣＤＲ１配列、配列番号５に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号６に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号２８に示される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ＣＤＲ１配列、配列番号２９に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号３０に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｂ）配列番号１０に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号１１に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号１２に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号３４に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号３５に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号３６に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｃ）配列番号１３に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号１４に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号１５に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号３７に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号４０に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号３９に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｄ）配列番号１６に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号１７に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号１８に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号４１に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号４２に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号４３に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；
（ｅ）配列番号１９に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号２０に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号２１に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号に４４示すＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号４７に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号４６に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列；並びに
（ｆ）配列番号２２に示されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、配列番号２３に示されるＶＨ  ＣＤＲ２配列及び配列番号２４に示されるＶＨ  ＣＤＲ３配列と、配列番号４８に示されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、配列番号５１に示されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及び配列番号５０に示されるＶＬ  ＣＤＲ３配列
の重鎖及び軽鎖の可変ドメインＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む、組成物。
【請求項３】
前記抗体又はその抗原結合性断片は、表面再構成されたものである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＣＤ３７およびマカクＣＤ３７に特異的に結合する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗体又は断片が以下のポリペプチド配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物：
（ａ）配列番号５７の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号７４の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列；
（ｂ）配列番号５８の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号７４の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列；
（ｃ）配列番号６３の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号７９の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列；
（ｄ）配列番号６５の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号８１の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列；
（ｅ）配列番号６７の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号８３の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列；
（ｆ）配列番号６９の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号８５の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列；又は
（ｇ）配列番号７１の重鎖可変ドメインポリペプチド配列及び配列番号８７の軽鎖可変ドメインポリペプチド配列。
【請求項６】
前記抗体又は抗原結合性断片が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、リンカー（Ｌ）を介して細胞毒性薬剤（Ｃ）に連結して免疫複合体を形成している、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記免疫複合体が２〜６個の細胞毒性薬剤（Ｃ）を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノアート（ＳＰＤＢ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノアート（スルホ−ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾアート（ＳＩＡＢ）；又はＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）である、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記細胞毒性薬剤がメイタンシノイドである、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
前記細胞毒性薬剤が、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）又はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ４）である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗体又は抗原結合性断片が、配列番号４、５及び６に示されるＣＤＲ配列を含む可変重鎖、並びに配列番号２８、２９及び３０のＣＤＲ配列を含む可変軽鎖を含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号５７のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
（Ｌ）が、ＳＭＣＣである、請求項１２又は１３に記載の組成物。
【請求項１５】
（Ｃ）が、ＤＭ１である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
（Ｃ）が、ＤＭ４である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記免疫複合体が、配列番号５７のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチド、リンカーＳＭＣＣ、並びに、細胞毒性薬剤ＤＭ１を含む抗体または抗原結合性断片を含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号１３、１４及び１５に示されるＣＤＲ配列を含む可変重鎖、並びに配列番号３７、４０及び３９に示されるＣＤＲ配列を含む可変軽鎖を含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号６５のポリペプチド及び配列番号８１のポリペプチドを含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
（Ｌ）が、ＳＭＣＣである、請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
（Ｃ）が、ＤＭ１である、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
（Ｃ）が、ＤＭ４である、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記免疫複合体が、配列番号６５のポリペプチド及び配列番号８１のポリペプチド、リンカーＳＭＣＣ、並びに、細胞毒性薬剤ＤＭ１を含む抗体又は抗原結合性断片を含む、請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記自己免疫疾患又は炎症疾患が、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、特発性炎症性筋疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、グレーブス病、皮膚筋炎、多発性筋炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、胃炎、橋本甲状腺炎、ぜん息、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、ぶどう膜炎、糸球体腎炎、湿疹、アテローム性動脈硬化症、白血球接着不全、レイノー症候群、シェーグレン症候群、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、免疫介在性血小板減少症、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、アトピー性皮膚炎、尋常性天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、赤芽球ろう、混合性クリオグロブリン血症、強直性脊椎炎、Ｃ型肝炎関連クリオグロブリン血症性血管炎、慢性局所脳炎、水疱性類天疱瘡、血友病Ａ、膜性増殖性糸球体腎炎、成人型及び若年性皮膚筋炎、成人型多発性筋炎、慢性じんま疹、原発性胆汁性肝硬変、視神経脊髄炎、グレーブス甲状腺異常症、水疱性類天疱瘡、膜性増殖性糸球体腎炎、チャーグ・ストラウス症候群、若年性糖尿病、溶血性貧血、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群及び糸球体腎炎、皮膚筋炎、ＡＮＣＡ、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、実質臓器移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫性肝炎、リンパ性間質性肺炎、ＨＩＶ、閉塞性細気管支炎（非移植片）、ギラン・バレー症候群、大型血管炎、巨細胞（高安）動脈炎、中型血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、ＨＩＶ、又はヘルペスウイルス関連疾患である、請求項１、又は３〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記自己免疫疾患又は炎症疾患が、多発性硬化症、真性糖尿病、又は関節リウマチである、請求項２４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広義には、ＣＤ３７に結合する抗体、その抗原結合性断片、ポリペプチド、及び免疫複合体、並びに自己免疫疾患及び炎症疾患等の疾患を処置するためのそのようなＣＤ３７結合性分子の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＰ５２−４０、テトラスパニン−２６、又はＴＳＰＡＮ２６としても知られる白血球抗原ＣＤ３７（「ＣＤ３７」）はテトラスパニンスーパーファミリーの膜貫通タンパク質である（（非特許文献１（Maecker  et  al.,  1997  FASEB  J.  11:428-442））。これは、４つの膜貫通ドメインを有する強くグリコシル化されたタンパク質であり、プレＢ細胞から末梢成熟Ｂ細胞への段階中にＢ細胞上で発現するが、報告によれば形質細胞への最終分化後には存在しない（非特許文献２（Link  et  al.,  1987,  J  Pathol.  152:12-21））。ＣＤ３７抗原はＴ細胞、骨髄性細胞、及び顆粒球上では弱くしか発現しない（非特許文献３（Schwartz-Albiez  et  al.  1988,  J.  Immunol.,  140(3)905-914））。しかし、ＣＤ３７は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）で見出されるような悪性Ｂ細胞上でも発現している（非特許文献４（Moore  et  al.  1986,  J  Immunol.  137(9):3013-8））。
【０００３】
ＣＤ３７の正確な生理学的役割は不明であるが、ＣＤ３７欠損マウスの研究から、免疫調節機能が示唆されている。ＣＤ３７発現欠損マウスは正常な発生をするが、（非特許文献５（Knobeloch  et  al.  2000,  Mol  Cell  Biol.,  20(15):5363-9））、Ｃ５７／Ｂｌ６が背景である場合、ＣＤ３７−／−Ｔ細胞は過剰増殖性であり（非特許文献６（van  Spriel  et  al.,  J  Immunol.  172,  2953  (2004)））、ＣＤ３７−／−樹状細胞（ＤＣ）は抗原提示の増大を示し（非特許文献７（Sheng  et  al.,  Eur  J  Immunol.  39,  50  (2009)））、ＣＤ３７−／−マクロファージは、デクチン−１誘発ＩＬ−６生産の増大を示す（非特許文献８（Meyer-Wentrup  et  al.,  J  Immunol.  178,  154  (2007)））。ＣＤ３７欠損Ｃ５７／Ｂｌ６マウスはまた、野生型マウスよりも有意に高いレベルのＩｇＡを含む（非特許文献９（van  Spriel  et  al.,  PLoS  Pathol.  5,  e1000338  (2009)）及び非特許文献１０（Rops  et  al.,  Am  J  Pathol.  176,  2188  (2010)））。これらの結果は全て、免疫系におけるＣＤ３７の全般的な調節的役割を示唆している。興味深いことに、ヒトＴ細胞上で抗体によりＣＤ３７抗原を架橋すると、ＣＤ３刺激により誘導されるＴ細胞増殖が阻害される（非特許文献６（van  Spriel  et  al.,  J  Immunol.  172,  2953  (2004)））。
【０００４】
抗体は自己免疫疾患を含むヒト疾患を処置する有望な方法であることが明らかになりつつある。現在、リツキシマブと呼ばれる抗ＣＤ２０抗体が関節リウマチ（ＲＡ）の処置に承認されている（非特許文献１１（Edwards  JC  et  al.  2006,  Nat  Rev  Immunol.  6:  119））。リツキシマブは、少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニストに対して不適切な反応を示した中程度〜重度の活性ＲＡに罹患した成人患者における徴候及び症状を軽減するために米国でメトトレキサート（ＭＴＸ）と併用されている。多くの研究が、Ｂ細胞及び自己抗体が疾患の病態生理に関与すると考えられるＲＡ等の種々の非悪性の自己免疫障害又は炎症障害におけるリツキシマブの使用に取り組んでいる（非特許文献１２（Edwards  et  al.,  Biochem  Soc.  Trans.  30:824-828  (2002)））。抗ＣＤ２０抗体を用いたＣＤ２０の標的化は、複数の自己免疫疾患又は炎症疾患の徴候及び症状を軽減し得ることが報告されており、そのような疾患としては、例えば、ＲＡ（非特許文献１３（Leandro  et  al.,  Ann.  Rheum.  Dis.  61:883-888  (2002)）；非特許文献１４（Edwards  et  al.,  Arthritis  Rheum.,  46  (Suppl.  9):  S46  (2002)）；非特許文献１５（Stahl  et  al.,  Ann.  Rheum.  Dis.,  62  (Suppl.  1):  OP004  (2003)）；非特許文献１６（Emery  et  al.,  Arthritis  Rheum.  48(9):  S439  (2003)））、ループス（非特許文献１７（Eisenberg,  Arthritis.  Res.  Ther.  5:157-159  (2003)）；非特許文献１８（Leandro  et  al.  Arthritis  Rheum.  46:  2673-2677  (2002)）；非特許文献１９（Gorman  et  al.,  Lupus,  13:  312-316  (2004)））、免疫性血小板減少性紫斑病（非特許文献２０（D'Arena  et  al.,  Leuk.  Lymphoma  44:561-562  (2003)）；非特許文献２１（Stasi  et  al.,  Blood,  98:  952-957  (2001)）；非特許文献２２（Saleh  et  al.,  Semin.  Oncol.,  27  (Supp  12):99-103  (2000)）；非特許文献２３（Zaja  et  al.,  Haematologica,  87:189-195  (2002)）；非特許文献２４（Ratanatharathorn  et  al.,  Ann.  Int.  Med.,  133:275-279  (2000)））、赤芽球ろう（非特許文献２５（Auner  et  al.,  Br.  J.  Haematol.,  116:725-728  (2002)））；自己免疫性貧血（前述のZaja  et  al.,  (Haematologica  87:336  (2002)に正誤表あり）、寒冷凝集素病（非特許文献２６（Layios  et  al.,  Leukemia,  15:187-8  (2001)）；非特許文献２７（Berentsen  et  al.,  Blood,  103:  2925-2928  (2004)）；非特許文献２８（Berentsen  et  al.,  Br.  J.  Haematol.,  115:79-83  (2001)）；非特許文献２９（Bauduer,  Br.  J.  Haematol.,  112:1083-1090  (2001)）；非特許文献３０（Zaja  et  al.,  Br.  J.  Haematol.,  115:232-233  (2001)））、重度のＢ型インスリン抵抗性症候群（非特許文献３１（Coll  et  al.,  N.  Engl.  J.  Med.,  350:310-311  (2004)）、混合性クリオグロブリン血症（非特許文献３２（DeVita  et  al.,  Arthritis  Rheum.  46  Suppl.  9:S206/S469  (2002)））、重症筋無力症（非特許文献３３（Zaja  et  al.,  Neurology,  55:1062-1063  (2000)）；非特許文献３４（Wylam  et  al.,  J.  Pediatr.,  143:674-677  (2003)））、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症（非特許文献３５（Specks  et  al.,  Arthritis  &  Rheumatism  44:2836-2840  (2001)））、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、難治性尋常性天疱瘡（非特許文献３６（Dupuy  et  al.,  Arch  Dermatol.,  140:91-96  (2004)））、皮膚筋炎（非特許文献３７（Levine,  Arthritis  Rheum.,  46  (Suppl.  9):S1299  (2002)））、シェーグレン症候群（非特許文献３８（Somer  et  al.,  Arthritis  &  Rheumatism,  49:394-398  (2003)））、活性ＩＩ型混合性クリオグロブリン血症（非特許文献３９（Zaja  et  al.,  Blood,  101:3827-3834  (2003)））、尋常性天疱瘡（非特許文献４０（Dupay  et  al.,  Arch.  Dermatol.,  140:91-95  (2004)））、自己免疫性神経障害（非特許文献４１（Pestronk  et  al.,  J.  Neurol.  Neurosurg.  Psychiatry  74:485-489  (2003)））、傍腫瘍性オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（非特許文献４２（Pranzatelli  et  al.  Neurology  60  (Suppl.  1)  PO5.128:A395  (2003)））、及び再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）（非特許文献４３（Cross  et  al.（要約）"Preliminary  Results  from  a  Phase  II  Trial  of  Rituximab  in  MS"  Eighth  Annual  Meeting  of  the  Americas  Committees  for  Research  and  Treatment  in  Multiple  Sclerosis,  20-21  (2003)））が含まれる。
【０００５】
モデル動物では、ＣＤ２０等のＢ細胞抗原に対する抗体を用いたＢ細胞枯渇は複数の自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ；多発性硬化症モデルマウス）、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、及び関節リウマチ（ＲＡ）を阻害する又は回復させることが示されている。リツキシマブはモデル動物及び患者においてインビボで悪性及び正常の両方のＢ細胞を枯渇させることが示されている（非特許文献４４（Maloney  DG  et  al,  Blood.  1994;84(8):2457-66）；非特許文献４５（Reff  ME,  et  al.  Blood.  1994;83(2):435-45）；非特許文献４６（Schrｏｒder  C,  et  al.  Transpl  Immunol.  2003;12(1):19-28））。リツキシマブはインビトロ実験でヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）に由来する正常Ｂ細胞も枯渇させることができる（非特許文献４７（Vugmeyster  Y,  et  al,  Cytometry  A.  2003;52(2):101-9）；非特許文献４８（Vugmeyster  Y  and  Howell  K.Int  Immunopharmacol.  2004;4(8):1117-24））。
【０００６】
抗ＣＤ５２キメラＩｇＧ１であるカンパス−１Ｈ（アルムツズマブ）は全てのリンパ球上で強く発現しているＣＤ５２抗原に結合する（非特許文献４９（Ginaldi  L,  et  al,Leuk  Res.  1998  Feb;22(2):185-91）；非特許文献５０（Hale  G,  et  al,  Tissue  Antigens.  1990  Mar;35(3):118-27））。カンパス−１Ｈは、患者体内で悪性リンパ球を枯渇させるために使用され、慢性リンパ球性白血病の処置に承認されている。カンパス−１Ｈは更に、多発性硬化症の処置における有効性も示されており、現在第ＩＩＩ相臨床試験中である（非特許文献５１（N  Engl  J  Med  2008;  359:1786-1801）;  ClinicalTrials.gov  NCT00530348  &  NCT00548405）。カンパス−１Ｈはインビトロで正常リンパ球を枯渇させることも示されている（非特許文献５２（Hale  G,  et  al.  Blood.  1983  Oct;62(4):873-82）；非特許文献５３（Waldmann  H  and  Hale  G  Philos  Trans  R  Soc  Lond  B  Biol  Sci.  2005  Sep  29;360(1461):1707-11））。
【０００７】
ＣＤ３７結合性薬剤はＢ細胞悪性腫瘍の潜在的治療薬としても試験されている。イマージェント・バイオソリューションズ社（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ  Ｂｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）（以前はトルビオン・ファーマシューティカルズ社（Ｔｒｕｂｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））はＣＤ３７結合性薬剤ＳＭＩＰ−０１６及びＴＲＵ−０１６を開発した（非特許文献５４（Zhao  et  al.,  2007,  Blood,  110:2569-2577））。ＳＭＩＰ−０１６は、ハイブリドーマに由来する可変領域及び操作されたヒト定常領域を含む単鎖ポリペプチドである。ＴＲＵ−０１６は、抗ＣＤ３７  ＳＭＩＰタンパク質のヒト化されたものである（例えば、特許文献１（米国特許出願公開第２００７／００５９３０６号）参照）。ＴＲＵ−０１６は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の処置について臨床試験中である。ベーリンガーインゲルハイム社も特許文献２（国際公開第２００９／０１９３１２号）でＣＤ３７結合性薬剤を開示している。しかし、これらの結合性薬剤のいずれもＣＤＣ活性については記載されておらず、架橋剤の非存在下におけるインビトロでのアポトーシス促進活性も記載されていない。
【０００８】
２つの別個の治験で放射標識抗ＣＤ３７抗体ＭＢ−１を用いて放射免疫療法（ＲＩＴ）が試みられた。治療的用量の１３１Ｉ−ＭＢ−１が再発ＮＨＬ患者６名に投与された（非特許文献５５（Press  et  al.  1989  J  Clin  Oncol.  7(8):1027-38）；非特許文献５６（Press  at  el.  1993,  N  Engl  J  Med.  329(17):1219-24））。４〜３１ヶ月の期間で、患者６名全員が完全寛解（ＣＲ）を達成した。別の治験では、１３１Ｉ−ＭＢ−１が再発ＮＨＬ患者１０名に投与された（非特許文献５７（Kaminski  et  al.  1992  J  Clin  Oncol.  10(11):1696-711））。２〜６ヶ月の期間中に合計４名の患者が反応したが、ＣＲが報告されたのは１名だけであった。しかし、重要な非標的器官の放射線被爆を懸念させる放射標識の好ましくない体内分布のため、全ての患者が処置できたわけではない。実際、これらの治験において重度の骨髄抑制及び心肺毒性を含むＲＩＴに関連する毒性が観察された。これらの臨床データは、抗ＣＤ３７放射免疫複合体が有効であり得ることを示唆しているが、これらの治療は投与が煩雑であり、高線量の放射線に付随するリスクのため、再発時にＲＩＴ後の患者をＲＩＴで再度処置することができない。
ＲＩＴの制限を克服するために、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）とも呼ばれる抗体−細胞毒性薬剤コンジュゲート（ＡＣＣ）が開発された。これらは、抗体により認識されるタンパク質を発現している細胞への細胞毒性薬物の特異的送達が可能な化学的リンカーを介して抗体に共有結合的に連結された細胞毒性薬剤を含む免疫複合体である。しかし、ほとんど内部移行しないタンパク質はそのような治療薬の好ましい標的とはみなされない。ＣＤ３７は構造的にＣＤ２０に類似しており、どちらの抗原も４個の膜貫通ドメインを含むが、ＣＤ２０はテトラスパニンファミリーの一員ではない（Tedder  et  al.  1989,  J.  Immun.  142:  2560-2568）。ＣＤ３７及びＣＤ２０を含む複数のＢ細胞抗原に対する抗体が、エンドサイトーシス及び分解を受ける能力について研究されている（非特許文献５８（Press  et  al.  1989,  Cancer  Res.  49(17):4906-12）及び非特許文献５９（Press  et  al.  1994,  Blood.  83(5):1390-7））。抗ＣＤ３７抗体ＭＢ−１は、Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞において、インビトロで、細胞表面に保持され、ゆっくりと内部移行する。ＭＢ−１抗体は更に、インビトロでＮＨＬ患者細胞中でのエンドサイトーシス及び細胞内代謝の速度が遅い。抗ＣＤ２０抗体１Ｆ５でも同様な結果が得られており、これも主にリンパ腫細胞表面に保持され、ほとんど内部移行しない。ＣＤ２０抗体のＡＤＣが過去に研究されているが、特に非ジスルフィド又は酸に安定なリンカーを用いた場合、有意に強力な効力は示されていない（例えば非特許文献６０（Polson  et  al.,  2009,  Cancer  Res.,  69(6):2358-2364）参照）。これらの知見に鑑み、ＣＤ３７は抗体−薬物コンジュゲートの好ましい標的と見なされていなかった。
癌の処置におけるこれらの役割が研究されてきたが、自己免疫疾患、炎症疾患、又は免疫系のその他の障害に関わる細胞に対する抗体、抗体誘導体、又は放射免疫複合体等のＣＤ３７特異的治療薬の潜在的効果は十分に理解されていない。更に、上記化合物のいずれも、これらの種類の疾患の発現又は進行に関与する標的細胞の枯渇を誘導することは示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００７／００５９３０６号明細書
【特許文献２】国際公開第２００９／０１９３１２号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Maecker  et  al.,  1997  FASEB  J.  11:428-442
【非特許文献２】Link  et  al.,  1987,  J  Pathol.  152:12-21
【非特許文献３】Schwartz-Albiez  et  al.  1988,  J.  Immunol.,  140(3)905-914
【非特許文献４】Moore  et  al.  1986,  J  Immunol.  137(9):3013-8
【非特許文献５】Knobeloch  et  al.  2000,  Mol  Cell  Biol.,  20(15):5363-9
【非特許文献６】van  Spriel  et  al.,  J  Immunol.  172,  2953  (2004)
【非特許文献７】Sheng  et  al.,  Eur  J  Immunol.  39,  50  (2009)
【非特許文献８】Meyer-Wentrup  et  al.,  J  Immunol.  178,  154  (2007)
【非特許文献９】van  Spriel  et  al.,  PLoS  Pathol.  5,  e1000338  (2009)
【非特許文献１０】Rops  et  al.,  Am  J  Pathol.  176,  2188  (2010)
【非特許文献１１】Edwards  JC  et  al.  2006,  Nat  Rev  Immunol.  6:  119
【非特許文献１２】Edwards  et  al.,  Biochem  Soc.  Trans.  30:824-828  (2002)
【非特許文献１３】Leandro  et  al.,  Ann.  Rheum.  Dis.  61:883-888  (2002)
【非特許文献１４】Edwards  et  al.,  Arthritis  Rheum.,  46  (Suppl.  9):  S46  (2002)
【非特許文献１５】Stahl  et  al.,  Ann.  Rheum.  Dis.,  62  (Suppl.  1):  OP004  (2003)
【非特許文献１６】Emery  et  al.,  Arthritis  Rheum.  48(9):  S439  (2003)
【非特許文献１７】Eisenberg,  Arthritis.  Res.  Ther.  5:157-159  (2003)
【非特許文献１８】Leandro  et  al.  Arthritis  Rheum.  46:  2673-2677  (2002)
【非特許文献１９】Gorman  et  al.,  Lupus,  13:  312-316  (2004)
【非特許文献２０】D'Arena  et  al.,  Leuk.  Lymphoma  44:561-562  (2003)
【非特許文献２１】Stasi  et  al.,  Blood,  98:  952-957  (2001)
【非特許文献２２】Saleh  et  al.,  Semin.  Oncol.,  27  (Supp  12):99-103  (2000)
【非特許文献２３】Zaja  et  al.,  Haematologica,  87:189-195  (2002)
【非特許文献２４】Ratanatharathorn  et  al.,  Ann.  Int.  Med.,  133:275-279  (2000)
【非特許文献２５】Auner  et  al.,  Br.  J.  Haematol.,  116:725-728  (2002)
【非特許文献２６】Layios  et  al.,  Leukemia,  15:187-8  (2001)
【非特許文献２７】Berentsen  et  al.,  Blood,  103:  2925-2928  (2004)
【非特許文献２８】Berentsen  et  al.,  Br.  J.  Haematol.,  115:79-83  (2001)
【非特許文献２９】Bauduer,  Br.  J.  Haematol.,  112:1083-1090  (2001)
【非特許文献３０】Zaja  et  al.,  Br.  J.  Haematol.,  115:232-233  (2001)
【非特許文献３１】Coll  et  al.,  N.  Engl.  J.  Med.,  350:310-311  (2004)
【非特許文献３２】DeVita  et  al.,  Arthritis  Rheum.  46  Suppl.  9:S206/S469  (2002)
【非特許文献３３】Zaja  et  al.,  Neurology,  55:1062-1063  (2000)
【非特許文献３４】Wylam  et  al.,  J.  Pediatr.,  143:674-677  (2003)
【非特許文献３５】Specks  et  al.,  Arthritis  &  Rheumatism  44:2836-2840  (2001)
【非特許文献３６】Dupuy  et  al.,  Arch  Dermatol.,  140:91-96  (2004)
【非特許文献３７】Levine,  Arthritis  Rheum.,  46  (Suppl.  9):S1299  (2002)
【非特許文献３８】Somer  et  al.,  Arthritis  &  Rheumatism,  49:394-398  (2003)
【非特許文献３９】Zaja  et  al.,  Blood,  101:3827-3834  (2003)
【非特許文献４０】Dupay  et  al.,  Arch.  Dermatol.,  140:91-95  (2004)
【非特許文献４１】Pestronk  et  al.,  J.  Neurol.  Neurosurg.  Psychiatry  74:485-489  (2003)
【非特許文献４２】Pranzatelli  et  al.  Neurology  60  (Suppl.  1)  PO5.128:A395  (2003)
【非特許文献４３】Cross  et  al.（要約）"Preliminary  Results  from  a  Phase  II  Trial  of  Rituximab  in  MS"  Eighth  Annual  Meeting  of  the  Americas  Committees  for  Research  and  Treatment  in  Multiple  Sclerosis,  20-21  (2003)
【非特許文献４４】Maloney  DG  et  al,  Blood.  1994;84(8):2457-66
【非特許文献４５】Reff  ME,  et  al.  Blood.  1994;83(2):435-45
【非特許文献４６】Schrｏｅder  C,  et  al.  Transpl  Immunol.  2003;12(1):19-28
【非特許文献４７】Vugmeyster  Y,  et  al,  Cytometry  A.  2003;52(2):101-9
【非特許文献４８】Vugmeyster  Y  and  Howell  K.Int  Immunopharmacol.  2004;4(8):1117-24
【非特許文献４９】Ginaldi  L,  et  al,Leuk  Res.  1998  Feb;22(2):185-91
【非特許文献５０】Hale  G,  et  al,  Tissue  Antigens.  1990  Mar;35(3):118-27
【非特許文献５１】N  Engl  J  Med  2008;  359:1786-1801
【非特許文献５２】Hale  G,  et  al.  Blood.  1983  Oct;62(4):873-82
【非特許文献５３】Waldmann  H  and  Hale  G  Philos  Trans  R  Soc  Lond  B  Biol  Sci.  2005  Sep  29;360(1461):1707-11
【非特許文献５４】Zhao  et  al.,  2007,  Blood,  110:2569-2577
【非特許文献５５】Press  et  al.  1989  J  Clin  Oncol.  7(8):1027-38
【非特許文献５６】Press  at  el.  1993,  N  Engl  J  Med.  329(17):1219-24
【非特許文献５７】Kaminski  et  al.  1992  J  Clin  Oncol.  10(11):1696-711
【非特許文献５８】Press  et  al.  1989,  Cancer  Res.  49(17):4906-12
【非特許文献５９】Press  et  al.  1994,  Blood.  83(5):1390-7
【非特許文献６０】Polson  et  al.,  2009,  Cancer  Res.,  69(6):2358-2364
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、自己免疫疾患、炎症疾患等の免疫系の障害を処置する手段としての抗体、その抗原結合性断片、抗体−薬物コンジュゲート（免疫複合体）を含むＣＤ３７結合性薬剤に対するニーズが存在する。本発明はこのニーズに取り組むものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
一態様では、本発明は、本明細書に記載のヒト化ＣＤ３７を標的とする抗体又は免疫複合体を有効量患者に投与することを含むＢ細胞を枯渇させる又は異常なＢ細胞活性に関連する疾患を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は非癌性Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞はＣＤ３７を過剰発現しない。
【００１３】
特定の実施形態では、異常なＢ細胞活性に関連する疾患は、Ｂ細胞の自己抗体産生に関連する疾患及び／又はＢ細胞経路に関連する不適切なＴ細胞刺激に関連する疾患である。
【００１４】
特定の実施形態では、自己抗体産生を特徴とする疾患は、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、特発性炎症性筋疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、グレーブス病、皮膚筋炎、多発性筋炎、又はその他の自己免疫疾患である。
【００１５】
特定の実施形態では、本発明は、Ｂ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞の集団中のＢ細胞）をＣＤ３７に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片と接触させることを含み、抗体又はその断片が、架橋剤の非存在下、インビトロでアポトーシスを誘導できるものである、Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合する治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含み、抗体又はその断片が、架橋剤の非存在下、インビトロでアポトーシスを誘導できるものである、自己免疫又は炎症疾患を有する患者を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することもできる。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することもできる。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は血清半減期が長い。
【００１６】
特定の実施形態では、本発明は、Ｂ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞の集団中のＢ細胞）を、以下からなる群から選択される抗体と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片と接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する：（ａ）配列番号５５のポリペプチド及び配列番号７２のポリペプチドを含む抗体；（ｂ）配列番号５６のポリペプチド及び配列番号７３のポリペプチドを含む抗体；（ｃ）配列番号５７のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；（ｄ）配列番号５８のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；（ｅ）配列番号５９のポリペプチド及び配列番号７５のポリペプチドを含む抗体；（ｆ）配列番号６０のポリペプチド及び配列番号７６のポリペプチドを含む抗体；（ｇ）配列番号６１のポリペプチド及び配列番号７７のポリペプチドを含む抗体；（ｈ）配列番号６２のポリペプチド及び配列番号７８のポリペプチドを含む抗体；（ｉ）配列番号６３のポリペプチド及び配列番号７９のポリペプチドを含む抗体；（ｊ）配列番号６４のポリペプチド及び配列番号８０のポリペプチドを含む抗体；（ｋ）配列番号６５のポリペプチド及び配列番号８１のポリペプチドを含む抗体；（ｌ）配列番号６６のポリペプチド及び配列番号８２のポリペプチドを含む抗体；（ｍ）配列番号６７のポリペプチド及び配列番号８３のポリペプチドを含む抗体；（ｎ）配列番号６８のポリペプチド及び配列番号８４のポリペプチドを含む抗体；（ｏ）配列番号６９のポリペプチド及び配列番号８５のポリペプチドを含む抗体；（ｐ）配列番号７０のポリペプチド及び配列番号８６のポリペプチドを含む抗体；（ｑ）配列番号７１のポリペプチド及び配列番号８７のポリペプチドを含む抗体；並びに（ｒ）配列番号１７７のポリペプチド及び配列番号１７８のポリペプチドを含む抗体。
【００１７】
特定の実施形態では、本発明は、上記群から選択される抗体と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合する治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は上記群から選択される抗体を競合的に阻害する。
【００１８】
特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合し且つ配列番号１８４のポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団中のＢ細胞）を接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合し且つ配列番号１８４のポリペプチドに特異的に結合する治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は配列番号１８５のポリペプチドに結合しない。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合し且つ配列番号１８５のポリペプチドに特異的に結合しない抗体又はその抗原結合性断片とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団中のＢ細胞）を接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合し且つ配列番号１８５のポリペプチドに特異的に結合しない治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法を提供する。
【００２０】
特定の実施形態では、本発明は、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６４、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６５、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６６、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６７、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６８、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６９、及び２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６７０からなる群から選択されるハイブリドーマにより産生された抗体又はその抗原結合性断片とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団中のＢ細胞）を接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、上記のハイブリドーマによって生産される治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患を有する患者を処置する方法を提供する。
【００２１】
特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団中のＢ細胞）を接触させることを含むＢ細胞を枯渇させる方法であって、抗体が以下からなる群から選択されるポリペプチド配列を含む方法を提供する：（ａ）配列番号４、５、及び６並びに配列番号２８、２９、及び３０；（ｂ）配列番号７、８、及び９並びに配列番号３１、３２、及び３３；（ｃ）配列番号１０、１１、及び１２並びに配列番号３４、３５、及び３６；（ｄ）配列番号１３、１４、及び１５並びに配列番号３７、３８、及び３９；（ｅ）配列番号１３、１４、及び１５並びに配列番号３７、４０、及び３９；（ｆ）配列番号１６、１７、及び１８並びに配列番号４１、４２、及び４３；（ｇ）配列番号１９、２０、及び２１並びに配列番号４４、４５、及び４６；（ｈ）配列番号１９、２０、及び２１並びに配列番号４４、４７、及び４６；（ｉ）配列番号２２、２３、及び２４並びに配列番号４８、４９、及び５０；（ｊ）配列番号２２、２３、及び２４並びに配列番号４８、５１、及び５０；（ｋ）配列番号２５、２６、及び２７並びに配列番号５２、５３、及び５４；（ｌ）配列番号１７１、１７２又は１８１、及び１７３並びに配列番号１７４、１７５、及び１７６；（ｍ）１、２、３、又は４個の保存的アミノ酸置換を含む（ａ）〜（ｌ）のバリアント。特定の実施形態では、本発明は、治療有効量のＣＤ３７に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片及び抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含み、抗体が上記の群から選択されるポリペプチド配列を含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、上記ポリペプチド配列と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド配列はポリペプチド配列と少なくとも９５％同一である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド配列はポリペプチド配列と少なくとも９９％同一である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５７及び配列番号７４のポリペプチド配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は同一のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５８及び配列番号７４のポリペプチド配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は同一のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号６３及び配列番号７９のポリペプチド配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は同一のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号６５及び配列番号８１のポリペプチド配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９９％同一、又は同一のポリペプチド配列を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片はマウス、非ヒト、ヒト化、キメラ、表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）、又はヒト抗体である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片は、架橋剤の非存在下、インビトロで、ＣＤ３７を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができる。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合性断片は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、抗体は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。
【００２４】
特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合するヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団中のＢ細胞）を接触させることを含み、抗体又はその断片が、架橋剤の非存在下、インビトロで、ＣＤ３７を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができるものである、Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合する治療有効量のヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含み、抗体又はその断片が、架橋剤の非存在下、インビトロで、ＣＤ３７を発現する細胞のアポトーシスを誘導できるものである、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することもできる。いくつかの実施形態では、ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することもできる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合性断片はヒトＣＤ３７及びマカクＣＤ３７に結合する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、抗体は全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合性断片が使用される。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖすなわちｓｃＦｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、二重特異性抗体、単ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片がリンカー（Ｌ）を介して細胞毒性薬剤（Ｃ）に連結されて免疫複合体を形成している。
【００２８】
特定の実施形態では、本発明は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）［式中、（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり、（Ｌ）は切断不可能なリンカーであり、（Ｃ）は細胞毒性薬剤であり、リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］で表される免疫複合体を含む組成物とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞の集団中のＢ細胞）を接触させることを含むＢ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）［式中、（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり、（Ｌ）は切断不可能なリンカーであり、（Ｃ）は細胞毒性薬剤であり、リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］で表される免疫複合体を含む治療有効量の組成物を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫複合体の血清半減期はネイキッド（ｎａｋｅｄ）抗体に匹敵する。
【００２９】
特定の実施形態では、本発明は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）［式中、（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり、（Ｌ）はリンカーであり、（Ｃ）はメイタンシノイドであり、リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］で表される免疫複合体を含む組成物とＢ細胞（例えば、非癌性Ｂ細胞を含む細胞の集団中のＢ細胞）を接触させることを含むＢ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）［式中、（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり、（Ｌ）はリンカーであり、（Ｃ）はメイタンシノイドであり、リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］で表される免疫複合体を含む治療有効量の組成物を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患を有する患者を処置する方法を提供する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、リンカーは切断不可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、免疫複合体は第２の（Ｃ）を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は第３の（Ｃ）を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は第４の（Ｃ）を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は２〜６個の（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は３〜４個の（Ｃ）を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸をベースとするリンカーからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノアート（ＳＰＤＢ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノアート（スルホ−ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾアート（ＳＩＡＢ）；及びＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、細胞毒性薬剤は、メイタンシノイド、メイタンシノイドアナログ、ドキソルビシン、改変ドキソルビシン、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、ＣＣ−１０６５アナログ、デュオカルマイシン、デュオカルマイシンアナログ、カリチアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチンアナログ、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体、又はこれらの薬剤のプロドラッグからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞毒性薬剤はメイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、細胞毒性薬剤は、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）又はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ４）である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、免疫複合体を含む組成物は、複数の細胞毒性薬剤（Ｃ）を含み、（Ｃ）は（Ａ）１個当たり平均約３〜約４個である。いくつかの実施形態では、免疫複合体は（Ａ）１個当たり平均約３．５個の（Ｃ）を有する。いくつかの実施形態では、免疫複合体は（Ａ）１個当たり平均約３．５±０．５個の（Ｃ）を有する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、免疫複合体を含む組成物は、配列番号５７及び配列番号７４又は配列番号５８及び配列番号７４を含む抗体、ＳＭＣＣリンカー、並びにＤＭ１を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体を含む組成物は、配列番号６３及び配列番号７９を含む抗体、ＳＭＣＣリンカー、並びにＤＭ１を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体を含む組成物は、配列番号６５及び配列番号８１を含む抗体、ＳＭＣＣリンカー、並びにＤＭ１を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合性断片はＢ細胞を枯渇させることができる。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合性断片はＴ細胞応答を阻害することができる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、Ｔ細胞を更に含む組成物中にある。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、末梢血液単核細胞を含む組成物中にある。いくつかの実施形態では、末梢血液単核細胞はヒトから得られたものである。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は全血中にある。いくつかの実施形態では、全血はヒトから得られたものである。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は生物中にある。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者の体内にある。
【００３７】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は自己反応性Ｂ細胞である。
【００３８】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞の少なくとも約３０％が枯渇される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の約５％未満が枯渇される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、第２の治療剤が投与される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、メトトレキサート、抗ＣＤ２０治療薬、抗ＩＬ−６受容体治療薬、抗ＩＬ−１２／２３ｐ４０治療薬、化学療法薬、免疫抑制薬、抗インターフェロンベータ−１ａ治療薬、グラチラマー酢酸塩、抗α４−インテグリン治療薬、フィンゴリモド、抗ＢＬｙｓ治療薬、ＣＴＬＡ−Ｆｃ、又は抗ＴＮＦ治療薬からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、及びＣＤ１５２からなる群から選択される抗原に対する抗体である。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２／２３  ｐ４０、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１８、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、及びＩＬ−５からなる群から選択される抗原に対する抗体である。
【００４０】
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患又は炎症疾患は以下からなる群から選択される：関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、特発性炎症性筋疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、グレーブス病、皮膚筋炎、多発性筋炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、胃炎、橋本甲状腺炎、ぜん息、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、ぶどう膜炎、糸球体腎炎、湿疹、アテローム性動脈硬化症、白血球接着不全、レイノー症候群、シェーグレン症候群、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、免疫介在性血小板減少症、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、アトピー性皮膚炎、尋常性天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、赤芽球ろう、混合性クリオグロブリン血症、強直性脊椎炎、Ｃ型肝炎関連クリオグロブリン血症性血管炎、慢性局所脳炎、水疱性類天疱瘡、血友病Ａ、膜性増殖性糸球体腎炎、成人型及び若年性皮膚筋炎、成人型多発性筋炎、慢性じんま疹、原発性胆汁性肝硬変、視神経脊髄炎、グレーブス甲状腺異常症、水疱性類天疱瘡、膜性増殖性糸球体腎炎、チャーグ・ストラウス症候群、若年性糖尿病、溶血性貧血、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群及び糸球体腎炎、皮膚筋炎、ＡＮＣＡ、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、実質臓器移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫性肝炎、リンパ性間質性肺炎、ＨＩＶ、閉塞性細気管支炎（非移植片）、ギラン・バレー症候群、大型血管炎、巨細胞（高安）動脈炎、中型血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎。Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、ＨＩＶ及びヘルペスウイルス関連疾患。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団をＣＤ３７に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片に接触させることを含み、前記抗体又はその断片が架橋剤の非存在下でインビトロでアポトーシスを誘導できる、Ｂ細胞を枯渇させる方法。
（項目２）
ＣＤ３７に特異的に結合する治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含み、前記抗体又はその断片が架橋剤の非存在下でインビトロでアポトーシスを誘導できる、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法。
（項目３）
前記抗体又はその抗原結合性断片が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することもできる、項目１又は２に記載の方法。
（項目４）
前記抗体又はその抗原結合性断片が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することもできる、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団を以下からなる群から選択される抗体と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片と接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法：
（ａ）配列番号５５のポリペプチド及び配列番号７２のポリペプチドを含む抗体；
（ｂ）配列番号５６のポリペプチド及び配列番号７３のポリペプチドを含む抗体；
（ｃ）配列番号５７のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；
（ｄ）配列番号５８のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；
（ｅ）配列番号５９のポリペプチド及び配列番号７５のポリペプチドを含む抗体；
（ｆ）配列番号６０のポリペプチド及び配列番号７６のポリペプチドを含む抗体；
（ｇ）配列番号６１のポリペプチド及び配列番号７７のポリペプチドを含む抗体；
（ｈ）配列番号６２のポリペプチド及び配列番号７８のポリペプチドを含む抗体；
（ｉ）配列番号６３のポリペプチド及び配列番号７９のポリペプチドを含む抗体；
（ｊ）配列番号６４のポリペプチド及び配列番号８０のポリペプチドを含む抗体；
（ｋ）配列番号６５のポリペプチド及び配列番号８１のポリペプチドを含む抗体；
（ｌ）配列番号６６のポリペプチド及び配列番号８２のポリペプチドを含む抗体；
（ｍ）配列番号６７のポリペプチド及び配列番号８３のポリペプチドを含む抗体；
（ｎ）配列番号６８のポリペプチド及び配列番号８４のポリペプチドを含む抗体；
（ｏ）配列番号６９のポリペプチド及び配列番号８５のポリペプチドを含む抗体；
（ｐ）配列番号７０のポリペプチド及び配列番号８６のポリペプチドを含む抗体；
（ｑ）配列番号７１のポリペプチド及び配列番号８７のポリペプチドを含む抗体；並びに（ｒ）配列番号１７７のポリペプチド及び配列番号１７８のポリペプチドを含む抗体。
（項目６）
以下からなる群から選択される抗体と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合する治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法：
（ａ）配列番号５５のポリペプチド及び配列番号７２のポリペプチドを含む抗体；
（ｂ）配列番号５６のポリペプチド及び配列番号７３のポリペプチドを含む抗体；
（ｃ）配列番号５７のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；
（ｄ）配列番号５８のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；
（ｅ）配列番号５９のポリペプチド及び配列番号７５のポリペプチドを含む抗体；
（ｆ）配列番号６０のポリペプチド及び配列番号７６のポリペプチドを含む抗体；
（ｇ）配列番号６１のポリペプチド及び配列番号７７のポリペプチドを含む抗体；
（ｈ）配列番号６２のポリペプチド及び配列番号７８のポリペプチドを含む抗体；
（ｉ）配列番号６３のポリペプチド及び配列番号７９のポリペプチドを含む抗体；
（ｊ）配列番号６４のポリペプチド及び配列番号８０のポリペプチドを含む抗体；
（ｋ）配列番号６５のポリペプチド及び配列番号８１のポリペプチドを含む抗体；
（ｌ）配列番号６６のポリペプチド及び配列番号８２のポリペプチドを含む抗体；
（ｍ）配列番号６７のポリペプチド及び配列番号８３のポリペプチドを含む抗体；
（ｎ）配列番号６８のポリペプチド及び配列番号８４のポリペプチドを含む抗体；
（ｏ）配列番号６９のポリペプチド及び配列番号８５のポリペプチドを含む抗体；
（ｐ）配列番号７０のポリペプチド及び配列番号８６のポリペプチドを含む抗体；
（ｑ）配列番号７１のポリペプチド及び配列番号８７のポリペプチドを含む抗体；並びに（ｒ）配列番号１７７のポリペプチド及び配列番号１７８のポリペプチドを含む抗体。
（項目７）
前記抗体又はその抗原結合性断片が以下からなる群から選択される抗体を競合的に阻害する、項目５又は６に記載の方法：
（ａ）配列番号５５のポリペプチド及び配列番号７２のポリペプチドを含む抗体；
（ｂ）配列番号５６のポリペプチド及び配列番号７３のポリペプチドを含む抗体；
（ｃ）配列番号５７のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；
（ｄ）配列番号５８のポリペプチド及び配列番号７４のポリペプチドを含む抗体；
（ｅ）配列番号５９のポリペプチド及び配列番号７５のポリペプチドを含む抗体；
（ｆ）配列番号６０のポリペプチド及び配列番号７６のポリペプチドを含む抗体；
（ｇ）配列番号６１のポリペプチド及び配列番号７７のポリペプチドを含む抗体；
（ｈ）配列番号６２のポリペプチド及び配列番号７８のポリペプチドを含む抗体；
（ｉ）配列番号６３のポリペプチド及び配列番号７９のポリペプチドを含む抗体；
（ｊ）配列番号６４のポリペプチド及び配列番号８０のポリペプチドを含む抗体；
（ｋ）配列番号６５のポリペプチド及び配列番号８１のポリペプチドを含む抗体；
（ｌ）配列番号６６のポリペプチド及び配列番号８２のポリペプチドを含む抗体；
（ｍ）配列番号６７のポリペプチド及び配列番号８３のポリペプチドを含む抗体；
（ｎ）配列番号６８のポリペプチド及び配列番号８４のポリペプチドを含む抗体；
（ｏ）配列番号６９のポリペプチド及び配列番号８５のポリペプチドを含む抗体；
（ｐ）配列番号７０のポリペプチド及び配列番号８６のポリペプチドを含む抗体；
（ｑ）配列番号７１のポリペプチド及び配列番号８７のポリペプチドを含む抗体；並びに（ｒ）配列番号１７７のポリペプチド及び配列番号１７８のポリペプチド。
（項目８）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団を以下からなる群から選択されるハイブリドーマによって生産された抗体又はその抗原結合性断片と接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法：２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６４、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６５、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｉｓｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６６、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６７、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６８、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６９、及び２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６７０。
（項目９）
以下からなる群から選択されるハイブリドーマによって生産された治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法：２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６４、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６５、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｉｓｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６６、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６７、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６８、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６９、及び２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６７０。
（項目１０）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団をＣＤ３７に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片と接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法であって、前記抗体が以下からなる群から選択されるポリペプチド配列を含む方法：
（ａ）配列番号４、５、及び６並びに配列番号２８、２９、及び３０；
（ｂ）配列番号７、８、及び９並びに配列番号３１、３２、及び３３；
（ｃ）配列番号１０、１１、及び１２並びに配列番号３４、３５、及び３６；
（ｄ）配列番号１３、１４、及び１５並びに配列番号３７、３８、及び３９；
（ｅ）配列番号１３、１４、及び１５並びに配列番号３７、４０、及び３９；
（ｆ）配列番号１６、１７、及び１８並びに配列番号４１、４２、及び４３；
（ｇ）配列番号１９、２０、及び２１並びに配列番号４４、４５、及び４６；
（ｈ）配列番号１９、２０、及び２１並びに配列番号４４、４７、及び４６；
（ｉ）配列番号２２、２３、及び２４並びに配列番号４８、４９、及び５０；
（ｊ）配列番号２２、２３、及び２４並びに配列番号４８、５１、及び５０；
（ｋ）配列番号２５、２６、及び２７並びに配列番号５２、５３、及び５４；
（ｌ）配列番号１７１、１７２、及び１７３並びに配列番号１７４、１７５、及び１７６；
（ｍ）配列番号１７１、１８１、及び１７３並びに配列番号１７４、１７５、及び１７６；並びに
（ｎ）１、２、３、又は４個の保存的アミノ酸置換を含む（ａ）〜（ｍ）のバリアント。
（項目１１）
ＣＤ３７に特異的に結合する治療有効量の抗体又はその抗原結合性断片と抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法であって、前記抗体が以下からなる群から選択されるポリペプチド配列を含む方法：
（ａ）配列番号４、５、及び６並びに配列番号２８、２９、及び３０；
（ｂ）配列番号７、８、及び９並びに配列番号３１、３２、及び３３；
（ｃ）配列番号１０、１１、及び１２並びに配列番号３４、３５、及び３６；
（ｄ）配列番号１３、１４、及び１５並びに配列番号３７、３８、及び３９；
（ｅ）配列番号１３、１４、及び１５並びに配列番号３７、４０、及び３９；
（ｆ）配列番号１６、１７、及び１８並びに配列番号４１、４２、及び４３；
（ｇ）配列番号１９、２０、及び２１並びに配列番号４４、４５、及び４６；
（ｈ）配列番号１９、２０、及び２１並びに配列番号４４、４７、及び４６；
（ｉ）配列番号２２、２３、及び２４並びに配列番号４８、４９、及び５０；
（ｊ）配列番号２２、２３、及び２４並びに配列番号４８、５１、及び５０；
（ｋ）配列番号２５、２６、及び２７並びに配列番号５２、５３、及び５４；並びに
（ｌ）１、２、３、又は４個の保存的アミノ酸置換を含む（ａ）〜（ｋ）のバリアント。
（項目１２）
前記抗体又はその抗原結合性断片が以下からなる群から選択されるポリペプチド配列と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を含む、項目１０又は１１に記載の方法：
（ａ）配列番号５５及び配列番号７２；
（ｂ）配列番号５６及び配列番号７３；
（ｃ）配列番号５７及び配列番号７４；
（ｄ）配列番号５８及び配列番号７４；
（ｅ）配列番号５９及び配列番号７５；
（ｆ）配列番号６０及び配列番号７６；
（ｇ）配列番号６１及び配列番号７７；
（ｈ）配列番号６２及び配列番号７８；
（ｉ）配列番号６３及び配列番号７９；
（ｊ）配列番号６４及び配列番号８０；
（ｋ）配列番号６５及び配列番号８１；
（ｌ）配列番号６６及び配列番号８２；
（ｍ）配列番号６７及び配列番号８３；
（ｎ）配列番号６８及び配列番号８４；
（ｏ）配列番号６９及び配列番号８５；
（ｐ）配列番号７０及び配列番号８６；
（ｑ）配列番号７１及び配列番号８７；並びに
（ｒ）配列番号１７７及び配列番号１７８。
（項目１３）
前記ポリペプチド配列が、以下からなる群から選択されるポリペプチド配列と少なくとも９５％同一である、項目１２に記載の方法：
（ａ）配列番号５５及び配列番号７２；
（ｂ）配列番号５６及び配列番号７３；
（ｃ）配列番号５７及び配列番号７４；
（ｄ）配列番号５８及び配列番号７４；
（ｅ）配列番号５９及び配列番号７５；
（ｆ）配列番号６０及び配列番号７６；
（ｇ）配列番号６１及び配列番号７７；
（ｈ）配列番号６２及び配列番号７８；
（ｉ）配列番号６３及び配列番号７９；
（ｊ）配列番号６４及び配列番号８０；
（ｋ）配列番号６５及び配列番号８１；
（ｌ）配列番号６６及び配列番号８２；
（ｍ）配列番号６７及び配列番号８３；
（ｎ）配列番号６８及び配列番号８４；
（ｏ）配列番号６９及び配列番号８５；
ｐ）配列番号７０及び配列番号８６；
（ｑ）配列番号７１及び配列番号８７；並びに
（ｒ）配列番号１７７及び配列番号１７８。
（項目１４）
前記ポリペプチド配列が以下からなる群から選択されるポリペプチド配列と少なくとも９９％同一である、項目１３に記載の方法：
（ａ）配列番号５５及び配列番号７２；
（ｂ）配列番号５６及び配列番号７３；
（ｃ）配列番号５７及び配列番号７４；
（ｄ）配列番号５８及び配列番号７４；
（ｅ）配列番号５９及び配列番号７５；
（ｆ）配列番号６０及び配列番号７６；
（ｇ）配列番号６１及び配列番号７７；
（ｈ）配列番号６２及び配列番号７８；
（ｉ）配列番号６３及び配列番号７９；
（ｊ）配列番号６４及び配列番号８０；
（ｋ）配列番号６５及び配列番号８１；
（ｌ）配列番号６６及び配列番号８２；
（ｍ）配列番号６７及び配列番号８３；
（ｎ）配列番号６８及び配列番号８４；
（ｏ）配列番号６９及び配列番号８５；
ｐ）配列番号７０及び配列番号８６；
（ｑ）配列番号７１及び配列番号８７；並びに
（ｒ）配列番号１７７及び配列番号１７８。
（項目１５）
前記抗体又はその抗原結合性断片が、マウス、非ヒト、ヒト化、キメラ、表面再構成、又はヒトである、項目１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記抗体又は抗体断片が、架橋剤の非存在下、インビトロで、ＣＤ３７を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができる、項目５〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記抗体又は抗原結合性断片が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができる、項目５〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる、項目５〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団をＣＤ３７に特異的に結合するヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片と接触させることを含み、前記抗体又はその断片が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができる、Ｂ細胞を枯渇させる方法。
（項目２０）
ＣＤ３７に特異的に結合する治療有効量のヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片を患者に投与することを含み、前記抗体又はその断片が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができる、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法。
（項目２１）
前記ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片が、架橋剤の非存在下、インビトロで、アポトーシスを誘導することもできる、項目１９又は２０に記載の方法。
（項目２２）
前記ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合性断片が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することもできる、項目２０〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記抗体がヒトＣＤ３７及びマカクＣＤ３７に結合する、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
全長抗体である、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
抗原結合性断片である、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記抗体又はその抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖすなわちｓｃＦｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、二特異性抗体、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、又はｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記抗体又はその抗原結合性断片が、リンカー（Ｌ）を介して細胞毒性薬剤（Ｃ）に連結して免疫複合体を形成している、項目１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団を、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）
［式中、
（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり；
（Ｌ）は切断不可能なリンカーであり；
（Ｃ）は細胞毒性薬剤であり；
前記リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］
で表される免疫複合体を含む組成物に接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法。
（項目２９）
式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）
［式中、
（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり；
（Ｌ）は切断不可能なリンカーであり；
（Ｃ）は細胞毒性薬剤であり；
前記リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］
で表される免疫複合体を含む治療有効量の組成物を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患の患者を処置する方法。
（項目３０）
非癌性Ｂ細胞を含む細胞集団を、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）
［式中、
（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり；
（Ｌ）はリンカーであり；
（Ｃ）はメイタンシノイドであり；
前記リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］
で表される免疫複合体を含む組成物と接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法。
（項目３１）
式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）
［式中、
（Ａ）はＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり；
（Ｌ）はリンカーであり；
（Ｃ）はメイタンシノイドであり；
前記リンカー（Ｌ）は（Ａ）を（Ｃ）に連結している］
で表される免疫複合体を含む治療有効量の組成物を患者に投与することを含む、自己免疫疾患又は炎症疾患を有する患者を処置する方法。
（項目３２）
前記リンカーが切断不可能なリンカーである、項目３０又は３１に記載の方法。
（項目３３）
前記免疫複合体が第２の（Ｃ）を更に含む、項目２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記免疫複合体が第３の（Ｃ）を更に含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記免疫複合体が第４の（Ｃ）を更に含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記免疫複合体が２〜６個の（Ｃ）を含む、項目２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記免疫複合体が３〜４個の（Ｃ）を含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記リンカーが、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸をベースとするリンカーからなる群から選択される、項目２７〜３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノアート（ＳＰＤＢ）又はＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノアート（スルホ−ＳＰＤＢ）；Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）；Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（スルホＳＭＣＣ）；Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾアート（ＳＩＡＢ）；及びＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）からなる群から選択される、項目２７〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記リンカーがＮ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記細胞毒性薬剤が、メイタンシノイド、メイタンシノイドアナログ、ドキソルビシン、改変ドキソルビシン、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、ＣＣ−１０６５アナログ、デュオカルマイシン、デュオカルマイシンアナログ、カリチアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチンアナログ、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体、又はこれらの薬剤のプロドラッグからなる群から選択される、項目２７〜２９及び３３〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記細胞毒性薬剤がメイタンシノイドである、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記細胞毒性薬剤が、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）又はＮ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ４）である、項目３０〜３２又は４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
免疫複合体を含む前記組成物が複数の細胞毒性薬剤（Ｃ）を含み、（Ａ）１個当たり（Ｃ）が平均約３〜約４個である、項目２７〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記免疫複合体が、（Ａ）１個当たり平均約３．５±０．５個の（Ｃ）を有する、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記免疫複合体が、（Ａ）１個当たり平均約３．５個の（Ｃ）を有する、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記抗体又は抗原結合性断片がＢ細胞を枯渇させることができる、項目１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記抗体又は抗原結合性断片がＴ細胞応答を阻害することができる、項目１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記細胞集団がＴ細胞を含む、項目１、３〜５、７、８、１０、１２〜１９、２１〜
２８、３０、又は３２〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記細胞集団が末梢血液単核細胞を含む、項目１、３〜５、７、８、１０、１２〜１９、２１〜２８、３０、又は３２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記末梢血液単核細胞がヒトから得られたものである、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記細胞集団が全血中にある、項目１、３〜５、７、８、１０、１２〜１９、２１〜２８、３０、又は３２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記全血がヒトから得られたものである、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記細胞集団が生物中にある、項目１、３〜５、７、８、１０、１２〜１９、２１〜２８、３０、又は３２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記細胞集団が自己免疫疾患又は炎症疾患の患者の体内にある、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記Ｂ細胞が自己反応性Ｂ細胞である、項目１、３〜５、７、８、１０、１２〜１９、２１〜２８、３０、又は３２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記細胞集団中のＢ細胞の少なくとも約３０％が枯渇される、項目１、３〜５、７、８、１０、１２〜１９、２１〜２８、３０、又は３２〜５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
Ｔ細胞の約５％未満が枯渇される、項目４９〜５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
第２の治療剤を投与することを更に含む、項目２〜４、６、７、９、１１〜１８、２０〜２７、２９、又は３１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記第２の治療薬が、メトトレキサート、抗ＣＤ２０治療薬、抗ＩＬ−６受容体治療薬、抗ＩＬ−１２／２３ｐ４０治療薬、化学療法薬、免疫抑制薬、抗インターフェロンベータ−１ａ治療薬、グラチラマー酢酸塩、抗α４−インテグリン治療薬、フィンゴリモド、抗ＢＬｙｓ治療薬、ＣＴＬＡ−Ｆｃ、又は抗ＴＮＦ治療薬からなる群から選択される、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記第２の治療薬が、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、及びＣＤ１５２からなる群から選択される抗原に対する抗体である、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
前記第２の治療薬が、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２／２３  ｐ４０、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１８、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、及びＩＬ−５からなる群から選択される抗原に対する抗体である、項目５９に記載の方法。
（項目６３）
前記自己免疫疾患又は炎症疾患が、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、特発性炎症性筋疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、グレーブス病、皮膚
筋炎、多発性筋炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、胃炎、橋本甲状腺炎、ぜん息、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、ぶどう膜炎、糸球体腎炎、湿疹、アテローム性動脈硬化症、白血球接着不全、レイノー症候群、シェーグレン症候群、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、免疫介在性血小板減少症、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、アトピー性皮膚炎、尋常性天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、赤芽球ろう、混合性クリオグロブリン血症、強直性脊椎炎、Ｃ型肝炎関連クリオグロブリン血症性血管炎、慢性局所脳炎、水疱性類天疱瘡、血友病Ａ、膜性増殖性糸球体腎炎、成人型及び若年性皮膚筋炎、成人型多発性筋炎、慢性じんま疹、原発性胆汁性肝硬変、視神経脊髄炎、グレーブス甲状腺異常症、水疱性類天疱瘡、膜性増殖性糸球体腎炎、チャーグ・ストラウス症候群、若年性糖尿病、溶血性貧血、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群及び糸球体腎炎、皮膚筋炎、ＡＮＣＡ、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、実質臓器移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫性肝炎、リンパ性間質性肺炎、ＨＩＶ、閉塞性細気管支炎（非移植片）、ギラン・バレー症候群、大型血管炎、巨細胞（高安）動脈炎、中型血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、ＨＩＶ、及びヘルペスウイルス関連疾患からなる群から選択される、項目２〜４、６、７、９、１１〜１８、２０〜２８、３０、３２〜４７、又は５８〜６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
配列番号１７７のポリペプチド及び配列番号１７８のポリペプチドを含む抗体と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片。
（項目６５）
配列番号１７１、１７２又は１８１、及び１７３並びに配列番号１７４、１７５、及び１７６の配列を含む、ＣＤ３７に特異的に結合する抗体又はその結合性断片。
（項目６６）
前記抗体又はその断片が、配列番号１７７及び配列番号１７８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を含む、項目６４又は６５に記載の抗体又は抗原結合性断片。
（項目６７）
項目６４〜６６のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片、リンカー、及び細胞毒性薬剤を含む、免疫複合体。
（項目６８）
Ｂ細胞を含む細胞集団を項目６４〜６６のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合性断片又は項目６７に記載の免疫複合体と接触させることを含む、Ｂ細胞を枯渇させる方法。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ヒトＢ細胞を用いたフローサイトメトリー実験のＦＬ２−Ｈ（ＰＥ）ヒストグラムを重ねた図である。以下の条件が示されている：ＣＤ１９＋Ｂ細胞に対して、抗体対照（濃く塗りつぶし）、アイソタイプ対照株（薄く塗りつぶし）、抗ＣＤ３７株（太い黒線）、抗ＣＤ２０株（点線）。
【図２】１０μｇ／ｍＬのｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０、ｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、リツキシマブ、ＴＲＵ−０１６、又はアレムツズマブで処置した精製ヒトＰＢＭＣサンプルを用いたインビトロ枯渇実験の結果を示す図である。異なる２ドナーの結果をパネルＡ及びＢに示す。
【図３】種々の濃度のｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１で処置した精製ヒトＰＢＭＣサンプルを用いたインビトロ枯渇実験の結果を示す図である。異なる２ドナーの結果をパネルＡ及びＢに示す。図３（Ｃ）はｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３８、ｈｕＣＤ３７−５０、及びｈｕＣＤ３７−５６を用いた結果を示す。
【図４】１０μｇ／ｍＬのｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０、ｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、リツキシマブ、ＴＲＵ−０１６、又はアレムツズマブで処置した未精製ヒト全血サンプルを用いたインビトロ枯渇実験の結果を示す図である。
【図５】種々の濃度の（Ａ）ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、及びリツキシマブ並びに（Ｂ）ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０、及びリツキシマブで処置した未精製ヒト全血サンプルを用いたインビトロ枯渇実験の結果を示す図である。
【図６】濃度２．５ｎｇ／ｍＬ〜２５０μｇ／ｍＬの化合物と１８〜２０時間インキュベートした１人の健康なヒトドナーの５×１０Ｅ５末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）当たりのスポットの数としてＥＬＩＳｐｏｔにより測定されたＩＦＮ−γ（インターフェロン）、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子）、及びＩＬ−６（インターロイキン−６）の放出を示す図である。
【図７】濃度２．５ｎｇ／ｍＬ〜２５０μｇ／ｍＬの化合物と１８〜２０時間インキュベートした第２の健康なヒトドナーの５×１０５末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）当たりのスポットの数としてＥＬＩＳｐｏｔにより測定されたＩＦＮ−γ（インターフェロン）、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子）、及びＩＬ−６（インターロイキン−６）の放出を示す図である。
【図８】抗ｍｕＣＤ３７モノクローナル抗体クローン２５２−３の結合曲線を示す図である。
【図９】Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいて２５２−３抗体が末梢血液Ｂ細胞を枯渇させる活性（Ａ）及びＥＡＥを阻害する活性（Ｂ）を示す図である。（Ａ）中、各印が１頭のマウスを表し、対照と実験マウスのＢ細胞レベルを比較するために、Ｂ細胞レベルをＴ細胞レベルで標準化し、対照マウスにおけるＢ／Ｔ細胞比を１００％と見なした。（Ｂ）中、白丸及び黒丸はそれぞれ対照群（ｎ＝１０）及び２５２−３抗体処置群（ｎ＝１０）のＥＡＥスコアの平均値を表し、矢印は抗体注射日を示す。
【図１０】ＮＯＤマウスにおいて２５２−３抗体が末梢血液Ｂ細胞を枯渇させる活性（Ａ）及びＴ１Ｄを阻害する活性（Ｂ）を示す図である。（Ａ）中、各印が１頭のマウスを表し、対照と実験マウスのＢ細胞レベルを比較するために、Ｂ細胞レベルをＴ細胞レベルで標準化し、対照マウスにおけるＢ／Ｔ細胞比を１００％と見なした。（Ｂ）中、白丸及び黒丸はそれぞれ対照群（ｎ＝６）及び２５２−３抗体処置群（ｎ＝６）における糖尿病発生率を表す。
【図１１】ＤＢＡ／１マウスにおいて２５２−３抗体が末梢血液Ｂ細胞を枯渇させる活性（Ａ）及びＣＩＡを阻害する活性（Ｂ）を示す図である。（Ａ）中、各印が１頭のマウスを表し、対照と実験マウスのＢ細胞レベルを比較するために、Ｂ細胞レベルをＴ細胞レベルで標準化し、対照マウスにおけるＢ／Ｔ細胞比を１００％と見なした。（Ｂ）中、白丸及び黒丸はそれぞれ対照群（ｎ＝１２）及び２５２−３抗体処置群（ｎ＝１２）におけるＣＩＡスコアの平均値を表し、矢印は抗体注射日を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明は、ＣＤ３７結合性分子を用いてＢ細胞を枯渇させる方法並びに異常なＢ細胞活性及び／又はＢ細胞経路に関連する異常なＴ細胞刺激に関連する疾患を処置する方法を提供する。
【００４３】
Ｉ．定義
本発明の理解を促すために複数の用語及び語句を以下に定義する。
【００４４】
本発明において、ＣＤ３７という用語は、特に断りのない限り、任意の天然のＣＤ３７を指す。ＣＤ３７は、ＧＰ５２−４０、白血球抗原ＣＤ３７、及びテトラスパニン−２６ともいう。用語「ＣＤ３７」は、プロセシングされていない「全長」のＣＤ３７及び細胞中でのプロセシングにより生じる任意の形態のＣＤ３７を包含する。この用語は更に、ＣＤ３７の天然バリアント、例えばスプライスバリアント、対立遺伝子バリアント、及びアイソフォームを包含する。本明細書に記載のＣＤ３７ポリペプチドは、種々の供給源、例えばヒト組織型又は他の供給源から単離され得、あるいは組換え又は合成方法によって製造され得る。
【００４５】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介してタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又は上記の組合せ等の標的を認識してこれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本発明において、「抗体」という用語は、抗体が所望の生物学的活性を示す限りにおいて、無傷の（ｉｎｔａｃｔ）ポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体、多重特異性抗体、例えば少なくとも２つの無傷の抗体から作製された二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意のその他の改変免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれるその重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、それぞれ免疫グロブリンの任意の５つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、又はそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のものであり得る。異なるクラスの免疫グロブリンは周知の異なるサブユニット構造及び三次元配置を有する。抗体は、ネイキッドであってもよく、毒素、ラジオアイソトープ等の他の分子にコンジュゲートしていてもよい。
【００４６】
「ブロッキング」抗体又は「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原、例えばＣＤ３７の生物学的活性を阻害又は低減するものである。いくつかの実施形態では、ブロッキング抗体又はアンタゴニスト抗体は抗原の生物学的活性を実質的に又は完全に阻害する。生物学的活性は１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％低減され得る。
【００４７】
「抗ＣＤ３７抗体」又は「ＣＤ３７に結合する抗体」という用語は、十分な親和性でＣＤ３７に結合でき、ＣＤ３７を標的とした診断及び／又は治療用薬剤として有用である抗体を指す。無関係の非ＣＤ３７タンパク質への抗ＣＤ３７抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）による測定でＣＤ３７への抗体の結合の約１０％未満であり得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７に結合する抗体の解離定数（Ｋｄ）は≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、又は≦０．１ｎＭである。
【００４８】
「抗体断片」という用語は、無傷の抗体の一部を指し、無傷の抗体の抗原性決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、抗体断片から形成された直鎖状抗体、単鎖抗体、及び多重特異性抗体が含まれる。
【００４９】
「モノクローナル抗体」とは、単一の抗原決定基又はエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均質な抗体集団を指す。これは、種々の抗原決定基に対する種々の抗体を通常含むポリクローナル抗体と対照的である。「モノクローナル抗体」という用語は、無傷且つ全長のモノクローナル抗体及び抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意のその他の改変免疫グロブリン分子を包含する。更に、「モノクローナル抗体」は、任意の複数の方法、例えば、限定されるものではないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物で作製された抗体を指す。
【００５０】
「ヒト化抗体」という用語は、最低限の非ヒト（例えばマウス）配列を含む特異的免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、又はその断片である非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲの残基で置換された、ヒト免疫グロブリンである（Jones  et  al.,  1986,  Nature,  321:522-525；Riechmann  et  al.,  1988,  Nature,  332:323-327；Verhoeyen  et  al.,  1988,  Science,  239:1534-1536）。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種の抗体の対応する残基で置換されている。ヒト化抗体は、抗体の特異性、親和性、及び／又は能力を洗練及び最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域中及び／又は置換された非ヒト残基内における更なる残基の置換により更に改変され得る。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全部又は実質的に全部を含む少なくとも１つ、典型的には２又は３つ、の可変ドメインの実質的に全部を含み、ＦＲ領域は全部又は実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域又はドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域又はドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含んでもよい。ヒト化抗体の作製に用いられる方法の例は米国特許第５，２２５，５３９号に記載されている。
【００５１】
抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域の単独又は組合せを指す。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって連結された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖中のＣＤＲはＦＲによって密接して保持されており、他の鎖のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。ＣＤＲの決定方法は少なくとも２つあり、すなわち、（１）種間配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Kabat  et  al.  Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest,  (5th  ed.,  1991,  National  Institutes  of  Health,  Bethesda  Md.)）；及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Al-lazikani  et  al  (1997)  J.  Molec.  Biol.  273:927-948)）である。更に、当該技術分野ではＣＤＲを決定するためにこれら２つのアプローチの組合せが用いられることもある。
【００５２】
可変ドメイン中の残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を参照する時にはKabatのナンバリングシステムが通常使用される（例えばKabat  et  al.,  Sequences  of  Immunological  Interest.  5th  Ed.  Public  Health  Service,  National  Institutes  of  Health,  Bethesda,  Md.  (1991)）。
【００５３】
Kabatにおけるように、アミノ酸位置のナンバリングは、Kabat  et  al.,  Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest,  5th  Ed.  Public  Health  Service,  National  Institutes  of  Health,  Bethesda,  Md.  (1991)における抗体編集物の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに用いられるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを用いると、実際の直鎖状アミノ酸配列に、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮又はその中への挿入に対応するより少ない又は追加的なアミノ酸を含めることができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後ろの単一アミノ酸インサート（Kabatの残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後ろに挿入された残基（例えば、Kabatの残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含み得る。Kabatの残基ナンバリングは、抗体の配列の相同領域と「標準的な」Kabatによりナンバリングされた配列とのアラインメントにより、与えられた抗体について決定することができる。Chothiaは、その代わりに、構造的ループの位置を指す（Chothia  and  Lesk  J.  Mol.  Biol.  196:901-917  (1987)）。Chothia  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、Kabatのナンバリング法を用いてナンバリングされた場合、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これはKabatのナンバリングスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を配置するためである。３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂが両方とも存在する場合、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、KabatのＣＤＲとChothiaの構造的ループの折衷案であり、オックスフォード・モレキュラー社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。
【００５４】
【表１】
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【００５５】
「ヒト抗体」という用語は、ヒトにより生成された抗体又は当該技術分野で公知の任意の技術を用いて作製された、ヒトにより生成された抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。このヒト抗体の定義は、無傷又は全長の抗体、その断片、並びに／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体、例えばマウス軽鎖ポリペプチド及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体を包含する。
【００５６】
「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）の種の１つに由来する抗体の可変領域に対応し、定常領域は別の種（通常はヒト）に由来する抗体中の配列に相同であって、その種における免疫応答の惹起が回避される。
【００５７】
「エピトープ」又は「抗原決定基」という用語は本明細書中で交換可能に使用され、特定の抗体によって認識され特異的に結合され得る抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは隣接アミノ酸及びタンパク質の三次フォールディング構造により近接する非隣接アミノ酸の両方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、タンパク質変性後も保持されており、一方、三次フォールディングによって形成されるエピトープはタンパク質変性後には通常失われる。エピトープは、固有の空間的コンホメーション中に、典型的には少なくとも３個、より典型的には少なくとも５又は８〜１０個のアミノ酸を含む。
【００５８】
「結合親和性」とは通常、分子（例えば抗体）の単一結合部位と、その結合相手（例えば抗原）との間の非共有結合性相互作用の総和の強度を指す。特に断りのない限り、本発明において、「結合親和性」は、結合対（例えば抗体及び抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する内因的な結合親和性を指す。分子Ｘの、その相手Ｙに対する親和性は一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当該技術分野で公知の一般的な方法により測定することができる。低親和性抗体は一般的に抗原にゆっくりと結合し、すぐに解離する傾向があり、一方、高親和性抗体は一般的により速く抗原に結合し、より長い期間結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する種々の方法が当該技術分野で公知であり、いずれも本発明の目的のために使用され得る。具体的な例示的実施形態を以下に記載する。
【００５９】
「又はそれより良い」とは、結合親和性を指して本明細書中で使用される場合、分子とその結合相手との間のより強い結合を指す。本明細書中で使用される場合、「又はそれより良い」は、より小さい数値のＫｄ値で表される、より強い結合を指す。例えば、抗体の抗原への親和性が「０．６ｎＭ又はそれより良い」場合、抗体の抗原への親和性は、＜０．６ｎＭ、すなわち、０．５９ｎＭ、０．５８ｎＭ、０．５７ｎＭ等、又は０．６ｎＭより小さい任意の値である。
【００６０】
「特異的に結合する」とは、一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間の幾分の相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、ランダムな無関係のエピトープに結合するよりも容易にその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合、抗体はエピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、本明細書において、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対的親和性を指して使用される。例えば、抗体「Ａ」は所定のエピトープに対して抗体「Ｂ」よりも高い特異性を有すると見なされ得、あるいは、抗体「Ａ」は、エピトープ「Ｃ」に、関連するエピトープ「Ｄ」に対するよりも高い特異性で結合すると言うことができる。
【００６１】
「優先的に結合する」とは、抗体が、関係するエピトープ、同様なエピトープ、相同なエピトープ、又は類似のエピトープに結合するよりも容易にエピトープに特異的に結合することを意味する。したがって、所定のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのような抗体が関係するエピトープと交差反応し得るとしても、関係するエピトープよりそのエピトープに結合し易い。
【００６２】
抗体は、エピトープへの参照抗体の結合をある程度ブロックする程度にそのエピトープに優先的に結合する場合、所定のエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、当該技術分野で公知の任意の方法、例えば競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって決定され得る。抗体は、所定のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、又は少なくとも５０％競合的に阻害すると言うことができる。
【００６３】
本発明において、「実質的に同様」又は「実質的に同じ」という語句は、２つの数値（通常、一方は本発明の抗体に関連し、もう一方は参照／比較抗体に関連する）間の十分に高度な類似性を意味し、前記値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特性の文脈内で２つの値の差に生物学的及び／又は統計的有意性がほとんどない又はないと当業者には見なされる。前記２つの値の差は、参照／比較抗体の値に対して、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、又は約１０％未満であり得る。
【００６４】
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物とは、自然には見出されない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は、それらがもはや自然に見出される形態ではない程に精製されたものを包含する。いくつかの実施形態では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は実質的に純粋である。
【００６５】
本発明において、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、又は少なくとも９９％純粋な材料を指す。
【００６６】
本発明において、「免疫複合体」又は「コンジュゲート」という用語は、細胞結合性物質（すなわち、抗ＣＤ３７抗体又はその断片）に連結した化合物又はその誘導体を指し、一般式：Ｃ−Ｌ−Ａ（式中、Ｃ−細胞毒素、Ｌ＝リンカー、Ａ＝細胞結合性物質又は抗ＣＤ３７抗体又は抗体断片である）で定義される。免疫複合体は、逆順の一般式：Ａ−Ｌ−Ｃによっても定義することができる。
【００６７】
「リンカー」とは、化合物（通常は薬物、例えばメイタンシノイド）を細胞結合性物質（例えば抗ＣＤ３７抗体又はその断片）に安定的、共有結合的に連結することができる任意の化学部分である。リンカーは、化合物又は抗体が活性である条件で、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断、及びジスルフィド結合切断に感受性であってもよく、実質的に抵抗性であってもよい。好適なリンカーは当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、及びエステラーゼに不安定な基が含まれる。リンカーは更に、本明細書に記載されており且つ当該技術分野で公知の荷電リンカー及びその親水性形態を含む。
【００６８】
「癌」及び「癌性」という用語は、未制御の細胞成長により細胞集団が特徴付けられる哺乳動物の生理的状態を指す又は説明している。癌の例としては、限定されるものではないが、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれる。「腫瘍」及び「新生物」とは、過剰な細胞成長又は増殖により生じる１又は複数の細胞を指し、良性（非癌性）であるか、前癌病変を含む悪性（癌性）である。処置及び／又は防止され得る「癌」又は「腫瘍形成性」疾患の例としては、Ｂ細胞リンパ腫、例えばＮＨＬ、前駆Ｂリンパ芽球性白血病リンパ腫、及び成熟Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、例えば低悪性度、中悪性度、及び高悪性度のＦＬ、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、節性及び脾性）、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞性骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、及び未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）が含まれる。非癌性細胞は、腫瘍若しくは新生物の形成又は癌の発生を招かない細胞である。しかし、非癌性細胞は疾患、例えば自己免疫疾患に寄与し得、例えば自己反応性Ｂ細胞を含む。
【００６９】
「癌細胞」、「腫瘍細胞」、及び文法的に同等な用語は、腫瘍又は前癌病変に由来する細胞の全集団を指し、腫瘍細胞集団のバルクを含む非腫瘍形成性細胞及び腫瘍形成性幹細胞（癌幹細胞）の両方を包含する。本発明において、「腫瘍細胞」という用語は、再生及び分化する能力を欠いた腫瘍細胞のみを参照する場合、これらの細胞を癌幹細胞と区別するために、「非腫瘍形成性」という用語で修飾される。
【００７０】
「自己反応性」という用語は、生物自身の細胞、組織、タンパク質、抗体等の物質に対する免疫応答を生成する細胞、組織、タンパク質、抗体等の物質を指す。
【００７１】
「対象」という用語は、特定の処置のレシピエントとなる任意の動物（例えば、哺乳動物）を指し、例えば、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類等が含まれる。典型的には、「対象」及び「患者」という用語はヒト対象に関して本明細書中で交換可能に使用される。
【００７２】
１又は複数の更なる治療剤と「組み合わせた」投与には、同時及び任意の順の逐次投与が含まれる。
【００７３】
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効であるような形態であり、製剤が投与される対象に許容不能な程毒性である更なる成分を含まない製剤を指す。製剤は無菌であり得る。
【００７４】
本明細書に開示される抗体の「有効量」は、具体的に記載されている目的を実施するのに十分な量である。「有効量」は、記載の目的に関連して、実験的に又は通例の方法で決定され得る。
【００７５】
「治療有効量」という用語は、対象又は哺乳動物における疾患又は障害を「処置する」ために有効な抗体又は他の薬物の量を指す。いくつかの実施形態では、薬物の治療有効量は、Ｂ細胞の数を低減させ得るか、自己反応性Ｂ細胞の数を低減し得るか、疾患の症状を軽減し得るか、疾患の進行を遅らせ得る。「処置」の本明細書中での定義を参照されたい。「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するのに有効な量（必要な投与量及び期間）を指す。必ずではないが、典型的には、予防的投薬は疾患の前又は初期段階で対象に使用されるため、予防的有効量は治療有効量よりも少ない。
【００７６】
「標識」という語は、本明細書中で使用される場合、「標識」抗体を作製するために抗体に直接又は間接的にコンジュゲートした検出可能な化合物又は組成物を指す。標識は、それ自体で検出可能であってもよく（例えば、ラジオアイソトープ標識又は蛍光標識）、あるいは、酵素的標識の場合、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変化を触媒し得る。
【００７７】
「処置」、「処置する」、「軽減」、又は「軽減する」等の用語は、診断された病態又は障害を治癒する、遅らせる、症状を軽減する、及び／又は進行を停止させる、治療的手段を指す。したがって、処置が必要なものには、既に障害の診断がなされた又は障害を有することが疑われているものが含まれる。予防的又は防止的手段とは、標的の病態又は障害の発症を防止する及び／又は遅らせる治療的手段を指す。したがって、予防的又は防止的手段が必要なものには、障害を有し易いもの及び障害が防止されるべきものが含まれる。特定の実施形態では、患者が以下の１又は複数を示す場合、対象の「処置」は成功である：Ｂ細胞の減少；自己反応性Ｂ細胞の減少；Ｂ細胞活性の低下；異常なＢ細胞活性の低下；非悪性Ｂ細胞の減少、非癌性Ｂ細胞の減少、免疫グロブリンレベルの低減；罹患率及び死亡率の低下；生活の質の改善；又は効果の組合せ。
【００７８】
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は本明細書中で交換可能に使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基、及び／又はそのアナログ、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによりポリマー中に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びそのアナログを含み得る。ヌクレオチド構造への修飾は、存在する場合、ポリマー構築の前又は後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によ割り込まれ得る。ポリヌクレオチドは、標識構成要素とのコンジュゲート等により重合化後に更に修飾され得る。その他の種類の修飾としては、例えば、「キャップ」、アナログによる天然ヌクレオチドの１又は複数の置換、ヌクレオチド間修飾、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホナート、ホスホトリエステル、ホストアミダート、カバマート（ｃａｂａｍａｔｅ）等）及び荷電結合（例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート等）、ペンダント部分を含むもの、例えばタンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジン等）を含むもの、介入物（例えば、アクリジン、ソラレン等）を有するもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化的金属等）を含むもの、アルキル化剤を含むもの、修飾結合（例えば、αアノマー核酸等）を有するもの、並びに非修飾形態のポリヌクレオチドが含まれる。更に、糖に通常存在するヒドロキシル基のいずれかが、例えばホスホン酸基、リン酸基で置換されてよく、標準的な保護基で保護されてよく、あるいは更なるヌクレオチドへの更なる結合を生成するために活性化されてよく、あるいは固体支持体にコンジュゲートされてよい。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化されてよく、あるいはアミン又は炭素数１〜２０の有機キャップ基部分で置換されてよい。その他のヒドロキシルも、標準的な保護基に誘導体化され得る。ポリヌクレオチドは、当該技術分野で一般に公知のリボース又はデオキシリボース糖のアナログ形態、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−、又は２’−アジド−リボース、炭素環式糖アナログ、α−アノマー糖、エピマー糖、例えばアラビノース、キシロース、又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式アナログ及び塩基脱落ヌクレオシドアナログ、例えばメチルリボシドも含み得る。１又は複数のホスホジエステル結合が代替的な連結基で置換されてよい。これらの代替的連結基としては、限定されるものではないが、リン酸がＰ（Ｏ）Ｓ（「チオアート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオアート」）、”（Ｏ）ＮＲ２（「アミダート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）で置換された実施形態（式中、各Ｒ又はＲ’は、独立して、Ｈであるか、エーテル（−−Ｏ−−）結合を含んでいてもよい置換若しくは非置換アルキル（１〜２０Ｃ）であるか、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、又はアラルジルである）が含まれる。ポリヌクレオチド中の全��の結合が同一である必要はない。上記の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む本明細書中で参照される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００７９】
「ベクター」という用語は、目的の１又は複数の遺伝子又は配列を宿主細胞中に送達して場合により発現させることができるコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、限定されるものではないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、陽イオン性縮合剤と会合したＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、及び産生細胞等の特定の真核細胞が含まれる。
【００８０】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書中で交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状であっても分岐鎖状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸に割り込まれてもよい。この用語は更に、自然に又は介入により修飾されたアミノ酸ポリマーを包含し、そのような修飾としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾、例えば標識構成要素とのコンジュゲーションが挙げられる。例えば、アミノ酸の１又は複数のアナログ（例えば非天然アミノ酸等を含む）及び当該技術分野で公知のその他の修飾を含むポリペプチドもこの定義に含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づくので、特定の実施形態では、ポリペプチドは単鎖又は会合した鎖として生じ得ると理解される。
【００８１】
２つ以上の核酸又はポリペプチドの文脈における「同一（性）」又はパーセント「同一（性）」という用語は、保存的アミノ酸置換を配列同一性の一部とは見なさずに、最大限一致するように整列させて（必要に応じてギャップを挿入）比較した際に同じであるか指定のパーセントの同じヌクレオチド又はアミノ酸残基を有する２つ以上の配列又は亜配列を指す。パーセント同一性は、配列比較用のソフトウェア又はアルゴリズムを用いて又は目視検査により測定され得る。アミノ酸又はヌクレオチド配列のアラインメントを得るために用いることができる種々のアルゴリズム及びソフトウェアが当該技術分野で公知である。配列アラインメントアルゴリズムのそのような非限定的な例の１つは、Karlin  et    al,  1990,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.,  87:2264-2268に記載され、Karlin  et  al.,  1993,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.,  90:5873-5877で改変され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Altschul  et  al.,  1991,  Nucleic  Acids  Res.,  25:3389-3402）に組み込まれているアルゴリズムである。特定の実施形態では、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴをAltschul  et  al.,  1997,  Nucleic  Acids  Res.  25:3389-3402に記載されているように用いることができる。ＢＬＡＳＴ−２、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２（Altschul  et  al.,  1996,  Methods  in  Enzymology,  266:460-480）、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２（ジェネンテック社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ社）が配列の整列に用いることができる公に利用可能な更なるソフトウェアプログラムである。特定の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェア中のＧＡＰプログラムを用いて決定される（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、並びに４０、５０、６０、７０、又は９０のｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ及び１、２、３、４、５、又は６のｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔを用いる）。別の特定の実施形態では、Needleman  and  Wunsch  (J.  Mol.  Biol.  (48):444-453  (1970))のアルゴリズムを組み込んだＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを用いて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性を決定することができる（例えば、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか並びに１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ及び１、２、３、４、５のｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔを用いる）。あるいは、特定の実施形態では、ヌクレオチド又はアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Myers  and  Miller  (CABIOS,  4:11-17  (1989)）のアルゴリズムを用いて決定される。例えば、パーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を、ＰＡＭ１２０  ｗｉｔｈ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ、ｇａｐ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｅｎａｌｔｙ  １２、ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ  ４で用いて決定することができる。特定のアラインメントソフトウェアによる最大のアラインメントのための適切なパラメーターは当業者によって決定され得る。特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメーターが用いられる。特定の実施形態では、第２配列アミノ酸に対する第１のアミノ酸配列のパーセンテージ同一性「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算される。ここで、Ｙは、（目視により又は特定の配列アラインメントプログラムにより整列された）第１及び第２の配列のアラインメントにおいて同一マッチとしてスコアされたアミノ酸残基の数であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列より長い場合、第２の配列に対する第１の配列のパーセント同一性は第１の配列に対する第２の配列のパーセント同一性より長くなる。
【００８２】
非限定的な例として、任意の特定のポリヌクレオチドが参照配列に対して特定のパーセンテージの配列同一性（例えば少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、いくつかの実施形態では、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一）を有するかどうかは、特定の実施形態では、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ（登録商標）、ジェネティクス・コンピューター・グループ社（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ）、大学研究パーク（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ）、５７５  サイエンスドライブ、マディソン、ウィスコンシン州５３７１１）を用いて決定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Smith  and  Waterman,  Advances  in  Applied  Mathematics  2:  482  489  (1981)の局所的相同性アルゴリズムを用いて、２配列間の相同性の最良なセグメントを見出す。本発明に係る参照配列に対して特定の配列が例えば９５％同一であるかどうかを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔ又は任意の他の配列アラインメントプログラムを用いる場合、パラメータ−は、同一性のパーセンテージが参照ヌクレオチド配列の全長にわたり計算されるように及び参照配列中のヌクレオチドの総数の５％まで相同性中にギャップが許容されるように設定される。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本発明の２つの核酸又はポリペプチドが実質的に同一であるとは、配列比較アルゴリズムを用いて又は目視検査による測定で最大の一致が得られるように整列及び比較した時に少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、いくつかの実施形態では少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチド又はアミノ酸残基同一性を有することを意味する。同一性は、少なくとも約１０、約２０、約４０〜６０残基長又はその間の任意の整数の配列領域にわたって存在し得、６０〜８０残基より長い領域、例えば少なくとも約９０〜１００残基にわたり得、いくつかの実施形態では、配列は、例えば、ヌクレオチド配列のコード領域等の比較されている配列の全長にわたって実質的に同一である。
【００８４】
「保存的アミノ酸置換」とは、１つのアミノ酸残基が同様な側鎖を有する別のアミノ酸残基で置換された置換である。同様な側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。例えば、フェニルアラニンによるチロシンの置換は保存的置換である。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチド及び抗体の配列中の保存的置換は、アミノ酸配列を含むポリペプチド又は抗体の抗原への結合、すなわちポリペプチド又は抗体が結合するＣＤ３７への結合を抑止しない。抗原結合を消失させないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換の同定方法は当該技術分野で周知である（例えば、Brummell  et  al.,  Biochem.  32:  1180-1  187  (1993)；Kobayashi  et  al.  Protein  Eng.  12(10):879-884  (1999)；及びBurks  et  al.  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  94:.412-417  (1997)参照）。
【００８５】
本明細書及び請求項で使用されるように、文脈中に明確に単数でないことが記載されていない限り、単数形は複数形を包含する。
【００８６】
実施形態が「を含む」という言葉を用いて本明細書中で説明される場合は常に、用語「からなる」及び／又は「から本質的になる」で説明されるその他の点が類似の実施形態も提供されるものと理解される。
【００８７】
本明細書中で「Ａ及び／又はＢ」等の語句中で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」、及び「Ｂ」の両方を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の語句中で使用される「及び／又は」という用語は以下の実施形態のそれぞれを包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
【００８８】
ＩＩ．ＣＤ３７結合性薬剤
本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合する薬剤を提供する。これらの薬剤は本明細書中で「ＣＤ３７結合性薬剤」と呼ばれる。例示的なＣＤ３７結合物質が、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に記載されている。
【００８９】
ヒト、マカク、及びマウスＣＤ３７の全長アミノ酸配列は当該技術分野で公知であり、本明細書中でそれぞれ配列番号１〜３としても提供される。
【００９０】
ヒトＣＤ３７：
【００９１】
ＭＳＡＱＥＳＣＬＳＬＩＫＹＦＬＦＶＦＮＬＦＦＦＶＬＧＳＬＩＦＣＦＧＩＷＩＬＩＤＫＴＳＦＶＳＦＶＧＬＡＦＶＰＬＱＩＷＳＫＶＬＡＩＳＧＩＦＴＭＧＩＡＬＬＧＣＶＧＡＬＫＥＬＲＣＬＬＧＬＹＦＧＭＬＬＬＬＦＡＴＱＩＴＬＧＩＬＩＳＴＱＲＡＱＬＥＲＳＬＲＤＶＶＥＫＴＩＱＫＹＧＴＮＰＥＥＴＡＡＥＥＳＷＤＹＶＱＦＱＬＲＣＣＧＷＨＹＰＱＤＷＦＱＶＬＩＬＲＧＮＧＳＥＡＨＲＶＰＣＳＣＹＮＬＳＡＴＮＤＳＴＩＬＤＫＶＩＬＰＱＬＳＲＬＧＨＬＡＲＳＲＨＳＡＤＩＣＡＶＰＡＥＳＨＩＹＲＥＧＣＡＱＧＬＱＫＷＬＨＮＮＬＩＳＩＶＧＩＣＬＧＶＧＬＬＥＬＧＦＭＴＬＳＩＦＬＣＲＮＬＤＨＶＹＮＲＬＡＹＲ（配列番号１）
【００９２】
アカゲザルＣＤ３７：
【００９３】
ＭＳＡＱＥＳＣＬＳＬＩＫＹＦＬＦＶＦＮＬＦＦＦＶＩＬＧＳＬＩＦＣＦＧＩＷＩＬＩＤＫＴＳＦＶＳＦＶＧＬＡＦＶＰＬＱＩＷＳＫＶＬＡＩＳＧＶＦＴＭＧＬＡＬＬＧＣＶＧＡＬＫＥＬＲＣＬＬＧＬＹＦＧＭＬＬＬＬＦＡＴＱＩＴＬＧＩＬＩＳＴＱＲＡＱＬＥＲＳＬＱＤＩＶＥＫＴＩＱＲＹＨＴＮＰＥＥＴＡＡＥＥＳＷＤＹＶＱＦＱＬＲＣＣＧＷＨＳＰＱＤＷＦＱＶＬＴＬＲＧＮＧＳＥＡＨＲＶＰＣＳＣＹＮＬＳＡＴＮＤＳＴＩＬＤＫＶＩＬＰＱＬＳＲＬＧＱＬＡＲＳＲＨＳＴＤＩＣＡＶＰＡＮＳＨＩＹＲＥＧＣＡＲＳＬＱＫＷＬＨＮＮＬＩＳＩＶＧＩＣＬＧＶＧＬＬＥＬＧＦＭＴＬＳＩＦＬＣＲＮＬＤＨＶＹＮＲＬＲＹＲ（配列番号２）
【００９４】
マウスＣＤ３７（ＮＰ＿０３１６７１）：
【００９５】
ＭＳＡＱＥＳＣＬＳＬＩＫＹＦＬＦＶＦＮＬＦＦＦＶＬＧＧＬＩＦＣＦＧＴＷＩＬＩＤＫＴＳＦＶＳＦＶＧＬＳＦＶＰＬＱＴＷＳＫＶＬＡＶＳＧＶＬＴＭＡＬＡＬＬＧＣＶＧＡＬＫＥＬＲＣＬＬＧＬＹＦＧＭＬＬＬＬＦＡＴＱＩＴＬＧＩＬＩＳＴＱＲＶＲＬＥＲＲＶＱＥＬＶＬＲＴＩＱＳＹＲＴＮＰＤＥＴＡＡＥＥＳＷＤＹＡＱＦＱＬＲＣＣＧＷＱＳＰＲＤＷＮＫＡＱＭＬＫＡＮＥＳＥＥＰＦＶＰＣＳＣＹＮＳＴＡＴＮＤＳＴＶＦＤＫＬＦＦＳＱＬＳＲＬＧＰＲＡＫＬＲＱＴＡＤＩＣＡＬＰＡＫＡＨＩＹＲＥＧＣＡＱＳＬＱＫＷＬＨＮＮＩＩＳＩＶＧＩＣＬＧＶＧＬＬＥＬＧＦＭＴＬＳＩＦＬＣＲＮＬＤＨＶＹＤＲＬＡＲＹＲ（配列番号３）
【００９６】
特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は抗体、免疫複合体、又はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はヒト化抗体である。
【００９７】
特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は補体依存性細胞傷害を誘導することができる。補体依存性細胞障害を誘導できるＣＤ３７結合性薬剤の例は、例えば、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に開示されている。例えば、ＣＤ３７結合性薬剤で細胞を処置すると、未処置細胞の細胞生存率の約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、又は約３５％未満に細胞生存率を低減させるＣＤＣ活性が生じ得る。ＣＤ３７結合性薬剤で細胞を処置すると、未処置細胞の細胞生存率の約７０〜８０％、約６０〜７０％、約５０〜６０％、約４０〜５０％、又は約３０〜４０％に細胞生存率を低減させるＣＤＣ活性が生じることもある。いくつかの特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＲａｍｏｓ細胞において補体依存性細胞傷害を誘導することができる。
【００９８】
特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導できるＣＤ３７結合性薬剤の例は、例えば、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に開示されている。例えば、ＣＤ３７結合性薬剤で細胞を処置すると、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、又は少なくとも約６０％の細胞溶解を起こすＡＤＣＣ活性が生じ得る。ＣＤ３７結合性薬剤で細胞を処置すると、約１０〜２０％、約２０〜３０％、約３０〜４０％、又は約４０〜５０％の細胞溶解を起こすＡＤＣＣ活性が生じ得る。ＣＤ３７結合性薬剤で細胞を処置すると更に、約１０〜５０％、約２０〜５０％、約３０〜５０％、又は約４０〜５０％の細胞溶解を起こすＡＤＣＣ活性が生じ得る。いくつかの特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＤａｕｄｉ、Ｒａｍｏｓ、及び／又はＧｒａｎａｔａ−５１９細胞においてＡＤＣＣを誘導することができる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はアポトーシスを誘導することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は架橋剤の非存在下でアポトーシスを誘導することができる。架橋剤の非存在下、インビトロでアポトーシスを誘導できるＣＤ３７結合性薬剤の例は、例えば、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に開示されている。例えば、ＣＤ３７結合性薬剤による細胞の処置は、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、又は少なくとも約５５％の細胞においてアポトーシスを誘導することができる。いくつかの特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＲａｍｏｓ細胞及び／又はＲａｊｉ細胞においてアポトーシスを誘導することができる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＢ細胞を枯渇させることができる。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は自己反応性Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は癌細胞ではない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は腫瘍細胞ではない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は癌性細胞ではない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞はＣＤ３７を過剰発現する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞はＣＤ３７を過剰発現しない。
【０１０１】
ＣＤ３７結合性薬剤による細胞の処置は、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、又は少なくとも約７５％のＢ細胞を枯渇させ得る。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、Ｂ細胞を枯渇させる同じ条件下でＴ細胞を枯渇させない。例えば、ＣＤ３７結合性薬剤による細胞の処置で枯渇されるＴ細胞は約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、又は約５％未満であり得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、Ｂ細胞の少なくとも約２５％を枯渇させ、Ｔ細胞の約１０％未満を枯渇させる。特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＢ細胞の少なくとも約３０％を枯渇させ、Ｔ細胞の約５％未満を枯渇させる。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、Ｂ細胞を枯渇させる同じ条件下で単球を枯渇させない。例えば、ＣＤ３７結合性薬剤で細胞を処置すると、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、又は約５％未満の単球が枯渇され得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＢ細胞の少なくとも約２５％を枯渇させ、単球の約１０％未満を枯渇させる。特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＢ細胞の少なくとも約３０％を枯渇させ、単球の約５％未満を枯渇させる。
【０１０４】
特定の実施形態では、ヒトＣＤ３７に特異的に結合する免疫複合体又はその他の薬剤は細胞毒性薬剤を介して細胞死を引き起こす。例えば、特定の実施形態では、ヒトＣＤ３７に対する抗体がメイタンシノイドにコンジュゲートしており、これが、タンパク質内部移行によりＣＤ３７を発現している細胞中で活性化される。別の特定の実施形態では、薬剤又は抗体はメイタンシノイド又は他の細胞毒性分子にコンジュゲートしていない。
【０１０５】
ＣＤ３７結合性薬剤は、ＣＤ３７抗体、例えばＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７並びにその断片、バリアント、及び誘導体を含む。ＣＤ３７結合性薬剤は更に、ＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７からなる群から選択される抗体と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合するＣＤ３７結合性薬剤を含む。ＣＤ３７結合性薬剤は更に、ＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７からなる群から選択される抗体を競合的に阻害するＣＤ３７結合性薬剤を含む。
【０１０６】
いくつかの特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号及び以下の表に記載のマウス／ヒト及びマカク／ヒトキメラポリペプチドを含むキメラＣＤ３７ポリペプチドに結合する能力を特徴とし得る。
【０１０７】
【表２−１】
0006018622.tif 000003
【表２−２】
0006018622.tif 000004
【０１０８】
いくつかの特定の実施形態では、ＣＤ３７へのＣＤ３７結合性薬剤の結合はヒトＣＤ３７アミノ酸１０９〜１３８を必要としない。したがって、いくつかのＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１８４のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する。別の実施形態では、ＣＤ３７へのＣＤ３７結合性薬剤の結合はヒトＣＤ３７アミノ酸２０２〜２４３の変異によって妨げられる。したがって、いくつかのＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１８５のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合しない。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１８４のポリペプチド及び配列番号１８６のポリペプチドに結合するが、配列番号１８５のポリペプチドに結合しない。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１８７のポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１８７のポリペプチド及び配列番号１８８のポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１８７のポリペプチド及び配列番号１８９のポリペプチドに結合する。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１９０のポリペプチドに結合するが、配列番号１９１のポリペプチドには結合しない。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１９２のポリペプチドに結合するが、配列番号１９１のポリペプチドには結合しない。
【０１１２】
特定のＣＤ３７結合性薬剤が結合するＣＤ３７ペプチド断片としては、限定されるものではないが、配列番号１のアミノ酸２００〜２４３、配列番号１のアミノ酸２０２〜２２０、又は配列番号１のアミノ酸２２１〜２４３を含む、から本質的になる、又はからなるＣＤ３７断片が含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は配列番号１のアミノ酸２０２〜２４３を含むヒトＣＤ３７エピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７へのＣＤ３７結合性薬剤の結合は配列番号１のアミノ酸２０２〜２４３を必要とする。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７へのＣＤ３７結合性薬剤の結合は配列番号１のアミノ酸２００〜２２０を必要とする。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７へのＣＤ３７結合性薬剤の結合は配列番号１のアミノ酸２２１〜２４３を必要とする。
【０１１３】
上記の結合特性を有するＣＤ３７結合性薬剤の例は、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に記載されている。
【０１１４】
ＣＤ３７結合性薬剤としては更に、ＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、又はＣＤ３７−５７の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列を含むＣＤ３７結合性薬剤が含まれる。ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７の重鎖及び軽鎖ＣＤＲは関連配列を含む。したがって、ＣＤ３７結合性薬剤は、ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７のアラインメントにより得られるコンセンサス配列を含む重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列も含み得る。ＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７のＣＤＲ配列並びにＣＤ３７−３８、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７のコンセンサス配列を以下の表１及び２に示す。
【０１１５】
【表３】
0006018622.tif 000005
【０１１６】
【表４】
0006018622.tif 000006
【０１１７】
ＣＤ３７結合性分子は、ＣＤＲ１個当たり４個まで（すなわち、０、１、２、３、又は４個）の保存的アミノ酸置換を有するＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、又はＣＤ３７−５７のＣＤＲを含む、ＣＤ３７に特異的に結合する抗体又は抗原結合性断片であり得る。
【０１１８】
ＣＤ３７結合性分子は、本明細書に記載の個々の可変軽鎖又は可変重鎖の１つを含み得る。抗体及びポリペプチドは可変軽鎖及び可変重鎖の両方を含んでもよい。マウス、キメラ、及びヒト化ＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７抗体の可変軽鎖及び可変重鎖配列を以下の表３及び４に示す。
【０１１９】
【表５−１】
0006018622.tif 000007
【表５−２】
0006018622.tif 000008
【表５−３】
0006018622.tif 000009
【０１２０】
【表６−１】
0006018622.tif 000010
【表６−２】
0006018622.tif 000011
【０１２１】
更に、以下を含むポリペプチドが提供される：（ａ）配列番号５５〜７１又は１７７に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド及び／又は（ｂ）配列番号７２〜８７又は１７８に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド。特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５５〜８７、１７７、又は１７８に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。したがって、特定の実施形態では、ポリペプチドは、（ａ）配列番号５５〜７１又は１７７に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド及び／又は（ｂ）配列番号７２〜８７又は１７８に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、（ａ）配列番号５５〜７１又は１７７のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び／又は（ｂ）配列番号７２〜８７又は１７８のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＣＤ３７に特異的に結合する抗体及び／又はポリペプチドである。特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＣＤ３７に特異的に結合するマウス、キメラ、又はヒト化抗体である。特定の実施形態では、配列番号５５〜８７、１７７、又は１７８に対して特定のパーセンテージの配列同一性を有するポリペプチドは、配列番号５５〜８７と保存的アミノ酸置換によってのみ異なる。
【０１２２】
ポリペプチドは本明細書に記載の個々の軽鎖又は重鎖の１つを含み得る。抗体及びポリペプチドは軽鎖及び重鎖の両方を含んでもよい。マウス、キメラ、及びヒト化ＣＤ３７−３、ＣＤ３７−１２、ＣＤ３７−５０、ＣＤ３７−５１、ＣＤ３７−５６、及びＣＤ３７−５７抗体の軽鎖及び可変鎖配列を以下の表５及び６に示す。
【０１２３】
【表７−１】
0006018622.tif 000012
【表７−２】
0006018622.tif 000013
【表７−３】
0006018622.tif 000014
【表７−４】
0006018622.tif 000015
【表７−５】
0006018622.tif 000016
【表７−６】
0006018622.tif 000017
【０１２４】
【表８−１】
0006018622.tif 000018
【表８−２】
0006018622.tif 000019
【表８−３】
0006018622.tif 000020
【０１２５】
また、以下を含むポリペプチドも提供される：（ａ）配列番号８８〜１０４又は１７９に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド及び／又は（ｂ）配列番号１０５〜１２０又は１８０に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド。特定の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８８〜１２０、１７９、又は１８０に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。したがって、特定の実施形態では、ポリペプチドは、（ａ）配列番号８８〜１０４又は１７９に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド及び／又は（ｂ）配列番号１０５〜１２０又は１８０に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、（ａ）配列番号８８〜１０４又は１７９のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び／又は（ｂ）配列番号１０５〜１２０又は１８０のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＣＤ３７に特異的に結合する抗体及び／又はポリペプチドである。特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＣＤ３７に特異的に結合するマウス、キメラ、又はヒト化抗体である。特定の実施形態では、配列番号８８〜１２０、１７９、又は１８０に対して特定のパーセンテージの配列同一性を有するポリペプチドは、保存的アミノ酸置換によってのみ配列番号８８〜１２０、１７９、又は１８０と異なる。
【０１２６】
特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６４、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６５、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｉｓｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６６、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６７、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６８、２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６６９、及び２０１０年２月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０６７０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１０８０１  ユニバーシティー・ブールバード、マナッサス、バージニア州  ２０１１０）からなる群から選択されるハイブリドーマから生産された抗体であり得る。特定の実施形態では、抗体は、ＰＴＡ−１０６６５、ＰＴＡ−１０６６６、ＰＴＡ−１０６６７、ＰＴＡ−１０６６８、ＰＴＡ−１０６６９、及びＰＴＡ−１０６７０からなる群から選択されるハイブリドーマから生産された抗体のＶＨ−ＣＤＲ及びＶＬ−ＣＤＲを含む。
【０１２７】
特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（２０１０年３月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０７２２）によってコードされる軽鎖を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（２０１０年３月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０７２３）によってコードされる重鎖を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（ＰＴＡ−１０７２２）によってコードされる軽鎖及び組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（ＰＴＡ−１０７２３）によってコードされる重鎖を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（ＰＴＡ−１０７２２）によってコードされるＶＬ−ＣＤＲ及び組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（ＰＴＡ−１０７２３）によってコードされるＶＨ−ＣＤＲを含み得る。
【０１２８】
モノクローナル抗体は、Kohler  and  Milstein  (1975)  Nature  256:495に記載されているようなハイブリドーマ法を用いて作製され得る。ハイブリドーマ法を用いて、マウス、ハムスター、又はその他の適切な宿主動物を、前述のように免疫化して、免疫化抗原に特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘導する。リンパ球はインビトロでも免疫化され得る。免疫化後、リンパ球を単離し、例えばポリエチレングリコールを用いて、好適な骨髄腫細胞系統と融合してハイブリドーマ細胞を形成し、次いでこれは未融合リンパ球及び骨髄腫細胞から分離して選択され得る。次いで、選択された抗原に特異的であることが免疫沈降、イムノブロッティング、又はインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ））により決定されたモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを、標準的な方法（Goding,  Monoclonal  Antibodies:  Principles  and  Practice,  Academic  Press,  1986）を用いたインビトロ培養又は動物中の腹水腫瘍としてインビボで増やすことができる。次いで、上記ポリクローナル抗体について記載したように、培養培地又は腹水液からモノクローナル抗体を精製することができる。
【０１２９】
あるいは、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように組換えＤＮＡ法を用いてモノクローナル抗体を作製することもできる。抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲ等により、成熟Ｂ細胞又はハイブリドーマ細胞からモノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドを単離し、その配列を定法により決定する。次いで、重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを、そうしなければ免疫グロブリンタンパク質を生産しない宿主細胞、例えば大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞に形質移入された時に宿主細胞によってモノクローナル抗体が生産される好適な発現ベクターにクローニングする。また、所望の種の組換えモノクローナル抗体又はその断片を、記載されているように、所望の種のＣＤＲを発現するファージディスプレイライブラリーから単離することができる（McCafferty  et  al.,  1990,  Nature,  348:552-554；Clackson  et  al.,  1991,  Nature,  352:624-628；及びMarks  et  al.,  1991,  J.  Mol.  Biol.,  222:581-597）。
【０１３０】
モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、別の抗体を作製するための組換えＤＮＡ技術を用いて複数の異なる様式で更に改変され得る。いくつかの実施形態では、例えばマウスモノクローナル抗体の、軽鎖及び重鎖の定常ドメインが、１）例えばヒト抗体のその領域で置換されてキメラ抗体が作製されてもよく、２）非免疫グロブリンポリペプチドで置換されて融合抗体が作製されてもよい。いくつかの実施形態では、定常領域が切り詰められるか除去されて、モノクローナル抗体の所望の抗体断片が作製される。可変領域の部位特異的又は高密度突然変異誘発を用いて、モノクローナル抗体の特異性、親和性等を最適化してよい。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３７に対するモノクローナル抗体はヒト化抗体である。特定の実施形態では、そのような抗体は、ヒト対象に投与された時に抗原性及びＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）応答を低減するために治療的に使用される。ヒト化抗体は当該技術分野で公知の種々の技術を用いて生成され得る。別の特定の実施形態では、ＣＤ３７に対する抗体はヒト抗体である。
【０１３２】
ヒト抗体は、当該技術分野で公知の種々の技術を用いて直接生成することができる。インビトロで免疫化された又は免疫化された個体から単離された、標的抗原に対する抗体を生産する不死化ヒトＢリンパ球を作製することができる（例えば、Cole  et  al.,  Monoclonal  Antibodies  and  Cancer  Therapy,  Alan  R.  Liss,  p.  77  (1985)；Boemer  et  al.,  1991,  J.  Immunol.,  147  (1):86-95；及び米国特許第５，７５０，３７３号参照）。また、ヒト抗体は、例えばVaughan  et  al.,  1996,  Nat.  Biotech.,  14:309-314、Sheets  et  al.,  1998,  Proc.  Nat’l.  Acad.  Sci.,  95:6157-6162、Hoogenboom  and  Winter,  1991,  J.  Mol.  Biol.,  227:381、及びMarks  et  al.,  1991,  J.  Mol.  Biol.,  222:581）に記載されているようにヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択され得る。抗体ファージライブラリーを作製及び使用する技術は、米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号；同第６，５９３，０８１号；同第６，３００，０６４号；同第６，６５３，０６８号；同第６，７０６，４８４号；及び同第７，２６４，９６３号；並びにRothe  et  al.,  2007,  J.  Mol.  Bio.,  376:1182（それぞれの全体を参照により援用する）にも記載されている。親和性成熟戦略及びチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）戦略（その全体を参照により援用するMarks  et  al.,  1992,  Bio/Technology  10:779-783）が当該技術分野で公知であり、高親和性ヒト抗体の作製に使用することができる。
【０１３３】
また、ヒト化抗体は、免疫化された時に内因的な免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生できるヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウス中で生成することもできる。このアプローチは米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号に記載されている。
【０１３４】
本発明は更に、ＣＤ３７を特異的に認識する二重特異性抗体を包含する。二重特異性抗体とは少なくとも２つの異なるエピトープを特異的に認識してこれに結合できる抗体である。異なるエピトープは、同じ分子（例えば、同じＣＤ３７）内であってもよく、異なる分子上にあって、抗体がＣＤ３７と例えば１）Ｔ細胞受容体（例えば、ＣＤ３）若しくはＦｃ受容体（例えば、ＣＤ６４、ＣＤ３２、又はＣＤ１６）等の白血球上のエフェクター分子又は２）以下に詳述する細胞毒性薬剤との両方を特異的に認識してこれに結合できるようになっていてよい。
【０１３５】
例示的な二重特異性抗体は、その少なくとも１つが本発明のポリペプチドに由来する２つの異なるエピトープに結合することができる。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームを、白血球上の引き金分子、例えばＴ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、又はＢ７）又はＩｇＧのＦｃ受容体に結合するアームと組み合わせて、特定の抗原を発現している細胞に細胞防御機構が集中するようにしてもよい。二重特異性抗体は、特定の抗原を発現している細胞に細胞毒性薬剤を方向付けるために用いることもできる。これらの抗体は、抗原結合性アーム及び細胞毒性薬剤又は放射性核種キレーター、例えばＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、又はＴＥＴＡに結合するアームを有する。二重特異性抗体の作製技術は当該技術分野で公知である（Millstein  et  al.,  1983,  Nature  305:537-539；Brennan  et  al.,  1985,  Science  229:81；Suresh  et  al,  1986,  Methods  in  Enzymol.  121:120；Traunecker  et  al.,  1991,  EMBO  J.  10:3655-3659；Shalaby  et  al.,  1992,  J.  Exp.  Med.  175:217-225；Kostelny  et  al.,  1992,  J.  Immunol.  148:1547-1553；Gruber  et  al.,  1994,  J.  Immunol.  152:5368；及び米国特許第５，７３１，１６８号）。３価以上の抗体も想定される。例えば、三重特異性抗体が作製され得る（Tutt  et  al.,  J.  Immunol.  147:60  (1991)）。したがって、特定の実施形態では、ＣＤ３７に対する抗体は多重特異性である。
【０１３６】
特定の実施形態では、例えば組織浸透を高めるため、抗体断片が提供される。抗体断片を生産するための種々の技術が公知である。従来より、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク質消化に由来する（例えば、Morimoto  et  al.,  1993,  Journal  of  Biochemical  and  Biophysical  Methods  24:107-117；Brennan  et  al.,  1985,  Science,  229:81）。特定の実施形態では、抗体断片は組換えにより作製される。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片は全て、大腸菌又は他の宿主細胞中で発現させて分泌させることが可能であるので、これらの断片の大量生産が可能である。そのような抗体断片は前述の抗体ファージライブラリーから単離することもできる。抗体断片は、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているように直鎖状抗体であってもよく、単一特異性であっても二特異性であってもよい。抗体断片を生産するためのその他の技術は当業者に明らかである。
【０１３７】
本発明によれば、ＣＤ３７に特異的な単鎖抗体の生産に技術が応用され得る（米国特許第４，９４６，７７８号参照）。更に、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築して、所望のＣＤ３７特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片又はその誘導体、断片、アナログ、若しくはホモログの迅速且つ効果的な同定が可能になるように方法が応用され得る（Huse,  et  al.,  Science  246:1275-1281  (1989)）。抗体断片は、当該分野の技術により生産することができ、そのような技術としては、限定されるものではないが、（ａ）抗体分子のペプシン消化により生成したＦ（ａｂ’）２断片；（ｂ）Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィドブリッジを還元することにより生成したＦａｂ断片；（ｃ）パパイン及び還元剤で抗体分子を処理することにより生成したＦａｂ断片、及び（ｄ）Ｆｖ断片が含まれる。
【０１３８】
特に抗体断片の場合、その血清半減期を延長するために抗体を改変することが更に望ましいことがある。これは、例えば、抗体断片の適切な領域の変異によりサルベージ受容体結合性エピトープを抗体断片中に導入することにより、又はエピトープをペプチドタグ中に組み込んだ後、（例えば、ＤＮＡ又はペプチド合成により）抗体断片のいずれかの末端又は中央に融合することにより、達成することができる。
【０１３９】
ヘテロコンジュゲート抗体も本発明の範囲に含まれる。ヘテロコンジュゲート抗体は共有結合的に連結されたされた２つの抗体で構成される。そのような抗体は、例えば、望まれない細胞への免疫細胞の標的化に提唱されている（米国特許第４，６７６，９８０号）。架橋剤を用いる方法を含む合成タンパク質化学における公知の方法を用いてインビトロで抗体を生産してもよいと考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて又はチオエーテル結合の形成により免疫毒素を構築することができる。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオラート及びメチル−４−メルカプトブチルイミダートが含まれる。
【０１４０】
本発明の目的のためには、抗体とヒトＣＤ３７のポリペプチドとを会合させる任意の種類の可変領域を改変抗体が含み得ると理解されるべきである。この点に関して、可変領域は、所望の抗原に対する体液性反応の開始及び免疫グロブリンの生産を誘導できる任意の種類の哺乳動物を含み得る又はこれに由来し得る。したがって、改変抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル、マカク等）又はオオカミ（ｌｕｐｉｎｅ）起源であり得る。いくつかの実施形態では、改変免疫グロブリンの可変及び定常領域の両方がヒトである。別の実施形態では、分子の結合特性を向上させるため又は免疫原性を低減するために、（通常、非ヒト供給源に由来する）適合性抗体の可変領域が操作又は特異的に適応されていてよい。この点に関して、本発明で有用な可変領域は、ヒト化されていてよく、あるいは移入アミノ酸配列を含めることにより変更されていてもよい。
【０１４１】
特定の実施形態では、重鎖及び軽鎖両方の可変ドメインが、１又は複数のＣＤＲの少なくとも一部の置換により、及び必要に応じて部分的フレームワーク領域置換及び配列変化により、変更されている。ＣＤＲはフレームワーク領域が由来する抗体と同じクラス又はサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲが、異なるクラスの抗体に由来すること及び異なる種の抗体に由来し得ることも予期される。１つの可変ドメインの抗原結合能を別の可変ドメインに移すためにＣＤＲの全てをドナー可変領域の完全ＣＤＲで置換することが常に必要であるわけではない。むしろ、場合によっては、抗原結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すだけでよい。米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、及び同第５，６９３，７６２号に記載の説明を考慮すると、ルーチンな実験を行うことにより又は試行錯誤の試験により免疫原性の低下した機能的抗体を得ることは、十分に当業者の能力に含まれる。
【０１４２】
可変領域への変更に関わらず、天然又は無変化の定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比べた時に血清半減期が短縮されているといった所望の生化学的特徴が付与されるように定常領域ドメインの１又は複数の少なくとも一部が欠失等の変化を受けた抗体（例えば、全長抗体又はその免疫応答性断片）が本発明の改変抗体に包含されると当業者には理解される。いくつかの実施形態では、改変抗体の定常領域はヒト定常領域を含む。本発明と両立する定常領域への改変には、１又は複数のドメイン中における１又は複数のアミノ酸の付加、欠失、又は置換が含まれる。すなわち、本明細書に開示の改変抗体は、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）の１又は複数及び／又は軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）への変更又は改変を含み得る。いくつかの実施形態では、１又は複数のドメインが部分的に又は全体的に欠失された改変定常領域が予期される。いくつかの実施形態では、改変抗体は、ＣＨ２ドメイン全体が除去されたドメイン欠失コンストラクト又はバリアント（ΔＣＨ２コンストラクト）を含む。いくつかの実施形態では、取り除かれた定常領域ドメインが、存在しない定常領域によって通常は付与される分子的柔軟性の一部を付与する短いアミノ酸スペーサー（例えば１０残基）で置換される。
【０１４３】
それらの立体配置に加え、定常領域は複数のエフェクター機能を仲介することが当該技術分野で知られている。例えば、抗体への補体のＣ１成分の結合は補体系を活性化する。補体の活性化はオプソニン作用及び病原細胞の溶解に重要である。補体の活性化は更に、炎症反応を刺激し、自己免疫過敏症にも関与し得る。更に、抗体は、Ｆｃ領域を介して、抗体Ｆｃ領域上のＦｃ受容体部位が細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合して、細胞に結合する。ＩｇＧ（ガンマ受容体）、ＩｇＥ（エータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）、及びＩｇＭ（ミュー受容体）等、異なるクラスの抗体に特異的な複数のＦｃ受容体がある。細胞表面上のＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体被覆粒子の貪食及び破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆標的細胞の溶解（抗体依存性細胞傷害又はＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症性メディエーターの放出、胎盤移行、並びに免疫グロブリン生産の制御を含む複数の重要且つ多様な生物学的反応を引き起こす。
【０１４４】
特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性抗体は、変化したエフェクター機能を提供し、これが、投与された抗体の生物学的特性に影響を与える。例えば、（点突然変異又は他の手段による）定常領域ドメインの欠失又は不活化は、循環している改変抗体のＦｃ受容体結合を低減し得る。別の場合には、本発明に一致する定常領域改変は、補体結合を緩和し、したがって、血清半減期及びコンジュゲートされた細胞毒素との非特異的会合を低減し得る。定常領域の更に別の改変を用いて、抗原特異性又は抗体柔軟性の増大により局在化を促進するジスルフィド結合又はオリゴ糖部分の除去が可能である。同様に、本発明に係る定常領域の改変は、当業者に周知の生化学的又は分子工学的技術を用いて容易に行うことができる。
【０１４５】
特定の実施形態では、抗体であるＣＤ３７結合性薬剤は１又は複数のエフェクター機能を有しない。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性及び／又は補体依存性細胞障害活性（ＣＤＣ）活性を有しない。特定の実施形態では、抗体はＦｃ受容体及び／又は補体因子に結合しない。特定の実施形態では、抗体はエフェクター機能を有しない。
【０１４６】
特定の実施形態では、ＣＨ３ドメインが各改変抗体のヒンジ領域に直接融合するように改変抗体が操作され得る。別のコンストラクトでは、ヒンジ領域と改変ＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインとの間にペプチドスペーサーを提供することが望ましいことがある。例えば、ＣＨ２ドメインが欠失されており且つ残りのＣＨ３ドメイン（改変又は非改変）が５〜２０アミノ酸のスペーサーでヒンジ領域に結合している適合コンストラクトが発現され得る。そのようなスペーサーは、例えば、定常ドメインの調節エレメントが自由且つ接近可能であるようにするため又はヒンジ領域の柔軟性を維持するために付加され得る。しかし、場合によっては、アミノ酸スペーサーが免疫原性でありコンストラクトに対する望まれない免疫応答を誘導することが判明し得ることに留意されたい。したがって、特定の実施形態では、コンストラクトに付加される任意のスペーサーは、改変抗体の所望の生化学的品質が維持されるように、比較的非免疫原性であるか、完全に取り除かれる。
【０１４７】
全定常領域ドメインの欠失に加えて、本発明の抗体は部分的欠失又は数個若しくは１個のアミノ酸の置換により提供され得ると理解される。例えば、ＣＨ２ドメインの選択された領域中における１個のアミノ酸の変異がＦｃ結合性を実質的に低下させるのに十分であり得る。同様に、１又は複数の定常領域ドメインの、調節されるべきエフェクター機能（例えば、補体ＣＬＱ結合）を制御する部分を単に欠失させることが望ましいことがある。そのような定常領域の部分的欠失は、対象定常領域ドメインに関連するその他の望ましい機能は損なわずに、抗体の選択された特性（血清半減期）を向上させ得る。更に、上記で示唆したように、開示抗体の定常領域は、得られるコンストラクトのプロファイルを高める１又は複数のアミノ酸の変異又は置換を介して改変され得る。この点に関して、改変抗体の立体配置及び免疫原性プロファイルを実質的に維持しながら、保存された結合部位により与えられる活性（例えば、Ｆｃ結合）を破壊することが可能であり得る。特定の実施形態は、エフェクター機能を低減若しくは増大する等の所望の特性を高めるため又はより多くの細胞毒若しくは炭水化物付着を提供するための、定常領域への１又は複数のアミノ酸の付加を含み得る。そのような実施形態では、選択された定常領域ドメインに由来する特異的配列を挿入又は複製することが望ましいことがある。
【０１４８】
本発明は更に、本明細書に記載のキメラ、ヒト化、及びヒト抗体、又はその抗体断片と実質的に相同なバリアント及び等価物を包含する。これらは、例えば、保存的置換変異、すなわち、同様なアミノ酸による１又は複数のアミノ酸の置換を含み得る。例えば、保存的置換とは、同じ一般的クラス内の別のアミノ酸によるアミノ酸の置換、例えば、別の酸性アミノ酸による酸性アミノ酸の置換、別の塩基性アミノ酸による塩基性アミノ酸の置換、又は別の中性アミノ酸による中性アミノ酸の置換等を指す。保存的アミノ酸置換が意図するところは当該技術分野で周知である。
【０１４９】
本発明のポリペプチドは、ヒトＣＤ３７に対する抗体又はその断片を含む組換えポリペプチド、天然ポリペプチド、又は合成ポリペプチドであり得る。タンパク質の構造又は機能に大きな影響を与えることなく本発明のいくつかのアミノ酸配列を変化させることが可能であると当該技術分野では理解される。したがって、本発明は更に、実質的な活性を示す又はＣＤ３７タンパク質に対する抗体若しくはその断片の領域を含むポリペプチドのバリエーションを含む。そのような変異体は、欠失、挿入、反転、リピート、及び型の置換（ｔｙｐｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）を含む。
【０１５０】
ポリペプチド及びアナログは、通常はタンパク質の一部ではない追加的な化学部分を含むように更に改変され得る。それらの誘導体化部分は、タンパク質の溶解度、生物学的半減期、又は吸収を改善し得る。部分は更に、タンパク質等の任意の望ましい副作用を低減又は消失させ得る。それらの部分の概要はREMINGTON'S  PHARMACEUTICAL  SCIENCES,  20th  ed.,  Mack  Publishing  Co.,  Easton,  PA  (2000)に見出すことができる。
【０１５１】
本明細書に記載の単離されたポリペプチドは、当該技術分野で公知の任意の好適な方法により生産することができる。そのような方法は、直接的なタンパク質合成法から、単離されたポリペプチド配列をコードするＤＮＡ配列の構築及び好適な形質転換宿主中におけるそれらの配列の発現にまでわたる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ配列は、目的の野生型タンパク質をコードするＤＮＡ配列を単離又は合成することにより組換え技術を用いて構築される。必要に応じて、その機能的アナログを得るために部位特異的突然変異誘発により配列を変異させてもよい（例えば、Zoeller  et  al.,  Proc.  Nat’l.  Acad.  Sci.  USA  81:5662-5066  (1984)及び米国特許第４，５８８，５８５号参照）。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、目的のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成装置を用いて化学合成により構築される。そのようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列及び目的の組換えポリペプチドを生産させる宿主細胞に好ましいコドンの選択に基づいて設計され得る。標準的方法を応用して目的の単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配列を合成することができる。例えば、完全アミノ酸配列を用いて逆翻訳された遺伝子を構築することができる。更に、特定の単離されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーを合成することができる。例えば、所望のポリペプチドの一部をコードする複数の小さなオリゴヌクレオチドを合成した後にライゲーションしてよい。個々のオリゴヌクレオチドは典型的には、相補的構築のための５’又は３’オーバーハングを含む。
【０１５３】
（合成、部位特異的変異誘発等の方法により）構築した後、目的の特定の単離されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を発現ベクターに挿入して、所望の宿主中でのタンパク質発現に適した発現制御配列に作動可能に連結する。ヌクレオチドシークエンシング、制限マッピング、及び好適な宿主中での生物学的活性ポリペプチドの発現により適切な構築を確認することができる。当該技術分野で周知なように、宿主中で高発現レベルの形質移入遺伝子を得るためには、選択された発現宿主中で機能的な転写及び翻訳の発現制御配列に遺伝子が作動可能に連結されなければならない。
【０１５４】
特定の実施形態では、組換え発現ベクターを用いて、ヒトＣＤ３７に対する抗体又はその断片をコードするＤＮＡを増幅及び発現する。組換え発現ベクターは、哺乳動物、微生物、ウイルス、又は昆虫遺伝子に由来する好適な転写又は翻訳調節エレメントに作動可能に連結された抗ＣＤ３７抗体又はその断片のポリペプチド鎖をコードする合成又はｃＤＮＡ由来ＤＮＡ断片を有する複製可能なＤＮＡコンストラクトである。転写単位は、通常、（１）遺伝子発現の制御的役割を有する遺伝子的エレメント、例えば転写プロモーター又はエンハンサー、（２）ｍＲＮＡに転写されてタンパク質に翻訳される構造的又はコード配列、及び（３）以下に詳述するような、適切な転写及び翻訳の開始及び終結配列、の集合体を含む。そのような調節エレメントには、転写を制御するオペレーター配列が含まれ得る。複製起源により通常付与される宿主中での複製能力及び形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子が更に組み込まれ得る。ＤＮＡ領域は、それらが互いに機能的に関連する時、作動可能に連結されている。例えば、シグナルペプチド（分泌性リーダー）のＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結されており；プロモーターは、配列の転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されており；リボソーム結合部位は、翻訳が可能なように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。酵母発現系での使用が意図される構造的エレメントとして、宿主細胞による翻訳タンパク質の細胞外分泌を可能にするリーダー配列が含まれる。あるいは、組換えタンパク質がリーダー又は輸送配列なしで発現される場合、これはＮ末端メチオニン残基を含み得る。この残基が、場合により、発現した組換えタンパク質からその後切断されて最終生成物が生成し得る。
【０１５５】
発現制御配列及び発現ベクターの選択は宿主の選択によって決まる。幅広い発現宿主／ベクターの組合せが使用され得る。真核生物宿主に有用な発現ベクターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス、及びサイトメガロウイルスの発現制御配列を含むベクターが含まれる。細菌宿主に有用な発現ベクターとしては、公知の細菌プラスミド、例えば大腸菌から得られるプラスミド、例えばｐＣＲ  １、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、及びそれらの誘導体、宿主範囲がより幅広いプラスミド、例えばＭ１３及び糸状一本鎖ＤＮＡファージが含まれる。
【０１５６】
ＣＤ３７結合性のポリペプチド又は抗体（又は抗原として用いるＣＤ３７タンパク質）の発現に適した宿主細胞としては、適切なプロモーターの制御下にある、原核生物、酵母、昆虫、又は高等真核細胞が含まれる。原核生物としては、グラム陰性又はグラム陽性の生物、例えば大腸菌又は桿菌が含まれる。高等真核細胞としては、後述する哺乳動物起源の確立された細胞系が含まれる。無細胞翻訳系を用いることもできる。細菌、真菌、酵母、及び哺乳動物の細胞宿主と使用するための適切なクローニング及び発現ベクターは、関連する開示を参照により援用するPouwels  et  al.  (Cloning  Vectors:  A  Laboratory  Manual,  Elsevier,  N.Y.,  1985)に記載されている。抗体生産を含むタンパク質生産方法に関する更なる定法は、例えば、それぞれその全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６号及び同第６，６６０，５０１号、並びに国際公開第０４００９８２３号中に見出すことができる。
【０１５７】
種々の哺乳動物又は昆虫の細胞培養系も組換えタンパク質の発現に好ましく用いられる。哺乳動物細胞中で組換えタンパク質の発現が行われてもよく、これは、そのようなタンパク質が全体的に正しく折り畳まれ、適切に修飾され、完全に機能性であるためである。好適な哺乳動物宿主細胞系の例としては、Gluzman  (Cell  23:175,  1981)に記載されているサル腎細胞のＣＯＳ−７系統及び適切なベクターを発現できるその他の細胞系、例えばＬ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、及びＢＨＫ細胞系が含まれる。哺乳動物用発現ベクターは、非転写エレメント、例えば、複製起源、発現すべき遺伝子に連結された好適なプロモーター及びエンハンサー、その他の５’又は３’フランキング非転写配列、並びに５’又は３’非翻訳配列、例えば必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスのドナー及びアクセプター部位、並びに転写終結配列を含み得る。昆虫細胞中で異種タンパク質を生産するためのバキュロウイルス系がLuckow  and  Summers,  Bio/Technology  6:47  (1988)に概括されている。
【０１５８】
形質転換された宿主によって生産されたタンパク質は任意の好適な方法に従って精製することができる。そのような標準的方法としては、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、及びサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心、溶解度の差、又はタンパク質精製のための任意の他の標準的技術が含まれる。親和性タグ、例えばヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列、及びグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼをタンパク質に付加することにより、適切な親和性カラムに通すことによる容易な精製が可能になり得る。タンパク質分解、核磁気共鳴、Ｘ線結晶解析等の技術を用いて、単離されたタンパク質の物理的特徴を解析することもできる。
【０１５９】
例えば、培養培地中に組換えタンパク質を分泌する系の上清は、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを用いて最初に濃縮され得る。濃縮ステップ後、精製物は好適な精製マトリックスにアプライされ得る。あるいは、陰イオン交換樹脂、例えばペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックス又は基体が用いられ得る。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、又はタンパク質精製に一般的に使用されるその他の種類のものであり得る。あるいは、陽イオン交換ステップが用いられ得る。好適な陽イオン交換体としては、スルホプロピル又はカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが含まれる。最後に、ペンダントなメチル又は他の脂肪族基を有する疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体（例えばシリカゲル）を用いる１又は複数の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）ステップを用いてＣＤ３７結合性薬剤を更に精製してもよい。上記精製ステップの一部又は全部は、種々の組合せで、均質な組換えタンパク質を得るためにも用いられ得る。
【０１６０】
細菌培養で生産された組換えタンパク質は、例えば、細胞ペレットからの最初の抽出、次いで１又は複数回の濃縮、塩析、水性イオン交換又は分子ふるいクロマトグラフィーステップにより単離され得る。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が最終精製ステップで用いられ得る。組換えタンパク質の発現に使用される微生物細胞は、凍結解凍サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞可溶化剤の使用等の任意の従来の方法により破壊され得る。
【０１６１】
抗体及び他のタンパク質を精製するための当該技術分野で公知の方法には更に、例えば、それぞれその全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２００８／０３１２４２５号、同第２００８／０１７７０４８号、及び同第２００９／０１８７００５号に記載の方法が含まれる。
【０１６２】
特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、抗体ではないポリペプチドである。タンパク質標的に高い親和性で結合する非抗体ポリペプチドを同定及び生産する種々の方法が当該技術分野で公知である（例えば、それぞれその全体を参照により本明細書に援用するSkerra,  Curr.  Opin.  Biotechnol.,  18:295-304  (2007)、Hosse  et  al.,  Protein  Science,  15:14-27  (2006)、Gill  et  al.,  Curr.  Opin.  Biotechnol.,  17:653-658  (2006)、Nygren,  FEBS  J.,  275:2668-76  (2008)、及びSkerra,  FEBS  J.,  275:2677-83  (2008)参照）。特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性ポリペプチドを同定／生産するためにファージディスプレイ技術が用いられている。特定の実施形態では、ポリペプチドは、プロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン、アンキリンコンセンサスリピートドメイン、及びチオレドキシンからなる群から選択される種類のタンパク質足場を含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、薬剤は非タンパク質分子である。特定の実施形態では、薬剤は小分子である。非タンパク質ＣＤ３７結合性薬剤の同定に有用な化学物質のコンビナトリアルライブラリー及び技術は当業者に公知である（例えば、それぞれその全体を参照により本明細書に援用するKennedy  et  al.,  J.  Comb.  Chem,  10:345-354  (2008)、Dolle  et  al,  J.  Comb.  Chem.,  9:855-902  (2007)、及びBhattacharyya,  Curr.  Med.  Chem.,  8:1383-404  (2001)参照）。別の特定の実施形態では、薬剤は炭水化物、グリコサミノグリカン、糖タンパク質、又はプロテオグリカンである。
【０１６４】
特定の実施形態では、薬剤は核酸アプタマーである。アプタマーとは、別の分子に結合するそれらの能力に基づいて（例えばランダム又は変異誘発されたプールから）選択されたポリヌクレオチド分子である。いくつかの実施形態では、アプタマーはＤＮＡポリヌクレオチドを含む。別の特定の実施形態では、アプタマーはＲＮＡポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、アプタマーは１又は複数の改変核酸残基を含む。核酸アプタマーの作製及びタンパク質結合についてのスクリーニング方法は当該技術分野で周知である（例えば、それぞれその全体を参照により本明細書に援用する米国特許第５，２７０，１６３号、同第５，６８３，８６７号、同第５，７６３，５９５号、同第６，３４４，３２１号、同第７，３６８，２３６号、同第５，５８２，９８１号、同第５，７５６，２９１号、同第５，８４０，８６７号、同第７，３１２，３２５号、同第７，３２９，７４２号、国際公開第０２／０７７２６２号、同第０３／０７０９８４号、米国特許出願公開第２００５／０２３９１３４号、同第２００５／０１２４５６５号、及び同第２００８／０２２７７３５号参照）。
【０１６５】
ＩＩＩ．免疫複合体
本発明は更に、薬物又はプロドラッグに連結又はコンジュゲートさせた本明細書に開示の抗ＣＤ３７抗体、抗体断片、及びその機能的等価物を含むコンジュゲート（本明細書中では免疫複合体とも呼ぶ）に関する。好適な薬物又はプロドラッグは当該技術分野で公知である。薬物又はプロドラッグは細胞毒性薬剤であり得る。本発明の細胞毒性コンジュゲートで使用される細胞毒性薬剤は、細胞死を生じさせる若しくは細胞死を誘導する、又は何らかの様式で細胞生存率を低下させる、あらゆる化合物であり得、例えば、メイタンシノイド及びメイタンシノイドアナログを含む。その他の好適な細胞毒性薬剤として、例えば、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５及びＣＣ−１０６５アナログ、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシンアナログ、エンジイン、例えばカリチアマイシン、ドラスタチン及びドラスタチンアナログ、例えばアウリスタチン、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、並びにモルホリノドキソルビシンが挙げられる。
【０１６６】
このようなコンジュゲートは、薬物又はプロドラッグを抗体又は機能的等価物に連結するための連結基を用いて作製され得る。好適な連結基は当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、及びエステラーゼに不安定な基を含む。
【０１６７】
薬物又はプロドラッグは、例えば、ジスルフィド結合を介して抗ＣＤ３７抗体又はその断片に連結することができる。リンカー分子又は架橋剤は、抗ＣＤ３７抗体又はその断片と反応できる反応性化学基を含む。細胞結合性薬剤との反応のための反応性化学基は、Ｎ−スクシンイミジルエステル及びＮ−スルホスクシンイミジルエステルであり得る。更に、リンカー分子は、薬物と反応してジスルフィド結合を形成できるジチオピリジル基であり得る反応性化学基を含む。リンカー分子としては、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）（例えば、Carlsson  et  al.,  Biochem.  J.,  173:  723-737  (1978)参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノアート（ＳＰＤＢ）（例えば、米国特許第４，５６３，３０４号参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノアート（スルホ−ＳＰＤＢ）（米国特許出願公開第２００９０２７４７１３号）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）（例えば、ＣＡＳ登録番号３４１４９８−０８−６参照）、２−イミノチオラン、又はアセチル無水コハク酸が含まれる。例えば、抗体又は細胞結合性薬剤を架橋試薬で改変することができ、そのようにして得られたフリーのチオール基又は保護されたチオール基を含む抗体又は細胞結合性薬剤を、次いで、ジスルフィド含有又はチオール含有メイタンシノイドと反応させるとコンジュゲートが生成する。コンジュゲートはクロマトグラフィー、例えば、限定されるものではないが、ＨＰＬＣ、分子ふるい、吸着、イオン交換、及びアフィニティー捕獲、透析、又はタンジェンシャル・フロー・フィルトレーションにより精製することができる。
【０１６８】
本発明の別の態様では、抗ＣＤ３７抗体は、免疫複合体の効力、溶解度、又は有効性を高めるためのポリエチレングリコールスペーサー及びジスルフィド結合を介して細胞毒性薬物に連結している。そのような切断可能な親水性リンカーは国際公開第２００９／０１３４９７６号に記載されている。このリンカー設計の更なる利点は、望ましい高い単量体率及び抗体−薬物コンジュゲートの最小限の凝集である。この態様で特に予期されるのは、細胞に対して比較的高い効力の生物学的活性を示し、コンジュゲーション収率が高く、タンパク質凝集が最小限であり単量体率が高いという所望の生化学的特性を有する、薬物負荷範囲が２〜８と狭いポリエチレングリコールスペーサー（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ＝１〜１４）を有するジスルフィド基（−Ｓ−Ｓ−）を介して連結された細胞結合性薬剤及び薬物のコンジュゲートである。
【０１６９】
この態様で特に予期されるのは、式（Ｉ）の抗ＣＤ３７抗体薬物コンジュゲート又は式（Ｉ’）のコンジュゲート
CB−[Xl−(−CH2−CH2O−)n−Y−D]m  （Ｉ）
[D-Y-(−CH2−CH2O−)n−Xl]m-CB  （Ｉ’）
であって、式中、
【０１７０】
ＣＢは抗ＣＤ３７抗体又は断片を表し；
【０１７１】
Ｄは薬物を表し；
【０１７２】
Ｘは、チオエーテル結合、アミド結合、カルバマート結合、又はエーテル結合を介して細胞結合性薬剤に結合した脂肪族、芳香族、又は複素環式の単位を表し；
【０１７３】
Ｙは、ジスルフィド結合を介して薬物に結合した脂肪族、芳香族、又は複素環式の単位を表し；
【０１７４】
ｌは０又は１であり；
【０１７５】
ｍは２〜８の整数であり；
【０１７６】
ｎは１〜２４の整数である。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、ｍは２〜６の整数である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ｍは３〜５の整数である。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ｎは２〜８の整数である。あるいは、例えば米国特許第６，４４１，１６３号及び同第７，３６８，５６５号に開示されていように、最初に薬物を改変して、細胞結合性薬剤との反応に適した反応性エステルを導入してもよい。活性型リンカー部分を含むこれらの薬物と細胞結合性薬剤との反応により、細胞結合性薬剤薬物コンジュゲートを生産する別の方法が得られる。例えば米国特許第６，７１６，８２１号に記載されているように、ＰＥＧ連結基を用いてメイタンシノイドを抗ＣＤ３７抗体又は断片に連結することもできる。これらの切断不可能なＰＥＧ連結基は水及び非水性溶媒の両方に可溶性であり、１又は複数の細胞毒性薬剤を細胞結合性薬剤に連結するために使用することができる。例示的なＰＥＧ連結基としては、一方の末端の機能的スルフヒドリル又はジスルフィド基を介して且つもう一方の末端の活性エステルを介して、リンカーの反対側の末端で細胞毒性薬剤及び細胞結合性薬剤と反応するヘテロ二官能性ＰＥＧリンカーが含まれる。ＰＥＧ連結基を用いた細胞毒性コンジュゲートの合成の一般的な例として、全体を参照により本明細書に援用する米国特許第６，７１６，８２１号をを再度参照する。合成は、反応性ＰＥＧ部分を有する１又は複数の細胞毒性薬剤と細胞結合性薬剤との反応により開始され、各反応性ＰＥＧ部分の末端活性エステルが細胞結合性薬剤のアミノ酸残基によって置換されて、細胞結合性薬剤にＰＥＧ連結基を介して共有結合した１又は複数の細胞毒性薬剤を含む細胞毒性コンジュゲートが得られる。あるいは、細胞結合を二官能性ＰＥＧ架橋剤で改変して反応性ジスルフィド部分（例えばピリジルジスルフィド）を導入してよく、次いでこれをチオール含有メイタンシノイドで処理してコンジュゲートを得ることができる。別の方法では、細胞結合性を二官能性ＰＥＧ架橋剤で改変してチオール部分を導入してよく、次いでこれを反応性ジスルフィド含有メイタンシノイド（例えばピリジルジスルフィド）で処理することによりコンジュゲートを得ることができる。
【０１８０】
切断不可能な結合を有する抗体−メイタンシノイドコンジュゲートも生産され得る。そのような架橋剤は当該技術分野で公知であり（米国特許出願公開第２００５０１６９９３３号参照）、限定されるものではないが、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）が含まれる。いくつかの実施形態では、文献に記載されているように、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、又はスクシンイミジル−ヨードアセタート等の架橋試薬で抗体を改変して１〜１０個の反応性基を導入する（Yoshitake  et  al,  Eur.  J.  Biochem.,  101:395-399  (1979)；Hashida  et  al,  J.  Applied  Biochem.,  56-63  (1984)；及びLiu  et  al,  Biochem.,  18:690-697  (1979)）。次いで、改変抗体をチオール含有メイタンシノイド誘導体と反応させてコンジュゲートが生成する。コンジュゲートはＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５カラムによるゲル濾過又は透析若しくはタンジェンシャル・フロー・フィルトレーションにより精製され得る。改変抗体をチール含有メイタンシノイド（１〜２モル当量／マレイミド基）で処理し、抗体−メイタンシノイドコンジュゲートを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを用いたゲル濾過、セラミックヒドロキシアパタイトカラムを用いたクロマトグラフィー、透析、又はタンジェンシャル・フロー・フィルトレーション、又はこれらを組み合わせた方法により精製する。典型的には、抗体１個当たり平均１〜１０個のメイタンシノイドが連結される。方法の１つは、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）で抗体を改変してマレイミド基を導入し、次いで、改変抗体とチオール含有メイタンシノイドを反応させてチオエーテル結合コンジュゲートを得ることである。やはり抗体分子１個当たり１〜１０個の薬物分子のコンジュゲートが得られる。抗体、抗体断片、及びその他のタンパク質のメイタンシノイドコンジュゲートも同様に作製される。
【０１８１】
本発明の別の態様では、ＰＥＧスペーサーの仲介による切断不可能な結合を介してＣＤ３７抗体を薬物に連結する。薬物と抗ＣＤ３７抗体又は断片との間でリンカーを形成する親水性ＰＥＧ鎖を含む好適な架橋試薬も当該技術分野で周知であるか、市販されている（例えばクオンタ・バイオデザイン社（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ；パウエル、オハイオ州）から）。好適なＰＥＧ含有架橋剤は、当業者に公知の標準的な合成化学技術を用いて市販のＰＥＧ自体から合成することもできる。米国特許出願公開第２００９０２７４７１３号及び国際公開第２００９／０１３４９７６号に詳説されている方法で薬物を二官能性ＰＥＧ含有架橋リンカーと反応させて以下の式Z−Xl−(−CH2−CH2−O−)n−Yp−Dの化合物を得ることができ、次いで、これを細胞結合性薬剤と反応させることによりコンジュゲートを得ることができる。あるいは、チオール反応性基（例えば、マレイミド又はハロアセトアミド）を導入する二官能性ＰＥＧ架橋剤で細胞結合を改変してもよく、次いでこれをチオール含有メイタンシノイドで処理してコンジュゲートを得ることができる。別の方法では、チオール部分を導入する二官能性ＰＥＧ架橋剤で細胞結合を改変してもよく、次いでこれをチオール反応性メイタンシノイド（例えば、マレイミド又はハロアセトアミドを有するメイタンシノイド）で処理してコンジュゲートを得ることができる。
【０１８２】
したがって、本発明の別の態様は、式（ＩＩ）又は式（ＩＩ’）で表される抗ＣＤ３７抗体薬物コンジュゲートである：
CB−[Xl−(−CH2−CH2−O−)n−Yp−D]m  （ＩＩ）
[D−Yp−(−CH2−CH2−O−)n−Xl]m−CB  （ＩＩ’）
式中、ＣＢは抗ＣＤ３７抗体又は断片を表し；
【０１８３】
Ｄは薬物を表し；
【０１８４】
Ｘは、チオエーテル結合、アミド結合、カルバマート結合、又はエーテル結合を介して細胞結合性薬剤に結合した脂肪族、芳香族、又は複素環式の単位を表し；
【０１８５】
Ｙは、チオエーテル結合、アミド結合、カルバマート結合、エーテル結合、アミン結合、炭素−炭素結合、及びヒドラゾン結合からなる群から選択される共有結合を介して薬物に結合した脂肪族、芳香族、又は複素環式の単位を表し；
【０１８６】
ｌは０又は１であり；
【０１８７】
ｐは０又は１であり；
【０１８８】
ｍは２〜１５の整数であり；
【０１８９】
ｎは１〜２０００の整数である。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、ｍは２〜８の整数である。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、ｎは１〜２４の整数である。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ｍは２〜６の整数である。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、ｍは３〜５の整数である。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、ｎは２〜８の整数である。好適なＰＥＧ含有リンカーの例としては、抗ＣＤ３７抗体又はその断片と反応するためのＮ−スクシンイミジルエステル又はＮ−スルホスクシンイミジルエステル部分及び化合物と反応するためのマレイミド又はハロアセチルをベースとする部分を有するリンカーが含まれる。ＰＥＧスペーサーは本明細書に記載の方法により当該技術分野で公知の任意の架橋剤中に組み込まれ得る。
【０１９５】
本明細書に開示されているリンカーの多くが、内容全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２００５０１６９９３３号及び同第２００９０２７４７１３号並びに国際公開第２００９／０１３４９７６号に詳細に説明されている。
【０１９６】
本発明は、約２〜約８個の薬物分子（「薬物負荷」）、例えばメイタンシノイド、が抗ＣＤ３７抗体又はその断片に連結した態様を含む。本発明において、「薬物負荷（ｄｒｕｇ  ｌｏａｄ）」とは、細胞結合性薬剤（例えば、抗ＣＤ３７抗体又はその断片）に結合させることができる薬物分子（例えばメイタンシノイド）の数を指す。一態様では、細胞結合性薬剤に結合させることができる薬物分子の数は平均約２〜約８（例えば、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１）個であり得る。Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）及びＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）メイタンシン（ＤＭ４）が用いられ得る。
【０１９７】
したがって、一態様では、免疫複合体は抗体１個当たり１個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり２個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり３個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり４個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり５個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり６個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり７個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり８個のメイタンシノイドを含む。
【０１９８】
一態様では、免疫複合体は抗体１個当たり約１〜約８個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり約２〜約７個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり約２〜約６個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり約２〜約５個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり約３〜約５個のメイタンシノイドを含む。別の態様では、免疫複合体は抗体１個当たり約３〜約４個のメイタンシノイドを含む。
【０１９９】
一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約２〜約８（例えば、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１）個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）が結合している。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約１〜約８個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約２〜約７個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約２〜約６個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約２〜約５個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約３〜約５個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約３〜約４個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。
【０２００】
一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約２±０．５、約３±０．５、約４±０．５、約５±０．５、約６±０．５、約７±０．５、又は約８±０．５個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）が結合している。一態様では、免疫複合体を含む組成物は、抗体１個当たり平均約３．５±０．５個の薬物分子（例えばメイタンシノイド）を有する。
【０２０１】
抗ＣＤ３７抗体又はその断片と二官能性架橋試薬を反応させることでリンカー分子と抗ＣＤ３７抗体又はその断片を共有結合させることにより抗ＣＤ３７抗体又はその断片を改変することができる。本発明において、「二官能性架橋試薬」とは、細胞結合性薬剤を本明細書に記載の薬物等の薬物に共有結合する任意の化学的部分である。別の方法では、薬物によって連結部分の一部が提供される。この点で、薬物は、細胞結合性薬剤を薬物に結合するために用いられるもっと大きなリンカーの一部である連結部分を含む。例えば、メイタンシノイドＤＭ１を形成するために、フリーのスルフヒドリル基（ＳＨ）を有するように側鎖をメイタンシンのＣ−３ヒドロキシル基で改変する。このメイタンシンのチオール化形態は、改変された細胞結合性薬剤と反応してコンジュゲートを形成することができる。したがって、最終リンカーは２つの構成要素から構築され、１つは架橋試薬によって提供され、もう１つはＤＭ１の側鎖によって提供される。
【０２０２】
血清アルブミン等の仲介キャリア分子を介して薬物分子を抗体分子に結合することもできる。
【０２０３】
本発明において、「細胞結合性薬剤に連結」又は「抗ＣＤ３７抗体又は断片に連結」という表現は、好適な連結基又はその前駆体を介して細胞結合性薬剤抗ＣＤ３７抗体又は断片に結合した少なくとも１つの薬物誘導体を含むコンジュゲート分子を指す。連結基の１つはＳＭＣＣである。
【０２０４】
特定の実施形態では、本発明に有用な細胞毒性薬剤はメイタンシノイド及びメイタンシノイドアナログである。好適なメイタンシノイドの例として、メイタンシノール及びメイタンシノールアナログのエステルが含まれる。メイタンシノール及びメイタンシノールアナログのように微小管形成を阻害し且つ哺乳動物細胞に強い毒性がある、あらゆる薬物が含まれる。
【０２０５】
好適なメイタンシノールエステルの例としては、改変された芳香族環を有するもの及び他の位置に改変を有するものが含まれる。そのような好適なメイタンシノイドは、米国特許第４，４２４，２１９号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６２，６６３号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３７１，５３３号；同第５，２０８，０２０号；同第５，４１６，０６４号；同第５，４７５，０９２号；同第５，５８５，４９９号；同第５，８４６，５４５号；同第６，３３３，４１０号；同第７，２７６，４９７号；及び同第７，４７３，７９６号に開示されている。
【０２０６】
特定の実施形態では、本発明の免疫複合体は、正式名称をＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシンというチオール含有メイタンシノイド（ＤＭ１）を細胞毒性薬剤として用いる。ＤＭ１は以下の構造式（ＩＩＩ）で表される。
【０２０７】
【化１】
0006018622.tif 000021
【０２０８】
別の実施形態では、本発明のコンジュゲートは、チオール含有メイタンシノイドＮ２’−デアセチル−Ｎ２’（４−メチル１−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン（例えば、ＤＭ４）を細胞毒性薬剤として用いる。ＤＭ４は以下の構造式（ＩＶ）で表される。
【０２０９】
【化２】
0006018622.tif 000022
【０２１０】
立体障害のあるチオール結合を含む側鎖を含むもう１つのメイタンシノイドは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ−２’（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ３と命名されている）であり、以下の構造式（Ｖ）で表される。
【０２１１】
【化３】
0006018622.tif 000023
【０２１２】
各メイタンシノイドは米国特許第５，２０８，０２０号及び同第７，２７６，４９７号に教示されており、本発明のコンジュゲートでも用いられ得る。この点に関して、米国特許第５，２０８，０２０号及び同第７，２７６，６９７号の全開示を参照により本明細書に援用する。
【０２１３】
メイタンシノイド上の多くの位置が、連結部分を化学的に結合させる位置となり得る。例えば、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで改変されたＣ−１４位、ヒドロキシで改変されたＣ−１５位、及びヒドロキシ基を有するＣ−２０位が全て有用であると予想される。いくつかの実施形態では、Ｃ−３位が連結部分を化学的に連結する位置となり、いくつかの特定の実施形態では、メイタンシノールのＣ−３位が、連結部分を化学的に連結する部分となる。
【０２１４】
いくつかのコンジュゲートの構造を以下に示す：
【０２１５】
【化４】
0006018622.tif 000024
【０２１６】
【化５】
0006018622.tif 000025
【０２１７】
【化６】
0006018622.tif 000026
【０２１８】
【化７】
0006018622.tif 000027
【０２１９】
【化８】
0006018622.tif 000028
【０２２０】
【化９】
0006018622.tif 000029
【０２２１】
【化１０】
0006018622.tif 000030
【０２２２】
【化１１】
0006018622.tif 000031
【０２２３】
このような抗体−メイタンシノイドコンジュゲートの生産についての複数の記述がそれぞれの全体を本明細書に援用する米国特許第６，３３３，４１０号、同第６，４４１，１６３号、同第６，７１６，８２１号、及び同第７，３６８，５６５号にある。
【０２２４】
一般的に、水性バッファー中の抗体溶液が、反応性基を有するジスルフィド部分を有する過剰モル濃度のメイタンシノイドとインキュベートされ得る。反応混合物は、過剰のアミン（例えば、エタノールアミン、タウリン等）を添加することによりクエンチされ得る。次いで、メイタンシノイド−抗体コンジュゲートはゲル濾過により精製され得る。
【０２２５】
抗体分子１個当たりの結合したメイタンシノイド分子の数は、２５２ｎｍ及び２８０ｎｍの吸収比を分光測定することにより決定され得る。メイタンシノイド分子／抗体の平均数は、例えば約１〜１０、２〜５、３〜４、又は約３．５であり得る。一態様では、メイタンシノイド分子／抗体の平均数は約３．５±０．５である。
【０２２６】
アントラサイクリン化合物並びにその誘導体、中間体、及び改変バージョンを用いて抗ＣＤ３７免疫複合体を生産することもできる。例えば、ドキソルビシン、ドキソルビシン誘導体、ドキソルビシン中間体、及び改変ドキソルビシンが抗ＣＤ３７コンジュゲート中に用いられ得る。例示的な化合物は、その全体を参照により本目最初に援用する国際公開第２０１０／００９１２４号に記載されている。そのような化合物は、例えば、以下の式：
【０２２７】
【化１２】
0006018622.tif 000032
（式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシ、又はメトキシ基であり、Ｒ２はＣ１−Ｃsアルコキシ基である）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０２２８】
抗体とメイタンシノイド等の薬物とのコンジュゲートは、種々の望ましくない細胞系の増殖をインビトロで抑制する能力について評価され得る。例えば、ヒトリンパ腫細胞系Ｄａｕｄｉ及びヒトリンパ腫細胞系Ｒａｍｏｓ等の細胞系をこれらの化合物の細胞毒性の評価に容易に用いることができる。評価される細胞を、化合物に４〜５日曝し、生存細胞の割合を公知の方法による直接的アッセイにより測定することができる。次いで、アッセイの結果からＩＣ５０値が計算され得る。
【０２２９】
免疫複合体は、本明細書に記載のいくつかの実施形態によれば、細胞内部に取り入れられ得る。したがって、免疫複合体は、ＣＤ３７発現細胞により取り込まれた時又は内部移行した時に治療効果を発揮し得る。いくつかの特定の実施形態では、免疫複合体は、切断可能なリンカーにより細胞毒性薬剤に連結した抗体、抗体断片、又はポリペプチドを含み、細胞毒性薬剤は抗体、抗体断片、又はポリペプチドから切断され、ＣＤ３７発現細胞により内部に取り込まれる。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、免疫複合体はＢ細胞、例えば自己反応性Ｂ細胞を枯渇させることができる。例えば、いくつかの実施形態では、免疫複合体による処置は、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、又は少なくとも約７５％のＢ細胞を枯渇させる。
【０２３１】
本発明の別の態様では、ｓｉＲＮＡ分子が薬物の代わりに本発明の抗体に連結され得る。ｓｉＲＮＡは、オリゴヌクレオチドの改変に一般的に用いられる方法により本発明の抗体に連結させることができる（例えば、米国特許出願公開第２００５０１０７３２５号及び同第２００７０２１３２９２号参照）。したがって、ｓｉＲＮＡを、その３’又は５’−ホスホロミダイトの形態で、ヒドロキシル官能基を有する架橋剤の一方の末端と反応させてｓｉＲＮＡと架橋剤の間にエステル結合を生じさせることができる。同様に、ｓｉＲＮＡホスホラミダイトと末端アミノ基を有する架橋剤との反応により、アミンを介して架橋剤がｓｉＲＮＡに連結される。あるいは、ｓｉＲＮＡを標準的な化学的方法により誘導体化してチオール基を導入してもよい。このチオール含有ｓｉＲＮＡを、活性ジスルフィド又はマレイミド部分が導入されるように改変された抗体と反応させて切断可能又は切断不可能なコンジュゲートが生成し得る。この方法で１〜２０個のｓｉＲＮＡ分子が抗体に連結され得る。
【０２３２】
ＩＩＩ．ポリヌクレオチド
特定の実施形態では、本発明は、ＣＤ３７に特異的に結合するポリペプチド又はそのようなポリペプチドの断片をコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包含する。例えば、本発明は、ヒトＣＤ３７に対する抗体をコードする又はそのような抗体の断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態又はＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含み、二本鎖又は一本鎖であり得、一本鎖の場合、コード鎖又は非コード（アンチセンス）鎖であり得る。
【０２３３】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは単離されている。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。
【０２３４】
本発明は、配列番号４〜１２０からなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。
【０２３５】
本発明は更に、以下の表７〜１０に示すものから選択される配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０２３６】
【表９−１】
0006018622.tif 000033
【表９−２】
0006018622.tif 000034
【表９−３】
0006018622.tif 000035
【表９−４】
0006018622.tif 000036
【０２３７】
【表１０−１】
0006018622.tif 000037
【表１０−２】
0006018622.tif 000038
【表１０−３】
0006018622.tif 000039
【表１０−４】
0006018622.tif 000040
【０２３８】
【表１１−１】
0006018622.tif 000041
【表１１−２】
0006018622.tif 000042
【表１１−３】
0006018622.tif 000043
【表１１−４】
0006018622.tif 000044
【表１１−５】
0006018622.tif 000045
【表１１−６】
0006018622.tif 000046
【表１１−７】
0006018622.tif 000047
【０２３９】
【表１２−１】
0006018622.tif 000048
【表１２−２】
0006018622.tif 000049
【表１２−３】
0006018622.tif 000050
【表１２−４】
0006018622.tif 000051
【０２４０】
更に、配列番号１２１〜１７０、１８２、又は１８３に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを提供する。したがって、特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号１２１〜１３５、１５２〜１６１、又は１８２に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド及び／又は（ｂ）配列番号１３６〜１５１、１６２〜１７０、又は１８３に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号１２１〜１３５、１５２〜１６１、又は１８２の核酸配列を有するポリヌクレオチド及び／又は（ｂ）配列番号１３６〜１５１、１６２〜１７０、又は１８３の核酸配列を有するポリヌクレオチドを含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（２０１０年３月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０７２２）にコードされる軽鎖又はｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（ＰＴＡ−１０７２２）にコードされる軽鎖に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％の軽鎖をコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（２０１０年３月１８日付でＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＰＴＡ−１０７２３）にコードされる重鎖又はｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（ＰＴＡ−１０７２３）にコードされる重鎖に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％同一の重鎖をコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えプラスミドＤＮＡ  ｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（ＰＴＡ−１０７２２）又は組換えプラスミド  ｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（ＰＴＡ−１０７２３）である。
【０２４２】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えば宿主細胞からのポリペプチドの発現及び分泌を促進するポリヌクレオチド（例えば、細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列）に同じ読み枠で融合した成熟ポリペプチドのコード配列を含む。リーダー配列を有するポリペプチドはプレタンパク質であり、宿主細胞によってリーダー配列が切断されて成熟形態のポリペプチドを形成し得る。ポリヌクレオチドは更に、成熟タンパク質と追加的な５’アミノ酸残基であるプロタンパク質をコードしてもよい。プロ配列を有する成熟タンパク質がプロタンパク質であり、不活性形態のタンパク質である。プロ配列が切断されると、活性な成熟タンパク質が残る。
【０２４３】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えばコードされたポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列に同じ読み枠で融合した成熟ポリペプチドのコード配列を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合にマーカーに融合した成熟ポリペプチドを精製するための、ｐＱＥ−９ベクターによって供給されるヘキサヒスチジンタグであり得、あるいは、マーカー配列は、哺乳動物宿主（例えば、ＣＯＳ−７細胞）を使用する場合、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来する赤血球凝集素（ＨＡ）タグであり得る。
【０２４４】
本発明は更に、例えば断片、アナログ、及び誘導体をコードする、前述のポリヌクレオチドのバリアントに関する。
【０２４５】
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、又はその両方の中に変化を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレントな置換、付加、又は欠失を生じるがコードされるポリペプチドの特性又は活性は変化させない変化を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝暗号の縮重によるサイレント置換により生成し得る。ポリヌクレオチドバリアントは、種々の理由で、例えば特定の宿主での発現用にコドンを最適化する（ヒトｍＲＮＡ中のコドンを大腸菌等の細菌宿主に好ましいコドンに変化させる）ために、作製され得る。
【０２４６】
本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞も提供される。
【０２４７】
ＩＶ．使用方法及び医薬組成物
本発明のＣＤ３７結合性薬剤（例えば、抗体、免疫複合体、及びポリペプチド）は、種々の応用例において有用であり、そのような応用例としては、限定されるものではないが、治療的処置方法、例えばＢ細胞悪性腫瘍、自己免疫疾患、炎症性疾患等の癌の処置が含まれる。特定の実施形態では、薬剤はＢ細胞を枯渇させるのに有用である。特定の実施形態では、薬剤は自己反応性Ｂ細胞を枯渇させるのに有用である。特定の実施形態では、薬剤は末梢Ｂ細胞を枯渇させるのに有用である。特定の実施形態では、薬剤は不適切なＴ細胞刺激の防止に有用である。Ｔ細胞刺激はＢ細胞経路に関連し得る。使用方法は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボの方法であり得る。特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性の薬剤、抗体、免疫複合体、又はポリペプチドは、それが結合するヒトＣＤ３７のアンタゴニストである。
【０２４８】
一態様では、本発明の抗ＣＤ３７抗体及び免疫複合体は、生体サンプル中のＣＤ３７の存在を検出するのに有用である。本発明において、「検出」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。特定の実施形態では、生体サンプルは細胞又は組織を含む。特定の実施形態では、そのような組織は、他の組織、例えばＢ細胞及び／又はＢ細胞関連組織よりも高いレベルのＣＤ３７を発現する組織を含む。
【０２４９】
一態様では、本発明は、生体サンプル中のＣＤ３７の存在を検出する方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、ＣＤ３７への抗ＣＤ３７抗体の結合が可能な条件下で抗ＣＤ３７抗体と生体サンプルを接触させること及び抗ＣＤ３７抗体とＣＤ３７の間で複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。
【０２５０】
一態様では、本発明は、ＣＤ３７の発現増加に関連する障害の診断方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、被験細胞を抗ＣＤ３７抗体と接触させること；ＣＤ３７への抗ＣＤ３７抗体の結合を検出することにより、被験細胞によるＣＤ３７の発現レベルを決定すること（定量的又は定性的に）；及び被験細胞によるＣＤ３７の発現レベルと対照細胞（例えば、被験細胞と同じ組織起源の正常細胞又はそのような正常細胞と同等なレベルでＣＤ３７を発現する細胞）によるＣＤ３７の発現レベルを比較することを含み、対照細胞と比べて被験細胞によるＣＤ３７の発現レベルが高いことが、ＣＤ３７の発現増加に関連する障害の存在が示している。特定の実施形態では、被験細胞は、自己免疫障害又は炎症性障害を有することが疑われる個体から得られる。いくつかの実施形態では、障害は、ＣＤ３７の発現増加に関連する。いくつかの実施形態では、障害はＢ細胞の数の増加に関連する。いくつかの実施形態では、障害はＢ細胞の活性増大に関連する。
【０２５１】
特定の実施形態では、上記のような診断又は検出方法は、細胞表面で発現したＣＤ３７又は表面にＣＤ３７を発現する細胞から得られた膜標品中で発現したＣＤ３７への抗ＣＤ３７抗体の結合を検出することを含む。特定の実施形態では、方法は、ＣＤ３７への抗ＣＤ３７抗体の結合が可能な条件下で細胞を抗ＣＤ３７抗体と接触させること及び抗ＣＤ３７抗体と細胞表面のＣＤ３７との間で複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。細胞表面に発現したＣＤ３７への抗ＣＤ３７抗体の結合を検出するためのアッセイの例は「ＦＡＣＳ」アッセイである。
【０２５２】
その他の特定の方法を用いてＣＤ３７への抗ＣＤ３７抗体の結合を検出することができる。そのような方法としては、限定されるものではないが、当該技術分野で周知の抗原結合アッセイ、例えばウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、蛍光免疫測定法、プロテインＡイムノアッセイ、及び免疫組織化学（ＩＨＣ）が含まれる。
【０２５３】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３７抗体は標識化されている。標識は、限定されるものではないが、直接検出される標識又は部分（例えば、蛍光、発色団、高電子密度、化学発光、及び放射性標識）及び例えば酵素反応又は分子相互作用を介して、間接的に検出される、酵素又はリガンド等の部分を含む。
【０２５４】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３７抗体が不溶性マトリックス上に固定化される。固定化は、溶液中に遊離しているあらゆるＣＤ３７から抗ＣＤ３７抗体を分離することを伴う。これは、従来、非水溶性のマトリックス又は表面への吸着等によりアッセイの手順前に抗ＣＤ３７抗体を不溶化することにより（Bennich  et  al.、米国特許第３，７２０，７６０号）、あるいは共有結合により（例えば、グルタルアルデヒド架橋を用いる）、あるいは抗ＣＤ３７抗体とＣＤ３７の複合体形成後に例えば免疫沈降により抗ＣＤ３７抗体を不溶化することにより実現される。
【０２５５】
診断又は検出の上記実施形態のいずれも、抗ＣＤ３７抗体の代わりに又はそれに加えて本発明の免疫複合体を用いて行われ得る。
【０２５６】
特定の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤で処置される疾患は自己免疫疾患又は炎症疾患である。特定の実施形態では、自己免疫疾患又は炎症疾患は、乾癬、皮膚炎、全身性強皮症及び硬化症、炎症性腸疾患に関連する反応、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、皮膚炎、髄膜炎、脳炎、ぶどう膜炎、結腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ）、糸球体腎炎、アレルギー状態、湿疹、ぜん息、Ｔ細胞の浸潤及び慢性炎症反応を伴う状態、アテローム性動脈硬化症、白血球接着不全、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、真性糖尿病、多発性硬化症、レイノー症候群、自己免疫性甲状腺炎、アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、サイトカイン及びＴリンパ球に仲介される急性及び遅延型過敏症に関連する免疫応答、結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症、脈管炎、悪性貧血（アジソン病）、白血球血管外漏出を伴う疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症障害、多臓器損傷症候群、溶血性貧血、重症筋無力症、抗原−抗体複合体に仲介される疾患、抗糸球体基底膜抗体病、抗リン脂質症候群、アレルギー性神経炎、グレーブス病、ランバート・イートン筋無力症症候群、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、自己免疫性多腺性内分泌不全症、ライター病、スティッフマン症候群、ベーチェット病、巨細胞性動脈炎、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、及び自己免疫性血小板減少症からなる群から選択される。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患又は炎症疾患は以下からなる群から選択される：ＲＡ、ループス、免疫性血小板減少性紫斑病、赤芽球ろう、自己免疫性貧血、寒冷凝集素病、重度のＢ型インスリン抵抗性症候群、混合性クリオグロブリン血症、重症筋無力症、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、難治性尋常性天疱瘡、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、活性タイプＩＩ混合性クリオグロブリン血症、尋常性天疱瘡、自己免疫性神経障害、傍腫瘍性オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、及び再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）。
【０２５８】
特定の実施形態では、自己免疫疾患又は炎症疾患はＣＤ３７結合性薬剤（例えば抗体）が結合するＣＤ３７発現細胞を特徴とする。
【０２５９】
本発明は、対象（例えば、処置を必要とする対象）に治療有効量のＣＤ３７結合性薬剤を投与することを含む、自己免疫疾患及び炎症疾患の処置方法を提供する。特定の実施形態では、対象はヒトである。
【０２６０】
本発明は更に、本明細書に記載の抗体等の薬剤を用いてＢ細胞、例えば自己反応性Ｂ細胞を枯渇させる方法を提供する。特定の実施形態では、Ｂ細胞を枯渇させる方法は、Ｂ細胞をＣＤ３７結合性薬剤（例えば抗体）とインビトロで接触させることを含む。例えば、ＣＤ３７を発現する細胞系を、細胞を枯渇させる抗体等の薬剤を添加した培地で培養する。いくつかの実施形態では、細胞を患者サンプル、例えば組織生検試料、胸水、又は血液サンプルから単離し、細胞を枯渇させるためのＣＤ３７結合性薬剤を添加した培地で培養する。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞、例えば自己反応性Ｂ細胞を枯渇させる方法は、細胞をＣＤ３７結合性薬剤（例えば抗体）とインビボで接触させることを含む。特定の実施形態では、細胞をＣＤ３７結合性薬剤と接触させる工程は、モデル動物中で行われる。例えば、免疫無防備状態マウス（例えば、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス）中で成長させた１又は複数のＣＤ３７を発現する異種移植片にＣＤ３７結合性薬剤が投与され得る。いくつかの実施形態では、細胞を患者サンプル、例えば組織生検試料、胸水、又は血液サンプルから単離し、免疫無防備状態マウスに注射し、次いでＣＤ３７結合性薬剤を投与してＢ細胞を枯渇させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、動物への細胞の導入と同時又はそのすぐ後に投与される。更なる例では、ＣＤ３７結合性薬剤は、１又は複数のＣＤ３７抗原を発現するマウスにインビボで投与され得る。いくつかの実施形態では、これらのマウスは、マウスＣＤ３７に加えて、又はその代わりにヒトＣＤ３７を発現するように操作されていてよい。いくつかの実施形態では、これらのマウスは疾患モデル、例えば自己免疫疾患のモデルである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤の投与はインビボでＢ細胞を枯渇させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はＴ細胞刺激を防止する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤の投与は自己免疫疾患を防止又は緩和する。
【０２６２】
特定の実施形態では、Ｂ細胞はＣＤ３７を過剰発現する。別の実施形態では、Ｂ細胞はＣＤ３７を過剰発現しない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は癌細胞ではない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は腫瘍細胞ではない。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は癌性細胞ではない。
【０２６３】
本発明は更に、本明細書に記載のＣＤ３７結合性薬剤の１又は複数を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、医薬組成物は薬学的に許容される賦形剤を更に含む。これらの医薬組成物はヒト患者における自己免疫疾患及び炎症疾患の処置に用いることができる。
【０２６４】
特定の実施形態では、本発明の精製された抗体又は薬剤を薬学的に許容される賦形剤（例えば担体、補形剤）（Remington,  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy  20th  Edition  Mack  Publishing,  2000）と組み合わせることにより、保存又は使用のための製剤が製造される。好適な薬学的に許容される賦形剤は、限定されるものではないが、非毒性バッファー、例えばリン酸、クエン酸等の有機酸；塩化ナトリウム等の塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメソニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド（例えば、約１０アミノ酸残基未満）；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン；炭水化物、例えば単糖、二糖、グルコース、マンノース、又はデキストリン；キレート化剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース、又はソルビトール；塩を形成する対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【０２６５】
本発明の医薬組成物は、局所又は全身処置のための複数の方法で投与され得る。投与は、（例えば、腟及び直腸送達を含む粘膜への）局所、例えば経皮パッチ、軟膏、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、液剤、及び散剤；肺（例えば、ネブライザー等による散剤又はエアゾール剤の吸入又は通気；気管内、鼻腔内、表皮、及び経皮）；経口；又は非経口、例えば静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、又は筋肉内の注射又は注入；又は頭蓋内（例えば、くも膜下腔内又は脳室内）投与であり得る。
【０２６６】
本発明の抗体又は免疫複合体は、医薬的配合製剤で又は併用療法としての投与レジメンで、抗自己免疫又は抗炎症特性を有する第２の化合物と組み合わせてよい。医薬的配合製剤又は投与レジメンの第２の化合物は、互いに悪影響を与えないように、併用するＣＤ３７結合性薬剤に相補的な活性を有し得る。ＣＤ３７結合性薬剤及び第２の薬剤を含む医薬組成物も提供される。例えば、ＣＤ３７結合性薬剤をリツキシマブ等のＣＤ２０結合性薬剤と組み合わせて投与してよい。別の実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、サリチル酸塩；非ステロイド性抗炎症薬、例えばインドメタシン、フェニルブタゾン、フェニル酢酸誘導体（例えば、イブプロフェン及びフェノプロフェン）、ナフタレン酢酸（ナプロキセン）、ピロールアルカン酸（トメチン（ｔｏｍｅｔｉｎ））、インドール酢酸（スリンダク）、ハロゲン化アントラニル酸（メクロフェナム酸ナトリウム）、ピロキシカム、ゾメピラック、及びジフルニサル；抗マラリア薬、例えばクロロキン；金塩；ペニシラミン；又は免疫抑制剤、例えばメトトレキサート又はコルチコステロイドと組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、メトトレキサート、抗ＣＤ２０治療薬、抗ＩＬ−６受容体治療薬、抗ＩＬ−１２／２３ｐ４０治療薬、化学療法薬、免疫抑制薬、抗インターフェロンベータ−１ａ治療薬、グラチラマー酢酸塩、抗α４−インテグリン治療薬、フィンゴリモド、抗ＢＬｙｓ治療薬、ＣＴＬＡ−Ｆｃ、又は抗ＴＮＦ治療薬からなる群から選択される第２の治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、及びＣＤ１５２からなる群から選択される抗原に対する抗体である第２の治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２／２３  ｐ４０、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１８、ＩＬ−８、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、及びＩＬ−５からなる群から選択される標的に対する抗体である第２の治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ３７結合性薬剤はメトトレキサートと組み合わせて投与される。
【０２６７】
疾患の処置では、本発明の抗体又は薬剤の適切な投与量は、処置する疾患の種類、疾患の重症度及び経過、疾患の応答性、抗体又は薬剤が治療目的で投与されるのか、予防目的で投与されるのか、過去の治療、患者の医療履歴等によって異なり、全て処置する医師の自由裁量である。抗体又は薬剤は、一度に投与されてもよく、数日から数ヶ月続く一連の処置で投与されてもよく、治癒が達成されるまで又は疾患状態の軽減が達成されるまで投与されてもよい。最適な投与計画は、患者の体への薬物蓄積量の測定値から計算することができ、個々の抗体又は薬剤の相対的効力によって異なる。投与する医師は、最適な投与量、投薬方法、及び反復の割合を容易に決定することができる。特定の実施形態では、投与量は体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００ｍｇであり、１日１回以上、週１回以上、月１回以上、年１回以上与えられ得る。特定の実施形態では、抗体又は他のＣＤ３７結合性薬剤は２週間に１回又は３週間に１回与えられる。特定の実施形態では、抗体又は他のＣＤ３７結合性薬剤の投与量は体重１ｋｇ当たり約０．１〜約２０ｍｇである。処置する医師は、測定された体液又は組織中の薬物の滞留時間及び濃度に基づいて投薬の反復率を推定することができる。
【０２６８】
併用療法は、「相乗作用」を提供し得、「相乗的」であること、すなわち、活性成分を一緒に使用した時に達成される効果が化合物を別個に用いて得られる効果の和よりも大きいことが証明され得る。相乗効果は以下の場合に得られ得る：活性成分が、（１）組み合わされた単位用量製剤中で同時に処方されて投与されるか同時に送達された時（２）別個の製剤として交互に又は平行して送達された時；又は（３）何らかのその他の投与計画による。交互の治療で送達される場合、例えば別個のシリンジを用いた異なる注射により、化合物が逐次的に投与又は送達された時、相乗効果が得られ得る。一般的に、交互治療中は、有効な投与量の各活性成分が逐次、すなわち順次、投与され、一方、併用療法では、有効な投与量の２つ以上の活性成分が一緒に投与される。
【０２６９】
ＶＩ．ＣＤ３７結合性薬剤を含むキット
本発明は、本明細書に記載の方法を実施するために使用することができる本明細書に記載の抗体、免疫複合体等の薬剤を含むキットを提供する。特定の実施形態では、キットは、１又は複数の容器に入ったＣＤ３７に対する少なくとも１つの精製抗体を含む。いくつかの実施形態では、キットは、全ての対照、アッセイを実施するための指針、並びに結果の分析及び表示に必要な任意のソフトウェアを含む、検出アッセイの実施に必要及び／又は十分な構成要素の全てを含む。本発明のリガンド検出方法におけるキットの構成要素を説明するラベル若しくは指示物又は取扱説明書のセットも含めてよい。取扱説明書は、キット又はその構成要素の添付文書及び／又は包装に関連し得る。当業者には、本発明の開示の抗体、免疫複合体等の薬剤が、当該技術分野で周知の確立されているキットフォーマットの１つに容易に組み込まれ得ることが容易に理解される。そのようなキットは、例えば、他の化合物及び／又は組成物、化合物及び／又は組成物を投与するためのデバイス、並びに医薬又は生物学的製品の製造、使用、又は販売を規制する行政機関により定められた形態の文書による指示を更に含み得る。
【０２７０】
更に、ＣＤ３７結合性薬剤（例えばＣＤ３７結合性抗体）及び第２の薬剤を含むキットが提供される。特定の実施形態では、第２の薬剤はリツキシマブである。特定の実施形態では、第２の薬剤はメトトレキサートである。
＊  ＊  ＊
【０２７１】
本開示の特定の抗体の標品及び本開示の抗体の使用方法を詳細に記載する以下の非限定的な例を参照して本開示の実施形態が更に定義され得る。本開示の範囲から逸脱することなく材料及び方法の両方に多くの改変を加えることが可能であることが当業者には明らかである。
【実施例】
【０２７２】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は説明のみを目的とするものであり、その点に鑑み、種々の改変又は変更が当業者に示唆され、本願の精神及び範囲に含まれると理解される。
【０２７３】
本明細書に引用されている全ての公開物、特許、特許出願、インターネットサイト、及びアクセッション番号／データベース配列（ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列の両方を含む）を、各個々の公開物、特許、特許出願、インターネットサイト、及びアクセッション番号／データベース配列が具体的且つ個々に参照により組み込まれると記載される場合と同じ程度に、あらゆる目的のためにその全体を参照により本明細書に援用する。
【０２７４】
実施例１
正常ヒトＰＢＭＣ中でのＣＤ３７発現
ＣＤ３７抗原は、プレＢ段階から末梢成熟Ｂ細胞段階のＢ細胞上で発現し、Ｂ細胞前駆体及び最終分化形質細胞上にはないことが報告されている（Link  et  al.,  1987,  J  Pathol.  152:12-21）。更に、ＣＤ３７抗原はＴ細胞、骨髄性細胞、及び顆粒球上では弱くしか発現しない（Schwartz-Albiez  et  al.  1988,  J.  Immunol.,  140(3)905-914）。
【０２７５】
蛍光標識抗体を用いたフローサイトメトリーアッセイにより、抗体（その全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５３号に過去に記載されている特定のＣＤ３７抗体及び免疫複合体を含む）が正常ヒトＢ細胞に結合する能力を測定した。更に、ＢＤバイオサイエンス社から市販されているＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥシステムを用いて、細胞に結合した抗体（ＡＢＣ）の数に基づいて抗原密度を推定した。ＢＤバイオサイエンス社のＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥシステムは以下の試薬を用いる：１００μｇ／ｍＬで提供される抗ＣＤ２０−ＰＥ及び凍結乾燥ＰＥ標識ビーズとして提供されるＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ  ＰＥ。更に、ｈｕＣＤ３７−３抗体をＰＥで標識して、Ａｂ：ＰＥ比が約１：１の抗体−ＰＥコンジュゲートを得た。
【０２７６】
Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ブライトン、マサチューセッツ州、米国）から健常ドナーの新鮮なバフィーコートを正常血液細胞源として得た。１単位の全血の遠心し、血漿と赤血球の間の界面を回収することにより、バフィーコートを調製した。この未精製バフィーコートはＰＢＭＣ、好中球、血小板、赤血球、及び血漿を含み、採取したその日の実験に用いた。以下の通り、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅを用いた標準的な密度勾配遠心により、バフィーコートから末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を調製した。血液を、１×ＨＢＳＳ含有５ｍＭ  ＥＤＴＡで１：３希釈し、５０ｍＬの円錐状チューブに３０ｍＬまで加えた。１０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥヘルスケア社）をゆっくりと各チューブの底に加えた。サンプルをＲＴ、５００×ｇで３０分間、休みなく遠心して、血漿の下のＰＢＭＣ層を得、赤血球及びほとんどの顆粒球を除去した。ＰＢＭＣを新たなチューブに移し、４００×ｇ、ＲＴで１０分間遠心することにより１×ＨＢＳＳ含有５ｍＭ  ＥＤＴＡで２回洗浄した。次いで、染色バッファー（１×ＨＢＳＳ、１％ＢＳＡ、０．１％アジ化ナトリウム）でＰＢＭＣペレットを６．２５×１０６細胞／ｍＬで懸濁した。８０μＬの細胞を丸底９６ウェルプレートに移して５×１０５細胞／アッセイにし、Ｆｃ受容体が仲介する結合をブロックするために２０μＬのヒト血清（シグマ社、Ｈ４５２２）を加え、細胞と一緒に暗黒下、氷上で２０分間インキュベートした。ミルテニー社から入手した蛍光標識抗体を用いてＰＢＭＣ集団を同定した：抗ＣＤ３−アロフィコシアニン（ＡＰＣ）でＴ細胞を、抗ＣＤ１９−ＡＰＣでＢ細胞を、抗ＣＤ５６−ＡＰＣでナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を、抗ＣＤ１４−ＡＰＣで単球を同定した。
【０２７７】
２０μＬのｈｕＣＤ３７−３−ＰＥを終濃度約１０μｇ／ｍＬで用いてＣＤ３７発現について細胞を共染色した。同様に、２０μＬの抗ＣＤ２０−ＰＥを用いてＣＤ２０の発現について細胞を共染色した。対照として、非結合性ＰＥ標識ｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を１０μｇ／ｍＬで用いた。染色は暗黒下、氷上で１時間行った。サンプルを染色バッファーで２回洗浄し、２００μＬの１％ホルムアルデヒドを含む１×ＰＢＳで固定した。サンプル調製から４日以内に行った取得時までサンプルを暗黒下４℃で保存した。
【０２７８】
サンプル取得の直前に、新鮮なチューブのＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥビーズを、提供されたチューブ中で０．５ｍＬの染色バッファーを用いて再構成した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤバイオサイエンス社）でサンプルを取得した。各アッセイで補償対照のランを行って適切な機器設定を選択し、各サンプルについて少なくとも１０，０００事象を収集した。蛍光及び補償の機器設定は細胞サンプル及びビーズサンプル取得の両方で同じにし、正確な比較ができるようにした。取得の調節及び分析にＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（バージョン５．２．１、ＢＤバイオサイエンス社）を用いた。
【０２７９】
ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ分析は、既知の数のＰＥ分子をコンジュゲートした４つのビーズ集団のビーズ標準を用いる。データ分析で、ＦＳＣ−Ｈ／ＳＳＣ−Ｈ散布図上のビーズシングレット周辺をＧ１としてゲーティングした。その後、このゲーティングされたビーズ集団をＦＬ２−Ｈのヒストグラムプロットを用いて分析してＰＥ染色レベルを評価した。４つのビーズ集団のピーク周辺に別個のマーカーを描き（Ｍ１〜Ｍ４）、各ビーズ集団のＦＬ２の幾何平均を決定した。ロット特異的なＰＥ／ビーズ値に対してｌｏｇ−ｌｏｇプロットで各ビーズのＦＬ２幾何平均をプロットした。以下の等式を用いて線形回帰を行って標準曲線を得た：
y  =  mx  ＋  c、
式中、「ｍ」は傾きに等しく、「ｃ」はｙ切片に等しい。
【０２８０】
ＰＢＭＣサンプル分析では、ＳＳＣ−Ｈ／ＦＬ４−Ｈドットプロット上の目的の陽性蛍光細胞集団周辺をＧ１としてゲーティングした。その後、このゲーティングされた細胞集団をＦＬ２−Ｈのヒストグラムプロットを用いて分析してＰＥ標識抗体染色レベルを評価した。抗ＣＤ３７−ＰＥ又は抗ＣＤ２０−ＰＥで染色した各血液細胞サンプル及び非染色対照サンプルについてＦＬ２幾何平均を決定した。ＦＬ２の全ての幾何平均値をビーズ標準曲線に対してプロットし、細胞当たりのＰＥの値を外挿した。どちらの抗体−ＰＥコンジュゲートもＰＥ：Ａｂ比が約１：１であったので、細胞当たりのＰＥの値は細胞１個当たりに結合した抗体数（ＡＢＣ）の値に相当する。各アッセイで実験は２連のサンプルで行った。各血液細胞集団について複数回のアッセイから平均値及び標準偏差を求めた。
【０２８１】
４名の無関係なドナーから得た正常血液細胞でＣＤ３７発現を評価した。結果を、ＣＤ２０染色、非染色細胞、及び対照としての非結合性ｈｕＩｇＧ−ＰＥコンジュゲートと比較した。正常Ｂ細胞の典型的な染色プロファイルを図１のヒストグラムに示す。ＣＤ３７及びＣＤ２０の異なる４実験の平均ＡＢＣ値を計算し、表１に示した。
【０２８２】
【表１３】
0006018622.tif 000052
【０２８３】
全体でＣＤ３７染色レベルが最高であったのはＣＤ１９＋Ｂ細胞であり、約７７，０００  ＡＢＣであった。更に、調べた他のＰＢＭＣ集団ではＣＤ３７染色レベルは低く、ＣＤ１４＋単球は約５，０００  ＡＢＣ、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞は３，０００  ＡＢＣ、ＣＤ３＋Ｔ細胞は２，０００  ＡＢＣのＣＤ３７染色を示した。非結合性ｈｕＩｇＧ−ＰＥ対照での染色は、Ｂ、Ｔ、及びＮＫ細胞で約７０〜９０、単球で約２００のＡＢＣ値であった。同じ４ドナーで、ＣＤ３７と比較してＣＤ２０発現を評価した。公開されている知見と一致し、ＣＤ２０染色は主にＣＤ１９＋Ｂ細胞に限定されており、ＡＢＣ値は約９５，０００ＡＢＣであった。ＣＤ２０発現レベルはＣＤ３７発現レベルよりわずかに高かった。調べた他のＰＢＭＣ集団では最低限のＣＤ２０染色のみが観察され、ＣＤ１４＋単球は７９４ＡＢＣ、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞は２６４  ＡＢＣ、ＣＤ３＋Ｔ細胞は３３６  ＡＢＣのＣＤ２０染色を示した。
【０２８４】
この結果は、高いＣＤ３７発現が主に末梢血液サンプル中のＢ細胞に限定されており、末梢Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び単球上では微量にしか発現していないことを示している。これは公開されている知見と一致する（Moore  et  al.  1986,  J  Immunol.  137(9):3013-8；Schwartz-Albiez  et  al.  1988,  J.  Immunol.,  140(3)905-914）。更に、本発明者らは、末梢Ｂ細胞上でのＣＤ３７発現レベルがＣＤ２０発現レベルに近いことを見出した。この発現パターンは、ＣＤ３７を標的とした治療が、ＣＤ２０標的治療の利用と同様に、Ｂ細胞悪性腫瘍、自己免疫疾患、炎症疾患、又は他の免疫系の障害等の疾患におけるＢ細胞の標的化に好適であり得ることを強く示唆している。
【０２８５】
実施例２Ａ
精製ＰＢＭＣを用いたインビトロＢ細胞枯渇
リツキシマブで行われた公開されている研究（Vugmeyster  et  al.  Cytometry  A.  2003;52(2):101-9及びVugmeyster  et  al.  Int  Immunopharmacol.  2004;4(8):1117-24）に従って、ヒトＰＢＭＣを用いたインビトロアッセイでヒト化抗体がＢ細胞を枯渇させる能力を測定した。アレムツズマブ（カンパス）がインビボ及びインビトロでリンパ球を効率的に枯渇させることが報告されているので、これを陽性対照として用いた（Hale,  Blood.  1983  Oct;62(4):873-82及びWaldmann,  Philos  Trans  R  Soc  Lond  B  Biol  Sci.  2005  Sep  29;360(1461):1707-11）。
【０２８６】
本研究内の全ての実験の正常血液細胞源としてＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ブライトン、マサチューセッツ州、米国）から健常ドナーの新鮮なバフィーコートを得た。１単位の全血の遠心し、血漿と赤血球の間の界面を回収することにより、バフィーコートを調製した。この未精製バフィーコートはＰＢＭＣ、好中球、血小板、赤血球、及び血漿を含み、採取したその日の実験に用いられた。以下の通り、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅを用いた標準的な密度勾配遠心により、バフィーコートから末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を調製した。血液を１×ＨＢＳＳ含有５ｍＭ  ＥＤＴＡで１：３希釈し、５０ｍＬの円錐状チューブに３０ｍＬまで加えた。１０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥヘルスケア社）をゆっくりと各チューブの底に加えた。サンプルをＲＴ、５００×ｇで３０分間、休みなく遠心して、血漿の下のＰＢＭＣ層を得、赤血球及びほとんどの顆粒球を除去した。ＰＢＭＣを新たなチューブに移し、４００×ｇ、ＲＴで１０分間遠心することにより１×ＨＢＳＳ含有５ｍＭ  ＥＤＴＡで２回洗浄した。次いで、染色バッファー（１×ＨＢＳＳ、１％ＢＳＡ、０．１％アジ化ナトリウム）でＰＢＭＣペレットを最初の血液体積で再懸濁して最初の細胞密度にした。
【０２８７】
ＰＢＭＣ枯渇に対するｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０、ｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、リツキシマブ、アレムツズマブ（カンパス）、及びＴＲＵ−０１６の影響を評価するために９０μＬの精製細胞を１２×７５ｍｍのポリスチレンチューブに入れ、各サンプル又はｈｕＩｇＧアイソタイプ対照抗体の１００μｇ／ｍＬ溶液１０μＬと、加湿した５％ＣＯ２インキュベーター中３７℃で１時間インキュベートした。最終抗体（Ａｂ）濃度は、最終体積１００μＬの染色バッファー中に１０μｇ／ｍＬとした。３つの独立したサンプルを各処置について調製した。
【０２８８】
ＰＢＭＣ集団を同定するために、Ａｂインキュベーションの直後に、例えばＢＤバイオサイエンス社又はミルテニー社から入手した１０〜２０μＬの蛍光標識Ａｂで全てのサンプルを共染色した。抗ＣＤ３−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５を用いてＴ細胞を、抗ＣＤ１９−ＡＰＣでＢ細胞を、抗ＣＤ１４−ＦＩＴＣで単球を同定した。合計１５０μＬで、暗黒下、ＲＴにて３０分間染色を行った。ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ  Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｂｅａｄｓ（インビトロジェン社）をボルテックスし、チューブ当たり５０μＬで各サンプルに加えた。ＰＢＭＣ調製サンプルを得るために、細胞を１ｍＬの染色バッファーで１回洗浄し、４００×ｇで３〜５分間遠心した。１ｍＬのピペットで上清を除去し、細胞を５００μＬの１％ホルムアルデヒドを含む１×ＰＢＳに再懸濁した。サンプル調製から４日以内に行った取得時までサンプルを暗黒下４℃で保存した。
【０２８９】
ツリースター社（ＴｒｅｅＳｔａｒ）のＦｌｏｗＪｏソフトウェア（バージョンＰＣ７．５）をデータ分析に用いた。ＦＳＣ−Ｈ対ＳＳＣ−Ｈドットプロット上でＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔビーズ集団の周りでゲーティングし、サンプルの総ビーズ数を求めた。目的の各ＰＢＭＣ集団の総数を求めるために、ｘを目的のチャンネルとして、ＳＳＣ−Ｈ対ＦＬ（ｘ）−Ｈドットプロット上で陽性蛍光集団周辺に別個にゲーティングした。具体的には、ＳＳＣ−Ｈ対ＦＬ３−Ｈドットプロット上で陽性集団をゲーティングすることによりサンプル中のＴ細胞の総数を求め；Ｂ細胞では、ＳＳＣ−Ｈ対ＦＬ４−Ｈドットプロット上で陽性集団を見出し；ＮＫ細胞では、ＳＳＣ−Ｈ対ＦＬ２−Ｈドットプロットを用い；単球では、ＳＳＣ−Ｈ対ＦＬ１−Ｈドットプロットを用いた。ビーズに対して、Ｂ細胞ではＣＤ１９＋細胞（Ｔ細胞ではＣＤ３＋細胞、ＮＫ細胞ではＣＤ５６＋細胞、単球ではＣＤ１４＋細胞）の割合を求め、１００倍した。次いで、処置サンプルにおける細胞対ビーズ比とアイソタイプ対照で処置されたサンプルにおける細胞対ビーズ比の割合を取り、これを１から引き、１００倍することにより、枯渇率を計算した。これは、以下の式に相当する：枯渇率＝１００×（１−処置サンプルの細胞対ビーズ比／対照サンプルの細胞対ビーズ比）。全ての細胞タイプのデータを同様に分析した。
【０２９０】
試験した２つのドナーでは、ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０、又はｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１による精製ＰＢＭＣサンプルの処置はＢ細胞を約５５〜７０％枯渇させた（図２参照）。Ｔ細胞又は単球の枯渇は１０％未満であった。Ｂ細胞限定的な枯渇効果は、この活性がＢ細胞上の強いＣＤ３７発現に関連することを示している。これに比べ、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブによる処置は約３０〜４０％のＢ細胞を枯渇させた。抗ＣＤ３７  ＳＭＩＰ（商標）  ＴＲＵ−０１６による処置は２０〜３０％しかＢ細胞を枯渇させなかった。アレムツズマブ処置はＢ細胞の６０〜７０％、Ｔ細胞の５５〜６５％、及び単球の４０〜６５％を枯渇させた。
【０２９１】
実施例２Ｂ
精製ＰＢＭＣを用いたインビトロＢ細胞枯渇の用量反応
抗体及びコンジュゲートの用量反応を評価するために、２ドナーから得られた精製ＰＢＭＣを５倍サンプル希釈系列とインキュベートした。チューブ当たり１０μＬの各サンプル希釈物を９０μＬの精製細胞に３連で加え、加湿した５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて１時間インキュベートした。終濃度は１０μｇ／ｍＬ〜０．１３ｎｇ／ｍＬであった。アイソタイプ対照として同じ量の非結合性ｈｕＩｇＧ  Ａｂを用いた。
【０２９２】
試験した２ドナーで、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１による精製ＰＢＭＣサンプルの処置はＢ細胞枯渇活性に対する明確な用量反応を示した（図３Ａ及びＢ参照）ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１とのインキュベーションは、４０〜７５ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０で約６０％のＢ細胞をインビトロで枯渇させた。試験した更なるドナーでは、ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３８、ｈｕＣＤ３７−５０、及びｈｕＣＤ３７−５６抗体による精製ＰＢＭＣサンプルの処置もＢ細胞枯渇活性の明確な用量反応を示した（図３Ｃ参照）。これらの抗体とのインキュベーションは、２０〜３０ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０で約６０〜７０％のＢ細胞をインビトロで枯渇させた。
【０２９３】
実施例２Ｃ
全血を用いたインビトロＢ細胞枯渇
リツキシマブを用いて行われた公開されている研究（Vugmeyster  et  al.  Cytometry  A.  2003;52(2):101-9及びVugmeyster  et  al.  Int  Immunopharmacol.  2004;4(8):1117-24）に従い、全血を用いたインビトロアッセイによりヒト化抗体がＢ細胞を枯渇させる能力を測定した。
【０２９４】
本研究内の全ての実験の正常血液細胞源としてＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ブライトン、マサチューセッツ州、米国）から健常ドナーの新鮮なバフィーコートを得た。全血マトリックス中の末梢血液細胞（ＰＢＣ）に対するｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、リツキシマブ、アレムツズマブ（カンパス）、及びＴＲＵ−０１６の効果を評価するために、バフィーコートからの全血９０μＬを上記で詳細に説明したように総体積１００μＬでＡｂ又はアイソタイプ対照とインキュベートした。各Ａｂ処置に３つの独立したサンプルを調製した。
【０２９５】
血液細胞の集団を同定するために、Ａｂインキュベーションの直後に、例えばＢＤバイオサイエンス社又はミルテニー社から入手した１０〜２０μＬの蛍光標識Ａｂで全てのサンプルを共染色した。抗ＣＤ３−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５を用いてＴ細胞を、抗ＣＤ１９−ＡＰＣでＢ細胞を、抗ＣＤ５６−ＰＥでＮＫ細胞を、抗ＣＤ１４−ＦＩＴＣで単球を同定した。合計１５０μＬで、暗黒下、ＲＴにて３０分間染色を行った。ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ  Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｂｅａｄｓ（インビトロジェン社、＃Ｃ３６９５０）をボルテックスし、各サンプルにチューブ当たり５０μＬで加えて、細胞数の標準化を可能にした。
【０２９６】
細胞染色後、存在するＲＢＣを溶解するために、２ｍＬのＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤバイオサイエンス社、メーカーの取扱説明書に従ってｄＨ２Ｏで１：１０希釈）を各サンプルに加えた。サンプルをＲＴ、暗黒下で１５〜２０分間インキュベートし、４００×ｇで３〜５分間遠心し、５００μＬの１％ホルムアルデヒドを含む１×ＰＢＳに再懸濁した。サンプル調製から４日以内に行った取得時まで、サンプルを暗黒下４℃で保存した。サンプルをＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒで取得した。補償対象のランを各アッセイで行い、機器設定を確認した。ＢＤ  ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（バージョン５．２）を用いて各サンプルについて合計１６０，０００のゲーティングされない事象を取得した。前述したようにツリースター社のＦｌｏｗＪｏソフトウェア（バージョンＰＣ７．５）をデータ分析に用いた。
【０２９７】
試験した１ドナーで、ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０、又はｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１による精製ＰＢＭＣサンプルの処置はＢ細胞を４０％枯渇させた（図４参照）。Ｔ細胞、ＮＫ細胞、又は単球の枯渇は１０％未満であった。精製ＰＢＭＣで見られたように、インビトロ枯渇はＢ細胞に限定されており、このことは、活性がＢ細胞上の強いＣＤ３７発現に関連することを示している。これに比べ、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ又は抗ＣＤ３７  ＳＭＩＰ（商標）  ＴＲＵ−０１６による処置で枯渇したＢ細胞は１０％未満であった。アレムツズマブ処置は、４０％のＢ細胞、８０％のＴ細胞、１５％のＮＫ細胞、及び２０％の単球を枯渇させた。
【０２９８】
実施例２Ｄ
全血を用いたインビトロＢ細胞枯渇の用量反応
抗体及びコンジュゲートの用量反応を評価するために、２ドナーの全血を１０倍サンプル希釈系列とインキュベートした。チューブ当たり１０μＬの各サンプル希釈物を、９０μＬの精製細胞に３連で加え、加湿した５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて１時間インキュベートした。終濃度は１０μｇ／ｍＬ〜０．１ｎｇ／ｍＬであった。アイソタイプ対照として同じ量の非結合性ｈｕＩｇＧ  Ａｂを用いた。
【０２９９】
試験した２ドナーで、ｈｕＣＤ３７−３又はｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１による全血サンプルの処置はＢ細胞枯渇活性の明確な用量反応を示した（図５Ａ及びＢ参照）。更に、ｈｕＣＤ３７−５０を１ドナーで調べ、これもＢ細胞枯渇活性について同様な用量反応を示した（図５Ｂ参照）。ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、又はｈｕＣＤ３７−５０とのインキュベーションで反応が最大であり、約３０〜４５％のＢ細胞をインビトロで枯渇させ、ＥＣ５０は４０〜１２０ｎｇ／ｍＬであった。
【０３００】
上記のインビトロ実験に加えて、ＣＤ３７抗体がインビボでＢ細胞を枯渇させる能力をｈｕＣＤ３７発現マウスで試験することができ（実施例３に記載）、マカクＣＤ３７と交差反応とする抗体についてサルで試験することができる。
【０３０１】
実施例２Ｅ
ヒトＰＢＭＣを用いたインビトロサイトカイン放出実験
２．５ｎｇ／ｍＬ〜２５０μｇ／ｍＬの化合物と１８〜２０時間インキュベートした健康なヒトドナーの末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いて、ＩＦＮ−γ（インターフェロン）、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子）、及びＩＬ−６（インターロイキン−６）について、ＥＬＩＳｐｏｔによりインビトロサイトカイン放出を測定した。ＥＬＩＳｐｏｔ法は、インキュベーションの全期間中アッセイプレートにサイトカインを捕捉することによりサイトカインを分泌する細胞の数を測定するようにデザインされている。全てのアッセイに陽性対照抗ＣＤ３抗体ＣＤ３−２及び陰性非結合性アイソタイプｈｕＩｇＧ対照抗体を含めた。アレムツズマブ（カンパス（登録商標））及びリツキシマブ（リツキサン（登録商標））がどちらも患者におけるサイトカイン放出を誘導することが報告されているため（Wing.  J  Clin  Invest.  98:2819-26  (1996)及びWinkler,  Blood  94:2217-2224  (1999)）、これらを比較に用いた。アッセイ条件は、抗体治療に関連する条件を反映するように選択した。試験した最高濃度の２５０μｇ／ｍＬは、１０ｍｇ／ｋｇの抗体を注入した後の患者血漿中の抗体（例えば、ＣＤ２０に対するリツキシマブ等）の最高血清濃度に相当する。
【０３０２】
図６及び７に見られるように、陽性対照抗ＣＤ３抗体は、異なるドナー２名のＰＢＭＣで非常に高いレベルのＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−６の放出を誘導した。同じアッセイにおいて、異なるドナー２名のＰＢＭＣでリツキシマブはサイトカインを中程度放出させ、アレムツズマブによるサイトカイン放出はその中間であった。対照的に、ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−５０、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、又はｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は本発明者らのアッセイで有意なサイトカイン放出を引き起こさなかった。
【０３０３】
このことは、記載のＣＤ３７標的化抗体又はコンジュゲートがＢ細胞枯渇等の強力な活性とサイトカイン放出に関する好ましい安全性プロファイルとを兼ね備えており、これらが治療薬として有用であることを裏付けている。
【０３０４】
実施例３
ＣＤ３７に対する抗体又はコンジュゲートの活性を評価するためのインビボモデル
Ｂ細胞枯渇は自己免疫疾患を改善することが知られている。実際、リツキシマブは関節リウマチ処置に承認されている（Edwards  JC  et  al.  Nat  Rev  Immunol.  6:  119  (2006)）。モデル動物では、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ７９等のＢ細胞抗原に対する抗体を用いたＢ細胞枯渇は複数の自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ；多発性硬化症のモデルマウス）、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、及び関節リウマチ（ＲＡ）を抑制又は改善することが示されている。ＣＤ３７抗原はヒトＢ細胞で高レベルに発現している。したがって、ＣＤ３７抗原に対する抗体又は免疫複合体はＢ細胞を枯渇し得るので、複数の自己免疫疾患の処置に有用であり得る。
【０３０５】
ヒト自己免疫疾患の処置におけるＣＤ３７標的化抗体及び免疫複合体の有用性を調べるために、複数のマウス自己免疫疾患モデルを用いてマウス中でこのようなＣＤ３７標的化抗体及び免疫複合体の活性を研究することができる。
【０３０６】
例えば、ＣＤ３７をノックアウトしたマウス又は他の種、例えばラット及びハムスターを用いて抗マウスＣＤ３７抗体を作製することができ、インビボでＢ細胞を枯渇させる抗体を効果的に選択することができる。抗ＣＤ３７抗体の治療上の可能性は、ヒト自己免疫疾患を表すモデルマウス、例えばＮＯＤマウスの自然発生的なＴ１Ｄモデル、野生型Ｃ５７／Ｂｌ６マウスのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド誘発ＥＡＥマウス、ＤＢＡ／１マウスのコラーゲン誘発関節リウマチモデル、又はＭＲＬ／ｌｐｒマウスの自然発生的全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）モデルで試験することができる。自己免疫疾患の種々のモデル動物におけるマウスＣＤ３７抗体及びその治療有効性の例を以下に示す。
【０３０７】
あるいは、抗ヒトＣＤ３７抗体及び免疫複合体の治療上の可能性は、ヒトＣＤ３７抗原を発現するように操作されたマウス自己免疫疾患モデルにおいて試験することもできる。そのようなヒトＣＤ３７（ｈｕＣＤ３７）発現マウスは、標準的なノックイン（ＫＩ）又はトランスジェニック（Ｔｇ）アプローチを用いて作製することができる。例えば、ｈｕＣＤ３７  ＫＩマウスを作製するには、ヒトＣＤ３７  ｃＤＮＡがＣ５７／Ｂｌ６胚性幹（ＥＳ）細胞のマウスＣＤ３７遺伝子座に挿入され得る。ホモ接合ｈｕＣＤ３７  ＫＩマウスは内因性マウスＣＤ３７プロモーターの制御下でヒトＣＤ３７  ｃＤＮＡを発現するので、ｈｕＣＤ３７の発現パターンは内因性ｍｕＣＤ３７の発現パターンを模倣したものになる。別のアプローチでは、マウスゲノム中にランダムに挿入され得るヒトＣＤ３７遺伝子を含むバクテリア人工染色体（ＢＡＣ）が用いられる。このトランスジェニックアプローチは、抗原をＢ細胞特異的に高レベルで発現するｈｕＣＤ２０  Ｔｇマウスの作製に成功している。
【０３０８】
Ｃ５７／Ｂｌ６を背景とする得られたｈｕＣＤ３７発現マウスは複数の自己免疫疾患モデルを更に開発するために用いることができる。例えば、背景のＣ５７／Ｂｌ６株をＭＯＧペプチドで免疫化すると２週間で重度のＥＡＥが誘発され得る。更に、ｈｕＣＤ３７発現マウスとＣ５７／Ｂｌ６  ＦｃγＲＩＩＢノックアウトマウスを掛け合わせることによりＦｃγＲＩＩＢノックアウト表現型を導入すると、自然発生的にＳＬＥを発症し且つコラーゲンＩＩ抗原による免疫化によりＲＡを発症するモデルマウスが得られる。あるいは、ｈｕＣＤ３７発現Ｃ５７／Ｂｌ６マウスを、背景となるＮＯＤ又はＭＲＬ／ｌｐｒと１０代戻し交雑することにより、それぞれ自然発生的なＴ１Ｄ及びＳＬＥモデルを得ることができる。
【０３０９】
実施例４Ａ
抗ｍｕＣＤ３７モノクローナル抗体クローン２５２−３の作製
ＣＤ３７標的化抗体及び免疫複合体が自己免疫疾患を阻害できるという考えを証明するために、内因的にｍｕＣＤ３７抗原を発現するマウスプレＢ細胞系である３００−１９でＣＤ３７ノックアウトＣ５７Ｂｌ／６マウスを免疫化することにより抗マウスＣＤ３７（ｍｕＣＤ３７）モノクローナル抗体を作製した。マウス１頭当たり５×１０６細胞で、２週間に１回で５回、免疫原を皮下注射した。ハイブリドーマ作製のために屠殺する３日前に、免疫化マウスにもう１度抗原を腹腔内注射した。標準的な方法に従い、脾臓細胞をマウスミエローマＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（Ｐ３細胞）（J.  F.  Kearney  et  al.  1979,  J  Immunol,  123:  1548-1550）にＰ３細胞：脾臓細胞＝１：３の比率で融合させた。抗体スクリーニング用のハイブリドーマクローンが用意できるまで５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）（シグマアルドリッチ社）を含むＲＰＭＩ−１６４０選択培地中で融合細胞を培養した。
【０３１０】
野生型マウス及びＣＤ３７ノックアウトマウスの脾臓細胞でフローサイトメトリーによる結合アッセイを用いてスクリーニングを行った。ＣＤ３７抗原を構成的に発現するＢ細胞を同定するために脾臓細胞を抗ＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）抗体で対比染色した。野生型Ｂ細胞に結合するがＣＤ３７ノックアウトＢ細胞には結合しない抗体を生成するハイブリドーマを限界希釈によりサブクローニングした。安定なサブクローンが１つ得られた（クローン２５２−３）。２５２−３ハイブリドーマを低ＩｇＧ血清含有培地中で増やし、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィーを用いた標準的な方法により抗体を精製した。
【０３１１】
実施例４Ｂ
抗ｍｕＣＤ３７モノクローナル抗体クローン２５２−３の特徴解析
ＩｓｏＳｔｒｉｐマウスモノクローナル抗体アイソタイピングキット（ロシュ・ダイアグノスティックス社、インディアナポリス、インディアナ州）を用いて、精製２５２−３モノクローナル抗体をマウスＩｇＧ２ａとして同定した。ｍｕＣＤ３７抗原への結合親和性を決定するために、種々の濃度の２５２−３抗体を、ｍｕＣＤ３７抗原を発現するマウスプレＢ細胞系３００−１９細胞と４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、抗ｍｕＩｇＧ−ＰＥコンジュゲート（ジャクソン・イムノリサーチ社（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）、ウェストグローブ、ペンシルベニア州）を用いて４℃で３０分間対比染色した。最後に、細胞を洗浄し、ホルマリンで固定し、ＦＡＣＳａｒｒａｙ（ＢＤバイオサイエンス社、サンホゼ、カリフォルニア州）を用いたフローサイトメトリーにより分析した。フローサイトメトリーデータをＦｌｏｗＪｏ（ツリースター社、アシュランド、オレゴン州）を用いて分析し、片対数プロットで抗体濃度に対して幾何平均蛍光強度をプロットした（図８）。非線形回帰により用量反応曲線を作製し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（グラフパッドソフトウェア社（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）、ラ・ホーヤ、カリフォルニア州）を用いて、抗体の見かけの解離定数（Ｋｄ）に相当する曲線のＥＣ５０値を計算した。２５２−３抗体のＫｄは１４ｎＭであることが見出された。対照的に、２５２−３抗体はヒトＣＤ３７抗原を発現するヒト腫瘍細胞には結合しなかった。次いで、２５２−３抗体をマウス自己免疫疾患モデルにおいて代替抗体として用いて、自己免疫疾患の処置におけるＣＤ３７標的化抗体の治療可能性を実証した（実施例５〜７）。
【０３１２】
実施例５
抗ｍｕＣＤ３７モノクローナル抗体は実験的自己免疫性脳脊髄炎を抑制する
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、ヒトの多発性硬化症を含む中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性脱髄疾患のモデル動物である。マウスＥＡＥは通常、脊髄ホモジネート、脳抽出物、又はＣＮＳタンパク質、例えばミエリンタンパク質又はペプチドで免疫化し、次いで血液脳関門を破綻させて免疫細胞がＣＮＳ組織に接近できるようにする百日咳毒素を注射することにより誘発される。この免疫化は、脳及び脊髄における脱髄の複数の小さな散布巣を生じさせ、尾の麻痺、次いで肢の麻痺を引き起こす。
【０３１３】
ＥＡＥモデルにおける抗ｍｕＣＤ３７抗体の活性を調べるために、本発明者らは最初に２５２−３抗体がインビボでＢ細胞を枯渇させる能力を調べた。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、２５ｍｇ／ｋｇの２５２−３抗体又は対照としてポリクローナルマウスＩｇＧ（ジャクソン・イムノリサーチ社、ウェストグローブ、ペンシルベニア州）を腹腔内注射した。種々の時点で末梢血液を採取し、フローサイトメトリーでＢ及びＴ細胞のレベルを分析した。アロフィコシアニン（ＡＰＣ）−コンジュゲート抗マウスＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）抗体（イーバイオサイエンス社（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、サンディエゴ、カリフォルニア州）及びフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−コンジュゲート抗ＣＤ３ε抗体（イーバイオサイエンス社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いてそれぞれＢ及びＴ細胞集団を染色した。各サンプルのＢ細胞とＴ細胞の比率を計算することによりＢ細胞枯渇を評価し、マウスＩｇＧ処置サンプルの平均Ｂ／Ｔ比を１００％に設定してＢ／Ｔ比を標準化した。ｍｕＩｇＧ対照マウス及び２５２−３抗体処置マウスの標準化したＢ／Ｔ細胞比をプロットした（図９Ａ）。結果は、２５２−３抗体で処置したマウスのＢ細胞レベルが抗体注射後数時間以内に急速に減少したことを示している。Ｂ細胞枯渇は３時間目で約７０％に達し、３日目にピークであった（＞９５％）。３日目より後、Ｂ細胞レベルはゆっくりと上昇し、１４日目に通常レベルの約６０％に達した。このデータは、２５２−３抗体が末梢血液Ｂ細胞を迅速且つ効率的に枯渇させることができ、この効果が抗体注射後少なくとも７日間持続することを示唆している。
【０３１４】
第２の研究で、２５２−３抗体がＥＡＥを阻害する能力を試験した。この研究では、０日目にフロイント完全アジュバント（フック・ラボラトリーズ社、ローレンス、マサチューセッツ州のＥＡＥキット）で乳化したＭＯＧ３５−５５ペプチドを背中上部及び下部に皮下免疫化し、抗原免疫化後２時間目及び２４時間目に百日咳毒素を２回腹腔内注射することにより、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスでＥＡＥを誘発した。免疫化後７日目から開始して毎日、マウスのＥＡＥの徴候を調べた。疾患の重症度を以下の基準を用いて０〜５のスケールでスコア化した：
【０３１５】
【表１４−１】
0006018622.tif 000053
【表１４−２】
0006018622.tif 000054
【０３１６】
全てのマウスが抗原免疫化の１２〜１８日後にＥＡＥの徴候を示し始めた。疾患発症時に、マウスをランダム化し、２５２−３抗体又はポリクローナルｍｕＩｇＧを用量２５ｍｇ／ｋｇで１回腹腔内注射した。合計１０頭のマウスを各群に登録した。研究の終わり（疾患発症の１８日後）に、各マウスの疾患発症日に基づいてデータを同期化した。疾患進行プロット（図９Ｂ）は、両群のマウスが再発−寛解型のＥＡＥを有したことを示している。臨床症状の最初の波の間、対照マウスは平均３に達し、一方２５２−３抗体で処置したマウスは平均２を示した。これら２群間の疾患重症度の差は疾患発症後２週間を超えて維持された。総合すると、このデータは、２５２−２抗体処置が急速にＢ細胞集団を枯渇させ、ＥＡＥを緩和することを示唆している。
【０３１７】
実施例６
抗ｍｕＣＤ３７モノクローナル抗体はＮＯＤマウスにおいて１型糖尿病を抑制する
１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）又は若年性糖尿病又はインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）は、インスリンを産生する脾臓ベータ細胞に対する自己免疫反応により生じる。ベータ細胞が破壊されると、インスリンの産生が減少し、グルコースレベルが上昇し、種々の臨床症状が生じる。北欧及び米国におけるＴ１Ｄ発生率は１００，０００人当たり８〜１７人である。疾患の最も一般的な処置はインスリンサプリメントである。
【０３１８】
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスは自然にＴ１Ｄを発症し、ヒト疾患のモデリングに広く使用されている。ＮＯＤマウスでは、疾患は４週齡という早い時期に膵島の白血球浸潤（膵島炎と呼ばれる）で始まる。膵島炎は急速に進行し、膵島の破壊及び１２〜１５週齡で始まる糖尿病を生じさせる。膵島炎の初期における抗ＣＤ２０抗体を用いたＢ細胞枯渇は疾患発症を遅らせることが報告されており（Hu  et  al.,  J  Clin  Inves.  117,  3857  (2007)）、このことから、ＮＯＤマウスの疾患の原因にＢ細胞が重要な役割を果たしていることが示唆される。
【０３１９】
抗ｍｕＣＤ３７抗体の活性を試験するために、２５ｍｇ／ｋｇの２５２−３抗体をＮＯＤマウス６頭に５週齡から開始して１０日に１回、合計４回腹腔内注射した（ｎ＝６）。対照マウス（ｎ＝６）にはポリクローナルマウスＩｇＧ（ジャクソン・イムノリサーチ社、ウェストグローブ、ペンシルベニア州）を注射した。最後の注射の３日後、末梢血液中のＢ及びＴ細胞レベルをフローサイトメトリーで調べた。アロフィコシアニン（ＡＰＣ）−コンジュゲート抗マウスＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）抗体（イーバイオサイエンス社、サンディエゴ、カリフォルニア州）及びフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−コンジュゲート抗ＣＤ３ε抗体（イーバイオサイエンス社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いてそれぞれＢ及びＴ細胞集団を染色した。前述したようにマウスＩｇＧ処置サンプルに対してＢ／Ｔ細胞比を標準化し、標準化Ｂ／Ｔ細胞比をｍｕＩｇＧ対照マウス及び２５２−３抗体処置マウスでプロットした（図１０Ａ）。結果は、２５２−３抗体で処置したマウスのＢ細胞レベルが対照マウスと比べて有意に低減したことを示しており、２５２−３抗体がＮＯＤマウスにおいて末梢血液Ｂ細胞を効率的に枯渇させることを示唆している。抗ｍｕＣＤ３７抗体によるＢ細胞の枯渇の影響を調べるために、１２週齡から毎週血糖値を測定した。２週連続で血糖値が２５０ｍｇ／ｄＬ以上のマウスを糖尿病と見なす。図１０Ｂのデータは、対照マウスが１５週目に糖尿病を発症し始め、２２週目には８３％のマウスが糖尿病を有していたことを示している。対照的に、２５２−３抗体で処置したマウスは１７週目に糖尿病を発症し始め、２７週目に糖尿病のマウスは５０％だけであった。このデータは、２５２−３抗体処置がＮＯＤマウスにおいてＢ細胞を効率的に枯渇させ、糖尿病の発症を遅らせ、疾患発生率を有意に低減することを示している。
【０３２０】
実施例７
抗ｍｕＣＤ３７モノクローナル抗体はコラーゲン誘発関節炎を抑制する
コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）は疾患原因の調査及び治療標的の検証に広く使用されている関節リウマチ（ＲＡ）のモデル動物である。関節炎は通常、自己又は異種のＩＩ型コラーゲンを含むアジュバントを用いた免疫化によりマウス又はラットにおいて誘発される。この免疫化は抗原に対する強いＴ及びＢ細胞応答を誘発し、多形核細胞及び単核細胞の浸潤を伴う増殖性滑膜炎、パンヌス形成、軟骨分解、骨侵食、及び線維症を引き起こす。
【０３２１】
異なるマウス株は抗体介在Ｂ細胞枯渇に対して異なる感受性を示すので（Ahuja  et  al.,  J.  Immunol.,  179:  3351-3361  (2007)）、ＣＩＡモデルで抗ｍｕＣＤ３７抗体の活性を調べるために、本発明者らは最初に、ＤＢＡ／１マウスにおいて２５２−３抗体がＢ細胞を枯渇させる能力を調べた。マウスに２５ｍｇ／ｋｇの２５２−３抗体又は対照としてポリクローナルマウスＩｇＧ（ジャクソン・イムノリサーチ社、ウェストグローブ、ペンシルベニア州）を腹腔内注射した。種々の時点で末梢血液を採取し、フローサイトメトリーでＢ及びＴ細胞レベルを分析した。アロフィコシアニン（ＡＰＣ）−コンジュゲート抗マウスＣＤ４５Ｒ（Ｂ２２０）抗体（イーバイオサイエンス社、サンディエゴ、カリフォルニア州）及びフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−コンジュゲート抗ＣＤ３ε抗体（イーバイオサイエンス社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いてそれぞれＢ及びＴ細胞集団を染色した。標準化したＢ／Ｔ細胞比を前述の通りに計算し、ｍｕＩｇＧ対照マウスと２５２−３抗体処置マウスで比較した（図１１Ａ）。結果は、２５２−３抗体により、抗体注射の１日後及び３日後に末梢血液Ｂ細胞レベルが約２０％及び約８％に有意に低減したことを示しており、この低いＢ細胞レベルは抗体注射の７日後に維持されていた。このデータは、２５２−３抗体が末梢血液Ｂ細胞を急速且つ効率的に枯渇できることを示唆しており、この効果は抗体注射後少なくとも７日間維持された。
【０３２２】
第２の研究で、２５２−３抗体がＣＩＡを抑制する能力を調べた。本研究では、０日目にニワトリコラーゲン／ＣＦＡ（フロイント完全アジュバント）、２１日目にニワトリコラーゲン／ＩＦＡ（フロイント不完全アジュバント）（フック・ラボラトリーズ社、ローレンス、マサチューセッツ州）で皮下免疫化するにより、ＤＢＡ／１マウスにおいてＣＩＡを誘発した。免疫化後２１日目から毎日マウスをＣＩＡの徴候について調べた。ＣＩＡの重症度を以下の基準を用いて（各足のスコア０〜４に基づいて）０〜１６のスケールでスコア化した：
【０３２３】
【表１５】
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【０３２４】
関節炎症状の発症時に、マウスを２つの群にランダム化し、２５２−３抗体又はポリクローナルｍｕＩｇＧを１０ｍｇ／ｋｇの用量で３日連続して腹腔内注射した。合計１２頭のマウスを各群に登録した。研究の終わりに（疾患発症の２１日後）、各マウスの疾患発症日に基づいてデータを同期化した。疾患進行プロット（図１１Ｂ）は、対照マウスの疾患重症度が１日目の平均スコア２から７日目の９．５へとから急上昇したことを示している。一方、２５２−３抗体で処置したマウスでは、疾患の進行が有意に遅く、７日目の平均スコアは４．４であった。総合すると、このデータは、２５２−２抗体処置がＢ細胞集団を有意に枯渇させ且つＣＩＡを緩和することを示唆している。
【０３２５】
結論として、代替抗ｍｕＣＤ３７抗体を用いた上記実験により、ＣＤ３７標的化抗体又はＣＤ３７抗体を含む免疫複合体がモデル動物において自己免疫疾患を抑制できることが証明された。
＊  ＊  ＊  ＊
【０３２６】
発明を実施するための形態のセクションは請求項を解釈するために使用されるが、要約書セクションは請求項の解釈に使用されないと理解される。要約書要約書は、本発明者らが考える本発明の例示的実施形態の１又は複数を記載し得るが、全てを記載しているわけではなく、したがって、本発明及び添付の請求項を如何なる点でも限定することは意図されない。
【０３２７】
特定の機能及びその関係の実施を説明する機能的基本単位を用いて本発明を上記に説明した。これらの機能的基本単位の境界は説明の便宜上本明細書中で任意に定義したものである。特定の機能及びその関係が適切に行われる限り、代わりの境界を定義することが可能である。
【０３２８】
上記の具体的な実施形態の説明により本発明の一般的性質が完全に明らかにされており、当該技術分野の知識を適用することにより、本発明の一般的概念から逸脱することなく、過度な実験をせずに、このような具体的実施形態を種々の応用例に容易に改変及び／又は適応できる。したがって、本明細書に示した教示及び指針に基づいて、そのような適応例及び改変例は本開示の実施形態の等価物の意味及び範囲に含まれることが意図される。本明細書中の表現法及び用語法は限定ではなく説明を目的としており、したがって、本明細書の用語法又は表現法は教示及び指針に鑑みて当業者に解釈されるべきであると理解される。
【０３２９】
本発明の幅及び範囲は上記の例示的実施形態のいずれにも限定されず、添付の請求項及びその等価物によってのみ定義される。
【０３３０】
本明細書中で言及された全ての公開物、特許、及び特許出願を、独立した各公開物、特許、又は特許出願が具体的に個々に参照により援用されると示されている場合と同じ程度に、参照により本明細書に援用する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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