(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
マルメロ種子アルコール抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
アルコールが、低級アルコール又は低級アルコール−水混合液である請求項１記載の抗アレルギー剤。
【請求項３】
抗アレルギー剤が、アレルギー性皮膚疾患予防治療用組成物である請求項１又は２記載の抗アレルギー剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アトピー性皮膚炎等の予防治療に有用な抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー性疾患は、皮膚、呼吸器、眼、消化器等広範囲の部位に生じる。特に、皮膚においては、じんましん、結節性紅斑、湿疹、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎等が挙げられる。
【０００３】
これらのアレルギー性疾患の治療薬としては、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤、ステロイド剤等が使用されている。また、植物抽出物の中には抗アレルギー作用を有するものが報告されている（特許文献１〜３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／０９２３５７号
【特許文献２】特開２０１１−２６２６８号公報
【特許文献３】特開平０８−５３３６０号公報
【特許文献４】特開平０９−１６５３１６号公報
【特許文献５】特開２０００−２７３０１５号公報
【特許文献６】特開２００５−６８０３４号公報
【特許文献７】特開２００５−６８０８４号公報
【特許文献８】特開平０７−１７８７３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、抗ヒスタミン剤や抗アレルギー剤は、眠気、口渇などの副作用を生じ、またステロイド剤も副作用が懸念される。一方、従来の植物抽出物の抗アレルギー作用は十分とは言えない。
従って、本発明の課題は、植物由来であって、特にアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患に有用な新たな抗アレルギー剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者は、アトピー性皮膚炎の重症度の判定に用いられているＴＡＲＣ（thymus and activation-regulated chemokine、胸腺および活性化制御ケモカイン）の発現を指標として植物や果物由来の成分の抗アレルギー作用を検討してきたところ、マルメロ種子又はマルメロ果実の抽出物が、マルメロ果肉に比べて顕著に強い抗アレルギー作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔４〕を提供するものである。
【０００８】
〔１〕マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤。
〔２〕マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物が、有機溶媒抽出物又は水抽出物である〔１〕記載の抗アレルギー剤。
〔３〕有機溶媒が、アルコールである〔２〕記載の抗アレルギー剤。
〔４〕抗アレルギー剤が、アレルギー性皮膚疾患予防治療用組成物である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の抗アレルギー剤。
【発明の効果】
【０００９】
マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物は、アトピー性皮膚炎のマーカーであるＴＡＲＣの発現を強く抑制することから、アレルギー性皮膚疾患に代表されるアレルギー性疾患の予防治療用組成物の有効成分として有用である。また、マルメロ種子抽出物及びマルメロ果実抽出物は、安全性が高く、長期継続使用が可能であることから、難治性のアレルギー疾患にも有効である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】１０ng／mL  ＴＮＦ−α＋１０ng／mL  ＩＦＮ−γによるＴＡＲＣ誘導に対するマルメロ抽出物の効果を示す図である。
【図２】２０ng／mL  ＴＮＦ−αによるＴＡＲＣ誘導に対するマルメロ抽出物の効果を示す図である。
【図３】ＮＣ／Ｎｇａ系マウスの皮膚症状スコアの変化を示す図である。
【図４】ＮＣ／Ｎｇａ系マウス背部におけるＴＡＲＣ遺伝子発現量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の抗アレルギー剤の有効成分は、マルメロ種子又はマルメロ果実の抽出物である。
【００１２】
マルメロ（Cydonia oblonga）は、中央アジア原産のバラ科マルメロ属の落葉高木であり、明るい黄橙色の洋梨形の果実をつける。マルメロの種子の水抽出物は、化粧品の増粘剤として使用されている（特許文献４、５）。また、マルメロ種子のアルコールや１，３−ブタンジオール抽出物を油性クレンジングやフォーム状洗浄料に配合することが知られている（特許文献６、７）。マルメロ果実のアルコール抽出物は、チロシナーゼインヒビターとして、有用であることが知られている（特許文献８）。しかし、本発明の抗アレルギー作用は全く知られていない。
【００１３】
本発明に用いるマルメロの抽出部位は、種子又は果実である。このうち、マルメロ種子又はマルメロ果皮がより好ましい。抽出溶媒としては、有機溶媒及び／又は水が挙げられる。有機溶媒としては、アルコール類、アセトン、アセトニトリル等の親水性有機溶媒が好ましく、アルコール類がより好ましい。アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、１，３−ブチレングリコール等が挙げられるが、低級アルコールが好ましく、エタノールが特に好ましい。また、これらの親水性有機溶媒は、水と混合して用いることができ、その混合比率は親水性有機溶媒：水＝５：９５〜９５：５が好ましく、特に３０：７０〜７０：３０がより好ましい。また、水により抽出する場合は室温又は熱水（５０〜１００℃）抽出するのがより好ましい。使用する溶媒の量は、抽出対象物の質量の１０〜１００質量倍が好ましい。
【００１４】
抽出にあたっては、マルメロの種子又は果実から溶媒で直接抽出することもできるが、種子又は果実の乾燥物を粉砕し、当該粉砕物から抽出するのが好ましい。抽出方法としては、常温又は加温下で行えばよく、浸漬法、ソックスレー抽出器を用いる方法などが挙げられる。抽出後は、そのまま用いてもよく、濃縮物、乾燥物として用いてもよい。
【００１５】
マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物は、後記の実施例に示すように優れた抗アレルギー作用を有し、種々のアレルギー疾患の予防治療剤として有用である。アレルギー疾患としては、じんましん、結節性紅斑、湿疹、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎等のアレルギー性皮膚疾患；気管支喘息；アレルギー性鼻炎等のアレルギー性呼吸器疾患；アレルギー性眼疾患等が挙げられる。このうち、アレルギー性皮膚疾患に用いるのが好ましい。
【００１６】
本発明の抗アレルギー剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品等として使用することができる。医薬品又は医薬部外品とする場合には、賦形剤、安定剤、等張剤、崩壊剤、滑沢剤等を添加して、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤等の経口投与用製剤とすることができる。また、医薬品、医薬部外品、化粧品とする場合には、植物油、脂肪酸類、高級アルコール、シリコーン類、界面活性成分、水溶性合成高分子、増粘成分、粉体成分、保湿成分、紫外線吸収剤、紫外線遮蔽物、香料、金属キレート剤、pH調整剤などの公知の成分を含有させて、皮膚外用剤とすることができる。さらには、抗炎症成分、活性酸素消去成分、血行促進成分、美白成分あるいは、その他の公知の添加剤である有効成分を配合することもできる。ここで、皮膚外用剤の形態としては、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、液剤が挙げられる。
【００１７】
これらの医薬品、医薬部外品又は化粧品中のマルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物の含有量は、０．００１〜８０質量％が好ましく、０．００１〜５０質量％がより好ましい。
【００１８】
本発明の抗アレルギー剤は、マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物の乾燥固形分量として、０．００１mg〜１００mgを１日１〜数回に分けて投与するのが好ましい。
【実施例】
【００１９】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００２０】
実施例１（抽出物の調製）
１）マルメロ果皮エタノール抽出物
果皮８０ｇにＥｔＯＨ３２０mLを加え、常温、１週間浸漬後、ろ紙でろ過し、抽出液３００mLを得た。
固形分濃度  ３３．７mg／mL（固形分収率１２．６％）
２）マルメロ果肉エタノール抽出物
果肉２００ｇにＥｔＯＨ８００mLを加え、常温、１週間浸漬後、ろ紙でろ過し、抽出液８００mLとした。
固形分濃度２４．２mg／mL（固形分収率９．７％）
３）マルメロ果皮熱水抽出物（果皮熱水１５min）
果皮１００ｇを熱水３００mLに加え、１５分間煮沸し、ガーゼおよびろ紙でろ過し、抽出液３００mLとした。
固形分濃度２９．８mg／mL（固形分収率８．９％）
４）マルメロ果肉熱水抽出物（ＦＳＥ）
果肉２００ｇを熱水６００mLに加え、１５分間煮沸し、ガーゼおよびろ紙でろ過し、抽出液６００mLとした。
固形分濃度３３．９mg／mL（固形分収率１０．２％）
５）マルメロ果肉熱水抽出物（ＦＬＥ）
果肉１００ｇを熱水３００mLに加え、３時間煮沸し、ガーゼおよびろ紙でろ過し、抽出液３００mLとした。
固形分濃度３８．３mg／mL（固形分収率１１．５％）
６）マルメロ種子エタノール抽出物（種子ＥｔＯＨ）
種子２０ｇにＥｔＯＨ８０mLを加え、常温、１週間浸漬後、ろ紙でろ過し、抽出液８０mLとした。
固形分濃度０．７３mg／mL（固形分収率０．３％）
７）マルメロ種子１０％ＥｔＯＨ抽出物（種子１０％ＥｔＯＨ）
種子２０ｇに１０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ２８０mLを加え、常温、１週間浸漬後、ざるおよびブフナーロートで吸引ろ過し、抽出液２５０mLを回収した。
固形分濃度１２．９mg／mL（固形分収率１６．０％）
【００２１】
実施例２（皮膚角化細胞におけるＴＡＲＣ発現に対する作用）
皮膚角化細胞が誘導する免疫担当細胞誘因性サイトカイン（ケモカイン）のうち、ＴＡＲＣへの影響を評価した。ＴＡＲＣは、アレルギー型免疫応答の司令塔となるＴｈ２型細胞を誘因するケモカインであり、ＩｇＥ抗体とならび近年アトピー性皮膚炎の病態との相関が強いマーカーとして認識されてきている。これを抑制することは皮膚炎に炎症性免疫応答の起点をつくることを妨げることから、炎症の軽減につながることが期待されている。
【００２２】
（方法）
ヒト皮膚角化細胞株ＨａＣａＴの培養系にマルメロ各部位の抽出物を加え、２４時間培養後に細胞を洗浄し、ＴＮＦ−α及び／又はＩＦＮ−γの６時間刺激によりＴＡＲＣ発現を誘導した後の発現量について定量ＰＣＲ法により確認を行った。
【００２３】
（結果）
（１）１０ng／mL  ＴＮＦ−α＋１０ng／mL  ＩＦＮ−γによるＴＡＲＣ誘導に対する効果を図１に示す。図１中、ＮＣはネガティブコントロールであり、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γによる刺激をしない場合である。ＰＣはポジティブコントロールであり、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γのみの刺激をした場合である。
図１より、マルメロ果肉熱水抽出物（ＦＳＥ）及びマルメロ果皮熱水抽出物にＴＡＲＣ発現抑制作用が認められ、マルメロ果皮熱水抽出物のＴＡＲＣ発現抑制作用が強かった。
【００２４】
（２）２０ng／mL  ＴＮＦ−αによるＴＡＲＣ誘導に対する効果を図２に示す。図２中のＮＣとＰＣは、図１と同じである。
図２より、マルメロ種子エタノール抽出物が、強力なＴＡＲＣ発現抑制作用を有することが判明した。また、マルメロ種子エタノール抽出物の添加量を２０ng／mLから７０００ng／mLに段階的に増加させることにより、さらにＴＡＲＣ発現抑制作用が増強することを確認した。
【００２５】
実施例３（マウス皮膚における抗アレルギー作用）
（１）マルメロ種子エタノール抽出物（種子ＥｔＯＨ）の調製
マルメロ種子をエタノール（特級品９９．５％）で１週間室温で浸漬した。抽出液を二重の市販ガーゼでろ過し、Ｎｏ．２ろ紙でろ過した。得られた抽出液に適量の水を加え、ロータリーエバポレーターで４０℃でエタノールを除去し、得られた懸濁液をフリーザーで凍結した。抽出物の固形分収率は０．４％であった。
【００２６】
（２）マウス皮膚における抗アレルギー作用
（方法）
１０週齢のＮＣ／Ｎｇａ系雌性マウスを、コントロール群、０．１％種子抽出物（０．１％ＳＥ固形分）塗布群及び１％種子抽出物（１％ＳＥ固形分）塗布群（各群６匹）に分けた。マウスの背部毛を剃り、０〜２８日の間１週間に２回背部をＳＤＳで処理して皮膚のバリア機能を低下させた後、ＥｔＯＨ（コントロール群）、種子抽出物を０．１％含むＥｔＯＨ（０．１％ＳＥ塗布群）、種子抽出物を１％含むＥｔＯＨ（１％ＳＥ塗布群）を１匹あたり１００μL塗布した。加えて７日〜２８日の間１週間に２回（種子ＥｔＯＨ塗布と同日）背部にダニ抗原入り軟膏を１匹あたり１００mg塗布した。その後１週間に１回ずつ、Allergology International, Vol 56, No.2, 2007:139-148の記載に従って皮膚症状スコア（発赤、痂皮形成・乾燥、浮腫、擦傷・組織欠損）を測定した。また、２８日目のマウス皮膚背部におけるＴＡＲＣ遺伝子発現量を測定した。さらに、２８日目のマウス背部皮膚における病理組織学的検査を行った。
【００２７】
（結果）
（１）マウスの皮膚症状スコアの変化を図３に示す。図３から明らかなように、種子ＥｔＯＨ（図３中ＳＥ）塗布により、アトピー性皮膚炎モデルであるＮＣ／Ｎｇａ系マウスに対して有意な皮膚症状の低下をもたらした。
また、種子ＥｔＯＨ塗布群は、病理組織学的検査におけるＨＥ染色標本で、表皮の痂皮形成及び表皮の肥厚を抑制し、真皮及び皮下組織の炎症性細胞の浸潤を抑制した。また、種子ＥｔＯＨ塗布群は、トルイジン青染色標本で、真皮及び皮下組織での肥満細胞出現度を抑制した。
【００２８】
（２）マウス皮膚背部におけるＴＡＲＣ遺伝子発現量の測定結果を図４に示す。
図４より、種子ＥｔＯＨ（図４中ＳＥ）塗布により、ＮＣ／Ｎｇａ系マウスのＴＡＲＣ遺伝子発現量が有意に低下した。
【００２９】
［処方例１］クリーム
下記の処方（単位は質量％）により、クリームを製造した。
（１）精製水  ６９．９
（２）メチルパラベン  ０．１５
（３）ジプロピレングリコール  ２．５
（４）オリーブ油  １２．０
（５）硬化油  ４．０
（６）パルミチン酸イソプロピル  １．８
（７）セタノール  １．５
（８）ステアリン酸  ３．５
（９）親油型モノステアリン酸グリセリン  ２．８
（１０）モノステアリン酸ソルビタン  ０．２
（１１）ポリオキシエチレンステアリルエーテル  １．０
（１２）プロピルパラベン  ０．０５
（１３）ジステアリン酸ポリエチレングリコール（１）  ０．５
（１４）フェノキシエタノール  ０．３
（１５）マルメロ種子１０％ＥｔＯＨ抽出物（種子１０％ＥｔＯＨ）  １．０
【００３０】
〔製法〕上記成分（１）に（２）、（３）を加え８０℃に加熱溶解し水相とする。成分（４）〜（１３）を８０℃に加熱溶解し油相とする。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら４０℃まで冷却する。成分（１４）、（１５）を加え、３０℃まで攪拌冷却してクリームを得た。
【００３１】
［処方例２］乳液
下記の処方（単位は質量％）により、乳液を製造した。
（１）精製水  ９１．９
（２）ジプロピレングリコール３．０
（３）キサンタンガム  ０．２
（４）メチルパラベン  ０．２
（５）モノステアリン酸ポリエチレングリコール  ０．３
（６）自己乳化型モノステアリン酸グリセリル  ０．９
（７）オリーブ油  ２．５
（８）マルメロ種子１０％ＥｔＯＨ抽出物（種子１０％ＥｔＯＨ）  ０．１
【００３２】
〔製法〕上記成分（１）に（２）、（３）を加え８０℃に加熱溶解し水相とする。成分（４）〜（７）８０に加熱溶解し油相とする。油相に水相を徐々に加え乳化し、攪拌しながら４０℃まで冷却する。成分（８）を加え、３０℃まで攪拌冷却して乳液を得た。
【００３３】
［処方例３］リキッドファンデーション
下記の処方（単位は質量％）により、リキッドファンデーションを製造した。
（１）精製水  ５７．７
（２）濃グリセリン  ８．０
（３）１，３ブチレングリコール  ８．０
（４）マルメロ種子１０％ＥｔＯＨ抽出物（種子１０％ＥｔＯＨ）  ０．１
（５）エタノール  ５．０
（６）メチルパラベン  ０．１
（７）ブチルパラベン  ０．１
（８）セリサイト  ８．０
（９）酸化チタン  １０．０
（１０）酸化鉄  １．０
（１１）メチルポリシロキサン  ０．５
（１２）ネオペンチルグリコール  １．５
【００３４】
〔製法〕上記成分（１）に（２）〜（４）を加え室温で攪拌し水相とする。成分（５）〜（７）を攪拌して溶解した後、水相に加え室温で攪拌する。成分（８）〜（１０）を攪拌して混合し、成分（１１）、（１２）を加え攪拌混合し、顔料粉末とする。水相に顔料粉末加え室温で攪拌し、リキッドファンデーションを製造した。
【要約】      （修正有）【課題】アトピー性皮膚炎等の予防治療に有用な安全で連続使用可能な抗アレルギー剤の提供。【解決手段】マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤。マルメロ種子抽出物又はマルメロ果実抽出物が、有機溶媒抽出物又は水抽出物である抗アレルギー剤。前記有機溶媒が、アルコールである抗アレルギー剤。抗アレルギー剤が、アレルギー性皮膚疾患予防治療用組成物である抗アレルギー剤。【選択図】なし【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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