(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄ−アラニン又はその塩を含むことを特徴とする、皮膚組織におけるラミニン３３２産生促進組成物(ただし、肌荒れの改善用途を除く)。
【請求項２】
肌荒れを除く皮膚状態を抑制及び／又は改善するために用いられることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記皮膚状態は、光老化、シワ、小ジワ及び乾燥からなるグループから選択されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
医薬品として用いられることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
皮膚外用剤として用いられることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、ラミニン３３２産生促進組成物と、前記化合物を投与するステップを含む皮膚障害を抑制及び／又は改善する方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
ラミニンは、α鎖、β鎖及びγ鎖からなる３本鎖タンパク質で、５種類のα鎖、３種類のβ鎖及び３種類のγ鎖の組合せで少なくとも１５種類のアイソマーの存在が知られている。なかでも、ラミニン３３２（α３β３γ２、以前の命名法ではラミニン５）は、表皮と真皮とを隔てる基底膜に多量に存在し、皮膚の構造及び機能に重要な役割を果たすと考えられる（非特許文献１）。ラミニン３３２のノックアウトマウスは、表皮と真皮とが分離し、水泡を形成するヒト遺伝性疾患である結合部型表皮水疱症と同様の表現型となり、ラミニン３３２が表皮と真皮の接着に必須であることが示された（非特許文献２）。また、ヒト線維芽細胞を包埋したコラーゲンゲル上で角化細胞を培養した皮膚等価モデルに、ラミニン３３２の精製標品を添加すると、基底膜形成が増強される（非特許文献３）。表皮細胞で産生される活性化タンパク質分解酵素プラスミンは、ラミニン３３２のα３サブユニットのアミノ末端及びカルボキシル末端のペプチドと、β３サブユニットのアミノ末端のペプチドとを切断する。切断断片には、それぞれ、細胞の基質接着分子の認識部位と、７型コラーゲンとの結合部位とが含まれる。そこで、プラスミンで消化されたラミニン３３２は、角質細胞との接着能力が減少する。また、プラスミンで消化されたラミニン３３２は７型コラーゲンとの親和性が減退する。そのため、紫外線照射その他による皮膚の老化には、プラスミンによるラミニン３３２消化と、これによる基底膜の機能低下とが関与すると考えられる（非特許文献４）。【０００３】
したがって、ラミニン３３２の産生を促進することによって、紫外線照射その他による皮膚の老化を抑制及び／又は改善できる可能性がある。ラミニン３３２の産生を促進する因子については、α３サブユニットの遺伝子の転写をＨＩＦ１（非特許文献５）及びＳｍａｄ４（非特許文献６）が誘導することが近年報告された。しかし、ＨＩＦ１は酸素欠乏や機械的刺激のような環境刺激に応答する転写調節因子であり、好炎症性サイトカインによっても上向き調節される。Ｓｍａｄ４はＴＧＦβのシグナル伝達に関与する転写調節因子である。これらの因子は、いずれも分子量の大きいタンパク質であり、活性がリン酸化等による修飾や他のサブユニットとの会合状態によって調節されるため、直接生体内に投与して、皮膚組織内の表皮細胞に送達させて、ラミニン３３２の産生を促進するために使用することはできない。また、いずれも広範な因子によって調節され、ラミニン３３２の産生を促進する他に炎症反応等の生体の機能に大きな影響を与える因子であるため、日常的に安全に使用することはできない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｕｇａｗａｒａら、Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １７（６），４７３−８０（２００８）
【非特許文献２】Ａｂｅｒｄａｍら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．６，２９９，（１９９４）
【非特許文献３】Ａｍａｎｏ，Ｓ．、ＳＯＦＷ  Ｊ．、１３４：１０（２００８）
【非特許文献４】Ａｍａｎｏ，Ｓ．、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．１４：２−７（２００９）
【非特許文献５】Ｆｉｔｓｉａｌｏｓ，Ｇ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．、１２１：２９９２（２００８）
【非特許文献６】Ｚｂｏｒａｌｓｋｉ，Ｄ．ら、ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ、８：２１５（２００８）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、ラミニン３３２の産生を促進することができる組成物であって、日常的に使用でき、安定かつ安全な組成物を開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、ラミニン３３２産生促進組成物を提供する。【０００７】
本発明のラミニン３３２産生促進組成物は皮膚状態を抑制及び／又は改善するために用いられる場合がある。【０００８】
本発明のラミニン３３２産生促進組成物において、前記皮膚状態は、光老化、シワ、肌荒れ、小ジワ及び乾燥を含むが、これらに限定されない。【０００９】
本発明のラミニン３３２産生促進組成物は医薬品として用いられる場合がある。【００１０】
本発明のラミニン３３２産生促進組成物は皮膚外用剤として用いられる場合がある。【００１１】
本発明のラミニン３３２産生促進組成物は食品として用いられる場合がある。【００１２】
本発明は、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、ラミニン３３２産生促進組成物を投与するステップを含む、皮膚状態を抑制及び／又は改善する方法を提供する。【００１３】
本発明の方法によって抑制及び／又は改善される皮膚状態は、光老化、シワ、肌荒れ、小ジワ及び乾燥を含むが、これらに限定されない。【００１４】
本発明の方法において、前記ラミニン３３２産生促進組成物は医薬品の場合がある。【００１５】
本発明の方法において、前記ラミニン３３２産生促進組成物は皮膚外用剤の場合がある。【００１６】
本発明の方法において、前記ラミニン３３２産生促進組成物は食品組成物の場合がある。【００１７】
本明細書においてＤ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの「塩」とは、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンのラミニン３３２産生の促進効果を損なわないことを条件として、金属塩、アミン塩等を含むいずれかの塩をいう。前記金属塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等を含む場合がある。前記アミン塩は、トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩等を含む場合がある。【００１８】
本明細書においてＤ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの「誘導体」とは、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンのラミニン３３２産生の促進効果を損なわないことを条件として、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの分子が、アミノ基か、カルボキシル基か、側鎖かにおいて、いずれかの原子団と共有結合したものを指す。前記いずれかの原子団は、Ｎ−フェニルアセチル基、４，４’−ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基等のような保護基と、タンパク質、ペプチド、糖、脂質、核酸等のような生体高分子と、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリビニル、ポリエステル等のような合成高分子と、エステル基等のような官能基とを含むがこれらに限定されない。前記エステル基は、例えば、メチルエステル、エチルエステルその他の脂肪族エステルか、芳香族エステルかを含む場合がある。【００１９】
アミノ酸には光学異性体としてＬ−体とＤ−体とがあるが、天然のタンパク質はＬ−アミノ酸がペプチド結合したものであり、細菌の細胞壁などの例外を除きＬ−アミノ酸のみが利用されていることから、ヒトを始めとする哺乳類にはＬ−アミノ酸のみが存在し、Ｌ−アミノ酸のみを利用していると考えられてきた。（木野内忠稔ら、蛋白質  核酸  酵素、５０：４５３−４６０  （２００５）、レーニンジャーの新生化学［上］第２版  ｐｐ１３２−１４７  （１９９３）  廣川書店、ハーパー・生化学  原書２２版  ｐｐ２１−３０（１９９１）  丸善）したがって、従前より、学術的にも産業的にもアミノ酸としてはＬ−アミノ酸のみが専ら使用されてきた。【００２０】
例外的にＤ−アミノ酸が使用されるケースとしては、細菌に産生させる抗生物質の原料として使用する場合、およびアミノ酸を化学合成した際に等量得られるＬ−アミノ酸とＤ−アミノ酸混合物からＬ−アミノ酸のみを分取するコストを省くために、そのままＤＬ−アミノ酸混合物としてＤ−アミノ酸を使用している食品添加物の例がある。しかし、生理活性を有する物質として、Ｄ−アミノ酸だけを産業的に使用している例は従来なかった。【００２１】
Ｄ−セリンやＤ−アスパラギン酸はＤ体の割合が高いことから比較的研究が進んでいる。Ｄ−セリンは大脳、海馬に局在し、脳内のＮＭＤＡ受容体の調節因子で明らかにされている。Ｄ−アスパラギン酸は精巣や松果体に局在が認められ、ホルモン分泌の制御に関与していることが示されている（特開２００５−３５５８号公報）。しかし、皮膚におけるＤ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの生理作用は明らかにされていない。【００２２】
以下の実施例に示すとおり、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンがラミニン３３２産生量を増大する効果はこれまで知られていなかった。したがって、Ｄ−アラニン及び／又はＤ−ヒドロキシプロリンを含む本発明のラミニン３３２産生促進組成物は新規発明である。【００２３】
近年、ｄｄＹマウスに１０ｍＭのＤ−アミノ酸水溶液を２週間自由摂取させた後、各器官でＤ−アミノ酸濃度を測定したところ、松果体では松果体１腺あたり３−１０００ｐｍｏｌであり、脳組織では湿重量１グラムあたり２−５００ｎｍｏｌであることが報告された（Ｍｏｒｉｋａｗａ，Ａ．ら、Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，３２：１３−２０（２００７））。これに基づいて、以下に説明する本発明の組成物に含まれるＤ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの一日摂取量の下限が算出された。【００２４】
本発明のＤ−アラニンは、以下の実施例に示すとおり、培養ヒト表皮角化細胞に対して０．１μＭ〜１μＭの濃度でラミニン３３２産生を促進する効果を有する。したがって、本発明の皮膚症状改善剤と、皮膚外用剤と、食品組成物とに含まれるＤ−アラニンの量は、この濃度範囲のＤ−アラニンが生体皮膚組織の線維芽細胞に送達されることを条件として、いかなる含有量であってもかまわない。本発明の組成物が外用剤の場合におけるＤ−アラニンの含有量は、本発明の組成物全量中０．００００１５重量％から５０重量％か配合可能な最大重量濃度かまでの範囲であればよい。すなわち前記組成物が外用剤の場合におけるＤ−アラニンの含有量は、０．００００３重量％〜３０重量％が望ましく、０．０００３重量％〜３重量％が最も望ましい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ−アラニンの含有量は、０．００００１重量％〜１００重量％の範囲であればよい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ−アラニンの含有量は、０．００００２重量％〜８０重量％が望ましく、０．０００２重量％〜６０重量％であることが最も望ましい。なお、本発明の組成物に含まれるＤ−アラニンの一日摂取量の下限は、体重１ｋｇあたり０．０１ｎｇであればよく、０．１ｎｇが好ましく、１ｎｇがより好ましい。【００２５】
本発明のＤ−ヒドロキシプロリンは、以下の実施例に示すとおり、培養ヒト表皮角化細胞に対して０．１μＭ〜１μＭの濃度でラミニン３３２産生を促進する効果を有する。したがって、本発明の皮膚症状改善剤と、皮膚外用剤と、食品組成物とに含まれるＤ−ヒドロキシプロリンの量は、この濃度範囲のＤ−ヒドロキシプロリンが生体皮膚組織の線維芽細胞に送達されることを条件として、いかなる含有量であってもかまわない。本発明の組成物が外用剤の場合におけるＤ−ヒドロキシプロリンの含有量は、本発明の組成物全量中０．００００１５重量％から５０重量％か配合可能な最大重量濃度かまでの範囲であればよい。すなわち前記組成物が外用剤の場合におけるＤ−ヒドロキシプロリンの含有量は、０．００００３重量％〜３０重量％が望ましく、０．０００３重量％〜３重量％が最も望ましい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ−ヒドロキシプロリンの含有量は、０．００００１重量％〜１００重量％の範囲であればよい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ−ヒドロキシプロリンの含有量は、０．００００２重量％〜８０重量％が望ましく、０．０００２重量％〜６０重量％であることが最も望ましい。なお、本発明の組成物に含まれるＤ−ヒドロキシプロリンの一日摂取量の下限は、体重１ｋｇあたり０．０１ｎｇであればよく、０．１ｎｇが好ましく、１ｎｇがより好ましい。【００２６】
本発明の組成物は、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリン、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの塩、及び／又は、生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ−アラニンを放出できる誘導体に加えて、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンのラミニン３３２産生の促進効果を損なわないことを条件として、さらに１種類又は２種類以上の薬学的に許容される添加物を含む場合がある。前記添加物は、希釈剤及び膨張剤と、結合剤及び接着剤と、滑剤と、流動促進剤と、可塑剤と、崩壊剤と、担体溶媒と、緩衝剤と、着色料と、香料と、甘味料と、防腐剤及び安定化剤と、吸着剤と、当業者に知られたその他の医薬品添加剤とを含むが、これらに限られない。【００２７】
本発明の組成物は、有効成分として、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリン、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの塩、及び／又は、生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンを放出できる誘導体のみを使用して調製することも可能であるが、通常本発明の効果を損なわない範囲で、医薬部外品を含む化粧品や医薬品等の皮膚外用剤等に用いられる他の成分を、必要に応じて適宜配合することができる。前記他の成分（任意配合成分）としては、例えば、油分、界面活性剤、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤等が挙げられる。【００２８】
本発明の皮膚状態を抑制及び／又は改善するために用いられるラミニン３３２産生促進組成物（以下、「皮膚状態改善剤」という。）の剤型は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ジェル剤、貼付剤等の外用剤と、例えば粉末、顆粒、ソフトカプセル、錠剤等の経口剤と、例えば経鼻スプレー等の経鼻剤と、注射剤とを含む、従来の医薬部外品組成物及び医薬品組成物に用いるものであればいかなるものでもかまわない。【００２９】
本発明の皮膚外用剤の剤型は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ジェル剤、貼付剤等を含む、従来の皮膚外用剤に用いるものであればいかなるものでもかまわない。【００３０】
本発明の食品組成物は、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリン、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの塩、及び／又は、生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンを放出できる誘導体に加えて、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンのラミニン３３２産生の促進効果を損なわないことを条件として、調味料、着色料、保存料その他の食品として許容される成分を含む場合がある。【００３１】
本発明の食品組成物は、例えば、キャンディー、クッキー、味噌、フレンチドレッシング、マヨネーズ、フランスパン、醤油、ヨーグルト、ふりかけ、調味料・納豆のたれ、納豆、もろみ黒酢等、従来食品組成物に用いるものであればいずれでもよく、前記例示に限定されるものでない。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】ＫＣ細胞に対するＤ−アラニンの影響を示すグラフ。
【図２】ＫＣ細胞でのラミニン３３２産生に対するＤ−アラニンの効果を示すグラフ。
【図３】ＨａＣａＴ細胞に対するＤ−アラニンの影響を示すグラフ。
【図４】ＨａＣａＴ細胞に対するＤ−ヒドロキシプロリンの影響を示すグラフ。
【図５】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するＤ−アラニンの効果を示すグラフ。
【図６】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するＤ−ヒドロキシプロリンの効果を示すグラフ。
【図７】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のＤ−アラニンの効果を示すグラフ。
【図８】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のＤ−ヒドロキシプロリンの効果を示すグラフ。
【図９】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のＤ−アスパラギン酸の効果を示すグラフ。
【図１０】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のＤ−アスパラギンの効果を示すグラフ。
【図１１】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のＤ−プロリンの効果を示すグラフ。
【図１２】ＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のＤ−セリンの効果を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。
【００３４】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【実施例１】
【００３５】
１．アラニン及びヒドロキシプロリン添加によるラミニン３３２産生促進
１−１．材料と方法
（１）細胞
細胞は、ヒト表皮細胞由来のＨａＣａＴ細胞（Ｈ．  Ｈａｎｓら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３９：３９９（１９９８））と、ヒト角化細胞由来のＫＣ細胞（三光純薬（株）、製造元：ＬＯＮＺＡ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ  Ｉｎｃ．）とが用いられた。前記細胞は、２４ウェルプレートに１ウェルあたり４ｘ１０４個となるように播種され、細胞培養用培地（Ｄ−ＭＥＭ（１ｇ／Ｌグルコース）、和光純薬）にＢＳＡを０．１％添加した培地（以下、「通常培地」という。）を用いて、３７°Ｃ、５％ＣＯ２及び飽和水蒸気雰囲気下で２４時間培養された。【００３６】
（２）アラニン及びヒドロキシプロリンの添加
その後、前記細胞は、Ｌ−又はＤ−アラニンの１μＭか、Ｌ−及びＤ−アラニンをともに０．５μＭずつか、Ｌ−又はＤ−ヒドロキシプロリンの１μＭか、Ｌ−及びＤ−ヒドロキシプロリンをともに０．５μＭずつかを前記通常培地に添加した培地に切り替えて２４時間培養された。アラニン及びヒドロキシプロリンを添加しない前記通常培地が陰性対照として用いられた。本実施例で用いられたＤ−ヒドロキシプロリンは、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンであった。【００３７】
（３）ラミニン３３２産生量の定量
培養終了後に培地を回収し、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清中のラミニン３３２濃度がＥＬＩＳＡ法（Ａｍａｎｏ，  Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２２４：１６１（１９９９））を用いて測定された。前記ＥＬＩＳＡ法は、ラミニン５のα３鎖に対するモノクローナル抗体であるＢＭ１６５と、ラミニン５のβ３鎖に対するモノクローナル抗体である６Ｆ１２のビオチン化コンジュゲートとを用いるサンドイッチＥＬＩＳＡ法で、ホースラディッシュペロキシダーゼ標識アビジンＤ(Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ社、カタログ番号Ａ−２００４)により検出される。ＰＢＳが対照として用いられた。【００３８】
（４）生細胞数の定量
培地回収後、細胞はＰＢＳで洗浄され、ａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ、バイオソース・インターナショナル）が最終濃度１０％となるように添加された。２時間後、Ａｈｍｅｄ  Ｓ．Ａ．ら、（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄ．  １７０，２１１−２２４（１９９４））及び製造者の指示書に従って励起波長５４４ｎｍ、蛍光波長５９０ｎｍでａｌａｍａｒＢｌｕｅ液の蛍光強度が測定された。【００３９】
１−２．結果
（１）ＫＣ生細胞数の定量
図１は、ＫＣ細胞の増殖へのアラニン添加の影響を調べた実験結果を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で３回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。【００４０】
ＫＣ細胞において、陰性対照のａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）の蛍光強度の相対値（以下、同じ）は５０であった。１μＭのＬ−アラニン添加培地と、１μＭのＤ−アラニン添加培地と、０．５μＭずつのＬ−及びＤ−アラニン添加培地とで培養されたＫＣ細胞の蛍光強度は、それぞれ、４０、４５及び５０であった。ＫＣ細胞では、陰性対照と比較してアラニン添加培地で培養された細胞のａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）の蛍光強度は、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ検定で有意差はなかった。そこで、Ｌ−及びＤ−アラニンは、ＫＣ細胞に対して細胞毒性がないことが示された。【００４１】
（２）ＫＣ細胞のラミニン３３２産生
図２にＫＣ細胞でのラミニン３３２産生に対するアラニン添加の効果を調べた実験結果を示す。図２のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度に比例するＥＬＩＳＡ測定の吸光度を、各ウェルの細胞数に比例するａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）の蛍光強度で除算した商（以下、「細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値」という。）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で３回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。また、アステリスク（＊＊）はＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ検定でｐが１％未満であることを示す。【００４２】
細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値は、陰性対照で０．３５であった。１μＭのＬ−アラニン添加培地と、１μＭのＤ−アラニン添加培地と、０．５μＭずつのＬ−及びＤ−アラニン添加培地とで培養されたＫＣ細胞の細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値は、それぞれ、０．４０、０．５０及び０．４５であった。１μＭのＤ−アラニン添加と陰性対照との間ではＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ検定でｐが１％未満となり、有意の差があった。そこで、Ｄ−アラニン添加によるＫＣ細胞でのラミニン３３２産生促進が証明された。【００４３】
（３）ＨａＣａＴ生細胞数の定量
図３及び図４は、ＨａＣａＴ細胞の増殖へのアラニン及びヒドロキシプロリンの添加の影響を調べた実験結果を示す。以下、Ｄ−ヒドロキシプロリン（Ｄ−Ｈｙｐ）とは、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを指す。各実験条件の誤差棒は同一条件で３回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。【００４４】
ＨａＣａＴ細胞において、陰性対照のａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）の蛍光強度は３００であった。１μＭのＬ−アラニン添加培地と、１μＭのＤ−アラニン添加培地と、０．５μＭずつのＬ−及びＤ−アラニン添加培地とで培養されたＨａＣａＴ細胞の蛍光強度はいずれも２５０であった（図３）。１μＭのＬ−ヒドロキシプロリン添加培地と、１μＭのＤ−ヒドロキシプロリン添加培地と、０．５μＭずつのＬ−及びＤ−ヒドロキシプロリン添加培地とで培養されたＨａＣａＴ細胞の蛍光強度はいずれも２８０であった（図４）。ＨａＣａＴ細胞でも、陰性対照と比較してアラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンの添加培地で培養された細胞のａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標）の蛍光強度は、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ検定で有意差はなかった。そこで、Ｌ−及びＤ−アラニンと、Ｌ−及びＤ−ヒドロキシプロリンとは、ＨａＣａＴ細胞に対しても細胞毒性がないことが示された。【００４５】
（４）アラニン添加によるＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２産生
図５にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するアラニン添加の効果を調べた実験結果を示す。図５のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中の細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で３回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。また、アステリスク（＊＊）はＳｃｈｅｆｆｅ’ｓ  Ｆ−検定でｐが１％未満であり、アステリスク（＊）はｐが５％未満であることを示す。【００４６】
細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値は、陰性対照で０．０４であった。１μＭのＬ−アラニン添加培地と、１μＭのＤ−アラニン添加培地と、０．５μＭずつのＬ−及びＤ−アラニン添加培地とで培養されたＨａＣａＴ細胞の細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値は、それぞれ、０．０７、０．１１及び０．１０であった。１μＭのＤ−アラニン添加と陰性対照との間ではＳｃｈｅｆｆｅ’ｓ  Ｆ−検定でｐが１％未満となり、Ｄ−アラニン及びＬ−アラニンの０．５μＭずつ混合添加と陰性対照との間ではＳｃｈｅｆｆｅ’ｓ  Ｆ−検定でｐが５％未満となり、１μＭのＤ−アラニンと１μＭのＬ−アラニンとの間ではＳｃｈｅｆｆｅ’ｓ  Ｆ−検定でｐが５％未満となり、いずれも有意の差があった。そこで、ＫＣ細胞と同様に、ＨａＣａＴ細胞でもＤ−アラニン添加によるラミニン３３２産生促進が証明された。【００４７】
（５）ヒドロキシプロリン添加によるＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２産生
図６にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するヒドロキシプロリン添加の効果を調べた実験結果を示す。図６のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中の細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で３回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００４８】
細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値は、陰性対照で０．０４であった。１μＭのＬ−ヒドロキシプロリン添加培地と、１μＭのＤ−ヒドロキシプロリン添加培地と、０．５μＭずつのＬ−及びＤ−ヒドロキシプロリン添加培地とで培養されたＨａＣａＴ細胞の細胞数あたりのラミニン３３２濃度の相対値は、それぞれ、０．０５、０．０６５及び０．０６であった。
【実施例２】
【００４９】
２．さまざまなアミノ酸添加によるラミニン３３２産生量の比較
２−１．材料と方法
細胞はＨａＣａＴ細胞が用いられ、実施例１と同様に培養された。その後、前記細胞は、１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−又はＤ−アラニンか、Ｌ−又はＤ−ヒドロキシプロリンか、Ｌ−又はＤ−アスパラギン酸か、Ｌ−又はＤ−アスパラギンか、Ｌ−又はＤ−プロリンか、Ｌ−又はＤ−セリンかのアミノ酸を通常培地に添加した培地に切り替えて２４時間培養された。前記アミノ酸を添加しない前記通常培地が陰性対照として用いられた。本実施例で用いられたＤ−ヒドロキシプロリンは、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンであった。ラミニン３３２産生量は実施例１と同様に測定された。なお、以下の実験では、アミノ酸添加による細胞毒性はどの濃度でも認められなかったため、それぞれの実験条件で細胞のラミニン３３２産生量が比較された。【００５０】
２−２．結果
（１）アラニン添加
図７にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のアラニンの添加効果を調べた実験結果を示す。図７のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で４回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００５１】
ラミニン３３２濃度は、陰性対照で１．７ｎｇ／ｍＬであった。１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−アラニン添加培地及びＤ−アラニン添加培地で培養されたＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２濃度は、それぞれ、１．７ｎｇ／ｍＬ及び１．７ｎｇ／ｍＬと、２．３ｎｇ／ｍＬ及び３．４ｎｇ／ｍＬと、２．８ｎｇ／ｍＬ及び４．８ｎｇ／ｍＬとであった。以上の結果から、Ｄ−アラニンは、１００ｎｇ／ｍＬ以上の濃度でラミニン３３２産生を促進することが示された。【００５２】
（２）ヒドロキシプロリン添加
図８にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のヒドロキシプロリンの添加効果を調べた実験結果を示す。図８のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で４回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００５３】
ラミニン３３２濃度は、陰性対照で１．５ｎｇ／ｍＬであった。１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−ヒドロキシプロリン添加培地及びＤ−ヒドロキシプロリン添加培地で培養されたＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２濃度は、それぞれ、１．５ｎｇ／ｍＬ及び１．５ｎｇ／ｍＬと、２．３ｎｇ／ｍＬ及び３．３ｎｇ／ｍＬと、２．７ｎｇ／ｍＬ及び４．４ｎｇ／ｍＬとであった。以上の結果から、Ｄ−ヒドロキシプロリンは、１００ｎｇ／ｍＬ以上の濃度でラミニン３３２産生を促進することが示された。【００５４】
（３）アスパラギン酸添加
図９にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のアスパラギン酸の添加効果を調べた実験結果を示す。図９のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で４回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００５５】
ラミニン３３２濃度は、陰性対照で１．７ｎｇ／ｍＬであった。１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−アスパラギン酸添加培地及びＤ−アスパラギン酸添加培地で培養されたＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２濃度は、それぞれ、１．８ｎｇ／ｍＬ及び１．９ｎｇ／ｍＬと、１．８ｎｇ／ｍＬ及び１．９ｎｇ／ｍＬと、２．０ｎｇ／ｍＬ及び１．７ｎｇ／ｍＬとであった。以上の結果から、Ｌ−及びＤ−アスパラギン酸はラミニン３３２産生を促進しないことが示された。【００５６】
（４）アスパラギン添加
図１０にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のアスパラギンの添加効果を調べた実験結果を示す。図１０のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で４回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００５７】
ラミニン３３２濃度は、陰性対照で１．５ｎｇ／ｍＬであった。１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−アスパラギン添加培地及びＤ−アスパラギン添加培地で培養されたＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２濃度は、それぞれ、１．６ｎｇ／ｍＬ及び１．５ｎｇ／ｍＬと、１．５ｎｇ／ｍＬ及び１．５ｎｇ／ｍＬと、１．６ｎｇ／ｍＬ及び１．５ｎｇ／ｍＬとであった。以上の結果から、Ｌ−及びＤ−アスパラギンはラミニン３３２産生を促進しないことが示された。【００５８】
（５）プロリン添加
図１１にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のプロリンの添加効果を調べた実験結果を示す。図１１のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で４回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００５９】
ラミニン３３２濃度は、陰性対照で１．８ｎｇ／ｍＬであった。１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−プロリン添加培地及びＤ−プロリン添加培地で培養されたＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２濃度は、それぞれ、１．８ｎｇ／ｍＬ及び２．０ｎｇ／ｍＬと、１．９ｎｇ／ｍＬ及び１．９ｎｇ／ｍＬと、１．９ｎｇ／ｍＬ及び１．９ｎｇ／ｍＬとであった。以上の結果から、Ｌ−及びＤ−プロリンはラミニン３３２産生を促進しないことが示された。【００６０】
（６）セリン添加
図１２にＨａＣａＴ細胞でのラミニン３３２産生に対するさまざまな濃度のセリンの添加効果を調べた実験結果を示す。図１２のグラフの縦軸は、各ウェルの培養上清中のラミニン３３２濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で４回繰り返した実験結果の計算値の標準偏差を示す。【００６１】
ラミニン３３２濃度は、陰性対照で１．７ｎｇ／ｍＬであった。１０ｎＭ、１００ｎＭ及び１０００ｎＭのＬ−セリン添加培地及びＤ−セリン添加培地で培養されたＨａＣａＴ細胞のラミニン３３２濃度は、それぞれ、１．８ｎｇ／ｍＬ及び１．８ｎｇ／ｍＬと、１．９ｎｇ／ｍＬ及び１．８ｎｇ／ｍＬと、１．９ｎｇ／ｍＬ及び１．８ｎｇ／ｍＬとであった。以上の結果から、Ｌ−及びＤ−セリンはラミニン３３２産生を促進しないことが示された。【００６２】
結論
実施例１及び２の実験結果から、ラミニン３３２産生促進効果は、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンで認められたが、アスパラギン酸、アスパラギン、プロリン及びセリンでは認められなかった。そこで、Ｄ−アラニン及びＤ−ヒドロキシプロリンは、基底膜の構造及び機能に重要な役割を果たすラミニン３３２の産生を促進することによって、皮膚状態を抑制及び／又は改善できると示唆された。
【実施例３】
【００６３】
本発明にもとづいてＤ−アラニン及び／又はＤ−ヒドロキシプロリンを含む、乳液製剤、貼付剤、錠剤、ソフトカプセル、顆粒、ドリンク、キャンディー、クッキー、味噌、フレンチドレッシング、マヨネーズ、フランスパン、醤油、ヨーグルト、ふりかけ、調味料・納豆のたれ、納豆、もろみ黒酢、クリーム、ボディー用クリーム、ジェル剤、ピールオフマスク、含浸マスク、乳液、化粧水及びエアゾール剤の配合例を以下に示す。これらの配合例は例示を目的として列挙されるものであって本発明の技術的範囲を限定することを意図するものではない。【００６４】
配合例１（乳液製剤）
（組成物）                        配合量（重量％）
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                ０．４２
ベヘニルアルコール                        ０．２
セタノール                                ０．５
グリセリンモノ脂肪酸エステル              １．８
硬化ヒマシ油ＰＯＥ（６０）                １．０
白色ワセリン                              ２．０
流動パラフィン                          １０．０
ミリスチン酸イソプロピル                  ３．０
メチルポリシロキサン（６ｃｓ）            １．５
濃グリセリン                            １３．０
ジプロピレングリコール                    ２．０
カルボキシビニルポリマー                  ０．２５
ヒアルロン酸ナトリウム                    ０．００５
水酸化カリウム                            適量
乳酸                                      適量
エデト酸ナトリウム                        適量
エチルパラベン                            適量
精製水                                    残余

１００．０００【００６５】
配合例２（貼付剤）
（組成物）                              配合量（重量％）
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                      ０．３
ポリアクリル酸                                  ３．０
ポリアクリル酸ナトリウム                        ２．５
ゼラチン                                        ０．５
カルボキシメチルセルロースナトリウム            ４．０
ポリビニルアルコール                            ０．３
濃グリセリン                                  １４．０
１，３−ブチレングリコール                    １２．０
水酸化アルミニウム                              ０．１
エデト酸ナトリウム                              ０．０３
メチルパラベン                                  ０．１
精製水                                          残余

１００．００  【００６６】
配合例３（錠剤）
（組成物）                              配合量（ｍｇ／１錠中）
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                    ３６０．５
乳糖                                          １０２．４
カルボキシメチルセルロースカルシウム            ２９．９
ヒドロキシプロピルセルロース                      ６．８
ステアリン酸マグネシウム                          ５．２
結晶セルロース                                  １０．２

５１５．０  【００６７】
配合例４（錠剤）
（組成物）                            配合量（ｍｇ／１錠中）
ショ糖エステル                                ７０
結晶セルロース                                ７４
メチルセルロース                              ３６
グリセリン                                    ２５
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                  ４７５
Ｎ−アセチルグルコサミン                    ２００
ヒアルロン酸                                １５０
ビタミンＥ                                    ３０
ビタミンＢ６                                  ２０
ビタミンＢ２                                  １０
α−リポ酸                                    ２０
コエンザイムＱ１０                            ４０
セラミド（コンニャク抽出物）                  ５０
Ｌ−プロリン                                ３００

１５００    【００６８】
配合例５（ソフトカプセル）
（組成物）                          配合量（ｍｇ／１カプセル中）
食用大豆油                                ５３０
トチュウエキス                              ５０
ニンジンエキス                              ５０
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                １００
ローヤルゼリー                              ５０
マカ                                        ３０
ＧＡＢＡ                                    ３０
ミツロウ                                    ６０
ゼラチン                                  ３７５
グリセリン                                １２０
グリセリン脂肪酸エステル                  １０５

１５００【００６９】
配合例６（ソフトカプセル）
（組成物）                          配合量（ｍｇ／１カプセル中）
玄米胚芽油                                ６５９
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                ５００
レスベラトロール                              １
ハス胚芽エキス                            １００
エラスチン                                １８０
ＤＮＡ                                      ３０
葉酸                                        ３０

１５００【００７０】
配合例７（顆粒）
（組成物）                        配合量（ｍｇ／１包中）
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン              ４００
ビタミンＣ                              １００
大豆イソフラボン                        ２５０
還元乳糖                                ３００
大豆オリゴ糖                              ３６
エリスリトール                            ３６
デキストリン                              ３０
香料                                      ２４
クエン酸                                  ２４

１２００【００７１】
配合例８（ドリンク）
（組成物）                          配合量（ｇ／６０ｍＬ中）
トチュウエキス                              １．６
ニンジンエキス                              １．６
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                  １．６
還元麦芽糖水飴                            ２８
エリスリトール                              ８
クエン酸                                    ２
香料                                        １．３
Ｎ−アセチルグルコサミン                    １
ヒアルロン酸Ｎａ                            ０．５
ビタミンＥ                                  ０．３
ビタミンＢ６                                ０．２
ビタミンＢ２                                ０．１
α−リポ酸                                  ０．２
コエンザイムＱ１０                          １．２
セラミド（コンニャク抽出物）                ０．４
Ｌ−プロリン                                ２
精製水                                      残余

６０【００７２】
配合例９（キャンディー）
（組成物）                      配合量（重量％）
砂糖                                  ５０
水飴                                  ４８
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン              １
香料                                    １

１００【００７３】
配合例１０（クッキー）
（組成物）                        配合量（重量％）
薄力粉                                  ４５．０
バター                                  １７．５
グラニュー糖                            ２０．０
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                ４．０
卵                                      １２．５
香料                                      １．０

１００．０【００７４】
配合例１０（クッキー）の製造方法
バターを撹拌しながらグラニュー糖を徐々に添加し、卵及び香料と、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンとを添加して撹拌した。十分に混合した後、均一に振るった薄力粉を加えて低速で撹拌し、塊状で冷蔵庫で寝かせた。その後、成型し１７０°Ｃ１５分間焼成しクッキーとした。【００７５】
配合例１１（味噌）
（組成物）                  配合量（ｇ）
大豆                              １０００
米麹                              １０００
塩                                  ４２０
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン          １５８
水                                    残余

４０００【００７６】
配合例１１（味噌）の製造方法
米こうじと塩とをよく混ぜ合わせる。洗浄した大豆を３倍量の水に一晩つけた後に水を切り、新しい水を加えながら煮込み、ざるにあける。煮汁（種水）を集め、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを１０％ｗ／ｖとなるように溶解する。煮あがった豆を直ちにすりつぶし、塩を混ぜた米麹を加えて、上記のＤ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを溶解した種水を足しながら粘土程の固さになるまでむらなく混ぜ合わせる。団子状に丸めたものを桶に隙間のない様に隅々まで、しっかりと詰め込み、表面を平らにしてラップで覆い密封する。３箇月後に容器を移し変え、表面を平らにしてラップで覆う。なお、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを種水に加える代わりに、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを多く産生する米麹を用いてもよい。前記米麹を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法で、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを定量することにより選抜することができる。また、市販の味噌にＤ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加えてもよい。【００７７】
配合例１２（フレンチドレッシング）
（組成物）                    配合量（ｇ）
サラダ油                            ２７．０
酢                                  ３０．０
塩化ナトリウム                        ０．９
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン            １．１
胡椒                                  １．０

６０．０  【００７８】
配合例１２（フレンチドレッシング）の製造方法
酢に塩化ナトリウムと、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンとを加えた後に、よく攪拌して溶解する。サラダ油を加えて、よく攪拌し胡椒を加える。【００７９】
配合例１３（マヨネーズ）
（組成物）                  配合量（ｇ）
サラダ油                          １３４．０
酢                                    ５
塩化ナトリウム                        ０．９
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン            １
卵黄                                １８
砂糖                                  ０．２
胡椒                                  ０．９

１６０．０【００８０】
配合例１３（マヨネーズ）の製造方法
卵黄（室温）に酢、塩化ナトリウム及び胡椒と、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンとを加えて、泡立て器で十分に攪拌する。サラダ油を少しずつ加えながら攪拌を継続してエマルジョンにする。最後に砂糖を加えて攪拌する。【００８１】
配合例１４（フランスパン）
（組成物）                    配合量（ｇ）
強力粉                              １４０
薄力粉                                ６０
塩化ナトリウム                          ３
砂糖                                    ６
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン              ２
ドライイースト                          ４
ぬるま湯                            １２８

３４３【００８２】
配合例１４（フランスパン）の製造方法
ぬるま湯に砂糖１ｇ及びドライイーストを入れて予備発酵させる。強力粉、薄力粉、塩化ナトリウム、砂糖５ｇと、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンとをボウルに入れ、その中に予備発酵させたイーストを入れる。十分捏ねた後に球状にして３０°Ｃで一次発酵させる。生地を再度捏ねてから休ませた後に適当な形に整形して電子発酵機を用いて最終発酵させる。クープを入れて２２０°Ｃのオーブンで３０分間焼く。【００８３】
配合例１５（醤油）
（組成物）                      配合量（ｇ）
市販の醤油                            ９００
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン            １００

１０００【００８４】
配合例１５（醤油）の製造方法
市販の醤油にＤ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加えてよく攪拌する。また、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加える代わりに、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを多く産生する麹を用いて醤油を醸造してもよい。前記麹を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法で、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを定量することにより選抜することができる。【００８５】
配合例１６（ヨーグルト）
（組成物）                      配合量（ｇ）
牛乳                                  ８８０
Ｌ．ブルガリカス菌                      ５０
Ｓ．サーモフィルス菌                    ５０
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン              ２０

１０００【００８６】
配合例１６（ヨーグルト）の製造方法
４０°Ｃ〜４５°Ｃで発酵させる。他の市販の種菌を用いてもよく、市販のヨーグルトにＤ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加えてもよい。また、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加える代わりに、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを多く産生する菌を用いてもよい。前記菌を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法で、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを定量することにより選抜することができる。【００８７】
配合例１７（ふりかけ）
（組成物）                    配合量（ｇ）
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン          ５０
のり                                １５
Ｌ−グルタミン酸Ｎａ                １０
塩化ナトリウム                        ２
煎りごま                            １０
さば削り節                          １０
砂糖                                  １
醤油                                  ２

１００【００８８】
配合例１８（調味料・納豆のたれ）
（組成物）                    配合量（ｇ）
市販の納豆のたれ                    ９
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン          １

１０【００８９】
配合例１９（納豆）
（組成物）                      配合量（ｇ）
市販の納豆                            １９．９
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン              ０．１

２０【００９０】
配合例１９（納豆）の製造方法
市販の納豆に、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加えてよく攪拌する。また、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加える代わりに、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを多く産生する菌を用いて納豆を作ってもよい。前記菌を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法で、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを定量することにより選抜することができる。【００９１】
配合例２０（もろみ黒酢）
（組成物）                  配合量（ｇ）
市販のもろみ黒酢                  ９００
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン        １００

１０００【００９２】
配合例２０（もろみ黒酢）の製造方法
市販のもろみ黒酢に、Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加えてよく攪拌する。Ｄ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンか、それらの塩かを加える代わりにＤ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを多く産生する菌を用いて酢、黒酢、もろみを作ってもよい。前記菌を得るには、特開２００８−１８５５５８に記載の方法でＤ−アラニン又はＤ−ヒドロキシプロリンを定量することにより選抜することができる。【００９３】
配合例２１（クリーム）
（組成物）                                        配合量（重量％）
流動パラフィン                                              ３
ワセリン                                                    １
ジメチルポリシロキサン                                      １
ステアリルアルコール                                        １．８
ベヘニルアルコール                                          １．６
グリセリン                                                  ８
ジプロピレングリコール                                      ５
マカデミアナッツ油                                          ２
硬化油                                                      ３
スクワラン                                                  ６
ステアリン酸                                                ２
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                          ０．５
２−エチルヘキサン酸セチル                                  ４
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                              ０．５
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                        ３
水酸化カリウム                                              ０．１５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．０５
トリメチルグリシン                                          ２
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム      １
酢酸トコフェロール                                          ０．１
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                                  ４
パラベン                                                    適量
エデト酸３ナトリウム                                        ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン            ０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル    ０．０５
色剤                                                        適量
カルボキシビニルポリマー                                    ０．０５
精製水                                                      残余

１００．００【００９４】
配合例２２（ボディー用クリーム）
（組成物）                                        配合量（重量％）
ジメチルポリシロキサン                                      ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                          １３
ドデカメチルシクロヘキサシロキサン                        １２
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体            １
エタノール                                                  ２
イソプロパノール                                            １
グリセリン                                                  ３
ジプロピレングリコール                                      ５
ポリエチレングリコール６０００                              ５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．０５
酢酸トコフェロール                                          ０．１
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                                  ５
ウイキョウエキス                                            ０．１
ハマメリスエキス                                            ０．１
ニンジンエキス                                              ０．１
Ｌ−メントール                                              適量
パラオキシ安息香酸エステル                                  適量
エデト酸三ナトリウム                                        ０．０５
ジモルホリノピリダジノン                                    ０．０１
トリメトキシ桂皮酸メチルビス（トリメチルシロキシ）
シリルイソペンチル    ０．１
黄酸化鉄                                                    適量
チタン酸コバルト                                            適量
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト                １．５
ポリビニルアルコール                                        ０．１
ヒドロキシエチルセルロース                                  ０．１
トリメチルシロキシケイ酸                                    ２
香料                                                        適量
精製水                                                      残余

１００．００【００９５】
配合例２３（ジェル剤）
（組成物）                                        配合量（重量％）
ジメチルポリシロキサン                                      ５
グリセリン                                                  ２
１，３−ブチレングリコール                                  ５
ポリエチレングリコール１５００                              ３
ポリエチレングリコール２００００                            ３
オクタン酸セチル                                            ３
クエン酸                                                    ０．０１
クエン酸ナトリウム                                          ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．１
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                                  ２
酢酸トコフェロール                                          ０．１
オウゴンエキス                                              ０．１
ユキノシタエキス                                            ０．１
エデト酸三ナトリウム                                        ０．１
キサンタンガム                                              ０．３
アクリル酸・メタクリル酸
アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−２）          ０．０５
寒天末                                                      １．５
フェノキシエタノール                                        適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                  適量
精製水                                                      残余

１００．００【００９６】
配合例２４（ピールオフマスク）
（組成物）                                        配合量（重量％）
エタノール                                                １０
１，３−ブチレングリコール                                  ６
ポリエチレングリコール４０００                              ２
オリーブ油                                                  １
マカデミアナッツ油                                          １
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル                        ０．０５
乳酸                                                        ０．０５
乳酸ナトリウム                                              ０．１
Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム                  ０．１
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム      ０．１
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                                １０
魚コラーゲン                                                ０．１
コンドロイチン硫酸トリウム                                  ０．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム                        ０．２
ポリビニルアルコール                                      １２
パラオキシ安息香酸エステル                                  適量
香料                                                        適量
精製水                                                      残余

１００．００【００９７】
配合例２５（含浸マスク）
（組成物）                              配合量（重量％）
グリセリン                                      １
１，３−ブチレングリコール                      ８
キシリット                                      ２
ポリエチレングリコール１５００                  ２
ローズマリー油                                  ０．０１
セージ油                                        ０．１
クエン酸                                        ０．０２
クエン酸ナトリウム                              ０．０８
ヘキサメタリン酸ナトリウム                      ０．０１
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン      ０．１
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                      ０．５
バーチエキス                                    ０．１
ラベンダー油                                    ０．０１
キサンタンガム                                  ０．０５
カルボキシビニルポリマー                        ０．１５
パラオキシ安息香酸エステル                      適量
精製水                                          残余

１００．００【００９８】
配合例２６（乳液）
（組成物）                                    配合量（重量％）
流動パラフィン                                        ７
ワセリン                                              ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                      ２
ベヘニルアルコール                                    １．５
グリセリン                                            ５
ジプロピレングリコール                                ７
ポリエチレングリコール１５００                        ２
ホホバ油                                              １
イソステアリン酸                                      ０．５
ステアリン酸                                          ０．５
ベヘニン酸                                            ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット          ３
２−エチルヘキサン酸セチル                            ３
モノステアリン酸グリセリン                            １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン          １
水酸化カリウム                                        ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                            ０．０５
グリチルレチン酸ステアリル                            ０．０５
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                            １
ローヤルゼリーエキス                                  ０．１
酵母エキス                                            ０．１
酢酸トコフェロール                                    ０．１
アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム                      ０．１
エデト酸三ナトリウム                                  ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン      ０．１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                  ０．１
カルボキシビニルポリマー                              ０．１５
パラベン                                              適量
香料                                                  適量
精製水                                                残余

１００．００【００９９】
配合例２７（乳液）
（組成物）                                  配合量（重量％）
ジメチルポリシロキサン                              ２
ベヘニルアルコール                                  １
バチルアルコール                                    ０．５
グリセリン                                          ５
１，３−ブチレングリコール                          ７
エリスリトール                                      ２
硬化油                                              ３
スクワラン                                          ６
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット        ２
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル        １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン        １
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                          ０．３
水酸化カリウム                                      適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム                          ０．０５
フェノキシエタノール                                適量
カルボキシビニルポリマー                            ０．１
精製水                                              残余

１００．００【０１００】
配合例２８（化粧水）
（組成物）                                        配合量（重量％）
エチルアルコール                                            ５
グリセリン                                                  １
１，３−ブチレングリコール                                  ５
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン
デシルテトラデシルエーテル        ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．０３
トリメチルグリシン                                          １
ポリアスパラギン酸ナトリウム                                ０．１
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム      ０．１
チオタウリン                                                ０．１
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                                  ８
ＥＤＴＡ３ナトリウム                                        ０．１
カルボキシビニルポリマー                                    ０．０５
水酸化カリウム                                              ０．０２
フェノキシエタノール                                        適量
香料                                                        適量
精製水                                                      残余

１００．００【０１０１】
配合例２９（化粧水）
（組成物）                                  配合量（重量％）
エタノール                                        １０
ジプロピレングリコール                              １
ポリエチレングリコール１０００                      １
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                  １
ホホバ油                                            ０．０１
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                  ０．１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                      ０．２
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                    ０．１５
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム        ０．１
クエン酸                                            ０．０５
クエン酸ナトリウム                                  ０．２
水酸化カリウム                                      ０．４
グリチルリチン酸ジカリウム                          ０．１
塩酸アルギニン                                      ０．１
Ｌ−アスコルビン酸  ２−グルコシド                  ２
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                          ０．５
エデト酸三ナトリウム                                ０．０５
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                ０．０１
ジブチルヒドロキシトルエン                          適量
パラベン                                            適量
海洋深層水                                          ３
香料                                                適量
精製水                                              残余

１００．００【０１０２】
配合例３０（エアゾール尿素外用剤原液）
（組成物）                          配合量（重量％）
エタノール                                １５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０          １．５
ジフェンヒドラミン                          １．０
ジブカイン                                  ２．０
酢酸トコフェロール                          ０．５
Ｄ−アラニン
又はＤ−ヒドロキシプロリン                  ０．１
イソステアリン酸                            ０．１
１，３−ブチレングリコール                  ３．０
ポリエチレングリコール４００                ３．０
カンフル                                    ０．０５
尿素                                      ２０．０
精製水                                      残余

１００．００【０１０３】
配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）
（組成物）                      配合量（重量％）
エアゾール尿素外用剤原液              ６５．０
ジメチルエーテル                      ３５．０

１００．００【０１０４】
配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）の充填方法
エアゾール尿素外用剤原液及びジメチルエーテルを内面テフロン（登録商標）コート処理耐圧エアゾールアルミ缶に充填してエアゾール剤を調製する。
【図１】
0006023428.tif 000002
【図２】
0006023428.tif 000003
【図３】
0006023428.tif 000004
【図４】
0006023428.tif 000005
【図５】
0006023428.tif 000006
【図６】
0006023428.tif 000007
【図７】
0006023428.tif 000008
【図８】
0006023428.tif 000009
【図９】
0006023428.tif 000010
【図１０】
0006023428.tif 000011
【図１１】
0006023428.tif 000012
【図１２】
0006023428.tif 000013