(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で繊維の内側が修飾された繊維を有する中空繊維（ＨＦ）モジュールであって、
前記アクアポリン水チャネルが小胞中に取り込まれており、該小胞がＴＦＣ層内に取り込まれている、前記中空繊維（ＨＦ）モジュール。
【請求項２】
前記小胞が、リポソームまたはポリマーソームである、請求項１に記載のＨＦモジュール。
【請求項３】
前記リポソームが、ＤＰｈＰＣ、ＤＯＰＣ、混合ダイズ（ｓｏｙ  ｂｅａｎ）脂質、アソレクチン（ａｓｏｌｅｃｔｉｎ）または大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）混合脂質のような脂質より調製される、請求項２に記載のＨＦモジュール。
【請求項４】
前記ポリマーソームが、親水性−疎水性−親水性（Ａ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ）型のトリブロックコポリマー、親水性−疎水性型（Ａ−Ｂ）のジブロックコポリマー、又はそれらの組み合わせを含む、請求項２に記載のＨＦモジュール。
【請求項５】
前記アクアポリン水チャネルがＡｑｐＺチャネルまたはＳｏＰＩＰ２；１水チャネルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＨＦモジュール。
【請求項６】
前記ＴＦＣ層が、有機溶媒中のハロゲン化ジアシルまたはトリアシルと水溶液中のジアミンまたはトリアミンとの界面重合反応物であり、そして小胞が前記反応物中に取り込まれている、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＨＦモジュール。
【請求項７】
中空繊維支持材料がポリエーテルスルホンである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＨＦモジュール。
【請求項８】
繊維面積が０．１ｃｍ２〜０．５ｍ２である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＨＦモジュール。
【請求項９】
アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で繊維の内側が修飾されている繊維を有する中空繊維膜であって、
前記アクアポリン水チャネルが、小胞中に取り込まれており、該小胞がＴＦＣ層内に取り込まれている、前記中空繊維膜。
【請求項１０】
前記小胞が、リポソームまたはポリマーソームである、請求項９に記載のＨＦ膜。
【請求項１１】
前記リポソームが、ＤＰｈＰＣ、ＤＯＰＣ、混合ダイズ脂質、アソレクチン（ａｃｏｌｅｃｔｉｎ）または大腸菌混合脂質のような脂質より調製される、請求項１０に記載のＨＦ膜。
【請求項１２】
前記ポリマーソームが、親水性−疎水性−親水性（Ａ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ）型のトリブロックコポリマー、親水性−疎水性型（Ａ−Ｂ）のジブロックコポリマー、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１０に記載のＨＦ膜。
【請求項１３】
前記アクアポリン水チャネルがＡｑｐＺチャネルまたはＳｏＰＩＰ２；１水チャネルである、請求項９〜１２のいずれか一項に記載のＨＦ膜。
【請求項１４】
前記ＴＦＣ層が、有機溶媒中のハロゲン化ジアシルまたはトリアシルと水溶液中のジアミンまたはトリアミンとの界面重合反応物であり、そして小胞が前記反応物中に取り込まれている、請求項９〜１３のいずれか一項に記載のＨＦ膜。
【請求項１５】
アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で繊維の内側が修飾されたＨＦ膜を含む中空繊維モジュールを調製する方法であって：
ａ）タンパク質の２５〜５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲを有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミンまたはトリアミンの水溶液を調製し、
ｃ）ハロゲン化ジアシルまたはトリアシルを無極性有機溶媒に溶解し、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、アミンおよびアクアポリン小胞の混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のハロゲン化アシル溶液を、中空繊維の管腔を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、前記方法。
【請求項１６】
ａ）タンパク質の２５〜５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲを有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）１％〜５％（ｗ／ｗ）の濃度の１，３−ジアミノベンゼン水溶液を調製し、
ｃ）ヘキサン、ヘプタン、オクタンまたは溶媒混合物からなる群より選択される有機溶媒に、ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを溶解して、０．０５％〜１％（ｗ／ｖ）の濃度を得て、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／アクアポリン小胞混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド溶液を、中空繊維の管腔を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記中空繊維モジュールがポリエーテルスルホン繊維を含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
工程ｆ）において、繊維を乾燥するまでガスパージし、そして工程ｆ）において、モジュールが逆さまに保持される、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
正浸透を通じた純水の抽出のための、又は血液透析を通じて失われた患者血漿由来の純水の再抽出のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＨＦモジュールの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薄層複合（ＴＦＣ）修飾繊維膜を有する中空繊維（ＨＦ）モジュール、例えば繊維の外側または内側、あるいは両側に、ポリアミドＴＦＣ層を有し、そして前記ＴＦＣ層中にアクアポリン水チャネルを含む、前記モジュールに関する。本発明はまた、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）修飾分離層を有する中空繊維膜、例えば繊維の外側または内側にポリアミドＴＦＣ層を有する前記中空繊維膜に関し、そして前記ＴＦＣ修飾を、モジュール中に搭載される際に、繊維上に直接調製する方法であって、そして前記ＴＦＣ層が、前記層中に固定されているかまたは包埋されているアクアポリン水チャネルを含む、前記方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ＰＥＳ中空繊維支持膜の内側表面上にポリアミド薄層を生成する界面重合を通じて、正浸透用に、薄層複合中空繊維膜が如何にして調製され得るかが示されており（Ｓｕｋｉｔｐａｎｅｅｎｉｔ  ＆  Ｃｈｕｎｇ  ２０１２）、そこでは、０．５重量％のトリエチルアミンおよび０．１重量％のドデシル硫酸ナトリウムを含有する２重量％のメタ−フェニレンジアミン（ＭＰＤ）水溶液を、底部入口からのポンピングを通じて、垂直に配置されたＨＦモジュール内に導入し、それから風乾し、そして次いで、ヘキサン溶液中の０．１５重量％の塩化トリメソイル（ＴＭＣ）を導入してポリアミド薄層を形成し、そして最後に空気でパージして、６５℃で硬化させ、脱イオン水でリンスし、そして脱イオン水中で保存している。さらに、Ｐｅｉｎｅｍａｎｎらは、中空繊維の内部表面上で、類似のＴＦＣ層を調製する方法を記載している。米国公開特許出願第２００７／０１９９８９２号を参照されたい。さらに、Ｚｈｏｎｇら（２０１３）は、膜支持体として、直接スルホン化ポリフェニレンスルホンを用いたＴＦＣ正浸透中空繊維膜の開発について記載している。しかし、中空繊維モジュールを使用する分離適用範囲は広いため、濾過プロセス中に、比較的低分子量の有機溶質を分離できるか、または濾過して取り除くことができるかが重要である。例えば、ＨＦモジュールが広く用いられる血液透析において、尿毒素および有機分解産物、例えば硫酸インドキシル（硫酸インドキシルカリウム塩、ＣＡＳ番号２６４２−３７−７、分子量２５１．３０）は、特に困難な問題を引き起こす。硫酸インドキシルは、慢性腎疾患患者の血清中に集積する。食餌性タンパク質由来トリプトファンの一部は、腸細菌中のトリプトファナーゼによってインドールに代謝される。インドールは腸から血液内に吸収され、そして肝臓において硫酸インドキシルに代謝される。硫酸インドキシルは、通常、尿内に排出される。しかし、血液透析患者において、硫酸インドキシルの不適切な腎クリアランスは血清レベルの上昇を導く。Ｎｉｗａ  Ｔ．（２０１０）を参照されたい。Ｎｉｗａら（１９９７）は、硫酸インドキシルの集積が、糸球体硬化および腎疾患進行を加速させるという仮説を提示している。経口吸着剤の投与によって、非透析尿毒性患者における硫酸インドキシルレベルが低下する。Ｎｉｗａら（１９９７）を参照されたい。現在の透析法、すなわち血液透析および腹膜透析（後者は連続限外濾過および溶質除去によって特徴付けられる）は、硫酸インドキシルおよびｐ−クレゾール（４−メチルフェノール、ＣＡＳ番号１０６−４４−５、分子量１０８．１３）などのいくつかの低分子量分解産物を血清から十分には除去しない。さらに、低分子水溶性分子、例えば尿素、尿酸およびクレアチニン、ならびにペプチド／タンパク質、例えばβ２−ミクログロブリンは好ましくは透析中に除去されるべきである。主に硫酸ｐ−クレシルを反映するｐ−クレゾールと、末期腎疾患および慢性腎疾患における全体の死亡率および心臓血管疾患との間で直接的な関連性が見出されている。同様に、硫酸インドキシルと全体の死亡率および心臓血管疾患との間で直接的な関連性が報告されている。連続血液濾過療法において、生理学的（��命維持）タンパク質の喪失は最小限でなければならず、そして低分子量（＜５００Ｄａ）および中程度の分子量（約５００〜約４０ｋＤａ）の尿毒素およびペプチドの除去を最適化しなければならない。Ｗｅｎｈａｏ  Ｘｉｅら（２０１１）を参照されたい。
【０００３】
Ａｏｉｋｅ（２０１１）は、血液精製療法において使用するための高性能膜の最も重要な特徴または性質パラメータ、すなわち高い透水性、広範囲の尿毒素を除去する能力、および他の特徴的な特徴を述べている。しかし、Ａｏｉｋｅはまた、巨大な孔サイズを有するＨＰＭ、例えばポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）の膜は、血液区画内に逆流してくる透析された内毒素断片の有害で迅速な拡散を引き起こすことから、現存する高性能膜（ＨＰＭ）の巨大な孔サイズは、透析液によって血液を汚染するであろうことを指摘している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国公開特許出願第２００７／０１９９８９２号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｕｋｉｔｐａｎｅｅｎｉｔ  ＆  Ｃｈｕｎｇ  ２０１２
【非特許文献２】Ｚｈｏｎｇら（２０１３）
【非特許文献３】Ｎｉｗａ  Ｔ．（２０１０）
【非特許文献４】Ｎｉｗａら（１９９７）
【非特許文献５】Ｗｅｎｈａｏ  Ｘｉｅら（２０１１）
【非特許文献６】Ａｏｉｋｅ（２０１１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、低分子量化合物を分離することが可能な中空繊維モジュールであって、血液透析などのプロセスにおいて、液体からの低分子量化合物の除去を可能にし、そして中空繊維モジュールが、高い透水性と、より小さい孔サイズを組み合わせる、前記中空繊維モジュールを提供することが、当該技術分野における問題であり続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
広く、本発明は、低分子量化合物を分離することが可能である中空繊維モジュールであって、例えばＨＦモジュールが、尿素、硫酸インドキシル、ｐ−クレゾールおよび／または硫酸ｐ−クレシルを含む有機化合物、および好ましくは約５００Ｄａ未満の分子量を有する化合物を濃縮することを可能にし、そしてしたがって前記化合物の除去、例えば液体からの除去を改善することを可能にする、前記モジュールを提供する。代替的にまたは追加的に、本発明は、高い透水性を有するがより小さい孔サイズを有し、例えば約５〜１０ｎｍ未満の孔直径を有する、中空繊維モジュールを提供することを目的とする。Ｃｌａｒｋ  ＆  Ｇａｏ（２００２）を参照されたい。
【０００８】
したがって、１つの側面において、本発明は、繊維表面、例えば内部繊維表面（管腔）上に形成されるアクアポリン水チャネルを含むＴＦＣ層を有する中空繊維（ＨＦ）モジュールを提供する。
【０００９】
さらなる側面において、本発明は、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾されたＨＦ膜を含む中空繊維モジュールを調製する方法であって：
ａ）タンパク質の約２５〜約５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲを有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミンまたはトリアミンの水溶液を調製し、
ｃ）ハロゲン化ジアシルまたはトリアシルを無極性有機溶媒に溶解し、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、アミンおよびアクアポリン小胞の混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のハロゲン化アシル溶液を、中空繊維の管腔を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、前記方法を提供する。
【００１０】
さらなる側面において、本発明は、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾されたＨＦ膜を含む中空繊維モジュールを調製する方法であって：
ａ）タンパク質の約２５〜約５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲを有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）約１％〜約５％（ｗ／ｗ）の濃度の１，３−ジアミノベンゼン水溶液を調製し、
ｃ）ヘキサン、ヘプタン、オクタンまたは溶媒混合物からなる群より選択される有機溶媒に、ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを溶解して、約０．０５％〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度を得て、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／アクアポリン小胞混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド溶液を、中空繊維の管腔を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、前記方法を提供する。
【００１１】
さらなる側面において、本発明は、中空繊維膜の外側を、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層でコーティングする方法であって：
ａ）アクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミンまたはトリアミンの水溶液を調製し、
ｃ）ハロゲン化ジアシルまたはトリアシルを無極性有機溶媒に溶解し、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、アミンおよびアクアポリン小胞の混合物を調製し、
ｅ）中空繊維膜を、工程ｄ）由来の混合物に通過させ、
ｆ）過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）中空繊維膜を、工程ｃ）由来のハロゲン化アシル溶液に通過させて、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）例えば中空繊維を水槽に通過させることによって、水性溶媒で中空繊維膜をリンスする
工程を含む、前記方法を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾された中空繊維膜に関する。
【００１３】
さらなる側面において、本発明は、正浸透を通じた純水の抽出のための、または血液透析を通じて失われた患者血漿由来の純水の再抽出のための、本明細書に記載するような中空繊維（ＨＦ）モジュールの使用を提供する。
【００１４】
さらなる側面において、本発明は、水性液体から水を抽出する方法であって：
ａ）液体膜マトリックスのものより低いかまたはそれと等しい浸透圧を有する第一の水性液体（フィード溶液）と制御された接続にあり、そしてさらに、マトリックスのものより高い浸透圧を有する第二の水性液体（ドロー溶液）と制御された接続にある、請求項１〜９のいずれか一項の中空繊維（ＨＦ）モジュールを配置して、前記の第一および前記の第二の液体の間で、浸透圧ポテンシャルを生成し
ｂ）浸透圧勾配が存在する限り、マトリックスが、前記の第一の液体から純水を吸収し、そして前記の第二の液体内への純水流束（ｐｕｒｅ  ｗａｔｅｒ  ｆｌｕｘ）を仲介することを可能にし、
ｃ）場合によって、前記の第二の液体から、抽出された純水を分離する
工程を含む、前記方法を提供する。
【００１５】
本発明の態様はここで、付随する図を参照しながら、例として、そして限定なしに、記載されるであろう。しかし、本発明の多様なさらなる側面および態様は、本開示を考慮して当業者には明らかであろう。
【００１６】
「および／または」は、本明細書において、他方を伴うまたは伴わない、２つの明記する特徴または構成要素の各々の特定の開示と解釈されるものとする。例えば「Ａおよび／またはＢ」は、本明細書に、ちょうど各々が個々に示されるように、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、ならびに（ｉｉｉ）ＡおよびＢの各々の特定の開示と解釈されるものとする。
【００１７】
文脈が別に示さない限り、上に示す特徴の説明および定義は、本発明のいかなる特定の側面または態様にも限定されず、そして記載するすべての側面および態様に等しく適用される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】図１Ａは、９つの中空繊維、２つの末端入口／出口（１、２）および２つの側面入口／出口（３、４）、ならびに前記入口／出口を密封する４つの末端キャップ（５）を有するＨＦモジュールを、写真および図として示す。モジュール全長：１００ｍｍ；繊維の直径：１０ｍｍ；密封時直径１３０ｍｍ。
【図１Ｂ】図１Ｂは、９８４の繊維、２つの末端入口／出口（１、２）および２つの側面入口／出口（３、４）を有するＨＦモジュールを、写真および図として示す。全長：２５ｃｍ、繊維直径７００μｍ。
【図２】図２は、約２２０μｍ±１５μｍの壁厚、約７６０μｍ±３０μｍの内径、６５ｋＤ±２０ｋＤの分子量カットオフ（ＭＷＣＯ、デキストラン、９０％、０バール）、および２５℃での≧０．６５ｍｌ／［分ｘｃｍ２ｘバール］の膜貫通水流束を有する中空繊維、ＵｌｔｒａＰＥＳＴＭの一部の横断面を、写真および図として示す。写真はＭｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨより得た。
【図３】図３は、本発明の中空繊維上に形成される薄層複合層の微小構造の原理スケッチを示す。以下の実施例１を参照されたい。
【図４】図４は、中空繊維の自動化連続外側コーティングのプロセスの原理スケッチを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
より具体的には、本発明は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）繊維、または他の適切な多孔性支持材料、例えばそのブレンドおよび混合物を含む、ポリスルホン、ポリフェニレンスルホン、ポリエーテルイミド、ポリビニルピロリドンおよびポリアクリロニトリルの繊維を有するＨＦモジュールであって、例えば界面重合を通じて、薄層複合層を形成することによって修飾されている、前記モジュールに関する。さらに、中空繊維支持材料を製造する際に、多様なドーピング材料を用いてもよい。例えばＱｉａｎ  Ｙａｎｇら（２００９）を参照されたい。こうしたＨＦモジュールは、一般的に、食品および飲料適用、例えばビールおよびワインの濾過に用いられるが、廃水再使用およびプールの水のリサイクルを含めて、いくつかの水および廃水適用にも用いられる。例えば、ドイツ企業Ｍｅｍｂｒａｎａは、モジュールあたり７５平方メートルの全表面積を持つ、数千の繊維を含有する中空繊維モジュールを供給する。典型的には１〜２平方メートルおよび約８，０００〜２０，０００繊維を有する、より小さいモジュールが、医学的透析適用に一般的に用いられる（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃａｒｅ、Ｇａｍｂｒｏ）。原理的には、すべてのこれらの商品は、薄層複合層を生じる本発明の方法を用いて、界面重合を通じてコーティング可能であり、ここで、好ましくはその形成中に、例えば好ましくは小胞型の適切なタンパク質懸濁物または溶液を、水性反応性アミン溶液、例えばメタ−フェニレンジアミン溶液に添加し、そして合わせた溶液を、支持繊維を通じてポンピングまたは注入し、過剰な溶液を取り除き、そして続いて、有機溶媒中の反応性塩化アシル、例えばヘキサン中の塩化トリメソイルをポンピングまたは注入し、そして最後に脱イオン水、例えばＭｉｌｌｉＱＴＭ水でリンスすることによって、アクアポリン水チャネルが取り込まれる。本発明のＨＦモジュールの筐体材料は、ＨＦモジュールに一般的に用いられる任意の適切な材料、例えばポリプロピレン、ポリエチレン、ＰＶＤＦおよびステンレススチールであってもよい。一般的に既知のエポキシ接着性物質等を用いて、繊維をＨＦモジュール筐体内に密封することも可能である。本発明にしたがってＴＦＣ修飾されてもよいＨＦモジュールのさらなる例が、膜製造者のウェブサイト上、例えば：
【００２０】
【化１】
0005946591.tif 000002
【００２１】
で見られる。
【００２２】
本発明の１つの態様において、ＨＦモジュールは、ドローおよびフィード溶液の対向流で操作される。本発明の別の態様において、ＨＦモジュールは、ドローおよびフィード溶液の並流で操作される。本発明のさらなる態様において、ＨＦモジュールは、ＴＦＣ層に対するドロー溶液で操作される。本発明のさらにさらなる態様において、ＨＦモジュールは、ＴＦＣ層に対するフィード溶液で操作される。さらに、本発明の修飾中空繊維を、膜バイオリアクター（ＭＢＲ）として使用するため、系またはモジュールに搭載してもよく、ここで、中空繊維を含有するＭＢＲモジュールは水性液体中に沈められ、そして精製水はドロー溶液の使用によって、または中程度の吸気圧力の適用によって、繊維を通じて前記液体から除去される。
【００２３】
本発明のさらなる側面は、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾された中空繊維膜を製造する方法であって、アクアポリン水チャネルを含むＴＦＣ層が、ＨＦモジュール中に搭載および密封された膜繊維表面上で直接調製され、該方法が：
ａ）タンパク質の約２５〜約５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲ（モル含量に基づく比）（好ましくは、脂質／ジブロックコポリマーに関しては１００ＬＰＲ／ＰＯＰＲ、トリブロックコポリマーに関しては５０ＰＯＰＲ）を有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミン、例えば１，３−ジアミノベンゼン水溶液を調製して、約１％〜約５％、例えば約２．５〜４．２％（ｗ／ｗ）の濃度の溶液を得て、
ｃ）炭化水素溶媒、例えば直鎖または分枝鎖炭化水素を有するヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナンまたはこれらの混合物、例えばイソアルカン炭化水素溶媒に、塩化アシル、例えばベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを溶解して、約０．０５％〜約１％、例えば約０．１５％（ｗ／ｖ）の濃度を得て、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、ジアミン／アクアポリン小胞混合物、例えば１，３−ジアミノベンゼン／アクアポリン小胞混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来の塩化アシル溶液を、入口を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、前記方法を提供する。
【００２４】
場合によって、水を充填した後、モジュールを堅いキャップで密封して、乾燥を防止する。
【００２５】
本発明のさらなる側面は、中空繊維膜の外側を、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層でコーティングする方法であって：
ａ）アクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミンまたはトリアミンの水溶液を調製し、
ｃ）ハロゲン化ジアシルまたはトリアシルを無極性有機溶媒に溶解し、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、アミンおよびアクアポリン小胞の混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物に中空繊維膜を通過させ、
ｆ）過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のハロゲン化アシル溶液に、中空繊維膜を通過させて、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）例えば中空繊維を水槽に通過させることによって、水性溶媒で中空繊維膜をリンスする
工程を含む、前記方法に関する。
【００２６】
中空繊維膜をコーティングし、そして中空繊維モジュールを調製する上述の方法において、工程ａ）〜ｃ）を任意の好適な順序で実行してもよい。また、工程ｃ）を工程ｄ）の前または後に実行してもよい。
【００２７】
例示的な態様において、本発明のＨＦモジュールの調製で用いる前記リポソームは、脂質、例えばＤＰｈＰＣ、ＤＯＰＣ、混合ダイズ（ｓｏｙ  ｂｅａｎ）脂質、例えばアソレクチン（ａｓｏｌｅｃｔｉｎ）およびダイズ・レシチン、または大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）混合脂質より調製され；そして前記ポリマーソームは、親水性−疎水性−親水性（Ａ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ）型のトリブロックコポリマーまたは親水性−疎水性型（Ａ−Ｂ）のジブロックコポリマーを含むことも可能である。
【００２８】
さらなる態様において、前記ポリマーソームは、親水性−疎水性−親水性型のトリブロックコポリマーおよび親水性−疎水性型のジブロックコポリマーの組み合わせを含むことも可能である。組み合わせにおいて、ジブロックコポリマーは、約１０モル％〜約６０モル％、例えば約２５モル％〜約５０モル％を含むことも可能である。
【００２９】
前記アクアポリン水チャネルは、好ましくはＡｑｐＺチャネルであるが、原理的にはすべての水選択性アクアポリン、例えばアクアポリンＺ（ＡｑｐＺ）、Ａｑｐ１、ＧｌｐＦまたはＳｏＰＩＰ２；１が、本発明において有用である。
【００３０】
前記ＴＦＣ層は、好ましくは有機溶媒中の酸塩化物溶液とアミンの水溶液との界面重合を通じて形成され、そしてここで、アクアポリン水チャネル小胞は前記水溶液に取り込まれる。前記アクアポリン水チャネルは、好ましくは、本発明の中空繊維膜のＴＦＣ層内に取り込まれる前に、小胞中に取り込まれ、そして前記小胞は、リポソームまたはポリマーソームの形であってもよく、ここで前記リポソームは、脂質、例えばＤＰｈＰＣ、ＤＯＰＣ、混合ダイズ脂質、または大腸菌混合脂質から調製され、そして前記ポリマーソームは、親水性−疎水性−親水性（Ａ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ）型のトリブロックコポリマーまたは親水性−疎水性型（Ａ−Ｂ）のジブロックコポリマーを含む。さらなる態様において、前記ポリマーソームは、親水性−疎水性−親水性型のトリブロックコポリマーおよび親水性−疎水性型のジブロックコポリマーの組み合わせを含むことも可能である。
【００３１】
本発明のＨＦ膜は、好ましくは、アミンの水溶液と有機溶媒中の酸塩化物の溶液の界面重合を通じて形成されるＴＦＣ層を有し、そしてアクアポリン水チャネル小胞は前記水溶液中に取り込まれる。
【００３２】
本発明のＨＦモジュールを調製する方法の１つの態様において、工程ｆ）において、繊維をガスパージして、過剰な水を吹き飛ばし、そして工程ｆ）において、モジュールを逆さまに保持する。
【００３３】
本発明のさらなる側面において、高い透水性および小さい孔サイズを有する、例えば約５〜１０ｎｍ未満、例えば約１ｎｍに等しいかまたはそれ未満の孔直径を有する、中空繊維モジュールを提供する。当該技術分野に知られるような、薄層の形での支持膜繊維表面上での分離層形成は、水輸送機構の変化を生じる。支持膜孔を通じた通常の拡散によって行われる水輸送の代わりに、別のタイプの水輸送が、逆浸透膜のこのタイプから知られるように薄層を通じて行われ、ここで膜浸透性は限定される。層を分離する薄層の非孔性によって、Ｋｏｔｅｌｙａｎｓｋｉｉら、１９９８に記載されるような、「ジャンプ拡散」を必要とする水の輸送が生じる。したがって、水膜の薄層修飾は、主に、逆浸透における使用を見出しており、この場合、膜を通じて水を強制的に送るには、静水圧が必要であり、そして得られる利点は、濾過しようとする水における望ましくない溶質の分離の改善である。逆浸透のためのこれらの慣用的な膜は、多孔性材料によって支持される、有効な１００〜２００ｎｍ厚の非孔性層を有する。これらの膜における水浸透は、間隙（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｓｐａｃｅ）の出現および消失を通じて確立される非孔性層を通じた拡散プロセスとして起こる。本発明のＨＦモジュールは、薄層中に取り込まれて該薄層を薄層複合（ＴＦＣ）層とするアクアポリン水チャネルを有することによって、先行技術の逆浸透膜に比較してさらに改善されることも可能である。アクアポリンの取り込みは、最も狭い通路でわずか２．４Åの直径を有する孔（ＡｑｐＺ孔、Ｗａｎｇら、２００５を参照されたい）を通じた選択的水輸送を提供する、追加された利点を有し、ここで、効率的な一列縦隊水輸送が起こる。本発明のＨＦモジュールは、薄層分離層を有する利点とアクアポリン水チャネルとを一緒に組み合わせて、こうして、分離の改善、ならびに逆浸透、正浸透両方、補助正浸透、ナノ濾過等に適したＨＦモジュールを作製するオングストロームサイズの孔を通じた水流束を提供する。
【００３４】
定義
用語「中空繊維膜」および「ＨＦ膜」は、本明細書において、液体濾過目的に使用可能な任意のタイプの毛細膜を指す。
【００３５】
用語「ポリエーテルスルホン」は、本明細書において、中空繊維モジュール製造において使用される膜材料を指す。一例は、Ｍｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨによって市販される膜材料ＵｌｔｒａＰＥＳＴＭである。ＵｌｔｒａＰｅｓＴＭ繊維の横断面顕微鏡写真を図２に示す。Ｍｅｍｂｒａｎａ  ＧＭＢＨを参照されたい。
【００３６】
「アクアポリン」は、本明細書において、選択的水チャネルタンパク質を指し、Ｍａｒｉａ  Ｋａｒｌｓｓｏｎら（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５３７（２００３）６８−７２）に記載される方法にしたがって、またはＪｅｎｓｅｎら、ＵＳ  ２０１２／００８０３７７  Ａ１に記載されるように調製される、ＡｑｐＺおよびＳｏＰＩＰ２；１が含まれる。
【００３７】
「アソレクチン」は、本明細書において、ダイズ・レシチン分画［ＩＶ−Ｓ］を指し、該分画は、レシチン、セファリン、イノシトールホスファチドおよびダイズ油を含有する高度に精製されたリン脂質産物である（同義語：アゾレクチン（ａｚｏｌｅｃｔｉｎ））。
【００３８】
「ブロックコポリマー」は、本明細書において、膜を形成する、または小胞を形成する、親水性（ＡまたはＣ）および疎水性（Ｂ）ブロックの両方を有するジブロックコポリマーおよびトリブロックコポリマーを指し；ジブロックコポリマーは、二重層を形成可能なＡ−ＢまたはＣ−Ｂ型であり、そしてトリブロックコポリマーは自己組み立てによって単層を形成するＡ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ型であり、すべての膜で疎水性層が中央にある。
【００３９】
有用なジブロックコポリマーの例および有用なトリブロックコポリマーの例は以下の通りである：
【００４０】
【表１】
0005946591.tif 000003
【００４１】
式中、ＥＯブロック−ＤＭＳブロック、例えばＥＯ２５ＤＭＳ８は、ポリ（ジメチルシロキサン−ブロック−酸化エチレン−ブロック）を示す。
【００４２】
ＥＯブロック−ＢＯブロック、例えばＥＯ１５ＢＯ１６は、ポリ（酸化ブチレンブロック−酸化エチレンブロック）を示し、そしてＭＯＸＡブロック−ＤＭＳブロック−ＭＯＸＡブロック、例えばＭＯＸＡ６ＤＭＳ３５ＭＯＸＡ６は、ポリ（２−メチルオキサゾリンブロック−ジメチルシロキサンブロック−２−メチルオキサゾリン）を示す。天然の膜貫通特性および機能により、両親媒性特性を有するアクアポリンを取り込むため、生物模倣型膜、例えば小胞または平面膜の生成において、ジブロックコポリマーおよびトリブロックコポリマーを、単一の構成要素として、または混合物として、用いてもよい。
【００４３】
「液体膜」は、本明細書において、ＷＯ２０１０／１４６３６５（アクアポリンＡ／Ｓ）およびＷＯ２０１２／０８０９４６（アクアポリンＡ／Ｓ）に開示されるような膜系を指す。前記液体膜は、固定されているかまたは被包されている、本発明のＴＦＣ  ＨＦ膜の統合構成要素である。
【００４４】
用語「補助正浸透」（または「圧力補助正浸透」）は、本明細書において、浸透および水圧駆動力を協同させることによって、膜のフィード側に機械的圧力を適用して、水流束を増進させる概念を指す。
【００４５】
「薄層複合」または（ＴＦＣ）中空繊維膜は、本明細書において、水溶液中のアミン反応物、好ましくは芳香族アミン、例えばジアミンまたはトリアミン、例えば１，３−ジアミノベンゼン（ｍ−フェニレンジアミン＞９９％、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈより購入するもの）、および有機溶媒に溶解されたハロゲン化アシル反応物、例えば塩化二酸または三酸、好ましくはハロゲン化芳香族アシル、例えばベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド（ＣＡＳ番号８４２７０−８４−８、塩化トリメソイル（ＴＭＣ）、９８％、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈより購入するもの）を用いて調製され、ここで、前記反応物は、界面重合反応において化合物を形成する。支持膜、例えばポリエーテルスルホン膜の表面で多孔膜支持体にラミネート化されたポリアミドを含む複合膜の形成について詳細に記載しているＵＳ４，２７７，３４４を参照されたい。ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを溶媒、例えばヘキサン（＞９９．９％、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン等（直鎖または分枝鎖炭化水素）を含むＣ６〜Ｃ１２炭化水素、あるいは他の低分子量芳香族炭化水素溶媒、例えばＩｓｏｐａｒＴＭ  Ｇ液（これは、触媒の存在下で水素処理した石油に基づく原料から産生され、その主要構成要素にイソアルカンが含まれる低臭気液体を生じる）に溶解する。ＩｓｏｐａｒＴＭ  Ｇ液：化学名：炭化水素、Ｃ１０〜Ｃ１２、イソアルカン、＜２％芳香族；ＣＡＳ番号６４７４２−４８−９、化学名：ナフサ（石油）、水素化重質（ＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌより）。当該技術分野に知られるように、反応物１，３−ジアミノベンゼンの代替物には、ジアミン、例えばヘキサメチレンジアミン等が含まれ、そして反応物ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドの代替物には塩化ジアシル、塩化アジポイル等が含まれる。
【００４６】
「ガス」は、本明細書において、溶媒を吹き飛ばすために使用可能な、任意のガス状液体、例えば不活性ガス、二窒素、大気等を意味する。
【００４７】
プロテオリポソームは、本明細書において、典型的には、２５〜５００の間、例えば約１００〜約２００の脂質対タンパク質比（モルに基づいて計算されたＬＰＲ）を有する。
【００４８】
プロテオポリマーソームは、本明細書において、典型的には、トリブロックコポリマーを用いた際には、２５〜５００の間、例えば約５０〜約１００のポリマー対タンパク質比（モルに基づいて計算されたＰＯＰＲ）、そしてジブロックコポリマーを用いた際には、２５〜５００の間、例えば約１００〜約２００のポリマー対タンパク質比を有する。
【００４９】
本発明の好ましい態様において、中空繊維束は、以下の特性を有する親水性毛細膜材料の形で、ポリエーテルスルホン（ＵｌｔｒａＰＥＳＴＭ）支持材料を含む（平均値を示す）：
物理的特性：壁厚２２０μｍ±１５μｍ；内径７６０μｍ±３０μｍ；引っ張り強さ≧４１０ｃＮ；切断時の伸張≧４０％；爆発圧≧１２バール；内破圧≧７バール；最小孔サイズ、６〜７ｎｍ。
【００５０】
膜性能特性：膜貫通流（水、２５℃）≧０．６５ｍｌ／［分ｘｃｍ２ｘバール］；分子量カットオフＭＷＣＯ（デキストラン、９０％、０バール）６５ｋＤ±２０ｋＤ。
【００５１】
示す特性は、Ｍｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨ、Ｏｅｈｄｅｒ  Ｓｔｒａｓｓｅ  ２８，  Ｄ−４２２８９  Ｗｕｐｐｅｒｔａｌ，  Ｇｅｒｍａｎｙによって提供される好ましいＵｌｔｒａＰＥＳ材料の代表である。
【００５２】
本発明の別の好ましい態様において、中空繊維束は、ポリエーテルスルホンＭｉｃｒｏＰＥＳ（登録商標）、例えばＭｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨより提供されるＴＦ１０バージョン、の支持材料を含み、これは、膜貫通流（水、２５℃）≧３５ｍｌ／［分ｘｃｍ２ｘバール］；１００μｍ±２５μｍの壁厚；３００μｍ±４０μｍの内径；≧５０ｃＮの引っ張り強さ；切断時の伸張≧３０％；０．５μｍ±０．１μｍの最大孔サイズを有する点で、ＵｌｔｒａＰＥＳ材料とは異なる。
【実施例】
【００５３】
実験実施例
以下のプロトコルによるＡｑｐＺ  Ｍｗ  ２７２３３を用いた１ｍｇ／ｍＬアソレクチン・プロテオリポソームおよび脂質対タンパク質比（ＬＰＲ）２００の調製：
１）ＣＨＣｌ３中のアソレクチン（ｍＷ  ７８６．１１ｇ／ｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ）の２ｍｇ／ｍＬストック溶液５ｍＬを、５０ｍＬガラス蒸発バイアルに充填する。
２）回転蒸発装置を用いて、少なくとも２時間、ＣＨＣｌ３を完全に乾燥するまで蒸発させる。
３）緩衝溶液（ＰＢＳ  ｐＨ７．４中、１．３％オクチルグルコシド（ＯＧ））を０．８ｍＬ添加して、工程２の蒸発バイアル中で得たフィルムを再水和する。
４）プラットホーム振盪装置（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ軌道プラットホーム振盪装置Ｕｎｉｍａｘ２０１０または同等物）上で、脂質が溶解するまで、最大のｒｐｍでバイアルを振盪する。
５）Ｔｒｉｓ  ｐＨ８、グルコースおよびＯＧを含有するタンパク質緩衝液中のＡｑｐＺ  １０ｍｇ／ｍＬの１．７３ｍｇを添加し、そしてバイアルを２００ｒｐｍで１５分間回転させる。ＡｑｐＺは本明細書の説明にしたがって調製される。
６）９．０３ｍｌ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４、ＯＧを含まない）をゆっくりと添加し、そしてバイアルを２００ｒｐｍで１５分間振盪する。
７）ドライアイス／４０℃水槽で３回、合わせた溶液／懸濁物を凍結／融解して、ありうる多層構造を除去する。
８）水和Ｂｉｏｂｅａｄｓ（ＢｉｏＲａｄのＳＭ２）２５０ｍｇを添加して、そしてバイアルを２００ｒｐｍで１時間、４℃で回転させて、界面活性剤（ＯＧ）を吸着させる。
９）さらに２５０ｍｇの水和Ｂｉｏｂｅａｄｓを添加し、そしてバイアルを２００ｒｐｍで２〜３日間、４℃で回転させる。
１０）次いで、吸着したＯＧを含むＢｉｏｂｅａｄｓを、懸濁物からピペッティングによって除く。
１１）少なくとも１回、そして最大約２２回、押出機（例えばカナダ、ＡｖｅｓｔｉｎのＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ−Ｃ５）を用いて、２００ｎｍポリカーボネートフィルターを通じて、約１１回、得た懸濁物を押し出して、均質なプロテオリポソーム懸濁物（小胞）懸濁物を得る。
【００５４】
１ｍｇ／ｍｌプロテオ−ポリマーソーム、タンパク質対ポリマー比（ＰＯＰＲ）５０に関するプロトコル
ポリオキサゾリンに基づくトリブロックコポリマー、ポリ（２−メチルオキサゾリン−ｂ−ジメチルシロキサン−ｂ−２−メチルオキサゾリン、Ｍｏｘａ  １２：ＤＭＳ  ３５、Ｍｗ  ３５１０）（Ｐｏｌｙｍｅｒ  ＳｏｕｒｃｅＴＭ、カナダ、ケベックより購入したＰ３６９１）、ＡｑｐＺ  Ｍｗ  ２７２３３
１）ＣＨＣｌ３中のＰ３６９１の２ｍｇ／ｍＬストック溶液５ｍＬを、５０ｍｌガラス蒸発バイアルに充填する。
２）回転蒸発装置を用いて、少なくとも２時間、ＣＨＣｌ３を完全に乾燥するまで蒸発させる。
３）緩衝溶液（１．３％ＯＧ；２００ｍＭスクロース；１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８；５０ｍＭ  ＮａＣｌ）を３．０ｍＬ添加して、工程２の蒸発バイアル中で得たフィルムを再水和する。
４）プラットホーム振盪装置（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ軌道プラットホーム振盪装置Ｕｎｉｍａｘ２０１０または同等物）上で、２００ｒｐｍで３時間バイアルを振盪して、コポリマーの溶解物を得る。
５）Ｔｒｉｓ、グルコースおよびＯＧを含有するタンパク質緩衝液中のＡｑｐＺ  １．５５ｍｇ／μＬを添加し、そしてバイアルを２００ｒｐｍおよび４℃で一晩回転させる。
６）６．８８ｍｌ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８；５０ｍＭ  ＮａＣｌ）を、ピペットで上下に混合しながらゆっくりと添加する。
７）１８０ｍｇ水和Ｂｉｏｂｅａｄｓを添加し、そして２００ｒｐｍで１時間回転させる。
８）２１０ｍｇ水和Ｂｉｏｂｅａｄｓを添加し、そして２００ｒｐｍで１時間回転させる。
９）２４０ｍｇ水和Ｂｉｏｂｅａｄｓを添加し、そして２００ｒｐｍで４℃で一晩回転させる。
１０）２４０ｍｇ水和Ｂｉｏｂｅａｄｓを添加し、そして２００ｒｐｍで４℃で一晩回転させる。
１１）次いで、吸着したＯＧを含むＢｉｏｂｅａｄｓを、懸濁物からピペッティングによって取り除く。
１２）例えば少なくとも１回、そして最大約２２回、押出機を用いて、２００ｎｍポリカーボネートフィルターを通じて、約２１回、懸濁物を押し出して、均質なプロテオポリマーソーム懸濁物（小胞）懸濁物を得る。
【００５５】
実施例１．  繊維の内側表面が、固定されたＡｑｐＺ小胞で機能化されている、中空繊維モジュールの調製
ポリエーテルスルホン膜を有する中空繊維モジュール、例えばオーダーメードモジュール、例えば約１０ｃｍ２の外側面積および５ｃｍ２の内側面積に対応する９つの繊維を有するもの、またはモジュールの長さに応じて数百の繊維に対応しうる最大０．５ｍ２の膜面積を有するもの（Ｍｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨ、ドイツ・ヴッパータール）を使用し（当該モジュールは、本質的にＳｕｋｉｔｐａｎｅｅｎｉｔら、２０１１に記載されるように調製されている）、薄層複合層を、以下の工程を伴う界面重合を通じて内側繊維表面上に調製する：
１）上記の例で調製されるような４ｍＬのＡｑｐＺ小胞を得る。
２）２５０ｍｇの１，３−ジアミノベンゼンを６ｍＬのＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）７５ｍｇのベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを５０ｍＬのヘキサンに溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
４）工程１由来の４ｍＬの小胞調製物を工程２由来の６ｍＬの溶液に溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／ＡｑｐＺ小胞混合物を調製する。
５）末端入口１（または入口２）を用いて、モジュールを通じて、工程４で得た混合物を２分間一定にポンピングする。図１を参照されたい。
６）例えば入口１（図１参照）を用いて、好ましくはモジュールを逆さまに保持しながら、繊維の管腔側に２分間、一定に空気パージすることによって、過剰な１，３−ジアミノベンゼンを取り除く。
７）次いで、工程３由来のベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド溶液を、シリンジポンプを用いて、例えばＴＳＥ系から（参考［２０１２−１１−０９にインターネット：（＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｓｅ−ｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｏｔｈｅｒ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｐｕｍｐｓ−ｉｎｆｕｓｉｏｎ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）から検索］）、入口１を通じてモジュール内におよそ３０秒間一定流量で注入して、界面重合反応が起こることを可能にする。
８）最後に、好ましくはモジュールを、側面入口３および４を通じた注入によって、ＭｉｌｌｉＱ水、およそ１０ｍＬを用いてリンスする。
【００５６】
水を充填した後、モジュールを白色密封キャップ（５）で密封して（図１参照）、乾燥を防止する（密封キャップはモジュールの一部であり、そしてモジュールとともに送達される）。
【００５７】
あるいは、工程２および３は以下に記載する通りであり、この場合、すべての他の工程は上に示すものと同じである：
２）１，３−ジアミノベンゼンをＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを、ヘキサンまたはイソアルカン炭化水素溶媒などの溶媒に溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
【００５８】
実施例２．  繊維の内側表面が、固定されたＡｑｐＺ小胞で機能化されている中空繊維モジュールの調製
実施例１におけるものと同じ中空繊維モジュールを用いて、薄層複合層を以下の工程を伴う界面重合を通じて内側繊維表面上で調製する：
１）上記の例で調製されるような４ｍＬのＡｑｐＺ小胞を得る。
２）２５０ｍｇの１，３−ジアミノベンゼンを６ｍＬのＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）７５ｍｇのベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを５０ｍＬのヘキサンに溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
４）工程１由来の４ｍＬの小胞調製物を工程２由来の６ｍＬの溶液に溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／ＡｑｐＺ小胞混合物を調製する。
５）末端入口１（または入口２）を用いて、モジュールを通じて、工程４で得た混合物を２分間一定にポンピングする。図１を参照されたい。
６）シリンジポンプを用い、入口１を通じて、ヘキサンなどの有機液体の一定流によって、モジュールから過剰な１，３−ジアミノベンゼンを１分間除去する。
７）次いで、工程３由来のベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド溶液を、シリンジポンプを用いて、例えばＴＳＥ系から（参考［２０１２−１１−０９にインターネット：（＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｓｅ−ｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｏｔｈｅｒ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｐｕｍｐｓ−ｉｎｆｕｓｉｏｎ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）から検索］）、入口１を通じてモジュール内におよそ３０秒間一定流量で注入して、界面重合反応が起こることを可能にする。
８）最後に、好ましくはモジュールを、側面入口１および３を通じた注入によって、ＭｉｌｌｉＱ水、およそ１０ｍＬを用いてリンスする。
【００５９】
水を充填した後、モジュールを白色密封キャップ（５）で密封して（図１参照）、乾燥を防止する（密封キャップはモジュールの一部であり、そしてモジュールは密封キャップとともに送達される）。
【００６０】
あるいは、工程２および３は以下に記載する通りであり、この場合、すべての他の工程は上に示すものと同じである：
２）１，３−ジアミノベンゼンをＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを、ヘキサンまたはイソアルカン炭化水素溶媒などの溶媒に溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
【００６１】
実施例３．  繊維の内側表面が、固定されたＡｑｐＺ小胞で機能化されている中空繊維モジュールの調製
実施例１におけるものと同じ中空繊維モジュールを用いて、以下の工程を伴う界面重合を通じて、そしてモジュールを通じて溶液を押し込むシリンジポンプを用いて、薄層複合層を内側繊維表面上で調製する：
１）上記の例で調製されるような４ｍＬのＡｑｐＺ小胞を得る。
２）２５０ｍｇの１，３−ジアミノベンゼンを６ｍＬのＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）７５ｍｇのベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを５０ｍＬのヘキサンに溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
４）工程１由来の４ｍＬの小胞調製物を工程２由来の６ｍＬの溶液に溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／ＡｑｐＺ小胞混合物を調製する。
５）入口を下にして、モジュールを垂直に保持し、空気が出て行くことを確実にしながら、工程２由来の溶液を、繊維の内側を通じて添加し；溶液は、好ましくは、約５ｍＬ／分の流速を用いてポンピングし、そして、例えば溶液がモジュール上端に視認可能となった直後のタイミングで開始して、溶液を２分間ポンピングし続けてもよい。
６）シリンジポンプからモジュールを外し、そして回転させて、過剰な溶液を収集ガラス内に流し出す。
７）モジュールを逆さまにつないで空気を入れ、そして１０Ｌ／分に到達するまで、ゆっくりと気流を開始し；気流を２分間流す。
８）モジュールを、ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド溶液シリンジにつなぎ、モジュールを垂直に保持して、そして例えば約１５ｍＬ／分の流速を維持しながら、ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド／ヘキサン流を開始する。
９）ヘキサンシリンジからモジュールを外し、そして逆さまにして残ったヘキサンを外に出す；空気につなぎ、そして約１０Ｌ／分で５〜１０秒間パージする。
１０）ガラス容器から吸い込むことによって、ＭｉｌｌｉＱをモジュールに充填する。
【００６２】
あるいは、工程２および３は以下に記載する通りであり、この場合、すべての他の工程は上に示すものと同じである：
２）１，３−ジアミノベンゼンをＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを、ヘキサンまたはイソアルカン炭化水素溶媒などの溶媒に溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
【００６３】
あるいは、ｐＨＦ２２プロトコルにおいて、本発明者らは、モジュール、例えばＭｉｃｒｏＰＥＳ−ＴＦ１０  ＨＦモジュールを通じて溶液を押し込むシリンジポンプを用い、次いで、上記の例で調製されるような４ｍＬのＡｑｐＺ小胞を得た後、以下の工程にしたがう：
１）ＭＰＤをＭｉｌｌｉＱ水に溶解し、そしてＡｑｐＺ小胞を添加して、水／小胞溶液中のＭＰＤの２．５％（Ｗ／Ｗ）濃度を得る。
２）ＴＭＣを有機溶媒、例えばヘキサンまたはイソアルカン炭化水素溶媒に、０．１５％Ｗ／Ｖの最終濃度に溶解する。
３）入口を下に向けて垂直に保持しながら、繊維の内側を通じて、ＭＰＤ溶液を押し込む（モジュールを充填しながら、繰り返し振って空気を外に出す）；５ｍＬ／分の流速
４）ＭＰＤ溶液を１分間（ＭＰＤ溶液がモジュール上端に視認可能となってからの時間）押し込み続け、そして次いで、内側をＭＰＤ溶液に１分間浸す
５）シリンジからモジュールを外し、そして回転させて、収集ガラス内に過剰なＭＰＤ溶液を流し出す。
６）モジュールを逆さまにつないで（数字のある端を上にすることを意味する）空気を通し、そしてゆっくりと気流を開始し；制御された気流で１〜２分間乾燥させ、そして合間にモジュールを回転させる。
７）ＴＭＣ溶液につなぎ、垂直に保持し（数字のある端を底に）、そしてＴＭＣ溶液流を開始する（流速：１０ｍＬ／分）。
８）溶液を繊維に４５秒間流す（モジュールを充填した後、水平位置に傾けてもよい）。
９）シリンジからモジュールを外し、そして逆さまに回転させて、残ったＴＭＣ溶液を出す；空気につなぎ、そして約１０Ｌ／分で５〜１０秒間パージする。
１０）ガラスから吸い込むことによって、ＭｉｌｌｉＱをモジュールに充填する。
【００６４】
上に概略する多様な方法にしたがって、ＴＦＣアクアポリン修飾中空繊維モジュールを得て、ここで、繊維の内部表面は、図３に示すような新規微小構造を獲得し、図中、（１）は〜２００ｎｍのＴＦＣ層を指し、そして（２）は２２０μｍの支持膜を指し、（１）および（２）はともに、中空繊維壁の横断面を示す；（３）は、親水性頭部基および疎水性テール基を有する両親媒性膜形成材料として、脂質およびジブロックコポリマーの場合の二重層膜を模式的に示す。特徴（３）は、両親媒性膜材料としてトリブロックコポリマーを用いる場合は、疎水性中央部分および親水性末端部分を有する単層を示すか、またはトリブロックコポリマーが蹄鉄コンホメーションを採る場合は二層のタイプを示すか、または両方の混合物を示すであろう。（４）は、四量体型を示すアクアポリンタンパク質を示す。しかし、タンパク質はまた、単量体としてまたは二量体として存在することも可能であり、この両方もまた水チャネルである。
【００６５】
正浸透を用いた濾過結果
以下の表１および２は、どちらも脱イオン水（ＭｉｌｌｉＱ水）中の１０μＭカルセイン（ＣＡＳ番号１４６１−１５−０、Ｍｗ  ６２２．５５）のフィード溶液および２Ｍ  ＮａＣｌのドロー溶液を用いて、本発明にしたがって調製されたＨＦモジュールに関する測定された水流束、Ｊｗ、および測定された逆塩流束（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｓａｌｔ  ｆｌｕｘ）、Ｊｓの形の濾過結果を示し、そしてそこでは、ＴＦＣ−アクアポリン層は中空繊維の内側（管腔）上に形成されており、そしてドロー溶液は当該繊維の外側または内側に適用されている。並流または対向流を用いた。図１を参照されたい：典型的には、フィード溶液を、入口（１）を通じてポンピングし、そして（２）を通じて出し、そしてドロー溶液を入口（３）を通じてポンピングし、そして（４）を通じて出した。５回の実験で、対向流を用いた。表１および２、ならびに以下の説明を参照されたい。水チャネルタンパク質ＡｑｐＺをすべての実験に用い、そして脂質（アソレクチン）および多様なブロックコポリマー（Ｐ３６９１、Ｐ８０６１）の両方とも小胞膜の材料とした。
【００６６】
各実験は、水流束（Ｊｗ）、逆塩流束（Ｊｓ）およびカルセイン排出によって特徴付けられる。水流束は、どれだけ多くの水が、所定の時間で、特定の量の膜面積上を輸送されたか（通常Ｌ／ｍ２ｈ）を記載し、そしてフィード溶液中の重量喪失を監視することによって測定される。逆塩流束は、フィード溶液内に逆に拡散するドロー溶質の量を特徴付ける。これは、膜がどれだけ塩をもらさないか（ｓａｌｔ−ｔｉｇｈｔ）の指標である。Ｊｓは、フィード溶液中の伝導度変化を測定することによって決定される。カルセイン排出を用いて、膜の順方向排出特性を決定する。ここで、デスクトップ蛍光計（例えばＱｕｂｉｔ蛍光計、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって容易に検出可能な、蛍光マーカーをフィード溶液に添加する。ドロー中の濃度を測定することによって、本発明者らは、どれだけ多くのマーカーが排出されたか決定可能である。
【００６７】
水流束を以下のように計算する：
Ｊｗ＝Ｖｔ／（Ａ＊ｔ）；［Ｌ／ｍ２ｈ］、
式中、Ｖｔは輸送体積であり、Ａは活性膜面積であり、そしてｔは時間単位での時間である。逆塩流束を決定するため、本発明者らは、フィード溶液中の伝導度を測定しなければならない。較正曲線の補助を得て、次いで、本発明者らは、伝導度を塩濃度に関連づけることも可能であり、そしてしたがって、以下のように逆塩流束を計算することも可能である：
Ｊｓ＝（ｃｆ、終了＊Ｖｆ、終了−ｃｆ、開始＊Ｖｆ、開始）／（Ａ＊ｔ）；［ｇ／ｍ２ｈ］
式中、Ｖｆは開始および終了体積を示し、そしてｃｆは、フィード中の塩の開始および終了濃度を示す。
【００６８】
カルセイン排出は、以下によって近似される：
Ｒｃａ＝１−（（Ｖｄ、終了＊ｃｃａ、ｄ、終了−Ｖｄ、開始＊ｃｃａ、ｄ、開始）／（Ｖｔ＊ｃｃａ、ｆ、開始））
式中、Ｖｄは開始および終了ドロー体積であり、そしてｃｃａ、ｄは、ドロー溶液中のカルセイン読み取り値である。フィード中のカルセイン開始濃度（ｃｃａ、ｆ）は定数と解釈される。カルセインを排出する膜は、フィード中のカルセイン濃度を高濃縮（ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅ）するであろうことから、これは近似値である。しかし、計算中で開始濃度を一定にしておくことによって、本発明者らは総排出を過小評価し、このことは許容されうるため、これは容認可能である。
【００６９】
表１
【００７０】
【表２】
0005946591.tif 000004
【００７１】
注：ａ  対向流；ａｂ  内側ドロー＆対向流；ｄ  実施例１にしたがう。ＨＦモジュール番号１２−０６４４は、小胞および／またはタンパク質を含まずに薄層のみで修飾されており、そしてしたがって、Ｓｕｋｉｔｐａｎｅｅｎｉｔ  ＆  Ｃｈｕｎｇ  ２０１２によって開示されるような、先行技術に相当する。
【００７２】
表１は、本発明のＨＦモジュールを用いた際に、９つの繊維を有する薄層修飾ＨＦモジュールで得られうる流束を超えて、最大３Ｌ／ｍ２ｈのより大きい水流束Ｊｗを得ながら、なお約０．２２程度に低い優れたＪｓ／Ｊｗ比を維持することが可能であることを明らかに示す。これは、濾過目的には好適であり、この場合、高い水流束が望ましい一方、例えば廃水処理では、より効率的でない塩保持が許容されうる。表１に示す本発明にしたがった結果は、すべて、対向流を用いて得られ、これは、高い水流束に関する利点を立証しうる。
【００７３】
表２
【００７４】
【表３】
0005946591.tif 000005
【００７５】
注：ａ  対向流；ｃ  内側ドロー；ｄｄ  実施例３にしたがって調製。ＨＦモジュール番号１２−０６４４は、小胞および／またはタンパク質を含まずに薄層のみで修飾されており、そしてしたがって、Ｓｕｋｉｔｐａｎｅｅｎｉｔ  ＆  Ｃｈｕｎｇ  ２０１２によって開示されるような、先行技術に相当する。
【００７６】
表２は、本発明のＨＦモジュールを用いて、約８〜９Ｌ／ｍ２ｈの優れた水流束をなお維持しながら、９つの繊維を有する薄層修飾ＨＦモジュールに関して得られうる逆塩保持に比較して、２５％増加に対応する、約０．５ｇ／ｍ２ｈの逆塩保持、Ｊｓの増加を得ることが可能であることを明らかに示す。これらの結果は、ＨＦモジュール繊維の内側に対し、ドロー溶液で並流を用いて得られる。上記カルセイン排出値はすべて、９９％より優れており、用いたＨＦモジュールが非常に緊密である（膜漏洩がない）ことを示す。本発明のＨＦモジュールは、並流および対向流の両方で使用可能であり、そして上記結果からわかるように、対向流を有することが好ましい可能性がある。その場合、浸透圧の相違は、繊維の全長に渡って、より均一に分布する。フィードおよびドロー溶液の両方が同じ側から進入する場合（並流）、水はフィード流からドロー流に直ちに引き込まれ、そして繊維に沿って、浸透圧の相違は迅速に減少するであろう（フィードが濃縮され、そしてドローが希釈される）。ＨＦモジュールがここで、対向流で操作される場合、本発明者らは、一方の端で希釈されたドローと出会う、より清浄な（ｃｌｅａｎｅｒ）フィード、およびもう一方の端で弱く浸透圧性のフィード（塩混入）と出会う高浸透圧性ドローを有する。したがって、両方の液体間の浸透圧差は、繊維の全長に沿って同一であることに近くなる。これは対向流を支持する可能性もある。しかし、並流を支持するという場合、内側のポンピングによって生じる圧は、繊維の外側のポンピングによって生じる等しい圧をもたらす。
【００７７】
上記の代替法（ＰＨＦ２２）を用いた４回の実行からの結果を示す表３
【００７８】
【表４】
0005946591.tif 000006
【００７９】
上記の代替法（ＰＨＦ２２）を用いた４回の実行からの結果を示す表４
【００８０】
【表５】
0005946591.tif 000007
【００８１】
上記の代替法（ＰＨＦ２２）を用いた４回の実行からの結果を示す表５
【００８２】
【表６】
0005946591.tif 000008
【００８３】
ＨＦ  ＭｉｃｒｏＰＥＳ  ＴＦ１０  ５ｃｍ２活性膜面積中空繊維モジュールの内側コーティングは、高い再現性を生じた；表３および４のすべての実験は、匹敵するＪｓ／Ｊｗ比を有するとともに多様なＪｗおよびＪｓを有した（これは、実験における相違／許容性、測定正確性の相違が、そしておそらくコーティングが手製プロセスであるという事実が原因となり得る）。したがって、２つの異なる実験は、匹敵するＪｓ／Ｊｗを有するが、ＪｗおよびＪｓの多様な平均範囲を有するＨＦモジュールを生じた。中程度のＪｗおよび低いＪｓの実験結果を示す表３、ならびに高いＪｗおよび中程度のＪｓの実験結果を示す表４を参照されたい。
【００８４】
実施例４．  繊維の外側表面が、固定されたＡｑｐＺ小胞で機能化されている、中空繊維モジュールの調製
ポリエーテルスルホン膜を有する中空繊維モジュール、例えばオーダーメードモジュール、例えば約１０ｃｍ２に対応する９つの繊維を有するもの、またはモジュールの長さに応じて数百の繊維に対応しうる最大０．５ｍ２の膜面積を有するもの（Ｍｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨ、ドイツ・ヴッパータール）を用いて、薄層複合層を、プロトコルＰＨＦ２１の以下の工程を伴う界面重合を通じて、外側繊維表面上に調製する：
１）上記の例で調製されるような４ｍＬのＡｑｐＺ小胞を得る。
２）１，３−ジアミノベンゼンをＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
３）ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを有機溶媒、例えばヘキサンまたはイソアルカン炭化水素溶媒に溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
４）工程１由来の４ｍＬの小胞調製物を工程２由来の６ｍＬの溶液に溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／ＡｑｐＺ小胞混合物を調製する。
５）工程４由来の溶液を、繊維の外側のモジュール内部に充填する（モジュールの側面入口）；流速５ｍＬ／分。
６）１分後に流れを停止し、そして繊維を１分間浸したままにする。
７）モジュールを空にし、そして空気をパージして、残ったＭＰＤ溶液を出す。
８）気流を用いて、繊維から表面の水を取り除く（気流速度２５Ｌ／分）。
９）工程３由来の溶液を、１５ｍＬ／分の流速を用いてモジュール内にポンピングする。
１０）モジュールに充填した後、ポンピングを３０秒間続ける。
１１）シリンジからモジュールを外し、そして逆さまにして残った溶液を出す；空気につなぎ、そして１０Ｌ／分で５〜１０秒間パージする。
１２）ガラスから吸い込むことによって、ＭｉｌｌｉＱをモジュールに充填する。
【００８５】
上記の方法（ＰＨＦ２１）を用いた４回の実行からの結果を示す表５
【００８６】
【表７】
0005946591.tif 000009
【００８７】
ＨＦ  ＵｌｔｒａＰＥＳ  ＴＦ１０  ５ｃｍ２活性膜面積中空繊維モジュールの外側コーティングは、高い再現性を生じた；表５の実験は、匹敵するＪｗおよびＪｓ値を有する２セット（およそ２ｘ８［Ｌ／ｍ２ｈ］および２ｘ６［Ｌ／ｍ２ｈ］）を示す。
【００８８】
実施例５．  ＭｉｃｒｏＰＥＳ  ＴＦ１０  ＨＦモジュール中の繊維上のＴＦＣ層生成のための内側コーティング
シリンジポンプを用い、モジュールを通じて溶液を吸い込む、１００ｃｍ２モジュールの内側コーティングのためのプロトコルＨＦ２４：
シリンジポンプを用いて、モジュールを通じて溶液をポンピングする。
１）少なくとも一晩、モジュールをあらかじめＭｉｌｌｉＱに浸す。
２）上記実施例で調製したように、１６ｍＬのＡｑｐＺ小胞を得る。
３）１，３−ジアミノベンゼンをＭｉｌｌｉＱ水に溶解して、４．２％（ｗ／ｗ）濃度の溶液を得る。
４）７５ｍｇのベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを５０ｍＬのヘキサンに溶解して、０．１５％（ｗ／ｖ）の最終濃度を得る。
５）工程１由来の１６ｍＬの小胞調製物を工程３由来の２４ｍＬの溶液に溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／ＡｑｐＺ小胞混合物を調製する。
６）工程５由来の溶液を、１０ｍＬ／分で、モジュールを通じて、泡が出てこなくなるだけの長さの時間、ポンピングし（連続して軽くたたいて泡を揺すって外に出す）；モジュールを垂直に維持する。
７）溶液を繊維中に１分間染み込ませる。
８）シリンジからモジュールを外し、そして過剰な溶液を収集ガラス内に流し出す。
９）モジュールを逆さまにつないで空気を入れ、そして２０Ｌ／分に到達するまで、ゆっくりと気流を開始する。
１０）制御された気流で３〜５分間乾燥させ、そして合間にモジュールを回転させる。
１１）工程４由来の溶液を、一定流（流速：１５ｍＬ／分）で４５秒間、繊維を通じて押し込む（ＴＭＣが繊維に進入してからの時間）。
１２）チューブを外すことによって、モジュールを空にする。
１３）繊維を通じて空気を５〜１０秒間吹き入れて、残った溶液を排出する。
１４）ＭｉｌｌｉＱを繊維およびモジュールに充填する。
【００８９】
上記の方法（ＰＨＦ２４）を用いた２回の実行からの結果を示す表６
【００９０】
【表８】
0005946591.tif 000010
【００９１】
上記の方法（ＰＨＦ２４）を用いた３回の実行からの結果を示す表７
【００９２】
【表９】
0005946591.tif 000011
【００９３】
ＨＦ  ＭｉｃｒｏＰＥＳ  ＴＦ１０  １００ｃｍ２活性膜面積中空繊維モジュールの内側コーティングは、高い再現性を生じた。ドロー溶液として２Ｍ  ＮａＣｌを用いた実験結果を示す表６および７、ならびに１Ｍ  ＮａＣｌドロー溶液での実験結果を示す表６を参照されたい（そこでは、水流束の減少が、逆塩流束のわずかな減少とは対照的に顕著である）。
【００９４】
実施例６．  中空繊維外側連続コーティング試験
この実験の目的は、自動化産生プロセスを通じて、中空繊維膜外側に連続コーティングする方法を確立することである。
【００９５】
材料
機械および繊維は、Ｍｅｍｂｒａｎａより提供され、そしてコーティング化学薬品およびＡｑｐＺ小胞は、先の実施例に用いたものと同じである。試験した異なる中空繊維膜は、ＭｉｃｒｏＰＥＳ（登録商標）ＴＦ１０およびＤｕｒａＰＥＳ（登録商標）０．７（Ｍｅｍｂｒａｎａ  ＧｍｂＨ、ドイツ・ヴッパータール）である。したがって、最終コーティングは、アクアポリンタンパク質を含有する固定された液体膜構成要素を保持する。
【００９６】
方法
図４は、中空繊維（細い線で示す）の自動化連続外側コーティングをスケッチの形で示す。図中：（１）は非コーティング中空繊維のコイルであり、好ましくは多孔性ポリエーテルスルホン（またはポリスルホン等）材料のものである。ここから、これらはアクアポリン液体膜／ＭＰＤ槽（２）内に輸送されて、ここでアクアポリン小胞が繊維内に染み込み、そして表面に付着するであろう。過剰なＭＰＤ／アクアポリン溶液を乾燥工程（３）中に取り除き、ここで空気ナイフを用いて、過剰な溶液の除去を増進することも可能である。ここから、繊維はＴＭＣ／イソアルカン炭化水素溶媒槽内を通過し、ここで界面重合が起こる（４）。したがって、アクアポリン小胞（液体膜のプロテオポリマーソーム）は、繊維上に形成されるＴＦＣ層のために被包される。乾燥工程（５）は、繊維を水槽に漬けて、残った化学薬品を取り除く（６）前に、すべての有機溶液が蒸発していることを確実にする。ここで、繊維を新しいコイルに巻き付ける。次いで、コーティングされた中空繊維を適切な長さに切断して、そしてＦＯ水抽出および分離目的に適したモジュール内に取り付ける。
【００９７】
実施例７．  ２つの低分子ペプチドの中空繊維モジュール保持および高濃縮
本実施例において、本発明者らは、上記実施例３にしたがって調製した５ｃｍ２活性領域を有するＨＦモジュールを用いた。
【００９８】
ペプチドＡ：  ＧＧＧ  ＳＧＡ  ＧＫＴ  ＭＷ  ０．６９２ｋＤａ
１００ｍＬのＴＥＳ緩衝液（フィード溶液）中のＧＧＧ  ＳＧＡ  ＧＫＴペプチド（ＭＷ  ０．６９２ｋＤａ）を、正浸透ＨＦモジュールを通じて、ドロー溶液として１Ｍ  ＮａＣｌを用い、望ましい高濃縮（およそ２０ｘ）まで濾過した。高濃縮試料の重量を測定して、最初の開始試料からの体積減少を決定した。高濃縮ペプチド試料の最終濃度を決定する際には、１０μｌの高濃縮試料を９０μｌの１０ｘＴＥＳ緩衝液と混合して、緩衝液の高濃縮因子を排除した。次いで、１００μｌの総試料を１００μｌのＬａｖａＰｅｐ定量化キットと混合し、室温で１時間インキュベーションして、そして次いでＱｕＢｉｔ蛍光計（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、蛍光カウントを読み取った。次いで、蛍光カウントを標準曲線に比較して、ペプチド試料の実際の濃度を決定した。同一の最初の高濃縮ペプチド試料から、３つの試料（ｎ＝３）を調製し、そしてＱｕｂｉｔ中で測定し、そして平均蛍光カウント値を用いて、標準曲線から濃度を決定した。試料体積を約２０倍濃縮し、そしてペプチドＡを約１８〜１９倍、高濃縮した。
【００９９】
ペプチドＢ：ＡＧＫＴ  ＭＷ  ０．３７５ｋＤａ（実験条件は、ペプチドＡに関して上述したものに緊密に対応する）
１００ｍＬのＴＥＳ緩衝液中のＡＧＫＴペプチド（ＭＷ  ０．３７５ｋＤａ）を、ＦＯ中空繊維モジュールを用いて、望ましい高濃縮（およそ２０倍）まで流動させた。高濃縮試料の質量を測定して、最初の開始試料からの体積減少を決定した。次いで、高濃縮試料をＴＥＳ緩衝液で４倍希釈して、さらなる試料プロセシング前に、５倍高濃縮ペプチド試料を生成した。これを行って、先のアッセイで観察されていたような、より小さいペプチドに関する蛍光シグナルが消光されることを回避する。高濃縮ペプチド試料の最終濃度を決定する際には、１０μｌの５ｘ高濃縮試料を９０μｌの１０ｘＴＥＳ緩衝液と混合して、緩衝液の高濃縮因子を排除した。次いで、１００μｌの総試料を１００μｌのＬａｖａＰｅｐ定量化キットと混合し、室温で１時間インキュベーションして、そして次いでＱｕＢｉｔ蛍光計（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、蛍光カウントを読み取った。次いで、蛍光カウントを標準曲線に比較して、ペプチド試料の実際の濃度を決定した。同一の最初の高濃縮ペプチド試料から、３つの試料（ｎ＝３）を調製し、そしてＱｕｂｉｔ中で測定し、そして平均蛍光カウント値を用いて、標準曲線から濃度を決定した。試料体積を約２１倍濃縮し、そしてペプチドＢを約２４倍、高濃縮した。
【０１００】
どちらの場合も、試料ペプチドＡおよびＢの高濃縮係数は、体積減少係数に対応し、したがって、内側に活性アクアポリンＴＦＣ層を有する中空繊維モジュールを用いて、少なくとも０．３７５ｋＤａのサイズまで小さい生体分子を高濃縮することも可能であるという結論が導かれる。
【０１０１】
材料および装置：
ペプチド：  ＣＡＳＬＯより購入したＧＧＧ  ＳＧＡ  ＧＫＴ
ＴＥＳ：  Ｎ−（Ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）メチル）−２−アミノエタンスルホン酸）、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｓ  ７３６５−４４−８
ＬａｖａＰｅｐペプチド定量化キット：  ｗｗｗ．ｌａｖａｐｅｐ．ｃｏｍより購入
パーツＡ（ＬＰ−０２２０１０）
パーツＢ（ＬＰ−０２２０１０）
Ｑｕｂｉｔ蛍光計、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
カタログ番号：Ｑ３２８５７
シリアル番号：４５２５７−２３３
測定設定：Ｑｕａｎｔ−ｉＴ  ｓｓＤＮＡ
ＴＥＳ緩衝液、１００ｍＬ
ｍ（ＴＥＳ）＝２２９．８ｍｇ
ｍ（ＥＤＴＡ）＝３７．２ｍｇ
１Ｍ  ＮａＯＨでｐＨを８に調整し、そしてｍＱ水を充填する。真空フィルターを通じて濾過する。
【０１０２】
１０ｘＴＥＳ緩衝液に関しては、ＴＥＳおよびＥＤＴＡ量を１０倍する。
【０１０３】
ＬａｖａＰｅｐ定量化キット：
パーツＡ、パーツＢおよびｍＱ水を、比（１：１：８）にしたがってともに混合する。
【０１０４】
Ｌａｖａｐｅｐ作業溶液を、比（１：１）にしたがって高濃縮ペプチド試料と混合する。
【０１０５】
８．クレアチニンの中空繊維モジュール保持
本実施例において、本発明者らは、とりわけ、上記実施例３にしたがって調製した５ｃｍ２活性面積を有するＨＦモジュールを用いる。目的は、血液および尿中に天然に存在するクレアチニン（ＭＷ  １１３．１２ｇ  ｍｏｌ−１）の保持率を決定することである。腎臓における濾過が不全であれば、クレアチニン血液レベルは上昇する。血液および尿中のクレアチニンレベルは、一般的に、クレアチニン・クリアランス（ＣｒＣｌ）を計算するために用いられ、クレアチニン・クリアランスは、腎機能の測定値として臨床的に重要な、糸球体濾過率（ＧＦＲ）と相関する。
【０１０６】
クレアチニンアッセイ
試料中のクレアチニンを、ａｂｃａｍ（ａｂ６５３４０）のクレアチニンアッセイキットで検出する。アッセイにおいて、クレアチニンをクレアチナーゼによってクレアチンに変換し、クレアチンをザルコシンに変換し、これがプローブと反応して、赤色（ラムダ最大値＝５７０ｎｍ）および蛍光（Ｅｘ／Ｅｍ＝５３８／５８７ｎｍ）を生成する。
【０１０７】
改変なしにキットの指示にしたがう。クレアチニナーゼ、クレアチナーゼおよびクレアチン酵素混合物を各２２０μｌのアッセイ緩衝液で再構成し、そして使用前にアリコットして凍結融解サイクルを回避する。クレアチニン標準を１００μｌの脱イオンＨ２Ｏで再構成して、１００ｍＭクレアチニン標準を生成する。比色アッセイのため、クレアチニン標準をアッセイ緩衝液中で１００倍希釈して、１ｎｍｏｌ／μｌの作業ストック溶液を生じる。０、２、４、６、８および１０μｌの作業溶液をアッセイ緩衝液と混合して、最終体積５０μｌにする、希釈シリーズを調製する。
【０１０８】
各試料に関して、以下の体積で反応混合物を調製する。
【０１０９】
アッセイ緩衝液：４２μｌ
クレアチナーゼ２μｌ
クレアチニナーゼ：２μｌ
酵素混合物：２μｌ
プローブ：２μｌ
バックグラウンド反応混合物は、クレアチニナーゼ以外は同じ試薬を含有する。アッセイ緩衝液の量はその代わり、４４μｌである。標準試料（５０μｌ）を反応混合物（５０μｌ）と混合し、３７℃で１時間インキュベーションする。Ｏ．Ｄ．をマイクロキュベット中、５７０ｎｍで測定し、そしてすべての試料からバックグラウンドを減じる。次いで、濃度に対してＯ．Ｄ．をプロットして、標準曲線を生成する。
【０１１０】
中空繊維中のクレアチニン試料に関して、同じ方法を行い、ここで、高濃縮試料をアッセイ緩衝液中で１００倍希釈し、そして生じた試料の５０μｌを５０μｌの反応混合物と混合する。測定Ｏ．Ｄ．値を測定し、そして試料の濃縮を標準曲線から決定する。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾された繊維を有する中空繊維（ＨＦ）モジュール。
［態様２］前記アクアポリン水チャネルが、ＴＦＣ層内への取り込みの前に、小胞中に取り込まれている、態様１に記載のＨＦモジュール。
［態様３］アクアポリン水チャネルが取り込まれる前記小胞が、リポソームまたはポリマーソームである、態様１または２に記載のＨＦモジュール。
［態様４］前記リポソームが、ＤＰｈＰＣ、ＤＯＰＣ、混合ダイズ（ｓｏｙ  ｂｅａｎ）脂質、アソレクチン（ａｓｏｌｅｃｔｉｎ）または大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）混合脂質より調製される、態様１〜３のいずれか一に記載のＨＦモジュール。
［態様５］前記ポリマーソームが、親水性−疎水性−親水性（Ａ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ）型のトリブロックコポリマー、親水性−疎水性型（Ａ−Ｂ）のジブロックコポリマー、またはそれらの組み合わせを含む、態様１〜３のいずれか一に記載のＨＦモジュール。
［態様６］前記アクアポリン水チャネルがＡｑｐＺチャネルまたはＳｏＰＩＰ２；１水チャネルである、態様１〜５のいずれか一に記載のＨＦモジュール。
［態様７］前記ＴＦＣ層が、有機溶媒中のハロゲン化ジアシルまたはトリアシル溶液とジアミンまたはトリアミンの水溶液との界面重合を通じて形成され、そしてアクアポリン水チャネル小胞が前記水溶液中に取り込まれる、態様１〜６のいずれか一に記載のＨＦモジュール。
［態様８］中空繊維支持材料がポリエーテルスルホンである、態様１〜７のいずれか一に記載のＨＦモジュール。
［態様９］繊維面積が約０．１ｃｍ２〜約０．５ｍ２である、態様１〜８のいずれか一に記載のＨＦモジュール。
［態様１０］アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾されている中空繊維膜。
［態様１１］前記アクアポリン水チャネルが、ＴＦＣ層内への取り込みの前に、小胞中に取り込まれている、態様１０に記載の中空繊維膜。
［態様１２］アクアポリン水チャネルが取り込まれる前記小胞が、リポソームまたはポリマーソームである、態様１０または１１に記載のＨＦ膜。
［態様１３］前記リポソームが、ＤＰｈＰＣ、ＤＯＰＣ、混合ダイズ脂質、アソレクチン（ａｃｏｌｅｃｔｉｎ）または大腸菌混合脂質より調製される、態様１０〜１２のいずれか一に記載のＨＦ膜。
［態様１４］前記ポリマーソームが、親水性−疎水性−親水性（Ａ−Ｂ−ＡまたはＡ−Ｂ−Ｃ）型のトリブロックコポリマー、親水性−疎水性型（Ａ−Ｂ）のジブロックコポリマー、またはそれらの組み合わせを含む、態様１０〜１２のいずれか一に記載のＨＦ膜。
［態様１５］前記アクアポリン水チャネルがＡｑｐＺチャネルまたはＳｏＰＩＰ２；１水チャネルである、態様１０〜１４のいずれか一に記載のＨＦ膜。
［態様１６］前記ＴＦＣ層が、有機溶媒中のハロゲン化ジアシルまたはトリアシル溶液とジアミンまたはトリアミンの水溶液との界面重合を通じて形成され、そしてアクアポリン水チャネル小胞が前記水溶液中に取り込まれる、態様１０〜１５のいずれか一に記載のＨＦ膜。
［態様１７］アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾されたＨＦ膜を含む中空繊維モジュールを調製する方法であって：
ａ）タンパク質の約２５〜約５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲを有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミンまたはトリアミンの水溶液を調製し、
ｃ）ハロゲン化ジアシルまたはトリアシルを無極性有機溶媒に溶解し、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、アミンおよびアクアポリン小胞の混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のハロゲン化アシル溶液を、中空繊維の管腔を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、前記方法。
［態様１８］ａ）タンパク質の約２５〜約５００ＬＰＲ／ＰＯＰＲを有するアクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）約１％〜約５％（ｗ／ｗ）の濃度の１，３−ジアミノベンゼン水溶液を調製し、
ｃ）ヘキサン、ヘプタン、オクタンまたは溶媒混合物からなる群より選択される有機溶媒に、ベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリドを溶解して、約０．０５％〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度を得て、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、１，３−ジアミノベンゼン／アクアポリン小胞混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物を、末端入口を用いて、中空繊維モジュール中の中空繊維の管腔を通じてポンピングし、
ｆ）モジュール入口を用いて、繊維の管腔側をガスパージすることによって、過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のベンゼン−１，３，５−トリカルボニルクロリド溶液を、中空繊維の管腔を通じてモジュール内に注入して、界面重合反応が起こることを可能にし、そして  ｈ）モジュール入口を通じた注入によって、水溶液でモジュールをリンスする
工程を含む、態様１７に記載の方法。
［態様１９］前記中空繊維モジュールがポリエーテルスルホン繊維を含む、態様１７または１８に記載の方法。
［態様２０］工程ｆ）において、繊維を乾燥するまでガスパージし、そして工程ｆ）において、モジュールが逆さまに保持される、態様１７または１８に記載の方法。
［態様２１］中空繊維膜の外側を、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層でコーティングする方法であって：
ａ）アクアポリン小胞懸濁物（プロテオリポソームまたはプロテオポリマーソーム）を得て、
ｂ）ジアミンまたはトリアミンの水溶液を調製し、
ｃ）ハロゲン化ジアシルまたはトリアシルを無極性有機溶媒に溶解し、
ｄ）工程ａ）由来の小胞調製物を工程ｂ）由来の溶液で溶解する／該溶液と混合することによって、アミンおよびアクアポリン小胞の混合物を調製し、
ｅ）工程ｄ）由来の混合物に、中空繊維膜を通過させ、
ｆ）過剰な水溶液を取り除き、
ｇ）工程ｃ）由来のハロゲン化アシル溶液に、中空繊維膜を通過させて、界面重合反応が起こることを可能にし、そして
ｈ）例えば中空繊維を水槽に通過させることによって、水性媒体で中空繊維膜をリンスする
工程を含む、前記方法。
［態様２２］正浸透を通じた純水の抽出のための、態様１〜９のいずれか一に記載の中空繊維（ＨＦ）モジュールの使用。
［態様２３］血液透析を通じて失われた患者血漿由来の純水の再抽出のための、態様１〜９のいずれか一に記載の中空繊維（ＨＦ）モジュールの使用。
［態様２４］水性液体から水を抽出する方法であって：
ａ）液体膜マトリックスのものより低いかまたはそれと等しい浸透圧を有する第一の水性液体（フィード溶液）と制御された接続にあり、そしてさらに、マトリックスのものより高い浸透圧を有する第二の水性液体（ドロー溶液）と制御された接続にある、態様１〜９のいずれか一に記載の中空繊維（ＨＦ）モジュールを配置して、前記の第一および前記の第二の液体の間で、浸透圧ポテンシャルを生成し
ｂ）浸透圧勾配が存在する限り、マトリックスが、前記の第一の液体から純水を吸収し、そして前記の第二の液体内への純水流束（ｐｕｒｅ  ｗａｔｅｒ  ｆｌｕｘ）を仲介することを可能にし、
ｃ）場合によって、前記の第二の液体から、抽出された純水を分離する
工程を含む、前記方法。
［態様２５］前記の第一の水性液体が、任意のタイプの天然水源、例えば海水、河川水、湖水、汽水、雨水、アクアポリン水チャネルに対して毒性でない廃水、ワイン、果物および野菜ジュース、ミルク、全血、血漿、尿、唾液、汗、ホモジナイズされた組織等を含む生物学的液体からなる群より選択される、態様２４に記載の方法。
［態様２６］１またはそれより多い低分子量化合物を含有する水性液体を精製する方法であって、１またはそれより多い低分子量化合物を含有する水性液体を含むフィード溶液を、態様１〜９のいずれか一に記載の中空繊維（ＨＦ）モジュール内に通過させて、アクアポリン水チャネルを含む薄層複合（ＴＦＣ）層で修飾された繊維を通じて、水分子が通過可能であり、それによって低分子量汚染物質から水分子を分離するようにする工程を含む、前記方法。
［態様２７］低分子量化合物が、尿素、硫酸インドキシル、ｐ−クレゾールおよび／またはｐ−クレシルの１またはそれより多くを含む、態様２６に記載の方法。
【０１１１】
参考文献
本明細書で言及するすべての文書は、その全体が本明細書に援用される。
【０１１２】
【化２−１】
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【０１１３】
【化２−２】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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