(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化６３】
0005859640.tif 000079
［式中、
----は、二重結合であり；
Ａは、１個以上のＡ’で置換されているピラゾリルであり；
Ａ’は、−ＮＨＲであり；
Ｒは、−Ｒ１、−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３、又は−Ｒ１−Ｒ３であり；
Ｒ１は、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクロアルキルと縮合しているヘテロアリールであり、これらの各々は、場合により、１個以上のＲ１’又はＲ１”で置換されており；
各Ｒ１’は、独立に、ハロ、又はシアノであり；
各Ｒ１”は、独立に、低級アルキル、又は低級アルコキシ（各々場合により、１個以上のＲ１’’’で置換されている）であり；
各Ｒ１’’’は、独立に、ヒドロキシ、ハロ、又はヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ２は、−Ｃ（＝Ｏ）、又は−Ｓ（＝Ｏ）２であり；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ４であり；
Ｒ４は、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、低級アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、又はアルキルヘテロシクロアルキルであり、これらの各々は、場合により、１個以上の低級アルキル、ハロ、低級ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、又はヒドロキシ低級アルキルで置換されており、ここで、２個の低級アルキル基は、一緒になって環を形成してもよく；
Ｑは、ＣＨであり；
Ｘは、Ｎであり；
Ｙ０は、Ｈであり；
Ｙ１は、Ｙ１ｂであり；
Ｙ１ｂは、tert-ブチル又はiso-プロピルであり；
Ｙ２は、Ｈであり；
Ｙ３は、Ｈ又はＦであり；そして
Ｙ４は、Ｈ、又は低級ヒドロキシアルキルであり、
ここで、
「低級」は、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖状基を示し；
「ヘテロアリール」は、ヘテロアリール基の結合点が芳香族又は部分不飽和環上に存在するであろうという理解の下、１個以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子を包含し、残りの環原子が炭素である、環あたり４〜８個の原子を含有する少なくとも１個の芳香族又は部分不飽和環を有する、５〜１２個の環原子の単環式又は二環式基を意味し；
「ヘテロシクロアルキル」は、１個以上の環ヘテロ原子を包含する環あたり３〜８個の原子の、スピロ環系を含む、１〜２個の環よりなる一価飽和環状基を示す］
で示される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｙ０が、Ｈであり、Ｙ２が、Ｈであり、そしてＹ４が、ヒドロキシメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｙ１が、tert−ブチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｙ３が、Ｆである、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
下記：
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
３−［５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピラジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−フルオロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−フルオロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピラジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−シアノ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
３−（４−アセチル−フェニルアミノ）−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；及び
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−ジメチルアミノメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
からなる群より選択される、化合物。
【請求項６】
少なくとも１つの薬学的に許容しうる担体、賦形剤又は希釈剤と混合した、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項７】
炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
関節リウマチ又は喘息を処置するための、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項９】
炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための医薬の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、Ｂｔｋを阻害し、かつ異常Ｂ細胞活性化により引き起こされる自己免疫性及び炎症性疾患の処置に有用な新規な化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
タンパク質キナーゼはヒト酵素の最大のファミリーの一つを構成し、かつリン酸基をタンパク質に加えることにより、多くの異なるシグナル伝達過程を調節する（T. Hunter, Cell 1987 50:823-829）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール性部分上のタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞増殖、移動、及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫性及び炎症性疾患を含む多様なヒト疾患に関与している。タンパク質キナーゼは、小さな分子キナーゼ阻害剤で細胞機能を調節する標的を提供する細胞シグナル伝達の主要な調節因子のうちの一つであるので、これらは、良好な薬物設計標的となる。キナーゼ媒介疾患過程の処置に加えて、キナーゼ活性の選択的かつ有効な阻害剤もまた、細胞シグナル伝達過程の調査及び治療目的の他の細胞標的の同定について有用である。
【０００３】
Ｂ細胞が自己免疫性及び／又は炎症性疾患の病因において主要な役割を果たすという十分な証拠がある。リツキサン（Rituxan）のようなＢ細胞を枯渇させるタンパク質に基づいた治療法は、関節リウマチのような自己抗体誘導炎症性疾患に対して効果的である（Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477）。したがって、Ｂ細胞活性化において役割を果たすタンパク質キナーゼの阻害剤は、自己抗体産生のようなＢ細胞媒介疾患病理に対する有用な治療法となるであろう。
【０００４】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を通してのシグナル伝達は、増殖及び成熟抗体産生細胞への分化を含む様々なＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性についての主要な調節点であり、そして異常シグナル伝達は、多数の自己免疫性及び／又は炎症性疾患に至る無秩序なＢ細胞増殖及び病原性自己抗体の形成を引き起こすことがある。ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、膜に近接し、ＢＣＲの直ぐ下流にある非ＢＣＲ関連キナーゼである。Ｂｔｋの欠失は、ＢＣＲシグナル伝達を阻止することが示されており、それゆえＢｔｋの阻害はＢ細胞媒介性疾患過程を阻止するための有用な治療手法となる可能性がある。
【０００５】
ＢｔｋはチロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、初期のＢ細胞成長ならびに成熟Ｂ細胞活性化及び生存の非常に重要な調節因子であることが示されている（Khan et al. Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611）。ヒトにおけるＢｔｋの突然変異は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）の状態に至る（Rosen et al. New Eng.J. Med. 1995 333:431 and Lindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200において概説）。これらの患者は、免疫無防備状態であり、そしてＢ細胞の成熟障害、免疫グロブリン及び末梢Ｂ細胞レベルの減少、Ｔ細胞非依存性免疫応答の縮小ならびにＢＣＲ刺激に続くカルシウム動員の低下を示す。
【０００６】
自己免疫性及び炎症性疾患におけるＢｔｋについての役割の証拠はまた、Ｂｔｋ欠損マウスモデルによっても提供されている。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルにおいて、Ｂｔｋ欠損マウスは、疾患進行の顕著な改善を示す。加えて、Ｂｔｋ欠損マウスは、コラーゲン誘導関節炎に対して耐性がある（Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459）。選択的Ｂｔｋ阻害剤は、マウス関節炎モデルにおける用量依存性効能を示している（Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61）。
【０００７】
Ｂｔｋはまた、疾患過程に関与しうるＢ細胞以外の細胞によっても発現される。例えば、Ｂｔｋはマスト細胞により発現され、そしてＢｔｋ欠損骨髄誘導マスト細胞は抗原誘発脱顆粒障害を示す（Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261）。このことは、Ｂｔｋがアレルギー及び喘息のような病理学的マスト細胞応答を処置するのに有用である可能性があることを示している。また、Ｂｔｋ活性が存在しないＸＬＡ患者の単球は、刺激後のＴＮＦα産生の減少を示す（Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003）。したがって、ＴＮＦα媒介炎症は、小分子Ｂｔｋ阻害剤により調節される可能性がある。また、Ｂｔｋはアポトーシスにおいて役割を果たすことが報告されており（Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49）、それゆえＢｔｋ阻害剤は、特定のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用であろう（Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837）。
【発明の概要】
【０００８】
本出願は、本明細書において下記に記載される、式（Ｉ）で示されるＢｔｋ阻害剤化合物、その使用方法を提供する。
【０００９】
本出願は、式（Ｉ）：
【化１】
0005859640.tif 000002
［式中、
----は、単結合又は二重結合のいずれかであり；
Ａは、ＣＯＮＨ２が５員ヘテロアリールに結合している、５員ヘテロアリール又は５、６員二環式ヘテロアリール（各々場合により、１個以上のＡ’で置換されている）であり；
Ａ’は、−ＮＨＲ又はＲ４であり；
Ｒは、Ｈ、−Ｒ１、−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３、−Ｒ１−Ｒ３、又は−Ｒ２−Ｒ３であり；
Ｒ１は、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロシクロアルキルと縮合しているヘテロアリールであり、これらの各々は、場合により、１個以上のＲ１’又はＲ１”で置換されており；
各Ｒ１’は、独立に、ハロ、ニトロ、シアノ、低級アルキルスルホンアミド、−Ｓ（Ｏ）２、又はオキソであり；
各Ｒ１”は、独立に、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、低級アルコキシ、アミノ、又はアミド（各々場合により、１個以上のＲ１’’’で置換されている）であり；
各Ｒ１’’’は、独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、又はヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ２は、−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２’、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ、−Ｃ（Ｒ２’）２、−Ｏ、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ２’、又は−Ｓ（＝Ｏ）２であり；
各Ｒ２’は、独立に、Ｈ又は低級アルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ４であり；
Ｒ４は、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、二環式シクロアルキル、二環式ヘテロシクロアルキル、スピロシクロアルキル、又はスピロヘテロシクロアルキルであり、これらの各々は、場合により、１個以上の低級アルキル、ハロ、低級アルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、ニトロ、アミノ、アミド、アシル、シアノ、オキソ、グアニジノ、ヒドロキシルアミノ、カルボキシ、カルバモイル、カルバマート、ハロ低級アルコキシ、又はハロ低級アルキルで置換されており、ここで、２個の低級アルキル基は、一緒になって環を形成してもよく；
Ｑは、ＣＨ又はＮであり；
Ｘは、ＣＨ、Ｎ、又はＮ（Ｘ’）であり；
Ｘ’は、低級アルキルであり；
Ｙ０は、Ｈ、ハロゲン又は低級アルキルであり；
Ｙ１は、Ｙ１ａ、Ｙ１ｂ、Ｙ１ｃ、又はＹ１ｄであり；
Ｙ１ａは、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｙ１ｂは、低級アルキル（場合により、低級ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、及び低級アルコキシからなる群より選択される１個以上の置換基で置換されている）であり；
Ｙ１ｃは、低級シクロアルキル（場合により、低級アルキル、低級ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、及び低級アルコキシからなる群より選択される１個以上の置換基で置換されている）であり；
Ｙ１ｄは、アミノ（場合により、１個以上の低級アルキル、アルコキシ低級アルキル、又はヒドロキシ低級アルキルで置換されている）であり；
Ｙ２は、Ｈ、ハロゲン又は低級アルキルであり；
Ｙ３は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、又は低級ヒドロキシアルキルであり；そして
Ｙ４は、Ｈ、低級アルキル、又は低級ヒドロキシアルキルである］で示される化合物又はその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００１０】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本出願は、少なくとも１つの薬学的に許容しうる担体、賦形剤又は希釈剤と混合した式（Ｉ）の化合物を含む、医薬組成物を提供する。
【００１２】
発明の詳細な説明
定義
本明細書で使用される実体「a」又は「an」という語句は、１つ以上のその実体を指し、例えば、ある化合物は、１つ以上の化合物、又は少なくとも１つの化合物を指す。したがって、「a」（または「an」）、「１つ以上」及び「少なくとも１つ」という用語を、本明細書では互換的に使用することができる。
【００１３】
「本明細書において上記定義のとおり」という語句は、発明の概要又は最も広範囲の請求の範囲に提供される、各基についての最も広範囲の定義を指す。以下に提供する全ての他の実施態様において、各実施態様において存在しうるものでありかつ明確には定義されていない置換基は、発明の概要に提供される最も広範囲の定義を保持する。
【００１４】
本明細書で使用されるように、移行句中であろうと、又は請求の範囲の主部中であろうと、「含む(comprise(s))」又は「含んでいる(comprising)」という用語は、無制限的意味を有すると解釈すべきである。すなわち、これらの用語は、「少なくとも有する」または「少なくとも含む」という語句と同義であると解釈すべきである。方法の文脈で使用する場合、「含んでいる(comprising)」という用語は、その方法が列挙された工程を少なくとも含むが、さらなる工程を含み得ることを意味する。化合物または組成物の文脈で使用する場合、「含んでいる(comprising)」という用語は、その化合物または組成物が列挙された特徴または成分を少なくとも含むが、更なる特徴または成分も含み得ることを意味する。
【００１５】
本明細書で使用されるように、他に特に示さない限り、「又は」という語は、「及び／又は」の「包括的な」意味で使用され、そして「いずれか／又は」の「排他的な」意味ではない。
【００１６】
「独立に」という用語は、ある変数が、同じ化合物内の同じか又は異なる定義を有する変数の存在又は非存在にかかわらず、いずれか１つの場合に適用されることを示すために本明細書では使用される。したがって、Ｒ”が２回出現し、かつ「独立に炭素又は窒素」として定義される化合物において、両方のＲ”が炭素であっても、両方のＲ”が窒素であっても、又は一方のＲ”が炭素であってそしてもう一方が窒素であることもできる。
【００１７】
任意の変数が、本発明において使用され又は特許請求される化合物を描写及び記述する任意の部分又は式中に１回より多く出現する場合、出現毎のその定義は、他の全ての出現でのその定義とは独立している。また、置換基及び／又は変数の組合せは、そのような化合物が安定な化合物となる場合に限り許される。
【００１８】
結合の末端の記号の「＊」又は結合に沿って描かれる「------」は各々、それが一部分である分子の残りの部分への、官能基又は他の化学部分の結合点を指す。即ち、例えば、以下のとおりである：
【化２】
0005859640.tif 000003
【００１９】
環系の中へと描かれる結合（明らかな頂点で接続されるのとは対照的に）は、この結合が、任意の適切な環原子に結合してもよいことを示す。
【００２０】
「場合による」又は「場合により」という用語は、本明細書中に使用されるとき、引き続き記述される事象又は状況が、生じ得るが生じる必要がないこと、ならびに、その記述が、その事象または状況が生じる場合、及びそれが生じない場合を含むことを意味する。例えば、「場合により置換されている」とは、その場合により置換基されている部分には、水素原子又は置換基を組み込んでよいことを意味する。
【００２１】
「場合により結合」という語句は、結合が存在しても、しなくてもよく、その記載が一重、二重、又は三重結合を含むことを意味する。置換基が「結合」又は「不在」を意味する場合、置換基に結合している原子は直接接続している。
【００２２】
「約」という用語は、およそ、ほぼ、大体、又は前後を意味するのに本明細書では使用される。「約」という用語が、数値範囲と併せて使用されるとき、これは、記載された数値の上下に境界を延長することにより、その範囲に修正を加える。一般に、「約」という用語は、表示値の上下２０％の変動で数値に修正を加えるために本明細書では使用される。
【００２３】
式（Ｉ）の特定の化合物は、互変異性を示す場合がある。互変異性化合物は、２つ以上の相互転換可能な種として存在することができる。プロトトロピック互変異性体は、２つの原子間の共有結合した水素原子の移動に由来する。互変異性体は、一般に平衡状態で存在し、個々の互変異性体を単離しようという試みは、通常、その化学的及び物理的性質が化合物の混合物と一致する混合物の生成に終わる。平衡の位置は、分子内の化学特性に依存する。例えば、アセトアルデヒドのような多くの脂肪族アルデヒド及びケトンでは、ケト型が優位を占めるが、一方、フェノール類では、エノール型が優位を占める。普通のプロトトロピック互変異性体は、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ− ⇔ −Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ− ⇔ −Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）及びアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ− ⇔ −Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体を含む。後者の２つは、ヘテロアリール及び複素環において特に一般的であり、そして本発明は、本化合物の全ての互変異性型を包含する。
【００２４】
本明細書で使用される技術及び科学用語は、他に定義しない限り、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味を有する。本明細書において、当業者に公知の種々の方法論及び材料が参照される。薬理学の一般原理を記載する標準的な参考文献の著作には、Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001)が含まれる。当業者に公知の任意の好適な材料及び／又は方法を利用して、本発明を実施することができる。しかしながら、好ましい材料及び方法が記載される。後述の記載及び実施例において参照される材料、試薬などは、他に述べない限り、商業的供給源から入手可能である。
【００２５】
本明細書で記載される定義を追加して、化学的に関連する組み合わせ、例えば、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」などを形成してもよい。「アルキル」という用語が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように、別の用語に続く接尾語として使用される場合、これは、特に指定された他の基より選択される１〜２個の置換基で置換されている、上記で定義されたアルキル基を指すことを意図する。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、１〜２個のフェニル置換基を有するアルキル基を指し、したがってベンジル、フェニルエチル、及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２個のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」は、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピルなどを包含する。したがって、本明細書で使用されるように、「ヒドロキシアルキル」という用語は、下記で定義されるヘテロアルキル基のサブセットを定義するために使用される。−（ar）アルキルという用語は、非置換アルキル又はアラルキル基のいずれかを指す。用語（ヘテロ）アリール又は（het）アリールは、アリール基又はヘテロアリール基のいずれかを指す。
【００２６】
本明細書で使用される「スピロシクロアルキル」という用語は、例えば、スピロ［３．３］ヘプタンのようなスピロ環シクロアルキル基を意味する。本明細書で使用されるスピロヘテロシクロアルキルという用語は、例えば、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタンのようなスピロ環ヘテロシクロアルキルを意味する。
【００２７】
本明細書で使用される「アシル」という用語は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは本明細書で定義される水素又は低級アルキルである］の基を示す。本明細書で使用される「アルキルカルボニル」という用語は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒは本明細書で定義されるアルキルである］の基を示す。Ｃ１−６アシルという用語は、６個の炭素原子を含有する、基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。本明細書で使用される「アリールカルボニル」という用語は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ［式中、Ｒはアリール基である］の基を意味し；本明細書で使用される「ベンゾイル」という用語は、Ｒがフェニルである、「アリールカルボニル」基を意味する。
【００２８】
本明細書で使用される「エステル」という用語は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒは、本明細書で定義される低級アルキルである］の基を示す。
【００２９】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１〜１０個の炭素原子を含有する非分岐鎖又は分岐鎖状の飽和一価炭化水素基を示す。「低級アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖状の炭化水素基を示す。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルキル」は、１〜１０個の炭素からなるアルキルを指す。アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチルを含む低級アルキル基、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、及びオクチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
「アルキル」という用語が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語に続く接尾語として使用される場合、これは、その他の特に指定された基より選択される１〜２個の置換基で置換されている、上記で定義されたアルキル基を指すことを意図する。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、そのフェニルアルキル部分の結合点がアルキレン基上に存在するであろうという理解の下、Ｒ’Ｒ”−基（ここで、Ｒ’は、フェニル基であり、そしてＲ”は、本明細書で定義されるアルキレン基である）を示す。アリールアルキル基の例には、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。「アリールアルキル」又は「アラルキル」という用語は、Ｒ’がアリール基であることを除けば、同様に解釈される。「（het）アリールアルキル」又は「（het）アラルキル」という用語は、Ｒ’が場合によりアリール基又はヘテロアリール基であることを除けば、同様に解釈される。
【００３１】
「ハロアルキル」又は「ハロ−低級アルキル」もしくは「低級ハロアルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子（ここで、１個以上の炭素原子は、１個以上のハロゲン原子で置換されている）を含有する、直鎖又は分岐鎖状の炭化水素基を指す。
【００３２】
本明細書で使用される「アルキレン」又は「アルキレニル」という用語は、他に示さない限り、１〜１０個の炭素原子の二価飽和直鎖状炭化水素基（例えば、（ＣＨ２）ｎ）又は２〜１０個の炭素原子の分岐鎖状飽和二価炭化水素基（例えば、−ＣＨＭｅ−又は−ＣＨ２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ２−）を示す。メチレンの場合を除いて、アルキレン基の空原子価（open valences）は、同じ原子に結合していない。アルキレン基の例には、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１，１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３３】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基（ここで、アルキルは、上記で定義されたとおりである）、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（それらの異性体を包含する）を意味する。本明細書で使用される「低級アルコキシ」は、先に定義された「低級アルキル」基を有するアルコキシ基を示す。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル（ここで、アルキルは、Ｃ１−１０である）を示す。
【００３４】
「ＰＣｙ３」という用語は、３つの環状部分で三置換されているホスフィンを指す。
【００３５】
「ハロアルコキシ」又は「ハロ−低級アルコキシ」もしくは「低級ハロアルコキシ」という用語は、１個以上の炭素原子が１個以上のハロゲン原子で置換されている、低級アルコキシ基を指す。
【００３６】
本明細書で使用される「ヒドロキシアルキル」という用語は、異なる炭素原子上の１〜３個の水素原子がヒドロキシル基により置き換えられている、本明細書で定義されるアルキル基を示す。
【００３７】
本明細書で使用される「アルキルスルホニル」及び「アリールスルホニル」という用語は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ［式中、Ｒは、それぞれアルキル又はアリールであり、そしてアルキル及びアリールは、本明細書で定義されるとおりである］の基を指す。本明細書で使用される「ヘテロアルキルスルホニル」という用語は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ［式中、Ｒは本明細書で定義された「ヘテロアルキル」である］の基を示す。
【００３８】
本明細書で使用される「アルキルスルホニルアミノ」及び「アリールスルホニルアミノ」という用語は、式−ＮＲ’Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ［式中、Ｒは、それぞれアルキル又はアリールであり、そしてＲ’は、水素又はＣ１−３アルキルであり、そしてアルキル及びアリールは本明細書で定義されるとおりである］の基を指す。
【００３９】
本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、３〜８個の炭素原子を含有する飽和炭素環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチルを指す。本明細書で使用される「Ｃ３−７シクロアルキル」又は「低級シクロアルキル」は、炭素環中の３〜７個の炭素からなるシクロアルキルを指す。
【００４０】
本明細書で使用される、カルボキシ−アルキルという用語は、ヘテロアルキル基の結合点が炭素原子を介するという理解の下、１個の水素原子がカルボキシルで置き換えられているアルキル部分を指す。用語「カルボキシ」又は「カルボキシル」は、−ＣＯ２Ｈ部分を指す。
【００４１】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」又は「ヘテロ芳香族」という用語は、ヘテロアリール基の結合点が芳香族又は部分不飽和環上に存在するであろうという理解の下、１個以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子を包含し、残りの環原子が炭素である、環あたり４〜８個の原子を含有する少なくとも１個の芳香族又は部分不飽和環を有する、５〜１２個の環原子の単環式又は二環式基を意味する。当業者に周知のとおり、ヘテロアリール環は、その全てが炭素である対応のものよりも芳香族性が小さい。したがって、本発明の目的のためには、ヘテロアリール基は、ある程度の芳香族特性さえあれば十分である。５〜６個の環原子及び１〜３個のヘテロ原子を有する単環式芳香族複素環を含むヘテロアリール部分の例には、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサゾリル、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール及びオキサジアキソリン（これらは、場合により、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルボニルアミノ及びアリールカルボニルアミノより選択される１個以上、好ましくは１又は２個の置換基で置換されていることができる）が挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分の例には、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，６］ナフチリジニル、及びベンゾイソチアゾールが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分は、場合により、いずれの環においても置換されていることができるが、しかし結合点は、ヘテロ原子を含有する環上に存在する。
【００４２】
本明細書で使用される「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」又は「複素環」という用語は、１個以上の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ又はＳ（Ｏ）０−２より選択される）を包含する環あたり３〜８個の原子の、スピロ環系を含む、１個以上の環、好ましくは１〜２個の環よりなる一価飽和環状基を示し、そしてこれは、他に示さない限り、場合により、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びそれらのイオン形態より選択される、１個以上、好ましくは１又は２個の置換基で独立して置換されていることができる。複素環基の例には、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル及びイミダゾリニル及びそれらのイオン形態が挙げられるが、これらに限定されない。例はまた、例えば、３，８−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタン、又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジンのような二環式であってもよい。
【００４３】
Ｂｔｋの阻害剤
本出願は、式（Ｉ）：
【化３】
0005859640.tif 000004
［式中、
----は、単結合又は二重結合のいずれかであり；
Ａは、ＣＯＮＨ２が５員ヘテロアリールに結合している、５員ヘテロアリール又は５、６員二環式ヘテロアリール（各々場合により、１個以上のＡ’で置換されている）であり；
Ａ’は、−ＮＨＲ又はＲ４であり；
Ｒは、Ｈ、−Ｒ１、−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３、−Ｒ１−Ｒ３、又は−Ｒ２−Ｒ３であり；
Ｒ１は、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロシクロアルキルと縮合しているヘテロアリールであり、これらの各々は、場合により、１個以上のＲ１’又はＲ１”で置換されており；
各Ｒ１’は、独立に、ハロ、ニトロ、シアノ、低級アルキルスルホンアミド、−Ｓ（Ｏ）２、又はオキソであり；
各Ｒ１”は、独立に、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、低級アルコキシ、アミノ、又はアミド（各々場合により、１個以上のＲ１’’’で置換されている）であり；
各Ｒ１’’’は、独立に、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、又はヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ２は、−Ｃ（＝Ｏ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２’、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ、−Ｃ（Ｒ２’）２、−Ｏ、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ２’、又は−Ｓ（＝Ｏ）２であり；
各Ｒ２’は、独立に、Ｈ又は低級アルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ４であり；
Ｒ４は、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、ヘテロアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、二環式シクロアルキル、二環式ヘテロシクロアルキル、スピロシクロアルキル、又はスピロヘテロシクロアルキルであり、これらの各々は、場合により、１個以上の低級アルキル、ハロ、低級アルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、ニトロ、アミノ、アミド、アシル、シアノ、オキソ、グアニジノ、ヒドロキシルアミノ、カルボキシ、カルバモイル、カルバマート、ハロ低級アルコキシ、又はハロ低級アルキルであり、ここで、２個の低級アルキル基は、一緒になって環を形成してもよく；
Ｑは、ＣＨ又はＮであり；
Ｘは、ＣＨ、Ｎ、又はＮ（Ｘ’）であり；
Ｘ’は、低級アルキルであり；
Ｙ０は、Ｈ、ハロゲン又は低級アルキルであり；
Ｙ１は、Ｙ１ａ、Ｙ１ｂ、Ｙ１ｃ、又はＹ１ｄであり；
Ｙ１ａは、Ｈ又はハロゲンであり；
Ｙ１ｂは、低級アルキル（場合により、低級ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、及び低級アルコキシからなる群より選択される１個以上の置換基で置換されている）であり；
Ｙ１ｃは、低級シクロアルキル（場合により、低級アルキル、低級ハロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、及び低級アルコキシからなる群より選択される１個以上の置換基で置換されている）であり；
Ｙ１ｄは、アミノ（場合により、１個以上の低級アルキル、アルコキシ低級アルキル、又はヒドロキシ低級アルキルで置換されている）であり；
Ｙ２は、Ｈ、ハロゲン又は低級アルキルであり；
Ｙ３は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、又は低級ヒドロキシアルキルであり；そして
Ｙ４は、Ｈ、低級アルキル、又は低級ヒドロキシアルキルである］で示される化合物又はその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００４４】
本出願は、Ｘが、Ｎである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００４５】
本出願は、Ｑが、ＣＨである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００４６】
本出願は、Ｙ１が、Ｙ１ａである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００４７】
本出願は、Ｙ１ａが、Ｈである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００４８】
本出願は、Ｙ１が、低級アルキル又は低級シクロアルキルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００４９】
本出願は、Ｙ１が、tert−ブチル、イソ−プロピル、シクロプロピル、又はイソプロピルニトリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５０】
本出願は、Ｙ１が、tert−ブチルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５１】
本出願は、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はシクロプロピルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５２】
本出願は、Ｙ２が、Ｈである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５３】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はハロゲンである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５４】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５５】
本出願は、Ｙ０が、Ｈであり、Ｙ２が、Ｈであり、Ｙ３が、Ｆ又はＨであり、そしてＹ４が、ヒドロキシメチルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５６】
本出願は、Ｑが、ＣＨであり、Ｘが、Ｎであり、そして----が、二重結合である、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５７】
本出願は、Ａが、フラニル、イミダゾリル、チアゾリル、ピロリル、ピラゾリル、フェニル、インドリル、ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、又はオキサゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５８】
本出願は、Ｙ１が、tert−ブチル又はシクロプロピルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００５９】
本出願は、Ｙ３が、Ｆである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６０】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、そしてＸが、Ｎである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６１】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はシクロプロピルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６２】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はシクロプロピルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６３】
本出願は、Ｙ４が、低級ヒドロキシアルキルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６４】
本出願は、Ｙ４が、ヒドロキシメチルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６５】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているフラニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６６】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はシクロプロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているフラニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６７】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているイミダゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６８】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はシクロプロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているイミダゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６９】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているチアゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７０】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているチアゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７１】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているピロリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７２】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているピロリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７３】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているピラゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７４】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているピラゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７５】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているフェニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７６】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているフェニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７７】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているインドリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７８】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているインドリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００７９】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているピロロ［２，３−ｂ］ピリジニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８０】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているピロロ［２，３−ｂ］ピリジニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８１】
本出願は、Ａが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているオキサゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８２】
本出願は、Ｙ３が、Ｈ又はＦであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルであり、そしてＡが、場合により、１個以上のＡ’で置換されているオキサゾリルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８３】
本出願は、Ｙ３が、ヒドロキシメチルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８４】
本出願は、Ｙ３が、ヒドロキシメチルであり、Ｘが、Ｎであり、そしてＹ１が、tert−ブチル又はイソ−プロピルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８５】
本出願は、下記：
４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド；
２−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−チアゾール−４−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
２−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−４−メチル−オキサゾール−５−カルボン酸アミド；
２−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−チアゾール−４−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
５−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−フラン−２−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−フラン−２−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−８−ヒドロキシメチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−シクロプロピル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
４−［３−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
４−［２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−３−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
３−［５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピラジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−フルオロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−フルオロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピラジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−メタンスルホニル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−シアノ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
７−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−クロロ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
６−ブロモ−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，２−ジヒドロキシ−エチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−ジメチルアミノ−エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−ジメチルアミノメチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド；
３−（４−アセチル−フェニルアミノ）−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド； 
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−ジメチルアミノメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド；及び
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
からなる群より選択される、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８６】
本出願は、治療活性物質としての、式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００８７】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための、式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００８８】
本出願は、炎症性病態を処置するための、式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００８９】
本出願は、関節リウマチ又は喘息を処置するための、式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００９０】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性病態の処置における使用のための、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００９１】
本出願は、炎症性病態の処置における使用のための、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００９２】
本出願は、関節リウマチ又は喘息の処置における使用のための、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００９３】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００９４】
本出願は、炎症性病態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００９５】
本出願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００９６】
本出願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００９７】
本出願は、少なくとも１つの薬学的に許容しうる担体、賦形剤又は希釈剤と混合した式（Ｉ）の化合物を含む、医薬組成物を提供する。
【００９８】
本出願は、炎症性障害の処置用の医薬の製造における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００９９】
本出願は、自己免疫性障害の処置用の医薬の製造における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０１００】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性障害の処置用の医薬の製造における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０１０１】
本出願は、関節リウマチ又は喘息の処置用の医薬の製造における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０１０２】
本出願は、本明細書で記載した化合物、方法、又は組成物を提供する。
【０１０３】
化合物及び調製
本発明に包含され、本発明の範囲内にある、代表的な化合物の例は、以下の表に示される。後述のこれら実施例及び調製法は、当業者が、本発明をより明確に理解し、かつ実施することができるように提供される。これらは、本発明の範囲を限定するものと考えるべきではなく、単にそれを例示かつ代表するものと考えるべきである。
【０１０４】
一般に、本出願において使用される命名法は、ＩＵＰＡＣの体系的命名の生成のためのバイルシュタイン研究所（Beilstein Institute）のコンピュータシステムである、AUTONOM（商標）v.4.0に基づく。描写される構造とその構造に与えられた名称の間に矛盾があれば、描写される構造をより重視されたい。加えて、構造又は構造の一部の立体化学が、例えば、太線又は点線により示されない場合、この構造又は構造の一部は、その全ての立体異性体を包含するものと解釈されたい。
【０１０５】
表Ｉは、一般式（Ｉ）によるピリダジノン化合物の例を描写している。
【０１０６】
【表１】
0005859640.tif 000005
0005859640.tif 000006
0005859640.tif 000007
0005859640.tif 000008
0005859640.tif 000009
0005859640.tif 000010
0005859640.tif 000011
0005859640.tif 000012
0005859640.tif 000013
0005859640.tif 000014
0005859640.tif 000015
【０１０７】
合成：  一般合成スキーム
【化４】
0005859640.tif 000016
【０１０８】
スキーム１に記載のように、ブロモ−置換５員複素環式芳香族カルボキサミド（１）は、対応するエステル又はカルボン酸から、アンモニアとのアミド形成により調製することができる。構造（１）において、Ｘは、ＮＨ、ＮＲ、Ｏ又はＳであることができ、ここで、Ｒは、メチル基のような低級アルキルであることができる。構造（１）において、Ｙは、ＣＨもしくはメチル基のような低級アルキルで置換されている炭素、又は窒素原子であることができる。構造（２）において、Ｚは、窒素又はＣＨであることができ、そしてＲは、一置換又は二置換であることができる。置換は、フルオロ、クロロ、アルキル、置換アルキル、又は環状アルキル基であることができる。（２）の調製は、文献（US2010/0222325）に記載されている。パラジウム触媒化カップリング条件（US2010/0222325）下、化合物（１）と（２）とのカップリングにより化合物（３）を与えることができ、これを加水分解して、所望の化合物（４）とすることができる。
【０１０９】
【化５】
0005859640.tif 000017
【０１１０】
代替的に、５員カルボキサミド（４）を、スキーム（２）に従って調製することができる。ブロモ−置換５員複素環式芳香族カルボキサミド（１）は、対応するエステル又はカルボン酸からアンモニアとのアミド形成により調製することができる。構造（１）において、Ｘは、ＮＨ、ＮＲ、Ｏ又はＳであることができ、ここで、Ｒは、メチル基のような低級アルキルであることができる。構造（１）において、Ｙは、ＣＨもしくはメチル基のような低級アルキルで置換されている炭素、又は窒素原子であることができる。ブロモ−置換５員複素環式芳香族カルボキサミド（１）は、パラジウム触媒化アリールボラート形成条件（US2010/0222325）下、ビス−ピナコラートボランとの反応により、対応するピナコラートボラート（５）に変換することができる。構造（６）において、Ｚは、窒素又はＣＨであることができ、そしてＲは、一置換又は二置換であることができる。置換は、フルオロ、クロロ、アルキル、置換アルキル、又は環状アルキル基であることができる。化合物（６）の調製は、スキーム９に記載されている。アリールブロミド（６）を、パラジウム触媒化カップリング条件（US2010/0222325）下、５員芳香族複素環ホウ酸（５）とカップリングして、所望の化合物（４）を提供することができる。
【０１１１】
【化６】
0005859640.tif 000018
【０１１２】
スキーム３に示すように、５員複素環式カルボキサミドを芳香族環に縮合させて、二環式芳香族複素環カルボキサミドを与えることができる。インドール又はアザ−インドール誘導体（７）を、文献（Tetrahedron Letters 2009, 50, 15-18）と同様の条件に従ってパラジウム触媒化カップリング条件下、アリールボロン酸（８）とカップリングして、アリール−置換インドール又はアザ−インドール（９）を提供することができる。アリールボロン酸（８）の調製は、スキーム９に記載されている。構造（７）において、Ｘは、ＣＨ又は窒素であることができ、そしてＹは、アルキル、ヘテロ原子で置換されているアルキル、又は複素環であることができる。構造（８）において、Ｒは、一置換又は二置換であることができる。置換は、フルオロ、クロロ、アルキル、置換アルキル、又は環状アルキル基であることができる。構造（８）において、Ｚは、窒素又はＣＨであることができる。化合物（９）のシアノ基の加水分解は、中性条件下、白金触媒の存在（Journal of Organic Chemistry 2004, 69, 2327-2331）下で達成して、対応するカルボキサミド（１０）を提供することができる。
【０１１３】
【化７】
0005859640.tif 000019
【０１１４】
代替的に、カルボキサミド（１０）は、スキーム４に従って調製することができる。構造（７）において、Ｘは、ＣＨ又は窒素であることができ、そしてＹは、アルキル，ヘテロ原子で置換されているアルキル、又は複素環であることができる。塩基性条件（例えば、カリウムtert−ブトキシド）下、化合物（７）をフッ化アリール（１１）と求核性芳香族置換反応により反応させて、化合物（１２）を与えることができ、ここで、化合物（１１）のハロゲンは、ブロモ又はヨード原子であることができる。ヨウ化第一銅の存在（US2010/0222325）下、（１３）での化合物（１２）の処理により、化合物（１４）を与えることができる。化合物（１３）の調製は、文献（US2010/0222325）に記載されており、ここで、Ｒは、一置換又は二置換であることができる。置換は、フルオロ、クロロ、アルキル、置換アルキル、又は環状アルキル基であることができる。構造（１３）において、Ｚは、窒素又はＣＨであることができる。化合物（１４）のアルデヒド基は、還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）の使用により、還元してアルコールとすることができる。化合物（１４）のシアノ基の加水分解は、中性条件下、白金触媒の存在（Journal of Organic Chemistry 2004, 69, 2327-2331）下で達成して、対応するカルボキサミド（１０）を提供することができる。
【０１１５】
【化８】
0005859640.tif 000020
【０１１６】
５員芳香族複素環カルボキサミドがアミノピラゾールカルボキサミドである化合物に関して、その調製はスキーム５に記載されている。市販のアミノピラゾールニトリル（１５）を、酢酸銅の存在下、カリウムトリフルオロボラート塩（１６）と反応させて、化合物（１７）を提供することができる。（１７）への（１５）の変換の間のＮ−アリール化の混合位置異性体に関して、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）条件下、所望の化合物（１７）を分離することができる。構造（１６）において、Ｒ１は、水素、アルキル基、及びアセトキシ基であることができる。構造（１６）において、Ｒは、一置換又は二置換であることができる。置換は、フルオロ、クロロ、アルキル、置換アルキル、又は環状アルキル基であることができ、そしてＺは、窒素又は炭素であることができる。化合物（１６）の調製は、スキーム１０に記載されている。パラジウム触媒条件下、アリールハライド（例えば、アリールブロミド）での化合物（１７）のＮ−アリール化反応により、化合物（１８）（ここで、Ｘ及びＹは、ＣＨであることができ、又はＸ及びＹの一方は、窒素であることができる）を提供することができる。アリールハライドのＲ２基は、ジアルキルアミノカルボニル、アミノアルキル、複素環式アルキル、メチルスルホニル、モノ−又はジ−ヒドロキシ置換アルキル基であることができる。（１８）への（１７）の変換におけるアリールハライド反応物は、６員芳香族ハライドに限定されず、それは、５員芳香族ハライド又は複素環と縮合した５員芳香族ハライドであることができる。（１８）のシアノ基の加水分解により、所望のカルボキサミド（１９）を与えることができる。
【０１１７】
【化９】
0005859640.tif 000021
【０１１８】
アミノピラゾール部分を含有する５員芳香族カルボキサミドを調製する代替経路は、スキーム６に記載されている。塩基（例えば、水素化ナトリウム）の存在下、トリメチルシリルエトキシメチレンクロリド（ＳＥＭ−Ｃｌ）での化合物（１５）のＮＨ基の保護により、２つの位置異性体を与えることができる。２つの位置異性体を分離して、（２０）を与えることができる。パラジウム触媒の存在下、アリールハライドでの（２０）のＮ−アリール化により、化合物（２１）（ここで、Ｘ及びＹは、ＣＨであることができるか、又はＸ及びＹの一方は、窒素であることができる）を与えることができる。アリールハライドのＲ基は、ジアルキルアミノカルボニル、アミノアルキル、複素環式アルキル、メチルスルホニル、モノ−又はジ−ヒドロキシ置換アルキル基であることができる。（２１）への（２０）の変換におけるアリールハライド反応物は、６員芳香族ハライドに限定されず、それは、５員芳香族ハライド又は複素環と縮合した５員芳香族ハライドであることができる。（２１）のＳＥＭ基の脱保護は、酸性条件（例えば、希塩酸）下、又は塩基性条件（例えば、フッ化テトラブチルアンモニウム）下で達成して、化合物（２２）を与えることができる。塩基（例えば、カリウムtert−ブトキシド）の存在下、２−フルオロ−６−ヨードベンズアルデヒドでの化合物（２２）の処理により、化合物（２３）を提供することができる。Ｃｕ（Ｉ）触媒条件（例えば、ヨウ化第一銅）下、化合物（２３）を化合物（１３）によりＮ−アリール化して、化合物（２４）（ここで、化合物（２４）のＺ及びＲ１は、化合物（１３）のＺ及びＲと同じものとして定義される）を与えることができる。化合物（２４）のアルデヒドの還元、続くニトリル加水分解により、所望のカルボキサミド（２５）を与えることができる。
【０１１９】
【化１０】
0005859640.tif 000022
【０１２０】
アミノピラゾール部分を含有する５員芳香族カルボキサミドを調製する代替経路は、スキーム７に記載されている。市販の化合物（１５）を、文献の手順（WO2005/005414）に従って、対応するヨウ化物（２６）に変換することができる。文献の手順（WO2005/005414）に従って、ＳＥＭ−Ｃｌでの（２６）のＮＨ基の保護により、化合物（２７）を与えることができる。パラジウム触媒（例えば、ビス（トリ−tert−ブチルホスフィン）パラジウム（０））の存在下、化合物（２７）をアリールアミンと反応させて、Ｎ−アリール化生成物（２８）を与えることができ、ここで、アリール基は、芳香族複素環部分であることができ、そしてアリール基は、ジアルキルアミノカルボニル、アミノアルキル、複素環式アルキル、メチルスルホニル、モノ−又はジ−ヒドロキシ置換アルキル基で置換されていることができる。（２８）のＳＥＭ基の脱保護は、酸性条件（例えば、希塩酸）下、又は塩基性条件（例えば、フッ化テトラブチルアンモニウム）下で達成して、化合物（２９）を与えることができる。Ｃｕ（II）触媒（例えば、酢酸銅）の存在下、トリフルオロホウ酸カリウム塩（１６）での化合物（２９）の処理により、化合物（３０）を提供することができ、ここで、化合物（１６）のＲ基及びＲ１基は、スキーム５に記載のように定義されている。化合物（３０）のシアノ基の加水分解により、所望のカルボキサミド（３１）を与えることができる。
【０１２１】
【化１１】
0005859640.tif 000023
【０１２２】
スキーム７で、（３０）への（２９）の変換において、Ｎ−アリール化生成物の所望の位置異性体を混合位置異性体の精製により得ることができる。
【０１２３】
代替的に、スキーム８に従って、所望のアミノピラゾール誘導体を調製することができる。ヨウ化第一銅の存在下、化合物（３２）は、Ｒ１−置換２，６−ジブロモベンゼンを化合物（１３）で処理することにより得ることができる。パラジウム触媒条件下、化合物（３２）での市販ヒドラゾン（３３）のＮ−アリール化、続く、酸性条件下での加水分解により、所望のヒドラジン（３４）を与えることができる。市販の化合物（３５）での化合物（３４）の処理を、同様の文献の手順（Journal of Organic Chemistry 2005, 70, 9222）を使用することにより達成して、所望のアミノピラゾール（３６）を与えることができる。スキーム５で化合物（１８）の調製において記載されているように、化合物（３６）は、アリールハライドでＮ−アリール化することができる。化合物（３０）のニトリル加水分解により、所望のカルボキサミド（３１）を与えることができる。
【０１２４】
【化１２】
0005859640.tif 000024
【０１２５】
必要なホウ酸アリール（２）、アリールボロン酸（８）及び中間体（６）の調製は、スキーム９に記載されている。ヨウ化第一銅の存在下、化合物（３７）を化合物（１３）で置換して、Ｎ−アリール化生成物（３８）を与えることができる。穏やかな塩基性条件下、（３８）の加水分解により、所望のヒドロキシル誘導体（６）を与えることができる。（２）への（３８）の変換は、パラジウム触媒条件下、ビス（ピナコラト）ボランを使用することにより達成することができる。ホウ酸（２）の加水分解により、ボロン酸（８）を導くことができる。
【０１２６】
【化１３】
0005859640.tif 000025
【０１２７】
最後に、必要なトリフルオロホウ酸カリウム塩（１６）の調製は、スキーム１０に記載されている。ヨウ化第一銅の存在下、アリールブロミド（３９）での化合物（１３）のＮ−アリール化により、化合物（４０）（ここで、Ｒは、一置換又は二置換であることができる)を与えることができる。（４１）への（４０）の変換は、パラジウム触媒の存在下、ビス（ピナコラト）ボランを使用することにより達成することができる。文献の手順（Tetrahedron Letters 2005, 46, 7899）に従って、ホウ酸ピナコリルエステル（４１）を、トリフルオロホウ酸（１６）の対応する塩に変換することができる。
【０１２８】
医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、多種多様な経口投与剤形及び担体で処方しうる。経口投与は、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形態で行うことができる。本発明の化合物は、他の投与経路の中でも、持続的（静脈内点滴）局所非経口的、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（透過促進剤を含みうる）、舌下、経鼻、吸入及び坐薬投与を含む他の投与経路により投与されたときに、有効である。好ましい投与様式は、一般に、苦痛の度合い及び活性成分に対する患者の反応に応じて調節することができる、好都合な一日投与レジメンを使用する経口投与である。
【０１２９】
本発明の化合物、ならびにそれらの薬学的に使用しうる塩は、１種以上の従来の賦形剤、担体、又は希釈剤と共に、医薬組成物の形態及び単位投薬形態にしてもよい。医薬組成物及び単位投薬形態は、追加の活性化合物又は成分を伴うか又は伴わない、従来の割合の従来の成分を含むものであってよく、そして単位投薬形態は、利用すべき所期の１日用量範囲に見合う、任意の好適な有効量の活性成分を含んでもよい。医薬組成物は、経口使用のために、錠剤又は充填カプセル剤などの固体として、半固体として、粉末として、徐放製剤として、又は液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、又は充填カプセル剤などの液体として；あるいは直腸内又は膣内投与用の坐剤の剤形で；あるいは非経口使用のために無菌注射剤の剤形で利用してもよい。典型的な製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物（w/w）を含む。「製剤」又は「投与剤形」という用語は、活性化合物の固体及び液体製剤の両方を含むことが意図されており、当業者は、活性成分が、標的臓器又は組織、及び所望の用量及び薬物動態パラメーターに応じて、異なる製剤として存在することができることを理解するであろう。
【０１３０】
本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、一般的に安全で、非毒性であり、生物学的にも、それ以外でも望ましくないものでない、医薬組成物の調製に有用である化合物を指し、獣医学的使用ならびにヒトに対する薬学的使用を許容しうる賦形剤を含む。本発明の化合物は単独で投与することができるが、一般的には、意図した投与経路及び標準的な製薬法に関して選択された１種以上の好適な医薬賦形剤、希釈剤又は担体と混合して投与される。
【０１３１】
「薬学的に許容しうる」とは、一般的に安全で、非毒性であり、生物学的にも、それ以外でも望ましくないものでない、医薬組成物の調製に有用であるものを意味し、そして獣医学用ならびにヒトに対する薬学的使用を許容しうるものを含む。
【０１３２】
活性成分の「薬学的に許容しうる塩」の形態はまた、まず非塩形態においては存在しなかった望ましい薬物動態学的特性を活性成分に付与し、そして身体におけるその治療活性の点で活性成分の薬力学に良い影響を与えることさえある。化合物の「薬学的に許容しうる塩」という語句は、薬学的に許容することができ、かつ親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。そのような塩には：（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸で形成される酸付加塩；又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸で形成される酸付加塩；あるいは（２）親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオンもしくはアルミニウムイオンにより置換されているか；又はエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基と配位結合するかのいずれかの場合に形成される塩が挙げられる。
【０１３３】
固体形態の製剤には、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤及び分散性顆粒剤が含まれる。固体担体は、希釈剤、風味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩解剤又はカプセル化材料としても作用しうる１種以上の物質であってよい。粉末剤では、担体は、一般に、微粉化した活性成分との混合物である微粉化した固体である。錠剤では、活性成分は、一般に、必要な結合能力を有する担体と好適な割合で混合され、所望の形状及び大きさに成形される。好適な担体には、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ロウ、カカオバターなどが含まれるが、これらに限定されない。固体形態の製剤は、活性成分に加えて、着色剤、風味剤、安定剤、緩衝剤、人工及び天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有してもよい。
【０１３４】
液体製剤もまた経口投与に適しており、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水性液剤、水性懸濁剤を含む液体製剤が含まれる。これらには、使用の直前に液体形態の製剤に変換されることが意図される固体形態の製剤が含まれる。乳剤は、溶液、例えば、プロピレングリコール水溶液で調製してもよく、あるいはレシチン、ソルビタンモノオレアート又はアカシアなどの乳化剤を含有してもよい。水性液剤は、活性成分を水に溶解し、好適な着色剤、風味剤、安定剤及び増粘剤を加えることにより調製することができる。水性懸濁剤は、微粉化した活性成分を、天然又は合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他の周知の懸濁化剤などの粘性材料と共に水に分散することにより調製することができる。
【０１３５】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例としてはボーラス注入又は持続注入による）のために処方してもよく、アンプル、充填済注射器（pre-filled syringes）、小量注入容器に単位用量形態で、又は防腐剤を添加した複数回投与用容器中に存在してもよい。組成物は、油性又は水性溶剤中の懸濁剤、液剤又は乳剤、例えばポリエチレングリコール水溶液中の液剤のような形態をとってもよい。油性又は非水性担体、希釈剤、溶媒又は溶剤の例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射用有機エステル類（例えば、オレイン酸エチル）が含まれ、そして防腐剤、湿潤剤、乳化剤もしくは懸濁化剤、安定剤及び／又は分散剤のような配合剤を含有してもよい。代替的には、活性成分は、好適な溶剤、例えば滅菌した、発熱物質を含まない水を用いて使用前に構成されるための、滅菌固体の無菌分離によるか又は溶液から凍結乾燥することにより得られる粉末形態であってもよい。
【０１３６】
本発明の化合物は、軟膏、クリーム剤、又はローション剤として、又は経皮貼布として表皮に局所投与するために処方してもよい。軟膏及びクリーム剤は、例えば、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加した水性又は油性基剤と共に処方してもよい。ローション剤は水性又は油性基剤と共に処方してもよく、一般に、１つ以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、又は着色剤も含む。口腔内の局所投与に好適な製剤には、風味付けした基剤、通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性化剤を含むロゼンジ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアのような不活性基剤中に活性成分を含むパステル剤；ならびに好適な液体担体中に活性成分を含む洗口剤が含まれる。
【０１３７】
本発明の化合物は坐剤としての投与のために処方してもよい。脂肪酸グリセリド又はカカオバターの混合物のような低融点ロウを最初に溶融し、活性化合物を、例えば撹拌により均質に分散する。次に均質溶融混合物を、都合のよい大きさの成形型に注いで、放冷及び固化させる。
【０１３８】
本発明の化合物は膣内投与用に処方してもよい。活性成分に加えてそのような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレーが適切であることが、当技術分野で公知である。
【０１３９】
本発明の化合物は、経鼻投与用に処方してもよい。液剤又は懸濁剤は、例えば点滴器、ピペット又はスプレーのような従来の手段により直接鼻腔に塗布する。製剤は単回又は複数回投与形態で提供しうる。点滴器又はピペットの後者の場合、これは、適切な所定量の液剤又は懸濁剤を患者が投与することで達成しうる。スプレーの場合、これは、例えば計量噴霧スプレーポンプにより達成しうる。
【０１４０】
本発明の化合物は、特に、鼻内投与を含む、気道へのエアゾール投与用に処方してもよい。化合物は、一般に、例えば５ミクロン以下のオーダーの小さな粒径を有する。このような粒径は、例えば微粉化など、当技術分野で公知の手段により得ることができる。活性成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、もしくはジクロロテトラフルオロエタン、又は二酸化炭素、あるいは他の好適なガスのような好適な噴霧剤を用いた加圧パック内で提供される。エアゾールはまた、好都合には、レシチンなどの界面活性剤を含有しうる。薬物の用量は、計量弁により調節されうる。代替的には、活性成分は、乾燥粉末、例えば、乳糖、デンプン、デンプン誘導体、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）のような好適な粉末基剤中の化合物の粉末混合物の形態で提供されうる。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセルもしくはカートリッジ、又はブリスターパックの単位用量形態で存在してもよく、これから粉末剤が吸入器により投与されうる。
【０１４１】
所望であれば、製剤は、活性成分の徐放又は制御放出投与に適合するように、腸溶コーティングを用いて調製することができる。例えば、本発明の化合物は、経皮又は皮下薬物送達装置内に処方することができる。これらの送達系は、化合物の徐放が必要であり、患者の治療レジメンに対するコンプライアンスが重要である場合に有益である。経皮送達系における化合物は、多くの場合、皮膚付着固体支持体に付着させる。目的の化合物はまた、浸透向上剤、例えばAzone（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わせることができる。徐放出送達系は、手術又は注入により皮下層に皮下的に挿入される。皮下インプラントは、脂溶性膜、例えばシリコーンゴム、又は生物分解性ポリマー、例えばポリ乳酸中に化合物を封入する。
【０１４２】
医薬担体、希釈剤及び賦形剤を伴った適切な製剤は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載されている。熟練した製剤科学者は、本発明の組成物を不安定にしたり、あるいはその治療活性を損なうことなく、特定の投与経路のための多数の製剤を提供するために、本明細書の教示の範囲内で製剤を変更しうる。
【０１４３】
本発明の化合物を水又は他の溶剤中でより可溶性にするためのその変更は、例えば、わずかな変更（塩形成、エステル化等）により容易に達成することができ、それは十分に、当技術分野における通常の技術の範囲内である。また、患者における最大限の有益な効果のために本発明の化合物の薬物動態を管理する目的で、特定の化合物の投与経路及び投薬レジメンを変更することもまた、十分に、当技術分野における通常の技術の範囲内である。
【０１４４】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、個体における疾患の症状を軽減するために必要な量を意味する。用量は、それぞれの特定の症例における個別の要件に適合される。用量は、治療される疾患の重篤度、患者の年齢及び身体全体の健康状態、患者が治療を受けている他の医薬、投与経路及び形態、ならびに関与する医師の好み及び経験のような多数の要因に応じて広い範囲で変化させることができる。経口投与では、１日あたり約０．０１〜約１０００mg／kg体重の１日投与量が、単独療法及び／又は併用療法で適切である。好ましい１日投与量は、１日あたり、約０．１〜約５００mg／kg体重、より好ましくは０．１〜約１００mg／kg体重、最も好ましくは１．０〜約１０mg／kg体重である。したがって、７０kgの人に対する投与では、投与量範囲は、１日あたり約７mg〜０．７ｇであろう。１日投与量は、単回投与として又は分割投与で、典型的には１日あたり１〜５回投与で投与することができる。一般に、処置は、化合物の最適用量未満の少量の投与量で始められる。その後、投与量は、個別の患者に最適な効果が達成されるまで少量ずつ増加される。本明細書に記載されている疾患を処置する通常の技術を有する当業者は、過度の実験を行うことなく、個人的な知識、経験及び本出願の開示に拠り、所与の疾患及び患者のために、治療有効量の本発明の化合物を確認することが可能となるであろう。
【０１４５】
医薬製剤は、好ましくは単位投薬形態である。そのような形態では、製剤は、適量の活性成分を含有する単位用量に細分化される。単位投薬形態は、パッケージ製剤であることができ、そのパッケージは、パケット錠剤、カプセル剤及びバイアル又はアンプル中の粉末剤などの製剤の別個の分量を含有する。また、単位投薬形態は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、又はロゼンジ剤自体であることができるか、あるいはそれはこれら任意のものの適切な数のパッケージ形態であることができる。
【０１４６】
適応症及び処置方法
【化１４】
0005859640.tif 000026
一般式（Ｉ）の化合物は、ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）を阻害する。上流のキナーゼによるＢｔｋの活性化により、ホスホリパーゼ−Ｃγの活性化がもたらされ、それが次に炎症性媒介物質の放出を刺激する。１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イルの側鎖を含む、一般式（Ｉ）の化合物は、他の側鎖を有する類似体と比較して、予想外に増強した阻害活性を示す。とりわけ、不飽和側鎖上のフッ素置換により、ヒトの全血中の効能において予想外のおよそ５〜１０倍の増加が生じる。フェニル環上のヒドロキシメチル置換はさらに、その位置に別の置換を有する類似体と比較して、予想外に増加した効能を提供する。式（Ｉ）の化合物は、関節炎ならびに他の抗炎症性及び自己免疫性疾患の処置に有用である。したがって、式（Ｉ）による化合物は、関節炎の処置に有用である。式（Ｉ）の化合物は、細胞中のＢｔｋを阻害すること及びＢ細胞成長を調節することに有用である。本発明はさらに、薬学的に許容しうる担体、賦形剤又は希釈剤と混合した式（Ｉ）の化合物を含有する、医薬組成物を含む。
【０１４７】
本明細書に記載の第一級カルボキサミド誘導体は、キナーゼ阻害剤、特に、Ｂｔｋ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳動物において、Ｂｔｋ阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に対して応答性のある疾患を含む、キナーゼ阻害に対して応答性のある１つ以上の疾患を処置するのに有用であることができる。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、本発明の化合物のＢｔｋとの相互作用により、Ｂｔｋ活性の阻害、ひいてはこれらの化合物の薬学的有用性がもたらされると考えられる。したがって、本発明は、Ｂｔｋ活性の阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に対して応答性のある疾患を有する哺乳動物、例えば、ヒトの処置方法であって、かかる疾患を有する哺乳動物に、本明細書で提供される有効量の少なくとも１つの化学物質（chemical entity）を投与することを含む方法を包含する。有効濃度は、例えば、化合物の血液濃度をアッセイすることにより実験的に、あるいは生物学的利用能を計算することにより理論的に確定しえる。Ｂｔｋに加えて、影響を受け得る他のキナーゼには、他のチロシンキナーゼ及びセリン／トレオニンキナーゼが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４８】
キナーゼは、増殖、分化、及び死（アポトーシス）のような基本的な細胞過程を制御するシグナル伝達経路において注目に値する役割を果たす。異常なキナーゼ活性は、多発性癌、自己免疫性及び／又は炎症性疾患、ならびに急性炎症反応を含む広範な疾患に関与している。主要な細胞シグナル伝達経路におけるキナーゼの多面的な役割は、キナーゼ及びシグナル経路を標的とする新規な薬物を同定するための重要な機会を提供する。
【０１４９】
実施態様は、自己免疫性及び／又は炎症性疾患、あるいはＢｔｋ活性及び／又はＢ細胞増殖の阻害に対して応答性のある急性炎症性反応を有する患者の処置方法を包含する。
【０１５０】
本発明による化合物及び組成物を使用して影響を与えることができる自己免疫性及び／又は炎症性疾患には、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、シェーグレン（Sjogren）病、組織移植片拒絶、及び移植器官の超急性拒絶、喘息、全身性エリテマトーデス（及び関連する糸球体腎炎）、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、血管炎（ＡＮＣＡ関連及び他の血管炎）、自己免疫性溶血及び血小板減少状態、グッドパスチャー（Goodpasture）症候群（ならびに関連する糸球体腎炎及び肺出血）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血症性ショック、ならびに重症筋無力症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
本明細書に含まれるものは、本明細書で提供される少なくとも１つの化学物質を、抗炎症性薬剤と組み合わせて投与する処置方法である。抗炎症性薬剤には、ＮＳＡＩＤ、非特異的及びＣＯＸ−２特異的シクロオキシゲナーゼ酵素阻害剤、金化合物、コルチコステロイド、メトトレキサート、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）受容体アンタゴニスト、免疫抑制剤及びメトトレキサートが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５２】
ＮＳＡＩＤの例には、イブプロフェン、フルビプロフェン、ナプロキセン及びナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、ジクロフェナクナトリウムとミソプロストールの組み合わせ、スリンダック、オキサプロジン、ジフルニサル、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、ケトプロフェン、ナトリウムナブメトン、スルファサラジン、トルメチンナトリウム、及びヒドロキシクロロキンが含まれるが、これらに限定されない。ＮＳＡＩＤの例には、セレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ及び／又はエトリコキシブのようなＣＯＸ−２特異的阻害剤も含まれる。
【０１５３】
いくつかの実施態様において、抗炎症性薬剤は、サリチル酸塩である。サリチル酸塩には、アセチルサリチル酸又はアスピリン、サリチル酸ナトリウム、ならびにサリチル酸コリン及びサリチル酸マグネシウムが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５４】
抗炎症性薬剤はまた、コルチコステロイドであり得る。例えば、コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、又はプレドニゾンであり得る。
【０１５５】
更なる実施態様において、抗炎症性薬剤は、金チオリンゴ酸ナトリウム又はオーラノフィンのような金化合物である。
【０１５６】
本発明はまた、抗炎症性薬剤が、代謝阻害剤、例えば、メトトレキサートのようなジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、又はレフルノミドのようなジヒドロオロト酸脱水素酵素阻害剤である実施態様を包含する。
【０１５７】
本発明の他の実施態様は、少なくとも１つの抗炎症性化合物が、抗Ｃ５モノクローナル抗体（例えば、エクリズマブ又はパキセリズマブ）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体である、エタネルセプト、又はインフリキシマブである組み合わせに関する。
【０１５８】
本発明のさらに他の実施態様は、少なくとも１つの活性薬剤が、免疫抑制化合物、例えば、メトトレキサート、レフルノミド、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、及びミコフェノール酸モフェチルより選択される免疫抑制化合物である組み合わせに関する。
【０１５９】
ＢＴＫを発現するＢ細胞及びＢ細胞前駆体は、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含む）、毛様細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性及び急性骨髄性白血病ならびに慢性及び急性リンパ性白血病を含むが、これらに限定されないＢ細胞悪性腫瘍の病理に関与している。
【０１６０】
ＢＴＫは、Ｂ系列リンパ系細胞におけるＦａｓ／ＡＰＯ−１（ＣＤ−９５）死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の阻害剤であることが示されている。白血病／リンパ腫細胞の運命は、ＤＩＳＣにより活性化されるカスパーゼの相反するアポトーシス促進性効果とＢＴＫ及び／又はその基質を伴う上流の抗アポトーシス調節機構との間の均衡に存在しうる（Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656）。
【０１６１】
Ｂｔｋ阻害剤が化学増感剤として有用であり、そしてそれゆえ他の化学療法薬、特にアポトーシスを誘導する薬物と組み合わせる際に有用であることも発見されている。化学増感Ｂｔｋ阻害剤と組み合わせて使用することができる他の化学療法薬の例には、トポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン又はトポテカン）、トポイソメラーゼII阻害剤（例えば、ダウノマイシン及びエトポシド）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン及びＢＣＮＵ）、チューブリン指向剤（例えば、タキソール及びビンブラスチン）、及び生物学的薬剤（例えば、抗ＣＤ２０抗体のような抗体、ＩＤＥＣ８、免疫毒素、及びサイトカイン）が挙げられる。
【０１６２】
Ｂｔｋ活性は、第９及び第２２染色体の部分の転座によりもたらされるｂｃｒ−ａｂｌ融合遺伝子を発現するいくつかの白血病にも関連している。この異常は、一般に、慢性骨髄性白血病に認められる。Ｂｔｋは、ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼにより恒常的にリン酸化され、これが下流の生存シグナルを開始し、これがｂｃｒ−ａｂｌ細胞におけるアポトーシスを回避する（N. Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005201(11):1837-1852）。
【０１６３】
処置の方法
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１６４】
本出願は、炎症性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１６５】
本出願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１６６】
本出願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１６７】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１６８】
本出願は、炎症性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１６９】
本出願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７０】
本出願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７１】
本出願は、Ｂ細胞増殖を阻害するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７２】
本出願は、ＢｔＫ活性を阻害するための方法であって、Ｂｔｋ阻害剤化合物がＢｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて５０マイクロモル以下のＩＣ５０を示す、式（Ｉ）のいずれか一つのＢｔｋ阻害剤化合物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７３】
上記方法の一つの変法において、Ｂｔｋ阻害剤化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１００ナノモル以下のＩＣ５０を示す。
【０１７４】
上記方法の別の変法において、該化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１０ナノモル以下のＩＣ５０を示す。
【０１７５】
本出願は、炎症性病態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の抗炎症性化合物を、式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物と組み合わせて共投与することを含む、方法を提供する。
【０１７６】
本出願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の抗炎症性化合物を、式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物と組み合わせて共投与することを含む、方法を提供する。
【０１７７】
本出願は、リンパ腫又はＢＣＲ−ＡＢＬ１＋白血病細胞を処置するための方法であって、それを必要としている患者に治療有効量の式（Ｉ）のＢｔｋ阻害剤化合物を投与することによる、方法を提供する。
【実施例】
【０１７８】
略語
一般的に使用される略語には、以下が挙げられる：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、気圧（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−tert−ブチルピロカルボナート又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ＣＡＳ登録番号／Chemical Abstracts Registration Number（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ジエチルアゾジカルボキシラート（ＤＥＡＤ）、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ）、ジ−イソ−ブチルアルミニウムヒドリド（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ、Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソ−プロパノール（ＩＰＡ）、イソプロピルマグネシウムクロリド（ｉＰｒＭｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、��−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（II）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、酢酸パラジウム（II）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１’−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、sec−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフラート又はＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−又はトシル（Ｔｓ）、及びＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。接頭辞ノルマル（ｎ）、イソ−（ｉ−）、第二級（sec−）、第三級（tert−）及びネオを包含する従来の命名法は、アルキル部分と共に使用される場合、その慣用の意味を有する（J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979Pergamon Press, Oxford.）。
【０１７９】
一般条件
本発明の化合物は、当業者に公知の一般合成技術及び手順を利用することにより市販の出発物質を用い開始して調製することができる。以下の概説は、かかる化合物を調製するために好適な反応スキームである。さらなる例示は、特定の実施例に見出すことができる。
【０１８０】
調製例
４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド（中間体−１）
【化１５】
0005859640.tif 000027
ＤＣＭ １６mL中１−メチル−１Ｈ−イミダゾール（２ｇ、２４．４mmol）の溶液に、トリクロロアセチルクロリド４．４ｇを滴下し、得られた混合物を２５℃で６時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン３．４mLを撹拌しながら滴下した。溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＤＣＭ＝４／１）により精製して、２，２，２−トリクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタノン（３．１ｇ、収率５６％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.35 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.06 (s, 3H)。
【０１８１】
無水ＴＨＦ ２６mL中の２，２，２−トリクロロ−１−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタノン（１．５ｇ、６．６mmol）の溶液に、ＮＢＳ ２．３５ｇを−１０℃で加えた。得られた混合物を−１０℃で２時間、次に２５℃で１６時間撹拌した。溶液を蒸発させ、残留物をシリカゲルカラム（溶離剤としてＤＣＭ）により精製して、１−（−４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２，２−トリクロロエタノン（１．１８ｇ、収率５８％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.15 (s, 1H), 4.05 (s, 3H)。
【０１８２】
メタノール１０mL中の１−（−４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，２，２−トリクロロエタノン１．１８ｇの溶液に、ナトリウムメトキシド４２mgを加え、得られた混合物を２５℃で２０分間撹拌した。ＴＬＣは、反応の完了を示した。溶液を蒸発させ、ＤＣＭ ３０mLに再溶解し、水（１５mL×２）及びブライン（１５mL）で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。残留物をシリカゲルカラム（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝６０／１）により精製して、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸メチルエステル（０．５７５ｇ、収率６８％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.02 (s, 1H), 4.00 (s, 3H). 3.93 (s, 3H). LC-MS  C6H7BrN2O2 (m/e)の計算値217.97、実測値219及び221 [M+1]+
【０１８３】
ＭｅＯＨ中のアンモニアの飽和溶液に、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸メチルエステル１６５mgを加え、得られた混合物を２０℃で１６時間撹拌した。溶液を蒸発させて、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド（１５４mg、収率１００％）を得た。LC-MS C5H6BrN3O (m/e)の計算値202.97、実測値204 及び206 [M+1]+。
【０１８４】
２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸アミド（中間体−２）
【化１６】
0005859640.tif 000028
２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（５０mg）を、メタノール中の飽和アンモニアの溶液（４mL）に溶解した。反応溶液を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸アミド（４６mg、収率１００％）を黄色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.11 (s, 1H)。LC-MS C4H3BrN2OS (m/e)の計算値205.91、実測値207及び209 [M+1]+。
【０１８５】
４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（中間体−３）
【化１７】
0005859640.tif 000029
４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（１２２mg、０．６０mmol）、ＨＡＴＵ（２７４mg、０．７２mmol）及びＤＩＥＡ（１９４mg、１．５０mmol）を、ＤＭＦ（５mL）に溶解した。一晩、アンモニアガスを絶え間なく泡立て入れながら反応混合物を室温で撹拌した。反応混合物をＤＣＭ １００mLで希釈し、次に水（５０mL）で洗浄した。水層をＤＣＭ（２０mL×２）で抽出した。すべての有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル ６／１）により精製して、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（５６mg、収率４６％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.74 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H). LC-MS C6H7BrN2O (m/e)の計算値201.97、実測値203及び205 [M+1]+。
【０１８６】
酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体−４）
【化１８】
0005859640.tif 000030
四塩化炭素（３００mL）中の２，６−ジブロモトルエン（５５．５ｇ、２２２．１mmol）及びＮＢＳ（４３．５ｇ、２４４．３mmol）の溶液に、過酸化ベンゾイル（５．３７ｇ、２２．２mmol）を加えた。反応混合物を２０時間還流し、室温に冷まし、水（３００mL×３）及びブライン（３００mL）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発させて、１，３−ジブロモ−２−ブロモメチルベンゼンを黄色の粉末（７１ｇ）として得た。この物質を更に精製しないで次の工程で使用した。
【０１８７】
ＤＭＦ（３００mL）中の１，３−ジブロモ−２−ブロモメチルベンゼン（７１．３ｇ）の溶液に、酢酸ナトリウム（９１．７ｇ）を加え、得られた混合物を１０５℃で６時間撹拌した。混合物を冷まし、水（１５００mL）でクエンチし、酢酸エチル（１０００mL´２）で抽出した。合わせた有機層を水（１０００mL）及びブライン（１０００mL）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。残留物をシリカゲルカラム（２００〜３００メッシュ、石油エーテル／酢酸エチル ３０／１で溶離）により精製して、酢酸 ２，６−ジブロモベンジルエステルを黄色の油状物（５９．４２ｇ、収率８９％）として得た。1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.07 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.41 (s, 2H), 2.11 (s, 3H)。
【０１８８】
Ｎ２下、酢酸 ２，６−ジブロモベンジルエステル（３４．８８ｇ、１１３mmol）、６−tert−ブチル−２Ｈ−フタラジン−１−オン（４．５６ｇ、２２．５mmol）、Ｃｓ２ＣＯ３（１４．７２ｇ、４５mmol）、ＣｕＩ（６．４４ｇ、３３．８mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（２ｇ、２２．７mmol）を、ＤＭＦ（９２mL）に溶解した。反応混合物を１５０℃で４時間撹拌し、次に室温に冷まし、酢酸エチル（５００mL）で希釈し、水５００mLで洗浄した。水層を分離し、酢酸エチル（２００mL×２）で抽出した。合わせた有機層を水（３００mL×２）及びブライン（３００mL）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル ４／１）により精製して、酢酸 ２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンジルエステル（６．２ｇ、収率６４％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.91 - 7.87 (m, 1H), 7.72 (s, 2H), 7.41 - 7.35 (m, 2H), 5.17 (s, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.44 (s, 9H)。LC-MS C21H21BrN2O3 (m/e)の計算値428.07、実測値429 及び431 [M + 1]+。
【０１８９】
Ｎ２下、ＤＭＳＯ １６．７mL中の酢酸 ２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンジルエステル（１．４３ｇ、１０．７mmol）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．０３ｇ、４．０５mmol）、ＫＯＡｃ（０．９９ｇ、１０．１mmol）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．３ｇ、０．３６mmol）を、８０℃で１６時間撹拌した。混合物を室温に冷まし、酢酸エチル（１００mL）で希釈し、水１００mLで洗浄した。水層を酢酸エチル（５０mL×２）で抽出した。合わせた有機層を水（１００mL×２）及びブライン（１００mL）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル ２／１）により精製して、酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステルを、緑色を帯びた固体（１．４５ｇ、収率９１％）として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.39 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 6.4, 2.5 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 7.52-7.45 (m, 2H), 5.30 (s, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.33 (s, 12H)。LC-MS C27H33BN2O5(m/e)の計算値476.25、実測値477 [M + 1]+。
【０１９０】
酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体−５）
【化１９】
0005859640.tif 000031
Ｎ２下、酢酸 ２，６−ジブロモベンジルエステル（２４．７４ｇ、８０．３mmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（３．５４ｇ、１６．１mmol）、Ｃｓ２ＣＯ３（１０．４６ｇ、３２．１mmol）、ＣｕＩ（４．６１ｇ、２４．２mmol）及びＮ，Ｎ−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（１．４２ｇ、１６．１mmol）を、ＤＭＦ（７０mL）に溶解した。反応混合物を１５０℃で４時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷まし、酢酸エチル（２００mL）で希釈し、次に水２００mLを加えた。混合物を分離し、水層を酢酸エチル（２００mL×２）で抽出した。有機層を合わせ、水（２００mL）及びブライン（２００mL）で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル ４／１）により精製して、２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンジルエステル（３．２１ｇ、４５％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.17 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.50-7.45 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.34 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.42 (s, 9H)。LC-MS C21H20BrFN2O3(m/e)の計算値446.06、実測値447及び449 [M+1]+。
【０１９１】
Ｎ２下、２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンジルエステル（１．５１ｇ、３．３９mmol）、ビスピナコラトジボロン（１．０３ｇ、４．０６mmol）、ＫＯＡｃ（０．９９８ｇ、１０．７mmol）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．２７７ｇ、０．３３９mmol）を、乾燥ＤＭＳＯ（８０mL）に溶解した。反応混合物を８０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００mL）で希釈し、水（２００mL×２）で洗浄した。水層を酢酸エチル（１００mL×２）で抽出した。合わせた有機層を水（２００mL×２）及びブライン（２００mL）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を濾過し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル ２／１）により精製して、酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（１．２６ｇ、７５％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.17 (d, J = 2.6, 2.4 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 6.9, 2.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.44 (m, 4H), 6.31 (br s, 2H), 1.90 (s, 3H), 1.42 (s, 9H), 1.34 (s, 12H)。LC-MS C27H32BFN2O5(m/e)の計算値494.24、実測値495 [M+1]+。
【０１９２】
６−tert−ブチル−２−（３−クロロ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−８−ヒドロキシメチル−２Ｈ−フタラジン−１−オン（中間体−６）
【化２０】
0005859640.tif 000032
１００mL容量の丸底フラスコに、６−tert−ブチル−２−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（６７１mg、１．８６mmol、US2010/0222325に従って調製した）、シアン化ナトリウム（３６５mg、７．４４mmol）及びＤＭＳＯ（１０mL）を加えて、明黄色の懸濁液を得た。混合物を８０℃で１６時間撹拌した。さらなるシアン化ナトリウム（１８２mg、３．７２mmol）を加え、混合物を８０℃で６０時間さらに撹拌した。混合物を室温に冷まし、酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、残留物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２２０ｇ、ヘプタン中の０％〜４０％アセトン）により精製して、７−tert−ブチル−３−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−４−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−５−カルボニトリルを黄色の固体（３９０mg、収率５７％）として得た。
【０１９３】
２５０mL容量の丸底フラスコ中に、７−tert−ブチル−３−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−４−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−５−カルボニトリル（３９０mg、１．０６mmol）及びトルエン（８mL）を加えた。溶液を氷浴下で冷却し、トルエン中のＤＩＢＡＨ（２．３３mL、２．３３mmol）を加えた。混合物を氷浴下で１時間撹拌し、次にジクロロメタンで希釈し、１M 塩酸でクエンチした。混合物を１０分間撹拌し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、粗物質をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１２０ｇ、ヘプタン中の０％〜３５％酢酸エチル）により精製して、７−tert−ブチル−３−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−４−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−５−カルボアルデヒド（１４７mg、３７．４％）を明黄色の粉末として得た。
【０１９４】
上記７−tert−ブチル−３−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−４−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−５−カルボアルデヒド（１４７mg、０．３９６mmol）を、ジクロロエタン（５mL）及びメタノール（５mL）と合わせて、黄色の溶液を得た。水素化ホウ素ナトリウム（２７mg、０．７１４mmol）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を１N 塩酸で処理し、ジクロロメタンで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒の蒸発の後、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル４０ｇ、ヘプタン中の０％〜４０％酢酸エチル）により精製して、６−tert−ブチル−２−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−８−（ヒドロキシメチル）フタラジン−１（２Ｈ）−オンを明黄色の固体（３９mg、２６．４％）として得た。LC/MS C20H21ClN2O3(m/e)の計算値372.12、実測値371.1 (M-H, ES-)。
【０１９５】
実施例１
５−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−フラン−２−カルボン酸アミド
【化２１】
0005859640.tif 000033
【０１９６】
マイクロ波用のフラスコ中で、ジオキサン（７mL）及び水（０．７mL）中の５−ブロモフラン−２−カルボキサミド（２００mg、１．０５mmol）、酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体−５、１．０４ｇ、２．１１mmol）、Ｘ−ＰＨＯＳ（５０．２mg、０．１０５mmol）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４８．２mg、０．０５２mmol）及びリン酸カリウム（８９４mg、４．２１mmol）の懸濁液を、アルゴンで３〜５分間脱気した。混合物を１２５℃で３０分間マイクロ波中に置いた。水を加え、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。粗物質をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の酢酸エチル、１００％酢酸エチルまでの勾配）により精製して、酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（５−カルバモイル−フラン−２−イル）−ベンジルエステル（７８．５mg、１６％）を得た。
【０１９７】
メタノール（２mL）中の上記酢酸（７８．５mg、０．１６４mmol）の溶液に、炭酸カリウム（４．５mg、０．０３３mmol）を加えた。混合物をＮ２下、５時間撹拌した。ジクロロメタンを加え、混合物を水で洗浄した。水相をジクロロメタンで１回抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。酢酸エチルを加え、懸濁液を５分間撹拌し、固体を濾別し、乾燥させて、５−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−フラン−２−カルボン酸アミド（４２mg、５９％）を得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.38 (s, 9 H) 4.33 - 4.53 (m, 2 H) 4.66 - 4.92 (m, 1 H) 7.05 (d, J=3.78 Hz, 1 H) 7.20 (d, J=3.40 Hz, 1 H) 7.29 - 7.47 (m, 2 H) 7.50 - 7.63 (m, 1 H) 7.75 (dd, J=13.41, 1.70 Hz, 1 H) 7.81 - 8.03 (m, 3 H) 8.52 (d, J=2.64 Hz, 1 H); LC/MS C24H22FN3O4(m/e)の計算値435.16、実測値458 [M+Na]+。
【０１９８】
実施例２
４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−フラン−２−カルボン酸アミド
【化２２】
0005859640.tif 000034
【０１９９】
マイクロ波用のフラスコ中で、ジオキサン（５mL）及び水（０．５mL）中の４−ブロモフラン−２−カルボキサミド（１５０mg、０．７９mmol）、２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンジルアセタート（中間体５、４６８mg、０．９５mmol）、Ｘ−ＰＨＯＳ（３７．６mg、０．０７９mmol）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３６．１mg、０．０４０mmol）及びリン酸カリウム（６７０mg、３．１６mmol）の懸濁液を、アルゴンを５分間泡立て入れながら脱気した。混合物を１２５℃で３０分間マイクロ波中に置いた。水を加え、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固した。粗物質をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の酢酸エチル、１００％ＥｔＯＡｃまでの直線勾配）により精製して、２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−（５−カルバモイルフラン−３−イル）ベンジルアセタート（２７３mg、０．５７２mmol、収率７２．４％）を得た。
【０２００】
メタノール（５mL）中の上記アセタート（２６２．６mg、０．５５mmol）の溶液に、炭酸カリウム（１５．２mg、０．１１mmol）を加えた。混合物をＮ２下、３．５時間撹拌した。ジクロロメタン（５０mL）を加え、混合物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮乾固した。粗物質をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の酢酸エチル、１００％ＥｔＯＡｃまでの直線勾配）により精製して、４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−フラン−２−カルボン酸アミド（１９２mg、８０％）を得た。1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.36 - 1.62 (m, 9 H) 4.40 (br. s., 2 H) 7.35 (dd, J=6.80, 2.64 Hz, 1 H) 7.44 - 7.64 (m, 5 H) 8.14 (d, J=1.13 Hz, 4 H) 8.29 (d, J=2.64 Hz, 1 H); LC/MS C24H22FN3O4 (m/e)の計算値435.16、実測値 436 [M+H]+。
【０２０１】
実施例３
４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド
【化２３】
0005859640.tif 000035
この化合物を、実施例１に記載した同じ方法で、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド（中間体−１）及び酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体４）を使用することにより調製した。所望の化合物を２工程で調製した（収率３３％）。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.46 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.95 - 7.91 (m, 2H), 7.77 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.54 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 4.42 (br s, 2H), 4.14 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)。LC-MS C24H25N5O3 (m/e)の計算値431.20、実測値432 [M+1]+。
【０２０２】
実施例４
２−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−チアゾール−４−カルボン酸アミド
【化２４】
0005859640.tif 000036
この化合物を、実施例１に記載した同じ方法で、２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸アミド（中間体−２）及び酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体４）を使用することにより調製した。所望の化合物を２工程で調製した（収率２５％）。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 8.56 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.05-8.00 (m, 2H), 7.82 (dd, J = 1.8, 7.2 Hz, 1H), 7.61-7.58 (m, 2H), 4.54 - 4.45 (m, 2H), 1.41 (s, 9H). LC-MS C23H22N4O3S (m/e)の計算値434.14、実測値435 [M+1]+。
【０２０３】
実施例５
４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化２５】
0005859640.tif 000037
この化合物を、実施例１に記載した同じ方法で、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（中間体−３）及び酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体４）を使用することにより調製した。所望の化合物を２工程で調製した（収率２０％）。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.54 (s, 1H), 8.25 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 1.8, 8.4 Hz, 1H), 7.48 - 7.45 (m, 2H), 7.28 - 7.23 (m, 2H), 7.08 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 1.41 (s, 9H)。LC-MS C25H26N4O3(m/e)の計算値430.20、実測値431 [M+1]+。
【０２０４】
実施例６
２−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−チアゾール−４−カルボン酸アミド
【化２６】
0005859640.tif 000038
この化合物を、実施例１に記載した同じ方法で、２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸アミド（中間体−２）及び酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体５）を使用することにより調製した。所望の化合物を２工程で調製した（収率１０％）。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.94 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.88 - 7.79 (m, 2H), 7.66 - 7.63 (m, 2H), 4.61 - 4.52 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。LC-MS C23H21FN4O3S の計算値452.13、実測値453 [M+1]+。
【０２０５】
実施例７
４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチルフェニル］−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド
【化２７】
0005859640.tif 000039
この化合物を、実施例１に記載した同じ方法で、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボン酸アミド（中間体−１）及び酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体５）を使用することにより調製した。所望の化合物を２工程で調製した（収率１２％）。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.50 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.87 - 7.71 (m, 5H), 7.50 - 7.44 (m, 2H), 7.30 (dd, J = 1.2, 7.8 Hz, 1H), 4.38 - 4.33 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 1.39 (s, 9H)。LC-MS C24H24FN5O3(m/e)の計算値449.19、実測値450 [M+1]+。
【０２０６】
実施例８
４−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化２８】
0005859640.tif 000040
この化合物を、実施例１に記載した同じ方法で、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（中間体−３）及び酢酸 ２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体５）を使用することにより調製した。所望の化合物を２工程で調製した（収率６０％）。1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 8.49 - 8.48 (m,1H), 7.86 (s, 1H), 7.73 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 7.44 - 7.42 (m, 3H), 7.25 - 7.23 (m, 2H), 7.06 (br s, 2H), 4.56 (s, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)。LC-MS C25H25FN4O3(m/e)の計算値448.19、実測値449.1 [M+H]+。
【０２０７】
実施例９
４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化２９】
0005859640.tif 000041
工程１：  Ｎ２下、ジオキサン（１５mL）及び水（３mL）中の酢酸 ２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体−４に記載されている調製、３００mg、０．６９９mmol）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピロール−１，２−ジカルボン酸 １−tert−ブチルエステル ２−メチルエステル（２７０mg、０．７６９mmol）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１７１mg、０．２１mmol）及びＫ２ＣＯ３（２８９mg、２．１９mmol）の混合物を、１００℃で４時間加熱した。混合物を濃縮乾固した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル（２／１の比）で溶離）により精製して、４−［２−アセトキシメチル−３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−ピロール−１，２−ジカルボン酸 １−tert−ブチルエステル ２−メチルエステル（１６０mg、収率４０％）を得た。LC-MS C32H35N3O7(m/e)の計算値573.25、実測値473 [M-Boc+1]+。
【０２０８】
工程２：  ジオキサン５mL及び水５mL中の４−［２−アセトキシメチル−３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−ピロール−１，２−ジカルボン酸 １−tert−ブチルエステル ２−メチルエステル（１３６mg、０．２４mmol）の溶液に、ＮａＯＨ（４０mg）を加え、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残留物を水８mLに溶解し、１N ＨＣｌでｐＨ３〜４に酸性化した。混合物を酢酸エチル（５mL×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（９９mg、収率１００％）を得た。LC-MS C24H23N3O4(m/e)の計算値417.17、実測値418 [M+1]+。
【０２０９】
工程３：  ＨＡＴＵ（１０４mg、０．２７mmol）及びトリエチルアミン（１mL）を、乾燥ＴＨＦ（１５mL）中の４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（９５mg、０．２３mmol）の溶液に加えた。アンモニアガスを溶液に５時間泡立て入れた。混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝２：１）により精製して、４−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（２５mg、収率２６％）を白色の固体として得た。 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.43 (s, 1H), 8.28 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.98 - 7.92 (m, 2H), 7.52 - 7.39 (m, 2H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 7.03 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.38 (s, 2H), 1.38 (s, 9H). LC-MS C24H24N4O3(m/e)の計算値416.18、実測値417 [M+1]+。
【０２１０】
実施例１０
５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化３０】
0005859640.tif 000042
【０２１１】
工程１：  Ｎ２下、ジオキサン（１５mL）及び水（３mL）中の酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体４の調製に記載されている、３００mg、０．６３mmol）、５−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１５０mg、０．６９mmol）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１５０mg、０．１９mmol）及びＫ２ＣＯ３（２６１mg、１．９mmol）の混合物を、１００℃で３時間加熱した。混合物を濃縮乾固した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル（８：１〜５：１の比）で溶離）により精製して、５−［２−アセトキシメチル−３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（２３７mg、収率７７％）を黄色の液体として得た。LC-MS C28H29N3O5 (m/e)の計算値487.21、実測値 997 [2M+Na]+。
【０２１２】
工程２：  飽和ＮＨ３／ＭｅＯＨ（２０mL）中の５−［２−アセトキシメチル−３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（２３７mg、０．４８６mmol）の混合物を、室温で４８時間撹拌した。混合物を蒸発乾固して、５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１５０mg、収率６８％）を黄色の固体として得た。LC-MS C26H27N3O4(m/e)の計算値445.20、実測値913 [2M+Na]+。
【０２１３】
工程３：  水（５mL）を、ジオキサン（５mL）中の５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１５０mg、０．３３７mmol）の溶液に加えた。混合物を５分間撹拌し、ＮａＯＨ（４０mg）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残留物をジエチルエーテル（５mL×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（１１３mg、収率７８％）を黄色の固体として得た。LC-MS C25H25N3O4(m/e)の計算値431.18、実測値885 [2M+23]+。
【０２１４】
工程４：  ＨＡＴＵ（１１０mg、０．２８８mmol）を、乾燥ＴＨＦ（１５mL）中の５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（１１３mg、０．２６２mmol）の溶液に加えた。アンモニアガスを溶液に泡立て入れた。混合物をＮＨ３（ｇ）下、室温で１６時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、５−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（２５mg、収率２２％）を白色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.42 (s, 1H), 8.27 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.02 - 7.90 (m, 2H), 7.54 - 7.35 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 2H), 7.02 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)。LC-MS C25H26N4O3(m/e)の計算値430.20、実測値883 [2M+Na]+。
【０２１５】
実施例１１
２−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−４−メチル−オキサゾール−５−カルボン酸アミド
【化３１】
0005859640.tif 000043
【０２１６】
工程１：  Ｎ２下、酢酸 ２−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジルエステル（中間体−４に記載された調製、７２mg、０．１５３mmol）、２−ブロモ−４−メチル−オキサゾール−５−カルボン酸エチルエステル（３４mg、０．１４６mmol）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３６mg、０．０４３８mmol）及びＫ２ＣＯ３（６１mg、０．４３８mmol）を、ジオキサン／Ｈ２Ｏ（５：１、６mL）に溶解した。反応混合物を１００℃で約１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２：１）により精製して、２−［２−アセトキシメチル−３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−オキサゾール−５−カルボン酸エチルエステルを得た。
【０２１７】
工程２：  上記２−［２−アセトキシメチル−３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−４−メチル−オキサゾール−５−カルボン酸エチルエステルを、ＮＨ３／ＭｅＯＨ １０mLに溶解した。反応物を室温で２日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１：１）により精製して、２−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−４−メチル−オキサゾール−５−カルボン酸アミド（４７mg、２工程を経て収率６８％）を白色の固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.57 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.20 (dd, J = 2.1, 8.4 Hz, 1H), 8.06 - 8.00 (m, 2H), 7.66 - 7.58 (m, 2H), 4.73 - 4.57 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.41 (s, 9H)。LC-MS C24H24N4O4(m/e)の計算値432.18、実測値433 [M+H]+。
【０２１８】
実施例１２
４−［３−（６−シクロプロピル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−ヒドロキシルメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化３２】
0005859640.tif 000044
【０２１９】
工程１：  １−（４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２，２，２−トリフルオロエタノン（５．０ｇ、１９．５mmol）を、水酸化アンモニウム（７２．５mL、２９．４％水溶液）に溶解し、室温で４５分間撹拌した。溶液を２N ＨＣｌでｐＨ＝７にした。固体の沈殿物を濾過により回収した。固体を水で洗浄し、減圧下、５０℃で一晩乾燥させた。水層をジクロロメタンで２回抽出した。有機相を減圧下で濃縮して、さらなる固体を得た。濾過及び抽出から得た固体を合わせて、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（３．２ｇ、８１％）を白色の固体として得た。LC/MS-ESI 実測値 [M+H]+ 203及び205。
【０２２０】
工程２：  ２５mL容量のマイクロ波用管に、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．５ｇ、９．８５mmol）、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（１．０ｇ、４．９３mmol）及び酢酸カリウム（１．４５ｇ、１４．８mmol）を加えた。ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（１４２mg、２４６μmol）を、続いてＸ−ｐｈｏｓ（２３５mg、４９３μmol）を加えた。１，４−ジオキサン（１０．０mL）を加えて、黒色の溶液を得た。管を密閉し、混合物をアルゴンで１０分間パージした。反応混合物を６５℃に加熱し、１８時間撹拌した。粗反応混合物をＨ２Ｏ １００mLに注ぎ、酢酸エチル（４×１００mL）で抽出した。有機相をブラインで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１５０ｇ、５％〜５０％酢酸エチル／ヘキサンの勾配）により精製した。減圧下で濃縮して、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（９７３mg、７９％）を明黄色の泡状物として得た。LC/MS-ESI 実測値 [M+H]+ 251。
【０２２１】
工程３：  １０mL容量のマイクロ波用バイアルに、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（１００mg、４００μmol、当量：１．００）、２−（３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−８−フルオロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（１３７mg、４００μmol、当量：１．００）、Ｘ−ｐｈｏｓ（１９．１mg、４０．０μmol、当量：０．１）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１８．３mg、２０．０μmol、当量：０．０５）、及び第三リン酸カリウム（２１２mg、１．００mmol、当量：２．５０）を加え、続いて１，４−ジオキサン（５mL）及び水（０．５mL）を加えて、暗褐色の懸濁液を得た。アルゴンで１０分間パージしている間、反応混合物を撹拌した。溶液を１２５℃でマイクロ波中３０分間加熱した。反応混合物を室温に冷ました。反応混合物をジクロロメタン５０mLで希釈し、水で抽出した。水溶液を減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％〜５０％［６０：１０：１ ジクロロメタン：メタノール：水酸化アンモニウム水溶液］／ジクロロメタンの勾配）により精製して、４−［３−（６−シクロプロピル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−ヒドロキシルメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（２５．９mg、１５％）を白色の固体として得た。LC/MS-ESI 実測値 [M+H]+ 432。
【０２２２】
実施例１３
４−［３−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化３３】
0005859640.tif 000045
【０２２３】
工程１：  １００mL容量の丸底フラスコ中、６−tert−ブチル−２−（３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−メチル−３，４−ジヒドロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（５００mg、１．３９mmol、当量：１．００）、無水酢酸（７１１mg、６５７μL、６．９７mmol、当量：５）及びピリジン（３３１mg、３３８μL、４．１８mmol、当量：３）を、ジクロロメタン（１０．０mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、８時間撹拌した。室温に冷まし、４８時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮して、黄褐色の油状物とした。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％〜３０％酢酸エチル／ヘキサンの勾配）により精製して、２−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−クロロベンジルアセタート（４８９mg、８８％）を得た。1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.37 (s, 9 H) 2.03 (s, 3 H) 2.62 (s, 3 H) 4.45 (s, 2 H) 5.33 (s, 2 H) 7.23 (d, J=1.51 Hz, 1 H) 7.35 - 7.39 (m, 2 H) 7.43 - 7.52 (m, 2 H) 8.03 (d, J=8.31 Hz, 1 H)。
【０２２４】
工程２：  アルゴンバルーン及び温度計付きのコンデンサーを備えた５０mL容量の２−口フラスコ中、２−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−クロロベンジルアセタート（４８９mg、１．２２mmol、当量：１．００）及びビス（ピナコラト）ジボロン（６１９mg、２．４４mmol、当量：２）を、１，４−ジオキサン（２０．０mL）と合わせて、無色の溶液を得た。すべてが溶解するまで撹拌した。混合物を排気し、アルゴンで３回充填し、次に酢酸カリウム（３５９mg、３．６６mmol、当量：３）を加えた。ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（３５．１mg、６１．０μmol、当量：０．０５）を加えた。Ｘ−ｐｈｏｓ（５８．１mg、１２２μmol、当量：．１）を加えた。混合物を排気し、アルゴンで３回充填した。反応混合物を６５℃に加熱し、１８時間撹拌した。反応混合物を室温に冷まし、Ｈ２Ｏ ５０mLに注ぎ、次に酢酸エチル（４×５０mL）で抽出した。有機相を合わせ、ブラインで洗浄した。脱色活性炭を有機層に加えた。溶液を５分間撹拌した。溶液を、Celiteを通して濾過し、次に減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、２５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンジルアセタート（５１８mg、８２％）を得た。1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.35 (d, J=9.44 Hz, 21 H) 1.99 (s, 3 H) 2.62 (s, 3 H) 4.44 (br. s., 2 H) 5.44 (s, 2 H) 7.22 (d, J=1.51 Hz, 1 H) 7.36 - 7.58 (m, 3 H) 7.87 (dd, J=7.18, 1.89 Hz, 1 H) 8.04 (d, J=8.31 Hz, 1 H)。
【０２２５】
工程３：  １０mL容量のマイクロ波用バイアル中、４−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（８２．５mg、４０６μmol、当量：１．００）［実施例１２、工程１で調製した］、２−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンジルアセタート（２００mg、４０６μmol、当量：１．００）、Ｘ−ｐｈｏｓ（１９．４mg、４０．６μmol、当量：０．１０）、及び第三リン酸カリウム（２５９mg、１．２２mmol、当量：３．００）を、１，４−ジオキサン（５mL）及び水（０．５mL）と合わせて、暗褐色の懸濁液を得た。アルゴンで１０分間パージしている間、反応混合物を撹拌した。反応混合物を１２５℃でマイクロ波中３０分間加熱した。反応混合物をジクロロメタン５０mLで希釈し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させた。減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、２０％〜１００％酢酸エチル／ヘキサンの勾配）により精製して、２−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−（５−カルバモイル−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ベンジルアセタート（３１mg、１６％）を得た。1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.37 (s, 9 H) 1.98 (s, 3 H) 2.68 (s, 3 H) 3.99 (s, 2 H) 5.28 (s, 2 H) 6.72 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 6.84 - 6.94 (m, 1 H) 7.23 (d, J=1.51 Hz, 1 H) 7.27 - 7.52 (m, 5 H) 7.61 (s, 1 H) 8.04 (d, J=7.93 Hz, 1 H)。
【０２２６】
工程４：  テトラヒドロフラン中の２−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−６−（５−カルバモイル−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ベンジルアセタート（３１mg、６３．４μmol、当量：１．００）に、ＮａＯＨ（１．０M（水溶液）１．０mL、１．００mmol、当量：１５．８）を加えた。反応混合物を６０℃で４時間加熱した。混合物を室温に冷ました。溶液を飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）及びジクロロメタンで希釈した。層を分離した。水層をジクロロメタンで１回抽出した。有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶液を濾過した。減圧下で濃縮して、４−［３−（６−tert−ブチル−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（２８mg、９９％）を得た。1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.26 - 1.40 (m, 9 H) 2.56 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.53 (br. s., 2 H) 5.23 (s, 2 H) 6.93 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 7.24 - 7.38 (m, 3 H) 7.39 - 7.53 (m, 1 H) 7.64 (dd, J=5.67, 3.40 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=8.31 Hz, 1 H)。LC/MS-ESI 実測値 [M+H]+ 447。
【０２２７】
実施例１４
４−［３−（６−tert−ブチル−８−ヒドロキシメチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド
【化３４】
0005859640.tif 000046
１５mL容量の管に、６−tert−ブチル−２−［３−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−８−（ヒドロキシメチル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（３９mg、０．１０５mmol）、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（２６．２mg、０．１０５mmol、中間体−４の調製において記載されたホウ酸塩の生成と同じ条件下、中間体−３及びビス（ピナコラト）ジボロンから調製した）、Ｘ−Ｐｈｏｓ（４．９９mg、０．０１０５mmol）及びトリス−リン酸カリウム（５５．５mg、０．２６２mmol）を加えた。ジオキサン（５mL）及び水（０．５mL）を、続いてＰｄ２（ｄｂａ）３（４．７９mg、０．００５２３mmol）を加えた。混合物をアルゴンでパージし、次に３０分間撹拌しながら、１２５℃に加熱した。さらなるＰｄ２（ｄｂａ）３（６．０mg、０．００６５５mmol）を加え、混合物を１２５℃で３０分間さらに撹拌した。混合物をジクロロメタン及び水で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１２ｇ、ジクロロメタン中０％〜１０％メタノール）により精製した。所望の画分を分取ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール／水酸化アンモニウム ９０／１０／１）によりさらに精製して、４−［３−（６−tert−ブチル−８−ヒドロキシメチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミドを明黄色の粉末（７．６mg、収率１５．８％）として得た。LC/MS C26H28N4O4(m/e)の計算値460.21、実測値459.0 (M-H, ES-)。1H-NMR (300 MHz, CDCl3)
【０２２８】
実施例１５
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化３５】
0005859640.tif 000047
【０２２９】
工程１：  ３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１０ｇ、９２．５mmol）を、ＤＭＦ １００mLに溶解し、溶液を０℃で撹拌した。水素化ナトリウム（鉱油中６０％、７．４ｇ、１８５mmol）を少しずつ加えた。混合物を３０分間撹拌し、（２−（クロロメトキシ）エチル）トリメチルシラン（純度９０％、１７．１ｇ、９２．５mmol）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、次にクロロホルム及び塩化アンモニウム水溶液で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、ＩＳＣＯフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２２０ｇ、ヘキサン中の酢酸エチル、２５分間で５％〜４０％）により精製した。主要な成分として、僅かにより大きいＲｆ値を有する画分を蒸発させ、次にヘキサン中の７％酢酸エチルから結晶化させて、結晶質で純粋な白色の化合物を１Ｎ−トリメチルシリルエトキシメチル−５−アミノ−４−シアノピラゾール（３．７５ｇ）として得た。主要な成分として、僅かにより小さいＲｆ値を有する画分を蒸発させ、次にヘキサン中の４％酢酸エチルから結晶化させて、純粋な結晶質化合物を１Ｎ−トリメチルシリルエトキシメチル−３−アミノ−４−シアノピラゾール（３．５０ｇ）として得た。両方の成分を含有する母液及び画分を合わせ、蒸発させて、混合物（７．４ｇ、この工程の総収率６７％）を得た。１Ｎ−トリメチルシリルエトキシメチル−５−アミノ−４−シアノピラゾールについて：LC/MS C10H18N4OSi (m/e)の計算値238.12、実測値237.2 (M-H, ES-); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.00 (s, 9 H), 0.82 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 3.53 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 5.24 (s, 2 H) 6.80 (s, 2 H) 7.58 (s, 1 H)；１Ｎ−トリメチルシリルエトキシメチル−３−アミノ−４−シアノピラゾールについて：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.00 (s, 9 H), 0.83 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 3.51 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 5.15 (s, 2 H), 5.65 (s, 2 H), 8.28 (s, 1 H)。
【０２３０】
工程２：  工程１からの５−アミノ−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（４７６mg、２．０mmol）及び（４−ブロモフェニル）（モルホリノ）メタノン（５３９mg、２．０mmol、４−ブロモベンゾイルクロリド及びモルホリンから調製した）を、温トルエン（１０mL）に溶解し、炭酸セシウム（９７６mg、３．０mmol）を加え、トルエン（４mL）の添加が続いた。混合物をアルゴンで脱気し、ビス（トリ−tert−ブチルホスフィン）パラジウム（１０２mg、０．２mmol）を加えた。混合物を密閉し、１２０℃で５時間撹拌した。混合物を濾過し、酢酸エチル（６０mL）で濯いだ。有機層を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、ヘキサン中の酢酸エチル（８％メタノール含有）（１５分間で５％〜５０％、シリカゲル５０ｇ）を使用するＩＳＣＯ フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の画分を得て、これをエーテル及びヘキサンから結晶化させて、白色の結晶質物質を５−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（６３１mg、収率７４．１％）として得た。LC/MS C21H29N5O3Si (m/e)の計算値427.20、実測値428.0 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.02 (s, 9 H), 0.95 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 3.61 (t, J=8.0 Hz, 2H), 3.50 - 3.80 (m, 8 H), 5.44 (s, 2 H), 6.57 (br. s., 1 H), 7.02 (d, J=8.5 Hz, 2 H), 7.42 (d, J=8.5 Hz, 2 H), 7.68 (s, 1 H)。
【０２３１】
工程３：  ５−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（８８０mg、２．０６mmol）を、エタノール４０mLに溶解した。塩酸（２N ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。室温で１６時間後、ＬＣ／ＭＳは、６０％の所望の物質及び４０％の未反応出発物質を示した。混合物を６５℃に加熱し、２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳは、出発物質の完全な消費及び所望の生成物の生成を示した。混合物を氷浴下、水酸化ナトリウム溶液（水４０mL中ＮａＯＨ ４ｇ）で処理した。得られた混合物を酢酸エチル（３５０mL）で２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。ＴＬＣは、混じりけのないスポットを示した。溶媒を蒸発させ、残留物を乾燥エーテルでトリチュレートして、５−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを白色の固体（５３０mg、収率８６．６％）として得た。Ｈ−ＮＭＲは、所望の構造と一致した。ＬＣ／ＭＳは、混じりけがなく、所望の分子量と一致した。LC/MS C15H15N5O2(m/e)の計算値297.12、実測値298.0 (M+H, ES+)。
【０２３２】
工程４：  カリウムtert−ブトキシド（６８mg、０．６０mmol）を、ＤＭＳＯ ３mLに溶解し、室温で５分間撹拌した。５−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１５０mg、０．５０５mmol）を加え、混合物を５分間撹拌した。２−フルオロ−６−ヨードベンズアルデヒド（３７８mg、１．５１mmol）を加え、混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させた。溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチルでトリチュレートした。固体を濾過して、オフホワイトの固体７１mgを得た。ＴＬＣ及びＬＣ／ＭＳによる白色の固体の分析は、混じりけのない物質を示した。濾液を濃縮し、ジクロロメタンに溶解し、ジクロロメタン中のメタノール（１５分間で０〜５％、シリカゲル２４ｇ）を使用するＩＳＣＯ フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡いピンク色の固体５８mgを得た。単離したいずれの固体も、所望の１−（２−ホルミル−３−ヨード−フェニル）−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（収率４８．５％）として、ＴＬＣ及びＬＣ／ＭＳから同じ結果を示した。LC/MS C22H18N5O3I (m/e)の計算値527.05、実測値526.0 (M-H, ES-); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.52-3.85 (m, 8H), 6.60 (br. s, 1H), 7.33 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.38-7.49 (m, 4H), 7.52 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.0 Hz, 1H), 9.93 (br. s, 1H)。
【０２３３】
工程５：  １−（２−ホルミル−３−ヨードフェニル）−３−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（７１mg、０．１３５mmol）、６−tert−ブチルフタラジン−１（２Ｈ）−オン（２７．２mg、０．１３５mmol）、ヨウ化第一銅（２５．６mg、０．１３５mmol）及び重炭酸ナトリウム（２２．６mg、０．２６９mmol）を、ＤＭＳＯ ２mL中で合わせた。混合物をアルゴンで十分に脱気し、次に１００℃に予熱した油浴中で撹拌した。１時間後、混合物をジクロロメタン及び水で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１２ｇ、ジクロロメタン中の０％〜５％メタノール）により精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを淡いピンク色の固体（３４mg、収率４２％）として得た。 LC/MS C34H31N7O4(m/e)の計算値 601.24、実測値602.1 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm1.45 (s, 9 H), 3.68 (br. m., 8 H),  6.68 (br. s., 1 H), 7.39 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.46 (d, J=8.6 Hz, 2 H),  7.57 (dd, J=8.0, 1.1Hz, 1 H), 7.65 - 7.74 (m, 1 H), 7.74 - 7.81 (m, 2 H), 7.93 (dd, J=8.6, 1.8 Hz, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 8.40 (d, J=8.6 Hz, 1 H),  8.47 (br. s., 1 H), 9.90 (br. s., 1 H)。
【０２３４】
工程６：  １−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ］ピラゾール−４−カルボニトリル（５３mg、０．０８７５mmol）を、ジクロロメタン６mL及びメタノール２mLに溶解した。水（０．５mL）及びメタノール（１．０mL）中の水素化ホウ素ナトリウム（８．２８mg、０．２１９mmol）溶液を滴下した。混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳは、混ざりけのない所望の生成物を示した。混合物を蒸発乾固し、ジクロロメタン及び水で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、純粋な所望の１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５２．８mg、収率１００％）を得た。LC/MS C34H33N7O4(m/e)の計算値603.26、実測値604.1 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm1.47 (s, 9 H), 3.61 - 3.77 (m, 8 H), 4.35 (br. s., 2 H), 6.59 (br. s., 1 H), 7.43 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.50 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.58 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.67 (t, J=8.1 Hz, 1 H), 7.80 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.83 (dd, J=8.1, 1.3 Hz, 1 H), 7.97 (dd, J=8.6, 1.7 Hz, 1 H), 8.39 (d, J=0.5 Hz, 1 H), 8.48 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 8.79 (s, 1 H)。
【０２３５】
工程７：  １−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５２mg、０．０８６１mmol）を、ＴＨＦ ４mL及び水０．４mLに溶解した。次に二水素トリス（ジメチルホスフィニト）ヒドロプラチナート（CAS#173416-05-2、３mg、８％当量）を加えた。混合物を１時間還流した。ＴＬＣは、出発物質の完全な消費を示した。ＬＣ／ＭＳは、正しい分子量を有して生成された混じりけのない生成物を示した。混合物を蒸発乾固し、次にジクロロメタンに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒の蒸発の後、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２４ｇ、ジクロロメタン中のメタノール、１６分間で０％〜５％）により精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドを白色の固体（４１mg、収率７６．６％）として得た。 LC/MS C34H35N7O5 (m/e)の計算値621.27、実測値622.1 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm 1.41 (s, 9 H) 3.41 - 3.71 (m, 8 H), 4.37 (br. s., 2 H), 4.74 (br. s., 1 H), 7.36 (d, J=6.3 Hz, 3 H), 7.49 - 7.71 (m, 5 H), 7.80 (br. s., 1 H), 8.04 (d, J=9.1 Hz, 2 H), 8.25 (d, J=6.6 Hz, 1 H), 8.56 (br. s., 2 H), 9.44 (br. s., 1 H)。
【０２３６】
実施例１６
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化３６】
0005859640.tif 000048
【０２３７】
この化合物を実施例１５（実施例１５の工程５、６及び７）に記載した同じ方法で、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２Ｈ−フタラジン−１−オン（US2010/0222325に従って調製した）を使用することにより調製した。
【０２３８】
１−（２−ホルミル−３−ヨードフェニル）−３−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１１５mg、０．２１８mmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（４８mg、０．２１８mmol）、ヨウ化第一銅（４１．５mg、０．２１８mmol）及び重炭酸ナトリウム（３６．６mg、０．４３６mmol）を、ＤＭＳＯ ２mL中で合わせた。混合物をアルゴンで十分に脱気し、次に１００℃に予熱した油浴中で１時間撹拌した。混合物をジクロロメタン及び水で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、残留物を、ジクロロメタン中のメタノール（１６分間で０％〜５％、シリカゲル２４ｇ）を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを淡いピンク色の固体（５４mg、収率４０％）として得た。LC/MS C34H30FN7O4 (m/e)の計算値 619.23、実測値620.0 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm1.43 (s, 9 H), 3.56-3.76 (m, 8 H), 6.61 br. s., 1 H), 7.40 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.46 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.52 (dd, J=12.4, 1.8 Hz, 1 H), 7.55 - 7.59 (m, 2 H), 7.64 (d, J=7.8 Hz, 1 H), 7.78 (t, J=8.1 Hz, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 9.97 (s, 1 H)。
【０２３９】
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５２mg、０．０８３９mmol）を、ジクロロメタン６mL及びメタノール２mLに溶解した。水（０．５mL）及びメタノール（１．０mL）中の水素化ホウ素ナトリウム溶液（９．５２mg、０．２５２mmol）を滴下した。混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳは、混ざりけのない所望の生成物を示した。混合物を蒸発乾固し、ジクロロメタン及び水で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、純粋な所望の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５１mg、収率９８％）を得た。LC/MS C34H32FN7O4(m/e)の計算値621.25、実測値622.1 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm1.45 (s, 9 H), 3.59 - 3.77 (m, 8 H), 4.37 (br. s., 2 H), 6.59 (br. s., 1 H), 7.43 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.48 (dd, J=7.8, 1.3 Hz, 1 H), 7.54 - 7.61 (m, 4 H), 7.66 (t, J=8.1 Hz, 1 H), 7.81 (dd, J=8.1, 1.3 Hz, 1 H), 8.32 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 8.74 (s, 1H)。
【０２４０】
１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（４６mg、０．０７４mmol）を、ＴＨＦ ４mL及び水０．５mLに溶解した。次に二水素トリス（ジメチルホスフィニト）ヒドロプラチナート（３mg、０．００６９mmol）を加え、混合物を還流下、撹拌した。１時間後、ＴＬＣは、出発物質の完全な消費を示した。ＬＣ／ＭＳは、混じりけのない所望の生成物が生成されたことを示した。混合物を蒸発させ、残留物をジクロロメタンに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ミクロンフィルターを通して濾過し、蒸発させた。残留物を、塩化メチレン中のメタノール（１０分間で１．５％〜５％メタノール、シリカゲル１２ｇ）を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドを白色の固体（３６mg、収率７６．１％）として得た。LC/MS C34H34FN7O5(m/e)の計算値639.26、実測値640.1 (M+H, ES+); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm 1.38 (s, 9 H), 3.50 (br., 4 H), 3.59 (br., 4 H), 4.38 (br. s., 2 H), 4.78 (t, J=5.2 Hz, 1 H), 7.36 (d, J=8.6 Hz, 3 H), 7.52 - 7.69(m, 5 H), 7.76 (d, J=13.1 Hz, 2 H), 7.88 (s, 1 H), 8.54 (m, 2 H), 9.44 (s, 1 H)。
【０２４１】
実施例１７
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化３７】
0005859640.tif 000049
【０２４２】
工程１：  カリウムtert−ブトキシド（１２０mg、１．０７mmol）を、ＤＭＳＯ ５mLに溶解し、室温で５分間撹拌した。次に５−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（２９０mg、０．９７５mmol）を加え、混合物を５分間撹拌した。この溶液に、２−ブロモ−６−フルオロベンズアルデヒド（３９６mg、１．９５mmol）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残留物を酢酸エチル２０mLでトリチュレートし、濾過して、所望の化合物７０mgを得た。濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより分離して、２つ目のバッチである所望の化合物（１１０mg）を１−（３−ブロモ−２−ホルミル−フェニル）−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（収率３８．４％）として得た。LC/MS C22H18BrN5O3(m/e)の計算値479.06、実測値477.8 (M-H, ES-); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δppm 3.50 (br. s., 4 H), 3.59 (d, J=3.8 Hz, 4 H), 7.34 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 7.53 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 7.65 (t, J=7.9 Hz, 1 H), 7.79 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 7.85 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 9.08 (s, 1 H), 9.47 (s, 1 H), 10.07 (s, 1 H)。1H-NMRのNOE分析により、所望の位置化学を確認した。
【０２４３】
工程２：  １−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−３−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（３４mg、０．０７０８mmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（３１．２mg、０．１４２mmol）、ヨウ化第一銅（２７mg、０．１４２mmol）及び重炭酸ナトリウム（１４．９mg、０．１７７mmol）を、ＤＭＳＯ １mL中で合わせた。溶液をアルゴンで脱気し、次にマイクロ波中１２０℃で１時間加熱した。得られた混合物を酢酸エチル及び塩化アンモニウム溶液で抽出した。有機層を濃縮し、ヘキサン中の酢酸エチル（５％メタノール含有）（１５分間で５％〜８０％直線勾配、シリカゲル１２ｇ）を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、純粋な所望の生成物を得た。この物質をヘキサン中のエーテルでトリチュレートし、濾過して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１８．２mg、収率４１．５％）を、淡いピンク色の固体として得た。LC/MS C33H30FN7O3(m/e)の計算値591.24、実測値592.0 (M+H, ES+)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.38 (s, 9 H), 3.50 (br., 4 H), 3.59 (br., 4 H), 7.37  (d, J=8.6 Hz, 2 H), 7.59 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.65 - 7.71 (m, 3 H), 7.78 (d, J=13.1 Hz, 1 H), 7.87 - 7.93 (m, 2 H), 8.08 (s, 1 H), 8.58 (d, J=2.3 Hz, 1 H), 9.29 (s, 1 H), 9.47 (s, 1 H)。
【０２４４】
工程３：  １−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）フェニル）−３−（４−（モルホリン−４−カルボニル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（３０mg、０．０５０mmol）を、ＴＨＦ ４mL及び水０．５mLに溶解した。次に二水素トリス（ジメチルホスフィニト）ヒドロプラチナート（２．３mg、０．００５２mmol）を加え、混合物を還流下、撹拌した。１時間後、ＴＬＣは出発物質の完全な消費を示した。ＬＣ／ＭＳは、混じりけのない所望の生成物が生成されたことを示した。混合物を蒸発させ、残留物をジクロロメタンに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ミクロンフィルターを通して濾過し、蒸発させた。残留物を、塩化メチレン中のメタノール（１０分間で０％〜５％メタノール、シリカゲル１２ｇ）を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−３−［４−（モルホリン−４−カルボニル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドを白色の固体（２１mg、収率６８％）として得た。LC/MS C33H32FN7O4(m/e)の計算値609.25、実測値608.0 (M-H, ES-)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.39 (s, 9 H), 3.51 (br. s., 4 H), 3.59 (br. s., 4 H), 7.39 (d, J=8.3 Hz, 3 H), 7.56 (d, J=7.8 Hz, 1 H), 7.65- 7.73 (m, 3 H), 7.75 - 7.86 (m, 3 H), 7.89 (s, 1 H), 7.98 (br. s., 1 H), 8.60 (d, J=2.0 Hz, 1 H), 9.04 (s, 1 H), 9.42 (s, 1 H)。
【０２４５】
実施例１８
１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド
【化３８】
0005859640.tif 000050
【０２４６】
工程１：  乾燥ジメチルホルムアミド（１０mL）中の１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（１ｇ、７．０３mmol）の冷却（氷浴）した溶液に、窒素雰囲気下、水素化ナトリウム（３８３mg、８．４４mmol、油中６０％）を２回に分けて、約４分間かけて加えた。該物質を５分間撹拌し、次に氷浴を取り外し、混合物を周囲温度に温めた。２−ブロモ−６−フルオロベンズアルデヒド（１．４３ｇ、７．０３mmol）を粉末のまま一度に加えた。その物質を２時間激しく撹拌した。混合物を、機械式ポンプに接続しているロータリエバポレーターの上に置き、溶媒を除去した。残りの部分を、塩化アンモニウム水溶液（４０mL）と酢酸エチル（４０mL）との５％溶液に取り、分液漏斗に移した。有機相を回収し、５０％希ブライン溶液（４０mL）で洗浄した。酢酸エチル相を回収し、水相を酢酸エチル（２×３５mL）で逆抽出した。有機相を合わせ、乾燥（硫酸マグネシウム）させ、濾過し、取り出した。粗生成物をシリカ（１０ｇ、ジクロロメタンから）に吸着させ、１００％塩化メチレンで溶離するＨＰＬＣ（乾燥添加（dry loading）；シリカゲル；４０ｇ）により精製して、準−純粋な生成物（９９０mg）を得た。この物質を高温のジクロロメタン／ヘキサンからトリチュレーションにより精製して、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリルを橙色の固体（３５４mg、収率１６％）として得た。1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.02 - 7.11 (m, 1 H) 7.27 - 7.38 (m, 2 H) 7.45 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 7.61 (t, J=8.12 Hz, 1 H) 7.68 (s, 1 H) 7.80 - 7.86 (m, 1 H) 7.90 (dd, J=7.93, 1.13 Hz, 1 H) 10.05 (s, 1 H)。
【０２４７】
工程２：  乾燥ジメチルスルホキシド（１．８mL）中の６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（US2010/0222325に従って調製した）３６mg、０．１６mmol）及び１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（５９mg、０．１８mmol）の溶液に、重炭酸ナトリウム（３１mg、０．３６mmol）をアルゴン雰囲気下、加えた。次にヨウ化銅（３５mg、０．１８mmol）を加え、混合物を１１０℃に２時間加熱した。反応物を周囲温度に冷まし、水（４０mL）及びジクロロメタン（４０mL）に取った。該物質を、ジクロロメタンで十分に濯ぎながらセライトのプラグを通して濾過した。濾液を分液漏斗に移し、ジクロロメタン相を回収した。これを、希ブラインの５０％溶液（４０mL）で洗浄した。有機相を回収し、水相をジクロロメタンで逆抽出（２×３５mL）した。ジクロロメタン相を合わせ、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、取り出した。次に１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（２９０mg、０．８９mmol）を用いて大規模に、及び上記の試薬を同様な規模の量で、同一の手順及び処理により、同一の反応を繰り返した。２つの反応からの粗生成物を合わせ、ＨＰＬＣ（シリカゲル、１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜１％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離）により精製して、準−純粋な生成物を得た。該物質を分取薄層クロマトグラフィー（３プレート、０．５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離、そして次に０．７５％で、そして次に１％ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で再溶離）によりさらに精製した。生成物バンドを回収して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３ カルボニトリルを黄色の泡状固体（３８４mg、収率７７％）として得た。LC/MS C28H21FN4O2(m/e)の計算値464.49、実測値465.0 (M+H, ES+): 1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.42 (s, 9 H) 7.24 - 7.32 (m, 1 H) 7.34 - 7.41 (m, 2 H) 7.46 - 7.60 (m, 3 H) 7.75 (d, J=7.55 Hz, 1 H) 7.81 (s, 1 H) 7.83 - 7.87 (m, 1 H) 7.90 (t, J=7.96 Hz, 1 H) 8.25 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 9.56 (s, 1 H)。
【０２４８】
工程３：  丸底フラスコに入っている１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３ カルボニトリル（１２mg、０．０３mmol）を、１０％水／テトラヒドロフラン（１．５mL）に溶かした。次に、ヒドリド（ジメチル亜ホスフィン酸）−ｋｐ）［水素ビス−（ジメチルホスフィニト−ｋｐ）］白金（II）触媒（２mg、０．００５mmol）を加え、混合物を加熱還流（油浴）した。１時間後、混合物を周囲温度に冷まし、揮発物を取り除いて（ロータリエバポレーター）、粗生成物を得た。この反応（上記と同様に、しかし溶媒として１０％ Ｈ２Ｏ／エタノールを使用した）を、６１mg規模（０．２４mmol）で繰り返し、上記のように処理した。２つの反応からの合わせた粗物質を分取薄層クロマトグラフィー（３プレート、５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶離、そして次に同じく５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で再展開）により精製した。生成物バンドを回収して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミドを明黄色の固体（５１mg）として得た。LC/MS C28H23FN4O3(m/e)の計算値482.52、実測値483.0 (M+H, ES+): 1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.40 (s, 9 H) 6.03 (br. s, 2 H)  7.20 - 7.36 (m, 3 H) 7.44 - 7.59 (m, 3 H) 7.66 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 7.81 (t, J=7.60 Hz, 1 H) 7.91 (s, 1 H) 8.19 (m, 1 H) 8.23 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 9.52 (s, 1 H)
【０２４９】
工程４：  メタノール／ジクロロメタン（１．３５mL、２．９：１）に溶解した１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド（５１mg、０．１１mmol）が入っている冷却（氷浴）したフラスコに、水（０．３５mL）中の水素化ホウ素ナトリウム（２０mg、０．５３mmol）の溶液を、ゆっくりと滴下した。混合物を１０分間撹拌し、次にジクロロメタン（２０mL）及び水（２０mL）に溶かした。内容物を分液漏斗に注ぎ、撹拌した。有機相を回収し、５０％希ブラインの溶液（２０mL）で洗浄した。ジクロロメタン層を回収し、水相を塩化メチレン（２×２０mL）で逆抽出した。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。粗物質を、７．５％メタノール／ジクロロメタンで溶離するシリカゲルのショートカラムを通して濾過により精製した。所望の画分を回収し、次に該物質を高温のジクロロメタン／ヘキサンの溶液から結晶化させて、白色の結晶質生成物を１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド（３７mg）として得た。LC/MS C28H25FN4O3(m/e)の計算値484.54、実測値485.0 (M+H, ES+): 1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.44 (s, 9 H) 4.03 - 4.37 (m, 2 H) 5.49 - 6.00 (br. s, 2 H) 7.18 - 7.38 (m, 3 H) 7.49 - 7.71 (m, 5 H) 8.13 - 8.28 (m, 2 H) 8.32 (d, J=2.64 Hz, 1 H)。
【０２５０】
実施例１９
１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−フェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド
【化３９】
0005859640.tif 000051
【０２５１】
工程１：  １−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリルの調製は、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（２２２mg、純度４０％、０．２７mmol、上記の実施例１８、工程１に記載の合成）と６−tert−ブチルフタラジン−１（２Ｈ）−オン（１３８mg、０．６８mmol）との反応を介して、実施例１８に記載された手順と同様の手順で実施した。同様の処理及び精製により、所望の生成物を明黄色−白色の固体（８２mg、収率６６％）として得た。LC/MS C28H22N4O2(m/e)の計算値446.51、実測値447.0 (M+H, ES+): 1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.44 (s, 9 H) 7.23 - 7.40 (m, 3 H) 7.55 (dd, J=7.93, 1.13 Hz, 2 H) 7.72 - 7.94 (m, 6 H) 8.32 (s, 1 H) 8.39 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 9.59 (s, 1 H)。
【０２５２】
工程２：  １−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミドの調製は、１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（８２mg、０．１８mmol）のニトリル加水分解、且つ触媒ヒドリド（ジメチル亜ホスフィン酸）−ｋｐ）［水素ビス−（ジメチルホスフィニト−ｋｐ）］白金（II）触媒（５mg、０．０６４mmol）の使用を介して、実施例１８に記載された手順と同様の手順で実施した。同様の処理及び精製により、所望の生成物を明黄色のガラス状の固体（５４mg、収率６３％）として得た。LC/MS C28H24N4O3(m/e)の計算値464.5、実測値465.0 (M+H, ES+): 1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.44 (s, 9 H) 7.21 - 7.37 (m, 3 H) 7.48 - 7.59 (m, 2 H) 7.67 - 7.76 (m, 2 H) 7.85 (t, J=7.93, 1.00 Hz, 1 H) 7.90 (s, 1 H) 8.14 - 8.20 (m, 1 H) 8.30 (s, 1 H) 8.37 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 9.56 (s, 1 H)
【０２５３】
工程３：  １−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−フェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミドの調製は、水素化ホウ素ナトリウム（２２mg、０．５８mmol）の使用による１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−カルボニトリル（５４mg、０．１２mmol）の還元を介して、実施例１８に記載された手順と同様の手順で実施した。同様の処理及び精製により、所望の生成物を白色の結晶質固体（３６mg、収率６４％）として得た。LC/MS C28H26N4O3(m/e)の計算値466.54、実測値467.0 (M+H, ES+): 1H NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.46 (s, 9 H) 4.07 (br. d, J=11.70 Hz, 1 H) 4.30 (br. d, J=11.70 Hz, 1 H) 5.60 - 5.97 (m, 2 H) 7.20 - 7.38 (m, 3 H) 7.52 - 7.71 (m, 3 H) 7.80 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 7.96 (dd, J=8.31, 1.89 Hz, 1 H) 8.17 - 8.29 (m, 2 H) 8.39 (s, 1 H) 8.46 (d, J=8.31 Hz, 1 H)。
【０２５４】
実施例２０
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化４０】
0005859640.tif 000052
【０２５５】
工程１：  １００mL容量のナシ型フラスコ中、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１５０mg、１．０５mmol、当量：１．００）、酢酸銅（II）（３８１mg、２．１mmol、当量：２）、ピリジン（１６６mg、１７０μL、２．１mmol、当量：２）及び６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）−２Ｈ−フタラジン−１−オン（７０６mg、１．１５mmol、当量：１．１）を、塩化メチレン（１０mL）と合わせて、青緑色の懸濁液を得た。反応混合物を窒素でフラッシュした。反応混合物を８０℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。混合物をヘキサン中の３０〜５０％ ＥｔＯＡｃを使用するＩＳＣＯで分離して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１２２mg、２５％）をオフホワイトの泡状物として得た。1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.64 (dd, J = 7.9, 1.6 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.36 (dd, J = 4.8, 1.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 13.2, 1.6 Hz, 1H), 7.66 - 7.78 (m, 3H), 7.63 (dd, J = 7.3, 2.3 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.18 (br. s., 1H), 4.72 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.11 - 4.34 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。MS m/e 468.5 (M+H+)。
【０２５６】
工程２：  トルエン（２５．２mL）中の１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（６１０mg、７８３μmol、当量：１．００）、アセトアルドキシム（１３９mg、１４３μL、２．３５mmol、当量：３）及び塩化インジウム（III）（８．６６mg、３９．１μmol、当量：０．０５）の撹拌した溶液を、１１０℃に加熱し、３時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ １５mLに注ぎ、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶媒の除去の後、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ヘキサン中の８０％〜１００％ ＥｔＯＡｃ）により分離して、不純物を含む所望の生成物６６mgを得た。この物質を、ＴＦＡ中、分取逆相ＨＰＬＣにより再精製した。所望の生成物をＮａＨＣＯ３（１×２５mL）で中和した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、酢酸エチル／メタノール（９：１）で抽出して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（４３mg、１２％）を白色の固体として得た。1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.64 (dd, J = 7.9, 1.6 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.36 (dd, J = 4.8, 1.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 13.2, 1.6 Hz, 1H), 7.66 - 7.78 (m, 3H), 7.63 (dd, J = 7.3, 2.3 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.18 (br. s., 1H), 4.72 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.11 - 4.34 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。MS m/e 486.6 (M+H+)。
【０２５７】
実施例２１
【化４１】
0005859640.tif 000053
【０２５８】
工程１：  １００mL容量の丸底フラスコ中、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（６１．０mg、２４４μmol、当量：１．１０）、２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−ヨードニコチンアルデヒド（１００mg、２２２μmol、当量：１．００）及び［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（II）（１６．２mg、２２．２μmol、当量：０．１）を、ジオキサン（６６７μL）と合わせて、赤色の溶液を得た。水（６６．７μL）中の炭酸カリウム（６１．３mg、４４３μmol、当量：２）を加え、得られた懸濁液を７０℃に加熱し、３２時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（１０mL）で希釈し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、へキサン中の１０％〜１５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、４−［２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−３−ホルミル−ピリジン−４−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（２８mg、２８．２％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (DMSO-d6) δ: 10.06 (s, 1H), 8.72 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 13.3, 1.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.69 - 7.76 (m, 1H), 7.50 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.12 (br. s., 1H), 3.93 (s, 3H), 1.39 (s, 9H); MS m/e 448.5 (M+H+)。
【０２５９】
工程２：  ２５mL容量のナシ型フラスコ中、４−（２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−３−ホルミルピリジン−４−イル）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（２８mg、６２．６μmol、当量：１．００）を、ＣＨ２Ｃｌ２（３mL）及びＭｅＯＨ（１mL）と合わせて、無色の溶液を得た。水素化ホウ素ナトリウム（４．７３mg、１２５μmol、当量：２．００）を加えた。反応混合物を１時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２５mL）に注ぎ、飽和ＮＨ４Ｃｌ（３×１０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、その後、凍結乾燥して、４−［２−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−３−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸アミド（１４mg、５０％）を白色の固体として得た。1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 8.52 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 13.3, 1.8 Hz, 1H), 7.55 - 7.72 (m, 1H), 7.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.04 (br. s., 1H), 4.88 (br. s., 1H), 4.29 - 4.57 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 1.39 (s, 9H); MS m/e 450.5 (M+H+)。
【０２６０】
実施例２２
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化４２】
0005859640.tif 000054
【０２６１】
工程１：  実施例１５工程１からの５−アミノ−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５００mg、２．１mmol）、２−（４−ブロモフェニル）プロパン−２−オール（５１９mg、２．４１mmol）、及び炭酸セシウム（１．０３ｇ、３．１５mmol）を、無水トルエン（１４mL）に溶かした。混合物をアルゴンで脱気し、ビス（トリ−tert−ブチルホスフィン）パラジウム（１０７mg、０．２１mmol）を加えた。混合物をアルゴンで再び脱気し、次にアルゴン下、１２０℃で４．５時間撹拌した。さらなる２−（４−ブロモフェニル）プロパン−２−オール（５０mg）を加え、混合物をさらに２時間加熱した。該物質を周囲温度に冷まし、一晩撹拌した。粗生成物をセライトのプラグを通して濾過し、酢酸エチル（６０mL）で十分に濯いだ。有機層を分液漏斗中で水（６０mL）と一緒に振盪し、回収した。水相を酢酸エチル（２×４０mL）で逆抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。残りを、ヘキサン中の酢酸エチルを使用するAnalogixフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０％〜４５％の勾配、シリカゲル２３ｇ）により精製して、５−（４−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）フェニルアミノ）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを赤褐色の粘性油状物（４８２mg、収率６２％）として得た。LC/MS C19H28N4O2Si (m/e)の計算値372.55、実測値371 (M-H, ES-)。
【０２６２】
工程２：  ５−（４−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）フェニルアミノ）−１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（４８０mg、１．１３mmol）を、フッ化テトラブチルアンモニウムの溶液（１M、１６．８mL）に溶かし、フラスコを密閉した。混合物を１１０℃に加熱した油浴中に置き、２８時間撹拌した。混合物を周囲温度に冷ました。水（６０mL）及びジエチルエーテル（６０mL）を加え、該物質を分液漏斗中で振盪し、有機相を回収した。水相をジエチルエーテル（２×５０mL）で逆抽出した。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。残りの粗生成物を、ヘキサン中の酢酸エチルを使用するAnalogixフラッシュカラムクロマトグラフィー（３０％〜９０％の勾配、シリカゲル４０ｇ）により精製して、３−（４−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルをオフホワイトの粉末（１２８mg、収率４７％）として得た。LC/MS C13H14N4O(m/e)の計算値242.28, 実測値241(M-H, ES-)。
【０２６３】
工程３：  ３−（４−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを、実施例１５に記載のプロトコルと同様のプロトコルに従うことにより、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルに変換した。
【０２６４】
工程４：  １−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（７８mg、０．１４mmol）及び二水素トリス（ジメチルホスフィニト）ヒドロプラチナート（７．１mg、０．１２当量）を、テトラヒドロフラン（３．１mL）及び水（０．３１mL）に溶かした。該物質を撹拌し、１時間加熱還流（油浴）した。混合物を周囲温度に冷まし、揮発物を取り除いた（ロータリエバポレーター）。粗物質を分取薄層クロマトグラフィー（２プレート、最初に塩化メチレン中の７％メタノールで溶離し、そして次に塩化メチレン中の６％メタノールで再展開した）により精製した。生成物のバンドを回収し、所望の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドを明黄色の粉末（４１mg）として得た。LC/MS C32H31FN6O4 (m/e)の計算値582.62、実測値581.0 (M-H, ES-)。
【０２６５】
工程５：  １−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド（３４mg、０．０６mmol）を、１：１のメタノール及びジクロロメタンの溶液（１５mL）に溶解した。これに、水（０．２５mL）に溶解した水素化ホウ素ナトリウム（１１mg、０．２９mmol）の溶液を滴下した。１０分間の撹拌の後、揮発物を取り除き（ロータリエバポレーター）、残りをジクロロメタン（３０mL）及び水（３０mL）に溶かし、分液漏斗中で振盪した。有機相を回収し、水相をジクロロメタンで逆抽出（２×２５mL）した。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１ｇ、ジクロロメタン中の７．５％メタノールで溶離）により精製して、所望の生成物１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドをオフホワイトの粉末（３２mg）として得た。LC/MS C32H33FN6O4 (m/e)の計算値584.66、実測値583 (M-H, ES-)。
【０２６６】
実施例２３
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化４３】
0005859640.tif 000055
【０２６７】
工程１：  WO2005/5414 A2と同様の手順に従った。このようにして、３−アミノ−４−シアノピラゾール（１１ｇ、１０２mmol）を、ヨウ化メチレン（１５０mL、１．８７mol）に溶かし、フラスコを−１０℃に冷却した。十分に撹拌しながら、亜硝酸イソアミル（９２．４mL、６８８mmol）を、４０分間かけて滴下した。添加の完了の後、混合物を５分間撹拌した。次に添加フラスコを取り外し、効率的なコンデンサーと取替え、該物質を１００℃で２時間加熱（油浴）した。フラスコを周囲温度に冷まし、溶媒を除去（ロータリエバポレーター、最後に機械式ポンプ）した。残りを酢酸エチル（１２０mL）に取り、分液漏斗に移した。メタ重亜硫酸ナトリウムの５％水溶液（１２０mL）を加え、二相性混合物を振盪した。有機相を回収し、そして１N 塩酸の溶液（水溶液、１２０mL）と一緒に、続いて水（１２０mL）と一緒に振盪した。有機相を回収し、水相を酢酸エチル（２×１００mL）で逆抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。粗生成物をシリカに吸着（約２５ｇ、ジクロロメタンから）させ、ヘキサン中の酢酸エチルを使用するAnalogix フラッシュカラムクロマトグラフィー（２３％〜５０％の勾配、シリカゲル８０ｇ）により精製（乾燥添加）して、明黄色の粉末（２０ｇ）を得た。この物質を、高温の酢酸エチル／ヘキサンから結晶化することによりさらに精製して、３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１１．３ｇ）を明褐色の固体として得て、これを濾過により回収（５％酢酸エチル／ヘキサンで十分に濯いだ）した。母液から、第２の産生物（３．７６ｇ）も得た。LC/MS C4H2IN3 (m/e)の計算値 218.98、実測値218 (M-H, ES-)。
【０２６８】
工程２：  ３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（３．６２ｇ、１６．５mmol）を、窒素雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（６７mL）に溶かした。水素化ナトリウム（９９２mg、２４．８mmol、油中６０％）を一度に加え、混合物を、加熱（５０℃）された超音波処理浴に５０分間置いた。この混合物に、２−フルオロ−６−ヨードベンズアルデヒド（５．３７ｇ、２１．５mmol）を加え、混合物を６０〜６５℃に加熱した油浴中に置いた。２時間の撹拌の後、さらなる２−フルオロ−６−ヨードベンズアルデヒド（３５０mg、１．４mmol）を加え、該物質をさらに１時間撹拌した。フラスコを周囲温度に冷まし、溶媒の９０％近くまで取り除いた（ロータリエバポレーター）。ジエチルエーテル（３０mL）及び水（５０mL）を加え、混合物を３０分間激しく撹拌した。沈殿した生成物を濾過により回収し、ジエチルエーテル及び水で十分に濯ぎ、真空オーブン中で乾燥させて、明黄褐色の粉末（４．７８ｇ）を得た。この固体生成物を、ジクロロメタン中の２％メタノールの溶液（約６０mL、加熱溶解）に取り、分液漏斗に移した。水（６０mL）を加え、該物質を振盪し、有機相を回収した。これを硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出して、所望の１−（２−ホルミル−３−ヨード−フェニル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを明黄色の粉末（３．９７３ｇ）として得た。LC/MS C11H5I2N3O(m/e)の計算値448.99、実測値450(M+H, ES+)。
【０２６９】
工程３：  オーブンで乾燥させたフラスコに、１−（２−ホルミル−３−ヨード−フェニル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１．７０３ｇ、３．７９mmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン［US2010/0222325に従って調製した］（９１９mg、４．１７mmol）及び重炭酸ナトリウム（６３７mg、７．５９mmol）を入れ、乾燥ジメチルスルホキシド（３０mL）に溶かした。混合物を超音波処理浴中にてアルゴンで脱気した。ヨウ化銅（７２２mg、３．７９mmol）を加え、該物質を再び十分に脱気した。超音波処理にて、混合物を６０℃に２．５時間加熱し、周囲温度で一晩静置した。さらなるヨウ化銅（３６０mg）を加え、該物質を超音波処理下、６０℃で４時間加熱した。フラスコを周囲温度に冷まし、塩化メチレン（４０mL）及び水（４０mL）を激しく撹拌しながら加えた。５分後、該物質を、塩化メチレン中の１％メタノールの溶液で十分に濯ぎながら、セライトのプラグを通して濾過した。濾液を分液漏斗に移し、有機相を回収した。これを、５０％希ブライン溶液（６０mL、幾分粗粒）と一緒に振盪した。塩化メチレン相を回収し、水相を塩化メチレンで逆抽出した（注記：幾分の粗粒が観察された。それは、逆抽出の際、大量の有機溶液及び水溶液を使用するのに役に立った）。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。残りを塩化メチレンに溶かし、最初に１００％ジクロロメタン（５分間維持）で溶離する、次にジクロロメタン中の１％〜３％メタノールの勾配（シリカゲル２５ｇ）に換えて溶離するAnalogix フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを、明褐色の粉末（１．２ｇ）として得た。LC/MS C23H17FIN5O2(m/e)の計算値541.32、実測値542 (M+H, ES+)。
【０２７０】
工程４：  １−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１．２ｇ、２．２２mmol）を、ジクロロメタン（４０mL）及びメタノール（８０mL）の溶液に溶解した。これに、水（０．３５mL）に溶解した水素化ホウ素ナトリウム（２１mg、０．５３mmol）の溶液を滴下した。１０分間の撹拌の後、揮発物を取り除き（ロータリエバポレーター）、残りをジクロロメタン（６０mL）及び水（５０mL）に取り、分液漏斗中で振盪した。有機相を回収し、水相をジクロロメタンで逆抽出（２×５０mL）した。有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。粗生成物を、Analogixフラッシュカラムクロマトグラフィー（カラム４０ｇ、最初に１００％ジクロロメタン［１０分間維持］で溶離する、次にジクロロメタン中の１％メタノールに換えて溶離）により精製し、これにより所望の生成物１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを明橙色の色付き油状物として得て、これを静置して凝固させた（１．０２９ｇ）。LC/MS C23H19FIN5O2 (m/e)の計算値543.33、実測値544 (M+H, ES+)。
【０２７１】
工程５：  小さな丸底フラスコに、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（２１２mg、０．３９mmol）、５−クロロピリジン−２−アミン（６５mg、０．５１mmol）、ＸＡＮＴＰＨＯＳ（５６mg、０．０９８mmol）、及び炭酸セシウム（３８１mg、１．１７mmol）を入れた。乾燥ジオキサン（５．７mL）を加え、混合物をアルゴンで十分に脱気した。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４６mg、０．０５１mmol）を加え、該物質を再びアルゴンで脱気した。フラスコを、９５℃に加熱した油浴中に２．５時間置いた。フラスコを周囲温度に冷まし、酢酸エチル（３０mL）及び水（３０mL）を加えた。内容物を分液漏斗中で振盪し、有機相を回収した。水相を酢酸エチル（２×３０mL）で逆抽出し、有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。粗物質を分取薄層クロマトグラフィー（２プレート、塩化メチレン中の４％メタノールで溶離）により精製した。生成物バンドを回収して、所望の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルを明黄色の粉末（１１１mg）として得た。LC/MS C28H23ClFN7O2(m/e)の計算値543.98、実測値544 (M+H, ES+)。
【０２７２】
工程６：  １−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１１１mg、０．２０４mmol）及び二水素トリス（ジメチルホスフィニト）ヒドロプラチナート（１０．５mg、０．０２５mmol）を、テトラヒドロフラン（３．８mL）及び水（０．３８mL）に溶かした。該物質を撹拌し、１時間加熱還流（油浴）した。混合物を周囲温度に冷まし、揮発物を取り除いた（ロータリエバポレーター）。残りの粗生成物を、分取薄層クロマトグラフィー（２プレート、最初に、塩化メチレン中の７％メタノールで溶離する、次に同じく塩化メチレン中の７％メタノールで再展開する）により精製した。生成物バンドを回収して、所望の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１−Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドをオフホワイトの粉末（７０mg）として得た。LC/MS C28H25ClFN7O3(m/e)の計算値561.99、実測値562 (M+H, ES+)。
【０２７３】
実施例２４
３−［５−（２−アゼチジン−３−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化４４】
0005859640.tif 000056
【０２７４】
工程１：  ２−（６−クロロピリジン−３−イルオキシ）−２−メチルプロパナール［US2012/40949 A1に従って調製した］（２８ｇ、１４０mmol、当量：１．００）を、乾燥ジクロロメタン（２５２mL）に溶かし、窒素雰囲気下、−１０℃に冷却した（ドライアイス／アセトニトリル冷却浴）。酢酸（１０．４mL、１８２mmol）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（４１．６ｇ、１９６mmol）を加えた。次に、効率的に撹拌しながら、アゼチジン（１７mL、２５２mmol）を６分間かけて滴下した。添加の完了の後、混合物を５分間撹拌し、次に冷却浴を取り外し、該物質を周囲温度に温めた。１時間後、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（２００mL）及びジクロロメタン（８０mL）を加えた。二相性物質を分液漏斗に移し、撹拌し、有機相を回収した。これを重炭酸ナトリウムの５％溶液（２００mL）と一緒に、次にブラインの５０％希釈溶液（２００mL）と一緒に振盪した。有機相を回収し、水相を塩化メチレン（２×１００mL）で逆抽出した。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。残りの粗生成物を、ジクロロメタン中のメタノールの４％溶液で溶離するカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ）により精製して、所望の５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−２−クロロ−ピリジン（２９．６６ｇ）を金褐色の流動性油状物として得た。LC/MS C12H17ClN2O (m/e)の計算値240.73、実測値241 (M+H, ES+)。
【０２７５】
工程２：  無水テトラヒドロフラン（３１４mL）中の５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−２−クロロ−ピリジン（２１．２ｇ、８８．１mmol）の脱気した溶液に、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）ビフェニル（６．１７ｇ、１７．６mmol）及びトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（８．０６ｇ、８．８１mmol）を加えた。次にＴＨＦ中の１M リチウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液（２６４mL、２６４mmol）を、添加漏斗を介して５分間かけて加えた。反応混合物をアルゴン雰囲気下、７５℃で一晩撹拌した。反応混合物を塩化アンモニウムの飽和水溶液（４００mL）に注ぎ、酢酸エチル（３５０mL）で抽出した。有機相を回収し、５０％希ブライン（３５０mL）で洗浄した。有機相を回収し、水相を酢酸エチル（２×２００mL）で逆抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。残りの生成物をジクロロメタン中の０％〜１２％メタノールで溶離するAnalogix フラッシュカラムクロマトグラフィー（カラム８０ｇ）により精製して、所望の５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミン（１０．５９ｇ）を暗褐色の半−粘性油状物（及び純度がより低い画分を、同様の条件下、再精製して、もう一つの生成物４．０１ｇを得ることもできる）として得た。LC/MS C12H19N3O (m/e)の計算値221.3、実測値222 (M+H, ES+)。
【０２７６】
工程３及び４：  上記工程２で調製した該５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミンを、粗生成物を得るために実施例１６−Ｃ、工程５及び６に記載のプロトコルと同様のプロトコルを使用して、所望の生成物に変換した。この物質を、分取薄層クロマトグラフィー（２プレート、最初に、塩化メチレン中の１４％メタノールで溶離する、次に塩化メチレン中の１２％メタノールでさらに２回再展開する）により精製して、所望の３−［５−（２−アゼチジン−１−イル−１，１−ジメチル−エトキシ）−ピリジン−２−イルアミノ］−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドを明褐色の粉末（２７mg）として得た。LC/MS C35H39FN8O4(m/e)の計算値654.73、実測値655 (M+H, ES+)。
【０２７７】
表Ｉ＊は、上記実施例中に記載された手順と同様の手順を使用して調製した、さらなる類似化合物を示す。
【０２７８】
【表２】
0005859640.tif 000057
0005859640.tif 000058
【０２７９】
実施例３９
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−シアノ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化４５】
0005859640.tif 000059
工程１：  小容量のマイクロ波用管中に、乾燥ジメチルホルムアミド１．５mL中の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−クロロ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４カルボン酸アミド（上記実施例２３で調製した）（３１mg、５５．２μmol）、シアン化亜鉛（５１．８mg、４４１μmol）及び２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（６mg、１４．６μmol）を取り、アルゴンで十分に脱気した。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（７mg、７．６μmol）を加え、再び脱気した。混合物をマイクロ波用反応器中、１５０℃で６０分間加熱した。溶媒を取り除き（ロータリエバポレーター／ポンプ）、残りを酢酸エチル（２５mL）及び水（２５mL）に溶かし、分液漏斗中で振盪した。有機相を回収し、水相を酢酸エチル（２×２０mL）で逆抽出した。有機相を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、取り出した。粗生成物を分取薄層クロマトグラフィー（１プレート、ジクロロメタン中の９．５％メタノールで溶離）により精製した。生成物バンドを回収して、準−純粋な所望の生成物（２１mg、純度９１％）を得た。より高い純度のために、物質を１つの分取薄層クロマトグラフィープレートに再び添加し、ジクロロメタン中の７％メタノールで溶離させた。ジクロロメタン中の７％、次に８．５％、そして最後に９％メタノールでプレートを再展開させ、その時、より極性の高い不純物を分離した。より極性の低い生成物バンドを回収して、所望の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−シアノ−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミドをオフホワイトの固体（１７mg、５６％）として得た。LC/MS C29H25FN8O3 (m/e)の計算値552.57、実測値553 (M+H, ES+)。
【０２８０】
実施例４０
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸アミド
【化４６】
0005859640.tif 000060
【０２８１】
工程１：  １Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（８５０mg、９．１３mmol）を、乾燥ＤＭＳＯ １５mLに溶解し、カリウムtert−ブトキシド（１．０８ｇ、９．１３mmol、当量：１．００）を加えた。混合物を室温で２０分間撹拌し、２−ブロモ−６−フルオロベンズアルデヒド（３．７１ｇ、１８．３mmol、当量：２）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次に酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を乾燥させ、濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（１．８３ｇ、７３％）を得た。
【０２８２】
工程２：  ２５mL容量の容器中、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（５０mg、１８１μmol、当量：１．００）、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（７９．８mg、３６２μmol、当量：２）及びヨウ化銅（Ｉ）（６９．０mg、３６２μmol、当量：２．００）を、ＤＭＳＯ（２．００mL）と合わせて、黄色の懸濁液を得た。重炭酸ナトリウム（３８．０mg、４５３μmol、当量：２．５）をそれに加えた。混合物をマイクロ波中、１２０℃で１時間加熱した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２５mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。有機層を濃縮し、ヘキサン中の酢酸エチル（５％メタノール含有）を使用するＩＳＣＯ フラッシュカラムクロマトグラフィー（１５分間で５％〜８０％の直線勾配、シリカゲル１２ｇ）により精製して、純粋な所望の生成物を得て、これをヘキサン中のエーテルでトリチュレートし、濾過して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（１９mg、２５％）を得た。
【０２８３】
工程３:  ２５mL容量の容器中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（１８mg、４３．３μmol、当量：１．００）、水素化ホウ素ナトリウム（６．５６mg、１７３μmol、当量：４）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２mL）及びＭｅＯＨ（１mL）と合わせて、白色の懸濁液を得た。混合物を１時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２５mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。有機層を濃縮して、白色の生成物の１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（１６mg、９９％）を得た。
【０２８４】
工程４:  １０mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボニトリル（１６mg、３８．３μmol、当量：１．００）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（１mg、２．３３μmol、当量：０．０６０８）を、エタノール（８２１μL）及び水（４１０μL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を８０℃に加熱し、２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈した。反応混合物を、ガラス繊維紙を通して濾過した。粗物質を分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥させた白色の固体の１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸アミド（１１mg、６６％、[M+H]+ 436）を得た。
【０２８５】
実施例４１
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化４７】
0005859640.tif 000061
【０２８６】
工程１：  １Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（９３５mg、１０．０mmol、当量：１．００）を、乾燥ＤＭＳＯ １５mLに溶解し、カリウムtert−ブトキシド（１．１９ｇ、１０．０mmol、当量：１．００）を加えた。混合物を室温で２０分間撹拌し、２−ブロモ−６−フルオロベンズアルデヒド（４．０８ｇ、２０．１mmol、当量：２）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次に酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を乾燥させ、濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１．５３ｇ、５５％）を得た。
【０２８７】
工程２：  ２５mL容量の容器中、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１００mg、３６２μmol、当量：１．００）、６−tert−ブチル−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン（１６０mg、７２４μmol、当量：２）及びヨウ化銅（Ｉ）（１３８mg、７２４μmol、当量：２．００）を、ＤＭＳＯ（２．００mL）と合わせて、黄色の懸濁液を得た。重炭酸ナトリウム（７６．１mg、９０６μmol、当量：２．５）をそれに加えた。混合物をマイクロ波中、１２０℃で１時間加熱した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２５mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。有機層を濃縮し、ヘキサン中の酢酸エチル（５％メタノール含有）を使用するＩＳＣＯ フラッシュカラムクロマトグラフィー（１５分間で５％〜８０％直線勾配、シリカゲル２４ｇ）により精製して、純粋な所望の生成物を得て、これをヘキサン中のエーテルでトリチュレートし、濾過して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１１０mg、７３％）を得た。
【０２８８】
工程３：  実施例２２のように、アルデヒドをアルコールに還元した。
【０２８９】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（８９mg、２１３μmol、当量：１．００）及びヒドリド（ジメチル亜ホスフィン酸−ｋＰ）（４．５８mg、１０．７μmol、当量：０．０５）を、エタノール（１mL）及び水（１．００mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を８５℃に加熱し、４５分間撹拌した。混合物が室温になるにまかせ、溶媒を減圧下で除去した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド（５１mg、５６％、[M+H]+ 436）を得た。
【０２９０】
実施例４２
７−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸アミド
【化４８】
0005859640.tif 000062
【０２９１】
工程１：  ２５０mL容量の丸底フラスコ中、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４．３４ｇ、３６．４mmol、当量：１．００）及びＮ−ヨードスクシンイミド（８．６１ｇ、３８．３mmol、当量：１．０５）を、アセトニトリル（６０mL）と合わせて、明褐色の懸濁液を得た。反応混合物を３時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ １００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をジエチルエーテル（２×２５mL）でトリチュレートして、５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（７．５８ｇ、８５％）を橙色の固体として得た。
【０２９２】
工程２：  ２００mL容量の丸底フラスコ中、５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２．５ｇ、１０．２mmol、当量：１．００）、トリエチルアミン（１．１４ｇ、１．５６mL、１１．２mmol、当量：１．１）及びＤＭＡＰ（７４．８mg、６１２μmol、当量：０．０６）を、ＣＨ２Ｃｌ２（５０．０mL）と合わせて、橙色の懸濁液を得た。トシル−Ｃｌ（２．００ｇ、１０．５mmol、当量：１．０３）を反応混合物に少しずつ加え、反応混合物をさらに３時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ ２５mLに注ぎ、ＤＣＭ（３×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、赤色の油状物２gmを得た。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、ヘキサン中の２５％〜７０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、５−ヨード−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１ｇ、２４．６％）を黄色の固体として得た。
【０２９３】
工程３：  ２０mL容量の丸底フラスコ中、５−ヨード−７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３．３２ｇ、８．３２mmol、当量：１．００）、シアン化銅（Ｉ）（２．９８ｇ、３３．３mmol、当量：４）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３０５mg、３３３μmol、当量：０．０４）及びＤＰＰＦ（７３８mg、１．３３mmol、当量：０．１６）を、ジオキサン（４８．１mL）と合わせて、黄色の懸濁液を得た。反応物をアルゴンでパージし、混合物を８０℃に加熱し、４時間撹拌した。４時間時点でのＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。粗反応混合物を減圧下で濃縮した。粗物質をエタノール（２×１５mL）でトリチュレートして、オフイエローの固体１ｇを得た。
【０２９４】
工程４：  １５mL容量の丸底フラスコ中、７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル（１ｇ、３．３５mmol、当量：１．００）及びＴＢＡＦ（１３．４mL、１３．４mmol、当量：４．００）を、テトラヒドロフランと合わせて、オフホワイトの溶液を得た。反応混合物を３時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をジエチルエーテル（１×２０mL）でトリチュレートして、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル（３１２mg、６５％）を得た。
【０２９５】
工程５：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル（４０．９mg、２８４μmol、当量：１．００）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１００mg、２８４μmol、当量：１．００）、酢酸銅（３４．８mg）及びピリジン（４４．９mg、４５．９μL、５６８μmol、当量：２）を、ジクロロエタンと合わせて、暗青色の懸濁液を得た。反応混合物を窒素でフラッシュした。反応混合物を８０℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。混合物を、ヘキサン中の３０〜５０％ＥｔＯＡｃを使用するフラッシュカラムにより分離して、７−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル（４２mg、３１％）を凍結乾燥した白色の粉末として得た。
【０２９６】
工程６：  １０mL容量の丸底フラスコ中、７−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボニトリル（３９mg、８３．２μmol、当量：１．００）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（１mg、２．３３μmol、当量：０．０２８０）を、エタノール（２mL）及び水（１mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を８０℃に加熱し、２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈した。反応混合物を、ガラス繊維紙を通して濾過した。ＨＰＬＣ精製を行って、７−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸アミド（３３mg、６６％、[M+H]+ 487）を得た。
【０２９７】
実施例４３
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化４９】
0005859640.tif 000063
【０２９８】
工程１：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（２５０mg、１．２７mmol、当量：１．００）、ＴＩＰＳ−ＯＴｆ（９７２mg、８６０μL、３．１７mmol、当量：２．５）及びＤＩＥＡ（４９２mg、６６５μL、３．８１mmol、当量：３）を、ジオキサン（６．２５mL）と合わせて、明褐色の溶液を得た。反応混合物を５５℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ ２０mLに注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ヘキサン中の５％〜１０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、無色の油状物の６−ブロモ−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３８０mg、８５％）を得た。
【０２９９】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（５２０mg、１．４７mmol、当量：１．００）、酢酸パラジウム（II）（１６５mg、７３６μmol、当量：０．５）及びトリ−tert−ブチルホスフィン（１４９mg、１８２μL、７３６μmol、当量：０．５）を、トルエンと合わせて、黄色の溶液を得た。１−メチルピペラジン（４４２mg、４９１μL、４．４１mmol、当量：３）及びナトリウムtert−ブトキシド（４２４mg、４．４１mmol、当量：３）を加えた。反応混合物を８０℃に加熱し、１時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ ２０mLに注ぎ、飽和ＮａＣｌ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ＤＣＭ中の２％〜５％ ＭｅＯＨ）により精製して、６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３２６mg、６０％）を黄色の油状物として得て、それを静置して凝固させた。
【０３００】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３２０mg、８５９μmol、当量：１．００）を、ＤＭＦ（１１．８mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を−２０℃に冷却し、５分間撹拌した。アセトニトリル（１１．８mL）中のイソシアン酸クロロスルホニル（３６５mg、２２４μL、２．５８mmol、当量：３）を滴下し、得られた冷却した反応物を−２０℃で撹拌し、そして３時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ ２５mLに注ぎ、飽和ＮａＣｌ（３×２０mL）で抽出した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ ＭｅＯＨ）により精製して、６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１１３mg、５５％）を得た。
【０３０１】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン３−カルボニトリル（１１０mg、４５６μmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１７７mg、５０１μmol、当量：１．１０）及び酢酸銅（１１２mg）を、１，２−ジクロロエタン（３．０３mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（７２．１mg、７３．７μL、９１２μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ ２０mLに注ぎ、飽和ＮＨ４Ｃｌ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ ＭｅＯＨ）により精製して、オフホワイトの固体の１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（４３mg、１７％）を得た。
【０３０２】
工程５：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（４３mg、７６．０μmol）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（２．００mg、４．６６μmol、当量：０．０６１３）を、エタノール（１．００mL）及び水（１．００mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮した。混合物をアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（３５mg、９７％、[M+H]+ 584）を得た。
【０３０３】
実施例４４
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５０】
0005859640.tif 000064
【０３０４】
工程１：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（８００mg、２．２６mmol、当量：１．００）、酢酸パラジウム（II）（２５４mg、１．１３mmol、当量：０．５）及びトリ−tert−ブチルホスフィン（２２９mg、２７９μL、１．１３mmol、当量：０．５）を、トルエンと合わせて、黄色の溶液を得た。モルホリン（７８９mg、７８９μL、９．０６mmol、当量：４）及びナトリウムtert−ブトキシド（６５３mg、６．７９mmol、当量：３）を加えた。反応混合物を８０℃に加熱し、１時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＣｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、ヘキサン中の１０％〜１５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、４−（１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−６−イル）モルホリン（７０３mg、８６％）を明褐色の油状物として得た。
【０３０５】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、４−（１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−６−イル）モルホリン（８０３mg、２．２３mmol）を、ＤＭＦ（１．００mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を−２０℃に冷却し、５分間撹拌した。アセトニトリル（１mL）中のイソシアン酸クロロスルホニル（４７４mg、２９１μL、３．３５mmol、当量：１．５）を滴下し、得られた冷却した反応物を−２０℃で撹拌し、そして３時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＣｌ（２５mL）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、油状物３９０mgを得た。２５mL容量の丸底フラスコ中、粗シアノ化合物及びＴＢＡＦ（１．０２mL、１．０２mmol、当量：１）を、ＴＨＦ（２．００mL）と合わせて、白色の懸濁液を得た。反応混合物を１時間撹拌した。ｔ＝１時間の時点でＬＣ−ＭＳは、反応が完了したことを示した。反応混合物をＤＣＭ ２０mLに注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ３（２×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２４ｇ、ヘキサン中の５０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６−モルホリノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１８０mg、３５％）を白色の固体として得た。
【０３０６】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−モルホリノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（６５mg、２８５μmol、当量：１．００）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１５０mg、４２７μmol、当量：１．５）及び酢酸銅（６９．８mg）を、１，２−ジクロロエタン（３mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（４５．１mg、４６．１μL、５７０μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ、次にシリカゲル、１２ｇ、ヘキサン中の３０％〜４５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−モルホリノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１５７mg、５０％）を無色の油状物として得て、これを乾燥させた時、発泡した。
【０３０７】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−モルホリノ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（７５mg、１３６μmol、当量：１．００）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（２mg、４．６６μmol、当量：０．０３４３）を、エタノール（１mL）及び水（１．００mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌し、次に減圧下で濃縮した。混合物をアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（７０mg、９０％、[M+H]+ 571）を得た。
【０３０８】
実施例４５
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５１】
0005859640.tif 000065
【０３０９】
工程１：  １００mL容量の丸底フラスコ中、１−アセチル−６−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２５０mg、９４７μmol、当量：１．００）、トリエチルアミン（５７５mg、７９２μL、５．６８mmol、当量：６）及びＸ−ＰＨＯＳ（１８１mg、３７９μmol、当量：０．４０）を、ジオキサン（２５mL）と合わせて、無色の溶液を得た。［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（II）（１７３mg、２３７μmol、当量：０．２５）及び２−エトキシ−５−ピリジンボロン酸（２０５mg、１．２３mmol、当量：１．３）を加え、得られた混合物を窒素下、５分間脱気した。反応混合物を１００℃に加熱し、一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ ５０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２０％〜３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６−（６−エトキシピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１６７mg、６７％）を得た。
【０３１０】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（６−エトキシピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１１０mg、４１６μmol、当量：１．００）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１６１mg、４５８μmol、当量：１．１０）及び酢酸銅（１０２mg）を、１，２−ジクロロエタン（３mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（６５．８mg、６７．３μL、８３２μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ）により、次にＳＦＣにより精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（６−エトキシピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（３６mg、１５％）を得た。
【０３１１】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（６−エトキシピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（３６mg、６１．２μmol）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（２６３μｇ、０．６１２μmol、当量：０．０１）を、エタノール（４８０μL）及び水（４８０μL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮した。混合物をアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（３１mg、８４％、[M+H]+ 607）を得た。
【０３１２】
実施例４６
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５２】
0005859640.tif 000066
【０３１３】
工程１：  １００mL容量の丸底フラスコ中、１−アセチル−６−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２５０mg、９４７μmol、当量：１．００）、トリエチルアミン（５７５mg、７９２μL、５．６８mmol、当量：６）及びＸ−ＰＨＯＳ（１８１mg、３７９μmol、当量：０．４０）を、ジオキサン（２５．０mL）と合わせて、無色の溶液を得た。［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（II）（１７３mg、２３７μmol、当量：０．２５）及び２−フルオロフェニルボロン酸（２６５mg、１．８９mmol）を加え、得られた混合物を窒素下、５分間脱気した。反応混合物を１００℃に加熱し、１時間マイクロ波にかけた。反応混合物をＥｔＯＡｃ ５０mLに注ぎ、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２０％〜３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２２０mg、９８％）を得た。
【０３１４】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２００mg、８４３μmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（２９７mg、８４３μmol、当量：１．００）及び酢酸銅（２０７mg）を、１，２−ジクロロエタン（１０mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（１３３mg、１３６μL、１．６９mmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の５０％〜６０％ＥｔＯＡｃ）により、次にＳＦＣにより精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１６３mg、１３％）を得た。
【０３１５】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（６５mg、１１６μmol）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（４９７μｇ、１．１６μmol、当量：０．０１）を、エタノール（８５３μL）及び水（８５３μL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、次にアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−フルオロ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（６１mg、９１％、[M+H]+ 580）を得た。
【０３１６】
実施例４７
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−クロロ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５３】
0005859640.tif 000067
【０３１７】
工程１：  １００mL容量の丸底フラスコ中、１−アセチル−６−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２５０mg、９４７μmol、当量：１．００）、トリエチルアミン（５７５mg、７９２μL、５．６８mmol、当量：６）及びＸ−ＰＨＯＳ（１８１mg、３７９μmol、当量：０．４０）を、ジオキサン（２５．０mL）と合わせて、無色の溶液を得た。［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（II）（１７３mg、２３７μmol、当量：０．２５）及び２−クロロフェニルボロン酸（２９６mg、１．８９mmol）を加え、得られた混合物を、窒素下、５分間脱気した。反応混合物を１００℃に加熱し、一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ ５０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２０％〜３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１４２mg、５９％）を得た。
【０３１８】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１２５mg、４９３μmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１７４mg、４９３μmol、当量：１．００）及び酢酸銅（１２１mg）を、１，２−ジクロロエタン（６．２５mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（７８．０mg、７９．７μL、９８５μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（２０mL）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ）により、次にＳＦＣにより精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（４．５mg、２％）を得た。
【０３１９】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（４mg、６．９２μmol）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（２９．７μｇ、０．０６９２μmol、当量：０．０１）を、エタノール（８５３μL）及び水（８５３μL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し１時間撹拌し、次に減圧下で濃縮した。混合物をアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−クロロ−フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（３．９mg、９５％、[M+H]+ 596）を得た。
【０３２０】
実施例４８
６−ブロモ−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５４】
0005859640.tif 000068
【０３２１】
工程１：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（７５．０mg、３３８μmol、当量：１．１９）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１００mg、２８４μmol、当量：１．００）及び酢酸銅（５２．２mg）を、１，２−ジクロロエタン（３．００mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（４４．９mg、４５．９μL、５６８μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２５％〜４５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６−ブロモ−１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１６mg、１０．３％）を得た。
【０３２２】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１４mg、２５．６μmol）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（１１０μｇ、０．２５６μmol、当量：０．０１）を、エタノール（２．９９mL）及び水（２．９９mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮した。ＨＰＬＣによる精製により、６−ブロモ−１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（１１mg、７７％、[M+H]+ 565）を得た。
【０３２３】
実施例４９
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，２−ジヒドロキシ−エチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５５】
0005859640.tif 000069
【０３２４】
工程１：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−アセチル−６−ブロモ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（３７２mg、１．４１mmol、当量：１．００）、２，６−ジ−tert−ブチル−４−メチルフェノール（５mg、２２．７μmol、当量：０．０１６１）及びトリブチル（ビニル）スズ（５３６mg、４９４μL、１．６９mmol、当量：１．２０）を、トルエン（８mL）と合わせて、明黄色の溶液を得た。窒素をその中に５分間泡立て入れながら混合物を脱気し、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１３０mg、１１３μmol、当量：０．０８）を加えた。反応物を再び窒素で脱気し、反応混合物を８０℃に加熱し、一晩撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３ １５mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の１０％〜２０％ＥｔＯＡｃ）により精製して２つの生成物を得た：１−アセチル−６−ビニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１６０mg）、及び６−ビニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１３８mg）。
【０３２５】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ビニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１３８mg、８１６μmol、当量：１．００）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（２８７mg、８１６μmol、当量：１．００）及び酢酸銅（２００mg）を、１，２−ジクロロエタン（３．５８mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（１２９mg、１３２μL、１．６３mmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、飽和ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ ＭｅＯＨ）により、次にＨＰＬＣにより精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−ビニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（５１mg、１３％）を得た。
【０３２６】
工程３：  １０mL容量のナシ型フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−ビニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（５０mg、１０１μmol、当量：１．００）、４−メチルモルホリン Ｎ−オキシド（１７．８mg、１５２μmol、当量：１．５０）及び四酸化オスミウム（４１．２mg、５０．９μL、４．０５μmol、当量：０．０４）を、アセトン（２mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を２日間撹拌した。反応物を亜硫酸ナトリウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、蒸発させた。さらなる４−メチルモルホリン Ｎ−オキシド（１７．８mg、１５２μmol、当量：１．５０）、四酸化オスミウム（４１．２mg、５０．９μL、４．０５μmol、当量：０．０４）及びアセトン（３mL）を加えて、褐色の溶液を得て、反応を１日間続けた。反応物を亜硫酸ナトリウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、蒸発させた。粗１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（１，２−ジヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１５mg）を、次の工程で使用した。
【０３２７】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（１，２−ジヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１４mg、２６．５μmol、当量：１．００）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（３７３μｇ、０．８７０μmol、当量：０．０３２８）を、エタノール（２００μL）及び水（２００μL）と合わせて、無色の溶液とした。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮した。混合物をアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，２−ジヒドロキシ−エチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（１１．２mg、７７％、[M+H]+ 546）を得た。
【０３２８】
実施例５０
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５６】
0005859640.tif 000070
【０３２９】
工程１：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（４２０mg、１．１９mmol、当量：１．００）及びチオモルホリン１，１−ジオキシド（４８２mg、３．５７mmol）を、トルエン（３mL）と合わせて、黄色の溶液を得た。ビス（トリ−tert−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（６０．７mg、１１９μmol）及びナトリウムtert−ブトキシド（４００mg、４．１６mmol、当量：３．５）を加えた。反応混合物を８０℃に加熱し、１時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＣｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ヘキサン中の２０％〜４０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３２７mg、６８％）を黄色の油状物として得て、これを静置してオフホワイトの固体として凝固させた。
【０３３０】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１−トリイソプロピルシラニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（３２２mg、７９０μmol、当量：１．００）を、ＤＭＦ（１１．９mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を−２０℃に冷却し、５分間撹拌した。アセトニトリル（１１．９mL）中のイソシアン酸クロロスルホニル（３３５mg、２０６μL、２．３７mmol、当量：３）を滴下し、得られた冷却した反応物を−２０℃で撹拌し、３時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ ２５mLに注ぎ、飽和ＮａＣｌ（３×２０mL）で洗浄した。蒸発の後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ）により精製して、６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１２２mg、５６％）を得た。
【０３３１】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１２２mg、４４２μmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（１５５mg、４４２μmol、当量：１．００）及び酢酸銅（１０８mg）を、１，２−ジクロロエタン（３．８９mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（６９．８mg、７１．４μL、８８３μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ）により、次にＨＰＬＣにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２２mg、８％）を得た。
【０３３２】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２２mg、３６．６μmol）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（１．１mg、２．５６μmol、当量：０．０７）を、エタノール（２００μL）及び水（２００μL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮して、次にアセトニトリル及び水で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（１，１−ジオキソ−１λ＊６＊−チオモルホリン−４−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（１５．５mg、６８％、[M+H]+ 619）を得た。
【０３３３】
実施例５１
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−ジメチルアミノ−エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド
【化５７】
0005859640.tif 000071
【０３３４】
工程１：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−ブロモ−１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（７１３mg、２．０２mmol、当量：１．００）、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１．０７ｇ、１．３２mL、１２．１mmol、当量：６）及びビス（トリ−tert−ブチルホスフィン）パラジウム（０）（２０６mg、４０４μmol、当量：０．２）を、トルエン（２mL）と合わせて、黄色の溶液を得た。ナトリウムtert−ブトキシド（５８２mg、６．０５mmol、当量：３）を加えた。反応混合物を８０℃に加熱し、１時間撹拌し、次に飽和ＮａＣｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ＤＣＭ中の２％〜５％ＭｅＯＨ）により精製して、Ｎ１，Ｎ１−ジメチル−Ｎ２−（１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−６−イル）エタン−１，２−ジアミン（４０５mg、５６％）を黄色の油状物として得て、それを静置して凝固させた。
【０３３５】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、Ｎ１，Ｎ１−ジメチル−Ｎ２−（１−（トリイソプロピルシリル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−６−イル）エタン−１，２−ジアミン（４０５mg、１．１２mmol）を、ＤＭＦ（１４．９mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を−２０℃に冷却し、５分間撹拌した。アセトニトリル（１４．９mL）中のイソシアン酸クロロスルホニル（４７７mg、２９３μL、３．３７mmol、当量：３）を滴下し、得られた冷却した反応物を−２０℃で撹拌し、３時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＣｌ ２５mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。蒸発の後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ）により精製して、６−（２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２１１mg、８２％）を得た。
【０３３６】
工程３：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、６−（２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２１１mg、９２０μmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（３２４mg、９２０μmol、当量：１．００）及び酢酸銅（２２６mg）を、１，２−ジクロロエタン（６．７３mL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（１４６mg、１４９μL、１．８４mmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４０ｇ、ＤＣＭ中の５％〜１０％ＭｅＯＨ）により、次にＨＰＬＣにより精製して、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１８mg、３．５％）を得た。
【０３３７】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（２−（ジメチルアミノ）エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１９mg、３４．３μmol、当量：１．００）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（１．４７mg、３．４３μmol、当量：０．１）を、エタノール（２７１μL）及び水（２７１μL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮し、次にアセトニトリル及び水で希釈し、濾過した。得られた濾液を凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−（２−ジメチルアミノ−エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（１４．２mg、７１％、[M+H]+ 572）を得た。
【０３３８】
実施例５２
【化５８】
0005859640.tif 000072
【０３３９】
工程１：  １０mL容量のナシ型フラスコ中、６−ビニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（２７４mg、１．６２mmol）、４−メチルモルホリン Ｎ−オキシド（１７．８mg、１５２μmol、当量：１．５０）及び四酸化オスミウム（３．２９ｇ、４．０７mL、３２４μmol、当量：０．２）を、アセトン（３mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を室温で保持し、２日間撹拌した。反応物を亜硫酸ナトリウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、蒸発させた。さらなる４−メチルモルホリン Ｎ−オキシド（１７．８mg、１５２μmol、当量：１．５０）及び四酸化オスミウム（４１．２mg、５０．９μL、４．０５μmol、当量：０．０４）及びアセトン（３mL）を加えて、褐色の溶液を得て、反応を１日間続けた。反応物を亜硫酸ナトリウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、蒸発させた。粗６−ホルミル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリルを次の工程で使用した。
【０３４０】
工程２及び３：  標準的還元的アミノ化条件に従った後、６−（（ジメチルアミノ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（１８mg、８９．９μmol）、６−tert−ブチル−８−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−１，３−ジヒドロベンゾ［ｃ］［１，２］オキサボロール−４−イル）フタラジン−１（２Ｈ）−オン（３８．０mg、１０８μmol、当量：１．２０）及び酢酸銅（２２．０mg）を、１，２−ジクロロエタン（５７４μL）と合わせて、青色の懸濁液を得た。ピリジン（１４．２mg、１４．５μL、１８０μmol、当量：２）を加えた。反応混合物を４５℃に加熱し、２日間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ ２０mLに注ぎ、飽和ＮＨ４Ｃｌ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（（ジメチルアミノ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（８mg）は精製しなかったが、次の工程で使用した。
【０３４１】
工程４：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−（（ジメチルアミノ）メチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニトリル（８mg、１５．３μmol、当量：１．００）及び［水素ビス（ジメチルホスフィニト−ｋＰ）］白金（II）（６５５μｇ、１．５３μmol、当量：０．１）を、エタノール（１mL）及び水（１mL）と合わせて、無色の溶液として得た。反応混合物を４５℃に加熱し、１時間撹拌した。粗反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物のＬＣＭＳは、所望の生成物を示した。反応混合物をアセトニトリル及び水で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ精製に付し、続いて凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−６−ジメチルアミノメチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸アミド（２．５mg、３０％、[M+H]+ 543）を得た。
【０３４２】
実施例５３
３−（４−アセチル−フェニルアミノ）−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル
【化５９】
0005859640.tif 000073
【０３４３】
工程１：  乾燥アセトニトリル（１０mL）及び乾燥テトラヒドロフラン（３０mL）の溶液に、５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１．０ｇ、９．２５mmol）を、続いてトリエチルアミン（１．０８mL、１．７４mmol）を加えた。得られた懸濁液を室温で５分間撹拌し、次に０℃に冷却した。乾燥テトラヒドロフラン（１０mL）中の（ブロモメタントリイル）トリベンゼン（１．８９ｇ、５．８４mmol）の溶液を、窒素入口を備えた添加漏斗を介して、温度が５℃を超えない速度で滴下した。次に添加漏斗を乾燥テトラヒドロフラン（５mL）で洗浄し、反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次に室温に温まるにまかせて、２時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１５０mL）に溶解し、そして水（１００mL）で１回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、塩化メチレンを使用するカートリッジ式シリカゲル８０ｇに適用し、カラムを１０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配で溶離した。生成物を含有する画分を合わせて、３−（トリチル−アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１．３ｇ、４１％）をオフホワイトの準−結晶質固体として得た。
【０３４４】
工程２：  脱気したＤＭＦ（１．５mL）に、５−（トリチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１．３６ｇ、３．８９mmol）、２−ブロモ−６−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）ベンズアルデヒド（１．０ｇ、２．６mmol）、ヨウ化銅（Ｉ）（４９４mg、２．６mmol）及び炭酸カリウム（７１７mg、５．１９mmol）を加えた。真空と窒素パージを交互に行い反応物を５回不活性化し、次に１００℃（外部温度）に８時間加熱した。次の朝、ＴＬＣは、微量の出発物質を示した。反応物をＥｔＯＡｃ（５０mL）で希釈し、珪藻土のパッドを通した。パッドをさらなるＥｔＯＡｃ（５０mL）で濯ぎ、減圧下で濃縮した。粗物質をシリカカラムに吸着させ、カートリッジ式シリカゲル４０ｇ（２０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、５分間の均一濃度保持、次に２０分間かけて４０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）により精製した。生成物を含有する画分を合わせ、濃縮して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−（トリチル−アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（６３２mg、３７％）を得た。
【０３４５】
工程３：  塩化メチレン（２０mL）及びメタノール（１０mL）中の１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ホルミル−フェニル］−３−（トリチル−アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（６３２mg、０．９６５mmol）の溶液に、０℃で、水素化ホウ素ナトリウム（３７mg、０．９６５mmol）を加えた。得られた濁った反応混合物を０℃で５分間撹拌し、次に室温で１０分間撹拌した。次にＴＬＣにより反応が完了したことを判断した。揮発物を減圧下で除去し、粗生成物をシリカゲルに吸着させ、カートリッジ式シリカゲル４０ｇ（２０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）により精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（トリチル−アミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（４８２mg、７６％）を得た。
【０３４６】
工程４：  １−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−（トリチルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（３８２mg、０．５８２mmol）を、Ｅｔ２Ｏ（３０mL）に溶解し、０℃に冷却した。ＭｅＯＨ（２mL）を、続いて飽和エーテル性ＨＣｌ（２mL、ＨＣｌガスをエーテル１００mL中に泡立て入れることにより調製した）を加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、その後、ＴＬＣにより反応が完了したことを判断した。揮発物を減圧下で除去し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００mL）とＥｔＯＡｃ（１００mL）とに分配し、激しく撹拌した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（５０mL）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。油状残留物をシリカゲルに吸着させ、粗生成物を、カートリッジ式シリカゲル２５ｇ（２０〜７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）により精製して、３−アミノ−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１７８mg、７４％）を白色の粉状固体として得た。
【０３４７】
工程５：  ５mL容量のマイクロ波用反応バイアルに、３−アミノ−１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（５０mg、０．１２１mmol）、１−（４−ブロモフェニル）エタノン（２９mg、０．１４５mmol）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（７．７mg、０．００８mmol）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−３，６−ジメトキシ−２’−４’−６’−トリ−ｉ−プロピル−１，１’−ビフェニル（Brett-Phos）（９．１mg、０．０１７mmol）、炭酸セシウム（５９mg、０．１８１mmol）を入れ、ｔ−ブタノール（１．５mL）に懸濁した。真空とＡｒパージを交互に行うことにより反応容器を３回不活性化し、次に室温で５分間撹拌して、不均質な混合物を得て、これが紫色を帯びた赤色から赤色を帯びた橙色に色が変わった。反応物を１００℃（外部温度）に加熱し、その間に、約２分間の加熱の後に反応混合物の色が橙色に変化した。１．５時間後、ＴＬＣにより反応が完了したことを判断した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土のパッドを通して濾過し、シリカゲルに吸着させた。粗生成物を、カートリッジ式シリカゲル１２ｇ（３０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）を使用するシリカゲルにより精製して、３−（４−アセチル−フェニルアミノ）−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（４０mg、６２％）を白色の粉末として得た。
【０３４８】
工程６：  実施例２２工程４と同じ手順に従った。そのようにして、３−（４−アセチル−フェニルアミノ）−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１１４mg、０．２１４mmol）から、粗カルボキサミドを得て、これをRediSepカートリッジ式シリカゲル１２ｇ（３０％〜１００％（２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）を使用するシリカゲルにより精製して、３−（４−アセチル−フェニルアミノ）−１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド（９９mg、８４％、[M+H]+ 551）をオフホワイトの粉末として得た。
【０３４９】
実施例５４
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化６０】
0005859640.tif 000074
【０３５０】
工程１：  ５mL容量のマイクロ波用反応バイアルに、３−アミノ−１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（２５mg、０．０６０mmol）、２−ブロモピリジン（１１mg、０．０７２mmol）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３．９mg、０．００４mmol）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−３，６−ジメトキシ−２’−４’−６’−トリ−ｉ−プロピル−１，１’−ビフェニル（Brett-Phos）（４．５mg、０．００８mmol）、炭酸セシウム（２９．５mg、０．０９１mmol）を入れ、ｔ−ブタノール（０．６０９mL）に懸濁した。真空とＡｒパージを交互に行うことにより反応容器を３回不活性化し、次に室温で５分間撹拌して、不均質な混合物を得て、これが紫色を帯びた赤色から赤色を帯びた橙色に色が変わった。反応物を１００℃（外部温度）に加熱し、その間に、約２分間の加熱の後に反応混合物の色が橙色に変化した。２時間後、ＴＬＣにより反応が完了したことを判断した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土のパッドを通して濾過し、シリカゲルに吸着させた。粗生成物を、RediSepカートリッジ式シリカゲル１２ｇ（３０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）を使用するシリカゲルにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１５mg、５１％）を白色の粉末として得た。
【０３５１】
工程２：  実施例２２工程４と同じ手順に従った。そのようにして、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１５mg、０．０３０５mmol）から、粗カルボキサミドを得て、これをRediSepカートリッジ式シリカゲル１２ｇ（３０％〜１００％（２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）を使用するシリカゲルにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド（１０mg、６７％、[M+H]+ 510）をオフホワイトの粉末として得たが、これは５〜１０％のピリジンにより加水分解されたアミド副生成物を含有していた。
【０３５２】
実施例５５
１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−ジメチルアミノメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化６１】
0005859640.tif 000075
【０３５３】
工程１：  ５mL容量のマイクロ波用反応バイアルに、３−アミノ−１−（３−（６−tert−ブチル−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（２５mg、０．０６mmol）、１−（６−クロロピリジン−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（１３mg、０．０７５mmol）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４mg、０．００４mmol）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−３，６−ジメトキシ−２’−４’−６’−トリ−ｉ−プロピル−１，１’−ビフェニル（Brett-Phos）（４．５mg、０．００８mmol）、炭酸セシウム（３０mg、０．０９１mmol）を入れ、ｔ−ブタノール（０．６０９mL）に懸濁した。真空とＡｒパージを交互に行うことにより反応容器を３回不活性化し、次に室温で５分間撹拌して、不均質な混合物を得て、これが紫色を帯びた赤色から赤色を帯びた橙色に色が変わった。反応物を１００℃（外部温度）に加熱し、その間に、約２分間の加熱の後に反応混合物の色が橙色に変化した。４時間後、ＴＬＣにより反応が完了したことを判断した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土のパッドを通して濾過し、シリカゲルに吸着させた。粗生成物を、RediSepカートリッジ式シリカゲル１２ｇ（３０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）を使用するシリカゲルにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−ジメチルアミノメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１８mg、５４％）を白色の粉末として得た。
【０３５４】
工程２：  実施例２２工程４と同じ手順に従った。そのようにして、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−ジメチルアミノメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１８mg、０．０３２８mmol）から、粗カルボキサミドを得て、これをRediSepカートリッジ式シリカゲル１２ｇ（３０％〜１００％（２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）／ヘキサンの勾配を用いるカラムで溶離）を使用するシリカゲルにより精製して、１−［３−（６−tert−ブチル−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−２−ヒドロキシメチル−フェニル］−３−（５−ジメチルアミノメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド（１０mg、５４％、[M+H]+ 567）をオフホワイトの粉末として得た。
【０３５５】
実施例５６
１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド
【化６２】
0005859640.tif 000076
【０３５６】
工程１：  実施例２１の例における工程２と同様の方法で、１−（３−ブロモ−２−ホルミルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（１００mg、３６２μmol、上記実施例４１で得た）を、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（８８mg、６３％）に変換した。
【０３５７】
工程２：  ２５mL容量の丸底フラスコ中、１−（３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（８７mg、２２５μmol、当量：１．００）及びヒドリド（ジメチルイル亜ホスフィン酸−ｋＰ）（４．８２mg、１１．２μmol、当量：０．０５）を、エタノール（１mL）及び水（１．００mL）と合わせて、無色の溶液を得た。反応混合物を８５℃に加熱し、４５分間撹拌した。必要な反応時間（変換はＬＣＭＳ及びＴＬＣによりチェックした）の後、反応物が室温になるにまかせ、溶媒を減圧下で除去した。次に混合物を、ＨＰＬＣテフロンフィルターを通して濾過し、逆相ＨＰＬＣに通し、一晩凍結乾燥させて、１−［３−（６−tert−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−１Ｈ−フタラジン−２−イル）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸アミド（４９mg、５４％、[M+H]+ 406）を得た。
【０３５８】
生物学的実施例
ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害アッセイ
本アッセイは、濾過による放射性３３Ｐリン酸化生成物の捕捉である。Ｂｔｋ、ビオチン化ＳＨ２ペプチド基質（Ｓｒｃ相同）、及びＡＴＰの相互作用により、ペプチド基質のリン酸化がもたらされる。ビオチン化生成物は、結合ストレプトアビジンセファロースビーズである。全ての結合放射性標識化生成物を、シンチレーションカウンターにより検出する。
【０３５９】
アッセイしたプレートは、９６ウェルポリプロピレン（Greiner）及び９６ウェル１．２μm親水性ＰＶＤＦフィルタープレート（Millipore）である。ここで報告される濃度は最終アッセイ濃度である：１０〜１００μMの、ＤＭＳＯ中の化合物（Burdick and Jackson）、５〜１０nM Ｂｔｋ酵素（Ｈｉｓでタグ付け、完全長）、３０μMペプチド基質（ビオチン−Ａｃａ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ−ＮＨ２）、１００μM ＡＴＰ（Sigma）、８mMイミダゾール（Sigma、ｐＨ７．２）、８mMグリセリン−２−ホスファート（Sigma）、２００μM ＥＧＴＡ（Roche Diagnostics）、１mM ＭｎＣｌ２（Sigma）、２０mM ＭｇＣｌ２（Sigma）、０．１mg／mL ＢＳＡ（Sigma）、２mM ＤＴＴ（Sigma）、１μＣｉ３３Ｐ ＡＴＰ（Amersham）、２０％ストレプトアビジンセファロースビーズ（Amersham）、５０mM ＥＤＴＡ（Gibco）、２M ＮａＣｌ（Gibco）、２M ＮａＣｌ w/１％リン酸（Gibco）、microscint-20（Perkin Elmer）。
【０３６０】
ＩＣ５０の決定は、標準的な９６ウェルプレートアッセイテンプレートから生成されるデータを利用して、１化合物当たり１０個のデータ点から計算する。１個の対照化合物及び７個の未知の阻害剤を各プレート上で試験し、各プレートで２回行った。典型的には、化合物を、１００μMから開始し、３nMで終了する半対数で希釈した。対照化合物はスタウロスポリンであった。ペプチド基質の不在下でバックグラウンドを計数した。ペプチド基質の存在下で総活性を決定した。以下のプロトコルを使用して、Ｂｔｋ阻害を決定した。
【０３６１】
１）  試料調製：試験化合物を、アッセイ緩衝液（イミダゾール、グリセリン−２−ホスファート、ＥＧＴＡ、ＭｎＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＢＳＡ）中、半対数の増分で希釈した。
２）  ビーズ調製
ａ.）ビーズを５００ｇで遠心分離することにより濯ぐ。
ｂ.）ＰＢＳ及びＥＤＴＡでビーズを再構成して、２０％ビーズスラリーを生成する。
３）  基質を含まない反応ミックス（アッセイ緩衝液、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ ＡＴＰ）及び基質を含むミックス（アッセイ緩衝液、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ ＡＴＰ、ペプチド基質）を、３０℃で１５分間プレインキュベートする。
４）  アッセイを開始するために、酵素緩衝液（イミダゾール、グリセリン−２−ホスファート、ＢＳＡ）中のＢｔｋ １０μL及び試験化合物１０μLを、室温で１０分間プレインキュベートする。
５）  基質を含まないか又は含む反応混合物３０μLを、Ｂｔｋ及び化合物に加える。
６）  総アッセイミックス５０μLを３０℃で３０分間インキュベートする。
７）  アッセイ４０μLをフィルタープレート中のビーズスラリー１５０μLに移して、反応を停止させる。
８）  ３０分後、以下の工程で、フィルタープレートを洗浄する。
ａ．  ＮａＣｌ                      ３×２５０μL
ｂ．  １％リン酸を含有するＮａＣｌ  ３×２５０μL
ｃ．  Ｈ２Ｏ                         １×２５０μL
９）  プレートを６５℃で１時間又は室温で一晩、乾燥させる。
１０）  microscint-20 ５０μLを加え、シンチレーションカウンターで３３Ｐ ｃｐｍを計数する。
ｃｐｍの生データから活性パーセントを計算する。
活性パーセント＝（試料−ｂｋｇ）／（総活性−ｂｋｇ）×１００
一部位用量反応シグモイドモデルを使用して、活性パーセントからＩＣ５０を計算する。
ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）Ｄ））））
ｘ＝化合物濃度、ｙ＝活性パーセント、Ａ＝最小、Ｂ＝最大、Ｃ＝ＩＣ５０、Ｄ＝１（ヒルの傾き）
【０３６２】
ＣＤ６９発現により測定される全血中のＢ細胞活性化の阻害
ヒト血液中のＢ細胞のＢ細胞受容体媒介活性化を抑制するＢｔｋ阻害剤の能力を試験する手順は以下のとおりである：
【０３６３】
ヒト全血（ＨＷＢ）を、健康な志願者から、以下の制限（２４時間薬物を摂取しない非喫煙者）で得る。血液を、静脈穿刺により、ヘパリンナトリウムで抗凝固処理したバキュテナー管に回収する。試験化合物を、ＰＢＳ中の所望の開始薬物濃度の１０倍に希釈し（２０×）、続いてＰＢＳ中の１０％ ＤＭＳＯ中で３倍連続希釈を行って、９点用量反応曲線を生成する。各化合物の希釈物５．５μLを２mLの９６ウェルＶ底プレート（Analytical Sales and Services, #59623-23）に二重に加え；ＰＢＳ中の１０％ ＤＭＳＯ ５．５μLを、対照物及び非刺激ウェルに加える。ＨＷＢ（１００μL）を各ウェルに加え、混合の後、プレートを３７℃、５％ ＣＯ２、１００％湿度で３０分間インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Southern Biotech, #2022-14）（５００μg／mL溶液の１０μL、最終濃度５０μg／mL）を、混合しながら、各ウェルに加え（非刺激ウェルを除く）、プレートを更に２０時間インキュベートする。
【０３６４】
２０時間のインキュベーションの終わりに、試料を、蛍光プローブ標識抗体（ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０ １５μL、BD Pharmingen, #555623、及び／又はＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９ ２０μL、BD Pharmingen #555533）を用い、３７℃、５％ ＣＯ２、１００％湿度で３０分間インキュベートする。誘発制御、補償調節のための未染色かつ単一のステイン、及び初期電圧設定が含まれている。次に、試料を、１×Pharmingen溶解緩衝液１mL（BD Pharmingen # 555899）で溶解し、プレートを１８００rpmで５分間遠心分離する。上澄みを吸引により除去し、残留ペレットを、さらなる１×Pharmingen溶解緩衝液１mLで再び溶解し、プレートを前述のとおり沈降させる。上澄みを吸い出し、残留ペレットをＦＡＣｓ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）中で洗浄する。最後の沈降の後、上澄みを除去し、ペレットをＦＡＣｓ緩衝液１８０μLに再懸濁する。試料を、ＢＤ ＬＳＲ IIフローサイトメーターのＨＴＳ９６ウェルシステム上で作動させるのに適した９６ウェルプレートに移す。
【０３６５】
使用する蛍光体に適切な励起及び発光波長を使用して、データを取得し、Cell Questソフトウェアを使用して陽性細胞値（％）を得る。結果を最初にＦＡＣＳ分析ソフトウェア（Flow Jo）により分析する。試験化合物のＩＣ５０は、抗ＩｇＭによる刺激の後、ＣＤ２０−陽性でもあるＣＤ６９−陽性細胞の割合の５０％減少する濃度（非刺激バックグラウンドについて８つのウェルを減算した後の８つの対照ウェルの平均）として定義される。ＩＣ５０値を、XLfit software version 3, equation 201を使用して計算する。
【０３６６】
このアッセイについての代表的な化合物データを、下記の表IIに列挙する。
【０３６７】
【表３】
0005859640.tif 000077
0005859640.tif 000078
【０３６８】
本発明の化合物によるＢ細胞活性化の阻害を、抗ＩｇＭ刺激Ｂ細胞応答に及ぼす試験化合物の作用を測定することにより立証する。
【０３６９】
Ｂ細胞ＦＬＩＰＲアッセイは、抗ＩｇＭ抗体による刺激からの細胞内カルシウム上昇の阻害剤候補の作用を測定する、細胞に基づく機能的方法である。Ｒａｍｏｓ（ラモス）細胞（ヒトBurkittリンパ腫細胞株。ＡＴＣＣ番号：CRL-1596）を増殖培地（後述）で培養した。アッセイの１日前に、Ｒａｍｏｓ細胞を新鮮増殖培地（上記と同じ）に再懸濁して、組織培養フラスコ中で０．５×１０６／mLの濃度に設定した。アッセイ当日、細胞を計数し、そして組織培養フラスコ中で、１μM FLUO-3AM（TefLabs Cat-No. 0116、無水ＤＭＳＯ及び１０％プルロニック酸中で調製）を補足した増殖培地中で、１×１０６／mLの濃度に設定して、３７℃（４％ ＣＯ２）で１時間インキュベートした。細胞外色素を除去するために、遠心分離（５分、１０００rpm）により細胞を回収し、ＦＬＩＰＲ緩衝液（後述）に１×１０６細胞／mLで再懸濁し、次に９６ウェルのポリ−Ｄ−リシン被覆した黒色／透明プレート（BD Cat-No. 356692）中にウェル当たり１×１０５細胞で分注した。試験化合物を１００μM〜０．０３μMの範囲の種々の濃度（７濃度、詳細は後述）で加え、細胞と共に室温で３０分間インキュベートさせた。Ｒａｍｏｓ細胞のＣａ２＋シグナル伝達を、１０μg/mL抗ＩｇＭ（Southern Biotech、Cat-No. 2020-01）の添加により刺激し、ＦＬＩＰＲ（Molecular Devices、４８０nm励起のアルゴンレーザーを有するＣＣＤカメラを使用して９６ウェルプレートの画像を捕捉）で測定した。
【０３７０】
培地／緩衝液：
増殖培地：  Ｌ−グルタミン（Invitrogen、Cat-No. 61870-010）、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Summit Biotechnology、Cat-No. FP-100-05）；１mMピルビン酸ナトリウム（Invitrogen、Cat. No. 11360-070）を含む、ＲＰＭＩ １６４０培地。
ＦＬＩＰＲ緩衝液：  ＨＢＳＳ（Invitrogen、Cat-No. 141175-079）、２mM ＣａＣｌ２（Sigma、Cat-No. C-4901）、ＨＥＰＥＳ（Invitrogen、Cat-No. 15630-080）、２．５mM プロベネシド（Sigma、Cat-No. P-8761)、０．１％ ＢＳＡ（Sigma、Cat-No. A-7906）、１１mMブドウ糖（Sigma、Cat-No. G-7528）。
【０３７１】
化合物希釈の詳細：
１００μMの最も高い最終アッセイ濃度を達成するために、１０mM 化合物原液（ＤＭＳＯ中に調製）２４μLをＦＬＩＰＲ緩衝液５７６μLに直接加える。試験化合物を、ＦＬＩＰＲ緩衝液に希釈（Biomek 2000ロボット分注器を使用）することにより、以下の希釈スキームを得る：溶剤、１．００×１０−４M、１．００×１０−５、３．１６×１０−６、１．００×１０−６、３．１６×１０−７、１．００×１０−７、３．１６×１０−８。
【０３７２】
アッセイ及び分析：
カルシウムの細胞内上昇は、最大−最小統計量（Molecular DevicesのＦＬＩＰＲ対照及び統計値エクスポートソフトウェアを使用して、刺激性抗体の添加に起因するピーク値から休止基線値を減算する）を使用して報告した。ＩＣ５０を非線形曲線当て嵌め（GraphPad Prism software）を使用して決定した。
【０３７３】
マウスのコラーゲン誘発関節炎（ｍＣＩＡ）
０日目に、マウスに、完全（Complete）フロイント（Freund）アジュバント（adjuvant）（ＣＦＡ）中のII型コラーゲンの乳濁液を、尾の基部又は背中の幾つかの位置に皮内（i.d.）注射する。コラーゲン免疫後、およそ２１〜３５日で、マウスは関節炎を発症する。関節炎の発症は、２１日目に不完全（Incomplete）フロイント（Freund）アジュバント（adjuvant）（ＩＦＡ；i.d.）中のコラーゲンを全身投与して同期（追加免疫）する。追加免疫に対するシグナルである軽度関節炎（スコア１又は２；後述のスコアの説明を参照のこと）の発症について、２０日後から毎日マウスを調べる。追加免疫後に、マウスのスコアをつけ、所定の時間（典型的には２〜３週間）及び投与頻度（毎日（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で、候補治療薬を投与する。
【０３７４】
ラットのコラーゲン誘発関節炎（ｒＣＩＡ）
０日目に、ラットに、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のウシII型コラーゲンの乳濁液を、背中の幾つかの位置に皮内（i.d.）注射する。７日目頃にコラーゲン乳濁液の追加免疫注射（i.d.）を、尾の基部又は背中の別の部位に行う。関節炎は一般に、最初のコラーゲン注射の１２〜１４日後に観察される。１４日目以降は、後述（関節炎の評価）のように関節炎の進行について、ラットを評価することができる。２回目の抗原刺激の時点から開始し、そして所定の時間（典型的には２〜３週間）及び投与頻度（毎日（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ））で、候補治療薬をラットに予防的に投与する。
【０３７５】
関節炎の評価：
両方のモデルで、以下に記載の基準による４つの足の評価を伴うスコアリングシステムを用いて足及び肢関節の炎症の進行を定量する：
スコア：  １＝足又は１つの指の腫脹及び／又は発赤。
２＝２つ以上の関節の腫脹。
３＝３つ以上の関節が関係する足の大きな腫脹。
４＝足及び指全体の重篤な関節炎。
評価は、基線測定については０日目に行い、最初の徴候又は腫脹が現れたら１週間に最大３回再び開始して実験の最後まで行う。動物あたり最大スコア１６を与える、個々の足の４つのスコアを足すことにより、各マウスの関節炎指標を得る。
【０３７６】
ラットのインビボ喘息モデル
オスのBrown-Norwayラットに、ミョウバン０．２mL中のＯＡ（オボアルブミン）１００μgを、週に１回で３週間（０、７、１４日目）腹腔内（i.p.）投与して感作させる。２１日目（最後の感作の１週間後）に、ラットにＯＡエーロゾルで抗原刺激（１％ＯＡを４５分間）する０．５時間前に、溶剤又は化合物処方のいずれかを毎日(q.d.）皮下投与し、抗原刺激の４又は２４時間後に止める。殺処分時に、血清試験及びＰＫのために、全てのラットからそれぞれ血清及び血漿を採取する。気管カニューレを挿入し、ＰＢＳで３回肺を洗浄する。ＢＡＬ液を、総白血球数及び白血球分画について分析する。細胞のアリコート（２０〜１００μL）中の総白血球数は、コールターカウンター（Coulter Counter）で測定する。白血球分画については、５０〜２００μLの試料をサイトスピン（Cytospin）で遠心分離して、スライドをDiff-Quikで染色する。光学顕微鏡下で標準形態学的基準を使用して、単球、好酸球、好中球、及びリンパ球の比率を計数し、パーセントとして表す。Ｂｔｋの代表的阻害剤は、対照レベルと比較して、ＯＡ感作ラット及び抗原刺激ラットのＢＡＬ中の総白血球数の低下を示す。
【０３７７】
前記の発明は、明瞭さ及び理解の目的のために、説明及び例として幾つかの詳細が記載されている。変更及び変形を添付の請求項の範囲内で実施してもよいことが、当業者には明白であろう。したがって、上記の記載は、例示的であり制限的ではないことを意図していることが理解される。したがって、本発明の範囲は、上記の記載に関して決定されるべきではなく、下記添付の特許請求項に関して、そのような特許請求が享受できる権利の同等物の包括的範囲と共に決定されるべきである。
【０３７８】
本出願で引用された全ての特許、特許出願書及び出版物は、各個々の特許、特許出願書又は出版物が個々に示すのと同じ程度に、全ての目的についてその全体が参照により本明細書に組み込まれる。