(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）の化合物又はその薬学的に許容可能な誘導体であって、
【化１】
0005864590.tif 000012
前記化学式（１）中、
Ｒ1は、Ｈ、
Ｒ2は、ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7、
Ｒ3は、Ｈ、
Ｒ4は、ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7、
Ｒ5は、メチル基、ｉ−プロピル基、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、及び、−ＣＨ（ＣＨ3）（Ｃ2Ｈ5）からなる群から選ばれ、そして、
各々のＲ6は、Ｈ、
各々のＲ7は、分岐した又は分岐のない、Ｃ1〜Ｃ18の非環式アルキル基、及び、Ｃ3〜Ｃ8の環式アルキル基からなる群から選ばれ、
Ｙは、Ｈ、
Ｚは、Ｈであり、
前記Ｒ7は、飽和又は不飽和であってもよく、１ないし３個の置換基で置換されていてもよく、該置換基は、
Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ原子からなる群から選択されるハロゲン原子；
ＣＦ3基及びＣＣｌ3基からなる群から選択されるハロメチル基；
オキソ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルコキシ基、アルコイル基、アルコイロキシ基、アリーロキシ基、アリーロイル基及びアリーロイロキシ基からなる群から選択される酸素を含む基；
アミノ基、シアノ基、アジド基及びニトロ基からなる群から選択される窒素を含む基；
チオール基、スルホニル基及びスルホキシド基からなる群から選択される硫黄を含む基；
ピロリル基、イミダゾリル基、ピラジオリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、ピロリジニル基、ピロリニル基、イミダゾリジニル基、イミダゾリニル基、ピラゾリジニル基、テトラヒドロフラニル基、ピラニル基、ピロニル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピラダジニル基、ピペリジル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、チオナフチル基、ベンゾフラニル基、イソベンゾフリル基、インドリル基、オキシインドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、インドリニル基、７−アザインドリル基、イソインダゾリル基、ベンゾピラニル基、クマリニル基、イソクマリニル基、キノリル基、イソキノリル基、ナフチリジニル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、ピリドピリジル基、ベンゾオキサジニル基、キノキサジニル基、クロメニル基、クロマニル基、イソクロマニル基、及び、カルボリニル基からなる群から選択される複素環基；
フェニル基、ナフチル基、ピリジル基、ピロリル基、フラニル基及びチオフェニル基からなる群から選択されるアリール基；
から選択されることを特徴とする、化学式（１）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩、水和物又は溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ2及びＲ4が同一であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ7は、メチル基、エチル基、ｉ−プロピル基、ｔ−ブチル−ＣＨ2−、ベンジル基、及び、Ｃ3〜Ｃ6のシクロアルキル基からなる群から選ばれることを特徴とする、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ7はｔ−ブチル−ＣＨ2−あることを特徴とする、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ5はメチル基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ7は、メチル基、エチル基、ｉ−プロピル基、ｔ−ブチル−ＣＨ2−、ベンジル基、及び、Ｃ3ないしＣ6のシクロアルキル基からなる群から選ばれることを特徴とする、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ7は、ｔ−Ｂｕ−ＣＨ2−であることを特徴とする、請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物は、*ＣＲ5Ｒ6に天然のＬ配置の立体化学を有することを特徴とする、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物は、*ＣＲ5Ｒ6にＤ配置の立体化学を有することを特徴とする、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
ビス（エトキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２′−デオキシ−２′，２′−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５′−Ｏエステル、
ビス（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２′−デオキシ−２′，２′−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５′−Ｏエステル、
ビス（シクロヘキソキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２′−デオキシ−２′，２′−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５′−Ｏエステル、
ビス（２，２−ジメチルプロポキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２′−デオキシ−２′，２′−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５′−Ｏエステル、及び、
ビス（イソ−プロポキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２′−デオキシ−２′，２′−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５′−Ｏエステルからなる群から選ばれることを特徴とする、化合物。
【請求項１１】
がんの予防又は治療の必要な患者で、前記予防又は治療の方法で使用するための、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
がんの予防又は治療のための薬剤の製造における、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物の有効量を含むことを特徴とする、がんの予防又は治療のための医薬組成物。
【請求項１４】
薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は添加剤と組み合わせることを特徴とする、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物を、薬学的に許容可能な添加剤、担体又は希釈剤と組み合わせるステップを含むことを特徴とする、医薬組成物の調製方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の化学式（１）の化合物を調製するための工程であって、
化学式（２）の化合物を、
【化２】
0005864590.tif 000013
塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ3）と反応し、その後に、Ｒ1Ｒ2ＮＨ及びＲ3Ｒ4ＮＨと反応するステップを含み、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ、Ｙ及びＺは、請求項１に記載の意味を有することを特徴とする、工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヌクルオチド誘導体及びそのがん治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヌクレオシド類似体のゲムシタビンは抗がん剤としてよく知られている。ゲムシタビンは、その５’を位リン酸エステル形に活性化した後、ＤＮＡ合成阻害剤として機能する。
【０００３】
特許文献１には、ゲムシタビンのアミド亜リン酸エステル（phosphoramidate）誘導体のがん治療での使用について開示されている。前記誘導体全ては、Ｏを通じてＰに結合した芳香族基と、Ｎを介してＰに結合しているアミダート（amidate）基１個との両方を有している。ゲムシタビンに比べて、前記誘導体は、がんに対する増大した有効性、及び／又は、低減した毒性を示す。
【０００４】
カリフォルニア州ロサンゼルスでの２００７年度ＡＡＣＲ年会では、D M Vailらは、悪性リンパ腫の治療に用いられた抗増殖作用を有するヌクレオチド類似体、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニンのプロドラッグの有効性と安全性プロフィールを報告した。グアニンはプリンから得られる。試験した化合物は、ヌクレオシドのホスホン酸エステル、すなわち、ヌクレオシド基本骨格へのＰ−Ｃ結合を有する化合物を含んだ。
【０００５】
非特許文献１には、ＦＵｄＲのアミド亜リン酸ジエステル、及び、抗がん剤としてのそれらの使用が開示されている。
【０００６】
非特許文献２及び３の各々には、ＡＺＴのホスホロジアミダート（phosphorodiamidates）、及び、その抗ウイルス剤としての使用が開示されている。
【０００７】
がん治療に用いる化合物としては、より改良された特性を示す、特に、増大した有効性、及び／又は、低減した細胞毒性を有するがん治療用化合物を提供する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００５／０１２３２７Ａ号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】C R Wagner et al, Med. Res. Rev. 2000, 20 417-451
【非特許文献２】D Cahard et al, Mini-Reviews in Medicinal Chemistry, 2004, 4, 371-382
【非特許文献３】B C Jones et al, Antiviral Chemistry & Chemotherapy (1991) 2(1), 35-39
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、そのような化合物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらなる目的は、がん治療で用いるための前記化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明によると、以下の化学式（１）の化合物又はその薬学的に許容可能な誘導体が提供される。
【００１３】
【化１】
0005864590.tif 000002
前記化学式（１）中、
Ｒ2は、ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7及びＣ1〜Ｃ6のアルキル基からなる群から選ばれ、Ｒ1は、Ｈ及びＣ1〜Ｃ6のアルキル基からなる群から選ばれるか、
又は、
Ｒ1及びＲ2は、それらが結合しているＮ原子とともに、５ないし８個の環原子からなる環部分を形成し、
Ｒ4は、ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7及びＣ1〜Ｃ6のアルキル基からなる群から選ばれ、Ｒ3は、Ｈ及びＣ1〜Ｃ6のアルキル基からなる群から選ばれるか、
又は、
Ｒ3及びＲ4は、それらが結合しているＮ原子とともに、５ないし８個の環原子からなる環部分を形成し、
Ｒ2及びＲ4の各々と独立して：
Ｒ5及びＲ6は、独立して、天然のアルファ−アミノ酸の側鎖からなる群から選      ばれ、そして、
Ｒ7は、Ｃ1〜Ｃ18のアルキル基からなる群から選ばれ、
Ｙは、Ｈ、及び、Ｃ（Ｏ）Ｒ（Ｒは、Ｃ1〜Ｃ18のアルキル基）からなる群から選ばれ、
Ｚは、Ｈ、及び、Ｃ（Ｏ）Ｒ（Ｒは、Ｃ1〜Ｃ18のアルキル基）からなる群から選ばれる。
【発明の効果】
【００１４】
驚くべきことに、化学式（１）のホスホロジアミダート誘導体に、がん治療における化学療法剤となりうる有効性が見いだされた。特に化学式（１）の化合物は、ゲムシタビンに比べて、増大した有効性、及び／又は、低減した細胞毒性を示す。したがって、本発明は、ヒト、及び、その他の哺乳動物のがん治療での本発明の化合物の使用を提供する。特に、本発明の化合物は、固形腫瘍、例えば、大腸がん、乳がん、すい臓がん、肺がん及び前立腺がんの治療で有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
いかなる理論により拘束されることを望まないが、化学式（１）の化合物では、Ｐ原子に２個のアミダート基のあることが、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7基の独自性と相まって、対応するヌクレオシド化合物に比べて、増大した有効性、及び／又は、低減した細胞毒性に寄与しているものと思われる。Ｒ2及び／又はＲ4がエステル−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7である場合に、示された抗がんの効力は、Ｒ5、Ｒ6、及び、特にＲ7の選択に伴って変化する。また、Ｒ2及びＲ4が、各々、エステル基である場合に、Ｒ1及びＲ3の各々の選択と、Ｒ2及び／又はＲ4がエステル基でない場合に、それぞれのアミノＮ原子上の残りのＲ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4の選択とが、抗がんの効力に寄与する。１つの実施態様では、Ｒ2及びＲ4の各々が−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7であり、Ｒ1及びＲ3がＨであり、特に、Ｒ2及びＲ4の各々が−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7であり、Ｒ1及びＲ3の各々がＨであって、Ｒ2及びＲ4は同一である。
【００１６】
Ｒ2及び／又はＲ4がエステル基−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7であるとき、化学式（１）のホスホロジアミダート化合物の−ＮＲ1−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2−及び−ＮＲ3−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2−のそれぞれの部分が、アルファ−アミノ酸の構造に対応することが理解されよう。
【００１７】
Ｒ5及びＲ6は、独立して、天然のアルファ−アミノ酸の側鎖からなる基から選ばれる。「天然のアルファ−アミノ酸」とは、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、ヒドロキシリジン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンを意味する。個別にＲ5及びＲ6を選択するための群は、これら天然のアルファ−アミノ酸の側鎖からなり、したがって、下記の部分（moieties）を含む：
【００１８】
アラニン中に存在する、            ＣＨ3−、
アルギニン中に存在する、          Ｈ2ＮＣ（＝ＮＨ）ＮＨ［ＣＨ2］3−、
アスパラギン中に存在する、        ＮＨ2Ｃ（Ｏ）ＣＨ2−、
アスパラギン酸中に存在する、      ＨＯ2ＣＨ2−、
システイン中に存在する、          ＨＳＣＨ2−、
シスチン中に存在する、            ＨＯ2ＣＨ（ＮＨ2）ＣＨ2ＳＳＣＨ2−、
グリシン中に存在する、            Ｈ−、
グルタミン酸中に存在する、        ＨＯ2ＣＨ2ＣＨ2−、
グルタミン中に存在する、          Ｈ2Ｎ（Ｏ）ＣＣＨ2ＣＨ2−、
ヒスチジン中に存在する、          Ｃ3Ｎ2ＨＣＨ2−、
ヒドロキシリジン中に存在する、    Ｈ2ＮＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2ＣＨ2−、
ヒドロキシプロリン中に存在する、  −ＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2−、
イソロイシン中に存在する、        ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）−、
ロイシン中に存在する、            （ＣＨ3）2ＣＨＣＨ2−、
リジン中に存在する、              Ｈ2ＮＣＨ2（ＣＨ2）3−、
メチオニン中に存在する、          ＣＨ3ＳＣＨ2ＣＨ2−、
フェニルアラニン中に存在する、    ＰｈＣＨ2−、
プロリン中に存在する、            −ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、
セリン中に存在する、              ＯＨＣＨ2−、
スレオニン中に存在する、          ＣＨ3ＣＨ（ＯＨ）−、
トリプトファン中に存在する、      Ｃ8ＮＨ6ＣＨ2−、
チロシン中に存在する、            ＨＯＣ6Ｈ4ＣＨ2−、
バリン中に存在する、              （ＣＨ3）2ＣＨ−。
【００１９】
したがって、「天然のアルファ−アミノ酸の側鎖」の用語は、Ｈ及びＣ原子１個のみを含む部分を含み、さらには、飽和した分岐のないＣ3部分であって、その末端のＣ原子が、対応するアミノ基のＮ原子とさらに結合したものも含み、この場合は、Ｒ2が存在する代わりに、Ｒ1は存在せず、Ｒ4が存在する代わりに、Ｒ3は存在しないことになる。
【００２０】
「薬学的に許容可能な誘導体」とは、薬学的に許容可能ないずれかの、塩、エステル、そのようなエステルの塩、水和物、溶媒和物、又は結晶形、又は代謝物、又は受容者に投与すると、（直接又は間接的に）化学式（１）の化合物を提供することができる、いかなる他の化合物を意味する。
【００２１】
１つの実施態様では、Ｒ2及びＲ4は同一である。
【００２２】
１つの実施態様では、Ｒ2及びＲ4は、それぞれ、−ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7である。
【００２３】
好適な、Ｒ7は、分岐のない及び分岐した、Ｃ1〜Ｃ18の非環式アルキル基、及び、Ｃ3〜Ｃ8の環式アルキル基からなる群から選ばれ、これら、非環式及び環式のアルキル基部分はいずれも、以下に示すように、通常、１個、２個又は３個の置換基で置換されていてもよく、さらに、飽和されていなくてもよい。１つの実施態様では、Ｒ7は、分岐した飽和の非置換の非環式のアルキル基であり、その例はｉ−プロピル基及びｔ−ブチル−ＣＨ2−である。１つの実施態様では、Ｒ7は、分岐のない非環式のアルキル基であり、その例は、メチル基及びエチル基である。１つの実施態様では、Ｒ7は、置換された非環式アルキル基であり、その例はベンジル基である。１つの実施態様では、Ｒ7は、Ｃ3〜Ｃ8の環式アルキル基であり、その例はシクロへキシル基である。好適な、Ｒ7はＨＣのみからなる。１つの実施態様では、Ｒ7は、メチル基、エチル基、ｉ−プロピル基、ｔ−ブチル−ＣＨ2−、ベンジル基、及び、Ｃ3〜Ｃ6のシクロアルキル基からなる群から選ばれる。Ｒ7は特にｔ−ブチル−ＣＨ2−である。Ｒ2及びＲ4がともにエステル基である場合は、Ｒ2及びＲ4におけるそれぞれのＲ7は互いに同じものであって、Ｒ1及びＲ3の各々はＨであるのが好ましい。
【００２４】
１つの実施態様では、Ｒ2及び／又はＲ4がエステル基である場合に、Ｒ6がＨであり、Ｒ5が天然のアルファ−アミノ酸の側鎖からなる群から、特に、Ｈ又はＨＣのみからなる前記側鎖のうちから選ばれる。そのような実施態様では、Ｒ6がＨである場合に、Ｒ5は、特に、Ｈ、メチル基、ｉ−プロピル基、−ＣＨ2Ｐｈ、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、及び、−ＣＨ（ＣＨ3）（Ｃ2Ｈ5）からなる群から選ばれる。そのような実施態様では、Ｒ6がＨである場合に、より特にはＲ5はメチル基であり、さらにより具体的には、Ｒ6がＨである場合に、Ｒ5はメチル基であり、Ｒ7はｔ−Ｂｕ−ＣＨ2−である。Ｒ2及びＲ4がともにエステル基である場合は、Ｒ2及びＲ4におけるそれぞれのＲ5、Ｒ6及びＲ7は互いに同じものであって、Ｒ1及びＲ3の各々はＨであるのが好ましい。
【００２５】
Ｒ2及び／又はＲ4がエステル基であり、Ｒ5がＲ6と異なる場合に、アミノ酸の立体化学は、Ｄ配置又はＬ配置であってもよい。１つの実施態様では、前記アミノ酸は、*ＣＲ5Ｒ6に天然のＬ配置の立体化学を有する。もう１つの実施態様では、アミノ酸は、*ＣＲ5Ｒ6にＤ配置を有する。
【００２６】
１つの実施態様では、Ｒ2及び／又はＲ4がエステル基である場合に、Ｒ5及びＲ6の各々はメチル基である。
【００２７】
１つの実施態様では、Ｒ1及びＲ3同一である。特に、Ｒ1及びＲ3はＨである。Ｒ1及びＲ3の各々がＨである場合に、特に、Ｒ2及びＲ4はＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7である。より特にはＲ1及びＲ3の各々がＨであり、Ｒ2及びＲ4の各々がＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7である場合に、Ｒ6はＨであり、Ｒ5はＨ、メチル基、ｉ−プロピル基、−ＣＨ2Ｐｈ、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＣＨ2（ｉ−Ｃ3Ｈ7）、及び、−ＣＨ（ＣＨ3）（Ｃ2Ｈ5）からなる群から選ばれ、より特にはＲ5はメチル基である。さらにより特には、そのような実施態様のいずれにおいても、Ｒ7は、メチル基、エチル基、ｉ−プロピル基、ｔ−ブチル−ＣＨ2−、ベンジル基、及び、Ｃ3〜Ｃ6のシクロアルキル基からなる群から選ばれ、具体的には、ｔ−Ｂｕ−ＣＨ2−である。特には、Ｒ1及びＲ3の各々がＨである場合に、Ｒ2及びＲ4の各々は、同一のエステル基である。
【００２８】
Ｒ1及びＲ2が、それらが結合しているＮアミノ原子とともに、５ないし８個の環原子からなる環部分を形成する場合に、及び／又は、Ｒ3及びＲ4が、それらが結合しているＮアミノ原子とともに、５ないし８個の環原子からなる環部分を形成する場合に、前記環原子は、Ｏ及び／又はさらにＮなどの追加のヘテロ原子を含むことができ、及び／又は、前記環原子は、置換されても、又は、置換されなくてもよく、及び／又は、前記環は、飽和されるか、若しくは飽和されなくてもよい。いずれの環でも、前記環原子は全部で４個までのヘテロ原子を含むことが好ましい。好適な、置換基を有している場合に、いずれか１つの環にある、通常、１個、２個又は３個の置換基が存在する。置換基は、−ＣＯ2Ｒ7（Ｒ7は、ＣＲ5Ｒ6ＣＯ2Ｒ7部分について上述のように定義される）、及び、化学式（１）の化合物にあるアルキル基にとって好適な置換基として以下に示される部分のうちのいずれであってもよい。Ｒ1及びＲ2の組み合わせと、Ｒ3及びＲ4の組み合わせとの両方か、若しくはいずれかが、それらが結合している各々のＮ原子とともに、４個のＣ原子を含む飽和の５員環を形成し、少なくとも−ＣＯ2Ｒ7置換基をＮ原子に隣接している適切なＣ原子に有する場合に、−ＮＲ1Ｒ2及び／又は−ＮＲ3Ｒ4の各々の基は、それぞれ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4について上記で定義されたものと一致してもかまわず、この場合、Ｒ5及びＲ6の１個又は両方は、プロリン又はヒドロキシプロリンの側鎖を含む。
【００２９】
化学式（１）の化合物の１つの実施態様では、Ｒ1及びＲ2が、それらが結合しているＮ原子とともに、５ないし８個の環原子からなる環部分を形成し、そして、Ｒ3及びＲ4が、それらが結合しているＮ原子とともに、５〜８個の環原子からなる環部分を形成する場合に、好ましくは、そのような実施態様のいずれにおいても、前記各々の環部分は、同一であり、上述のものである。
【００３０】
リン酸エステル中心がキラルであれば、Ｒ体及びＳ体が混在していてもよいか、若しくは１つの立体異性体が豊富であってもよい。
【００３１】
１つの実施態様では、ＹがＨである。
【００３２】
１つの実施態様では、ＺがＨである。
【００３３】
１つの実施態様では、Ｙ及びＺの各々がＨであり、この実施態様では、化学式（１）の化合物はゲムシタビンからの基本骨格を有する。
【００３４】
上記で具体的に記載された特徴のうちのいずれも、本願発明の化学式（１）の化合物を提供するために、請求項１に記載するようにともに組み合されてもよい。特に、Ｘ及びＹが、それぞれ、Ｈであるため、ヌクレオシドの基本骨格はゲムシタビン由来であり、ジアミダートモチーフの上記の実施態様の各々は、ゲムシタビン由来の基本骨格部分と特に好適に組み合される。
【００３５】
本発明の特に好ましい化合物は、
ビス（エトキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏエステル、
ビス（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏエステル、
ビス（シクロヘキソキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏエステル、
ビス（２，２−ジメチルプロポキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏエステル、及び、
ビス（イソ−プロポキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏエステルを含む。
【００３６】
本明細書におけるアルキル基とは、他に断りのない限り、分岐した又は分岐していない、環式又は非環式の、飽和又は不飽和（例えば、アルケニル基又はアルキニル基）のヒドロカルビルラジカル基をいう。環式の場合に、アルキレン基は、好ましくはＣ3〜Ｃ12であり、より好ましくはＣ5〜Ｃ10であり、より好ましくはＣ5〜Ｃ7である。非環式の場合に、アルキル基は、好ましくはＣ1〜Ｃ16であり、より好ましくはＣ1〜Ｃ6である。
【００３７】
前記アルキル基は、置換されていてもよく、置換されていなくともよい。置換されている場合に、通常、１ないし３個の置換基が存在し、好ましくは１個の置換基である。置換基は、ハロゲン原子、即ち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ原子、並びに、ＣＦ3基及びＣＣｌ3基等のハロメチル基と；オキソ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルボキシＣ1〜Ｃ16アルキル基、アルコキシ基、アルコイル基、アルコイロキシ基、アリーロキシ基、アリーロイル基及びアリーロイロキシ基等の酸素を含む基と；アミノ基、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ基、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノ基、シアノ基、アジド基及びニトロ基等の窒素を含む基と；チオール基、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオール基、スルホニル基及びスルホキシド基等の硫黄を含む基と；それ自体が置換されてもよい複素環基と；それ自体が置換されてもよい、上記で定義されたようなアルキル基と；アリール基、即ち、５ないし１４個の環原子からなる芳香族基、例えばフェニル基又はナフチル基、及び、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選ばれる、１個、２個、３個又は４個、好ましくは１個のヘテロ原子を含む複素芳香族基、例えば、ピリジル基、ピロリル基、フラニル基及びチオフェニル基とを含むことを意味し、ここで、アリール基自体が置換されてもよい。前記複素環基、アルキル基及びアリール基の置換基は、直前で定義されたものである。
【００３８】
本明細書におけるアルコキシ基及びアリーロキシ基とは、それぞれ、アルキル−Ｏ−（例えば、アルキル基はＣ1〜Ｃ16であり、好ましくはＣ1〜Ｃ6である）、及び、アリール−Ｏ−（例えば、アリール基は、Ｏ、Ｓ及びＮから独立して選ばれる、１個、２個、３個又は４個のヘテロ原子を任意に含む、５ないし１４員の芳香族単環又は２縮合環部分であり、好ましくはアリール基はフェニル基である）を意味する。
【００３９】
本明細書におけるアルコイル基及びアリーロイル基とは、それぞれ、アルキル−ＣＯ−（例えば、アルキル基はＣ1〜Ｃ16であり、好ましくはＣ1〜Ｃ6である）、及び、アリール−ＣＯ−（例えば、アリール基は、Ｏ、Ｓ及びＮから独立して選ばれる、１個、２個、３個又は４個のヘテロ原子を任意に含む、５ないし１４員の芳香族単環又は２縮合環部分であり、好ましくはアリール基はフェニル基である）を意味する。
【００４０】
本明細書におけるアルコイロキシ基及びアリーロイロキシ基とは、それぞれ、アルキル−ＣＯ−Ｏ（例えば、アルキル基はＣ1〜Ｃ16であり、好ましくはＣ1〜Ｃ6である）、及び、アリール−ＣＯ−Ｏ（例えば、アリール基は、Ｏ、Ｓ及びＮから独立して選ばれる、１個、２個、３個又は４個のヘテロ原子を任意に含む、５ないし１４員の芳香族単環又は２縮合環部分であり、好ましくはアリール基はフェニル基である）を意味する。
【００４１】
本明細書における複素環基とは、１つ以上の、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラジオリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、ピロリジニル基、ピロリニル基、イミダゾリジニル基、イミダゾリニル基、ピラゾリジニル基、テトラヒドロフラニル基、ピラニル基、ピロニル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピラダジニル基、ピペリジル基、ピペラジニル基、モルホリニル基、チオナフチル基、ベンゾフラニル基、イソベンゾフリル基、インドリル基、オキシインドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、インドリニル基、７−アザインドリル基、イソインダゾリル基、ベンゾピラニル基、クマリニル基、イソクマリニル基、キノリル基、イソキノリル基、ナフチリジニル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、ピリドピリジル基、ベンズオキサゾニル基、キノキサジニル基、クロメニル基、クロマニル基、イソクロマニル基、及び、カルボリニル基を含む基を意味する。
【００４２】
本発明のさらなる態様によると、治療方法で、好ましくはがんの予防又は治療で、特に、例えば、大腸がん、乳がん、すい臓がん、肺がん、及び、前立腺がんのうちのいずれか１つの固形腫瘍の予防又は治療で、使用するための本発明の化学式（１）を有する化合物が提供される。
【００４３】
本発明のさらなる態様によると、がんの予防又は治療方法、特に、例えば、大腸がん、乳がん、すい臓がん、肺がん、及び、前立腺がんのうちのいずれか１つの固形腫瘍の予防又は治療方法が提供され、該方法は、本発明の化学式（１）を有する化合物の有効量を、前記治療の必要な患者に投与することを含む。
【００４４】
本発明のさらなる態様によると、がんの治療又は予防で使用するための薬剤、特に、例えば、大腸がん、乳がん、すい臓がん、肺がん、及び、前立腺がんのうちのいずれか１つの固形腫瘍の治療又は予防で使用するための薬剤の製造における本発明の化学式（１）を有する化合物の使用を提供する。
【００４５】
本発明のさらなる態様によると、薬学的に許容可能な添加剤、担体又は希釈剤と組み合わせて、本発明の化学式（１）を有する化合物を含む医薬組成物が提供される。
【００４６】
本発明のさらなる態様によると、本発明の化学式（１）を有する化合物を、薬学的に許容可能な添加剤、担体又は希釈剤と組み合わせるステップを含む、医薬組成物の調製方法が提供される。
【００４７】
本発明のさらなる態様によると、化学式（１）の化合物を調製するための工程を提供し、該工程は、化学式（２）の化合物を、塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ3）と反応し、その後に、化学式、Ｒ1Ｒ2ＮＨ及びＲ3Ｒ4ＮＨのアミンと反応するステップを含み、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ、Ｚ及びＹは、上記に記載された意味を有する。
【００４８】
【化２】
0005864590.tif 000003
【００４９】
化学式（１）を有する化合物、又は、本発明の医薬組成物は、ヒト（homo sapiens）又は動物であってもよい患者に、いかなる好適な手段によって投与することができる。
【００５０】
本発明で用いられる薬剤は、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与、経皮投与、気道（噴霧）投与、直腸投与、膣内投与、及び、局所投与（口腔、及び、舌下投与を含む）を含む、経口経路又は非経口経路によって投与できる。
【００５１】
経口投与のために、本発明の化合物は、通常、錠剤若しくはカプセルの剤形、粉剤若しくは顆粒剤として、又は、水溶液剤若しくは懸濁液剤として、提供される。
【００５２】
経口用の錠剤は、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤等の薬学的に許容可能な添加剤と混合した活性成分を含む。好適な不活性希釈剤は、炭酸ナトリウム及びカルシウムと、リン酸ナトリウム及びカルシウムと、乳糖とを含む一方、コーンスターチ、及び、アルギン酸が好適な崩壊剤である。結合剤は、でんぷん、及び、ゼラチンを含んでもよい一方、存在するのであれば、滑沢剤は、通常、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又は、タルクである。必要に応じて、前記錠剤は、消化管での吸収を遅くするために、モノステアリン酸グリセリン、又は、グリセリンジエステル等の材料でコーティングされてもよい。
【００５３】
経口用のカプセルは、硬質ゼラチンカプセルと、軟質ゼラチンカプセルとを含み、前記硬質ゼラチンカプセルでは、活性成分が固形希釈剤と混合され、前記軟質ゼラチンカプセルでは、活性成分が、水か、若しくはピーナッツ油、液状パラフィン又はオリーブ油等の油と混合される。
【００５４】
直腸投与用の剤形は、例えば、ココアバター、又は、サリチル酸エステルを含む好適な基剤とともに坐剤として提供されてもよい。
【００５５】
膣内投与用に好適な剤形は、活性成分に加えて、当該技術分野で適切であると知られるような担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡沫剤、又は、噴霧剤の剤形として提供されてもかまわない。
【００５６】
筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与、及び、静脈内投与用として、本発明の化合物は、通常、適当なｐＨに緩衝され、等張性で、滅菌水溶液又は懸濁液で提供される。好適な水性媒体は、リンゲル液及び生理食塩水を含む。本発明の懸濁液は、セルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、及び、トラガカントゴム等の懸濁剤と、レシチン等の湿潤剤とを含んでもかまわない。懸濁液用の好適な防腐剤は、エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート及びｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートを含む。
【００５７】
また、本発明の化合物はリポソームの剤形として提供されてもよい。
【００５８】
通常、好適な投与量は、１日あたり、受容者の体重１キログラムあたり、０．１ないし３００ｍｇの範囲である。好ましい低投与量は、１日あたり、受容者の１キログラムあたり、０．５ｍｇであり、より好ましい低投与量は、１日あたり、受容者の１キログラムあたり、６ｍｇであり、さらにより好ましい低投与量は、１日あたり、受容者の１キログラムあたり、１０ｍｇである。好適な投与量は、好ましくは、１日あたり、体重１キログラムあたり、６ないし１５０ｍｇの範囲であり、より好ましくは、１５ないし１００ｍｇの範囲である。望ましい投与量が、好ましくは、一日の間に適当な間隔で投与される２回、３回、４回、５回又は６回か、若しくはそれ以上の分割投与量（sub-doses）として提供される。前記分割投与量は、例えば、１０ないし１５００ｍｇ、好ましくは２０ないし１０００ｍｇ、より好ましくは５０〜７００ｍｇを含む投与剤形単位で投与されてもよい。
【００５９】
本発明の実施態様は、以下の実施例、実験手順及び実験データに関して、例示のみを目的でここで説明される。
【００６０】
反応経路（scheme）１は、化学式（１）の化合物を調製するための調製経路を示す。当業者は、反応経路１で開示された手順を通じて、実施例に関連する近似の類似体を調製するための確立した合成方法を用いることができる。
【００６１】
【化３】
0005864590.tif 000004
【００６２】
前記化学式（１）中、Ｂはシトシン等の請求項１に記載の核酸塩基であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は請求項１に記載の意味を有する。
【００６３】
容易に合成を行うために、ヌクレオシドの３’位の−ＯＨは、例えばＢＯＣ基で予め保護され、その後、アミド亜リン酸エステルの構築後に標準的な方法を用いて脱保護されてもよい。
【００６４】
化合物の構造及び純度を決定するには、Ｐ−３１  ＮＭＲによるのが最も簡便であるが、Ｃ−１３又はＨ−１  ＮＭＲも有用であり、ＨＰＬＣやマススペクトル法も用いることができる。
【００６５】
化合物は、多くのｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏの方法によってアッセイすることができるが、まず第１に、細胞増殖アッセイが容易で有益である。多くの腫瘍細胞株が前記アッセイに用いることができるが、本明細書で、出願人は、多くの研究室で典型的な、標準的なＭＴＴアッセイ方法を用いて、ＨＲＴ１８大腸がん細胞株でのターゲット化合物についての典型的なデータを報告する。
【実施例】
【００６６】
実施例
ゲムシタビンのジアミダートの調製
【００６７】
標準的な手順Ａ：ジアミダートの合成
リン酸トリエチル（１．０ｍＬ）中に懸濁された３’−Ｂｏｃ−ゲムシタビン（１．０当量）の攪拌溶液が０°Ｃに冷却された後、これに、ＰＯＣｌ3（２．０当量）がＡｒ雰囲気下で滴加された。この反応混合物が、０°Ｃ−４°Ｃで１６時間攪拌された。粗精製（ｃｒｕｄｅ）混合物が無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈され、適当なアミノ酸エステル（５．０当量）が添加され、その後に−７８°ＣでＤＩＰＥＡ（１０．０当量）が滴加された。前記反応混合物は９６時間攪拌された。前記粗精製混合物は水で希釈され、ＤＣＭ（２０ｍＬで６回）で抽出された。抽出後の有機相が合わされて、ＭｇＳＯ4下で乾燥され、粗精製残渣を生成するために溶媒留去され、前記粗精製残渣は溶離液の濃度勾配（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９９：１〜９７：３〜９５：５）を用いてシリカゲルで精製された。（過剰のアミノ酸エステルは、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９５／５を用いて分取（preparative）ＴＬＣ精製によって除去された。）
【００６８】
標準的な手順Ｂ：ジアミダートの合成
リン酸トリエチル（１．０ｍＬ）中に懸濁されたゲムシタビン（１．０当量）の攪拌溶液が０°Ｃに冷却された後、これに、ＰＯＣｌ3（２．０当量）がＡｒ雰囲気下で滴加された。この反応混合物が、０°Ｃ−４°Ｃで１６時間攪拌された。粗精製混合物が無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈され、適当なアミノ酸エステル（５．０当量）が添加され、その後に−７８°ＣでＤＩＰＥＡ（１０．０当量）が滴加された。前記反応混合物は、０°Ｃ−４°ＣでＡｒ雰囲気下で９６時間攪拌された。前記粗精製混合物は水で希釈され、ＤＣＭ（２０ｍＬで６回）で抽出された。抽出後の有機相が合わされて、ＭｇＳＯ4下で乾燥され、粗精製残渣を生成するために溶媒留去され、前記粗精製残渣は溶離液の濃度勾配（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９９：１〜９７：３〜９５：５）を用いてシリカゲルで精製された。（過剰のアミノ酸エステルは、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９５／５を用いて分取ＴＬＣ精製によって除去された。）
【００６９】
標準的な手順Ｃ：ＢＯＣ基の脱保護
ＴＦＡ／ＤＣＭ（１：１）中の３’位をＢＯＣ基で保護されたジアミダートの混合物が、０°Ｃで２時間攪拌された。溶媒は溶媒留去され、残渣は飽和ＮａＨＣＯ3で処理され、ＥｔＯＡｃで抽出された。有機相（layers）が混ぜ合わされ、（ＭｇＳＯ4で）乾燥され、濾過され、蒸発乾固（reduced to dryness）され、溶離液の濃度勾配（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９９：５〜９２：８）を用いてシリカゲルで精製された。
【００７０】
ビス（エトキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−３’−（ｔ−ブトキシカルボニルオキシ）−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−エステル（１，ＭＳ１５１）
【００７１】
【化４】
0005864590.tif 000005
（「化４」の化合物は、）３’−Ｂｏｃ−ゲムシタビン（０．２０ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ＰＯＣｌ3（０．１７ｇ、０．１７ｍＬ、１．１０ｍｍｏｌ）、及び、（Ｅｔ）3ＰＯ（１．０ｍＬ）から、その後にＬ−ＡｌａエチルエステルＨＣｌ塩（０．４２ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．７１ｇ、０．９５ｍＬ、５．５５ｍｍｏｌ）を添加し、前記標準的な手順Ａに従って調製された。生成物がカラム精製によって白色固体（０．０７５ｇ、２１％）として得られた。
31P-NMR (MeOD, 202 MHz) (13.90
19F-NMR (MeOD, 121 MHz) (-115.35 (d, J = 251 Hz), -119.19 (d, ブロードシグナル, J = 249 Hz)
1H-NMR (MeOD, 500 MHz) (7.71 (1H, d, J= 8.16 Hz, H-塩基), 6.34 (1H, t, J= 9.27 Hz, H-l'), 6.00 (1H, d, J = 8.16 Hz, H-塩基), 5.27 - 5.22 (1H, m, H-3'), 4.37 - 4.33 (2H, m, 1 x H-5', H-4'), 4.29 - 4.23 (1H, m, 1 x H-5'), 4.22 - 4.16 (4H, m, 2 x CH2CH3), 3.97 - 3.90 (2H, m, 2 x CHCH3), 1.52 (9H, s, C(CH3)3), 1.40 (6H, d, J = 7.23 Hz, 2 x CHCH3), 1.28 (6H, 明瞭なtd, J = 7.23 Hz, 2 x CH2CH3)
13C-NMR (MeOD, 125 MHz) (175.64 (d, 3JC-P = 5.70 Hz, C=0, エステル), 167.76 (C=O, C-Ar, 塩基), 157.60 (C-Ar, 塩基), 153.18 (C=O, 3'-Boc), 143.02 (CH-Ar, 塩基), 123.53 (明瞭なt, lJC-F = 260 Hz, CF2), 96.86 (CH-Ar, 塩基), 86.20 - 85.81 (m, ブロードシグナル, C-1'), 85.19 (C(CH3)3), 78.82 (d, 3JC-F = 6.50 Hz, C-4'), 74.16, 73.84 (2 x d, 2JC-F = 18.0 Hz, 17.53 Hz, C-3'), 64.45 (d, 2JC-P = 3.91 Hz, C-5'), 62.37 (CH2CH3), 51.10 (d, 2JC-P = 3.90 Hz, CHCH3), 27.87 (C(CH3)3), 20.86, 20.75 (2 x d, 3JC-P = 5.43 Hz, CHCH3), 14.53 (CH2CH3) 
MS (ES+) m/e: 664 (MNa+, 100%), 精密質量分析: C24H38F2N5O11P 理論値 641.56 実測値 642.24 (13%) 
【００７２】
ビス（エトキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−エステル（２，ＣＰＦ４５９）
【００７３】
【化５】
0005864590.tif 000006
（「化５」の化合物は、）化合物１（ＭＳ１５１）（０．０７５ｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ／ＤＣＭ（４ｍＬ）から、前記標準的な手順Ｃに従って調製された。生成物２が、カラム精製と、その後の分取ＴＬＣ精製とによって白色固体（７．０ｍｇ、１１％）として得られた。
31P-NMR (MeOD, 202 MHz) (13.91 
19F-NMR (MeOD, 121 MHz) (-118.39 (d, J = 239 Hz), -119.83 (d, J = 239 Hz)
1H-NMR (MeOD, 500 MHz) (7.70 (1H, d, J= 7.41 Hz, H-塩基), 6.29 (1H, t, J= 8.35 Hz, H-l'), 6.01 (1H, d, J = 7.41 Hz, H-塩基), 4.36 - 4.22 (3H, m, 2 x H-5', H-3'), 4.19 - 4.17 (4H, m, 2 x CH2CH3), 4.07 - 4.05 (1H, m, H-4'), 3.96 - 3.89 (2H, m, 2 x CHCH3), 1.40 (6H, d, J = 7.23 Hz, 2 x CHCH3), 1.30 - 1.27 (6H, m, 2 x CH2CH3) 
13C-NMR (MeOD, 125 MHz) (175.71 (d, 3JC-P = 4.15 Hz, C=0, エステル), 167.70 (C=O, C-Ar, 塩基), 157.79 (C-Ar, 塩基), 142.67 (CH-Ar, 塩基), 124.69 (明瞭なt, lJC-F = 259 Hz, CF2), 96.77 (CH-Ar, 塩基), 86.15 - 85.80 (m, ブロードシグナル, C-1'), 80.40 (ブロードシグナル, C-4'), 71.32, 71.13 (2 x d, 2JC-F = 22.80 Hz, C-3'), 64.38 (d, 2JC-P = 5.41 Hz, C-5'), 62.34 (CH2CH3), 51.10 (d, 2JC-P = 3.90 Hz, CHCH3), 20.85, 20.70 (2 x d, 3JC-P = 5.79 Hz, CHCH3), 14.47 (CH2CH3) 
ＨＰＬＣb（Ｈ2Ｏ／ＭｅＯＨ  ３５分間で１００／０から０／１００まで）Ｒｔ２４．２１分
【００７４】
ビス（ベンゾキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−エステル（３，ＣＰＦ４５７）
【００７５】
【化６】
0005864590.tif 000007
（「化６」の化合物は、）ゲムシタビン（０．２５ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、ＰＯＣｌ3（０．２９ｇ、０．１７ｍＬ、１．８９ｍｍｏｌ）、及び、（Ｅｔ）3ＰＯ（１．０ｍＬ）から、その後にＬ−ＡｌａベンジルエステルＴｓ塩（１．６７ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ、１．６５ｍＬ、９．５０ｍｍｏｌ）を添加し、前記標準的な手順Ｂに従って調製された。生成物３が、カラム精製と、その後の分取ＴＬＣ精製とによって白色固体（０．０７９ｇ、１２％）として得られた。
31P-NMR (MeOD, 202 MHz) (13.87 
19F-NMR (MeOD, 121 MHz) (-118.14 (d, J = 239 Hz), -119.70 (d, ブロードシグナル, J = 239 Hz)
1H-NMR (MeOD, 500 MHz) (7.67 (1H, d, J= 7.53 Hz, H-塩基), 7.38 - 7.31 (10H, m, H-Ar), 6.27 (1H, t, J= 8.05 Hz, H-l'), 5.97 (1H, d, J = 7.51 Hz, H-塩基), 5.18 - 5.10 (4H, m, 2 x CH2Ph), 4.31 - 4.17 (3H, m, H-5', H-3' H-5'), 4.02 - 3.95 (3H, m, H-4', 2 x CHCH3), 1.38, 1.36 (6H, 2 x d, J = 7.14 Hz, 2 x CHCH3)
13C-NMR (MeOD, 125 MHz) (175.43 (d, 3JC-P = 5.40 Hz, C=0, エステル), 167.68 (C=O, C-Ar, 塩基), 157.81 (C-Ar, 塩基), 142.63 (CH-Ar, 塩基), 137.29, 137.28 (C-Ar), 129.85, 129.66, 129.65, 129.40, 129.39, 129.32, 127.02 (CH-Ar), 123.69 (明瞭なt, lJC-F = 258 Hz, CF2), 96.87 (CH-Ar, 塩基), 86.02 (明瞭なt, ブロードシグナル, 2JC-F = 27.0 Hz, C-1'), 80.46 (明瞭なt, 3JC-F = 8.20 Hz, C-4'), 71.28 (明瞭なt, 2JC-F = 23.44 Hz, C-3'), 68.00, 67.99 (CH2Ph), 64.52 (d, 2JC-P = 4.78 Hz, C-5'), 51.15 (d, 2JC-P = 5.41 Hz, CHCH3), 20.78, 20.67 (2 x d, 3JC-P = 5.53 Hz, CHCH3).
MS (ES+) m/e: 688.21 (MNa+, 100%), 精密質量分析: C29H34F2N5O9P 理論値 665.58 実測値 666.22 (3%)
ＨＰＬＣb（Ｈ2Ｏ／ＭｅＯＨ  ３５分間で１００／０から０／１００まで）Ｒｔ２４．１５分
【００７６】
ビス（シクロヘキソキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−エステル（４，ＣＰＦ４５８）
【００７７】
【化７】
0005864590.tif 000008
（「化７」の化合物は、）ゲムシタビン（０．２５ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、ＰＯＣｌ3（０．２９ｇ、０．１７ｍＬ、１．８９ｍｍｏｌ）、及び、（Ｅｔ）3ＰＯ（１．０ｍＬ）から、その後にＬ−ＡｌａシクロヘキシルエステルＨＣｌ塩（０．９９ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ、１．６５ｍＬ、９．５０ｍｍｏｌ）を添加し、前記標準的な手順Ｂに従って調製された。生成物４が、カラム精製と、その後の分取ＴＬＣ精製とによって白色固体（０．０２９ｇ、５％）として得られた。
31P-NMR (MeOD, 202 MHz) (13.94 
19F-NMR (MeOD, 121 MHz) (-118.30 (d, J = 241 Hz), -119.78 (d, ブロードシグナル, J = 245 Hz) 
1H-NMR (MeOD, 500 MHz) (7.70 (1H, d, J= 7.15 Hz, H-塩基), 6.29 (1H, t, J = 7.97 Hz, H-l'), 6.01 (1H, d, J = 7.51 Hz, H-塩基), 4.79 - 4.73 (2H, m, 2 x CH-シクロヘキシル), 4.37 - 4.33 (1H, m, H-5'), 4.32 - 4.22 (2H, m, H-3', H-5'), 4.08 - 4.06 (1H, m, H-4'), 3.93 - 3.89 (2H, m, 2 x CHCH3), 1.87 - 1.84 (4H, m, 2 x CH2, シクロヘキシル), 1.77 - 1.74 (4H, m, 2 x CH2, シクロヘキシル), 1.58 - 1.56 (2H, m, 2 x CH2-シクロヘキシルのCH), 1.48 - 1.33 (16H, m, 10H, CH2-シクロヘキシル; 6H, 2 x CHCH3)
13C-NMR (MeOD, 125 MHz) (175.64 (d, 3JC-P = 5.37 Hz, C=0, エステル), 167.69 (C=O, C-Ar, 塩基), 157.79 (C-Ar, 塩基), 142.66 (CH-Ar, 塩基), 123.66 (明瞭なt, lJC-F = 259 Hz, CF2), 96.85 (CH-Ar, 塩基), 86.00 (明瞭なt, ブロードシグナル, 2JC-F = 30 Hz, C-1'), 80.48 (明瞭なt, 3JC-F = 8.50 Hz, C-4'), 74.66, 74.56 (2 x CH-シクロヘキシル), 71.29 (明瞭なt, 2JC-F = 25.0 Hz, C-3'), 64.54 (d, 2JC-P = 4.23 Hz, C-5'), 51.13 (d, 2JC-P = 13.0 Hz, CHCH3), 32.55, 32.53, 32.48, 32.34, 26.58, 26.44, 24.79, 24.69 (CH2-シクロヘキシル), 21.15, 20.93 (2 x d, 3JC-P = 5.52 Hz, CHCH3)
MS (ES+) m/e: 672.26 (MNa+, 100%), 精密質量分析: C27H42F2N5O9P 理論値 649.62 実測値 650.28 (33%) 
ＨＰＬＣb（Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ  ３５分間で１００／０から０／１００まで）Ｒｔ１７．７２分
【００７８】
ビス（２，２−ジメトキシプロポキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−エステル（５，ＣＰＦ４６０）
【００７９】
【化８】
0005864590.tif 000009
（「化８」の化合物は、）ゲムシタビン（０．２５ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、ＰＯＣｌ3（０．２９ｇ、０．１７ｍＬ、１．８９ｍｍｏｌ）、及び、（Ｅｔ）3ＰＯ（１．０ｍＬ）から、その後にＬ−ＡｌａネオペンチルエステルＴｓ塩（１．５７ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ、１．６５ｍＬ、９．５０ｍｍｏｌ）を添加し、前記標準的な手順Ｂに従って調製された。生成物５（compound 5）が、カラム精製と、その後の分取ＴＬＣ精製とによって白色固体（０．０４１ｇ、７％）として得られた。
31P-NMR (MeOD, 202 MHz) (13.93 
19F-NMR (MeOD, 121 MHz) (-118.1 (d, J = 245 Hz), -119.6 (d, J = 245 Hz)
1H-NMR (MeOD, 500 MHz) (7.70 (1H, d, J= 7.58 Hz, H-塩基), 6.29 (1H, t, J = 8.20 Hz, H-l'), 6.01 (1H, d, J = 7.58 Hz, H-塩基), 4.37 - 4.33 (1H, m, H-5'), 4.30 - 4.23 (2H, m, H-5', H-3'), 4.08 - 4.06 (1H, m, H-4'), 4.03 - 3.96 (2H, 2 x CHCH3), 3.90, 3.93, 3.79, 3.73 (4H, 2 x AB, JAB = 10.55 Hz, 2 x CH2(CH3)3), 1.45, 1.43 (6H, 2 x d, J = 7.08 Hz, 2 x CHCH3), 0.97 (18H, s, 2 x CH2C(CH3)3)
13C-NMR (MeOD, 125 MHz) (175.71, 175.67 (2 x d, 3JC-P = 3.44 Hz, C=0, エステル), 167.70 (C=O, C-Ar, 塩基), 157.79 (C-Ar, 塩基), 142.68 (CH-Ar, 塩基), 123.65 (明瞭なt, lJC-F = 258 Hz, CF2), 96.84 (CH-Ar, 塩基), 86.04 (明瞭なt, 2JC-F = 26 Hz, C-1'), 80.48 (明瞭なt, 3JC-F = 8.51 Hz, C-4'), 75.46, 75.43 (CH2C(CH3)3), 71.30 (t, 2JC-F = 23.0 Hz, C-3'), 64.57 (d, 2JC-P = 4.73 Hz, C-5'), 51.17 (d, 2JC-P = 7.78 Hz, CHCH3), 26.7 (CH2C(CH3)3), 21.08, 20.96 (2 x d, 3JC-P = 6.10 Hz, CHCH3)
MS (ES+) m/e: 648 (MNa+, 100%), 精密質量分析: C25H42F2N5O9P 理論値 625.60, 実測値 626.28 (2%)
ＨＰＬＣb（Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ  ３５分間で１００／０から０／１００まで）Ｒｔ１７．２７分
【００８０】
ビス（イソプロポキシ−Ｌ−アラニニル）リン酸２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−Ｄ−シチジン−５’−Ｏ−エステル（６，ＣＰＦ４６１）
【００８１】
【化９】
0005864590.tif 000010
（「化９」の化合物は、）ゲムシタビン（０．２５ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、ＰＯＣｌ3（０．２９ｇ、０．１７ｍＬ、１．８９ｍｍｏｌ）、及び、（Ｅｔ）3ＰＯ（１．０ｍＬ）から、その後にＬ−ＡｌａイソプロピルエステルＨＣｌ塩（０．８０ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ、１．６５ｍＬ、９．５０ｍｍｏｌ）を添加し、前記標準的な手順Ｂに従って調製された。生成物６が、カラム精製と、その後の分取ＴＬＣ精製とによって白色固体（０．０３７ｇ、７％）として得られた。
31P-NMR (MeOD, 202 MHz) (13.97 
19F-NMR (MeOD, 121 MHz) (-117.5 (d, J = 245 Hz), -120.3 (d, J = 245 Hz)
1H-NMR (MeOD, 500 MHz) (7.70 (1H, d, J= 7.20 Hz, H-塩基), 6.29 (1H, t, J = 8.0 Hz, H-l'), 6.00 (1H, d, J = 7.58 Hz, H-塩基), 5.10 - 4.98 (2H, 明瞭な７重, J = 6.40 Hz, 2 x H, CH(CH3)2), 4.36 - 4.34 (1H, m, H-5'), 4.30 - 4.22 (2H, m, H-5', H-3'), 4.09 - 4.06 (1H, m, H-4'), 3.93 - 3.86 (2H, m, 2 x CHCH3), 1.49, 1.47 (6H, 2 x d, J = 6.70 Hz, 2 x CHCH3), 1.29 - 1.26 (12H, m, 2 x CH(CH3)2)
13C-NMR (MeOD, 125 MHz) (175.25 (d, JC-P = 2.20 Hz, C=0, エステル), 167.70 (C=O, C-Ar, 塩基), 157.81 (C-Ar, 塩基), 142.68 (CH-Ar, 塩基), 123.38 (明瞭なt, lJC-F = 257 Hz, CF2), 96.85 (CH-Ar, 塩基), 85.94 (明瞭なt, 2JC-F = 28.7 Hz, C-1'), 80.46 (明瞭なt, 3JC-F = 8.21 Hz, C-4'), 71.28 (明瞭なt, 2JC-F = 24.0 Hz, C-3'), 70.12 (CH(CH3)2), 64.52 (d, 2JC-P = 4.77 Hz, C-5'), 51.17 (d, 2JC-P = 8.6 Hz, CHCH3), 22.07, 22.05 (CH(CH3)2), 20.91, 20.82 (2 x d, 3JC-P = 6.3 Hz, CHCH3) 
MS (ES+) m/e: 592.19 (MNa+, 100%), 精密質量分析: C21H34F2N5O9P 理論値 569.49, 実測値 570.20 (10%) 
ＨＰＬＣb（Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ  ３５分間で１００／０から０／１００まで）Ｒｔ１２．１５分
【００８２】
生物学的アッセイ
ヒトのヒト大腸がん細胞株のＨＲＴ１８が、動物培養細胞の欧州コレクション（European Collection of Animal Cell Cultures）（ＥＣＡＣＣ、英国サリスベリー）から購入された。細胞毒性（cytoxicity）アッセイは、我々が以前に報告したＭＴＴアッセイに基づく。この方法は水溶性テトラゾリウム塩のＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアジド−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）を不溶性ホルマザン沈殿物に変換する、生きているミトコンドリアの能力に基づき、前記沈殿物は溶解され、分光光度法によって定量される。９６穴の培養細胞培養プレートが用いられた。細胞は血球計算盤（haemocytomete counting chamber）で数を数えられ、特定数の細胞（ウェル１個あたり４０００個）が培養培地（ＤＭＥＭ）とともに各々のウェルに播種された。ＤＭＳＯに溶解した本発明の化合物は、培養培地内で、順次（１：５）の割合で希釈され、最終的に０．１２８ｎＭから２０００ｎＭまでの濃度範囲が網羅された。前記培養プレートは３７°Ｃで７２時間インキュベーションされた。前記細胞はＢＳＳで２回洗浄された。培養培地中に０．５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴの溶液が各々のウェルに添加された。その後、前記培養プレートは３７°Ｃで４時間インキュベーションされた。その後、ＭＴＴが吸引によって除去された。その後、細胞内にＭＴＴ試薬によって生成した結晶が、１００ｌＬのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００（水に１０％）の添加によって抽出された。細胞は４°Ｃで２４時間インキュベーションされた。その後、発色生成物の吸光度が、分光光度計（Titertecek）を用いて波長５４０ｎｍで測定された。
【００８３】
データ
【表１】
0005864590.tif 000011
【００８４】
本アッセイでは、全てのジアミダートは、親のゲムシタビンと比較してより効力があり、いくつかは２０倍までの効力であった。効力は、表に示されたようにエステルのＲ7基によって変化し、アミノ部分（moiety）によっても変化する（データは示されない）。