(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビール酵母を放線菌産生酵素類および担子菌産生酵素類で酵素処理して得られるビール酵母の酵素分解物からなるビール酵母エキスを、有機塩素化合物で汚染された環境に供給し、該環境から脱塩素化細菌の活性化によって有機塩素化合物を除去することを特徴とする、有機塩素化合物による汚染の浄化方法。
【請求項２】
酵素処理した後に膜濾過および／または活性炭処理をさらに行う、請求項１に記載の有機塩素化合物による汚染の浄化方法。
【請求項３】
放線菌産生酵素類が、５’−リン酸生成型ヌクレアーゼ、デミナーゼおよびプロテアーゼを必須構成酵素とする酵素類であって、担子菌産生酵素類が、プロテアーゼ、セルラーゼおよびグルカナーゼを必須構成酵素とする酵素類である、請求項１に記載の有機塩素化合物による汚染の浄化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有機塩素化合物による土壌や地下水汚染の浄化促進剤および浄化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
土壌や地下水汚染の原因となる物質は多様であるが、有機塩素化合物の占める割合が高いのが現状である。なかでも、テトラクロロエチレンやトリクロロエチレンなどの塩素化エチレンは安価で油に対する洗浄力の強い溶剤として、金属産業、半導体産業、ドライクリーニング店など幅広い分野で使用されている。テトラクロロエチレンやトリクロロエチレンなどの有機塩素化合物は、揮発性が高く、水よりも比重が大きく、粘性および表面張力が小さいという物理化学的性状を有するため、工場などから汚染原液が地盤に漏洩すると土壌への吸着や分解を起こしにくく、一部の汚染原液が土壌間隙中に滞留しながら鉛直下方に深く浸透していき、不透水層まで到達する。一方、水への溶解度は比較的大きいために帯水層（地下水が存在する地層）まで到達した汚染原液から汚染物質が地下水に溶解することにより広い範囲の地下水汚染を引き起こす場合が多い。
【０００３】
テトラクロロエチレンやトリクロロエチレンなどの有機塩素化合物による土壌や地下水汚染は、地下深部まで到達していることが多いため、土壌を掘削せずに浄化を行う原位置浄化技術が多く採用されている。原位置浄化技術として、地下水揚水法がこれまで多く採用されてきたが、特に濃度の低い汚染地下水に対して浄化効率が低いために必ずしも有効な浄化方法とはなっていない。これに対し、近年、微生物を利用して、土壌や地下水中の有機塩素化合物を地盤内で直接分解除去する浄化技術（バイオレメディエーション）は環境負荷が小さく、設備や動力の点で低コストであることから着目され、その研究が急速に進められている。
【０００４】
有機塩素化合物の中でもテトラクロロエチレンやトリクロロエチレンなどは、嫌気性微生物（脱塩素化細菌）による還元脱塩素化によって逐次分解されることが知られている（非特許文献１）。よって、従来の有機塩素化合物のバイオレメディエーションにおいては、この脱塩素化細菌を利用する方法が主流である。たとえば、微生物の栄養源となる有機資材を浄化井戸などから帯水層中に注入して脱塩素化細菌を活性化させ、テトラクロロエチレンやトリクロロエチレンを無害なエチレンまで浄化する技術が既に実用化されている（非特許文献２）。本浄化技術で用いられる有機資材は、脱塩素化細菌の増殖に適した嫌気的環境を形成するだけでなく、脱塩素化に必要な水素（電子供与体）を分解過程で供給して脱塩素化細菌の活性を高める役割があり、バイオレメディエーションには必要不可欠である。
【０００５】
嫌気性微生物（脱塩素化細菌）を活性化するための有機資材には大きく分けて、高級脂肪酸やポリ乳酸などを主成分とした徐放性有機資材と、アミノ酸、有機酸、糖類などを主成分とした即効性有機資材がある。このうち、即効性有機資材として様々な材料が報告されており、なかでも酵母エキスは効果が高いことが確認されている（特許文献１〜３等）。酵母エキスは、ビール酵母やパン酵母等を原料として、自己消化、酵素分解、熱水処理などにより抽出・濃縮されたエキスであり、原料となる酵母の種類や処理方法によって性質や用途が異なっている。酵母エキスは食品分野では、酵母特有の臭いや苦味、沈殿や濁りを除去し、呈味や風味を改善する様々な処理方法を検討されている。しかしながら、土壌浄化分野では、これまでの報告はいずれも単に酵母エキスとしか記載がなく、どのような酵母エキスで高い浄化効果が得られるかについてはほとんど検討されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第3564573号
【特許文献２】特許第4483541号
【特許文献３】特許第4557219号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】D.L.Freedman & J.M.Gossett:Appl.Environ.Microbiol., 55, 2144 (1989)
【非特許文献２】高畑  陽、化学と生物、Vol.49, No.4, 2011
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、嫌気性微生物（脱塩素化細菌）を利用して土壌や地下水における有機塩素化合物を浄化する技術において、該微生物を活性化し、浄化を促進することのできる新たな有機資材を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく様々な有機資材を用いて脱塩素化細菌による有機塩素化合物の浄化効果の検討を行った結果、酵母を特定の微生物産生酵素で処理することにより得られる酵母エキスを用いることにより、一般的な酵母エキスと比較して、脱塩素化細菌の活性を早期に高め、優れた脱塩素化効果が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は以下の発明を包含する。
(1) 酵母を放線菌産生酵素類および/または担子菌産生酵素類で酵素処理して得られる酵母の酵素分解物からなる酵母エキスを含む、有機塩素化合物による汚染浄化促進剤。
(2) 酵素処理した後に膜濾過および／または活性炭処理をさらに行う、(1)に記載の汚染浄化促進剤。
(3) 酵母がビール酵母である、(1)または(2)に記載の汚染浄化促進剤。
(4) (1)から(3)のいずれかに記載の汚染浄化促進剤を、有機塩素化合物で汚染された環境に供給し、該環境から有機塩素化合物を除去することを特徴とする、有機塩素化合物による汚染の浄化方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の汚染浄化促進剤は、嫌気性微生物（脱塩素化細菌）による有機塩素化合物の脱塩素反応系において、従来用いられている材料と比較して有機塩素化合物の脱塩素化の速度を促進することができるため、浄化期間が短縮され、浄化のための作業量が低減できる。本発明の汚染浄化促進剤に用いられる有機資材は、酵母を放線菌産生酵素類および/または担子菌産生酵素類で酵素処理して得られる酵母の酵素分解物からなる酵母エキスであり、懸濁物が存在しない水溶性であるため、井戸からの注入時に、井戸の目詰まりを防止できる。また、酵母エキスは食品分野でも用いられているものであるから、安全性に富み、環境負荷も小さい。
【００１２】
また、本発明の汚染浄化促進剤を用いた浄化方法は、掘削を伴わず地下水の揚水も不要な原位置バイオレメディエーションにより行うことが可能であるから、特殊な処理や装置も必要なく、浄化にかかるコストも低い。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】汚染浄化用ビール酵母エキスまたは市販酵母エキスを添加した培養系における、塩素化エチレン類(トリクロロエチレン：TCE, シス-1,2-ジクロロエタン：cis-1,2-DCE, 塩化ビニルモノマー：VCM)およびエチレンの経時変化の比較を示す。
【図２】汚染浄化用ビール酵母エキスまたは市販酵母エキスを添加した培養系における、Dehalococcoides属細菌の16SｒDNAコピー数およびvcrA遺伝子のコピー数の経時変化の比較を示す。
【図３】酵母エキスの処理の違いによる、塩素化エチレン類(TCE, cis-1,2-DCE, VCM)の経時変化の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下に、本発明について詳細に述べる。
本発明の有機塩素化合物による汚染浄化促進剤は、酵母を放線菌産生酵素類および/または担子菌産生酵素類で酵素処理して得られる酵母の酵素分解物からなる酵母エキス（以下、「汚染浄化用酵母エキス」という）を含む。
【００１５】
上記汚染浄化用酵母エキスの製造に用いる酵母は、食品製造分野で通常利用される酵母であれば特に限定はされず、ビール酵母、パン酵母、ワイン酵母、清酒酵母等のいずれであってもよいが、ビール酵母が好ましい。
【００１６】
上記汚染浄化用酵母エキスは、酵母を放線菌産生酵素類および/または担子菌産生酵素類で処理することによって、菌体を分解または破砕し、可溶化させた酵母の酵素分解物である。放線菌産生酵素類および担子菌産生酵素類による酵素処理はいずれか一方を行えばよく、両方を行なってもよい。両方を行なう場合は、まず、放線菌産生酵素類で処理し、ついで担子菌産生酵素類で処理することが好ましい。
【００１７】
放線菌産生酵素類としては、例えば、ストレプトミセス属に属する菌株を自体公知の方法により培養し、５’−リン酸生成型ヌクレアーゼ、デアミナーゼおよびプロテアーゼを含有する培養物をそのまま、または培養濾液、菌体、菌体破砕物、これらの抽出液、その乾燥物等を使用することができ、あるいは自体公知の方法により５’−リン酸生成型ヌクレアーゼ、デアミナーゼおよびプロテアーゼを必須構成酵素とする酵素類を採取し、粗製のまま、または精製酵素として用いることができる。また、担子菌産生酵素類としては、例えば、ホウロクタケ属に属する担子菌、好ましくはヒイロタケを自体公知の方法により培養し、プロテアーゼ、セルラーゼおよびグルカナーゼ含有する培養濾液、その抽出物等を使用することができ、あるいは自体公知の方法により、プロテアーゼ、セルラーゼおよびグルカナーゼを必須構成酵素とする酵素類を採取し、粗製のまま、または精製酵素として用いることができる。また、放線菌産生酵素類も担子菌産生酵素類も酵素力価を落とさずに乾燥させて粉末化して使用することが好ましい。乾燥方法としては、酵素を失活させない方法であればいずれでもよく、例えば、凍結乾燥方法等がある。
【００１８】
酵素処理を行うに際し、酵母は、例えば、乾燥酵母の場合、通常、５〜３０重量％、好ましくは、１０〜２０重量％の濃度で、水に懸濁し、酵素類と接触させる。懸濁液の濃度が低すぎる場合は生産性の低下を招き、また、濃度が高すぎる場合は、粘度が高くなりすぎ、撹拌等が困難となる。酵素処理は、例えば、上記濃度に調製した酵母懸濁液に放線菌産生酵素類の乾燥物を３５℃〜６０℃で０．１〜３．０重量％（対固形分）の割合で３〜１０時間接触させ、ついで同液を６０〜７０℃で１〜８時間保持した後、ｐＨを３．５〜５．５に調整する。これに担子菌産生酵素類の乾燥物を４５〜６０℃で０．３〜１．５重量％（対固形分）の割合で５〜２０時間接触させることにより行なう。
【００１９】
上記操作で得られる酵母の酵素分解物（粗エキスまたは酵母エキス原液）は、汚染浄化用酵母エキスとしてそのまま用いることができるが、濾過等の精製処理によって酵素分解物に含まれる残存菌体や菌体破砕物を除去することが好ましい。
【００２０】
精製処理は、膜濾過および／または活性炭処理が好ましい。膜濾過および活性炭処理はいずれか一方を行えばよく、両方を行なってもよい。両方を行なう場合は、膜濾過後、続いて活性炭処理を行う。
【００２１】
上記膜濾過は、精密濾過から限外濾過の範囲の膜孔径を有する膜濾過であればよいが、
精密濾過は、限外濾過よりも孔径が大きいことから、単位膜面積当たりの濾過速度が早く、かつ、酵母エキス分の濾液側への透過性が高いうえで、精密濾過がより好ましい。この膜濾過処理により苦味物質、細胞壁成分などが除去できる。精密濾過膜の材質は、特に限定はされないが、酢酸セルロース、芳香族ポリアミド、ポリビニルアルコール、ポリスルホン、ポリフッ化ビニリデン、ポリエチレン、ポリオレフィン、ポリアクリロニトリル、セラミックなどが挙げられる。ビール酵母の場合は、セラミックなどの無機の濾過材が好ましい。孔径は、０．０１〜１μｍ、０．０５〜０．５μｍのものが好ましい。
【００２２】
濾過の方法は、全量濾過方式であっても、クロスフロー濾過方式のいずれでもよいが、濁り成分を膜表面に堆積するのを抑制しながら濾過を行える点においてクロスフロー濾過方式が好ましい。クロスフロー濾過方式を行う場合、中空糸膜型の精密ろ過膜が適している。濾過温度については特に限定されないが、一般的に温度が高いほど単位膜面積当たりの濾過速度が早い。
【００２３】
膜濾過後、所望により、濾液の固形分濃度を５０重量％程度に濃縮してもよい。濃縮方法は特に限定するものではなく、例えば、常圧加熱濃縮、減圧過熱濃縮、冷凍濃縮等の公知の濃縮方法が採用できる。
【００２４】
活性炭処理は、前記の酵母の酵素分解物、あるいは、膜濾過により得られた濾液またはその濃縮液に対して行なう。活性炭処理は、濾液またはその濃縮液をｐＨ５．０〜６．０に調整し、濾液またはその濃縮液の固形分に対して０．５〜１０．０重量％、好ましくは１．０〜５．０重量％の活性炭を添加し、分散した後、５０〜６０℃で、０．５〜１時間保持することにより行なう。ｐＨの調整は、常法に従い、必要に応じて酸（例、塩酸等）またはアルカリ（例、水酸化ナトリウム等）を用いて行う。
【００２５】
活性炭には、原料（木質系、石炭系、石油系）と賦活化形式（塩化亜鉛賦活法、水蒸気賦活法）の異なる多種類の活性炭が存在し、形状的に分類すると、粉末活性炭（おが屑、木材チップ、木炭等）、粒状活性炭（木炭、ヤシ殻炭、石炭（亜炭、褐炭、瀝青炭等）、オイルカーボン、フェノール樹脂等）、繊維状活性炭（レーヨン、アクリロニトリル、石油ピッチ、石炭ピッチ、フェノール樹脂等）などが含まれる。本発明の活性炭処理に用いる活性炭としては、ビールや清酒などの醸造関連分野において製品の脱色・香味調整・雑味除去のために用いられているものであれば特に限定はされない。
【００２６】
本発明の汚染浄化促進剤の処理対象となる汚染環境としては、有機塩素化合物を含む土壌や水環境であれば特に制限はなく、土壌としては、一般の表層土壌のほか、地下土壌、汚泥（産業廃棄物汚泥および一般廃棄物汚泥）、河川・湖沼・港湾の底泥などが挙げられ、水環境としては、地下水、工業廃水、家庭排水、河川、ため池及び湖等などが挙げられる。
【００２７】
ここで、浄化対象となる代表的な有機塩素化合物は、テトラクロロエチレン(ＰＣＥ）、トリクロロエチレン（ＴＣＥ）、ｃｉｓ−１,２−ジクロロエチレン（ｃｉｓ−１,２−ＤＣＥ)、ｔｒａｎs−１,２−ジクロロエチレン（ｔｒａｎs−１,２−ＤＣＥ）、塩化ビニルモノマー(ＶＣＭ)などのエチレン系の揮発性有機塩素化合物や、トリクロロエタン、四塩化炭素、及びジクロロメタンなどのエタン系、メタン系の揮発性有機塩素化合物であるが、コプラナーＰＣＢに代表されるポリ塩化ビフェニル（ＰＣＢ）、ポリ塩化ジベンゾ−P-ジオキシン（ＰＣＤＤ）、ポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）などのダイオキシン類、ＤＤＴ類、ＢＨＣ類、アルドリン、エンドリン、ディルドリン、ヘプタクロルなどの有機塩素系農薬も含まれる。
【００２８】
本発明の汚染浄化促進剤の形状は、水溶液または水分散液等の液状が好ましいが、固体状、スラリー状としてもよく、汚染対象となる地層や汚染状態に応じて適宜使用すればよい。
【００２９】
本発明の汚染浄化促進剤は、有機塩素化合物で汚染された土壌や地下水に適用することによって、有機塩素化合物分解能を有する微生物を活性化し、有機塩素化合物の分解を促進させることができる。有機塩素化合物の分解能を有する微生物としては、デスルフォバクテリウム（Desulfobacterium）属、デスルフォモニル（Desulfomonile）属、デスルフィトバクテリウム(Desulfitobacterium)属、デスルフォビブリオ（Desulfovibrio）属、デスルフォバクター（Desulfobacter）属、デスルフォコッカス（Desulfococcus）属、デハロスピリルム（Dehalospirillum）属、デハロバクター（Dehalobacter）属、デハロバクテリウム（Dehalobacterium）属、デハロコッコイデス（Dehalococcoides）属、メタノサルシナ（Methanosarcina）属、メタノバクテリウム（Methanobacterium）属、メタノロブス（Methanolobus）属、メタノブレビバクター（Methanobrevibacter）属、アセトバクテリウム（Acetobacterium）属、クロストリジウム（Clostridium）属等の嫌気性微生物を挙げることができる。これら嫌気性微生物は、処理対象に予め含まれているものであってもよく、処理対象に対して別途添加したものであってもよい。よって、本発明の汚染浄化促進剤によるバイオレメディエーションは、主としてバイオスティミュレーションを意味するが、バイオオーグメンテーションの態様をも含む。
【００３０】
上記の嫌気性微生物による還元脱塩素化反応により、テトラクロロエチレン(ＰＣＥ）やトリクロロエチレン（ＴＣＥ）は、ｃｉｓ−１,２−ジクロロエチレン（ｃｉｓ−１,２−ＤＣＥ)、塩化ビニルモノマー(ＶＣ)を順に経て、エチレンまで分解される。すなわち、上記の嫌気性微生物は、水素を電子供与体とし、テトラクロロエチレン等の有機塩素化合物を電子受容体とする還元化反応により、エネルギーを獲得して増殖することができる。その際に、本発明の汚染除去剤に含まれる酵母エキスが、上記反応系の水素の供給源となる。
【００３１】
本発明の汚染浄化促進剤を用いて汚染された土壌や地下水の浄化を行う場合、土壌の堀削または地下水の揚水を行わず、汚染された土壌や地下水を原位置で浄化する、いわゆる原位置浄化法で行うことが好ましい。しかしながら、堀削した土壌に汚染浄化促進剤を添加してもよい。
【００３２】
原位置浄化法を行う場合は、本発明の汚染浄化促進剤を汚染土壌に散布する方法、地盤改良工事で利用される土木機械等を利用して機械的に原位置攪拌する方法、汚染土壌や帯水層に注入管を設置し、この注入管から汚染浄化促進剤を注入する方法で行えばよい。
【００３３】
本発明の汚染浄化促進剤を用い、例えば、原位置浄化法で汚染土壌を浄化する場合、本発明の汚染浄化促進剤の土壌への投入量は、土壌10ｇあたりの酵母エキスの量として10〜500g-wet程度が例示できるが、これに限定はされず、汚染の状況、周囲の土壌環境等により適宜調整すればよい。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３５】
（実施例１）汚染浄化用ビール酵母エキスと市販の酵母エキスによる浄化効果の比較検討
(1) 汚染浄化用ビール酵母エキスの調製
ストレプトミセス・アウレウス（Streptomyces aureus IFO 3175)の胞子懸濁液（10７個／ml以上）１白金耳を種培地（可溶性コーンスターチ30g/l、コーン・スティープ・リカー30 g/l、硫酸アンモニウム1g/l、硫酸マグネシウム0.5g/l、炭酸カルシウム3g/l、pH7.0)20mlに接種し、28℃、200rpmで24時間培養し、種培養終了液を得た。得られた種培養終了液1mlを主培地（可溶性コーンスターチ30g/l、コーン・スティープ・リカー15 g/l、硫酸アンモニウム 1 g/l、硫酸マグネシウム 0.5 g/l、炭酸カルシウム 3g/l、pH7.0)20mlに移植し、28℃、200rpmで40時間培養し、主培養終了液を得た。得られた主培養終了液20mlを28℃、200 rpmで3時間撹拌し、ついでイソブタノール1.2 mlを加え、さらに28℃、200rpmで3時間撹拌して溶菌し、酵素処理液を得た。これを品温が80℃以下で乾燥し、放線菌産生酵素類の乾燥粉末を得た。
【００３６】
ヒイロタケ（Trametes sanguinea)の胞子懸濁液（10７個/ml以上）2mlを種培地（塩化カルシウム1g/l、硫酸マグネシウム1g/l、硫酸アンモニウム2g/ml、リン酸一カリウム2g/l、ショ糖50g/l、コーン・スティープ・リカー30g/l、pH7.0)20mlに接種し、28℃、200rpmで48時間培養し、種培養終了液を得た。得られた種培養終了液2mlを主培地（塩化カルシウム1g/l、硫酸マグネシウム1g/l、硫酸アンモニウム2g/l、リン酸一カリウム2g/l、ショ糖80g/l、脱脂大豆粉35g/l、pH6.0)20mlに移植し、28℃、200rpmで96時間培養し、主培養終了液を得た。主培養終了液を、濾紙で濾過し、得られた酵素液を真空乾燥してヒイロタケ産生酵素類の乾燥粉末を得た。
【００３７】
ビール酵母を純水に懸濁して11%懸濁液を調製し、30%水酸化ナトリウム溶液でpH 7.7に調整した。これに、酵母固形分に対して0.62 %の割合で、上記で得られた放線菌産生酵素類液を加え、40〜60℃で5時間、ついで65℃で3時間保持した。このときのpHは6.7〜6.8であった。ついで、50℃に冷却し、35％塩酸でpH4.0に調整し、酵母固形分に対して0.6%の割合で、上記で得られた担子菌産生酵素類を加え、50℃で12時間反応させた。反応終了後、90℃で10分間加熱殺菌し、60℃に冷却した。反応液を0.1〜0.2μmの平均孔径を有するセラミック膜で濾過した。このときの上澄液のエキス濃度はBｘ11.5であった。残渣を約3倍量の純水と共に撹拌し、再度濾過して、濾液を上記の濾液と合した。この液のpHは4.0、エキス濃度はBｘ5〜6であった。35％塩酸でｐH5.5に調整し、薄膜流下式真空濃縮によりBx30〜35まで濃縮した。これを90℃まで急速加熱した後、60℃まで急速冷却し、固形分に対して1.5 %の活性炭を加えて濾過し、濾液をさらに真空濃縮によりBx55〜60まで濃縮し、所望の「汚染浄化用ビール酵母エキス」を得た。
【００３８】
(2)試験方法
有機資材として、(1)で調製した「汚染浄化用ビール酵母エキス」と市販酵母エキス（Difco社製）を用いた培養試験を実施し、塩化エチレン類の浄化状況を比較検討した。
全量120mlのバイアル瓶に無機塩培地（表１）を90ml入れた培養系に、有機資材（上記の汚染浄化用ビール酵母エキスと市販酵母エキス）を炭素換算で100mg-C/L、種菌として塩素化エチレン汚染サイトの帯水層の土壌上澄み液を1ml添加した。次に、塩素化エチレン類としてトリクロロエチレン（TCE）およびシス-1,2-ジクロロエチレン（cis-1,2-DCE ）を終濃度で1.2mg/L、2.8mg/Lになるようにそれぞれ添加し、テフロン加工したブチルゴムで密栓して、30℃の恒温室で振とう培養を行った。汚染浄化用ビール酵母エキスまたは市販酵母エキスを添加したバイアル瓶はそれぞれ複数本作成し、定期的に培養瓶を回収して分析に供した。
【００３９】
【表１】
0005841001.tif 000002
【００４０】
(3)試験結果
試験期間中の塩素化エチレン類及びエチレンの経時変化を図１に示す。汚染浄化用ビール酵母エキスを添加した条件では、培養開始直後にTCEからcis-1,2-DCEの速やかな脱塩素化が確認され、培養36日目以降はcis-1,2-DCEの減少に伴う塩化ビニルモノマー（VCM）への脱塩素化が確認された。更に、培養62日目にはVCMは減少に転じ、脱塩素化の最終生成産物であるエチレンも62日目に検出された。一方、市販の酵母エキスは、塩素化エチレンの脱塩素化傾向がみられたが、培養82日目の時点でcis-1,2-DCEの濃度も環境基準値（0.04mg/L）を超過しており、汚染浄化用ビール酵母エキスと比較すると脱塩素化の速度が遅くなっていることが示された。
【００４１】
また、脱塩素化に寄与する細菌であるDehalococcoides属細菌の16SｒDNAコピー数、及びcis-1,2-DCE の脱塩素化に係わる遺伝子であることが知られているvcrA遺伝子のコピー数を定量した結果を図２に示す。この結果、汚染浄化用ビール酵母エキスを用いた培養系でのDehalococcoides属細菌の16SｒDNAコピー数およびvcrA遺伝子のコピー数は、市販の酵母エキスを用いた培養系と比較して培養初期から高い値を示しており、汚染浄化用ビール酵母エキスは浄化に係わる脱塩素化細菌の活性を早期に高めることが可能な材料であることが確認された。
【００４２】
（実施例２）酵母エキスの製造工程別の材料を用いた浄化効果の検討
(1) 試験方法
酵母エキスの処理方法による浄化効果を把握するため、乾燥ビール酵母（酵母を乾燥させたものであり懸濁質（細胞壁）が残っているもの）、乾燥ビール酵母を細胞壁溶解酵素（ザイモリエイス）で消化したビール酵母エキス、または実施例１で調製した「汚染浄化用ビール酵母エキス」について、各酵母エキスを培養液中の有機物濃度が100mg-C/Lになるように前記表１の無機塩培地に添加し、実施例１と同様の方法で培養試験を実施した。
【００４３】
(2) 試験結果
試験期間中の塩素化エチレン類の経時変化を図３に示す。この結果、乾燥ビール酵母は脱塩素化効果がみられるが、培養期間中にcis-1,2-DCE以降の脱塩素化はほとんどみられなかった。また、乾燥ビール酵母を消化酵素により処理したビール酵母エキスについては、明確な浄化効果はみられなかった。一方、乾燥ビール酵母を放線菌産生酵素類と担子菌産生酵素類で処理することによって得た汚染浄化用ビール酵母エキスを添加した培養系では、培養20日目以降からcis-1,2-DCEのVCMへの脱塩素化が確認された。したがって、ビール酵母の中でも、放線菌産生酵素類と担子菌産生酵素類で処理することによって得た汚染浄化用ビール酵母エキスが、塩素化エチレン類の脱塩素化の促進に効果があることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明は、環境汚染浄化剤の製造分野において利用できる。
【図１】
0005841001.tif 000003
【図２】
0005841001.tif 000004
【図３】
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