(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
0005843623.tif 000009
［式中、Ｒ１及びＲ２はいずれも水素原子を示す。］
又は一般式（ＩＩ）：
【化２】
0005843623.tif 000010
［式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はいずれも水素原子を示す。］
で表される化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を有効成分として含有する抗酸化剤（但し、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物がアランギウム  サルヴィフォリウム(Alangium salviifolium)の樹脂の抽出物に含まれる場合を除く）。
【請求項３】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を有効成分として含有する美白剤（但し、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物がアランギウム  サルヴィフォリウム(Alangium salviifolium)の樹脂の抽出物に含まれる場合を除く）。
【請求項４】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を含有する医薬品（但し、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物がアランギウム  サルヴィフォリウム(Alangium salviifolium)の樹脂の抽出物に含まれる場合を除く）。
【請求項５】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を含有する化粧料（但し、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物がアランギウム  サルヴィフォリウム(Alangium salviifolium)の樹脂の抽出物に含まれる場合を除く）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）の樹皮から得られる化合物、該化合物を有効成分として含有する抗酸化剤及び美白剤、並びに該化合物を含有する医薬品、化粧料及び食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
タイハーブは、種類が非常に多く、様々な生理活性を示すため、タイでは古来より薬、食品、化粧料、香料等として用いられてきた。また近年では、アロマテラピーやエステ、健康食品等の美容又は健康分野で注目を集めている。
【０００３】
しかしながら、タイハーブの研究はほとんど進んでおらず、タイハーブに含まれる物質の多くが未だ単離同定されていないのが現状である。このことから、タイハーブには有用な新規化合物が含まれている可能性があると考えられている。
【０００４】
このようなタイハーブの１つに、アランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）がある。このアランギウム  サルヴィフォリウムは、下痢止め、喘息患者の去痰等の薬理効果を有することが知られており、含有成分として、枝及び根から数種のアルカロイドが、地上部よりクロモン類が単離されている（非特許文献１〜４）。樹皮に含まれる成分については、本発明の発明者らが、特許文献１においてカラメネン−３，７，８−トリオールを単離したことを報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−３７２９９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Zhongcaoyao 1981, 12, 352
【非特許文献２】Indian J. Chem. 1966, 4, 457
【非特許文献３】Zhiwu Xuebao 1980, 22, 257
【非特許文献４】Asian J. Chem. 2003, 3, 1963
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、アランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）の樹皮に含まれる有用な新規化合物を単離すること、及び該化合物を含有する医薬品等を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の発明者らは、アランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）の樹皮の抽出物から単離した新規化合物が抗酸化活性及びチロシナーゼ阻害活性を有することを見出し、さらにこれに検討を重ねることにより、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下の化合物、該化合物を有効成分として含有する抗酸化剤及び美白剤、並びに該化合物を含有する医薬品、化粧料及び食品組成物を提供する。
項１．一般式（Ｉ）：
【００１０】
【化１】
0005843623.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子又は保護基を示す。］
又は一般式（ＩＩ）：
【００１２】
【化２】
0005843623.tif 000003
【００１３】
［式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、水素原子又は保護基を示す。］で表される化合物。
項２．項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を有効成分として含有する抗酸化剤。
項３．項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を有効成分として含有する美白剤。
項４．項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を含有する医薬品。
項５．項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を含有する化粧料。
項６．項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物及び一般式（ＩＩ）で表される化合物の少なくとも１種を含有する食品組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物は新規であり、高い抗酸化活性及びチロシナーゼ阻害活性を有するため、これを有効成分として含有する抗酸化剤及び美白剤として有用であり、医薬品、化粧料、食品組成物等に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】アランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）の樹皮からの活性成分の単離操作を示す工程図である。
【図２】化合物１の１Ｈ  ＮＭＲ及び１３Ｃ  ＮＭＲのスペクトルデータを示す図である。
【図３】化合物１の１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ及びＨＭＢＣ相関を示す図である。
【図４】化合物２の１Ｈ  ＮＭＲ及び１３Ｃ  ＮＭＲのスペクトルデータを示す図である。
【図５】化合物２の１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ及びＨＭＢＣ相関を示す図である。
【図６】化合物１及び２等のチロシナーゼ阻害活性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１７】
本発明の化合物は、下記一般式（Ｉ）：
【００１８】
【化３】
0005843623.tif 000004
【００１９】
［式中、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって、水素原子又は保護基を示す。］
で表される化合物（以下、「化合物（Ｉ）」ということもある）又は一般式（ＩＩ）：
【００２０】
【化４】
0005843623.tif 000005
【００２１】
［式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は同一又は異なって、水素原子又は保護基を示す。］で表される化合物（以下、「化合物（ＩＩ）」ということもある）である。
【００２２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５で示される保護基としては、水酸基の保護基であれば特に限定はなく、例えば、アシル基（アセチル、プロパノイル、ベンゾイル基等）、シリル基（トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基等）、アルキル基（メチル、エチル、プロピル、ブチル基等）、アルケニル基（アリル、クロチル基等）、アラルキル基（ベンジル、フェネチル基等）、アルコキシメチル基（メトキシメチル基等）、スルホニル基（メタンスルホニル、ベンゼンスルホニル基等）等が挙げられる。
【００２３】
化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は、アランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）の樹皮を溶媒で抽出することにより単離することができる。
【００２４】
本発明において用いられるアランギウム  サルヴィフォリウム（Alangium salviifolium）は、被子植物門・双子葉植物綱・バラ亜綱・ミズキ目・ウリノキ科（Alangiaceae）・ウリノキ属（Alangium）に属し、タイ、インド等の熱帯地域に広く分布する植物である。アランギウム  サルヴィフォリウムであれば、その産地は特に限定されない。
【００２５】
アランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮は、そのまま抽出に供することができるが、より細かく粉砕した後、抽出に供してもよい。また、粉末にした後更に乾燥して抽出に供したり、水中で粉砕してスラリー状にして抽出に供することもできる。また、市販されている乾燥樹皮を使用することも可能である。
【００２６】
抽出溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、水等を用いることができる。これらの中で、エタノール、１，３−ブチレングリコール、水、アセトン、ジクロロメタン等が好ましく用いられる。これらの溶媒は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。溶媒を混合して用いる場合、各溶媒の混合比は、溶媒の種類に応じて適宜調整すればよい。
【００２７】
抽出方法については、特に限定されるものではなく、アランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮に溶媒（例えば、エタノール）を加えた後、抽出物に含まれる活性成分の活性を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を適宜適用できる。また、一定量の溶媒にアランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的に溶媒を送り続ける連続抽出法等、公知の種々の抽出法を適用できる。
【００２８】
具体的な抽出方法の一例を挙げると、例えば、アランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮に対して、その乾燥重量の０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬して加熱し、６〜１５時間程度溶媒を還流させることにより、活性成分を抽出することができる。或いは、アランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮に対して、その乾燥重量の０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬し、室温で１〜１４日間程度放置することにより活性成分を抽出することも可能である。勿論、溶媒の種類、溶媒量や加熱温度、加熱時間等については、活性成分を効率的に抽出できるように適宜調整すればよい。
【００２９】
上記した方法によってアランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮から抽出物を得た後、通常、濾過、遠心分離等の常法によって残渣と固液分離することによって、抽出液を得ることができる。本発明では、得られた抽出液をそのまま抗酸化剤又は美白剤として用いることが可能であるが、活性が低い場合もあるため、適宜濃縮又は溶媒を留去して、エキス状や粉末状として用いることもできる。更に、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン、アセトン等の有機溶媒を１種又は２種以上用いた溶媒分画操作によって、得られた抽出液から活性画分を分取することができる。更に、必要に応じて、アルミナカラムクロマトグラフィーやシリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を１種若しくは２種以上組み合わせて精製することもできる。
【００３０】
なお、アランギウム  サルヴィフォリウムの樹皮からの化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の単離及び同定は、具体的には実施例１の記載に従い行うことができる。
【００３１】
このように、本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は、天然物から単離及び精製することができるが、該化合物の製造方法はこれに限定されるものではない、公知の化学合成法をもとに該化合物を合成してもよいし、天然物から得られた物質を原材料として反応等の処理を施して製造することも可能である。
【００３２】
本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は、後述する試験例で示すように、抗酸化作用を有し、抗酸化剤の有効成分として有用である。具体的には、本発明の抗酸化剤は、例えば、鎮痛、抗エイズ、アルコール中毒改善、抗アレルギー、抗狭心症、抗不整脈、抗動脈硬化、抗喘息、抗菌、抗糖尿病、解毒、抗炎症、抗高脂血症、ＤＮＡ変異抑制、抗パーキンソン病、抗乾癬、抗リウマチ、抗潰瘍、脳機能保護、細胞増殖抑制、皮膚疾患改善、肝機能賦活、降圧、免疫抑制、腎機能賦活、神経細胞保護、向知能、眼科疾患改善、放射線防御、血管賦活、抗ウイルス、傷薬、虚弱体質の改善等に有効な効果を奏することができる。
【００３３】
本発明の抗酸化剤には、有効成分として化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種を用いることができる。
【００３４】
本発明の抗酸化剤中に含まれる有効成分の割合は、該抗酸化剤が抗酸化能を発揮する限りにおいて特に制限されない。また、化合物（Ｉ）だけ、化合物（ＩＩ）だけ又は化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の混合物からなるものであってもよい。化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）の含有量として、具体的には、乾燥重量に換算して総量として０．００５重量％以上の割合を挙げることができる。抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）が上記割合となる量を使用すればよい。
【００３５】
本発明の抗酸化剤は、その形状も特に制限されない。例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、丸剤状、乳剤状、液状、懸濁液状、濃縮エキス、乾燥エキス等を例示することができる。
【００３６】
また、本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は、後述する試験例で示すように、チロシナーゼ活性を阻害する作用を有することから、美白（色素沈着やくすみの改善）作用を有し、美白剤の有効成分として有用である。具体的には、本発明の美白剤は、日焼け後の色素沈着、しみ、そばかす、紅斑等の淡色化、くすみを目立たなくさせる等の美肌効果を奏することができる。
【００３７】
本発明の美白剤には、有効成分として化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種を用いることができる。
【００３８】
本発明の美白剤中に含まれる有効成分の割合は、該美白剤が美白作用を発揮する限りにおいて特に制限されない。また、化合物（Ｉ）だけ、化合物（ＩＩ）だけ又は化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の混合物からなるものであってもよい。化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）の含有量として、具体的には、乾燥重量に換算して総量として０．００５重量％以上の割合を挙げることができる。抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）が上記割合となる量を使用すればよい。
【００３９】
本発明の美白剤は、その形状も特に制限されない。例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、丸剤状、乳剤状、液状、懸濁液状、濃縮エキス、乾燥エキス等を例示することができる。
【００４０】
本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は、前述の効果を目的として、様々な用途に適用することができる。用途として、医薬品、試薬（研究用、テストキット用）、化粧料、食品、健康食品、機能性食品、サプリメント、特定用途食品、特定健康用食品、ペットフード、ペット用サプリメント等の食品組成物が挙げられる。
【００４１】
本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種を医薬品（医薬組成物）に用いる場合の摂取量は、通常、成人１人１日あたり０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度である。抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）が上記割合となるような量を設定すればよい。
【００４２】
本発明の化合物（Ｉ）を含む医薬組成物は、賦形剤、担体又は添加剤を含んでいてもよい。賦形剤、担体及び添加剤としては、通常使用され、かつ薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、その種類及び組成は、適宜変更が可能である。
【００４３】
賦形剤としては、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられ、担体としては、滅菌水、生理食塩水、及び各種緩衝液等が挙げられる。添加剤としては、粘ちょう剤、緩衝材、保存剤、防腐剤等が挙げられる。
【００４４】
医薬用組成物の剤型としては特に制限されるものではなく、必要に応じて適宜選択すればよいが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤；注射剤、坐剤、塗布剤等の非経口剤が挙げられる。
【００４５】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤は、例えば、デンプン、乳糖、白糖、トレハロース、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される、これらの製剤中の本発明の化合物の配合量は特に限定されるものではなく、適宜設定することができる。この種の製剤には、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を適宜使用することができる。
【００４６】
非経口剤の場合、患者の年齢、体重、疾患の程度等に応じて用量を調節し、例えば、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射等によって投与する。この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水等を用いることができる。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤等を加えてもよい。また、この非経口剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。さらに必要に応じて、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加えてもよい。その他の非経口剤の例として、外用液剤、軟膏等の塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、これらも常法に従って製造される。
【００４７】
本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種を化粧料（化粧料組成物）に用いる場合、該化合物を、化粧料成分として一般に使用されている成分、例えば、界面活性剤、油分、保湿剤、皮膜形成剤、色素、香料等と任意に組み合わせて配合することにより調製することができる。その形態は特に制限されず、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール、エッセンス、パック、洗浄剤、ファンデーション、打粉、各種メーク剤（口紅、チーク等）とすることができる。
【００４８】
化粧料に配合される化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種の配合割合は、該化合物の期待される効果が得られるのであれば特に制限されないが、通常、０．０００１〜１０重量％程度である。抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）が上記割合となるような量を設定すればよい。
【００４９】
本発明の化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種を食品組成物に用いる場合、各種飲料や各種加工製品の原材料として本発明の化合物を飲食品に添加したり、必要に応じてデキストリン、乳糖、デンプン等の賦形剤や香料、色素等とともにペレット、錠剤、顆粒等に加工したり、またゼラチン等で被覆してカプセルに成形加工して健康食品、保健食品等の食品組成物を製造することができる。
【００５０】
食品組成物に配合される化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）の少なくとも１種の配合割合は、該化合物の期待される効果が得られるのであれば特に制限されないが、通常、１回あたりの摂取量が０．０００１〜２０ｍｇ程度である。抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）が上記割合となるような量を設定すればよい。
【実施例】
【００５１】
以下、本発明の具体例（実施例）を示すが、これにより本発明が限定されるものではない。
【００５２】
実施例１
（１）アランギウム  サルヴィフォリウムからの化合物の抽出及び単離
アランギウム  サルヴィフォリウムからの化合物の抽出及び単離は、図１に従って行った。なお、減圧濃縮は、ロータリーエバポレーターを用いた。アランギウム  サルヴィフォリウムの乾燥樹皮（株式会社ピカソ美化学研究所製）（５ｋｇ）をジクロロメタン（８リットル）により１２時間還流した。可溶性画分を減圧濃縮することにより、ジクロロメタン抽出物（８９．７ｇ）を得た。ジクロロメタン抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ジクロロメタン−アセトン）に付すことにより５つのフラクション（以下、「ｆｒ．」とする）１〜ｆｒ．５に分画した。ｆｒ．１（８．０ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ヘキサン−酢酸エチル）に付すことで３つのフラクション（ｆｒ．１−１〜１−３）に分画し、さらにｆｒ．１−２についてシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ヘキサン−酢酸エチル）を繰り返すことにより、化合物１（０．５ｇ）を単離した。さらにｆｒ．３を結晶化（クロロホルム−ジエチルエーテル）により化合物２（９．３ｇ）を単離した。
【００５３】
（２）化合物１及び２の構造決定
化合物１及び２の構造を決定する目的で、ＨＲＥＩＭＳ、ＥＩ−ＭＳ、ＩＲ、１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲを測定した。
【００５４】
ＥＩ−ＭＳの測定には、日本電子株式会社製JEOL the Tandem MS station JMS-700を使用した。
【００５５】
ＩＲ（赤外線吸収）スペルトルの測定には、日本分光株式会社製のJASCO FT/IR-470 plus Fourier transform infrared spectrometerを使用した。
【００５６】
ＮＭＲスペクトルの測定には、JEOL FX-500(500.00 MHz, 1H; 125.65 MHz, 13C)spectrometerを使用した。化合物１についてはＣＤＣｌ３で測定し、化合物２はＤＭＳＯ−ｄ６で測定した。いずれも標準物質としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を使用した。多重度は、DEPT pulse sequenceにより決定した。
【００５７】
（２−１）化合物１の物性は下記の通りである。
ＨＲＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２４８．１４１２（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１５Ｈ２０Ｏ３，  ２４８．１４２８）
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，％）  ２４８（Ｍ＋，１５），２０５（１００），１７７（１０），１５９（１８），１３１（１３）
ＩＲ（νｍａｘ，ｆｉｌｍ，ｃｍ−１）：３７４４，２９５７，２８６９，１６５２
化合物１の１Ｈ  ＮＭＲおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを図２に示す。
【００５８】
ＨＲＥＩＭＳでは、ｍ／ｚ  ２４８．１４１２に分子イオンピークが確認され、化合物１の分子量が２４８．１４１２であり、組成式がＣ１５Ｈ２０Ｏ３であることが示唆された。また、ｍ／ｚ  ２０５（Ｃ１５Ｈ２０Ｏ３）のピークが確認され、これは４３質量単位（イソプロピル基）の消失を示すことから、化合物１にはイソプロピル基が存在することが示唆された。ＩＲスペクトルより、３７４４ｃｍ−１付近に幅広い水酸基の吸収が確認され、また、アセチル化によって２個のアセチル基の導入が確認されたことから、水酸基の数は２つであると決定した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルに芳香環由来のプロトンのシグナル（δＨ  ６．９４（ｓ））、アルデヒドプロトンのシグナル（δＨ  ９．８０（ｓ））が見られることから、芳香環及びアルデヒドの存在も示唆された。また１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルでは、３つのメチル基、２つのメチレン基、４つのメチン基、及びヒドロキシ置換芳香族炭素（δＣ  １４５．０および１４１．７）を含む５つの第４級炭素の存在を示す合計１５の吸収が確認された。
【００５９】
さらに、部分構造を決定するため、２次元ＮＭＲとして、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ(correlation spectroscopy)及びＨＭＢＣ(hetero-nuclear multiple-bond connectivity)を測定した。１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹにより、部分構造ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２（ＣＨ）２（ＣＨ３）２が示された。さらに、化合物１の分子式がＣ１５Ｈ２０Ｏ３であり、不飽和度が５であることと芳香環を持つことを考え合わせると、化合物１双環性のセスキテルペノイドであると推測された。
【００６０】
なお、水酸基の位置については、ＨＭＢＣより、１５位のアルデヒドプロトンから水酸基の付け根の炭素（δＣ  １４５．０および１４１．７）に相関が観測され、５位のプロトンから７位の水酸基の付け根の炭素（δＣ  １４１．７）が観測された。また、５位のプロトンからアルデヒドの炭素が観測された。このことから水酸基は７位、８位に導入され、アルデヒドが１５位に導入されたものであると考えられた（図３）。
【００６１】
以上の結果から、化合物１の構造が、７，８−ジヒドロキシカラメナール（７，８−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃａｌａｍｅｎａｌ）であると決定した。
【００６２】
（２−２）化合物２の物性は下記の通りである。
ＨＲＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２８８．０６３４（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１５Ｈ１２Ｏ６，  ２８８．０６５３）
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，％）  ２８８（Ｍ＋，１００），２６０（５０），２４５（４７），７７（１０）
ＩＲ（νｍａｘ，ＫＢｒ，ｃｍ−１）：  ３２９７，１６１３，１５８９
化合物２の１Ｈ  ＮＭＲおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを図４に示す。
【００６３】
ＨＲＥＩＭＳでは、ｍ／ｚ  ２８８．０６３４に分子イオンピークが確認され、化合物２の分子量が２８８．０６３４であり、組成式がＣ１５Ｈ１２Ｏ６であることが示唆された。ＩＲスペクトルより、３２９７ｃｍ−１付近に幅広い水酸基の吸収が、１６１３ｃｍ−１にカルボニル基の吸収が、及び１５８９ｃｍ−１付近に芳香環由来の吸収が確認できた。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルに芳香環由来のプロトンのシグナル（δＨ  ６．８１（ｓ））、アルデヒドプロトンのシグナル（δＨ  １０．３５（ｓ）、１１．１５（ｓ））が見られることから、芳香環及び２つのアルデヒドの存在も示唆された。重水を添加した後、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを測定すると、３つの水酸基由来のプロトンシグナル（δＨ  ９．５３，δＨ  １１．５５，δＨ  １４．５６）が消失したことから、３つの水酸基の存在が示唆された。さらに、部分構造を決定するため、２次元ＮＭＲとして、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ及びＨＭＢＣを測定した。１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹにより、部分構造ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ３が示された。
【００６４】
なお、ＨＭＢＣより、３位のプロトンから２位、４位及び１位の炭素に相関が見られ、１２位のプロトンから４位、５位の炭素に相関が見られた。１５位のプロトンから７位の炭素と相関が見られた。また１４位のアルデヒドプロトンから８位の炭素との相関が見られた。このことから水酸基は２位、７位及び８位に導入され、アルデヒドが、１４位および１５位に導入されたものであると考えられた（図５）。
【００６５】
以上の結果から、化合物２の構造が、５，１２−エポキシ−２，７，８−トリヒドロキシ−カダレン−１４，１５−ジアール(５，１２−ｅｐｏｘｙ−２，７，８−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｃａｄａｌｅｎ−１４，１５−ｄｉａｌ)であると決定した。
【００６６】
試験例１
抗酸化試験（ＯＲＡＣ）
Oxygen Radical Absorbance Capacity（ＯＲＡＣ）は、ＡＡＰＨから誘導されるペルオキシラジカルにより蛍光プローブであるフルオレセインが分解されて蛍光を失う過程の抑制を評価するものである。操作方法は、以下のとおりである。下記表１に示す親油性の試料を０．０５％  β−シクロデキストリン溶液を用い、１時間、室温でプレインキュベーションした後、フルオレセインを加えて３７℃で３０分間インキュベーションし、そこへ反応開始剤でもあるＡＡＰＨを添加し、１分ごとに９０分間蛍光波長を測定した。得られた阻害値を以下の計算式のもと、一般的な抗酸化物質であるＴｒｏｌｏｘ等量で表すことで阻害値を算出して評価した。なお、参考のために、本発明者らが特開２０１０−３７２９９号公報において報告した、アランギウム  サルヴィフォリウムから単離した化合物（カラメネン−３，７，８−トリオール）についても同様の試験を行った。その結果を表１に示す。
【００６７】
【数１】
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【００６８】
【表１】
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【００６９】
表１から、化合物１はＴｒｏｌｏｘの約２倍、さらに化合物２に関しては、Ｔｒｏｌｏｘの約４倍の抗酸化能を有していることが確認された。また、化合物１及び２は、カラメネン−３，７，８−トリオールよりも優れた抗酸化能を有することも確認された。
【００７０】
試験例２
美白評価（チロシナーゼ活性阻害評価）
０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ＝７．０）１３８μＬ、０．５ｍＭのＬ−チロシン水溶液及び試料（上記実施例１で得られた化合物１又は２をＤＭＳＯに溶解させたＤＭＳＯ溶液）の混合溶液（化合物１又は２の終濃度：１５０μＭ又は３００μＭ）に、マッシュルーム由来チロシナーゼ溶液（溶媒：リン酸バッファー）を加え、３７℃でインキュベートし、４９５ｎｍの吸光度を測定した。
【００７１】
ポジティブコントロールとして、上記試料の代わりにアルブチン水溶液を使用した混合溶液（アルブチンの終濃度：１５０μＭ、３００μＭ又は８００μＭ）で同様の試験を行った。また、参考のために、カラメネン−３，７，８−トリオールを用いた混合溶液についても同様の試験を行った。その結果を表２及び図６に示す。
【００７２】
【表２】
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【００７３】
これらの結果から、化合物２は、比較物質として用いたアルブチンと同等のチロシナーゼ阻害活性を有していることが確認された。また、化合物１は、アルブチンと比較して約４倍のチロシナーゼ阻害活性を有していることが確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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