(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バンダセルレア種のランの少なくとも一部の抽出物を含有する、皮膚の保湿状態の維持又は回復用化粧剤。
【請求項２】
前記抽出物が、前記ランの茎及び／又は根及び／又は葉の抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の化粧剤。
【請求項３】
前記抽出物が茎の抽出物であることを特徴とする請求項１又は２に記載の化粧剤。
【請求項４】
前記抽出物が、乾燥又は粉砕された前記ランの少なくとも一部の抽出物であり、
前記抽出物が、少なくとも１種の極性溶媒抽出物であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化粧剤。
【請求項５】
前記極性溶媒が、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、Ｃ２〜Ｃ６グリコール及びこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項４に記載の化粧剤。
【請求項６】
前記極性溶媒が水、エタノール、グリセロール、ブチレングリコール、プロピレングリコール及びこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項４又は５に記載の化粧剤。
【請求項７】
前記極性溶媒が水性−エタノール性混合物であることを特徴とする、請求項４〜６のいずれか一項に記載の化粧剤。
【請求項８】
前記極性溶媒が１０容量％のエタノールに対して９０容量％の水を含む水性−エタノール性混合物であることを特徴とする、請求項４〜７のいずれか一項に記載の化粧剤。
【請求項９】
前記極性溶媒が、臨界未満の状態の溶媒であることを特徴とする、請求項４〜８のいずれか一項に記載の化粧剤。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化粧剤の乾燥抽出物を０．００１重量％〜５重量％含有することを特徴とする、化粧用組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、保湿特性を有する一種若しくは複数種の分子及び／又は一種若しくは複数種の植物抽出物をさらに含有し、
前記保湿特性を有する一種若しくは複数種の分子及び／又は一種若しくは複数種の植物抽出物が、グリコール、グリセロール、天然ポリオール、天然若しくは合成セラミド、尿素、ヒアルロン酸及びアジュガツルケスタニカ（Ａｊｕｇａ  ｔｕｒｋｅｓｔａｎｉｃａ）からなる群から選択される、請求項１０に記載の化粧用組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、美容液、ローション、クリーム、ヒドロゲル、マスク、スティック又はパッチの形態であることを特徴とする請求項１０又は１１に記載の化粧用組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、前記化粧剤の乾燥抽出物を０．０１重量％〜１重量％含有することを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の化粧用組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、皮膚保湿剤としてのバンダセルレア（Ｖａｎｄａ  ｃｏｅｒｕｌｅａ）種のラン抽出物の新規な使用に関する。
【０００２】
ラン（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）は、有利な性質を有する新規化合物の同定を目標とした医療又は化粧品分野における多数の調査研究の対象である。
【０００３】
バンダ属のランは、アジア及びオーストラリアの熱帯森林の着生又は岩上着生のランである。
【０００４】
それらは、大気の湿度の高い、高度の低い森林の単軸性のランである。
【０００５】
この属は、およそ５０種を含み、多くの雑種を有する。
【０００６】
[従来技術]
現在までのバンダ属の植物の研究は、地域集団によるこれらの植物の知識及び使用法に基づいている。
【０００７】
Ｍａｎａｎｄｈａｒら（Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ、１９９４年、６５（１）、７〜１３頁）は、ネパールのカスキ（Ｋａｓｋｉ）地域におけるバンダクリスタータ（Ｖａｎｄａ  ｃｒｉｓｔａｔａ）の使用法を、この植物をベースにした（ｂａｓｅｄ  ｏｎ）ペーストを用いた切傷及び創傷の処置に関して記載している。
【０００８】
Ｓｉｇｈらは、インドのウッタルプラデーシュ（Ｕｔｔａｒ  Ｐｒａｄｅｓｈ）地域におけるナイニタール（Ｎａｉｎｉｔａｌ）地方のタルー（Ｔｈａｒｕ）族によって使用される薬用植物による伝統的な植物療法を研究している（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎ．１９９４年、３２  １、５１〜５８頁）。
【０００９】
これらの著者は、この植物全体から得られたバンダテッサラータ（Ｖａｎｄａ  ｔｅｓｓａｌｌａｔａ）（別名：バンダロクスブルギイ（Ｖａｎｄａ  ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ））をベースにした、骨折領域に塩と共に適用されるペーストの使用法を記載している。
【００１０】
該刊行物はまた、同じ目的で経口投与される、この同じ植物の水性抽出物（ａｑｕｅｏｕｓ  ｅｘｔｒａｃｔ）の使用法を記載している。
【００１１】
また、バンダロクスブルギイ植物の抽出物を含有する、スキンケアを目的とする組成物は、日本国特許出願第２００６−２５７０５６号に記載されており、前記抽出物は、この組成物において、皮膚の老化処置のためのエストロゲン剤として用いられている。
【００１２】
Ｃｈａｗｌａら（Ｉｎｄ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９９２年、５４（４）、１５９〜６１頁）は、Ｖａｎｄａ  ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉの根から得られる有機溶媒ベースの抽出物の抗炎症性を記載している。
【００１３】
Ｂｕｌｐｉｔｔ（「Ｔｈｅ  ｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｍｉｓｕｓｅｓ  ｏｆ  ｏｒｃｈｉｄｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、ＱＪＭ、２００５年、９８（９）、６２５〜３１頁）は、バンダセルレアのランが、インドの薬局方の一部にあることを示している。
【００１４】
さらに、Ｇｒｅｅｎｔｅｃｈ  ＳＡによって、Ｂｉｏｇｒｅｅｎ  Ｏｒｃｈｉｄｅｅ  Ｂｌｅｕｅ（Ｂｉｏｇｒｅｅｎ  Ｂｌｕｅ  Ｏｒｃｈｉｄ）の名称で販売されているバンダセルレアの全植物体の抽出物も知られている。
【００１５】
この抽出物は、化粧用組成物中で抗酸化剤として用いられている。
【００１６】
バンダセルレア種のランの抽出物が、皮膚の保湿を維持又は促進することが求められているケアを提供するための化粧品組成物において、それらの使用を特に有利にする、新規で顕著な皮膚保湿特性を有することが、本発明の発明者らによって全く予想外に発見された。
【００１７】
特に、バンダセルレアのこれらの抽出物は、特に、表皮内の水輸送を改善することによって、蒸発に対して皮膚を保護し、かなりの保湿効果を提供する。
【００１８】
実際、バンダセルレアの抽出物は、皮膚保湿の機序に関与している２つの生物学的マーカー、アクアポリン３（ＡＱＰ３）及びＬＥＫＴＩタンパク質（リンパ−上皮カザル（Ｋａｚａｌ）タイプ関連阻害剤）の発現を増加させることを、本発明者らは示した。
【００１９】
アクアポリン又は水チャネルは、溶液中の水分及び、例えば、グリセロール及び尿素などの小型分子を輸送する膜貫通タンパク質系である。
【００２０】
ヒト表皮、より具体的には、ヒト皮膚のケラチノサイトの細胞膜におけるアクアポリン３型（ＡＱＰ３）の存在、及びヒト表皮内での水分輸送においてこれらのＡＱＰ−３ｓが果たしている重要な役割が知られている（ＳＯＵＧＲＡＴら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ；１９９８年１１月、第９巻、４９９ａ頁）。
【００２１】
ＬＥＫＴＩタンパク質（リンパ−表皮カザルタイプ関連阻害剤）は、プロテアーゼ阻害剤であり、角質層下に位置する表皮の顆粒層に発現する。
【００２２】
このタンパク質をコードするＳＰＩＮＫ５遺伝子の変異によって、罹患個体におけるＬＥＫＴＩタンパク質の完全な欠失が生じ、皮膚バリア、特にデスモソームレベルでの皮膚バリアのきわめて大きな障害へと至る。
【００２３】
デスモソームは、細胞の互いの機械的結合を可能にして、密封系の機械的剛性を補強し、また、２つの細胞間でケラチンの結合部位でもある（ケラチノサイト又はコルネオサイト）。
【００２４】
したがってそれらは、真皮及び表皮を構成する細胞区画間の接着において、及び、皮膚の乾燥の原因である現象、細胞間の水分蒸発の防止において、必須の役割を果たしている。
ＬＥＫＴＩ産生の非存在下（ネザートン症候群を罹患している患者の場合）、皮膚の高度の脆弱性が見られ、重症の脱水がもたらされる。
【００２５】
ノックアウトマウス（ＳＰＩＮＫ５遺伝子を有さない）の皮膚の角質層が、角質層を顆粒層に結合するデスモソームの分解により、残りの表皮から分離することが示されている。
【００２６】
この変化は、ＬＥＫＴＩによる阻害が存在しない場合、デスモソームの重要な成分の１つであるデスモグレイン１（Ｄｅｓｍｏｇｌｅｉｎ１）を分解する表皮プロテアーゼの機能亢進に二次的なものである。
【００２７】
したがってＬＥＫＴＩは、これらの結合構造の分解を制御することにより、表皮の剥離過程の調節において主要な役割を果たす。
【００２８】
このように、バンダセルレア抽出物によるＡＱＰ３及びＬＥＫＴＩの発現刺激は、細胞間の水蒸発の制限、及び表皮内部の水分輸送の改善の両方を可能にする。
【００２９】
本発明の基礎を形成し、皮膚の正しい保湿を担っている２つの機序に同時に作用するバンダセルレア抽出物の著しい保湿活性を明らかにするのはこの発見である。
【００３０】
したがって、バンダセルレア種のランから得られる抽出物は、少なくとも１種の化粧用に許容できる賦形剤を含む化粧用組成物において活性剤として使用でき、皮膚の保湿を維持又は増強する効果を得るために、顔又は身体の皮膚の少なくとも一部に適用することを目的とすることができる。
【００３１】
［発明の目的］
本発明の主な目的は、皮膚の保湿を維持又は増強することのできる新規な化粧剤（ｃｏｓｍｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）を提供することである。
【００３２】
本発明はまた、皮膚の保湿に関する美容ケアの方法に関する。
【００３３】
本発明の目的はまた、産業的規模で使用できる特に簡便で比較的安価な解決法によって、技術的問題を解決することである。
【００３４】
[発明の概要]
第１の態様によれば、本発明は、化粧用組成物における、皮膚の保湿状態を維持又は回復するための試剤としての、バンダセルレア種のランの少なくとも一部の抽出物の使用であって、前記組成物が化粧用に許容できる賦形剤も含有する使用に関する。
【００３５】
第２の態様によれば、本発明は、皮膚の保湿状態を維持又は回復するための美容皮膚ケアの方法であって、バンダセルレア種のランの抽出物、又は第１の態様の対象である組成物を心配な顔又は身体の皮膚の部分に有効量適用することを含むことを特徴とする方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】実施例２の参照に提供され、顕微鏡によって観察された組織学的切片を示す図であり、Ｄ０におけるアクアポリン３の免疫標識の結果を提供している。
【図２】実施例２の参照に提供され、顕微鏡によって観察された組織学的切片を示す図であり、Ｄ６におけるアクアポリン３の免疫標識の結果を提供している。
【図３】実施例２の参照に提供され、顕微鏡によって観察された組織学的切片を示す図であり、Ｄ０におけるＬＥＫＴＩの免疫標識の結果を提供している。
【図４】実施例２の参照に提供され、顕微鏡によって観察された組織学的切片を示す図であり、Ｄ６におけるＬＥＫＴＩの免疫標識の結果を提供している。
【００３７】
[発明の詳細な説明]
したがって、本発明の第１の主題は、皮膚保湿剤として、バンダセルレア種のランから形成される植物材料から得られる抽出物の使用である。
【００３８】
使用される植物材料は、全植物体でもよく、葉、茎、花又は根など、植物の一部でもよい。
【００３９】
該抽出物は、好ましくは、該ランの茎及び／又は根及び／又は葉から得られ、好ましくは、茎である。
【００４０】
該抽出物は、当業者に知られた種々の抽出法によって調製される。
【００４１】
しかし、抽出は、選択された植物材料を、極性溶媒又は極性溶媒の混合物に接触させることによって実施することが好ましい。
【００４２】
該植物の少なくとも一部を、少なくとも１種の極性溶媒に接触させるこのステップの前に、この植物部分を任意選択で乾燥及び／又は粉砕することができる。
【００４３】
抽出ステップに使用できる極性溶媒又は極性溶媒の混合物としては、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、例えば、エタノール、及びＣ２〜Ｃ６グリコールから選択された、好ましくは、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコール、及びそれらの混合物から選択された溶媒又は溶媒混合物を選択すると有利である。
【００４４】
本発明の好ましい一実施形態により、抽出は、水性アルコール混合物、特に、水とエタノールの混合物、好ましくは、約９０容量％の水と１０容量％のエタノールを含む水とエタノールの混合物を用いて実施される。
【００４５】
本発明の他の変型により、抽出はまた、臨界未満の状態の極性溶媒を用いる方法によっても実施することができ、前記溶媒は、臨界未満の状態の水であると有利である。
【００４６】
抽出ステップ自体の前に、該植物材料は乾燥及び／又は粉砕しておくことができる。
【００４７】
抽出の好ましい一実施形態により、該植物材料は乾燥及び粉砕状態にある。
【００４８】
該抽出はまた、該抽出物を部分的に、又は完全に脱色する目的で、又は該抽出物の精製において、該抽出物の処理からなる少なくとも１つの追加ステップを任意選択で含むことができる。
【００４９】
この脱色ステップは、例えば、該抽出物を、活性炭素粒子の存在下、極性溶媒又は極性溶媒の混合物の溶液によって処理すること、好ましくは、７０／３０ｖ／ｖの比率におけるエタノール／水の溶液によって処理することを含むことができる。
【００５０】
該脱色ステップはまた、該抽出物を、超臨界状態の非極性溶媒、例えば、Ｃ６〜Ｃ７アルカン、或いは、ＣＯ２によって処理することを含むことができる。
【００５１】
該抽出は、抽出溶媒の部分的な、又は完全な除去のステップによって完了させることができる。
【００５２】
第１の場合、該抽出物は一般に、有意な量の有機溶媒の無い水性濃縮物が得られるまで濃縮され；第２の場合、乾燥残査が得られる。
【００５３】
或いは、該抽出ステップの生成物は、粉末の形態にするために、凍結乾燥するか又は微粒化することができる。
【００５４】
該粉末はそれ自体で、化粧用又は皮膚科用の組成物中に使用することもでき、溶媒又は溶媒混合物中に再分散させることもできる。
【００５５】
一般に、抽出ステップの生成物は、本発明によって包含される化粧用組成物中の活性剤として使用するために、溶媒又は溶媒混合物中に溶解又は分散させることができる。
【００５６】
該抽出物を溶解又は分散させる溶媒又は溶媒混合物は、該抽出に用いたものと同一でもよく、異なっていてもよい。
【００５７】
該抽出物はまた、支持体、有利には、多孔性又は非多孔性ナイロン粉末、及び雲母類、又は任意の層状鉱物から選択された支持体上に吸着させることもできる。
【００５８】
この場合、用いられる抽出物は水性抽出物であることが好ましい。
【００５９】
該化粧用組成物は、所望の効果を得る上で有効な量の抽出物を含む。
【００６０】
したがって該組成物は、抽出物の乾燥重量で、０．００１％〜５％、好ましくは０．０１％〜１％を含むことが好ましい。
【００６１】
本発明者らによって実施された試験は、該抽出物を、バンダセルレアの抽出物の化粧用効果と同様、及び／又は相補的な化粧用効果を有する他の活性剤と組み合わせた化粧用又は皮膚科用組成物においても、該抽出物の特性を得ることができる、又は改善することができることを示している。
【００６２】
したがって、該抽出物を、グリコール、特にグリセロール、又は天然ポリオール、天然若しくは合成のセラミド、尿素、ヒアルロン酸又はアジュガツルケスタニカ（Ａｊｕｇａ  ｔｕｒｋｅｓｔａｎｉｃａ）の抽出物など、保湿特性を有する一種又は複数種の分子及び／又は一種又は複数種の植物抽出物と組み合わせることができる。
【００６３】
該抽出物はまた、化粧用組成物において、ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）に属する少なくとも１種の他の植物の少なくとも１種の抽出物と組み合わせると有利であり得る。ラン科に属する別の植物のこの追加抽出物は特に、バンダ属の少なくとも１種のランの抽出物であり得る。
【００６４】
本発明により包含される組成物は、上記のバンダ属の別のランの少なくとも一部の少なくとも１種の抽出物と組み合わせた、バンダセルレア植物の少なくとも一部の抽出物、及び任意選択で、ラン科に属する別の植物の少なくとも１種の他の抽出物を同時に含み得る。
【００６５】
上記で定義された抽出物に加えて、該化粧用組成物は、顔料、染料、ポリマー、界面活性剤、レオロジー剤、芳香剤、電解質、ｐＨ改変剤、抗酸化剤及び保存剤、並びにそれらの混合物から選択することのできる、少なくとも１種の化粧用又は皮膚科用に許容できる賦形剤を含む。
【００６６】
該化粧用組成物は、例えば、美容液、ローション、クリーム又はヒドロゲル、好ましくはマスクであり得るか、又はスティック若しくはパッチの形態であり得る。
【００６７】
該抽出物及び該組成物は、それらが顔又は身体の皮膚に適用された際に、皮膚の保湿状態の維持又は増強のために特に求められる効果を有する。
【００６８】
本発明は、上記に開示されたとおり、皮膚の保湿状態の維持又は増強のための化粧用試剤としての上記に定義された抽出物の使用に関する。
【００６９】
以降の実施例に明らかになるように、本出願者は、以下に挙げられた活性改善に関する、バンダセルレア植物の抽出物の利点を実証した：
ＡＱＰ３発現の刺激
ＬＥＫＴＩタンパク質発現の刺激。
【００７０】
本発明の主題はまた、皮膚の乾燥徴候の出現を防止するか、又は遅速化する効果を得るために、前記抽出物の有効量を含む、上記に定義された抽出物又は上記に定義された化粧用組成物を用いた美容ケアの方法である。
【００７１】
前記美容ケアの方法は、上記で説明され、上記で定義された抽出物を含む組成物を、心配な顔又は身体の皮膚の少なくとも１つの領域に適用することを含む。
【００７２】
実施例において、別に指示されない限り、パーセンテージはすべて重量によって、温度は℃で、圧力は大気圧で示されている。
【００７３】
バンダセルレア種の抽出物に加えて、該組成物は、植物全体又は植物の部分から得られた一種又は複数種の他の植物抽出物を含み得る。
これらの植物は、ラン、特にバンダ属のラン、又はバンダセルレア種のランで示される特性に類似の、又は相補的な特性を有することが知られている別の科の植物であり得る。
【００７４】
その抽出物が、皮膚の乾燥徴候の出現を遅速化するか、又は防止することが知られている植物を特に選択することができる。
【００７５】
単に例示のために提供され、したがって、本発明の範囲を決して限定し得ない、抽出物の調製、及び抽出物の特性を実証する試験の実施例、及びこのような抽出物を用いる化粧用組成物の例を参照し、以下の説明的記述を考慮することにより、本発明の他の目的、特徴及び利点は明白になるであろう。
【００７６】
[実施例]
実施例１：バンダセルレアの茎抽出物の調製
ａ）茎抽出物の調製
乾燥状態におけるバンダセルレアの茎から形成された植物材料を、即時調合的に粉砕する。
１０ｇの粉砕植物材料を２５０ｍｌの丸底フラスコ内に導入し、これに、１５０ｍｌのエタノール／水の混合物（９０／１０ｖ／ｖ）を導入する。
磁気攪拌子を有する球状凝縮器を備えた超半球丸底フラスコを、サーモスタット浴中で加熱し、溶媒を還流させる。
攪拌しながら３０分間、還流を維持する。
加熱を停止したら、丸底フラスコを浴外で室温まで冷却させる。
次いでこの混合物を、ワットマン７０μｍＧＦ／Ｆフィルター及びタールを塗ったフラスコを有するブフナー漏斗を通して減圧濾過し、濾液１を得る。
このケークを、ブフナー漏斗において、５０ｍｌの抽出溶媒によって洗浄し、濾液２を得る。
２つの濾液を合わせて秤量する。
このようにして得られた濾液を、予めタールを塗った丸底フラスコ内に導入してから、最高温度５０℃に置かれた水浴中、ロータリーエバポレーター上、乾燥するまで濃縮させる。
導入した乾燥植物の質量に相対的に表された、質量による抽出収量を判定するために、このようにして得られた乾燥残査を定量化する。
抽出収量（乾燥粉砕状態における１００ｇの出発植物材料当たり得られた乾燥抽出物の質量として表された）は、８．９である。
【００７７】
ｂ）根の抽出物の調製
バンダセルレアの根の抽出物を調製するために、該手順を同じプロトコルに従って実施する（抽出物２）。
これら２種の抽出物を、別個に、又は種々の比率で合わせた混合物として、以下の実施例に用いる。
【００７８】
実施例２：バンダセルレア抽出物の活性に関する試験
抽出物使用に関する用量は、２つの細胞系、ＨａＣａＴ細胞（インビトロで不死化したケラチノサイト系）及び通常のヒト線維芽細胞（ＮＨＦ）の細胞培養物に対するＸＴＴ試験（試薬：テトラゾリウム塩）によって予め決定する。
【００７９】
（使用される組織学的用語の解説）
海綿状：デスモソーム結合が破壊されていない細胞間浮腫
凝縮核：細胞壊死に至る核変性状態にある核
細胞浮腫：細胞の腫張
錯角化：最後の生存表皮層である顆粒層中のケラチン化
【００８０】
［材料及び方法］
実施例１に従って得られた、バンダセルレアの茎からの乾燥抽出物を、乾燥抽出物の１．５重量％の濃度で、ＤＭＳＯ中に溶解させる。
（生検材料の調製）
４０才の女性の腹部移植から、直径およそ１０ｍｍを有する１５の外植片を調製する。それらは、ＢＥＭ特定培地（ＢＩＯ−ＥＣ外植片培地）中で生存を維持する。
該外植片を、以下の方法で分け、２バッチの６つの外植片と＋Ｔ０における３つの外植片に分ける：
−対照用の６つの外植片（活性剤を欠く処方物）
−６つの外植片、対照と同じ処方物であるが、それ自体で、５重量％のバンダセルレア抽出物、すなわち、０．０７５重量％の最終濃度の乾燥抽出物を含有する処方物。
該生成物を、外植片１つ当たり２ｍｇの用量で局所に適用し、小型スパーテルにより塗布する。
適用は、Ｄ０、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ４、Ｄ６及びＤ８の時点で実施する。
【００８１】
［サンプル及び組織検査］
（サンプル）
Ｄ０、Ｄ６及びＤ１０の時点で、組織検査用に外植片のサンプルを採取する。
Ｄ０の時点で、Ｔ０バッチの３つの外植片からサンプルを採取し、Ｄ６及びＤ１０の時点で、各バッチの３つの外植片からサンプルを採取する。
各外植片を直ちに２つに切断する。一方の半分をリン酸緩衝液によりｐＨ７．５で緩衝化したホルムアルデヒドに固定し、他方の半分を−８０℃で冷凍する。
【００８２】
（組織検査）
緩衝化ホルムアルデヒドに２４時間固定後、サンプルを脱水し、Ｌｅｉｃａ  １０２０自動脱水装置を用いて、パラフィンに含浸させる。それらを、Ｌｅｉｃａ  ＥＧ  １１６０コーティングステーションを用いてブロックに置く。Ｌｅｉｃａ  ＲＭ  ２１２５  Ｍｉｎｏｔミクロトーム上で、５μｍの切片を切断し、スーパーフロストシラン処理した組織学的スライドガラス上に付着させる。
凍結サンプルを、Ｌｅｉｃａ  ＣＭ  ３０５０低温槽において、７μｍに切断する。該切片を、免疫標識のために、シラン処理した組織学的スライドガラス上に付着させる。
ＬｅｉｃａのＤＭＬＢ型顕微鏡を用い、×４０の対物レンズで、光学顕微鏡による顕微鏡観察を実施する。画像は、Ｓｏｎｙ  ＤＸＣ  ３９０Ｐ  ３ＣＣＤカメラにより撮影し、Ｌｅｉｃａ  ＩＭ１０００データアーカイビングソフトウェアを用いて保存する。
【００８３】
（全体的形態）
パラフィンゲルに包埋し、マッソントリクローム染色、Ｇｏｌｄｎｅｒ変型染色した切片で全体的形態を観察する。
【００８４】
［免疫標識］
（アクアポリン３）
ＡＱＰ３を、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社、参照番号ＡＢ  ３２７６の、ウサギからのポリクローナル抗ＡＱＰ３で標識化する。これは、ベクタステイン（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ）ユニバーサルベクタービオチン／ストレプトアビジン増幅系によって実施し、ペルオキシダーゼに対する基質分子である３，３−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）において表示させる。核を、マッソンのヘマルン（ｈｅｍａｌｕｎ）で対比染色する。
【００８５】
（ＬＥＫＴＩ）
ＬＥＫＴＩを、ホルムアルデヒド固定、パラフィン包埋切片に対し、モノクローナル抗体の抗ＬＥＫＴＩ、クローン１Ｃ１１Ｇ６、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚの参照番号ＳＣ−３２３３０で標識化し、ビオチン／ストレプトアビジンの増幅系を用い、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）によって明らかにする。核を、ヨウ化プロピジウムによって対比染色する。
【００８６】
［結果］
（全体的形態）
Ｄ０の時点：
非処理外植片について：
角質層はそれほど厚くなく、非常にわずかに積層化し、表面及びその基底部で完全にケラチン化している。表皮はケラチノサイトによる４〜５細胞層を示し、良好な形態を示す。真皮−表皮接合部の輪郭は鮮明である。真皮乳頭は、多少密な網状構造を形成しているきわめて厚いコラーゲン線維を示す。それは十分に細胞化している。
【００８７】
Ｄ６の時点：
非処理外植片について：
角質層は中程度に厚く、非常に中程度に積層化し、表面では中程度にケラチン化している。錯角化は非常に中程度である。表皮は良好な形態を示すケラチノサイトによる４〜５細胞層を示す。真皮−表皮接合部の輪郭は鮮明である。真皮乳頭は、多少密な網状構造を形成しているきわめて厚いコラーゲン線維を示す。それは十分に細胞化している。
バンダセルレア抽出物を含有する処方物によって処理した外植片について
角質層は中程度に厚く、中程度に積層化し、表面ではわずかにケラチン化している。錯角化は中程度である。表皮は良好な形態を示すケラチノサイトによる５〜６細胞層を示す。海綿状態は表皮の基底部で弱い。真皮−表皮接合部の輪郭は鮮明である。真皮乳頭は、密な網状構造を形成している厚いコラーゲン線維を示す。それは十分に細胞化している。
【００８８】
Ｄ１０の時点：
非処理外植片について：
角質層はきわめて厚く、きわめて十分に積層化し、表面では中程度にケラチン化している。錯角化は弱い。表皮は良好な形態を示すケラチノサイトによる４〜５細胞層を示す。真皮−表皮接合部の輪郭は鮮明である。真皮乳頭は、それほど密でない網状構造を形成しているきわめて厚いコラーゲン線維を示す。それは十分に細胞化している。
バンダセルレア抽出物を含有する処方物によって処理した外植片について
角質層はきわめて厚く、きわめて十分に積層化し、表面では中程度にケラチン化している。錯角化は強い。表皮はきわめて平均的な形態を示すケラチノサイトによる５〜６細胞層を示す。有棘細胞層で多くのケラチノサイトがわずかに浮腫状であり、上部有棘細胞層では、細胞は凝縮核及び核周囲浮腫を含有する。真皮−表皮接合部の輪郭は鮮明である。真皮乳頭は、密な網状構造を形成している厚いコラーゲン線維を示す。それは十分に細胞化している。
【００８９】
（アクアポリン３免疫標識）
一次抗体又は二次抗体をＰＢＳで置換した切片では標識化は見られない。
Ｄ０の時点：
非処理外植片について（図１を参照）：
標識は、膜及び周囲において鮮明で規則的で明白である。上部表皮層では鮮明で規則的であり、最終細胞層では見られない。それは基底層において外側が十分に鮮明である。
【００９０】
Ｄ６の時点：
バンダセルレア抽出物を含有する処方物によって処理した外植片について（図２を参照）：
標識は、膜及び周囲において鮮明で規則的で明白である。上部表皮層での標識は、鮮明できわめて規則的であり、最終細胞層では見られない。表皮の基底層すべてに沿って、真皮−表皮接合部において、標識はきわめて鮮明であり、表皮の深層において、ＡＱＰ３の強い発現活性の徴候がある。
【００９１】
（ＬＥＫＴＩ免疫標識）
一次抗体又は二次抗体をＰＢＳで置換した切片では標識化は見られない。
Ｄ０の時点：
非処理外植片について（図３を参照）：
角質層基部の顆粒層における４〜５細胞層の膜上で、標識は弱く、きわめて規則的である。角質層における２〜３細胞層ではそれがわずかに見られる。基礎をなしている表皮層には標識は見られない。
【００９２】
Ｄ６の時点：
バンダセルレア抽出物を含有する処方物によって処理した外植片について（図４を参照）：
角質層基部の顆粒層における２〜３細胞層で、標識はきわめて鮮明で、きわめて規則的であり、明らかに細胞形質である。角質層に標識はほとんど見られない。基礎をなしている表皮層における１細胞層で標識はわずかに見られる。
【００９３】
結論
バンダセルレアの抽出物は、ＬＥＫＴＩの発現を増加させることによる表皮の結合構造の分解制御によって、表皮の剥離過程の調節を改善することを可能にし、このことによって、皮膚バリア、したがって皮膚の保湿の保護及び増強を可能にする。
さらに、該抽出物は、アクアポリンＡＱＰ３の調節及び／又は機能性に及ぼす効果を介して、表皮における水分流動の調節に関して特別な有効性を有し、したがって、表皮の基底層の良好な保湿を可能にする。
【００９４】
実施例３−本発明の抽出物を含む化粧用組成物
以下の化粧用組成物において活性剤として用いられるランの抽出物は、実施例１における方法を再現することによって得られる。
該乾燥抽出物を、グリセロール／水の６０／４０（ｖ／ｖ）混合物中、１重量％に溶解させる。
この溶液を活性剤として用い、以下の化粧用組成物（重量％として表されている）を調製する：
【００９５】
Ａ相
バンダセルレアの１％抽出物を含有する溶液                      ０．３％
フェノキシエタノール                                          ０．５％
キサンタンゴム                                                ０．２％
アクリレート／Ｃ２０−３０アルキルアクリレート架橋ポリマー    ０．１５％
ＥＤＴＡ四ナトリウム                                          ０．１％
水                                                            適量
【００９６】
Ｂ相
水素化ポリイソブテン                                          ４％
スクワラン                                                    ３％
カプリル／カプリントリグリセリド                              ３％
ペンチレングリコール                                          ３％
ステアリン酸グリセリル                                        ３％
ステアリン酸ＰＥＧ−１００                                    ２．５％
蜜蝋                                                          １．５％
ジカプリリルカーボネート                                      １．５％
セチルアルコール                                              １％
ステアリルアルコール                                          １％
ジメチコーン                                                  １％
【００９７】
Ｃ相
水酸化ナトリウム                                              ０．０４％
水                                                            適量  １００％
【００９８】
Ａ相のゲル化剤を水中に分散させ、次いで、混合物を８０〜８５℃に加熱してから、バンダセルレアの抽出物溶液を含む他のすべての化合物を溶解させる。
【００９９】
Ｂ相の化合物を、均一な相を形成する目的で、８５℃に加熱する。
【０１００】
Ｙｓｔｒａｌ混合器を用いて、Ａ相をＢ相に乳濁化させる。
【０１０１】
このようにして得られた油／水乳液を、最後に０．０４重量％の水酸化ナトリウム水溶液により中和してから冷却させる。
【０１０２】
得られた組成物は、顔又は顔の一部への適用を目的とした保湿クリームである。
【図１】
0005924513.tif 000002
【図２】
0005924513.tif 000003
【図３】
0005924513.tif 000004
【図４】
0005924513.tif 000005