(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）４年根紅尾参に５０％酒精を添加して紅尾参酒精抽出物を製造するステップ；
ｂ）前記ａ）ステップの紅尾参酒精抽出物を冷却した後、ろ過するステップ；
ｃ）前記ｂ）ステップのろ液を２５〜３０ブリックス（Ｂｒｉｘ）まで濃縮して酒精を除去するステップ；
ｄ）前記ｃ）ステップの濃縮液を希釈し、ｐｅｃｔｉｎａｓｅ、ｐｅｃｔｉｎ  ｌｙａｓｅ、ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ及びｅｎｄｏａｒａｂｉｎａｓｅを含有する第１の酵素、ｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ及びｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅを含有する第２の酵素、ｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｐｒｅｔｅａｓｅ及びｎａｒｉｎｇｉｎａｓｅを含有する第３の酵素、ｐｅｃｔｉｎ  ｅｓｔｅｒａｓｅ、ｐｅｃｔｉｎ  ｄｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ｃｅｌｌｕｌａｓｅ及びｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅを含有する第４の酵素並びにｐｅｃｔｉｎａｓｅを含有する第５の酵素からなる群から選択された３種の酵素の組み合わせを濃度１〜３％の範囲で５０℃で４８〜７２時間の間処理してサポニンを転換させるステップ；
ｅ）前記ｄ）ステップの酵素反応液にラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）ＨＹ７８０２菌株（寄託番号：ＫＣＴＣ  １２０９７ＢＰ）を接種して発酵させるステップ；
ｆ）前記ｅ）ステップの発酵液を加熱してｄ）ステップの酵素を不活性化させるステップ；
ｇ）前記ｆ）ステップの酵素が不活性化された発酵液を７０〜８０ブリックス（Ｂｒｉｘ）まで減圧濃縮するステップ；及び
ｈ）前記ｇ）ステップの濃縮液を殺菌するステップ
を含むことを特徴とする化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液の製造方法。
【請求項２】
前記ａ）ステップの紅尾参酒精抽出物の製造は、紅尾参重量の２０倍の５０％酒精を用いて８０℃で６時間の間３回抽出することを特徴とする請求項１に記載の発酵紅参濃縮液の製造方法。
【請求項３】
前記ｂ）ステップの紅尾参酒精抽出物の冷却は、４０〜５０℃まで行い、ろ過は、パーライト（ｐｅｒｌｉｔｅ）を用いることを特徴とする請求項１に記載の発酵紅参濃縮液の製造方法。
【請求項４】
前記ｄ）ステップの３種の酵素の組み合わせは、前記第１の酵素、前記第２の酵素及び前記第５の酵素の組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の発酵紅参濃縮液の製造方法。
【請求項５】
前記ｆ）ステップの酵素の不活性化は、９０℃で１０分間実施することを特徴とする請求項１に記載の発酵紅参濃縮液の製造方法。
【請求項６】
前記ｈ）ステップの殺菌は、９０℃で２時間の間実施することを特徴とする請求項１に記載の発酵紅参濃縮液の製造方法。
【請求項７】
請求項１の方法で製造された化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含む機能性飲料。
【請求項８】
請求項１の方法で製造された化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含む健康機能食品。
【請求項９】
請求項１の方法で製造された化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含む機能性化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵素転換と乳酸菌発酵を用い、化合物Ｋの含量が強化された発酵紅参濃縮液の製造方法及びその製造方法により製造された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する製品に関し、さらに詳細には、紅尾参を酒精で抽出し、その抽出物を自社選定した食用可能な複合酵素に転換した後、キムチから分離した乳酸菌を接種、発酵させることによって、様々な機能の生体有効性の高い化合物Ｋの含量が強化された発酵紅参濃縮液の製造方法及びその製造方法により製造された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
人参（高麗人参）及び紅参（加工した高麗人参）の効能成分として知られているものは、サポニン（ｓａｐｏｎｉｎ）である。人参及び紅参のサポニンは、配糖体の一種であって、他の植物から発見されるサポニンとは異なる特異な化学構造を有しており、その効能にも大きな差がある。人参及び紅参のサポニンは、他の植物界のサポニンと区別するために、人参（ｇｉｎｓｅｎｇ）配糖体（ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）という意味で'ジンセノサイド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）'と呼ぶ。近来、分析技術の発達によってこれまで３０種余りのジンセノサイド化学構造が明らかになった。これは、西洋参１４種、中国の田七人参１５種に比べて遥かに多くの種類が入っている。ジンセノサイドは、ｄａｍｍａｒａｎｅ骨格を有する配糖体に、一種の化学構造上、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３位にどの種類の糖が幾つ付くのかによってジオール系（ＰＰＤ）とトリオール系（ＰＰＴ）のジンセノサイド等に分類される。加工過程中、このようなジンセノサイドに高い圧力を加えたり、酵素添加、または加熱をしたりすると、糖の一部が離れ落ちることもあり、新たな二重結合が生じて特異なジンセノサイドが作られる。従って、人参の加工方法によって種々の特異ジンセノサイドが含有された製品が発売されている。
【０００３】
人参サポニンが体内に吸収されるためには、ジオール系ジンセノサイドは、２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（２０（Ｓ）−ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ２０−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ、ＦＧＭ  １、以下、'化合物Ｋ'という）に、そして、トリオール系ジンセノサイドは、２０（Ｓ）−プロトパナキサトリオール（２０（Ｓ）−ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ、ＦＧＭ  ４）に分解された後、体内に吸収されて効能を発揮するが、熱や酸、圧力、消化酵素等によっては少量のみ転換、吸収されるだけである。近来、研究結果によると、人参サポニンがこのような最終産物に転換するとき、腸内微生物が必要となることが明らかになった。
【０００４】
経口服用したサポニンが吸収されるには、腸内微生物により分解されなければならないが、Ｐｒｉｖｏｔｅｌｌａ  ｏｒｉｓ菌が、ジンセノサイド含むサポニンを代謝する代表的な菌であり、それ以外に乳酸菌等の種々の有益菌がサポニンの代謝に関与する。一般人の人糞を調査して推定した研究において、健常人のうち３０％はサポニンを代謝することのできる菌が全くなく、菌のある残りの７０％の中でも代謝能力に差があり、ジオール系とトリオール系サポニンをいずれも正常に代謝できるヒトは少数に過ぎない。特に、持続的な抗癌治療や薬剤を服用する場合は、腸内細菌叢が安定的でないため、サポニンの代謝率がさらに落ちることが報告された。このような点から、既に外部で腸内微生物で発酵し、個人の身体の状況に関係なく人参の効能成分を吸収できる形態に転換して誰にも効果があるように発酵紅参を開発することは、非常に好ましいと見られる。
【０００５】
これまで言及したように、全ての人参サポニンは、腸内微生物の分解を通して最終代謝物に代謝されて始めて吸収される。しかし、ヒトの腸内微生物細菌叢は均一でもなく、時々刻々に変わるものであるため、個人によって人参サポニン吸収率が異なることが明らかになった。従って、これを克服できる方法が正に人参及び紅参を腸内微生物で発酵させて直接体内に吸収させる方案である。発酵紅参には、このような腸内微生物の差による吸収と効能の差を減らすために、紅参を予め特有の微生物で発酵させることで吸収が容易な有用サポニンに転換し、個人差や民族差を克服して人参効能の標準化をなすことができるという長所がある。このような理由のため、最近、韓国内で発酵紅参に係る製品が発売されており、これに関する効能が研究されている。
【０００６】
発酵紅参は、サポニンの均衡的な代謝にも役立つ。ジオール系サポニンは、身体を安定化させ、免疫力を高め、過度なものは低くして正常化させる作用がある。トリオール系サポニンの場合、血液循環を良くし、気力を高め、活力を与える。このように互いに補完し、相反する作用を有している。仮に、腸内細菌叢が不安定でジオール系とトリオール系サポニンの一方だけを代謝させるか、またはいずれも代謝できない場合、サポニンの吸収に不均衡が生じ、従って、人参を服用しても効果が落ちることがあり、一部のヒトでは熱の発生や息苦しさ等の不便な経験をすることとなる。しかし、外部でジオール系とトリオール系サポニンを均衡的に代謝させて身体に吸収させた場合は、人参及び紅参が持っている本来の効能が全て期待でき、その他の副作用等が顕著に減るという研究結果が報告されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、紅尾参からの酵素転換とキムチ由来の乳酸菌を用いた発酵を通して、化合物Ｋの含量が強化された発酵紅参濃縮液を製造する方法及びその製造方法により製造された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する製品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記のような目的を達成するために、本発明は、ａ）４年根紅尾参に５０％酒精を添加して紅尾参酒精抽出物を製造するステップ；ｂ）前記ａ）ステップの紅尾参酒精抽出物を冷却した後、ろ過するステップ；ｃ）前記ｂ）ステップのろ液を２５〜３０ブリックス（Ｂｒｉｘ）まで濃縮して酒精を除去するステップ；ｄ）前記ｃ）ステップの濃縮液を希釈し、Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ、Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ  ＫＮ、Ｃｒｙｓｔａｌｚｙｍｅ  ＡＰＸＬ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘからなる群から選択された３種の酵素の組み合わせを濃度１〜３％の範囲で５０℃で４８〜７２時間の間処理してサポニンを転換させるステップ；ｅ）前記ｄ）ステップの酵素反応液にラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）ＨＹ７８０２菌株を接種して発酵させるステップ；ｆ）前記ｅ）ステップの発酵液を加熱してｄ）ステップの酵素を不活性化させるステップ；ｇ）前記ｆ）ステップの酵素が不活性化された発酵液を７０〜８０ブリックス（Ｂｒｉｘ）まで減圧濃縮するステップ；及びｈ）前記ｇ）ステップの濃縮液を殺菌するステップを含む、化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液の製造方法を提供することを特徴とする。
【０００９】
前記ａ）ステップの紅尾参酒精抽出物の製造は、紅尾参重量の２０倍の５０％酒精を用いて８０℃で６時間の間３回抽出することが好ましい。一般に、紅参抽出の際、１０〜２０倍の酒精を用いることが知られており、収率を最大にするために、紅参重量の２０倍で用いて３回抽出する。
【００１０】
前記ｂ）ステップの紅尾参酒精抽出物の冷却は、４０〜５０℃まで行い、ろ過は、パーライト（ｐｅｒｌｉｔｅ）を用いることが好ましい。パーライトろ過は、一般に、微細な懸濁物やコロイダル粒子を除去するためであり、ジンセノサイド成分は、ろ過によって含量の変化がないからである。４０〜５０℃に冷却する理由は、抽出温度である８０℃では抽出物の溶解度等の原因によってろ過効果が半減するためである。
【００１１】
また、前記ｂ）ステップのろ液を２５〜３０ブリックス（Ｂｒｉｘ）まで濃縮して酒精を除去することが好ましい。最小限２５ブリックス（Ｂｒｉｘ）まで濃縮をしないと、残っている酒精が酵素反応を阻害することがある。
【００１２】
また、前記ｄ）ステップの３種の酵素の組み合わせは、Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘの酵素の組み合わせであることが好ましい。
【００１３】
前記ｆ）ステップの酵素の不活性化は、９０℃で１０分間実施することが好ましい。酵素を不活性化することにより、次のステップである乳酸菌発酵時に乳酸菌の生育阻害の可能性をなくすことができるためである。
【００１４】
前記ｈ）ステップの殺菌は、９０℃で２時間の間実施することが好ましい。
【００１５】
一方、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する機能性飲料は、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液と混合果汁シロップ及び水を一定の比率で組み合わせて１５０ｂａｒで均質してから、１０℃以下に冷却した後、ガラス瓶、ペットボトル等、小包装容器に包装して製造する。
【００１６】
また、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する健康機能食品は、化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を含むこと以外に、栄養補助成分としてビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ５、Ｂ６、Ｅ及び酢酸エステル、ニコチン酸アミド、オリゴ糖等が添加されてもよく、その他の食品添加物が添加されても構わない。
【００１７】
また、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する機能性化粧料組成物は、化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を通常の化粧料組成物の製造方法に添加して製造される。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液は、酵素転換と乳酸菌発酵過程を通してジンセノサイドを変換させることで、人体内で消化吸収率が増大された化合物Ｋを多量に含有している健康機能食品または食品素材として活用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明において、化合物Ｋの転換活性を有する酵素を選抜するために反応物をＴＬＣ展開した写真である。
【図２】本発明において、β−グルコシダーゼ（ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）活性を示す菌株のうちジンセノサイド転換能を示す菌株を選抜するために反応物をＴＬＣ展開した写真である。
【図３】本発明の酵素転換及び乳酸菌発酵による発酵紅参濃縮液の製造方法の好ましい実施例を示す工程図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、実施例を通じて、本発明をさらに詳細に説明する。しかし、下記実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の技術的思想の範囲内で当業者による通常の変化が可能である。
【００２１】
＜実施例１＞
紅参原料の選定
【００２２】
豊基人参農協から購入した６年根本参（６年間生育した高麗人参の主根）、６年根尾参（６年間生育した高麗人参の細根）、４年根本参、４年根尾参を購入して用いた。
【００２３】
６年根紅参の本参１００ｇ、６年根紅参の尾参１００ｇ、４年根紅参の本参１００ｇ、４年根紅参の尾参１００ｇそれぞれに７０％酒精２Ｌを入れ、８０℃で還流抽出して減圧濃縮後、凍結乾燥した。
【００２４】
前記方法により得られた酒精抽出物でジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｂ１及びＲｇ１の含量を測定し、結果を下記表１に示した。
【００２５】
【表１】
0005917772.tif 000002
【００２６】
前記表１から確認できるように、本参に比べて尾参は化合物Ｋの主要基質となるＲｂ１の含量が多く、６年根より４年根で含量がさらに多かった。従って、化合物Ｋの含量が強化された発酵紅参濃縮液の原料として４年根紅尾参（高麗人参を蒸した後、乾燥させたもの）を選択した。
【００２７】
＜実施例２＞
使用酵素の選定
【００２８】
化合物Ｋの主要基質となるジンセノサイドＲｂ１を用いた酵素反応を通じて食用可能な酵素１３種（Ｓｕｍｉｚｙｍ  ＡＣ、ＴＧ−Ｂ、Ｌｕｍｉｃｅｌｌ  ＹＸ１、Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ  ＫＮ、Ｒａｐｉｄａｓｅ  ＴＦ、Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ  ＵｌｔｒａＳＰ、Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｆｉｌｔｒａｓｅ  Ｐｒｅｍｉｕｍ、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ  Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ  ＦＥ、Ｃｒｙｓｔａｌｚｙｍｅ  ＡＰＸＬ、Ｒａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０ＭＡｘ、ＧＣ２２０、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ  ＣＸＸＬ）から化合物Ｋを生成する酵素７種を選別した。
【００２９】
前記の反応は、１％（ｗ／ｖ）のジンセノサイドＲｂｌ水溶液１ｍｌに１３種の酵素それぞれを、総反応体積１ｍｌの５％である０．０５ｍｌ添加し、５０℃、２００ｒｐｍで２４時間反応させ、総反応体積１ｍｌの同量の水飽和ブタノール（ｂｕｔａｎｏｌ）でジンセノサイドを抽出した後、ＴＬＣ（ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）に点滴及び展開して化合物Ｋの生成有無を確認した。
【００３０】
その結果を図１に示した。縦軸の"Ｃ−Ｋ"は、"化合物Ｋ"を示す。"ＡＣ"は、"Ｓｕｍｉｚｙｍ  ＡＣ"を示す。
【００３１】
図１から確認できるように、Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５（製造会社：ＤＳＭ、酵素の種類：ｐｅｃｔｉｎａｓｅ、ｐｅｃｔｉｎ  ｌｙａｓｅ、ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ  ａｎｄ  ｅｎｄｏａｒａｂｉｎａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ  Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ  ＦＥ（製造会社：Ｇｅｎｅｎｃｏｒ、酵素の種類：ｐｅｃｔｉｎａｓｅ、ｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｈｅｎｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅ  ａｎｄ  ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、Ｓｕｍｙｚｙｍｅ  ＡＣ（製造会社：ＳｈｉｎＮｉｐｐｏｎ、酵素の種類：ｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ  ＫＮ（製造会社：ＳｈｉｎＮｉｐｐｏｎ、酵素の種類：ｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅ、ｐｒｅｔｅａｓｅ  ａｎｄ  ｎａｒｉｎｇｉｎａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、Ｒａｐｉｄａｓｅ  ＴＦ（製造会社：ＤＳＭ、酵素の種類：ｐｅｃｔｉｎａｓｅ  ａｎｄ  ｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、Ｃｒｙｓｔａｌｚｙｍｅ  ＡＰＸＬ（製造会社：ＤＳＭ、酵素の種類：ｐｅｃｔｉｎ  ｅｓｔｅｒａｓｅ、ｐｅｃｔｉｎ  ｄｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ｃｅｌｌｕｌａｓｅ  ａｎｄ  ｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘ（製造会社：ＹＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、酵素の種類：ｐｅｃｔｉｎａｓｅ、酵素生産微生物：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）の計７種の化合物Ｋへの転換酵素を選別した。
【００３２】
＜実施例３＞
選別酵素の最適な組み合わせの選定
【００３３】
選別された前記実施例２の７種の酵素のうちＭｕｌｔｉｆｅｃｔ  Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ  ＦＥは、Ｇｅｎｅｎｃｏｒ社の生産中止により製品の生産に適用が不可能であって除外し、Ｒａｐｉｄａｓｅ  ＴＦとＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０ＭａｘのうちＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘを選定した。この計５種の酵素Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ、Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ  ＫＮ、Ｃｒｙｓｔａｌｚｙｍｅ  ＡＰＸＬ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘから最適な組み合わせを見つける実験を行った。
【００３４】
前記実施例１の１０％（ｗ／ｖ）の４年根紅尾参酒精抽出物１０ｍｌに前記５種類の酵素のうち３種類の酵素の組み合わせをそれぞれ１％ずつ、４年根紅尾参酒精抽出物の総体積１０ｍｌの３％である０．３ｍｌ添加し、５０℃で２００ｒｐｍで２４時間反応させ、反応物の化合物ＫをＨＰＬＣを通して定量した。
【００３５】
その結果を下記表２に示した。
【００３６】
【表２】
0005917772.tif 000003
【００３７】
前記表２から確認できるように、化合物Ｋの生成能が最も良いＣｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘの酵素の組み合わせを選定した。
【００３８】
＜実施例４＞
選別酵素組み合わせの最適な条件の決定
【００３９】
前記実施例３で選別された３種の酵素組み合わせ、Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘの最適な転換条件を設定するために、基質である前記実施例１の４年根紅尾参酒精抽出物の濃度を５％、１０％及び１５％、前記３種の酵素（Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘの組み合わせ）の濃度を１％（Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５  ０．３３％、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ  ０．３３％及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘ  ０．３４％）、２％（Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５  ０．６７％、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ  ０．６６％及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘ  ０．６７％）及び３％（Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５  １％、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ  １％及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘ  １％）、反応時間を２４時間、４８時間及び７２時間のうちから選択された条件で、５０℃、２００ｒｐｍで反応させ、反応表面分析法（ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｍｅｔｈｏｌｏｇｙ）を用いて下記表３のように最適な転換条件を決定した。
【００４０】
【表３】
0005917772.tif 000004
【００４１】
前記表３から確認できるように、４年根紅尾参酒精抽出物５％、酵素組み合わせの濃度３％及び反応時間４８時間（サンプル２）の場合に最大の化合物Ｋの生成量を示した。
【００４２】
以後、７２時間の間反応して化合物Ｋの生成量を測定した結果、４８時間の反応と比較したとき、その生成量が７．４３ｍｇ／ｇと多少増加する結果であった。
【００４３】
従って、発酵紅参濃縮液の製造時の反応条件を、４年根紅尾参酒精抽出物５％、酵素組み合わせの濃度３％及び反応時間７２時間と決定した。
【００４４】
＜実施例５＞
５−１．キムチ乳酸菌からのジンセノサイド転換乳酸菌の分離
【００４５】
多様な地域の家庭及び飲食店から種々のキムチを収集し、各キムチのキムチ液を滅菌水を用いて希釈した後、ＭＲＳ  Ａｇａｒ培地に塗抹して３０℃で培養した後、菌株の形状、色、透明度、大きさ、外形構造等を目視で観察し、キムチ乳酸菌を１次選抜した。
【００４６】
前記の方法を通じて１次選抜された１０８種の菌株をβ−グルコシダーゼ（β−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）活性、ジンセノサイド転換能及び紅参抽出液での成長能を通して最高の転換能及び成長能を示す１種の乳酸菌を最終選抜した。
【００４７】
先ず、β−グルコシダーゼ活性を有する乳酸菌を選抜するために１次選抜された乳酸菌培養物（菌体を含む）０．２ｍｌのそれぞれに最終濃度が１０ｍＭとなるようにｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ溶液０．２ｍｌを添加し、３７℃で１時間の間反応させた。１．６ｍｌの０．５Ｍ炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）を添加して反応を終了させ、４２０ｎｍで吸光度を測定してＯＤ４２０値が１．５以上である菌株８種を選抜した。
【００４８】
その結果を下記表４に示した。
【００４９】
【表４】
0005917772.tif 000005
【００５０】
前記表４の菌株８種を対象にジンセノサイドＲｂ１の転換能を測定するために、１％（ｗ／ｖ）のジンセノサイドＲｂ１水溶液１ｍｌに１ｍｌの前記８種の乳酸菌培養物それぞれを添加して３７℃、２００ｒｐｍで２４時間反応させ、ＴＬＣに点滴及び展開した後、ジンセノサイド転換能を示した４種の菌株を選抜した。
【００５１】
その結果を図２に示した。
【００５２】
図２から確認できるように、ジンセノサイド転換能を示した４種の菌株は、＃２５、＃３１、＃３５、＃６６であることが分かった。
【００５３】
前記選抜された４種の菌株を１０％紅尾参抽出物に接種してから３７℃で４８時間培養後、成長能を観察した。
【００５４】
その結果を下記の表５に示した。
【００５５】
【表５】
0005917772.tif 000006
【００５６】
前記表５から確認できるように、最高の成長能を示した菌株１種＃３５を最終選抜した。
【００５７】
５−２．分離されたキムチ乳酸菌の同定
【００５８】
前記５−１の選別された菌株＃３５をＭＲＳ培地で培養した後、ゲノムＤＮＡを分離した。１６ｒＤＮＡ部位は、始発体（ｐｒｉｍｅｒ）としてＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）を用いて増幅させた。始発体配列は、５′−ＡＧＡ  ＧＴＴ  ＴＧＡ  ＴＣＣ  ＴＧＧ  ＣＴＣ  ＡＧ−３′（順方向）と、５′−ＧＧＴ  ＴＡＣ  ＣＴＴ  ＧＴＴ  ＡＣＧ  ＡＣＴ  Ｔ−３′（逆方向）を用いた。ＰＣＲ反応のために抽出したゲノムＤＮＡ  ５０ｎｇ、各ｄＮＴＰｓ  １００μＭ、始発体各０．２μＭ、１×ｅｎｚｙｍｅ  ｂｕｆｆｅｒ、Ｔａｑ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ２ｕｎｉｔを入れ、蒸留水を全体体積が５０μｌとなるように追加した。増幅反応は、初期に９４℃で９０秒間変性させた後、２８サイクルで９４℃で３０秒、４２℃で６０秒、７２℃で６０秒実施し、さらに７２℃で５分延長した。ＰＣＲ産物は、１．５％アガロースゲル（ａｇａｒｏｓｅ  ｇｅｌ）で分離した後、溶出して株式会社コスモジーンテックに塩基配列分析を依頼し、結果を得た。その得られた結果をＢＬＳＡＴ  Ｓｅａｒｃｈを通して分析したところ、既存のデータベース（Ｄａｔａ  Ｂａｓｅ）に載せられているラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）菌株と９９％以上の相同性を示した。
【００５９】
本発明に係る乳酸菌の特性は、次のとおりである。
【００６０】
１）菌の形態
エム・アール・エス（ＭＲＳ）寒天平板培地で３７℃、２日間培養した時の菌の特性
（１）細胞の形態：桿菌
（２）運動性：なし
（３）胞子形成能：なし
（４）グラム（Ｇｒａｍ）染色：陽性
【００６１】
２）菌コロニーの形態
エム・アール・エス（ＭＲＳ）寒天平板培地で３７℃、２日間培養した時の菌コロニーの形態
（１）形状：円形
（２）隆起：凸
（３）表面：滑らか（ｓｍｏｏｔｈ）
【００６２】
３）生理的性質
（１）最適な生育温度：３６〜３８℃
（２）最適な生育ｐＨ：５．０〜７．０
（３）酸素への影響：通性嫌気性
【００６３】
４）カタラーゼ：−
【００６４】
５）ガス形成有無：−
【００６５】
６）１５℃で生育：−
【００６６】
７）４５℃で生育：＋
【００６７】
８）インドール生産：−
【００６８】
９）乳酸生産：＋
【００６９】
以上のような本発明の新菌株の形態学的特性、生理的及び生長特性と１６Ｓ  ｒＤＮＡ分析を通した分子遺伝学的な方法に基づいて同定した結果、本発明の新菌株は、ラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）に属するということが分かった。従って、本発明者らは、本発明の新菌株をラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）ＨＹ７８０２と命名し、韓国生命工学研究院生物資源センターに２０１１年１２月６日付で寄託した（寄託番号：ＫＣＴＣ  １２０９７ＢＰ）。
【００７０】
＜実施例６＞
発酵紅参濃縮液の製造
【００７１】
図３の工程図のように、本発明の発酵紅参濃縮液の製造方法は、次のとおりである。
（１）原料参の計量
豊基人参農協から購入した４年根紅尾参１００ｋｇを用いた。
【００７２】
（２）抽出
前記紅尾参に食品原料として用いることのできる５０％酒精２０００Ｌずつ（酒精１０００Ｌ＋精製水１０００Ｌ）を添加し、８０℃で６時間の間３回抽出した。
【００７３】
（３）ろ過
前記抽出物を５０℃に冷却した後、パーライト（ｐｅｒｌｉｔｅ）を用いてろ過した。
【００７４】
（４）濃縮
前記ろ液を３０ブリックス（Ｂｒｉｘ）に減圧濃縮した。
【００７５】
（５）酵素転換
前記減圧濃縮液に精製水を添加して５ブリックス（Ｂｒｉｘ）となるように希釈した後、ここに総体積の０．８％のＣｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘの酵素組み合わせを添加し、５０℃で７２時間の間反応させた。
【００７６】
（６）乳酸菌発酵
前記酵素反応液にキムチ由来乳酸菌のラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）ＨＹ７８０２を接種し、３７℃で発酵させた。
【００７７】
（７）酵素失活
前記発酵液を９０℃で１０分間加熱し、前記酵素Ｃｙｔｏｌａｓｅ  ＰＣＬ５、Ｓｕｍｉｚｙｍｅ  ＡＣ及びＲａｐｉｄａｓｅ  Ｃ８０Ｍａｘを不活性化した。
【００７８】
（８）濃縮
前記酵素が不活性化された発酵液を７５ブリックス（Ｂｒｉｘ）となるように減圧濃縮した。
【００７９】
（９）殺菌及び包装
前記濃縮液を９０℃で２時間の間殺菌した後、包装し、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を製造した。
【００８０】
＜実施例７＞
化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する機能性飲料の製造
【００８１】
本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液と混合果汁シロップとで構成された機能性飲料を製造する方法は、次のとおりである。
【００８２】
先ず、混合果汁シロップは、液状果糖１３重量％、白砂糖２．５重量％、茶色砂糖２．５重量％、混合果汁濃縮液５６Ｂｒｉｘｏ１０．９重量％、ペクチン１．０重量％、フレッシュフルーツミックスエッセンス０．１重量％及び精製水７０重量％を３０〜３５℃で撹拌して混合してからＵＨＴ熱処理（１３５℃で２秒間殺菌）した後、冷却して製造した。
【００８３】
そして、前記の方法で製造された混合果汁シロップ３０．４重量％と前記実施例６の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液０．１重量％及び残りの精製水６９．５重量％を組み合わせて１５０ｂａｒで均質してから１０℃以下に冷却した後、それをガラス瓶、ペットボトル等の小包装容器に包装し、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する機能性飲料を製造した。
【００８４】
＜実施例８＞
化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する健康機能食品の製造
【００８５】
前記実施例６の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液０．１重量％に、栄養補助成分（ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ５、Ｂ６、Ｅ、酢酸エステル及びニコチン酸アミド）及びオリゴ糖を、前記実施例６の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液１００重量部に対して１０重量部となるように添加し、高速回転混合器で混合した。前記混合物１００重量部に対して滅菌精製水１０重量部を添加、混合し、直径１〜２ｍｍの顆粒状に成形した。前記成形された顆粒は、４０〜５０℃の真空乾燥機で乾燥させた後、１２〜１４メッシュ（ｍｅｓｈ）を通して均一な顆粒を製造した。前記のように製造された顆粒は、適量ずつ押出成形され、錠剤または粉末となるか、または硬質カプセルに充填され、硬質カプセル製品を製造した。
【００８６】
＜実施例９＞
化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する化粧料組成物の製造
【００８７】
本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する機能性化粧料組成物は、クリーム状であって、プロピレングリコール５重量％を加熱して７０℃に保存した後、ステアリルアルコール８重量％、ステアリン酸２重量％、ステアリン酸コレステロール２重量％、スクアラン４重量％、２−オクチルドデシルアルコール６重量％、ポリオキシエチレンアルコールエステル３重量％、グリセリルモノステアリン酸エステル２重量％の混合物を加えてから予備乳化後、ホモミキサーで均一に乳化し、次に徐々に冷却した後、４５℃で前記実施例６の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液６重量％及び残量の精製水を添加して３２℃まで冷却し、本発明の化合物Ｋが強化された発酵紅参濃縮液を有効成分として含有する機能性化粧料組成物を製造した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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