(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号１５の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１と、配列番号１６の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２と、配列番号１７の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３とを含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１８の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１と、配列番号１９の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２と、配列番号２０の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３とを含む軽鎖、
を含み、かつ
ヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１ＲへのＣＳＦ１およびＩＬ３４の結合を遮断する、前記抗体。
【請求項２】
（ａ）配列番号３９の配列を含む重鎖と配列番号４６の配列を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号９の配列を含む重鎖と配列番号１０の配列を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号４０の配列を含む重鎖と配列番号４６の配列を含む軽鎖、
（ｄ）配列番号４１の配列を含む重鎖と配列番号４６の配列を含む軽鎖、
（ｅ）配列番号３９の配列を含む重鎖と配列番号４７の配列を含む軽鎖、
（ｆ）配列番号４０の配列を含む重鎖と配列番号４７の配列を含む軽鎖、または
（ｇ）配列番号４１の配列を含む重鎖と配列番号４７の配列を含む軽鎖、
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
（ａ）配列番号５３の配列を含む重鎖と配列番号６０の配列を含む軽鎖、または
（ｂ）配列番号５３の配列を含む重鎖と配列番号６１の配列を含む軽鎖、
を含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号５３の配列からなる重鎖と配列番号６０の配列からなる軽鎖、または
（ｂ）配列番号５３の配列からなる重鎖と配列番号６１の配列からなる軽鎖、
を含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項５】
（ａ）カニクイザルＣＳＦ１Ｒに結合する；
（ｂ）ＣＳＦ１Ｒへのリガンド結合を遮断する；
（ｃ）リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を抑制する；
（ｄ）ＣＳＦ１誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を抑制する；
（ｅ）ＩＬ３４誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を抑制する；
（ｆ）親和性（ＫＤ）１ｎＭ未満でヒトＣＳＦ１Ｒに結合する；ならびに／または
（ｇ）ＣＳＦ１もしくはＩＬ３４の存在下での単球の増殖反応および／もしくは生存反応を抑制する、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ'、および（Ｆａｂ'）２から選択される、請求項１〜２、５〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体を含む薬学的組成物。
【請求項１０】
第１の核酸と第２の核酸とを含む組成物であって、前記第１の核酸が第１のポリヌクレオチド配列を含み、前記第２の核酸が第２のポリヌクレオチド配列を含み、前記第１のポリヌクレオチド配列および前記第２のポリヌクレオチド配列が、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする、前記組成物。
【請求項１１】
第１のポリヌクレオチド配列と第２のポリヌクレオチド配列とを含む単離された核酸であって、前記第１のポリヌクレオチド配列および前記第２のポリヌクレオチド配列が、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする、前記核酸。
【請求項１２】
請求項１０に記載の組成物または請求項１１に記載の単離された核酸を含む、宿主細胞。
【請求項１３】
真核生物宿主細胞または哺乳動物宿主細胞である、請求項１２に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
癌、自己免疫疾患、炎症状態、または溶骨性の骨量減少の治療のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体を含む薬学的組成物。
【請求項１５】
前記自己免疫疾患が多発性硬化症および関節リウマチから選択され、前記溶骨性の骨量減少が骨粗しょう症、転移による溶骨性の骨量減少、および関節リウマチによる骨量減少から選択される、自己免疫疾患の治療のための請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記癌が乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、扁平上皮癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、および肺腺癌から選択される、癌の治療のための請求項１４に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１０年５月４日出願の米国特許仮出願第６１／３３１，１７７号の利益を主張するものであり、当該出願は、あらゆる目的で参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体が提供される。また、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を形成することができる抗体重鎖および抗体軽鎖も提供される。さらに、１つまたは複数の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、重鎖、および軽鎖も提供される。ＣＳＦ１Ｒに対する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。また、抗体重鎖または抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドも提供される。ＣＳＦ１Ｒに対する抗体を用いた治療方法が提供される。このような方法には、関節リウマチ、骨量減少、および多発性硬化症を治療する方法が含まれるが、それらに限定されない。
【背景技術】
【０００３】
コロニー刺激因子１受容体（本明細書においてＣＳＦ１Ｒとする。また、当技術分野において、ＦＭＳ、ＦＩＭ２、Ｃ−ＦＭＳ、およびＣＤｌ１５とも称される）は、Ｎ末端細胞外ドメイン（ＥＣＤ）とチロシンキナーゼ活性を有するＣ末端細胞内ドメインとを有する１回膜貫通受容体である。ＣＳＦ１またはインターロイキン３４リガンド（本明細書においてＩＬ３４とする。Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２０：８０７−１１（２００８）（非特許文献１））のＣＳＦ１Ｒへのリガンド結合は、受容体二量体化、ＣＳＦ１Ｒタンパク質チロシンキナーゼ活性の上昇、ＣＳＦ１Ｒチロシン残基のリン酸化、および下流シグナル伝達事象をもたらす。ＣＳＦ１およびＩＬ３４の両者は、単球の生存、増殖、およびマクロファージへの分化を刺激する。
【０００４】
多くの腫瘍細胞がＣＳＦ１を分泌することがわかっているが、これはＣＳＦ１Ｒにより単球／マクロファージ細胞を活性化する。腫瘍中のＣＳＦ１の量は、腫瘍中の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の量と相関することが示されている。多量のＴＡＭは、患者の予後の悪化と相関していることがわかっている。さらに、ＣＳＦ１は、例えばマウスにおけるヒト乳癌異種移植片において、腫瘍の成長および転移への進行を促進することがわかっている。例として、Ｐａｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：４３４９−５６（２００６）（非特許文献２）を参照されたい。さらに、ＣＳＦ１Ｒは骨転移における溶骨性骨破壊に関与していると思われる。これは受容体チロシンキナーゼ活性の小分子遮断剤がその破壊を抑制するためである。例として、Ｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．５：２６３４−４３（２００６）（非特許文献３）を参照されたい。
【０００５】
また、ＣＳＦ１およびその受容体は、種々の炎症性疾患および自己免疫疾患に関与していることもわかっている。例として、Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．８：５３３−４４（２００８）（非特許文献４）を参照されたい。例えば、関節リウマチ罹患関節の滑膜内皮細胞は、ＣＳＦ１を産生することがわかっており、関節リウマチにおけるＣＳＦ１とその受容体の役割を示唆している。抗体によるＣＳＦ１Ｒ活性の遮断は、関節炎のマウスモデルにおいて、骨および軟骨の破壊の減少や、マクロファージ数の減少などの好ましい臨床効果をもたらす。例として、Ｋｉｔａｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：３４１８−３４２７（２００５）（非特許文献５）を参照されたい。
【０００６】
成熟した分化骨髄系細胞、例えばマクロファージ、ミクログリア細胞、および破骨細胞は、種々の疾患、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、および骨量減少疾患の病理の一因となっている。分化骨髄系細胞は、末梢血単球中間体から誘導される。ＣＳＦ１Ｒ刺激は、骨髄前駆体からの単球の発生、単球の増殖および生存、ならびに末梢血単球の分化骨髄系細胞、例えばマクロファージ、ミクログリア細胞、および破骨細胞への分化に寄与する。ＣＳＦ１Ｒ刺激は、このように分化骨髄系細胞の増殖、生存、活性化、および成熟に寄与し、また病的な状態においては、ＣＳＦ１Ｒ刺激は、分化骨髄系細胞が疾病病理を媒介する能力に寄与している。
【０００７】
したがって、癌、炎症状態、および自己免疫疾患などのＣＳＦ１Ｒに関連する種々の疾患の治療に、付加的なＣＳＦ１Ｒシグナル伝達拮抗薬が有用と考えられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２０：８０７−１１（２００８）
【非特許文献２】Ｐａｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：４３４９−５６（２００６）
【非特許文献３】Ｏｈｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．５：２６３４−４３（２００６）
【非特許文献４】Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．８：５３３−４４（２００８）
【非特許文献５】Ｋｉｔａｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：３４１８−３４２７（２００５）
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、ヒトＣＳＦ１Ｒ細胞外ドメイン（ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ）に対するヒト化抗体を含む新しい一連の抗体を発明した。ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質で免疫したマウスの脾臓から、Ｆａｂファージディスプレイライブラリーを作製した。ＣＳＦ−１Ｒ  ＥＣＤ−Ｆｃに結合するＦａｂを発現する１０５６個のファージクローンをこのライブラリーのパニングによって単離した。これらの１０５６個のＦａｂが精製タンパク質として発現したとき、６６８個がＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合していることが認められた。これら６６８個の結合Ｆａｂのうち、１２１個のＦａｂのみが、ＣＳＦ１および／またはＩＬ３４のＣＳＦ１Ｒへの結合を遮断した。これらのＦａｂのうち３３個のみが、ＣＳＦ１およびＩＬ３４の両者のＣＳＦ１Ｒへの結合を遮断することが認められた。配列決定時、これら３３個のＦａｂは１９組の固有の配列を示した。さらなる研究用のキメラ抗体を作製するために、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対してナノモル以下の親和性を有する１１個のＦａｂを選択した。ヒトおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ結合親和性、ＣＳＦ１およびＩＬ３４のＣＳＦ１Ｒへの結合の遮断、ならびにＣＳＦ１Ｒのリガンド誘導性リン酸化の抑制に基づいて、ヒト化用に３個のキメラ抗体を選択し、これら３個のキメラ抗体を基に１６個のヒト化抗体を作製した。
【００１０】
これら１６個のヒト化抗体のうち１４個が、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対してナノモル以下の結合親和性を保持した。例として、表５を参照されたい。これらのヒト化抗体は、ＣＳＦ１およびＩＬ３４の両リガンドのヒトＣＳＦ１Ｒへの結合を遮断し、また多くはＣＳＦ１およびＩＬ３４両者のカニクイザルＣＳＦ１Ｒへの結合も遮断する。例として、表４を参照されたい。
【００１１】
治療薬の開発において、ヒトおよびカニクイザルの両抗原に同様の親和性で結合する抗体を有することは有利である。ヒト化用に選択した３個のキメラ抗体が選ばれた理由の１つは、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対して同様の結合親和性を有したことである。しかしながら、これらのキメラ抗体のうちの１つである０３０２のヒト化型のほとんどは、ヒト化時に、強いヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ結合親和性は保持したが、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対する結合親和性を著しく喪失した。例として、表３を参照されたい。０３０１および０３１１のヒト化型は、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤの両者に対して同じような強い結合を保持し、これら２つの種に対する結合親和性の差は約２倍未満であった。
【００１２】
ＣＳＦ１Ｒ結合親和性、リガンド抑制、および免疫原性の可能性に基づき、さらなる研究用に３個のヒト化抗体を選択した。これらの３個のヒト化抗体は、ヒト化時にカニクイザルＣＳＦ１Ｒ結合親和性を著しく喪失しなかった２個のキメラ抗体から誘導された。これらの３個のヒト化抗体は、ヒトＣＳＦ１Ｒのリガンド誘導性リン酸化を抑制し、また一次ヒト単球においてリガンド誘導性の増殖反応および生存反応を遮断する。例として、表６および表７、ならびに図１０および図１１を参照されたい。したがって、これらの抗体は、例えば一次ヒト単球におけるリガンド誘導性の増殖反応および生存反応に関連する疾患の治療に有用である。
【００１３】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体によるＣＳＦ１Ｒ誘導性反応の遮断は、分化骨髄系細胞の増殖、生存、活性化、成熟を抑制し、それらが疾病病理を媒介する能力を低下させるであろう。さらに、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体によるＣＳＦ１Ｒ誘導性反応の遮断は、末梢血単球中間体の分化骨髄系細胞への分化を抑制し、病理を媒介する分化骨髄系細胞の数を減少させるであろう。
【００１４】
したがって、本明細書に記載のヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、分化骨髄系細胞が疾病病理を媒介する能力を抑制することによって、現存する慢性疾患を治療するために使用することができる。また、このヒト化抗体は、疾患の寛解期に末梢血単球から分化した病理を媒介する新しい骨髄系細胞の発生を抑制し、それにより病理を媒介する細胞の数および新規形成を減少させることによって、本質的に再発し寛解する慢性疾患を治療するためにも使用することができる。
【００１５】
一部の実施形態において、重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体が提供される。一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖は以下の構造を有する。
【００１６】
一部の実施形態において、重鎖は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む。一部の実施形態において、軽鎖は、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む。一部の実施形態において、重鎖は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含み、軽鎖は、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む。
【００１７】
一部の実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、およびＨＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１５、１６、および１７、（ｂ）配列番号２１、２２、および２３、ならびに（ｃ）配列番号２７、２８、および２９から選択される１組の配列を含む。一部の実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、およびＬＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１８、１９、および２０、（ｂ）配列番号２４、２５、および２６、ならびに（ｃ）配列番号３０、３１、および３２から選択される１組の配列を含む。
【００１８】
一部の実施形態において、重鎖はＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、およびＨＣ  ＣＤＲ３を含み、このときＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、およびＨＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１５、１６、および１７、（ｂ）配列番号２１、２２、および２３、ならびに（ｃ）配列番号２７、２８、および２９から選択される１組の配列を含み、軽鎖はＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、およびＬＣ  ＣＤＲ３を含み、このときＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、およびＬＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１８、１９、および２０、（ｂ）配列番号２４、２５、および２６、ならびに（ｃ）配列番号３０、３１、および３から選択される１組の配列を含む。
【００１９】
一部の実施形態において、重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、（ａ）配列番号９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号１０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｂ）配列番号１１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号１２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｃ）配列番号１３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号１４と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｄ）配列番号３９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４６と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｅ）配列番号４０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４６と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｆ）配列番号４１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４６と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｇ）配列番号３９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４７と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｈ）配列番号４０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４７と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｉ）配列番号４１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４７と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｊ）配列番号４２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４８と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｋ）配列番号４２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｌ）配列番号４２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号５０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｍ）配列番号４３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４８と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｎ）配列番号４３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号４９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｏ）配列番号４３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号５０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｐ）配列番号４４と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号５１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｑ）配列番号４４と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号５２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、（ｒ）配列番号４５と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号５１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖、または（ｓ）配列番号４５と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む重鎖と、配列番号５２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％一致する配列を含む軽鎖を含む抗体が提供される。
【００２０】
一部の実施形態において、重鎖と軽鎖とを含む抗体であって、（ａ）配列番号１５の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１と、配列番号１６の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２と、配列番号１７の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３とを含む重鎖、および配列番号１８の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１と、配列番号１９の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２と、配列番号２０の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３とを含む軽鎖、（ｂ）配列番号２１の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１と、配列番号２２の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２と、配列番号２３の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３とを含む重鎖、および配列番号２４の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１と、配列番号２５の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２と、配列番号２６の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３とを含む軽鎖、または（ｃ）配列番号２７の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１と、配列番号２８の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２と、配列番号２９の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３とを含む重鎖、および配列番号３０の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１と、配列番号３１の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２と、配列番号３２の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３とを含む軽鎖を含む抗体が提供される。
【００２１】
一部の実施形態において、抗体は重鎖と軽鎖とを含み、このとき抗体は、（ａ）配列番号５３の配列を含む重鎖と配列番号６０の配列を含む軽鎖、（ｂ）配列番号５３の配列を含む重鎖と配列番号６１の配列を含む軽鎖、または（ｃ）配列番号５８の配列を含む重鎖と配列番号６５の配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗体は重鎖と軽鎖とを含み、このとき抗体は、（ａ）配列番号５３の配列からなる重鎖と配列番号６０の配列からなる軽鎖、（ｂ）配列番号５３の配列からなる重鎖と配列番号６１の配列からなる軽鎖、または（ｃ）配列番号５８の配列からなる重鎖と配列番号６５の配列からなる軽鎖を含む。
【００２２】
一部の実施形態において、抗体はヒト化抗体である。一部の実施形態において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ'、および（Ｆａｂ'）２から選択される。一部の実施形態において、抗体はキメラ抗体である。一部の実施形態において、抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択される。一部の実施形態において、抗体はＩｇＧである。一部の実施形態において、抗体はＩｇＧ４である。一部の実施形態において、抗体は少なくとも１つのＩｇＧ４重鎖定常領域にＳ２４１Ｐ変異を含むＩｇＧ４である。
【００２３】
一部の実施形態において、抗体はヒトＣＳＦ１Ｒおよび／またはカニクイザルＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、抗体はＣＳＦ１Ｒへのリガンドの結合を遮断する。一部の実施形態において、抗体はＣＳＦ１ＲへのＣＳＦ１および／またはＩＬ３４の結合を遮断する。一部の実施形態において、抗体はリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を抑制する。一部の実施形態において、抗体はＣＳＦ１誘導性および／またはＩＬ３４誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を抑制する。一部の実施形態において、抗体は親和性（ＫＤ）１ｎＭ未満でヒトＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、抗体はＣＳＦ１またはＬ３４の存在下での単球の増殖反応および／または生存反応を抑制する
【００２４】
一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物が提供される。
【００２５】
一部の実施形態において、単離された核酸であって、上記に記載の重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸が提供される。一部の実施形態において、単離された核酸は上記に記載の軽鎖をコードする。一部の実施形態において、単離された核酸は上記に記載の重鎖と上記に記載の軽鎖とをコードする。一部の実施形態において、組成物であって、上記に記載の重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む第１の核酸と上記に記載の軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む第２の核酸とを含む組成物が提供される。一部の実施形態において、上記に記載の核酸または組成物を含む宿主細胞が提供される。一部の実施形態において、宿主細胞は真核生物宿主細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は哺乳動物宿主細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞はＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＮＳＯ細胞、およびＰＥＲ．Ｃ６細胞から選択される。一部の実施形態において、宿主細胞は２９３−６Ｅ細胞またはＤＧ４４細胞である。
【００２６】
一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、疾患を治療する方法が提供される。一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、多発性硬化症を治療する方法が提供される。一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、関節リウマチを治療する方法が提供される。一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、溶骨性の骨量減少を治療する方法が提供される。一部の実施形態において、溶骨性の骨量減少が骨粗しょう症、転移による溶骨性の骨量減少、および関節リウマチによる骨量減少から選択される。一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、癌を治療する方法が提供される。一部の実施形態において、癌は乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、扁平上皮癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、および肺腺癌から選択される。
【００２７】
一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、炎症状態を治療する方法が提供される。
【００２８】
一部の実施形態において、ヒトまたは動物の治療方法で用いるための、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体およびＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、ヒトまたは動物の関節リウマチを治療する方法で用いるための、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体およびＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、ヒトまたは動物の多発性硬化症を治療する方法で用いるための、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体およびＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、ヒトまたは動物の癌を治療する方法で用いるための、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体およびＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物が提供される。一部の実施形態において、ヒトまたは動物の炎症状態を治療する方法で用いるための、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体およびＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物が提供される。
[本発明1001]
重鎖と軽鎖とを含みかつコロニー刺激因子1受容体（ＣＳＦ1Ｒ）に結合する単離された抗体であって、前記重鎖が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも90％一致する配列を含む、前記抗体。
[本発明1002]
前記重鎖が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも95％一致する配列を含む、本発明1001の抗体。
[本発明1003]
前記重鎖が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも97％一致する配列を含む、本発明1001の抗体。
[本発明1004]
前記重鎖が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも99％一致する配列を含む、本発明1001の抗体。
[本発明1005]
前記重鎖が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列を含む、本発明1001の抗体。
[本発明1006]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも90％一致する配列を含む、本発明1001〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1007]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも95％一致する配列を含む、本発明1001〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1008]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも97％一致する配列を含む、本発明1001〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1009]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも99％一致する配列を含む、本発明1001〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1010]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列を含む、本発明1001〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1011]
重鎖と軽鎖とを含みかつコロニー刺激因子1受容体（ＣＳＦ1Ｒ）に結合する単離された抗体であって、前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも90％一致する配列を含む、前記抗体。
[本発明1012]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも95％一致する配列を含む、本発明1011の抗体。
[本発明1013]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも97％一致する配列を含む、本発明1011の抗体。
[本発明1014]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも99％一致する配列を含む、本発明1011の抗体。
[本発明1015]
前記軽鎖が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列を含む、本発明1011の抗体。
[本発明1016]
重鎖と軽鎖とを含みかつＣＳＦ1Ｒに結合する単離された抗体であって、前記重鎖が、（ｉ）配列番号15、21、および27から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ1と、（ｉｉ）配列番号16、22、および28から選択される配列を含むＨＣ  ＣＤＲ2と、（ｉｉｉ）配列番号17、23、および29から選択される配列を含むＨＣ  ＣＤＲ3とを含む、前記抗体。
[本発明1017]
前記ＨＣ  ＣＤＲ1、ＨＣ  ＣＤＲ2、およびＨＣ  ＣＤＲ3が、（ａ）配列番号15、16、および17、（ｂ）配列番号21、22、および23、ならびに（ｃ）配列番号27、28、および29から選択される1組の配列を含む、本発明1016の抗体。
[本発明1018]
前記軽鎖が、（ｉ）配列番号18、24、および30から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、（ｉｉ）配列番号19、25、および31から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ2と、（ｉｉｉ）配列番号20、26、および32から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ3とを含む、本発明1016または本発明1017の抗体。
[本発明1019]
前記ＬＣ  ＣＤＲ1、ＬＣ  ＣＤＲ2、およびＬＣ  ＣＤＲ3が、（ａ）配列番号18、19、および20、（ｂ）配列番号24、25、および26、ならびに（ｃ）配列番号30、31、および32から選択される1組の配列を含む、本発明1018の抗体。
[本発明1020]
重鎖と軽鎖とを含みかつＣＳＦ1Ｒに結合する単離された抗体であって、前記軽鎖が、（ｉ）配列番号18、24、および30から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、（ｉｉ）配列番号19、25、および31から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ2と、（ｉｉｉ）配列番号20、26、および32から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ3とを含む、前記抗体。
[本発明1021]
前記ＬＣ  ＣＤＲ1、ＬＣ  ＣＤＲ2、およびＬＣ  ＣＤＲ3が、（ａ）配列番号18、19、および20、（ｂ）配列番号24、25、および26、ならびに（ｃ）配列番号30、31、および32から選択される1組の配列を含む、本発明1020の抗体。
[本発明1022]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号9と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号10と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号11と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号12と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号13と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号14と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｄ）配列番号39と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｅ）配列番号40と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｆ）配列番号41と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｇ）配列番号39と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｈ）配列番号40と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｉ）配列番号41と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、および
（ｊ）配列番号42と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号48と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｋ）配列番号42と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号49と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｌ）配列番号42と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号50と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｍ）配列番号43と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号48と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｎ）配列番号43と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号49と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｏ）配列番号43と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号50と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｐ）配列番号44と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号51と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｑ）配列番号44と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号52と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、
（ｒ）配列番号45と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号51と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖、または
（ｓ）配列番号45と少なくとも95％一致する配列を含む重鎖と、配列番号52と少なくとも95％一致する配列を含む軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1023]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号9と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号10と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号11と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号12と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号13と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号14と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｄ）配列番号39と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｅ）配列番号40と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｆ）配列番号41と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｇ）配列番号39と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｈ）配列番号40と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｉ）配列番号41と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、および
（ｊ）配列番号42と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号48と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｋ）配列番号42と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号49と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｌ）配列番号42と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号50と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｍ）配列番号43と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号48と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｎ）配列番号43と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号49と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｏ）配列番号43と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号50と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｐ）配列番号44と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号51と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｑ）配列番号44と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号52と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、
（ｒ）配列番号45と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号51と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖、または
（ｓ）配列番号45と少なくとも97％一致する配列を含む重鎖と、配列番号52と少なくとも97％一致する配列を含む軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1024]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号9と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号10と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号11と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号12と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号13と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号14と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｄ）配列番号39と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｅ）配列番号40と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｆ）配列番号41と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号46と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｇ）配列番号39と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｈ）配列番号40と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｉ）配列番号41と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号47と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｊ）配列番号42と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号48と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｋ）配列番号42と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号49と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｌ）配列番号42と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号50と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｍ）配列番号43と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号48と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｎ）配列番号43と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号49と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｏ）配列番号43と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号50と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｐ）配列番号44と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号51と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｑ）配列番号44と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号52と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、
（ｒ）配列番号45と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号51と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖、または
（ｓ）配列番号45と少なくとも99％一致する配列を含む重鎖と、配列番号52と少なくとも99％一致する配列を含む軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1025]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号9の配列を含む重鎖と配列番号10の配列を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号11の配列を含む重鎖と配列番号12の配列を含む軽鎖、
（ｃ）配列番号13の配列を含む重鎖と配列番号14の配列を含む軽鎖、
（ｄ）配列番号39の配列を含む重鎖と配列番号46の配列を含む軽鎖、
（ｅ）配列番号40の配列を含む重鎖と配列番号46の配列を含む軽鎖、
（ｆ）配列番号41の配列を含む重鎖と配列番号46の配列を含む軽鎖、
（ｇ）配列番号39の配列を含む重鎖と配列番号47の配列を含む軽鎖、
（ｈ）配列番号40の配列を含む重鎖と配列番号47の配列を含む軽鎖、
（ｉ）配列番号41の配列を含む重鎖と配列番号47の配列を含む軽鎖、および
（ｊ）配列番号42の配列を含む重鎖と配列番号48の配列を含む軽鎖、
（ｋ）配列番号42の配列を含む重鎖と配列番号49の配列を含む軽鎖、
（ｌ）配列番号42の配列を含む重鎖と配列番号50の配列を含む軽鎖、
（ｍ）配列番号43の配列を含む重鎖と配列番号48の配列を含む軽鎖、
（ｎ）配列番号43の配列を含む重鎖と配列番号49の配列を含む軽鎖、
（ｏ）配列番号43の配列を含む重鎖と配列番号50の配列を含む軽鎖、
（ｐ）配列番号44の配列を含む重鎖と配列番号51の配列を含む軽鎖、
（ｑ）配列番号44の配列を含む重鎖と配列番号52の配列を含む軽鎖、
（ｒ）配列番号45の配列を含む重鎖と配列番号51の配列を含む軽鎖、または
（ｓ）配列番号45の配列を含む重鎖と配列番号52の配列を含む軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1026]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号15の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ1と、配列番号16の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ2と、配列番号17の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ3とを含む重鎖、および配列番号18の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、配列番号19の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ2と、配列番号20の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ3とを含む軽鎖、
（ｂ）配列番号21の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ1と、配列番号22の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ2と、配列番号23の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ3とを含む重鎖、および配列番号24の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、配列番号25の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ2と、配列番号26の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ3とを含む軽鎖、または
（ｃ）配列番号27の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ1と、配列番号28の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ2と、配列番号29の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ3とを含む重鎖、および配列番号30の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、配列番号31の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ2と、配列番号32の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ3とを含む軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1027]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号53の配列を含む重鎖と配列番号60の配列を含む軽鎖、
（ｂ）配列番号53の配列を含む重鎖と配列番号61の配列を含む軽鎖、または
（ｃ）配列番号58の配列を含む重鎖と配列番号65の配列を含む軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1028]
重鎖と軽鎖とを含む単離された抗体であって、
（ａ）配列番号53の配列からなる重鎖と配列番号60の配列からなる軽鎖、
（ｂ）配列番号53の配列からなる重鎖と配列番号61の配列からなる軽鎖、または
（ｃ）配列番号58の配列からなる重鎖と配列番号65の配列からなる軽鎖
を含む、前記抗体。
[本発明1029]
ヒトＣＳＦ1Ｒに結合する、本発明1001〜1028のいずれかの抗体。
[本発明1030]
カニクイザルＣＳＦ1Ｒに結合する、本発明1001〜1029のいずれかの抗体。
[本発明1031]
ＣＳＦ1Ｒへのリガンド結合を遮断する、本発明1001〜1030のいずれかの抗体。
[本発明1032]
ＣＳＦ1ＲへのＣＳＦ1結合を遮断する、本発明1001〜1031のいずれかの抗体。
[本発明1033]
ＣＳＦ1ＲへのＩＬ34結合を遮断する、本発明1001〜1032のいずれかの抗体。
[本発明1034]
リガンド誘導性のＣＳＦ1Ｒのリン酸化を抑制する、本発明1001〜1033のいずれかの抗体。
[本発明1035]
ＣＳＦ1誘導性のＣＳＦ1Ｒのリン酸化を抑制する、本発明1001〜1034のいずれかの抗体。
[本発明1036]
ＩＬ34誘導性のＣＳＦ1Ｒのリン酸化を抑制する、本発明1001〜1035のいずれかの抗体。
[本発明1037]
キメラ抗体である、本発明1001〜1036のいずれかの抗体。
[本発明1038]
ヒト化抗体である、本発明1001〜1036のいずれかの抗体。
[本発明1039]
Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ'、および（Ｆａｂ'）2から選択される、本発明1001〜1038のいずれかの抗体。
[本発明1040]
ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択される、本発明1001〜1038のいずれかの抗体。
[本発明1041]
ＩｇＧである、本発明1040の抗体。
[本発明1042]
ＩｇＧ4である、本発明1041の抗体。
[本発明1043]
少なくとも1つのＩｇＧ4重鎖定常領域にＳ241Ｐ変異を含む、本発明1042の抗体。
[本発明1044]
親和性（ＫＤ）1ｎＭ未満でヒトＣＳＦ1Ｒに結合する、本発明1001〜1043のいずれかの抗体。
[本発明1045]
ＣＳＦ1またはＩＬ34の存在下での単球の増殖反応および／または生存反応を抑制する、本発明1001〜1044のいずれかの抗体。
[本発明1046]
本発明1001〜1045のいずれかの抗体を含む薬学的組成物。
[本発明1047]
配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも90％一致するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
[本発明1048]
前記アミノ酸配列が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも95％一致する、本発明1047の核酸。
[本発明1049]
前記アミノ酸配列が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも97％一致する、本発明1047の核酸。
[本発明1050]
前記アミノ酸配列が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される配列と少なくとも99％一致する、本発明1047の核酸。
[本発明1051]
前記アミノ酸配列が配列番号9、11、13、および39〜45から選択される、本発明1047の核酸。
[本発明1052]
配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも90％一致するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、本発明1045〜1051のいずれかの核酸。
[本発明1053]
前記アミノ酸配列が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも95％一致する、本発明1052の核酸。
[本発明1054]
前記アミノ酸配列が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも97％一致する、本発明1052の核酸。
[本発明1055]
前記アミノ酸配列が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも99％一致する、本発明1052の核酸。
[本発明1056]
前記アミノ酸配列が配列番号10、12、14、および46〜52から選択される、本発明1052の核酸。
[本発明1057]
10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも90％一致するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
[本発明1058]
前記アミノ酸配列が10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも95％一致する、本発明1057の核酸。
[本発明1059]
前記アミノ酸配列が10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも97％一致する、本発明1057の核酸。
[本発明1060]
前記アミノ酸配列が10、12、14、および46〜52から選択される配列と少なくとも99％一致する、本発明1057の核酸。
[本発明1061]
前記アミノ酸配列が10、12、14、および46〜52から選択される、本発明1057の核酸。
[本発明1062]
第1の核酸と第2の核酸とを含む組成物であって、前記第1の核酸が本発明1047〜1051のいずれかの核酸から選択され、前記第2の核酸が本発明1057〜1061のいずれかの核酸から選択される、前記組成物。
[本発明1063]
重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、前記重鎖が、（ｉ）配列番号15、21、および27から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ1と、（ｉｉ）配列番号16，22、および28から選択される配列を含むＨＣ  ＣＤＲ2と、（ｉｉｉ）配列番号17、23、および29から選択される配列を含むＨＣ  ＣＤＲ3とを含む、前記核酸。
[本発明1064]
前記ＨＣ  ＣＤＲ1、ＨＣ  ＣＤＲ2、およびＨＣ  ＣＤＲ3が、（ａ）配列番号15、16、および17、（ｂ）配列番号21、22、および23、ならびに（ｃ）配列番号27、28、および29から選択される1組の配列を含む、本発明1063の核酸。
[本発明1065]
軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む核酸であって、前記軽鎖が、（ｉ）配列番号18、24、および30から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、（ｉｉ）配列番号19、25、および31から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ2と、（ｉｉｉ）配列番号20、26、および32から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ3とを含む、本発明1063または本発明1064の核酸。
[本発明1066]
前記ＬＣ  ＣＤＲ1、ＬＣ  ＣＤＲ2、およびＬＣ  ＣＤＲ3が、（ａ）配列番号18、19、および20、（ｂ）配列番号24、25、および26、ならびに（ｃ）配列番号30、31、および32から選択される1組の配列を含む、本発明1065の核酸。
[本発明1067]
軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、前記軽鎖が、（ｉ）配列番号18、24、および30から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ1と、（ｉｉ）配列番号19、25、および31から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ2と、（ｉｉｉ）配列番号20、26、および32から選択される配列を含むＬＣ  ＣＤＲ3とを含む、前記核酸。
[本発明1068]
前記ＬＣ  ＣＤＲ1、ＬＣ  ＣＤＲ2、およびＬＣ  ＣＤＲ3が、（ａ）配列番号18、19、および20、（ｂ）配列番号24、25、および26、ならびに（ｃ）配列番号30、31、および32から選択される1組の配列を含む、本発明1067の核酸。
[本発明1069]
第1の核酸と第2の核酸とを含む組成物であって、前記第1の核酸が本発明1063および1064のいずれかの核酸から選択され、前記第2の核酸が本発明1067および本発明1068のいずれかの核酸から選択される、前記組成物。
[本発明1070]
第1のポリヌクレオチド配列と第2のポリヌクレオチド配列とを含む単離された核酸であって、前記第1のポリヌクレオチド配列および前記第2のポリヌクレオチド配列が、本発明1022〜1028のいずれかの抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする、前記核酸。
[本発明1071]
第1の核酸と第2の核酸とを含む組成物であって、前記第1の核酸が第1のポリヌクレオチド配列を含み、前記第2の核酸が第2のポリヌクレオチド配列を含み、前記第1のポリヌクレオチド配列および前記第2のポリヌクレオチド配列が、本発明1022〜1028のいずれかの抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする、前記組成物。
[本発明1072]
本発明1047〜1061、1063〜1068、および1070のいずれかの核酸を含む宿主細胞。
[本発明1073]
本発明1060または本発明1069または本発明1071の組成物を含む宿主細胞。
[本発明1074]
真核生物宿主細胞である、本発明1072または本発明1073の宿主細胞。
[本発明1075]
哺乳動物宿主細胞である、本発明1074の宿主細胞。
[本発明1076]
ＣＨＯ細胞、293細胞、ＮＳＯ細胞、およびＰＥＲ．Ｃ6細胞から選択される、本発明1075の宿主細胞。
[本発明1077]
293−6Ｅ細胞またはＤＧ44細胞である、本発明1076の宿主細胞。
[本発明1078]
本発明1046の薬学的組成物を患者に投与することを含む、多発性硬化症を治療する方法。
[本発明1079]
本発明1046の薬学的組成物を患者に投与することを含む、関節リウマチを治療する方法。
[本発明1080]
本発明1046の薬学的組成物を患者に投与することを含む、溶骨性の骨量減少を治療する方法。
[本発明1081]
前記溶骨性の骨量減少が骨粗しょう症、転移による溶骨性の骨量減少、および関節リウマチによる骨量減少から選択される、本発明1080の方法。
[本発明1082]
本発明1046の薬学的組成物を患者に投与することを含む、癌を治療する方法。
[本発明1083]
前記癌が乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、扁平上皮癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、および肺腺癌から選択される、本発明1082の方法。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】実施例４で説明する、各ヒト化抗体Ａｂ１〜Ａｂ１６のヒト化重鎖可変領域のアラインメントを示す。囲み内の残基は、対応するマウス残基に戻されたヒトアクセプター配列中のアミノ酸である。
【図２】実施例４で説明する、各ヒト化抗体Ａｂ１〜Ａｂ１６のヒト化軽鎖可変領域のアラインメントを示す。囲み内のアミノ酸は、対応するマウス残基に戻されたヒトアクセプター配列中の残基である。
【図３】実施例５に記載する、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する特定のヒト化抗体の結合曲線を示す。図３Ａは、親キメラ抗体（ｃＡｂ）０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の結合曲線を示す。図３Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の結合曲線を示す。図３Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の結合曲線を示す。
【図４】実施例５に記載する、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する特定のヒト化抗体の結合曲線を示す。図４Ａは、親ｃＡｂ０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の結合曲線を示す。図４Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の結合曲線を示す。図４Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の結合曲線を示す。
【図５】実施例５に記載する、マウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する特定のヒト化抗体の結合曲線を示す。図５Ａは、親ｃＡｂ０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の結合曲線を示す。図５Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の結合曲線を示す。図５Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の結合曲線を示す。
【図６】実施例６に記載する、特定のヒト化抗体によるＣＳＦ１誘導性ＣＳＦ１Ｒリン酸化の抑制を示す。図６Ａは、親ｃＡｂ０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。図６Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の遮断曲線を示す。図６Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。
【図７】実施例６に記載する、特定のヒト化抗体によるＩＬ３４誘導性ＣＳＦ１Ｒリン酸化の抑制を示す。図７Ａは、親ｃＡｂ０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。図７Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の遮断曲線を示す。図７Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。
【図８】実施例７に記載する、特定のヒト化抗体による、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへのヒトＣＳＦ１結合の遮断を示す。図８Ａは、親ｃＡｂ０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。図８Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の遮断曲線を示す。図８Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。
【図９】実施例７に記載する、特定のヒト化抗体による、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへのヒトＩＬ３４結合の遮断を示す。図９Ａは、親ｃＡｂ０３０１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０１．１、０３０１．２、０３０２．３、０３０１．４、０３０１．５、および０３０１．６（それぞれｈ０３０１−Ｌ０Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０１−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ０、ｈ０３０１−Ｌ１Ｈ１、およびｈ０３０１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。図９Ｂは、親ｃＡｂ０３０２ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３０２．１、０３０２．２、０３０２．３、０３０２．４、０３０２．５、および０３０２．６（それぞれｈ０３０２−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ２Ｈ１、ｈ０３０２−Ｌ０Ｈ２、ｈ０３０２−Ｌ１Ｈ２、およびｈ０３０２−Ｌ２Ｈ２）の遮断曲線を示す。図９Ｃは、親ｃＡｂ０３１１ならびにヒト化抗体（ｈｕＡｂ）０３１１．１、０３１１．２、０３１１．３、および０３１１．４（それぞれｈ０３１１−Ｌ０Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ１Ｈ１、ｈ０３１１−Ｌ０Ｈ２、およびｈ０３１１−Ｌ１Ｈ２）の遮断曲線を示す。
【図１０】実施例９に記載する、ヒトＣＳＦ１Ｒを発現するＣＨＯ細胞における、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１による、ＣＳＦ１誘導性（Ａ）およびＩＬ３４誘導性（Ｂ）のＣＳＦ１Ｒリン酸化の遮断を示す。
【図１１】実施例１０に記載する、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１による、ＣＳＦ１誘導性（Ａ）およびＩＬ３４誘導性（Ｂ）の単球の増殖／生存反応の遮断を示す。
【図１２Ａ】実施例１１に記載するように、異なる３例のドナーに由来する単球を用いて、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１が一次単球の増殖または生存を刺激しないことを示す。
【図１２Ｂ】実施例１１に記載するように、異なる３例のドナーに由来する単球を用いて、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１が一次単球の増殖または生存を刺激しないことを示す。
【図１２Ｃ】実施例１１に記載するように、異なる３例のドナーに由来する単球を用いて、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１が一次単球の増殖または生存を刺激しないことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
新規のＣＳＦ１Ｒに対する抗体を投与することを含む、疾患を治療する方法が提供される。これら全ての抗体はヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対して２ｎＭ未満の結合親和性を有し、これらのヒト化抗体の２個以外の全てはヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対してナノモル以下の結合親和性を有する。さらに、この新しい抗体は、ＣＳＦ１およびＩＬ３４の両者のヒトＣＳＦ１Ｒへの結合を遮断し、ヒトＣＳＦ１Ｒのリガンド誘導性リン酸化を抑制する。またこの新しい抗体の多くは、ＣＳＦ１およびＩＬ３４のカニクイザルＣＳＦ１Ｒへの結合も遮断し、このことは抗ＣＳＦ１Ｒ抗体治療薬の開発を支持するインビボ実験を容易にする。したがってこの新しい抗体は、癌、自己免疫疾患、および炎症状態を含むがこれらに限定されないヒトの疾患に対する治療的使用に適している。
【００３１】
本明細書で使用する項目の表題は構成上の目的にすぎず、記載する対象を限定するものと解釈すべきではない。
【００３２】
定義
特に明示しない限り、本発明に関連して使用する科学用語および技術用語は、当業者に一般に理解される意味を有するものとする。また、文脈からそうでないことが求められない限り、単数形には複数形が含まれ、複数形には単数形が含まれるものとする。
【００３３】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織の培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、ならびに精製法に関連して使用される代表的な技法は、当技術分野において公知である。多くのそのような技法および手順は、とりわけ、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））に記載されている。さらに、化学合成、化学分析、薬学的な調製、処方、および送達、ならびに患者の治療のための代表的な技法も当技術分野において公知である。
【００３４】
本願において、「または」の使用は、特に指定のない限り「および／または」を意味する。多項従属クレームに関して、「または」の使用は、複数の先行する独立クレームまたは従属クレームを択一的にのみ引用する。また、「要素」または「構成要素」などの用語は、特に指定のない限り、１つのユニットを含む要素および構成要素と複数のサブユニットを含む要素および構成要素との双方を包含する。
【００３５】
以下の用語は、本開示に従って使用するとき、他に指示がない限り以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００３６】
用語「核酸分子」および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用してもよく、ヌクレオチドのポリマーを指す。このようなヌクレオチドのポリマーは、天然および／または非天然のヌクレオチドを含んでもよく、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＰＮＡを含むがこれらに限定されない。用語「核酸配列」は、核酸分子またはポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖配列を指す。
【００３７】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指して互換的に使用され、最小長に限定されない。このようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含んでもよく、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、および多量体を含むがこれらに限定されない。全長タンパク質およびその断片は、どちらもこの定義に包含される。またこれらの用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化などを含む。さらに、本発明の目的で、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加、および置換（一般に、本質的に保存的である）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異誘発による意図的なものであってもよく、あるいはタンパク質を産生する宿主の突然変異またはＰＣＲ増幅によるエラーなどによる偶発的なものであってもよい。
【００３８】
用語「ＣＳＦ１Ｒ」は、本明細書において、Ｎ末端ＥＣＤと、膜貫通ドメインと、細胞内チロシンキナーゼドメインとを含み、場合によってＮ末端リーダー配列を有する、全長ＣＳＦ１Ｒを指す。一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＣＳＦ１Ｒである。
【００３９】
本明細書で使用する用語「ＣＳＦ１Ｒ細胞外ドメイン」（「ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ」）は、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを含まないＣＳＦ１Ｒポリペプチドを指す。ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤは、ＣＳＦ１Ｒおよび／またはＩＬ３４に結合することができる、全長ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよびＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ断片を含む。ヒト全長ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤは、本明細書において、配列番号２のアミノ酸１〜５１２（すなわち、リーダー配列を含む）またはアミノ酸２０〜５１２（すなわち、リーダー配列を含まない）のいずれかを含むと定義される。一部の実施形態において、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ断片は、配列番号２のアミノ酸２０〜５０６を含む（配列番号５を参照）。一部の実施形態において、ヒトＣＳＦ１Ｒ断片は、アミノ酸５０７、５０８、５０９、５１０、または５１１で終了する。一部の実施形態において、ｃｙｎｏＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤは、配列番号７の配列（リーダー配列を含む）または配列番号７のアミノ酸２０〜５０６（リーダー配列を含まない）を含む。
【００４０】
本明細書で使用する用語「抗体」は、重鎖の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む分子であって、抗原に結合することができる分子を指す。抗体という用語には、抗原に結合することができる断片、例えばＦｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、および（Ｆａｂ'）２が含まれるが、これらに限定されない。また、抗体という用語には、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびマウス、ヒト、カニクイザルなどのさまざまな種の抗体も含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
一部の実施形態において、抗体は重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域と重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む少なくとも１つの重鎖、および軽鎖可変領域と軽鎖定常領域の少なくとも一部とを含む少なくとも１つの軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗体は２つの重鎖（各重鎖が重鎖可変領域と重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む）と２つの軽鎖（各軽鎖が軽鎖可変領域と軽鎖定常領域の少なくとも一部とを含む）を含む。本明細書において使用するとき、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または例えば６つ全てのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む一本鎖ポリペプチドを含む他のあらゆる抗体は、重鎖と軽鎖とを有すると考えられる。そのような実施形態の一部において、重鎖は３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。
【００４２】
本明細書で使用する用語「重鎖可変領域」は、重鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＣＤＲ３を含む領域を指す。一部の実施形態において、重鎖可変領域はＦＲ１の少なくとも一部および／またはＦＲ４の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、重鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基２６〜３５に対応し、重鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０〜６５に対応し、重鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基９５〜１０２に対応する。例として、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８７および１９９１，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、および図１を参照されたい。一部の実施形態において、重鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基３１〜３５に対応し、重鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０〜６５に対応し、重鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基９５〜１０２に対応する。同文献を参照されたい。
【００４３】
本明細書で使用する用語「重鎖定常領域」は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な代表的重鎖定常領域には、γ、δ、およびαが含まれる。また、非限定的な代表的重鎖定常領域には、εおよびμも含まれる。各重鎖定常領域は、抗体のアイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ体である。さらに、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。一部のアイソタイプは、サブクラスにさらに細かく分類することができる。例えば、ＩｇＧ抗体は、これらに限定されないが、ＩｇＧ１抗体（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２抗体（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３抗体（γ３定常領域を含む）、およびＩｇＧ４抗体（γ４定常領域を含む）を含み、ＩｇＡ抗体は、これらに限定されないが、ＩｇＡ１抗体（α１定常領域を含む）およびＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体を含み、ＩｇＭ抗体は、これらに限定されないが、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を含む。
【００４４】
一部の実施形態において、重鎖定常領域は、抗体に所望の特徴を与える１つまたは複数の突然変異（または置換）、付加、または欠失を含む。非限定的な代表的突然変異は、ＩｇＧ４ヒンジ領域（定常ドメインＣＨ１とＣＨ２の間）のＳ２４１Ｐ変異であり、これはＩｇＧ４モチーフをＣＰＳＣＰからＩｇＧ１の相当するモチーフと同様のＣＰＰＣＰに変更する。一部の実施形態において、この突然変異は、より安定なＩｇＧ４抗体をもたらす。例として、Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−１０８（１９９３）、Ｂｌｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．６：４０７−４１５（１９９７）、Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１−８（２００１）を参照されたい。
【００４５】
本明細書で使用する用語「重鎖」は、少なくとも重鎖可変領域を含み、場合によってリーダー配列を含むポリペプチドを指す。一部の実施形態において、重鎖は重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する用語「全長重鎖」は、重鎖可変領域と重鎖定常領域とを含み、場合によってリーダー配列を含むポリペプチドを指す。
【００４６】
本明細書で使用する用語「軽鎖可変領域」は、軽鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＣＤＲ３を含む領域を指す。一部の実施形態において、軽鎖可変領域はＦＲ１および／またはＦＲ４も含む。一部の実施形態において、軽鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基２４〜３４に対応し、軽鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０〜５６に対応し、軽鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基８９〜９７に対応する。例として、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８７および１９９１，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）および図１を参照されたい。
【００４７】
本明細書で使用する用語「軽鎖定常領域」は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指す。非限定的な代表的軽鎖定常領域には、λおよびκが含まれる。
【００４８】
本明細書で使用する用語「軽鎖」は、少なくとも軽鎖可変領域を含み、場合によってリーダー配列を含むポリペプチドを指す。一部の実施形態において、軽鎖は軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する用語「全長軽鎖」は、軽鎖可変領域と軽鎖定常領域とを含み、場合によってリーダー配列を含むポリペプチドを指す。
【００４９】
本明細書で使用する「キメラ抗体」は、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの可変領域と、第２の種（例えば、ヒト、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの定常領域とを含む抗体を指す。一部の実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。一部の実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域と少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。一部の実施形態において、キメラ抗体の全ての可変領域は第１の種に由来し、キメラ抗体の全ての定常領域は第２の種に由来する。
【００５０】
本明細書で使用する「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域で少なくとも１つのアミノ酸がヒト可変領域由来の対応するアミノ酸に置換されている抗体を指す。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体はＦａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ'）２などである。
【００５１】
本明細書で使用する「ＣＤＲグラフト抗体」は、第１の（非ヒト）種の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトされているヒト化抗体を指す。
【００５２】
本明細書で使用する「ヒト抗体」は、ヒトで産生された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物、例えばＸｅｎｏマウス（登録商標）で産生された抗体、およびインビトロ法、例えばファージディスプレイを用いて選択される抗体であって、抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づく抗体を指す。
【００５３】
用語「リーダー配列」は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進する、ポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。哺乳動物細胞からポリペプチドを移動する際に、リーダー配列を切断して成熟タンパク質を形成してもよい。リーダー配列は、天然でも合成でもよく、またリーダー配列は、それらを付与するタンパク質に対して異種でも同種でもよい。代表的リーダー配列には、抗体リーダー配列、例えばヒト軽鎖リーダー配列およびヒト重鎖リーダー配列にそれぞれ対応する配列番号３および４のアミノ酸配列などが含まれるが、これらに限定されない。また、非限定的な代表的リーダー配列には、異種タンパク質に由来するリーダー配列も含まれる。一部の実施形態において、抗体はリーダー配列を含まない。一部の実施形態において、抗体は、少なくとも１つのリーダー配列を含み、これは天然抗体リーダー配列および異種リーダー配列から選択してよい。
【００５４】
用語「ベクター」は、クローン化ポリヌクレオチドを含有するように操作することができるポリヌクレオチド、または宿主細胞で増殖させることができるポリヌクレオチドを表すために使用される。ベクターは、以下の要素のうちの１つまたは複数を含んでもよい：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つまたは複数の調節配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）、および／または１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質抵抗性遺伝子、および比色分析に使用することができる遺伝子、例えばβ−ガラクトシダーゼ）。用語「発現ベクター」は、宿主細胞で目的のポリペプチドを発現するために使用するベクターを指す。
【００５５】
「宿主細胞」は、ベクターもしくは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントにすることができる、またはそれらのレシピエントにされている細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。代表的真核細胞には、霊長類または非霊長類の動物細胞などの哺乳動物細胞、酵母などの真菌細胞、植物細胞、および昆虫細胞が含まれる。非限定的な代表的哺乳動物細胞には、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ社）、ならびに２９３細胞およびＣＨＯ細胞とそれらの誘導体、例えばそれぞれ２９３−６Ｅ細胞およびＤＧ４４細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【００５６】
本明細書で使用する用語「単離された」とは、自然界で通常一緒に認められる構成要素のうちの少なくとも一部から分離した分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の構成要素のうちの少なくとも一部から分離されている場合に、「単離された」とみなされる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、それを産生した細胞からポリペプチドを含有する上清を物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、自然界で典型的にはより大きいポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡ）の中に認められるが、これらのより大きいポリペプチドの一部でないときに、あるいは例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合、ポリヌクレオチドが産生された細胞の構成要素のうちの少なくとも一部から分離しているときに、「単離された」とみなされる。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが自然界でそのベクター中で認められない限り、「単離された」とみなすことができる。
【００５７】
用語「対象」および「患者」は、本明細書において、ヒトを指して互換的に使用される。一部の実施形態において、齧歯類、真猿類、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類実験動物、哺乳類家畜、哺乳類スポーツ動物、および哺乳類ペットを含むがこれらに限定されない他の哺乳動物を治療する方法も提供される。
【００５８】
用語「関節リウマチ」（「ＲＡ」）は、間接の損傷を引き起こし、慢性的な痛み、機能喪失、および障害をもたらす、間接内膜（滑膜）の炎症を主に特徴とする慢性自己免疫疾患を指す。ＲＡは、皮膚、肺、および眼を含む身体の複数の器官に影響を及ぼすため、全身性の疾患とみなされる。
【００５９】
用語「多発性硬化症」（「ＭＳ」）は、ミエリン鞘を産生する細胞に対抗して身体が抗体および白血球を生成する、ＣＮＳの慢性自己免疫性脱髄疾患を指す。「脱髄」は、ミエリン鞘が炎症を起こし、損傷し、神経線維から離れたときに発生する。
【００６０】
用語「癌」は、制御されない細胞増殖、抑制されない細胞成長、細胞死／アポトーシスの減少に関連する増殖性障害を指す。癌には、これらに限定されないが、乳癌、前立腺癌、肺癌、腎癌、甲状腺癌、食道癌、黒色腫、濾胞性リンパ腫、ブドウ膜黒色腫、脳癌、頭頸部癌、肺腺癌が含まれ、これらに限定されないが、結腸癌、心臓腫瘍、膵臓癌、網膜芽腫、グリア芽腫、腸癌、睾丸癌、胃癌、神経芽細胞腫、粘液腫、筋腫、リンパ腫、内皮腫、骨芽細胞腫、破骨細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、腺腫、カポジ肉腫、卵巣癌、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、骨髄芽球性白血病を含む急性骨髄性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病）を含む）および慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病）、骨髄異形成症候群、真性赤血球増加症、リンパ腫（例えば、ホジキン病、非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、およびこれらに限定されないが肉腫および癌腫を含む固形腫瘍、例えば線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮症、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胎生期癌、腎芽細胞腫、子宮頸癌、子宮内膜癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠種、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、および髄膜腫が含まれる。用語「転移」および「癌転移」は、本明細書において、癌細胞の他の組織に拡大する能力を指して互換的に使用される。例えば、「骨への転移」は、乳癌、前立腺癌、肺癌、腎臓癌、甲状腺癌、および黒色腫を含むがこれらに限定されない特定の種類の癌の骨に転移する能力を指す。
【００６１】
用語「溶骨性障害」は、本明細書において、骨吸収に関与する細胞である破骨細胞の活性増加によって生じるあらゆる症状を指して使用される。用語「骨溶解症」および「溶骨性骨量減少」は、溶骨性障害に関連する破骨細胞媒介性の骨吸収もしくは骨量減少を指して互換的に使用することができる。溶骨性障害は、溶骨性障害を発症する傾向のある対象に生じることがあり、あるいはこれらの障害は、破骨細胞を刺激することにより溶骨性障害の原因または一因となる疾患を有する対象に生じることもある。本発明の代表的な実施形態において、溶骨性障害は、溶骨性骨量減少および癌転移による溶骨性骨量減少を含みうる。本発明のさらなる代表的な実施形態において、溶骨性骨障害は代謝性骨疾患、例えば内分泌障害、例えば副腎皮質機能亢進症、性腺機能低下症、原発性もしくは二次性副甲状腺機能亢進症、および甲状腺機能亢進症；食事障害、例えばくる病、骨軟化症、壊血病、および栄養失調；骨粗しょう症；薬物使用、例えばグルココルチコイド（グルココルチコイド誘導性骨粗しょう症）、ヘパリン、およびアルコール；慢性疾患、例えば吸収不良症候群；慢性腎不全、例えば腎性骨ジストロフィー；慢性肝疾患、例えば肝性骨異栄養症；遺伝性疾患、例えば骨形成不全症およびホモシスチン尿症；ならびに関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、線維性骨異形成、歯周疾患、およびパジェット病に関連する骨炎が含まれる。
【００６２】
用語「転移による溶骨性骨量減少」および「癌転移による溶骨性骨量減少」は、本明細書において、癌細胞の骨への転移に起因する骨溶解症または溶骨性骨量減少を指して互換的に使用される。用語「癌転移による破骨細胞活性」は、本明細書において、骨に転移した癌細胞の破骨細胞活性を誘導する能力を指して使用される。
【００６３】
用語「腫瘍」は、本明細書において、異常に高い値の増殖および成長を示す細胞群を指して使用される。腫瘍は、良性、前癌性、または悪性であってよく、悪性腫瘍細胞は癌性である。腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞または白血病腫瘍細胞であってよい。用語「腫瘍成長」は、本明細書において、対応して腫瘍のサイズの増加をもたらす、腫瘍を含む１つまたは複数の細胞の増殖または成長を指して使用される。用語「ＣＳＦＩＲ依存性腫瘍成長」は、本明細書において、１つまたは複数の腫瘍細胞が増殖または成長するために、その１つまたは複数の腫瘍細胞に必要なＣＳＦＩＲ媒介機能を指して使用される。
【００６４】
本明細書で使用する「治療」は、ヒトを含む哺乳動物の疾患の治療薬のいかなる投与または適用も含み、また疾患または疾患の進行を抑制すること、疾患またはその進行を抑制または減速すること、その発症を阻止すること、疾患を部分的または完全に取り除くこと、あるいは疾患を治癒することを含み、これは例えば退行を生じさせることにより、または喪失、欠落、もしくは低下した機能を回復または修復することにより、または非効率的なプロセスを刺激することにより行う。
【００６５】
用語「抑制」または「抑制する」は、任意の表現型の特徴の減少または停止、あるいはその特徴の発生、程度、または可能性の減少または停止を指す。
【００６６】
「薬学的に許容される担体」は、治療剤とともに用いられ、対象に投与される「薬学的組成物」を共に構成する、当技術分野で一般的な毒性のない固体、半固体、もしくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料、配合助剤、または担体を指す。薬学的に許容される担体は、使用する用量および濃度で受容者に対して毒性がなく、その配合物の他の原料と適合する。薬学的に許容される担体は、使用する剤形に適している。例えば、治療剤を経口投与する場合、担体はゲルカプセルであってもよい。治療剤を皮下投与する場合、担体は、理想的には皮膚に対して非刺激性であり、注射部位反応を発生させない。
【００６７】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体
本発明者らは、ＣＳＦ１Ｒに対する新しい一連の抗体を発明した。抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体、および本明細書で説明する重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲを含む抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００６８】
代表的ヒト化抗体
一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合するヒト化抗体が提供される。ヒト化抗体は治療用分子として有用であるが、これはヒト化抗体が、抗体治療薬に対する免疫応答をもたらして治療薬の効果を低下させうる、非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（例えばヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答）を減少または排除するためである。
【００６９】
非限定的な代表的ヒト化抗体には、本明細書に記載のＡｂ１〜Ａｂ１６が含まれる。また、非限定的な代表的ヒト化抗体には、Ａｂ１〜Ａｂ１６から選択される抗体の重鎖可変領域および／またはＡｂ１〜Ａｂ１６から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む抗体も含まれる。非限定的な代表的ヒト化抗体には、配列番号３９〜４５から選択される重鎖可変領域および／または配列番号４６〜５２から選択される軽鎖可変領域を含む抗体が含まれる。また、代表的ヒト化抗体には、０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３および／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むヒト化抗体も含まれるが、これらに限定されない。
【００７０】
一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３および／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。非限定的な代表的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、配列番号１５、１６、および１７、配列番号２１、２２、および２３、ならびに配列番号２７、２８、および２９から選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組を含む抗体が含まれる。また、非限定的な代表的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、配列番号１８、１９、および２０、配列番号２４、２５、および２６、ならびに配列番号３０、３１、および３２から選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組を含む抗体も含まれる。
【００７１】
非限定的な代表的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、表１（配列番号を示す。配列は表８を参照）の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組とを含む抗体が含まれる。表１の各列は、代表的抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を示している。
【００７２】
（表１）重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲ
0006008842.tif 000002
【００７３】
さらなる代表的ヒト化抗体
一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む重鎖を含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む軽鎖を含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む重鎖と、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む軽鎖とを含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。
【００７４】
本明細書で使用する際、特定のポリペプチドが、例えばアミノ酸配列と少なくとも９５％一致するかどうかは、例えばコンピュータプログラムを用いて測定することができる。特定の配列が、例えば参照配列と９５％一致するかどうかを測定するとき、同一性のパーセンテージは、参照アミノ酸配列の全長にわたって計算する。
【００７５】
一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明するＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。すなわち、一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ２、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ３、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ２、および本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。さらに、一部の実施形態において、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明するＣＤＲに基づく少なくとも１つの変異ＣＤＲを含み、このとき変異ＣＤＲは、本明細書で説明するＣＤＲに対して１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換のうちの１つまたは複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して１つまたは複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、この適切な保存的アミノ酸置換は、変異ＣＤＲを含む抗体の結合特性を著しく変更することが予測されない。
【００７６】
また、代表的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関して本明細書に記載の抗体と競合する抗体も含む。したがって、一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関してＦａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体と競合するヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、ならびにこれらのＦａｂの二価（すなわち、２個の重鎖と２個の軽鎖とを有する）抗体型が提供される。
【００７７】
代表的ヒト化抗体定常領域
一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ変異を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
【００７８】
重鎖定常領域の選択により、抗体がインビボでエフェクター機能を有するようになるかどうかを測定することができる。そのようなエフェクター機能には、一部の実施形態において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が含まれ、抗体が結合する細胞の殺滅をもたらすことができる。一部の癌を治療する方法を含む一部の治療方法において、細胞殺滅は、例えば腫瘍の維持および成長を支持する細胞に抗体が結合する場合に望ましい。腫瘍の維持および成長を支持しうる代表的細胞には、腫瘍細胞自体、腫瘍の脈管形成を助ける細胞、リガンドを供給する細胞、成長因子、または腫瘍成長もしくは腫瘍生存を支持もしくは促進するカウンター受容体が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖またはヒトＩｇＧ３重鎖を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【００７９】
一部の治療方法では、エフェクター機能は望ましくないことがある。例えば、一部の実施形態では、ＭＳおよび／またはＲＡおよび／または骨溶解症の治療に使用する抗体が、エフェクター機能を有さないことが望ましいであろう。したがって、一部の実施形態において、癌の治療のために開発された抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＭＳおよび／またはＲＡおよび／または骨溶解症の治療における使用には適さないことがある。その結果、一部の実施形態において、著しいエフェクター機能を有さない抗ＣＳＦ１Ｒ抗体をＭＳおよび／またはＲＡおよび／または骨溶解症の治療に使用する。一部の実施形態において、ＭＳおよび／またはＲＡおよび／または骨溶解症の治療のための抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、ＩｇＧ４定常領域はＳ２４１Ｐ変異を含む。
【００８０】
抗体は、いかなる方法でヒト化してもよい。ヒト化の非限定的な代表的方法には、例えば米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第６，１８０，３７０号、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−３６（１９８８）、および米国特許公開第２００９／０１３６５００号に記載の方法が含まれる。
【００８１】
上で述べたように、ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域内の対応する位置のアミノ酸に置換されている抗体である。一部の実施形態において、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸を１つまたは複数のヒトフレームワーク領域内の１つまたは複数の対応する位置のアミノ酸に置換する。
【００８２】
一部の実施形態において、置換に使用する対応するヒトアミノ酸の一部は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域に由来する。すなわち、一部のそのような実施形態において、例えば、非ヒトアミノ酸のうちの１つまたは複数は、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域に由来するか、または第１のヒト免疫グロブリン遺伝子でコードされた対応するアミノ酸に置換してもよく、非ヒトアミノ酸のうちの１つまたは複数は、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域に由来するか、または第２のヒト免疫グロブリン遺伝子でコードされた対応するアミノ酸に置換してもよく、非ヒトアミノ酸のうちの１つまたは複数は、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域に由来するか、または第３のヒト免疫グロブリン遺伝子でコードされた対応するアミノ酸に置換してもよい。さらに、一部の実施形態において、単一のフレームワーク領域、例えばＦＲ２において置換に使用する対応するヒトアミノ酸は、全てが同一のヒトフレームワークに由来する必要はない。しかしながら、一部の実施形態では、置換に使用する対応するヒトアミノ酸の全てが、同一のヒト抗体に由来するか、または同一のヒト免疫グロブリン遺伝子でコードされている。
【００８３】
一部の実施形態において、１つまたは複数の全フレームワーク領域を対応するヒトフレームワーク領域に置換して、抗体をヒト化する。一部の実施形態において、置換する非ヒトフレームワーク領域に対して最も高い相同性を有するヒトフレームワーク領域を選択する。一部の実施形態において、そのようなヒト化抗体はＣＤＲグラフト抗体である。
【００８４】
一部の実施形態において、ＣＤＲグラフト化の後、１つまたは複数のフレームワークアミノ酸をマウスフレームワーク領域内の対応するアミノ酸に戻す。このような「復帰変異」は、一部の実施形態において、１つまたは複数のＣＤＲの構造に寄与していると思われる、および／または抗原接着に関与しているかもしれない、および／または抗体の全体的な構造的完全性に関与していると思われる、１つまたは複数のマウスフレームワークアミノ酸を保持するように行われる。一部の実施形態において、ＣＤＲグラフト化の後、抗体のフレームワーク領域に１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個、または０個の復帰変異を行う。
【００８５】
一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常領域および／またはヒト軽鎖定常領域も含む。
【００８６】
代表的キメラ抗体
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はキメラ抗体である。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、少なくとも１つの非ヒト可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。一部のそのような実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の全ての可変領域は非ヒト可変領域であり、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の全ての定常領域はヒト定常領域である。一部の実施形態において、キメラ抗体の１つまたは複数の可変領域は、マウス可変領域である。キメラ抗体のヒト定常領域は、それが置換する非ヒト定常領域がもし存在する場合、これと同一のアイソタイプである必要はない。キメラ抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−５５（１９８４）において説明されている。
【００８７】
非限定的な代表的キメラ抗体には、０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含むキメラ抗体が含まれる。さらなる非限定的な代表的キメラ抗体には、０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３および／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むキメラ抗体が含まれる。
【００８８】
非限定的な代表的キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、以下の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の対を含む抗体が含まれる：配列番号９および１０、配列番号１１および１２、ならびに配列番号１３および１４。
【００８９】
非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、上記の表１に示す重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３との組を含む抗体が含まれる。
【００９０】
さらなる代表的キメラ抗体
一部の実施形態において、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む重鎖を含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む軽鎖を含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む重鎖と、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む軽鎖とを含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。
【００９１】
一部の実施形態において、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明するＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。すなわち、一部の実施形態において、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ２、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ３、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ２、および本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。さらに、一部の実施形態において、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明するＣＤＲに基づく少なくとも１つの変異ＣＤＲを含み、このとき変異ＣＤＲは、本明細書で説明するＣＤＲに対して１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換のうちの１つまたは複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して１つまたは複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、この適切な保存的アミノ酸置換は、変異ＣＤＲを含む抗体の結合特性を著しく変更することが予測されない。
【００９２】
また、代表的キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関して本明細書に記載の抗体と競合するキメラ抗体も含む。したがって、一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関してＦａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体と競合するキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、ならびにこれらのＦａｂの二価（すなわち、２個の重鎖と２個の軽鎖とを有する）抗体型が提供される。
【００９３】
代表的キメラ抗体定常領域
一部の実施形態において、本明細書に記載のキメラ抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施形態において、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ変異を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
【００９４】
上で述べたように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体に施そうとする特定の治療方法によって異なりうる。したがって、一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【００９５】
代表的ヒト抗体
ヒト抗体は、いかなる適切な方法で作製してもよい。非限定的な代表的方法には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウス中でのヒト抗体の作成が含まれる。例として、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１−５５（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−８（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−９（１９９４）、ならびに米国特許第５，５４５，８０７号、同第６，７１３，６１０号、同第６，６７３，９８６号、同第６，１６２，９６３号、同第５，５４５，８０７号、同第６，３００，１２９号、同第６，２５５，４５８号、同第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号、および同第５，５４５，８０６号を参照されたい。
【００９６】
非限定的な代表的方法には、ファージディスプレイライブラリーを用いたヒト抗体の作成も含まれる。例として、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１−８（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−９７（１９９１）、およびＰＣＴ公報第ＷＯ９９／１０４９４号を参照されたい。
【００９７】
一部の実施形態において、ヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１の配列を有するポリペプチドに結合する。また、代表的ヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関して本明細書に記載の抗体と競合する抗体も含む。したがって、一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関してＦａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体と競合するヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、ならびにこれらのＦａｂの二価（すなわち、２個の重鎖と２個の軽鎖とを有する）抗体型が提供される。
【００９８】
一部の実施形態において、ヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施形態において、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ変異を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
【００９９】
一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【０１００】
さらなる代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体
代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、本明細書に記載のＣＤＲ配列のうち例えば１つまたは複数を含むマウス抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、および組換え抗体も含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖可変領域と本明細書に記載の軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲを含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む。
【０１０１】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖可変領域を含む。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、ヒト化抗体Ａｂ１〜Ａｂ１６から選択される抗体の重鎖可変領域を含む抗体も含まれる。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む抗体が含まれる。
【０１０２】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、ヒト化抗体Ａｂ１〜Ａｂ１６から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む抗体も含まれる。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体が含まれる。
【０１０３】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、ヒト化抗体Ａｂ１〜Ａｂ１６から選択される抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体も含まれる。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との以下の対を含む抗体が含まれる：配列番号９および１０、配列番号１１および１２、および配列番号１３および１４、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、配列番号４９および５０、ならびに配列番号５１および５２。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、重鎖と軽鎖との以下の対を含む抗体も含まれる：配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、ならびに配列番号３７および３８。
【０１０４】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、配列番号１５、１６、および１７、配列番号２１、２２、および２３、ならびに配列番号２７、２８、および２９から選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組を含む抗体が含まれる。
【０１０５】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、配列番号１８、１９、および２０、配列番号２４、２５、および２６、ならびに配列番号３０、３１、および３２から選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組を含む抗体が含まれる。
【０１０６】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む。
【０１０７】
非限定的な代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体には、上記の表１に示す重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３との組を含む抗体が含まれる。
【０１０８】
さらなる代表的抗体
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む重鎖を含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む軽鎖を含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む重鎖と、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含む軽鎖とを含み、この抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。
【０１０９】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明するＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。すなわち、一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ２、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ３、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ２、および本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。さらに、一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書で説明するＣＤＲに基づく少なくとも１つの変異ＣＤＲを含み、このとき変異ＣＤＲは、本明細書で説明するＣＤＲに対して１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換のうちの１つまたは複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して１つまたは複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、この適切な保存的アミノ酸置換は、変異ＣＤＲを含む抗体の結合特性を著しく変更することが予測されない。
【０１１０】
また、代表的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関して本明細書に記載の抗体と競合する抗体も含む。したがって、一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒとの結合に関してＦａｂ０３０１、０３０２、および０３１１から選択される抗体と競合する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、ならびにこれらのＦａｂの二価（すなわち、２個の重鎖と２個の軽鎖とを有する）抗体型が提供される。
【０１１１】
代表的抗体定常領域
一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、１つまたは複数のヒト定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κおよびλから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ変異を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。
【０１１２】
上で述べたように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体に施そうとする特定の治療方法によって異なりうる。したがって、一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【０１１３】
代表的抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖可変領域
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域が提供される。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域はマウス可変領域、ヒト可変領域、またはヒト化可変領域である。
【０１１４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、重鎖ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、重鎖ＦＲ１および／またはＦＲ４をさらに含む。非限定的な代表的重鎖可変領域には、アミノ酸配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列を有する重鎖可変領域が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１５】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、配列番号１５、２１、および２７から選択される配列を含むＣＤＲ１を含む。
【０１１６】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、配列番号１６、２２、および２８から選択される配列を含むＣＤＲ２を含む。
【０１１７】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、配列番号１７、２３、および２９から選択される配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０１１８】
非限定的な代表的重鎖可変領域には、配列番号１５、１６、および１７、配列番号２１、２２、および２３、ならびに配列番号２７、２８、および２９から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組を含む重鎖可変領域が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１９】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、配列番号９、１１、１３、および３９〜４５から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含み、このとき重鎖は軽鎖と一緒になってＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を形成することが可能である。
【０１２０】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、本明細書で説明するＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。すなわち、一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ２、および本明細書で説明する重鎖ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。さらに、一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、本明細書で説明するＣＤＲに基づく少なくとも１つの変異ＣＤＲを含み、このとき変異ＣＤＲは、本明細書で説明するＣＤＲに対して１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換のうちの１つまたは複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して１つまたは複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、この適切な保存的アミノ酸置換は、変異ＣＤＲを含む重鎖の結合特性を著しく変更することが予測されない。
【０１２１】
一部の実施形態において、重鎖は重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、重鎖はヒト重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択されるアイソタイプである。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域はＩｇＧ定常領域である。一部の実施形態において、重鎖はヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施形態において、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域はＳ２４１Ｐ変異を含む。
【０１２２】
一部の実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、重鎖はヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３重鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、エフェクター機能があまり望ましくない場合、重鎖はヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。
【０１２３】
代表的抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖可変領域
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域が提供される。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、マウス可変領域、ヒト可変領域、またはヒト化可変領域である。
【０１２４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、軽鎖ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、軽鎖ＦＲ１および／またはＦＲ４をさらに含む。非限定的な代表的軽鎖可変領域には、アミノ酸配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列を有する軽鎖可変領域が含まれる。
【０１２５】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、配列番号１８、２４、および３０から選択される配列を含むＣＤＲ１を含む。
【０１２６】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、配列番号１９、２５、および３１から選択される配列を含むＣＤＲ２を含む。
【０１２７】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、配列番号２０、２６、および３２から選択される配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
非限定的な代表的軽鎖可変領域には、配列番号１８、１９、および２０、配列番号２４、２５、および２６、ならびに配列番号３０、３１、および３２から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の組を含む軽鎖可変領域が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２９】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、配列番号１０、１２、１４、および４６〜５２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％一致する可変領域配列を含み、このとき軽鎖は重鎖と一緒になってＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を形成することが可能である。
【０１３０】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、本明細書で説明するＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。すなわち、一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ１、本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ２、および本明細書で説明する軽鎖ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む。さらに、一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、本明細書で説明するＣＤＲに基づく少なくとも１つの変異ＣＤＲを含み、このとき変異ＣＤＲは、本明細書で説明するＣＤＲに対して１個、２個、３個、または４個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換のうちの１つまたは複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して１つまたは複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、この適切な保存的アミノ酸置換は、変異ＣＤＲを含む軽鎖の結合特性を著しく変更することが予測されない。
【０１３１】
一部の実施形態において、軽鎖はヒト軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、ヒトκおよびヒトλ軽鎖定常領域から選択される。
【０１３２】
代表的なさらなるＣＳＦ１Ｒ結合性分子
一部の実施形態において、ＣＳＦ１Ｒに結合するさらなる分子が提供される。そのような分子には、非標準骨格、例えばアンチカリン、アドネクチン、アンキリン反復などが含まれるが、これらに限定されない。例として、Ｈｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．１５：１４（２００６）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｄｕｂｅｌ，Ｓ．，ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００７の第４６７頁〜第４９９頁に記載のＦｉｅｄｌｅｒ，Ｍ．ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．，"Ｎｏｎ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ"を参照されたい。
【０１３３】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の代表的特性
一部の実施形態において、上記に記載の構造を有する抗体は、１ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）でＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１および／またはＩＬ３４のＣＳＦ１Ｒへの結合を遮断し、ＣＳＦ１および／またはＩＬ３４に誘導されるＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する。
【０１３４】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒの細胞外ドメイン（ＣＳＦ１Ｒ−ＥＣＤ）に結合する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒに対して１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、または０．０５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、０．０１〜１ｎＭ、０．０１〜０．５ｎＭ、０．０１〜０．１ｎＭ、０．０１〜０．０５ｎＭ、または０．０２〜０．０５ｎＭのＫＤを有する。
【０１３５】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒへのリガンド結合を遮断する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１ＲへのＣＳＦ１の結合を遮断する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１ＲへのＩＬ３４の結合を遮断する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１ＲへのＣＳＦ１およびＩＬ３４の両者の結合を遮断する。一部の実施形態において、リガンド結合を遮断する抗体は、ＣＳＦ１Ｒの細胞外ドメインに結合する。抗体は、実施例７に記載の検定を用いて、リガンドのＣＳＦ１Ｒに対する検出可能な結合の量を少なくとも５０％減少させる場合に、「ＣＳＦ１Ｒへのリガンド結合を遮断する」とみなされる。一部の実施形態において、抗体は、実施例７に記載の検定を用いて、リガンドのＣＳＦ１Ｒに対する検出可能な結合の量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させる。一部のそのような実施形態において、抗体は、リガンド結合を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％など遮断するとされる。
【０１３６】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＩＬ３４誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化およびＩＬ３４誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化の両者を抑制する。抗体は、実施例６に記載の検定を用いて、検出可能なリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化の量を少なくとも５０％減少させる場合に、「リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する」とみなされる。一部の実施形態において、抗体は、実施例６に記載の検定を用いて、検出可能なリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化の量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させる。一部のそのような実施形態において、抗体は、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を少なくとも少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％など抑制するとされる。
【０１３７】
一部の実施形態において、抗体は、ＣＳＦ１および／またはＩＬ３４存在下での単球の増殖反応および／または生存反応を抑制する。抗体は、実施例１０に記載の検定を用いて、ＣＳＦ１および／またはＩＬ３４存在下での単球の増殖反応および／または生存反応の量を少なくとも５０％減少させる場合に、「単球の増殖反応および／または生存反応を抑制する」とみなされる。一部の実施形態において、抗体は、実施例１０に記載の検定を用いて、ＣＳＦ１および／またはＩＬ３４存在下での単球の増殖反応および／または生存反応の量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させる。一部のそのような実施形態において、抗体は、単球の増殖反応および／または生存反応を少なくとも少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％など抑制するとされる。
【０１３８】
代表的抗体複合体
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を標識および／または細胞毒性剤とコンジュゲートする。本明細書で使用する標識とは、抗体の検出を容易にする、および／または抗体が結合する分子の検出を容易にする部分である。非限定的な代表的標識には、放射性同位体、蛍光基、酵素基、化学発光基、ビオチン、エピトープ標識、金属結合標識などが含まれるが、これらに限定されない。当業者は、目的の用途に応じて適当な標識を選択することができる。
【０１３９】
本明細書で使用する細胞毒性剤とは、１つまたは複数の細胞の増殖能を低下させる部分である。細胞は、例えばその細胞がアポトーシスを遂げるか、または別の方法で死滅する、その細胞が細胞周期を進行させることができない、および／または分裂できない、その細胞が分化する、などの理由で増殖しにくくなった場合に、低下した増殖能を有する。非限定的な代表的細胞毒性剤には、放射性同位体、毒素、および化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、目的の用途に応じて適当な細胞毒素を選択することができる。
【０１４０】
一部の実施形態にでは、インビトロで化学的方法を用いて標識および／または細胞毒性剤を抗体にコンジュゲートする。非限定的なコンジュゲーションの代表的化学的方法は当技術分野において公知であり、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｅｓ社（前Ｐｉｅｒｃｅ社、米国イリノイ州ロックフォード）、Ｐｒｏｚｙｍｅ社（Ｈａｙｗａｒｄ社、米国カリフォルニア州）、ＳＡＣＲＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社（カナダ、カルガリー）、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ社（米国ノースカロライナ州ローリー）などから市販されているサービス、方法、および／または試薬がある。一部の実施形態において、標識および／または細胞毒性剤がポリペプチドである場合、その標識および／または細胞毒性剤を少なくとも１つの抗体鎖を有する同一の発現ベクターから発現させて、抗体鎖に融合したその標識および／または細胞毒性剤を含むポリペプチドを産生することができる。当業者は、目的の用途に応じて、標識および／または細胞毒性剤を抗体にコンジュゲートするための適当な方法を選択することができる。
【０１４１】
代表的リーダー配列
一部の分泌タンパク質が大量に発現および分泌するためには、異種タンパク質に由来するリーダー配列が望ましいことがある。一部の実施形態において、リーダー配列は、それぞれ軽鎖リーダー配列および重鎖リーダー配列である配列番号３および４から選択される。一部の実施形態では、異種リーダー配列を使用することは、分泌過程においてＥＲでリーダー配列が除去される際に、得られる成熟ポリペプチドが変化しないままである点で有利となりうる。異種リーダー配列の付加は、一部のタンパク質を発現および分泌するために必要となることがある。
【０１４２】
特定の代表的リーダー配列の配列は、例えば、国立シンガポール大学生化学科が管理するオンラインのリーダー配列データベースに記載されている。Ｃｈｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，６：２４９（２００５）、およびＰＣＴ公報第ＷＯ２００６／０８１４３０号を参照されたい。
【０１４３】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体をコードする核酸分子
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の１つまたは複数の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が提供される。一部の実施形態において、核酸分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、核酸分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドと、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドとの両者を含む。一部の実施形態において、第１の核酸分子は重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
【０１４４】
一部のそのような実施形態において、重鎖および軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から２つの別個のポリペプチドとして発現される。一部の実施形態において、例えば抗体がｓｃＦｖである場合に、単一のポリヌクレオチドが、互いに連結した重鎖と軽鎖との両者を含む単一のポリペプチドをコードする。
【０１４５】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されたときに重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上述のように、リーダー配列は、天然の重鎖もしくは軽鎖リーダー配列であってもよく、または別の異種リーダー配列であってもよい。
【０１４６】
核酸分子は、当技術分野における従来の組換えＤＮＡ技法を使用して構築することができる。一部の実施形態において、核酸分子は、選択される宿主細胞中での発現に適した発現ベクターである。
【０１４７】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の発現および産生
ベクター
抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖および／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖および／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。そのようなベクターには、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列とを含む。一部の実施形態において、重鎖および軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。一部の実施形態において、重鎖および軽鎖は、例えば抗体がｓｃＦｖである場合などに、単一のポリペプチドの一部として発現される。
【０１４８】
一部の実施形態において、第１のベクターが重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターが軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、第１のベクターおよび第２のベクターを同様の量（例えば同様のモル量または同様の質量）で宿主細胞にトランスフェクトする。一部の実施形態において、モル比または質量比５：１〜１：５の第１のベクターおよび第２のベクターを宿主細胞にトランスフェクトする。一部の実施形態において、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターとの質量比１：１〜１：５を使用する。一部の実施形態において、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターとの質量比１：２を使用する。
【０１４９】
一部の実施形態において、ＣＨＯもしくはＣＨＯ誘導細胞、またはＮＳＯ細胞でのポリペプチドの発現に最適化されたベクターが選択される。代表的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０−８８９（２００４）に記載されている。
【０１５０】
一部の実施形態において、ヒトを含む動物での抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖および／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖のインビボ発現用のベクターが選択される。一部のそのような実施形態において、ポリペプチドの発現は、組織特異的に機能するプロモーターの制御下で行われる。例えば肝臓特異的プロモーターは、例えばＰＣＴ公報第ＷＯ２００６／０７６２８８号に記載されている。
【０１５１】
宿主細胞
種々の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖および／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖は、原核細胞、例えば細菌細胞、または真核細胞、例えば真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞で発現させることができる。そのような発現は、例えば当技術分野で周知の手順に従って実施することができる。ポリペプチドを発現させるために使用可能な代表的真核細胞には、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞、２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞、ＣＨＯ−Ｓ細胞およびＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕ細胞）、ならびにＮＳＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖および／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖は、酵母で発現させることができる。例として、米国特許公開第２００６／０２７００４５（Ａ１）号を参照されたい。一部の実施形態において、特定の真核生物宿主細胞が抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖および／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖に対して望ましい翻訳後修飾を行うその能力に基づいて選択される。例えば、一部の実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同一のポリペプチドよりも高いシアリル化度を有するポリペプチドを産生する。
【０１５２】
所望の宿主細胞への１つまたは複数の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されないいかなる方法で実施してもよい。非限定的な代表的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、いかなる適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一時的もしくは安定にトランスフェクトしてもよい。
【０１５３】
一部の実施形態において、１つまたは複数のポリペプチドは、いかなる適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸分子を用いて操作もしくはトランスフェクトされた動物でインビボ産生してもよい。
【０１５４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の精製
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、いかなる適切な方法で精製してもよい。そのような方法には、アフィニティーマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が含まれるが、これらに限定されない。適切な親和性リガンドには、ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよび抗体定常領域に結合するリガンドが含まれる。例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムを用いて、定常領域に結合し、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を精製してもよい。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えばブチルカラムまたはフェニルカラムも一部のポリペプチドの精製に適していることがある。ポリペプチドを精製する多数の方法が、当技術分野において公知である。
【０１５５】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の無細胞産生
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は無細胞系で産生される。非限定的な代表的無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９−４４（２００９）、Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８−４５（２００４）、Ｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５−７１３（２００３）に記載されている。
【０１５６】
治療用組成物および治療方法
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を用いた疾患治療方法
本発明の抗体および本発明の抗体を含む組成物が、ヒトまたは動物の治療方法における使用のために提供される。また、抗ＣＳＲ１Ｒ抗体を投与することを含む疾患を治療する方法も提供される。抗ＣＳＦ１Ｒ抗体で治療することができる非限定的な代表的疾患には、ＲＡ、ＭＳ、癌、転移による溶骨性骨量減少、溶骨性障害、および高カルシウム血症による骨量減少が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５７】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を投与することを含む炎症状態を治療する方法が提供される。一部の実施形態において、炎症状態は、乾癬、ＳＬＥ（ループス）、ＣＯＰＤ、アトピー性皮膚炎、およびアテローム性動脈硬化症、マクロファージ活性化症候群、およびヒスチオサイトーシスＸから選択される。
【０１５８】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を投与することを含む炎症状態を治療する方法であって、増殖性血管疾患、急性呼吸促迫症候群、サイトカイン媒介毒性、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化性潰瘍、胃潰瘍および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍性大腸炎、偽膜性大腸炎、急性大腸炎、および虚血性大腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、アカラシア、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症性腸疾患、クローン病、腸炎、ウィップル病、ぜんそく、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合体病、臓器虚血、再かん流傷害、臓器壊死、花粉症、セプシス、敗血症、内毒素性ショック、悪液質、超高熱、好酸球性肉芽腫、肉芽腫症、サルコイドーシス、敗血性流産、精巣上体炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞性線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、ＲＳウイルス感染症、ヘルペス感染症、ＨＩＶ感染症、Ｂ型肝炎感染症、Ｃ型肝炎感染症、播種性菌血症、デング熱、カンジダ症、マラリア、フィラリア症、アメーバ症、単包虫症、熱傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日光皮膚炎、じんま疹、いぼ、膨疹、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、アテローム性動脈硬化症、血栓性静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リウマチ熱、アルツハイマー病、セリアック病、うっ血性心不全、髄膜炎、脳炎、脳梗塞、脳塞栓症、ギラン・バレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄損傷、麻痺、ブドウ膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周疾患、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、ベルジェ病、１型糖尿病、２型糖尿病、ベルジェ病、ライター症候群、ならびにホジキン病から選択される炎症状態を治療する方法、あるいはこれらの状態に関連する炎症を治療する方法が提供される。
【０１５９】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を投与することを含む、癌を治療する方法が提供される。一部の実施形態において、癌はＣＳＦ１分泌性癌である。一部の実施形態において、癌は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、扁平上皮癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、および卵巣癌から選択される１つまたは複数の癌である。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、および肺腺癌から選択される１つまたは複数の癌の治療に有用である。
【０１６０】
投与経路および担体
種々の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心腔内、心室内、気管内、口腔内、直腸、腹腔内、皮内、局所、経皮、および髄腔内が含まれるがこれらに限定されない種々の経路により、あるいは移植または吸入により、インビボ投与することができる。本組成物は、固体、半固体、液体、または気体の形態の調製物に配合することができ、これには錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、かん腸剤、注射剤、吸入剤、および噴霧剤が含まれるが、これらに限定されない。抗ＣＳＦ１Ｒ抗体をコードする核酸分子は、金微粒子上にコーティングして、文献（例として、Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  ３５６：１５２−１５４（１９９２）を参照されたい）に記載されているように粒子衝突装置または「遺伝子銃」によって皮内に送達してもよい。適当な剤形および投与経路は、目的の用途に応じて選択することができる。
【０１６１】
種々の実施形態において、さまざまな薬学的に許容される担体を含む配合物として、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む組成物が提供される（例として、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｗｉｔｈ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ  Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ  ｅｄ．（２００３）、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）、Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。賦形剤、アジュバント、および希釈剤を含む種々の薬学的に許容される担体を使用することができる。さらに、種々の薬学的に許容される補助剤、例えばｐＨ調整剤および緩衝剤、等張化剤、安定剤、湿潤剤なども使用可能である。非限定的な代表的担体には、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【０１６２】
種々の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む組成物は、所望であれば従来の添加剤、例えば可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、および保存剤とともに、水性または非水性の溶剤、例えば植物油または他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪族アルコールのエステル、またはプロピレングリコールにそれらを溶解、懸濁、または乳化することにより、皮下投与を含む注射用に配合することができる。種々の実施形態において、組成物は、例えば許容される加圧推進剤、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などを用いて、吸入用に配合してもよい。また、種々の実施形態において、組成物は、生分解性ポリマーまたは非生分解性ポリマーなどを用いて、徐放性マイクロカプセル中に配合してもよい。非限定的な代表的生分解性配合物には、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーが含まれる。非限定的な代表的非生分解性配合物には、ポリグリセリン脂肪酸エステルが含まれる。そのような配合物を作成する特定の方法は、欧州特許第１  １２５  ５８４（Ａ１）号に記載されている。
【０１６３】
それぞれ１用量または複数用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む１つまたは複数の容器を含む薬学的パックまたはキットも提供される。一部の実施形態において単位剤形が提供されるが、この単位剤形は、所定の量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む組成物を含有し、場合により１つまたは複数の添加剤を含む。一部の実施形態において、そのような単位剤形は、注射用の使い捨て充填済み注射器として提供される。種々の実施形態において、単位剤形に含有される組成物は、食塩水やショ糖など、例えばリン酸塩などの緩衝剤を含んでもよく、および／または安定かつ有効なｐＨ範囲内で配合してもよい。あるいは、一部の実施形態において、組成物は、適当な液体、例えば滅菌水の添加により再構成できる凍結乾燥粉末として提供してもよい。一部の実施形態において、組成物は、ショ糖およびアルギニンを含むがこれらに限定されないタンパク質凝集を抑制する１つまたは複数の物質を含む。一部の実施形態において、本発明の組成物はヘパリンおよび／またはプロテオグリカンを含む。
【０１６４】
薬学的組成物は、特定の適応症の治療または予防に有効な量で投与される。治療効果のある量は、典型的には、治療を受ける対象の体重、その対象の身体状態および健康状態、治療を受ける状態の広範性、または治療を受ける対象の年齢に依存する。一般に、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１回あたり約１０μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与してよい。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１回あたり約５０μｇ／ｋｇ体重〜約５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与してよい。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１回あたり約１００μｇ／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与してよい。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１回あたり約１００μｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与してよい。一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１回あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与してよい。
【０１６５】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体組成物は、必要に応じて対象に投与してもよい。投与頻度は、治療を受ける状態、治療を受ける対象の年齢、治療を受ける状態の重症度、治療を受ける対象の全般的健康状態などを考慮した上で、担当医などの当業者が決定することができる。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の有効用量を１回または複数回対象に投与する。種々の実施形態において、有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を月１回、月１回を超えて、例えば２ヶ月に１回または３ヶ月に１回対象に投与する。他の実施形態では、有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を月１回未満、例えば２週間に１回または３週間に１回対象に投与する。有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、少なくとも１度対象に投与する。一部の実施形態において、有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、例えば少なくとも１ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間にわたり複数回投与してもよい。
【０１６６】
併用療法
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、単独で投与しても、または他の治療形態とともに投与してもよい。これらは、例えば手術、化学療法、放射線療法などの他の治療形態、あるいは別の治療用抗体などの生物製剤の投与の前、実質的に同時、またはその後に提供することができる。関節リウマチの治療では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、他の治療剤、例えばメトトレキサート、抗ＴＮＦ剤、例えばＲｅｍｉｃａｄｅ、Ｈｕｍｉｒａ、Ｓｉｍｐｏｎｉ、およびＥｎｂｒｅｌ；グルココルチコイド、例えばプレドニゾン；レフルノミド；アザチオプリン；ＪＡＫ阻害剤、例えばＣＰ  ５９０６９０；ＳＹＫ阻害剤、例えばＲ７８８；抗ＩＬ−６抗体；抗ＩＬ−６Ｒ抗体；抗ＣＤ−２０抗体；抗ＣＤ１９抗体；抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体；および抗ＧＭ−ＣＳＦ−Ｒ抗体とともに投与してもよい。多発性硬化症の治療では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、他の治療剤、例えばインターフェロンα；インターフェロンβ；プレドニゾン；抗α４インテグリン抗体、例えばＴｙｓａｂｒｉ；抗ＣＤ２０抗体、例えばＲｉｔｕｘａｎ；ＦＴＹ７２０（フィンゴリモド）；およびクラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ）とともに投与してもよい。
【実施例】
【０１６７】
下記に説明する実施例は、純粋に本発明の例示を目的とし、決して本発明を制限するとみなすべきものではない。これらの実施例は、下記の実験が実施された全てまたは唯一の実験であることを示すものではない。使用する数字（例えば、量や温度など）に関して正確性を確保するよう努力しているが、ある程度の実験誤差および偏差は考慮すべきである。特に指示のない限り、部は質量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。
【０１６８】
実施例１：ＣＳＦ１Ｒ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合するＦａｂの選択
マウスをヒトＣＳＦ１Ｒ細胞外ドメインＦｃ融合、ｈＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ．５０６−Ｆｃ（配列番号６）で免疫した。免疫したマウスの脾臓を取り出し、その脾細胞からＦａｂファージディスプレイライブラリーを作製した。ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合するために、Ｆａｂ発現ファージを選択した。陽性結合ファージからＦａｂを発現させ、細菌から精製した。さらなる分析用に、合計１０５６個のＦａｂクローンを選択した。
【０１６９】
ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する能力、ヒトＣＳＦ１のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力、およびヒトＩＬ３４のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力について、Ｆａｂをスクリーニングした。続いてそのスクリーニングで選択したＦａｂの配列分析およびクラスター化を実施し、一定の固有Ｆａｂを選択した。
【０１７０】
ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する能力、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する能力、およびマウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する能力について、それらの固有Ｆａｂをさらに分析した。またこれらのＦａｂは、ヒトＣＳＦ１のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力、およびヒトＩＬ３４のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力、ならびにＣＳＦ１またはＩＬ３４存在下でリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する能力についても分析した（データは示さず）。
【０１７１】
実施例２：キメラ抗体を作製するための抗ＣＳＦ１Ｒ  Ｆａｂの再構成
Ｆａｂのキャラクタリゼーションに続いて、キメラ抗体に再構成するためにこれらのＦａｂのうち１１個を選択した。各Ｆａｂを、Ｓ２４１Ｐ変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域およびヒトκ軽鎖定常領域を含むキメラ抗体に再構成した。要するに、マウスＩｇＨリーダー配列（配列番号４）およびＳ２４１Ｐ変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域（配列番号９４）を含有するように改変したベクターｐＴＴ５（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、カナダ、モントリオール、およびＮａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｆ  Ｃａｎａｄａ、カナダ、オタワ）にＦａｂのＶＨ領域をクローニングし、そこから発現させた。マウスＩｇκリーダー配列（配列番号３）およびヒトＩｇκ軽鎖定常領域（配列番号９５）を含有するように改変したベクターｐＴＴ５にＦａｂのＶＬ領域をクローニングし、そこから発現させた。ＦａｂのＶ領域は、非抗体由来アミノ酸配列を最終タンパク質に導入しないような形で挿入した。
【０１７２】
実施例３：キメラ抗体の発現およびキャラクタリゼーション
実施例５に記載のように、キメラ抗体を一時的に発現させ、実質的に精製した。
【０１７３】
ヒト、カニクイザル、およびマウスのＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合について１１個のキメラ抗体を分析した。また、これらのキメラ抗体は、ヒトＣＳＦ１のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力、ヒトＩＬ３４のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力、ヒトＣＳＦ１のカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力、およびＣＳＦ１またはＩＬ３４の存在下でリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する能力についても分析した。細胞表面のＣＳＦ１Ｒへの結合について、これらのキメラ抗体をさらに分析した。最後に、これらのキメラ抗体をリガンド不在下でＣＳＦ１Ｒリン酸化を誘導しないことを確認するために分析した（データは示さず）。
【０１７４】
実施例４：抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のヒト化
上述の分析から、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体０３０１、０３０２、および０３１１をヒト化用に選択した。これらの抗体を重鎖可変領域および軽鎖可変領域のフレームワーク領域内で一定のアミノ酸残基を変更することによりヒト化した。ヒト化に用いた基準は、例えば米国特許公開第２００９／０１３６５００号に既に記載されている。
【０１７５】
ｃＡｂ０３０１では、合計６個のヒト化抗体Ａｂ１〜Ａｂ６用に、３個のヒト化重鎖可変領域および２個のヒト化軽鎖可変領域を設計した。ｃＡｂ０３０２では、合計６個のヒト化抗体Ａｂ７〜Ａｂ１２用に、２個のヒト化重鎖可変領域および３個のヒト化軽鎖可変領域を設計した。ｃＡｂ０３１１では、合計４個のヒト化抗体Ａｂ１３〜Ａｂ１６用に、２個のヒト化重鎖可変領域および２個のヒト化軽鎖可変領域を設計した。
【０１７６】
親キメラ抗体可変領域の配列およびヒトアクセプター可変フレームワーク領域の配列とアラインした、ヒト化重鎖可変領域およびヒト化軽鎖可変領域のそれぞれの配列を図１（重鎖）および図２（軽鎖）に示す。ヒト化可変領域配列におけるヒトアクセプター可変フレームワーク領域配列に対する変更を四角で囲む。それぞれの可変領域のそれぞれのＣＤＲを囲み領域内に示し、囲まれた配列の上に「ＣＤＲ」と記す。
【０１７７】
下記の表８は、抗体Ａｂ１〜Ａｂ１６のヒト化重鎖およびヒト化軽鎖の全配列を示す。これらの抗体それぞれのヒト化重鎖およびヒト化軽鎖の名称および配列番号を表２に示す。
【０１７８】
（表２）Ａｂ１〜Ａｂ１６のヒト化重鎖およびヒト化軽鎖
0006008842.tif 000003
【０１７９】
実施例５：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合するが、マウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤには結合しない
１６個のヒト化抗体を以下のようにＣＨＯ細胞で一時的に発現させた。ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）をＤＮＡ：ＰＥＩ比１：５で用いて、重鎖プラスミド１：軽鎖プラスミド２の質量比で、個々の重鎖発現プラスミドおよび軽鎖発現プラスミドをＣＨＯ−３Ｅ７細胞にコトランスフェクトした。トランスフェクション当たりに使用した合計ＤＮＡは、１．５μｇ／ｍＬ細胞である。
【０１８０】
ＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて、トランスフェクト細胞の上清からヒト化抗体を精製し、続いてＰｈｅｎｙｌ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いてさらに精製した。ＰＢＳ／０．５Ｍ  ＮａＣｌで事前に平衡化したＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＨＰカラムに抗体を含有する上清を装填した。抗体を装填したカラムを１０カラム体積のＰＢＳ／０．５Ｍ  ＮａＣｌで洗浄し、０．１Ｍ  グリシン（ｐＨ２．７）／０．５Ｍ  ＮａＣｌのリニアとステップとの混合勾配で、１００μＬの１Ｍ  トリス緩衝液（ｐＨ８．０）に直接溶出させた。抗体を含有する溶出液をＰＢＳに対して透析し、その後２．４Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４（Ｓｉｇｍａ社）を添加して、１０ｍＭ  リン酸カリウム（ｐＨ７．０）／１．２Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４と同等の伝導度を得た。次に抗体を１０ｍＭ  リン酸カリウム（ｐＨ７．０）／１．２Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４で事前に平衡化した１ｍＬのＰｈｅｎｙｌ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）に装填した。抗体を装填したカラムを１５カラム体積の１０ｍＭ  リン酸カリウム（ｐＨ７．０）／１．２Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４で洗浄し、２０カラム体積の１０ｍＭ  リン酸カリウム（ｐＨ７．０）の勾配で溶出させた。抗体を含有する画分を回収し、ＰＢＳに対して透析した。
【０１８１】
ヒト化抗体およびそれらの親キメラ抗体（ｃＡｂ）をヒト、カニクイザル、およびマウスのＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合について以下のように分析した。
【０１８２】
ヒトＣＳＦ１Ｒ結合活性
９６ウェル透明ボトムＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの組換えｈＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ．５０６−Ｆｃ（配列番号６、ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）またはヒトＭ−ＣＳＦ  Ｒ  Ｆｃ  Ｃｈｉｍｅｒａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）で一晩コーティングした。翌朝、ウェルをＰＢＳ中０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で４回洗浄し、Ｂｌｏｃｋｅｒ−Ｂｌｏｔｔｏ（Ｐｉｅｒｃｅ社）でブロッキングした。２０００ｎｇ／ｍＬから出発して、Ｂｌｏｃｋｅｒ−Ｂｌｏｔｔｏに１：１で希釈したヒト化抗体または親キメラ抗体の０．５倍連続希釈物５０μＬをＣＳＦ１Ｒでコーティングしたウェルに添加した。室温（ＲＴ）で９０分間のインキュベーション後、ウェルをＰＢＳＴで４回洗浄し、ペルオキシダーゼ複合ヤギ抗ヒトκ軽鎖抗体（Ｓｉｇｍａ社）のＢｌｏｃｋｅｒ−Ｂｌｏｔｔｏ中１：５０００希釈物を各ウェルに添加した。ＲＴで６０分間のインキュベーション後、ウェルをＰＢＳＴで４回洗浄し、５０μＬのｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロリドペルオキシダーゼ基質（Ｓｉｇｍａ社）を各ウェルに添加した。ＲＴで３０分間のインキュベーション後、ＳｏｆｔＭａｘＰｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を用いて、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＰｌｕｓ分光光度計で、各ウェルのＡ４５０値を直接読み取った。
【０１８３】
その実験結果を図３に示す。試験した濃度範囲内で、全てのヒト化抗体がヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合した。
【０１８４】
カニクイザルＣＳＦ１Ｒ結合曲線
ヒトＣＳＦ１Ｒについて上述したように、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する各ヒト化抗体の結合曲線を測定したが、ただし透明ボトムＥＬＩＳＡプレートのウェルは、２μｇ／ｍＬの組換えｃｙｎｏＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ−Ｆｃ（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、配列番号８であるが１９個のアミノ酸リーダー配列を含まない）で一晩コーティングした。
【０１８５】
その実験結果を図４に示す。試験した濃度範囲内で、全てのヒト化抗体がカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合した。
【０１８６】
マウスＣＳＦ１Ｒ結合曲線
ヒトＣＳＦ１Ｒについて上述したように、マウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する各ヒト化抗体の結合曲線を測定したが、ただし透明ボトムＥＬＩＳＡプレートのウェルは、２μｇ／ｍＬの組換えｍＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ−Ｆｃ（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、配列番号９３）で一晩コーティングした。
【０１８７】
その実験結果を図５に示す。ヒト化抗体または親キメラ抗体のいずれも試験した濃度範囲にわたりマウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに検出可能に結合しなかった。
【０１８８】
ＥＣ５０の計算
表３は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）の非線形回帰（曲線適合）分析アルゴリズムを用いて計算した、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに結合する各ヒト化抗体のＥＣ５０を示している。いずれのキメラ抗体もマウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに検出可能に結合しなかったため、そのデータからはＥＣ５０は計算できなかった。表３は、親キメラ抗体について計算したＥＣ５０も含む。
【０１８９】
（表３）ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の結合活性
0006008842.tif 000004
【０１９０】
実施例６：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する
ＣＳＦ１Ｒは、リガンドＣＳＦ１またはＩＬ３４の存在下でリン酸化される。いずれかのリガンドに誘導されるＣＳＦ１Ｒリン酸化を抑制する能力について、ヒト化抗体およびそれらの親キメラ抗体（ｃＡｂ）を以下のように試験した。
【０１９１】
ＣＳＦ１誘導性リン酸化の抑制
ＣＳＦ１Ｒ（配列番号２）トランスフェクトＣＨＯ細胞を８μｇ／ｍＬから出発するヒト化抗体または親キメラ抗体のそれぞれの連続希釈物とともに氷上で６０分間インキュベーションし、続いてそれらの細胞に３．３ｎＭのヒトＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を添加した（ヒト化抗体の０３０１系列では、２μｇ／ｍＬから出発するヒト化抗体および親キメラ抗体の連続希釈物を用いた）。これらの細胞を３７℃で３分間インキュベーションし、その後１／１０ｘ体積の１０ｘ細胞溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を添加して溶解した。細胞溶解物中のリン酸化されたＣＳＦ１Ｒの量をヒトｐｈｏｓｐｈｏ−Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて、製造者の取扱説明書に従って定量化した。
【０１９２】
その実験結果を図６Ａ〜６Ｃに示す。全てのヒト化抗体は、試験した濃度範囲内でヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤのヒトＣＳＦ１誘導性リン酸化を抑制することができた。
【０１９３】
ＩＬ３４誘導性リン酸化の抑制
ＣＳＦ１Ｒ（配列番号２）トランスフェクトＣＨＯ細胞を０．００２〜８μｇ／ｍＬのヒト化抗体または親キメラ抗体それぞれとともに氷上で６０分間インキュベーションし、続いてそれらの細胞に３．３ｎＭのヒトＩＬ３４（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、配列番号６８）を添加した。これらの細胞を３７℃で３分間インキュベーションし、その後１／１０ｘ体積の１０ｘ細胞溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を添加して溶解した。細胞溶解物中のリン酸化されたＣＳＦ１Ｒの量をヒトｐｈｏｓｐｈｏ−Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて、製造者の取扱説明書に従って定量化した。
【０１９４】
その実験結果を図７Ａ〜７Ｃに示す。全てのヒト化抗体は、試験した濃度範囲内でヒトＣＳＦ１ＲのヒトＩＬ３４誘導性リン酸化を抑制することができた。
【０１９５】
実施例７：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はヒトＣＳＦ１およびヒトＩＬ３４のヒトＣＳＦ１ＲおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒへの結合を遮断する
ヒトＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ遮断活性
ヒトＣＳＦ１のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力について、ヒト化抗体および親キメラ抗体（ｃＡｂ）を以下のように試験した。
【０１９６】
ＮＨ２−Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて組換えヒトＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）をビオチン化した。１００μＬのＰＢＳＴ／０．１％  ＢＳＡ中１μｇ／ｍＬビオチン化ＣＳＦ１をＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋブロッキング緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ社）で製造者の取扱説明書に従って事前にブロッキングしたＲｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎコーティングプレート（Ｐｉｅｒｃｅ社）のウェルに添加した。２０００ｎｇ／ｍＬから出発するヒト化抗体または親キメラ抗体の０．５倍連続希釈物５０μＬを１００μＬのＰＢＳＴ／０．１％ＢＳＡ中５０ｎｇ／ｍＬのｈＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ．５０６−Ｆｃ（配列番号６、ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社）または５０ｎｇ／ｍＬのｃｙｎｏＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ−Ｆｃ（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、配列番号８であるが、１９個のアミノ酸リーダー配列を含まない）とともにＲＴで９０分間インキュベーションし、続いてその混合物をリガンドでコーティングしたプレートの１つまたは複数のウェルに移動した。ＲＴで９０分経過後、ウェルをＰＢＳＴで洗浄し、Ｆｃ−断片特異的ペルオキシダーゼ複合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社）のＰＢＳＴ／０．１％  ＢＳＡ中１：５０００希釈物を各ウェルに添加した。ＲＴで６０分間のインキュベーション後、ウェルをＰＢＳＴ／０．１％  ＢＳＡで洗浄し、ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロリドペルオキシダーゼ基質（Ｓｉｇｍａ社）を各ウェルに添加した。ＲＴで３０分間のインキュベーション後、ＳｏｆｔＭａｘＰｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を用いて、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＰｌｕｓ分光光度計で、各ウェルのＡ４５０値を直接読み取った。
【０１９７】
カニクイザルＣＳＦ１Ｒに対するその実験の結果を図８Ａ〜８Ｃに示す。Ｆａｂ０３０１および０３１１に基づく全てのヒト化抗体は、試験した濃度範囲内でヒトＣＳＦ１のカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断することができた。その実験では、Ｆａｂ０３０２に基づくいずれのヒト化抗体もｃＡｂ０３０２の遮断活性と比較して類似する遮断活性を示さなかった。
【０１９８】
ヒトＩＬ３４／ＣＳＦ１Ｒ遮断活性
ヒトＩＬ３４のヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断する能力について、ヒト化抗体を試験した。ＣＳＦ１の遮断について上述したように、各ヒト化抗体の遮断活性を測定したが、ただしＮＨ２−Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて組換えヒトＩＬ３４（ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、配列番号６８）をビオチン化し、その後１００μＬのＰＢＳＴ／０．１％  ＢＳＡ中１μｇ／ｍＬのビオチン化組換えＩＬ３４をＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋブロッキング緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ社）で製造者の取扱説明書に従って事前にブロッキングしたＲｅａｃｔｉ−Ｂｉｎｄ  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎコーティングプレート（Ｐｉｅｒｃｅ社）のウェルに添加した。
【０１９９】
カニクイザルＣＳＦ１Ｒに対するその実験の結果を図９Ａ〜９Ｃに示す。Ｆａｂ０３０１および０３１１に基づく全てのヒト化抗体は、試験した濃度範囲内でヒトＩＬ３４のカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合を遮断することができた。その実験では、Ｆａｂ０３０２に基づくいずれのヒト化抗体もｃＡｂ０３０２の遮断活性と比較して類似する遮断活性を示さなかった。
【０２００】
ＩＣ５０の計算
表４は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）の非線形回帰（曲線適合）分析アルゴリズムを用いて計算した、各ヒト化抗体によるリガンド誘導性ＣＳＦ１Ｒリン酸化抑制のＩＣ５０を示している。また、表４は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社）の非線形回帰（曲線適合）分析アルゴリズムを用いて計算した、各ヒト化抗体によるＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへのリガンド結合の遮断のＩＣ５０も示している。最後に、表４は、対応するマウスアミノ酸残基に復帰変異した、各ヒト化抗体の軽鎖および重鎖のフレームワーク領域内のアミノ酸の数を示している。例えば、ヒト化抗体ｈ０３０１Ｌ１Ｈ１は、マウスアミノ酸に復帰変異した軽鎖フレームワーク領域内のアミノ酸１個、およびマウスアミノ酸に復帰変異した重鎖フレームワーク領域内のアミノ酸１個を有する。図１および２を参照すると、Ｋａｂａｔ番号付けに従って、軽鎖フレームワーク内の復帰変異したアミノ酸はフレームワーク１の１位にあり、重鎖における復帰変異したアミノ酸はフレームワーク３の７１位にある（図１Ｂを参照）。
【０２０１】
（表４）ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の遮断活性
0006008842.tif 000005
【０２０２】
実施例８：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体結合定数
各ヒト化抗体について、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合のｋａ、ｋｄ、およびＫＤを以下のように測定した。
【０２０３】
抗ＣＳＦ１Ｒヒト化抗体のＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対する結合反応速度をＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｐｌａｓｍｏｎ  Ｒｅｓｏｎｏｎａｎｃｅ（ＳＰＲ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国ニューヨーク州ピスカタウェイ）を用いて測定した。ｈＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ．５０６（配列番号５）結合のＲｍａｘ値が１００ＲＵになるように、１５０ＲＵでヒト抗体捕捉キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国ニューヨーク州ピスカタウェイ）を用いて、抗ヒトＩｇＧ抗体で固定化したＣＭ５センサーチップ上に各ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を捕捉した。反応速度値を正確に測定するためには、１５０ＲＵ未満のＲｍａｘ値が推奨される。泳動および希釈用緩衝液として、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝食塩水（ｐＨ７．４）を０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０（ＨＰＳ−Ｐ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国ニューヨーク州ピスカタウェイ）とともに使用した。ｈＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ．５０６を６種の濃度（９０ｎＭ、３０ｎＭ、１０ｎＭ、３．３３ｎＭ、１．１１ｎＭ、および０ｎＭ）で２分間注入し、解離を５分間観察して、ヒト化抗体／ｈＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤの結合反応速度パラメータを測定した。ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤの各Ｆａｂの会合定数、解離定数、親和性、および結合能力は、１：１結合モデルを用い、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアパッケージを用いて計算した。
【０２０４】
反応速度測定結果を表５に示す。
【０２０５】
（表５）ヒトＣＳＦ１Ｒに対するヒト化抗体結合親和性
0006008842.tif 000006
【０２０６】
２個以外の全てのヒト化抗体は、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対してナノモル以下の結合親和性を示し、残り２個のヒト化抗体は、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤに対して２ｎＭ未満の結合親和性を示した。
【０２０７】
実施例９：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はリガンド誘導性のリン酸化を遮断する
各ヒト化抗体についてのＣＳＦ１Ｒ結合およびリガンド抑制、ならびに免疫原性の可能性を含む上記のデータに基づき、さらなる研究用に３個のヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１を選択した。
【０２０８】
０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１がそれぞれ細胞表面上のＣＳＦ１Ｒに結合することを確認した後（データは示さず）、実施例６に記載するように、ＣＨＯ細胞においてリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を遮断する能力について、これら各抗体を試験した。
【０２０９】
その実験の結果を図１０に示す。試験した３個全てのヒト化抗体は、ＣＨＯ細胞において、ＣＳＦ１ＲのＣＳＦ１誘導性（Ａ）およびＩＬ３４誘導性（Ｂ）のリン酸化をいずれも遮断した。表６に、各抗体のリガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化遮断のＩＣ５０を示す。
【０２１０】
（表６）ヒト化抗体のリガンド誘導性リン酸化遮断ＩＣ５０
0006008842.tif 000007
【０２１１】
実施例１０：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は一次ヒト単球のリガンド誘導性増殖／生存反応を遮断する
リガンド誘導性の単球の増殖／生存反応を遮断する能力について、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１を以下のように試験した。
【０２１２】
製造者の取扱説明書に従って、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅクッション（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上への遠心分離により、健康なドナーの血液からヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。続いて、４８．５％  Ｐｅｒｃｏｌｌ（商標）クッション（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上への遠心分離により、回収したＰＢＭＣ画分から末梢血単球を単離した。Ｐｅｒｃｏｌｌ（商標）クッションから回収後、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、ヒト化抗体０３０１−Ｌ１Ｈ０、またはヒト化抗体０３１１−Ｌ０Ｈ１の連続希釈物の存在下または不在下で、１６２ｐＭ  組換えヒトＣＳＦ１または１．６ｎＭ  組換えヒトＩＬ３４（両者ともＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）で精製した末梢血単球を刺激した。３７℃で４８時間インキュベーション後、製造者の取扱説明書に従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いて、個々の培養物の相対細胞ＡＴＰ含有量を判定した。この検定において、相対細胞ＡＴＰ含有量は、培養物中の生存細胞の数と正比例し、したがって単球の増殖／生存反応を反映している。
【０２１３】
その実験の結果を図１１に示す。試験した３個全てのヒト化抗体は、ＣＳＦ１（Ａ）またはＩＬ３４（Ｂ）刺激後の単球の増殖／生存反応を遮断することができた。表７に、各抗体について、リガンド誘導性の単球増殖／生存反応の遮断のＩＣ５０を示す。表７に示す値は、試験した３例の異なる一次ドナーから観察された範囲を表している。
【０２１４】
（表７）ヒト化抗体の単球の増殖／生存遮断ＩＣ５０
0006008842.tif 000008
【０２１５】
実施例１１：ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は一次ヒト単球の増殖または生存反応を直接刺激しない
一次単球の増殖および／または生存を直接刺激する能力について、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、０３０１−Ｌ１Ｈ０、および０３１１−Ｌ０Ｈ１を以下のように試験した。
【０２１６】
実施例１０に記載のように、ヒト末梢血単球を単離した。外因性ＣＳＦまたは外因性ＩＬ３４による刺激の不在下で、ヒト化抗体０３０１−Ｌ０Ｈ０、ヒト化抗体０３０１−Ｌ１Ｈ０、またはヒト化抗体０３１１−Ｌ０Ｈ１の連続希釈物を単球に添加した。３７℃で４８時間インキュベーション後、実施例１０と同様に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いて、個々の培養物の相対ＡＴＰ含有量を判定した。この実験は、３例の異なるドナーからの末梢血単球に対して実施した。
【０２１７】
その実験の結果を図１２に示す。試験したいずれの一次単球調製物においても、いずれのヒト化抗体も一次単球の増殖または生存を刺激しなかった。
【０２１８】
配列表
表８は、本明細書で説明する一定の配列を示す。全てのポリペプチドおよび抗体の配列は、特に指示しない限りリーダー配列を含まずに示される。
【０２１９】
（表８）配列および説明
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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