(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化９】
0006008864.tif 000012
［式中、
Ｒ１は、水素、ＯＨ、またはＯＣＨ３であり、
Ｒ２は、水素またはＯＨであり、
Ｒ３は、水素またはＯＣ１〜Ｃ５アルキルである］
のモルホリニルアントラサイクリン誘導体またはその薬学的に許容される酸付加塩を調製する方法であって、
塩化シアヌルと式（ＩＩ）
【化１０】
0006008864.tif 000013
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は上記に定義する通りである］
のＮ−オキシドアントラサイクリン誘導体とを反応させるステップを含み、それによって式（Ｉ）のモルホリニルアントラサイクリン誘導体が形成される、方法。
【請求項２】
式（ＩＩ）の化合物から式（Ｉ）の化合物を得る反応が、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、１，２−ジクロロエタン、およびアセトニトリルから選択される非プロトン性溶媒中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシンであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
得られた式（Ｉ）の生成物をその薬学的に許容される酸付加塩に変換するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
式（ＩＩ）の化合物から式（Ｉ）の化合物を得る反応が、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、および炭酸カリウムから選択される塩基の存在下で行われる、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
米国特許法施行規則第１．５３条（ｂ）項に基づいて出願される本非仮出願は、２０１０年１２月２日出願の米国仮出願第６１／４１８，９４９号の、米国特許法施行規則第１１９条（ｅ）項に基づく利益を主張するものであり、該仮出願は、参照により全体が組み込まれる。
【０００２】
本発明は、モルホリノ環が酸素原子によって糖残基のＣ−４’位に架橋していることを特徴とするモルホリニルアントラサイクリン誘導体の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
これらのモルホリニルアントラサイクリン誘導体、それらの調製方法、それらを含む医薬組成物、および特にがんの処置における治療薬としての、それらの使用は、国際特許出願ＷＯ９８／０２４４６に記載され、特許請求されている。
【０００４】
モルホリニルアントラサイクリンは、アントラサイクリンの半合成類似体であり、顕著な抗腫瘍活性をもっている（Bioactive Molecules Vol.6, ED. J.W. Lown, Elsevier 1988;Curr Pharm Des. Mar 5(3):217-27, 1999を参照のこと）。
【０００５】
これらの化合物は、上記に引用された国際特許出願ＷＯ９８／０２４４６に記載されているように、公知の化学的方法に従って、鉄錯体形成剤の存在下でモルホリニルアントラサイクリン誘導体のＮ−オキシド誘導体と鉄塩を反応させることによって調製することができる。
【０００６】
モルホリニルアントラサイクリンの抗体コンジュゲートは、標的抗腫瘍活性（targetted antitumor activity）を有する（ＷＯ２００９／０９９７４１；ＷＯ２０１０／００９１２４）。
【発明の概要】
【０００７】
本発明者らは、今回、驚くべきことに、前記モルホリニルアントラサイクリン誘導体を新規方法によって有利に調製することができ、所望の生成物が高収率および高純度で得られることを見出した。
【０００８】
したがって、本発明の第１の目的は、式（Ｉ）
【０００９】
【化１】
0006008864.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素、ＯＨ、またはＯＣＨ３であり、
Ｒ２は、水素またはＯＨであり、
Ｒ３は、水素またはＯＣ１〜Ｃ５アルキルである］
のモルホリニルアントラサイクリン誘導体またはその薬学的に許容される酸付加塩を調製する方法であって、
（ｉ）塩化シアヌルと式（ＩＩ）
【００１０】
【化２】
0006008864.tif 000003
［式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は上記に定義する通りである］
のＮ−オキシドアントラサイクリン誘導体を反応させるステップと、
（ｉｉ）任意選択で、得られた式（Ｉ）の化合物をその薬学的に許容される酸付加塩に変換するステップと
を含む方法を提供することである。
【００１１】
式（Ｉ）のモルホリニルアントラサイクリン誘導体の具体例は、以下に挙げる化合物：３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（１）；
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］イダルビシン（２）；
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ダウノルビシン（３）；
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］カルミノマイシン（４）；および
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−エトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（５）、またはそれらの薬学的に許容される酸付加塩である。
【００１２】
式（Ｉ）のモルホリニルアントラサイクリン誘導体の具体例は、３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（１）である。式（Ｉ）は、ネモルビシンの代謝産物であり、ＰＮＵ−１５９６８２としても知られている（Quintieriら、(2005)Clinical Cancer Research, 11(4):1608-1617;Beulz-Richeら、(2001)Fundamental & Clinical Pharmacology, 15(6):373-378;ＥＰ０８８９８９８；ＷＯ２００４／０８２６８９；ＷＯ２００４／０８２５７９）。式（１）のＰＮＵ−１５９６８２は、インビトロでネモルビシンおよびドキソルビシンより細胞傷害性が高く、インビボ腫瘍モデルにおいて有効である。式（１）のＰＮＵ−１５９６８２を含む抗体−薬物コンジュゲートは、標的細胞致死（targeted cell-killing）をもたらす（ＷＯ２０１０／００９１２４）。
【００１３】
【化３】
0006008864.tif 000004
【００１４】
「ＯＣ１〜Ｃ５アルキル」という用語は、１から５個の原子を有し、酸素原子を介して分子の残りの部分に連結している直鎖または分枝の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。
【００１５】
実施例１の環化反応は、単一異性体を形成しながら進行する。反応は、通常、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド、１，２−ジクロロエタンまたはアセトニトリルなどの非プロトン性溶媒中で、トリエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸セシウムまたは炭酸カリウムなどの塩基の存在下で行われる。反応は、一般的に０℃〜室温で、５分〜６０分間行われる。例示的な条件は、溶媒としてアセトニトリル、塩基として炭酸カリウム、室温で３０分間である。
【００１６】
式（ＩＩ）のＮ−オキシド出発化合物は、ＧＢ２  ２９６  ４９５  Ａに記載されるように、モルホリニルアントラサイクリン誘導体のジメチルジオキシラン酸化によって調製することができる。
【００１７】
国際特許出願ＷＯ９８／０２４４６に包括的に記載および特許請求されている以下のモルホリニルアントラサイクリン誘導体、ならびにそれらを含む医薬組成物、および特にがんの治療における治療薬としての、それらの使用は新規である。
【００１８】
【表１】
0006008864.tif 000005
【００１９】
好適な投与経路としては、非経口投与が挙げられる。非経口投与用に、活性化合物、および活性化合物を溶解するまたは活性化合物の懸濁液をもたらすことができる無菌希釈剤または担体を使用して、液体製剤を調製することができる。非経口製剤を無菌固体の形で調製し、投与前に、生理的食塩水、滅菌水、または他の無菌媒体などの好適な媒体で再構成してもよい。
【００２０】
本発明の化合物は、白血病、結腸腺癌および他の固形腫瘍、ならびに血液学的悪性疾患などの過増殖性疾患の治療方法において有用である。
【００２１】
治療有効量を、腫瘍などの過増殖性疾患の患者に投与して、患者の病態を良くするまたは改善する（ameliorate or improve）。疾患の進行、例えば腫瘍の成長を抑制するのに十分な量を投与し得る。投与可能な投与量は、インビトロおよびインビボの抗腫瘍試験で本化合物が示す活性を参照して修正されるドキソルビシンおよびダウノルビシンの既知の投与量範囲を使用して、確認することができる。好適な投与量は、治療対象の疾患の性質および重症度ならびに患者の全身状態にもよるが、一般に０．０１〜１００ｍｇ／ｍ２の範囲である。
【００２２】
生物活性：インビトロ細胞増殖アッセイ
Ａ２７８０ヒト卵巣癌細胞およびＭＣＦ７ヒト乳癌細胞（１２５０細胞／ウェル）を白色３８４ウェルプレート中の完全培地（ＲＰＭＩ１６４０またはＥＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清）に播種し、２４時間後に、０．１％ＤＭＳＯに溶解させた化合物で処理した。細胞を３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートした。７２時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、製造業者の指示書に従ってプレートを処理した。
【００２３】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）は、代謝的に活性な細胞（metabolitically active cell）の指標であるＡＴＰの存在量の定量化に基づくホモジニアス法（homogenous method）である。ＡＴＰは、発光するルシフェラーゼおよびＤ−ルシフェリンに基づく系を用いて定量化する。発光シグナルは、培養中に存在する細胞の数に比例する。
【００２４】
２５μＬ／ウェルの量の試薬溶液を各ウェルに添加し、５分間振盪した後、マイクロプレートをルミノメーターで読み取り（red）、ＩＣ５０値を明らかにする。発光シグナルは、培養中に存在する細胞の数に比例する。
【００２５】
【表２】
0006008864.tif 000006
【００２６】
下記の実施例は、本発明を例示するものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【００２７】
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（１）。
【００２８】
【化４】
0006008864.tif 000007
３’−デアミノ−３’［２（Ｓ）−メトキシ−４−モルホリニル］−ドキソルビシンＮ−オキシド（ＧＢ２９６４９５Ａに記載のようにして調製）（５０．０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル（１２．５ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム粉末（３１．５ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）および塩化シアヌル（２，４，６−トリクロロ−１，３，５−トリアジン、ＣＡＳ登録番号１０８−７７−０、２８．０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）を添加した。出発材料が検出可能でなくなるまで（ＴＬＣ分析、ＥｔＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１：９）、反応混合物を暗所、室温で２０分間激しく撹拌した。次いで、３−アミノ−１，２−プロパンジオール（４２．０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の水（１ｍｌ）溶液を、反応混合物に添加し、水相をジクロロメタンで抽出した（４回×３０ｍｌ）。合わせた有機相を、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空下で蒸発させた。粗生成物を、シリカゲル（２３０〜４００メッシュ）上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝０．２：９．８）で精製し、赤色固体の３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（１）２４．４ｍｇを得た（収率＝５０％）。
1H NMR (500 MHz, アセトニトリル-d3) δ ppm 1.29 (d, J=6.41 Hz, 3 H) 1.68 (dt, J=15.02, 5.86 Hz, 1 H) 1.89 (dt, J=15.02, 5.50 Hz, 1 H) 2.07 - 2.13 (m, 1 H) 2.46 (dt, J=14.66, 2.02 Hz, 1 H) 2.69 - 2.75 (m, 1 H) 2.76 - 2.81 (m, 1 H) 2.95 (d, J=18.50 Hz, 1 H) 3.08 (t, J=5.50 Hz, 1 H) 3.14 (dd, J=18.59, 1.92 Hz, 1 H) 3.37 (s, 3 H) 3.41 - 3.47 (m, 1 H) 3.52 - 3.58 (m, 1 H) 3.73 (ddd, J= 11.50, 8.11, 2.93 Hz, 1 H) 4.01 (s, 3 H) 4.02 - 4.08 (m, 2 H) 4.25 (d, J=2.93 Hz, 1 H) 4.53 (d, J=2.93 Hz, 1 H) 4.61 (s, 1 H) 4.63 - 4.75 (m, 2 H) 5.22 (dd, J=3.94, 2.11 Hz, 1 H) 5.36 (t, J=5.59 Hz, 1 H) 7.54 (d, J=8.06 Hz, 1 H) 7.84 (t, J=8.06 Hz, 1 H) 7.96 (dd, J=7.69, 0.73 Hz, 1 H). MS (ESI): 642 [M+H]+.保持時間＝４．８８
【００２９】
好適な置換誘導体を使用した点以外は、３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（１）の調製に使用されたのと同じ方法に従って、以下の化合物を調製した。
【００３０】
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］イダルビシン（２）。
【００３１】
【化５】
0006008864.tif 000008
1H NMR (アセトニトリル-d3) δ: 8.29 - 8.34 (m, 2H), 7.86 - 7.95 (m, 2H), 5.35 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.19 (dd, J = 4.1, 2.1 Hz, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.26 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.09 (dd, J = 6.6, 1.7 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 7.1, 1.8 Hz, 1H), 3.74 (ddd, J = 11.5, 8.2, 3.0 Hz, 1H), 3.51 - 3.58 (m, 1H), 3.44 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.06 - 3.11 (m, 1H), 2.91 -2.98 (m, 1H), 2.67 - 2.81 (m, 2H), 2.44 (dt, J = 14.8, 2.1 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.06 (dd, J = 14.6, 4.4 Hz, 1H), 1.85 - 1.91 (m, 1H), 1.71 (dt, J = 15.0, 5.9 Hz, 1H), 1.29 (d, J = 6.6 Hz, 3H). MS計算値: 596.2127; MS実測値: 596.2117. MS (ESI): 596 [M+H]+.
保持時間＝６．３２分
【００３２】
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ダウノルビシン（３）
【００３３】
【化６】
0006008864.tif 000009
1H NMR (アセトニトリル-d3) δ: 7.94 - 7.99 (m, 1H), 7.84 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.35 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 5.19 (m, 1H), 4.55 (s, 1H), 4.54 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.09 (dd, J = 6.6, 1.7 Hz, 1H), 3.97 - 4.05 (m, 4H), 3.74 (, 1H), 3.54 (m, 1H), 3.44 (q, J = 6.1 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.02 - 3.10 (m, 1H), 2.88 - 3.01 (m, 1H), 2.64 - 2.86 (m, 2H), 2.43 (dt, J = 14.8, 2.1 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.05 (dd, J = 14.7, 4.3 Hz, 1H), 1.88 (dt, J = 15.1, 5.7 Hz, 1H), 1.70 (dt, J = 15.1, 5.8 Hz, 1H), 1.29 (d, J = 6.6 Hz, 3H) MS計算値: 626.2232; MS実測値: 626.2208. MS (ESI): 626 [M+H]+.保持時間＝５．６６分
【００３４】
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−メトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］カルミノマイシン（４）。
【００３５】
【化７】
0006008864.tif 000010
1H NMR (アセトニトリル-d3) δ: 7.81 - 7.91 (m, 1H), 7.84 (m, 1H), 7.35 (dd, J = 8.3, 1.1 Hz, 1H), 5.24-540 (m, 1H), 5.19 (m, 1H), 4.54 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.26 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.06-4.14 (m, 1H), 4.04 (dd, J=7.1, 1.8 Hz, 1 H), 3.74 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.07-3.11 (m, 1H), 2.94 - 2.98 (m, 1H), 2.69 - 2.80 (m, 2H), 2.42-2.46 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.99-2.11 (m, 1H), 1.85 - 1.92 (m, 1 H), 1.66 - 1.75 (m, 1H), 1.29 (d, J=6.56 Hz, 2 H). MS計算値: 612.2076; MS実測値: 612.2054. MS (ESI): 612 [M+H]+.
保持時間＝６．２８分
【００３６】
３’−デアミノ−３”−４’−アンヒドロ−［２”（Ｓ）−エトキシ−３”（Ｒ）−ヒドロキシ−４”−モルホリニル］ドキソルビシン（５）。
【００３７】
【化８】
0006008864.tif 000011
1H NMR (アセトニトリル-d3) δ : 7.96 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.83 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.36 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.21 (br. s., 1H), 4.69 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.04 - 4.04 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.70 - 3.82 (m, 2H), 3.37 - 3.60 (m, 3H), 3.13 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 3.08 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 2.94 (d, J = 18.6 Hz, 1H), 2.66 - 2.83 (m, 2H), 2.46 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.07 - 2.12 (m, 1H), 1.86 - 1.92 (m, 1H), 1.63 - 1.77 (m, 1H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS計算値: 656.2338; MS実測値: 656.2325 MS (ESI): 656 [M+H]+.保持時間＝５．２２分
【００３８】
ＨＰＬＣ／ＭＳ解析方法
ＨＰＬＣ機器は、２９９６  Ｗａｔｅｒｓ  ＰＤＡ  検出器を装備したＷａｔｅｒｓ  ２７９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ（登録商標）システムと、エレクトロスプレー（ＥＳＩ）イオン源を装備したＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ｍｏｄ．  ＺＱ単一四重極質量分析計とから構成された。装置制御、データ取得、およびデータ処理は、Ｅｍｐｏｗｅｒ  ａｎｄ  ＭａｓｓＬｙｎｘ  ４．０  ソフトウェアで行われた。ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ  Ｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８−３．５μΜ（４．６×５０ｍｍ）カラムを使用して、３０℃、流速１．０ｍＬ／分で行われた。移動相Ａは、酢酸アンモニウム５ｍＭ、ｐＨ＝５．２バッファー／アセトニトリル（９５：５）であり、移動相Ｂは、Ｈ２Ｏ／アセトニトリル（５：９５）であった。グラジエントは、１０％から９０％Ｂ（８分間）、次いで、１００％Ｂまで（１．０分間）の上昇であった。質量分析計を正および負のイオンモードで操作し、キャピラリー電圧を３．５ｋＶ（ＥＳ＋）および２８Ｖ（ＥＳ−）に設定した。電源温度は１２０℃であった。コーン電圧は１４Ｖ（ＥＳ＋）および２．８ｋＶ（ＥＳ−）であった。フルスキャン、１００から１０００ｍ／ｚの質量範囲を設定した。