(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンパ球の表面上におけるＣＴＬＡ−４に対する結合を本質的に示さず、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合する、及びアミノ酸配列ＡＫＥＫＫＰＳＹＮＲＧＬＣＥＮＡＰＮＲＡＲＭ（配列番号１１）内のｓＣＴＬＡ−４エピトープに結合する、モノクローナル抗体、又はモノクローナル抗体の機能的な部分である抗体分子であって、前記抗体分子は、抗原特異的Ｔリンパ球の細胞応答を高めることができる、抗体分子であって、
前記抗体分子は、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ３についての配列番号７のアミノ酸配列、重鎖ＣＤＲ１についての配列番号５のアミノ酸配列、及び重鎖ＣＤＲ２についての配列番号６のアミノ酸配列を有する３つの重鎖ＣＤＲを含むＶＨドメインと、
（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１についての配列番号８のアミノ酸配列、軽鎖ＣＤＲ２についての配列番号９、及び軽鎖ＣＤＲ３についての配列番号１０のアミノ酸配列を有する３つの軽鎖ＣＤＲを含むＶＬドメインと、
を含む、抗体分子。
【請求項２】
前記抗体分子は、
（ｉ）配列番号４に示される配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び、
（ｉｉ）配列番号２に示される配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、
請求項１に記載の抗体分子。
【請求項３】
（ｉ）ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨドメイン（配列番号４）並びに配列番号７、５及び６のアミノ酸配列を有する３つ全てのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨドメイン、からなる群より選択される抗体ＶＨドメイン、及び
（ｉｉ）ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬドメイン（配列番号２）並びに配列番号８、９、及び１０のアミノ酸配列を有する３つ全てのＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬドメインからなる群より選択される抗体ＶＬドメイン、を含む抗体分子。
【請求項４】
ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨドメイン（配列番号４）及びＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬドメイン（配列番号２）を含む請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体分子。
【請求項５】
（ｉ）抗体断片又は抗原結合ドメインを含むか、抗体断片又は抗原結合ドメインからなるか、或いは抗体断片又は抗原結合ドメインから本質的になり、且つＦａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２から選択される抗体分子、
（ｉｉ）抗体定常領域を含む抗体分子
からなる群から選択される請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体分子。
【請求項６】
全ヒト化抗体である請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体分子。
【請求項７】
配列番号２で表されるＶＬドメイン及び配列番号４で表されるＶＨドメインを有するモノクローナル抗体である、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体分子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸。
【請求項９】
請求項８に記載の核酸で形質転換された宿主細胞。
【請求項１０】
抗体分子を産生する方法であって、前記抗体分子を産生する条件下で請求項９に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。
【請求項１１】
前記抗体分子又は抗体ＶＨ若しくはＶＬ可変ドメインを単離及び／又は精製することを更に含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
リンパ球の表面上におけるＣＴＬＡ−４に対する結合を本質的に示さない、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合する請求項１に記載の抗体分子を得る方法であって、
（ｉ）ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨドメイン（配列番号４）のアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、又は挿入を介して、各々がＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨドメインのアミノ酸配列変異体である１つ以上のＶＨドメインを提供する工程と、
（ｉｉ）前記のように提供される１つ以上のＶＨドメインアミノ酸配列変異体を１つ以上のＶＬドメインと組み合わせて、１つ以上のＶＨ／ＶＬの組み合わせを提供する工程と；及び／又は
（ｉｉｉ）ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＬドメイン（配列番号２）のアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、又は挿入を介して、ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＬドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＬドメインを提供する工程と、
（ｉｖ）前記のように提供される１つ以上のＶＬドメインアミノ酸配列変異体を１つ以上のＶＨドメインと組み合わせて、１つ以上のＶＨ／ＶＬドメインの組み合わせを提供する工程と；
（ｖ）前記ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体又はＶＨ／ＶＬの組み合わせを試験して、リンパ球の表面上のＣＴＬＡ−４に対する結合を本質的に示さない、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体分子を同定する工程とを含む方法。
【請求項１３】
リンパ球の表面上におけるＣＴＬＡ−４に対する結合を本質的に示さない、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合する請求項１に記載の抗体分子を得る方法であって、
（ｉ）ＣＤＲ３が置換されているか又はＣＤＲ３コード領域が欠失している１つ以上のＶＨドメインをコードする出発核酸を提供して、ＶＨドメインをコードする生成物核酸を産生するために、ドナー核酸が出発核酸中のＣＤＲ３領域に挿入されるように、前記出発核酸と配列番号７のＶＨ  ＣＤＲ３アミノ酸配列をコードするドナー核酸とを組み合わせる工程；又は
（ｉｉ）ＣＤＲ３が置換されているか又はＣＤＲ３コード領域が欠失している１つ以上のＶＬドメインをコードする出発核酸を提供して、ＶＬドメインをコードする生成物核酸を産生するために、ドナー核酸が出発核酸中のＣＤＲ３領域に挿入されるように、前記出発核酸と配列番号１０のＶＬ  ＣＤＲ３アミノ酸配列をコードするドナー核酸とを組み合わせる工程と；を含み
いずれの場合も
（ｉｉｉ）ＶＨドメインをコードする前記生成物核酸の核酸を発現させ、前記のように提供されるＶＨドメインを１つ以上のＶＬドメインと組み合わせて、ＶＨ／ＶＬの組み合わせを提供し、及び／又はＶＬドメインをコードする前記生成物核酸の核酸を発現させ、前記のように提供されるＶＬドメインを１つ以上のＶＨドメインと組み合わせて、ＶＨ／ＶＬの組み合わせを提供する工程と；
（ｉｖ）リンパ球の表面上におけるＣＴＬＡ−４に対する結合を本質的に示さない、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合するＶＨ／ＶＬの組み合わせを含む抗体分子を選択する工程と、
（ｖ）前記抗体分子及び／又はｓＣＴＬＡ−４に結合する抗体分子をコードする核酸を回収する工程とを含む方法。
【請求項１４】
請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体分子を、ｓＣＴＬＡ−４又はｓＣＴＬＡ−４のｃ−末端断片と接触させることを含むインビトロでの方法。
【請求項１５】
個体から得られるサンプル中のｓＣＴＬＡ−４を検出するため、又はｓＣＴＬＡ−４濃度を検出するための請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
リンパ球の表面上におけるＣＴＬＡ−４に対する結合を本質的に示さない、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体分子であって、前記抗体の存在下で免疫原又は抗原投与に対する抗原特異的免疫反応を選択的に高めるインビボでの方法で使用するための抗体分子。
【請求項１７】
前記方法が、
（ｉ）前記抗体分子を被験体に投与する工程、又は
（ｉｉ）前記抗体分子に血漿を曝露して、次いで、前記血漿を被験体に提供する工程とを含む、前記抗体の存在下で免疫原又は抗原投与に対する抗原特異的免疫反応を選択的に高めるインビボでの方法で使用するための請求項１６に記載の抗体分子。
【請求項１８】
免疫反応が、免疫原又は抗原投与に対するＴ細胞応答であり、前記免疫反応が、免疫原の腫瘍、ワクチン、病原体、又はこれらのうちのいずれかに由来するタンパク質免疫原又は抗原に対する免疫反応から選択される、前記抗体の存在下で免疫原又は抗原投与に対する抗原特異的免疫反応を選択的に高めるインビボでの方法で使用するための請求項１６又は１７に記載の抗体分子。
【請求項１９】
治療有効量の、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体分子を含み、薬学的に許容しうる担体、希釈剤、及び／又は賦形剤を更に含む、治療、予防、又は診断用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトの可溶型の細胞毒性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）に特異的に対する抗体及びその機能的部分を含む抗体分子、並びにこれに関連する方法及び物質に関する。
【背景技術】
【０００２】
患者における適応免疫反応を調節する能力は、現在利用可能な従来の医薬に比べて安全性の改善された強力な標的指向化治療法の可能性を提供する。Ｔ細胞応答を増強又は抑制することを目的とする方法を、多くの疾患における治療法として成功裏に開発することができた。これは、Ｔ細胞が病原体の攻撃に対する特異性及び記憶の両方を媒介する適応免疫系の重要な構成要素を形成しているので、全体として免疫系に影響を与え、且つ治癒ではなく疾患を制御する現在のブランケット治療法に置き換わる選択性の高い治療法を開発するための対象を提供するためである。
【０００３】
Ｔ細胞の完全な活性化には、Ｔ細胞抗原受容体を通じた刺激、及びＴ細胞の細胞表面上に提示される共刺激分子、主にＣＤ２８受容体を介する更なるシグナル伝達を必要とする（１〜３）。ＣＤ２８のリガンドは、受容性Ｔ細胞にも抗原を提示する、樹状細胞、マクロファージ及びＢ細胞等の細胞によって提示されるＣＤ８０（Ｂ７．１）及びＣＤ８６（Ｂ７．２）である（４、５）。ＣＤ８０又はＣＤ８６によるＣＤ２８の結合は、抗原特異的Ｔ細胞応答を安定化させ且つ増幅するシグナル伝達経路を刺激する。これは、サイトカインＩＬ−２のＴ細胞産生、アポトーシスを抑制するタンパク質（Ｂｃｌ―ＸＬ）の発現、及び抗原特異的免疫反応を増幅するエフェクターサイトカインの分泌の増加を特徴とする。
【０００４】
ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８の構造的相同体であり、これらは、両方共免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、およそ３０％のアミノ酸配列相同性を共有し、ヒトでは、２番染色体の同じ領域に位置する（６〜８）。特に、これらは、ＣＤ８０／ＣＤ８６結合にとって重要な配列モチーフを保持している。しかし、ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８と比べてＴ細胞活性に対して反対の作用を備える受容体として、広く認められており、活性化Ｔ細胞に刺激性シグナルではなく阻害シグナルを送達する。ＣＴＬＡ−４は、それが提示される活性化Ｔ細胞により遂行される免疫反応の強度を減ずることができる反受容体であると一般的に認められている（９、１０）。また、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞はその細胞表面上の分子を恒常的に発現するが、他のエフェクターＴ細胞サブセット、例えば、ＣＤ４＋Ｔｈ１Ｔ細胞は、活性化後にしかそれを発現しないことが広く認められている（１１〜１３）。前記分子がＴｒｅｇ機能に関与しているという更なる証拠が存在しているため、ＣＴＬＡ−４は、それを発現する細胞の固有活性を調節することによって、且つ免疫反応中に他の活性化Ｔ細胞を阻害することによって、免疫反応の制御に関与している可能性がある（１４〜１８）。
【０００５】
Ｔ細胞刺激におけるＣＴＬＡ−４の役割を描写しようとする試みにより、それがＴ細胞の阻害性制御因子として重要であることが実証された。まず、ＣＴＬＡ−４遺伝子欠損マウスは、活性化Ｔ細胞芽球がリンパ組織に速やかに蓄積し、進行して身体の他の器官及び組織に浸潤する大リンパ球増殖性障害によって誕生後３〜５週間で死亡する（１９、２０）。これは、ＣＴＬＡ−４が、Ｔ細胞の活性化状態の限定、及びＴ細胞ホメオスタシスの維持の両方において何らかの役割を有しているという証拠を提供する。更に、ＣＴＬＡ−４に特異的な抗体に関する研究を使用して、精製されたＴ細胞集団におけるその役割が評価され、細胞表面上におけるＣＴＬＡ−４の抗体架橋がＴ細胞の増殖及びＩＬ−２の産生を阻害することが見出されている（２１〜２４）。これらの効果は、ＣＤ２８によって媒介される刺激作用と正反対であるので、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４共刺激分子は、組み合わせられて、それぞれ刺激性及び阻害性シグナルを送達することによってＴ細胞抗原受容体刺激を調節している可能性がある。
【０００６】
ＣＴＬＡ−４の抗体遮断は、ＣＴＬＡ−４機能の阻害が、癌、感染症及び他の免疫に関連するシナリオを含む広範囲にわたる疾患状況において、Ｔ細胞活性を高めることを実証するために広く使用されている。癌では、強力な抗腫瘍Ｔ細胞応答を確立する潜在的に実行可能な方法として、ＣＴＬＡ−４機能の抗体遮断が確立されている（２５〜３１；特許文献１）。癌のマウスモデルにおいて最初の実験が行われた。ＣＴＬＡ−４の遮断は、腫瘍の縮小及び消滅を成功裏に導く抗腫瘍性Ｔ細胞免疫反応を高めた。抗体を単独で使用するか又は癌に特異的なワクチンと併用して、癌モデルにおけるＣＴＬＡ−４の遮断が行われた。特定の腫瘍の天然免疫原性は、ＣＴＬＡ−４の遮断のみ、又はワクチン若しくは他の免疫アクチベータと組み合わせたＣＴＬＡ−４の遮断が、成功裏に抗腫瘍免疫反応を生じさせるのに十分であるかどうかの決定因子であると思われる。癌のマウスモデルにおけるＣＴＬＡ−４遮断の最初の研究は、ヒトにおける類似の研究を導き、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的な少なくとも２つのモノクローナル抗体が、多様な範囲の癌治療を目指す治験において広範囲に研究されている（３１）。
【０００７】
感染症に関しては、ＣＴＬＡ−４機能の抗体遮断が、抗原特異的抗体の増加、及びＴｈ１／Ｔｈ２  Ｔヘルパー細胞応答を含む免疫のスペクトルを高める抗寄生虫、抗細菌、及び抗ウイルス反応を含む、免疫反応を大きく増強することを実証した（３２〜３６）。また、ＣＴＬＡ−４の抗体遮断は、自己免疫反応を高める（３７）。
【０００８】
ＣＴＬＡ−４に関するほとんどの研究は、分子の受容体の形態に注目していたが、タンパク質の形態で、Ｔ細胞の細胞表面上に存在しない別の遺伝的アイソフォームが存在している（３８）。
【０００９】
ＣＴＬＡ−４の完全長膜結合型アイソフォームは、ヒトにおいては、２番染色体の４つのエキソン（１〜４）にコードされているが、分泌可能可溶型のＣＴＬＡ−４（ｓＣＴＬＡ−４）を産生するものを含む他のｍＲＮＡ転写物が存在する（３９、４０）。この別の様式でスプライシングされた転写物は、完全長ＣＴＬＡ−４の膜貫通ドメインに対応するエキソン３が欠損しており、エキソン４のリーディングフレームシフトによって、未知の機能を有する様々なＣ末端アミノ酸配列を有する細胞質尾部配列が置き換わる。完全長ＣＴＬＡ−４と同様に、ｓＣＴＬＡ−４は、ＡＰＣの上のＢ７．１／Ｂ７．２共刺激リガンドに結合する能力を有するが、抗原特異性免疫反応の制御因子としての役割は、未だ評価されていない。最初の研究は、休止Ｔ細胞がｓＣＴＬＡ−４の主な源であることを示し、これは、抗ＣＤ３  ｍＡｂによる非特異的活性化の後に、完全長アイソフォームの生成に速やかに切り換えて、免疫反応を制御する。
【００１０】
Ｏａｋｓ及びＨａｌｌｅｔｔ（４３）は、ｓＣＴＬＡ−４のＣ末端領域に対するウサギのポリクローナル抗血清の産生について記載している。前記抗血清は、ｓＣＴＬＡ−４タンパク質の存在を検出するためのウェスタンブロットにおいて使用された。それは、いずれの機能分析においても使用されなかった。
【００１１】
ＣＴＬＡ−４遺伝子座内の一塩基変異多型（ＳＮＰ）は、自己免疫疾患の感受性に関係している。ＣＴＬＡ−４に関連するＳＮＰ（ＣＴ６０）の強力な人口分析によって、特定のハプロタイプ（ホモ接合性のｇ／ｇ）が、グレーブス病、自己免疫甲状腺機能低下症及び１型糖尿病の感受性上昇と相関していることが見出された（４１）。前記ＳＮＰは、４つのＣＴＬＡ−４をコードするエキソンに下流に位置し、後続の分析は、産生されるｓＣＴＬＡ−４タンパク質の量の相対的な減少を判定することにより、感受性ＳＮＰがＣＴＬＡ−４に大きな影響を与えることを示した。完全長ＣＴＬＡ−４の発現レベルは、影響を受けなかった。これらのデータは、ｓＣＴＬＡ−４が免疫系の制御において実際に何らかの役割を有している可能性があるという証拠を提供した。
【００１２】
特許文献２は、ＣＴＬＡ−４受容体及び可溶性ＣＴＬＡ−４分子の変異体について記載している。
【００１３】
他のＣＴＬＡ−４の別のアイソフォームは別の転写物がエキソン２を欠損しており、且つエキソン１及び４によってのみコードされる場合、げっ歯類には存在するが、ヒトには存在しないｌｉＣＴＬＡ−４を含む。ヒトに存在するこの後者の転写物の機能は現在報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許第６９８４７２０号明細書
【特許文献２】国際公開第２００５／０７２３４０号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、必要な選択されたエピトープが欠損しているので、他のアイソフォーム又は組換え型ＣＴＬＡ−４タンパク質に結合しない、ＣＴＬＡ−４の可溶形に対して特異的である、本明細書においてＪＭＷ−３Ｂ３と呼ばれるモノクローナル抗体を提供した。
【００１６】
対照的に、ＣＴＬＡ−４に結合する現在の抗体は、典型的にエキソン２によってコードされるタンパク質領域のエピトープによって識別される両方のアイソフォームに結合する。
【００１７】
下記の他の有用性に加えて、ｓＣＴＬＡ−４特異的ＪＭＷ−３Ｂ３抗体は、抗原特異的ヒト免疫反応、特に抗原特異的Ｔリンパ球細胞（Ｔ細胞）に対する強い増強効果を有する。この活性は先行技術からは予測できなかった。具体的には、当技術分野における先行研究では、ｓＣＴＬＡ−４は、一般に、休止Ｔ細胞により産生され、免疫反応の活性成分ではないと考えられていた。これは、ｓＣＴＬＡ−４がモノマーの形態で分泌されるという見解と一致しており、この見解に基づいて、免疫反応を制御するために必要な機能的効力を有する可能性は低いと考えられていた（対照的に、完全長ＣＴＬＡ−４の研究から、完全長ＣＴＬＡ−４は、二量体型で細胞表面に提示され、且つ二数性がその機能において主な役割を果たしていることが明らかになった（４２）。同様に、人工の組換え型ＣＴＬＡ４−ｌｇは、二量体型においてより強力である（８））。
【００１８】
ｍＡｂ  ＪＭＷ−３Ｂ３を用いた研究は、仮定とは対照的に、ｓＣＴＬＡ−４が、機能的な形態において二量体である可能性が高いことを明らかにした。理論に縛られるものではないが、これは、その機能の遮断が、細胞増殖及びエフェクターサイトカイン産生の点から抗原特異的免疫反応に対してこのように強く且つ予想外の効果を有する理由を説明することができる。
【００１９】
フレームワーク（ＦＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、特に、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域の両方についてＦＲ１から、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４にわたる配列を含む、ｍＡｂ  ＪＭＷ−３Ｂ３抗体可変領域を含むヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を提供する（図１及び２を参照）。
【００２０】
以下により詳細に記載されるように、本発明の好ましい態様は、ＪＭＷ−３Ｂ３又はその断片若しくは変異体の抗体ＶＨ及び／又はＶＬドメインを使用する。更なる好ましい態様は、ＪＭＷ−３Ｂ３重鎖可変（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、特に他の抗体フレームワーク領域におけるＶＨ  ＪＭＷ−３Ｂ３（又はこれらの任意の変異体）を使用する。
【００２１】
次に、本発明のいくつかの局面及び態様についてより詳細に議論する。
【００２２】
１つの局面では、本発明は、ｓＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体分子を提供する。
【００２３】
多くの方法で抗体を改変できるとき、用語「抗体分子」は、必要とされる特異性を備えた抗体抗原結合ドメインを有する任意の抗体分子又は物質を包含すると解釈するべきである。したがって、この用語は、天然であろうと全体的に又は部分的に合成であろうと、免疫グロブリン結合ドメインを含む任意のポリペプチドを含む抗体断片及び誘導体を包含する。したがって、別のポリペプチドに融合した、免疫グロブリン結合ドメイン、又は等価物を含むキメラ分子も含まれる。好ましい抗体分子は、任意のそれと機能的に等価な抗体及びその機能的な部分を含む、本発明に係るＪＭＷ−３Ｂ３等のモノクローナル抗体である。このような等価物及び部分の例を以下により詳細に記載する。
【００２４】
本発明の文脈において「特異的に」は、ｓＣＴＬＡ−４に結合するが、リンパ球の表面上におけるＣＴＬＡ−４の他の主形態への結合を本質的に示さない能力を意味する。本発明の抗体分子は、同様に、「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」と呼ばれる人工的組み換え型ＣＴＬＡ−４への結合を本質的に示さなくてもよい。
【００２５】
「本質的に結合しない」とは、ｓＣＴＬＡ４に対する結合よりも、少なくとも約９０％以下結合が少ないことを意味する。
【００２６】
典型的に、特異性は、抗原のパネルを使用するＥＬＩＳＡ等の結合アッセイによって決定することができ、ここで、本発明に係る抗体分子がｓＣＴＬＡ４を特異的に認識するが、ＣＴＬＡ４は認識しないことを実証することができるであろう（図５を参照）。別の方法として、Ｂｉａｃｏｒｅセンサー等のセンサーを用いて、結合を比較又は定量することもできる。
【００２７】
１つの局面では、本発明は、以下のアミノ酸配列内のエピトープに結合する抗体分子を提供する：
ＡＫＥＫＫＰＳＹＮＲＧＬＣＥＮＡＰＮＲＡＲＭ（配列番号１１）。
【００２８】
この配列は、ｓＣＴＬＡ４のＣ末端タンパク質配列（Ａ１１６〜Ｍ１３７）の一部であり、一般にヒトＴ細胞の表面上で検出されるＣＴＬＡ−４アイソフォームの配列とは異なる。
【００２９】
したがって、本発明に係る抗体分子は、ｓＣＴＬＡ４（特に、配列番号１１におけるエピトープ）に対する結合について任意の抗体分子と競合する抗体分子であってもよく、これらは、両方、抗原に結合し、抗体分子の本明細書に記載されるＶＨ及び／又はＶＬドメイン、又は本明細書に開示されるＶＨ  ＣＤＲ３、又はこれらのうちのいずれかの変異体を含む。
【００３０】
抗体分子間の競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、及び／又は他のタグ付けされていない抗体分子の存在下で検出することができるある抗体分子に特異的レポーター分子をタグ付けして、同一エピトープ又は重複するエピトープに結合する抗体分子を同定することによって、インビトロで容易にアッセイすることができる。
【００３１】
したがって、本発明の更なる局面は、ｓＣＴＬＡ−４に対する（例えば、配列番号１１におけるエピトープに対する）結合についてＪＭＷ−３Ｂ３と競合し、且つ、同様にリンパ球の表面上のＣＴＬＡ−４には結合しないヒト抗体抗原結合部位を含む抗体分子を提供する。
【００３２】
本明細書における開示に照らして、ｓＣＴＬＡ−４に特異的であり、且つ同一又は近傍のｓＣＴＬＡ−４エピトープへの結合についてＪＭＷ−３Ｂ３と競合する可能性がある抗体を容易に提供することができる。例えば、方法は、抗体分子のライブラリと前記エピトープとを接触させ、前記エピトープに結合することができるライブラリの１以上の特異的抗体分子を選択することを含み得る。
【００３３】
また、前記ライブラリは、バクテリオファージ粒子の表面上に提示されてもよく、各粒子は、その表面上に提示される抗体のＶＨ可変ドメインをコードする核酸を含み、場合によっては、存在する場合ＶＬドメインも提示する。
【００３４】
エピトープに結合することができ、且つバクテリオファージ粒子上に提示されている特異的抗体分子を選択した後、前記選択された特異的抗体分子を提示しているバクテリオファージ粒子から核酸を得ることができる。このような核酸は、前記選択された特異的抗体分子を提示しているバクテリオファージ粒子から得られた核酸の配列を有する核酸から発現させることによって、特異抗体分子又は抗体ＶＨ可変ドメイン（場合により、抗体ＶＬ可変ドメイン）を産生する後続工程において使用することができる。
【００３５】
特異的にｓＣＴＬＡ−４に結合する能力、また、ｓＣＴＬＡ−４に対する結合についてＪＭＷ−３Ｂ３と競合する能力に関して更に試験してもよい。以下で更に議論されるように、特定の文脈におけるｓＣＴＬＡ−４の作用に拮抗する能力を試験してもよい。
【００３６】
本発明に係る抗体分子は、ＪＭＷ−３Ｂ３の親和性でｓＣＴＬＡ−４に結合することができる。
【００３７】
したがって、本発明は、更に、ｓＣＴＬＡ４に対する結合について任意の抗体分子と競合する抗体分子まで及び、これらは、両方、ｓＣＴＬＡ−４に結合し、実質的に本明細書に記載されるアミノ酸を有するＣＤＲを含むＶドメイン又は実質的に本明細書に記載されるアミノ酸配列を有するＶドメインを含む。抗体分子間の競合は、例えば、他のタグ付けされていない抗体分子の存在下で検出することができるある抗体分子にレポーター分子をタグ付けして、同一エピトープ又は重複するエピトープに結合する抗体分子を同定することによってインビトロで容易にアッセイすることができる。例えば、ＥＬＩＳＡ又はフローサイトメトリーを使用して、競合を判定することができる。
【００３８】
競合試験において、ｓＣＴＬＡ−４のペプチド断片、特に、対象エピトープを含むペプチドを使用してもよい。いずれか一方の末端に１つ以上のアミノ酸を付加したエピトープ配列を有するペプチドを使用してもよい。このようなペプチドは、特定の配列から「本質的に成る」ということができる。本発明に係る抗体分子は、ｓＣＴＬＡ−４に対する結合が、所与の配列を有するか又は含むペプチドによって阻害されるようになっていてもよい。この試験において、１つ以上のアミノ酸を付加したいずれかの配列を有するペプチドを使用してもよい。
【００３９】
上述のように、好ましい抗体分子は、ＪＭＷ−３Ｂ３等のモノクローナル抗体、又はその機能的に等価な抗体若しくはその機能的部分である。
【００４０】
好ましい態様では、抗体分子は、ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨドメイン（配列番号４）及び／又はＪＭＷ−３Ｂ３のＶＬドメイン（配列番号２）を含む。
【００４１】
一般的に、ＶＨドメインはＶＬドメインと対になって抗体抗原結合部位を提供するが、以下に更に論じるように、ＶＨドメインを単独で用いて抗原に結合させることもできる。
【００４２】
１つの好ましい態様では、ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨドメイン（配列番号４）はＪＭＷ−３Ｂ３のＶＬドメイン（配列番号２）と対になり、その結果、ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨ及びＶＬドメインの両方を含む抗体抗原結合部位が形成される。他の態様では、ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨは、ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＬ以外のＶＬドメインと対になる。軽鎖のプロミスキュイティー（ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ）は、当技術分野においてよく確立されている。
【００４３】
ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨ又はＶＬドメインから１つ以上のＣＤＲを得、好適なフレームワークに組み込んでもよい。これについて以下に更に議論する。ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＨ  ＣＤＲ１、２及び３をそれぞれ配列番号５、６、及び７に示す。ＪＭＷ−３Ｂ３のＶＬ  ＣＤＲ１、２及び３をそれぞれ配列番号８、９、及び１０に示す。
【００４４】
配列が本明細書に記載されており、且つｓＣＴＬＡ−４に対する抗体分子において使用することができるＶＨ及びＶＬドメインの変異体は、配列を変化又は突然変異させ、スクリーニングする方法を用いて得ることができる。本発明もこのような方法を提供する。
【００４５】
本発明に従って、その配列が本明細書に具体的に開示されているＶＨ及びＶＬのドメインのいずれかの可変ドメインアミノ酸配列変異体を、本発明に従って使用することができる。特定の変異体は、１つ以上のアミノ酸配列変化（アミノ酸残基の付加、欠失、置換及び／又は挿入）、恐らく、約２０個未満の変化、約１５個未満の変化、約１０個未満の変化、又は約５個未満の変化、４、３、２、又は１個の変化を含んでもよい。１つ以上のフレームワーク領域及び／又は１つ以上のＣＤＲを変化させてもよい。
【００４６】
好ましい置換は、保存的置換である。
【００４７】
したがって、本発明の１つの局面は、ＡＫＥＫＫＰＳＹＮＲＧＬＣＥＮＡＰＮＲＡＲＭ内のｓＣＴＬＡ−４エピトープに特異的な抗体抗原結合ドメインを得るための方法であって、本明細書に記載されるＶＨドメインのアミノ酸配列における１以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、又は挿入を介して、前記ＶＨドメインのアミノ酸変異体であるＶＨドメインを提供する工程と、場合により、上記のように提供されるＶＨドメインを１以上のＶＬドメインと組み合わせる工程と、ＶＨドメイン又はＶＨ／ＶＬの組み合わせを試験して、ｓＣＴＬＡ−４に特異的な抗体分子又は抗体抗原結合ドメインを同定する工程とを含む方法を提供する。前記ＶＬドメインは、実質的に本明細書に記載されているアミノ酸配列を有し得る。
【００４８】
本明細書に開示されるＶＬドメインの１つ以上の配列変異体を１つ以上のＶＨドメインと組み合わせる類似の方法を使用してもよい。
【００４９】
１つの態様では、本発明は、配列番号２に示される配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を示すＶＬ領域、又は軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、具体的には少なくとも２つ、より具体的には少なくとも３つであるが、特に、天然のフレームワーク領域に埋め込まれている全てのＣＤＲを含むその機能的部分に関する。
【００５０】
１つの態様では、本発明は、配列番号４に示される配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を示すＶＨ領域、又は重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、具体的には少なくとも２つ、より具体的には少なくとも３つであるが、特に、天然のフレームワーク領域に埋め込まれている全てのＣＤＲを含むその機能的部分に関する。
【００５１】
本発明の更なる局面は、本発明に係る、且つ本明細書に記載されている任意の機能的に等価な抗体又はその機能的部分を含むモノクローナル抗体等の抗体分子であって、本明細書に記載されるＶＬ又はＶＨドメインを含む抗体分子を提供する。
【００５２】
本発明の更なる局面は、ｓＣＴＬＡ−４に特異的な抗体分子を調製する方法であって、
（ａ）ＣＤＲ３が置換されているか、又はＣＤＲ３コード領域が欠失しているＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリを提供する工程と；
（ｂ）ドナー核酸が前記レパートリ中のＣＤＲ３領域に挿入されるようにＶＨ  ＣＤＲ３について実質的に本明細書に記載されるアミノ酸配列をコードするドナー核酸と前記レパートリとを組み合わせて、ＶＨドメインをコードする核酸の生成物レパートリを提供する工程と；
（ｃ）前記生成物レパートリの核酸を発現させる工程と；
（ｄ）ｓＣＴＬＡ−４に特異的な抗体分子を選択する工程と；
（ｅ）前記特異的抗体分子又はそれをコードする核酸を回収する工程とを含む方法を提供する。
【００５３】
更に、ＣＤＲ３が置換されているか、又はＣＤＲ３コード領域が欠失しているＶＬドメインをコードする核酸のレパートリと本発明のＶＬ  ＣＤＲ３を組み合わせる類似の方法を使用してもよい。
【００５４】
同様に、１つ以上、又は３つ全てのＣＤＲをＶＨ又はＶＬドメインのレパートリに移植し、次いで、それをｓＣＴＬＡ−４に特異的な抗体分子についてスクリーニングしてもよい。
【００５５】
免疫グロブリンの可変ドメインの実質的な部分は、それらの介在フレームワーク領域と共に、３つのＣＤＲ領域を少なくとも含む。好ましくは、前記部分は、また、１番目及び４番目フレームワーク領域のいずれか又は両方の少なくとも約５０％を含み、前記５０％は、前記１番目のフレームワーク領域のＣ末端５０％、及び前記４番目のフレームワーク領域のＮ末端５０％である。可変ドメインの実質的な部分のＮ末端又はＣ末端における更なる残基は、天然に存在する可変ドメイン領域には通常結合しないものであってもよい。例えば、組換ＤＮＡ技術によって作製される本発明の特異的抗体分子の構築は、クローニング又は他の操作工程を促進するために導入されるリンカーによってコードされるＮ又はＣ末端残基の導入をもたらす場合がある。他の操作工程は、以下により詳細に論じられるように免疫グロブリン重鎖、他の可変ドメイン（例えばダイアボディの産生における）又はタンパク質標識を含む更なるタンパク質配列に本発明の可変ドメインを接合させるためにリンカーを導入することを含む。
【００５６】
本発明の抗体分子は、天然であろうと部分的に又は全体的に合成的に産生されようと、抗体分子及び他の免疫グロブリンを含む。前記用語は、抗体結合ドメインを含む任意のポリペプチド又はタンパク質を包含する。特に、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆｄなどである抗原結合ドメインを含む抗体断片；及びダイアボディが含まれる。これらについては、以下でより詳細に議論する。
【００５７】
本発明の好ましい局面では、ＶＨ及びＶＬドメインの対を含む特異的抗体分子が好ましいが、ＶＨ又はＶＬドメイン配列のいずれかに基づく単一結合ドメインが、本発明の更なる局面を形成する。単一免疫グロブリンドメイン、特にＶＨドメインは、特異的に標的抗原に結合できることが知られている。
【００５８】
したがって、本発明の他の局面では、このようなＶＨドメインを含む抗体分子のように、本発明の抗体分子の抗体ＶＨ可変ドメインのアミノ酸配列を有する抗体ＶＨ可変ドメインを単離型で提供することができる。
【００５９】
単鎖結合ドメインのいずれかの場合には、これらドメインを用いて、ｓＣＴＬＡ−４に結合することができる２−ドメイン抗体分子を形成することができる相補的なドメインについてスクリーニングすることができる。
【００６０】
参照文献に記載されているもの等のファージディスプレー技術に従って、Ｈ又はＬ鎖のクローンを含有している個々のコロニーを使用して、他方の鎖（Ｌ又はＨ）をコードするクローンの完全なライブラリを感染させ、得られる二本鎖抗体分子を選択する、国際公開第９２／０１０４７号に開示されているようないわゆる階層的二重コンビナトリアルアプローチを使用するファージディスプレースクリーニング法によって、これを達成することができる。Ｍａｒｋｓらによる同書にもこの技術が開示されている。
【００６１】
本発明の抗体分子は、抗体定常領域又はその一部を更に含んでもよい。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端で、ヒトＣκ又はＣλ鎖、好ましくはＣκ鎖を含む抗体軽鎖定常領域に結合することができる。同様に、ＶＨドメインに基いた抗体分子は、そのＣ末端で、任意の抗体アイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ、並びにアイソタイプサブクラスのいずれかに由来する免疫グロブリン重鎖の全て又は一部に結合することができる。国際公開第９９／５８５７２号に開示されているΔｎａｂ及びΔｎａｃなどのＦｃ領域を使用してもよい。
【００６２】
国際公開第９４／２５５９１号は、単鎖結合ドメインの提供におけるラクダ科由来の免疫グロブリンのフレームワーク領域の有用性について論じている。他の態様において、抗体又はフレームワーク領域は、サメ等の軟骨魚類の免疫グロブリンに由来してもよい（例えば、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８年７月１日；１８０（１１）：７４６１−７０を参照）。
【００６３】
本発明のいくつかの好ましい態様における抗体分子は、Ｆ（ａｂ）又はｓｃＦｖなどの単量体断片である。このような抗体断片は、半減期が比較的短いという利点を有する場合がある。
【００６４】
抗体配列に加えて、本発明に係る抗体分子は、例えば、折り畳まれたドメインなどのペプチド又はポリペプチドを形成する他のアミノ酸を含んでもよく、あるいは特異的にｓＣＴＬＡ４に結合する能力に加えて、別の機能特性（例えば、半減期の延長）を前記分子に付与してもよい。
【００６５】
１つの態様では、本発明の抗体分子を、親水性部分、特にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分で改変し（前記親水性部分は、例えば、リジン、又はリンカー分子として機能し得る他の好適なアミノ酸若しくはアミノ酸類似体等のアミノ酸を通して各末端に共有結合する）；そして、抗体を単離してもよい。
【００６６】
当業者は、分子をタンパク質に化学的にコンジュゲートする多数のアプローチに気づいている。抗体分子が薬学的に使用するためのものである場合、前記共役結合は、循環において安定であるが、一旦コンジュゲートが細胞内で隔離されたら、不安定になることが好ましい。
【００６７】
したがって、例えば、検出可能又は機能的標識で本発明の抗体分子を標識してもよい。検出可能な標識としては、１３１Ｉ又は９９Ｔｃなどの放射標識が挙げられ、これらは、抗体画像診断の分野において公知である従来の化学作用を使用して、本発明の抗体に結合することができる。また、標識は、ワサビペルオキシダーゼなどの酵素標識を含む。標識は、特定の同族の検出可能な部分、例えば、標識されたアビジンへの結合を介して検出できる、ビオチン等の化学部分を更に含む。好ましくは、標識は、ＦＩＴＣなどの蛍光標識を含む。
【００６８】
本発明は、本発明の抗体分子をコードする単離核酸を更に提供する。核酸は、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。好ましい局面では、本発明は、本明細書に記載される本発明のＣＤＲ、ＶＨ、又はＶＬドメインをコードする核酸、及び本発明の抗体分子、ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを調製する方法であって、前記抗体分子、ＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを産生する条件下で前記核酸を発現させる工程と、それを回収する工程とを含む方法を提供する。
【００６９】
また、本発明は、上記のような少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、ベクター、転写物又は発現カセットの形態のコンストラクトを提供する。
【００７０】
また、本発明は、上記のような１つ以上のコンストラクトを含む組換え宿主細胞を提供する。それをコードする核酸から発現させることを含む、コードされている産物の産生方法が行うように、任意のＣＤＲ、ＶＨ又はＶＬドメインをコードする核酸、又はそれ自体提供されるような抗体分子は、本発明の局面を形成する。発現は、適切な条件下で、核酸を含有している組換え宿主細胞を培養することにより、便利に達成することができる。発現による産生後、ＶＨ若しくはＶＬドメイン、又は抗体分子を任意の適切な技術を使用して単離及び／又は精製し、次いで、必要に応じて使用することができる。
【００７１】
実質的に純粋又は相同な形態で、例えば、天然環境から単離及び／又は精製された、或いは、核酸の場合、必要な機能を備えるポリペプチドをコードする配列以外の核酸又は遺伝子源を含まないか、実質的に含まない本発明に係る抗体分子、ＶＨ及び／又はＶＬドメイン、及びコードする核酸分子及びベクターを提供することができる。本発明に係る核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡを含んでもよく、全体的に又は部分的に合成されてもよい。本明細書に記載されるヌクレオチド配列に対する言及は、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、特定の配列を有するＤＮＡ分子を包含し、且つＵがＴで置換された特定の配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
【００７２】
様々な異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニング及び発現系は、周知である。適切な宿主細胞としては、細菌、哺乳類細胞、酵母及びバキュロウイルス系が挙げられる。異種ポリペプチド発現の分野において利用可能な哺乳類細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳＯマウスメラノーマ細胞、ＹＢ２／０ラット骨髄細胞及び他の多くの細胞を含む。一般的な好ましい細菌宿主は、大腸菌である。
【００７３】
大腸菌などの原核細胞における抗体及び抗体断片の発現は、当技術分野においてよく確立されている。概説として、例えば、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：５４５−５５１（１９９１年）を参照されたい。また、抗体分子の産生の選択肢として、培養物中の真核細胞における発現も当業者が利用可能であり、最近の概説としては、例えば、Ｒｅｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６；Ｔｒｉｌｌ  Ｊ．Ｊ．ら（１９９５年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ６：５５３−５６０を参照されたい。
【００７４】
必要に応じて、プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子及び他の配列を含む適切な制御配列を含有する、適切なベクターを選択又は構築することができる。ベクターは、必要に応じて、例えば、「ファージ」又はファージミド等のプラスミド、ウイルスであってもよい。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：第３版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ及びＲｕｓｓｅｌｌ，２００１年，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ。例えば、核酸コンストラクトの調製、突然変異誘発、シーケンシング、細胞へのＤＮＡの導入及び遺伝子発現、並びにタンパク質の分析における、核酸の操作のための多くの公知技術及びプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２年に詳細に記載されている。
【００７５】
したがって、本発明の更なる局面は、本明細書に開示される核酸を含むか、又は前記核酸で形質転換された宿主細胞を提供する。更なる局面は、宿主細胞にこのような核酸を導入することを含む方法を提供する。前記導入は、任意の利用可能な技術を使用してもよい。真核細胞については、好適な技術は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介性トランスフェクション及びレトロウイルス又は他のウイルス、例えば、種痘疹を使用するトランスダクションを含んでよく、又は昆虫細胞については、バキュロウイルスである。細菌細胞については、好適な技術は、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション及びバクテリオファージを使用するトランスフェクションを含んでもよい。
【００７６】
導入は、核酸から発現を引き起した後又は発現させた後、例えば、遺伝子を発現させる条件下で宿主細胞を培養した後であってもよい。
【００７７】
１つの態様では、宿主細胞のゲノム（例えば染色体）に本発明の核酸を組み込む。標準的な技術に従って、ゲノムの組換えを促進する配列を含むことにより、組込を促進することができる。
【００７８】
また、本発明は、上記のような抗体分子又はポリペプチドを発現させるために、発現系において上述のようなコンストラクトを使用することを含む方法を提供する。
【００７９】
したがって、例えば、本発明は様々な局面において、以下を提供する：
配列番号２に示される配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を示すＶＬ領域、又は軽鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、具体的には少なくとも２つ、より具体的には少なくとも３つであるが、特に、天然のフレームワーク領域に埋め込まれている全てのＣＤＲを含むその機能的部分をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【００８０】
配列番号４に示される配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を示すＶＬ領域、又は重鎖ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、具体的には少なくとも２つ、より具体的には少なくとも３つであるが、特に、天然のフレームワーク領域に埋め込まれている全てのＣＤＲを含むその機能的部分をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【００８１】
本明細書に開示される抗体ＶＨ可変ドメイン（配列番号３）及び／又はＶＬ可変ドメイン（配列番号１）をコードする、一般的に単離されている核酸。
【００８２】
本発明の別の局面は、本明細書に開示されるＶＨ  ＣＤＲ又はＶＬ  ＣＤＲ配列、特に、配列番号５、６、及び７から選択されるＶＨ  ＣＤＲ又は配列番号８、９、及び１０から選択されるＶＬ  ＣＤＲ、最も好ましくはＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号７）をコードする、一般的に単離されている核酸を提供する。
【００８３】
抗体ＶＨ可変ドメインの産生方法であって、コードする核酸から発現させる工程を含む方法。このような方法は、前記抗体ＶＨ可変ドメインを産生させる状態下で宿主細胞を培養する工程を含んでもよい。
【００８４】
ＶＬ可変ドメイン、及びＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む抗体分子を産生するための類似の方法。
【００８５】
産生方法は、生成物を単離及び／又は精製する工程を含んでもよい。
【００８６】
産生方法は、生成物を薬学的に許容しうる賦形剤などの少なくとも１つの追加成分を含む組成物に製剤化する工程を含んでもよい。
【００８７】
ｓＣＴＬＡ−４特異的ＪＭＷ−３Ｂ３抗体は、抗原特異的ヒト免疫反応、特に抗原特異的Ｔリンパ球細胞（Ｔ細胞）に対する強い増強効果を有する。この活性は、先行技術から予測することはできなかった。
【００８８】
細胞表面の完全長ＣＴＬＡ−４機能に影響を与えることなく、選択的な標的指向化方法で、免疫原又は抗原投与に対するＴ細胞応答を高める、可溶性ＣＴＬＡ−４アイソフォームに特異的な抗体分子の能力は、かなりの有用性を有し、多くの疾患状況で利用することができる。
【００８９】
したがって、本発明に係る抗体分子は、例えば、抗原特異的細胞の増殖、及びこれらの抗原特異的免疫反応のドライブに関与するサイトカイン分子の産生を促進することにより、抗原特異的Ｔリンパ球細胞応答を高めることができる場合がある。
【００９０】
このような応答を測定するために、典型的なアッセイは、抗原、及びＪＭＷ−３Ｂ３抗−ｓＣＴＬＡ−４抗体又は非特異的に結合するアイソタイプ対照抗体のいずれかの存在下又は不在下で、３７℃、５％ＣＯ２にて５日間インキュベートされた精製末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み得る。免疫反応をインビトロで発現させた後（典型的には４〜５日後）、ＪＭＷ−３Ｂ３による免疫反応の増強を、ＥＬＩＳＡによってエフェクターサイトカイン、例えば、インターフェロン−γを測定することによって判定することができる。
【００９１】
「免疫原又は抗原投与」は、微生物、ウイルス、若しくは寄生虫病原体、癌細胞、又はこれらに由来するタンパク質免疫原及び抗原を含む、適応免疫反応を促進する任意の抗原投与として定義される。
【００９２】
例えば、上記抗原特異的増強効果を有する本発明に係る抗体分子を、ヒト又は動物の身体の治療又は診断方法、例えば、ヒト患者における疾患又は障害を治療する方法（予防的治療を含んでもよい）であって、有効量の本発明の抗体分子を前記患者に投与することを含む方法等で使用してもよい。本発明に従って治療可能な状態は、本明細書の他の箇所に論じられるものを含む。
【００９３】
本発明の更なる局面は、提供されるような抗体分子の投与を含む治療方法、このような抗体分子を含む医薬組成物、及び例えば、前記抗体分子を薬学的に許容しうる賦形剤と共に製剤化することを含む医薬又は医薬組成物を作製する方法において投与するための医薬の製造におけるこのような抗体分子の使用を提供する。
【００９４】
したがって、本発明の異なる局面では、ｓＣＴＬＡ−４に対して選択的な本発明の抗体分子を用いるｓＣＴＬＡ−４の機能的遮断を使用して、例えば以下のように抗原特異的免疫反応を高めることができる：
・免疫原性腫瘍に対する免疫反応の増強。
・抗腫瘍ワクチン剤の増強−特定の抗腫瘍免疫反応を生じさせるよう設計されたワクチンと併用されて特定の免疫反応を増強するためのアジュバント。
・ワクチン接種を用いて又は用いずに、細菌、ウイルス及び寄生虫を含む病原体に対する免疫反応の増強。
・感染後ワクチン接種−感染後に抗ウイルス免疫反応を増強するため。
【００９５】
下記の通り、抗原の不在下で、免疫系の増強又は刺激が穏やかであるか又は存在しない（図４中の抗体の存在又は不在下における「０」μｇ／ｍＬの抗原と比較して）という意味で、抗原特異的免疫反応の増強又は刺激は選択的であり得る。
【００９６】
当業者は、本明細書の開示に照らして、ｓＣＴＬＡ−４作用の遮断を用いて特異的免疫反応を高めるために有利な効果を与えることができる多くの適応又は疾患があるということを認識する。
【００９７】
非限定的な例として、癌又は他の増殖性疾患の治療では、免疫原性腫瘍は、例えば、黒色腫、腎癌、リンパ腫、繊維肉腫、結腸癌、前立腺及び卵巣癌において標的とされる場合がある（５０〜５５）。
【００９８】
感染症では、ｓＣＴＬＡ４の遮断は、ＨＩＶ（３５、３６）、線虫及びリーシュマニア属感染症（３２、３３）、また肺炎球菌莢膜多糖（３４）に対する有効な免疫反応の増強において有用性を有する場合がある。
【００９９】
他の免疫増強部分（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、インターロイキン（ＩＬ−）２、又は特定の病原体由来の任意の免疫原性物質を含む他の特定のワクチン）と組み合わせて本発明の抗体分子を使用することができると認識される。
【０１００】
本発明に従って、提供される組成物を個体に投与してもよい。投与は、好ましくは、「治療上有効量」で行われ、これは、患者に効果を示すのに十分な量である。このような効果は、少なくとも１つの症状を少なくとも改善することであり得る。投与される実際の量、並びに投与速度及び投与の時間的経過は、治療されるものの性質及び重症度に依存する。治療の指示、例えば、投薬量などに関する決定は、一般開業医及び他の医師の責任の範囲内である。抗体の適切な用量は、当技術分野において周知である；Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  Ｊ．Ａ．ら（１９９１年）  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：６５９−６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ  Ｋ．Ｄ．ら（１９９１年）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ４：９１５−９２２を参照されたい。
【０１０１】
正確な用量は、抗体が診断用であるか治療用であるか、治療される領域の大きさ及び位置、抗体の正確な性質（例えば、抗体全体、断片又はダイアボディ）、及び任意の検出可能な標識又は抗体に結合する他の分子の性質を含む、多くの要因に依存する。典型的な抗体用量は、０．５ｍｇ〜１．０ｇであり、これをボーラスとして静脈内投与してもよい。投与の他のモードとしては、類似の合計累積量を得るための数時間にわたる静脈注射を含む。これは、成人患者の単回治療用の用量であり、これは小児及び幼児用に比例的に調節することができ、また、分子量に比例して他の抗体フォーマットに合わせて調節することもできる。治療は、医師の裁量で１日１回、週２回、週１回、又は月１回の間隔で繰り返してもよい。
【０１０２】
投与の更なるモードは、プレコーティング又は他の方法による留置装置への組込を使用し、そのために適切な実験によって最適な量の抗体を決定する。
【０１０３】
投与の更なるモードは、血漿のｓＣＴＬＡ−４を枯渇させることであり、これは、次いで、（例えばプラスマフェレーシスを介して）患者自身の血漿を交換してもよい。
【０１０４】
投与の更なるモードは、プレコーティング又は他の方法による留置装置への組込を使用し、そのために適切な実験によって最適な量の抗体を決定する。
【０１０５】
本発明の抗体分子は、通常、医薬組成物の形で投与され、それは抗体分子に加えて少なくとも１つの成分を含んでもよい。
【０１０６】
したがって、本発明に係る医薬組成物、及び本発明に従って使用するための医薬組成物は、活性成分に加えて、薬学的に許容しうる賦形剤、担体、バッファ、安定剤、又は当業者に周知の他の物質を含んでもよい。このような物質は、無毒でなければならず、且つ活性成分の有効性に干渉してはならない。担体又は他の物質の正確な性質は、投与経路に依存し、それは、経口、又は例えば静脈内等への注入であってもよい。
【０１０７】
経口投与用医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末又は液体の形態であってもよい。錠剤は、ゼラチン又は佐剤などの固体の担体を含んでもよい。液体医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物又は植物油、鉱油又は合成油などの液体担体を含む。生理食塩液、デキストロース又は他の糖溶液、又は、エチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール等のグリコールを含んでもよい。
【０１０８】
静脈内注射、又は罹患部位における注入については、活性成分は、発熱物質を含まず、且つ適切なｐＨ、等張性及び安定を有する、非経口的に許容しうる水溶液の形態である。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注入、リンゲル液注入、乳酸加リンゲル液注入などの等張性ビヒクルを使用して、好適な溶液をよく調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、バッファ、酸化防止剤及び／又は他の添加剤を含んでもよい。
【０１０９】
組成物は、単独で投与してもよく、又は治療される状態に依存して同時に若しくは順次他の治療と組み合わせてもよい。他の治療としては、非ステロイド系抗炎症薬（例えばアスピリン、イブプロフェン又はケトプロフェン）等の鎮痛薬、あるいはモルヒネ、又は抗催吐薬等のアヘン製剤を好適な用量投与することを含み得る。
【０１１０】
本発明の抗体分子は、完全長細胞表面ＣＴＬＡ−４及びｓＣＴＬＡ−４の代替アイソフォームの両方に関係する個々の制御的機能の細かい分析において有用性を有する。
【０１１１】
例えば、身体、又は細胞若しくは組織におけるｓＣＴＬＡ４の濃度又は存在を決定するための検出方法において本発明に係る抗体分子を使用してもよい。
【０１１２】
本発明は、本明細書において提供されるような抗体分子のｓＣＴＬＡ−４への結合を引起すか又は可能にすることを含む方法を提供する。上述のように、このような結合は、例えば、抗体分子又は抗体分子をコードする核酸の投与後、インビボで生じる場合もあり、あるいは、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、免疫細胞化学、免疫沈澱反応、アフィニティークロマトグラフィー、フローサイトメトリー等において、インビトロで生じる場合もある。
【０１１３】
抗体分子がｓＣＴＬＡ−４に結合する量を決定することができる。定量は、試験サンプルにおけるｓＣＴＬＡ−４の量と関係している場合があり、それは診断対象、例えば、高い又は低い血清濃度のｓＣＴＬＡ−４に関連する疾患又は適応であり得る。このような方法は、インビトロで、例えば、関連する個体から既に得られているサンプルに対して実施してもよい。
【０１１４】
現在、いくつかの自己免疫疾患、例えば、自己免疫甲状腺疾患、強皮症、活性全身性エリテマトーデスを含む疾患の患者において高濃度のｓＣＴＬＡ−４が検出される場合があると幾つかの科学文献に報告されている（４２〜４８）。報告によれば、喘息患者においても可溶性ＣＴＬＡ−４が検出された（４９）。したがって、ｓＣＴＬＡ−４に選択的な抗体分子の使用は、これらの疾患又は適応のいずれか、又は高血清濃度又は低血清濃度のｓＣＴＬＡ−４に関連している任意の他のものの調査において、そして、必要に応じて、診断又は評価において有用性を有し得る。
【０１１５】
任意の適切な手段によって、サンプルに対する抗体の反応性を判定することができる。放射免疫定量法（ＲＩＡ）は、１つの可能性である。放射性標識されたｓＣＴＬＡ−４を標識されていないｓＣＴＬＡ−４（試験サンプル）と混合し、抗体に結合させる。結合したｓＣＴＬＡ−４を、結合していないｓＣＴＬＡ−４から物理的に分離し、抗体に結合している放射性ｓＣＴＬＡ−４の量を決定する。試験サンプル中に存在するｓＣＴＬＡ−４が多いほど、抗体に結合する放射性ｓＣＴＬＡ−４が少ないであろう。ｓＣＴＬＡ−４又はレポーター分子に結合する類似体を使用して、非放射性ｓＣＴＬＡ−４との競合結合アッセイを使用してもよい。リポーター分子は、スペクトルで単離される吸収又は放射特性を備えた蛍光色素、リン光体又はレーザ色素であってもよい。適切な蛍光色素としては、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン及びテキサスレッドが挙げられる。好適な色原体色素としては、ジアミノベンジジンが挙げられる。
【０１１６】
他のリポーターとしては、有色、磁気、又は常磁性であるラテックスビーズ等の巨大分子のコロイド粒子又は微粒子物質、及び視覚的に観察されるか、電子的に検出されるか、又は他の方法で記録される検出可能なシグナルを直接又は間接的に生じさせることができる生物学的又は化学的活性剤が挙げられる。例えば、これら分子は、顕色又は変色させるか、又は電気的性質の変化を引起す反応を触媒する酵素であってもよい。エネルギー状態間の電子移動が特徴的なスペクトルの吸収又は放射を生じさせるように、それらは分子的に興奮性であってもよい。それらは、バイオセンサーと共に使用される化学実体を含んでもよい。ビオチン／アビジン又はビオチン／ストレプトアビジン及びアルカリホスファターゼ検出系を使用してもよい。
【０１１７】
サンプル（正常及び試験）における関連する抗体の結合の定量的絶対又は相対データを得るために個々の抗体−リポーターコンジュゲートによって生じるシグナルを使用してもよい。
【０１１８】
また、本発明は、競合アッセイにおけるｓＣＴＬＡ−４濃度を測定するための上記抗体分子の使用、即ち、競合アッセイにおいて本発明によって提供される抗体分子を使用することにより、サンプル中のｓＣＴＬＡ−４レベルを測定する方法を提供する。これは、結合しているｓＣＴＬＡ−４を結合していないｓＣＴＬＡ−４から物理的に分離することが必要ではない場合であり得る。結合時に物理的又は光学的変化が生じるようにリポーター分子を抗体分子に結合させることが１つの可能性である。リポーター分子は、直接又は間接的に、検出可能なシグナル、好ましくは測定可能なシグナルを生じさせることができる。リポーター分子の結合は、例えば、ペプチド結合又は非共有結合を介する、直接又は間接的共有結合であってもよい。ペプチド結合を介する結合は、抗体及びリポーター分子をコードする遺伝子融合物の組み換え発現の結果である場合もある。
【０１１９】
また、本発明は、例えば、バイオセンサシステムにおいて本発明に係る抗体分子を使用することにより、ｓＣＴＬＡ−４レベルを直接測定することを提供する。
【０１２０】
また、本発明に係る抗体分子は、様々な文脈における研究ツールとしての有用性を有する。非限定的な例として、それらを使用して、サンプルにおけるｓＣＴＬＡ−４の相対量を測定することができる。前記分子を使用して、多くの技術を利用して、細胞、血清、血漿又は細胞培養上清におけるｓＣＴＬＡ−４の存在を検出することができる。蛍光標識（例えばフィコエリトリン）にコンジュゲートしたとき、分子は、フローサイトメトリー又は蛍光顕微鏡によって細胞、例えば、Ｔ細胞中のｓＣＴＬＡ−４を検出することができる。ＥＬＩＳＡを使用して、血清を含む流体におけるｓＣＴＬＡ−４の存在を検出することができる。また、前記抗体分子を使用して、アフィニティークロマトグラフィーを用いて流体からｓＣＴＬＡ−４を吸着させ、精製することができる。更に、活性化因子の存在下で、精製末梢血単核細胞又は精製細胞サブセット（例えば、Ｔ細胞）にそれを添加することにより、インビトロにおけるｓＣＴＬＡ−４の機能を調査するためにそれらを使用することができる。
【０１２１】
これらの用途のいずれかにおいて結合を判定する方法は、それ自体本発明の特徴ではなく、当業者は、嗜好及び一般知識に従って適切な方法を選択することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】モノクローナル抗−ｓＣＴＬＡ−４抗体であるＪＭＷ−３Ｂ３の可変軽鎖フレームワーク及び相補性決定領域にアノテーションをつけたヌクレオチド及びアミノ酸配列である。
【図２】モノクローナル抗−ｓＣＴＬＡ−４抗体であるＪＭＷ−３Ｂ３の可変重鎖フレームワーク及び相補性決定領域にアノテーションをつけたヌクレオチド及びアミノ酸配列。
【図３】既存の抗体は、ＣＴＬＡ−４の主形態全て−リンパ球、例えばＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上のＣＴＬＡ−４及び天然可溶性ＣＴＬＡ−４の両方−に結合する。ＪＭＷ−３Ｂ３は、可溶型のみが有するタンパク質配列を標的として天然可溶型ヒトＣＴＬＡ−４のみに結合する。時に、ＣＴＬＡ−４の人工の組み換え型（ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）が、文献中で可溶性ＣＴＬＡ−４と呼ばれることもあることに留意すべきである。ＪＭＷ−３Ｂ３は、いずれの形態にも結合しない。
【図４ａ】ヒト可溶性ＣＴＬＡ−４に特異的なモノクローナル抗体であるＪＭＷ−３Ｂ３は、抗原特異的免疫反応を増強する。ＪＭＷ−３Ｂ３の存在下又は不在下で、３７℃、５％ＣＯ２にて５日間、漸増量のヒト結核菌（ＰＰＤ）の精製タンパク質誘導体と共に末梢血単核細胞（１ウェル当り１００万、１ｍＬの培養培地）をインキュベートした。グラフは、抗体の添加が、免疫細胞増殖を増強し（上図）、且つエフェクターサイトカインであるインターフェロン−γの産生を増加させることを示す。
【図４ｂ】抗−ｓＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体であるＪＭＷ−３Ｂ３による抗原特異的免疫反応の増強。抗−ｓＣＴＬＡ−４  ｍＡｂであるＪＭＷ−３Ｂ３又はＩｇＧ１アイソタイプ対照の存在下で、０又は５μｇ  ｍＬ−１のＰＰＤリコール抗原のいずれかによってＰＢＭＣを刺激したときのＩＦＮ−γ及び細胞増殖の差を実証する６つの別々の実験から得られたデータ。
【図５】全特異的抗−ＣＴＬＡ−４抗体によるＣＴＬＡ−４の検出と可溶性ＣＴＬＡ−４選択的抗体ＪＭＷ−３Ｂ３とを比較するＥＬＩＳＡ。一般的な全特異的抗ＣＴＬＡ−４抗体を用いて、１１人の健常ボランティアドナーの血清中に存在するＣＴＬＡ−４を捕捉した。リン酸塩緩衝食塩水中の２％のスキムミルク製品でプレートをブロッキングした。ビオチン化全特異的抗−ＣＴＬＡ−４抗体又はビオチン化ｓＣＴＬＡ−４選択的抗体であるＪＭＷ−３Ｂ３のいずれかを用いてＣＴＬＡ−４の存在を検出した。次いで、ストレプトアビジンとコンジュゲート化しているアルカリホスファターゼを用いて各場合において結合しているビオチン化抗体の存在を検出した。共通のホスファターゼ基質を用いてプレートを顕色させて、４０５ｎｍのフィルタを備えた分光光度計を使用して色の変化を検出した。
【図６】抗−ｓＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体であるＪＭＷ−３Ｂ３による、腫瘍に関連する癌胎児抗原（ＣＥＡ）特異的免疫反応の増強。抗−ｓＣＴＬＡ−４  ｍＡｂであるＪＭＷ−３Ｂ３又はＩｇＧ１アイソタイプ対照（無し）の存在下で０又は１０μｇ  ｍＬ−１のＣＥＡ抗原のいずれかを用いてＰＢＭＣを刺激した。
【図７】抗−ｓＣＴＬＡ−４であるＪＭＷ−３Ｂ３は、血清及び培養液上清において、真の天然可溶性ＣＴＬＡ−４と細胞外膜結合型ＣＴＬＡ−４（ｍＣＴＬＡ−４）とを識別する。ｍＣＴＬＡ−４の細胞外部分はエキソン２にコードされ、ｓＣＴＬＡ−４、ｍＣＴＬＡ−４及びＣＴＬＡ−４の組み換え可溶型であるＣＴＬＡ４−Ｉｇにおいて同一である。ＪＭＷ−３Ｂ３はｓＣＴＬＡ−４特有のＣ末端領域に対して産生されるので、それは、細胞外ＣＴＬＡ−４ドメインと交差反応しない。ＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインに特異的な、２つのビオチン化全特異的抗ＣＴＬＡ−４検出ｍＡｂｓ（クローンＡＳ−３３及び１４Ｄ３）を、典型的なサンドイッチＥＬＩＳＡにおいて、ＣＴＬＡ４をＪＭＷ−３Ｂ３と結合させる能力について比較した。全特異的抗−ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ（クローンＢＮＩ３）を捕捉抗体として使用した。
【発明を実施するための形態】
【０１２３】
用語
抗体分子
用語「抗体分子」は、本明細書で使用するとき、公知の抗原に結合する分子又は分子の活性断片、特に、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、免疫特異的に抗原と結合する結合部位を含む分子を指すと理解される。本発明に係る免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）又はクラス（ＩｇＧＩ、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ＩｇＡＩ及びｌｇＡ２）又はサブクラスであってもよい。
【０１２４】
抗体分子は、天然であってもよく、部分的に又は全体的に合成されてもよい。
【０１２５】
本発明の範囲内になるように意図される抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、キメラの単鎖、二重特異的又は二重有効的、サル化、ヒト及びヒト化抗体に加えて、その活性断片を含む。公知抗原と結合する分子の活性断片（抗原結合ドメインを含む）の例は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ及びＦａｂ免疫グロブリン発現ライブラリの生成物、並びに抗体及び断片のいずれかのエピトープ結合断片に加えて、ｄＡｂ、Ｆｄ；ダイアボディ等も含む。
【０１２６】
結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなるＦＡｂ断片；（ｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬ及びＶＨのドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９年））；（ｖ）単離ＣＤＲ領域；（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、２つの結合したＦａｂ断片を含む二価断片；（ｖｉｉ）、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが、２つのドメインを結合させて抗原結合部位を形成するペプチドリンカーによって結合される単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６，１９８８年；Ｈｕｓｔｏｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３，１９８８年）；（ｖｉｉｉ）二重特異的単鎖Ｆｖ二量体（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５号）、及び（ｉｘ）遺伝子融合によって構築される多価又は多重特異的断片である「ダイアボディ」（国際公開第９４／１３８０４号；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０，６４４４−６４４８，１９９３年）。ＶＨ及びＶＬのドメインを結合させるジスルフィド架橋の組込によって、Ｆｖ、ｓｃＦｖ又はダイアボディ分子を安定させることができる（Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，１４，１２３９−１２４５，１９９６年）。ＣＨ３ドメインに結合したｓｃＦｖを含むミニボディを作製してもよい（Ｓ．Ｈｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１，１９９６年）。
【０１２７】
二重特異性抗体を使用する場合、これらは従来の二重特異性抗体であってもよく、例えば、化学的に若しくはハイブリッドハイブリドーマから調製する等の様々な方法で製造することができ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．及びＷｉｎｔｅｒ  Ｇ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４，４４６−４４９（１９９３年））又は上述の二重特異的抗体断片のいずれかであってもよい。可変ドメインのみを用いて、Ｆｃ領域を用いずにダイアボディ及びｓｃＦｖを構築して、抗イディオタイプの反応の作用を潜在的に弱めることができる。
【０１２８】
容易に構築し、且つ大腸菌で発現させることができるので、二重特異的ダイアボディは、二重特異的抗体全体とは対照的に、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（及び抗体断片などの他の多くのポリペプチド）は、ライブラリからファージディスプレー（国際公開第９４／１３８０４号）を使用して容易に選択することができる。例えば、ダイアボディの一方の腕をｓＣＴＬＡ−４に対する特異性について一定に保つ場合、他の腕を変化させ、適切な特異性の抗体を選択するライブラリを作製することができる。二重特異的抗体全体は、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ操作によって作製することができる（Ｊ．Ｂ．Ｂ．Ｒｉｄｇｅｗａｙら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９，６１６−６２１，１９９６年）。
【０１２９】
モノクローナル及び他の抗体をとり、組換えＤＮＡ技術のテクニックを使用して、オリジナル抗体の特異性を保持する他の抗体又はキメラ分子を生成することが可能である。このような技術は、様々な免疫グロブリンの定常領域、又は定常領域及びフレームワーク領域に、抗体の免疫グロブリン可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするＤＮＡを導入することを含んでもよい。例えば、欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ−１８４１８７号、英国特許出願公開第２１８８６３８Ａ号又は欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ−２３９４００号を参照されたい。ハイブリドーマ又は抗体を産生する他の細胞は、産生される抗体の結合特異性を変化させても、変化させなくてもよい遺伝子突然変異又は他の変更に供してもよい。
【０１３０】
抗体の活性断片を単離するための一般的技術の更なる説明については、例えば、Ｋｈａｗ，Ｂ．Ａ．ら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２３：１０１１−１０１９（１９８２年）；Ｒｏｕｓｓｅａｕｘら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：６６３−６９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６年を参照されたい。
【０１３１】
抗原結合ドメイン
本明細書で使用される場合、これは、特異的に結合し、抗原の一部又はすべてに対して相補的な領域を含む抗体分子の一部について記載する。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定部分にのみ結合する場合があり、この部分は、エピトープと呼ばれる。
【０１３２】
この文脈における「特異的結合」は、ファンデルワールス力又は他の非特異的タンパク質：タンパク質相互作用からのみ生じる非特異的結合とは対照的に、抗原結合ドメインとその結合パートナーとの高次構造間の特定の相互作用から生じる結合に関すると理解される。
【０１３３】
ＣＤＲ
用語「ＣＤＲ」は、抗体の超可変領域を指す。用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」は、本明細書において使用するとき、配列が超可変である及び／又は構造上規定されているループを形成する抗体の可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗体は６つの超可変領域を含む；３つはＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つはＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に存在する。多くの超可変領域の描写が使用されており、本明細書に包含される。カバットの相補性決定領域は、配列の可変性に基づいており、最も一般的に用いられる（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１年））。
【０１３４】
本発明のＣＤＲを有する構造は、一般に、再配置された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然ＶＨ及びＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲに相当する箇所にＣＤＲが位置する、抗体重鎖若しくは軽鎖配列、又はこれらの実質的な部分である。
【０１３５】
本発明において使用される可変ドメインは、任意の生殖細胞系列又は再配置されたヒト可変ドメインから得てもよく、公知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列に基づく合成可変ドメインであってもよい。本発明のＣＤＲ配列（例えばＣＤＲ３）を、組換えＤＮＡ技術を使用して、ＣＤＲ（例えばＣＤＲ３）が欠失している可変ドメインのレパートリに導入してもよい。
【０１３６】
更なる選択肢は、１つ以上の選択されたＶＨ及び／又はＶＬ遺伝子のランダム変異導入法を使用して、本発明のＣＤＲ由来配列を有する新規ＶＨ又はＶＬを生成して、可変ドメイン全体に突然変異を生じさせることである。このような技術は、エラープローンＰＣＲを用いてＧｒａｍら（１９９２年，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ，８９：３５７６−３５８０）によって記載されている。
【０１３７】
ヒト化抗体
「ヒト化抗体」は、非ヒトドナー免疫グロブリン由来のＣＤＲを有し、分子の残りの免疫グロブリン由来部分は、１つ（又はそれ以上の）ヒト免疫グロブリンに由来する改変抗体の１種を指す。更に、結合能を保存するためにフレームワーク支持残基を変化させてもよい。「ヒト化抗体」を得る方法は、当業者に周知である。（例えば、Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８６：１００２９−１００３２（１９８９年），Ｈｏｄｇｓｏｎら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：４２１（１９９１年）を参照されたい）。
【０１３８】
また、「ヒト化抗体」は、例えば、ウサギなどの大動物における親和性成熟されたヒト様ポリクローナル抗体の産生を可能にする新しい遺伝子工学アプローチによって得ることもできる（例えば、米国特許第７，１２９，０８４号を参照されたい）。
【０１３９】
モノクローナル抗体
用語「モノクローナル抗体」は、当技術分野においてよく認識されており、単一のクローンから研究所で大量生産され、且つ唯１つの抗原を認識する抗体を指す。モノクローナル抗体は、典型的に、通常短命である抗体産生Ｂ細胞を、癌細胞（時に「不死」細胞と呼ばれる）などの急成長する細胞に融合させることにより産生される。得られるハイブリッド細胞、即ち、ハイブリドーマは、急速に増殖して、大量の抗体を生成するクローンを産生する。本発明の目的のために、「モノクローナル抗体」は、まだ十分な単クローン性に達していない母クローンによって産生される抗体も含むと理解される。
【０１４０】
機能的に等価な抗体
本発明の範囲内の「機能的に等価な抗体」とは、少なくとも１つの主な機能的性質、例えば、ｓＣＴＬＡ−４に対する結合特異性が挙げられるが、これらに限定されない、本明細書に記載される機能的性質をＪＭＷ−３Ｂ３と実質的に共有する抗体を指す。
【０１４１】
免疫原及び抗原
「免疫原」は、適応免疫反応を誘導することができる任意の物質であると定義され、一方、「抗原」は、適応免疫系の細胞によって（免疫反応の観点で）認識され得る任意の物質である。
【０１４２】
含む
これは、「包含する」、即ち、１つ以上の特徴又は構成要素の存在を許容するという意味で一般的に用いられる。
【０１４３】
単離
これは、本発明の抗体分子、又はこのような抗体分子をコードする核酸が、一般に本発明に従うという状態を指す。メンバー及び核酸は、天然環境、又はインビトロ若しくはインビボで実施される組換えＤＮＡ技術によって調製されるとき、調製される環境（例えば、細胞培養物）中で見出される他のポリペプチド又は核酸等の自然界で関連している物質を含まないか、実質的に含まない。メンバー及び核酸を希釈剤又は佐剤と共に製剤化してもよく、更に実際的な目的のために単離してもよい―例えば、メンバーは、通常、免疫アッセイで使用するためのマイクロタイタープレートをコーティングするために用いられる場合、ゼラチン又は他の担体と混合される、或いは、診断又は治療で用いるとき、薬学的に許容しうる担体又は希釈剤と混合される。抗体分子は、天然又は異種の真核細胞系（例えばＣＨＯ、ＮＳＯ（ＥＣＡＣＣ  ８５１１０５０３）細胞）のいずれかによって糖鎖形成してもよく、又は糖鎖形成しなくてもよい（例えば、原核細胞における発現により産生される場合）。
【０１４４】
変異体配列
「記載されるように実質的に」とは、関連する本発明のＣＤＲ又はＶＨ若しくはＶＬドメインが、配列が本明細書に記載される特定の領域と同一であるか、又は非常に類似していることを意味する。「非常に類似している」とは、ＣＤＲ及び／又はＶＨ又はＶＬドメインにおいて１〜５、好ましくは１〜４、例えば、１〜３又は１若しくは２又は３若しくは４つのアミノ酸置換が行われてもよいと考えられる。
【０１４５】
２つの配列間の「相同性」は、配列同一性によって決定される。互いと比較される２つの配列の長さが異なる場合、配列同一性は、好ましくは、長い方の配列のヌクレオチド残基と同一であるより短い方の配列のヌクレオチド残基の割合に関する。配列同一性は、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，バージョン８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７１１）などのコンピュータプログラムを使用して従来通り決定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、２つの配列間で最も高い配列同一性を有するセグメントを見つけるために、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２（１９８１年），４８２−４８９の局所相同性アルゴリズムを利用する。Ｂｅｓｔｆｉｔ又は特定の配列アラインメントプログラムを用いて、特定の配列が、本発明のレファレンス配列と例えば９５％の同一性を有するかどうかを判定するとき、同一性の割合がレファレンス配列全体に対して計算され、且つレファレンス配列中のヌクレオチドの総数の５％以下の相同性ギャップが許容されるように、パラメータを調整することが好ましい。Ｂｅｓｔｆｉｔを使用する場合、所謂任意パラメータが、それらのプリセット（「デフォルト」）値に残っていることが好ましい。所与の配列と本発明の上記配列との間の比較に出現する偏差は、例えば、付加、欠失、置換、挿入、又は組換えによって引き起こされる場合がある。また、このような配列比較は、好ましくは、プログラム「ｆａｓｔａ２０ｕ６６」（バージョン２．０ｕ６６、１９９８年９月、Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｖｉｒｇｉｎｉａによる；またＷ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９０年），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８３，６３−９８の添付例及びｈｔｔｐ：／／ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ．ｓｄｓｃ．ｅｄｕ／を参照されたい）を用いて実行される。この目的のために、「デフォルト」パラメータ設定を使用してもよい。
【０１４６】
本明細書で使用するとき、「保存的変化」は、ネイティブなタンパク質と比較したとき、それぞれ、突然変異体ポリペプチドの三次構造に最低限の変化を生じさせるか、又は突然変異体ポリペプチドの抗原決定基において最低限の変化を生じさせる、実質的に高次構造的又は抗原的に中立である変化を指す。本発明の抗体及び抗体断片に言及する場合、保存的変化は、抗体を対象エピトープに結合させなくすることのないアミノ酸置換を意味する。当業者は、高次構造的且つ抗原的に中立である高確率を維持しながら、どのアミノ酸置換を行い得るかを予測することができる。このような指針は、例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：９３２−９４０及びＢｏｗｉｅら（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０に提供されている。高次構造的及び抗原的中立性を維持する可能性に影響を与えると考えられる要因としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ａ）疎水性残基がタンパク質の内部に位置する可能性が高いので、疎水性アミノ酸の置換は抗原性に影響を与える可能性が低い；（ｂ）置換アミノ酸がネイティブなアミノ酸に構造上類似しているので、生理化学的に類似したアミノ酸の置換は高次構造に影響を与える可能性が低い；及び（ｃ）進化的に保存されている配列の変化は、アミノ酸配列が機能的重要性を有する可能性があることを示唆しているので、このような保存は、高次構造に悪影響を及ぼす可能性がある。当業者は、顕微鏡補体固定試験（例えば、Ｗａｓｓｅｒｍａｎら（１９６１年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８７：２９０−２９５；Ｌｅｖｉｎｅら（１９６７年）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１１：９２８−９３６を参照されたい）及び高次構造依存性モノクローナル抗体を用いる結合試験を通じて（例えば、Ｌｅｗｉｓら（１９８３年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：９４８−９５４を参照されたい）等であるが、これらに限定されない周知のアッセイを使用して、タンパク質の高次構造の変化を評価することができる。
【０１４７】
このような当技術分野において公知である上記技術の全てが、本発明の一部を形成する訳ではない。当業者は、このような技術を使用して、当技術分野における常法を用いて本発明の抗体分子を提供することができる。
【０１４８】
便宜上、本明細書には任意の副題が含まれるが、いかなる方法でも本開示を限定すると解釈するべきではない。
【０１４９】
更に以下の非限定的な図及び実施例を参照して本発明を記載する。当業者は、これらに照らして本発明の他の態様を思いつくであろう。
【０１５０】
当業者は、本発明を実施するためにそれを使用してもよいので、本明細書に引用される全ての参照文献の開示は、相互参照によって本明細書に具体的に組み込まれるものとする。
【０１５１】
配列
配列番号１は、ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬをコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２は、ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬのアミノ酸配列である。
配列番号３は、ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨをコードするヌクレオチド配列である。
配列番号４は、ＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨのアミノ酸配列である。
配列番号５は、ＶＨアミノ酸配列（配列番号４）内のＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ１である。
配列番号６は、ＶＨアミノ酸配列（配列番号４）内のＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ２である。
配列番号７は、ＶＨアミノ酸配列（配列番号４）内のＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＨ  ＣＤＲ３である。
配列番号８は、ＶＬアミノ酸配列（配列番号２）内のＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬ  ＣＤＲ１である。
配列番号９は、ＶＬアミノ酸配列（配列番号２）内のＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬ  ＣＤＲ２である。
配列番号１０は、ＶＬアミノ酸配列（配列番号２）内のＪＭＷ−３Ｂ３  ＶＬ  ＣＤＲ３である。
配列番号１１は、ｓＣＴＬＡ４のＣ末端タンパク質配列（Ａ１１６−Ｍ１３７）である。
【０１５２】
図１及び２に上記の配列をすべて示す。矢印で、抗原結合部位を作製する超可変性相補性決定領域（ＣＤＲ）を示す。
【実施例】
【０１５３】
実験
ＪＭＷ−３Ｂ３は、ヒトｓＣＴＬＡ−４に特異的なマウスＩｇＧ１λ  ｍＡｂである（図１及び２を参照）。
【０１５４】
図３は、ＪＭＷ−３Ｂ３  ｍＡｂが現在の全特異的抗−ＣＴＬＡ−４抗体とどのように異なるのかを専門用語を用いずに例証する。
【０１５５】
ＪＭＷ−３Ｂ３  ｍＡｂは、ｓＣＴＬＡ−４のＣ末端領域内に存在するエピトープに対して増加し、それを認識した。
【０１５６】
Ｂａｌｂ／ｃマウスを、キャリアタンパク質であるキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲート化しているヒトｓＣＴＬＡ−４のｃ−末端を表すペプチドで免疫した。マウスを、３週間間隔で皮下に２度免疫した。最初の免疫は、完全フロインドアジュバントのエマルション中に懸濁させたペプチド−ＫＬＨ（１ｍｇ／ｍＬ）を含んでいた。次の免疫は、同じペプチド−ＫＬＨ濃度であるが、不完全フロインドアジュバントの懸濁液で適用した。屠殺の１週間前に、無菌生理食塩水中のペプチド−ＫＬＨをマウスに腹腔内注入した。広く利用可能な標準プロトコルを使用して、脾臓のＢ細胞に由来するハイブリドーマの調製、選択及び維持を行った。不死化細胞株の融合パートナーは、Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇｅｎｃｙ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，ＵＫ  （ＥＣＡＣＣ）製のＳＰ２／０−Ａｇ１４であった。研究所で開発されたペプチドＥＬＩＳＡを使用して、推定上の抗−ｓＣＴＬＡ−４抗体を産生するハイブリドーマの検出を行った。ヒト可溶性ＣＴＬＡ−４のＣ末端配列を表すペプチドを、３７℃で一晩水中５０μｇ／ｍＬにてＧｒｅｉｎｅｒ  ３９１２可撓性９６ウェルＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。この期間中にペプチド溶液を完全に蒸発させ、次いで、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２度プレートを洗浄し、３６℃で１時間ＰＢＳ中の２％Ｍａｒｖｅｌでブロッキングした。アルカリホスファターゼにコンジュゲート化している抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ特異的試薬で検出する前に、プレート上でハイブリドーマ細胞培養物（約１００の活発に成長しているハイブリドーマ）からサンプリングされた上清をインキュベートした。ホスファターゼ基質でプレートを顕色させ、４０５ｎｍにおける吸収度の増加によって陽性ウェルを検出した。ｓＣＴＬＡ−４ペプチドについて陽性のハイブリドーマを液体窒素下で保存した。典型的な限界希釈プロトコルを使用して、ハイブリドーマＪＭＷ−３Ｂ３を２度クローニングし、血清から精製されたｓＣＴＬＡ−４を使用して、ネイティブなｓＣＴＬＡ−４分子に結合する能力を試験した。
【０１５７】
正常なドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の細胞培養物への抗体の添加は、抗原特異的免疫反応を増強する。特に、抗原刺激がない状態における抗体の刺激作用は、穏やか〜存在しない。図４（ａ）は、ＪＭＷ−３Ｂ３の刺激活性の例を示す。健康なドナーに由来するＰＢＭＣを、漸増量のヒト結核菌（ＰＰＤ）のリコール抗原の精製タンパク質誘導体の量の存在下で、且つ１０μｇ／ｍＬのＪＭＷ−３Ｂ３の存在下又は不在下で、インビトロにおいてインキュベートした。ＪＭＷ−３Ｂ３の存在下で、ＰＰＤ特異的免疫反応は、細胞増殖の増加及びエフェクターサイトカインであるインターフェロン−γの産生の両方の点で増強される。図４（ｂ）は、ＰＰＤを使用した更なる調査の結果を示す。
【０１５８】
興味深いことに、免疫反応の増強は抗原の存在に依存していた。事実、ｓＣＴＬＡ−４の抗体遮断は、免疫系に対して非常に選択的な正の効果を有していた。この増強を実証する実験を少なくとも４回繰り返したところ、同じ結論が得られた。
【０１５９】
図６は、ＪＭＷ−３Ｂ３及び対照の存在下における、ＣＥＡに対する免疫反応の増強を示す。
【０１６０】
別の実験では、１１人の正常なドナーに由来する血清をｓＣＴＬＡ−４の存在について試験した。ＪＭＷ−３Ｂ３を一般に用いられている全特異的抗ヒトＣＴＬＡ−４抗体と比較した、捕捉ＥＬＩＳＡ技術を使用した（図５）。この場合、２つの陽性サンプルは両方とも各抗体によって同定されたが、全特異的抗−ＣＴＬＡ−４抗体は更に３つの陽性サンプルを同定した。これらは、ｓＣＴＬＡ−４エピトープを有していないので、分解されたｓＣＴＬＡ−４又は表面膜から切断されたＣＴＬＡ−４のいずれかである可能性がある。これは、機能的なｓＣＴＬＡ−４の同定におけるＪＭＷ−３Ｂ３抗体の選択的な性質を実証し；これは、図７にも実証されている。
【０１６１】
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（２８）  Ｈｕｒｗｉｔｚ  ＡＡ，Ｙｕ  ＴＦ，Ｌｅａｃｈ  ＤＲ，Ａｌｌｉｓｏｎ  ＪＰ．ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ−  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍａｍｍａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９８年８月１８日；９５（１７）：１００６７−１００７１．
（２９）  Ｍｏｋｙｒ  ＭＢ，Ｋａｌｉｎｉｃｈｅｎｋｏ  Ｔ，Ｇｏｒｅｌｉｋ  Ｌ，Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ  ＪＡ．Ｒｅａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９８年１２月１日；５８（２３）：５３０１−５３０４．
（３０）  Ｐｈａｎ  ＧＱ，Ｙａｎｇ  ＪＣ，Ｓｈｅｒｒｙ  ＲＭ，Ｈｗｕ  Ｐ，Ｔｏｐａｌｉａｎ  ＳＬ，Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｎｔｒｕｂｅｒ  ＤＪら，Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００３年７月８日；１００（１４）：８３７２−８３７７．
（３１）  Ｆｏｎｇ  Ｌ，Ｓｍａｌｌ  ＥＪ．Ａｎｔｉ−ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−４  ａｎｔｉｂｏｄｙ：ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｉｎ  ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８年１１月１０日；２６（３２）：５２７５−５２８３．
（３２）  ＭｃＣｏｙ  Ｋ，Ｃａｍｂｅｒｉｓ  Ｍ，Ｇｒｏｓ  ＧＬ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｎｅｍａｔｏｄｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７年７月２１日；１８６（２）：１８３−１８７．
（３３）  Ｓａｈａ  Ｂ，Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙ  Ｓ，Ｇｅｒｍｏｎｄ  Ｒ，Ｈａｒｌａｎ  ＤＭ，Ｐｅｒｒｉｎ  ＰＪ．ＣＴＬＡ４  （ＣＤ１５２）  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  Ｔｈ  ｓｕｂｓｅｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｓ  ｔｈｅ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８年１２月；２８（１２）：４２１３−４２２０．
（３４）  Ｂｏｕｄｅｗｉｊｎｓ  Ｍ，Ｊｅｕｒｉｓｓｅｎ  Ａ，Ｗｕｙｔｓ  Ｍ，Ｍｏｅｎｓ  Ｌ，Ｂｏｏｎ  Ｌ，Ｖａｎ  Ｎｅｅｒｖｅｎ  ＪＪら，Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  （ＣＤ１５２）  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ  ｃａｐｓｕｌａｒ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２００５年１１月；７８（５）：１０６０−１０６９．
（３５）  Ｈｒｙｎｉｅｗｉｃｚ  Ａ，Ｂｏａｓｓｏ  Ａ，Ｅｄｇｈｉｌｌ−Ｓｍｉｔｈ  Ｙ，Ｖａｃｃａｒｉ  Ｍ，Ｆｕｃｈｓ  Ｄ，Ｖｅｎｚｏｎ  Ｄら，ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ，ＩＤＯ，ａｎｄ  ｖｉｒａｌ  ＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｏｆ  ＳＩＶｍａｃ２５１  −ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍａｃａｑｕｅｓ．Ｂｌｏｏｄ  ２００６年１２月１日；１０８（１２）：３８３４−３８４２．
（３６）  Ｋａｕｆｍａｎｎ  ＤＥ，Ｋａｖａｎａｇｈ  ＤＧ，Ｐｅｒｅｙｒａ  Ｆ，Ｚａｕｎｄｅｒｓ  ＪＪ，Ｍａｃｋｅｙ  ＥＷ，Ｍｉｕｒａ  Ｔら，Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｂｙ  ＨＩＶ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７年１１月；８（１１）：１２４６−１２５４．
（３７）  Ｋａｒａｎｄｉｋａｒ  ＮＪ，Ｖａｎｄｅｒｌｕｇｔ  ＣＬ，Ｗａｌｕｎａｓ  ＴＬ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＳＤ，Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ  ＪＡ．ＣＴＬＡ−４：ａ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９６年８月１日；１８４（２）：７８３−７８８．
（３８）  Ｔｅｆｔ  ＷＡ，Ｋｉｒｃｈｈｏｆ  ＭＧ，Ｍａｄｒｅｎａｓ  Ｊ．Ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２００６年；２４：６５−９７．
（３９）  Ｍａｇｉｓｔｒｅｌｌｉ  Ｇ，Ｊｅａｎｎｉｎ  Ｐ，Ｈｅｒｂａｕｌｔ  Ｎ，Ｂｅｎｏｉｔ  Ｄｅ  Ｃｏｉｇｎａｃ  Ａ，Ｇａｕｃｈａｔ  ＪＦ，Ｂｏｎｎｅｆｏｙ  ＪＹら，Ａ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｎｏｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９年１１月；２９（１１）：３５９６−３６０２．
（４０）  Ｏａｋｓ  ＭＫ，Ｈａｌｌｅｔｔ  ＫＭ，Ｐｅｎｗｅｌｌ  ＲＴ，Ｓｔａｕｂｅｒ  ＥＣ，Ｗａｒｒｅｎ  ＳＪ，Ｔｅｃｔｏｒ  ＡＪ．Ａ  ｎａｔｉｖｅ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４．Ｃｅｌｌ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２０００年５月１日；２０１（２）：１４４−１５３．
（４１）  Ｕｅｄａ  Ｈ，Ｈｏｗｓｏｎ  ＪＭ，Ｅｓｐｏｓｉｔｏ  Ｌ，Ｈｅｗａｒｄ  Ｊ，Ｓｎｏｏｋ  Ｈ，Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ  Ｇら，Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｇｅｎｅ  ＣＴＬＡ４  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００３年３月２９日；４２３（６９３９）：５０６−５１１．
（４２）  Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ａ．Ｖ．，Ｄ．Ｗ．Ｂｒｏｄｉｅ，Ｒ．Ｊ．Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ａ．ｌａｂｏｎｉ，Ｒ．Ｍａｎｓｏ−Ｓａｎｃｈｏ，Ｂ．Ｗａｌｓｅ，Ｄ．Ｉ．Ｓｔｕａｒｔ，Ｐ．Ａ．ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍｅｒｗｅ，及びＳ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ．Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００２年．１７：２０１−２１０．
（４３）  Ｏａｋｓ，Ｍ．Ｋ．，及びＫ．Ｍ．Ｈａｌｌｅｔｔ．Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：ａ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００年．１６４：５０１５−５０１８．
（４４）  Ｌｉｕ，Ｍ．Ｆ．，ＣＲ．Ｗａｎｇ，Ｐ．Ｃ．Ｃｈｅｎ，及びＬ．Ｌ．Ｆｕｎｇ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−４  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３年．５７：５６８−５７２．
（４５）  Ｓａｔｏ，Ｓ．，Ｍ．Ｆｕｊｉｍｏｔｏ，Ｍ．Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｋ．Ｋｏｍｕｒａ，Ｋ．Ｙａｎａｂａ，Ｉ．Ｈａｙａｋａｗａ，Ｔ．Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ，及びＫ．Ｔａｋｅｈａｒａ．Ｓｅｒｕｍ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＴＬＡ−４  ｌｅｖｅｌｓ  ａｒｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （Ｏｘｆｏｒｄ，）  ２００４年．４３：１２６１−１２６６．
（４６）  Ｗｏｎｇ，Ｃ．Ｋ．，Ｓ．Ｗ．Ｌｕｎ，Ｆ．Ｗ．Ｋｏ，Ｗ．Ｋ．Ｉｐ，Ｄ．Ｓ．Ｈｕｉ，及びＣＷ．Ｌａｍ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ＣＴＬＡ−４，ＣＤ２８  ａｎｄ  ＣＤ８６  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ａｓｔｈｍａ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５年．１４１：１２２−１２９．
（４７）  Ｗｏｎｇ，ＣＫ．，Ｌ．Ｃ．Ｌｉｔ，Ｌ．Ｓ．Ｔａｒｎ，Ｅ．Ｋ．Ｌｉ，及びＣＷ．Ｌａｍ．Ａｂｅｒｒａｎｔ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ＣＴＬＡ−４，ＣＤ２８，ＣＤ８０  ａｎｄ  ＣＤ８６  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （Ｏｘｆｏｒｄ）  ２００５年．４４：９８９−９９４．
（４８）  Ｓａｖｅｒｉｎｏ，Ｄ．，Ｒ．Ｂｒｉｚｚｏｌａｒａ，Ｒ．Ｓｉｍｏｎｅ，Ａ．Ｃｈｉａｐｐｏｒｉ，Ｆ．Ｍｉｌｉｎｔｅｎｄａ−Ｆｌｏｒｉａｎｉ，Ｇ．Ｐｅｓｃｅ，及びＭ．Ｂａｇｎａｓｃｏ．Ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＴＬＡ−４  ｉｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｗｉｔｈ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．２００７年．ＣＮｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：１９０−１９８．
（４９）  Ｉｐ，Ｗ．Ｋ．，ＣＫ．Ｗｏｎｇ，Ｔ．Ｆ．Ｌｅｕｎｇ，及びＣＷ．Ｌａｍ．Ｐｌａｓｍａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＴＬＡ−４，ＣＤ２８，ＣＤ８０  ａｎｄ  ＣＤ８６  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｒｅｆｌｅｃｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ａｓｔｈｍａ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ．２００６年．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｐｕｌｍｏｎｏｌ．４１：６７４−６８２．
（５０）  Ｈｏｄｉ  ＦＳ，Ｍｉｈｍ  ＭＣ，Ｓｏｉｆｆｅｒ  ＲＪら，Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ４  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｎｄ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００３年；１００：４７１２−４７１７．
（５１）  Ａｔｔｉａ  Ｐ，Ｐｈａｎ  ＧＱ，Ｍａｋｅｒ  ＡＶら，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉ−ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−４．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００５年；２３：６０４３−６０５３．
（５２）  Ｓｍａｌｌ  ＥＪ，Ｔｃｈｅｋｍｅｄｙｉａｎ  ＮＳ，Ｒｉｎｉ  Ｂｌ，Ｆｏｎｇ  Ｌ，Ｌｏｗｙ  Ｉ，Ａｌｌｉｓｏｎ  ＪＰ．Ａ  ｐｉｌｏｔ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ＣＴＬＡ−４  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００７年；１３：１８１０−１８１５．
（５３）  Ｐｈａｎ  ＧＱ，Ｙａｎｇ  ＪＣ，Ｓｈｅｒｒｙ  ＲＭら，Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００３年；１００：８３７２−８３７７．
（５４）  Ｋｏｒｍａｎ  Ａ，Ｙｅｌｌｉｎ  Ｍ，Ｋｅｌｅｒ  Ｔ．Ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＴＬＡ４  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．２００５年；６：５８２−５９１．
（５５）  Ｗｏｌｃｈｏｋ  ＪＤ及びＳａｅｎｇｅｒ  Ｙ．Ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＴＬＡ−４  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２００８年；１３  Ｓｕｐｐｌ  ４：２−９．
【図１】
0005864266.tif 000002
【図２】
0005864266.tif 000003
【図３】
0005864266.tif 000004
【図４ａ】
0005864266.tif 000005
【図４ｂ】
0005864266.tif 000006
【図５】
0005864266.tif 000007
【図６】
0005864266.tif 000008
【図７】
0005864266.tif 000009
【配列表】
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