(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
主要含有成分としてビタミンＨ（ビオチン），スフィンゴミエリン，ビタミンＢ１２を含有し、その他の成分として、葉酸，Ｎａ（ナトリウム），Ｃｌ（塩化物），Ｋ（カリウム），ＩＰ（無機リン），Ｃａ（カルシウム），Ｍｇ（マグネシウム），Ｆｅ（鉄），Ｃｕ（銅），Ｚｎ（亜鉛），エタノール，乳酸を成分として含有した培地を選定し、前記選定した培地で乳酸菌を培養して、ビタミンＨ（ビオチン） ３．７ｎｇ／ｍｌ，スフィンゴミエリン ０．２ｍｇ／ｍｌ，ビタミンＢ１２ １５６ｐｇ／ｍｌ，葉酸 ０．３ｎｇ／ｍｌ，Ｎａ（ナトリウム） ５ｍＥｑ／ｌ，Ｃｌ（塩化物） ２１ｍＥｑ／ｌ，Ｋ（カリウム） １．０ｍＥｑ／ｌ，ＩＰ（無機リン） ０．３ｍＥｑ／ｌ，Ｃａ（カルシウム） ０．３ｍＥｑ／ｌ，Ｍｇ（マグネシウム） ０．５ μｇ／ｇ，Ｆｅ（鉄） ５μｇ／ｇ，Ｃｕ（銅） ０．１未満 μｇ／ｌ，Ｚｎ（亜鉛） １未満μｇ／ｇ，エタノール ０．２％ｖ／ｖ，乳酸 ２．５８％を成分として含む抽出液を抽出することを特徴とする乳酸菌共生培養抽出液の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌群を培養して抽出した乳酸菌共生培養抽出液の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
例えば甘藷茎葉から加工した健康食品（特開２００６−３０６８５１号公報）、葛花から加工した健康食品（特開２００６−２６２８８８号公報）、樹皮から抽出した腸内菌改善剤（特開２００７−３０８３７３号公報）、スフィンゴミエリンを含有した飲料品（特開２００７−１１２７９３号公報）、アセロラ果実を発酵させたアセロラ発酵物（特開２００５−２５３４６３号公報）、或いはスフィンゴミエリンを有効成分として含有したインタフェロン産生増強用薬剤（特許第３５１９７４９号公報）などが開発されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−３０６８５１号公報
【特許文献２】特開２００６−２６２８８８号公報
【特許文献３】特開２００７−３０８３７３号公報
【特許文献４】特開２００７−１１２７９３号公報
【特許文献５】特開２００５−２５３４６３号公報
【特許文献６】特許第３５１９７４９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
２００６年９月に文部科学省で決定された「新型インフルエンザ対策行動計画」では、「大学等の閉鎖を行い、極力外出を控えることと併せて、閉鎖期間中の各大学等と学生との連絡方法を明確にし、閉鎖期間中の学生生活について十分な指導を行う」ことなどが定められていた。
【０００５】
最近、メキシコで鳥インフルエンザではなく、インフルエンザが新型インフルエンザに変異して、日本を含む世界中に猛威をふるっており、ＷＨＯでは最盛期のフェーズ６として認定することにより警戒を呼びかけている。
【０００６】
また、情報の過多などにより、ストレスが蓄積しやすい状況にあり、過敏性大腸炎や旅行者下痢などの消化器系の疾患、或いはアレルギー皮膚炎などの疾患が多発していることも事実である。
【０００７】
以上のようなことを考えると、栄養補助食品であっても、インフルエンザの抑制や前記疾患の抑制などに寄与して健康増進の手助けになればと考えるものである。
【０００８】
本発明の目的は、乳酸菌群を培養して抽出した乳酸菌共生培養抽出液であって、インフルエンザの抑制や前記疾患の抑制などに寄与できる乳酸菌共生培養抽出液を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記目的を達成するため、本発明に係る乳酸菌共生培養抽出液の製造方法は、主要含有成分としてビタミンＨ（ビオチン），スフィンゴミエリン，ビタミンＢ１２を含有し、その他の成分として、葉酸，Ｎａ（ナトリウム），Ｃｌ（塩化物），Ｋ（カリウム），ＩＰ（無機リン），Ｃａ（カルシウム），Ｍｇ（マグネシウム），Ｆｅ（鉄），Ｃｕ（銅），Ｚｎ（亜鉛），エタノール，乳酸を成分として含有した培地を選定し、前記選定した培地で乳酸菌を培養して、ビタミンＨ（ビオチン） ３．７ｎｇ／ｍｌ，スフィンゴミエリン ０．２ｍｇ／ｍｌ，ビタミンＢ１２ １５６ｐｇ／ｍｌ，葉酸 ０．３ｎｇ／ｍｌ，Ｎａ（ナトリウム） ５ｍＥｑ／ｌ，Ｃｌ（塩化物） ２１ｍＥｑ／ｌ，Ｋ（カリウム） １．０ｍＥｑ／ｌ，ＩＰ（無機リン） ０．３ｍＥｑ／ｌ，Ｃａ（カルシウム） ０．３ｍＥｑ／ｌ，Ｍｇ（マグネシウム） ０．５ μｇ／ｇ，Ｆｅ（鉄） ５μｇ／ｇ，Ｃｕ（銅） ０．１未満 μｇ／ｌ，Ｚｎ（亜鉛） １未満μｇ／ｇ，エタノール ０．２％ｖ／ｖ，乳酸 ２．５８％を成分として含む抽出液を抽出することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、治験の結果、アレルギー反応の抑制の効果やＮＫ細胞の活性化、免疫機能，過敏性大腸炎や旅行者下痢症，旅行者下痢症，潰瘍性大腸炎，食中毒などの消化器系の改善，アレルギー皮膚炎，免疫機能，抗加齢効果（アンチエイジング）などの効能の発揮，食品の食感向上，日持ち（防腐効果），糖尿病の予防等の効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験１の結果を示す図である。
【図２】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験２の結果を示す図である。
【図３】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験３の結果を示す図である。
【図４】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験４の結果を示す図である。
【図５】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験６の結果を示す図である。
【図６】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験７の結果を示す図である。
【図７】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験８の結果を示す図である。
【図８】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験８の結果を示す図である。
【図９】本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いた治験８の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施形態を図に基づいて詳細に説明する。
【００１３】
本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液の製造方法は、主要含有成分としてビタミンＨ（ビオチン），スフィンゴミエリン，ビタミンＢ１２を含有し、その他の成分として、葉酸，Ｎａ（ナトリウム），Ｃｌ（塩化物），Ｋ（カリウム），ＩＰ（無機リン），Ｃａ（カルシウム），Ｍｇ（マグネシウム），Ｆｅ（鉄），Ｃｕ（銅），Ｚｎ（亜鉛），エタノール，乳酸を成分として含有した培地を選定し、前記選定した培地で乳酸菌を培養して、ビタミンＨ（ビオチン） ３．７ｎｇ／ｍｌ，スフィンゴミエリン ０．２ｍｇ／ｍｌ，ビタミンＢ１２ １５６ｐｇ／ｍｌ，葉酸 ０．３ｎｇ／ｍｌ，Ｎａ（ナトリウム） ５ｍＥｑ／ｌ，Ｃｌ（塩化物） ２１ｍＥｑ／ｌ，Ｋ（カリウム） １．０ｍＥｑ／ｌ，ＩＰ（無機リン） ０．３ｍＥｑ／ｌ，Ｃａ（カルシウム） ０．３ｍＥｑ／ｌ，Ｍｇ（マグネシウム） ０．５ μｇ／ｇ，Ｆｅ（鉄） ５μｇ／ｇ，Ｃｕ（銅） ０．１未満 μｇ／ｌ，Ｚｎ（亜鉛） １未満μｇ／ｇ，エタノール ０．２％ｖ／ｖ，乳酸 ２．５８％を成分として含む抽出液を抽出することを特徴とするものである。
【００１４】
本発明の実施形態では、前記選定した乳酸菌群を培養して抽出した抽出液中に含まれる主要含有成分を調べた。その測定をするにあたって、サンプルとして複数の前記抽出液を用意した。任意に１つのサンプルの抽出液を選択して、その成分を調べた結果、次のような結果を得た。
ビタミンＨ（ビオチン）                  ３．７      ｎｇ／ｍｌ
スフィンゴミエリン                      ０．２      ｍｇ／ｍｌ
ビタミンＢ１２                          １５６      ｐｇ／ｍｌ
が主要含有成分として検出できた。
この成分の他に、
葉酸                                    ０．３      ｎｇ／ｍｌ
が含まれていた。また、微量ながら、Ｎａ（ナトリウム）、Ｃｌ（塩分）、Ｋ（カリウム）、ＩＰ（無機リン）、Ｃａ（カルシウム）、Ｍｇ（マグネシウム）、Ｆｅ（鉄）、Ｃｕ（銅）、Ｚｎ（亜鉛）、エタノールも含まれていた。これらの含有成分が抽出液中に含有されている含有量の一例を示すと、次のような含有量であった。
Ｎａ（ナトリウム）                      ５          ｍＥｑ／ｌ
Ｃｌ（塩化物）                            ２１        ｍＥｑ／ｌ
Ｋ（カリウム）                          １．０      ｍＥｑ／ｌ
ＩＰ（無機リン）                        ０．３      ｍＥｑ／ｌ
Ｃａ（カルシウム）                      ０．３      ｍＥｑ／ｌ
Ｍｇ（マグネシウム）                    ０．５      μｇ／ｇ
Ｆｅ（鉄）                              ５          μｇ／ｇ
Ｃｕ（銅）                              ０．１未満  μｇ／ｌ
Ｚｎ（亜鉛）                            １未満      μｇ／ｇ
エタノール                              ０．２      ％ｖ／ｖ
乳酸                                    ２．５８％
【００１５】
次に、残りの複数のサンプル用抽出液に含有する前記主要含有成分の含有量を同様に調べた。その結果に基づくと、本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液に含まれる主成分であるビタミンＨ（ビオチン），スフィンゴミエリン，ビタミンＢ１２のそれぞれの含有量は、次の様な範囲に含まれるものであった。なお、前記主成分の含有量が範囲をもつ現象は、乳酸菌を培養する環境及び抽出液を抽出する過程などにおいて条件が微妙に変化することに起因しているものと考えている。
ビタミンＨ（ビオチン）    最小値３．３ｎｇ／ｍｌ〜最大値４．１ｎｇ／ｍｌ
スフィンゴミエリン        最小値０．１８ｍｇ／ｍｌ〜最大値０．２２ｍｇ／ｍｌ
ビタミンＢ１２            最小値１４０．０ｐｇ／ｍｌ〜最大値１７１．６ｐｇ／ｍｌ
葉酸については、最大値で０．３ｎｇ／ｍｌ含まれており、サンプルの抽出液によっては、微量である場合もあり、葉酸の含有量は、０．３ｎｇ／ｍｌ〜０．０３ｎｇ／ｍｌの範囲が望ましいものである。
【００１６】
発明者は、次のような主要成分を含有する抽出液を抽出し、これらの乳酸菌共生培養抽出液を用いて各種の治験を行い、本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液の有効性、効能を調べた。
（サンプル１）
ビタミンＨ（ビオチン）            ３．３ｎｇ／ｍｌ
スフィンゴミエリン              ０．１８ｍｇ／ｍｌ
ビタミンＢ１２                １４０．０ｐｇ／ｍｌ
（サンプル２）
ビタミンＨ（ビオチン）            ３．７ｎｇ／ｍｌ
スフィンゴミエリン                ０．２ｍｇ／ｍｌ
ビタミンＢ１２                    １５６ｐｇ／ｍｌ
(サンプル３)
ビタミンＨ（ビオチン）            ４．１ｎｇ／ｍｌ
スフィンゴミエリン                ０．２２ｍｇ／ｍｌ
ビタミンＢ１２                １７１．６ｐｇ／ｍｌ
【００１７】
なお、葉酸については、厚生労働省も「妊婦さんは積極的に１日４００μｇの葉酸を摂るように」と推奨している。本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液には、ビタミンＨ（ビオチン）、ビタミンＢ１２を主要成分としており、これらとともに葉酸を摂取することになるから、葉酸の含有による有効性及び効能は十分に予測できるものと考える。
【００１８】
以下、上述したサンプル１〜３の乳酸菌共生培養抽出液を用いて次の治験１〜８をそれぞれ行った結果について説明する。
【００１９】
本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液は、乳酸菌群を培養して抽出したものであり、過敏性大腸炎，旅行者下痢症，潰瘍性大腸炎，食中毒などの消化器系の改善、アレルギー皮膚炎，免疫機能，抗加齢効果（アンチエイジング）などの種々の効能の発揮，食品の食感向上，日持ち（防腐効果），糖尿病の予防などへの効果が期待されているばかりでなく、動物に適用しても、整腸作用，食欲増進作用，免疫増強による感染症改善作用・抗炎症作用の効果があると期待されている。
【００２０】
（治験１）
そこで、乳酸菌共生培養抽出液の飲用が免疫バランスにどのように作用しているかを血液中のＩＦＮ−γとＩＬ−４とを測定することにより調べた。
【００２１】
また、乳酸菌共生培養抽出液を飲用する組と、擬似薬を飲用する組とに分類し、プラセボ効果についても調べた。
【００２２】
（治験方法）
事前に被験者（２２歳  男性１名  女性  ５名の計６名）に対し、実験の趣旨及び方法について説明し被験者の同意を得て治験を行った。
被験者６名のうち３名は乳酸菌共生培養抽出液を、他の３名は擬似薬を、それぞれ１日５ｍｌを１週間、毎朝飲用してもらった。そして、毎日午前１０時に採血を行い、血清を得た。被験者には、プラセボ効果を観察するため、どちらを飲用したかについては事前に告知しなかった。
【００２３】
免疫バランスを調べるために、血液中のサイトカインＩＦＮ−γとＩＬ−４との測定を行い、プラセボ効果の有無について治験を行った。前記測定は、採血を行い、その後に血清分離を行い、その分離した血清を−２０°Ｃで保存し、サイトカイン測定キットFlow Cytomix（BECKMAN  COULTER）を使用し、フローサイトメトリ法によりサイトカインＩＦＮ−γとＩＬ−４を測定した。
【００２４】
（効果）
図１は、治験の結果である飲用日数とＴｈ１／Ｔｈ２の変化量（％）との関係を示している。図１の横軸は飲用日数、縦軸はＴｈ１／Ｔｈ２の変化量（％）を表している。また、図１の実線は前記乳酸菌共生培養抽出液を飲用した場合、点線は擬似薬を飲用した場合をそれぞれ示している。
【００２５】
図１に示す治験結果から明らかなように、前記乳酸菌共生培養抽出液を飲用すると、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４（Ｔｈ１／Ｔｈ２）の変化率が日毎に増加していることが分かる。これに対して、擬似薬を飲用した場合、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４（Ｔｈ１／Ｔｈ２）の変化量の値に大きな変化が見られなかった。図１の治験結果からすると、前記乳酸菌共生培養抽出液を飲用すると、Ｔｈ１／Ｔｈ２を上昇させる効果があること、プラセボ効果はなかったことが分かる。
【００２６】
（考察）
ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ細胞）は、サイトカインの分泌のパターンからＴｈ１細胞とＴｈ２細胞とに分けられる。今回測定したＩＦＮ−γは、Ｔｈ１細胞が産生する主なサイトカインであり、強力なマクロファージ活性化作用を有しており、病原体を排除するのに効能がある。
これに対して、ＩＬ−４は、Ｔｈ２細胞を産生するサイトカインであり、ＩｇＥ抗体の産生を促す効能がある。また、ＩＬ−４は、マクロファージの活性化を抑制してＴｈ１細胞の機能を抑制している。
このように、免疫機能はＴｈ１とＴｈ２との作用バランスによって調整されている。
【００２７】
図１に示す様に、前記乳酸菌共生培養抽出液を飲用するという治験の結果、ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４が日毎に上昇していることは、ＩＦＮ−γ（Ｔｈ１細胞）の活性化、或いはＩＬ−４（Ｔｈ２細胞）の抑制が行われていると考えられる。
以上の治験結果からすると、前記乳酸菌共生培養抽出液を飲用することにより、乳酸菌共生培養抽出液によるアレルギー反応抑制に効能があることが裏付けられた。
【００２８】
（治験２）
次に、前記乳酸菌共生培養抽出液のマウスへの経口投与による病原性大腸菌、サルモネラ菌の感染、防御（防衛）実験を行った。この実験では、濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液をマウスに経口投与して、病原性大腸菌（Ｏ−１８）、サルモネラ菌（S.typhimurium ATCC14028）の感染に対する前記乳酸菌共生培養抽出液の効能について、マウスを用いて観察を行った。
【００２９】
（実験方法）
６匹のマウスを１つのグループとして、４つのグループを作り、それぞれのグループに、以下のスケジュールで濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を自由吸水させ、その上でマウスにサルモネラ菌を投与した。ただし、サルモネラ菌は同一日に投与した。
(1)グループ１  サルモネラ菌を投与する７日前から濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与。
(2)グループ２  サルモネラ菌と濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液とを投与。
(3)グループ３  サルモネラ菌を投与する７日後から濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与。
(4)グループ４  サルモネラ菌だけを投与。
【００３０】
以上の実験結果を図２に示す。
グループ１では、６匹のマウスがサルモネラ菌の投与にも関わらず、濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液の投与によってサルモネラ菌で死亡しなかった。
グループ２では、６匹のマウスのうち、１匹のマウスがサルモネラ菌に感染して死亡した。
グループ３では、６匹のマウスのうち、２匹のマウスがサルモネラ菌に感染して死亡した。
グループ４では、６匹のマウスのうち、３匹のマウスがサルモネラ菌に感染して死亡した。
なお、死亡したマウスは全例ＢＷ（体重）が２０％以下に落ちたマウスであった。また、グループ１のマウスの１匹もＢＷ（体重）が２０％以下となったが、そこから生還した。
【００３１】
（考察）
以上の結果により、グループ４のサルモネラ菌のみの投与ではマウスの死亡率が５０％であった。しかし、濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与したグループでは、サルモネラ菌の投与によるマウスの死亡率はグループ１が０％、グループ２が１６．７％、グループ３が３３．３％であり、濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与する時期が早いほど、死亡率が低かった。
この結果からすると、食中毒の原因となる病原性大腸菌（Ｏ−１８）、サルモネラ菌の消化器における作用に対して、前記乳酸菌共生培養抽出液の投与は予防的、治療的な効能があるものと考えられる。
前記乳酸菌共生培養抽出液の検討を行った結果、前記乳酸菌共生培養抽出液は消化器系をはじめとした諸種の症状の予防、改善に効能があると考えられる、また、その機序の１つに腸内の善玉菌の増加によるものが考えられる。
【００３２】
（治験３）
次に、腫瘍による被験者に前記乳酸菌共生培養抽出液を投与してもらい、画像診断による結果を得た。
【００３３】
（方法）
２００８年３月２０日        前記乳酸菌共生培養抽出液を２０ｍｌ／ｄ投与開始
２００８年３月２４日        前記乳酸菌共生培養抽出液を５０ｍｌ／ｄ投与
２００８年４月２０日        前記乳酸菌共生培養抽出液を５０ｍｌ／ｄ投与
２００８年５月  ３日        前記乳酸菌共生培養抽出液を７５ｍｌ／ｄ投与
【００３４】
（結果）
なお、疼痛スコアーは、投与開始（２００８年３月２０日）以前で、疼痛をスコアー０〜１０で示すものとし、健康で無傷であった時を０とし、最も疼痛のあった時を１０とし、患者の主観で記載した。
２００８年３月  ６日      左腸骨部疼痛スコアー    ８
２００８年３月２０日      左腸骨部疼痛スコアー    １０
２００８年３月２４日      左腸骨部疼痛スコアー    ８
２００８年４月２０日      左腸骨部疼痛スコアー    ６
２００８年５月  ３日      左腸骨部疼痛スコアー    ３
２００８年５月１４日      左腸骨部疼痛スコアー    １〜２
【００３５】
以上のように、前記乳酸菌共生培養抽出液を投与することにより、左腸骨部疼痛が日毎に抑制され、ついには左腸骨部疼痛が「８」から「１〜２」に鎮まった。図３に示す骨シンチグラフィーの画像診断の結果、矢印で示す様に左腸骨部の腫瘍巣に縮小傾向が見られた。
【００３６】
（治験４）
次に、前記乳酸菌共生培養抽出液の投与によるＮＫ細胞活性の経時変動について治験を行った。この治験は、体温３９度，頭痛，咽頭痛，関節痛，筋肉痛を訴えている被験者に前記乳酸菌共生培養抽出液を１０ｍｌ飲用してもらい、時間経過に伴うＮＫ細胞の活性度を測定した。その結果を図４に示す。
【００３７】
図４の横軸は時間を、縦軸はＮＫ細胞の活性（％）を示している。比較のため、健常時のＮＫ細胞の活性を点線で示している。
【００３８】
被験者の体温が３９度になり、その被験者が頭痛，咽頭痛，関節痛，筋肉痛を訴えた時点で、その被験者に前記乳酸菌共生培養抽出液を１０ｍｌ投与して、時間経過に伴うＮＫ細胞の活性度合いを測定した。
【００３９】
図４から明らかなように、被験者がインフルエンザに感染して前記乳酸菌共生培養抽出液を飲用した後、２時間経過した時点でＮＫ細胞の活性が６０％まで上昇したが、その後、時間の経過と共にＮＫ細胞の活性度合いが低下する傾向を示し、６時間後に被験者のＮＫ細胞の活性度合いが健常者のものと同様の値になった。
この治験結果からすると、インフルエンザに感染した際に即座に前記乳酸菌共生培養抽出液を投与することにより、短時間の内（飲用２時間後）にＮＫ細胞の活性度合いを上昇させ、その後（６時間後）、健常状態に戻ることが分かる。したがって、前記乳酸菌共生培養抽出液は、インフルエンザの予防に効能があるものと考えられる。
【００４０】
（治験５）
被験者である２２歳女性の医学部学生に前記乳酸菌共生培養抽出液を１日５ｍｌ投与して、投与前後の便秘と腸内細菌叢の変化を調べた。前記被験者は、便秘で排便が週に１回であった。
その結果を次に示す。
投与前            投与後（２ヶ月後）
便秘の状況                  １回／週    →    １回／日
［腸内細菌叢］
嫌気菌                      ７１．４％    →    ４６．５％
乳酸菌                        ０．０％    →    ０．６％
ビフィグス菌                無検出        →    ２．０％
【００４１】
以上の結果から明らかなように、腸内での嫌気性菌が７１．４％から４６．５％まで下がり、乳酸菌が０．０％から０．６％まで上昇し、ビフィグス菌が２．０％まで上昇した。この結果、投与前は、排便が週に１回の便秘の状態であったのに、投与後は、排便が日に１回に改善された。
この事からしても、前記乳酸菌共生培養抽出液を投与することにより、便秘が改善されていることが分かる。
【００４２】
（治験６）
次に、同日齢，１歳のマウスを各５匹，２グループに分け、グループ１のマウスに濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与し、グループ２のマウスに前記乳酸共生培養抽出液を投与せずに、その経過を観察した。
【００４３】
前記乳酸菌共生培養抽出液を投与せずに飼育したグループ２のマウスの状態、前記乳酸共生培養抽出液を投与したマウスの状態を図５に示す。
【００４４】
図５の左上に示したグループ２のマウスの皮膚を観察すると、その一部に禿げた箇所が見られる。しかし、図５の右下に示したグループ１のマウスの皮膚を観察すると、前記濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与して経過を観察したマウスには禿の部分が見あたらず、皮膚は健康なままである。
この現象は、医学（生物学）的には不明であるが、マウスの寿命が約２４ヶ月であり、特に今回使用したマウスは、死期が近づくと、全身性に禿げることが認められている（加齢現象）。
グループ１のマウスに濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与した結果、グループ１のマウスには、前記乳酸共生培養抽出液に含まれる葉酸の相乗効果によって抗加齢効果が発揮されているように考えられる。
【００４５】
また、濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与した群のマウスのうち、最後に生き残った１匹は、濃度５％の乳酸菌共生培養抽出液を投与せずに生き残ったマウスの死後、３ヶ月健康な状態で生き延びた。マウスの３ヶ月は人の年齢に換算すると、約１０年に相当する。このことからも、前記乳酸菌共生培養抽出液を投与することは、抗加齢効果（アンチエイジング）の効能があることが分かった。
【００４６】
また、治験６で確かめられた抗加齢効果からすると、葉酸を含む場合にも有効性及び効能があるものと考えられる。その場合、前記葉酸の含有量は、前記抽出液１ｍｌ中に０．３ｎｇ以下（ｎｇ／ｍｌ）であることが望ましい。
【００４７】
（治験７）
次に、血糖値調整物質として本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を用いたことにより糖尿病の予防を発揮するかどうかの治験を行った。治験方法は、被験者として２１〜２２歳の健常者を５名選び、７５ｇ経口ブドウ糖負荷試験（７５ｇＯＧＴＴ）を行った（トレーランＧ７５ｇ負荷試験）。その結果を図６（ａ），（ｂ），（ｃ）にそれぞれ示す。
【００４８】
治験方法は、２１〜２２歳の健常者を被験者として５名選び、７５ｇ経口ブドウ糖負荷試験に血糖調整物質としての乳酸菌共生培養抽出液を同時に摂取し、時間の経過に伴う血糖値を測定した。その際、前記乳酸菌共生培養抽出液の摂取量を変えて７５ｇ経口ブドウ糖負荷試験を行った。図６において、横軸は時間を示しており、縦軸は血糖値（ｍｇ／ｄｌ）を示している。さらに、図６において、◆を結んだ棒線はトレーランＧ７５ｇのみを摂取した場合の血糖値の変化を示しており、■を結んだ棒線は、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値の変化を示している。
【００４９】
図６（ａ）は、７５ｇ経口ブドウ糖負荷試験に血糖調整物質として乳酸菌共生培養抽出液を２ｍｌ同時に摂取した場合における血糖値の変化を測定した結果を示している。
図６（ａ）から明らかなように、３０分〜６０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より低くなっている。６０分から８０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値に変化が見られず、トレーランＧ７５ｇのみを摂取した場合の血糖値よりも高くなる傾向にあった。８０分を過ぎて１５０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より低くなるという傾向を示した。そして、１８０分経過した際には、その血糖値は摂取する前の値に戻っていた。
【００５０】
図６（ｂ）は、７５ｇ経口ブドウ糖負荷試験に血糖調整物質として乳酸菌共生培養抽出液を５ｍｌ同時に摂取した場合における血糖値の変化を測定した結果を示している。
図６（ｂ）から明らかなように、３０分〜６０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より低くなっている。６０分から８０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値に変化が見られないが、トレーランＧ７５ｇのみを摂取した場合の血糖値よりも低い値を示している。８０分を過ぎて１５０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より低くなるという傾向を示した。そして、１８０分経過した際には、その血糖値は摂取する前の値に戻っていた。
図６（ｂ）から明らかなことは、トレーランＧ７５ｇと５ｍｌの乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より時間の経過に拘わらず低くなっていることが分かる。
【００５１】
図６（ｃ）は、７５ｇ経口ブドウ糖負荷試験に血糖調整物質として乳酸菌共生培養抽出液を１０ｍｌ同時に摂取した場合における血糖値の変化を測定した結果を示している。
図６（ｃ）から明らかなように、３０分〜６０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より低くなっている。６０分から８０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値に変化が見られないが、トレーランＧ７５ｇのみを摂取した場合の血糖値よりも低い値を示している。８０分を過ぎて１５０分経過した際には、トレーランＧ７５ｇと乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より低くなるという傾向を示した。そして、１８０分経過した際には、その血糖値は摂取する前の値に戻っていた。
図６（ｃ）から明らかなことは、トレーランＧ７５ｇと１０ｍｌの乳酸菌共生培養抽出液とを同時に摂取した場合の血糖値は、トレーランＧ７５ｇ単体を摂取した場合の血糖値より時間の経過に拘わらず低くなっていることが分かる。この血糖値の変化の傾向は図６（ｂ）と同様であった。
【００５２】
（考察）
図６に示す結果からすると、乳酸菌共生培養抽出液は血糖値を低下させる働きがあることが示された。さらに、乳酸菌共生培養抽出液５ｍｌ以上を投与することにより血糖値抑制作用が強く認められた。以上の治験の結果からして、本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液は糖尿病予防の効果を発揮することが分かった。
【００５３】
（治験８）
次に、本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を食パンの添加剤として用いた場合の食感と日持ち（カビの発生；防腐効果）について治験を行った。その結果を図７〜図９に示す。
【００５４】
治験方法として、本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンと、無添加の食パンとを家庭用食パン製造器を用いて製造した。そして、それぞれの食パンを半分に切り、半分を味見し、残りの半分をビニール袋に入れて比較を行った。
図７〜図９の右側の写真は、前記家庭用食パン製造器に添付されていた説明書に基づいて製造した食パンを示している。図７〜図９の左側の写真は、水を本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液１０％水にして、前記説明書に基づいて製造した食パンを示している。
また、図７〜図９の写真に添え書きした数字は、製造した日からの経過日を示している。
【００５５】
治験のために２０１０年１月１９日のパンを製造し、製造直後に無菌操作で、それぞれビニール袋に入れ、２０°Ｃにて保存して経過を観察した。
２０１０年１月２５日の段階において、図６の最上段右側の写真から明らかなように、無添加食パンに○で示す位置に２箇所カビが発見された。
これに対して、図６の左側の写真に示す乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンの場合、図８に示す様に２０１０年1月２８日の段階において、○で示す位置に２箇所カビが発見された。
図９に示す様に、２０１０年２月１日の段階において、図９の右側の写真で示す無添加食パンでは、カビは約１／３の面積に拡大していた。これに対して、図９の左側の写真で示す乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンでは、カビがほとんど拡大していなかった。
図９に示す様に、２０１０年２月２日の段階において、図９の右側の写真で示す無添加食パンでは、カビはほぼ全面に明瞭に拡大していた。これに対して、図９の左側の写真で示す乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンでは、カビが約１／２に薄く拡大していた。
【００５６】
（考察）
２０１０年１月１９日に製造した無添加食パンと、本実施形態の乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンとの食感を比較した。本実施形態の乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンの場合、無添加食パンにはない、もちもち感・しっとり感があり、風味があった。
さらに、図７〜図９に示す結果から明らかなように、製造後にカビが発生したのは、本実施形態の乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンの場合、製造後９日目であるのに対して、無添加食パンの場合、製造後６日目であり、本実施形態の乳酸菌共生培養抽出液を添加した食パンの方が無添加食パンより日持ちが約５０％延長した。
【００５７】
（結論）
本実施形態の乳酸菌共生培養抽出液は食パンに添加することにより、食感，日持ち（防腐効果）を明確に向上させた。これは、本実施形態の乳酸菌共生培養抽出液は天然食品添加物として、他の食品の添加物としても同様な効果を期待できることを示唆している。
【００５８】
以上の治験の結果からして、本発明の実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液は、ビオチン（ビタミンＨ）、スフィンゴミエリン、ビタミンＢ１２を主成分とし、ビオチン（ビタミンＨ）を、前記抽出液１ｍｌ中に３．３〜４．１ｎｇ（ｎｇ／ｍｌ）、スフィンゴミエリンを、前記抽出液１ｍｌ中に０．１８〜０．２２ｍｇ（ｍｇ／ｍｌ）、ビタミンＢ１２を、前記抽出液１ｍｌ中に１４０．０〜１７１．６ｐｇ（ｐｇ／ｍｌ）をそれぞれ含むことにより、治験の結果、栄養補助食品に該当するにも関わらず、過敏性大腸炎や旅行者下痢症，旅行者下痢症，潰瘍性大腸炎，食中毒などの消化器系の改善、アレルギー皮膚炎，免疫機能，抗加齢効果（アンチエイジング）などの種々の効能の発揮，食品の食感向上，日持ち（防腐効果），糖尿病の予防などの効能を発揮することができるものである。
【００５９】
次に、本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を動物のサプリメントとして用いて、症状の改善に寄与した例を列挙する。
（１）ネコAIDSで口内炎ができ、食欲廃絶した例
食欲が廃絶し、獣医医院に行ったところ、どのような治療をしても効果がなく、あきらめるように言われた飼い主から依頼があった。
症例の６歳、日本ネコに本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を２ｍｌ経口投与したところ、約1時間後から食欲がではじめ、全ての所見が正常時と同様になり、行動も３，４歳若返ったようになった。
その後も毎日１mlを経口投与することで良好な状態をまる２年維持しつづけている。
（２）難治性慢性下痢の秋田犬への使用
1年以上続く、難治性の慢性下痢の秋田県で、微生物学的検査(細菌・真菌・寄生虫)では何も検出されず、対症療法を行うも改善は認められなかった。 
本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を1日２ｍｌ経口で与えたところ、数日で下痢が止まった。
（３）難治性外聴道炎のネコへの使用（局所的）
５歳、日本ネコで、長年獣医医院に通っていたが、耳から悪臭を伴い、疼痛もあり、ほとんど改善が認められない状況であった。本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を約５０倍に希釈し、局部を綿棒等で清拭したところ、数日で改善し、症状が消失した。
（４）難治性外聴道炎のネコへの使用（全身的）
６歳、日本ネコで、症例３と同様な状況であった。本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を１ml経口投与したところ、数日で改善し、症状が消失した。
（５）感冒のネコへの使用
５歳、日本ネコで、体温が約３９℃で、くしゃみをし、食欲がなく感冒と考えられた。
本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液を２ｍｌ経口投与したところ、約３０分後に食欲がでて通常どおりに食べ、その後順調に回復した。
【００６０】
本実施形態に係る乳酸菌共生培養抽出液は、人と同様に動物に適用しても、整腸作用，食欲増進作用，免疫増強による感染症改善作用・抗炎症作用があると考えられ、多くの疾患に役立つことが期待される。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明は、栄養補助食品でありながら、今期流行している新型インフルエンザ等の病原性疾患などの予防、改善に貢献できるばかりでなく、過敏性大腸炎や旅行者下痢症，旅行者下痢症，潰瘍性大腸炎，食中毒などの消化器系の改善、アレルギー皮膚炎，免疫機能，抗加齢効果（アンチエイジング）などの効能の発揮，食品の食感向上，日持ち（防腐効果），糖尿病の予防などの効能を発揮するばかりでなく、動物に適用しても、整腸作用，食欲増進作用，免疫増強による感染症改善作用・抗炎症作用があると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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