(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫酸カルシウム及び／又はその水和物を含み、単独で又は他の飼料と組合せて給与される乾乳牛用飼料であって、
硫酸カルシウム及び／又はその水和物は、給与される飼料全体で、乾物換算で０．８１〜１．４５重量％となる量で含み、
硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計は、給与される飼料全体で、乾物換算で４０ｍＥｑ／ｋｇ以下となる量である飼料。
【請求項２】
式［Ｎａ］＋［Ｋ］−［Ｃｌ］−０．６［Ｓ］（式中［］は当量値を示す）で求められる給与飼料のイオンバランス（ＤＣＡＤ）が、給与される飼料全体で、乾物換算で５５〜１１０ｍＥｑ／ｋｇである、請求項１に記載の飼料。
【請求項３】
前期乾乳牛用飼料が混合飼料である、請求項１又は２に記載の飼料。
【請求項４】
硫酸カルシウム及び／又はその水和物を乾物換算で２５〜５０重量％含む、請求項３に記載の飼料。
【請求項５】
前記他の飼料と前記混合飼料との飼料全体で換算したときに、ＤＣＡＤが乾物換算で７０〜９５ｍＥｑ／ｋｇとなるＤＣＡＤ値を有する、請求項３又は４に記載の飼料。
【請求項６】
前記他の飼料と前記混合飼料との飼料全体で換算したときに、硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計が、乾物換算で０ｍＥｑ／ｋｇである、請求項３〜５の何れか１項に記載の飼料。
【請求項７】
前記混合飼料がペレット形態である、請求項３〜６の何れか１項に記載の飼料。
【請求項８】
前記硫酸カルシウム及び／又はその水和物が、無水石膏、半水石膏及び二水石膏からなる群から選ばれる少なくとも１種に由来する、請求項１〜７の何れか１項に記載の飼料。
【請求項９】
前記硫酸カルシウムが無水石膏に由来する、請求項１〜８の何れか１項に記載の飼料。
【請求項１０】
７歳以上の乾乳牛に給与するための、請求項１〜９の何れか１項に記載の飼料。
【請求項１１】
請求項１〜１０の何れか１項に記載の飼料を乾乳牛に給与することを特徴とする、乾乳牛の飼育方法。
【請求項１２】
硫酸カルシウム及び／又はその水和物を乾乳牛に７３〜１３１ｇ／日給与し、硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの給与量の総計が、４００ｍＥｑ／頭・日以下である乾乳牛の飼育方法。
【請求項１３】
尿ｐＨを７．１〜７．６に調整する、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
給与対象が４歳以上の乾乳牛である、請求項１１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１５】
給与対象が７歳以上の乾乳牛である、請求項１１〜１４の何れか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記硫酸カルシウムが無水石膏に由来する、請求項１１〜１５の何れか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、牛の嗜好性及び飼料摂取量を低下させることなく、分娩前後の低カルシウム血症及び乳熱ならびにそれらと併発する周産期疾病（第四胃変位、ケトーシス等）を予防する乳牛用飼料及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
牛の低カルシウム血症は、主に乳牛の分娩と泌乳の開始に伴って発生する疾患である。分娩前後には、主に消化管運動の低下から消化管におけるカルシウム吸収量は減少することに加え、骨からのカルシウム動員が抑制されるため、乳汁中への急激なカルシウム流出に対応できず、血中カルシウム濃度が低下すると考えられている（非特許文献１）。乳熱とは分娩性低カルシウム血症のことであり、血中カルシウム濃度の低下が重篤で、体温や皮温の低下、筋肉の弛緩麻痺、起立不能などの臨床症状を示す症例を指す。発症時期は主に分娩日前日〜分娩２日後、特に分娩日及び分娩翌日が多く、産次が進むほど乳熱は発生しやすい（非特許文献２）。乳熱は、初産での発生は極めて稀で、３産目以上で発生が急増するが、その原因としては、産次が進むことで泌乳量が増えカルシウムの流出量が増えること、腸管の１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３受容体が加齢により減少し、かつ２４位水酸化酵素が増加することで、カルシウム吸収能が低下すること、骨からのカルシウム動員能が低下することなどが考えられている（非特許文献３）。乳熱は、第四胃変位、異常分娩（難産）、胎盤停滞、ケトーシス、乳房炎、子宮炎など、他の周産期疾病の発症リスクを高めることも知られており、結果として繁殖成績を悪化させたり淘汰率を高めることが報告されている（非特許文献４及び５）。
【０００３】
通常、牛の血清総カルシウム濃度は１０ｍｇ／ｄＬ前後であるが、一般的に軽度の低カルシウム血症（５．５〜７．５ｍｇ／ｄＬ）では、歯ぎしり、食欲不振、興奮、四肢筋肉の振戦、後肢のふらつきなどの症状を示し、中等度の低カルシウム血症（３．５〜６．５ｍｇ／ｄＬ）では、体温の低下、消化管運動の停止、呼吸数低下、四肢筋肉の弛緩麻痺などの症状が発現し、起立不能となることが多い。重度の低カルシウム血症（３．５ｍｇ／ｄＬ以下）では、乳牛は脱力し昏睡状態となる。乳熱発症牛では血中無機リン濃度も同時に低下していることが多く、無機リン濃度の低下が著しい場合には症状は重篤化する。乳熱の発症牛の多くは、カルシウム剤の投与により臨床症状の改善を認めるが、回復までに時間を要し、長時間起立不能状態が続いた牛では、ダウナー症候群を継発する（非特許文献１及び６）。また、分娩前後の血清総カルシウム濃度が８．４または８．６ｍｇ／ｄＬ以下の個体は、それ以上の個体よりも乳量が少なく、初回人工授精受胎率が低いとの報告もあり（非特許文献７）、臨床症状を示さない軽度の血中カルシウム濃度の低下であっても、乳牛の生産性に悪影響が生じると考えられている。
【０００４】
乳熱の治療方法としては、ボログルコン酸カルシウムなどのカルシウム剤の静脈及び／又は皮下注射が広く実践されており、また分娩時の予防対策としてリン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、プロピオン酸カルシウムなどのカルシウム剤の経口投与も有効とされている（非特許文献１及び６）。
一方、乾乳期に実施する予防策としては、飼料中カルシウム及びリン含量の低減、給与飼料のイオンバランス（Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｃａｔｉｏｎ−Ａｎｉｏｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ、以下、ＤＣＡＤとする）の低減、分娩８〜２日前の高単位（１，０００万単位程度）のビタミンＤ３の筋肉注射などの方法が知られている（非特許文献１及び６）。また、ビタミンＤ３代謝物である１α−ＯＨ−ビタミンＤ３、２５−ＯＨ−ビタミンＤ３及び１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３は、ビタミンＤ３よりも生体内における活性が高く、乳熱の予防により有効と考えられている（非特許文献８〜１１）。この他、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３配糖体を含むリュウキュウヤナギ（和名：ルリヤナギ、学名：Ｓｏｌａｎｕｍ  ｍａｌａｃｏｘｙｌｏｎ（＝Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ））やシロバナコウボク（学名：Ｃｅｓｔｒｕｍ  Ｄｉｕｒｎｕｍ）の葉、その搾汁物及び抽出物についても、低カルシウム血症の緩和に有効とされている（特許文献１）。
カルシウム剤の静脈注射及び／又は皮下注射や、カルシウム剤の経口投与は、分娩時及び／又は乳熱の臨床症状を呈した際に速やかに実施する必要があるが、分娩日の正確な予測は困難であり、また夜間に分娩した場合等においては対応が難しく、処置が遅れると症状が重篤化するために、これらの対策と並行して乾乳期に乳熱の予防策を講じることが重要である。
【０００５】
より具体的には、Ｇｒｅｅｎらは、分娩約２週間前の乳牛を供試し、カルシウムを８０ｇ／日または８ｇ／日給与する試験を行ったところ、８ｇ／日給与した乳牛の方が、分娩前の血漿１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３及びヒドロキシプロリン濃度が有意に高く、分娩日及び分娩翌日の血漿カルシウム濃度が有意に高かったことを報告しており（非特許文献１２）、分娩前のカルシウムの給与制限は、ビタミンＤ３の代謝や骨からのカルシウム動員を促進し、乳熱の緩和に有効であると考えられている。
一方、カルシウムの給与制限による乳熱予防は、カルシウムの給与量を非常に低い水準にまで低減させないと効果が薄く、鈴木は、飼料中カルシウム含量が乾物換算で０．３６重量％、カルシウム給与量が４０．４ｇ／日とした場合には、低カルシウム血症（血漿総カルシウム濃度７．５ｍｇ／ｄＬ未満）が多発し、飼料中カルシウム含量を乾物換算で０．２６重量％、カルシウム給与量を２８．７ｇ／日まで減少させると低カルシウム血症が減少したことを報告している（非特許文献１３）。粗飼料のカルシウム含量は変動が大きいことから、乳熱の予防効果が期待できる水準にまでカルシウム給与量を制限することは困難な場合が多いのが難点である。
【０００６】
ＨｏｖｅとＫｒｉｓｔｉａｎｓｅｎは、分娩前に油脂でカプセル化した１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３ペレットを１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３として５００μｇ経口投与したところ、分娩４〜５日前及び分娩当日の投与では低カルシウム血症を抑制できなかったこと、ならびに分娩１〜３日前の投与は分娩日及び分娩翌日の血漿カルシウム濃度の低下を抑えることができたものの、分娩日を正確に予測し投与することが難しいと述べている（非特許文献１４）。また、Ｈｏｖｅは、分娩予定５日前から分娩翌日まで、脂肪酸ペレットの形態で２００μｇ／日の１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３を４頭の初産牛と８頭の経産牛に連続給与したところ、分娩５日後以降、全頭が低カルシウム血症（血漿総カルシウム濃度が２．１８ｍｍｏｌ／Ｌ未満）に陥ったことを報告している（非特許文献１５）。このように、リュウキュウヤナギやシロバナコウボクの葉、その搾汁物又は抽出物を含む、ビタミンＤ３代謝物を用いて乳熱を予防するには、用量及び用法を厳密に守る必要があり、また、リュウキュウヤナギやシロバナコウボクの葉、その搾汁物又は抽出物を含むビタミンＤ３代謝物は活性が強いが故に用量を誤ると、肺動脈・大動脈へのカルシウム沈着等の過剰症を引き起こす恐れもあることから、生産現場での使い易さの点で難があると考えられる。
【０００７】
この他、飼料中リン及びマグネシウム含量も乳熱の発生と関連がある。血漿中無機リン濃度は、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３によって直接的に、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）とカルシウムのネガティブフィードバック機構によって間接的に制御されており相互に関連しているため、カルシウム代謝はリンの影響を受ける（非特許文献１６）。そのため、飼料中リン含量が多いと乳熱の発症リスクは高まることが知られており、Ｊｕｌｉｅｎらは、分娩前の飼料中カルシウム含量が乾物換算で０．４７〜０．５３重量％であり、かつ飼料中リン含量が０．２２〜０．２８重量％であったグループは、飼料中カルシウム含量が０．５３重量％超かつリン含量が０．２８重量％超及び飼料中カルシウム含量が０．４７重量％未満かつリン含量が０．２８重量％超のグループよりも乳熱の発生が少なかったことを報告している（非特許文献１７）。一方で、リンの摂取量が１日１頭当たり２５ｇ（分娩前（乾乳後期）のホルスタイン種乳牛の乾物摂取量は１０ｋｇ／日前後であるため、飼料中約０．２５重量％に相当する）以下の場合、低リン血症及びダウナー症候群の発症リスクが高まるとの報告がある（非特許文献１８及び１９）。このように、乳熱対策に有効な飼料中リン含量の水準は、低リン血症及びダウナー症候群のリスクを高める飼料中リン含量の水準とほとんど差がないため、リンの給与制限を生産現場で実施するのは一定の危険性が伴う。なお、リンの要求量は１日１頭当たり４０〜５０ｇ（飼料中約０．４〜０．５重量％に相当）と言われているため（非特許文献２０）、飼料中リン含量は多くとも０．５重量％超とするべきではない。
マグネシウムは、ＰＴＨの分泌とＰＴＨに対する反応性に関与するため、腎臓におけるカルシウムの排出を抑制したり、骨からのカルシウム動員を促進する働きを有する（非特許文献２１〜２４）。分娩前にマグネシウム含量が乾物換算で１．５８重量％の飼料を給与した牛群は、０．２２重量％の飼料を給与した牛群に比べ、分娩前及び分娩時の血漿中マグネシウム濃度が高く、０．２２重量％の牛群では９頭中２頭が分娩後に低カルシウム血症の臨床症状を示したのに対し、１．５８重量％の牛群では、低カルシウム血症は１０頭中１頭も発生しなかったこと、またカルシウム動員能力は１．５８重量％の牛群の方が高かったことが報告されている（非特許文献２５）。分娩前の飼料中マグネシウム含量は、一般に乾物換算で０．３５〜０．４０重量％が推奨されている（非特許文献２０）。しかしながら、飼料中マグネシウム含量が乾物換算で０．２０重量％の群と０．３７重量％の群では、カルシウム代謝に差がなかったとする報告もあり（非特許文献２４）、マグネシウムは乳熱と関連があるものの直接の原因ではないと考えられている（非特許文献２６）。また、マグネシウム塩は一般に嗜好性が悪く、添加量によっては飼料摂取量が低下するという欠点がある（非特許文献２０）。
【０００８】
飼料面での乳熱予防対策として、近年盛んに研究されてきたのが、ＤＣＡＤのコントロールである。ＤＣＡＤとは、飼料中に含まれる陽イオンと陰イオンの差のことであり、代表的な陽イオンとしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられ、陰イオンとしては、塩素、イオウ（硫酸イオン）、リン（リン酸イオン）などが挙げられる。ＤＣＡＤには様々な計算式が提唱されているが、消化管における吸収効率の高さから、一般にナトリウム、カリウム、塩素、イオウの４種のミネラルから計算されることが多い（非特許文献２１）。ＤＣＡＤをマイナスに傾けることが乳熱対策として有効であると考えられているが、そのメカニズムとして、陰イオンが消化管から血中へ相対的に多く取り込まれると、電気的中性を保とうとする働きにより水素イオンが増加し（非特許文献２７）、代謝性アシドーシスが誘発され、カルシウム代謝が活性化されるためと考えられている（非特許文献２８）。血液ｐＨの低下は、蛋白質に結合して存在しているカルシウムを解離させ、カルシウムイオンを増加させること（非特許文献２９）、過剰な水素イオンを緩衝するため骨からの重炭酸イオン放出が促進され、それに伴いカルシウムイオンが血中へ溶出することが報告されている（非特許文献３０〜３２）。血中カルシウムイオン濃度の上昇は、腎臓を経由した尿へのカルシウム排出を増加させるが（非特許文献３０及び３３）、これがＰＴＨを活性化させ、尿中カルシウムの再吸収や腎臓におけるビタミンＤ３の代謝（１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成）を促し、腸管からのカルシウム吸収も促進される（非特許文献３４及び３５）。Ｇｏｆｆらは、３産目以上の分娩前ジャージー種乾乳牛を供試し、［Ｎａ］＋［Ｋ］−［Ｃｌ］−０．６［Ｓ］により計算されるＤＣＡＤが乾物換算で−７９（低ＤＣＡＤ群）または２８７ｍＥｑ／ｋｇ（高ＤＣＡＤ群）の飼料を給与した２群を比較した試験を行い、尿ｐＨは低ＤＣＡＤ群で５．５〜６．０、高ＤＣＡＤ群で８．０前後であり、ＰＴＨ投与後の血漿カルシウム濃度及び１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３濃度は低ＤＣＡＤ群の方が有意に高かったことを確認し、ＤＣＡＤコントロールはＰＴＨに対する応答性を改善することを示した（非特許文献３６）。
なお、ＤＣＡＤのコントロールを行う場合、尿へのカルシウム排出が増加するため、飼料中カルシウム含量は低くするべきでないと考えられており、Ｏｅｔｚｅｌらは、［Ｎａ］＋［Ｋ］−［Ｃｌ］−０．６［Ｓ］により計算されるＤＣＡＤが乾物換算で９．４〜９．６（低ＤＣＡＤ）または２２５．８〜２２９．２ｍＥｑ／ｋｇ（高ＤＣＡＤ）とカルシウム給与量が５３ｇ（乾物換算で飼料中０．６重量％：低Ｃａ）または１０５ｇ／日（乾物換算で飼料中１．２重量％：高Ｃａ）の計４群で試験したところ、分娩時の低カルシウム血症（血清イオン化カルシウム濃度が４．０ｍｇ／ｄＬ未満）の発生は、低ＤＣＡＤ・高Ｃａ、低ＤＣＡＤ・低Ｃａ、高ＤＣＡＤ・低Ｃａ、高ＤＣＡＤ・高Ｃａの順に少なかったことを報告しており（非特許文献３７）、ＧｅｌｆｅｒｔとＳｔａｕｆｅｎｂｉｅｌは、分娩前の飼料に陰イオン塩を添加する際には飼料中カルシウム含量は乾物換算で０．９〜１．２重量％にするべきであると述べている（非特許文献３８）。
【０００９】
ＤＣＡＤコントロールは有効な乳熱対策であるが、一般に陰イオン塩は嗜好性が悪く、飼料摂取量の低下が問題となる。ＤＣＡＤコントロールによる分娩前の飼料摂取量の低下は、負のエネルギーバランスを招き、脂肪肝、ケトーシス、乳房炎、第四胃変位、胎盤停滞等の周産期疾病の誘因となり得る（非特許文献２６および３９〜４１）。過度のＤＣＡＤコントロールはむしろ乳牛の健康に悪影響を及ぼしかねないため、ＤＣＡＤの水準は随時チェックすることが望ましいとされている。ＤＣＡＤの調整により誘導される代謝性アシドーシスは尿ｐＨを低下させるため、ＤＣＡＤの水準を確認する場合には、尿ｐＨのモニタリングが有効とされている。
Ｃｈａｒｂｏｎｎｅａｕらの総説では、５種類の代表的なＤＣＡＤの計算式のうち、［Ｎａ］＋［Ｋ］−［Ｃｌ］−０．６［Ｓ］（以下、式１とする）が最も乳熱の発症率及び尿ｐＨとの相関が高いとし、式１により計算されるＤＣＡＤを乾物換算で３００から０ｍＥｑ／ｋｇまで低下させると、尿ｐＨは８．１から７．０へ低下し、乳熱の発生率は１６．４から３．２％へと低減されるが、乾物摂取量が１１．３％減少するとされている（非特許文献４２）。従って、乳熱の予防効果と乾物摂取量の低下の双方を考慮してＤＣＡＤコントロールを行うことが重要であるが、両者はいわゆるトレード・オフの関係にあるため、適切なＤＣＡＤコントロールの水準については一定の見解が得られておらず、Ｊａｒｄｏｎは、尿ｐＨが６．０〜７．０（非特許文献４２の式に基づくと、ＤＣＡＤは乾物換算で−１８０〜０ｍＥｑ／ｋｇ）の範囲にコントロールするのが望ましいとし（非特許文献４３）、Ｈｏｒｓｔらは、ｐＨ５．５〜６．２（非特許文献４２の式に基づくと、ＤＣＡＤは乾物換算で−２６０〜−１５０ｍＥｑ／ｋｇ）の範囲を推奨したが、近年は乾物摂取量の低下を懸念して大幅なＤＣＡＤの低下は避けられる傾向にあり、ＣｈａｒｂｏｎｎｅａｕらはｐＨ７．０程度（乾物換算で０ｍＥｑ／ｋｇ）を推奨している（非特許文献４２）。
ＤＣＡＤコントロールによる飼料摂取量低下は、陰イオン塩の嗜好性が悪いことや（非特許文献４４）、代謝性アシドーシスによる軽度の体調不良（非特許文献４５）に起因するのではないかとの説が主張されているが、その機序は未だ明らかにされていない（非特許文献４２）。
【００１０】
ＤＣＡＤコントロールに用いられる陰イオン供給源としては、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）、塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）、硫酸アンモニウム（（ＮＨ４）２ＳＯ４）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、硫酸カルシウム（ＣａＳＯ４）、塩酸（ＨＣｌ）、硫酸（Ｈ２ＳＯ４）、グルタミン酸発酵粕、グルタミン酸発酵副産液などが挙げられる。例えば、Ｋｕｒｏｓａｋｉらは、平均４．２産、平均ボディコンディションスコア３．１〜３．４の分娩前ホルスタイン種乾乳牛に、陰イオン塩として塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ）８０ｇ／日と硫酸マグネシウム７水和物（ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ）６５ｇ／日を投与したところ、尿ｐＨは６．８〜７．０に低下し、有意差はないものの陰イオン塩を給与しないグループよりも血清カルシウム濃度は高値を示したことを報告した（非特許文献４６）。またＧｏｆｆらは、平均５５ヶ月齢で３産目以上の分娩前のジャージー種乾乳牛を供試し、陰イオン塩として塩化カルシウム二水和物（ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ）を乾物換算で飼料中１．２重量％、塩化マグネシウム６水和物（ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を３．０重量％、塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）を１．４重量％混合し、式１により計算されるＤＣＡＤを乾物換算で−１５８ｍＥｑ／ｋｇに調整したところ、ＤＣＡＤを１，０４６ｍＥｑ／ｋｇとしたグループよりも有意に分娩日〜分娩２日後の血漿総カルシウム濃度が高かったことを報告している（非特許文献４７）。
【００１１】
硫酸カルシウムについても乳熱対策としての活用が検討されており、Ｒａｍｏｓ−Ｎｉｅｖｅｓらは、２産目以上の分娩前ホルスタイン種乾乳牛を供試し、陰イオン塩として含塩酸混合飼料「ＳｏｙＣｈｌｏｒ  １６−７」（Ｗｅｓｔ，Ｃｅｎｔｒａｌ，Ｒａｌｓｔｏｎ，ＩＡ）と硫酸カルシウム二水和物（ＣａＳＯ４・２Ｈ２Ｏ）を用い、塩素含量を乾物換算で飼料中１．１７重量％、イオウ含量を０．４０重量％、式１により計算されるＤＣＡＤを乾物換算で−４９ｍＥｑ／ｋｇに調整した飼料を給与した牛群（低ＤＣＡＤ群）と、陰イオン塩を使用せずＤＣＡＤが乾物換算で１８３ｍＥｑ／ｋｇとした牛群（高ＤＣＡＤ群）の２群に分けて試験を行った。その結果、分娩２日前の尿ｐＨは高ＤＣＡＤ群で約８．１、低ＤＣＡＤ群で約６．１であったが、分娩前の乾物摂取量は低ＤＣＡＤ群で有意に少なく、分娩２４時間以内の血漿総カルシウム濃度は高ＤＣＡＤ群で７．１２ｍｇ／ｄＬ、低ＤＣＡＤ群で７．９９ｍｇ／ｄＬであったが、分娩後５日以内の低カルシウム血症の発生率（血漿総カルシウム濃度が８ｍｇ／ｄＬ以下）には両群間で差がなかった（非特許文献４８）。
このように、硫酸カルシウムは乳熱対策としての使用が検証されているものの、通常は塩素イオンを含む陰イオン塩と併用される。その理由は、消化管における硫酸塩の吸収率は約６０％と見積もられており（非特許文献４９）、硫酸塩の血液酸性化活性は塩化物の０．６倍であり（非特許文献５０）、乳熱予防効果も０．６倍程度と考えられていること（非特許文献４２）、並びにイオウは銅の吸収を阻害し、乳牛では報告は無いが肉牛においては灰白質脳軟化症のリスクを高めることから、乾物換算で飼料中０．４重量％以下が推奨されているためであると考えられる（非特許文献２０）。
また国内では、肉牛の尿石症対策としての用途が検証されており、硫酸カルシウム二水和物を主成分とする鉱物である二水石膏は、炭酸カルシウムと嗜好性が同等であり、塩化カルシウム二水和物、硫酸マグネシウム三水和物及びグルタミン酸発酵粕よりも選択嗜好性に優れ、尿石症の予防効果を奏することが報告されている（特許文献２）。
【００１２】
本発明者の知る限りでは、陰イオン塩として硫酸カルシウムを単独で使用し乳熱の予防効果を比較・検証した例は、天野の報告のみであり、国内９戸の酪農家で飼養されている３産目以上（平均４．３産目）のホルスタイン種乾乳牛１２頭に対し、硫酸カルシウム二水和物を主成分とする二水石膏を２００ｇ／日以上給与し、無給与群（１０頭）と分娩前後の血液性状及び乳熱発症率を比較している。二水石膏給与群の飼料中カルシウム含量（設定値）は０．８重量％、無給与群については０．５重量％であり、飼料中リン含量は両群ともに０．３重量％であった。その結果、分娩日の血清カルシウム濃度は、無給与群で６．６ｍｇ／ｄＬであったのに対し、給与群は８．０ｍｇ／ｄＬと有意に高く、血清骨型アルカリホスファターゼ（以下、ＢＡＰとする）濃度は無給与群で１４．６μｇ／Ｌであったのに対し、給与群で１９．１μｇ／Ｌと有意差はないがやや高い傾向であり、乳熱発症率（起立不能の有無で診断）は無給与群２０％（２／１０）、給与群０％（０／１２）であった（非特許文献５１）。なお、この報告では、二水石膏の正確な給与量、飼料の内容、成分値（ＤＣＡＤ等）、給与量及び摂取量等の情報は示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特許第５２４３８７５号
【特許文献２】特許第５４３９６１８号
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】前出吉光，小岩政照監修 デーリィマン社発行「新版 主要症状を基礎にした牛の臨床」ｐ．４３２―４３４
【非特許文献２】Ｈａｒｄｅｎｇ  ａｎｄ  Ｅｄｇｅ．２００１．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．８４：２６７３−２６７９
【非特許文献３】Ｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９７．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．８０：１２６９−１２８０
【非特許文献４】Ｃｕｒｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８３．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．１８３：５５９−５６１
【非特許文献５】Ｅｒｂ  ｅｔ  ａｌ．１９８５．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．６８：３３３７−３３４９
【非特許文献６】小岩政照，澤向豊監修 デーリィマン社発行「テレビ・ドクター３  乳牛の病気と対処１００選」ｐ．４６−４７
【非特許文献７】Ｃｈａｐｉｎａｌ  ｅｔ  ａｌ．２０１２．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．９５：１３０１−１３０９
【非特許文献８】Ｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８５．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．６８：１９５２−１９５８
【非特許文献９】Ｓａｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８７．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．７０：１６７１−１６７５
【非特許文献１０】Ｗｉｌｋｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１２．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．９５：１５１−１６４．
【非特許文献１１】Ｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．１９７９．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．６２：１００９−１０１３
【非特許文献１２】Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８１．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．６４：２１７−２２６
【非特許文献１３】独立行政法人家畜改良センター岩手牧場  分娩後低カルシウム血症の発生減少について［平成２６年１２月３日検索］  インターネットhttp://www.nlbc.go.jp/iwate/topics/080307-lowCa.htm
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【非特許文献４５】Ｖａｇｎｏｎｉ  ａｎｄ  Ｏｅｔｚｅｌ．１９９８．Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．８１：１６４３−１６５２
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、以上の技術的背景において、良好な嗜好性と飼料摂取量を維持しながら、分娩前後の低カルシウム血症及び乳熱ならびにそれらと併発する周産期疾病（第四胃変位、ケトーシス等）を予防する乳牛用飼料及び方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、従来困難であった、低カルシウム血症及び乳熱の十分な予防効果と、嗜好性及び飼料摂取量の維持の双方を満たす飼料及び飼育方法を求めて鋭意検討を重ねた結果、意外にも、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を７３〜１３１ｇ／日（硫酸カルシウム換算値）の範囲で給与すると、硫酸カルシウム等以外の陰イオン供給源を低減してＤＣＡＤを比較的高くしても、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成を促進し、従来の知見から予想される以上に血中カルシウム濃度の低下を抑制し得ることを見出し、本発明を完成するに到った。
【００１７】
即ち、本発明は、その一の実施形態において、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を７３〜１３１ｇ／日乳牛に給与する飼育方法を提供する。
また、他の実施の形態では、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を含み、単独で又は他の飼料と組合せて給与される乳牛用飼料であって、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を、該飼料及び任意に組み合わされる他の飼料の合計で７３〜１３１ｇ／日が乳牛に給与される量となり、具体的には、該飼料及び任意に組み合わされる他の飼料の全体で、乾物換算で飼料中０．８１〜１．４５重量％の硫酸カルシウム及び／又はその水和物を含む乳牛用飼料を提供する。
後述の実施例で実証する通り、硫酸カルシウム及びその水和物は、飼料に対する乳牛の嗜好性に悪影響を及ぼさず、上述の範囲の給与量においては飼料摂取量を低下させずにＤＣＡＤを低下させ、代謝性アシドーシスを誘導できる。この結果、本発明によれば、良好な嗜好性・採食性を維持しながら、低カルシウム血症及び乳熱に対する予防効果に優れる飼料を提供できる。特に、硫酸カルシウム等以外の陰イオン供給源を低減して、従来推奨されていた水準より、飼料中カルシウム含量を低くし、ＤＣＡＤを高く（相対的に陽イオンを多く）設定しても、低カルシウム血症及び乳熱に対して十分な予防効果が得られることが見出されており、好ましい実施形態においては、塩素や硫黄、並びに代謝性アシドーシスの影響がより低い乳牛用飼料を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】試験７において、比較例７の飼料又は実施例１１の飼料を給与した乳牛の、血清総カルシウム濃度のＥＤＴＡ溶液静脈点滴開始時に対する変動を示すグラフある。
【図２】試験７において、比較例７の飼料又は実施例１１の飼料を給与した乳牛の、血清１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３濃度のＥＤＴＡ溶液静脈点滴開始時に対する変動を示すグラフである。
【図３】試験７において、比較例７の飼料又は実施例１１の飼料をそれぞれ６歳齢及び１０歳齢の乳牛に給与した際の、血清１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３濃度のＥＤＴＡ溶液静脈点滴開始時に対する変動を示す、グラフである。
【図４】試験７において、比較例７の飼料又は実施例１１の飼料を給与した乳牛の、血清骨型アルカリフォスファターゼ（ＢＡＰ）濃度のＥＤＴＡ溶液静脈点滴開始時に対する変動を示すグラフである。
【図５】試験８における、実施例１２、１３及び１４の各飼料給与期間における尿ｐＨを示すグラフである。
【図６】試験８における、実施例１２、１３及び１４の各飼料給与期間における残飼の発生率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。但し、本発明の範囲は、以下の説明によって限定されるものではない。
【００２０】
本発明の飼料は、分娩前の乳牛（乾乳牛）に給与するための飼料であり、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を有効成分として含有する。
【００２１】
硫酸カルシウムの水和物としては、例えば、硫酸カルシウム０．５水和物、硫酸カルシウム二水和物等を挙げることができ、本発明の飼料では、いずれか１種又は２種以上の硫酸カルシウム及び／又はその水和物を配合することができるが、牛消化管での吸収性がより高く、迅速に血液・尿ｐＨを低下させることから、２種以上のうち１種には硫酸カルシウムを用いることが望ましく、硫酸カルシウムのみを用いることがより望ましい。
硫酸カルシウム及び／又はその水和物は、例えば、石膏を利用して配合することができる。石膏は、硫酸カルシウムを主成分とする鉱物であり、無水石膏（ＣａＳＯ４）、半水石膏（ＣａＳＯ４・１／２Ｈ２Ｏ）、及び二水石膏（ＣａＳＯ４・２Ｈ２Ｏ）がある。二水石膏は加熱（１２０〜１５０℃）すると水和水を失って半水石膏へ変化し、半水石膏は水を加えると水和して二水石膏となり、凝固する性質を持つ。無水石膏には可溶性と不溶性の２種類が存在し、半水石膏を加熱（１８０〜１９０℃）して得られる可溶性無水石膏は、空気中の水分を吸収し再び半水石膏へ戻る性質を有するが、二水石膏を３００〜７００℃で焼成して得られ、天然にも存在する不溶性無水石膏は、容易に水和反応しない。本発明の飼料では、無水石膏、半水石膏及び二水石膏のいずれか１種又は２種以上に由来する硫酸カルシウム及び／又はその水和物を配合することができる。牛消化管での吸収性がより高く、迅速に血液・尿ｐＨを低下させることから、２種以上の石膏のうち１種は無水石膏とすることが好ましく、無水石膏のみを用いることがより好ましい。
【００２２】
本発明においては、硫酸カルシウム及び／又はその水和物の給与量を、良好な嗜好性・採食性を維持しながらも低カルシウム血症及び乳熱予防効果を発揮し得る量とする。１日当たりの牛１頭に供給される量で見ると、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を７３〜１３１ｇ／日・頭供給することが好ましく、９０〜１２０ｇ／日・頭供給することがより好ましく、１００〜１０９ｇ／日・頭供給することが最も好ましい。
これを飼料中の含有量で見ると、乾乳後期の乳牛の１日当たりの飼料摂取量が乾物換算で９〜１２ｋｇ程度であるため、飼料の形態に応じて変動するものの、一種単独で又は他の飼料と組み合わせて乳牛に給与される飼料の何れにおいても、乳牛に給与される飼料全体では、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を、乾物換算で０．８１〜１．４５重量％含むことが好ましく、より確実な飼料摂取量の維持と十分な低カルシウム血症及び乳熱予防効果の発揮といった観点から０．９０〜１．３５重量％含むことがより好ましく、１．００〜１．２０重量％含むことが最も好ましい。
例えば、他の飼料（粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて乳牛に給与される配合飼料であって、当該配合飼料を通じて硫酸カルシウム及び／又はその水和物を給与する場合には、他の飼料を含む飼料全体の１日当りの総給与量に対して、上記含有量となるように、当該配合飼料に硫酸カルシウム及び／又はその水和物を配合することが好ましい。乾乳後期の乳牛には、配合飼料は通常、乾物換算で約５〜８ｋｇの粗飼料、混合飼料及び単体飼料等の他の飼料と組合せて給与され、４ｋｇ／日・頭程度給与するため（総飼料給与量：乾物換算で約９〜１２ｋｇ／頭・日）、配合飼料を通じて上記硫酸カルシウム等の含有量を達成するには、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を配合飼料中に乾物換算で１．８〜３．８重量％含むことが好ましく、より確実な飼料摂取量の維持と十分な低カルシウム血症及び乳熱予防効果の発揮といった観点から２．２〜３．４重量％含むことがより好ましく、２．６〜３．２重量％含むことが最も好ましい。
同様に、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（例えば、配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与されることを前提にする飼料であって、当該飼料を通じて硫酸カルシウム及び／又はその水和物を給与する場合にも、組合せて給与される飼料全体での１日当りの総給与量に対して上記含有量となるように、当該飼料に硫酸カルシウム及び／又はその水和物を配合することが好ましい。通常、混合飼料又は単体飼料等は、一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、このような硫酸カルシウム等の供給を単独で達成可能な混合飼料は、通常、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を飼料中に乾物換算で２５〜５０重量％含み、より好ましくは３０〜４５重量％含む。また、硫酸カルシウム等を上記の量、単独で供給可能な単体飼料は、通常、硫酸カルシウム及び／又はその水和物を飼料中に乾物換算で１５〜９９重量％含み、好ましくは４０〜９９重量％含み、より好ましくは７０〜９９重量％含み、最も好ましくは９５〜９９重量％含む。
ここで、配合飼料とは牛のエネルギー及びタンパク質要求量を満たす目的で主として給与される、濃厚飼料を主体とした飼料のことを指し、必要に応じてビタミン、ミネラル、その他の添加剤が添加される。濃厚飼料とは、トウモロコシなどの穀類、大豆粕などの植物性油粕類、ふすまなどのそうこう類、その他食品残渣など、牛のエネルギー及びタンパク質供給源となる飼料を指す。混合飼料とは、配合飼料及び／又は濃厚飼料とは別途、補助的にエネルギー、タンパク質、ビタミン・ミネラル及び／又はその他の添加剤を補給する目的で、一般的に配合飼料及び／又は濃厚飼料よりも少量給与される飼料のことを指す。
また、本願明細書において、硫酸カルシウム又はその水和物の重量及び重量パーセント濃度は、水和水を除いた硫酸カルシウム、すなわちＣａＳＯ４換算の重量及び重量パーセント濃度を指す。
【００２３】
本発明の飼料では、硫酸カルシウム又はその水和物を主たる陰イオン供給源とすることから、乳牛に給与される総飼料中のＤＣＡＤを比較的高くしても、従来の知見から予想される以上に血中カルシウム濃度の低下を抑制し得、飼料摂取量の減退を招くことなく、低カルシウム血症及び乳熱を効果的に防止することがでる。具体的には、総飼料中のＤＣＡＤは乾物換算で５５〜１１０ｍＥｑ／ｋｇとするのが好ましく、７０〜９５ｍＥｑ／ｋｇとするのがより好ましく、７５〜９０ｍＥｑ／ｋｇとするのが最も好ましい。なお、特に言及しない限り、本明細書においてＤＣＡＤは式１によって計算された値を示す。
例えば、配合飼料の場合では、単独で給与される場合又は他の飼料（粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与される場合の何れでも給与される飼料全体の１日当りの総量において、上記のＤＣＡＤとなるようにすることが好ましい。上述の通り、乾乳後期の乳牛には、配合飼料は通常、４ｋｇ／日・頭程度給与するため、配合飼料を通じて上記のＤＣＡＤを達成するには、配合飼料のＤＣＡＤを乾物換算で−１６０〜０ｍＥｑ／ｋｇとするのが好ましく、−１３０〜−３０ｍＥｑ／ｋｇとするのがより好ましく、−１００〜−６０ｍＥｑ／ｋｇとするのが最も好ましい。
同様に、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与されることを前提にする飼料でも、当該飼料と他の飼料との１日当りの総量において、上記のＤＣＡＤとすることが好ましい。通常、混合飼料又は単体飼料等は、一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、これらの飼料を通じてこのようなＤＣＡＤを達成するには、混合飼料等のＤＣＡＤを、乾物換算で−４，５００〜−２，０００ｍＥｑ／ｋｇとすることが好ましく、−４，０００〜−２，５００ｍＥｑ／ｋｇとすることがより好ましい。
【００２４】
本発明の飼料では、硫酸カルシウム等と共に、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム等の嗜好性に悪影響の少ない他のカルシウム供給原料を含んでもよい。但し、本発明の飼料では、従来推奨されていた水準よりもカルシウム含量を低減することができるため、これらのカルシウム塩の含有量は少なくてよい。前述の通り、低カルシウム血症及び乳熱の予防の観点から、分娩前の飼料中リン含量は必要最低限とするべきであるため、リン酸カルシウムの含有量は少なくするのが好ましい。
【００２５】
上述の点から、配合飼料とする場合では、炭酸カルシウムの含有量を飼料中乾物換算で０〜３．０重量％とすることが好ましく、０．４〜２．０重量％とすることがより好ましく、０．８〜１．６重量％とすることが最も好ましい。同様に、リン酸カルシウムは、配合飼料中に乾物換算で１．０％以下とするのが好ましい。
【００２６】
また、混合飼料等のように他の飼料と組合せて用いられる飼料では、単独で又は他の飼料と共に炭酸カルシウムを１日当たり０〜１００ｇ／頭供給する形態の飼料が好ましく、０〜７０ｇ／頭供給する形態の飼料が特に好ましい。このような炭酸カルシウムを単独で供給するための混合飼料等は、通常、炭酸カルシウムを飼料中に乾物換算で０〜５０重量％含み、好ましくは０〜２５重量％含む。
【００２７】
同様に、混合飼料等のように他の飼料と組合せて用いられる飼料では、単独で又は他の飼料と共に、リン酸カルシウムを１日当たり０〜５０ｇ／頭供給する形態の飼料が好ましい。リン酸カルシウムを単独で供給するための混合飼料等は、通常、リン酸カルシウムを飼料中に乾物換算で０〜２０重量％含み、好ましくは０〜１０重量％含む。
【００２８】
本発明の飼料では、総飼料中のカルシウム含量は乾物換算で０．６〜０．９重量％とすることができ、より好ましくは０．５〜０．８重量％とする。
例えば、配合飼料の場合には、単独で給与する場合、及び他の飼料（粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与する場合の何れにおいても給与される飼料全体の１日当りの総量において、上記のカルシウム含有量となるように調製することが好ましい。上述の通り、乾乳後期の乳牛には、配合飼料は通常、４ｋｇ／日・頭程度給与するため、配合飼料を通じて上記のカルシウム含有量を達成するためには、配合飼料のカルシウム含量を乾物換算で１．２〜１．８重量％とすることができ、より好ましくは０．９〜１．５重量％とする。
また、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与される飼料でも、組合せて給与される飼料全体の１日当りの総量において、上記のカルシウム含量となるように調製することが好ましい。通常、混合飼料又は単体飼料等は、一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、これらの飼料を通じてこのようなカルシウム含量を達成するには、混合飼料等のカルシウム含量を乾物換算で７〜３４重量％とすることが好ましく、９〜２０重量％とすることがより好ましい。
【００２９】
本発明の飼料では、硫酸カルシウム及び／又はその水和物が１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の産生能力を向上させるため、飼料中マグネシウム含量を従来推奨されていた水準より少なくしても十分な低カルシウム血症及び乳熱の予防効果が得られる。前述の通り、マグネシウム塩の添加は飼料の嗜好性を悪化させるため、本発明の飼料の利点である良好な嗜好性及び採食性を最大限に発揮するためには、飼料中マグネシウム含量を低減させることが好ましい。この点で、総飼料中のマグネシウム含量は乾物換算で０．２０〜０．４０重量％とすることが好ましく、０．２０〜０．３０重量％とすることがより好ましく、０．２０〜０．２５重量％とすることが更に好ましい。
例えば、配合飼料の場合には、単独で給与する場合、及び他の飼料（粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与する場合の何れにおいても、給与される飼料全体の１日当りの総量において、上記のマグネシウム含有量となるように調製することが好ましい。上述の通り、乾乳後期の乳牛には、配合飼料は通常、４ｋｇ／日・頭程度給与するため、配合飼料を通じて上記のマグネシウム含有量を達成するためには、配合飼料のマグネシウム含量を乾物換算で０．２０〜０．５０重量％とすることが好ましく、０．２０〜０．３５重量％とすることがより好ましく、０．２０〜０．２５重量％とすることが更に好ましい。
また、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与される飼料でも、組合せて給与される飼料全体の１日当りの総量において、上記のマグネシウム含量となるように調製することが好ましい。上述の通り、混合飼料又は単体飼料等は、通常一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、これらの飼料を通じてこのようなマグネシウム含量を達成するには、混合飼料等のマグネシウム含量を乾物換算で０．０５〜２５重量％とすることが好ましく、０．１〜５．０重量％とすることがより好ましく、０．２〜１．０重量％とすることが更に好ましい。
【００３０】
本発明の飼料は、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、塩酸、硫酸、グルタミン酸発酵粕、グルタミン酸発酵副産液等の硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源を、全く含まないか、あるいは少量含む。これらの陰イオン供給源は飼料の嗜好性を低減するため、その供給量は少なくすべきであり、具体的には、これらの陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計を、給与される飼料全体の一日当たり総量で、４００ｍＥｑ／頭・日以下とするのが好ましく、２５０ｍＥｑ／頭・日以下とするのがより好ましく、１８０ｍＥｑ／頭・日以下とするのがより好ましく、１００ｍＥｑ／頭・日以下とするのが更に好ましく、０ｍＥｑ／頭・日とするのが最も好ましい。
これを飼料中の含有量で見ると、乾乳後期の乳牛の一日当たりの乾物摂取量は１０ｋｇ／頭・日前後であるため、硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計は総飼料中に乾物換算で０〜４０ｍＥｑ／ｋｇ含むことが好ましく、０〜２５ｍＥｑ／ｋｇ含むことがより好ましく、０〜１８ｍＥｑ／ｋｇ含むことがより好ましく、０〜１０ｍＥｑ／ｋｇ含むことが更に好ましく、０ｍＥｑ／ｋｇとするのが最も好ましい。
配合飼料の場合、上述の通り、乾乳後期の乳牛には、配合飼料（通常、乾物は８７重量％程度）を通常、４ｋｇ／日・頭程度給与するため、硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの含有量は、乾物換算で０〜１２０ｍＥｑ／ｋｇであることが好ましく、０〜８０ｍＥｑ／ｋｇであることがより好ましく、０〜６０ｍＥｑ／ｋｇであることがより好ましく、０〜３０ｍＥｑ／ｋｇであることが更に好ましく、０ｍＥｑ／ｋｇであるのが最も好ましい。
また、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与される飼料の場合でも、組合せて給与される飼料全体の１日当りの総量において、硫酸カルシウム及び／又はその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計が上記の量となるように調製することが好ましい。通常、混合飼料又は単体飼料等は、上述の通り、一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、硫酸カルシウム及び／又はその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計は、飼料中に乾物換算で０〜１，６００ｍＥｑ／ｋｇ含み、好ましくは０〜１，０００ｍＥｑ／ｋｇ含み、より好ましくは０〜５００ｍＥｑ／ｋｇ含み、より好ましくは０〜２００ｍＥｑ／ｋｇ含み、より好ましくは０〜１００ｍＥｑ／ｋｇ含み、更に好ましくは０〜５０ｍＥｑ／ｋｇ含み、最も好ましくは０ｍＥｑ／ｋｇとする。
【００３１】
本発明の飼料では、低カルシウム血症及び乳熱の予防効果をより高めるため、ビタミンＤ３代謝物を併用することも有効な実施形態の一つである。１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３を分娩前１週間以内に合計２００〜８００μｇ投与することが好ましく、２５０〜５００μｇ投与することがより好ましい。ビタミンＤ３代謝物としてリュウキュウヤナギやシロバナコウボクの葉及びその搾汁物、抽出物等を用いる場合、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３換算で上記の量を給与すればよい。
【００３２】
前述の通り、イオウは銅の吸収を阻害し、肉牛では過剰摂取により灰白質脳軟化症の発症が報告されている。イオウの過剰摂取による灰白質脳軟化症は、ルーメン内で発生する硫化水素が原因となって発症するが、硫化水素はルーメンｐＨが低いと発生量が増えるため、ルーメンｐＨの安定化が灰白質脳軟化症の予防に有効と考えられている（非特許文献５２）。そのため、本発明の飼料では、硫酸カルシウム及び／又はその水和物の添加による銅の吸収阻害による害を低減するため、銅を添加することが好ましく、また灰白質脳軟化症のリスクを軽減するため、ルーメンｐＨを安定化させるイーストカルチャー及び／または活性酵母を添加することも好ましい。銅の供給源としては、硫酸銅、炭酸銅、塩化銅、酸化銅等の無機態の銅及び／又は有機態の銅（例えば、アミノ酸及び／又はペプチドと複合体を形成した銅など）を用いることができる。
【００３３】
銅の供給量は８０〜１，０００ｍｇ／頭・日が好ましく、１００〜８００ｍｇ／頭・日がより好ましく、１５０〜５００ｍｇ／頭・日が最も好ましい。これを乳牛の一日当たりの飼料摂取量を考慮の上、給与される飼料全体の含有量で見ると、銅は総飼料中に乾物換算で８〜１００ｍｇ／ｋｇ含むことが好ましく、１０〜８０ｍｇ／ｋｇ含むことがより好ましく、１５〜５０ｍｇ／ｋｇ含むことが最も好ましい。
例えば、配合飼料の場合には、単独で給与する場合、及び他の飼料（粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与する場合何れにおいても、給与される飼料全体の１日当りの総量において、銅が上記の給与量となるように調製することが好ましい。上述の通り、乾乳後期の乳牛には、配合飼料は通常、４ｋｇ／日・頭程度給与するため、配合飼料を通じて上記の銅給与量を達成するには、銅が配合飼料中に乾物換算で８〜２００ｍｇ／ｋｇ含むことが好ましく、１０〜１６０ｍｇ／ｋｇ含むことがより好ましく、１５〜１００ｍｇ／ｋｇ含むことが最も好ましい。
また、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与される飼料でも、組合せて給与される飼料全体の１日当りの総量において、銅が上記の給与量となるように調製することが好ましい。上述の通り、混合飼料又は単体飼料等は、通常、一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、銅は飼料中に乾物換算で３〜３，０００ｍｇ／ｋｇ含むことが好ましく、５０〜２，０００ｍｇ／ｋｇ含むことがより好ましく、１００〜１，０００ｍｇ／ｋｇ含むことが最も好ましい。
【００３４】
イーストカルチャー及び／または活性酵母の供給量は酵母生菌数として１×１０９〜５×１０１０ＣＦＵ／頭・日が好ましく、５×１０９〜２×１０１０ＣＦＵ／頭・日がより好ましい。これを乳牛の一日当たりの飼料摂取量を考慮の上、飼料中の含有量で見ると、イーストカルチャー及び／または活性酵母は総飼料中に乾物換算で酵母生菌数として１×１０８〜５×１０９ＣＦＵ／ｋｇ含むことが好ましく、５×１０８〜２×１０９ＣＦＵ／ｋｇ含むことがより好ましい。
例えば、配合飼料の場合、単独で給与する場合、及び他の飼料（粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与する場合の何れにおいても、給与される飼料全体において、イーストカルチャー及び／または活性酵母が上記の含有量となるように調製することが好ましい。上述の通り、乾乳後期の乳牛には、配合飼料は通常、４ｋｇ／日・頭程度給与するため、配合飼料を通じてこのようなイーストカルチャー等の含有量を達成するには、イーストカルチャー及び／または活性酵母が配合飼料中に乾物換算で酵母生菌数として３×１０８〜２×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ含有することが好ましく、２×１０９〜７×１０９ＣＦＵ／ｋｇ含有することがより好ましい。
また、混合飼料又は単体飼料のように他の飼料（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等を含む）と組合せて給与される飼料の場合でも、組合せて給与される飼料全体において、イーストカルチャー及び／または活性酵母が上記の含有量となるように調製することが好ましい。前述の通り、混合飼料又は単体飼料等は、通常一日１〜２回、一回当たり５０〜１５０ｇ程度給与されるので、イーストカルチャー及び／または活性酵母を飼料中に乾物換算で３×１０１０〜１×１０１２ＣＦＵ／ｋｇ含むことが好ましく、１×１０１０〜４×１０１１ＣＦＵ／ｋｇ含むことがより好ましい。
【００３５】
本発明の飼料は、嗜好性・採食性を向上させるため、飼料形態はペレット、フレーク・ペレット、ペレットクランブル、エクスパンダーなど、飼料を粉状ではなく牛が採食しやすいように一定の粒径に成型することが好ましい。また同様の理由により、本発明の飼料には甘味料及び／又は着香料を添加することが好ましく、甘味料としては、例えばサッカリンナトリウム、アスパルテーム、スクラロースなどを用いることができる。サッカリンナトリウムの場合、配合飼料又は混合飼料中に乾物換算で０．００３〜０．１重量％含むことが好ましく、０．０１〜０．０７重量％含むことがより好ましく、０．０２〜０．０５重量％含むことが最も好ましい。着香料は、配合飼料又は混合飼料中に乾物換算で０．０００１〜０．１重量％含むことが好ましく、０．００５〜０．０５重量％含むことがより好ましい。
【００３６】
ここで、本発明の好ましい実施形態の飼料の組成（配合飼料、粗飼料、混合飼料及び単体飼料等、乳牛に給与される全ての飼料の全体としての組成）を以下に示す。
硫酸カルシウム及び／又はその水和物：乾物換算で０．９０〜１．３５重量％
カルシウム：乾物換算で０．６〜０．９重量％
マグネシウム：乾物換算で０．２０〜０．３０重量％
銅：乾物換算で１０〜８０ｍｇ／ｋｇ
ＤＣＡＤ：乾物換算で７０〜９５ｍＥｑ／ｋｇ
硫酸カルシウム及び／又はその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計：乾物換算で０〜１８ｍＥｑ／ｋｇ
任意に、イーストカルチャー及び／または活性酵母：乾物換算で５×１０８〜２×１０９ＣＦＵ／ｋｇ
任意に、甘味料：乾物換算で０．０１〜０．０７重量％
任意に、着香料：乾物換算で０．００５〜０．０５重量％
配合飼料、混合飼料及び／又は単体飼料によって硫酸カルシウム等を供給する場合には、それと組み合わせて給与する配合飼料、粗飼料、混合飼料及び／又は単体飼料との合算において、上記の組成とすれば良い。
【００３７】
本発明において、飼料の給与対象は、乳牛であり、好ましくは乾乳牛であり、より好ましくは乾乳後期（分娩３週間前〜分娩）の全期間又は一部の期間（好ましくは分娩２週間前〜分娩）の乾乳牛である。なお、乾乳牛とは、分娩前（通常、分娩２ヶ月前〜分娩）で搾乳を中止している乳牛のことを指し、乾乳期は、乾乳前期（通常、分娩２ヶ月前〜３週間前）と乾乳後期（分娩３週間前〜分娩）に大別される。但し、本願の一部の記載（実施例）では、便宜上、搾乳を行っていない非妊娠の乳牛も含む意味で用いている。
本発明の飼料は、通常、２産目（概ね３歳）以上の乳牛を対象とするが、ビタミンＤ３の代謝能が低下した老齢牛において特に有効である。前述の通り、牛は加齢に伴い腸管の１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３受容体が減少し、かつ２４位水酸化酵素が増加することで、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の産生及び反応性の双方が低下し、カルシウム吸収能が低下する。しかしながら、本発明の飼料は、特に老齢牛において、血中カルシウム濃度の低下に呼応した１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の産生能力を高めるため、老齢牛における低カルシウム血症及び乳熱対策として特に有効である。具体的には、乳熱の発症が増加する３産目（通常、２４ヶ月齢前後で初産分娩し、以後は平均して１５ヶ月間隔で分娩を重ねるため、概ね４歳）以上、その中でも特に５産目（概ね７歳）以上、さらには７産目（概ね９〜１０歳）以上の乳牛の低カルシウム血症及び乳熱対策として有効である。
【００３８】
給与方法については、特に制限はなく、配合飼料、粗飼料、混合飼料及び／又は単体飼料と併用することができ、不断給餌又は制限給餌とすることができる。配合飼料の場合には、通常１日１〜１０回に分割して給与することができ、一日当たり２〜６ｋｇの飼料を給与して、７３〜１３１ｇ／頭・日の硫酸カルシウム及び／又はその水和物を供給することが好ましい。このような量の硫酸カルシウム及び／又はその水和物の供給は、牛群の平均尿ｐＨを７．１〜７．６に調整し、飼料摂取量に悪影響を及ぼすことなく、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成を促進し、血中カルシウム濃度の低下を抑制し得る。
硫酸カルシウム等の供給は混合飼料又は単体飼料によって行ってもよく、この場合には、１日当たりの硫酸カルシウムの供給量が７３〜１３１ｇ／頭・日となるように混合飼料又は単体飼料を給与する。混合飼料又は単体飼料で硫酸カルシウム等を給与する場合には、カルシウム含量が低く、及び／又はＤＣＡＤが高い飼料と組み合わせることができ、具体的には、総飼料中カルシウム含量が乾物換算で０．６〜０．９重量％、ＤＣＡＤが乾物換算で７０〜９５ｍＥｑ／ｋｇとなるような飼料と組み合わせることができる。組み合わされる飼料は混合給与若しくは分離給与され、牛が同時に摂取できるようにすることが望ましい。
【００３９】
本発明の方法では、上記の量の硫酸カルシウム及び／又はその水和物と共に、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム及び／又はその水和物以外の陰イオン供給源（塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、塩酸、硫酸、グルタミン酸発酵粕、グルタミン酸発酵副産液等）に由来する塩素及びイオウ、カルシウム、リン、マグネシウム、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３（リュウキュウヤナギやシロバナコウボクの葉及びその搾汁物、抽出物等に由来する１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３を含む）等を以下の表１に示す量供給することができる（各成分の供給量の技術的意義は、飼料に関して述べたところと同様である）。
【表１】
0005864807.tif 000002
【００４０】
本発明の方法では、上記飼料の給与により、牛群の平均尿ｐＨが７．１〜７．６となっていることを確認することが好ましい。上述の通り、この尿ｐＨの範囲内では、良好な嗜好性・採食性の維持と低カルシウム血症及び乳熱の予防の双方が達成可能である。
【実施例】
【００４１】
以下、本発明を実施例により説明するが、本発明は以下の実施例によって限定されるものではない。
【００４２】
試験１．無水石膏と二水石膏の嗜好性評価
無水石膏又は二水石膏の添加が飼料の嗜好性に及ぼす影響について検討した。乾物８６．９重量％、乾物換算で粗蛋白質１４．０重量％、可消化養分総量（ＴＤＮ）８４．１重量％、炭酸カルシウム含有量０．９２重量％のフレーク・マッシュの市販肥育牛用配合飼料を基礎飼料とし、これを基に下記の表２に示す配合割合及び成分値（設計値）の飼料を調製した。
【表２】
0005864807.tif 000003
注）成分値（設計値：乾物中の値）は、粗タンパク質、ＣａおよびＰについては原料ごとの分析に基づく設計値であり、その他は「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。配合割合は小数点第二位以下を四捨五入して示した。
【００４３】
表２に示す通り、比較例１の飼料は市販肥育牛用配合飼料である。実施例１の飼料は、市販肥育牛用配合飼料に対し無水石膏を２．０重量％（硫酸カルシウム換算値：１．９重量％）添加した飼料であり、実施例２の飼料は、二水石膏を２．０重量％（硫酸カルシウム換算値：１．５３重量％）添加した飼料である。
約６ヶ月齢のホルスタイン種去勢育成牛４頭を供試し、カフェテリア方式にてこれら３種の飼料の嗜好性を比較した。供試牛は同一牛房に群飼いし、飼槽を３分割し各飼料を朝の給餌時に設置し、７時間後に各飼料を回収し残量を計量した。試験は３日間行い、毎日各飼料の設置場所を入れ替えた。結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
0005864807.tif 000004
【００４５】
実施例１及び実施例２の飼料は、平均摂取量・平均摂取比率ともに比較例１の飼料と大差なく、嗜好性は比較例１の飼料と同等であると考えられた。
以上の結果から、配合飼料への無水石膏または二水石膏２．０重量％の添加は、嗜好性に悪影響を及ぼさないことが示された。
【００４６】
試験２．無水石膏と二水石膏の尿ｐＨ低下効果の比較
無水石膏又は二水石膏の添加が尿ｐＨに及ぼす影響について検討した。乾物８６．９重量％、乾物換算で粗蛋白質１４．０重量％、可消化養分総量（ＴＤＮ）８４．１重量％、炭酸カルシウム含有量０．９２重量％のフレーク・マッシュの市販肥育牛用配合飼料を基礎飼料とし、これを基に下記の表４に示す配合割合及び成分値（設計値）の飼料を調製した。
【表４】
0005864807.tif 000005
注）成分値（設計値：乾物中の値）は、粗タンパク質、ＣａおよびＰについては原料ごとの分析に基づく設計値であり、その他は「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。配合割合は小数点第三位以下を四捨五入して示した。
【００４７】
表４に示す通り、実施例３の飼料は市販肥育牛用配合飼料に対し、無水石膏を０．９９重量％添加した飼料である。実施例４の飼料は、市販肥育牛用配合飼料に対し二水石膏を１．２０重量％添加した飼料である。
繋ぎ飼いで飼養する３〜８歳齢の非妊娠ホルスタイン種雌乾乳牛６頭を供試し、実施例３の飼料を８．０８ｋｇ／日給与と実施例４の飼料を８．１０ｋｇ／日給与の２群に分け試験を実施した。すなわち、実施例３の飼料を給与した群には、肥育牛用配合飼料を約８．０ｋｇ／日と無水石膏を約８０ｇ／日（硫酸カルシウム換算値：７８ｇ／日）給与した計算となり、実施例４の飼料を給与した群には、肥育牛用配合飼料約８．０ｋｇ／日と二水石膏を約９７ｇ／日（硫酸カルシウム換算値：７６ｇ／日）給与したこととなるため、両群に給与した肥育牛用配合飼料と硫酸カルシウムの量（水和物を除く）はほぼ同一である。粗飼料については両群ともに稲ワラ１．０ｋｇ／日給与とし、飼料は１日２回、朝９：３０と夕１７：３０に等量ずつ分けて給与した。試験は各飼料給与期間を５〜６日間とする反転試験法にて行い、試験期間最終日の１１：００、１４：００及び１７：００に尿を採取しｐＨメーター（ＰＨ８２  横河電機株式会社）にてｐＨを測定した。結果を表５に示す。
【００４８】
【表５】
0005864807.tif 000006
【００４９】
１４：００と１７：００においては尿ｐＨに明確な差は認められなかったが、１１：００においては実施例３の飼料の方が尿ｐＨは統計的に有意に低く（ｐ＜０．０５）、個体ごとに計３回の平均値で集計すると、有意差はないものの実施例３の方がやや尿ｐＨは低い値を示した。
以上の結果から、無水石膏と二水石膏のいずれも尿ｐＨを低下させる効果を有し、陰イオン塩として用いることができるが、無水石膏の方が牛における利用性・吸収性が高い可能性が示唆された。
【００５０】
試験３．無水石膏による他の陰イオン塩の代替が嗜好性に及ぼす影響の検討
無水石膏による硫酸マグネシウム及びグルタミン酸発酵粕の代替が、配合飼料の嗜好性に及ぼす影響について検討した。乾物８８．０重量％の表６に示す配合割合及び成分値（設計値）のフレーク・ペレット飼料を調製した。
【表６】
0005864807.tif 000007
注）成分値（設計値：乾物中の値）は、粗タンパク質、ＣａおよびＰについては原料ごとの分析に基づく設計値であり、その他は「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。
【００５１】
表６に示す通り、比較例２の飼料は、陰イオン塩として硫酸マグネシウム三水和物を０．８０重量％、グルタミン酸発酵粕を４．５０重量％配合した飼料である。比較例３の飼料は陰イオン塩としてグルタミン酸発酵粕を４．５０重量％、無水石膏を０．６５重量％（硫酸カルシウム換算値：０．６３重量％）配合した飼料であり、実施例５の飼料は陰イオン塩としてグルタミン酸発酵粕を２．５０重量％、無水石膏を１．５０重量％（硫酸カルシウム換算値：１．４６重量％）配合した飼料である。硫酸マグネシウム三水和物はイオウを現物中１８．４重量％含み、グルタミン酸発酵粕は塩素を１１．１重量％、イオウを３．４９重量％含み、無水石膏はイオウを２２．７重量％含む。そのため、比較例２の飼料は硫酸マグネシウム三水和物及びグルタミン酸発酵粕由来の塩素及びイオウの総計を乾物換算で−２９０ｍＥｑ／ｋｇ含み、比較例３の飼料はグルタミン酸発酵粕由来の塩素及びイオウの総計を乾物換算で−２２７ｍＥｑ／ｋｇ含み、実施例５の飼料はグルタミン酸発酵粕由来の塩素及びイオウの総計を乾物換算で−１２６ｍＥｑ／ｋｇ含む。
約７ヶ月齢のホルスタイン種去勢育成牛４頭を供試し、カフェテリア方式にてこれら３種の飼料の嗜好性を比較した。供試牛は同一牛房に群飼いし、飼槽を３分割し各飼料を朝の給餌時に設置し、７時間後に各飼料を回収し残量を計量した。試験は３日間行い、毎日各飼料の設置場所を入れ替えた。結果を表７に示す。
【００５２】
【表７】
0005864807.tif 000008
【００５３】
平均摂取量、平均摂取比率及び平均順位のいずれにおいても、実施例５、比較例３、比較例２の順に優れた。
以上の結果から、硫酸マグネシウム及びグルタミン酸発酵粕を無水石膏により代替することで、配合飼料の嗜好性が向上することが示された。また、実施例５の飼料は比較例２及び３の飼料よりも大幅に嗜好性に優れる結果であったことから、配合飼料中の硫酸カルシウム及び／またはその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの総計は、−１２６ｍＥｑ／ｋｇを超えるべきではないと考えられた。
【００５４】
試験４．無水石膏使用混合飼料と他の陰イオン塩との嗜好性比較
無水石膏を含む混合飼料と他の陰イオン塩を含む混合飼料の嗜好性を比較した。乾物８７．６重量％、乾物換算で粗蛋白質１７．２重量％、可消化養分総量（ＴＤＮ）８２．７重量％のフレーク・マッシュの市販肥育牛用配合飼料を基礎飼料とした。この基礎飼料に、塩化アンモニウム含量４０重量％、重質炭酸カルシウム含量４０重量％のマッシュ形態の市販塩化アンモニウム製剤又は下記の表８に示す配合割合及び成分値のペレット形態の無水石膏混合飼料（実施例６）を混合し、それぞれ下記の表９に示す配合割合及び成分値（設計値）の比較例４及び実施例７の飼料を調製した。
【表８】
0005864807.tif 000009
注）成分値はＴＤＮとＣｕのみ設計値（乾物中の値）であり、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。その他は分析値（乾物中の値）である。
【表９】
0005864807.tif 000010
注）成分値（設計値：乾物中の値）は、粗タンパク質、ＣａおよびＰについては原料ごとの分析に基づく設計値であり、その他は「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。
【００５５】
表８に示す通り、実施例６の飼料は、無水石膏を３７．５０重量％（硫酸カルシウム換算値：３６．３８重量％）含む混合飼料である。表９に示す通り、比較例４の飼料は、市販肥育牛用配合飼料に対し塩化アンモニウム製剤を２．２５重量％添加した飼料であり、実施例７の飼料は、実施例６の飼料を５．１３重量％添加した飼料（飼料中の硫酸カルシウム含有量：１．８７重量％）であり、両飼料のＤＣＡＤ値は略同等である。
約１０ヶ月齢の交雑種去勢肥育牛５頭を供試し、カフェテリア方式にてこれら２種の飼料の嗜好性を比較した。供試牛は同一牛房に群飼いし、飼槽を２分割し各飼料を朝の給餌時に設置し、４時間後に各飼料を回収し残量を計量した。試験は４日間行い、毎日各飼料の設置場所を入れ替えた。結果を表１０に示す。
【００５６】
【表１０】
0005864807.tif 000011
【００５７】
平均摂取量、平均摂取比率は、比較例４の飼料に対し実施例７の飼料で顕著に優れ、４日間の試験期間全てにおいて実施例７の飼料が好まれる結果であった。
以上の結果から、陰イオン塩として無水石膏を用い、サッカリンナトリウムや着香料を使用しペレット化した実施例６の飼料は、市販の塩化アンモニウム製剤より明確に嗜好性に優れることが示された。
【００５８】
試験５．配合飼料への無水石膏の添加が育成牛の飼料摂取量及び発育成績に及ぼす影響の検討
配合飼料への無水石膏の添加が飼料摂取量及び発育成績に及ぼす影響を検討するため、４ヶ月齢ホルスタイン種去勢育成牛１２頭を供試し試験を行った。供試牛を６頭ずつ対照群と試験群に分け、対照群には比較例５の配合飼料を、試験群には実施例８の配合飼料を給与し（配合割合及び成分値：表１１参照）、粗飼料については両群ともチモシー乾草（成分値：表１２）を給与した。配合飼料、粗飼料とも自由採食（不断給与）とし、１ヶ月間の飼育試験を行った。試験終了時に血液を採取し、血清中総コレステロール濃度は酵素法にて、尿素窒素濃度は酵素法にて、総カルシウム濃度はＯＣＰＣ（オルトクレゾールフタレインコンプレキソン）法にて、無機リン濃度はモリブデンブルー法にて、マグネシウム濃度はキシリジルブルー法にて、骨型アルカリフォスファターゼ（ＢＡＰ）濃度はＣＬＥＩＡ（化学発光酵素免疫測定法）法にて測定した。試験終了時に尿を採取し、ｐＨメーター（ＰＨ８２  横河電機株式会社）にてｐＨを測定した。
【表１１】
0005864807.tif 000012
注）成分値（設計値：乾物中の値）は、粗タンパク質、ＣａおよびＰについては原料ごとの分析に基づく設計値、Ｍｇ、Ｎａ、Ｋ、ＣｌおよびＳについては比較例５では分析値、実施例８では設計値である。Ｃｕについては「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。
【表１２】
0005864807.tif 000013
注）成分値（設計値：乾物中の値）は、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。
【００５９】
表１１に示す通り、比較例５の飼料は、カルシウム供給源として炭酸カルシウムを配合し、無水石膏は不使用である。実施例８の飼料は、無水石膏を１．２０重量％（硫酸カルシウム換算値：１．１６重量％）含み、ＤＣＡＤは乾物換算で９４．７ｍＥｑ／ｋｇである。試験期間中の配合飼料及び粗飼料の摂取量（１日当たりの総乾物摂取量：対照群５．０３ｋｇ、試験群５．２２ｋｇ）から、対照群、試験群それぞれの総飼料中の成分値を計算した結果が表１３である。対照群と試験群ではＤＣＡＤは約１００ｍＥｑ／ｋｇの差となり、試験群の総飼料中ＤＣＡＤは１０５．８ｍＥｑ／ｋｇであった。
【表１３】
0005864807.tif 000014
【００６０】
結果を表１４及び１５に示す。
【表１４】
0005864807.tif 000015
【表１５】
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【００６１】
日増体量は対照群と試験群で同等であり、乾物摂取量は試験群でやや多い傾向であった。血液性状については両群で差が無く、尿ｐＨは試験群の方が統計的に有意に低く（ｐ＜０．０５）、平均値で７．１２であった。
以上の結果から、配合飼料へ無水石膏を添加し、総飼料中ＤＣＡＤを乾物換算で約１００ｍＥｑ／ｋｇ低下させ、１０５．８ｍＥｑ／ｋｇとしても、発育成績及び乾物摂取量に悪影響は無いことが示された。
Ｃｈａｒｂｏｎｎｅａｕら（非特許文献４２）は、分娩前の乾乳牛において、飼料中ＤＣＡＤが１００ｍＥｑ／ｋｇ低下するごとに乾物摂取量が０．４３ｋｇ／日減少することを報告している。本試験では育成牛を供試しているという点で違いはあるものの、乾物摂取量はむしろ試験群の方が多い傾向であり、無水石膏の飼料への添加は、ＤＣＡＤが１０５．８ｍＥｑ／ｋｇ、尿ｐＨが平均７．１２までの水準においては、他の陰イオン塩と異なり、自由採食時においても飼料摂取量に悪影響を及ぼさないことが示唆された。
【００６２】
試験６．無水石膏使用混合飼料の給与が尿ｐＨに及ぼす影響の確認
無水石膏を使用した混合飼料の給与によるＤＣＡＤコントロールについて確認した。繋ぎ飼いで飼養する５〜１０歳齢の非妊娠ホルスタイン種雌乾乳牛５頭を供試し、一般的な乾乳後期の給与メニューにおける無水石膏使用混合飼料が尿ｐＨに及ぼす影響を検討した。すなわち、供試牛を２群に分け、乾物８６．８重量％、乾物換算で粗蛋白質２０．９重量％、可消化養分総量（ＴＤＮ）８６．４重量％のフレーク・ペレットの市販乳牛用配合飼料を４．０ｋｇ／頭／日、スーダングラス乾草を５．０ｋｇ／日を給与し、一方の群には追加で実施例６の無水石膏使用混合飼料をトップドレスで２００ｇ／日（無水石膏として７５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：７３ｇ／日）給与した（表１６参照）。飼料は１日２回、朝・夕に等量ずつ分けて給与した。試験は各飼料給与期間を７日間以上とする反転試験法にて行い、試験期間の最終日に尿を採取しｐＨメーター（ＰＨ８２  横河電機株式会社）にてｐＨを測定した。さらに、実施例６の無水石膏使用混合飼料の給与量を３００ｇ／日（無水石膏として１１２．５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１０９ｇ／日）として追試験を行った（表１７参照）。
【表１６】
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注）成分値はＴＤＮとＣｕのみ設計値（乾物中の値）であり、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。その他は分析値（乾物中の値）である。
【表１７】
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注）成分値はＴＤＮとＣｕのみ設計値（乾物中の値）であり、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。その他は分析値（乾物中の値）である。
【００６３】
結果を表１８および１９に示す。
【００６４】
【表１８】
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【表１９】
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【００６５】
比較例６の飼料と実施例９の飼料の比較では、実施例９の飼料の方が平均尿ｐＨは０．８０低かったが、個体Ｂ及び個体Ｅにおいては実施例９の飼料の給与期間においても尿ｐＨは８．０以上であり、個体によっては高めの値であった。比較例６の飼料と実施例１０の飼料の比較では、平均尿ｐＨは実施例１０の飼料の方が統計的に有意に低く（ｐ＜０．０５）、明確に尿ｐＨの低下が確認できた。
以上の結果より、乾乳後期の乳牛への実施例６の無水石膏使用混合飼料の給与量は、少なくとも２００ｇ／日（無水石膏として７５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：７３ｇ／日）以上とすることが望ましく、３００ｇ／日（無水石膏として１１２．５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１０９ｇ／日）の方がより望ましいと考えられた。
【００６６】
試験７．無水石膏使用混合飼料の低カルシウム血症の予防効果の検証
無水石膏を使用した混合飼料の低カルシウム血症予防効果について検証した。繋ぎ飼いで飼養する６〜１０歳齢の非妊娠ホルスタイン種雌乾乳牛４頭を供試し、供試牛を２群に分け、乾物８６．８重量％、乾物換算で粗蛋白質２０．９重量％、可消化養分総量（ＴＤＮ）８６．４重量％のフレーク・ペレットの市販乳牛用配合飼料を４．０ｋｇ／頭／日、スーダングラス乾草を６．０ｋｇ／日を給与し、一方の群には追加で実施例６の無水石膏使用混合飼料をトップドレスで３００ｇ／日（無水石膏として１１２．５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１０９ｇ／日）給与した（表２０参照）。飼料は１日２回、朝・夕に等量ずつ分けて給与した。試験は各飼料給与期間を１４日間とする反転試験法にて行った。尿は１２〜１３日目に採取しｐＨメーター（ＰＨ８２  横河電機株式会社）にてｐＨを測定した。Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎら（非特許文献５４）の報告を参考とし、１４日目の朝の給餌１時間後に、滅菌した５．０％Ｎａ２ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏ溶液を右頸静脈より５００ｍＬ／ｈの流量で３時間注入することで低カルシウム血症を誘導し、経時的に左頸静脈より血液を採取した。血清中総カルシウム濃度はＯＣＰＣ（オルトクレゾールフタレインコンプレキソン）法で、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３濃度はＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）法で、骨型アルカリフォスファターゼ（ＢＡＰ）濃度はＣＬＥＩＡ（化学発光酵素免疫測定法）法にて測定した。
【表２０】
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注）成分値はＴＤＮとＣｕのみ設計値（乾物中の値）であり、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。その他は分析値（乾物中の値）である。
【００６７】
結果を表２１及び図１〜４に示す。
【００６８】
【表２１】
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【００６９】
尿ｐＨは、実施例１１の飼料において平均７．４０であり、比較例７の飼料に対し統計的に有意に低い値を示した（ｐ＜０．０５）。個体ごとにＮａ２ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏ溶液の静脈点滴開始時の数値に対する増減で見ると、血清総カルシウム濃度は１．５および４時間後において実施例１１の飼料の方が統計的に有意に高い値であり（ｐ＜０．１０，ｐ＜０．０５）、特に静脈点滴を実施している３時間後までは、１ｍｇ／ｄＬ前後の差が確認された。Ｃｈａｒｂｏｎｎｅａｕら（非特許文献４２）が報告した、飼料中ＤＣＡＤから分娩時の血中総カルシウム濃度を求める予測式（総カルシウム濃度（ｍｇ／ｄＬ）＝８．０７１−０．００２６０×ＤＣＡＤ（ｍＥｑ／ｋｇ））に基づくと、実施例１１の飼料では比較例７の飼料よりも血中総カルシウム濃度は０．２７ｍｇ／ｄＬ高くなる計算となるため、実施例１１の飼料は従来技術から予想される以上に、血中総カルシウム濃度の低下を緩和した可能性があると考えられる。また血清１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３濃度は、静脈点滴開始時においては比較例７の飼料で平均２７．３ｐｇ／ｍＬ、実施例１１の飼料で２５．０ｐｇ／ｍＬと差はなく、いずれの飼料においてもＮａ２ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏ溶液の静脈点滴によって上昇する傾向であったが、６時間後において実施例１１の飼料の方が統計的に有意に大きく上昇した（ｐ＜０．０１）。これを６歳齢と１０歳齢の個体で分けて集計すると、１０歳齢の個体において、比較例７の飼料では血清１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３濃度はほとんど上昇しなかったのに対し、実施例１１の飼料では６歳齢の個体と遜色ない水準にまで上昇する傾向であり、実施例１１の飼料は老齢牛において特に１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成を促進したものと考えられた。血清ＢＡＰ濃度は６μｇ／Ｌ前後と低い水準で推移し、比較例７の飼料と実施例１１の飼料に差はなかった。なお、試験期間中、比較例７の飼料と実施例１１の飼料のいずれにおいても残飼の発生は認められなかった。
以上の結果から、実施例６の無水石膏使用混合飼料３００ｇ／日（無水石膏として１１２．５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１０９ｇ／日）の給与は、飼料摂取量に悪影響がなく、１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成を促し、血中総カルシウム濃度の低下を緩和することが示され、低カルシウム血症及び乳熱の予防策として有効であることが示唆された。
【００７０】
実施例１１の飼料において１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成が促進されたのは、ＤＣＡＤコントロールにより誘導される代謝性アシドーシスがＰＴＨに対する応答性を向上させたためと思われるが、老齢牛において特に１，２５−（ＯＨ）２ビタミンＤ３の合成能が改善されることは、本発明者が知る限りにおいて新規の知見である。また、実施例１１の飼料において無水石膏の給与量は１１２．５ｇ／日（硫酸カルシウム換算値：１０９ｇ／日）、ＤＣＡＤは乾物換算で７５．４ｍＥｑ／ｋｇ、尿ｐＨは平均７．４０であり、従来推奨されるよりも硫酸カルシウムの給与量は少なく、ＤＣＡＤと尿ｐＨは高い水準であったにも関わらず、十分な血中カルシウム濃度の低下抑制効果が確認された。硫酸カルシウムは炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなどの他の一般的なカルシウム供給源と比べ、牛の十二指腸内における溶解性に大差はないが第一胃内で高い溶解性を示すことが報告されており（非特許文献５５）、そのような消化管内における溶解性の違いによって高い低カルシウム血症予防効果が発揮されている可能性も考えられた。
【００７１】
試験８．無水石膏使用混合飼料の給与量の違いが飼料摂取量及び尿ｐＨに及ぼす影響
無水石膏を使用した混合飼料の上限給与量について検討するため、乾物８６．８重量％、乾物換算で粗蛋白質２０．９重量％、可消化養分総量（ＴＤＮ）８６．４重量％のフレーク・ペレットの市販乳牛用配合飼料を４．０ｋｇ／頭／日、スーダングラス乾草を６．０ｋｇ／日を給与する、繋ぎ飼いの６〜１０歳齢の非妊娠ホルスタイン種雌乾乳牛４頭を試験に供した。３〜４日ごとに実施例６の無水石膏使用混合飼料の給与量を５００ｇ／日（無水石膏として１８７．５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１８２ｇ／日）、４２４ｇ／日（無水石膏として１５９ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１５４ｇ／日）、３６０ｇ／日（無水石膏として１３５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１３１ｇ／日）へと変更した（表２２参照）。飼料は１日２回、朝・夕に等量ずつ分けて給与し、実施例６の飼料の給与方法はトップドレスとし、朝・夕の給餌前に残飼の有無を記録した。尿は各々の給与量の給与期間最終日に採取しｐＨメーター（ＰＨ８２  横河電機株式会社）にてｐＨを測定した。
【表２２】
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注）成分値はＴＤＮとＣｕのみ設計値（乾物中の値）であり、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」（非特許文献５３）の値を引用し、「日本標準飼料成分表（２００９年版）」に値が記載されていないものは「ＮＲＣ乳牛飼養標準（２００１年・第７版）」（非特許文献２０）の値を引用した。その他は分析値（乾物中の値）である。
【００７２】
結果を図５及び６に示した。
【００７３】
尿ｐＨは、実施例１２、１３または１４の飼料の給与期間最終日でそれぞれ平均６．３８、６．１８または６．６８であった。個体によって差はあるが、無水石膏使用混合飼料の給与量が多いほど残飼の発生率は高まる傾向であり、実施例１２の飼料の給与期間は４頭中４頭で、実施例１３の飼料では４頭中３頭で、実施例１４の飼料では４頭中２頭で残餌の発生が確認された。実施例１４の飼料の給与期間においては、残餌の発生は２頭で認められたものの残飼量は僅かであり、実施例１４が無水石膏使用混合飼料の給与上限に相当すると考えられた。
以上の結果から、実施例６の無水石膏使用混合飼料の給与上限は３６０ｇ／日（無水石膏として１３５ｇ／日、硫酸カルシウム換算値：１３１ｇ／日）であり、給与量をそれ以上に増やし尿ｐＨが６．５を下回るような水準にまでＤＣＡＤを低下させると、飼料摂取量が低下することが示された。
石膏は嗜好性に悪影響を及ぼさないため、他の陰イオン塩と異なり硫酸カルシウムとして１３１ｇ／日以下の給与量においては飼料摂取量を低下させないが、１３１ｇ／日を超える給与量においては、軽度の代謝性アシドーシスに起因する体調不良により、飼料摂取量を低下させる可能性が考えられた。
【００７４】
以上の各試験の結果によれば、乾乳牛用飼料への硫酸カルシウム等の添加は、飼料の嗜好性に悪影響を及ぼさず、他の陰イオン塩よりも嗜好性に優れ、給与量は７３〜１３１ｇ／日、飼料のＤＣＡＤとして乾物換算で５５〜１１０ｍＥｑ／ｋｇとすることで、牛群の平均尿ｐＨを７．１〜７．６に調整でき、優れた低カルシウム血症及び乳熱予防効果を奏することが分かった。一方で、１３１ｇ／日を超える給与量では、嗜好性の問題ではなくＤＣＡＤコントロールにより誘導される代謝性アシドーシスによって飼料摂取量が低下するため、硫酸カルシウム等の優れた嗜好性を最大限発揮するためには、他の陰イオン塩の使用量は極力少なくし、硫酸カルシウムの給与上限を１３１ｇ／日とすべきであることが明らかとなった。従って、本発明の飼料は、従来技術より有効な低カルシウム血症及び乳熱予防策ならびにそれらと併発する周産期疾病（第四胃変位、ケトーシス等）の予防策を提供し得るものである。
【要約】
【課題】牛の嗜好性及び飼料摂取量を低下させることなく、分娩前後の低カルシウム血症及び乳熱ならびにそれらと併発する周産期疾病（第四胃変位、ケトーシス等）を予防する乳牛用飼料及び方法を提供すること。
【解決手段】硫酸カルシウム及び／又はその水和物を乾乳牛に７３〜１３１ｇ／日給与し、硫酸カルシウム及びその水和物以外の陰イオン供給源に由来する塩素及びイオウの給与量の総計を４００ｍＥｑ／頭・日以下とすること。
【選択図】なし【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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