(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４７で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むホモ型植物由来乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４８で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合し、当該配合物を、前記配合物の植物由来乳酸菌の基質である糖質及び蛋白質で乳酸発酵することで得られる乳酸菌液であって、
本乳酸菌液の植物由来乳酸菌の生菌数は、１０７ｃｆｕ／ｇ以上であり、
本乳酸菌液のｐＨは、３．５〜４．０であることを特徴とする乳酸菌液。
【請求項２】
本乳酸菌液は、−４℃〜４℃の範囲内で冷却又は冷蔵され、生菌のまま安定保存される
請求項１に記載の乳酸菌液。
【請求項３】
本乳酸菌液は、ヒト、家畜、愛玩動物、水産物のいずれかを含む動物の食品、食品添加物、植物の栽培用培地の添加物、発酵培地の添加物のいずれかに利用される
請求項１又は２に記載の乳酸菌液。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵して製造する発酵物の製造方法。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵して製造する発酵物の製造方法であって、
本発酵物は、ヒト、家畜、愛玩動物、水産物のいずれかを含む動物の食品、食品添加物、植物の栽培用培地の添加物、発酵培地の添加物のいずれかに利用される
発酵物の製造方法。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の乳酸菌液を栽培用培地の添加物に利用して栽培して製造する食用植物の製造方法であって、
食用植物内の植物由来乳酸菌の生菌数は、１０３ｃｆｕ／ｇ以上であることを特徴とする食用植物の製造方法。
【請求項７】
受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４７で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むホモ型植物由来乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４８で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合する配合ステップと、
前記配合物を、前記配合物の植物由来乳酸菌の基質である糖質及び蛋白質で乳酸発酵して乳酸菌液を得る乳酸発酵ステップと、
を備え、
本乳酸菌液の植物由来乳酸菌の生菌数は、１０７ｃｆｕ／ｇ以上であり、
本乳酸菌液のｐＨは、３．５〜４．０であることを特徴とする乳酸菌液の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌液、発酵物の製造方法、食用植物の製造方法、乳酸菌液の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、乳酸菌を用いた技術は多種存在する。特開２００８−２３９５５３号公報（特許文献１）には、植物系乳酸菌により免疫能が活性化することが記載されている。特開２００９−１００６７７号公報（特許文献２）には、乳酸菌が野菜や果物に導入されることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００８−２３９５５３号公報
【特許文献２】特開２００９−１００６７７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
現在、食品に用いられている乳酸菌は、単菌株であり、単菌株の機能しか期待出来ないという課題がある。
【０００５】
そこで、本発明は、前記課題を解決するためになされたものであり、細胞活性による、あらゆる生物の健康増進、免疫力向上等を図ることが可能な乳酸菌液、発酵物の製造方法、食用植物の製造方法、乳酸菌液の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、鋭意研究を重ねた結果、本発明に係る新規な乳酸菌液、発酵物の製造方法、食用植物の製造方法、乳酸菌液の製造方法を完成させた。即ち、本発明に係る乳酸菌液は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４７で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むホモ型植物由来乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４８で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合し、当該配合物を、前記配合物の植物由来乳酸菌の基質である糖質及び蛋白質で乳酸発酵することで得られる乳酸菌液であって、本乳酸菌液の植物由来乳酸菌の生菌数は、１０７ｃｆｕ／ｇ以上であり、本乳酸菌液のｐＨは、３．５〜４．０であることを特徴とする。
【０００７】
又、本乳酸菌液は、−４℃〜４℃の範囲内で冷却又は冷蔵され、生菌のまま安定保存される。
【０００８】
本乳酸菌液は、ヒト、家畜、愛玩動物、水産物のいずれかを含む動物の食品、食品添加物、植物の栽培用培地の添加物、発酵培地の添加物のいずれかに利用される。又、本発明では、乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵して製造する発酵物の製造方法である。又、本発明では、乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵して製造する発酵物の製造方法であって、本発酵物は、ヒト、家畜、愛玩動物、水産物のいずれかを含む動物の食品、食品添加物、植物の栽培用培地の添加物、発酵培地の添加物のいずれかに利用される。又、本発明では、本乳酸菌液を栽培用培地の添加物に利用して栽培して製造する食用植物の製造方法であって、食用植物内の植物由来乳酸菌の生菌数は、１０３ｃｆｕ／ｇ以上であることを特徴とする。又、本発明に係る乳酸菌液の製造方法は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４７で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌との２種類を少なくとも含むホモ型植物由来乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４８で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌との２種類の乳酸菌を少なくとも含むヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合する配合ステップと、前記配合物を、前記配合物の植物由来乳酸菌の基質である糖質及び蛋白質で乳酸発酵して乳酸菌液を得る乳酸発酵ステップと、を備え、本乳酸菌液の植物由来乳酸菌の生菌数は、１０７ｃｆｕ／ｇ以上であり、本乳酸菌液のｐＨは、３．５〜４．０であることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、細胞活性による、あらゆる生物の健康増進、免疫力向上等を図ることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明に係るホモ型植物由来乳酸菌及びヘテロ型植物由来乳酸菌の顕微鏡写真及びこれらの配合・乳酸発酵により得られた乳酸菌液の写真である。
【図２】試験例４における対照区、死菌区、生菌区のラットの胃潰瘍状態の写真である。
【図３】試験例９における発芽から約１カ月後の対照区、実験区のバジルの写真（図３Ａ）と、試験例９における発芽から約２カ月後の対照区、実験区のバジルの写真（図３Ｂ）と、試験例１０における発芽から７日後の対照区、実験区のレタスの写真（図３Ｃ）、とである。
【図４】試験例１１における発芽から数週間後の対照区、実験区の苺の写真（図４Ａ）と、試験例１２における発芽から約１カ月後の対照区、実験区の玉ねぎの写真（図４Ｂ）、とである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下に、添付図面を参照して、本発明の実施形態について説明し、本発明の理解に供する。尚、以下の実施形態は、本発明を具体化した一例であって、本発明の技術的範囲を限定する性格のものではない。
【００１２】
本発明に係る乳酸菌液は、ホモ型植物由来乳酸菌と、ヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合し、当該配合物を乳酸発酵することで得られることを特徴とする。ここで、ホモ型乳酸菌とは、乳酸発酵による代謝物の１００％が（炭酸ガスを除いて）乳酸である乳酸菌を意味し、ヘテロ型乳酸菌とは、乳酸発酵による代謝物の５０％以上が（炭酸ガスを除いて）乳酸であり、その他の代謝物が乳酸以外の有機酸（例えば、エタノール、酢酸、ギ酸等）である乳酸菌を意味する。そして、植物由来乳酸菌（植物性乳酸菌、植物系乳酸菌）とは、耐熱性、耐塩性、耐酸性を有する微好気性菌であり、腸内環境を改善できる善玉菌である。一方、動物由来乳酸菌（動物性乳酸菌、動物系乳酸菌）とは、チーズやヨーグルトの生成に利用される嫌気性菌であるが、耐熱性、耐塩性、耐酸性のいずれも無く、ヒトを含む動物が摂取しても、胃酸やコール酸（胆汁）で死滅し、環境温度が４１．９度以上になると細胞膜が損傷・破壊される。植物由来乳酸菌は、動物由来乳酸菌が自然の厳しい環境の下、植物細胞内で生き延びて嫌気性菌から微好気性菌に変異した特別な菌である。
【００１３】
本発明者は、長年、植物由来乳酸菌を研究しており、後述する実施例に基づいて、本発明を完成させたのである。即ち、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合発酵させた乳酸菌液は、動物に摂取されると、動物由来乳酸菌と比較して、胃内で死滅せず、小腸まで生菌のまま運ばれ、プロバイオティクス効果を発揮することが判明した。具体的には、乳酸菌液は、小腸内の糖質を乳酸に変換して、当該糖質が小腸へ吸収されることを防止し、血糖値の上昇を抑制し、例えば、ＨｂＡ１ｃを正常範囲へ導く。又、乳酸菌液は、小腸内の蛋白質を分解して、血圧降下作用や血管機能改善作用を持つペプチド、アミノ酸を生成し、血中コレステロールの減少、小腸内の有害物質の産生の抑制、リンパ球の活性化、細胞活性・細胞修復の促進、抗癌作用（抗腫瘍作用）、花粉症、下痢、アトピー性皮膚炎等の感染症の抑制、ピロリ菌繁殖の抑制等の効果を発揮する。上述の効果について、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌との配合により、それぞれの機能の違いを相互に補完して、単一菌では得ることが出来ない複数菌の相乗効果を発揮し、一般細菌の大腸菌、サルモネラ菌、黄色ブドウ球菌等の繁殖を抑制し、腸内環境を整えて、免疫力を向上させる。
【００１４】
前記乳酸菌液のプロバイオティクス効果は、従来の動物由来乳酸菌のプレバイオティクス効果と比較して顕著に異なる。従来の動物由来乳酸菌では、胃内で死滅し、生きたまま小腸に到達することはない。動物由来乳酸菌が死菌として小腸から大腸に達し、プレバイオティクス効果を発揮する場合もあるが、上述した生菌のプロバイオティクス効果の方が顕著である。
【００１５】
ここで、ホモ型植物由来乳酸菌及びヘテロ型植物由来乳酸菌に特に限定は無いが、例えば、ホモ型植物由来乳酸菌は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌の１種類を少なくとも含み、ヘテロ型植物由来乳酸菌は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌の１種類を少なくとも含めば良い。更に好ましくは、ホモ型植物由来乳酸菌は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４７で特定される乳酸菌との２種類を少なくとも含み、ヘテロ型植物由来乳酸菌は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４８で特定される乳酸菌との２種類を少なくとも含むと、本発明の作用効果を十分に発揮し得る。上述の受託番号の植物由来乳酸菌は、ラクトバチルス桿菌属である。植物由来乳酸菌は、通常の方法により凍結乾燥した乳酸菌、又は冷蔵保存した乳酸菌を用いることが出来る。
【００１６】
又、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌との配合方法に特に限定は無く、一般に使用されている通常の配合方法を採用することが出来る。例えば、ホモ型植物由来乳酸菌及びヘテロ型植物由来乳酸菌の増殖率に基づいて、乳酸発酵後のホモ型植物由来乳酸菌の量と乳酸発酵後のヘテロ型植物由来乳酸菌の量とが同等となるように配合することが出来る。この場合、増殖率が高い植物由来乳酸菌の配合量は、増殖率が低い植物由来乳酸菌の配合量と比較して減らしておく。又、特定の植物由来乳酸菌を他の植物由来乳酸菌と比較して多く配合して、全体のバランスを取るようにしても良い。ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌とが通常の配合方法によりバランスよく配合されていれば良い。これにより、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌がバランスよく存在することになり、各植物由来乳酸菌毎の機能を十分に発揮し、どのような症状であっても有効な免疫力の向上を図ることが出来る。
【００１７】
又、乳酸菌液中に含まれる植物由来乳酸菌の生菌数に特に限定は無いが、例えば、１０７ｃｆｕ／ｇ〜１０８ｃｆｕ／ｇであると好ましく、１０７ｃｆｕ／ｇ〜１０９ｃｆｕ／ｇであると更に好ましく、１０７ｃｆｕ／ｇ〜１０１２ｃｆｕ／ｇであると最も好ましい。尚、一般的なチーズ、ヨーグルトに含まれる動物由来乳酸菌は、全て嫌気性菌で、その生菌数は、１０５ｃｆｕ／ｇ〜１０６ｃｆｕ／ｇであり、この生菌数は、微生物学上で、腐敗菌数の範囲内とされている。一方、生菌数が、１０７ｃｆｕ／ｇ以上であれば、発酵に相当する。そのため、本発明に係る乳酸菌液では、生菌数を１０７ｃｆｕ／ｇ以上に設定することで、腐敗で無く発酵を意図し、生体内でのプロバイオティクス効果を確実に得ることが可能となる。
【００１８】
ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合する際に、目的に応じて、他の菌を添加しても構わない。例えば、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０８８８で特定されるバチルス・サブチルス菌（枯草菌）、真菌類、酵素菌等を適宜添加しても構わない。
【００１９】
又、前記配合物を乳酸発酵する方法に特に限定は無いが、例えば、通常の培養方法（乳酸発酵方法）が利用される。具体的には、前記配合物を培養釜に投入するとともに、当該配合物の植物由来乳酸菌の基質である糖質及び蛋白質を投入し、当該培養釜を所定の培養温度（例えば、４０度）で所定の培養時間（例えば、２４時間〜３６時間）保持する。基質に対する配合物の接種量は、少量で構わない。
【００２０】
ここで、培養温度及び培養時間の条件は、例えば、乳酸発酵後の乳酸菌液のｐＨが３．５〜４．０となり、生菌数が１０７ｃｆｕ／ｇ以上となる条件に設定される。乳酸発酵後の乳酸菌液のｐＨが３．５〜４．０の弱酸性に設定されることで、乳酸菌液による制菌、殺菌等のバイオプリザベーション効果を発揮し、大腸菌、サルモネラ菌、黄色ブドウ球菌等を２４時間程度で死滅させることが可能となる。又、乳酸菌液のｐＨが３．５〜４．０であることで、ｐＨが２．０〜２．５の酢酸のような強酸の刺激が無く、まろやかな味とすることが出来る。更に、生菌数が１０７ｃｆｕ／ｇ以上となることで、上述のように、プロバイオティクス効果を確実に得ることが可能となる。
【００２１】
又、培養温度は、例えば、３０℃〜５５℃の範囲内に設定され、培養時間は、例えば、１０時間〜４８時間の範囲内に設定される。培養時間は、乳酸発酵後における積算培養温度に基づいて決定されるため、培養温度が高い場合は、培養時間は短く設定され、培養温度が低い場合は、培養時間は長く設定される。
【００２２】
更に、前記配合物を糖質及び蛋白質で培養する際に、そのまま糖質及び蛋白質に接触させて培養しても良いし、糖質及び蛋白質を調理して味付けしたものに前記配合物を接触させて培養しても良い。
【００２３】
基質となる糖質に特に限定は無いが、例えば、ブドウ糖、果糖、ガラクトース、ショ糖、麦芽糖、乳糖等の小腸吸収糖質やラフィノース（オリゴ糖）、希少糖等の小腸非吸収糖質、てんさい糖、砂糖大根等を挙げることが出来る。基質となる蛋白質に特に限定は無いが、例えば、大豆等の豆類、植物由来蛋白質、食肉等を挙げることが出来る。蛋白質は、例えば、大豆の全粒粉を採用しても良い。これにより、大豆のポリフェノール（イソフラボン）を十分に利用することが出来る。又、基質の糖質及び蛋白質の他に、他の素材を添加しても良い。例えば、葉野菜、根菜類、トマト等の実野菜等を粉砕して、粉砕物を基質に添加しても良い。又、基質として、例えば、豆乳等、糖質及び蛋白質を兼ね備える原材料を採用しても良い。
【００２４】
糖質及び蛋白質の添加比率に特に限定は無く、例えば、植物由来の乳酸菌を乳酸発酵させる際の通常の添加比率を採用すれば良い。例えば、糖質及び蛋白質の基質の全量に対する糖質の添加比率は、１．０ｗ％〜２０．０ｗ％の範囲内であると好ましい。豆乳であれば、豆乳単体だけでも基質となり得る。
【００２５】
前記配合物の乳酸発酵では、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌とが基質に基づいて同時に乳酸発酵するため、基質の糖質が乳酸及び他の有機酸に変換され、基質の蛋白質が分子化し、ペプチド、アミノ酸に変換される。
【００２６】
乳酸発酵後の配合物である乳酸菌液は、例えば、所定の冷却温度（例えば、−４℃〜４℃の範囲内）まで冷却又は冷蔵されることで、生菌のまま安定保存することが出来る。ここで、通常の乳酸菌液では、冷却温度が０度未満となると、乳酸菌液に含まれる水が針状結晶となり、乳酸菌を死滅させてしまうが、本発明に係る乳酸菌液では、ヘテロ型植物由来乳酸菌が乳酸以外の有機酸（エタノール等）を産出することで、水の氷点が降下して、冷却温度が０度未満になっても、水の針状結晶が生じず、凍らない。そのため、本発明に係る乳酸菌液では、例えば、−３℃〜−４℃まで冷蔵しても、凍らずに生菌のままであり、凍結寸前の温度まで冷却して保存することが出来る（チルド）。又、基質に味が付けられている場合には、この冷却保存により乳酸菌液が熟成してまろやかな味を付すことが出来る。味付けは、嗜好の範囲内で適宜設計変更可能である。
【００２７】
尚、乳酸菌液をスターター（親菌）として更に増殖培養しても良い。例えば、最初の乳酸発酵を一次培養とし、当該増殖培養を二次培養とした場合、二次培養では、乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵を行って発酵物を得ることが出来る。例えば、乳酸菌液に、乳酸発酵に必要な基質を添加し、上述した培養条件で乳酸発酵させる。二次培養でも、乳酸菌液は、基質に対して少量で良く、基質に他の素材を添加しても良く、一次培養と同様である。例えば、二次培養の際に、豆乳（基質）とトマト（他の素材）との比率を１：９に設定し、全体の量が４００ｋｇであっても、乳酸菌液は少量添加して混ぜるだけでも良い。二次培養後の発酵物は、一次培養後の乳酸菌液と同様の利用形態で利用することが出来る。
【００２８】
さて、乳酸菌液の利用方法に特に限定は無く、例えば、ヒトを含む動物が食品としてそのまま摂取しても良いし、食品の添加物として利用しても良い。乳酸菌液をそのまま摂取する場合には、上述したプロバイオティクスの効果により医薬品に加工しても良い。医薬品として乳酸菌液を利用する場合、例えば、血管注射や浣腸注射による方法を採用しても良い。又、食品の添加物として、例えば、野菜サラダのドレッシング、魚介類のタルタルソース、味噌、醤油、ロールパン、サンドイッチ等の具材、香料、生クリーム、羊羹、どら焼き、三笠饅頭、鯛焼き、餡、ゼリー、プリン、ヨーグルト、豆乳、チーズ、小豆等を挙げることが出来る。乳酸菌液を食品に積極的に利用することで、健康増進、免疫力向上、美容向上、生命力向上等を図ることが出来る。
【００２９】
乳酸菌液の摂取量に特に限定は無いが、ヒトの場合、例えば、１回の食事に対して２０ｃｃ〜３００ｃｃの範囲内であれば好ましく、１回の食事に対して２０ｃｃ〜６０ｃｃの範囲内であれば更に好ましい。摂取回数に特に限定は無いが、例えば、朝・昼・夕の３回の食事時と、就寝前の１回で、１日４回、乳酸菌液を継続して摂取すると好ましい。このような摂取回数を少なくとも１ヵ月以上の摂取期間で継続して行うことで、本発明の作用効果を得ることが可能となる。摂取期間は、ユーザーの体調に応じて、１ヵ月、３カ月、６ヵ月、１年等適宜設計すれば良い。本発明に係る乳酸菌液の摂取には、医薬品と異なり、摂取量が多くても、単に排出されるだけで、体内に残らず、副作用が無いという利点がある。尚、ヒト以外の動物、水産物の場合は、その体重等の種類に応じて、摂取量、摂取回数、摂取期間は適宜設計される。
【００３０】
又、乳酸菌液をフリーズドライ（凍結乾燥）させて、ホモ型植物由来乳酸菌及びヘテロ型植物由来乳酸菌を生菌の状態で粉末状にしても良い。ここで、フリーズドライは、例えば、凍結させた乳酸菌液を真空状態にし、乳酸菌液中の水分を昇華させることで乾燥状態にすることを意味する。これにより、液体状の乳酸菌液と比較して長期的に（２年以上）安定して保存することが可能となる。
【００３１】
又、乳酸菌液は、例えば、動物の飼料の添加物として利用することが出来る。具体的には、動物の飼料に乳酸菌液を含浸させたり、ペースト状に加工した乳酸菌液を飼料に混在させたり、乳酸菌液をフリーズドライした粉末を飼料に混合させたりする。又、飼料の飲料水に乳酸菌液を混入して摂取させても良い。
【００３２】
ここで、飼料に対する乳酸菌液の添加濃度に特に限定は無いが、例えば、乳酸菌液を多量に添加する程、効果が顕著に現れるというものでは無く、少量であっても、上述の効果を得ることが出来る。そのため、乳酸菌液の添加濃度は、コスト面から、全飼料に対して０．１ｗｔ％〜１０．０ｗｔ％の範囲内であると好ましい。
【００３３】
ここで、動物は、例えば、牛、豚、鶏等の家畜、愛玩動物や水産物を挙げることが出来る。家畜に乳酸菌液入りの飼料を所定の期間（例えば、１ヵ月〜６ヵ月の範囲内）継続して与えた場合、その家畜の腸に、配合バランスの良い植物由来乳酸菌が導入されるため、その家畜の健康増進、成長促進等を図ることが出来る。
【００３４】
具体的には、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた乳牛の搾乳量を、乳酸菌液無しの通常の飼料を与えた乳牛の搾乳量と比較して増加させることが出来る。又、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた肉牛の肉質を、乳酸菌液無しの通常の飼料を与えた肉牛の肉質と比較して向上させることが出来る。更に、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた子豚の死亡率を、乳酸菌液無しの通常の飼料を与えた子豚の死亡率と比較して低下させることが出来る。そして、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた採卵鶏の産卵期間を、乳酸菌液無しの通常の飼料を与えた採卵鶏の産卵期間と比較して延長させることが出来る。又、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた肉用鶏の肉質を、乳酸菌液無しの通常の飼料を与えた肉用鶏の肉質と比較して向上させることが出来る。又、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた家畜では、共通して、その排泄物の臭気が大幅に減少し、衛生環境の改善が見られる。これらは、乳酸菌液による家畜の免疫力向上による効果と考える。本発明に係る乳酸菌液は、家畜用の飼料に添加するだけでなく、家畜用の飼育場に噴霧することで、プロバイオティクス効果を利用して、家畜の衛生環境を更に改善することが出来る。愛玩動物であっても同様である。
【００３５】
又、魚介類、貝類等の水産物に乳酸菌液入りの飼料を所定の期間継続して与えた場合、水産物の腸に、配合バランスの良い植物由来乳酸菌が導入されるため、その水産物の健康増進、成長促進等を図ることが出来るとともに、水揚げした水産物の内蔵腐敗の遅延効果を発揮することが出来る。特に、養殖・畜養において水槽に乳酸菌液入りの飼料を供給したり、飼育水に乳酸菌液を混入したりすることで、配合バランスの良い植物由来乳酸菌が、水産物の排泄物に起因するアンモニアの分解、水質改善を発揮し、水槽内の衛生環境を向上させる。具体的には、乳酸菌液入りの飼料を継続して与えた海老の生長速度を、乳酸菌液無しの通常の飼料を与えた海老の生長速度と比較して増加させることが出来る。カキ貝であっても同様である。
【００３６】
又、乳酸菌液は、例えば、植物の栽培用培地の添加物として利用することが出来る。具体的には、土壌栽培の場合には、乳酸菌液をそのまま土壌に含浸させたり、ペースト状に加工した乳酸菌液を土壌に混練・分散させたり、乳酸菌液をフリーズドライした粉末を飼料に混合させたりする。砂地（砂）栽培の場合は、土壌栽培と同様である。水耕栽培の場合には、乳酸菌液を培養液に添加させる。培地に添加する乳酸菌液の添加濃度に特に限定は無いが、例えば、全培地に対して０．００１ｗｔ％〜１０．０００ｗｔ％の範囲内であると好ましく、０．０１ｗｔ％〜５．００ｗｔ％の範囲内であると更に好ましい。
【００３７】
ここで、植物は、例えば、食用植物や鑑賞用植物を挙げることが出来る。食用植物は、例えば、バジル、レタス、パセリ、ホウレン草、イチゴ、セリ、オランダガラシ（クレソン）、フダンソウ（スイスチャード）、ブロッコリー、カイワレ大根、ネギ、キクナ、チンゲン菜、オオバ、玉ねぎ、ミズナ、グリーンフィールドレタス、小松菜、マイルドリーフ（リーフレタス）、ルッコラ、トマト、ピーマン等の青果物を挙げることが出来る。例えば、植物の培地（土、砂、培養液等）に乳酸菌液を添加して栽培した場合、その植物の成長促進、衛生環境の改善、乳酸菌の導入等を図ることが出来る。
【００３８】
具体的には、乳酸菌液入りの培地で生長する植物の生長速度を、乳酸菌液無しの通常の培地で生長する植物の生長速度と比較して増加させることが出来る。生長対象の植物の部位は、例えば、根茎、茎、葉、花、実、根瘤等を挙げることが出来る。又、乳酸菌液を培地及び植物に噴霧することで、大腸菌、サルモネラ菌、黄色ブドウ球菌等の病原性菌の殺菌効果や植物に対する害虫の忌避効果を得ることが出来る。
【００３９】
更に、乳酸菌液を用いて植物を栽培した場合、植物内に、配合バランスの良い植物由来乳酸菌を導入することが出来る。通常、植物の導管は、大腸菌の寸法（約４μｍ）の物質を物理的に通過させないものの、ホモ型植物由来乳酸菌及びヘテロ型植物由来乳酸菌は、図１に示すように、桿菌属であり、長手方向の寸法が０．５μｍ〜３．０μｍで、先端が０．０１μｍであり、先鋭状であることから、通常の菌と比較して植物の導管に導入し易い形状を有している。そのため、培地に混入した乳酸菌液中のホモ型植物由来乳酸菌及びヘテロ型植物由来乳酸菌は、生菌の状態で、植物の導管を通過し、根茎から茎を移動して、葉・茎の内部に滞留・蓄積する。これにより、植物由来乳酸菌を内部に蓄積した植物を栽培することが出来る。
【００４０】
配合バランスの良い植物由来乳酸菌が導入された植物は、ヒトを含む動物の食用として利用可能であり、その味はまろやかとなる。即ち、植物は、通常、紫外線から自身を守るために、ポリフェノールを内部に生成するが、このポリフェノールが、植物独特の渋み、苦味、エグ味、青臭さ等の原因になる。そこで、配合バランスの良い植物由来乳酸菌が植物に導入されると、これらの植物由来乳酸菌の細胞膜が有するアミノ酸が植物独特の味を消失させ、まろやかな味を引き出す。尚、植物由来乳酸菌が植物に導入されたとしても、植物には、蛋白質や糖質が存在しないため、これらの植物由来乳酸菌が乳酸発酵することが無い。つまり、植物由来乳酸菌が導入された植物には、乳酸は導入されないため（検出限界０．０１ｇ／１００ｇ以下）、乳酸特有の酸味が生じることは無い。又、植物が収穫された後には、通常、腐敗菌に侵されるものの、配合バランスの良い植物由来乳酸菌が導入されている場合には、これらのバイオプリザベーション効果が働き、腐敗菌の侵入を防止し、殺菌し、植物の鮮度維持を図ることが出来る。
【００４１】
尚、食用植物内の植物由来乳酸菌の生菌数に特に限定は無いが、例えば、１０３ｃｆｕ／ｇ以上であると好ましい。これにより、ヒトを含む動物が食用植物を摂取することで、当該食用植物の植物由来乳酸菌を十分に摂取し、プロバイオティクス効果を得ることが出来る。
【００４２】
又、乳酸菌液は、例えば、発酵培地の添加物として利用することが出来る。具体的には、食品を発酵させるための発酵培地に乳酸菌液を添加したり混在させたりして、その中に食品を添加して発酵させる。ここで、食品は、例えば、ナス、キュウリ等の漬物となる食品でも良いし、上述のように、既に植物由来乳酸菌が導入された食用植物でも良い。又、発酵は、乳酸発酵を含み、乳酸菌液を、チーズやヨーグルトの発酵原料の一部として利用しても良い。発酵方法は、食品の種類に応じて適宜変更される。例えば、発酵培地に、基質（糖質及び蛋白質）、乳酸菌液を投入し、上述の乳酸菌液の培養条件を考慮して、４０℃等の所定の発酵温度で、１０時間〜３６時間等の所定の発酵期間で発酵することで、美味な発酵食品が出来上がる。発酵培地は、大豆等の蛋白質を有効利用出来る、おからを採用しても良い。
【００４３】
ここで、植物由来乳酸菌が導入された食用植物を、乳酸菌液で発酵させることで、当該植物由来乳酸菌の生菌数が著しく増加するため、プロバイオティクス効果を確実に得ることが出来る発酵食品となる。この発酵食品内の植物由来乳酸菌の生菌数は、例えば、１０８ｃｆｕ／ｇ以上となる。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例、比較例等によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。
【００４５】
（実施例１）
ホモ型植物由来乳酸菌は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４７で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７５０で特定される乳酸菌との２種類を採用し、ヘテロ型植物由来乳酸菌は、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４８で特定される乳酸菌と、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７４９で特定される乳酸菌との２種類を採用した。図１に示すように、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌とを通常の配合方法によりバランスよく配合し、その配合した配合物を市販の培養釜に入れ、通常の基質（蛋白質及び糖質）を追加し、４０度の培養温度で２４時間の培養時間だけ培養し、乳酸発酵させた。乳酸発酵後の乳酸菌液のｐＨが４．０であり、生菌数が１０７ｃｆｕ／ｇ以上となったことを確認し、それを実施例１の乳酸菌液とした。
【００４６】
（試験例１）
ＨｂＡ１ｃが８．６％であるＩＩ型糖尿病の患者が、朝・昼・夕の食事時と就寝前の１日４回、実施例１における乳酸菌液を所定量（例えば、３０ｃｃ）摂取することを６ヵ月間継続した。その結果、ＨｂＡ１ｃが８．６％から５．８％まで低下し、糖尿病の改善が見られた。尚、ＨｂＡ１ｃの正常範囲は、４．３％〜５．６％である。
【００４７】
（試験例２）
ＣＡ１９−９が２９１１．６Ｈの膵臓癌の患者に、朝・昼・夕の食事時と就寝前の１日４回、実施例１における乳酸菌液を所定量（例えば、２０ｃｃ）摂取することを３カ月継続させた。その結果、ＣＡ１９−９が１２００．０Ｈ以下となり、膵臓癌の増殖、転移が停止し、改善に向かっていることが確認された。
【００４８】
（実施例２）
実施例１の乳酸菌液の製造方法において、培養温度を３０℃とし、培養時間を３６時間〜４８時間としたこと以外は、同様の製造方法によって乳酸菌液を製造した。製造後の乳酸菌液のｐＨが４．０であり、生菌数が１０７ｃｆｕ／ｇ以上となったことを確認し、それを実施例２の乳酸菌液とした。
【００４９】
（試験例３）
直腸癌、子宮・卵巣癌の患者に、直腸前方、子宮・卵巣を切除後、朝・昼・夕の食事時と就寝前の１日４回、実施例２における乳酸菌液を所定量（例えば、６０ｃｃ）摂取することを３カ月継続させた。その結果、３か月後の検診では、直腸癌の局所再発が無く、骨盤内及び下腸間膜動脈根部周囲リンパ節は縮小し、リンパ節転移巣はほぼ消失した。
【００５０】
（実施例３）
実施例１の乳酸菌液の製造方法において、培養温度を５５℃とし、培養時間を１０時間としたこと以外は、同様の製造方法によって乳酸菌液を製造した。製造後の乳酸菌液のｐＨが３．５であり、生菌数が１０７ｃｆｕ／ｇ以上となったことを確認し、それを実施例３の乳酸菌液とした。
【００５１】
（試験例４）
実施例３における乳酸菌液をそのまま用いた生菌の乳酸菌液と、実施例３における乳酸菌液に６０度以上加熱させることで、植物由来乳酸菌を死滅させた乳酸菌液とを用意した。胃潰瘍の４匹のラットに、実施例３における乳酸菌液を２％添加した試料を２週間継続して摂取させた後に、胃潰瘍の状態を確認した。乳酸菌液が無い飼料を摂取させたラットを対照区とし、植物由来乳酸菌を死滅させた乳酸菌液の飼料を摂取させたラットを死菌区とし、植物由来乳酸菌を生菌とした乳酸菌液の飼料を摂取させたラットを生菌区とした。その結果、図２に示すように、対照区では、全てのラットにおいて胃潰瘍の症状が確認されたが、死菌区では、胃潰瘍の発現がやや抑えられており、生菌区では、胃潰瘍の発現が見られなかった。
【００５２】
（試験例５）
乳牛に、実施例１における乳酸菌液を５．０ｗ％添加した飼料を数週間継続して摂取させた。その結果、その乳牛の搾乳量が、乳酸菌液が無添加の飼料を摂取していた乳牛の搾乳量と比較して２５％〜３０％増加した。
【００５３】
（試験例６）
肉牛に、実施例２における乳酸菌液を１０．０ｗｔ％添加した飼料を数週間継続して摂取させた。その結果、その肉牛の牛肉質等級が、乳酸菌液が無添加の飼料を摂取していた肉牛の牛肉質等級「４」と比較して、「５」に向上した。
【００５４】
（試験例７）
子豚は、離乳期の給餌の変化に伴い胃腸の脆弱の原因により、下痢や肺炎を発症し、体力衰退して、毎月平均５頭〜６頭死亡する。子豚に、実施例３における乳酸菌液を１．０ｗｔ％添加した飼料を６ヵ月間継続して摂取させた。その結果、胃腸の脆弱による子豚の死亡は無くなった。
【００５５】
（実施例４）
実施例１の乳酸菌液の製造方法において、他の乳酸菌（動物由来乳酸菌）を添加したこと以外は、同様の製造方法によって乳酸菌液を製造した。製造後の乳酸菌液のｐＨが３．５であり、生菌数が１０７ｃｆｕ／ｇ以上となったことを確認し、それを実施例４の乳酸菌液とした。
【００５６】
（試験例８）
採卵鶏に、実施例４における乳酸菌液を添加した飼料を数週間継続して摂取させた。その結果、その採卵鶏の産卵期間が、乳酸菌液が無添加の飼料を摂取していた採卵鶏の産卵期間と比較して、平均３０％延長した。
【００５７】
（試験例９）
実施例１における乳酸菌液を０．００１ｗｔ％添加した土壌にバジルを植えて、間欠的に霧吹きで水を供給し、発芽から約２ヵ月間栽培した。乳酸菌液が無い土壌で栽培したバジルを対照区とし、乳酸菌液が添加された土壌で栽培したバジルを実験区とした。その結果、図３Ａに示すように、発芽から約１カ月後では、実験区のバジルが対照区のバジルよりも生長していることが分かった。更に、図３Ｂに示すように、発芽から約２カ月後では、実験区のバジルが対照区のバジルよりも約３０％以上速く生長していることが分かった。財団法人日本食品分析センターによる分析では、実験区のバジル内における植物由来乳酸菌の生菌数は、１．２×１０５ｃｆｕ／ｇであった。それを食すると、植物独特の味が消失し、まろやかな味であった。
【００５８】
（試験例１０）
実施例２における乳酸菌液を０．０３ｗ％の添加濃度で添加した土壌にレタスを植えて、間欠的に霧吹きで水を供給し、発芽から７日間栽培した。乳酸菌液が無い土壌で栽培したレタスを対照区とし、乳酸菌液が添加された土壌で栽培したレタスを実験区とした。その結果、図３Ｃに示すように、発芽から７日後では、実験区のレタスが対照区のレタスよりも約２５％以上速く生長していることが分かった。財団法人日本食品分析センターによる分析では、実験区のレタス内における植物由来乳酸菌の生菌数は、１．１×１０６ｃｆｕ／ｇであった。それを食すると、植物独特の味が消失し、まろやかな味であった。
【００５９】
（試験例１１）
実施例３における乳酸菌液を１０ｗｔ％添加した土壌に苺を植えて、間欠的に霧吹きで水を供給し、発芽から数週間栽培した。乳酸菌液が無い土壌で栽培した苺を対照区とし、乳酸菌液が添加された土壌で栽培した苺を実験区とした。その結果、図４Ａに示すように、発芽から数週間後では、実験区の苺が対照区の苺よりも約４０％以上速く生長していることが分かった。財団法人日本食品分析センターによる分析では、実験区の苺内における植物由来乳酸菌の生菌数は、１．８×１０３ｃｆｕ／ｇであった。それを食すると、まろやかな味であった。
【００６０】
（試験例１２）
実施例４における乳酸菌液を５ｗｔ％添加した培養液に玉ねぎを植えて、水耕栽培とし、約１カ月間栽培した。乳酸菌液が無い培養液で栽培した玉ねぎを対照区とし、乳酸菌液が添加された培養液で栽培した玉ねぎを実験区とした。その結果、図４Ｂに示すように、約１カ月後では、実験区の玉ねぎが対照区の玉ねぎよりも約３０％以上速く生長していることが分かった。財団法人日本食品分析センターによる分析では、実験区の玉ねぎ内における植物由来乳酸菌の生菌数は、２．７×１０３ｃｆｕ／ｇであった。それを食すると、まろやかな味であった。
【００６１】
（実施例５）
実施例１の乳酸菌液の製造方法において、ホモ型植物由来乳酸菌とヘテロ型植物由来乳酸菌とに、更に、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０８８８で特定されるバチルス・サブチルス菌を少量配合したこと以外は、同様の製造方法によって製造した乳酸菌液を実施例５の乳酸菌液とした。
【００６２】
（試験例１３）
養殖用の海老に、実施例５における乳酸菌液を２ｗｔ％添加した飼料を数週間継続して摂取させた。その結果、その海老の生長速度は、乳酸菌液が無添加の飼料を摂取していた海老の生長速度と比較して約２５％以上速く生長し、その海老の収穫率が９０％となった。通常の海老の養殖では、５０％〜７０％である。それを食すると、美味であった。
【００６３】
（試験例１４）
豆乳（基質）とトマト（他の素材）との比率を１：９にした、全体の量が４００ｋｇである物に、実施例１における乳酸菌液を少量接種させ、乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵を行って発酵物を得た。発酵物の体積は、基質の数倍にも増加し、それを食すると、美味であった。
【００６４】
（試験例１５）
おからに、実施例２における乳酸菌液を少量接種させ、乳酸菌液をスターターとして乳酸発酵を行って発酵物を得た。それを食すると、美味であった。
【００６５】
このように、本発明に係る乳酸菌液は、ヒト、動物、水産物、植物等、あらゆる生物（ウイルス・リケッチアを除く）の細胞活性化を果たし、健康増進、免疫力向上等を図ることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
以上のように、本発明に係る乳酸菌液、発酵物の製造方法、食用植物の製造方法、乳酸菌液の製造方法は、食品分野はもちろん、医薬分野、健康分野、衛生分野、美容分野、畜産分野、養殖分野等に有用であり、細胞活性による、あらゆる生物の健康増進、免疫力向上等を図ることが可能な乳酸菌液、発酵物の製造方法、食用植物の製造方法、乳酸菌液の製造方法として有効である。
【要約】      （修正有）【課題】あらゆる生物の健康増進、免疫力向上等を図ることが可能となる細胞活性方法の提供。【解決手段】ホモ型植物由来乳酸菌と、ヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合し、当該配合物を乳酸発酵することで得られる乳酸菌液。又、ホモ型植物由来乳酸菌と、ヘテロ型植物由来乳酸菌とを配合する配合ステップと、前記配合物を乳酸発酵して乳酸菌液を得る乳酸発酵ステップと、を備える乳酸菌液の製造方法。乳酸液の植物由来の生菌数が、１０７ｃｆｕ／ｇ以上であり、そのｐＨが３．５〜４．０である乳酸液。【選択図】図１【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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