(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
0005909535.tif 000058
で表される化合物であって、ＬＧ’がｐ−ニトロフェノキシド、ｐ−クロロフェノキシド、ｏ−クロロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、又はペンタフルオロフェノキシドである化合物。
【請求項２】
化合物が
0005909535.tif 000059
である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
化合物が
0005909535.tif 000060
である請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、米国を除くすべての国の指定のための出願人である米国の企業であるＰｈａｒｍａｓｓｅｔ，Ｉｎｃ．、ならびに米国のみの指定のための出願人である、両方とも米国国民であるＭｉｃｈａｅｌ  Ｊｏｓｅｐｈ  ＳｏｆｉａおよびＢｒｕｃｅ  Ｓ．Ｒｏｓｓ、両方ともインド国国民であるＧａｎａｐａｔｉ  Ｒｅｄｄｙ  ＰａｍｕｌａｐａｔｉおよびＳｕｇｕｎａ  Ｒａｃｈａｋｏｎｄａ、米国国民であるＨａｉ−Ｒｅｎ  Ｚｈａｎｇ、韓国国民であるＢｙｏｕｎｇ−Ｋｗｏｎ  Ｃｈｕｎ、および中国国民であるＰｅｉｙｕａｎ  Ｗａｎｇの名義でのＰＣＴ国際特許出願として、２０１０年５月２０日に出願されており、２００９年５月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／１７９，９２３号、および２０１０年３月３１日に出願された第６１／３１９，５１９号の優先権を主張し、これらの対象はそれらの全体が参照により組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
ヌクレオシドホスホルアミデートおよびウイルス性疾患を治療するための薬剤としてのそれらの使用が本明細書に開示される。これらの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、および哺乳動物におけるＣ型肝炎感染の治療のために有用である。
【背景技術】
【０００３】
背景
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は、世界の人口の２〜１５％であると見積もられている相当な数の感染個体において、肝硬変および肝細胞癌などの慢性肝臓疾患をもたらす大きな健康問題である。米国疾病管理センターによると、米国だけで４５０万人の感染者が存在すると見積もられている。世界保健機関によると、世界中で２億人を超える感染個体が存在し、少なくとも３〜４百万人が毎年感染している。一旦感染すると、約２０％の人はウイルスを一掃するが、残りの人はＨＣＶを彼らの残りの寿命に抱え得る。１０〜２０パーセントの慢性感染個体が、最終的に、肝臓を破壊する肝硬変または癌を発症する。ウイルス性疾患は、汚染した血液および血液製剤、汚染した針によって非経口的に、または性的に、および感染母体もしくはキャリア母体から彼女らの子孫に垂直感染される。組換えインターフェロンαを単独でまたはヌクレオシドアナログであるリバビリンと組み合わせて用いる免疫療法に制限されているＨＣＶ感染の現在の治療は、臨床的な利点が限られている。さらに、ＨＣＶのワクチンは確立されていない。結果的に、慢性ＨＣＶ感染と効果的に戦う治療剤の改善の危急の必要性が存在している。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３，０１０アミノ酸のポリタンパク質をコードする約９６００塩基の単一オリゴヌクレオチドゲノム配列を有するエンベロープを持ったプラス鎖ＲＮＡウイルスである。ＨＣＶ遺伝子のタンパク質産物は構造タンパク質Ｃ、Ｅ１、およびＥ２、ならびに非構造タンパク質ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、およびＮＳ４Ｂ、ならびにＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂからなる。非構造（ＮＳ）タンパク質は、ウイルス複製のための触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼは、ポリタンパク質鎖から、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを遊離する。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶの複製サイクルにおけるテンプレートとして働く一本鎖ウイルスＲＮＡからの二本鎖ＲＮＡの合成のために必要とされる。それゆえに、ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶ複製複合体における必須の成分であると見なされている（Ｋ．Ｉｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ，Ｈｅｐｔｏｌｏｇｙ，１９９９，２９：１２２７−１２３５；Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９８，２４９：１０８−１１８）。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は、二本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成を阻害し、それゆえに、ＨＣＶ特異的抗ウイルス治療の開発に対して魅力的なアプローチを構成する。
【０００５】
ＨＣＶは、多くの共通する特徴を共有するウイルスの非常に大きな科に属する。
【０００６】
フラビウイルス科ウイルス
フラビウイルス科のウイルスは、少なくとも３つの区別できる属：ウシおよびブタにおいて疾患を引き起こすペスチウイルス；デング熱および黄熱病などの疾患の根本原因であるフラビウイルス；ならびにその唯一のメンバーがＨＣＶであるヘパシウイルスを含む。フラビウイルス属は、血清学的関連性に基づいて分類された６８より多くのメンバーを含む（Ｃａｌｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ，１９９３，７０，３７−４３）。臨床的徴候は変動し、これには、熱、脳炎、および出血熱が含まれる（Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｅｄｉｔｏｒｓ：Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．，Ｋｎｉｐｅ，Ｄ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．Ｍ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，１９９６，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，９３１−９５９）。ヒトの疾患と関連があるフラビウイルスの世界的懸念には、デング出血熱（ＤＨＦ）ウイルス、黄熱病ウイルス、ショック症候群、および日本脳炎ウイルスが挙げられる（Ｈａｌｓｔｅａｄ，Ｓ．Ｂ．，Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，１９８４，６，２５１−２６４；Ｈａｌｓｔｅａｄ，Ｓ．Ｂ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：４７６−４８１，１９８８；Ｍｏｎａｔｈ，Ｔ．Ｐ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ，１９８８，３１９，６４１−６４３）。
【０００７】
ペスチウイルス属には、ウシウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）、古典的ブタ熱（ｓｗｉｎｅ  ｆｅｖｅｒ）ウイルス（ＣＳＦＶ、ブタコレラ（ｈｏｇ  ｃｈｏｌｅｒａ）ウイルスとも呼ばれる）、およびヒツジのボーダー病ウイルス（ＢＤＶ）が含まれる（Ｍｏｅｎｎｉｇ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．Ａｄｖ．Ｖｉｒ．Ｒｅｓ．１９９２，４１，５３−９８）。家畜（ウシ、ブタ、およびヒツジ）のペスチウイルス感染は、世界中で顕著な経済学的な損失を引き起こしている。ＢＶＤＶは、ウシの粘膜疾患を引き起こし、家畜産業に対して顕著な経済学的な重要性がある（Ｍｅｙｅｒｓ，Ｇ．ａｎｄ  Ｔｈｉｅｌ，Ｈ．Ｊ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９６，４７，５３−１１８；Ｍｏｅｎｎｉｇ  Ｖ．，ｅｔ  ａｌ，Ａｄｖ．Ｖｉｒ．Ｒｅｓ．１９９２，４１，５３−９８）。ヒトペスチウイルスは、動物のペスチウイルスと同程度には広範に特徴付けられてはいない。しかし、血清学的調査は、ヒトにおける考慮すべきペスチウイルスへの曝露を示している。
【０００８】
ペスチウイルスおよびヘパシウイルスは、フラビウイルス科の中で、密接に関連しているウイルスグループである。この科の中で他の密接に関連しているウイルスには、ＧＢウイルスＡ、ＧＢウイルスＡ様因子、ＧＢウイルスＢおよびＧＢウイルスＣ（Ｇ型肝炎ウイルス、ＨＧＶとも呼ばれる）が挙げられる。ヘパシウイルスグループ（Ｃ型肝炎ウイルス；ＨＣＶ）は、密接に関連するが、遺伝子型が区別できる、ヒトに感染する多数のウイルスからなる。少なくとも６種のＨＣＶ遺伝子型と５０を超えるサブタイプが存在している。ペスチウイルスとヘパシウイルスの間の類似性に起因して、細胞培養中で効率的に増殖するヘパシウイルスの乏しい能力と組み合わせると、ウシウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）は、しばしば、ＨＣＶウイルスを研究するための代理として使用される。
【０００９】
ペスチウイルスとヘパシウイルスの遺伝的構成は非常に類似している。これらのプラス鎖ＲＮＡウイルスは、ウイルス複製のために必要なすべてのウイルスタンパク質をコードする単一の大きなオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を保有する。これらのタンパク質は、成熟ウイルスタンパク質を生じるために、細胞とウイルスの両方にコードされたプロテイナーゼによって、翻訳と同時にまたは翻訳後にプロセシングされるポリタンパク質として発現される。ウイルスゲノムＲＮＡの複製の原因であるウイルスタンパク質は、ほぼカルボキシ末端に位置している。ＯＲＦの３分の２は、非構造（ＮＳ）タンパク質と呼ばれている。ペスチウイルスとヘパシウイルスにとってのＯＲＦの非構造タンパク質部分の遺伝的構成およびポリタンパク質プロセシングは非常に類似している。ペスチウイルスとヘパシウイルスの両方にとって、成熟非構造（ＮＳ）タンパク質は、非構造タンパク質コード領域のアミノ末端から、ＯＲＦのカルボキシ末端までの配列の順序で、ｐ７、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂからなる。
【００１０】
ペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳタンパク質は、特定のタンパク質機能に特徴的である配列ドメインを共有している。例えば、両方のグループのウイルスのＮＳ３タンパク質は、セリンプロテイナーゼおよびヘリカーゼに特徴的なアミノ酸配列モチーフを保有する（Ｇｏｒｂａｌｅｎｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３３，２２；Ｂａｚａｎ  ａｎｄ  Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９８９，１７１，６３７−６３９；Ｇｏｒｂａｌｅｎｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，１９８９，１７，３８８９−３８９７）。同様に、ペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳ５Ｂタンパク質は、ＲＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼに特徴的なモチーフを有する（Ｋｏｏｎｉｎ，Ｅ．Ｖ．ａｎｄ  Ｄｏｌｊａ，Ｖ．Ｖ．，Ｃｒｉｒ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．１９９３，２８，３７５−４３０）。
【００１１】
ウイルスの生活環の中でのペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳタンパク質の実際の役割および機能は、直接的に類似している。両方の場合において、ＮＳ３セリンプロテイナーゼは、ＯＲＦの中でのその位置の下流のポリタンパク質前駆体のすべてのタンパク質分解性プロセシングの原因である（Ｗｉｓｋｅｒｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｃｏｌｌｅｔｔ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９１，１８４，３４１−３５０；Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９３，６７，３８３５−３８４４；Ｅｃｋａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９３，１９２，３９９−４０６；Ｇｒａｋｏｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９３，６７，２８３２−２８４３；Ｇｒａｋｏｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９３，９０，１０５８３−１０５８７；Ｈｉｊｉｋａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９３，６７，４６６５−４６７５；Ｔｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９３，６７，４０１７−４０２６）。両方の場合において、ＮＳ４Ａタンパク質は、ＮＳ３セリンプロテアーゼを伴うコファクターとして働く（Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９４，６８，５０４５−５０５５；Ｆａｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９４，６８，３７５３−３７６０；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９７，７１：５３１２−５３２２）。両方のウイルスのＮＳ３タンパク質は、ヘリカーゼとしてもまた機能する（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９５，２１５，１６０−１６６；Ｊｉｎ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９９５，３２３，４７−５３；Ｗａｒｒｅｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｏｌｌｅｔｔ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９５，６９，１７２０−１７２６）。最後に、ペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳ５Ｂタンパク質は、推定のＲＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼ活性を有する（Ｂｅｈｒｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ，１９９６，１５，１２−２２；Ｌｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９７，７１，８４１６−８４２８；Ｙｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９７，２３２，２３１−２３５；Ｈａｇｅｄｏｒｎ，ＰＣＴ  ＷＯ  ９７／１２０３３；Ｚｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９８，７２，９３６５−９３６９）。
【００１２】
現在、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した個体について限られた治療オプションが存在している。現在認可されている治療オプションは、組換えインターフェロンαを単独でまたはヌクレオシドアナログであるリバビリンと組み合わせて用いる免疫療法の使用である。この治療は、その臨床的な有効性が限られており、治療された患者の５０％のみが治療に応答する。従って、ＨＣＶ感染によってもたらされた、満たされていない医学的必要性に取り組むためのより有効かつ新規な治療についての顕著な必要性が存在している。
【００１３】
抗ＨＣＶ治療としての直接作用する抗ウイルス剤の薬剤開発のための多数の潜在的な分子標的が今日同定されており、これらには、ＮＳ２−ＮＳ３オートプロテアーゼ、Ｎ３プロテアーゼ、Ｎ３ヘリカーゼ、およびＮＳ５Ｂポリメラーゼが含まれるがこれらに限定されない。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、一本鎖、プラスセンス、ＲＮＡゲノムの複製のために絶対的に必須であり、この酵素は、医化学者の中で顕著な関心を引き起こしている。
【００１４】
ＨＣＶ感染のための潜在的な治療剤としてのＨＣＶ  ＮＳ５Ｂの阻害剤は概説されている：Ｔａｎ，Ｓ．−Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，２００２，１，８６７−８８１；Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ，２００３，１２，１２６９−１２８０；Ｎｉ，Ｚ−Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００４，７，４４６−４５９；Ｂｅａｕｌｉｅｕ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ，２００４，５，８３８−８５０；Ｗｕ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ−Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，２００３，３，２０７−２１９；Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，３９，２２３−２３７；Ｃａｒｒｏｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，２００６，６，１７−２９。抵抗性ＨＣＶ系統の出現の潜在能力および広範な遺伝子型の範囲を有する因子を同定する必要性は、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤としての新規でありかつより有効なヌクレオシドを同定するための継続する努力の必要性を支持する。
【００１５】
ＮＳ５Ｂポリメラーゼのヌクレオシド阻害剤は、鎖終止を生じる非天然基質として、またはポリメラーゼへのヌクレオチド結合と競合する競合的阻害剤としてのいずれかで作用できる。鎖終止剤として機能するために、ヌクレオシドアナログは、細胞によって取り込まれなければならず、かつポリメラーゼヌクレオチド結合部位について競合するためにインビボで三リン酸に転換されなければならない。この三リン酸への転換は、一般的には、潜在的なヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤上にさらなる構造的な要求性を付与する、細胞キナーゼによって媒介される。不運にも、これは、ＨＣＶ複製の阻害剤としてのヌクレオシドの直接的評価を、インサイチュリン酸化を可能にする細胞ベースのアッセイに限定する。
【００１６】
ある場合において、ヌクレオシドの生物学的活性は、それを活性な三リン酸型に転換するために必要とされる１種以上のキナーゼに特徴的なその乏しい基質によって妨害される。ヌクレオシドキナーゼによる一リン酸の形成は、一般的には、３つのリン酸化事象のうちの律速段階と見られている。活性三リン酸アナログへのヌクレオシドの代謝における最初のリン酸化段階の必要性を回避するために、安定なリン酸プロドラッグの調製が報告されてきた。ヌクレオシドホスホルアミデートプロドラッグは、ウイルス感染した全細胞に投与された場合に、活性なヌクレオシド三リン酸の前駆体であること、およびウイルス複製を阻害することが示されてきた（ＭｃＧｕｉｇａｎ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，３９，１７４８−１７５３；Ｖａｌｅｔｔｅ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，３９，１９８１−１９９０；Ｂａｌｚａｒｉｎｉ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１９９６，９３，７２９５−７２９９；Ｓｉｄｄｉｑｕｉ，Ａ．Ｑ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，４２，４１２２−４１２８；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，Ｅ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２００１，２０，１０９１−１０９８；  Ｌｅｅ，Ｗ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２００５，４９，１８９８）；ＵＳ  ２００６／０２４１０６４；およびＷＯ  ２００７／０９５２６９。
【００１７】
ヌクレオシドの時折乏しい物理化学的および薬物動態学的特性もまた、実行可能な治療剤としてのヌクレオシドの有用性を制限している。これらの乏しい特性は、薬剤の腸吸収を制限し、標的組織または細胞への取り込みを制限できる。これらの特性を改善するために、ヌクレオシドのプロドラッグが利用されてきた。ヌクレオシドホスホルアミデートの調製は、ヌクレオシドの全身吸収を改善し、さらに、これらの「プロヌクレオチド」のホスホルアミデート部分は、適切な分配係数を得るために中性親油性基でマスクされ、細胞への取り込みおよび輸送を最適化して、親のヌクレオシド単独を投与することと比較して、ヌクレオシド一リン酸アナログの細胞内濃度を劇的に増強することが実証されてきた。リン酸エステル部分の酵素媒介性加水分解はヌクレオシド一リン酸を生じ、ここで、律速の最初のリン酸化は不要である。この目的のために、ＷＯ  ２００８／１２１６３４およびＵＳ  ２０１０／００１６２５１に対応する米国特許出願第１２／０５３，０１５号は、多数のホスホルアミデートヌクレオシドプロドラッグを開示し、これらの多くがＨＣＶアッセイにおいて活性を示す。ＵＳ  ２０１０／００１６２５１において開示されているいくつかの化合物は、ＦＤＡによる認可のための潜在的な臨床候補として試験された。
【発明の概要】
【００１８】
化学式４によって表される化合物、ならびに化学式ＳＰ−４およびＲＰ−４によって表されるそのそれぞれのリンベースのジアステレオマーが本明細書に開示される。
0005909535.tif 000002
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである。
【図２】ＲＰ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである。
【図３】ＳＰ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（１型）。
【図４】ＳＰ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（１型）。
【図５】ＳＰ−４・ＣＨ２Ｃｌ２の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（２型）。
【図６】ＳＰ−４・ＣＨＣｌ３の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（３型）。
【図７】ＳＰ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（４型）。
【図８】ＳＰ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（５型）。
【図９】ＳＰ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムである（アモルファス）。
【図１０】ＳＰ−４のＸ線結晶構造（１型）。
【図１１】ＳＰ−４・ＣＨ２Ｃｌ２のＸ線結晶（等方性）構造（２型）。
【図１２】ＳＰ−４・ＣＨ２Ｃｌ２のＸ線結晶（異方性）構造（２型）。
【図１３】ＳＰ−４・ＣＨＣｌ３のＸ線結晶構造（３型）。
【図１４】４のＦＴ−ＩＲスペクトル。
【図１５】ＲＰ−４のＦＴ−ＩＲスペクトル。
【図１６】ＳＰ−４のＦＴ−ＩＲスペクトル。
【図１７】４のＴＧＡおよびＤＳＣ分析。
【図１８】ＲＰ−４のＴＧＡおよびＤＳＣ分析。
【図１９】ＳＰ−４のＴＧＡおよびＤＳＣ分析。
【図２０Ａ】８（ＳＰ異性体）のＸ線結晶構造（非対称単位の分子番号１）。
【図２０Ｂ】８（ＳＰ異性体）のＸ線結晶構造（非対称単位の分子番号２）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
発明の詳細な説明
定義
本明細書で使用される、「１つの（「ａ」または「ａｎ」）」実体という語句は、１つ以上のその実体をいい、例えば、化合物とは、１つ以上の化合物または少なくとも１つの化合物をいう。このようなものとして、「１つの（「ａ」（または「ａｎ」））」、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」は本明細書では交換可能に使用できる。
【００２１】
本明細書で使用される「任意の」または「任意に」という用語は、続けて説明される事象または状況が起こり得るが必ずしも起こらなくてもよいこと、およびその説明が、その事象または状況が起こる例とそれが起こらない例を含むことを意味する。例えば、「任意の結合」とは、その結合が存在してもよいし、存在しなくてもよいこと、およびこの説明が単結合、二重結合、または三重結合を含むことを意味する。
【００２２】
「Ｐ＊」という用語は、リン原子がキラルであること、およびこれが、受け入れられているそれらの明白な意味を有する、対応する「Ｒ」または「Ｓ」のＣａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ（カーン−インゴルド−プレローグ）表示を有することを意味する。
【００２３】
本明細書に記載される「精製されている」という用語は、所定の化合物の純度をいう。例えば、所定の化合物が組成物の主要成分であるとき、すなわち、少なくとも５０％ｗ／ｗ純度であるときに、その化合物は「精製されている」。このように「精製されている」は、少なくとも５０％ｗ／ｗ純度、少なくとも６０％ｗ／ｗ純度、少なくとも７０％純度、少なくとも８０％純度、少なくとも８５％純度、少なくとも９０％純度、少なくとも９２％純度、少なくとも９４％純度、少なくとも９６％純度、少なくとも９７％純度、少なくとも９８％純度、少なくとも９９％純度、少なくとも９９．５％純度、および少なくとも９９．９％純度を包含し、ここで、「実質的に純粋」とは、少なくとも９７％純度、少なくとも９８％純度、少なくとも９９％純度、少なくとも９９．５％純度、および少なくとも９９．９％純度を包含する。
【００２４】
本明細書に記載される「代謝物」という用語は、投与の必要がある被験体への投与後にインビボで産生される化合物をいう。
【００２５】
「約」（〜によってもまた表される）という用語は、引用される数値が標準実験誤差の範囲内で変動する範囲の一部であることを意味する。
【００２６】
特定のＸＲＰＤパターンの「中に実質的に示される」という表現は、選択されたピークリスト（±０．２°２θ）に対する目視検査または手段の中で、ＸＲＰＤパターンに示されるピーク位置が実質的に同じであることを意味する。当業者は、強度がサンプルに依存して変動し得ることを理解している。
【００２７】
「実質的に無水物である」という用語は、物質が最大で１０重量％の水、好ましくは最大で１重量％の水、より好ましくは最大で０．５重量％の水、および最も好ましくは最大で０．１重量％の水を含むことを意味する。
【００２８】
溶媒または抗溶媒（反応、結晶化など、もしくは空間格子において、および／または吸着溶媒において使用される）には、少なくとも１つのＣ１−Ｃ８アルコール、Ｃ２−Ｃ８エーテル、Ｃ３−Ｃ７ケトン、Ｃ３−Ｃ７エステル、Ｃ１−Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２−Ｃ７ニトリル、多様な溶媒、Ｃ５−Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６−Ｃ１２芳香族炭化水素が挙げられる。
【００２９】
Ｃ１−Ｃ８アルコールとは、このような数の炭素を有する直鎖／分枝鎖および／または環式／非環式アルコールをいう。Ｃ１−Ｃ８アルコールには、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール、ヘキサノール、およびシクロヘキサノールが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３０】
Ｃ２−Ｃ８エーテルとは、このような数の炭素を有する直鎖／分枝鎖および／または環式／非環式エーテルをいう。Ｃ２−Ｃ８エーテルには、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、ジ−イソプロピルエーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、メチル−ｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、テトラヒドロフラン、およびジオキサンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３１】
Ｃ３−Ｃ７ケトンとは、このような数の炭素を有する直鎖／分枝鎖および／または環式／非環式ケトンをいう。Ｃ３−Ｃ７ケトンには、アセトン、メチルエチルケトン、プロパノン、ブタノン、メチルイソブチルケトン、メチルブチルケトン、およびシクロヘキサノンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３２】
Ｃ３−Ｃ７エステルとは、このような数の炭素を有する直鎖／分枝鎖および／または環式／非環式エステルをいう。Ｃ３−Ｃ７エステルには、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ｎ−ブチルなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３３】
Ｃ１−Ｃ２クロロカーボンとは、このような数の炭素を有するクロロカーボンをいう。Ｃ１−Ｃ２クロロカーボンには、クロロホルム、塩化メチレン（ＤＣＭ）、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、およびテトラクロロエタンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３４】
Ｃ２−Ｃ７ニトリルとは、このような数の炭素を有するニトリルをいう。Ｃ２−Ｃ７ニトリルには、アセトニトリル、プロピオンニトリルなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３５】
多様な溶媒とは、有機化学において一般的に利用されている溶媒をいい、これにはジエチレングリコール、ジグリム（ジエチレングリコールジメチルエーテル）、１，２−ジメトキシ−エタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、グリセリン、ヘキサメチルホスホラミド、ヘキサメチルリントリアメ（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ  ｔｒｉａｍｅ）、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、ニトロメタン、ピリジン、トリエチルアミン、および酢酸が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３６】
Ｃ５−Ｃ１２飽和炭化水素という用語は、直鎖／分枝鎖および／または環式／非環式炭化水素をいう。Ｃ５−Ｃ１２飽和炭化水素には、ｎ−ペンタン、石油エーテル（リグロイン）、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン、シクロヘキサン、およびシクロヘプタンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３７】
Ｃ６−Ｃ１２芳香族という用語は、それらのバックボーンとしてフェニル基を有する置換および非置換炭化水素をいう。好ましい炭化水素には、ベンゼン、キシレン、トルエン、クロロベンゼン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、キシレン類が挙げられ、トルエンがより好ましい。
【００３８】
本明細書で使用される「ハロ」または「ハロゲン」という用語には、クロロ、ブロモ、ヨード、およびフルオロが含まれる。
【００３９】
「ブロッキング基」という用語は、以下の特性を示す化学基をいう。この「基」は「保護化合物」から誘導される。基は、ホスホルアミデートの安定性と一致する条件下で（ｐＨ  ２−８）配置できる二級ヒドロキシルを超えて、一級ヒドロキシルについて選択的であり、得られる生成物に、実質的に異なる物理特性を付与し、未反応の所望の化合物から、３'−ホスホルアミデート−５'−新たな基の生成物のより容易な分離を可能にする。この基は、良好な収率で選択的に反応して、計画された反応に対して安定である保護された基質を与えるはずである（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｎｄ  ｅｄ．Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９９を参照のこと）。基の例には、ベンゾイル、アセチル、フェニル置換ベンゾイル、テトラヒドロピラニル、トリチル、ＤＭＴ（４，４'−ジメトキシトリチル）、ＭＭＴ（４−モノメトキシトリチル）、トリメトキシトリチル、ピキシル（９−フェニルキサンテン−９−イル）基、チオピキシル（９−フェニルチオキサンテン−９−イル）または９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンチン−９−イル（ＭＯＸ）など；Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）アリール、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルが挙げられるがこれらに限定されない。ＭＯＭまたはＴＨＰなどのアセタールは、可能な基と見なされている。フッ素化化合物もまた、これらが化合物に結合でき、フッ素系固相抽出媒体（Ｆｌｕｏｒｏ  Ｆｌａｓｈ（登録商標））を通すことによって選択的に除去できる限り、意図される。特定の例には、フッ素化トリチルアナログ、トリチルアナログ１−［４−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−パーフルオロデシル）フェニル］−１，１−ジフェニルメタノールが挙げられる。トリチル、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、ＣＢｚなどの他のフッ素化アナログもまた意図される。ｐ−トルエンスルホニルクロリドのような塩化スルホニルは、５'位で選択的に反応できる。酢酸エステルおよび安息香酸エステルなどのエステルが選択的に形成できる。無水コハク酸およびその誘導体などのジカルボン酸無水物は、遊離のカルボン酸とのエステル結合を生成するために使用でき、このような例には、オキサリル、マロニル、スクシニル、グルタリル、アジピル、ピメリル、スペリル、アゼライル、セバシル、フタリル、イソフタリル、テレフタリルなどが挙げられるがこれらに限定されない。遊離のカルボン酸は極性が劇的に増加し、炭酸水素ナトリウム溶液などの穏やかな塩基性水相に反応生成物を抽出するためのハンドルとしてもまた使用できる。ホスホルアミデート基は、酸性媒体中で比較的安定であるので、テトラヒドロピラニルなどの酸性反応条件を必要とする基もまた使用できる。
【００４０】
「保護化合物」から誘導される「保護基」という用語は、その明白かつ通常の意味を有し、すなわち、少なくとも１つの保護基またはブロッキング基が、少なくとも１つの他の官能基の化学修飾を可能にする少なくとも１つの官能基（例えば、−ＯＨ、−ＮＨ２など）に結合される。保護基の例には、ベンゾイル、アセチル、フェニル置換ベンゾイル、テトラヒドロピラニル、トリチル、ＤＭＴ（４，４'−ジメトキシトリチル）、ＭＭＴ（４−モノメトキシトリチル）、トリメトキシトリチル、ピキシル（９−フェニルキサンテン−９−イル）基、チオピキシル（９−フェニルチオキサンテン−９−イル）または９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンチン−９−イル（ＭＯＸ）など；Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキレン）アリール（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）、Ｃ（Ｏ）Ｏアリール、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、少なくとも１つのケイ素原子を含む保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、Ｓｉ（低級アルキル）２ＯＳｉ（低級アルキル）２ＯＨ（例えば、−Ｓｉ（ｉＰｒ）２ＯＳｉ（ｉＰｒ）２ＯＨが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４１】
本明細書に記載され、他に規定されない限り、「保護化合物」という用語は、「保護基」を含み、保護されることが可能である官能基を含む化合物との反応が可能である化合物をいう。
【００４２】
本明細書で使用される「脱離基」という用語は、当業者に対して同じ意味を有し（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｊｅｒｒｙ  Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  Ｅｄ．；１９９２  ｐａｇｅｓ  ３５１−３５７）、基質分子の一部でありかつそれに結合している基を表し；基質分子が置換反応を受ける反応（例えば、求核試薬を用いる）において、次いで、脱離基が置き換わる。脱離基の例には、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）、好ましくは、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ；トシラート、メシラート、トリフラート、アセテート、カンファースルホネート、アリールオキシド、および少なくとも１つの電子求引基で置換されたアリールオキシド（例えば、ｐ−ニトロフェノキシド、２−クロロフェノキシド、４−クロロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、ペンタフルオロフェノキシドなど）などが挙げられるがこれらに限定されない。「電子求引基」という用語は、本明細書でその明白な意味に従う。電子求引基の例には、ハロゲン、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）（アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アリール）などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４３】
本明細書で使用される「塩基試薬」という用語は、ヒドロキシル基を脱プロトン化可能な化合物を意味する。塩基試薬の例には、アルコール性溶媒と組み合わせた（低級アルキル）オキシド（（低級アルキル）ＯＭ）が含まれるがこれらに限定されず、ここで、（低級アルキル）オキシドには、ＭｅＯ−、ＥｔＯ−、ｎＰｒＯ−、ｉＰｒＯ−、ｔＢｕＯ−、ｉＡｍＯ−（イソ−アミルオキシド）などが含まれるがこれらに限定されず、ここで、Ｍは、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋などのアルカリ金属カチオンである。アルコール性溶媒には、（低級アルキル）ＯＨ，例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、ｎＰｒＯＨ、ｉＰｒＯＨ、ｔＢｕＯＨ、ｉＡｍＯＨなどが含まれる。水素化ナトリウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、ヘキサメチルジシラザンリチウム、ジイソプロピルアミドリチウム、水素化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ＭｅＭｇＣｌ、ＭｅＭｇＢｒ、ｔＢｕＭｇＣｌ、ｔＢｕＭｇＢｒなどを含むがこれらに限定されない（低級アルキル）Ｍｇ（ハロゲン）などのグリニャール試薬などの非アルコキシ塩基もまた使用できる。
【００４４】
「塩基」という用語は「塩基試薬」という用語を包含し、プロトン含有化合物を脱プロトン化可能な化合物、すなわち、ブレンステッド塩基であることを意味する。上記に列挙された例に加えて、塩基のさらなる例には、ピリジン、コリジン、２，６−（低級アルキル）−ピリジン、ジメチル−アニリン、イミダゾール、Ｎ−メチル−イミダゾール、ピラゾール、Ｎ−メチル−ピラゾール、トリエチルアミン、ジ−イソプロピルエチルアミンなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４５】
「電子求引基」という用語はその平易な意味に従う。電子求引基の例には、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）（アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アリール）などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４６】
「共結晶」という用語は、塩と組み合わせた４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４の共結晶を含み、これには、薬学的に受容可能な塩が包含される。
【００４７】
本明細書に記載される「塩」という用語は、カチオンおよびアニオンを含む化合物をいい、これは、プロトン受容部分のプロトン化および／またはプロトン供与部分の脱プロトン化によって産生できる。プロトン受容部分のプロトン化は、その電荷が生理学的アニオンの存在によってバランスが取れているカチオン種の形成を生じるのに対して、プロトン供与部分の脱プロトン化は、電荷が生理学的カチオンの存在によってバランスが取れているアニオン種の形成を生じることが注目されるべきである。
【００４８】
「薬学的に受容可能な塩」という語句は、薬学的に受容可能である塩を意味する。薬学的に受容可能な塩の例には以下が挙げられるがこれらに限定されない：（１）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などと形成されるか、もしくは有機酸、例えば、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、サリチル酸、ムコン酸などと形成される酸付加塩、または（２）上記に列挙された無機酸のいずれかの共役塩基と形成される塩基付加塩、ここで、この共役塩基は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、ＮＨｇＲ'''４−ｇ＋の中から選択されるカチオン性成分を含み、ここで、Ｒ'''はＣ１−３アルキルであり、ｇは０、１、２、３、または４の中から選択される数である。薬学的に受容可能な塩へのすべての言及には、同じ酸付加塩の、本明細書に規定されるような、溶媒付加型（溶媒和物）または結晶型（多形体）が含まれることが理解されるべきである。
【００４９】
「アルキル」という用語は、１〜３０個の炭素原子を含む、非分枝鎖または分枝鎖、飽和、一価の炭化水素残基をいう。「Ｃ１−Ｍアルキル」という用語は、１〜Ｍ個の炭素原子を含むアルキルをいい、ここで、Ｍは以下の値：２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０を有する整数である。「Ｃ１−４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を含むアルキルをいう。「低級アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖炭化水素残基を示す。本明細書で使用される「Ｃ１−２０アルキル」は、１〜２０個の炭素原子を含むアルキルをいう。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルキル」は、１〜１０個の炭素を含むアルキルをいう。アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルまたはペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、およびオクチルが挙げられる低級アルキル基が挙げられるがこれらに限定されない。（アル）アルキルまたは（ヘテロアリール）アルキルという用語は、それぞれ、アリール基またはヘテロアリール基によって任意に置換されたアルキル基を示す。
【００５０】
「アルケニル」という用語は、１個または２個のオレフィン二重結合、好ましくは、１個のオレフィン二重結合を有する２〜１０個の炭素原子を有する非置換炭化水素鎖基をいう。「Ｃ２−Ｎアルケニル」という用語は、２〜Ｎ個の炭素原子を含むアルケニルをいい、ここで、Ｎは以下の値：３、４、５、６、７、８、９、または１０を有する整数である。「Ｃ２−１０アルケニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子を含むアルケニルをいう。「Ｃ２−４アルケニル」という用語は、２〜４個の炭素原子を含むアルケニルをいう。例には、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）、または２−ブテニル（クロチル）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００５１】
本明細書で使用され、他に特定されない限り、「アリール」という用語は、置換または非置換の、フェニル（Ｐｈ）、ビフェニル、またはナフチルをいい、好ましくは、アリールという用語は、置換または非置換フェニルをいう。アリール基は、当業者に公知であるように、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」３ｒｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９に教示されているように、必要に応じて、保護されていないかまたは保護されているかのいずれかである、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルフェート、ホスホン酸、ホスフェート、およびホスホネートの中から選択される１つ以上の部分で置換できる。
【００５２】
本明細書で使用され、他に特定されない限り、「アリールオキシド」という用語は、置換または非置換の、フェノキシド（ＰｈＯ−）、ｐ−フェニル−フェノキシド（ｐ−Ｐｈ−ＰｈＯ−）、またはナフトキシドをいい、好ましくは、アリールオキシドという用語は、置換または非置換のフェノキシドをいう。アリールオキシド基は、当業者に公知であるように、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」３ｒｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９に教示されているように、必要に応じて、保護されていないかまたは保護されているかのいずれかである、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ（Ｏ）（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルフェート、ホスホン酸、ホスフェート、およびホスホネートの中から選択される１つ以上の部分で置換できる。
【００５３】
「調製物」または「剤形」という用語は、活性化合物の固体と液体の両方の製剤を含むことが意図され、当業者は、所望の用量および薬物動態学的パラメーターに依存して、活性成分が異なる調製物中に存在できることを認識している。
【００５４】
本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、薬学的組成物を調製するために使用される化合物をいい、一般的には、安全、非毒性であり、および生物学的にも他の点でも望ましくないことはなく、そしてヒトの医薬的用途と同様に獣医学的用途のためにも受容可能な賦形剤が含まれる。
【００５５】
「結晶性」という用語は、ＳＰ−４またはＲＰ−４のいずれかの固体サンプルが、Ｘ線粉末回折または単結晶Ｘ線技術によって決定される場合に結晶特性を有する状況をいう。
【００５６】
「結晶様」という用語は、ＳＰ−４またはＲＰ−４のいずれかの固体サンプルが、１つの手段、例えば、目視的にまたは光学もしくは偏光顕微鏡法によって決定されるときに結晶特性を有するが、しかし、別の手段、例えば、Ｘ線粉末回折によって決定されるときに結晶特性を示さない状況をいう。目視によってまたは光学もしくは偏光顕微鏡法によって固体サンプルの結晶性を視覚的に決定する方法は、ＵＳＰ＜６９５＞および＜７７６＞に開示されており、これらの両方は参照により組み込まれる。「結晶様」であるＳＰ−４またはＲＰ−４のいずれかの固体サンプルは、特定の条件下では結晶性であり得るが、他の条件に供せられたときには非結晶性になり得る。
【００５７】
「アモルファス」という用語は、ＳＰ−４またはＲＰ−４のいずれかの固体サンプルが結晶性でも結晶様でもない状況をいう。
【００５８】
実施形態
第１の実施形態は化学式４によって表される化合物に関する：
0005909535.tif 000003
ここで、Ｐ＊はキラルリン原子を表す。このキラルリン原子に起因して、化学式４によって表される化合物は、ＲＰ−４およびＳＰ−４と称する２つのジアステレオマーを含む。化学式４によって表される化合物は、溶媒和物、水和物、または溶媒和物／水和物の混合物の一部でもあり得る。溶媒和物は４・ｎＳと称するのに対して、水和物は４・ｍＨ２Ｏと称し、ここで、Ｓは格子溶媒であり、ｎは約０から約３までの整数または整数でない量だけ変動し、ｍは約０から約５までの整数または整数でない量だけ変動する。最後に、化学式４によって表される化合物は、溶媒和物または水和物として存在しないかもしれないが、しかし、特定の有利な量の吸収された溶媒（Ｓ）または水を有する。この場合において、Ｓまたは水の量は、化学式４によって表される化合物の重量に基づいて、約０重量％から約１０重量％まで変動し得る。化学式４によって表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファス性である。
【００５９】
第２の実施形態は、化学式ＲＰ−４によって表される化合物に関する：
0005909535.tif 000004
【００６０】
化学式ＲＰ−４によって表される化合物はまた、溶媒和物、水和物、または溶媒和物／水和物の混合物の一部でもあり得る。溶媒和物はＲＰ−４・ｎＳと称するのに対して、水和物はＳＰ−４・ｍＨ２Ｏと称し、ここで、Ｓは格子溶媒であり、ｎは約０から約３までの整数または整数でない量によって変動し、ｍは約０から約５までの整数または整数でない量によって変動する。最後に、化学式ＲＰ−４によって表される化合物は、溶媒和物、水和物、または溶媒和物／水和物の混合物として存在しないかもしれないが、しかし、特定の有利な量の吸収された溶媒（Ｓ）、水、またはＳと水の両方を有し得る。この場合において、Ｓまたは水の量は、化学式ＲＰ−４によって表される化合物の重量に基づいて、約０重量％から約１０重量％まで変動し得る。化学式ＲＰ−４によって表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファス性である。
【００６１】
第２の実施形態の第１の態様は結晶性ＲＰ−４に関する。
【００６２】
第２の実施形態の第２の態様は、約：６．６、７．１、９．０、１１．６、１７．９、２０．７、２４．１、２４．４、および２６．２においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＲＰ−４に関する。
【００６３】
第２の実施形態の第３の態様は、約：６．６、７．１、９．０、１１．０、１１．６、１２．０、１６．０、１７．９、１９．６、２０．７、２１．０、２１．７、２１．９、２２．２、２３．１、２４．１、２４．４、２６．１、２７．３、２７．７、および２８．２においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＲＰ−４に関する。
【００６４】
第２の実施形態の第４の態様は、実質的に図２に示されるようなＸＲＰＤ回折パターンを有する結晶性ＲＰ−４に関する。
【００６５】
第２の実施形態の第５の態様は、以下のＦＴ−ＩＲピーク（ｃｍ−１）：１７４２、１７１３、１６７９、１４６０、１３７７、１２５９、１１５７、および１０７９を有するＲＰ−４に関する。
【００６６】
第２の実施形態の第６の態様は、実質的に図１５に示されるようなＦＴ−ＩＲスペクトルを有するＲＰ−４に関する。
【００６７】
第２の実施形態の第７の態様は実質的に純粋なＲＰ−４に関する。
【００６８】
第２の実施形態の第８の態様は実質的に純粋な結晶性ＲＰ−４に関する。
【００６９】
第２の実施形態の第９の態様は実質的に純粋なアモルファス性ＲＰ−４に関する。
【００７０】
第３の実施形態は、化学式ＳＰ−４によって表される化合物に関する：
0005909535.tif 000005
【００７１】
化学式ＳＰ−４によって表される化合物はまた、溶媒和物、水和物、または溶媒和物／水和物の混合物の一部でもあり得る。溶媒和物はＳＰ−４・ｎＳと称するのに対して、水和物はＳＰ−４・ｍＨ２Ｏと称し、ここで、Ｓは格子溶媒であり、ｎは約０から約３までの整数または整数でない量によって変動し、ｍは約０から約５までの整数または整数でない量によって変動する。最後に、化学式ＳＰ−４によって表される化合物は、溶媒和物または水和物として存在しないかもしれないが、しかし、特定の有利な量の吸収された溶媒（Ｓ）または水を有し得る。この場合において、Ｓまたは水の量は、化学式ＳＰ−４によって表される化合物の重量に基づいて、約０重量％から約１０重量％まで変動し得る。化学式ＳＰ−４によって表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファス性である。
【００７２】
第３の実施形態の第１の態様は結晶性ＳＰ−４に関する。
【００７３】
第３の実施形態の第２の態様は、単斜晶系結晶性ＳＰ−４に関し、好ましくは、以下の単位セルパラメーターａ〜１２．８８Å、ｂ〜６．１７Å、ｃ〜１７．７３Å、およびβ〜９２．０５°を有する。
【００７４】
第３の実施形態の第３の態様は、単斜晶系結晶性ＳＰ−４に関し、好ましくは、以下の単位セルパラメーターａ〜２０．０９Å、ｂ〜６．１０Å、ｃ〜２３．０１Å、およびβ〜１１２．２９°を有する。
【００７５】
第３の実施形態の第４の態様は、単斜晶系結晶性ＳＰ−４に関し、好ましくは、以下の単位セルパラメーターａ〜１２．８３Å、ｂ〜６．１５Å、ｃ〜１７．６３Å、およびβ〜９１．７５°を有する。
【００７６】
第３の実施形態の第５の態様は、単斜晶系結晶性ＳＰ−４に関し、好ましくは、以下の単位セルパラメーターａ〜１２．９３Å、ｂ〜６．１８Å、ｃ〜１８．０１Å、およびβ〜９６．４０°を有する。
【００７７】
第３の実施形態の第６の態様は、約：５．２、７．５、９．６、１６．７、１８．３、２２．２においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＳＰ−４に関する。
【００７８】
第３の実施形態の第７の態様は、約：５．０、７．３、９．４、および１８．１においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＳＰ−４に関する。
【００７９】
第３の実施形態の第８の態様は、約：４．９、６．９、９．８、１９．８、２０．６、２４．７、および２６．１においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＳＰ−４に関する。
【００８０】
第３の実施形態の第９の態様は、約：６．９、９．８、１９．７、２０．６、および２４．６においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＳＰ−４に関する。
【００８１】
第３の実施形態の第９の態様は、約：５．０、６．８、１９．９、２０．６、２０．９、および２４．９においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＳＰ−４に関する。
【００８２】
第３の実施形態の第１０の態様は、約：５．２、６．６、７．１、１５．７、１９．１、および２５．０においてＸＲＰＤ  ２θ反射（°）を有する結晶性ＳＰ−４に関する。
【００８３】
第３の実施形態の第１１の態様は、図３、図４、図５、図６、図７、および図８のいずれか１つに示されるもののような実質的にＸＲＰＤ回折パターンを含む結晶性ＳＰ−４に関する。
【００８４】
第３の実施形態の第１２の態様は、以下のＦＴ−ＩＲピーク（ｃｍ−１）約：１７４３、１７１３、１６８８、１４５４、１３７８、１２０８、および１０８２を有するＳＰ−４に関する。
【００８５】
第３の実施形態の第１３の態様は、図７に示されるようなＦＴ−ＩＲスペクトルを実質的に有するＳＰ−４に関する。
【００８６】
第３の実施形態の第１４の態様は、実質的に純粋なＳＰ−４に関する。
【００８７】
第３の実施形態の第１５の態様は、実質的に純粋な結晶性ＳＰ−４に関する。
【００８８】
第３の実施形態の第１６の態様は、実質的に純粋なアモルファス性ＳＰ−４に関する。
【００８９】
投薬量、投与、および使用
第４の実施形態は、化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかを使用する、ウイルス性因子のいずれかの治療および／または予防のための組成物に関する。可能性があるウイルス性因子には、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、牛ウイルス性下痢症ウイルス、日本脳炎ウイルス、またはペスチウイルス、ヘパシウイルス、またはフラバウイルスのグループに属するウイルスが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９０】
この実施形態の１つの態様は、本明細書に開示されるウイルス性因子のいずれかの治療のための組成物に関し、上記組成物は、賦形剤、キャリア、希釈剤、および等価な媒体の中から選択される薬学的に受容可能な媒体、ならびに、水和物、溶媒和物、および、化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４またはその水和物およびその溶媒和物のいずれかの任意の結晶型を含むことが意図される化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかを含む。
【００９１】
化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は、広範な種々の経口投与剤形およびキャリア中で独立して製剤化されてもよい。経口投与は、錠剤、コーティング錠剤、ハードおよびソフトゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン、シロップ、または懸濁液の剤形であり得る。化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は、投与の経路の中でも、坐剤投与によって投与されるときに有効である。投与の最も便利な様式は、一般的には、疾患の重篤度および抗ウイルス医薬に対する患者の応答に従って調整できる、便利な日々の投薬レジメンを使用する経口である。
【００９２】
１種以上の従来的な賦形剤、キャリア、または希釈剤と一緒にある化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は、薬学的組成物および単位剤形の型で配置されてもよい。薬学的組成物および単位剤形は、さらなる活性化合物を伴ってまたは伴わずに、従来的な割合で従来的な成分から構成されてもよく、この単位剤形は、利用される日々の意図される投薬範囲に相応する任意の適切な有効量の活性成分を含んでもよい。薬学的組成物は、経口使用のためには、錠剤もしくは充填カプセル、半固体、散剤、持続放出製剤などの固体として、または懸濁液、エマルジョン、もしくは充填カプセルなどの液体として；あるいは直腸または膣投与のためには、坐剤の型で利用されてもよい。典型的な調製物は、約５％〜約９５％活性化合物（ｗ／ｗ）を含有する。
【００９３】
化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は単独で投与できるが、一般的には、意図される投与の経路および標準的な薬学的実務に関して選択される１種以上の適切な薬学的賦形剤、希釈剤、またはキャリアと混合して投与される。
【００９４】
固体剤形の調製物には、例えば、散剤、錠剤、丸薬、カプセル、坐剤、および分散性顆粒が挙げられる。固体キャリアは、希釈剤、香料、溶解剤、滑剤、懸濁剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化物質としてもまた働いてもよい、１種以上の物質であってもよい。散剤中では、キャリアは、一般的には、微細に分割された活性成分と混合されている、微細に分割された固形物である。錠剤中では、活性成分は、一般的には、適切な割合の必要な結合能を有するキャリアと混合され、所望の形状およびサイズに圧縮されている。適切なキャリアには、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖類、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバターなどが挙げられるがこれらに限定されない。固体剤形調製物は、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、濃厚剤、可溶化剤などを含有してもよい。固体製剤の例は、ＥＰ  ０５２４５７９；ＵＳ  ２００２／０１４２０５０；ＵＳ  ２００４／０２２４９１７；ＵＳ  ２００５／００４８１１６；ＵＳ  ２００５／００５８７１０；ＵＳ  ２００６／００３４９３７；ＵＳ  ２００６／００５７１９６；ＵＳ  ２００６／０１８８５７０；ＵＳ  ２００７／００２６０７３；ＵＳ  ２００７／００５９３６０；ＵＳ  ２００７／００７７２９５；ＵＳ  ２００７／００９９９０２；ＵＳ  ２００８／００１４２２８；ＵＳ  ６，２６７，９８５；ＵＳ  ６，２９４，１９２；ＵＳ  ６，３８３，４７１；ＵＳ  ６，３９５，３００；ＵＳ  ６，５６９，４６３；ＵＳ  ６，６３５，２７８；ＵＳ  ６，６４５，５２８；ＵＳ  ６，９２３，９８８；ＵＳ  ６，９３２，９８３；ＵＳ  ７，０６０，２９４；およびＵＳ  ７，４６２，６０８において例示されており、これらの各々は参照により組み込まれる。
【００９５】
液体製剤もまた経口投与のために適切であり、エマルジョン、シロップ、エリキシル、および水性懸濁液を含む液体製剤を含む。これらは、使用直前に液体型調製物に転換されることが意図されている固体型調製物を含む。液体製剤の例は、米国特許第３，９９４，９７４号；同第５，６９５，７８４号；および同第６，９７７，２５７号に例示されている。エマルジョンは、溶液中で、例えば、プロピレングリコール水溶液中で調製されてもよく、またはレシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアカシアなどの乳化剤を含んでもよい。水性懸濁液は、天然または合成のガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁剤などの粘性物質とともに、水中で微細に分けられた活性成分を分散させることによって調製できる。
【００９６】
化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は、坐剤としての投与のために、独立して製剤化されてもよい。脂肪酸グリセリドまたはココアバターの混合物などの低融点ワックスが最初に融解され、例えば、撹拌によって、活性成分が均質に分散される。次いで、融解された均質混合物が好都合なサイズの型に注がれ、冷却され、そして固化される。
【００９７】
化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は、膣投与のために独立して製剤化されてもよい。活性成分に加えて、このようなキャリアを含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレーは、当該分野において適切であることが知られている。特定のこれらの製剤はまた、殺精子剤を有するかまたは有さないコンドームとともに使用されてもよい。
【００９８】
薬学的キャリア、希釈剤、および賦形剤を伴う適切な製剤はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １９９５，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａに記載されており、本明細書によって参照により組み込まれる。訓練された製剤科学者は、本発明で意図される化合物を含有する組成物を不安定にすることなく、またはそれらの治療活性を損なうことなく、特定の経路の投与のために多数の製剤を提供するために本明細書の教示内で製剤を改変してもよい。
【００９９】
加えて、精製された化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４は、リポソームまたはミセルとともに独立して製剤化されてもよい。リポソームに関しては、精製された化合物は、各々が参照により組み込まれる、米国特許第４，７９７，２８５号；同第５，０１３，５５６号；同第５，０７７，０５６号；同第５，０７７，０５７号；同第５，１５４，９３０号；同第５，１９２，５４９号；同第５，２１３，８０４号；同第５，２２５，２１２号；同第５，２７７，９１４号；同第５，３１６，７７１号；同第５，３７６，３８０号；同第５，５４９，９１０号；同第５，５６７，４３４号；同第５，７３６，１５５号；同第５，８２７，５３３号；同第５，８８２，６７９号；同第５，８９１，４６８号；同第６，０６０，０８０号；同第６，１３２，７６３号；同第６，１４３，３２１号；同第６，１８０，１３４号；同第６，２００，５９８号；同第６，２１４，３７５号；同第６，２２４，９０３号；同第６，２９６，８７０号；同第６，６５３，４５５号；同第６，６８０，０６８号；同第６，７２６，９２５号；同第７，０６０，６８９号；および同第７，０７０，８０１号に開示されるような様式で製剤化できることが意図されている。ミセルに関しては、精製された化合物は、両方とも参照により組み込まれる、米国特許第５，１４５，６８４号および同第５，０９１，１８８号に開示されるような様式で製剤化できることが意図される。
【０１００】
第５の実施形態は、以下のウイルス性因子：Ｃ型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、牛ウイルス性下痢症ウイルス、および日本脳炎ウイルスのいずれか１つによる感染の結果である任意の状態の治療のための医薬の製造における化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかの使用に関する。
【０１０１】
「医薬」という用語は、その必要がある被験体の治療および／または予防の方法において使用される物質を意味し、ここで、この物質としては、化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかを含む組成物、製剤、剤形などが挙げられるがこれらに限定されない。単独で、または本明細書に開示される別の化合物と組み合わせてのいずれかで、本明細書に開示される抗ウイルス条件のいずれかの治療のための医薬の製造における、化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかの使用が意図される。医薬としては、本明細書に開示される第４の実施形態によって意図される組成物のいずれか１つが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０２】
第６の実施形態は、その必要がある被験体における治療および／または予防の方法に関し、上記方法は、治療有効量の化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかを被験体に投与することを含む。
【０１０３】
その必要がある被験体とは、本明細書に開示されるウイルス性因子のいずれかによる感染の結果の任意の状態を有するものであり、この因子としては、Ｃ型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デング（ｄｅｇｕｅ）ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、牛ウイルス性下痢症ウイルス、または日本脳炎ウイルス、フラビウイルス科のウイルスまたはペスチウイルスまたはヘパシウイルスまたは上記に列挙したウイルスのいずれかと等価であるかもしくはそれに比較し得る徴候を引き起こすウイルス性因子が挙げられるがこれらに限定されないことが意図される。
【０１０４】
「被験体」という用語は、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、シチメンチョウ、バッファロー、ラマ、ダチョウ、イヌ、ネコ、およびヒトが挙げられるがこれらに限定されない哺乳動物を意味し、好ましくは、この被験体はヒトである。第９の実施形態の被験体を治療する方法は、単独で、または本明細書に開示される別の化合物と組み合わせてのいずれかで、本明細書に意図される化合物のいずれかであり得ることが意図される。
【０１０５】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、個体における疾患の徴候を減少させるために必要とされる量を意味する。この用量は、各特定の場合における個々の要求まで調整される。この投薬量は、治療される疾患の重篤度、患者の年齢および一般的な健康状態、患者がそれを用いて治療されている他の医薬、投与の経路および型、ならびに関与している医薬の実務者の選択および経験などの多数の要因に依存して、広い限度内で変化できる。経口投与のために、間のすべての値を含む１日あたり約０．００１から約１０ｇの間の日々の投薬量、例えば、０．００１、０．００２５、０．００５、０．００７５、０．０１、０．０２５、０．０５０、０．０７５、０．１、０．１２５、０．１５０、０．１７５、０．２、０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、および９．５が、単独治療および／または組み合わせ治療において適切であるはずである。特定の日々の投薬量は、１日あたり約０．０１から約１ｇの間であり、間のすべての０．０１ｇ（すなわち、１０ｍｇ）増分値を含み、好ましい日々の投薬量は１日あたり約０．０１から０．８ｇであり、より好ましくは１日あたり約０．０１から約０．６ｇであり、最も好ましくは、１日あたり約０．０１から約０．２５ｇであり、これらの各々は、間の０．０１ｇのすべての増分値を含む。一般的には、治療は、ウイルスを急速に減少または抹殺するための大量の初期の「負荷用量」で開始し、続いて、感染の再発を妨害するために十分なレベルの用量まで減少させる。本明細書に記載される疾患を治療する際の当業者は、過度の実験を伴うことなく、かつ知識、経験、および本願の開示に頼って、所定の疾患および患者のための本明細書に開示される化合物の治療有効量を確定することが可能である。
【０１０６】
治療の有効性は、血清タンパク質（例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（例えば、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギントランスアミナーゼ）、５'−ヌクレオシダーゼ、γ−グルタミニルトランスペプチダーゼなど）などのタンパク質レベル、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成が挙げられるがこれらに限定されない肝機能の試験；炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝が挙げられるがこれらに限定されない肝臓代謝機能から確定できる。あるいは、治療の有効性は、ＨＣＶ−ＲＮＡを測定することによってモニターされてもよい。これらの試験の結果は、用量が最適化されることを可能にする。
【０１０７】
第６の実施形態の第１の態様は、その必要がある被験体における治療および／または予防の方法に関し、上記方法は、化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかによって表される治療有効量の化合物および治療有効量の別の抗ウイルス剤を被験体に投与することを包含し、ここで、この投与は同時または代替的である。代替投与の間の時間は１−２４時間の間の範囲であり得、これは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、および２３時間を含む間の任意の下位の範囲を含むことが理解される。
【０１０８】
「別の抗ウイルス剤」の例には以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤（ＥＰ  １８８１００１、ＵＳ  ２００３１８７０１８、ＵＳ  ２００５２６７０１８、ＷＯ  ２００３００６４９０、ＷＯ  ２００３６４４５６、ＷＯ  ２００４０９４４５２、ＷＯ  ２００５０２８５０２、ＷＯ  ２００５０３７２１４、ＷＯ  ２００５０９５４０３、ＷＯ  ２００７０１４９２０、ＷＯ  ２００７０１４９２１、ＷＯ  ２００７０１４９２２、ＷＯ  ２００７０１４９２５、ＷＯ  ２００７０１４９２６、ＷＯ  ２００７０１５８２４、ＷＯ  ２００８０１０９２１、およびＷＯ  ２００８０１０９２１を参照のこと）；ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤（ＵＳ  ２００４２２９８４０、ＵＳ  ２００５１５４０５６、ＵＳ  ２００５−９８１２５、ＵＳ  ２００６０１９４７４９、ＵＳ  ２００６０２４１０６４、ＵＳ  ２００６０２９３３０６、ＵＳ  ２００６０４０８９０、ＵＳ  ２００６０４０９２７、ＵＳ  ２００６１６６９６４、ＵＳ  ２００７２７５９４７、ＵＳ  ６７８４１６６、ＵＳ２００７２７５９３００、ＷＯ  ２００２０５７２８７、ＷＯ  ２００２０５７４２５、ＷＯ  ２００３０１０１４１、ＷＯ  ２００３０３７８９５、ＷＯ  ２００３１０５７７０、ＷＯ  ２００４０００８５８、ＷＯ  ２００４００２９４０、ＷＯ  ２００４００２９４４、ＷＯ  ２００４００２９７７、ＷＯ  ２００４００３１３８、ＷＯ  ２００４０４１２０１、ＷＯ  ２００４０６５３６７、ＷＯ  ２００４０９６２１０、ＷＯ  ２００５０２１５６８、ＷＯ  ２００５１０３０４５、ＷＯ  ２００５１２３０８７、ＷＯ  ２００６０１２０７８、ＷＯ  ２００６０２００８２、ＷＯ  ２００６０６５３３５、ＷＯ  ２００６０６５５９０、ＷＯ  ２００６０９３８０１、ＷＯ  ２００７０２６０２、ＷＯ  ２００７０３９１４２、ＷＯ  ２００７０３９１４５、ＷＯ  ２００７０７６０３４、ＷＯ  ２００７０８８１４８、ＷＯ  ２００７０９２０００、およびＷＯ２００７０９５２６９を参照のこと）；ＨＣＶ  ＮＳ４阻害剤（ＷＯ  ２００５０６７９００およびＷＯ  ２００７０７０５５６を参照のこと）；ＨＣＶ  ＮＳ５ａ阻害剤（ＵＳ  ２００６２７６５１１、ＷＯ  ２００６０３５０６１、ＷＯ  ２００６１００３１０、ＷＯ  ２００６１２０２５１、およびＷＯ  ２００６１２０２５２を参照のこと）；Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（ＷＯ  ２００７０９３９０１を参照のこと）；および他の阻害剤（ＷＯ  ２０００００６５２９、ＷＯ  ２００３１０１９９３、ＷＯ  ２００４００９０２０、ＷＯ  ２００４０１４３１３、ＷＯ  ２００４０１４８５２、およびＷＯ  ２００４０３５５７１を参照のこと）；および２００８年３月２１日に出願された米国特許出願第１２／０５３，０１５号に開示されている化合物（ＵＳ  ２０１０／００１６２５１）（この内容は参照により組み込まれる）、インターフェロンα、インターフェロンβ、ペグ化インターフェロンα、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶ非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、またはＨＣＶ融合阻害剤。
【０１０９】
化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれかが別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されるとき、活性は親の化合物を超えて増加されてもよい。治療が組み合わせ治療であるとき、このような投与は、ヌクレオシド誘導体のそれに関して同時または連続的であってもよい。従って、本明細書で使用される「同時投与」とは、同じ時点または異なる時点での薬剤の投与を含む。２種以上の薬剤の同時の投与は、２種以上の活性成分を含有する単一の製剤によって、または単一の活性薬剤を有する２つ以上の剤形の実質的な同時投与によって、達成できる。
【０１１０】
治療に対する本明細書における言及は、存在する状態の治療に対してと同様に、予防に対しても拡張されることが理解される。さらに、本明細書で使用される、ＨＣＶ感染の「治療」という用語は、ＨＣＶ感染と関連するか、もしくはＨＣＶ感染によって媒介される疾患もしくは状態、またはその臨床徴候の治療または予防もまた含む。
【０１１１】
調製
第７の実施形態は、化合物４、ＲＰ−４、またはＳＰ−４のいずれか１つを調製するためのプロセスに関し、これは、ａ）イソプロピル−アラニン酸、Ａ、ジ−ＬＧ−フェニルリン酸、Ｂ、２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン、３、および塩基を反応させて、ＳＰ−４およびＲＰ−４の少なくとも１つを含む第１の混合物を得ること
0005909535.tif 000006
ここで、Ｘは酸の共役塩基であり、ｎは０または１であり、およびＬＧは脱離基であり；ｂ）第１の混合物を保護化合物と反応させて、保護されたＳＰ−４および保護されたＲＰ−４の少なくとも１つを含む第２の混合物を得ること；ならびにｃ）任意に、４、ＳＰ−４、またはＲＰ−４を得るために、上記第２の混合物を、結晶化、クロマトグラフィー、または抽出に供することを包含する。
【０１１２】
第７の実施形態の第１の態様において、イソプロピルアラニン酸はその塩酸塩として存在し、これは好ましくは、実質的に無水である。
【０１１３】
第７の実施形態の第２の態様において、塩基はＮ−メチルイミダゾールである。
【０１１４】
第７の実施形態の第３の態様において、Ａ−対−Ｂ−対−３のモル比は約１．６−対−１．３−対−１である。
【０１１５】
第７の実施形態の第４の態様において、保護化合物はｔ−ブチル−ジメチル−シリル−クロリドである。
【０１１６】
第８の実施形態は、ＳＰ−４またはＲＰ−４を調製するためのプロセスに関し、これは、ａ）イソプロピル−アラニン酸、Ａ、ジ−ＬＧ−フェニルリン酸、Ｂ、２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン、３、および塩基を反応させて、ＳＰ−４およびＲＰ−４の少なくとも１つを含む第１の混合物を得ること
0005909535.tif 000007
ここで、Ｘは酸の共役塩基であり、ｎは０または１であり、およびＬＧは脱離基であり；ならびにｂ）精製されたＳＰ−４またはＲＰ−４を得るために、第２の混合物を、結晶化、クロマトグラフィー、または抽出に供することを包含する。
【０１１７】
ＲＰ−４を調製するための第８の実施形態の第１の態様は、溶媒中に第２の混合物または精製されたＲＰ−４混合物を溶解または懸濁すること；任意に、続いて結晶性ＲＰ−４で播種すること；および十分な抗溶媒を添加して結晶性ＲＰ−４を得ることによって、第２の混合物または精製されたＲＰ−４をさらに精製することを追加的に含む。
【０１１８】
ＳＰ−４を調製するための第８の実施形態の第２の態様は、ｄ）溶媒中に第２の混合物または精製されたＳＰ−４を溶解または懸濁すること；続いてほぼ室温にて結晶性ＳＰ−４を播種すること；その大部分がＳＰ−４を含む第１の固形物を収集すること；その還流温度で溶媒中の第１の固形物を溶解すること；および冷却しまたは十分な抗溶媒を添加して第２の固形物を得ることによって、第２の混合物または精製されたＳＰ−４をさらに精製することを追加的に含む。
【０１１９】
ＳＰ−４の調製のための第８の実施形態の第３の態様は、ｄ）第１の溶媒中に第２の混合物または精製されたＳＰ−４混合物を溶解または懸濁すること；続いて第１の組成物を得るために抗溶媒を加え、ここで、残りの溶媒／抗溶媒はデカンテーションによって除去されて残渣を得ること；第１の溶媒および抗溶媒を含有する溶液でこの残渣を処理して、第２の組成物を生じ、それによって、圧力を減少する際に第１の固形物を与えること；第２の溶媒を使用して第１の固形物を溶解または懸濁して、第３の組成物を得ること；ＳＰ−４の種結晶を第３の組成物に加えること；第２の固形物を収集すること；任意に、第３の溶媒の還流温度まで加熱された第３の溶媒中で、第２の固形物を溶解または懸濁して、第４の組成物を得ること、および、必要な場合、第４の組成物を冷却して、ＳＰ−４を含む第３の固形物を得、これがろ過によって収集されることによってＳＰ−４をさらに精製することを追加的に含む。
【０１２０】
ＳＰ−４の調製のための第８の実施形態の第４の態様において、ｄ）第２の混合物または精製されたＳＰ−４にシリカゲルを添加し、続いて溶媒のエバポレーションを行って乾燥スラリーを与えること；この乾燥スラリーを第１の溶媒／抗溶媒の組み合わせの中で撹拌して、第１のウェットスラリーを得ること；第１のウェットスラリーから第１の溶媒／抗溶媒の組み合わせをデカントして、第２のウェットスラリーおよび第１の組成物を得ること；第２のウェットスラリーに第２の溶媒／抗溶媒の組み合わせを加え、続いて撹拌を行うこと；第２のウェットスラリーから第２の溶媒／抗溶媒の組み合わせをデカントして、第３のウェットスラリーおよび第２の組成物を得ること；任意に、第３のウェットスラリーまたはさらなるウェットスラリー上で工程ｇ）−ｈ）を反復すること；第２の組成物、および選択的に、選択的な工程ｉ）から得られる任意のさらなる組成物から溶媒をエバポレートして、第１の固形物を得ること；第３の溶媒および任意に第４の溶媒を含む溶液中に第１の固形物を溶解または懸濁して、第３の組成物を得ること；任意に、第３の組成物にＳＰ−４の種結晶を加えること；第３の組成物から、ＳＰ−４を含む第２の固形物を得ること；および任意に、第３の溶媒を使用して、第２の固形物を再結晶化して、ＳＰ−４を含む第３の固形物を得ることにより、ＳＰ−４は、第２の混合物または精製されたＳＰ−４によってさらに精製される。
【０１２１】
当業者は、化合物が、伝統的な抽出、伝統的な結晶化、または伝統的なクロマトグラフィー技術により分離できることを認識している。伝統的なクロマトグラフィー技術には、１つの異性体のレベルを増強し（５０−１００％）、次いでそれを結晶化するためのシリカゲル上のクロマトグラフィー（例えば、ＤＣＭ中の３−５％メタノールまたはＤＣＭ中の４−６％イソプロパノールを使用する）が挙げられるがこれらに限定されない。あるいは、逆相クロマトグラフィーを使用できる（例えば、１−３０％アセトニトリル−水移動相を使用する）。さらに、化合物は、主要な溶媒としての二酸化炭素および修飾剤としてのメタノールなどのアルコールを用いる超臨界流体クロマトグラフィーＳＦＣによって、好ましくは、Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ  ＩＡなどの適切なキラル媒体を使用して単離できる。あるいは、ＳＭＢクロマトグラフィーは、Ｄａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＰａｃｋ  ＩＡなどの適切なキラル媒体を使用して、ヘキサン／イソプロパノールなどの溶媒の混合物または酢酸エチルなどの単一溶媒を使用して利用されてもよい。
【０１２２】
第９の実施形態は、ＳＰ−４を調製するためのプロセスに関し、このプロセスは：ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートを３'−Ｏ−保護されたかまたは保護されていない３、および塩基試薬と反応させて、保護されたかまたは保護されていないＳＰ−４を含む組成物を得ることを包含し
0005909535.tif 000008
ここで、イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートは、以下の構造によって表されるジアステレオマーの混合物から構成され：
0005909535.tif 000009
ここで、Ｃ：Ｃ'の比率は約１：１である。
【０１２３】
第１の態様において、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ'の比率は約１：１以上である。
【０１２４】
第２の態様において、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ'の比率は約１：１より大きい。
【０１２５】
第３の態様において、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ'の比率は、少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１２６】
第４の態様において、ＬＧ'はｐ−ニトロフェノキシドであり、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ'の比率は少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１２７】
ＳＰ−４を調製するための第５の態様は、ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデート（Ｃ）を３'−Ｏ−保護されたかまたは保護されていない３、および塩基試薬と反応させて、保護されたかまたは保護されていないＳＰ−４を含む組成物を得ること
0005909535.tif 000010
ここで、Ｚは保護基または水素であり、ＬＧ'は脱離基であり；ならびにｂ）任意に、精製された、保護されたかまたは保護されていないＳＰ−４を得るために、得られた保護されたかまたは保護されていないＳＰ−４を、クロマトグラフィー、抽出、または結晶化に供することを包含する。下位の実施形態において、ＬＧ'は、トシレート、カンファースルホン酸、または少なくとも１つの電子求引基で置換されたアリールオキシドであり；より好ましくは、ＬＧ'は、ｐ−ニトロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドの中から選択される。さらなる下位の実施形態において、ＳＰ−４が保護されるとき、すなわち、Ｚが水素ではないとき、第９の実施形態のプロセスは、保護されたＳＰ−４を脱保護することにさらに関する。さらなる下位の実施形態において、反応は、単独で、または互いにもしくはアセトニトリルなどのＣ２〜Ｃ７ニトリルと組み合わせたかのいずれかのものである、テトラヒドロフランまたは別のエーテル性溶媒などの極性非プロトン性溶媒中で行われる。
【０１２８】
第９の実施形態のプロセスは、１）ＬＧがＬＧ'とは無関係に脱離基である、（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２を、（ｉ）（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて、（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）をフェノールおよび第２の塩基と反応させてＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのイソプロピル−アラニン酸および第１の塩基と、（ｉｉ）（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）を得、続いて、（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）をイソプロピル−アラニン酸および第２の塩基と反応させてＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのフェノールおよび第１の塩基と、もしくは（ｉｉｉ）ＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのイソプロピル−アラニン酸、フェノール、および少なくとも１種の塩基の組み合わせと反応させること；または２）ＬＧ'がＬＧとは無関係に脱離基である（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２を、（ｉ）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて、（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）を脱離基前駆体および第２の塩基と反応させて、ＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのイソプロピル−アラニン酸および第１の塩基と反応させること、
0005909535.tif 000011
ならびにこの混合物を、クロマトグラフィーまたは結晶化に供して、Ｃを得ることをさらに包含する。
【０１２９】
第９の実施形態の１つの態様において、イソプロピルアラニン酸がその塩酸塩型で存在し、これは好ましくは実質的に無水である。
【０１３０】
第１０の実施形態は、ＲＰ−４を調製するためのプロセスに関し、このプロセスは、ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートを、３'−Ｏ−保護されたかまたは保護されていない３、および塩基試薬と反応させて、保護されたかまたは保護されていないＲＰ−４を含む組成物を得ることを包含し
0005909535.tif 000012
ここで、イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートは、以下の構造によって表されるジアステレオマーの混合物から構成され：
0005909535.tif 000013
ここで、Ｃ'：Ｃの比率は約１：１である。
【０１３１】
第１の態様において、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ'：Ｃの比率は約１：１以上である。
【０１３２】
第２の態様において、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ'：Ｃの比率は約１：１より大きい。
【０１３３】
第３の態様において、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ'：Ｃの比率は、少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１３４】
第４の態様において、ＬＧ'はｐ−ニトロフェノキシドであり、塩基試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ'：Ｃは少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１３５】
ＲＰ−４を調製するための第５の態様は、ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデート（Ｃ'）を３'−Ｏ−保護されたかまたは保護されていない３、および塩基試薬と反応させて、保護されたかまたは保護されていないＲＰ−４を含む組成物を得ること
0005909535.tif 000014
ここで、Ｚは保護基または水素であり、ＬＧ'は脱離基であり；およびｂ）任意に、得られた、保護されたかまたは保護されていないＲＰ−４を得るために、保護されたかまたは保護されていないＲＰ−４を、クロマトグラフィー、抽出、または結晶化に供することを包含する。下位の実施形態において、ＬＧ'は、トシレート、カンファースルホン酸、または少なくとも１つの電子求引基で置換されたアリールオキシドであり；より好ましくは、ＬＧ'は、ｐ−ニトロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドの中から選択される。さらなる下位の実施形態において、ＲＰ−４が保護されるとき、すなわち、Ｚは水素ではなく、第９の実施形態のプロセスは、保護されたＲＰ−４を脱保護することに関する。さらなる下位の実施形態において、反応は、単独で、または互いにもしくはアセトニトリルなどのＣ２〜Ｃ７ニトリルと組み合わせたかのいずれかのものである、テトラヒドロフランまたは別のエーテル性溶媒などの極性非プロトン性溶媒中で行われる。
【０１３６】
第１０の実施形態のプロセスは、１）ＬＧがＬＧ'とは無関係に脱離基である、（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２を、（ｉ）（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて、（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）をフェノールおよび第２の塩基と反応させてＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのイソプロピル−アラニン酸および第１の塩基と、（ｉｉ）（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）を得、続いて、（ＬＧ'）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）をイソプロピル−アラニン酸および第２の塩基と反応させてＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのフェノールおよび第１の塩基と、もしくは（ｉｉｉ）ＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのイソプロピル−アラニン酸、フェノール、および少なくとも１種の塩基の組み合わせと反応させること；または２）ＬＧ'がＬＧとは無関係に脱離基である（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２を、（ｉ）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて、（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（Ａｌａ−ｉＰｒ）を脱離基前駆体および第２の塩基と反応させて、ＣおよびＣ'を含む混合物を得るためのイソプロピル−アラニン酸および第１の塩基と反応させること、
0005909535.tif 000015
ならびにこの混合物を、クロマトグラフィーまたは結晶化に供して、Ｃ'を得ることをさらに包含する。第９の実施形態の１つの態様において、イソプロピルアラニン酸がその塩酸塩型で存在し、これは好ましくは実質的に無水である。
【０１３７】
第１１の実施形態は、第７の実施形態、第８の実施形態、第９の実施形態、または第１０の実施形態、ならびにそれらのそれぞれの態様に列挙されるプロセスによって得られる組成物に関する。第１１の実施形態の１態様は、以下に開示される例示的な実施形態のいずれか１つによって得られる組成物に関する。そのように得られる組成物は、結晶性、結晶様、アモルファス性、またはこれらの組み合わせであり得る。
【０１３８】
第１２の実施形態は化合物３に関し
0005909535.tif 000016
ここで、Ｚは保護基または水素であり；これはＲＰ−４またはＳＰ−４の調製のために有用である。
【０１３９】
第１２の実施形態の第１の態様は、以下の構造を有する化合物の中から選択される。
0005909535.tif 000017
【０１４０】
第１３の実施形態は、以下の構造によって表される化合物、その塩、水和物、溶媒和物、またはその組み合わせに関する。
0005909535.tif 000018
ここで、ＬＧ'は脱離基であり、これは、ＲＰ−４またはＳＰ−４の調製のために有用である。
【０１４１】
第１３の実施形態の第１の態様において、ＬＧ'はトシレート、カンファースルホン酸、アリールオキシド、または少なくとも１つの電子求引基で置換されたアリールオキシドである。
【０１４２】
第１３の実施形態の第２の態様において、ＬＧ'は、ｐ−ニトロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドの中から選択される。
【０１４３】
第１４の実施形態は、アイソトープ標識されたＲＰ−４またはＳＰ−４のアナログに関する。「アイソトープ標識された」アナログという用語は、「重水素置換されたアナログ」、「１３Ｃ標識されたアナログ」、または「重水素置換／１３Ｃ標識されたアナログ」であるＲＰ−４またはＳＰ−４のアナログに関する。「重水素置換されたアナログ」という用語は、１Ｈ−アイソトープ、すなわち、水素（Ｈ）が、２Ｈ−アイソトープ、すなわち、重水素（Ｄ）によって置換されている、本明細書に記載されている化合物を意味する。重水素置換は部分的または完全であり得る。部分的重水素置換とは、少なくとも１つの水素が少なくとも１つの重水素によって置換されていることを意味する。例えば、ＲＰ−４またはＳＰ−４については、当業者は、少なくとも以下の部分重水素置換アナログ（「ｄｎ」は重水素原子のｎ数を表し、例えば、イソプロピル基については、ｎ＝１−７であるのに対し、フェニル基については、ｎ＝１−５である）、ならびに以下に示されるものを意図することができる。
0005909535.tif 000019
【０１４４】
上記に示されたメチル基は完全に重水素置換されたものとして示されているが、部分的に重水素置換されたバリエーションもまた可能であり、例えば、−ＣＤＨ２および−ＣＤ２Ｈであることが認識される。フラノンおよび塩基上のアイソトープ標的もまた意図される。同様に、「１３Ｃ標識アナログ」および「重水素置換／１３Ｃ標識アナログ」という用語は、それによって、炭素原子が１３Ｃアイソトープで富化されており、富化の程度が通常の天然の豊富さの約１．１％を超えることを意味する、本明細書に記載される化合物をいう。
【実施例】
【０１４５】
例として制限されるのではなく、以下の実施例は、本開示のより良好な理解を容易にするように働く。
【０１４６】
合成の態様
ウリジンヌクレオシドを調製するために、パイロットプラントスケールですでに効率的に製造された特定の３の３'，５'−ジアシル化アナログ（以下を参照のこと）の合成における進行したトリベンゾイル化シチジン中間体を利用できる（ＷＯ  ２００６／０３１７２５またはＵＳ  ２００６／０１２２１４６を参照のこと、これらの両方は、それらの全体が参照により組み込まれる）。以下の方法は、スケール変更可能でありかつコスト効果が優れていることが見い出された。
0005909535.tif 000020
【０１４７】
３'，５'−Ｏ−ジベノジル−２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチル−Ｎ４−ベンゾイルシチジン（１）は、ＷＯ  ２００６／０３１７２５およびＷＯ  ２００８／０４５４１９に開示されている方法によって得られ、この両方はその全体が参照により組み入れられる。１は７０％酢酸水溶液で処理されて、３'，５'−Ｏ−ジベノジル−２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチル−ウリジン（２）を形成する。ベンゾイルエステルは、同様に多数の方法、例えば、アルコール性溶媒中のアルコキシド、例えば、メタノール中のナトリウムメトキシド、メタノール中の炭酸カリウム、またはエタノールアナログ、メタノール中のアルキルアミン、例えば、メチルアミン、ブチルアミンなどによって加水分解できる。メタノール性アンモニアは、大スケール研究のために選択された。ウリジン生成物（３）は結晶化によって精製されて、トリベンゾイル化シチジン（１）から７０％収率で生じることができる。
【０１４８】
多くの文献の手順が、数倍当量の試薬を使用してホスホルアミデートを作製するための異なる経路および条件を詳述している。例えば、ＭｃＧｕｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５、４８、３５０４−３５１５  ａｎｄ  ＭｃＧｕｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６、４９、７２１５を参照のこと。プロセススケールの研究において、現在公知の唯一の例が存在し、これはＬｅｈｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２００２，６，８１９−８２２（「Ｌｅｈｓｔｅｎ」）に開示されている。この文献において、著者らは、「ワンポット手順」の概念を提出しており、ここでは、アミノ酸塩酸塩およびジクロロリン酸フェニルが、ジクロロメタン中のＮ−メチルイミダゾールと一緒に反応される。その後、ヌクレオシドは、所望の５'−Ｏ−ホスホルアミデート生成物を形成するために加えられ、これは、本件の場合、化学式４によって表される化合物を生じる。不運にも、Ｌｅｈｓｔｅｎ手順は欠点がある。例えば、Ｌｅｈｓｔｅｎ手順は、必要とされるよりもはるかに大量の試薬を利用し、これは、クロマトグラフィー精製のコストおよび困難さを増大した。さらに、Ｌｅｈｓｔｅｎは、より低い温度およびヌクレオシドの遅い付加を使用することを通した文献の参照と比較して、３'−ヒドロキシルよりも５'−ヒドロキシルに対する反応選択性を制御し得ることを示唆している。
0005909535.tif 000021
【０１４９】
本明細書に開示される化合物のためにＬｅｈｓｔｅｎ手順を使用することは、約１−５％のモノ置換３'−Ｏ−ホスホルアミデートジアステレオマー（５）および約１０−３０％のビス置換生成物（６）を提供した。３'−ジアステレオマーの極性が所望の５'−ジアステレオマー（４）に非常に類似していたので、クロマトグラフィー分離は非常に困難であった。プロセスをスケールアップすることは、より低極性の５'−ジアステレオマー（４）の実質的な部分を廃棄することなしに、または３'−ジアステレオマー（５）の高レベルの夾雑を受け入れることなしでは、ほぼ不可能であった。最初の５０ｇスケールアップにおいて、得られた生成物は、低極性の５'−ジアステレオマー（ｄｉａｓｔｅｒｅｒｏｍｅｒ）（４）と同時溶出した、約３％の３'−ジアステレオマー（５）の夾雑を含有した。
【０１５０】
より少ない量の試薬を使用する反応条件および不純物３'−Ｏ−ホスホルアミデートジアステレオマー（５）を、容易なクロマトグラフィー分離を用いて選択的に除去し、それによって、はるかにより高い純度である所望の５'−Ｏ−ホスホルアミデートジアステレオマー（４）を与えるための方法が本明細書に開示される。
【０１５１】
試薬の化学量論のために、Ｌｅｈｓｔｅｎが報告したのと同様に、試薬の化学量論が体系的に変化される研究が行われ、結果は粗反応のリンＮＭＲによってモニターされた。より首尾よい実行において、所望の生成物の単離収率および純度が比較された。一級５'−ヒドロキシルが２級３'−ヒドロキシルよりも速い速度で反応することが観察された。これは、すべての出発ヌクレオシドを消費することと、５'−および３'−モノ置換生成物（４および５）を５'，３'−ビス置換生成物（６）に転換することの反応進行間の競合する状況を生じる。３'−モノ置換生成物は、５'−モノ置換生成物よりも速くビス生成物に転換するので、反応をビス置換生成物に推進させることによって、３'−ジアステレオマー夾雑レベルを減少させることが可能である。しかし、３'−ジアステレオマーを除去するための効果的な方法を用いると、反応は、多くの５'−ジアステレオマーがビス置換物（６）に転換されるような犠牲を払う必要なく、多くの所望の５'−ジアステレオマーを産生するように最適化できる。アミノ酸塩酸塩は非常に吸湿性であることもまた観察された。存在する任意の水が当量のフェニルジクロロリン酸試薬を消費するので、アミノ酸が実質的に無水物であることを維持するように注意が払われなければならないか、またはこれは使用前に実質的に無水にするべきである。手短に述べると、Ｌｅｈｓｔｅｎは、アミノ酸対フェニルジクロロリン酸対ヌクレオシドの最適な比率は、それぞれ、３．５：２．５：１であると報告した。３'−ジアステレオマーが効果的に除去できる条件下で、かつアミノ酸塩酸塩が実質的に無水であるときには、約１．６対約１．３対約１のアミノ酸対フェニルジクロロリン酸対ヌクレオシドの最適な比率が最適であることが見い出された。少量の試薬を使用することによって、試薬の副産物からおよび減少したレベルのビスジアステレオマーからの所望の生成物のクロマトグラフィー分離の単純化と組み合わせて、コストの削減が実現される。
【０１５２】
１つの代替的な手順において、３の３'−ヒドロキシ−ブロック誘導体は、ｔ−ブチルジメチルシリルブロッキング基を使用して、２段階で調製された。次いで、これは、その５'−ホスホルアミデート誘導体に転換された。次いで、シリル基が除去でき、そこで３'異性体（５）または３'，５'−ビスホスホルアミデート（６）が存在しないという欲求がある。同様のアプローチは、Ｂｏｒｃｈ  ａｎｄ  Ｆｒｉｅｓ（米国特許第５，２３３，０３１号）によって、アルキルホスホルアミデートに対して、より低い全体の収率で実証された。
【０１５３】
別の代替のアプローチは、直接合成を使用し、次いで、分離を補助するために所望の５'−ジアステレオマー４から３'−ジアステレオマーの不純物５を識別することを補助するための化学を使用することであった。所望の５'−Ｏ−ホスホルアミデート４の遊離の２級ヒドロキシルを超えて、３'−Ｏ−ホスホルアミデート不純物５の遊離の一級ヒドロキシルと選択的に反応する基が所望される。ブロッキング基は、所望の５'−Ｏ−ホスホルアミデート４から生じる５'−Ｏ−ブロックされた３'−Ｏ−ホスホルアミデート生成物の極性を有意に変化させることもまた所望される。所望の５'−ジアステレオマー４が変化しないので、ブロッキング基を除去するために余分の工程は必要とされない。次いで、化学的に変化した３'−ジアステレオマーは、より容易なクロマトグラフィー分離または特別な除去支持体もしくは抽出による分離を可能にする。
【０１５４】
具体的には、ブロッキング基ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）はこれらの判断基準に合致し、実証され、続いてマルチキログラムスケールで使用されるための最初のものであった。溶媒および塩基としてのピリジン中などの特定の条件下では、ｔＢＤＭＳ基は、３'二級ヒドロキシル位を超えて、一級ヒドロキシル位において高い選択性で反応する。このホスホルアミデート反応は、Ｎ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ）を塩基として使用する。ＮＭＩの存在下では、シリル化は選択性が低い。好ましくは、ＮＭＩの量は減少されるべきである。これは、１Ｎ塩酸で反応溶液を洗浄することによって、ホスホルアミデート反応後に容易に達成できる。ＮＭＩおよび残存する出発ヌクレオシドが除去され、モノおよびビス置換生成物ならびに試薬副産物の粗混合物を残す。次いで、これはピリジンに溶解され、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドで処理される。３'−モノ置換生成物５は、数時間以内に、５'−Ｏ−ｔＢＤＭＳ−３'−Ｏ−ホスホルアミデート７に転換される。反応の進行は、ＨＰＬＣによってモニターできる。このシリル化生成物７の極性はビスホスホルアミデート６よりも低く、クロマトグラフィーによって容易に除去される。この方法を使用すると、シリル化処理を伴わない１−３％と比較して、０．１％未満の５'−生成物４まで、３'−モノホスホルアミデート５のレベルを減少することが可能であった。同様に、同じ条件下でのジメトキシトリフェニルメチルクロリド（ＤＭＴ−Ｃｌ）を用いる処理は、ほぼ同様に機能した。ＤＭＴ含有分子は加熱または酸への曝露に際して茶色がかったオレンジ色に染まるので、ＴＬＣによってＤＭＴ反応生成物を同定することもまたより容易であった。上記に記述されるように、多くの他のブロッキング基を使用することもまた想定できる。
【０１５５】
これらの反応条件と３'−不純物の除去の両方が一般的な方法であり、遊離の３'ヒドロキシルを有する多くのヌクレオシドホスホルアミデートに適用できる。ホスホルアミデート部分は、アミノ酸エステルと芳香族アルコールの任意の組み合わせであり得る。ヌクレオシド部分は、５'ホスホルアミデートが５'−モノリン酸をもたらし、さらに５'−トリリン酸型に代謝できる任意のヌクレオシドであり得る。
【０１５６】
以下のスキームは、２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジンのイソプロピルＬ−アラニン酸フェニルホスホルアミデートを作製するために図示される主な反応スキームであり、所望の５'−Ｏ−ホスホルアミデート（４、２種のジアステレオマー）としての主生成物および３'−Ｏ−ホスホルアミデート（５、２種のジアステレオマー）および３'，５'−ビス−Ｏ−ホスホルアミデート（６、４種のジアステレオマー）としての微量生成物を伴う。試薬は、調製セクションの方法において記載されるように、化学量論的比率で加えられる。反応は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）上でのＵＶ可視化によって判断されるように、約５％の出発物質が残るまで進行させられる。また、ＵＰＬＣ／ＭＳは、所望の５'−生成物と比較して、約１０％の３'，５'ビス−ホスホルアミデート６が形成したことを示した。クエンチングおよび酸性水溶液ワークアップ後、有機層からの粗残基がシリル化のために調製された。記載された反応条件下で、シリル基は、３'−Ｏ−ホスホルアミデートの遊離の５'−ヒドロキシルと優先的に反応して、７を形成した。この反応は、３'−Ｏ−ホスホルアミデートがＵＰＬＣ／ＭＳによってもはや検出できなくなるまで継続された。
0005909535.tif 000022
【０１５７】
シリル化反応のワークアップ後、所望の生成物はシリカゲル上のクロマトグラフィーに供され、ジクロロメタン中のメタノールのグラジエント（１−４％）で溶出された。所望の５'−モノホスホルアミデート４は最後に溶出する。
【０１５８】
調製の方法
実施例１．２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン（３）の調製
１０Ｌフラスコに、３'，５'−Ｏ−ジベノジル−２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチル−Ｎ４−ベンゾイルシチジン（５００ｇ、０．８７４ｍｏｌ）および７０％酢酸水溶液（７．５Ｌ）が加えられた。この溶液は、２０時間、加熱して還流された（１１０℃）。ＴＬＣは反応の完了を示した（ジクロロメタン（ＤＣＭ）中５％メタノール中でＲｆ  ０．６）。この混合物は周囲温度まで冷却し、水（２Ｌ）で希釈された。２時間の攪拌後、得られた沈殿はろ過によって収集され、固形物は水（５Ｌ）ですすがれ、そして周囲温度にて大気中で１２時間乾燥され、３６０ｇ（８８％）が得られた。このジベンゾイルウリジン中間体は、これを新鮮に調製されたメタノール性アンモニア（５．４Ｌ、約２５％）に０℃ですべて加えることにより、次の工程において直接的に使用された。この温度は３時間維持され、次いで、２４時間の間、１５℃に温められた。ＴＬＣは反応の完了を示した（ＤＣＭ中１０％メタノールＲｆ  ０．４）。この反応混合物は、Ｃｅｌｉｔｅベッドを通してろ過され、減圧下で濃縮されて粗生成物が得られた（２１６ｇ）。この粗生成物は、周囲温度にて、３時間、酢酸エチル（３２５ｍＬ）とともに攪拌された。得られた固形物はろ過によって収集され、酢酸エチル（２１６ｍＬ）で洗浄された。この固形物は、周囲温度にて、真空下で４時間乾燥され、１６０ｇ（７８％）の９８．７％  ＨＰＬＣ純度の所望の生成物が得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １１．４４  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．９５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ−６Ｈ），  ５．９７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ−１'Ｈ），  ５．６４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ−５Ｈ），  ３．８４−３．７７  （ｍ，  ３Ｈ，  Ｃ−５'−Ｈａ，  Ｃ−３'Ｈ．  Ｃ−４'Ｈ），  ３．６３−３．６０  （ｍ，  １Ｈ，  Ｃ５'−Ｈｂ），  １．２３  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｃ−２'−ＣＨ３）．    ＥＳ−ＭＳ  Ｍ−１  ２５９．
【０１５９】
実施例２．（Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−（Ｒ）−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメトキシ］−フェノキシ−ホスホリルアミノ｝−プロピオン酸イソプロピルエステル（４）の調製
同義語：５'−Ｏ−（イソプロピル−Ｌ−アラニン酸、フェニルホスホルアミジル）−２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチル−ウリジンジアステレオマー混合物。
【０１６０】
５Ｌの三つ口フラスコに、機械撹拌機、ブラインアイスバス、内部温度計、および窒素雰囲気が取り付けられた。このフラスコに、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（８２．０ｇ、０．４９０モル）および無水ジクロロメタン（０．８０Ｌ）が仕込まれた。これは攪拌されながら、フェニルジクロロリン酸（８５．０ｇ、０．４０モル）が１ロットで加えられ、攪拌された。内部温度を−５〜５℃の間に維持しながら、ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中のＮ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ、２５０ｇ、３．０７モル）の溶液が、３０分間の時間にわたって加えられた。この溶液はこの温度範囲で１時間攪拌された。２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチル−ウリジン（３、８０．０ｇ、０．３０７モル）が０℃で１度に加えられ、次いで、この反応フラスコは、ブラインバス中でゆっくりと温められた。１時間の時点で、内部温度は上限−２℃であった。１時間のＴＬＣ（ＤＣＭ中５％メタノール）は、５０％より多くのヌクレオシドが消費されたことを示した。このバスは取り外され、１時間以上にわたって、この反応フラスコは周囲温度に達した。３時間後でありかつ全体で５時間の時点でのＴＬＣは、開始時のヌクレオシドの９５％が消費されたことを示した。この反応混合物は、メタノール（１００ｍＬ）を加えることおよび５分間、反応物を攪拌することによってクエンチされた。
【０１６１】
この反応混合物は、１Ｎ  ＨＣｌ（２×５００ｍＬ）、続いて、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×５００ｍＬ）で洗浄された。分離した有機層は無水硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥され、そしてろ過された。この溶液は減圧下で、次いで、高真空下で乾燥するまでエバポレートされ、粘性油状物として粗生成物が得られた（１７０ｇ）。粗生成物（３１Ｐおよび１Ｈ）のＮＭＲが取られた。３１Ｐ−ＮＭＲは、全体のリン積分値の約１％が３'異性体５の存在に起因することを示した。
【０１６２】
この粗生成物に、無水ピリジン（１７００ｍＬ）が加えられた。コエバポレーションを通して粗混合物の水含量を減少させるために、この溶媒は減圧下で、次いで、高真空下でエバポレートされた。得られた油状物は無水ピリジン（５００ｍｌ）に再溶解され、次いで、過剰のｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（９．０ｇ、６０ｍＭ）が加えられた。この反応は大気温度で攪拌された。反応の進行はＵＰＬＣ／ＭＳによってモニターされた。３時間後、３'不純物５はもはや検出できず、反応は、メタノール（５０ｍＬ）の添加によってクエンチされた。
【０１６３】
この反応物は油状物まで減圧下でエバポレートされた。残渣は酢酸エチル（１．５Ｌ）に溶解され、１Ｎ  ＨＣｌ（２×５００ｍＬ）で、続いて、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×５００ｍＬ）で洗浄された。有機層は無水硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥され、ろ過され、そして減圧下でエバポレートされて、淡黄色油状物として粗生成物が得られた。
【０１６４】
この粗油状物は同じ体積のジクロロメタンで希釈され、１００ｐｓｉの空気圧のラジアル圧縮モジュールの中で２．５Ｋｇ  シリカゲルカートリッジにロードされた。６０ｐｓｉおよび流速４００ｍＬ／分のグラジエントポンプを使用して、このカートリッジは、塩化メチレン（４Ｌ）、続いて塩化メチレン（４８Ｌ）中１−４％メタノールグラジエントで洗浄された。主な不純物、（ジ−（イソプロピルアラニル）フェニルリン酸、３'，５'−ビスホスホルアミデート（６）、３'−ホスホルアミデート−５'−ＴＢＤＭＳ付加物（７））の大部分が約３％グラジエントで溶出した。所望の生成物は、３から４％メタノールの間で溶出した。生成物を含有する画分は２つのロットに分類された。第１のロットは少量の上流の不純物を含み、後者は純粋な生成物であった。第１の画分のセットは、少量のより極性が低い不純物（上流の不純物）、例えば、３'，５'−ビスホスホルアミデートおよびジ−アラニルフェニルリン酸、ならびに大部分はＲｐジアステレオマーを含み、第２のカラム精製を必要とした。（相対的な用語、上流対下流は、順相シリカゲルクロマトグラフィー上の溶出をいい、「上流の異性体」は最初に溶出する異性体を意味する。）第２のセットの画分は、有意な量の不純物を有さず−残りのＲＰおよび大部分はＳＰジアステレオマーのみを有した。これは、後で、２回カラムを通した画分と再度合わせられた。溶媒は減圧下でエバポレートされ、得られた白色泡状物はさらに１時間乾燥されて（０．２０ｍｍＨｇ）、不純物を含む４２ｇのロット（３１Ｐ−ＮＭＲに基づき、４：１の上流対下流の異性体）および３８ｇの純粋なロット（１：３の上流対下流の異性体）が得られた。不純物を含むロットは、同様の様式で再度カラムにかけられ、３．８ｇの９７％純度上流異性体（画分は取っておく）および３６ｇの純粋生成物を４：１比率で与えた。２つのメインロットは、ＤＣＭに溶解され、合わされ、減圧下でエバポレートされ、そして乾燥されて（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、２４時間）、４８：５１のジアステレオマー比率を有する７４ｇ（４５．７％）の純粋な生成物４を、白色泡状物、ｍｐ  約７５−８５℃として得た。
【０１６５】
ジアステレオマー混合物のアモルファス固体を製造するために、７４ｇの白色泡状物がｔ−ブチルメチルエーテル（７５０ｍＬ）中で攪拌され、部分的な溶液およびゴム状固体残渣を生じた。攪拌しながら、ヘプタン（７５０ｍＬ）がゆっくりと加えられ、この懸濁液は、ゴム状物の大部分が白色固形物に転換するまで、１時間、機械的に攪拌された。この固形物はスパチュラでこすり取られ、得られたスラリーがろ過された。この固形物はヘプタン（４×５０ｍＬ）で洗浄され、真空下で乾燥されて（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、２４時間）、およそ７０−８０℃の広い融解範囲を有する白色のアモルファス粉末（６４ｇ）が得られた。１Ｈおよび３１Ｐ  ＮＭＲは構造に一致し、ＨＰＬＣは４６：５４のジアステレオマー比率を有する９９．８％の純度を示した（３１Ｐ  ＮＭＲによってもまた確認された）。
【０１６６】
固体混合物４を作製するための代替方法。クロマトグラフィー後、残渣はジクロロメタンで（５ｍＬ／ｇ）２回、コエバポレートし、３５−４０℃、３５−４５ｍＴｏｒｒで２４時間乾燥させた。泡状残渣を、２５０ミクロンスクリーンを通してふるいにかけ、ヘッドスペースＧＣによって測定されるように、残渣のジクロロメタンが４００ｐｐｍより下に低下するまで、同じ条件下でさらに乾燥させた。得られた微細なオフホワイトから白色のアモルファス粉末は、５３．７〜６３．５℃のガラス転移温度の範囲を有する。
【０１６７】
異性体（４）の混合物の特徴：
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  １０．０５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ，  ＳＰ），  １０．００  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ，  ＲＰ），  ７．４９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ，  ＳＰ），  ７．３６  （ｍ，  ５Ｈ，  Ｃ６−Ｈ，  ＲＰ，  芳香族  ），  ７．２３−７．１４  （ｍ，  ６Ｈ，  ＲＰ／ＳＰ，  芳香族），  ６．１８  （ｂｒ  ｄ，  ２Ｈ，  Ｃ１'−Ｈ，  ＲＰ／ＳＰ），  ５．６３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ，  ＳＰ），  ５．５８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ，  ＲＰ），  ５．０１  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ−（ＣＨ３）２，  ＲＰ／ＳＰ），  ４．４６−４．３３  （ｍ，  ８Ｈ，  Ｃ−５'−Ｈ２，  ａｌａ−ＮＨ，  Ｃ３'−ＯＨ，  ＲＰ／ＳＰ），  ４．１２  （ｍ，  ２  Ｈ，  ａｌａ−ＣＨ−ＣＨ３，  ＲＰ／ＳＰ），  ４．０１−３．８５  （ｍ，  ４Ｈ，  Ｃ３'−Ｈ，  Ｃ４'−Ｈ，  ＲＰ／ＳＰ），  １．３９−１．２２  （ｍ，  １２Ｈ，  すべての  ＣＨ３，  ＲＰ／ＳＰ）．
【０１６８】
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ３．６０（ＲＰ）、−１７．８０ｐｐｍのトリフェニルリン酸に対して３．２０  Ｓｐ。ＥＳ−ＭＳ  Ｍ＋１  ５３０．２。元素分析：計算値％（Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ分析により見い出されるような０．２９％水を含む）Ｃ、４９．７５；Ｈ、５．５４；Ｎ、７．９０、Ｆ、３．５８、Ｐ、５．８４．実測値％：Ｃ、４９．５０；Ｈ、５．４４；Ｎ、７．８５；Ｆ、３．６２；Ｐ、６．０５。
【０１６９】
異性体の分離に対する議論
リンにおけるキラリティーに起因して、化合物４は、ＳＰ−４およびＲＰ−４と称する２つのジアステレオマーから構成される。立体化学配置は、ＳＰ−４の単結晶Ｘ線分析に基づいて作製された。ＲＰ−４とＳＰ−４の両方で結晶性生成物が得られた。
【０１７０】
結晶化のための手順は以下に概説される。
0005909535.tif 000023
【０１７１】
実施例３．ＲＰ−４異性体の結晶化：最初に溶出する、より極性の低いＲＰ−４異性体（３．８ｇ、９７％純度）を含むクロマトグラフィー画分は、イソプロパノール（３６ｇ）に溶解され、混濁するまでヘプタンで希釈された（７２ｇ）。この溶液は、播種され、周囲温度で５時間攪拌された。得られた固形物は真空ろ過によって収集され、ヘプタンで洗浄され（２×２０ｍＬ）、そして２．３ｇの非常に小さな白色針状物ｍｐ  １３６．２−１３７．８℃まで乾燥された（５０℃、０．２ｍｍ、２４時間）。得られた物質のＨＰＬＣ純度は９９．０２％であることが見い出された。
【０１７２】
ＲＰ−４：      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  ９．１０  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），    ７．３６  （ｍ，  ２Ｈ，  ｏ−芳香族），  ７．２６−７．１６  （ｍ，  ４  Ｈ，  Ｃ６−Ｈ，  ｍ，ｐ−芳香族），  ６．１６  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  Ｃ１'−Ｈ），    ５．５８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ），  ５．０１  （ｓｅｐｔ，  １Ｈ，  ＣＨ−（ＣＨ３）２），    ４．５２−４．４７  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ−５'−Ｈ２），  ４．１０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ３'−Ｈ），  ４．０２−３．７６  （ｍ，  ４Ｈ，  ａｌａ−ＮＨ，  Ｃ３'−ＯＨ，  Ｃ４'−Ｈ，  ａｌａ−ＣＨ−ＣＨ３），  １．３７−１．２０  （ｍ，  １２Ｈ，  すべてのＣＨ３）．
【０１７３】
実施例４．ＳＰ−４の調製および結晶化
方法１：粗４からの直接的沈殿：ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（１０．５ｇ、６１．５ｍｍｏｌ、共沸的に乾燥、２回、各回５０ｍＬのトルエンを用いる）の攪拌溶液に、室温で、フェニジクロロリン酸（７．５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）が加えられた。この混合物は−１０℃に冷却され、次いで、３０分間の時間にわたって、３０ｍＬのジクロロメタン中のＮＭＩ（３０．５ｍＬ、３８４．３ｍｍｏｌ）の溶液が加えられた。添加の完了後、この混合物は−１０から−１５℃の間で１時間攪拌された。上記の混合物に、２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン（３）（１０ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）が１ロットで加えられ、この混合物は−１０℃で３時間攪拌され、次いで、２０℃までゆっくりと温められた（６時間）。この混合物は、この温度において一晩（１５時間）攪拌され、次いで、１０ｍＬのメタノールでクエンチされた。溶媒はエバポレートされ、残渣はＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に再溶解された。ＥｔＯＡｃ層は、水（１００ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（３×７５ｍＬ）、２％  ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）、およびブライン（５０ｍＬ）中に再溶解された。有機層はＮａ２ＳＯ４で乾燥され、ろ過され、そして濃縮された。残渣は高真空下で２時間乾燥され、白色泡状物が得られた（２２ｇ）。
【０１７４】
上記の泡状物は３３ｍＬのＤＣＭに溶解され、次いで、６５ｍＬのＩＰＥ（イソプロピルエーテル）が加えられ、飽和溶液が得られた。この溶液は、Ｃｅｌｉｔｅの小さなパッドを通してろ過され、ろ液は、大気温度にて（約２２℃−この懸濁液を０℃まで冷却すると、粗生成物の油状化（ｏｉｌｉｎｇ  ｏｕｔ）をもたらすことに留意のこと）、７２時間、ＳＰ−４シードとともに攪拌された。白色固形物がろ過され、ＩＰＥ（２０ｍＬ）で洗浄され、そして乾燥されて、４．５８ｇの白色粉末が得られた（３１Ｐ  ＮＭＲによって決定されるようなＳＰ−４：ＲＰ−４のそれぞれ〜８５：１５混合物）。上記の固形物は、２３ｍＬのＤＣＭに懸濁され、次いで、３時間還流された。この混合物は室温まで冷却され、１５時間攪拌された。白色固形物がろ過され、４．５ｍＬの冷ＤＣＭで洗浄され、そして高真空下、４５℃で乾燥されて、純粋なＳＰ−４、ｍｐ  ９３．９−１０４．７℃、ＨＰＬＣ純度９９．７４％（３．１１ｇ、ウリジンヌクレオシドから１５．２％）が得られた。
【０１７５】
ＳＰ−４  １Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  ８．６３  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），    ７．４７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ６−Ｈ），  ７．３０  （ｍ，  ２Ｈ，  ｏ−芳香族  ），  ７．２６−７．１８  （ｍ，  ３Ｈ，  ｍ，ｐ−芳香族），  ６．１８  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  Ｃ１'−Ｈ），    ５．７０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ５−Ｈ），  ５．０２  （ｓｅｐｔ，  ＣＨ−（ＣＨ３）２），    ４．５３  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｃ−５'−Ｈ２），  ４．１１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｃ３'−Ｈ），  ３．９７  （ｍ，  ３Ｈ，  Ｃ３'−ＯＨ，  Ｃ４'−Ｈ，  ａｌａ−ＣＨ−ＣＨ３），  ３．７７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ａｌａ−ＮＨ），  １．３９  （ｄ，  ３Ｈ，Ｃ２'−ＣＨ３），  １．３７  （ｄ，  ３Ｈ，  ａｌａ−ＣＨ３），  １．２４  （ｄ，  ６Ｈ，  ＣＨ−（ＣＨ３）２）．    
【０１７６】
方法２：粗４からの油状化：ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（２０．６ｇ、１２３ｍｍｏｌ、共沸的に乾燥、２回、各回７５ｍＬのトルエンを用いる）の攪拌溶液に、室温で、フェニジクロロリン酸（１４．９ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）が加えられた。この混合物は−１０℃に冷却され、次いで、３０分間の時間にわたって、６０ｍＬのジクロロメタン中のＮＭＩ（６１．３ｍＬ、７６９ｍｍｏｌ）の溶液が加えられた。添加の完了後、この混合物は−１０℃から−１５℃の間で１時間攪拌された。上記の混合物に、２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン（３）（２０ｇ、７６．９ｍｍｏｌ）が１ロットで加えられ、この混合物は−１０℃未満で３時間攪拌され、次いで、２０℃までゆっくりと温められた（６時間）。この混合物は、この温度において一晩（１５時間）攪拌され、次いで、１０ｍＬのメタノールでクエンチされた。溶媒はエバポレートされ、残渣はＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）中に再溶解された。ＥｔＯＡｃ層は、水（２００ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（３×１００ｍＬ）、２％  ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）、およびブライン（５０ｍＬ）中に再溶解された。有機層はＮａ２ＳＯ４で乾燥され、ろ過され、そして濃縮された。残渣は高真空下で２時間乾燥され、白色泡状物が得られた（４３ｇ）。上記の泡状物は、機械式スターラーを装着した２つ口丸底フラスコ中の８６ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解された。攪拌しながら、１００ｍＬのヘプタンがゆっくりと加えられ、この懸濁物は１時間攪拌された。上層はデカントされ、残渣は再度、５０ｍＬの２：３  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン溶液とともに１０分間攪拌され、次いで、デカントされた。残渣は高真空下で乾燥されて、白色泡状物が得られた（３１ｇ）。
【０１７７】
上記の泡状物は４６ｍＬのＤＣＭに溶解され、次いで、９５ｍＬのＩＰＥが加えられ、飽和溶液が得られた。この溶液は、Ｃｅｌｉｔｅの小さなパッドを通してろ過され、ろ液は、大気温度にて、７２時間、ＳＰ−４シードとともに攪拌された。白色固形物がろ過され、ＩＰＥ（３０ｍＬ）で洗浄され、そして乾燥されて、７．３３ｇの白色粉末が得られた（３１Ｐ  ＮＭＲによって決定されるようなＳＰ−４：ＲＰ−４のそれぞれ〜８５：１５混合物）。上記の固形物は、３６ｍＬのＤＣＭに懸濁され、次いで、３時間還流された。この混合物は室温まで冷却され、１５時間攪拌された。白色固形物がろ過され、７．５ｍＬの冷ＤＣＭで洗浄され、そして高真空下、４５℃で乾燥されて、＞９９％純粋なＳＰ−４（４．７８ｇ、ウリジンヌクレオシドから１１．６％）が得られた。
【０１７８】
方法３：粗４のシリカゲルローディング：およそ２．５ｇの２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン（３）で開始するカラムクロマトグラフィー工程の直前のジアステレオマーの混合物と同じ様式で、５．０ｇの粗４が製造された。この粗生成物は、１０ｍＬのＤＣＭ中に溶解し、１０ｇのシリカゲルがこの溶液に加えられた。溶媒がエバポレートされて乾燥スラリーが得られた。このスラリーは、４０ｍＬの５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサンとともに１５分間攪拌され、次いでろ過された。このシリカゲルは、さらなる１０ｍＬの５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄された。次いで、このシリカゲルは１５％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄され、別々に収集された。溶媒がエバポレートされ、高真空で乾燥されて、４．０ｇの残渣（泡状物）が得られた。残渣はＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解され、次いで、〜９ｍＬのＩＰＥが加えられて、飽和溶液となった。次いで、この混合物は、ＳＰ−４シードとともに、周囲温度にて、一晩穏やかに攪拌された。白色固形物はろ過され、ＩＰＥ（５ｍＬ）で洗浄されて、１．２８ｇの生成物が得られた。３１Ｐ  ＮＭＲは、上記の生成物が、ＳＰ−４：ＲＰ−４のそれぞれ７７：２３混合物を含むことを明らかにした。これは、２０ｍＬのＤＣＭから再結晶されて、０．７５ｇの＞９９％純度ＳＰ−４（ウリジンヌクレオシドから約１２％）が得られた。このＳＰ−４の調製は、混合物について行われるシリル化工程を必要とせず、従って、全体の反応手順は上に示されている。単結晶および多型ＳＰ−４の態様は以下に提示される。
【０１７９】
方法４：４の１：１混合物４０．０ｇは、９０ｍＬのジクロロメタンに溶解された。ジイソプロピルエーテル（７０ｍＬ）が上記の溶液に加えられて、飽和溶液が得られた。（ジイソプロピルエーテルの量は生成物の純度に基づいて変動する可能性がある。）この溶液は、純粋なＳＰ−４（＞９９％）が播種され、この混合物は、攪拌バーを用いて、室温にて２０時間（固形物の形成は２時間後に観察された）、穏やかに攪拌された。固形物はろ過され、ジイソプロピルエーテル／ジクロロメタン（１：１）の混合物４０ｍＬで洗浄され、そして乾燥されて、白色固形物が得られた（１６．６ｇ、ＮＭＲによる８９．３５％純度のＳＰ−４）。この固形物は、８３ｍＬ  ジクロロメタンに懸濁され、３時間還流された。この懸濁物は室温まで冷却され、一晩攪拌された。この固形物はろ過され、１０ｍＬの冷ＤＣＭで洗浄された。この固形物は真空下で乾燥されて、ＳＰ−４（１３．１ｇ、ＨＰＬＣにより９９．４８％純度）が得られた。１１ｇのこの固形物が、熱条件下で３３０ｍＬのＤＣＭ中に再溶解された。この溶液は室温まで冷却され、この温度で一晩放置された。結晶性生成物がろ過され、乾燥されて１０．５ｇのＳＰ−４（ＨＰＬＣにより９９．７４％）が得られた。
【０１８０】
化合物ＳＰ−４およびＲＰ−４は、第９の態様または第１０の態様に従って、以下の反応式に示されるように、ヌクレオシド（保護されているかまたは保護されていない）３をイソプロピル−アラニル−ホスホルアミデート（ＣおよびＣ'の混合物、Ｃ、またはＣ'）と反応させることによって、代替的に調製されてもよい。
0005909535.tif 000024
【０１８１】
Ｐ．Ｄ．Ｈｏｗｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ、Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ２００３，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏｓ．５−８，ｐｐ．６８７−６８９（「Ｈｏｗｅｓ」）は、ｔ−ブチルマグネシウムクロリドとの反応によって得られた２'−および５'−ホスホルアミデートを開示している。そこでは、Ｈｏｗｅｓは、３'−デオキシ−シチジンヌクレオシドが、１．２当量のｔ−ブチルマグネシウムクロリドの存在下で、（Ｓ）−２−［クロロ−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸メチルエステルと反応されるときに、２'位における選択的リン酸化が起こったが、さらなる当量のｔ−ブチルマグネシウムクロリドを用いると、５'位における選択的リン酸化が起こったことを開示している。この開示は、スキーム１において開示されていることと対照されるべきである。
【０１８２】
実施例５−１．（Ｓ）−２−［（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルの調製
0005909535.tif 000025
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の４−ニトロフェニルホスホロジクロリデート  １２．８ｇ、５０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のフェノールおよびトリエチルアミン（７．７ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）の溶液が、−７８℃で、２０分間の時間にわたって加えられた。この混合物は、この温度で３０分間攪拌され、次いで、０℃のジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（８．３８ｇ、５０ｍｍｏｌ）を含む別の丸底フラスコに移された。この混合物に、第２のトリエチルアミン（１４．６ｍＬ、１０５ｍｍｏｌ）部分が１５分間の時間にわたって加えられた。この混合物は０℃で１時間攪拌され、次いで、溶媒がエバポレートされた。残渣は酢酸エチル（１５０ｍＬ）で粉砕され、白色固形物が濾過して除かれた。ろ液は減圧下で濃縮され、淡黄色油状物が得られた。この粗化合物は、０−２０％  酢酸エチル／ヘキサングラジエントを使用してクロマトグラフィーを行い、約１：１比率のジアステレオマーの混合物として生成物（１７ｇ、８３％収率）が得られた。
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  −０．３１，  −０．４７；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．３１−８．２７  （ｍ，  ２Ｈ），    ７．５１−７．３７（ｍ，  ４Ｈ），  ７．２７−７．１９（ｍ，  ３Ｈ），  ６．７０−６．６３（ｍ，  １Ｈ），  ４．８５−４．７８（ｍ，  １Ｈ），  ３．９７−３．８６（ｍ，  １Ｈ），  １．２１−１．１９（ｍ，  ３Ｈ），  １．１１−１．０９  （ｍ，  ６Ｈ）；  ＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ    ４０７  （Ｍ−１）＋．    ３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  −２．０５，  −２．１０；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  ８．２２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．２Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４１−７．３３（ｍ，  ４Ｈ），  ７．２６−７．１８（ｍ，  ３Ｈ），  ５．０５−４．９６（ｍ，  １Ｈ），  ４．１４−４．０５（ｍ，  １Ｈ），  ３．９３−３．８８（ｍ，  １Ｈ），  １．３８（ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．２  ＆  ３．０Ｈｚ，  ６Ｈ）；  ＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４０７  （Ｍ−１）＋．
【０１８３】
実施例５−２．ＳＰ−４／ＲＰ−４の調製
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乾燥ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（１３０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．０５ｍＬ、１．０５ｍｍｏｌ、２．１当量））の１．０Ｍ溶液が、室温にて、５分間の時間にわたって加えられた。３０分後、ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（異性体の１：１混合物、４０８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液が、５分間の時間にわたって、滴下して加えられた。この混合物は、室温で４８時間攪拌され、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）でクエンチされた。この混合物は、酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）の間で分配された。合わせた有機抽出物は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、そして減圧下で濃縮されて、淡黄色残渣が得られた。０−２％  ＭｅＯＨ／ジクロロメタングラジエントを使用するこの残渣のカラムクロマトグラフィーは、白色泡状固形物を与えた（１２５ｍｇ、４７％収率、約３．０５：１．０比率のＳＰ−４／ＲＰ−４の混合物）。
【０１８４】
実施例６．（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルの調製およびクロマトグラフィーによらない単離
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Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（３３０ｇ、１．９７ｍｏｌ）は、減圧下でのトルエン（２×４００ｍＬ）とのコエバポレーションによって前乾燥され、次いで、真空オーブン中で乾燥された（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、１７時間）。無水ジクロロメタン（３．０Ｌ）中の４−ニトロフェニルホスホロジクロリデート（５００．０ｇ、１．９５３ｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジクロロメタン（９００ｍＬ）中のフェノール（１８３．８ｇ、１．９５３ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３００ｍＬ、２．１５ｍｏｌ）の溶液が、−６０℃内部温度で、３時間の時間にわたって加えられた。この混合物はこの温度でさらに３０分間攪拌され、次いで、２．５時間にわたって−５℃まで温められた。前乾燥したアミノ酸エステルは、−５〜０℃で、窒素雰囲気下で、１０分間にわたって加えられた。添加フラスコ中のアミノエステル塩の残渣は、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）を用いるすすぎを介して、反応混合物に移された。この混合物は０℃で４０分間攪拌され、第２の部分のトリエチルアミン（５７１ｍＬ、４．１０ｍｏｌ）が４０分間にわたって、０℃で加えられた。この混合物は０〜１０℃で３時間攪拌され、次いで、白色固形物（トリエチルアミン塩酸塩）がろ過されて除かれ、ジクロロメタン（３×３００ｍＬ）ですすがれた。このろ液は減圧下で濃縮され、残渣はメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、４Ｌ）で粉砕された。このようにして形成されたさらなる固形物塩がろ過されて除かれ、ＭＴＢＥ（３×１５０ｍＬ）ですすがれた。このろ液は減圧下で濃縮され、透明な明茶色油状物が得られた。残渣はヘキサン（２×１４０ｍＬ）とコエバポレートされて、いかなる残りのＭＴＢＥも除かれ、さらに４０℃で２時間、真空下で乾燥された。乾燥残渣はジイソプロピルエーテル（ＩＰＥ、１．１Ｌ）と混合され、氷水バス中、５℃で攪拌された。所望のＳＰ−異性体の生成物の少量の結晶シードがこの溶液に加えられ、そしてこの混合物は５℃で２２時間にわたって攪拌され、中程度の粘度のスラリーを形成した。これは、フリーザー中で（−１０℃）４４時間、静置させた。沈殿した生成物はろ過を介して収集され、あらかじめ冷却したＩＰＥとヘキサンの混合溶媒ですすがれた（１：１、３×１９０ｍＬ）。この固形物は、一定の重量が得られるまで、周囲温度にて真空下（０．５ｍｍ  Ｈｇ）で乾燥され、２２７．２３ｇ（収率：２８．５％）が白色粉末固形物として得られた。２つのジアステレオマーＳＰ：ＲＰの比率は、３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δ−０．３１（ＳＰ）、−０．４７）に基づくと、９．６５／１であった。この生成物は、６０℃バス中で加熱しながら、ＩＰＥ（８４０ｍＬ）に溶解することによって再結晶された。上記の溶液は室温で１時間攪拌され、次いで、少量の結晶Ｓｐ異性体シードが加えられた。白色粉末固形物が２時間以内に形成し、フラスコはフリーザー中に（−１０℃）１６時間保存された。得られた白色かつ微細な結晶性固形物は、ろ過され、あらかじめ冷却したＩＰＥ（３×５０ｍＬ）で洗浄され、そして真空下で、一定量の重量まで乾燥されて（周囲温度、０．５ｍｍ  Ｈｇ）、白色の綿状の固形物が得られ（１７７．７ｇ、ＳＰ異性体��理論収率に基づき、２２％全体収率または４４％全体収率）、Ｐ−ＮＭＲに基づいて４８／１のジアステレオマー比率であった。Ｍｐ  ６２−６６℃。
【０１８５】
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  −０．３１；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．３０−８．２７  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．４９（ｄ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４１−７．３７（ｍ，  ２Ｈ），  ７．２３−７．１９  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．６６  （ｄｄ，  Ｊ＝１３．６，  １０．０Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８６−４．７８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９７−３．８６  （ｍ，  １Ｈ），  １．１９  （ｄ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．１０（ｄ，  Ｊ＝６．４Ｈｚ，  ６Ｈ）；  
【０１８６】
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  −２．０５；  （１６２  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  −０．３１；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  ８．２２  （ｄ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ，  ２Ｈ），    ７．４１−７．３３（ｍ，  ４Ｈ），  ７．２６−７．１８（ｍ，  ３Ｈ），  ５．０５−４．９６（ｍ，  １Ｈ），  ４．１４−４．０５（ｍ，  １Ｈ），  ３．９３−３．８８（ｍ，  １Ｈ），  １．３８（ｄ，  Ｊ＝６．８Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２２  （ｄｄ，  Ｊ＝６．２  ＆  ３．０Ｈｚ，  ６Ｈ）；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．３０−８．２７  （ｍ，  ２Ｈ），    ７．４９（ｄ，  Ｊ＝８．８Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４１−７．３７（ｍ，  ２Ｈ），  ７．２３−７．１９  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．６６  （ｄｄ，  Ｊ＝１３．６，  １０．０Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８６−４．７８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９７−３．８６  （ｍ，  １Ｈ），  １．１９  （ｄ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．１０（ｄ，  Ｊ＝６．４Ｈｚ，  ６Ｈ）
【０１８７】
ＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４０７  （Ｍ−１）＋．
【０１８８】
８（ＳＰ異性体）の立体化学は単結晶Ｘ線結晶学によって確認された。以下に提供される詳細を参照のこと。
【０１８９】
実施例７．ジアステレオマー混合物（Ｓ）−２−［（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルのＳＦＣによる分離
ＲＰ異性体で富化されたジアステレオマー（４．８ｇ）の混合物のサンプルは、ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（２×１５ｃｍ）カラムを使用するＳＦＣに供され、１００バール二酸化炭素中の３５％イソプロパノールで溶出された。１７ｍｇ／ｍＬ濃度のメタノールのサンプルの４ｍＬの注入ローディングが使用された。ＲＰ異性体［（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル］が最初に溶出した。複数の実行の適切な画分が合わされ、減圧下で濃縮されて、２．９ｇのＲＰ異性体［（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル］が明黄色粘性油状物として、および１．９ｇのＳＰ異性体［（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル］が白色固形物として得られた。ＲＰ異性体の分析データは、上記の結晶化方法によって単離された生成物に類似している。
【０１９０】
（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＲＰ異性体）の分析データ：
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  −０．４７；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ８．３０−８．２７  （ｍ，  ２Ｈ），    ７．４６−７．３８  （ｍ，  ４Ｈ），  ７．２７−７．２０  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．６８  （ｄｄ，  Ｊ＝１３．８，  １０．２Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８６−４．７７  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９７−３．８６  （ｍ，  １Ｈ），  １．２０  （ｄ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．１０（ｄｄ，  Ｊ＝６．２，  ２．２Ｈｚ，  ６Ｈ）；  ＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ    ４０７  （Ｍ−１）＋．    
【０１９１】
実施例８−１．ラセミ体２−［（４−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（±）の調製：
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ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の４−クロロ−フェニルホスホロジクロリデート（２．４５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のフェノール（０．９４ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．５６ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃にて、２０分間の時間にわたって加えた。この混合物はこの温度で３０分間攪拌され、次いで、０℃のジクロロメタン（５０ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（１．６７ｇ、１０ｍｍｏｌ）を含む別の丸底フラスコに移された。この混合物に、第２のロットのトリエチルアミン（２．９２ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）が、１５分間の時間にわたって加えられた。この混合物は０℃で１時間攪拌され、次いで、溶媒がエバポレートされた。残渣は酢酸エチル（３０ｍＬ）で粉砕され、白色固形物がろ過されて除かれた。ろ液は減圧下で濃縮されて、淡黄色油状物が得られた。粗化合物は１０−２０％  酢酸エチル／ヘキサングラジエントを使用してクロマトグラフィーに供され、約１：１比率のジアステレオマーの混合物として生成物（２．０ｇ、５０％収率）が得られた。
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  −１．５８，  −１．６２；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．０６−７．５１  （ｍ，  ８Ｈ），  ７．１５−７．２８  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．２９−７．４７（ｍ，  ２Ｈ），  ４．０−４．１０（ｍ，  １Ｈ），  ３．８２−３．８８  （ｍ，  ３Ｈ），  １．３５−１．３６  （ｄｄ，  ６Ｈ）；    １．１９−１．２２  （ｍ，  ３Ｈ）．  ＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ    ３９８  （Ｍ−１）＋．    
得られた生成物は、上記に言及されるように、抽出、結晶化、またはクロマトグラフィーによって精製される。
【０１９２】
実施例８−２．（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエート（４）の調製
乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３、２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１．７Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド溶液（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）を室温で１５分間にわたって加えた。３０分後、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のラセミ（２−［（４−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（４．０８ｇ、１０ｍｍｏｌ）が、１０分間にわたって滴下して加えられた。この混合物は、室温で７２攪拌された。オーセンティックな生成物とのＴＬＣ同時スポットは、出発ヌクレオシドと比較して約５％の所望の生成物が形成したことを示した。
【０１９３】
実施例９−１．ラセミ２−［（２−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（±）の調製
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ジクロロメタン（８０ｍＬ）中の２−クロロ−フェニルホスホロジクロリデート（９．８ｇ、４０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジクロロメタン（８０ｍＬ）中のフェノール（３．７６ｇ、４０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６．１６ｍＬ、４４ｍｍｏｌ）の溶液が、−７８℃で、２０分間にわたって加えられた。この混合物は、この温度で３０分間攪拌され、次いで、０℃のジクロロメタン（１５０ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（６．７ｇ、４０ｍｍｏｌ）を含む別の丸底フラスコに移された。この混合物に、第２の部分のトリエチルアミン（１１．６ｍＬ、８４ｍｍｏｌ）が１５分間の時間にわたって加えられた。この混合物は０℃で１時間攪拌され、次いで、溶媒がエバポレートされた。残渣は酢酸エチル（１００ｍＬ）とともに粉砕され、白色固形物がろ過されて除かれた。ろ液は減圧下で濃縮され、淡黄色油状物が得られた。粗化合物は１０−２０％酢酸エチル／ヘキサングラジエントを使用するクロマトグラフィーに供され、約１：１比率のジアステレオマーの混合物として生成物（１１．３ｇ、７２％収率）が得られた。
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  −１．５８，  −１．６１；  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．０６−７．５１  （ｍ，  ８Ｈ），  ５．０２−５．９４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１０−４．１６（ｍ，  １Ｈ），  ３．３１−３．９４（ｍ，  １Ｈ），  １．１８−１．３５（ｍ，  ３Ｈ），  １．３８−１．４０  （ｄｄ，  ６Ｈ）；  ＭＳ  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ    ３９８  （Ｍ−１）＋．    
得られた生成物は、上記に言及されるように、抽出、結晶化、またはクロマトグラフィーによって精製される。
【０１９４】
実施例９−２．（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエートの調製
乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリジン−２，４−ジオン（３、２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、１．７Ｍ溶液のｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量））が室温で１５分間の時間にわたって加えられた。３０分後、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の（２−［（２−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（ラセミ４．０８ｇ、１０ｍｍｏｌ）が、１０分間の時間にわたって滴下して加えられた。混合物は、室温で７２時間攪拌された。オーセンティックな生成物とのＴＬＣ同時スポットは、出発ヌクレオシドと比較して、約５−１０％の所望の生成物が形成したことを示した。
【０１９５】
実施例１０−１．ラセミ２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（±）の調製
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ジクロロメタン（４０ｍＬ）中のペンタフルオロフェニルホスホロジクロリデート（６．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ジクロロメタン（４０ｍＬ）中のフェノールおよびトリエチルアミン（３．０８ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）の溶液が、−７８℃で、２０分間にわたって加えられた。この混合物は、この温度で３０分間攪拌され、次いで、０℃のジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（３．３５ｇ、２０ｍｍｏｌ）を含む別の丸底フラスコに移された。この混合物に、第２の部分のトリエチルアミン（５．８４ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）が１５分間の時間にわたって加えられた。この混合物は０℃で１時間攪拌され、次いで、溶媒がエバポレートされた。残渣は酢酸エチル（６０ｍＬ）とともに粉砕され、白色固形物がろ過されて除かれた。ろ液は減圧下で濃縮され、約１：１比率のジアステレオマーの混合物として淡黄色油状物が得られた。
３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  −０．４９，  −０．５８．    
得られた生成物は、上記に言及されるように、抽出、結晶化、またはクロマトグラフィーによって精製される。
【０１９６】
実施例１０−２．（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエートの調製
乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３、２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、室温で、１５分間にわたって、１．７Ｍ溶液のｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）が加えられた。３０分後、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の粗ラセミ（２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（４．０８ｇ、１０ｍｍｏｌ）が１０分間の時間にわたって滴下して加えられた。この混合物は室温で７２時間撹拌された。オーセンティックな生成物とのＴＬＣ同時スポットは、出発ヌクレオシドと比較して、約４０−５０％の所望の生成物が形成したことを示した。
【０１９７】
ＣまたはＣ'の調製および精製は、以下の実施例において例証されるように、ＳＰ−４またはＲＰ−４のいずれかへの直接的なアクセスを提供する。
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【０１９８】
実施例１１．ＳＰ−４の調製（３２ｍｇスケール）：乾燥ＴＨＦ（１ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン  ３（３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、１Ｍ溶液のｔブチルマグネシウムクロリド（０．２６ｍＬ、０．２６ｍｍｏｌ、２．１当量））が、室温で３分間の時間にわたって加えられた。３０分後、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ異性体）の溶液が、３分間の時間にわたって滴下して加えられた。この混合物は室温で４２時間撹拌され、次いで、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（１０ｍＬ）でクエンチされた。この混合物は酢酸エチルと水の間で分配された。合わせた有機抽出物は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、そして濃縮された。残渣は、０−４％メタノール／ジクロロメタングラジエントを使用してクロマトグラフィーが行われ、泡状固形物としてＳＰ−４が得られた（２９ｍｇ、４４．５％収率）。１Ｈおよび３１Ｐ  ＮＭＲは本明細書に開示されるものと一致する。
【０１９９】
実施例１２．ＳＰ−４の調製（２．６ｇスケール、クロマトグラフィーなし）：乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、１．７Ｍ溶液のｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）が室温で１５分間の時間にわたって加えられた。３０分後、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ異性体、４．０８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液が、１０分間の時間にわたって滴下して加えられた。この混合物は、室温で６０時間撹拌され、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）でクエンチされた。この混合物は、酢酸エチル（１５０ｍＬ）と、連続して、１０％  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３×２０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）の間で分配された。合わせた有機抽出物は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、そして減圧下で濃縮されて、淡黄色残渣を得た（３．８ｇ）。残渣はジクロロメタン（７．６ｍＬ）に溶解され、次いで、室温で２０時間撹拌された。白色固形物がろ過され、１：１  ＩＰＥ／ジクロロメタン（５ｍＬ）で洗浄され、そして真空下で乾燥されて、白色固形物として精製生成物を得た（１．８５ｇ、３５％収率）。
【０２００】
実施例１３．ＮａＨＭＤＳを使用するＳＰ−４の調製：乾燥ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（７１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、−７８℃で、２分間の時間にわたって、ＴＨＦ（２７０μＬ、０．５４ｍｍｏｌ）中のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＮａＨＭＤＳ）の２．０Ｍ溶液が加えられた。３０分後、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］−プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ異性体、１１１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液がこの混合物に加えられた。この反応混合物は、この温度で２時間撹拌させられ、次いで、−２０℃に暖められ、この温度でこれはさらに２０時間撹拌された。ＴＬＣは約３０％の未反応のヌクレオシド出発材料を示した。従って、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の０．５当量の試薬（５５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）が反応混合物に加えられ、さらに６時間撹拌された。この反応混合物は、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチされ、次いで、酢酸エチルと水の間で分配された。合わせた有機抽出物は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、そして濃縮され、明茶色残渣が得られた。０−５％メタノール／ジクロロメタングラジエントを使用する粗生成物のカラムクロマトグラフィーは、ＳＰ−４（２２ｍｇ、１５％収率）、３'−ホスホルアミデート（５、ＳＰ異性体、１１．５ｍｇ、１６％収率）、およびビスホスホルアミデート（６、ＳＰ、ＳＰ異性体、１２．６ｍｇ）を与えた。
【０２０１】
実施例１４．ＲＰ−４（２６０ｍｇスケール）の調製：乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）中の１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（２６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．２３ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、２．１当量））の１．７Ｍ溶液が、室温で５分間の時間にわたって加えられた。３０分後、ＴＨＦ（３ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＲＰ異性体）の溶液に、３分間の時間にわたって滴下して加えられた。この混合物は室温で９６時間撹拌され、次いで、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）でクエンチされた。この混合物は、酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（２×２０ｍＬ）の間で分配された。合わせた有機抽出物は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、そして減圧下で濃縮されて、淡黄色残渣（４９０ｍｇ）が得られた。この残渣は０−５％メタノール／ジクロロメタングラジエントを使用してクロマトグラフィーが行われ、白色固形物として生成物が得られた（１６０ｍｇ、３０％収率）。
【０２０２】
ＳＰ−４またはＲＰ−４の調製は、以下の実施例に例証されるように、３'−保護された３を、適切な試薬ＣまたはＣ'またはＣおよびＣ'を含む混合物と反応させることによってもまた達成されてもよい。
【０２０３】
実施例１５．３ａを合成中間体として用いるＳＰ−４の調製
0005909535.tif 000032
【０２０４】
実施例１５−１．５'−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン（９）の合成：
乾燥ピリジン（７５０ｍＬ）中の２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジン（３、８１．１ｇ、３１２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、４５分間の時間にわたって、周囲温度で、乾燥ピリジン（５００ｍＬ）中のＴＢＤＭＳＣｌ（１０３．１９ｇ、６８５．６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。この反応は周囲温度で２４時間撹拌された。メタノール（８５ｍＬ）が反応混合物に加えられ、これは１０分間撹拌させられ、次いで、溶媒が減圧下で蒸留して除かれた。熱水（４５℃）（１Ｌ）が反応塊に加えられ、この混合物は酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出され、水（１×５００ｍＬ）で洗浄された。有機層は無水硫酸ナトリウムで乾燥された。酢酸エチルは蒸留して除かれ、得られた残渣はトルエン（２×５００ｍＬ）とコエバポレートされて、白色泡状物として粗９が得られた。収率＝１１６．９ｇ（定量的）。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ３００  ＭＨｚ）：  δ  ０．１  （ｓ，６Ｈ），  ０．９１  （ｓ，  ９Ｈ），  １．２２  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ２１  Ｈｚ），  ２．５０  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．７５−４．０５  （ｍ，４Ｈ），  ５．５４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ），  ５．７３  （ｓ，  １Ｈ），  ６．０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １８  Ｈｚ），  ７．８１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ），  ８．５７  （ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ），  １１．１  （ｓ，  １Ｈ）．    
【０２０５】
実施例１５−２．５'−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３'−Ｏ−レブリニル−２'−デオキシ−２'−フルオロ  ２'−Ｃ−メチル−ウリジン（１０）の合成：
ＤＣＭ（１Ｌ）中のヌクレオシド９（１１６．９ｇ、３１２．１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液にＤＭＡＰ（３０．５ｇ、２４９．７ｍｍｏｌ）が加えられ、これは室温で２０分間撹拌させられた。ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の無水レブリン酸（１３３．６ｇ、６４２．３ｍｍｏｌ）の溶液がこの混合物に加えられ、２４時間撹拌させられた。この混合物のＴＬＣは反応の完了を示した。冷水（５００ｍＬ）が加えられ、この混合物は２０分間撹拌された。層が分離し、有機層は飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２×２５０ｍＬ）で洗浄され、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、次いで溶媒が減圧下で蒸留されて黄色油状物が得られた。粗収率１９７．６ｇ（１３５％）。この物質はこのまま次の段階で使用された。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ３００  ＭＨｚ）  δ  ０．１１  （ｓ，  ６Ｈ），  ０．９４  （ｓ，  ９Ｈ），  １．３４  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ２１  Ｈｚ），  ２．２２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６−２．８９  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．７２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２  Ｈｚ），  ４．２３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ），  ５．３３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １５  Ｈｚ），  ５．７３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ），  ６．２６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １５  Ｈｚ），  ８．１２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２  Ｈｚ），  ８．７２  （ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ）．    
【０２０６】
実施例１５−３．３'−Ｏ−レブリニル−２'−デオキシ−２'−フルオロ  ２'−Ｃ−メチル−ウリジン（３ａ）の合成：
粗１０（１９７．６ｇ、約３１２．１ｍｍｏｌ）はＤＣＭ（１Ｌ）に溶解され、ここにＴＥＡ．３ＨＦ（５０．３ｇ、３１２．１ｍｍｏｌ）が加えられ、一晩周囲温度で撹拌させられた。この混合物のＴＬＣは反応の約５０％完了を示した。別の当量のＴＥＡ．３ＨＦ（５０．３ｇ、３１２．１ｍｍｏｌ）が加えられ、この反応混合物は６時間反応させられた。この時点でのＴＬＣは約１０％の未反応出発物質を示した。別の０．２５当量のＴＥＡ．３ＨＦ（１２．５ｇ、７８．０ｍｍｏｌ）が加えられ、この反応混合物は一晩撹拌させられた。反応混合物は乾燥するまで濃縮されて黄色油状物が得られた。すべてのバッチからの粗物質は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０−２％  ＭｅＯＨ）によって精製され、１２４．１ｇの３'−レブリネートを白色泡状固形物として得た（２'−デオキシ−２'−フルオロ−２'−Ｃ−メチルウリジンからの３段階にわたって９０％精製収率）。
１Ｈ  ＮＭＲ：  （ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）  δ  １．５５  （ｄ，  ３Ｈ，  ＣＨ３，  Ｊ  ＝  ２０  Ｈｚ），  ２．３６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３），  ２．８−３．０３  （ｍ，  ５Ｈ，  ＣＨ２ＣＨ３），  ３．９１−３．９６  （ｄｄ，  １Ｈ，  ＣＨ''），  ４．２−４．２５  （ｍ，  １Ｈ，  ＣＨ'），  ４．３４  （ｄｄ，  １Ｈ，  ＣＨ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ），  ５．２５  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １６  Ｈｚ），  ５．９３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ），  ８．２０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ），  ９．１８  （ｓ，  １Ｈ）．    
【０２０７】
実施例１５−４．（Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−（Ｒ）−フルオロ−３−（４−オキソペンタノイル）−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメトキシ］−フェノキシ−ホスホリルアミノ｝−プロピオン酸（Ｓ）−イソプロピルエステル（１１）立体選択的合成：
０℃に冷却された、５ｍＬ  無水ＴＨＦ中のヌクレオシド（３ａ、１．００ｍｍｏｌ、３５８ｍｇ）の溶液に、ｔＢｕＭｇＣｌ（ＴＨＦ中１．７Ｍ、２当量）が加えられ、これを周囲温度まで暖められ、３０分間撹拌された。この混合物に、試薬（約９７％キラル純度）（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ異性体）（４０８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．００当量）を１ロットで加え、室温で撹拌させた。１６時間後、約３０％の出発物質が残っていた。この反応混合物は、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液１０ｍＬでクエンチし、水相は酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出された。合わせた有機層はブラインで洗浄され、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、そして乾燥するまでエバポレートされて、淡黄色泡状物（５００ｍｇ）が得られた。これは、塩化メチレン中の２−５％メタノールを使用するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製され、約９７％  Ｐキラル純度の白色泡状物としての生成物（２７５ｍｇ）および未反応の出発物質（１６２ｍｇ）が得られた。消費された出発物質に基づくと、収率は７６％であった。
３１Ｐ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １６２  ＭＨｚ）：    ３．７  ｐｐｍ；  １Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）：  δ  １．２２  （ｄｄ，  ６Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ），  １．３７  （ｓ，  ３Ｈ），  １．５８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．１８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６３−２．９  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ），  ４．２−４．３３  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８Ｈｚ），  ４．９６−５．００  （ｓｅｐｔ，  １Ｈ），  ５．２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９  Ｈｚ），  ５．４２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８Ｈｚ），  ６．１９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １８Ｈｚ），  ７．１５−７．３５  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ），  ８．２  （ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ）．    
【０２０８】
実施例１５−５．（Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−（Ｒ）−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメトキシ］−フェノキシ−ホスホリルアミノ｝−プロピオン酸（Ｓ）−イソプロピルエステル（ＳＰ−４）の合成
亜硫酸ナトリウムの溶液は、水（２５ｍＬ）中にＮａ２Ｓ２Ｏ３（１．５１ｇ）およびＮａ２Ｓ２Ｏ５（０．５７ｇ）を加えることによって調製された。無水ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中のレブリネート（１１、２５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、１．０ｍＬの亜硫酸ナトリウム溶液が加えられた。これは、室温で４時間撹拌させられた。この反応混合物は、水（１５ｍＬ）に注がれ、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出され、そしてエバポレートされて、保護されていないヌクレオシドから直接産生されたＳＰ−４の物理的およびスペクトル的特性と一致する約９７％  Ｐキラル純度を有する白色固体生成物を定量的に与えた。
【０２０９】
実施例１６．３ａからＳＰ−４を調製するための代替方法
乾燥ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の４−オキソ−ペンタン酸（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−フルオロ−２−ヒドロキシメチル−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−３−イルエステル（３ａ、２１０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温で２分間の時間にわたって、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．０７ｍＬ、１．８２ｍｍｏｌ）の１．７Ｍ溶液が加えられた。最初に白色沈殿が観察され、１０分後に反応混合物は暗黄色溶液に変化した。３０分後、ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロフェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］−プロピオン酸イソプロピルエステル（８（ＳＰ異性体）、３８２ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）が、３分間の時間にわたって滴下して加えられた。この混合物は４０℃で５時間加熱され、この時点で、ＴＬＣおよび１Ｈ  ＮＭＲは２％未満の未反応出発物質を示した。反応は飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチされ、次いで、酢酸エチルと水の間で分配された。合わせた有機層は１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３×１０ｍＬ）で、続いて水で洗浄された。有機層は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、そして濃縮され、茶色残渣が得られた（４１０ｍｇ）。粗生成物はテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）に溶解され、次いで、１ｍＬ水中の亜硫酸ナトリウム（３７ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）およびメタ重亜硫酸ナトリウム（２２４ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の混合物の水溶液が加えられた。この混合物は４５℃で２０時間加熱され、この段階で約１０％のみの転換がＴＬＣによって観察され、従って、さらなる亜硫酸ナトリウム（７４ｍｇ）およびメタ重亜硫酸ナトリウム（４４８ｍｇ）が加えられ、加熱がさらに５２時間継続された。この時点で、約４０％の転換がＴＬＣによって観察された。この反応混合物は水と酢酸エチルの間で分配された。合わせた有機層は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、濃縮されて茶色残渣が得られた（２１０ｍｇ）。０−５％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭグラジエントを使用する残渣のカラムクロマトグラフィーは、未反応の出発物質（８９ｍｇ）およびＳＰ−４（５７ｍｇ、１８％収率、回収された出発物質に基づいて２４％）を与えた。
【０２１０】
実施例１７．合成中間体として３ｃを用いるＳＰ−４の調製
0005909535.tif 000033
【０２１１】
実施例１７−１．１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−３−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン、１２の調製
ピリジン（５０ｍＬ）中の３（１０．０ｇ、３８．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（５０ｍＬ）が加えられた。この溶液は０℃まで冷却された。この溶液に、４，４'−ジメトキシトリチルクロリド（１４．３２ｇ、４２．２７ｍｍｏｌ）が加えられ、この溶液は０℃で５時間撹拌された。メタノール（５ｍＬ）が加えられて反応がクエンチされた。この溶液は減圧下で乾燥するまで濃縮され、残渣は酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）の間で分配された。有機溶液はブライン（５０ｍＬ）で洗浄され、乾燥された（硫酸ナトリウム、４ｇ）。溶媒は減圧下で除去され、残渣はジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解された。この溶液にイミダゾール（７．８３ｇ、１１５ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（８．６８ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）が加えられた。この溶液は大気温度で１６時間撹拌された。メタノールが加えられて反応がクエンチされ（５ｍＬ）、溶媒は減圧下で除去され、残渣は酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）の間で分配された。有機溶液は乾燥され（硫酸ナトリウム、４ｇ）、減圧下でエバポレートされた。残渣はカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中１０−４０％  ＥｔＯＡｃ）によって精製され、５'−Ｏ−ＤＭＴ−３'−Ｏ−ｔＢＤＭＳ中間体生成物が得られた。これは、次には、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中の１％トリフルオロ酢酸で処理された。この溶液は周囲温度で１時間撹拌された。水（２０ｍＬ）が加えられ、この溶液は周囲温度でさらに１時間撹拌された。メタノール（５ｍＬ）がゆっくりと加えられ、この溶液はさらに１時間、周囲温度で撹拌された。溶液のｐＨを７に調整するために水酸化アンモニウムが加えられた。有機溶液が分離され、乾燥され（硫酸ナトリウム、４ｇ）、そして乾燥するまで減圧下でエバポレートされた。残渣はシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製され（ジクロロメタン中１−５％メタノール）、白色固形物７．５ｇとして、３段階に対して５０％収率で１２が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  （ｐｐｍ）  １１．４８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．９４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｈ−６），  ６．００  （ｄ，  １Ｈ，  Ｈ−１'），  ５．６９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｈ−５），  ４．０６  （ｄｄ，  １Ｈ，  ３'−Ｈ），    ３．８５  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｈ−５'ａ，  Ｈ−４'），  ３．５８  （  ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  Ｈ−５'ｂ），  １．２７  （ｄ，  ３  Ｈ，  ２−ＣＨ３），  ０．８９  （ｓ，  ９Ｈ，  Ｃ（ＣＨ３）３），  ０．１２  （ｓ，  ６Ｈ，  Ｓｉ（ＣＨ３）２）．
【０２１２】
実施例１７−２．１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−３−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３ｃ）を使用するＳＰ−４の調製
乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）中の１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニルオキシ）−３−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（１２、３７４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、室温で、２分間の時間にわたって、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．８ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）の１．７Ｍ溶液を加えた。最初に白色沈殿が観察され、１０分後に反応混合物は透明な暗黄色溶液に変化した。３０分後、ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロフェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］−プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ異性体、６５３ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）が、３分間の時間にわたって滴下して加えられた、この混合物は４０℃で２０時間加熱され、この時点で、ＴＬＣおよび１Ｈ  ＮＭＲは２％未満の未反応出発物質を示した。反応混合物は飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチされ、次いで、酢酸エチルと水の間で分配された。有機層は１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３×１０ｍＬ）で、続いて水で洗浄された（２０ｍＬ）。有機層は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、そして濃縮され、３ｃを含む茶色残渣が得られた（８５０ｍｇ）。粗生成物はテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解され、室温で０．８ｍＬの８０％ギ酸水溶液が加えられた。反応混合物は５０℃で９６時間加熱された。約７０％の転換がＴＬＣによって観察された。この反応混合物は冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注がれ、次いで、酢酸エチルと水の間で分配された。合わせた有機層は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、濃縮されて茶色残渣が得られた（２２０ｍｇ）。０−５％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭグラジエントを使用する残渣のカラムクロマトグラフィーは、未反応の出発物質（２１ｍｇ）およびＳＰ−４（７７ｍｇ、３５％収率、回収された出発物質に基づいて３９％）を与えた。
【０２１３】
実施例１８．合成中間体として３ｄを用いるＳＰ−４の調製
0005909535.tif 000034
【０２１４】
実施例１８−１．３ｄの調製
０℃のピリジン（２０ｍＬ）中の３の撹拌溶液に、１５分間の時間にわたって、ＴＩＰＤＳ−Ｃｌを滴下して加えた。この混合物は室温まであたためさせられて、この温度にてこれは１６時間撹拌された。ピリジンはエバポレートされ、残渣はトルエン（５０ｍＬ）とコエバポレートされた。次いで、残渣はヘキサンとともに粉砕され、白色沈殿は、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを使用してろ過されて除かれた。ろ液は減圧下で濃縮されて、泡状固形物（１２．９７ｇ）が得られた。粗生成物（１３）はテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）に再溶解され、０℃で２０分間の時間にわたって、ＴＦＡの水溶液（７５ｍＬ、１：１  ＴＦＡ／水）が加えられた。この混合物はこの温度で６時間撹拌された。ＴＬＣは約５％の出発物質を示した。この反応混合物は、ｐＨが８になるまで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチされ、次いで、酢酸エチルで抽出された。合わせた有機抽出物は水で洗浄され、乾燥され、そして濃縮されて、白色結晶性固形物が得られた。さらに、ヘキサン（３０ｍＬ）との固形物の粉砕は白色固形物を与え、これはろ過され、そして高真空下で乾燥されて３ｄ（１０．１ｇ、２段階で８４％収率）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：  δ  ８．８３  （ｂｓ，  １Ｈ），    ７．９４  （ｂｄ，  Ｊ＝６．０Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．１０（ｂｄ，  Ｊ＝１８．４Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．７１  （ｄ，  Ｊ＝８．２Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．４３  （ｂｓ，  １Ｈ），  ４．３６  （ｄｄ，  Ｊ＝２２．６，  ９．０Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２７  （ｂｓ，  １Ｈ），  ４．１０（ｄ，  Ｊ＝１３．２Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０３  （ｄ，  Ｊ＝９．２Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９２  （ｄ，  Ｊ＝１３．２Ｈｚ，  １Ｈ），  １．３９  （ｄ，  Ｊ＝２２．０Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．１１−０．９２  （ｍ，  ２８Ｈ）．
【０２１５】
実施例１８−２．ＳＰ−４の調製
乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３ｄ（５２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温で１５分間の時間にわたって、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．８ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ、３．１当量）の１．７Ｍ溶液が加えられた。３０分後、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ異性体、６５３ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液が、３分間の時間にわたって滴下して加えられた。この混合物は室温で６０時間撹拌させられた。粗サンプルの１Ｈおよび３１Ｐ  ＮＭＲは、約１：０．７６のジアステレオマーの混合物を示した。この反応混合物は、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）でクエンチされた。この混合物は、酢酸エチル（１５０ｍＬ）と、順番に、１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３×２０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）との間で分配された。合わせた有機抽出物は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、ろ過され、そして減圧下で濃縮されて、淡黄色残渣（１４、８７８ｍｇ）が得られた。
【０２１６】
上記の化合物１４は、テトラヒドロフラン（３ｍＬ）に再溶解され、次いで、８０％ギ酸水溶液が加えられた。この混合物は、５５℃で２０時間加熱された。この反応混合物は０℃まで冷却され、次いで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（ｐＨ  ７．０）でクエンチされた。次いで、この反応混合物は、酢酸エチルと水の間で分配された。合わせた有機層は硫酸ナトリウムで乾燥され、濃縮されて、５６０ｍｇの残渣が得られた。残渣は０−５％メタノール／ジクロロメタングラジエントを使用するクロマトグラフィーが行われ、白色固形物として、未反応の出発材料（１４、２４２ｍｇ）およびＳＰ−４（８０ｍｇ、１５％収率）が得られた。
【０２１７】
実施例１９．アイソトープ標識されたＳＰ−４の調製
0005909535.tif 000035
【０２１８】
実施例１９−１．１−（（６ａＲ，８Ｒ，９Ｒ，９ａＳ）−９−ヒドロキシ−２，２，４，４−テトライソプロピルテトラヒドロ−６Ｈ−フロ［３，２−ｆ］［１，３，５，２，４］トリオキサジシロシン−８−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、１６の調製
ウリジン（１５、１００．０ｇ、４０９．５ｍｍｏｌ）は、無水ピリジン（６００ｍＬ）とともに、乾燥するまでコエバポレートされ、そして無水ピリジン（７００ｍＬ）中に再懸濁された。この撹拌微細懸濁液に、６０分間にわたって、周囲温度で、１，３−ジクロロ−１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン（１３５．７ｇ、４８２．５ｍｍｏｌ）が加えられた。１７時間、周囲温度での微細懸濁液の撹拌後、反応は、メタノール（２０ｍＬ）を加えることによってクエンチされ、次いで、減圧下で濃縮された。残渣は酢酸エチル（１．５Ｌ）と水（２Ｌ）の間で分配された。有機層は、５％塩酸（２×１Ｌ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄され、固体硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥され、ろ過され、そして粗生成物、約２５０ｇまで減圧下で濃縮された。残渣は、シリカゲル（１．７５ｋｇ）およびヘキサン中の酢酸エチルの２０−６５％グラジエントを使用するろ過カラムに供された。均一なＴＬＣ（１：１  ヘキサン−酢酸エチル中Ｒｆ  ０．５５）によって判断されるような純粋生成物画分は合わされ、減圧下で濃縮され、乾燥されて（４０℃、０．２ｍｍ  Ｈｇ、２４時間）、白色泡状固形物として１４５．５ｇ（７６％）の１６が得られた。わずかに不純物を含む１６のさらなる画分（３５ｇ）もまた収集された。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  （ｐｐｍ）  １１．３５  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．６６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ５．５７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，  ２'−ＯＨ），  ５．５０−５．４９  （ｍ，  ２Ｈ，  １'−Ｈ  ａｎｄ  Ｈ−５），  ４．１４−４．１８  （ｍ，  ３Ｈ，  ２'，  ３'，  ４'−Ｈ），  ３．９７−３．８７  （ｍ，  ２Ｈ，  ５'−Ｈａ  ａｎｄ  Ｈｂ），  １．０２−０．９５  （ｍ，  ２８Ｈ，  ＣＨ（ＣＨ３）２）．
【０２１９】
実施例１９−２．１−（（６ａＲ，８Ｒ，９ａＲ）−２，２，４，４−テトライソプロピル−９−オキソテトラヒドロ−６Ｈ−フロ［３，２−ｆ］［１，３，５，２，４］トリオキサジシロシン−８−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、１７の調製
乾燥三つ口丸底フラスコに、無水ＤＣＭ（６００ｍＬ）およびＤＭＳＯ（３０．８２ｇ、３９４．５ｍｍｏｌ）が加えられた。この溶液は、窒素雰囲気下で、ドライアイス／アセトンバス中で−７８℃に冷却された。無水トリフルオロ酢酸（未処理、７７．７ｇ、３６９．８ｍｍｏｌ）は、４０分間にわたって、シリンジを介して加えられ、濁った混合物を与えた。この混合物に、ＤＣＭ（６００ｍＬ）中のウリジン誘導体１６の溶液が、−７８℃で、７５分間にわたって、添加漏斗を介して滴下して加えられた。不均一混合物が−７８〜−６５℃で２時間撹拌され、次いで、無水トリエチルアミン（９２ｍＬ）が素早くシリンジを介して加えられ、透明な明黄色溶液が形成した。ＴＬＣ（ヘキサン中で３０％  ＥｔＯＡｃ）によって示されるように、１時間後、低温にて、反応は完了した。冷却バスが取り外され、反応混合物は、１時間にわたって、周囲温度までゆっくりとあたためられた。反応は、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１８０ｍＬ）の添加によってクエンチされた。水（２００ｍＬ）が加えられ、有機層が分離された。水層は再度ＤＣＭ（３００ｍＬ）で抽出された。合わせた有機層は、水（３×４００ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄され、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥された。溶媒の除去は粘性の茶色残渣を与えた。
【０２２０】
粗油状残渣（痕跡量のＤＣＭを含む）は一晩フリーザー中に保存された。一晩経過後、いくつかの結晶固体が油状物に観察された。油状物は、５００ｍＬ  ヘキサン中に、周囲温度で溶解された。この溶液は、フリーザー中に２４時間保存され、そしてより多くの固体が形成された。固体はろ過によって収集され、ヘキサン（１Ｌ）中の冷１０％  ＤＣＭですすがれ、オレンジ色の大部分が除去された。固形物（１７）は真空下で２時間乾燥され、次いで２４時間風乾された。この固形物は、５０℃、真空下で乾燥後に２１ｇの重量であった。ろ液は濃縮され、残渣はカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中１０−７０％酢酸エチル）を介して精製され、明オレンジ色固形物として、さらに３７ｇ（合わせた収率９７％）の１７が得られた。
【０２２１】
実施例１９−３．１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−１３Ｃ−パージューテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、１８の調製
５％塩酸水溶液で洗浄し、乾燥させた（５０℃、０．２ｍｍ  Ｈｇ、２４時間）マグネシウム（３．５３ｇ、１４７ｍｍｏｌ）は、マグネチックスターラーおよび冷却器を装着した二つ口丸底フラスコに入れた。このフラスコはアルゴンガスが満たされ、次いで無水エーテル（８０ｍＬ）が加えられた。エーテル中のマグネシウムに、ゆっくりとパージューテリオ−１３Ｃ  メチルヨーダイドが加えられ、これは、発熱反応を生じた。反応混合物が冷却された後、上清は、−５０℃で、２０分間にわたって、無水ＴＨＦ（１Ｌ）中の乾燥化合物１７（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、１５時間）（１０．０ｇ、２０．６３ｍｍｏｌ）の溶液に移された。温度は−４０℃まで上昇させられ、この混合物は−４０から−２５℃の間で４時間撹拌された。反応の完了の際に、この混合物は、−５０℃にてＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で希釈され、次いで、ブライン（３００ｍＬ）がゆっくりと加えられた。有機層は分離され、次いで飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄され（３００ｍＬ×２）、硫酸ナトリウムで乾燥された。ろ過および減圧下での濃縮後、残渣はＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）中に溶解された。フッ化アンモニウム（１２ｇ）およびＴＢＡＦ（４００ｍｇ）が加えられた。得られた混合物は、９０℃で７時間撹拌され、次いで、減圧下でシリカゲル（２０ｇ）を用いて濃縮された。徹底的な真空乾燥後、得られた残渣は、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１：２０〜１：１０）によって精製され、白色固形物として化合物１８（５ｇ、４６％）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  （ｐｐｍ）  １１．２６  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．６５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ５．７７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  Ｈ−１'），  ５．５７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−５），    ５．４６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ，  ＨＯ−３'），  ５．２４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  ＨＯ−２'），  ５．１４  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，  ＨＯ−５'），  ３．７４−３．５６  （ｍ，  ４Ｈ，  Ｈ−３'，  ４'，  ５'，  ５''）．
【０２２２】
実施例１９−４．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−アセトキシ−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシ−４−１３Ｃ−パージューテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メチルアセテート、１９の調製
無水ピリジン（１００ｍＬ）中の化合物１８（５．００ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度で、無水酢酸（３ｍＬ）が加えられた。得られた混合物は、周囲温度で１５時間撹拌され、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で希釈され、水（５０ｍＬ×３）で洗浄され、そして硫酸ナトリウムで乾燥された。ろ過および濃縮の後、残渣はフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ  ０〜５％）で精製され、灰色固形物として化合物１９（４．０ｇ、６８％）が得られた。
【０２２３】
実施例１９−５．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−アセトキシ−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−４−１３Ｃ−パージュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メチルアセテート、２０の調製
無水ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中の化合物１９（２．３３ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、ＤＡＳＴ（１．３３ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られた混合物は、周囲温度にさらした後、３０分間撹拌された。さらなる２回の２．３３ｇスケール反応および１回の１．００ｇスケール反応は、正確に同じ方法で実施された。４つすべての反応混合物は合わされ、ＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）で希釈され、そして氷水（１００ｍＬ×２）次いで冷ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄された。乾燥、ろ過、および濃縮の後、残渣はフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製されて（ヘキサン中ＥｔＯＡｃ  ０％〜５０％、化合物は約４８％出てくる）、白色固形物として化合物２０（２．０ｇ、総計７．９９ｇの化合物１９の２４％）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  （ｐｐｍ）  ８．２７  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．５５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ６．１７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １８．８  Ｈｚ，  Ｈ−１'），  ５．７８  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １．２，  ８．４  Ｈｚ，  Ｈ−５），  ５．１２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９．６，  ２１．６  Ｈｚ，  Ｈ−３'），  ４．４０−４．３１  （ｍ，  ３Ｈ，  Ｈ−４'，  ５'，  ５''），  ２．１９  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３），  ２．１５  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３）．
【０２２４】
実施例１９−６．１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−１３Ｃ−パージューテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、２１の調製
メタノール（２０ｍＬ）中の化合物２０（２ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ブチルアミン（６ｍＬ）が加えられた。得られた混合物は、室温で１５時間撹拌され、真空中でシリカゲルを用いて濃縮された。得られた残渣は、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨ  ０〜１０％）によって精製されて、白色固形物として化合物２１（１．３ｇ、８５％）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ）  δ  （ｐｐｍ）  ８．０８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−６），  ６．１３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １８．４  Ｈｚ，  Ｈ−１'），  ５．７０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−５），    ３．９９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １３．６  Ｈｚ，  Ｈ−５'），  ３．９７−３．９１  （ｍ，  ２Ｈ，  Ｈ−３'，  ４'），  ３．８０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ２．０，  １２．８  Ｈｚ，  Ｈ−５''），ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）理論値２６５，実測値２６５．  
0005909535.tif 000036
【０２２５】
実施例１９−７．（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−１３Ｃ−パージューテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリルアミノ）プロパノエート、２２の調製
ＴＨＦ（４ｍＬ）中の保護されていないヌクレオシド２１（２０７ｍｇ、０．７８３ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルイミダゾール（０．４ｍＬ、５ｍｍｏｌ）の溶液に、あらかじめ作製されたＴＨＦ中のホスホロクロリデート（１．０Ｍ、２．３５ｍＬ、２．３５ｍｍｏｌ）が、０℃で滴下されて加えられた。この反応は、１時間にわたって周囲温度までゆっくりとあたためられ、次いで、水（１ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）が加えられた。有機溶液は、飽和クエン酸一塩基ナトリウム水溶液（２×２ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１×２ｍＬ）で洗浄され、乾燥され（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で濃縮された。粗物質は、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２中の０〜５％  ｉＰｒＯＨを使用するシリカカラムクロマトグラフィーによって精製されて、白色固形物として、ホスホルアミデート、２２（２１６ｍｇ、５２％、Ｐ−ジアステレオマーの１：１混合物）が得られた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １１．５４  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４０−７．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．２３−７．１８  （ｍ，  ３  Ｈ），  ６．１４−５．９６  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．８９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．６，  ２５．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．５５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８５  （ｄｑ，  Ｊ  ＝  １．６，  ６．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．４４−４．３２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０６−３．９８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．８６−３．７０  （ｍ，  ２Ｈ），  １．３０−１．０８  （ｍ，  ９Ｈ）；  ３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ４．９０，  ４．７７；  ＬＲＭＳ  （ＥＳＩ）  
［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２１１３ＣＨ２７Ｄ３ＦＮ３Ｏ９Ｐについての計算値５３４．５、実測値５３４．４．
【０２２６】
実施例１９−８．（２Ｓ）−２−（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−１３Ｃ−パージューテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸、２３の調製
ホスホルアミデート２２（１４７ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）は、トリエチルアミン（２ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中に懸濁され、６０℃で３０時間加熱された。次いで、揮発性成分は減圧下でエバポレートされた。粗物質は、シリカカラムクロマトグラフィーによって、ＣＨ２Ｃｌ２中５０−７０％  ｉＰｒＯＨ、次いで、ｉＰｒＯＨ中０〜２０％  ＮＨ４ＯＨで溶出させることによって精製され、白色固形物として２３が得られた（９５ｍｇ、８３％）：
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．００  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．９８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １９．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０２−３．８１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．１０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ３Ｈ）；  ３１Ｐ  ＮＭＲ  （１６２  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．１２；  ＬＲＭＳ  （ＥＳＩ）  
［Ｍ  ＋  Ｈ］＋  Ｃ１２１３ＣＨ１７Ｄ３ＦＮ３Ｏ９Ｐについて理論値４１６．３、実測値４１６．４．
【０２２７】
ＲＰ−４、４、およびＳＰ−４のサンプルの特性
ＲＰ−４、４、およびＳＰ−４のサンプルは、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル分析、フーリエ変換赤外（ＦＴ−ＩＲ）スペクトル分析、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、蒸気収着重力測定（ＧＶＳ）、熱力学的水溶解度、および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分析された。
【０２２８】
実施例２０．Ｘ線粉末回折
ＲＰ−４、４、およびＳＰ−４のサンプルは、以下のレジメンに従ってＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって分析された。
【０２２９】
ａ．Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ／Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５０００
Ｘ線粉末回折パターンは、Ｃｕ  Ｋα照射（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θゴニオメーター、Ｖ２０および受容スリットの逸脱、グラファイト二次単色光分光器、およびシンチレーションカウンターを使用して、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５０００回折計で収集された。この機器は、認定されたＣｏｒｕｎｄｕｍ標準（ＮＩＳＴ  １９７６）を使用して性能チェックされた。データ収集のために使用されたソフトウェアはＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＸＲＰＤ  Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ  ｖ２．３．１であり、データはＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡ  ｖ  １１．０．０．２またはｖ  １３．０．０．２を使用して分析および提示された。
【０２３０】
周囲条件
周囲条件下で実行されたサンプルは、受け取ったままの粉末を使用して、平板試料として調製された。約３５ｍｇのサンプルは、研磨され、ゼロバックグラウンド（５１０）であるシリコンウェハに切断されたキャビティーに穏やかに充填された。サンプルは、分析の間にそれ自体の平面で回転された。データ収集の詳細は、角範囲：２〜４２°２θ；ステップサイズ：０．０５°２θ；および収集時間：４ｓ．ステップ−１である。
【０２３１】
ｂ．Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｃ２  ＧＡＤＤＳ
Ｘ線粉末回折パターンは、Ｃｕ  Ｋα照射（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、自動ＸＹＺステージ、自動サンプルポジショニングのためのレーザービデオ顕微鏡、およびＨｉＳｔａｒ２次元面積検出器を使用して、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｃ２  ＧＡＤＤＳ回折計上で収集された。Ｘ線光学装置は、０．３ｍｍのピンホールコリメータと結合された単一のＧｏｅｂｅｌ多層ミラーからなる。
【０２３２】
ビーム広がり、すなわち、サンプル上のＸ線ビームの有効サイズは、約４ｍｍであった。θ−θ連続スキャンモードは、３．２°−２９．７°の有効２θ範囲を与える２０ｃｍのサンプル−検出器距離を用いて利用された。典型的には、サンプルは、１２０秒間の間、Ｘ線ビームにさらされる。データ収集のために使用されるソフトウェアは、ＧＡＤＤＳ  ｆｏｒＷＮＴ  ４．１．１６であり、データはＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡ  ｖ  ９．０．０．２またはｖ  １３．０．０．２を使用して分析および提示された。
【０２３３】
周囲条件
周囲条件下で実行されたサンプルは、受け取ったままの粉末を研磨なしで使用して、平板試料として調製された。約１−２ｍｇのサンプルは、ガラススライド上で軽く圧縮され、平らな表面を得た。
【０２３４】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
４はアモルファスであることがＸＲＰＤによって見い出された（図１を参照のこと）。実施例３に従って調製されたＲＰ−４の高分解能ＸＲＰＤ分析は、結晶性固体であることもまた確認されたＳＰ−４（実施例４、方法４に従って調製）とは異なる粉末パターンを示す結晶固体を確認した。ＲＰ−４およびＳＰ−４についてのＸＲＰＤの結果の表は表１に示され、すべてのピークは≦５％（ＲＰ−４）および≦３％（ＳＰ−４）の強度が除外されている。
表１．ＲＰ−４およびＳＰ−４についてのＸＲＰＤデータ．
0005909535.tif 000037
【０２３５】
ＳＰ−４のサンプルは乳棒および乳鉢で粉砕し、次いで、引き続いて５００および２５０μｍふるいを通して、微細粉末としてサンプルを得た。このサンプルは高分解能ＸＲＰＤによって再分析され、型の変化が起こっていないことを確認した。
【０２３６】
実施例２１．ＳＰ−４についての結晶化研究
結晶性ＳＰ−４は多形を示す。従って、１つの態様は、結晶性ＳＰ−４およびその個々の多形型に関する。ＳＰ−４は、１−５型と称される、少なくとも５種の多形型で存在する。さらに、アモルファスＳＰ−４もまた調製できる。典型的な結晶化は、適切な体積の結晶化溶媒（アセトニトリル（５体積）、クロロホルム（５体積）、ｎ−ブチルアセテート（７体積）、ジクロロメタン（５０体積）、アニソール（７体積）、および１：１  ＭＴＢＥ／ヘプタン（５０体積））中に約１００ｍｇのＳＰ−４を溶解すること、次いで５℃でのこの溶液のエバポレーションを許容することを提供する。種々の結晶型が得られたが、各型は、ろ過および／または乾燥に際して、１型を与えた。
【０２３７】
１、２、および３型は、単結晶Ｘ線およびＸＲＰＤ分析によって確認されたように、それぞれ、非溶媒和型、１：１  ＤＣＭ溶媒和物、および１：１  クロロホルム溶媒和物である。４および５型は、それぞれ、アセトニトリルおよびアニソールの溶液からのＳＰ−４の結晶化から得られた。十分な品質の単結晶が得られなかったので、４型および５型が非溶媒和型、水和型、または溶媒和型のいずれであるかについてを決定するための十分なデータは収集できなかった。４型および５型はろ過に際して１型に転換する。２つのさらなる結晶型が、酢酸ｎ−ブチル（ｎＢｕＡｃ）ならびにメチル−ｔブチルエーテル（ＭＴＢＥ）およびヘプタンを含む溶液からのＳＰ−４の結晶化の際に得られ；ろ過の際にこれらの両方は１型に転換する。２型および３型もまた、単離の際に１型に転換する。１型は広い融解吸熱を示す非溶媒和型であり、９４．３℃の開始温度および２４．０ｋＪｍｏｌ−１のΔＨｆｕｓである。さらなる１型ＳＰ−４のＸＲＰＤパターンは図４に示される。
【０２３８】
実施例２１−１．１型ＳＰ−４
１型ＳＰ−４のピークリストは表２に提示される。
0005909535.tif 000038
【０２３９】
実施例２１−２．２型ＳＰ−４
２型ＳＰ−４のＸＲＰＤパターンは図５に示される。
２型ＳＰ−４のピークリストは表３に示される。
0005909535.tif 000039
【０２４０】
実施例２１−３．３型ＳＰ−４
３型ＳＰ−４のＸＲＰＤパターンは図６に示される。
３型ＳＰ−４のピークリストは表４に示される。
0005909535.tif 000040
【０２４１】
実施例２１−４．４型ＳＰ−５
４型ＳＰ−４のＸＲＰＤパターンは図７に示される。
４型ＳＰ−４のピークリストは表５に示される。
0005909535.tif 000041
【０２４２】
実施例２１−５．５型ＳＰ−４
５型ＳＰ−４のＸＲＰＤパターンは図８に示される。
５型ＳＰ−４のピークリストは表６に示される。
0005909535.tif 000042
【０２４３】
実施例２１−６．ＳＰ−４（アモルファス）
アモルファスＳＰ−４のＸＲＰＤパターンは図９に示される。
【０２４４】
実施例２２．ＳＰ−４およびその溶媒和物の単結晶Ｘ線結晶学
【０２４５】
実施例２２−１．ＳＰ−４（１型）の単結晶Ｘ線結晶学
図１０は、１型ＳＰ−４についてのＸ線結晶構造を示す。ここでは、この図は、利用される番号付けスキームを示す結晶構造からの１型の分子の概観を示す。非水素原子についての異方性原子置換楕円は５０％確率レベルで示される。水素原子は任意に小さな半径で置き換えられる。
【０２４６】
構造解は、直接方法、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３である、重み付けｗ−１＝σ２（Ｆｏ２）＋（０．０５９２Ｐ）２＋（０．６９５０Ｐ）を用いるＦ２上でのフルマトリックス最小二乗微調整、異方性置換パラメーター、球面調和関数を使用する経験的吸収相関によって得られ、ＳＣＡＬＥ３  ＡＢＳＰＡＣＫスケール付けアルゴリズムにおいて実施された。すべてのデータについて、最終ｗＲ２＝｛Σ［ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２］／Σ［ｗ（Ｆｏ２）２］１／２｝＝０．０８７１、Ｆｏ＞４σ（Ｆｏ）を用いる７０９０反射のＦ値に対する従来的なＲ１＝０．０３２９、すべてのデータおよび８７０パラメーターについてＳ＝１．０１６。最終Δ／σ（最大）０．００１、Δ／σ（平均）、０．０００。最終的な差は＋０．５３４と−０．３６ｅÅ−３の間にマッピングされる。
表７．１型の単結晶パラメーター
0005909535.tif 000043
【０２４７】
実施例２２−２．ＳＰ−４（２型）の単結晶Ｘ線結晶学
図１１は、２型ＳＰ−４のＸ線結晶構造を示す。ここでは、この図は、利用される番号付けスキームを示す結晶構造からの２型の分子の概観を示す。ヘテロ原子は非常に弱いデータのために等方性に解析された。水素原子は示されていない。
【０２４８】
構造解は、直接方法、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３である、重み付けｗ−１＝σ２（Ｆｏ２）＋（０．０９７５Ｐ）２＋（１０．６９６９Ｐ）を用いるＦ２上でのフルマトリックス最小二乗微調整、異方性置換パラメーター、球面調和関数を使用する経験的吸収相関によって得られ、ＳＣＡＬＥ３  ＡＢＳＰＡＣＫスケール付けアルゴリズムにおいて実施された。すべてのデータについて、最終ｗＲ２＝｛Σ［ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２］／Σ［ｗ（Ｆｏ２）２］１／２｝＝０．１８８３、Ｆｏ＞４σ（Ｆｏ）を用いる２５２５反射のＦ値に対する従来的なＲ１＝０．０７４１、すべてのデータおよび１５８パラメーターについてＳ＝１．０５。最終Δ／σ（最大）０．０００、Δ／σ（平均）、０．０００。最終的な差は＋１．３８８と−０．９６７ｅÅ−３の間にマッピングされる。
表８．２型の単結晶パラメーター
0005909535.tif 000044
【０２４９】
実施例２２−３．ＳＰ−４（２型）の単結晶Ｘ線結晶学
図１２はＸ線結晶構造（ＯＲＴＥＰ−異方性）ＳＰ−４（２型）を示す。ＳＰ−４（２型）の塩化メチレン溶媒和物の結晶構造、Ｃ２３Ｈ３１Ｎ３ＰＯ９ＦＣｌ２は、単斜晶系空間群Ｐ２１（系統的不在０ｋ０：ｋ＝奇数）を生じ、ａ＝１２．８８２２（１４）Å、ｂ＝６．１６９０（７）Å、ｃ＝１７．７３３（２）Å、β＝９２．０４５（３）、Ｖ＝１４０８．４（３）Å３、Ｚ＝２、およびｄｃａｌｃ＝１．４４９ｇ／ｃｍ３であった。Ｘ線強度データは、グラファイト単色Ｍｏ−Ｋα照射（λ＝０．７１０７３Å）を利用し、１４３Ｋの温度において、Ｒｉｇａｋｕ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ＣＣＤ面積検出器上で収集された。予備的インデックスは、３０秒間の曝露を用いる、一連の１２回の０．５°回転画像から実施された。結晶から検出器まで３５ｍｍの距離、１２°の２θスイング角、０．５°の回転深さ、および３０秒間の曝露を用いて、全体で６４８枚の回転画像が収集された：スキャン番号１はω＝１０°およびχ＝２０°におけるφスキャン３１５°〜５２５°であった；スキャン番号２はχ＝−９０°およびφ＝３１５°におけるωスキャン−２０°〜５°であった；スキャン番号３はχ＝−９０°およびφ＝１３５°におけるωスキャン−２０°〜４°であった；スキャン番号４はχ＝−９０°およびφ＝２２５°におけるωスキャン−２０°〜５°であった；スキャン番号５はχ＝−９０°およびφ＝４５°におけるωスキャン−２０°〜２０°であった。回転画像はＣｒｙｓｔａｌＣｌｅａｒ（ＣｒｙｓｔａｌＣｌｅａｒ：Ｒｉｇａｋｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，１９９９）を使用して処理され、平均化されていないＦ２およびσ（Ｆ２）値のリストを生じ、次いで、これは、Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ  （登録商標）  ＩＩＩコンピュータ上でのさらなる処理および構造解のためのＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ：Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｒｉｇａｋｕ  Ｃｏｒｐ．Ｒｉｇａｋｕ／ＭＳＣ（２００２））プログラムパッケージに移された。全体で７７０７反射が、５．４８≦２θ≦５０．０４°、−１４≦ｈ≦１５、−７≦ｋ≦６、−１９≦ｌ≦２１の範囲にわたって測定され、４２５３の独特な反射を生じた（Ｒｉｎｔ＝０．０１８０）。強度データは、ＲＥＱＡＢ（最小および最大透過  ０．８２４、１．０００）を使用して、Ｌｏｒｅｎｔｚおよび偏光について、ならびに吸収について補正された。
【０２５０】
構造は直接的方法によって解かれた（ＳＩＲ９７，ＳＩＲ９７：Ａｌｔｏｍａｒｅ，Ａ．，Ｍ．Ｂｕｒｌａ，Ｍ．Ｃａｍａｌｌｉ，Ｇ．Ｃａｓｃａｒａｎｏ，Ｃ．Ｇｉａｃｏｖａｚｚｏ，Ａ．Ｇｕａｇｌｉａｒｄｉ，Ａ．Ｍｏｌｉｔｅｒｎｉ，Ｇ．Ｐｏｌｉｄｏｒｉ  ＆  Ｒ．Ｓｐａｇｎａ（１９９９）．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．，３２，１１５−１１９）。微調整は、ＳＨＥＬＸＬ−９７を使用するＦ２に基づいて、フルマトリックス最小２乗法によった（ＳＨＥＬＸＬ−９７：Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ｇ．Ｍ．（２００８）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．，Ａ６４，１１２−１２２）。すべての反射が微調整の間に使用された。使用された重み付けスキームはｗ＝１／［σ２（Ｆo2 ）＋０．０４７２Ｐ２＋０．４９６０Ｐ］であり、ここで、Ｐ＝（Ｆo2 ＋２Ｆc2 ）／３であった。非水素原子は異方的に微調整され、水素原子は「ライディングモデル」を使用して微調整された。微調整は、Ｆ＞４σ（Ｆ）についての４０４６微調整について、Ｒ１＝０．０３２８およびｗＲ２＝０．０８１７に収束し、ならびに、４２５３のすべての独特な非ゼロ反射および３５８変数（Ｒ１＝  Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜；ｗＲ２＝｛Σｗ（Ｆo2  −Ｆc2 ）２／Σｗ（Ｆo2 ）２｝１／２；ＧＯＦ＝｛Σｗ（Ｆo2  −Ｆc2 ）２／（ｎ−ｐ）｝１／２；ここでｎ＝反射の数、ｐ＝微調整されたパラメーターの数）について、Ｒ１＝０．０３４８、ｗＲ２＝０．０８３８、およびＧＯＦ＝１．０５６に収束した。最小２乗法の最後のサイクルにおける最大Δ／σは０．０００であり、最終示差フーリエにおける２つも最も顕著なピークは＋０．３１２および−０．３８９  ｅ／Å３であった。Ｆｌａｃｋ絶対構造パラメーターは−０．０６（６）まで微調整され、従って、表題化合物の立体化学を裏付けた。
【０２５１】
表１は、セル情報、データ収集パラメーター、および微調整データを列挙する。最終的な位置および等価な等方性熱パラメーターは表２に与えられる。異方性熱パラメーターは表３にある。（「ＯＲＴＥＰ−ＩＩ：Ａ  Ｆｏｒｔｒａｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｅｌｌｉｐｓｏｉｄ  Ｐｌｏｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎｓ」．Ｃ．Ｋ．Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９７６）ＯＲＮＬ−５１３８．）は、３０％確率熱楕円を有する分子の表示を示した。
表９．化合物ＳＰ−４・ＣＨ２Ｃｌ２．の構造決定の要約
0005909535.tif 000045
【０２５２】
実施例２２−４．ＳＰ−４（３型）の単結晶Ｘ線結晶学
図１３は、３型ＳＰ−４のＸ線結晶構造を示す。ここでは、この図は、利用される番号付けスキームを示す結晶構造からの３型の分子の概観を示す。非水素原子についての異方性原子置換楕円は５０％確率レベルで示される。水素原子は任意に小さな半径で置き換えられる。
【０２５３】
構造解は、直接方法、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３である、重み付けｗ−１＝σ２（Ｆｏ２）＋（０．０５１２Ｐ）２＋（０．６８１０Ｐ）を用いるＦ２上でのフルマトリックス最小二乗微調整、異方性置換パラメーター、球面調和関数を使用する経験的吸収相関によって得られ、ＳＣＡＬＥ３  ＡＢＳＰＡＣＫスケール付けアルゴリズムにおいて実施された。すべてのデータについて、最終ｗＲ２＝｛Σ［ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２］／Σ［ｗ（Ｆｏ２）２］１／２｝＝０．０７９６、Ｆｏ＞４σ（Ｆｏ）を用いる２４８６反射のＦ値に対する従来的なＲ１＝０．０２９４、すべてのデータおよび３７７パラメーターについてＳ＝１．０６８。最終Δ／σ（最大）０．００１、Δ／σ（平均）、０．０００。最終的な差は＋０．２１１と−０．３３４ｅÅ−３の間にマッピングされる。
表１０．３型の単結晶パラメーター
0005909535.tif 000046
【０２５４】
実施例２３．温度および相対湿度の上昇における安定性
ＲＰ−４のサンプルは、４０℃で７５％相対湿度の湿度チャンバーに１週間保存され、サンプルはＸＲＰＤによって再分析された。ＲＰ−４について得られた粉末パターンは、実験の過程の間に実質的な変化を示さず、このことは固体型の変化が観察されなかったことを意味する。これは、４０℃で７５％相対湿度での保存の際に約１６時間以内に潮解した４のサンプルと対比されるべきである。確かに、４の潮解性質の例証は以下によって例証される。４のサンプルは２５０μｍふるいを通され、次いで、サンプルは４０℃／７５℃ＲＨおよび２５℃／５３％相対湿度で保存され、規則的な間隔で目視検査が行われた。結果は表４に与えられる。
表１１．相対湿度の上昇に対する４の安定性
0005909535.tif 000047
【０２５５】
４０℃および７５％相対湿度での保存に際して、ＳＰ−４のサンプルは１６時間以内に潮解した。例えば、ＳＰ−４のサンプルは、乳棒および乳鉢で粉砕され、次いで、５００および２５０μｍふるいに引き続いて通されて、微粉末としてのサンプルを生じた。この物質のサンプルは、４０℃および７５％相対湿度ならびに２５℃および５３％ＲＨで保存され、目視検査が規則的な間隔で行われた。結果は表５に与えられる。
表１２．相対湿度の上昇に対するＳＰ−４の安定性
0005909535.tif 000048
【０２５６】
２５℃および５３％  ＲＨで１０４時間の保存後のサンプルのＸＲＰＤ分析は、生じたディフラクトグラムにおける有意な変化を示さず、このことは、型の変化が起こらなかったことを示す。
【０２５７】
実施例２４．フーリエ変換赤外（ＦＴ−ＩＲ）スペクトル分析
データは、汎用Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  Ｔｏｔａｌ  Ｒｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ（ＡＴＲ）サンプリングアクセサリーを装着したＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｏｎｅにて収集された。Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｖ５．０．１ソフトウェアを使用して、データは収集され、分析された。
【０２５８】
４、ＲＰ−４、およびＳＰ−４について得られたＩＲスペクトルは図５−７にそれぞれ示される、選択されたピークは、波長（ｃｍ−１）で以下に列挙される：
４：〜１６８０、〜１４５４、〜１３７６、〜１２０５、〜１０９２、〜１０２３（図１４）；
ＲＰ−４：〜１７４２、〜１７１３、〜１６７９、〜１４６０、〜１３７７、〜１２５９、〜１１５７、〜１０７９（図１５）；および
ＳＰ−４（１型）：〜１７４３、〜１７１３、〜１６８８、〜１４５４、〜１３７８、〜１２０８、〜１０８２（図１６）。
【０２５９】
実施例２５．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）熱重量分析（ＴＧＡ）
ＤＳＣデータは、５０ポジションオートサンプラーが装着されたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ２０００で収集された。熱容量の較正はサファイアを使用して実行され、エネルギーおよび温度の較正は保証されたインジウムを使用して実行された。
【０２６０】
改変された温度ＤＳＣは、典型的には、０．８−１．２ｍｇの各サンプルで、ピンホールを有するアルミニウムパンの中で、根本的な２℃．分−１の加熱速度ならびに±０．２℃．分−１および４０秒の温度改変パラメーターを使用して実行された。５０ｍＬ．分−１の乾燥窒素のパージはサンプルにわたって維持された。
【０２６１】
機器制御ソフトウェアは、Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｆｏｒ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｖ２．８．０．３９２およびＴｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｖ４．８．３であり、データはＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｖ４．３Ａを使用して分析された。
【０２６２】
ＤＳＣデータは、３４ポジションオートサンプラーを装着したＭｅｔｔｌｅｒ  ＤＳＣ  ８２３ｅで収集された。この機器は、保証されたインジウムを使用して、エネルギーおよび温度について較正された。典型的には、０．８−１．２ｍｇの各サンプルが、ピンホールを有するアルミニウムパンの中で、２５℃から２５０℃まで、１０℃．分−１で加熱された。５０ｍＬ．分−１の窒素パージはサンプルにわたって維持された。機器制御およびデータ分析ソフトウェアはＳＴＡＲｅ  ｖ９．２０であった。
【０２６３】
ＴＧＡデータは、３４ポジションオートサンプラーを装着したＭｅｔｔｌｅｒ  ＴＧＡ／ＳＤＴＡ  ８５１ｅで収集された。この機器は、保証されたインジウムを使用して温度較正された。典型的には、８−１２ｍｇの各サンプルが、あらかじめ秤量されたアルミニウムるつぼにロードされ、周囲温度から３５０℃まで１０℃．分−１で加熱された。５０ｍＬ．分−１の窒素パージはサンプルにわたって維持された。機器制御およびデータ分析ソフトウェアはＳＴＡＲｅ  ｖ９．２０であった。
【０２６４】
４のＤＳＣ分析は、５８．７℃で開始する単一の広い吸熱（ΔＨ  １４Ｊ．ｇ−１）を示し、これは、さらなる改変ＤＳＣ分析によってガラス転移の間の分子緩和に起因することが確認された（図１７）。４のＴＧＡ分析は、２４０℃より上の分解の前に重量の損失を示さず、この物質が非溶媒和型であることを確認した。４のＸＲＰＤ分析は物質がアモルファスであることを確認したので、ガラス転移温度を計算する試みにおいて、改変ＤＳＣ分析が着手され、これは５７℃であることが見い出された。
【０２６５】
ＤＳＣ分析は、１３６．２℃（ΔＨ  ７６Ｊ．ｇ−１）で開始する単一の鋭い吸熱を示し、これは、ホットステージ顕微鏡法によって融解することが確認された。図１８を参照のこと。ＲＰ−４のＴＧＡ分析は、２４０℃よりも上での分解前に重量の損失は示さず、この物質が非溶媒和型であることを確認した。
【０２６６】
ＳＰ−４のＤＳＣ分析は、９３．９℃（ΔＨ  ４３Ｊ．ｇ−１）で開始する単一の広い吸熱を示し、これは、ホットステージ顕微鏡法によって融解することが確認された。図１９を参照のこと。ＳＰ−４のＴＧＡ分析は、２４０℃よりも上での分解前に重量の損失は示さず、この物質が非溶媒和型であることを確認した。
【０２６７】
実施例２６．蒸気収着重力測定（ＧＶＳ）
ＳＭＳ  ＤＶＳ内部
収着等温線は、ＳＭＳ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｉｔｅソフトウェアによって制御されるＳＭＳ  ＤＶＳ内部湿度分析装置を使用して得られた。サンプル温度は、機器制御により２５℃に維持された、湿度は、乾燥窒素およびウェット窒素の流れを混合することによって制御され、全体の流速は２００ｍＬ．分−１であった。相対湿度は、サンプルの近くに配置された、較正したＲｏｔｒｏｎｉｃプローブ（１．０−１００％ＲＨのダイナミックレンジ）によって測定された。％ＲＨの関数としてのサンプルの重量変化（質量緩和）は、微量天秤（正確さ±０．００５ｍｇ）によって定常的にモニターされた。
【０２６８】
典型的には、５−２０ｍｇのサンプルが、周囲条件下で、風袋測定したメッシュステンレス鋼バスケット中に配置された。サンプルは、４０％ＲＨおよび２５℃（典型的な室温条件）でロードされるかまたはアンロードされた。湿度収着等温線は、以下に概説されるように実施された（２スキャンが１完全サイクルを与えた）。標準等温線は、０．５−９０％ＲＨ範囲にわたって、２５℃、１０％ＲＨ間隔で実施された。
表１３．ＳＭＳ  ＤＶＳ内部実験のための方法パラメーター
0005909535.tif 000049
【０２６９】
サンプルは、等温線の完了後に回収され、ＸＲＰＤによって再分析された。
【０２７０】
ＧＶＳ分析は、ＲＰ−４が非吸湿性であることを示し、約０．２重量％の０〜９０％相対湿度の水の可逆的な取り込みを提示する。ＧＶＳ実験後のＸＲＰＤによるサンプルの再分析は型の変化を示さなかった。
【０２７１】
ＳＰ−４のサンプルは、乳房および乳鉢で粉砕され、次いで、連続的に５００および２５０μｍふるいを通して、微細粉末としてサンプルを生じ、次いで、これは、改変サイクル法を使用して分析された。このサンプルは、標準的な方法のための９０％の代わりに、４０％ＲＨ（ほぼ周囲）〜６０％ＲＨをとり、次いで、０％までと、４０％ＲＨまで戻すサイクルが行われた。この分析は、ＳＰ−４が６０％ＲＨまで非吸湿性であることを示し、０〜６０％ＲＨで〜０．２重量％の水の可逆的な取り込みであった。
【０２７２】
実施例２７．熱力学的水溶解度
水溶解度は、水中の十分な量の化合物を懸濁させることによって決定されて、親の遊離型の化合物の≧１０ｍｇ．ｍｌ−１までの最大最終濃度を与えた。この懸濁物は、２５℃で２４時間平衡化され、次いで、ｐＨが測定された。次いで、この懸濁液は、ガラス繊維フィルターを通して、９６ウェルプレートにろ過された。次いで、ろ液は、係数１０１で希釈された。定量は、ＤＭＳＯ中の約０．１ｍｇ．ｍｌ−１の標準溶液を参照して、ＨＰＬＣによって行われた。異なる体積の標準、希釈されたサンプル溶液および希釈されていないサンプル溶液が注入された。溶解度は、標準注入中の主要なピークと同じ保持時間において見い出されるピークの積分によって決定されたピーク面積を使用して計算された。
表１４．溶解度測定のためのＨＰＬＣ方法パラメーター
0005909535.tif 000050
【０２７３】
分析は、上記に記述された条件下で、ダイオードアレイ検出器を装着したＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ１１００シリーズシステムで、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖＢ．０２．０１−ＳＲ１を使用して実施された。
表１５．ＲＰ−４、４、およびＳＰ−４についての水溶解度結果
0005909535.tif 000051
【０２７４】
実施例２８．ＨＰＬＣによる化学純度決定
種々のＨＰＬＣ条件が、本明細書に開示される化合物の化学純度を決定するために使用できる。１つのこのような例は、熱力学的水溶解性研究に関連して上記に開示されている。別の例は以下に開示される。
【０２７５】
ＨＰＬＣ条件：
ＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｍｏｄｕｌｅ、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６  ＰＤＡ検出器、およびＷａｔｅｒｓ  Ｅｍｐｏｗｅｒ  ２  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．００）
カラム：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ  Ｃ１８（２）；４．６×５０ｍｍ；３μｍ
流速：１．２ｍＬ／分
注入体積：１０μＬ
移動相：溶媒Ａ：５％メタノールおよび１０ｍＭ  酢酸アンモニウムを伴う９５％水；ｐＨ〜５．３
溶媒Ｂ：１０ｍＭ  酢酸アンモニウムを伴うメタノール
グラジエント：０％Ｂに保持        ３分間
０−４７％Ｂ        ３−４分間
４７％Ｂに保持      ４−１０分間
４７％−７４％Ｂ    １０−１１分間
７４％Ｂに保持      １１−１３．５分間
０％Ｂに戻す        １３．５−１３．６分間
０％Ｂに保持        １３．６−１５．５分間
【０２７６】
これらの条件下では、４、ＲＰ−４、およびＳＰ−４の純度は、それぞれ、〜９９．６、〜９９％、および〜９９．５％であると決定された。より高純度は、上記に開示される方法を最適化することによって現実化できることが注目される。
【０２７７】
ＸＲＰＤディフラクトグラムの精査は、２つの結晶性単一ジアステレオマーが明確に異なるＸＲＰＤパターンを与えたことを示す。加えて、２つの結晶性ジアステレオマーの融点の明確な違いが存在し、ＲＰ−４はＳＰ−４よりも顕著に高い開始温度を有する（１３６℃対９４℃）。
【０２７８】
実施例２９．さらなる分離方法
以下のＳＦＣ分離は、ジアステレオマーＲＰ−４およびＳＰ−４の混合物の十分な分離を生じた。
0005909535.tif 000052
【０２７９】
以下のＳＦＣ分離（以下に列挙する条件）は、ジアステレオマーＲＰ−４およびＳＰ−４の混合物の十分な分離を生じた。
0005909535.tif 000053
表１６．ＲＰ−４、４、およびＳＰ−４のバッチ特徴付けからの結果の要約
0005909535.tif 000054
【０２８０】
実施例３０．８（ＳＰ異性体）のＸ線結晶学
化合物８（ＳＰ異性体）、Ｃ１８Ｈ２１Ｎ２ＰＯ７、は、単斜晶系空間群Ｐ２１（系統的不在０ｋ０：ｋ＝奇数）において、ａ＝５．３３１２（４）Å、ｂ＝１５．３３８８（８）Å、ｃ＝２３．７８０７（１３）Å、β＝９２．８９１（３）°、Ｖ＝１９４２．２（２）Å３、Ｚ＝４、およびｄｃａｌｃ＝１．３９７ｇ／ｃｍ３で結晶化する。Ｘ線強度データは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸＩＩ  ＣＣＤ面積検出器で、グラファイト単色Ｍｏ−Ｋα照射（λ＝０．７１０７３Å）を利用して、１００（１）Ｋの温度で収集された。図２０Ａおよび２０Ｂは、非対称単位をそれぞれ１および２と番号付けした分子を示す。
【０２８１】
予備的インデックスは、３０秒間の曝露を用いる一連の３６の０．５°回転フレームから実施された。全部で３６０８フレームが、結晶から検出器までの距離７０．００ｎｍ、回転深さ０．５°、および２０秒間の曝露で収集された：
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【０２８２】
回転フレームは、ＳＡＩＮＴ（Ｂｒｕｋｅｒ（２００９）ＳＡＩＮＴ．Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ．）を使用して積分され、平均されていないＦ２およびσ（Ｆ２）値のリストを生じ、次いでこれは、Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ  （登録商標）  ４コンピュータでのさらなる処理および構造解析のために、ＳＨＥＬＸＴＬ（Ｂｒｕｋｅｒ（２００９）ＳＨＥＬＸＴＬ．Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ．）プログラムに通された。合計で６９０９反射が、１．５８≦θ≦２５．０９°、−６≦ｈ≦６、−１８≦ｋ≦１８、−２８≦ｌ≦２８の範囲にわたって測定され、６９０９の独特な反射を生じた（Ｒｉｎｔ＝０．０５８１）。強度データは、Ｌｏｒｅｎｔｚおよび偏光効果について、ならびにＳＡＤＡＢＳ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ｇ．Ｍ．（２００７）ＳＡＤＡＢＳ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ．）を使用して吸収について補正された（最小および最大透過  ０．６０９３、０．７４５２）。
【０２８３】
構造は、直接方法によって解析された（ＳＨＥＬＸＳ−９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ｇ．Ｍ．（２００８）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ａ６４，１１２−１２２．））。微調整は、ＳＨＥＬＸＬ−９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，Ｇ．Ｍ．（２００８）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ａ６４、１１２−１２２．）を使用するＦ２に基づくフルマトリックス最小二乗法による。すべての反射は微調整の間に使用された。使用される重み付けスキームは、ｗ＝１／［σ２（Ｆｏ２）＋（０．００００Ｐ）２＋１４．０７３８Ｐ］であり、ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３であった。非水素原子は異方性で微調整され、水素原子は、ライディングモデルを使用して微調整された。微調整は、Ｆ＞４σ（Ｆ）についての６１７３の観察された微調整について、Ｒ１＝０．０８４７およびｗＲ２＝０．１８９９に収束し、ならびに、６９０９のすべての独特な非ゼロ反射および５１２変数（Ｒ１＝Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜；ｗＲ２＝｛Σｗ（Ｆo2  −Ｆc2 ）２／Σｗ（Ｆo2 ）２｝１／２；ＧＯＦ＝｛Σｗ（Ｆo2  −Ｆc2 ）２／（ｎ−ｐ）｝１／２；ここでｎ＝反射の数、ｐ＝微調整されたパラメーターの数）について、Ｒ１＝０．０９６３、ｗＲ２＝０．１９６３、およびＧＯＦ＝１．１１９に収束した。最小２乗法の最後のサイクルにおける最大Δ／σは０．０００であり、最終示差フーリエにおける２つも最も顕著なピークは＋０．４０２および−０．５５９ｅ／Å３であった。
表１７．化合物８（ＳＰ異性体）の構造決定の要約
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【０２８４】
実施例３１．生物学的活性
レプリコン含有細胞は、９６ウェル白色／不透明プレート中で３，０００細胞／ウェル（５０μＬ）、または３８４ウェル白色／不透明プレート中で１，５００細胞／ウェル（２５μＬ）のいずれかで播種された。５０μＬの化合物を２回、９６ウェルプレートに加えるか、または２５μＬの化合物を２回、３８４ウェルプレートに加えた。プレートは、４日間、加湿された５％ＣＯ２雰囲気下で３７℃でインキュベートされた。インキュベーション後、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ試薬（９６ウェルプレート用には５０μＬ、または３８４ウェルプレート用には２５μＬ）が、ＨＣＶ複製についてホタルルシフェラーゼレポーターを測定するために加えられた。阻害パーセントが薬物なし対照に対して計算された。
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【０２８５】
ＲＰ−４およびＳＰ−４は、広い遺伝子型をカバーすることが実証された。例えば、両方が、Ｃ型肝炎ウイルス、遺伝子型１−４に対して活性であることが示された。
【０２８６】
米国特許出願第１２／０５３，０１５号、および２００９年５月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／１７９，９２３号、および２０１０年３月３１日に出願された第６１／３１９，５１９号の対象は、それらの全体が参照により組み込まれる。すべての引用された参考文献の対象は参照により組み込まれる。組み込まれた用語の意味が本明細書に定義された用語の意味と矛盾する場合には、本開示に含まれる用語の意味が、組み込まれた用語の意味よりも優先する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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