(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおける使用のための結核に対するワクチンであって、
有効成分として組み換えマイコバクテリウムを含み、
前記組み換えマイコバクテリウムは、
ウレアーゼ欠損であり、
（ａ）配列番号１のヌクレオチド１２１−１５３によってコードされるペプチド配列を含み、Ａｇ８５Ｂである、マイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、および（ｂ）配列番号１のヌクレオチド２１１−１７２２によってコードされるペプチド配列を含むファゴリソソームエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含み、かつ
前記組み換えマイコバクテリウム細胞は、抗生物質耐性遺伝子を持たない、Ｄａｎｉｓｈ株の亜型Ｐｒａｇｕｅからの組み換えＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓの細胞であることを特徴とする
ワクチン。
【請求項２】
請求項１に記載のワクチンであって、
マイコバクテリウム−未投与の対象への投与のための
ワクチン。
【請求項３】
請求項２に記載のワクチンであって、
新生児への投与のための
ワクチン。
【請求項４】
請求項１に記載のワクチンであって、
マイコバクテリウム−前暴露の対象への投与のための
ワクチン。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載のワクチンであって、
凍結乾燥物であることを特徴とする
ワクチン。
【請求項６】
請求項５に記載のワクチンであって、
再構成液と一緒の、凍結乾燥物であることを特徴とする
ワクチン。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載のワクチンであって、
一回分１０３〜１０４ＣＦＵ、１０４〜１０５ＣＦＵまたは１０５〜１０６ＣＦＵを含むことを特徴とする
ワクチン。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載のワクチンであって、
皮内投与のための
ワクチン。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項に記載のワクチンであって、
単回または複数回での投与のための
ワクチン。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載のワクチンであって、
多機能のＣＤ４＋  Ｔ細胞の上方調節のための
ワクチン。
【請求項１１】
結核の治療のための医薬の製造における、薬学的に有効な量の組み換えマイコバクテリウム細胞の使用であって、
前記組み換えマイコバクテリウム細胞は、
ウレアーゼ欠損であり、かつ、抗生物質耐性遺伝子を持たず、
（ａ）配列番号１のヌクレオチド１２１−１５３によってコードされるペプチド配列を含み、Ａｇ８５Ｂである、マイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、および（ｂ）配列番号１のヌクレオチド２１１−１７２２によってコードされるペプチド配列を含むファゴリソソームエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含み、かつ、
前記組み換えマイコバクテリウム細胞は、Ｄａｎｉｓｈ株の亜型Ｐｒａｇｕｅからの組み換えＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓの細胞であることを特徴とする
使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト対象において、特に結核に対して防御免疫を提供する、新規の組み換えワクチンに関する。
【背景技術】
【０００２】
１９９３年に、結核（ＴＢ）は、世界保健機関（ＷＨＯ）によって世界的緊急事態が宣言された。世界中でおよそ２０億人［１、２］が、ＴＢの原因菌である結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に感染している。全てが、その疾患の臨床症状を発症する危険性がある。ほとんどの人々において、結核菌の感染は、最初は宿主防衛によって阻止され、その感染は潜伏性のままである。しかしながら、潜伏性のＴＢ感染は、いつでも活性のＴＢ疾患へと発展する可能性があり、活性のＴＢを有する人々は、新しい感染源となる。２００７年における新しい症例の数は、ＷＨＯ報告（２００９年）において９３０万［１］であると報告され、着実に増加している。およそ１８０万人が、毎年その疾患で死亡している。したがって、ＴＢは世界中で感染症による主な死亡原因であり続ける。
【０００３】
ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓの弱毒化株であり、１９２１年からＴＢワクチンとして使用されている。これまでに、およそ４０億回投与されている［３］。しかしながら、ＢＣＧのワクチン接種は、ＴＢのまん延を止めるのに効果が不十分である。ＢＣＧは、子供における重症の全身性ＴＢ、特に髄膜炎を防ぐ、または少なくとも改善することができる。ＢＣＧは、その疾患の肺での感染型を防がない［４］。しかしながら、これは、その疾患の伝染（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）の遮断のために必要である。
【０００４】
利用可能な抗生物質治療はほんのわずかしかない。ますます多くの患者が多剤耐性ＴＢ株に感染するので、それらはますます芳しくない［１，５］。さらに悪いことには、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｂｅｉｊｉｎｇ／Ｗのような新しい高病原性株がまん延している［６］。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、特に、流行地域における居住者、および非流行地域における危険性のある者のための、安全で、耐容性良好で効果的な、ＴＢに対するワクチンの開発である。本ワクチンは、現在使用されているＢＣＧワクチンに置き換わるものである。その新しいワクチンは、少なくとも、現在の株と同じくらい効果があり、ＢＣＧよりも安全である［５、７］。
【０００６】
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓおよびＢＣＧは、宿主マクロファージによって取り込まれる。ファゴソーム内への配置は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ＩＩの経路を通じた細菌性抗原の輸送を引き起こす。これは、ＣＤ４  Ｔ細胞の選択的刺激をもたらす。しかしながら、ＭＨＣ  Ｉ制限ＣＤ８細胞障害性Ｔ細胞が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対する免疫において極めて重要であることが示されている［８、９］。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓとは対照的に、ＢＣＧは、ＣＤ８細胞障害性Ｔ細胞の弱い刺激を誘導するのみである［２、３、１０］。それ故に、ファゴリソソームエスケープドメイン（ｐｈａｇｏｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｅｓｃａｐｅ  ｄｏｍａｉｎ）を発現する組み換えＢＣＧ株が、マイコバクテリア抗原をＭＨＣ  Ｉ経路に向かわせるために作り出された［２、７］。その株は、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓのリステリオリシン（Ｈｌｙ）を分泌する［７、１１］。それは、ファゴソームの膜を穿孔することによって、感染した宿主細胞のファゴソームからその株が逃れることを可能にする。ウレアーゼＣ遺伝子の不活化は、最適なＨｌｙ活性のための、酸性のファゴソームのｐＨを確実にするために必要であった。穿孔は、細胞質の中への、抗原の移行を促進させ、増加したアポトーシスを通してクロスプライミングを促進する［７、９］。この過程は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの免疫誘導をとても効果的に模倣する。その作用機序は、効果的で、耐容性良好な、ＴＢに対するワクチンをもたらすと期待される。
【０００７】
その概念は、その内容が本明細書中に参照により援用される、国際公開第９９／１０１４９６号パンフレットおよび国際公開第２００４／０９４４６９号パンフレットに記載されている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本研究において、組み換えウレアーゼ欠損ＢＣＧワクチンが、初めてヒト対象に適用された。本研究は、そのワクチンの安全性、局所的および全身的耐容性、並びに、免疫原性を評価した。それは、市販のＢＣＧと比較して、用量漸増逐次計画に従った。ドイツにおける八十（８０）の対象は無作為に２０の対象からなる４グループに割り当てられ、それぞれは、ＢＣＧワクチン接種歴で階層化された。
【０００９】
検査値、身体的安全評価、および、詳細な心電図分析を含む集中安全モニタリングが、標準安全モニタリングに加えて行われた。
【００１０】
本発明の内容は、ヒトにおける使用のためのワクチンであって、
有効成分として組み換えマイコバクテリウムを含み、
前記組み換えマイコバクテリウムは、
ウレアーゼ欠損であり、
（ａ）マイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、および（ｂ）ファゴリソソーム（ｐｈａｇｏｌｙｓｏｍａｌ）エスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含む。
【００１１】
本発明のさらなる内容は、ヒト対象にワクチン接種するための方法であって、
薬学的に有効な量の組み換えマイコバクテリウムを投与することを含み、
前記組み換えマイコバクテリウムは、
ウレアーゼ欠損であり、
（ａ）マイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、および（ｂ）ファゴリソソームエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含む。
【００１２】
本発明は、以下の図、配列表および実施例によってさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】治療グループによる平均硬結サイズと試験日の相関関係。
【図２】治療グループによる平均紅斑（Ｅｒｙｔｈｅｍｅ）サイズと試験日。
【図３】未投与の対象におけるＡｇ８５Ｂでの刺激後のＩＦＮ−γ−応答に関する、ベースラインからの平均変化。  Ａ．ＩＦＮ−γに関するＰＢＭＣ  ＥＬＩＳＡ、  Ｂ．ＥＬＩＳｐｏｔ、  Ｃ．ＩＦＮ−γに関する全血ＥＬＩＳＡ。  全分析はＡｇ８５Ｂ  ２μｇ／ｍＬで刺激された。ＶＰＭ１００２（５×１０５）は赤い棒、ＢＣＧグループは青い棒である。  刺激：Ａｇ８５Ｂ  ２μｇ／ｍＬ。ＶＰＭ１００２はＩＦＮ−γ応答を増大させる。
【図４】前免疫の対象におけるＡｇ８５Ｂでの刺激後のＩＦＮ−γ応答に関する、ベースラインからの平均変化。  Ａ．ＩＦＮ−γに関するＰＢＭＣ  ＥＬＩＳＡ、  Ｂ．ＩＦＮ−γに関する全血ＥＬＩＳＡ。  全分析はＡｇ８５Ｂ  ２μｇ／ｍＬで刺激された。ＶＰＭ１００２（５×１０５）は赤い棒、ＢＣＧグループは青い棒である。  刺激：Ａｇ８５Ｂ  ２μｇ／ｍＬ。ＶＰＭ１００２はＩＦＮ−γ応答を増大させる。
【図５】未投与の対象における、単独の多機能ＣＤ４＋  Ｔ細胞のベースラインからの変化。  Ａ．ＰＰＤで再刺激された単独陽性ＣＤ４＋  Ｔ細胞（ＩＦＮ−γの発現）の頻度  Ｂ．Ａｇ８５Ｂで再刺激された多機能ＣＤ４  Ｔ細胞（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の発現）の頻度。  Ｃ．ＰＰＤで再刺激された、または  Ｄ．Ａｇ８５Ｂで再刺激された、  多機能ＣＤ４  Ｔ細胞（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２およびＴＮＦ−αを発現している）の頻度は、ＶＰＭ１００２（赤）またはＢＣＧコントロール（青）で免疫付与された大人からのＰＢＭＣのＦＡＣＳ  ＩＣＳによって決定された。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
特に好ましい実施態様において、例えば、選択マーカー遺伝子によって破壊されたｕｒｅＣ遺伝子を含む自殺ベクター（ｓｕｉｃｉｄｅ  ｖｅｃｔｏｒ）を構築して、そのベクターで標的細胞を形質転換し、ウレアーゼ陰性の表現型を有する選択マーカー−陽性の細胞をスクリーニングすることによって［１２］、ｕｒｅＣ配列は不活化される（ΔＵｒｅｃ）。
【００１５】
その細胞は、好ましくはＭ．ｂｏｖｉｓの細胞、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの細胞であり、特に、弱毒化されたＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの細胞またはその他のマイコバクテリア、例えば、Ｍ．ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｍ．ｃａｎｅｔｔｉｉ、Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍまたはＭ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍである。さらに好ましくは、その細胞は、組み換えＭ．ｂｏｖｉｓ（ＢＣＧ）細胞であり、特に、Ｄａｎｉｓｈ株の亜型Ｐｒａｇｕｅ［１３］からの組み換えＭ．ｂｏｖｉｓの細胞である。最も好ましくは、その細胞は、ｒＢＣＧ  ΔＵｒｅｃ：：Ｈｌｙ＋：：Ｈｙｇ＋（ＶＰＭ１００２）として特徴付けられる組み換えＢＣＧのＤａｎｉｓｈ株の亜型Ｐｒａｇｕｅである。
【００１６】
本発明のマイコバクテリウムの細胞は、組み換え核酸分子、例えば、配列番号１における核酸分子を含む。この核酸分子は、シグナルペプチドをコードする配列（ヌクレオチド１−１２０）、免疫原性ドメインをコードする配列（ヌクレオチド１２１−１５３）、ペプチドリンカーをコードする配列（ヌクレオチド１５４−２１０）、ファゴリソソームドメインをコードする配列（ヌクレオチド２１１−１７２２）、さらなるペプチドリンカーをコードする配列（ヌクレオチド１７２３−１８００）、および、ランダムペプチドをコードする配列（ヌクレオチド１８０１−１８７０）を含む。対応するアミノ酸配列を配列番号２に示す。
【００１７】
免疫応答を誘導することが可能なドメインは、Ｍ．ｂｏｖｉｓまたはＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからの免疫原性ペプチドまたはポリペプチドから、または、少なくとも６、好ましくは少なくとも８アミノ酸の長さを有するそれの免疫原性フラグメントから、選択される。適切な抗原の具体例は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のＡｇ８５Ｂ（ｐ３０）（Ｈａｒｔｈら、１９９６年）、Ｍ．ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧ由来のＡｇ８５Ｂ（α−抗原）（Ｍａｔｓｕｏら、１９８８年）、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のＡｇ８５Ａ（Ｈｕｙｇｅｎら、１９９６年）、および、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のＥＳＡＴ−６（Ｓｏｒｅｎｓｅｎら、１９９６年；Ｈａｒｂｏｅら、１９９６年；および、Ａｎｄｅｒｓｅｎら、１９９５年）である。さらに好ましくは、その免疫原性ドメインは抗原Ａｇ８５Ｂに由来する。最も好ましくは、その免疫原性ドメインは、配列番号２における４１アミノ酸から５１アミノ酸までの配列を含む。
【００１８】
その組み換え核酸分子は、ファゴリソソームエスケープドメイン、すなわち、ファゴリソソームから哺乳類細胞の細胞質ゾルの中への融合ポリペプチドの流出に供されるポリペプチドドメインをさらに含む。好ましくは、そのファゴリソソームエスケープドメインは、本明細書中に参照により援用される米国特許第５７３３１５１号明細書に記載されている、リステリアのファゴリソソームエスケープドメインである。さらに好ましくは、そのファゴリソソームエスケープドメインは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓのリステリオリシン遺伝子（Ｈｌｙ）に由来する。最も好ましくは、そのファゴリソソームエスケープドメインは、
（ａ）  配列番号１に示されるヌクレオチド２１１−１７２２を含むヌクレオチド配列；
（ｂ）  （ａ）からの配列と同一のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；
および、
（ｃ）  （ａ）または（ｂ）からの配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列；
から選択される核酸分子でコードされる。
【００１９】
配列番号１で示されるヌクレオチド配列の他に、本発明は、それとハイブリダイズする核酸配列も含む。本発明において、「ハイブリダイゼーション」の用語は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ．  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９），１．１０１−１．１０４）に定義された通りに用いられる。本発明に従って、「ハイブリダイゼーション（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）」の用語は、１×ＳＣＣおよび０．１％ＳＤＳとともに５５℃にて、好ましくは６２℃にて、さらに好ましくは６８℃にて１時間、特に、０．２×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳの中で５５℃にて、好ましくは６２℃にて、さらに好ましくは６８℃にて１時間洗浄した後に、陽性のハイブリダイゼーションシグナルがまだなお観察され得る場合に用いられる。そのような洗浄条件下で配列番号１のとおりのヌクレオチド配列とハイブリダイズする配列は、本発明で好まれるファゴリソソームエスケープドメインをコードするヌクレオチド配列である。
【００２０】
上述したファゴリソソームエスケープドメインをコードするヌクレオチド配列は、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｏｒｇａｎｉｓｍ）から、または、任意の組み換え源、例えば、対応するリステリア核酸分子または上述したその変異体を含む組み換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞から直接得てよい。
【００２１】
好ましくは、融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子は、シグナルペプチドをコードする配列を含む。さらに好ましくは、そのシグナル配列は、マイコバクテリアにおいて、好ましくはＭ．ｂｏｖｉｓにおいて活性のシグナル配列、例えば、天然のＭ．ｂｏｖｉｓシグナル配列である。適切なシグナル配列の好ましい例は、配列番号１のヌクレオチド１から１２０に示された、Ａｇ８５Ｂシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列である。
【００２２】
さらに、ペプチドリンカーが免疫原性ドメインとファゴリソソームエスケープドメインとの間に備えられることが好ましい。好ましくは、そのペプチドリンカーは５から５０までのアミノ酸の長さを有する。さらに好ましくは、配列番号１のヌクレオチド１５４から２１０に示されたリンカーをコードする配列または遺伝子コードの変性に関してそれに対応する配列である。
【００２３】
その核酸は、組み換えベクターに配置してよい。好ましくは、その組み換えベクターは、原核生物ベクター、すなわち、原核細胞における複製または／およびゲノム組み込みのための要素を含むベクターである。好ましくは、その組み換えベクターは、動作可能なように発現調節配列と連結された、本発明の核酸分子を持つ。その発現調節配列は、好ましくは、マイコバクテリアにおいて、特に、Ｍ．ｂｏｖｉｓにおいて、活性な、発現調節配列である。そのベクターは、染色体外ベクターまたは染色体内への組み込みに適したベクターであり得る。そのようなベクターの例は、当業者に知られており、例えば、上記のＳａｍｂｒｏｏｋらに示されている。
【００２４】
一部の実施態様において、その組み換えマイコバクテリウムの細胞は、抗生物質耐性遺伝子、例えば、ハイグロマイシン（Ｈｙｇ）耐性遺伝子を持っていてよい。他の実施態様において、その組み換えマイコバクテリウムの細胞は、抗生物質耐性遺伝子を持たない。
【００２５】
好ましくは、そのワクチンは、ヒトにおける使用のため、例えば、結核のようなマイコバクテリア感染の流行地域の居住者における使用のため、または、非流行地域における危険性のある者における使用のための、生ワクチンである。そのワクチンは、マイコバクテリウム、例えばＢＣＧ−未投与（ｎａｉｖｅ）の対象、例えば、免疫原性のマイコバクテリウム抗原投与（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に前暴露（ｐｒｅ−ｅｘｐｏｓｅｄ）されていない人、またはＢＣＧで前免疫（ｐｒｅ−ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）されていない人への投与のためであってよい。そのような対象の例は、例えば、結核のようなマイコバクテリア感染の流行地域における、例えば、新生児、または、子供、例えば８才まで、または非感染地域における危険性のある者である。そのワクチンは、特に、ＨＩＶ−陽性である親たち、例えば母親たちを有する対象への投与に適している。そのワクチンは、ＨＩＶ−感染が流行している集団における、マイコバクテリウム−、例えば、ＢＣＧ−未投与の対象へ投与されてよい。他の実施態様において、そのワクチンは、マイコバクテリウム、例えば、ＢＣＧの前暴露の対象、例えば、結核の流行地域に居住する、例えば、９才以降の子供または大人、または、ＢＣＧで前免疫された対象への投与のためであってよい。そのような対象においては、本発明のワクチンは、既存のＢＣＧ誘導の免疫状態を強化する効果（ｂｏｏｓｔｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）を有する。
【００２６】
さらに好ましい実施態様において、そのワクチンの投与は、未投与または前免疫の対象における増加したＩＦＮ−γ応答、および、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、特に多機能のＣＤ４＋  Ｔ細胞の上方調節をもたらす。
【００２７】
好ましい実施態様において、そのワクチンは、マイコバクテリウム細胞、および、場合により物質、例えばグルコースおよび／またはデキストランを含む凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｅ）である。場合により、そのワクチンは、さらに、再構成液、注射用水または生理食塩水を含む。一部の実施態様において、そのワクチンは、一回分約１０３−１０４ＣＦＵ（コロニー形成単位）、約１０４−１０５ＣＦＵまたは約１０５−１０６ＣＦＵを含む。
【００２８】
粘膜面（例えば、眼球、鼻腔内、口腔、胃、腸管、直腸、膣または尿路）への、または非経口経路（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内または腹腔内）による、投与が選択されてよい。特に好ましいのは皮内投与である。
【００２９】
一部の実施態様において、そのワクチンは、単回での投与のためであり、マイコバクテリウム−未投与の対象の免疫付与、または、マイコバクテリウム−前暴露の対象の、例えばマイコバクテリウムに基づいたワクチン、例えば本発明のワクチンの投与の前にマイコバクテリア、例えば病原性マイコバクテリアと接触した対象のための天然のＢＣＧワクチンで前ワクチン接種された対象の、ブースターワクチン接種（ｂｏｏｓｔｅｒ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ）を含む。あるいは、本発明のワクチンは、２以上の回で投与されてよい。各回は、約１週間から約６箇月またはより長い間隔で投与されてよい。
【００３０】
本発明のワクチンは、マイコバクテリア感染に対する使用のためであり、より具体的には、結核に対する使用のためである。
【００３１】
配列番号１：マイコバクテリウム８５Ｂ抗原およびリステリアのファージ−リソソームエスケープドメイン（ｐｈａｇｅ−ｌｙｓｏｍａｌ  ｅｓｃａｐｅ  ｄｏｍａｉｎ）をコードする核酸分子のヌクレオチド配列を示す。
配列番号２：配列番号１の核酸分子の対応するアミノ酸配列を示す。
【実施例】
【００３２】
ＢＣＧワクチン接種歴で階層化された健常男性ボランティアにおける、ＢＣＧと比較した本発明のワクチン（ＶＰＭ１００２）の安全性および免疫原性を評価するための第Ｉ相臨床試験。
【００３３】
１．ワクチンＶＰＭ１００２の特性
ＶＰＭ１００２は、ｒＢＣＧ  ΔｕｒｅＣ：：Ｈｌｙ＋：：Ｈｙｇ＋として特徴付けられる、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧのＤａｎｉｓｈ株の亜型Ｐｒａｇｕｅに由来する、遺伝子組み換えされたＢＣＧワクチンである。ＶＰＭ１００２は、生きているＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧΔｕｒｅＣ：：Ｈｌｙ＋：：Ｈｙｇ＋の凍結乾燥された固形物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ  ｃａｋｅ）として入手された。１バイアルは５×１０６  ＣＦＵ（範囲２−８×１０６  ＣＦＵ）のＶＰＭ１００２を含んでいた。
【００３４】
リステリオリシン（Ｈｌｙ）に関する遺伝子がウレアーゼＣ遺伝子（ｕｒｅＣ）の中に組み込まれることにより、ウレアーゼＣ活性の欠失およびリステリオリシン活性の導入がもたらされる。
【００３５】
ＶＰＭ１００２はハイグロマイシン（Ｈｙｇ）耐性である。ハイグロマイシン耐性は、その株の遺伝子操作中の選択マーカーとしての役割を果たし、遺伝子組み換え生物（ＧＭＯ）−モニタリングおよびＧＭＯ−緊急対策において、特異的マーカーとしての役割を果たす。ＶＰＭ１００２は、マイコバクテリア感染の治療において一般に使用される抗生物質、すなわち、イソニアジド、リファンピシンおよびエタンブトールに対して感受性である。
【００３６】
ＶＰＭ１００２は、１ｍｌの水（純水（ａｑｕａ  ａｄ  ｉｎｊｅｃｔａｂｉｌｉａ））で再構成された、凍結乾燥の（凍結乾燥された（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））固形物として供給された。再構成後の濃度は、約５×１０６  ＣＦＵであった。５×１０３および５×１０４  ＣＦＵの用量の投与に関しては、その再構成されたＶＰＭ１００２懸濁液は、それぞれ１：１００または１：１０に、滅菌されておりすぐに使用できる０．９％塩化ナトリウム溶液を用いて希釈された。
【００３７】
２．目的
本研究の第一の目的は、単回のＶＰＭ１００２の安全性を調査することであった。
【００３８】
本研究の第二の目的は、結核に対するワクチン接種のための単回のＶＰＭ１００２の免疫原性を調査することであった。
【００３９】
３．方法論（研究企画）：
これは、ヒトへのＶＰＭ１００２の最初の適用であった。その研究は、公開の、無作為化され、管理された、用量漸増計画に従い、単回のＶＰＭ１００２の安全性および免疫原性を評価した。
【００４０】
ＶＰＭ１００２での１ワクチン接種が、Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）未投与か、またはＢＣＧでの前免疫付与を持つか（ワクチン接種資料において記録されたＢＣＧ−ワクチン接種またはＢＣＧ痕、どちらの場合においても加えて、精製タンパク質誘導物（ＰＰＤ）−皮膚試験で弱陽性を超えない）、のいずれかの対象に、皮内投与された。３段階に増加させた用量のＶＰＭ１００２が調査された。対象の参照グループは、１回のＢＣＧワクチンを投与された。
【００４１】
以下のワクチン接種安全性パラメーターは、投薬後４時間まで厳重にモニターされた。その後、その対象は、ワクチン接種後２４時間まで病院に滞在した、それぞれの用量グループのうちの最初の３対象を除いて、病院から退院した。
【００４２】
安全性および薬力学的な評価は、ワクチン接種後Ｄａｙ  ５７までと６箇月で再度、行われた。
【００４３】
Ｄａｙ  ５７の結果がそれぞれの群の最初の３対象から入手できた後に、中間安全解析が行われた。これらのデータに基づき、５×１０５  ＣＦＵまでの用量でのＶＰＭ１００２の投与が安全で耐容性良好であると見なされた。免疫原性の二次試験エンドポイントに基づき、サンプルサイズの統計的再評価が行われた。この分析結果（ｐ１＝０．０１１９）は、本研究に含まれた、計画されたサンプルサイズの８０対象は、十分であることを示した。サンプルサイズの拡大は必要なかった。
【００４４】
４．対象数
四十（４０）のＢＣＧ未投与およびＢＣＧ前ワクチン接種をされている（またはＰＰＤ陽性の）４０対象が、本研究に含まれるように計画された。追跡不能となった１対象を除き、全８０対象が計画どおりに研究を完了した。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
５．診断および主な選定基準：
【００４７】
１８〜５５才（両端含む）の、全身性疾患または進行中の病気を示唆する何の兆候も、身体的兆候も、または、臨床検査値も無く、活性または潜伏性の結核感染（ＬＴＢＩ）の何の兆候も無い、健常男性対象。ツベルクリン−ＰＰＤ試験は、ベースラインにおいて、以前にＢＣＧワクチン接種歴のある対象に関しては<１０ｍｍで、未投与の対象に関しては<１ｍｍであるべきであった。
【００４８】
６．試験生産物、用量および投与方法、バッチ番号：
【００４９】
ＶＰＭ１００２の活性成分は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ｒＢＣＧΔｕｒｅＣ：：Ｈｌｙ＋：：Ｈｙｇ＋であり、凍結−乾燥され、１適用あたりのマイコバクテリア生菌数（コロニー形成単位（ＣＦＵ））に標準化された。
【００５０】
用量レベル：５×１０３  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２  （範囲２〜８×１０３  ＣＦＵ）
５×１０４  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２  （範囲２〜８×１０４  ＣＦＵ）
５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２  （範囲２〜８×１０５  ＣＦＵ）
【００５１】
およそ０．１ｍＬの再構成されて希釈されたＶＰＭ１００２懸濁液は、短いベベル針（２５Ｇ／０．５０ｍｍまたは２６Ｇ／０．４５ｍｍ、長さ１０ｍｍ）を装着した、ｍＬの１００分の１（１／１００ｍＬ）のサブ目盛りの付いた１ｍＬのシリンジで皮内注射により投与された。ジェット式注射器または複合穿刺器具は許容されなかった。
【００５２】
７．治療期間：
１単回ワクチン接種
【００５３】
８．参照治療、用量および投与方法、バッチ番号：
ＢＣＧ  Ｖａｃｃｉｎｅ  ＳＳＩ、紛体および注射用懸濁液のための溶媒、デンマーク国立血清学研究所（Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｄｅｎｍａｒｋ）。
【００５４】
再構成後、一回分（０．１ｍＬ）含有：
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）、Ｄａｎｉｓｈ株１３３１、弱毒化生、２〜８×１０５  ＣＦＵ
【００５５】
投与は、ＶＰＭ１００２に関して記述されたとおりに行われた。
【００５６】
９．評価基準：
安全性パラメーター：
・有害事象の発生率、有害事象の時間プロフィール、有害事象のその他のプロフィール
・ワクチン接種部位における局所的反応の評価およびワクチン接種部位における局所的反応の写真記録（Ｄａｙ  １、５、１１、２９、５７、６箇月後）
・標準安全性検査パラメーター（血液学、凝固、肝酵素を含む臨床化学、検尿）
・ベースライン、Ｄａｙ  ５７（５７日目）およびＭｏｎｔｈ  ６（６箇月目）におけるＱｕａｎｔｉＦｅｒｏｎ  ｇｏｌｄ  ｔｅｓｔ
・心電図（ＥＣＧ）、バイタルサインおよび体重を含む身体検査
・胸部Ｘ線
・ベースライン、Ｄａｙ  ５７およびＭｏｎｔｈ  ６における超音波肝撮像
・対象の、忍容性の全体的評価。
免疫原性パラメーター：
・リンパ球刺激試験（ＬＳＴ）：細胞あたりのインターフェロン（ＩＦＮ）−γの量
・酵素結合免疫スポット技術（ＥＬＩｓｐｏｔ）：末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の総数あたりの、ＩＦＮ−γを分泌するＰＢＭＣの数
・全血アッセイ（ＷＢＡ）：リンパ球の数あたりのＩＦＮ−γの量
・細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）（蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）−分析）：リンパ球の総数あたりの、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋リンパ球の数；それらはｘｘｘ−ｂｒｉｇｈｔ、ｘｘｘ−ｂｒｉｇｈｔおよびｘｘｘｂｒｉｇｈｔ（「三重陽性細胞（ｔｒｉｐｌｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｃｅｌｌｓ）」）であった。
【００５７】
１０．研究のエンドポイント：
第一のエンドポイント：
身体検査、バイタルサイン、ＥＣＧ、肝臓超音波検査、胸部Ｘ線、検査の安全性パラメーター（血液学、凝固、臨床化学および検尿を含む）、忍容性、併用薬の記録および有害事象のモニタリングにより評価されたとおりに、単回のＶＰＭ１００２の安全性を評価すること。
【００５８】
第二のエンドポイント：
・ツベルクリン（ＰＰＤ）に関するＬＳＴに続く、ＰＢＭＣの上清におけるＩＦＮ−γ特異的酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）；
・ＰＰＤで刺激後のＩＦＮ−γ分泌ＰＢＭＣ数に特異的なＥＬＩＳｐｏｔ；
・ＰＰＤで３日間、細胞を刺激し、ＥＬＩＳＡにより血漿中ＩＦＮ−γを測定するＷＢＡ；
により評価される免疫原性。
【００５９】
試験のエンドポイント：
・ＰＰＤで一晩刺激したＣＤ４＋およびＣＤ８＋リンパ球における、ＩＦＮ−γ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αおよびインターロイキン（ＩＬ）−２に関するＩＣＳのＦＡＣＳ−分析；
・ＰＰＤで一晩刺激したＣＤ４＋およびＣＤ８＋リンパ球における、カルボキシフルオレセイン  ジアセテート  スクシンイミジル  エステル（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ  ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ  ｅｓｔｅｒｓ）（ＣＦＳＥ）で細胞内染色したＦＡＣＳ−分析；
・結核抗原（ＴＢ−Ａｇ）８５ｂペプチドカクテルでの刺激に関するＬＳＴ、ＥＬＩＳｐｏｔ、ＩＣＳおよびＷＢＡ；
・ＰＰＤまたはＴＢ−Ａｇ８５Ｂペプチドカクテルに対する血清抗体の濃度；これらの血清抗体の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ−サブタイプの定量化；
により評価される免疫原性。
【００６０】
１１．統計的方法：
記述統計学が、安全性パラメーターの評価のために用いられた。
以下の統計的試験方法が、免疫原性データのために用いられた。
・ＢＣＧグループと比較した、繰り返し測定環境での、ベースラインからの調整された変化から用量反応関係を検出するためのヨンクヒール・タプストラ検定（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ  Ｔｅｒｐｓｔｒａ  ｔｅｓｔ）（α＝０．０５）
・事前に定義された推定の、治療因子の共変量および余因子を有するそれぞれのパラメーターでの、ベースラインから、ベースラインの後の個々の訪問値（ｖｉｓｉｔｓ）への変化を調整するための線形回帰モデル（後退的選択）
・グループ内、およびＶＰＭ１００２グループとＢＣＧグループとの比較の両方での、９５％信頼区間を用いた、治療効果（ベースラインからの変化）の推定
・調整回帰モデルにおける、統計学的に無関係の共変数／余因子の変数減少（ｂａｃｋｗａｒｄ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）
・２つの治療グループ間の試験的比較に関するＸ２検定、ｔ検定、Ｕ検定
・ノンパラメトリック分析の感度を推定するヨンクヒール・タプストラ検定の代わりの多変量線形回帰
【００６１】
１２．研究母集団の要約：
全８０対象は、安全性母集団および包括解析（Ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ）（ＩＴＴ）母集団に含まれた。全８０対象は、免疫原性パラメーターに関して正当で解釈可能な評価を提供し、大幅な手順の逸脱は無く；したがって、全ての対象は、免疫原性（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）（ＩＭ）および治験実施計画（Ｐｅｒ−Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）（ＰＰ）母集団として有効であった。
【００６２】
全体平均年齢は３３．１才（異なる群に関する平均は２５．２と３８．７才との間）であった。平均身長は１７９．７ｃｍ（１７７．２と１８１．８ｃｍとの間）であり、平均体重は７８．８ｋｇ（７３．０と８２．５ｋｇとの間）であり、平均ＢＭＩは２４．３８ｋｇ／ｍ２（２２．９８と２５．７８ｋｇ／ｍ２との間）であった。治療グループ間の違いは、臨床的に関連がないと見なされた。
【００６３】
１３．薬力学の（Ｐｈａｒｍｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ）要約
本研究の第二の目的は、ＶＰＭ１００２の免疫原性を示すことであった。第二の目的は達成された。本研究は、ＶＰＭ１００２が、「未投与」およびＢＣＧ「前免疫」の対象の両層において、量的および質的に、非常に良好な細胞免疫応答を誘導することを示す。
全ての観測データは、ＶＰＭ１００２によって誘導された、明確なＴｈ１タイプの免疫応答を示す。その特定のワクチンＶＰＭ１００２株の開発の当初の目標は、細胞媒介性の免疫応答を増大させること、および、ＢＣＧよりも質的により良い免疫応答を誘導することであった。これらの目標は達成可能であった。加えて、それは、ＢＣＧによって誘導された既存の免疫応答へのブーストワクチン接種の可能性も示す。
【００６４】
リンパ球数あたりのＩＦＮ−γの量（第二のエンドポイントのＬＳＴおよびＷＢＡ）に関しては、用量−反応の相関が、ノンパラメトリックおよびパラメトリック統計によって、ＶＰＭ１００２を投与されたグループ間で観察された。それぞれの層内で、ベースラインからの平均変化は、全試験日数において、５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２グループにおいて最も高く、５×１０３  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２において最も低かった。これは、受容者に対するＶＰＭ１００２の効果を証明する。
【００６５】
第二のエンドポイントにおけるベースラインからの変化の線形回帰分析は、年齢、体重、ベースラインにおける総ＰＢＭＣおよびベースラインにおける総リンパ球は、結果に対して統計的に有意な効果を有さないことを示した。
【００６６】
試験のエンドポイントでは、両層において、多機能ＣＤ４＋  Ｔ細胞の誘導にかなりの効果が観察された。
【００６７】
結論として、ＶＰＭ１００２は、ＩＦＮ−γを誘導することによって、ＢＣＧと量的に異なるだけでなく、多機能Ｔ細胞と質的にも異なるＴｈ１免疫応答を引き起こす。これらの結果は、そのワクチンのさらなる開発を促す。
【００６８】
１４．安全性の要約：
この第Ｉ相臨床試験の第一のエンドポイントは、ＶＰＭ１００２の安全性評価であった。実際、本研究はＶＰＭ１００２に関して安全性に対する懸念を少しも見せなかった。
【００６９】
詳しくは、最大で５×１０５  ＣＦＵまでのＶＰＭ１００２での単回ワクチン接種は、耐容性良好であった。重篤な有害事象（ＡＥ）は発生しなかった。
【００７０】
全ＡＥのうち８０．７％の全てが、治験責任医師によって、本研究の投薬に関係していると見なされた（薬物有害反応（ＡＤＲｓ）：関係性は、「確かである（ｃｅｒｔａｉｎ）」、「可能性が高い（ｐｒｏｂａｂｌｅ）」または「可能性がある（ｐｏｓｓｉｂｌｅ）」として評価された）。
ＡＤＲｓは全ての対象で報告された。ほぼ全てのＡＤＲが注射部位の障害であった（全ＡＤＲｓの９８．０％）。
【００７１】
ＡＤＲｓの数は、用量が増加するのに伴い増加した。しかしながら、ＡＤＲｓの頻度および強度は、ＶＰＭ１００２の最も高い用量（５×１０５  ＣＦＵ）においてさえ、常に医学的に容認可能であった。以前にＢＣＧワクチン接種歴のある対象では、ＢＣＧ前免疫付与無しの各治療グループと比較して、より高いＡＤＲｓの発生率の傾向もあった（それぞれ２３９  ｖｓ．  ２０４  ＡＤＲｓ）。
【００７２】
全ての対象はＡＥを経験した。ＡＥｓの数は、ＢＣＧワクチン接種で前免疫されていない対象において、ＢＣＧおよび５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２グループで同様であり（それぞれ７６および８２  ＡＥｓ）、その他の２グループでは、より低かった（５×１０３  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２後は４７  ＡＥｓで、５×１０４  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２後は５３  ＡＥｓ）。
以前にＢＣＧワクチン接種歴のある対象のグループにおいては、ＡＥｓの数は、ＢＣＧグループにおける７２ＡＥｓおよび５×１０３  ＣＦＵと５×１０４  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２グループの両方における６１  ＡＥｓと比較して、５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２グループにおいて最も高かった（９７  ＡＥｓ）。
【００７３】
ＢＣＧ−未投与の対象の層内では、ＢＣＧおよびＶＰＭ１００２を同じ用量範囲（５×１０５  ＣＦＵ）で投与された治療グループにおいて観察されたＡＤＲｓは、同等の発生率および重症度であった（ＢＣＧおよびＶＰＭ１００２後、それぞれ、６４対７２）。ＢＣＧ前免疫の対象の層内では、ＡＤＲｓの発生率は、５×１０５  ＣＦＵ  ＢＣＧと比較して、５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２を投与された対象では、わずかに高かった（ＶＰＭ１００２後、７８ＡＤＲｓに対し、ＢＣＧ後、６０ＡＤＲｓ）。しかしながら、ＡＤＲｓの強度は、両群間で同等であり、さらに詳しく調べると、この不均衡の主な原因は、ＶＰＭ１００２後の注射部位での潰瘍（ＢＣＧおよびＶＰＭ１００２後、それぞれ４および８事象；直径１から８ｍｍ）と、それに付随して続いて生じる、当該注射部位での痂皮形成および剥脱（ＢＣＧおよびＶＰＭ１００２後、それぞれ、６対９および４対７のＡＤＲｓ）のような関連事象が若干高い発生率であるからと考えられ、全ては強度が軽く、免疫原性の誘導の別の指標となると評価された。
【００７４】
ほとんどのＡＥｓは軽度の強度であり（全ＡＥの９５．３％）、２５  ＡＥｓ（全ＡＥの４．６％）は中度の強度であり、１  ＡＥ（全ＡＥの０．１％、ＢＣＧ後に報告）は重度の強度であった。
ＡＥが原因で中断した対象はなかった。
【００７５】
【表２】
0005919276.tif 000003
【００７６】
概して、局所的反応を有する対象の数および局所的反応の強度は、用量が増加するのに伴い増加し、５×１０５  ＣＦＵ  ＢＣＧとＶＰＭ１００２グループで同等であった。ＢＣＧ未投与の対象とＢＣＧで前免疫した対象における結果は概して類似しており、異なる局所的反応に対する明確な傾向は観察されなかった。最も目立った局所的反応は紅斑と硬結であった。紅斑は全ての対象において観察された。紅斑の平均サイズは用量とともに増加した。平均紅斑サイズは、５×１０５  ＣＦＵ  ＢＣＧおよびＶＰＭ１００２でのワクチン接種後で同様であった。ＢＣＧグループでは、平均サイズは、前ＢＣＧ−免疫付与無しの対象グループで、より高かったのに対し、５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２を投与された対象では、平均紅斑サイズは、前免疫の対象で、常に、より高かった。
【００７７】
硬結を有する対象の数に関して明確な用量−関連性は観察されなかった。硬結の平均サイズは、５×１０５  ＣＦＵ  ＢＣＧまたはＶＰＭ１００２を投与された治療グループにおいて最も高かった。最大の硬結は５×１０５  ＣＦＵ  ＢＣＧでワクチン接種したグループにおいておよそｄａｙ  ３から５で発生し、それは、Ｄａｙ  １１から２９に最大サイズを示した５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２でワクチン接種したグループでのよりも早かった。局所的な硬結のサイズは、局所的な細胞免疫応答の尺度である。ＶＰＭ１００２グループでの特徴的な時間プロフィールは、薬力学的な免疫原性の結果に合致するＢＣＧグループでの時間プロフィールとは異なる。
【００７８】
治療グループごとの平均紅斑サイズと試験日の相関関係を図１に示す。
【００７９】
治療グループごとの平均硬結サイズと試験日の相関関係を図２に示す。
【００８０】
全体的な忍容性は、対象ごとに、ほとんど常に、良い（４２％）または、とても良い（５７％）と評価された。１対象（ＢＣＧ、前にワクチン接種無し）のみが、全体的な忍容性についてＤａｙ  ５７で悪いと評価されたが、ワクチン接種６箇月後にはもはや悪くはなかった。
【００８１】
検査値は、臨床的に関連する時間−または用量−に相関した差異を示さなかった。いくつかの対象は、ベースラインにおいて既に正常範囲を超えた値を有した。肝機能パラメーター、特にＡＬＴは、いくつかの対象（１９対象、ＢＣＧ未投与の１３対象および以前にＢＣＧワクチン接種歴のある６対象）において正常範囲を超えて増加した。ワクチン接種後に異常なＡＬＴ値を有した対象の数は、ＢＣＧ未投与であった、および５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２を投与された対象のグループにおいて最も高かった。しかしながら、さらに目立った増加が、より低用量のグループで観察され、そして、決して正常範囲の６倍を超えることはなく、研究の終わりまで減少した。
バイタルサインおよびＥＣＧパラメーターは、時間−または用量−に相関した差異を示さなかった。
【００８２】
臨床的に関連する知見は、ワクチン接種後の身体検査、肝臓超音波検査および胸部Ｘ線において観察されなかった。全てのＱｕａｎｔｉＦｅｒｏｎ  ｇｏｌｄ  ｔｅｓｔは陰性であった。
【００８３】
１５．結論
薬力学（第二の試験目的）
・第二の試験目的は達成された。
・ＶＰＭ１００２は、用量依存的なＩＦＮ−γ刺激によって検出されたように免疫原性を示す。その結果を図３および４に示す。
・ＶＰＭ１００２は、ＢＣＧとは量的および質的に異なる免疫応答を誘導する。
・ＶＰＭ１００２は、既存のＢＣＧ誘導の免疫状態を強化する効果を有する。
・多機能ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、ＶＰＭ１００２（５×１０５  ＣＦＵ）の全群において、上方調節された。その結果を図５に示す。
【００８４】
安全性（第一の試験目的）
【００８５】
・第一の試験目的は達成された：最大で５×１０５  ＣＦＵまでのＶＰＭ１００２での単回ワクチン接種は安全で耐容性良好であった。
・薬剤関連と考えられた有害事象は、ほとんど常に注射部位での障害であった。ＡＥｓの数は、用量とともに増加し、５×１０５  ＣＦＵ  ＶＰＭ１００２と５×１０５  ＣＦＵ  ＢＣＧの参照ワクチンの後で、同様であった。
・局所的反応の数と強度は、ＶＰＭ１００２の用量とともに増加し、最も高い用量において、局所的反応の発生率は、ＢＣＧでのワクチン接種後に観察されたものと同様であった。
・ＶＰＭ１００２の全体的な忍容性は、対象ごとに、常に、良いまたは非常に良いと評価された。
・検査値、バイタルサインおよびＥＣＧデータは、臨床的に関連する時間−または用量−に相関した差異を示さなかった。
【００８６】
１６．総括
ＶＰＭ１００２の安全性プロフィールは良好であった。ＶＰＭ１００２は免疫原性を示した。ＶＰＭ１００２の免疫原性プロフィールは、ＢＣＧのそれとは異なる。そのベネフィット／リスク比は、このワクチン候補の臨床開発を継続することを可能にする。
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【図１】
0005919276.tif 000004
【図２】
0005919276.tif 000005
【図３】
0005919276.tif 000006
【図４】
0005919276.tif 000007
【図５】
0005919276.tif 000008
【配列表】
0005919276000001.app