(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＺＬＣ３３１と称するサルモネラフラゲリン誘導体を含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の予防または治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病（ＣＤ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＣＺＬＣ３３１が、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチド、Ｎ末端からサルモネラフラゲリンのアミノ酸残基１〜１７６および４０２〜５０５を含み、該Ｎ末端からサルモネラフラゲリンのアミノ酸残基１〜１７６と４０２〜５０５がフレキシブルリンカーペプチドによって連結されている、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記医薬組成物が、注射剤、経口剤、浣腸剤、カプセル、腸溶コーティング錠、散剤または錠剤の形態にある、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物が、カプセル、腸溶コーティング錠、散剤、または顆粒の形態にある場合、活性薬学的成分ＣＺＬＣ３３１は１〜３５重量％存在し、注射用、経口用または浣腸用液体剤形の形態にある場合、ＣＺＬＣ３３１の濃度が２〜６４ｇ／Ｌである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記医薬組成物がタンパク質注射剤であり、前記医薬組成物がＣＺＬＣ３３１（重量／体積の、発現された、比が５％（５ｇ／１００ｍｌ））、塩化ナトリウム（０．８５％、すなわち、０．８５ｇ／１００ｍｌ）および注射用水からなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
次のステップを含む、ＣＺＬＣ３３１と称するサルモネラフラゲリン誘導体を含有する炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の予防または治療用医薬組成物の製造方法；
１）ＣＺＬＣ２９６のコーディング遺伝子を合成するステップ、そのヌクレオチド配列は配列番号１で示され、ここで該ＣＺＬＣ２９６は、フレキシブルリンカーペプチドを介して、Ｎ末端１〜１７６アミノ酸残基とＮ末端４０２〜５０５アミノ酸残基を連結することにより構成される、
２）ＣＺＬＣ２９６の合成されたコーディング遺伝子を、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列を保持する原核細胞発現ベクターにクローニングするステップ、ｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１と称する組換え発現ベクターが結果として生じる、これは、ＣＺＬＣ２９６コーディング遺伝子とＴａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列の両方を保持し、サルモネラフラゲリン誘導体ＣＺＬＣ３３１をコードし、ここで、ＣＺＬＣ３３１のコーディング遺伝子のヌクレオチド配列は配列番号２で示される、
３）組換え発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１を宿主細菌内に形質転換するステップ、
４）発現のために、前記組換え発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１を保持する宿主細菌を誘導するステップ、ならびに
５）タンパク質ＣＺＬＣ３３１を得るために、産生されたタンパク質を単離および精製するステップ。
【請求項８】
前記ステップ４）において、前記ＣＺＬＣ３３１が、従来の原核細胞発現方法を使用して調製され、純度が９５％を上回る、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記ステップ２）において使用したＴａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列を保持する前記原核細胞発現ベクターが、原核細胞発現ベクターｐＥＴ−２２ｂ、ｐＥＴ−２８またはｐＥＴ−１５から構築され、及び、ステップ３）において宿主細菌が大腸菌である、請求項７または８に記載の製造方法。
【請求項１０】
更に以下のステップを含有し、前記医薬組成物が腸溶コーティング錠の形態にある、請求項７〜９のいずれか一項に記載の製造方法；
（重量で）、ＣＺＬＣ３３１  １００、ラクトース  ６０、微結晶セルロース  ２０、カルボキシメチルスターチナトリウム  ２０、ポビドンＫ３０  １０を混合及び顆粒化し、その後、顆粒化された混合物にタルク粉を、顆粒化された混合物とタルク粉の重量比２５００：５０で添加し、得られたものを錠剤化に供し、その後、得られた錠剤を腸溶フィルムコーティング層で噴霧コーティングするステップ。
【請求項１１】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の予防または治療のための医薬組成物を製造するための、サルモネラフラゲリン誘導体ＣＺＬＣ３３１の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の予防および治療における、医薬および薬物における組換えタンパク質の新たな適用、特にＣＺＬＣ３３１と称するサルモネラ由来のフラゲリン誘導体の新たな適用に属する。
【背景技術】
【０００２】
特発性潰瘍性大腸炎または慢性の非特異性潰瘍性大腸炎としても知られる潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、粘膜の浸潤および慢性非特異性炎症を伴う大腸の疾患である。主要な臨床症状は、腹痛、下痢、粘液便および血便であり、視神経炎、神経炎および骨粗鬆症を随伴する。治療が困難で、時間がかかり、再発しやすいので、世界保健機関（ＷＨＯ）によって難病と指定された。現在、ＩＢＤを治癒させるためにアミノサリチル酸、グルココルチコイドおよび免疫抑制剤など様々な薬物があるが、不十分な有効性（特に重度のＵＣに対して）、遅い作用発現、長い治療期間および広範な副作用など多くの欠点を有する。したがって、効果的で、作用発現が迅速で、治療期間が短く、安全性が高く、副作用が少なく、ＩＢＤ（特に、慢性の非特異性潰瘍性大腸炎）に対して簡便な薬物が緊急に必要とされている。
【０００３】
サルモネラのフラゲリン誘導体の１つであるＣＢＬＢ５０２は、造血系に対して保護効果を有し、高用量放射線損傷に対するマウスの生存時間を延長させ、低用量照射マウスの生存率を改善し得ることが示されている（Ｌｙｕｄｍｉｌａ  Ｇ．Ｂｕｒｄｅｌｙａら、Ａｎ  Ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  Ｈａｓ  Ｒａｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  Ｐｒｉｍａｔｅ  Ｍｏｄｅｌｓ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００８年、３２０（５８７３）：２２６〜２３０頁）。研究によって、サルモネラのフラゲリンタンパク質誘導体ならびにＮおよびＣ末端に保存されたドメインを含有するその他の誘導体は放射線保護を有し、マウスの骨髄中の造血幹細胞の数を効果的に改善させることができ、致死的照射によって引き起こされるマウスの死を効果的に予防することが見出された。その機構は、ＮＦ−κＢシグナル経路による抗アポトーシスの役割である可能性がある。これは、このタンパク質は抗放射線薬の開発に応用できることを意味する。抗放射線薬以外にサルモネラフラゲリン誘導体に関する報告はない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｌｙｕｄｍｉｌａ  Ｇ．Ｂｕｒｄｅｌｙａら、Ａｎ  Ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  Ｈａｓ  Ｒａｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  Ｐｒｉｍａｔｅ  Ｍｏｄｅｌｓ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００８年、３２０（５８７３）：２２６〜２３０頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、ＩＢＤの予防および治療において、ＣＺＬＣ３３１と称するサルモネラのフラゲリン誘導体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ＣＺＬＣ３３１は、本発明において、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）およびクローン病（ＣＤ）などのＩＢＤに対して優れた予防および治療効果を有する。したがって、このタンパク質は、ＩＢＤの予防および治療のための候補薬物として開発することができる。
【０００７】
本発明におけるＣＺＬＣ３３１は、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチド（Ｔａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、サルモネラフラゲリンのＮ末端からアミノ酸残基１〜１７６および４０２〜５０５を含む。融合タンパク質は、フレキシブルリンカーペプチドによって連結することができる。
【０００８】
ＣＺＬＣ３３１は、従来の原核細胞発現を使用して調製することができ、その純度は９５％を上回る。ＣＺＬＣ３３１の調製方法には、以下のステップが含まれる。
【０００９】
１）ＣＺＬＣ２９６のコーディング遺伝子を合成し、ヌクレオチド配列は配列Ｉに示される。ＣＺＬＣ２９６は、Ｎ末端１〜１７６とＮ末端４０２〜５０５のアミノ酸残基との間のフレキシブルアームによって連結される。
【００１０】
２）サルモネラフラゲリン誘導体ＣＺＬＣ２９６をコードするＤＮＡ配列を、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列を保持する原核細胞発現ベクターにサブクローニングした。サルモネラフラゲリン誘導体ＣＺＬＣ２９６をコードする人工的に合成されたＤＮＡ配列を、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列を保持する原核細胞発現ベクターにサブクローニングした。これにより、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドとサルモネラフラゲリン誘導体ＣＺＬＣ２９６のコーディングジーンの両方を保持する原核細胞発現ベクターを作製できる。フラゲリン誘導体はＣＺＬＣ３３１と称され、ヌクレオチド配列を配列ＩＩに示す。
【００１１】
３）組換え発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１を宿主細胞内に形質転換した。
【００１２】
４）Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列およびＣＺＬＣ２９６の原核細胞発現ベクターを保持する宿主細菌を誘導し、発現させた。
【００１３】
５）組換えタンパク質を単離および精製し、ＣＺＬＣ３３１のタンパク質を得た。
【００１４】
Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列を保持する原核細胞発現ベクターは、ＣＺＬＣ３３１、ｐＥＴ−２２ｂ、ｐＥＴ−２８またはｐＥＴ−１５の調製における大腸菌の１つの原核細胞発現ベクターであり、ｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔが最も良い。ＣＺＬＣ３３１の原核細胞発現ベクターは、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドのコーディング配列を保持するｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１である。
【００１５】
宿主細菌は、ステップ３）において大腸菌ＢＬ２ｌ（ＤＥ３）、大腸菌ＥＲ２５６６（ＤＥ３）、大腸菌ＢＬ２ｌ（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ、大腸菌ＪＭ１０９、大腸菌ＨＢ１０１または大腸菌Ｔｏｐｌ０である。最も良い宿主細菌は、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）である。
【００１６】
ＣＺＬＣ３３１タンパク質を含有する薬物は、注射剤、経口剤、浣腸剤、カプセル、腸溶コーティング錠、散剤または錠剤に調製することができ、本発明では、注射剤、浣腸剤または腸溶コーティング錠がより良い。
【００１７】
前述の薬物は、薬学分野における従来の方法に従って、様々な剤形で投与することができる。
【００１８】
ＣＺＬＣ３３１の活性薬学成分は、カプセル、腸溶コーティング錠、散剤、または顆粒中１〜３５％であってもよい。
【００１９】
ＣＺＬＣ３３１の濃度は、注射、経口および浣腸用液体剤形中２〜６４ｇ／Ｌであってもよい。
【００２０】
必要ならば、吸収促進剤、界面活性剤、滑沢剤、安定化剤、希釈剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、希釈剤、吸着担体および賦形剤を含む１種または複数の薬学的に許容される賦形剤も、前記薬物に添加することができる。必要ならば、着色剤、甘味料および香味料も添加することができる。
【００２１】
具体的に、薬物はタンパク質注射剤であり、この薬物の成分は、質量／体積の比が５％（５ｇ／１００ｍｌ）のＣＺＬＣ３３１、塩化ナトリウム（０．８５％、０．８５ｇ／１００ｍｌ）および注射用水である。
【００２２】
あるいは、薬物はコーティング錠であり、その成分の重量比は、ＣＺＬＣ３３１  １００、ラクトース  ６０、微結晶セルロース  ２０、カルボキシメチルスターチナトリウム  ２０、ポビドンＫ３０  １０である。混合後の成分を粒状にする。次いで、均一に混合された錠剤を乾燥粒子２５００：タルク錠剤化剤５０によって作製し（重量比）、噴霧コーティングされた腸溶フィルムコーティング層をテーブルサイド（ｔａｂｌｅ  ｓｉｄｅ）に作製する。
【００２３】
この薬物の用量は一般的に、ＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２〜６．４ｍｇ／ｋｇ体重で、１日１〜２回投与され、期間は５〜１０日間である。注射は、筋肉内注射、腹腔内注射または静脈内注射によって投与することができる。
【００２４】
本発明では、ＩＢＤにおけるＣＺＬＣ３３１の新たな適用を示す。ＣＺＬＣ３３１は、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）の投与によるヒト潰瘍性大腸炎の模倣実験を通して、ＩＢＤに対して明らかな予防および治療効果を有する。結果は、１）モデル群：マウスの摂食／摂水が著しく低下し、活動が低下し、便中に血液が伴う。結腸において鬱血、浮腫、出血および潰瘍が明らかに認められる。顕微鏡下で、細胞構造障害、杯状細胞の消失、リンパ球および好中球の浸潤が明らかに認められる。２）腹腔内投与群：マウスの摂食／摂水は正常まで回復し、活動は著しく増加し、便中の血液は低下する。結腸における明らかな鬱血、浮腫、出血および潰瘍は著しく低下する。さらに、顕微鏡下での細胞構造障害、杯状細胞の消失、リンパ球および好中球の浸潤は著しく低下する。実験結果によって、ＣＺＬＣ３３１の腹腔内注射は腸損傷における結腸の炎症に対して有効であり、マウスにおける炎症に保護的役割を果たしていることが示される。したがって、ＣＺＬＣ３３１タンパク質は、ＩＢＤに対して活性のある薬物として作製することが可能である。この薬物は以下の利点を有する：１）著しい効果（有効率は１００％で、治癒率は７０％である）、一方、臨床薬スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅｉｓ）の有効率は約９０％にすぎず、著効率は５０％のみであった；２）迅速な作用発現（投与後、作用発現まで２４時間）、スルファサラジンでは約２週間、その後、症状は改善した；３）短い治療期間（治療は通常５〜１０日間）、スルファサラジン治療は通常約６週間；４）安全（非毒性）、スルファサラジンアラニンを服用した患者はアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が上昇し、これらは肝毒性があることを示唆する；５）少ない副作用（著しい副作用がない）、しかし、スルファサラジン服用後では、悪心、発疹、好中球減少がある、６）簡便な処方（１日１回の腹腔内注射）、スルファサラジンでは経口的に３〜４ｇ／日、１日３〜４回である。要約すると、ＣＺＬＣ３３１は、ＩＢＤの既存の治療薬の不十分な有効性、遅い作用発現、長い治療期間、副作用を解決することができ、患者の苦痛を著しく低下させ、身体的リハビリテーションを促進し、患者の生活の質を向上させることができる。これは本発明のＩＢＤの予防および治療において重要な役割を果たし、広範な応用が見込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、ＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇで０．５時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸外観を示した図である。
【図２】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、ＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇで０．５時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸粘膜を示した図である。
【図３】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、ＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇで０．５時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸粘膜ＨＥ染色を示した図である。
【図４】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で０．５時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸外観および結腸粘膜を示した図である。
【図５】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で様々な時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸外観を示した図である。
【図６】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で様々な時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸外観および結腸粘膜を示した図である。
【図７】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で様々な時間治療した後のＵＣを有するマウスの結腸粘膜ＨＥ染色を示した図である。
【図８】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、ＣＺＬＣ３３１タンパク質３．２ｍｇ／ｋｇで４時間治療した後のＵＣで、ＲＴ−ＰＣＲを使用したＴＬＲ１〜４遺伝子の発現を示した図である。
【図９】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、ＣＺＬＣ３３１タンパク質３．２ｍｇ／ｋｇで４時間治療した後のＵＣで、ＲＴ−ＰＣＲを使用したＴＬＲ６〜９遺伝子の発現を示した図である。
【図１０】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、モデル化０．５時間前にＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇを与えた、ＵＣを有するマウスの結腸外観を示した図である。
【図１１】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるモデル化において、モデル化０．５時間前にＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇを与えた、ＵＣを有するマウスの結腸粘膜を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
サルモネラフラゲリンの新たな特性を研究し、新たな薬物として開発するために、ＣＺＬＣ３３１がＵＣおよびクローン病などのＩＢＤにおいてＴＬＲｓ発現を遮断し、優れた予防および治療効果を有することを見出した。
【００２７】
腸上皮細胞は、ＴＬＲ４の発現を下方制御することによって腸の免疫寛容を維持できることが報告された（Ａｂｒｅｕ  ＭＴ、Ｖｏｒａ  Ｐ、Ｆａｕｒｅ  Ｅ、Ｔｈｏｍａｓ  ＬＳ、Ａｒｎｏｌｄ  ＥＴ、Ａｒｄｉｔ  ｉ  Ｍ．、Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ  ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−４  ａｎｄ  ＭＤ−２  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００１年８月１日；１６７（３）：１６０９〜１６頁）。予期せぬことに、サルモネラフラゲリンは、ＵＣの予防および治療に役割を果たしており、さらなる証拠によって、この効果は結腸におけるＴＬＲの発現のダウン−レギュレーティングによって達成されることが示唆された。
【００２８】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ファミリーは、ショウジョウバエＴｏｌｌタンパク質と相同性を有する受容体タンパク質で、パターン認識受容体に属する。主な機能は、病原体微生物の保存された構造を確認し、様々なシグナル伝達方法によって免疫系を改善することである。ＴＬＲファミリーは、抗感染免疫および先天性免疫において重要な役割を果たし、後天性免疫調節因子にも重要である。病原体を確認した後、ＴＬＲは活性化シグナルを細胞内に送達し、ＮＦ−κＢを含む転写因子を活性化し、ＴＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８などを含む炎症反応促進因子（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒｓ）の産生を誘導し、ＩＬ−１２やＴＮＦのような重要な炎症性因子（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒｓ）の発現レベルや病原体に対する殺傷レベル（ｋｉｌｌｉｎｇ  ｌｅｖｅｌ）をアップレギュレートする。ＩＬ−１２は細胞性免疫応答におけるＴおよびＢリンパ球の誘導において主要調節因子である。これは、病原体に対するＴ細胞応答に特異的な生物学的アジュバントとして使用することができる。したがって、ＴＬＲファミリーは、免疫応答に関与するＩＬ−１２およびＴｈｌ細胞の早期シグナルということができる。ＴＬＲと正常な細菌叢の間のバランスが壊れると、病理学的な腸の炎症が引き起こされる。特に、サルモネラフラゲリンは、結腸組織におけるＴＬＲファミリーの発現のダウン−レギュレーティングに効果があり、ＵＣの治療においてはその役割のため重要な機構であり得る。
【００２９】
サルモネラフラゲリンの１〜１７６および４０２〜５０５アミノ酸のコーディング配列を合成し、全長３３１のサルモネラフラゲリンアミノ酸を原核細胞発現によって調製し、ＣＺＬＣ３３１と称した。これは、ＵＣおよびクローン病などのＩＢＤの優れた予防および治療となることがわかった。これはＩＢＤの予防および治療に重要な関連性を提供する。
【００３０】
詳細な実施形態および具体的な方法を以下に挙げるが、本発明の保護範囲は以下の実施形態に限定されない。本発明で使用した方法は、従来の方法である。
【実施例１】
【００３１】
サルモネラフラゲリンＣＺＬＣ３３１の調製
１．ＣＺＬＣ３３１を発現するための原核細胞発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１の構築
１）ＣＺＬＣ２９６のコーディング遺伝子を合成し、ヌクレオチド配列は配列リスト１に示される。ヌクレオチド配列の長さは８９１ｂｐであり、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｂｏ  Ｍａｉ  Ｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｌｔｄによって合成された。遺伝子は、２％アガロースゲル電気泳動を使用して試験し、その結果、標的遺伝子８９１ｂｐが予測された結果と一致することが示された。
【００３２】
２）組換え発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１の構築
ａ）ＣＺＬＣ２９６タンパク質のコーディング遺伝子をＰＣＲによって増幅した。
【００３３】
配列が８９１ｂｐであるＣＺＬＣ３３１のコーディング遺伝子は、従来のＰＣＲを使用して増幅した。反応系は５０μｌである：プラスミド鋳型は０．５μｌで、ＣＺＬＣ３３１コーディング遺伝子を有するクローニングベクターｐＧＨ−ＣＺＬＣ２９６であり、その方法は、ＣＺＬＣ２９６コーディング遺伝子をクローニングベクターｐＧＨのＳｍａＩ制限部位に挿入する。１０×ｄＮＴＰ  ５μ１、１０×Ｅｘ  Ｔａｑ緩衝液５μ１、上流および下流プライマー０．５μ１で、上流プライマー配列は５’−ＣＧＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＣＴＣＡＡＧＴＴＡＴＣＡ−３’であり、リバースプライマー配列は５’−ＣＣＧＣＴＣＧＡＧＴＣＴＣＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＧＴＴ−３’である。Ｅｘ  Ｔａｑ酵素０．２５μ１、ｄｄＨ２Ｏ  ３８．２５μｌ。ＰＣＲの反応条件は、９５℃４分、９５℃４５秒、５６℃３０秒、７２℃４５秒、全３０サイクルで、その後７２℃で７分である。反応完了後、ＰＣＲ生成物は１％アガロースゲル電気泳動を行い、その結果、８９１ｂｐの増幅ＤＮＡ断片は予測した結果と一致していることが示され、その後、標的断片を回収し、精製した。
【００３４】
ｂ）制限エンドヌクレアーゼを使用した標的遺伝子ＣＺＬＣ２９６およびｐＥＴ２８ｂ−ＴａＴベクターの消化。
【００３５】
ＣＺＬＣ２９６およびｐＥＴ２８ｂ−ＴａＴベクターは、制限エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩおよびＸｈｏＩを使用して消化した。ｐＥＴ２８ｂ−ＴａＴベクターの構築物は、上流にＮｃｏＩおよび下流にＮｄｅＩを有するようにＴＡＴ配列を合成し、その後、制限エンドヌクレアーゼを使用してＴＡＴ配列およびｐＥＴ２８ｂを消化した。回収した断片をＴ４ＤＮＡリガーゼおよび制限消化によって再生した。配列は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄによって確認された。その後、消化した生成物をコンピテント細胞大腸菌ＤＨ５α内にＴ４ＤＮＡリガーゼを使用して１６℃で形質転換した。
【００３６】
ｃ）確認
培養増殖させたクローンを制限酵素による消化および配列決定によって確認した。
【００３７】
配列決定の結果によって、得られた配列および挿入位置は正しく、Ｔａｔタンパク質伝達ペプチドおよびＣＺＬＣ２９６のコーディング配列のための組換え発現ベクターを有していることが示され、ｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１と称した。Ｎ末端がＣＺＬＣ２９６のＴａｔタンパク質伝達ペプチドであるタンパク質はＣＺＬＣ３３１と称した。このコーディングタンパク質配列のヌクレオチド配列を配列リストＮｏ．２に示す。
【００３８】
２．形質転換および細菌の回収
正しく構築された原核細胞発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）内に形質転換し、次にＫａｎａ＋１００μｇ／ｍｌを含有するＬＢプレートにコーティングした。その後、クローンをＫａｎａ＋１００μｇ／ｍＬを含有する５ｍＬ  ＬＢに接種し、細菌を完全に回収するため２２０ｒｐｍで１６時間振盪した。
【００３９】
３．原核細胞発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１の誘導性発現。
【００４０】
細菌を回収し、ＯＤ６００＝０．８まで希釈した。次に、細菌（５ｍｌ）をＫａｎａ＋（最終濃度１００μｇ／ｍｌ）を含有するＬＢ１５０ｍｌに接種した。細菌を３７℃、２２０ｒｐｍで約４〜５時間振盪した。ＯＤ６００が０．６〜１．０の時に、誘導剤ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍＭ）を細菌に迅速に添加し、３０℃、２２０ｒｐｍで８時間誘導させ発現させた。
【００４１】
４．ＣＺＬＣ３３１タンパク質の調製
誘導し発現した細菌は、４℃、１２０００ｒｐｍ、１０分間で収集した。細菌を２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を使用して超音波によって壊して、ＣＺＬＣ３３１タンパク質を調製し、その後ＣＺＬＣ３３１タンパク質を分離して精製した。
【００４２】
５．ＣＺＬＣ３３１タンパク質の分離および精製
未精製のＣＺＬＣ３３１を直接ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰ  ５ｍｌカラム（ＧＥ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入）に添加し、その後、前記の緩衝液４〜５カラム体積を使用してピークベースライン（ｐｅａｋ  ｂａｓｅｌｉｎｅ）を洗浄した。最後に、タンパク質は溶出緩衝液（２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４＋０．５Ｍ  ＮａＣｌ＋０．５Ｍ  イミダゾール、ｐＨ７．４）を使用して洗浄し、その後ＣＺＬＣ３３１を得、純度は９５％を上回っていた。
【実施例２】
【００４３】
ＩＢＤを治療するためのＣＺＬＣ３３１の効果
実験動物：雄ＢＡＬＢ／ｃマウス（７〜８週齢、２５±５ｇ）を軍事医学科学院の実験動物センター（北京、中華人民共和国）から得た。マウスには滅菌した食餌および水を与え、１２時間明／１２時間暗サイクルにした。全動物実験は、軍事医学科学院の動物実験委員会によって承認された。
【００４４】
試薬：２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．から購入した）、ＣＺＬＣ３３１（実施例１において調製）、ＲＴ  ＰＣＲキット  （ＩＤはＦＳＫ１００であり、Ｔｏｙｏｂｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入）。
【００４５】
モデルの作製：麻酔器を使用してマウス（３６時間絶食）をイソフルランで麻酔した。ＩＢＤを誘導するため、３８％エタノール中のＴＮＢＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）１５０ｍｇ／ｋｇ（腸上皮バリアを破壊するため）を、１ｍｌシリンジを装着した、直径２．０ｍｍ、長さ約１０ｃｍのシリコンチューブのマウス強制栄養針（ｇａｖａｇｅ  ｎｅｅｄｌｅ）によって投与し、強制栄養針は先端が肛門縁の近位４ｃｍに位置するまで直腸内に進めた。全注射量は１００μｌであった。
【００４６】
実験動物群：モデル群、治療群および対照群（ｎ＝８）。対照マウスには、前述と同じ方法を使用して３８％エタノールのみを投与し、２日間通常に給餌した。治療群：ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＴＮＢＳ投与の０．５時間後、ＣＺＬＣ３３１（３．２ｍｇ／ｋｇ）で治療的に処置した。同時に、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＴＮＢＳ投与の０．５時間から８時間後にＣＺＬＣ３３１（０．２〜６．４ｍｇ／ｋｇ）で治療的に処置し、２日間通常に給餌した。モデル群のマウスは、ＴＮＢＳ投与後、２日間通常に給餌した。
【００４７】
マウスは、下痢の出現、体重の変化および全体の死亡数をモニターした。ＴＮＢＳ投与２日間の実験終了時に、生存したマウスを殺処分し、血液試料を心臓穿刺によって収集し、結腸の７ｃｍ部分を肉眼的（図１、図４左および図５）および顕微鏡的（図２、図４右および図６）損傷評価のために取り出した。そして、生理食塩水を使用して洗浄した後の結腸の端を追跡試験のために−８０℃で凍結維持した。
【００４８】
１．結果によって、モデルマウスにおいて摂食／摂水および活動は著しく低下し、便中に血液があることが示された。モデル化によって、著しい鬱血、浮腫、出血および潰瘍が認められた。ＴＮＢＳモデル化における、ＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇでの０．５時間治療後の、潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸外観および結腸粘膜を図１および２に示し、Ａは対照群、Ｂはモデル群、Ｃは治療群である。結果は、モデル群において、顕微鏡下で、細胞の構造障害、杯状細胞の消失、リンパ球および好中球の浸潤があった。ＴＮＢＳモデル化において、ＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇでの０．５時間治療後の潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸粘膜ＨＥ染色を図３に示し、Ａは対照群、Ｂはモデル群、Ｃは治療群である。便中の血液、摂食の減少および動きの減少の現象は低下した。鬱血、浮腫、出血の現象は低下し始めた、例えば、図１、図２、図４（ＴＮＢＳモデル化において様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質での０．５時間治療後の潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸外観および結腸粘膜。Ａ．ＣＺＬＣ３３１  ０．２ｍｇ／ｋｇ、Ｂ．ＣＺＬＣ３３１  ０．４ｍｇ／ｋｇ、Ｃ．ＣＺＬＣ３３１  ０．８ｍｇ／ｋｇ、Ｄ．ＣＺＬＣ３３１  １．６ｍｇ／ｋｇ）、図５（ＴＮＢＳモデル化において様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で様々な時間治療した後の潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸外観。Ａ．ＣＺＬＣ３３１  ０．２ｍｇ／ｋｇ、Ｂ．ＣＺＬＣ３３１  ０．４ｍｇ／ｋｇ、Ｃ．ＣＺＬＣ３３１  ０．８ｍｇ／ｋｇ、Ｄ．ＣＺＬＣ３３１  １．６ｍｇ／ｋｇ、Ｅ．ＣＺＬＣ３３１  ３．２ｍｇ／ｋｇ、Ｆ．ＣＺＬＣ３３１  ６．４ｍｇ／ｋｇ）図６（ＴＮＢＳモデル化において様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で様々な時間治療した後の潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸外観および結腸粘膜。Ａ．ＣＺＬＣ３３１  ０．２ｍｇ／ｋｇ、Ｂ．ＣＺＬＣ３３１  ０．４ｍｇ／ｋｇ、Ｃ．ＣＺＬＣ３３１  ０．８ｍｇ／ｋｇ、Ｄ．ＣＺＬＣ３３１  １．６ｍｇ／ｋｇ、Ｅ．ＣＺＬＣ３３１  ３．２ｍｇ／ｋｇ、Ｆ．ＣＺＬＣ３３１  ６．４ｍｇ／ｋｇ）。細胞の構造はきちんと整列し、杯状細胞の数は少なく、リンパ球および好中球浸潤が消失した（図３および図７）。
【００４９】
対照マウスでは、食餌摂取および水摂取は正常で、便中の血液および活動の低下はなかった。細胞はきちんと列に並び、杯状細胞の減少およびリンパ球および好中球の浸潤はなかった。
【００５０】
２．組織学的検査：結腸試料を４％緩衝化ホルマリンで一晩固定し、その後７０％エタノールに移し、切片を作製するためにパラフィンに封入し、次いで組織学的差違を調べるためにヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【００５１】
ＴＮＢＳモデル化においてＣＺＬＣ３３１タンパク質０．２ｍｇ／ｋｇで０．５時間治療した後の潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸粘膜ＨＥ染色を図３に示す。ＴＮＢＳモデル化において様々な濃度のＣＺＬＣ３３１タンパク質で様々な時間治療した後の潰瘍性大腸炎を有するマウスの結腸粘膜ＨＥ染色を図７に示す（Ａ．ＣＺＬＣ３３１  ０．２ｍｇ／ｋｇ、Ｂ．ＣＺＬＣ３３１  ０．４ｍｇ／ｋｇ、Ｃ．ＣＺＬＣ３３１  ０．８ｍｇ／ｋｇ、Ｄ．ＣＺＬＣ３３１  １．６ｍｇ／ｋｇ、Ｅ．ＣＺＬＣ３３１  ３．２ｍｇ／ｋｇ、Ｆ．ＣＺＬＣ３３１  ６．４ｍｇ／ｋｇ）。細胞はきちんと列に並び、杯状細胞の減少およびリンパ球および好中球の浸潤がないことは、十分な治療結果であったことを意味する。
【００５２】
３．ＴＬＲファミリーの発現
結腸試料を指示された時間に取り出し、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）で洗浄し、小片に切断した。対照群、モデル化群および治療群である結腸試料の全ＲＮＡをＴｏｔａｌＲＮＡキットＩＩ（Ｏｍｅｇａ、日本）によって、製造者の使用説明書に従って抽出し、次いで逆転写システム（Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ））によって逆転写した。その後、ＴＬＲｓおよびβ−アクチンを、以下のプライマー（表１）を使用してＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲの反応系は５０μｌで、Ｅｘ  Ｔａｑ  ０．２５μｌ、１０×緩衝液  ５μｌ、ｄＮＴＰ  ５μｌ、鋳型  ２μｌ、上流および下流プライマー  １μ１、ｄｄＨ２Ｏ  ３５．７５μｌであった。ＰＣＲの反応条件は、９５℃５分、９５℃４５秒、６２℃４５秒、７２℃１分、全２５サイクルで、その後７２℃で５分である。ＰＣＲ生成物は、２％アガロースゲル電気泳動に続いて画像分析ソフトウェアによって確認した。
【００５３】
結果は、ＴＬＲファミリーの発現は、図８および図９において、ＣＺＬＣ３３１治療後のモデル群で著しく異なっていた。ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９の発現はモデル群では著しく上昇し、発現はＣＺＬＣ３３１療法後に変化した。ＴＬＲ６およびＴＬＲ７の発現もモデル群で著しく上昇したが、ＣＺＬＣ３３１療法後に著しい差違はなかった。
【００５４】
治療および機構はまた、ＴＬＲファミリーの発現の低下と関連する可能性がある。さらに、ＩＢＤのＣＺＬＣ３３１による療法がＴＬＲファミリーの経路によって有効となり、これはＩＢＤ治療用の薬物となり得ることが示唆された。
【００５５】
【表１】
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【実施例３】
【００５６】
ＩＢＤに対するＣＺＬＣ３３１タンパク質の予防効果
実験動物：実施例２と同じ。
【００５７】
試薬：実施例２と同じ。
【００５８】
モデル作製：実施例２と同じ。
【００５９】
実験動物群：モデル群、予防群および対照群（ｎ＝８）。予防群：ＢＡＬＢ／ｃマウスはＴＮＢＳ投与前にＣＺＬＣ３３１（３．２ｍｇ／ｋｇ）で治療的に処置し、次いで、マウスにＴＮＢＳおよび通常の食餌２日間を与えた。モデル群には、ＴＮＢＳ投与後、２日間通常に給餌した。対照マウスには、前述と同じ方法を使用して３８％エタノールのみを投与し、通常に給餌した。
【００６０】
試験内容および試験方法：実施例２と同じ。
【００６１】
結果によって、モデルマウスにおいて摂食／摂水および活動は著しく低下し、便中に血液があることが示された。モデル化において著しい鬱血、浮腫、出血および潰瘍が認められた（図１０、Ａ．対照群、Ｂ．モデル化群、Ｃ．予防群）。便中の血液、摂食の減少および動きの減少は低下し、鬱血、浮腫、出血は低下し始めた（図１１、Ａ．対照群、Ｂ．モデル化群、Ｃ．予防群）。これらの結果は、ＣＺＬＣ３３１がＩＢＤの予防に予防効果を有し、ＩＢＤを予防するための薬物となり得ることを示した。
【実施例４】
【００６２】
ＣＺＬＣ３３１注射の調製
１．組成物：ＣＺＬＣ３３１注射（５質量／体積％（ｍｇ／ｍＬ）ＣＺＬＣ３３１タンパク質）、０．８５％塩化ナトリウムおよび注射用水。
【００６３】
２．ＣＺＬＣ３３１タンパク質注射の調製法：
１）正しく構築された原核細胞発現ベクターｐＥＴ２８ｂ−Ｔａｔ−ＣＺＬＣ３３１を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換し、次にＫａｎａ＋１００μｇ／ｍｌを含有するＬＢプレートにコーティングした。その後、クローンをＫａｎａ＋１００μｇ／ｍｌを含有する５ｍＬ  ＬＢに接種し、細菌を２２０ｒｐｍで１６時間振盪した。
【００６４】
２）細菌を回収し、ＯＤ６００＝０．８まで希釈した。次いで、細菌（５ｍｌ）をＫａｎａ＋を含有するＬＢ１５０ｍｌに接種した（Ｋａｎａ＋最終濃度１００μｇ／ｍｌ）。細菌を３７℃、２２０ｒｐｍで約４〜５時間振盪した。誘導剤ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍＭ）を、ＯＤ６００が０．６〜１．０の時に細菌に迅速に添加し、３０℃、２２０ｒｐｍで８時間誘導させ発現させた。
【００６５】
３）誘導し発現した細菌は、４℃、１２０００ｒｐｍ、１０分間で収集した。細菌は２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を使用して超音波で破壊してＣＺＬＣ３３１タンパク質を調製した。未精製のＣＺＬＣ３３１を直接ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰ  ５ｍｌカラム（ＧＥ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入）に添加し、その後、前記の緩衝液４〜５カラム体積を使用してピークベースラインを洗浄した。最後に、タンパク質は溶出緩衝液（２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４＋０．５Ｍ  ＮａＣｌ＋０．５Ｍ  イミダゾール、ｐＨ７．４）を使用して洗浄し、その後ＣＺＬＣ３３１を得た。
【００６６】
４）ＣＺＬＣ３３１タンパク質を注射水に溶解し、次いで塩化ナトリウムを添加し、均一に撹拌した。０．３％（質量／体積）で乾燥加熱処理した活性炭を、１５分間吸着させるためにこの溶液に添加し、この溶液を濾過して透明にして保管した。フィルターは３種類のフィルター：脱炭用のチタンフィルター、０．４５μｍカートリッジフィルターフィルタリングおよび０．２２μｍドラムフィルタークリーニング濾過器を含む。
【実施例５】
【００６７】
ＣＺＬＣ３３１タンパク質腸溶コーティング錠の調製
１．ＣＺＬＣ３３１タンパク質１００ｇを計量し、１００メッシュの篩に通す。ラクトース６０ｇ、微結晶セルロース２０ｇ、カルボキシメチルスターチナトリウム２０ｇ、ポビドンＫ３０  １０ｇを８０メッシュの篩に通す。主要な薬物および付属物を等分に増加させる（ｅｑｕａｌ  ｉｎｃｒｅｍｅｎｔｓ）原理に従って混合し、その後その他の材料を３０％体積比で添加した。最後に、薬物を２０メッシュに通して顆粒化し、湿式顆粒を得る。
【００６８】
２．ＣＺＬＣ３３１タンパク質を５５〜６５℃で３時間乾燥し、２０メッシュで篩った後乾燥ペレットを得た。タルク５０ｇをＣＺＬＣ３３１のペレット２５００ｇに添加し、混合した。混合されたタンパク質の含量を決定した。決定したペレットを速度および加圧に適する錠剤機に送り、直径１．２ｃｍのプラトデ（ｐｌａｔｏｄｅ）ＣＺＬＣ３３１タンパク質錠に圧縮した。
【００６９】
３．腸溶コーティングは、ｐｌａｔｏｄｅ  ＣＺＬＣ３３１錠に約１．０ｍｍ塗布した。コーティング材料はＥ０ＢＳ６８で、この腸溶コーティングは気密で水分を含み、コーティング強度は強く、胃液に耐性がある。薬物の効果的かつ安全な放出は、溶液のｐＨを変化させることによって実施される。
【００７０】
有効性の分析：
活性成分としてのＣＺＬＣ３３１タンパク質を、ＩＢＤを予防し治癒させるための薬物に調製した。これは以下の特性を有する：
１）高効率：実験データは、実施例２および実施例３において、摂食および活動が少なく、便中の血液がある動物は全て、治療群および予防群において著しく改善されたことを示している。これらの結果は、有効率が１００％であることを示した。回収した結腸粘膜の有効率は、治療群では７５％である。臨床薬スルファサラジンの有効率は約９０％にすぎず、著効率は５０％のみであった。
【００７１】
２）迅速な作用発現：実験データは、実施例２および実施例３において全動物が治療後２４時間で効果を示し、一方、スルファサラジンの服用では約２週間かかることを示す。
【００７２】
３）治療期間は短い（通常５〜１０日）：スルファサラジン治療は一般的に約６週間である。この薬物を使用する治療期間は１〜２日であり、スルファサラジンの効果はほぼ１週間で、臨床的作用発現は６週間である。したがって、治療期間は本発明では５〜１０日である。
【００７３】
４）高い安全性（非毒性）：スルファサラジンを服用した患者のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）は増加したので、肝毒性があることが示唆される。ＣＺＬＣ３３１はタンパク質薬に属し、抗放射線薬として使用されており、身体に対して非毒性である。
【００７４】
５）副作用（著しい副作用はない）：スルファサラジン服用後、悪心、発疹、好中球減少があるが、これはタンパク質薬で、抗放射線薬として使用されており、身体に対して著しい副作用はない。
【００７５】
６）簡便（１日１回の腹腔内注射）：スルファサラジンの使用は経口的に３〜４ｇ／ｄで、１日３〜４回に分ける必要がある。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明は、ＩＢＤの予防および治療において、サルモネラＣＺＬＣ３３１のフラゲリン誘導体を提供する。これは、有効性が高く、作用発現が早く、治療期間が短く、非毒性で、副作用が少なく、処方が簡便である。ＣＺＬＣ３３１は、ＩＢＤの既存の治療薬の不十分な有効性、遅い作用発現、長い治療期間、副作用を解決することができ、患者の苦痛を著しく低下させ、身体的リハビリテーションを促進し、患者の生活の質を向上させることができる。ＣＺＬＣ３３１は本発明におけるＩＢＤの予防および治療において重要な役割を果たし、広範な応用が見込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
0005876930.tif 000011
【図１０】
0005876930.tif 000012
【図１１】
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【配列表】
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