(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体の高血圧を治療するための薬剤の製造へのデキストロメトルファン（ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）の用法であり、前記薬剤は、カルシウムチャネル拮抗剤を更に含み、前記カルシウムチャネル拮抗剤は、アムロジピンである用法。
【請求項２】
前記薬剤は、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤を更に備える請求項１に記載の用法。
【請求項３】
有効量のデキストロメトルファン、有効量のカルシウムチャネル拮抗剤、及び医薬的に許容可能な担体を含み、前記カルシウムチャネル拮抗剤は、アムロジピンである、個体の高血圧を治療する医薬組成物。
【請求項４】
剤形毎に０．１ｍｇ〜５００ｍｇのデキストロメトルファン及び０．０１ｍｇ〜１００ｍｇのアムロジピンを含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
剤形毎に１０ｍｇ〜１００ｍｇのデキストロメトルファン及び０．５ｍｇ〜２０ｍｇのアムロジピンを含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記アムロジピンは、光学的に純粋なＳ‐（‐）‐アムロジピンである請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記アムロジピンは、（Ｒ，Ｓ）‐アムロジピンである請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
１：０．５〜１：１００のアムロジピン：デキストロメトルファン比を含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤を更に備える請求項３〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧又はその関連疾患を治療する医薬組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧は、公衆衛生問題として、世界にわたって２５％を超えた成人人口に影響を与えている［１，２］。高血圧は、既に死亡の第１のリスク因子として確認され、また、障害調整生命年（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ‐ａｄｊｕｓｔｅｄ  ｌｉｆｅ‐ｙｅａｒ）の第３番目の原因に登録されている［１，３］。血圧降下薬が多く存在するが、高血圧の診断、管理、制御は、依然としてなかなか満足できなく、世界中の異なるコミュニティーにおいて、その制御率が６％〜３０％である［１］。血圧降下治療に関わる医者の指示に従わないことは、ずっと血圧（ＢＰ）の低制御率及び血管心臓障害の高発症率に関わっている［４〜６］。現在、医者の指示に従うこと及び血圧制御に対する改善対策としては、２種類以上の血圧降下薬を利用して、日に１回の固定用量併用（Ｆｉｘｅｄ‐ｄｏｓｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ；ＦＤＣ）治療を行う。この対策は、既に最近の治療準則で提案され、延いては初期治療の選択肢とされている［７，８］。
【０００３】
近年のデータによると、ＮＡＤＰＨオキシダーゼが、高血圧の発症メカニズムに関与することが示されている。Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５０：９‐１６及びその参照文献を参照する。当該文献では、これらの酵素の特異的阻害剤が、高血圧を治療する潜在能力を有する可能性があることが提出されている。ｇｐ９１ｄｓ‐ｔａｔ及びアポシニン（ａｐｏｃｙｎｉｎ）は、最も特異的な阻害剤の２つとして、高血圧動物モデルにおいて、血圧を低下させることができることが既に実証されている。ジフェニレンヨードニウム（ｄｉｐｈｅｎｙｌｅｎｅ  ｉｏｄｏｎｉｕｍ）、アミノエチルベンゼンスルホニルフルオライド（ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｏ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ）、Ｓ１７８３４、ＰＲ３９、蛋白質キナーゼＣ阻害剤及びＶＡＳ２８７０を含むその他の阻害剤も、生体外での可能性を示したが、生体内での高血圧に対する特異性、薬物動力学及び有効性は、まだ確定されていない。現在使える血圧降下薬、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断剤類は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化を効果的に抑制することもできる。同様に、現在、コレステロール降下薬（スタチン系薬物（ｓｔａｔｉｎｓ））は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化を減少できることが既に証明された。
【０００４】
デキストロメトルファン（ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ；ＤＭ）は、右旋性モルフィナン（ｍｏｒｐｈｉｎａｎ）であり、数多くのＯＴＣ医薬品による治療において、非オピオイド（ｎｏｎｏｐｉｏｉｄ）鎮咳薬として広く用いられる［１７］。それは、ＮＭＤＡ受容体拮抗剤であるが、その鎮咳活性の確実な作用メカニズムがまだ不明である。脳虚血及び低血糖性神経損傷の動物モデルで行った研究によると、ＤＭが、神経保護活性を有することが示されている  ［１８〜２３］。ＤＭは、１‐メチル‐４‐フェニル‐１，２，３，６‐テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）に誘導される活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ；ＲＯＳ）の発生を効果的に抑制している。ＤＭの神経保護作用は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの正常機能によって決まる［２４］。近来の生体外及び生体内の研究によると、ＤＭが、酸化ストレスを減少し、ＮＡＤＰＨオキシダーゼを直接抑制することで、マウス体内において、粥状動脈硬化及び内膜形成を抑制することが示唆され、また、アポリポ蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）遺伝子欠陥マウスの大動脈及び頸動脈において、超酸化物の生成を減少できることが示されている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８２：１６１‐１６９を参照する。Ａｌｖａｒｅｚ  Ｙ等は、高血圧ラットの血管において、ＮＡＤＰ（Ｈ）オキシダーゼからの超酸化物陰イオン（Ｏ２‐）の増加が血管収縮剤の反応に寄与し、ｉＮＯＳからのＮＯの増加及びこれらの反応の後続調整を相殺すると指摘する［２５］。
【０００５】
カルシウムチャネル拮抗剤（ＣＣＢ）は、高血圧の初期治療のためのものとされて、現在、既に複数の臨床試験でそれらのメリット及び潜在リスクについて検討されるようになる［９〜１４］。高用量ＣＣＢの使用は、末梢浮腫（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｅｄｅｍａ）及び便秘のような有害事象（ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔｓ；ＡＥ）の高発生率に関わっている［８，１１，１２］。
【０００６】
アムロジピン（ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）は、単剤療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）用の血圧降下性質を持つＣＣＢである。それは、ジヒドロピリジン系カルシウム拮抗剤の１つである。現在、高リスク患者（例えば、冠状動脈性心臓病、心不全を患い、又は複数の心血管系疾患のリスク因子を有する患者）に対しても、その耐性は依然として好適であることが発見された［１２〜１６］。例えば、ニフェジピンに比べ、アムロジピンは、通常、効き目が遅いが、作用時間が長い。（Ｊｅｎｓｅｎ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｕｍ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，４２（５）：  ５４１‐４５，１９９０）。アムロジピンは、代謝産物が明らかに顕著なカルシウムチャネル遮断活性を有しないが、親薬（ｐａｒｅｎｔ  ｄｒｕｇ）の生物学的半減期は、約３５〜４０時間であるため、日に１回の用量プログラムが発生する。（Ｌｏｒｉｍｅｒ，Ａ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｕｍ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，３（３）：  １９１‐９６，１９８９；Ｇｌａｓｓｅｒ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，ＡＪＨ，２（３）：  １５４‐５７，１９８９）。それは、平滑筋においてカルシウムチャネルの能力を遮断して周囲の血管を拡張させ、更に、収縮期圧及び拡張期圧を低下させる。アムロジピンのラセミ混合物（ｒａｃｅｍｉｃ  ｍｉｘｔｕｒｅ）は、現在、主に使用される血圧降下剤であり、血圧降下剤として使用される場合、周囲の血管を拡張させ、更に、収縮期圧及び拡張期圧を低下させる。このような血圧降下作用となる場合、相対的に、心拍数（ｃａｒｄｉａｃ  ｒａｔｅ）に対して顕著又は持続に影響を与えることはない。しかしながら、ヒトにアムロジピンのラセミ混合物を投与すると、例えば、四肢浮腫、末梢浮腫、頭痛、赤面／消耗熱、疲労、眩暈、筋けいれん、目眩のような副作用となることが発見された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現在、高血圧及びその関連疾患を治療したり予防する新規で有効且つ安全な方法及び医薬組成物は、依然として望まれている。このような方法及び医薬組成物について、本出願において説明する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
現在、デキストロメトルファンが、高血圧を患う個体の血圧を効果的に低下させることだけでなく、副作用なし、又は僅かの副作用しか生じずに、カルシウムチャネル拮抗剤と相乗的に作用して、高血圧の治療を大いに改善することもできることが発見された。
【０００９】
一般的な観点から言えば、本発明の具体的な実施態様は、有効量のデキストロメトルファン及び医薬的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を個体に投与する工程を備える、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する方法に関する。
【００１０】
一般的な観点から言えば、本発明の具体的な実施態様は、有効量のデキストロメトルファン及び有効量のカルシウムチャネル拮抗剤を個体に投与する工程を備える、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する方法に関する。
【００１１】
別の一般的な観点から言えば、本発明の具体的な実施態様は、有効量のデキストロメトルファン、有効量のカルシウムチャネル拮抗剤及び医薬的に許容可能な担体を含む、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する医薬組成物に関する。
【００１２】
本発明の一好適な具体的な実施態様は、有効量のデキストロメトルファン、有効量のアムロジピン及び医薬的に許容可能な担体を含む、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する医薬組成物に関する。
【００１３】
別の一般的な観点から言えば、本発明の具体的な実施態様は、有効量のカルシウムチャネル拮抗剤、有効量のＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤及び医薬的に許容可能な担体を含む、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する医薬組成物に関する。
【００１４】
本発明の他の具体的な実施態様は、有効量のカルシウムチャネル拮抗剤及び、有効量の、例えば、デキストロメトルファンのようなＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤を個体に投与する工程を備える、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する方法に関する。
【００１５】
本発明のその他の観点、特徴及びメリットは、本発明の詳細な説明、その好適な具体的な実施態様、及び添付の特許請求の範囲を含む下記内容において極めて明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
添付図面と一斉に読むと、前述の発明内容及び実施方式を更に理解することができる。本発明を説明するために、現在の好適な具体的な実施態様の図面を示す。理解すべきなのは、本発明が基準配列及び手段に限定されないことである。
【００１７】
【図１ａ−１ｄ】動物モデルが高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）である場合、１ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、及び２５ｍｇ／ｋｇ／日の３つの用量のデキストロメトルファン（ＤＭ）の高血圧動物モデルにおける血圧低下効果を示す。
【図１ａ】ＤＭ治療後の収縮期圧（ＳＢＰ）変化である。
【図１ｂ】ＤＭ治療後の拡張期圧（ＤＢＰ）変化である。
【図１ｃ】ＤＭ治療後の心拍数（ＨＲ）変化である。
【図１ｄ】ＤＭ治療後の平均血圧（ＭＢＰ）変化である。
【図２ａ−２ｄ】１ｍｇ／ｋｇ／日、及び５ｍｇ／ｋｇ／日の２つの用量のアムロジピン（ＡＭ）のＳＨＲモデルにおける血圧低下効果を示す。
【図２ａ】ＡＭ治療後のＳＢＰ変化である。
【図２ｂ】ＡＭ治療後のＤＢＰ変化である。
【図２ｃ】ＡＭ治療後のＨＲ変化である。
【図２ｄ】ＡＭ治療後のＭＢＰ変化である。
【図３ａ−３ｄ】複数の用量のＤＭとＡＭとの組み合わせのＳＨＲモデルにおける血圧低下効果を示す。
【図３ａ】ＤＭ＋ＡＭ治療後のＳＢＰ変化である。
【図３ｂ】ＤＭ＋ＡＭ治療後のＤＢＰ変化である。
【図３ｃ】ＤＭ＋ＡＭ治療後のＨＲ変化である。
【図３ｄ】ＤＭ＋ＡＭ治療後のＭＢＰ変化である。
【図４ａ−４ｄ】血圧又は心拍数の百分比の変化で表すように、異なった治療計画のＳＨＲモデルにおける血圧低下効果を示す。
【図４ａ】異なった治療計画で治療した後のＳＢＰ百分比の変化である。
【図４ｂ】異なった治療計画で治療した後のＤＢＰ変化である。
【図４ｃ】異なった治療計画で治療した後のＨＲ変化である。
【図４ｄ】異なった治療計画で治療した後のＭＢＰ変化である。
【図５ａ−５ｂ】ＳＢＰ及びＤＢＰの百分比の変化で表すように、ＳＨＲモデルにおいて単一薬物治療を行う場合、及び薬物を組み合わせて治療する場合の低下血圧効果を比較して示す。
【図５ａ】１ｍｇ／ｋｇ／日のＤＭで単一薬物治療を行う場合、５ｍｇ／ｋｇ／日のＡＭで単一薬物治療を行う場合、及び１ｍｇ／ｋｇ／日のＤＭと５ｍｇ／ｋｇ／日のＡＭを組み合わせて薬物治療を行った後のＳＢＰ及びＤＢＰ百分比の変化である。
【図５ｂ】５ｍｇ／ｋｇ／日のＤＭで単一薬物治療を行う場合、５ｍｇ／ｋｇ／日のＡＭで単一薬物治療を行う場合、及び５ｍｇ／ｋｇ／日のＤＭと５ｍｇ／ｋｇ／日のＡＭで組み合わせて薬物治療を行った後のＳＢＰ及びＤＢＰ百分比の変化である。
【図６】本願の動物研究において、血圧測量及び採血の異なった時点のフロー図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
背景技術及び明細書全体において、多種類の出版物、文章、特許が引用され、又は説明されたが、これらの参照文献は、それぞれ全文が参照されることにより、本出願に組み込まれる。本発明の内容を充実させるために、本明細書は、既に文書、作用、材料、装置、物件等についての討論を含む。以上の討論は、これらの事項の任一又は全部が既に開示され又は請求された如何なる発明に関わる先行技術の一部を構成することを認めるものではない。
【００１９】
特に定義されない限り、本出願で使用したあらゆる技術及び科学用語は、何れも当業者が一般的に理解するものと同様である。そうでなければ、本出願で使用したある用語は、明細書で決められた意味を有する。本出願に示すように、本出願で引用された特許、公開された特許出願及び出版物は、何れも参照されることにより、本出願に組み込まれる。注意すべきなのは、本文で特に明確に定義されない限り、本出願及び添付の特許請求の範囲で使用した単数形の「一」及び「前記」も、その複数形を含む。
【００２０】
本出願で使用したデキストロメトルファン又はアムロジピンのような化合物の名称は、化合物の存在可能なあらゆる異性体の形式（例えば、光学異性体、鏡像異性体、非鏡像異性体、ラセミ化合物又はラセミ混合物）、エステル類、プロドラッグ、代謝産物の形式、医薬的に許容可能な塩類、医薬的に許容可能なエステル類、医薬的に許容可能なアミド類、保護される誘導体を包括することができる。
【００２１】
本出願で使用した「医薬的に許容可能な塩（類）」という用語とは、目的化合物の哺乳動物の体への医薬用途について言えば、安全で有効であり、所望の生物活性を持つ塩類である。医薬的に許容可能な塩類は、特定の化合物における酸基又は塩基を含む塩である。前記酸基又は塩基は、有機又は無機であってよい。医薬的に許容可能な酸付加塩としては、塩化水素酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩（ｍａｌｅａｔｅ）、ゲンチジン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカラート酸塩（ｓａｃｃｈａｒａｔｅ）、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ‐トルエンスルホン酸塩及びパモエート（ｐａｍｏａｔｅ；すなわち１，１’‐メチレン‐ビス‐（２‐ヒドロキシ‐３‐ナフトエート））を含むが、これらに限定されない。適当なアルカリ塩としては、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩及びジエタノールアミン塩を含むが、これらに限定されない。本発明で使用したある化合物は、リジン、Ｎ，Ｎ’‐ジベンジルエチレンジアミン、塩化プロカイン（ｃｈｌｏｒｏｐｒｏｃａｉｎｅ）、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ；すなわちＮ‐メチルグルコサミン）、プロカイン、及びトリスヒドロキシメチルアミノメタン（ｔｒｉｓ）、並びにその他の現在医薬用途に広く用いられて当業者に熟知される来源（例えば、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ）から挙げられる塩類のような多種類のアミノ酸に合わせて、医薬的に許容可能な塩類を形成することができる。無毒で目的活性に実質的に妨害しない限り、如何なる適当な成分を選用して、本出願で討論する活性薬物の塩類を製造することができる。医薬的に許容可能な塩類の回顧としては、ＢＥＲＧＥ等，６６  Ｊ．ＰＨＡＲＭ．ＳＣＩ．１‐１９（１９７７）を参照することができ、前記文献は、参照されることにより、本出願に組み込まれる。
【００２２】
本出願で使用した「ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤」は、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ（すなわち、ニコチンアミドアデニンアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ）の酵素活性を抑制させ、減少させ又は低下させる薬物又は天然物質である。ＮＡＤＰＨオキシダーゼは、超酸化物（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）を発生させることができ、ＮＡＤＰＨから電子を転移して、分子酸素と結合させて超酸化物を発生させる、活性酸素種（ＲＯＳ）を発生可能な反応性遊離基である。「ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤」は、個体の血管での超酸化物の発生を効果的に予防し、低下させ又は減少させることで、ＲＯＳを予防し、低下させ又は減少させることができる。本発明に用いられるＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤の実例としては、デキストロメトルファン、ｇｐ９１ｄｓ‐ｔａｔ、アポシニン（ａｐｏｃｙｎｉｎ）、ジフェニレンヨードニウム、アミノエチルベンゼンスルホニルフルオライド、Ｓ１７８３４、ＰＲ３９、蛋白質キナーゼＣ阻害剤、ＶＡＳ２８７０、アンジオテンシン変換酵素阻害剤類、アンジオテンシン受容体遮断剤類及びスタチン類薬物を含むが、これらに限定されない。
【００２３】
本出願で使用した「デキストロメトルファン」又は「ＤＭ」とは、化合物（＋）‐３‐メトキシ‐１７‐メチル‐９α，１３α，１４α‐モルフィナン（（＋）‐３‐メトキシ‐Ｎ‐メチルモルフィナンとも呼ばれる）及びその如何なる医薬的に許容可能な塩である。例としては、デキストロメトルファンは、遊離酸塩、無機塩、硫酸塩、塩化水素酸塩及び臭化水素酸塩からなる群から選ばれた医薬的に許容可能な塩形式であってもよい。常用のデキストロメトルファンは、臭化水素酸塩一水和物である。
【００２４】
デキストロメトルファンは、右旋性（ｄ）鏡像異性体である。本発明の実施態様による好適な医薬組成物は、実質上光学的に純粋なデキストロメトルファンを含有し、又は実質上ＤＭの左旋性（ｌ）鏡像異性体を含有しない医薬組成物である。
【００２５】
本出願で使用した「実質上光学的に純粋なデキストロメトルファン」又は「実質上ＤＭの左旋性（ｌ）鏡像異性体を含有しない医薬組成物」とは、前記医薬組成物に含まれるＤＭの比例又は百分比が、その左旋性鏡像異性体より高いことである。例としては、好ましくは、前記医薬組成物は、約９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、９９重量％又は１００重量％のＤＭを含有し、ただし、その百分比は、前記医薬組成物におけるＤＭ及びその左旋性鏡像異性体の総量によって算出する。
【００２６】
例えば、米国特許第２６７６１７７号に記載の方法のような発明の属する分野における従来の方法によって、デキストロメトルファンを合成して光学的純化を行うことができ、前記特許の内容は、参照されることにより、本出願に組み込まれる。それを異なる商業来源から取得することもできる。
【００２７】
本出願で使用した「カルシウムチャネル拮抗剤」又は「ＣＢＢ」とは、カルシウムチャネルのカルシウムイオン（Ｃａ２＋）の伝導を破壊する薬物及び天然物質である。それらは、心筋及び血管における電位依存性カルシウムチャネル（ｖｏｌｔａｇｅ‐ｇａｔｅｄ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ；ＶＧＣＣｓ）を遮断し、血圧を低下させる。「カルシウムチャネル拮抗剤」という用語は、ジヒドロピリジン類、フェニルアルキルアミン類、ベンゾチアゼピン（ｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｅｐｉｎｅ）類及び非選択性ＣＢＢ類のような、個体の高血圧を治療できる如何なるＣＢＢを含む。本発明に用いられるＣＢＢの実例としては、アムロジピン、ベプリジル（ｂｅｐｒｉｄｉｌ）、クレンチアゼム（ｃｌｅｎｔｉａｚｅｍ）、ジルチアゼム（ｄｉｌｔｉａｚｅｍ）、フェンジリン（ｆｅｎｄｉｌｉｎｅ）、ガロパミル（ｇａｌｌｏｐａｍｉｌ）、ミベフラジル（ｍｉｂｅｆｒａｄｉｌ）、プレニラミン（ｐｒｅｎｙｌａｍｉｎｅ）、セモチアジル（ｓｅｍｏｔｉａｄｉｌ）、テロジリン（ｔｅｒｏｄｉｌｉｎｅ）、ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、アラニジピン（ａｒａｎｉｄｉｐｉｎｅ）、バルニジピン（ｂａｒｎｉｄｉｐｉｎｅ）、ベニジピン（ｂｅｎｉｄｉｐｉｎｅ）、シルニジピン（ｃｉｌｎｉｄｉｐｉｎｅ）、エホニジピン（ｅｆｏｎｉｄｉｐｉｎｅ）、エルゴジピン（ｅｌｇｏｄｉｐｉｎｅ）、フェロジピン（ｆｅｌｏｄｉｐｉｎｅ）、イスラジピン（ｉｓｒａｄｉｐｉｎｅ）、ラシジピン（ｌａｃｉｄｉｐｉｎｅ）、レルカニジピン（ｌｅｒｃａｎｉｄｉｐｉｎｅ）、マニジピン（ｍａｎｉｄｉｐｉｎｅ）、ニカルジピン（ｎｉｃａｒｄｉｐｉｎｅ）、ニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）、ニルバジピン（ｎｉｌｖａｄｉｐｉｎｅ）、ニモジピン（ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ）、ニソルジピン（ｎｉｓｏｌｄｉｐｉｎｅ）、ニトレンジピン（ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ）、シンナリジン（ｃｉｎｎａｒｉｚｉｎｅ）、フルナリジン（ｆｌｕｎａｒｉｚｉｎｅ）、リドフラジン（ｌｉｄｏｆｌａｚｉｎｅ）、ロメリジン（ｌｏｍｅｒｉｚｉｎｅ）、ベンシクラン（ｂｅｎｃｙｃｌａｎｅ）、エタフェノン（ｅｔａｆｅｎｏｎｅ）、ペルヘキシリン（ｐｅｒｈｅｘｉｌｉｎｅ）及びフルスピリレン（ｆｌｕｓｐｉｒｉｌｅｎｅ）を含むが、これらに限定されない。
【００２８】
本出願で使用した「アムロジピン」又は「ＡＭ」とは、化合物２‐［（２‐アミノエトキシ）メチル］‐４‐（２‐クロロフェニル）‐１，４‐ジヒドロ‐６‐メチルピリジン‐３，５‐ジカルボン酸‐３‐エチルエステル‐５‐メチルエステル及びその如何なる光学異性体、鏡像異性体、非鏡像異性体、ラセミ化合物又はラセミ混合物、医薬的に許容可能な塩、又は医薬的に許容可能なエステルである。例としては、アムロジピンは、無機酸及び有機酸の医薬的に許容可能な塩形式であってよい。これらの酸は、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、ビニルスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、２‐イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ガラクタル酸、硝酸、パモン酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ‐トルエンスルホン酸等からなる群から選ばれる。ベンゼンスルホン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、リン酸、及び硫酸が特に好ましい。（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｓ．Ｆ．等，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８０６，５５７参照）。アムロジピンは、アムロジピンの医薬的に許容可能なエステルであってもよく、特に、その低級アルキルエステルである。
【００２９】
アムロジピンは、キラル化合物である。本発明の実施態様による医薬組成物は、ラセミ化合物、つまり、（Ｒ）‐（＋）‐及び（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンの１：１混合物、又は（Ｒ）‐（＋）‐及び（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンの異なる比例のラセミ混合物を含むことができる。前記医薬組成物は、分離されて実質上別種の立体異性体を含有しない（Ｒ）‐（＋）‐アムロジピン又は（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンを含むこともできる。
【００３０】
（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンは、（Ｒ）‐（＋）‐アムロジピンよりも有効なカルシウムチャネル拮抗剤である。このため、本発明の実施態様による医薬組成物は、好ましくは、実質上光学的に純粋な（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンを含有し、又は実質上（Ｒ）‐（＋）‐アムロジピンを含有しない。
【００３１】
本出願で使用した「実質上光学的に純粋な（Ｓ）‐（−）‐アムロジピン」又は「実質上（Ｒ）‐（＋）‐アムロジピンを含有しない」とは、前記医薬組成物に含まれる（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンの比例又は百分比が、（Ｒ）‐（＋）‐アムロジピンより高いことである。例としては、好ましくは、前記医薬組成物は、約９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、９９重量％又は１００重量％の（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンを含有し、ただし、その百分比は、前記医薬組成物における（Ｒ）‐（＋）‐アムロジピン及び（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンの総量によって算出する。
【００３２】
例えば、Ａｒｒｏｗｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｅ．等，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２９：  １６９６‐１７０２（１９８６）に記載の方法のような、従来の方法によって、アムロジピンのラセミ混合物の化学合成を行うことができる。それを異なる商業来源から購入することもできる。例えば、米国特許第６，４４８，２７５号及び米国特許第７，４８２，４６４号に記載の方法のような、従来の方法によって、ラセミ混合物からアムロジピン異性体を分離することができる。上記参照文献は、参照されることにより、本出願に組み込まれる。
【００３３】
本出願で使用した「医薬組成物」という用語は、特定量の特定成分を含有する製品又は組成物、及び前記特定量の特定成分から直接又は間接に取得した如何なる組み合わせの製品を包括しようとする。
【００３４】
本出願で使用した「個体」という用語とは、本発明の実施態様による化合物又は医薬組成物を投与され、又は既に投与された如何なる動物、好ましくは、哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。本出願で使用した「哺乳動物」という用語は、如何なる哺乳動物を包括する。哺乳動物の実例としては、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒト等を含むが、これらに限定されなく、好ましくはヒトである。個体として、好ましくは、高血圧及びその関連疾患を治療したり予防する必要があり、又は既に観察したり実験した対象である。
【００３５】
本出願で使用した「高血圧又はその関連疾患を治療する」という用語とは、血圧降下効果を引き起こすことであり、例えば、その他の要素で上昇した収縮期圧及び／又は拡張期圧を正常化し、又はこのようにすることで血圧上昇による１種以上の可能な病状又はその他の血行力学的効果を緩やかにする。
【００３６】
一実施態様において、「治療」とは、疾病又は病症、或いは少なくとも１つの識別可能な病状を軽減し、予防し又は逆転することであり、例としては、上昇した収縮期圧及び／又は拡張期圧を低下させることで、高血圧及び／又はその関連疾患を治療することである。
【００３７】
別の実施態様において、「治療」とは、哺乳動物の体における病状又は哺乳動物による識別可能な病状に限らず、治療されている疾病又は病症に関わる算出可能な少なくとも１つの物理的パラメータを軽減し、予防し又は逆転することであり、例としては、血管におけるＲＯＳを低下させることで、高血圧又はその関連疾患を治療することである。
【００３８】
別の実施態様において、「治療」とは、疾病又は病症の進展を抑制し又は軽くすることであり、体において、例えば、識別可能な病状を安定させること、生理上において、例えば、生理的パラメータを安定させること、或いはその両者である。
【００３９】
さらに他の実施態様において、「治療」とは、例えば、高血圧又はその関連疾患のような、疾病又は病症の発症を遅らせ、又は疾病又は病症となるリスクを低下させることである。例としては、高血圧の病状が存在せず、又は極めて軽微であっても、特定の医薬組成物を予防措置として、高血圧を患う可能性のある個体に投与する。
【００４０】
本出願で使用した化合物の「有効量」という用語とは、前記化合物が組織系、動物又はヒトの体において、研究員、獣医、医者又はその他の臨床医の求めた生物又は医学反応を誘発する用量であり、治療される疾病又は病症の病状を軽減することも含まれる。一好適な実施態様において、化合物の有効量は、高血圧又はその関連疾患を十分に治療し、その治療を改善し、或いは高血圧又はその関連疾患を事前的に予防することができるが、前記化合物の投与に関連する顕著な副作用となるにも引き起こさない。
【００４１】
本発明の実施態様のような治療活性成分の有効量を測定する方法は、発明の属する分野で知られている。また、当業者が理解するように、如何なる特定の個体に用いる投与量は、年齢、体重、通常の健康状態、性別、飲食、薬物投与時間、薬物投与経路、排泄率、組み合わせて投与した如何なる他の治療剤、及び治療する疾病又は病状の厳しさを含む多種類の要素によって決まる。一般的に、前記鑑別された病状の予防性又は治療性の処理は、日に約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、０．０３ｍｇ／ｋｇ体重〜約７５ｍｇ／ｋｇ体重、０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重、又は日に約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重という用量の活性成分を投与した後で達成されるべくことが予想される。所望又は適当な用量レベルを問わず、日に単一用量で投与し、又は毎日の総用量を日に２回、３回又は４回の用量に分けて投与することができる。又は、用量を実質上連続的に搬送されるように調合し、持続放出及び／又は制御放出剤形に調合し、又は経皮貼布によって提供することができる。
【００４２】
「副作用」という用語は、心血管効果（急速心拍（ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）及び心筋収縮能低下を含む）、四肢浮腫、頭痛、目眩、紅潮、疲れ、眩暈、筋けいれん、幻覚、下痢、発熱、尿貯留、嘔吐、体表発疹・痒い等を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
現在、デキストロメトルファンを単独で、又はその他の抗高血圧薬と組み合わせて使用すると、高血圧を患う個体の血圧を効果的に低下させることができることが発見された。更に、デキストロメトルファン（ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤）とアムロジピン（ＣＣＢ）が、高血圧を患う個体の血圧を低下さてる点で相乗的に作用できることが発見される。この相乗的な作用は、予想外のものである。このため、現在の発見に基づいて、高血圧又はその関連疾患を治療する新規でより効果的な医薬組成物及び方法を開発することができる。
【００４４】
一般的な観点から言えば、本発明の具体的な態様は、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する方法に関する。前記方法は、有効量のデキストロメトルファン及び医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物を前記個体に投与する工程を備える。
【００４５】
本発明の実施態様の医薬組成物及び方法において、デキストロメトルファンの如何なる医薬的に許容可能な塩を使用することができる。好適な実施態様において、本発明は、例えば、実質上光学的に純粋なデキストロメトルファン臭化水素酸塩のような、実質上光学的に純粋なデキストロメトルファンを使用する。
【００４６】
大部分の患者において、デキストロメトルファンは、胃腸管から迅速に吸収され、肝臓でシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６によって、活性の低い代謝産物であるデキストロルファン（ｄｅｘｔｒｏｒｐｈａｎ）に変換される。ＣＹＰ２Ｄ６の酵素活性を抑制すると、デキストロメトルファンの安定性を増加し、前記個体の体内における半減期を延長して、より効果的に治療すると同時に、より一致で予測可能な結果を得ることができる。
【００４７】
このため、本発明の実施態様による方法は、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤を前記個体に投与する工程を更に備えることができる。本発明に用いられるＣＹＰ２Ｄ６阻害剤の実例としては、キニジンを含むが、これに限定されない。ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤については、ＤＭ及びＣＹＰ２Ｄ６阻害剤の薬物投与スケジュールが時間上重なっている限り、ＤＭと共に同一の医薬組成物において一斉に投与され、又はＤＭと異なる医薬組成物において別々に投与されることができ、このようにして、投与されたＣＹＰ２Ｄ６阻害剤は、前記個体の体内におけるデキストロメトルファンの半減期を効果的に延長することができる。
【００４８】
別の一般的な観点から言えば、本発明の具体的な態様は、有効量のデキストロメトルファン及び有効量のカルシウムチャネル拮抗剤（ＣＣＢ）を前記個体に投与する工程を備える、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する方法に関する。
【００４９】
個体の高血圧を効果的に治療できるＣＢＢであれば、何れも本発明に用いることができ、それは、アムロジピン、ベプリジル、クレンチアゼム、ジルチアゼム、フェンジリン、ガロパミル、ミベフラジル、プレニラミン、セモチアジル、テロジリン、ベラパミル、アラニジピン、バルニジピン、ベニジピン、シルニジピン、エホニジピン、エルゴジピン、フェロジピン、イスラジピン、ラシジピン、レルカニジピン、マニジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、シンナリジン、フルナリジン、リドフラジン、ロメリジン、ベンシクラン、エタフェノン、ペルヘキシリン及びフルスピリレンを含むが、これらに限定されない。
【００５０】
本発明の一具体的な態様において、ＣＣＢは、アムロジピンである。アムロジピンの光学異性体、鏡像異性体、非鏡像異性体、ラセミ化合物又はラセミ混合物、医薬的に許容可能な塩、又は医薬的に許容可能なエステルは、何れも本発明に用いることができる。
【００５１】
一具体的な態様において、本発明においてアムロジピンのラセミ混合物又は（Ｒ，Ｓ）‐アムロジピンを使用する。
【００５２】
一好適な具体的な態様において、本発明において、例えば、実質上光学的に純粋な（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンベンゼンスルホン酸塩、（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンメシラート又は（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンマレイン酸塩のような、実質上光学的に純粋な（Ｓ）‐（−）‐アムロジピンを使用する。
【００５３】
本発明の実施態様によると、ＤＭ及びＣＣＢの薬物投与スケジュールが時間上重なっている限り、デキストロメトルファンは、ＣＣＢと共に同一の医薬組成物において一斉に投与され、又は異なる医薬組成物において別々に投与されることができる。
【００５４】
本発明の一具体的な実施態様において、ＣＣＢ及びＤＭは、同一の医薬組成物（例えば、ＣＣＢ及びＤＭの両者を含む剤形）又は異なる医薬組成物（例えば、ＣＣＢ及びＤＭを別々に含む分離剤形）において、ＣＣＢ：ＤＭが１：０．５〜１：１００であり、例えば、１：１、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０又は１：１００の用量比で投与される。
【００５５】
本発明の別の一般的な観点は、有効量のデキストロメトルファン、有効量のカルシウムチャネル拮抗剤及び医薬的に許容可能な担体を含む、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する医薬組成物に関する。
【００５６】
本発明の実施態様も、有効量のカルシウムチャネル拮抗剤、有効量のＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤及び医薬的に許容可能な担体を含む、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する医薬組成物に関する。
【００５７】
前記のような個体の高血圧を効果的に治療できる如何なるＣＣＢを本発明に用いることができる。
【００５８】
本願に用いられるＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤の実例としては、ｇｐ９１ｄｓ‐ｔａｔ、アポシニン、ジフェニレンヨードニウム、アミノエチルベンゼンスルホニルフルオライド、Ｓ１７８３４、ＰＲ３９、蛋白質キナーゼＣ阻害剤、ＶＡＳ２８７０、アンジオテンシン変換酵素阻害剤類、アンジオテンシン受容体遮断剤類、スタチン系薬物及びデキストロメトルファンを含むが、これらに限定されない。
【００５９】
本発明の具体的な態様による医薬組成物は、例えば、別種の血圧降下剤のような、その他の治療活性成分を選択的に含むことができる。
【００６０】
本発明の具体的な態様は、個体の高血圧又はその関連疾患を治療する方法にも関する。これらの方法は、有効量のＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤（例えば、デキストロメトルファン）及び有効量のＣＣＢ（例えば、アムロジピン）を前記個体に投与する工程を備える。
【００６１】
前記ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤及びＣＣＢは、単一の医薬組成物において一斉に投与され、又はほぼ同一の時点で別々に投与され、又は異なる薬物投与スケジュールで別々に投与されることができる。上記投与方式として、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤及びＣＣＢの薬物投与スケジュールが時間上重ならなければならないため、同時に行うこともできる。
【００６２】
本発明の具体的な態様の方法は、例えば、別種の血圧降下剤のような、その他の治療活性成分を前記個体に投与する工程を、選択的に備えることができる。
【００６３】
単独に投与され、又はその他の治療剤と組み合わせて投与されるに関わらず、治療活性成分は、何れも如何なる既知の薬物投与経路（経口、外用、非経口（皮下、静脈内、筋肉内及び胸骨内注射又は輸液投与技術を含む）を含む）によって投与され、又は噴霧吸入又は直腸を介して投与され、用量単位で、又は従来の医薬的に許容可能な担体及びこのような如何なる用量単位を含む医薬組成物で、又は本発明の範囲内の医薬組成物で投与されることができる。
【００６４】
経口用の医薬組成物としては、例えば、丸薬、錠剤、糖衣錠（ｃａｐｌｅｔ）、硬質又は軟質カプセル（それぞれが即時放出、定時放出及び持続放出の製剤を含む）及びトローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）及び分散可能な粉末又は顆粒剤のような、固体形式を含む。経口に好適に用いられる医薬組成物の液体形式としては、溶液、シャリベツ、エリキシル剤、乳化液及び水性又は油性懸濁液を含む。上記剤形は、何れも医薬組成物の製造技術における既知の方法又は配合技術によって調製することができる。固体経口剤形の製造に特に用いられる医薬的に許容可能な担体としては、不活性希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム）、整粒剤又は崩壊剤（例えば、トウモロコシ澱粉又はアルギン酸）、粘着剤（例えば、澱粉、ゼラチン又はアラビアゴム）及び潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルク）を含む。必要に応じて、経口薬物投与に好適に用いられる固体医薬組成物は、うま味があり又はおいしい製剤を提供するように、１種以上の甘味剤、着香料、着色剤又は防腐剤を更に含むことができる。
【００６５】
剤形が錠剤又は丸薬である実施態様において、それは、被覆されず又は被覆されたものであってよく、被覆された場合、如何なる既知の技術によって被覆することができる。また、特に提供した被覆層の場合、既知の技術によって調合し又は使用することができるので、その被覆層は錠剤又は丸薬の崩壊を遅らせることができるため、有効成分の吸収を遅らせることで、長時間内で持続的な治療又は予防作用を提供可能な制御放出及び／又は持続放出剤形を提供することができる。例としては、前記錠剤又は丸薬は、内部用量組成成分と、内部用量組成成分を被包する形式となる外部用量組成成分と、を含むことができる。胃において崩壊を防止して内部組成成分を十二指腸に実質上完備的に進入させ、又は放出を遅らせるための腸溶層は、この２つの組成成分を仕切ることができる。多種類の高分子酸（ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ａｃｉｄ）、シェラック、セタノール及び酢酸セルロースを含む多種類の材料は、何れもこのような腸溶層又は被覆層に用いることができる。又は、このような制御放出及び持続放出が望まれる実施態様において、如何なる既知の方法によって錠剤、丸薬又はカプセルを浸透ポンプ剤形に調合することができる。
【００６６】
経口に好適に用いられる医薬組成物は、硬質又は軟質ゼラチンカプセルで現れることもでき、前者の場合、活性成分は、不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はカオリン）と混合することができ、また後者の場合、水又は混合可能な溶剤（例えば、プロピレングリコール、ＰＥＧ及びエタノール）又は油媒体（例えば、ラッカセイ油、流動パラフィン又はオリーブ油）と混合することができる。
【００６７】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適に用いられる賦形剤と混合する活性成分を含有するように調製されることができる。これらの賦形剤としては、懸濁化剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアゴム、グルコサン、ポリビニルピロリドン又はゼラチン）、及び分散剤又は湿潤剤（例えば、レシチン、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ヘプタデカンエトキシ基セタノール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリエチレンソルビタンモノオレエート）を含む。水性懸濁液は、１種以上の防腐剤（例えば、ｐ‐ヒドロオキシ安息香酸エチル又はｎ‐プロピルエステル）、１種以上の着色剤、１種以上の着香料及び１種以上の甘味剤（例えば、蔗糖、サッカリン又はアスパルテーム）更に含むことができる。
【００６８】
油性懸濁液は、活性成分を植物油（例えば、綿実油、オリーブ油、ゴマ油又はココナッツ油）又は鉱物油（例えば、流動パラフィン）に懸濁させることで調製し得る。油性懸濁液は、増粘剤（例えば、蜜蝋、固形パラフィン又はセタノール）を含むことができる。おいしい経口製剤を提供するために、前記のように、甘味剤及び着香料を添加することができる。このような油性懸濁液は、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸）を含むことで防腐することができる。
【００６９】
経口用の医薬組成物の調製に好適に用いられる分散可能な粉末及び顆粒剤は、前記のような分散剤又は湿潤剤、懸濁化剤及び１種以上の防腐剤と混合する活性成分を提供することができる。必要に応じて、甘味剤、着香料又は着色剤を含むこともできる。
【００７０】
経口に好適に用いられる医薬組成物は、水中油型乳化液で現れることもできる。油相としては、前記のような植物油又は鉱物油、或いはその混合物であってよい。好適に用いられる乳化剤としては、自然生産リン脂質（例えば、大豆、レシチン、ソルビタンモノオレエート又はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）であってよい。乳化液は、甘味剤又は着香料を含むこともできる。
【００７１】
シャリベツ及びエリキシル剤は、甘味剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール又は蔗糖）と共に調合することができる。このような製剤は、緩和剤、防腐剤、着香料又は着色剤を含むこともできる。
【００７２】
前記医薬組成物は、更に、非経口薬物投与（すなわち、注射又は輸液）に好適に用いられる形式であってもよい。注射可能な水状又は油状懸濁液は、無菌で、既知の方法によって前記適当な分散剤、湿潤剤及び懸濁化剤を利用して調合することができる。例えば、１，３‐プチレングリコール、水、リンガー溶液及び等張性塩化ナトリウムのような、非経口投与可能な希釈剤又は溶剤を使用することもできる。例えば、エタノール、プロパノール又はポリエチレングリコールのような、共溶媒（ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ）を使用することもできる。また、無菌の不揮発性油は、常に注射可能又は輸液可能な溶液において溶剤又は懸濁媒剤として用いられ、それらは、如何なる人工合成によるモノグリセリド又はジグリセリドのような、如何なる無刺激性の不揮発性油を含むことができる。注射可能又は輸液可能な溶液製剤に、例えば、オレイン酸のような、脂肪酸を使用することもできる。
【００７３】
医薬組成物は、座薬の形式で現れることもできる。座薬は、活性成分、如何なるその他の理想的な治療剤及び好適に用いられる無刺激性の賦形剤を混合することで調合し得る。前記賦形剤は、室温で固体であるが体温で溶解して、活性成分を放出する。好適に用いられる材料は、カカオ脂及びポリエチレングリコールを含む。
【００７４】
外用部分として、活性成分を含有するクリーム、膏薬、ゲル、溶液又は懸濁液を調合することができる。本出願における外用は、含嗽薬（ｍｏｕｔｈ  ｗａｓｈ）及びうがい薬（ｇａｒｇｌｅ）を含む。外用製剤としては、共溶媒、乳化剤、透過促進剤、防腐剤、柔軟剤等を含むことができる。
【００７５】
本発明の実施態様による活性成分は、例えば、小さな１枚膜リポソーム（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、大きな１枚膜リポソーム（ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、多重層リポソーム（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）の医薬組成物のような、リポソームによる搬送系の形式で提供されることもできる。リポソームは、多種類の脂質からなることができ、両親媒性脂質（例えば、ホスファチジルコリン類、スフィンゴミエリン類、ホスファチジルエタノールアミン類、、カルジオリピン類、ホスファチジルセリン類、ホスファチジルグリセロール類、ホスファチジン酸類、ホスファチジルイノシトール類、ジアシルトリメチルアミノプロパン類、ジアシルジメチルアミノプロパン類及びオクタデシルアミン）、中性脂質（例えば、トリグリセリド）、及びその組み合わせを含むが、これらに限定されない。それらは、コレステロールを含有しても含有しなくてもよい。
【００７６】
本発明の実施態様による医薬組成物は、経口薬物に調合されることは好ましい。前記医薬組成物は、剤形で適切に現れ、製薬学の技術分野で知られる如何なる方法を利用して本願の開示によって調製することができる。一般的に、医薬組成物の調製としては、活性成分を、液体キャリア又は細分した固体キャリア又はその両者と均一で、密接に混合した後、必要に応じて、産物を所望の形に作る。
【００７７】
剤形内に含まれる治療活性成分の予定の量は、治療される患者、薬物投与手段及び所望の薬物投与用量によって決まる。代表的な医薬組成物は、一般的に、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜５００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ又は約１０ｍｇ〜約１００ｍｇの活性成分を含む。
【００７８】
本発明の一具体的な実施態様において、経口薬物の各剤形（例えば、丸薬、錠剤、糖衣錠、硬質又は軟質カプセル）は、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇのＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤（例えば、ＤＭ）を含む。各剤形は、１０ｍｇ〜約１００ｍｇのＣＹＰ２Ｄ６阻害剤（例えば、キニジン）を更に含むことができる。また、各剤形は、約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇのＣＣＢ（例えば、ＡＭ）を含むことができる。
【００７９】
本発明の別の具体的な実施態様において、経口薬物の各剤形（例えば、丸薬、錠剤、糖衣錠、硬質又は軟質カプセル）に含まれるＣＣＢ（例えば、ＡＭ）：ＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤（例えば、ＤＭ）の比率は、１：０．５〜１：１００であり、例えば、１：１、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、１：９０又は１：１００である。
【００８０】
経口医薬組成物を使用する場合、本発明で用いたＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤（例えば、デキストロメトルファン）の適当な用量範囲は、毎日約０．１ｍｇ〜５００ｍｇの総用量であり、それは日に１回朝で薬物を投与し、必要に応じて、分割投与することができる。好ましくは、約１ｍｇ〜約３００ｍｇである用量範囲においては、日に１回薬物を投与し、必要に応じて、分割投与することができ、最も好ましくは、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ又は約２０ｍｇ〜約５０ｍｇである用量範囲においては、日に１回薬物を投与し、必要に応じて、分割投与することができる。必要に応じて、患者は、この用量より低い範囲内から、病状又は血圧を満足的に制御するまで滴定することができる。
【００８１】
経口医薬組成物を使用する場合、本発明で用いるＣＣＢ（例えば、アムロジピン）の適当な用量範囲は、毎日約０．０１ｍｇ〜約１００．０ｍｇの総用量であり、それは日に１回朝で薬物を投与し、必要に応じて、分割投与することができる。好ましくは、約０．５ｍｇ〜約２０．０ｍｇである用量範囲においては、日に１回薬物を投与し、必要に応じて、分割投与することができ、最も好ましくは、約０．５ｍｇ〜約１０．０ｍｇである用量範囲においては、日に１回薬物を投与し、必要に応じて、分割投与することができる。必要に応じて、患者は、この用量より低い範囲内から、病状又は血圧を満足的に制御するまで滴定することができる。
【００８２】
次の非限定性の実施例を参照すると、本発明を更に理解することができるが、当業者であれば、これらの実施例が性質を説明するためのものだけであり、添付の特許請求の範囲によってより全面的に説明することが容易に理解できる。
【００８３】
実施例１：デキストロメトルファン及びアムロジピンによる単一薬物治療及び組み合わせ薬物治療に対する動物研究
高血圧自然発症ラット（高血圧の動物モデル）において、デキストロメトルファン及びアムロジピンによる単一薬物治療及び組み合わせ薬物治療の生体内研究を行って、その血圧降下効果及び耐性を測量して比較した。同様の研究を、その他のＮＡＤＰＨオキシダーゼ阻害剤及びＣＣＢによって行ってもよい。
【００８４】
材料と方法
動物
本研究は、米国国立衛生研究所の掲載した実験動物の管理と使用に関する指針（ＮＩＨ出版物番号８５‐２３、１９９６年訂正）の規範に合致し、且つ台北栄民総医院（Ｔａｉｐｅｉ  Ｖｅｔｅｒａｎｓ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）の現行法規に合致する。この研究において、１８週齢の正常血圧の雄性Ｗｉｓｔａｒ  Ｋｙｏｔｏラット（ＷＫＹ）及び高血圧自然発症ラット（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  ｒａｔ；ＳＨＲ）を使用した。
【００８５】
治療されなかったＷＫＹ及びＳＨＲラット、アムロジピン（１、５ｍｇ／ｋｇ／日）又はデキストロメトルファン（１、５、２５ｍｇ／ｋｇ／日）によって治療されたＳＨＲラット、及び前記用量のマトリクス組み合わせの固定用量で併用（ＡＭ＋ＤＭ）して治療されたＳＨＲラットを比較し、治療時間を４週間にした。対照群としてのＳＨＲラットのＧ１〜Ｇ１２、及びＷＫＹラットのＧ０を含む治療群を、全て表１に示す。
【００８６】
【表１】
0005847162.tif 000002
【００８７】
＊アムロジピンによる治療：Ａ０‐薬物を投与せず、Ａ１‐１ｍｇ／ｋｇ／日、Ａ２‐５ｍｇ／ｋｇ／日。
デキストロメトルファンによる治療：Ｄ０‐薬物を投与せず、Ｄ１‐１ｍｇ／ｋｇ／日、Ｄ２‐５ｍｇ／ｋｇ／日、Ｄ３‐２５ｍｇ／ｋｇ／日。
【００８８】
実験設計
上記表１に基づいて、ラットを次の実験群に分けた。
Ｇ０：ＷＫＹを対照群とする（正常血圧ラット、薬物を投与せず、ｎ＝１０）
Ｇ１：ＳＨＲ（高血圧ラット、薬物を投与せず、ｎ＝１０）
Ｇ２：ＳＨＲ＋Ｄ１（ＤＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ３：ＳＨＲ＋Ｄ２（ＤＭ  ５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ４：ＳＨＲ＋Ｄ３（ＤＭ  ２５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ５：ＳＨＲ＋Ａ１（ＡＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ６：ＳＨＲ＋Ａ１＋Ｄ１（ＡＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日＋ＤＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ７：ＳＨＲ＋Ａ１＋Ｄ２（ＡＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日＋ＤＭ  ５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ８  ：ＳＨＲ＋Ａ１＋Ｄ３（ＡＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日＋ＤＭ  ２５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ９：ＳＨＲ＋Ａ２（ＡＭ  ５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ１０：ＳＨＲ＋Ａ２＋Ｄ１（ＡＭ  ５ｍｇ／ｋｇ／日＋ＤＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ１１：ＳＨＲ＋Ａ２＋Ｄ２（ＡＭ  ５ｍｇ／ｋｇ／日＋ＤＭ  ５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
Ｇ１２：ＳＨＲ＋Ａ２＋Ｄ３（ＡＭ  １ｍｇ／ｋｇ／日＋ＤＭ  ２５ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝１０）
【００８９】
対照群ラット（Ｇ０及びＧ１）に、媒剤としての１％のメチルセルロース溶液（１ｍＬ／ｋｇ）を飲ませた。ＡＭ及びＤＭは、１％のメチルセルロース溶液に懸濁し、１ｍＬ／ｋｇの量で飲ませて投与された。全ての化合物は、何れも４週間で薬物投与された。治療前、及び薬物投与後の第２週と第４週に、動脈血圧を測量して、採血を行った。
【００９０】
血圧測定
カニューラシーベル法（ｔａｉｌ‐ｃｕｆｆ  ｍｅｔｈｏｄ）によって、意識のあるラットの体に、自動血圧計で動脈血圧を測量した。測量前、動物を落ち着かせるように、温室（約３４℃）に３０分間放置して、尾部の血管を拡張させた。各動物に対して、動脈血圧を少なくとも３回測量した。圧力の変化は、基線値の百分比で現れる。
【００９１】
生物化学
全自動生化学自動分析装置（Ｓｐｏｔｃｈｅｍ  ＴＭ  ＳＰ  ４４１０  Ｋｙｏｔｏ  Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｋａｇａｋｕ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．）を採用して、総コレステロール、ＬＤＬ‐コレステロール、ＡＬＴ、ＡＳＴ及びクレアチニンを測量した。
【００９２】
血清酸素分圧及び炎症マーカー
前記酸化剤系は、酵素（例えば、超酸化物不均化酵素、カタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）、グルタチオンペルオキシダーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ））、大分子（例えば、アルブミン、セルロプラスミン及びフェリチン）、小分子（例えば、アスコルビン酸、α‐トコフェロール、β‐カロテン、還元型グルタチオン（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｇｌｕｔｈｉｏｎｉｎｅ）、尿酸及びビリルビン）を含む。内因性及び食品に由来する酸化防止剤の総和は、体系全体の酸化防止剤の活性を表す。血漿、血清、尿液、唾液又は細胞溶解物（ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅ）の全体酸化抵抗力又は全体酸化抵抗状態（ＴＡＳ、ｍｍｏｌ／Ｌ）については、例えば、Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｃａｔ  Ｎｏ．７０９００１，Ｃａｙｍａｎ）又はＴｏｔａｌ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ（Ｒａｎｄｏｘ  Ｌａｂ  Ｌｔｄ）のような、市販のセットを利用して、セットにおける方法によって測量することができる。その結果は、ｍｍｏｌ／Ｌで表す。
【００９３】
また、血清ペルオキシ硝酸塩（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒａｔｅ）（３‐ニトロチロシン、３‐ＮＴ）、８‐ヒドロキシデオキシグアノシン（８‐ＯＨｄＧ）、エンドセリン‐１（ＥＴ‐１）、超酸化物不均化酵素（ＳＯＤ）及びグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）の活性（ＩＵ／ｇ  Ｈｂ）についても、評価を行った。
【００９４】
ニトロチロシンは、活性代謝産物ＮＯが存在する場合で形成した。ニトロチロシンを発生するには、過酸化亜硝酸を形成する経路を含めて、多種類の経路があった。ニトロチロシンが、過酸化亜硝酸の酸化反応後の安定な最終生成物であるため、その血漿濃度に対する評価は、生体内のＮＯへの依存性損害のマーカーとされることができる。動脈硬化性プラーク、セリアック病、関節リウマチ、慢性腎不全及び敗血性ショックを含む多種類の炎症状態において、ずっとニトロチロシンの存在を検出することができる。ニトロチロシンが炎症マーカーに定義されることもあった。正常血漿において、少量で検出不能なニトロチロシンが存在することがある。例えば、Ｎｉｔｒｏｔｙｒｏｓｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（Ｈｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＫ５０１）のような、市販のセットを利用して、血漿及びその他の生体サンプルに対して、ニトロチロシンを定量測定することができる。
【００９５】
活性酸素種及び窒素族による  ＤＮＡ酸化損傷で発生された８‐ＯＨｄＧは、酸素分圧の既定マーカーとされることができる。８‐ＯＨｄＧの増加は、高血圧に関わっており、また、老化及び数多くのその他の病状（例えば、癌及び糖尿病）にも関わる。例えば、８‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐２‐ｄｅｏｘｙ  Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ，Ｃａｔ  Ｎｏ．５８９３２０又は５８９３２１）のような、市販のセットを利用して、血漿及びその他の生体サンプルに対して、８‐ＯＨｄＧを定量測定することができる。
【００９６】
血漿エンドセリン１（ＥＴ‐１）は、２１個のアミノ酸残基を持つペプチドであり、現在知られている最も潜在力のある血管収縮剤物質であった。ＥＴ‐１は、平滑筋細胞、線維芽細胞に対して効果的に作用し、数多くの疾病の過程、特に、血管心臓障害に関与することが既に証明された。現在、それは鬱血心不全、腎不全及び肺高血圧において、重要な役割を果たすことが明らかになった。例えば、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ‐１  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｌ）（ＩＢＬ，Ｃｏｄｅ  Ｎｏ．２７１６５）のような、市販のセットを利用して、血漿及びその他の生体サンプルに対して、ＥＴ‐１を定量測定することができる。
【００９７】
市販の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）セットを利用して、メーカーの指示によって、３‐ＮＴ、８‐ＯＨｄＧ、ＥＴ‐１に対して繰り返して測量することもできる。
【００９８】
これらの測定としては、２サイトＥＬＩＳＡサンドイッチ法（ｔｗｏ‐ｓｉｔｅ  ＥＬＩＳＡ  ｓａｎｄｗｉｃｈ  ｆｏｒｍａｔ）によって、ＭＭＰに対する２種類の異なるエピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）の抗体を利用して行った。９６穴マイクロプレーンに予めＭＭＰの抗体を塗布した。血漿サンプルをマイクロプレーンに仕込み、また、検出したホースラディシュペルオキシダーゼと共役結合した抗体を仕込んだ。そして、基質として、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を使用した。硫酸を仕込むことで、過酸化物‐ＴＭＢ反応を終止させて、マイクロプレーン分光光度計において、４５０ｎｍで得られたカラーを測定した。１００μＬのサンプルを、作業標準物質によって繰り返して分析して、マイクロプレーン読込装置（Ａｓｙｓ‐Ｈｉｔｅｃｈ，Ａｕｓｔｒｉａ）によって測量した。標準曲線を作った後、マイクロプレーン読込装置のソフトウエア（ｖｅｒｓｉｏｎ  ３・１，Ａｓｙｓ‐Ｈｉｔｅｃｈ，Ａｕｓｔｒｉａ）によって、サンプルの数値を測定した。
【００９９】
ＳＯＤ及びＧＰｘの活性は、ＩＵ／ｇ  Ｈｂで表れ、市販のセット（それぞれがＲａｎｄｏｘ  Ｌａｂ  Ｌｔｄ，Ｃｒｕｍｌｉｎ，ＵＫのＲａｎｓｏｄ及びＲａｎｓｅｌから購入）によって測定された。
【０１００】
脂質過酸化反応の産物であるマロンアルデヒド（ＭＤＡ）は、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）測定法によって測定された。前記測定した混合物は、０．１ｍＬの血清、０．４ｍＬの０．９％のＮａＣｌ、０．５ｍＬの３％のラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）及び３ｍＬのＴＢＡ試薬（等分の０．８％のＴＢＡ水溶液及び酢酸を含む）からなる。上記混合物を、９５℃で７５分間加熱した後、１ｍＬの０．９％冷たいＮａＣｌを仕込んで、５ｍＬのｎ‐ブチルアルコールによって抽出した。４℃において、７３０ｇで１５分間遠心して、分光光度計によって５３２ｎｍでその有機相を分析し、外部標準物質として、１，１，３，３‐テトラメトキシプロパンを用いた。結果は、μｍｏｌ／ＬのＭＤＡで表す。
【０１０１】
測量時点
治療前、及び薬物投与後の第２週と第４週に、動脈血圧を測量して、採血を行った（図６）。
【０１０２】
統計的分析
結果は、平均値±標準偏差で表す。Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ‐Ｓｍｉｒｎｏｖ検定及びＬｉｌｌｉｅｆｏｒｓ検定を利用して、分布の常態を確認した。差異分析（ＡＮＯＶＡ）によって統計評価を行って、最小有意差法（ＬＳＤ）試験の方式で事後で比較した。データが常態分布でない場合、ＡＮＯＶＡ（Ｋｒｕｓｋａｌｌ‐Ｗａｌｌｉｓ）及びＭａｎｎ‐Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定によって統計評価を行った。ｐ＜０．０５である場合、有意差と認めた。
【０１０３】
表２において、対照群（すなわち、ＷＫＹ及びＳＨＲラット）が空白治療（１％のメチルセルロース溶液）を受ける前、受けた後で測量した血圧が列記された。表２に示すように、通常、２つの測量点で測定した血圧は、変わらずに保持される。
【０１０４】
【表２】
0005847162.tif 000003
【０１０５】
図１ａ‐ｄに示すように、１ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日の３つの異なった用量のＤＭによって、単独治療すると、何れの用量も、ＳＨＲの血圧を低下させた。しかしながら、明らかな用量反応は観察されなかった。
【０１０６】
図２ａ‐ｄに示すように、１ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日の２つの異なった用量のＡＭによって、単独治療すると、何れの用量も、ＳＨＲの血圧を低下させた。ＡＭ治療の用量が高いほど、血圧降下効果は顕著となる。
【０１０７】
図３ａ‐ｄに示すように、多種類の用量のＤＭとＡＭの組み合わせで治療すると、ＤＭ及びＡＭの個別の血圧降下効果を顕著に改善した。
図４ａ‐４ｄ、図５ａ、及び図５ｂに明らかに示すように、ＤＭ及びＡＭの血圧降下効果は、特に、収縮期圧（ＳＢＰ）の測量方面で、ＤＭ及びＡＭを別々に使用する付加効果より大きかった。これは、ＤＭ及びＡＭが血圧降下方面における相乗的な作用を持つことを表す。
【０１０８】
実施例２：血管内皮依存性血管拡張の研究
デキストロメトルファンの血圧降下作用メカニズム、又はカルシウムチャネル拮抗剤との高血圧治療における相乗的な作用メカニズムは、内皮依存性血管拡張の研究方法によって研究され、前記研究方法としては、ラットの大動脈弁輪の薬物反応に対する等長張力（ｉｓｏｍｅｔｒｉｃ  ｔｅｎｓｉｏｎ）を測量した。特に、試験薬物（例えば、デキストロメトルファン、アムロジピン、又はアムロジピンとデキストロメトルファンとの組み合わせ）が高ＫＣｌ誘発収縮方面での効用を研究し、例えば、内皮依存性及び内皮独立性弛緩薬の興奮薬アセチルコリン（ＡＣｈ）及びニトロプルシドナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ；ＳＮＰ）に対する累積濃度‐反応曲線を別々に測量し、又は１‐受容体（１‐ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の興奮薬フェニレフリン（ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ；ＰＥ）に対する累積濃度‐反応曲線を測量することで、研究を行う。
【０１０９】
大動脈弁輪の調製
ラットを、ペントバルビタール（キログラム体重あたり６０ｍｇ、ｉ．ｐ．）によって麻酔し、下行大動脈を解剖し、小環（３〜５ｍｍ幅）に切断し、正常のＫｒｅｂｓ生理的食塩水（ｎｏｒｍａｌ  Ｋｒｅｂｓ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＫＰＳＳ）を含む５ｍＬの浴槽（ｏｒｇａｎ  ｂａｔｈ）に懸濁させ、その内、ＫＰＳＳは、１１８．２のＮａＣｌ、４．７のＫＣｌ、２．５のＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１．２のＫＨ２ＰＯ４、１．２のＭｇＣｌ２、１１．７の葡萄糖、２５．０のＮａＨＣＯ３、及び０．０２６のＥＤＴＡ（ｍＭ）を含んだ。浴槽溶液に、３７℃で９５％の酸素ガス及び５％の炭酸ガス（ｐＨ値７．４）を持続して入れた。
【０１１０】
等長張力（ｇ）は、Ｍａｃ  Ｌａｂ記録系（ＡＤＩ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に接続される力変位変換器（ｆｏｒｃｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ）によって測量された。大動脈弁輪を、最適な基礎張力（ｂａｓａｌ  ｔｅｎｓｉｏｎ）が１ｇとなるまで、次第に延伸させて、４５分間平衡した。この間、浴槽溶液を、１５分間ごとに１回交換した。必要な場合、基礎値（ｂａｓａｌ  ｔｏｎｅ）を再び１ｇに調整する。
【０１１１】
その後、２回連続して同等の収縮量となるまで、ＫＣｌ溶液（高Ｋ＋、８０ｍＭ）によって、毎回５分間で、１０分間毎に大動脈弁輪を繰り返して刺激した。これは、組織の安定性を証明した。
【０１１２】
薬理学的研究
高Ｋ＋反応が無くされた後、大動脈弁輪を、例えば、デキストロメトルファン、アムロジピン、又はデキストロメトルファンとアムロジピンとの組み合わせ、又はその媒剤（対照群）のような試験薬物と共に２０分間培養した後、内皮依存性及び内皮独立性弛緩薬の興奮薬アセチルコリン（ＡＣｈ、１０‐１０〜１０‐５Ｍ）とニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ、１０‐１１〜１０‐６Ｍ）に対する累積濃度‐反応曲線を別々に測量し、又は１‐受容体の興奮薬フェニレフリン（ＰＥ、１０‐１０〜１０‐５Ｍ）に対する累積濃度‐反応曲線を測量した。ＡＣｈ及びＳＮＰの緩和反応を試験するために、大動脈弁輪について、ＰＥ（１μＭ）によって予収縮を行った。
【０１１３】
試験薬物の濃度は、薬物の生理上達成可能な血漿濃度によって選択される。試験薬物の効果に関わるメカニズムを決めようとする実験において、大動脈弁輪及び薬物又は媒剤を培養する前に、大動脈弁輪を各種の薬剤に５分間暴露した。
【０１１４】
指示がある場合、ブラントピンセットで血管内層を軽くなでて内皮を除去した。ＰＥの予収縮の大動脈弁輪における、ＡＣｈ（１μＭ）による緩和程度が１０％未満であれば、内皮が既に効果的に去除されたと認める。
【０１１５】
一酸化窒素、プロスタサイクリン（ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ）及び環型ＧＭＰ弛緩薬の作用経路が試験薬物の効果で果たした役割を検証するために、それぞれＮ‐ニトロ基‐ｌ‐アルギニンメチルエステル（Ｌ‐ＮＡＭＥ、１０μＭ）（ｅＮＯｓ阻害剤）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ、１０μＭ）（シクロオキシゲナーゼ阻害剤）及びメチレンブルー（１０μＭ）（環型ＧＭＰ阻害剤）の３つの物質と共同で持続的に培養された大動脈弁輪において、ＡＣｈに対する濃度‐反応曲線を測量した。
【０１１６】
内皮由来過分極因子（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ‐ｄｅｒｉｖｅｄ  ｈｙｐｅｒｐｏｌａｒｉｚｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ；ＥＤＨＦ）又はカリウム（Ｋ＋）チャネルの試験薬物の効果への貢献を検証するために、ＫＰＳＳにおけるＫＣｌ濃度（４．８〜２０ｍＭ）を増加することで、大動脈弁輪の一部を脱分極した後、ＡＣｈに対する濃度‐反応曲線を行った。
【０１１７】
統計的分析
大動脈弁輪の濃度が漸進的に変化するＰＥに対する収縮反応は、各組織における高濃度Ｋ＋の最大収縮効果の百分比で表す。
【０１１８】
濃度が漸進的に増加するＡＣｈ又はＳＮＰの血管拡張作用は、最高のＰＥ（１０‐６Ｍ）収縮の減少百分比で表す。
【０１１９】
各実験条件における濃度‐反応曲線を作成し、これに基づいて最大収縮値（Ｃｍａｘ）又は最大緩和値（Ｒｍａｘ）を導き出して、５０％の最大収縮又は緩和を得た場合の試験薬物の濃度（負のｌｏｇ  ｍｏｌａｒで表す）（ｐＥＣ５０）（Ｐｒｉｓｍ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０，ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＵＳＡ）を記録した。
【０１２０】
当業者であれば、前記具体的な実施態様は、その広範な発明概念から逸脱せずに変更可能であることが理解できる。このため、本発明は本出願で開示した特定の具体的な実施態様に限定されず、添付された特許請求の範囲の定義した発明の精神及び範囲内での変化を含むことが理解できる。
【図１ａ】
0005847162.tif 000004
【図１ｂ】
0005847162.tif 000005
【図１ｃ】
0005847162.tif 000006
【図１ｄ】
0005847162.tif 000007
【図２ａ】
0005847162.tif 000008
【図２ｂ】
0005847162.tif 000009
【図２ｃ】
0005847162.tif 000010
【図２ｄ】
0005847162.tif 000011
【図３ａ】
0005847162.tif 000012
【図３ｂ】
0005847162.tif 000013
【図３ｃ】
0005847162.tif 000014
【図３ｄ】
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【図４ａ】
0005847162.tif 000016
【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図４ｄ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６】
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