(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容されるミカファンギン塩を製造する方法であって、その方法は、
ａ）ミカファンギン出発原料を疎水性の吸着樹脂支持体にアプライするステップと、
ｂ）結合したミカファンギンを、溶解した薬学的に許容される塩の水溶液に接触させるステップと、
ｃ）水混和性の有機溶剤を含んだ溶液を用いて、溶解したミカファンギンの薬学的に許容される塩を溶出するステップと
を含み、ただし、
ｉ）ステップａ）における前記出発原料
ｉｉ）ステップｂ）における前記水溶液
のうち少なくとも１つが水混和性の有機溶剤を含有する、方法。
【請求項２】
不純物を除去するために、ステップｂ）の前記結合したミカファンギンを、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液に１回以上さらに接触させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップａ）における前記出発原料は、０〜３０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ステップａ）における前記出発原料は、５〜１５％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ステップａ）における前記出発原料は、１０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ステップｂ）における前記水溶液は、０〜４０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ステップｂ）における前記水溶液は、２０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記水混和性の有機溶剤は、分枝状または非分枝状のＣ１〜Ｃ３アルコール類、Ｃ３〜Ｃ６ケトン類、および極性の非プロトン有機溶剤からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記水混和性の有機溶剤は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、およびアセトニトリルからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップｃ）における前記水溶液は、水混和性の有機溶剤として、少なくとも３０％ｖ／ｖのアセトニトリルを含有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記水混和性の有機溶剤はメタノールである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ステップｃ）における前記水溶液は、水混和性の有機溶剤として、少なくとも９０％ｖ／ｖのメタノール、少なくとも９５％ｖ／ｖのメタノールのような少なくとも７０％ｖ／ｖのメタノールを含有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ステップａ）における前記出発原料、ステップｂ）における前記水溶液、およびステップｃ）における洗浄溶液は、水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ミカファンギンの薬学的に許容される塩はナトリウム塩であり、前記樹脂はＨＰ２０ＳＳであり、前記ミカファンギン出発原料はミカファンギンＤＩＰＥＡおよび１０％ｖ／ｖのメタノールを含有し、ステップｂ）における前記溶液は２０％ｖ／ｖのメタノールおよび８０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ、０．１Ｍ  ＮａＣＨ３ＣＯＯを含有し、ステップｃ）における前記溶液は４０％ｖ／ｖのメタノールを含有し、ステップｄ）における前記溶液は９０％ｖ／ｖのメタノールを含有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
薬学的に許容されるミカファンギン塩を製造する方法であって、その方法は、
ａ）ミカファンギン出発原料を疎水性の吸着樹脂支持体にアプライするステップと、
ｂ）結合したミカファンギンを、溶解した薬学的に許容される塩の水溶液に接触させるステップと、
ｃ）不純物を除去するために、ｂ）で得られる結合したミカファンギンの塩を、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液に１回以上、任意に接触させるステップと、
ｄ）水混和性の有機溶剤を含んだ溶液を用いて、溶解したミカファンギンの薬学的に許容される塩を溶出するステップと
を含み、ただし、ステップｃ）が実施されないときには、前記ミカファンギン出発原料およびステップｂ）における前記水溶液の少なくとも一方が水混和性の有機溶剤を含有する、方法。
【請求項１６】
前記ミカファンギン出発原料または本方法のステップｂ）における前記水溶液は、２〜３０％ｖ／ｖの水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ミカファンギン出発原料および本方法のステップｂ）における前記水溶液は、２〜３０％ｖ／ｖの水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１または１５に記載の方法。
【請求項１８】
本方法のステップｃ）における前記水溶液は、３０〜５０％ｖ／ｖの水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
本発明の前記ミカファンギン出発原料中に存在するカチオンはＤＩＰＥＡである、請求項１，１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
本方法に従って使用される前記樹脂はＨＰ２０ＳＳである、請求項１，１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ミカファンギン出発原料および本方法のステップｂ）における前記水溶液は水混和性の有機溶剤を含有する、請求項１，１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ミカファンギン出発原料および本方法のステップｂ）における前記水溶液はメタノールを含有する、請求項１，１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ミカファンギン出発原料およびステップｂ）における前記水溶液の少なくとも一方の中に存在する前記水混和性の有機溶剤はメタノールである、請求項１および１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ステップｂ）における前記水溶液はメタノールを含有する、請求項１および１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ミカファンギンの薬学的に許容される塩はナトリウム塩であり、前記樹脂はＨＰ２０ＳＳであり、前記ミカファンギン出発原料はミカファンギンＤＩＰＥＡおよび１０％ｖ／ｖのメタノールを含有し、ステップｂ）における前記溶液は２０％ｖ／ｖのメタノールおよび８０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ、０．１Ｍ  ＮａＣＨ３ＣＯＯを含有し、ステップｃ）における前記溶液は４０％ｖ／ｖのメタノールを含有し、ステップｄ）における前記溶液は９０％ｖ／ｖのメタノールを含有する、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ミカファンギン塩、特にミカファンギンナトリウムの改良された精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ミカファンギンは、マイカミン（Mycamine  登録商標)中の有効医薬成分である。ＦＤＡラベルによれば、ミカファンギンナトリウムの化学構造は式（Ｉ）：
【０００３】
【化１】
0005992507.tif 000002
で表される。
【０００４】
ミカファンギンは、ニューモカンジン（Pneumocandin）Ａ０、１−［（４Ｒ，５Ｒ）−４，５−ジヒドロキシ−Ｎ２−［４−［５−［４−（ペンチルオキシ）フェニル］−３−イソキサゾリル］ベンゾイル］−Ｌ−オルニチン］−４−［（４Ｓ）−４−ヒドロキシ−４−［４−ヒドロキシ−３（スルホオキシ）フェニル］−Ｌ−トレオニン］としても知られる。ミカファンギンナトリウムはさらに、ＦＫ−４６３としても知られる。ケミカル・アブストラクトにより指定された登録番号は、ミカファンギンが２３５１１４−３２−６であり、ミカファンギンナトリウムが２０８５３８−７３−２である。
【０００５】
ミカファンギンは、１，３−β−Ｄ−グルカン合成酵素を阻害して真菌細胞溶解を招くエキノカンジンである。したがって、ミカファンギンは、たとえばアスペルギルス属（Aspergillus）、クリプトコッカス属（Cryptococcus）、カンジダ属（Candida）、ムコール属（Mucor）、アクチノミセス属（Actinomyces）、ヒストプラスマ属（Histoplasma）、皮膚糸状菌（Dermatophyte）、マラセジア属（Malassezia）、およびフサリウム属（Fusarium）の菌株に起因する感染症の治療における抗真菌薬として有用である。ミカファンギンは、カンジダに起因する感染症の治療および予防に使用される承認薬マイカミン（Mycamine  登録商標）およびファンガード（Funguard  登録商標）中の有効成分である。
【０００６】
ミカファンギンを調製および精製するための様々な方法が当業者には知られており、たとえば米国特許第６，１０７，４５８号明細書および米国特許第７，１９９，２４８号明細書を参照されたい。より詳細には、米国特許第７，１９９，２４８号明細書には、濾過および、１３５０−Ｌカラム内で再生γアルミナを使用し、メタノールを用いてミカファンギンＤＩＰＥＡを溶出する、クロマトグラフィー分離によってミカファンギンの未処理のＤＩＰＥＡ塩を精製する方法が開示されている。ミカファンギン含有画分はさらに精製され、特に再生イオン交換樹脂ＵＢＫ５１０Ｌを使用したイオン交換クロマトグラフィーにより、ミカファンギンのナトリウム塩に変換される。ミカファンギンナトリウムは、水メタノールを用いて溶出される。ミカファンギンナトリウムを沈殿させるのにアセトンおよび酢酸エチルが最終的に使用される。
【０００７】
ミカファンギンのジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）塩がミカファンギンのナトリウム塩よりも安定していることは当該技術分野でよく知られている。したがって、上で開示した方法のように、先行技術の方法は、ミカファンギンナトリウムを調製するとき、中間体としてＤＩＰＥＡ塩をしばしば使用する。このことは、たとえば、大東（Ohigasi）らによる総合論文「リポペプチド系抗真菌剤ミカファンギンの工業化（Process Development of Micafungin,a Novel Lipopeptide Antifungal Agent）」、有機合成化学協会誌（Journal of Synthetic Organic Chemistry）、日本、第６４巻、第１２号、２００６年１２月に開示されている。大東らには、ミカファンギンのＤＩＰＥＡ塩中に存在する不純物を、樹脂の使用によって除去する方法が開示されている。アルミナ樹脂カラムの使用により精製されるＤＩＰＥＡ塩は大東らに準じ、次いでミカファンギンのＤＩＰＥＡ塩をミカファンギンのナトリウム塩に転化させるためのイオン交換クロマトグラフィーに供される。
【０００８】
ミカファンギンナトリウムを調製するための上述した先行技術の方法には、連続した２つのクロマトグラフィー工程、すなわち、第一に逆相クロマトグラフィー（ＲＰＣ）樹脂上でのミカファンギンＤＩＰＥＡの精製、および第二にイオン交換樹脂上でのナトリウム塩へのＤＩＰＥＡ塩の変換、すなわち塩交換（salt awap）が含まれることは明らかである。ミカファンギンの所望のナトリウム塩を得るのに後続する２つのクロマトグラフィー工程を使用することは手間のかかることであり、より少ない処理の工程、より少ない化学薬品および装置が関与する改良された方法を提供することは、経済面からも、環境的な観点および省力化の観点からも有益であろう。
【０００９】
したがって、精製されたミカファンギンおよびその誘導体、たとえばミカファンギンのナトリウム塩を調製するためのより効率的な方法が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第６，１０７，４５８号明細書
【特許文献２】米国特許第７，１９９，２４８号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】大東篤ら、「リポペプチド系抗真菌剤ミカファンギンの工業化」、有機合成化学協会誌、日本、第６４巻、第１２号、２００６年１２月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、ミカファンギンナトリウムなどのミカファンギン塩を精製するための改良された方法を提供することである。
上述の通り、先行技術の方法は、連続する２つのクロマトグラフィー工程という不都合を特に伴う。本発明は、この２つの工程（塩交換および精製）を１つの同じ操作で行なうことができるという驚くべき発見に基づく。したがって、本発明の方法は、化学薬品の使用の減少、より短い処理時間、およびより少ないハードウェア要件の使用など環境性と経済性の両方について自明の利点を幾つか有する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一実施形態によれば、薬学的に許容されるミカファンギン塩を製造する方法が提供され、その方法は、
ａ）ミカファンギン出発原料を、疎水性の吸着樹脂支持体にアプライするステップと、
ｂ）結合したミカファンギンを、溶解した薬学的に許容される塩の水溶液に接触させるステップと、
ｃ）溶解したミカファンギンの薬学的に許容される塩を、水混和性の有機溶剤を含んだ溶液を用いて溶出するステップと
を含み、ただし、
ｉ）ステップａ）における出発原料
ｉｉ）ステップｂ）における水溶液
のうち少なくとも１つが水混和性の有機溶剤を含有する。
【００１４】
上記の実施形態の一態様によれば、不純物を除去するために、ステップｂ）の結合したミカファンギンを、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液に１回以上さらに接触させるステップをさらに含む方法が提供される。
【００１５】
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップａ）における出発原料が０〜３０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する方法が提供される。
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップａ）における出発原料が５〜１５％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する方法が提供される。
【００１６】
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップａ）における出発原料が１０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する方法が提供される。
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップｂ）における水溶液が０〜４０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する方法が提供される。
【００１７】
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップｂ）における水溶液が２０％ｖ／ｖの範囲で水混和性の有機溶剤を含有する方法が提供される。
上記の実施形態の別の態様によれば、水混和性の有機溶剤が分枝状または非分枝状のＣ１〜Ｃ３アルコール類、Ｃ３〜Ｃ６ケトン類、および極性の非プロトン有機溶剤からなる群から選択される方法が提供される。
【００１８】
上記の実施形態の別の態様によれば、水混和性の有機溶剤がメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、およびアセトニトリルからなる群から選択される方法が選択される。
【００１９】
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップｃ）における水溶液が水混和性の有機溶剤として少なくとも３０％ｖ／ｖのアセトニトリルを含有する方法が提供される。
上記の実施形態の別の態様によれば、水混和性の有機溶剤がメタノールである方法が提供される。
【００２０】
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップｃ）における水溶液が水混和性の有機溶剤として少なくとも７０％ｖ／ｖのメタノール、たとえば少なくとも９０％ｖ／ｖのメタノール、少なくとも９５％ｖ／ｖのメタノールを含有する方法が提供される。
【００２１】
上記の実施形態の別の態様によれば、ステップａ）における出発原料、ステップｂ）における水溶液、およびステップｃ）における洗浄溶液が水混和性の有機溶剤を含有する方法が提供される。
【００２２】
本発明の別の実施形態によれば、薬学的に許容されるミカファンギン塩を製造する方法が提供され、その方法は、
ａ）ミカファンギン出発原料を、疎水性の吸着樹脂支持体にアプライするステップと、
ｂ）結合したミカファンギンを、溶解した薬学的に許容される塩の水溶液に接触させるステップと、
ｃ）不純物を除去するために、ｂ）で得られる結合したミカファンギン塩を、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液に１回以上、任意に接触させるステップと、
ｄ）溶解したミカファンギンの薬学的に許容される塩を、水混和性の有機溶剤を含んだ溶液を用いて溶出するステップと
を含み、ただし、ステップｃ）が実施されないときには、ミカファンギン出発原料および／またはステップｂ）における水溶液が水混和性の有機溶剤を含有する。
【００２３】
一実施形態によれば、ミカファンギン出発原料または本方法のステップｂ）における水溶液は、２〜３０％ｖ／ｖの水混和性の有機溶剤を含有する。
一実施形態によれば、ミカファンギン出発原料および本方法のステップｂ）における水溶液は、２〜３０％ｖ／ｖの水混和性の有機溶剤を含有する。
【００２４】
一実施形態によれば、本方法のステップｃ）における水溶液は、３０〜５０％ｖ／ｖの水混和性の有機溶剤を含有する。
別の実施形態によれば、本発明のミカファンギン出発原料中に存在するカチオンはＤＩＰＥＡである。
【００２５】
さらに別の実施形態によれば、本方法に従って使用される樹脂はＨＰ２０ＳＳである。
別の実施形態によれば、ミカファンギン出発原料および本方法のステップｂ）における水溶液は水混和性の有機溶剤を含有する。
【００２６】
また別の実施形態によれば、ミカファンギン出発原料および本方法のステップｂ）における水溶液はメタノールを含有する。
本方法のさらに別の実施形態によれば、ミカファンギン出発原料中および／またはステップｂ）における水溶液中に存在する水混和性の有機溶剤はメタノールである。
【００２７】
本方法のさらに別の実施形態によれば、ステップｂ）における水溶液はメタノールを含有する。
本発明の最後の実施形態によれば、ミカファンギンの薬学的に許容される塩がナトリウム塩であり、樹脂がＨＰ２０ＳＳであり、ミカファンギン出発原料がミカファンギンＤＩＰＥＡおよび１０％ｖ／ｖのメタノールを含有し、ステップｂ）における溶液が２０％ｖ／ｖのメタノールおよび８０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ、０．１Ｍ  ＮａＣＨ３ＣＯＯを含有し、ステップｃ）における溶液が４０％ｖ／ｖのメタノールを含有し、ステップｄ）における溶液が９０％ｖ／ｖのメタノールを含有する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】実施例１による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図２】実施例２による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図３】実施例３による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図４】実施例４による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図５】実施例５による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図６】実施例６による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図７】実施例７による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図８】実施例８による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【図９】実施例９による、ＨＰ２０ＳＳからのＤＩＰＥＡおよびミカファンギンナトリウムの溶出プロフィールを示す。付属の表は、溶出した画分中のＤＩＰＥＡレベルを表す（ＣＶ＝カラム容積）。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明によれば、ミカファンギンは、構造
【００３０】
【化２】
0005992507.tif 000003
を含む化合物またはそれの塩である。「それの塩」との語句は、医薬製剤中の有効成分として有用なミカファンギンまたはミカファンギンの薬学的に許容される塩の調製および／または精製のために有用であるミカファンギンの塩類を包含することを意味する。これに関連して、ミカファンギンの塩の非限定的なリストとして、ナトリウム塩、カリウム塩、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）塩などがある。
【００３１】
ミカファンギンは、コレオフォマ・エンペトリ（Coleophoma empetri）Ｆ−１１８９９（ＦＥＲＭ  ＢＰ−２６３５として寄託）から得られる発酵産物であるＦＲ９０１３７９の半合成誘導体である。
【００３２】
ミカファンギンは、発酵産物ＦＲ９０１３７９を脱アシル化することと、ミカファンギンペプチドコアとここに命名する化合物を取得することと、その後、４−［５−（４−ペンチルオキシフェニル）イソオキサゾール−３−イル］安息香酸であるミカファンギン側鎖を前記ペプチドコアにカップリングすることとによって調製することができる。ケミカル・アブストラクトにより指定された前記側鎖の登録番号は、１７９１６２−５５−１である。これはＦＲ１９５７５２という名でも知られる。
【００３３】
ＦＲ９０１３７９の脱アシル化は、アクチノプラーネス（Actinoplanaceae）属の特定の微生物、たとえば、アクチノプラーネス・ウタヘンシス（Actinoplanes utahensis）１Ｆ０−１３２４４、アクチノプラーネス・ウタヘンシスＡＴＣＣ１２３０１、アクチノプラーネス・ミソウリエンセス（Actinoplanes missourienses）ＮＲＲＬ１２０５３により産生される酵素によって行なうことができる。脱アシル化したペプチドコアをここでは式ＩＩとして表す。脱アシル化ペプチドコアのナトリウム塩は、ＦＲ１３３３０３と命名された（欧州特許第４６２５３１号明細書参照）。
【００３４】
式ＩＩで表されるペプチドコアの再アシル化は、米国特許第７，１９９，２４８号明細書に開示されているように行なうことができる。
ミカファンギンペプチドコアは、式ＩＩで表される。
【００３５】
【化３】
0005992507.tif 000004
本発明によれば、精製されたミカファンギンの塩を調製する方法が提供される。本発明の一実施形態によれば、本発明に従って得られるミカファンギンの塩は、ミカファンギンのナトリウム塩である。当然のことながら、ミカファンギンの他の薬学的に許容される塩、たとえばミカファンギンのカリウム塩も本方法により得ることができる。
【００３６】
本発明によれば、ミカファンギンの薬学的に許容される塩を精製および調製する方法が提供され、ここで、ミカファンギン出発原料を固体支持体に吸着させ、吸着したミカファンギンを、溶解した塩を含んだ水溶液と接触させて洗浄し、最後に、そのようにして得られたミカファンギンの薬学的に許容される塩を、水混和性の有機溶剤を含んだ溶出液を使用して溶出する。
【００３７】
本発明によれば、「ミカファンギン出発原料」との用語は、溶解したミカファンギンの塩を含んだ水溶液である。ミカファンギン出発原料は、塩交換と精製の両方を１つの工程で行なうことができるように、固体支持体へのミカファンギン塩の吸着を可能にする。
【００３８】
ミカファンギン出発原料は、固体支持体への吸着に適したミカファンギンの塩を含有する。前記塩を固体支持体に吸着させ、さらに、溶解した薬学的に許容される塩の溶液に接触させると、塩交換が可能になる。次いで、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液を用いて任意で洗浄することにより、ミカファンギン出発原料中のミカファンギンと結合した最初のカチオンを除去することができる。最後に、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液を用いて、薬学的に許容されるミカファンギン塩を溶出することができる。
【００３９】
したがって、出発原料中に存在するミカファンギン塩は、塩交換および精製後に固体支持体から溶出されるミカファンギンの塩とは異なる。ミカファンギン出発原料中に存在するミカファンギン塩は、本発明の好ましい実施形態によれば、ミカファンギンのＤＩＰＥＡ塩である。
【００４０】
本発明の一態様によれば、ミカファンギンの最終的な塩が、ミカファンギン出発原料中に存在するミカファンギン塩のカチオンを実質的に含まない方法が提供される。「実質的に含まない」との用語は、本発明の文脈において、最終的なミカファンギン塩中の前記カチオンのレベルが検出可能でないことを意味する。「検出可能ではない」との用語は、本発明の文脈において、ミカファンギン出発原料のカチオン、たとえばＤＩＰＥＡが以下のＨＰＬＣアッセイで検出できないことを意味する。
【００４１】
【表１】
0005992507.tif 000005
本発明の別の態様によれば、ミカファンギンの最終的な塩が、ミカファンギン出発原料中に存在するミカファンギン塩のカチオンを十分に含まない方法が提供される。「十分に含まない」との用語は、本発明の文脈において、最終的なミカファンギン塩に残存するミカファンギン出発原料由来のカチオンのレベルが３００ｐｐｍよりも下であることを意味する。たとえば、本方法の一実施形態によれば、製造されたミカファンギンナトリウム中のＤＩＰＥＡのレベルは３００ｐｐｍ未満である。
【００４２】
本発明の一態様によれば、得られるミカファンギンナトリウムがＤＩＰＥＡを実質的に含まない、ミカファンギンナトリウムの製造方法が提供される。
本発明の一態様によれば、得られるミカファンギンナトリウムがＤＩＰＥＡを十分に含まない、ミカファンギンナトリウムの製造方法が提供される。
【００４３】
本発明のさらに別の態様によれば、ミカファンギン出発原料は、水混和性の有機溶剤を追加で含んだ溶解したミカファンギン塩の水溶液である。水混和性の有機溶剤が存在することにより、精製と塩交換の両方を１つの工程で行なうことができるよう、ミカファンギン出発原料中に存在するミカファンギン塩を固体支持体に吸着させることがさらに容易になる。より詳細には、ミカファンギン出発原料は、溶解したミカファンギンジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の水溶液と水混和性の有機溶剤とを含有してもよい。
【００４４】
ミカファンギン出発原料中に存在するミカファンギンの塩は、当業者に公知の方法に従って調製することができる。たとえば、式
【００４５】
【化４】
0005992507.tif 000006
のミカファンギンＤＩＰＥＡは、米国特許第６，１７０，４５８号明細書または米国特許第７，１９９，２４８号明細書に開示されている方法に従って調製することができる。本発明による出発原料として有用なミカファンギン塩は、上記した大東らに概説されているようにして調製することもできる。
【００４６】
当然のことながら、ミカファンギン出発原料中に任意で存在してもよい「水混和性の有機溶剤」との用語は、１つのクロマトグラフィー工程のみでミカファンギンの精製に加えて塩交換を行なうことができるよう、ミカファンギン出発原料中に存在するミカファンギンの結合をさらに容易にする溶剤を表す。適当な水混和性の有機溶剤の非限定的なリストには、分枝状または非分枝状のＣ１〜Ｃ３アルコール類、Ｃ３〜Ｃ６ケトン類、および極性の非プロトン有機溶剤（たとえばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、およびアセトニトリル）が含まれる。本発明の一実施形態によれば、水混和性の有機溶剤はメタノールである。
【００４７】
当業者は、本発明の教示および彼／彼女の一般常識に基づいて、ミカファンギン出発原料中に存在すべき水混和性の有機溶剤の適量を理解するであろう。より詳細には、当業者は、出発原料中に含まれるミカファンギン塩の結合およびさらなる塩交換、所望のミカファンギン塩の精製および溶出を容易にする、水混和性の有機溶剤の量が使用できることを理解するであろう。
【００４８】
出発原料中に存在する水混和性の有機溶剤の量は、使用する溶剤の種類によって異なる。本発明の一実施形態によれば、本発明に従って使用されるミカファンギン出発原料中に存在する水混和性の有機溶剤の量は０〜３０％ｖ／ｖである。本発明の別の実施形態によれば、本発明に従って使用されるミカファンギン出発原料中に存在する水混和性の有機溶剤の量は５〜１５％ｖ／ｖである。本発明のさらに別の実施形態によれば、本発明に従って使用されるミカファンギン出発原料中に存在する水混和性の有機溶剤の量は約１０％ｖ／ｖである。
【００４９】
本発明による固体支持体は、出発原料中に存在するミカファンギン塩が前記支持体に吸着することを可能にする任意の材料であってもよく、すなわち結合したミカファンギン塩を別の塩に変換するよう、たとえばミカファンギンナトリウムへのミカファンギンＤＩＰＥＡの変換を容易にすることができるよう、疎水的相互作用を通じて前記塩を結合することを可能にする任意の材料であってもよい。このように化合物の１つの塩を前記化合物の別の塩へと変換することは、一般に「塩交換」として知られている。
【００５０】
さらに、固体支持体は、ミカファンギンの薬学的に許容される所望の塩の溶出に先立ち、前記塩交換に加えて不純物が除去され得るよう、出発原料中に存在するミカファンギン塩の結合も提供しなければならない。
【００５１】
上記に加えて、固体支持体のさらに別の特徴は、当業者の裁量によって、固体支持体がミカファンギン塩の可逆的結合を最終的に容易にしなければならないこと、すなわち、ミカファンギンの塩交換および精製の後に得られる所望の塩の溶出を可能にすることである。
【００５２】
より詳細には、固体支持体は、本発明によれば、改質されたシリカ材料、ポリスチレン材料、またはアクリル材料を含むがそれに限定されない疎水性の吸着樹脂支持体であり、たとえばポリアミド吸着材であるポリアミドＣ６（マッハライ・ナーゲル（Macherey Nagel））、アクリル系吸着材であるＸＡＤ７ＨＰ(登録商標）（ローム・アンド・ハース（Rohm & Haas））またはＨＰ２ＭＧ(登録商標）（ダイアイオン）、およびポリスチレンジビニルベンゼン吸着材であるＸＡＤ１６００（ローム・アンド・ハース）、ＨＰ２０ＳＳ（ダイヤイオン）、ＳＰ２０ＳＳ（ダイヤイオン）などが挙げられる。最も好ましい樹脂はＨＰ２０ＳＳである。
【００５３】
塩交換は、固体支持体に吸着されている出発原料のミカファンギン塩を、薬学的に許容される所望の塩の水溶液、たとえばナトリウム塩またはカリウム塩の水溶液などに接触させることにより行なわれる。本発明の一実施形態によれば、吸着されたミカファンギン塩、たとえばミカファンギンのＤＩＰＥＡ塩は、ｐＨ４〜６のＮａＣｌおよび／または酢酸ナトリウムバッファーの水溶液に接触させられる。薬学的に許容される塩の水溶液は、水混和性の有機溶剤も含有してよい。水混和性の有機溶剤は、上で定義したように、ミカファンギン出発原料中に存在し得る同一の溶剤であってもよい。
【００５４】
一実施形態によれば、吸着されたミカファンギン塩は、薬学的に許容される塩と１０％ｖ／ｖのメタノールの水溶液に接触させられる。別の実施形態によれば、吸着されたミカファンギン塩は、２０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ薬学的に許容される塩の水溶液に接触させられる。この工程で得られるミカファンギンの薬学的に許容される塩の水溶液のｐＨは、前記ミカファンギン塩の分解を回避するように選択すべきである。好ましくは、前記溶液のｐＨは酸性である。たとえば、溶解した薬学的に許容される塩の水溶液のｐＨは、約４．５であってもよい。
【００５５】
ミカファンギンのさらなる精製は、段階的にすなわち勾配を使用して、水混和性の有機溶剤を含んだ溶液を用いて固体支持体を洗浄することにより行なうことができる。たとえば、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ洗浄溶液は、相当量の不純物（たとえば副生成物または分解生成物）をＨＰ２０ＳＳ樹脂から除去することができる。概して、所望のミカファンギン塩と類似した結合／溶出特性を有する副生成物および分解生成物は、水混和性の有機溶剤をより高濃度で含んだ洗浄溶液を使用することによって選択的に除去することができる。これに関連して、「より高濃度」とは、ミカファンギン出発原料またはミカファンギンの薬学的に許容される塩を含んだ溶液中（すなわち、本方法のステップｂ））に存在する水混和性の有機溶剤の濃度と比較して、水混和性の有機溶剤の濃度がより高いことを意味する。本方法のステップａ）〜ｄ）を通じて漸増する水混和性の有機溶剤の濃度を使用することは、これらのステップが前記溶剤の存在を含むときにはいつもステップａ）〜ｄ）のすべてで同一種類の水混和性の有機溶剤が使用されることを前提とする。本発明による出発原料中に存在する副生成物や分解生成物などの反応物は、ミカファンギン出発原料中に存在するのと同じ溶剤をより高濃度で使用することで除去することができる。
【００５６】
結果として得られるミカファンギン塩、たとえば塩交換および任意の洗浄（精製）工程を通じて得られる固体支持体に結合したミカファンギンのナトリウム塩は、水混和性の有機溶剤を含んだ水溶液を使用することにより溶出することができ、溶出液中の水混和性の有機溶剤の濃度は、本方法のそれ以前のステップで存在する水混和性の有機溶剤の量と比べてより高い。水混和性の有機溶剤は、ミカファンギン出発原料中に存在するものと同一種類のものであってもよい。すなわち、本発明に従って固体支持体から所望のミカファンギン塩を溶出するときに使用されるべき適当な水混和性の有機溶剤の非限定的なリストには、分枝状または非分枝状のＣ１〜Ｃ３アルコール類、Ｃ３〜Ｃ６ケトン類、および極性の非プロトン有機溶剤、たとえばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、およびアセトニトリルが含まれる。本発明の一実施形態によれば、水混和性の有機溶剤はメタノールである。
【００５７】
溶出液中に存在する水混和性の有機溶剤の量は、ミカファンギンの溶出に十分な量である。溶出液中に存在する水混和性の有機溶剤の量は、溶剤の極性および疎水性の吸着樹脂支持体の疎水性によって異なる。たとえばミカファンギンの薬学的に許容される塩は、３０％ｖ／ｖ超のアセトニトリルを含んだ水溶液によりＨＰ２０ＳＳから溶出することができる。ミカファンギンの薬学的に許容される塩は、７０％ｖ／ｖ超のメタノールを含んだ水溶液によりＨＰ２０ＳＳから溶出することができる。当業者は、ルーチンの実験により、本発明に従って使用される様々な疎水性の吸着樹脂支持体に関する常識に基づいて、水性の溶出液中の水混和性の有機溶剤の適量を決定することができる。
【００５８】
本発明の好ましい実施形態によれば、７０％〜９５％ｖ／ｖの濃度でメタノールを含んだ水溶液を使用することによって、ミカファンギンナトリウムが溶出される。
本発明に従って調製されるミカファンギン塩は、ヒトおよびを動物含む哺乳類における感染病の治療および予防に有用な医薬組成物の製造に使用することができる。前記医薬組成物は、当該技術分野で周知の一般的な技術を使用して調製することができる。医薬組成物は、滅菌などの従来の薬品操作に供することもできる。
【００５９】
たとえば、医薬組成物は、単独でまたは別の有効成分と組み合わせて、薬学的に許容される賦形剤と共に所与の量の精製ミカファンギンを含んだ投与単位形態で調製することができる。「薬学的に許容される賦形剤」との用語は、医薬組成物中に含まれるミカファンギンを必要としている患者に対してその送達を遂行または増強するのに適した１つまたは複数の配合材料を指す。「薬学的に許容される賦形剤」とは、補助剤、たとえば保存料、安定剤、湿潤剤、乳化剤、バッファーなどの存在によって表されることもある。ラクトースは、特に凍結乾燥された形態において、ミカファンギンに適した安定剤の一例である。当業者は、ミカファンギンのような抗真菌化合物を含んだ医薬製剤の調製に利用できる様々な医用賦形剤を熟知している。本発明による組成物は、非経口投与、たとえば静脈内投与ができるように調製してもよい。
【００６０】
本発明による組成物を必要としている患者に対し、適当な用量のミカファンギンを投与してもよい。ヒトまたは哺乳動物の適当な日用量は、患者の状態または他の因子によって大きく異なる場合がある。日用量は、各患者に適した適切な用量を決定するためのルーチンの方法を使用することにより、感染症の治療および予防のために一般に使用される用量に基づき、たとえばマイカミン(登録商標）の投与時に当業者が決定することができる。
【００６１】
当業者は、以下の実施例から、本発明の多くの長所を理解するであろう。以降の実験および結果は、非限定的な例の役割を果たすにすぎないことを理解すべきである。
実施例
以下の実施例で、疎水性樹脂のＨＰ２０ＳＳ（ダイアイオン（Diaion））をクロマトグラフィーカラム（１５ｍｌ、内径１．１ｃｍ）に充填した。１．１２５ｇのミカファンギン出発原料（１００ｍｇミカファンギン／ｍｌ）を同カラムに加えた（０．５ｍｌ／分）。メタノール添加または無添加の３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５溶液（１５０ｍｌ）を用いて同カラムを洗浄した。次いで、４０％メタノールを含む水溶液（９０ｍｌ）を用いて同カラムを洗浄した。９０％メタノールを用いてミカファンギンナトリウムを同カラムから溶出した。
【００６２】
３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５溶液は、３５０．６４ｇのＮａＣｌを１９８８．５ｍｌのＲＯ水に溶解させ、１１．４４ｍｌの酢酸を加えることによって調製した。ｐＨはＮａＯＨを用いて５．５に調整した。
【００６３】
実施例１：装填および洗浄時の有機溶剤
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００６４】
９０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムをまず洗浄した。
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００６５】
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
図１に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
【００６６】
実施例２：装填時の有機溶剤
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００６７】
３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５を含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
【００６８】
図２に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
実施例３：装填および洗浄時の有機溶剤
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００６９】
９０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムをまず洗浄した。
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００７０】
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
図３に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを十分に含んでいない。
【００７１】
実施例４：装填時の有機溶剤
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００７２】
３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５を含んだ水溶液を用いて同カラムをまず洗浄した。
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００７３】
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
図４に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
【００７４】
実施例５：装填時に有機溶剤なし
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および３Ｍ塩化ナトリウム、０．１Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５を含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００７５】
３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５を含んだ水溶液を用いて同カラムをまず洗浄した。
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００７６】
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
図５に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを十分に含んでいない。
【００７７】
実施例６：装填時に有機溶剤なし
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩を含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００７８】
３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５を含んだ水溶液を用いて同カラムをまず洗浄した。
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００７９】
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
図６に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
【００８０】
実施例７：装填および洗浄時の有機溶剤
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００８１】
８０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５および２０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液で同カラムをまず洗浄した。
次いで、７０％ｖ／ｖの３Ｍ塩化ナトリウム、０．１Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５および３０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００８２】
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
【００８３】
図７に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
実施例８：装填および洗浄時の有機溶剤
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした。
【００８４】
６０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５および４０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液で同カラムをまず洗浄した。
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノール水溶液を用いて同カラムを洗浄した。
【００８５】
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
図８に示すとおり、１８〜２０ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
【００８６】
実施例９：装填および洗浄時の有機溶剤
疎水性樹脂のＨＰ２０ＳＳ（ダイアイオン）をクロマトグラフィーカラム（７２ｍｌ、内径２．６ｃｍ）に充填した。５．４ｇのミカファンギン出発原料（１００ｍｇミカファンギン／ｍｌ）を同カラムに加えた（２．４ｍｌ／分）。
【００８７】
未処理のミカファンギンＤＩＰＥＡ塩および１０％ｖ／ｖのメタノールを含んだ水溶液をＨＰ２０ＳＳカラムにアプライした（５４ｍｌ）。
８０％ｖ／ｖの３Ｍ  ＮａＣｌ／０．１Ｍ  ＮａＡｃ  ｐＨ５．５および２０％ｖ／ｖのメタノール（５７６ｍｌ）を含んだ水溶液を用いて同カラムをまず洗浄した。
【００８８】
次いで、４０％ｖ／ｖのメタノール水溶液（２８８ｍｌ）を用いて同カラムを洗浄した。
９０％ｖ／ｖのメタノールおよび１０％ｖ／ｖの水を含んだ溶液を用いてミカファンギンナトリウムを溶出した。
【００８９】
図９に示すとおり、１５〜１７ＣＶにおいて溶出したミカファンギンナトリウム溶液は、ＤＩＰＥＡを実質的に含んでいない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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