(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化粧品として許容できる媒材中に、有効量のＤＬ−デスチオビオチン又はその局所適用可能な塩を有効成分として含み、
皮膚に局所適用され、
皮膚の老化の１又は２以上のサインの治療のために用いられる、
ことを特徴とするＬＯＸＬ−１亢進剤。
【請求項２】
前記皮膚の老化のサインが、しわ及び／又は小じわ、皮膚のたるみ又は萎縮、薄皮、開いた毛穴、皮膚のトーン又は色の喪失、皮膚の弾力性又は張りの低下、ならびにこれらの組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のＬＯＸＬ−１亢進剤。
【請求項３】
前記皮膚の老化のサインが、しわ及び／又は小じわを含む、
ことを特徴とする請求項１又は２に記載のＬＯＸＬ−１亢進剤。
【請求項４】
ＤＬ−デスチオビオチン又はその局所適用可能な塩が、０．００１重量％から５重量％含まれる、
ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載のＬＯＸＬ−１亢進剤。
【請求項５】
化粧品として許容できる媒材中に、有効量のＤＬ−デスチオビオチン又はその局所適用可能な塩を有効成分として含み、
皮膚に局所適用され、
皮膚の老化の１又は２以上のサインの治療のために用いられる、
ことを特徴とするエラスチン再生剤。
【請求項６】
前記皮膚の老化のサインが、しわ及び／又は小じわ、皮膚のたるみ又は萎縮、薄皮、開いた毛穴、皮膚のトーン又は色の喪失、皮膚の弾力性又は張りの低下、ならびにこれらの組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項５に記載のエラスチン再生剤。
【請求項７】
前記皮膚の老化のサインが、しわ及び／又は小じわを含む、
ことを特徴とする請求項５又は６に記載のエラスチン再生剤。
【請求項８】
ＤＬ−デスチオビオチン又はその局所適用可能な塩が、０．００１重量％から５重量％含まれる、
ことを特徴とする請求項５乃至７のいずれか１項に記載のエラスチン再生剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デスチオビオチン、その誘導体及びその異性体を含む局所用組成物、及び皮
膚の小じわ及びしわを含む、皮膚老化のサインを治療し、逆行させ、及び／又は防止する
ためのこれら組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
徐々に進行する顔のしわは、表面の小じわであれ深いしわであれ、早期に現れる皮膚のダメージの蓄積及び老化の典型的なサインである。早すぎる老化や皮膚のしわは、太陽光への過剰な暴露、及びその他の要因、例えば、顔面表情筋の過剰な運動、タバコ製品の頻繁な使用、栄養不足又は皮膚疾患によって促進され得る。顔の表情を作る際に繰り返して皮膚が折り畳まれることにより、表面の小じわは、より深いしわへと進行する。また、年を重ねるごとに進行する深いしわにより、容貌が見劣りするようになるとともに、明白な変化がもたらされる。物質を皮膚の一部に注入又は移植するという侵襲的な方法が利用可能ではある。それは、一時的に筋肉の働きを弱め、又は皮膚充填剤として作用する。しかし、非侵襲的な方法は、これまでほとんどうまくいっていなかった。このように顔のしわは、従来から問題視されていたにもかかわらず、この問題を排除又は低減させるための、安全かつ効果的な治療を成し遂げるのは、非常に困難であった。
【０００３】
皮膚の弾性は、たるみといったダメージを改善し、皮膚を柔らかくし、若々しい容姿をもたらすのに重要である。また、小じわ及びしわを改善させるのに重要である。それらすべては、エラスチンにより実現可能となる。エラスチンは、ゴムバンドのように作用する繰り返し伸縮可能なタンパク質ポリマーであり、生体に何らダメージを与えることはない
【０００４】
エラスチンポリマーは、トロポエラスチンモノマーの架橋結合により形成されている。この過程を触媒し得る酵素は５つも存在するが、架橋結合がどのように調節されているのか正確にはわかっていない。Ｌｉらは、これらの酵素のひとつである、リシルオキシダーゼ様１（ＬＯＸＬ１）が、エラスチン線維のリモデリングに不可欠であることを報告した。Ｌｉｕらは、この酵素が、細胞外マトリックスタンパク質であるフィブリン−５によって、エラスチンの結合部位に誘導される、と予測した。ＬＯＸＬ１によりトロポエラスチンモノマー（ＴＥ）が架橋形成され、ポリマーが形成される。Ｌｉｕは、ＬＯＸＬ１が、老化に関連する動脈及び肺組織の弾力性低下を防ぐのに必須であることを発見した（非特許文献１）。
【０００５】
Ｎｏｂｌｅｓｓｅらは、ＬＯＸＬ１が、正常の皮膚及び皮膚と同等のモデル（ＳＥ）の真皮と表皮に存在することを示した。ＬＯＸＬの微細構造的局在により、ＬＯＸＬとエラスチンが存在するマテリアルとの関連性が示唆された。研究者らは、ＬＯＸＬがエラスチン線維の形成において役割を持つだろうとの仮説を立てた（非特許文献２）。
【０００６】
Ｐａｓｃｕａｌらは、年齢とともに、ＬＯＸＬ１を含むエラスチン合成のマーカーのレベルが、著しく減少することを示した（非特許文献３）。
【０００７】
ＬｉとＬｉｕによる特許文献１では、皮膚のたるみやしわといった、エラスチン線維の低下に関連する症状を有する対象を治療する方法が開示されている。それには、ＬＯＸＬ１亢進剤（ｅｎｈａｎｃｅｒ）を治療に有効な投与量をもって対象に投与することが含まれる。このＬＯＸＬ１亢進剤は、ＬＯＸＬ１のポリペプチド若しくはその活性断片、又はＬＯＸＬ１のポリペプチド若しくはその活性断片をコードする核酸である。また、このＬＯＸＬ１亢進剤は、小分子、又は該公報に記載のスクリーニング方法により同定される他の治療用化合物を含む。
【０００８】
デスチオビオチンは、１９４０年代半ばより、細菌及びかびにおけるビオチンの前駆体として知られている（非特許文献４を参照）。デスチオビオチンは、ビオチンから硫黄原子を除くことにより得られる。それは、いくつかの微生物においてビオチンの代わりとなる。しかし、他の生物への影響はなく、生物の成長を阻害することもない。この化合物は下記の構造を有する。
【化１】
0006038200.tif 000002
【０００９】
特許文献２では、低濃度のビオチン誘導体を歯のケアに用いることが開示されている。この特許は、デスチオビオチンといった化合物が、虫歯を発生させる微生物のビオチンを枯渇させる、という考えに基づいている。
【００１０】
Ｌｅｖｅｒ  Ｂｒｏｔｈｅｒｓ  Ｃｏｒｐの特許文献３では、皮脂の生成を抑えるために、ビオチン拮抗剤を用いることが開示されている。この化合物は、下記一般式で表される。
【化２】
0006038200.tif 000003
また特許文献３には、脂質合成に関わる酵素に依存してビオチンをブロックし、特にこの作用が、アセチル−ＳＣｏＡ−カルボキシラーゼに反する作用であることが記載されている。該組成物は、皮膚を脱脂することなく、表面の“グリース（ｇｒｅａｓｅ）”を減らすのに有用であると言われる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００５／０１８８４２７号明細書
【特許文献２】米国特許第４，２４３，６６５号
【特許文献３】米国特許第４，５２９，５８７号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｌｉｕ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｅｌａｓｔｉｃ  ｆｉｂｅｒ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ−ｌｉｋｅ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ．ＮａｔＧｅｎｅｔ．３６（２）：１７８−８２
【非特許文献２】Ｎｏｂｌｅｓｓｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ−ｌｉｋｅ  ａｎｄ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｒｅ  ｐｒｅｓｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｒｍｉｓ  ａｎｄ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ｏｆ  ａ  ｓｋｉｎ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｏ  ｅｌａｓｔｉｃ  ｆｉｂｅｒｓ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２２（３）：６２１−３０
【非特許文献３】Ｐａｓｃｕａｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｙｌ  ｏｘｙｄａｓｅ−ｌｉｋｅ  ｉｎ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．２３（２）：１７９−８６
【非特許文献４】Ｌｅｏｎｉａｎ  ａｎｄ  Ｌｉｌｌｙ（１９４５）Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｅｓｔｈｉｏｂｉｏｔｉｎ  Ｉｎｔｏ  Ｂｉｏｔｉｎ  ｏｒ  Ｂｉｏｔｉｎｌｉｋｅ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ｂｙ  Ｓｏｍｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．４９（３）：２９１−２９７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
特に顔、首、手などのたるみ、弾力性低下、小じわ及びしわを含む、老化のサインを軽減させる化粧品組成物は、いまだ必要とされている。
【００１４】
すなわち、本発明の目的は、小じわ及びしわの症状を軽減させることを含む、皮膚の症状を改善させるための組成物を提供することである。
【００１５】
驚くべきことに、デスチオビオチンが、小じわ及び／又はしわ、皮膚のたるみ及び皮膚の老化に関連するサインを含む、皮膚の弾力性低下により引き起こされる皮膚の老化のサインを軽減し、逆行させ、改善し、及び／又は防止する効果を有することが見出された。
【００１６】
一般的に、この組成物は、エラスチン線維の低下に関連する皮膚状態を処置するのに有用である。本発明は、少なくとも、この化合物のＬＯＸＬ−１生成促進能に基づく利益をもたらす。言い換えれば、本発明の化合物は、ＬＯＸＬ−１亢進剤である。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明のひとつの態様において、小じわ、しわ及び皮膚のたるみの出現といった、皮膚弾力性低下に関連する皮膚の状態を処置するための組成物が提供され、この組成物は、有効量の化学式Ｉ、
【化３】
0006038200.tif 000004
（上記化学式Ｉ中、ｎは１から２２までの整数であり、典型的には１から１８までの整数であり、好ましくは５から１２までの整数である。
Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれ独立して、Ｏ原子、Ｓ原子及びＮＲＮからなる群から選択される。ＲＮは、水素原子、低級アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、ＣＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＳＯ２Ｒ３、ＰＯ３（Ｒ３）２、又はＣＨ（ＯＲ３）２を表す。ここでＲ３は、それぞれ独立してＨ原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。Ｘ２及びＸ３は、好ましくはＮＲＮであり、より好ましくはＮＨであり；Ｘ０、Ｘ１及びＸ４は、好ましくはＯ原子である。
Ｒ１は、水素原子、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、へテロアリール、アルキルアリール（例えば、ベンジル）、アルコキシアルキル、カルボキシアミドアルキル及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
Ｒ２は、水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロアリール、アルコキシル、アリールオキシ、チオアルコキシ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。）
で表される化合物、該化合物の局所適用に許容できる塩及び該化合物のプロドラッグを含む、化粧品組成物を、必要に応じて皮膚に局所適用してもよい。
【００１８】
化学式Ｉの化合物は、好ましくはＬＯＸＬ１活性を増加させ得る（ＬＯＸＬ１亢進剤（「ＬＯＸＬ１  ｅｎｈａｎｃｅｒ」）。ある実施形態において、さらに、フィブリリン−１を促進し得る。
【００１９】
本発明の関連する態様において、小じわ若しくはしわの出現、皮膚のたるみ若しくは萎縮、開いた毛穴、皮膚の弾力性若しくは張りの低下、又は皮膚の色若しくはトーンの低下といった、皮膚の弾力性低下に関連する皮膚状態を処置するための組成物が提供される。この組成物は、有効量の、下記の構造を有する化合物（又は、局所適用に許容できるそれらの塩又はエステル）を含有する組成物を含み、必要に応じて皮膚に局所適用される。
【化４】
0006038200.tif 000005
【００２０】
本発明のこれらの態様及び他の態様は、以下の詳細な説明及び添付の図面を参照することによってより良く理解されるだろう。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
驚くべきことに、デスチオビオチンが、ＬＯＸＬ１酵素の生成を促進し、又はＬＯＸＬ１の酵素活性を亢進することが見出された。ＬＯＸＬ１は、皮膚において、エラスチンの維持と再構築に必要不可欠な酵素である。本知見等において、デスチオビオチン及びその誘導体は、皮膚の老化のサインに対して治療効果を奏するとされる。この効果は、小じわ及びしわ、たるみ並びにその他関連する皮膚の老化のサインを低減することを含む。
【００２２】
本明細書で用いられる“重量％”又は“％ｗｔ”は、特に指定のない限り、該組成物（例えば、担体、媒材（媒材）、溶媒、皮膚軟化剤、増量剤又は皮膚への適用前に添加される他の成分を含む）の全重量中の、成分の重量パーセントをいう。
【００２３】
ある範囲を参照することにより用語が特定される場合、その範囲には、それぞれの要素が明確に記載されている、と理解され得る。一例を挙げると、炭素数１〜４のアルキルは、炭素数１、炭素数２、炭素数３、又は炭素数４のアルキルであると理解され得る。
【００２４】
２又は３以上の置換基が、“独立して”列挙された選択肢の群から“選択される”という記載は、それぞれの置換基は、他の置換基とは独立して、その群のいかなる要素ともなり得ることを意味する。
【００２５】
本発明は、デスチオビオチン、それに構造的に関連する化合物、及びそれらの塩といった、ＬＯＸＬ１亢進剤の有効量を含む、局所用組成物を提供する。該組成物は、皮膚の老化のサインを治療し、逆行させ、改善し、及び／又は防止する。本発明が提供する組成物を皮膚の老化のサインに適用することにより、例えば以下のような効果が得られる。
（ａ）小じわ又はしわの処置し、軽減させ、及び／又は防止する。
（ｂ）皮膚の毛穴のサイズを小さくする。
（ｃ）皮膚の厚み、ふくらみ、及び／又は張りを改善する。
（ｄ）皮膚の柔らかさ、及び／又は柔軟性を改善する。
（ｅ）皮膚のトーン、輝き、及び／又は透明度を改善する。
（ｆ）プロコラーゲン及び／又はコラーゲンの生成を改善する。
（ｇ）エラスチンの維持及び再構築を改善する。
（ｈ）皮膚のきめを改善し、及び／又は再組織化を促進する。
（ｉ）皮膚バリアの修復し、及び／又はその機能を改善する。
（ｊ）皮膚の凹凸を改善する。
（ｋ）皮膚の艶及び／又は明るさを修復する。
（ｌ）皮膚の必須栄養素及び／又は構成要素を補充する。
（ｍ）老化及び／又は更年期による影響を軽減する。
（ｎ）皮膚の潤いを改善する。
（ｏ）皮膚の弾力性を向上させる。
【００２６】
実際には、本発明の組成物は、処置の必要に応じて、皮膚に適用される。この場合の皮膚とは、前述の皮膚の状態において、何らかが不足している、若しくは失われている状態、又は、前述の皮膚の状態を改善することで恩恵が得られる状態のものをいう。
【００２７】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、皮膚の小じわ及び／若しくはしわの防止、処置及び／又は改善のために用いられる。この場合、該組成物は、しわ及び／又は小じわがある皮膚に対して処置が必要な場合に適用される。好ましくは、該組成物は、小じわ及び／又はしわに直接適用される。該組成物は、顔、首、及び／又は手の皮膚に限定されることなく、いずれの皮膚の小じわ及び／又はしわの治療にも適している。
【００２８】
該ＬＯＸＬ１亢進剤は、典型的には式Ｉ、
【化５】
0006038200.tif 000006
（上記式Ｉ中、ｎは１から２２までの整数であり、典型的には１から１８までの整数であり、好ましくは５から１２までの整数である。
Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれ独立してＯ原子、Ｓ原子及びＮＲＮからなる群より選択される。ＲＮは、水素原子、低級アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、ＣＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＳＯ２Ｒ３、ＰＯ３（Ｒ３）２又はＣＨ（ＯＲ３）２を表す。Ｒ３は、水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。Ｘ２及びＸ３は、好ましくはＮＲＮであり、より好ましくはＮＨである。Ｘ０、Ｘ１及びＸ４は、好ましくはＯ原子である。
Ｒ１は、水素原子、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、へテロアリール、アルキルアリール（例えば、ベンジル）、アルコキシアルキル、カルボキシアミドアルキル及びそれらの組み合わせからなる群より選択される。Ｘ０及びＸ１が、Ｏ原子である場合、Ｒ１は、好ましくは水素原子（従って、カルボン酸と定義される）又はアルキル（従って、エステルと定義される）である。
Ｒ２は、水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロアリール、アルコキシル、アリールオキシ、チオアルコキシ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。Ｒ２は、好ましくは水素原子、又は、メチル、エチル、プロピルなど、といった低級アルキルである。）
の構造を有する化合物、局所適用可能な塩又はプロドラッグである。
【００２９】
本明細書で使われる“アルキル”という用語は、特に指定しない限り、直鎖、分岐鎖又は環式（この場合、シクロアルキルと特定される）、第一級、第二級、又は第三級炭化水素をいう。炭素数１〜１８、より具体的には炭素数１〜６に限定されない。アルキル基の実例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、１−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、ペンチル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル及びシクロヘキシルが挙げられる。特に指定しない限り、アルキル基は、１若しくは２以上のヘテロ原子、又はハロ基、水酸基、カルボキシル基、アシル基、アシルオキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アリールアミノ基、アミド基（ａｍｉｄｏ）、エステル基（ｅｓｔｅｒｓ）、カルバミド基、アルコキシ基、アリールオキシ基、ニトロ基、シアノ基、オキソ基、オキサ基、チオ基、スルホニル基、エステル基（ｅｓｔｅｒ）、アミド基（ａｍｉｄｅ）、ホスフォニル基、ホスフィニル基、チオエーテル基、オキシム基、及び該化合物の薬理学的活性を阻害しない官能基からなる群から選択される基により非置換又は置換され得る。好ましい置換基として、ハロゲン基（フッ素、塩素、臭素及びヨウ素）、オキソ基、オキサ基、アミノ基、アルキルアミノ基及びジアルキルアミノ基が挙げられる。
【００３０】
アリール基は、限定されることなく、フェニル基、ビフェニル基、ナフチル基、及びヘテロ原子又は上記の官能基と任意に置換される基を含む。ヘテロ環の基として、１又は２以上のヘテロ原子（例えば、Ｎ原子、Ｏ原子又はＳ原子）を含む芳香族炭化水素又は非芳香族炭化水素が挙げられる。好ましい芳香族複素環は、五員環又は六員環であり、先に述べたように、それぞれ追加のヘテロ原子又は環に結合した官能基を含み得る。五員環の一例として、限定されることなく、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、オキサゾリジン、チアゾリジン、１，３−ジオキソラン（１，３−ｄｉｏｉａｎｅ）、１，３−オキサチオラン、１，３−ジチオラン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピロール、フラン、チオフェン、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、ピラゾール、１，３，４−オキサジアゾール、１，２，４−オキサジアゾール、１，３，４−チアジアゾール、１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−チアゾール、又は１，２，３−チアゾールなどが挙げられる。六員環の一例として、限定されることなく、２Ｈ−ピラン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、１，４−ジオキサン、モルホリン、ピペラジン、１，４−ジチアン、チオモルホリン、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、１，２，３−トリアジン、１，２，４−トリアジン、１，３，５−トリアジン、１，２，３，４−テトラジン、又はペンタジンなどが挙げられる。
【００３１】
Ｒ１及びＲ２が特定の基（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールなど）の“組み合わせ”である場合、該基の２又は３以上を含む置換基は、例えば、アルキル−アリール、アリール−アルキルなどを明示的に含むことを意味する。
【００３２】
化学式Ｉの五員環は、少なくとも１の立体中心を有し、Ｘ２に隣接した炭素原子上のアスタリスクにより表示される。該五員環は、Ｒ２が水素でない場合、付加的な立体中心を有することもあり、この場合もアスタリスクにより表示される。それぞれの立体中心は、独立してＲ配置又はＳ配置となる。Ｒ２が水素でない場合、化学式Ｉの該化合物は、（Ｒ，Ｒ）、（Ｓ，Ｓ）、（Ｒ，Ｓ）又は（Ｓ，Ｒ）のジアステレオマーとして存在する。この場合、これらの立体異性体の混合物と同様、それぞれ本発明の他の実施形態とされる。Ｒ２が水素である場合、化学式Ｉの該化合物は、Ｒ又はＳとなる。この場合、Ｒ及びＳのラセミ混合物と同様、それぞれ本発明の他の実施形態とされる。
【００３３】
ひとつの実施形態おいて、Ｘ２及びＸ３がＮＲＮであり、Ｘ４がＯ原子である場合、化学式Ｉ−ａとして表される。
【化６】
0006038200.tif 000007
【００３４】
上記化学式Ｉ−ａ中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、ＲＮ、Ｘ０及びＸ１は、上記のとおりである。本実施形態において、ＲＮは、好ましくは水素原子又は低級アルキルである。特に好ましい実施形態において、ＲＮは、水素原子であり、Ｒ２は、低級アルキル、好ましくはメチルである。特に好ましい実施形態において、Ｘ０及びＸ１は、それぞれ酸素原子である。他の実施形態において、Ｘ０は、Ｏ原子、Ｓ原子又はＮＲＮであり、好ましくはＯ原子であり、Ｘ１はＮＲＮの基である。
【００３５】
好ましい実施形態において、Ｘ０及びＸ１は、それぞれＯ原子であり、該化合物は、化学式Ｉ−ｂの構造を有する。
【化７】
0006038200.tif 000008
【００３６】
上記化学式Ｉ−ｂ中、ｎ、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、上記のとおりである。本実施形態において、該化合物は、カルボン酸（Ｒ１は水素原子である）又はエステルである。Ｒ１は、好ましくは水素原子であるが、本発明の実施形態において、エステルが有利となることがある。例えば、該化合物の親油性をより高めるために、より分子量の大きいエステル（例えば、Ｒ１は炭素数６〜１８のアルキル）で修飾するべく、Ｒ１が選択され得る。Ｒ１が水素原子である場合、この化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解してカルボン酸を提供する、適当なカルボン酸保護基を選択することにより、プロドラッグとしてデリバーされ得る、と理解される。
【００３７】
化学式Ｉ−ｂによるある実施形態において、Ｘ４は、Ｏ原子又はＳ原子であり、好ましくはＯ原子である。Ｘ２及び／又はＸ３は、ＮＲＮであり、最も典型的には、ＮＨである。ひとつの実施形態において、Ｘ４は、Ｏ原子であり、Ｘ２及びＸ３は、それぞれＮＨである。ある具体的な実施形態において、Ｘ２及びＸ３はＮＨであり、Ｘ４はＯ原子である。
【００３８】
化学式Ｉ、化学式Ｉ−ａ及び化学式Ｉ−ｂによる特定の実施形態において、“ｎ”は、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。化学式Ｉ、化学式Ｉ−ａ及び化学式Ｉ−ｂのそれぞれにおいて、“ｎ”は、特に好ましくは５である。
【００３９】
化学式Ｉ、Ｉ−ａ及びＩ−ｂのそれぞれにおいて、Ｒ２は、最も典型的には直鎖又は分岐鎖のアルキルであり、特には炭素数１〜１８のアルキルであり、１又は２以上のヘテロ原子が付加される場合もある。具体的な実施形態において、Ｒ２は、炭素数１〜１６、炭素数１〜１４、炭素数１〜１２、炭素数１〜１０、炭素数１〜８、炭素数１〜６、炭素数１〜４又は炭素数１〜２である。典型的には、Ｒ２は、炭素数１、炭素数２、炭素数３、炭素数４又は炭素数５のアルキルであり、それぞれ直鎖又は分岐鎖である。特定の具体的な実施形態において、Ｒ２は、メチル又はエチルである。
【００４０】
Ｒ１及びＲ２は、典型的には（独立して）それぞれ水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖のアルキルであり、特には炭素数１〜１８のアルキルである。具体的な実施形態において、Ｒ１は、炭素数１〜１６、炭素数１〜１５、炭素数１〜１４、炭素数１〜１３、炭素数１〜１２、炭素数１〜１１、炭素数１〜１０、炭素数１〜９、炭素数１〜８、炭素数１〜７、炭素数１〜６、炭素数１〜５、又は炭素数１、炭素数２、炭素数３、炭素数４又は炭素数５のアルキルといったこれらより少ない炭素数であり、それぞれ直鎖又は分岐鎖である。特定の具体的な実施形態において、Ｒ１及び／又はＲ２は、メチル又はエチルである。他の具体的な実施形態において、Ｒ１及び／又はＲ２は、水素原子である。
【００４１】
Ｒ１及びＲ２は、−（ＣＨ２）ａ−Ｒ＊で表される直鎖のアルキル（“ａ”は１から６までの整数であり、例えば、−ＣＨ２−Ｒ＊、−ＣＨ２ＣＨ２−Ｒ＊、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｒ＊、又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｒ＊を含む）；−Ｏ（ＣＨ２）ａ−Ｒ＊で表される直鎖のアルコキシ（“ａ”は１から６までの整数であり、例えば、−ＯＣＨ２−Ｒ＊、−ＯＣＨ２ＣＨ２−Ｒ＊又はＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｒ＊を含む）；−Ｏ（ＣＨ２）ａＯ−Ｒ＊で表される直鎖のアルコキシ（“ａ”は上記と同様である）；−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａ−Ｒ＊又は（ＣＨ２）ｂＯ（ＣＨ２）ｃ−Ｒ＊、−（ＣＨ２）ｂＳ（ＣＨ２）ｃ−Ｒ＊若しくは（ＣＨ２）ｂＮＲＮ（ＣＨ２）ｃ−Ｒ＊で表される（部分）構造（“ｂ”及び“ｃ”は独立して０から６までの整数であり、ＲＮは上記同様である）を含み得る。それぞれの場合、Ｒ＊は、低級アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、水素原子、ヒドロキシル、チオール、−（ＣＨＯ）、カルボキシル、アミノ、アルキルアミノ、又はジアルキルアミノである。
【００４２】
Ｒ１及びＲ２は、独立して炭素環又はヘテロ環より選択され得る。該炭素環は、独立して飽和環、不飽和環、又は芳香環とされ得る。該炭素環は、典型的には炭素数３〜８であり、より典型的には炭素数３〜７であり、最も典型的には炭素数５〜６である（例えば、シクロペンチル又はシクロヘキシル）。それらは、それぞれ随意に置換される。該ヘテロ環も、独立して飽和環、不飽和環、又は芳香環とされ得る。該ヘテロ環は、典型的には三員環から八員環であり、より典型的には三員環から七員環であり、好ましくは五員環又は六員環である。該ヘテロ環は、Ｎ原子、Ｓ原子又はＯ原子から選択される、１又は２以上のヘテロ原子を環内に有し得る。
【００４３】
特に好ましい化合物は、化学式Ｉｃの構造を有する。
【化８】
0006038200.tif 000009
【００４４】
上記化学式Ｉｃ中、ｎは４から６（好ましくは５）である。Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、又はフェニル（好ましくはメチル）である。Ｒ１は、水素原子、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、フェニル又はベンジル（好ましくは水素原子）である。
【００４５】
ある実施形態において、この化合物は、下記の構造を有するデスチオビオチンである。
【化９】
0006038200.tif 000010
【００４６】
該化合物は、（Ｒ，Ｒ）、（Ｒ，Ｓ）、（Ｓ，Ｒ）、若しくは（Ｓ，Ｓ）の立体異性体として、又は、これらの立体異性体の２又は３以上の混合物として存在する。化学式ＩＩは、Ｌ−デスチオビオチン、Ｄ−デスチオビオチン、及びＤＬ−デスチオビオチンの化合物を含む。好ましくは、下記に示すように、メチル基が結合する立体中心はＳ配置であり、他の立体中心はＲ配置である。
【化１０】
0006038200.tif 000011
【００４７】
化学式ＩＩの該化合物は、Ｄ−デスチオビオチン（ＣＡＳ登録番号５３３−４８−２）であり、（＋）−デスチオビオチン又はｄ−デスチオビオチンとして知られている。
【００４８】
本明細書に記載される該化合物は、典型的には局所適用可能な塩又は錯体（例えば、非毒性及び／又は非刺激性）であってもよく、これらは該化合物の生物学的活性を保持している。該塩は、無機酸若しくは有機酸付加塩、又は塩基付加塩であってもよい。適した酸性塩としては、限定されることなく、アセテート、アジペート、アルギネート、シトレート、アスパルテート、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ビスルフェート、ブチレート、カンホレート、カンホスルホネート、ジグルコネート、シクロペンタンプロピオネート、ドデシルスルフェート、エタンスルフェート、グルコヘプトネート、グリセロホスフェート、ヘミスルフェート、ヘプトネート、ヘキサノエート、フマレート、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ヒドロアイオダイド、２−ヒドロキシーエタンスルホフェート、ラクテート、マレエート、メタンスルホネート、ニコチネート、２−ナフタレンスルホネート、オキサレート、パモエート、ペクチネート、ペルスルフェート、３−フェニルプロピオネート、ピクレート、ピバレート、プロピオネート、スクシネート、タータレート、チオシアネート、トシレート、及びウンデカノエートが挙げられる。特に好ましくは、塩酸塩である。塩基付加塩は、亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、マンガン、リチウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムなどといったメタルカチオンにより形成されるもの、又は、アンモニア、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、Ｄ−グルコサミン、テトラエチルアンモニウム、若しくはエチレンジアミンなどのカチオンより形成されるものを含む。窒素含有基は、塩化メチル、塩化エチル、塩化プロピル、塩化ブチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化プロピル、臭化ブチル、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピル、及びヨウ化ブチルといったハロゲン化低級アルキル；硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、及び硫酸ジアミルといったジアルキル硫酸塩；塩化デシル、塩化ラウリル、塩化ミリスチル、塩化ステアリル、臭化デシル、臭化ラウリル、臭化ミリスチル、臭化ステアリル、ヨウ化デシル、ヨウ化ラウリル、ヨウ化ミリスチル、及びヨウ化ステアリルといったハロゲン化長鎖アルキル；臭化ベンジル、及び臭化フェネチルといったハロゲン化アラルキルなどにより四級化され得る。
【００４９】
デスチオビオチン及びその類縁体（例えば、化学式Ｉの化合物）の適したプロドラッグは、化学式ＩＩＩａ又はＩＩＩｂの構造を有する。
【化１１】
0006038200.tif 000012
【００５０】
化学式ＩＩＩａの構造において、Ｘ３はＮ原子であり、Ｘ４はＯＲ１又はＮＲＮＲ１である。ＲＮ、Ｒ１、Ｒ２及びＸ２は、上記のとおりである。化学式ＩＩＩｂの構造において、Ｘ２はＮ原子であり、Ｘ４はＯＲ１又はＮＲＮＲ１である。ＲＮ、Ｒ１、Ｒ２及びＸ３は上記のとおりである。該プロドラッグはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、加水分解されて、化学式Ｉの該化合物になる。
【００５１】
本発明の局所用組成物は、局所適用が可能な様々な形態をとることができ、約０．０００１重量％〜約１０重量％の該化合物を含む。具体的な実施形態において、該組成物は、約０．００１重量％〜約５重量％、又は、約０．０１重量％〜約２．５重量％の該組成物を含む。特定の実施形態において、該組成物は、約０．００１重量％〜約１．５重量％、又は約０．０１重量％〜約０．５重量％の該組成物を含む。
【００５２】
該組成物は、典型的には、エマルション（油中水滴型又は水中油滴型を含む）、ローション、クリーム、乳液（ｓｅｒｕｍ）、スプレー、エアロゾル、ケーキ（ｃａｋｅ）、軟膏、エッセンス、ゲル、ペースト、パッチ、ペンシル、ウェットティッシュ（ｔｏｗｅｌｅｔｔｅ）、マスク、スティック等、局所投与に適する形態をとり得る。
【００５３】
該組成物は、化粧用として使用可能な媒材を含み得る。該媒材は、皮膚への適用に適したいかなる形態をもとり得る。水；植物油；鉱物油；オクタルパルミテート、イソプロピルミリステート若しくはイソプロピルパルミテートといったエステル；ジカプリルエーテル若しくはジメチルイソソルバイドといったエーテル；エタノール若しくはイソプロパノールといったアルコール；セチルアルコール、セチアリルアルコール、ステアリルアルコール、若しくはビフェニルアルコールといった脂肪族アルコール；イソオクタン、イソドデカン若しくはイソヘキサデカンといったイソパラフィン；シクロメチコン、ジメチコン、ジメチコンのクロスポリマー、ポリシロキサン若しくはそれらの誘導体、好ましくは有機修飾された誘導体といったシリコーン油；鉱物油、ペトラタム、イソエイコサン又はポリイソブテンといった炭化水素油；プロピレングリコール、グリセリン、ブチレングリコール、ペンチレングリコール若しくはヘキシレングリコールといったポリオール；ビーズワックス若しくは植物性ワックスといったワックス；又は前述の組み合わせ若しくは混合物を含み得る。実施形態のひとつにおいて、媒材はリポソームを含む。
【００５４】
該組成物は、限定されることなく、増量剤、乳化剤、抗酸化剤、界面活性剤、皮膜形成剤、キレート剤、ゲル化剤、増粘剤、皮膚軟化剤、保湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔｓ）、モイスチャー剤、ビタミン剤、ミネラル、粘度及び／若しくはレオロジー改変剤、日焼け防止剤、角質溶解剤、脱色剤、レチノイド、ホルモン性化合物、α−ヒドロキシ酸、α−ケト酸、抗抗酸菌剤、抗真菌剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、鎮痛剤、脂質分子、抗アレルギー剤、Ｈ１ブロッカー若しくはＨ２ブロッカーである抗ヒスタミン剤、抗炎症剤、抗刺激剤、抗癌剤、免疫賦活剤、免疫抑制剤、抗ニキビ剤、麻酔剤、防腐剤、防虫剤、皮膚冷化剤、皮膚保護剤、皮膚浸透促進剤、剥脱剤、潤滑剤、香料、着色剤、脱色剤、色素沈着抑制剤、保存料、安定剤、医薬品、光安定化剤、日焼け止め剤又はこれらの組み合わせを含む、他の化粧料又は添加剤を任意に含んでいてもよい。前述に加えて、本発明の該化粧品組成物は、皮膚疾患の治療用化合物を他に含んでいてもよい。
【００５５】
該組成物は、老化防止の効果を有する活性成分を付加的に含んでいてもよい。付加的に１又は２以上のＬＯＸＬ１亢進剤を含むのが望ましい。これらを組み合わせることで相乗的な改善効果が得られる。他の適する老化防止剤としては、限定することなく、ツルハナモツヤクノキといった植物の抽出物、チオジプロピオン酸（ＴＤＰＡ）、レチノイド、アルファハイドロキシ酸、グリコール酸などが挙げられる。
【００５６】
皮膚弾力性低下の症状を治療する組成物が提供される。該組成物は、本明細書に記載の化合物又はそれらの塩の有効量を、必要に応じて皮膚に局所投与することを含む。典型的には、本発明の該化合物は、化粧用として使用可能な媒材を含む組成物の形態で提供される。該媒材は、ヒトの皮膚への適用に適合可能である（例えば、安全である）、とされる。
【００５７】
該組成物は、理想的には、皮膚のＬＯＸＬ１活性を亢進する。好ましくは、本発明の該組成物は、付加的に、フィブリリン−１活性促進作用を有する。ある実施形態において、毛包（例えば、頭皮の毛包）には投与されない。ある実施形態において、ホストの皮脂生成が増加することはない。ある実施形態において、皮膚の皮脂生成が増加することはない。本発明の該化合物は、皮膚ダメージを改善又は処置し得る。該皮膚ダメージには、小じわ及び／若しくはしわ、皮膚の脆弱化若しくは薄皮、皮膚のたるみ、光沢を失った皮膚、疲労した皮膚、乾燥肌、皮膚過敏症、目の下のくま、腫れぼったい皮膚、不規則な色素沈着又は肝斑といった、皮膚弾力性低下のいかなるサインをも含む。
【００５８】
本発明の該組成物を皮膚に局所適用することにより、皮膚の審美性を向上及び改善し得る。該組成物は、特に、紫外線による老化、及び内因性の老化のサインを処置するのに有用である。該サインは、小じわ及びしわ、皮膚のトーン及び色の喪失、皮膚のたるみ及び萎縮、開いた毛穴、皮膚の菲薄化、又は弾力性及び張りの低下を含む。
【００５９】
本発明はまた、組成物を局所適用することによる、皮膚の老化を処置する方法を提供する。本発明の該組成物は、皮膚弾力性低下による皮膚科学的なサインを低減し、改善するのに十分な時間、影響を受けた領域に作用する。該組成物を、所望の治療効果が得られるのに必要な期間、２４時間に１〜３回、皮膚に局所適用してもよい。処置方法は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間又は少なくとも１２週間にわたる連日投与を含み得る。該方法は、年齢による皮膚の老化及び内因性の皮膚の老化の両方に関連する、皮膚の変化を治療することも含む。該方法は、紫外線によりダメージを受けた皮膚の処置に、特に有用とされる。
【００６０】
ひとつの実施形態において、皮膚（例えば、顔、首又は手）のしわを処置する方法は、デスチオビオチン又はそれの塩及び／若しくはエステルを含有する化粧用組成物の有効量を、しわの程度又は深さを改善するのに十分な時間、しわに直接適用することを含む。
【００６１】
他の実施形態において、皮膚（例えば、顔又は首）のたるみを処置する方法は、デスチオビオチン又はそれの塩及び／若しくはエステルを含有する化粧品組成物の有効量を、たるみの程度を改善するのに十分な時間、皮膚のたるみに直接適用することを含む。
【００６２】
他の実施形態において、皮膚の菲薄化を治療する方法は、デスチオビオチン又はそれの塩及び／若しくはエステルを含有する化粧品組成物の有効量を、菲薄化の程度を改善するのに十分な時間、菲薄化した皮膚に直接投与することを含む。
【００６３】
他の実施形態において、開いた毛穴を治療する方法は、デスチオビオチン又はそれの塩及び／若しくはエステルを含有する化粧品組成物の有効量を、開いた毛穴の程度を改善するのに十分な時間、開いた毛穴に直接投与することを含む。
【実施例】
【００６４】
（実施例１）
【００６５】
１．１  ＤＬ−デスチオビオチンによるＬＯＸＬ１活性促進
【００６６】
酵素であるリシルオキシダーゼ様１（“ＬＯＸＬ１”）は、エラスチンポリマーの再生のキー・レギュレーターとして発見された。エラスチンは、細胞外マトリックスの成分であり、皮膚を含む結合組織（伸縮性を有する）を供給する。エラスチンは、思春期を過ぎると生成されなくなると言われ、それ以降は、抗エラスターゼ活性とエラスターゼ活性のバランスにより、エラスチン線維が維持される。年齢が進むと、両活性のバランスが崩れ、エラスチンを含む組織において、弾力性が失われる。皮膚に関しては、この弾力性が失われると、通常、しわとして現れる。
【００６７】
この生成／分解のメカニズム（例えば、抗エラスターゼ活性／エラスターゼ活性）は正確には知られていなかったが、ＬＯＸＬ１は“抗エラスターゼ”因子として同定された。ＬＯＸＬ１は、トロポエラスチンモノマーを重合させることにより、エラスチン線維の再生を仲介する（Ｋａｇａｎｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８８：６６０−６７２；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３６：１７８−１８２参照，それぞれ、参照によりその全体が本明細書に含まれる）。それゆえに、ＬＯＸＬ１の転写及び／若しくは翻訳、又はＬＯＸＬ１の活性を促進する剤は、“抗エラスターゼ”活性を増加させる。その結果、エラスチン線維の再生を助長させ、エラスチンを含む組織において、弾力性を改善する。ルシフェラーゼレポーターシステムを用いて、ＤＬ−デスチオビオチンによるＬＯＸＬ１発現誘導能を分析した。ＬＯＸＬ１制御因子を含む培養系にＤＬ−デスチオビオチンを添加したところ、コントロールよりも顕著なレポーター遺伝子の発現誘導が認められた。
【００６８】
１．１．１  材料と方法
【００６９】
ベクター構築、トランスフェクション及び発現：使用説明書に従って、当業者に周知の通常の方法により、ＬＯＸＬ１遺伝子のプロモーター領域を単離し、ｐＧＬ３ルシフェラーゼレポーター（Ｐｒｏｍｅｇａ）にクローニングした。使用説明書に従って、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ（商標）ＬＴＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ＬＯＸＬ１／ｐＧＬ３ベクター、及び調節エレメントを含有しないコントロールベクターであるｐＲＬ−ＮＵＬＬ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、ヒト線維肉腫細胞株ＨＴＩ０８０に共トランスフェクトした。
【００７０】
トランスフェクトした細胞は、２４時間にわたって回復させた。その後、培地をさまざまな濃度のＤＬ−デスチオビオチンを含む新鮮培地と交換し、さらに２４時間、トランスフェクトした細胞を培養した。
【００７１】
その後、培養物をＰＢＳで洗浄し、細胞溶解液を培養エリア２５ｃｍ２につき１００μＬ加え、３０分間室温で穏やかに振盪した。細胞溶解物を含む培養フラスコを、ただちに−８０℃に置いた。
【００７２】
レポーター活性測定：ホタルルシフェラーゼのレポーター遺伝子活性は、使用説明書に従って測定した（Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（Ｒ）Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐｒｏｍｅｇａ）。簡潔に、レポーター遺伝子活性は、ウミシイタケルシフェラーゼ由来の第二のルシフェラーゼ遺伝子をコードするコントロールベクターのレポーター遺伝子活性との相対評価により測定した。試験培地及びコントロール培地から得られた遺伝子の活性は、制御因子の活性の変化率を測定することで相対評価した。
【００７３】
１．１．２  結果
【００７４】
ｐＧＬベクターは、ルシフェラーゼ遺伝子を調節するのに必要なプロモーター領域を有していないため、この遺伝子の発現は、クローニングされたエレメント（この場合、ＬＯＸＬ１遺伝子の調節エレメント）によりコントロールされる。３回のテストの結果、０．００１％のＤＬ−デスチオビオチンの添加により、レポーター遺伝子の発現が９０％増加したことが示された（ｐ＜０．０５、対媒材コントロール）。このことから、ＤＬ−デスチオビオチンは、ＬＯＸＬ１発現のポジティブなレギュレーターであり、エラスチン再生に効果を奏することが示唆された。
【００７５】
（実施例２）
１．２  ＤＬ−デスチオビオチンによるフィブリリン−１促進
【００７６】
フィブリリン−１は、３４０ｋＤａのタンパク質であり、皮膚においてミクロフィブリルの構成成分である。フィブリリンミクロフィブリルは、広くはミクロフィブリルに分類され、結合組織に長いレンジの弾力性を与える。それらは、エラスチン線維形成の間、トロポエラスチンの沈着を起こし、成熟したエラスチン線維の最外層を形成する。フィブリリン−１の変異は、マルファン症候群を引き起こす。マルファン症候群は、遺伝性の疾患であり、エラスチン線維に欠陥を生じるため、大動脈、眼球その他に深刻な異常をもたらす（Ｋｉｅｌｔｙ  ｅｔ  ａｌ，Ａｄｖ．ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ７０，ｐ．４０５，２００４）。フィブリリン−１発現亢進組成物は、さらには“抗エラスターゼ”活性を亢進させる。その結果、エラスチン線維の再生を助長させ、エラスチンを含む組織において、弾力性を改善させる。定量ＲＴ−ＰＣＲにより、ＤＬ−デスチオビオチンによるフィブリリン−１発現誘導能をアッセイした。ヒト線維芽細胞の培地にＤＬ−デスチオビオチンを添加することにより、コントロールよりも顕著なフィブリリン−１発現誘導が認められた。
【００７７】
１．２．１  材料と方法
【００７８】
細胞の取り扱い：正常ヒト皮膚線維芽細胞を、１０ｍｌの標準培地に、１００ｍｍの培養プレートに対して１０６細胞播種し、３７℃、１０％ＣＯ２下でインキュベートした。
【００７９】
約２４時間後、培養細胞に、新鮮培地で希釈された試験対象（活性物）とコントロールとしての溶媒とをそれぞれ加え、３７℃で４８時間インキュベートした。４８時間のインキュベート後、細胞培地を除去し、１ｍＬのＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬を加えて、それぞれのプレートの細胞を溶解した。それぞれのプレートの細胞は廃棄し、ピペットで数回通して、１．５ｍＬの遠心用チューブに集めた。核タンパク質複合体を完全に分離するために、細胞溶解物を１５〜３０℃で５分間インキュベートし、その後、ＲＮＡ単離のために−８０℃で保存した。
【００８０】
ＲＮＡ単離とＲＴ−ＰＣＲ：標準的な手段を用いて、ＲＮＡを単離した。ＲＮａｓｅを含まない水に溶解し、−８０℃で保存した。全ＲＮＡの濃度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを用いて測定した。ＲＮＡ  ６０００  Ｎａｎｏ−ｃｈｉｐにより、ＲＮＡサンプルがインタクトであることが示された。
【００８１】
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＣＡにより提供された使用説明書に従って、逆転写酵素（ＲＴ）反応を行った。ＲＴステップの後、ＱＰＣＲ分析のため、反応物を−２０℃で保存した。ＱＰＣＲは、全容量２０μＬで行った。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＡＢ）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘを用いた。反応混合液は、１０μＬのＴａｑｍａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  ｍｉｘ、１μＬのプライマーとプローブとの混合液、２μＬのＲＴ生成物、及び７μＬの脱イオン水を含むように調製した。フィブリリン−１とＧＡＰＤＨのプライマーとプローブは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより購入した。フィブリリン−１のＩＤは、Ｈｓ００１７１１９１＿ｍｌであり、ヒトＧＡＰＤＨのＩＤは、４３５２９３４Ｅである。ＱＰＣＲは、５０℃で２分間、９５℃で１０分間を１サイクル、その後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間を４０サイクルの温度プロトコルで行った。
【００８２】
１．２．２  結果
【００８３】
結果：ＱＰＣＲの結果、０．００１％のＤＬ−デスチオビオチンの添加により、溶媒コントロールに比して、フィブリリン−１遺伝子の発現が４７．５５％増加したことが示された（ｐ＜０．０５）。
【００８４】
本明細書において引用された、特許出願及び刊行物を含む全ての文献は、それぞれ個々の文献の記載全体が本明細書に記載されているものとみなされる。
以下に本発明とその実施態様をまとめて記載する。
１．（ｉ）有効量の、式Ｉ
【化１２】
0006038200.tif 000013
（式Ｉ中、
ｎは１から２２までの整数であり；
Ｘ０、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、それぞれ独立してＯ原子、Ｓ原子及びＮＲＮからなる群から選択され；ここでＲＮは、水素原子、低級アルキル、ＣＯＲ３、ＣＯ２Ｒ３、ＳＯ２Ｒ３、ＰＯ３（Ｒ３）２又はＣＨ（ＯＲ３）２を表し；Ｒ３は、水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロアリール及びそれらの組み合わせからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素原子、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、へテロアリール、アルキルアリール、アルコキシアルキル、カルボキシアミドアルキル及びそれらの組み合わせからなる群から選択され；
Ｒ２は、水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、チオアルコキシ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される；）
で示される化合物、又はその局所適用可能な塩もしくはプロドラッグ；および
（ｉｉ）化粧品として許容できる媒材、
からなる、ことを特徴とする組成物を、皮膚へ局所適用することを含む、エラスチン減少に由来する皮膚の老化のサインを処置するための方法。
２．ｎが５から１２である、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
３．ｎが５である、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
４．Ｒ２が炭素数１〜５のアルキルである、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
５．Ｒ２がメチルである、ことを特徴とする上記４に記載の方法。
６．Ｘ４及びＸ０がＯ原子である、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
７．Ｘ２及びＸ３がＮＨである、ことを特徴とする上記６に記載の方法。
８．Ｘ１がＯ原子である、ことを特徴とする上記７に記載の方法。
９．Ｒ１が水素原子である、ことを特徴とする上記８に記載の方法。
１０．Ｒ１が炭素数１〜６のアルキルである、ことを特徴とする上記８に記載の方法。
１１．前記化合物がデスチオビオチンである、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１２．前記化合物がＤ−デスチオビオチンである、ことを特徴とする上記１１に記載の方法。
１３．前記皮膚の老化のサインが、しわ及び／又は小じわを含む、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１４．前記皮膚の老化のサインが、皮膚のたるみ又は萎縮を含む、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１５．前記皮膚の老化のサインが、薄皮を含む、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１６．前記皮膚の老化のサインが、開いた毛穴を含む、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１７．前記皮膚の老化のサインが、皮膚のトーン又は色の喪失を含む、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１８．前記組成物が、約０．００１重量％から約５重量％の化粧品組成物を含む、ことを特徴とする上記１に記載の方法。
１９．化粧品組成物を、皮膚へ局所適用することを含む、エラスチン減少に由来する皮膚の老化のサインを処置するための方法であって、
該組成物が、
有効量の、式ＩＩ
【化１３】
0006038200.tif 000014
で示される化合物又はその塩もしくはエステルを、化粧品として許容できる媒材中に含み、
前記皮膚の老化のサインが、小じわ又はしわ、皮膚のたるみ又は萎縮、薄皮、開いた毛穴、皮膚の弾力性又は張りの低下、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、ことを特徴とする方法。
２０．前記化合物がＤ−デスチオビオチン又はその塩もしくはエステルである、ことを特徴とする上記１９に記載の方法。
２１．前記皮膚の老化のサインがしわ又は小じわである、ことを特徴とする上記２０に記載の方法。
２２．皮膚へ局所適用される前記化合物が、式Ｉの化合物のプロドラッグである、ことを特徴とする上記１に記載の方法。