(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１０重量％から約５０重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの遊離した塩基および水溶性生物学的適合性ポリマーを含有する固体分散物であって、前記５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの約２５重量％から約１００重量％が非晶質であり、かつ前記水溶性生物学的適合性ポリマーが酢酸フタル酸セルロースである、固体分散物。
【請求項２】
約５０％から約１００重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが非晶質であることを特徴とする、請求項１に記載の固体分散物。
【請求項３】
約９５重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが非晶質であることを特徴とする、請求項２に記載の固体分散物。
【請求項４】
固体分散物の最小直径が、約１から約１００マイクロメータであることを特徴とする、請求項１に記載の固体分散物。
【請求項５】
約２５重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む、請求項１に記載の固体分散物。
【請求項６】
前記固体分散物が噴霧乾燥した分散物またはホットメルト押出し成形物であることを特徴とする、請求項１に記載の固体分散物。
【請求項７】
前記固体分散物が噴霧乾燥した分散物であることを特徴とする、請求項６に記載の固体分散物。
【請求項８】
医薬的に不活性な担体および約１０重量％〜約５０重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含み、約２５％から約１００重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが非晶質であり、かつ前記５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンは、水溶性生物学的適合性ポリマーをさらに含む固体分散物内部に含有し、前記水溶性生物学的適合性ポリマーは酢酸フタル酸セルロースである、医薬製剤。
【請求項９】
約９５重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが非晶質であることを特徴とする、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
約２５重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含むことを特徴とする、請求項８に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬化学の分野に関し、より具体的には、医薬製剤、ならびにかかる製剤を調製するために使われる中間体およびかかる製剤を製造するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病およびその他の代謝疾患の治療に有用なピリミジン化合物は、参照により、その全体を本明細書に組み込む  米国特許第７，６３８，５４１号に開示されている。かかる化合物の１つは、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンである。この化合物を調製する方法は、その出願全体を参照により組み込む２０１０年６月４日出願の米国特許第６１／３５１，８０３号に規定されている。本化合物は、ＧＰＲ１１９のアゴニストである、膵島および胃腸管で発現されるＧＰＣＲである。ＧＰＲアゴニストは、グルコース依存性インスリン分泌およびインクレチンホルモンの放出を刺激し、β細胞の健康の維持に繋がることが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従来、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの記述された製剤に備わったバイオアベイラビリティの特性は最適には満たなかった。そこで、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンのバイオアベイラビリティを高めた。
【０００４】
本発明は、医薬的に不活性な担体および治療的に有効量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む医薬製剤を提供する。本明細書に開示される医薬製剤は、向上した溶解度および薬物動態プロファイルを示す。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】刺激した胃液中で試験した化合物Ａの溶融押出し組成物の非シンク（ｎｏｎ−ｓｉｎｋ）溶解プロファイルを示す。
【図２】刺激した摂食時の腸液中で試験した化合物Ａの溶融押出し組成物の非シンク溶解プロファイルを示す。
【図３】刺激した空腹時の腸液中で試験した化合物Ａの溶融押出し組成物の非シンク溶解プロファイルを示す。
【図４】２５％の化合物Ａ対ＣＡＰの噴霧乾燥分散物（ＳＤＤ）の製造工程のフローチャートを示す。
【図５】ヘッドスペースガスクロマトグラフィー（ＧＣ）解析に基く、２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤに対する４０℃／相対湿度（ＲＨ）３０％でのトレイ乾燥時間の関数として、残留アセトン含有量を示す。
【図６】２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤおよび結晶性化合物Ａのｉｎ  ｖｉｔｒｏ  での溶解結果を示す。
【図７ａ】コーティングのない化合物ＡのＳＤＤ２５ｍｇ錠剤の製造工程のフローチャートを示す。
【図７ｂ】コーティングのない化合物ＡのＳＤＤ２５ｍｇ錠剤の製造工程のフローチャートを示す。
【図８】コーティングのない化合物ＡのＳＤＤ１００ｍｇ錠剤の製造工程のフローチャートを示す。
【図９】コーティングのない化合物ＡのＳＤＤ（噴霧乾燥分散物）２５ｍｇおよび１００ｍｇ錠剤のフィルムコーティングの工程フローチャートを示す。
【図１０】ＩＦＧを患う被験体に化合物Ａを反復して（５）１日１回投与した後の濃度−時間プロファイルを示す。
【図１１】１回量としての化合物Ａの微晶質とＳＤＤ（噴霧乾燥分散物）製剤とのＡＵＣの比較を示す。
【図１２】１回量としての化合物Ａの微晶質とＳＤＤ（噴霧乾燥分散物）製剤とのＣｍａｘの比較を示す。
【図１３】糖尿病前症を患う被験体に化合物Ａの１日量を繰返し（４）投与した後のＭＭＴＴ中のグルコース可動域の低下率（パーセント）をグラフで示す。
【図１４】ベースラインでグルコース不耐性の度合いが増加している被験体のプールしたサブセットにおいて、化合物Ａの１日量を繰返し（４）投与した後のＭＭＴＴ中のグルコース可動域の低下率（パーセント）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本発明は、医薬的に不活性な担体および治療有効量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化１】
0005847813.tif 000002
を含む医薬製剤を対象とする（ただし、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの少なくとも一部［は非晶質である］）。ただし、本発明をより詳しく記述する前に、まず下記の用語を定義しておく。
【０００７】
本発明をさらに記述する前に、本発明は、記述される特定の実施形態に限定されず、したがって当然ながら変化してもよいことが理解されるべきである。さらに、本明細書において用いられる用語は、特定の実施形態を記述する目的のためだけであり、限定を意図するものでなないことも理解されるべきである。なぜなら、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。
【０００８】
本明細書および添付された特許請求の範囲内で使用される際には、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に他を示すのでない限り、複数の指示対象も包含することに注意すべきである。それゆえ、例えば、「医薬的に不活性な担体」と言及されている場合には、複数のそのような担体も包含する。
【０００９】
定義
特に他に定義されているのでない限り、本明細書で用いられる技術的および科学的用語はすべて、本発明が属する分野の専門家により共通に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書で用いられる場合、以下の用語は以下の意味を有する。
【００１０】
本明細書において用いられた場合、用語「含んでいる」または「含む」は、組成物および方法が、列挙されている要素を含み、他のものを排除しないことを意味する。組成物および方法を定義するために用いるときの「実質的に〜から成る」は、明記された用途のための組み合わせにとっていずれの実質的に有用なもの以外の要素も含まないことを意味するものとする。したがって、本明細書において定義するような要素から実質的に成る組成物は、請求する発明の基本的および新規の特性に著しい影響を及ぼさないその他の材料またはステップを除外しない。「〜から成る」は、他の成分の微量元素および実質的方法ステップ以上のものを除外することを意味するものとする。これらの変転用語（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｔｅｒｍ）のそれぞれによって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。
【００１１】
範囲も含めて数値の指定、例えば、温度、時間、量および濃度の前に用いられたとき、「約」という用語は、＋または−１０％、＋または−５％または＋または−１％の範囲で変化し得る概算値を意味する。
【００１２】
本明細書で用いられる場合、「化合物Ａ」という用語は、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化２】
0005847813.tif 000003
を指す。
【００１３】
本明細書で用いられる場合、「結晶質」という用語は、各次元に少なくとも約１００の反復単位を持ち、３次元で長距離秩序を示す、固体５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）―チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを指す。
【００１４】
本明細書で用いられる場合、「非晶質」という用語は、原子の位置において何らの長距離秩序も示さない、固体５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを指す。したがって、「非晶質」という用語は、実質的に秩序を有さない固体だけでなく、わずかな程度の秩序を有し得る固体も包含するが、その秩序は３次元より少なく、かつ／または短い距離にしか過ぎない。非晶質化合物は、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）結晶解析法、固体ＮＭＲまたは示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）などの熱的技術など、当業で公知の技法によって特徴を明らかにされ得る。
【００１５】
本明細書で用いられる場合、「固体分散物」という用語は、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの少なくとも一部が非晶質であり、水溶性の生物学的適合性ポリマーに分散している分散物を指す。本発明の固体分散物は、以下に限定されないが、機械的方法、熱的方法および溶媒による方法によって形成される固体分散物も含め、当業で公知の方法によって調製されることが可能である。典型的な機械的方法には、粉砕および押出しがあり；溶融法には、高温融解、溶媒修飾融合（ｓｏｌｖｅｎｔ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｆｕｓｉｏｎ）および融解凝固法などがあり；溶媒による方法には、非溶媒沈殿、スプレーコーティングおよび噴霧乾燥などがある。例えば、関係する開示が参照により本明細書に組み込まれる、以下の米国特許を参照されたい：第５，４５６，９２３号および第５，９３９，０９９号（押出し法による分散物の形成を記述している）；第５，３４０，５９１号および第４，６７３，５６４号（粉砕法による分散物の形成を記述している）；第５，７０７，６４６号および第４，８９４，２３５号（融解凝固法による分散物の形成を記述している）。１つの実施形態では、欧州特許出願公開第０  ９０１  ７８６  Ａ２号で開示されているように、固体分散物は噴霧乾燥法により形成される。この方法では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンは、水溶性生物学的適合性ポリマーの有無に関わらず、アセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノールおよびメチルエチルケトンなどの適切な溶媒中で溶解され、その後、溶媒は噴霧乾燥によって溶液から速やかに除去され、固体分散物が形成される。本発明の固体分散物の例は、水溶性生物学的適合性ポリマーと実質的に均一に混合された約２５重量％の化合物Ａを含む、噴霧乾燥された固体分散物である。
【００１６】
本明細書で用いられる場合、「医薬的に不活性な担体」という用語は、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンと不利益な形で化学反応しないという意味で不活性であり、薬学的に許容可能であり、生理的に適切なｐＨ（例えば、ｐＨ１〜８）において水溶液中で少なくともある程度の溶解度を有する担体を指す。医薬的に不活性な担体の例は、文献で公知されており、例示としてのみ挙げると、酢酸フタル酸セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ラクトース、ラクトース一水和物、クロスポビドン、微晶質セルロース、コロイド状二酸化シリカなどがある。
【００１７】
本明細書で用いられる場合、「水溶性生物学的適合性ポリマー」という語句は、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンと、そのｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に有害となる不利益な形で相互作用せず、薬学的に許容可能であり、生理的に適切なｐＨ（例えば、ｐＨ１〜８）にて、水溶液中、少なくともある程度の溶解度を有し、上で用語を定義した固体分散物を形成するために化合物Ａと混合したとき、化合物Ａの溶解度を高めるポリマーを指す。水溶性生物学的適合性ポリマーは、中性またはイオン性とすることができ、ｐＨ１から８の範囲の少なくとも一部に渡り、少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬの水溶解度を有する。１つの実施形態では、ポリマーのガラス遷移温度（Ｔｇ）は、生じる固体分散物が比較的高いＴｇ（相対湿度（ＲＨ）５０％において５０℃より高い）を有するようになるのに十分なだけ高い。ポリマーのＴｇは、５０％ＲＨにて、少なくとも１００℃、５０％ＲＨにて、少なくとも１０５℃または５０％ＲＨにて、さらに少なくとも１１０℃となり得る。
【００１８】
本明細書で用いられる場合、「実質的に均一」という用語は、任意の与えられた量の固体分散物中における化合物Ａの濃度が、他の任意の与えられた量の固体分散物中における濃度と実質的に均一であるように、固体分散中に分散している、上で定義した固体分散物を指す。
【００１９】
本明細書で用いられる場合、「治療有効量」という語句は、担当の臨床医によって求められている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的反応を引き出す量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを意味する。「治療有効量」には、疾患の治療の目的で哺乳類に投与されたとき、疾患のかかる治療に作用するのに十分な量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが含まれる。「治療有効量」は、医薬的に不活性な担体、疾患およびその重度ならびに治療の対象となる該哺乳類の年齢、体重などによって変化する。
【００２０】
本発明は、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの水溶解度およびバイオアベイラビリティは、化合物の少なくとも一部（例えば、２５％より多く）が非晶質であり、水溶性生物学的適合性ポリマーと組み合わせて、好ましく用いられているときに高まるという発見に部分的に基礎を置いている。いかなる理論にも制約されるものではないが、水溶性生物学的適合性ポリマーは、本化合物の非晶質製の維持に貢献すると信じられている。したがって、本発明は、医薬的に不活性な担体および治療有効量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化３】
0005847813.tif 000004
を含む医薬製剤を対象とする（ここで、前記５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの少なくとも一部は  非晶質である）。
【００２１】
本発明は、本発明において有用な中間体もさらに対象とし、ここで、前記中間体は、水溶性生物学的適合性ポリマー、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む固体分散物であるものとし、ここで、前記５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの少なくとも一部は非晶質であるものとする。
【００２２】
製剤
１つの態様では、医薬的に不活性な担体および５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化４】
0005847813.tif 000005
を含む医薬製剤が提供され、ここで、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの約２５重量％から約１００％は非晶質であり、水溶性生物学的適合性ポリマーをさらに含む固体分散物中に含まれる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの約５０重量％から約１００重量％は、非晶質である。いくつかの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの約７５重量％から約１００重量％は非晶質である。いくつかの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの約９５重量％は非晶質である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明は、水溶性生物学的適合性ポリマーをさらに含む固体分散物全体に実質的に均一に分散する５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの固体分散物をさらに含む。本発明の医薬製剤中で使用するのに適した水溶性生物学的適合性ポリマーは、セルロース系または非セルロース系とすることができる。ある種の実施形態では、ポリマーは水溶液中で中性またはイオン性である。これらの中で、イオン性ポリマーおよびセルロース系ポリマーが好ましく、イオン性セルロース系ポリマーがより好ましい。
【００２５】
代表的な水溶性ポリマーとしては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、トリメリト酸酢酸セルロース、およびこれらの混合物が挙げられる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、前記水溶性ポリマーは、ポビドン、コポビドン、ヒプロメロースアセテートサクシネート、ポリエチレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、トリメリト酸酢酸セルロースおよび酢酸フタル酸セルロースから成る群から選択される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、前記水溶性生物学的適合性ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、トリメリト酸酢酸セルロースおよび酢酸フタル酸セルロースから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、前記ポリマーは酢酸フタル酸セルロースである。
【００２８】
いくつかの実施形態では、該固体分散物は、約５重量％から約７５重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、該固体分散物は、医薬的に不活性な担体をさらに含む医薬製剤を提供するために使われ、該製剤は、約１０重量％から約５０重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、該医薬製剤は、約２０重量％から約３０重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、該医薬製剤は、約５重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン、あるいは約１０重量％、または約１５重量％、または約２０重量％、または約２５重量％、または約３０重量％、または約３５重量％、または約４０重量％、または約４５重量％、または約５０重量％、または約５５重量％、または約６０重量％、または約６５重量％、または約７０重量％、または約７５重量％、または約８０重量％、または約８５重量％、または約９０重量％、または約９５重量％を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンは、固体分散物中、比較的純粋な非晶質ドメインに存在することができ、または、いくつかの実施形態では、固体分散物全体を通して、実質的に均一に分散される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本発明の固体分散物は、実質的に均一であり、水溶性生物学的適合性ポリマーおよび治療有効量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含んでいる。ある種の実施形態では、固体分散物中、比較的純粋な非晶質ドメインまたは領域に存在している５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの割合は、比較的小さく、組成物中の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの全体量のおよそ２０重量％未満、好ましくは１０重量％未満である。
【００３４】
その方法の態様の１つにおいて、本発明は、治療有効量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンおよび水溶性生物学的適合性ポリマーを含む固体分散物を産生する方法を対象とし、ここで約２５重量％から約１００重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンは非晶質であり、該方法は次のステップを含む：
ａ）  ５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンと溶媒とを混合し、溶液Ａを形成すること；
ｂ）  さらに水溶性生物学的適合性ポリマーを混合すること；
ｃ）  溶液Ａから溶媒を速やかに除去すること。
【００３５】
いくつかの実施形態では、非晶質形態の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンは、結晶質５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを溶媒と混合し、溶液Ｃを形成し、溶液Ｃを速やかに除去することにより調製することができる。その後、本明細書に記述の固体分散物を形成するために、非晶質形態の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを使用することができる。
【００３６】
その方法の態様のもう１つにおいて、本発明は、約２５重量％から約１００重量％の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが非晶質である固体分散物を産生する方法を対象とし、該方法は次のステップを含む：
ａ）  非晶質５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンと溶媒とを混合し、溶液Ａを形成すること；
ｂ）  溶液Ａと水溶性生物学的適合性ポリマーとを混合し、溶液Ｂを形成すること；および
ｃ）  溶液Ｂから溶媒を速やかに除去すること。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ステップａ）の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンは結晶質である。ただし、１つの実施形態では、非晶質形態の本化合物を使用することができる。
【００３８】
任意の適切な水溶性生物学的適合性ポリマーをステップｂ）で使用することが可能であると考えられている。非制限的な例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、トリメリト酸酢酸セルロースおよび酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。１つの実施形態では、水溶性生物学的適合性ポリマーは酢酸フタル酸セルロースである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、溶液Ｂから溶媒を速やかに除去するステップでは、噴霧乾燥機が使用される。噴霧乾燥機は、液体流（例えば、上記の溶液ＡまたはＢ）を乾燥ガスと混合し、溶質または懸濁液を蒸発によって固体と溶媒に分離する。固体はドラムまたはサイクロンで回収することができる。液体入力流はノズルを通じて熱い蒸気に噴霧され、蒸発する。湿気が液滴から速やかに離脱して、固体ができる。ノズルは通常、液滴をできるだけ小さくし、熱伝統および脱水率を最大化するために使われる。可燃性溶媒が使われるとき、通常、噴霧乾燥装置の全ての部分から酸素が除去される。したがって、本明細書で開示された方法での使用に適した乾燥ガスは、窒素、アルゴン、二酸化炭素、ヘリウム、クリプトンおよびゼノンなどの不活性ガスを、約１２００ｇ／分から約２５００ｇ／分の流量で含む。いくつかの実施形態では、流量は約１８５０ｇ／分である。典型的な液滴の大きさは、選択されたノズルに応じて、約１から約５００マイクロメータの範囲を取ることができる。したがって、いくつかの実施形態では、固体分散物の最小直径は、約１から約５００マイクロメータ、または約１から約４００マイクロメータ、または約５から約３００マイクロメータ、または約５から約２００マイクロメータ、または約５から約１００マイクロメータ、または約５から約８０マイクロメータ、または約５から約６０マイクロメータ、約５から約４０マイクロメータ、約５から約５０マイクロメータ、または約１０から約４０マイクロメータ、または約１５から約３５マイクロメータ、または約２５マイクロメータである。
【００４０】
いくつかの実施形態では、溶液Ｂは１７５ｇ／分から約２５０ｇ／分の速度で噴霧乾燥機に送達される。いくつかの実施形態では、溶液Ｂは約２００ｇ／分から約２３０ｇ／分の速度で噴霧乾燥機に送達される。いくつかの実施形態では、溶液Ｂは、約１５０ｐｓｉから約５００ｐｓｉの圧力で噴霧乾燥機に送達される。いくつかの実施形態では、溶液Ｂは、約２００ｐｓｉから約４５０ｐｓｉの圧力で噴霧乾燥機に送達される。いくつかの実施形態では、溶液Ｂは、約３００ｐｓｉから約３１５ｐｓｉの圧力で噴霧乾燥機に送達される。商業規模での製造の場合、乾燥ガスの流量は大幅に増加させることが可能である。上記は化合物Ａの少なくとも一部が非晶質で留まるように、溶媒を速やかに除去することを可能にする。
【００４１】
噴霧乾燥機での使用に適した溶媒には、極性有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、およびブタノールなどのアルコール；アセトン、メチルエチルケトンおよびメチルイソブチルケトンなどのケトン；酢酸エチルおよび酢酸プロピルなどのエステル；ならびにテトラヒドロフラン、アセトニトリル、塩化メチレン、トルエンおよび１，１，１−トリクロロエタンなどの、その他の種々の溶媒が含まれる。いくつかの実施形態では、溶液Ａの溶媒はアセトンである。
【００４２】
噴霧乾燥機の温度は、使用している溶媒およびノズルのサイズに基いて調節することができる。いくつかの実施形態では、噴霧乾燥は、約１００℃から約１５０℃の間の温度で実施される。いくつかの実施形態では、噴霧乾燥は、約１１５℃から約１３５℃の間の温度で実施される。いくつかの実施形態では、噴霧乾燥は、約１２５℃の温度で実施される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、水溶性生物学的適合性ポリマーをホットメルトし、所望の量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを、ホットメルトの均一な分散物を作り出すための条件下で、ホットメルトに添加した後、ホットメルトを押出し成形して固体分散物を形成することで、本発明の固体分散物を調製することができる。ここで産生される固体分散物は、「ホットメルト押出成形物」と称されることもある。ホットメルトの用途に適したポリマーとしては、例えば、ポビドン、コポビドン、ヒプロメロースアセテートサクシネート、およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【００４４】
本発明の化合物
本発明の医薬製剤は、本明細書で「化合物Ａ」と総称される、治療有効量の５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを含む。化合物Ａの調製方法は、その出願の全体を参照により組み込む、２０１０年６月４日出願の米国特許第６１／３５１，８０３号で開示されている。本明細書に開示される医薬製剤での使用のための５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの代表的な調製方法は、本明細書で以下に詳述される。
【００４５】
１つの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化５】
0005847813.tif 000006
を調製するための方法が提供され、該方法は以下を含む：
（ａ）  式（Ｉ）の化合物を二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｂｏｃ２Ｏ）と接触させ、式（ＩＩ）の化合物を形成すること
【化６】
0005847813.tif 000007
（ｂ）  式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と接触させ、式（ＩＶ）の化合物を形成すること
【化７】
0005847813.tif 000008
（ｃ）  式（ＩＶ）の化合物を式（Ｖ）の化合物と接触させ、式（ＶＩ）の化合物を形成すること
【化８】
0005847813.tif 000009
（ｄ）  式（ＶＩ）の化合物を式（ＶＩＩ）の化合物と接触させ、式（ＶＩＩＩ）の化合物を形成すること
【化９】
0005847813.tif 000010
（ｅ）  式（ＶＩＩＩ）の化合物を酸と接触させ、式（ＩＸ）の化合物を形成すること
【化１０】
0005847813.tif 000011
（ｆ）  塩基の存在下で、ジメチルホルムアミド中、式（ＩＸ）の化合物を式（Ｘ）の化合物と（式中、ＬはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３およびＯＳ（Ｏ）ＣＦ３などの脱離基である）と接触させ、
【化１１】
0005847813.tif 000012
５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを形成すること。
【００４６】
１つの実施形態では、ＮａＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３  、Ｋ２ＣＯ３  、Ｃｓ２ＣＯ３  および  ＮａＨなどの塩基の存在下で、式（ＸＸＩＶ）の化合物を式（ＶＩＩ）の化合物
【化１２】
0005847813.tif 000013
と接触させることを含む、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化１３】
0005847813.tif 000014
を調製するための方法が提供される。
【００４７】
１つの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化１４】
0005847813.tif 000015
を調製するための方法が提供され、該方法は以下を含む：
ａ）  式（Ｉ）の化合物を式（ＸＸＩ）の化合物  と接触させ、式（ＸＸＩＩ）の化合物を形成すること
【化１５】
0005847813.tif 000016
（式中、ＴはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３およびＯＳ（Ｏ）ＣＦ３などの脱離基である）；
（ｂ）  式（ＸＸＩＩ）の化合物  を式（ＩＩＩ）の化合物と接触させ、式（ＸＸＩＩＩ）の化合物を形成すること
【化１６】
0005847813.tif 000017
（ｃ）  式（ＸＸＩＩＩ）の化合物を式（Ｖ）の化合物と接触させて、式（ＸＸＩＶ）の化合物を形成すること
【化１７】
0005847813.tif 000018
（ｄ）  式（ＸＸＩＶ）の化合物を式（ＶＩＩ）の化合物
【化１８】
0005847813.tif 000019
と接触させて、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを形成すること。
【００４８】
１つの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化１９】
0005847813.tif 000020
を調製するための方法が提供され、該方法は以下を含む：
（ａ）  式（ＩＶ）の化合物を酸と接触させ、式（ＸＩ）の化合物を形成すること
【化２０】
0005847813.tif 000021
（ｂ）  式（ＸＸＩ）の化合物（式中、ＴはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３およびＯＳ（Ｏ）ＣＦ３などの脱離基である）を接触させ、式（ＸＸＩＩＩ）の化合物を形成すること
【化２１】
0005847813.tif 000022
（ｃ）  式（ＸＸＩＩＩ）の化合物を式（Ｖ）の化合物と接触させ、式（ＸＸＩＶ）の化合物を形成すること
【化２２】
0005847813.tif 000023
（ｄ）  式（ＸＸＩＶ）の化合物を式（ＶＩＩ）の化合物と接触させ、
【化２３】
0005847813.tif 000024
５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを形成すること。
【００４９】
いくつかの態様では、式（ＩＸ）および（Ｘ）の化合物は、６０℃から１００℃の温度で接触させる。他の態様では、温度は７０℃から９０℃、７９℃から８１℃または８０℃である。
【００５０】
いくつかの態様では、塩基はＮａＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ（トリエチルアミン）およびｉ−Ｐｒ２Ｎｅｔ（ジイソプロピルエチルアミン）である。
【００５１】
いくつかの実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）の化合物を酸と接触させることにより調製される
【化２４】
0005847813.tif 000025
【００５２】
いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（ＶＩ）の化合物を式（ＶＩＩ）の化合物と接触されることにより調整される
【化２５】
0005847813.tif 000026
【００５３】
いくつかの態様では、式（ＶＩ）と式（ＶＩＩ）の化合物とを、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびアセトニトリル（ＭｅＣＮ）から選択される極性有機溶媒中、塩基の存在下で接触させる。いくつかの態様では、該塩基は、ＮａＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３およびＮａＨから成る群から選択される。
【００５４】
いくつかの態様では、溶媒の化合物はＭｅＣＮである。他の態様では、溶媒はＤＭＦである。
【００５５】
いくつかの態様では、該塩基はＣｓ２ＣＯ３である。さらなる他の態様では、該塩基はＫ２ＣＯ３である。
【００５６】
いくつかの実施形態では、式（ＶＩ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物を式（Ｖ）の化合物と接触させることにより、調製される
【化２６】
0005847813.tif 000027
【００５７】
いくつかの態様では、式（ＩＶ）および式（Ｖ）の化合物を極性有機溶媒中、塩基の存在下で還流させる。いくつかのかかる態様では、該塩基はＮａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯおよびＭｇＣＯ３から成る群から選択される。
【００５８】
いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、４−アミノフェノールをアジ化ナトリウムおよびオルトギ酸トリメチルと接触させることにより調製される。
【００５９】
いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と接触させることにより、調製される
【化２７】
0005847813.tif 000028
【００６０】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｂｏｃ２Ｏ）と接触させることにより調製される。
【００６１】
１つの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化２８】
0005847813.tif 000029
を調製するための以下を含む方法が提供される：
（ａ）  式（ＸＸＩＩＩ）の化合物を式（ＸＸＩＶ）の化合物と接触させ、式（ＸＸＶ）の化合物を形成すること
【化２９】
0005847813.tif 000030
（ｂ）  式（ＸＸＶ）の化合物を、還元剤、例えば、水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ４）、水素化ホウ素リチウム（ＬｉＢＨ４）またはジイソブチルアルミニウムヒドリド（ＤｉＢａｌ）と接触させて、式（ＸＸＶＩ）の化合物を形成する
【化３０】
0005847813.tif 000031
（ｃ）  式（ＸＸＶＩ）の化合物を、光延カップリング条件下で、式（ＶＩＩ）の化合物
【化３１】
0005847813.tif 000032
と接触させ、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを形成すること。
【００６２】
１つの実施形態では、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化３２】
0005847813.tif 000033
を調製するための方法が提供され、該方法は以下を含む：
（ａ）  式（ＸＸＩＩＩ）の化合物を式（ＸＸＩＶ）の化合物と接触させ、式（ＸＸＶ）の化合物を形成させること
【化３３】
0005847813.tif 000034
0005847813.tif 000035
（ｂ）  式（ＸＸＶ）の化合物を還元剤と接触させ、式（ＸＸＶＩ）の化合物を形成すること
【化３４】
0005847813.tif 000036
（ｃ）  式（ＸＸＶＩ）の化合物を式（ＸＸＶＩＩ）の化合物に変換すること
【化３５】
0005847813.tif 000037
（式中、ＱはＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３およびＯＳ（Ｏ）ＣＦ３などの脱離基である）；
（ｄ）式（ＸＸＶＩＩ）の化合物を式（ＶＩＩ）の化合物
【化３６】
0005847813.tif 000038
に接触させ、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンを形成すること。
【００６３】
１つの実施形態では、例えば、ＮａＯＨ、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３およびＮａＨなどの塩基の存在下で、式（ＸＸＶＩＩ）の化合物を、式（ＶＩＩ）の化合物
【化３７】
0005847813.tif 000039
0005847813.tif 000040
（式中、ＱはＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３およびＯＳ（Ｏ）ＣＦ３などの脱離基である）
と接触させることを含む、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジン
【化３８】
0005847813.tif 000041
の調製方法が提供される。
【００６４】
いくつかの態様では、以下の群から成る群から選択される、５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンの調製で使用するための中間化合物が提供される：
【化３９】
0005847813.tif 000042
0005847813.tif 000043
（式中、ＱはＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３、ＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３およびＯＳ（Ｏ）ＣＦ３などの脱離基である）。
【００６５】
他の実施形態では、フェニル環中の炭素原子について炭素１４同位元素標識を有する５−エチル−２−｛４−［４−（４−テトラゾル−１−イル−フェノキシメチル）−チアゾール−２−イル］−ピペリジン−１−イル｝−ピリミジンが提供される。標識化合物は、市販の１４Ｃ（Ｕ）］−４−アミノフェノール塩酸塩（Ａｒｃｈｅｍｉ１−８００−３３１−６６６１、ＡＲＣ−５４５）から次のスキームに従って、調製することができる：
【化４０】
0005847813.tif 000044
【００６６】
治療組成物および治療方法
本発明に従って、Ｉ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、およびメタボリック症候群から成る群から選択される疾病または症状の治療方法が提供される。該方法は、かかる治療を必要とする被験体に、有効量の本発明の医薬製剤を投与することを含む。
【００６７】
もう１つの態様では、ＧＰＲ１１９を発現している細胞中のＣａ２＋の細胞内濃度を上昇する方法が提供される。該方法は、ＧＰＲ１１９を発現する細胞を、本発明の医薬製剤に暴露することを含む。Ｃａ２＋濃度は、当業で公知の方法により測定することができる。
【００６８】
１つの実施形態では、ＧＰＲ１１９を発現する細胞は、膵臓細胞、膵島細胞またはベータ細胞、腸内分泌細胞、Ｌ細胞またはＫ細胞である。
【００６９】
本発明のもう１つの態様は、哺乳類、特にヒトにおけるインスリン産生を刺激する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の医薬製剤を哺乳類に投与することを含む。被験体への化合物の投与に反応して、インスリンがベータ細胞により産生される。本発明の医薬製剤の投与に反応した、実験動物におけるインスリン分泌を当業者が測定できる方法は、当業で公知である。
【００７０】
もう１つの態様では、本発明は、哺乳類、特にヒトにおけるインスリン分泌を刺激する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の医薬製剤を哺乳類に投与することを含む。被験体への医薬製剤の投与に反応して、インスリンがベータ細胞によって血流に分泌される。
【００７１】
本発明のさらなる態様は、哺乳類、特にヒトにおけるグルコース依存性インスリン分泌を刺激する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の医薬製剤を哺乳類に投与することを含む。被験体への投与後、インスリンがグルコースに依存する形でベータ細胞により血流に分泌される。本発明の医薬製剤の血中グルコース低下作用を示す方法は、当業で公知である。
【００７２】
もう１つの実施形態では、本発明は、哺乳類、好ましくは、ヒトにおける血中グルコースを低下する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の医薬製剤を哺乳類に投与することを含む。被験体への医薬製剤の投与に反応して、血中グルコース濃度は低下される。１つの実施形態では、哺乳類における血中グルコースは、約５％以上、または約１５％以上、または約２５％以上、または約３５％以上、または約４５％以上、または約５０％以上、または約６０％以上、または約７０％以上、または約７５％以上、または約８０％以上、または約８５％以上、または約９０％以上低減される。
【００７３】
いくつかの実施形態では、該方法は、本発明の医薬製剤の投与の前および後に血中グルコース濃度を測定するステップをさらに含む。血中グルコース濃度は、血液または尿の試料から血中グルコースを測定する、数多くの市販のグルコース監視装置を使って容易に測定される。血中グルコースは、血液または尿試料を必要としない市販のグルコメーターによっても測定することができる。血中グルコースの監視も含め、糖尿病パラメータの改善をどのように測定するかを教える方法は、当業で公知である。
【００７４】
本発明のもう１つの態様は、哺乳類、特にヒトにおけるインクレチン産生を刺激する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の医薬製剤を哺乳類に投与することを含む。被験体への医薬製剤の投与に反応して、グルカゴン様ペプチド１およびグルコース依存性インスリン分泌促進ポリペプチドが、腸内分泌細胞によって産生される。本発明の医薬製剤の投与に反応した、実験動物におけるインクレチン産生を当業者が測定できる方法は、当業で公知である。
【００７５】
本発明は、以下の実施例によってさらに詳しく記述される。ただし、これらの実施例は、説明の目的のみのために提供されるものであって、本発明の範囲を制限するものと解釈されるものではないことを理解される必要がある。
【００７６】
実施例
本発明は、以下の実施例によってさらに詳しく記述される。ただし、これらの実施例は、説明の目的のみのために提供されるものであって、本発明の範囲を制限するものと解釈されるものではないことを理解される必要がある。
実施例１：４−カルバモイル−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル  エステル
【化４１】
0005847813.tif 000045
【００７７】
５リットルの三口フラスコに入れた塩化メチレン（１５００ｍＬ）中のイソニペコトアミド（２５５ｇ、１．９９ｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（２０４ｍｇ、１．８２ｍｏｌ）の懸濁液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５０２ｇ、２．３０ｍｏｌ、１．１５当量）の塩化メチレン（５００ｍＬ）溶液を、機械的に攪拌しながら、室温で滴下で添加した。添加を終了した時点で、澄んだ溶液を得た。室温にて、さらに２時間、攪拌後、溶液をリン酸水溶液（２．５ｖ／ｖ％，５００ｍＬ）、水（５００ｍＬ）、半飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、および１０％の塩水（５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。塩化メチレンの除去の過程で、酢酸エチル（１００ｍＬ）およびヘプタン（２００ｍＬ）を添加した。塩化メチレンを除去した後、形成された白色の固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、乾燥して、４１４ｇ（９５％）の産生物を得た。
【００７８】
ＴＬＣ：ジクロロメタン／メタノール９０：１０、Ｒｆ（産生物）＝０．２８；Ｒｆ（出発物質）＝ベースライン、ヨウ素陽性。
実施例２：  ４−チオカルバモイル−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化４２】
0005847813.tif 000046
【００７９】
５リットルの三口フラスコに入れたジメトキシエタン（２０００ｍＬ）および塩化メチレン（８００ｍＬ）中の４−カルバモイル−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２８８ｇ、１．２６ｍｏｌ）の懸濁液に、ローソン試薬（２５５ｇ、０．６３ｍｏｌ）を添加した。混合物を８０分間、室温にて攪拌した。ＴＬＣは、出発物質が残っていないことを示した。溶媒を真空下で除去した。残渣を酢酸エチル（１５００ｍＬ）に溶解し、半飽和炭酸カリウム水溶液（それぞれ５００ｍＬ、２回）、５０％の塩水（５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して乾燥させた。得た固体を酢酸エチル（１０００ｍＬ）に溶解し、熱い状態で濾過して、不溶の白色の物質を除去した。溶液に、ヘプタン（３００ｍＬ）を添加した。酢酸エチルの大半を除去した後、形成された固体を濾過し、ヘキサン／エーテル（１：１）で洗浄し、乾燥して、産生物２５２ｇ（８２％）を得た。
【００８０】
ＴＬＣ：ジクロロメタン／メタノール９０：１０、Ｒｆ（産生物）＝０．３７、ＵＶおよびヨウ素陽性；Ｒｆ（出発物質）＝０．２８、ヨウ素陽性。
実施例３ａ：４−テトラゾ−１−イル−フェノール
【化４３】
0005847813.tif 000047
【００８１】
空気下、油浴に浸し、還流コンデンサーを取り付けた２リットルの一口フラスコに、４−アミノフェノール（５０ｇ、０．４５９ｍｏｌ）、酢酸（５００ｍＬ）、アジ化ナトリウム（４１．７ｇ、０．６４２ｍｏｌ）およびオルトギ酸トリメチル（７０ｍＬ、６８ｇ、０．６４２ｍｏｌ）を添加した。混合物を１時間、６０℃（油浴）にて攪拌した後、３時間、還流した（油浴、１００℃）。還流中に、澄んだ溶液が形成された。溶液の温度を８０℃（油浴）まで低下させ、水（３００ｍＬ）をゆっくりと添加した。溶液の温度を室温まで冷却した。一晩かけて形成された固体を濾過して、乾燥し、最初の収穫として、６１．７ｇ（８３％）の産生物を得た。
【００８２】
ＴＬＣ：ヘキサン／酢酸エチル５０：５０、Ｒｆ（産生物）＝０．２８；Ｒｆ（出発物質）＝０．２３、ＵＶおよびヨウ素陽性。
【００８３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ３ＣＯＤ）、δ９．５８（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．９７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）ｐｐｍ。
【００８４】
変更後の手順：反応を上述の１．５倍の規模で実施した。空気下の２リットルのフラスコに、室温にて攪拌しながら、酢酸を装填し、続いて、４−アミノフェノール、アジ化ナトリウム、およびトリメチルオルトギ酸を装填した。フラスコにバンプトラップを取り付け、１時間から１．５時間の途中で１００℃（油浴）まで加熱した。固体が沈殿し始め、混合物の温度を８０℃まで低下させた。水を添加し、混合物を室温まで冷却した。混合物を濾過し、固体を水で洗浄し、乾燥して、所望の産生物を得た（収量＞８８％）。
【００８５】
１ＨＮＭ（４００ＭＨｚ、Ｄ３ＣＯＤ）、δ９．５８（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．９７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ、２Ｈ）ｐｐｍ。
実施例３ｂ
【化４４】
0005847813.tif 000048
【００８６】
空気下、油浴およびコンデンサーに浸した５００ｍＬのフラスコに、４−チオカルバモイル−ピペリジン１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２９ｇ、１２０ｍｍｏｌ）、アセトン（３００ｍＬ）ＭｇＳＯ４（２１．６ｇ、１８０ｍｍｏｌ）およびＭｇＣＯ３（１０ｇ、１２０ｍｍｏｌ）、１，３−ジクロロアセトン（１９．８ｇ、１５６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を一晩、還流下で加熱し、冷却し、シーライトで濾過した。溶媒を減圧して除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で再び溶解した。得られた溶液を５％のＮａＨＳＯ３（２回）、飽和ＮａＨＣＯ３および塩水で続けて洗浄した。（ＮａＳＯ４で）乾燥後、溶媒を除去し、３５ｇの表題化合物を薄い黄色の油として得た。油は室温で放置した後、濃い固体になった。色は活性炭で除去することができた。純度は９２％から９６％に向上した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．２０（１Ｈ，ｓ）、４．６７（２Ｈ，ｓ）、４．２０（２Ｈ，ｂｒ）、３．１６（１Ｈ，ｍ）、２．８７（２Ｈ，ｍ）、２．０９（２Ｈ，ｍ）、１．７２（２Ｈ，ｍ）、１．４７（９Ｈ，ｓ）。
実施例４
【化４５】
0005847813.tif 000049
【００８７】
アセトニトリル（４００ｍＬ）中、４−（４−クロロメチル−チアゾール−２−イル）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３５ｇ、０．１１ｍｏｌ）、４−テトラゾル−１−イル−フェノール（２１．４ｇ、０．１３２ｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（４３ｇ、０．１３２ｍｏｌ）、ＫＩ（１．８ｇ、１１ｍｍｏｌ）の混合物を一晩、還流下で加熱した。冷却後、固体をシーライトのパッドで濾過した。濾液を真空で濃縮した。残渣を塩化メチレン中で溶解し、５％ＮａＯＨ水溶液（３回）、水および塩水で洗浄した。（ＮａＳＯ４で）乾燥後、溶媒を除去した。得られた固体を酢酸エチルで溶解した。得られた溶液を活性炭で加熱し、シーライトのパッドで濾過した。濾液を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶化により精製し、所望の産生物３７ｇを得た。
【００８８】
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３）：δ８．０１（１Ｈ，ｓ）、７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．２５（１Ｈ，ｓ）、７．１５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、５．２２（２Ｈ，ｓ）、４．２（２Ｈ，ｂｒ）、３．１７（１Ｈ，ｍ）、２．８７（２Ｈ，ｍ）、２．１１（２Ｈ，ｍ）、１．７３（２Ｈ，ｍ）、１．４６（９Ｈ，ｓ）。
実施例５
【化４６】
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【００８９】
窒素下で、添加漏斗を取り付けた３リットルの三口フラスコに、４００ｍＬの無水塩化メチレン（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社の低水グレード；ＣＨ２Ｃｌ２は基質の溶解を容易にする）および１１５．５９ｇのカルバミン酸ｔ−ブチル基質（０．２６ｍｏｌ）を一度に添加した。２〜５分間、室温で攪拌した後、得られた、ほぼ澄んだ溶液に、４００ｍＬのメタノール（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社のＨＰＬＣグレード）を添加した。得られた澄んだ褐色の溶液を攪拌しながら、０〜４℃（氷水浴温度）に冷却した後、１，４−ジオキサン（１．３２ｍｏｌ、５当量）中の３３０ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ  ３３０ｍＬを３０分かけて、滴下で添加した。氷水浴を取り除き、得られた褐色の均一な溶液を一晩（１５時間）かけて、室温で攪拌した。反応を完了させるには、少なくとも７時間を必要とする。反応混合物を分取し、２Ｎ  ＮａＯＨにクエンチした後、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＤＭＳＯ−ｄ６中で１Ｈ  ＮＭＲを測定した。診断ピーク：遊離アミン産生物δ７．６３（ｓ，１Ｈ）；出発物質（基質）δ７．６６（ｓ，１Ｈ）。一般に、変換はイタリック表記のシグナルの積分を通じて概算した：４時間、８０％変換；６時間、９５％変換。反応溶液を放置して、１０℃（氷水浴温度）に冷却した後、水〜５００ｍＬ中の１５％（ｗ／ｖ）ＮａＯＨ（７０５ｍＬ；２．６４ｍｏｌ、２当量のＨＣｌを使用）溶液を１５分かけて滴下で添加した。（希釈した１５％のＮａＯＨ水溶液は、有機相に沈殿（無機塩）が生じないようにするために使用した）。攪拌を中止して、上部に褐色の水層と底に薄い黄色の有機層が得られたときに、直ちに相のブレークを観察した。有機層を採取し、残りの水層をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を混合し、５００ｍＬの水で漱ぎ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のほとんどを真空で除去した後、沈殿が始まった。この薄い黄色の混合物に、５００ｍＬのヘプタンを添加し、薄い黄色のスラリーを得た。得られた沈殿を濾過用漏斗に採取し、母液から不純物を除去した。混合した固体をヘプタン（２００ｍＬ）で漱いだ。一晩かけて、空気乾燥した後、遊離アミン８４．１ｇ（収率９４％）を白色またはオフホワイトの固体として得た。
【００９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．９８（１Ｈ，ｓ）、７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．６３（１Ｈ，ｓ）、７．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、５．２０（２Ｈ，ｓ）、３．０５（１Ｈ，ｍ）、２．９７（２Ｈ，ｍ）、２．５６（２Ｈ，ｍ）、１．９３（２Ｈ，ｍ）、１．５５（２Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【００９１】
ＨＣｌを使う代わりに、反応をＣＨ２Ｃｌ２中の５当量のＴＦＡを使って室温で処理した場合は、〜５０％の未知の副産物が生じ、これはＤＭＳＯ−ｄ６中で１Ｈ  ＮＭＲ  を撮影すると、観察できる：診断ピークδ７．４５（１Ｈ，ｓ）、６．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、６．４４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、４．８９（２Ｈ，ｓ）ｐｐｍ。ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨを共溶媒として使用すると、他の溶媒を使った場合に見られる不純物の形成を除去できる。１，４−ジオキサン、１，４−ジオキサン／メタノール、または塩化メチレンを使用すると、検知可能な微量の不純物が発生し、これはＤＭＳＯ−ｄ６で１Ｈ  ＮＭＲを撮影すると観察できる：診断ピークδ６．８２（ｍ）、６．５６（ｍ）、４．９９（ｍ）ｐｐｍ。この不純物は次のステップの最終産生物にキャリーオーバーされ、再結晶化による精製では除去することができない。
実施例６
【化４７】
0005847813.tif 000051
窒素下の３リットルの三口フラスコに、１０５．７ｇの粗製遊離アミン（０．３１ｍｏｌ）、８８．０ｇの２−クロロ−５−エチルピリミジン（０．６２ｍｏｌ、２当量）を一度に添加し、続いて８００ｍＬの無水ＤＭＦを添加した。１〜２分間、室温で攪拌した後、得られた澄んだ溶液に、６４．０ｇの無水Ｋ２ＣＯ３（０．４６ｍｏｌ、１．５当量）を一度に添加した。フラスコを予熱した油浴（９０℃、油浴温度）に漬け、反応混合物を３．５時間、９０℃（油浴温度）で攪拌した。反応混合物を分取し、水／塩水にクエンチした後、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＤＭＳＯ−ｄ６での１Ｈ  ＮＭＲ。診断ピーク：産生物δ７．６６（ｓ，１Ｈ）；遊離アミン（出発物質）δ７．６３（ｓ，１Ｈ）；ピリミジンδ８．６７（ｓ，２Ｈ）、ＤＭＦδ７．０３（ｓ，１Ｈ）。通常、変換はイタリック表記のシグナルの積分を通じて概算した。完全な変換は３時間から４時間の間に観察された。加熱時間を延長（＞５時間）すると、同定できない不純物が形成された。
【００９２】
反応混合物を５リットルの三口フラスコに移し、攪拌しながら、氷水浴を使って室温まで冷却した。室温にて激しく攪拌（機械的スターラーで）しながら、反応混合物に、およそ２０００ｍＬの水を３０分かけて、ゆっくりと滴下で添加し、オフホワイトのスラリーを得た（〜５００ｍＬの水を添加したときに、沈殿は開始した）。添加が終了した後、得られたスラリーをさらに１０〜１５分間、室温で攪拌した。オフホワイトの沈殿物を濾過した後、水で漱いだ（２５０ｍＬｘ２）。一晩かけて空気乾燥した後、およそ３８７ｇの湿ったオフホワイトの固体を得、約１０分間、５５℃（内部溶液温度）にて加熱することにより、１５００ｍＬのＥｔＯＡｃに再溶解した。得られた薄い黄色の溶液を水（２５０ｍＬｘ３）および水／塩水（２００ｍＬ／１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のほとんどを真空で除去した後、沈殿が始まり、オフホワイトのスラリーが生じた（残った溶媒は〜５００ｍＬ）。得られた白色の沈殿を濾過用漏斗に採取し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬｘ２）で漱いだ。母液は後でもう一度再結晶化を行うために保存し、濾過用漏斗上の沈殿をもう一度、３００ｍＬのヘプタンで漱いだ。空気乾燥の後、９１．１１ｇの産生物を白色の固体として得た。厚いスラリーが形成されるまで、母液（ヘプタンなし）の不純物除去を行い、得られた沈殿を濾過し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ２）で２回、ヘプタン（１００ｍＬ）で１回漱ぎ、新たに１６．８４の産生物を白色の固体として得た。全体の収率７８％。
【００９３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．９８（１Ｈ，ｓ）、８．２４（２Ｈ，ｓ）、７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．６６（１Ｈ，ｓ）、７．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、５．２０（２Ｈ，ｓ）、４．６７（２Ｈ，ｍ）、３．３２（１Ｈ，ｍ）、３．０１（２Ｈ，ｍ）、２．４３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．０７（２Ｈ，ｍ）、１．５９（２Ｈ，ｍ）、１．１１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）ｐｐｍ。残っている母液を混合し、真空で濃縮し、１５．０７ｇのオフホワイトの固体を得、それは後にＥｔＯＡｃを使って、もう一度再結晶化するかまたはシリカゲル上の７０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使ったクロマトグラフィーによって精製された。
【００９４】
１Ｈ  ＮＭＲ
この反応を小規模（０．６ｍｍｏｌ）で、より高濃度（２当量のピリミジンを含む０．６Ｍおよび１．３当量のピリミジンを含む１．２Ｍ）でも試した。
【００９５】
遊離アミン（２０７ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を９０℃にて、１７８．３ｍｇの２−クロロ−５−エチルピリミジン（２当量）および無水Ｋ２ＣＯ３（１．５当量）を含む１ｍＬのＤＭＦで処理した（遊離アミンの最終濃度は、〜０．６０Ｍである）。反応は２時間で完了した。しかし、産生物が沈殿したため、反応混合物は終了時に均一ではなかった。
【００９６】
遊離アミン（２１２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を９０℃にて、１１４．２ｍｇの２−クロロ−５−エチルピリミジン（１．３当量）および無水Ｋ２ＣＯ３（１．５当量）を含む０．５ｍＬのＤＭＦで処理した（遊離アミンの最終濃度は〜１．２Ｍである）。反応は２時間で〜８５％の変換を達成し、反応混合物は産生物の沈殿のために均一ではなかった。９０℃で４時間、加熱した後、相当な量の同定できない副産物が形成された。
実施例７
【化４８】
0005847813.tif 000052
４−テトラゾル−１−イル−フェノール
【００９７】
Ｋｉｍａｘの管２５ｘ１５０ｍｍ）に、室温にて、４−アミノフェノール（２００ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（１６７ｍｇ、２．５７ｍｇ、１．４当量）、酢酸（１ｍＬ）、濃塩酸２滴およびオルトギ酸トリメチル（０．５ｍＬ）を添加した。混合物を攪拌し、加熱ブロック上で最大１００℃まで過熱した。２０分間、１００℃にて、温度を８０℃まで低下させ、水（１ｍＬ）を添加した。混合物が室温まで冷却したら、液体をピペットを使って除去した。固体を水（１ｍＬｘ３）およびヘプタン（１ｍＬ）で洗浄し、真空下で試した。さらなる精製をせずに次のステップで、この白色の固体を使用した。
【００９８】
ＴＬＣ：ヘキサン／酢酸エチル５０：５０、Ｒｆ（産生物）＝０．２８；Ｒｆ（出発物質）＝０．２３、ＵＶおよびヨウ素陽性。
【００９９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ３ＣＯＤ）、δ９．５８（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【０１００】
上の反応からの同じ管（合成４−テトラゾル−１−イル−フェノールを加えた）に、２−［４−（４−クロロメチルチアゾール−２−イル）−ピペリジン−１−イル］−５−エチルピリミジン（５７１−１１０、５３２ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（５９６ｍｇ，１．８３ｍｍｏｌ）、ＫＩ（１４ｍｇ）を含むアセトニトリル（２ｍＬ）を添加した。混合物を１０時間、６０℃にて加熱した。（反応に続いて、ＨＰＬＣ／ＭＳにかけた）。
【０１０１】
冷却後、反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）および水（２０ｍＬ）で処理した。水相を分離した。有機相を塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を少量のジクロロメタンに溶解し、４０ｇのシリカゲルＣｏｍｂｉｆｌａｓｈカラムで精製し、所望の産生物を白色の固体として５８０ｍｇ（２つのステップで収率７０％）を得た。
【０１０２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．９８（１Ｈ，ｓ）、８．２４（２Ｈ，ｓ）、７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．６６（１Ｈ，ｓ）、７．２８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、５．２０（２Ｈ，ｓ）、４．６７（２Ｈ，ｍ）、３．３２（１Ｈ，ｍ）、３．０１（２Ｈ，ｍ）、２．４３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．０７（２Ｈ，ｍ）、１．５９（２Ｈ，ｍ）、１．１１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）ｐｐｍ、ＭＳ（ＥＳＩ）、ｍ／ｚ４４９。
実施例８：溶融押出し製剤
【０１０３】
固体分散物製剤をライストリッツ（Ｌｅｉｓｔｒｉｔｚ）の１６ｍｍ押出し機を使って調製し、ポリマーの種類、薬物負荷および処理温度が化合物Ａの固体分散物の重要な産生物属性に及ぼす影響を調べた。代表的な工程の条件および製剤の変数を表１に示す。
【表１】
0005847813.tif 000053
【０１０４】
経口バイオアベイラビリティの向上を評価するために、非シンク条件下での溶解挙動について、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ  ＰＯ（製剤２）およびＫｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＶＡ  ６４（製剤３）の化合物Ａ固体分散物製剤を調べた。調査は、刺激した胃液、摂食時の刺激した腸液および空腹時の刺激した腸液（表２、表３および表４、ならびに図１、図２および図３に提示されている）を含め、３つの異なる媒質の調製物で実施された。
【表２】
0005847813.tif 000054
【表３】
0005847813.tif 000055
【表４】
0005847813.tif 000056
実施例９：  化合物Ａを２５％含有する噴霧乾燥した分散物の製剤
【０１０５】
噴霧乾燥工程には、化合物Ａおよび酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）を溶解するための噴霧溶液の調整、噴霧乾燥した分散物（ＳＤＤ）粉末を形成するための噴霧乾燥、および残留溶媒を除去するためのＳＤＤ粉末の二次乾燥が含まれる。図４は、化合物Ａを２５０ｍｇ／ｇおよびＣＡＰを７５０ｍｇ／ｇ含有する２５％のＳＤＤ製剤（２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤと呼ぶ）をＰＳＤ−１噴霧乾燥機で製造するために使う工程の概要を示している。
【０１０６】
噴霧溶液の調製：噴霧溶液の調製中、溶液の温度は、室温だが。２０℃より高い温度に維持し、化合物Ａが確実に溶解できるようにする。化合物Ａをアセトンに添加後、結晶質化合物Ａが完全に溶解するまで、溶液を少なくとも１時間、混合する。次にＣＡＰを溶液に添加し、ＣＡＰが完全に溶解するまで少なくとも１時間、混合する。噴霧溶液は、化合物Ａを１．２５％、ＣＡＰを３．７５％、およびアセトンを９５％含有する。
【０１０７】
噴霧乾燥：  噴霧乾燥の条件は、予熱、ウォームアップ／シャットダウンおよび供給液処理段階に分類される。ウォームアップ段階では、噴霧乾燥機を熱的に均衡化するために、純粋なアセトンが噴霧される。供給液処理段階では、化合物Ａ：ＣＡＰ噴霧溶液が噴霧される。
【０１０８】
３つの段階の動作条件を表５に要約する。
【表５】
0005847813.tif 000057
【０１０９】
１つの実施形態では、噴霧乾燥条件は下記の通りである：
・圧力ノズル：ＳＫ７６−１６
・乾燥ガス入口温度（ｔｉｎ）：１２５℃±１０℃
・乾燥機出口温度（ｔｏｕｔ）：４５℃±５℃
・窒素乾燥ガス流：１８５０±３００ｇ／分
・溶液供給速度：２１５±１５ｇ／分
・噴霧化圧力：３１５±１００ｐｓｉｇ
・産生物の採取：６インチ外径サイクロン
・溶液供給フィルター：≦２３０μｍ
【０１１０】
二次乾燥：ＳＤＤ粉末は、開放トレイ上に均一に拡散され、トレイ乾燥機に置かれ、一晩をかけて乾燥され、残留アセトンを除去する（工程内管理：残留アセトン＜０．２％）。乾燥パラメータを以下に列挙する：
・トレイ乾燥機の種類：対流
・トレイ乾燥機温度：４０℃±５℃
・トレイ乾燥機の相対湿度（ＲＨ）：１５％から３０％ＲＨ±１５％
・乾燥時間：２４時間
・床の奥行き：≦２．５ｃｍ
【０１１１】
図５は、トレイ乾燥機の床の奥行きが２．５ｃｍ以下である条件下でのヘッドスペースガスクロマトグラフィー（ＧＣ）解析に基く、２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤに対する４０℃／３０％ＲＨでのトレイ乾燥時間の関数として、残留アセトンの含有量を示している。
【０１１２】
１つの例では、噴霧溶液は、以下の要領で、１．２５重量％の化合物Ａ、３．７５重量％のＣＡＰ、および９５％のアセトンを含むように形成された。上部にミキサーを装着したステンレス鋼製溶液タンク中のアセトンに化合物Ａを添加し、少なくとも１時間、混合した。次に、この混合物にＣＡＰを直接添加し、少なくともさらに１時間、混合物を攪拌した。ポリマーの全量を添加した後、得られた混合物にはわずかな曇りがあった。続いて、この混合物を篩サイズ２３０μｍのフィルターを通して濾過し、混合物から全ての大きな不溶物質を除去し、このようにして噴霧溶液を形成した。
【０１１３】
続いて、以下の手順を使って、噴霧乾燥した分散物を形成した。該噴霧溶液を、圧力渦動アトマイザー（ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｓｗｉｒｌ  ａｔｏｍｉｚｅｒ）（Ｓｐｒａｙｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｎｏｚｚｌｅ  ａｎｄ  Ｂｏｄｙ（ＳＫ  ７６−１６））を装備した噴霧乾燥機（Ｌｉｑｕｉｄ−Ｆｅｅｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｖｅｓｓｅｌ付きＮｉｒｏ  ＸＰ型Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｅｒ（ＰＳＤ−１））に汲み上げた。ＰＳＤ−１に９インチのチャンバ延長部を取り付け、乾燥機の縦の長さを増加した。乾燥ガスの流れを一定方向に向けて、噴霧乾燥機内での産生物の再循環を最小限に抑えるために、１％の開放領域を有する散気板も噴霧乾燥機に取り付けた。ノズルは、操作中、散気板と同一平面上にした。約３１５ｐｓｉｇの圧力、約２１５ｇｍ／分で噴霧乾燥機に噴霧溶液を汲み上げた。乾燥ガス（例えば、窒素）を約１２５℃の入口温度で、散気板を通じて循環させた。蒸発した溶媒および湿った乾燥ガスは、４５ ± ５℃の温度で噴霧乾燥機から出た。このプロセスにより形成されるＳＤＤをサイクロンに捕集した。
【０１１４】
ＨＰＭＣＡＳ−ＭＧを含む１０または２５％化合物Ａの固体非晶質分散物も調製した
【０１１５】
ＳＤＤを長期貯蔵は、平均５℃（例えば、２℃から８℃）で、ＨＤＰＥドラム内に２重の低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）袋で、２つの袋の間に乾燥剤を入れることで行える。ＳＤＤは、短期、例えば、１週間ならば、雰囲気温度および湿度（例えば、２５℃／６０％ＲＨ）で貯蔵することができる。
実施例１０：２５％の化合物Ａを含有する噴霧乾燥した分散物製剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏ解析
１．物理特性
【０１１６】
表６に、アセトン溶液から製造した２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤの一般的な物理特性を一覧表示する。
【表６】
0005847813.tif 000058
２．効能／純度
【０１１７】
ＳＤＤの効能および純度を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定し、その結果は、アセトン溶液から調製したＳＤＤは、化合物Ａの純度をほとんど変えないこと、および効能は製剤の理論上の効能と類似していることを示した。
３．溶解性能
【０１１８】
ＰＢＳ  （ｐＨ６．５）中のＮａＴＣ／ＰＯＰＣで、２００μｇ／ｍＬの理論上Ｃｍａｘの化合物Ａで実行したｉｎ  ｖｉｔｒｏでの溶解試験を使って、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ性能を評価した（ただし、Ｃｍａｘは観察された最高濃度；ＮａＴＣ／ＰＯＰＣは、タウロコール酸ナトリウム／１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（３．７／１の比）であり、ＰＢＳはリン酸緩衝液である）。試料を計量し、緩衝系に溶解し、遠心分離し、１０分、２０分、４０分、および９０分にて、上澄液をＨＰＬＣで解析した。
【０１１９】
表７ａ  および７ｂ、ならびに図６は、化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの溶解性能を、化合物Ａ、ＨＰＭＣＡＳ−ＭＧ、およびＨＰＭＣＡＳ−ＨＧの結晶質のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの溶解性能と比較している。図が示すように、ＳＤＤのＣｍａｘおよびＡＵＣ０−９０（最初の９０分における曲線下の面積）は、化合物Ａの結晶質対照に比べて６倍よりも大きかった。
【表７ａ】
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【表７ｂ】
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実施例１１：  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  性能
【０１２０】
雄のイヌでｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施し、２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤ（ｎ＝２）の全身暴露を、結晶質化合物Ａ（ｎ＝２）の全身暴露と比較した。表８に示すように、２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤは、１０ｍｇ／ｋｇおよび２００ｍｇ／ｋｇにて化合物Ａを経口投与した雄のビーグル犬でバルク結晶質薬物に比べ、全身暴露を増大した。
【表８】
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実施例１２：  錠剤
【０１２１】
錠剤の製造には、均一なブレンドを形成するためのＳＤＤと粒内賦形剤とのブレンド、流れる顆粒を形成するための乾式造粒、追加の打錠機能を提供するための粒外賦形剤のブレンド、単位投与量を形成するための錠剤圧縮、および白色の不透明なコーティングを施すためのフィルムコーティングが含まれる。２５ｍｇ錠剤および１００ｍｇ錠剤で使われる賦形剤を、それぞれ表９および１０に示す。十分な量の化合物Ａの固体分散物を使って、２５ｍｇ錠剤中に２５ｍｇの本化合物を提供し、十分な量の化合物Ａの固体分散物を使って、１００ｍｇ錠剤中に１００ｍｇの本化合物を提供した。図７は、コーティングなしの２５ｍｇ錠剤の製造プロセスの概要を示している。図８は、コーティングなしの１００ｍｇ錠剤の製造プロセスの概要を示している。
【表９】
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【表１０】
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【０１２２】
同一のブレンドおよび乾式造粒プロセスを、２５ｍｇおよび１００ｍｇの活性錠剤に使用した（すなわち、「共通の造粒」を両方の錠剤の強化に用いた）。２５ｍｇおよび１００ｍｇのコーティングしていない錠剤は、同一の大きさ、形および重量を有してもよい。一般に、２５ｍｇおよび１００ｍｇの錠剤は、例えば、当業で公知のフィルムコーティング組成物、例えば、Ｏｐａｄｒｙ  ＩＩ（白色の８５Ｆ１８３７８、Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）および純水などを使ってコーティングすることができる。
乾式造粒
【０１２３】
乾式造粒プロセスを以下の手順で実施する：
１．  粒内賦形剤を低剪断コーンミル（ｌｏｗ−ｓｈｅａｒ  ｃｏｎｅ  ｍｉｌｌ）を通過させて、塊を破壊する。
２．  塊を破壊した賦形剤および２５％化合物Ａ：ＣＡＰ  ＳＤＤをビンブレンダーに添加し、ブレンドする。
３．  ステアリン酸マグネシウムをステップ２で生じたブレンドの一部で手動でスクリーニングし、ビンブレンダーに添加し、ブレンドする。
４．  ブレンドをブレンダーから出し、ローラー圧縮する。ローラー圧縮機のパラメータは、０．６３の固形分率（単位のない相対密度パラメータ）を有する、ローラー圧縮された材料を提供するように設定する。これは工程内測定によって保証される。
５．  ローラー圧縮した材料を、０．８ｍｍの振動スクリーンミルを通過させることで造粒する。ステップ５からの造粒は「共通造粒」と呼ばれ、２５ｍｇと１００ｍｇの両方の活性錠剤を製造する目的に使われる。
【０１２４】
粒外最終ブレンドおよび錠剤圧縮は、以下の手順で実施する：
１．  粒外賦形剤の必要量を計算する。
２．  ２５ｍｇの活性錠剤についてのみ、  顆粒化粒外ラクトース、および粒外微晶質セルロースをビンブレンダーに添加し、ブレンドする。
３．  コロイド状二酸化シリカを、ステップ２からのブレンドの一部で手動スクリーニングし、ビンブレンダーに添加して、ブレンドする。
４．  ステアリン酸マグネシウムを、ステップ３からのブレンドの一部で手動スクリーニングし、ビンブレンダーに添加して、ブレンドする。
５．  粉末をブレンダーから出し、ロータリー打錠機を使って、圧縮し、全量８００ｍｇの錠剤にする。浄財の重量、錠剤の重量分布、および錠剤の硬さは、起動時に調節し、圧縮の途中、一定間隔で監視し、産生物の属性が確実に満たされるようにする。
６．  錠剤をデダスト（ｄｅ−ｄｕｓｔ）し、金属検知器を通過させ、ドラム内で２重のポリエチレンバッグに入れて貯蔵する。
【０１２５】
錠剤調製の工程内管理：
打錠―乾式造粒：固形分率（相対造粒密度）：０．６３±０．０３（無次元）。
打錠−圧縮：
・外観：目に見える欠陥がないこと
・錠剤の平均重量：目標の動作範囲±３％、目標のアラート範囲±６％
・重量の均一性：＜４％ＲＳＤ
・錠剤の硬さ：動作範囲１８−２２ｋＰ、アラート範囲１６−２４ｋＰ。
【０１２６】
１つの具体例では、クロスポビドン、ラクトース一水和物、および微晶質セルロースの塊を、０．０３２インチ（０３２Ｒ）のスクリーンおよび１６０１インペラを備えたｃｏｍｉｌ１９７を使って、破壊した。塊を破壊した混合物に、噴霧乾燥した分散物を添加し、ＰＫツインシェルブレンダーを使ってブレンドし、続いて、ステアリン酸マグネシウムを添加して、ブレンドし、粒内ブレンドを形成した。次に、粒内ブレンドをローラー圧縮し、０．８ｍｍスクリーンを使い、圧縮力４から７ｋＮ／ｃｍ、圧延速度２から６ｒｐｍで、Ｇｅｒｔｅｉｓ  Ｓｔａｒ  Ｒｏｔｏｒ  Ｍｉｌｌと一緒に、Ｇｅｒｔｅｉｓ  Ｍｉｎｉ−Ｐａｃｔｏｒを使って、顆粒に粉砕した。粉砕した造粒をコロイド状二酸化シリカとブレンドし、続いて、粒外ステアリン酸マグネシウムを添加して、ブレンドした。錠剤を０．３５８６”Ｘ０．７１７４”の修正楕円工具（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｏｖａｌ  ｔｏｏｌｉｎｇ）で、ＫｉｌｉａｎＴ−１００ロータリープレスを使い、錠剤を圧縮して、硬度を１７−２３ｋＰにした。
実施例１３：錠剤のフィルムコーティング
【０１２７】
水性フィルムコーティングプロセスは、２５ｍｇおよび１００ｍｇの活性錠剤で同一であり、そのプロセスを以下に記述し、図９に示す。
１．  Ｏｐａｄｒｙ  ＩＩ粉末を純水に添加し、塊が全く残らなくなるまで攪拌する。
２．  コーティングパンを予熱し、次に空のパンにＯｐａｄｒｙ  ＩＩの薄い層を噴霧コーティングし、フィルムコーティング時の錠剤の滑動を防止する。
３．  錠剤をパンに加え、予熱する。
４．  錠剤をフィルムコーティングし、コーティングプロセスの間、終始、コーティング懸濁液を攪拌して、沈降を防ぐ。
５．  コーティングプロセスが完了したら、錠剤を軽く転動して乾燥させる。
６．  完成した、コーティングした錠剤をドラム内の２重ポリエチレンバッグで貯蔵する。
【０１２８】
１つの具体例では、オーバーヘッドのプロペラ攪拌機の付いた混合容器で、純水にＯｐａｄｒｙ  ＩＩを添加する（１：９重量：重量）ことによりコーティング溶液を形成した。蠕動ポンプを使って、１．０ｍｍノズルおよび標準エアキャップ付きのＳｃｈｌｉｃｋ９７０スプレーガンにコーティング溶液を汲み上げ、錠剤をＶｅｃｔｏｒ  ＬＤＣＳパンコーターでコーティングした。次の条件を使った：噴霧気圧１５ｐｓｉ、ノズルの先端から床までの距離２．５インチ、入口気流４５ＣＦＭ、入口空気温度７０から７５℃、出口温度４６℃、パン運転速度２０ｒｐｍ、および溶液の流量９ｇ／分。コーティングした錠剤は２０ｋＰの硬さを有した。
シンク溶解試験
【０１２９】
シンク溶解試験を、１００ｍｇのフィルムコーティングしたＳＤＤ錠剤について実施した。９００ｍＬの溶出溶媒（１重量％の硫酸ラウリルナトリウムを含む、０．０５ ＭのＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ６．８）を、１０００ｍＬのＶａｎＫｅｌ溶解容器に添加し、約３０分間、予熱した。３７℃で試験を実施した。錠剤４錠を、時間０にて、溶出溶媒を含む個々の容器に投下した。溶出溶媒における化合物Ａの理論上の最大濃度は、１１μｇ／ｍＬだった。１０μｍのフルフローフィルターを取り付けたカニューレと一緒に、２０ｍＬの注射器を使って、５分、１５分、３０分、および４５分に試料（１０ｍＬ）を採取した。試料を０．４５μｍのナイロン注射器フィルターで濾過し、解析のために、ＨＰＬＣ瓶に入れた。結果を表１１に示す。１００ｍｇ錠剤は、４５分までに、理論上の値の９８．３％を放出した。錠剤は５分以内に８０％を超えて溶解した。
【表１１】
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【０１３０】
錠剤は、ポリプロピレン熱誘導シールキャップおよび乾燥剤と一緒に、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）ボトルに装填することができる。ボトルには、必要に応じて、ロット番号、内容物、保管条件およびその他の情報を記載したラベルを付けることができる。
実施例１４：  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  の結果
方法論：
試験デザイン
【０１３１】
これは、「糖尿病前症」（空腹時耐糖能障害、耐糖能障害、もしくはＨｂＡ１Ｃ≧５．８）または食事でコントロールされる２型糖尿病を患う、それ以外は健康な被験者に対する、再処方された錠剤（噴霧乾燥した分散物、すなわちＳＤＤ）として経口投与される化合物Ａのシングルセンター（ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｎｔｅｒ）、フェーズ１、２重盲検、プラセボ対照、反復投与用量漸増試験（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｓｃｅｎｄｉｎｇ  ｄｏｓｅ  ｓｔｕｄｙ）である。この試験は、化合物Ａの安全性、忍容性、薬物動態学（ＰＫ）、および概念証明薬力学を評価するために設計された。各投与コホートは、適格性を評価するためのスクリーニング期間、投与および観察期間、ならびに追跡調査期間から成った。
【０１３２】
インフォームド・コンセントを提供した潜在的な被験者における予備的な適格性を評価するために、スクリーニング外来を利用した。試験に登録するための最終的な適格性は、クリニックにチェックインした後、ランダム化および投与（１日目）の前、−３日目に決定された。スクリーニングを無事に完了した適格な被験者１１名がまだ満たされていない最低投与コホートに登録され、二重盲検の形で、ランダムに割り当てられ、化合物Ａ（ｎ＝８）または相当するプラセボ（ｎ＝３）を受け取った。さらに４名の追加被験者がクリニックに入所し、最初の１１名の被験者の１人が何らかの理由で投与の対象にならなかった場合のバックアップとして待機した。
【０１３３】
これらの試験コホートは、それぞれ独立して、順次の形で登録され、完了された。８日目の入院患者観察期間を完了後、（ＰＫを含め）、盲検化した臨床的安全性および臨床検査値のパラメータを、治験責任医師（Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ）または治験分担医師（Ｓｕｂ−Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ）とＭｅｔａｂｏｌｅｘ医療監督者（Ｍｅｔａｂｏｌｅｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｏｎｉｔｏｒ）との間で、テレビ会議で評価し、その後、必要であれば、用量制限毒性（ＤＬＴ）を決定するために、被験者の投与量割当てを明らかにすることもできた。２つの用量制限毒性（ＤＬＴ）が、活性薬物を受け取っている被験者において、同一の治療コホート内で起きた場合は、それ以上の用量の増加は許可されず、最大耐量（ＭＴＤ）は、前回のコホートでの用量によって定義された。さらに、それまでのコホートの安全性および薬力学的プロファイルの文脈において、それまでのコホートから観察された化合物Ａの濃度およびＰＫパラメータに応じて、投与はスポンサーの裁量で中止されることもあり得た。
試験手順
スクリーニングフェーズ（−３５から−３日目）
【０１３４】
最初のスクリーニング外来は、被験者の適格性を判断するために、新しい用量コホートが各々開始される前に、−３５日目から−４日目の間に行われた。最初のスクリーニング外来では、被験者はいかなる検査固有の評価またはスクリーニング番号の付与の前にも、インフォームド・コンセントに署名した。スクリーニングの評価には、人口統計学的特性、ならびに薬歴調査１２誘導ＥＣＧおよびバイタルサイン（身長および体重を含む）、薬物およびアルコールの評価、血清妊娠試験（女性のみ）、臨床検査値の評価、ならびにＨｂＡ１ｃを伴う完全な病歴の収集も含まれた。最初のスクリーニングで適格性評価を満足した、最小で１５名の被験者が−３日目の評価を完了するように招かれた。被験者は、バイタルサイン（体重も含む）、ＥＣＧ、眼底検査も含めた人間ドック、臨床検査評価、反復薬物およびアルコールの評価、反復血清妊娠試験（女性のみ）、ならびに併用薬および前回から今回までの病歴の確認から成る反復安全性および最終適格性評価のために、予定されている薬物投与の３日前（−３日目）に、クリニックに戻った。各被験者は最終的な適格性評価を受け、最大１５名の完全に適格な被験者が一晩、クリニックに入院した。
投与、観察および評価期間（−２日目から８日目）
【０１３５】
−２日目には、１０時間の一晩の絶食に続き、最大１５名の適格被験者は、グルコースおよびインスリン反応ならびに合計ＧＬＰ−１およびグルカゴンの評価のために、午前９：３０から１０：１５の間に投与されたベースラインＭＭＴＴを受けた。１０時間の一晩の絶食に続き、−１日目に、最大１５名の適格被験者は、同一マーカーの評価のために、ＭＭＴＴと同じ時刻に投与されたベースラインＯＧＴＴ（７５ｇ）を受けた。ベースラインＯＧＴＴの評価の後、１１名の被験者が登録され、現在の投与コホートに無作為に割り当てられた。最大４名の追加被験者が、一晩留まり、何らかの理由で元の１１名の被験者の１人が投与を受けなかった場合のバックアップとして待機した。コホートの要件を満たす適格被験者が１１名を超えた場合は、３５日間のスクリーニングウィンドウ以内であり、彼らが適格性を満たし続けていた場合は、１２人目からの被験者は、次のチェックインに含まれたこともあり得た。１日目から５日目は、１０時間の一晩の絶食に続き、被験者は、空腹状態で、ベースラインＭＭＴＴの開始の正確に２時間前に、化合物Ａまたはプラセボの１日分の用量を受けた。クリニックでの入院期間は、−２日目に始まり、最終入院患者試験プロシージャに続いて、８日目に終了した。他に記載がない限り、１日目、０時間にて投与された試験薬物の投与に時間的に関連づけて、以下の評価が行われた：
・薬物動態的血液および尿の試料採取：
−  化合物Ａまたはプラセボに無作為に割り当てられた被験者は、単回用量ＰＫ（１日目）および反復用量ＰＫ（４日目）を受けた。化合物Ａは、１日目に投与前（ｔ  −３０および０分）および投与後２０分目と４０分目、ならびに１時間目、２時間目、３時間目、４時間目、６時間目、８時間目、１２時間目および２４時間目に測定された。化合物Ａは、４日目の投与と関係して同一の時点で測定されたが、投与後４８時間目および７２時間目に追加測定が加えられた。さらに、化合物Ａおよびその代謝物の潜在的な測定のために、２４時間目の尿採取は、４日目に完了した。
・安全性評価：
−ＡＥ：試験薬物投与の直前および入院観察期間（８日目まで）毎日２回、確認および記録した。
−  眼底検査も含めた人間ドック：６日目
−  バイタルサイン：−２日目、−１日目、１日目から５日目（投与直前および投与の１５分後、３０日後、６０分後、２時後、４時間後、および１２時間後）、６日目、７日目、および８日目
−  ＥＣＧ：１日目から５日目（投与直前および投与の２時間後、４時間後、１２時間後）ならびに６日目、７日目、および８日目
−  臨床検査：１日目（投与前）、２日目、４日目、６日目および８日目。
−  併用薬の確認およびスクリーニング以降に使用した全ての医薬品の記録：−２日目に始まる外来ごと、観察期間全体。
・薬力学的血液採取：
−  ＭＭＴＴをベースライン（投与前、−２日目）および４日目の投与の２時間後に、毎回、同時刻に投与した。グルコースおよびインスリンを、食事の３０分前、食事の直前（０分）、および食事の開始から３０分後、６０分後、９０分後、１２０分後および２４０分後に実施した７回の測定から求めた。ＧＬＰ−１およびグルカゴンの合計は、食事の３０分前、食事の直前（０分）、および食事の開始から１０分後、１５分後、２０分後、３０分後、４０分後、６０分後、９０分後、２時間後および４時間後に実施した１１回の測定から求めた。
−  ７５ｇのＯＧＴＴをベースライン（投与前、−１日目）および５日目の投与の２時間後に、各回、同一の時刻に投与した。グルコースおよびインスリンを、グルコース摂取の３０分前、グルコース摂取の直前（０分）、グルコース摂取の３０日後、６０分後、９０分後、１２０分後、および２４０分後に実施した７回の測定から得た。ＧＬＰ−１およびグルカゴンの合計を、食事の３０分前、食事の直前（０分）、食事開始の１０分後、１５分後、２０分後、３０分後、４０分後、６０分後、９０分後、２時間後および４時間後に実施した１１回の測定から求めた。
−  空腹時グルコース：１日目投与前（５分の間隔を空けて、試料を２回採取）および５日目投与前（５分の間隔を空けて、試料を２回採取）
−  残りの試料材料は、将来、本化合物に関係した探査分析を行う可能性に備えて、保管した。
追跡調査の外来（１５日目±１日）
【０１３６】
この外来には、バイタルサイン、眼底検査も含めた人間ドック、臨床検査評価、血清妊娠試験（女性のみ）、ＥＣＧ、併用薬の確認、および継続中のＡＥの評価が含まれた。この外来の完了で、被験者の本試験の正式参加は終了となった。
患者の数（計画）：
【０１３７】
合計４４名の被験者について、本試験の４つの投与コホートの各々の投与フェーズに、１１名の被験者（活性８名、プラセボ３名）が無作為に割り当てられた。
主要適格性判断基準
・調査官（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ）による判断で、重大な病歴のない、年齢１８歳から６０歳までの、健康な外来の成人の男性および成人の志願者。
・２型糖尿病の病歴があっても、食事によりコントロールされ、スクリーニングの３ヶ月以内にインスリンまたは経口グルコール低下薬による治療を受けていないならば、許容される。
・空腹時グルコース≧１００ｍｇ／ｄＬおよび≦１５０ｍｇ／ｄＬまたはＯＧＴＴ（７５ｇ）２時間後グルコース＞１４０ｍｇ／ｄＬまたはスクリーニング時のＨｂＡ１ｃ≧５．８％
・スクリーニング時にＨｂＡ１ｃが＜５．８％であれば、空腹時グルコース≧１０５ｍｇ／ｄＬ
・ＨｂＡ１ｃが５．５％から７．５％の間であること
・ＢＭＩが２５から４５ｋｇ／ｍ２（両端を含む）
・肥満外科手術の前歴がないこと
・すべての臨床検査結果が正常範囲内であり、臨床的に重要でないと見なされていなければならない。
・ＥＣＧは、調査官による判断で、正常であるか、または臨床的に意義のある病理がないものでなければならなかった；血圧も含め、すべてのバイタルサインは正常な限界値内になければならなかった
調査産生物、投与量および投与形態：
【０１３８】
化合物Ａ（２５ｍｇ錠剤および１００ｍｇ錠剤）または相当するプラセボ。表１２は、フェーズ１ｃ試験のベースラインの人口統計学的特性を示す。
用量／経路／投与計画：
・コホート１：５日間、１日に１回２５ｍｇ（２５ｍｇ  ｘ    １）を経口投与
・コホート２：５日間、１日に１回１００ｍｇ（１００ｍｇ  ｘ  １）
を経口投与
・コホート３：５日間、１日に１回３００ｍｇ（１００ｍｇ  ｘ  ３）を経口投与
・コホート４：５日間、１日に１回６００ｍｇ（１００ｍｇ  ｘ  ６）を経口投与
治療の期間：
・スクリーニング期間：最大３３日（−３５日目から−３日目）
・投薬および観察期間：１０日間（−２日目から８日目）
・経過観察フェーズ：７日（９日目から１５日目）
【表１２】
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薬物動態結果
【０１３９】
この試験では、空腹時に投与された、化合物ＡのＳＤＤ製剤の単回増量用量（４コホート）が、投与された全ての用量において、Ｃｍａｘおよび暴露における比較的直線的な用量に依存する増加につながった。微晶質製剤の単回用量と比較して、暴露は最高用量（６００ｍｇ）において、最大４．２倍まで増加した。単回用量と比較して、反復的な１日１回投与用量のＰＫ（５日目）は、穏やかな累積（〜２倍）を示したが、５日目までに、定常状態薬物濃度をほぼ達成した。最高用量（６００ｍｇ）での反復用量の２４時間暴露は、微晶質製剤で以前に達成した最大暴露よりも８倍高かった。反復用量の半減期は１回１日の投与と一致していた。投与群ごとに、反復用量（５日目）の濃度−時間プロファイルおよびＰＫパラメータの要約を、それぞれ図１０および表１３に示す。ＳＤＤ製剤および微晶質製剤のＡＵＣおよびＣｍａｘの比較を、それぞれ図１１および図１２に示す。
【表１３】
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薬力学的結果
【０１４０】
現在までに実施された研究では、化合物Ａは、混合食負荷試験（ＭＭＴＴ）および経口耐糖試験（ＯＧＴＴ）に続いて、空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）およびグルコース可動域を一貫して低下した。研究Ａにおける化合物Ａの微晶質製剤の単回用量（６００ｍｇおよび１０００ｍｇ）、ならびに研究Ｂにおける４日間に渡る１００ｍｇおよび３００ｍｇの１日１回の反復投与は、プラセボおよび／またはベースラインに比較して、混合食負荷試験中に用量に依存する形で、グルコース可動域を２０〜４０％減少させた。研究Ｃで試験したあらゆる用量において、化合物ＡのＳＤＤ製剤の１日１回の反復用量（２５ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇおよび６００ｍｇ）は、混合食負荷試験中および経口耐糖試験中に、ベースラインおよびプラセボと比較して、グルコース可動域を減少したＭＭＴＴ中に観察されたグルコース低下の規模はより県所であり、図１３に示すように、３４％から５１％に及んだ。ＳＤＤ製剤を使うと、ピークグルコース効果は、１００ｍｇおよび３００ｍｇ用量で観察されたように見えたのに対し、６００ｍｇの投与（最大暴露＞５０，０００ｎｇ＊時間／ｍＬ）は、初期の前糖尿病患者のこの集団では、追加的にグルコースを低下することはなかった。ベースラインにて、６００ｍｇ群の被験者は、他の群に比べてより良好な血糖耐性を示しており、これは、この用量での効果の大きさが他よりも明らかに低いことの説明になるだろう。
【０１４１】
グルコースの低下は、ベースラインでの耐糖能障害の程度が最も高い被験者の部分集合で最大だった（最大７７％の低下、プラセボ抜き）。これは、図１４に示すように、フェーズ１ｃにおける化合物Ａの任意用量を受けていた被験者のプールした部分解析によって例示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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