(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルム（Lactobacillus pentosus var.plantarum）Ｃ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐ。
【請求項２】
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐ菌株を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化薬学組成物。
【請求項３】
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐ菌株を有効成分として含む、認知症の予防または治療用の薬学組成物。
【請求項４】
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐ菌株を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化効果を有する健康機能食品。
【請求項５】
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐ菌株を有効成分として含む、認知症の予防または改善用健康機能食品。
【請求項６】
認知症は、老人性認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、パーキンソン病認知症、ハンチントン病認知症、正常圧脳水頭症による認知症、頭部損傷による認知症、及び物質で誘発される認知症からなる群から選択される、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項７】
認知症は、老人性認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、パーキンソン病認知症、ハンチントン病認知症、正常圧脳水頭症による認知症、頭部損傷による認知症、及び物質で誘発される認知症からなる群から選択される、請求項５に記載の健康機能食品。
【請求項８】
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐ菌株を含む発酵組成物を有効成分として含む、認知症の予防または治療用組成物。
【請求項９】
前記発酵組成物は、大豆または脱脂大豆発酵組成物、ハリギリの樹皮発酵組成物、ニンジン発酵組成物、及びツルニンジン発酵組成物からなる群から選択される、請求項８に記載の認知症の予防または治療用組成物。
【請求項１０】
認知症は、老人性認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、パーキンソン病認知症、ハンチントン病認知症、正常圧脳水頭症による認知症、頭部損傷による認知症、及び物質で誘発される認知症からなる群から選択される、請求項８または９に記載の認知症の予防または治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キムチから分離した新規の乳酸菌に関し、さらに具体的には、老化及び認知症の予防及び／または治療活性を有する新規のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルム（Lactobacillus pentosus var. plantarum）Ｃ２９及びラクトバチルス・カルバタス（Lactobacillus curvatus）Ｃ３に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会に急速に進行している現代社会において、老化過程を遅延させることは重要な保健課題の一つである。韓国の場合、２０１０年に６５歳以上の人口が１１．３％を占め、２０５０年には３７．３％に急増することが予想されている。このような高齢化社会では、疾病罹患率の上昇及び莫大な医療費用の支出が予想され、認知症などの老人性疾患の急増が社会的に問題になることが予想される。
【０００３】
老化が進行する過程は、遺伝、環境、そして生活方式の複合的な作用により影響を受け、多様な形態的、生化学的変化が伴われるが、特に、酸化ストレスの増加と炎症反応の増加は、老化促進に関与する主要原因として考えられている。酸化ストレスは、反応性の強い酸素ラジカル（ＲＯＳ、reactive oxygen species）の生成増加や体内の抗酸化防御メカニズムの減少により起こるが、その結果、ＤＮＡなどの生体高分子が破壊され、細胞損傷を誘発して老化を促進させ、認知症を含む神経退行性疾患、がん、心血関係疾患などの老化疾病の危険度を高める。
【０００４】
Adlerら（Adler AS,Sinha S,Kawahara TL,Zhang JY,Segal E,Chang HY. Motif module map reveals enforcement of aging by continual NF-kappaB activity. Genes Dev.2007;21:3244-57）は、多数の人体組織と実験動物組織でＮＦ−κＢ活性化モチーフ（motif）と、老化過程を調節する単位の関連性を立証して、ＮＦ−κＢで媒介する炎症反応と老化過程が非常に密接に連関していることを立証した。また、老化は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴを活性化させ、これは、ＦＯＸＯ３をリン酸化してＲＯＳ生成を抑制できず、遺伝子変異などが起こることが知られている。
【０００５】
老化疾病の一つである認知症は、脳の晩成的或いは進行性疾患により発生し、脳組織の退行、変性及び老化中枢神経系感染（神経梅毒、結核性脳膜炎、ウイルス性脳炎など）、脳梗塞、脳損傷、毒性代謝障害、神経系疾患（パーキンソン病）などが認知症を起こす主要原因として知られている。認知症には、アルツハイマー型認知症（Alzheimer’s disease）、血管性認知症、及びその他の混合型があり、韓国の６５歳以上の老人認知症患者の５０〜６０％がアルツハイマー型認知症であり、１５〜３０％が血管性認知症であり、残りの１０〜１５％が両方の疾患の混合型である。脳内の老廃物であるベータアミロイド（Ａβ）がアルツハイマー型認知症の主要な発病原因として知られており、アルツハイマー型認知症の治療のために多くの薬物が治療剤として試みられたが、未だに明らかな効果が立証された薬物はない。アルツハイマー型認知症患者に足りない脳内の重要神経伝達物質の一つであるアセチルコリン（acetylcholine）に作用するアセチルコリンエステラーゼ（acetylcholinesterease）阻害剤が治療剤として唯一に使用されているが、この薬物は、部分的に認知機能の好転は見せるが、アルツハイマー病の進行には全く作用をしないことで知られ、効果的な認知症予防または治療剤の開発が要求されている。
【０００６】
一方、乳酸菌は、長い間利用され、乳酸菌の整腸作用、抗がん効果、免疫増強効果などの有益な効果が報告されてきた。そこで、本発明者らは、老化と認知症に有益な効果を有する乳酸菌を探すために研究した結果、キムチから分離した新規の乳酸菌が老化と認知症に対して予防または治療効果を有することを確認して本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、老化と認知症に対して予防または治療効果を有する乳酸菌の提供を目的とする。
また、本発明は、前記乳酸菌を含む、抗酸化及び抗老化組成物及び認知症の予防または治療用組成物の提供を目的とする。
また、本発明は、前記乳酸菌で発酵させた、抗酸化及び抗老化発酵組成物及び認知症の予防または治療用発酵組成物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記のような目的を達成するために、本発明は、キムチから分離したラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルム（Lactobacillus pentosus var. plantarum）Ｃ２９  ＫＣＣＭ１１２９１Ｐを提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化薬学組成物を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９を有効成分として含む、認知症の予防または治療用の薬学組成物を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化効果を有する健康機能食品を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９を有効成分として含む、認知症の予防または改善用の健康機能食品を提供する。
【０００９】
また、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９で発酵した発酵組成物を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化組成物を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９で発酵した発酵組成物を有効成分として含む、認知症の予防または治療用組成物を提供する。
【００１０】
また、本発明は、キムチから分離したラクトバチルス・カルバタス（Lactobacillus curvatus）Ｃ３  ＫＣＣＭ４３００９を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・カルバタスＣ３を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化薬学組成物を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・カルバタスＣ３を有効成分として含む、認知症の予防または治療用の薬学組成物を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・カルバタスＣ３を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化効果を有する健康機能食品を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・カルバタスＣ３を有効成分として含む、認知症の予防または改善用の健康機能食品を提供する。
【００１１】
また、本発明は、ラクトバチルス・カルバタスＣ３で発酵した発酵組成物を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化組成物を提供する。
また、本発明は、ラクトバチルス・カルバタスＣ３で発酵した発酵組成物を有効成分として含む、認知症の予防または治療用組成物を提供する。
【００１２】
以下で、本発明をさらに詳しく説明する。
本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９及びラクトバチルス・カルバタスＣ３は、白菜キムチから分離した新規の微生物である。
【００１３】
本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９は、１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列に基づいた分子系統分類学的及び生化学的特性の分析において、ラクトバチルスに属する菌株であり、ラクトバチルス・ペントーサスとラクトバチルス・プランタルムの両方に高い分子系統学的類縁関係を表す菌株として同定されたが、生化学的特性がラクトバチルス・ペントーサスにより類似して、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９と命名し、国際寄託機関である韓国微生物保存センターに２０１２年７月９日付で寄託番号ＫＣＣＭ１１２９１Ｐとして寄託された。
【００１４】
また、本発明のラクトバチルス・カルバタスＣ３は、１６ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列に基づいた分子系統分類学的分析において、ラクトバチルスに属する菌株であり、ラクトバチルス・カルバタスに属する菌株として同定され、ラクトバチルス・カルバタスＣ３と命名し、国際寄託機関である韓国微生物保存センターに２０１２年７月９日付で寄託番号ＫＣＣＭ４３００９として寄託された。
【００１５】
本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９（以下では、「Ｃ２９」ともいう）及びラクトバチルス・カルバタスＣ３（以下では、「Ｃ３」ともいう）は、アルツハイマー病モデル動物であるマウスを利用した受動回避反応試験において、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株の投与によりマウスの記憶が改善される効果が確認され、Ｃ２９菌株は、Ｙ字形迷路試験と水中迷路試験でも記憶改善効果が確認され、認知症の予防及び治療効果が立証された（実施例２参照）。
【００１６】
本発明において、認知症とは、多様な原因によって脳機能が損傷され、以前に比べて記憶力、言語能力、判断力などの認知機能が持続的かつ全般的に低下して、日常生活に差し支えが表れている状態をいい、老人性認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、パーキンソン病認知症、ハンチントン病認知症、正常圧脳水頭症による認知症、頭部損傷による認知症、物質で誘発される認知症などを含む。
【００１７】
また、１６ヶ月令マウスに、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株を３ヶ月間投与した後、脂質過酸化物、スーパーオキシドディスムターゼ（Superoxide dismutase）活性、カタラーゼ（Catalase）活性、及びグルタチオン濃度を測定した結果、生理食塩水を３ヶ月間投与した１６ヶ月令マウスに比べて、顕著に優れた抗酸化効果を表し、老化関連の遺伝子の発現減少を表して、抗酸化及び抗老化効果が立証された（表６及び実施例３参照）。
【００１８】
これにより、本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９とラクトバチルス・カルバタスＣ３は、認知症と老化の予防及び治療に優れた効果を有する菌株であることを確認することができた。
【００１９】
本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９の形態的特徴と生理学的特徴、スクロース発酵分析の結果、及び細胞脂肪酸組成がそれぞれ下記の表１、表２及び表３で公知のエル．プランタルム（L.plantarum）ＡＴＣＣ  １４９１７及びエル．ペントーサス（L.pentosus）ＤＳＭ２０３１４の特性と共に表れる。
【００２０】
【表１】
0006009080.tif 000002
【００２１】
＋：陽性反応、−：陰性反応
ａ：Zanoni,P.,Farrow,J.A.E.,Phillips,B.A.,Collins,M.D.(1987)Lactobacillus pentosus(fred,peterson, and anderson)sp.Nov.,norn,rev.Int J Syst Bacteriol 37, 339-341より入手
【００２２】
【表２】
0006009080.tif 000003
【００２３】
＋：陽性反応、−：陰性反応、Ｄ：可変的反応
前記三つの乳酸菌のいずれも２−ケト−グルコネート、５−ケト−グルコネート、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロース、β−メチル−Ｄ−キシロシド、Ｌ−ソルボース、イノシトール、グリコーゲン、キシリトール、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｌ−アラビトールを発酵しなかった。
【００２４】
ａ：Van Reenen,C.A.,Dicks,L.M.(1996)Evaluation of numerical analysis of random amplified polymorphic DNA(rapd)-pcr as a method to differentiate lactobacillus plantarum and lactobacillus pentosus.Curr Microbiol 32, 183-187より入手。
ｂ：Zanoni,P.,Farrow,J.A.E.,Phillips,B.A.,Collins,M.D.(1987)Lactobacillus pentosus(fred,peterson,and anderson)sp.Nov.,norn,rev.Int J Syst Bacteriol 37, 339-341より入手。
【００２５】
【表３】
0006009080.tif 000004
【００２６】
Ｔ：１％未満の微量の酸
ａ：エル．プランタルム：Van Reenen,C.A.,Dicks,L.M.(1996)Evaluation of numerical analysis of random amplified polymorphic DNA(rapd)-pcr as a method to differentiate lactobacillus plantarum and lactobacillus pentosus.Curr Microbiol 32, 183-187より入手。
エル．ペントーサス：Zanoni,P.,Farrow,J.A.E.,Phillips,B.A.,Collins,M.D.(1987)Lactobacillus pentosus(fred,peterson,and anderson)sp.Nov.,norn,rev.Int J Syst Bacteriol 37, 339-341より入手。
【００２７】
また、本発明のラクトバチルス・カルバタスＣ３の形態的特徴と生理学的特徴、及びスクロース発酵分析の結果が、それぞれ下記の表４及び表５で公知のエル．カルバタスＡＴＣＣ２５６０１の特性と共に表れる。
【００２８】
【表４】
0006009080.tif 000005
【００２９】
【表５】
0006009080.tif 000006
【００３０】
前記乳酸菌のいずれも２−ケト−グルコネート、５−ケト−グルコネート、エリスリトール、Ｄ−アラビノース、Ｌ−キシロース、β−メチル−Ｄ−キシロシド、Ｌ−ソルボース、イノシトール、グリコーゲン、キシリトール、Ｄ−リキソース、Ｄ−タガトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｌ−アラビトールを発酵しなかった。
【００３１】
本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９菌株とラクトバチルス・カルバタスＣ３菌株は、老化と認知症の予防及び治療のために利用されることができるので、本発明は、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９菌株またはラクトバチルス・カルバタスＣ３菌株を有効成分として含む抗酸化及び抗老化薬学組成物、及び認知症の予防または治療用の薬学組成物を提供する。
【００３２】
本発明の薬学組成物は、経口的に（例えば、服用または吸入）、または非経口的に（例えば、注射、経皮吸収、直腸投与）投与されることができ、注射は、例えば、静脈注射、皮下注射、筋肉内注射または腹腔内注射であることができる。本発明に係る薬学組成物は、投与経路によって、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤（fine subtilae）、粉剤、舌下錠剤、座薬、軟膏、注射剤、乳濁液剤、懸濁液剤、シロップ剤、噴霧剤などに製型化することができる。前記様々な形態の本発明に係る薬学組成物は、各製型に通常使用される薬学的に許容される担体（carrier）を使用して公知技術によって製造することができる。薬学的に許容される担体の例は、賦形剤、結合剤、崩壊剤（disintegrating agent）、潤滑剤、防腐剤、抗酸化剤、等張剤（isotonic agent）、緩衝剤、皮膜剤、甘味剤、溶解剤、基剤（base）、分散剤、湿潤剤、懸濁化剤、安定剤、着色剤などを含む。
【００３３】
本発明に係る薬学組成物は、薬剤の形態によって異なるが、本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９菌株またはラクトバチルス・カルバタスＣ３菌株を約０．０１〜１００重量％で含む。
【００３４】
本発明の薬学組成物の具体的な投与量は、治療するヒトを含む哺乳動物の種類、体重、性別、疾患の程度、医者の判断などによって異なり、本技術分野の通常の知識を持った者なら、特定の用途による適切な投与量を決めることができる。好ましくは、経口投与の場合は、一日に体重１ｋｇあたり活性成分０．００１〜５００ｍｇが投与され、非経口投与の場合は、一日に体重１ｋｇあたり活性成分０．０１〜２００ｍｇが投与される。より好ましくは、一日に体重１ｋｇあたり活性成分１００ｍｇが投与される。前記総一日投与量は、疾患の程度、医者の判断などによって一回または数回に分けて投与されることができる。
本発明は、さらに、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化効果を有する健康機能食品と認知症の予防または改善用の健康機能食品を提供する。
【００３５】
本発明の健康機能食品の種類には、特に制限がなく、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液剤、エマルジョン、シロップ剤などの経口型製剤形態であってもよく、キャンディ、お菓子、ガム、アイスクリーム、麺類、パン、飲み物などの一般的な食品に添加してもよい。
本発明の健康機能食品は、形態により、通常の方法で、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、甘味剤、芳香剤、保存剤、界面活性剤、潤滑剤、賦形剤などを適切に使用して製造することができる。
【００３６】
前記健康機能食品の製造において、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株の含量は、健康機能食品の形態によって異なるが、略０．０１〜１００重量％の濃度である。
また、本発明は、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株で発酵した発酵組成物を有効成分として含む、抗酸化及び抗老化効果を有する組成物と認知症の予防または改善用組成物を提供する。
本発明において、前記発酵組成物は、大豆または脱脂大豆発酵組成物、ハリギリの樹皮発酵組成物、ニンジン発酵組成物、及びツルニンジン発酵組成物を含む。
【００３７】
本発明において、大豆または脱脂大豆粉末の水懸濁物は、乾燥した大豆または脱脂大豆粉末に重量対比５〜１５倍の水を添加して懸濁して使用することを意味するが、これに限定されず、本発明の目的に符合する限り、水にふやかした大豆を粉砕して豆乳形態に製造して使用してもよい。
本発明において、前記ハリギリの樹皮、ニンジン、及びツルニンジンは、抽出物またはエキス形態であってもよく、好ましくは、熱水抽出法、酒精抽出法または混合抽出法によって製造された抽出物の形態を使用してもよいが、これに限定されるものではない。前記抽出物の抽出効率を高めるために、粉砕または粉末化してもよく、当業界に公知された通常の抽出法によって行なってもよい。例えば、水抽出法、アルコール抽出法、有機溶媒抽出法及び超臨界抽出法などを使用することができ、好ましくは水抽出法を利用するが、これに限定されるものではない。
【００３８】
前記アルコール抽出法において使用される抽出溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール，イソプロパノール、ブタノールなどの炭素数１〜６の低級アルコールなどを使用することができ、前記有機溶媒抽出法の抽出溶媒としては、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、塩酸、酢酸、蟻酸、クエン酸、シクロヘキサン及び石油エーテルなどの有機溶媒、またはこれらの混合物を使用することができる。
【００３９】
ここで、抽出の際に添加する抽出溶媒の割合は特に限定されないが、ハリギリの樹皮、ニンジンまたはツルニンジン乾燥重量に対して抽出溶媒を２倍〜２０倍（重量基準）で使用することができる。抽出効率を増加させるためには、好ましくは、ハリギリの樹皮、ニンジンまたはツルニンジンに対して抽出溶媒５倍〜１５倍（重量基準）を使用して２回以上数回を繰り返すことができる。
【００４０】
ここで、抽出温度は、５０〜１１０℃が好ましく、さらに好ましくは、７０〜１００℃である。抽出時間は抽出温度によって異なるが、１時間〜４８時間、好ましくは、２時間〜８時間抽出する。また、抽出の際に撹拌機（shaker）で撹拌する場合に、さらに抽出効率を増大させることができる。
前記エキスは、減圧蒸留法や薄膜蒸留法で製造することができる。
【００４１】
本発明において、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株を接種して発酵させた大豆または脱脂大豆発酵組成物、ハリギリの樹皮発酵組成物、ニンジン発酵組成物、及びツルニンジン発酵組成物は、アルツハイマー病モデル動物であるマウスを利用した受動回避反応試験において、前記発酵組成物の投与によりマウスの記憶が改善される効果が確認され、認知症の予防及び治療効果が立証された（実施例５参照）。
【００４２】
本発明において、前記抽出物にＣ２９菌株またはＣ３菌株を接種する時に、雑菌の生長を抑制するために、１００℃以上で１５分〜１時間加熱して滅菌して使用する。
前記Ｃ２９菌株またはＣ３菌株の接種量は、発酵に利用する抽出物の種類によって異なるが、１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ以上で、発酵温度は２０〜４０℃が好ましい。本発明の目的に符合すれば、発酵時間は特に制限されないが、Ｃ２９菌株またはＣ３菌株を接種して１０〜３０時間発酵することができる。ここで、発酵が１０時間以下であれば、発酵組成物が充分に作られず、発酵が３０時間以上であれば、有機酸が作られ過ぎて酸味が強くて食感が落ちるため、上述した発酵時間範囲内で発酵することが好ましい。
【００４３】
また、本発明において、発酵に使用する材料によって多様な発酵食品を製造することができ、一例として、粉ミルクまたは牛乳にＣ２９菌株またはＣ３菌株を接種し、上記のような方法で発酵させることで、ヨーグルトなどの乳酸菌発酵飲み物を製造することができる。
【発明の効果】
【００４４】
本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９またはラクトバチルス・カルバタスＣ３菌株は、老化と認知症に対して優れた予防及び改善効果を有することが確認され、老化と認知症の予防または治療のために有用に利用することができる。従って、本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９菌株またはラクトバチルス・カルバタスＣ３菌株を含む薬学組成物と健康機能食品は、老化と認知症を予防するか治療するために効果的に利用することができ、日常的に摂取するキムチに存在する菌株が有効成分であるので、副作用や毒性などの恐れもなく利用することができる。また、本発明のラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９またはラクトバチルス・カルバタスＣ３菌株を接種して発酵組成物を製造することで、老化と認知症を予防するか治療するための組成物として効果的に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】Ｃ２９乳酸菌の１６Ｓ  ｒＤＮＡ配列（配列番号１）を示す図面である。
【図２】ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９の位置を示す系統樹である。
【図３】受動回避反応試験の結果を示すグラフである。
【図４】Ｃ２９菌株の記憶改善効果が濃度依存的に大きくなることを示すグラフである。
【図５】Ｃ２９菌株の記憶改善効果を示すゲル写真である。
【００４６】
【図６】実施例２のＹ字形迷路試験の結果を示すグラフである。
【図７】実施例２の水中迷路試験の結果を示すグラフであって、黒い四角形はスコポラミン＋（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウスＣ２９）であり、白い四角形は、スコポラミン＋（１×１０１０ＣＦＵ／マウスＣ２９）であり、黒い三角形は、スコポラミン＋（１０ｍｇ／ｋｇタクリン陽性対照薬物）であり、白い円は、スコポラミン単独であり、黒い円は、正常対照マウスである。価は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）である。＃ｐ＜０．０５ｖｓ．正常対照群であり、＊ｐ＜０．０５ｖｓ．スコポラミン単独処理対照群である。
【図８】Ｃ２９菌株の投与による老化関連遺伝子リン酸体の発現量の変化を示すゲル写真である。
【００４７】
【図９】実施例３のＹ字形迷路試験の結果を示すグラフであって、Ｙは幼いマウスであり、Ｏは老化マウスであり、Ｏ／Ｃ２９は、Ｃ２９乳酸菌（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウス）を投与した老化マウスであり、Ｏ／Ｃ３は、Ｃ３乳酸菌（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウス）を投与した老化マウスであり、Ｏ／Ｃ２４は、Ｃ２４乳酸菌（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウス）を投与した老化マウスである。
【００４８】
【図１０】実施例３の水中迷路試験の結果を示すグラフであって、Ｙは幼いマウスであり、Ｏは老化マウスであり、Ｏ／Ｃ２９は、Ｃ２９乳酸菌（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウス）を投与した老化マウスであり、Ｏ／Ｃ３は、Ｃ３乳酸菌（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウス）を投与した老化マウスであり、Ｏ／Ｃ２４は、Ｃ２４乳酸菌（１×１０９コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／マウス）を投与した老化マウスである。価は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）である。
【図１１】Ｃ３乳酸菌の１６Ｓ  ｒＤＮＡ配列（配列番号２）を示す。
【図１２】Ｃ２９またはＣ３菌株で発酵した発酵組成物の認知機能改善効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
以下、実施例によって本発明をさらに具体的に説明する。これらの実施例は、単に本発明を説明するためのものであるだけで、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されないことは、当業者において自明である。
【実施例１】
【００５０】
実施例１．乳酸菌の分離
白菜キムチをＭＲＳブロス（broth）に懸濁し、上澄液をＭＲＳ寒天（agar）培地に移植した後、２４時間３７℃で嫌気的に培養して育ったコロニーを選別し、グラム染色と１６Ｓ  ｒＤＮＡを分析してラクトバチルス菌株を分離した。
また、ヒトの糞便をＧＡＭブロス（Nissui Pharmaceutical Company,Ltd.、日本）に懸濁し、上澄液をＢＬ寒天培地（Nissui製薬）に移植した後、４８時間３７℃で嫌気的に培養して育ったコロニーを選別し、グラム染色と１６Ｓ  ｒＤＮＡを分析してラクトバチルスとビフィドバクテリウム菌株を分離した。
分離した菌株は、以下の通りである。
【００５１】
１）キムチから分離して使用した乳酸菌
リゥコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）Ｃ１
リゥコノストック・キムチ（Leuconostoc kimchii）Ｃ２
ラクトバチルス・カルバタス（Lactobacillus curvatus）Ｃ３
ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）Ｃ４
ラクトバチルス・ブレビスＣ５
ラクトコッカス・プランタルム（Lactococcus plantarum）Ｃ６
リゥコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）Ｃ７
ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）Ｃ８
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）Ｃ９
ラクトバチルス・ラクチス（Lactobacillus lactis）Ｃ１０
ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）Ｃ１１
ラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）Ｃ１２
ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）Ｃ１３
ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）Ｃ１４
ラクトバチルス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）Ｃ１５
ラクトバチルス・サケイＣ２１
ラクトバチルス・サケイＣ２２
ラクトバチルス・サケイＣ２３
ラクトバチルス・プランタルムＣ２４
ラクトバチルス・プランタルムＣ２５
ラクトバチルス・プランタルムＣ２６
ラクトバチルス・ペントーサスＣ２７
ラクトバチルス・ペントーサスＣ２８
ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９
ラクトバチルス・サケイＣ３０
【００５２】
２）ヒトの消化管から分離して使用した乳酸菌
ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）Ｃ１６
ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）Ｃ１７
ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）Ｃ１８
ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）Ｃ１９
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）Ｃ２０
【実施例２】
【００５３】
実施例２．抗認知症効果の確認
キムチと糞便から分離した３０種の乳酸菌のうち抗認知症効果を有する乳酸菌を確認するために、上記のＣ１〜Ｃ３０菌株と実験動物を利用して実験を実施した。
実験に使用された全ての動物は、２８〜３０ｇの雄ＩＣＲ系マウスで、実験動物の使用及び管理に関する指針（NIH publication No.85-23）に基づいて実験を行った。
実験動物をケージ（cage）あたり５〜６匹を入れて、エサの摂取は自由に放置した。飼育場内の温度は２３±１℃、湿度は６０±１０％であり、１２時間（０７：３０〜１９：３０）日長を常に維持した。
【００５４】
２−１．受動回避反応試験（Passive avoidance task test）
実験器具として、実験箱（５０×１５×４０ｃｍ、electrofiable frid floor）は、仕切りを利用して二つの区画に区分するが、小さい入口を通じて一方から他方の区画に入れば自動的に入口が閉まるようになっている。仕切りで分けられた区画の一方に照明をつけて動物を入れると、周りを察して照明のない暗い区画に入れば自動的に入口が閉まり、直ちに０．２５ｍＡの電流を底のステンレスグリッドを通じて１秒間流して電気衝撃（foot shock）を与える。翌日、照明がつけられた区画に実験動物を入れてから該動物が暗い区画に行って入口が閉まるまでの時間（latency）を測定する。対照群と試験群に、このように暗い区画に入るまでの時間を測定、比較する。最大制限時間は３００秒とするが、３００秒を超えてからも暗い区画に入らなければ、受動回避反応時間を３００秒と決める。動物が暗い区画に入って入口が閉まるまでの時間が大きいほど、学習を通じた受動回避に対する記憶がよく維持されると判断した。
【００５５】
実験に使用したＣ１〜Ｃ３０の乳酸菌３０種をそれぞれ１×１０１０ＣＦＵ（個）を１日１回ずつ、２日間認知症モデル動物であるマウスに投与した。スコポラミン（Scopolamine）（０．９ｍｇ／ｋｇ）は、乳酸菌の最後の投与１時間後に投与した。その結果、図３で確認できるように、実験に使用した乳酸菌のうちＣ２９が受動回避に対する記憶が最もよく維持され、認知症治療剤であるタクリン（Tacrin、ＴＡＣ、１０ｍｇ／ｋｇ）より効果が優れることが表れ、次いでＣ３、Ｃ２４の順であった。
最も効果が優れたものと確認されたＣ２９乳酸菌を１×１０９及び１×１０１０ＣＦＵ（個）を１日１回ずつ、２日間マウスに投与した。スコポラミン（０．９ｍｇ／ｋｇ）は、乳酸菌の最後の投与１時間後に投与した。その結果、図４で確認できるように、Ｃ２９は、濃度依存的に効果を表した。
【００５６】
また、該動物で認知症改善効果を確認するために、脳のヒッポカムポスを分離してプロテアーゼインヒビターカクテル（protease inhibitor cocktail）が含有された１００μｌのＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（Ｇｉｂｃｏ社）を添加して均質化した。４℃、１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上澄液を−８０℃で保管しながらｐ−ＣＲＥＢ、ＣＲＥＢ、ＢＤＮＦ及びβ−アクチンを免疫ブロット（immunoblotting）方法で測定した。
【００５７】
先ず、上澄液を取ってＳＤＳ１０％（ｗ／ｖ）のポリアクリルアミドゲルで１時間３０分間電気泳動をした（サンプル、５０μｇ）。電気泳動したものをニトロセルロース紙に１００Ｖ、４００ｍＡで１時間１０分間トランスファーし、このトランスファーしたニトロセルロース紙を３０分間５％の脱脂乳でブロッキングした後、５分ずつ３回ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄し、１次抗体（Santa Cruz Biotechnology、米国）を１：１００で一晩中反応させた。その後、１０分ずつ３回洗浄した後、２次抗体（Santa Cruz Biotechnology、米国）を１：１０００で１時間２０分間反応させた。その後、１５分ずつ３回洗浄し、蛍光発色させて現像した。その結果、図５で確認できるように、スコポラミンのみを投与した認知症モデル動物群に比べて、Ｃ２９をスコポラミンと同時に投与した群で、スコポラミンの投与により減少したｐ−ＣＲＥＢ及びＢＤＮＦが回復することを観察することができた。これは、Ｃ２９乳酸菌が記憶改善効果を有することを示すものである。
上記のような実験結果は、Ｃ２９とＣ３乳酸菌が記憶力の改善を通じて認知症改善効果を有することをよく示す。
【００５８】
２−２．Ｙ字形迷路実験（Y-maze task）
Ｙ字形迷路測定装置は、３個の通路（arm）を伸ばせてアルファベットＹ字状をなし、各枝は、長さ２５ｃｍ、高さ１４ｃｍ、幅５ｃｍであり、同一の角度で位置する。Ｙ字形迷路の一通路の終端部に実験動物の頭部が向かうように置き、８分間自由に通路を歩き回るようにする。動物の動きを記録し、動物の後ろ足まで通路に入った場合を通過したもの（arm entry）と見なす。動物の動きを交差回数（alternation）で表すが、交差回数とは、動物が連続的に３個の通路を通過した時に一度交差したことと定義する。自発的な交差行動量は、実際の交差回数と最大可能な交差回数（即ち、総交差回数から２を引いた値）の百分比で表示する。
【００５９】
実験に使用した乳酸菌のうち最も優れた乳酸菌であるＣ２９を１×１０９及び１×１０１０ＣＦＵ（個）を１日１回ずつ、２日間投与した。スコポラミン（０．９ｍｇ／ｋｇ）は、乳酸菌の最後の投与１時間後に投与した。
その結果、図６で確認できるように、スコポラミンのみを投与した試験群に比べて、Ｃ２９を投与した試験群は、濃度依存的に記憶改善効果を表した。
【００６０】
２−３．水中迷路試験（Water maze task）
円形の水槽（直径１００ｃｍ、高さ３５ｃｍ）に温度２３℃の水中に設置したプラットホームが見えないように粉ミルクを入れて不鮮明にした水を１５ｃｍの深さで満たした。  マウスを利用する場合、プラットホーム（platform、直径４．５ｃｍ、高さ１４．５ｃｍ）を、全体水槽を４等分したもののうち一つの扇形中央におき、プラットホーム上端が水面０．５ｃｍ下に位置するようにした。この装置を位置が確認できるような標識のある実験室に設置した。訓練試験（Training trial）は、１日３回ずつ、５日間連続的に実施した。一旦、マウスがプラットホームを見つければ約１０秒間プラットホームに留まるようにおき、元のケージに帰らせた５分後に次の試験を実施した。もしマウスが１２０秒以内にプラットホームを見つけなければ、これをプラットホームに１０秒間置いてから試験を終わらせた。訓練が終わった動物を対象として最後の訓練試験２４時間後にプローブ試験（probe test）を実施した。この時は、水槽からプラットホームを除去し、９０秒間プラットホームが置かれていた４分円に留まる時間を測定して百分率で表した。
【００６１】
実験に使用した乳酸菌のうち最も優れたＣ２９乳酸菌を１×１０９及び１×１０１０ＣＦＵ（個）を１日１回ずつ、４日間投与しながら、毎日水泳時間を測定した。スコポラミン（０．９ｍｇ／ｋｇ）は、乳酸菌の初投与１時間後に投与した。
その結果、図７で確認できるように、Ｃ２９乳酸菌は、濃度依存的に記憶改善効果を表した。
【実施例３】
【００６２】
実施例３．抗酸化、抗老化、及び抗認知症効果の確認
抗酸化、抗老化及び抗認知症効果の確認のために、１６ヶ月令マウスに３つの乳酸菌Ｃ２９、Ｃ３、Ｃ２４（それぞれ１×１０９ＣＦＵ）を週５日ずつ１２週間投与し、酸化反応の進行が速い大腸で、乳酸菌の抗酸化効果と老化関連の遺伝子ＡＫＴ、ＦＯＸＯ３、ＮＦ−ｋＢ（ｐ６５）、ｍＴｏｒリン酸化体を測定した。比較遺伝子としてベータ−アクチンを測定した。また、記憶力改善効果を測定した。
【００６３】
１）脂質過酸化物の分析
実験動物の大腸組織１００ｍｇにプロテアーゼインヒビターカクテルが含有された２５０μｌのＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒを添加して均質化した。その後、４℃、１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上澄液を−８０℃で保管しながら脂質過酸化の分析に使用した。
大腸組織内の脂質過酸化の程度は、ＴＢＡＲＳ分析キット（Cayman chem.、ＵＳＡ）を使用して分析した。大腸組織の均質液１００μｌを５ｍｌのポリプロピレンスクリューキャップ遠心分離チューブに入れた後、１００μｌのＳＤＳ溶液を添加して軽く振った。４ｍｌのカラー試薬をチューブに添加した後、１時間熱湯に入れて反応を中止した。その後、４℃、１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、室温で３０分間静置し、ＥＬＩＳＡ読取機を利用して５４０ｎｍで吸光度を測定した。標準物質としてマロンアルデヒド（ＭＤＡ）を使用して標準曲線を作成し、これから生成されたＭＤＡの量を測定した。
【００６４】
２）スーパーオキシドディスムターゼ（Superoxide dismutase）（ＳＯＤ）の活性
Ｃｕ、Ｚｎ−ＳＯＤ活性は、キサンチンオキシダーゼシトクロム（xanthine oxidase-cytochrome）Ｃシステムを使用して測定した。５０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．８、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ含有）２．４ｍｌ、０．１ｍＭのフェリチトクロムＣ０．３ｍｌ、１％のデオキシコレート０．２ｍｌ、１．５ｍＭのシアン化カリウム０．１ｍｌ、０．５ｍＭのキサンチン０．３ｍｌ及び希釈キサンチンオキシダーゼ２０ｍｌをよく混合して、フェリチトクロムＣの減少率を２５℃、５５０ｎｍで測定した。ＳＯＤの１ｕｎｉｔは、シトクロムＣの５０％減少を阻害するためのＳＯＤの量と定義した。
【００６５】
３）カタラーゼ（Ｃａｔａｌａｓｅ）の活性
５０ｍＭのリン酸塩バッファー（ｐＨ７．０）２ｍｌに酵素原１００μｌを加え、１０ｍＭのＨ２Ｏ２溶液を１ｍｌ加えて２４０ｎｍで２分間吸光度の減少を測定した。１ｕｎｉｔは、１分間Ｈ２Ｏ２の１ｍｏｌを分解する酵素の量と定義した。
【００６６】
４）グルタチオン（ＧＳＨ）
ＧＳＨ濃度は、サンプルをリン酸塩バッファーで希釈してｏ−フタルアルデヒドを加え、１５分振とう後、励起波長３４５ｎｍ、放射波長４２５ｎｍで蛍光を測定した。
上記のような４種の実験の結果、下記の表６に示すように、実験に使用した３種の菌株は、全て優れた抗酸化及び抗老化の結果を表した。最も優れた菌株は、Ｃ２９であり、次いでＣ２４、Ｃ３の順であった。
【００６７】
【表６】
0006009080.tif 000007
【００６８】
また、実験動物の大腸組織１００ｍｇにプロテアーゼインヒビターカクテルが含有された２５０μｌのＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（Gibco社）を添加して均質化した。４℃、１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、上澄液を−８０℃で保管しながら、フォスファー−ＦＯＸＯ３、フォスファー−ｐ６５、ｐ６５、フォスファー−ｍＴｏｒ、フォスファー−ＡＫＴ及びβ−アクチンを免疫ブロット方法で測定した。
【００６９】
上澄液を取ってＳＤＳ１０％（ｗ／ｖ）のポリアクリルアミドゲルで１時間３０分間電気泳動をした（サンプル、５０μｇ）。電気泳動したものをニトロセルロース紙に１００Ｖ、４００ｍＡで１時間１０分間トランスファーし、このトランスファーしたニトロセルロース紙を３０分間５％の脱脂乳でブロッキングした後、５分ずつ３回ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄し、１次抗体（Santa Cruz Biotechnology、米国）を１：１００で一晩中反応させた。その後、１０分ずつ３回洗浄した後、２次抗体（Santa Cruz Biotechnology、米国）を１：１０００で１時間２０分間反応させた。その後、１５分ずつ３回洗浄し、蛍光発色させて現像した。
【００７０】
有効成分とＬＰＳ処理しないものを除いて、同一に処理した細胞を対照群とした。その結果、図８に示すように、Ｃ２９またはＣ３で処理した試験群の場合、非処理群に比べてｐ−ｐ６５、ｐ−ＦＯＸＯ３、ｐ−ｍＴｏｒ、ｐ−ＡＫＴなどが顕著に減ることが確認され、これは、Ｃ２９またはＣ３による抗酸化及び抗老化効果をよく示すものである。
【００７１】
５）Ｙ字形迷路実験（Y-maze task）
Ｙ字形迷路測定装置は、３個の通路（arm）を伸ばせてアルファベットＹ字状をなし、各枝は、長さ２５ｃｍ、高さ１４ｃｍ、幅５ｃｍであり、同一の角度で位置する。Ｙ字形迷路の一通路の終端部に実験動物の頭部が向かうように置き、８分間自由に通路を歩き回るようにする。動物の動きを記録し、動物の後ろ足まで通路に入った場合を通過したもの（arm entry）と見なす。動物の動きを交差回数（alternation）で表すが、交差回数とは、動物が連続的に３個の通路を通過した時に一度交差したことと定義する。自発的な交差行動量は、実際交差回数と最大可能な交差回数（即ち、総交差回数から２を引いた値）の百分比で表示する。
【００７２】
実験において、Ｃ２９乳酸菌、Ｃ３乳酸菌及びＣ２４乳酸菌を１６ヶ月令マウスに、それぞれ１×１０９ＣＦＵ（個）を１日１回ずつ、２日間投与した。本試験においては、幼いマウスに比べて老化マウスは記憶力が劣るため、スコポラミンは投与しなかった。
その結果、図９で確認できるように、老化したマウスの記憶力の改善効果は、Ｃ２９乳酸菌が最も優れ、次いでＣ３乳酸菌、Ｃ２４乳酸菌の順であった。
【００７３】
６）水中迷路試験（Morris water maze test）
円形の水槽（直径１００ｃｍ、高さ３５ｃｍ）に温度２３℃の水中に設置したプラットホームが見えないように粉ミルクを入れて不鮮明にした水を１５ｃｍの深さで満たした。マウスを利用する場合、プラットホーム（platform、直径４．５ｃｍ、高さ１４．５ｃｍ）を、全体水槽を４等分したもののうち一つの扇形中央におき、プラットホーム上端が水面０．５ｃｍ下に位置するようにした。この装置を位置が確認できるような標識のある実験室に設置した。訓練試験（Training trial）は、１日３回ずつ、５日間連続的に実施した。一旦、マウスがプラットホームを見つければ約１０秒間プラットホームに留まるようにおき、元のケージに帰らせた５分後に次の試験を実施した。もしマウスが１２０秒以内にプラットホームを見つけなければ、これをプラットホームに１０秒間置いてから試験を終わらせた。訓練が終わった動物を対象として最後の訓練試験２４時間後にプローブ試験（probe test）を実施した。この時は、水槽からプラットホームを除去し、９０秒間プラットホームが置かれていた４分円に留まる時間を測定して百分率で表した。
【００７４】
実験において、Ｃ２９乳酸菌、Ｃ３乳酸菌及びＣ２４乳酸菌を１６ヶ月令マウスにそれぞれ１×１０９ＣＦＵ（個）を１日１回ずつ、４日間投与しながら、毎日水泳時間を測定した。本試験では、幼いマウスに比べて老化マウスは記憶力が劣るため、スコポラミンは投与しなかった。
その結果、図１０で確認できるように、老化したマウスの記憶力の改善効果は、Ｃ２９乳酸菌が最も優れ、次いでＣ３乳酸菌、Ｃ２４乳酸菌の順であった。
【実施例４】
【００７５】
実施例４．Ｃ２９及びＣ３乳酸菌の同定
前記実験において優れた抗酸化及び抗老化効果及び認知症改善効果を有すると確認されたＣ２９菌株とＣ３菌株を同定するために、１６Ｓ  ｒＤＮＡ遺伝子配列の比較を通じた系統遺伝学的分析を実施した。
ＢＬＡＳＴ類似性調査プログラムを利用してｒＤＮＡの塩基配列を比較し、多様なラクトバチルス種菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡ遺伝子配列と共に多重配列アライメントを進行した後、系統樹における位置を判別した結果、Ｃ２９乳酸菌は、ラクトバチルス・プランタルム菌株ＢＩＭ  Ｂ−５３６とラクトバチルス・ペントーサス菌株ＬＳ３と９９．９％以上の相同性を表して、ラクトバチルス・ペントーサス変種プランタルムＣ２９と命名し、寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１２年７月９日付で寄託番号ＫＣＣＭ１１２９１Ｐとして寄託した。また、Ｃ３乳酸菌は、ラクトバチルス・カルバタスと９９．９％以上の相同性を表して、ラクトバチルス・カルバタスＣ３と命名し、寄託機関である韓国微生物保存センター（ＫＣＣＭ）に２０１２年７月９日付で寄託番号ＫＣＣＭ４３００９として寄託した。
【実施例５】
【００７６】
実施例５．Ｃ２９またはＣ３菌株発酵組成物の抗認知症効果の確認
Ｃ２９またはＣ３菌株で発酵した大豆または脱脂大豆発酵組成物、ハリギリの樹皮発酵組成物、ニンジン発酵組成物、及びツルニンジン発酵組成物の抗認知症効果を確認するために、前記実施例２と同一の方法で実験動物を利用して受動回避反応試験（Passive avoidance task test）を実施した。
【００７７】
５−１．発酵組成物の製造
大豆または脱脂大豆粉末１０ｇを水９０ｍｌに懸濁して滅菌し、１×１０８ＣＦＵ（個）／０．１ｍｌのＣ２９またはＣ３菌株１０ｍｌを入れて２４時間培養した。
ハリギリの樹皮水抽出物、ニンジン水抽出物及びツルニンジン水抽出物のそれぞれ１０ｇを水９０ｍｌに懸濁して滅菌し、１×１０８／０．１ｍｌのＣ２９またはＣ３菌株１０ｍｌを入れて２４時間培養した。
【００７８】
５−２．受動回避反応試験（Passive avoidance task test）
上記方法により製造された大豆または脱脂大豆発酵組成物、ハリギリの樹皮発酵組成物、ニンジン発酵組成物、及びツルニンジン発酵組成物のそれぞれの０．１ｍｌを１日１回ずつ、２日間認知症モデル動物であるマウスに投与した。スコポラミン（Scopolamine）（０．９ｍｇ／ｋｇ）は、乳酸菌の最後の投与１時間後に投与した。その結果、図１２で確認できるように、Ｃ２９で発酵させた大豆発酵組成物が受動回避に対する記憶が最もよく維持され、認知症治療剤であるタクリン（Tacrin、ＴＡＣ、１０ｍｇ／ｋｇ）より効果が優れていることが表れ、次いでＣ２９で発酵させたニンジン発酵組成物、Ｃ３で発酵させた大豆発酵組成物、Ｃ２９で発酵させたツルニンジン発酵組成物の順であった。これは、Ｃ２９またはＣ３菌株で発酵させた発酵組成物が記憶改善効果を有することを示すものである。
上記のような実験結果は、Ｃ２９またはＣ３菌株で発酵させた発酵組成物が記憶力改善を通じて認知症改善効果を表すことをよく示す。
【図１】
0006009080.tif 000008
【図２】
0006009080.tif 000009
【図３】
0006009080.tif 000010
【図４】
0006009080.tif 000011
【図５】
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【図６】
0006009080.tif 000013
【図７】
0006009080.tif 000014
【図８】
0006009080.tif 000015
【図９】
0006009080.tif 000016
【図１０】
0006009080.tif 000017
【図１１】
0006009080.tif 000018
【図１２】
0006009080.tif 000019
【配列表】
0006009080000001.app