(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
0006034880.tif 000031
（式中、
Ｒ１は、水素またはＣ１−２アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの２つ以下が、水素以外であることを条件に、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ水素、Ｃ１−２アルキル、フッ素、塩素、Ｃ１−２アルコキシおよびトリフルオロメチルから選択される）
を有する化合物、およびその塩。
【請求項２】
Ｒ１が、水素およびメチルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、水素、フッ素、塩素、メチル、エチルおよびメトキシから選択される、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３が、水素である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４が、水素、フッ素、メチルおよびエチルから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
（ｉ）Ｒ１が水素であり；Ｒ２がメチル、エチル、フルオロ、クロロおよびメトキシから選択され；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が水素であるか、または（ii）Ｒ１が水素であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４がメチルであるか、または（iii）Ｒ１が水素であり；Ｒ２がフルオロであり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４がメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２が水素およびフッ素から選択され、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２がフッ素である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
以下の表の化合物Ｅｘ．１〜Ｅｘ．１２から選択される、請求項１に記載の化合物、およびその塩。
【表１】
0006034880.tif 000032
【請求項１０】
Ｅｘ．２、Ｅｘ．３、Ｅｘ．５およびＥｘ．７から選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
【化２】
0006034880.tif 000033
である請求項９に記載の化合物又はその塩。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を含む癌治療のための医薬組成物。
【請求項１４】
増殖性疾患の治療のための医薬組成物であって、前記増殖性疾患は、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される造血系腫瘍である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１５】
前記癌は、ＦＬＴ３キナーゼによる阻害に感受性のあるものであり、かつ急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記医薬組成物は他の化学療法剤と併用して用いられる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キナーゼ、詳細にはオーロラキナーゼおよびＦＬＴ３キナーゼの活性を阻害またはモジュレートする化合物、キナーゼにより介在される疾患状況または状態の処置または予防における該化合物の使用に関する。同じく、該化合物を含有する医薬組成物、それらの調製方法、および新規な化学的中間体が提供される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
プロテインキナーゼは、細胞内の様々なシグナル伝達工程の制御を担う、構造的に関連する酵素の大きなファミリーを構成している（Ｈａｒｄｉｅ  ａｎｄ  Ｈａｎｋｓ（１９９５）Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ．Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ所在）。該キナーゼは、それらがリン酸化する基質により各ファミリーに分類され得る（例えば、蛋白質−チロシン、蛋白質−セリン／トレオニン、脂質など）。これらキナーゼファミリーのそれぞれに概ね対応する配列モチーフが、同定された（例えば、ＨＡＮＫＳ  ＡＮＤ  ＨＵＮＴＥＲ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，（１９９５）９．５７６−５９６；Ｋｎｉｇｈｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９１）２５３，４０７−４１４；Ｈｉｌｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，（１９９２）７０，４１９−４２９；Ｋｕｎｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，（１９９３）７３，５８５−５９６；Ｇａｒｃｉａ−Ｂｕｓｔｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，（１９９４）１３，２３５２−２３６１）。
【０００３】
プロテインキナーゼは、それらの調節メカニズムにより特徴づけることができる。これらのメカニズムには、例えば自己リン酸化、他のキナーゼによるリン酸基転移、蛋白質−蛋白質相互作用、蛋白質−脂質相互作用、および蛋白質−ポリヌクレオチド相互作用がある。個々のプロテインキナーゼは１種を超えるメカニズムにより調節される場合がある。
【０００４】
キナーゼは、リン酸基を標的蛋白質に付加することにより、非限定的に増殖、分化、アポトーシス、運動、転写、翻訳および他のシグナル伝達工程をはじめとし、多くの異なる細胞工程を調節する。これらのリン酸化事象は、標的蛋白質の生物学的機能をモジュレートまたは調節し得る分子オン／オフスイッチとして作用する。標的蛋白質のリン酸化は、様々な細胞外シグナル（ホルモン、神経伝達物質、増殖および分化因子など）、細胞周期事象、環境または栄養ストレスなどに反応して生じる。適切なプロテインキナーゼは、例えば、代謝酵素、調節蛋白質、受容体、細胞骨格蛋白質、イオンチャンネルもしくはポンプ、または転写因子を活性化または不活性化（直接的または間接的に）するために、シグナル伝達経路において機能する。蛋白質リン酸化の欠陥的制御を原因とする非制御的シグナル伝達は、例えば炎症、癌、アレルギー／喘息、免疫系の疾患および症状、中枢神経系の疾患および症状、ならびに血管新生をはじめとし、多くの疾患に関連づけられている。
【０００５】
オーロラキナーゼ 
これまでに、オーロラキナーゼファミリーの３つのメンバーが、哺乳動物において見出されている（Ｎｉｇｇ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００１）２，２１−３２）。オーロラＡキナーゼ（前記文献ではオーロラ２とも称される）は、細胞周期のＧ２およびＭ期に関与し、有糸分裂の重要な調節因子であるセリン／トレオニンキナーゼである。オーロラキナーゼＡは、有糸分裂チェックポイント制御、染色体動態、および細胞質分裂において役割を担うと考えられている（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，（２００１  ）１１，４９−５４）。該キナーゼは、間期細胞の中心体に、双極紡錘体の極に、そして有糸分裂装置の中央体に位置する。
【０００６】
他の２種の現在知られるオーロラキナーゼが、オーロラＢ(前記文献ではオーロラ１とも称される)およびオーロラＣ(前記文献ではオーロラ３とも称される)である。オーロラキナーゼは、高度に相同的な触媒ドメインを有するが、それらのＮ末端部がかなり異なっている（Ｋａｔａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．（２００３）２２（４），４５１−６４）。
【０００７】
オーロラキナーゼＡおよびＢの基質は、キネシン様モーター蛋白質、紡錘体装置蛋白質、ヒストンＨ３蛋白質、動原体蛋白質、および腫瘍抑制蛋白質p５３などが同定されている。
【０００８】
オーロラＡキナーゼは、紡錘体形成に関与して、それらが紡錘体結合蛋白質をリン酸化する初期Ｇ２期に中心体上に局在化するようになると考えられている（Ｐｒｉｇｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２００３）１１４，５３１−５３５）。Ｈｉｒｏｔａら（Ｃｅｌｌ，（２００３）１１４：５８５−５９８）は、オーロラＡ蛋白質キナーゼが欠如した細胞が有糸分裂に移行できないことを見出した。更に、様々な種におけるオーロラＡ遺伝子の突然変異または破壊が、中心体分離および成熟不全、紡錘体異常、ならびに染色体分配不全をはじめとし、有糸分裂異常をもたらすことが見出された（Ａｄａｍｓ，２００１）。
【０００９】
オーロラキナーゼＡは、一般に、胸腺および精巣など、分裂細胞を高い割合で有する組織を除き、大部分の正常組織において低レベルで発現される。しかしオーロラキナーゼレベルの上昇が、多くのヒト癌において見出されている（Ｇｉｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．（１９９９）１１２，３５９１およびＫａｔａｙａｍａ（２００３））。更にオーロラＡキナーゼは、多くのヒト癌において増幅されることがしばしば見出されている染色体２０q１３領域に位置する。
【００１０】
こうして、例えば著しいオーロラＡ過剰発現は、ヒト乳癌、卵巣癌、および膵臓癌において検出されている(Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．（１９９８）２０，１８９−１９３；Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９９）５９，２０４１−２０４４およびＨａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００２）６２，２８９０−２８９６参照)。
【００１１】
その上、Ｉｓｏｌａ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（１９９５）１４７，９０５−９１１）は、オーロラＡ遺伝子座(２０ｑ１３)の増幅が、リンパ節転移陰性の乳癌患者に関する予後不良と相関することを報告している。
【００１２】
オーロラＡの増幅および／または過剰発現は、ヒト膀胱癌において観察され、オーロラＡの増幅は、異数性および攻撃的臨床挙動と関連する（Ｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（２００２）９４，１３２０−１３２９参照)。
【００１３】
オーロラＡの発現増加は、大腸癌(Ｂｉｓｃｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９８）１７，３０５２−３０６５およびＴａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０００）９１，１００７−１０１４参照）、卵巣癌(Ｇｒｉｔｓｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００３）９，１４２０−１４２６参照）、および胃腫瘍(Ｓａｋａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（２００１）８４，８２４−８３１参照）において５０％を超えて検出されている。
【００１４】
Ｔａｎａｋａら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）５９：２０４１−２０４４）は、浸潤性乳腺導管腺癌の９４％においてオーロラＡの過剰発現に関する証拠を見出した。
【００１５】
高レベルのオーロラＡキナーゼは、腎腫瘍、頸部腫瘍、神経芽細胞腫、黒色腫、リンパ腫、膵臓腫瘍、および前立腺腫瘍細胞株においても見出されている（Ｂｉｓｃｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８），ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９８）１７，３０５２−３０６５；Ｋｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）２７４，７３３４−７３４０；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０：１８９−１９３（１９９８）；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９（３）：９９１−７（２００３））。
【００１６】
Ｒｏｙｃｅら（Ｃａｎｃｅｒ．（２００４）１００（１），１２−１９）は、オーロラ２遺伝子(ＳＴＫ１５またはＢＴＡＫとして公知)の発現が原発性乳房腫瘍のおよそ１／４において認められたことを報告している。
【００１７】
Ｒｅｉｃｈａｒｄｔら（Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．（２００３）１０（５）１２７５−９）は、神経膠腫におけるオーロラ増幅を調査するためのＰＣＲによる定量的ＤＮＡ分析で、ＷＨＯグレードが異なる(１×グレードII、１×グレードIII、３×グレードIV) １６の腫瘍のうち５ (３１％)がオーロラ２遺伝子のＤＮＡ増幅を示すことが明らかになったことを報告している。オーロラ２遺伝子の増幅が、ヒト神経膠腫における非ランダムの遺伝子変化で、腫瘍形成の遺伝子経路において役割を担う可能性が推定された。
【００１８】
Ｈａｍａｄａら（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．（２００３）１２１（３），４３９−４７）による結果からも、オーロラ２が非ホジキンリンパ腫の疾患活性だけでなく腫瘍形成も示す効果的な候補物質であることが示唆される。この遺伝子機能の制限から得られた腫瘍細胞増殖の遅延が、非ホジキンリンパ腫の治療的アプローチになる可能性がある。
【００１９】
Ｇｒｉｔｓｋｏら（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００３）９（４），１４２０−６）による研究において、オーロラＡのキナーゼ活性および蛋白質レベルが、原発性卵巣腫瘍の患者９２名で検査された。インビトロでのキナーゼ分析により、４４の症例(４８％)でオーロラＡキナーゼ活性の上昇が明らとなった。オーロラＡ蛋白質レベルの上昇は、５２(５７％)の標本で検出された。オーロラＡの高い蛋白質レベルは、キナーゼ活性の上昇と十分に相関した。
【００２０】
Ｌｉら（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３  Ｍａｒ；９（３）：９９１−７）により得られた結果から、オーロラＡ遺伝子が膵臓腫瘍および癌細胞株において過剰発現されることを示されており、オーロラＡの過剰発現が膵臓癌発症での役割を担い得ることが示唆される。
【００２１】
同様に、オーロラＡ遺伝子増幅、およびそれがコードする分裂期キナーゼの関連的な発現増加が、ヒト膀胱癌における異数性および攻撃的臨床挙動と関連することが示された（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（２００２）９４（１７），１３２０−９）。
【００２２】
幾つかのグループ（Ｄｕｔｅｒｔｒｅ  ａｎｄ  Ｐｒｉｇｅｎｔ，Ｍｏｌ．Ｉｎｔｅｒｖ．（２００３）３（３），１２７−３０およびＡｎａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．（２００３）３（１），５１−６２）による研究から、オーロラキナーゼ活性の過剰発現が現行の一部の癌治療への耐性と関連することが示唆される。例えば、マウス胚線維芽細胞におけるオーロラＡの過剰発現は、タキサン誘導体の細胞毒性作用に対するこれらの細胞の感受性を低下させ得る。それゆえオーロラキナーゼ阻害剤は、既存の治療への耐性を発現させた患者において特定の用途を見出し得る。
【００２３】
今日まで実施された研究に基づけば、オーロラＡキナーゼの阻害が、腫瘍発生を停止させる有効な手段であることが予想される。
【００２４】
正常細胞に比較して、腫瘍細胞においてオーロラＢの発現が増加することも示された（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｒｏｍａｓｏｍａ．（２００１）１１０，６５−７４）。１つの報告から、オーロラＢの過剰発現が、セリン１０にあるヒストンＨ３のリン酸化増加を介して異数性を誘導すること、およびオーロラＢを過剰発現する細胞がより攻撃的な腫瘍を形成し、転移性腫瘍を形成する傾向がより高いことが示唆される（Ｏｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００２）６２，５１６８−５１７７）。
【００２５】
オーロラＢは、ヒト細胞において紡錘体チェックポイント機能と中期染色体配置の両方に必要となる（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００１）１５３，８６５−８８０；Ｋａｌｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．（２００２）１２，９００−９０５およびＭｕｒａｔａ−Ｈｏｒｉ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ  Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．（２００２）１２，８９４−８９９）。オーロラＢキナーゼ活性の抑制が染色体配置、紡錘体チェックポイント機能および細胞質分裂を損傷することが実証された（Ｄｉｔｃｈｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００３）１６１，２６７−２８０およびＨａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００３），１６１，２８１−２９４）。その結果、若干の遅延の後、細胞は分裂を行わず４Ｎ  ＤＮＡ量で有糸分裂を終了し、増殖能力を急速に喪失する。
【００２６】
Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．（２００４）１０（３），２６２−７）は、オーロラキナーゼの阻害剤が、インビボで腫瘍増殖を抑制し、腫瘍退縮を誘発することを実証した。その研究では、オーロラキナーゼ阻害剤が、癌細胞増殖を遮断し、そしてまた白血病細胞株、大腸細胞株および乳房細胞株をはじめとする一定範囲の癌細胞株の細胞死も惹起した。加えてそれは、白血病細胞のアポトーシスを誘発することによる白血病処置の可能性を示した。ＶＸ‐６８０は、患者から得られた治療抵抗性の原発性急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)細胞を強力に死滅させた（Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００５）２４，５００５−５０１５）。
【００２７】
Ｍａｎｆｒｅｄｉら（ＰＮＡＳ（２００７）１０４，４１０６−４１１１） は、オーロラＡの小分子阻害剤がインビボで腫瘍の増殖を抑制することを実証した。この研究では、用量依存的な腫瘍増殖阻害が、ベヒクル処置マウスに対してＨＣＴ−１１６担腫瘍マウスおよびＰＣ−３担腫瘍マウスにおいて実証された。ＨＣＴ−１１６細胞異種移植片に対して最大８４％、そしてＰＣ−３細胞異種色変異体して最大９３％の腫瘍増殖阻害が、観察された。
【００２８】
Ｍｏｒｔｌｏｃｋら（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）１３（１２），３６８２−３６８８）は、オーロラＢの小分子阻害剤がインビボで腫瘍増殖を抑制することを実証した。樹立されたＳＷ６２０、ＨＣＴ−１１６、Ｃｏｌｏ２０５、Ａ５４９、Ｃａｌｕ−６またはＨＬ−６０腫瘍異種移植片を担持する免疫欠損マウスに、皮下ミニポンプ輸注により小分子阻害剤ＡＺＤ１１５２を４８時間かけて投与した。全例での腫瘍増殖の阻害は、５５％〜１００％の範囲内であり、完全な腫瘍退縮が、ＨＬ−６０異種移植片を担持する動物１１匹中８匹で観察された。
【００２９】
今日までに得られた証拠に基づけば、オーロラキナーゼ阻害剤が、腫瘍発生を停止させて、乳癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、非ホジキンリンパ腫、神経膠腫、非類内膜子宮内膜癌、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、Ｂ細胞リンパ腫(マントル細胞)、および急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)などの癌を処置するのに特に有用になるはずであると判断される。
【００３０】
ＦＬＴ３
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、造血および非造血細胞の増殖、分化およびアポトーシスに関与する受容体チロシンキナーゼである（Ｓｃｈｅｉｊｅｎ  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００２）２１，３３１４−３３３３およびＲｅｉｌｌｙ，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２００２）１１６，７４４−７５７）。天然のリガンド（ＦＬ）が結合する結果、ＦＬＴ３受容体は二量体化して、そのチロシンキナーゼドメインが活性化し、受容体が自己リン酸化して、ＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール３キナーゼ）のｐ８５サブユニット、ＰＬＣ−γ（ホスホリパーゼ−Ｃγ）、ＳＴＡＴ５ａ（シグナル伝達兼転写活性化因子５ａ）およびＳＲＣファミリーチロシンキナーゼなどの下流のシグナル伝達分子が動員される（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（５），１５３２−４２；Ｄｒｅｘｌｅｒ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（１９９６）１０（４），５８８−９９およびＲａｖａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００３）９（２），５３５−５０）。
【００３１】
リン酸化によるこれらの下流シグナル伝達分子の活性化が、ＦＬＴ３の増殖および生存促進作用を誘導する（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ（２００２）およびＬｅｖｉｓ  ａｎｄ  Ｓｍａｌｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２００３）１７（９），１７３８−５２）。
【００３２】
受容体の膜近接領域に遺伝子内縦列重複を含む、または活性化ループ内のＤ８３５の点突然変異による、ＦＬＴ３の体細胞突然変異が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（未熟な骨髄白血球細胞の過剰産生により誘発される白血球の癌）の患者のおよそ３０％で実証された（Ｎａｋａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（１９９６）１０（１２），１９１１−８；Ｔｈｉｅｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００２）９９（１２），４３２６−３５；Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００１）９７（８），２４３４−９；Ａｂｕ−Ｄｕｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．（２０００）１１１（１），  １９０−５およびＡｂｕ−Ｄｕｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．（２００１）１１３（４），９８３−８）。
【００３３】
ＡＭＬにおける白血病性形質転換に寄与するＦＬＴ３の他のリガンド非依存性活性化突然変異が、近年になり記載された。診断の際にそのような突然変異が存在することが、一部の患者における予後不良に関連づけられた（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００４）１０４（６），１８５５−８およびＫｉｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（１），３３５−４０）。
【００３４】
本発明者らの以前の国際特許出願ＷＯ２００８／１３９１６１号に、置換されたオキサゾールカルボキサミドの一分類が、様々なキナーゼ、特にオーロラキナーゼ、ＦＬＴ３キナーゼおよびＦＬＴ４キナーゼの阻害剤として開示されている。
【００３５】
ＷＯ２００８／１３９１６１号のｐ１３２の実施例Ｍ−１２に、以下に示された構造式を有する化合物２−（１Ｈ−インドル−４−イル）−５−（４−ピペラジン−１−イル−フェニル）−オキサゾール−４−カルボン酸アミドの調製が記載される。
【化１】
0006034880.tif 000002
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３６】
発明の概要
ピペラジン環の３−位のＣＨ２部分がＣ（ＣＨ３）２部分で置き換えられている、先に記載された化合物の類似体が、先のＷＯ特許の実施例Ｍ−１２の化合物と比較して、オーロラＡキナーゼ、オーロラＢキナーゼおよびＦＬＴ３キナーゼから選択される１種以上のキナーゼに対して実質的に高い能力を有し、低いエフラックス傾向を有することが、ここに見出された。同じく、オーロラキナーゼに対する該化合物の能力がインドール基上での置換基の存在により更に実質的に高められることが、見出された。
【課題を解決するための手段】
【００３７】
したがって、第一の実施形態（実施形態１．１）において本発明は、式（１）：
【化２】
0006034880.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、水素またはＣ１−２アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの２つ以下が、水素以外であることを条件に、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、同一または異なっており、それぞれ水素、Ｃ１−２アルキル、フッ素、塩素、Ｃ１−２アルコキシおよびトリフルオロメチルから選択される）を有する化合物、およびその塩を提供する。
【００３８】
本発明の特別の化合物および好ましい化合物は、以下の実施形態１．２〜１．３３に定義された通りである。
【００３９】
１．２  Ｒ１が水素およびメチルから選択される、実施形態１．１による化合物。 
【００４０】
１．３  Ｒ１が水素である、実施形態１．２による化合物。
【００４１】
１．４  Ｒ１がメチルである、実施形態１．２による化合物。
【００４２】
１．５  Ｒ２が水素、フッ素、塩素、メチル、エチル、トリフルオロメチルおよびメトキシから選択される、実施形態１．１〜１．４のいずれか１つによる化合物。
【００４３】
１．６  Ｒ２が水素、フッ素、塩素、メチル、エチルおよびメトキシから選択される、実施形態１．１〜１．４のいずれか１つによる化合物。
【００４４】
１．６Ａ  Ｒ２が水素、フッ素、塩素、メチルおよびメトキシから選択される、実施形態１．６による化合物。
【００４５】
１．７  Ｒ２が水素である、実施形態１．５による化合物。
【００４６】
１．８  Ｒ２がフッ素である、実施形態１．５による化合物。
【００４７】
１．９  Ｒ２が塩素である、実施形態１．５による化合物。
【００４８】
１．１０  Ｒ２がメチルである、実施形態１．５による化合物。
【００４９】
１．１１  Ｒ２がエチルである、実施形態１．５による化合物。
【００５０】
１．１２  Ｒ２がメトキシである、実施形態１．５による化合物。
【００５１】
１．１３  Ｒ２がトリフルオロメチルである、実施形態１．５による化合物。
【００５２】
１．１４   Ｒ３が水素およびフッ素から選択される、実施形態１．１〜１．１３のいずれか１つによる化合物。
【００５３】
１．１５  Ｒ３が水素である、実施形態１．１４による化合物。
【００５４】
１．１６  Ｒ４が水素、フッ素、メチルおよびエチルから選択される、実施形態１．１〜１．１５のいずれか１つによる化合物。 
【００５５】
１．１７  Ｒ４が水素である、実施形態１．１６による化合物。
【００５６】
１．１８  Ｒ４がフッ素、メチル、およびエチルから選択され、Ｒ２およびＲ３の一方が水素である、実施形態１．１６による化合物。
【００５７】
１．１９  Ｒ３が水素である、実施形態１．１８による化合物。
【００５８】
１．２０  Ｒ４がフッ素である、実施形態１．１８または実施形態１．１９による化合物。
【００５９】
１．２１  Ｒ４がメチルである、実施形態１．１８または実施形態１．１９による化合物。
【００６０】
１．２２  Ｒ４がエチルである、実施形態１．１８または実施形態１．１９による化合物。
【００６１】
１．２２Ａ  Ｒ１が水素であり；Ｒ２が水素、メチル、エチル、フルオロ、クロロおよびメトキシから選択され；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が水素、フルオロおよびメチルから選択される、実施形態１．１による化合物。
【００６２】
１．２３  （ｉ）Ｒ１が水素であり；Ｒ２がメチル、エチル、フルオロ、クロロおよびメトキシから選択され；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が水素であるか、または（ii）Ｒ１が水素であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４がメチルであるか、または（iii）Ｒ１が水素であり；Ｒ２がフルオロであり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４がメチルである、実施形態１．２２Ａによる化合物。
【００６３】
１．２４  以下の表１の化合物Ｅｘ．１〜Ｅｘ．１２から選択される、実施形態１．１による化合物、およびその塩。
【表１】
0006034880.tif 000004
【００６４】
１．２５  表１の化合物Ｅｘ．２、Ｅｘ．３、Ｅｘ．５およびＥｘ．７から選択される実施形態１．２４による化合物、およびその塩。
【００６５】
１．２６  化合物Ｅｘ．２である、実施形態１．２５による化合物、またはその塩。
【００６６】
１．２７  化合物Ｅｘ．３である、実施形態１．２５による化合物、またはその塩。
【００６７】
１．２８  化合物Ｅｘ．５である、実施形態１．２５による化合物、またはその塩。
【００６８】
１．２９  化合物Ｅｘ．７である、実施形態１．２５による化合物、またはその塩。
【００６９】
１．３０  遊離塩基の形態である、実施形態１．１〜１．２９のいずれか１つによる化合物。
【００７０】
１．３１  塩の形態である、実施形態１．１〜１．２９のいずれか１つによる化合物。
【００７１】
１．３２  前記塩が酸付加塩である、実施形態１．３１による化合物。
【００７２】
１．３３  前記塩が薬学的に許容し得る塩である、実施形態１．３１または実施形態１．３１による化合物。
【００７３】
一般的好適性および定義
本明細書におけるキナーゼの言及は、該当するキナーゼの通常の機能形態だけでなく、その突然変異体形態も包含する。
【００７４】
本明細書において用いられる、キナーゼの活性に適用される用語「モジュレーション」は、キナーゼ（複数可）の生物学的活性レベルの変動を定義するものとする。つまりモジュレーションは、関連のキナーゼ活性の上昇または低下を実行する生理学的変動を包含する。後者の場合、モジュレーションは、「阻害」と記載してもよい。
【００７５】
本明細書でキナーゼに関連して用いられる用語「アップレギュレーション」は、キナーゼの発現増加または過剰発現を含むこと、転写作用による遺伝子増幅（即ち、複数の遺伝子コピー）および発現増加を含むこと、ならびに突然変異による活性化を含むキナーゼの過剰活性化および活性化と定義される。
【００７６】
用語「介在される」が適用される様々な疾患状況または状態が、該当するキナーゼ（またはその突然変異形態）により生物学的役割を担われる疾患状況または状態であるように、本明細書における、特定のキナーゼにより「介在される」疾患状況または状態の言及は、限定的に作用するものとする。キナーゼが担う生物学的役割は、直接的または間接的になり得、疾患、状況または状態の症状発現（またはその因果関係または進行）に必須になり得、そして／または十分になり得る。
【００７７】
塩
本発明の化合物は、塩の形態で存在してもよい。
【００７８】
塩（実施形態１．３１〜１．３３に定義）は、典型的には酸付加塩である。
【００７９】
塩は、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，  Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ（編集），Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編集），ＩＳＢＮ：３−９０６３９−０２６−８，Ｈａｒｄｃｏｖｅｒ，３８８ページ，２００２年８月」に記載された方法などの従来の化学的方法により、親化合物から合成することができる。一般にこのような塩は、該化合物の遊離塩基形態を、水もしくは有機溶媒、またはそれら２種の混合物中で酸と反応させることにより調製することができ、一般にはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が用いられる。
【００８０】
酸付加塩（実施形態１．３２に定義）は、非常に様々な無機および有機の両方の酸で形成することができる。酸付加塩の例としては、酢酸、２,２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸(例えば、Ｌ−アスコルビン酸)、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ブタン酸、(＋)樟脳酸、カンファー−スルホン酸、(＋)−(１Ｓ)−カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１,２−二スルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、グルクロン酸(例えば、Ｄ−グルクロン酸)、グルタミン酸(例えば、Ｌ−グルタミン酸)、α−オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、イセチオン酸、(＋)−Ｌ−乳酸、(±)−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、(−)−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、(±)−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１,５−二スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、(＋)−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデシレン酸および吉草酸からなる群より選択される酸、ならびにアシル化アミノ酸および陽イオン交換樹脂により形成される塩が挙げられる。
【００８１】
本発明の化合物の塩形態は、典型的には薬学的に許容し得る塩であり、薬学的に許容し得る塩の例は、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７，”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．６６，ｐｐ．１−１９に議論される。しかし薬学的に許容し得ない塩も、中間体形態として調製することができ、それをその後、薬学的に許容し得る塩に変換することができる。例えば本発明の化合物の精製または分離において、有用となり得るこのような非薬学的に許容し得る塩形態も、本発明の一部を形成する。
【００８２】
同位体
実施形態１．１〜１．３３のいずれか１つに定義された本発明の化合物は、１種以上の同位体置換を含んでいてもよく、特定の元素の言及は、その範囲内にその元素の同位体全てを含む。例えば水素の言及は、その範囲内に、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、および３Ｈ（Ｔ）を含む。同様に炭素および酸素の言及は、それらの範囲内に、それぞれ１２Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃ、ならびに１６Ｏおよび１８Ｏを含む。
【００８３】
類似の手法で特定の官能基の言及は、他に断りがなければ、その範囲内に同位性の変異体も含む。  
【００８４】
例えばエチル基などのアルキル基の言及は、例えば５個の水素原子全てがジューテリウム同位体形態であるエチル基（ペルジューテロエチル基）と同様に、基内の水素原子１つ以上がジューテリウムまたはトリチウム同位体の形態である変異体も含む。
【００８５】
同位体は、放射性または非放射性であってもよい。本発明の一実施形態（実施形態１．３４）において、実施形態１．１〜１．３３のいずれか１つの化合物は、放射性同位体を全く含まない。このような化合物は、治療的使用に好ましい。しかし別の実施形態（実施形態１．３５）において、実施形態１．１〜１．３３のいずれか１つの化合物は、１つ以上の放射性同位体を含み得る。このような放射性同位体を含む化合物は、診断関連に有用となり得る。
【００８６】
溶媒和物
実施形態１．１〜１．３５のいずれか１つに定義された式（Ｉ）で示される化合物は、溶媒和物を形成していてもよい。
【００８７】
好ましい溶媒和物は、本発明の化合物の固体状態の構造（例えば、結晶構造）に、非毒性の薬学的に許容し得る溶媒（以後、溶媒和溶媒と称する）の分子を組み込むことにより形成された溶媒和物である。そのような溶媒の例としては、水、アルコール（エタノール、イソプロパノールおよびブタノールなど）およびジメチルスルホキシドが挙げられる。本発明の化合物を溶媒和溶媒を含む溶媒または溶媒混合物と共に再結晶化することにより、溶媒を調製することができる。任意の付与の例において、溶媒和物が形成されているか否かは、熱重量分析（ＴＥＧ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）およびＸ線結晶解析などの周知の技術および標準の技術を用いた分析に該化合物の結晶を供することにより、決定することができる。
【００８８】
溶媒和物は、化学量論的または非化学量論的溶媒和物であってもよい。
【００８９】
特に好ましい溶媒和物は、水和物であり、水和物の例としては、半水和物、一水和物および二水和物が挙げられる。
【００９０】
したがって更なる実施形態１．３６および１．３７において、本発明は、以下のものを提供する。
【００９１】
１．３６  溶媒和物の形態の、実施形態１．１〜１．３５のいずれか１つによる化合物。
【００９２】
１．３７  前記溶媒和物が水和物である、実施形態１．３６による化合物。
【００９３】
溶媒和物のより詳細な議論、ならびにそれを生成および特徴づけするために用いられる方法については、１９９９年に米国インディアナ州ウェストラファイエット所在のＳＳＣＩ，Ｉｎｃにより発行されたＢｒｙｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ  ０−９６７−０６７１０−３を参照されたい。
【００９４】
あるいは本発明の化合物は、水和物として存在するのではなくむしろ無水物であってもよい。それゆえ別の実施形態（実施形態１．３８）において、本発明は、実施形態１．１〜１．３５のいずれか１つに定義された化合物を無水形態で提供する。 
【００９５】
結晶および非晶質形態
実施形態１．１〜１．３８のいずれか１つの化合物は、結晶または非結晶（例えば、非晶質）状態で存在してもよい。
【００９６】
化合物が結晶状態で存在するか否かは、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）などの標準技術により即座に決定することができる。
【００９７】
結晶およびその結晶構造は、単結晶Ｘ線結晶解析、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量分析（ＤＳＣ）および赤外線分光法、例えばフーリエ変換赤外線分光法（ＦＴＩＲ）をはじめとする多数の技術を利用して特徴づけることができる。様々な湿度の条件下での結晶の挙動を、重量測定による水蒸気収着試験、およびＸＲＰＤによって分析することができる。
【００９８】
化合物の結晶構造の測定は、Ｘ線結晶解析により実施することができ、それは本明細書に記載されたような従来法に従い、そしてＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ｃ．Ｇｉａｃｏｖａｚｚｏ，Ｈ．Ｌ．Ｍｏｎａｃｏ，Ｄ．Ｖｉｔｅｒｂｏ，Ｆ．Ｓｃｏｒｄａｒｉ，Ｇ．Ｇｉｌｌｉ，Ｇ．Ｚａｎｏｔｔｉ  ａｎｄ  Ｍ．Ｃａｔｔｉ，（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ／Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９２  ＩＳＢＮ  ０−１９−８５５５７８−４（ｐ／ｂ），０−１９−８５５７９−２  （ｈ／ｂ）)に記載された通り実施することができる。この技術は、単結晶のＸ線回折法の分析および解釈を必要とする。
【００９９】
非晶質固体では、通常、結晶形態で存在する三次元構造が存在せず、非晶質形態で互いに関する分子の位置が、本質的にランダムである（例えば、Ｈａｎｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（１９９７），８６，１参照）。
【０１００】
したがって更なる実施形態において、本発明は、以下のものを提供する。
【０１０１】
１．３９  結晶形態である、実施形態１．１〜１．３８のいずれか１つによる化合物。 
【０１０２】
１．４０  （ａ）５０％〜１００％の結晶である、より特別には少なくとも５０％の結晶、または少なくとも６０％の結晶、または少なくとも７０％の結晶、または少なくとも８０％の結晶、または少なくとも９０％の結晶、または少なくとも９５％の結晶、または少なくとも９８％の結晶、または少なくとも９９％の結晶、または少なくとも９９．５％の結晶、または少なくとも９９．９％の結晶、例えば１００％の結晶である、 実施形態１．１〜１．３８のいずれか１つによる化合物。
【０１０３】
１．４１  非晶質形態である、実施形態１．１〜１．３８のいずれか１つによる化合物。 
【０１０４】
プロドラッグ
実施形態１．１〜１．４１のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物は、プロドラッグの形態で提供されてもよい。「プロドラッグ」は、例えばインビボで実施形態１．１〜１．４１のいずれか１つに定義された式（１）で示される生物学的活性化合物に変換される任意の化合物を意味する。
【０１０５】
例えば幾つかのプロドラッグは、活性化合物のエステル（例えば、生理学的に許容し得る代謝的に不安定なエステル）である。代謝の間に、エステル基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ）が切断されて、活性薬を生成する。このようなエステルは、例えば、適宜、親化合物中に存在する任意の他の反応基をあらかじめ保護し、その後必要に応じて脱保護して、例えば親化合物中に存在する任意のヒドロキシル基をエステル化することにより形成され得る。
【０１０６】
同じく幾つかのプロドラッグは、酵素により活性化されて、活性化合物、または更なる化学反応の際に該活性化合物を生成する化合物を生成する（例えば、ＡＤＥＰＴ、ＧＤＥＰＴ、ＬＩＤＥＰＴなどのように）。例えばプロドラッグは、糖誘導体もしくは他のグリコシド抱合体であってもよく、またはアミノ酸エステル誘導体であってもよい。
【０１０７】
したがって別の実施形態（実施形態１．４２）において、本発明は、実施形態１．１〜１．４１のいずれか１つに定義された化合物が生理学的条件下でヒドロキシル基またはアミノ基を形成するように変換可能である官能基を含む、前記化合物のプロドラッグを提供する。
【０１０８】
錯体およびクラスレート
同じく、実施形態１．１〜１．４２の式（１）に包含されるものは、実施形態１．１〜１．４２の化合物の錯体（例えば、シクロデキストリンなどの化合物の包接錯体もしくはクラスレート、または金属の錯体）である。
【０１０９】
したがって別の実施形態（実施形態１．４３）において、本発明は、錯体またはクラスレートの形態の、実施形態１．１〜１．４２のいずれか１つによる化合物を提供する。
【０１１０】
生物学的活性
本発明の化合物は、様々な治療的用途を有する。
【０１１１】
したがって別の実施形態（実施形態２．１）において、本発明は、薬品内で使用するための、実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物を提供する。
【０１１２】
より詳細には本発明の化合物は、キナーゼ、例えばＦＬＴ３キナーゼ、ならびにオーロラキナーゼＡおよびオーロラキナーゼＢなどのオーロラキナーゼの阻害剤である。
【０１１３】
それゆえ更なる実施形態（２．２〜２．１４）において、本発明は、以下のものを提供する。
【０１１４】
２．２  ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）により介在される疾患状況または状態の予防または処置に使用するための実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例。
【０１１５】
２．３  ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）の異常な発現（例えば、過剰発現）を特徴とする疾患状況または状態の予防または処置に使用するための、実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例。
【０１１６】
２．４  ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）により介在される疾患状況または状態の予防または処置用の薬剤を製造するための、実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例の使用。
【０１１７】
２．５  ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）の異常な発現（例えば、過剰発現）を特徴とする疾患状況または状態の予防または処置用の薬剤を製造するための、実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例の使用。
【０１１８】
２．６  実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例を、必要とする対象に投与することを含む、ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）により介在される疾患状況または状態の予防または処置の方法。
【０１１９】
２．７  実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例を、必要とする対象に投与することを含む、ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）の異常な発現（例えば、過剰発現）を特徴とする疾患状況または状態の予防または処置の方法。
【０１２０】
２．８  実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物またはその任意のサブグループもしくは例を、必要とする対象に投与することを含む、ＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢなど）により介在される疾患状況または状態の罹患率を軽減または低減する方法。
【０１２１】
２．９  疾患状況もしくは状態がＦＬＴ３キナーゼにより介在されるもの、またはＦＬＴ３キナーゼの異常な発現（例えば、過剰発現）を特徴とするものである、実施形態２．１〜２．８のいずれか１つに使用するための化合物、その使用または方法。
【０１２２】
２．１０  疾患状況もしくは状態がオーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡまたはオーロラＢキナーゼ）により介在されるもの、またはオーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡまたはオーロラＢキナーゼ）の異常な発現（例えば、過剰発現）を特徴とするものである、実施形態２．１〜２．８のいずれか１つに使用するための化合物、その使用または方法。 
【０１２３】
２．１１  ＦＬＴ３キナーゼを、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示されるキナーゼ阻害化合物、またはその任意のサブグループもしくは例と接触させることを含む、ＦＬＴ３キナーゼを阻害する方法。
【０１２４】
２．１２  オーロラキナーゼ（例えば、オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢ）を、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示されるキナーゼ阻害化合物、またはその任意のサブグループもしくは例と接触させることを含む、オーロラキナーゼを阻害する方法。
【０１２５】
２．１３  実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例を用いて、ＦＬＴ３キナーゼの活性を阻害することにより、細胞内プロセス（例えば、細胞分裂）をモジュレートする方法。 
【０１２６】
２．１４  実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例を用いて、オーロラキナーゼ（例えば、オーロラキナーゼＡまたはオーロラキナーゼＢ）の活性を阻害することにより、細胞内プロセス（例えば、細胞分裂）をモジュレートする方法。
【０１２７】
ＦＬＴ３キナーゼおよびオーロラキナーゼをモジュレートする、詳細には阻害することにおけるそれらの活性の結果として、それらは、癌などの増殖性障害を処置または防御することに有用となることが予測される。
【０１２８】
したがって更なる実施形態（実施形態２．１５〜２．２８）において、本発明は、以下のものを更に提供する。
【０１２９】
２．１５  癌などの増殖性障害の予防または処置に使用するための、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例。
【０１３０】
２．１６  癌などの増殖性障害を処置または防御することに使用する薬剤を製造するための、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例の使用。
【０１３１】
２．１７  実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例を、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することを含む、対象における癌などの増殖性疾患を処置する方法。
【０１３２】
２．１８  異常な細胞増殖を含む、またはそれにより生ずる疾患または状態の予防または処置において使用するための、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例。
【０１３３】
２．１９  異常な細胞増殖を含む、またはそれにより生ずる疾患または状態の予防または処置において使用する薬剤の製造のための、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例の使用。
【０１３４】
２．２０  異常な細胞増殖を阻害することに効果的な量の、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における異常な細胞増殖を含む、またはそれを生ずる疾患または状態を処置する方法。
【０１３５】
２．２１  異常な細胞増殖を阻害することに効果的な量の、実施例１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物、またはその任意のサブグループもしくは例を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における異常な細胞増殖を含む、またはそれを生ずる疾患または状態の罹患率を軽減または低減する方法。
【０１３６】
２．２２  前記増殖性疾患が、癌腫、例えば膀胱癌、乳癌、結腸癌(例えば、結腸腺癌および結腸腺腫のような大腸癌)、腎臓癌、表皮癌、肝臓癌、肺癌、例えば腺癌、小細胞性肺癌および非小細胞性肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、例えば外分泌膵臓癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌または皮膚癌、例えば扁平上皮癌；リンパ系の造血系腫瘍、例えば白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫またはバーケットリンパ腫；骨髄系の造血系腫瘍、例えば急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群または前骨髄球性白血病；甲状腺瀘胞癌；間葉由来の腫瘍、例えば線維肉腫または横紋筋肉腫；中枢または末梢神経系の腫瘍、例えば星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫または神経鞘腫；黒色腫；精上皮腫；奇形癌；骨肉腫；色素性乾皮症；角化棘細胞種；甲状腺濾胞癌；またはカポジ肉腫から選択される癌である、実施形態２．１５〜２．１７のいずれか１つに定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１３７】
２．２３  癌がオーロラＡキナーゼの阻害を受け易いものであり、乳癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌および子宮癌、非ホジキンリンパ腫、肉芽腫、子宮内膜の非類内膜癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞リンパ腫（マントル細胞）、および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）から選択される、実施形態２．２２に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１３８】
２．２４  癌がオーロラＢキナーゼの阻害を受け易いものであり、大腸癌、肺癌、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病および急性好酸球性白血病から選択される、実施形態２．２２に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１３９】
２．２５  癌がＦＬＴ３キナーゼの阻害を受け易いものであり、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、実施形態２．２２に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１４０】
２．２６  ＡＭＬがＦＬＴ３の体細胞突然変異または点突然変異を有する患者に関連する、実施形態２．２５に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１４１】
２．２７  ＡＭＬがＦＬＴ３受容体の膜近接領域に遺伝子内縦列重複を含むＦＬＴ３の体細胞突然変異を有する患者に関連する、実施形態２．２６に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１４２】
２．２８  ＡＭＬがＦＬＴ３の活性化ループにおいてＤ８３５の点突然変異を有する患者に関連する、実施形態２．２６に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１４３】
２．２９  増殖性疾患が造血系腫瘍である、実施形態２．２２に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１４４】
２．３０  造血系腫瘍が急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される、実施形態２．２９に定義された使用のための化合物、使用または方法。
【０１４５】
特定の癌がオーロラキナーゼまたはＦＬＴ３キナーゼによる阻害に感受性のあるものであるか否かは、細胞増殖アッセイ、例えば以下の実施例に記載されたアッセイまたは「診断の方法」という題目の部分に示された方法により、決定することができる。
【０１４６】
本発明の化合物のキナーゼ阻害剤としての活性は、以下の実施例に示されたアッセイを用いて測定することができ、所与の化合物により示された活性レベルは、ＩＣ５０値に関連して定義することができる。本発明の好ましい化合物は、０．０１μＭ未満、より好ましくは０．００５μＭ未満のＩＣ５０値を有する化合物である。
【０１４７】
本発明の化合物の調製方法
別の態様（実施形態３．１）において、本発明は、
（ｉ）式（１０）：
【化３】
0006034880.tif 000005
（式中、ＬＧ1は、ヨウ素または臭素（最も典型的にはヨウ素）であり、ＤＭＢは、２，４−ジメトキシベンジル保護基であり、ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル保護基である）で示される化合物を鈴木カップリング反応条件下で式（１１Ａ）もしくは（１１Ｂ）で示される化合物、またはそれらの対応するボロン酸ジエステル：
【化４】
0006034880.tif 000006
（式中、ＰＧは、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基などの保護基である）と反応させ、その後、保護基ＤＭＢおよびｂｏｃを除去するか、あるいは
（ii）式（１８）：
【化５】
0006034880.tif 000007
（式中、ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである）で示される化合物をアミド形成条件下でアンモニアと反応させ、その後，ｂｏｃ基を除去すること、
を含む、実施形態１．１〜１．３５のいずれか１つに定義された化合物の調製方法を提供する。
【０１４８】
改変された工程（ｉ）において、鈴木カップリング反応条件は、典型的にはテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムまたはビス（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィン）フェロセン）パラジウムジクロリド）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２）などのパラジウム触媒および塩基（例えば、炭酸カリウムなどの炭酸塩）の存在を必要とする。反応は、極性溶媒、例えばアセトニトリルもしくはジオキサンおよびそれらの混合物、または水性エタノールなどの水性溶媒、またはジメトキシエタンなどのエーテル中で実施してもよく、反応混合物は典型的には、例えば８０℃以上の温度、例えば８０℃〜１００℃の範囲内の温度への加熱に供される。。
【０１４９】
化合物（１０）と化合物（１１Ａ）または化合物（１１Ｂ）のいずれかとのカップリング反応を実施した後、保護基が、簡便にはジクロロメタンなどの溶媒中でトリフルオロメタンスルホン酸などの酸を用いて通常は室温またはその前後で除去されてもよい。
【０１５０】
ＬＧ1 がヨウ素原子である式（１０）で示される化合物は、以下のスキーム１に示された一連の反応により調製することができる。
【０１５１】
スキーム１において、塩化ヨードベンゾイルを、例えば室温で、テトラヒドロフランなどの極性非プロトン性溶媒中、２−イソシアノ酢酸エチルと反応させて、ヨードフェニルオキサゾールエステル（１３）を与える。その後、エステル（１３）を、酢酸パラジウムなどのパラジウム化合物およびビフェニル−２−イルジシクロヘキシルホスフィンなどのホスフィンリガンドの存在下で保護されたピペラジン（１４）と反応させて、置換されたピペラジニルフェニル−オキサゾールエステル（１５）を与える。反応は典型的には、炭酸セシウムなどの塩基の存在下、トルエンなどの非プロトン性溶媒中で、通常は例えば約７０〜９０℃の温度に、穏やかに加熱しながら実施される。
【化６】
0006034880.tif 000008
【０１５２】
エステル（１５）を、メタノールおよび／またはＴＨＦなどの極性溶媒中で水酸化ナトリウムなどのアルカリ金属水酸化物を用いて加水分解して、カルボン酸（１６）を与え、その後、アミド形成条件下、例えばアミド結合の形成で一般的に用いられるタイプの試薬の存在下で、ジメトキシベンジルアミンと反応させることにより、ジメトキシベンジルアミド（１７）に変換する。そのような試薬の例としては、典型的には１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）（Ｌ．Ａ．Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９９３，１１５．４３９７）または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（Ｋｏｎｉｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１０３，７０８，２０２４−２０３４）と共に用いられる、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（Ｓｈｅｅｈａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．１９５５，７７，１０６７）および１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（本明細書ではＥＤＣまたはＥＤＣＩのいずれかと称される）（Ｓｈｅｅｈａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９６１，２６，２５２５）などのカルボジイミド系カップリング剤が挙げられる。そのような試薬の更なる例が、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）などのウロニウム系カップリング剤である。好ましいアミドカップリング剤は、ＨＡＴＵである。
【０１５３】
カップリング反応は、典型的には非干渉性塩基、例えばトリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの第三級アミンの存在下、ジメチルホルムアミドなどの非水性の非プロトン性溶媒中、室温で実施される。
【０１５４】
ジメトキシベンジルアミド（１７）を、ＴＨＦ中、リチウムヘキサメチルジシラジド（ＬｉＨＭＤＳ）を用いて低温でリチウム化し、その後、ヨウ素と反応させて、２−ヨード−オキサゾール（１０）を与える。その後、化合物（１０）は、先に記載された方法により式（１）で示される化合物に変換することができる。
【０１５５】
改変された工程（ii）において、式（１８）で示されるカルボン酸を、先に記載されたタイプのアミド形成条件下、例えばＥＤＣをＨＯＢｔと共に用いて、アンモニア（またはジメトキシベンジルアミンなどのアミノ基前駆体）と反応させる。
【０１５６】
式（１８）で示される化合物は、以下のスキーム２に示された反応系列により調製することができる。
【０１５７】
スキーム２において、エステル（１５）（先のスキーム１参照）をＴＨＦ中でヘキサメチルジシラジド（ＬｉＨＭＤＳ）と低温で反応させ、その後、ヨウ素と反応させてヨード化合物（１９）を与えることによりヨウ素化される。ヨード化合物（１９）は、その後、鈴木カップリング条件下（先を参照）で式（１１）で示されるボロン酸エステル化合物と反応させて、中間体（２０）を与え、水酸化ナトリウムを用いて加水分解して、式（１８）で示されるカルボン酸を与える。
【０１５８】
形成されたら、式（１）で示される多くの化合物は、標準的な官能基相互変換を利用して他の式（１）で示される化合物に変換することができる。
【０１５９】
官能基相互変換、ならびにこのような変換を実施するための試薬および条件の例は、例えばＪｅｒｒｙ  ＭａｒｃｈによるＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，  １１９，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｍａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒにより編集されたＦｉｅｓｅｒｓ’  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−１７，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ（ＩＳＢＮ：０−４７１−５８２８３−２）、およびＪｅｒｅｍｉａｈ  Ｐ．Ｆｒｅｅｍａｎにより編集されたＯｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−８，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ（ＩＳＢＮ：０−４７１−３１１９２−８）に見出すことができる。
【０１６０】
先に記載された反応の多くでは、１つ以上の基を保護して、反応が分子の望ましくない位置で起こるのを防ぐことが必要な場合がある。保護基の例、ならびに官能基をを保護および脱保護する方法は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｔ．Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ｗｕｔｓ；３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９)に見出すことができる。
【化７】
0006034880.tif 000009
【０１６１】
本発明の化合物は、当業者に周知の標準的技術により単離および精製することができる。該化合物を精製するのに特に有用な一技術は、クロマトグラフィーカラムから出現する精製された化合物を検出する手段として質量分析を利用した、分取液体クロマトグラフィーである。
【０１６２】
分取ＬＣ−ＭＳは、本明細書に記載された化合物などの小さな有機分子の精製に用いられる標準的かつ効果的な方法である。液体クロマトグラフィー（ＬＣ）および質量分析（ＭＳ）の方法は、粗材料のより良好な分離、およびＭＳによる試料の検出改善をもたらすように変更することができる。分取勾配ＬＣ法の最適化は、様々なカラム、揮発性溶離液および改質剤、ならびに勾配を必要とする。分取ＬＣ−ＭＳを最適化し、その後、それを用いて化合物を精製する方法は、周知である。そのような方法は、Ｒｏｓｅｎｔｒｅｔｅｒ  Ｕ，Ｈｕｂｅｒ  Ｕ．；Ｏｐｔｉｍａｌ  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ  ｉｎ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣ／ＭＳ；Ｊ  Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ．；２００４；６（２），１５９−６４、およびＬｅｉｓｔｅｒ  Ｗ，Ｓｔｒａｕｓｓ  Ｋ，Ｗｉｓｎｏｓｋｉ  Ｄ，Ｚｈａｏ  Ｚ，Ｌｉｎｄｓｌｅｙ  Ｃ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｃｕｓｔｏｍ  ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ；Ｊ  Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ．；２００３；５（３）；３２２−９に記載される。
【０１６３】
中間体化合物（１０）、（１０Ａ）および（１５）〜（２０）も、本発明の一部を形成する。したがって更なる実施形態（実施形態３．２）において、本発明は、先に記載された式（１０）、（１０Ａ）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）および（２０）で示される中間体化合物から選択される化合物を提供する。
【０１６４】
医薬配合剤
活性化合物を単独で投与することは可能であるが、少なくとも１種の本発明の活性化合物を、１種以上の薬学的に許容し得る担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、安定化剤、防腐剤、滑沢剤、または当業者に周知の他の材料、そして場合により他の治療的または予防的薬剤と共に含む医薬組成物（例えば、配合剤）として活性化合物を提供することが好ましい。
【０１６５】
したがって、別の態様（実施形態４．１）において、本発明は、実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された化合物、および薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物を提供する。
【０１６６】
本明細書で用いられる用語「薬学的に許容し得る」は、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を誘発せず、合理的なベネフィット／リスク比に適い、対象（例えば、ヒト）の組織と接触して使用されるのに適した、健全な判断の範囲内の化合物、材料、組成物、および／または投与剤型を指す。各担体、賦形剤などは、配合剤の他の原材料と適合性があるという意味で「許容し得」なければならない。
【０１６７】
医薬組成物は、経口、非経口、局所、鼻腔、眼科的、耳内、直腸内、膣内、または経皮投与に適した任意の形態であってもよい。組成物が非経口投与を意図されるものであれば、それらは静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下投与するように、または注射、輸注もしくは他の送達手段により標的臓器もしくは組織に直接送達するように配合することができる。
【０１６８】
一実施形態（実施形態４．２）において、医薬組成物は、例えば注射または輸注による、ｉ．ｖ．投与に適した形態である。
【０１６９】
別の実施形態（実施形態４．３）において、医薬組成物は、皮下（Ｓ．ｃ．）投与に適した形態である。
【０１７０】
更なる実施形態（実施形態４．４）において、医薬組成物は、経口投与に適した形態である。
【０１７１】
経口投与に適した医薬投与剤型としては、錠剤、カプセル、カプレット、丸薬、ロゼンジ、シロップ、溶液剤、粉末、顆粒、エリキシル、および懸濁剤、舌下錠、ウエハーまたはパッチ、ならびにバッカルパッチが挙げられる。
【０１７２】
式（１）で示される化合物を含む医薬組成物は、公知技術に従って配合させることができ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡを参照されたい。
【０１７３】
つまり錠剤組成物は、活性化合物と、糖または糖アルコール、例えばラクトース、スクロース、ソルビトールもしくはマンニトールなどの不活性希釈剤もしくは担体、および／または炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウムなどの非糖由来希釈剤、またはメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロースもしくはその誘導体、およびコーンスターチなどのデンプンとの単位投与剤型を含み得る。錠剤は、ポリビニルピロリドンなどの結合および造粒剤、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロースなどの膨潤性架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸塩）、防腐剤（例えば、パラベン）、抗酸化剤（例えば、ＢＨＴ）、緩衝剤（例えば、リン酸またはクエン酸緩衝液）、およびクエン酸塩／重炭酸塩混合物などの発泡剤など、標準的原材料を含んでいてもよい。そのような賦形剤は周知であり、本明細書で詳細に議論する必要はない。
【０１７４】
カプセル配合剤は、硬ゼラチンまたは軟ゼラチン類であってもよく、固体、半固体、または液体形態の活性成分を含んでいてもよい。ゼラチンカプセルは、動物性ゼラチンまたはその合成もしくは植物由来の均等物であってもよい。
【０１７５】
固体投与剤型（例えば、錠剤、カプセルなど）は、コーティングされていても、コーティングされていなくてもよいが、典型的にはコーティング、例えば保護フィルムコーティング（例えば、ワックスまたはワニス）または放出制御型コーティングを有する。コーティング（例えば、Ｅｕｄｇｒａｇｉｔ（商標）型ポリマー）は、活性成分を胃腸管内の所望の位置で放出するように設計することができる。つまりコーティングは、胃腸管内の特定のｐＨ条件下で分解し、それにより該化合物を胃、回腸、または十二指腸内で選択的に放出するように選択することができる。
【０１７６】
コーティングの代替または追加として、薬物を、放出制御剤、例えば放出遅延剤を含む固体マトリックス中で提供することができ、胃腸管内の様々な酸性またはアルカリ性の条件下で化合物を選択的に放出するように適合させることができる。あるいはマトリックス材料または放出遅延性コーティングは、該投与剤型が胃腸管内を通過すると実質的に連続して浸食される浸食性ポリマー（例えば、無水マレイン酸ポリマー）の形態をとることができる。更なる代替例として、活性化合物は、該化合物の放出の浸透圧制御をもたらす送達システム内に配合させることができる。浸透圧制御放出および他の遅延放出もしくは持続放出配合剤は、当業者に周知の方法に従って調製してもよい。
【０１７７】
局所使用のための組成物としては、軟膏、クリーム、スプレー、パッチ、ゲル、液滴および挿入物（例えば、眼内挿入物）が挙げられる。そのような組成物は、公知方法に従って配合させることができる。
【０１７８】
非経口投与用の組成物は、典型的には滅菌水性もしくは油性溶液または微粒子懸濁液として存在し、あるいは滅菌注射水で即時作製される超微粒子滅菌粉末形態で提供されてもよい。
【０１７９】
非経口投与用の組成物は、別個の投与単位として投与されるように配合されても、または輸注により投与されるように配合されてもよい。
【０１８０】
結腸または膣内投与用の配合剤の例としては、ペッサリーおよび坐剤が挙げられ、それらは例えば活性化合物を含む形作られた成形可能な材料またはワックス性材料から形成されてもよい。
【０１８１】
吸入による投与のための組成物は、吸入可能な粉末組成物または液体もしくは粉末スプレーの形態をとっていてもよく、粉末吸入デバイスまたはエアロゾル分配デバイスを用いて標準形態で投与することができる。そのようなデバイスは、周知である。吸入による投与の場合、粉末配合剤は、典型的には活性化合物をラクトースなどの不活性固体粉末希釈剤と共に含む。
【０１８２】
本発明の化合物は、一般に、単位投与剤型で存在し、そのため典型的には所望の生物学的活性レベルを提供するのに十分な化合物を含む。例えば経口投与を意図された配合剤は、有効成分を０．１ミリグラム〜２グラム、より通常には１０ミリグラム〜１グラム、例えば５０ミリグラム〜５００ミリグラム含んでいてもよい。
【０１８３】
活性化合物は、所望の治療効果を実現するのに十分な量で、必要とする患者（例えば、ヒトまたは動物の患者）に投与される。
【０１８４】
処置の方法
式（１）で示される化合物および本明細書に定義されたそのサブグループは、オーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡキナーゼまたはオーロラＢキナーゼ）により介在される一定範囲の疾患状況または状態の予防または処置に有用となることが予想される。そのような疾患状況および状態の例は、先に示されている。
【０１８５】
詳細には式（１）で示される化合物は、増殖性疾患（癌など）および骨髄増殖性障害の予防および処置に有用となることが予想される。
【０１８６】
該化合物は一般に、そのような投与を必要とする対象、例えばヒトまたは動物患者、好ましくはヒトに投与される。
【０１８７】
該化合物は、典型的には治療的または予防的に有用で一般に非毒性の量で投与される。しかし特定の状況において（例えば、生命を脅かす疾患の場合）、式（１）で示される化合物を投与する利益が、任意の毒性作用または副作用の欠点を上回る場合があり、そのような場合には、ある程度の毒性を伴う量で化合物を投与することが望ましいと判断されてもよい。
【０１８８】
該化合物は、有益な治療効果を維持するように長期間にわたり投与されてもよく、または短期間だけ投与されてもよい。あるいは該化合物は、脈動的または連続的な手法で投与されてもよい。
【０１８９】
該化合物の典型的な日用量は、１００ピコグラム〜１００ミリグラム／キログラム体重、より典型的には５ナノグラム〜２５ミリグラム／キログラム体重、より通常には１０ナノグラム〜１５ミリグラム（例えば、１０ナノグラム〜１０ミリグラム）／キログラム体重の範囲内になり得るが、必要ならば、より高用量またはより低用量を投与してもよい。結局、投与される化合物の量および用いられる組成物のタイプは、処置される疾患の性質または生理学的条件に適合させ、医師の判断に従う。
【０１９０】
式（１）で示される化合物は、単独で治療剤として投与することができ、またはそれは、特定の疾患状況、例えば本明細書の先に定義された癌などの新生物疾患を処置するために１種以上の他の化合物との併用療法で投与することができる。式（１）で示される化合物と共に（同時に、または異なる時間間隔で）投与され得る他の治療薬の例としては、非限定的に、トポイソメラーゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、ＤＮＡ結合剤および微小管阻害剤（チューブリン標的薬）、例えばシスプラチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、イリノテカン、フルダラビン、５ＦＵ、タキサン、マイトマイシンＣ、または放射線療法が挙げらる。あるいは式（１）で示される化合物は、モノクローナル抗体またはシグナル伝達阻害剤との併用療法で投与することができる。
【０１９１】
式（１）で示される化合物が、１、２、３、４またはそれを超える他の治療薬（好ましくは１または２つ、より好ましくは１つ）との併用療法で投与される場合、該化合物は、同時に、または連続して投与することができる。連続して投与される場合、それは、短い間隔で（例えば５〜１０分間にわたり）または長い間隔で（例えば、１、２、３、４時間もしくはそれを超える間隔を空けて、または必要に応じてより長い間隔を空けて）投与することができ、正確な投与レジメンは、治療薬（複数可）の特性に適合させる。
【０１９２】
本発明の化合物は、放射線療法、光線力学的治療、遺伝子治療、手術および食事制限などの非化学的な治療的処置と併用で投与されてもよい。
【０１９３】
他の化学療法剤との併用療法で用いられる場合、式（１）で示される化合物および１，２、３、４種またはそれを超える他の治療薬を、例えば２，３、４種またはそれを超える治療薬を含む投与剤型に一緒に配合させることができる。あるいは個々の治療薬を、別個に配合して、場合により使用説明書と共に、キットの形態で提供されてもよい。
【０１９４】
診断方法
式（１）で示される化合物の投与前に、患者は、罹患している、または罹患し得る疾患または状態がＦＬＴ３キナーゼまたはオーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡキナーゼまたはオーロラＢキナーゼ）に対する活性を有する化合物での処置を受け易いものであるか否かを決定するために、スクリーニングされてもよい。
【０１９５】
したがって更なる実施形態（５．１〜５．６）において、本発明は、以下のものを提供する。 
【０１９６】
５．１  スクリーニングされて、オーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡキナーゼまたはオーロラＢキナーゼ）に対する活性を有する化合物での処置を受け易い疾患または状態に罹患している、または罹患するリスクがあると決定された患者において、疾患の状況または状態の処置または予防において使用するための、本明細書の実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された式（１）で示される化合物または本明細書に定義されたその任意のサブグループもしくは例。
【０１９７】
５．２  スクリーニングされて、オーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡキナーゼまたはオーロラＢキナーゼ）に対する活性を有する化合物での処置を受け易い疾患または状態に罹患している、または罹患するリスクがあると決定された患者において、疾患の状況または状態の処置または予防用の薬剤を製造するための、本明細書の実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された化合物または本明細書に定義されたその任意のサブグループもしくは例の使用。
【０１９８】
５．３  （ｉ）患者が罹患している、または罹患し得る疾患または状態がオーロラキナーゼ（例えば、オーロラＡキナーゼまたはオーロラＢキナーゼ）に対する活性を有する化合物での処置を受け易いものであるか否かを決定するために、患者をスクリーニングすること；および（ii）患者がそのような処置を受け易い疾患または状態であることが示されれば、その後、患者に本明細書の実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された化合物または本明細書に定義されたその任意のサブグループもしくは例を投与すること、を含む、オーロラキナーゼにより介在される疾患状況または状態の診断および処置の方法。
【０１９９】
５．４  スクリーニングされて、ＦＬＴ３キナーゼに対する活性を有する化合物での処置を受け易い疾患または状態に罹患している、または罹患するリスクがあると決定された患者において、疾患の状況または状態の処置または予防に使用するための、本明細書の実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された化合物または本明細書に定義されたその任意のサブグループもしくは例。
【０２００】
５．５  スクリーニングされて、ＦＬＴ３キナーゼに対する活性を有する化合物での処置を受け易い疾患または状態に罹患している、または罹患するリスクがあると決定された患者において、疾患の状況または状態の処置または予防用の薬剤を製造するための、本明細書の実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された化合物または本明細書に定義されたその任意のサブグループもしくは例の使用。
【０２０１】
５．６  （ｉ）患者が罹患している、または罹患し得る疾患または状態がＦＬＴ３キナーゼに対する活性を有する化合物での処置を受け易いものであるか否かを決定するために、患者をスクリーニングすること；および（ii）患者がそのような処置を受け易い疾患または状態であることが示されれば、その後、患者に本明細書の実施形態１．１〜１．４３のいずれか１つに定義された化合物または本明細書に定義されたその任意のサブグループもしくは例を投与すること、を含む、ＦＬＴ３キナーゼにより介在される疾患状況または状態の診断および処置の方法。
【０２０２】
患者から採取された生物学的試料は、患者が罹患している、または罹患し得る癌などの状態または疾患が遺伝子異常（例えば、キナーゼの突然変異）またはオーロラキナーゼもしくはＦＬＴ３キナーゼの過剰発現もしくはアップレギュレーションなどの異常な蛋白質発現を特徴とするものか否かを決定するために、診断試験に供されてもよい。患者は、オーロラキナーゼもしくはＦＬＴ３キナーゼのアップレギュレーションに特徴的なマーカー、またはオーロラキナーゼもしくはＦＬＴ３キナーゼの突然変異の存在を検出するために、診断試験に供されてもよい。オーロラキナーゼまたはＦＬＴ３キナーゼのアップレギュレーションを有する腫瘍は、キナーゼ阻害剤に対して特に感受性がある場合がある。それゆえ腫瘍は、オーロラキナーゼまたはＦＬＴ３キナーゼのアップレギュレーションについて優先的にスクリーニングされてもよい。診断試験は、典型的には腫瘍生検試料、血液試料（切除された腫瘍細胞の単離および増殖）、糞便生検、唾液、染色体解析、胸膜液、腹水、または尿から選択された生物学的試料で実施される。
【０２０３】
オーロラキナーゼまたはＦＬＴ３キナーゼにおける突然変異を有する個体の同定は、患者がキナーゼ阻害剤での処置に特に適することを意味し得る。腫瘍は、処置前に変異体の存在について優先的にスクリーニングされてもよい。スクリーニング工程は、典型的には直接スクリーニング、オリゴヌクレオチドマイクロアレイ解析、または突然変異体特異性抗体を必要とする。
【０２０４】
蛋白質の突然変異およびアップレギュレーションの同定および解析の方法は、当業者に公知である。スクリーニング法としては、非限定的に、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）またはインサイチュハイブリダイゼーションなどの標準法が挙げられる。
【０２０５】
ＲＴ−ＰＣＲによるスクリーニングにおいて、腫瘍におけるｍＲＮＡレベルは、ｍＲＮＡのｃＤＮＡコピーを作製した後、ＰＣＲによりｃＤＮＡを増幅することにより評価される。ＰＣＲ増幅の方法、プライマーの選択、および増幅条件は、当業者に公知である。核酸操作およびＰＣＲは、例えばＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，編集. Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００４）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，またはＩｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．編集．ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９０）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ．に記載された標準法により実施される。核酸技術を必要とする反応および操作は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，３ｒｄ Ｅｄ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２００１）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓにも記載される。あるいはＲＴ−ＰＣＲ用に市販されるキット（例えば、 Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）が、用いられてもよく、または米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号;同第５，１９２，６５９号、同第５，２７２，０５７号、同第５，８８２，８６４号、および同第６，２１８，５２９号に示され、参照により本明細書に組み入れられる方法。
【０２０６】
ｍＲＮＡ発現を評価するためのインサイチュハイブリダイゼーション技術の例は、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）である（Ａｎｇｅｒｅｒ，１９８７  Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５２：６４９参照)。
【０２０７】
一般にインサイチュハイブリダイゼーションは、以下の主要なステップを含む：（１）分析される組織の固定；（２）標的核酸の接近性を上昇させて非特異的結合を減少させるための試料のハイブリダイゼーション前処置；（３）核酸の混合物の、生物学的構造または組織中の核酸へのハイブリダイゼーション；（４）ハイブリダイゼーションで結合されなかった核酸フラグメントを除去するためのハイブリダイゼーション後洗浄、および（５）ハイブリダイズされた核酸フラグメントの検出。そのような適用例に用いられるプローブは、典型的には例えば放射性同位体または蛍光レポーターで、標識されている。好ましいプローブは、ストリンジェントな条件下で標的核酸（複数可）との特異的なハイブリダイゼーションが可能なように、十分に長く、例えば約５０、１００、または２００ヌクレオチド〜約１０００またはそれを超えるヌクレオチドである。ＦＩＳＨを実施するための標準的方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，編集，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００４）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ、およびＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｂｙ  Ｊｏｈｎ  Ｍ．Ｓ．Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２ｎｄ  ｅｄ．；ＩＳＢＮ：１−５９２５９−７６０−２；（２００４）ｐｐｓ．０７７−０８８；Ｓｅｒｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅに記載される。
【０２０８】
あるいはｍＲＮＡから発現された蛋白質産物は、腫瘍試料の免疫組織化学的検査、マイクロタイタープレートを用いた固相免疫アッセイ、ウェスタンブロット法、二次元ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、および特異的蛋白質検出のための当該技術分野で公知の他の方法によりアッセイされてもよい。検出方法は、部位特異性抗体の使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【０２０９】
【図１】実施例１７に記載されたＭＶ４−１１異種移植マウスモデルにおいてシタラビンと比較した実施例２および７の化合物の抗腫瘍効果を示す。
【図２】ＭＶ４−１１異種移植マウスモデルにおいてシタラビンと比較した実施例２の化合物の抗腫瘍効果を示す。
【図３】ＭＶ４−１１異種移植マウスモデルにおいてシタラビンと比較した実施例７の化合物の抗腫瘍効果を示す。
【図４】ベヒクル、実施例２および７の化合物、ならびにシタラビンの投与後２９日目（最終時点）のＭＶ４−１１異種移植片担持ヌードマウスの腫瘍重量を示す。
【図５】ベヒクル、実施例２および７の化合物、ならびにシタラビンの投与後、実施例１７に記載された試験の試験期間全体でのＭＶ４−１１異種移植片担持ヌードマウスの体重変動を示す。
【発明を実施するための形態】
【０２１０】
実施例
ここに本発明を、以下の実施例に記載された具体的な実施形態を参照することにより例示するが、これは本発明を限定するものではない。
【０２１１】
実施例において、以下の略語が用いられる。
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＰＥ：石油エーテル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＳＴＭ：出発原料
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ：分取ＨＰＬＣ
【０２１２】
中間体の調製
Ａ．中間体化合物（１０Ａ）の調製
４−｛４−［４−（２，４−ジメトキシ−ベンジルカルバモイル）−２−ヨード−オキサゾール−５−イル］−フェニル）−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化８】
0006034880.tif 000010
【０２１３】
中間体化合物（１０Ａ）は、先のスキーム１に示された反応系列により調製することができる。
【０２１４】
ステップ１
５−（４−ヨード−フェニル）−オキサゾール−４−カルボン酸エチルエステル（スキーム１の化合物（１３））
ＴＨＦ  １００ｍｌ中の塩化４−ヨードベンゾイル（１４．０ｇ、０．０５２ｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１５．６ｇ、０．１５６ｍｏｌ）を滴加し、混合物を１０分間撹拌した後、２−イソシアノ酢酸エチル（６．５ｇ、０．０５８ｍｏｌ）を緩やかに添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、溶媒を除去して、残渣をＥｔＯＡｃおよび水で処理した。有機層を分離して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して溶媒を除去した。粗生成物をカラムにより精製して、表題化合物（１１．０ｇ、６１．７％）を赤橙色固体として与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ−δ７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８０−７．９０（ｍ，４Ｈ），４．４３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
【０２１５】
ステップ２
４−［４−（４−エトキシカルボニル−オキサゾル−５−イル）−フェニル］−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（スキーム１の化合物（１５））
乾燥トルエン（３００ｍＬ）中の５−（４−ヨード−フェニル）−オキサゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１１．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７．５３ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＡｃＯ）２ （５８０ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、ビフェニル−２−イルシクロヘキシルホスフィン（０．９ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２０．７ｇ、６４ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、室温で添加した。混合物を８０℃に加熱して、２４時間撹拌した。溶液を室温に放冷し、その後、水とＥｔＯＡｃとに分配させた。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して溶媒を除去し、粗生成物を与えた。それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝４０／１〜１０／１で未反応の出発原料を回収して、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝８／１〜５／１で標題化合物（６．０ｇ、４３％）を黄色固体として得た）。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＤＭＳＯ  ４００ＭＨｚ−δ８．０６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４２（ｑ，２Ｈ），３．８６（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｍ，２Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），１．５６（ｓ，９Ｈ），１．４３（ｓ，６Ｈ）
【０２１６】
ステップ３
４−｛４−［４−（２，４−ジメトキシ−ベンジルカルバモイル）−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（スキーム１の化合物（１７））
ＴＨＦ  ２０ｍＬおよびメタノール  ２０ｍＬ中の４−［４−（４−エトキシカルボニル−オキサゾル−５−イル）−フェニル］−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．４ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ  水性水酸化ナトリウム溶液（１１．２ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、その後、有機溶媒を真空除去した。残留する水性混合物を、１Ｎ水性塩酸の添加によりｐＨ４〜５に調整した。混合物を凍結乾燥して、４−［４−（４−カルボキシ−オキサゾル−５−イル）−フェニル］−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル  ３ｇをオフイエロー色（ｏｆｆ−ｙｅｌｌｏｗ）の粉末として得て、次のステップで直接使用した。
【０２１７】
４−［４−（４−カルボキシ−オキサゾル−５−イル）−フェニル］−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、ＤＭＦ  ３０ｍＬに溶解した。溶液に２，４−ジメトキシ−ベンジルアミン（１．２６ｇ、７．６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．８ｇ、７．４ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌して、溶媒を真空除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１からＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２００：１へ)により精製して、表題化合物（１．６ｇ、３ｍｍｏｌ、収率：２ステップで５４％）を与えた。
１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＭｅＯＤ）δ８．１０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．４８−６．５８（ｍ，２Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），３．８４−３．９０（ｍ，５Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｔ，２Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），１．４５（ｓ，６Ｈ）
【０２１８】
ステップ４
４−｛４−［４−（２，４−ジメトキシ−ベンジルカルバモイル）−２−ヨード−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（スキーム１の化合物（１０Ａ））
−７８℃のＴＨＦ  ２０ｍＬ中の４−｛４−［４−（２，４−ジメトキシ−ベンジルカルバモイル）−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．６ｇ、４．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳ（４４ｍＬ、４４ｍｍｏｌ）の１Ｍ溶液を添加した。混合物を０．５時間撹拌し、その後、Ｉ２（９ｇ、３５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を１５％水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３でクエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出し、水で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を真空除去して、粗生成物を与え、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２／１からＰＥ／ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ＝１／１／２へ）、標題化合物（２．４ｇ、収率：７５％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ：ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ−δ８．１６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２２−７．４７（ｍ，３Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．４１−６．４６（ｍ，３Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８２−３．８８（ｍ，５Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｔ，２Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４１（ｓ，６Ｈ）
【０２１９】
Ｂ．ボロン酸中間体の調製 
以下に示された方法に従うことにより、以下のボロン酸／ボロン酸エステル中間体Ｂ１〜Ｂ１２を調製した。
【表２】
0006034880.tif 000011
【０２２０】
中間体Ｂ−１
１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−５−フルオロ−１Ｈ−インドル−４−イルボロン酸
ステップ１
１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−５−フルオロ−１Ｈ−インドールの調製
０℃で、ＮａＨ（１．８８ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ  ４０ｍＬ中の５−フルオロ−１Ｈ−インドール（５．２ｇ、３８．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。０℃で１０分間後に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（６．９６ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を０℃で更に１時間撹拌した。混合物を室温まで昇温させて一晩撹拌し、その後、水の添加により希釈して、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６．５ｇ、６７．７％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ７．４１（ｓ，１Ｈ），７．２８−７．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４  ａｎｄ  Ｊ＝８．８），７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２），６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８），６．５８−６．５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．８  ａｎｄ  Ｊ＝３．２），０．９３（ｔ，９Ｈ），０．６０（ｔ，６Ｈ）
【０２２１】
ステップ２
１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−５−フルオロ−１Ｈ−インドル−４−イルボロン酸の調製
−７８℃のＴＨＦ中のステップ１の生成物（４．９８ｇ、２０ｍｍｏｌ）とＴＭＥＤＡ（２．３２ｇ、２０ｍｍｏｌ）との混合物に、シクロヘキサン中のｓ−ＢｕＬｉ（１５．４ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の１．３Ｍ溶液を緩やかに添加して、混合物を−７８℃で２時間撹拌した。ホウ酸トリイソプロピル（３．７６ｇ、２０ｍｍｏｌ）を−７８℃で混合物に添加し、更に１時間撹拌して、その後、−２０℃に昇温させた。水を添加して、混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して蒸発させた。残渣を再結晶化させて（ＥｔＯＡｃおよびｎ−ヘキサン）、標題化合物（１．２ｇ、２０．７％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＤＭＳＯ  ４００ＭＨｚ  δ７．４８−７．４５（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２），６．８３（ｔ，１Ｈ），６．５０（ｓ，２Ｈ），６．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．８  ａｎｄ  Ｊ−３．２），０．８４（ｓ，９Ｈ），０．５６（ｓ，６Ｈ）
【０２２２】
中間体Ｂ−２
５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２２３】
ステップ１
３−ブロモ−２，４−ジメチル−ニトロベンゼン
発煙硝酸（３２．５ｍｌ）を、アイスバスで冷却されたＡｃＯＨ（７５ｍｌ）中の２，６−ジメチル−ブロモベンゼン（１０ｇ、５４ｍｍｏｌ）の溶液に緩やかに添加した。得られた混合物を室温まで昇温させて、１時間撹拌し、８０℃で２時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却して、撹拌しながら氷水に注いだ。得られた沈殿物を吸引ろ過により回収して、表題化合物（１０ｇ）を得て、更に精製せずに使用した。
【０２２４】
ステップ２
［２−（２−ブロモ−３−メチル−６−ニトロ−フェニル）−ビニル］−ジメチル−アミン
ＤＭＦ／ＤＭＡ（１８０ｍｌ）中の３−ブロモ−２，４−ジメチル−ニトロベンゼン（１２ｇ、５２ｍｍｏｌ）とピロリジン（２．１２ｍｌ）との混合物を、密閉試験管中、１２０℃で一晩加熱した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、粗標題化合物（１０ｇ）を与えた。
【０２２５】
ステップ３
４−ブロモ−５−メチルインドール
［２−（２−ブロモ−３−メチル−６−ニトロ−フェニル）−ビニル］−ジメチル−アミン（１０ｇ）を、ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ：２５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却して、緩やかに少しずつ添加したＺｎ（３０ｇ）で処理した。完全に添加した後、反応混合物を１１０℃で一晩加熱した。混合物を水で希釈して、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、粗生成物を与えた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．４ｇ、２０％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ２．４７（ｍ，３Ｈ），６．５０−６．５１（ｍ，１Ｈ），６．９７−６．９９（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．１８（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ）
【０２２６】
ステップ４
５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製：
４−ブロモ−５−メチルインドール（０．７ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．７ｇ、６．７ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（１ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７３ｍｇ、３ｍｏｌ％）を、４０ｍＬガラス管２本の中で乾燥ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）に懸濁させて、アルミニウム／Ｔｅｆｌｏｎクリンプでしっかりと密閉した。ＣＥＭ−Ｄｉｓｃｏｖｅｒモノモードマイクロ波反応装置において、試料に２５０Ｗ、１８０℃で４０分間、照射した。反応完了後に、容器を６０℃に冷却してひとまとめにし、粗混合物を薄いセライト栓でろ過した。セライト栓をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄し、有機画分をひとまとめにして、溶媒を減圧除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、その後、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製して、５（２８０ｍｇ、３３％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ１．４１（ｓ，１２Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），６．９６−６．９７（ｍ，１Ｈ），７．０１−７．０３（ｍ，１Ｈ），７．１８−７．２０（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．３４（ｍ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ）
【０２２７】
中間体Ｂ−３
７−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２２８】
ステップ１
４−ブロモ−７−フルオロ−１Ｈ−インドールの調製
−４０℃で、ビニルマグネシウムブロミド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液３００ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（７００ｍｌ）中の３−ニトロ−４−フルオロ−ブロモベンゼン（２２ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。−４０℃で１時間後に、混合物を水性ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチして、ＥｔＯＡｃにより抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、粗生成物を与え、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、４−ブロモ−７−フルオロ−１Ｈ−インドール（５ｇ、２３．３％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ６．５６−６．５８（ｍ，１Ｈ），６．７２−６．７９（ｍ，１Ｈ），７．０６−７．１７（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．２４（ｍ，１Ｈ），８．４５（ｓ，１Ｈ）。
【０２２９】
ステップ２
７−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
４−ブロモ−７−フルオロ−１Ｈ−インドール（５ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（９．５ｇ、３７．４ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（６．８５ｇ、６９．９ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．５１ｇ、３ｍｏｌ％）を、４０ｍＬガラス管５本の中の乾燥ＤＭＥ（６０ｍＬ）に懸濁させて、アルミニウム／Ｔｅｆｌｏｎクリンプでしっかりと密閉した。ＣＥＭ−Ｄｉｓｃｏｖｅｒモノモードマイクロ波反応装置において、試料に２５０Ｗ、１５０℃で２５分間、照射した。反応完了後に、容器を６０℃に冷却してひとまとめにし、粗混合物を薄いセライト栓でろ過した。セライト栓をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄し、有機画分をひとまとめにして、溶媒を真空除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、その後、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（２ｇ、３２．９％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ１．４０（ｓ，１２Ｈ），６．８６−６．９６（ｍ，１Ｈ），７．０２−７．１４（ｍ，１Ｈ），７．２０−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．５１−７．６２（ｍ，１Ｈ），８．４３（ｓ，１Ｈ）
【０２３０】
中間体Ｂ−４
７−クロロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２３１】
ステップ１
４−ブロモ−１−クロロ−２−ニトロ−ベンゼンの調製:
０℃のＨＢｒ（４８％）２６０ｍＬ中の４−クロロ−３−ニトロ−フェニルアミン（１７．２ｇ、０．１ｍｏｌ）の溶液に、水中のＮａＮＯ２（１３．８ｇ、０．２ｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、ＣｕＢｒ（２４ｇ、０．１７ｍｏｌ）を混合物に少しずつ添加して、更に１時間撹拌した。水を添加し、混合物を室温に昇温させ、その後、ＥｔＯＡｃで抽出した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（１３ｇ、５５％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ８．０３−８．０２（ｍ，１Ｈ），７．６６−７．６３（ｍ，１Ｈ），７．４５−７．４２（ｍ，１Ｈ）
【０２３２】
ステップ２
４−ブロモ−７−クロロインドールの調製：
−４０℃のＴＨＦ４００ｍＬ中の４−ブロモ−１−クロロ−２−ニトロ−ベンゼン（１４ｇ、０．０５９ｍｏｌ）の溶液に、ビニルマグネシウムブロミド(ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液１７７ｍＬ、０．１７７ｍｏｌ)を滴加した。反応混合物を−４０℃で２時間撹拌した。水性ＮＨ４Ｃｌを添加して、混合物をエーテルで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（６ｇ、４４％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ８．５（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．２９（ｍ，１Ｈ），７．２６−７．２２（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．０５（ｍ，１Ｈ），６．６５−６．６３（ｍ，１Ｈ）
【０２３３】
ステップ３
７−クロロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製：
４−ブロモ−７−クロロインドール（０．６ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（０．７２８ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（０．７６ｇ、７．８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５７ｍｇ、３ｍｏｌ％）を、ＤＭＥ（１５ｍＬ）に懸濁させて、ＣＥＭ−Ｄｉｓｃｏｖｅｒモノモードマイクロ波反応装置において、２５０Ｗ、1３０℃で３５分間、照射した。固体をろ過により除去し、水を添加して、得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（０．３ｇ、３９％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ８．５（ｓ，１Ｈ），７．５７−７．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３（ｓ，１Ｈ），７．２１−７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．０８−７．０７（ｍ，１Ｈ），１．３９６−１．３８５（ｍ，１２Ｈ）
【０２３４】
中間体Ｂ−５
７−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２３５】
ステップ１
４−ブロモ−３−メチル−２−ニトロ−フェノールの調製：
ＣＨＣｌ３（２０ｍＬ）中の３−メチル−２−ニトロ−フェノール（２０ｇ、０．１３ｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（１５ｍＬ）中のＢｒ２（６．４ｍＬ）の溶液を０℃で滴加して、混合物を０℃で３時間撹拌した。氷を添加して、混合物をＣＨＣｌ３で抽出した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、ＣＨＣｌ３を除去して、４−ブロモ−３−メチル−２−ニトロ−フェノール（３０ｇ）を与え、更に精製せずに使用した。
【０２３６】
ステップ２
１−ブロモ−４−メトキシ−２−メチル−３−ニトロ−ベンゼンの調製：
アセトン（２００ｍＬ）中の４−ブロモ−３−メチル−２−ニトロ−フェノール（３０  ｇ、０．１３ｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３９ｇ、０．２８ｍｏｌ）およびヨードメタン（１７．６ｍＬ、０．２８ｍｏｌ）を添加した。混合物を１８時間撹拌し、その後、濃縮して、水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過して濃縮し、１−ブロモ−４−メトキシ−２−メチル−３−ニトロ−ベンゼン（３１ｇ、９６％）を与え、更に精製せずに使用した。
【０２３７】
ステップ３
４−ブロモ−７−メトキシインドールの調製：
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の１−ブロモ−４−メトキシ−２−メチル−３−ニトロ−ベンゼン（３１ｇ、０．１２６ｍｏｌ）の溶液に、ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２７ｍＬ）およびピロリジン（１０．５ｍＬ、０．１２７ｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で１８時間加熱し、室温に冷却した。混合物を水で希釈して、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過して濃縮した。残渣をＨＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解して、沸騰しているＨＯＡｃ（１５０ｍＬ）中のＦｅ（２０．５ｇ、０．３７ｍｏｌ）の溶液に滴加した。混合物を１時間還流して、室温に冷却し、水を添加して、混合物をＮａ２ＣＯ３で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過して濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５／１）により精製して、表題化合物（１３ｇ、４４％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ：８．４１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１８−７．０８（ｍ，２Ｈ），６．４９−６．４３（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）
【０２３８】
ステップ４
７−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製：
１，４−ジオキサン（１７０ｍＬ）中の４−ブロモ−７−メトキシインドール（５ｇ，  ２２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン（６．２ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（６．５ｇ、６６．３ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を１５時間加熱還流した。冷却した後、混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２０／１）により精製して、表題化合物（２．６ｇ、４３％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ  δ：８．３８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，１Ｈ），７．２１（ｄ，１Ｈ），７．０１（ｄ，１Ｈ），６．６６（ｄ，１Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，１２Ｈ）
【０２３９】
中間体Ｂ−６
５．７−ジメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル−１Ｈ−インドール
【０２４０】
ステップ１
１−ブロモ−２，４−ジメチル−５−ニトロ−ベンゼンの調製：
１−ブロモ−２，４−ジメチル−ベンゼン（９ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）を、室温でＨＮＯ３（１００ｍＬ、６０％）に添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を氷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。その後、有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、１−ブロモ−２，４−ジメチル−５−ニトロ−ベンゼン（６．５ｇ）を与えて、更に精製せずに次のステップで使用した。
【０２４１】
４−ブロモ−５，７−ジメチルインドールの調製：
−７８℃のＴＨＦ（１００ｍＬ）中の１−ブロモ−２，４−ジメチル−５−ニトロ−ベンゼン（７．５ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ビニルマグネシウムブロミド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液  １１０ｍＬ、１．１ｍｏｌ）を滴加した。反応物を−４０℃に緩やかに昇温させ、その後、４時間撹拌した。水を添加して、反応混合物を室温に緩やかに昇温させて、ＥｔＯＡｃで抽出した。その後、有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、４−ブロモ−５，７−ジメチルインドール（２．３ｇ）を与えて、精製せずに次のステップで使用した。
【０２４２】
５，７−ジメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製：
４−ブロモ−５，７−ジメチルインドール（２．３ｇ粗製、７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．５４ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（２ｇ、２０ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１５０ｍｇ、３ｍｏｌ％）を、５０ｍＬガラス管５本の中の乾燥ＤＭＥ（３０ｍＬ）に懸濁させて、アルミニウム／Ｔｅｆｌｏｎクリンプでしっかりと密閉した。マイクロ波反応装置において、試料に２５０Ｗ、１３０℃で５０分間、照射した。反応完了後に、混合物をひとまとめにし、水で希釈して、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して、溶媒を蒸発により除去した。分取ＨＰＬＣにより表題化合物（０．３７ｇ、１５％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９７（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），２．６１（ｓ，３Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｓ，１２Ｈ）
【０２４３】
中間体Ｂ−７
７−フルオロ−５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２４４】
ステップ１
１−ブロモ−４−フルオロ−２−メチル−５−ニトロ−ベンゼンの調製：
Ｈ２ＳＯ４  １６０ｍＬ中の１−ブロモ−４−フルオロ−２−メチル−ベンゼン（２０ｇ、０．１１ｍｏｌ）の溶液に、ＫＮＯ３（１１６ｇ、０．１１ｍｏｌ）を０℃で一度に添加した。混合物を室温に昇温させて、一晩撹拌した。混合物を氷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して濃縮し、１−ブロモ−４−フルオロ−２−メチル−５−ニトロ−ベンゼン（２０ｇ）を与えて、精製せずに次のステップで使用した。
【０２４５】
ステップ２
４−ブロモ−７−フルオロ−５−メチルインドールの調製：
−７８℃のＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の１−ブロモ−４−フルオロ−２−メチル−５−ニトロ−ベンゼン（２０ｇ、０．０８６ｍｏｌ）の溶液に、ビニルマグネシウムブロミド（３００ｍＬ、０．３ｍｏｌ）を滴加し、その後、混合物を−７８℃で２時間撹拌した。水を添加して、反応物を室温に緩やかに昇温させた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、４−ブロモ−７−フルオロ−５−メチルインドール（３．２ｇ、１６．４％）を与えた。
【０２４６】
ステップ３
７−フルオロ−５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製：
４−ブロモ−７−フルオロ−５−メチルインドール（３．２ｇ、０．０１４ｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（５．０８ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．１ｇ）およびＫＯＡｃ（４．１ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬガラス管１０本の中の乾燥ＤＭＥ（６０ｍＬ）に懸濁させて、アルミニウム／Ｔｅｆｌｏｎクリンプでしっかりと密閉した。マイクロ波反応装置において、試料に２５０Ｗ、１３５℃で２時間、照射した。試料を冷却してひとまとめにし、水で希釈して、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水して、溶媒を蒸発により除去した。分取ＨＰＬＣにより表題化合物（０．４３ｇ、１．１％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭＤＯＨ  ４００ＭＨｚ）
δ：７．２２−７．２１（ｄ，１Ｈ），６．８７−６．８５（ｍ，１Ｈ），６．６８−６．６５（ｄ，１Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，１２Ｈ）
【０２４７】
中間体Ｂ−８
３−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の３−メチル−４−ブロモインドール（０．７９ｇ、３．８ｍｍｏｌ）とビス（ピナコラト）ジボロン（１．１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）とＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２（８３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）とＫＯＡｃ（１．１ｇ、１１．３ｍｍｏｌ)との混合物を、Ｎ２雰囲気下で１０分間パージした後、８０℃で一晩加熱した。反応混合物を、水で希釈した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（０．７ｇ、７２％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．９３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．１７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．０１（ｓ，１Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｓ，１２Ｈ）
【０２４８】
中間体Ｂ−９
５−エチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２４９】
ステップ１
６−エチル−２−メチル−３−ニトロ−フェニルアミンの調製
２−エチル−６−メチル−フェニルアミン（２１ｇ、１５６ｍｍｏｌ）を、０℃のアイスバス内で、濃Ｈ２ＳＯ４  １７５ｍＬに溶解した。濃ＨＮＯ３  ９ｍＬ（１７１ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加して、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物を氷１Ｌに注ぎ、得られた溶液をＥｔＯＡｃで５回抽出した。ひとまとめにした有機層を溶媒をＮａ２ＳＯ４で脱水して、溶媒を減圧除去し、６−エチル−２−メチル−３−ニトロ−フェニルアミンと副生物６−メチル−２−エチル−３−ニトロ−フェニルアミンとの混合物１９ｇ（収率６８％）を得た。混合物は、更に精製せずに次の反応で使用した。
【０２５０】
ステップ２
２−ブロモ−１−エチル−３−メチル−４−ニトロ−ベンゼンの調製
水１５ｍＬ中のＮａＮＯ２（７．７ｇ、１１０ｍｍｏｌ）を、０℃の４８％水性ＨＢｒ（３５ｍＬ）中のステップ１の生成物（１９ｇ、１０６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に緩やかに添加した。４８％水性ＨＢｒ（１０ｍＬ）中のＣｕＢｒ（１．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を滴加した。１５分間撹拌した後、混合物を９０℃で２時間加熱した。冷却した後、混合物を水で希釈して、ＥｔＯＡｃで５回抽出した。ひとまとめにした有機相を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）により精製して、２−ブロモ−１−エチル−３−メチル−４−ニトロ−ベンゼンと２−ブロモ−３−エチル−１−メチル−４−ニトロ−ベンゼンとの混合物を得た（２３ｇ、収率９５％）。
【０２５１】
ステップ３
１−［２−（２−ブロモ−３−エチル−６−ニトロ−フェニル）−ビニル］−ピロリジンの調製
ＤＭＦ／ＤＭＡ（１５０ｍｌ）中のステップ２の生成物（１３ｇ、５３ｍｍｏｌ）およびピロリジン（２．３ｍＬ）を、一晩、加熱還流した。混合物を冷却し、その後、濃縮して、粗製の表題化合物を与え、次のステップで直接使用した。
【０２５２】
ステップ４
４−ブロモ−５−エチル−１Ｈ−インドールの調製
ＡｃＯＨ  ８０ｍＬ中のステップ３から得た粗製の１−［２−（２−ブロモ−３−エチル−６−ニトロ−フェニル）−ビニル］−ピロリジンの溶液を、ＡｃＯＨ  ５０ｍＬ中の鉄（１３ｇ）の還流懸濁液に一度に添加した。得られた混合物を２時間還流した。冷却後、混合物を水で希釈して、Ｎａ２ＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。ひとまとめにした有機相を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーおよび分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（１．５ｇ、６−エチル−２−メチル−３−ニトロ−フェニルアミンから１２％）を得た。
【０２５３】
ステップ５
５−エチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製
４−ブロモ−５−エチル−１Ｈ−インドール（１．０ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．４ｇ、９ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（１．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２１０ｍｇ、６ｍｏｌ％）を、乾燥ジオキサン（５０ｍＬ）に懸濁させて、８０℃で一晩加熱した。混合物を冷却してろ過し、ろ液を濃縮して分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（３００ｍｇ、２５％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３， ４００ＭＨｚ）：δ７．９０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．３１−７．２５（ｍ，１Ｈ），７．１５−７．０８（ｍ，１Ｈ），６．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．９０−９．８５（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．３４（ｓ，１２Ｈ），１．１６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）
【０２５４】
中間体Ｂ−１０
７−エチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル−１Ｈ−インドール
【０２５５】
ステップ１
４−ブロモ−１−エチル−２−ニトロ−ベンゼンの調製
−２０℃の濃Ｈ２ＳＯ４  ９ｍＬ中の１−ブロモ−４−エチルベンゼン（７ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ２ＳＯ４（３．７４ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）とＨＮＯ３（２．６４ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）との混合物を添加した。混合物を−２０℃で２時間撹拌した。水を添加して、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を水性ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４ で脱水して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（３ｇ、３４％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ）
δ：８．０４−８．０３５（ｄ，１Ｈ），７．６８−７．６５（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．２７（ｄ，１Ｈ），２．９２−２．８７（ｍ，２Ｈ），１．３１−１．２８（ｔ，３Ｈ）
【０２５６】
ステップ２
４−ブロモ−７−エチル−１Ｈ−インドールの調製
−４０℃のＴＨＦ中の４−ブロモ−１−エチル−２−ニトロ−ベンゼン（８．７ｇ、０．０３７ｍｏｌ）の溶液に、ビニルマグネシウムブロミド（１３２ｍｌ、０．１３２ｍｏｌ）を滴加して、混合物を−４０℃で更に２時間撹拌した。反応混合物を水で希釈して、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４ で脱水して濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（１．３５ｇ、１６％）を与えた。
【０２５７】
ステップ３
７−エチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドールの調製
４−ブロモ−７−エチル−１Ｈ−インドール（１．３５ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（３．０５ｇ、１２ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（１．８ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１２８ｍｇ）を、乾燥ＤＭＥ（１００ｍＬ）に懸濁させて、１３５℃で一晩加熱した。混合物を冷却してろ過し、ろ液を濃縮して分取ＨＰＬＣにより精製し、表題化合物（３００ｍｇ、２５％）を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ）
δ:８．１４（ｓ，１Ｈ），７．６１−７．６０（ｄ，１Ｈ），７．２８−７．２５（ｄ，１Ｈ），７．０８−７．０５（ｍ，２Ｈ），２．９２−２．８６（ｍ，２Ｈ），１．３８−１．３５（ｍ，１５Ｈ）
【０２５８】
中間体Ｂ−１１
市販品
【０２５９】
中間体Ｂ−１２
７−トリフルロメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
【０２６０】
ステップ１
４−ブロモ−７−トリフルオロメチルインドール
ＴＨＦ  ２００ｍＬ中の４−ブロモ−２−ニトロ−１−トリフルオロメチル−ベンゼン（１１．４ｇ、０．０４ｍｏｌ）の溶液に、−７８℃のビニルマグネシウムブロミド（１６０ｍＬ、０．１６ｍｏｌ）を添加し、混合物を１．５時間撹拌した後、ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液でクエンチして、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４ で脱水して、溶媒を真空除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（２ｇ、２５％）を与えた。 １Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ４００ＭＨｚ），δ８．６（ｂｒ，１Ｈ），７．２８−７．３８（ｍ，３Ｈ），６．７０（ｍ，１Ｈ）。
【０２６１】
ステップ２
７−トリフルオロメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール
ＤＭＳＯ  ３０ｍＬ中の４−ブロモ−７−トリフルオロメチルインドール（２ｇ、７．６ｍｍｏｌ）とビス（ピナコラト）ジボロン（２．５ｇ、９ｍｍｏｌ）とＫＯＡｃ（１ｇ、０．０１ｍｏｌ）とＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．２ｇ）との混合物を、Ｎ２下、９０℃で一晩加熱した。残渣を水とＥｔＯＡｃとに分配させた。有機相をＮａ２ＳＯ４ で脱水して、溶媒を真空除去し、粗生成物を与えて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（１ｇ、４１％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ４００ＭＨｚ），δ８．６（ｂｒ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，１２Ｈ）
【０２６２】
式（１）で示される化合物の調製
実施例１
２−（５−フルオロ−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化９】
0006034880.tif 000012
ステップ１
ジオキサン４ｍＬ、アセトニトリル１ｍＬおよび水１ｍＬの中の中間体（１０Ａ）（２００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の混合物に、中間体Ｂ１（１６１ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（８０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３６．５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、９０℃で１６時間加熱した。溶媒を真空除去し、残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して、所望の生成物１３（１２０ｍｇ、６０％）を与えた。
【０２６３】
ステップ２
ＣＨ２Ｃｌ２  ３ｍＬ中の１３（１２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフリン酸１ｍＬを添加して、混合物を室温で４時間撹拌した。その後、混合物を撹拌しながら飽和水性ＮａＨＣＯ３に緩やかに添加して、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。ひとまとめにした有機相を真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（１８ｍｇ、２３％）をオフホワイト色の固体として与えた。
（１８ｍｇ、１０からの収率：１４％、Ｍ＋１：４３４） １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．５５（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，２Ｈ），７．５１−７．６７（ｍ，４Ｈ），７．３２（ｓ，２Ｈ），７．１１（ｔ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８３（ｍ，２Ｈ），１．０８（ｓ，６Ｈ）。
【０２６４】
実施例２
２−（５−メチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１０】
0006034880.tif 000013
【０２６５】
ステップ１
ジオキサン４０ｍＬ、アセトニトリル１０ｍＬおよび水１０  ｍＬの中の中間体（１０Ａ）（１．９ｇ、２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ボロン酸エステル中間体Ｂ２（１ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．７ｇ、５．１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．５ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、９０℃で６時間加熱した。溶媒を除去して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物１１（１．３２ｇ、収率：７０％）を与えた。
【０２６６】
ステップ２
ＣＨ２Ｃｌ２  ２０ｍＬ中の化合物１１（１．３２ｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフリン酸５ｍＬを添加した。混合物を２５℃で６時間撹拌した。混合物を撹拌しながら水性ＮａＨＣＯ３に緩やかに添加して、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。ひとまとめにした有機相を、真空濃縮した。粗生成物を、以下に記載されたシステムを利用し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（３６０ｍｇ、４２％）をオフイエロー色の固体として与えた。
（２２ｍｇ、１０からの収率：１７％、Ｍ＋１：４３０） １Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．３（ｓ，Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．６０（ｍ，４Ｈ），７．１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．００−７．０４（ｍ，３Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｍ，２Ｈ），２．７４（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）
【０２６７】
ＳＲＵＭ−３についてのｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ分離法：
機器:島津ＬＣ−８Ａ分取ＨＰＬＣ
カラム:Ｇｅｍｉｎｉ  ２５０×５０ｍｍ内径  １０ｕ
移動相：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．０４％  ＮＨ３Ｈ２０）  Ｂ：ＣＨ３ＣＮ
勾配：２３分間で２５％から５０％へ（Ｂ相) 
流速：８０ｍＬ／分
波長：２２０および２５４ｎｍ
【０２６８】
実施例３
２−（７−フルオロ−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１１】
0006034880.tif 000014
【０２６９】
ボロン酸エステル中間体Ｂ３を使用して実施例２の方法により調製した。
（２０ｍｇ、１０からの収率：１５％、Ｍ＋１：４３４）１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．９０（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，２Ｈ），７．７０−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．０６（ｑ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｔ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８３（ｔ，２Ｈ），１．０７（ｓ，６Ｈ）．
【０２７０】
実施例４
２−（７−クロロ−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１２】
0006034880.tif 000015
【０２７１】
ボロン酸エステル中間体Ｂ４を使用して実施例２の方法により調製した。
（２４ｍｇ、１０からの収率：１８％、Ｍ＋１：４５０）１ＨＮＭＲ:（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．８５（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ）７．００（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１６（ｔ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｔ，２Ｈ），１．０８（ｓ，６Ｈ）
【０２７２】
実施例５
２−（７−メトキシ−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１３】
0006034880.tif 000016
【０２７３】
ボロン酸エステル中間体Ｂ５を使用して実施例２の方法により調製した。
（１９ｍｇ、１０からの収率：１４％、Ｍ＋１：４４６） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．５８（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｔ，１Ｈ），７．２８（ｔ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．１７−３．１４（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ２Ｈ），２．８７（ｔ，２Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）
【０２７４】
実施例６
２−（５．７−ジメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１４】
0006034880.tif 000017
【０２７５】
ボロン酸エステル中間体Ｂ６を使用して実施例２の方法により調製した。
（３３ｍｇ、１０からの収率：２５％、Ｍ＋１：４４４） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．３（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４４−７．５６（ｍ，３Ｈ），６．９１−７．０５（ｍ，４Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ），１．０８（ｓ，６Ｈ）
【０２７６】
実施例７
２−（５−メチル−７−フルオロ−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド 
【化１５】
0006034880.tif 000018
【０２７７】
ボロン酸エステル中間体Ｂ７を使用して実施例２の方法により調製した。
（１６ｍｇ、１０からの収率：１２％、Ｍ＋１：４４８） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．６０（ｍ，３Ｈ），６．９−７．１（ｍ，３Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｍ，２Ｈ），２．７２（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）
【０２７８】
実施例８
２−（３−メチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１６】
0006034880.tif 000019
【０２７９】
ボロン酸エステル中間体Ｂ８を使用して実施例２の方法により調製した。
（９．４ｍｇ、１０からの収率：７％、Ｍ＋１：４３０） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１７（ｂｒ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．６０（ｍ，４Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｔ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），２．９９（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），１．０８（ｓ，６Ｈ）
【０２８０】
実施例９
２−（５−エチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１７】
0006034880.tif 000020
【０２８１】
ボロン酸エステル中間体Ｂ９を使用して実施例２の方法により調製した。
（２８ｍｇ、１０からの収率：２１％、Ｍ＋１：４４４）１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．３（ｂｒ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．５１（ｍ，４Ｈ），６．９２−７．１２（ｍ，４Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０８（ｑ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｔ，３Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）
【０２８２】
実施例１０
２−（７−エチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１８】
0006034880.tif 000021
【０２８３】
ボロン酸エステル中間体Ｂ１０を使用して実施例２の方法により調製した。.
（３２ｍｇ、１０からの収率：２４％、Ｍ＋１：４４３） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．４（ｂｒ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．９９−７．７９（ｍ，８Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，２Ｈ），２．９４（ｑ，２Ｈ），２．８５（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｔ，３Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）
【０２８４】
実施例１１
２−（１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化１９】
0006034880.tif 000022
【０２８５】
ボロン酸エステル中間体Ｂ１１を使用して実施例２の方法により調製した。
（４６６ｍｇ、中間体１０Ａからの収率３８％、Ｍ＋１：４１６） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．４８（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｄ，２Ｈ），７．８５（ｄ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．６１−７．５３（ｍ，３Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｔ，１Ｈ），７．０２（ｄ，２Ｈ），３．１９−３．１７（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｓ，２Ｈ），２．８９−２．８６（ｍ，２Ｈ），１．１１（ｓ，６Ｈ）
【０２８６】
実施例１２
２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
【化２０】
0006034880.tif 000023
【０２８７】
表題の化合物は、先の一般的スキーム２に示された反応系列により調製した。
【０２８８】
ステップ１
エチル  ５−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）フェニル）−２−ヨードオキサゾール−４−カルボキシラート
表題化合物は、中間体エチルエステル化合物（１５）（先の中間体化合物（１０Ａ）の調製のステップ２参照）から、同じ調製のステップ４のリチウム化／ヨウ素化法を用いて調製した。
【０２８９】
ステップ２
４−｛４−［４−エトキシカルボニル−２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
エチル５−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）フェニル）−２−ヨードオキサゾール−４−カルボキシラートを、先の実施例２に記載されたものと類似の鈴木カップリング条件下で、ボロン酸エステル中間体Ｂ−１２と反応させて、表題化合物を与えた。
【０２９０】
ステップ３
４−｛４−［４−カルボキシル−２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
メタノール５ｍＬ、水およびＴＨＦ中の４−｛４−［４−エトキシカルボニル−２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．２ｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ（０．０２４ｇ、０．６ｍｍｏｌ）を、５０℃で一晩撹拌した。有機溶媒を真空除去し、残留する溶液をｐＨ５に調整して、得られた表題化合物をろ過により白色固体として回収して、減圧乾燥させた。
【０２９１】
ステップ４
４−｛４−［４−カルバモイル−２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＭＦ  １５ｍＬ中の４−｛４−［４−カルボキシル−２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルとＥＤＣＩ  ＨＣｌ（０．３６ｇ、０．００２ｍｏｌ）とＨＯＢｔ（０．３ｇ、０．００２ｍｏｌ）とジオキサン中のＮＨ３  １５ｍＬとの混合物を、２時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣を、水とＥｔＯＡｃに分配させ、有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、溶媒を真空除去して、表題化合物の粗生成物（０．１８ｇ粗製)を与えた。
【０２９２】
ステップ５
２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）−５−［４−（３，３−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−オキサゾール−４−カルボン酸アミド
４−｛４−［４−カルバモイル−２−（７−トリフルオロメチル−１Ｈ−インドル−４−イル）オキサゾル−５−イル］−フェニル｝−２，２−ジメチル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．１８ｇ粗製）を、ＤＣＭとＴＦＡとの混合物（３０ｍＬ  ２：１）に溶解し、溶媒が真空除去されたら、溶液を室温で２時間撹拌した。残渣を水とＥｔＯＡｃとに分配させた。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、溶媒を真空除去して、粗生成物を与え、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（６０ｍｇ、エチル５−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３，３−ジメチルピペラジン−１−イル）フェニル）−２−ヨードオキサゾール−４−カルボキシラートから４１％)を与えた。
Ｍ＋１：４８４） １ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．８５（ｓ，１Ｈ），８．２７−８．２５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．９７−７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．６６−７．５６（ｍ，３Ｈ），７．０２−７．００（ｄ，２Ｈ  Ｊ＝０．８Ｈｚ），３．１９−３．１７（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｓ，２Ｈ），２．８７−２．８６（ｍ，２Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）
【０２９３】
生物学的活性
【０２９４】
実施例１３
ＦＬＴ３キナーゼおよびオーロラキナーゼ阻害活性
ＦＬＴ３キナーゼならびにオーロラＡおよびオーロラＢキナーゼを阻害する本発明の化合物の能力を、以下に記載されるアッセイを利用して測定した。
【０２９５】
キナーゼアッセイは、以下の一般的手順を利用して、米国ペンシルバニア州マルバーン所在のＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐ．で実施した：
１）新たに調製されたＢａｓｅ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２ｍＭ  ＤＴＴ、１％ＤＭＳＯ）中で、示された基質を調製する
２）補因子（１．５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１６μｇ／ｍＬカルモジュリン、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２）を先の基質溶液に送達する
３）示されたキナーゼを基質溶液に送達して、穏やかに混合する
４）ＤＭＳＯ中の様々な濃度の試験化合物を、キナーゼ反応混合物に送達する
５）３３Ｐ−ＡＴＰ(比活性０．０１  □Ｃｉ／□Ｌ最終)を反応混合物に送達して、反応を開始させる
６）キナーゼ反応物を室温で１２０分間インキュベートする
７）反応物をＰ８１イオン交換ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  ＃３６９８−９１５）にスポットする
８）フィルターを０．７５％リン酸中で広範囲に洗浄することにより、未結合のリン酸塩を除去する
９）Ｔｙｐｈｏｏｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、３３Ｐのシグナルを測定した。不活性酵素を含む対照反応物から得られたバックグランド値を減算した後、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウエア）の非線形回帰関数を用いてＩＣ５０値を決定した。
【表３】
0006034880.tif 000024
【０２９６】
基質：ケンプチド＝［Ｈ−ＬＲＲＡＳＬＧ］  アブルチド＝［ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ］  
【０２９７】
３種のキナーゼそれぞれの酵素活性の５０％阻害に必要な試験化合物の濃度（ＩＣ５０）を、以下の表に示す。比較の目的で、ＷＯ２００８／１３９１６１号の実施例Ｍ−１２に開示された化合物２−（１Ｈ−インドル−４−イル）−５−（４−ピペラジン−１−イル−フェニル）−オキサゾール−４−カルボン酸アミドのＩＣ５０値も示す。
【表４】
0006034880.tif 000025
【０２９８】
実施例１４
抗増殖活性
本発明の化合物の抗増殖活性を、細胞株ＨＣＴ−１１６由来の大腸癌の増殖を阻害する該化合物の能力を測定することにより、決定する。細胞増殖の阻害は、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅアッセイ（Ｎｏｃｉａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９９８）  ２１３，１５７−１６７）を利用して測定する。その方法は、レサズリンを蛍光産物レゾルフィンに還元する生存細胞の能力に基づく。各増殖アッセイごとに、細胞を９６ウェルプレートに播種して、１６時間回復させた後、阻害化合物を更に９６時間添加する。インキュベーションの終了時に、１０％（ｖ／ｖ）Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅを添加して、更に６時間インキュベートした後、励起波長５３５ｎｍおよび発光波長５９０ｎｍで蛍光産物を測定する。全ての細胞株は、ＥＣＡＣＣ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）から得られる。
【０２９９】
ヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６に対する本発明の化合物の活性を、以下の表に示す。列の項目「ＨＣＴ−１１６  ９６  Ｈｒｓ」は、９６時間暴露によりＨＣＴ−１１６細胞の増殖を５０％低下させるのに必要な化合物濃度を指す。列の項目「［高次倍数性］」は、オーロラＢ阻害が原因と予測される、異なる高次倍数体表現型を生成するのに必要な化合物の最小濃度を指す。
【表５】
0006034880.tif 000026
【０３００】
実施例１５
Ｃａｃｏ−２細胞を用いた浸透性試験
細胞に取り込まれ保持される化合物の能力を、Ｃａｃｏ−２細胞を用いた透過性試験を実施することにより測定することができる。Ｃａｃｏ−２細胞は、典型的には化合物の経口生物学的利用度を予測するために用いられるが、得られた測定値は、化合物の細胞透過能も示す。
【０３０１】
それゆえ本発明の化合物を、標準のＣａｃｏ−２アッセイで試験して、化合物が細胞に流入する速度および細胞から流出する速度を測定した。結果から、エフラックス比を、細胞を離れる化合物の速度対細胞に入る化合物の速度の比率として計算した。
【０３０２】
結果を以下の表に示す。表において、列の項目「Ｃａｃｏ−２  Ａ２Ｂ」は、化合物が細胞に流入する速度を示し、列「Ｃａｃｏ−２  Ｂ２Ａ」は、化合物が細胞から流出する速度を示す。「エフラックス比」は、Ｃａｃｏ−２  Ｂ２Ａ：Ｃａｃｏ−２  Ａ２Ｂの比率である。
【０３０３】
結果から、試験された化合物の全てがＷＯ２００８／１３９１６１号の実施例Ｍ−１２の化合物よりも好適なエフラックス比を有することが実証される。実施例２〜１１の化合物の場合、エフラックス比は、先行技術の化合物である実施例Ｍ−１２のエフラックス比の５倍を超えて良好である。
【０３０４】
化合物Ｍ−１２と実施例１１の化合物とのデータ比較から、ピペラジン環内のＣＨ２基をＣ（ＣＨ３）２基と置換することで、エフラックス比が劇的に改善されることが示される。
【表６】
0006034880.tif 000027
【０３０５】
実施例１６
ヒト血液腫瘍細胞株に対する活性
実施例２および７の化合物を、製造業者の使用説明書に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）アッセイ（＃Ｇ８０８１，Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、一定範囲のヒト血液細胞株に対して試験した。細胞を指数関数的増殖期の培養物から採取して計数し、９６ウェル平底マイクロタイタープレートに細胞密度２０，０００〜９０，０００細胞／ウェルで播種した。細胞に指数関数的増殖を再開させる２４時間の回復期間の後、培地（対照ウェル４個／プレート）または培地と試験化合物１０μｌを、添加した。該化合物を１０種の濃度で二重測定で使用し、４日間処理を続けた。細胞処理の後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）試薬  １０μｌ／ウェルを添加した。最大４時間のインキュベーションの後、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｘｃｉｔｅ  ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  ｒｅａｄｅｒ(励起λ＝５３１ｎｍ、発光λ＝６１５ｎｍ)を用いて蛍光（ＦＵ）を測定した。化合物を、各細胞株ごとに２〜４の独立した実験で試験した。各細胞株に対するＩＣ５０（μモル）値を、以下の表に示す。
【表７】
0006034880.tif 000028
0006034880.tif 000029
【０３０６】
検索表
ＡＬＬ＝急性リンパ芽球性白血病
ＡＭＬ＝急性骨髄性白血病
ＣＭＬ＝慢性骨髄性白血病
ＨＬ＝ホジキンリンパ腫
ＮＨＬ＝非ホジキンリンパ腫
ＭＭ＝多発性骨髄腫
【０３０７】
実施例１７
異種移植試験
本発明の化合物のインビボ抗腫瘍活性を、ＭＶ４−１１癌細胞株のヌードマウス異種移植モデルにおける腫瘍増殖に及ぼす実施例２および７の化合物の影響を検証することにより研究した。
【０３０８】
材料および方法
２．１．動物および試薬
ＭＶ４−１１細胞株（ＡＴＣＣ、米国所在）；ＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国所在）;ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、オーストラリア所在）；Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｓｌａｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，中国、上海所在）: 雌１８〜２２ｇ;ΗΡ−β−ＣＤ（Ｓｉｇｍａ、米国所在）
【０３０９】
２．２．手順
全５２匹のメスヌードマウスを、使用した。マウスを３日間の馴化期間を経た後、実験を開始した。試験の開始時に、マウスの右脇腹に５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ中の１×１０７個のＭＶ４−１１腫瘍  ２００μｌを皮下（Ｓ．Ｃ．）移植した。腫瘍が平均体積１００〜１５０ｍｍ３に達したら、マウス５２匹中３２匹を腫瘍体積に基づいて選択し、無作為に４群に割り付けた後投与した。各処置群は、担腫瘍動物で構成された（ｎ＝８／群）。
【０３１０】
担腫瘍マウスを、実施例２の化合物、実施例７の化合物またはベヒクルで５日間ＢＩＤ処置して２日間休止し、それを４サイクル繰り返した。比較群のマウスには、シタラビンで１日１回５日間処置して２日間休止し、それを４サイクル繰り返した。マウスは、各投与時に計量し、腫瘍サイズを各週２回記録した。マウスを、任意の明白な有害兆候、処置関連の副作用について綿密に観察し、観察されればそれらを記録した。
【０３１１】
腫瘍サイズをキャリパを用いて二次元で週に２回測定し、体積を式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａおよびｂは、それぞれ腫瘍の長径および短径である）を用いてｍｍ３で表した。
【０３１２】
適切な量の試験化合物をバイアルに量り入れ、適切な容量の２０％ΗΡ−β−ＣＤを添加して実施例２の最終濃度２ｍｇ／ｍＬおよび実施例７（遊離塩基）の最終濃度３ｍｇ／ｍＬを達成し、ｐＨをｐＨ５に調整して、バイアルを５分間ボルテックスにかけ、その後、バイアルを水浴音波処理装置に入れて試験化合物を確実に透明にすることにより、試験化合物を週に１回調製した。
【０３１３】
実験の設定を、以下の表に要約する。
【表８】
0006034880.tif 000030
【０３１４】
２．３．実験の終了時：
マウスを、４サイクル投与の後、ＣＯ２暴露により安楽死させた。腫瘍体積、乾燥させた腫瘍の重量、およびマウスの体重を測定および記録した。腫瘍阻害率（ＩＲ）を、式ＩＲ＝（Ｗｖ−ＷＴ）／Ｗｖ×１００％により計算した。
【０３１５】
群間の腫瘍サイズの差を、対応のない両側スチューデントｔ検定を用いて有意性について解析した。ｐ＜０．０５を、統計学的に有意であると判断した。
【０３１６】
３．結果および考察
３．１．ＭＶ４−１１担持ヌードマウスの腫瘍体積
図１〜３に、ヌードマウスのＭＶ４−１１異種移植腫瘍に対する実施例２および７の化合物の増殖阻害を示す。腫瘍体積の有意差が、試験化合物を受けたマウスの腫瘍と、ベヒクルのみを受けたマウスの腫瘍の間に観察され、それは該化合物の初回投与後４日目（初回測定）から開始して、終了時まで持続した。腫瘍体積の有意差は、試験化合物（実施例２および７）を受けたマウスの腫瘍と、シタラビン処置群のマウスの腫瘍の間にも観察され、それは初回投与後１１日目に開始して、その後持続した。図１から、実施例２および７が両者とも腫瘍増殖を完全に阻害したが、シタラビンの作用は緩やかになり腫瘍増殖を完全に遮断しなかったことも示される。 
【０３１７】
３．２．ＭＶ４−１１担持ヌードマウスの腫瘍重量
ＭＶ４−１１異種移植腫瘍増殖に対する実施例２および７の化合物の腫瘍阻害効果が、担腫瘍ヌードマウスの殺処分により終了時に採取された処置群とベヒクル群の間の腫瘍重量の有意差（図４）により更に確認された。
【０３１８】
３．３．担ＭＶ４−１１ヌードマウスの体重変動（％）
図５に、全試験期間の体重変動（％）を示す。処置マウスは全て、最初の数日間で体重をほぼ５％減量し、その後回復しており、試験化合物がヌードマウスにおける現行の投与量および投与経路で良好に耐容されることが示された。
【０３１９】
３．４．腫瘍阻害率（ＩＲ）の計算
実施例２の化合物  −  ２０ｍｇ／ｋｇ群: ＩＲ＝９８．１３％
実施例７の化合物  −  ３０ｍｇ／ｋｇ群: ＩＲ＝９８．２４％
シタラビン−  １００ｍｇ／ｋｇ群：ＩＲ＝６６．７２％
【０３２０】
４．結論
ＭＶ４−１１癌細胞株から得たヌードマウス異種移植モデルの腫瘍増殖に対する実施例２および実施例７の化合物の影響を、この試験で研究した。担ＭＶ４−１１ヌードマウスの体重を、インビボ毒性を反映する指標としてモニタリングした。試験化合物（実施例２および７）処置群とベヒクル群との間、およびシタラビン比較群との間で、腫瘍体積の差は有意であった。この試験において、実施例２および実施例７は両者とも、腫瘍増殖を完全に阻害したが、シタラビンの作用は緩やかになり腫瘍増殖を完全には遮断しなかった。処置群とベヒクル群の間の腫瘍重量の有意差から、抗腫瘍効果が更に確認された。実施例２群、実施例７群およびシタラビン群のＩＲ値は、それぞれ９８．１３％、９８．２４％、および６６．７２％であった。
【０３２１】
体重変動プロファイルから、試験化合物を受けたマウスが最初の数日間で体重を減量し、その後体重が回復することが明らかとなり、それにより試験化合物がヌードマウスにおける現行の投与量および投与経路で良好に耐容することが示された。結論として、ＩＶ  ＢＩＤ投与される２０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例２の化合物、および３０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例７の化合物は、ＭＶ４−１１異種移植腫瘍増殖の効果的阻害剤であり、任意の明白な毒性を有さなかった。
【０３２２】
医薬配合剤
実施例１８
【０３２３】
（ｉ）錠剤配合剤
式（１）で示される化合物５０ｍｇを希釈剤としてのラクトース（ＢＰ）１９７ｍｇ、および滑沢剤としてのステアリン酸マグネシウム３ｍｇと混合して、公知手法で打錠することにより、式（１）で示される化合物を含む錠剤組成物を調製する。
【０３２４】
（ii）カプセル配合剤
式（１）で示される化合物１００ｍｇをラクトース１００ｍｇと混合し、得られた混合物を標準的な不透明の硬ゼラチンカプセルに充填することにより、カプセル配合剤を調製する。
【０３２５】
(iii)注射用配合剤Ｉ
式（１）で示される化合物（例えば、塩形態）を１０％プロピレングリコールを含む水に溶解して、活性化合物濃度１．５重量％を与えることにより、注射により投与される非経口組成物を調製することができる。その後、溶液をろ過により滅菌し、アンプルに充填して、密閉する。
【０３２６】
（ｉｖ）注射用配合剤ＩＩ
式（１）で示される化合物（例えば、塩形態）（２ｍｇ／ｍＬ）およびマンニトール（５０ｍｇ／ｍＬ）を水に溶解して、溶液を滅菌ろ過し、密閉可能な１ｍＬバイアルまたはアンプルに充填することにより、注射用の非経口組成物を調製する。
【０３２７】
（iv）皮下注射用配合剤
式（１）で示される化合物を医薬品等級のコーン油と混合して、５ｍｇ／ｍＬ濃度を与えることにより、皮下投与用の組成物を調製する。その組成物を滅菌して、適切な容器に充填する。 
【０３２８】
均等物
前述の実施例は、本発明を例示する目的で示しており、本発明の範囲に限定を課すものとみなすべきではない。先に記載され、実施例に例示された本発明の具体的実施形態に、本発明に含まれる原理を逸脱することなく、数多くの修正および変更を施し得ることは、即座に明白となろう。そのような修正および変更は全て、本願に包含されるものとする。
【図１】
0006034880.tif 000034
【図２】
0006034880.tif 000035
【図３】
0006034880.tif 000036
【図４】
0006034880.tif 000037
【図５】
0006034880.tif 000038