(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓ−アリル−Ｌ−システイン、その薬学的に許容可能な塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含み、該Ｓ−アリル−Ｌ−システインが、単離かつ精製または合成されたものである、ヘリコバクター・ピロリ、胃酸、または薬物によって誘発される胃腸疾患を予防または治療するための薬学的組成物であって、該薬物が、エタノール、アスピリン、インドメタシンもしくはそれらのいずれかの組み合わせであり、該胃腸疾患が、胃潰瘍および十二指腸潰瘍からなる群より選択される、薬学的組成物（ただし、該薬学的組成物がニンニク抽出物である場合を除く）。
【請求項２】
胃酸が塩酸である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記Ｓ−アリル−Ｌ−システインが、アリウム（Allium）属植物から単離かつ精製または合成されたものである、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
請求項１または２に記載の組成物を含む、経口投与用製剤である、医薬製剤。
【請求項５】
経口投与用製剤が、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤、錠剤、懸濁剤、散剤、徐放型製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤からなる群より選択される、請求項４に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する特許出願の相互参照
本願は、2009年9月23日付で韓国特許庁に出願された韓国特許出願第10-2009-0090232の恩典を主張するものであり、その開示は全体として参照により本願に組み入れられる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、抗ヘリコバクター・ピロリ活性または胃粘膜保護機能を有する組成物、胃腸疾患の予防または治療に有用な組成物及びそれを利用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
胃腸疾患の原因は多様であり、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）を始めとする胃酸、ペプシン、過労、ストレス、アルコールなどの攻撃因子；及び粘液、組織再生能、血行改善能などの防御因子；の不均衡に起因することが知られている。過労、ストレス、ヘリコバクター・ピロリ感染などによる胃炎の発生は、一般的な症状であり、これを放置すれば、慢性胃炎、胃潰瘍などに進み、まれに、胃ガンに発展する可能性がある。アルコールによる胃粘膜の病変は、刺激要因を排除することによって、数日内に正常に回復したりもするが、はなはだしい場合は、胃腸管出血、胃穿孔などが発生することもある（非特許文献１）。シメチジン、ラニチジン、ファモチジン、オメプラゾールやビスマスなど多様な胃腸疾患治療剤が開発されて使われているが、それらは、投薬中止時に再発率が高いという短所があるため、新しい薬物の開発が必要である。
【０００４】
ヘリコバクター・ピロリは、グラム陰性菌であり、主にヒトの胃粘膜や粘液で発見され、急性・慢性胃炎、萎縮性胃炎、胃潰瘍、胃ガン、十二指腸潰瘍などのほとんどの胃腸管関連疾病に致命的な原因菌であると明らかにされた（非特許文献２）。それだけではなく、消化器系疾患以外にも、肝性脳症（hepatic encephalopathy）、動脈硬化症、肝胆道系疾患などの疾病誘発にあたり、ヘリコバクター・ピロリが危険因子として関与する可能性があるという研究が報告されている（非特許文献３、非特許文献４）。米国疾病統制センター（ＣＤＣ）は、ヘリコバクター・ピロリ菌に感染すると、慢性疲労、じんましん、偏頭痛、低身長、不妊、食品アレルギーなどが現れることがあると明らかにし、かような症状を、「異常なヘリコバクター・ピロリ症候群（strange Helicobacter syndrome）」と命名した。ヘリコバクター・ピロリの除菌には、抗生物質が主に使われているが、完全撲滅後にも再感染が起こりやすく、完全に除菌するためには、多量の薬剤を長期間使用せねばならないために、抗生物質治療の副作用や耐性菌増加の問題などがあり、抗生物質ではない新たな代案が必要である。
【０００５】
最近、ヘリコバクター・ピロリによる疾患に、新規かつ安全な治療方法の一つとして、食品中の菌を抑制することができる物質を探索する研究が進められている。プロバイオティクスを利用した乳酸菌発酵乳、ヘリコバクター・ピロリに対して中和効果抗体を含んだ卵黄抗体（ＩｇＹ）、ワイン及び緑茶に含まれたカテキン（catechin）などが有効な物質として予測されている（非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。
【０００６】
一方、ニンニクは、アリウム（Allium）属の一種であり、抗細菌作用、抗真菌作用、抗酸化作用及び抗ガン作用があるということが明らかになり（非特許文献８）、血栓症（thrombosis）、炎症（inflammation）そして細胞の酸化的ストレス（oxidative stress）を防止することが知られ（非特許文献９）、注目される生薬素材である。ニンニクは、非常に多様な成分を含むが、それらのうちには、抗真菌効果、抗ガン効果を有するエルボシド（eruboside）Ｂのようなステロイドサポニン（非特許文献１０）；コレステロール低下効果を有するグリコシド分画（非特許文献１１）；血小板凝集阻害効果を有するβ−クロロゲニン（非特許文献１２）などの非硫黄化合物（nonsulfur compound）；及びさまざまな種類の有機硫黄化合物（organosulfur compound）などが含まれる。アリウム属植物に含まれる有機硫黄化合物としては、Ｓ−アリル−Ｌ−システインスルホキシド（alliin：Ｓ−allyl−Ｌ−cysteine sulfoxide）、ジアリルジスルフィド（ＤＡＤＳ：diallyl disulfide）、ジアリルスルフィド（ＤＡＳ：diallyl sulfide）などの脂溶性有機硫黄化合物；及びＳ−アリル−Ｌ−システイン（ＳＡＣ：Ｓ−allyl−Ｌ−cysteine）、Ｓ−アリルメルカプトシステイン（ＳＡＭＣ：Ｓ−allylmercaptocysteine；ＳＡＭＣ）などの水溶性有機硫黄化合物などがある。
【０００７】
成熟したニンニクの有効成分のうち一つであるＳ−アリル−Ｌ−システイン（ＳＡＣ）は、抗酸化剤の役割を有することが知られ、かような抗酸化活性でもって、動脈硬化にも抑制効果を示し、いくつかのガン細胞株に対しても抗ガン活性（非特許文献１３）を示すなど、多様な効能が報告されている。しかし、Ｓ−アリル−Ｌ−システインの胃腸疾患治療効果や抗ヘリコバクター・ピロリ活性については報告されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Taeyoung Oh, et al., J. Applied Pharmacology, Vol. 5, pp202-210, 1997
【非特許文献２】Crowe, Curr Opin Gastrenterol., 21(1), pp32-38, 2005
【非特許文献３】Karahalil, et al., Curr Drug Saf, 2, pp43-46, 2007
【非特許文献４】Scragg, et al., J. Epidemiol Community Health, 50(5), pp578-579, 1996
【非特許文献５】McMahon, et al., Aliment Pharmacol Ther 23(8), pp1215-1223, 2006
【非特許文献６】Sachdeva, et al., Eur J Gastroenterol Hepatol, 21(1), pp45-53, 2009
【非特許文献７】Shin, et al., J Med Microbiol., 53(Pt 1), pp31-34, 2004
【非特許文献８】Ankri, et al., Microbes Infect. 1(2), pp125-129, 1999
【非特許文献９】Sener, et al., Mol Nutr Food Res., 51(11), pp1345-1352, 2007
【非特許文献１０】Matsuura H, et al., Chem Pharm Bull (Tokyo), 36: 3659-3663, 1988
【非特許文献１１】Slowing, et al., J Nutr., 131, pp994S-9S, 2001
【非特許文献１２】Rahman K, et al., J. Nutr. 2006
【非特許文献１３】Proceedings of the American Association for Cancer Research, 30, p181, 1989
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ヘリコバクター・ピロリの除菌に、抗生物質が主に使われているが、完全撲滅後にも、再感染が起こりやすく、完全に除菌するためには、多量の薬剤を長期間使用しなければならないために、抗生物質治療の副作用や耐性菌の増加の問題などがあり、抗生物質ではない新たな代案が必要である。このために、本発明は抗ヘリコバクター・ピロリ活性と、胃粘膜保護機能とを有する薬物を提供することを解決課題とする。また、本発明は、胃腸疾患の予防、緩和または治療のための安全かつ新規な組成物を提供することを解決課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記課題を解決するために、本発明は、アリウム（Allium）属植物の水溶性有機硫黄化合物であるＳ−アリル−Ｌ−システイン（ＳＡＣ：Ｓ−allyl−Ｌ−cysteine）を有効成分として含み、かつ抗ヘリコバクター・ピロリ活性または胃粘膜保護機能を有する組成物を提供する。また本発明は、Ｓ−アリル−Ｌ−システインを有効成分として含む胃腸疾患の予防用、緩和用、治療用の組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のＳ−アリル−Ｌ−システインを有効成分として含む組成物は、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染を抑制し、ヘリコバクター・ピロリによる胃病変を保護する効果を有する。従って、本発明の組成物は、抗ヘリコバクター・ピロリ剤として使用可能である。
【００１２】
また、発明のＳ−アリル−Ｌ−システインを有効成分として含む組成物は、塩酸−エタノール、アスピリンまたはインドメタシンによって誘発された胃粘膜病変を予防し、かつ回復させる効果を示すので、胃腸疾患の予防用途、緩和用途または治療用途として有用に使うことができる。本発明のＳ−アリル−Ｌ−システインを有効成分として含む組成物は、薬学的組成物、食品組成物として使用可能である。
[本発明1001]
Ｓ−アリル−Ｌ−システイン、その薬学的に許容可能な塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含み、かつ抗ヘリコバクター・ピロリ活性を有する、薬学的組成物。
[本発明1002]
抗ヘリコバクター・ピロリ活性が、肝性脳症、動脈硬化症、肝胆道系疾患、じんましん、偏頭痛、低身長、不妊、食品アレルギー、慢性胃炎、急性胃炎、胃潰瘍、胃ガン、胃腸管出血、逆流性食道炎、十二指腸炎、または十二指腸潰瘍を予防または治療する活性を含む、本発明1001の薬学的組成物。
[本発明1003]
Ｓ−アリル−Ｌ−システイン、その薬学的に許容可能な塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含む、胃腸疾患の予防用または治療用の薬学的組成物。
[本発明1004]
前記胃腸疾患が、慢性胃炎、急性胃炎、胃潰瘍、胃ガン、胃腸管出血、逆流性食道炎、十二指腸炎、及び十二指腸潰瘍からなる群より選択される、本発明1003の薬学的組成物。
[本発明1005]
Ｓ−アリル−Ｌ−システイン、その薬学的に許容可能な塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含み、かつ胃粘膜保護機能を有する、薬学的組成物。
[本発明1006]
前記Ｓ−アリル−Ｌ−システインが、アリウム（Allium）属植物から単離され、かつ精製、合成、または発酵によって調製されたものである、本発明1001ないし本発明1005のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1007]
本発明1001ないし本発明1005のいずれかの組成物を含む、経口投与用製剤、粘膜適用製剤、注射剤、吸入剤及び外用剤からなる群より選択される、医薬製剤。
[本発明1008]
経口投与用製剤が、硬質カプセル剤、軟質カプセル剤、錠剤、懸濁剤、散剤、徐放型製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、エキス剤、液剤、芳香水剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、流動エキス剤、浸煎剤、チンキ剤、酒精剤、及び浸出油剤からなる群より選択される、本発明1007の医薬製剤。
[本発明1009]
Ｓ−アリル−Ｌ−システイン、その塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含み、かつ抗ヘリコバクター・ピロリ活性または胃粘膜保護機能を有する、食品組成物。
[本発明1010]
Ｓ−アリル−Ｌ−システイン、その塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物を有効成分として含む、胃腸疾患の予防用、緩和用または治療用の食品組成物。
[本発明1011]
前記胃腸疾患が、慢性胃炎、急性胃炎、胃潰瘍、胃ガン、胃腸管出血、逆流性食道炎、十二指腸炎、及び十二指腸潰瘍からなる群より選択される、本発明1010の食品組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
本発明の上記または他の特徴および利点は、以下である添付の図面を参照して例示的態様を詳細に説明することでより明らかになるだろう。
【００１４】
【図１】全試験期間にわたる対照群および実験群の動物の平均体重変化を比較したグラフであり、値はすべて、平均値で表示されている。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、ＳＡＣが、ヘリコバクター・ピロリ感染後に測定した各群の平均血清ＩｇＧ抗体生成に及ぼす影響を示したグラフであり、値はすべて、平均値と標準誤差とで表示されており、＊＊：Ｐ＜０．０１、＊：Ｐ＜０．０５である。
【図３】１０週間の全試験期間の間に測定した各群の平均血清ＴＮＦ−αに及ぼす影響を示したグラフであり、値はすべて、平均値と標準誤差とで表示されている。
【図４】実験群間での組織病理学的変化を比較したイメージである。
【図５】実験群間での組織病理学的変化及び好酸球の数を比較した図面であり、値はすべて、平均値と標準誤差とで表示されており、＊＊：Ｐ＜０．０１、＊：Ｐ＜０．０５である。
【図６】各群間での組織病理学的変化を比較した図面であり、値はすべて、平均値と標準誤差とで表示されている。
【図７】実験群の血清ＧＯＴレベルを示したグラフであり、値はすべて、平均値と標準誤差とで表示されている。
【図８】実験群の血清ＧＰＴレベルを示したグラフであり、値はすべて、平均値と標準誤差とで表示されている。
【図９】実験群の血清Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤレベルを示したグラフであり、値はすべて、平均値と標準偏差で表示されている。
【図１０】塩酸−エタノールにより誘発されたラットの胃病変の長さに対するＳＡＣの効果を示したグラフであり、＊＊は、ビヒクル対照群（Ｇ１）について、ｐ＜０．０１で有意に違いがあることを示しており、Ｇ１：ビヒクル対照群（蒸留水）、Ｇ２：ＳＡＣ １００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ３：ＳＡＣ ２００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ４：ＳＡＣ ４００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ５：陽性対照群（有効成分としてスチレン（登録商標）５５．６ｍｇ／ｋｇ）である。
【図１１】塩酸−エタノールにより誘発されたラットの胃病変に対する阻害率を示したグラフであり、＊＊は、ビヒクル対照群（Ｇ１）について、ｐ＜０．０１で有意に違いがあることを示しており、Ｇ１：ビヒクル対照群（蒸留水）、Ｇ２：ＳＡＣ １００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ３：ＳＡＣ ２００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ４：ＳＡＣ ４００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ５：陽性対照群（有効成分としてスチレン（登録商標）５５．６ｍｇ／ｋｇ）である。
【図１２】塩酸−エタノール誘発胃病変モデルでの、実験群ラットの胃組織のイメージであり、Ｇ１：ビヒクル対照群（蒸留水）、Ｇ２：ＳＡＣ １００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ３：ＳＡＣ ２００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ４：ＳＡＣ ４００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ５：陽性対照群（有効成分としてスチレン（登録商標）５５．６ｍｇ／ｋｇ）である。
【図１３】アスピリンにより誘発されたラットの胃病変面積に対するＳＡＣの効果を示したグラフであり、＊＊＊は、ビヒクル対照群（Ｇ１）について、ｐ＜０．００１で有意に違いがあることを示しており、Ｇ１：ビヒクル対照群（蒸留水）、Ｇ２：ＳＡＣ １００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ３：ＳＡＣ ２００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ４：ＳＡＣ ４００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ５：陽性対照群（有効成分としてスチレン（登録商標）５５．６ｍｇ／ｋｇ）である。
【図１４】アスピリンにより誘発されたラットの胃病変に対する阻害率を示したグラフである。
【図１５】アスピリン誘発胃病変モデルでの実験群ラットの胃組織のイメージである。
【図１６】インドメタシンにより誘発されたラットの胃病変の長さに対するＳＡＣの効果を示したグラフであり、＊は、ビヒクル対照群（Ｇ１）について、ｐ＜０．０５で有意に違いがあることを示しており、Ｇ１：ビヒクル対照群（蒸留水）、Ｇ２：ＳＡＣ １００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ３：ＳＡＣ ２００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ４：ＳＡＣ ４００ｍｇ／ｋｇ、Ｇ５：陽性対照群（有効成分としてスチレン（登録商標）５５．６ｍｇ／ｋｇ）である。
【図１７】インドメタシンにより誘発されたラットの胃病変に対する阻害率を示したグラフである。
【図１８】インドメタシン誘発胃病変モデルでの実験群ラットの胃組織のイメージである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
以下、本発明の例示的態様を示す添付の図面を参照して、本願発明をより詳細に説明する。
【００１６】
本発明のＳ−アリル−Ｌ−システイン（ＳＡＣ：Ｓ-allyl-Ｌ-cysteine）を含む組成物の特徴は、強力な抗ヘリコバクター・ピロリ活性があり、胃粘膜保護効果にすぐれるということである。
【００１７】
本発明の発明者らは、マウス実験を介して、ヘリコバクター・ピロリを投与した陽性対照群（positive control group）では、ヘリコバクター・ピロリを投与していない陰性対照群（negative control group）に比べて、ヘリコバクター・ピロリに対する抗体力価（antibody titer）（抗Ｈ．Pylori ＩｇＧ）が有意に上昇するが（ｐ＜０．０１）、ＳＡＣとヘリコバクター・ピロリとを共に投与した実験群では、抗ヘリコバクター・ピロリＩｇＧが、陽性対照群に比べて、有意な減少を示すということを確認した（図２）。これは、ＳＡＣが、ヘリコバクター・ピロリのマウスへの感染を抑制する効果があるということを意味する。また、本発明の発明者らは、ヘリコバクター・ピロリを投与した陽性対照群マウスで増加したＴ細胞関連炎症因子であるＴＮＦ−αの量が、ＳＡＣとヘリコバクター・ピロリとを共に投与すると、陽性対照群に比べて減少するということを確認した（図３）。これから、ＳＡＣが、ヘリコバクター・ピロリ感染マウスで誘発される炎症を抑制するということが分かる。
【００１８】
ヘリコバクター・ピロリ感染による胃病変に及ぼす影響に対するＳＡＣの効果を観察するために、マウスの胃を組織切片にして、Ｈ＆Ｅ（hematoxylin and eosin）染色を実施して観察した結果、ヘリコバクター・ピロリを投与した群で、胃粘膜細胞の変性（denaturation）、及び胃粘膜固有層での好酸球の浸潤が観察され（図４）、胃粘膜上皮方向に浸潤していく好酸球の数が、非感染群の陰性対照群に比べて、ヘリコバクター・ピロリ感染群である陽性対照群で増加し（ｐ＜０．０１）、一方、陽性対照群に比べて、ＳＡＣを投与した群では有意に減少するということが確認された（ｐ＜０．０５）（図５）。細胞の核が分裂する有糸分裂像（mitotic figure）の個数も、陰性対照群に比べて、ヘリコバクター・ピロリに感染した群で増加したが、ＳＡＣを共に投与した群では減少する傾向を示し（図６）、ヘリコバクター・ピロリによる胃病変が、ＳＡＣによって抑制されたり回復するということが分かる。
【００１９】
ＳＡＣが実験動物の血清生化学的数値に及ぼす影響を分析した結果は、ＧＯＴ（グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ）とＧＰＴ（グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）の測定結果で、非感染群である陰性対照群で、最も低い数値を示し、ＳＡＣを供給した群は、陽性対照群より低いＧＯＴおよびＧＰＴ数値を示した（図７及び図８）。
【００２０】
ＳＡＣが酸化的病変に及ぼす影響を観察するために、血清中のＣｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ（銅-亜鉛含有スーパーオキシドジスムターゼ）数値を測定した結果、ヘリコバクター・ピロリ感染群で、非感染群である陰性対照群に比べて増加する結果が示された。しかし、単独でヘリコバクター・ピロリのみ投与した陽性対照群に比べて、ＳＡＣを同時に投与した群ではさらに上昇することが示され（図９）、ヘリコバクター・ピロリ感染による防御メカニズムによって生産されるＳＯＤの発現を、ＳＡＣが増加させると確認された。
【００２１】
また、本発明の発明者らは、薬物投与によってラットに誘発された胃粘膜病変に対して、ＳＡＣが有意な胃病変抑制効果を示すということを確認した。塩酸−エタノール投与によりラットに誘発された胃病変に対して、ＳＡＣ投与群は、ビヒクルのみ投与した対照群と比較して、有意な病変減少効果（図１０、図１２）、及び最大約６６％の胃病変阻害率（％）を示した（図１１）。アスピリン投与（図１３〜図１５）またはインドメタシン投与（図１６〜図１８）により誘発された胃病変に対しても、ＳＡＣ投与群は、陰性対照群と比較して、有意な病変減少効果を示した。ＳＡＣは、アスピリン誘発モデルの場合、最大約８５％、インドメタシン誘発モデルの場合、最大約９４％の胃病変阻害率を示し、陽性対照群に使われたスチレン（登録商標）（Stillen（登録商標））と同等であるか、さらに優秀な胃粘膜保護効果を有すると確認された。前記実験結果は、ＳＡＣが多様な原因によって発生した胃病変に対して、幅広い胃粘膜保護活性を有するということを示している。
【００２２】
前記のような実験結果を基にして、本発明は、ＳＡＣを有効成分として含み、さらに薬学的に許容される担体を含む、抗ヘリコバクター・ピロリ活性を有する薬学的組成物を提供する。
【００２３】
本発明は、ＳＡＣを有効成分として含み、さらに薬学的に許容される担体を含む、胃粘膜保護機能を有する薬学的組成物を提供する。
【００２４】
また本発明は、ＳＡＣを有効成分として含み、かつ抗ヘリコバクター・ピロリ活性または胃粘膜保護機能を有する食品組成物を提供する。
【００２５】
さらに本発明は、ＳＡＣを有効成分として含む組成物を使用してヘリコバクター・ピロリ菌の感染を抑制し、ヘリコバクター・ピロリによる胃病変を抑制する方法を提供する。
【００２６】
本発明は、ＳＡＣを有効成分として含み、さらに薬学的に許容される担体を含む、胃腸疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００２７】
また本発明は、ＳＡＣを有効成分として含む、胃腸疾患の予防用または緩和用の食品組成物を提供する。
【００２８】
本発明の範囲には、ＳＡＣと共に、他の胃腸疾患治療剤または抗ヘリコバクター・ピロリ剤をさらに含む組成物を含む。
【００２９】
さらに本発明は、ＳＡＣを有効成分として含みかつ薬学的に許容される担体を含む組成物を使用し、胃腸疾患の予防または治療を行う方法を提供する。
【００３０】
ヘリコバクター・ピロリ菌や胃腸疾患は、ヒトだけではなく、多くの他の動物でも問題になるので、本発明はまた、ヒト以外の他の動物のための組成物を提供する。
【００３１】
本発明の組成物が使われる胃腸疾患としては、慢性胃炎、急性胃炎、胃潰瘍、胃ガン、胃腸管出血、逆流性食道炎（ＧＥＲＤ）、十二指腸炎、及び十二指腸潰瘍を含み、これらに制限されるものではない。
【００３２】
本発明の組成物による抗ヘリコバクター・ピロリ効果は、肝性脳症（hepatic encephalopathy）、動脈硬化症、肝胆道系疾患、じんましん、偏頭痛、低身長、不妊、食品アレルギー、慢性胃炎、急性胃炎、胃潰瘍、胃ガン、胃腸管出血、逆流性食道炎（ＧＥＲＤ）、十二指腸炎、十二指腸潰瘍などの予防または治療に使われるが、これらに制限されるものではない。
【００３３】
本発明の組成物において、有効成分としては、ＳＡＣの薬学的または食品学的に許容可能な塩を利用しても良い。かような塩としては、酸付加塩や第４級アンモニウム塩などを挙げることができる。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、ブロム化水素酸塩、ヨード化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩のような無機酸塩；シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩のような有機酸塩を挙げることができる。また、第４級アンモニウム塩としては、例えば、ヨウ化メチル、臭化メチル、ヨウ化エチル、臭化エチルのような低級アルキルハロゲン化物（short-chain alkyl halogenide）；メチルメタンスルホネート、エチルメタンスルホネートのような低級アルキルスルホネート；メチル−ｐ−トルエンスルホネートなどの低級アルキルアリールスルホネートなどの第４級アンモニウム塩を挙げることができる。
【００３４】
また、ＳＡＣまたはその薬学的または食品学的に許容可能な塩は、溶媒和物または水和物として存在するものもあるので、本発明の治療剤の有効成分としては、それらの溶媒和物または水和物を利用してもよい。
【００３５】
本発明に使われるＳＡＣは、ヨーロッパ公開特許公報ＥＰ０４２９０８０Ａ１に記載された方法、それ以外の合成、発酵などこの技術分野に公知の多様な方法で、ニンニク（garlic）、巨大ニンニク（elephant garlic）、玉ネギ（onion）、ネギ（scallion）などのアリウム（Allium）属植物から製造可能である。
【００３６】
本発明の組成物の有効成分であるＳＡＣ、その薬学的または食品学的に許容可能な塩、またはそれらの溶媒和物もしくは水和物は、それら自体を患者に投与してもよいが、一般的には、それらの有効成分の１種または２種以上を含む組成物を調製して投与したり、他の有用な抗ヘリコバクター・ピロリ剤や胃腸疾患治療薬物と混合し、複合製剤形態に剤形化して投与することができる。
【００３７】
また本発明は、前記薬学的組成物が、経口投与用製剤、粘膜適用製剤、注射剤、吸入剤、外用剤として剤形化される薬学的組成物を提供し、これらに制限されるものではない。前記経口投与用製剤は、硬質／軟質カプセル剤、錠剤、懸濁剤、シロップ剤、散剤、徐放型製剤、腸溶性製剤、顆粒剤、油糖剤、細粒剤、丸剤、エキス剤、液剤、芳香水剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、流動エキス剤、浸煎剤、チンキ剤、酒精剤、浸出油剤などを含むが、これらに制限されるものではない。粘膜適用剤としては、トローチ剤、口腔錠、舌下錠、坐剤、鼻腔噴霧剤を含むことができるが、これらに制限されるものではない。注射剤としては、皮下注射、筋肉注射、静脈注射、移植錠などが含まれ、これらに制限されるものではない。外用剤としては、経鼻剤、点眼剤、点耳剤、眼軟膏剤、ペースト剤、パップ剤、リニメント剤、ローション剤、塗布剤、散布剤、外用液剤などが含まれ、これらに制限されるものではない。
【００３８】
本発明の製剤には、一つまたはそれ以上の活性成分以外に、一つまたはそれ以上の不活性である一般的な担体、例えば、澱粉、ラクトース、カルボキシメチルセルロース、カオリンなどの賦形剤；水、ゼラチン、アルコール、グルコース、アラビアゴム、トラガカントゴムなどの結合剤；澱粉、デキストリン、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤（disintegrant）；タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、流動パラフィンなどの滑沢剤；溶解補助剤のような追加の添加剤成分が含まれてもよい。
【００３９】
本発明による用途のためのＳＡＣの１日投与量は、投与しようとする対象の疾病進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症などの多様な要因によって異なるが、一般的には、成人基準で、１ｍｇないし１０ｇ、望ましくは１００ｍｇないし４ｇ、さらに望ましくは１日２００〜２，０００ｍｇを投与することができる。しかし、重症の患者や合併症がある場合には、治療効率性を増進させるために、本発明の薬物を前記範囲を超える大用量まで増量して投与することができる。１日投与量は、１回１〜２回または１〜３回に分けて投与することができる。例えば、ＳＡＣ ２００ないし５００ｍｇを含有する投与単位１〜２個を、１日１回ないし２回経口投与可能であり、状況によって、適切に調節可能である。
【００４０】
本発明の組成物が食品組成物である場合、有効成分の混合量は、その使用目的（予防的処置または治療的処置、健康補助）に適するように決定することができる。一般的には、ＳＡＣは、食品または飲料などの製造時に、原料に対して０．０００１ないし９０重量％、望ましくは０．１ないし５０重量％の量で添加されてもよい。健康及び衛生を目的としたり、健康調節を目的とする長期間の摂取の場合には、前記量は、前記範囲以下でもよいが、有効成分は安全性面で何らの問題もないので、それ以上の量でも使用可能であることは自明である。本発明の食品組成物を使用する食品としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含んだ酪農製品、各種スープ、飲料水、茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などがあり、これらに制限されるものではない。本発明は、下記実験例及び実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明はそれらによって制限されるものではない。
【実施例】
【００４１】
実験例
Ｉ．ヘリコバクター・ピロリ感染動物におけるＳＡＣの効果
実験材料
ＳＡＣ（Ｓ−アリル−Ｌ−システイン）は、ＴＣＩ Chemical Ｃｏ．（Tokyo、Japan）から購入した。ヘリコバクター・ピロリは、ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection） ４３５０４（ｃａｇＡ＋，ｖａｃＡ ｓ１−ｍｌタイプ）を使用し、培養は、Mueller Hinton-Agar brothで３７℃で４８時間、５％ＣＯ２微好気性条件下で行い、感染濃度は、１Ｘ１０９ＣＦＵ／ｍｌであった。
【００４２】
実験動物
特定病原体除去（ＳＰＦ）オス８週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用し、マウスは、慶北大学校獣医科大学病理学教室動物室で体重を測定した後、全て４群に分け、各群にマウスの体重が平均になるように適切に分配して飼育した。本試験に使われたマウスは、温度２２±３℃、相対湿度５０±１０％、照明時間１２時間（０８：００点灯〜２０：００消灯）に設定された自動温湿度調節装置が設置された慶北大学校獣医科大学病理学教室の動物室で順化及び飼育された。全試験期間の間、試験に影響を及ぼすと思料される飼育環境の変動は、認知されなかった。飼料は、実験動物用固形飼料（PMI Nutrition International, 505 North 4th Street Richmond, In 47374, USA）を自由摂取させ、水は、上水道水を濾過した後、給水瓶を利用して自由摂取させた。
【００４３】
試験群の構成及び投与
８週齢、オス、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを陽性対照群（ヘリコバクター・ピロリのみ投与した群；ＰＣ）、陰性対照群（生理食塩水投与群；ＮＣ）、実験群１（ヘリコバクター・ピロリ及びＳＡＣ ２００ｍｇ／ｋｇ投与群；ＳＡＣ １）、実験群２（ヘリコバクター・ピロリ及びＳＡＣ ４００ｍｇ／ｋｇ投与群；ＳＡＣ ２）の４群に区分した。各群は、１０匹のマウスで構成された。実験に使われた白色粉末状のＳＡＣは、上水道水に、それぞれ２０ｍｇ／ｍＬと４０ｍｇ／ｍＬとの濃度に希釈し、各実験群１と実験群２とのマウスに体重別ｇ当たり１０μｌを基準に、週３回経口投与法で供給して１０週間投与した。全試験期間の間、飲み水は自由摂取させた。感染物質であるヘリコバクター・ピロリは、１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの濃度で生理食塩水により集められ、マウス１匹当たり０．２ｍＬずつ経口投与を行い、ＳＡＣ投与開始後の２週間後から８週間実施した。感染前に８時間の絶食状態が維持され、ヘリコバクター・ピロリ投与１０分前、絶食で酸性化された胃内部を中和させるために、０．２Ｍ重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）を、マウス１匹当たり０．１５ｍＬずつ投与した。陰性対照群には、感染物質の代わりに、生理食塩水だけを同一用量で投与した。すべての群に、一般飼料が供給された。１０週間の実験期間後、すべての実験動物の剖検を実施し、病理組織学的検査のために、各実験動物ごとに、血液と臓器のサンプルを採取した。実験スケジュールは、次の通りであった。
0005904943.tif 000002
【００４４】
統計学的方法
得られた資料についての統計学的有意性検定は、独立標本ｔ検定法で実施した。統計分析は、統計プログラムであるＳＰＳＳ １４．ＯＫを利用して分析し、有意確率ｐが０．０５未満である場合、有意性があると判定した。
【００４５】
＜実験例１＞試験物質が体重変化に及ぼす影響
オスＣ５７ＢＬ／６マウスヘリコバクター・ピロリ感染モデルで、１０週間の全試験期間の間、１週間に３回ずつ体重を測定することによって、体重変化を観察した。ヘリコバクター・ピロリ感染時点と、感染を確認するために中間血清採取を行った時点で若干の減少を示したことを除いては、全試験群で、徐々に増加することを観察することができた（図１）。非感染群である陰性対照群は、３１．３％の体重増加率を示し、陽性対照群は２８．９％、ＳＡＣ １は２６．９％、ＳＡＣ ２は２８．７％の体重増加率を示した。陽性対照群では、陰性対照群に比べて、２．４％の減少率を示し、ＳＡＣ １群は、陽性対照群に比べて２％が減少し、ＳＡＣ ２群は、０．２％ほど減少し、ＳＡＣ ２群は、ＳＡＣ １群に比べて、１．８％が増加したが、有意性があるものではないので、ヘリコバクター・ピロリ感染と実験物質とが、実験期間の体重変化に有意な影響を及ぼさないと思料される。
【００４６】
＜実験例２＞血清抗ヘリコバクター・ピロリ抗体（anti−Ｈ．Pylori ＩｇＧ）形成能に対するＳＡＣの効果
方法
血清抗ヘリコバクター・ピロリ抗体形成能に対するＳＡＣの効果を確認するために、酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）を使用した。マウスに、経口感染物質であるＨ．ピロリ ＡＴＣＣ ４３５０４と、ヘリコバクター・ピロリが特異的に生産する組み換え毒素ＶａｃＡとを抗原として、それぞれ１μｇ／ウェル及び１０ｎｇ／ウェルの濃度で、分析用９６ウェル・マイクロプレートに入れ、４℃に維持してコーティングされるようにした。上澄液を捨てた後、他の不要な反応を遮断するために、ブロッキングバッファー（１％スキムミルク）を入れた後、３７℃で１時間反応させ、ここに各実験群のマウス血清を１０μｌ入れ、３７℃で２時間反応させた。Tween２０の入っているトリス緩衝溶液で洗浄過程を経たマイクロプレートに、ＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）が結合された抗マウスＩｇＧである二次抗体を入れ、３７℃で１時間維持した。その後、同じ洗浄過程を経た後、発色試薬である３、３'，５，５'−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）とＨ２Ｏ２とを同量混合させて１００μｌを入れた後、光を遮断し、３０分以内に発色を観察した。反応を止めるための０．２Ｍ硫酸を１００μｌ入れて反応を終了させた後、それらを４５０ｎｍで吸光度を測定した。
【００４７】
結果
血清中抗Ｈ．ピロリＩｇＧ抗体値を測定した結果、ヘリコバクター・ピロリを投与した陽性対照群、ＳＡＣ １及びＳＡＣ ２では、感染期間の間、ヘリコバクター・ピロリに対する抗体（抗Ｈ．ピロリＩｇＧ）が生産されるということを確認することができ、ヘリコバクター・ピロリを投与していない陰性対照群では、生成されないということを確認することができた（図２）。一方、ＳＡＣを供給した実験群では、抗Ｈ．ピロリＩｇＧ抗体力価（antibody titer）が陽性対照群に比べて減少したが、ＳＡＣ ２群は、陽性対照群及びＳＡＣ １群と比較して、抗体力価の著しい減少を示し、ＳＡＣ濃度依存的に、実験群のヘリコバクター・ピロリに対する抗体生成が抑制された（図２Ａ）。また、ヘリコバクター・ピロリの毒素型蛋白質であるＶａｃＡに対する抗体（抗ｓ１ｍ１ ＶａｃＡ ＩｇＧ）形成も、抗Ｈ．ピロリＩｇＧの減少と同じ様相を示した（図２Ｂ）。それにより、ＳＡＣが濃度依存的に、ヘリコバクター・ピロリのマウスへの感染を抑制させるということが分かった。
【００４８】
＜実験例３＞血清ＴＮＦ−αに対するＳＡＣの効果
方法
炎症因子である血清のＴＮＦ−αに及ぼすＳＡＣの影響を観察するために、市販のマウスＴＮＦ−α抗体分析キットMicroplate（R&D systems Inc., USA）を利用し、キットに付属された実験方法によって、各実験動物の血清内に存在するＴＮＦ−αの濃度を測定した。
【００４９】
結果
ヘリコバクター・ピロリを投与したすべての群で、非感染群である陰性対照群に比べて、ＴＮＦ−α値が上昇することが観察され（ｐ＜０．１）、ＳＡＣを供給したＳＡＣ １、ＳＡＣ ２群では、陽性対照群に比べて、その値が低下する傾向を示した（ｐ＜０．０９）（図３）。従って、ＳＡＣが、ヘリコバクター・ピロリ感染マウスで、ヘリコバクター・ピロリによって誘発される炎症を抑制させると思料された。
【００５０】
＜実験例４＞ヘリコバクター・ピロリによる胃組織学的変化に対するＳＡＣの効果
方法
オスＣ５７ＢＬ／６マウスヘリコバクター・ピロリ感染モデルで、感染８週間の試験期間の間、進行する病変過程中、胃に現れる組織病理学的変化を観察するために、胃サンプルを１０％ホルマリンで固定した後、パラフィンブロックを形成した後、４μｍ厚に組織切片を作り、Ｈ＆Ｅ（hematoxylin-eosin）染色法を実施して光学顕微鏡で観察した。群間の細胞病変程度、浸潤した好酸球の数、胃全般組織に現れる有糸分裂像の数など、すべての病理学的観察は二重検証を実施した。また、好酸球の数は、食道−胃連接部を確認し、胃憤門部を開始点として、胃小窩（gastric pit）及び粘膜固有層の胃陰窩（gastric crypt）の３つを基準とし、有糸分裂像の数は、憤門部を開始点として、幽門部確認地点前までの全体胃前庭部を確認し、個体当たり２ヵ所を４００倍倍率で算定した後、各群間の平均値を求めて比較した。
【００５１】
結果
Ｈ＆Ｅ染色の結果、群間の好酸球の浸潤および有糸分裂像の数の差を観察することができた。胃粘膜固有層に多数存在し、胃粘膜上皮側に浸潤していく好酸球の様子を観察でき（図４）、その数を算定した結果、非感染群の陰性対照群に比べて、ヘリコバクター・ピロリ感染群で、好酸球の数が有意に増加することが分かった（ｐ＜０．０１）（図５Ｂ）。一方、陽性対照群に比べて、ＳＡＣ １、ＳＡＣ ２群では、その数が減少するという結果を観察でき、特に、ＳＡＣ １群では、有意な差を示した（ｐ＜０．０５）（図５Ｂ）。細胞の核が分裂する有糸分裂像の個数もまた、陰性対照群に比べて、ヘリコバクター・ピロリ感染群で増加する結果を観察できた。陽性対照群、ＳＡＣ １及びＳＡＣ ２群間の有意な差は観察することができなかったが、ＳＡＣ ２で、多少減少すると示された。従って、ヘリコバクター・ピロリ感染による胃の好酸球の浸潤増加は、先行実験及びさまざまな研究結果によって観察されていたが、ＳＡＣ供給がこれを減少させたということは、ヘリコバクター・ピロリによる胃病変に対するＳＡＣの保護作用があることを意味する。
【００５２】
＜実験例５＞ＳＡＣが、ヘリコバクター・ピロリ感染を誘発したマウスモデルの血清指標に及ぼす影響
一般的病変に関連する指標である血清ＧＯＴ（グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ）の分析結果、ヘリコバクター・ピロリを投与した陽性対照群が、全群で最も高いＧＯＴ数値を示し、ＳＡＣ １、ＳＡＣ ２群は、陽性対照群と比較して有意差が観察されなかったが、２つの群いずれも減少する様相を示した（ｐ＜０．０８）（図７）。
【００５３】
肝病変に関連する指標である血清ＧＰＴ（グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）の分析結果、ヘリコバクター・ピロリを投与した陽性対照群が、全群で最も高いＧＰＴ数値を示し、ＳＡＣ １、ＳＡＣ ２群は、陽性対照群と比較して有意差が観察されなかったが、２つの群いずれも減少するという様相を示した（図８）。
【００５４】
＜実験例６＞血清Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ数値測定
方法
オスＣ５７ＢＬ／６マウスヘリコバクター・ピロリ感染モデルで、１０週間の全試験期間の間、試験物質が血清の抗酸化酵素であるＣｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ（銅-亜鉛含有スーパーオキシドジスムターゼ）に及ぼす影響を観察するために、Superoxide Dismutase Activity Assay kit（BioVision, Mountain View, CA, USA）を利用して測定した。血清２０μｌと、基質であるＷＳＴ希釈標準溶液２００μｌを入れ、ここに酵素希釈標準溶液２０μｌを入れ、３７℃で２０分反応させた。４５０ｎｍで吸光度を測定した。血清に対する対照反応を検討するために、血清の代わりに蒸留水２０μｌを入れて同一反応を行い、ＳＯＤ活性（阻害率％）を計算し、ＳＯＤの活性度を測定した。
【００５５】
結果
ＳＡＣを投与した群では、陽性対照群に比べて増加したＣｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ数値を示したが、ＳＡＣ １群は、陽性対照群に比べて約４％、ＳＡＣ ２群は、約３％の増加数値を示した。ＳＡＣ投与群の間で、ＳＡＣ ２群では、若干の減少を観察した（図９）。従って、ＳＡＣは、ヘリコバクター・ピロリ感染による防御メカニズムによって生産されたＳＯＤの発現をさらに促進させると思料された。
【００５６】
ＩＩ．薬物により誘発された胃病変動物におけるＳＡＣの胃粘膜保護効果
塩酸−エタノール、アスピリンまたはインドメタシンによって誘発された胃病変動物モデルにおいて、ＳＡＣの胃粘膜保護効果を評価した。
【００５７】
実験材料
ＳＡＣは、ＴＣＩ Chemical Ｃｏ．（Tokyo、Japan）から購入した。ビヒクルとしては、滅菌注射用水（製造番号７３Ｈ５Ｆ２１、大韓薬品工業株式会社）を使用し、陽性対照物質としては、スチレン（登録商標）を使用した。スチレン（登録商標）の賦形剤としては、０．５％ＣＭＣ−Ｎａ及び滅菌注射用水を使用した。塩酸は、Samjung Chemical, Co.、エタノールは、Baker, Co.から購入し、アスピリンは、Sigma, Co.、インドメタシンは、Sigma, Co.から購入した。
【００５８】
実験動物
特定病原体除去（ＳＰＦ）ラット、ＨｓｄＫｏａｔ： Sprague-Dawley（登録商標）（商標）ＳＤ（登録商標）（商標）７〜８週齢オス（体重２０８．４４〜２２７．３９ｇ（７週齢）、２２３．８５〜２４５．０３ｇ（８週齢）、供給源：Koatech, Co. Ltd., Gyunggido, Korea）を入手して、試験を実施する動物室内で７日間隔離し順化させて使用した。飼育環境条件は、温度２３±３℃、相対湿度５５±１５％、換気回数１０〜２０回／時間、照明時間１２時間（０８：００点灯〜２０：００消灯）に設定した京畿バイオ研究センター動物飼育区域で行った。全試験期間の間、試験に影響を及ぼすものと思料される飼育環境の変動は認知されなかった。飼料は、実験動物用固形飼料（Harlan Co. Ltd., USA. Teklad certified global 18% protein rodent diet, 2918C）をFolas Internationalから供給を受けて自由摂取させ、飼料の成分分析証明書を検討した結果、飼料組成及び混入物において、試験に悪影響を与えるほどの要因はなかった。水は、上水道水を紫外線殺菌器及び微細濾過装置で消毒した後、給水瓶を利用して自由摂取させた。
【００５９】
試験群構成及び投与
試験群は、ビヒクルのみを投与したビヒクル対照群Ｇ１、試験物質（ＳＡＣ）１００ｍｇ／ｋｇ投与群Ｇ２、２００ｍｇ／ｋｇ投与群Ｇ３、４００ｍｇ／ｋｇ投与群Ｇ４、陽性対照物質スチレン（登録商標）１００ｍｇ／ｋｇ（有効成分として５５．６ｍｇ／ｋｇ投与群）Ｇ５に分けた。各試験群は、塩酸／エタノール誘発モデル（実験例７）の場合、ラット８匹ずつ、アスピリン及びインドメタシン誘発モデル（実験例８及び９）の場合、ラット６匹ずつで構成した。
【００６０】
【表１】
0005904943.tif 000003
Ｇ１：ビヒクル対照群
Ｇ２〜Ｇ４：試験物質投与群
Ｇ５：陽性対照物質投与群
ａ）：有効成分の用量
【００６１】
試験物質は、経口用ゾンデを装着した注射管を利用して胃内に直接投与し、投与回数は、１回／日、単回投与した。
【００６２】
試験期間中、すべての試験群で、死亡動物や一般症状変化は観察されず、投与及び観察の期間中、試験物質の投与と関連した有意な体重変化は観察されなかった。
【００６３】
統計学的方法
ビヒクル対照群に対する試験物質投与群及び陽性対照物質投与群の比較は、一方向分散分析（一方向ＡＮＯＶＡ）を介して検証し、このとき、有意性と等分散性とが認定され、ダンカンテストを利用して事後検定を実施した。有意性の認定は、ｐ＜０．０５である場合とし、商用統計プログラムであるＳＰＳＳ １０．１を利用した。
【００６４】
＜実験例７＞塩酸−エタノールにより誘発された胃病変モデル動物での胃病変の長さ及び阻害率に対するＳＡＣの効果
方法
試験物質投与１時間後に、１５０ｍＭ ＨＣｌ（６０％エタノール中）をラット１匹当たり１．５ｍｌ経口で投与した。エタノールと試験物質とを投与した動物をステンレス製網飼育かごで、水を与えず、絶食させて、１時間放置した。塩酸−エタノール投与１時間後、エーテル麻酔下で屠殺し、十二指腸と食道の一部を含めて胃を摘出した。摘出した胃は、すぐに２％中性緩衝ホルマリン溶液１３ｍｌを注入して胃の内部洗浄した後、鉗子（forceps）で食道及び十二指腸の部分を固定し、２％中性緩衝ホルマリン溶液１３ｍｌを注入した後、５分間固定した。胃大彎部を切開し、剖検台に固定して広げた後、胃病変の長さをノギス（vernier calipers）で測定した。広げられた胃の個別写真撮影を行い（図１２）、測定及び撮影が終わった胃組織は、１０％中性緩衝ホルマリン溶液で固定した。
【００６５】
結果
本胃病変モデルでは、エタノールが直接的に胃粘膜を刺激して粘膜下筋肉層に浮腫を誘発し、一時的な虚血状態を発生させることによって、酸化的損傷による細胞の懐死を誘発すると同時に、塩酸が胃粘膜に直接的な刺激を加え、胃運動を亢進して急性胃炎を起こす。誘発後、肉眼所見は、胃粘膜内全般にわたって発生し、線状に長く出血所見が観察された。塩酸−エタノール投与１時間後、剖検時にビヒクル対照群は、胃粘膜全体に病変が誘発された（２０９．６０±２８．３９ｍｍ）。試験物質投与群のうち２００ｍｇ／ｋｇ投与群（１０６．６５±１６．７０ｍｍ、ｐ＜０．０１）、４００ｍｇ／ｋｇ投与群（７２．２５±１９．３３ｍｍ、ｐ＜０．０１）及び陽性対照群（スチレン（登録商標）投与群）（１０２．５１±１１．３５、ｐ＜０．０１）は、ビヒクル対照群と比較して、有意な病変減少効果を示した（図１０、図１２）。
【００６６】
胃病変阻害率（％）は（ビヒクル対照群の平均−各動物の胃病変の長さ）／ビヒクル対照群の平均Ｘ１００で表した。胃病変阻害率（％）では、ビヒクル対照群に比べて、試験物質２００ｍｇ／ｋｇ投与群（４１．１２±７．９７％、ｐ＜０．０１）、４００ｍｇ／ｋｇ投与群（６５．５３±９．２２％、ｐ＜０．０１）及び陽性対照群（５１．０９±５．４１％、ｐ＜０．０１）で有意な胃病変阻害率（％）が観察された（図１１）。
【００６７】
＜実験例８＞アスピリンにより誘発された胃病変モデル動物での胃病変面積及び阻害率に対するＳＡＣの効果
方法
試験動物を、一般環境条件下で２４時間以上絶食させ、試験物質を投与した後、それから３０分後に、アスピリン０．１５ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌを２００ｍｇ／ｋｇ用量で経口投与した。投与３時間後、エーテル麻酔下で屠殺し、十二指腸と食道の一部を含めて胃を摘出した。摘出した胃は、２％ホルマリン溶液１２ｍｌを注入して１０分間固定した。胃大彎部を切開して広げた後、胃腺胃部の病変部位を写真撮影した後、映像分析機（image analyzer）を利用して胃病変面積を測定した。
【００６８】
結果
【表２】
0005904943.tif 000004
【００６９】
本胃病変モデルでは、アスピリンは、非ステロイド性消炎剤であり、胃壁保護因子であるプロスタグランジンの合成を阻害することによって、胃潰瘍を発生させる。誘発後、肉眼所見は、胃粘膜全般にわたって発生し、網状に出血所見が観察された。アスピリン投与後、剖検時にビヒクル対照群は、胃粘膜全体にわたって出血及び病変が誘発された（２１５．３±４８．３５ｍｍ２）。試験物質１００ｍｇ／ｋｇ投与群（６８．６±２５．９４ｍｍ２）、２００ｍｇ／ｋｇ投与群（３１．４±１６．９９ｍｍ２）、４００ｍｇ／ｋｇ投与群（３２．５±２９．７８ｍｍ２）及び陽性対照群（３２．５±２８．０９ｍｍ２）いずれも、ビヒクル対照群と比較して、有意な病変減少効果を示した（図１３、図１５）。
【００７０】
胃病変阻害率は、（ビヒクル対照群の平均−各動物の胃病変面積）／ビヒクル対照群の平均胃病変面積Ｘ１００（％）で表した。ビヒクル対照群に比べて、試験物質１００ｍｇ／ｋｇ投与群（６８．２％）、２００ｍｇ／ｋｇ投与群（８５．４％）、４００ｍｇ／ｋｇ投与群（８４．９％）及び陽性対照群（８４．９％）で、有意な胃病変阻害率（％）が観察された（図１４）。
【００７１】
＜実験例９＞インドメタシンにより誘発された胃病変モデル動物での胃病変面積及び阻害率に対するＳＡＣの効果
方法
試験動物を、一般環境条件下で２４時間以上絶食させ、試験物質を投与した後、それから３０分後に、インドメタシン（蒸留水中）を２５ｍｇ／ｋｇ用量で経口投与した。投与６時間後に、エーテル麻酔下で屠殺し、十二指腸と食道の一部を含めて胃を摘出した。摘出した胃は、２％ホルマリン溶液１２ｍｌを注入して１０分間固定し、大彎部に沿って切開して広げた後、病変部位を写真撮影し、映像分析機（image analyzer）を介して胃病変面積を測定した。
【００７２】
結果
【表３】
0005904943.tif 000005
【００７３】
本胃病変モデルでは、インドメタシンは、非ステロイド性消炎剤であり、胃壁保護因子であるプロスタグランジンの合成を阻害することによって、胃病変を発生させる。誘発後、肉眼所見は、胃粘膜に局地的病変が発生し、一部出血所見が観察された。インドメタシン投与後、剖検時にビヒクル対照群は、７．６±５．８５ｍｍ２の面積にわたって病変が誘発された。試験物質１００ｍｇ／ｋｇ投与群で、病変面積は、３．２±３．４７ｍｍ２とおよそ半分以下に減少し、２００ｍｇ／ｋｇ投与群（０．５±０．３０ｍｍ２）、４００ｍｇ／ｋｇ投与群（０．４±０．３６ｍｍ２）及び陽性対照群（３．４±２．７５ｍｍ２）いずれも、ビヒクル対照群と比較して、有意な病変減少効果を示した。特に、２００ｍｇ／ｋｇ及び４００ｍｇ／ｋｇ投与群で、胃病変は、軽微なレベルであり、出血も、ほとんど観察されなかった（図１６、図１８）。
【００７４】
胃病変阻害率（％）は、＜実験例８＞と同様の方法で計算した。ビヒクル対照群に比べて、試験物質１００ｍｇ／ｋｇ投与群（５７．９％）、２００ｍｇ／ｋｇ投与群（９３．８％）、４００ｍｇ／ｋｇ投与群（９４．４％）及び陽性対照群（５５．２％）で有意な胃病変阻害率（％）が観察され、特に、２００ｍｇ／ｋｇ以上投与時に、ほぼ完全な胃病変抑制を示すことを確認した（図１７）。
【００７５】
製造例
有効成分としてＳＡＣを含有する多様な形態の製剤を下記の通り製造した。
【００７６】
＜製造例１＞錠剤の製造
ＳＡＣ  ２００mg
乳糖  ５０mg
澱粉  １０mg
ステアリン酸マグネシウム  適量
【００７７】
前記の成分を混合し、一般的な錠剤の製造方法によって打錠して錠剤を製造した。
【００７８】
＜製造例２＞散剤の製造
ＳＡＣ  ２５０mg
乳糖  ３０mg
澱粉  ２０mg
ステアリン酸マグネシウム  適量
【００７９】
前記の成分を稠密に混合した後、ポリエチレンがコーティングされた包に充填して密封して散剤を製造した。
【００８０】
＜製造例３＞カプセル剤の製造
ＳＡＣ  ５００mg
乳糖  ３０mg
澱粉  ２８mg
ステアリン酸マグネシウム  適量
【００８１】
前記の成分を混合し、一般的なカプセル剤の製造方法によって、ゼラチン硬カプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００８２】
＜製造例４＞懸濁剤の製造
ＳＡＣ  ５０mg
異性化糖  １０ｇ
砂糖  ３０mg
ナトリウムカルボキシメチルセルロース  １００mg
レモン香  適量
精製水  適量加えて全体１００ｍｌ
【００８３】
前記の成分を混合し、一般的な懸濁剤の製造方法によって懸濁剤を製造した後、１００ｍｌ量の褐色ビンに充填して滅菌して懸濁剤を製造した。
【００８４】
＜製造例５＞軟質カプセル剤の製造（軟質カプセル剤１錠中の含有量）
ＳＡＣ  ５００mg
ポリエチレングリコール４００  ４００mg
濃グリセリン  ５５mg
精製水  ３５mg
【００８５】
ポリエチレングリコールと濃グリセリンとを混合した後、精製水を添加した混合物を約６０℃に維持した状態でフラボンを入れ、撹拌器で約１，５００ｒｐｍで撹拌しつつ均一に混合した。前記混合液を徐々に撹拌しつつ室温に冷却し、真空ポンプで気泡を除去して軟質カプセルの内容物を調製した。軟質カプセルの被膜は、当分野で公知のゼラチンおよび可塑剤により調製した。１カプセル当たりゼラチン１３２mg、濃グリセリン５２mg、７０％ジソルビトール液６mg、着香剤としてエチルバニリン適量、コーティング基剤としてカルナウバワックスを使用し、一般的な製造方法で製造した。
【００８６】
＜製造例６＞注射剤の製造
ＳＡＣ  ２００mg
マンニトール  １８０mg
注射用滅菌蒸留水  ２，９７４mg
Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ  ２６mg
【００８７】
一般的な注射剤の製造方法によって、１アンプル当たり前記の成分含有量で製造する。
【００８８】
＜製造例７＞飲料の製造
ＳＡＣ  ０．０１ｇ
クエン酸  ８．５ｇ
精白糖  １０ｇ
ブドウ糖  ２．５ｇ
ＤＬ−リンゴ酸  ０．３ｇ
精製水  適量
【００８９】
前記の成分含有量に、精製水を適量配合して総１００ｍＬになるようにして撹拌し、通常の飲料製造方法で製造した。
【００９０】
本発明を、その例示的態様を参照しながら具体的に示し説明してきたが、添付の特許請求の範囲に記載された本発明の精神および範囲から逸脱することなく形態および詳細における様々な改変を行うことができることが、当業者により理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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