(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストおよび医薬的に許容される担体を含む製剤を含む、患者における癌を治療するための組み合わせ治療における使用のための医薬組成物であって、前記組み合わせ治療が、ドキソルビシンを投与することを含むものであり、前記ＴＬＲ８アゴニストが、２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−（４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル）−３Ｈ−ベンゾ［ｂ］アゼピン−４−カルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項２】
前記癌が、卵巣癌、乳癌、頭頸部癌、腎臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、リンパ腫およびこれらの組み合わせからなる群から選択される固形癌である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記癌が、卵巣癌である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤およびドキソルビシンが、同時に、または連続して投与されるものである、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤およびドキソルビシンが、連続して投与されるものである、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤およびドキソルビシンが、別々に５日間隔で投与されるものである、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記癌が、卵巣癌であり、ドキソルビシンが、ペグ化リポソーム形態である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ドキソルビシンが、静脈内に投与されるものである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記患者が、哺乳類である、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路または経皮経路によって注入されるものである、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、皮下に投与されるものである、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、患者の体重の約０．０２〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０４〜約５ｍｇ／ｋｇの前記ＴＬＲ８アゴニストの濃度を供するように投与されるものである、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、患者の体重の約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０７５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇまたは約５ｍｇ／ｋｇの前記ＴＬＲ８アゴニストの濃度を供するように投与されるものである、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、患者の体表面積の約２．５〜３．５ｍｇ／ｍ２の前記ＴＬＲ８アゴニストの濃度を供するように投与されるものである、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、１週間に１回または２週間に１回の頻度で患者に投与されるものである、請求項１〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ドキソルビシンが、患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるものである、請求項３〜１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、約１重量／体積％〜約３０重量／体積％、約５重量／体積％〜１５重量／体積％または約５重量／体積％〜約１０重量／体積％のシクロデキストリンをさらに含むものである、請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、約１重量／体積％、約５重量／体積％、約１０重量／体積％、約１５重量／体積％、約２０重量／体積％、約２５重量／体積％または約３０重量／体積％のシクロデキストリンをさらに含むものである、請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、約１５ｗ／ｖ％のシクロデキストリンをさらに含むものである、請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記シクロデキストリンが、ベータ−シクロデキストリンである、請求項１７〜１９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記シクロデキストリンが、スルホブチルエーテル ベータ−シクロデキストリンである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
ドキソルビシンが、ペグ化されたリポソーム形態である、請求項１〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、ＴＬＲ８アゴニストを約０．０１〜５０ｍｇ／ｍｌ含有するものである、請求項１〜２２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、前記ＴＬＲ８アゴニストを約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌまたは約２ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ含有するものである、請求項１〜２２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、ＴＬＲ８アゴニストを約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌまたは約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ含有するものである、請求項１〜２２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、ＴＬＲ８アゴニストを約０．０１ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌ含有するものである、請求項１〜２２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２７】
ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストの製剤を液体または凍結乾燥された形態で充填した１つまたはそれ以上の第１の容器、およびドキソルビシンを充填した１つまたはそれ以上の第２の容器を含む医薬パックまたはキットであって、前記ＴＬＲ８アゴニストが、２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−（４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル）−３Ｈ−ベンゾ［ｂ］アゼピン−４−カルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である、医薬パックまたはキット。
【請求項２８】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、水溶液製剤である、請求項２７に記載の医薬パックまたはキット。
【請求項２９】
前記ＴＬＲ８アゴニスト製剤が、ＴＬＲ８アゴニストを約０．０１〜５０ｍｇ／ｍｌ含有するものである、請求項２７または２８に記載の医薬パックまたはキット。
【請求項３０】
ドキソルビシンが、医薬的に許容される塩形態である、請求項２７〜２９のいずれかに記載の医薬パックまたはキット。
【請求項３１】
ドキソルビシンが、ペグ化されたリポソーム形態である、請求項２７〜３０のいずれかに記載の医薬パックまたはキット。
【請求項３２】
前記癌が、卵巣癌であり、ドキソルビシンが、ペグ化されたリポソーム形態である、請求項１〜２６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記癌が、頭頸部癌であり、ドキソルビシンが、ペグ化されたリポソーム形態である、請求項１、２、４〜６、および９〜２６のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、出典明示によりそれらの全体が本明細書に取り込まれる、２０１０年１０月１日に提出した米国仮出願第６１／３８８，９５３号、２０１０年１０月１日に提出した米国仮出願第６１／３８８，９６７号、および２０１０年１０月６日に提出した米国仮出願第６１／３９０，４４７号の優先権および利益を請求するものである。
【０００２】
本発明の技術分野
本発明は、癌の治療における使用のためのＴＬＲアゴニスト（好ましくは、ＴＬＲ８アゴニスト）の製剤、およびＴＬＲ８アゴニストおよび抗癌剤を投与することを特徴とする組み合わせ治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明の背景技術
免疫系の活性化は、自然免疫および獲得免疫のいずれか、または両方の活性化を含み、宿主に対して保護または有害な生理的な結果を生じうる複雑な現象である。近年、獲得免疫を開始し、サポートすると考えられている自然免疫の根底にあるメカニズムに興味が注がれている。この興味は、一部に、病原体由来の構成分子のパターン（ＰＡＭＰ）に対する受容体として獲得免疫に関連すると考えられているＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）として知られる高度に保存されたパターン認識受容体タンパク質のファミリーの最近の知見によって助長されている。よって、獲得免疫を調節するのに有用である組成物および方法は、癌、感染症、自己免疫、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶、移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）および免疫不全に関する疾患に対する治療上のアプローチに影響しうるため、非常に興味深い。
【０００４】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、インビボでの活性が、特定のサイトカイン、ケモカインおよび成長因子に関する先天性免疫反応を開始するものである、Ｉ型膜貫通型タンパク質の１つのファミリーである。全てのＴＬＲが特定の細胞内シグナル伝達分子（例えば、核因子カッパベータ（ＮＦ−κＢ）および分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰキナーゼ））を活性化できる一方で、放出されるサイトカインおよびケモカインの特定のセットは、各ＴＬＲに独特であるようである。ＴＬＲ７、８および９には、樹状細胞および単球などの免疫細胞のエンドソームまたはリソソーム構成物中に局在するＴＬＲのサブファミリーが含まれる。形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）上で多く発現しているＴＬＲ７および９とは対照的に、ＴＬＲ８は、骨髄性ＤＣ（ｍＤＣ）および単球上で主に発現する。このサブファミリーは、一本鎖ＲＮＡなどの微生物核酸の認識を介在している。ＴＬＲ８のアゴニストは、様々な炎症性サイトカイン（インターロイキン−６、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−アルファおよびインターフェロンガンマを含む）の産生を活性化する。このようなアゴニストはまた、共刺激分子、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＣＤ８６、主要組織適合複合分子およびケモカイン受容体などの発現の増加を促進する。Ｉ型インターフェロン、ＩＦＮαおよびＩＦＮβはまた、ＴＬＲ８アゴニストによる活性化によって細胞から産生される。
【０００５】
小さな低分子量（４００ダルトン以下）の合成イミダゾキノリン化合物は、プリンヌクレオチドであるアデノシンおよびグアノシンに類似しており、最初にＴＬＲ７およびＴＬＲ８アゴニストとして同定されている。これらの化合物の多くは、抗ウイルスおよび抗癌特性を示した。例えば、ＴＬＲ７アゴニストであるイミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（登録商標））は、ヒトパピローマウイルスの特定株によって引き起こされる皮膚病変の治療のための局所薬として米国食品医薬品局に認可された。イミキモドはまた、原発性皮膚癌および皮膚腫瘍、例えば、基底細胞癌、角化棘細胞腫、光線角化症およびボーエン病の治療に有用でありうる。ＴＬＲ７／８アゴニストのレシキモド（Ｒ−８４８）は、ヒト陰部ヘルペスの治療のための局所薬として評価されている。
【０００６】
ドキソルビシンは、癌化学療法で用いられる薬である。これは、天然物のダウノマイシンに密接に関連するアントラサイクリン抗生物質であり、全てのアントラサイクリンと同様に、ＤＮＡに挿入されることによって機能する。ドキソルビシンは、一般に、広範囲の癌（血液悪性腫瘍、多くのタイプの癌および柔組織肉腫を含む）の治療で用いられる。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、一般に、例えば、癌、好ましくは、固形腫瘍（例えば、肉腫、癌およびリンパ腫）の治療、軽減または予防における使用のための、ならびに白血病の治療、特定の皮膚病または疾患（例えば、アトピー性皮膚炎）の治療、感染症（好ましくは、ウイルス性疾患）の治療を含む他の使用のための、ならびに癌治療および感染症治療における使用のために製剤化されるワクチンにおけるアジュバントとしての使用のための、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストの投与および１つまたはそれ以上のさらなる治療法（抗癌剤（例えば、ドキソルビシン））を含む組み合わせ治療に関する。具体的に、本発明は、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニスト、ＶＴＸ−２３３７およびドキソルビシンを含む方法および組成物に関する。好ましい実施態様において、ＶＴＸ−２３３７およびドキソルビシンは、癌の治療に用いられ、前記癌は、卵巣癌、乳癌、頭頸部癌、腎臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、メラノーマおよびリンパ腫またはこれらの組み合わせからなる群から選択されるものである。
【０００８】
好ましくは、ＶＴＸ−２３３７は、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌまたは約２ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約６ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌまたは約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。好ましくは、前記製剤には、約１〜３０重量／体積（ｗ／ｖ）％、５〜１５重量／体積（ｗ／ｖ）％または５〜１０重量／体積（ｗ／ｖ）％のシクロデキストリン、好ましくは、β−シクロデキストリン、最も好ましくは、スルホブチルエーテル β−シクロデキストリンが含まれる。ある実施態様において、前記製剤には、１ｗ／ｖ％、５ｗ／ｖ％、１０ｗ／ｖ％、１５ｗ／ｖ％、２０ｗ／ｖ％、２５ｗ／ｖ％または３０ｗ／ｖ％のシクロデキストリン、好ましくは、β−シクロデキストリン、最も好ましくは、スルホブチルエーテル β−シクロデキストリンが含まれる。ある実施態様において、前記製剤は、ＶＴＸ−２３３７を少なくとも２ｍｇ／ｍｌの濃度で含む水性溶剤である。さらなる実施態様において、前記製剤には、１５ｗ／ｖ％のシクロデキストリン、好ましくは、β−シクロデキストリン、最も好ましくは、スルホブチルエーテル β−シクロデキストリンが含まれる。好ましい実施態様において、前記製剤は、哺乳類（好ましくは、ヒト）における注射に適する。ある実施態様において、注射は、皮下経路、筋肉内経路または経皮経路によるものである。ある実施態様において、前記製剤は、静脈内投与に適する。
【０００９】
好ましくは、再構成された製剤は、哺乳類（好ましくは、ヒト）における注射に適する。ある実施態様において、注射は、皮下経路、筋肉内経路または経皮経路によるものである。ある実施態様において、前記製剤は、静脈内投与に適する。
【００１０】
本発明は、患者（好ましくは、ヒト患者）に、ドキソルビシンおよびＴＬＲ８アゴニストであるＶＴＸ−２３３７（シクロデキストリンを含有）を投与することによる癌の治療方法をさらに提供する。好ましい態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上の治療法と組み合わせて投与されるものであって、前記方法は、化学療法剤、サイトカイン、抗体、ホルモン療法または放射線治療から選択される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、固形腫瘍の治療計画の一部として投与される。さらなる実施態様において、前記固形腫瘍は、卵巣癌、乳癌、頭頸部癌、腎臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌またはリンパ腫、あるいはこれらの組み合わせから選択される癌の形態である。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、リンパ腫の治療計画の一部として投与される。ある実施態様において、前記リンパ腫は、ホジキンリンパ腫である。別の態様において、前記リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。別の態様において、ＶＴＸ−２３３７は、癌の治療のためのワクチンアジュバントとして用いられる。
【００１１】
癌の治療方法のある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、注射または静脈内によって投与される。ある実施態様において、注射は、皮下経路、筋肉内経路または経皮経路によるものである。ある実施態様において、前記製剤は、皮下注射によって投与される。癌の治療方法のある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．０５〜０．０７５ｍｇ／ｋｇまたは約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇ）の用量で患者に投与される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇまたは約５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。例えば、患者が約７０ｋｇの体重である場合、ＶＴＸ−２３３７は、約１．４ｍｇ〜７００ｍｇ（例えば、３．５ｍｇ〜５．２５ｍｇまたは約２．８〜３５０ｍｇ）の用量で投与される。あるさらなる実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１週間に１回または２週間に１回の頻度で投与される。
【００１２】
本発明はまた、癌またはその１つまたはそれ以上の症状の治療のための本発明の液体または凍結乾燥させたＶＴＸ−２３３７および抗癌剤（例えば、ドキソルビシン）を充填した１つまたはそれ以上の容器を含む、医薬パックまたはキットを提供する。前記液体または凍結乾燥させたＶＴＸ−２３３７および抗癌剤（例えば、ドキソルビシン）は、キットの同一または異なる容器に詰めることができる。好ましくは、ＶＴＸ−２３３７の製剤には、約１〜３０ｗ／ｖ％、５〜１５ｗ／ｖ％または５〜１０ｗ／ｖ％のシクロデキストリン、好ましくは、β−シクロデキストリン、最も好ましくは、スルホブチルエーテル β−シクロデキストリンが含まれる。ある実施態様において、製剤ＶＴＸ−２３３７には、２ｗ／ｖ％、５ｗ／ｖ％、１０ｗ／ｖ％、１５ｗ／ｖ％、２０ｗ／ｖ％、２５ｗ／ｖ％または３０ｗ／ｖ％のシクロデキストリン、好ましくは、β−シクロデキストリン、最も好ましくは、スルホブチルエーテル β−シクロデキストリンが含まれる。ある実施態様において、前記製剤は、ＶＴＸ−２３３７の水性製剤である。好ましくは、ＶＴＸ−２３３７は、少なくとも２ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化され、前記製剤は、水性か再構成される凍結乾燥製剤のいずれかであり、哺乳類（好ましくは、ヒト）における皮下注射に適する。
【００１３】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、少なくとも２ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。さらに、前記製剤は、注射であって、皮下、筋肉内または経皮注射による患者への投与に適するものであり、前記患者は、好ましくはヒトである。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇの用量、約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの用量または約０．０５〜０．０７５ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。あるさらなる実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１週間に１回または２週間に１回の頻度で投与される。
【００１４】
好ましい態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上のさらなる治療法と組み合わせて投与され、前記治療法は、化学療法剤、サイトカイン、抗体、ホルモン療法または放射線治療から選択されるものである。本発明はまた、ウイルスによって引き起こされる感染症の治療方法を提供するものであり、前記ウイルスは肝炎ウイルスである。
【００１５】
好ましい態様において、ドキソルビシンは、注射（最も好ましくは、静脈内投与）用に製剤化される。ある実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、皮内、経皮、皮下または筋肉内経路による投与用に製剤化される。
【００１６】
癌の治療方法のある実施態様において、ドキソルビシンは、患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。
【００１７】
本発明はまた、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストの低用量製剤による癌の治療方法を提供する。前記方法は、それを必要とする患者に、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストを０．００７ｍｇ／ｋｇ／週以下、例えば、０．００２ｍｇ／ｋｇ／週〜０．００６ｍｇ／ｋｇ／週の用量で投与することを特徴とする。ある実施態様において、前記ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストは、２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−（４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル）−３Ｈ−ベンゾ［ｂ］アゼピン−４−カルボキサミドである。前記方法は、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストのみを活性成分として投与することを特徴としてもよく、あるいは第２の治療剤（例えば、抗癌剤）をベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストの低用量製剤と組み合わせて投与することをさらに特徴としていてもよい。第２の治療剤は、別のベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストまたは本明細書に記載の薬分子（例えば、ドキソルビシン、ゲムシタビンまたはシクロホスファミド）でありうる。前記方法はまた、癌の治療計画において、１つまたはそれ以上のさらなる治療法（例えば、放射線治療）と組み合わせて実施されうる。
【００１８】
別の態様において、本発明はまた、患者における癌の治療のためのベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストを含む皮下製剤を提供するものであって、前記皮下製剤は、２〜４ｍｇ／ｍ２のアゴニストの用量でヒトに投与することによって、約５５〜約９０ｈ＊ｎｇ／ｍＬ、例えば、約６０〜約８０ｈ＊ｎｇ／ｍＬのアゴニストのＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【００１９】
さらに別の態様において、本発明はまた、患者における癌の治療のためのベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニストを含む皮下製剤を提供するものであって、前記皮下製剤は、２〜４ｍｇ／ｍ２のアゴニストの用量でヒトに投与することによって、約１０〜約３０ｎｇ／ｍＬ、例えば、約１５〜約２５ｎｇ／ｍＬのアゴニストのＣｍａｘを提供する。
【００２０】
本発明はまた、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニスト（例えば、ＶＴＸ−２３３７）および抗癌剤（例えば、ドキソルビシン）の液体または凍結乾燥製剤を含む医薬組成物を提供する。前記アゴニストおよび抗癌剤の製剤は、同一の医薬組成物中であってもよく、あるいは異なる組成物中であってもよく、異なる組成物中の場合、前記アゴニストおよび抗癌剤の製剤は、同時に、または連続して投与することができる。
【００２１】
上記記載は、以下の詳細な説明が理解され、当該技術分野への貢献がより理解されうるために、本発明のより重要な特徴を広く説明するものである。本発明の他の目的および特徴は、実施例と合わせて考慮すると下記の詳細な説明から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１Ａ】図１Ａは、ＮＳＧ−ＨＩＳマウスに由来する血液リンパ系細胞について取得したＦＡＣＳ図の一組である。ＮＳＧマウスに、臍帯血で生じるヒト造血性ＣＤ３４＋幹細胞を受容させた。ヒト細胞生着のレベル（ＣＤ４５＋、ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋、ＣＤ４５＋ＣＤ３３）を示す。マウスは、０．５または５ｍｇ／ｋｇのＶＴＸ−２３３７で処理した。ＣＤ１４＋細胞（ＣＤ８３、ＣＤ８６）の成熟を示す。
【００２３】
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＶＴＸ−２３３７のＮＳＧ−ＨＩＳマウスへのＳＣ投与６時間後の単球（ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋）、ｍＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋）およびｐＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１２３＋）における活性化マーカー（ＣＤ８６＋、ＭＨＣクラスＩＩ）レベルの変化を示す棒グラフの一組である。
【００２４】
【図１Ｃ】図１Ｃは、ＶＴＸ−２３３７のＮＳＧ−ＨＩＳへのＳＣ投与６時間後の血漿サイトカインレベル（ＩＮＦ−ｇ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１２およびＩＬ−１０）の変化を示す棒グラフの一組である。
【００２５】
【図２】図２は、治療なし（ＣＴＲＬ）、最大耐容用量のドキシル（ＭＴＤ，５０ｍｇ／ｍ２）またはドキシルによる治療５日後に５ｍｇ／ｋｇのＶＴＸ−２３３７を受容したマウスにおける血漿サイトカインレベル（ＩＦＮ−ｇ、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−アルファ）の変化を示す棒グラフの一組である。
【００２６】
【図３Ａ】図３Ａは、ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ５を用いて腫瘍を発生させたヒト化マウス（ＮＳＧ−ＨＩＳ）の卵巣癌モデルにおいてドキシル、ＶＴＸ−２３３７またはそれらの組み合わせでＮＳＧ−ＨＩＳマウスを治療するためのプロトコールを示す模式図である。
【００２７】
【図３Ｂ】図３Ｂは、ＯＶＣＡＲ５細胞の接種後にドキシルを５０ｍｇ／ｍ２で、ＶＴＸ−２３３７を０．５ｍｇ／ｋｇで、またはそれらの組み合わせで処理したＮＳＧ−ＨＩＳマウスの腫瘍サイズの時間に対する変化を示す線グラフである。
【００２８】
【図３Ｃ】図３Ｃは、ヒト化卵巣癌モデルにおいてドキシルを５０ｍｇ／ｍ２で、ＶＴＸ−２３３７を０．５ｍｇ／ｋｇで、またはそれらの組み合わせで処理したマウスに由来するＣＤ４５＋細胞に浸潤した腫瘍を示すＩＨＣ図の一組である。
【００２９】
【図３Ｄ】図３Ｄは、ヒト化卵巣癌モデルにおいてドキシルを５０ｍｇ／ｍ２で、ＶＴＸ−２３３７を０．５ｍｇ／ｋｇで、またはそれらの組み合わせで処理したマウスにおける、腫瘍が浸潤したＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６９＋活性化ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４０＋活性化マクロファージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋）、ｐＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１２３＋）およびｍＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋）のレベルの変化を示す棒グラフの一組である。
【００３０】
【図４Ａ】図４Ａは、標的ＯＶＣＡＲ５細胞に対する様々な比率のエフェクターＴＩＬに応答して、ドキシルまたはＶＴＸ−２３３７およびドキシルの組み合わせで処理したマウスから増殖させたＴＩＬで溶解させた溶解性５１Ｃｒ標識ＯＶＣＡＲ５細胞のカウント毎分（ｃｐｍ）の変化を示す線グラフである。
【００３１】
【図４Ｂ】図４Ｂは、図３に記載の実験において、ＯＶＣＡＲ５細胞を接種し、マウスに由来する適合移植したＴＩＬＳで処理したＮＳＧ−ＨＩＳマウスの腫瘍サイズの時間に対する変化を示す線グラフである。
【００３２】
【図４Ｃ】図４Ｃは、抗ＭＨＣクラスＩ（ＭＨＣＩ）中和抗体の非存在または存在中において、ドキシルまたはＶＴＸ−２３３７およびドキシルの組み合わせで処理したマウスに由来するＴＩＬによって溶解した溶解性５１Ｃｒ標識ＯＶＣＡＲ５細胞の数の変化を示す線グラフの一組である。
【００３３】
【図４Ｄ】図４Ｄは、ＯＶＣＡＲ５細胞またはメラノーマ細胞とインキュベートしたＴＩＬによって遊離されたＩＦＮｇレベルの変化を示す棒グラフの一組である。
【００３４】
【図５Ａ】図５Ａは、緩衝液のみ、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズまたは１μｇ／ｍＬのＶＴＸ−２３３７でインキュベートしたヒトＰＢＭＣに由来する条件培地で処理したＯＶＣＡＲ５細胞において、アネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤによって染色したアポトーシス細胞の割合の変化を示す棒グラフである。
【００３５】
【図５Ｂ】図５Ｂは、緩衝液のみ、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズまたは１μｇ／ｍＬ  ＶＴＸ−２３３７でインキュベートしたヒトＰＢＭＣに由来する条件培地で処理したＯＶＣＡＲ５細胞における生存細胞数の変化を示す棒グラフである。
【００３６】
【図５Ｃ】図５Ｃは、ＯＶＣＡＲ５細胞におけるＴＮＦアルファ−受容体１の発現を示すウェスタンブロット写真を示す図である。
【００３７】
【図５Ｄ】図５Ｄは、ＴＮＦアルファ（１０ｎｇ／ｍｌ）またはドキシル（１μｇ／ｍｌ）あるいはそれらの組み合わせで処理したＯＶＣＡＲ５細胞のＦＡＣＳ図およびアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤによって染色したアポトーシス細胞の割合の生じた変化を示すグラフの一組である。
【００３８】
【図５Ｅ】図５Ｅは、０．５または２．５μｇ／ｍＬのドキシルで処理したＯＶＣＡＲ５細胞におけるＦＬＩＰＬ発現のウェスタンブロット写真を示す図である。
【００３９】
【図５Ｆ】図５Ｆは、１０μｇ／ｍｌ  シクロヘキシミド（ｃｙｃｌｘ）で２４時間前もって培養し、続いて１０または５０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦアルファで処理したＯＶＣＡＲ５細胞のＦＡＣＳ図、ならびにアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤによって染色したアポトーシス細胞の割合の生じた変化を示すグラフの一組を示す。
【００４０】
【図６】図６は、１５人の健全なドナーに由来する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＴＬＲ８またはＴＬＲ７およびＮＦ−κＢで駆動するレポーター遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞におけるＶＴＸ−２３３７の効力および選択性を示すグラフの一組である。
【００４１】
【図７】図７は、ＶＴＸ−２３３７が、ヒト全血中の様々なサイトカインおよびケモカインを活性化することを示すグラフの一組である。
【００４２】
【図８】図８は、ＶＴＸ−２３３７が、単球および骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）を活性化するが、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化しないことを示すグラフの一組である。
【００４３】
【図９】図９は、皮下投与後のＶＴＸ−２３３７の薬物動態を示すグラフである。この図中の数値表記「１〜８」は、それぞれ、コホート１〜８に相当する。
【００４４】
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂは、複数の治療周期について一貫した薬力学反応を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
発明の詳細な説明
本発明の１つまたはそれ以上の実施態様の詳細は、下記に記載の明細書で説明される。本明細書に記載の方法および材料と同様または同等のものが本発明の実施または試験で用いることができるが、好ましい方法および材料が記載される。本発明の他の特徴、目的および有利な点は、これらの記載から明らかである。本明細書において、単数形には、特に示されていない限り、複数形も含まれるものである。他で定義されていない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する。矛盾する場合、本明細書が優先される。
【００４６】
本発明は、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニスト（例えば、ＶＴＸ−２３３７）および別の治療法（例えば、抗癌剤、例えば、ドキソルビシン）を使用して、本明細書に記載の癌または他の障害を治療し、軽減し、または予防する組成物および方法を提供する。ＶＴＸ−２３３７は、新規の強力かつ選択的な低分子ＴＬＲ８アゴニストである。ＶＴＸ−２３３７の製剤は、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ１０／０１４９１３に記載される。本発明の製剤は、本明細書に記載されるヒト癌の治療方法における使用に適する。
【００４７】
特に断りがなければ、本明細書で用いられる用語は、特定の実施態様を説明するためのものであって、限定することが意図されるものではないことが理解されるべきである。本明細書および下記の特許請求の範囲において、下記に説明される定義を有するものとして、多くの用語が参照される。
【００４８】
本発明の文脈において「患者」は、好ましくは、哺乳類である。前記哺乳類として、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマまたはウシを挙げることができるが、これらの例に限定されるものではない。患者は、雄または雌でありうる。患者は、癌にかかっていると以前に診断されているか、または同定されているものであり得、適宜、ドキシル治療または放射線治療などの癌に対する治療介入をすでに受けていたか、または受けていてもよい。あるいは、患者はまた、癌にかかっていると以前に診断されていないが、かかる疾患を発症するリスクを有するものであってもよい。例えば、患者は、１種類またはそれ以上の癌の症状を示すものでありうる。
【００４９】
用語「疾患」、「障害」および「病気」は、本明細書で相互に交換可能に用いられ、正常な体の機能の阻害またはいずれかのタイプの病変の出現を意味する。正常な生理機能の阻害を引き起こす病原因子は、公知であってもよく、または公知でなくてもよい。さらに、２人の患者が同一の疾患と診断されうるが、その特定の病状は、それぞれによって呈される特定の症状は、同一であってもよく、同一でなくてもよい。
【００５０】
本明細書で用いられる用語「治療する」および「治療」は、症状の重症度および／または頻度の減少、症状および／または根本原因の排除、症状および／またはそれらの根本原因の発生の予防、ならびに損傷の改良または改善を意味する。例えば、本発明の抗癌剤の投与による患者の治療には、癌を発症しやすい（例えば、遺伝学的素因、環境因子などの結果として高いリスクを有する）患者および／または癌再発のリスクを有する癌を克服したヒトにおける化学予防、ならびに障害または疾患を抑制し、または障害または疾患の退縮を引き起こすことによる癌患者の治療が包含される。
【００５１】
本明細書で用いられる用語「軽減する」または「改善する」は、疾患障害または病気の少なくとも１つの症状を軽減することを意味する。
【００５２】
本明細書で用いられる用語「予防する」には、リスクを有する個体において、臨床的に明らかな疾患の進行を全体的に予防し、またはその発症を遅延させるか、あるいは疾患の前臨床的な明らかな段階を予防し、またはその発症を遅延させることが含まれる。これらには、疾患を進行するリスクを有する患者の予防的治療が含まれる。
【００５３】
本発明の化合物を示す場合、出願人は、用語「化合物」には、特定の分子物質だけではなく、その医薬的に許容される薬理学的に活性な類似体（例えば、以下に限定されないが、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、抱合体、活性な代謝物および他のかかる誘導体、類似体および関連化合物が挙げられる）が含まれることを意図するものとする。
【００５４】
本化合物の用語「有効量」および「治療上の有効量」は、所望する効果を供するために薬物または薬剤の毒性はないが十分な量を意味する。
【００５５】
「医薬的に許容される」は、生物学的ではなく、または望ましくないものではない物質を意味し、すなわち、前記物質は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、または含有される組成物の他の構成成分のいずれとも有害な方法で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に取り入れられる。用語「医薬的に許容される」が医薬担体または賦形剤を意味するように用いられる場合、この担体または賦形剤が毒物学的製造試験で必要とされる基準に適合し、あるいは米国食品医薬品局によって作成された不活性成分基準（Inactive Ingredient Guide）に含まれることを意味する。「薬理学的に活性な」（または単に「活性な」）は、「薬理学的に活性な」誘導体または類似体などのように、親化合物として同一タイプの薬理学的活性およびほぼ同程度の同等物を有する誘導体または類似体を意味する。
【００５６】
「必要とする」は、「必要とする投与」または「それを必要とする」などのように、症状が観察される場合、または症状の出現が予想される場合、患者および／または医師が望ましくない症状（例えば、癌から生じる症状）を（治療的にまたは予防的に）治療することが適当とされる場合、製剤が患者に投与されることを意味する。
【００５７】
本発明のＴＬＲアゴニスト
製剤
ＶＴＸ−２３３７製剤には、下記の構造
【化１】
0005951615.tif 000002
を有する活性な化合物が含まれる。本発明の製剤は、患者、特に、ヒト患者への皮下投与に適するが、他の方法による投与に用いることができる。
【００５８】
本発明のＶＴＸ−２３３７製剤には、１つまたはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤が含まれる。本明細書で用いられる用語「賦形剤」は、前記製剤の活性な薬剤と組み合わせて使用される生物学的に不活性な物質を広く意味する。賦形剤は、例えば、可溶化剤、安定化剤、希釈剤、不活担体、保存剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、香料または着色剤として用いることができる。好ましくは、少なくとも１つの賦形剤は、製剤に１つまたはそれ以上の有益な物理特性（例えば、活性薬剤の安定性および／または溶解性の増加）を供するように選択される。本明細書に記載されるＶＴＸ−２３３７は、本発明の製剤中の主要な活性薬剤である。しかしながら、ＶＴＸ−２３３７は、他の活性薬剤（例えば、本明細書に記載される他のＴＬＲアゴニスト、抗癌剤または抗ウイルス薬）と共に製剤化されていてもよい。
【００５９】
「医薬的に許容される」賦形剤は、動物における使用、好ましくは、ヒトにおける使用のための州または連邦取締機関によって認可され、あるいは動物における使用、好ましくは、ヒトにおける使用のために米国薬局方、欧州薬局方または他の一般的に認められている薬局方に記載されるものである。
【００６０】
賦形剤の例としては、一定の不活性タンパク質（例えば、アルブミン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、アスパラギン酸（または、アスパラテートとも呼ばれうる）、グルタミン酸（または、グルタメートとも呼ばれる）、リジン、アルギニン、グリシンおよびヒスチジン；脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸およびカプリル酸アルキル；界面活性剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート）；非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））；炭水化物（例えば、グルコース、ショ糖、マンノース、マルトース、トレハロースおよびデキストリン（シクロデキストリンを含む））；ポリオール（例えば、マンニトールおよびソルビトール）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；ならびに塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）が挙げられる。
【００６１】
ＶＴＸ−２３３７の製剤は、ＴＬＲアゴニストの水溶解度を増加させるシクロデキストリンを含有しうる。シクロデキストリンは、α−Ｄ−グルコピラノースの結晶性非吸湿性環状オリゴマーである。グルコピラノース単位を繋ぐ結合に関する回転の欠如の結果として、シクロデキストリンは円筒型ではなく、トロイダル型である。この回転の制限のため、これらは、分子中のグルコピラノース単位の数によってサイズが変動する中央の空洞を有する固定された構造である。３つの最も一般的なシクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンおよびγ−シクロデキストリンであり、それぞれ、６個、７個または８個のグルコピラノース単位からなる。シクロデキストリン分子内のヒドロキシル基の配置および分子の形のため、空洞の内部表面は疎水性であり、外部表面は親水性である。主要なヒドロキシル基は、トロイダル分子の狭い（内部）側面に局在し、次のヒドロキシル基は、広い（外部の）端に局在する。この配置は、シクロデキストリンが、包接錯体を形成することによって様々な小さい疎水性分子を疎水性の空洞内に受容することを可能にする。
【００６２】
本発明の製剤における使用のための適当なシクロデキストリンは、当該技術分野で知られている。例えば、ＴＲＡＰＰＳＯＬ（登録商標）および他のシクロデキストリンは、ＣＴＤ，Ｉｎｃ．（Ｈｉｇｈ  Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＦＬ）によって製造され、ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）（スルホブチルエーテル β−シクロデキストリン）は、市販品として入手可能な注射物質（例えば、ＡＢＩＬＩＦＹ  ＩＭ（登録商標）、ＧＥＯＤＯＮおよびＶＦＥＮＤ  ＩＶ）中に存在する。好ましくは、ＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）は、本発明の製剤中で用いられる。
【００６３】
他の水溶解性薬剤が用いられうる。他のこのような薬剤の例としては、ポロキサマー、ポビドンＫ１７、ポビドンＫ１２、Ｔｗｅｅｎ  ８０、エタノール、クレモホール／エタノール、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００およびプロピレングリコールが挙げられる。好ましい実施態様において、本発明の製剤は、かかる製剤の１０ｖ／ｖ％以下を含有する。ある実施態様において、油を基質とした可溶化剤（例えば、リピオドールまたは落花生油）が用いられる。
【００６４】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７の製剤は、粉末、錠剤、丸剤またはカプセル剤などの液体または固形の形態として調製されうる。液体製剤は、油性または水性ベヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液のような形態であり得、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤のような製剤化薬剤（formulatory agent）を含有しうる。ある実施態様において、前記製剤は、水溶液である。別の態様において、最終製剤は、凍結乾燥されている。他の実施態様において、前記製剤には、コロイド性薬物系が含まれる。このような薬物送達系には、例えば、リポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル剤が含まれる。
【００６５】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、哺乳類、好ましくは、ヒトにおける注射に適する液体または凍結乾燥製剤である。ある実施態様において、前記製剤は、滅菌されている。別の態様において、前記製剤は、水性担体の量で再構成されることによって注射に適切である滅菌された凍結乾燥製剤である。ある実施態様において、前記液体または凍結乾燥製剤は、下記に記載される単位用量として調製される。前記製剤は、添加された保存剤を含有していてもよく、または含有していなくてもよい。
【００６６】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上のアジュバントをさらに含む。適当なアジュバントの例としては、免疫応答増強剤、例えば、微生物誘導体（例えば、細菌生成物、毒素（コレラ毒素およびＥ．ｃｏｌｉに由来する易熱性毒素など）、脂質、リポタンパク質、核酸、ペプチドグリカン、炭水果物、ペプチド）、細胞、サイトカイン（例えば、樹状細胞、ＩＬ−１２およびＧＭ−ＣＳＦ）、ホルモンおよび低分子が挙げられる。包含されるアジュバントとしては、以下に限定されないが、油を基質としたアジュバント（例えば、フロイントアジュバント）、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、アルミニウム塩アジュバント、カルシウム塩アジュバント、乳濁液および界面活性剤を基質にした製剤（例えば、ＭＦ５９、ＡＳ０２、モンタナイド、ＩＳＡ−５１、ＩＳＡ−７２０およびＱＡ２１）が挙げられる。
【００６７】
ある実施態様によれば、ＶＴＸ−２３３７は、約０．５〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。ある実施態様において、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニストは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌまたは約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。他の実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌまたは約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、０．５〜１０ｍｇ／ｍｌ、０．５〜５ｍｇ／ｍｌまたは１〜５ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。他の実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１０〜２０ｍｇ／ｍｌ、２０〜３０ｍｇ／ｍｌまたは３０〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。特定の実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌまたは約４０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。
【００６８】
ＶＴＸ−２３３７の製剤化は、適宜、単位製剤として調製することができる。「単位製剤」は、目的の用途に適する物理的に別個の単位、すなわち、治療される患者への単一投与として意味する。各単位は、適当な医薬的に許容される賦形剤と共に製剤化された所定量の活性薬剤を含有する。例えば、１バイアルあたりの単位用量には、活性薬剤の特定濃度を含有する、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬまたは２０ｍＬのような一定量が含有されうる。製剤には、単一の活性薬剤、すなわち、本明細書に記載のＶＴＸ−２３３７、その誘導体および類似体、または組み合わせ治療における使用のための他の薬剤（例えば、ドキソルビシンなどの抗癌剤）とのその混合物が含まれうる。好ましい実施態様において、単位製剤には、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌのＶＴＸ−２３３７が含まれる。前記製剤は、適宜、単位用量または複数回用量容器中に、例えば、密封アンプルまたはバイアル中に含有されていてもよく、凍結乾燥条件であってもよい。即時注射溶剤および懸濁剤は、当該技術分野で公知の方法に従って、滅菌した散剤、顆粒剤および錠剤から調製されうる。単位製剤の例としては、以下に限定されないが、錠剤；カプレット；カプセル剤（例えば、軟ゼラチンカプセル剤）；カシュ剤；トローチ；トローチ剤；分散剤；座剤；軟膏剤；パップ剤（湿布）；ペースト剤；散剤；包帯剤；クリーム剤；膏薬；溶剤；貼付剤；エアロゾル（例えば、経鼻スプレーまたは吸入剤）；ゲル剤；患者への経口または粘膜投与に適する液体製剤（懸濁剤（例えば、水性または非水性液体懸濁剤、水中油型乳濁液または油中水型液体乳濁剤）、溶剤およびエリキシル剤を含む）；患者への皮下投与に適する液体製剤；ならびに再構成して患者への皮下投与に適する液体製剤を供することができる滅菌固形物（例えば、結晶またはアモルファス固形）が挙げられる。
【００６９】
本発明による組成物および製剤ならびに組成物および製剤を含む構成成分の製造方法に関するさらなる情報は、当該分野で標準的な文献、例えば、"Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA.などの中で見出すことができる。
【００７０】
使用方法
ＶＴＸ−２３３７および１つまたはそれ以上のさらなる治療法（例えば、抗癌剤（ドキソルビシンなど））の組み合わせは、癌の治療方法で有用である。好ましくは、ＶＴＸ−２３３７製剤は、癌の治療計画において１つまたはそれ以上のさらなる治療法と組み合わせて用いられる。ある実施態様において、前記癌は、固形腫瘍である。ある実施態様において、前記癌は、卵巣癌、乳癌、頭頸部癌、腎臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、メラノーマおよびリンパ腫、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施態様において、前記癌は、リンパ腫である。ある実施態様において、前記リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
【００７１】
癌を治療するためのＴＬＲ８アゴニストまたは癌を治療するための抗癌剤およびＴＬＲ８アゴニストの組み合わせの有効性を試験する方法としては、以下に限定されないが、インビトロアッセイ（例えば、ヒトＰＢＭＣ、ＨＥＫ細胞またはＩＨＣを使用する方法および浸潤細胞に対するＦＡＣＳおよび腫瘍細胞の溶解）、ならびにインビボアッセイ（例えば、卵巣細胞株を注射したＮＳＧ−ＨＩＳマウスまたはヒト化マウス（ＮＳＧ−ＨＩＳ）、あるいはヒト患者を用いる方法）が挙げられる。
【００７２】
組み合わせ治療
組み合わせ治療には、ＶＴＸ−２３３７の投与に加えて、癌の予防または治療に役に立つ１つまたはそれ以上の方法の補助的な使用が包含される。このような方法には、以下に限定されないが、化学療法剤、免疫治療剤、抗血管新生薬、サイトカイン、ホルモン、抗体、ポリヌクレオチド、放射線および光線力学療法薬が含まれる。具体的な実施態様において、組み合わせ治療は、癌の再発を予防し、転移を阻害し、または癌または転移の増殖および／または広がりを防ぐために用いることができる。本明細書で用いられるように、「と組み合わせて」は、本発明のＶＴＸ−２３３７製剤が、下記の項目でより詳細に説明されるように１つまたはそれ以上のさらなる治療法を含む治療計画の一部として投与されることを意味する。
【００７３】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上の他の治療剤の投与の前、同時または後に投与される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、抗癌剤（例えば、ドキソルビシン）の投与前または投与後（例えば、５日後）に投与される。ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上の方法で製剤化される。別の態様において、１つまたはそれ以上の他の方法は、別々の医薬組成物中で投与される。この実施態様によれば、１つまたはそれ以上の他の方法は、ＶＴＸ−２３３７を投与するために用いられる投与経路と同一または異なる経路によって患者に投与されうる。
【００７４】
ドキソルビシンとの組み合わせ
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７を含む前記製剤は、ドキソルビシンと組み合わせて投与される。好ましくは、ドキソルビシンは、ペグ化されたリポソーム形態中にある。ドキソルビシンの化学構造は、下記に示される：
【化２】
0005951615.tif 000003
。
【００７５】
他の抗癌剤との組み合わせ
ある実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７を含む前記製剤は、１つまたはそれ以上の抗癌剤、好ましくは、化学療法剤と組み合わせて投与される。このような化学療法剤としては、以下に限定されないが、下記の化合物群：細胞毒性抗生物質、代謝拮抗物質、抗有糸分裂薬、アルキル化剤、白金化合物、ヒ素化合物、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、タキサン、ヌクレオシド類似体、植物アルカロイドおよび毒素；ならびにこれらの合成誘導体が挙げられる。下記は、これらの群内の特定の化合物の非限定的な例である。アルキル化剤には、ナイトロジェンマスタード（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、トロホスファミドおよびクロランブシル）；ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ））；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファンおよびトレオスルファン）；ならびにトリアゼン（例えば、ダカルバジン）が含まれる。白金を含有する化合物には、シスプラチン、カルボプラチン、アロプラチン（aroplatin）およびオキサリプラチンが含まれる。植物アルカロイドには、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）；およびタキソイド系（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）が含まれる。ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤としては、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトテシンおよびクリスナトール）；ならびにマイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）が挙げられる。葉酸代謝拮抗剤としては、ＤＨＦＲ阻害剤（例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート）；ＩＭＰデヒドロゲナーゼ阻害剤（例えば、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、ヒドロキシ尿素およびＥＩＣＡＲ）；ならびにリボヌクレオチド還元酵素阻害剤（例えば、デフェロキサミン）が挙げられる。ピリミジン類似体としては、ウラシル類似体（例えば、５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、ドキシフルリジンおよびラルチトレキセド（ratitrexed））；およびシトシン類似体（例えば、シタラビン（ａｒａ  Ｃ）、シトシンアラビノシドおよびフルダラビン）が挙げられる。プリン類似体としては、メルカプトプリンおよびチオグアニンが挙げられる。ＤＮＡ代謝拮抗剤としては、３−ＨＰ、２’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−ＨＰ、アルファ−ＴＧＤＲ、アフィジコリングリシネート、ａｒａ−Ｃ、５−アザ−２’−デオキシシチジン、ベータ−ＴＧＤＲ、シクロシチジン、グアナゾール、イノシングリコジアルデヒド（inosine glycodialdehyde）、マセベシン（macebecin）ＩＩおよびピラゾロイミダゾールが挙げられる。有糸分裂阻害剤としては、アロコルヒチン、ハリコンドリンＢ、コルヒチン、コルヒチン誘導体、ドラスタチン１０、メイタンシン、リゾキシン、チオコルヒチンおよびトリチルシステインが挙げられる。
【００７６】
本発明のベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニスト製剤と共に使用するための化学療法剤の他の例としては、イソプレニル化阻害剤；ドーパミン作動性神経毒（例えば、１−メチル−４−フェニルピリジニウムイオン）；細胞周期阻害剤（例えば、スタウロスポリン）；アクチノマイシン（例えば、アクチノマイシンＤおよびダクチノマイシン）；ブレオマイシン（例えば、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２およびペプロマイシン）；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシンおよびミトキサントロン）；ＭＤＲ阻害剤（例えば、ベラパミル）；ならびにＣａ２＋ＡＴＰアーゼ阻害剤（例えば、タプシガルジン）が挙げられる。
【００７７】
１つまたはそれ以上の化学療法剤（例えば、ＦＬＡＧ、ＣＨＯＰ）を含む組成物はまた、本発明のＶＴＸ−２３３７と組み合わせて使用することが意図される。ＦＬＡＧには、フルダラビン、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）およびＧ−ＣＳＦが含まれる。ＣＨＯＰには、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシンおよびプレドニゾンが含まれる。前記記載の各々は、例示であって、限定することが意図されるものではない。
【００７８】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、下記のうちの１つまたはそれ以上と組み合わせて投与される：ＩＦＮα、ＩＬ−２、ダカルバジン（Ｂａｙｅｒ）、テモゾロマイド（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、タモキシフェン（ＡＺ）、カルムスチン（ＢＭＳ）、メルファラン（ＧＳＫ）、プロカルバジン（Ｓｉｇｍａ−Ｔａｕ）、ビンブラスチン、カルボプラチン、シスプラチン、タキソール、シクロホスファミド、ドキソルビン（doxorubin）、リツキサン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、ハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、グリベック、イレッサ（ＡＺ）、アバスチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）またはタルセバ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）。
【００７９】
別の実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、下記のうちの１つまたはそれ以上と組み合わせて投与される：エンジイン（例えば、カリチアマイシンおよびエスペラミシン）；デュオカルマイシン、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロランブシル、Ａｒａ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シス白金、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシル。
【００８０】
本発明のベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニスト製剤と組み合わせて用いることができる適当な毒素および化学療法剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Ed.（Mack Publishing Co. 1995）およびGoodman and Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics, 7th Ed.（MacMillan Publishing Co. 1985）に記載される。他の適当な毒素および／または化学療法剤は、当業者に公知である。
【００８１】
本発明のＶＴＸ−２３３７と組み合わせて使用することができる抗癌剤のさらなる例としては、下記に限定されないが、アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール（acodazole）塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アムボマイシン（ambomycin）；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビスアントレン塩酸塩；メシル酸ビスナフィド；ビセレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼルシン；セデフィンゴール；クロランブシル；シロレマイシン（cirolemycin）；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエン酸塩；ドロモスタノロンプロピオン酸塩；デュアゾマイシン；エダトレキサート；エフロールニチン塩酸塩；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸ナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；エトポシドリン酸塩；エトプリン；ファドロゾール塩酸塩；ファザラビン；フェンレチニド；フロキシウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルオシタビン；ホスキドン；フォストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；インターロイキンＩＩ（組み換え体インターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−Ｉａ；インターフェロンガンマ−Ｉｂ；イプロプラチン；イリノテカン塩酸塩；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；ロイプロリド酢酸塩；リアロゾール塩酸塩；ロメテレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；メイタンシン；メクロレタミン塩酸塩；メゲストロール酢酸塩；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン（metoprine）；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル（mitosper）；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパラガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；硫酸ペプロマイシン；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナ��リウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；スパルホセートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；トレミフェンクエン酸塩；トレストロン酢酸塩；トリシビリンリン酸塩；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン硫酸塩；ビンクリスチン硫酸塩；ビンデシン；ビンデシン硫酸塩；ビネピジン硫酸塩；ビングリシネート硫酸塩；ビンロイロシン硫酸塩；ビノレルビン酒石酸塩；ビンロシジン硫酸塩；ビンゾリジン硫酸塩；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸塩が挙げられる。
【００８２】
使用することができる他の抗癌剤としては、以下に限定されないが、５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管形成阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背側形成タンパク質１（anti-dorsalizing morphogenetic protein-1）；抗アンドロゲン薬（前立腺癌）；抗エストロゲン剤；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子修飾因子；アポトーシス調節因子；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ−アレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビスアントレン；ビサジリジニルスペルミン（bisaziridinylspermine）；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート（breflate）；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシイミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリア痘ＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼルシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン類（chlorlns）；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クラムベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタアントラキノン類；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオクホスフェート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール、９−；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルフォシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフール；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；エトポシドリン酸塩；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；フルオロダウノルビシン（fluorodaunorunicin）塩酸塩；フォルフェニメックス；フォルメスタン；フォストリエシン；フォテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモフォシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫刺激ペプチド；インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール，４−；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；三酢酸ラメラリン−Ｎ；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球インターフェロンα；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；ロイプロレリン；レバミゾール；リアロゾール；直鎖ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；細胞溶解性ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテフォシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；ミトトキシン繊維芽細胞増殖因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体，ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；複数腫瘍抑制因子１に基づく治療；マスタード抗癌剤；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素修飾因子；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；０６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導因子；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール���パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペガスパルガーゼ；ペルデシン；ポリ硫酸ペントサンナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルフォスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；酢酸フェニル；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡに基づく免疫調節因子；プロテインＡに基づく免疫修飾因子；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤（微細藻類）；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン類；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン抱合体；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；エチドロン酸レニウムＲｅ１８６；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメックス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣剤；セムスチン；老化誘導阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達修飾因子；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ナトリウムボロカプテート；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルフォシン酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；過活性血管作動性腸ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロマイド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣剤；チマルファシン；チモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプルプリン；チラパザミン；二塩化チタノセン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキセート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン類；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクター系、赤血球遺伝子治療；ベラレソール；ベラミン；ベルジン類；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；ビタキシン；ボロゾール���ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ;およびジノスタチンスチマラマーが挙げられる。
【００８３】
放射線治療との組み合わせ
別の態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、癌の治療のための放射線治療の投薬計画と組み合わせて投与される。前記方法には、体外照射療法、放射性同位体（Ｉ−１２５、パラジウム、イリジウム）の壁内着床、放射性同位体（例えば、ストロンチウム−８９）、胸部放射線治療、腹腔内Ｐ−３２放射線治療および／または腹式子宮および骨盤放射線治療を含む投薬計画が包含される。適当な細胞毒性放射性核種または治療上の放射線同位体は、放射線治療の投薬計画で用いられうる。ある実施態様において、前記同位体は、アルファ粒子放出同位体、例えば、２２５Ａｃ、２２４Ａｃ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２２４Ｒａまたは２２３Ｒａである。他の実施態様において、細胞毒性放射性核種は、ベータ粒子放出同位体、例えば、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、９０Ｙ、１３１Ｉ、６７Ｃｕ、１７７Ｌｕ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏまたは６４Ｃｕである。ある実施態様において、細胞毒性放射性核種は、オージェおよび低エネルギー電子を放出する同位体、例えば、１２５Ｉ、１２３Ｉまたは７７Ｂｒである。他の実施態様において、前記同位体は、１９８Ａｕ、３２Ｐなどである。
【００８４】
ある実施態様において、患者に投与される放射性核種の量は、約０．００１ｍＣｉ／ｋｇ〜約１０ｍＣｉ／ｋｇである。ある実施態様において、患者に投与される放射性核種の量は、約０．１ｍＣｉ／ｋｇ〜約１．０ｍＣｉ／ｋｇである。他の実施態様において、患者に投与される放射性核種の量は、約０．００５ｍＣｉ／ｋｇ〜０．１ｍＣｉ／ｋｇである。
【００８５】
治療抗体との組み合わせ
別の態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上の免疫治療剤（例えば、抗体またはワクチン）と組み合わせて投与される。ある実施態様において、前記抗体は、癌に対するインビボでの治療上および／または予防上の用途を有する。
【００８６】
本発明のベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニスト製剤と組み合わせて用いることができる治療および予防抗体の非限定的な例としては、ＭＤＸ−０１０（Ｍｅｄａｒｅｘ，ＮＪ）（前立腺癌の治療について現在臨床段階にあるヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体）；ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，ＭＤ）（ＲＳＶ感染の治療のためのヒト化抗呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）モノクローナル抗体である）；ならびにハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，ＣＡ）（転移性乳癌の治療のためのヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体）が挙げられる。他の例は、ヒト化抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ＣＤＰ８６０（ヒト化抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ，ＵＫ）；ＰＲＯ５４２（ＣＤ４と融合した抗ＨＩＶ  ｇｐ１２０抗体（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ／Ｇｅｎｚｙｍｅ遺伝子組み換え体）；オスタビル（Ostavir）（ヒト抗Ｂ型肝炎ウイルス抗体）（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＲＯＴＯＶＩＲ（登録商標）（ヒト化抗ＣＭＶ  ＩｇＧ１抗体）（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＭＡＫ−１９５（ＳＥＧＡＲＤ）（マウス抗ＴＮＦ−α  Ｆ（ａｂ’）２）（Ｋｎｏｌｌ  Ｐｈａｒｍａ／ＢＡＳＦ）；ＩＣ１４（抗ＣＤ１４抗体（ＩＣＯＳ  Ｐｈａｒｍ））；ヒト化抗ＶＥＧＦ  ＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）（マウス抗ＣＡ１２５抗体（Ａｌｔａｒｅｘ））；ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標）（マウス抗１７−ＩＡ細胞表面抗原ＩｇＧ２ａ抗体（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ／Ｃｅｎｔｏｃｏｒ））；ＢＥＣ２（マウス抗イディオタイプ（ＧＤ３エピトープ）ＩｇＧ抗体（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ））；ＩＭＣ−Ｃ２２５（キメラ抗ＥＧＦＲ  ＩｇＧ抗体（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ））；ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）（ヒト化抗αＶβ３インテグリン抗体（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ））；キャンパス１Ｈ／ＬＤＰ−０３（ヒト化抗ＣＤ５２  ＩｇＧ１抗体（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ））；Ｓｍａｒｔ  Ｍ１９５（ヒト化抗ＣＤ３３  ＩｇＧ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ／Ｋａｎｅｂｏ））；ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（キメラ抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１抗体（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、  Ｒｏｃｈｅ／Ｚｅｔｔｙａｋｕ））；ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（登録商標）（ヒト化抗ＣＤ２２  ＩｇＧ抗体（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ））；Ｓｍａｒｔ  ＩＤ１０（ヒト化抗ＨＬＡ抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ））；ＯＮＣＯＬＹＭ（登録商標）（Ｌｙｍ−１）（放射性標識化マウス抗ＨＬＡ診断用試薬抗体（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ））；ＡＢＸ−ＩＬ８（ヒト抗ＩＬ８抗体（Ａｂｇｅｎｉｘ））；抗ＣＤ１１ａ（ヒト化ＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｘｏｍａ））；ＩＣＭ３（ヒト化抗ＩＣＡＭ３抗体（ＩＣＯＳ  Ｐｈａｒｍ））；ＩＤＥＣ−１１４（霊長類抗ＣＤ８０抗体（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ））；ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（放射性標識化マウス抗ＣＤ２０抗体（ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ））；ＩＤＥＣ−１３１（ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体（ＩＤＥＣ／Ｅｉｓａｉ））；ＩＤＥＣ−１５１（霊長類抗ＣＤ４抗体（ＩＤＥＣ））；ＩＤＥＣ−１５２（霊長類抗ＣＤ２３抗体（ＩＤＥＣ／Ｓｅｉｋａｇａｋｕ））；ＳＭＡＲＴ  抗ＣＤ３（ヒト化抗ＣＤ３  ＩｇＧ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂ））；５Ｇ１．１（ヒト化抗補体因子５（Ｃ５）抗体（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍ））；Ｄ２Ｅ７（ヒト化抗ＴＮＦ−α抗体（ＣＡＴ／ＢＡＳＦ））；ＣＤＰ８７０（ヒト化抗ＴＮＦ−α  Ｆａｂフラグメント（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ））；ＩＤＥＣ−１５１（霊長類抗ＣＤ４  ＩｇＧ１抗体（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ））；ＭＤＸ−ＣＤ４（ヒト抗ＣＤ４  ＩｇＧ抗体（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｅｉｓａｉ／Ｇｅｎｍａｂ））；ＣＤＰ５７１（ヒト化抗ＴＮＦ−α  ＩｇＧ４抗体（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ））；ＬＤＰ−０２（ヒト化抗α４β７抗体（ＬｅｕｋｏＳｉｔｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ４Ａ（ヒト化抗ＣＤ４  ＩｇＧ抗体（Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ））；ＡＮＴＯＶＡ（登録商標）（ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ  ＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｇｅｎ））；ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録商標）（ヒト化抗ＶＬＡ−４  ＩｇＧ抗体（Ｅｌａｎ））；ＭＤＸ−３３（ヒト抗ＣＤ６４（ＦｃγＲ）抗体（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｃｅｎｔｅｏｎ））；ＳＣＨ５５７００（ヒト化抗ＩＬ−５  ＩｇＧ４抗体（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ））；ＳＢ−２４０５６３およびＳＢ−２４０６８３（各々、ヒト化抗ＩＬ−５およびＩＬ−４抗体（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ））；ｒｈｕＭａｂ−Ｅ２５（ヒト化抗ＩｇＥ  ＩｇＧ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｒｖａｒｔｉｓ／Ｔａｎｏｘ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））；ＡＢＸ−ＣＢＬ（マウス抗ＣＤ−１４７  ＩｇＭ抗体（Ａｂｇｅｎｉｘ））；ＢＴＩ−３２２（ラット抗ＣＤ２  ＩｇＧ抗体（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／Ｂｉｏ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ））；Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ／ＯＫＴ３（マウス抗ＣＤ３  ＩｇＧ２ａ抗体（ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ））；ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標）（キメラ抗ＣＤ２５  ＩｇＧ１抗体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍ））；ＬＤＰ−０１（ヒト化抗β２−インテグリンＩｇＧ抗体（ＬｅｕｋｏＳｉｔｅ））；抗ＬＦＡ−１（マウス抗ＣＤ１８Ｆ（ａｂ’）２（Ｐａｓｔｅｕｒ−Ｍｅｒｉｅｕｘ／Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ））；ＣＡＴ−１５２（ヒト抗ＴＧＦ−β２抗体（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｂ  Ｔｅｃｈ））；およびコルセビンＭ（キメラ抗因子ＶＩＩ抗体（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ））が挙げられる。上記に列挙した免疫活性化試薬、ならびに他の免疫活性化試薬は、免疫活性化試薬の供給者によって推奨される投薬計画を含む当業者に公知の投薬計画に従って投与されうる。
【００８７】
他の治療剤との組み合わせ
抗癌剤および治療抗体に加えて、本発明のＶＴＸ−２３３７は、他の治療剤、例えば、抗血管新生薬（例えば、固形腫瘍の治療方法および転移の治療および予防方法において）および抗ホルモン剤（特に、乳癌および前立腺癌などのホルモン依存性癌の治療方法において）と組み合わせて投与することができる。
【００８８】
ある実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、１つまたはそれ以上の抗血管新生薬と組み合わせて投与される。このような薬剤としては、以下に限定されないが、アンジオスタチン、サリドマイド、クリングル５、エンドスタチン、セルピン（セリンプロテアーゼ阻害剤）抗トロンビン、フィブロネクチンの２９ｋＤａのＮ末端および４０ｋＤａのＣ末端タンパク質分解フラグメント、プロラクチンの１６ｋＤａのタンパク質分解フラグメント、血小板因子４の７．８ｋＤａのタンパク質分解フラグメント、血小板因子４のフラグメントに相当する１３アミノ酸ペプチド（Maione et al., 1990, Cancer Res. 51:2077-2083）、コラーゲンＩのフラグメントに相当する１４アミノ酸ペプチド（Tolma et al., 1993, J. Cell Biol. 122:497-511）、トロンボスポンジンＩのフラグメントに相当する１９アミノ酸ペプチド（Tolsma et al., 1993, J. Cell Biol. 122:497-511）、ＳＰＡＲＣのフラグメントに相当する２０アミノ酸ペプチド（Sage et al., 1995, J. Cell. Biochem. 57:1329-1334）、あるいはこれらのフラグメント、ファミリーまたは変異体（その医薬的に許容される塩を含む）が挙げられる。
【００８９】
血管形成を阻害し、ラミニン、フィブロネクチン、プロコラーゲンおよびＥＧＦのフラグメントに相当する他のペプチドもまた、記載されている（例えば、CaO, 1998, Prog Mol Subcell Biol. 20:161-176を参照のこと）。ＲＧＤタンパク質（すなわち、ペプチドモチーフＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを有する）に結合する一定のインテグリンを阻害するモノクローナル抗体および環状ペンタペプチドは、抗血管新生活性を有することが示されている（Brooks et al., 1994, Science 264:569-571； Hammes et al., 1996, Nature Medicine 2:529-533）。さらに、受容体アンタゴニストによるウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体の阻害は、血管形成、腫瘍増殖および転移を抑制する（Min et al., 1996, Cancer Res. 56: 2428-33； Crowley et al., 1993, Proc Natl Acad Sci. 90：5021-25）。
【００９０】
別の態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、ホルモン治療法と組み合わせて用いられる。このような治療法としては、ホルモンアンタゴニスト（例えば、フルタミド、ビカルタミド、タモキシフェン、ラロキシフェン、ロイプロリド酢酸塩（ＬＵＰＲＯＮ）、ＬＨ−ＲＨアンタゴニスト）、ホルモン生合成およびプロセッシングの阻害剤、およびステロイド（例えば、デキサメタゾン、レチノイド、デルトイド（deltoid）、ベタメタゾン、コルチゾール、コルチゾン、プレドニゾン、デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、鉱質コルチコイド、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン）、ビタミンＡ誘導体（例えば、オール・トランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ））；ビタミンＤ３類似体；抗ゲスターゲン（antigestagen）（例えば、ミフェプリストン、オナプリストン）、および抗アンドロゲン（例えば、シプロテロン酢酸塩）の投与が挙げられる。
【００９１】
別の態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、ポリヌクレオチド化合物（例えば、アンチセンスポリヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡ干渉分子、三重らせんポリヌクレオチドなど）を利用する治療法と組み合わせて用いられる。
【００９２】
免疫調節剤との組み合わせ
ある実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、免疫調節剤と組み合わせて投与される。ある実施態様において、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニストは、免疫調節剤と共に製剤化される。「免疫調節剤」は、投与される患者の免疫系を抑制し、マスクし、または増強する物質である。典型的な薬剤は、サイトカインの産生を抑制し、自己抗原の発現を下流調節もしくは抑制し、あるいはＭＨＣ抗原をマスクするものである。かかる薬剤の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号を参照）、アザチオプリン（またはアザチオプリンに対して有害反応が存在する場合、シクロホスファミド）；ブロモクリプチン；グルタルアルデルヒド（ＭＨＣ抗原をマスクする、米国特許第４，１２０，６４９号に記載）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントに対する抗イディオタイプ抗体；サイクロスポリンＡ；ステロイド系（例えば、糖質コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロンおよびデキサメタゾンなど））；サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト（抗インターフェロン−γ、−β、または−α抗体を含む）；抗腫瘍壊死因子−α抗体；抗腫瘍壊死因子−β抗体；抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；パン−Ｔ抗体、好ましくは、抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトキナーゼ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスパガリン；およびラパマイシンが挙げられる。サイトカインの例としては、以下に限定されないが、リンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンが挙げられる。前記サイトカインには、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体ホルモン（ＬＨ）；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−α；ミュラー管阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ−α；血小板増殖因子；形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−α；インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子（osteoinductive factor）；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣｇＰ（ＧＭ−ＣＳＰ）；および顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−ｌａ、ＩＬ−２、１Ｌ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；および他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含む）が含まれる。本明細書で用いられるように、用語サイトカインには、天然源由来または組み替え細胞培養由来のタンパク質および内因性配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。
【００９３】
ある実施態様において、前記方法は、患者に、１つまたはそれ以上の免疫調節剤、好ましくは、サイトカインを投与することをさらに特徴とする。好ましいサイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポエチンおよびγインターフェロンからなる群から選択されるものである。
【００９４】
単球またはマクロファージの機能を亢進する化合物との組み合わせ
ある実施態様において、単球またはマクロファージの機能を亢進する化合物（例えば、少なくとも約２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９％またはそれ以上）は、本発明のベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニスト製剤と組み合わせて用いることができる。このような化合物は、当該技術分野で公知であり、以下に限定されないが、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１２）およびインターフェロン（例えば、アルファまたはガンマインターフェロン）などのサイトカインが含まれる。
【００９５】
ある実施態様において、単球またはマクロファージの機能を亢進する化合物は、ＶＴＸ−２３３と共に製剤化され、それによりＶＴＸ−２３３７と同時に投与される。
【００９６】
他の実施態様において、単球またはマクロファージの機能を亢進する化合物は、ＶＴＸ−２３３７とは別個に投与され、ＶＴＸ−２３３７と同時に（相互に数時間以内）、治療の同一過程の間に、または連続して投与することができる。かかる実施態様において、単球またはマクロファージの機能を亢進する化合物は、好ましくは、ヒト患者に投与される。ある実施態様において、ヒト患者は、ヒトの正常の範囲内である白血球、単球、好中球、リンパ球および／または好塩基球の数を有する。ヒトの白血球の正常な範囲（総数）は、約３．５〜１０．５（１０９／Ｌ）である。ヒト好中球の正常な範囲は、約１．７〜７．０（１０９／Ｌ）であり、単球は、約０．３〜０．９（１０９／Ｌ）であり、リンパ球は、約０．９〜２．９（１０９／Ｌ）であり、好塩基球は、約０〜０．３（１０９／Ｌ）であり、好酸球は、約０．０５〜０．５（１０９／Ｌ）である。他の実施態様において、ヒト患者は、ヒトの正常な範囲、例えば、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８（１０９／Ｌ）以下の白血球である白血球の数を示す。
【００９７】
標的の癌
本発明の方法によって治療される癌のタイプは、固形癌、例えば、卵巣癌、乳癌、頭頸部癌、腎臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌またはリンパ腫、あるいはこれらの組み合わせである。本発明の方法によって治療することができる癌の他のタイプとしては、以下に限定されないが、ヒト肉腫および癌、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫，横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球）白血病および慢性リンパ性白血病）；および真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症および重鎖病が挙げられる。
【００９８】
投与および用量
本発明のＶＴＸ−２３３７は、好ましくは、注射、最も好ましくは、皮下投与のために製剤化される。ある実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７は、経皮、静脈内または筋肉内経路による投与のために製剤化される。
【００９９】
本発明の製剤は、目的の用途に有効であるＶＴＸ−２３３７の量を含有する。特定の用量はまた、患者の年齢、性別、種および状態を含む他の因子の数に基づいて選択される。有効量はまた、インビトロ試験系または動物モデルに由来する用量応答曲線から推定することができる。
【０１００】
ある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７の用量は、体重のｍｇ／ｋｇの単位で測定される。他の実施態様において、前記用量は、除脂肪体重のｍｇ／ｋｇの単位（すなわち、体重から体脂肪含有量を引いた単位）で測定される。他の実施態様において、前記用量は、体表面積のｍｇ／ｍ２の単位で測定される。他の実施態様において、前記用量は、患者に投与される１用量あたりｍｇの単位で測定される。用量の測定は、本発明の組成物および方法と組み合わせて用いることができ、用量単位は、当該技術分野で標準的な方法によって変換することができる。
【０１０１】
本発明の方法で用いることができる投薬計画の例としては、以下に限定されないが、１日１回、１週間に３回（間欠的に）、２週間に１回、または１４日に１回が挙げられる。ある実施態様において、投薬計画としては、以下に限定されないが、１月に１回の投与または６〜８週間に１回の投与が挙げられる。好ましい態様において、本発明のベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニスト製剤は、患者（好ましくは、ヒト患者）における癌の治療のための適当な治療法と組み合わせて、１週間に１回または２週間に１回で皮下注射によって投与される。
【０１０２】
ＶＴＸ−２３３７の典型的な用量としては、患者のキログラムあたりミリグラム量が挙げられる。ある実施態様において、前記用量は、体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは体重の約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇである。具体的な実施態様において、前記用量は、患者の体重の約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０１０３】
癌の治療方法のある実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは体重の約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの用量で患者に、単独で、または癌治療の組み合わせ治療において投与される。ある実施態様において、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニストは、患者の体重の約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。あるさらなる実施態様において、ＶＴＸ−２３３７は、患者に１週間または２週間に１回の頻度で投与される。具体的な実施態様において、１日の用量は、少なくとも０．０５ｍｇ、０．５０ｍｇ、１．０ｍｇ、５．０ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇまたは少なくとも５０ｍｇである。
【０１０４】
ある実施態様において、単独で、または癌治療の組み合わせ治療で投与されるベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲ８アゴニスト（例えば、ＶＴＸ−２３３７）の用量は、０．１〜１０ｍｇ／ｍ２（例えば、０．１〜０．３ｍｇ／ｍ２、０．１〜３．９ｍｇ／ｍ２、０．１〜１ｍｇ／ｍ２、０．１〜２ｍｇ／ｍ２、０．１〜４ｍｇ／ｍ２、２〜４ｍｇ／ｍ２、２．５〜３．５ｍｇ／ｍ２、２〜６ｍｇ／ｍ２、２〜８ｍｇ／ｍ２）である。これには、０．１ｍｇ／ｍ２、１ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、７ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２およびその間が含まれる。１．５ｍ２の体表面積が７０ｋｇの体重に相当すると仮定した場合、２．５〜３．５ｍｇ／ｍ２は、〜０．０５〜０．０７５ｍｇ／ｋｇに相当することに留意すべきである。投与頻度は、好ましくは、７〜２１日ごとに１回（例えば、７、１０、１４、１８、２１日ごとに１回）である。ある実施態様において、投与頻度は、好ましくは、７〜２１日ごとに１、２または３回（例えば、７、１０、１４、１８、２１日に１回）である。ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニストは、疾患の進行を遅らせるか、または許容されない毒性が減少するまで付与されうる。ある実施態様において、２〜２０回の投薬が付与される（例えば、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０回の投薬）。好ましい投与経路は皮下である。
【０１０５】
癌の治療方法のある実施態様において、ドキソルビシンは、患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは体重の約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの用量で、あるいは患者の体表面積の５０ｍｇ／ｍ２以下の用量で患者に、単独でまたは本発明の組み合わせ治療において投与される。
【０１０６】
皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、硬膜外または静脈内投与のための推奨される用量は、１日あたり体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。局所投与に適当な用量は、投与部位に応じて、約０．００１ミリグラム〜約５０ミリグラムの範囲内である。当業者は、維持投薬計画と比較して初期治療に対して一般的に用量が高いか、および／または投与頻度が高いことを評価する。
【０１０７】
ドキソルビシンは、好ましくは、注射、最も好ましくは、静脈内投与のために製剤化される。ある実施態様において、ドキソルビシンは、皮内、経皮、皮下または筋肉内経路による投与のために製剤化される。
【０１０８】
ある実施態様において、ドキソルビシンの用量は、体重のｍｇ／ｋｇの単位で測定される。他の実施態様において、前記用量は、除脂肪体重のｍｇ／ｋｇの単位（すなわち、体重から体脂肪含有量を引いた単位）で測定される。他の実施態様において、前記用量は、体表面積のｍｇ／ｍ２の単位で測定される。他の実施態様において、前記用量は、患者に投与される１回の投薬あたりｍｇの単位で測定される。用量の測定は、本発明の組成物および方法とともに用いることができ、用量単位は、当該分野で標準的な方法によって変換することができる。
【０１０９】
ある実施態様において、ドキソルビシンは、ＶＴＸ−２３３７の投与の前、同時または後に投与される。
【０１１０】
癌の治療方法のある実施態様において、ドキソルビシンは、患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与される。
【０１１１】
癌の治療のための典型的な投薬計画
特定の実施態様において、本発明のＶＴＸ−２３３７製剤は、患者（好ましくは、ヒト患者）における癌の治療のための既存の治療投薬計画と組み合わせて用いられる。本実施態様によれば、ベンゾ［ｂ］アゼピンＴＬＲアゴニスト製剤は、癌の治療に適する抗癌剤の前、後または同時に投与することができる。好ましくは、ＶＴＸ−２３３７の投与は、癌のタイプ、患者の既往歴および状態、ならびに特定の選択された抗癌剤に応じて、抗癌剤の用量および時期に適合する。
【０１１２】
ある実施態様において、前記投薬計画には、乳癌の治療のための５−フルオロウラシル、シスプラチン、ドセタキセル、ハーセプチン（登録商標）、ゲムシタビン、ＩＬ−２、パクリタキセルおよび／またはＶＰ−１６（エトポシド）が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、前立腺癌の治療のためのパクリタキセル、ドセタキセル、ミトキサントロンおよび／またはアンドロゲン受容体アンタゴニスト（例えば、フルタミド）が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、白血病の治療のためのフルダラビン、シトシンアラビノシド、ゲムツズマブ（ＭＹＬＯＴＡＲＧ）、ダウノルビシン、メトトレキサート、ビンクリスチン、６−メルカプトプリン、イダルビシン、ミトキサントロン、エトポシド、アスパラギナーゼ、プレドニゾンおよび／またはシクロホスファミドが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、ミエローマの治療のためのデキサメタゾンが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、メラノーマの治療のためのダカルバジンが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、結腸直腸癌の治療のためのイリノテカンが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、肺癌の治療のためのパクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドおよび／またはシスプラチンが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、非ホジキンリンパ腫の治療のためのシクロホスファミド、ＣＨＯＰ、エトポシド、ブレオマイシン、ミトキサントロンおよび／またはシスプラチンが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、胃癌の治療のためのシスプラチンが含まれる。ある実施態様において、前記投薬計画には、膵臓癌の治療のためのゲムシタビンが含まれる。
【０１１３】
抗癌剤を用いた治療期間は、用いられる特定の治療剤によって変動しうる。ある実施態様において、前記投与は、不連続であり、すなわち、１日１回の投与は、数回の部分投与に分割される。ある実施態様によれば、治療方法には、単一治療剤または順次治療剤が投与される間に少なくとも１周期、好ましくは、１周期以上が含まれる。適当な１周期の期間は、当業者による通常の方法、ならびに合計の周期数および周期間の間隔によって決定することができる。
【０１１４】
具体的な実施態様において、前記投薬計画には、ゲムシタビンの１００〜１０００ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ダカルバジンの２００〜４０００ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。好ましい態様において、ダカルバジンの７００〜１０００ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、フルダラビンの２５〜５０ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）の２００〜２０００ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ドセタキセルの１．５〜７．５ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、パクリタキセルの５〜１５ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、シスプラチンの５〜２０ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、５−フルオロウラシルの５〜２０ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ドキソルビシンの２〜８ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、エピポドフィロトキシンの４０〜１６０ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、シクロホスファミドの５０〜２００ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、イリノテカンの５０〜７５、７５〜１００、１００〜１２５または１２５〜１５０ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ビンブラスチンの３．７〜５．４、５．５〜７．４、７．５〜１１または１１〜１８．５ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ビンクリスチンの０．７〜１．４または１．５〜２ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。さらに別の実施態様において、前記投薬計画には、メトトレキサートの３．３〜５、５〜１０、１０〜１００または１００〜１０００ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量が含まれる。
【０１１５】
ある実施態様において、前記投薬計画には、化学療法剤の低用量の使用が含まれる。本実施態様によれば、本発明のＶＴＸ−２３３７による患者の最初の治療は、抗癌剤による後の誘発に対して腫瘍の感受性を増加させる。よって、前記抗癌剤は、単独で投与される薬剤について許容可能な用量のより低い範囲付近またはそれ以下の用量で患者に投与することができる。ある実施態様において、前記投薬計画には、ドセタキセルを６〜６０ｍｇ／ｍ２／日またはそれ以下で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、パクリタキセルを１０〜１３５ｍｇ／ｍ２／日またはそれ以下で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、フルダラビンを２．５〜２５ｍｇ／ｍ２／日またはそれ以下で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）を０．５〜１．５ｇ／ｍ２／日またはそれ以下で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ゲムシタビンを１０〜１００ｍｇ／ｍ２／周期で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、シスプラチン、例えば、ＰＬＡＴＩＮＯＬまたはＰＬＡＴＩＮＯＬ−ＡＱ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ）を、５〜１０、１０〜２０、２０〜４０または４０〜７５ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、シスプラチンを７．５〜７５ｍｇ／ｍ２／周期の範囲で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、カルボプラチン、例えば、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ）を、２〜４、４〜８、８〜１６、１６〜３５または３５〜７５ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ドセタキセル、例えば、タキソテール（Ｒｈｏｎｅ  Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）を、６〜１０、１０〜３０または３０〜６０ｍｇ／ｍ２／周期の範囲の用量で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、パクリタキセル、例えば、タキソール（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）を、１０〜２０、２０〜４０、４０〜７０または７０〜１３５ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、５−フルオロウラシルを０．５〜５ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量で後に投与することが含まれる。別の態様において、前記投薬計画には、ドキソルビシン、例えば、アドリアマイシン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ）、ドキシル（Ａｌｚａ）、ＲＵＢＥＸ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）を、２〜４、４〜８、８〜１５、１５〜３０または３０〜６０ｍｇ／ｋｇ／周期の範囲の用量で後に投与することが含まれる。
【０１１６】
上記に記載の投与スケジュールは、例示のためのみに供されるものであって、限定するものと考慮されるべきではない。
【０１１７】
キット
本発明は、液体または凍結乾燥されたＶＴＸ−２３３７および／またはドキソルビシンで充填された１つまたはそれ以上の容器を含む医薬パックまたはキットを提供する。好ましい実施態様において、液体または凍結乾燥された製剤は、滅菌されている。ある実施態様において、前記キットには、１つまたはそれ以上の容器内の本発明の液体または凍結乾燥された製剤、および癌または感染症の治療に有用である１つまたはそれ以上の他の予防剤または治療剤が含まれる。１つまたはそれ以上の他の予防剤または治療剤は、ＶＴＸ−２３３７と同じ容器中、または１つまたはそれ以上の他の容器中に存在しうる。好ましくは、ＶＴＸ−２３３７は、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌまたは約２ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化され、前記製剤は、注射、好ましくは、皮下注射に適する。好ましくは、前記キットは、単位製剤中でＶＴＸ−２３３７を含有しうる。最も好ましくは、前記単位製剤は、治療される患者の体重の約０．０２〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０４〜５ｍｇ／ｋｇの単位用量を提供するために適する形態である。
【０１１８】
ある実施態様において、前記キットは、癌の治療の使用（例えば、本発明の液体製剤を単独で、または別の予防剤または治療剤と組み合わせての使用）ならびに副作用および１つまたはそれ以上の投与経路のための投与情報に関する説明書がさらに含まれる。かかる容器には、医薬品または生物薬品の製造、使用または販売を規制する行政機関によって定められた形式の書類（前記書類は、ヒト投与のための製造、使用または販売の機関による認可を反映する）が適宜添付されていてもよい。
【０１１９】
本明細書で引用される全ての刊行物および特許文献は、各かかる刊行物および文献が出典明示により本明細書に取り込まれると特に個別に示されている場合、出典明示により本明細書に取り込まれるものである。刊行物および特許文献の引用は、適切な先行技術と認められるものとされるものではなく、その内容または日付として認められるものでもない。
【０１２０】
本発明は、本発明の範囲を限定するものとされるものではない下記の実施例を参照してさらに定義されるものである。材料および方法の両方に対する多くの改変が本発明の目的と利益から逸脱することなく行われうることは、当業者にとって明らかである。
【実施例】
【０１２１】
実施例１：ＴＬＲ８アゴニストおよびドキシルの化学療法は、ヒト免疫系マウスモデルにおいてヒト抗腫瘍免疫応答を高度に活性化する
【０１２２】
マウスとヒトの免疫系の相違により、免疫調節剤の効果の多くは、同系マウスモデルでは十分に研究することができない。ヒト免疫系を有する新規の腫瘍保有マウスモデル（ＨＩＳ）を作成して化学療法と免疫調節治療との相互作用を研究した。ドキソルビシン（免疫原性腫瘍細胞死を誘発し、抗原提示細胞を活性化する薬）およびＶＴＸ−２３３７（強力な活性化とヒト骨髄性ＤＣの１型極性化を誘発するＴＬＲ８アゴニスト）の各効果および相互作用を試験し、マウス白血球における活性の減少が示された。Ｎｏｄ／ＳＣＩＤ／ＩＬＲγｃノックアウト（ＮＳＧ）マウスを、ＨＬＡ−Ａ２＋ヒトドナーに由来するヒトＣＤ３４＋臍帯血細胞で接種し；ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ＯＶＣＡＲ５卵巣癌腫瘍で皮下注射にて移植し；続いてペグ化リポソームドキソルビシン（ドキシルまたはＰＬＤ）；ＶＴＸ−２３３７；またはこれらの２つの薬剤の組み合わせで処理した。ＮＳＧ−ＨＩＳマウスは、完全なヒト造血系（ヒト単球、マクロファージおよび形質細胞様樹状ＤＣおよび骨髄性ＤＣならびにＴ細胞サブセットを含む）を示した。ＮＳＧ−ＨＩＳマウスにおいて、ＶＴＸ−２３３７は、６時間以内にインビボでヒトＣＤ１４＋およびＣＤ１１ｃ＋細胞の用量依存的活性化を誘導した。ＶＴＸ−２３３７で処理したマウスの血漿において、ヒトＴｈ１サイトカインに加えてＩＬ−１０の一時的な用量依存的な上方調節が観察され、これは、６時間以内にピークに達し、２４時間以内に下がった。ドキシルのみはまた、インビボでＣＤ１１ｃ＋ＤＣの弱い活性化およびＴｈ１サイトカインの弱い上方調節を誘導した。２つの薬剤の組み合わせは、ＣＤ１１ｃ＋ＤＣおよび単球の強力な活性化を誘導し、Ｔｈ１サイトカインで著しく増加したが、ＩＬ−１０では増加しなかった。ＨＬＡ−Ａ２＋ＯＶＣＡＲ５腫瘍は移植に成功し、ヒト白血球による浸潤を示した。ＶＴＸ−２３３７およびドキシル治療は、独立して、腫瘍浸潤ヒト白血球を誘発し、用量依存的にヒト卵巣腫瘍異種移植の増殖を制限する一方、２つの薬剤の組み合わせは、最も高い頻度で腫瘍浸潤ヒト白血球を誘発し、卵巣腫瘍の増殖を強く制限した。ＶＴＸ−２３３７およびドキシルによる自然および獲得免疫の活性化の組み合わせ、ならびにドキシルによる腫瘍細胞の獲得および自然免疫エフェクター機構に対する感作は、腫瘍増殖を抑制する相互作用の観察に基づくものであった。ＮＳＧ−ＨＩＳは、ＴＬＲ８アゴニストおよびドキシル化学療法時に相互作用を確立するための適当なツールを提供し、その結果で臨床試験が認可される。
【０１２３】
材料および方法
試薬：
【０１２４】
ＶＴＸ−２３３７製剤：４０ｍｇ／ｍＬの２−アミノ−Ｎ，Ｎ−ジプロピル−８−（４−（ピロリジン−１−カルボニル）フェニル）−３Ｈ−ベンゾ［ｂ］アゼピン−４−カルボキサミド（１０ｍＭ  クエン酸緩衝液（ｐＨ＝６．５）中で１５ｗ／ｖ％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（スルホブチルエーテル β−シクロデキストリン）と包接錯体として製剤化される）。前記製剤は、使用前に０．９％の滅菌した塩化ナトリウムで適当な濃度までさらに希釈した。
【０１２５】
ＰＬＤ（すなわち、Ｂｅｎ  Ｖｅｎｕｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ  Ｂｅｄｆｏｒｄ  ＯＨ４４１４１４６によって製造されたドキシル）は、ペンシルバニア大学病院薬局から購入した。
【０１２６】
ＮＳＧ−ＨＩＳマウスの作成：
全てのインビボでのマウス実験は、アメリカ国立衛生研究所（ＮＩＨ）の指針に従ってペンシルバニア大学動物実験委員会（University of Pennsylvania Institutional Animal Care and Use Committee）によって認可された。ペンシルバニア大学異種移植施設から得たＮＯＤ−ｓｃｉｄ  ＩＬ２ｒγヌル（ＮＳＧ）マウスを、前もって放射線で照射し（２５０Ｒａｄ）、翌日、１〜２×１０５個のＣＤ３４＋（ＬＯＮＺＡ，２Ｃ−１０１）を含有するＴ細胞欠乏ヒト臍帯血細胞を静脈内（ｉ．ｖ．）に注射した。約３ヶ月後、ヒト造血系の移植および再構成のレベルは、出血およびｈＣＤ４５染色（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，クローン２Ｄ１  ｃａｔ＃５５７８３３  ＡＰＣ−ＣＹ７）によって調べた。
【０１２７】
サイトカインの測定：
ある実験において、ＮＳＧ−ＨＩＳは、０．５または５ｍｇ／ｋｇのＶＴＸ−２３３７を単独で皮下（ｓ．ｃ．）に、またはＰＬＤを最大耐容用量（ＭＴＤ，５０ｍｇ／ｍ２）で組み合わせて腹腔内（ｉ．ｐ．）に注射した。他の実験において、ヒトＰＢＭＣは、ＶＴＸ−２３３７を用いてインビトロで活性化した。全ての実験において、血漿または培地の上澄み液は、ＶＴＸ−２３３７投与６時間後に収集した。ＶＴＸ−２３３７またはＶＴＸ−２３３７およびＰＬＤ投与によって誘導されたサイトカインのレベルは、処置した動物から収集した培養上澄み液または血漿サンプルのいずれかにおける９６個のヒト検体レベルを測定するルミネックスに基づく技術を用いるＲｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）によってインビトロおよびインビボの両方で測定した。
【０１２８】
ＯＶＣＡＲ５腫瘍を保有するＮＳＧ−ＨＩＳマウスの治療：
ＯＶＣＡＲ５細胞は、ＨＬＡ−Ａ２＋ＣＤ３４＋を移植したＮＳＧ−ＨＩＳマウスに皮下で注射した（５ｘ１０６細胞）。処置していない対照マウスでは、腫瘍が徐々に成長して、腫瘍誘発９０日に動物は死んだ。腫瘍は、１週間に２回測定し、腫瘍体積は、以下のように算出した：（長さｘ長さ）ｘ（幅）／２。腫瘍を保有するマウスは、平均腫瘍体積が約５０ｍｍ３または腫瘍細胞移植〜３０日後に達したら、４つの処置群にランダムに分けた（ｎ＝８〜１０／群）。処置群は、ベヒクル対照、ＰＬＤ（２週間に１回腹腔内で５０ｍｇ／ｍ２付与）、ＶＴＸ−２３３７（各周期間に３回１日おきに皮下注射で０．５ｍｇ／ｋｇ付与）またはＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の組み合わせ（ＶＴＸ−２３３７ 処置はＰＬＤの５日後に開始）からなった。処置周期は１４日間であり、３回の処置周期で各群に投与した。各処置周期の過程について、ＰＬＤを付与した群は、１日目に当該化学療法剤を受容し、ＶＴＸ−２３３７を単独で、またはＰＬＤと組み合わせて付与した群は、周期の５、７および９日目にＶＴＸ−２３３７を受容した。
【０１２９】
フローサイトメトリー：
白血球のフローサイトメトリー解析について、腫瘍、骨髄または脾臓を６ｃｍのペトリ皿に置いてすりつぶし、１５ｍＬのチューブに移し、ＲＰＭＩ（Ｃｅｌｌｇｒｏ  ＃１６４０ＣＶ）中に２ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｃ９４０７）およびＤＮアーゼ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｄ５０２５−１５ＫＯ）を含有する溶液中で持続回転下にて２時間インキュベートした。該懸濁液は、シリンジプランジャーを用いて７０μｍのセルストレイナーに通し、洗浄し、遠心分離し、続いて沈殿物を２％ＦＢＳのＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ  ＃１０４３７）中に再懸濁させた。溶解後、３〜５ｘ１０６細胞を０．５μｇ／ｍｌのＡｂで４℃にて３０分間染色し、洗浄し、続いてフローサイトメトリーＦＡＣＳ−Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）により解析した。細胞は、ヒトｈＣＤ４５（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  クローン２Ｄ１  カタログ＃５５７８３３  ＡＰＣ−ＣＹ７）、ｈＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  クローンＵＣＨＴ１  ＃３００４２９  ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５）、ｈＣＤ４（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  クローンＲＰＡ−Ｔ４  ＃５５５３４９Ａ  ＰＣ）、ｈＣＤ８（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  クローンＲＰＡ−Ｔ８  ＃１１−００８８  ＦＩＴＣ）、ｈＣＤ１１ｂ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  クローンＩＣＲＦ４４  ＃５５５３８８  ＰＥ）、ｈＣＤ１１ｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン３．９  ＃３０１６０８  Ｐｅ−Ｃｙ７）、ｈＣＤ１２３（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  クローン７Ｇ３  ＃５５８７１４  ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）、ｈＣＤ１４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  クローン６１Ｄ３  ＃２５−０１４９  ＰＥ−Ｃｙ７）、ｈＣＤ４０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  クローン５Ｃ３  ＃１１−０４０９  ＦＩＴＣ）、ｈＣＤ８０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  クローン２Ｄ１０  ＃３０５２１６  ＡＦ６４７）およびｈＣＤ８６［ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  クローン２３３１（ＦＵＮ−１）  ＃５５５６５８  ＰＥ］を用いて染色した。
【０１３０】
インビトロでのＴ細胞増殖、反応性選択および養子移入実験：
腫瘍浸潤白血球（ＴＩＬ）は、他で報告されているように（例えば、Dudley, M.E., et al. 2003. J Immunother 26:332-342およびRiddell, S.R., and Greenberg, P.D. 1990. J Immunol Methods 128:189-201を参照のこと）、最初に、高濃度の組み換え体ヒトインターロイキン２（ｒｈＩＬ−２，６００ＩＵ／ｍｌ）を用いて培養した異なる処置群に由来する腫瘍片から増殖させた。簡単に説明すると、異なる処置群に由来する腫瘍片（〜２ｘ２ｍｍ）を、５％のヒト血清（Ｖａｌｌｅｙ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｃ  ＃１０１７）および６００Ｉ．Ｕ．／ｍｌのｈＩＬ−２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  ＃ＡＦ−２００−０２）を補充したＡＩＭＶ培地（ＧＩＢＣＯ＃１２０５５）中に入れた。指数関数的に増殖するまで、培地の半分を３日ごとに交換し；培地は、細胞の濃度を１ｍＬあたり〜５ｘ１０５〜１ｘ１０６細胞の範囲内に保ちながら必要に応じて分配した。十分な数の細胞を得たら、全ての培養物は、インビトロでＯＶＣＡＲ５反応性について測定した。続いて、ＯＶＣＡＲ５特異的な反応性のＴＩＬを、以前に記載された技術（例えば、Dudley, M.E., et al. 2003. J Immunother 26:332-342を参照のこと）を用いて増殖させた。簡単に説明すると、２ｘ１０８個の同種の照射したフィーダー細胞（ＨＬＡ−Ａ２＋ヒトＰＢＭＣ）を、３０μｇ／ｍＬ  ＯＫＴ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  クローンＯＫＴ３  ＃１６−００３７−８５）、６００ＩＵ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  ＃ＡＦ−２００−０２）および１ｘ１０６ ＴＩＬを合わせ、混合し、続いて１７５ｃｍ２の組織培養フラスコにアリコートした。次いで、フラスコを、５％  ＣＯ２中で３７℃にて直立でインキュベートした。５日目、培地の半分を、６００ＩＵ／ｍＬのｒｈＩＬ−２を含有するＡＩＭの１：１混合物と交換した。細胞密度を約０．５〜１ｘ１０６細胞／ｍＬに保つように必要に応じて培地をこれらのフラスコに加えた。各最初のウェルは、依存していないＴＩＬ培養物と考えられ、他のウェルとは別個に維持した。養子移入実験では、非ヒトＣＤ３４＋移植ＮＳＧマウスを、１ｘ１０７個に増殖させたＴ細胞の静脈内（ｉ．ｖ．）注射３０〜４０日後に、５ｘ１０６個のＯＶＣＡＲ５細胞の皮下注射で誘発した。
【０１３１】
サイトカイン放出および細胞毒性アッセイ：
ＴＩＬ活性および特異性は、サイトカイン分泌および直接のＣＴＬの解析によって調べた。インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）アッセイについては、ＴＩＬおよびコントロールＴ細胞株を共培養アッセイ前に２回洗浄して、ｒｈＩＬ−２を取り除いた。１ｘ１０５個のＴＩＬおよび１ｘ１０５個の刺激細胞を、９６ウェル平底プレートの各ウェルに入れた。ＴＩＬ培養物は、一般的に、ＯＶＣＡＲ５および２つのコントロールＨＬＡ−Ａ２＋メラノーマ腫瘍細胞株（５２６ｍｅｌおよび６２４ｍｅｌ）で刺激した。いくつかのウェルにおいて、ＭＨＣの独立した活性を確かめるために、標的細胞を抗ＨＬＡ−Ａ、ＢおよびＣ中和抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  クローンｗ６／３２  ＃１６−９９８３−８５）で前もって処理した。終夜共培養し、上澄み液を回収し、ＩＦＮγ分泌をＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＃４３０１０２）で定量した。ＣＴＬアッセイにおいて、ＯＶＣＡＲ５をクロム−５５でパルスし、異なる比率のＴＩＬ：標的細胞を９６ウェルプレート中に入れ、４時間インキュベートした。いくつかのウェルにおいて、ＯＶＣＡＲ５は、前もって抗ＨＬＡ−Ａ、ＢおよびＣ中和抗体とインキュベートした。インキュベーション後、共培養物からの３０μｌの培地をＬｕｍａＰｌａｔｅ上にスポットし、終夜乾燥させた。液体シンチレーションカウンターＷａｌｌａｃ  １４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｐｌｕｓで放射能を検出した。
【０１３２】
細胞生存性アネキシンＶ／７ＡＡＤ：
アポトーシスを検出するために、腫瘍細胞をアネキシンＶ／７ＡＡＤ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５５９７６３）で染色した。アポトーシス細胞は、製造業者のプロトコールに従ってフローサイトメトリーによって分析した。簡単に説明すると、増殖させ、異なる処置を施したＯＶＣＡＲ５細胞を収集し、１２００ｒｐｍで沈殿させ、続いて氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、１ｘ１０６細胞／ｍＬの濃度で結合緩衝液（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５１−６６１２１  Ｅ）中に再懸濁させ；１００μＬの溶液（１ｘ１０５細胞）を２つの５ｍＬの培地チューブに各々移した。５μｌのアネキシンＶ−ＰＥ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５１−６５８７５Ｙ）を各１００Ｌの溶液に加え、軽くボルテックスをし、暗中にて室温で１５分間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、５μＬの７ＡＡＤ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５１−６８９８１Ｅ）で１０分間インキュベートし、ＦＡＣＳにより１時間以内に分析した。
【０１３３】
タンパク質抽出およびウェスタンブロット解析：
総細胞タンパク質は、溶解緩衝液［Ｍ−ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬  ＃７８５０１  ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ］で氷上にて３０分間で抽出した。続いて、各サンプルからの５０μｇのタンパク質を、２ｘローディング緩衝液中で１００℃にて５分間変性させ、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ゲル上で分離し、続いてニトロセルロース膜上にトランスファーした。続いて、該膜を５％脱脂乳中にて室温で２時間インキュベートし、一次抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃３２１０  ラビット）と４℃で終夜インキュベートした。該膜を、０．５％  Ｔｗｅｅｎ２０（Ｓｉｇｍａ）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、二次抗体（ＢｉｏＲａｄ  １７２−１０１９）と室温で２時間インキュベートした。タンパク質バンドをＸフィルム（Ｂｉｏｅｘｐｒｅｓｓ  ＃Ｆ−９０２３）と共にＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＃ＲＰＮ２１３２）を用いて可視化した。
【０１３４】
インビトロでヒトＰＢＭＣの抗腫瘍エフェクター機構を活性化するＴＬＲ８アゴニスト
ＶＸ−２３３７は、ヒトｍＤＣおよび単球の両方を効果的に活性化する選択性の強力なＴＬＲ８アゴニストである。その活性は、主にこれらの集団に限られ、他のヒト白血球集団は、間接的な活性化により単球およびＤＣの活性化を生じうるが、直接的に活性化されることはない。ヒト白血球におけるＴＬＲ８活性の広範囲の効果を試験するために、健常なヒトボランティア（ｎ＝６）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、広い濃度範囲でＶＴＸ−２３３７と２４時間インキュベートした。ＶＴＸ−２３３７によるＴＬＲ８活性化に用量依存的に応答して、高いレベルのＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＩＬ−１２ｐ７０が誘導された。よって、ＰＢＭＣのＴＬＲ８活性化の優れた特徴は、細胞を介した癌に対する免疫反応において重要な役割を果たすことが知られているエフェクター介在因子を誘導することにある。その結果として、ＴＬＲ８アゴニストはヒト免疫治療に有用である。
【０１３５】
ＴＬＲ８アゴニストは、ヒトＡＰＣを強く活性化し、ＮＳＧ−ＨＩＳマウスにおけるインビボでのＴｈ１免疫活性化を促進する
ＶＴＸ−２３３７の活性は、ＮＳＧマウスがヒトＣＤ３４＋臍帯血細胞で再構成される新たなマウスモデルで測定した。ヒト造血性幹細胞が骨髄を再構成し、造血が開始されると、前記動物では、ヒト免疫系（Ｂ細胞、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ、ｍＤＣ、ｐＤＣおよび単球を含む）の完全な再構成が３〜４ヶ月以内に示される。ＶＴＸ−２３３７刺激によりヒトＰＢＭＣにおいて見られる免疫刺激効果のため、ＮＳＧ−ＨＩＳマウスは、ＶＴＸ−２３３７に対して高度に応答することが予想された。実際に、これらのマウスに対するＶＴＸ−２３３７の投与は、移植したヒトＣＤ１４＋単球、ＣＤ１１ｃのｍＤＣおよびＣＤ１２３のｐＤＣ上で多数の共刺激分子（ＣＤ８３、ＣＤ８６およびＭＨＣクラスＩＩを含む）の表面発現で用量依存的に増加したヒトＰＢＭＣにてすでに示した免疫刺激効果を再現した。腫瘍に対する免疫応答で重要であり、ＴＬＲ８の活性化にも伴うことが知られているヒトサイトカインの血液レベルの増加もまた示された。これらには、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１２ｐ４０が含まれる。
【０１３６】
ＴＬＲ８タンパク質の構造は、種によって変化しており、ＶＴＸ−２３３７がマウスにおいて活性を有するが、該分子は、ヒトＴＬＲ８に対して強力であり、選択的であるために最適であった。
【０１３７】
ヒトＴＬＲ８に対するＶＴＸ−２３３７の選択性のため、ＮＳＧ−ＨＩＳをヒト造血系で再構成されたマウス宿主モデルとして選択して、インビボでヒト白血球におけるＶＴＸ−２３３７の効果を調べた。様々な構成；血液中の総細胞の３５〜７５％、脾臓中の総細胞の４０〜６８％および骨髄中の総細胞の４０〜７０％を示すｈＣＤ４５＋細胞においてヒト（ｈ）ＣＤ４５定量法によって測定されるように（図１Ａ）、ＩＶ経路によって６週齢のＮＳＧマウスに投与したヒト臍帯血ＣＤ３４＋細胞の移行１４〜２２週間後に、高いレベルのヒト造血リンパ系細胞移植が観察された。
【０１３８】
インビボでＶＴＸ−２３３７の活性を示すために、ＶＴＸ−２３３７は、移植後完全に再構成されたＮＳＧ−ＨＩＳマウスに０．５または５ｍｇ／ｋｇで皮下注射にて投与した。脾臓細胞を６時間後に収集して、活性化マーカーのレベルを測定した。０．５または５ｍｇ／ｋｇのいずれかのＶＴＸ−２３３７で処理したマウスは、対照の未処理マウスと比較して、単球（ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋）、骨髄性ＤＣ（ｍＤＣ，ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋）および形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ，ＣＤ４５＋ＣＤ１２３＋）におけるＣＤ８３、ＣＤ８６ならびにＭＨＣクラスＩＩの発現の著しい増加を示した（図１Ｂ）。
【０１３９】
ヒトサイトカインプロファイルは、ルミネックスに基づくアッセイを用いて、ＶＴＸ−２３３７の単一皮下注射投与（０．５または５ｍｇ／ｋｇ）後のマウス血漿において調べた（図１Ｃ）。Ｔｈ１極性化サイトカイン（ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１２ｐ４０を含む）の濃度における用量依存的な増加が６時間で観察された。ＩＬ−１０血漿レベルの著しい増加もまた、対照と比較して、ＶＴＸ−２３３７で処理した動物で検出された。よって、ＶＴＸ−２３３７は、ＩＬ−１０産生の増加も観察されたが、インビボにおいてヒト単球／ＤＣ構成物の直接的な活性、続いてヒト免疫系の強力なＴｈ１活性を誘導した。
【０１４０】
ＰＬＤ後のＴＬＲ８活性化は、Ｔｈ１サイトカイン応答を生じる
「段階的」投与スケジュールを試し、最大耐容用量のＰＬＤ（ＭＴＤ，５０ｍｇ／ｍ２、腹腔内）を２０〜２８週齢のｈＣＤ３４＋移植ＮＳＧマウスに最初に投与して、腫瘍細胞の損傷および免疫原性抗原の放出を生じさせ；ＶＴＸ−２３３７（０．５ｍｇ／ｋｇ）を５日後に投与して、ＡＰＣを活性化させた。多数のサイトカインのレベルは、ＶＴＸ−２３３７の注射６時間後に血漿中で測定した。未処理のＮＳＧ−ＨＩＳは、血漿中でインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を検出できないことを示した。同様に、ＰＬＤ単独で処理したマウスでは、ＩＦＮγが誘導されなかったが；ＶＴＸ−２３３７およびＰＬＤの組み合わせで処理したマウスでは（図２）、有意レベルのＩＦＮγが誘導され、ＶＴＸ−２３３７単独で誘導されたＩＦＮγレベルと同様であった（図１Ｃ）。さらに、ＶＴＸ−２３３７およびＰＬＤを組み合わせて処理すると、未処理の対照を超えたＴＮＦαの上方調節を誘導し、ＰＬＤまたはＶＴＸ−２３３７を単独で処理した場合と同様であった。よって、ＰＬＤ後の投与は、ＶＴＸ−２３３７がＴｈ１応答を誘導することを可能にする。重要なことに、ＰＬＤならびにＶＴＸ−２３３７は単独で付与された場合にＩＬ−１０の上方調節を生じるが（図２）、この効果は、当該２つの薬剤を組み合わせると弱まる（図２）。概して、これらのデータは、ＰＬＤとＶＴＸ−２３３７との投与の５日の間隔が、ＶＴＸ−２３３７によって誘導されるＴｈ１サイトカインプロファイルを維持し、さらにＩＬ−１０レベルを減少させることを示す。したがって、この組み合わせは、最適なサイトカイン応答を誘発した。ＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の同時投与は、ＩＦＮγ応答が抑制されるように、負の相互作用を生じた。
【０１４１】
ＴＮＦαおよびＩＬ−１０の血漿レベルの増加は、ＰＬＤによるＮＳＧ−ＨＩＳマウスの処理が免疫の活性化を誘発することを示した。この免疫活性化は、正常な細胞および腫瘍細胞の両方において「抗原細胞死」を誘導するドキソルビシンと一致し、ＶＴＸ−２３３７によるＴＬＲ８活性が、抗腫瘍応答を高めることを支持する。ＶＴＸ−２３３７およびＰＬＤ（登録商標）の投与は、抗炎症介在因子のＩＬ−１０の血漿レベルでの減少およびＩＦＮγおよびＴＮＦαレベルの増加を引き起こした。
【０１４２】
ＴＬＲ８活性化は、インビボでＰＬＤの抗腫瘍活性を亢進する
続いて、ＭＴＤのＰＬＤおよび０．５ｍｇ／ｋｇ（臨床腫瘍学試験で評価できる用量に相当するマウス用量）のＶＴＸ−２３３７の組み合わせを用いて、腫瘍を保有するＮＳＧ−ＨＩＳマウスを処置した。処置計画は、複数の１４日処置周期を用いて、ＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の薬力学的活性を利用するように設計した。腫瘍を保有するＮＳＧ−ＨＩＳマウスにＰＬＤを最初に付与して、腫瘍細胞死を誘導した。続いて、５日後に複数のＶＴＸ−２３３７で処置して、免疫スカベンジャー細胞（ｍＤＣ、単球およびマクロファージを含む）を活性化し、死滅した腫瘍細胞を取り除いた。予想されるように、ＭＴＤのＰＬＤは、ベヒクル対照と比較して腫瘍増殖速度の著しい減少を生じ、一方で、ＶＴＸ２３３７単独では腫瘍増殖速度のわずか効果が見られたのみであった。当該２つの薬剤の組み合わせは、１４日処置周期にわたり、ＰＬＤを単独で処置した場合より腫瘍増殖速度の著しい減少を生じた。
【０１４３】
ヒト卵巣癌に対するＰＬＤとＶＴＸ−２３３７とを組み合わた効果の実験過程において、ｈＣＤ３４を移植したＮＳＧ−ＨＩＳ−Ａ２マウスに、ＨＬＡ−Ａ２＋適合ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ５（５ｘ１０６）を接種した。腫瘍が十分に定着したら、マウス群（ｎ＝８〜９／群）をベヒクル、ドキシル単独、ＶＴＸ−２３３７単独またはＶＴＸ−２３３７およびドキシルの組み合わせで処理した。興味深いことに、ＶＴＸ−２３３７の免疫調節効果にもかかわらず、ＴＬＲ８アゴニストのみで処理したマウスは、コントロール未処理マウスと同様の腫瘍増殖を示した。ＭＴＤ（５０ｍｇ／ｍ２，ｉ．ｐ．）のＰＬＤで処理したマウスは、コントロール未処理マウスと比較して腫瘍増殖の減少を示した。重要なことに、２つの薬物間の強い正の相互作用が存在した；ＰＬＤの効果は、ＶＴＸ−２３３７（Ｐ＝０．０４）と組み合わせることによって著しく高まり（図３Ｂ）、ほぼ完全に腫瘍増殖を抑制した。
【０１４４】
この薬の相互作用をさらに特徴づけるステップにおいて、実験終了後の各処置群から腫瘍を収集し、免疫組織化学およびフローサイトメトリーによって白血球の浸潤について評価した。相対的に少ないヒトＣＤ４５＋細胞は、コントロール群からの腫瘍中に存在するが（図３Ｃ）、全ての処置はＣＤ４５＋浸潤の増加を生じた。ＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の組み合わせで処理したマウスからの腫瘍は、ＰＬＤまたはＶＴＸ−２３３７のいずれか単独のものと比較して浸潤ヒトＣＤ４５＋細胞の最も大きな増加を示した（図３Ｃ）。フローサイトメトリーを用いて、異なる群で腫瘍を浸潤するヒト白血球集団の組成および成熟状態をさらに特徴付けた。ＰＬＤ単独では、基準線を超えた腫瘍浸潤白血球における顕著な変化は誘導されなかった。興味深いことに、ＴＬＲ８アゴニストは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合、ならびにＣＤ６９＋（活性化）ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合における総ＣＤ３＋Ｔ細胞の顕著な増加を誘導した。ＰＬＤおよびＴＬＲ８アゴニストの組み合わせは、同様の変化を生じた。さらに、ＶＴＸ−２３３７、ＰＬＤ単独またはそれらの組み合わせで処理したマウスにおいて、腫瘍浸潤ＣＤ４０＋（活性化）マクロファージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋）、ｐＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１２３＋）およびｍＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｃ＋）の増加が見られた（図３Ｄ）。興味深いことに、各薬物単独と比較して組み合わせで処理したマウスにおいて、腫瘍浸潤マクロファージのｐＤＣに対する比率およびｍＤＣのｐＤＣに対する比率において相対的な増加が生じた。
【０１４５】
ＴＬＲ８活性化はＰＬＤ後に腫瘍特異的なＣＴＬの発生を促進する
上記の結果は、腫瘍に対するＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の強い正の相互作用を示す。ＣＤ８＋Ｔ細胞を介在する拒絶反応は、抗腫瘍免疫応答の重要な要素であり、上記相互作用を介在するメカニズムのうちの１つでありうる。重要なことに、ＶＴＸ−２３３７およびＰＬＤの組み合わせは、有効な腫瘍抑制を生じた。
【０１４６】
この相互作用を調べる過程において、Ｔ細胞浸潤の特性は、ＰＬＤ、ＶＴＸ−２３３７またはそれらの組み合わせに応じて解析した。薬物単独、ＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の組み合わせまたはコントロール／ベヒクルで処理したＮＳＧ−ＨＩＳ−Ａ２マウスから収集した腫瘍からのＴＩＬを単離し、ｒｈＩＬ−２（６００ＩＵ／ｍＬ）を用いて増殖させた。Ｔ細胞は、コントロールとして腫瘍を保有していないＮＳＧ−ＨＩＳ−Ａ２マウスの脾臓から単離した。
【０１４７】
エクスビボで増殖させたＴＩＬは、ＯＶＣＡＲ５腫瘍を保有するＮＳＧマウスに養子導入した（腫瘍撒種３０および４０日後）。ベヒクルコントロールまたはＰＬＤ処理ドナーのいずれかから単離したＴＩＬ、ならびに腫瘍を保有するレシピエントに養子導入した腫瘍を保有していないマウスの脾臓からのＴ細胞は、レシピエントマウスにおいて腫瘍増殖を制御できなかった（図４Ｂ）。しかしながら、ＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の組み合わせ（「ＰＬＤ／ＶＴＸ−２３３７」または「ＶＴＸ−２３３７／ドキシル」）で処理したマウスに由来するＴＩＬは、レシピエントマウスにおいてＯＶＣＡＲ５腫瘍の増殖を効率的に制御することができた（図４Ｂ）。これらの結果は、ＰＬＤおよびＴＬＲ８アゴニストは、インビボで組み合わされて効果的にＴ細胞抗腫瘍免疫応答を誘導することを確認する。
【０１４８】
ＴＩＬは、インビボで腫瘍特異的ＣＴＬの存在について試験した。ＰＬＤおよびＶＴＸ−２３３７の組み合わせで処理したドナーマウスに由来するＴＩＬは、５１Ｃｒ標識ＯＶＣＡＲ５標的細胞を効果的に溶解し（図４Ａ）、ＰＬＤ単独で処理したドナーマウスに由来するＴＩＬは、溶解活性がより低かった。標的細胞を溶解するそれらの能力は、コントロール／ベヒクルで処理した群に由来するＴＩＬより非常に高かった。全ての処理群において、ＴＩＬによる標的細胞の溶解は、抗ＭＨＣクラスＩ中和抗体の付加がＣＴＬによる傷害を減少させるため、ＭＨＣ−Ｉ拘束性抗原に応答するＣＴＬによるものであった（図４Ｃ）。ＴＩＬは、ＯＶＣＡＲ５細胞またはメラノーマ細胞株のいずれかと共培養した。ＰＬＤおよびＰＬＤ／ＶＴＸ−２３３７で処理したドナーの両方に由来するＴＩＬは、メラノーマ細胞よりＯＶＣＡＲ５細胞に応じて非常に多くのＩＦＮγを放出した（図４Ｄ）。コントロール未処理マウスに由来するＴＩＬは、ＯＶＣＡＲ５刺激に応答して最小量の特異的なＩＦＮγを生じた。腫瘍を有していないマウスの脾臓から増殖させたリンパ球は、ＯＶＣＡＲ５細胞に応答してＩＦＮγ産生の細胞溶解活性を示さなかった。
【０１４９】
ＰＬＤ／ＶＴＸ−２３３７で処理したマウスに由来するＣＴＬ（細胞傷害性Ｔ細胞または細胞傷害性リンパ球）は、ＰＬＤ単独で処理したマウスに由来するＣＴＬより非常に高いレベルの細胞毒性活性を有し、このことは、ＡＰＣのＴＬＲ８活性化が抗腫瘍特異的Ｔ細胞の発生を亢進することを確認する。ＣＴＬ活性は、ｍＡｂのＭＨＣクラスＩへの付加および無関係のＨＬＡ−Ａ２＋標的細胞に対する活性の欠如によって示されるように、ＭＨＣクラスＩ拘束性であり、ＯＶＣＡＲ５特異的である。養子導入実験を用いて、ＰＬＤ／ＶＴＸ−２３３７処置から生じる腫瘍特異的なＣＴＬ活性の増加は、インビボで抗腫瘍活性を付与することが示された。ＯＶＣＡＲ５で誘発３０日および４０日後に１ｘ１０７個のＴ細胞を養子導入した非拘束性ＮＳＧ腫瘍を保有するマウスにおいて、ＶＴＸ−２３３７／ＰＬＤ（登録商標）を投与したマウスに由来する増殖させた腫瘍浸潤細胞は、有効に腫瘍増殖を制御することができた。興味深いことに、ＰＬＤ（登録商標）単独で処理したマウスの腫瘍に由来する細胞は、コントロールで処理したマウスに由来する細胞より有効ではなかった。
【０１５０】
結果から、ＶＴＸ−２３３７によるＡＰＣ活性化がアントラサイクリンによって誘導される適応免疫応答の発生を高めることがさらに示される。腫瘍特異的ＣＴＬの発生がＰＬＤを付与した場合にＶＴＸ−２３３７の治療効果の重要な構成成分であるが、抗腫瘍活性を有するメディエーターの放出は、補完的でありうる。高いレベルのＩＦＮγの放出は、ＮＫ細胞を活性化し、腫瘍細胞の溶解を増加することができる。ＶＴＸ−２３３７によるＩＬ−１２の放出はまた、腫瘍に対する免疫応答の発生の成功に重要な意味を持つ。このメディエーターは、ＮＫ細胞を活性化し、抗血管形成経路を増強し、Ｔｈ１およびＣＴＬ応答を増加させることが報告されており、ＴＮＦαによって亢進される直接的な抗腫瘍活性を有する。よって、ＶＴＸ−２３３７によるＴＬＲ８の選択的な活性化によって誘導されるメディエーターは、ＯＶＣＡＲ５腫瘍細胞に対する直接的な活性について測定した。
【０１５１】
ＴＮＦαは、ＴＬＲ８活性化およびＰＬＤの間の相互作用を部分的に介在する
ドキシル／ＶＴＸ−２３３７の組み合わせで観察される抗腫瘍活性を高めることに関連することを示すために実験を行った。新たに調製したヒトＰＢＭＣをＶＴＸ−２３３７（１μｇ／ｍｌ）または抗ＣＤ３／２８ビーズで活性化させ、培地を６時間後に収集した。ＯＶＣＡＲ５細胞を培地に暴露し、アポトーシスを２４時間で測定し、細胞生存率を４８時間で測定した。
【０１５２】
腫瘍特異的ＣＴＬ以外に、ＴＬＲ８活性化はまた、腫瘍細胞に直接作用してアポトーシスを誘導することができる自然抗腫瘍応答（ＴＮＦファミリーのメンバーなどの可溶性メディエーターの放出を含む）にも関連しうる。ＴＬＲ８活性化は、図１に示すように、高いレベルのＴＮＦαの産生に関連するため、ＴＮＦαは、ＶＴＸ−２３３７の効果のメディエーターである可能性がある。ＯＶＣＡＲ５細胞におけるＴＮＦα受容体１（ＴＮＦＲ１）の発現は、ウェスタンブロットによって試験し、実証した（図５Ｃ）。ＯＶＣＡＲ５細胞のＴＮＦαに対する感受性試験の間、細胞は２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα（細胞毒性効果を直接発揮する用量）で２４時間インキュベートした。ＴＮＦＲ１を発現しているにもかかわらず、ＯＶＣＡＲ５細胞は、アネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤ染色によって測定されるように（図５Ｄ）、ＴＮＦα介在アポトーシスに耐性を示した。
【０１５３】
腫瘍細胞は、ＦＡＤＤ様ＩＬ−１ｈ変換酵素（ＦＬＩＣＥ）様抑制タンパク質またはＦＬＩＰＰの過剰発現を介してＴＮＦα介在アポトーシスに耐性を有しうる。ＦＬＩＰは、長い型（ＦＬＩＰＬ，５５ＫＤａ）および短い型（ＦＬＩＰＳ，２８ＫＤａ）の両方で存在することができ、異なる細胞タイプにおいてＴＮＦαファミリーメンバー（ＴＮＦαおよびＴＲＡＩＬを含む）によって誘導されたアポトーシスを阻害することができる。ＯＶＣＡＲ５細胞は、ＦＬＩＰの５５Ｋｄ型であるＦＬＩＰＬを発現した（図５Ｅ，ＣＴＲＬレーン：コントロール未処理細胞）。
【０１５４】
ドキソルビシンは細胞死を誘発し、インビボでのその活性はＶＴＸ−２３３７によって高められるため、ドキソルビシンがＯＶＣＡＲ５細胞をＴＮＦαで誘発されたアポトーシスに対してより感受性にすることを試験した。ＯＶＣＡＲ５細胞は、コントロール培地またはＰＬＤを１μｇ／ｍＬで含有する培地で前もって２４時間インキュベートし、続いてコントロール培地またはＴＮＦα（２０ｎｇ／ｍｌ）を含有する培地で１２時間インキュベートした。ＴＮＦαおよびドキシル単独では、最小のアポトーシスが誘導され、細胞がこれらの２つの薬剤の組み合わせで処理された場合、アポトーシスの顕著な増加が検出された（図５Ｄ）。ＯＶＣＡＲ５細胞をＰＬＤで処理することにより、ウェスタンブロットで示されるように（図５Ｅ）、ＦＬＩＰ発現が抑制されることが見出された。
【０１５５】
ＴＮＦαは、図１Ｃおよび図２に示されるように、ＶＴＸ−２３３７または組み合わせ処理によってインビボで顕著に上方調節された。腫瘍細胞におけるＴＮＦα受容体のファミリーの活性化は、カスパーゼ８の活性化を生じ、これによってアポトーシスを誘導することができる。ＯＶＣＡＲ５細胞は、ＴＮＦα受容体１を発現することが見出されたが、ＴＮＦαのみにほぼ完全に耐性を有した。しかしながら、ＯＶＣＡＲ５細胞を単一薬剤と比較して組み合わせ薬剤で処理した場合、アポトーシスの増加が検出された。ドキソルビシンは、ＤＮＡに挿入されてＤＮＡ複製を妨げ、翻訳を阻害して高分子の生合成を阻害し、ＲＯＳの産生によりＤＮＡを損傷させることによって細胞を死滅させる。ＰＬＤで前処理したＯＶＣＡＲ５細胞によるＦＬＩＰ発現の阻害も示し、このことにより、新たなタンパク質合成の妨げがこれらの腫瘍細胞をＴＮＦファミリーメンバーによって介在されるアポトーシスに対してより感受性を与えることが示される。
【０１５６】
要するに、ドキソルビシンによって介在される腫瘍の細胞死は、免疫学的にサイレントではなく、免疫系の活性化および腫瘍細胞の制御に関与する適応免疫応答の発生が介在する。しかしながら、ドキソルビシンの活性はまた、免疫系細胞傷害による防御免疫応答の発生をも損ないうる。予想外なことに、ＴＬＲ８アゴニストＶＴＸ−２３３７を治療計画に加えると、腫瘍を保有するＮＳＧ−ＨＩＳマウスを用いた新規な卵巣癌マウスモデルにおいて、ＰＬＤ（登録商標）の抗腫瘍効果を高めることがわかった。ＶＴＸ−２３３７で処理すると、免疫細胞の腫瘍への遊走を増加させ、ＯＶＣＡＲ５細胞をインビトロで溶解し、インビボで腫瘍増殖を制御できる腫瘍特異的ＣＴＬの発生を高めることがわかった。ＴＬＲ８の活性はまた、抗腫瘍活性を有する複数のメディエーター（ＴＮＦα、ＩＬ−１２およびＩＦＮγを含む）の放出を生じ、抗腫瘍応答をさらに高めることができる。ＴＬＲ８活性を生じる高レベルのＴＮＦαは、ＯＶＣＡＲ５細胞に直接作用して、アポトーシスを誘導できるが、前記細胞は、タンパク質合成におけるドキソルビシンの効果のため、このアポトーシス経路により感受性を有するようになる。よって、これらの結果は、免疫療法が卵巣癌における現在の癌治療の効果を増加させることができることを示す。進行性の再発した卵巣癌を有する患者のための二次治療としてＰＬＤ（登録商標）と組み合わせたＶＴＸ−２３３７の実験は、現在継続中である。
【０１５７】
実施例２：ＶＴＸ−２３３７の効力および選択性
【０１５８】
ＴＬＲ８およびＴＬＲ７のＶＴＸ−２３３７活性の半数効果濃度（ＥＣ５０）は、１５人の健常なドナーに由来する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＴＬＲ８またはＴＬＲ７およびＮＦ−κＢ駆動レポーター遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞中でも測定した。図６に示されるように、ＰＢＭＣにおいて、ＶＴＸ−２３３７で刺激したＴＮＦα産生（７４ｎＭのＥＣ５０を有するＴＬＲ８活性のマーカー）およびＩＦＮα産生（ＥＣ５０＞３，３３３ｎＭを有するＴＬＲ７活性のマーカー）は、ＶＴＸ−２３３７がＴＬＲ７と比較してＴＬＲ８に対して＞４５倍の選択性を有することを示す。ＴＬＲ７およびＴＬＲ８のＨＥＫ２９３形質転換体からのデータは、ＴＬＲ８について７０ｎＭおよびＴＬＲ７について２，００５ｎＭのＥＣ５０を有するＰＢＭＣを用いて得たデータに密接に相関した。ＶＴＸ−２３３７は、２５μＭまでの濃度でＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６またはＴＬＲ９に対して活性を有さないことが観察された。
【０１５９】
実施例３：ＶＴＸ−２３３７は、ヒト全血中の様々なサイトカインおよびケモカインを活性化する
【０１６０】
ＶＴＸ−２３３７の免疫刺激特性は、炎症プロセスに関連する９８個の異なる分析物（サイトカイン、ケモカインおよびＴＬＲ７／８活性に応じて白血球によって作り出される他のタンパク質を含む）のレベルを定量するために、ｈｕｍａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｎａｌｙｔｅ  ｐａｎｅｌ（ＭＡＰ），ｖｅｒｓｉｏｎ  １．８（Ｒｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）を用いて特徴付けした。全血は、６人の正常なヒトボランティアから収集し、Ｉｎｓｔａｎｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、ＶＴＸ−２３３７を０．１、０．３、１．０および３．０μＭの濃度でインビトロにて活性化した。ＶＴＸ−２３３７と共培養して、図７に示されるように、多くの免疫メディエーター（ＴＮＦα、ＩＬ−１２p４０、ＩＬ−１βおよび ＭＩＰ−１βを含む）で用量依存的な増加を生じた。
【０１６１】
実施例４：ＶＴＸ−２３３７は、単球および骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）を活性化するが、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化しない
【０１６２】
ＶＴＸ−２３３７の細胞特異性を評価するために、健常なドナーに由来するヒトＰＢＭＣを０．８μＭ  ＶＴＸ−２３３７で刺激し、ＰＢＭＣ中に存在する特異的な細胞サブセットの産生細胞内サイトカインをフローサイトメトリーで測定した。図８に示されるように、データは、単球（ＣＤ１４＋）、ｐＤＣ（ＣＤ１２３＋）およびｍＤＣ（ＣＤ１１ｃ＋）中のＩＬ−１２、ＴＮＦαおよびＩＦＮαに陽性である細胞の割合として表す。各データポイントは、各ドナー（ｎ＝１０）からの応答を表す。水平バーは、その群の平均を表す。ＩＬ−１２およびＴＮＦαの細胞内レベルは、ＴＬＲ８の細胞発現パターンと一致して、ＶＴＸ−２３３７で処理した単球およびｍＤＣで上昇したが、ｐＤＣでは上昇しなかった。
【０１６３】
実施例５：ＶＴＸ−２３３７の第Ｉ相臨床試験
【０１６４】
用量漸増試験は、進行性の固形腫瘍またはリンパ腫にかかっている成人患者に投与した場合、ＶＴＸ−２３３７の安全性、忍容性および薬理を評価するために実施した。この試験の主な目的は、ＶＴＸ−２３３７の安全性および薬物動態を測定し、用量制限毒性を同定することであった。前記試験の第２の目的は、ＶＴＸ−２３３７に対する薬力学的応答を測定し、ＶＴＸ−２３３７を用いた単一治療周期のための最大耐容用量（ＭＴＤ）を調べることであった。
【０１６５】
試験方法：
ＶＴＸ−２３３７は、２周期の２８日投薬周期のうちの１、８および１５日目に皮下注射により１週間に１回投与した。フィボナッチ漸増スケジュールを改変して用いて、連続するコホートは、ＶＴＸ−２３３７の０．１ｍｇ／ｍ２から３．９ｍｇ／ｍ２の範囲である用量を受容した。血漿サンプルは、最初の治療周期の最初の投薬後の薬物動態解析のために、および最初と２回目の治療周期の最初の投薬後に薬力学的解析のために収集した。
【０１６６】
臨床反応は、ＲＥＣＩＳＴによって測定し、ＣＲ（すなわち、完全な応答）、ＰＲ（すなわち、部分的な応答）またはＳＤ（すなわち、安定な疾患）を示す患者は、さらなる治療周期を受けた。
【０１６７】
患者の人口統計：
様々な後期固形腫瘍にかかっている３３人の患者は、８つの連続コホートで評価した。。評価した癌の分布は以下のとおりであった：結腸直腸（ｎ＝９、または登録される患者の２７％）、膵臓（ｎ＝６／１８％）、メラノーマ（ｎ＝５／１５％）、胆管癌（ｎ＝２／６％）、腎臓細胞（ｎ＝２／６％）、ならびに肝細胞、乳房、子宮内膜、前立腺、卵巣、舌の腺様嚢胞癌、転移性基底細胞、十二指腸および肝臓の神経内分泌癌、起源不明の腫瘍をそれぞれ有する１人の患者（３％）。ＶＴＸ−２３３７の最初の用量の皮下投与０．５、１、１．５、２、４、８および２４時間後にサンプルを収集し、ＶＴＸ−２３３７の血漿レベルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量した。ＶＴＸ−２３３７は、投薬０．５〜０．８時間の間に平均Ｔｍａｘを生じつつ全身循環血流に急速に吸収された。ＶＴＸ−２３３７は、１．７〜６．７時間の間の平均半減期（ｔ１／２）で循環血流から急速に消失した。ピーク血漿レベル（Ｃｍａｘ）および総全身暴露量の両方は、用量の増加に伴って増加した。ＣｍａｘおよびＡＵＣ（０−∞）についての用量標準化（ＤＮ）値を算出した。一般に、評価される用量範囲に関して、ＶＴＸ−２３３７の薬物動態は、直線であるように見える。薬物動態的結果は、下記の図９および表１に示す。
表１
【化３】
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【０１６８】
ＶＴＸ−２３３７に対する薬力学的（ＰＤ）応答を評価するために、血液は、ＶＴＸ−２３３７の最初の周期の最初の投薬の皮下投与０、４、８、２４時間後に収集した。免疫メディエーターの血漿レベルは、ｈｕｍａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｎａｌｙｔｅ  ｐａｎｅｌ（ＭＡＰ），ｖｅｒｓｉｏｎ  １．８（Ｒｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）を用いて定量した。多くのバイオマーカー（Ｇ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１βおよびＴＮＦαを含む）での用量依存的な増加が、投薬４〜８時間後に、一般的に２４時間までに基底線に戻るレベルで観察された。９人の健常なボランティアから収集した血漿中のメディエーターのレベルは、腫瘍集団との比較のために示す。ＶＴＸ−２３３７の皮下投与後の薬力学的応答は、下記の表２に示す。
表２
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【０１６９】
ＶＴＸ−２３３７に対する薬力学的応答は、繰り返し投与が同等の効果を生じるかどうかを評価するために、ＶＴＸ−２３３７による一次および二次治療周期の両方の最初の投与後に測定した（１日目および２９日目）。図１０Ａおよび１０Ｂにおけるバーは、複数の周期のＶＴＸ−２３３７を受容した各コホートにおける各患者からのＧ−ＣＳＦおよびＭＩＰ−１βの血漿レベルを表す。ＶＴＸ−２３３７による治療周期後の免疫応答の増強または脱感作を生じた。すなわち、薬力学的応答は、複数の治療周期について一致する。
【０１７０】
有害事象プロファイル：
ＶＴＸ−２３３７は、一般に、安全であり、十分に耐容性を示した。最も一般的な薬物関連有害事象は、注射部位の反応、微熱およびインフルエンザ様症状であった。これらの観察は、免疫調節剤の投与後に予想されなかったわけではなかった。薬物に関連する血液または胃腸の有害事象は観察されなかった。
【０１７１】
要するに、新規のＴＬＲ８アゴニストであるＶＴＸ−２３３７の１週間に１回の皮下投与は、一般に安全であり、十分に忍容性を有することが観察された。すなわち、ＶＴＸ−２３３７の血漿レベルおよびＶＴＸ−２３３７に対するＰＤ応答は、用量依存的に増加し、ＶＴＸ−２３３７の皮下投与は、自然免疫応答の活性と一致する複数の炎症メディエーター（サイトカインおよびケモカインを含む）を刺激する。
【０１７２】
参照による引用
本明細書で引用する特許文献および科学論文の各々の全体の開示は、出典明示により本明細書に取り込まれる。
【０１７３】
同等物
本発明は、その精神または必須な特性から逸脱することなく他の具体的な形態で実施することができる。よって、前記の実施態様は、本明細書に記載の発明として限定されるものではなく、むしろ例示されるものと考えられるべきである。本発明の範囲は、上記の明細書によるものではなく、特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の同等の意味と範囲内にあるあらゆる変形は、本発明に含まれるものとされる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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