(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
米糠加水分解物を有効成分とするＳＲＥＢＰ１抑制剤。
【請求項２】
米糠加水分解物が少なくともシクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を含有する請求項１記載のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
【請求項３】
米糠加水分解物が更にβ-シトステロール及び／又はカンペステロールを含有する請求項２記載のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
【請求項４】
米糠加水分解物がシクロアルテノール又はその誘導体を１〜１００質量％含有する請求項１〜３のいずれか１項記載のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
【請求項５】
シクロアルタン型トリテルペン又はそのエステル体若しくは配糖体を有効成分とするＳＲＥＢＰ１抑制剤。
【請求項６】
シクロアルタン型トリテルペンが、シクロアルテノール及び／又は２４−メチレンシクロアルタノールである請求項５記載のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＳＲＥＢＰ１抑制剤及び脂漏性脱毛症の予防又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＳＲＥＢＰ（sterol regulatory element-binding protein）は、コレステロールや脂肪酸の合成を調節する転写因子として知られており、不活性な前駆体型として小胞体膜に結合している。ステロールの枯渇などの特定の条件下になると、ＳＲＥＢＰは特異的なプロテアーゼによって切断され、活性な核移行ドメインが遊離されてＳＲＥ(Sterol responsive element)に結合することができ、標的遺伝子の発現を活性化する（非特許文献１）。
【０００３】
ＳＲＥＢＰには、ＳＲＥＢＰ１ａ、ＳＲＥＢＰ１ｃ及びＳＲＥＢＰ２と呼ばれる３種のアイソフォームが同定されている。ＳＲＥＢＰ１ａ及びＳＲＥＢＰ１ｃは、異なった転写開始点によるスプライシングバリアントであり、これらは同一の遺伝子（Ｓｒｅｂｆ１）からなる（非特許文献２）。これら３つのアイソフォームは、それぞれ違った生体機能を有しており、ＳＲＥＢＰ１ａ、ＳＲＥＢＰ２は特にコレステロール生合成を活性化するのに対し、ＳＲＥＢＰ１ｃは主に脂肪酸生合成に必要な遺伝子の転写を高めることが知られている（非特許文献３）。
【０００４】
近年の研究から、ＳＲＥＢＰ１ｃがヒト頭皮における皮脂腺細胞に発現していることが明らかにされ（非特許文献４）、頭皮皮脂腺の分化や脂質合成において重要な役割を担っていることが明らかとなっている。更に、男性ホルモンによる皮脂腺細胞の活性化は、ＳＲＥＢＰ１の発現亢進や、ＳＲＥＢＰ１に依存的な脂肪酸及びコレステロール合成に関わる酵素の発現亢進を起こすので、それにより過剰に分泌された皮脂が髪の成長の妨げや炎症を引き起こすことも示されている（非特許文献５）。これらのことから、ＳＲＥＢＰ１の抑制は、男性ホルモンによる皮脂腺の過剰な脂質産生の抑制を介して、脂漏性脱毛症などの頭皮トラブルの予防あるいは改善に有効であると考えられる。
【０００５】
また、ＳＲＥＢＰ１はインスリンシグナルと深く関わっていることから（非特許文献６）、糖尿病との関連も指摘されており、肝臓組織でのＳＲＥＢＰ１の発現抑制がインスリン抵抗性改善に寄与するとの報告（非特許文献７）や膵β細胞でのＳＲＥＢＰ１発現を亢進させるとインスリン分泌能に障害が起きるとの報告（非特許文献８）がある。
【０００６】
これまでに、魚油などの高度不飽和脂肪酸を含有する油脂についてＳＲＥＢＰ１発現抑制作用が報告されているものの（非特許文献９）、これらは酸化されやすく、酸化による異臭の発生や風味の悪化などの問題が生じ易い。
【０００７】
一方、米糠は、玄米を精白する際に取り除かれる胚乳以外の部分で、食物繊維（セルロース）、タンパク質、脂質、ビタミン類、ミネラル等の多種の栄養素や、γ−オリザノール、フィチン酸、遊離γ−アミノ酪酸等の機能性成分が含まれている。米糠の抽出物には、抗肥満作用、アディポネクチン分泌促進作用、抗コレステロール作用、抗癌作用、アルコール性肝臓疾患の改善作用等が報告されているが（特許文献１〜２、非特許文献１０〜１２）、米糠とＳＲＥＢＰ１の発現との関係については全く知られてはいない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００６−２５７０６４号公報
【特許文献２】特開２００５−６８１３２号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Hua, X., J Biol Chem., 271; 10379-84 (1996)
【非特許文献２】Shimomura, I., J Clin Invest., 99; 838-45 (1997)
【非特許文献３】Horton, J. D., J Clin Invest., 109; 1125-31 (2002)
【非特許文献４】Harrison, W. J.， J Invest Dermal., 127; 1309-17 (2007)
【非特許文献５】Rosignoli, C.， Exp Dermatol., 12; 480-9 (2003)
【非特許文献６】Shimomura, I.， Mol Cell, 6; 77-86 (2000)
【非特許文献７】Muraoka, T.， Metabolism, 60; 617-628 (2011)
【非特許文献８】Iwasaki, Y.， BBRC, 378; 545-550 (2009)
【非特許文献９】Sekiya, M., Hepatology, 38; 1529-39 (2003)
【非特許文献１０】Chen, CW.， J Nutr., 136; 1472-6 (2006)
【非特許文献１１】Ullah, A., Carcinogenesis, 11; 2219-22 (1990)
【非特許文献１２】Oh, CH., J Med Food, 6; 115-21 (2003)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、安全性に優れ、ＳＲＥＢＰ１の抑制、脂漏性脱毛症等の皮脂脂質異常を伴う頭皮トラブルの予防又は改善効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、食品又はそれらに配合するための素材を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、種々の天然物質について検討した結果、シクロアルテノールに代表されるトリテルペンアルコールに優れたＳＲＥＢＰ１発現抑制作用があり、当該トリテルペンアルコール、或いは当該トリテルペンアルコールを豊富に含む米糠加水分解物がＳＲＥＢＰ１抑制剤、脂漏性脱毛症の予防又は改善剤として有用であることを見出した。
すなわち、本発明は、以下の１）〜１０）に係るものである。
１）米糠加水分解物を有効成分とするＳＲＥＢＰ１抑制剤。
２）米糠加水分解物が少なくともシクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を含有する上記１）のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
３）米糠加水分解物が更にβ-シトステロール及び／又はカンペステロールを含有する上記２）のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
４）米糠加水分解物がシクロアルテノール又はその誘導体を1〜１００質量％含有する上記１）〜３）のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
５）シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を有効成分とするＳＲＥＢＰ１抑制剤。
６）シクロアルタン型トリテルペンが、シクロアルテノール及び／又は２４−メチレンシクロアルタノールである上記５）のＳＲＥＢＰ１抑制剤。
７）米糠加水分解物を有効成分とする脂漏性脱毛症の予防又は改善剤。
８）米糠加水分解物がシクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を含有する上記７）の脂漏性脱毛症の予防又は改善剤。
９）米糠加水分解物が更にβ-シトステロール及び／又はカンペステロールを含有する上記８）の脂漏性脱毛症の予防又は改善剤。
１０）米糠加水分解物がシクロアルテノール又はその誘導体を1〜１００質量％含有する上記７）〜９）の脂漏性脱毛症の予防又は改善剤。
１１）シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を有効成分とする脂漏性脱毛症の予防又は改善剤。
１２）シクロアルタン型トリテルペンが、シクロアルテノール及び／又は２４−メチレンシクロアルタノールである上記１１）の脂漏性脱毛症の予防又は改善剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のＳＲＥＢＰ１抑制剤、脂漏性脱毛症の予防又は改善剤によれば、安全に、脂漏性脱毛症等の皮脂脂質異常を伴う頭皮トラブルの予防又は改善を図ることできる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】米糠加水分解物摂取によるＳＲＥＢＰ１遺伝子の発現変化を示すグラフ。
【図２】米糠加水分解物中に含まれるステロール群添加によるＳＲＥＢＰ１遺伝子の発現変化を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
玄米は、種皮、果皮、胚乳及び胚芽からなり、胚乳組織の外層には糊粉層がある。玄米を精白する際、その度合いによって糊粉層までが米糠（生糠）として排除される。
本発明における米糠としては、玄米を精白する際に取り除かれる胚乳以外の部分（種皮、果皮、澱粉層及び胚芽）の混合物を用いてもよく、いずれかを分離したものを用いてもよい。米糠の原料となる米の分類・種類に特に限定はなく、例えばジャポニカ種、インディカ種、ジャバニカ種の糯米、粳米、赤米、紫黒米等いずれも用いることができる。
【００１５】
本発明の米糠加水分解物としては、米糠を、そのまま或いは乾燥、凍結乾燥した後に適当に粉砕加工したもの又はこれらの抽出物（米糠抽出物）を、酵素、酸、アルカリ等によって加水分解したものが挙げられる。ここで、米糠抽出物には、米糠油等が包含される。
【００１６】
米糠抽出物を得るための抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させるか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出の他に、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、あるいは圧搾して抽出物を得る圧搾法等を用いることができる。抽出は、例えば米糠１質量部に対して１〜５０質量部の溶剤を用い、室温（２５℃）〜１００℃で数時間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましい。
【００１７】
例えば、米糠油は、米糠および米胚芽を原料として抽出される植物油であり、抽出法としては、例えば米糠を圧縮してペレット状にした後、油分を抽出することにより得られる。具体的には、溶剤１００質量部に対して、米糠の凍結乾燥物を１０質量部添加して数時間攪拌抽出し、濾過により固形分を除去したのち、蒸留により溶剤を除去することにより得られる。また、米糠油製造工程である脱酸工程で副生する脱酸フーツや、米糠より抽出されたガンマ−オリザノールの精製品や粗精製品を用いても良い。
【００１８】
溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用でき、溶剤を変えて繰り返し行うことも可能である。このうち、炭化水素類などの脂溶性溶剤を用いるのが好ましく、特にヘキサンを用いるのが好ましい。
【００１９】
また、抽出物の分離精製手段としては、例えば、抽出物を脱ガム処理、活性炭処理、液々分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、精密蒸留等を挙げることができる。
【００２０】
加水分解処理は、酸、アルカリもしくは酵素を用いて行うことができるが、このうちアルカリによる分解処理が、生成物の均一性の点から好ましい。
【００２１】
酸による加水分解処理としては、例えば塩酸、硫酸などを用い、処理液のｐＨを通常ｐＨ０〜１とし、２５〜２００℃で、０．５〜５０時間反応させる方法が挙げられる。
アルカリによる加水分解処理としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウムなどを用い、処理液のｐＨを通常ｐＨ１２〜１４に調整し、    ２５〜２００℃で０．５〜５０時間反応させる方法が挙げられる。
【００２２】
酵素による加水分解において用いられる酵素としては、例えば、リパーゼ、コレステロールエステラーゼ、オリザノールエステラーゼなどが挙げられる。
酵素による加水分解処理は、米糠又は米糠抽出物に対して、適量の上記酵素を、当該酵素の至適ｐＨおよび至適温度付近の条件にて、０．５〜５０時間反応させる方法が挙げられる。
【００２３】
本発明の米糠加水分解物は、上述した方法で製造することができるが、より具体的には、例えば特公昭５５−２４４０、特開２００６‐２７３７６４、特開２００６−２５７０６４号公報に記載されている方法などが挙げられる。このうち、特開２００６−２５７０６４号公報に記載の、米糠をエタノールで加熱溶解（８０℃、１時間）し、濃縮後ヘキサンを加えて溶解し、更に、硫酸を加えてｐＨを３にし、濾過した濾液をエタノールと水酸化ナトリウムで還流抽出（８０℃、１時間）を行い、静置させた上澄みに塩酸を加えて中和させ、濃縮乾固する方法が好適である。
また、「オリザトリテルペノイド−Ｐ」（オリザ油化（株）製）等の市販品を使用することもできる。
【００２４】
本発明の米糠加水分解物には、トリテルペンアルコール又はその誘導体の他、β-シトステロール、カンペステロール等の植物ステロール等が含まれる。ここでトリテルペンアルコール又はその誘導体としては、ルパン型トリテルペン又はその誘導体、ククルビタン型トリテルペン又はその誘導体、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体が挙げられる。このうち、シクロアルテノール、２４−メチレンシクロアルタノール、シクロブラノール、シクロアルタノール、９，１９‐シクロラノスタン‐２３，２５‐ジエン‐３‐オールなどのシクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を含むものが好ましく、シクロアルテノール又はその誘導体を含むものがより好ましい。尚、これらの誘導体としては、例えば、脂肪酸エステル、フェルラ酸エステル、桂皮酸エステルなどのエステル体、サポニンなどの配糖体が挙げられる。
【００２５】
更に、本発明の米糠加水分解物中には、トリテルペンアルコール又はその誘導体が０．０１質量％以上、更には０．１〜１００質量％含まれていることが好ましく、１〜９０質量％含まれていることがより好ましく、１０〜７０質量％含まれていることが更に好ましい。また、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体が０．０１質量％以上、更には０．１〜１００質量％含まれていることが好ましく、１〜９０質量％含まれていることがより好ましく、１０〜７０質量％含まれていることが更に好ましい。更に、シクロアルテノール又はその誘導体が、０．０１質量％以上、更には０．１〜１００質量％含まれていることが好ましく、１〜９０質量％含まれていることがより好ましく、更には１０〜７０質量％、更には２０〜５０質量％含まれていることが好ましい。
【００２６】
本発明の米糠加水分解物として、より具体的には、シクロアルテノールを１０質量％〜３０質量％、好ましくは１５質量％〜２５質量％、より好ましくは１８質量％〜２２質量％、24-メチレンシクロアルタノールを２５質量％〜４５質量％、好ましくは３０質量％〜４０質量％、より好ましくは３２質量％〜３６質量％、β-シトステロールを３質量％〜２０質量％、好ましくは７質量％〜１６質量％、より好ましくは１０質量％〜１４質量％、カンペステロールを５質量％〜２５質量％、好ましくは１０質量％〜２０質量％、より好ましくは、１３質量％〜１７質量％を含むものが挙げられる。
【００２７】
本発明の米糠加水分解物は、斯くして得られる加水分解処理物をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２８】
また本発明においては、シクロアルテノール、２４−メチレンシクロアルタノール等のシクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体を単独又は複数混合して用いることができるが、斯かるシクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体は、上述した米糠抽出物や米糠加水分解物から分離・取得することができる他、小麦、トウモロコシ、コーヒー豆、アワ、ヒエ、アロエなどから分離・精製することによっても得ることができる。さらにJ.Chem.Soc.,Chem.Commun., 1968，643や、J.Chem.Soc.,Perkin. Trans.1, 1979, 563などに記載の合成法によっても調製することができる。また、市販品を使用することでもできる。
【００２９】
後記実施例に示すように、米糠加水分解物又はシクロアルタン型トリテルペンはＳＲＥＢＰ１遺伝子の発現抑制作用を有する。前述したとおり、ＳＲＥＢＰ１はヒト頭皮における皮脂腺細胞に発現し、頭皮皮脂腺の分化や脂質合成において重要な役割を担っている（非特許文献４）。また、男性ホルモンによる皮脂腺細胞の活性化は、ＳＲＥＢＰ１の発現亢進や、ＳＲＥＢＰ１に依存的な脂肪酸及びコレステロール合成に関わる酵素の発現亢進を起こし、それにより過剰に分泌された皮脂が髪の成長の妨げや炎症を引き起こすと考えられている（非特許文献５）。したがって、ＳＲＥＢＰ１の抑制は、皮脂腺細胞の活性化による過剰な脂質産生を抑制し、脂漏性脱毛症の予防あるいは改善に有効であると云える。
したがって、米糠加水分解物又はシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体は、ヒトを含む動物に摂取又は投与して、ＳＲＥＢＰ１の抑制を図るため、更にはＳＲＥＢＰの活性化に起因する皮脂脂質異常を伴う症状や疾患、例えば脂漏性脱毛症や脂漏性皮膚炎（湿疹）の予防又は改善を図るために使用することができる。すなわち、米糠加水分解物又はシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体は、ＳＲＥＢＰ１抑制剤、脂漏性脱毛症及び/又は脂漏性皮膚炎の予防又は改善剤となり得、また、ＳＲＥＢＰ１抑制剤、脂漏性脱毛症及び/又は脂漏性皮膚炎の予防又は改善剤を製造するために使用することができる。
ここで、「ＳＲＥＢＰ１の抑制」とは、ＳＲＥＢＰ１遺伝子の発現が抑制されること、更にはＳＲＥＢＰ１の生成が抑制されることを意味し、好ましくは、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子の発現が抑制されること、ＳＲＥＢＰ１ｃの生成が抑制されることを意味する。
【００３０】
当該ＳＲＥＢＰ１抑制剤、脂漏性脱毛症及び/又は脂漏性皮膚炎の予防又は改善剤は、それ自体、ＳＲＥＢＰ１抑制、脂漏性脱毛症及び/又は脂漏性皮膚炎を予防又は改善するための食品、医薬部外品、医薬品等であってもよく、又は当該食品、医薬部外品、医薬品等に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。また、当該食品には、ＳＲＥＢＰ１抑制、脂漏性脱毛症及び/又は脂漏性皮膚炎の予防又は改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した美容食品、病者用食品若しくは特定保健用食品等の機能性食品が包含される。
【００３１】
本発明の米糠加水分解物又はシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体を含有する上記医薬品の投与形態は任意であり、経口、経腸、経粘膜、注射等が挙げられるが、経口投与が好ましい。経口投与のための製剤の剤型としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、トローチ剤、内服液、糖衣錠、丸剤、細粒剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳液等が挙げられる。非経口投与としては、静脈内注射、筋肉注射剤、吸入、輸液、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、クリーム、ジェル、ローション、貼付剤、ゲル、ペースト等が挙げられる。
【００３２】
このような種々の剤型の医薬製剤は、本発明の米糠加水分解物又はシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体を単独で、又は他の薬学的に許容される担体と組み合わせて調製することができる。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、流動性促進剤、吸収助剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定化剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、固着剤、香料、被膜剤等が挙げられる。斯かる担体の具体例としては、乳糖、カオリン、ショ糖、結晶セルロース、コーンスターチ、タルク、寒天、ペクチン、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、レシチン、塩化ナトリウム等の固形状坦体や、グリセリン、落花生油、ポリビニルピロリドン、オリーブ油、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール、水等の液状坦体が挙げられる。
【００３３】
上記製剤中の米糠加水分解物の含有量は、製剤の種類によっても異なるが、一般的に０．００１〜１００質量％とすることができ、０．０１〜９０質量％が好ましく、０．０５〜７０重量％とするのが更に好ましい。
また、上記製剤中のシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体の含有量は、製剤の種類によっても異なるが、一般的に０．１〜１００質量％とすることができ、１〜９０質量％が好ましく、５〜７０質量％とするのが更に好ましい。
【００３４】
本発明の米糠加水分解物又はシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体を含有する上記食品の形態としては、パン類、麺類、クッキー等の菓子類、スナック類、ゼリー類、乳製品、冷凍食品、粉末コーヒー等のインスタント食品、でんぷん加工製品、加工肉製品、その他加工食品、コーヒー飲料等の飲料、缶コーヒー飲料や清涼飲料水、果汁飲料等の容器詰め飲料、スープ類、調味料、食用油、栄養補助食品等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤形態、丸剤形態、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等）が挙げられる。
【００３５】
種々の形態の食品は、米糠加水分解物の他、他の飲食品材料や、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、増粘剤、固着剤、分散剤、湿潤剤等を適宜組み合わせて配合し、調製することができる。
【００３６】
食品中における米糠加水分解物の含有量は、その使用形態により異なるが、乾燥物換算で、一般的に０．００１〜１００質量％とすることができ、０．０１〜９０質量％とするのがより好ましく、０．０５〜７０重量％とするのが更に好ましい。
また、上記食品中のシクロアルタン型トリテルペン若しくはその誘導体の含有量は、製剤の種類によっても異なるが、一般的に、０．１〜１００質量％とすることができ、１〜９０質量％が好ましく、５〜７０質量％とするのが更に好ましい。
【００３７】
上記医薬品や機能性食品の投与量又は摂取量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たり、シクロアルテノールとして１日あたり５０μｇ〜５００ｍｇとすることが好ましく、更に７５μｇ〜１００ｍｇ、更に１００μｇ〜５０ｍｇとするのが好ましく、より更に１５０μｇ〜２５ｍｇとするのが好ましい。また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。
【実施例】
【００３８】
実施例１  SREBP1遺伝子発現抑制作用
（１）米糠加水分解物
米糠加水分解物として、「オリザトリテルペノイド−Ｐ」（オリザ油化（株）製）を用いた。本品は、イネ科イネ（Oryza sativa Linne）の種子から生ずる米糠及び米胚芽から加水分解して得られたトリテルペンアルコールを粉末化したものである。本品のキャピラリーガスクロマトグラフィーによる成分分析結果を表１に示す。
【００３９】
【表１】
0005947061.tif 000002
【００４０】
（分析条件）
カラム：キャピラリーＧＣカラム  ＤＢ−１（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、３０ｍ×０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ
キャリアガス：ヘリウム、２．３０ｍＬ／ｍｉｎ
スプリット比：４０：１
インジェクター：Ｔ＝３００℃
ディテクター：ＦＩＤ、Ｔ＝３００℃
オーブン温度：１５０℃で１．５分間保持、１５℃／分で２５０℃まで昇温、５℃／分で３２０℃まで昇温、２０分間保持
【００４１】
（２）動物および飼育方法
実験にはC57BL/6Jマウス（雄性、８週齢、日本クレア社）を用い、各群体重が同等になるように群分けし（Ｎ＝１２/群）、１ケージあたり４匹飼いで飼育した。
食餌組成は下記（表２）に示す。試験食中の含有量を百分率（W/W%）で示した。５％の脂質を含む低脂肪食、30%の脂質を含む高脂肪食、上記（１）の米糠加水分解物（０．２％又は０．５％オリザトリテルペノイド‐Ｐ（オリザ油化社製））を含む高脂肪食をそれぞれの群に７週間給餌した。飼育期間中、体重は週1回、摂食量は週2回測定した。なお、飼育期間中は自由摂食、自由摂水とした。
【００４２】
【表２】
0005947061.tif 000003
【００４３】
（３）採血および採材
給餌最終日に、麻酔下にて腹部大静脈から全血を採取し、簡易血糖測定装置（アキュチェックアビバ, Roche社製）を用いて血糖値を測定した後、氷中保存した。更に、肝臓と内臓脂肪（副睾丸周囲脂肪、副腎周囲脂肪、後腹膜脂肪、腸間膜脂肪）を摘出し、重量を測定した。
【００４４】
（４）血中成分分析
採取した血液を遠心分離後、血漿を調製した。血漿中のグルコース、中性脂質（トリグリセライド）、遊離脂肪酸、総コレステロール、GOT、およびGPTは、ニットーボーメディカル社または和光純薬工業社製の試薬を用い、自動血清成分分析装置（Accute, 東芝社製）にて定法に従い測定した。
【００４５】
（５）マウス肝臓中の遺伝子解析（RNAの抽出、cDNAの調製、及び定量的PCR）
摘出した肝臓からRNeasy Mini Kits（QIAGEN社製）およびRNeasy Lipid Tissue Mini Kits（QIAGEN社製）を用いてRNAを抽出した。抽出した各RNAサンプル１μgから逆転写酵素を用いてcDNAを調製した。調製したcDNAサンプルを10倍希釈し、Taqman  Gene  Expression  Assays（Applied  Biosystems社製）を用いてSREBP1（SREBP1c）遺伝子について定量的PCRを行った。SREBP1遺伝子の発現量は36B4遺伝子（Rplp0; ribosomal protein, large, P0）で補正した。
【００４６】
（６）統計解析
統計は全て平均±標準誤差で示した。また、FisherのPLSDにより、P<0.05を有意水準とした検定を行い、群間の有意差を判定した。
【００４７】
（７）結果
（ｉ）体重・内臓脂肪重量・肝臓重量・血中成分分析
7週間飼育後の体重、内臓脂肪重量、肝臓重量、および血中成分（グルコース、トリグリセライド、遊離脂肪酸、総コレステロール、GOT、およびGPT）分析値において、高脂肪食群とオリザトリテルペノイド‐Ｐ添加群の間に特筆すべき差異（異常値）は認められなかった。なお、対照群（高脂肪食群）とオリザトリテルペノイド‐Ｐ添加群との間に、摂食量の有意な差は認められなかった。
【００４８】
（ii）マウス肝臓におけるSREBP1遺伝子解析
米糠加水分解物（0.5%のオリザトリテルペノイド‐Ｐ）を添加した高脂肪食の摂取により、肝臓での脂肪酸合成酵素であるSREBP1遺伝子の発現量が、対照である高脂肪食群と比較して有意に低減していた（図１）。このことから、米糠中の加水分解物がSREBP1の発現抑制に有効である。
【００４９】
実施例２  ヒト肝臓癌由来培養細胞におけるSREBP1遺伝子解析
（１）培養細胞および培養条件
ヒト肝臓癌由来のHepG2細胞は、10%（w/v）FBS（Fetal bovine serum）およびペニシリン（100 unit/ml）・ストレプトマイシン（100 μg/ml）を含むDMEM培地中で、37℃、5% CO2条件下で培養し
た。
【００５０】
（２）米糠成分の添加条件
一晩血清飢餓処理したHepG2細胞に、トリテルペンアルコール（0.0003%のシクロアルテノール（Sigma-Aldrich社製、又はオリザトリテルペノイド-Pより精製）、２４−メチレンシクロアルタノール（オリザトリテルペノイド-Pより精製））あるいは、植物ステロール成分（β-シトステロール（和光純薬工業社製）、又はカンペステロール（和光純薬工業社製））を含む上記（１）のDMEM培地を添加し、24時間培養した。
尚、シクロアルテノール及び２４−メチレンシクロアルタノールは、オリザトリテルペノイド-P（オリザ油化社製）について、まず、シリカゲルカラムクロマト（カラム温度：室温、流速：15mL / min、溶離液：ヘキサン / EtOAc＝9 / 1（isocratic））を用いてトリテルペンアルコール画分を得、更に、本トリテルペンアルコール画分を、RP-HPLC（カラム：Inertsil ODS-3（GLサイエンス）20 x 250mm、カラム温度：室温、流速：18.9mL / min、検出：UV=210nm、溶離液：MeOH / MeCN / THF / H2O = 15 / 2 / 2 / 1（isocratic））により精製することにより得ることができる。
【００５１】
（３）ヒト肝臓癌由来HepG2細胞の遺伝子解析（RNAの抽出、cDNAの調製、及び定量的PCR）
細胞はRNeasy Mini Kits（QIAGEN社製）およびRNeasy Lipid Tissue Mini Kits（QIAGEN社製）を用いて溶解後、RNAを抽出した。抽出した各RNAサンプル１μgから逆転写酵素を用いてcDNAを調製した。調製したcDNAサンプルを10倍希釈し、Taqman  Gene  Expression  Assays（Applied  Biosystems社製）を用いてSREBP1（SREBP1c）遺伝子について定量的PCRを行った。SREBP1遺伝子の発現量は36B4遺伝子（Rplp0; ribosomal protein, large, P0）で補正した。
（４）統計解析
統計は全て平均±標準誤差で示した。また、FisherのPLSDにより、P<0.05を有意水準とした検定を行い、群間の有意差を判定した。
（５）結果
米糠中のトリテルペンあるいは植物ステロール成分（0.0003%のシクロアルテノール、２４−メチレンシクロアルタノール、β-シトステロール、又はカンペステロール）含有培地の添加により、SREBP1遺伝子の発現量が、対照群と比較して有意に低減していた（図２）。このことから、米糠中のトリテルペン又はその誘導体がSREBP1の発現抑制に有効である。また、２４−メチレンシクロアルタノールやβ-シトステロールと比較して、シクロアルテノールの低減効果が有意に強いことから、米糠加水分解物中のシクロアルテノール含有率を上げることがSREBP1の発現抑制により有効である。
【図１】
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【図２】
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