(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）α１‐プロテイナーゼインヒビター（ＡＰＩ）；および
（ｂ）アラニン
を含む、液体組成物であって、ここで前記ＡＰＩの濃度が少なくとも５０ｍｇ／ｍｌであり、前記アラニンが前記液体組成物中に０．１Ｍ〜０．３Ｍの量で存在し、そして前記液体組成物のｐＨが６．７〜７．１である、前記液体組成物。
【請求項２】
５℃〜４０℃の温度に少なくとも６月間、前記液体組成物を曝したときに、前記ＡＰＩがその活性を少なくとも５０％保持する、請求項１に記載の液体組成物。
【請求項３】
さらに一またはそれ以上の賦形剤を含む、請求項１又は２に記載の液体組成物。
【請求項４】
前記一またはそれ以上の賦形剤が、スクロース、マンニトール、グリセロール、ソルビトール、デキストラン、トレハロース、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、および１，２‐プロパンジオールからなる群から選択される、請求項３に記載の液体組成物。
【請求項５】
さらに医薬的に許容される担体を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の液体組成物。
【請求項６】
対象への静脈内投与に用いる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の液体組成物。
【請求項７】
５℃〜２５℃の温度に６月間、前記液体組成物を曝した後、全タンパク質凝集が５％未満に維持される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の液体組成物。
【請求項８】
５℃〜２５℃の温度に６月間、前記液体組成物を曝した後、全タンパク質凝集が２％未満に維持される、請求項７に記載の液体組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の液体組成物の凍結乾燥品。
【請求項１０】
静脈内投与に用いる医薬組成物として、請求項１に記載の液体組成物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α‐１プロテイナーゼインヒビター（ＡＰＩ)、特に安定なＡＰＩ組成物を含む組成物に関する。本発明はまた、対象に対してＡＰＩを提供するための、特にＡＰＩの治療的にまたは予防的に効果的な量を提供するための方法およびキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＰＩ欠損は、肝臓疾患および／または肺気腫について発症した個人の素因となる比較的一般的な遺伝子疾患である。もっとも一般的なタイプのＡＰＩ欠損は、プロテアーゼインヒビタータイプＺ（ＰｉＺ）と呼ばれ、常染色体性の劣性形質として遺伝し、およびほとんどの北ヨーロッパおよび北アメリカの人口について１７００人の出生あたり約１人に影響する。ＰｉＺ突然変異は、１アミノ酸置換（グルタミン３４２からリジン）を生じる１ヌクレオチド置換である。
【０００３】
ヒトＡＰＩは、５２ｋＤａの全分子量を与えられ、１のシステイン残基、および３の炭化水素（糖）側鎖を持つ、３９４アミノ酸を有する。反応中心ループ（ＲＣＬ）は、３５８‐３５９位のＭｅｔ‐Ｓｅｒ配列に位置する。ＡＰＩの三次構造は、８の詳細に明らかにされたα‐へリックス（Ａ‐Ｈ）および３の大きなβシート（Ａ‐Ｃ）を含む。セルピンが、不可逆的な「自殺基質（ｓｕｉｃｉｄｅ‐ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）」機構を介して機能すると考えられている。プロテアーゼによる切断時には、セルピンが、コンフォメーションの変化を起こし、それによって、ＲＣＬが、切断されおよびβシートの中心内に挿入され、およびプロテアーゼが、分子の遠心端に転位置される。この構造的転移は、セルピンの安定化およびプロテアーゼの三次構造の広範な歪みに起因し、そしてそれは、その触媒機構を不活性化する。ＡＰＩの生物活性は、例えば分子内、または分子間重合、酸化、複合体形成、および／または非特異的なプロテアーゼによる切断を含む化学的修飾により影響を受けるであろう。
【０００４】
ＡＰＩの主な生理的機能は、好中球エラスターゼ、カセプシンＧ、およびプロテイナーゼ３の阻害と考えられている。特異的なエラスターゼ阻害能について減少するかもしれないが、ＰｉＺ  ＡＰＩ欠損を伴う個人において産生されるＡＰＩは、機能的に活性である。ＡＰＩ合成の主要な部位は、肝臓であるが、またマクロファージ、腸管上皮細胞、および腸パネート細胞を含む肝外細胞タイプ中でも合成される。
【０００５】
ＡＰＩ欠損における肺傷害の病因は、利用可能なＡＰＩ活性における顕著な減少に起因しうる。ＡＰＩは、肺胞洗浄液中の好中球エラスターゼインヒビター活性の９０％超を構成することが見出されている。従って、ＡＰＩ欠損を伴う多くの個人について破壊的な肺疾患が見られるのは、肺内のエラスターゼおよびＡＰＩ間の正味のバランスにおける撹乱によると思われる。好中球エラスターゼ、カセプシンＧ、およびプロテイナーゼ３の阻害されていない活性は、順番に、肺の統合性結合組織の緩慢な破壊の結果である。結合組織のこの破壊は、膨張しすぎまたは減少された呼気性の気流となる肺の収縮性の力について減少となる。喫煙は、ＡＰＩが存在する酸化不活性化を引き起こすことにより、問題を悪化させる。
【０００６】
現時点では、ＡＰＩ欠損と関連する症状の個人のための治療選択肢は、限られている。ＡＰＩ欠損と関連する肝臓疾患は、同所性肝移植により治療されている。欠損したＡＰＩ遺伝子を置換するための体細胞遺伝子治療が、議論されているが、いまだにうまく使用されていない。
【０００７】
従って、安定でありおよび対象に対しての以下の投与のための所望のＡＰＩ血漿生体利用能レベルを提供するＡＰＩ組成物のための要求がある。
【発明の概要】
【０００８】
一つの側面では、（ａ）α１‐プロテイナーゼインヒビター（ＡＰＩ）；（ｂ）少なくとも一のアミノ酸を含む組成物をここで提供する。
【０００９】
他の側面では、本発明は、本組成物を調製するための方法を提供する。
【００１０】
他の側面では、組成物を含むキットが、提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例１の表１に示された液体ＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフである。
【図２】図２は、アラニン、スクロース、またはスクロース／アラニンを含むＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフである。
【図３】図３は、アラニン、マンニトール、またはマンニトール／アラニンを含むＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフである。
【図４】図４は、アラニン、スクロース、またはトレハロースを含むＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフである。
【図５】図５は、４０℃で１週間インキュベーション後、ＡＰＩ調合物の凝集に対するアミノ酸濃度の影響を示すグラフである。
【図６】図６は、４０℃で２週間インキュベーション後、ＡＰＩ調合物の凝集に対するアミノ酸濃度の影響を示すグラフである。
【図７】図７は、酸素スカベンジャーを異なる濃度で含むまたは含まないＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフである。
【図８】図８は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図９】図９は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物のネフェロメトリー（ＮＴＵ）プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１０】図１０は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の比活性プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１１】図１１は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の脱アミド化プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１２】図１２は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の凝集増加プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１３】図１３は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１４】図１４は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物のオリゴマーレベルプロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１５】図１５は、５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物のモノマーレベルプロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１６】図１６は、２５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の効力プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１７】図１７は、２５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物のＮＴＵプロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１８】図１８は、２５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の比活性プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図１９】図１９は、２５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の脱アミド化プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図２０】図２０は、２５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の凝集増加プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図２１】図２１は、２５℃での、実施例６に記載されたＡＰＩ調合物の凝集プロファイルを示すグラフであり：「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図２２】図２２は、２５℃での、ＡＰＩ調合物のオリゴマープロファイルを示すグラフである。「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図２３】図２３は、２５℃での、ＡＰＩ調合物のモノマープロファイルを示すグラフである。「グリシン」は調合物１（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）グリシン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン」は調合物２（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（２５０ｍＭ））を示し、「アラニン／スクロース」は調合物３（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｌ‐アラニン（１２５ｍＭ）／スクロース（１２５ｍＭ））を示し、およびＮａＣｌは調合物４（ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）／ＮａＣｌ（２５０ｍＭ））を示す。
【図２４】図２４は、４０℃での、ＡＰＩ溶液について１週間、２週間、３週間の凝集に対するｐＨおよびタンパク質濃度の２Ｄコンタープロットである。
【図２５】図２５は、４０℃で１週間、２週間、３週間のＡＰＩ溶液のｐＨおよび凝集相互作用プロットである。
【図２６】図２６は、４０℃で１週間、２週間、３週間のＡＰＩ溶液について凝集に対するｐＨの影響を示す。
【図２７】図２７は、４０℃で１週間、２週間、３週間のＡＰＩ溶液について凝集プロファイルに対するタンパク質濃度の影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
本発明は、相対的に安定なＡＰＩを含む組成物が、また一またはそれ以上のアミノ酸を組成物中に含むことにより調製できる発見に基づいている。特定の実施態様では、本発明は、治療的または予防的効果のため対象に投与するためのＡＰＩを提供するために好適である安定なＡＰＩを含む医薬組成物を包含する。ＡＰＩに関連する障害または疾患（例えば、通常の血漿ＡＰＩレベルより低い）、および特に有用であろう本実施態様の非限定的な例は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（例えば、肺気腫）などの肺疾患、肝臓疾患、血管疾患（例えば、頭蓋内動脈瘤（ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ  ａｎｅｕｒｙｓｍｓ）、動脈の線維筋性形成異常症（ａｒｔｅｒｉａｌ  ｆｉｂｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）、重度の出血障害、および高血圧）、脂肪組織炎、眼疾患（例えば、前部ブドウ膜炎）、全身性壊死性血管炎およびウェゲナー肉芽腫症を含むが、限定されない。
【００１３】
Ｉ．組成物
一つの側面では、本発明は、以下：
（ｉ）ＡＰＩ；および
（ｉｉ）少なくとも一のアミノ酸
を含む組成物を提供する。
【００１４】
いくつかの実施態様では、組成物は、ＡＰＩおよび少なくとも一のアミノ酸からなるまたは本質的になる。
【００１５】
本発明の組成物は、相対的に純品で提供できる。例えば、いくつかの実施態様では、組成は、医薬品グレードとして特徴づけられる。
【００１６】
組成物は、固体、液体、または半固体形態についてでもよい。例えば、組成物は、水溶液、水性懸濁液、油性懸濁液などを含む液体調合物であってもよいが、限定されない。代替的に、本組成物は、凍結乾燥製剤、乾燥粉末、固体粒子などでもよいが、限定されない。他の例は、コロイド、エマルジョン、ゲル、および軟膏を含むが、限定されない。
【００１７】
一つの実施態様では、本組成物は、液体調合物、好ましくは水溶液である。他の実施態様では、組成物は、医薬品使用に適当であり、例えば、医薬的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物である。
【００１８】
一つの実施態様では、組成物は、ＡＰＩ、アミノ酸、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物である。本明細書で使用されるように、「医薬的に許容される担体」は、生理的に適合性の任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング剤などを含む。担体のタイプは、意図する投与経路に基づいて選択できる。いくつかの実施態様では、担体は、静脈内、吸入、非経口、皮下、筋肉内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、膀胱内（ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌ）、ボーラス、膣内、直腸、頬側、舌下、鼻腔内、または経皮手段を経由して投与するために適当であるが、限定されない。医薬的に許容される担体は、滅菌  注射用溶液または分散液の調製のための滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。
【００１９】
いくつかの実施態様では、組成物は、滅菌であり、および製造および保存の一またはそれ以上の状況下で、安定である。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または他の要求された構造として処方できる。例えば、滅菌注射可能な溶液は、フィルター滅菌により調製できる。分散剤は、分散媒を含む滅菌賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）内にＡＰＩを組み込むことにより調製できる。滅菌注射可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、好ましくは、それについて、従前の滅菌フィルター溶液由来のＡＰＩ粉末および任意の追加的な所望する成分を加えたアミノ酸を含む組成物を提供する真空乾燥および凍結乾燥である。
【００２０】
代表的な希釈剤（例えば、組成物の希釈、再調製用に使用のための）は、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩溶液、およびリンガー溶液またはデキストロース溶液を含むが、限定されない。希釈剤は、場合により、防腐剤を含む。使用される防腐剤の量は、ＡＰＩとの適合性のための異なる防腐剤の濃度の評価および防腐剤の有効性の試験により決定される。
【００２１】
吸入治療は、気道に対してエアロゾル形態での薬の投与を含む。エアロゾル送達は、深部肺部位（肺胞）に対する送達が、仮に分子が生体利用可能なら、肺上皮組織の９５％の割合で、上皮膜を介してタンパク質の輸送を顕著に増強することができるコンセプトに基づいている。液体エアロゾルは、ＡＰＩの溶液を噴霧することにより産生できる。代替的に、固体粒子は、定量噴霧式吸入器から投与される噴霧剤中に浮遊した粉末形態または単純に乾燥粉末吸入器から投与された粉末としての形態のいずれかでよい。例えば、固体粒子エアロゾルは、溶液からＡＰＩを凍結乾燥すること（例えば、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ‐ｄｒｙ）すること）により調製でき、その後、肺投与のための所望する粒子サイズ分布に凍結乾燥薬を製粉しまたは粉砕する。スプレー乾燥に関連する他の技術は、そしてそれは、連続的な液体供給の微粒化により生成された分散液滴を蒸発するためのホットガスストリーム（高温ガスストリーム）（通常気体）由来の熱を使用する脱水プロセスである。これらの方法を使用することにより、ＡＰＩを含む組成物は、細かい粒子内に、好ましくは、水置換剤（ｗａｔｅｒ−ｒｅｐｌａｃｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）として機能できるような賦形剤の適当なタイプおよび量で、乾燥され得る。
【００２２】
加圧された定量噴霧式吸入器は、現在当該技術分野で周知である。患者の肺または鼻に対する薬の適当な適用である任意の定量噴霧式吸入器が、使用できる。エアロゾル調合剤および絞り弁（ｍｅｔｅｒｉｎｇ  ｖａｌｖｅ）は、ＡＰＩの治療的または予防的効果を提供するために選択できる。
【００２３】
Ａ．ＡＰＩ
本明細書中で使用される用語「ＡＰＩ」は、特に断らないかぎり、広範であることを意図する。本用語は、ＡＰＩのすべての天然型多形を指す。本用語はまた、ＡＰＩの機能的フラグメント、ＡＰＩまたはそれらの機能的フラグメントを含むキメラタンパク質、ＡＰＩの一またはそれ以上のアミノ酸の類似性置換により得られたホモログ、および種ホモログを含む。本用語はまた、遺伝子導入技術の製品であるＡＰＩを含む組み換えＤＮＡ技術の製品であるすべてのＡＰＩポリペプチドを指す。例えば、ＡＰＩをコードする遺伝子は、ＤＮＡ配列が、例えば、米国特許第５，３２２，７７５号中に記載されたような乳腺において発現するそのような方法についてミルクホエイタンパク質をコードする哺乳類の遺伝子内に挿入でき、そしてそれは、タンパク質性の組成物を製造するための方法のその教授のため参照により本明細書中に取り込まれる。本用語はまた、例えば、固相ペプチド合成などの当該技術分野において知られた方法により化学的に合成されたすべてのＡＰＩタンパク質を指す。本用語はまた、血漿から調製されるＡＰＩを指す。本用語はまた、商業的に得ることができるＡＰＩを指す。ＡＰＩは、ヒトまたは非ヒトＡＰＩと対応できる。
【００２４】
一つの実施態様では、ＡＰＩは、血漿由来のＡＰＩである。他の実施態様では、ＡＰＩは、コーン画分（Ｃｏｈｎ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ）ＩＶ‐１ペーストから調製される。他の実施態様では、ＡＰＩは、アルブミン欠乏血漿画分、コーンＶ沈殿物、または予備精製されたＡＰＩ調製画分から調製される。米国特許第６，９７４，７９２号は、ＡＰＩを調製するための方法のその教授のため参照により本明細書に取り込まれる。
【００２５】
他の実施態様では、ＡＰＩは、組み換えＡＰＩである。ＡＰＩのためのアミノ酸および核酸配列および／または組み換えＡＰＩの製品は、例えば、米国特許第４，７１１，８４８号、４，７３２，９７３号、４，９３１，３７３号、５，０７９，３３６号、５，１３４，１１９号、５，２１８，０９１号、６，０７２，０２９号、およびＷｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：８３０（１９９１）、およびＡｒｃｈｉｂａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，８７：５１７８（１９９０）により記載され、そしてそれらそれぞれは、ＡＰＩ配列、組み換えＡＰＩ、および／またはＡＰＩの組み換え発現のその教授のため本明細書中に取り込まれる。
【００２６】
一つの実施態様では、組成物は、９０％超純度を有するＡＰＩを含むことにより特徴づけられる。他の実施態様において、ＡＰＩは、９５％超、好ましくは少なくとも約９９％の純度を有する。いくつかの実施態様では、少なくとも約５０％、実例として、組成物中のすべてのＡＰＩの約５０％‐約１００％、約６０％‐約９０％、約７０％‐約８０％が、活性ＡＰＩである。
【００２７】
一つの実施態様では、組成物は、治療上効果的な量のＡＰＩを含む。「治療上効果的な量」は、例えばＡＰＩの先天性欠損と関連する肺気腫の減少または阻害などの所望する治療上の結果を達成するために、必要な投与量および期間での効果的な量を指す。ＡＰＩの治療上効果的な量は、個々の対象の疾態、年齢、性別、および体重、並びに対象中で所望する反応を引き出すためのＡＰＩの能力などの要因により異なる。治療上効果的な量は、治療上有益な効果が、ＡＰＩの任意の毒性なまたは有害な影響を上回る量であってもよい。
【００２８】
他の実施態様では、組成物は予防上効果的な量のＡＰＩを含む。「予防上効果的な量」は、例えば、ＡＰＩの先天性の欠損に関連する肺気腫を予防することまたは阻害することなどの所望する予防的な結果を達成するために、必要な投与量および期間での効果的な量を指す。予防上の効果的な量は、治療上の効果的な量として上記されたように決定できる。
【００２９】
ＡＰＩの治療上または予防上の効果的な量を決定するときに考慮されてもよい一つの要因は、例えば、対象の気道の下部または気管支肺胞分泌液（ＥＬＦ）中などの治療を受けるための対象の生体コンパートメント中で発現された機能的活性ＡＰＩの濃度である。ＡＰＩの治療上または予防上の効果的な量を決定するときにまた考慮してもよい他の要因は、ＡＰＩの薬理学（例えば、薬物動態）である。
【００３０】
ＡＰＩの薬物動態は、対象の血液中のＡＰＩの濃度またはレベルを指す。血中ＡＰＩレベルの薬物動態パラメーターまたは測定は、曲面下面積（ＡＵＣ）、Ｃmin（すなわち、トラフ）、およびＣmaxを含む。ＡＵＣは、固定投与期間（例えば、８、１２、および２４時間）におよぶ対象血液中のＡＰＩの総暴露である。Ｃmin（すなわち、トラフレベル）は、固定投与期間の間のＡＰＩの最低血液レベルである。Ｃmaxは、固定投与期間におよぶ対象血液中のＡＰＩにより達成される最高またはピークレベルである。
【００３１】
一つの実施態様では、投与される治療上または予防上の効果的な量は、目標閾値レベルより上のＡＰＩ血液（例えば、血漿）トラフレベルを達成または維持するために十分である。一つの実施態様では、目標閾値レベルは、少なくとも約１０ｍｇ／ｄＬ、実例として約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、および２００ｍｇ／ｄＬである。
【００３２】
他の実施態様では、治療上または予防上の効果的な量は、少なくとも約５０ｍｇ／ｄＬのＡＰＩ血液トラフレベルを達成または維持するために十分である。他の実施態様では、ＡＰＩの治療上または予防上の効果的な量は、少なくとも約８０ｍｇ／ｄＬのＡＰＩトラフレベルを維持するために十分である。
【００３３】
一つの実施態様では、組成物中のＡＰＩの濃度は、少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、実例として、少なくとも約０．１、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、および１０００ｍｇ／ｍｌである。一つの実施態様では、組成物中のＡＰＩの比活性は、少なくとも約０．０５ｍｇ活性ＡＰＩ／ｍｇ全タンパク質、実例として少なくとも約０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、またはそれ以上の活性ＡＰＩ／ｍｇ全タンパク質である。
【００３４】
いくつかの実施態様では、組成物中に含まれたＡＰＩの濃度は、重量パーセント（ｗ／ｖ）基準で、少なくとも約１％、実例として、約１‐約６０％、約５‐５５％、約１０‐約４５％、約２０‐約３０％（ｗ／ｖ）である。
【００３５】
Ｂ．アミノ酸
本明細書中に特異的に列挙されたアミノ酸は、例示的な目的のみのためおよび本発明に関して使用できるアミノ酸を制限するための意図ではないことが理解される。本明細書中に特異的に列挙されていない他のアミノ酸は、それらの認められた物理的および化学的特性に基づいて容易に分類できる。さらに、本明細書中で列挙されたアミノ酸のいくつかは、遺伝子的にコードされるアミノ酸の面から例示されているが、しかしながら、アミノ酸は、遺伝子的にコードされたアミノ酸に限定する必要はなく、また遺伝子的にコードされないアミノ酸も含んでもよい。例えば、アミノ酸はまた、天然型のコードされないアミノ酸および合成アミノ酸（例えば、β‐アラニン、ヒドロキシプロリン）を含み得る。また、Ｌ‐エナンチオーマーのアミノ酸（Ｌ‐アミノ酸）およびＤ‐アミノ酸と同様に、フリーアミノ酸形態および／または生理的に許容される塩形態および／またはそれらの混合物を考慮する。
【００３６】
表１は、アミノ酸のいくつかの非限定的な例を列挙する。
【００３７】
【表１】
0006030201.tif 000002
【００３８】
一つの実施態様では、Ａｌａ（Ａ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、ヒドロキシプロリン、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、アセチルシステイン、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ａｓｐ（Ｄ）、およびＡｒｇ（Ｒ）からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸それぞれを含む。
【００３９】
他の実施態様では、Ａｌａ（Ａ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、ヒドロキシプロリン、Ｇｌｙ（Ｇ）、およびＳｅｒ（Ｓ）からなる群から選択される少なくとも一のアミノ酸それぞれである。
【００４０】
他の実施態様では、少なくとも一つのアミノ酸は、Ａｌａ（Ａ）またはＧｌｙ（Ｇ）である。
【００４１】
いくつかの実施態様では、アミノ酸は、中性アミノ酸または親水性アミノ酸である。他の実施態様では、親水性アミノ酸は、コンセンサス疎水性尺度に従って、ゼロ未満の疎水性を示すものとして特徴づけられるアミノ酸である。
【００４２】
一つの実施態様では、少なくとも一つのアミノ酸は、例えば、少なくとも一のアミノ酸を有しないＡＰＩ組成物に対して決定されるように、安定なＡＰＩ組成物を提供するために十分である全アミノ酸量について組成物中に存在する。
【００４３】
他の実施態様では、全アミノ酸量は、ＡＰＩが、ある温度で、ある期間の間、ＡＰＩ活性の少なくとも約５％を保持するような十分な量であり、実例として、ある温度で、ある期間の間、ＡＰＩ活性の少なくとも約５％‐約１００％、約１０％‐約９５％、約２０％‐約９０％、約３０％‐約８０％、約４０％‐約７０％、および約５０％‐約６０％である。いくつかの実施態様では、期間および／または温度は、保存時間および／または温度（例えば、有効期間（ｓｈｅｌｆ‐ｌｉｆｅ）として特徴づけられる。一つの実施態様では、期間は、少なくとも約１日、１週間、２週間、３週間、１月、２月、３月、４月、５月、６月、８月、１年、２年、および３年である。他の実施態様では、温度は、約−１２０℃、−７０℃、−２０℃、０℃、５℃、２５℃、３７℃、４０℃、および５０℃相当または超である。
【００４４】
一つの実施態様では、ＡＰＩ活性は、例えば、Ｃｏａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｏｘ  Ｓａｎｇ．，４８：３３３（１９８５）により記載されたようにブタすい臓エラスターゼの阻害により決定（測定）でき、そしてそれは、そのすべてについて参照により本明細書中に取り込まれる。いくつかの実施態様では、ＡＰＩ活性は、動物でインビトロ、インビボ、および／またはエクスビボ決定（定量）（例えば、治療指数、ＬＤ50、ＥＤ50など）により、効力としてまたは毒性として評価できる。例えば、バルクまたはストック溶液、または凍結乾燥されたまたは真空乾燥されたＡＰＩを含む組成物の再調製液から連続的な希釈液に続いて、再調製されたまたは水溶性の組成物中に存在するＡＰＩは、（少なくとも一のアミノ酸および／または少なくとも一のアミノ酸量のすべての存在で）生物学的に活性なＡＰＩが、先に組成物中に組み込まれることを有する効力または毒性の少なくとも約５％超‐約１００％を有する。
【００４５】
他の実施態様では、ＡＰＩの安定性は、例えば、酸化形成、タンパク質分解性、および／または脱アミド製品、分子量分布についての変化、効力の変化、機能性の変化、非酵素的なグリケーションなどの賦形剤の存在による製品の凝集または修飾などの不溶性物質の増加を含むが、限定されないＡＰＩの分解を決定することにより決定できる。さらに、安定性は、例えば、揮発、吸着、化学修飾などによる濃度の変化として決定できる。従って、いくつかの実施態様では、安定なＡＰＩ組成物の貯蔵は、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０％未満のＡＰＩ分解を示す組成物の貯蔵である。安定な組成物の貯蔵は、また、それらの特性の任意の組み合わせを示してもよい。
【００４６】
他の実施態様では、組成物の全アミノ酸量は、少なくとも一のアミノ酸を含まない組成物に対するＡＰＩの融点を増加するために十分な量である。当業者は、例えば、示差走査熱量計（ＤＳＣ）を使用することで、融点を決定できる。一つの実施態様では、組成物の全アミノ酸量は、少なくとも約０．０１℃、０．１℃、１℃、１．２℃、１．４℃、１．６℃、１．８℃、および２℃融点を上昇するために十分である。
【００４７】
他の実施態様では、組成物の全アミノ酸量は、ある温度で、ある期間、組成物の貯蔵後、組成物中の単量体ＡＰＩのパーセンテージが、少なくとも５０％、実例として、約５０％‐約１００％、約６０％‐約９９％、約７０％‐約９８％、約８０％‐約９５％、および約８５％‐約９０％であるのに十分な量である。一つの実施態様では、期間は、少なくとも約１日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、２月、３月、４月、５月、６月、８月、１年、２年、および３年である。他の実施態様では、温度は、約−１２０℃、−７０℃、−２０℃、０℃、５℃、２５℃、３７℃、４０℃、および５０℃相当または超である。
【００４８】
他の実施態様では、組成物の全アミノ酸量は、ある温度で、ある期間の間、組成物の貯蔵後、組成物中のタンパク質凝集の存在が、約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、および０％未満または相当であるのに十分な量である。一つの実施態様では、期間は、少なくとも約１日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、２月、３月、４月、５月、６月、８月、１年、２年、および３年である。他の実施態様では、温度は、約−１２０℃、−７０℃、−２０℃、０℃、５℃、２５℃、３７℃、４０℃、および５０℃相当または超である。
【００４９】
組成物中のタンパク質凝集レベルは、例えば、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ‐ＨＰＬＣ）を使用することで、当業者により決定され得る。
【００５０】
一つの実施態様では、組成物中に存在する全アミノ酸量は、少なくとも約０．０１Ｍ，実例として、約０．０１‐約３Ｍ、約０．０３‐約１Ｍ、約０．０５‐約０．５Ｍ、および約０．１‐０．３Ｍである。
【００５１】
他の実施態様では、組成物中に存在する全アミノ酸量は、少なくとも約０．０１Ｍ、少なくとも約０．０３Ｍ、または少なくとも約０．３Ｍである。
【００５２】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍアラニン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．０１Ｍ‐約０．７５Ｍアラニンの全アラニン濃度でアラニンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一つのアミノ酸がアラニンで、ここで、組成物がアラニン以外にアミノ酸を含まない。
【００５３】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍのスレオニン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍスレオニンの全スレオニン濃度でスレオニンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一つのアミノ酸がスレオニンで、ここで、組成物がスレオニン以外にアミノ酸を含まない。
【００５４】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍヒドロキシプロリン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍヒドロキシプロリンの全ヒドロキシプロリン濃度でヒドロキシプロリンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、ヒドロキシプロリンであり、ここで組成物が、ヒドロキシプロリン以外にアミノ酸を含まない。
【００５５】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍグリシン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍグリシンの全グリシン濃度でグリシンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、グリシンであり、ここで組成物が、グリシン以外にアミノ酸を含まない。
【００５６】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍセリン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍセリンの全セリン濃度でセリンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、セリンであり、ここで組成物が、セリン以外にアミノ酸を含まない。
【００５７】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍグルタミン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍグルタミンの全グルタミン濃度でグルタミンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、グルタミンであり、ここで組成物が、グルタミン以外にアミノ酸を含まない。
【００５８】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍフェニルアラニン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍフェニルアラニンの全フェニルアラニン濃度でフェニルアラニンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、フェニルアラニンであり、ここで組成物が、フェニルアラニン以外にアミノ酸を含まない。
【００５９】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍトリプトファン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍトリプトファンの全トリプトファン濃度でトリプトファンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、トリプトファンであり、ここで組成物が、トリプトファン以外にアミノ酸を含まない。
【００６０】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍメチオニン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍメチオニンの全メチオニン濃度でメチオニンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、メチオニンであり、ここで組成物が、メチオニン以外にアミノ酸を含まない。
【００６１】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍアセチルシステイン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍアセチルシステインの全アセチルシステイン濃度でアセチルシステインを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、アセチルシステインであり、ここで組成物が、アセチルシステイン以外にアミノ酸を含まない。
【００６２】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍロイシン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．０３Ｍ‐約０．１５Ｍロイシンの全ロイシン濃度でロイシンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、ロイシンであり、ここで組成物が、ロイシン以外にアミノ酸を含まない。
【００６３】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍイソロイシン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍイソロイシンの全イソロイシン濃度でイソロイシンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、イソロイシンであり、ここで組成物が、イソロイシン以外にアミノ酸を含まない。
【００６４】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍバリン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍバリンの全バリン濃度でバリンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、バリンであり、ここで組成物が、バリン以外にアミノ酸を含まない。
【００６５】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍリジン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍリジンの全リジン濃度でリジンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、リジンであり、ここで組成物が、リジン以外にアミノ酸を含まない。
【００６６】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍプロリン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍプロリンの全プロリン濃度でプロリンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、プロリンであり、ここで組成物が、プロリン以外にアミノ酸を含まない。
【００６７】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍチロシン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍチロシンの全チロシン濃度でチロシンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、チロシンであり、ここで組成物が、チロシン以外にアミノ酸を含まない。
【００６８】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍヒスチジン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍヒスチジンの全ヒスチジン濃度でヒスチジンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、ヒスチジンであり、ここで組成物が、ヒスチジン以外にアミノ酸を含まない。
【００６９】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍグルタミン酸、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍグルタミン酸の全グルタミン酸濃度でグルタミン酸を含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、グルタミン酸であり、ここで組成物が、グルタミン酸以外にアミノ酸を含まない。
【００７０】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍアスパラギン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍアスパラギンの全アスパラギン濃度でアスパラギンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、アスパラギンであり、ここで組成物が、アスパラギン以外にアミノ酸を含まない。
【００７１】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍアスパラギン酸、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１Ｍ‐約０．３Ｍアスパラギン酸の全アスパラギン酸濃度でアスパラギン酸を含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、アスパラギン酸であり、ここで組成物が、アスパラギン酸以外にアミノ酸を含まない。
【００７２】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍアルギニン、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１７Ｍ‐約０．３Ｍアルギニンの全アルギニン濃度でアルギニンを含む。いくつかの実施態様では、少なくとも一のアミノ酸が、アルギニンであり、ここで組成物が、アルギニン以外にアミノ酸を含まない。
【００７３】
Ｃ．賦形剤
他の実施態様では、本発明は、以下：
（ｉ）ＡＰＩ；
（ｉｉ）少なくとも一のアミノ酸、ここで組成物は、さらに一またはそれ以上の賦形剤を含む
を含む組成物を提供する。賦形剤の非限定的な例では、ポリオール、糖、界面活性剤、抗酸化剤、塩（例えば、無機塩）、金属キレート剤、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、シクロデキストリン、デキストラン）、ウレア、塩化グアニジウム、ポリペプチド（例えば、抗体）、およびそれらの組み合わせを含む。従って、当業者は、本明細書中で使用される用語「賦形剤」が、広範であることを意図し、およびタンパク質を含む組成物を調製するために当業者により通常使用されるようなそのような剤を含み得る。
【００７４】
いくつかの実施態様では、賦形剤は、ポリオールまたは糖である。例えば、ポリオールまたは糖は、スクロース、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、ソルボース、メレチトース、グリセロール、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、キシリトール、エリスリトール、トレイトール、ラフィノース、および／またはなどでよいが、限定されない。
【００７５】
一つの実施態様では、一またはそれ以上の賦形剤それぞれは、スクロース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン、トレハロース、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、サッカリンナトリウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ８０００）、および１，２‐プロパンジオールからなる群から選択される。他の実施態様では、賦形剤は、スクロースまたはマンニトールである。
【００７６】
他の実施態様では、スクロースの全量は、仮に組成物中に存在すれば、２０％（ｗ／ｖ）未満であり、実例として、約０％‐約１５％（ｗ／ｖ）、約２．５％‐約７．５％、および約４％‐約５％（ｗ／ｖ）である。一つの実施態様では、組成物は、スクロースを含まない。
【００７７】
それぞれの賦形剤の全量および／または組成物の全賦形剤量は、例えば、種類および／または使用される賦形剤量および／または種類および／またはＡＰＩを含む組成物中に存在する他の成分量に依拠して、変更できる。
【００７８】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍの糖、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１２５‐約０．７５Ｍの糖の全糖濃度で糖を含む。いくつかの実施態様では、糖はスクロースである。他の実施態様では、糖はスクロースであり、ここで、組成物はスクロース以外に糖を含まない。
【００７９】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍのポリオール、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１２５‐約０．７５Ｍのポリオールの全ポリオール濃度でポリオールを含む。いくつかの実施態様では、ポリオールはマンニトールである。他の実施態様では、ポリオールはマンニトールであり、ここで、組成物はマンニトール以外にポリオールを含まない。
【００８０】
他の実施態様では、少なくとも約０．２５％（ｗ／ｖ）のポリオール、実例として、約０．２５‐５％（ｗ／ｖ）のポリオールの全ポリオール濃度でポリオールを含む。いくつかの実施態様では、ポリオールはグリセロールである。他の実施態様では、ポリオールは、グリセロールであり、ここで、組成物は、グリセロール以外にポリオールを含まない。
【００８１】
一つの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍのポリオール、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．２７‐約０．５５Ｍポリオールの全ポリオール濃度でポリオールを含む。いくつかの実施態様では、ポリオールはソルビトールである。他の実施態様では、ポリオールはソルビトールであり、ここで、組成物はソルビトール以外にポリオールを含まない。
【００８２】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．２５％（ｗ／ｖ）のポリマー、実例として、約０．２５‐約５％（ｗ／ｖ）ポリマーの全ポリマー濃度でポリマーを含む。いくつかの実施態様では、ポリマーはデキストランである。他の実施態様では、ポリマーはデキストランであり、ここで組成物は、デキストラン以外にポリマーを含まない。
【００８３】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍの糖、実例として、約０．０１‐約１Ｍ、および約０．１５‐約０．７５Ｍの糖の全糖濃度で糖を含む。いくつかの実施態様では、糖はトレハロースである。他の実施態様では、糖はトレハロースであり、ここで、組成物は、トレハロース以外に糖を含まない。
【００８４】
一つの実施態様では、少なくとも約０．２５％（ｗ／ｖ）のＨＥＳ、実例として、約０．２５‐約５％（ｗ／ｖ）のＨＥＳの全ＨＥＳ濃度でＨＥＳを含む。
【００８５】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍのサッカリンナトリウム、実例として、約０．０１‐約１Ｍおよび約０．１５‐０．７５Ｍのサッカリンナトリウムの全サッカリンナトリウム濃度でサッカリンナトリウムを含む。
【００８６】
他の実施態様では、組成物は、少なくとも約０．２５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ、実例として、約０．２５‐約１０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ、および約１‐５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧの全ＰＥＧ濃度でＰＥＧを含む。いくつかの実施態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ３３５０である。いくつかの実施態様では、ＰＥＧは、約５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ３３５０であり、ここで組成物は、ＰＥＧ３３５０以外にＰＥＧを含まない。
【００８７】
いくつかの実施態様では、組成物は、少なくとも約０．０１Ｍの１，２‐プロパンジオール、実例として、約０．０１‐約１Ｍ、および約０．１２５‐約０．３Ｍの１，２‐プロパンジオールの全１，２‐プロパンジオール濃度で１，２プロパンジオールを含む。
【００８８】
界面活性剤は、例えば、ポリエチレンおよびポリプロピレングリコール（例えば、プルロニックＦ６８）のブロックポリマー、またはポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（例えば、ツイーン８０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（ツイーン２０）、および／またはなどに限定されないが、含み得る。
【００８９】
一つの実施態様では、組成物は、さらに、少なくとも約０．００２５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤、実例として、約０．００２５‐約１％（ｖ／ｖ）の界面活性剤、約０．０２５‐約０．１％（ｖ／ｖ）の界面活性剤、および約０．０５‐約０．０７５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤の全界面活性剤濃度で界面活性剤を含む。いくつかの実施態様では、界面活性剤は、プルロニックＦ６８またはツイーン８０である。
【００９０】
他の実施態様では、本発明は、以下：
（ｉ）ＡＰＩ
（ｉｉ）少なくとも一のアミノ酸、ここで組成物は、さらに塩、好ましくは無機塩を含む
を含む組成物を提供する。無機塩の例は、塩化ナトリウムまたはリン酸ナトリウムを含むが、限定されない。
【００９１】
一つの実施態様では、無機塩は、少なくとも０．０１Ｍ、実例として約０．０１‐約０．５Ｍ、約０．０５‐約０．４Ｍ、および約０．１‐約０．１５Ｍの無機塩の全無機塩量について組成物中に存在する。いくつかの実施態様では、無機塩は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、またはそれらの組み合わせである。
【００９２】
本明細書中で使用されるように、用語「抗酸化剤」は、酸化を低減しまたは防止する物質を指す。「抗酸化剤」は、メチオニン、グルタチオン、アセチルシステイン、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシルアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシルトルエン（ＢＨＴ）、およびマレイン酸を含むが、限定されない。
【００９３】
一つの実施態様では、本発明は、以下：
（ｉ）ＡＰＩ
（ｉｉ）少なくとも一のアミノ酸、ここで、組成物はさらに、抗酸化剤を含む。いくつかの実施態様では、抗酸化剤はメチオニンである。他の実施態様では、抗酸化剤は、グルタミンである。他の実施態様では、抗酸化剤は、少なくとも約０．０１％（ｗ／ｖ）、実例として、約０．０１‐約５％（ｗ／ｖ）、および約０．０５‐約０．７％（ｗ／ｖ）の全酸化剤量について組成物中に存在する。
【００９４】
金属キレート剤の非限定的な例は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、（０．１‐０．５％）、［エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２‐ビス（２‐アミノフェノキシ）エタン‐Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’‐四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、ヒドロキシエチレントリアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、またはそれらの塩を含む。一つの実施態様では、金属キレート剤は、二価金属キレート剤である。他の実施態様では、金属キレート剤は、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、ＨＥＤＴＡ、またはそれらの塩である。いくつかの実施態様では、組成物は、金属キレート剤の組み合わせを含む。他の実施態様では、金属キレート剤は、少なくとも約０．０１％（ｗ／ｖ）、実例として、約０．０１‐約１％（ｗ／ｖ）、約０．０５％‐約０．５％（ｗ／ｖ）、および約０．１‐約０．２５％の全キレート剤量で組成物中に存在する。
【００９５】
他の実施態様では、本発明は、以下：
（ｉ）ＡＰＩ；
（ｉｉ）少なくとも一のアミノ酸、ここで、組成物はさらに、金属キレート剤を含む
を含む組成物を提供する。
【００９６】
従って、他の実施態様では、本発明は、以下：
（ａ）ＡＰＩ；および
（ｂ）アミノ酸、
ここで組成物はさらに、または場合によりさらに、一またはそれ以上の賦形剤を含む、を含む組成物を提供する。
【００９７】
異なるＡＰＩを含む組成物の多様性は、本発明に従って提供される。そのような調合物内の活性成分は、ＡＰＩであり、そしてそれは、ヒトまたはヒト以外の組み換えＡＰＩでもよく、上述したようにまた、血漿源から抽出されたＡＰＩを含んでもよい。ＡＰＩは、単独の活性成分としてそれ自体で存在できるが、ＡＰＩはまた、一またはそれ以上の追加の活性成分と一緒に存在してもよい。
【００９８】
ＩＩ．組成物を調製するための方法
他の側面では、本発明は、ＡＰＩおよび少なくとも一のアミノ酸を含む組成物を調製するための方法を提供する。
【００９９】
一つの実施態様では、方法は、仮に組成物中に存在すれば、塩を除去するために、ＡＰＩを含む第一組成物を透析することを含む。
【０１００】
例えば、第一組成物は、緩衝液中または接触して調製されたＡＰＩを含む組成物でもよく、ここで第一組成物は、塩を含む。組成物は、血漿（例えば、ヒト血漿）からＡＰＩを調製するためのバルク生産プロセスまたは組み換えＡＰＩ調製から得た組成物でもよいが、限定されない。
【０１０１】
一つの実施態様では、第一組成物は、リン酸緩衝液（例えば、２０ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ７）中にＡＰＩを含み、ここで、塩化ナトリウムは、緩衝液中に、例えば、約１００ｍＭ  ＮａＣｌで、存在する。いくつかの実施態様では、透析は、限外ろ過／ダイヤフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）である。
【０１０２】
いくつかの実施態様では、本方法は、さらに、透析ステップに続いて、組成物に一またはそれ以上のアミノ酸を提供することを含む。賦形剤および／または任意の他の剤などは、アミノ酸と一緒に添加してもよく、アミノ酸添加に続いて、またはアミノ酸添加と同時でもよい。
【０１０３】
他の実施態様では、本方法は、少なくとも一のアミノ酸および／または賦形剤および／または任意の他の剤を含む緩衝液（例えば、リン酸緩衝液  ２０ｍＭ、ｐＨ７）中にＡＰＩを含む第一組成物を透析することを含む。
【０１０４】
一つの実施態様では、本方法はさらに、ＡＰＩを含む組成物のｐＨを、約６．０‐約８．０、好ましくは、約６．６‐約７．４に維持することを含む。例えば、他の実施態様では、緩衝塩は、アミノ酸および／または賦形剤および／または任意の他の剤／成分の添加に続いて、効果的なｐＨ範囲を達成するために最初に添加できる。他の実施態様では、アミノ酸および／または賦形剤、および／または他の剤は、ＡＰＩを含む組成物に添加するために組み合わせてもよい。
【０１０５】
ＩＩＩ．キット
他の側面では、本発明はさらに、キット、例えば、ＡＰＩ発現または活性に関連する疾患または症状を治療するためのキットを提供する。一つの実施態様では、キットは、本発明に拠る組成物、特にＡＰＩおよびアミノ酸を含む医薬組成物、および場合により、ＡＰＩと関連した疾患または症状、例えば通常の血漿ＡＰＩレベルよりも低いことに関連し、またはそれによって引き起こされる疾患または症状の治療または予防について使用するための説明書を含む。
【０１０６】
他の実施態様では、分離したコンテナが、キットにより提供され、ここで、少なくとも一のコンテナが、ＡＰＩを含む組成物を含み、および、一またはそれ以上のさらなるコンテナ中に、異なる組成物、特にＡＰＩ以外の活性成分を含む組成物を含む。場合により、キットは、そのうえさらに活性成分と結合して医薬的に許容される担体および希釈剤、および／または、分離したコンテナ中にそこから離れて含んでもよい。
【０１０７】
本発明は、実施例を通じてさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されないことに留意されたい。
【実施例】
【０１０８】
実施例１：ＡＰＩを含む液体調合物の安定性
ＡＰＩを含む液体調合物の安定性を決定するために、加速安定性試験を行った。
【０１０９】
画分ＩＶ‐１製造からＡＰＩを調製し、およびマクロベンチロットを、塩を除去するためにリン酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７）中で透析を行い、およびその後１００ｍｇ／ｍｌに濃縮した。透析に続いて、他の成分を含むさまざまなＡＰＩ調合物を、他の成分（複数）を含む２倍溶液を添加することで得た。１０ｍｌバイアルチューブ内に約２ｍｌの最終調合物を加えることにより、最終ＡＰＩ調合物をその後、ＡＰＩ安定性について試験し、そしてそれをその後、４０℃で３‐４週間、温度制御チャンバー中でインキュベートした。サンプルを、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣを使用して凝集レベルを決定するために毎週採取した。
【０１１０】
結果を図１に示し、および表２で概要を述べる。
【０１１１】
【表２】
0006030201.tif 000003
【０１１２】
図１および図２に示したように、ＡＰＩのみを含む調合物および０．１Ｍ  ＮａＣｌを含む調合物が、もっとも多い凝集量を示した。スクロースを含むＡＰＩ調合物は、期間を通じて凝集形成のもっとも少ない量で、もっとも安定であった。
【０１１３】
加速安定性試験をまた、４０℃で、ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍＬ）、ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍＬ）＋アラニン（０．２５Ｍ）またはスクロース（０．２５Ｍ）、およびＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍＬ）＋アラニン（０．１２５Ｍ）／スクロース（０．１２５Ｍ）を含む液体ＡＰＩ調合物で行った。
【０１１４】
図２に示すように、アラニンのみは、期間を通じて、パーセント凝集レベルにより決定された、ＡＰＩを含む組成物に対する安定性の程度を付与した。さらに、アラニンとスクロースの限定された量の組み合わせは、またある安定性の程度を提供し、そしてそれはアラニンのみより大きかった。
【０１１５】
実施例２：ＡＰＩを含む液体調合物の安定性
実施例１で記載した加速安定性試験を、４０℃で、ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍＬ）、ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍＬ）＋アラニン（０．２５Ｍ）またはマンニトール（０．２５Ｍ）、およびＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍＬ）＋アラニン（０．１２５Ｍ）／マンニトール（０．１２５Ｍ）を含む液体ＡＰＩ調合物で行った。
【０１１６】
図３に示したように、アラニンのみは、期間を通じてパーセント凝集レベルにより決定するための組成物を含むＡＰＩに安定性の程度を付与する。さらに、アラニンと伴に限定された量のマンニトールを組み合わせは、また安定性の程度を提供し、そしてそれは、アラニンのみより大きかった。
【０１１７】
実施例３：ＡＰＩを含む液体調合物の安定性
実施例１で記載した加速安定性試験をまた、さまざまな濃度でスクロース、トレハロース、およびアラニンの安定化効果を決定するために、４０℃で行った。スクロース、トレハロースおよびアラニンの安定化効果を評価するために、０．２５Ｍ、０．５Ｍ、および０．７５Ｍでこれらの成分を含む１０の調合物それぞれを、調製しおよび無菌的に５ｍｌバイアルチューブに充填した。４０℃でこれらのサンプルの凝集を、４週間試験した。
【０１１８】
図４に結果を示す。開始凝集レベルは０であった。４週間のインキュベーションの間、ＡＰＩの非凝集を、０．７５Ｍスクロースまたは０．７５Ｍトレハロース調合物で認めた。非凝集を、４０℃で第１週において認めた。さまざまな成分が不存在であるＡＰＩは、第１週で凝集しおよび凝集レベルは、それぞれの時点で、もっとも高かった。凝集レベルは、添加された成分の濃度の増加につれて減少した。トレハロースは、凝集に対して一番の安定化効果を提供し、続いてスクロースおよびアラニンであった。
【０１１９】
実施例４：ＡＰＩを含む液体調合物の安定性
実施例１で記載した加速安定性試験をまた、ＡＰＩ調合物におけるアラニンまたはグリシンの濃度の効果を決定するために、４０℃で行った。０Ｍ、０．１Ｍ、０．１５Ｍ、０．２Ｍ、０．２５Ｍ、または０．３ＭでアラニンまたはグリシンをＡＰＩ液体調合物に添加し、および凝集レベルを４０℃で、異なる期間について比較した。すべての調合物は、約１．３‐１．４％凝集レベルから開始した。
図５は、４０℃で１週間インキュベーション後、アラニンまたはグリシンの異なる濃度を伴い処方されたＡＰＩ溶液中の凝集レベルを示す。図６は、２週間での凝集レベルを示す。結果は、１週間のデータと一致する。凝集レベルは、アラニンまたはグリシン濃度について増加につれて減少した。３および４週での凝集もまた、アラニンまたはグリシンのより多い添加につれて凝集がより少なくなることを示した（データ未記載）。
【０１２０】
実施例５：ＡＰＩを含む液体調合物の安定性
実施例１に記載した加速安定性試験をまた、凝集について酸素スカベンジャーの効果を決定するために４０℃で行った。従って、ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）およびアラニン（０．２５Ｍ）を含む液体調合物を調製し、さらに０．３％、０．５％、および０．７％メチオニンを含む液体調合物を調製した。
【０１２１】
図７は、４０℃での、凝集プロファイルを示す。凝集に対するメチオニンの効果は、最小であった。凝集レベルの顕著な低下は見られなかった。
【０１２２】
実施例６：ＡＰＩを含む液体調合物の安定性
α‐１プロテイナーゼインヒビター（ＡＰＩ）（ヒト血漿から調製；６５ｍｇ／ｍｌ効力）を含むバルク溶液を、１００ｍＭ塩化ナトリウムを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中で得た。限外ろ過／ダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を、エンドポイントに到達するために２４０Ｌのリン酸緩衝液を使用して、リン酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７）中でバルク溶液（３０Ｌ）のろ過を適用した。アミノ酸および／または他の成分をその後添加し、および最終タンパク質濃度を５０ｍｇ／ｍｌに調整した。最終調合物溶液を、０．２２μｍフィルターを通してろ過し、およびラミナーフローフード下充填した。充填量は、２０．０ｍｌであった。バイアルを、オーバーシールしおよび標識した。
【０１２３】
調合物１は、２５０ｍＭグリシンを含み、調合物２は、２５０ｍＭ  Ｌ‐アラニンを含み、調合物３は、１２５ｍＭ  Ｌ‐アラニンおよび４．２％スクロースを含み、調合物４は、１００ｍＭ塩化ナトリウムを含む。それぞれの調合物について、ＡＰＩは、５０ｍｇ／ｍｌであり、および緩衝液は、２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（一塩基および二塩基性七水和物の混合物）であった。凍結乾燥製品について、再調製およびケーキ水分（ｃａｋｅ  ｍｏｉｓｔｕｒｅ）後、溶解時間／外観を含む追加のアッセイを行った。
【０１２４】
サンプルを、５℃および２５℃で、安定に設置した。以下：外観、線維、効力、ｐＨ、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ、Ａ２８０で吸光度の測定、ネフェロメトリー（ＮＴＵ）測定、キャピラリーゾーン電気泳動（ＣＺＥ）によるタンパク質組成、脱アミド化および動的光散乱（ＤＬＳ）の試験を、調合物ごとに初期（開始）サンプル（０時間）について行った。ナトリウムの測定を、原子吸光分析法により行い、スクロースの分析を、イオンクロマトグラフィーにより行い、ネフェロメトリー：混濁測定を、ＨＡＣＨ比濁計を使用して行い、およびＡＰＩの定量測定を、９６ウェルプレートベースの効力アッセイを使用することで行った。
【０１２５】
表３は、初期分析試験の結果を示す。
【０１２６】
【表３】
0006030201.tif 000004
【０１２７】
５℃安定性データ：５℃で、３および６月で、アラニン／スクロースを伴って処方されたＡＰＩにおいて線維は、ほとんど見られなかった。他の任意の調合物においては、任意の期間で線維が認められなかった。効力（図８）、ＮＵＴ（図９）、ｐＨ、比活性（図１０）、ＤＬＳおよび脱アミド化測定（図１１）では、顕著な変化が見られなかった。効力のための最終コンテナ精度（ＢＣＳ）は、５％である。ＮＴＵおよび脱アミド化のための中間精度は、３．０％および１８．５％である。見られる相違は、アッセイのばらつきの範囲である。
【０１２８】
サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）で、分子の流体力学的体積（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｖｏｌｕｍｅ）を基準としたサンプルタンパク質を分離した。ＳＥＣ‐ＨＰＬＣにおいて、大きな流体力学的体積を伴う分子は、カラムの充填剤と最小の相互作用（仮にあれば）を有し、およびカラムの排除体積（ｖｏｉｄ  ｖｏｌｕｍｅ）で溶出する。より小さい流体力学的体積を伴う分子は、カラムの充填剤とより相互作用し、および排除体積の後、カラムから溶出する。
【０１２９】
安定性のデータによると、ＮａＣｌを伴い処方されたＡＰＩ（調合物４）は、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣにより測定したように他の調合物と比較してわずかに高い凝集レベルであった。６月で、凝集レベルは、ＮａＣｌ（調合物４）、グリシン（調合物１）、アラニン（調合物２）およびアラニン／スクロース（調合物３）サンプルそれぞれについて、０．６６％、０．５８％、０．４３％および０．４２％増加し（図１２および１３）、並びにオリゴマーピークは、未変化を維持するように見え（図１４）、並びにモノマーレベルは、０．８７％、０．６１％、０．５７％および０．６５％それぞれ減少した（図１５）。
【０１３０】
２５℃安定性データ：２５℃で、６月で、すべての調合物で線維が見られなかった。効力（図１６）、ｐＨおよびＤＬＳでほとんど変化が見られなかった。ＮＴＵは、ＮａＣｌで、もっとも高い値７．８８に達し増加した（図１７）。
【０１３１】
比活性は、６月を通じてすべての調合物で０．２‐０．３減少した（図１８）。この減少は、Ａ280吸収の増加に起因でき、そしてそれは、６月を通じてすべての調合物について２５ＡＵから約２８ＡＵ増加した（図１９）。
【０１３２】
脱アミド化は、バルク製造プロセスで起こるかもしれず、そしてそれは開始材料の約６％脱アミド化レベルと説明してもよい。脱アミド化は、６月で、開始（初期）平均６％から２０％まで増加した（図１９）。さらに調合物４は、他の調合物（約２０％）と比してわずかに低い脱アミド化レベル（１７％）を示すが、相違は、１８．５％のアッセイのばらつきの範囲内である。
【０１３３】
凝集レベルおよびオリゴマーレベルは、増加した（図２１‐２３）。モノマーレベルは、期間を通じて減少した（図２３）。モノマーレベルについての減少は、凝集およびオリゴマー増加の合計と比較できる。６月で、凝集レベルは、調合物４、調合物１、調合物２、および調合物３でそれぞれ、３．５２％、３．１２％、２．６％および２．２５％まで増加した（図２０）。
【０１３４】
５℃で、６月間のインキュベーション後、明らかな変化は、効力、ＮＴＵ、ｐＨ、比活性、ＤＬＳおよび脱アミド化測定により見られなかった。凝集レベルについてわずかな増加（＜１％）およびモノマーレベルの対応する増加があった。これらの結果は、５℃で、６月間について、ＡＰＩ調合物の安定性を示す。
【０１３５】
２５℃で、６月間のインキュベーションの後、調合物４（すなわち、ＡＰＩ＋ＮａＣｌ）について、凝集レベルおよびＮＴＵで顕著な増加が見られた。グリシン、アラニン、およびアラニン／スクロースは、凝集およびＮＴＵを減少し、アラニン／スクロースでもっとも効果的な安定化であった。脱アミド化は、劇的に増加した。これらの結果は、ＡＰＩを含む液体調合物は、２５℃で凝集および脱アミド化を受け、およびアミノ酸が凝集に対して保護を提供することを示す。５℃での凝集データから推定では、５％凝集レベルの到達する予測時間は、調合物４で〜２５月、調合物２で４４月、および調合物３で５１月であることを示す。アミノ酸は、それゆえ、顕著なタンパク質安定化を与えることを期待され、および実質的に有効期間を増加することが期待される。
【０１３６】
実施例７：ＡＰＩを含む液体調合物の融点
ＡＰＩ調合物の融点を決定するために、さまざまなそれらの転移中点値（Ｔｍ）を測定するために、ＤＳＣを行った。
【０１３７】
ＡＰＩ（５０ｍｇ／ｍｌ）を含むＡＰＩ調合物を、さまざまな成分を含むように調製した。短時間で、ＡＰＩ溶液を、表４に列挙されたそれぞれの成分を含むリン酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７）中で透析した。結果を表４に示す。
【０１３８】
【表４】
0006030201.tif 000005
【０１３９】
ｐＨ７のリン酸緩衝液中でＡＰＩタンパク質の融点は、６１．５４℃である。融点の増加を、ＡＰＩタンパク質の立体構造の安定性について増加するための指標として提供できる。
【０１４０】
実施例８：ＡＰＩを含む液体調合物のｐＨおよびタンパク質濃度の影響
凝集に対するｐＨおよびタンパク質濃度の影響を決定するため、異なるｐＨおよびタンパク質濃度で調製したＡＰＩ溶液を、４０℃でインキュベーションし、および凝集データをＥ‐ＣＨＩＰ分析に供した。タンパク質濃度を、Ａ２８０／０．５３が５０ｍｇ／ｍｌの濃度値に対応するところで、２８０ｎｍで吸光度を測定することにより計算した。表５に列挙した試験について、４０℃での凝集データを決定した。
【０１４１】
【表５】
0006030201.tif 000006
【０１４２】
５０ｍｇ／ｍｌのＡＰＩでの最小凝集のための最適ｐＨを示すＥ‐ＣＨＩＰモデルは、６．９である（図２４）。凝集は、ｐＨ６．３で見られ、および凝集量は、ｐＨ６．７および７．１でさらに少ない（図２５）。凝集は、ｐＨ増加で減少し、およびｐＨ６．９で最小値に達した（図２６）。図２７は、凝集が、タンパク質濃度でほとんど直線的に増加することを示す。
【図１】
0006030201.tif 000007
【図２】
0006030201.tif 000008
【図３】
0006030201.tif 000009
【図４】
0006030201.tif 000010
【図５】
0006030201.tif 000011
【図６】
0006030201.tif 000012
【図７】
0006030201.tif 000013
【図８】
0006030201.tif 000014
【図９】
0006030201.tif 000015
【図１０】
0006030201.tif 000016
【図１１】
0006030201.tif 000017
【図１２】
0006030201.tif 000018
【図１３】
0006030201.tif 000019
【図１４】
0006030201.tif 000020
【図１５】
0006030201.tif 000021
【図１６】
0006030201.tif 000022
【図１７】
0006030201.tif 000023
【図１８】
0006030201.tif 000024
【図１９】
0006030201.tif 000025
【図２０】
0006030201.tif 000026
【図２１】
0006030201.tif 000027
【図２２】
0006030201.tif 000028
【図２３】
0006030201.tif 000029
【図２４】
0006030201.tif 000030
【図２５】
0006030201.tif 000031
【図２６】
0006030201.tif 000032
【図２７】
0006030201.tif 000033