(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とする被験者の膣表面に局所投与することにより、膣境界潤滑低下を治療またはせん断力及び不快から膣上皮を保護するために用いる医薬組成物であって、
該医薬組成物は、単離もしくは組み換えＰＲＧ４またはそれらの潤滑フラグメント及び製薬上許容される担体を含み、膣境界潤滑を改善するのに十分である、医薬組成物。
【請求項２】
前記潤滑フラグメントは、ヒトＰＲＧ４の潤滑作用の少なくとも２０％の潤滑作用を示す、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
ゲル、浸透圧平衡塩類水溶液、多相エマルション、又は徐放放出性若しくは持続放出性製剤に製剤されている、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
更に、１またはそれ以上の治療薬を含有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記治療薬が、アンドロゲン、抗ＴＮＦα抗体および可溶性ＴＮＦα受容体から成る群より選択される炎症性サイトカインアンタゴニスト、抗炎症性サイトカインであるＴＧＦ−β、抗炎症薬、中性もしくは極性脂質、脂肪酸、エストロゲン、エストラジオール、プロゲステロン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸、ならびにアミノ酸からなる群より選択される、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗炎症薬が、シクロスポリンＡ、ならびにω３脂肪酸およびω６脂肪酸から成る群より選択される、請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記アミノ酸が、Ｌ−アルギニン、シトルリンまたはアスパラギン酸である、請求項５記載の医薬組成物。
【請求項８】
組成物が１０〜１００，０００μｇ／ｍＬまたは５００〜５，０００μｇ／ｍＬの濃度のヒアルロン酸ナトリウムまたはヒアルロン酸を更に含有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
組成物が１０〜１０，０００μｇ／ｍＬの濃度のＰＲＧ４を含有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＰＲＧ４が５０ｋＤａ〜４００ｋＤａの平均モル質量を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ＰＲＧ４が、その潤滑性フラグメント、多量体またはホモログを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ＰＲＧ４が、組換えＰＲＧ４タンパク質、単離ＰＲＧ４タンパク質またはそれらの機能的フラグメントである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ＰＲＧ４又はそれらのフラグメントのアミノ酸配列が、配列番号：１と少なくとも７５％一致している、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記不快は、膣萎縮症、性交疼痛症、シェーグレン症候群、更年期障害、アンドロゲン欠損症、エストロゲン欠損症、エストロゲン補充療法、アレルギー、慢性炎症、閉経、早発閉経、化学療法、授乳、閉経前の卵巣の外科的切除、生殖器硬化性萎縮性苔癬、外陰部痛、細菌性膣炎、疱疹、カンジダ症、乾癬、接触皮膚炎、コンジローム、薬剤の副作用および加齢により生じる不快である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
有効量のＰＲＧ４を含み、膣表面、陰茎表面またはその組合せに局所投与することにより、性交の間の潤滑または受胎促進を提供するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２００９年１月１３日出願の米国特許仮出願第６１／１４４，３４４号および２００９年１１月１２日出願の米国特許仮出願第６１／２６０，４０２号の優先権を主張するものであり、前記出願はそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
【０００２】
本発明は膣の健康の管理に関する。特に、本発明は、膣表面（例えば上皮）の境界潤滑低下に関連する疾患の治療のためのものを含む、医薬組成物およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
プロテオグリカン４（ｐｒｇ４）遺伝子は、巨核球刺激因子（ＭＳＦ）、ルブリシンおよび表在層タンパク質（ＳＺＰ）と称される高度にグリコシル化されたタンパク質をコードする。ルブリシンは最初に滑液から単離され、軟骨−ガラス界面で滑液に類似したインビトロでの潤滑能力を明らかにした。ルブリシンはその後滑液線維芽細胞の生成物として同定された。エクソン６によってコードされる、９４０アミノ酸の大きなムチン様ドメイン内のＯ結合型β（ｌ−３）Ｇａｌ−ＧａｌＮＡｃオリゴ糖についても記述されている。ＳＺＰは、最初に表在層からの外植片軟骨の表面で局在化され、馴化培地から単離された。これらの分子（ならびにそのＯ結合型プロテオグリカン）を本明細書ではＰＲＧ４と総称する。ＰＲＧ４は、滑膜、腱および半月の表面に存在することが示されているが、ＰＲＧ４を膣における潤滑剤として使用することの記述はない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、様々な実施形態において、膣上皮における境界潤滑分子の治療的補充および富化を含む、膣潤滑を管理するための医薬組成物およびその使用の方法を提供する。本発明の特定実施形態では、ＰＲＧ４  ｍＲＮＡがマウスの膣および子宮頸部上皮細胞において発現され、ＰＲＧ４タンパク質がこれらの組織によって膣上皮に分泌されることを示唆するという所見を述べる。図１は、膣および子宮頸部組織での増幅後のアガロース電気泳動によって明らかにされる、ヒトＰＲＧ４  ｍＲＮＡ発現を示す。配列決定を介してｍＲＮＡを確認した。図２は、様々なマウス上皮細胞におけるＰＲＧ４  ｍＲＮＡ発現を示す。アガロースゲル電気泳動を使用することにより、増幅した試料をＰＲＧ４生成物の存在に関してスクリーニングした。垂直のレーン６〜８は、３匹の異なるマウスの膣組織からの、増幅して確認したＰＲＧ４  ｍＲＮＡを含む。
【０００６】
本発明の特定の場合には、ＰＲＧ４タンパク質が膣上皮で果たす役割が、性交、出産、および他の望ましくない状態の間に生じる強いせん断力に対して膣腔を保護することであるという所見を述べる。さらに、本発明の特定の場合には、動的荷重の存在下でせん断応力を伝達する分泌成分の能力を含む、軟骨において認められる境界潤滑の分子機構が、膣上皮を潤滑化するために利用された場合有用である可能性が高いという所見を述べる。
【０００７】
特定実施形態では、本発明は、ゲル、浸透圧平衡塩類水溶液、多相エマルションに懸濁された、または徐放性装置内に封入された治療有効濃度のＰＲＧ４タンパク質（例えばＰ
ＲＧ４  Ｏ結合型プロテオグリカンを含む）の治療量を含有する製剤を患者の膣表面に局所適用するのに適した医薬組成物を提供する。
【０００８】
特定実施形態では、本発明の医薬組成物は、治療有効濃度の１またはそれ以上の付加的な治療薬、例えば膣内投与した場合に膣への利益をもたらすおよび／または効果を及ぼす薬剤をさらに含有する。特定実施形態では、付加的な薬剤は、アンドロゲンもしくはアンドロゲン類似体［この場合、アンドロゲンもしくはアンドロゲン類似体は１７α−メチル−１７β−ヒドロキシ−２−オキサ−５α−アンドロスタン−３−オン誘導体である］、エストロゲンもしくはエストロゲン類似体、窒素置換アンドロゲン、窒素置換エストロゲン、テストステロン誘導体、エストロゲン誘導体、４，５α−ジヒドロテストステロン誘導体、１９−ノルテストステロン誘導体、環Ａ不飽和を含む１７β−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン誘導体を含むが、これらに限定されないか、または異常な構造特徴を有するアンドロゲン化合物を含むアンドロゲンの構造サブクラスからである。または、前記製剤は、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド系リガンドのインビボでのアンドロゲン活性および同化活性を有する、アリール−プロピオンアミド（例えばＳ−３−（４−アセチルアミノフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（４−ニトロ−３−トリフルオロメチルフェニル）−プロピオンアミド［Ｓ−４］またはＳ−３−（４−フルオロフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（４−ニトロ−３−トリフルオロメチルフェニル）−プロピオンアミド［Ｓ−１］）、二環式ヒダントイン、キノリンおよびテトラヒドロキノリン類似体である、選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）化合物、受容体における多くの立体配座変化を誘導し、それによって様々な異なる生物学的プロフィールを惹起することができるエストロゲン受容体の非ステロイド系リガンドである選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）化合物、受容体の親和性に関わらないエストロゲンアンタゴニスト（ステロイド系、非ステロイド系）、アロマターゼ阻害剤、アンチプロテアーゼ、炎症性サイトカインアンタゴニスト（例えば抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦα受容体、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト）、サイトカイン放出阻害剤、ＮＦ−κＢ阻害剤、抗炎症性サイトカイン（例えばＴＧＦ−β）、他の抗炎症薬（例えばシクロスポリンＡ、ω３およびω６脂肪酸）、またはプロテアソーム阻害剤を含む。
【０００９】
特定実施形態では、本発明の医薬組成物は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸およびリン脂質を含むがこれらに限定されない、治療有効濃度が１またはそれ以上の付加的な治療薬をさらに含有する。例示的なリン脂質は、Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンおよびスフィンゴミエリンを含むが、これらに限定されない。
【００１０】
特定実施形態では、本発明の医薬組成物は、エストロゲン、プロゲステロン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、または上皮増殖を促進する他の分子を含む、上皮増殖および適切な形態を促進する治療有効濃度の化合物をさらに含有する。
【００１１】
本発明は、膣潤滑欠損症またはそれに関連する症状を治療するための方法を提供する。そのような方法は、必要とする被験者の膣表面に本発明の医薬組成物を局所投与することを含む。膣潤滑欠損症の症状は、膣乾燥、膣のかゆみまたは灼熱感、性交疼痛、および性交後の軽度の膣出血を含む。
【００１２】
特定実施形態では、本発明は、膣潤滑不良または欠損に関連する状態に対処し、治療するための方法をさらに提供する。例示的な状態は、膣萎縮症、性交疼痛症、シェーグレン症候群、更年期障害、アンドロゲン欠損症、エストロゲン欠損症、エストロゲン補充療法、アレルギー、慢性炎症、閉経、早発閉経、化学療法、授乳、閉経前の卵巣の外科的切除、生殖器硬化性萎縮性苔癬、外陰部痛、細菌性膣炎、疱疹、カンジダ症、乾癬、接触皮膚炎、コンジローム、薬剤の副作用および加齢を含むが、これらに限定されない。
【００１３】
本発明は、装着期間にわたって境界潤滑を補充するための補足、例えばＰＲＧ４被覆した避妊具表面の存在下でのＰＲＧ４および／またはヒアルロン酸の補足を用いて、境界潤滑分子を避妊具の表面および／または移植可能な溶出装置内に付着させることを含む、性交の間の境界潤滑を高めるための方法を提供する。
【００１４】
一部の実施形態では、治療組成物は、リン酸緩衝食塩水、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、またはそれらの組合せを含む。
【００１５】
本発明の他の特徴および利点は、その好ましい実施形態の以下の説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
参照による組込み
【００１６】
本明細書の中で言及されるすべての公表文献および特許出願は、引用される目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
本発明の新規特徴については、付属の特許請求の範囲において詳細に説明する。本発明の原理を利用した例示的実施形態を述べる以下の詳細な説明および付属の図面を参照することにより、本発明の特徴および利点のより良好な理解が得られる。
【００１８】
【図１】膣および子宮頸部組織での増幅後のアガロース電気泳動によって明らかにされる、ヒトＰＲＧ４  ｍＲＮＡ発現を示す。配列決定を介してｍＲＮＡを確認した。
【図２】様々なマウス上皮細胞におけるＰＲＧ４  ｍＲＮＡ発現を示す。アガロースゲル電気泳動を使用することにより、増幅した試料をＰＲＧ４生成物の存在に関してスクリーニングした。垂直のレーン６〜８は、３匹の異なるマウスの膣組織からの、増幅して確認したＰＲＧ４  ｍＲＮＡを含む。
【図３】ＰＲＧ４のアミノ酸配列ならびにＰＲＧ４  ｍＲＮＡのＰＣＲ増幅のための核酸プライマー配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の好ましい実施形態を本明細書で示し、説明したが、そのような実施形態は単なる例として提供されるものであることは当業者に明白である。数多くの変形、変更および置換が、今や、本発明から逸脱することなく当業者に可能である。本発明を実施するにあたって本明細書で述べる本発明の実施形態の様々な代替手段を用い得ることが了解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法と構造およびそれらの等価物がそれによってカバーされることが意図されている。
【００２０】
ｐｒｇ４の機能的重要性は、ヒトにおいて屈指症−関節症−内反股−心膜炎（ＣＡＣＰ）疾患症候群を引き起こす突然変異によって示された。ＣＡＣＰは、内反股変形、心膜炎および胸水と共に、屈指症、非炎症性関節症および肥大滑液膜炎として発現する。また、ＰＲＧ４ヌルマウスにおいて、軟骨の劣化およびその後の関節障害が認められた。それ故、ＰＲＧ４発現は健康な滑膜性の連結の必要成分である。
【００２１】
ＰＲＧ４はムチンファミリーの成員であり、ムチンファミリーは一般に上皮内層に豊富に存在し、潤滑および侵入微生物からの保護を含む多くの機能を提供する。ムチンの機能特性は、一般に、特殊なグリコシル化パターンと分子間ジスルフィド結合を介して多量体を形成するそれらの能力によって決定され、慢性疾患（例えば嚢胞性線維症、喘息）ではその両方が変化している。滑液から単離されたＰＲＧ４の生化学的特徴づけは、潤滑特性を媒介すると思われる、Ｏグリコシル化の分子多様性を示した。ウシ滑液からのＰＲＧ４
に関する予備データは、Ｃ末端の非対合システインと共に、Ｎ末端およびＣ末端の両方の保存されたシステインリッチドメインから予測される単量体形態に加えて、ジスルフィド結合の二量体の存在を明らかにした。
【００２２】
潤滑の物理化学的モードは、流体膜または境界と分類されてきた。作動潤滑モードは、関節接合する組織への垂直抗力と接線分力、これらの面の間の接線運動の相対速度、および荷重と運動の両方の時間履歴に依存する。摩擦係数μは定量的評価尺度を提供し、接線摩擦力対垂直効力の比と定義される。流体伝達性潤滑モードの１つのタイプは静水圧である。荷重の開始時および典型的には長期間にわたって、組織の二相性のために、間質液が加圧される；流体はまた、浸出機構を介して関節表面の間の凹凸へと推進され得る。加圧された間質液と捕捉された潤滑剤プールは、それ故、せん断力に対する抵抗をほとんど伴わずに垂直荷重の支持に有意に寄与し、非常に低いμを促進し得る。また、荷重および／または運動の開始時に、相対運動における２つの面の間隙からおよび／または間隙を通して粘性潤滑剤を推進するように働く加圧、運動および変形により、スクイーズ膜、流体力学および弾性流体力学型の流体膜潤滑が起こる。
【００２３】
一部の場合には、流体圧／流体膜対境界潤滑が起こる適切な度合は多くの因子に依存する。潤滑膜が、弾性的に変形することができる適合摺動面の間を流動できる場合、弾性流体力学的潤滑が起こる。圧、表面粗さおよび相対すべり速度が、完全な流体潤滑が壊れ始め、潤滑が新しいレジームに入る時点を決定する。速度がさらに低下するにつれ、関節接合面に付着した潤滑膜が寄与し始め、混合レジームの潤滑が起こる。速度がさらに一層低下し、数個の分子から成る超薄潤滑層だけが残る場合、境界潤滑が起こる。特定の場合には、境界モードの潤滑は、それ故、相対すべり速度および軸荷重などの流体膜の形成に影響を及ぼす因子と共に、定常すべりが不変である間は、摩擦係数（相対運動の２つの接触面の間で測定された摩擦力対適用された垂直抗力の比）によって指示される。関節軟骨などの身体の特定組織に関しては、境界潤滑が起こり、流体加圧および他の機構によって補完されると結論づけられた。しかし、例えば膣内潤滑の主要モードが流体力学および弾性流体力学的であると推測されていたため、膣内境界潤滑のための薬剤の使用はこれまで追求されていなかった。さらに、膣潤滑能力低下のための治療は、伝統的にポリカルボフィル、ポリエチレングリコールおよびグリセリンなどの長鎖ポリマーによる粘性流体相の潤滑または水和を重視してきた。
【００２４】
境界潤滑では、荷重は面と面との接触によって支持され、関連する摩擦特性は潤滑剤表面分子によって決定される。特定の場合には、反対側の組織表面が総面積の１０％までにわたって接触し、これはほとんどの摩擦が起こる場合に該当し得るので、このモードは重要であると考えられる。さらに、一部の場合には、荷重時間が上昇し、静水圧が消失すると共に、潤滑剤被覆表面は加圧流体に比べてますます高い割合の荷重を受け、その結果、このモードがますます支配的となり得る。特定の場合には、境界潤滑がスティックスリップ現象を軽減し、それ故、定常運動および運動開始の両方に対する抵抗の低下として現れる。一部の場合には、後者の状況は長期的な圧縮荷重（例えばインビボでの座位または起立位）後の荷重支持面に該当する。軟骨におけるような、関節表面の典型的な損耗パターンも、一部の場合には、境界潤滑が組織構造の保護と維持のために重要であることを示す。一部の場合には、膣上皮の荷重は、表面細胞に強い応力を生じさせる性交により、せん断力を受ける（例えばせん断力に支配される）。さらに、膣内の潤滑剤の産生を下方調節するまたは上皮細胞を萎縮させるように働く疾患状態では、日常的な、性交によるものではないせん断応力も、強い劣化および炎症の危険性を与え得る。重度の萎縮、またはタモキシフェンなどの癌治療、抗ヒスタミン薬、尿路感染症のための治療、抗うつ薬もしくは高血圧薬による医原性の乾燥も、性交とは無関係に、通常レベルのせん断応力を痛みにし得る。
【００２５】
一部の場合には、関節接合面の間の流体内でのＰＲＧ４の蓄積ならびに自発的に組織マトリックスに結合するその性向が、ＰＲＧ４の境界潤滑能力に寄与する。
【００２６】
本明細書で述べる特定実施形態において、発明人は、プロテオグリカン４（ＰＲＧ４）が膣腔の壁に沿った境界潤滑剤としての役割を果たすことを開示する。一部の実施形態では、この糖タンパク質（ＰＲＧ４）は、摩擦力、細胞接着および／またはタンパク質沈着から膣表面を保護する。様々な天然および組換えルブリシンタンパク質およびアイソフォームのいずれか１つまたはそれ以上を本明細書で述べる様々な実施形態で利用する。例えば、米国特許第５，３２６，５５８号；同第６，４３３，１４２号；同第７，０３０，２２３号および同第７，３６１，７３８号はヒト巨核球刺激因子（ＭＳＦ）のファミリーを開示しており、前記の各々はそのような開示に関して参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第６，９６０，５６２号および同第６，７４３，７７４号も、ＭＳＦの実質的に純粋なフラグメントを含む潤滑ポリペプチド、トリボネクチンを開示しており、前記の各々はそのような開示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
【００２７】
本明細書の特定実施形態では、それを必要とする個体において膣潤滑欠損症（例えば膣境界潤滑欠損症）を治療する（または膣潤滑を改善する）、またはそれに関連する症状を治療するための方法であって、前記個体の膣表面に治療有効量のＰＲＧ４タンパク質を含有する医薬組成物を局所投与することを含む方法が提供される。また、本明細書の一部の実施形態では、例えば膣潤滑欠損症（例えば膣境界潤滑欠損症）を治療する（または膣潤滑を改善する）ための、経膣的に許容される製剤中に（経膣的に許容されるとは、過度の不快、痛み、アレルギー、炎症、または熱を引き起こさない製剤と定義される）ＰＲＧ４タンパク質を含有する医薬組成物も提供される。一部の実施形態では、経膣的に許容される製剤は、粘滑薬、収斂薬、皮膚軟化薬、またはそれらの組合せを含む。一部の実施形態では、組成物は、避妊具を処理するもしくは被覆するために使用されるか、または移植可能な溶出装置（例えば溶出リング）を介して投与される。一部の実施形態では、そのような投与は、移植可能な溶出装置を投与し、その後移植可能装置が治療有効量のＰＲＧ４を溶出することによって達成される。特定実施形態では、移植可能な溶出装置は長期間の治療を提供するために利用される。
【００２８】
本明細書の一部の実施形態では、膣上皮における膣潤滑の欠損症（例えば低いまたは望ましくない膣境界潤滑のような、膣境界潤滑の欠損症）を治療するための医薬組成物およびその使用の方法が提供される。本発明の特定実施形態の医薬組成物は、粘滑薬、賦形剤、収斂薬、血管収縮薬および皮膚軟化薬から成る群より選択される１またはそれ以上の薬剤と組み合わせて単離または精製ＰＲＧ４タンパク質（例えば経膣的に許容される平衡塩類溶液中に懸濁された）を含有する。一部の実施形態では、本明細書で提供される任意の医薬組成物は、局所投与のための医薬的に許容される担体中に、ヒアルロン酸ナトリウム、表面活性リン脂質および電解質から成る群より選択される１またはそれ以上の付加的な治療薬をさらに含有する。
【００２９】
本発明は、特定実施形態では、膣表面における境界潤滑分子の治療的補充および富化を含む、膣潤滑を管理する新規アプローチを提供する。本発明は、ＰＲＧ４が膣上皮細胞によって合成され、その後膣表面に分泌されることを提供する。さらに、本発明は、ＰＲＧ４が膣表面上で類似した役割を果たし、性交中もしくは疾患状態において生じる強いせん断力またはその境界潤滑能力を低下させる他の医原性因子から膣上皮表面を保護することを提供する。
【００３０】
膣潤滑を管理し、非限定的な例として、膣萎縮症、性交疼痛症、シェーグレン症候群、アンドロゲン欠損症、エストロゲン欠損症、エストロゲン補充療法、アレルギー、慢性炎症、更年期障害、閉経、早発閉経、化学療法、授乳、閉経前の卵巣の外科的切除、生殖器
硬化性萎縮性苔癬、外陰部痛、細菌性膣炎、疱疹、カンジダ症、乾癬、接触皮膚炎、コンジローム、薬剤の副作用および加齢を含む、本明細書で述べる望ましくない状態から生じるせん断力（強いせん断力を含む）および不快から膣上皮を保護する必要がある。膣潤滑欠損症の症状または徴候は、非限定的な例として、膣乾燥、膣のかゆみまたは灼熱感、性交疼痛、および性交後の軽度の膣出血を含む。
【００３１】
膣潤滑欠損症およびそれに関連する症状は、任意の適切な方法によって判定することができる。一部の場合には、膣潤滑欠損症およびそれに関連する症状は、定性的に（例えば低潤滑の感覚、不快、膣乾燥、膣のかゆみまたは灼熱感、性交疼痛、および性交後の軽度の膣出血等）または定量的に（例えば定量アッセイの機械的、生化学的、電気的、光学的または他の方法を介して測定される）定義される。
【００３２】
特定実施形態では、本発明は、適切な境界潤滑のための好ましい状態を促進する膣表面でのＰＲＧ４制御の調節のための組成物および方法を提供する。本発明の特定実施形態の医薬組成物は、治療有効量のアンドロゲンもしくはアンドロゲン類似体、エストロゲンもしくはエストロゲン類似体、エストラジオール、選択的アンドロゲン受容体調節剤、選択的エストロゲン受容体調節剤、エストロゲンアンタゴニスト、アロマターゼ阻害剤、アンチプロテアーゼ、炎症性サイトカインアンタゴニスト、サイトカイン放出阻害剤、抗炎症性サイトカイン（例えばＴＧＦ−β）、抗炎症薬（例えばシクロスポリンＡ、ω３およびω６脂肪酸）、ＮＦ−κＢ阻害剤、またはプロテアソーム阻害剤、ヒアルロン酸、中性もしくは極性脂質、脂肪酸、プロゲステロン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、または上皮増殖を促進する他の分子を含む薬剤の１またはそれ以上および局所使用のための医薬的に許容される担体と組み合わせて単離または精製ＰＲＧ４タンパク質を含有する。
【００３３】
１つの実施形態では、アンドロゲンまたはアンドロゲン類似体は、１７α−メチル−１７β−ヒドロキシ−２−オキサ−５α−アンドロスタン−３−オン誘導体、窒素置換アンドロゲン、テストステロン誘導体（すなわち安定性または溶解度に影響を及ぼすアミノ、ヒドロキシル、水素、メチル、酸素または他の基の付加または除去、ならびに安定性または溶解度を変化させる環構造内の飽和の付加または除去などの、修飾された側鎖を有するテストステロン中央環分子）から成る群より選択され、４，５α−ジヒドロテストステロン誘導体、１９−ノルテストステロン誘導体、環Ａ不飽和を含む１７β−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン誘導体、および異常な構造特徴を有するアンドロゲン化合物を含むアンドロゲンの構造サブクラス、およびリン酸緩衝食塩水または局所使用のためのヒアルロン酸塩などの担体物質である。局所使用に適する任意の医薬的に許容される担体および／または賦形剤は本発明の範囲内である。
【００３４】
もう１つの実施形態では、選択的アンドロゲン受容体調節剤（ＳＡＲＭ）は、アンドロゲン受容体に対する非ステロイド系リガンドのインビボでのアンドロゲン活性および同化活性を有する、アリール−プロピオンアミド（例えばＳ−３−（４−アセチルアミノフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（４−ニトロ−３−トリフルオロメチルフェニル）−プロピオンアミド［Ｓ−４］またはＳ−３−（４−フルオロフェノキシ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（４−ニトロ−３−トリフルオロメチルフェニル）−プロピオンアミド［Ｓ−１］）、二環式ヒダントイン、キノリン、およびテトラヒドロキノリン類似体から成る群より選択される。
【００３５】
さらにもう１つの実施形態では、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）は、受容体における多くの立体配座変化を誘導し、それによって様々な異なる生物学的プロフィールを惹起することができるエストロゲン受容体の非ステロイド系リガンドである。好ましくは、ＳＥＲＭは、膣表面組織においてエストロゲンが誘導する炎症を防ぐものである。さらなる好ましい特定の実施形態では、エストロゲンアンタゴニストは、受容体の親和
性を問わずステロイド系または非ステロイド系化合物である。
【００３６】
１つの実施形態では、炎症性サイトカインアンタゴニストは、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦα受容体、およびＩＬ−１受容体アンタゴニストから成る群より選択される。
【００３７】
さらにもう１つの実施形態では、エストロゲンまたはプロゲステロンは、Ｅｓｔｒａｃｅ、ＰｒｅｍａｒｉｎおよびＥｓｔｒｉｎｇを含む、市販のホルモン補充療法を包含する。
【００３８】
一部の実施形態では、単離または精製ＰＲＧ４は、例えば経膣的に許容される賦形剤と共に、膣使用のために製剤される。特定実施形態では、本明細書で述べる組成物は、有効量のＰＲＧ４を、それを必要とする個体の膣に送達するように製剤される。一部の実施形態では、組成物は、クリーム、軟膏（ｓａｌｖｅ）、溶液、懸濁液、ペースト、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）等のような局所製剤として製剤される。そのような組成物の投与は、注腸、圧注、手操作、スプレー、坐薬、含浸装置、塗布器等のような任意の適切な方法で達成される。様々な実施形態において、投与は、必要とされる領域、例えば膣の外面、膣の内面、またはその部分および／もしくは組合せにおいて実施される。一部の実施形態では、ＰＲＧ４は、坐薬または持続放出製剤が組み込まれたタンポンにおけるような、持続放出または長期放出用に製剤される。
被覆避妊具
【００３９】
本発明の特定実施形態では、ＰＲＧ４または任意のＰＲＧ４医薬組成物を含有する避妊具を提供する。また、ＰＲＧ４または本明細書で述べる任意のＰＲＧ４医薬組成物を避妊具の表面に沈着させる（例えば付着させる、被覆する等）ことを含む、避妊具を処理する方法も本明細書で述べる。避妊具へのＰＲＧ４の沈着は、被覆（例えば適切な組成物中で）、共有結合による付着、疎水性またはイオン性相互作用を介した結合等のような、任意の適切な方法で達成される。また、ＰＲＧ４をその上に沈着させた他の膣装置（例えばタンポン）も本明細書で提供される。一部の実施形態では、装置へのＰＲＧ４の沈着は、特に膣潤滑低下（例えば膣境界潤滑低下）を患っている個体において、そのような装置によって引き起こされる刺激を軽減する。
【００４０】
さらにもう１つの実施形態では、有効量のＰＲＧ４または本明細書で述べる任意の医薬組成物の局所投与で避妊具を補完することをさらに含む。
【００４１】
有効量のＰＲＧ４または本明細書で述べる任意の医薬組成物を膣表面、陰茎表面に局所投与することを含む、性交の間の潤滑を提供する方法。
【００４２】
ＰＲＧ４の投与は、局所投与、つまりクリーム、ゲル、溶液または任意の他の塗布可能な組成物による投与などの、任意の適切な方法で達成される。一部の実施形態では、投与は、ＰＲＧ４またはＰＲＧ４組成物を含浸させたタンポンなどの、移植可能な装置で達成される。一部の実施形態では、ＰＲＧ４を別のパーソナル潤滑剤またはパーソナル潤滑剤組成物、例えばＫ−Ｙゼリーのような石油ベースの潤滑剤と組み合わせる。
【００４３】
本発明の特定実施形態では、有効量のＰＲＧ４または本明細書で述べる任意の医薬組成物を、必要とする患者の膣に適用することから成る、接触する精子の運動性を維持するまたは高めることによって受胎の可能性を上昇させるパーソナル潤滑剤を提供する。グリセリンなどの成分を含有する多くの市販の潤滑剤は殺精子性であり、精子の運動性を妨げる。一部の場合には、膣液の正常成分であるＰＲＧ４は、精子の運動性を維持し、受胎を促進する役割を果たし得る。もう１つの実施形態では、パーソナル潤滑剤または本明細書で述べる任意の他の組成物は、添加剤、例えば、アミノ酸、例えばＬ−アルギニン、シトル
リンおよびアスパラギン酸などの天然酸化窒素前駆体のような酸化窒素を放出する添加剤を含有する。そのような添加剤は、膣への潤滑剤の適用後に加温作用を誘導することができ、従って膣の感覚を高め得る。加えて、酸化窒素の放出は、精子の運動性を維持するまたは増強する作用を有し得る。そのため酸化窒素放出化合物の含有は受胎の可能性を高め得るまたは最大化し得る。
【００４４】
１つの実施形態では、本明細書で述べる医薬組成物は、２．４〜７．８、５．８〜７．４または６．５〜７．４のｐＨを有する。
【００４５】
本明細書で使用される、「避妊具」という用語は、男性用および女性用コンドームを含む、妊娠の防止のために使用される装置を指す。
【００４６】
本明細書で使用される、「ＰＲＧ４」、「ＰＲＧ４タンパク質」または「プロテオグリカン４」タンパク質という用語は、「ルブリシン」タンパク質という用語と交換可能に使用される。ＰＲＧ４は、本明細書ではまた、ＵＣＬ／ＨＧＮＣ／ＨＵＧＯ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅデータベースに認められている巨核球刺激因子（ＭＳＦ）という用語、および表在層タンパク質（ＳＺＰ）を包含するためにも使用される。本明細書で使用されるＰＲＧ４またはルブリシンタンパク質（本明細書ではルブリシンプロテオグリカンと交換可能に使用される）は、任意の単離されたまたは精製された天然または組換えルブリシンタンパク質、そのホモログ、機能的フラグメントもしくはモチーフ、アイソフォーム、および／または変異体を指す。特定実施形態では、単離または精製ＰＲＧ４タンパク質は、ヒト天然または組換えルブリシンタンパク質についてのアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、単離または精製ＰＲＧ４タンパク質は、完全長ＰＲＧ４タンパク質またはアイソフォームの一次構造をコードするｐｒｇ４遺伝子のエクソンによってコードされるアミノ酸配列を含む。プロテオグリカン４（ｐｒｇ４）遺伝子は１２のエクソンを含む。本明細書で使用されるＰＲＧ４タンパク質は、ｐｒｇ４遺伝子のエクソン１〜１２、より好ましくはエクソン６〜１２、最も好ましくはエクソン９〜１２によってコードされるアミノ酸配列を含む。
【００４７】
本明細書で使用される、ＰＲＧ４タンパク質は、現在公知のまたは今後記述される任意のＰＲＧ４タンパク質を包含する。特定実施形態では、好ましいＰＲＧ４タンパク質のアミノ酸配列が配列番号：１で提供される。ＰＲＧ４タンパク質は、任意の公知のＰＲＧ４タンパク質またはアイソフォームの一次アミノ酸構造を、少なくとも６０％の相同性、好ましくは７５％の相同性、より好ましくは８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の相同性で共有する。特定実施形態では、好ましいＰＲＧ４タンパク質は、ＰＲＧ４タンパク質の１またはそれ以上の生物活性部分、または潤滑性フラグメントのような機能的フラグメント、またはそのホモログを含む、５０ｋＤａ〜４００ｋＤａの平均モル質量を有する。
【００４８】
本明細書で使用される、ＰＲＧ４タンパク質は、該タンパク質の生物活性部分を含む。本明細書で使用される、ＰＲＧ４タンパク質の「生物学的に活性な部分」は、完全長タンパク質より少ないアミノ酸を含み、完全長タンパク質の少なくとも１つの活性を示す、該タンパク質のアミノ酸配列と十分に相同なまたは前記アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含むタンパク質の機能的フラグメントを包含する。典型的には、生物学的に活性な部分は、タンパク質の少なくとも１つの活性を有する機能的ドメインまたはモチーフを含む。タンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば１０、２５、５０、１００、２００またはそれ以上のアミノ酸長のポリペプチドであり得る。１つの実施形態では、ＰＲＧ４タンパク質の生物学的に活性な部分は、単独でまたは他の治療薬と組み合わせて、望ましくないまたは低下した膣境界潤滑を治療するために治療薬として使用することができる。
【００４９】
さらにもう１つの実施形態では、ＰＲＧ４の機能的フラグメント、多量体（例えば二量体、三量体、四量体等）、ホモログまたはオーソログは、口腔ケア組成物において使用される。ＰＲＧ４の機能的フラグメントおよびホモログは、中央のムチン様ＫＥＰＡＰＴＴ反復ドメイン内により少ない反復を有するもの、該タンパク質のグリコシル化および非グリコシル化形態、スプライス変異体、組換え形態等を包含する。ＰＲＧ４の潤滑性フラグメントは、定性的に、機械的に、光学的に、電気的に、または生化学アッセイによって測定される、ヒトＰＲＧ４の潤滑作用の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％を示す。
【００５０】
いくつかの天然および組換えＰＲＧ４またはルブリシンタンパク質の核酸およびアミノ酸配列、ならびにＰＲＧ４タンパク質および様々なアイソフォームの特徴づけは、例えば、Ｔｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第５，３２６，５５８号；同第６，４３３，１４２号；同第７，０３０，２２３号；同第７，３６１，７３８号およびＪａｙ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許第６，７４３，７７４号および同第６，９６０，５６２号に開示されている。Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．への米国特許出願公開第２００７０１９１２６８号も、本発明において有用な組換えＰＲＧ４またはルブリシン分子を開示する。
【００５１】
ＰＲＧ４タンパク質の単離、精製および組換え発現のための方法は当技術分野において周知である。特定実施形態では、その方法は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲなどの標準的な分子生物学技術を使用してＰＲＧ４タンパク質またはアイソフォームをコードするｍＲＮＡおよびｃＤＮＡをクローニングし、単離することから始まる。次に、ＰＲＧ４タンパク質またはアイソフォームをコードする単離されたｃＤＮＡを発現ベクターにクローニングし、組換えＰＲＧ４タンパク質を生産するためにさらに形質転換し、宿主細胞において発現させる。
【００５２】
本明細書で使用される、「組換え」は、合成されたもしくはインビトロで操作されたポリヌクレオチド（例えば「組換えポリヌクレオチド」）、細胞もしくは他の生物系において遺伝子産物を生産するために組換えポリヌクレオチドを使用する方法、または組換えポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド（「組換えタンパク質」）を指す。「組換え」はまた、異なるソースからの様々なコード領域またはドメインまたはプロモーター配列を有する核酸を発現カセットまたは発現のためのベクター、例えばＰＲＧ４遺伝子の活性ドメインと本発明のプライマーを使用して増幅された核酸配列を含む融合タンパク質の誘導的または構成的発現のためのベクターに連結することを包含する。
【００５３】
特定実施形態では、ＰＲＧ４タンパク質をコードする核酸は、１またはそれ以上の変異、欠失または挿入を含み得る。そのような実施形態では、ＰＲＧ４タンパク質をコードする核酸は、野生型ＰＲＧ４タンパク質をコードする核酸に少なくとも６０％相同、好ましくは７５％相同、より好ましくは８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上相同である。
【００５４】
本明細書で使用される、「ｃＤＮＡ」という用語は、逆転写酵素などの酵素でｃＤＮＡに変換され得る、細胞または生物ｍＲＮＡ中に存在するｍＲＮＡ分子に相補的なＤＮＡを包含する。特定実施形態では、ＰＲＧ４タンパク質をコードするｃＤＮＡは、当技術分野で周知のＲＴ−ＰＣＲ法を用いてヒト角膜または結膜上皮細胞において発現されるＰＲＧ４  ｍＲＮＡから単離される。
【００５５】
本明細書で使用される、「ポリヌクレオチド」、「核酸／ヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は、交換可能に使用され、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態、またはその類似体を包含する。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有してよく、公知または非
公知の任意の機能を果たし得る。以下はポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子フラグメント、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、天然に生じ得るか、合成、組換えまたはそれらの任意の組合せであり得る。
【００５６】
ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの構築の前または後に行われ得る。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識成分との抱合などにより、重合後にさらに修飾され得る。この用語はまた、二本鎖および一本鎖分子の両方を包含する。特に指定されないまたは必要でない限り、ポリヌクレオチドである本発明の任意の実施形態は、二本鎖形態および二本鎖形態を形成することが公知であるかまたは予測される２つの相補的な一本鎖形態の各々の両方を包含する。
【００５７】
本明細書で使用される、「ポリヌクレオチド配列」という用語は、ポリヌクレオチド分子のアルファベット表記である。ポリヌクレオチドは、４つのヌクレオチド塩基：アデニン（Ａ）；シトシン（Ｃ）；グアニン（Ｇ）；チミン（Ｔ）；およびポリヌクレオチドがＤＮＡではなくＲＮＡである場合は、チミンの代わりにウラシル（Ｕ）、の特定配列から成る。このアルファベット表記はコンピュータのデータベースに入力することができ、例えば機能的ゲノム学および相同性検索などのバイオインフォマティクス適用のために使用できる。
【００５８】
本明細書で使用される、「単離ポリヌクレオチド／ｃＤＮＡ」という用語は、ポリヌクレオチドの天然ソース中に存在する他のポリヌクレオチド分子から分離されたポリヌクレオチド分子を包含する。例えば、ゲノムＤＮＡに関しては、「単離」という用語は、ゲノムＤＮＡが天然に結合している染色体から分離されたポリヌクレオチド分子を包含する。好ましくは、「単離」ポリヌクレオチドは、該ポリヌクレオチドが由来する生物のゲノムＤＮＡ中で該ポリヌクレオチドに天然に隣接する配列（すなわち対象とするポリヌクレオチドの５’および３’末端に位置する配列）を含まない。例えば、様々な実施形態において、本発明で使用されるＰＲＧ４タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド分子は、該ポリヌクレオチドが由来する細胞のゲノムＤＮＡ中で該ポリヌクレオチド分子に天然に隣接するヌクレオチド配列の約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂまたは０．１ｋｂ未満を含み得る。さらに、ｃＤＮＡ分子などの「単離」ポリヌクレオチド分子は、組換え技術によって生産された場合は他の細胞物質または培地を実質的に含まず、または化学合成された場合は化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。
【００５９】
本明細書で使用される、「遺伝子」は、転写され、翻訳された後、特定のポリペプチドまたはタンパク質をコードすることができる少なくとも１つのオープン・リーディング・フレームを含むポリヌクレオチドを包含する。本明細書で述べるポリヌクレオチド配列のいずれもが、それらが結合している遺伝子のより大きなフラグメントまたは完全長コード配列を同定するためにも使用され得る。より大きなフラグメント配列を単離する方法は当業者に公知である。本明細書で使用される、「天然または天然に生じる」ポリヌクレオチド分子は、例えば、天然に生じる（例えば天然タンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有するＲＮＡまたはＤＮＡ分子を包含する。
【００６０】
本明細書で使用される、「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は交換可能であり、２またはそれ以上のサブユニットのアミノ酸、アミノ酸類似体、またはペプチドミメティックの化合物を包含する。サブユニットはペプチド結合によって連結され得る。
もう１つの実施形態では、サブユニットは他の結合、例えばエステル、エーテル結合等によって連結され得る。本明細書で使用される、「アミノ酸」という用語は、グリシンおよびＤまたはＬの両光学異性体を含む、天然および／または非天然または合成アミノ酸、ならびにアミノ酸類似体およびペプチドミメティックを包含する。３またはそれ以上のアミノ酸のペプチドは一般にオリゴペプチドと称される。３またはそれ以上のアミノ酸のペプチド鎖はポリペプチドまたはタンパク質と称される。
【００６１】
特定実施形態では、本明細書で使用されるＰＲＧ４タンパク質は、ヒトまたは他の宿主細胞において天然にまたは組換えによって発現される、ＰＲＧ４タンパク質またはその様々なホモログもしくはアイソフォームを指す。本明細書で使用される、「発現する」または「発現」は、ポリヌクレオチドがＲＮＡに転写されるおよび／またはポリペプチドに翻訳されるプロセスを包含する。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、適切な真核生物宿主が選択された場合は、ＲＮＡのスプライシングを含み得る。発現に必要な調節エレメントは、ＲＮＡポリメラーゼに結合するプロモーター配列およびリボソーム結合のための転写開始配列を含む。例えば、細菌発現ベクターは、ｌａｃプロモーターなどのプロモーターならびに転写開始のためのシャイン−ダルガーノ配列および開始コドンＡＵＧを含む。同様に、真核生物発現ベクターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのための異種または同種プロモーター、下流のポリアデニル化シグナル、開始コドンＡＵＧ、およびリボソームの分離のための終止コドンを含む。そのようなベクターは、商業的に入手できるかまたは当技術分野で周知の方法、例えば一般にベクターを構築するための以下で述べる方法において説明される配列によって構築することができる。本明細書で使用される、「ベクター」という用語は、挿入されたポリヌクレオチドを宿主細胞内におよび／または宿主細胞の間に転移する自己複製核酸分子を包含する。この用語は、主として核酸分子の細胞への挿入のために機能するベクター、主として核酸の複製のために機能する複製ベクター、ならびにＤＮＡまたはＲＮＡの転写および／または翻訳のために機能する発現ベクターを包含することが意図されている。また、上記機能の２以上を提供するベクターも意図されている。
【００６２】
本明細書で使用される、「宿主細胞」は、ベクターのためのまたは外因性ポリヌクレオチドおよび／もしくはポリペプチドの組込みのためのレシピエントとなり得るまたはレシピエントであった任意の個別細胞または細胞培養物を包含することが意図されている。また、単一細胞の子孫を包含することも意図されている。子孫は、天然、偶発的または意図的な変異に起因して元の親細胞と必ずしも完全に同一でなくてもよい（形態においてまたはゲノムもしくは全ＤＮＡ相補物において）。細胞は原核または真核であり得、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、動物細胞、およびマウス、ラット、サルまたはヒト細胞を含むがこれらに限定されない哺乳動物細胞を包含するが、これらに限定されない。本明細書で使用される、「宿主細胞」はまた、遺伝的に修飾された細胞を包含する。「遺伝的に修飾された細胞」という用語は、その後細胞またはその子孫の遺伝子型または表現型を修飾する、外来性もしくは外因性遺伝子またはポリヌクレオチド配列を含むおよび／または発現する細胞を包含する。「遺伝的に修飾された」はまた、細胞に導入された遺伝子またはポリヌクレオチド配列を含むまたは発現する細胞も包含する。例えば、この実施形態では、遺伝的に修飾された細胞は導入された遺伝子を有しており、前記遺伝子は同時に細胞に対して内因性でもある。「遺伝的に修飾された」という用語はまた、細胞の内因性ヌクレオチドに対する任意の付加、欠失または分断を包含する。本明細書で使用される、「宿主細胞」は、ヒトＰＲＧ４タンパク質を発現する任意の細胞であり得る。
【００６３】
本明細書で使用される、「ホモログ」は、本明細書では、それぞれ類似のまたは実質的に同一の核酸またはアミノ酸配列を有する２つの核酸またはペプチドと定義される。「ホモログ」という用語は、遺伝暗号の縮重に起因してヌクレオチド配列の１つと異なる核酸分子をさらに包含し、従って同じアミノ酸配列をコードする。好ましい実施形態の１つで
は、ホモログは、ＰＲＧ４タンパク質をコードする核酸（例えば配列番号：１、例えば図３参照）の対立遺伝子変異体、オーソログ、パラログ、アゴニスト、およびアンタゴニストを含む。
【００６４】
本明細書で使用される、「オーソログ」という用語は、異なる種からであるが、種分化によって共通の祖先遺伝子から進化した２つの核酸を指す。通常、オーソログは同じかまたは類似の機能を有するペプチドをコードする。特に、本発明のオーソログは、一般に、任意の公知のＰＲＧ４タンパク質のアミノ酸配列（例えば配列番号：１）、そのアイソフォームまたは類似体の全部または一部と少なくとも８０〜８５％、より好ましくは８５〜９０％または９０〜９５％、最も好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、さらには９９％の同一性、または１００％の配列同一性を示し、これらのペプチドと類似の機能を示す。同じく本明細書で使用される、「パラログ」という用語は、ゲノム内の重複によって関連する２つの核酸を指す。パラログは通常異なる機能を有するが、これらの機能は関連し得る。
【００６５】
２つのアミノ酸配列の配列同一性パーセントを決定するためには、配列を最適比較のために整列させる（例えば、一方のポリペプチドの配列内に、他方のポリペプチドまたは核酸との最適アラインメントのためにギャップを導入することができる）。次に対応するアミノ酸位置のアミノ酸残基を比較する。一方の配列内のある位置が他方の配列における対応する位置と同じアミノ酸によって占有されている場合、分子はその位置で同一である。同じタイプの比較を２つの核酸配列の間で行うことができる。２つの配列間の配列同一性パーセントは、配列によって共有される同一位置の数の関数である（すなわち、配列同一性パーセント＝同一位置の数／位置の総数×１００）。好ましくは、本発明に含まれる単離アミノ酸ホモログは、任意の公知のＰＲＧ４タンパク質のアミノ酸配列全体（例えば配列番号：１）と少なくとも約５０〜６０％、好ましくは少なくとも約６０〜７０％、より好ましくは少なくとも約７０〜７５％、７５〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％または９０〜９５％、最も好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である。
【００６６】
特定実施形態では、ＰＲＧ４タンパク質をコードする単離核酸ホモログは、そのようなＰＲＧ４タンパク質のアミノ酸配列（例えば配列番号：１）をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約４０〜６０％、好ましくは少なくとも約６０〜７０％、より好ましくは少なくとも約７０〜７５％、７５〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％または９０〜９５％、さらに一層好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるヌクレオチド配列を含む。
【００６７】
２つの核酸またはペプチドの配列間の配列同一性パーセントの決定は当技術分野において周知である。例えば、２つの核酸またはペプチドの配列間の配列同一性パーセントを決定するためにＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ  ６．０（ＰＣ）ソフトウエアパッケージ（Ｉｎｆｏ
ｒＭａｘ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）が使用できる。この方法では、２つの核酸の同一性パーセントを決定するためにギャップ・オープン・ペナルティ１５およびギャップ伸長ペナルティ６．６６を使用する。２つのポリペプチドの同一性パーセントを決定するためにはギャップ・オープン・ペナルティ１０およびギャップ伸長ペナルティ０．１を使用する。他のすべてのパラメータはデフォルト設定にする。多重アラインメント（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズム）に関しては、ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックスでギャップ・オープン
・ペナルティは１０、ギャップ伸長ペナルティは０．０５である。ＤＮＡ配列をＲＮＡ配列に比較する場合の配列同一性の決定に関しては、チミジンヌクレオチドはウラシルヌクレオチドと等価であることが了解されるべきである。
【００６８】
さらに、本明細書で使用されるＰＲＧ４タンパク質は、ストリンジェントな条件下でＰ
ＲＧ４タンパク質をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるＰＲＧ４タンパク質を包含する。本明細書で使用される、「ハイブリダイゼーション」は、１またはそれ以上のポリヌクレオチドが反応して、ヌクレオチド残基の塩基間の水素結合によって安定化された複合体を形成する反応を含む。水素結合は、ワトソン−クリック塩基対合、フーグスティーン結合によって、または任意の他の配列特異的方式で起こり得る。複合体は、二重鎖構造を形成する２本鎖、多重鎖複合体を形成する３本またはそれ以上の鎖、１本の自己ハイブリダイズ鎖、またはこれらの任意の組合せを含み得る。ハイブリダイゼーション反応は、ＰＣＲ反応の開始、またはリボザイムによるポリヌクレオチドの酵素的切断などの、より広範囲のプロセスにおける工程を構成し得る。
【００６９】
ハイブリダイゼーション反応は種々のストリンジェント条件下で実施され得る。本発明は、本明細書で述べるＰＲＧ４タンパク質をコードするポリヌクレオチドに低ストリンジェントな条件下で、より好ましくはストリンジェントな条件下で、最も好ましくは高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用される、「ストリンジェントな条件」という用語は、１０×デンハート液、６×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ中６０℃における一晩のハイブリダイゼーションを指す。ブロットを、３×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ、次いでｌ×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ、最後に０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中にて６２℃で連続的に各々３０分間洗浄する。また本明細書で使用される場合、特定実施形態では、「ストリンジェントな条件」という語句は、６５℃で６×ＳＳＣ溶液中でのハイブリダイゼーションを指す。他の実施形態では、「高ストリンジェントな条件」は、１０×デンハート液、６×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ中６５℃における一晩のハイブリダイゼーションを指す。ブロットを、３×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ、次いでｌ×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ、最後に０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中にて６５℃で連続的に各々３０分間洗浄する。核酸ハイブリダイゼーションのための方法は当技術分野において周知である。従って、本明細書で使用される核酸によってコードされるＰＲＧ４タンパク質は、ヒトＰＲＧ４タンパク質またはその特定アイソフォームもしくはホモログをコードするポリヌクレオチド配列（例えば配列番号：１）に少なくとも６０％の相同性、好ましくは７５％の相同性、より好ましくは８５％、さらに好ましくは９０％、最も好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の相同性を有する核酸を含む。
【００７０】
さらに、本明細書で使用されるＰＲＧ４タンパク質はまた、キメラタンパク質または融合タンパク質であり得る。本明細書で使用される、「キメラタンパク質」または「融合タンパク質」は、第二ポリペプチドに作動可能に連結された第一ポリペプチドを含む。キメラタンパク質は、場合により第一または第二ポリペプチドに作動可能に連結された第三、第四または第五または他のポリペプチドを含み得る。キメラタンパク質は、２またはそれ以上の異なるポリペプチドを含み得る。キメラタンパク質は、同じポリペプチドの複数のコピーを含み得る。キメラタンパク質はまた、ポリペプチドの１またはそれ以上の中に１またはそれ以上の突然変異を含み得る。キメラタンパク質を作製するための方法は当技術分野において周知である。本発明の特定実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＲＧ４タンパク質と他のＰＲＧ４タンパク質アイソフォームとのキメラである。
【００７１】
本明細書で使用される、「単離」または「精製」タンパク質、ポリヌクレオチドまたは分子は、それらが天然に生じる環境から取り出されている、または該タンパク質、ポリヌクレオチドもしくは分子が由来する細胞もしくは組織からの他の夾雑タンパク質などの細胞物質を実質的に含まない、または化学合成された場合は化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないことを意味する。「細胞物質を実質的に含まない」という語は、それが単離されたまたは組換え生産されたまたは合成された細胞の細胞成分から分離され
た試料を包含する。特定実施形態では、「細胞物質を実質的に含まない」という語は、約３０％（乾燥重量比）未満の他のタンパク質（本明細書では「夾雑タンパク質」とも称される）、より好ましくは約２０％未満、さらに一層好ましくは約１０％未満、最も好ましくは約５％未満の他のタンパク質を有するＰＲＧ４タンパク質の試料を包含する。タンパク質またはポリヌクレオチドが組換えによって生産される場合、該タンパク質またはポリヌクレオチドも、好ましくは培地を実質的に含まない、すなわち、培地は対象タンパク質の試料の約２０％未満、より好ましくは約１０％未満、最も好ましくは約５％未満の容積を占める。
実施例
【実施例１】
【００７２】
インビボでの膣境界潤滑欠損の治療
６５歳の閉経後患者が、膣表面の刺激、排尿の際の灼熱感、性交疼痛症、性交後の間欠的な軽度の出血を訴えたため、定期的な膣分泌物を検査したところ、急性感染症を有する可能性は除外されたが、萎縮性膣炎を有すると判定された。特に、骨盤検査では、膣壁の外観が薄くて淡色であることが示されている。
【００７３】
患者に、１００μｇ／ｍＬのＰＲＧ４および１μｇの１７β−エストラジオールの用量を与える週に１回の膣内ＰＲＧ４／１７β−エストラジオール坐薬を投与した。これは、典型的なエストラジオール療法よりもはるかに低い総濃度であるが、ＰＲＧ４共輸送によって膣壁に直接送達される。年に１回の追跡調査来院の際の子宮内膜の組織病理学検査では、特定の場合には、陰唇および外陰部肥大、尿道および膣上皮の潮紅、ならびに／または症状の改善（例えば症状が残らない）が見られるであろう。
【実施例２】
【００７４】
癌患者における膣境界潤滑欠損の治療
最近タモキシフェン化学療法を終えた６０歳の閉経期乳癌患者は、小さな外陰部病変に加えて、膣上皮の炎症、発赤斑、点状出血、および脆弱性上昇を呈している。さらに、膣の超音波検査では、子宮内膜が幅約４ｍｍと薄いことが明らかになる。トリコモナス、カンジダまたは他の細菌の証拠は認められない。パパニコラウスミアにより、無定形の好塩基性顆粒状デブリおよび炎症性滲出物のバックグラウンドに、拡大した核を有する未熟な傍基底扁平上皮細胞が示される。
【００７５】
該患者に、２００μｇ／ｍＬの緩衝ＰＲＧ４ゲルの１日用量を膣投与する。６ヶ月目の追跡調査時に、膣上皮の表在層および中間層からの扁平上皮細胞を明らかにするためにパパニコラウスミアを実施する。一部の場合には、最初の来院時と異なり、細胞の多くは豊富な細胞質と低い核／細胞質比を示す。特定の場合には、大部分の核が凝縮し、適切に角質化した桃色の細胞質の証拠が存在する。一部の場合には、患者は組織の弾性の改善と炎症の軽減を示す。特定の場合には、症状は完全に緩和されるか、または重症から許容される程度へと改善される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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