(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１作動活性及びＧＩＰＲ刺激活性を有しており、且つ、下記の一般式Ｉに表されるアミノ酸配列を含み、
Ｔｙｒ−Ａ２−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａ１３−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａ１７−Ａ１８−Ａ１９−Ａ２０−Ａ２１−Ａ２２−Ａ２３−Ａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａ２７−Ａ２８−Ａ２９−Ｙ                                                  一般式Ｉ
ここで、
Ａ２は、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、及びＡｌａからなる群から選択され、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、及びＰｈｅ（４−ＮＨ２）から選択され、
Ａ１７は、Ｇｌｕ、及びＧｌｎからなる群から選択され、
Ａ１８は、Ａｌａ、及びＨｉｓからなる群から選択され、
Ａ１９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅからなる群から選択され、
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｕ、及びＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ２１は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２２は、Ｐｈｅであり、
Ａ２３は、Ｉｌｅ、及びＶａｌからなる群から選択され、
Ａ２４は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２７は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−Ｚ、Ａｌａ、Ａｒｇ、及びＡｓｎからなる群から選択され、
Ａ２９は、Ｇｌｙであり、
Ｙは、Ａ３０、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ４０、及び欠失（ａｂｓｅｎｔ）からなる群から選択され、
Ａ３０とＡ４０は、独立して、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、−Ｃｙｓ−Ｚ、及び欠失からなる群から選択され、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数であり、
且つ、ＧＩＰアナログのｉ位及びｉ＋４位のアミノ酸の間に任意的に形成されてもよいラクタム連鎖（ｌａｃｔａｍ  ｌｉｎｋａｇｅ）を形成しており、ｉは１２〜２４から選択された整数であること、
を特徴とするＧＩＰ（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に由来するＧＩＰアナログ、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
一般式Ｉにおいて、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、及びＰｈｅ（４−ＮＨ２）から選択され、
Ａ１８は、Ａｌａであり、
Ａ１９は、Ｖａｌ、及びＡｌａからなる群から選択され、
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｕ、及びＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ２１は、Ｇｌｕ、及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２２は、Ｐｈｅであり、
Ａ２３は、Ｉｌｅであり、
Ａ２７は、Ｖａｌ、及びＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−Ｚ、及びＡｓｎからなる群から選択され、且つ
Ａ２９は、Ｇｌｙであり、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｍは、０〜３から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項３】
一般式Ｉにおいて、
Ｙは、Ａ３０や欠失であり、
Ａ３０は、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、−Ｃｙｓ−Ｚ、及び欠失からなる群から選択され、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜２のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項４】
一般式Ｉにおいて、
Ｙは、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ４０であり、
Ａ４０は、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、−Ｃｙｓ−Ｚ、及び欠失からなる群から選択され、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜２のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項５】
一般式Ｉにおいて、
Ｙは、欠失であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項６】
一般式Ｉにおいて、Ｙは、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒであることを特徴とする請求項１、２、４のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項７】
一般式Ｉにおいて、Ａ２は、Ａｉｂであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項８】
一般式Ｉにおいて、Ａ１３は、Ｔｙｒであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項９】
一般式Ｉにおいて、Ａ１７は、Ｇｌｕであることを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１０】
一般式Ｉにおいて、Ａ１９は、Ｖａｌであることを特徴とする請求項１〜９のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１１】
一般式Ｉにおいて、Ａ２０は、Ａｒｇであることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１２】
一般式Ｉにおいて、
Ａ２４は、Ｃｙｓ−Ｚであり、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧであり、
ｍは、０〜３から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１３】
一般式Ｉにおいて、
Ａ３０とＡ４０は、独立して、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚであり、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１４】
一般式Ｉにおいて、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、及び−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、
ｍは、０〜２から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１５】
Ｇｌｕは、γ−Ｇｌｕであること、
を特徴とする請求項１４に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１６】
一般式Ｉにおいて、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧであり、
ｍは、０〜２から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１７】
Ｇｌｕは、γ−Ｇｌｕであること、
を特徴とする請求項１６に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１８】
一般式Ｉにおいて、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、
ｍは、０〜２から選択された整数であること、
を特徴とする請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項１９】
Ｇｌｕは、γ−Ｇｌｕであること、
を特徴とする請求項１８に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２０】
一般式Ｉにおいて、
ＧＩＰアナログのｉ位及びｉ＋４位のアミノ酸の間にラクタム連鎖を形成しており、ｉは１２、１６、及び２４から選択された整数であることを特徴とする請求項１〜１９のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２１】
脂肪酸は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、及びコール酸からなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜２０のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２２】
ＰＥＧの分子量は、５ｋＤａ〜４０ｋＤａから選択されることを特徴とする請求項１〜２１のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２３】
ＰＥＧの分子量は、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａであること
を特徴とする請求項１〜２１のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２４】
ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、１８−２１、３１−３５、３８−４７、４９−５９、６２−６４、６６−７４、７６−７８、及び８０−８３に表される配列からなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜２１のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２５】
ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８、１９、２０、２１、３５、４５、５２、６３、６５、７２、７４、及び８０に表される配列からなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜２４のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２６】
ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２、７２、及び７４に表される配列からなる群から選択され、且つ、上記の配列は、２０位、２４位、及び／またはＣ−末端に連結された少なくとも一つの脂肪酸部分（ｍｏｉｅｔｙ）を有することを特徴とする請求項１、２、４〜２５のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２７】
ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、及び７４に表される配列からなる群から選択され、且つ、上記の配列は、２０位、２４位、及び／またはＣ−末端に連結された少なくとも一つのＰＥＧ部分（ｍｏｉｅｔｙ）を有することを特徴とする請求項１、２、４〜２５のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２８】
ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４に表されるアミノ酸配列を含み、且つ、２４位に連結されたＰＥＧ部分とＣ−末端に連結された脂肪酸部分とを有することを特徴とする請求項１、２、４〜２５のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ。
【請求項２９】
有効量の請求項１〜２８のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログ、薬学的に許容できる希釈剤、担体または賦形剤、及び任意的に含有されてもよい抗糖尿病剤を含み、前記抗糖尿病剤は、インスリン系（ｉｎｓｕｌｉｎｓ）、ビグアニド系（ｂｉｇｕａｎｉｄｅｓ）、スルホニル尿素系（ｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｕｒｅａ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）またはピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、α−グルコシダーゼ阻害剤（ａｌｐｈａ−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、及びアミノジペプチダーゼＩＶ（ａｍｉｎｏｄｉｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ＩＶ）阻害剤から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項３０】
医薬組成物の剤形は、注射剤または凍結乾燥粉末剤であることを特徴とする請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩、又は、請求項２９又は３０に記載の医薬組成物の、代謝疾患を治療する医薬を製造するための使用。
【請求項３２】
前記代謝疾患は、糖尿病、肥満症、及び骨粗鬆症からなる群から選択されることを特徴とする請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載のＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩の、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）及び／又はインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）に同時にＧＩＰ及びＧＬＰ−１受容体を活性化させる薬剤を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１１年６月１０日に出願された中国出願第２０１１１０１５６２９６．２号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、慢性代謝疾患の一種である。その主な特徴としては、グリコーゲン（ｇｌｙｃｏｇｅｎ）出力の増加、膵臓β細胞機能障害、インスリン分泌不足とインスリン抑制、最終的に、継続的な高血糖の症状に発展されている（Ｇｒｅｅｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ、２００４、１０）。Ｔ２Ｄは、腎不全、失明や四肢切断の主な原因にもなり、さらに、世界的に心血管による高い死亡リスクとも緊密に関係している。また、肥満症の迅速な増加に伴い、Ｔ２Ｄは、更に流行になり、且つ、この現象は、発展途上国では非常に顕著であると考えられる。しかしながら、多くの抗糖尿病の治療は、すでにＦＤＡ（米国飲食医薬品局）に認可されたが、血糖値と体重をより良く制御する新しい治療手段が依然に必要である。
【０００３】
１９２９年に、Ｌａ  Ｂａｒｒｅは、インクレチン（ｉｎｃｒｅｔｉｎ）の概念（インスリンの腸内分泌）を提出した。この概念から、多年後、ユニークな糖尿病の治療方法を開発した。グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１、ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ−１）とグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ、ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）は、これまで、人体内で発見された活性の一番強い二つ種類のインクレチンである。過去３０年の間に、この二つ種類のポリペプチドに対して大規模な研究を行った（ＢａｇｇｉｏとＤｒｕｃｋｅｒ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２００７、１３２、２１３１−２１５７）。ＧＬＰ−１とＧＩＰは、それぞれ小腸内皮のＬ細胞とＫ細胞から分泌される。ＧＬＰ−１は、３０個または３１個のアミノ酸を含有するポリペプチドである。且つ、その前駆体であるプレプログルカゴンは翻訳後遺伝子修飾によって産生される（Ｏｒｓｋｏｖら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１９８６、１１９、１４６７−１４７５）。さらに、ＧＩＰは、４２個のアミノ酸のポリペプチドの形式で分泌され、ＧＬＰ−１に対して、約６８％の配列相同性を持つ（Ｇａｌｌｗｉｔｚら、Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１９９６、６３、１７−２２）。
【０００４】
ＧＬＰ−１とＧＩＰのいずれも、それぞれの特異的受容体と結合して、相応的な生理作用を発生する。それらは、それぞれのＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）とＧＩＰ受容体（ＧＩＰＲ）と結合する。当該二つ種類の受容体は、いずれもＧタンパク質共役受容体（Ｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）ファミリーに属する（Ｓｅｉｎｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、２０１０、１、８−２３）。ＧＬＰ−１とＧＩＰは、いずれも栄養物質が吸収された後、グルコース依存性の方式でインスリンの分泌を促進する。他の伝統的な糖尿病の治療方法と比較すると、例えば、インスリン注射、スルホニル尿素（ｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｕｒｅａ）とメトホルミンの経口投与等と比較すると、これらのグルコース依存性の作用方式は、低血糖の可能性を最大限に減少させた。また、これらの二つ種類のポリペプチドは、インスリンの生物的合成を促進することができ、膵臓β細胞の増殖を向上し、β細胞の死滅を抑制することができるため、潜在的にβ細胞の機能を保護することができ、Ｔ２Ｄの発展を遅らせることができる（Ｇｒｅｅｎ．Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、２００７、２１、４９７−５１６）。ＧＬＰ−１とＧＩＰとの上記の特徴は、これらを非常に開発前途があるＴ２Ｄ及びその他の代謝疾患の潜在的治療薬になるようにする。
【０００５】
ＧＬＰ−１とＧＩＰとは、潜在的抗糖尿病活性を持つとしても、インビボでディペプチディルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ、ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ−ＩＶ）によって迅速に不活性型（ＧＬＰ−１（９−３７または９−３６）、及びＧＩＰ（３−４２））に分解され、インビボの循環過程で除去される（Ｄｅａｃｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９９５、８０、９５２−９５７）。この酵素は特異的にＮ−末端の２位のアラニン（ａｌａｎｉｎｅ）、プロリン（Ｐｒｏｌｉｎｅ）、またはヒドロキシプロリン（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ）を分解する。従って、内因性ＧＬＰ−１とＧＩＰは、ＤＰＰ−ＩＶの分解作用によって人体内の半減期が非常に短い（Ｄｅａｃｏｎら、Ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、３６、７６１−７６５）。これは、外因性のＧＬＰ−１とＧＩＰが抗糖尿病の治療に直接使用することができない原因である。
【０００６】
数多くの研究組織では、ＧＬＰ−１及びＧＩＰの天然配列に対して構造修飾を行い、ＤＰＰ−ＩＶを抵抗する目的を達成する。まず、それぞれのＧＬＰ−１とＧＩＰのＨｉｓ７  とＴｙｒ１残基に様々な官能基を置換してＮ−末端を延長する（Ｇｒｅｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００４、１８０、３７９−３８８；Ｏ’Ｈａｒｔｅら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、１９９９、４８、７５８−７６５）。次ぎ、ＧＬＰ−１の配列中のＡｌａ８とＧｌｕ９、及びＧＩＰの配列中のＡｌａ２とＧｌｕ３はそれぞれ広範囲の他のアミノ酸、ひいては、いくつかの非通常のアミノ酸に置換されている（Ｇｒｅｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００３、３１、５２９−５４０；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３、３８４、１５４１−１５５１；Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、２００４、５３、２５２−２５９；Ｇａｕｌｔら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２００３、１７６、１３３−１４１；Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、２００３、５２、６７９−６８７；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ＆Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２００２、２９０、１４２０−１４２６；Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２００３、４６、２２２−２３０）。最終的に、ＧＬＰ−１とＧＩＰは、短鎖又は長鎖の脂肪酸に連結され、インビボの循環時間及び生体利用度を延長させる（ＨｏｌｚとＣｈｅｐｕｒｎｙ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３、１０、２４７１−２４８３；Ｉｒｗｉｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５、４８、１２４４−１２５０；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００６、４９、１０４７−１０５４）。このような構造修飾は、多くの異なる生物的活性を有するＧＬＰ−１とＧＩＰのアナログを産生するとともに、これらのＤＰＰ−ＩＶ分解作用に対する耐性を大きく向上した。
【０００７】
１９９２年に、トカゲの毒液から最初に分離され、且つ、識別されたエクセンディン−４（ｅｘｅｎｄｉｎ−４）は、３９個のアミノ酸で組成されたポリペプチドである（Ｅｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９２、２６７、７４０２−７４０５）。ｅｘｅｎｄｉｎ−４は、ＧＬＰ−１と比べ、約５３％の配列相同性を有している。実験によると、ｅｘｅｎｄｉｎ−４は、インビボとインビトロの両方でも、純粋で強力なＧＬＰ−１受容体作動薬である。ｅｘｅｎｄｉｎ−４は、天然のＧＬＰ−１と非常に似ている生理的作用を発生することができ、胃内容物排出、インスリン分泌、食物摂取及びグルカゴン（ｇｌｕｃａｇｏｎ）の分泌を調節することができる。Ｅｘｅｎｄｉｎ−４は、正常なげっ歯類及び糖尿病を患うマウスとラットの実験モデルでは、いずれも血糖値の低下を引き起こすことができる（Ｒａｕｆｍａｎ、Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１９９６、６１、１−１８）。主には、その薬物動力学的特性が向上されたので、インビボでの薬理活性は、天然のＧＬＰ−１によりはるかに優れている。Ｅｘｅｎｄｉｎ−４の配列の２位にグリシン（Ｇｌｙｃｉｎｅ）で置換され、天然のＧＬＰ−１配列と異なり、同じ位置にアラニンではない。従って、Ｅｘｅｎｄｉｎ−４は、ＤＰＰ−ＩＶ分解に対してより良い安定性を持ち、インビボでの半減期は、天然のＧＬＰ−１よりはるかに長い。化学的に合成されたｅｘｅｎｄｉｎ−４（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ、エクセナチド）は、アミリン（Ａｍｙｌｉｎ）会社とイーライリリー（ＥｌｉＬｉｌｌｙ）会社との協力で開発されたものである。極強力な血糖低下の特徴及び比較的長いインビボ作用時間に基づき、エクセナチドは２００５年にＦＤＡに許可されて発売しており、商品名は、バイエッタ（Ｂｙｅｔｔａ）である。現在、エクセナチドは、皮下注射で１日２回投与される。週に１回投与されることができる長期有効性のｅｘｅｎｄｉｎ−４製剤（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ−ＬＡＲと命名され）は、動物モデルと人に対して大規模な研究が行われた（Ｇｅｄｕｌｉｎら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２００５、４８、１３８０−１３８５；Ｄｒｕｃｋｅｒら、Ｌａｎｃｅｔ、２００８、３７２、１２４０−１２５０）。
【０００８】
エクセナチドの巨大な成功に励まされ、ノボノルディスク（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）会社では、人間のＧＬＰ−１と約９７％の配列同一性を有する長期有効性のＧＬＰ−１アナログであるリラグルチド（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）を開発した。天然のＧＬＰ−１（７−３７）の配列に基づき、リラグルタイドは、３４位にアルギニン置換を導入した同時に、２６位のリジン（ｌｙｓｉｎｅ）のε−アミン（ｅｐｓｉｌｏｎ−ａｍｉｎｅ）に一つのγ−グルタミル（γ−Ｇｌｕｔａｍｙｌ）をスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）としてパルミトイル（ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）と連結される。これにより、パルミトイル連結は、血清アルブミンとの結合及びポリペプチドの凝集によって、インビボでＤＰＰ−ＩＶから保護され、インビボで循環する速度を著しく延長した（Ｍａｌｍ−Ｅｒｊｅｆaｌｔら、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ：ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｆａｔｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、２０１０、３８、１９４４−１９５３）。リラグルタイドは、２００９年と２０１０年に、ＥＭＡ（欧州医薬品庁）とＦＤＡにそれぞれ許可され発売しており、商品名は、ビクトーザ（Ｖｉｃｔｏｚａ）であり、毎日一回、皮下注射でＴ２Ｄを治療するために用いられる。リラグルタイドは、現在、抗肥満症（非糖尿病性群）の３期臨床実験に関する探索研究を進めている（Ａｓｔｒｕｐら、Ｌａｎｃｅｔ、２００９、３７４、１６０６−１６１６）。他のＧＬＰ−１とｅｘｅｎｄｉｎ−４アナログ、例えばｔａｓｐｏｇｌｕｔｉｄｅ（タスポグルタイド）、ａｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ（アルビグルータイド）とｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ（リキシセナチド）等は、単一のＧＬＰ−１受容体作動薬として、いずれも臨床開発の後期にある。
【０００９】
ＧＩＰは、正常の個体で約６０％のインクレチン効果（Ｎａｕｃｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９８６、６３、４９２−４９８）を有するとしても、ＧＩＰアナログを抗糖尿病薬とする治療への応用の発展は極大な制限を受けている。一部のＴ２Ｄ被験体（すべての被験体ではない）に、膵臓β細胞がＧＩＰに対する応答は著しく減少したり、消失する（Ｋｒａｒｕｐら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９８７、３６、６７７−６８２；Ｊｏｎｅｓら、Ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９８９、２１、２３−２６）。従って、Ｔ２Ｄ患者インビボにＧＩＰを静脈内注射した後、比較的弱いインスリン分泌作用が発生したことだけが発見された。ＧＩＰと逆に、ＧＬＰ−１は、様々な程度のＴ２Ｄ被験体に対しインスリンの分泌を効果的に刺激できることが示される（Ｎａｕｃｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、１９９３、９１、３０１−３０７）。
【００１０】
ＧＩＰのインスリンの分泌刺激効果の弱化は、ＧＩＰ受容体の慢性脱感（ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）によるものであるか（Ｔｓｅｎｇら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１９９６、２７０、Ｅ６６１−６６６）、または、ＧＩＰ受容体がＴ２Ｄ患者の膵臓β細胞での発現の減少によるものであるかの可能性がある（Ｈｏｌｓｔら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、１９９７、４０、９８４−９８６）。ＧＩＰに対する臨床応用研究が比較的少ないが、ＧＩＰがＴ２Ｄの発症メカニズムと緊密に関連していることが実証された（Ｍｅｉｅｒら、Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００２、１０７、１−１３）。最近の文献に、Ｎ−末端が修飾されたＧＩＰアナログは、インスリンがグルコースの感度を向上させることができ、また、肥満糖尿病を患っているｏｂ／ｏｂマウスモデルで血糖低下作用を発生できることが報告された（Ｏ’Ｈａｒｔｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２０００、１６５、６３９−６４８）。
【００１１】
一方、ＧＩＰがＴ２Ｄにインスリンの分泌を減少させることは、通常、点滴静脈内投与方法で発生されるが、他の断続的投与方法には多く見られない（Ｍｅｉｅｒら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２００４、５３、Ｓ２２０−２２４）。また、高血糖の症状が良くなるとき、Ｔ２Ｄ患者の膵臓β細胞は、内因性及び外因性のＧＩＰへの応答を回復することができる（Ｐｉｔｅａｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２００７、３６２、１００７−１０１２）。従って、ＧＩＰは、潜在的なＴ２Ｄの治療方法として、再び注目を集めた。例えば、Ｎ−ＡｃＧＩＰは、単独使用、またはｅｘｅｎｄｉｎ−４と連合して使用するとき、いずれも、飲食に誘導された肥満糖尿病モデルにおいて血糖値を顕著に下げ、グルコースの耐性を向上した（Ｉｒｗｉｎら、Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２００９、１５３、７０−７６）。
【００１２】
ＧＬＰ−１とＧＩＰに誘導されたインスリン分泌刺激効果は、ＧＬＰ−１とＧＩＰがグルコース依存性インスリン分泌刺激及び細胞内ｃＡＭＰの生成方面において、協力効果と強化作用があることを実証された（Ｇａｌｌｗｉｔｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１９９３、２５９−２６８；Ｓｉｅｇｅｌら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、１９９２、２２、１５４−１５７；Ｎａｕｃｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９９３、７６、９１２−９１７）。多くの研究組織では、ＧＬＰ−１Ｒ及びＧＩＰＲを同時に活性化させることができる合成されたＧＬＰ−１／ＧＩＰヘテロペプチドを開発することに努力してきた。
【００１３】
Ｇａｌｌｗｉｔｚらは、いくつかの合成されたＧＬＰ−１／ＧＩＰキメラペプチドを報道した。そのＮ−末端とＣ−末端の３分の１の配列は、そのうちの一つのポリペプチドに由来され、中間部分は、別のポリペプチドに由来される。その他、ポリペプチド配列の１３位及び１５位に別の単一の変異を有するヘテロペプチド、及びＣ−末端の３分の１だけが置換されたキメラペプチドも製造される。しかしながら、Ｎ−末端の２２個のアミノ酸とＧＩＰ様断片との置換、及び１３位と１５位との二つの位置の改変は、いずれもこれらのヘテロペプチドとＧＬＰ−１Ｒの結合親和性（親和性が２８０倍〜１０００倍に減少する）に影響を与える。ＧＩＰのＣ−末端でＧＬＰ−１配列の対応部分を置換することは、ＧＬＰ−１Ｒとの親和性を２０倍程度だけを減少した。これらのヘテロペプチドは、いずれもＧＩＰＲで非常に弱い結合親和性を持っている（Ｇａｌｌｗｉｔｚら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９９５、２、３９−４６；Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１９９６、６３、１７−２２）。
【００１４】
ＧＩＰの生物的活性部位が既に知られていることを基礎として、Ｈｉｎｋｅも五つの種類のＧＩＰ／ＧＬＰ−１ヘテロペプチドを報道しており、且つ、これらのポリペプチドを使用してＧＩＰとＧＬＰ−１の結合及び活性化領域を明確にした。これらの合成されたキメラペプチドは、ＧＬＰ−１［１−１４］／ＧＩＰ［１５−３０］ＮＨ２（ＣＨ１）、ＧＩＰ［１−１４］／ＧＬＰ−１［１５−３０］ＮＨ２（ＣＨ２）、ＧＬＰ−１［１−１１］／ＧＩＰ［１２−３０］ＮＨ２（ＣＨ３）、ＧＩＰ［１−１１］／ＧＬＰ−１［１２−１８］／ＧＩＰ［１９−３０］ＮＨ２（ＣＨ４）及びＧＩＰ［１−１４］／ＧＬＰ−１［１５−１８］／ＧＩＰ［１９−３０］ＮＨ２（ＣＨ５）である。ＧＬＰ−１の下付きのアミノ酸番号は、一次配列に従い配列されたものである（即ち、ＧＬＰ−１［７−３７］＝ＧＬＰ−１［１−３１］）。ＧＩＰＲとＧＬＰ−１Ｒによって形質感染したＣＨＯ細胞における実験によると、これらのキメラペプチドにＧＬＰ−１の配列を添加したことは、これらのＧＩＰＲとの親和性や生物的活性を向上されていない（Ｈｉｎｋｅら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００４、７５、１８５７−１８７０）。
【００１５】
特許ＷＯ２０１００１１４３９は、修飾されたグルカゴンアナログを開示した。このグルカゴンアナログは、グルカゴン及び／またはＧＬＰ−１活性を有することに加え、非常に強力なＧＩＰ受容体活性化能力を示した。このようなヘテロペプチドは、グルカゴンの配列に基づき開発されたものである。グルカゴンの中間部分（１７〜１９）は、ＧＬＰ−１の配列によって置換されると同時に、Ｃ−末端はｅｘｔｅｎｄｉｎ−４の残基（３０〜３９）に置換される。また、上記特許において、２位と２０位にそれぞれのα、α−二置換されたアミノ酸修飾は、ＤＰＰ−ＩＶから保護作用及びＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲとの同時活性化を得るために非常に重要な役割があることが開示された。ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＩＰＲ二重作動薬は、飲食に誘導された肥満（ＤＩＯ）マウスに対して、純粋なＧＬＰ−１作動薬（例えば、ｅｘｅｎｄｉｎ−４とリラグルタイド）に比べて、より優れた血糖低下作用及び体重低下作用を示した。これらの二重作動薬は、ひいては、ＧＬＰ−１Ｒノックアウト（ｋｎｏｃｋｏｕｔ）された動物モデルに血糖値の低下と体重の低下を起こすことができる（ＤｉＭａｒｃｈｉとＭａ．ＷＯ２０１００１１４３９、２００９、６月、１６）。
【００１６】
注目すべきであることは、報道によると、簡単にＧＬＰ−１とＧＩＰを同時に経口投与してもＴ２Ｄ患者のインスリン分泌作用をいっそう向上させることなく、血糖値もいっそう低下させることができない（Ｍｅｎｔｉｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１２７０−１２７６）。これは、ＧＬＰ−１とＧＩＰを簡単に組み合わせても、これらのそれぞれの臨床的に表現されたインスリン分泌刺激効果について協同効果や強化作用を引き起こすことができないと表明したと考えられる。同様に、Ｇａｕｌも、下記のようなことを報道した。リラグルタイドとＮ−ＡｃＧＩＰと、または両者の簡単なペプチド組み合わせと比較すると、リラグルタイド−Ｎ−ＡｃＧＩＰの単一の製剤は、正常のオスのＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓ  ＴＯ  マウス及び肥満糖尿病（ｏｂ／ｏｂ）マウス  に更なる強力な血糖低下作用及びインスリン分泌刺激を発生することができる（Ｇａｕｌｔら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１１、１２１、１０７−１１７）。
【００１７】
発明内容
本発明の記載通り、天然のＧＩＰの配列（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に基づくＧＩＰアナログが開示された。これらのポリペプチドは、部分的に、顕著なＧＬＰ−１受容体活性を示すと同時にＧＩＰＲ刺激活性を示した。本発明は、前記ＧＩＰアナログを糖尿病や肥満などの代謝疾患を治療する薬物に用いられる方法も提供した。
【００１８】
一方、本発明に提供されるＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１とＧＩＰとの二重活性を有している。ＧＩＰ及び／またはＧＬＰ−１の活性は、当業者が、本分野の既存のインビボ及びインビトロの方法によって測定される（ＦａｎＲ、ＫａｎｇＺ、ＨｅＬ、ＣｈａｎＪ、ＸｕＧ（２０１１）Ｅｘｅｎｄｉｎ−４  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ｂｌｏｏｄ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  Ｂｏｔｈ  Ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｎｏｎ−Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍｉｃｅ、Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｅｔａ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｅｆｆｅｃｔｓ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ６（５）：ｅ２０４４３．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２０４４３；Ｄａｖｉｄ  Ｇ．Ｐａｒｋｅｓら、Ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｅｘｅｎｄｉｎ−４  ａｎｄ  Ｇｌｕｃａｇｏｎ−Ｌｉｋｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−１  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、Ｖｏｌ  ５０、Ｎｏ５（Ｍａｙ）、２００１：ｐｐ５８３−５８９；Ｊｅｎｓ  Ｊｕｕｌ  Ｈｏｉｓｔ、Ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  １；Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ８７：１４０９−１４３９、２００７；ｄｏｉ：１０．１１５２／ｐｈｙｓｒｅｖ．０００３４．２００６；及びＭ．Ｓｈｉｍｏｄａら、Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ  ｐｒｅｓｅｒｖｅｓ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｂｅｔａ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ（２０１１）５４：１０９８−１１０８、ＤＯＩ１０．１００７／ｓ００１２５−０１１−２０６９−９）。
【００１９】
例えば、何れかのポリペプチドのＥＣ５０値は、一般的に、後述する実施例８に詳細に記載されたように、ｃＡＭＰ誘導試験によって測定される（Ｍｅｅｒａ  Ｋｕｍａｒら、Ａ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ−Ｂａｓｅｄ、ＨＴＳ−Ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ａｓｓａｙ  ｔｏ  Ｍｏｎｉｔｏｒ  Ｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃｙｃｌｉｃ  ＡＭＰ、ＡＳＳＡＹ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖｏｌ．５、Ｎｏ．２、２００７；ＹｕｘｉｎＹａｎら、Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ  Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ＧＰｒｏｔｅｉｎ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  β−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、Ｖｏｌ．７、Ｎｏ．５、２００２；Ｔｈｏｍａｓ  Ｃ．ＲｉｃｈとＪｅｆｆｒｅｙ  Ｗ．Ｋａｒｐｅｎ．、Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｌｉｖｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ．３０７：Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ；Ｊａｙｎｅ  Ｈｅｓｌｅｙら、Ｓｔａｂｌｅ、Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｃＡＭＰ、Ｂｉｏ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ３３：６９１−６９４（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００２）；及びＣｈｒｉｓｔｉｎｅ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ．、ｃＡＭＰ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＦＮ  ＨＴＳ：Ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｂｅｓｔ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｖｏｌ．３、Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００４）。
一つの実施形態において、本発明によって提供されるＧＩＰアナログ（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）は、下記の実施例８に記載される汎用のｃＡＭＰ誘導試験方法によって測定されると、少なくとも０．０１％の天然のＧＬＰ−１のＧＬＰ−１受容体に対する作動活性（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）、例えば、少なくとも０．１％、０．２％、０．５％、０．８％、１％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％の天然のＧＬＰ−１のＧＬＰ−１受容体に対する作動活性を有し、及び／または少なくとも０．０１％のＧＩＰのＧＩＰ受容体に対する作動活性、例えば、少なくとも０．１％、０．２％、０．５％、０．８％、１％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％の天然のＧＩＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）のＧＩＰ受容体に対する作動活性を有する。
【００２０】
ＧＩＰアナログは、下記の少なくとも一つの修飾でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列から誘導されることができる。
（１）７位のアミノ酸を置換してそのＧＬＰ−１受容体とＧＩＰ受容体に対する作動活性を誘導する。
（２）１３位のアミノ酸を置換してそのＧＬＰ−１とＧＩＰ受容体の能力を向上させる。
（３）２２位のアミノ酸を置換してそのＧＬＰ−１とＧＩＰ受容体の能力を向上させる。
【００２１】
または、アナログは、下記の少なくとも一つの修飾でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列から誘導されることができる。
（１）７位のアミノ酸を置換してそのＧＬＰ−１受容体とＧＩＰ受容体に対する作動活性を誘導する。
（２）１３位のアミノ酸を置換してそのＧＬＰ−１受容体及びＧＩＰ受容体の能力を向上させる。
（３）Ｃ−末端に１〜２０個のアミノ酸を延長させる。
【００２２】
本発明において、記載のアミノ酸位置番号と本文のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に表されるアミノ酸配列の同じ位置と一致している。より具体的に、その位置は、序列と本文のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に表されるアミノ酸配列をアラインメントして鑑定れたものである。
【００２３】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログは、２位をＡｉｂに置換されて、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列とアラインメントすると、上記置換（ＡｌａをＡｉｂに置換され）は、これにより得られたＧＩＰアナログのＤＰＰ−ＩＶ酵素に対する安定性を向上した。
【００２４】
一つの実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列とアラインメントする結果、本発明のＧＩＰアナログの７位のアミノ酸はＴｈｒである。
【００２５】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログの１３位のアミノ酸は、その側鎖にアリール基を含有する。側鎖にアリール基を含有するアミノ酸は、Ｔｙｒ、Ｔｙｒの誘導体、ＰｈｅとＰｈｅの誘導体から選択される。一つの実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列とアラインメントする結果、本発明のＧＩＰアナログの１３位のアミノ酸はＴｙｒである。
【００２６】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログの１６位のアミノ酸は、正電荷を荷電したアミノ酸であり、例えば、ＬｙｓまたはＡｒｇであるが、これに限定されない。
【００２７】
一つの実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列とアラインメントする結果、本発明のＧＩＰアナログの１７位のアミノ酸はＧｌｕである。
【００２８】
一つの実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列とアラインメントする結果、本発明のＧＩＰアナログの１９位のアミノ酸はＶａｌである。
【００２９】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログの２０位のアミノ酸は、正電荷を荷電したアミノ酸であり、例えば、ＬｙｓまたはＡｒｇであるが、これに限定されない。一つの実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列とアラインメントする結果、本発明のＧＩＰアナログの２０位のアミノ酸はＡｒｇである。
【００３０】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログの２２位のアミノ酸は、ＰｈｅまたはＰｈｅ誘導体に置換されている。例えば、４−ハロ−フェニルアラニン（４−ｈａｌｏ−Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４−ニトロ−フェニルアラニン（４−ｎｉｔｒｏ−Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４−アミノフェニルアラニン（４−ａｍｉｎｏＰｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４−アルキルフェニルアラニン（４−ａｌｋｙｌＰｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４−メトキシフェニルアラニン（４−ｍｅｔｈｏｘｙＰｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、４−カルボキシフェニルアラニン（４−ｃａｒｂｏｘｙｌＰｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）及び飽和または不飽和環側鎖を有するＣｈａ、Ｃｈｇ及びＰｈｇを含むアナログなどの非通常のアミノ酸に置換される。
【００３１】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログの２９位のアミノ酸は、ＧｌｙまたはＧｌｎである。
【００３２】
さらなる態様において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列に誘導されるＧＩＰアナログは、少なくとも前記修飾における一つ種類の修飾を行った後、更に、修飾を行ってそのＧＬＰ−１の作動活性を向上させることができる。
【００３３】
一つの実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列に誘導されるＧＩＰアナログのＮ−末端領域（１−１６）は、２、７、１３位の一つまたは複数の位に少なくとも一つの修飾によって、ＧＬＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）またはｅｘｅｎｄｉｎ−４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９）の中間部分（１７〜２０位）及びＧＬＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）またはｅｘｅｎｄｉｎ−４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９）のＣ−末端領域（２１−２９）と融合する。
【００３４】
一つの実施形態において、ｅｘｅｎｄｉｎ−４の中間部分（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９の１７〜２０位のアミノ酸残基）は、本発明のＧＩＰアナログのペプチド骨格に組み込まれて、ＧＬＰ−１活性を向上させ、且つ、ＧＩＰ受容体作動活性を保持する。
【００３５】
一つの実施形態において、ＧＬＰ−１［７−３７］的Ｃ−末端領域（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の２７−３５位のアミノ酸残基）は、本発明のＧＩＰアナログのペプチド骨格に組み込まれて、ＧＬＰ−１活性を向上させ、ＧＩＰ受容体作動活性を保持する。
【００３６】
さらなる態様において、ＧＬＰ−１及び／またはｅｘｅｎｄｉｎ−４の領域融合して得られたＧＩＰアナログは、更に修飾を行って、その活性及び／または性質を向上させることができる。
【００３７】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログのＣ−末端は、ｅｘｅｎｄｉｎ−４の断片（３０〜３９位）、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳによって延長される。
【００３８】
一つの実施形態において、Ｃ−末端は、１〜１０個の正電荷を荷電したアミノ酸残基によって延長される。正電荷を荷電したアミノ酸残基はＬｙｓ及び／またはＡｒｇであり、Ｌｙｓであることが好ましい。正電荷を荷電したアミノ酸残基数は、１つ〜６つであることが好ましく、１つ〜４つであることがより好ましく、例えば、Ｃ−末端は、２つ、３つ、４つまたは５つの正電荷を荷電したアミノ酸残基によって延長される。好ましい一つの実施形態において、ＧＩＰアナログのＣ−末端は、オキシントモジュリン（ｏｘｙｎｔｏｍｏｄｕｌｉｎ）から由来した介在ペプチド（ｉｎｔｅｒｖｅｎｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ）（ＩＰ−１断片）ＫＲＮＲＮＮＩＡによって延長される。
【００３９】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログのｉ位とｉ＋４位のアミノ酸の間に、例えば、１２位と１６位のアミノ酸の間に塩橋（ｓａｌｔ  ｂｒｉｄｇｅ）を形成する。このような実施形態において、１２位と１６位のアミノ酸の一つは、負電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｇｌｕに置換され、他の一つは、正電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｌｙｓである。
【００４０】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログのｉ位とｉ＋４位のアミノ酸の間に、例えば、１２位と１６位のアミノ酸の間にラクタム環（Ｌａｃｔａｍ  ｒｉｎｇ）を形成する。このような実施形態において、１２位と１６位のアミノ酸の一つは、負電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｇｌｕに置換され、他の一つは、正電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｌｙｓである。
【００４１】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログのｊ位とｊ＋３位のアミノ酸の間に、例えば、１７位と２０位のアミノ酸の間に塩橋（ｓａｌｔ  ｂｒｉｄｇｅ）を形成する。このような実施形態において、１７位と２０位のアミノ酸の一つは、負電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｇｌｕに置換され、他の一つは、正電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｌｙｓである。
【００４２】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログのｊ位とｊ＋３位のアミノ酸の間に、例えば、１７位と２０位のアミノ酸の間にラクタム環（Ｌａｃｔａｍ  ｒｉｎｇ）を形成する。このような実施形態において、１７位と２０位のアミノ酸の一つは、負電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｇｌｕに置換され、他の一つは、正電荷を荷電したアミノ酸、例えば、Ｌｙｓである。
【００４３】
一つの実施形態において、ＧＩＰアナログは、本発明のＧＩＰアナログのｉ位とｉ＋４位のアミノ酸の側鎖の間に位置する塩橋を含んでおり、ここで、ｉは１２、１３、１６、１７、２０または２４である。
【００４４】
一つの実施形態において、ＧＩＰアナログは、本発明のＧＩＰアナログのｊ位とｊ＋３位に位置する塩橋を含んでおり、ここで、ｊは１７、１８、１９または２０である。
【００４５】
一つの実施形態において、本発明のＧＩＰアナログに含有されるＬｙｓのε−アミン（ｅｐｓｉｌｏｎ−ａｍｉｎｅ）は、脂肪酸部分、例えばＬｙｓ１６またはＬｙｓ１８と連結してもよい。脂肪酸は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びコール酸から選択されることができる。
【００４６】
一つの実施形態において、ε−アミン基（例えば、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ＤａｂまたはＤａｐ）は、本発明のＧＩＰアナログの２０、２４、２８、３２、３３及び／または３７位に位置する。一つの実施形態において、正電荷を荷電したアミノ酸残基の側鎖に共有結合されたアシル基は、３０位からＣ−末端までの任意の位に位置することができる。
【００４７】
一つの実施形態において、１６位Ｌｙｓのε−アミン基は脂肪酸にアシル化される。
【００４８】
一つの実施形態において、正電荷を荷電したアミノ酸残基の側鎖は、アシル化される。
【００４９】
一つの実施形態において、アシル基と連結しているアミノ酸は、４０位にあることが好ましい。
【００５０】
一つの実施形態において、ペプチド鎖と脂肪酸部分との間にスペーサーが挿入される。スペーサーは、１〜１０個のアミノ酸残基を含むペプチドであってもよく、例えば、（Ｇｌｕ）ｍであり、ｍは０〜３の間の整数である。
【００５１】
一つの実施形態において、スペーサは、単一のアミノ酸、または、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、ｄ−Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ、ｄ−Ａｌａ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−ｄ−ＡｌａまたはＧｌｕ−Ｇｌｕから選択されたジペプチドである。
【００５２】
一つの実施形態において、アシル基はＣ８−Ｃ２０の脂肪アシルであり、パルミトイルであることが最も好ましい。
【００５３】
一つの実施形態において、ＧＩＰアナログと親水性のポリマーとは、３０位からＣ−末端までの任意のアミノ酸位で共有結合して、薬物動力学的特性を著しく向上させる。一つの実施形態において、親水性ポリマーは、ＧＩＰアナログの２４位のアミノ酸と共有結合する。
【００５４】
一つの実施形態において、親水性ポリマーは、ＧＩＰアナログのＣｙｓ、ホモシステイン（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｂ、Ｄａｐまたはｐ−アミノ−フェニルアラニン（ｐ−Ａｍｉｎｅ−Ｐｈｅｎｙｌ  ａｌａｎｉｎｅ）の側鎖と結合する。
【００５５】
一つの実施形態において、親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）である。
【００５６】
一つの実施形態において、ＰＥＧの分子量は約１，０００〜約４０，０００ダルトン（Ｄａｌｔｏｎ）、例えば、約５，０００〜約４０，０００ダルトンであり、約１，０００〜約２０，０００ダルトンであることが好ましい。
【００５７】
一つの実施形態において、ＰＥＧは、マレイミドまたはアルデヒドの官能基を含む。
【００５８】
一つの実施形態において、ペプチド鎖と脂肪酸との間にスペーサーが挿入される。スペーサーは、１〜１０個のアミノ酸残基を含むペプチド、例えば（Ｇｌｕ）ｍであり、ｍは０〜３の間の整数である。
【００５９】
一つの実施形態において、スペーサは、単一のアミノ酸、または、γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ、ｄ−Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ、ｄ−Ａｌａ−γ−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ−ｄ−ＡｌａまたはＧｌｕ−Ｇｌｕから選択されたジペプチドである。
【００６０】
一つの実施形態において、ＧＩＰアナログは、遊離のカルボン酸（ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、アミド（ａｍｉｄｅ）、または薬学的に許容できる塩の形式で存在する。
【００６１】
一方、本発明によって提供されるＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１の作動活性を有する。本発明によって提供されるＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１作動活性とＧＩＰＲ刺激活性を有している。
【００６２】
一つの実施形態において、本発明は、ＧＩＰ（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に由来するＧＩＰアナログ、またはその薬学的に許容できる塩を提供する。当該ＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１作動活性とＧＩＰＲ刺激活性を有し、且つ、以下の一般式に表されるアミノ酸配列を含む。
Ｔｙｒ−Ａ２−Ａ３−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａ１２−Ａ１３−Ａ１４−Ａ１５−Ｌｙｓ−Ａ１７−Ａ１８−Ａ１９−Ａ２０−Ａ２１−Ａ２２−  Ａ２３−Ａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａ２７−Ａ２８−Ａ２９−Ｙ                                                        一般式Ｉ
【００６３】
ここで、
Ａ２は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、サルコシン（Ｓａｒｃｏｓｉｎｅ）、Ａｉｂ、ｄ−Ａｌａ及びｄ−Ｓｅｒからなる群から選択され、
Ａ３は、Ｇｌｕ及びＧｌｎからなる群から選択され、
Ａ７は、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ及びＳｅｒからなる群から選択され、
Ａ１２は、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ及びＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）、Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）、Ａｌａ、Ａｌａ（２−チエニル）、Ａｌａ（ベンゾチエニル）、Ａｌａ（４−ピリジル）とフェニルグリシン（ｐｈｅｎｙｌ  ｇｌｙｃｉｎｅ）から選択され、
Ａ１４は、Ｍｅｔまたは酸化されたＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、ノルロイシン及びＩｌｅからなる群から選択され、
Ａ１５は、Ｇｌｕ及びＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ１７は、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ及びＧｌｎからなる群から選択され、
Ａ１８は、Ａｌａ及びＨｉｓからなる群から選択され、
Ａ１９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｎ、及びＩｌｅからなる群から選択され、
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
【００６４】
Ａ２１は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２２は、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ（４−Ｍｅ）及びＮａｌからなる群から選択され、
Ａ２３は、Ｉｌｅ及びＶａｌからなる群から選択され、
Ａ２４は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ｚ及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２７は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ及びＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−Ｚ、Ａｌａ、Ａｒｇ、及びＡｓｎからなる群から選択され、
Ａ２９は、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ及びＡｒｇからなる群から選択され、
Ｙは、Ａ３０、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ４０、及び欠失からなる群から選択され、
Ａ３０とＡ４０は独立して−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、−Ｃｙｓ−Ｚ、及び欠失からなる群から選択され、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン（Ｂｉｏｔｉｎ）、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数であり、
ここで、ＧＩＰアナログのｉ位とｉ＋４位のアミノ酸の間に任意的に形成されてもよいラクタム連鎖（ｌａｃｔａｍ  ｌｉｎｋａｇｅ）を形成しており、ｉは１２〜２４から選択された整数である。
【００６５】
一つの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。
ここで、
Ａ３は、Ｇｌｕであり、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）、Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）、Ａｌａ（２−チエニル）、Ａｌａ（ベンゾチエニル）とフェニルグリシンから選択され、
Ａ１５は、Ｇｌｕであり、
Ａ１８は、Ａｌａであり、
Ａ１９は、Ｖａｌ及びＡｌａからなる群から選択され、
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
【００６６】
Ａ２１は、Ｇｌｕ及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２２は、Ｐｈｅであり、
Ａ２３は、Ｉｌｅであり、
Ａ２７は、ＶａｌとＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−ＺとＡｓｎからなる群から選択され、また、
Ａ２９は、Ｇｌｙであり、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｍは、０〜３から選択された整数である。
【００６７】
一つの態様において、本発明は、ＧＩＰ（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に由来するＧＩＰアナログ、またはその薬学的に許容できる塩を提供する。当該ＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１作動活性とＧＩＰＲ刺激活性を有し、且つ、下記の一般式に表されるアミノ酸配列を含む。
Ｔｙｒ−Ａ２−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａ１２−Ａ１３−Ａ１４−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａ１７−Ａｌａ−Ａ１９−Ａ２０−Ａ２１−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａ２７−Ａ２８−Ｇｌｙ−Ｙ
【００６８】
ここで、
Ａ２は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、サルコシン、Ａｉｂ、ｄ−Ａｌａ及びｄ−Ｓｅｒからなる群から選択され、
Ａ７は、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ及びＳｅｒからなる群から選択され、
Ａ１２は、Ｉｌｅ、ＧｌｕとＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）、Ｐｈｅ−（４−ＮＨ２）、Ａｌａ（２−チエニル）、Ａｌａ（ベンゾチエニル）とフェニルグリシンから選択され、
Ａ１４は、Ｍｅｔまたは酸化されたＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、ノルロイシン、及びＩｌｅからなる群から選択され、
Ａ１７は、ＧｌｕとＧｌｎからなる群から選択され、
Ａ１９は、Ｖａｌ及びＡｌａからなる群から選択され、
【００６９】
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２１は、Ｇｌｕ及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２４は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ｚ及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され；
Ａ２７は、ＶａｌとＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−ＺとＡｓｎからなる群から選択され、
Ｙは、Ａ３０、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ４０、及び欠失からなる群から選択され、
Ａ３０とＡ４０は、独立して、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、Ｃｙｓ−Ｚ、及び欠失からなる群から選択され、
Ｚは、（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数であり、
ここで、ＧＩＰアナログのｉ位とｉ＋４位のアミノ酸の間に任意的に形成されても良いラクタム連鎖を形成しており、ｉは１２〜２４から選択された整数である。
【００７０】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ｙは、Ａ３０や欠失であり、
Ａ３０は、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、−Ｃｙｓ−Ｚ及び欠失からなる群から選択され；
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数である。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ｙは、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａ４０であり、
Ａ４０は、−（Ｌｙｓ）ｎ−Ｚ、−Ｃｙｓ−Ｚ及び欠失からなる群から選択され、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数である。
【００７２】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ｚは、（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン及び（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、ｍは、０〜３から選択された整数である。
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ｙは欠失である。
【００７３】
これらの実施形態において、本発明は、ＧＩＰ（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に由来したＧＩＰアナログ、またはその薬学的に許容できる塩であるを提供する。当該ＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１作動活性とＧＩＰＲ刺激活性を有し、且つ、下記の一般式に表されるアミノ酸配列を含む。
Ｔｙｒ−Ａ２−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａ１２−Ａ１３−Ａ１４−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａ１７−Ａｌａ−Ａ１９−Ａ２０−Ａ２１−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａ２７−Ａ２８−Ｇｌｙ
【００７４】
ここで、
Ａ２は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、サルコシン、Ａｉｂ、ｄ−Ａｌａ、及びｄ−Ｓｅｒからなる群から選択され、
Ａ７は、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、及びＳｅｒからなる群から選択され、
Ａ１２は、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ、及びＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）、Ｐｈｅ−（４−ＮＨ２）、Ａｌａ（２−チエニル）、Ａｌａ（ベンゾチエニル）、及びフェニルグリシンから選択され、
Ａ１４は、Ｍｅｔまたは酸化されたＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、ノルロイシン、及びＩｌｅからなる群から選択され、
Ａ１７は、Ｇｌｕ及びＧｌｎからなる群から選択され、
Ａ１９は、Ｖａｌ及びＡｌａからなる群から選択され、
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
【００７５】
Ａ２１は、Ｇｌｕ及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２４は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ｚ、及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２７は、Ｖａｌ及びＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−Ｚ及びＡｓｎからなる群から選択され、
Ｚは、（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、及び（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、
ｍは、０〜３から選択された整数であり、
ここで、ＧＩＰアナログのｉ位及びｉ＋４位のアミノ酸の間に任意的に形成されても良いラクタム連鎖を形成しており、ｉは１２〜２４から選択された整数である。
【００７６】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ｙは、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒである。
【００７７】
これらの実施形態において、本発明は、ＧＩＰ（１−２９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）に由来するＧＩＰアナログ、またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ＧＩＰアナログは、ＧＬＰ−１作動活性とＧＩＰＲ刺激活性を有し、且つ、下記の一般式に表されるアミノ酸配列を含む。
Ｔｙｒ−Ａ２−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ａ７−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａ１２−Ａ１３−Ａ１４−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａ１７−Ａｌａ−Ａ１９−Ａ２０−Ａ２１−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａ２７−Ａ２８−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ
【００７８】
ここで、
Ａ２は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、サルコシン、Ａｉｂ、ｄ−Ａｌａ及びｄ−Ｓｅｒからなる群から選択され、
Ａ７は、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ及びＳｅｒからなる群から選択され、
Ａ１２は、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ及びＡｓｐからなる群から選択され、
Ａ１３は、アリール基を有するアミノ酸残基からなる群から選択され、且つ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）、Ｐｈｅ−（４−ＮＨ２）、Ａｌａ（２−チエニル）、Ａｌａ（ベンゾチエニル）、及びフェニルグリシンから選択され、
Ａ１４は、Ｍｅｔまたは酸化されたＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、ノルロイシン、及びＩｌｅからなる群から選択され、
Ａ１７は、Ｇｌｕ及びＧｌｎからなる群から選択され、
Ａ１９は、Ｖａｌ及びＡｌａからなる群から選択され、
Ａ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｚ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
【００７９】
Ａ２１は、Ｇｌｕ及びＬｅｕからなる群から選択され、
Ａ２４は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ｚ、及びＣｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２７は、Ｖａｌ及びＬｙｓ−Ｚからなる群から選択され、
Ａ２８は、Ｌｙｓ−Ｚ及びＡｓｎからなる群から選択され、
Ｚは、（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン及び（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、
ｍは、０〜３から選択された整数であり、
ここで、ＧＩＰアナログのｉ位及びｉ＋４位のアミノ酸の間に任意的に形成されても良いラクタム連鎖を形成しており、ｉは１２〜２４から選択される整数である。
【００８０】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ７は、Ｔｈｒである。
【００８１】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ２はＡｉｂである。
【００８２】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ１３は、Ｔｙｒである。
【００８３】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ１７は、Ｇｌｕである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ１９はＶａｌである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ２０はＡｒｇである。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、Ａ２４は、Ｃｙｓ−Ｚであり、Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧであり、ｍは、０〜３から選択された整数である。
【００８７】
一つの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ａ３０とＡ４０は、独立して（Ｌｙｓ）ｎＺから選択され、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ、−（Ｇｌｕ）ｍ−ビオチン、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸、及び欠失からなる群から選択され、
ｎは、１〜６から選択された整数であり、
ｍは、０〜３から選択された整数である。
【００８８】
一つの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧ及び−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、
ｍは、０〜２から選択された整数である。
【００８９】
一つの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−ＰＥＧであり、
ｍは、０〜２から選択された整数である。
【００９０】
一つの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、
Ｚは、−（Ｇｌｕ）ｍ−脂肪酸からなる群から選択され、
ｍは、０〜２から選択された整数である。
例えば、−（Ｇｌｕ）ｍは、γ−Ｇｌｕまたはγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕであることができる。
【００９１】
いくつかの実施形態において、本発明は、一般式Ｉに表されるＧＩＰアナログを提供する。ここで、ラクタム連鎖は、ＧＩＰアナログのｉ位とｉ＋４位のアミノ酸の間に形成されており、ｉは１２、１６及び２４から選択された整数である。
【００９２】
いくつかの実施形態において、脂肪酸は、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びコール酸からなる群から選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態において、ＰＥＧの分子量は、５ｋＤａ〜４０ｋＤａであり、例えば、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａである。
【００９４】
いくつかの実施形態において、ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、２−６４と６６−９８に表される配列からなる群から選択される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、１８、１９、２０、２１、３５、４５、５２、６３、６５、７２、７４、８０、９７及び９８に表される配列からなる群から選択される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２、７２及び７４に表される配列からなる群から選択され、これらの配列は、２０位、２４位及び／またはＣ−末端に連結された少なくとも一つの脂肪酸部分を有する。
【００９７】
いくつかの実施形態において、ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩に含まれるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５、７４及び９８に表される配列からなる群から選択され、これらの配列は、２０位、２４位及び／またはＣ−末端に連結された少なくとも一つのＰＥＧ部分を有する。
【００９８】
いくつかの実施形態において、ＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４に表されるアミノ酸配列を含む。それは、２４位に連結されたＰＥＧ部分とＣ−末端に連結された脂肪酸部分を有する。
【００９９】
本発明のＧＩＰアナログは、いずれも、当業者が周知している方法により合成され、且つ修飾されて得ることができる。例えば、本発明のＧＩＰアナログのペプチド骨格は、標準的な固相ペプチド合成方法（Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｈａｎ、Ｗｅｎｇ  Ｃ、Ｗｈｉｔｅ、Ｐｅｔｅｒ  Ｄ．、ＯＸＦＯＲ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｐｒｅｓｓ、２０００、４１−７２）、または後文の実施例１−７に記載されている方法によって得ることができる。ＧＩＰアナログは、更に、組換えＤＮＡ技術またはその他のペプチドの製造とタンパク質の融合の方法により製造することができる。
【０１００】
さらなる態様において、本発明は、有効量の上記のＧＩＰアナログ、薬学的に許容できる希釈剤、担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供した。
【０１０１】
一つの実施形態において、医薬組成物は、一つまたは複数の抗糖尿病剤をさらに含むことができる。上記の抗糖尿病剤は、インスリン系、ビグアニド系、スルホニル尿素系、ロシグリタゾンまたはピオグリタゾン、α−グルコシダーゼ阻害剤、及びアミノジペプチダーゼＩＶ阻害剤から選択される。
【０１０２】
一つの実施形態において、医薬組成物は、注射剤または凍結乾燥粉末剤として製造することができる。
【０１０３】
本発明で記載される「医薬組成物」とは、本発明の治療効果を有する製剤を意味する。
【０１０４】
本発明の組成物を製造するための方法と使用では、有効成分の治療有効量も提供した。治療有効量は、一般的な専門家や獣医作業者は、例えば年齢、体重、性別、状態、合併症、及び本分野で周知の他の疾患などの患者の特徴に基づいて測定されることができる。
【０１０５】
本発明の医薬組成物は、通常、何れかの非経口投与経路で投与され、且つ、有効成分を含む医薬組成物の形式で、任意の無毒の有機酸、無機酸または塩基付加塩の形式で、薬学的に許容できる剤量の形式で投与される。治療しようとする疾患及び患者、並びに投与経路に依存して、本発明の化合物が各種の用量で投与されることができる。
【０１０６】
本発明の医薬組成物は、例えば、静脈内、動脈内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内または皮下経路などの非経口投与経路で投与することができ、また、点滴で投与することもできる。医薬組成物は、滅菌注射液の形式として使用することが好ましく、その中に、注射液と血液との等張性（ｉｓｏｔｏｎｉｃ）を確保するため、例えば、十分な塩またはグルコースのような他の物質をさらに含むことがある。必要により、注射液は、適切な緩衝システム（ｐＨ値は３〜９に調整されることが好ましい）を必要とする場合もある。当業者は、周知の標準的な製薬技術によって、無菌条件下で非経口投与製剤を製造することができる。
【０１０７】
非経口投与に適した医薬組成物は、水性及び非水性の無菌注射剤を含み、酸化防止剤、緩衝剤、細菌抑制剤及び製剤が目標受付者の血液の等張性を達成するための溶解物を含有することができる。且つ、水性および非水性の無菌懸濁物は、懸濁化剤および粘稠化剤を含むことができる。医薬組成物は、単回投与量または多回投与量の容器、例えば、密封されたアンプルや薬剤瓶に入れることができる。凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ）粉末の形式で保存することもできる。それは、使用前に注射用水のような無菌液体の担体を添加することだけで、溶解させて使用することができる。
【０１０８】
人間の患者の経口投与と非経口投与において、本発明の医薬組成物の一日投与量としては、一般的に０．１μｇ−１００μｇの範囲、例えば１μｇ−１００μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇまたは１００μｇ／大人／日で、一回または複数回投与する。
【０１０９】
従って、例えば、本発明の医薬組成物は、０．１μｇ−１００μｇの範囲、例えば、１μｇ−１００μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇまたは１００μｇの有効成分を含むことが好ましい。必要により、１つまたは２つまたは多数個を一回投与することができる。
【０１１０】
一つの実施形態において、本発明の医薬組成物の投与量の範囲は、０．１μｇ−１００μｇの範囲であり、例えば１μｇ−１００μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇまたは１００μｇである。投与頻度は、例えば、一日に一回又は二回投与するが、これに限定されない。
【０１１１】
さらなる態様において、本発明は、本発明のＧＩＰアナログの代謝異常（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）を治療または予防することにおける使用に関するものである。
【０１１２】
さらなる態様において、本発明は、代謝異常を治療または予防する方法に関するものである。この方法は、需要とする被験者に有効量の本発明のＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩又は本発明の医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１１３】
本発明において、代謝疾患は、糖尿病、肥満症及び骨粗鬆症を含むが、これらに限定されない。
【０１１４】
さらなる態様において、本発明は、インビボ及び／またはインビトロでＧＩＰとＧＬＰ−１受容体を活性化させる方法に関するものである。この方法は、本発明のＧＩＰアナログまたはその薬学的に許容できる塩をＧＩＰ及びＧＬＰ−１受容体と接触させるステップを含む。これらの方法は、いずれも、インビボまたはインビトロの両方で施行されることができる。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】図１は、ｅｘｅｎｄｉｎ−４（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）を参照化合物として、正常のＩＣＲマウスに対してアナログ０２３、０２４、０２５及び０２６（３ｎｍｏｌ／ｋｇ）の腹腔内グルコース耐性試験（ｉｐＧＴＴ、Ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ）を実施した図である。前記化合物は、それぞれ−３０ｍｉｎの時点で皮下注射で投与され、且つ、０ｍｉｎの時点にグルコース（３ｇ／ｋｇ）が投与される。
【図２】図２は、アナログ０２３、０２４、０２５及び０２６のｉｐＧＴＴを実施した曲線下面積図（ＡＵＣ、Ａｒｅａ  Ｕｎｄｅｒ  Ｔｈｅ  Ｃｕｒｖｅ）である。ＡＵＣデータに基づき、アナログ０２４がさらに良いインビトロ活性を有するとしても、アナログ０２３は、これらのアナログの中で最も効果的である。従って、アナログ０２３は、活性化合物（ｈｉｔｃｏｍｐｏｕｎｄ）で選択される。
【図３】図３は、同じ剤量のｅｘｅｎｄｉｎ−４を参照化合物として、正常ＩＣＲマウスにアナログ０５１（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）のｉｐＧＴＴを実施した図である。前記化合物は、それぞれ−３０ｍｉｎの時点で皮下注射で投与され、０ｍｉｎと２４０ｍｉｎの時点でグルコース（３ｇ／ｋｇ）が投与される。
【図４】図４は、アナログ０５１のｉｐＧＴＴを実施したＡＵＣである。ＡＵＣデータに基づき、グルコースを二回連続投与した後、アナログ０５１とｅｘｅｎｄｉｎ−４は、同じ剤量のレベルではかなり似ている血糖低下作用を有する。
【図５】図５は、アナログ０８８と０８９のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ、Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｏｖａｒｙ）細胞系で行われたｈＧＬＰ−１Ｒによって媒介されたｃＡＭＰ誘導試験である。アナログ０８８（２０ｋ  ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、ｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）化されたペプチド）は、アナログ０８９（４０ｋ  ＰＥＧ化されたペプチド）と近いグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１、ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１）活性を示す。
【図６】図６は、アナログ０８８と０８９のＣＨＯ細胞系で行われたｈＧＩＰＲによって媒介されたｃＡＭＰ誘導試験である。アナログ０８８（２０ｋ  ＰＥＧ化されたペプチド）は、アナログ０８９（４０ｋ  ＰＥＧ化されたペプチド）と近いＧＩＰ活性を示す。
【図７】図７は、リラグルタイドを参照化合物として、０〜４９日に、アナログ０８９のｄｂ／ｄｂマウスに投与量調整の形式で得られた非空腹時血糖値レベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力な血糖低下活性が観察された。
【図８】図８は、リラグルタイドを参照化合物として、４２日目に、アナログ０８９がｄｂ／ｄｂマウスに投与量調整の形式で得られたヘモグロビン（ＨｂＡ１Ｃ、ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ  Ａ１ｃ）のレベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力なＨｂＡ１Ｃ低下活性が観察された。
【図９】図９は、リラグルタイドを参照化合物として、５０日目に、アナログ０８９がｄｂ／ｄｂマウスに投与量調整の形式で得られた血清ＴＧのレベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力な血清ＴＧ低下活性が観察された。
【図１０】図１０は、リラグルタイドを参照化合物として、０〜２８日に、アナログ０８９が食餌誘導性肥満（ＤＩＯ、ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ）マウスに投与量調整の形式で得られた体重レベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力な体重低下活性が観察された。
【図１１】図１１は、リラグルタイドを参照化合物として、２８日目に、アナログ０８９がＤＩＯマウスに投与量調整の形式で得られた血清ＴＧのレベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力な血清ＴＧ低下活性が観察された。
【図１２】図１２は、リラグルタイドを参照化合物として、２８日目に、アナログ０８９がＤＩＯマウスに投与量調整の形式で得られた血清ＣＨＯのレベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力な血清ＣＨＯ低下活性が観察された。
【図１３】図１３は、リラグルタイドを参照化合物として、２８日目に、アナログ０８９がＤＩＯマウスに投与量調整の形式で得られた血清高密度リポタンパク質（ＨＤＬ、ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）／低密度リポタンパク質（ＬＤＬ、ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）のレベルを示す。全てのアナログ０８９群においてリラグルタイドよりさらに強力な血清ＨＤＬ／ＬＤＬ比を改善する活性が観察された。
【図１４】図１４は、アナログ０８９の正常のマウスにおける薬物代謝動力学研究を示す。アナログ０８９は、１７ｎｍｏｌ／ｋｇ静脈内注射、半減期が１５時間であり、１７ｎｍｏｌ／ｋｇ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ及び１５０ｎｍｏｌ／ｋｇ皮下注射、半減期が１１．９時間、１９．９時間及び２５．２時間である。生体利用率は約３０％である。
【発明を実施するための形態】
【０１１６】
定義
本発明において、以下の用語は、以下の用語の解釈と一致している。
本発明で使用する用語「類似」または「近接」は、一定の数値または数値範囲より１０％大きい又は小さい。但し、何れかの数値または数値範囲がこの広い定義内に定義された範囲だけだと規定したものではない。用語「類似」または「近接」と記載される数値または数値範囲は、一定の絶対値または数値の範囲も含む。
【０１１７】
本発明で使用する用語「薬学的に許容できる担体」は、任意の標準的な薬物担体を含む。例えば、リン酸塩の生理食塩水緩衝液、水、オイル／水または水／オイルのようなエマルジョン、及び様々な湿潤剤を含む。
【０１１８】
本発明で使用する用語「薬学的に許容できる塩」は、親化合物の生物的活性を維持する化合物の塩、及び生物活性がない塩またはその他の非需要活性を有する塩を意味する。本発明で述べた多くの化合物は、アミノ及び／またはカルボキシル、又はこれらを類似する官能基で酸及び／または塩基の塩を形成することができる。
【０１１９】
薬学的に許容できる塩基付加塩は、無機塩基と有機塩基で製造することができる。無機塩基かれ得られた塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩だけが含まれている。有機塩基から得られた塩は、一級アミン（ｐｒｉｍａｒｙ  ａｍｉｎｅ）、二級アミン（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｍｉｎｅ）や三級アミン（ｔｅｒｔｉａｒｙ  ａｍｉｎｅ）の塩を含むが、これらに限定されない。
【０１２０】
薬学的に許容できる酸付加塩は、無機酸と有機酸で製造することができる。無機酸を使用して得られた塩は、塩酸（Ｈｙｄｒｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、臭化水素酸（ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｃ  ａｃｉｄ）、硫酸（ｓｕｌｆｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、硝酸（ｎｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）、リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）及び類似物を含む。有機酸を使用して得られた塩は、酢酸（ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、プロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、グリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ピルビン酸（ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ）、シュウ酸（ｏｘａｌｉｃ  ａｃｉｄ）、リンゴ酸（ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ）、マロン酸（ｍａｌｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、マレイン酸（ｍａｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）、フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、酒石酸（ｔａｒｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）、安息香酸（ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸（ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、マンデル酸（ｍａｎｄｅｌｉｃ  ａｃｉｄ）、メタンスルホン酸（ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、エタンスルホン酸（ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、パラトルエンスルホン酸（ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅ−ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、サリチル酸（Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）及び他の類似の酸類を含む。
【０１２１】
本発明で使用する用語「治療」は、具体的な障害や状況の予防、又は具体的な障害や状況に関連する症状の緩和、及び／または前記した症状を予防または解消することを含む。例えば、本発明で使用する用語「糖尿病の治療」は、通常、血糖値を正常範囲内に改変することを意味しており、一定の状況に応じて、血糖値のレベルをアップさせる又は低下させることが含まれる。
【０１２２】
本発明で記載されたＧＩＰアナログの「有効量」または「治療有効量」は、無毒で期待される治療効果に達することができるペプチドの量を意味する。例えば、ある期待される治療効果は、高血糖の予防または治療であり、血糖値の低下レベルで評価することを意味する。ある期待される治療効果は、体重の減らす又は体重の増加の防止であり、体重の低下で評価することを意味する。「有効」的な投与量は、個体の年齢及び自身の状況、管理モード及び類似な状況の変更によって変更される。従って、精確な「有効的投与量」を確定することは不可能である。しかしながら、人ごとに使用される適切な「有効」的な投与量は、本分野の当業者が通常の試験によって確定することができる。
【０１２３】
本発明で記載された用語「精製」と類似な用語は、分子または化合物を分離して、天然的または自然環境に通常上記の分子または化合物と共存する汚染物質を基本的に含まないようにすることであるを意味する。本発明で記載された用語「精製」は、絶対的な純粋を要求しなく、逆に、これは相対的な定義である。本発明で記載された用語「精製されたポリペプチド」は、他の化合物から分離されたポリペプチドを意味する。上記の他の化合物は、核酸分子、脂質体及び炭水化物を含むが、これらに限定されない。
【０１２４】
用語「分離」は、原始の環境から上記の物質を分離し得ることを意味する。例えば、生きている動物に存在する天然のポリヌクレオチドは、分離されていないことであるが、同じ種類のポリヌクレオチドが部分的または全ての自然界の共存物質から独立されるのは、分離されていることである。
【０１２５】
本発明で記載された用語「ペプチド」は、３つまたはより多くの、典型的ではない５０個未満のアミノ酸の配列を含むことを意味する。ここで、これらのアミノ酸は、天然または非天然のアミノ酸であることができる。非天然のアミノ酸は、インビボに存在していないが、本発明に述べたペプチド構造に含有することができるアミノ酸を意味する。
【０１２６】
本発明で記載された用語「ＧＩＰアナログ」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８のアミノ酸配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８のアミノ酸配列の任意のアナログの任意のペプチドを含み、且つ、ペプチドのアミノ酸の置換、添加、欠失、または翻訳後修飾（例えば、メチル化、アセチル化、アルキル化、パントテン酸化、分子内の共有結合（例えば、ラクタム連鎖の形成）、ポリエチレングリコール化など）を含む。ここで、上記のアナログは、例えば、実施例に記載のｃＡＭＰ誘導試験によって測定されるように、ＧＩＰＲとＧＬＰ−１Ｒの活性化を刺激することができる。
【０１２７】
本発明で記載されたアミノ酸の「修飾」は、アミノ酸の置換、添加または欠失を意味し、２０つ種類の天然のアミノ酸のうちのいずれかを置換または添加することを含む。本発明において、特定されたアミノ酸位置番号（例えば、２４位）は、いずれも天然のＧＩＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）またはその任意のアナログ中の相応的なアミノ酸の位置を意味する。
【０１２８】
本発明で記載された用語「天然のＧＬＰ−１」は、人間のＧＬＰ−１（７−３６または７−３７）配列を含むペプチドを意味し、用語「天然のＧＩＰ」は、人間のＧＩＰ（１−４２）配列を含むペプチドを意味する。本発明で使用する用語「ＧＬＰ−１」または「ＧＩＰ」は、更なる解釈されない限り、それぞれ天然のＧＬＰ−１または天然のＧＩＰを意味する。
【０１２９】
本発明で記載されたアミノ酸「置換」は、一つのアミノ酸残基が他の異なるアミノ酸残基に置換されることを意味する。
【０１３０】
本発明で記載された一般的な用語「ポリエチレングリコール」または「ＰＥＧ」は、エチレンオキシド（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）と水との縮合重合体の混合物を意味し、且つ、直鎖または分岐鎖の形式で存在し、一般式Ｈ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨに表される。ここで、ｎは、最小で９である。更なる説明がない限り、これらの用語は、平均合計分子量が５，０００−４０，０００ダルトンの間で選択されるポリエチレングリコールの重合体を含む。「ポリエチレングリコール」または「ＰＥＧ」が一つの数値の接尾語と一緒に使用されていることは、これらのおおよその平均分子量を表示する。例えば、ＰＥＧ−５０００は、約５０００ダルトンの平均分子量を有するポリエチレングリコールを意味する。
【０１３１】
本発明で記載された用語「ＰＥＧ化」または類似の用語は、化合物の天然の状態からペプチドにＰＥＧ鎖を連結することによって、修飾されたものである。「ＰＥＧ化ペプチド」は、ＰＥＧ鎖が共有結合でペプチドに結合されるペプチドである。
【０１３２】
本発明で記載された用語「脂肪酸」は、長い脂肪族尾（鎖）を有するカルボン酸を意味し、飽和であってもよく、不飽和であってもよい。本発明において、脂肪酸は、Ｃ４−Ｃ３０の直鎖または分岐鎖の脂肪族基を有するカルボン酸を意味する。好ましい脂肪酸は、ミリスチン酸、パルミチン酸及びステアリン酸から選択される。
【０１３３】
本発明で記載されたペプチドの一般的な定義は、修飾されたアミノ末端とカルボキシル末端を有するペプチドを含む。例えば、アミド基で末端のカルボキシル基を置換したアミノ酸の鎖も、天然のアミノ酸と命名されたアミノ酸配列内に含まれる。
【０１３４】
本発明で記載された「スペーサー」（ｓｐａｃｅｒ）は、結合（ｂｏｎｄ）、分子または分子の官能基を意味し、二つの分離の実体を互いに連結させる。スペーサーは、２つの実体の空間構造を最適化し、または２つの実体を互いに分離させる容易に変更できる結合物を提供することができる。容易に変更できる結合物は、光分解基、酸に不安定な部分、塩基に不安定な部分と酵素分解基を含む。
【０１３５】
本発明で記載された「電荷を荷電したアミノ酸」は、生理的ｐＨ値の水溶液に、負電荷（即ち、脱プロトン化）または正電荷（即ち、プロトン化）を荷電した側鎖を有するアミノ酸を意味する。例えば、負電荷を荷電したアミノ酸は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、システイン（ｃｙｓｔｅｉｎｅ）、ホモシステイン及びホモグルタミン酸（Ｈｏｍｏｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄ）を含む。正電荷を荷電したアミノ酸は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ及びＨｉｓを含む。電荷を荷電したアミノ酸は、２０つ種類の天然のアミノ酸と非天然のアミノ酸における電荷を荷電したアミノ酸を含む。
【０１３６】
本発明で記載された用語「酸性アミノ酸」は、第２の酸性基を含むアミノ酸を意味し、例えば、カルボキシル基または硫酸基を含む。
【０１３７】
本発明で記載されたペプチドの「ＧＩＰ活性」は、天然のＧＩＰがＧＩＰＲでのＥＣ５０値と前記ペプチドがＧＩＰＲでのＥＣ５０値の比率を意味する。
【０１３８】
本発明で記載されたペプチドの「ＧＬＰ−１活性」は、天然のＧＬＰ−１がＧＬＰ−１ＲでのＥＣ５０値と前記ペプチドがＧＬＰ−１ＲでのＥＣ５０値の比率を意味する。
【０１３９】
本発明で記載された用語「アルキル」は、規定された数の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の炭化水素化合物を意味する。例示的なアルキル基は、メチル（ｍｅｔｈｙｌ）、エチル（ｅｔｈｙｌ）、及びノルマルプロピル（ｎ−ｐｒｏｐｙｌ）を含む。
【０１４０】
本発明で記載された用語「ヘテロアルキル」は、規定された数の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の炭化水素化合物を意味し、ここで、上記構造の骨格に、少なくとも一つのヘテロ原子が含まれる。本発明に適用されるヘテロ原子は、Ｎ、Ｓ及びＯを含むが、これらに限定されない。
【０１４１】
本発明で記載された用語「シクロアルキル」は、規定された数の炭素原子を有する環状炭化水素化合物を意味し、例えば、シクロプロピル（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ）、シクロブチル（ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌ）、シクロヘキシル（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）及びシクロペンチル（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ）である。
【０１４２】
本発明で記載された用語「ヘテロシクロアルキル」は、規定された数の炭素原子と１つ個ないし３つ個のヘテロ原子を有する環状炭化水素化合物を意味し、ここで、ヘテロ原子は、独立して、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される。制限ではないヘテロシクロアルキルの例として、ピペリジン、テトラヒドロフラン（Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）、テトラヒドロピラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒａｎｅ）、ジヒドロフラン（ｄｉｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）、モルホリン（Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ）、チオフェン（ｔｈｉｏｐｈｅｎｅ）などが含まれる。
【０１４３】
本発明で記載された用語「アリール基」は、単環または多環式アリールを意味し、好ましくはフェニルまたはナフチル（ｎａｐｈｔｈｙｌ）のような指定された数の炭素原子を有する単環または二環式アリールを含む。特別な説明がない限り、アリール基は、未置換であってもよく、置換されたものであってもよい。
【０１４４】
本発明で記載された用語「Ａｉｂ」は、α−アミノイソブチル酸（α−ａｍｉｎｏ  ｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）を意味する。
【０１４５】
本発明で記載された用語「Ｐｈｅ（４−Ｆ）」は、フェニルアラニンのアナログを意味し、そのフェニルのパラ位置（ｐａｒａ−ｐｏｓｉｔｉｏｎ）は、フッ素原子に置換されている。
【０１４６】
本発明で記載された用語「Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）」は、フェニルアラニンのアナログを意味し、そのフェニルのパラ位置は、ニトロ（ｎｉｔｒｏ）に置換される。
【０１４７】
本発明で記載された用語「Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）」は、フェニルアラニンのアナログを意味し、そのフェニルのパラ位置は、アミノに置換される。
【０１４８】
本発明で記載された用語「Ａｌａ（２−チエニル）」は、アラニンのアナログを意味し、そのβ−メチルは２−チエニル基に修飾される。
【０１４９】
本発明で記載された用語「Ａｌａ（ベンゾチエニル）」は、アラニンのアナログを意味し、そのβ−メチルは、ベンゾチエニル基に修飾される。
【０１５０】
本発明で記載された用語「Ｎａｌ」は、アラニンのアナログを意味し、そのβ−メチルは、ナフチル基に修飾される。
【０１５１】
本発明で記載された用語「Ａｌａ（４−ピリジル）」は、アラニンのアナログを意味し、そのβ−メチルは、４−ピリジル基に修飾される。
【０１５２】
本発明で記載された用語「フェニルグリシン」は、グリシンのアナログを意味し、そのメチレンはフェニルに修飾される。
【０１５３】
本発明で記載された用語「Ｔｙｒ（４−Ｍｅ）」は、チロシン（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ）のアナログを意味し、そのヒドロキシの水素原子は、メチルに置換される。
【０１５４】
本発明で記載された用語「サルコシン」は、グリシンのアナログを意味し、そのアミノはメチルに修飾される。
【０１５５】
本発明で記載された用語「Ｏｒｎ」は、２，５−ジアミノペンタン酸（２，５−ｄｉａｍｉｎｏ  ｐｅｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）を意味する。
【０１５６】
本発明で記載された用語「Ｄａｂ」は、２，４−ジアミノブタン酸（２，４−ｄｉａｍｉｎｏ  ｂｕｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）を意味する。
【０１５７】
本発明で記載された用語「Ｄａｐ」は、２，３−ジアミノプロピオン酸（２，３−ｄｉａｍｉｎｏ  Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ）を意味する。
【０１５８】
本発明で記載された用語「ノルロイシン」は、２−アミノカプロン酸（２−ａｍｉｎｏ  ｃａｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ）を意味する。
【０１５９】
天然のＧＩＰ（１−４２）は、ＧＬＰ−１Ｒの作動活性（Ｍｏｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌｓ、２０１０、３０、１４９−１５４）が全くないから、言うまでもなく、そのＧＩＰ（１−２９）断片も作動活性がない。しかしながら、研究の概況によると、ＧＩＰ（１−２９）断片は、全長ＧＩＰ（１−４２）に相当するインビトロＧＩＰＲ作動活性を維持することができる。従って、ヘテロ化の概念により、ＧＩＰ（１−２９）の配列に基づき、点突然変異によって、新たなＧＩＰアナログを形成することができる。ＧＬＰ−１、ｅｘｅｎｄｉｎ−４及びリラグルタイド序列における一部のアミノ酸残基を導入し、ＧＬＰ−１活性を誘導する。これらのＧＩＰアナログは、同等あるいは天然のＧＩＰを超える強力なＧＩＰＲ作動活性を持つだけでなく、インビトロで同等あるいは天然のＧＬＰ−１（７−３６または７−３７）を超える強力なＧＬＰ−１Ｒ作動活性を持つ。
【０１６０】
特異性点突然変異によりＧＬＰ−１活性を誘導する
Ｎ−末端から順番に位ごとにＧＬＰ−１とＧＩＰの配列を比較して、Ｈｉｓ７／Ｔｙｒ１以外、一番大きく相違する置換はＴｈｒ１３／Ｉｌｅ７ある。最近の報道によると、何れのペプチドのＮ−末端部分は、特に、７位（何れのペプチドの一次配列番号）のアミノ酸残基のリガンドの選択は、非常に重要である（Ｍｏｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌｓ、２０１０、３０、１４９−１５４）。従って、研究の概況によると、ＧＩＰ（１−２９）の配列に基づき、まずＴｈｒ７を導入してＧＬＰ−１Ｒ作動活性を誘導する。そして、続いてＴｙｒ１３及びＧｌｕ１５の置換をしてＧＬＰ−１の活性を増強させ、Ａｉｂ２の置換をしてＤＰＰ−ＩＶ安定性を付与する。
【０１６１】
得られたＧＩＰアナログ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）は、ＣＨＯ／ｈＧＬＰ−１Ｒ細胞選別で、天然のＧＬＰ−１と比較すると、ほぼ０．２％ＧＬＰ−１Ｒ作動活性を示し、最初の構造骨格（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）よりはるかに優れており、且つ、ＣＨＯ／ｈＧＩＰＲ細胞選別で、天然のＧＩＰと比較すると、７７．７％のＧＩＰＲ作動活性を示す。これは、ＧＩＰＲが上記の位の置換に耐えることを示す。ＧＬＰ−１Ｒの活性がまだ非常に低いとしても、更なる修飾によってそのＧＬＰ−１Ｒ刺激活性を向上させると同時にＧＩＰの活性を維持することは、更なる研究する価値がある。
【０１６２】
第二回の修飾は、アナログ００３の骨格に基づき、且つ、主に、１３位と２２位にそれぞれ集中した。Ｔｙｒ１３において、その４’位のヒドロキシ基がフルオロに置換されて（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ニトロに置換され（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、８及び１５）、または、Ｔｙｒ１３がＰｈｅ１３に置換されて（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７及び１１）、フェニルグリシン残基１３に置換される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）。Ｐｈｅ２２において、それぞれこの位でＴｙｒ残基に置換されて（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、Ｔｙｒ（４−Ｍｅ）残基に置換されて（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、Ｐｈｅ（４−Ｆ）残基に置換される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）。手動操作で固相ペプチドを合成する過程に、酸素ガスが介入されることによって酸化されたＭｅｔ１４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、５、６及び７）が偶然に観察された。手動操作の過程での酸化を避けるために、後にＭｅｔがＭｅｔバイオイソスター（ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｅ）ノールロイシン（ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８〜１３、１４、及び１６〜１７）に置換された。しかしながら、このように修飾された全てのアナログのインビトロＧＬＰ−１活性は、いずれもアナログ００３より低く、ひいては、いくつかの修飾されたアナログが比較的低いＧＩＰ活性を有することが観察された。
【０１６３】
１７位〜１９位がＧｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ及びＧｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎに置換されても（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）、より多くのＧＬＰ−１活性（天然のＧＬＰ−１に比べて、作動活性が１％より小さい）を起こさなかった。このほかに、リラグルタイドに由来するいくつかのアミノ酸残基Ｖａｌ２７及びＡｒｇ２８の置換（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）は、確かにＧＬＰ−１活性を増加させ、天然のＧＬＰ−１に比べて約５％の活性を有するが、そのＧＩＰ活性は、天然のＧＩＰに比べて２１％まで減少した。従って、望ましいインビトロＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲ活性を得るように、必ず新しい策略を研究して、さらに多くのＧＬＰ−１の特徴のアミノ酸残基を導入する。
【０１６４】
ＧＬＰ−１の特徴性部分の導入により更なる修飾を行う
ＧＬＰ−１配列とｅｘｅｎｄｉｎ−４配列の中間断片及びＣ−末端に由来する確定的なアミノ酸残基を好ましい骨格（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）に導入させる。また、受容体の識別を考慮して、Ｎ−末端領域（１−１６位）を高度保存領域とする。設計されたヘテロペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８、１９、２０及び２１）の配列アラインメントは下記の通りである。本発明の説明を便利にするために、ＧＬＰ−１の下付きのアミノ酸の名称は、加工されたペプチドの一次配列によるものである（つまり、ＧＬＰ−１［７−３６］＝ＧＬＰ−１［１−３０］）。
【化１】
0005914641.tif 000002
【０１６５】
上記４つのキメラペプチド（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）は、一つごとにＣＨＯ／ｈＧＬＰ−１ＲとＣＨＯ／ｈＧＩＰ−１Ｒの細胞選別で天然のリガンド（ＧＬＰ−１及びＧＩＰ）と比較する。インビトロデートは、表１に示す。更にＧＬＰ−１の特徴性のアミノ酸残基を中間領域［１７−２０］とＣ−末端領域［２１−２９］に導入することによって、ＧＬＰ−１の活性は著しく増加し、その一部では、天然のＧＬＰ−１を超える。
【０１６６】
【表１】
0005914641.tif 000003
【０１６７】
アナログ０２４は、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲの両方でも最も高い活性を有し、ＧＬＰ−１Ｒでの活性は、天然のＧＬＰ−１の３００％以上であり、ＧＩＰＲでの活性は、天然のＧＩＰの約５００％である。アナログ０２５及び０２６も、天然のＧＬＰ−１より良いＧＬＰ−１活性（それぞれ１３１％と２８８％）を示したが、これらのＧＩＰ活性は、天然のＧＩＰより弱い（それぞれ、わずか３３．３％と１１．９％）。纏めて言えば、アナログ０２３と０２４は、バランスがより良いインビトロのＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲとの二重作動活性を示し、且つ、ＧＬＰ−１活性に比べて、ＧＩＰ活性が主導的である。
【０１６８】
インビトロで同時にＧＬＰ−１Ｒ及びＧＩＰＲの作動活性を持つことに、インビボ活性を確認することが励まされる。インビボの活性は、最初に、正常のＩＣＲマウスを利用してグルコース腹腔注射負荷試験（ｉｐＧＴＴ）をして評価された。適切な投与量レベルを研究するように、ｅｘｅｎｄｉｎ−４を陽性コントロール群として、ｉｐＧＴＴにより、まずアナログ０２３を評価した。
【０１６９】
グルコースが投与された後、ｅｘｅｎｄｉｎ−４は、１ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量で明らかな血糖低下作用を示したが、アナログ０２３は、同じ投与量でｅｘｅｎｄｉｎ−４より非常に弱い血糖低下作用を示した。グルコースが存在する場合、アナログ０２３は、３ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量でほぼ最大の血糖低下作用を示し、投与量レベルを向上させても（６ｎｍｏｌ／ｋｇ及び９ｎｍｏｌ／ｋｇ）、その活性は完全に差異がない。ＡＵＣによると、ｅｘｅｎｄｉｎ−４（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）群とアナログ０２３（３ｎｍｏｌ／ｋｇ、６ｎｍｏｌ／ｋｇ、及び９ｎｍｏｌ／ｋｇ）群は統計学的に有意差がない。
【０１７０】
続いて、依然にｅｘｅｎｄｉｎ−４（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）を参照として、３ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量でｉｐＧＴＴを行い、順次にアナログ０２３、０２４、０２５及び０２６を評価した。予備試験と比較すると、ｅｘｅｎｄｉｎ−４は非常に類似した血糖低下作用を示した。コントロール群と比較して、ＧＩＰアナログは、いずれも、明確な血糖低下活性を示したとしても、全てのアナログの中にアナログ０２３だけは、インビボの活性が一番強い（図１及び図２を参照）。上記の観察によると、ｅｘｅｎｄｉｎ−４に由来した［１７−２０］のアミノ酸残基及びＧＬＰ−１に由来した［２１−２９］のアミノ酸残基は、インビトロとインビボとの二重作動活性を得る最適な置換の組み合わせである。従って、研究の過程に、アナログ０２３は、活性化合物として選択された。
【０１７１】
脂肪酸の抱合（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）により更なる修飾を行う
インビトロとインビボの活性を高めるように、リラグルタイド構造に啓発され、脂肪酸もアナログ０２３と抱合される。パルミトイルは２８位のＬｙｓのε−アミン基と直接結合して、何のスペーサーも添加されていない（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１）。しかしながら、脂肪酸が抱合されるアナログ０４６は、天然のＧＬＰ−１と比較するとわずか１４．７％のＧＬＰ−１Ｒ作動活性を示し、天然のＧＩＰと比較するとわずか８．５％のＧＩＰＲ作動活性を示す。インビトロでの比較的低い活性は、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲが活性化合物序列の２８位に脂肪酸を抱合することに耐えられないことを表明する。
【０１７２】
パルミトイルの連結位置を２０位に変更する場合、リラグルタイドと同様に、活性化合物の配列のＡｒｇ２０をＬｙｓ２０に有意に置換される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）。脂肪酸もＬｙｓ２０のε−アミン基と直接結合して、何のスペーサーも添加されていない（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１）。アナログ０６７は、アナログ０４６と非常に類似したインビトロ活性を示し、天然のＧＬＰ−１と比較するとわずか１３．９％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰと比較するとわずか４．６％のＧＩＰ活性を有する。アナログ０４６と０６７の観察結果に基づいて、研究の過程において、脂肪酸を抱合してＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲ二重活性を増加する策略は、一時休止された。
【０１７３】
ラクタム結合を形成してα−らせん構造を安定させることにより更なる修飾を行う
天然のＧＬＰ−１とＧＩＰの中間領域にα−らせん構造が存在することが既に証明されており、このα−らせん構造は異なる受容体と結合するのを決定する（Ｐａｒｔｈｉｅｒら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００７年、１０４、１３９４２−１３９４７、Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０、２８５、７２３−７３０）。増強されたα−らせん構造の性質は、中性エンドペプチダーゼ（ｎｅｕｔｒａｌ  ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）の安定性を改善させることができ、より良い活性を誘導することができる（Ｍｕｒａｇｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０、５３、６４１２−６４２０）。
【０１７４】
活性化合物（即ち、アナログ０２３）の配列に基づき、α−らせん構造を安定化させるように、中間領域（１１〜２０）のｉ位とｉ＋４位に有意にラクタム結合を導入する。ラクタム結合を形成するために、それぞれＩｌｅ１２とＡｒｇ２０をＧｌｕに置換される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６と３８）。カップリング試薬の作用で、１２位と１６位のアミノ酸の側鎖基は、アミド結合によって互いに共有結合される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）。同じ合成操作によって、１６位と２０位の間にラクタム連鎖（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）を形成する。
【０１７５】
これらのアナログもｃＡＭＰ誘導によってインビトロＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲの評価をする。初歩的なデータによると、１２位と１６位の間にラクタム結合を形成したアナログが活性化合物を比較すると、インビトロでの活性が非常に近い、つまり、天然のＧＬＰ−１に比べると１３２．８％のＧＬＰ−１Ｒ作動活性を有し、天然のＧＩＰに比べると１４６．８％のＧＩＰＲ作動活性を有する。しかしながら、１６位と２０位の間にラクタム結合を形成したアナログが活性化合物を比較すると、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲの作動活性が比較的低い、つまり、天然のＧＬＰ−１に比べて３７％だけのＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰに比べてわずか３５．４％の活性を有する。
【０１７６】
Ｃ−末端の延長により更なる修飾を行う
研究の過程に、活性化合物（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）の配列に基づき、Ｃ−末端の延長によって更なる修飾も行った。３０位〜３４位に初めに５つの連続したＬｙｓを導入してＣ−末端（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）を延長させた。活性化合物と比較すると、Ｃ−末端に正電荷を荷電した別のアミノ酸を増加して、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲでのさらに低い活性を誘導した。即ち、天然のＧＬＰ−１に比べてわずか３６．８％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰに比べてわずか８．４％のＧＩＰ活性を有する。
【０１７７】
アナログをＧＬＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）に更に類似させるように、Ｅｘｅｎｄｉｎ−４のＣ−末端アミノ酸残基（３０〜３９）、即ち、ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳは、ＣＥＸと命名され、続いて、活性化合物の序列に導入される。下記の図面に示されるように、新しいＧＩＰ／ＧＬＰ−１ヘテロペプチドの配列が詳細に説明された。
【化２】
0005914641.tif 000004
【０１７８】
アナログ０５１は、活性化合物と類似なインビトロでの活性を有する。つまり、天然のＧＬＰ−１に比べて１５９．８％のＧＬＰ−１Ｒ作動活性を有し、天然のＧＩＰに比べて８９．５％のＧＩＰＲ作動活性を有する。ＧＬＰ−１活性は、ＧＩＰ活性に比べてより一層主導的である。
【０１７９】
ｅｘｅｎｄｉｎ−４を参照化合物として、正常のＩＣＲマウスでｉｐＧＴＴを施行してアナログ０５１のインビボの活性を評価した。Ｅｘｅｎｄｉｎ−４とアナログ０５１とは、同じ投与量（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）で、最初にグルコースを投与した後、著しく且つ類似した血糖低下活性を示す。３時間後、二番目にグルコースを投与した後、アナログ５１は、ｅｘｅｎｄｉｎ−４より良い血糖低下活性を示す（図３及び図４を参照）。Ｃ−末端にＣＥＸの延長を導入した後、インビボの活性を著しく高めることができる。アナログ０５１が非常に高いインビボ機能を有するので、上記の化合物を、上記の研究のリード化合物として選択した。
【０１８０】
リード化合物と親水性部分との抱合
一般的には、親水性部分は、活性タンパク質と抱合して、著しく循環速度を増やし、溶解度を高めることができる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、周知の親水性部分として、医薬品の分野に広く適用される。従って、研究の過程に、ＰＥＧを使用してリード化合物、即ち、アナログ０５１と抱合させる。ＰＥＧ抱合体を得る基本的な反応は、マレイミド基と遊離チオール（ｆｒｅｅ  ｔｈｉｏｌ）との間に行われるマイケル（Ｍｉｃｈａｅｌ）付加反応である。マレイミド基により活性化されたＰＥＧを使用してチオールと反応させて下記のようなチオエーテル（ｔｈｉｏｅｔｈｅｒ）を含有するＰＥＧ化されたペプチドを得た。
【化３】
0005914641.tif 000005
【０１８１】
研究の過程に、分子量が約２０，０００と４０，０００ダルトンであり、マレイミド基により活性化されたＰＥＧ部分、をそれぞれ使用して、ＰＥＧ化されたポリペプチドを形成した。このほかに、４０位に一つのＣｙｓ置換を有意に導入して、一つの遊離チオールを提供した。下記の図面に示されるように、ＰＥＧ化されたペプチドの配列が詳細に説明された。
【化４】
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【０１８２】
ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲにより誘導されたｃＡＭＰによって、アナログ０８８と０８９について、インビトロ試験を行った。リード化合物と比較すると、この二つのＰＥＧ化されたペプチドは、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲでさらに低い活性を示した。アナログ０８８は、天然のＧＬＰ−１と比較すると、１１％だけのＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、わずか４．９％のＧＩＰの活性を有する。アナログ０８９は、天然のＧＬＰ−１を比較すると、１８．３％だけのＧＬＰ−１受容体作動活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、わずか３．４％のＧＩＰ受容体作動活性を有する（図５及び図６を参照）。インビトロ活性の弱化は、ＧＬＰ−１Ｒは、特にはＧＩＰＲは、リガンドＰＥＧ化に対して非常に敏感であることを表明する。
【０１８３】
また、これらの血糖値の低下と体重の低下の有効性を研究するように、アナログ０８８と０８９の正常のＩＣＲマウスでのインビボの活性を評価した。ＰＥＧを抱合すると、インビボの薬物代謝動力学性質を著しく改善することができる。この二つの化合物は、それぞれ０日目と３日目に皮下注射で投与され、投与量はいずれも４０ｎｍｏｌ／ｋｇである。コントロール群と比較すると、アナログ０８８と０８９は類似な血糖低下活性を有すると同時に、アナログ０８９の体重低下活性はアナログ０８８より優れて、特に二番目に投与された後更に優れる。
【０１８４】
リード化合物のＣ−末端延長及び脂肪酸の抱合により更なる修飾を行う
アナログ０５１は、Ｃ−末端で正電荷を荷電したアミノ酸、例えばＬｙｓを利用して、更に延長された。アナログ０５１の序列に対して、その４０位に一つのＬｙｓ置換だけを導入してアナログ０６６を得ることができる。Ｃ−末端に連続的な６つのＬｙｓを導入すると、アナログ０７１を得ることができる。ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲにより誘導されたｃＡＭＰによって、アナログ０６６と０７１について、インビトロ活性を評価した。しかしながら、リード化合物（アナログ０５１）と比較すると、Ｃ−末端に正電荷を荷電したアミノ酸残基を導入した延長は、より良いインビトロ活性を起こさなかった。アナログ０６６は、天然のＧＬＰ−１と比較すると、単に４３．７％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、わずか５０％のＧＩＰの活性を有する。同時に、アナログ０７１は、天然のＧＬＰ−１と比較すると、単に２５．１％のＧＬＰ−１受容体作動活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、わずか２２．１％のＧＩＰ受容体作動活性を有する。これは、より長いＣ末端尾は、インビトロ活性を下げることを表明している。
【０１８５】
α−らせん構造を安定させるように、リード化合物（アナログ０５１）の配列に基づいて、ｉ位及びｉ＋４位の間にラクタム連鎖を形成する。Ｉｌｅ１２がＧｌｕ１２に有意に置換されると、１２位と１６位の間にラクタム連鎖を形成し、アナログ０８１を得た。同様に、Ａｒｇ２０とＡｌａ２４がそれぞれＬｙｓ２０とＧｌｕ２４に置換された後、２０位と２４位の間にラクタム環を形成して、アナログ０８５を得た。アナログ０８１は、アナログ０５２−２と非常に近いインビトロ活性を示す。つまり、天然のＧＬＰ−１と比較すると、１２４％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、２５０％のＧＩＰ活性を有する。これは、１２位と１６位の間にラクタム連鎖を形成すると、より良いインビトロ活性を維持することができるということを表明する。
【０１８６】
脂肪酸を抱合してリード化合物（アナログ０５１）の活性をアップするということは、改めて検討される。アナログ０６６と０７１の序列に基づいて、パルミトイルはＣ−末端Ｌｙｓのε−アミン（それぞれ、Ｌｙｓ４０とＬｙｓ４４）に抱合され、それぞれアナログ０６８と０７８を得た。下記の図面に示されるように、新しいＧＩＰ／ＧＬＰ−１ヘテロペプチドの配列が詳細に説明された。
【化５】
0005914641.tif 000007
【０１８７】
アナログ０２３が脂肪酸に抱合された後の状況とは異なり、アナログ０６８と０７８の両方はいずれも優れたインビトロ活性を示し、特にＧＬＰ−１Ｒ活性について優れたインビトロ活性を示す。アナログ０６８は、天然のＧＬＰ−１と比較すると、５６６％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、３１９％のＧＩＰの活性を有する。同時に、アナログ０７８は、天然のＧＬＰ−１と比較すると、７５４％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰと比較すると、３５２％のＧＩＰ活性を有する。これにより、ＧＩＰの活性に比べ、ＧＬＰ−１の活性は著しく強い。遊離ペプチドと比較すると、脂肪酸とリード化合物（アナログ０５１）の抱合によって、インビトロ活性が大幅に向上する。
【０１８８】
アナログ０６８もリラグルタイドとインビトロで相互に比較される。アナログ０６８のＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲのインビトロ活性は確定されており、同時に、リラグルタイドのＧＬＰ−１Ｒの活性は、天然のＧＬＰ−１より強いが、リラグルタイドのＧＬＰ−１Ｒの活性はアナログ０６８より弱い。前に予想されたように、濃度が１μＭまで向上されても、リラグルタイドはＧＩＰＲ活性を誘導できない。これらのインビトロで観察結果は、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲの同時活性化が、任意の単一のＧＬＰ−１Ｒ作動薬より有利であり、活性もより強いことを証明した。
【０１８９】
良好なインビトロ活性に基づき、続いて、リラグルタイドを参照化合物として、正常のＩＣＲマウスでのｉｐＧＴＴによってアナログ０６８と０７８のインビボ活性を評価した。４０ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量レベルで、グルコースを投与する場合、アナログ０６８は、リラグルタイドに比べて、より多くの血糖値を低下させ、特に５時間後の第２回の糖負荷試験の過程により多くの血糖値を低下させる。アナログ０７８が第１回のグルコース投与の過程にアナログ０６８と非常に類似する血糖値低下効果を示したとしても、第２回の糖負荷試験では、その活性は大幅に低下する。これにより、より長いＣ−末端尾は、より良いインビボ機能を得られなかった。従って、アナログ０６８の非常に良いインビトロ及びインビボの活性に基づき、前記化合物は、候補化合物として選択された。
【０１９０】
候補化合物にスペーサーを挿入することにより更なる修飾を行う
γ−Ｇｌｕスペーサーもペプチド鎖と脂肪酸部分の間に挿入される。その方式は、リラグルタイドと類似する。リラグルタイドの形成と同様に、スペーサーのγ−カルボキシルは、まず、４０位のＬｙｓのε−アミンと結合され、その後、スペーサーのα−アミンは、パルミチン酸によってカルボキシル化される。従って、スペーサーのα−カルボキシル基は、最終的に遊離したものである。スペーサーは、より多くのγ−Ｇｌｕを導入して更に延長される。下記の図面に示されるように、スペーサであるγ−Ｇｌｕを含有する脂肪酸を抱合するアナログの序列が詳細に説明された。
【化６】
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【０１９１】
アナログ０９０と０９１とは、インビトロで高い活性を示したが、両者の間には有意な差がない。アナログ０９０は、天然のＧＬＰ−１に対して５６８％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰに対して１３１１％のＧＩＰ活性を有する。同時に、アナログ０９１は、天然のＧＬＰ−１に対して９２１％のＧＬＰ−１活性を有し、天然のＧＩＰに対して２８７％のＧＩＰ活性を有する。候補化合物（アナログ０６８）と比較すると、同様に有意な差がない。
【０１９２】
続いて、アナログ０６８を参照化合物として、正常のＩＣＲマウスでのｉｐＧＴＴによってアナログ０９０と０９１のインビボの活性を評価した。４０ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量レベルで、二つの連続的なグルコース負荷試験で、全ての三つのアナログは、いずれも有意かつ類似的な血糖低下作用を示した。上記類似的なインビトロ及びインビボの活性によると、現段階の研究で、スペーサーの導入は、何の優位性を示さなかった。
【０１９３】
アナログ０５１の序列で、Ａｒｇ２０がＬｙｓに置換されるとき、Ｌｙｓ２０のε−アミンがパルミトイルと抱合され、γ−Ｇｌｕとγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕをスペーサーにして、それぞれのアナログ０９２と０９３を得た。アナログ０５１序列でのＬｙｓ２８のε−アミンがパルミトイルと抱合され、γ−Ｇｌｕをスペーサーにして、アナログ０９４を得た。アナログ０９０と０９１の構造と比較すると、脂肪酸部分は、Ｃ−末端ではなく、好ましい配列の中間部分に位置する。
【０１９４】
全ての三つのアナログは、いずれもＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲにより誘導されたｃＡＭＰによってインビトロ活性を測定した。上記の三つのアナログは、いずれも、非常に類似的な、天然のＧＬＰ−１より強力なＧＬＰ−１活性を示したが、アナログ０９０と０９１に比べて、これらの活性は比較的弱い。ＧＬＰ−１Ｒの活性は約１０倍に低下する。ＧＩＰＲの測定の状況もこれと非常に類似する。アナログ０９３以外、これらのＧＩＰＲ刺激活性は、いずれも、天然のＧＩＰとアナログ０９０、０９１に比べて大きく弱い。アナログ０９３は、天然のＧＩＰとほぼ同じのＧＩＰＲ刺激活性を示した。
【０１９５】
親水性部分を候補化合物に抱合する
インビボの薬物代謝動力学性質を向上させるように、親水性のＰＥＧ部分も化合物に連結される。マレイミド基と遊離チオールの間にＭｉｃｈａｅｌ付加反応を行い、候補化合物とＰＥＧ部分を連結させる。候補化合物（アナログ０６８）の配列を基にして、２４位のＡｌａはＣｙｓに置換されて、側鎖が遊離されたチオールを提供する。続いて、アナログ０９６を得た。マレイミドによって活性化されたＰＥＧ試薬（４０ｋ型）は、弱塩基性緩衝液でチオールと容易に反応する。上記の序列を詳細に説明するために、Ｃｙｓ２４に置換されたアナログがＰＥＧと連結したアナログは、下記の図面に示される。
【化７】
0005914641.tif 000009
【０１９６】
ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲでのインビトロｃＡＭＰ誘導試験によって、アナログ０９６と０９８の活性を評価した。一般的に、アナログ０９６と０９８は、活性が非常に類似であるが、ＧＬＰ−１Ｒの刺激活性が天然のＧＬＰ−１の活性より強い（それぞれ、天然のＧＬＰ−１に比べて、ＧＬＰ−１の活性の４０４．７％と４６３．３％を有する）。しかしながら、候補化合物と比較すると、これらの活性は比較的に弱い。天然のＧＩＰと比較すると、アナログ０９６は、単に４２％のＧＩＰＲ活性を有する。同時に、天然のＧＩＰと比較すると、アナログ０９８は、１５０％のＧＩＰＲ活性を有し、候補化合物とほとんど同じである。最初のインビトロ活性によると、Ｃｙｓ２４置換は、二つの受容体でやや低いが許容できる活性を誘導した。且つ、２４位にＰＥＧを連結すると、非常に高いインビトロ活性を維持することができ、特にＧＩＰＲ刺激活性に非常に高いインビトロ活性を維持することができる。
【０１９７】
ｄｂ／ｄｂマウスにより候補化合物の抗糖尿病能力について評価を行う
リラグルタイドを参照化合物として、ｄｂ／ｄｂマウスによって候補化合物（アナログ０６８）の抗糖尿病性質について更なる評価した。アナログ０６８とリラグルタイドの投与方法は、いずれも、皮下注射で、毎日一回投与する。
【０１９８】
それぞれ、０日目、１４日目と２８日目の非空腹時の血糖値を測定する。０日目に、リラグルタイド群とアナログ０６８群の両方で血糖値が低下したことが観察された。しかしながら、アナログ０６８は、低投与量群に属してもリラグルタイド群より血糖低下効果が顕著であり、特に、最初の注射後２４時間以内に顕著である。アナログ０６８の投与量依存性は明らかではない。１４日目に、初期血糖値は、両周の治療を経た後、明らかに異なってなる。アナログ０６８の中投与量群と高投与量群の間に、統計学的な差がないが、アナログ０６８群は、リラグルタイド群に比べて、より高い活性を示す。２８日目に、アナログ０６８群は、リラグルタイド群に比べて、比較的低い血糖レベルを維持した。組合されたデータ（０日目、１４日目及び２８日目）を１つづつ比較して、アナログ０６８の抗糖尿病概況を形成する。
【０１９９】
第一週の観察に、体重と平均累積食物摂取量の状況についても記録した。コントロール群と比較すると、アナログ０６８は、低投与量の体重低下の効果でも、リラグルタイドより顕著であり、アナログ０６８の投与量依存性は非常に良好である。リラグルタイド群と比較すると、アナログ０６８群は、より良い食事の摂取を阻害する能力を有する。明らかに、体重低下効果と食物摂取量の減少が一致である。
【０２００】
８日目に、続いて、血脂パラメータを測定した。注意すべきであるのは、アナログ０６８がトリグリセライドを減少する効果はリラグルタイドより強く、特にはアナログ０６８の低投与量群はなおさらである。コレステロールレベルにおいて、コントロール群と比較すると、アナログ０６８とリラグルタイドとは、類似なコレステロール低下効果がある。２１日目に、全ての群の高密度脂質タンパク（ＨＤＬ）コレステロール及び低密度の脂質蛋白（ＬＤＬ）コレステロール値も測定した。コントロール群と比較すると、アナログ０６８の高投与量群がＨＤＬコレステロールレベルを少し増加させることができるが、アナログ０６８とリラグルタイドは、いずれもＨＤＬコレステロールレベルを変更させることができない。そして、コントロール群と比較すると、アナログ０６８のＬＤＬコレステロール低下レベルは、リラグルタイドより優れている。
【０２０１】
２１日目に、全ての群に外因性インスリンを投与し攻撃して、即ち、インスリン抵抗性試験（ＩＴＴ、ｉｎｓｕｌｉｎ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ）を行った。コントロール群は、インスリン抵抗性の能力をまだ維持しており、コントロール群に、血糖値が低下することが発見されなかった。しかしながら、アナログ０６８は、リラグルタイドに比べてインスリン攻撃に抵抗する血糖値低下効果がさらに顕著である。アナログ０６８群のインスリン抵抗性の情況がさらに多く改善されたことが明らかである。
【０２０２】
３５日目に、付加的に、ｉｐＧＴＴによってアナログ０６８とリラグルタイドの活性を評価した。低投与量群以外、アナログ０６８は、リラグルタイドより優れた外因性グルコースの攻撃に抵抗する血糖値低下効果を有する。
【０２０３】
ｄｂ／ｄｂマウスでのアナログ０６８の更なる評価は、ＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲ二重動作剤として使用される優位性を証明した。
【０２０４】
また、アナログ０８９がｄｂ／ｄｂマウスとＤＩＯマウスでのインビボ活性の研究を相応的に行った（図７〜図１３を参照）。明らかに、アナログ０８９は、アナログ０６８より多くの優位性を有する。その理由として、ＰＥＧの抱合が毎週一回の投与頻度を保証できるからである。抗体に基づいたＥＬＩＳＡによって、マウス、ラット及びサルでのアナログ０８９のＰＫ研究を行った。図面の説明の部分及び実施例を参照して、詳細な情報を得ることができる。
【０２０５】
本発明に記載されたＧＩＰアナログの任意の修飾は、単独で使用することができ、組み合わせして使用することもできる。上記の修飾は、ＧＩＰ受容体活性及びＧＬＰ−１受容体作動活性（天然のＧＬＰ−１と等価またはさらに強い）を維持又は増加させ、安定性を増加したり、分解を減少させる。いくつかの実施例において、ＧＩＰアナログは、水、またはＰＢＳでの溶解度は、少なくとも２ｍｇ／ｍＬの濃度に達することができ、また、４℃で２４時間（ｐＨ＝７．４）放置した後、まだ少なくとも９２％の原型ペプチドが存在する。
【０２０６】
本発明において、薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む無菌の医薬組成物、及びデバイスを含むキットを提供した。本発明において、体重の低下を誘導したり、体重増加を防ぐ方法を提供した。上記方法は、体重の低下を十分に誘導したり、体重増加を十分に防ぐことができる投与量で、これを需要とする被験者に上記医薬組成物を投与することを含む。本発明において、糖尿病を治療する方法を提供した。前記方法は、血糖値の低下を十分に誘導することができる投与量で、これを需要とする被験者に上記医薬組成物を投与することを含む。
【０２０７】
全ての治療方法、医薬組成物、キット、及び本発明に記載された他の類似する例は、いずれも、このように限定されたポリペプチド、作動薬、二重作動薬またはアナログ、及びその薬学的に許容できる塩またはエステル、を使用することが予想される。
【０２０８】
現在の概括では、本発明の全ての実施形態を定義することではなく、その他の部分、例えば、発明の具体的な実施形態において、付加的な例も記載した。全ての書類は、一つの一体的な文献となって、且つ、本発明に記載された全ての特徴の可能な組み合わせは、これらの特徴の組み合わせが本発明の同じ文、同じ段落または同じ部分に同時に表されることがないことに関わらず、いずれもこれに含まれることを理解すべきである。
【実施例】
【０２０９】
本発明のＧＩＰアナログは、標準的なペプチド固相合成法、組換えＤＮＡ技術またはポリペプチドと融合タンパク質を製造する他の任意の方法によって得られる。いくつかの非天然のアミノ酸は、標準的な組換えＤＮＡ技術により発現されることができないが、現在、これらのアミノ酸を製造するための技術もある。本発明の非ペプチド部分を含有するＧＩＰアナログは、標準的なペプチド合成方法により得られる以外、標準的な有機化学反応によって合成されることもできる。
【０２１０】
実施例１  線形ペプチドの合成の一般的な方法
標準的な固相ペプチド合成方法により、Ｎ−末端Ｆｍｏｃ−保護策略を採用して、ペプチドを製造する。標準的なＦｍｏｃの規定に基づいて手動的にペプチド鎖の組み立て合成を行う。天津南開合成科学技術有限公司から購入したＦｍｏｃ  Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ樹脂（１％ＤＶＢ、１００〜２００メッシュ、置換度０．３４−０．４４ｍｍｏｌ／ｇ）を固相担体として使用する。以下に使用された側鎖が保護されたアミノ酸は、上海吉尓生化有限公司から提供される：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ（Ａｌｌｙｌ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｎｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ。全ての化学製品（シグマ−オールドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｊ＆Ｋ株式会社（Ｊ＆Ｋ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ  ＬＴＤ）、上海吉尓生化有限公司を含む異なるベンダーから由来される）は合成級である。
【０２１１】
合成完了後、ポリペプチドは、固相重合体担体から切断され、且つ、全ての側鎖は脱保護される。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）で２時間処理すると、このプロセスを完了することができる。この場合、トリフルオロ酢酸に２．５％の水と２．５％の１，２−エタンジチオオール（ＥＤＴ、１，２−Ｅｔｈａｎｅ  ｄｉｔｈｉｏｌ）を添加して、側鎖保護基を除去する。ペプチド−ＴＦＡ溶液を樹脂で濾過して、ほとんどのＴＦＡを除去した後、冷却されたエチルエーテル（ｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｅｒ）を添加してペプチドを沈殿させる。ペプチドを遠心分離し、エチルエーテルで洗浄した後、アセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）緩衝液に溶解させる。
【０２１２】
樹脂から切断された後、ペプチド粗生成物（ｃｒｕｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ）抽出物は、分析型逆相ＨＰＬＣによって分析される。分析型の分離は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ＠ＭＳシステムでＣ１８カラム（５０×２．１ｍｍ）を使用して、０．１％ＴＦＡのアセトニトリル勾配で行われる（１ｍＬ／ｍｉｎ、２１４ｎｍ、Ａ緩衝液＝０．１％ＴＦＡ、Ｂ緩衝液＝０．１％ＴＦＡ／９０％アセトニトリル、勾配は１５ｍｉｎ以内に１０％から９０％までになる）。分析型の分析した後、ペプチド粗生成物をＶｙｄａｃＣ４またはＣ８カラム（２．２×２５ｃｍ）、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル勾配を利用して、半製造クロマトグラフィーによって精製する。純品は液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ−ＭＳ、Ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）により測定した後、凍結乾燥させて目的のペプチドを得る。
【０２１３】
実施例２  Ａｉｂ２−ＧＩＰ（１−２９）−Ｃｙｓ３０とＣｙｓの単一置換アナログとの合成
０．０５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ  Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ樹脂を１０ｍＬの反応容器に入れて、以下の配列に応じて、ジイソプロピルカルボジイミド／／ヒドロキシベンゾトリアゾール）（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ／Ｈｙｄｒｏｘｙ  ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ）をカップリング試薬として、標準的なＦｍｏｃ−化学固相ペプチド合成の過程を実施する。
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ
【０２１４】
以下の側鎖が保護されたアミノ酸を使用する：Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
【０２１５】
全ての合成サイクルが完了した後、２０％ピペリジン（Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）／ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）溶液でポリペプチドが連結された樹脂を処理して、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基を除去する。続いて、最後の切除試薬（９５％ＴＦＡ、２．５％Ｈ２Ｏ、２．５％ＥＤＴ）で２時間処理する。固体樹脂を濾過し、得られたろ液に窒素ガスを吹き込んで濃縮させる。冷却されたエチルエーテルでペプチドを沈殿させ、遠心分離によって、粗生成物を得る。ポリペプチド粗生成物は、アセトニトリル緩衝液に溶解され、セミ分取逆相カラムに添加する。Ｗａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステムでアセトニトリル勾配溶出を実施する。適切な部分は、ＬＣ−ＭＳで測定した後、混合して一緒に凍結乾燥させる。ＨＰＬＣ分析によると、得られた産物の純度が９０％を超えていることを示した。ＥＳＩ−ＭＳは、目的ペプチドの望ましい信号を証明した。
アナログ０２８、０８７と０９６は同じような方法を使用して製造される。
【０２１６】
実施例３  アナログ０４６と脂肪酸が連結された類似ペプチドとの合成
０．０５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ  Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ樹脂を１０ｍＬの反応容器に入れて、以下の配列に応じて、ＤＩＣ／ＨＯＢｔをカップリング試薬として、標準的なＦｍｏｃ−化学固相ペプチド合成の過程を実施する。
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（パルミトイル）−Ｇｌｙ
【０２１７】
以下の側鎖が保護されたアミノ酸を使用する：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
【０２１８】
全ての合成サイクルが完了した後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４／ジクロロメタンでポリペプチドが連結された樹脂を１時間処理して、Ａｌｌｏｃ保護基を除去して、パルミチン酸を添加して、２８位のＬｙｓのε−アミンと抱合される。続いて、２０％ピペリジン（Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）／ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）溶液で樹脂を処理して、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基を除去した後、最後の切除試薬（９５％ＴＦＡ、２．５％Ｈ２Ｏ、２．５％ＥＤＴ）で２時間処理する。固体樹脂を濾過し、得られたろ液に窒素ガスを吹き込んで濃縮させる。冷却されたエチルエーテルでペプチドを沈殿させ、遠心分離によって、粗生成物を得る。ポリペプチド粗生成物は、アセトニトリル緩衝液に溶解され、セミ分取逆相カラムに添加する。Ｗａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステムでアセトニトリル勾配溶出を実施する。適切な部分は、ＬＣ−ＭＳで測定した後、混合して一緒に凍結乾燥させる。ＨＰＬＣ分析によると、得られた産物の純度が９０％を超えていることを示した。ＥＳＩ−ＭＳは、目的ペプチドの望ましい信号を証明した。
アナログ０４７は、類似的な方法を使用して製造される。
【０２１９】
実施例４  アナログ０６５とマレイミド（Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ）が連結された類似ペプチドとの合成
０．０５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ  Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ樹脂を１０ｍＬの反応容器に入れて、以下の配列に応じて、ＤＩＣ／ＨＯＢｔをカップリング試薬として、標準的なＦｍｏｃ−化学固相ペプチド合成の過程を実施する。
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（３−マレイミドプロピオニル）−Ｇｌｙ
【０２２０】
以下の側鎖が保護されたアミノ酸を使用する：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
【０２２１】
全ての合成サイクルが完了した後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４／ジクロロメタンでポリペプチドが連結された樹脂を１時間処理して、Ａｌｌｏｃ保護基を除去して、３−マレイミドプロピオン酸（３−Ｍａｌｅｉｍｉｄｏ  ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）を添加して、２８位のＬｙｓのε−アミンと縮合される。続いて、２０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド溶液で樹脂を処理して、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基を除去した後、最後の切除試薬（９５％ＴＦＡ、２．５％Ｈ２Ｏ、２．５％ＥＤＴ）で２時間処理する。固体樹脂を濾過し、得られたろ液に窒素ガスを吹き込んで濃縮させる。冷却されたエチルエーテルでペプチドを沈殿させ、遠心分離によって、粗生成物を得る。ポリペプチド粗生成物は、アセトニトリル緩衝液に溶解され、セミ分取逆相カラムに添加する。Ｗａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステムでアセトニトリル勾配溶出を実施する。適切な部分は、ＬＣ−ＭＳで測定した後、混合して一緒に凍結乾燥させる。ＨＰＬＣ分析によると、得られた産物の純度が９０％を超えていることを示した。ＥＳＩ−ＭＳは、目的ペプチドの望ましい信号を証明した。
アナログ０６９と０７９は同じような方法で製造される。
【０２２２】
実施例５  アナログ０５２−２とラクタム結合を含む類似なペプチドとの合成
０．０５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ  Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ樹脂を１０ｍＬの反応容器に入れて、以下の配列に応じて、ＤＩＣ／ＨＯＢｔをカップリング試薬として、標準的なＦｍｏｃ−化学固相ペプチド合成の過程を実施する。
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ  ［Ｇｌｕ１２  とＬｙｓ１６との間にラクタム連鎖を形成する］
【０２２３】
以下の側鎖が保護されたアミノ酸を使用する：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
【０２２４】
全ての合成サイクルが完了した後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４／ジクロロメタンでポリペプチドが連結された樹脂を１時間処理して、Ａｌｌｏｃ保護基を除去して、カップリング試薬ＰｙＢＯＰ（Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ−ｏｘｙｔｒｉｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ  ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）／ＤＩＥＡ作用下ラクタム連鎖を生成する。続いて、２０％ピペリジン（Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）／ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）溶液で樹脂を処理して、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基を除去した後、最後の切除試薬（９５％ＴＦＡ、２．５％Ｈ２Ｏ、２．５％ＥＤＴ）で２時間処理する。固体樹脂を濾過し、得られたろ液に窒素ガスを吹き込んで濃縮させる。冷却されたエチルエーテルでペプチドを沈殿させ、遠心分離によって、粗生成物を得る。ポリペプチド粗生成物は、アセトニトリル緩衝液に溶解した後、セミ分取逆相カラムに添加する。Ｗａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステムでアセトニトリル勾配溶出を実施する。適切な部分は、ＬＣ−ＭＳで測定した後、混合して一緒に凍結乾燥させる。ＨＰＬＣ分析によると、得られた産物の純度が９０％を超えていることを示した。ＥＳＩ−ＭＳは、目的ペプチドの望ましい信号を証明した。
アナログ０５３−２、０８１、０８４及び０８５は、類似的な方法で製造される。
【０２２５】
実施例６  アナログ０９０とγ−Ｇｌｕをスペーサーとする類似ペプチドとの合成
０．０５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ  Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ樹脂を１０ｍＬの反応容器に入れて、以下の配列に応じて、ＤＩＣ／ＨＯＢｔをカップリング試薬として、標準的なＦｍｏｃ−化学固相ペプチド合成の過程を実施する。
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）
【０２２６】
以下の側鎖が保護されたアミノ酸を使用する：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。
【０２２７】
最後のサイクルは、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを抱合して完成される。全ての合成サイクルが完了した後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４／ジクロロメタンでポリペプチドが連結された樹脂を１時間処理して、Ａｌｌｏｃ保護基を除去して、続いてγ−グルタミル（γ−ｇｌｕｔａｍｙｌ）は、４０位のＬｙｓのε−アミンに抱合される。続いて２０％ピペリジン（Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）／ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｆｏｒｍａｍｉｄｅ）溶液で樹脂を処理して、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基を除去した後、続いてパルミチン酸をスペーサーのα−アミンに抱合させる。最終的に、樹脂を切除試薬（９５％ＴＦＡ、２．５％Ｈ２Ｏ、２．５％ＥＤＴ）で２時間処理する。固体樹脂を濾過し、得られたろ液に窒素ガスを吹き込んで濃縮させる。冷却されたエチルエーテルでペプチドを沈殿させ、遠心分離によって、粗生成物を得る。ポリペプチド粗生成物は、アセトニトリル緩衝液に溶解した後、セミ分取逆相カラムに添加する。Ｗａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステムでアセトニトリル勾配溶出を実施する。適切な部分は、ＬＣ−ＭＳで測定した後、混合して一緒に凍結乾燥させる。ＨＰＬＣ分析によると、得られた産物の純度が９０％を超えていることを示した。ＥＳＩ−ＭＳは、目的ペプチドの望ましい信号を証明した。
アナログ０９１、０９２、０９３、０９４及び０９５は、類似的な方法で製造される。
【０２２８】
実施例７  ＰＥＧ化の一般的な方法（Ｃｙｓ−マレイミド）
一般的に、Ｃｙｓ置換基を含むＧＩＰアナログ８７をリン酸塩緩衝液（〜１０ｍｇ／ｍＬ）に溶解させ、等当量のマレイミドにより活性化されたメトキシＰＥＧ試薬を添加して、室温で攪拌して反応させると同時に分析型ＨＰＬＣで反応の進展を測定した。１０−２４ｈ後、反応混合物を酸性化させて製造型逆相カラムに添加して精製し、０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）勾配を使用する。適切な部分を混合して、凍結乾燥させて、目的のＰＥＧ化ポリペプチドを得る。
アナログ０８８と０８９は類似的な方法で製造される。
【０２２９】
下記の配列表に、本発明で合成された全てのＧＩＰアナログが記載される。
天然のＧＩＰ：Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）
アナログ００２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）
アナログ００３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）
アナログ００４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−Ｍｅｔ（酸化）−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）
アナログ００５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）−Ｍｅｔ（酸化）−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）
【０２３０】
アナログ００６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ（酸化）−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）
アナログ００７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ（酸化）−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）
アナログ００８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）
アナログ００９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｇ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）
【０２３１】
アナログ０１０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）
アナログ０１１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）
アナログ０１２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）
【０２３２】
アナログ０１３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（４−Ｍｅ）−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）
アナログ０１５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）
アナログ０１６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）
アナログ０２０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）
【０２３３】
アナログ０２１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）
アナログ０２３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）
アナログ０２４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）
【０２３４】
アナログ０２５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）
アナログ０２６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）
アナログ０２８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）
アナログ０２９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）
【０２３５】
アナログ０３０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）
アナログ０３１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）
アナログ０３２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）
アナログ０３４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）
【０２３６】
アナログ０４０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）
アナログ０４３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐａｌ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）
アナログ０４４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）
アナログ０４６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（パルミトイル）−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１）
【０２３７】
アナログ０４７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（パルミトイル）−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）
アナログ０４８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（パルミトイル）−Ａｓｎ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３）
アナログ０４９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（パルミトイル）−Ａｓｎ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）
【０２３８】
アナログ０５１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）
アナログ０５２−１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）
【０２３９】
アナログ０５２−２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）［１２と１６との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）
アナログ０５３−１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）
アナログ０５３−２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）［１６と２０との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）
【０２４０】
アナログ０５４−１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）
アナログ０５６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）
アナログ０５７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）
【０２４１】
アナログ０５８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）
アナログ０５９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４）
アナログ０６０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）
アナログ０６２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６）
【０２４２】
アナログ０６３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｎａｌ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７）
アナログ０６４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｐａｌ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８）
【化８】
0005914641.tif 000010
【０２４３】
アナログ０６６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０）
アナログ０６７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（パルミトイル）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１）
アナログ０６８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２）
【０２４４】
【化９】
0005914641.tif 000011
アナログ０７１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４）
アナログ０７４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ビオチン）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５）
アナログ０７５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６）
【０２４５】
アナログ０７８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７）
【化１０】
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【０２４６】
アナログ０８０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（ビオチン）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９）
アナログ０８１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）［１２と１６との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０）
アナログ０８４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）［１２と１６との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１）
【０２４７】
アナログ０８５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）［２０と２４との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２）
アナログ０８７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３）
アナログ０８８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（２０ｋＰＥＧ）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４）
【０２４８】
アナログ０８９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５）
アナログ０９０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）
アナログ０９１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）
【０２４９】
アナログ０９２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）
アナログ０９３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）
アナログ０９４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）
【０２５０】
アナログ０９５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（γ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕ−パルミトイル）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１）
アナログ０９６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）
【０２５１】
アナログ０９７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ（２０ｋＰＥＧ）−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）
アナログ０９８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）
アナログ０９９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）［１２と１６との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５）
【０２５２】
アナログ１００：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）［１６と２０との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６）
アナログ１０１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）［２０と２４との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）
【０２５３】
アナログ１０２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）［２４と２８との間にラクタム連鎖を形成する］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８）
アナログ１０４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）
アナログ１０５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）
【０２５４】
アナログ１０６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ヘキサデカノイル（ｈｅｘａｄｅｃａｎｅｄｉｏｉｃ  ａｃｙｌ））（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１）
アナログ１０７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２）
アナログ１０８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（コール酸アシル（ｃｈｏｌｉｃ  ａｃｙｌ））（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３）
【０２５５】
アナログ１１４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４）
アナログ１１５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５）
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【０２５６】
アナログ１１７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７）
アナログ１２０：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８）
【０２５７】
アナログ１２１：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９）
アナログ１２２：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９０）
アナログ１２３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１）
【０２５８】
アナログ１２４：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２）
アナログ１２５：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３）
アナログ１２６：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４）
【０２５９】
アナログ１２７：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（４０ｋＰＥＧ）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５）
アナログ１２８：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（パルミトイル）（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６）
アナログ１２９：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ（ビオチン）−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（ビオチン）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７）
【０２６０】
アナログ１３３：Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ（４０ｋＰＥＧ）−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＮＨ２）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９８）
Ｅｘｅｎｔｉｎ−４：Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９）
ＧＬＰ−１：Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１００）
【０２６１】
ペプチドの特性情報は、表２に記載された。
【０２６２】
【表２】
0005914641.tif 000013
0005914641.tif 000014
0005914641.tif 000015
0005914641.tif 000016
0005914641.tif 000017
0005914641.tif 000018
【０２６３】
実施例８  正常ｃＡＭＰ誘導試験のプロトコル
試験のメカニズム
サンプルまたは標準品のｃＡＭＰとホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）で標識されたｃＡＭＰ抱合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）とは、抗−ｃＡＭＰ抗体の結合サイトを競争する。ｃＡＭＰが不足しているとき、大部分のＨＲＰ−ｃＡＭＰ抱合体は、抗体と結合する。増加したｃＡＭＰ濃度は競争的に結合された抱合体の量を減少させるので、測定されたＨＲＰの活性を低下させる。
【０２６４】
材料と装置
テストキット：Ｃａｔｃｈ  ＰｏｉｎｔTM  Ｃｙｃｌｉｃ−ＡＭＰ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｐｒｏｄｕｃｔ＃Ｒ８０８８）
細胞株：ＣＨＯｈＧＬＰ−１Ｒ及びＣＨＯｈＧＩＰＲ、
増殖培地：α−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、１２５６１−０５６）、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、１００９９）、１ｍｇ／ｍＬＧ４１８（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１００３１０３５）及び１０ｎＭＭＴＸ（Ｓｉｇｍａ、Ｍ４０１０）を添加する、
【０２６５】
試薬：イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ、ｉｓｏｂｕｔｙｌ  ｍｅｔｈｙｌ  ｘａｎｔｈｉｎｅ）（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、Ｉ５８７９）、フォースコリン（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）（Ｓｉｇｍａ、Ｆ６８８６）、クレブスリンガー重炭酸塩（ＫＲＢ、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）緩衝液（Ｓｉｇｍａ、Ｐ／ＮＫ４００２＋１５ｍＭ炭酸水素ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  Ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ））、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）（ＧＩＢＣＯ、ＲＥＦ１４１９０−１３６）、３％Ｈ２Ｏ２（北京世紀）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）（Ｓｉｇｍａ、Ｄ２６５０）、トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）（Ｇｉｂｃｏ、１５４００）、蒸留水または脱イオン水、９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ、３５３０７２）、天然のリガンド（ＧＬＰ−１及びＧＩＰ）は上海ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ会社から購入される。
【０２６６】
装置：クリーンベンチ（ｃｌｅａｎ  ｂｅｎｃｈ）（ＥＳＣＯ、ＳＶＥ−４Ａ１）、Ｃ０２培養槽（ｔｈｅｒｍｏ、３１１１）、自動細胞計数器（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＣｏｕｔｅｓｓＴＭ）、微量ピペット（ｍｉｃｒｏｐｉｐｅｔ）（エッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ））、マイクロウェルプレート渦流ミキサー（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒ）（ＴＡＩＴＥＣ、Ｍ．ＢＲ−０２２ＵＰ）、精密フィルターを備えたマイクロプレートリーダー（励起５３０ｎＭ、放出５９０ｎＭ）（Ｔｅａｃｏｎ、ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ２００）
【０２６７】
試験ステップ：
細胞接種：ＣＨＯｈＧＬＰＩＲまたはＣＨＯｈＧＩＰＲの細胞：１０，０００細胞／ウェル／１００ｕＬは、３７℃の５％ＣＯ２で一晩を過ごす。
【０２６８】
細胞溶解物の製造：
培地を徐々に吸収し取り除いて、ＫＲＢＧ緩衝液で細胞を洗浄しており、１００ｕＬ／ウェル。
ＫＲＢＧを徐々に吸収し取り除いて、ウェルごとに１００μＬの１．５×刺激緩衝液（０．７５ｍＭＩＢＭＸを含むＫＲＢＧ、実験当日に新たに製造される）を添加し、室温でプレートを１０分間インキュベーションした後、５０μＬ／ウェルの３×最終濃度のテストサンプル（５０００ｎＭから５倍系列に希釈）を含むＫＲＢＧを添加し、３７℃の５％ＣＯ２で３０ｍｉｎインキュベーションする。
ウェルごとに５０μＬ溶解液を入れ、続いて、振とう機に入れ、１０分振とうさせる。
【０２６９】
ｃＡＭＰの検出とデータ分析
４０μＬのサンプルを設置して適当なウェルにおいて分析する。全てのサンプルのｃＡＭＰ濃度を検出し、キットの説明書に従って操作する。
Ｅｘ：４９０ｎｍとＥｍ：５３０ｎｍでの蛍光信号を検出する。ｃＭＡＰ標準曲線によってＦＩ信号をｃＡＭＰ濃度に転換させる。投与量−反応曲線を作成し、Ｏｒｉｇｉｎ８．０を使用してロジスティックフィット（ｌｏｇｉｓｔｉｃ  ｆｉｔｔｉｎｇ）を行い、ＥＣ５０値を求める。
【０２７０】
全ての合成されたＧＩＰアナログは、いずれも、上記のプロトコルのインビトロのＧＬＰ−１ＲとＧＩＰＲにより媒介されたｃＡＭＰ誘導試験により評価をした。各種のポリペプチドのＥＣ５０値は、表３に示される。
【０２７１】
【表３】
0005914641.tif 000019
0005914641.tif 000020
0005914641.tif 000021
【０２７２】
実施例９  ＩＣＲマウスの評価の一般的なプロトコル
動物
オスＩＣＲマウス（２３−２５ｇ）は、北京維通利華実験動物技術有限公司（ＶＲＬ）から購入した。北京韓美薬品有限公司実験動物の飼育及び使用指南の原則に基づいて動物を飼育した。マウスを１２時間ごとの定期的な明暗交替の環境に置かせる。動物は、科澳協力動物食品有限公司から購入した標準飼料で飼育して、自由に水を飲ませた。正式実験前に、マウスをランダムにコントロール群と薬物処理群に分ける。
【０２７３】
材料
グルコースは天津福晨化学試剤厂から購入した。血糖測定器（ＡＣＣＵ−ＣＨＥＫ（登録商標）Ａｃｔｉｖｅ）及び血糖測定試験紙はレイシー（Ｒｏｃｈｅ）（上海）有限公司から購入した。
【０２７４】
腹腔内注射グルコース負荷試験（ｉｐＧＴＴ）：
マウスが夜を明かして断食（１６時間）させた後、血糖値を測定し（−３０ｍｉｎ）、続いて、サンプルペプチド（最高１０００ｎＭ）または担体を皮下注射で投与した。投与３０分後、０ｍｉｎ血糖値を測定した。この後、腹腔内注射方式でグルコース３ｇ／ｋｇを投与した。且つ、グルコース投与後１５、３０、６０及び１２０分の血糖値を測定した。血糖値測定後、データを収集し分析した。ＡＵＣ（ｍｍｏｌ／Ｌ＊ｈ）＝（ＢＧ−３０＋ＢＧ０）×３０／２／６０＋（ＢＧ０＋ＢＧ１５）×１５／２／６０＋（ＢＧ１５＋ＢＧ３０）×１５／２／６０＋（ＢＧ３０＋ＢＧ６０）×３０／２／６０＋（ＢＧ６０＋ＢＧ１２０）×６０／２／６０（ＢＧ−３０、ＢＧ０は、それぞれグルコース投与前３０分及び０分の場合の血糖値であり、ＢＧ１５、ＢＧ３０、ＢＧ６０とＢＧ１２０は、グルコース投与後１５、３０、６０及び１２０分の場合の血糖値である）。
【０２７５】
実施例１０  ｄｂ／ｄｂマウスの一般的な評価のプロトコル
動物
オスＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７ｍ＋／＋Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊマウス（ｄｂ／ｄｂ、６−８週齢）は、南京大学模式動物研究所で購入した。北京韓美薬品有限公司実験動物の飼育及び使用指南の原則に基づいて動物を飼育した。マウスを１２時間ごとの定期的な明暗交替の環境に置かせて飼育して、且つ、正式実験前、１０日間に適応的に飼育した。マウスは、科澳協力動物食品有限公司から購入した標準飼料で飼育して、自由に水を飲ませた。実験前に、マウスをランダムにコントロール群と薬物処理群に分ける。
【０２７６】
材料と方法
グルコースは天津福晨化学試剤厂から購入した。優泌林（登録商標）Ｒ（Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒ）は、Ｌｉｌｌｙから購入した。血糖測定器（ＡＣＣＵ−ＣＨＥＫ（登録商標）Ａｃｔｉｖｅ）及び血糖測定試験紙はレイシー（Ｒｏｃｈｅ）（上海）有限公司から購入した。血中コレステロール（Ｂｌｏｏｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）、トリグリセリド（Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−ｃ）及び低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−ｃ）測定キットは、北京中生北控生物科技有限会社から購入した。
【０２７７】
非空腹時血糖値
朝９時３０分に、マウス０ｍｉｎ血糖値を測定する。続いて、マウスに皮下注射でサンプルペプチド（約１０００ｎＭ）を投与する。投与後１０時間以内、２時間ごとに血糖値を測定する。投与後２４時間で、最後の時点の血糖値を測定する。
【０２７８】
腹腔内グルコース負荷試験（ｉｐＧＴＴ）
マウスを実験前１２時間絶食させる。投与３０分後に０ｍｉｎ血糖値を測定する。続いて、マウスに腹腔内注射で１ｇ／ｋｇの投与量のグルコースを投与し、グルコース注射後１５、３０、６０及び１２０分の血糖値を測定する。
【０２７９】
インスリン負荷試験（ＩＴＴ）
マウスを朝の４時間絶食させた後、０ｍｉｎ血糖値を測定する。続いて、動物に皮下注射で優泌林（登録商標）Ｒ（Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒ）０．４Ｕ／ｋｇを投与し、注射後１５、３０、６０及び１２０分の血糖値を測定する。
【０２８０】
血中脂質プロファイルテスト
血中コレステロール、トリグリセライド、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−ｃ）及び低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−ｃ）は、測定キットを使用して、明細書の方法によって測定される。
【０２８１】
実施例１１  ビオチンで抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰモノクローナル抗体を標識する一般的なプロトコル
材料
試薬：ビオチン標識キット（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｉｌｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１１４１８１６５００１）、抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰモノクローナル抗体（Ｃｏｗｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、２０１２０１２９）
【０２８２】
装置：マイクロプレートシェーカー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、４６２５−１ＣＥＱ）、分光光度計（島津（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＵＶ−２４５０）
【０２８３】
ステップ
溶液調製：
ブロッキング液（Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）：ブロッキング試薬瓶の中の物質を３００ｍＬの蒸留水に溶解させる。この試薬を完全に溶解させる。
ＰＢＳ溶液：ＰＢＳ瓶の中の物質を１Ｌの蒸留水に溶解させる。この試薬を完全に溶解させる。
ビオチン−７−ＮＨＳ溶液：この溶液は必ず標識する前に新たに調製する。２５０ｕＬ  ＤＭＳＯをビオチン−７−ＮＨＳを含有する瓶の中に投与し、溶液を数回振とうする。得られたビオチン−７−ＮＨＳ溶液の濃度は２０ｍｇ／ｍＬである。
【０２８４】
ビオチン−７−ＮＨＳでタンパク質を標識する：
１ｍＬ抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体溶液（１ｍｇ／ｍＬ、ＰＢＳ製剤）を取り、１．５ｍＬエッペンドルフ（ＥＰ、ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）管に入れる。１０ｕＬビオチン−７−ＮＨＳ溶液（２０ｍｇ／ｍＬ）をＤＭＳＯで１：１０に希釈する。１５ｕＬビオチン−７−ＮＨＳ溶液（２ｍｇ／ｍＬ）をとり、１ｍｌの抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体溶液が入れられたエッペンドルフ管中に入れる。アルミ箔で試験管を包装して陽光を遮断させる。室温状態で、水平方向のマイクロプレートシェーカーで試験管を２時間インキュベーションして、振動速度を５００ｒｐｍ±５０ｒｐｍに設定する。
【０２８５】
ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムの製造：
抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体とビオチン−７−ＮＨＳをインキュベーションすると同時に、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムを製造する。スタンドにクランプでカラムを固定し、カラムの下に少なくとも１００ｍＬのビーカーを置く。カラムのボトムの出口をカットして、カラム最上端のカバーを取り外して、カラム中の物質を流出させる。５ｍＬブロッキング液をカラムに投与して、且つ、ブロッキング液を流出させる。続いて、合計３０ｍＬ（５ｍＬ×６回）のＰＢＳ溶液でカラムを洗浄して、且つ、ＰＢＳ溶液を流出させる。ここで、カラム中の液体が全部流出してしまうことを避けるべきである。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムは、現在使用可能である。
【０２８６】
カラムクロマトグラフィー法：
インキュベーションの混合物からビオチンで標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体を精製する。下記の通りである。
反応混合物をカラムに投与して、流出させる。
１．５ｍＬＰＢＳ溶液をカラムに投与し、流出させる。
更に、３．５ｍＬＰＢＳ溶液をカラムに投与し、標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体を溶出させる。
最初の１０滴の溶液を流出させる。
１１−２０滴を新たな１．５ｍＬエッペンドルフ管に収集する。この部分は、ビオチンで標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体である。
２０滴の液体を収集した後、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムが放棄されるべきである。
【０２８７】
濃度測定：
ＰＢＳ溶液で標識されたタンパク質を５倍に希釈する（例えば、２０μＬの標識されたタンパク質を８０μＬのＰＢＳ溶液に投与する。正確な体積と分光光度計のキュベット（ｃｕｖｅｔｔｅ）体積とは、正比例である）。２８０ｎｍの吸光度値を検出する（プラスチック製キュベットを使用してはならない）。分光光度計は、ＰＢＳ溶液をブランク群にしてキャリブレーションすべきである。
標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体濃度（濃度は：Ｏ．Ｄ．２８０ｎｍ／１．３５×５（希釈度）＝Ｘｍｇ／ｍＬ）を測定する。１．３５は抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体の消光係数値である。
【０２８８】
実施例１２  ジゴキシンで抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰポリクローナル抗体を標識する一般的なプロトコル
材料
試薬：ジゴキシゲニン−３−Ｏ−メチルカルボニル−ε−アミンカプロン酸−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ−３−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｎｙｌ−ε−ａｍｉｎｏｃａｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｅｓｔｅｒ）（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｉｌｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１１３３３０５４００１）、ビオチン標識キット（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｉｌｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１１４１８１６５００１）、抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰポリクローナル抗体（Ｃｏｗｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、２０１１１１０４）
装置：マイクロプレートシェーカー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、４６２５−１ＣＥＱ）、分光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、ＵＶ−２４５０）
【０２８９】
ステップ
溶液調製：
ブロッキング液：ブロッキング試薬瓶の中の物質を３００ｍＬの蒸留水に溶解させる。この試薬を完全に溶解させる。
ＰＢＳ溶液：ＰＢＳ瓶の中の物質を１Ｌの蒸留水に溶解させる。この試薬を完全に溶解させる。
ジゴキシン−７−ＮＨＳ溶液：２５０ｕＬ  ＤＭＳＯにジゴキシゲニン−３−Ｏ−メチルカルボニル−ε−アミンカプロン酸−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルを溶解させ、溶液を数回振とうさせる。得られたジゴキシン−ＮＨＳ溶液の濃度は２０ｍｇ／ｍＬである。
【０２９０】
ジゴキシン−７−ＮＨＳでタンパク質を標識する：
１ｍＬ抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体（１ｍｇ／ｍＬ、ＰＢＳ製剤）をとり、１．５ｍＬエッペンドルフ管に投与する。１１ｕＬジゴキシン−ＮＨＳ（２０ｍｇ／ｍＬ）をとり、１ｍＬの抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体溶液が入れられたエッフェンドルフ管に投与する。アルミ箔で試験管を包装して陽光を遮断させる。室温状態で、水平方向のマイクロプレートシェーカーで試験管を２時間インキュベーションさせ、振動速度は５００ｒｐｍ±５０ｒｐｍに設定する。
【０２９１】
ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムの製造：
抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体とジゴキシン−ＮＨＳをインキュベーションすると同時に、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムを製造する。スタンドにクランプでカラムを固定し、カラムの下に少なくとも１００ｍＬのビーカーを置く。カラムのボトムの出口をカットして、カラム最上端のカバーを取り外して、カラム中の物質を流出させる。５ｍＬブロッキング液をカラムに投与して、且つ、ブロッキング液を流出させる。続いて、合計３０ｍＬ（５ｍＬ×６回）のＰＢＳ溶液でカラムを洗浄して、且つ、ＰＢＳ溶液を流出させる。ここで、カラム中の液体が全部流出してしまうことを避けるべきである。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムは、現在使用可能である。
【０２９２】
カラムクロマトグラフィー法：
インキュベーションの混合物からジゴキシンで標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体を精製する。下記の通りである。
反応混合物をカラムに投与して、流出させる。
１．５ｍＬＰＢＳ溶液をカラムに投与し、流出させる。
更に、３．５ｍＬＰＢＳ溶液をカラムに投与し、標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体を溶出させる。
最初の１０滴の溶液を流出させる。
１１−２０滴を新たな１．５ｍＬエッペンドルフ管に収集する。この部分は、ジゴキシンで標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体である。
２０滴の液体を収集した後、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムが放棄されるべきである。
【０２９３】
濃度測定：
ＰＢＳ溶液で標識されたタンパク質を５倍に希釈する（例えば、２０μＬの標識されたタンパク質を８０μＬのＰＢＳ溶液に投与する。正確な体積と分光光度計のキュベット（ｃｕｖｅｔｔｅ）体積とは、正比例である）。２８０ｎｍの吸光度値を検出する（プラスチック製キュベットを使用してはならない）。分光光度計は、ＰＢＳ溶液をブランク群にしてキャリブレーションすべきである。
標識された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体濃度（濃度は：Ｏ．Ｄ．２８０ｎｍ／１．３５×５（希釈度）＝Ｘｍｇ／ｍＬ）を測定する。１．３５は抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰ抗体の消光係数値である。
【０２９４】
実施例１３  マウスＰＫ研究
オスＣ５７ＢＬ／６マウス（２３−２５ｇ）は、北京維通利華実験動物技術有限公司（ＶＲＬ）から購入した。北京韓美薬品有限公司実験動物の飼育及び使用指南の原則に基づいて動物を飼育した。マウスを１２時間の光照／１２時間の黒暗が交替する環境に置かせて飼育した。動物は、北京科澳協力飼料有限公司から購入した標準飼料で飼育して、自由に水を飲ませた。これらのマウスに静脈内注射で１７ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量のアナログ０８９、または、皮下投与で１７ｎｍｏｌ／ｋｇ、５０ｎｍｏｌ／ｋｇ及び１５０ｎｍｏｌ／ｋｇの投与量のアナログ０８９を投与した。静脈内投与５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１、３、６、１０、２４、３０、４８、７２、９６、１２０、１６８、２１６、２８８ｈ後、または皮下投与１、２、４、６、８、１０、２４、３０、４８、７２、９６、１２０、１６８、２１６、２８８、３６０ｈ後の時点で、０．３ｍｌの血液サンプルを収集する。眼窩静脈叢から採血の方法によって血液を収集し、ＥＤＴＡを含有する遠心分離管に投与する。１２０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離して血漿を得る。血漿を−２０℃で保存して、分析するために使用する。血漿中のＧＩＰアナログの濃度は、サンドイッチ（ｓａｎｄｗｉｃｈ）酵素結合免疫吸収分析（ＥＬＩＳＡ、ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ  ｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）の方法により検出された。その検出のステップは下記のとおりである。
ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）でコーティングされたマイクロプレート（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ＃１１６４５６９２００１）を２５℃のインキュベーター（ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）に入れ、４℃から予熱させる。
【０２９５】
ビオチン化された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰモノクローナル抗体（１μｇ／ｍＬ）を検出緩衝液−１に希釈され、ウェルごとに１００μＬ入れ、２５℃で３０ｍｉｎインキュベーションする。
洗浄緩衝液（３００μＬ／ウェル）でマイクロプレートを５回洗浄する。
ウェルごとにブロッキング緩衝液３００μｌを入れて、２５℃で１ｈインキュベーションする。
洗浄緩衝液（３００μＬ／ウェル）でマイクロプレートを５回洗浄する。
ウェルごとに標準品と試験サンプル１００μＬを入れて、２５℃で１ｈインキュベーションする。
【０２９６】
洗浄緩衝液（３００μＬ／ウェル）でマイクロプレートを５回洗浄する。
ジゴキシン化された抗ＧＬＰ−１／ＧＩＰポリクローナル抗体（０．５μｇ／ｍＬ）を検出緩衝液−２で希釈して、ウェルごとに１００μＬ入れ、２５℃で１ｈインキュベーションする。
洗浄緩衝液（３００μＬ／ウェル）でマイクロプレートを５回洗浄する。
抗ＤＩＧ−ＰＯＤ（７５ｍＵ／ｍＬ、Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、ｃａｔ＃１１６３３７１６００１）を検出緩衝液−２で希釈して、ウェルごとに１００μＬ入れ、２５℃で１ｈインキュベーションする。
【０２９７】
洗浄緩衝液（３００μＬ／ウェル）でマイクロプレートを５回洗浄する。
１００μＬテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ、ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ  ｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）溶液（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｃａｔ＃５５５２１４）を入れ、２５℃でマイクロプレートを１０ｍｉｎ間呈色（ｃｏｌｏｒｉｚｅ）させる。
１００μＬ  １Ｍ  Ｈ２ＳＯ４溶液（北京興青紅精細化学品科技有限公司）を入れて呈色を停止させる。１５ｍｉｎ内に、マイクロプレートリーダー（Ｍｉｃｒｏ  ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ）（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＥＬＸ−８０８）で４５０ｎｍでの光学密度値を測定する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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