(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１】
0006019021.tif 000068
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５が独立して、水素、ヒドロキシル、メチル、Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ３、およびＣＨ２ＯＨからなる群から選択される；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のうちの少なくとも１つは、ヒドロキシルである；
Ｒ１０はＣＨ２Ｏ−チグロイル基に結合する、若しくはＲ１０ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ８のうちの少なくとも１つまたは２つが独立して、Ｏ−チグロイル及びＣＨ２Ｏ−チグロイルからなる群から選択される基に結合する；
Ｒ１６はＨ、ＣＨ３、又はＯＨである；
から選択される化合物。
【請求項２】
構造：
【化２】
0006019021.tif 000069
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８が独立して、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、水素、ヒドロキシル、メチル、Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイルからなる群から選択され；
ここで、Ｒ１０はＣＨ２Ｏ−チグロイル基に結合する、若しくはＲ１０ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ８のいずれか１もしくは２もしくは３もしくは４つが独立して、Ｏ−チグロイルまたはＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合し；
Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５が独立して、ＣＨ３に結合する；
Ｒ３が、ＯＨもしくはＨである；
から選択される化合物。
【請求項３】
Ｒ１０ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ８のうちの少なくとも１または２つが独立して、Ｏ−チグロイルまたはＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合する、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ４およびＲ１０が独立して、Ｏ−チグロイルまたはＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合する、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４およびＲ１０が独立して、Ｏ−チグロイルまたはＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合する、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１０がＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合する、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４およびＲ１０が独立して、ＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合する；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ８が、ＯＨもしくはＨである；
Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５が、ＣＨ３である、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１０ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ８のいずれか２つが独立して、Ｏ−チグロイル又はＣＨ２Ｏ−チグロイルに結合する、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項９】
ａ）構造：
【化３】
0006019021.tif 000070
または化学名：２４，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
ｂ）構造：
【化４】
0006019021.tif 000071
または化学名：２４−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
ｃ）構造：
【化５】
0006019021.tif 000072
または化学名：２２，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
ｄ）構造
【化６】
0006019021.tif 000073
または化学名：２１，２４，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
ｅ）構造
【化７】
0006019021.tif 000074
または化学名：２２，２４，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
ｆ）構造
【化８】
0006019021.tif 000075
または化学名：３，２１，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
ｇ）構造
【化９】
0006019021.tif 000076
または化学名：２１，２４−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エンを有する、単離、精製または合成された化合物
から選択される、請求項２記載の化合物。
【請求項１０】
薬剤的に許容される担体または希釈剤をさらに含む、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む組成物。
【請求項１１】
ガンの治療のため、ガン成長の阻害、ガン浸潤の阻害、ガン転移の阻害、細胞接着の調節、細胞付着の調節のための、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む組成物であり、
ガンが、乳ガン、白血球ガン、肝臓ガン、卵巣ガン、膀胱ガン、前立腺ガン、皮膚ガン、骨ガン、脳ガン、白血病ガン、肺ガン、結腸ガン、ＣＮＳガン、黒色腫、腎臓ガン、子宮頸ガン、食道ガン、精巣ガン、脾臓ガン、腎臓ガン、リンパ腺ガン、膵臓ガン、胃ガンおよび甲状腺ガンからなる群から選択され；
前記細胞が、乳房細胞、白血球細胞、肝臓細胞、卵巣細胞、膀胱細胞、前立腺細胞、皮膚細胞、骨細胞、脳細胞、白血病細胞、肺細胞、結腸細胞、ＣＮＳ細胞、黒色腫細胞、腎臓細胞、子宮頸部細胞、食道細胞、精巣細胞、脾臓細胞、腎臓細胞、リンパ細胞、膵臓細胞、胃細胞および甲状腺細胞からなる群から選択される、組成物。
【請求項１２】
ガンを治療するため、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤；細胞接着、細胞付着、細胞循環の阻害；ウイルスを阻害するため；脳の老化を予防するため；記憶力を向上させるため；脳機能を改善するため；遺尿症、頻尿、尿失禁、認知症、アルツハイマー病、自閉症、脳外傷、パーキンソン病または脳機能不全に起因する他の疾患を治療するため；関節炎、リウマチ、血行不良、動脈硬化、レイノー症候群、狭心症、心疾患、冠動脈性心疾患、頭痛、眩暈、腎臓障害、脳血管疾患を治療するため；ＮＦ−カッパＢ活性化の阻害；脳浮腫、重症急性呼吸器症候群、呼吸器ウイルス疾患、慢性静脈不全、高血圧、慢性静脈疾患、浮腫、炎症、痔、末梢浮腫形成、拡張蛇行静脈疾患、インフルエンザ、外傷後浮腫および術後の腫脹を治療するため；血栓を阻害するため；エタノール吸収を阻害するため；血糖を下げるため；副腎皮質刺激ホルモンおよびコルチコステロンレベルを調節するための、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む組成物。
【請求項１３】
医薬を製造するための、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１４】
医薬として、有効量の請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含む組成物。
【請求項１５】
化合物が、次の方法：
１．コア化合物またはトリテルペン、ヒドロキシル化トリテルペンコアをピリジン中に溶解させる；
２．塩化アシルを添加する；
３．混合物を、５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日を含む時間の長さで、異なる温度にて撹拌する；
４．反応の最後で、酸もしくは塩基の水溶液、または水を反応混合物に添加する；
５．溶液を次いで酢酸エチルで抽出し、凍結乾燥する；
６．反応生成物を、トリフルオロ酢酸またはＤＭＳＯを含むアセトニトリル中に溶解させる；
７．混合物の反応生成物および個々のフラクションをＭＴＴ細胞毒性アッセイで試験する；
８．単離のためのＨＰＬＣフラクションの選択は、特定の反応時間で得られる反応生成物の細胞毒性活性にしたがう；
９．活性なエステル化生成物をＨＰＬＣで精製する；
１０．生成物を集める；
１１．生成物を試験する
を用いて得られる、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を製造する方法。
【請求項１６】
コア化合物が、テルペン、イソプレン、またはトリテルペンコアであり；
前記コア化合物がヒドロキシル化され；前記コア化合物がピリジン中に溶解され；塩化アシルが、塩化チグロイルを含む；
混合物の反応時間が、５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日間撹拌され；温度が、０Ｃ、２５Ｃ、５０Ｃまたは７５Ｃの温度であり；
ＨＣｌをはじめとする酸またはＮａＨＣＯ３をはじめとする弱塩基である塩基を、反応混合物に添加し；溶液を次いで酢酸エチルで３回抽出し、凍結乾燥し；
反応生成物を８０％アセトニトリル−０．００５％トリフルオロ酢酸またはＤＭＳＯ中に溶解させ；
単離のためのＨＰＬＣフラクションの選択が、５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日の反応時間で得られる反応生成物の細胞毒性活性にしたがう、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が０．０１ｕｇ／ｍｌ〜４０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合が０．０１ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．０１ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．０１ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が５ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．１ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．１ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．１ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．１ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．１ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が０．１ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が１ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が１ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が１ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が１ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が１ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が１ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が３ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が３ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が３ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が３ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が３ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が３ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか；または４ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が４ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が４ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が４ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が４ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が４ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌ、または５ｕｇ／ｍｌ〜８ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が５ｕｇ／ｍｌ〜９ｕｇ／ｍｌの濃度の濃度で存在するか、または前記化合物が５ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が５ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が５ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が５ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌ、または７ｕｇ／ｍｌ〜８ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が７ｕｇ／ｍｌ〜９ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が７ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が７ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が７ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物が７ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか；あるいは投与が、２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．００３〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の点滴によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．００３〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物、または２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の静脈内注射によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物、または２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の静脈内注射によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物の静脈内注射による、請求項１記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１０年７月１６日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００４２２４０号、および２０１０年８月１３日に出願された米国特許出願第１２／８５６，３２２号の優先権を主張する。本出願はまた、２００９年８月１４日に出願された米国特許出願第１２／５４１，７１３号の優先権を主張し、２００９年７月１６日に出願された米国特許出願第６１／２２６，０４３号の利益を主張する。本出願は、２００９年２月１３日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０９／３４１１５号の優先権を主張し、本出願は、２００８年３月２０日に出願された米国特許出願第６１／０３８，２７７号、２００８年５月１９日に出願された米国特許出願第６１／０５４，３０８号、の利益を主張し、２００８年２月１５日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６号、２００７年８月３０日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７７２７３号、２００７年２月１６日に出願された米国特許出願第６０／８９０，３８０号、２００７年７月３日に出願された米国特許出願第６０／９４７，７０５号、および２００７年３月７日に出願された米国特許出願第１１／６８３，１９８号の優先権を主張し、これは、２００６年４月２７に出願された米国特許出願第６０／７９５，４１７号、２００６年９月１日に出願された同第６０／８４１，７２７号、２００７年２月１６日に出願された同第６０／８９０，３８０号、および２００６年４月２７に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０１６１５８号（これは、以下の出願：（１）２００５年１１月２８日に出願された米国特許出願第１１／２８９１４２号、および２００５年１１月４日に出願された同第１１／２６７，５２３号；（２）２００５年９月７日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／３１９００号（２００４年１０月８日に出願された米国特許出願第６０／６１７，３７９号、２００４年９月２７日に出願された同第６０／６１３，８１１号、および２００４年９月７日に出願された同第６０／６０７，８５８号の優先権を主張する）；（３）２００５年５月１７日に出願された米国特許出願第１１／１３１，５５１号；ならびに（４）２００５年４月２７日に出願された米国特許出願第１１／１１７，７６０号の優先権の利益を主張する）の利益を主張する。本出願はさらに、２００６年４月２７日に出願された米国特許出願第１１／４１２，６５９号、２００５年２月１４日に出願された米国特許出願第１０／９０６，３０３号、および２００８年１２月２９日に出願された米国特許出願第１２／３４４，６８２号の優先権を主張する。これらの先行出願の内容は、それらの全体が参照によって本出願に組み入れられる。
【０００２】
本発明は、ガン浸潤、細胞浸潤、またはガン細胞浸潤を阻害するための化合物、組成物、抽出物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
本発明は、製薬学的用途のための新規化合物の合成方法を提供する。本発明は、ガンの治療のため、ガン浸潤、細胞浸潤、またはガン細胞浸潤の阻害のための方法、化合物および組成物を提供し、ここで、ガンは、乳房、白血球、肝臓、卵巣、膀胱、前立腺、皮膚、骨、脳、白血病、肺、結腸、ＣＮＳ、黒色腫、腎臓、子宮頸部、食道、精巣、脾臓、腎臓、リンパ、膵臓、胃および甲状腺ガンを含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、製薬学的用途のための新規化合物の合成方法を提供する。本発明は、ガンの治療のため、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤、および転移の阻害のための化合物、組成物、および方法を提供する。本発明は、ガンの治療のため、ガン浸潤、および転移の阻害のための医薬を製造するための化合物、組成物の使用を提供する。本発明は、接着タンパク質またはアンジオポエチンのメディエータまたは阻害剤として使用される化合物を提供する。本発明は、接着タンパク質またはアンジオポエチンを調節または阻害することによって、細胞の付着もしくは接着または血管形成を調整する方法において使用するための化合物を提供する。化合物は、本出願における式から選択される構造を含み、ここで、化合物は合成されるかまたは単離され、ここで、化合物は、サポニン、トリテルペン、５環性トリテルペン、および本出願における式から選択される化合物を含み、ここで、ガンは、乳房、白血球、肝臓、卵巣、膀胱、前立腺、皮膚、骨、脳、白血病、肺、結腸、ＣＮＳ、黒色腫、腎臓、子宮頸部、食道、精巣、脾臓、腎臓、リンパ、膵臓、胃および甲状腺ガンを含む。本発明は、細胞循環、細胞移動および炎症性疾患のメディエータとして使用される化合物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと塩化チグロイルとのエステル化生成物（Ａ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（５秒、１分、２分、５分、および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を室温（上列）および０Ｃ（下列）で実施した。
【図２】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと３，３−ジメチルアクリロイルクロリドとのエステル化生成物（Ｂ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（５秒、１分、２分、５分、および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を室温（上列）および０Ｃ（下列）で実施した。
【図３】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと４−塩化ペンテノイルとのエステル化生成物（Ｃ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（５秒、１分、２分、５分、および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を室温で実施した。
【図４】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａとヘキサノリ（Ｈｅｘａｎｏｌｙ）クロリドとのエステル化生成物（Ｄ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（５秒、１分、２分、および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を０Ｃで実施し（上列）；エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと２−エチルブチリルクロリドとのエステル化生成物（Ｅ）のＨＰＬＣプロフィールの結果を示す。反応の各時間（５秒、１分、２分、および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を０Ｃで実施した。（下列）
【図５】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと塩化アセチルとのエステル化生成物（Ｈ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（１分、２分、５分および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を室温で実施した。
【図６】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと塩化クロトノイルとのエステル化生成物（Ｉ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（５秒、１分、２分、５分および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を室温で実施した。
【図７】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと塩化シンナモイルとのエステル化生成物（Ｊ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（１分、１時間、２時間、１８時間、１８時間（加熱））から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を室温および７５Ｃで実施した。
【図８】エステル化反応の様々な時間からのＥ４Ａと塩化ベンゾイルとのエステル化生成物（Ｋ）のＨＰＬＣプロフィールを示す図である。反応の各時間（５秒、１分、２分、５分、および１０分）から得られた反応生成物を、ＨＰＬＣによって分別した。プロフィールをフラクションのＨＰＬＣ溶出時間および光学密度にしたがってプロットする。反応を０Ｃで実施した。
【図９】ＡはＥ４Ａ−チグロイル、ＢはＥ４Ａ−３，３−ジメチルアクリロイル、ＣはＥ４Ａ−４−ペンテノイルについての室温での時間分析のＭＴＴ細胞毒性活性を示す図である。
【図１０】ＡはＥ４Ａ−チグロイル、ＢはＥ４Ａ−３，３−ジメチルアクリロイル、ＣはＥ４Ａ−４−ペンテノイルについての０Ｃでの時間分析のＭＴＴ細胞毒性活性を示す図である。
【図１１】ＪはＥ４Ａ−シンナモイル、ＤはＥ４Ａ−ヘキサノイル、ＥはＥ４Ａ−２−エチルブチリル、および対照（Ｔｉｇ対照はＥ４Ａを含まないチグロイルクロリド、ＡＣ対照はＥ４Ａを含まない塩化アセチル、ＨはＥ４Ａ反応１分の塩化アセチル）についての時間分析のＭＴＴ細胞毒性活性を示す図である。
【図１２】ＨはＥ４Ａ−アセチル、ＩはＥ４Ａ−クロトノイルについての時間分析のＭＴＴ細胞毒性活性を示す図である。
【図１３】１分、１５分、３０分、１時間、２時間でのＥ４Ａ−Ｔｉｇについての時間分析のＭＴＴ細胞毒性活性を示す図である。
【図１４】１分および２時間でのＥ４Ａ−ＴｉｇのＨＰＬＣプロフィールを示す図である。
【図１５】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇについての時間分析のＭＴＴ細胞毒性活性を示す図である。結果：５秒〜１分の反応からのＥ４Ａ−Ｔｉｇが最も活性である。活性は反応の１分後に減少する。１０分以上で最小ないし０の活性が得られた。
【図１６】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ（Ｅ４Ａ、Ｅ４Ａ−ＡＳＡＰ（５秒）、Ｅ４Ａ−１分、Ｅ４Ａ−２分、Ｅ４Ａ−５分、Ｅ４Ａ−１０分、Ｅ４Ａ−３０分）のＨＰＬＣプロフィールの結果を示す図である。
【図１７】Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｅ４Ａの活性オーダーの結果を示す図であり、Ｍ＝Ｅ４Ａは活性がない。
【図１８】様々な器官のガン細胞におけるＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＭＴＴ細胞毒性活性の結果を示す図である。Ａ、骨（Ｕ２ＯＳ）ＩＣ５０＝４．５ｕｇ／ｍｌ；Ｂ、膀胱（ＴＢ９）：ＩＣ５０＝２．５ｕｇ／ｍｌ；Ｃ、肺（Ｈ４６０）：ＩＣ５０＝４．８ｕｇ／ｍｌ；Ｄ、卵巣（ＥＳ２）：ＩＣ５０＝２．８ｕｇ／ｍｌ
【図１９】様々な器官のガン細胞におけるＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＭＴＴ細胞毒性活性の結果を示す図である。Ｅ、結腸（ＨＣＴ１１６）ＩＣ５０＝５．２ｕｇ／ｍｌ；Ｆ、膵臓（Ｃａｐａｎ）ＩＣ５０＝２．４ｕｇ／ｍｌ；Ｇ、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）ＩＣ５０＝５．８ｕｇ／ｍｌ；Ｈ、乳房（ＭＣＦ−７）ＩＣ５０＝４．５ｕｇ／ｍｌ
【図２０】様々な器官のガン細胞におけるＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＭＴＴ細胞毒性活性の結果を示す図である。Ｉ、前立腺（ＤＵ１４５）ＩＣ５０＝３．６ｕｇ／ｍｌ；Ｊ、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）ＩＣ５０＝５．１ｕｇ／ｍｌ；Ｋ、口（ＫＢ）ＩＣ５０＝３ｕｇ／ｍｌ；Ｌ、腎臓（Ａ４９８）ＩＣ５０＝３．５ｕｇ／ｍｌ
【図２１】様々な器官のガン細胞におけるＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＭＴＴ細胞毒性活性の結果を示す図である。Ｍ、肝臓（ＨｅｐＧ２）ＩＣ５０＝６ｕｇ／ｍｌ；Ｎ、脳（Ｔ９８Ｇ）ＩＣ５０＝８ｕｇ／ｍｌ；Ｐ、白血病（Ｋ５６２）ＩＣ５０＝２ｕｇ／ｍｌ；Ｑ、子宮頸部（ＨｅＬａ）ＩＣ５０＝５ｕｇ／ｍｌ
【図２２（Ａ）】結果を示す図であり、Ｔｉｇ−Ｎ、−Ｑ、−Ｒ、−Ｔ−Ｓおよび−Ｖは、２０ｕｇ／ｍｌまで溶血活性を有さない。最初の化合物ＥＳは、５ｕｇ／ｍｌで１００％赤血球（ＲＢＣ）を溶解させる。
【図２２（Ｂ）】結果を示す図であり、Ｙ３と比較して、ＡＣＨ−Ｙ３は溶血活性においてあまり強力でない。Ｔｉｇ−Ｒは溶血活性を有しない。
【図２３（Ａ）】反応生成物のＨＰＬＣプロフィールの結果を示す図である。複数のフラクションが得られた。さらなる研究のために個々のフラクションを集めた。
【図２３（Ｂ）】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒの精製の結果を示す図である。
【図２４】骨Ｕ２ＯＳ細胞を用いたＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＭＴＴアッセイの結果を示す図である。
【図２５】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＨＮＭＲの結果を示す図である。
【図２６】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＣＮＭＲの結果を示す図である。
【図２７】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＨＭＱＣの結果を示す図である。
【図２８】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＨＭＢＣの結果を示す図である。
【図２９】Ｔｉｇ−Ｒ（Ｍ＋Ｈ）の質量スペクトルは６７１．４５０９であることを示す図である。質量は、提案された構造と一致する。
【図３０】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒ、２４，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エン、式：Ｃ４０Ｈ６２Ｏ８、ＦＷ：６７０．９１５４８の化学構造を示す図である。
【図３０】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒ、２４，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エン、式：Ｃ４０Ｈ６２Ｏ８、ＦＷ：６７０．９１５４８の化学構造を示す図である。
【図３１（Ａ）】反応生成物のＨＰＬＣプロフィールの結果を示す図である。複数のフラクションが得られた。さらなる研究のために個々のフラクションを集めた。
【図３１（Ｂ）】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの精製の結果を示す図である。
【図３１（Ｃ）】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓの精製の結果を示す図である。
【図３１（Ｄ）】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｔの精製の結果を示す図である。
【図３２（Ａ）】骨Ｕ２ＯＳ細胞を用いたＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＮのＭＴＴアッセイの結果を示す図である。
【図３２（Ｂ）】骨Ｕ２ＯＳ細胞を用いたＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＳのＭＴＴアッセイの結果を示す図である。
【図３３（Ａ）】骨Ｕ２ＯＳ細胞を用いたＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＴのＭＴＴアッセイの結果を示す図である。
【図３３（Ｂ）】骨卵巣ＥＳ２細胞を用いたＥ４Ａ−Ｔｉｇ−ＶのＭＴＴアッセイの結果を示す図である。ＩＣ５０＝２ｕｇ／ｍｌ
【図３３（Ｃ）】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｖの精製の結果を示す図である。
【図３４】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＶのＨＮＭＲの結果を示す図である。
【図３５】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＶのＨＭＱＣの結果を示す図である。
【図３６】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＶのＨＭＢＣの結果を示す図である。
【図３７】Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｖの質量スペクトルの結果を示す図である。Ｔｉｇ−Ｒ（Ｍ＋Ｈ）質量は７５３．４９２４であり、これは提案された式（Ｃ４５Ｈ６８Ｏ９）と一致する。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本発明は、製薬学的用途のための新規活性化合物の合成方法を提供する。本発明は、化合物を接着タンパク質およびアンジオポエチンのメディエータまたは阻害剤として使用する抗接着療法を提供する。これは、過剰な接着を阻害し、細胞付着を阻害する。これは血管形成を調節する。この化合物はさらに、細胞接着受容体のメディエータとして使用する。
【０００７】
本発明は、ガンを治療するため；ガン成長を阻害するため、ウイルスを阻害するため；脳の老化を予防するため；記憶力を向上させるため；脳機能を改善する；遺尿症、頻尿、尿失禁、認知症、アルツハイマー病、自閉症、脳外傷、パーキンソン病または脳機能不全に起因する他の疾患を治療するため；関節炎、リウマチ、血行不良、動脈硬化、レイノー症候群、狭心症、心疾患、冠動脈性心疾患、頭痛、眩暈、腎臓障害、脳血管疾患を治療するため；ＮＦ−カッパＢ活性化を阻害する；脳浮腫、重症急性呼吸器症候群、呼吸器ウイルス疾患、慢性静脈不全、高血圧、慢性静脈疾患、浮腫、炎症、痔、末梢浮腫形成、拡張蛇行静脈疾患、インフルエンザ、外傷後浮腫および術後の腫脹を治療するため；血栓を阻害するため、エタノール吸収を阻害するため；血糖を下げるため；副腎皮質刺激ホルモンおよびコルチコステロンレベルを調節するために本発明で提供される化合物またはこの化合物を含む組成物を提供する。本発明は、抗ＭＳ、抗動脈瘤、抗喘息、抗浮腫、抗炎症、抗ブラジキニン、抗毛細血管出血、抗頭痛、抗頸腕痛、抗子癇、抗浮腫、抗脳炎（ａｎｔｉｅｎｃａｐｈａｌｉｔｉｃ）、抗咽頭蓋炎、抗滲出、抗インフルエンザ、骨折治療、抗歯肉炎、抗血腫、抗ヘルペス、抗ヒスタミン、抗ヒドラスリティック（ａｎｔｉｈｙｄｒａｔｈｒｉｔｉｃ）、抗髄膜炎、抗酸化、抗歯周病、抗静脈炎、抗胸膜炎、抗嗄声、抗鼻炎、抗扁桃腺炎（ａｎｔｉｔｏｎｓｉｌｉｔｉｃ）、抗潰瘍、抗静脈瘤、抗眩暈、ガン静止（ｃａｎｃｅｒｏｓｔａｔｉｃ）、コルチコステロイド産生（ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｇｅｎｉｃ）、利尿、防かび、溶血、ヒアルロニダーゼ阻害剤、増リンパ物質、ナトリウム排泄増加、殺虫剤、脳下垂体刺激剤、チモール分解、血管保護、リーシュマニア症の阻害、ガン細胞の接着または血管形成の調節、駆虫；遺伝子：ＡＮＧＰＴ２、ＤＤＩＴ３、ＬＩＦおよびＮＦＫＢ１Ｚの発現の増大、ならびにアジュバント組成物および静脈緊張治療薬（ｖｅｎｏｔｏｎｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の製造のための組成物を提供する。
【０００８】
本発明は、ガンを治療するため、ガン浸潤を阻害するため、ガン成長を阻害するため、またはガン転移を阻害するための化合物、組成物および方法を提供し、ここで、化合物は、本出願の式から選択される構造を含み、化合物は、合成または単離することができ、化合物は、トリテルペン、５環性トリテルペン、サポニン、および本出願の式から選択される化合物を含み、ガンは、乳ガン、白血球ガン、肝臓ガン、卵巣ガン、膀胱ガン、前立腺ガン、皮膚ガン、骨ガン、脳ガン、白血病ガン（ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃａｎｃｅｒ）、肺ガン、結腸ガン、ＣＮＳガン、黒色腫、腎臓ガン、子宮頸ガン、食道ガン、精巣ガン、脾臓ガン、腎臓ガン、リンパ腺ガン、膵臓ガン、胃ガンおよび甲状腺ガンを含み；ここで、細胞は、乳房細胞、白血球細胞、肝臓細胞、卵巣細胞、膀胱細胞、前立腺細胞、皮膚細胞、骨細胞、脳細胞、白血病細胞、肺細胞、結腸細胞、ＣＮＳ細胞、黒色腫細胞、腎臓細胞、子宮頸部細胞、食道細胞、精巣細胞、脾臓細胞、腎臓細胞、リンパ細胞、膵臓細胞、胃細胞および甲状腺細胞を含む。
【０００９】
本発明は、チグロイル、アンゲロイル、アセチル、クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイル、セネシオイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、ジベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、糖部分、またはジアンゲロイル基で置換された糖部分が、５環性トリテルペン、トリテルペン、トリテルペニオド（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｉｏｄ）、トリテルペニオド（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｉｏｄ）サポニンまたは本出願の式から選択される化合物で存在することによって、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤、細胞接着、細胞循環または細胞付着の阻害をもたらすことを示す。
【００１０】
本発明は、チグロイル、アンゲロイル、アセチル、クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイル、セネシオイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、ジベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、糖部分、またはジアンゲロイル基で置換された糖部分が、５環性トリテルペン、トリテルペン、トリテルペニオド（ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｉｏｄ）、トリテルペニオドサポニンまたは本出願の式から選択される化合物の炭素位置２１、２２、２４および／または２８で存在することによって、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤の阻害をもたらすことを示す。一つの実施形態において、チグロイル、アンゲロイル、アセチル、クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイル、セネシオイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、ジベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、および糖部分から選択される基（複数可）が、トリテルペン、トリテルペニオド、トリテルペニオドサポニンまたは本出願の式から選択される化合物の炭素位置３、８、１５、２１、２２、２４および／または２８に存在することによって、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤、細胞接着、細胞付着または細胞循環の阻害をはじめとする活性を生じる。実施形態において、炭素位置２４に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２４および２８に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２４および２１に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２４、２８および２１に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２４、２８および２２に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２４、２８および３に基が存在すると活性が生じる。実施形態において炭素位置２４、および３に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２８および３に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置３に基が存在すると活性が生じる。実施形態において、炭素位置２１および２２に基が存在すると活性が生じる。
【００１１】
本発明は、官能基をコア化合物に結合させることによって活性化合物を合成する方法を示し、ここで、官能基（複数可）は、チグロイル、アンゲロイル、アセチル、クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイル、セネシオイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、ジベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、およびヘテロアリールから選択され、コア化合物は５環トリテルペンである。実施形態において、コア化合物は、４環テルペンである。実施形態において、コア化合物は、３環テルペンである。実施形態において、コア化合物は、２環テルペンである。実施形態において、コア化合物は、１環テルペンである。本発明で提供される化合物は、ガンを治療するため、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤；細胞接着、細胞付着、細胞循環の阻害；ウイルスを阻害するため；脳の老化を予防するため；記憶力を向上させるため；脳機能を改善する；遺尿症、頻尿、尿失禁、認知症、アルツハイマー病、自閉症、脳外傷、パーキンソン病または脳機能不全に起因する他の疾患を治療するため；関節炎、リウマチ、血行不良、動脈硬化、レイノー症候群、狭心症、心疾患、冠動脈性心疾患、頭痛、眩暈、腎臓障害、脳血管疾患を治療するため；ＮＦ−カッパＢ活性化を阻害する；脳浮腫、重症急性呼吸器症候群、呼吸器ウイルス疾患、慢性静脈不全、高血圧、慢性静脈疾患、浮腫、炎症、痔、末梢浮腫形成、拡張蛇行静脈疾患、インフルエンザ、外傷後浮腫および術後の腫脹を治療するため；血栓を阻害するため、エタノール吸収を阻害するため；血糖を下げるため；副腎皮質刺激ホルモンおよびコルチコステロンレベルを調節するためである。本発明は、抗ＭＳ、抗動脈瘤、抗喘息、抗浮腫、抗炎症、抗ブラジキニン、抗毛細血管出血、抗頭痛、抗頸腕痛、抗子癇、抗浮腫、抗脳炎、抗咽頭蓋炎、抗滲出、抗インフルエンザ、骨折治療、抗歯肉炎、抗血腫、抗ヘルペス、抗ヒスタミン、抗ヒドラスリティック、抗髄膜炎、抗酸化、抗歯周病、抗静脈炎、抗胸膜炎、抗嗄声、抗鼻炎、抗扁桃腺炎、抗潰瘍、抗静脈瘤、抗眩暈、ガン静止、コルチコステロイド産生、利尿、防かび、溶血、ヒアルロニダーゼ阻害剤、増リンパ物質、ナトリウム排泄増加、殺虫剤、脳下垂体刺激剤、チモール分解、血管保護、リーシュマニア症の阻害、ガン細胞の接着または血管形成の調節、駆虫；遺伝子：ＡＮＧＰＴ２、ＤＤＩＴ３、ＬＩＦおよびＮＦＫＢ１Ｚの発現の増大、ならびにアジュバント組成物および静脈緊張治療薬の製造のための組成物を提供する。
【００１２】
本発明で提示される実験は、化合物ＡＫＯＨが、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤の阻害に効果がないことを示した。ＡＫＯＨは、アンゲロイル基を活性なＸａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ（Ｙ３）の炭素位置２１および２２から除去することによって得られた。本発明は、Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ（Ｙ３）のガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害する能力が、炭素位置２１および２２からアンゲロイル基を除去することによって失われることを示す。
【００１３】
本発明で提示される実験は、Ｅ４Ａ、Ｅ５Ａ、Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ−コアを含むコア化合物が、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤の阻害に効果がないことを示した。Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ−コアは、活性なＸａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ（Ｙ３）の炭素位置２１および２２からアンゲロイル基を除去し、炭素３から糖部分を除去することによって得られた。Ｅ４Ａ（Ｅ  ＩＶ  Ａ）は、活性なＥｓｃｉｎの炭素位置３、２１および２２から基を除去することによって得られた。Ｅ５Ａ（Ｅ  Ｖ  Ａ）は、活性なＥｓｃｉｎの炭素位置３、２１および２２から基を除去することによって得られた。
【００１４】
本発明は、Ｅ４Ａ、Ｅ５Ａ、Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ−コアを含むコア化合物およびＡＫＯＨが、溶血活性および抗ガン活性を有しないことを示した。
【００１５】
本発明は、Ｔｉｇ−Ｎ、Ｔｉｇ−Ｑ、Ｔｉｇ−Ｒ、Ｔｉｇ−Ｔ  Ｔｉｇ−ＳおよびＴｉｇ−Ｖが、２０ｕｇ／ｍｌまで溶血活性を有しないことを示した。最初の化合物ＥＳは、５ｕｇ／ｍｌで１００％の赤血球（ＲＢＣ）を溶解させる。Ｙ３と比べると、ＡＣＨ−Ｙ３は溶血活性において効力が低い。Ｔｉｇ−Ｒは溶血活性を有しない。本発明は、Ｔｉｇ−Ｎ、Ｔｉｇ−Ｑ、Ｔｉｇ−Ｒ、Ｔｉｇ−Ｔ  Ｔｉｇ−ＳおよびＴｉｇ−Ｖが、抗ガン活性を有することを示した。
【００１６】
本発明は、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害するための能力は、糖部分を活性化合物、トリテルペン、トリテルペニオド、またはトリテルペニオドサポニンの炭素位置３から除去する場合に維持されることを示す。本発明で提示される実験は、化合物ＡＣＨ−Ｙ３がガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害する能力を有することを示した。化合物ＡＣＨ−Ｙ３は、活性なＸａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ（Ｙ３）の炭素位置３から糖部分を除去することによって得られた。本発明は、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害する能力が、活性なＸａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ（Ｙ３）の炭素位置３から糖部分を除去する場合に維持されることを示す。
【００１７】
ガン成長の阻害、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤の阻害を含む生物活性を有する化合物を、活性化合物と呼ぶ。
【００１８】
本発明は、ガンの治療のため、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤；細胞接着、細胞付着、細胞循環の阻害、またはガン転移を阻害するための医薬を製造するための化合物、組成物、および医薬の使用を提供し、ここで、化合物は、本出願の式から選択される構造を含み、化合物は合成または単離することができ、化合物は５環性トリテルペンを含み、細胞はガン細胞を含み、ガンは、乳ガン、白血球ガン、肝臓ガン、卵巣ガン、膀胱ガン、前立腺ガン、皮膚ガン、骨ガン、脳ガン、白血病ガン、肺ガン、結腸ガン、ＣＮＳガン、黒色腫、腎臓ガン、子宮頸ガン、食道ガン、精巣ガン、脾臓ガン、腎臓ガン、リンパ腺ガン、膵臓ガン、胃ガンおよび甲状腺ガンを含む。ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤活性を阻害する方法は、非細胞毒性薬物濃度を使用する。転移を阻害する方法は、非細胞毒性薬物濃度を使用する。細胞形態において目立った変化はない。
【００１９】
本発明は、ガンの治療のため、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤；ガンの細胞接着、細胞付着、細胞循環、遊走、転移または成長の阻害のための方法を提供し、この方法は、遺伝子発現に影響を及ぼすことを含むか、または方法は遺伝子発現を刺激することを含むか、または方法は遺伝子発現を阻害することを含むか、または方法は対象に本出願における化合物、組成物の有効量を投与することを含む。一つの実施形態において、方法は、前記細胞を、Ａ１−１８、Ａ２０−３２、Ｂ１−１８、Ｂ２０−３２、Ｃ１−１８、Ｃ２０−３２、Ｄ１−１８、Ｄ２０−３２、Ｄ１−１８、Ｄ２０−３２、Ｄ１−１８、Ｄ２０−３２、Ｄ１−１８、Ｄ２０−３２、Ｄ１−１８、Ｄ２０−３２、Ｅ１−１８、Ｅ２０−３２、Ｇ１−１８、Ｇ２０−３２、Ｈ１−１８、Ｈ２０−３２、Ｉ１−１８、Ｉ２０−３２、Ｊ１−１８、Ｊ２０−３２、Ｋ１−１８、Ｋ２０−３２、Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ０、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ（Ｙ３）、Ｙ５、Ｙ７、Ｙ８、Ｙ９、Ｙ１０、Ｘａｎｉｆｏｌｉａ（ｘ）、Ｍ１０、Ｅｓｃｉｎ（ｂＥＳ）、Ａｅｓｃｉｎ、ＡＣＨ−Ｙ（Ｙ３）、ＡＣＨ−Ｙ１０、ＡＣＨ−Ｙ２、ＡＣＨ−Ｙ８、ＡＣＨ−Ｙ７、ＡＣＨ−Ｙ０、ＡＣＨ−Ｘ、ＡＣＨ−Ｚ４、ＡＣＨ−Ｚ１、ＡＣＨ−Ｅｓｃｉｎ（ｂＥＳ）、ＡＣＨ−Ｍ１０およびその塩、エステル、代謝物、ならびに式２Ａ、およびＫから選択される化合物と接触させることを含む。
【００２０】
インビトロ実験は、構造（２Ａ）または（Ｋ）から選択される化合物が培養フラスコへの細胞接着を阻害することを示す。化合物は、細胞に対するこれらの接着分子の機能を遮断する。一つの実施形態において、選択された化合物は、細胞に対するこれらの接着分子の機能を遮断する。一つの実施形態において、選択された化合物は、ガン細胞に対するこれらの接着分子の機能を遮断する。一つの実施形態において、選択された化合物は、中皮細胞に対するこれらの接着分子の機能を遮断する。本発明は、化合物を接着タンパク質およびアンジオポエチンのメディエータまたは阻害剤として使用する抗接着療法を提供する。これは、過剰な接着を阻害し、細胞付着を阻害する。本発明は、細胞循環、細胞移動および炎症性疾患のメディエータとして使用するための化合物を提供する。一つの実施形態において、選択された化合物は、膜上の接着タンパク質と結合し（マスキングによる）、接着タンパク質とそれらの受容体との相互作用を阻害する。一つの実施形態において、膜に対する選択された化合物の作用は、膜における接着タンパク質の機能に影響を及ぼす。ガン細胞の接着活性の喪失は、膜タンパク質に対する選択された化合物の直接的または間接的作用の結果である。
【００２１】
（本発明者等の精製方法および生物学的アッセイは、２００５年９月７日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／３１９００号、２００５年１１月２８日に出願された米国特許出願第１１／２８９１４２号、および２００５年５月１７日に出願された米国特許出願第１１／１３１５５１号、および２００８年２月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６、１１８８−ＡＬＡ−ＰＣＴにおけるＭＴＴアッセイ、２０１０年７月１６日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００４２２４０号における細胞浸潤実験方法を含み、これらの内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）
【００２２】
本発明は、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤、ガンの遊走、転移または成長を阻害するための化合物または方法の使用を提供し、ここで、本発明は、組成物の投与のためのプロセスおよび方法を含み、ここで、投与は、静脈内注射、点滴、腹腔内注射または経口投与により；投与は、２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．００３〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の点滴によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．００３〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物、または２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の静脈内注射によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０３ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物、または２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の静脈内注射によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物、または２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の静脈内注射によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物の静脈内注射によるか、あるいは２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中もしくは２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物の点滴によるか、あるいは１０〜２０ｍｌの１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物の静脈内注射によるか、あるいは１０％グルコース溶液もしくは０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた２．５ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物の腹腔内注射（Ｉ．Ｐ．）によるか、あるいはほ乳動物の投与量が、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、３０〜６０ｍｇ／ｋｇ、または６０〜９０ｍｇ／ｋｇ体重の化合物である経口投与によるか、あるいはほ乳動物の投与量が、０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２〜０．４ｍｇ／ｋｇ体重、または０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇ体重の化合物である静脈内注射もしくは点滴によるか、あるいはほ乳動物の投与量が、１〜３ｍｇ／ｋｇ、３〜５ｍｇ／ｋｇ、４〜６ｍｇ／ｋｇ、または６〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の化合物である腹腔内注射（Ｉ．Ｐ．）による。
【００２３】
本発明は、ガンを治療するため、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤；ガンの細胞接着、細胞付着、細胞循環、遊走、転移または成長を阻害するための化合物または方法の使用を提供し、ここで、本発明は、本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩、および薬剤的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物を含み、前記化合物は、０．０１ｕｇ／ｍｌ〜６５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕｇ／ｍｌ〜４０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、４ｕｇ／ｍｌ〜５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、４ｕｇ／ｍｌ〜７．５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、４ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、４ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、４ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、４ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜８ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜９ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕｇ／ｍｌ〜８ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕｇ／ｍｌ〜９ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕｇ／ｍｌ〜１０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕｇ／ｍｌ〜１５ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕｇ／ｍｌ〜２０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕｇ／ｍｌ〜３０ｕｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００２４】
本発明は、ガンを治療するため、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤；ガンの細胞接着、細胞付着、細胞循環、遊走、転移または成長を阻害するための化合物または方法の使用を提供し、ここで、本発明は、本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩、および薬剤的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物を含み、ここで、前記化合物は、０．００８ｕＭ〜８０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕＭ〜６０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕＭ〜５０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕＭ〜４０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕＭ〜３０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕＭ〜２０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．０１ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜７．５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜１５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜２０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜３０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜４０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜５０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜６０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、０．１ｕＭ〜８０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜７．５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜１５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜２０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜３０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜４０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜５０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜６０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、１ｕＭ〜８０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜７．５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜１５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜２０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜３０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜４０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜５０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜６０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、３ｕＭ〜８０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜８ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜１５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜２０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜３０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜４０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜５０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜６０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、５ｕＭ〜８０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜８ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜１０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜１５ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜２０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜３０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜４０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜５０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜６０ｕＭの濃度で存在するか、または前記化合物は、７ｕＭ〜８０ｕＭの濃度で存在する。
【００２５】
本発明は、後述の実験の詳細を参照することによってよりよく理解されるであろうが、当業者らは、詳述された特定の実験が単に例示的であって、本明細書中に記載されるように本発明を限定するものではなく、本発明はその後に記載される特許請求の範囲によって規定されることを容易に理解するであろう。
【００２６】
本出願全体を通して、様々な参考文献または刊行物が引用されている。これらの参考文献または刊行物の開示は、本発明が関連する技術分野の状態をさらに十分に記載するために、その全体が参照によって本出願に組み込まれる。
【００２７】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という移行句は、「包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「〜によって特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」と同義であり、包括的であるかまたは最低限含み、記載されていないさらなる要素または方法ステップを除外しないということに注意すべきである。
【００２８】
例１
１０ｍｇ、２０ｍｇ  ３０ｍｇの活性化合物を含有する用量の錠剤
活性化合物  １ｍｇ  ５ｍｇ  １０ｍｇ  ２０ｍｇ  ３０ｍｇ
微結晶セルロース  ２０ｍｇ  ２０ｍｇ  １９．７５ｍｇ  ６０ｍｇ  １００ｍｇ
コーンスターチ  ２９ｍｇ  ２４．５ｍｇ  １９．７５ｍｇ  １９．２５ｍｇ  １８．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ０ｍｇ  ０．５ｍｇ  ０．５ｍｇ  ０．７５ｍｇ  １．５ｍｇ
【００２９】
活性化合物、セルロース、およびコーンスターチの一部を混合し、造粒して、１０％コーンスターチペーストにする。結果として得られた顆粒を篩過し、乾燥し、コーンスターチの残りおよびステアリン酸マグネシウムとブレンドする。結果として得られた顆粒を次いで圧縮して、１錠あたりそれぞれ１、５、１０、２０、３０ｍｇの活性成分を含有する錠剤にする。
【００３０】
例２
静脈内溶液製剤
活性化合物の静脈内投与形態を次のようにして調製する：
活性化合物  １〜１０ｕｇ
クエン酸ナトリウム  ５〜５０ｍｇ
クエン酸  １〜１５ｍｇ
塩化ナトリウム  １〜８ｍｇ
注射用水（ＵＳＰ）  １ｍＬにするために必要な量
【００３１】
前述の量を使用して、活性化合物を、注射用水中、塩化ナトリウム、クエン酸、およびクエン酸ナトリウムの調製された溶液中に室温にて溶解させる。
【００３２】
例３
点滴製剤
２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中または２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた０．２５〜２．５ｍｇの化合物
点滴製剤：２５０ｍｌの１０％グルコース溶液中または２５０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液中に溶解させた１〜２．ｍｇの化合物
【００３３】
アンゲリカ酸を、オキシ塩化リン、三塩化リンおよび塩化チオニルをはじめとする多くの標準的塩素化試薬のうちの１つで処理すると、塩化チグロイルが生じる。塩化オキサリルは、２：１比の塩化アンゲロイルと塩化チグロイルを生成する。ジエチルエーテル中カリウム塩を塩化オキサリルおよび触媒ＤＭＦで２時間０Ｃにて処理すると、純粋な塩化アンゲロイルが生じる。
【００３４】
【化１】
0006019021.tif 000002
【００３５】
次の化合物の酸加水分解：
【００３６】
ａ）Ｘａｎｉｆｏｌｉａ（Ｙ）
【化２】
0006019021.tif 000003
または化学名：３−Ο−［β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）］−α−Ｌ−アラビノフラノシ（１→３）−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−２１，２２−Ｏ−ジアンゲロイル−３β，１５α，１６α，２１β，２２α，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エン；
【００３７】
ｃ）Ｘａｎｉｆｏｌｉａ（Ｙ２）
【化３】
0006019021.tif 000004
または化学名：３−Ο−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｌ−アラビノフラノシ（１→３）−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−２１，２２−Ｏ−ジアンゲロイル−３β，１５α，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘプタヒドロキシオレアン−１２−エン；
【００３８】
ｄ）Ｘａｎｉｆｏｌｉａ（Ｙ８）
【化４】
0006019021.tif 000005
または化学名：３−Ｏ−［β−グルコピラノシル（１→２）］−α−アラビノフラノシル（１→３）−β−Ｄ−グルクロノピラノシル−２１，２２−Ｏ−ジアンゲロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エン；
【００３９】
ｆ）Ｘａｎｉｆｏｌｉａ（Ｙ１０）
【化５】
0006019021.tif 000006
または化学名：３−Ｏ−［β−ガラクトピラノシル（１→２）］−α−アラビノフラノシル（１→３）−β−グルクロノピラノシル−２１，２２−Ｏ−ジアンゲロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２８−ペンタヒドロキシオレアン−１２−エン。
【００４０】
ｊ）構造（Ｍ１０）
【化６】
0006019021.tif 000007
【００４１】
ｍ）構造（ｂＥＳ）：
【化７】
0006019021.tif 000008
【００４２】
前記の酸加水分解後、以下から選択される構造（ＡＣＨ）を有する単離、精製または合成された化合物を生成する：
【００４３】
【化８】
0006019021.tif 000009
【００４４】
組成物は、天然の植物または合成から得られる生物活性化合物を含む。
【００４５】
プログラムは、本発明者等の精製方法およびＭＴＴアッセイを含む生物学的アッセイに基づく。２００５年９月７日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０５／３１９００号、２００５年１１月２８日に出願された米国特許出願第１１／２８９１４２号、および２００５年５月１７日に出願された米国特許出願第１１／１３１５５１号、および２００８年２月１５に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６、１１８８−ＡＬＡ−ＰＣＴ、２００８年１２月２９日に出願された１２／３４４，６８２、１０２０−Ｂ１−ＵＳ（その内容は、参照によって本明細書中に組み込まれる）を参照のこと。ミクロアレイによるＹ−処理後のＥＳ２細胞の遺伝子発現の分析、データ分析方法およびウェスタンブロットの詳細は、２００８年２月１５に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６、１１８８−ＡＬＡ−ＰＣＴ、および細胞浸潤実験方法は、２０１０年７月１６日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００４２２４０号に記載されており、その内容は、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００４６】
溶血アッセイ
赤血球（ＲＢＣ）は、ヒト血液（ＥＤＴＡ全血、ランダムに集める）から単離した。５０ｕｌの１０％ＲＢＣ懸濁液（ＰＢＳ中）を２ｍｌの試料のＰＢＳ中溶液（濃度は０．１ｕｇ／ｍｌから４００ｕｇ／ｍｌまでの範囲）に添加した。混合物を短時間ボルテックスし、室温で６０分間静置した。混合物を３Ｋで１０分間スピンさせ、上清中の溶解したヘモグロビンの相対量を５４０ｎｍで測定した。本出願の合成化合物をこの方法で試験した。
【００４７】
サポニンの酸加水分解
１５ｍｇのＸａｎｉｆｏｌｉａ−Ｙを１ｍｌのメタノール中に溶解させた。１ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌを次いで添加した。混合物を８０Ｃの水浴中で５時間還流させた。次いで、２ｍｌの１Ｎ  ＮａＯＨを添加することによって、溶液を（最終ｐＨ４〜６まで）中和した。次いで、アグリコンを酢酸エチル３ｍｌ×２で抽出した。抽出物を集め、プールした。アグリコン（ＡＣＨ−Ｙ）のさらなる単離は、ＨＰＬＣにより８０〜１００％アセトニトリルの定組成溶離で達成された。化合物Ｚ４、Ｙ１０、Ｙ２、Ｙ８、Ｙ７、Ｙ０、Ｘ、Ｍ１０およびＥＳＣＩＮ（ｂＥＳ）を用いて実験を繰り返して、それぞれ次の化合物を得る：ＡＣＨ−Ｚ４、ＡＣＨ−Ｙ１０、ＡＣＨ−Ｙ２、ＡＣＨ−Ｙ８、ＡＣＨ−Ｙ７、ＡＣＨ−Ｙ０、ＡＣＨ−Ｘ、ＡＣＨ−Ｅ、ＡＣＨ−Ｚ５、ＡＣＨ−Ｍ１０およびＡＣＨ−ｂＥＳ。２０１０年７月１６に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／００４２２４０号（その内容は、参照によって本明細書中に組み込まれる）における実験方法。
【００４８】
アルカリ加水分解によるアシル基の除去
２０ｍｇのＸａｎｉｆｏｌｉａ−Ｙを０．５ｍｌの１Ｎ  ＮａＯＨ中に溶解させた。溶液を８０Ｃの水浴中で４時間インキュベートした。それを室温まで冷却した後、０．５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌで中和した（ｐＨを約３に調節）。混合物を２ｍｌの１−ブタノールで３回抽出した。ブタノールフラクションを集め、凍結乾燥した。加水分解されたサポニンをＣ−１８カラム中ＨＰＬＣでさらに精製し、２５％アセトニトリルで溶出させた。
【００４９】
【化９】
0006019021.tif 000010
【００５０】
化合物ＡＫＯＨ−ＹおよびＡＫＯＨ−Ｍ１０は、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害する能力を示さない。
【００５１】
コア化合物
コア化合物または５環性トリテルペン、ヒドロキシル化トリテルペンは、天然源からサポニンの酸およびアルカリ加水分解によって得られる。５環性トリテルペンはまた、合成方法によっても得ることができる。コア化合物を合成する方法は次のとおりである：
【００５２】
１Ｍ  ＮａＯＨ中に溶解させたベータ−Ｅｓｃｉｎ、化合物Ｙ、Ｙ１０、Ｙ２、Ｙ８、Ｙ７、Ｙ０、Ｘ、またはＭ１０（２０ｍｇ／ｍｌ）を７０Ｃで５時間インキュベートした。加水分解された溶液をＨＣｌで中和し、水を凍結乾燥によって蒸発させた。生成物を５０％メタノールおよび１Ｎ  ＨＣｌ中に溶解させた。混合物を７０Ｃで５時間インキュベートした。溶液をＮａＯＨで中和した。加水分解生成物を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを続いて蒸発によって除去した。（Ｅ４Ａ）を含むコア化合物の加水分解生成物のさらなる精製は、１ｍｌ／分の流速にて７０％アセトニトリル／ＴＦＡで平衡化されたＣ１８カラム中ＦＰＬＣクロマトグラフィーで達成された。コア化合物が得られる。
【００５３】
コア化合物は、ガン成長、ガン浸潤、または細胞接着を阻害する能力を示さない。
【００５４】
コア化合物の構造：
【００５５】
【化１０】
0006019021.tif 000011
【００５６】
【化１１】
0006019021.tif 000012
ｂＥＳ−コア、Ｅ  ＩＶ  Ａ、ＥＳ４Ａ、Ｅ４Ａまたは（Ｅ）とも呼ばれる；
【００５７】
【化１２】
0006019021.tif 000013
ＥＳＶ、Ｅ５Ａまたは（Ｆ）とも呼ばれる；
【００５８】
【化１３】
0006019021.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８はＯＨを表す；Ｒ３は、ＯＨ、Ｈを表すか、または存在しない；Ｒ４、Ｒ１０は、ＣＨ３またはＣＨ２ＯＨを表す；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５はＣＨ３を表す）；
【００５９】
【化１４】
0006019021.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ１７、Ｒ１８はＯＨを表す；Ｒ３は、ＯＨ、Ｈを表すか、または存在しない；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５はＣＨ３を表す）。
【００６０】
【化１５】
0006019021.tif 000016
５環性トリテルペンの１〜３０の炭素位置の典型的なナンバリング。
【００６１】
【化１６】
0006019021.tif 000017
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ１７、Ｒ１８はＯＨを表す；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５はＣＨ３を表し、Ｅ４Ａまたは（Ｅ）とも呼ばれる）。
【００６２】
本発明は、新規活性化合物を合成する方法を提供する。官能基をコア化合物［（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）を含むが、これらに限定されない］に結合させる方法は、コア化合物を塩化アシル、例えばこれらに限定されないが、塩化チグロイル、塩化アンゲロイル、塩化アセチル、塩化クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイルクロリド、塩化セネシオイル、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイルまたはエチルブチリルクロリドで５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日、０Ｃ、２５Ｃまたは７５Ｃの温度でエステル化することを含む。反応の最後に、５ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌまたは１Ｍ  ＮａＨＣＯ３を反応混合物に添加する。溶液を次いで１０ｍｌの酢酸エチルで３回抽出し、これを次いで真空下、４５Ｃで蒸発させ、凍結乾燥する。反応生成物を８０％アセトニトリル−０．００５％トリフルオロ酢酸中に溶解させる。活性なエステル化生成物をＨＰＬＣで精製する。ＭＴＴ活性を実施して、塩化アシル、反応後の溶液、個々のフラクション、および個々の化合物の活性を試験した。コア化合物は、合成、半合成または天然源由来である。コア化合物は、テルペン、イソプレン、トリテルペン、およびヒドロキシル化トリテルペンを含む。
【００６３】
０Ｃ、２５Ｃまたは７５Ｃの温度で（ＡＳＡＰ）５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日の異なる反応時間でのコア化合物のアシル化のＭＴＴ活性を調査した。コア化合物Ｅ４Ａの塩化アシル、例えば塩化チグロイル、塩化アンゲロイル、塩化アセチル、塩化クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイルクロリド、塩化セネシオイル、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイルまたはエチルブチリルクロリドでのエステル化生成物のＨＰＬＣプロフィールは、反応の時間または温度が変化すると、化合物は組成が変化することを示す。図１〜２１を参照のこと。
【００６４】
ピーク、フラクションおよび化合物は、時間分析の活性およびピークの変化にしたがって選択される。単離のためのＨＰＬＣフラクションの選択は、特定の時間で得られる反応生成物の細胞毒性活性にしたがう。強ないし弱活性を有する化合物を選択し、単離する。抗ガン活性は、骨（Ｕ２ＯＳ）、肺（Ｈ４６０）、膀胱（ＨＴＢ−９）、卵巣（ＥＳ２）、結腸（ＨＣＴ１１６）、膵臓（Ｃａｐａｎ）、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）、前立腺（ＤＵ１４５）、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）、口（ＫＢ）、腎臓（Ａ４９８）、乳房（ＭＣＦ−７）、肝臓（ＨｅｐＧ２）、脳（Ｔ９８Ｇ）、白血病（Ｋ５６２）、子宮頸部（ＨｅＬａ）のＭＴＴ研究である。
【００６５】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、次の化合物を得る：
【００６６】
【化１７】
0006019021.tif 000018
【００６７】
【表１】
0006019021.tif 000019
【００６８】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化アンゲロイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離により、以下の化合物を得る：
【００６９】
【表２】
0006019021.tif 000020
【００７０】
コア化合物Ｅ４Ａの（３，３−ジメチルアルチロイルクロリド）塩化セネシオイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｓｅｎ＝セネシオイル
【００７１】
【表３】
0006019021.tif 000021
【００７２】
コア化合物Ｅ４Ａの４−塩化ペンテノイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｐｅｎ＝４−ペンテノイル
【００７３】
【表４】
0006019021.tif 000022
【００７４】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化ヘキサノイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｈｅｘ＝ヘキサノイル
【００７５】
【表５】
0006019021.tif 000023
【００７６】
コア化合物Ｅ４Ａの２−エチルブチリルクロリドでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｅｔｈ＝２−エチルブチリル
【００７７】
【表６】
0006019021.tif 000024
【００７８】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化アセチル（Ｈ）でのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ａｃｙ＝アセチル
【００７９】
【表７】
0006019021.tif 000025
【００８０】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化クロトノイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｃｒｏ＝クロトノイル
【００８１】
【表８】
0006019021.tif 000026
【００８２】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化シンナモイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｃｉｎ＝シンナモイル
【００８３】
【表９】
0006019021.tif 000027
【００８４】
コア化合物Ｅ４Ａの塩化ベンゾイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
Ｂｅｎ＝ベンゾイル
【００８５】
【表１０】
0006019021.tif 000028
【００８６】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化セネシオイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００８７】
【表１１】
0006019021.tif 000029
【００８８】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化クロトノイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００８９】
【表１２】
0006019021.tif 000030
【００９０】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化アセチルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００９１】
【表１３】
0006019021.tif 000031
【００９２】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの４−塩化ペンテノイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００９３】
【表１４】
0006019021.tif 000032
【００９４】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化ヘキサノリでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００９５】
【表１５】
0006019021.tif 000033
【００９６】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化シンナモイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００９７】
【表１６】
0006019021.tif 000034
【００９８】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化アンゲロイルでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【００９９】
【表１７】
0006019021.tif 000035
【０１００】
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの２−エチルブチリルクロリドでのエステル化および化合物のＨＰＬＣでの単離によって、以下の化合物を得る：
【０１０１】
【表１８】
0006019021.tif 000036
【０１０２】
化合物（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）の塩化アシル、例えば塩化チグロイル、塩化アンゲロイル、塩化アセチル、塩化クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイルクロリド、塩化セネシオイル、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイルまたはエチルブチリルクロリドでのエステル化。化合物は、反応の時間または温度が変わると組成が変わる。ピーク、フラクションおよび化合物は、時間分析の活性およびピークの変化にしたがって選択される。強ないし弱活性を有する化合物が選択され、単離される。抗ガン活性は、骨（Ｕ２ＯＳ）、肺（Ｈ４６０）、膀胱（ＨＴＢ−９）、卵巣（ＥＳ２）、結腸（ＨＣＴ１１６）、膵臓（Ｃａｐａｎ）、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）、前立腺（ＤＵ１４５）、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）、口（ＫＢ）、腎臓（Ａ４９８）、乳房（ＭＣＦ−７）、肝臓（ＨｅｐＧ２）、脳（Ｔ９８Ｇ）、白血病（Ｋ５６２）、子宮頸部（ＨｅＬａ）のＭＴＴ研究である。活性なエステル化生成物をＨＰＬＣで精製する。混合物の反応生成物および個々の化合物をＭＴＴ細胞毒性アッセイで試験する。方法の詳細は、本出願の実験３にある。化合物の第２エステル化を、前記実験結果から選択して、新規活性化合物を得ることができる。部分エステル化化合物を、前記実験から選択し、第２エステル化を実施するか、または本出願における実験で新規活性化合物を生成させるために、異なる塩化アシルでの第３エステル化を再度おこなう。
【０１０３】
方法は次のとおりである。１）コア化合物またはトリテルペンコア、ヒドロキシル化トリテルペンコアをピリジン中に溶解させる；２）塩化アシルを添加する；３）混合物を、５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日を含む時間の長さで、異なる温度にて撹拌する；４）反応の最後で、酸もしくは弱塩基の水溶液、または水を反応混合物に添加する；５）溶液を次いで酢酸エチルで抽出し、凍結乾燥する；６）反応生成物を、トリフルオロ酢酸またはＤＭＳＯを含むアセトニトリル中に溶解させる；７）混合物の反応生成物および個々のフラクションをＭＴＴ細胞毒性アッセイで試験する；８）単離のためのＨＰＬＣフラクションの選択は、特定の反応時間で得られる反応生成物の細胞毒性活性にしたがう；１０）活性なエステル化生成物をＨＰＬＣで精製する；１１）生成物を集める；１２）生成物を試験する；ここで、コア化合物はテルペン、イソプレン、またはトリテルペンコアもしくはヒドロキシル化トリテルペンコアである；ここで、コア化合物をピリジン中に溶解させた；ここで、塩化アシルは、塩化チグロイル、塩化アンゲロイル、塩化アセチル、塩化クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイルクロリド、塩化セネシオイル、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイルおよびエチルブチリルクロリドを含む；ここで、混合物の反応時間は、５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日間撹拌する；ここで、温度は、０Ｃ、２５Ｃ、５０または７５Ｃの温度である；ここで、ＨＣｌをはじめとする酸またはＮａＨＣＯ３をはじめとする塩基を、反応混合物に添加する；ここで、溶液を次いで酢酸エチルで３回抽出し、凍結乾燥する；ここで、反応生成物を８０％アセトニトリル−０．００５％トリフルオロ酢酸またはＤＭＳＯ中に溶解させる；ここで、単離のためのＨＰＬＣフラクションの選択は、５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日の反応時間で得られる反応生成物の細胞毒性活性にしたがう。一つの実施形態において、反応時間は、３日を超える可能性がある。一つの実施形態において、実験を０Ｃ未満で実施することができる。一つの実施形態において、実験は７５Ｃを超えて実施することができる。
【０１０４】
Ｔｉｇ−Ｒ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は４．５ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は４．８ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は２．５ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は２．８ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は５．２ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は２．４ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は５．８であり、前立腺（ＤＵ１４５）は３．６ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は５．１ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は３ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は３．５ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は４．５ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は６ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は８ｕｇ／ｍｌ）であり、白血病（Ｋ５６２）は２ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は５ｕｇ／ｍｌである。
【０１０５】
Ｔｉｇ−Ｖ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は７ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は６．８ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は４ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は２ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は８ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は５ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は９であり、前立腺（ＤＵ１４５）は４ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は６ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は４．５ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は４．８ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は９ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は１２ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は１４ｕｇ／ｍｌ）、白血病（Ｋ５６２）は４ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は７ｕｇ／ｍｌである。
【０１０６】
Ｔｉｇ−Ｎ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は１５ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は１３ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は７．５ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は９ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は１５ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は８ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は１８であり、前立腺（ＤＵ１４５）は４．８ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は１５ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は９ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は１１ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は１３ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は１８ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は１９ｕｇ／ｍｌ）であり、白血病（Ｋ５６２）は６ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は１５ｕｇ／ｍｌである。
【０１０７】
Ｔｉｇ−Ｑ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は２０ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は１８ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は１０ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は１２ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は２２ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は９ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は２３であり、前立腺（ＤＵ１４５）は１５ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は２０ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は１２ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は１３ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は１８ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は２４ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は２９ｕｇ／ｍｌ）であり、白血病（Ｋ５６２）は６ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は２０ｕｇ／ｍｌである。
【０１０８】
Ｔｉｇ−Ｔ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は２０ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は２１ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は１２ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は１４ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は２３ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は１０ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は２５であり、前立腺（ＤＵ１４５）は１６ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は２２ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は１３ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は１５ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は２０ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は２６ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は２６ｕｇ／ｍｌ）であり、白血病（Ｋ５６２）は９ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は１８ｕｇ／ｍｌである。
【０１０９】
Ｔｉｇ−Ｓ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は５．２ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は５．６ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は３．５ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は４．２ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は６．６ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は２．９ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は６．５であり、前立腺（ＤＵ１４５）は４．３ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は５．８ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は４ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は４．８ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は６．３ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は８．５ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は９ｕｇ／ｍｌ）であり、白血病（Ｋ５６２）は４．３ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は７ｕｇ／ｍｌである。
【０１１０】
Ｔｉｇ−Ｕ化合物の抗ガン活性：骨（Ｕ２ＯＳ）のＩＣ５０は２３ｕｇ／ｍｌであり、肺（Ｈ４６０）は１９ｕｇ／ｍｌであり、膀胱（ＨＴＢ−９）は１５ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＥＳ２）は１７ｕｇ／ｍｌであり、結腸（ＨＣＴ１１６）は２６ｕｇ／ｍｌであり、膵臓（Ｃａｐａｎ）は９ｕｇ／ｍｌであり、卵巣（ＯＶＣＡＲ３）は２７であり、前立腺（ＤＵ１４５）は１５ｕｇ／ｍｌであり、皮膚（ＳＫ−Ｍｅｌ−５）は２４ｕｇ／ｍｌであり、口（ＫＢ）は１  ６ｕｇ／ｍｌであり、腎臓（Ａ４９８）は１８ｕｇ／ｍｌであり、乳房（ＭＣＦ−７）は２５ｕｇ／ｍｌであり、肝臓（ＨｅｐＧ２）は２３ｕｇ／ｍｌであり、脳（Ｔ９８Ｇ）は２２ｕｇ／ｍｌ）であり、白血病（Ｋ５６２）は１０ｕｇ／ｍｌであり、子宮頸部（ＨｅＬａ）は１７ｕｇ／ｍｌである。
【０１１１】
本発明は、ガンを治療するため、ガン成長を阻害するため、ガン浸潤を阻害するため、ガン転移を阻害するため、細胞接着を調節するため、細胞付着を調節するための、医薬を製造するための化合物、方法、もしくは化合物の使用、または式（２Ａ）から選択される医薬のための化合物の使用を提供し、次のものから選択される化合物を使用する：
【０１１２】
【化１８】
0006019021.tif 000037
【０１１３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は、独立して、水素、ヒドロキシル、メチル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリル、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、アルカン、アルケンおよびその糖部分または誘導体からなる群から選択され；ここで、構造（２Ａ）は、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルから選択される少なくとも２つの基を含む；またはＲ１およびＲ２は、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルから選択される；一つの実施形態において、Ｒ１およびＲ２はＯＨに結合する。一つの実施形態において、Ｒ４、Ｒ１０は、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、またはＣＨ２Ｏ−エチルブチリルに結合する。一つの実施形態において、Ｒ３およびＲ８は水素またはヒドロキシルである。一つの実施形態において、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は独立してメチルと結合しいている。一つの実施形態において、Ｒ４はＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＨ２Ｒ６またはＣＯＲ６を表し、ここで、Ｒ６は、ヒドロキシル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルおよびその誘導体から選択される；一つの実施形態において、Ｒ３はＨまたはＯＨである；一つの実施形態において、Ｒ８は、ＨまたはＯＨである；一つの実施形態において、Ｒ１６は、Ｈ、ＣＨ３、ＯＨであるか、またはＲ４およびＲ１６は一緒になって、−ＣＨ２−Ｘ−、ＣＨ（ＯＨ）−Ｘ−またはＣ（＝Ｏ）−Ｘ−を形成する可能性があり、ここで、−Ｘ−はＯまたはＮＨまたはＳであり得る；トリテルペンの環３のＣ１２〜１３が二重結合を有する場合、Ｒ１６は存在しない。一つの実施形態において、Ｒ１０はＣＨ３、ＣＨＯ、またはＣＨ２Ｒ６を表し、ここでＲ６は、ヒドロキシル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルおよびその誘導体から選択される；
【０１１４】
一つの実施形態において、Ｒ５は水素、ヒドロキシル、複素環式またはＯ−糖部分（複数可）であり、ここで糖部分（複数可）は、グルコース、ガラクトース、ラムノース、アラビノース、キシロース、フコース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、リキソース、マンノース、プシコース、リボース、ソルボース、タガトース、タロース、フルクトース、アルズロン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、およびそれらの誘導体または組み合わせからなる群から選択される；ここで、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は独立して、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、ＣＯＯ−アリール、ＣＯＯ−複素環式、ＣＯＯ−ヘテロアリール、ＣＨ２Ｏアリール、ＣＨ２Ｏ−複素環式、ＣＨ２Ｏ−ヘテロアリール、アルキル基、ヒドロキシル、アセチル基から選択される基に結合する；ここで、Ｒ４およびＲ１６は、式ＣＨ２Ｏ、ＣＨ（ＯＲ７）Ｏ、またはＣＯＯＲ７の二価ラジカルを形成し、式中、Ｒ７は水素、アルキル、アンゲロイル、チグロイル、セネシオイル、ジベンゾイル、ベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、およびその誘導体である；ここで、Ｒ１、Ｒ２およびＲ６のうちの少なくとも２つは、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、およびその誘導体から選択される基に結合する；またはＲ１、Ｒ２、およびＲ４のうちの少なくとも１つは、アンゲロイル、アセチル、チグロイル、セネシオイル、クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、ベンゾイル、ジベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、およびそれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも２つの基を有する糖部分である；または、Ｒ４はＣＨ２Ｒ６を表し、式中、Ｒ６は、ヒドロキシル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルおよびその誘導体から選択される；ここで、Ｒ５は、次の糖およびアルズロン酸から選択される糖部分（複数可）である：グルコース、ガラクトース、ラムノース、アラビノース、キシロース、フコース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、リキソース、マンノース、プシコース、リボース、ソルボース、タガトース、タロース、フルクトース、グルクロン酸、ガラクツロン酸；またはそれらの誘導体。一つの実施形態において、Ｒ５は、ヒドロキシル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルおよびその誘導体である。一つの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、１以上の糖部分を含む。一つの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、１以上の酸を含む。一つの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のうちの少なくとも１、または２、または３、または４は、ヒドロキシルである。一つの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のうちの少なくとも２、または３、または４、または５、または６、または７は独立して、Ｏ−アセチル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、アルカン、アルケンおよびその誘導体の群から選択される基に結合し、ここで、基は、直接または連結部分（複数可）によってトリテルペンに結合する；一つの実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの少なくとも１または２、または３、または４、または５、または６、または７は独立して、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリル、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、およびその誘導体の群から選択される基に結合し、ここで、基は、直接または連結部分（複数可）によってトリテルペンに結合される。一つの実施形態において、ガンは、乳ガン、白血球ガン、肝臓ガン、卵巣ガン、膀胱ガン、前立腺ガン、皮膚ガン、骨ガン、脳ガン、白血病ガン、肺ガン、結腸ガン、ＣＮＳガン、黒色腫、腎臓ガン、子宮頸ガン、食道ガン、精巣ガン、脾臓ガン、腎臓ガン、リンパ腺ガン、膵臓ガン、胃ガンおよび甲状腺ガンを含み；ここで、細胞は、乳房細胞、白血球細胞、肝臓細胞、卵巣細胞、膀胱細胞、前立腺細胞、皮膚細胞、骨細胞、脳細胞、白血病細胞、肺細胞、結腸細胞、ＣＮＳ細胞、黒色腫細胞、腎臓細胞、子宮頸部細胞、食道細胞、精巣細胞、脾臓細胞、腎臓細胞、リンパ細胞、膵臓細胞、胃細胞および甲状腺細胞を含む。
【０１１５】
一つの実施形態において、化合物は、構造：
【化１９】
0006019021.tif 000038
から選択される。
【０１１６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は独立して、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、水素、ヒドロキシル、メチル、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリル、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−ジベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＣＨ２Ｏ−アシル、ＣＨ２Ｏ−複素環式、ＣＨ２Ｏ−ヘテロアリール、ＣＨ２Ｏ−アルケニルカルボニル、アルカン、アルケンおよびそれらの糖部分もしくは誘導体の群から選択される；または
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０の任意の１もしくは２もしくは３もしくは４つは独立して、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリルに結合される；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は独立して、ＣＨ３に結合される；またはＲ１０は、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリル、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−ジベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＣＨ２Ｏ−アシル、ＣＨ２Ｏ−複素環式、ＣＨ２Ｏ−ヘテロアリール、ＣＨ２Ｏ−アルケニルカルボニルに結合される；またはＲ４およびＲ１０は独立して、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニル、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリル、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−ジベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＣＨ２Ｏ−アシル、ＣＨ２Ｏ−複素環式、ＣＨ２Ｏ−ヘテロアリール、ＣＨ２Ｏ−アルケニルカルボニルに結合される；Ｒ３は、ＯＨもしくはＨであるか、または存在しない；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ８は、ＯＨもしくはＨであるか、または存在しない；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５はＣＨ３である；またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８はＯＨを表す；Ｒ３は、ＯＨ、Ｈを表すか、または存在しない；Ｒ４、Ｒ１０はＣＨ２Ｏアンゲロイルを表す；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５はＣＨ３を表す；あるいはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８はＯＨまたはＯ−チグロイルを表す；Ｒ３はＯＨ、Ｈを表すか、または存在しない；Ｒ４、Ｒ１０はＣＨ２Ｏチグロイルを表す；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５はＣＨ３を表す；ここで、アセチル、アンゲロイル、チグロイル、セネシオイル、クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、アルキル、ジベンゾイル、ベンゾイル、メチルブタノイル、メチルプロパノイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリールおよびアルケニルカルボニルから選択されるコア化合物に結合する基は、交換可能である。それらは同じ基である可能性があるか、またはそれらの組み合わせである可能性がある。他の基（複数可）による前述の化合物における任意の基の置換、欠失および／または付加は、本出願の教唆に基づいて当業者には明らかになるであろう。さらなる実施形態において、本発明の化合物における基（複数可）の置換、欠失および／または付加は、化合物の生物学的機能に実質的に影響を及ぼさない。
【０１１７】
一つの実施形態において、化合物は以下の構造から選択される：
【０１１８】
【化２０】
0006019021.tif 000039
【０１１９】
【化２１】
0006019021.tif 000040
【０１２０】
【化２２】
0006019021.tif 000041
【０１２１】
【化２３】
0006019021.tif 000042
【０１２２】
【化２４】
0006019021.tif 000043
【０１２３】
【化２５】
0006019021.tif 000044
【０１２４】
【化２６】
0006019021.tif 000045
【０１２５】
【化２７】
0006019021.tif 000046
【０１２６】
【化２８】
0006019021.tif 000047
【０１２７】
有効量の前記式から選択される化合物またはその塩、エステル、代謝物もしくは誘導体を含む組成物は、ガン細胞の浸潤、遊走、転移を遮断するため、腫瘍またはガン細胞成長を阻害するため、およびガンを治療するための医薬として使用することができ、ここで、ガンは、乳ガン、白血球ガン、肝臓ガン、卵巣ガン、膀胱ガン、前立腺ガン、皮膚ガン、骨ガン、脳ガン、白血病ガン、肺ガン、結腸ガン、ＣＮＳガン、黒色腫、腎臓ガン、子宮頸ガン、食道ガン、精巣ガン、脾臓ガン、腎臓ガン、リンパ腺ガン、膵臓ガン、胃ガンおよび甲状腺ガンを含む。
【０１２８】
本発明は、ガンを治療するため；ウイルスを阻害するため；脳の老化を予防するため；記憶力を向上させるため；脳機能を改善するため；遺尿症、頻尿、尿失禁；認知症、アルツハイマー病、自閉症、脳外傷、パーキンソン病または脳機能不全に起因する他の疾患を治療するため；関節炎、リウマチ、血行不良、動脈硬化、レイノー症候群、狭心症、心疾患、冠動脈性心疾患、頭痛、眩暈、腎臓障害；脳血管疾患を治療するため；ＮＦ−カッパＢ活性化を阻害；脳浮腫、重症急性呼吸器症候群、呼吸器ウイルス疾患、慢性静脈不全、高血圧、慢性静脈疾患、浮腫、炎症、痔、末梢浮腫形成、拡張蛇行静脈疾患、インフルエンザ、外傷後浮腫および術後の腫脹を治療するため；血栓を阻害するため、エタノール吸収を阻害するため；血糖を下げるため；副腎皮質刺激ホルモンおよびコルチコステロンレベルを調節するための、本発明で提供される化合物を含む組成物を提供する。本発明は、抗ＭＳ、抗動脈瘤、抗喘息、抗浮腫、抗炎症、抗ブラジキニン、抗毛細血管出血、抗頭痛、抗頸腕痛、抗子癇、抗浮腫、抗脳炎、抗咽頭蓋炎、抗滲出、抗インフルエンザ、骨折治療、抗歯肉炎、抗血腫、抗ヘルペス、抗ヒスタミン、抗ヒドラスリティック、抗髄膜炎、抗酸化、抗歯周病、抗静脈炎、抗胸膜炎、抗嗄声、抗鼻炎、抗扁桃腺炎、抗潰瘍、抗静脈瘤、抗眩暈、ガン静止、コルチコステロイド産生、利尿、防かび、溶血、ヒアルロニダーゼ阻害剤、増リンパ物質、ナトリウム排泄増加、殺虫剤、脳下垂体刺激剤、チモール分解、血管保護、リーシュマニア症の阻害、ガン細胞の接着または血管形成の調節、駆虫；遺伝子：ＡＮＧＰＴ２、ＤＤＩＴ３、ＬＩＦおよびＮＦＫＢ１Ｚの発現の増大、ならびにアジュバント組成物および静脈緊張治療薬の製造のための組成物を提供する。
【０１２９】
アルケニルは、その中に１以上の二重結合がある式Ｒ２Ｃ＝ＣＲ２を有する不飽和直線状または分枝構造およびそれらの組み合わせを意味する。アルケニル基の例としては、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、ｓ−およびｔ−ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ならびにヘキサジエニルが挙げられる。
【０１３０】
アリールは、ベンゼン、１〜３個のベンゼン環を含む６〜１４員炭素環式芳香環系などの芳香族化合物由来の有機分子の官能基である。２以上の芳香環が存在するならば、環は一緒になって縮合し、したがって隣接する環は共通の結合を共有する。例としては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。アリール基は、ハロゲン、アルキルまたはアルコキシから独立して選択される１以上の置換基で置換され得る。
【０１３１】
アシルは、カルボキシルの除去によって有機酸から得ることができる官能基である。アシル基は、一般式−ＣＯＲを用いて表すことができ、炭素と酸素との間に二重結合がある。アシル基の名称は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリルおよびベンゾイルなど、典型的には語尾が−イルである。
【０１３２】
ベンゾイルは、カルボキシルの除去によって安息香酸から得られるアシル（Ｃ６Ｈ５ＣＯＲ）の一種である。
【０１３３】
複素環式化合物は、１〜４個のヘテロ原子を有する非芳香環である複素環式環を含有する化合物であり、前記環は、分離しているか、または０〜４個のヘテロ原子を含有する３〜７員脂環式環、アリールおよびヘテロアリールから選択される第２の環と縮合し、ここで、複素環式化合物には、ピロリジニル、ピピラジニル（ｐｉｐｙｒａｚｉｎｙｌ）、モルホリニル、トラヒドロフラニル（ｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｙｌ）、イミダゾリニル、チオモルホリニルなどが含まれる。
【０１３４】
ヘテロサイクリル基は、任意の環原子から水素原子を除去することによって、ヘテロアレーンから誘導される。
【０１３５】
アルカノイルは、有機官能基ＲＣＯ−（式中、Ｒは水素またはアルキル基を表す）の一般名である。アルカノイルの例は、アセチル、プロピオノイル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイルおよびヘキサノイルである。
【０１３６】
アルケノイルは、アルケニルカルボニルであり、ここで、アルケニルは前記で定義される。例は、ペンテノイル（チグロイル）およびヘキセノイル（アンゲロイル）である。
【０１３７】
アルキルは、１〜１８個の炭素原子を有する鎖状、分枝状、環状もしくは二環式構造またはそれらの組み合わせで配置された炭素および水素原子のみを含有するラジカルである。例としては、メチル、エチル、プロピルイソプロピル、ブチル、ｓ−およびｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１３８】
ベンゾイルアルキル置換アルカノイルは、少なくとも１つのベンゾイルおよび少なくとも１つのアルキルで置換された直鎖または分枝アルカノイルを指し、ここで、ベンゾイルが、直鎖または分枝アルキルに結合する。ベンゾイルアルキル置換アルカノイルの一例は、ベンゾイルメチルイソブタノイルである。
【０１３９】
糖部分は、１以上の糖またはその誘導体またはそのアルズロン酸を含む分子のセグメントである。
【０１４０】
イソブチリルは、２−メチルプロパノイルの同義語である。
【０１４１】
（Ｙ）Ｙ３、ＹおよびＹ３は、同じ化合物を表す。
【０１４２】
ＹＭおよび（ＡＣＨ−Ｙ）は、同じ化合物を表す。
【０１４３】
連結部分は、官能基をコア化合物に連結する原子の下位構造または基である。例：アンゲロイル基は、糖部分によってトリテルペンコアに連結される。
トリテルペン、ヒドロキシル化トリテルペン、アセチル、アンゲロイル、チグロイル、セネシオイル、クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、アルキル、ジベンゾイル、ベンゾイル、メチルブタノイル、メチルプロパノイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、アルケニルカルボニル、塩化アセチル、塩化アンゲロイル、塩化チグロイル、塩化セネシオイル、塩化クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイルクロリド、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイル、エチルブチリルクロリドをはじめとする、本発明で使用されるビルディングブロック。
【０１４４】
【化２９】
0006019021.tif 000048
【０１４５】
本発明の実験では、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、１５％以下の細胞成長（すなわち、対照の８５％以上）を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。一つの実施形態において、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、１０％以下の細胞成長（すなわち、対照の９０％以上）を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。一つの実施形態において、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、５％以下の細胞成長（すなわち、対照の９５％以上）を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。一つの実施形態において、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、２０％以下の細胞成長（すなわち、対照の８０％以上）を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。一つの実施形態において、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、２５％以下の細胞成長（すなわち、対照の７５％以上）を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。一つの実施形態において、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、３０％以下の細胞成長を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。一つの実施形態において、無薬剤対照（ＤＭＳＯ）と比較して、４５％以下の細胞成長を阻害する薬剤濃度を、非細胞毒性濃度とみなす。
【０１４６】
本発明から選択されるトリテルペン化合物（複数可）を、それを必要とする対象に投与することができ、ガンの予防、または対象に対するアジュバント効果の提供、またはガンの開始もしくは促進の阻害、またはガン／腫瘍細胞の殺滅、またはガン細胞浸潤の阻害など、対象を治療することができる。一つの実施形態において、化合物は、局在化を阻害するか、またはＤＮＡと結合する、核因子−ｋＢの活性化を阻害する。一つの実施形態において、化合物は、ガン細胞においてアポトーシスを誘導する。
【０１４７】
表１〜１２、ＹおよびＹＭの遺伝子発現に対する効果（２００８年２月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６、１１８８−ＡＬＡ−ＰＣＴの表１〜１２は、参照によって本明細書中に組み込まれる）  表１３〜１９、ＹおよびＹＭの遺伝子発現に対する効果（２００８年２月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３４１１５、１１８８−Ｄ−ＰＣＴの表１３〜１９は、参照によって本明細書中に組み込まれる）
【０１４８】
リアルタイムＰＣＲ法（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ＱＰＣＲ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）による遺伝子発現の測定：リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応は、ミクロアレイ分析から得られた結果をさらに確認する。リアルタイムＰＣＲ結果（後述）は、化合物Ｙ３およびＹＭが遺伝子：ＡＮＧＰＴ２、ＤＤＩＴ３、ＬＩＦおよびＮＦＫＢ１Ｚの発現を増大させることを確認した（ここで、２００９年２月１３日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ０９／３４１１５で開示されている表１９〜２１中の結果は、参照によって本明細書中に組み込まれる）。
【０１４９】
サポニンは部分的に加水分解されて、生成物の混合物を得、これはＨＰＬＣによって分離することができる。サポニンの特定の部分加水分解は、酵素を用いておこなうこともできる。グリコシダーゼは、グリコシド結合の加水分解を触媒する。ガラクトシダーゼは、ガラクトシドの加水分解を触媒する酵素である。グルコシダーゼは、サポニンからグルコースを分解する酵素である。他の酵素の例は、キシラナーゼ、ラクターゼ、アミラーゼ、キチナーゼ、スクラーゼ、マルターゼ、およびノイラミニダーゼである。
【０１５０】
トリテルペノイドサポニン（例：Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ）の糖部分は、酸加水分解によって除去することができる。ＡＣＨ−Ｙの合成化合物が得られる。ＡＣＨ−Ｙは、アシル基を有するが、糖部分のないトリテルペンである。サポニン（例えば、Ｘａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙ）のアシル基は、アルカリ加水分解によって除去することができる。合成化合物ＡＫＯＨ−Ｙを得ることができる。ＡＫＯＨ−Ｙは、糖部分を有する５環性トリテルペンである。５環性トリテルペンは、天然源由来のサポニンの酸およびアルカリ加水分解によって得ることができる。５環性トリテルペンは、合成方法によって得ることができる（参考文献：Ｓｕｒｅｎｄｒａら、Ｒａｐｉｄ  ａｎｄ  Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ａｐｐｒｏｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｇｅｒｍａｎｉｃｏｌ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｐｅｎｔａｃｙｃｌｉｃ  Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００８，１３０（２７）、８８６５−８８６９）。糖部分を有する５環性トリテルペンもまた、合成によって得ることができる（参考文献：Ｐｉｅら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｌ−ａｒａｂｉｎｏｐｙｒａｎｏｓｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｈｅｄｅｒａｇｅｎｉｎ  ｓａｐｏｎｉｎｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ６１（２００５）４３４７−４３６２）。アシル化は、化合物にアシル基を付加するプロセスである。フリーデル・クラフツ反応は、このプロセスの一例である。活性化合物は、５環性トリテルペン、またはヒドロキシル化トリテルペンをアシル化することによって得ることができる。一つの実施形態において、５環性トリテルペン、またはヒドロキシル化トリテルペンのＣ２４、Ｃ２８、Ｃ２１およびＣ２２のアシル化によって、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤、ガン細胞浸潤、細胞付着・接着、または細胞循環を阻害するための化合物が生成される。一つの実施形態において、アシル基（複数可）はＣ３であり得る。一つの実施形態において、糖部分は、Ｃ２１、２２、または２８であり、ここで、糖部分は、２つのアシル基と結合している。一つの実施形態において、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）の化合物をアシル化して、ガン浸潤、細胞浸潤もしくはガン細胞浸潤；ガン転移；またはガン成長を阻害するための化合物を生成させる。本出願におけるビルディングブロックを用いて、活性なサポニンを合成する。
【０１５１】
化合物（Ｇ）をアンゲロイルまたはチグロイル基でアシル化して、次の化合物
【０１５２】
【化３０】
0006019021.tif 000049
【０１５３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８は、ＯＨもしくはＯ−アンゲロイルを表す；Ｒ３は、ＯＨ、ＨもしくはＯ−アンゲロイルを表す；Ｒ４、Ｒ１０は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨもしくはＣＨ２Ｏアンゲロイルを表す；Ｒ３は、ＯＨ、ＨもしくはＯ−アンゲロイルを表す；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は、ＣＨ３を表す；またはＲ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８は、ＯＨもしくはＯ−チグロイルを表す；Ｒ３は、ＯＨ、ＨもしくはＯ−チグロイルを表す；Ｒ４、Ｒ１０は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨもしくはＣＨ２Ｏチグロイルを表す；Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は、ＣＨ３を表す）を得、ここで、この化合物は、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害する。
化合物（Ｇ）を、アンゲロイル、チグロイル、セネシオイル、アセチル、クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、ベンゾイル、エチルブチリル、アルキル、ジベンゾイル、ベンゾイル、アルカノイル、アルケノイル、ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、アルカノイル置換フェニル、アルケノイル置換フェニル、アリール、アシル、複素環式、ヘテロアリール、ＣＨ２Ｏ−アルケニルカルボニル、アルカン、アルケンでアシル化して、化合物（Ｋ）を得、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ８は、ＯＨ、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルを表す；Ｒ４、Ｒ１０は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２Ｏ−アンゲロイル、ＣＨ２Ｏ−チグロイル、ＣＨ２Ｏ−セネシオイル、ＣＨ２Ｏ−アセチル、ＣＨ２Ｏ−クロトノイル、ＣＨ２Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、ＣＨ２Ｏ−シンナモイル、ＣＨ２Ｏ−ペンテノイル、ＣＨ２Ｏ−ヘキサノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−エチルブチリル、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−ジベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル、ＣＨ２Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、ＣＨ２Ｏ−アルカノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アルケノイル置換フェニル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＣＨ２Ｏ−アシル、ＣＨ２Ｏ−複素環式、ＣＨ２Ｏ−ヘテロアリール、ＣＨ２Ｏ−アルケニルカルボニル、アルカン、アルケンを表す；Ｒ３は存在しないか、またはＯＨ、Ｈ、Ｏ−アンゲロイル、Ｏ−チグロイル、Ｏ−セネシオイル、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロトノイル、Ｏ−３，３−ジメチルアルチロイル、Ｏ−シンナモイル、Ｏ−ペンテノイル、Ｏ−ヘキサノイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−エチルブチリル、Ｏ−アルキル、Ｏ−ジベンゾイル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルケノイル、Ｏ−ベンゾイルアルキル置換Ｏ−アルカノイル、Ｏ−アルカノイル置換フェニル、Ｏ−アルケノイル置換フェニル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、Ｏ−複素環式、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−アルケニルカルボニルを表す；ここで、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５は、ＣＨ３を表す；ここで、化合物は、ガン成長、ガン浸潤、細胞浸潤またはガン細胞浸潤を阻害する；ここで、接着タンパク質またはアンジオポエチンのメディエータまたは阻害剤として使用するための化合物；ここで、化合物は、細胞付着、細胞接着または細胞循環を阻害するためにフィブロネクチンを還元することを含む接着タンパク質の分泌、発現、または合成を調節するメディエータとして使用する；ここで、接着タンパク質は、フィブロネクチン、インテグリンファミリー、ミオシン、ビトロネクチン、コラーゲン、ラミニン、ポリグリカン、カドヘリン、ヘパリン、テネイシン、ＣＤ５４、およびＣＡＭを含む；化合物は、抗接着療法のために使用し、療法のために接着分子を標的とする。
【０１５４】
本出願者らは、抗接着療法および療法のための接着分子の標的化は、薬剤開発のための新しい方向であることをさらに記載する。臨床試験における抗接着剤の数例は、Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ、Ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ、Ａｌｉｃａｆｏｒｓｅｎ、Ａｓｅｌｉｚｕｍａｂなどであり、これらの標的は接着タンパク質を変える。ＴＥＸＴ  ＢＯＯＫ，Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２），ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｋｌａｕｓ  Ｌｅｙ  ｐａｇｅ  ２８９−２９１，２９７を参照されたい。
【０１５５】
炎症性疾患における接着分子、（参考文献４）、Ａｂｓｔｒａｃｔ，ｌｉｎｅ  ７−８  “Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＡＭ  ｈａｓ  ｅｍｅｒｇｅｄ  ａｓ  ａ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”。本出願者らの発明は、化合物の接着タンパク質およびアンジオポエチンのメディエータまたは阻害剤としての新規使用である抗接着療法である。これは、過剰な接着を阻害し、細胞付着を阻害する。
【０１５６】
本出願において、出願者らは、抗接着療法のための構造（２Ａ）から選択される化合物を、接着タンパク質およびアンジオポエチン、ならびに細胞付着、および細胞接着の調節のメディエータまたは阻害剤として使用した。
【実施例】
【０１５７】
実験の詳細
薬草抽出、ＨＰＬＣによる抽出物成分の分析、ＭＴＴアッセイを用いた異なるヒト器官由来の細胞でのＸａｎｉｆｏｌｉａ  Ｙによる細胞成長活性の測定、植物抽出物からの生物活性成分の精製、ＦＰＬＣでの植物抽出物の分別、分取ＨＰＬＣでの成分Ｙの単離、化学構造の決定、細胞実験および動物実験の実験詳細は、ＰＣＴ／ＵＳ０５／３１９００、米国特許出願第１１／２８９１４２号、米国特許出願第１０／９０６３０３号、米国特許出願第１１／１３１５５１号および２００７年３月７日に出願された米国特許出願第１１／６８３１９８号、２００７年８月３０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００７／０７７２７３、２００７年２月１６日に出願された米国特許出願第６０／８９０３８０号、２００７年７月３日に出願された米国特許出願第６０／９４７，７０５号、２００８年２月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６、１１８８−ＡＬＡ−ＰＣＴ、２００９年２月１３日に出願された出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ０９／３４１１５号で開示されており、その内容は、参照によって本明細書中に組み込まれる。２００８年２月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／００２０８６、１１８８−ＡＬＡ−ＰＣＴの実験１〜２３は、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０１５８】
実験１：酸加水分解によるサポニンからの糖部分の除去
１５ｍｇのサポニンを１ｍｌのメタノール中に溶解させた。１ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌを次いで添加した。混合物を８０Ｃの水浴中で５時間還流させた。溶液を次いで、２ｍｌの１Ｎ  ＮａＯＨを添加することによって中和した（最終ｐＨ４〜６まで）。次いで、アグリコンを酢酸エチル３ｍｌ×２で抽出した。抽出物を集め、プールした。アグリコン（糖を除去したサポニン）のさらなる単離は、８０〜１００％アセトニトリルの定組成溶離でのＨＰＬＣによって達成された。
【０１５９】
実験２：アルカリ加水分解によるアシル基の除去
方法：２０ｍｇのサポニンを０．５ｍｌの１Ｎ  ＮａＯＨ中に溶解させた。溶液を８０Ｃの水浴中で４時間インキュベートした。室温まで冷却した後、０．５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌで中和した（ｐＨを約３に調節）。混合物を２ｍｌの１−ブタノールで３回抽出した。ブタノールフラクションを集め、凍結乾燥した。加水分解されたサポニンをＣ−１８カラム中ＨＰＬＣでさらに精製し、２５％アセトニトリルで溶出させた。
【０１６０】
実験３：エステル化によるトリテルペンへのアシル基の付加
方法：４０ｍｇのトリテルペンコア（フラクションＩＶ）を５０ｍｌの試験管中、１ｍｌのピリジン中に溶解させた。０．２ｍｌの塩化アシル（塩化チグロイル、塩化アンゲロイル、塩化アセチル、塩化クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイルクロリド（塩化セネシオイル）、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイルまたはエチルブチリルクロリド）を添加することによって、反応を開始する。混合物を５秒、１分、２分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、１８時間、２日または３日間、０Ｃ、２５Ｃまたは７５Ｃの温度で撹拌する。反応の最後に、５ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌまたは１Ｍ  ＮａＨＣＯ３を反応混合物に添加する。溶液を次いで１０ｍｌの酢酸エチルで３回抽出し、これを次いで真空下、４５Ｃにて蒸発させ、凍結乾燥する。反応生成物を８０％アセトニトリル−０．００５％トリフルオロ酢酸またはＤＭＳＯ中に溶解させ；ＨＰＬＣで分離した。単離のためのＨＰＬＣフラクションの選択は、特定の反応時間で得られる反応生成物の細胞毒性活性にしたがう。活性なエステル化生成物をＨＰＬＣで精製する。混合物の反応生成物および個々の化合物を、ＭＴＴ細胞毒性アッセイで試験する。例えば、図１〜１２を参照のこと。
【０１６１】
実験４：Ｅ４Ａの調製
１．１Ｍ  ＮａＯＨ（２０ｍｇ／ｍｌ）中に溶解させたベータ−Ｅｓｃｉｎを７０Ｃで５時間インキュベートした。
２．加水分解された溶液をＨＣｌで中和し、水を凍結乾燥によって蒸発させた。
３．生成物を５０％メタノールおよび１Ｎ  ＨＣｌ中に溶解させた。混合物を７０Ｃで５時間インキュベートした。
４．溶液をＮａＯＨで中和した。
５．加水分解生成物を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチルを次に蒸発によって除去した。
６．加水分解生成物（Ｅ４Ａ）のさらなる精製は、１ｍｌ／分の流速にて７０％アセトニトリル／ＴＦＡで平衡化させたＣ１８カラム中ＦＰＬＣクロマトグラフィーで保管した。
【０１６２】
実験５：Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化
１．１ｍｌのピリジン中５０ｍｇのＥ４Ａを５０ｍｌの試験管中でおだやかに撹拌する。２００ｕｌの塩化チグロイルを添加することによって、２５Ｃでエステル化を実施した。
２．１分間撹拌し；次いで直ちに５ｍｌの２Ｎ  ＨＣｌを添加する。
３．１時間撹拌し、室温で一晩静置する。
４．エステル化生成物を１０ｍｌの酢酸エチルで抽出する。
５．酢酸エチルを蒸発させる。
６．試料を１ｍｌのＤＭＳＯで溶解させる。
７．反応生成物をＨＰＬＣで分別する。
８．試料を集める。
【０１６３】
実験６：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ活性化合物のＨＰＬＣでの単離
１．カラム：ＺＯＲＢＡＸ  ＯＤＳ  ９．４×２５０ｍｍ、５ｕｍ
２．溶媒：Ａ：４５％ＡＮ／ＴＦＡ；Ｂ：１００％ＡＮ／ＴＦＡ
３．クロマトグラフィー条件：ａ）溶出：８０分で溶媒Ａから溶媒Ｂ；次いで溶媒Ｂで４０分間；ｂ）流速：１ｍｌ／分。ｃ）モニターＯＤ：２０７ｎｍ；
【０１６４】
実験７：ＭＴＴ実験
細胞。ＨＴＢ−９（膀胱）、ＨｅＬａ−Ｓ３（子宮頸部）、ＤＵ１４５（前立腺）、Ｈ４６０（肺）、ＭＣＦ−７（乳房）、Ｋ５６２（白血病）、ＨＣＴ１１６（結腸）、ＨｅｐＧ２（肝臓）、Ｕ２ＯＳ（骨）、Ｔ９８Ｇ（脳）、ＳＫ−ＭＥＬ−５（皮膚）およびＯＶＣＡＲ３、ＥＳ２（卵巣）、膵臓（Ｃａｐａｎ）、口（ＫＢ）、腎臓（Ａ４９８）。
【０１６５】
ＭＴＴアッセイ。
ＭＴＴアッセイの手順は、Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌら（１９８７）によって記載されている方法に変更を加えたものにしたがった。細胞を９６ウェルプレート中に２４時間蒔いた後、薬剤処理した。次いで、細胞を薬剤に、４８、７２、または９６時間曝露した。薬剤処理後、ＭＴＴ（０．５ｍｇ／ｍｌ）を培養物に添加し、１時間インキュベートした。形成されたホルマザン（生存細胞によるテトラゾリウムの還元生成物）をＤＭＳＯで溶解させ、４９０ｎｍでのＯ．Ｄ．をＥＬＩＳＡリーダーによって測定した。薬剤処理前の細胞のＭＴＴレベルも測定した（Ｔ０）。％細胞成長（％Ｇ）を：％Ｇ＝（ＴＤ−Ｔ０／ＴＣ−Ｔ０）×１００（１）（式中、ＴＣまたはＴＤは、対照または薬剤処理された細胞のＯ．Ｄ．読みを表す）として計算する。Ｔ０＞ＴＤである場合、対照の％として表される細胞毒性（ＬＣ）を：％ＬＣ＝（ＴＤ−Ｔ０／Ｔ０）×１００（２）として計算する。
【０１６６】
実験８：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＲのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造決定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
図２３〜３０を参照のこと。
表１を参照のこと。
【０１６７】
化合物Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒ
２４，２８−Ｏ−チグロイル−３β，１６α，２１β，２２α，２４β，２８−ヘキサヒドロキシオレアン−１２−エン
【化３１】
0006019021.tif 000050
【０１６８】
実験９：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＮのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造決定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１６９】
【化３２】
0006019021.tif 000051
【０１７０】
実験１０：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｑの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＱのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造決定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１７１】
【化３３】
0006019021.tif 000052
【０１７２】
実験１１：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｖの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｖの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＶのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造測定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１７３】
【化３４】
0006019021.tif 000053
【０１７４】
実験１２：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｔの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｔの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＴのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造測定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１７５】
【化３５】
0006019021.tif 000054
【０１７６】
実験１３：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｕの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＳのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造測定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１７７】
【化３６】
0006019021.tif 000055
【０１７８】
実験１４：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓの化学合成、単離および特性化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓの化学合成：１．Ｅ４Ａの調製；２．Ｅ４Ａの塩化チグロイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−ＳのＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造測定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１７９】
【化３７】
0006019021.tif 000056
【０１８０】
実験１５：実験８における方法を用いて、Ｅ４Ａをアセチル、アンゲロイル、チグロイル、セネシオイル、クロトノイル、シンナモイル、ペンテノイル、ヘキサノイル、エチルブチリルでエステル化して、次の化合物を得た
【０１８１】
【化３８】
0006019021.tif 000057
【０１８２】
【化３９】
0006019021.tif 000058
【０１８３】
【化４０】
0006019021.tif 000059
【０１８４】
【化４１】
0006019021.tif 000060
【０１８５】
【化４２】
0006019021.tif 000061
【０１８６】
【化４３】
0006019021.tif 000062
【０１８７】
【化４４】
0006019021.tif 000063
【０１８８】
実験１６：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化セネシオイルでのエステル化
Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓｅｎ−１の化学合成：１．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化セネシオイルでのエステル化；３．Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓｅｎ−１のＨＰＬＣでの単離
細胞毒性活性測定：１．ＭＴＴアッセイ
化学構造測定：１．ＮＭＲ分析；２．質量スペクトル分析
【０１８９】
【化４５】
0006019021.tif 000064
【０１９０】
実験１７：Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎの塩化アンゲロイル、塩化アセチル、塩化クロトノイル、３，３−ジメチルアルチロイルクロリド、塩化セネシオイル、塩化シンナモイル、塩化ペンテノイル、塩化ヘキサノイル、塩化ベンゾイルまたはエチルブチリルクロリドでのエステル化；ＨＰＬＣでの単離；細胞毒性活性測定；実験８の方法での化学構造測定によって、次の化合物を得た：
【０１９１】
【化４６】
0006019021.tif 000065
【０１９２】
実験１８：細胞接着の阻害。
方法および結果。ＥＳ２またはＨｅｙ８Ａ細胞を、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｖ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｑ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｔを含む構造（２Ａ）から選択される５ｕｇ／ｍｌの化合物を含有する培地を含むＴ２５フラスコ中に蒔いた。培養物を５時間インキュベートした。付着した細胞をトリプシン処理によってフラスコから除去し、量を計数した。無薬剤対照と比較して、８０±４％のＥＳ２細胞および６０±４％のＨｅｙ８Ａ細胞が、この条件下でフラスコに付着しているのが見出された。５ｕｇ／ｍｌの前記化合物で、トリパンブルー排除アッセイによって、そして試験化合物を含まない培地中に蒔いた場合、フラスコにそれらが再付着する可能性によって測定して、９０％を超える付着していない細胞が生存している。しかし、１０ｕｇ／ｍｌの試験化合物で、フラスコに付着した細胞の４０％未満およびそれらの多くは死んだ細胞である。この実験は、試験化合物が細胞接着プロセスを阻害することを示す。
【０１９３】
実験１９：フィブロネクチン分泌実験
本発明における化合物で処理および未処理の細胞中の特定の化合物を検出するための方法として、ウェスタンブロットを本発明において適用し、ここで、細胞は、膀胱、子宮頸部、前立腺、肺、乳房、白血病、結腸、肝臓、骨、脳、皮膚、卵巣、膵臓（Ｃａｐａｎ）、口（ＫＢ）、腎臓である。
【０１９４】
細胞：標的細胞をＲＰＭＩ１６４０培地中で成長させた。１５０万の細胞をＴ２５フラスコ中に蒔き、２４時間成長させた後、薬剤処理した。
【０１９５】
薬剤処理：細胞培養物を、２．５ｕｌのＤＭＳＯ（対照として）［Ｄ］；または１０、２０、３０、４０、８０ｕｇ／ｍｌの試験化合物のいずれかを含有する新鮮なＲＰＭＩ培地で置換した。
【０１９６】
２４時間後、培養培地のアリコートを、フィブロネクチン測定（ウェスタンブロット法）のために取り出した。
【０１９７】
２４時間での細胞の生存をＭＴＴアッセイによって測定した。培養物を、ＭＴＴを含むＲＰＭＩ培地（５ｍｌ）で置換し、１時間インキュベートした。ホルマザンの形成物を１０ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解させ、５７０ｎｍでのＯＤを測定した（ＭＴＴ単位）。
【０１９８】
ウェスタンブロット：使用済培養培地（ｓｐｅｎｔ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｕｍ）をＳＤＳ試料緩衝液と混合し、３分間沸騰させた後、ＳＤＳゲルにロードした。試料を６〜１０％ＳＤＳゲルに適用し、電気泳動を１００ボルトで２時間実施した。タンパク質を電気泳動法でニトロセルロース膜に移した。ニトロセルロースブロットを一次抗体および二次抗体（ＡＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ，Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｓ３７２１）とともにインキュベートした。免疫バンドをＢＣＩＰ／ＮＢＴ発色系で展開させた。
【０１９９】
ウェスタンバンド強度の測定：ウェスタンブロットのバンド画像をデジタルカメラで取り込み、「Ｉｍａｇｅ  Ｊ」ソフトウェアを用いてバンドの強度を測定した。
【０２００】
結果は、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｒ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｖ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｓ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｎ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｑ、Ｅ４Ａ−Ｔｉｇ−Ｔの化合物が、膀胱、子宮頸部、前立腺、肺、乳房、白血病、結腸、肝臓、骨、脳、皮膚、卵巣、膵臓（Ｃａｐａｎ）、口（ＫＢ）、腎臓でのフィブロネクチン分泌を２０〜４０％阻害することを示す。
【０２０１】
【表１９】
0006019021.tif 000066
【０２０２】
【表２０】
0006019021.tif 000067
【図１】
0006019021.tif 000077
【図２】
0006019021.tif 000078
【図３】
0006019021.tif 000079
【図４】
0006019021.tif 000080
【図５】
0006019021.tif 000081
【図６】
0006019021.tif 000082
【図７】
0006019021.tif 000083
【図８】
0006019021.tif 000084
【図９】
0006019021.tif 000085
【図１０】
0006019021.tif 000086
【図１１】
0006019021.tif 000087
【図１２】
0006019021.tif 000088
【図１３】
0006019021.tif 000089
【図１４】
0006019021.tif 000090
【図１５】
0006019021.tif 000091
【図１６】
0006019021.tif 000092
【図１７】
0006019021.tif 000093
【図１８】
0006019021.tif 000094
【図１９】
0006019021.tif 000095
【図２０】
0006019021.tif 000096
【図２１】
0006019021.tif 000097
【図２２】
0006019021.tif 000098
【図２３】
0006019021.tif 000099
【図２４】
0006019021.tif 000100
【図２５】
0006019021.tif 000101
【図２６】
0006019021.tif 000102
【図２７】
0006019021.tif 000103
【図２８】
0006019021.tif 000104
【図２９】
0006019021.tif 000105
【図３０】
0006019021.tif 000106
【図３１】
0006019021.tif 000107
【図３２】
0006019021.tif 000108
【図３３】
0006019021.tif 000109
【図３４】
0006019021.tif 000110
【図３５】
0006019021.tif 000111
【図３６】
0006019021.tif 000112
【図３７】
0006019021.tif 000113