(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜４４および９９〜１０７からなる群から選択される少なくとも１つのＧＣＣアゴニストペプチドを含有するコアと、
（ｉ）便秘に関連する疾患の治療または予防のための、４．５〜５．５のｐＨ範囲、または５．５〜６．５のｐＨ範囲で分解するｐＨ依存性ポリマーであって、製剤が、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストペプチドを送達するために最適化されている、ｐＨ依存性ポリマー、または
（ｉｉ）炎症性腸疾患に関連する疾患の治療または予防のための、５．５〜６．５のｐＨ範囲、または６．５〜７．５のｐＨ範囲で分解するｐＨ依存性ポリマーであって、製剤が、回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストペプチドを送達するために最適化されている、ｐＨ依存性ポリマーと、
を含むＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２】
前記ＧＣＣアゴニストペプチドが、配列番号１、８、および９からなる群から選択される、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項３】
前記ＧＣＣアゴニストペプチドが、配列番号１および９からなる群から選択される、請求項２に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項４】
経口投与経路用である、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項５】
前記ｐＨ依存性ポリマーが、メタクリル酸コポリマー、ポリビニル酢酸フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸セルローストリメリエテート、酢酸フタル酸セルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートからなる群から選択される、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項６】
前記ｐＨ依存性ポリマーが、メタクリル酸コポリマーである、請求項５に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項７】
前記メタクリル酸コポリマーが、ポリ（メタ）アクリレートポリマーの中から選択される、請求項６に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項８】
前記ポリ（メタ）アクリレートポリマーが、ポリ（メタクリル酸-コ-メチルメタクリレート）１：１、ポリ（メタクリル酸-コ-エチルアクリレート）１：１、ポリ（メタクリル酸-コ-メチルメタクリレート）１：２、ポリ（メチルアクリレート-コ-メチルメタクリレート-コ-メタクリル酸）７：３：１、およびポリ（メタクリル酸-コ-エチルアクリレート）１：１、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される、請求項７に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項９】
１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーおよび膨潤性ポリマーを含む、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１０】
前記製剤が、６．５〜７．５のｐＨ範囲内で分解する２つのｐＨ依存性ポリマーを含み、前記膨潤性ポリマーが２つのｐＨ依存性ポリマーの間で層を形成する、請求項９に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１１】
前記膨潤性ポリマーが、アクリル樹脂コポリマー、ポリビニルアセテート、およびセルロース誘導体からなる群から選択される、請求項９に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１２】
前記膨潤性ポリマーが、ポリ（エチルアクリレート-コ-メチルメタクリレート-コ-トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロライド）１：２：０．２、ポリ（エチルアクリレート-コ-メチルメタクリレート-コ-トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロライド）１：２：０．１、およびポリ（エチルアクリレート-コ-メチルメタクリレート）２：１からなる群から選択されるアクリル樹脂コポリマーである、請求項１１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１３】
孔形成剤をさらに含む、請求項９に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１４】
前記孔形成剤が、サッカロース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、水溶性有機酸、糖、および糖アルコールからなる群から選択される、請求項１３に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１５】
分解性組成物を含む、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１６】
前記分解性組成物が、アミラーゼ、キトサン、コンドロイチン硫酸、シクロデキストリン、デキストラン、グアーガム、ペクチン、およびキシランからなる群から選択される、請求項１５に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１７】
酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ポリ（メタクリル酸-コ-メチルメタクリレート）１：１、およびポリ（メタクリル酸-コ-エチルアクリレート）１：１からなる群から選択される物質をさらに含み、該物質が前記分解性組成物の上に外側コーティングを形成する、請求項１６に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１８】
前記分解性組成物が、共有結合によってＧＣＣアゴニストに結合された担体分子であり、前記共有結合が、胃および小腸内で安定であるが、下部胃腸管、特に結腸内で不安定である、請求項１５に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項１９】
前記共有結合が、アゾ結合またはグリコシド結合である、請求項１８に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２０】
前記担体分子が、グルクロニド、シクロデキストリン、デキストランエステル、または極性アミノ酸からなる群から選択される、請求項１８に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２１】
前記製剤が、４．５〜５．５のｐＨ範囲、または５．５〜６．５のｐＨ範囲内で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含む、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２２】
前記便秘に関連する疾患が、慢性腸偽性閉塞症、結腸偽性閉塞症、慢性特発性便秘症、オピオイドの使用に関連する便秘、術後便秘、および神経障害に関連する便秘からなる群から選択される、請求項２１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２３】
前記製剤が、５．５〜６．５のｐＨ範囲、または６．５〜７．５のｐＨ範囲内で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含む、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２４】
前記炎症性腸疾患に関連する疾患が、回腸炎（術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、およびセリアック病からなる群から選択される、請求項２３に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２５】
前記製剤が、有効量のｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤と併せて投与されることを特徴とする、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２６】
前記ｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤が、スリンダクスルホン、ザプリナスト、およびモタピゾン、バルデナフィル、およびシルデナフィルからなる群から選択される、請求項２５に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２７】
前記製剤が、有効量の少なくとも１つの緩下剤と併せて投与されることを特徴とする、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの緩下剤が、センノシド、ポリエチレングリコール、またはカルシウムポリカルボフィルからなる群から選択される、請求項２７に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項２９】
前記製剤が、有効量の少なくとも１つの抗炎症剤と併せて投与されることを特徴とする、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【請求項３０】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００８年１２月３日出願の、米国仮特許出願第６１／１１９，５２１号に対して優先権の利益を主張し、この内容はその全体が参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、胃腸管の特定の領域への送達のために最適化されており、胃腸の疾患および障害を治療および予防するのに有用な、グアニル酸シクラーゼＣアゴニストの新規製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
グアニル酸シクラーゼＣは、膜貫通型のグアニル酸シクラーゼであり、これは、胃腸上皮細胞を含めた様々な細胞上で発現される（非特許文献１に概説されている）。これは、腸内細菌によって分泌され、下痢を引き起こす熱安定性毒素（ＳＴ）ペプチドの腸受容体として最初に発見された。ＳＴペプチドは、腸粘膜および尿から単離された２つのペプチド、すなわちグアニリンおよびウログアニリンと同様の主要なアミノ酸構造を共有する（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７）。
【０００４】
腸において、グアニリンおよびウログアニリンは、流体と電解質の平衡の制御因子として作用する。経口による高い塩摂取量に応答して、これらのペプチドは、腸管腔中に放出され、そこでこれらは、腸細胞（小腸および結腸の単純な円柱上皮細胞）の管腔膜上に局在化したグアニル酸シクラーゼＣに結合する。グアニリンペプチドがグアニル酸シクラーゼＣに結合すると、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の増加によって開始される、複雑な細胞内シグナル伝達カスケードを介した、腸管腔への電解質および水の排出が誘発される。
【０００５】
グアニリンペプチドによって開始されるｃＧＭＰ媒介シグナル伝達は、腸の通常の機能にとって極めて重要である。このプロセスにおけるいずれの異常性も、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および炎症性腸疾患などの胃腸障害に至る場合がある。炎症性腸疾患は、腸を、赤く腫れた組織を特徴とする炎症した状態にさせる障害の群に与えられる一般的な名称である。例には、潰瘍性大腸炎およびクローン病が含まれる。クローン病は、回腸および大腸に主に影響するが、胃腸管の他のセクションでも起こり得る深刻な炎症疾患である。潰瘍性大腸炎はもっぱら結腸、大腸の炎症疾患である。腸のすべての層が関わり、患部の腸の部分同士の間に通常の健康な腸が存在し得るクローン病と異なり、潰瘍性大腸炎は、結腸の最内側のライニング（粘膜）のみに連続的な様式で影響する。胃腸管のどの部分が関わっているかに応じて、クローン病は、回腸炎、限局性腸炎、大腸炎などと呼ばれる場合がある。クローン病および潰瘍性大腸炎は、胃腸管の運動性障害である痙攣性結腸または過敏性腸症候群と異なる。胃腸炎症は、慢性状態となり得る。１，０００，０００人もの多くのアメリカ人が炎症性腸疾患に苦しんでおり、男性および女性の患者は同様に発症していると思われることが推定されている。ほとんどの場合は、３０歳になる前に診断されるが、この疾患は、生涯のうちで６０代、７０代、およびそれより後の生涯の何十年においても起こり得る。
【０００６】
ＩＢＳおよび慢性特発性便秘症は、かなりの腸の不快感および苦痛を引き起こす場合のある病理学的状態であるが、炎症性腸疾患と異なり、ＩＢＳは、腸組織において深刻な炎症または変化を引き起こさないので、結腸直腸癌のリスクを増大させるとは考えられていない。過去において、炎症性腸疾患、セリアック病、およびＩＢＳは、完全に別個の障害とみなされていた。現在では、たとえ低い程度であってもＩＢＳにおける炎症の記述、およびＩＢＳとセリアック病の間の症状の重なりの記述によって、この主張は疑問となっている。急性細菌性胃腸炎は、感染後過敏性腸症候群を引き続いて発症することに対する、これまで同定された最も強いリスク要因である。臨床的なリスク要因には、急性疾病が長引くこと、および嘔吐がないことが含まれる。炎症刺激に対する遺伝的に決定される感受性も、過敏性腸症候群のリスク要因となり得る。基本的な病態生理は、腸透過性の増大および低い程度の炎症、ならびに運動性の変化および内臓の敏感性を示す。セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン［５−ＨＴ］）は、消化管機能の重要なモジュレーターであり、ＩＢＳの病態生理において主要な役割を果たすことが公知である。５−ＨＴの活性は、ｃＧＭＰによって調節される。
【０００７】
ＩＢＳおよび炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の正確な原因は公知でないが、胃腸粘膜の連続的な再生プロセスの崩壊がＩＢＤにおける疾患に関与し、ＩＢＳを悪化させ得る。胃腸ライニングの再生プロセスは、連続的な増殖および望まれない損傷細胞の埋め合わせを伴う効率的で動的なプロセスである。胃腸粘膜に沿って並ぶ細胞の増殖速度は非常に速く、造血系に次いで２番目である。胃腸の恒常性は、腸粘膜に沿って並ぶ上皮細胞の増殖およびプログラム細胞死（アポトーシス）の両方に依存する。細胞は、絨毛から管腔へと連続して失われ、陰窩中の細胞の増殖、その後の絨毛への上方移動によって実質的に等しい速度で補充される。腸上皮における細胞増殖およびアポトーシスの速度は、様々な状況において、例えば、生理的刺激、例えば、加齢、炎症シグナル、ホルモン、ペプチド、成長因子、化学物質、および食習慣などに応答して、増減する場合がある。さらに、増殖速度の上昇には、代謝回転時間の低減および増殖ゾーンの拡大がしばしば伴う。増殖指数は、潰瘍性大腸炎および他の胃腸障害などの病理学的状態においてはるかに高い。腸の過形成は、胃腸炎症の主要な促進因子である。アポトーシスおよび細胞増殖は一緒に、細胞数を調節し、増殖指数を決定する。アポトーシス速度の低減は、異常成長、炎症、および腫瘍性形質転換と関連することが多い。したがって、増殖の増大および／または細胞死の低減は、腸組織の増殖指数を増大させる場合があり、これにより、ひいては胃腸炎症疾患に至る場合がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｖａａｎｄｒａｇｅｒ  ２００２年  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２３０巻：７３〜８３頁
【非特許文献２】Ｃｕｒｒｉｅら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９巻：９４７〜９５１頁（１９９２年）
【非特許文献３】Ｈａｍｒａら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０巻：１０４６４〜１０４６８頁（１９９３年）
【非特許文献４】Ｆｏｒｔｅ，  Ｌ．、Ｒｅｇ．  Ｐｅｐｔ．  ８１巻：２５〜３９頁（１９９９年）
【非特許文献５】Ｓｃｈｕｌｚら、Ｃｅｌｌ  ６３巻：９４１〜９４８頁（１９９０年）
【非特許文献６】Ｇｕｂａら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１１巻：１５５８〜１５６８頁（１９９６年）
【非特許文献７】Ｊｏｏら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２７４巻：Ｇ６３３〜Ｇ６４４頁（１９９８年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ウログアニリンおよびグアニリンにとっての、腸液およびイオン分泌のモジュレーターとしての役割に加えて、これらのペプチドは、増殖とアポトーシスの平衡を維持することによって、胃腸粘膜の連続的な再生に関与することもできる。例えば、ウログアニリンおよびグアニリンペプチドは、細胞のイオンフラックスを制御することによって、アポトーシスを促進するように思われる。西洋社会における炎症状態の有病率を考慮すると、特に胃腸管の炎症状態についての治療選択肢を改善する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、胃腸管の特定の部分、例えば、小腸、好ましくは十二指腸もしくは空腸、または遠位小腸もしくは大腸、好ましくは回腸、末端回腸、もしくは上行結腸にアゴニストを標的化送達するために最適化されている、グアニル酸シクラーゼＣアゴニスト（「ＧＣＣアゴニスト」）の新規製剤を提供する。十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化された製剤は、過敏性腸症候群（好ましくは便秘支配的）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流疾患、慢性特発性便秘症、胃不全麻痺、胸やけ、胃癌、およびＨ．  ｐｙｌｏｒｉ感染症からなる群から選択される疾患または障害を治療または予防するのに特に有用である。回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化された製剤は、回腸炎（例えば、術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、および大腸癌からなる群から選択される疾患または障害を治療または予防するのに特に有用である。
【００１１】
本発明の標的化ＧＣＣアゴニスト製剤は、他の製剤、特に、従来の経口製剤に対していくつかの利点を提供する。ＧＣＣアゴニストは、胃腸管全体にわたって潜在的に作用し得るので、例えば、ＩＢＤの治療が意図された従来の経口製剤は、非標的組織におけるＧＣＣアゴニストの活性のために副作用を示す場合がある。１つのそのような副作用は下痢であり、これは、潰瘍性大腸炎およびクローン病などのＧＩ疾患のＧＣＣアゴニストによる治療を妨害する場合がある。従来の経口製剤はまた、胃内で、低ｐＨ環境のためにＧＣＣアゴニストの分解または凝集を被る（Ｍａｒｘら、１９９８年  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．  ５２巻：２２９〜２４０頁；Ｃｈｉｎｏら、１９９８年  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔ．  ４２１巻：２７〜３１頁）。対照的に、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、治療される疾患または障害に応じて、小腸であっても大腸であっても標的組織にＧＣＣアゴニストを放出するために最適化されている。そのような製剤は、ＧＣＣアゴニストペプチドの胃の酸性度への曝露を最小限にし、それによって、低ｐＨ条件下で起こる分解および凝集を低減または排除する。本発明のＧＣＣアゴニスト製剤の他の利点には、非標的組織における望まれないＧＣＣ活性によって引き起こされる副作用がより少ないことが含まれる。さらに、本発明によって製剤化されるＧＣＣアゴニストは、従来の（ｃｏｎｖｅｎｔｉａｌ）経口剤形より少ない有効用量で投与することができる。他の実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、従来の経口剤形と比較して副作用が低減された状態で、従来の経口剤形より高い有効用量を標的組織に送達する。
【００１２】
ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、ウログアニリンおよび細菌性ＳＴペプチドの類似体である。好適な実施形態では、この類似体は、天然に存在するペプチド、または「野生型」ペプチドと比較して、優れた特性を有する。そのような優れた特性の例には、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼによる、かつ／または刺激された（ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ）ヒト腸液およびヒト胃液中に存在する他のタンパク質分解酵素によるＮ末端およびＣ末端での分解に対する高い耐性が含まれる。本発明の製剤および方法において使用することができるＧＣＣアゴニストの例は、以下により詳細に記載される。
【００１３】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、（１）少なくとも１つのＧＣＣアゴニストペプチドを含有するコア、および（２）ｐＨ依存性ポリマー、膨潤性ポリマー、および分解性組成物からなる群から選択される、１つまたは複数の標的化物質を含み、ＧＣＣアゴニストペプチドは、配列番号１〜２４９からなる群から選択される。好適な実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、配列番号１、８、９、５５、または５６からなる群から選択される。一実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、配列番号１および９からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の標的化物質は、コアの周囲に１つまたは複数の層を形成する。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの標的化物質は、コアのＧＣＣアゴニストペプチドとマトリックスを形成する。製剤は、経口投与用であることが好ましい。
【００１４】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化されており、４．５〜５．５のｐＨ範囲で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含み、このｐＨ依存性ポリマーは、コアの周囲に１つまたは複数の層を形成する。
【００１５】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化されており、５．５〜６．５のｐＨ範囲、または６．５〜７．５のｐＨ範囲で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含み、このｐＨ依存性ポリマーは、コアの周囲に１つまたは複数の層を形成する。一実施形態では、１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーは、５．５超のｐＨで分解する。別の実施形態では、１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーは、７超のｐＨで分解する。一実施形態では、製剤は、ｐＨ依存性ポリマーの２つの層の間に介在する膨潤性ポリマーをさらに含む。膨潤性ポリマーは、アクリル樹脂コポリマー、ポリビニルアセテート、およびセルロース誘導体からなる群から選択されることが好ましい。一実施形態では、膨潤性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥからなる群から選択されるアクリル樹脂コポリマーである。一実施形態では、製剤は、孔形成剤をさらに含む。特定の実施形態では、孔形成剤は、サッカロース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、水溶性有機酸、糖、および糖アルコールからなる群から選択される。
【００１６】
本発明の製剤中に使用するためのｐＨ依存性ポリマーは、メタクリル酸コポリマー、ポリビニル酢酸フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸セルローストリメリテート（ｔｒｉｍｅｌｌｉａｔｅ）、酢酸フタル酸セルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートからなる群から選択されることが好ましい。一実施形態では、ｐＨ依存性ポリマーの少なくとも１つは、メタクリル酸コポリマーである。好適な実施形態では、メタクリル酸コポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーから選択される。特定の実施形態では、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ−３０Ｄ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄ、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００−５５、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される。
【００１７】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、分解性組成物を含む。ある特定の実施形態では、分解性組成物は、アミラーゼ、キトサン、コンドロイチン硫酸、シクロデキストリン、デキストラン、グアーガム、ペクチン、およびキシランからなる群から選択される。分解性組成物は、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０Ｄ−５５からなる群から選択される物質でコーティングされることが好ましい。
【００１８】
別の実施形態では、分解性組成物は、共有結合によってＧＣＣアゴニストに結合された担体分子であり、この共有結合は、胃および小腸において安定であるが、下部胃腸管、特に結腸において不安定である。共有結合は、アゾ結合またはグリコシド結合であることが好ましい。特定の実施形態では、担体分子は、グルクロニド、シクロデキストリン、デキストランエステル、または極性アミノ酸からなる群から選択される。
【００１９】
本発明は、胃腸の疾患または障害の治療または予防を必要とする被験体において、これらを治療または予防する方法であって、（１）少なくとも１つのＧＣＣアゴニストペプチドを含有するコア、および（２）ｐＨ依存性ポリマー、膨潤性ポリマー、および分解性組成物からなる群から選択される１つまたは複数の標的化物質を含むＧＣＣアゴニスト製剤をこの被験体に投与するステップを含み、ＧＣＣアゴニストペプチドは、配列番号１〜２４９からなる群から選択される方法も提供する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の標的化物質は、コアの周囲に１つまたは複数の層を形成する。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの標的化物質は、コアのＧＣＣアゴニストペプチドとマトリックスを形成する。製剤は、経口投与用であることが好ましい。
【００２０】
一実施形態では、製剤は、４．５〜５．５のｐＨ範囲で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含み、胃腸の疾患または障害は、過敏性腸症候群（好ましくは便秘支配的）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流疾患、慢性特発性便秘症、胃不全麻痺、胸やけ、胃癌、およびＨ．  ｐｙｌｏｒｉ感染症からなる群から選択される。一実施形態では、胃腸の疾患または障害は、慢性特発性便秘症および過敏性腸症候群からなる群から選択される。
【００２１】
一実施形態では、製剤は、６．５〜７．５のｐＨ範囲で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含み、胃腸の疾患または障害は、回腸炎（術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、および大腸癌からなる群から選択される。一実施形態では、胃腸の疾患または障害は、潰瘍性大腸炎およびクローン病からなる群から選択される。
【００２２】
好適な実施形態では、胃腸の疾患または障害の治療または予防を必要とする被験体において、これらを治療または予防する方法は、配列番号１、８、９、５５、または５６からなる群から選択されるＧＣＣアゴニストペプチドを含むＧＣＣアゴニスト製剤をこの被験体に投与するステップを含む。一実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、配列番号１および９からなる群から選択される。
【００２３】
一実施形態では、この方法は、有効量のｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼの阻害剤を被験体に投与するステップをさらに含む。特定の実施形態では、ｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤は、スリンダクスルホン（ｓｕｌｄｉｎａｃ  ｓｕｌｆｏｎｅ）、ザプリナスト、およびモタピゾン、バルデナフィル（ｖａｒｄｅｎｉｆｉｌ）、およびシルデナフィル（ｓｕｌｄｅｎｉｆｉｌ）からなる群から選択される。
【００２４】
一実施形態では、この方法は、有効量の少なくとも１つの緩下剤を被験体に投与するステップをさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つの緩下剤は、ＳＥＮＮＡ、ＭＩＲＡＬＡＸ、ＰＥＧ、またはカルシウムポリカルボフィルからなる群から選択される。
【００２５】
一実施形態では、この方法は、有効量の少なくとも１つの抗炎症剤を被験体に投与するステップをさらに含む。
【００２６】
好適な実施形態では、被験体はヒトである。
【００２７】
以下に、本発明の基本的な諸特徴および種々の態様を列挙する。
［１］
（１）少なくとも１つのＧＣＣアゴニストペプチドを含有するコアと、
（２）ｐＨ依存性ポリマー、膨潤性ポリマー、および分解性組成物からなる群から選択される１つまたは複数の標的化物質と
を含むＧＣＣアゴニスト製剤であって、該ＧＣＣアゴニストペプチドは、配列番号１〜２４９からなる群から選択される、ＧＣＣアゴニスト製剤。
［２］
前記ＧＣＣアゴニストペプチドが、配列番号１、８、９、５５、または５６からなる群から選択される、［１］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［３］
前記ＧＣＣアゴニストペプチドが、配列番号１および９からなる群から選択される、［２］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［４］
経口投与経路用である、［１］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［５］
十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化されている、［１］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［６］
４．５〜５．５のｐＨ範囲、または５．５〜６．５のｐＨ範囲で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含む、［５］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［７］
回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化されている、［１］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［８］
５．５〜６．５のｐＨ範囲、または６．５〜７．５のｐＨ範囲で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含む、［７］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［９］
前記ｐＨ依存性ポリマーが、メタクリル酸コポリマー、ポリビニル酢酸フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸セルローストリメリエテート、酢酸フタル酸セルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートからなる群から選択される、［６］または［８］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１０］
前記ｐＨ依存性ポリマーのうちの少なくとも１つが、メタクリル酸コポリマーである、［９］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１１］
前記メタクリル酸コポリマーが、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーの中から選択される、［１０］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１２］
前記ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーが、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ−３０Ｄ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ１００、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄ、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００−５５、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される、［１１］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１３］
１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーおよび膨潤性ポリマーを含む、［７］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１４］
前記製剤が、６．５〜７．５のｐＨ範囲内で分解する２つのｐＨ依存性ポリマーを含み、前記膨潤性ポリマーが２つのｐＨ依存性ポリマーの間で層を形成する、［１３］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１５］
前記膨潤性ポリマーが、アクリル樹脂コポリマー、ポリビニルアセテート、およびセルロース誘導体からなる群から選択される、［１３］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１６］
前記膨潤性ポリマーが、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥからなる群から選択されるアクリル樹脂コポリマーである、［１５］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１７］
孔形成剤をさらに含む、［１３］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１８］
前記孔形成剤が、サッカロース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、水溶性有機酸、糖、および糖アルコールからなる群から選択される、［１７］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［１９］
分解性組成物を含む、［１］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［２０］
前記分解性組成物が、アミラーゼ、キトサン、コンドロイチン硫酸、シクロデキストリン、デキストラン、グアーガム、ペクチン、およびキシランからなる群から選択される、［１９］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［２１］
酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０Ｄ−５５からなる群から選択される物質をさらに含み、該物質が前記分解性組成物の上に外側コーティングを形成する、［２０］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［２２］
前記分解性組成物が、共有結合によってＧＣＣアゴニストに結合された担体分子であり、前記共有結合が、胃および小腸内で安定であるが、下部胃腸管、特に結腸内で不安定である、［１９］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［２３］
前記共有結合が、アゾ結合またはグリコシド結合である、［２２］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［２４］
前記担体分子が、グルクロニド、シクロデキストリン、デキストランエステル、または極性アミノ酸からなる群から選択される、［２２］に記載のＧＣＣアゴニスト製剤。
［２５］
胃腸の疾患または障害の治療または予防を必要とする被験体において該疾患または障害を治療または予防するための方法であって、
（１）少なくとも１つのＧＣＣアゴニストペプチドを含有するコア、および
（２）ｐＨ依存性ポリマー、膨潤性ポリマー、および分解性組成物からなる群から選択される１つまたは複数の標的化物質
を含むＧＣＣアゴニスト製剤を該被験体に投与するステップを含み、該ＧＣＣアゴニストペプチドが配列番号１〜２４９からなる群から選択される方法。
［２６］
前記製剤が、４．５〜５．５のｐＨ範囲、または５．５〜６．５のｐＨ範囲内で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含む、［２５］に記載の方法。
［２７］
前記胃腸の疾患または障害が、過敏性腸症候群、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流疾患、慢性特発性便秘症、胃不全麻痺、胸やけ、胃癌、およびＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染症からなる群から選択される、［２６］に記載の方法。
［２８］
前記胃腸の疾患または障害が、慢性特発性便秘症および過敏性腸症候群からなる群から選択される、［２７］に記載の方法。
［２９］
前記製剤が、５．５〜６．５のｐＨ範囲、または６．５〜７．５のｐＨ範囲内で分解する１つまたは複数のｐＨ依存性ポリマーを含む、［２５］に記載の方法。
［３０］
前記胃腸の疾患または障害が、回腸炎（術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、および大腸癌からなる群から選択される、［２９］に記載の方法。
［３１］
前記胃腸の疾患または障害が、潰瘍性大腸炎およびクローン病からなる群から選択される、［３０］に記載の方法。
［３２］
前記ＧＣＣアゴニストペプチドが、配列番号１、８、９、５５、または５６からなる群から選択される、［２６］または［２９］に記載の方法。
［３３］
前記ＧＣＣアゴニストペプチドが、配列番号１および９からなる群から選択される［３２］に記載の方法。
［３４］
有効量のｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼの阻害剤を前記被験体に投与するステップをさらに含む、［２６］または［２９］に記載の方法。
［３５］
前記ｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤が、スリンダクスルホン、ザプリナスト、およびモタピゾン、バルデナフィル、およびシルデナフィルからなる群から選択される、［３４］に記載の方法。
［３６］
有効量の少なくとも１つの緩下剤を前記被験体に投与するステップをさらに含む、［２６］に記載の方法。
［３７］
前記少なくとも１つの緩下剤が、ＳＥＮＮＡ、ＭＩＲＡＬＡＸ、ＰＥＧ、またはカルシウムポリカルボフィルからなる群から選択される、［３６］に記載の方法。
［３８］
有効量の少なくとも１つの抗炎症剤を前記被験体に投与するステップをさらに含む、［２６］または［２９］に記載の方法。
［３９］
前記被験体がヒトである、［２６］または［２９］に記載の方法。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなり、これらによって包含される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１Ａ】図１Ａは、人工胃液（ＳＧＦ）中で、様々な長さの時間インキュベートされたＳＰ−３０４の生物活性を示す図である。ＳＰ−３０４の生物活性は、Ｔ８４細胞内でｃＧＭＰ合成を刺激するその能力を測定することによって求めた。それぞれ、０、１５、３０、６０、９０、および１２０分間インキュベートした試料を収集し、０分の試料の活性を１００％の生物活性として定義して、生物活性について分析した。他の試料の活性を、０分の活性の試料と比べた百分率活性として示す。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、それぞれ、ＳＧＦを用いて０分および１２０分間インキュベートした後の、ＳＰ−３０４試料のＨＰＬＣクロマトグラフィー分析の略図である。矢印は、ＳＰ−３０４の溶出位置を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、人工腸液（ＳＩＦ）中で、様々な長さの時間インキュベートされたＳＰ−３０４の生物活性を示す図である。ＳＰ−３０４試料を、それぞれ０、３０、６０、９０、１５０、および３００分間インキュベートし、次いで、Ｔ８４細胞内でｃＧＭＰ合成を刺激するその能力について試験した。ＳＩＦ中での０分のインキュベーション時間における試料中のｃＧＭＰ刺激活性を、１００％の生物活性として採用した。他のＳＰ−３０４インキュベーション試料の活性は、０分の試料の活性と比べた活性の百分率として計算した。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、（Ａ）熱不活化したＳＩＦを用いて３００分間、または（Ｂ）ＳＩＦを用いて１２０分間インキュベートした後の、ＳＰ−３０４試料のＨＰＬＣクロマトグラフィースペクトルを示す図である。矢印は、ＳＰ−３０４の溶出位置を示す。ＳＩＦを用いた処置により、２時間のインキュベーション後に、ＳＰ−３０４が完全に排除され、＊によって示したように、９．４分で溶出するペプチドシグナルが出現した。
【図３】図３は、ＳＰ−３０４の可能な分解生成物の略図である。
【図４】図４は、Ｔ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激によって測定した場合の、１６塩基長のＳＰ−３０４の切断ペプチドの生物活性を示す図である。ＳＰ−３３８  １５塩基長ペプチドは、これがＣ末端でＬｅｕを欠いていることを除いてＳＰ−３０４と同一である。ＳＰ−３２７、ＳＰ−３２９、およびＳＰ−３３１は、それぞれその対応する親のＳＰ−３２６、ＳＰ−３２８、およびＳＰ−３３０と比べて、そのＣ末端でＬｅｕを欠いている。示したデータ点は、二通りの測定値の平均である。
【図５】図５は、ＳＰ−３０４および同様の類似体によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を試験ペプチドに３０分間曝し、次いで細胞可溶化物を使用することによって細胞内ｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図６】図６は、ＳＰ−３３９（リナクロチド）および他のリナクロチド類似体によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を試験ペプチドに３０分間曝し、次いで細胞可溶化物を使用することによって細胞内ｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図７Ａ】図７Ａは、人工腸液（ＳＩＦ）中で、様々な長さの時間インキュベートされたＳＰ−３３３の生物活性を示す図である。ＳＰ−３３３試料を、それぞれ０、５、１０、３０、６０、および１２０分間インキュベートし、Ｔ８４細胞内でｃＧＭＰ合成を刺激するその能力について試験した。Ｃ１２０として印をつけた対照試料は、熱失活したＳＩＦを用いてＳＰ−３３３を１２０分間インキュベートすることによって作製した。インキュベーションからの試料を取り出し、９５℃で５分間加熱することによって消化酵素を不活化し、次いで、Ｔ８４細胞内で環状ＧＭＰ合成を刺激するのに使用した。ＳＩＦ中での０分のインキュベーション時間における試料中のｃＧＭＰ刺激活性を、１００％の生物活性として採用した。他のＳＰ−３０４インキュベーション試料の活性は、０分の試料の活性と比べた活性の百分率として計算した。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、人工腸液（ＳＩＦ）中で、様々な長さの時間インキュベートされたＳＰ−３３２の生物活性を示す図である。ＳＰ−３３３試料を、それぞれ０、５、１０、３０、６０、および１２０分間インキュベートし、Ｔ８４細胞内でｃＧＭＰ合成を刺激するその能力について試験した。Ｃ１２０として印をつけた対照試料は、熱失活したＳＩＦを用いてＳＰ−３３２を１２０分間インキュベートすることによって作製した。インキュベーションからの試料を取り出し、９５℃で５分間加熱することによって消化酵素を不活化し、次いで、Ｔ８４細胞内で環状ＧＭＰ合成を刺激するのに使用した。ＳＩＦ中での０分のインキュベーション時間における試料中のｃＧＭＰ刺激活性を、１００％の生物活性として採用した。他のＳＰ−３０４インキュベーション試料の活性は、０分の試料の活性と比べた活性の百分率として計算した。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図７Ｃ】図７Ｃは、人工腸液（ＳＩＦ）中で、様々な長さの時間インキュベートされたＳＰ−３０４の生物活性を示す図である。ＳＰ−３０４試料を、それぞれ０、１０、および６０分間インキュベートし、Ｔ８４細胞内でｃＧＭＰ合成を刺激するその能力について試験した。Ｃ０およびＣ６０として印をつけた対照試料は、熱失活したＳＩＦを用いてＳＰ−３０４をそれぞれ０分および６０分間インキュベートすることによって作製した。インキュベーションからの試料を取り出し、９５℃で５分間加熱することによって消化酵素を不活化し、次いで、Ｔ８４細胞内で環状ＧＭＰ合成を刺激するのに使用した。ＳＩＦ中での０分のインキュベーション時間における試料中のｃＧＭＰ刺激活性を、１００％の生物活性として採用した。他のＳＰ−３０４インキュベーション試料の活性は、０分の試料の活性と比べた活性の百分率として計算した。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図７Ｄ−１】図７Ｄは、それぞれ、ＳＩＦ中で０分間（図７Ｄ−１）、およびＳＩＦ中で６０分間（図７Ｄ−２）インキュベートされたＳＰ−３０４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。矢印は、親ＳＰ−３０４ペプチドの溶出位置を示す。データは、１４．３分に溶出するＳＰ−３０４のピークは完全に消滅し、２つの新しいピークが、７．４分および１０．３分に現れることを明らかに示す。これらの新しいペプチドのピークは、ＳＰ−３０４の分解生成物を表す。
【図７Ｄ−２】図７Ｄは、それぞれ、ＳＩＦ中で０分間（図７Ｄ−１）、およびＳＩＦ中で６０分間（図７Ｄ−２）インキュベートされたＳＰ−３０４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。矢印は、親ＳＰ−３０４ペプチドの溶出位置を示す。データは、１４．３分に溶出するＳＰ−３０４のピークは完全に消滅し、２つの新しいピークが、７．４分および１０．３分に現れることを明らかに示す。これらの新しいペプチドのピークは、ＳＰ−３０４の分解生成物を表す。
【図７Ｅ−１】図７Ｅは、それぞれ、ＳＩＦ中で０分間（図７Ｅ−１）、およびＳＩＦ中で１２０分間（図７Ｅ−２）インキュベートされたＳＰ−３３２のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。矢印は、親ＳＰ−３３２ペプチドの溶出位置を示す。データは、１４．８分に溶出するペプチドＳＰ−３３２は、ＳＩＦを用いて１２０分間インキュベートした後に無傷のままであることを示し、ＳＰ−３３２は、ＳＩＦ中に存在するプロテアーゼによるタンパク質分解に対して耐性であることを示す。
【図７Ｅ−２】図７Ｅは、それぞれ、ＳＩＦ中で０分間（図７Ｅ−１）、およびＳＩＦ中で１２０分間（図７Ｅ−２）インキュベートされたＳＰ−３３２のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。矢印は、親ＳＰ−３３２ペプチドの溶出位置を示す。データは、１４．８分に溶出するペプチドＳＰ−３３２は、ＳＩＦを用いて１２０分間インキュベートした後に無傷のままであることを示し、ＳＰ−３３２は、ＳＩＦ中に存在するプロテアーゼによるタンパク質分解に対して耐性であることを示す。
【図７Ｆ−１】図７Ｆは、それぞれ、ＳＩＦ中で０分間（図７Ｆ−１）、およびＳＩＦ中で１２０分間（図７Ｆ−２）インキュベートしたＳＰ−３３３のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。矢印は、親ＳＰ−３３３ペプチドの溶出位置を示す。データは、１４．８分に溶出するペプチドＳＰ−３３３は、ＳＩＦを用いてインキュベートした後に無傷のままであることを示し、ＳＰ−３３３は、１２０分のインキュベーション期間の間で、ＳＩＦ中に存在するプロテアーゼによるタンパク質分解に対して耐性であることを示す。
【図７Ｆ−２】図７Ｆは、それぞれ、ＳＩＦ中で０分間（図７Ｆ−１）、およびＳＩＦ中で１２０分間（図７Ｆ−２）インキュベートしたＳＰ−３３３のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。矢印は、親ＳＰ−３３３ペプチドの溶出位置を示す。データは、１４．８分に溶出するペプチドＳＰ−３３３は、ＳＩＦを用いてインキュベートした後に無傷のままであることを示し、ＳＰ−３３３は、１２０分のインキュベーション期間の間で、ＳＩＦ中に存在するプロテアーゼによるタンパク質分解に対して耐性であることを示す。
【図７Ｇ−１】図７Ｇは、２、６、１２、および２４時間のＳＩＦを用いたＳＰ−３３３のインキュベーションを示す図である。Ｔ８４刺激（ｓｔｉｍｕａｌａｔｉｏｎ）アッセイにおけるＳＰ−３３３の活性に対するＳＩＦ消化の効果を求め（図７Ｇ−１）、試料をＨＰＬＣによっても分析した（図７Ｇ２−５）。親ペプチドおよびその代謝産物の溶出位置を、矢印によって示す。
【図７Ｇ−２】図７Ｇは、２、６、１２、および２４時間のＳＩＦを用いたＳＰ−３３３のインキュベーションを示す図である。Ｔ８４刺激（ｓｔｉｍｕａｌａｔｉｏｎ）アッセイにおけるＳＰ−３３３の活性に対するＳＩＦ消化の効果を求め（図７Ｇ−１）、試料をＨＰＬＣによっても分析した（図７Ｇ２−５）。親ペプチドおよびその代謝産物の溶出位置を、矢印によって示す。
【図７Ｇ−３】図７Ｇは、２、６、１２、および２４時間のＳＩＦを用いたＳＰ−３３３のインキュベーションを示す図である。Ｔ８４刺激（ｓｔｉｍｕａｌａｔｉｏｎ）アッセイにおけるＳＰ−３３３の活性に対するＳＩＦ消化の効果を求め（図７Ｇ−１）、試料をＨＰＬＣによっても分析した（図７Ｇ２−５）。親ペプチドおよびその代謝産物の溶出位置を、矢印によって示す。
【図７Ｇ−４】図７Ｇは、２、６、１２、および２４時間のＳＩＦを用いたＳＰ−３３３のインキュベーションを示す図である。Ｔ８４刺激（ｓｔｉｍｕａｌａｔｉｏｎ）アッセイにおけるＳＰ−３３３の活性に対するＳＩＦ消化の効果を求め（図７Ｇ−１）、試料をＨＰＬＣによっても分析した（図７Ｇ２−５）。親ペプチドおよびその代謝産物の溶出位置を、矢印によって示す。
【図７Ｇ−５】図７Ｇは、２、６、１２、および２４時間のＳＩＦを用いたＳＰ−３３３のインキュベーションを示す図である。Ｔ８４刺激（ｓｔｉｍｕａｌａｔｉｏｎ）アッセイにおけるＳＰ−３３３の活性に対するＳＩＦ消化の効果を求め（図７Ｇ−１）、試料をＨＰＬＣによっても分析した（図７Ｇ２−５）。親ペプチドおよびその代謝産物の溶出位置を、矢印によって示す。
【図８】図８は、ＳＰ−３３３のペグ化（ｐｅｇｇｙｌａｔｅｄ）類似体によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を指定したペプチドに３０分間曝し、細胞可溶化物を使用することによって細胞内のｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、三通りの測定値の平均±標準偏差である。
【図９】図９は、単独での、またはホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤のスリンダクスルホン（１００μＭ）もしくはザプリナスト（１００μＭ）と併用したＳＰ−３０４（０．１μＭ）によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を、示したような様々な処置に３０分間曝し、細胞可溶化物を使用することによって細胞内ｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、二通りの測定値の平均である。
【図１０】図１０は、単独での、または示したような漸増濃度のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤と併用したＳＰ−３０４（０．１μＭまたは１．０μＭ）によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を、示したような様々な処置に３０分間曝し、細胞可溶化物を使用することによって細胞内ｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、二通りの測定値の平均である。
【図１１】図１１は、単独での、または示したような漸増濃度のザプリナストと併用したＳＰ−３３３（０．１μＭまたは１．０μＭ）によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を、示したような様々な処置に３０分間曝し、細胞可溶化物を使用することによって細胞内ｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、二通りの測定値の平均である。
【図１２】図１２は、単独での、または示したような漸増濃度のスリンダクスルホンと併用したＳＰ−３３３（０．１μＭ）によるＴ８４細胞内のｃＧＭＰ合成の刺激を示す図である。Ｔ８４細胞を、示したような様々な処置に３０分間曝し、細胞可溶化物を使用することによって細胞内ｃＧＭＰレベルを求めた。示したデータ点は、二通りの測定値の平均である。
【図１３】図１３は、ＳＰ−３０４処置は、大腸炎のＴＮＢＳ誘導性マウスモデルにおいて、便の硬さを改善し、ＴＮＢＳ誘導性腸閉塞を取り除くことを示す図である。
【図１４】図１４は、ＳＰ−３０４処置は、カニクイザルの胃腸管の管腔内の水流の増大を刺激したことを示す図である。
【図１５】図１５Ａ〜Ｂは、最初の排便のブリストルスコアによって判断した場合の、ヒト志願者における便の硬さに対するＳＰ−３０４投与の効果を示す図である。絶食した、健康な男性および女性被験体における、ＳＰ−３０４の第１相、単一部位、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、単回用量、漸増用量、経口用量、逐次用量エスカレーション試験からの結果。１コホート当たり８被験体（６人のＳＰ−３０４；２人のプラセボ）を利用する合計９コホートを利用し、合計して７１志願者に薬物を投与した。各コホートに単回、経口用量を投与し、または１０倍希釈したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（２４０ｍＬ）でマッチングプラセボを投与した。９つのコホートの用量は、０．１、０．３、０．９、２．７、５．４、８．１、１６．２、２４．３、および４８．６ｍｇのＳＰ−３０４を含んでいた。
【図１６】図１６は、ヒト志願者における、投与後２４時間にわたる最初の便通までの平均時間に対するＳＰ−３０４投与の効果を示す図である。絶食した、健康な男性および女性被験体における、ＳＰ−３０４の第１相、単一部位、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、単回用量、漸増用量、経口用量、逐次用量エスカレーション試験からの結果。１コホート当たり８被験体（６人のＳＰ−３０４；２人のプラセボ）を利用する合計９コホートを利用し、合計して７１志願者に薬物を投与した。各コホートに単回、経口用量を投与し、または１０倍希釈したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（２４０ｍＬ）でマッチングプラセボを投与した。９つのコホートの用量は、０．１、０．３、０．９、２．７、５．４、８．１、１６．２、２４．３、および４８．６ｍｇのＳＰ−３０４を含んでいた。
【図１７】図１７は、ＳＰ−３０４は、ＢＤＦ−１マウスにおけるＤＳＳ誘発性大腸炎の炎症を回復させるのに、スルファサラジンと比較して優れた活性を示したことを示す図である。
【図１８】図１８は、ＳＰ−３０４は、ＢＤＦ−１マウスにおけるＴＮＢＳ誘発性大腸炎の炎症を回復させるのに、スルファサラジンと比較して優れた活性を示したことを示す図である。
【図１９】図１９は、サルにおいて下痢を生じさせたＳＰ−３０４の用量の決定を示す図である。オスおよびメスの２つのサルの群を、１日当たり単回用量のＳＰ−３０４で持続的に２８日間処置した（各群について、０および７５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５；１、１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝４）。便の硬さおよび排便頻度を毎日記録した。結果を２８日間の累積スコアとして示した。便の硬さについて使用した採点は、以下の通りであった：０：便通なし１：正常な便、２：軟便／泥状便、および３：下痢／水様性便。
【図２０】図２０は、ｐＨ依存性放出用に製剤化したＳＰ−３０４の図である。ゼラチンカプセルに、計算量のＳＰ−３０４（体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ）を満たした。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＬ３０  Ｄ−５５（５．５超のｐＨでの放出用；ロット番号Ｂ０８１２１４６９０）、またはＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＦＳＤ（７超のｐＨでの放出用；ロット番号Ｇ０９０３６５０３０）でカプセルをコーティングした。各製剤からの１つのカプセルを、ｐＨ５．７またはｐＨ７．２に調整した緩衝食塩液５０ｍｌを含有するプラスチックチューブ内に配置した。同じ量のＳＰ−３０４を含有する、コーティングされていないゼラチンカプセルを対照として使用した。すべての対照は、ｐＨ１．０に調整された緩衝食塩水溶液中でインキュベートした。プラスチックチューブを、３７℃のインキュベーター内の回転振盪機上でインキュベートした。指定した時間間隔で、チューブから試料（０．５ｍｌ）を引き抜き、ＨＰＬＣ分析に直ちにかけることによって、溶液中のＳＰ−３０４の放出を求めた。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＬ３０  Ｄ−５５でコーティングされたカプセル（５．５超のｐＨでの放出用）を、ｐＨ２．５で６０分間インキュベートすることによって、胃の酸性度への曝露を模倣した。同じカプセルを取り出し、緩衝食塩液（ｐＨ５．７）中に配置し、様々な時間で試料を引き抜いてＨＰＬＣ分析を行った。同様に、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＦＳＤでコーティングされたカプセル（７超のｐＨでの放出用）を、ｐＨ２．５（６０分）、ｐＨ５．５（６０分）、次いで指定した時間間隔でｐＨ７．０で順次インキュベートして試料採取した。
【図２１】図２１は、ｐＨ依存性放出用に製剤化されたＳＰ−３０４の生物活性を示す図である。ゼラチンカプセルに、計算量のＳＰ−３０４（体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ）を満たした。５．５超または７超のｐＨで放出するために、標準的な手順に従って、カプセルをＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーでコーティングした。各製剤からの１つのカプセルを、ｐＨ５．７またはｐＨ７．２に調整した緩衝食塩液５０ｍｌを含有するプラスチックチューブ内に配置した。同じ量のＳＰ−３０４を含有する、コーティングされていないゼラチンカプセルを対照として使用した。プラスチックチューブを、３７℃のインキュベーター内の回転振盪機上でインキュベートした。指定した時間間隔で、チューブから試料（０．５ｍｌ）を引き抜き、Ｔ８４細胞を使用するバイオアッセイのために直ちに使用することによって、溶液中のＳＰ−３０４の放出を求めた。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＬ３０  Ｄ−５５でコーティングされたカプセル（５．５超のｐＨでの放出用）を、ｐＨ２．５で６０分間インキュベートすることによって、胃の酸性度への曝露を模倣した。同じカプセルを取り出し、緩衝食塩液（ｐＨ５．７）中に配置し、様々な時間で試料を引き抜いてバイオアッセイを行った。同様に、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＦＳＤでコーティングされたカプセル（７超のｐＨでの放出用）を、ｐＨ２．５（６０分）、ｐＨ５．５（６０分）、次いで指定した時間間隔でｐＨ７．０で順次インキュベートし、試料を引き抜いてバイオアッセイを行った。
【図２２】図２２は、７．０超のｐＨでＳＰ−３０４を送達するための製剤が、サルにおいて下痢の発生を低減したことを示す図である。ゼラチンカプセルに、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇの用量を生じるようにＳＰ−３０４を満たした。カプセルを、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＦＳＤでコーティングした。コーティングされていないカプセルを、サルの対照群において使用した。処置の効果を、便の硬さに対して評価した。結果を、７日の処置期間内の下痢発生数の累積スコアとして表す。
【図２３】図２３は、７．０超のｐＨでＳＰ−３３３を送達するための製剤が、サルにおいて下痢の発生を低減したことを示す図である。ゼラチンカプセルに、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇの用量を生じるようにＳＰ−３３３を満たした。カプセルを、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーＦＳＤでコーティングした。コーティングされていないカプセルを、サルの対照群において使用した。処置の効果を、便の硬さに対して評価した。結果を、７日の処置期間内の下痢発生数の累積スコアとして表す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、胃腸管の特定の部分、すなわち、近位小腸、好ましくは十二指腸もしくは空腸、または遠位小腸もしくは大腸、好ましくは回腸、末端回腸、もしくは上行結腸へのＧＣＣアゴニストの放出を標的にするＧＣＣアゴニストの新規製剤を提供する。本発明の標的化放出ＧＣＣアゴニスト製剤は、胃腸の疾患および障害を治療または予防するのに有用である。特に、十二指腸または空腸を標的にする製剤は、以下のうちの１つまたは複数を治療または予防するのに有用である：過敏性腸症候群（好ましくは便秘支配的）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流疾患、慢性特発性便秘症、胃不全麻痺、胸やけ、胃癌、およびＨ．  ｐｙｌｏｒｉ感染症。同様に、回腸、末端回腸、または上行結腸を標的にする製剤は、以下のうちの１つまたは複数を含めた特定の疾患および障害を治療または予防するのに有用である：回腸炎（例えば、術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、および大腸癌。
【００３０】
本発明の標的化放出ＧＣＣ製剤は、胃腸管の領域にＧＣＣアゴニストを有利に送達し、そこでこれは、その最大の治療効果を有する。特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、遠位小腸または大腸、好ましくは回腸、末端回腸、または上行結腸に特異的に送達されるために製剤化される。この製剤は、ＧＣＣアゴニストの従来の経口製剤の使用が、下痢を生じる傾向によって制限される、潰瘍性大腸炎などの徴候を治療するのに特に有用である。この有害な反応は、本発明の標的化放出製剤、特に、回腸、末端回腸、または上行結腸へのＧＣＣアゴニストの放出を標的にするものによって和らげられ、または排除される。
【００３１】
クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の分類によって包含される原則的（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）症候群である。ＣＤは、胃腸管の任意の部分に影響し得るが、これは、遠位回腸および結腸において最も一般に起こり、一方、定義によるＵＣは、結腸のみに影響する。その抗炎症治療効果を発揮するために、経口投与されるＧＣＣアゴニストは、遠位回腸および結腸における炎症部位に到達しなければならない。本発明の一態様によれば、ＧＣＣアゴニストは、ＵＣおよびＣＤの治療用に、５．５超のｐＨで薬物を放出するように製剤化される。一実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、好ましくは、５．５超のｐＨで放出するためのｐＨ依存性放出製剤を使用して、回腸に標的化送達するように製剤化される。ｐＨ依存性放出製剤は、セクション１．１で以下により詳細に記載される。この脈絡における「治療」は、寛解の有効な誘導および維持を指す。したがって、一実施形態では、本発明は、ＣＤまたはＵＣを治療するための方法であって、それを必要とする被験体に、５．５超のｐＨで放出するように製剤化された治療有効量のＧＣＣアゴニストを投与するステップを含む方法を提供する。ＵＣ患者における腸のｐＨは、健康な志願者と比較した場合、一般により酸性であることが最近示され、こうした変化は、薬物治療のｐＨ媒介性溶解送達に影響する場合があることも仮定された（Ｒｕｂｉｎ，  Ｄ．Ｔ．ら、Ｃｏｌｏｎｉｃ  ｐＨ  ｄｉｆｆｅｒｓ  ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  （ＵＣ）：Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐＨ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｖｅｒ  ｔｉｍｅ．  ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２００９年１０月２３〜２８日、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｐ１１１６で提示されたポスターを参照）。さらに、結腸のｐＨは、活性な炎症と後続の臨床的な静止期の間に実質的に上昇した（Ｒｕｂｉｎ，  Ｄ．Ｔ．ら、Ｌｕｍｉｎａｌ  ｐＨ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｉｔ  ｔｉｍｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  （ＵＳ）  ｒｅｓｅｍｂｌｅｓ  ｔｈａｔ  ｏｆ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ．  ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２００９年１０月２３〜２８日、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｐ１１１４で提示されたポスターを参照）。特にＵＣにおいて、一部の患者は、標準的な外来患者療法を用いて寛解を実現することに失敗し、この失敗は、おそらく管腔の通過時間およびｐＨの生理学的差異に起因し得る。したがって、本発明のさらなる利点は、ｐＨ依存性放出製剤を利用することによって、罹患した患者の遠位回腸または結腸に生理活性ＧＣＣアゴニストを送達するように特に設計されたＧＣＣアゴニスト製剤を提供することである。
【００３２】
本発明の標的化放出製剤の別の有利な特性は、放出が標的化されていないＧＣＣアゴニストと同じ治療的利益を実現するのに、必要とされるＧＣＣアゴニストの有効用量がより少ないことである。ＧＣＣアゴニストの標的化放出は、アゴニスト濃度が作用部位で最高であることをさらに保証し、したがって、経口投与に付随する場合のある副作用を低減する。
【００３３】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するのに最適化された経口製剤である。特定の実施形態では、この製剤は、標的化物質の１つまたは複数の層によって囲繞された、ＧＣＣアゴニストを含有するコアを含む。標的化物質は、十二指腸または空腸へのＧＣＣアゴニストの標的化放出をもたらすように選択される。一実施形態では、この製剤は、胃の低ｐＨ環境（ｐＨ１〜２）中で安定であり、４．５〜５．５のｐＨ範囲で崩壊し始めるｐＨ依存性ポリマーを含む標的化物質の外側層を含む。この製剤は、胃の酸性環境からＧＣＣアゴニストを保護する。
【００３４】
別の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化されている。特定の実施形態では、この製剤は、標的化物質の１つまたは複数の層によって囲繞された、ＧＣＣアゴニストを含有するコアを含む。標的化物質は、回腸、末端回腸、または上行結腸へのＧＣＣアゴニストの標的化放出をもたらすように選択される。一実施形態では、この製剤は、標的化物質の３つの層、すなわち、（１）胃の低ｐＨ環境（ｐＨ１〜２）中で安定であり、６．５〜７．５のｐＨ範囲で崩壊し始めるｐＨ依存性ポリマーを含む外側層；（２）膨潤性ポリマーを含む中央層；および（３）６．５〜７．５のｐＨ範囲で崩壊し始めるｐＨ依存性ポリマーを含む内側層を含む。好適な実施形態では、ｐＨ依存性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマー、例えば、ＥＵＤＲＡＴＧＩＴ  Ｌ、Ｓ、ＦＳ、およびＥポリマーの中から選択される。一実施形態では、膨潤性ポリマーはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
【００３５】
当技術分野で公知の任意のＧＣＣアゴニストを、本発明に従って製剤化することができるが、ウログアニリンおよび細菌性ＳＴペプチドの類似体が好適である。ある特定の実施形態では、ウログアニリン類似体および細菌性ＳＴペプチド類似体は、天然に存在するペプチド、または「野生型」ペプチドと比較して、優れた特性を有する。例えば、本発明において使用するためのウログアニリンおよび細菌性ＳＴペプチドは、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼによる、かつ／または刺激されたヒト腸液およびヒト胃液中に存在する他のタンパク質分解酵素によるＮ末端およびＣ末端での分解に対するその耐性を増大させるように修飾されることが好ましい。ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、配列番号１〜２４９から選択されるアミノ酸配列から本質的になるペプチドを含む。好適な実施形態では、このペプチドは、配列番号１、８、９、５５、および５６から選択されるアミノ酸配列から本質的になる。用語「から本質的になる」は、そのアミノ酸配列において参照ペプチドと同一であり、または参照ペプチドと構造もしくは機能の観点から実質的に異ならないペプチドと同一であるペプチドを指す。ペプチドは、その主要なアミノ酸配列が、参照ペプチドとアミノ酸が３個を超えて異なる場合、またはその細胞ｃＧＭＰ産生の活性化が、参照ペプチドと比較して５０％超低減される場合、参照ペプチドと実質的に異なる。好ましくは、実質的に同様のペプチドは、アミノ酸が２個以下、ｃＧＭＰ産生の活性に関して約２５％以下異なる。好適な実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、少なくとも１２アミノ酸残基、最も好ましくは１２から２６の間のアミノ酸を含むペプチドである。ウログアニリンおよび細菌性ＳＴペプチドのそのような類似体の非限定例は、セクション１．１で以下に記載されている。
【００３６】
本発明は、胃腸障害の治療または予防、および胃腸の運動の増大を必要とする被験体において、この被験体に有効量のＧＣＣアゴニスト製剤を投与することによって、胃腸障害を治療または予防し、胃腸の運動を増大させるための方法に関する。用語「治療すること」は、本明細書で使用する場合、治療されている胃腸障害に関連する少なくとも１つの臨床的症状の低減、部分的な改善、寛解、または緩和を指す。用語「予防すること」は、予防される胃腸障害に関連する少なくとも１つの臨床的症状の開始または進行の阻害または遅延を指す。用語「有効量」は、本明細書で使用する場合、被験体に何らかの改善または利益をもたらす量を指す。ある特定の実施形態では、有効量は、治療される胃腸障害の少なくとも１つの臨床的症状をいくらか軽減、緩和し、かつ／または減少させる量である。他の実施形態では、有効量は、予防される胃腸障害に関連する少なくとも１つの臨床的症状の開始または進行をいくらか阻害し、または遅延させる量を指す。治療効果は、被験体にいくらかの利益が提供される限り、完全でなくても、治癒的でなくてもよい。用語「被験体」は、好ましくはヒト被験体を指すが、非ヒト霊長類、またはマウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、もしくはブタの中から好ましくは選択される他の哺乳動物を指すこともできる。
【００３７】
本発明の方法によって治療または予防することができる胃腸（ｇａｓｔｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）障害として、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、イレウス炎症（例えば、術後イレウス）、胃不全麻痺、胸やけ（胃腸管内の高酸性度）、便秘（例えば、薬物療法、例えば、オピオイド、骨関節炎薬、および骨粗鬆症薬などの使用に伴う便秘）、術後便秘、ならびに神経障害に伴う便秘が挙げられる。
【００３８】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化される。この実施形態によれば、本発明の方法によって治療または予防することができる胃腸障害は、過敏性腸症候群（好ましくは便秘支配的）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流疾患、慢性特発性便秘症、胃不全麻痺、胸やけ、胃癌、およびＨ．  ｐｙｌｏｒｉ感染症からなる群から選択される。
【００３９】
別の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化される。この実施形態によれば、本発明の方法によって治療または予防することができる胃腸障害は、回腸炎（例えば、術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、および大腸癌からなる群から選択される。
【００４０】
本発明は、消化器癌の治療を必要とする被験体において、この被験体に有効量のＧＣＣアゴニスト製剤を投与することによって、消化器癌を治療するための方法も提供する。この脈絡における用語「癌」は、転移（ｍｅｔａｔａｓｅｓ）を含めた組織および臓器の発癌を含む。特定の実施形態では、本発明は、胃癌、食道癌、膵癌、結腸直腸癌、腸癌、肛門癌、肝癌、胆嚢癌、または大腸癌の中から選択される消化器癌を治療するための方法を提供する。
【００４１】
本発明の方法によれば、ＧＣＣアゴニスト製剤は、特に胃腸管の炎症、癌、他の障害を予防または治療するために、単独で、または１つもしくは複数の追加の治療剤と併用して投与することができる。一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、ホスホジエステラーゼ阻害剤、環状ヌクレオチド（ｃＧＭＰおよびｃＡＭＰなど）、緩下剤（ＳＥＮＮＡ、ＭＥＴＡＭＵＣＩＬ、ＭＩＲＡＬＡＸ、ＰＥＧ、またはカルシウムポリカルボフィルなど）、便軟化剤（ｓｔｏｏｌ  ｓｏｆｔｎｅｒ）、ＩＢＤのための抗腫瘍壊死因子α療法（ＲＥＭＩＣＡＤＥ、ＥＮＢＲＥＬ、またはＨＵＭＡＩＲＡなど）、ならびに抗炎症薬（ＣＯＸ−２阻害剤、スルファサラジン、５−ＡＳＡ誘導体、およびＮＳＡＩＤＳなど）からなる群から選択される、１つまたは複数の追加の治療剤を併用して投与される。ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、前記ＧＣＣアゴニストと同時に、または順次、有効用量のｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ（ｃＧＭＰ−ＰＤＥ）の阻害剤と併用して投与される。ｃＧＭＰ−ＰＤＥ阻害剤には、例えば、スリンダクスルホン、ザプリナスト、モタピゾン、バルデナフィル、およびシルデナフィルが含まれる。別の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、環状ヌクレオチドトランスポーターの阻害剤と併用して投与される。
【００４２】
１．１  製剤
本発明の製剤は、胃腸管の特定の領域にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化される。好適な実施形態では、製剤は経口製剤である。本発明の製剤は、ＧＣＣアゴニストを含有するコア、およびコアの周囲に１つもしくは複数の層を形成することができ、またはコアを含むマトリックス内で形成し得る１つまたは複数の標的化物質を含む。標的化物質は、胃腸管の特定の領域へのＧＣＣアゴニストの放出を標的にするように選択される。標的化物質は、以下のもの、すなわち（１）ｐＨ依存性ポリマー；（２）膨潤性ポリマー；または（３）分解性組成物のうちの１つを含むことが好ましい。標的化物質は、以下のセクション１．１．１〜１．１．３にさらに記載されている。
【００４３】
一実施形態では、標的化物質は、ＧＣＣアゴニストのｐＨ依存性放出をもたらすように選択される。好適な実施形態では、ｐＨ依存性放出製剤用の標的化物質は、胃の低ｐＨ環境（すなわち、ｐＨ１〜２）中で安定であり、近位小腸（ｐＨ４．５〜６）または遠位回腸（ｐＨ７〜８）のｐＨで崩壊し始めるｐＨ依存性ポリマーを含む。好ましくは、ｐＨ依存性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーの中から選択されるメタクリル酸コポリマーであり、これらは、セクション１．１．１で以下にさらに記載されている。
【００４４】
一実施形態では、標的化物質は、ＧＣＣアゴニストの制御（時間依存性）放出をもたらすように選択される。好適な実施形態では、制御放出製剤用の標的化物質は、セクション１．１．２で以下にさらに記載されているような、少なくとも１つの膨潤性ポリマーを含む。
【００４５】
別の実施形態では、制御放出製剤用の標的化物質は、少なくとも１つの結腸細菌酵素によって分解されやすい天然または合成ポリマーなどの分解性組成物（ｃｏｍｐｏｓｔｉｏｎ）を含む。ＧＣＣアゴニストは、ポリマーマトリックス中に埋め込まれることが好ましい。
【００４６】
別の実施形態では、制御放出製剤用の標的化物質は、胃および小腸中で安定であるが、下部胃腸管、特に結腸中で分解する不安定結合によって、ＧＣＣアゴニストに共有結合的に結合された担体分子の形態での分解性組成物を含み、それによって、ＧＣＣアゴニストの標的化放出をもたらす。このようにして担体に共有結合的に結合されたＧＣＣアゴニストは、ＧＣＣ「プロドラッグ」と本明細書で呼ばれる。ＧＣＣプロドラッグを含む製剤は、セクション１．１．３で以下にさらに記載されている。
【００４７】
ある特定の実施形態では、製剤は、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化される。一実施形態では、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化された製剤は、ＧＣＣアゴニストを含有し、４．５〜５．５のｐＨ範囲で分解するｐＨ依存性ポリマーからなる標的化層によって囲繞されたコアを含む。ｐＨ依存性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーの中から選択されるメタクリル酸コポリマーであることが好ましい。
【００４８】
ある特定の実施形態では、製剤は、回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化される。一実施形態では、回腸、末端回腸、または上行結腸にＧＣＣアゴニストを送達するために最適化された製剤は、ＧＣＣアゴニストを含有し、標的化物質の１、２、３、またはそれ以上の層によって囲繞されたコアを含む。少なくとも１つの標的化物質は、６．５〜７．５のｐＨ範囲で分解するｐＨ依存性ポリマーを含む。ｐＨ依存性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーの中から選択されるメタクリル酸コポリマーであることが好ましい。コアを囲繞する１つを超える層の標的化物質が存在する場合、少なくとも１つの層は、膨潤性ポリマーを含む。膨潤性ポリマーは、アクリル樹脂コポリマー、ポリビニルアセテート、またはセルロース誘導体であることが好ましい。一実施形態では、膨潤性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥから選択されるアクリル樹脂コポリマーである。別の実施形態では、膨潤性ポリマーは、エチルセルロース、酢酸セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースの金属塩から選択されるセルロース誘導体である。別の実施形態では、製剤は、ＥＵＤＲＡＣＯＬを含み、これは、ｐＨ依存性および時間依存性ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーの両方を組み合わせる。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーは、セクション１．１．１およびセクション１．１．２で以下に記載されている。膨潤性ポリマーのさらなる例は、セクション１．１．２で以下に記載されている。
【００４９】
本発明によれば、製剤用に選択される腸溶コーティングは、製剤の標的化目的を実現する任意のコーティングである。適当な腸溶コーティングの例には、それだけに限らないが、以下のものが含まれる：（１）ＥＵＤＲＡＧＩＴ（Ｄｅｇｕｓｓａ）ポリマーなどのアクリル酸ポリマー（メタクリル酸の陰イオン性ポリマー、および官能基としてメタクリル酸を有するメタクリレートポリマー）、例えば、十二指腸中の放出（ｐＨ５．５超での溶解）用に、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ  １００−５５およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ  ３０  Ｄ−５５；空腸中の放出（ｐＨ６．０超での溶解）用に、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ  １００；回腸中の放出（ｐＨ７超での溶解）用に、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ  １００、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０、およびＣＯＬＯＲＣＯＮ  ＡＣＲＹＬ−ＥＺＥ；（２）ＣＯＬＯＲＣＯＮ  ＳＵＲＥＴＥＲＩＣ水性腸溶コーティングシステム、およびＣＯＬＯＲＣＯＮ  ＯＰＡＤＲＹ腸溶コーティングシステムを含めたポリビニル酢酸フタレート（ＰＶＡＰ）；（３）ヒプロメロースフタレート、ＮＦ（ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（Ｐｈｔｈｔａｌａｔｅ）；ＨＰＭＣＰ；ＨＰ−５５  Ｓｈｉｎ−Ｅｔｓｕ）；（４）ＡＱＵＡＣＯＡＴ化合物などの酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）；ならびに（５）酢酸トリメリト酸セルロース（ＣＡＴ）。適当な腸溶コーティングのさらなる例には、限定することなく、徐放ブレンド、例えば、ＥＵＤＲＡＣＯＬ、ＥＵＤＲＡＰＵＬＳＥ、およびＥＵＤＲＡＭＯＤＥなど、ならびに徐放ポリマー、例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ、ＲＳ、およびＮＥポリマーなどが含まれる。
【００５０】
本発明の製剤のＧＣＣアゴニスト含有コアは、錠剤、カプセル、顆粒、ペレット、または結晶の形態とすることができる。ある特定の実施形態では、コアは、微粒子または微小球を含む。一実施形態では、コアは、酢酸酪酸セルロース微小球を含む。いくつかの実施形態では、コアは、標的化物質の１つまたは複数の層でコーティングされる。他の実施形態では、コアは、標的化物質を含むマトリックス内で製剤化される。ある特定の実施形態では、コアマトリックスは、少なくとも１つの追加の標的化物質でコーティングされる。
【００５１】
本製剤のＧＣＣアゴニスト含有コアは、当技術分野で認められている方法に従って形成される。一実施形態では、コアは、ペレット形成剤、例えば、微結晶性セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、キチン、キトサン、またはこれらの任意の組合せもしくは混合物を用いて形成される。一般に、２０重量％未満であるペレット形成剤の量は、低い球形度および広い粒径分布をもたらす。したがって、本製剤のペレット形成剤は、少なくとも２０重量％であることが好ましい。ある特定の実施形態では、ペレット形成剤は、２０重量％〜９５重量％、または５０重量％〜９０重量％存在する。
【００５２】
ＧＣＣアゴニスト製剤は、１つまたは複数の医薬として許容可能な賦形剤をさらに含むことができる。賦形剤は、コアの一部、またはコアを囲繞する１つもしくは複数の外側層の一部を含むことができる。賦形剤は、２〜７０重量％または５〜５０重量％の量で存在することが好ましい。用語の賦形剤は、製剤の活性剤と組み合わせて使用される生物学的に不活性な物質を広く指す。賦形剤は、例えば、可溶化剤、安定化剤、希釈剤、不活性な担体、保存剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、香味剤、または着色剤として使用することができる。少なくとも１つの賦形剤は、製剤に、安定性および／または活性剤（複数可）の溶解度の増大などの１つまたは複数の有益な物理的性質を与えるように選択されることが好ましい。
【００５３】
「医薬として許容可能な」賦形剤は、動物において使用するため、好ましくはヒトにおいて使用するために、州もしくは連邦の管理機関によって認可されたもの、または動物において使用するため、好ましくはヒトにおいて使用するために、米国薬局方（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｉａ）、欧州薬局方、もしくは別の一般に認知された薬局方に列挙されたものである。賦形剤の例として、アルブミンなどのある特定の不活性タンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、アスパラギン酸（これは、アスパルテートと代わりに呼ばれる場合がある）、グルタミン酸（これは、グルタメートと代わりに呼ばれる場合がある）、リシン、アルギニン、グリシン、およびヒスチジンなど；脂肪酸およびリン脂質、例えば、スルホン酸アルキルおよびカプリレートなど；界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウムおよびポリソルベートなど；非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など；炭水化物、例えば、グルコース、スクロース、マンノース、マルトース、トレハロース、およびシクロデキストリンを含めたデキストリンなど；ソルビトールなどのポリオール；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；ならびにナトリウムなどの塩形成対イオンが挙げられる。ＧＣＣアゴニスト（ａｇｉｏｎｉｓｔ）ペプチドのタンパク質結合活性および凝集を低減する親水性賦形剤が特に好適である。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、吸収エンハンサー、結合剤、崩壊剤、および硬度増強剤の中から選択される１つまたは複数の賦形剤をさらに含む。他の実施形態では、製剤は、芯剤（ｗｉｃｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、安定剤、流動調節剤、滑剤、抗酸化剤、キレート化剤、またはシクエストレート（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｅ）の中から選択される１つまたは複数の賦形剤をさらに含む。
【００５５】
適当な結合剤の非限定例として、デンプン、ポリビニルピロリドン（ＰＯＶＩＤＯＮＥ）、低分子量ヒドロキシプロピルセルロース、低分子量ヒドロキシプロピルメチルセルロース、低分子量カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ゼラチン、ポリエチレンオキシド、アカシア、デキストリン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、およびポリメタクリレートが挙げられる。崩壊剤の非限定例として、クロスカルメロースナトリウムクロスポビドン（架橋されたＰＶＰ）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（ナトリウムデンプングリコレート）、α化デンプン（デンプン１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、およびケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、結合剤は、ポリビニルピロリドンおよびナトリウムカルボキシメチルセルロースから選択される。
【００５６】
芯剤の非限定例として、コロイド二酸化ケイ素、カオリン、酸化チタン、ヒュームド二酸化ケイ素、アルミナ、ナイアシンアミド、硫酸ラウリルナトリウム、低分子量ポリビニルピロリドン、ｍ−ピロール、ベントナイト、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ポリエステル、ポリエチレン、およびこれらの混合物が挙げられる。ある特定の実施形態では、芯剤は、硫酸ラウリルナトリウム、コロイド二酸化ケイ素、および低分子量ポリビニルピロリドンから選択される。
【００５７】
安定剤の非限定例には、ブチルヒドロキシアニソール、アスコルビン酸、クエン酸、およびこれらの混合物が含まれる。安定剤は、製剤の水溶液または分散系のｐＨを少なくとも約ｐＨ６．８に上昇させることができる塩基性物質であることが好ましい。そのような塩基性物質の例には、例えば、制酸剤、例えば、アルミノメタケイ酸マグネシウム、アルミノケイ酸マグネシウム、アルミン酸マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、合成ヒドロタルサイト、合成ケイ酸アルミニウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、および炭酸水素ナトリウムなどが含まれる。他の例には、ｐＨ調整剤、例えば、Ｌ−アルギニン、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、クエン酸二ナトリウム、コハク酸ナトリウム、塩化アンモニウム、および安息香酸ナトリウムなどが含まれる。ある特定の実施形態では、安定剤は、アスコルビン酸およびアルミノメタケイ酸マグネシウムから選択される。
【００５８】
安定剤が塩基性物質である一実施形態では、塩基性物質は、水溶性無機化合物または水不溶性無機化合物とすることができる。安定剤として使用するための水溶性無機化合物の非限定例として、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、または炭酸水素カリウム；リン酸塩、例えば、無水リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、二塩基性リン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｄｉｂａｓｉｃ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、またはリン酸三ナトリウム；およびアルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、または水酸化リチウムなどが挙げられる。安定剤として使用するための水不溶性無機化合物の非限定例として、要求される塩基度を付与することができる適当なアルカリ化合物、例えば、制酸剤（ａｎｔｉａｃｉｄ）組成物中に一般に使用されるもの、例えば、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素マグネシウム、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、または炭酸カルシウムなど；水酸化アルミニウムマグネシウムなどの複合アルミニウム−マグネシウム化合物；ケイ酸塩化合物、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ  Ｆ）、アルミノメタケイ酸マグネシウム（Ｎｅｓｕｌｉｎ  ＦＨ２）、アルミノケイ酸マグネシウム（Ｎｉｓｕｌｉｎ  Ａ）など；および三塩基性リン酸カルシウムなどのリン酸の医薬として許容可能な塩が挙げられる。
【００５９】
流動調節剤の非限定例には、コロイド二酸化ケイ素およびケイ酸アルミニウムが含まれる。
【００６０】
滑剤の非限定例として、ステアリン酸塩、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびステアリン酸ナトリウムなど、ステアリン酸、タルク、フマル酸ステアリルナトリウム、硫酸ラウリルナトリウム、安息香酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ベヘン酸グリセロールコンプリトール（ベヘン酸グリセロール）、ｃｏｒｏｌａ油、グリセリルパルミトステアレート、硬化植物油、酸化マグネシウム、鉱油、ポロキサマー、およびこれらの組合せが挙げられる。ある特定の実施形態では、滑剤は、タルクおよびステアリン酸マグネシウムから選択される。
【００６１】
抗酸化剤の非限定例として、４，４（２，３ジメチルテトラメチレンジピロカテコール（ｄｉｐｙｒｏｃｈａｔｅｃｈｏｌ））、トコフェロールに富む抽出物（天然のビタミンＥ）、α−トコフェロール（合成ビタミンＥ）、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、ブチルヒドロキシノン（ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｘｉｎｏｎ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、３級ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、フマル酸、リンゴ酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸カリウム、パルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸アスコルビル，クエン酸、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、乳酸カルシウム、乳酸マグネシウム、アノキソマー、エリトルビン酸、エリトルビン酸ナトリウム、エリトルビン酸、ナトリウムエリトルビン（ｅｒｙｔｈｏｒｂｉｎ）、エトキシキン、グリシン、グアヤクガム、クエン酸ナトリウム（クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム）、クエン酸カリウム（クエン酸一カリウム、クエン酸三カリウム）、レシチン、ポリホスフェート、酒石酸、酒石酸ナトリウム（酒石酸一ナトリウム、酒石酸二ナトリウム）、酒石酸カリウム（酒石酸一カリウム、酒石酸二カリウム）、酒石酸カリウムナトリウム、リン酸、リン酸ナトリウム（リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸三ナトリウム）、リン酸カリウム（リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、リン酸三カリウム）、カルシウム二ナトリウムエチレンジアミンテトラ−アセテート（カルシウム二ナトリウムＥＤＴＡ）、乳酸、トリヒドロキシブチロフェノン、およびチオジプロピオン酸が挙げられる。
【００６２】
ある特定の実施形態では、製剤のコアは、抗酸化剤、ならびにキレーターおよびシクエストレートの両方を含む。キレート化剤は、痕跡量の金属を除去するように作用し、この金属は、さもなければＧＣＣアゴニストに結合し、例えば、酸化を通じて活性の喪失を引き起こす場合がある。シクエストレートは、いくつかのヒドロキシル基および／またはカルボン酸基を有することが好ましく、これらは、不活化された抗酸化フリーラジカルを再生するために水素を供給する。キレート化剤の非限定例として、抗酸化剤、エデト酸二カリウム（ｄｉｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｅｄｅｎｔａｔｅ）、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、マルトール、エデト酸ナトリウム、およびエデト酸三ナトリウムが挙げられる。シクエストレートの非限定例には、クエン酸およびアスコルビン酸が含まれる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、製剤は、充填剤をさらに含む。充填剤は、１０重量％〜８５重量％の量で存在することが好ましい。充填剤として使用するのに適した物質の非限定例として、デンプン、ラクチトール、ラクトース、無機カルシウム塩、微結晶性セルロース、スクロース、およびこれらの組合せが挙げられる。いくつかの実施形態では、充填剤は、微結晶性セルロースを含む。好ましくは、微結晶性セルロースは、約１００ミクロン未満の粒径を有し、最も好ましくは、微結晶性セルロースは、約５０ミクロンの粒径を有する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、コアは、緩衝剤、例えば、無機塩化合物および有機アルカリ塩化合物などを場合により含む。緩衝剤の非限定例として、炭酸水素カリウム、クエン酸カリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸ナトリウム、グルタミン酸一ナトリウム、三塩基性リン酸カルシウム、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、クエン酸一水和物、乳酸、プロピオン酸、酒石酸、フマル酸、リンゴ酸、および一塩基性リン酸ナトリウムが挙げられる。
【００６５】
いくつかの実施形態では、コアは、保存剤をさらに含む。保存剤の非限定例には、抗酸化剤、エデト酸二カリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、マルトール、エデト酸ナトリウム、およびエデト酸三ナトリウムが含まれる。
【００６６】
本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、経口送達のために最適化されていることが好ましい。しかし、いくつかの実施形態では、製剤は、直腸送達のために、坐剤（例えば、従来の坐剤基剤、例えば、カカオバター、および他のグリセリドなどを含む）、または停留浣腸の形態で調製することができる。固体経口剤形は、コーティングシステム（例えば、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）ｆｘフィルムコーティングシステム、例えば、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）青色（ＯＹ−ＬＳ−２０９２１）、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）白色（ＹＳ−２−７０６３）、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）白色（ＹＳ−１−７０４０）、および黒色インク（Ｓ−１−８１０６））で場合により処理することができる。
【００６７】
１．１．１  ｐＨ依存性放出製剤
ある特定の実施形態では、本発明の製剤は、薬理学的に不活性であるｐＨ依存性標的化物質を含み、薬理学的に不活性は、この物質が、吸収または代謝されることなく、排泄されることを意味する。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストが装填されたコアは、ｐＨ依存性物質でコーティングされる。他の実施形態では、ｐＨ依存性物質は、例えば、ある特定の実施形態では、制御（時間依存性）放出製剤の、コアを囲繞する外側層の一部を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストが装填されたコアは、ｐＨ依存性物質を含むマトリックスとして形成される。ｐＨ依存性物質は、ｐＨ依存性ポリマーを含むことが好ましい。
【００６８】
ｐＨ依存性ポリマーは、胃の低ｐＨ環境（すなわち、ｐＨ１〜２）中で安定であり、小腸（ｐＨ６〜７）または遠位回腸（ｐＨ７〜８）のより高いｐＨで崩壊し始めることが好ましい。ある特定の実施形態では、このポリマーは、ｐＨ４．５〜４．８、ｐＨ４．８〜５．０、ｐＨ５．０〜５．２、ｐＨ５．２〜５．４、ｐＨ５．４〜５．８、ｐＨ５．８〜６．０、ｐＨ６．０〜６．２、ｐＨ６．２〜６．４、ｐＨ６．４〜６．６、ｐＨ６．６〜６．８、ｐＨ６．８〜７．０、ｐＨ７．０〜７．２、またはｐＨ７．２〜７．４で崩壊し始める。ある特定の実施形態では、このポリマーは、ｐＨ４．５〜５．５、ｐＨ５．５〜６．５、またはｐＨ６．５〜７．５で崩壊し始める。ｐＨ感受性ポリマーが崩壊し始めるｐＨはまた、ポリマーの「閾値ｐＨ」と本明細書で呼ばれる。
【００６９】
ある特定の実施形態では、ｐＨ依存性ポリマーは、メタクリル酸コポリマー、ポリビニル酢酸フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セルロースアセテートトリメリテート（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ａｃｅｔａｔｅ  ｔｒｉｍｅｌｌｉａｔｅ）、酢酸フタル酸セルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートである。
【００７０】
好適な実施形態では、ｐＨ依存性ポリマーは、ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーの中から選択されるメタクリル酸コポリマーである。ＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーは、水溶液、水分散系、有機溶液、および固体物質を含めて、広範囲の様々な濃度および物理形態で利用可能である。ポリマーの医薬特性は、その官能基の化学的性質によって決定される。例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ、Ｓ、ＦＳ、およびＥポリマーは、ｐＨ依存性である酸性基またはアルカリ基を有する。腸溶ＥＵＤＲＡＧＩＴコーティングは、胃内でのＧＣＣアゴニストの放出から保護し、腸内での制御放出を可能にする。ある特定の実施形態では、カルボキシル基を含有する陰イオン性ＥＵＤＲＡＧＩＴグレードは、互いに混合されることによって、ＧＣＣアゴニストをｐＨ依存性放出する。ある特定の実施形態では、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＬおよびＳグレードが腸溶コーティングのために使用される。一実施形態では、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄが結腸中での制御放出のために使用される。様々なＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーは、国際的な薬局方、例えば、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ／ＮＦ、ＤＭＦ、およびＪＰＥにおいてさらに記載されている。
【００７１】
特定の実施形態では、ｐＨ依存性ポリマーは、６．０の閾値ｐＨを有するＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００；７．０の閾値ｐＨを有するＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ１００；５．６の閾値ｐＨを有するＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ−３０Ｄ；６．８の閾値ｐＨを有するＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄ；もしくは５．５の閾値ｐＨを有するＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００−５５、またはこれらの組合せから選択されるメタクリル酸コポリマーである。
【００７２】
１．１．２  制御放出製剤
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、ＧＣＣアゴニストの制御（時間依存性）放出をもたらす標的化物質を含む。この脈絡における制御放出には、遅延徐放、遅延制御放出、遅延緩徐放出（ｄｅｌａｙｅｄ  ｓｌｏｗ  ｒｅｌｅａｓｅ）、遅延持続放出（ｄｅｌａｙｅｄ  ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）、遅延持続放出（ｄｅｌａｙｅｄ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）、および急激な放出、すなわち「バースト」が含まれる。
【００７３】
制御放出製剤は、標的化物質によって囲繞された、ＧＣＣアゴニストを含む徐々に崩壊するコア含むことが好ましい。標的化物質は、少なくとも１つの膨潤性ポリマーを含むことが好ましい。本発明の制御放出製剤中に使用するための膨潤性ポリマーの非限定例として、アクリル樹脂コポリマー、例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ、またはＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥ；ポリビニルアセテート、例えば、ＫＯＬＬＩＣＯＡＴ  ＳＲ  ３０Ｄ；ならびにセルロース誘導体、例えば、エチルセルロースまたは酢酸セルロースなど、例えば、ＳＵＲＥＬＥＡＳＥ、およびＡＱＵＡＣＯＡＴ  ＥＣＤが挙げられる。好適な実施形態では、標的化物質は、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ、またはＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＮＥの１つまたは複数を含むことによって、ｐＨ非依存性膨潤によるＧＣＣアゴニストの制御時間放出をもたらす。特定の実施形態では、標的化物質は、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ：ＲＳ（２：８）を含み、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳを含む外側（ｏｕｔｉｎｇ）コーティングを含む。
【００７４】
本発明の徐放製剤中に使用することができる膨潤性ポリマーのさらなる非限定例として、３０，０００〜５，０００，０００の分子量を有するポリ（ヒドロキシアルキル（ｈｙｄｒｏｘａｌｋｙｌ）メタクリレート）；κ−カラギーナン；１０，０００〜３６０，０００の分子量を有するポリビニルピロリドン；陰イオン性および陽イオン性ヒドロゲル；高分子電解質複合体；グリオキサール、ホルムアルデヒド、またはグルタルアルデヒドで架橋された少量のアセテートを有し、２００〜３０，０００の重合度を有するポリ（ビニルアルコール）；メチルセルロース、架橋された寒天およびカルボキシメチルセルロースを含む混合物；微粉化した無水マレイン酸の分散物を形成することによって生成される、スチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、もしくはイソブチレンとの水不溶性、水膨潤性コポリマー；Ｎ−ビニルラクタムの水膨潤性ポリマー；多糖、水膨潤性ガム、高粘度ヒドロキシルプロピルメチル（ｈｙｄｒｏｘｙｌｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ）セルロースおよび／またはこれらの混合物が挙げられる。ある特定の実施形態では、膨潤性ポリマーは、ペクチン酸カルシウム、架橋多糖、水不溶性デンプン、微結晶性セルロース、水不溶性架橋ペプチド、水不溶性架橋タンパク質、水不溶性架橋ゼラチン、水不溶性架橋加水分解ゼラチン、水不溶性架橋コラーゲン、変性セルロース、および架橋ポリアクリル酸からなる群から選択される。架橋多糖の非限定例として、アルギネート、ペクチン、キサンタンガム（ｘａｎｔｈａｍ  ｇｕｍ）、グアーガム、トラガカントガム、およびローカストビーンガムの不溶性金属塩または架橋誘導体、カラギーナン、その金属塩、およびその共有結合的に架橋された誘導体が挙げられる。変性セルロースの非限定例には、ヒドロキシプロピルセルロースの架橋誘導体、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースの金属塩が含まれる。
【００７５】
ある特定の実施形態では、膨潤性コアは、二酸化ケイ素などの芯剤も含む。芯剤は、水取込みの速度を増強するために、微結晶性セルロースなどの崩壊剤から選択することもできる。他の適当な芯剤として、それだけに限らないが、カオリン、二酸化チタン、ヒュームド二酸化ケイ素、アルミナ、ナイアシンアミド、硫酸ラウリルナトリウム、低分子量ポリビニルピロリドン、ｍ−ピロール、ベントナイト、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ポリエステル、ポリエチレン、およびこれらの混合物が挙げられる。
【００７６】
ある特定の実施形態では、コアの一部を含みかつ／またはコアをコーティングする１つまたは複数の層を形成することができる標的化物質は、滑剤、流動促進剤（ｆｌｏｗ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、可塑剤、固着防止剤、界面活性剤、湿潤剤、懸濁剤、および分散剤のうちの少なくとも１つを場合によりさらに含む。
【００７７】
ある特定の実施形態では、標的化物質は、水不溶性ポリマーおよび孔形成剤を含む。孔形成剤の非限定例には、サッカロース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ポリビニルピロリドン、および／またはポリエチレングリコール、水溶性有機酸、糖、および糖アルコールが含まれる。ある特定の実施形態では、孔形成剤は、コーティングまたは外側層の一部を形成する。他の実施形態では、孔形成剤は、水不溶性ポリマー全体にわたって均一に分配される。
【００７８】
一実施形態では、標的化物質は、圧縮コーティング材を含む。圧縮コーティング材として使用することができる物質の非限定例として、キサンタンガム、ローカストビーンガム、ガラクタン、マンナン、アルギネート、カラヤガム、ペクチン、寒天、トラガカント、アカシア（ａｃｃａｃｉａ）、カラギーナン、トラガカント、キトサン、寒天、アルギン酸、親水コロイドａｃａｃｉａ  ｃａｔｅｃｈｕ（ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｃａｃｉａ  ｃａｔｅｃｈｕ）、サライグッガル、ｉｎｄｉａｎ  ｂｏｄｅｌｌｕｍ、コパイバガム（ｃｏｐａｉｂａ  ｇｕｍ）、アギ、カンビガム（ｃａｍｂｉ  ｇｕｍ）、Ｅｎｔｅｒｏｌｏｂｉｕｍ  ｃｙｃｌｏｃａｒｐｕｍ、マスティックガム、ベンゾインガム、サンダラック、ガンビアガム（ｇａｍｂｉｅｒ  ｇｕｍ）、ｂｕｔｅａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ（Ｆｌａｍｅ  ｏｆ  Ｆｏｒｅｓｔ  Ｇｕｍ）、ミルラ、コンニャクマンナン、グアーガム、ウェランガム、ゲランガム、タラガム、ローカストビーンガム、カラギーナン（ｃａｒａｇｅｅｎａｎ）ガム、グルコマンナン、ガラクタンガム、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、キトサン、キサンタンガム、脱アセチルキサンタンガム、ペクチン、ポリペクチン酸ナトリウム、グルテン、カラヤガム、タマリンドガム、ガティガム、Ａｃｃａｒｏｉｄ／Ｙａｃｃａ／Ｒｅｄガム、ダマールガム、ジュニパーガム、エステルガム、イピルイピル種子（ｉｐｉｌ−ｉｐｉｌ  ｓｅｅｄ）ガム、タルハガム（ａｃａｃｉａ  ｓｅｙａｌ）、ならびに以下の属、すなわち、ａｃａｃｉａ、ａｃｔｉｎｉｄｉａ、ａｐｔｅｎｉａ、ｃａｒｂｏｂｒｏｔｕｓ、ｃｈｉｃｋｏｒｉｕｍ、ｃｕｃｕｍｉｓ、ｇｌｙｃｉｎｅ、ｈｉｂｉｓｃｕｓ、ｈｏｒｄｅｕｍ、ｌｅｔｕｃａ、ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ、ｍａｌｕｓ、ｍｅｄｉｃａｇｏ、ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍ、ｏｒｙｚａ、ｐａｎｉｃｕｍ、ｐｈａｌａｒｉｓ、ｐｈｌｅｕｍ、ｐｏｌｉａｔｈｕｓ、ｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉｌ、ｓｉｄａ、ｓｏｌａｎｕｍ、ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ、ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ、Ａｆｚｅｌｉａ  ａｆｒｉｃａｎａ種子ガム、Ｔｒｅｃｕｌｉａ  ａｆｒｉｃａｎａガム、ｄｅｔａｒｉｕｍガム、ｃａｓｓｉａガム、ｃａｒｏｂガム、Ｐｒｏｓｏｐｉｓ  ａｆｒｉｃａｎａガム、Ｃｏｌｏｃａｓｓｉａ  ｅｓｕｌｅｎｔａガム、Ｈａｋｅａ  ｇｉｂｂｏｓａガム、ｋｈａｙａガム、ｓｃｌｅｒｏｇｌｕｃａｎ、およびｚｅａの植物のものを含めた培養植物細胞ガム、ならびに前述の任意の混合物からなる群から選択されるガムが挙げられる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、標的化物質は、可塑剤、硬化剤、湿潤剤、懸濁剤、もしくは分散剤、またはこれらの組合せをさらに含む。可塑剤の非限定例として、セバシン酸ジブチル、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル、クエン酸トリブチル、アセチル化モノグリセリド、クエン酸トリブチルアセチル、トリアセチン、フタル酸ジメチル、安息香酸ベンジル、脂肪酸のブチルエステルおよび／もしくはグリコースエステル、精製鉱油、オレイン酸、ヒマシ油、トウモロコシ油、樟脳、グリセロール、ならびにソルビトール、またはこれらの組合せが挙げられる。一実施形態では、硬化剤はセチルアルコールを含む。湿潤剤の非限定例として、ポロキサマー、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシメチレン、硫酸ラウリルナトリウム、ソルビタン脂肪酸エステル、塩化ベンザルコニウム、ポリエトキシ化ヒマシ油、およびドクセートナトリウムが挙げられる。懸濁剤の非限定例として、アルギン酸、ベントナイト、カルボマー、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、コロイド二酸化ケイ素、デキストリン、ゼラチン、グアーガム、キサンタンガム、カオリン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルチトール、中鎖トリグリセリド、メチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルピロリジノン、アルギン酸プロピレングリコール、アルギン酸ナトリウム、ソルビタン脂肪酸エステル、およびトラガカントが挙げられる。分散剤の非限定例には、ポロキサマー、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、およびソルビタン脂肪酸エステルが含まれる。
【００８０】
ある特定の実施形態では、標的化放出製剤は、標的化放出物質の上に外側腸溶コーティングをさらに含む。腸溶コーティングは、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００、およびＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０Ｄ−５５からなる群から選択されることが好ましい。
【００８１】
１．１．２．１  バースト製剤（ｂｕｒｓｔ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、結腸または小腸中で速いバーストでＧＣＣアゴニストを放出するように設計された時間遅延製剤である（「バースト製剤」）。この製剤は、コアおよび外側層を含む。コアは、少なくとも１つのＧＣＣアゴニストおよび少なくとも１つのバースト制御剤を含む。ある特定の実施形態では、コアは、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン（架橋ＰＶＰ）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（ナトリウムデンプングリコレート）、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、α化デンプン（デンプン１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、およびケイ酸アルミニウムマグネシウム、またはこれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１つの崩壊剤をさらに含む。他の実施形態では、コアは、吸収エンハンサー、結合剤、硬度増強剤、緩衝剤、充填剤、流動調節剤、滑剤、相乗作用剤、キレーター、抗酸化剤、安定剤、および保存剤のうちの少なくとも１つをさらに含む。場合により、コアは、１つまたは複数の他の賦形剤も含む。
【００８２】
コア中のバースト制御剤は、コア中に水が浸透する速度を制御し、コア内部の内圧（浸透圧）を上昇させるための水不溶性ポリマーを含むことが好ましい。そのようなバースト制御剤は、液体に接触すると膨潤することができることが好ましい。適当な水不溶性ポリマーの非限定例として、架橋多糖、水不溶性デンプン、微結晶性セルロース、水不溶性架橋ペプチド、水不溶性架橋タンパク質、水不溶性架橋ゼラチン、水不溶性架橋加水分解ゼラチン、水不溶性架橋コラーゲン、変性セルロース、および架橋ポリアクリル酸が挙げられる。一実施形態では、水不溶性ポリマーは、アルギネート、ペクチン、キサンタンガム、グアーガム、トラガカントガム、およびローカストビーンガムの不溶性金属塩または架橋誘導体、カラギーナン、その金属塩、およびその共有結合的に架橋された誘導体からなる群から選択される架橋多糖である。一実施形態では、水不溶性ポリマーは、ヒドロキシプロピルセルロースの架橋誘導体、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースの金属塩からなる群から選択される変性セルロースである。別の実施形態では、水不溶性ポリマーは、ペクチン酸カルシウム、微結晶性セルロース、またはこれらの組合せから選択される。
【００８３】
外側層は、水不溶性疎水性担体、および水不溶性親水性特定物質からなる孔形成剤を含む。孔形成剤は、コア中への液体の流入を可能にする水浸透剤（ｗａｔｅｒ  ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ａｇｅｎｔ）である。場合により、外側層は、湿潤剤、懸濁剤、分散剤、硬化剤、および可塑剤のうちの少なくとも１つをさらに含む。
【００８４】
ある特定の実施形態では、水不溶性疎水性担体は、ジメチルアミノエチルアクリレート／エチルメタクリレートコポリマー、低含量の４級アンモニウム基を有するアクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルに基づき、アンモニウム基と残りの中性（メト）アクリル酸エステルのモル比が約１：２０であるコポリマー、ＵＳＰ／ＮＦ「アンモニオメタクリレートコポリマータイプＡ」に対応するポリマー、エチルメタクリレート／クロロトリメチルアンモニウムメチル（ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｅｔｈｙｌ）メタクリレートコポリマー、低含量の４級アンモニウム基を有するアクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルに基づき、アンモニウム基と残りの中性（メト）アクリル酸エステルのモル比が１：４０であるコポリマー、ＵＳＰ／ＮＦ「アンモニオメタクリレートコポリマータイプＢ」に対応するポリマー、ジメチルアミノエチルメタクリレート／メチルメタクリレートおよびブチルメタクリレートコポリマー、中性メタクリル酸エステルおよびジメチルアミノエチルメタクリレートエステルに基づき、ポリマーが酸の存在下で陽イオン性であるコポリマー、エチルアクリレートおよびメチルアクリレート／エチルメタクリレートおよびメチルメチルアクリレートコポリマー、中性メタクリル酸およびアクリル酸エステルに基づく中性コポリマーであるコポリマー、エチルセルロース、セラック、ゼイン、およびワックスからなる群から選択される。
【００８５】
ある特定の実施形態では、水不溶性微粒子物質は、水不溶性架橋多糖、水不溶性架橋タンパク質、水不溶性架橋ペプチド、水不溶性架橋ゼラチン、水不溶性架橋加水分解ゼラチン、水不溶性架橋コラーゲン、水不溶性架橋ポリアクリル酸、水不溶性架橋セルロース誘導体、水不溶性架橋ポリビニルピロリドン、微結晶性セルロース、不溶性デンプン、微結晶性デンプン、およびこれらの組合せからなる群から好ましくは選択される、親水性であるが水不溶性のポリマーである。最も好ましくは、水不溶性微粒子物質は微結晶性セルロースである。
【００８６】
ある特定の実施形態では、バースト製剤は、外側層上に腸溶コーティングをさらに含む。腸溶コーティング材は、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、およびＥＵＤＲＡＧＩＴポリマー、例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００、またはＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０Ｄ−５５からなる群から選択されることが好ましい。
【００８７】
１．１．３  生分解性製剤
一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、少なくとも１つの結腸細菌酵素によって分解されやすい天然または合成ポリマーを含む。ＧＣＣアゴニストは、ポリマーマトリックス中に埋め込まれていることが好ましい。そのようなポリマーの非限定例には、多糖、例えば、アミラーゼ、キトサン、コンドロイチン硫酸、シクロデキストリン、デキストラン、グアーガム、ペクチン、およびキシランなどのポリマーが含まれる。天然または合成ポリマーは、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、または酢酸亜鉛に由来する亜鉛陽イオンなどの陽イオンでゲル化または架橋されていることが好ましい。製剤は、イオン的に架橋されたビーズの形態であることが好ましく、これは、引き続いて腸溶コーティングでコーティングされる。腸溶コーティングは、任意の適当な腸溶コーティング物質、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ポリビニル酢酸フタレート、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、アルギン酸、およびアルギン酸ナトリウム、またはＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーなどを含むことができる。
【００８８】
別の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、ＧＣＣアゴニストと担体の間の共有結合が、胃および小腸内で安定であるが、下部胃腸管、特に結腸内で不安定であるように、担体分子に共有結合的に結合されたＧＣＣアゴニストを含む。担体分子に共有結合的に結合されたＧＣＣアゴニストは、「ＧＣＣプロドラッグ」と呼ばれる。ある特定の実施形態では、ＧＣＣプロドラッグは、アゾ結合またはグリコシド結合を介して担体分子に共有結合的に結合されたＧＣＣアゴニストを含む。他の実施形態では、ＧＣＣプロドラッグは、グルクロニド、シクロデキストリン、デキストランエステル、または極性アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、ＧＣＣプロドラッグはポリマープロドラッグである。一実施形態では、ポリマープロドラッグは、アゾ基を含有するポリアミドを含む。
【００８９】
１．２  ＧＣＣアゴニスト
本発明の製造および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、グアニル酸シクラーゼＣに結合し、ｃＧＭＰの細胞内産生を刺激する。場合により、ＧＣＣアゴニストは、アポトーシスを誘導し、上皮細胞の増殖を阻害する。用語、「グアニル酸シクラーゼＣ」は、腸内細菌によって分泌される熱安定性毒素（ＳＴ）ペプチドの腸受容体として作用する、膜貫通型のグアニル酸シクラーゼを指す。グアニル酸シクラーゼＣは、天然に存在するペプチドのグアニリンおよびウログアニリンの受容体でもある。これらのペプチドのそれぞれについて、異なる受容体が存在し得る可能性は除外されていない。したがって、用語「グアニル酸シクラーゼＣ」は、胃腸粘膜に沿って並ぶ上皮細胞上に発現される膜貫通型グアニル酸シクラーゼ受容体のクラスも包含することができる。
【００９０】
用語「ＧＣＣアゴニスト」は、腸のグアニル酸シクラーゼＣに結合し、ｃＧＭＰの細胞内産生を刺激するものなどのペプチドおよび非ペプチド化合物の両方を指す。ＧＣＣアゴニストがペプチドである場合、この用語は、グアニル酸シクラーゼＣに結合し、ｃＧＭＰの細胞内産生を刺激するそのようなペプチドの生物学的活性断片およびプロペプチドを包含する。
【００９１】
本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、天然に存在するＧＣＣアゴニスト、例えば、ウログアニリン、グアニリン、およびＳＴペプチドなどより高いレベルで細胞内ｃＧＭＰ産生を刺激することが好ましい。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、ＳＰ−３０４と呼ばれるペプチド（配列番号１）より高いレベルで細胞内ｃＧＭＰ産生を刺激する。特定の実施形態では、本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、ウログアニリン、グアニリン、リンホグアニリン（ｌｙｍｐｈｏｇｕａｎｙｌｉｎ）、リナクロチド、ＳＴペプチド、またはＳＰ−３０４と比較して５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、９０％、またはそれ以上の細胞内ｃＧＭＰを刺激する。用語「誘導する」および「刺激する」は、本明細書全体にわたって互換的に使用される。
【００９２】
本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、天然に存在するＧＣＣアゴニスト、例えば、ウログアニリン、グアニリン、およびＳＴペプチドなどより安定であることが好ましい。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、ＳＰ−３０４と呼ばれるペプチドより安定である。この脈絡における「安定性」は、参照ペプチドと比較して、胃腸液および／または腸液（または模擬胃腸液もしくは模擬腸液）中での分解に対する耐性を指す。例えば、本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、天然に存在するＧＣＣアゴニスト（ａｎｇｏｎｉｓｔｓ）および／またはＳＰ−３０４と比較して、２％、３％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、９０％、またはそれ以下で分解することが好ましい。
【００９３】
本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、ペプチドであることが好ましい。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、長さが３０アミノ酸未満である。特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、長さが３０、２５、２０、１５、１４、１３、１２、１１、１０、または５アミノ酸以下である。本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストの例には、そのそれぞれが、その全体が本明細書に参照により組み込まれている、２００８年６月４日に出願された米国第１２／１３３，３４４号、２００９年６月４日に出願された同第１２／４７８５０５号；２００９年６月４日に出願された同第１２／４７８５１１号；２００９年７月１６日に出願された同第１２／５０４２８８号；ならびに２００７年６月４日に出願された米国仮出願第６０／９３３１９４号；２００８年６月４日に出願された同第６１／０５８，８８８号；２００８年６月４日に出願された同第６１／０５８，８９２号；および２００８年７月１６日に出願された同第６１／０８１，２８９号に記載されたものが含まれる。
【００９４】
本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストの具体例には、以下の表Ｉ〜ＶＩＩに記載されているものが含まれる。表Ｉ〜ＶＩＩで使用する場合、用語「ＰＥＧ３」または「３ＰＥＧ」は、アミノエチルオキシ−エチルオキシ−酢酸（ＡｅｅＡ）などのポリエチレングリコール、およびそのポリマーを指す。用語「Ｘａａ」は、任意の天然または非天然のアミノ酸またはアミノ酸類似体を指す。用語「Ｍａａ」は、システイン（Ｃｙｓ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、ホモシステイン、または３−メルカプトプロリンを指す。用語「Ｘａａｎ１」は、長さが１、２、または３残基である任意の天然または非天然のアミノ酸またはアミノ酸類似体のアミノ酸配列を意味し；Ｘａａｎ２は、長さが０または１残基であるアミノ酸配列を表すことを意味し；Ｘａａｎ３は、長さが０、１、２、３、４、５、または６残基であるアミノ酸配列を表すことを意味する。さらに、Ｘａａ、Ｘａａｎ１、Ｘａａｎ２、またはＸａａｎ３によって表される任意のアミノ酸は、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、メチル化アミノ酸、またはこれらの任意の組合せとすることができる。場合により、表中の式Ｉ〜ＸＸで表される任意のＧＣＣアゴニストペプチドは、Ｎ末端、Ｃ末端、または両方で１つまたは複数のポリエチレングリコール残基を含有することができる。
【００９５】
ある特定の実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、配列番号１〜２４９から選択されるペプチドを含み、その配列は、以下の表Ｉ〜ＶＩＩに以下に示されている。一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、配列番号１、８、９、５５、または５６によって示されるペプチドを含む。
【００９６】
ある特定の実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、配列番号１〜２４９から選択されるペプチドと実質的に等価であるペプチドを含む。用語「実質的に等価な」は、ペプチドの、腸のグアニル酸シクラーゼ受容体に結合し、流体および電解質の輸送を刺激する能力を損なうことなく、ある特定の残基が欠失、または他のアミノ酸と置換されていてもよい結合ドメインのアミノ酸配列と等価なアミノ酸配列を有するペプチドを指す。
【００９７】
１．２．１  ＧＣＣアゴニストペプチド
好適な実施形態では、本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、ＧＣＣアゴニストペプチドである。ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、ウログアニリンまたは細菌性ＳＴペプチドの類似体である。ウログアニリンは、ナトリウム利尿活性を有する循環ペプチドホルモンである。ＳＴペプチドは、グアニル酸シクラーゼ受容体を活性化し、分泌性下痢を引き起こすＥ．  ｃｏｌｉおよび他の腸内細菌の病原性菌株によって分泌される熱安定性エンテロトキシン（ＳＴペプチド）のファミリーのメンバーである。細菌性ＳＴペプチドと異なり、ウログアニリンのグアニル酸シクラーゼ受容体への結合は、消化管の生理的ｐＨに依存する。したがって、ウログアニリンは、ｐＨ依存様式で、重度の下痢を引き起こすことなく、体液および電解質輸送を調節することが予期される。
【００９８】
本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、または両方の組合せのポリマーとすることができる。例えば、様々な実施形態では、ペプチドは、Ｄレトロ−インベルソペプチドである。用語「レトロ−インベルソ異性体」は、配列の方向が逆転し、各アミノ酸残基の対掌性が逆である線形ペプチドの異性体を指す。例えば、Ｊａｍｅｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻、７４４〜７４６頁（１９９４年）；Ｂｒａｄｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻、６９２〜６９３頁（１９９４年）を参照。Ｄ−鏡像異性体および逆合成を組み合わせることの正味の結果は、各アミド結合におけるカルボニル基およびアミノ基の位置が交換される一方で、各α炭素での側鎖基の位置は保存されることである。別段の言明のない限り、本発明の任意の所与のＬ−アミノ酸配列は、対応する天然Ｌ−アミノ酸配列についての配列の逆を合成することによって、Ｄレトロ−インベルソペプチドにすることができることが推定される。
【００９９】
本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストペプチドは、グアニル酸シクラーゼＣを発現する細胞および組織内で細胞内ｃＧＭＰ産生を誘導することができる。ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、ウログアニリン、グアニリンまたはＳＴペプチドなどの天然に存在するＧＣＣアゴニストと比較して、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、９０％、またはそれ以上細胞内ｃＧＭＰを刺激する。場合により、ＧＣＣアゴニストペプチドは、ＳＰ−３０４（配列番号１）と比較して、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、９０％、またはそれ以上細胞内ｃＧＭＰを刺激する。さらなる実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、アポトーシス、例えば、プログラム細胞死を刺激し、または嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）を活性化する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストペプチドは、天然に存在するＧＣＣアゴニストおよび／またはＳＰ−３０４（配列番号１）、ＳＰ−３３９（リナクロチド）（配列番号５５）、またはＳＰ−３４０（配列番号５６）より安定である。例えば、ＧＣＣアゴニストペプチドは、天然に存在するＧＣＣアゴニストおよび／またはＳＰ−３０４、ＳＰ−３３９（リナクロチド）、またはＳＰ−３４０と比較して、２％、３％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、９０％、またはそれ以下で分解する。ある特定の実施形態では、本発明の製剤および方法において使用するためのＧＣＣアゴニストペプチドは、天然に存在するＧＣＣアゴニストおよび／またはＳＰ−３０４（配列番号１）、ＳＰ−３３９（リナクロチド）（配列番号５５）、またはＳＰ−３４０（配列番号５６）より、タンパク質分解消化に対して安定である。一実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、胃腸管の酵素によるタンパク質分解（ｐｒｏｔｅａｌｙｓｉｓ）に対して、ペプチドをより耐性にするためにペグ化されている。好適な実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、そのＣ末端、そのＮ末端、または両末端で、アミノエチルオキシ−エチルオキシ−酢酸（Ａｅｅａ）基でペグ化されている。
【０１０１】
本発明の方法および製剤において使用することができるＧＣＣアゴニストペプチドの具体例には、配列番号１〜２４９によって示された群から選択されるペプチドが含まれる。
【０１０２】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式Ｘ〜ＸＶＩＩ（例えば、配列番号８７〜９８）のいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドである。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式Ｉのアミノ酸配列を有するペプチドを含み、式Ｉの少なくとも１つのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸もしくはメチル化アミノ酸であり、かつ／または１６位のアミノ酸は、セリンである。式Ｉの１６位のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。例えば、式Ｉの１６位のアミノ酸は、ｄ−ロイシンまたはｄ−セリンである。場合により、式Ｉの１〜３位のアミノ酸の１つまたは複数は、Ｄ−アミノ酸、もしくはメチル化アミノ酸、またはＤ−アミノ酸もしくはメチル化アミノ酸の組合せである。例えば、式ＩのＡｓｎ１、Ａｓｐ２、またはＧｌｕ３（またはこれらの組合せ）は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸である。式Ｉの位置Ｘａａ６のアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはチロシンであることが好ましい。
【０１０４】
代替の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式ＩＩのアミノ酸配列を有するペプチドを含み、式ＩＩの少なくとも１つのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸である。式ＩＩのＸａａｎ２によって表されるアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。いくつかの実施形態では、式ＩＩのＸａａｎ２によって表されるアミノ酸は、ロイシン、ｄ−ロイシン、セリン、またはｄ−セリンである。式ＩＩのＸａａｎ１によって表される１つまたは複数のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。式ＩＩの位置Ｘａａ６のアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはチロシンであることが好ましい。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式ＩＩＩのアミノ酸配列を有するペプチドを含み、式ＩＩＩの少なくとも１つのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸もしくはメチル化アミノ酸であり、かつ／またはＭａａはシステインでない。式ＩＩＩのＸａａｎ２によって表されるアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。いくつかの実施形態では、式ＩＩＩのＸａａｎ２によって表されるアミノ酸は、ロイシン、ｄ−ロイシン、セリン、またはｄ−セリンである。式ＩＩＩのＸａａｎ１によって表される１つまたは複数のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。式ＩＩＩの位置Ｘａａ６のアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはチロシンであることが好ましい。
【０１０６】
他の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式ＩＶのアミノ酸配列を有するペプチドを含み、式ＩＶの少なくとも１つのアミノ酸はＤ−アミノ酸もしくはメチル化アミノ酸であり、かつ／またはＭａａはシステインでない。式ＩＶのＸａａｎ２は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。いくつかの実施形態では、式ＩＶのＸａａｎ２によって表されるアミノ酸は、ロイシン、ｄ−ロイシン、セリン、またはｄ−セリンである。式ＩＶのＸａａｎ１によって表されるアミノ酸の１つまたは複数は、Ｄ−アミノ酸またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。式ＩＶのＸａａ６によって表されるアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはチロシンであることが好ましい。
【０１０７】
さらなる実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式Ｖのアミノ酸配列を有するペプチドを含み、式Ｖの少なくとも１つのアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸である。式Ｖの１６位のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。例えば、式Ｖの１６位（すなわち、Ｘａａ１６）のアミノ酸は、ｄ−ロイシン、またはｄ−セリンである。場合により、式Ｖの１〜３位のアミノ酸の１つまたは複数は、Ｄ−アミノ酸、もしくはメチル化アミノ酸、またはＤ−アミノ酸もしくはメチル化アミノ酸の組合せである。例えば、式ＶのＡｓｎ１、Ａｓｐ２、またはＧｌｕ３（またはこれらの組合せ）は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸である。式ＶのＸａａ６で表されるアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはチロシンであることが好ましい。
【０１０８】
追加の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸのアミノ酸配列を有するペプチドを含む。式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの６位のアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはチロシンであることが好ましい。いくつかの態様では、式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの１６位のアミノ酸は、ロイシン、またはセリンである。式Ｖの１６位のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。
【０１０９】
追加の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、ＸＶＩ、またはＸＶＩＩのアミノ酸配列を有するペプチドを含む。場合により、式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、ＸＶＩ、またはＸＶＩＩの１つまたは複数のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸である。式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、ＸＶＩ、またはＸＶＩＩによるペプチドのカルボキシ末端のアミノ酸は、Ｄ−アミノ酸、またはメチル化アミノ酸であることが好ましい。例えば、式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＩＶ、ＸＶ、ＸＶＩ、またはＸＶＩＩによるペプチドのカルボキシ末端のアミノ酸は、Ｄ−チロシンである。
【０１１０】
式ＸＩＶのＸａａ６によって表されるアミノ酸は、チロシン、フェニルアラニン（ｐｈｅｎｙａｌａｎｉｎｅ）、またはセリンであることが好ましい。式ＸＩＶのＸａａ６によって表されるアミノ酸は、フェニルアラニン、またはセリンであることが最も好ましい。式ＸＶ、ＸＶＩ、またはＸＶＩＩのＸａａ４によって表されるアミノ酸は、チロシン、フェニルアラニン、またはセリンであることが好ましい。式Ｖ、ＸＶＩ、またはＸＶＩＩのアミノ酸位置Ｘａａ４は、フェニルアラニン、またはセリンであることが最も好ましい。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ＧＣＲＡペプチドは、式ＸＶＩＩＩのアミノ酸配列を含有するペプチドを含む。式ＸＶＩＩＩの１位のアミノ酸は、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、またはリシンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの２位および３位のアミノ酸は、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であることが好ましい。５位のアミノ酸は、グルタミン酸であることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの６位のアミノ酸は、イソロイシン、バリン、セリン、トレオニン、またはチロシンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの８位のアミノ酸は、バリン、またはイソロイシンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの９位のアミノ酸は、アスパラギンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの１０位のアミノ酸は、バリンまたはメチオニンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの１１位のアミノ酸は、アラニンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの１３位のアミノ酸は、トレオニンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの１４位のアミノ酸は、グリシンであることが好ましい。式ＸＶＩＩＩの１６位のアミノ酸は、ロイシン、セリン、またはトレオニンであることが好ましい。
【０１１２】
代替の実施形態では、ＧＣＲＡペプチドは、式ＸＩＸのアミノ酸配列を含有するペプチドを含む。式ＸＩＸの１位のアミノ酸は、セリン、またはアスパラギンであることが好ましい。式ＸＩＸの２位のアミノ酸は、ヒスチジン、またはアスパラギン酸であることが好ましい。式ＸＩＸの３位のアミノ酸は、トレオニン、またはグルタミン酸であることが好ましい。式ＸＩＸの５位のアミノ酸は、グルタミン酸であることが好ましい。式ＸＩＸの６位のアミノ酸は、イソロイシン、ロイシン、バリン、またはチロシンであることが好ましい。式ＸＩＸの８位、１０位、１１位、または１３位のアミノ酸は、アラニンであることが好ましい。式ＸＩＸの９位のアミノ酸は、アスパラギン、またはフェニルアラニンであることが好ましい。式ＸＩＸの１４位のアミノ酸は、グリシンであることが好ましい。
【０１１３】
さらなる実施形態では、ＧＣＲＡペプチドは、式ＸＸのアミノ酸配列を含有するペプチドを含む。式ＸＸの１位のアミノ酸は、グルタミンであることが好ましい。式ＸＸの２位または３位のアミノ酸は、グルタミン酸、またはアスパラギン酸であることが好ましい。式ＸＸの５位のアミノ酸は、グルタミン酸であることが好ましい。式ＸＸの６位のアミノ酸は、トレオニン、グルタミン、チロシン、イソロイシン、またはロイシンであることが好ましい。式ＸＸの８位のアミノ酸は、イソロイシン、またはバリンであることが好ましい。式ＸＸの９位のアミノ酸は、アスパラギンであることが好ましい。式ＸＸの１０位のアミノ酸は、メチオニン、またはバリンであることが好ましい。式ＸＸの１１位のアミノ酸は、アラニンであることが好ましい。式ＸＸの１３位のアミノ酸は、トレオニン（ｔｈｒｅｏｎｉｏｎｅ）であることが好ましい。式ＸＸの１位のアミノ酸は、グリシンであることが好ましい。式ＸＸの１５位のアミノ酸は、チロシンであることが好ましい。場合により、式ＸＸの１５位のアミノ酸は、長さが２アミノ酸であり、システイン（Ｃｙｓ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、ホモシステイン、または３−メルカプトプロリン、およびセリン、ロイシン、またはトレオニンである。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドの１つまたは複数のアミノ酸は、天然に存在しないアミノ酸、または天然に存在する、もしくは天然に存在しないアミノ酸類似体によって置換される。そのようなアミノ酸およびアミノ酸類似体は、当技術分野で公知である。例えば、Ｈｕｎｔ、「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ」、ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ、Ｂａｒｒｅｔｔ、Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ、１９８５年を参照。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然に存在する非必須アミノ酸、例えば、タウリンによって置換される。非タンパク質アミノ酸によって置換することができる天然に存在するアミノ酸の非限定例として、以下のものが挙げられる：（１）芳香族アミノ酸は、３，４−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ヨード−Ｌ−チロシン、トリヨードチロニン、Ｌ−チロキシン、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、またはｎｏｒ−チロシン（ｎｏｒＴｙｒ）によって置換することができる；（２）ＰｈｇおよびｎｏｒＴｙｒ、ならびにＰｈｅおよびＴｙｒを含めた他のアミノ酸は、例えば、ハロゲン、−ＣＨ３、−ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＳＨ、または別の基によって置換することができる；（３）グルタミン残基は、γ−ヒドロキシ−Ｇｌｕまたはγ−カルボキシ−Ｇｌｕで置換することができる；（４）チロシン残基は、Ｌ−α−メチルフェニルアラニンなどのα置換アミノ酸で、または類似体、例えば、３−アミノ−Ｔｙｒ；Ｔｙｒ（ＣＨ３）；Ｔｙｒ（ＰＯ３（ＣＨ３）２）；Ｔｙｒ（ＳＯ３Ｈ）；β−シクロヘキシル−Ａｌａ；β−（１−シクロペンテニル）−Ａｌａ；β−シクロペンチル−Ａｌａ；β−シクロプロピル−Ａｌａ；β−キノリル−Ａｌａ；β−（２−チアゾリル）−Ａｌａ；β−（トリアゾール−１−イル）−Ａｌａ；β−（２−ピリジル）−Ａｌａ；β−（３−ピリジル）−Ａｌａ；アミノ−Ｐｈｅ；フルオロ−Ｐｈｅ；シクロヘキシル−Ｇｌｙ；ｔＢｕ−Ｇｌｙ；β−（３−ベンゾチエニル）−Ａｌａ；β−（２−チエニル）−Ａｌａ；５−メチル−Ｔｒｐ；およびＡ−メチル−Ｔｒｐなどによって置換することができる；（５）プロリン残基は、ｈｏｍｏｐｒｏ（Ｌ−ピペコリン酸）；ヒドロキシ−Ｐｒｏ；３，４−デヒドロ−Ｐｒｏ；４−フルオロ−Ｐｒｏ；またはα−メチル−Ｐｒｏもしくはその構造：（ｎ＝０、１、２、３）を有するＮ（α）−Ｃ（α）環化アミノ酸類似体などで置換することができる；（６）アラニン残基は、α−置換もしくはＮ−メチル化アミノ酸、例えば、α−アミノイソ酪酸（ａｉｂ）、Ｌ／Ｄ−α−エチルアラニン（Ｌ／Ｄ−イソバリン）、Ｌ／Ｄ−メチルバリン、もしくはＬ／Ｄ−α−メチルロイシンなど、またはβ−フルオロ−Ａｌａなどの非天然アミノ酸で置換することができる。アラニンも、ｎ＝０、１、２、３で置換することができる。グリシン残基は、α−アミノイソ酪酸（ａｉｂ）またはＬ／Ｄ−α−エチルアラニン（Ｌ／Ｄ−イソバリン）で置換することができる。
【０１１５】
非天然アミノ酸のさらなる例として、チロシンの非天然類似体；グルタミンの非天然類似体；フェニルアラニンの非天然類似体；セリンの非天然類似体；トレオニンの非天然類似体；アルキル、アリール、アシル、アジド、シアノ、ハロ、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシル、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｙｎｌ）、エーテル、チオール、スルホニル、セレノ、エステル、チオ酸、ボレート、ボロネート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式、エノン、イミン、アルデヒド、ヒドロキシルアミン、ケト、もしくはアミノ置換アミノ酸、またはこれらの任意の組合せ；光活性化可能な架橋剤を有するアミノ酸；スピン標識されたアミノ酸；蛍光性アミノ酸；新規の官能基を有するアミノ酸；別の分子と共有結合的または非共有結合的に相互作用するアミノ酸；金属結合アミノ酸；天然にアミド化されていない部位でアミド化されたアミノ酸、金属含有アミノ酸；放射性アミノ酸；光ケージド（ｐｈｏｔｏｃａｇｅｄ）アミノ酸および／または光異性化可能なアミノ酸；ビオチンまたはビオチン−類似体含有アミノ酸；グリコシル化された、または炭水化物で修飾されたアミノ酸；ケト含有アミノ酸；ポリエチレングリコールまたはポリエーテルを含むアミノ酸；重原子で置換されたアミノ酸（例えば、重水素、トリチウム、１３Ｃ、１５Ｎ、または１８Ｏを含有するアミノ酸）；化学切断可能または光切断可能なアミノ酸；伸長された側鎖を有するアミノ酸；毒性基を含有するアミノ酸；糖置換アミノ酸、例えば、糖置換セリンなど；炭素結合糖含有アミノ酸；酸化還元活性アミノ酸；α−ヒドロキシ含有酸；アミノチオ酸含有アミノ酸；α，α二置換アミノ酸；β−アミノ酸；プロリン以外の環状アミノ酸；Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン；Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン；３−メチル−フェニルアラニン；ρ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン；Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン；４−プロピル−Ｌ−チロシン；トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン；Ｌ−ドーパ；フッ化フェニルアラニン；イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン；ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン；ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン；ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン；Ｌ−ホスホセリン；ホスホノセリン；ホスホノチロシン；ｐ−ヨード−フェニルアラニン；４−フルオロフェニルグリシン；ｐ−ブロモフェニルアラニン；ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン；イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン；Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン；Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニン（ｄＮａｌ）；アミノ−、イソプロピル−、またはＯ−アリル含有フェニルアラニン類似体；ドーパ、０−メチル−Ｌ−チロシン；グリコシル化アミノ酸；ｐ−（プロパルギルオキシ）フェニルアラニン；ジメチル−リシン；ヒドロキシ−プロリン；メルカプトプロピオン酸；メチル−リシン；３−ニトロ−チロシン；ノルロイシン；ピログルタミン酸；Ｚ（カルボベンゾキシル）；ε−アセチル−リシン；β−アラニン；アミノベンゾイル誘導体；アミノ酪酸（Ａｂｕ）；シトルリン；アミノヘキサン酸；アミノイソ酪酸（ＡＩＢ）；シクロヘキシルアラニン；ｄ−シクロヘキシルアラニン；ヒドロキシプロリン；ニトロ−アルギニン；ニトロ−フェニルア��ニン；ニトロ−チロシン；ノルバリン；オクタヒドロインドールカルボキシレート；オルニチン（Ｏｒｎ）；ペニシラミン（ＰＥＮ）；テトラヒドロイソキノリン；アセトアミドメチルで保護されたアミノ酸、およびペグ化アミノ酸が挙げられる。非天然アミノ酸およびアミノ酸類似体のさらなる例は、Ｕ．Ｓ．２００３０１０８８８５、Ｕ．Ｓ．２００３００８２５７５、ＵＳ２００６００１９３４７（段落４１０〜４１８）、およびこれらに引用された参考文献に見出すことができる。本発明のポリペプチドは、ＵＳ２００６００１９３４７、段落５８９に記載されたものを含めたさらなる修飾を含むことができる。天然に存在しないアミノ酸を含む例示的なＧＣＣアゴニストペプチドには、例えば、ＳＰ−３６８およびＳＰ−３６９が含まれる。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニストは環状ペプチドである。ＧＣＣアゴニスト環状ペプチドは、当技術分野で公知の方法によって調製することができる。例えば、大環状化は、ペプチドのＮ末端とＣ末端の間、側鎖とＮ末端もしくはＣ末端との間［例えば、ｐＨ８．５でＫ３Ｆｅ（ＣＮ）６を用いて］（Ｓａｍｓｏｎら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３７巻：５１８２〜５１８５頁（１９９６年））、またはシステインなどの２つのアミノ酸側鎖の間にアミド結合を形成することによって実現されることが多い。例えば、ＤｅＧｒａｄｏ、Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ、３９巻：５１〜１２４頁（１９８８年）を参照。様々な実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、［４，１２；７，１５］二環体（ｂｉｃｙｃｌｅ）である。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチド中で通常ジスルフィド結合を形成する１つまたは両方のＣｙｓ残基は、ホモシステイン、ペニシラミン、３−メルカプトプロリン（Ｋｏｌｏｄｚｉｅｊら  １９９６年  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．  ４８巻：２７４頁）；β，βジメチルシステイン（Ｈｕｎｔら  １９９３年  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．  ４２巻：２４９頁）、またはジアミノプロピオン酸（Ｓｍｉｔｈら  １９７８年  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２１巻：１１７頁）で置換されることによって、通常のジスルフィド結合の位置で代替の内部架橋結合を形成する。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチド中の１つまたは複数のジスルフィド結合は、代替の共有結合性架橋結合、例えば、アミド結合（−ＣＨ２ＣＨ（Ｏ）ＮＨＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ＮＨＣＨ（Ｏ）ＣＨ２−）、エステル結合、チオエステル結合、ラクタム架橋、カルバモイル結合、尿素結合、チオ尿素結合、ホスホネートエステル結合、アルキル結合（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、アルケニル結合（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−）、エーテル結合（−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−）、チオエーテル結合（−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ２−）、アミン結合（−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−）、またはチオアミド結合（−ＣＨ２ＣＨ（Ｓ）ＨＮＨＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ＮＨＣＨ（Ｓ）ＣＨ２−）によって置換される。例えば、Ｌｅｄｕら（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １００巻：１１２６３〜７８頁、２００３年）は、ラクタムおよびアミド架橋結合を調製するための方法を記載している。ラクタム架橋を含む例示的なＧＣＣアゴニストペプチドには、例えば、ＳＰ−３７０が含まれる。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、代替の結合によって置換された１つまたは複数の従来のポリペプチド結合を有する。そのような置換は、ポリペプチドの安定性を増大させることができる。例えば、残基のアミノ末端から芳香族残基（例えば、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ）の間のポリペプチド結合を代替の結合で置換することにより、カルボキシペプチダーゼによる切断を低減することができ、消化管内での半減期を増加させることができる。ポリペプチド結合を置換することができる結合として、レトロ−インベルソ結合（ＮＨ−Ｃ（Ｏ）の代わりにＣ（Ｏ）−ＮＨ）；還元アミド結合（ＮＨ−ＣＨ２）；チオメチレン結合（Ｓ−ＣＨ２またはＣＨ２−Ｓ）；オキソメチレン結合（Ｏ−ＣＨ２またはＣＨ２−Ｏ）；エチレン結合（ＣＨ２−ＣＨ２）；チオアミド結合（Ｃ（Ｓ）−ＮＨ）；トランス−オレフィン（ｏｌｅｆｉｎｅ）結合（ＣＨ＝ＣＨ）；フルオロ（ｆｉｕｏｒｏ）置換トランス−オレフィン（ｏｌｅｆｍｅ）結合（ＣＦ＝ＣＨ）；ケトメチレン結合（Ｃ（Ｏ）−ＣＨＲまたはＣＨＲ−Ｃ（Ｏ）（式中ＲはＨまたはＣＨ３である））；およびフルオロ−ケトメチレン結合（Ｃ（Ｏ）−ＣＦＲまたはＣＦＲ−Ｃ（Ｏ）（式中ＲはＨまたはＦまたはＣＨ３である））が挙げられる。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、標準的な修飾を使用して修飾される。修飾は、アミノ（Ｎ−）、カルボキシ（Ｃ−）末端で、内部で、または前述のいずれかを組み合わせて行うことができる。本明細書に記載される一態様では、ポリペプチド上に２つ以上の型の修飾が存在し得る。修飾として、それだけに限らないが、アセチル化、アミド化、ビオチン化、シンナモイル化（ｃｉｎｎａｍｏｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化、ホルミル化、ミリストイル化、パルミトイル化、リン酸化（Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、またはＴｈｒ）、ステアロイル化、スクシニル化、スルフリル化および環化（ジスルフィド架橋またはアミド環化を介して）、ならびにＣｙｓ３またはＣｙｓ５による修飾が挙げられる。本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドは、２，４−ジニトロフェニル（ＤＮＰ）、ＤＮＰ−リシンによって、７−アミノ−４−メチル−クマリン（ＡＭＣ）、フルオレセイン（ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎ）、ＮＢＤ（７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール）、ｐ−ニトロ−アニリド、ローダミンＢ、ＥＤＡＮＳ（５−（（２−アミノエチル）アミノ）ナフタレン−１−スルホン酸）、ダブシル（ｄａｂｃｙｌ）、ダブシル（ｄａｂｓｙｌ）、ダンシル、テキサスレッド、ＦＭＯＣ、およびＴａｍｒａ（テトラメチルローダミン）による修飾によって修飾することもできる。本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドは、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ２０の直線または分岐アルキル基）；脂肪酸ラジカル；ＰＥＧ、アルキル基、および脂肪酸ラジカルの組合せ（米国特許第６，３０９，６３３号；Ｓｏｌｔｅｒｏら、２００１年  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０６〜１１０頁を参照）；ＢＳＡおよびＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）に結合することもできる。本発明のポリペプチドを修飾するのに使用することができるＰＥＧおよび他のポリマーの付加は、ＵＳ２００６０１９３４７のセクションＩＸに記載されている。
【０１２１】
ＧＣＣアゴニストペプチドは、本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドの誘導体とすることもできる。例えば、誘導体には、ある特定のアミノ酸が欠失または置換された、ＧＣＣアゴニストペプチドのハイブリッドおよび修飾形態が含まれる。修飾は、グリコシル化も含むことができる。修飾がアミノ酸置換である場合、これは、ペプチドの生物活性について非必須アミノ酸残基であることが予測されている、１つまたは複数の位置での同類置換であることが好ましい。「同類置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換された置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。
【０１２２】
一実施形態では、本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドは、生物活性を有する突然変異体を同定するために、ランダムな突然変異生成にかけられる。
【０１２３】
一実施形態では、ＧＣＣアゴニストペプチドは、本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドと実質的に相同である。そのような実質的に相同のペプチドは、本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドに対する抗体との交差反応性によって単離することができる。
【０１２４】
本発明の方法および製剤において使用することができるＧＣＣアゴニストペプチドのさらなる例は、以下の表Ｉ〜ＶＩＩに見出される。
【０１２５】
１．２．２  ＧＣＣアゴニストペプチドの調製
ＧＣＣアゴニストペプチドは、当技術分野で認識された技法、例えば、分子クローニング、ペプチド合成、または部位特異的突然変異生成などを使用して調製することができる。
【０１２６】
ペプチド合成は、標準的な液相または固相ペプチド合成技法を使用して実施することができ、この技法において、水分子を脱離させて、一方のアミノ酸のアミノ基を、他方のアミノ酸のカルボキシ基と直接縮合することによってペプチド結合が起こる。上記に示した直接縮合によるペプチド結合合成は、第１のアミノ酸のアミノ基および第２のアミノ酸のカルボキシル基の反応特性を抑制する必要がある。マスキング置換基（ｍａｓｋｉｎｇ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）は、不安定なペプチド分子の分解を誘導することなく、速やかに除去されることを可能にしなければならない。
【０１２７】
液相合成では、多種多様なカップリング法および保護基を使用することができる（ＧｒｏｓｓおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１〜４巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９７９年）；ＢｏｄａｎｓｋｙおよびＢｏｄａｎｓｋｙ、「Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、２版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、１９９４年）を参照）。さらに、中程度の精製およびリニアスケールアップが可能である。当業者は、溶液合成には、主鎖および側鎖の保護基ならびに活性化方法の考慮が必要であることを理解するであろう。さらに、セグメント（ｓｅｇｍｅｎｔ）を縮合する間のラセミ化を最小限にするために、セグメントを慎重に選択する必要がある。溶解度の考慮も要因である。固相ペプチド合成は、有機合成の間の支持体用に不溶性ポリマーを使用する。ポリマーで支持されたペプチド鎖により、中間ステップで、労力を要する精製の代わりに単純な洗浄および濾過ステップを使用することが可能になる。固相ペプチド合成は一般に、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．、１９６３年、８５巻：２１４９頁の方法に従って実施することができ、これは、保護されたアミノ酸を使用して、樹脂支持体上で線形ペプチド鎖をアセンブルする。固相ペプチド合成は一般に、ＢｏｃまたはＦｍｏｃストラテジーを利用し、これらは当技術分野で周知である。
【０１２８】
当業者は、固相合成において、脱保護およびカップリング反応は完了しなければならず、側鎖ブロッキング基は、合成の間にわたって安定でなければならないことを認識するであろう。さらに、固相合成は、ペプチドが小スケールで作製される場合、一般に最も適している。
【０１２９】
Ｎ末端のアセチル化は、樹脂から切断する前に、最終的なペプチドを無水酢酸と反応させることによって実現することができる。Ｃ−アミド化は、メチルベンズヒドリルアミン樹脂などの適切な樹脂を使用して、Ｂｏｃ技術を使用して実現される。
【０１３０】
あるいはＧＣＣアゴニストペプチドは、最新のクローニング技法によって生成される。例えば、ＧＣＣアゴニストペプチドは、限定することなく、Ｅ．  ｃｏｌｉを含めた細菌中で、またはポリペプチドもしくはタンパク質産生のための他の既存のシステム（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓｆ９細胞を使用するバキュロウイルス発現系、酵母もしくは糸状菌発現系、哺乳動物細胞発現系）において生成され、あるいはこれらは、化学的に合成することができる。ＧＣＣアゴニストペプチドまたは変異体ペプチドが、細菌、例えば、Ｅ．  ｃｏｌｉ中で産生される場合、ポリペプチドをコードする核酸分子は、細胞から成熟したポリペプチドを分泌することを可能にするリーダー配列もコードすることができる。したがって、ポリペプチドをコードする配列は、例えば、天然に存在する細菌性ＳＴポリペプチドのプレ配列およびプロ配列を含むことができる。分泌された、成熟したポリペプチドは、培地から精製することができる。
【０１３１】
本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドをコードする配列は、細菌性細胞中の核酸分子を送達および維持することができるベクター中に挿入することができる。ＤＮＡ分子は、自律複製ベクター中に挿入することができる（適当なベクターには、例えば、ｐＧＥＭ３ＺおよびｐｃＤＮＡ３、ならびにこれらの誘導体が含まれる）。ベクター核酸は、細菌性またはバクテリオファージＤＮＡ、例えば、バクテリオファージλまたはＭ１３、およびこれらの誘導体とすることができる。本明細書に記載される核酸を含有するベクターを構築した後、細菌などの宿主細胞の形質転換をすることができる。適当な細菌性宿主には、それだけに限らないが、Ｅ．  ｃｏｌｉ、Ｂ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａが含まれる。遺伝子コンストラクトは、コード核酸分子に加えて、発現を可能にする要素、例えば、プロモーターおよび制御配列なども含む。発現ベクターは、転写開始を制御する転写制御配列、例えば、プロモーター、エンハンサー、オペレーター、および抑制因子配列などを含有することができる。
【０１３２】
様々な転写制御配列が当業者に周知である。発現ベクターは、翻訳制御配列も含むことができる（例えば、非翻訳５’配列、非翻訳３’配列、または内部リボソーム侵入部位）。ベクターは、自律複製をすることができ、またはこれは、宿主ＤＮＡ中に一体化することによって、ポリペプチド産生の間の安定性を保証することができる。
【０１３３】
本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドを含む、タンパク質をコードする配列は、精製を促進するために、ポリペプチド親和性タグ、例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、プロテインＡ、ＦＬＡＧタグ、ｈｅｘａ−ヒスチジン、ｍｙｃタグ、またはインフルエンザＨＡタグ、をコードする核酸と融合することもできる。親和性タグまたはレポーター融合物は、対象とするポリペプチド読み枠を、親和性タグをコードする遺伝子の読み枠に結合し、その結果翻訳融合が生じる。融合遺伝子の発現は、対象とするポリペプチド、および親和性タグの両方を含む１つのポリペプチドの翻訳をもたらす。場合によっては、親和性タグが利用される場合、プロテアーゼ認識部位をコードするＤＮＡ配列は、親和性タグについての読み枠と対象とするポリペプチドとの間で融合される。
【０１３４】
細菌以外のタンパク質発現系において、本明細書に記載される未成熟および成熟形態のＧＣＣアゴニストペプチドおよび変異体を産生させるのに適しており、当業者に周知である遺伝子コンストラクトおよび方法も、生物系においてポリペプチドを産生させるのに使用することができる。
【０１３５】
本明細書に開示されるペプチドは、体内での半減期の増大などの、ペプチドに所望の特性を付与する第２の分子を結合することによって修飾、例えば、ペグ化することができる。そのような修飾も、本明細書で使用する場合、用語「変異体」の範囲内に入る。
【０１３６】
【表１−１】
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【０１３７】
【表１−２】
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【０１３８】
【表１−３】
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【０１３９】
【表２−１】
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【０１４０】
【表２−２】
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【０１４１】
【表２−３】
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【０１４２】
【表３】
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【０１４３】
【表４−１】
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【０１４４】
【表４−２】
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【０１４５】
【表４−３】
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【０１４６】
【表４−４】
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【０１４７】
【表４−５】
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【０１４８】
【表４−６】
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【０１４９】
【表５−１】
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【０１５０】
【表５−２】
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【０１５１】
【表５−３】
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【０１５２】
【表６−１】
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【０１５３】
【表６−２】
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【０１５４】
【表６−３】
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【０１５５】
【表６−４】
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【０１５６】
【表７】
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１．３  使用方法
本発明は、胃腸障害の治療または予防、および胃腸の運動の増大を必要とする被験体において、有効量のＧＣＣアゴニスト製剤をこの被験体に投与することによって胃腸障害を治療または予防し、胃腸の運動を増大させるための方法を提供する。本発明の方法によって治療または予防することができる胃腸障害の非限定例として、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、イレウス（例えば、術後イレウス）、胃不全麻痺、胸やけ（胃腸管中の高酸性度）、便秘（例えば、薬物療法、例えば、オピオイド、骨関節炎薬、または骨粗鬆症薬などの使用に関連する便秘）；術後の（ｐｏｓｔ  ｓｕｒｉｇｉｃａｌ）便秘、神経障害に関連する便秘、クローン病、および潰瘍性大腸炎が挙げられる。
【０１５７】
本発明は、消化器癌の治療を必要とする被験体において、有効量のＧＣＣアゴニスト製剤をこの被験体に投与することによって消化器癌を治療するための方法も提供する。本発明の方法によって治療することができる消化器癌の非限定例として、胃癌、食道癌、膵癌、結腸直腸癌、腸癌、肛門癌、肝癌、胆嚢癌、または大腸癌が挙げられる。
【０１５８】
障害は、治療有効用量のＧＣＣアゴニストペプチドを、被験体、例えば、治療、予防、または軽減を必要とするヒトなどの哺乳動物に投与することによって治療、予防、または軽減される。ＧＣＣアゴニストペプチドは、１つまたは複数の医薬として許容可能な賦形剤と一緒に、単位用量形態での医薬組成物中にあってもよい。用語「単位用量形態」は、単一の薬物送達実体、例えば、錠剤、カプセル、溶液、または吸入製剤を指す。存在するペプチドの量は、患者に投与されたとき、正の治療効果を有するのに十分であるべきである（一般に、１０μｇと３ｇの間）。「正の治療効果」を構成するものは、治療されている特定の状態に依存し、当業者によって容易に認識される、状態の任意の有意な改善を含む。
【０１５９】
本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、胃腸管の領域にＧＣＣアゴニストを選択的に標的化することから利益を得る疾患および障害の治療または予防に特に有用である。一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、十二指腸または空腸にＧＣＣアゴニストを送達することを標的にする。この実施形態によれば、ＧＣＣアゴニスト製剤は、以下のうちの１つまたは複数を治療または予防するのに特に有用である：過敏性腸症候群（好ましくは便秘支配的）、非潰瘍性消化不良、慢性腸偽性閉塞症、機能性消化不良、結腸偽性閉塞症、十二指腸胃逆流、胃食道逆流疾患、慢性特発性便秘症、胃不全麻痺、胸やけ、胃癌、およびＨ．  ｐｙｌｏｒｉ感染症。一実施形態では、十二指腸または空腸に標的化送達するためのＧＣＣアゴニスト製剤は、４．５から６の間の閾値ｐＨを有するｐＨ依存性ポリマーを含む。別の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、回腸または結腸にＧＣＣアゴニストを送達することを標的にする。この実施形態によれば、ＧＣＣアゴニスト製剤は、以下のうちの１つまたは複数を治療または予防するのに特に有用である：回腸炎（術後回腸炎）、クローン病、潰瘍性大腸炎、末端回腸炎、および大腸癌。一実施形態では、回腸または結腸に標的化送達するためのＧＣＣアゴニスト製剤は、６．５から７．５の間の閾値ｐＨを有するｐＨ依存性ポリマーを含む。
【０１６０】
本発明の製剤中の投与されるＧＣＣアゴニストの具体的な用量は、治療または予防される疾患または障害の性質、ならびにその重症度に依存することになる。特定の被験体のための投与量を求めるのに日常的に使用される他の要因には、被験体の体重、全体的な健康、飲食物、および疾患の自然経過が含まれる。投与経路および投与のスケジューリングも考慮されることになる。ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニストの有効投与量は一般に、体重１キログラム当たり約１０μｇから約３ｍｇの間、好ましくは、体重１キログラム当たり約１０μｇから約１ｍｇの間の化合物となる。他の実施形態では、ＧＣＣアゴニストの投与量は、標的組織、特に大腸（例えば、末端回腸および結腸）内で抗炎症性活性を誘導するのに有効となる。この実施形態によれば、ＧＣＣアゴニストの有効投与量は、体重１キログラム当たり０．０１ｍｇ〜１０ｍｇとなる。好適な実施形態では、有効な投与量は、体重１キログラム当たり、０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、または１０ｍｇである。投与量の調整は、当技術分野で通常である方法を使用して行われることになり、使用されている特定の組成物、および臨床的な考慮事項に基づくことになる。
【０１６１】
上述した方法において使用するためのＧＣＣアゴニストは、経口投与されることが好ましい。剤形には、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、およびカプセルが含まれる。
【０１６２】
全一日量は、単回用量、または複数のサブ用量で患者に投与することができる。一般に、サブ用量は、１日当たり２〜６回、好ましくは１日当たり２〜４回、さらにより好ましくは１日当たり２〜３回投与することができる。
【０１６３】
ＧＣＣアゴニストは、唯一の活性剤として、または１つもしくは複数の追加の活性剤と併用して投与することができる。すべての場合において、追加の活性剤は、指針として既存の技術を使用して、治療的に有効である投与量で投与されるべきである。ＧＣＣアゴニストは、単一の組成物で、または１つまたは複数の追加の活性剤と順次投与することができる。一実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、ｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼの１つまたは複数の阻害剤、例えば、スリンダクスルホン、ザプリナスト、モタピゾン、バルデナフィル、またはシルデナフィル（ｓｉｌｉｄｅｎｉｆｉｌ）と併用して投与される。別の実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、１つまたは複数の化学療法剤と併用して投与される。別の実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、１つまたは複数の抗炎症薬、例えば、ステロイド、またはアスピリンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）などと併用して投与される。
【０１６４】
併用療法は、それぞれが別々に処方および投与される、２つ以上の薬剤、例えば、本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドおよび別の化合物を投与することによって、または２つ以上の薬剤を単一の製剤で投与することによって実現することができる。他の組合せも併用療法に包含される。例えば、２つの薬剤を一緒に処方し、第３の薬剤を含有する別個の製剤とともに投与することができる。併用療法における２つ以上の薬剤は、同時に投与することができるが、これらは必ずしも同時に投与される必要はない。例えば、第１の薬剤（または薬剤の組合せ）の投与は、数分、数時間、数日、または数週間、第２の薬剤（または薬剤の組合せ）の投与に先行することができる。したがって、２つ以上の薬剤は、互いに数分以内、または互いに１、２、３、６、９、１２、１５、１８、もしくは２４時間以内、または互いに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４日以内、または互いに、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０週間以内に投与することができる。いくつかの場合では、より長い間隔でさえ可能である。多くの場合において、併用療法において使用される２つ以上の薬剤は、同時に患者の体内に存在することが望ましいが、これは必ずしもそのようである必要はない。
【０１６５】
本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストペプチドは、ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えば、スリンダクスルホン（ｓｕｌｉｎｄａｅ  ｓｕｌｆｏｎｅ）、ザプリナスト、シルデナフィル、バルデナフィル、またはタダラフィルと合わせることによって、標的組織または臓器内のｃＧＭＰのレベルをさらに増強することができる。
【０１６６】
併用療法は、組合せにおいて使用される薬剤のうちの１つまたは複数の２回以上の投与も含むことができる。例えば、薬剤Ｘおよび薬剤Ｙは、組合せで使用される場合、１回または複数回、任意の組合せで順次、例えば、Ｘ−Ｙ−Ｘ、Ｘ−Ｘ−Ｙ、Ｙ−Ｘ−Ｙ、Ｙ−Ｙ−Ｘ、Ｘ−Ｘ−Ｙ−Ｙなどの順序でこれらを投与することができる。
【０１６７】
１．３．１  併用療法のための例示的な薬剤
本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、胃腸の疾患または障害を治療または予防するための治療レジメンの一部として、単独で、または１つまたは複数の追加の治療剤と併用して投与することができる。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、１つまたは複数の追加の治療剤を含む。他の実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、１つまたは複数の追加の治療剤と別個に製剤化される。この実施形態によれば、ＧＣＣアゴニストは、１つまたは複数の追加の治療剤と同時に、順次、または異なる時間に投与される。一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、ホスホジエステラーゼ阻害剤、環状ヌクレオチド（ｃＧＭＰおよびｃＡＭＰなど）、緩下剤（ＳＥＮＮＡ、またはＭＥＴＡＭＵＣＩＬなど）、便軟化剤、ＩＢＤのための抗腫瘍壊死因子α療法（ＲＥＭＩＣＡＤＥ、ＥＮＢＲＥＬ、またはＨＵＭＩＲＡなど）、ならびに抗炎症薬（ＣＯＸ−２阻害剤、スルファサラジン、５−ＡＳＡ誘導体、およびＮＳＡＩＤＳなど）からなる群から選択される１つまたは複数の追加の治療剤と併用して投与される。ある特定の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、前記ＧＣＣアゴニストと同時に、または順次、有効用量のｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ（ｃＧＭＰ−ＰＤＥ）の阻害剤と併用して投与される。ｃＧＭＰ−ＰＤＥ阻害剤として、例えば、スリンダクスルホン、ザプリナスト、モタピゾン、バルデナフィル、およびシルデナフィルが挙げられる。別の実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、環状ヌクレオチドトランスポーターの阻害剤と併用して投与される。本発明のＧＣＣアゴニスト製剤と併用して投与することができる治療剤のさらなる例は、以下のセクションに示されている。
１．３．１．１  消化器癌を治療するための薬剤
本明細書に記載されるＧＣＣアゴニスト製剤は、それだけに限らないが、アルキル化剤、エピポドフィロトキシン、ニトロソ尿素、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン抗生物質、ナイトロジェンマスタード剤などを含めた１つまたは複数の抗腫瘍薬と併用して使用することができる。特定の抗腫瘍薬には、タモキシフェン、タキソール、エトポシド、および５−フルオロウラシルが含まれる。一実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、抗ウイルス剤またはモノクローナル抗体と併用して使用される。
【０１６８】
大腸癌を治療するために、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤と併用して使用することができる抗腫瘍薬の非限定例として、抗増殖剤、ＤＮＡ修飾または修復のための作用剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ／ＲＮＡ転写制御因子、ＲＮＡプロセシング阻害剤、タンパク質発現、合成、および安定性に影響する作用剤、タンパク質局在化またはその生理的作用を発揮するその能力に影響する作用剤、タンパク質間相互作用またはタンパク質−核酸相互作用を妨害する作用剤、ＲＮＡ干渉によって作用する作用剤、任意の化学的性質の受容体結合分子（小分子および抗体を含む）、標的化毒素、酵素アクチベーター、酵素阻害剤、遺伝子制御因子、ＨＳＰ−９０阻害剤、微小管または他の細胞骨格系成分または細胞接着および細胞運動性を妨害する分子、光線療法のための薬剤、ならびに療法補助剤が挙げられる。
【０１６９】
代表的な抗増殖剤として、Ｎ−アセチル−Ｄ−スフィンゴシン（Ｃ２セラミド）、アピゲニン、塩化ベルベリン、ジクロロメチレンジホスホン酸二ナトリウム塩、ロエ（ｌｏｅ）−エモジン、エモジン、ＨＡ  １４−１、Ｎ−ヘキサノイル−Ｄ−スフィンゴシン（Ｃ６セラミド）、７ｂ−ヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、ヒペルホリン、パルテノリド、およびラパマイシンが挙げられる。
【０１７０】
ＤＮＡ修飾および修復のための代表的な作用剤として、アフィディコリン、硫酸ブレオマイシン、カルボプラチン、カルムスチン、クロランブシル、シクロホスファミド一水和物、シクロホスファミド一水和物ＩＳＯＰＡＣ．ＲＴＭ．、ｃｉｓ−ジアンミン白金（ＩＩ）ジクロリド（シスプラチン）、エスクレチン、メルファラン、メトキシアミン塩酸塩、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン二塩酸塩、オキサリプラチン、およびストレプトゾシンが挙げられる。
【０１７１】
代表的なＤＮＡ合成阻害剤として、（．＋−．）アメトプテリン（メトトレキセート）、３−アミノ−１，２，４−ベンゾトリアジン１，４−ジオキシド、アミノプテリン、シトシンｂ−Ｄ−アラビノフラノシド（ａｒａｂｉｎｏｆｕｒｄｎｏｓｉｄｅ）（シトシンアラビノシド）、シトシンｂ−Ｄ−アラビノフラノシド（シトシンアラビノシド）塩酸塩、２−フルオロアデニン−９−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシド（ｄｅｓ−リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ  ｄｅｓ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；Ｆ−ａｒａ−Ａ）、５−フルオロ−５’−デオキシウリジン（ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｃ）、５−フルオロウラシル、ガンシクロビル、ヒドロキシウレア、６−メルカプトプリン、および６−チオグアニンが挙げられる。
【０１７２】
代表的なＤＮＡ／ＲＮＡ転写制御因子として、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン塩酸塩、５，６−ジクロロベンゾイミダゾール１−ｂ−Ｄ−リボフラノシド、ドキソルビシン塩酸塩、ホモハリングトニン、およびイダルビシン塩酸塩が含まれる。
【０１７３】
代表的な酵素アクチベーターおよび阻害剤として、フォルスコリン、ＤＬ−アミノグルテチミド、アピシジン、Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋ阻害剤、ブテイン、（Ｓ）−（＋）−カンプトテシン、クルクミン、（−）−デグエリン、（−）−デプデシン、ドキシサイクリンヒクレート、エトポシド、フォルメスタン、ホストリエシンナトリウム塩、ヒスピジン、２−イミノ−１−イミダゾリジン酢酸（シクロクレアチン）、オキサムフラチン、４−フェニル酪酸、ロスコビチン、バルプロ酸ナトリウム、トリコスタチンＡ、チロホスチンＡＧ３４、チロホスチンＡＧ８７９、尿トリプシン阻害剤断片、バルプロ酸（２−プロピルペンタン酸）、およびＸＫ４６９が挙げられる。
【０１７４】
代表的な遺伝子制御因子として、５−アザ−２’−デオキシシチジン、５−アザシチジン、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、シグリチゾン（ｃｉｇｌｉｔｉｚｏｎｅ）、シプロテロンアセテート、１５−デオキシ−Ｄ１２，１４−プロスタグランジンＪ２、エピテストステロン、フルタミド、グリチルリジン酸アンモニウム塩（グリチルリジン）、４−ヒドロキシタモキシフェン、ミフェプリストーン、プロカインアミド塩酸塩、ラロキシフェン塩酸塩、オールトランス−レチナール（ビタミンＡアルデヒド）、レチノイン酸（ビタミンＡ酸）、９−ｃｉｓ−レチノイン酸、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、レチノイン酸ｐ−ヒドロキシアニリド、レチノール（ビタミンＡ）、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、テトラデシルチオ酢酸、およびトログリタゾンが挙げられる。
【０１７５】
代表的なＨＳＰ−９０阻害剤には、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン、およびゲルダナマイシンが含まれる。
【０１７６】
代表的な微小管阻害剤として、コルヒチン、ドラスタチン１５、ノコダゾール、タキサン、特に、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、リゾキシン、ビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、およびビンデシン硫酸塩、およびビノレルビン（ナベルビン）二酒石酸塩が挙げられる。
【０１７７】
光線療法を実施するための代表的な作用剤として、光活性ポルフィリン環、ヒペリシン、５−メトキシソラレン、８−メトキシソラレン、ソラレン、およびウルソデオキシコール酸が含まれる。
【０１７８】
療法補助剤として使用される代表的な作用剤として、アミホスチン、４−アミノ−１，８−ナフタルイミド、ブレフェルジンＡ、シメチジン、ホスホマイシン二ナトリウム塩、ロイプロリド（リュープロレリン）酢酸塩、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）酢酸塩、レクチン、パパベリン塩酸塩、ピフィトリン−ａ、（−）−スコポラミン臭化水素酸塩、およびタプシガルジンが挙げられる。
【０１７９】
薬剤は、当技術分野で公知のものなどのような抗ＶＥＧＦ（血管内皮成長因子）剤とすることもできる。いくつかの抗体および小分子が現在臨床試験下にあり、またはＶＥＧＦを阻害することによって機能すると認可されており、例えば、アバスチン（ベバシズマブ）、ＳＵ５４１６、ＳＵ１１２４８、およびＢＡＹ４３−９００６などである。薬剤は、増殖因子受容体、例えば、ＥＧＦ／Ｅｒｂ−Ｂファミリーのもの、例えば、ＥＧＦ受容体（イレッサ、またはゲフィチニブ、およびタルセバ、またはエルロチニブ）、Ｅｒｂ−Ｂ２受容体（ハーセプチンまたはトラスツズマブ）など、他の受容体（リツキシマブまたはリツキサン／ＭａｂＴｈｅｒａなど）、チロシンキナーゼ、非受容体チロシンキナーゼ、細胞セリン／トレオニンキナーゼ（ＭＡＰキナーゼを含む）、ならびにその調節解除が発癌の一因となる様々な他のタンパク質（小／Ｒａｓファミリーおよび大／ヘテロ三量体Ｇタンパク質など）に向けることもできる。こうした分子を標的にするいくつかの抗体および小分子は現在、開発の様々な段階にある（治療用に認可されたもの、または臨床試験下のものを含む）。
【０１８０】
好適な実施形態では、本発明は、大腸癌の治療を必要とする被験体において、パクリタキセル、ドセタキセル、タモキシフェン、ビノレルビン、ゲムシタビン、シスプラチン、エトポシド、トポテカン、イリノテカン、アナストロゾール、リツキシマブ、トラスツズマブ、フルダラビン、シクロホスファミド、ゲムツヅマブ（ｇｅｎｔｕｚｕｍａｂ）、カルボプラチン、インターフェロン、およびドキソルビシンからなる群から選択される１つまたは複数の抗腫瘍薬と併用して、ＧＣＣアゴニストをこの被験体に投与することによって大腸癌を治療するための方法を提供する。特定の実施形態では、抗腫瘍薬はパクリタキセルである。さらなる実施形態では、この方法は、５−ＦＵ、ドキソルビシン、ビノレルビン、シトキサン、およびシスプラチンからなる群から選択される抗腫瘍薬をさらに含む。
【０１８１】
１．３．１．２  クローン病を治療する薬剤
一実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、クローン病を治療するために、１つまたは複数の追加の治療剤を用いた併用療法の一部として投与される。１つまたは複数の追加の治療剤の非限定例には、スルファサラジン、および５−ＡＳＡ作用剤として一般に公知である他のメサラミン含有薬、例えば、アサコール、ジペンツム（Ｄｉｐｅｎｔｕｍ）、もしくはペンタサなど、またはインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）が含まれる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の追加の作用剤は、コルチコステロイド、または免疫抑制剤、例えば、６−メルカプトプリンもしくはアザチオプリンなどである。別の実施形態では、１つまたは複数の追加の薬剤は、止痢剤、例えば、ジフェノキシレート、ロペラミド、またはコデインなどである。
１．３．１．３  潰瘍性大腸炎を治療する薬剤
一実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、潰瘍性大腸炎を治療するために、１つまたは複数の追加の治療剤を用いた併用療法の一部として投与される。潰瘍性大腸炎を治療するのに使用される薬剤は、クローン病（Ｃｈｒｏｈｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）を治療するのに使用されるものと重複する。本発明のＧＣＣアゴニスト製剤と併用して使用することができる１つまたは複数の追加の治療剤の非限定例には、アミノサリチレート（５−アミノサリチル酸（ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ  ａｃｉｄ）（５−ＡＳＡ）を含有する薬物）、例えば、スルファサラジン、オルサラジン、メサラミン、およびバルサラジドなどが含まれる。使用することができる他の治療剤として、コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、およびヒドロコルチゾンなど、免疫調節剤、例えば、アザチオプリン、６−メルカプト−プリン（６−ＭＰ）、サイトカイン、インターロイキン、およびリンホカインなど、ならびにチアゾリジンジオン、またはグリタゾン、例えば、ロシグリタゾン、およびピオグリタゾンなどを含めた抗ＴＮＦ−α剤が挙げられる。一実施形態（ｅｍｏｂｉｄｍｅｎｔ）では、１つまたは複数の追加の治療剤は、活性な重度の潰瘍性大腸炎を治療するために、シクロスポリンＡ、および６−ＭＰまたはアザチオプリンの両方を含む。
【０１８２】
１．３．１．４  便秘／過敏性腸症候群を治療する薬剤
一実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、過敏性腸症候群に関連する便秘などの便秘を治療するために、１つまたは複数の追加の治療剤を用いた併用療法の一部として投与される。１つまたは複数の追加の治療剤の非限定例として、緩下剤（ＳＥＮＮＡ、ＭＩＲＡＬＡＸ、ＬＡＣＴＵＬＯＳＥ、ＰＥＧ、またはカルシウムポリカルボフィルなど）、便軟化剤（鉱油またはＣＯＬＡＣＥなど）、増量剤（ＭＥＴＡＭＵＣＩＬまたは糠など）、ＺＥＬＮＯＲＭ（テガセロドとも呼ばれる）などの薬剤、ならびに抗コリン作用性薬物療法、例えば、ＢＥＮＴＹＬおよびＬＥＶＳＩＮなどが挙げられる。
１．３．１．５  術後イレウスを治療するための薬剤
一実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、術後イレウスを治療するために、１つまたは複数の追加の治療剤を用いた併用療法の一部として投与される。１つまたは複数の追加の治療剤の非限定例には、ＥＮＴＥＲＥＧ（アルビモパン；以前はアドロー（ａｄｏ  ｌｏｒ）／ＡＤＬ８−２６９８と呼ばれていた）、コニバプタンが含まれ、関連薬剤は、ＵＳ６，６４５，９５９において記載する。
【０１８３】
１．３．１．６  抗肥満剤
一実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、肥満症を治療するために、１つまたは複数の追加の治療剤を用いた併用療法の一部として投与される。１つまたは複数の追加の治療剤の非限定例として、１ｌβ  ＨＳＤ−Ｉ（１１−βヒドロキシステロイド脱水素酵素１型）阻害剤、例えば、ＢＶＴ３４９８、ＢＶＴ２７３３、３−（１−アダマンチル）−４−エチル−５−（エチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、３−（１−アダマンチル）−５−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−４−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、３−アダマンタニル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，３ａ−デカヒドロ−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ａ］［１ｌ］アンヌレン、ならびにＷＯ０１／９００９１、ＷＯ０１／９００９０、ＷＯ０１／９００９２、およびＷＯ０２／０７２０８４に開示された化合物；５ＨＴアンタゴニスト、例えば、ＷＯ０３／０３７８７１、ＷＯ０３／０３７８８７などにおけるものなど；５ＨＴＩａモジュレーター、例えば、カルビドパ、ベンセラジド、およびＵＳ６２０７６９９、ＷＯ０３／０３１４３９に開示されたものなど；５ＨＴ２ｃ（セロトニン受容体２ｃ）アゴニスト、例えば、ＢＶＴ９３３、ＤＰＣＡ３７２１５、ＩＫ２６４、ＰＮＵ２２３９４、ＷＡＹ１６１５０３、Ｒ−１０６５、ＳＢ２４３２１３（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、およびＹＭ３４８、ならびにＵＳ３９１４２５０、ＷＯ００／７７０１０、ＷＯ０２／３６５９６、ＷＯ０２／４８１２４、ＷＯ０２／１０１６９、ＷＯ０１／６６５４８、ＷＯ０２／４４１５２、ＷＯ０２／５１８４４、ＷＯ０２／４０４５６、およびＷＯ０２／４０４５７に開示されたものなど；５ＨＴ６受容体モジュレーター、例えば、ＷＯ０３／０３０９０１、ＷＯ０３／０３５０６１、ＷＯ０３／０３９５４７などにおけるものなど；アシル−エストロゲン、例えば、ｄｅｌ  Ｍａｒ−Ｇｒａｓａ，  Ｍ．ら、Ｏｂｅｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、９巻：２０２〜９頁（２００１年）、および日本国特許出願第ＪＰ２０００２５６１９０号に開示されたオレオイル−エストロンなど；食欲低下薬の二環式化合物、例えば、１４２６（Ａｖｅｎｔｉｓ）、および１９５４（Ａｖｅｎｔｉｓ）、ならびにＷＯ００／１８７４９、ＷＯ０１／３２６３８、ＷＯ０１／６２７４６、ＷＯ０１／６２７４７、およびＷＯ０３／０１５７６９に開示された化合物など；ＣＢ１（カンナビノイド−１受容体）アンタゴニスト／逆アゴニスト、例えば、リモナバント（Ａｃｏｍｐｌｉａ；Ｓａｎｏｆｉ）、ＳＲ−１４７７７８（Ｓａｎｏｆｉ）、ＳＲ−１４１７１６（Ｓａｎｏｆｉ）、ＢＡＹ６５−２５２０（Ｂａｙｅｒ）、およびＳＬＶ３１９（Ｓｏｌｖａｙ）、ならびに特許刊行物ＵＳ４９７３５８７、ＵＳ５０１３８３７、ＵＳ５０８１１２２、ＵＳ５１１２８２０、ＵＳ５２９２７３６、ＵＳ５５３２２３７、ＵＳ５６２４９４１、ＵＳ６０２８０８４、ＵＳ６５０９３６７、ＵＳ６５０９３６７、ＷＯ９６／３３１５９、ＷＯ９７／２９０７９、ＷＯ９８／３１２２７、ＷＯ９８／３３７６５、ＷＯ９８／３７０６１、ＷＯ９８／４１５１９、ＷＯ９８／４３６３５、ＷＯ９８／４３６３６、ＷＯ９９／０２��９９、ＷＯ００／１０９６７、ＷＯ００／１０９６８、ＷＯ０１／０９１２０、ＷＯ０１／５８８６９、ＷＯ０１／６４６３２、ＷＯ０１／６４６３３、ＷＯ０１／６４６３４、ＷＯ０１／７０７００、ＷＯ０１／９６３３０、ＷＯ０２／０７６９４９、ＷＯ０３／００６００７、ＷＯ０３／００７８８７、ＷＯ０３／０２０２１７、ＷＯ０３／０２６６４７、ＷＯ０３／０２６６４８、ＷＯ０３／０２７０６９、ＷＯ０３／０２７０７６、ＷＯ０３／０２７１１４、ＷＯ０３／０３７３３２、ＷＯ０３／０４０１０７、ＷＯ０３／０８６９４０、ＷＯ０３／０８４９４３、およびＥＰ６５８５４６に開示されたものなど；ＣＣＫ−Ａ（コレシストキニン−Ａ）アゴニスト、例えば、ＡＲ−Ｒ１５８４９、ＧＩ１８１７７１（ＧＳＫ）、ＪＭＶ−１８０、Ａ−７１３７８、Ａ−７１６２３、およびＳＲ１４６１３１（Ｓａｎｏｆｉ）、ならびにＵＳ５７３９１０６に開示されたものなど；ＣＮＴＦ（繊毛様神経栄養因子）、例えば、ＧＩ−１８１７７１（Ｇｌａｘｏ−ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＳＲ１４６１３１（Ｓａｎｏｆｉ  Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ブタビンジド（ｂｕｔａｂｉｎｄｉｄｅ）、ＰＤ１７０，２９２、およびＰＤ１４９１６４（Ｐｆｉｚｅｒ）など；ＣＮＴＦ誘導体、例えば、Ａｘｏｋｉｎｅ（登録商標）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ならびにＷＯ９４／０９１３４、ＷＯ９８／２２１２８、およびＷＯ９９／４３８１３に開示されたものなど；ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤、例えば、イソロイシンチアゾリジド、バリンピロリジド、ＮＶＰ−ＤＰＰ７２８、ＬＡＦ２３７、Ｐ９３／０１、Ｐ３２９８、ＴＳＬ２２５（トリプトフィル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸；Ｙａｍａｄａら、Ｂｉｏｏｒｇ．  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  ８巻（１９９８年）１５３７〜１５４０頁に開示されている）、ＴＭＣ−２Ａ／２Ｂ／２Ｃ、ＣＤ２６阻害剤（ｉｎｈｉｂｔｏｒｓ）、ＦＥ９９９０１１、Ｐ９３１０／Ｋ３６４、ＶＩＰ０１７７、ＳＤＺ２７４−４４４、Ａｓｈｗｏｒｔｈら、Ｂｉｏｏｒｇ．  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．、６巻、２２号、１１６３〜１１６６頁および２７４５〜２７４８頁（１９９６年）によって開示されたような２−シアノピロリジドおよび４−シアノピロリジド、ならびに特許刊行物ＷＯ９９／３８５０１、ＷＯ９９／４６２７２、ＷＯ９９／６７２７９（Ｐｒｏｂｉｏｄｒｕｇ）、ＷＯ９９／６７２７８（Ｐｒｏｂｉｏｄｒｕｇ）、ＷＯ９９／６１４３１（Ｐｒｏｂｉｏｄｒｕｇ）、ＷＯ０２／０８３１２８、ＷＯ０２／０６２７６４、ＷＯ０３／０００１８０、ＷＯ０３／０００１８１、ＷＯ０３／０００２５０、ＷＯ０３／００２５３０、ＷＯ０３／００２５３１、ＷＯ０３／００２５５３、ＷＯ０３／００２５９３、ＷＯ０３／００４４９８、ＷＯ０３／００４４９６，ＷＯ０３／０１７９３６、ＷＯ０３／０２４９４２、ＷＯ０３／０２４９６５、ＷＯ０３／０３３５２４、ＷＯ０３／０３７３２７、およびＥＰ１２５８４７６に開示された化合物など；成長ホルモン分泌促進物質受容体アゴニスト／アンタゴニスト、例えば、ＮＮ７０３、ヘキサレリン、ＭＫ−０６７７（Ｍｅｒｃｋ）、ＳＭ−１３０６８６、ＣＰ−４２４３９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＬＹ４４４，７１１（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、Ｌ−６９２，４２９、およびＬ−１６３，２５５など、ならびにＵＳＳＮ０９／６６２４４８、米国仮出願第６０／２０３３３５号、ＵＳ６３５８９５１、ＵＳ２００２０４９１９６、ＵＳ２００２／０２２６３７、ＷＯ０１／５６５９２、およびＷＯ０２／３２８８８に開示されたものなど；Ｈ３（ヒスタミンＨ３）アンタゴニスト／逆アゴニスト、例えば、チオペラミド、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロピルＮ−（４−ペンテニル）カルバメート）、クロベンプロピット、ヨードフェンプロピット、イモプロキシファン、ＧＴ２３９４（Ｇｌｉａｔｅｃｈ）、およびＡ３３１４４０、Ｏ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノール］カルバメート（Ｋｉｅｃ−Ｋｏｎｏｎｏｗｉｃｚ，  Ｋ．ら、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ、５５巻：３４９〜５５頁（２０００年））、ピペリジン含有ヒスタミンＨ３−受容体アンタゴニスト（Ｌａｚｅｗｓｋａ，  Ｄ．ら、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ、５６巻：９２７〜３２頁（２００１年）、ベンゾフェノン誘導体および関連化合物（Ｓａｓｓｅ，  Ａ．ら、Ａｒｃｈ．  Ｐｈａｒｍ．（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）３３４巻：４５〜５２頁（２００１年））、置換Ｎ−フェニルカルバメート（Ｒｅｉｄｅｍｅｉｓｔｅｒ，  Ｓ．ら、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ、５５巻：８３〜６頁（２０００年））、ならびにプロキシファン（ｐｒｏｘｉｆａｎ）誘導体（Ｓａｓｓｅ，  Ａ．ら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、４３巻：３３３５〜４３頁（２０００年））、およびヒスタミンＨ３受容体モジュレーター、例えば、ＷＯ０２／１５９０５、ＷＯ０３／０２４９２８、およびＷＯ０３／０２４９２９に開示されたものなど；レプチン誘導体、例えば、ＵＳ５５５２５２４、ＵＳ５５５２５２３、ＵＳ５５５２５２２、ＵＳ５５２１２８３、ＷＯ９６／２３５１３、ＷＯ９６／２３５１４、ＷＯ９６／２３５１５、ＷＯ９６／２３５１６、ＷＯ９６／２３５１７、ＷＯ９６／２３５１８、ＷＯ９６／２３５１９、およびＷＯ９６／２３５２０に開示されたものなど；組換え型ヒトレプチン（ＰＥＧ−ＯＢ、Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）および組換え型メチオニルヒトレプチン（Ａｍｇｅｎ）を含めたレプチン；リパーゼ阻害剤、例えば、テトラヒドロリプスタチン（オーリスタット／Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））、Ｔｒｉｔｏｎ  ＷＲ１３３９、ＲＨＣ８０２６７、リプスタチン、テアサポニン、リン酸ジエチルウンベリフェリル、ＦＬ−３８６、ＷＡＹ−１２１８９８、Ｂａｙ−Ｎ−３１７６、バリラクトン、エステラシン、エベラクトンＡ、エベラクトンＢ、およびＲＨＣ８０２６７、ならびに特許刊行物ＷＯ０１／７７０９４、ＵＳ４５９８０８９、ＵＳ４４５２８１３、ＵＳＵＳ５５１２５６５、ＵＳ５３９１５７１、ＵＳ５６０２１５１、ＵＳ４４０５６４４、ＵＳ４１８９４３８、およびＵＳ４２４２４５３に開示されたものなど；脂質代謝モジュレーター、例えば、マスリン酸、エリトロジオール、ウルソール酸、ウバオール、ベツリン酸、ベツリンなど、およびＷＯ０３／０１１２６７に開示された化合物など；Ｍｃ４ｒ（メラノコルチン４受容体）アゴニスト、例えば、ＣＨＩＲ８６０３６（Ｃｈｉｒｏｎ）、ＭＥ−１０１４２、ＭＥ−１０１４５、およびＨＳ−１３１（Ｍｅｌａｃｕｒｅ）、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９９／６４００２号、同第ＷＯ００／７４６７９号、同第ＷＯ０１／９９１７５２号、同第ＷＯ０１／２５１９２号、同第ＷＯ０１／５２８８０号、同第ＷＯ０１／７４８４４号、同第ＷＯ０１／７０７０８号、同第ＷＯ０１／７０３３７号、同第ＷＯ０１／９１７５２号、同第ＷＯ０２／０５９０９５号、同第ＷＯ０２／０５９１０７号、同第ＷＯ０２／０５９１０８号、同第ＷＯ０２／０５９１１７号、同第ＷＯ０２／０６２７６号、同第ＷＯ０２／１２１６６号、同第ＷＯ０２／１１７１５号、同第ＷＯ０２／１２１７８号、同第ＷＯ０２／１５９０９号、同第ＷＯ０２／３８５４４号、同第ＷＯ０２／０６８３８７号、同第ＷＯ０２／０６８３８８号、同第ＷＯ０２／０６７８６９号、同第ＷＯ０２／０８１４３０号、同第ＷＯ０３／０６６０４号、同第ＷＯ０３／００７９４９号、同第ＷＯ０３／００９８４７号、同第ＷＯ０３／００９８５０号、同第ＷＯ０３／０１３５０９号、および同第ＷＯ０３／０３１４１０号に開示されたものなど；Ｍｃ５ｒ（メラノコルチン５受容体）モジュレーター、例えば、ＷＯ９７／１９９５２、ＷＯ００／１５８２６、ＷＯ００／１５７９０、ＵＳ２００３００９２０４１に開示されたものなど；メラニン凝集ホルモン１受容体（ＭＣＨＲ）アンタゴニスト、例えば、Ｔ−２２６２９６（Ｔａｋｅｄａ）、ＳＢ５６８８４９、ＳＮＰ−７９４１（Ｓｙｎａｐｔｉｃ）、ならびに特許刊行物ＷＯ０１／２１１６９、ＷＯ０１／８２９２５、ＷＯ０１／８７８３４、ＷＯ０２／０５１８０９、ＷＯ０２／０６２４５、ＷＯ０２／０７６９２９、ＷＯ０２／０７６９４７、ＷＯ０２／０４４３３、ＷＯ０２／５１８０９、ＷＯ０２／０８３１３４、ＷＯ０２／０９４７９９、ＷＯ０３／００４０２７、ＷＯ０３／１３５７４、ＷＯ０３／１５７６９、ＷＯ０３／０２８６４１、ＷＯ０３／０３５６２４、ＷＯ０３／０３３４７６、ＷＯ０３／０３３４８０、ＪＰ１３２２６２６９、およびＪＰ１４３７０５９などに開示されたものなど；ｍＧｌｕＲ５モジュレーター、例えば、ＷＯ０３／０２９２１０、ＷＯ０３／０４７５８１、ＷＯ０３／０４８１３７、ＷＯ０３／０５１３１５、ＷＯ０３／０５１８３３、ＷＯ０３／０５３９２２、ＷＯ０３／０５９９０４などに開示さ
れたものなど；セロトニン作動剤、例えば、フェンフルラミン（Ｐｏｎｄｉｍｉｎ（登録商標）（ベンゼンエタンアミン、Ｎ−エチル−α−メチル−３−（トリフルオロメチル）−，塩酸塩）、Ｒｏｂｂｉｎｓなど）、デクスフェンフルラミン（Ｒｅｄｕｘ（登録商標）（ベンゼンエタンアミン、Ｎ−エチル−α−メチル−３−（トリフルオロメチル）−，塩酸塩）、Ｉｎｔｅｒｎｅｕｒｏｎなど）、ならびに光学的に純粋な異性体（＋）および（−）としてのラセミ混合物を含めた、シブトラミン（（Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標）、Ｋｎｏｌｌ／Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（商標））、およびそのシブトラミンヒドロクロリド一水和物塩を含めた、その医薬として許容可能な塩、溶媒（ｓｏｌｖｅｎｔｓ）、水和物、クラスレート、およびプロドラッグ、ならびにＵＳ４７４６６８０、ＵＳ４８０６５７０、およびＵＳ５４３６２７２、ＵＳ２００２０００６９６４、ＷＯ０１／２７０６８、およびＷＯ０１／６２３４１に開示された化合物など；ＮＥ（ノルエピネフリン）輸送阻害剤、例えば、ＧＷ３２０６５９、デシプラミン（ｄｅｓｐｉｒａｍｉｎｅ）、タルスプラム、およびノミフェンシンなど；ＮＰＹ１アンタゴニスト、例えば、ＢＩＢＰ３２２６、Ｊ−１１５８１４、ＢＩＢＯ３３０４、ＬＹ−３５７８９７、ＣＰ−６７１９０６、ＧＩ−２６４８７９Ａ、ならびにＵＳ６００１８３６、ＷＯ９６／１４３０７、ＷＯ０１／２３３８７、ＷＯ９９／５１６００、ＷＯ０１／８５６９０、ＷＯ０１／８５０９８、ＷＯ０１／８５１７３、およびＷＯ０１／８９５２８に開示されたものなど；ＮＰＹ５（神経ペプチドＹ  Ｙ５）アンタゴニスト、例えば、１５２，８０４、ＧＷ−５６９１８０Ａ、ＧＷ−５９４８８４Ａ、ＧＷ−５８７０８１Ｘ、ＧＷ−５４８１１８Ｘ、ＦＲ２３５２０８、ＦＲ２２６９２８、ＦＲ２４０６６２、ＦＲ２５２３８４、１２２９Ｕ９１、ＧＩ−２６４８７９Ａ、ＣＧＰ７１６８３Ａ、ＬＹ−３７７８９７、ＬＹ−３６６３７７、ＰＤ−１６０１７０、ＳＲ−１２０５６２Ａ、ＳＲ−１２０８１９Ａ、ＪＣＦ−１０４、およびＨ４０９／２２、ならびに特許刊行物ＵＳ６１４０３５４、ＵＳ６１９１１６０、ＵＳ６２１８４０８、ＵＳ６２５８８３７、ＵＳ６３１３２９８、ＵＳ６３２６３７５、ＵＳ６３２９３９５、ＵＳ６３３５３４５、ＵＳ６３３７３３２、ＵＳ６３２９３９５、ＵＳ６３４０６８３、ＥＰ０１０１０６９１、ＥＰ−０１０４４９７０、ＷＯ９７／１９６８２、ＷＯ９７／２０８２０、ＷＯ９７／２０８２１、ＷＯ９７／２０８２２、ＷＯ９７／２０８２３、ＷＯ９８／２７０６３、ＷＯ００／１０７４０９、ＷＯ００／１８５７１４、ＷＯ００／１８５７３０、ＷＯ００／６４８８０、ＷＯ００／６８１９７、ＷＯ００／６９８４９、ＷＯ／０１１３９１７、ＷＯ０１／０９１２０、ＷＯ０１／１４３７６、ＷＯ０１／８５７１４、ＷＯ０１／８５７３０、ＷＯ０１／０７４０９、ＷＯ０１／０２３７９、ＷＯ０１／２３３８８、ＷＯ０１／２３３８９、ＷＯ０１／４４２０１、ＷＯ０１／６２７３７、ＷＯ０１／６２７３８、ＷＯ０１／０９１２０、ＷＯ０２／２０４８８、ＷＯ０２／２２５９２、ＷＯ０２／４８１５２、ＷＯ０２／４９６４８、ＷＯ０２／０５１８０６、ＷＯ０２／０９４７８９、ＷＯ０３／００９８４５、ＷＯ０３／０１４０８３、ＷＯ０３／０２２８４９、ＷＯ０３／０２８７２６、およびＮｏｒｍａｎら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４３巻：４２８８〜４３１２頁（２０００年）に開示された化合物など；オピオイドアンタゴニスト、例えば、ナルメフェン（ＲＥＶＥＸ（登録商標））、３−メトキシナルトレキソン、メチルナルトレキソン、ナロキソン、およびナルトレキソン（例えば、ＰＴ９０１；Ｐａｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ならびにＵＳ２００５０００４１５５、およびＷＯ００／２１５０９に開示されたものなど；オレキシンアンタゴニスト、例えば、ＳＢ−３３４８６７−Ａ、ならびに特許刊行物ＷＯ０１／９６３０２、ＷＯ０１／６８６０９、ＷＯ０２／４４１７２、ＷＯ０２／５１２３２、ＷＯ０２／５１８３８、ＷＯ０２／０８９８００、ＷＯ０２／０９０３５５、ＷＯ０３／０２３５６１、ＷＯ０３／０３２９９１、およびＷＯ０３／０３７８４７に開示されたものなど；ＰＤＥ阻害剤（例えば、ホスホジエステラーゼを阻害することによって、環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）および／または環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）の分解を遅らせ、これによりｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの細胞内濃度を相対的に増大させ得る化合物；可能なＰＤＥ阻害剤は主に、ＰＤＥ３阻害剤からなるクラス、ＰＤＥ４阻害剤からなるクラスおよび／またはＰＤＥ５阻害剤からなるクラスの中で番号付けされる物質、特に、ＰＤＥ３／４阻害剤の混合型、またはＰＤＥ３／４／５阻害剤の混合型と呼ぶことができる物質である）、例えば、特許刊行物ＤＥ１４７０３４１、ＤＥ２１０８４３８、ＤＥ２１２３３２８、ＤＥ２３０５３３９、ＤＥ２３０５５７５、ＤＥ２３１５８０１、ＤＥ２４０２９０８、ＤＥ２４１３９３５、ＤＥ２４５１４１７、ＤＥ２４５９０９０、ＤＥ２６４６４６９、ＤＥ２７２７４８１、ＤＥ２８２５０４８、ＤＥ２８３７１６１、ＤＥ２８４５２２０、ＤＥ２８４７６２１、ＤＥ２９３４７４７、ＤＥ３０２１７９２、ＤＥ３０３８１６６、ＤＥ３０４４５６８、ＥＰ０００７１８、ＥＰ０００８４０８、ＥＰ００１０７５９、ＥＰ００５９９４８、ＥＰ００７５４３６、ＥＰ００９６５１７、ＥＰＯｌ  １２９８７、ＥＰＯｌ  １６９４８、ＥＰ０１５０９３７、ＥＰ０１５８３８０、ＥＰ０１６１６３２、ＥＰ０１６１９１８、ＥＰ０１６７１２１、ＥＰ０１９９１２７、ＥＰ０２２００４４、ＥＰ０２４７７２５、ＥＰ０２５８１９１、ＥＰ０２７２９１０、ＥＰ０２７２９１４、ＥＰ０２９４６４７、ＥＰ０３００７２６、ＥＰ０３３５３８６、ＥＰ０３５７７８８、ＥＰ０３８９２８２、ＥＰ０４０６９５８、ＥＰ０４２６１８０、ＥＰ０４２８３０２、ＥＰ０４３５８１１、ＥＰ０４７０８０５、ＥＰ０４８２２０８、ＥＰ０４９０８２３、ＥＰ０５０６１９４、ＥＰ０５１１８６５、ＥＰ０５２７１１７、ＥＰ０６２６９３９、ＥＰ０６６４２８９、ＥＰ０６７１３８９、ＥＰ０６８５４７４、ＥＰ０６８５４７５、ＥＰ０６８５４７９、ＪＰ９２２３４３８９、ＪＰ９４３２９６５２、ＪＰ９５０１０８７５、ＵＳ４９６３５６１、ＵＳ５１４１９３１、ＷＯ９１１７９９１、ＷＯ９２００９６８、ＷＯ９２１２９６１、ＷＯ９３０７１４６、ＷＯ９３１５０４４、ＷＯ９３１５０４５、ＷＯ９３１８０２４、ＷＯ９３１９０６８、ＷＯ９３１９７２０、ＷＯ９３１９７４７、ＷＯ９３１９７４９、ＷＯ９３１９７５１、ＷＯ９３２５５１７、ＷＯ９４０２４６５、ＷＯ９４０６４２３、ＷＯ９４１２４６１、ＷＯ９４２０４５５、ＷＯ９４２２８５２、ＷＯ９４２５４３７、ＷＯ９４２７９４７、ＷＯ９５００５１６、ＷＯ９５０１９８０、ＷＯ９５０３７９４、ＷＯ９５０４０４５、ＷＯ９５０４０４６、ＷＯ９５０５３８６、ＷＯ９５０８５３４、ＷＯ９５０９６２３、ＷＯ９５０９６２４、ＷＯ９５０９６２７、ＷＯ９５０９８３６、ＷＯ９５１４６６７、ＷＯ９５１４６８０、ＷＯ９５１４６８１、ＷＯ９５１７３９２、ＷＯ９５１７３９９、ＷＯ９５１９３６２、ＷＯ９５２２５２０、ＷＯ９５２４３８１、ＷＯ９５２７６９２、ＷＯ９５２８９２６、ＷＯ９５３５２８１、ＷＯ９５３５２８２、ＷＯ９６００２１８、ＷＯ９６０１８２５、ＷＯ９６０２５４１、ＷＯ９６１１９１７、ＤＥ３１４２９８２、ＤＥ１１１６６７６、ＤＥ２１６２０９６、ＥＰ０２９３０６３、ＥＰ０４６３７５６、ＥＰ０４８２２０８、ＥＰ０５７９４９６、ＥＰ０６６７３４５、ＵＳ６３３１５４３、ＵＳ２００５０００４２２２（式Ｉ〜ＸＩＩＩ、ならびに段落３７〜３９、８５〜０５４５、および５５７〜５７７に開示されたものを含む）、ＷＯ９３０７１２４、ＥＰ０１６３９６５、ＥＰ０３９３５００、ＥＰ０５１０５６２、ＥＰ０５５３１７４、ＷＯ９５０１３３８、およびＷＯ９６０３３９９に開示されたもの、ならびにＰＤＥ５阻害剤（ＲＸ−ＲＡ−６９、ＳＣＨ−５１８６６、ＫＴ−７３４、ベスナリノン、ザプリナスト、ＳＫＦ−９６２３１、ＥＲ−２１３５５、ＢＦ／ＧＰ−３８５、ＮＭ−７０２、およびシルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（商標）））、ＰＤＥ４阻害剤（エタゾレート、ＩＣＩ６３１９７、ＲＰ７３４０１、イマゾリジノン（ｉｍａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ）（ＲＯ−２０−１７２４）、ＭＥＭ１４１４（Ｒ１５３３／Ｒ１５００；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｏｃｈｅ）、デンブフィリン、ロリプラム、オキサグレレート、ニトラクアゾン、Ｙ−５９０、ＤＨ−６４７１、ＳＫＦ−９４１２０、モタピゾン、リキサジノン、インドリダン、オルプリノン、アチゾラム、ＫＳ−５０６−Ｇ、ジパムフィリン（ｄｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）、ＢＭＹ−４３３５１、アチゾラム、アロフィリン、フィルアミナスト（ｆｉｌａｍｉｎａｓｔ）、ＰＤＢ−０９３、ＵＣＢ−２９６４６、ＣＤＰ−８４０、ＳＫＦ−１０７８０６、ピクラミラスト、ＲＳ−１７５９７、ＲＳ−２５３４４−０００、ＳＢ−２０７４９９、ＴＩＢＥＮＥＬＡＳＴ、ＳＢ−２１０６６７、ＳＢ−２１１５７２、ＳＢ−２１１６００、ＳＢ−２１２０６６、ＳＢ−２１２１７９、ＧＷ−３６００、ＣＤＰ−８４０、モピダモール、アナグレリド、イブジラスト、アムリノン、ピモベンダン、シロスタゾール、クアジノン、およびＮ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）−３−シクロプロピルメトキシ４−ジフルオロメトキシベンズアミドなど）、ＰＤＥ３阻害剤（ＩＣＩ１５３、１００、ベモランダン（ｂｅｍｏｒａｎｄａｎｅ）（ＲＷＪ２２８６７）、ＭＣＩ−���５４、ＵＤ−ＣＧ２１２、スルマゾール、アンピゾン、シロスタミド、カルバゼラン、ピロキシモン、イマゾダン、ＣＩ−９３０、シグアゾダン、アジベンダン、サテリノン、ＳＫＦ−９５６５４、ＳＤＺ−ＭＫＳ−４９２、３４９−Ｕ−８５、エモラダン、ＥＭＤ−５３９９８、ＥＭＤ−５７０３３、ＮＳＰ−３０６、ＮＳＰ−３０７、レビジノン、ＮＭ−７０２、ＷＩＮ−６２５８２、およびＷＩＮ−６３２９１、エノキシモン、およびミルリノンなど）、ＰＤＥ３／４阻害剤（ベナフェントリン、トレキンシン、ＯＲＧ−３００２９、ザルダベリン、Ｌ−６８６３９８、ＳＤＺ−ＩＳＱ−８４４、ＯＲＧ−２０２４１、ＥＭＤ−５４６２２、およびトラフェントリンなど）、ならびに他のＰＤＥ阻害剤（ビンポセチン（ｖｉｎｐｏｃｅｔｉｎ）、パパベリン、エンプロフィリン、シロミラスト、フェノキシモン、ペントキシフィリン、ロフルミラスト、タダラフィル（Ｃｉａｌｉｓ（登録商標））、テオフィリン、およびバルデナフィル（Ｌｅｖｉｔｒａ（登録商標））など）；神経ペプチドＹ２（ＮＰＹ２）アゴニストには、それだけに限らないが：ポリペプチドＹＹ、ならびにその断片および変異体（例えば、ＹＹ３−３６（ＰＹＹ３−３６）（Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４９巻：９４１頁、２００３年  ＩＫＰＥＡＰＧＥ  ＤＡＳＰＥＥＬＮＲＹ  ＹＡＳＬＲＨＹＬＮＬ  ＶＴＲＱＲＹ（配列番号：ＸＸＸ））ならびにＰＹＹアゴニスト、例えば、ＷＯ０２／４７７１２、ＷＯ０３／０２６５９１、ＷＯ０３／０５７２３５、およびＷＯ０３／０２７６３７に開示されたものなどが含まれる；セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、パロキセチン、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（商標））、フルボキサミン、セルトラリン、シタロプラム、およびイミプラミン、ならびにＵＳ６１６２８０５、ＵＳ６３６５６３３、ＷＯ０３／００６６３、ＷＯ０１／２７０６０、およびＷＯ０１／１６２３４１に開示されたものなど；甲状腺ホルモンβアゴニスト、例えば、ＫＢ−２６１１（ＫａｒｏＢｉｏＢＭＳ）、ならびにＷＯ０２／１５８４５、ＷＯ９７／２１９９３、ＷＯ９９／００３５３、ＧＢ９８／２８４４２５、米国仮出願第６０／１８３，２２３号、および日本国特許出願第ＪＰ２０００２５６１９０号に開示されたものなど；ＵＣＰ−Ｉ（脱共役タンパク質−１）、２、または３アクチベーター、例えば、フィタン酸、４−［（Ｅ）−２−
（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−１−プロペニル］安息香酸（ＴＴＮＰＢ）、レチノイン酸、およびＷＯ９９／００１２３に開示されたものなど；β３（βアドレナリン作用薬受容体３）アゴニスト、例えば、ＡＪ９６７７／ＴＡＫ６７７（Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ／Ｔａｋｅｄａ）、Ｌ７５０３５５（Ｍｅｒｃｋ）、ＣＰ３３１６４８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＬ−３１６，２４３、ＳＢ４１８７９０、ＢＲＬ−３７３４４、Ｌ−７９６５６８、ＢＭＳ−１９６０８５、ＢＲＬ−３５１３５Ａ、ＣＧＰ１２１７７Ａ、ＢＴＡ−２４３、ＧＷ４２７３５３、トレカドリン、Ｚｅｎｅｃａ  Ｄ７１１４、Ｎ−５９８４（Ｎｉｓｓｈｉｎ  Ｋｙｏｒｉｎ）、ＬＹ−３７７６０４（Ｌｉｌｌｙ）、ＳＲ５９１１９Ａ、ならびにＵＳ５５４１２０４、ＵＳ５７７０６１５、ＵＳ５４９１１３４、ＵＳ５７７６９８３、ＵＳ４８８０６４、ＵＳ５７０５５１５、ＵＳ５４５１６７７、ＷＯ９４／１８１６１、ＷＯ９５／２９１５９、ＷＯ９７／４６５５６、ＷＯ９８／０４５２６、およびＷＯ９８／３２７５３、ＷＯ０１／７４７８２、ＷＯ０２／３２８９７、ＷＯ０３／０１４１１３、ＷＯ０３／０１６２７６、ＷＯ０３／０１６３０７、ＷＯ０３／０２４９４８、ＷＯ０３／０２４９５３、およびＷＯ０３／０３７８８１に開示されたものなど；それだけに限らないが、ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標）（１−プロパノン、２−（ジエチルアミノ）−１−フェニル−，塩酸塩）、Ｍｅｒｒｅｌｌなど）、デキストロアンフェタミン（硫酸デキストロアンフェタミン、デキサンフェタミン、デキセドリン、デキサムペクス（Ｄｅｘａｍｐｅｘ）、フェルンデクス（Ｆｅｒｎｄｅｘ）、オキシデス（Ｏｘｙｄｅｓｓ）ＩＩ、ロベセ（Ｒｏｂｅｓｅ）、スパンキャップ  ＃１としても公知）、マジンドール（（または５−（ｐ−クロロフェニル）−２，５−ジヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［２，１−ａ］イソインドール−５−オール）、例えば、Ｓａｎｏｒｅｘ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ、またはＭａｚａｎｏｒ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ  Ａｙｅｒｓｔなど）、フェニルプロパノールアミン（またはベンゼンメタノール、α−（１−アミノエチル）−，塩酸塩）、フェンテルミン（（またはフェノール，３−［［４，５−デュヒドロ（ｄｕｈｙｄｒｏ）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル］（４−メチルフェニル（ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙ−ｌ））アミノ］，一塩酸塩）、例えば、Ａｄｉｐｅｘ−Ｐ（登録商標）、レモン（Ｌｅｍｍｏｎ）、ＦＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｓｍｉｔｈ−Ｋｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ、およびＩｏｎａｍｉｎ（登録商標）、Ｍｅｄｅｖａなど）、フェンジメトラジン（（または（２Ｓ，３Ｓ）−３，４−ジメチル−２フェニルモルホリンＬ−（＋）−酒石酸塩（１：１））例えば、Ｍｅｔｒａ（登録商標）（Ｆｏｒｅｓｔ）、Ｐｌｅｇｉｎｅ（登録商標）（Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ）、Ｐｒｅｌｕ−２（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、およびＳｔａｔｏｂｅｘ（登録商標）（Ｌｅｍｍｏｎ）、酒石酸フェンダミン（ｐｈｅｎｄａｍｉｎｅ  ｔａｒｔｒａｔｅ）（Ｔｈｅｐｈｏｒｉｎ（登録商標）（２，３，４，９−���トラヒドロ−２−メチル−９−フェニル−１Ｈ−インデノール［２，１−ｃ］ピリジンＬ−（＋）−酒石酸塩（１：１））、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−  ＬａＲｏｃｈｅなど）、メタンフェタミン（Ｄｅｓｏｘｙｎ（登録商標）、Ａｂｂｏｔ（（Ｓ）−Ｎ、（α）−ジメチルベンゼンエタンアミン塩酸塩）など）、ならびに酒石酸フェンジメトラジン（Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標）緩徐放出カプセルなど）、アマリン（−３，４−ジメチル−２−フェニルモルホリン酒石酸塩）などを含めたノルアドレナリン作動薬；Ｆａｍｏｘｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｓｅｔ）などの脂肪酸酸化アップレギュレーター／誘導物質；それだけに限らないが、ベフロキサトン、モクロベミド、ブロファロミン、フェノキサチン（ｐｈｅｎｏｘａｔｈｉｎｅ）、エスプロン、ベフォール（ｂｅｆｏｌ）、トロキサトン、ピルリンドール（ｐｉｒｌｉｎｄｏｌ）、アミフラミン、セルクロレミン、バジナプリン、ラザベミド、ミラセミド、カロキサゾン、およびＷＯ０１／１２１７６によって開示されたような他のある特定の化合物を含めたモノアミン（ｍｏｎａｍｉｎｅ）酸化酵素阻害剤；ならびに他の抗肥満剤、例えば、５ＨＴ−２アゴニスト、ＷＯ０３／０７２１９７に開示されたものなどのＡＣＣ（アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ）阻害剤、α−リポ酸（α−ＬＡ）、ＡＯＤ９６０４、ＷＯ０３／４０１０７に開示されたものなどの食欲抑制剤、ＡＴＬ−９６２（Ａｌｉｚｙｍｅ  ＰＬＣ）、ベンゾカイン、塩酸ベンズフェタミン（ジドレックス（Ｄｉｄｒｅｘ））、ブラダーラック（ｆｏｃｕｓ  ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）、ＢＲＳ３（ボンベシン受容体サブタイプ３）アゴニスト、ブプロピオン、カフェイン、ＣＣＫアゴニスト、キトサン、クロム、共役リノール酸、コルチコトロピン放出ホルモンアゴニスト、デヒドロエピアンドロステロン、ＤＧＡＴ１（ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１）阻害剤、ＤＧＡＴ２（ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２）阻害剤、ジカルボキシレートトランスポーター阻害剤、麻黄、エキセンジン−４（ｇｌｐ−１の阻害剤）ＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）阻害剤（セルレニンおよびＣ７５など）、脂肪再吸収阻害剤（ＷＯ０３／０５３４５１などにおけるものなど）、脂肪酸トランスポーター阻害剤、天然水溶性繊維（サイリウム、オオバコ、グアー、カラスムギ、ペクチンなど）、ガラニンアンタゴニスト、ガレガ（ゴーツルー、Ｆｒｅｎｃｈ  Ｌｉｌａｃ）、ｇａｒｃｉｎｉａ  ｃａｍｂｏｇｉａ、ゲルマンダー（ｔｅｕｃｒｉｕｍ  ｃｈａｍａｅｄｒｙｓ）、グレリン抗体、およびグレリンアンタゴニスト（ＷＯ０１／８７３３５、およびＷＯ０２／０８２５０に開示されたものなど）、島細胞分泌に影響を及ぼすポリペプチドホルモンおよびその変異体、例えば、セクレチン／胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）／血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）／脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）／グルカゴン様ポリペプチドＩＩ（ＧＬＰ−ＩＩ）／グリセンチン／グルカゴン遺伝子ファミリーおよび／またはＧＬＰ−１（グルカゴン様ポリペプチド１）アゴニストを含めたアドレノメデュリン／アミリン／カルシトニン遺伝子関連ポリペプチド（ＣＧＲＰ���遺伝子ファミリーのもの（例えば、（１）エキセンジン−４、（２）ＵＳ２００５０１３０８９１に記載されたＧＬＰ−１分子で、これらにはそのＣ−末端でカルボキシル化もしくはアミド化された形態での、またはＵＳ２００５０１３０８９１の段落１７〜４４に記載されたものを含めた修飾ＧＬＰ−１ポリペプチドおよびその修飾物としてのＧＬＰ−１（７−３４）、ＧＬＰ−１（７−３５）、ＧＬＰ−１（７−３６）、またはＧＬＰ−１（７−３７）、ならびにＧＬＰ−１−（７−３４）ＣＯＯＨに由来し、以下の一般式：Ｒ−ＮＨ−ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫ−ＣＯＮＨ２（式中、Ｒ＝Ｈもしくは１〜１０個の炭素原子を有する有機化合物である。Ｒは、カルボン酸の残基であることが好ましい。特に好適なのは以下のカルボン酸残基である：ホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル。）を有する対応する酸性アミドが使用される誘導体が含まれる）、ならびにｇｌｐ−１（グルカゴン様ポリペプチド−１）のホルモンなど、糖質コルチコイドアンタゴニスト、グルコーストランスポーター阻害剤、成長ホルモン分泌促進物質（ＵＳ５５３６７１６に開示され、具体的に記載されたものなど）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）およびそのモジュレーター（ＷＯ０３／０５７２３７におけるようなものなど）、Ｌ−カルニチン、Ｍｃ３ｒ（メラノコルチン３受容体）アゴニスト、ＭＣＨ２Ｒ（メラニン凝集ホルモン２Ｒ）アゴニスト／アンタゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、メラノコルチンアゴニスト（メラノタンＩＩまたはＷＯ９９／６４００２およびＷＯ００／７４６７９に記載されたものなど）、ｎｏｍａｍｅ  ｈｅｒｂａ、リン酸トランスポーター阻害剤、フィトファルム（ｐｈｙｔｏｐｈａｒｍ）化合物５７（ＣＰ６４４，６７３）、ピルビン酸、ＳＣＤ−Ｉ（ステアロイル−ＣｏＡデサチュラーゼ−１）阻害剤、Ｔ７１（Ｔｕｌａｒｉｋ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ  ＣＯ）、トピラメート（Ｔｏｐｉｍａｘ（登録商標）、体重減少を増大させることを示した抗痙攣薬として指示された）、転写因子モジュレーター（ＷＯ０３／０２６５７６に開示されたものなど）、β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素−１阻害剤（β−ＨＳＤ−Ｉ）、β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート、ｐ５７（Ｐｆｉｚｅｒ）、ゾニサミド（Ｚｏｎｅｇｒａｎ（商標）、体重減少に導くと示された抗てんかん薬として指示された）、ならびにＵＳ２００３０１１９４２８の段落２０〜２６に開示された薬剤が挙げられる。
【０１８４】
１．３．１．７  ホスホジエステラーゼ阻害剤
ある特定の実施形態では、併用療法のレジメンは、１つまたは複数のホスホジエステラーゼ（「ＰＤＥ」）阻害剤の投与を含む。ＰＤＥ阻害剤は、ホスホジエステラーゼを阻害することによって、環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）および／または環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）の分解を遅らせ、これによりｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰの細胞内濃度を相対的に増大させ得る。本発明のＧＣＣアゴニストと併用して使用することができるＰＤＥ阻害剤の非限定例には、ＰＤＥ３阻害剤、ＰＤＥ４阻害剤、および／またはＰＤＥ５阻害剤、特に、ＰＤＥ３／４阻害剤の混合型、またはＰＤＥ３／４／５阻害剤の混合型と呼ぶことができる物質が含まれる。そのようなＰＤＥ阻害剤の非限定例は、以下の特許出願および特許に記載されている：ＤＥ１４７０３４１、ＤＥ２１０８４３８、ＤＥ２１２３３２８、ＤＥ２３０５３３９、ＤＥ２３０５５７５、ＤＥ２３１５８０１、ＤＥ２４０２９０８、ＤＥ２４１３９３５、ＤＥ２４５１４１７、ＤＥ２４５９０９０、ＤＥ２６４６４６９、ＤＥ２７２７４８１、ＤＥ２８２５０４８、ＤＥ２８３７１６１、ＤＥ２８４５２２０、ＤＥ２８４７６２１、ＤＥ２９３４７４７、ＤＥ３０２１７９２、ＤＥ３０３８１６６、ＤＥ３０４４５６８、ＥＰ０００７１８、ＥＰ０００８４０８、ＥＰ００１０７５９、ＥＰ００５９９４８、ＥＰ００７５４３６、ＥＰ００９６５１７、ＥＰＯｌ１２９８７、ＥＰＯｌ１６９４８、ＥＰ０１５０９３７、ＥＰ０１５８３８０、ＥＰ０１６１６３２、ＥＰ０１６１９１８、ＥＰ０１６７１２１、ＥＰ０１９９１２７、ＥＰ０２２００４４、ＥＰ０２４７７２５、ＥＰ０２５８１９１、ＥＰ０２７２９１０、ＥＰ０２７２９１４、ＥＰ０２９４６４７、ＥＰ０３００７２６、ＥＰ０３３５３８６、ＥＰ０３５７７８８、ＥＰ０３８９２８２、ＥＰ０４０６９５８、ＥＰ０４２６１８０、ＥＰ０４２８３０２、ＥＰ０４３５８１１、ＥＰ０４７０８０５、ＥＰ０４８２２０８、ＥＰ０４９０８２３、ＥＰ０５０６１９４、ＥＰ０５１１８６５、ＥＰ０５２７１１７、ＥＰ０６２６９３９、ＥＰ０６６４２８９、ＥＰ０６７１３８９、ＥＰ０６８５４７４、ＥＰ０６８５４７５、ＥＰ０６８５４７９、ＪＰ９２２３４３８９、ＪＰ９４３２９６５２、ＪＰ９５０１０８７５、米国特許第４，９６３，５６１号、同第５，１４１，９３１号、ＷＯ９１１７９９１、ＷＯ９２００９６８、ＷＯ９２１２９６１、ＷＯ９３０７１４６、ＷＯ９３１５０４４、ＷＯ９３１５０４５、ＷＯ９３１８０２４、ＷＯ９３１９０６８、ＷＯ９３１９７２０、ＷＯ９３１９７４７、ＷＯ９３１９７４９、ＷＯ９３１９７５１、ＷＯ９３２５５１７、ＷＯ９４０２４６５、ＷＯ９４０６４２３、ＷＯ９４１２４６１、ＷＯ９４２０４５５、ＷＯ９４２２８５２、ＷＯ９４２５４３７、ＷＯ９４２７９４７、ＷＯ９５００５１６、ＷＯ９５０１９８０、ＷＯ９５０３７９４、ＷＯ９５０４０４５、ＷＯ９５０４０４６、ＷＯ９５０５３８６、ＷＯ９５０８５３４、ＷＯ９５０９６２３、ＷＯ９５０９６２４、ＷＯ９５０９６２７、ＷＯ９５０９８３６、ＷＯ９５１４６６７、ＷＯ９５１４６８０、ＷＯ９５１４６８１、ＷＯ９５１７３９２、ＷＯ９５１７３９９、ＷＯ９５１９３６２、ＷＯ９５２２５２０、ＷＯ９５２４３８１、ＷＯ９５２７６９２、ＷＯ９５２８９２６、ＷＯ９５３５２８１、ＷＯ９５３５２８２、ＷＯ９６００２１８、ＷＯ９６０１８２５、ＷＯ９６０２５４１、ＷＯ９６１１９１７、ＤＥ３１４２９８２、ＤＥ１１１６６７６、ＤＥ２１６２０９６、ＥＰ０２９３０６３、ＥＰ０４６３７５６、ＥＰ０４８２２０８、ＥＰ０５７９４９６、ＥＰ０６６７３４５、ＵＳ６３３１５４３、ＵＳ２００５０００４２２２（式Ｉ〜ＸＩＩＩならびに段落３７〜３９、８５〜０５４５、および５５７〜５７７に開示されたものを含む））、およびＷＯ９３０７１２４、ＥＰ０１６３９６５、ＥＰ０３９３５００、ＥＰ０５１０５６２、ＥＰ０５５３１７４、ＷＯ９５０１３３８、およびＷＯ９６０３３９９。例として述べることができるＰＤＥ５阻害剤は、ＲＸ−ＲＡ−６９、ＳＣＨ−５１８６６、ＫＴ−７３４、ベスナリノン、ザプリナスト、ＳＫＦ−９６２３１、ＥＲ−２１３５５、ＢＦ／ＧＰ−３８５、ＮＭ−７０２、およびシルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））である。例として述べることができるＰＤＥ４阻害剤は、ＲＯ−２０−１７２４、ＭＥＭ１４１４（Ｒ１５３３／Ｒ１５００；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｏｃｈｅ）、デンブフィリン、ロリプラム、オキサグレレート、ニトラクアゾン、Ｙ−５９０、ＤＨ−６４７１、ＳＫＦ−９４１２０、モタピゾン、リキサジノン、インドリダン、オルプリノン、アチゾラム、ＫＳ−５０６−Ｇ、ジパムフィリン（ｄｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）、ＢＭＹ−４３３５１、アチゾラム、アロフィリン、フィルアミナスト（ｆｉｌａｍｉｎａｓｔ）、ＰＤＢ−０９３、ＵＣＢ−２９６４６、ＣＤＰ−８４０、ＳＫＦ−１０７８０６、ピクラミラスト、ＲＳ−１７５９７、ＲＳ−２５３４４−０００、ＳＢ−２０７４９９、チベネラスト、ＳＢ−２１０６６７、ＳＢ−２１１５７２、ＳＢ−２１１６００、ＳＢ−２１２０６６、ＳＢ−２１２１７９、ＧＷ−３６００、ＣＤＰ−８４０、モピダモール、アナグレリド、イブジラスト、アムリノン、ピモベンダン、シロスタゾール、クアジノン、およびＮ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）−３−シクロプロピルメトキシ４−ジフルオロメトキシベンズアミドである。例として述べることができるＰＤＥ３阻害剤は、スルマゾール、アンピゾン、シロスタミド、カルバゼラン、ピロキシモン、イマゾダン、ＣＩ−９３０、シグアゾダン、アジベンダン、サテリノン、ＳＫＦ−９５６５４、ＳＤＺ−ＭＫＳ−４９２、３４９−Ｕ−８５、エモラダン、ＥＭＤ−５３９９８、ＥＭＤ−５７０３３、ＮＳＰ−３０６、ＮＳＰ−３０７、レビジノン、ＮＭ−７０２、ＷＩＮ−６２５８２およびＷＩＮ−６３２９１、エノキシモン、およびミルリノンである。例として述べることができるＰＤＥ３／４阻害剤は、ベナフェントリン、トレキンシン、ＯＲＧ−３００２９、ザルダベリン、Ｌ−６８６３９８、ＳＤＺ−ＩＳＱ−８４４、ＯＲＧ−２０２４１、ＥＭＤ−５４６２２、およびトラフェントリンである。他のＰＤＥ阻害剤として、シロミラスト、ペントキシフィリン、ロフルミラスト、タダラフィル（Ｃｉａｌｉｓ（登録商標））、テオフィリン、およびバルデナフィル（Ｌｅｖｉｔｒａ（登録商標））、ザプリナスト（���ＤＥ５特異的）が挙げられる。ＧＣＣアゴニスト
１．３．１．８  鎮痛剤
ある特定の実施形態では、併用療法のレジメンは、１つまたは複数の鎮痛剤、例えば、鎮痛性化合物または鎮痛性ポリペプチドの投与を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣＣアゴニスト製剤は、１つまたは複数の鎮痛剤と同時に、または順次投与される。他の実施形態では、ＧＣＣアゴニストは、鎮痛剤に共有結合的に結合または付着されることによって、治療コンジュゲートを作り出す。使用することができる鎮痛剤の非限定例として、カルシウムチャネル遮断薬、５ＨＴ受容体アンタゴニスト（例えば、５ＨＴ３、５ＨＴ４、および５ＨＴ１受容体アンタゴニスト）、オピオイド受容体アゴニスト（ロペラミド、フェドトジン、およびフェンタニル）、ＮＫ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＫ受容体アゴニスト（例えば、ロキシグルミド）、ＮＫ１受容体アンタゴニスト、ＮＫ３受容体アンタゴニスト、ノルエピネフリン−セロトニン再取り込み阻害剤（ＮＳＲＩ）、バニロイドおよびカンナビノイド（ｃａｎｎａｂａｎｏｉｄ）受容体アゴニスト、ならびにシアロルフィンが挙げられる。様々なクラスにおける鎮痛剤のさらなる例は、当技術分野で公知である。
【０１８５】
一実施形態では、鎮痛剤は、ＶＱＨＮＰＲ（配列番号２５１）；ＶＲＱＨＮＰＲ（配列番号２５２）；ＶＲＧＱＨＮＰＲ（配列番号２５３）；ＶＲＧＰＱＨＮＰＲ（配列番号２５４）；ＶＲＧＰＲＱＨＮＰＲ（配列番号２５５）；ＶＲＧＰＲＲＱＨＮＰＲ（配列番号２５６）；およびＲＱＨＮＰＲ（配列番号２５７）を含めて、アミノ酸配列ＱＨＮＰＲ（配列番号２５０）を含むものを含めたシアロルフィン関連ポリペプチドからなる群から選択される鎮痛性ポリペプチドである。シアロルフィン関連ポリペプチドは、ネプリライシンに結合し、サブスタンスＰおよびＭｅｔ−エンケファリンのネプリライシン媒介分解を阻害する。したがって、ネプリライシンの阻害剤である化合物またはポリペプチドは、有用な鎮痛剤であり、これらは、本明細書に記載されるＧＣＣアゴニストとともに投与することができ、またはＧＣＣアゴニストに共有結合的に結合することによって治療コンジュゲートを形成することができる。シアロルフィンおよび関連ポリペプチドは、米国特許第６，５８９，７５０号；Ｕ．Ｓ．２００３００７８２００Ａ１；およびＷＯ０２／０５１４３５Ａ２に記載されている。
【０１８６】
別の実施形態では、本発明のＧＣＣアゴニスト製剤は、オピオイド受容体アンタゴニストまたはアゴニストとの併用療法のレジメンの一部として投与される。一実施形態では、ＧＣＣアゴニストおよびオピオイド受容体アンタゴニストまたはアゴニストは、共有結合によって結合される。オピオイド受容体アンタゴニストの非限定例として、ナロキソン、ナルトレキソン、メチルナロゾン（ｍｅｔｈｙｌ  ｎａｌｏｚｏｎｅ）、ナルメフェン、シプリジム、βフナルトレキサミン、ナロキソナジン、ナルトリンドール、ノルビナルトルフィミン、エンケファリンペンタペプチド（ＨＯＥ８２５；Ｔｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌ−ホモセリン；配列番号２５８）、トリメブチン、血管作用性腸ポリペプチド、ガストリン、グルカゴンが挙げられる。オピオイド受容体アゴニストの非限定例として、フェドトジン、アシマドリン、ならびにケトシクラゾシン、ＷＯ０３／０９７０５１およびＷＯ０５／００７６２６に記載された化合物、モルヒネ、ジフェニルオキシレート（ｄｉｐｈｅｎｙｌｏｘｙｌａｔｅ）、フラケファミド（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ（Ｆ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２；配列番号２５９；ＷＯ  ０１／０１９８４９Ａ１）、ならびにロペラミドが挙げられる。
【０１８７】
本発明のＧＣＣアゴニスト製剤とともに、併用療法のレジメンにおいて使用することができる鎮痛剤のさらなる非限定例として、ジペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ（キョートルフィン）；クロモグラニン由来ポリペプチド（ＣｇＡ  ４７−６６；例えば、Ｇｈｉａら  ２００４年  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  １１９巻：１９９頁を参照）；カエルレインなどのＣＣＫ受容体アゴニスト；コノトキシンポリペプチド；チムリンのペプチド類似体（仏国出願第２８３０４５１号）；ロキシグルミドおよびデキスロキシグルミド（ロキシグルミドのＲ異性体）（ＷＯ８８／０５７７４）を含めたＣＣＫ（ＣＣＫａまたはＣＣＫｂ）受容体アンタゴニスト；５−ＨＴ４アゴニスト、例えば、テガセロド（Ｚｅｌｎｏｒｍ（登録商標））、モサプリド、メトクロプラミド、ザコプリド、シサプリド、レンザプリド、ＢＩＭＵ１およびＢＩＭＵ８などの、ベンゾイミダゾロン誘導体、ならびにリレキサプリドなど；カルシウムチャネル遮断薬、例えば、ジコノチド、および例えば、ＥＰ６２５１６２Ｂ１、ＵＳ５，３６４，８４２、ＵＳ５，５８７，４５４、ＵＳ５，８２４，６４５、ＵＳ５，８５９，１８６、ＵＳ５，９９４，３０５、ＵＳ６０８７，０９１、ＵＳ６，１３６，７８６、ＷＯ９３／１３１２８Ａ１、ＥＰ１３３６４０９Ａ１、ＥＰ８３５１２６Ａ１、ＥＰ８３５１２６Ｂ１、ＵＳ５，７９５，８６４、ＵＳ５，８９１，８４９、ＵＳ６，０５４，４２９、ＷＯ９７／０１３５１Ａ１に記載されている関連化合物など；ＮＫ−Ｉ受容体アンタゴニスト、例えば、アプレピタント（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｉｎｃ）、ボホピタント、エズロピタント（Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ．）、Ｒ−６７３（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｌｔｄ）、ＳＲ−４８９６８（Ｓａｎｏｆｉ  Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ＣＰ−１２２，７２１（Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ．）、ＧＷ６７９７６９（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ＴＡＫ−６３７（Ｔａｋｅｄａ／Ａｂｂｏｔ）、ＳＲ−１４０３３、および例えば、ＥＰ８７３７５３Ａ１、ＵＳ２００１０００６９７２Ａ１、ＵＳ２００３０１０９４１７Ａ１、ＷＯ０１／５２８４４Ａ１に記載されている関連化合物（概説については、Ｇｉａｒｄｉｎａら  ２００３年  Ｄｒｕｇｓ  ６巻：７５８頁を参照）など；ＮＫ−２受容体アンタゴニスト、例えば、ネパズタント（Ｍｅｎａｒｉｎｉ  Ｒｉｃｅｒｃｈｅ  ＳｐＡ）、サレズタント（Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ＧＷ５９７５９９（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ＳＲ−１４４１９０（Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、およびＵＫ−２９０７９５（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ）など；ＮＫ３受容体アンタゴニスト、例えば、オサネタント（ＳＲ−１４２８０１；Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ）、ＳＳＲ−２４１５８６、タルネタント、および例えば、ＷＯ０２／０９４１８７Ａ２、ＥＰ８７６３４７Ａ１、ＷＯ９７／２１６８０Ａ１、ＵＳ６，２７７，８６２、ＷＯ９８／１１０９０、ＷＯ９５／２８４１８、ＷＯ９７／１９９２７、およびＢｏｄｅｎら（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ３９巻：１６６４〜７５頁、１９９６年）に記載された関連化合物など；ノルエピネフリン−セロトニン再取り込み阻害剤（ＮＳＲＩ）、例えば、ミルナシプラン、およびＷＯ０３／０７７８９７に記載された関連化合物など；ならびにバニロイド受容体アンタゴニスト、例えば、アルバニル、およびＷＯ０１／６４２１２Ａ１に記載された関連化合物（ｃｏｍｐｏｕｄｓ）などが挙げられる。
【０１８８】
シアロルフィン関連ポリペプチドに加えて、鎮痛性ポリペプチドには、ＡｓｐＰｈｅ、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、ノシスタチン、ダラルギン、ルプロン、ジコノチド、およびサブスタンスＰが含まれる。
【実施例】
【０１８９】
（実施例１）
ＧＣＣアゴニストペプチドの合成および精製
ＧＣＣアゴニストペプチドは、固相ペプチド合成についての標準的な方法を使用して合成した。Ｂｏｃ／ＢｚｌまたはＦｍｏｃ／ｔＢｕ保護基ストラテジーを、生成されるペプチドの規模に応じて選択した。より少ない量の場合では、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕプロトコールを使用して所望の生成物を得ることが可能であるが、より大きい量（１ｇ以上）については、Ｂｏｃ／Ｂｚｌが優れている。
【０１９０】
各場合において、ＧＣＣアゴニストペプチドは、プレロードされたＷａｎｇ（Ｆｍｏｃ）またはＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（Ｂｏｃ）またはＰａｍ（Ｂｏｃ）樹脂を使用することによって開始した。Ｃ−末端のＬｅｕを有する生成物について、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｗａｎｇ（Ｄ−１１１５）、またはＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｐａｍ樹脂（Ｄ−１２３０）、またはＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（Ｄ−１０３０）、したがって、Ｃ−末端のｄ−Ｌｅｕを含有するペプチドについて、樹脂は、Ｆｍｏｃ−ｄＬｅｕ−Ｗａｎｇ樹脂（Ｄ−２５３５）、およびＢｏｃ−ｄＬｅｕ−Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｂｏｃ−ｄＬｅｕ−Ｐａｍ−樹脂（それぞれ、Ｂａｃｈｅｍ製品Ｄ−１２３０およびＤ−１５９０）（ＳＰ−３３２および関連類似体）であった。Ｃ末端アミドとして生成されるペプチドについては、第１の合成ステップとして、Ｒａｍａｇｅリンカー（Ｂａｃｈｅｍ製品Ｄ−２２００）（Ｆｍｏｃ）またはｍＢＨＡ（Ｂｏｃ）（Ｂａｃｈｅｍ製品Ｄ−１２１０）を含む樹脂を使用し、Ｃ末端残基を添加した。
【０１９１】
Ｆｍｏｃ−ｔＢｕの概要
各合成サイクルは、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いた脱保護で構成した。樹脂の洗浄は、ＤＭＦおよびＩｐＯＨを交互にして、それぞれ樹脂を膨潤および収縮させて実現した。ペプチド合成により、鎖をＣ末端からＮ末端に伸長した。各アミノ酸についての活性化化学反応は、４５分間４倍過剰でＨＢＴＵ／ＤＩＥＡを用いてであった。自動化化学反応では、カップリング効率を最大にするために、各アミノ酸を２倍カップリングさせた。ジスルフィド結合の正確な位置を保証するために、Ｃｙｓ残基を、位置１５および７にＣｙｓ（Ａｃｍ）として導入した。Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）は、Ｃｙｓ４およびＣｙｓ１２に配置した。この保護基ストラテジーにより、支配的な生成物として正常なトポイソマーが得られる（７５：２５）。（エンテロトキシン類似体については、第３のジスルフィド結合保護基（Ｍｏｂ）を利用した）。
【０１９２】
Ｃ−末端のＡｅｅａ（アミノエチルオキシエチルオキシアセチル）基を含有するペプチドについては、これらを、Ｆｍｏｃで保護されたＡｅｅａ誘導体を使用することによって、上記と同じ活性化化学反応を使用してＲａｍａｇｅアミドリンカーにカップリングさせた。これらの場合におけるＣｙｓの番号付けは同じままであり、保護基の位置決めも同様に同じままである。Ｎ末端に伸長したＡｅｅａを含有するペプチドについては、Ｃｙｓ残基の番号付けは３増加することになり、Ｃｙｓ４はＣｙｓ７になり、Ｃｙｓ１２はＣｙｓ１５になり；Ｃｙｓ７はＣｙｓ１０になり、Ｃｙｓ１５はＣｙｓ１８になる。後者の対はＡｃｍで保護され、前者の対は、Ｔｒｔ基を保持する。
【０１９３】
Ｄアミノ酸置換を含有する類似体については、これらは、この文書に記載した同じ活性化化学反応を使用して、所望の位置に正常に保護された誘導体を組み込むことによって直接導入した。Ｆｍｏｃストラテジーについては、Ｆｍｏｃ−ｄＡｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄＡｓｎ（Ｘａｎ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄＡｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄＧｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、ならびにＢｏｃストラテジーについては、Ｂｏｃ−ｄＡｓｎ（Ｘａｎ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−ｄＡｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−ｄＡｓｐ（Ｃｈｘ）、Ｂｏｃ−ｄＡｓｐ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−ｄＧｌｕ（Ｃｈｘ）−ＯＨ、およびＢｏｃ−ｄＧｌｕ（Ｂｚｌ）−ＯＨが利用される。
【０１９４】
各ペプチドは、樹脂のＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：トリスイソプロピルシラン（ｔｒｉｓｉｓｏｐｒｏｐｙｌｓｉｌａｎｅ）（８．５：０．７５：０．７５）ｍｌ／ｇの切断カクテルを室温で２時間使用して、固相支持体から切断する。粗製の脱保護されたペプチドを濾過することによって、使用済みの樹脂ビーズを除去し、氷冷のジエチルエーテル中に沈殿させる。
【０１９５】
各ジスルフィド結合を直交性に導入した。簡単に言えば、粗製の合成生成物をＮＨ４ＯＨを含有する水中に溶解させ、ｐＨを９に増加させた。生成物が完全に可溶化した後、Ｈ２Ｏ２を用いて滴定することによって、Ｔｒｔで脱保護したＣｙｓ残基同士間にジスルフィド結合を形成した。この単環式生成物をＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。精製した単環式生成物は、引き続いてヨウ素溶液で処理することによって、Ａｃｍ保護基を除去すると同時に２番目のジスルフィド結合を導入した。
【０１９６】
エンテロトキシン類似体については、１０％のＤＭＳＯおよび５％のチオアニソールを含有する８５％のＴＦＡを用いて、室温で２時間、二環式生成物を処理することによってＭｏｂ基を除去した。
【０１９７】
次いで各生成物を、Ｈ２Ｏ中のＴＥＡＰ対ＭｅＣＮ、その後にＨ２Ｏ中のＴＦＡ対ＭｅＣＮの組合せ緩衝液システムを使用して、ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。非常に純粋な画分を合わせ、凍結乾燥した。最終生成物を、酢酸を添加したＤｏｗ−Ｅｘ樹脂を用いたイオン交換を使用して、またはＮＨ４ＯＡｃ、その後に水中１％のＡｃＯＨ対ＭｅＣＮを用いた塩基洗浄ステップを使用するＲＰ−ＨＰＬＣを使用して酢酸塩に変換した。
【０１９８】
Ｆｍｏｃ中にＣｙｓ（Ｔｒｔ）またはＢｏｃ中にＣｙｓ（ＭｅＢ）を使用するランダムな酸化方法を使用して、エンテロトキシン類似体を調製することも可能である。切断した後、グルタチオン（ｒｅｄ／ｏｘ）および／またはシステイン／シスチンなどのジスルフィド交換酸化還元対を使用して、ジスルフィド結合を形成することができる。シスルフィド対の位置を直接知る方法はまったくないので、このプロセスは、ジスルフィド対が確定されていなければならない折りたたまれた生成物を生じる。
【０１９９】
Ｂｏｃ−Ｂｚｌプロセス
ペプチド合成は、Ｃ末端アミドとして生成されるペプチドについて、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂もしくはＰａｍをプレロードした樹脂上、またはｍＢＨＡを用いて開始される。各合成サイクルは、ＭｅＣＬ２中、５０％のＴＦＡを用いた脱保護ステップからなる。樹脂を、ＭｅＣｌ２およびＭｅＯＨを用いて繰り返し洗浄する。形成したＴＦＡ塩は、ＭｅＣｌ２中、１０％のＴＥＡで塩基洗浄して中和する。ＭｅＣｌ２およびＭｅＯＨを用いて、最後にＤＭＦを用いて樹脂を洗浄した後、カップリングステップを行う。脱保護を保証するために、比色試験を行う。各カップリングは、ＨＯＢＴとともにジイソプロピルカルボジイミドを用いて媒介されることによって、活性なエステルが形成される。各カップリングは、室温で２時間、またはカップリングが困難である際は一晩継続させる。遊離一級アミンについての比色試験が陰性になるまで、ウロニウムまたはホスホニウム試薬を用いて再カップリングを行う。次いで樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＣｌ２、およびＭｅＯＨで洗浄し、次の固相ステップを準備する。Ｃｙｓ保護は、位置７および１５でＣｙｓ（Ａｃｍ）を、Ｃｙｓ４およびＣｙｓ１２でＣｙｓ（ＭｅＢ）を利用する。
【０２００】
切断および同時の脱保護は、スカベンジャーとしてアニソールを使用して、ＨＦを用いて（９：１：１）ｍｌ：ｍｌ：ｇ（樹脂）、０℃で６０分間処理することによって実現する。引き続いてペプチドを樹脂から抽出し、氷冷エーテル中で沈殿させる。ジスルフィド結合の導入および精製は、Ｆｍｏｃで生成した生成物について上述したまったく同じプロトコールに従う。
【０２０１】
（実施例２）
人工胃液（ＳＧＦ）中でインキュベートした後のＳＰ−３０４のインビトロでの生物学的および化学的安定性
人工胃液（ＳＧＦ）の存在下でのＳＰ−３０４の安定性を、生物活性測定およびＨＰＬＣ分析によって求めた（図１Ａ＆１Ｂ）。ＳＰ−３０４（８．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度）は、ＳＧＦ（プロテオースペプトン（８．３ｇ／リットル；Ｄｉｆｃｏ）、Ｄ−グルコース（３．５ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＮａＣｌ（２．０５ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＫＨ２ＰＯ４（０．６ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＣａＣｌ２（０．１１ｇ／リットル）、ＫＣｌ（０．３７ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ中のブタ胆汁（最終的な１×濃度０．０５ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ中のリゾチーム（最終的な１×濃度０．１０ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＰＢＳ中のペプシン（最終的な１×濃度０．０１３３ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ））中でインキュベートした。ＳＧＦは実験日に作製し、必要に応じてＨＣｌまたはＮａＯＨを使用してｐＨを２．０±０．１に調整した。ｐＨを調整した後、ＳＧＦを、０．２２μｍの膜フィルターを用いて滅菌濾過する。ＳＰ−３０４（８．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度）を、３通りのアリコートで、ＳＧＦ中、３７℃でそれぞれ０、１５、３０、４５、６０、および１２０分間インキュベートした。インキュベートした後、試料をドライアイスで急速凍結させ、これらを二通りにアッセイするまで、−８０℃のフリーザー内で貯蔵した。
【０２０２】
図１Ａは、指定した時間について、ＳＧＦを用いてインキュベートした後のＳＰ−３０４の生物活性を示す棒グラフを示す。０分での活性を、１００％として採用した。データは、各データ点について、三通りの平均±標準偏差である。データは、ＳＰ−３０４は、２時間もの長く続くインキュベーションについて、ＳＧＦ中での分解に対して耐性であることを実証する。さらに、データは、ＳＰ−３０４の活性は、ＳＧＦの酸性ｐＨに曝すことによって変化しないことも示す。
【０２０３】
０分間および１２０分間ＳＧＦ中でインキュベートしたＳＰ−３０４の試料のＨＰＬＣクロマトグラムを、図１Ｂに示す。ここでは、２つの試料のアリコートを、ＳＰ−３０４ペプチドを分析するために以前に開発された方法を使用して、ＨＰＬＣによって分析した。ＳＧＦインキュベーションからの試料を希釈することによって、最終濃度０．１７ｍｇ／ｍＬのＳＰ−３０４を得た。ＳＰ−３０４の主要ピークは、ＳＧＦを用いてインキュベートした後に変化せず、ペプチドは、ＳＧＦ処理に対して耐性であることを示した。
【０２０４】
（実施例３）
人工腸液（ＳＩＦ）中でインキュベーションした後のＳＰ−３０４のインビトロでの生物学的および化学的安定性
ＳＰ−３０４の安定性を、その生物活性の測定およびＨＰＬＣ分析によって、人工腸液（ＳＩＦ）でインキュベーションした後も評価した（図２Ａおよび２Ｂ）。ＳＩＦ溶液は、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ、２４版、２２３６頁に記載された方法によって調製した。ＳＩＦ溶液を調整するためのレシピは、以下に記載した通りであった。ＳＩＦ溶液は、ＮａＣｌ（２．０５ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＫＨ２ＰＯ４（０．６ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、ＣａＣｌ２（０．１１ｇ／リットル）、ＫＣｌ（０．３７ｇ／リットル；Ｓｉｇｍａ）、およびパンクレアチン（Ｐａｃｒｅａｔｉｎ）１０ｍｇ／ｍｌを含有した。ｐＨは６に調整し、溶液を濾過滅菌した。ＳＰ−３０４（８．５ｍｇ／ｍｌ）の溶液を、３通りのアリコートで、ＳＧＦ中、３７℃でそれぞれ０、３０、６０、９０、１２０、１５０、および３００分間インキュベートした。インキュベートした後、試料を取り出し、ドライアイスを用いて急速凍結させ、これらを二通りにアッセイするまで、−８０℃のフリーザー内で貯蔵した。図２Ａは、指定した時間についてＳＩＦ中でインキュベートした後のＳＰ−３０４が、Ｔ８４細胞内のｃＧＭＰ合成を刺激する能力を示す棒グラフである。０分でのｃＧＭＰ刺激活性を１００％として採用した。データは、３つの三通りの平均±標準偏差である。データは、ＳＰ−３０４の生物活性は、３００分間、ＳＩＦ中でインキュベートした後に、約３０％低減されることを示した。
【０２０５】
ＳＩＦに曝したＳＰ−３０４ペプチドの物理的安定性を、ＳＧＦ消化について記載した方法を使用して、ＨＰＬＣによって評価した。図２Ｂはそれぞれ、熱不活化したＳＩＦで３００分間、およびＳＩＦで１２０分間インキュベートした後のＳＰ−３０４についてのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。熱不活化したＳＩＦで処理したＳＰ−３０４は、無傷のままであった（注：１６．２分で溶出するＳＰ−３０４の主要なピーク）一方で、ＳＩＦで１２０分間処理したＳＰ−３０４は完全に変換されて、９．４分で溶出する別のピークと、２〜３の軽微な追加のピークになった。
【０２０６】
図３は、ＳＰ−３０４の可能な代謝産物の略図である。主要な分解生成物は、ＳＰ３０４のＮ末端から切り取られたＡｓｎおよびＡｓｐ、ならびにＣ末端からのＬｅｕを伴う。ＳＩＦ中で２時間インキュベートした後でさえ、生物活性の３０％の低減しか観察されなかったという事実は、図２Ｂにおいて観察される分解生成物の１つまたは複数も、生物学的に活性であることを示す。この可能性に対処するために、いくつかの切断ペプチドを合成し、Ｔ８４細胞内でｃＧＭＰ合成を刺激するその能力について評価した（図４）。
【０２０７】
図４は、Ｔ８４細胞ｃＧＭＰ刺激アッセイにおける様々なペプチドの分析からのデータを示す（本質的に、Ｓｈａｉｌｕｂｈａｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０巻、５１５１〜５１５７頁（２０００年）に記載されたような）。簡単に言えば、２４ウェルプレート中のＴ−８４細胞のコンフルエントな単層を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌで２回洗浄し、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および１ｍＭのイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌを用いて、３７℃で１０分間プレインキュベートした。次いでＴ８４細胞の単層を、１．０μＭの濃度で図４に示したペプチドの１つを含有する５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌで、３０分間インキュベートした。３０分インキュベートした後、培地を吸引し、３％の過塩素酸を添加することによって反応を停止した。遠心分離し、ＮａＯＨ（０．１Ｎ）を添加してｐＨを中和した後、細胞内のｃＧＭＰレベルを、ｃＧＭＰ  ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号５８１０２１；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を使用して溶解産物中で求めた。ペプチドインキュベーションを二通りで行い、各インキュベーションから採取した試料は、ＥＬＩＳＡ試験において２つ組として続けた。
【０２０８】
データは、ＳＰ−３３８、すなわちＳＰ−３０４のＣ末端でロイシン（Ｌ）残基を欠損している１５塩基長のペプチドは、全長が１６塩基長のＳＰ−３０４ペプチドの生物活性の約８０％を保持することを示す。したがって、Ｃ末端Ｌｅｕは、ペプチドの生物学的効力に、明らかに何らかの寄与をする。同様に、すべてそのＣ末端Ｌｅｕを欠損している、ペプチドＳＰ−３２７、ＳＰ−３２９、およびＳＰ−３３１もそれぞれ、その対応物の親ペプチドＳＰ−３２６、ＳＰ−３２８、およびＳＰ−３３０と比べて、生物学的効力の２０〜２５％の低減を示した。さらに、データは、Ｎ末端のアミノ酸残基も、ペプチドの安定性および／または効力に寄与することができることも示す。ペプチドのＣ末端およびＮ末端で、対応するＬ型を置換しているＤ型のアミノ酸を用いて、いくつかの追加のペプチドを合成した。これらのペプチドを、図５に示したように、Ｔ８４細胞内のｃＧＭＰ合成を刺激するその能力について評価した。
【０２０９】
図５に提示した結果は、Ｃ末端およびＮ末端でＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸と置換することにより、ＳＰ−３０４と比べてその効力が有意に変化しなかったことを示す。ペプチドＳＰ−３３２、ＳＰ−３３３、およびＳＰ−３３５はすべて、Ｔ８４細胞内のｃＧＭＰ合成を刺激する同等の能力を示した。これらの結果は、Ｎ末端のアミノ酸残基Ａｓｎ、Ａｓｐ、およびＧｌｕ、ならびにＣ末端のＬｅｕは、そのそれぞれのＤ−アミノ酸型と置換することができることを示す。一方、６位（ＳＰ−３３７）でＬ−ロイシンをＤ−ロイシンと置換すると、生物活性の実質的に完全な喪失をもたらす。
【０２１０】
図７（Ａ〜Ｆ）は、ＳＩＦ中で２時間インキュベートされた場合のペプチドＳＰ−３３２、ＳＰ−３３３、およびＳＰ−３０４の安定性を示す。結果は、Ｎ末端でＤ−ＡｓｎおよびＣ末端でＤ−Ｌｅｕを有するＳＰ−３３３は、ＳＩＦ中で２時間インキュベートした後で、実質的に１００％生物学的に活性なままであり（図７Ａ）、ＳＩＦで２時間消化した後で、実質的に無傷のままである（図７Ｆ−１＆７Ｆ−２）ことを実証する。ＳＩＦ中で最大２４時間実施した、ＳＰ−３３３を用いたその後のインキュベーション試験は、ＳＩＦ中で２４時間後でさえもほとんど分解がないことを示す（図７Ｇ）。データは、ＳＩＦでの消化に対して最大２４時間安定であることを示した。Ｃ末端でＤ−Ｌｅｕを有するペプチドＳＰ−３３２は、ＳＩＦで１２０分インキュベートした後、効力の軽微な低減を示した（図７Ｂ）。興味深いことに、ＳＰ−３３２のＨＰＬＣ分析により、ペプチドのいずれの明らかな切断分解も明らかにされず（図７Ｅ−１＆７Ｅ２）、また、このペプチドも、２時間のインキュベーションの間のＳＩＦによるタンパク質分解（ｐｒｏｔｅｏｙｓｉｓ）に対してほとんど完全に耐性であることが示された。一方、ペプチドＳＰ−３０４は、ＳＩＦを用いてわずか１時間消化した後、その効力を約３０％喪失した（図７Ｃ）。ＳＩＦでインキュベートした後のＳＰ−３０４のＨＰＬＣ分析により、その分解が確認された（図７Ｄ−１＆７Ｄ−２）。これらの結果は、ＳＰ−３０４は、ＳＩＦでインキュベートした後、１時間以内に実質的なタンパク質分解を受けることを示す。
【０２１１】
（実施例４）
環状ＧＭＰの刺激アッセイ
ＧＣＣアゴニストペプチドが腸のＧＣ−Ｃ受容体に結合し、これを活性化する能力を、Ｔ８４ヒト結腸癌細胞株を使用して試験した。ヒトＴ８４結腸癌細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。１０％のウシ胎児血清、１００Ｕのペニシリン／ｍｌ、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充した、ハムＦ−１２培地とダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）の１：１混合物中で細胞を成長させた。細胞に新鮮培地を３日毎に供給し、約８０％のコンフルエンスで分割した。
【０２１２】
ＧＣＣアゴニストペプチドの生物活性を、以前に報告したようにアッセイした（Ｓｈａｉｌｕｂｈａｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、６０巻、５１５１〜５１５７頁（２０００年））。簡単に言えば、２４ウェルプレート中のコンフルエントな単層のＴ−８４細胞を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌで２回洗浄し、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および１ｍＭのイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌを用いて、３７℃で１０分間プレインキュベートし、その後、ＧＣＣアゴニストペプチド（０．１ｎＭ〜１０μＭ）を用いて３０分間インキュベートした。培地を吸引し、３％の過塩素酸を添加することによって反応を停止した。遠心分離し、０．１ＮのＮａＯＨで中和した後、ＥＬＩＳＡキット（Ｃａｙｍｅｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、Ｍｉｃｈ．）を使用してｃＧＭＰを測定するために、上澄を直接使用した。
【０２１３】
図６は、リナクロチドとも呼ばれる、１４塩基長のペプチドＳＰ−３３９と同様の構造を有するペプチドの効力を評価する実験（ｃＧＭＰ刺激アッセイによる）からの結果を示す。ＳＰ−３３９は、Ｅ．  ｃｏｌｉエンテロトキシンＳＴペプチドの切断類似体である。ＳＰ−３５４は、生物活性においてＳＰ−３３９と実質的に同一であることが判明した。特に、６位でＳｅｒ残基を有するペプチドＳＰ−３５３は、ＳＰ−３３９より強力であることが判明し、試験したすべてのペプチドのうちで最も強力であった。Ｃ末端でＤ−Ｔｙｒを有するペプチドＳＰ−３５５は、試験した他のペプチドより相当に低い効力を示した。
【０２１４】
（実施例５）
ペグ化（Ｐｅｇｇｙｌａｔｅｄ）ペプチド
ペプチドを、消化プロテアーゼによる消化に対してより耐性にする追加のストラテジーは、Ｎ末端およびＣ末端でペグ化する（ｐｅｇｇｙｌａｔｅ）ことである。ペプチドＳＰ−３３３を、Ｃ末端（ＳＰ−３４７）もしくはＮ末端（ＳＰ−３５０）または両末端（ＳＰ−３４３）でアミノエチルオキシ−エチルオキシ−酢酸（Ａｅｅａ）基を用いてペグ化した。Ｔ８４細胞中の環状ＧＭＰ合成を、上述した方法によって測定した。
【０２１５】
ペプチドＳＰ−３４７およびＳＰ−３５０は、Ｔ８４細胞内のｃＧＭＰ合成を刺激するその能力において、ＳＰ−３３３と同等の効力を示した。しかし、ペプチドＳＰ−３４３は、試験した他のペプチドと比較した場合、相当に能力が弱かった。ＳＰ−３４３の劣った活性は、両末端での大きいＡｅｅａ基によってもたらされる相当な立体障害に起因し得る。
【０２１６】
（実施例６）
グアニル酸シクラーゼ受容体アゴニストとホスホジエステラーゼ阻害剤の組合せ
環状ヌクレオチド（すなわち、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）の細胞内濃度の調節、およびしたがって、これらの第２のメッセンジャーを介するシグナル伝達は、細胞内の環状ヌクレオチドの産生速度対その破壊速度によって支配されていると一般に考えられている。したがって、組織および臓器中のｃＧＭＰレベルは、一般に癌および炎症疾患において過剰発現されるｃＧＭＰ特異的ホスホジエステラーゼ（ｃＧＭＰ−ＰＤＥ）の発現レベルによっても調節することができる。したがって、ｃＧＭＰ−ＰＤＥの阻害剤とともに、ＧＣ−Ｃのアゴニストからなる組合せは、標的組織および臓器中のｃＧＭＰレベルに対して相乗効果を生じることができる。
【０２１７】
スリンダクスルホン（ＳＳ）およびザプリナスト（ＺＡＰ）は、ｃＧＭＰ−ＰＤＥの公知の阻害剤の２つであり、ｃＧＭＰに依存する機構を介して癌細胞中でアポトーシスを誘導することが示されている。ＳＰ−３０４またはＳＰ−３３３と併用したＳＳおよびＺＡＰを評価することによって、これらのＰＤＥ阻害剤が、ｃＧＭＰの細胞内蓄積に対して何らかの相乗効果を有するかどうかをみた（図９〜１２）。データが示すように、１００μＭの濃度でのＳＳは、ｃＧＭＰの細胞内蓄積を増強しなかった。しかし、ＳＳとＳＰ−３０４の組合せは、ＳＰ−３０４単独による刺激より数倍ｃＧＭＰ産生を刺激した。ｃＧＭＰレベルに対するこの相乗効果は、ＳＰ−３０４を０．１μＭの濃度で使用したとき、より顕著であった（図１０）。ＳＰ−３０４またはＳＰ−３３３をＺＡＰと併用して使用したとき、同様の知見が得られた（図１０、図１１、および図１２）。これらの結果は、ＳＳが、細胞内ｃＧＭＰの枯渇の原因となり得るｃＧＭＰ−ＰＤＥを阻害するので、ｃＧＭＰの細胞内レベルは安定化されることを示す。したがって、ＧＣＣアゴニストとｃＧＭＰ−ＰＤＥ阻害剤の組合せを使用する手法は魅力的である。
【０２１８】
図９に示した結果について、Ｓｈａｉｌｕｂｈａｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０巻、５１５１〜５１５７頁（２０００年）に本質的に記載されているように、Ｔ８４細胞内の環状ＧＭＰ合成を評価した。簡単に言えば、２４ウェルプレート中のＴ−８４細胞のコンフルエントな単層を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌで２回洗浄し、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）および１ｍＭのイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌを用いて、３７℃で１０分間プレインキュベートした。次いでＴ８４細胞の単層を、以下の実験セットにおいて以下に示したように、ＳＰ−３０４またはＰＤＥ阻害剤を単独または組合せで含有する、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ２５０μｌを用いてインキュベートした：１）対照；２）ＳＰ−３０４（０．１μＭ）；３）スリンダクスルホン（１００μＭ）；４）ザプリナスト（１００μＭ）；５）ＳＰ−３０４（０．１μＭ）＋スリンダクスルホン（１００μＭ）；および６）ＳＰ−３０４（０．１μＭ）＋ザプリナスト（１００μＭ）。３０分インキュベートした後、培地を吸引し、３％の過塩素酸を添加することによって反応を停止した。遠心分離し、ＮａＯＨ（０．１Ｎ）を添加してｐＨを中和した後、細胞内のｃＧＭＰレベルを、ｃＧＭＰ  ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号５８１０２１；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を使用して溶解産物中で求めた。インキュベーションを二通りで実施し、各試料は、ＥＬＩＳＡ試験を使用して二通りで続けた。
【０２１９】
図１０に示した結果について、使用した方法は、Ｔ８４細胞の単層を、ＳＰ−３０４（０．１μＭもしくは１．０μＭ）を含有し、または漸増濃度のＰＤＥ阻害剤（０〜７５０μＭ）を単独で、もしくはＳＰ−３０４と組み合わせて含有する、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ５００μｌを用いてインキュベートしたことを除いて、図９について使用したものと同じであった。３０分インキュベートした後、培地を吸引し、３％の過塩素酸を添加することによって反応を停止した。遠心分離し、ＮａＯＨ（０．１Ｎ）を添加してｐＨを中和した後、細胞内のｃＧＭＰレベルを、ｃＧＭＰ  ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号５８１０２１；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を使用して溶解産物中で求めた。試料は、ＥＬＩＳＡ試験を使用して三通りで続けた。
【０２２０】
図１１に示した結果について、使用した方法は、Ｔ８４細胞の単層を、ＳＰ−３３３３（０．１μＭもしくは１．０μＭ）を含有し、または漸増濃度のＺＡＰ（０〜５００μＭ）を単独で、もしくはＳＰ−３３３と組み合わせて含有する、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ５００μｌを用いてインキュベートしたことを除いて、図１０について使用したものと同じであった。３０分インキュベートした後、培地を吸引し、３％の過塩素酸を添加することによって反応を停止した。遠心分離し、ＮａＯＨ（０．１Ｎ）を添加してｐＨを中和した後、細胞内のｃＧＭＰレベルを、ｃＧＭＰ  ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号５８１０２１；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を使用して溶解産物中で求めた。試料は、ＥＬＩＳＡ試験を使用して三通りで続けた。
【０２２１】
図１２に示した結果について、使用した方法は、Ｔ８４細胞の単層を、ＳＰ−３３３（０．１μＭ）を含有し、または漸増濃度のスリンダクスルホン（０〜５００μＭ）を単独で、もしくはＳＰ−３３３と組み合わせて含有する、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するＤＭＥＭ５００μｌを用いてインキュベートしたことを除いて、図１０について使用したものと同じであった。３０分インキュベートした後、培地を吸引し、３％の過塩素酸を添加することによって反応を停止した。遠心分離し、ＮａＯＨ（０．１Ｎ）を添加してｐＨを中和した後、細胞内のｃＧＭＰレベルを、ｃＧＭＰ  ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号５８１０２１；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を使用して溶解産物中で求めた。試料は、ＥＬＩＳＡ試験を使用して三通りで続けた。
【０２２２】
（実施例７）
カニクイザルにおけるＳＰ−３０４の繰り返し経口投与毒性試験
この実験の主要な目的は、カニクイザルにおけるＳＰ−３０４の繰り返し経口投与の毒性および薬物動態を評価することであった。ＳＰ−３０４の一日量２５０ｍｇを用いた１４連続日にわたる処置は、サルのすべてによって良好な耐容性が示されたが、この処置は、一貫して液状の糞便および水様性の下痢を生じた（図１４）。サルは、ＳＰ−３０４を最後に投与して２４〜４８後以内に正常な便の硬さに戻った。
【０２２３】
（実施例８）
ＳＰ−３０４処置は、大腸炎のＴＮＢＳ誘導性マウスモデルにおいて、便の硬さを改善し、ＴＮＢＳ誘導性腸閉塞を一掃する。
【０２２４】
ＳＰ−３０４は、ウログアニリンの優れた類似体およびＧＣ−Ｃのアゴニストである。トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）の肛門投与は、腸閉塞を生じさせるのに一般に使用され、芳しくない便の硬さをもたらす。図１３に示したように、ＳＰ−３０４の経口投与により、ＴＮＢＳで処置されたマウスにおける便の硬さが相当に改善された。体重１ｋｇ当たり０．０５〜０．５ｍｇの間の用量でのＳＰ−３０４を用いた処置は、ＴＮＢＳの代わりにリン酸緩衝液で処置されたマウス（負のＴＮＢＳ対照）において観察されたレベルに硬さスコアを完全に回復させるのに十分であった。陽性対照として使用されるＦＤＡ認可薬であるスルファサラジンも、正常な便の硬さに回復させた。
【０２２５】
（実施例９）
健康な成人ヒト男性および女性志願者における、ＳＰ−３０４の無作為化二重盲検プラセボ対照の単回用量、漸増用量、経口用量安全性、耐容性、および薬物動態学的試験
この試験の目的は、健康な被験体におけるＳＰ−３０４の単回経口投与の安全性および薬物動態を評価することであった。これは、絶食した健康な男性および女性被験体における、ＳＰ−３０４の第１相単一部位無作為化二重盲検プラセボ対照の単回用量、漸増用量、経口用量、逐次用量エスカレーション試験であった。１コホート当たり８被験体（６人のＳＰ−３０４；２人のプラセボ）を利用する合計９コホートを利用し、合計して７１志願者に薬物を投与した（一人の志願者が棄権した）。各コホートに単回、経口用量を投与し、または１０倍希釈したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（２４０ｍＬ）でマッチングプラセボを投与した。被験体は、試験処置の一用量のみが投与され、後続のコホートに登録することができなかった。９つのコホートの用量は、０．１、０．３、０．９、２．７、５．４、８．１、１６．２、２４．３ｍｇ、および４８．６ｍｇのＳＰ−３０４を含んでいた。
【０２２６】
ＳＰ−３０４の投与
０．１ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
０．３ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
０．９ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
２．７ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
５．４ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
８．１ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
１６．２ｍｇ（５人の活性、２人のプラセボ）
２４．３ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
４８．６ｍｇ（６人の活性、２人のプラセボ）
次のコホートに進むための決定は、コホートからの事前にブラインドにした、安全性情報を精査した後、治験依頼者および治験責任医師によって行われた。投薬後の４８時間を通じて収集したすべての安全性データを精査することによって、用量レベルの耐容性を評価した。各用量レベルでの安全性および耐容性を判定するのに、最低３人の評価可能な被験体を必要とした。
【０２２７】
停止判定基準は、１）４人以上の被験体（コホート内で一括して）における臨床的に有意な有害事象［実験室パラメータまたは心電図（ＥＣＧ）パラメータの臨床的に有意な変化を含む］、または２）１つの薬物に関連した、重篤な有害事象（ＳＡＥ）であった。これらの判定基準の１つが満たされた場合、より高い用量はまったく投与しなかった。さもなければ、試験を次のより高い用量コホートに進めることができた。
【０２２８】
安全性は、理学的検査、バイタルサイン、臨床検査室検査（血液学、化学、尿検査、便潜血、ＥＣＧ、および有害経験の評価）によってモニターした。連続血液試料は、投薬して０、０．５、１、１．５、２、３、４、６、８、１６、２４、３６、および４８時間後に収集した。血漿試料を、ＳＰ−３０４についてバリデートされた方法によってアッセイし、薬物動態学的パラメータを計算した。評価した薬力学的エンドポイントは、最初の便通までの時間、便通頻度（４８時間の期間）、およびブリストル便形状スケール（ＢＳＦＳ）を使用した便の硬さ（４８時間の期間）を含んでいた。
【０２２９】
第１相試験（プロトコール番号ＳＰ−ＳＰ３０４１０１−０８）では、用量を投与する前の１時間以内に、研究場所で、登録認定薬剤師によって調製された経口溶液を使用した。
【０２３０】
この臨床評価の主要な目的は、ＳＰ−３０４の単回経口用量の安全性、毒性、および全身の吸収を求めることであった。データは、ＳＰ−３０４は、すべての投与量レベルで耐容性良好であり、重篤な有害事象（ＳＡＥ）はまったくなかったことを示した。この試験の間に観察された、最も蔓延している有害事象（ＡＥ）は、有害事象共通用語基準（ＣＴＣＡＥ）を使用して定義された、グレートＩの下痢（１２．７％）であった。これは、２４時間の期間内に１回から４回未満の排便の数の増加である。特に、ＳＰ−３０４は、排便を促進することが予期され、したがって、排便の数の増加は、ＳＰ−３０４の薬力学的（ＰＤ）作用に関係していると考えられた。
【０２３１】
ブリストル便形状スケール（Ｂｒｉｓｔｏｌ  ｆｏｒｍ  ｓｔｏｏｌ  ｓｃａｌｅ）（ＢＳＦＳ）によって判断される便の硬さに対する、ＳＰ−３０４の単回経口用量の効果も、志願者において検査した。便の７つの型についてのＢＳＦＳスコアは、
・  １型：木の実のような分離した硬い塊（通過するのが困難）
・  ２型：ソーセージ形状であるが、でこぼこである
・  ３型：ソーセージのようであるが、その表面上にひびを有する
・  ４型：ソーセージまたは蛇のようであり、滑らかで軟らかい
・  ５型：境界鮮明な軟らかい小塊（容易に通過した）
・  ６型：縁部が不ぞろいの綿毛状断片、泥状の便
・  ７型：完全に液体
１型および２型は、便秘を示し、３および４、特に後者は、通過するのが最も容易であるので「理想的な便」であり、５〜７のスコアは、下痢または緊急性にさらに向かっていることを示す。
【０２３２】
図１５Ａ−Ｂは、０．１ｍｇから最大４８．６ｍｇの用量の範囲のＳＰ−３０４で処置した志願者におけるＢＳＦＳスコアに対する、単回用量のＳＰ−３０４またはプラセボの効果を示す。データは、ＳＰ−３０４で処置することにより、プラセボで処置した志願者と比べて、志願者のＢＳＦＳスコアの増加を生じたことを示し、ＳＰ−３０４で処置した志願者における、より緩い排便に向かう便の硬さの変化を反映している。これらの結果は、ＳＰ−３０４は、排便を正常化する可能性、および慢性の便秘による不快感を緩和する可能性を有することを示す。
【０２３３】
図１６は、投薬後２４時間の期間内での最初の便通までの時間に対する、単回用量のＳＰ−３０４またはプラセボの効果を示す。データは、ＳＰ−３０４で処置することにより、プラセボで処置した志願者の１０．６時間から、２．７〜４８．６ｍｇの範囲の用量で、ＳＰ−３０４で処置した後の約３〜６時間に、最初の排便までの時間を著しく減少させたことを示す。
【０２３４】
（実施例１０）
ＳＰ−３０４は、ＢＤＦ−１マウスにおいて、ＤＳＳ誘導性大腸炎の炎症を回復させる。
【０２３５】
ｃＧＭＰ経路は、一酸化窒素およびヘムオキシゲナーゼ−１などの細胞分子の抗炎症作用を媒介する。ｃＧＭＰ（ホスホジエステラーゼ−４阻害剤）を誘導する療法は、ＩＢＤのマウスモデルにおいて効力を実証した。ＧＣＣアゴニストＳＰ−３０４の抗炎症作用を、潰瘍性大腸炎のマウスモデル、ＤＳＳ誘導性大腸炎モデルにおいて評価した。
【０２３６】
４８匹のＢＤＦ１マウスを８つの処置群（６匹のマウス／群）に分けた。１つの群は、ＤＳＳに曝さず（未処置対照）、群２〜１０を、飲料水中５％のＤＳＳで処置した。ＤＳＳは、毎日新しくした。すべてのマウスは、−１日目に計量し、−１日目の始めに検査物質で処置した。０日目に投薬して４時間後に、群２〜８の飲料水中にＤＳＳを入れ、ＤＳＳは、試験の最後まで水中に残っていた。検査剤は、７日目まで、毎日午前９時に投与した。動物を単回用量の検査剤で処置し、群は以下の通りであった：
１．ＤＳＳ曝露なし−ＰＢＳ強制飼養（無ＤＳＳ対照）
２．５％のＤＳＳ＋ＰＢＳ（ビヒクル対照）
３．５％のＤＳＳ＋８０ｍｇ／ｋｇのスルファサラジン（陽性対照）
４．５％のＤＳＳ＋０．００５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
５．５％のＤＳＳ＋０．０５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
６．５％のＤＳＳ＋０．５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
７．５％のＤＳＳ＋２．５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
８．５％ＤＳＳ＋５０ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
すべての用量は、体重１０ｇ当たり０．１ｍｌの用量を使用して、経口強制飼養によって投与した。ケージ間変化を回避するために、異なる処置群を同じケージ内に収容し、動物は、識別目的のために耳に穴を開けた。７日目に、最後に投薬して４〜６時間後にマウスを屠殺した。動物は、任意の肉眼での異常について、主要な臓器の内部検査にもかけた。大腸の遠位切片（病理組織学的検査に十分な）を取り出し、カルノア液中に固定し、パラフィン中に埋め込んだ。スライド１枚当たり２つの連続しない切片を切断し、Ｈ＆Ｅ染色して視覚的な重症度スコア分析を行った。すべてのスライドに盲検様式でスコアをつけた。
【０２３７】
組織検査の採点
０  正常
１  すべての陰窩は残っているが異常に見え、すべての筋肉は無傷である
２  ９０％未満の陰窩が残っており、すべての筋肉は無傷である
３  ７５％未満の陰窩が残っており、大部分の筋肉は無傷である
４  １０％未満の陰窩が残っており、ほとんどの筋肉が劣化している
５  陰窩がまったく残っておらず、筋肉が劣化している
病理組織学的採点のために組織の５つの異なる切片を検査し、スコアを各マウスについて平均した。図１７中の組織検査スコアは、６匹のマウスの平均として表されている。図１７に示したように、データは、マウスをＤＳＳで処置することにより、大腸内に軽度の炎症を生じたことを示す。予期されたように、炎症の重症度は、スルファサラジンで処置したマウスにおいて相当に低減された。同様に、体重１ｋｇ当たり０．００５〜５ｍｇの範囲のＳＰ−３０４の用量で処置したマウスも、結腸組織において炎症の低減を示した。これらの結果は、ＳＰ−３０４を用いた経口投与により、結腸組織におけるＤＳＳ誘導性炎症が回復したことを示す。ＳＰ−３０４を用いた処置により、結腸重量はそれほど変化しなかった。
【０２３８】
（実施例１１）
ＳＰ−３０４は、ＢＤＦ−１マウスにおいて、ＴＮＢＳ誘導性大腸炎の炎症を回復させる
ＴＮＢＳの肛門投与は、マウスおよびラットの結腸において炎症を誘導するのに広く使用される。ＴＮＢＳ誘導性潰瘍性大腸炎は、ヒトにおけるＩＢＤを治療するのに使用される薬物を評価するための、マウスにおける実験的大腸炎についての一般に使用されるモデルである。ＧＣＣアゴニストＳＰ−３０４の抗炎症作用を評価するために、９０匹のＢＤＦ−１マウスを、以下のように、それぞれ１０匹の９つの群に無作為に分けた。
１．ＴＮＢＳ曝露なし−ＰＢＳ強制飼養（無ＴＮＢＳ対照）
２．ＴＮＢＳ＋ＰＢＳ（ビヒクル対照）
３．ＴＮＢＳ＋８０ｍｇ／ｋｇのスルファサラジン（陽性対照）
４．ＴＮＢＳ＋０．０００５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
５．ＴＮＢＳ＋０．００５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
６．ＴＮＢＳ＋０．０５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
７．ＴＮＢＳ＋０．５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
８．ＴＮＢＳ＋２．５ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
９．ＴＮＢＳ＋５０ｍｇ／ｋｇのＳＰ−３０４
０日目に、群２〜９に、ゴムカテーテルを使用して肛門経路を通じて、５０％のエタノール中ＴＮＢＳ２．５ｍｇを投与した。マウスに、７日にわたって毎日午前９時に、単回用量のＳＰ−３０４を投与した。試験の最後に、マウスを頸椎脱臼によって屠殺した。遠位大腸を取り出し、カルノア固定液中で固定した。試料をパラフィンに埋め込み、試料１つ当たり２つの連続しない切片を切断し、スライド上に取り付けた後、Ｈ＆Ｅで染色した。腸組織のスライドを採点した。ブラインドにした組織切片を顕微鏡で観察し、図８に記載した採点システムにより、０〜５の重症度スコアを割り当てた。マウス毎に、５つの大腸の断面範囲を評価した。結果を平均として表す。図１８に示したように、体重１ｋｇ当たり０．０５ｇという低い用量でＳＰ−３０４を用いて処置することにより、結腸の炎症が著しく低減した。興味深いことに、ＳＰ−３０４の効力は、０．０５ｍｇ．ｋｇという低い濃度でさえ、体重１ｋｇ当たり８０ｍｇ／ｋｇの用量で投与したスルファサラジンと同等であった。
【０２３９】
（実施例１２）
ＳＰ−３０４の一日量を繰り返すことにより、カニクイザルにおいて重篤な下痢を生じた
オス（ｎ＝４）およびメス（ｎ＝４）のサルに、一日量（体重１ｋｇ当たり１ｍｇまたは１０ｍｇまたは７５ｍｇ）のＳＰ−３０４を２８日間繰り返して投与した。便の硬さに対する処置の効果を１日３回記録した。図１９に示したように、ＳＰ−３０４で経口処置することにより、両方の性において下痢／水様性便が生じた。しかし、メスのサルは、より顕著な効果を示した。メスにおいて、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇの用量により、一貫して重篤な下痢が生じた。したがって、後続の実験において体重１ｋｇ当たり１０ｍｇでＳＰ−３０４を使用した。同様の結果が、ＳＰ−３３３で得られた。
【０２４０】
（実施例１３）
ＳＰ−３０４の投与を繰り返すことにより、マウスにおいて近位腸中の重篤な膨満が生じた
この実験の目的は、胃腸管内で水分泌を刺激するＳＰ−３０４の能力に関して、経口投与されたＳＰ−３０４についての主要な作用部位を求めることであった。正常な生理的環境下で、水分泌は、十二指腸内で主に起こり、次いで分泌された水は、回腸で再吸収される。マウス（メス、ｎ＝６；オス、ｎ＝６）に、経口強制飼養によって単回用量のＳＰ−３０４を投与し、３０分後に屠殺した。水の過剰な分泌を示す膨満の徴候について、胃腸管を検査した。表ＶＩＩＩに示したように、ＳＰ−３０４は、胃内および近位腸（十二指腸および空腸）内でのみ膨満（ｂｌｏｔｉｎｇ）を生じさせたが、盲腸または遠位腸（回腸および結腸）内で生じさせなかった。これらの結果は、経口投与されたＳＰ−３０４は、十二指腸／空腸内で水分泌を引き起こすことを実証した。したがって、ＳＰ−３０４の作用部位は主に、胃腸管の十二指腸および空腸部分においてである。
【０２４１】
【表８】
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（実施例１４）
様々なＧＩ疾患のためのＳＰ−３０４の製剤
表ＶＩＩＩ中のデータによって示したように、経口投与されたＳＰ−３０４は、胃腸管の近位部分（十二指腸、空腸）内で作用することによって、水分泌を刺激する。したがって、この領域にＳＰ−３０４を送達するための製剤は、慢性便秘、ＩＢＳ−Ｃ、および近位腸の他の疾患を治療するための効力の改善を実証するはずである。これは、そのような製剤が、これらの状態を罹患している患者において、水の分泌をより有効に刺激し、排便の正常化を促進するためである。さらに、１．０ｍｇ／ｍｌから起こり、酸性条件によって促進されるＳＰ−３０４の凝集は、より高いｐＨで放出するように設計されたｐＨ依存性放出製剤中で最小限にされる。したがって、Ｅｕｄｒａｇｉｔポリマーを含むＳＰ−３０４のｐＨ依存性放出製剤を、十二指腸への放出を標的にする、５．５超のｐＨでの放出の効力について検査した。図２０に示したように、５．５超のｐＨで溶解させるためにＥｕｄｒａｇｉｔポリマーをコーティングしたゼラチンカプセルは崩壊せず、ＳＰ−３０４は、ｐＨ１または２．５での酸性条件下で放出されなかった。予期されたように、ｐＨ５．７でカプセルをインキュベートすると、２０分以内にＳＰ−３０４が放出され、６０分以内に、ペプチドのほとんどが放出された。放出されたＳＰ−３０４は、Ｔ８４細胞バイオアッセイにおいて求めた場合、生物学的に活性であった（図２１を参照）。
【０２４２】
ＩＢＤ、および遠位胃腸管の他の疾患または障害を治療するために、ＧＣＣアゴニストを遠位胃腸管、特に末端回腸に向ける製剤を開発することが有利である。これは、下痢によって複雑になる場合の多いＩＢＤの治療について、特に当てはまる。したがって、ＧＣＣアゴニストの経口投与は、十二指腸内での水分泌の刺激のために、ＩＢＤにとって逆効果となる可能性がある。この問題は、末端回腸に標的化送達する製剤によって回避される。したがって、ＳＰ−３０４のｐＨ依存性放出製剤を、末端回腸への放出を標的にする、７超のｐＨでの放出の効力について検査した。図２０および２１に示したように、Ｅｕｄｒａｇｉｔポリマー製剤は、ｐＨ７．２でＳＰ−３０４を放出し、放出されたＳＰ−３０４は、生物学的に活性であった。
【０２４３】
（実施例１５）
ｐＨ７以上で送達するために、Ｅｕｄｒａｇｉｔポリマーコーティングで製剤化されたＳＰ−３０４およびＳＰ−３３３は、カニクイザルにおいて下痢を最小限にした
図２２に示したように、Ｅｕｄｒａｇｉｔポリマーでコーティングされたゼラチンカプセルで製剤化されたＳＰ−３０４（７超のｐＨで溶解させるため）は、同じ用量のＳＰ−３０４（体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ）を含有するコーティングされていないカプセルと比較した場合、下痢の発生を相当に低下させた。これらの結果は、ＧＣＣアゴニストを遠位腸に送達することにより、さもなければアゴニストの経口投与から予期される下痢の発生が低減されることを実証する。したがって、そのような製剤は、ＩＢＤ、大腸癌、および遠位腸の他の疾患を治療するのに好適となるであろう。
【０２４４】
ＳＰ−３３３は、腸液内で通常起こるタンパク質分解に対して安定性を増大させるために設計されたＧＣＣアゴニストである。したがって、このペプチドも、ＩＢＤ、大腸癌、および遠位腸の他の疾患を治療するのに有用である。ＳＰ−３３３を、７超のｐＨで溶解させるために、Ｅｕｄｒａｇｉｔポリマーでコーティングされたゼラチンカプセルで製剤化した。図２３に示したように、コーティングされたカプセルは、コーティングされていないカプセルと比較して、下痢の発生を相当に低下させた。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ−１】
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【図７Ｄ−２】
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【図７Ｅ−１】
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【図７Ｅ−２】
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【図７Ｆ−１】
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【図７Ｆ−２】
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【図７Ｇ−１】
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【図７Ｇ−２】
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【図７Ｇ−３】
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【図７Ｇ−４】
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【図７Ｇ−５】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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