(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）リン脂質と、
ｂ）グリチルレチン酸と、
ｃ）リシン、前記グリチルレチン酸と前記リシンとの複合体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分と、
を含むリポソーム。
【請求項２】
前記グリチルレチン酸が、リン脂質の１重量％〜２０重量％の量で存在する、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項３】
前記リシンが、リン脂質の１重量％〜２０重量％の量で存在する、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項４】
前記グリチルレチン酸と前記リシンのモル比が１：１０〜１０：１である、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項５】
前記リン脂質が水素添加リン脂質である、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項６】
非イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンコレステリルエーテル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される弾性エンハンサを更に含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項７】
前記非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０又はモノオレイン酸ソルビタンである、請求項６に記載のリポソーム。
【請求項８】
前記ポリオキシエチレンコレステリルエーテルが、Ｃ27Ｈ45Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＨであり、式中ｎが５〜１５である、請求項６に記載のリポソーム。
【請求項９】
ビタミンＥ、ビタミンＥエステル、ビタミンＣ、ビタミンＣエステル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される酸化防止剤を更に含む、請求項１に記載のリポソーム。
【請求項１０】
前記リン脂質が、水性分散液の１重量％〜２０重量％の量で存在する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のリポソームを含む、水性リポソーム分散液。
【請求項１１】
前記弾性エンハンサが、水性分散液の０．０１重量％〜１０重量％の量で存在する、請求項６に記載のリポソームを含む、水性リポソーム分散液。
【請求項１２】
前記酸化防止剤が、水性分散液の０．０１重量％〜５重量％の量で存在する、請求項９に記載のリポソームを含む、水性リポソーム分散液。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のリポソームを含むパーソナルケア組成物であって、クリーム、エマルション、ジェル、ローション、拭き取り用ローション、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される形態である、パーソナルケア組成物。
【請求項１４】
請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の水性リポソーム分散液を用いて作製されるパーソナルケア組成物であって、クリーム、エマルション、ジェル、ローション、拭き取り用ローション、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される形態である、パーソナルケア組成物。
【請求項１５】
ａ）リン脂質及びグリチルレチン酸を有機溶媒中に溶解し、プレミックスを形成する工程と、
ｂ）前記有機溶媒を前記プレミックスから蒸発させ、リン脂質フィルムを形成する工程と、
ｃ）リシンを含む水和媒体で前記フィルムを水和する工程と、
ｄ）水和媒体をホモジナイズし、水性リポソーム分散液を形成する工程と、
を含むリポソームの作製プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疎水性有効成分の皮膚への送達改善をもたらすリポソームに関し、水性リポソーム分散液に関し、リポソームを含むパーソナルケア組成物に関し、かつリポソームの作製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化粧品用途では、皮膚有効成分を皮膚深層部に、すなわち、角質層を通過して真皮層まで局所送達することを望むことが多い。しかしながら、角質層を通る皮膚有効成分の送達において、無傷皮膚は大きな障害をもたらす。角質層は、整列した脂質二重層で構成される脂質マトリックス中に埋め込まれた角質細胞からなり、脂肪性物質は、角質層中の細胞間のすき間を塞ぐ追加の細胞間接着剤として作用する。
【０００３】
無傷皮膚を通過して皮膚有効成分を送達するには、いくつかの方法が開発されている。これらの１つは、疎水性媒体、例えば、エマルション中の油相などの疎水性を用いて角質層中の脂質二重層を破壊、又は流動化し、それによって有効成分の透過を促進することである。
【０００４】
別の方法は、リポソームなどの小胞系を使用することである。リポソームは、リン脂質二重層から構成される小胞である。リン脂質分子は、極性「頭部」及び２つの非極性「尾部」を有する。その構造から、リン脂質は、リン脂質の極性頭部が外部又は内部水相を向いて整列し、一方、非極性尾部が互いに向き合って整列している状態の、小胞性二重層、すなわち、リポソームを形成する傾向がある。このようなリポソームは、有効成分送達のキャリア構築に用いられている。
【０００５】
しかしながら、リポソーム内へ有効成分を効率的に封入し、かかるリポソームの安定性を維持することは、いまだに課題である場合がある。封入される有効成分の化学的性質が、封入効率と、関連する有効成分のリポソームへの封入率に影響することは、当該業界では周知である。グリチルレチン酸などのカルボキシレート基を含む疎水性有効成分は、このような課題をもたらす。
【０００６】
したがって、カルボキシレート基を含む疎水性有効成分を配合できるリポソームへのニーズが存在する。リポソームは、安定で、かつかかる疎水性有効成分に対する満足できる封入率を有していなくてはならず、それによって皮膚深層部への透過が改善され、ゆえに皮膚層内の有効成分の残留量が改善される。
【０００７】
多くの者が、疎水性有効成分のリポソーム送達を改善しようとしてきたが、本発明の効果は達成されず、当該技術分野において開示されていなかった。例えば、水性分散液が、リポソームと、ヒドロキシル酸と、安定剤としてアミノ酸と、を含む、親水性又は疎水性薬物を封入するための水性分散液に関する米国特許第５，５６９，４６４号、及び、水和剤と、リポソーム形成物質と、を含む、リポソーム形成組成物に関する欧州特許第０２１１６４７  Ｂ１号を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第５，５６９，４６４号
【特許文献２】欧州特許第０２１１６４７  Ｂ１号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ａ）リン脂質と、ｂ）カルボキシレート基を含む疎水性有効成分と、ｃ）正帯電基を含む親水性アジュバント、該疎水性有効成分と該親水性アジュバントの複合体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分と、を含む、リポソームに関する。また本発明は、水性リポソーム分散液にも関し、リポソームを含むパーソナルケア組成物にも関する。また本発明は、本発明のリポソームを作製するプロセスにも関し、このプロセスは、リン脂質及びカルボキシレート基を含む疎水性有効成分を有機溶媒中に溶解し、プレミックスを形成する工程と、該有機溶媒を該プレミックスから蒸発させ、リン脂質フィルムを形成する工程と、正帯電基を含む親水性アジュバントを含む水和媒体で該フィルムを水和する工程と、水和媒体をホモジナイズし、水性リポソーム分散液を形成する工程と、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１〜４及び比較実施例１のリポソーム、並びに比較実施例２のクリームにおける、封入率の比較を示す。
【図２】８時間までのラット皮膚へのＧＡ透過に関する、実施例３のリポソーム及び比較実施例２のクリームの比較を示す。
【図３】透過８時間後のラット皮膚中ＧＡ残留量に関する、実施例３のリポソーム及び比較実施例２のクリームの比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書は、本発明を具体的に指摘し、明確に請求する特許請求の範囲をもって結論とするが、本発明は、以下の記載から更に十分に理解されるものと考えられる。
【００１２】
百分率、部及び比はすべて、特に記述しない限り、水性リポソーム分散液の総重量に基づく。すべてのこのような重量は、提示された成分に関する場合、有効成分の量に基づき、したがって市販材料に包含され得るキャリア又は副生成物を包含しない。
【００１３】
本明細書に有用な活性物質及び他の成分のような成分はすべて、美容及び／若しくは治療的な利益、又はそれらの自明であると見なされている作用様式によって分類又は記載されることがある。ただし、本明細書に有用な有効成分及び他の成分が、場合によっては美容的及び／若しくは治療的な複数の利益をもたらすこと、又は複数の作用様式で作用することもあることを理解すべきである。したがって、本明細書での分類は便宜上実施されるものであり、成分を特に規定した用途又は列挙した用途に制限しようとするものではない。
【００１４】
本明細書で使用するとき、「リポソーム」は、内部水相を取り囲む１種以上の天然又は合成脂質二重層を含む、オリゴ層状脂質小胞の説明に用いられる。
【００１５】
本明細書で使用するとき、「疎水性有効成分」は、そのオクタノール／水分配係数Ｌｏｇ値が、ゼロ超、好ましくは０〜８、より好ましくは１〜７である有効成分を意味する。疎水性有効成分は、リポソーム内に処方されるときのｐＨにおいて解離性カルボキシレート基を含み、つまり、カルボキシレート基はカルボン酸基又はその塩類であり得る。
【００１６】
本明細書で使用するとき、「親水性アジュバント」は、オクタノール／水分配係数であるＬｏｇ値がゼロ未満であるアジュバントを意味する。
【００１７】
本明細書で使用するとき、「正帯電基」は、親水性アジュバントが、本発明の水性リポソーム分散液のｐＨ条件下、例えば、ｐＨ  ７．０において正電荷を帯びている基を含むことを意味する。
【００１８】
本明細書で使用するとき、「弾性リポソーム」は、皮膚バリアを通って透過するとき、リポソームが形態変化を受ける傾向があることを意味する。
【００１９】
本発明は、リン脂質と、カルボキシレート基を含む疎水性有効成分と、正帯電基を含む親水性アジュバントと、を含む、リポソームに関する。本発明のリポソームを、水性リポソーム分散液の形態で作製してもよい。本発明のリポソームを、クリーム、エマルション、ジェル、ローション、拭き取り用ローション、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるパーソナルケア組成物に組み込んでもよい。
【００２０】
リン脂質
本発明のリポソームはリン脂質を含む。リン脂質は、天然リン脂質、合成リン脂質、及びこれらの組み合わせからなる群から選択してもよい。レシチンは、天然リン脂質源の１つである。レシチンは、卵黄及び大豆などに含まれる混合物である。これは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、及びホスファチジルイノシトール（ＰＩ）などの多くのリン脂質を含む。天然リン脂質として、例えば、水素添加大豆ＰＣ（ＨＳＰＣ）、スフィンゴミエリン、及びホスファチジルグリセロール（ＰＧ）も挙げられる。
【００２１】
合成リン脂質として、ホスホコリン誘導体（例えば、ＤＤＰＣ、ＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＥＰＣ）、ホスホグリセロール誘導体（例えば、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＰＯＰＧ）、ホスファチジン酸誘導体（例えば、ＤＭＰＡ、ＤＰＰＡ、ＤＳＰＡ）、ホスホエタノールアミン誘導体（例えば、ＤＭＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＯＰＥ）、ホスホセリン（例えば、ＤＯＰＳ）、リン脂質のＰＥＧ誘導体（例えば、ｍＰＥＧ−リン脂質、ポリグリセリン−リン脂質、官能化リン脂質、及び末端活性化リン脂質）が挙げられるが、これらに限定されない。上記略語に対応するリン脂質誘導体の化学名は、ウェブページ、ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄで見つけることができる。
【００２２】
本発明の一実施形態では、リン脂質は、水素添加リン脂質、具体的には水素添加大豆ＰＣ（ＨＳＰＣ）である。
【００２３】
リポソームは、水性リポソーム分散液の約１重量％、３重量％、又は６重量％から、約８重量％、１０重量％、又は２０重量％までのリン脂質を含む。
【００２４】
本発明のリポソームは、任意にステロイド類を含んでもよい。ステロイド類は、脂質二重層の安定性を増すのに役立ち、リポソームの漏れの問題を低減する。
【００２５】
疎水性有効成分
本発明のリポソームは、カルボキシレート基を含む疎水性有効成分を含む。
【００２６】
一実施形態では、疎水性有効成分は、カルボキシレート基に加え、少なくとも１個のアリール基を含む疎水性ドメインを含む。一実施形態では、疎水性ドメインは、複数のアリール基を含む。好ましくは、アリール基及びカルボキシレート基は、疎水性有効成分の２箇所の対向する末端部に位置する。代表的な疎水性有効成分は、グリチルレチン酸（ＧＡ）、グリチルレチニルステアレート、グリチルリチン酸、ウンデシレノイルフェニルアラニン（商標名Ｓｅｐｉｗｈｉｔｅ（商標））、レチノイン酸、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００２７】
グリチルレチン酸は、ホワイトニング効果をもたらす有効成分である。以下に示すように、その構造式は、一方の末端部に複数の疎水性アリール基を、もう一方の末端部に親水性カルボキシレート基を含む。
【００２８】
【化１】
0005864615.tif 000002
【００２９】
修飾フェニルアラニンであるウンデシレノイルフェニルアラニンは、以下に示す構造式を有する。一方の末端部に疎水性アリール基を、もう一方の末端部に親水性カルボキシレート基を含む。
【００３０】
【化２】
0005864615.tif 000003
【００３１】
好適な疎水性有効成分として、化粧品業界及び／又は製薬業界で用いられるものを挙げてもよい。
【００３２】
疎水性有効成分は、水性リポソーム分散液の約０．０１重量％、０．０５重量％、０．１重量％、０．３重量％、０．６重量％、又は０．９重量％から、約１．２重量％、１．５重量％、又は５重量％までの量で、本発明のリポソーム中に存在してもよい。あるいは、疎水性有効成分の量は、リポソーム作製に用いたリン脂質の量に基づいてもよく、通常はリン脂質の約１重量％〜約２０重量％の量である。
【００３３】
親水性アジュバント
リポソームは、正帯電基を含む親水性アジュバントを含む。正帯電基は、疎水性有効成分のカルボキシレート基と相互作用して、複合体を形成できる。正帯電基は、好ましくは正帯電アンモニウム基（−ＮＨ3+）である。一実施形態では、本発明のリポソームの親水性アジュバントは、一方の末端部に正帯電基を含み、正帯電末端部と反対のもう一方の末端部にカルボキシレート基を含む。本発明の別の実施形態では、親水性アジュバントは、リシン（式Ｉ）、アルギニン（式ＩＩ）、ヒスチジン（式ＩＩＩ）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３４】
【化３】
0005864615.tif 000004
【００３５】
親水性アジュバントの正帯電基は、疎水性有効成分のカルボキシレート基と複合体を形成すると考えられる。親水性アジュバントの非複合体化末端と疎水性有効成分のアリール末端は、形成された複合体の性質を両性にする。例えば、グリチルレチン酸及びリシンで形成された複合体の構造を、以下の式ＩＶに示す。
【００３６】
理論によって制限されるものではなく、親水性アジュバントと疎水性有効成分により形成された両性複合体は、リポソームの二重層壁中のリン脂質間への自身の安定な挿入を維持するのに役立ち、場合によってリポソームの弾性に更に影響すると考えられる。封入率の改善、その結果による疎水性有効成分の皮膚層への透過及び残留量の改善は、本発明のリポソームによって達成できる。
【００３７】
【化４】
0005864615.tif 000005
【００３８】
親水性アジュバントは、水性リポソーム分散液の約０．０５％、０．３％、０．８％、又は１％から、約１．５％、２％、８％、又は１０重量％までの量で、本発明のリポソーム中に存在する。
【００３９】
あるいは、親水性アジュバントの量は、リポソーム作製に用いたリン脂質の量に基づいてもよく、通常はリン脂質の約１重量％〜約２０重量％である。親水性アジュバントの疎水性有効成分に対するモル比は、約１／１０、１／４、１／２又は１から約２、４、又は１０である。
【００４０】
弾性エンハンサ
本発明のリポソームは、好ましくは弾性エンハンサを含む弾性リポソームである。弾性エンハンサは、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ  ８０）、オレイン酸、グリチルリチン酸二カリウム（ＫＧ）、及びコレステリルエーテル、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択してもよい。一実施形態では、弾性エンハンサは、界面活性剤、例えば、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、又は双極性界面活性剤、好ましくは非イオン性界面活性剤である。好ましくは、非イオン性界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｓｐａｎ−８０及び／又は、式Ｃ27Ｈ45Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＨ（式中、ｎは５〜１５、例えば５、１０、又は１５である）のポリオキシエチレンコレステリルエーテルである。
【００４１】
本発明では、弾性エンハンサは、水性リポソーム分散液の約０．０１重量％、０．１重量％、又は０．４重量％から約２．５重量％、５重量％、又は１０重量％までの量で存在する。
【００４２】
他の成分
本発明のリポソームは、水性リポソーム分散液の約０．０１重量％又は０．１重量％から約２重量％又は５重量％の酸化防止剤を、任意に含んでよい。酸化防止剤は、ビタミンＥ、ビタミンＥエステル、ビタミンＣ、ビタミンＣエステル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択してもよい。好ましい実施形態では、リポソームはビタミンＥアセテートを含む。
【００４３】
作製方法
本発明のリポソームを、以下に記載する工程に沿って、水性リポソーム分散液として作製してもよい。第１に、容器中で７０℃において、化粧品業界及び製薬業界でリポソーム作製に許容できる適切な有機溶媒、例えば、エタノール中に、リン脂質及び疎水性有効成分を含むすべての疎水性材料を完全に溶解することにより、プレミックスを形成する。室温において一晩真空下で、微量の溶媒を除去できる。続いて、例えば、回転真空蒸発により、有機溶媒をプレミックスから除去する。次に、溶媒除去後、容器の底部に付着したリン脂質フィルムが形成される。親水性アジュバントを含む水性媒体、例えば、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、フィルムを水和する。水和後、水性媒体をホモジナイズして水性リポソーム分散液を形成する。ホモジナイズは、連続的に攪拌した後の超音波処理により、又は市販のホモジナイザー、例えば、Ｅｍｕｌｓｉｆｌｅｘ  Ｃ５（Ａｖｅｓｔｉｎ，Ｃａｎａｄａ）により、達成できる。水和媒体の選択、水和方法、及びリポソーム形成に用いられるホモジナイズは、当該技術分野において周知である。水性リポソーム分散液を形成し、室温で保存できる。
【００４４】
測定方法
封入率
水性リポソーム分散液の作製において、最初に有機溶媒内に投入された疎水性有効成分の総量に対する、リポソーム内にきちんと封入された疎水性有効成分の割合の測定には、封入率を用いる。封入率は、封入効率（ＥＥ  ％）＝ＣS／ＣU×１００％として算出する。
【００４５】
ＣSは、リポソーム内に封入された疎水性有効成分の量を示す。まず、水性リポソーム分散液から未封入の疎水性有効成分を除去し、次に、純エタノールを用いてリポソームの構造を破壊して、濃度測定用に疎水性有効成分を遊離させることにより、測定する。具体的には、水性リポソーム分散液の最終調製物のアリコート（０．２ｍＬ）１回分を、適切な水性媒体、例えば、５００ｍＬのＰＢＳで透析し、未封入疎水性有効成分すべてを完全に除去する。透析後、透析袋中に残存する内容物を取り出して、別の容器に移し、最終量２５ｍＬに達するまでエタノールをその容器に添加する。次に、封入された疎水性有効成分のエタノール中濃度（ＣS）をＨＰＬＣで測定し、その結果疎水性有効成分量を算出する。
【００４６】
ＣUは、水性リポソーム分散液の作製において、最初に有機溶媒内に投入された疎水性有効成分の総量を表す。これには、リポソーム内に封入された疎水性有効成分量と、リポソーム分散液の水相中の未封入化学物質として存在する有効成分量の両方が含まれる。具体的には、水性リポソーム分散液の調製物のアリコート同量（０．２ｍＬ）を別の容器に移し、最終量２５ｍＬに達するまでエタノールをその容器に添加する。次に、疎水性有効成分の総濃度（ＣU）をＨＰＬＣで測定し、その結果、疎水性有効成分量を算出する。
【００４７】
ＨＰＬＣ測定では、クロマトグラフィーにおいて、Ｓｈｉｍａｄｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）のＬＣ−２０１０ＡＨＴというＨＰＬＣ装置を、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＯＤＳ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）クロマトグラフィーカラムと、Ｈ３ＰＯ４でｐＨを３．５に調整したメタノール：水＝９５：５の移動相と共に用いてもよい。ＨＰＬＣは、疎水性有効成分の濃度測定の好適な方法として用いられるが、別の濃度測定法を同様に用いてもよい。
【００４８】
透過効率測定−拡散セル試験
透過効率を用いて、特定の皮膚表面積を透過して、真皮層に達する疎水性有効成分の量を測定する。Ｆｒａｎｚ−Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎチャンバとも呼ばれるＦｒａｎｚ拡散セルシステムは、当該業界において有効成分の皮膚透過効率の測定に一般に使用される。
【００４９】
Ｆｒａｎｚ−Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎチャンバは、上部のドナー区画と、下部のアクセプター区画を備え、２つの区画の内部スペースは、バリアによって分離されている。アクセプター区画は通常、バリアを通って排出され、アクセプター区画に達したサンプルのリアルタイムモニタリングと分析に便利なように、サンプリングポートを有する。バリアは、天然皮膚調製物、又は人工皮膚構築物（ＡＳＣ）であってもよい。ＡＳＣは、異なる細胞種から培養されてもよく、真皮及び表皮等価物を含む。
【００５０】
試験中、サンプルをドナー区画内に投入し、バリアを通ってアクセプター区画の方へ排出されるように設定する。アクセプター区画を、１５％  ｖ／ｖエタノール−ＰＢＳ溶液で満たす。サンプルは、測定用にアクセプター区画のサンプリングポートから採取できる。アクセプター区画に達した皮膚有効成分量をバリアの表面積で除して、透過効率を算出する。
【００５１】
皮膚層内の疎水性有効成分残留量
この残留量を用いて、皮膚中の全透過深度にわたって、皮膚中に残存する有効成分の総量を測定する。上記透過試験後、ドナー区画中のすべてのサンプルがバリアを通って排出されたときに、バリアを取り外して表面を５回純水でリンスした後に、Ｆｒａｎｚ−Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎチャンバに戻した。次に、レセプター区画を５０％  ｖ／ｖエタノール−ＰＢＳで満たし、バリアの様々な層中に残存するＧＡをすべて溶解するために、Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎチャンバを更に１２時間放置する。続いて、サンプルをレセプター区画のサンプリングポートから採取してもよく、サンプル中有効成分濃度をＨＰＬＣで測定してもよい。
【００５２】
使用方法
本発明のリポソームを、疎水性有効成分の経皮的送達を改善する目的で、化粧品組成物及び医薬組成物などのパーソナルケア組成物に組み込んでもよい。化粧品組成物は、クリーム、エマルション、ジェル、ローション、拭き取り用ローション、及びこれらの組み合わせの形態であってもよい。
【実施例】
【００５３】
実施例１〜４は、本発明の水性リポソーム分散液に関する。実施例１は、標準的なリポソームに関し、実施例２は、コレステロールを更に含むリポソームに関し、実施例３及び４は、弾性エンハンサを更に含むリポソームに関する。比較実施例１〜２は、疎水性有効成分を含むが、本発明の範囲外である組成物を例示する。具体的には、比較実施例１は、親水性アジュバントを欠くリポソームに関し、比較実施例２は、リポソーム送達と比較して、疎水性有効成分送達用賦形剤としての水中油型クリームを示す。
【００５４】
これらの実施例はあくまで例示を目的として与えられるものであって、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。実施例には、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく多くの変形例が可能である。成分は、適用できる場合は、化学名又はＣＴＦＡ名称で識別され、そうでない場合には以下で定義される。
【００５５】
【表１】
0005864615.tif 000006
１．Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｔｏｓｈｉｓｕｎ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ  Ｃｏ．ＬｔｄからＰｈｏｐｈｏｌｉｐｏｎ  ８０Ｈの名称で市販される、水素添加大豆ホスホコリン（ＨＳＰＣ）
２．Ｎｉｈｏｎ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎ  Ｃｏ．Ｌｔｄのポリオキシエチレン（１０）コレステリルエーテル
３．Ｘｉｎｊｉａｎｇ  Ｔｉａｎｓｈａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｌｔｄ．のグリチルレチン酸
４．Ｓｏｌａｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，ＬｔｄのＬ−リシン、バイオテクグレード
【００５６】
清潔な丸底フラスコ中、７０℃において、２０ｍＬのエタノールに１．２グラムの水素添加大豆ホスホコリン（ＨＳＰＣ）、０．２８８ｇのビタミンＥアセテート、及び１２０ｍｇのグリチルレチン酸（ＧＡ）を溶解することで、まずプレミックスを形成することにより、実施例１のリポソームを作製する。次に、エタノールを回転真空蒸発により除去し、フラスコの底部に脂質フィルムを形成させる。続いて、溶解Ｌ−リシン８２ｍｇを含む、４０ｇの０．００５Ｍ、ｐＨ  ７．０のＰＢＳ溶液で、３０分間磁気攪拌を行って脂質フィルムを水和した。ＧＡ：リシンのモル比は１：２である。次に、水和溶液を、Ａｖｅｓｔｉｎ（Ｃａｎａｄａ）からＥｍｕｌｓｉｆｌｅｘ  Ｃ５の名称で入手可能なホモジナイザーを用いて、３４．５ＭＰａ（５０００ｐｓｉ）にて３度高圧ホモジナイズにかけ、均質の水性リポソーム分散液を得る。得られたサンプルを室温で保管する。
【００５７】
実施例２〜４の３種のリポソームの作製は、２１９．９ｍｇのコレステロール、２１９．９ｍｇのＴｗｅｅｎ−８０、１１０ｇのＴｗｅｅｎ−８０と１１０ｇの式Ｃ27Ｈ45Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）10Ｈのポリオキシエチレンコレステリルエーテル（ＣＳ１０とも称する）の混合物をそれぞれ、エタノールプレミックス中に更に添加する点で、実施例１のリポソームの作製とは異なる。
【００５８】
比較実施例１のリポソームの作製は、水和媒体がリシンを欠き、若干低濃度のグリチルレチン酸を添加する点で、実施例３のリポソームの作製とは異なる。
【００５９】
比較実施例２の組成物の作製は、水中油型エマルションの作製に対する従来の方法により実施できる。実施例２のクリームは、グリチルレチン酸０．３％と、１．４％の脂肪族アルコール（セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、及びセテアリルアルコールの混合物）、２％のシリコーンオイル（ジメチコーン及びジメチコノール）、０．２５％のシリコーン粉末（ポリメチルシルセスキオキサン）、及び２％のＳｅｐｉｇｅｌ  ３０５を含む水中油型クリーム基剤９９．７％と、を含み、他の成分と共に水を添加して総量１００％にする。
【００６０】
有効性の測定
１．封入率測定
本発明の実施例１〜４のリポソーム及び比較実施例１のリポソームの封入率を、上記測定方法の項に記載の測定方法に従って測定する。比較実施例２のクリーム中のグリチルレチン酸はクリームの油相中に完全に取り込まれているため、その封入率を１００％とする。
【００６１】
上記表１より、リシンを含む実施例１〜４の本発明のリポソームが、リシンを含まない比較実施例１のリポソームよりも顕著に高い封入率を有することがわかる。封入率のデータは図１中のグラフにも引用される。
【００６２】
２．透過効率測定
Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎチャンバを純水で１時間平衡化し、サンプルをドナー区画内に添加する。Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎチャンバの有効拡散面積に相当する好適な表面積のラット皮膚調製物を、レセプターとドナー区画との間に配置されるバリアとして用いる。この測定には、有効拡散面積０．６６ｃｍ2を有するＦｒａｎｚ拡散チャンバ、及び２．５ｍＬのレシーバーセル容量を用いた。
【００６３】
水性リポソーム分散調製液のアリコート２００μＬをドナー区画に移し、ドナー区画を密封せずに実験を実施する。レセプター区画を、１５％  ｖ／ｖエタノール−ＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）溶液で満たす。磁気ミキサーを、速度２８０ｒｐｍ、３７±０．２℃で用いて、レセプターセル中のエタノール−ＰＢＳ溶液を連続してホモジナイズする。１、３、５、及び８時間の時点で、レセプター区画から２．５ｍＬのサンプルを採取して、グリチルレチン酸濃度をＨＰＬＣで測定し、サンプル容量で乗じた結果、透過したＧＣ量を算出する。
【００６４】
【表２】
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【００６５】
表２より、本発明の実施例３のリポソームにより送達されるとき、比較実施例２の水中油型クリームによる送達と比較して、ラット皮膚を通って透過したグリチルレチン酸量が顕著に増加することがわかる。このＧＡ透過効率データは図２に示すグラフにも引用する。
【００６６】
３．残留物測定
ドナー区画中のすべてのサンプルがラット皮膚を通って排出された、透過試験の終了時点で、先の測定方法の項に記載の方法に従って、残留物測定に向けて皮膚を取り出す。
【００６７】
【表３】
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【００６８】
表３より、比較実施例２の水中油型クリームによるグリチルレチン酸の送達と比較して、ラットの皮膚のすべての層にわたって蓄積したグリチルレチン酸量が、実施例３のリポソームにより顕著に改善された送達であることがわかる。この残留物測定データは図３に示すグラフにも引用する。
【００６９】
本明細書に開示される寸法及び値は、列挙された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきではない。それよりむしろ、特に規定がない限り、こうした各寸法は、列挙された値とその値周辺の機能的に同等の範囲との両方を意味することを意図している。例えば、「４０ミリメートル」として開示される寸法は、「約４０ミリメートル」を意味するものである。
【００７０】
相互参照されるか又は関連するすべての特許又は特許出願を含む、本願に引用されるすべての文書を、特に除外すること又は限定することを明言しない限りにおいて、その全容にわたって本願に援用するものである。いずれの文献の引用も、こうした文献が本願で開示又は特許請求されるすべての発明に対する先行技術であることを容認するものではなく、また、こうした文献が、単独で、あるいは他のすべての参照文献とのあらゆる組み合わせにおいて、こうした発明のいずれかを参照、教示、示唆又は開示していることを容認するものでもない。更に、本文書において、用語の任意の意味又は定義の範囲が、参考として組み込まれた文書中の同様の用語の任意の意味又は定義と矛盾する場合には、本文書中で用語に割り当てられる意味又は定義に準拠するものとする。
【００７１】
本発明の特定の実施形態が例示され記載されてきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を実施できることが、当業者には自明であろう。したがって、本発明の範囲内にあるそのようなすべての変更及び修正を添付の特許請求の範囲で扱うものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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