(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）式（Ｉ）
【化１】
0005933544.tif 000198
の１つもしくは複数の化合物であり：
式中：
Ａは、−Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４）−であり；
Ｙは、Ｎ、ＳもしくはＯであり；
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルであり；
Ｒ２は、水素または、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１６アルキル、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、−Ｎ（Ｒ５）２、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり；かつ
各Ｒ５は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルであり；ならびに
Ｘは、医薬上許容可能なアニオンであり；ならびに
（ｂ）
（ｉ）少なくとも１つの沈殿剤、
（ｉｉ）少なくとも１つの低級アルコール、ならびに
（ｉｉｉ）少なくとも１つのカオトロープ
の１つ、２つ、もしくは全３つを含む血液試料中の核酸およびポリペプチド分子を安定的に貯蔵するための組成物。
【請求項２】
（ａ）キレート剤、
（ｂ）還元剤、
（ｃ）ｐＨ緩衝液、および
（ｄ）水
の１つもしくは複数をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記医薬上許容可能なアニオンが、ブロミド、塩化物、ヨウ化物、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルスルホネート、ヘキサフルオロホスファート、メチルスルファート、エチルスルファート、テトラフルオロボラート、トリフルオロメタンスルホネートおよびビス（トリフルオロメチルスルホニル）イミドからなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
（ａ）前記式（Ｉ）の化合物が、
１−メチル−３−カルボキシエチル−イミダゾリウムブロミド、
１−ヘキシル−３−メチルイミダゾリウムブロミド、
１−デシル−３−メチルイミダゾリウムブロミド、
１−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチルイミダゾリウムブロミド、および
１−ベンジル−３−ヘキシルイミダゾリウムブロミドからなる群から選択され、
（ｂ）前記沈殿剤が、
５−（４−ジメチル）アミノベンジリデンロダニン、
スルホサリチル酸、
塩化リチウム、および
水酸化リチウムからなる群から選択され、
（ｃ）前記低級アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、およびイソブタノール（２−メチルプロパン−１−オール）からなる群から選択され、
（ｄ）前記カオトロープが、
塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウムおよび尿素からなる群から選択される、
組成物のうちの少なくとも一つである請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
（ａ）前記キレート剤が、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングルコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（ＣＤＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−三酢酸、およびニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）からなる群から選択され、
（ｂ）前記還元剤が、２−メルカプトエタノール、チオスルファート、ＴＣＥＰ（トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、ジチオスレイトールおよびジチオエリトリトールからなる群から選択され、
（ｃ）前記ｐＨ緩衝液が、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ボラート、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）からなる群から選択される、組成物のうちの少なくとも一つである請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
界面活性剤または洗剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記界面活性剤または洗剤が、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ４０およびＢｒｉｊ（登録商標）洗剤から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記核酸分子がＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を１つまたは複数含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記血液試料が脊椎動物血液を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記脊椎動物血液が未分画である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記生体血液試料がヒト血液を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ヒト血液が未分画である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物と混合した血液試料を含む、血液試料由来の安定的に貯蔵された核酸分子。
【請求項１４】
前記血液試料は、
（ａ）脊椎動物血液、
（ｂ）ヒト血液、
（ｃ）前記核酸分子がＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を１つまたは複数含む（ａ）又は（ｂ）の試料、からなる群から選択される、請求項１３に記載の安定的に貯蔵された核酸分子。
【請求項１５】
（ａ）試験混合物を得るために未分画ヒト血液の第１試料と混合し、少なくとも６０日間冷蔵せずに前記試験混合物を保存した後に、前記期間中−２０℃で貯蔵された前記未分画ヒト血液の第２試料から収集可能なＤＮＡと比較して、前記試験混合物から収集可能なＤＮＡの分解を少なくとも７０％防止することが可能な組成物、または、
（ｂ）試験混合物を得るために未分画ヒト血液の第１試料と混合し、少なくとも２１日間冷蔵せずに前記試験混合物を保存した後に、前記期間中−８０℃で貯蔵された前記未分画ヒト血液の第２試料から収集可能なＲＮＡと比較して、前記試験混合物から収集可能なＤＮＡの分解を少なくとも７０％防止することが可能な組成物、から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
血液試料中に存在する核酸もしくはポリペプチド分子の１つもしくは複数の安定化方法であり、
（ａ）請求項１に記載の組成物と血液試料を混合して混合物を得ること；ならびに
（ｂ）前記混合物を冷蔵せずに少なくとも７日間維持することであって、
（ｉ）請求項１に記載の組成物を用いずに前記期間−２０℃で貯蔵時の試料から収集可能なＤＮＡもしくはポリペプチド量と比較して、混合物中で収集可能なＤＮＡの分解が少なくとも７０％防止されること、
（ｉｉ）請求項１に記載の組成物を用いずに前記期間−８０℃で貯蔵時の試料から収集可能なＲＮＡ量と比較して、混合物中で収集可能なＲＮＡの分解が少なくとも７０％防止されること、ならびに
（ｉｉｉ）請求項１に記載の組成物を用いずに前記期間−２０℃で貯蔵時の試料から収集可能なポリペプチド分子の量と比較して、混合物中で収集可能なポリペプチド分子の分解が少なくとも７０％防止されること、のうち１つ、２つもしくは全３つのいずれかであり、それにより、血液試料中に存在する前記核酸もしくはポリペプチド分子の１つもしくは複数を安定化させること、
を含む血液試料中に存在する核酸もしくはポリペプチド分子の１つもしくは複数の安定化方法。
【請求項１７】
前記血液試料が以下の：
（ａ）脊椎動物血液、
（ｂ）前記脊椎動物血液が未分画である前記（ａ）の生体試料、
（ｃ）ヒト血液、
（ｄ）前記ヒト血液が未分画である前記（ｃ）の生体試料、
から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記維持工程が少なくとも１０日間、２０日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間または７０日間の維持を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
血液試料中の核酸およびポリペプチド分子を安定的に貯蔵するための組成物であって、前記組成物は：１−ベンジル−３−へキシルイミダゾリウムブロミド、モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、スルホサリチル酸、トリス（カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩、および塩酸グアニジンを含むことを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、生体試料貯蔵のための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連出願の相互参照
生命科学分野における研究は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、血液、血液軟膜細胞、尿、頬側スワブ、細菌、古細菌、ウイルス、ファージ、植物、藻類、酵母、微生物、ＰＣＲ産物、クローン化ＤＮＡ、タンパク質、酵素、ペプチド、プリオン、真核生物（例えば、原生生物、真菌、植物界および動物界）、原核生物、細胞および組織、胚細胞（例えば、精子および卵母細胞）、幹細胞、ソートされた（例えば、免疫化学標識化に従い）もしくは選択された（例えば、積極的選択または消極的選択された）細胞、ならびにミネラルもしくは化学物質などの生体物質および試料の分析に基づいている。かかる試料は、典型的には適切な供給源から収集または取得され、さらなるプロセスおよび分析のために貯蔵庫および在庫内に置かれる。試料の輸送が必要とされて、完全性、無菌性および安定性を保持するように留意される場合が多い。生体試料は、氷、ドライアイスまたは他の冷凍設備を使用して冷蔵された環境で輸送できる。しかしながら、特に冷蔵装置のエネルギー源が不足する場合、国または大陸間の輸送に必要とされるような長時間、適切な低温を好都合に維持できない場合が多い。
【０００３】
かかる試料の貯蔵容器としては、瓶、試験管、バイアル、袋、箱、ラック、多ウェルディッシュおよび多ウェルプレートが挙げられ、これらは、典型的には個々のねじキャップもしくはスナップキャップ、スナップ、もしくはシール閉じ、蓋、接着ストリップもしくはテープ、または多キャップストリップによって密封されている。試料貯蔵、プロセス、および生物学的処理の自動化の中〜高スループットのための標準的な容器形式は、９６、３８４、もしくは１５３６のウェルプレートまたはアレイである。これらに含まれる容器および試料は、各種温度、例えば、外界温度または４℃または０℃未満の温度で、典型的には、約−２０℃または−７０℃〜−８０℃で貯蔵される。機器内に入れて貯蔵された試料は、液体培地または緩衝液中に含まれることが最も多く、それらはかかる氷点下温度（例えば、−２０℃または−７０〜−８０℃）での貯蔵が必要とされる。場合によって、試料は、まず乾燥させてから外界温度で（例えば、ＷＯ２００５／１１３１４７号、米国特許第２００５／０２７６７２８号、米国特許第２００６／００９９５６７号）、または４℃、−２０℃または−７０〜−８０℃で貯蔵される。
【０００４】
例えば、現在、核酸は、低温にて液体形態で貯蔵されている。短期貯蔵のためには、核酸は、４℃にて貯蔵できる。長期貯蔵のためには、特にゲノムＤＮＡおよびＲＮＡの場合、遺伝形質の分解を防止するために、一般に−２０℃〜−７０℃に温度を下げる。また、核酸は、セルロース膜などの固体充てん材上で室温でも貯蔵される。両貯蔵装置は不都合を伴う。低温下での貯蔵には、冷室、冷凍庫、予備電気発電機系などの費用のかかる設備が必要であり；かかる設備は、予想外の停電の場合、あてにすることができなくなり、または手近な電気供給源が無いかもしくは電気系統に頼ることができない領域で使用するのは困難であり得る。また、セルロース繊維上の核酸の貯蔵では、核酸は定量的に収集可能である代わりにセルロース繊維にトラップされ、それゆえ、結合したままであるため、再水和処理中に物質の実質的な損失を生じてしまう。また、セルロース上の核酸の乾燥貯蔵時には、その後、生体物質からセルロースを分離しないと、セルロース繊維が生体試料を汚染してしまうため、セルロースの分離が必要である。セルロース濾紙からの核酸の分離には、ピペット操作、新たな試験管もしくは容器へ試料を移す工程、ならびに遠心分離の工程を含むさらなる処理が必要であり、これらはすべて、収集率低下、および／または望まれない混入物の導入機会の増大、および／または試料分解を促進する状態への曝露を生じる可能性があり、これらはまた高価で手間がかかる。
【０００５】
現在、タンパク質は、主に溶液（例えば、塩および／または緩衝液を含む適合性の水溶液中）、または懸濁液（例えば、飽和硫酸アンモニウムスラリー中）として、液体形態で、典型的には−２０℃から液体窒素中の貯蔵までの範囲の冷蔵または冷凍環境で処理される（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ９６（１）：１−２６；  Ｗａｎｇ，  １９９９  Ｉｎｔｅｒ．  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍ．  １８５：  １２９−１８８）。一部の例外として、タンパク質を凍結乾燥させてもよく、トレハロースの存在下において室温で乾燥させて未処理の表面に直接適用してもよい（Ｇａｒｃｉａ  ｄｅ  Ｃａｓｔｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００  Ａｐｐｌ．  Ｅｎｖｉｒｏｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ６６：４１４２；  Ｍａｎｚａｎｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２  Ａｐｐｌ．  Ｅｎｖｉｒｏｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ６８：４３２８）。タンパク質は、さらに冷却して（４℃）または冷凍して（−２０℃または−８０℃）貯蔵時にも、分解する、および／または活性を失う場合が多い。タンパク質に対する凍結融解負荷は、特にタンパク質試料アリコートを反復して凍結融解する必要がある場合、生体活性（例えば、酵素活性、同族リガンドに対する特異的結合など）を低減する。結果として起こる、生物学的アッセイに必要であり得るタンパク質活性の喪失により、連続したアッセイにおいて同等のアッセイを得るために、典型的にはタンパク質濃度の再調整が必要であり、かかる試料から生成された実験データの信頼性が損なわれる場合が多い。
【０００６】
タンパク質および核酸の乾燥は、標準的な確立された信頼できるプロセスが無いこと、定量的および機能的特性の回復が困難であること、可変性緩衝液および溶媒との相容性および耐性、ならびに核酸およびタンパク質処理の必要性から生じる他の困難性のため、科学的、生物医学的、バイオテクノロジーなどの経済産業界の研究において未だ普遍的に適用されていない。同じ問題が、ウイルス、ファージ、細菌、細胞および多細胞生物などの他の生体物質の処理、貯蔵、および使用にも当てはまる。例えば、トレハロースまたはラクチトールなどの二糖類は、タンパク質含有試料の乾燥貯蔵のための添加物として記載されているが（例えば、米国特許第４，８９１，３１９号；米国特許第５，８３４，２５４号；米国特許第６，８９６，８９４号；米国特許第５，８７６，９９２号；米国特許第５，２４０，８４３号；ＷＯ９０／０５１８２号；ＷＯ９１／１４７７３号）、記載された状況におけるかかる化合物の有用性は、望ましくない微生物混入物におけるエネルギー源として役立つことにより、記載のとおり使用時に安定化効果が限定されることにより、多様な生体試料における一般的な適用性に欠けることにより、および他の要因により、損なわれている。
【０００７】
生体試料の高度に不安定な性質により、長時間にわたって生体試料の生体活性を保持することが極めて困難になる。凍結乾燥（（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）条件下で（例えば、凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｅｓ）として）核酸およびタンパク質を貯蔵すると、試料の貯蔵寿命（保存寿命）を延長できるが、その後の液体での再構成時の活性の喪失により、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）（例えば、凍結乾燥法（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））は、あまり理想的な貯蔵技術ではなくなってしまう。さらに、乾燥法は、大量で、またはバイオフィルムコレクションのための表面スワブとして、または一部のウイルス、細菌、もしくは多細胞生物のために収集されるものなどの、他の生体物質に対して効率的に使用することができない。例えば、非選択的増殖条件下で液体細菌培養を維持する能力は、特に増殖速度を遅らせて細菌の生存を維持する環境では、特に長期の輸送中には望ましいが、かかる能力は現在存在しない。同様に、試料を安定的に、かつ液体または半液体環境において、外界温度またはほぼ外界温度（例えば、約２３℃〜３７℃）にて長期間貯臓することにより、極端な温度（例えば、約０℃〜−８０℃）を回避する能力は、これらが多くの生体分子にとって天然の条件であるため、完全に機能的および無傷の生体試料を維持する上で非常に有利である。しかしながら、かかる能力は現在知られていない。
【０００８】
また、外国、大陸、海中または大気圏外空間などの遠隔地から収集された生体試料の分解も、適切な試料の分析および検査がその後に損なわれ、および／または遅れるため、現在の課題である。それゆえ、生体試料のために現在利用できる貯蔵技術は、特に乾燥貯蔵に受け入れられないであろう大量のタンパク質もしくは他のタイプの生体分子の調製もしくは収集に関して、ならびに／または実質的に特定の生体活性を保持しつつ、長期間の貯蔵能を有することが望まれる生体試料種に関しては、適切ではない。例えば、疾患大発生またはバイオテロリズム研究の場合、特に試料が極度の環境条件下で収集されてから分析に適した設備を可変温度状態および／または長期輸送下に置く場合、生体試料の完全性を維持するかかる能力が必要となる可能性がある。したがって、手間がかかり、非実用的、不便、および／または費用のかかる貯蔵方法を必要とせずに、生体試料を長時間貯臓する能力は、特に冷蔵が必要であるものでは、非常に有利である。
【０００９】
したがって、例えば、極度の環境条件下、例えば、極端な温度（例えば、氷点下または熱帯）、高圧（例えば、海中）または低重力（例えば、大気圏外）などの大気条件、紫外線、湿度などが挙げられるが、これらに限定されない条件下で収集された試料について、特に長時間にわたって、複雑な調製および貯蔵条件を伴わずに生体活性を維持しつつ、長期間（例えば、２週間、３週間、１ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間、１年間超、またはそれ以上）生体試料を貯蔵するための組成物および方法に対する明らかな需要が当該技術分野においてある。本開示の実施態様は、これらの需要に対応し、かつ他の関連した利点を提供する。
【発明の概要】
【００１０】
本明細書に提供するある実施形態により、
（ａ）式（Ｉ）
【化１】
0005933544.tif 000002
の１つもしくは複数の化合物であり：
式中：
Ａは、−Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４）−もしくは−Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４）−Ｃ（Ｒ４）２−であり；
Ｙは、Ｎ、ＳもしくはＯであり；
Ｒ１は、ＹがＮである場合に、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり、ＹがＳもしくはＯである場合にはＲ１はなく；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１６アルキル、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、−Ｎ（Ｒ５）２、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり；
または２つの隣接Ｒ４はそれらが結合している炭素と一緒になって任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリルもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールを形成し得；
各Ｒ５は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルであり；ならびに
Ｘは、医薬上許容可能なアニオンであり；ならびに
（ｂ）
（ｉ）少なくとも１つの沈殿剤、
（ｉｉ）少なくとも１つの低級アルコール、ならびに
（ｉｉｉ）少なくとも１つのカオトロープ
の１つ、２つ、もしくは全３つを含む、
生体試料中の核酸分子を実質的に安定的に貯蔵するための、ならびに／または生体試料中タンパク質および／もしくはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物を提供する。
【００１１】
ある実施形態では、組成物は（ａ）キレート剤、（ｂ）還元剤、（ｃ）ｐＨ緩衝液、および（ｄ）水の１つもしくは複数をさらに含む。ある実施形態では、医薬上許容可能なアニオンは、ブロミド、塩化物、ヨウ化物、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルスルホネート、ヘキサフルオロホスファート、メチルスルファート、エチルスルファート、テトラフルオロボラート、トリフルオロメタンスルホネートおよびビス（トリフルオロメチルスルホニル）イミドから選択される。
【００１２】
ある上記の実施形態では、Ａは、−Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４）−であり；Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり；Ｒ２は、水素もしくはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；ならびにＲ３は、Ｃ１〜Ｃ１６アルキルであり、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり；各Ｒ４は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、−Ｎ（Ｒ５）２、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり；ならびに各Ｒ５は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルである。
【００１３】
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、１−メチル−３−カルボキシエチル−イミダゾリウムブロミド、１−ヘキシル−３−メチルイミダゾリウムブロミド、１−デシル−３−メチルイミダゾリウムブロミド、１−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチルイミダゾリウムブロミド、および１−ベンジル−３−ヘキシルイミダゾリウムブロミドから選択される。
【００１４】
ある実施形態では、沈殿剤は、５−（４−ジメチル）アミノベンジリデンロダニン、スルホサリチル酸、塩化リチウム、および水酸化リチウムから選択される。ある実施形態では、低級アルコールは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、およびイソブタノール（２−メチルプロパン−１−オール）から選択される。ある実施形態では、カオトロープは、塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウムおよび尿素から選択される。ある実施形態では、キレート剤は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングルコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（ＣＤＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−三酢酸、およびニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）から選択される。ある実施形態では、還元剤は、２−メルカプトエタノール、チオスルファート、ＴＣＥＰ（トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、ジチオスレイトールおよびジチオエリトリトールから選択される。ある実施形態では、ｐＨ緩衝液は、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ボラート、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）から選択される。
【００１５】
ある実施形態では、組成物は界面活性剤または洗剤をさらに含み、これはある実施形態では、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ４０およびＢｒｉｊ（登録商標）洗剤から選択される。ある実施形態では、核酸分子はＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を１つまたは複数含む。ある実施形態では、生体試料は脊椎動物血液を含み、これはあるさらなる実施形態では、未分画である。ある実施形態では、生体試料はヒト血液を含み、これはあるさらなる実施形態では、未分画である。ある実施形態では、生体試料は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、血液、血液由来の軟膜、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳髄液、唾液、粘膜分泌液、膣液、腹水液、胸膜液、心嚢液、腹水（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｆｌｕｉｄ）、腹液、細胞培養培地、器官培養培地、口腔内細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｃＤＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖類、ワクチン、細胞、ソートもしくは選択された細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネートもしくは抽出物、組織溶解物、ホモジネートもしくは抽出物、血液試料、生検材料、組織移植片、器官培養および体液からなる群から選択される。
【００１６】
他のある実施形態では、任意の上記の組成物と混合した生体試料を含む、生体試料由来の実質的に安定的に貯蔵された核酸分子を提供する。ある実施形態では、任意の上記の組成物と混合した脊椎動物血液を含む、脊椎動物血液試料由来の実質的に安定的に貯蔵された核酸分子を提供する。ある実施形態では、任意の上記の組成物と混合したヒト血液を含む、ヒト血液試料由来の実質的に安定的に貯蔵されたポリペプチド分子を提供する。あるさらなる実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を１つまたは複数含む。
【００１７】
ある実施形態では、上記の組成物は、未分画ヒト血液の第１試料と混合後に、前記期間中−２０℃で貯蔵された前記未分画ヒト血液の第２試料から収集可能なＤＮＡと比較して試験混合物から収集可能なＤＮＡの分解を少なくとも７０％実質的に防止する試験混合物を得て、少なくとも６０日間冷蔵せずに試験混合物を貯蔵することが可能である。ある実施形態では、上記の組成物は、未分画ヒト血液の第１試料と混合後に、前記期間中−８０℃で貯蔵された前記未分画ヒト血液の第２試料から収集可能なＲＮＡと比較して試験混合物から収集可能なＲＮＡ分解を少なくとも７０％実質的に防止する試験混合物を得て、少なくとも２１日間冷蔵せずに試験混合物を貯蔵することが可能である。
【００１８】
次に別の実施形態では、（ａ）任意の上記の組成物と生体試料を混合して混合物を得ること；ならびに（ｂ）混合物を冷蔵せずに少なくとも７日間維持し、それにより、（ｉ）上記の組成物をいずれも用いずに一定期間−２０℃で貯蔵時の試料から収集可能なＤＮＡもしくはポリペプチド量と比較して、混合物中で収集可能なＤＮＡの分解が少なくとも７０％実質的に防止されること、（ｉｉ）上記の組成物をいずれも用いずに一定期間−８０℃で貯蔵時の試料から収集可能なＲＮＡ量と比較して、混合物中で収集可能なＲＮＡの分解が少なくとも７０％実質的に防止されること、ならびに（ｉｉｉ）上記の組成物をいずれも用いずに一定期間−２０℃で貯蔵時の試料から収集可能なポリペプチド分子量と比較して、混合物中で収集可能なポリペプチド分子の分解が少なくとも７０％実質的に防止されることの１つ、２つもしくは全３つのいずれかである、生体試料中に存在する前記核酸もしくはポリペプチド分子の１つもしくは複数を実質的に安定化させることを含む、生体試料中に存在する核酸もしくはポリペプチド分子の１つもしくは複数の実質的な安定化方法を提供する。
【００１９】
あるさらなる実施形態では、生体試料は脊椎動物血液を含み、これはあるなおさらなる実施形態では、未分画である。他のある実施形態では、生体試料はヒト血液を含み、これはあるさらなる実施形態では、未分画である。他のある実施形態では、生体試料は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、血液、血液軟膜、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳髄液、唾液、粘膜分泌液、膣液、腹水液、胸膜液、心嚢液、腹水（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｆｌｕｉｄ）、腹液、細胞培養培地、器官培養培地、口腔内細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｃＤＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖類、ワクチン、細胞、ソートもしくは選択された細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネートもしくは抽出物、組織溶解物、ホモジネートもしくは抽出物、血液試料、生検材料、組織移植片、器官培養および体液からなる群から選択される。他のある実施形態では、維持工程は少なくとも１０日間、２０日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間または７０日間の維持を含む。
【００２０】
本発明のこれらおよび他の態様は、以下の発明を実施するための形態および添付の図について言及時に明らかとなるであろう。本明細書に開示するすべての参考文献は、参照によりそれらの全体があたかも個別に組み込まれたかのように本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】それぞれ式（Ｉ）の化合物を含む組成物を含む３つの異なる製剤の１つと指定の比率（ｖｏｌ／ｖｏｌ）で混合後に室温で３１日間貯蔵後、Ｑｉａ  Ａｍｐ（商標）ミニカラム（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）を使用して完全ヒト血液から抽出したゲノムＤＮＡの完全性を示す。
【図２】それぞれ式（Ｉ）の化合物を含む組成物を含む３つの異なる製剤の１つと指定の比率（ｖｏｌ／ｖｏｌ）で混合後に室温で６２日間貯蔵後、Ｑｉａ  Ａｍｐ（商標）ミニカラム（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）、Ｆｌｅｘｉｇｅｎｅ（商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ）またはＣｈａｒｇｅＳｗｉｔｃｈ（商標）キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）のいずれかを使用して完全ヒト血液から抽出したゲノムＤＮＡの完全性を示す。
【図３】Ｆｌｅｘｉｇｅｎｅ（商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて１００μＬ完全ヒト血液から抽出したＤＮＡの分光学的定量化により測定した、（−２０℃対照）、−２０℃で；（製剤）、式（Ｉ）の化合物を含む組成物と室温で（４：１ｖｏｌ／ｖｏｌ）混合後に；（非保護）、添加物なしで室温で６２日間貯蔵後のＤＮＡ収率を示す。
【図４】それぞれ式（Ｉ）の化合物を含む組成物を含む３つの異なる製剤の１つと指定の比率（ｖｏｌ／ｖｏｌ）で混合後に出荷シミュレーションおよび室温で３６日間貯蔵後、Ｑｉａ  Ａｍｐ（商標）ミニカラム（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）、Ｆｌｅｘｉｇｅｎｅ（商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ）またはＣｈａｒｇｅＳｗｉｔｃｈ（商標）キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）のいずれかを使用して完全ヒト血液から抽出したゲノムＤＮＡの完全性を示す。
【図５】式（Ｉ）の化合物を含む組成物と（４：１ｖｏｌ／ｖｏｌ）混合後に室温で３６日間後に出荷シミュレーションおよび３６日間（−２０℃対照）、−２０℃で；（製剤）貯蔵後、Ｆｌｅｘｉｇｅｎｅ（商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて１００μＬ完全ヒト血液から抽出したＤＮＡの分光学的定量化により測定したＤＮＡ収率を示す。
【図６】式（Ｉ）の化合物を含む組成物を含む各３製剤（６〜８）と（１：４ｖｏｌ／ｖｏｌ）混合後に室温で１４日間貯蔵後、ＲｌｂｏＰｕｒｅ（商標）血液キット（Ａｍｂｉｏｎ／  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）を使用した完全血からのＲＮＡ収集を示す。Ｍ、核酸ラダーマーカー；ＮＰ、非保護；−２０、−２０℃で貯蔵。
【図７】式（Ｉ）の化合物を含む組成物を含む製剤（＃３）と（１：４ｖｏｌ／ｖｏｌ）混合後に室温で６日間貯蔵後、ＲｌｂｏＰｕｒｅ（商標）血液キット（Ａｍｂｉｏｎ／  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）を使用した完全血からのＲＮＡ収集を示す。ＮＰ、非保護；−８０、−８０℃で貯蔵。
【図８】３．４製剤の存在下で室温で貯蔵された完全血試料中の遺伝子発現のＲＴ−ｑＰＣＲ分析を示す（表３）。図８Ａ、安定剤なしで室温で３日間貯蔵された血液；図８Ｂ、安定剤なしで−８０℃で７日間貯蔵された血液；図８Ｃ、３．４製剤を用いて室温で３日間貯蔵された血液；図８Ｄ、３．４製剤を用いて室温で７日間貯蔵された血液。
【図９】各種条件下で貯蔵された血液試料中のＲＮＡ完全性（ＲＩＮ）分析を示す：Ｌ、ポリヌクレオチド標準ラダー；レーン１〜２、安定剤なしで−８０℃で貯蔵された血液；レーン３〜４、３．４製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン５〜６、３．２０製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン７〜８、３．２２製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン９〜１０、添加物なしで室温で貯蔵された血液；レーン１１〜１２、ＰＡＸｇｅｎｅ（商標）を用いて室温で貯蔵された血液。
【図１０】完全血試料中のｃ−ｆｏｓおよびＩＬ−１β遺伝子発現のＲＴ−ｑＰＣＲ分析を示す。レーン１、添加物なしで−８０℃で貯蔵された血液；レーン２、３．２０製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン３、３．２１製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン４、３．２３製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン５、３．２４製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン６、３．２５製剤を用いて室温で貯蔵された血液（表３）；レーン７、ＰＡＸｇｅｎｅ（商標）を用いて室温で貯蔵された血液；レーン８、添加物なしで室温で貯蔵された血液。
【図１１】１、３．２０製剤（表３）；２、３．２１製剤（表３）；３、３．２３製剤（表３）；４、３．２４製剤（表３）；５、３．２５製剤（表３）；６、ＰＡＸｇｅｎｅ（商標）の存在下で室温で１４日間貯蔵された完全血試料中のｃ−ｆｏｓ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１６および１８Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子発現のＲＴ−ｑＰＣＲ分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、本明細書に記載された、ある実施形態において、生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物および方法に関し、（ａ）以下の本明細書により詳細に開示する式（Ｉ）のある組成物、ならびに（ｂ）やはり以下により詳細に開示する少なくとも１つの沈殿剤、少なくとも１つの低級アルコール、ならびに少なくとも１つのカオトロープの１つ、２つ、もしくは全３つ；ならびに、以下に詳述するあるさらなる実施形態では、（ｃ）キレート剤、還元剤、ｐＨ緩衝液、および水の１つもしくは複数の存在下；生体試料は、液体もしくは半液体形態で外界温度で長期間貯蔵でき、分解され得る試料中の核酸および／もしくはポリペプチドが実質的に分解から保護されて、試料の生体活性を実質的にすべて収集できるという予想外の発見に基づく。したがって、本明細書に記載のとおり、ある実施形態は、１つもしくは複数の式（Ｉ）の化合物ならびに生体試料中の核酸分子および／もしくはポリペプチド分子の保護構造および／もしくは活性と適合する本明細書に提供する実質的に安定的に貯蔵するためのさらなる組成物成分の選択により得られる利点に部分的に関する。
【００２３】
ある非限定的な実施形態は、実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物を核酸および／またはポリペプチド分子を含む特定の生体試料タイプと混合時に得られる驚くべき利点にも部分的に関連する。例えば、実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の、ある組成物と完全血を混合時、粘性液体、半液体、ゲル、懸濁液、コロイドなどの形態として示される、（例えば、１つもしくは複数の組成物構成要素を欠いた混合など、適切な対照と比較して統計的有意に）増粘が観察され得る。試料の液体条件のかかる変化により、例えば、これを貯蔵する容器の輸送または達成プロセスにおける試料の喪失または汚染の可能性を低減することにより、または別の例として、自由に流れる液体物質であることが困難である粘性混合物を、あるプロセス工程（例えばロボット装置による自動または半自動化プロセスなど）の影響を受けやすくすることにより、処理および／または貯蔵が有利に容易となり得る。
【００２４】
これら、および関連した実施態様は、冷蔵または冷凍貯蔵せずに本明細書に提供する多種多様な生体試料（ポリヌクレオチド、酵素および他のタンパク質、ポリペプチド、組織および細胞が挙げられるが、これらに限定されない）の効率的、好都合および経済的な貯蔵、輸送、処理およびプロセスを可能とする。試料は、実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物と試料の混合後（例えば、貯蔵組成物の存在下で試料を貯蔵組成物と接触させて混合し、試料を貯蔵組成物でコーティングし、血液などの実質的に液体試料の場合は実質的に均一な混合物を得る）、外界温度で貯蔵し得る。
【００２５】
貯蔵後、本明細書に記載の好ましい実施形態では、冷蔵せずに貯蔵後（例えば、氷、ドライアイスまたは任意の天然もしくは人工的に冷却した培地などの冷却剤または冷媒の存在下で、冷蔵庫、冷凍庫または試料を一時的に保管する容器の使用を介して一般的に誘発されるより低い試料温度など、試料貯蔵組成物の混合物の温度を著しく下げる必要なく）、かかる生体分子を試料の他の成分から単離することにより含まれる試料の核酸分子および／またはポリペプチドをプロセス化または分析し得、同時にそれらを核酸および／またはポリペプチド分子の生体活性を含まない貯蔵組成物から分離し得る。本明細書に提供する実施形態では、貯蔵された生体試料から無傷の核酸および／またはポリペプチド分子の有利に優れた収集を提供し、臨床的、健康ケアおよび診断文脈、生物医学的研究、生体研究および法医科学、ならびに生体生成物および生命科学における安定した試料貯蔵が望まれ得る他の設定、特に、冷却（冷凍など）が利用不能、信頼できない、非実用的、高額、非効率的あるいは支持できない場合がある状態などにおいて用途を見出し得る。
【００２６】
ある企図される実施形態により、生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物と生体試料を混合させて混合物を得る；ならびに冷蔵せずに混合物を少なくとも７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間もしくはそれ以上の日数維持することを含む生体試料中に存在する核酸および／またはポリペプチド分子の１つもしくは複数の実質的な安定化方法を提供する。安定している企図された期間は、試料および生体分子タイプに応じて、ある実施形態では、少なくとも３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２１週間、２２週間、２３週間、２４週間、２５週間、２６週間もしくはそれ以上の週数、または少なくとも６ヶ月、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、１３ヶ月間、１４ヶ月間、１５ヶ月間、１６ヶ月間、１７ヶ月間、１８ヶ月間もしくはそれ以上の月数、または少なくとも１年間、２年間、３年間、４年間、５年間もしくはそれ以上の年数であり得る。
【００２７】
生体試料と、生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物の混合は、典型的には、試料貯蔵組成物に対する容積比の範囲、例えば、約１０部分試料対１部分貯蔵組成物（１０：１ｖｏｌ／ｖｏｌ）〜約１部分試料対１０部分貯蔵組成物（１：１０ｖｏｌ／ｖｏｌ）比など、またはその間の比率、例えば、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、もしくは１：６、またはそれらの中間比を含む単なる例示である他の任意の比率を使用して実施し得、本明細書の開示から当業者によって経験的に決定し得、使用される特定の試料および特定の貯蔵組成物の機能と共に変わり得る。典型的には、試料と貯蔵組成物の混合物のｐＨは約ｐＨ３〜約ｐＨ１０であり、これも使用される特定の試料および特定の貯蔵組成物の機能と共に変わり得、これも本明細書の開示から当業者によって経験的に決定し得る。例えば、実質的に安定したＲＮＡ貯蔵のためのｐＨ範囲は、約ｐＨ３〜約ｐＨ８、好ましくは、ある実施形態では、約ｐＨ３〜約ｐＨ６．５（例えば、約ｐＨ３．２、３．５、３．７、４．０、４．２、４．５、４．７、５．０、５．３、５．５、５．８、６．０、６．３または６．５）であり得る。実質的に安定したＤＮＡ貯蔵のためのｐＨ範囲は、約ｐＨ５〜約ｐＨ１０、好ましくは、ある実施形態では、約ｐＨ６〜約ｐＨ９（例えば、約ｐＨ６．３、６．５、６．８、７．０、７．４、７．８、８．０、８．２、８．４、８．６、８．８または９．０）であり得る。
【００２８】
好ましくは、これらのおよび関連したある実施形態では、生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物を用いずに−２０℃で同期間貯蔵時に試料から収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡまたはポリペプチド量と比較して、混合物中の収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはポリペプチドの少なくとも７０％の分解を実質的に防止する。長時間冷却しない間に本開示の組成物および方法により、生体試料中に存在し得る熱、光および／または酵素（例えば、ヌクレアーゼ、プロテアーゼ）などの分解作用に対して、ＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはポリペプチドの安定化は、前例がなく、予想外であり、かつ好都合である。
【００２９】
例えば、本明細書に記載された、ある実施形態では、貯蔵結果は、１つもしくは複数のポリヌクレオチドを有する特定の核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）不均一核酸集団内（例えば、総ＲＮＡまたは総ＲＮＡ−＋−ＤＮＡ）の生体試料中の相対的描写を正確に評価するための努力を妨げる、貯蔵中の経時的な特定のＲＮＡおよび／またはＤＮＡ種の（理論に束縛されず）異なる分解速度に起因する。結果的に、各種時点のかかる試料を特性化する「垣間みる」努力により、劇的に異なる結果（特定のＲＮＡ／ＤＮＡ種の経時的な相対的存在の本質的に異なる定量化値など、例えば、試料の収集時点での遺伝子発現活性の誤りを含む計算に至る）に至り得る。したがって、本明細書に記載の実施形態により提供された改善された安定化は、かかる結果を有用に低減し得る（例えば、統計的有意に低減する）かまたは実質的に除去して試料分解を妨害することにより、経時的に変化し得る試料の組成物中バイアスを回避する。
【００３０】
他の好ましい実施形態では、生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、−２０℃で生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物を用いずに同期間貯蔵時に試料から収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡまたはポリペプチド量と比較して、混合物中の収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはポリペプチドの少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の分解を実質的に防止する。他の好ましい実施形態では、生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、−２０℃、−３０℃、−４０℃、−５０℃、−６０℃、−７０℃、または−８０℃未満で生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物を用いずに同期間貯蔵時に試料から収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡまたはポリペプチド量と比較して、混合物中の収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはポリペプチドの少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の分解を実質的に防止する。さらに他の実施形態では、ある出荷旅程プロセスに起こり得る冷蔵または冷凍を含み得る時間の可変部分を含み、混合物が維持される温度が経時的に著しく変化し得る本明細書に記載の貯蔵方法が企図される。
【００３１】
生体試料を実質的に安定的に貯蔵するための組成物
理論に束縛されず、本明細書に提供する生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物は、式（Ｉ）の化合物の１つもしくは複数、ならびに（ｉ）少なくとも１つの沈殿剤、（ｉｉ）少なくとも１つの低級アルコール、および（ｉｉｉ）少なくとも１つのカオトロープの１つ、２つ、もしくは全３つ、ならびに充てん材（例えば、空間的に組織化された支点または足場）を形成することにより、生体試料の構成要素の生体物質を充てん材に関与させて立体空間を生成する分子構造を含み得る。さらに理論に束縛されず、核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物もある企図される実施形態では使用し得、生体試料（塩、糖類、阻害剤、緩衝液および／または他の安定剤など）からの核酸および／またはタンパク質分子の有益な安定化、保持、保護あるいは収集に貢献し得る１つもしくは複数のさらなる薬剤の導入を空間的に組織化する。貯蔵組成物はまた、ｐＨ調節用の成分（例えば、緩衝液）および他の変数（例えば、１つまたは複数のキレート剤および／または還元剤により）貯蔵状態の最適化のための、および本明細書に提供するように任意選択的に１つもしくは複数の検出可能な指示薬を含み得る（色ベースのｐＨ指示薬、および／または他の化学指示薬など）を含有させる。
【００３２】
ある好ましい実施形態では、安定的に貯蔵するための組成物は式（Ｉ）
【化２】
0005933544.tif 000003
の化合物を１つもしくは複数含み：
式中：
Ａは、−Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４）−もしくは−Ｃ（Ｒ４）＝Ｃ（Ｒ４）−Ｃ（Ｒ４）２−であり；
Ｙは、Ｎ、ＳもしくはＯであり；
Ｒ１は、ＹがＮである場合に、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり、ＹがＳもしくはＯである場合にはＲ１はなく；
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキルもしくは任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ１６アルキル、任意選択的に置換されたアリールもしくは任意選択的に置換されたアラルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、シアノ、ニトロ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、−Ｎ（Ｒ５）２、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたアラルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルキルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリルアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアリールもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルであり；
または２つの隣接Ｒ４はそれらが結合している炭素と一緒になって任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロシクリルもしくは任意選択的に置換されたヘテロアリールを形成し得；
各Ｒ５は、独立して、水素、アルキル、アリールもしくはアラルキルであり；ならびに
Ｘは、医薬上許容可能なアニオンである。
【００３３】
定義：
本明細書に称されるある化学基は、示した化学基に見られる炭素原子の総数を示す簡便な表記法により先行し得る。例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルキルは、下記に定義される、総炭素原子１〜８個のアルキル基を記す。簡便な表記法における総炭素数は、記載した群の置換基に存在し得る炭素を含まない。
【００３４】
前述に加えて、本明細書および添付の特許請求の範囲に使用されるように、別段の記載のない限り、下記の用語は指定された意味を有する。
【００３５】
「アルキル」とは、不飽和を含まず、１〜１６個の炭素原子を有し、本明細書に記載する式（Ｉ）の化合物のＲ１、Ｒ２およびＲ４において好ましくは１〜８個の炭素原子、または式（Ｉ）の化合物のＲ３において好ましくは４〜１６個の炭素原子を有し、単結合により残りの分子に結合する、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソプロピル）、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、３−メチルヘキシル、２−メチルヘキシルなどを有する炭素および水素原子のみからなる直鎖または分岐鎖の炭化水素ラジカルを指す。
【００３６】
「アルケニル」とは、少なくとも１つの二重結合、２〜１２個の炭素原子を有し、好ましくは２〜８個の炭素原子を有し、単結合により残りの分子に結合する、例えば、エテニル、プロプ−１−エニル、ブト−１−エニル、ペント−１−エニル、ペンタ−１，４−ジエニルなどを含む炭素および水素原子のみからなる直鎖または分岐鎖の炭化水素ラジカル基を指す。
【００３７】
「アルキレン」または「アルキレン鎖」とは、炭素および水素のみからなり、不飽和を含まず、１〜１２個の炭素原子を有する、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ−ブチレンなどラジカル基に残りの分子を結合させる直鎖または分岐鎖の二価炭化水素を指す。アルキレン鎖は、単結合により残りの分子に結合し、単結合によりラジカル基に結合する。アルキレン鎖の残りの分子およびラジカル基との結合点は、鎖中の１つの炭素または任意の２つの炭素を介することができる。
【００３８】
「アルコキシ」とは、式−ＯＲａのラジカルを指し、前記Ｒａは上に定義されたアルキルラジカルである。
【００３９】
「アルコキシアルキル」とは、式−Ｒｂ−Ｏ−Ｒａのラジカルを指し、前記Ｒｂは上に定義されたアルキレン鎖であり、Ｒａは上に定義されたアルキルラジカルである。酸素原子は、アルキレン鎖中およびアルキルラジカル中の任意の炭素に結合し得る。
【００４０】
「アリール」とは、水素、６〜１８個の炭素原子および少なくとも１つの芳香族環を含む炭化水素環系ラジカルを指す。本発明の目的において、アリールラジカルは、単環、二環、三環であっても四環系であってもよく、これは、縮合系を含んでも架橋環系を含んでもよい。アリールラジカルとしては、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナントレン、プレイアデン、ピレン、およびトリフェニレンに由来するアリールラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
「アラルキル」とは、式−Ｒｂ−Ｒｃのラジカルを指し、前記Ｒｂは上に定義されたアルキレン鎖であり、Ｒｃは上に定義された１つまたは複数のアリールラジカル、例えば、ベンジル、ジフェニルメチルなどである。アラルキルラジカルのアリール部分は、任意選択的に上記のアリール基と置換され得る。
【００４２】
「シクロアルキル」とは、３〜１５個の炭素原子を有し、好ましくは３〜１０個の炭素原子を有する縮合系を含んでも架橋環系を含んでもよく、飽和もしくは不飽和であり、単結合により残りの分子に結合する炭素および水素原子のみからなる安定した非芳香族単環もしくは多環炭化水素ラジカルを指す。単環ラジカルとしては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。多環ラジカルとしては、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニルなどが挙げられる。本明細書において他に特記されない限り、「任意選択的に置換されたシクロアルキル」という用語は、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、ニトロ、オキソ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、−Ｒ１５−ＯＲ１４、−Ｒ１５−ＯＣ（Ｏ）−Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）２、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（前記ｔは１〜２である）、−Ｒ１５−Ｎ＝Ｃ（ＯＲ１４）Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（前記ｔは１〜２である）、−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（前記ｐは０〜２である）、および−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（前記ｔは１〜２である）からなる群から独立して選択される１つもしくは複数の置換基により任意選択的に置換されているシクロアルキルラジカルを含むことを意味し、前記各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；各Ｒ１５は、独立して、直接結合もしくは直鎖もしくは分岐鎖アルキレンもしくはアルケニレンであり；ならびに各Ｒ１６は、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである。Ｒ１４およびＲ１６置換基を含むこれらの任意の置換基は、本明細書に定義されるように任意選択的に置換され得る。
【００４３】
「シクロアルキルアルキル」とは、式−ＲｂＲｇのラジカルを指し、前記Ｒｂは上に定義されたアルキレン鎖であり、Ｒｇは上に定義されたシクロアルキルラジカルである。
【００４４】
「ハロ」とは、ブロモ、クロロ、フルオロまたはヨードを指す。
【００４５】
「ハロアルキル」とは、上に定義された１つまたは複数のハロラジカル、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１−フルオロメチル−２−フルオロエチル、３−ブロモ−２−フルオロプロピル、１−ブロモメチル−２−ブロモエチルなどにより置換される上に定義されたアルキルラジカルを指す。
【００４６】
「ハロアルコキシ」とは、上に定義された１つまたは複数のハロラジカル、例えば、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリクロロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシなどにより置換される上に定義されたアルコキシラジカルを指す。
【００４７】
「ヘテロシクリル」とは、２〜１２個の炭素原子ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される１〜６個のヘテロ原子からなる安定した３〜１８員の非芳香族環ラジカルを指す。本明細書において他に特記されない限り、ヘテロシクリルラジカルは、単環、二環、三環であっても四環系であってもよく、これは縮合系を含んでも架橋環系を含んでもよく；ならびにヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素もしくは硫黄原子は任意選択的に酸化されていてよく；窒素原子は任意選択的に四級化されていてよく；ならびにヘテロシクリルラジカルは部分飽和でも完全飽和でもよい。かかるヘテロシクリルラジカルの例としては、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、および１，１−ジオキソ−チオモルホリニルが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において他に特記されない限り、「任意選択的に置換されたヘテロシクリル」という用語は、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、オキソ、チオキソ、ニトロ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、−Ｒ１５−ＯＲ１４、−Ｒ１５−ＯＣ（Ｏ）−Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）２、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（前記ｔは１〜２である）、−Ｒ１５−Ｎ＝Ｃ（ＯＲ１４）Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（前記ｔは１〜２である）、−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（前記ｐは０〜２である）、および−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（前記ｔは１〜２である）からなる群から選択される１つもしくは複数の置換基により任意選択的に置換されている上に定義されたヘテロシクリルラジカルを含むことを意味し、前記各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；各Ｒ１５は、独立して、直接結合もしくは直鎖もしくは分岐鎖アルキレンもしくはアルケニレンであり；ならびに各Ｒ１６は、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである。Ｒ１４およびＲ１６置換基を含むこれらの任意の置換基は、本明細書に定義されるように任意選択的に置換され得る。
【００４８】
「ヘテロシクリルアルキル」とは、式−ＲｂＲｈのラジカルを指し、前記Ｒｂは上に定義されたアルキレン鎖であり、Ｒｈは上に定義されたヘテロシクリルラジカルであり、ヘテロシクリルが窒素含有ヘテロシクリルである場合、ヘテロシクリルは窒素原子でアルキルラジカルに結合し得る。ヘテロシクリルアルキルラジカルのヘテロシクリル部分は、上に定義されたヘテロシクリル基と任意選択的に置換され得る。
【００４９】
「ヘテロアリール」とは、水素原子、１〜１３個の炭素原子、窒素、酸素および硫黄、ならびに少なくとも１つの芳香族環からなる群から選択される１〜６個のヘテロ原子を含む５〜１４員環系ラジカルを指す。本発明の目的において、ヘテロアリールラジカルは、単環、二環、三環であっても四環系であってもよく、これは縮合系を含んでも架橋環系を含んでもよく；ならびにヘテロアリールラジカル中の窒素、炭素もしくは硫黄原子は任意選択的に酸化されていてよく；窒素原子は任意選択的に四級化されていてよい。例としては、アゼピニル、アクリジニル、ベンジミダゾリル、ベンズチアゾリル、ベンジンドリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４−ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル（すなわち、ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１−オキシドピリジニル、１−オキシドピリミジニル、１−オキシドピラジニル、１−オキシドピリダジニル、１−フェニル−１Ｈ−ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル、およびチオフェニル（すなわち、チエニル）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において他に特記されない限り、「任意選択的に置換されたヘテロアリール」という用語は、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、オキソ、チオキソ、ニトロ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、−Ｒ１５−ＯＲ１４、−Ｒ１５−ＯＣ（Ｏ）−Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）２、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、−Ｒ１５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）２、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｒ１５−Ｎ（Ｒ１４）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１６（前記ｔは１〜２である）、−Ｒ１５−Ｎ＝Ｃ（ＯＲ１４）Ｒ１４、−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１６（前記ｔは１〜２である）、−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｐＲ１６（前記ｐは０〜２である）、および−Ｒ１５−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１４）２（前記ｔは１〜２である）からなる群から選択される１つもしくは複数の置換基により任意選択的に置換されている上に定義されたヘテロアリールラジカルを含むことを意味し、前記各Ｒ１４は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；各Ｒ１５は、独立して、直接結合もしくは直鎖もしくは分岐鎖アルキレンもしくはアルケニレンであり；ならびに各Ｒ１６は、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである。Ｒ１４およびＲ１６置換基を含むこれらの任意の置換基は、本明細書に定義されるように任意選択的に置換され得る。
【００５０】
「ヘテロアリールアルキル」とは、式−ＲｂＲｉのラジカルを指し、前記Ｒｂは上に定義されたアルキレン鎖であり、Ｒｉは上に定義されたヘテロアリールラジカルである。ヘテロアリールアルキルラジカルのヘテロアリール部分は、上に定義されたヘテロアリール基と任意選択的に置換され得る。
【００５１】
本明細書に開示する、生体試料中の核酸分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物は、（ａ）１つもしくは複数の式（Ｉ）の化合物；ならびに（ｂ）（ｉ）少なくとも１つの沈殿剤、（ｉｉ）少なくとも１つの低級アルコール、および（ｉｉｉ）少なくとも１つのカオトロープの１つ、２つ、もしくは全３つを含み得る。
【００５２】
医薬上許容可能なアニオンは、式（Ｉ）に示すカチオン部分に対する任意のアニオン性補体であり得、ハロゲン化合物、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルスルホネート、ヘキサフルオロホスファート、メチルスルファート、エチルスルファート、テトラフルオロボラート、トリフルオロメタンスルホネート、ビス（トリフルオロメチルスルホニル）イミド、硝酸塩、リン酸、アリールスルホネート、テトラフルオロボラート、トリフルオロメタンスルホネート、ヘキサフルオロアンチモン酸塩、ヘキサフルオロヒ酸塩、ヘキサフルオロホスファート、テトラフェニルボラート、もしくはテトラ（ペルフルオロフェニル）ボラート、または貯蔵された生体試料から核酸および／もしくはポリペプチド分子の実質的な収集に干渉しない任意の他の生体適合性アニオンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
したがって、医薬上許容可能なアニオンまたは「アニオン性部分」は、医薬上許容可能なおよび化学的に安定した陰性電荷種を含む。アニオン性部分はまた、安定的に貯蔵するための組成物を含む他のいずれの薬剤に対しても反応を示さないことが好ましい。医薬上許容可能なアニオン性部分のさらなる例としては、ハロゲンイオン（フッ化物イオン、塩化物イオン、ブロミドイオンおよびヨウ化物イオンなど）；無機酸塩アニオン（硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、および炭酸塩など）；低級アルキルスルホン酸塩の医薬上許容可能なアニオン（メタンスルホン酸、およびエタンスルホン酸塩など）；アリールスルホン酸塩の医薬上許容可能なアニオン（ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸塩など）；有機酸塩の医薬上許容可能なアニオン（トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、ヒドロキシ酢酸、安息香酸、マンデル酸、酪酸、プロピオン酸、ギ酸、フマル酸、コハク酸、クエン酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、酢酸、リンゴ酸、乳酸、およびアスコルビン酸塩など）；ならびに酸性アミノ酸塩の医薬上許容可能なアニオン（グルタミン酸およびアスパラギン酸塩など）が挙げられるが、これらに限定されない。式（Ｉ）の化合物のある好ましい例の場合、ハロゲンアニオン性部分の前駆体は、アリールまたはアルキルスルホン酸塩アニオン性部分と置換し得る。例としては、ベンゼンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート、２−スルホン酸ナップシレン、メタンスルホネート、エタンスルホネート、およびプロパンスルホネートが挙げられるが、これらに限定されない。これらおよび他の適切なアニオンは、任意の特定の望ましいアニオン性を有する本明細書に提供する式（Ｉ）の化合物を得るために、日常の方法を介して、カチオン部分と提供され得るアニオン性補体と置換し得ることを当業者は理解するであろう。
【００５４】
沈殿剤。生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物のある実施形態によれば、沈殿剤が含まれ得、これは核酸および／またはポリペプチド分子の溶解度に影響する化合物を指す。いくつかの実施形態では、沈殿剤は、生体試料からまたは生体試料の抽出物からの核酸沈殿促進剤など、核酸分子の単離に使用されている１つである。沈殿剤の非限定的な例としては、５−（４−ジメチル）アミノベンジリデンロダニン、スルホサリチル酸、塩化リチウム、および水酸化リチウムが挙げられる。他の例としては、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、デキストランス、ポリエチレングリコール、および多価金属カチオン塩（カルシウム、マグネシウム、マンガンおよび鉄など）が挙げられる。表１、２、３および４に提示するものが挙げられるが、これらに限定されないある実施形態では、約０．０５、０．１、０．５、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．４、３．６、３．８または４．０Ｍ濃度の沈殿剤の含有が企図され、前記「約」は、５０％未満、より好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、より好ましくは２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満、列挙した量を超すかまたは列挙した量未満であり得る定量変化を表すことが理解され得る。
【００５５】
低級アルコール。本明細書に記載された、ある好ましい実施形態は、生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物中に少なくとも１つの低級アルコールを含み得る。かかるアルコールとしては、比較的小さな直鎖および分岐鎖炭素、典型的には、８、７、６、５、４または３個以下の炭素に基づくものが挙げられる。例、非限定的な例証として、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、およびイソブタノール（２−メチルプロパン−１−オール）が挙げられ、使用される組成物の他の成分に基づき変化し得る、貯蔵される特定の生体試料（核酸分子もしくはポリペプチド分子または両方）は収集されるべきである安定的な貯蔵組成物における使用のための他の低級アルコールならびに他の要因を当事者は本開示から選択し得ることが理解されるであろう。表１、２、３および４に提示するものが挙げられるが、これらに限定されないある実施形態では、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０％（容積ベース、すなわち、ｖｏｌ／ｖｏｌ）の濃度（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の低級アルコールの含有が企図され、前記「約」は、５０％未満、より好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、より好ましくは２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満、列挙した量を超すかまたは列挙した量未満であり得る定量変化を表すことが理解され得る。
【００５６】
カオトロープ。本明細書に記載された、ある実施形態は、生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物中に少なくとも１つのカオトロープを含み得る。いくつかのカオトロープまたはカオトロピック剤は、生体高分子（ポリペプチド、タンパク質ならびにＤＮＡおよびＲＮＡなどの核酸）の二次、三次および／または四次構造を崩壊することが当該技術分野において知られている。本開示のある実施形態における使用が企図されるかかるカオトロープの非限定的な例としては、塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウムおよび尿素が挙げられる。具体的な生体試料タイプに関し得るものを含むある企図される実施形態では、キレート剤も存在時に、特にタンパク質、ポリペプチドまたは核酸分子を変性させる上で十分な濃度のカオトロープの存在が明らかに除外されるのに対し、他のある企図される実施形態も限定されない。表１、２、３および４に提示するものが挙げられるが、これらに限定されないある実施形態では、約０．０５、０．１、０．５、１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６、２．８、３．０、３．２、３．４、３．４、３．６、３．８または４．０Ｍ濃度のカオトロープの含有が企図され、前記「約」は、５０％未満、より好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、より好ましくは２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満、列挙した量を超すかまたは列挙した量未満であり得る定量変化を表すことが理解され得る。
【００５７】
キレート剤またはキレートは、ある実施形態により、生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物に含まれ得、それらの複合体化して金属カチオン反応を妨害する能力が当業者に知られている。キレート剤の例としては、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングルコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（ＣＤＴＡ）、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−四酢酸（ＢＡＰＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−三酢酸、およびニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）が挙げられる。
【００５８】
還元剤は、ある実施形態により、生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物に含まれ得、当業者に知られている。還元剤の例としては、２−メルカプトエタノール、チオスルファート、ＴＣＥＰ（トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、ジチオスレイトールおよびジチオエリトリトールが挙げられる。
【００５９】
ある実施形態によれば、生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、１つまたは複数のｐＨ緩衝液を含み得、これは、ｐＨ緩衝が存在する水溶液などの溶液のｐＨ変化に対する抵抗能について当該技術分野において知られている任意の大量の化合物であり得る。安定的な貯蔵組成物に含まれる１つもしくは複数の特定のｐＨ緩衝液の選択は、本開示に基づきおよび当該技術分野において通例の実践に従って行い得、生体試料の性質、使用される溶媒状態、使用される式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）および１つもしくは複数の沈殿剤の溶解度特性、低級アルコールおよび／もしくはカオトロープ、他の成分の含有、ならびに他の基準を維持することが望ましいｐＨを含む各種要因に影響され得る。例えば、典型的には、緩衝液の特徴であるｐＨが約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｐＨ単位のプロトン解離定数（ｐＫａ）内のｐＨ緩衝液が使用される。ｐＨ緩衝液の非限定的な例としては、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ボラート、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）が挙げられる。表１、２、３および４に記載する一部を含むある企図される実施形態では、ｐＨが約４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０である製剤を特徴とし得、前記「約」は、１未満、好ましくは０．５未満、好ましくは０．２５未満、より好ましくは０．１未満のｐＨ単位、列挙したｐＨ値を超すかまたは列挙したｐＨ値未満であり得る定量変化を表すことが理解され得る。
【００６０】
生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、ある実施形態では、界面活性剤または洗剤を含み得、これらはある実施形態では、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ４０、任意のＢｒｉｊ（登録商標）ファミリー洗剤、任意のＴｗｅｅｎ（登録商標）ファミリー界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、デオキシコレート、オクチル−グルコピラノシド、ベタインなどから選択され得る。具体的な生体試料タイプに関し得るものを含むある企図される実施形態では、キレート剤も存在時に変性洗剤、特にタンパク質、ポリペプチドまたは核酸分子を変性させる上で十分なタイプおよび濃度の洗剤の存在が明らかに除外されるのに対し、多くの洗剤および界面活性剤がすべてではないとしても多くの生体試料タイプについて非変性であることに留意すべきである他のある企図される実施形態も限定されない。
【００６１】
表１、２、３および４は、生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物の例を示す。本明細書および実施例に記載のとおり、ある好ましい実施形態では、血液試料から収集可能なＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはタンパク質を冷蔵せずに貯蔵することを含む、血液試料貯蔵のためのこれらの組成物の使用が企図される。本明細書において別段の記載のない限り、製剤は水溶液であり、アルコール（例えば、エタノール、２−メルカプトエタノール）を除いて「％」はパーセンテージ／単位容量としての重量（ｗ／ｖ）を指し、アルコールの場合は「％」はパーセンテージ／単位容量としての容量（ｖ／ｖ）を指す。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【００６２】
表１、２、３および４の組成物ならびに本明細書に記載の他の発明の実施形態は、液体試料の貯蔵に使用しても非液体試料の貯蔵に使用してもよく、外界温度での貯蔵に使用してもよく、さらに様々な生体物質および生体試料（限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質およびポリペプチドなど）、血液、血液の軟膜画分、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）またはその単離されたサブセット、血液起源の他の細胞（リンパ、脊髄、赤血球前駆体、骨髄間質または他の血液細胞など）、尿、他の体液（例えば、血清、漿膜液、血漿、リンパ液、脳髄液、唾液、分泌組織および器官の粘膜分泌液、膣分泌物、腹水液、胸膜液、心臓周囲液、腹膜液、腹腔液、および他の体腔の液体、細胞および器官培養培地（細胞または器官条件培地、洗浄液などを含む）、頬側スワブ、細菌、ウイルス、改変ウイルスベクター、酵母細胞、ワクチン（例えば、天然もしくは合成ウイルスまたは他の微生物ワクチンなどの無傷の生体粒子の場合、生ワクチンもしくは弱毒化ワクチン、または天然、合成もしくは遺伝子操作生成物などの人工物質の抽出物）、細胞および組織、ソートもしくは選択された細胞、細胞もしくは組織可溶化液、細胞もしくは組織のホモジネートもしくは抽出物など、または他の生体試料の貯蔵用途も有し得る。
【００６３】
本明細書に開示する組成物および方法のある好ましい実施形態は、血液（好ましくは脊椎動物由来、より好ましくは哺乳類由来、より好ましくは霊長類由来、さらにより好ましくはヒト由来）を含む生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子の実質的に安定的な貯蔵に関する。血液は、完全、例えば、未分画であり得、または１つもしくは複数の成分（例えば、白血球を富化する血液の単離された軟膜画分）を除去する一部のプロセスを行った血液であり得、または血小板および／もしくは赤血球および／もしくは血漿もしくは血清が部分的または実質的に枯渇した血液であり得る。また、対象または生物源（例えば、ヒトドナーもしくは患者または他の対象）から収集時点または収集直後の血液は、生物医学的分野において一般的な実践であることが理解される抗凝血剤または防腐剤など（例えば、ヘパリン、クエン酸塩、ＥＤＴＡなど）により処理し得ることが企図される。
【００６４】
したがって、生体試料には、血液試料、生検材料、組織移植片、器官培養、体液または任意の他の組織もしくは細胞調製物、またはそれらの、または対象もしくは生物源から単離された画分もしくは誘導体も含み得る。対象もしくは生物源は、哺乳類および非哺乳類を含むヒトもしくはヒト以外の動物、脊椎動物および無脊椎動物であってよく、真核生物（植物、および藻類など）もしくは原核生物の生物または古細菌、微生物（例えば、細菌、古細菌、真菌、原生生物、ウイルス）、水生プランクトン、土壌、バイオフィルム、微生物マットもしくはクラスター、染色体に組み込まれまたはエピソーム組換え核酸配列もしくは人工染色体を含み得る遺伝子操作された細胞系、不死化もしくは不滅化された細胞系、体細胞ハイブリッド細胞系、分化したもしくは分化可能な細胞系、幹細胞、胚細胞（例えば、精子、卵母細胞）、形質転換細胞系などが挙げられるが、これらに限定されない主要細胞培養もしくは培養適用された細胞系など、任意の他の多細胞生物であっても単細胞生物であってもよい。
【００６５】
本明細書に使用される「生体試料」、「生体分子（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」および「生体分子（ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅ）」という用語は、科学的、診断的および／または薬学的適用枠にて関連する特性を有する実質的に生物学的起源の任意の生体物質および化合物を含む。天然の供給源から単離できるものなどの天然分子だけでなく、天然分子の少なくとも１つの特性が存在する限り、それに由来する形態、断片および誘導体、ならびに組換え形態および人工分子もさらに包含される。好ましい生体試料は、核酸およびこれらの誘導体（例えば、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、ゲノムＤＮＡ、プラスミド、染色体、人工染色体、遺伝子移入ベクター、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｈｎＲＮＡリボザイム、ペプチド核酸（ＰＮＡ））、ポリペプチドおよびタンパク質（例えば、酵素、受容体タンパク質、タンパク質複合体、ペプチドホルモン、抗体、リポタンパク質、糖タンパク質、インテイン、プリオン）、ならびにこれらの生物学的に活性な断片、炭水化物およびこれらの誘導体（例えば、糖脂質、グリコシル化タンパク質、配糖体、オリゴ糖、単糖および多糖類、ならびにグリコサミノグリカン）、ならびに脂質およびこれらの誘導体（例えば、脂肪、脂肪酸、グリセリド、トリグリセリド、リン脂質、ステロイド、プロスタグランジン、およびロイコトリエン）などが挙げられるが、これらに限定されない、分析、診断および／または薬学的目的に適用できるものである。
【００６６】
本開示に基づいて、本発明に包含される実施態様に従った組成物およびプロセスはまた、細胞組織および完全細胞、ならびにかかる派生部分が上記の生体分子の担体である限り、その部分（例えば、細胞小器官、膜および膜断片、ホモジネート、抽出物、細胞成分分画、可溶化液など）に適用できることが、当業者には明らかであろう。この理由のために、組織、細胞およびその部分などは、基本的に「生体試料」という用語に包含される。
【００６７】
したがって、「生体試料」という用語は、最も広義にみなされ、脊椎動物もしくは無脊椎動物の細胞もしくは組織、例えば脊椎動物細胞の場合、魚細胞（例えば、ゼブラフィッシュ細胞、またはフグ細胞など）、両生類細胞（例えば、カエル細胞）、鳥細胞、爬虫類細胞、哺乳動物細胞などを指し得る。哺乳類の例としては、ヒトまたはヒト以外の哺乳類（サル、類人猿、雌牛、ヒツジ、ヤギ、バッファロ、アンテロープ、雄牛、ウマ、ロバ、ラバ、シカ、ヘラジカ、カリブー、水牛、ラクダ、ラマ、アルパカ、ウサギ、ブタ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、イヌ、ネコなど）が挙げられる。また、例えば、環形動物、軟体動物、海綿体、刺胞動物、節足動物、両生類、魚、鳥類、および爬虫類などの非哺乳類動物またはそれに由来する器官を含み得る生体試料が、他の実施態様において予想される。
【００６８】
他のある実施形態では、生体試料は、上記の水生プランクトン、動物組織および器官、微生物マット、クラスター、汚泥、浮氷、またはバイオフィルムから派生する微生物を指し得る。「水生」プランクトンの微生物は、細菌プランクトン、古細菌プランクトン、ウイルス、および植物プランクトンならびに動物プランクトンを含む。
【００６９】
他の実施形態により、「生体試料」という用語は、対象または生物源などの任意の供給源（動物、植物、細菌、ウイルスなど）から、ならびに生物学的および環境試料から得られる検体を含んでも培養を含んでもよい。生体試料は、いずれの脊椎動物から得ても非脊椎動物から得てもよく、液体、固体、組織、および気体を包含してよい。環境試料としては、表面物質、土壌、水、バイオフィルム、微生物マット、産業試料などの環境物質が挙げられる。
【００７０】
本明細書に使用される「土壌」は、地表に堆積する無機ミネラルおよびバイオマスに対して作用する地質学的および生物学的プロセスの複合産物である。これは、有機物をリサイクルおよびバイオミネラル化するように作用して、高等植物を支えて栄養分を与える基層としての役目を果たす地上の大部分の生物多様性を含む（Ｗｈｉｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９５（１２，６５７８−８３）。
【００７１】
バイオフィルムは、微生物が水和された重合体充てん材に包埋された「水性環境」の表面上の微生物集団である。この充てん材は、接着剤のように作用して、微生物を共に保持し、表面にこれらを付着させて、これらを有害な外部影響から保護する。これらは、いくつかの分類学上異なる種（例えば、細菌、真菌、藻類、および原生動物）を含み得、金属、ガラス、プラスチック、組織、ミネラル、および土壌粒子などの様々な組成物の固体または液体表面上で形成し得る。微生物マットおよびクラスターは、組成物のバイオフィルムに類似した微生物集団／凝集体であるが、固体表面ほど堅く付着している必要はない。
【００７２】
ある実施形態は、単離された生体分子を含み得る生体試料に関し、この場合、「単離された」という用語は、物質がその元の環境（例えば、天然である場合は天然環境）から除去されることを意味する。例えば、無傷の細胞または生動物に存在する天然核酸またはポリペプチドは単離されていないが、天然系に共存する物質の一部またはすべてから分離された同じ核酸またはポリペプチドは単離されている。かかる核酸はベクターの一部であることができ、ならびに／またはかかる核酸もしくはポリペプチドは組成物の一部であることができ、さらにかかるベクターもしくは組成物はその天然環境の一部でないという点で単離されている。
【００７３】
本明細書に記載された、ある実施態様は、生体試料の安定化および／または貯蔵に関し、これは生体試料（分子、多分子またはオリゴマー、細胞小器官、小細胞、細胞、多細胞、または高等組織レベルの生物構造および／もしくは機能など）の構造的および／もしくは機能的完全性ならびにこれに基づいた生体特性の維持、保持もしくは再構成に関する。特定の実施態様では、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドなどの高分子もしくは生体高分子などを含む生体試料の生体活性は、例えば、その一次、二次および／または三次構造の広範な維持に関与し得る。核酸プローブの生体活性は、例えば、配列特異的にプローブに相補的である核酸標的とハイブリダイゼーション複合体（例えば、二重鎖）を形成する、その特性を含む。抗体の生体活性は、例えば、その同族抗原と特異的に結合する相互作用を含む。
【００７４】
本明細書に記載の物質の生体活性としては、例えばウイルス、細菌、バクテリオファージ、プリオン、昆虫、真菌、植物、動物、およびヒトを含むが、これらに限定されない、生物体に関する生物系、経路、分子、または相互作用の任意の物理的または生化学的特性に影響を及ぼすことができる任意の活性を意味する。生体活性を有する物質の例としては、ポリヌクレオチド、ペプチド、タンパク質、酵素、抗体、低分子（例えば、生体活性低分子）、医薬組成物（例えば、薬剤）、ワクチン、炭水化物、脂質、ステロイド、ホルモン、ケモカイン、成長因子、サイトカイン、リポソーム、および毒素、リポソームが挙げられるが、これらに限定されない。生体系の物理的または生化学特性に影響を及ぼす物質の生体活性、例えば、遺伝子発現（例えば、Ａｓｕｂｅｌ，  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．（編）．  ２００７．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪを参照されたい）、受容体リガンド相互作用（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（編）．  ２００７．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪを参照されたい）、酵素活性（例えば、Ｅｉｓｅｎｔｈａｌ  ａｎｄ  Ｈａｎｓｏｎ（編），  Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｓｓａｙｓ，第２版  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｓｅｒｉｅｓ，  Ｎｏ．  ２５７．  ２００２，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ；  Ｋａｐｌａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｗｉｃｋ（編），  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｓｓａｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  （ｖｏｌｓ．  １，  ２  ａｎｄ  ６）．  １９５５  ａｎｄ  １９６１，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｌｔｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫを参照されたい）、サイトカイン、ホルモンおよび生体活性ペプチド活性および他の細胞増殖（例えば、マイトジェン）および／もしくは分化活性（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（編）．  ２００７  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪを参照されたい）、シグナル形質導入（例えば、Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（編）  ２００７  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪを参照されたい）および細胞毒性（例えば、細胞障害性、興奮性毒）（例えば、Ｂｕｓ  ＪＳ  ｅｔ  ａｌ．（編）  ２００７  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪを参照されたい）、アポトーシスおよび壊死（Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｒｅｅｄ，  １９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１（５３８１）：１３０９−１２；  Ｇｒｅｅｎ  ＤＲ，  １９９８  Ｎａｔｕｒｅ  Ｄｅｃ  １７：  ６２９；  Ｇｒｅｅｎ  ＤＲ，  １９９８  Ｃｅｌｌ  ９４（６）：６９５−６９；  Ｒｅｅｄ，  ＪＣ（編），  ２０００  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （ｖｏｌ．  ３２２），  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ）を挙げ得るが、これらに限定されない１つまたは複数の生体活性を決定する適切なアッセイおよび方法を当事者は認識するであろう。
【００７５】
ある実施形態では、本発明は、実質的に液体条件下で生物学的、化学物質および生化学的物質の、ならびに即時使用の準備ができている様式の長期貯蔵に関する。本明細書に記載のとおり、（ａ）式（Ｉ）の化合物の１つもしくは複数、ならびに少なくとも１つの沈殿剤、少なくとも１つの低級アルコール、ならびに少なくとも１つのカオトロープの１つ、２つ、もしくは全３つを含む本明細書に提供する生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物、ならびに（ｂ）長期貯蔵状態の耐久性を増大する組成物の調製および組成物の安定的な貯蔵の最適化を含み、ある実施形態では、例えば、キレート剤、還元剤、ｐＨ緩衝液、および水の１つもしくは複数の使用を含む実施形態を提供する。
【００７６】
したがって、これら、および関連した実施態様は、生体試料の生体活性の安定化および貯蔵の改善、液体もしくは半液体形態（例えば、ヒドロゲル）で室温で貯蔵中の生体試料の分解の低下、ならびに冷蔵の必要性を低減し、または無くすことにより、さらなる使用のための生体試料の調製、出荷および貯蔵プロセスの簡略化を含む、冷蔵せずに貯蔵した生体試料の液体もしくは半液体貯蔵に伴う利点を提供する。本明細書に記載の実施態様は、望ましくない試料分解、変性および／または試料容器表面への試料吸着による試料喪失など、試料収集率を低減する可能性がある要因を低減または除去することにより、優れた生体試料収集をさらに提供する。
【００７７】
本明細書に使用される「ヒドロゲル」は、水を含むがゲルに限定されるものとはみなされず、水の不在下での有機非ポリマー成分を含むものを含む、一般にすべての親水性ゲルおよびゲル合成物に拡張される。ゲルは、固体と液体の中間体であり、三次元ネットワーク内の溶媒からなる物質の状態である。
【００７８】
生体試料の液体貯蔵
本明細書に記載の組成物および方法は、生体試料の液体および／または実質的に液体の貯蔵に関し、任意の適切な容器の使用を含み得る。これら、および関連した実施態様は、生体試料または生体物質の安定した長期液体貯蔵は、かかる試料または物質を式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）を含む本明細書に記載のものなどの安定的な貯蔵組成物中に貯蔵時に冷蔵せずに成立し得るという観察に派生する。理論に束縛されず、生体試料中に存在する生体物質は、実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物の１つまたは複数の成分と特異的もしくは非特異的結合、または非共有結合および／もしくは共有化学結合形成および／もしくは分子間連合作用（疎水性および／または親水性相互作用、水素結合形成、静電相互作用など）に関与するものを含む他の結合機序により相互作用し得る。したがって、本発明のある実施形態は、一般的な屋内環境の室温で（例えば、典型的には、２０〜２７℃だが、地理的、季節的および物理的植物機能により約１５〜１９℃または約１８〜２３℃から約２２〜２９℃または約２８〜３２℃に変わる）で、生体試料の液体または半液体を長期間安定的に貯蔵する装置を提供する。
【００７９】
好ましい実施態様は、冷蔵せずに、例えば外界室温にて生体試料または生体物質の液体または半液体貯蔵ができる式（Ｉ）の化合物の１つもしくは複数を含む生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物を含む本明細書に記載の試料貯蔵装置の使用に関する。ある好ましい実施態様では、液体貯蔵可能な生体試料が維持される条件によって、蒸散させることができる生体適合性溶媒（例えば、水）の蒸発はほとんどまたは全くない。試料は、好ましくは試料を安定化させる液体、または実質的に液体の条件下で貯蔵され、すなわち貯蔵される試料の性質要因によって変化し、当業者に馴染みのある任意の事象における基準に応じて、試料の検出可能な（例えば、統計的有意に）分解、または望ましくない化学的もしくは物理的改変がほとんどまたは全く生じない。したがって、ある好ましい実施態様に従う本開示から、１つまたは複数の試料、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）、および安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物の他の成分は、例えば、生体適合性溶媒などの共通の液相に存在する液体中で互いに接触することが理解されるであろう。
【００８０】
試料貯蔵装置の非限定的な例としては、瓶、試験管、バイアル、袋、箱、ラック、多ウェルディッシュおよび多ウェルプレートを挙げ得、これらは、典型的には個々のねじキャップもしくはスナップキャップ、スナップ、もしくはシール閉じ、蓋、接着ストリップもしくはテープ、または多キャップストリップによって密封されている。本明細書に記載の液体貯蔵可能な生体試料に適した他の容器および器は、例えば検体収集コンテナなど、当業者に知られる。ある実施形態では、試料貯蔵、プロセス、および生物学的処理の自動化の中から高スループットのための標準的な容器形式は、９６、３８４、もしくは１５３６のウェルプレートまたはアレイである。一般の生体試料貯蔵装置に関する他の情報は、例えば、米国特許第２００５０２７６７２８号および米国特許第２００６００９９５６７号（引用参考文献を含む）に見出され得る。
【００８１】
ある好ましい実施態様は、生体物質（例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ＤＮＡ断片、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、蛍光発生物質、細胞、ウイルス、細菌、化学化合物、ワクチンなど）、または安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物と生体試料を混合することにより得られる混合物中の本明細書に提供する他の生体試料を貯蔵する組成物および方法を提供し、試料材料を完全に収集し、または実質的に収集（例えば、少なくとも５０パーセント、好ましくは少なくとも６０パーセント、より好ましくは少なくとも７０パーセント、より好ましくは少なくとも８０パーセント、典型的には、より好ましい実施形態において少なくとも８５パーセント、より好ましくは少なくとも９０、９１、９２、９３または９４パーセント、より好ましくは少なくとも９５パーセント、さらにより好ましくは９６、９７、９８または９９パーセントを超えて収集）させることができる。例えば、安定的な貯蔵組成物は、使用される特定の方法に従い、試料（例えば、生体活性）の１つまたは複数の望ましい構造的または機能的特性を回復できる形で、１つまたは複数の式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）および沈殿剤（１つまたは複数）、低級アルコール（１つまたは複数）および／またはカオトロープ（１つまたは複数）、および／または本明細書に記載の他の成分（例えば、還元剤、キレート、ｐＨ緩衝液、洗剤または非変性洗剤などの界面活性剤）、および／または試料の特性に基づき選択し得る。同様に、別の例として、安定的な貯蔵組成物のみまたは安定的な貯蔵組成物と生体試料を混合することにより得られた混合物は、適切な溶媒に分離し得、分散、懸濁液、コロイド、ゲル、ヒドロゲル、樹液、スラリー、シロップなど同様のものが得られるように、完全に可溶化してもよいが、そうする必要はない。
【００８２】
ある好ましい実施態様では、本明細書に開示した組成物および方法に使用するための溶媒の少なくとも１つは、水性の、例えばその生体分子のために構造および／または機能に寄与する好ましい化学物質環境を保護することにより、生体分子の生物構造および／または機能を補助するように選択した、体液、生理溶液、または水性生物学的緩衝液などの生体適合性溶媒である。かかる生体適合性溶媒の非限定的な例としては、生理食塩水（例えば、約１４５ｍＭ  ＮａＣｌ）、リンゲル液、ハンクス平衡塩類溶液、ダルベッコリン酸緩衝整理食塩水、エルレ平衡塩類溶液、ならびに当業者に知られる他の緩衝液および溶液などが挙げられ、関心対象の特定の生体分子のために望まれ得る添加物を含むものを含む。
【００８３】
しかしながら、他の実施形態により、本発明は限定される必要はなく、他の溶媒を、例えばＣａｔａｌａｎらの系を使用する溶媒極性／分極率（ＳＰＰ）スケール値に基づいて選択してもよく（例えば、１９９５  Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎ．  ２４１；Ｃａｔａｌａｎ，  ２００１  Ｉｎ：  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｏｌｖｅｎｔｓ，  Ｗｙｐｙｃｈ（編），  Ａｎｄｒｅｗ  Ｐｕｂｌ．，  ＮＹ、および引用参照文献も参照されたい）、これに従えば、例えば、水のＳＰＰ値は０．９６２、トルエンのＳＰＰ値は０．６５５、２−プロパノールのＳＰＰ値は０．８４８である。２−Ｎ，Ｎ−ジメチル−７−ニトロフルオレン／２−フルオロ−７−ニトロフルオレンプローブ／ホモモルフ対の紫外線測定に基づいた溶媒のＳＰＰ値を決定するための方法が記載されている（Ｃａｔａｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。望ましいＳＰＰ値の溶媒を（純粋な単成分溶媒として、または２つ、３つ、４つもしくはそれ以上の溶媒の混合溶媒としてであるかどうかにかかわらず；溶媒混和性については、例えば、Ｇｏｄｆｒｅｙ  １９７２，  Ｃｈｅｍ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ２：３５９を参照されたい）、特定の充てん材材料の溶解度特性に基づいて、本開示を考慮した当業者であれば容易に同定できる。
【００８４】
本開示に基づき、本明細書に記載のとおり液体または半液体条件下で貯蔵される生体試料中に存在する関心対象の特定の生体分子（例えば、ＤＮＡもしくはＲＮＡなどの核酸分子、またはポリペプチド）の物理化学的特性（例えば、分子質量、疎水性、表面電荷分布、溶解度など）に応じて、本組成物および方法において使用するための１つまたは複数の式（Ｉ）の具体的な化合物は、容易におよび過剰な実験を伴わずに同定できることを当事者は理解するであろう。
【００８５】
生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、ある実施形態（例えば、表１、２、３および４に記載の実施形態）によれば、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）の少なくとも約０．１％〜約１０重量対容量％を含む溶液（例えば、典型的には、水溶液）から調製し得、ある関連実施形態は、少なくとも約０．５％〜約５％、少なくとも約１％〜約５％、少なくとも約０．５％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％または１０重量対容量％の式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）を含み得、前記「約」は、５０％未満、より好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、より好ましくは２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満、列挙した量を超すかまたは不足し得る定量変化を表すことが理解され得る。生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物の少なくとも一部の異なる実施形態では、他の成分において類似の重量対容量比および耐性が関連し得る。
【００８６】
他のある実施形態により、生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物は、望ましい構造的および／または機能的特性を十分に保護する形で特定タイプの生体試料貯蔵と適合する特徴を有するものとして同定され、前記特徴には、安定的に貯蔵するための組成物と試料を混合後に冷蔵せずに貯蔵中に生体試料中の核酸および／またはポリペプチド分子分解を実質的に防止する能力が含まれる。
【００８７】
理論に束縛されず、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）の分子は、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）間の水素結合形成に優先的な形で生体試料の成分と少なくとも１つの水素結合形成が可能であり得るが、これら本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）が共有自己集合しない限り、限定されない。理論に束縛されず、生体試料、式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）および／または生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物の他の成分間の相互作用の安定化は、水素結合相互作用に起因する。しかしながら、他の非共有結合力も、例えば、イオン性結合、静電気、ファン・デル・ワールス力、金属配位、疎水性力、ならびに水素結合部分が１つもしくは複数の芳香族環を含む場合はπ−πスタッキングなどの結合に貢献し得る（Ｒｕｓｓｅｌｌ，  ＪＢ．  １９９９．  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．第２版  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，  ＯＨ；  Ｌｏｄｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．（編）  ２０００．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．第４版  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ）。
【００８８】
さらに理論に束縛されず、生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物中の式（Ｉ）の化合物は、前記安定的に貯蔵するための組成物のさらなる成分の１つまたは複数と非共有結合することが可能であり、液体貯蔵可能な生体試料中に存在し、対象または生物源（例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、天然オリゴ糖、天然脂質などの生体分子）起源の１つまたは複数の分子種との非共有結合も可能であり得る。かかる成分間の非共有結合を決定する方法および機器は、本開示を考慮した当業者に知られ、電気スプレーイオン化質量分析（Ｌｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊｕｎ；１７９（２）：４０４−４１２；  Ｄｉ  Ｔｕｌｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５  Ｊ．  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．  Ｊｕｌ；４０（７）：８４５−８６５）、拡散ＮＭＲ分光法（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ編  Ｅｎｇｌ．  Ｊａｎ  １４；４４（４）：５２０−５５４）などの技術を含み得、または関心対象の分子種間の非共有結合による他のアプローチにて容易におよび過剰な実験を伴わずに実証できる（例えば、生体高分子の円偏光二色性分光法、スキャニングプローブ顕微鏡検査、分光測光法および分光蛍光分析、ならびに核磁気共鳴；例えば、Ｓｃｈａｌｌｅｙ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．（編）  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２００７，  Ｗｉｌｅｙ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｈｏｂｏｋｅｎ，  ＮＪ；  Ｓａｕｖａｇｅ  ａｎｄ  Ｈｏｓｓｅｉｎｉ（編），  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １９９６  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｔｏｋｙｏ；  Ｃｒａｇｇ，  ＰＪ（編），  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２００５  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｌｔｄ．，  Ｗｅｓｔ  Ｓｕｓｓｅｘ，  ＵＫ；  Ｊａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（編），  ２００１  ａｎｄ  ２００５，  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （ｖｏｌｓ．  ３３８，  ３９９  ａｎｄ  ３９４）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｌｔｄ．，  Ｌｏｎｄｏｎ，  ＵＫを参照されたい）。
【００８９】
ある実施形態では、本開示を考慮した当業者であれば認識され得るように、生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物は、還元剤、アルキル化剤、抗菌薬、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、グランザイム阻害剤、細胞接着阻害剤、細胞分割阻害剤、細胞周期阻害剤、低分子阻害剤、脂質シグナル伝達阻害剤および／またはプロテアーゼ阻害剤であり得る生体阻害剤または生化学阻害剤を含むことが望まれ得る。関心対象の生体試料の性質および特定の生体活性に応じて選択され得る広範な容易に利用できる阻害剤について、当業者は理解するであろう。例えば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＳｏｕｒｃｅＢｏｏｋ（商標）（２００４（第１版）  ａｎｄ  ２００７（第２版），  ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）を参照されたい。抗菌薬については、例えば、Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，  ＬＫ編  ２００３  Ｒｅｄ  Ｂｏｏｋ：  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，第２６版．  Ｅｌｋ  Ｇｒｏｖｅ  Ｖｉｌｌａｇｅ，  ＩＬ，  ｐｐ．  ６９５−９７．；  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，  １９９８，  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，  １０１（１），  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ；  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，  Ｓｅｙｍｏｕｒ  Ｓ．  Ｂｌｏｃｋ（編），  ２００１  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ；  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，  Ａ．Ｉ．  Ｌａｓｋｉｎ  ａｎｄ  Ｈ．  Ａ．  Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，（編），  １９８８  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  ＦＬ；  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，  Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ，  Ａ．Ｄ．  Ｒｕｓｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，（編），  １９９９，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｍａｌｄｅｎ，  ＭＡ；  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ／  ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ，  Ｓ．Ｐ．  Ｓａｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（編），  ２０００  Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，  Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，  ＰＡ；  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｇｅｎｔｓ：  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，  Ｋ．  Ｌｏｈｎｅｒ，（編），  ２００１  Ｗｙｍｏｎｄｈａｍ，  Ｎｏｒｆｏｌｋ，  ＵＫ；  Ｃｏｎｔｅ，  Ｊ．Ｅ．  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅｓ（第９版），  ２００１，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照されたい。
【００９０】
生体試料中で提供されるかまたは生体試料から派生する生体物質は、（例えば、溶媒、例えば、水中に溶解または解離した安定的に貯蔵するための組成物と、試料の入った試料ウェルを同時に接触させることにより）液体形態の生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物と組み合わせてウェルに添加しても試験管に添加してもよい。冷蔵せずに貯蔵後、核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物と生体試料を混合することにより得られる混合物からの安定した核酸および／またはポリペプチド分子の精製が必要とされる場合、抽出、濾過、遠心分離、イオン交換、サイズ排除、クロマトグラフィー、もしくは分相、または当業者に知られている他の精製方法など、当業者に周知の技術を使用して核酸（１つまたは複数）および／またはポリペプチド（１つまたは複数）を試料から単離できる。
【００９１】
検出可能な指示薬
検出可能な指示薬としては、生体試料における酵素（タンパク質分解性および／または核分解性など）、呼吸性、代謝性、異化性、結合性、触媒性、アロステリック、高次構造、または他の生化学的もしくは生物物理学的活性の変化が挙げられるが、これらに限定されず、ならびにかかる活性の結果として形成される中間体（代謝産物、異化産物、基質、前駆体、補因子など）の間の相互作用を含む、生体試料における、条件、プロセス、経路、誘導、活性化、阻害、制御、動的構造、状態、混入、分解、または他の活性、または機能的もしくは構造的変化に直接関連する任意の検出可能な変数の検出（例えば、当業者に知られるように適切な対照と比較して統計的有意に）、または類似した決定を可能にする組成物が挙げられる。
【００９２】
多種多様な検出可能な指示薬が、当該技術分野において知られており、特定の試料貯蔵適用における特定の生体試料の関心対象であり得る特定の変数（１つまたは複数）に応じて、本開示の組成物および方法に包含するために選択できる。かかる検出可能な指示薬によって検出し得る変数の非限定的な例としては、アミン、アルコール、アルデヒド、チオール、スルフィド、亜硝酸塩、アビジン、ビオチン、免疫グロブリン、オリゴ糖、核酸、ポリペプチド、酵素、細胞骨格タンパク質、活性酸素種、金属イオン、ｐＨ、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ−、シアン化物、リン酸、セレン、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、グリコシダーゼ、および微生物の混入物などの１つもしくは複数の存在の検出が挙げられる。
【００９３】
特定の目的のために選択され得る検出可能な指示薬（比色指示薬など）の広範な例は、Ｈａｕｇｌａｎｄ，  ２００２  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ−第９版，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ；Ｍｏｈｒ，  １９９９  Ｊ．  Ｍａｔｅｒ．  Ｃｈｅｍ．，  ９：  ２２５９−２２６４；Ｓｕｓｌｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ６０：１１１３３−１１１３８；ならびに米国特許第６，３２３，０３９号に記載されている（例えば、Ｆｌｕｋａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃａｔａｌｏｇ，  ２００１  Ｆｌｕｋａ，  Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  ＷＩ；  ａｎｄ  Ｓｉｇｍａ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃａｔａｌｏｇ，  ２０００，  Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ．も参照されたい）。検出可能な指示薬は、蛍光指示薬、発光指示薬、リン光性指示薬、放射性指示薬、色素、酵素、酵素基質、エネルギー移動分子、または親和性標識であり得る。ある好ましい実施形態では、検出可能な指示薬は、フェノールレッド、臭化エチジウム、ＤＮＡポリメラーゼ、制限エンドヌクレアーゼ（例えば、部位または配列特異的制限エンドヌクレアーゼなどの制限ヌクレアーゼとして使用される制限酵素）、塩化コバルト（水が存在時の青色から、乾燥時のピンク色に変色する湿度指示薬）、ライハルト色素（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）および蛍光発生プロテアーゼ物質の１つもしくは複数であり得る。
【００９４】
ある実施態様における検出可能な指示薬は、ポリヌクレオチドポリメラーゼおよび／または適切なオリゴヌクレオチドを含み得、これらのいずれかまたは両方は、指示薬として、または他のある実施態様において、本明細書に記載の組成物および方法の他の核酸に基づいた適用の成分として適用し得る。例えば、それらの濃度の標準化により下流プロセスに使用される異なる試料量を調節するための用途を有する参照対照として使用するために１つまたは複数のオリゴヌクレオチドを含んでもよく、オリゴヌクレオチド量の範囲は定量カリブレーション曲線を生成するために適用してもよい。本発明のある実施態様に従った有用なポリメラーゼ（ＤＮＡポリメラーゼおよびＲＮＡポリメラーゼなど）としては、高度好熱菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ：Ｔｔｈ）ＤＮＡポリメラーゼ、サームス・アクアチカス（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ａｑｕａｔｉｃｕｓ：Ｔａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ、サーモロガ・ネオポリタナ（Ｔｈｅｒｍｏｌｏｇａ  ｎｅｏｐｏｌｉｔａｎａ：Ｔｎｅ）ＤＮＡポリメラーゼ、サーモトーガ・マリチマ（Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａ  ｍａｒｉｔｉｍａ：Ｔｍａ）ＤＮＡポリメラーゼ、サーモコッカス・リトラリス（Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｉｔｏｒａｌｉｓ：ＴｌｉまたはＶＥＮＴ（商標））ＤＮＡポリメラーゼ、パイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｕｒｉｏｓｕｓ：Ｐｆｕ）ＤＮＡポリメラーゼ、ＤＥＥＰＶＥＮＴ（商標）ＤＮＡポリメラーゼ、パイロコッカス・ウォーシイ（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕ  ）ｗｏｏｓｉｉ：Ｐｗｏ）ＤＮＡポリメラーゼ、バシラス・ステロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ：Ｂｓｔ）ＤＮＡポリメラーゼ、バシラス・カルドフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｌｄｏｐｈｉｌｕｓ：Ｂｃａ）ＤＮＡポリメラーゼ、スルフォロブス・アシドカルダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ（Ｓａｃ）ＤＮＡポリメラーゼ、サーモプラズマ・アシドフィルム（Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｍ：Ｔａｃ）ＤＮＡポリメラーゼ、サームス・フラブス（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｆｌａｖｕｓ：Ｔｆｌ／Ｔｕｂ）  ＤＮＡポリメラーゼ、サームス・ルバー（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｒｕｂｅｒ：Ｔｒｕ）ＤＮＡポリメラーゼ、サームス・ブロッキアヌス（Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｂｒｏｃｋｉａｎｕｓ：ＤＹＮＡＺＹＭＥ（商標））ＤＮＡポリメラーゼ、メタノバクテリウム・サーモオートトロピカム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ）（Ｍｔｈ）ＤＮＡポリメラーゼ、ミコバクテリアＤＮＡポリメラーゼ（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ：Ｍｔｂ、Ｍｌｅｐ）、ならびにこれらの突然変異体および変異体および誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。また、Ｔ３、Ｔ５、およびＳＰ６、ならびにこれらの突然変異体、変異体、および誘導体などのＲＮＡポリメラーゼも、本発明に従って使用し得る。
【００９５】
本発明に従って使用されるポリメラーゼは、典型的には５′から３′方向に、核酸鋳型から核酸分子を合成できる任意の酵素であり得る。本発明に使用される核酸ポリメラーゼは、中温性でも好熱性でもよく、好ましくは好熱性であり得る。好ましい中温性ＤＮＡポリメラーゼとしては、Ｔ７  ＤＮＡポリメラーゼ、Ｔ５  ＤＮＡポリメラーゼ、クレノーフラグメントＤＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩなどが挙げられる。本発明の方法に使用してもよい好ましい耐熱性ＤＮＡポリメラーゼとしては、Ｔａｑ、Ｔｎｅ、Ｔｍａ、Ｐｆｕ、Ｔｆｌ、Ｔｔｈ、Ｓｔｏｆｆｅｌ断片、ＶＥＮＴ（商標）、およびＤＥＥＰＶＥＮＴ（商標）ＤＮＡポリメラーゼ、ならびにこれらの突然変異体、変異体、および誘導体が挙げられる（米国特許第５，４３６，１４９号；米国特許第４，８８９，８１８号；米国特許第４，９６５，１８８号；米国特許第５，０７９，３５２号；米国特許第５，６１４，３６５号；米国特許第５，３７４，５５３号；米国特許第５，２７０，１７９号；米国特許第５，０４７，３４２号；米国特許第５，５１２，４６２号；ＷＯ９２／０６１８８号；ＷＯ９２／０６２００号；ＷＯ９６／１０６４０号；Ｂａｒｎｅｓ，  Ｗ．  Ｍ．、Ｇｅｎｅ  １１２：２９−３５  （１９９２）；  Ｌａｗｙｅｒら、ＰＣＲ  Ｍｅｔｈ．  Ａｐｐｌ．  ２：２７５−２８７  （１９９３）；  Ｆｌａｍａｎら、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２２（１５）：  ３２５９−３２６０  （１９９４））。
【００９６】
本明細書において企図されるある実施形態に使用するための他の検出可能な指示薬としては、抗体、レクチン、免疫グロブリンＦｃ受容体タンパク質（例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）タンパク質Ａ、タンパク質Ｇまたは他のＦｃ受容体）、アビジン、ビオチン、他のリガンド、受容体、もしくは対受容体、またはこれらの類似体もしくは擬態物などの親和性試薬が挙げられる。かかる親和法については、例えば放射性核種で、フルオロフォアで、親和性タグで、ビオチンまたはビオチン擬態配列で標識されたもの、または抗体−酵素抱合体として調製されたものを含む、適切に標識された抗体またはレクチンなどの免疫測定試薬を調製し得る（例えば、Ｗｅｉｒ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １９８６，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｂｏｓｔｏｎ；  Ｓｃｏｕｔｅｎ，  Ｗ．Ｈ．，  １９８７  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １３５：３０−６５；  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  １９８８  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ；  Ｈａｕｇｌａｎｄ，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ−第９版，  ２００２  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ；  Ｓｃｏｐｅｓ，  Ｒ．Ｋ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  １９８７，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  ＮＹ；  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｇ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  １９９２，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，  ＮＹ；  Ｌｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８  Ｊ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ６５：２２５ならびにこれらに引用された参照文献を参照されたい）。
【００９７】
本発明の他のある実施形態は、核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物と生体試料を混合することにより得られた混合物が、少なくとも１つ、およびある関連実施形態では、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれ以上の検出可能な指示薬を含み、これらはそれぞれ、独特および容易に識別可能なガスクロマトグラフィー／質量分析（ＧＣＭＳ）タグ分子を含む、生体試料の液体または半液体貯蔵のための組成物および方法に関する。多数のかかるＧＣＭＳタグ分子が当該技術分野において知られており、例えば、異なる試料の貯蔵容器（多ウェル貯蔵プレートの別々のウェルなど）内に貯蔵混合物を分離するための独特なＧＣＭＳ分光測定プロファイルをコードするための検出可能な識別子部分として単独もしくは併用使用のために選択され得る。非限定的な例証として、例えば１つ、２つまたはそれ以上のかかるＧＣＭＳタグの様々な異なる組み合わせを、その中のＧＣＭＳ「サイン」に基づいて同定できる様式で、個々のウェルに添加し得、これにより、その後に貯蔵装置ウェルから除去される任意の試料を、同定目的のために元のそのウェルまでさかのぼることができる。ＧＣＭＳタグの例としては、α，α，α−トリフルオロトルエン、α−メチルスチレン、ｏ−アニシジン、任意のいくつかの異なるコカイン類似体または定義された条件下で容易に識別可能なＧＣＭＳサインを有する他のＧＣＭＳタグ化合物、例えばＳｕｐｅｌｃｏ（登録商標）２００５ガスクロマトグラフィーカタログに記載されたＳｕｐｅｌｃｏ（登録商標）製品など、ＳＰＥＸ  ＣｅｒｔｉＰｒｅｐ  Ｉｎｃ．  （Ｍｅｔｕｃｈｅｎ，  ＮＪ）製品またはＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  Ｍｏ）製品が挙げられる。
【００９８】
生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物は、例えば、本明細書に記載の貯蔵装置の１つまたは複数の試料ウェルに、溶媒中組成物を接触させるかまたは投与することにより、生体試料の貯蔵容器に適用し得る。
生体試料中に提供されるかまたは生体試料に由来する生体物質は、（例えば、試料ウェルを溶媒に溶解または解離された試料および貯蔵組成物と同時に接触させることによって）液体（液体懸濁液などの）形態の貯蔵組成物と組み合わせて、ウェルに添加しても試験管に添加してもよい。
【００９９】
生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物の状態（例えば、ｐＨ、イオン強、極性、可溶化能）は、生体試料の少なくとも９０％超、好ましくは９５％超、より好ましくは９６、９７、９８または９９％超の生体活性（例えば、酵素もしくは親和性活性、または構造的完全性または本明細書に記載されて当該技術分野において知られている他の生体活性）が安定的に貯蔵するための組成物と生体試料を混合することにより得られた混合物の冷蔵せずに貯蔵後に維持されるように調節し得る。例えば、最初に生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物により得られる前例のない利点に加えて、緩衝液条件ならびにある化学物質および酵素ならびに他の試薬の添加は、ＤＮＡおよびＲＮＡ（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  Ｅ．  Ｆ．  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｔ．  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  ２００３）ならびに／または酵素、プロテアーゼおよび環境因子からの分解に対するタンパク質、ポリペプチド、酵素および／もしくは他の生体物質（例えば、血液、組織、体液）（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  ２００３を参照されたい）の安定化に貢献し得ることが理解されるであろう。また、生体試料に対する有益な効果を得るために、あるかかる化学物質成分をさらに含有することも企図され、特定の試料およびそれらの使用に応じて変更し得る（例えば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃａｔａｌｏｇ  ２００４／２００５，  ｐｐ．  ６８−６９、および引用ページ、ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ；ならびに１つもしくは複数の生体試料成分（例えば、生体分子）を維持、貯蔵、増強、保護あるいは促進するための塩（例えば、ＫＣｌ、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２など）などの適切な溶質、あるいは核酸ハイブリダイゼーションなどの特異的な生体分子の特定の活性、または酵素、抗体、もしくは他のタンパク質、もしくは他の緩衝液、例えば、トリス緩衝液（ＴＨＡＭ、トロメタノール、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、トリス−ＥＤＴＡ緩衝液（ＴＥ）、塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム緩衝液（ＳＳＣ）、ＭＯＰＳ／酢酸ナトリウム／ＥＤＴＡ緩衝液（ＭＯＰＳ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、生理学的ｐＨの酢酸ナトリウム緩衝液）などの活性に関して選択され、最適化され得る）。
【０１００】
安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物を使用して冷蔵せずに貯蔵された生体試料からの生体活性の回復を有利に増強し得るさらなる化学物質成分としては、（式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）および本明細書に記載の他の成分と共に）貯蔵組成物が含まれる生体適合性溶媒に含まれ得る溶質も挙げ得るが、これに限定されず、かかる溶質は、当業者により選択され得る望ましい等張性、高浸透圧性、または低浸透圧性環境、例えば細胞膜の破壊を防止するための等張食塩水液を提供する。それゆえ、本開示を考慮した当業者であれば理解するとおり、貯蔵される特定の生体試料およびかかる試料から回復される特定の生体活性（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチド）に応じて、試料と比較して等張性、高浸透圧性、または低浸透圧性である生体適合性溶媒と共に安定的な貯蔵組成物を調合することが望まれ得る。
【０１０１】
背景として、浸透圧ショックは、浸透圧の異なる溶液に対する細胞の曝露により生じ、この場合、浸透現象には、水に対して両方向に浸透するが、溶質に対しては様々に浸透する選択的浸透膜を越える水の総拡散を含み、水は、ある溶液から水ポテンシャルの低い別の溶液中へ拡散する。溶液の浸透圧は、半透膜（すなわち、溶質はいずれも浸透しないが、溶媒は自由に浸透する膜）を越えて溶液中へ蒸留水が通過するのを防止するように作用する圧であり、パスカル（１Ｐａ＝１ニュートン／ｍ２）で測定される場合が多い。逆に言えば、水ポテンシャルは、任意の系が、水をその周囲に押し上げる正味の傾向である。大気圧における純水の水ポテンシャルは、定義上、０圧単位であるので、純水に任意の溶質を添加すると、その水ポテンシャルが低下して、その値は負になる。したがって、水は、高い（すなわち、陰性度の低い）水ポテンシャルから低い（すなわち、陰性度の高い）水ポテンシャル系に動く。
【０１０２】
それゆえ、本明細書に開示したある実施形態により、生体試料の溶質濃度は、溶液に存在する細胞内の溶質濃度よりも高いため、水を細胞外に散在する生体適合性溶媒と共に調合されたものなどの高浸透圧性細胞の懸濁液を含み得る。これらのおよび関連した実施態様では、高浸透圧液充てん材は、細胞内のものなどの膜で区切られた液体区画の溶質濃度と比較して相対的に高い溶質濃度で提供される（例えば、細胞質ゾルは、安定的に貯蔵するための組成物と比較して低浸透圧性である）。かかる高張液は低浸透圧性であり、処理された高浸透圧液よりも水ポテンシャルが低い。したがって、例えば、低張液の溶質濃度は、溶液に懸濁された細胞内の溶質濃度よりも低いため、水を細胞中へ拡散させる。低張液は、別の溶液と相対的に溶質濃度が低い（すなわち、水ポテンシャルが高い）。他のある実施態様は、細胞内の溶質濃度（すなわち、これらの浸透圧によって示されるもの）と溶質濃度が等しい等張液であり得る液体製剤に関する。選択的浸透膜（例えば、細胞膜）による等張液の分離では、溶液の水ポテンシャルが同じであるため、細胞膜を越えていずれの方向にも水の正味の通過を生じない。
【０１０３】
安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物に含まれ得る他の化学物質成分としては、ヒト胎盤リボヌクレアーゼ阻害剤、ウシリボヌクレアーゼ阻害剤、ブタリボヌクレアーゼ阻害剤、ピロ炭酸ジエチル、ホルムアミド、バナジル−リボヌクレオシド複合体、マカロイド、プロテイナーゼＫ、ヘパリン、ヒドロキシルアミン−酸素−第２銅イオン、ベントナイト、硫酸アンモニウム、または特異的阻害抗体が挙げられる。
【０１０４】
したがって、ある発明の実施形態は、１つもしくは複数の式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）および本明細書に記載のさらなる成分、ならびに試料処理組成物を含む、生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための組成物を企図する。試料処理組成物は下記のような活性緩衝液を含み得る、および／または試料処理組成物は細胞溶解緩衝液、フリーラジカルトラップ薬、試料変性剤、ならびに病原菌中和剤の１つもしくは複数を含み得る。したがって、これらの実施形態により提供されるように、安定的な貯蔵組成物は、安定的な貯蔵組成物と試料を混合時に、生体試料に望ましい処理を行うように調製された一連の成分を含み得る。
【０１０５】
活性緩衝液は、例えば、試料の１つまたは複数の成分の機能的または構造的特性などの、冷蔵せずに貯蔵後の生体試料の望ましい用途に適した濃縮物を含む、液体形態の溶媒または溶液を含み得る。
【０１０６】
かかる用途の非限定的な例としては、１つまたは複数の酵素活性を決定すること、分子間結合相互作用を決定すること、特異的ポリヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の、または免疫学的に定義されたエピトープの、または定義されたオリゴ糖構造の存在を検出すること、特定のウイルスの、または微生物細胞の、またはヒトもしくは動物細胞を検出すること、特定の代謝産物もしくは異化産物を決定することなどを挙げ得、これらはすべて、適切な活性緩衝液と試料を接触させることによって提供できる適切な条件を含む、関連した技術において、定義され、当業者に知られている条件を使用して達成できる。
【０１０７】
細胞溶解緩衝液は、細胞または細胞小器官を溶解させる（すなわち、境界膜を崩壊させる）ために選択される任意の組成物であってよく、洗剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ−４０、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコレート、オクチル−グルコピラノシド、ベタインなど）および／または溶質（例えば、尿素、塩酸グアニジン、イソチオシアン酸グアニジニウム、高塩濃度）系などの界面活性剤を使用することにより、血漿膜などの細胞膜の浸透圧ショック（例えば、低浸透圧ショック）および／または破壊の原理に基づいた、かかる多くの製剤が当該技術分野において知られている。多数の細胞溶解緩衝液が知られており、生体試料および生体分子（１つまたは複数）、望ましく回復される生体活性または生物構造の性質の機能として適切に選択することができ、またこれは、いくつかの実施態様では、適切なｐＨ緩衝液、生物学的もしくは生化学的阻害剤の選択、ならびに検出可能であった指示薬を含み得る。
【０１０８】
試料変性剤は、同様に生体試料および安定的に貯蔵するための組成物の機能として変動し得るが、試料中の関心対象の生体分子の立体構造、四次、三次および／もしくは二次構造、溶媒和度、表面電荷プロファイル、表面疎水性プロファイル、または水素結合形成能の少なくとも１つを非共有結合的に改変する（例えば、未処理の試料などの適切な対照と比較して、統計的有意の）薬剤を含み得る。試料変性剤の例としては、カオトロープ（例えば、尿素、グアニジン、チオシアン酸塩）、洗剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム）、高塩条件、または変性条件を促進する他の薬剤もしくは薬剤の組み合わせが挙げられる。さらに上記のとおり、ある実施形態では、ある試料タイプにおいて、キレート剤も存在時に、試料変性剤の使用を明らかに除外することを企図するのに対し、他のある実施形態は、かかる成分を含み得る。
【０１０９】
ある実施形態に使用するためのフリーラジカルトラップ薬は、活性酸素種（ＲＯＳ）、例えばスーパーオキシド、ペルオキシ亜硝酸イオンもしくは水酸基などの反応性化合物、ならびに潜在的に他の反応性種から安定的に不対フリーラジカル電子を吸収できる任意の薬剤を含み得、抗酸化剤はフリーラジカルトラップ薬の例である。したがって、多種多様な公知のフリーラジカルトラップ薬が市販されており、本開示の組成物および方法のある実施形態に含めるために選択され得る。例としては、例えばＨａｌｌｉｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｇｕｔｔｅｒｉｄｇｅ  （Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  １９８９  Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ，  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５  ａｎｄ  ６）；  Ｖａｎｉｎ  （１９９９  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ３０１：２６９）；  Ｍａｒｓｈａｌｌ  （２００１  Ｓｔｒｏｋｅ  ３２：１９０）；  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １６３：３９）；  Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  ９０９：４６）などに記載されているように、アスコルビン酸塩、βカロチン、ビタミンＥ、リコピン、ｔｅｒｔ−ニトロソブタン、α−フェニル−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン、５，５−ジメチルピロリン−Ｎ−オキシドなどが挙げられる。
【０１１０】
ある実施形態は、本開示の組成物および方法における病原菌中和剤の包含を企図し、これは、それが完全または部分的に、しかしながら、いずれにしても適切な対照と比較して統計的有意に、ヒトもしくは脊椎動物において疾患または障害を引き起こす細菌、ウイルス、真菌、寄生虫、プリオン、酵母、原生動物、感染因子または任意の他の微生物学的因子などの病原体の任意の病原性効果を中和、障害、遅延化、阻害、遮断、予防、反対に作用、還元、低減、あるいは遮断できる任意の薬剤を含む。当業者は、本開示に従った使用に適した病原菌中和剤を認識するであろう。薬剤の例としては、アジ化ナトリウム、ボラート、次亜塩素酸ナトリウム、過酸化水素もしくは他の酸化剤、ジクロロイソシアヌル酸ナトリウム、エタノール、イソプロパノール、抗生物質、殺菌剤、ヌクレオシド類似体、抗ウイルス薬化合物、ならびに他の殺菌剤が挙げられ；これらまたは他は、関心対象の特定の生体試料の特性に応じて選択され得る。
【０１１１】
したがっておよび本開示を考慮して、ある好ましい実施形態は、ＲＮＡを含む生体試料を長時間冷却せずに安定的に貯蔵し、それにより、貯蔵後に（例えば、−８０℃で貯蔵後の試料において達し得る収集と比較して）実質的なＲＮＡ収集を達成できる組成物および方法を企図し、組成物は、３．４製剤、３．５製剤、３．６製剤、３．２０製剤、３．２１製剤または３．２４製剤（表３参照）の任意の１つを含み、あるかかる実施形態では、試料は完全血（例えば、哺乳類血液、例えば、ヒト血液などの霊長類血液）またはその画分もしくは成分を含む。他のある好ましい実施形態は、ＤＮＡを含む生体試料を長時間冷却せずに安定的に貯蔵し、それにより、貯蔵後に（例えば、−２０℃で貯蔵後の試料において達し得る収集と比較して）実質的なＤＮＡ収集を達成できる組成物および方法を企図し、組成物は、３．１製剤、３．２製剤、３．３製剤、３．４製剤、３．５製剤、３．６製剤、３．２０製剤、３．２１製剤または３．２４製剤（表３参照）の任意の１つを含み、あるかかる実施形態では、試料は完全血（例えば、哺乳類血液、例えば、ヒト血液などの霊長類血液）またはその画分もしくは成分を含む。
【０１１２】
さらに、生体試料中の核酸およびポリペプチド分子を実質的に安定的に貯蔵するための本明細書に記載の組成物を、望ましい用途のために選択され得る１つまたは複数の付属の試薬と共に含むキットに関する実施態様も本明細書において提供する。任意選択的に、キットは、箱、ケース、ジャー、ドラム、引き出し、キャビネット、段ボール箱、担体、ハンドル、ラック、トレー、パン、タンク、袋、包装材料、スリーブ、筐体など任意の他の適切な容器も含み得る。付属の試薬は、本明細書に記載される、当該技術分野において知られている１つまたは複数の溶媒または緩衝液を含み得、ある実施態様では、活性緩衝液を含み得る。
【０１１３】
本発明は、高スループットスクリーニングにおいて、すなわち大量の生体試料の自動化された検査またはスクリーニングにおいて主に価値があると考えられる。これは、例えば、活性化合物の合成または天然物ライブラリーのスクリーニングにおいて特に価値を有する。したがって、本発明の装置および方法は、自動化された、費用効果的な高スループット生体試料検査または薬剤スクリーニングに受け入れられ、医薬品開発計画の広範囲において即時の適用がある。典型的には、高スループット薬剤スクリーニングなどのある好ましい実施形態では、候補薬は、化合物、組成物または分子の「ライブラリー」またはコレクションとして提供される。かかる分子は、典型的には、「低分子」として当該技術分野において知られており、分子量が１０５ダルトン未満、好ましくは１０４ダルトン未満、さらにより好ましくは１０３ダルトン未満の化合物を含む。候補薬はコンビナトリアルライブラリーのメンバとしてさらに提供し得、これは、好ましくは、複数の反応器内で行われる複数の所定の化学反応に従って調製される合成剤を含み、これは、本開示に従った貯蔵装置内で同様に提供し得る。例えば、各種出発化合物は、所定の構成要素に複数の反応条件の順列および／または組み合わせを追跡可能に実施させる固相合成、記録されたランダムミックス法および記録された反応分裂技術の１つまたは複数を使用して調製し得る。生成した生成物は、ペプチド（例えば、ＰＣＴ／米国特許第９１／０８６９４号、およびＰＣＴ／米国特許第９１／０４６６６号を参照されたい）または本明細書に提供する低分子を含み得る他の組成物（例えば、ＰＣＴ／米国特許第９４／０８５４２号、欧州特許第０７７４４６４号、米国特許第５，７９８，０３５号、米国特許第５，７８９，１７２号、米国特許第５，７５１，６２９号を参照されたい）の合成コンビナトリアルライブラリーなどを含む、スクリーニングできるライブラリー、続いて反復選択および合成手順を含む。
【０１１４】
以下の実施例は、非限定的な例証として提示する。
【０１１５】
実施例
実施例１
血液の貯蔵
本実施例は、液体貯蔵可能な生体試料の調製および特性化を記載する。この実施例および以下の実施例において、標準的な細胞および分子生物学技術を使用し、本質的に公知の方法に従った（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  Ｅ．  Ｆ．  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｔ．  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  ２００３；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  ２００３）。この実施例および以下の実施例における試薬はすべて、別段の記載のない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  Ｍｏ）であった。
【０１１６】
新規の完全ヒト血液をＫ２ＥＤＴＡ試験管内に収集し、１．１〜１．３製剤（表１参照）と各種比率で混合した。比率が２：１の場合、１００μｌ血液を各製剤２５μｌに添加して、マイクロフュージ試験管内で試料をボルテックス混合した。比率が４：１の場合、１００μｌ血液を各製剤の各２５μｌに添加して、ボルテックス混合した。比率が８：１の場合、１００μｌ血液を各製剤の各１２．５μｌに添加して、ボルテックス混合した。試料を複数時点での検査用に調製し、プロセス時まで室温で貯蔵した。３１日間後、ＱｉａＡｍｐ（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）ミニカラム精製キットを製造業者により提供された血液プロトコルに従い使用して室温で３倍試料をプロセス化した。プロセス前にリン酸緩衝食塩水を用いて各試料を総２００μｌにした。各１００μＬ溶出液の試料１０μＬのゲノムＤＮＡ単離後、臭化エチジウムを含む０．８％アガロースゲルの各レーンに適用し、１２０Ｖで４０分間ゲルを電気泳動した。３０２ｎｍ  紫外線照明ゲル像をＫＯＤＡＫ１００ゲル系上で捕獲したので、これを図１に示す。
【０１１７】
実施例２
室温で６２日間の完全血中ＤＮＡの安定化
血液と異なる比率で混合した＃１．１〜１．３製剤（表１参照）を室温で６２日間貯蔵後に検討した。３つの異なる市販キットを使用して試料からＤＮＡを単離した。Ｑｉａｇｅｎ製ＱｉａＡｍｐ（商標）ミニキットを＃１．１製剤および非保護血液試料からのＤＮＡ抽出に使用した一方、やはりＱｉａｇｅｎ製のＦｌｅｘｉｇｅｎｅ（商標）キットを＃１．２製剤中で貯蔵された血液および−２０℃で貯蔵された血液試料からのＤＮＡ抽出に使用し、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製ＣｈａｒｇｅＳｗｉｔｃｈ（商標）キットを＃１．３製剤中で貯蔵された血液からのＤＮＡ抽出に使用した。すべての試料を１００μＬ溶出液中で単離した。各１００μＬ溶出液の試料１０μＬのゲノムＤＮＡ単離後、臭化エチジウムを含む０．８％アガロースゲルの各レーンに適用し、１２０Ｖで４０分間ゲルを電気泳動した。３０２ｎｍ  紫外線照明ゲル像をＫＯＤＡＫ１００ゲル系上で捕獲したので、これを図２に示す。＃１．２製剤の比率４：１からの溶出液中ＤＮＡ、非保護血液および−２０℃対照の濃度をＢｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダーを使用して紫外線分光法により算出したので、複製物からのＤＮＡ平均総量を図３に示す。
【０１１８】
実施例３
血液の冷蔵せずに貯蔵後のＤＮＡ収集
１．１〜１．３製剤（表１参照）を各種比率で血液と混合して、出荷シミュレーション中に試料を移動してから、室温でさらに３６日間試料を貯蔵後にＤＮＡを抽出した。以下のプロトコル：
ａ）室温で２日間
ｂ）４５℃で２日間
ｃ）室温で３日間
ｄ）−２０℃で２日間
ｅ）室温で３日間
ｆ）４５℃で２日間
を使用して出荷シミュレーションを実施した。
【０１１９】
プロトコル完了後、試料を室温でさらに３６日間保ってから、３つの異なる市販キットを使用して抽出し、各試料から収集したＤＮＡ量を測定した。Ｑｉａｇｅｎ製ＱｉａＡｍｐ（商標）ミニキットを＃１．１製剤および非保護血液試料からのＤＮＡ抽出に使用した一方、やはりＱｉａｇｅｎ製のＦｌｅｘｉｇｅｎｅ（商標）キットを＃１．２製剤中で貯蔵された血液および−２０℃で貯蔵された血液試料からのＤＮＡ抽出に使用し、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製ＣｈａｒｇｅＳｗｉｔｃｈ（商標）キットを＃１．３製剤中で貯蔵された血液からのＤＮＡ抽出に使用した。すべての試料を１００μＬ溶出液中で単離した。各１００μＬ溶出液の試料１０μＬのゲノムＤＮＡ単離後、臭化エチジウムを含む０．８％アガロースゲルの各レーンに適用し、１２０Ｖで５０分間ゲルを電気泳動した。３０２ｎｍ  紫外線照明ゲル像をＫＯＤＡＫ１００ゲル系上で捕獲したので、これを図４に示す。＃１．２製剤の比率４：１からの溶出液中ＤＮＡ、非保護血液および−２０℃対照の濃度をＢｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダーを使用して２６０ｎｍで紫外線分光法により算出したので、複製物からのＤＮＡ平均総量を図５に示す。
【０１２０】
実施例４
室温で１４日間のヒト完全血中ＲＮＡの安定化
抗凝血剤としてＫ２−ＥＤＴＡを含むバキュテイナー中のヒトドナーから完全血を収集した。試験管を完全に混合し、Ｈｅｍｏｇａｒｄ封を外して、表１に見られる指定の製剤（１．６〜１．８、図６参照）各９００μｌを含む２ｍＬエッペンドルフ型試験管に血液アリコート３００μｌを移した。試料を完全にボルテックス混合し、室温で貯蔵した。エッペンドルフ型試験管へ血液アリコート３００μｌを添加することにより非保護アリコートを調製した。エッペンドルフ型試験管へ血液３００μｌを添加することにより冷凍対照を調製して、−８０℃冷凍器内で冷凍した。１４日間後、室温で試験管を１４０００ｇで５分間回転させて沈殿物および除去した上清を堆積させた。Ａｍｂｉｏｎ  ＲｉｂｏＰｕｒｅ（商標）血液キット（Ａｍｂｉｏｎ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）から８００μｌ溶解液と５０μｌ酢酸ナトリウム溶液を混合することによりペレットを溶解させた。ＲｉｂｏＰｕｒｅ（商標）血液キットプロトコルに応じて試料をさらにプロセス化し、ＲＮＡを含む調製物を得た。−８０℃対照試料を加温してから、８００μｌ溶解緩衝液および５０μｌ酢酸ナトリウムを添加することにより非保護対照試料とプロセス化した。対照も保護された試料と共にプロセス化し、臭化エチジウムを含む１％非変性ゲルを使用して１５０Ｖで３５分間実施したアガロースゲル電気泳動によりＲＮＡを分析した。紫外線透光を３０２ｎｍで使用してゲル像（図６）をＫｏｄａｋ  Ｇｅｌ−１００系上で視覚化した。
【０１２１】
実施例５
室温で６日間の血中ＲＮＡの安定化
実施例４に記載した様式と同様に、さらなる核酸安定化製剤をいくつか調製して、ヒト完全血と混合した。この実験に使用した製剤を表２に提示する。上記のとおりＲｉｂｏＰｕｒｅ（商標）血液キットを使用してＲＮＡ抽出後、収集した核酸含有試料をアガロースゲル電気泳動により分析した。＃２．３製剤を使用して得られた代表的な結果（表２）を図７に示す。
【０１２２】
実施例６
式（Ｉ）の化合物の合成例
本実施例では、式（Ｉ）の化合物の合成例について３つ記載する。試薬はすべて、別段の記載のない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  Ｍｏ）であった。
【０１２３】
１−ヘキシル−３−メチルイミダゾリウムブロミドの合成。撹拌棒を含む３５ｍＬガラス圧試験管（Ａｃｅ  Ｇｌａｓｓ  Ｃａｔ＃８６４８−０７）を６．１５８ｇ（０．０７５モル）の１−メチルイミダゾール、続いて１２．３８０ｇ（０．０７５モル）の１−ブロモヘキサンで電荷した。試験管をスレッデッドテフロン（登録商標）プラグで密封し、Ｏリングおよび試験管をＶＷＲ撹拌熱プレート上で油浴に浸した。温度を９０℃に上昇して、この温度で１６時間維持し、この間に溶液は粘性になり、撹拌棒を停止した。試験管を油浴から移してボルテックスミキサー上で激しく混合して２層を完全に混合して、試験管を９０℃で油浴に浸した。試験管をさらに１時間加熱してから、激しく混合し、２回目の後にさらに１時間９０℃で加熱した。このサイクルを、粘性液体が均一となるまでもう１度反復した。液体を等量酢酸エチルで３回抽出してから、回転蒸発させて残存する酢酸エチルを除去して、１８．１４７ｇの１−ヘキシル−３−メチルイミダゾリウムブロミドを粘性淡黄色油として得た。化合物はＬｏｌｉｔｅｃ（Ｈｅｉｌｂｒｏｎｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）からも市販されている。
【０１２４】
１−オクチル−３−メチルイミダゾリウムブロミドの合成。撹拌棒を含む３５ｍＬガラス圧試験管（Ａｃｅ  Ｇｌａｓｓ  Ｃａｔ＃８６４８−０７）を４．１０５ｇ（０．０５０モル）の１−メチルイミダゾール、続いて９．６５６ｇ（０．０５０モル）の１−ブロモオクタンで電荷した。試験管をスレッデッドテフロン（登録商標）プラグで密封し、Ｏリングおよび試験管をＶＷＲ撹拌熱プレート上で油浴に浸した。温度を９０℃に上昇して、この温度で１６時間維持し、この間に溶液は粘性になり、撹拌棒を停止した。試験管を油浴から移してボルテックスミキサー上で激しく混合して２層を完全に混合して、試験管を９０℃で油浴に浸し、温度を９０℃に上昇させた。試験管をさらに１時間加熱してから、激しく混合し、２回目の後にさらに１時間９０℃で加熱した。このサイクルを、粘性液体が均一となるまでもう１度反復した。液体を等量酢酸エチルで３回抽出してから、回転蒸発させて残存する酢酸エチルを除去して、１３．２３９ｇの１−ヘキシル−３−メチルイミダゾリウムブロミドを粘性淡黄色油として得た。化合物はＬｏｌｉｔｅｃ（Ｈｅｉｌｂｒｏｎｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）からも市販されている。
【０１２５】
１−デシル−３−メチルイミダゾリウムブロミドの合成。撹拌棒を含む３５ｍＬガラス圧試験管（Ａｃｅ  Ｇｌａｓｓ  Ｃａｔ＃８６４８−０７）を４．１０５ｇ（０．０５０モル）の１−メチルイミダゾール、続いて１１．０５９ｇ（０．０５０モル）の１−ブロモデカンで電荷した。試験管をスレッデッドテフロン（登録商標）プラグで密封し、Ｏリングおよび試験管をＶＷＲ撹拌熱プレート上で油浴に浸した。温度を９０℃に上昇して、この温度で１６時間維持し、この間に溶液は粘性になり、撹拌棒を停止した。試験管を油浴から移してボルテックスミキサー上で激しく混合して２層を完全に混合して、試験管を９０℃で油浴に浸し、温度を１００℃に上昇した。試験管をさらに１時間加熱してから、激しく混合し、２回目の後にさらに１時間１００℃で加熱した。このサイクルを、粘性液体が均一となるまでもう１度反復した。液体を等量酢酸エチルで３回抽出してから、回転蒸発させて残存する酢酸エチルを除去して、１４．５３２ｇの１−ヘキシル−３−メチルイミダゾリウムブロミドを粘性淡黄色油として得た。化合物はＬｏｌｉｔｅｃ（Ｈｅｉｌｂｒｏｎｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）からも市販されている。
【０１２６】
実施例７
２９３Ｔ細胞からのゲノムＤＮＡおよびＲＮＡの安定化
ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ，  Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）を標準的な細胞培養手順に従い培養し、収集した細胞を洗浄して、アリコートした細胞ペレット（５×１０５細胞／試料）を１００μＬ核酸安定化３．５製剤もしくは３．６製剤（表３）中で再懸濁し、室温で１４日間貯蔵した。第１対照細胞ペレットを保護添加物なしで−８０℃で１４日間貯蔵し、第２対照ペレットを添加物なしで室温で貯蔵した。貯蔵後、ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ（商標）キット（Ａｍｂｉｏｎ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）を製造業者の説明書に従い使用してゲノムＤＮＡおよび総ＲＮＡを各試料から抽出した。次いで抽出物をアガロースゲル電気泳動により分析した（１．２％アガロース、１×トリス−酢酸塩ＥＤＴＡ（ＴＡＥ））。添加物なしで室温で貯蔵した対照細胞ペレット由来のＲＮＡは完全に分解し、電気泳動法中、離れたバンドは産生しなかった。対照的に、複数の別々のＲＮＡバンド（１８Ｓおよび２８Ｓ  ｒＲＮＡおよびその間のバンドを含む）は３．５製剤または３．６製剤中で貯蔵された電気泳動試料中において明らかであり、これらのバンドは−８０℃対照の相当バンドよりはっきりと分解した。ゲノムＤＮＡに相当する十分に分解した高分子量バンドも、３．５製剤または３．６製剤中で貯蔵された試料、および−８０℃対照試料中の電気泳動図において視認できた。
【０１２７】
実施例８
室温で貯蔵したマウス脳組織試料中のＲＮＡおよびタンパク質の安定化
確立された実験室での動物組織収集手順に従い、新規マウス脳組織断片（それぞれ約２５ｍｇ）を得て、いずれの保護添加物もなしで、または１００μＬ核酸安定化３．５製剤もしくは３．６製剤（表３）の存在下のいずれかで室温で１３日間または２０日間、別々のマイクロフュージ試験管に貯蔵した。対照組織断片を−８０℃でいずれの保護添加物もなしで貯蔵した。貯蔵後、ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ（商標）キット（Ａｍｂｉｏｎ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）を製造業者の説明書に従い使用して各試料から総ＲＮＡを抽出し、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＲＮＡ  ６０００  ＮａｎｏキットおよびＡｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，  ＣＡ）を供給元の提言に従い使用してＲＮＡ完全性を評価した。
【０１２８】
１３日間後、３倍試料の平均ＲＮＡ完全性（ＲＩＮ）スコアは、３．５製剤中で室温で貯蔵した試料において約７．５、安定剤なしで室温で貯蔵した試料において２．５、および−８０℃で貯蔵した試料において７．８を示した。２０日間後、複製試料の平均ＲＩＮスコアは３．５製剤中で室温で貯蔵した試料において約７．１、３．６製剤中で室温で貯蔵した試料において６．７、および−８０℃で貯蔵した試料において６．９を示した。
【０１２９】
３．５製剤中で室温で１３日間貯蔵したマウス脳試料から収集したＲＮＡも、定量リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）により、マウスＧＡＰＤＨ、ｐ２７およびＣｄｋ２  ｃＤＮＡ特異性オリゴヌクレオチドプライマーセットを使用して、−８０℃で１３日間貯蔵した試料由来のＲＮＡと比較した。標準的なｑＰＣＲ方法に従い、ＲＮＡアリコート２５０ｐｇ、２．５ｎｇまたは２５ｎｇを逆転写し、生成物を増幅した。３．５製剤中で室温で１３日間貯蔵されたＲＮＡおよびいずれの安定剤もなしで−８０℃で１３日間貯蔵されたＲＮＡを使用して同様の結果を得た。
【０１３０】
上記のとおり調製したマウス脳組織断片（それぞれ約２５ｍｇ）も、３．５製剤（表３）中でまたは安定剤なしでのいずれかで室温で１４日間貯蔵し、対照試料を安定剤なしで−８０℃で貯蔵後、ＳｕｒｅＰｒｅｐ（商標）キット（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，  ＰＡ）を製造業者の説明書に従い使用してタンパク質抽出物を調製した。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  ＩＬ）を使用して抽出物中タンパク質濃度を決定し、各試料の等量タンパク質をトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル４〜２０％勾配（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）で電気泳動上で分析した。電気泳動分離後、タンパク質をニトロセルロース膜へ電気ブロット移動させ、Ｐｏｎｃｅａｕ  Ｓ溶液で着色した；ブロットも、標準的なウエスタンブロット法に従いマウスダイニン１およびマウスβアクチン特異抗体を用いて免疫化学的にプローブした。
【０１３１】
Ｐｏｎｃｅａｕ  Ｓ染色により、３．５製剤中で貯蔵した試料からの抽出物において複数の異なるタンパク質バンドを検出し、これらのいくつかは、−８０℃で貯蔵した試料からの抽出物の電気泳動図と同等のものより豊富またはよりはっきりと分解した。室温で保護添加物なしで貯蔵した試料からの抽出物中のタンパク質の豊富さおよび分解度は、比較的乏しかった。免疫ブロット分析により、３．５製剤中で貯蔵した試料からの抽出物および−８０℃で貯蔵した試料と同等のダイニン１貯蔵が示されたが、保護安定化添加物なしで室温で貯蔵した試料からの抽出物においては弱いダイニン１バンドのみ検出可能であった。全３つの貯蔵条件下で貯蔵した試料の抽出物においてアクチンシグナルは容易に検出可能であり、室温で保護安定化添加物なしで貯蔵した試料からの抽出物に検出されるアクチンバンドはあまり顕著ではなかった。
【０１３２】
実施例９
ヒト乳癌試料中のタンパク質の安定化
前実施例に記載のとおりマウス脳組織断片（それぞれ約２５ｍｇ）を調製し、ヒト乳癌組織断片（それぞれ約２５ｍｇ）も室温で３．５製剤（表３）の存在下または安定剤なしで−８０℃でのいずれかにて３日間貯蔵した。タンパク質抽出、タンパク質の電気泳動分離、およびニトロセルロース膜への電気ブロット移動を前実施例に記載のとおり行った。アミド黒色を用いた染色により、分解したタンパク質を検出した。３．５製剤中で室温で貯蔵した試料の電気泳動図は、安定剤なしで−８０℃で貯蔵した試料に観察された電気泳動図に相当した。
【０１３３】
実施例１０
長時間冷却せずに貯蔵したヒト血液試料中のＲＮＡおよびＤＮＡの安定化
標準手順に従い、血液試料を健常ヒト志願者から採取して、抗凝血剤を含む試験管内に収集した。未分画血液試料を添加物なしで、または３．１製剤、３．２製剤もしくは３．３製剤（表３）の１つと２：１および８：１容量：容量比で混合後のいずれかに３１日間室温で貯蔵した。対照血液試料を−２０℃で添加物なしで貯蔵した。貯蔵期間終了時、５  Ｐｒｉｍｅ  Ｉｎｃ．  （Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）製のマニュアルＰＣＲ延長系を供給元の説明書に従い使用して、ゲノムＤＮＡを抽出して、アリコート１００ｎｇを、ＰＬＡＴ遺伝子を挿入した２２キロベース対断片の増幅ＰＣＲ鋳型として使用した。λＤＮＡ  ＨｉｎｄＩＩＩ消化ラダー（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，  Ｂｅｖｅｒｌｙ，  ＭＡ）を参照標準として使用してアンプリコンをアガロースゲル電気泳動（０．５％アガロース、１×ＴＡＥ）により分析した。
【０１３４】
３．１製剤、３．２製剤、および３．３製剤と混合した血中で室温で貯蔵した試料から調製した鋳型ＤＮＡから２２ｋｂアンプリコンははっきりと分解し、−２０℃対照試料から収集された鋳型ＤＮＡを使用して得られた対応するアンプリコンに見られたものより強度の強い電気泳動図におけるバンドとして容易に検出可能であった。添加物なしで室温で貯蔵された血液試料から鋳型ＤＮＡを使用時には、このアンプリコンの劇的に薄いバンドが観察された。
【０１３５】
別の類似の実験を実施して、出荷サイクル経過中、未分画完全血試料の貯蔵状態をシミュレートした。血液試料を３．１製剤、３．２製剤または３．３製剤（表３）の１つと２：１、４：１および８：１容量：容量比で、またはＰＡＸｇｅｎｅ（商標）ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）と供給元の説明書に従い混合した。対照試料２セットには添加物も安定剤も加えず、セットの片方はシミュレーションした出荷サイクルに応じてプロセス化したのに対し、セットの他方は−２０℃で貯蔵した。シミュレーションした出荷サイクルは、以下の連続５工程：（ｉ）室温で２日間、（ｉｉ）４５℃で２日間、（ｉｉ）室温で３日間、（ｉｉｉ）−２０℃で２日間、（ｉｖ）室温で３日間、（ｖ）４５℃で２日間であった。シミュレーションした出荷サイクル期間終了時、ゲノムＤＮＡを各試料から抽出して、アリコート１００ｎｇをＰＣＲ鋳型として上記のとおりＰＬＡＴ遺伝子を挿入した２２キロベース対断片の増幅に使用した。電気泳動分析により、３．１製剤、３．２製剤および３．３製剤を使用して貯蔵された試料から強くはっきりと分解し、容易に検出可能であり、−２０℃で貯蔵した対照と同等の強度で、ＰＡＸｇｅｎｅ（商標）を使用して貯蔵した試料から得られたアンプリコンバンドより強度の強いアンプリコンが示され、ＰＡＸｇｅｎｅ（商標）はいずれの添加物も安定剤もなしで貯蔵した試料から得られたアンプリコンより強度が強かった。
【０１３６】
別々の実験において、血液を３．１製剤、３．２製剤または３．３製剤（表３）の１つと２：１、４：１および８：１容量：容量比で混合後、血液試料を室温で９０日間貯蔵した。対照試料群をいずれの添加物も安定剤もなしで室温または−２０℃で貯蔵した。市販キット（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ製ＱＩＡａｍｐ（商標）ミニＤＮＡキットもしくはＦｌｅｘｉＧｅｎｅ（商標）キット、またはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ製のＣｈａｒｇｅＳｗｉｔｃｈ（商標）キット）を使用して精製後のＤＮＡ収集の電気泳動分析により、３．１製剤、３．２製剤および３．３製剤を使用して貯蔵された試料において、−２０℃対照群に観察されたもの以上の強度にて十分に分解したバンドが観察され、−２０℃対照群はいずれの添加物も安定剤もなしで貯蔵した試料から得られたものより強度が強かった。
【０１３７】
別の試験において、上記の方法を使用して、３．４製剤〜３．７製剤（表３）の１つと混合後に室温で７日間貯蔵した血液試料から収集したＲＮＡのＲＮＡ完全性（ＲＩＮ）スコアを得た。添加物なしで貯蔵した試料の平均ＲＩＮスコア６．３７および−８０℃で貯蔵した対照試料の平均ＲＩＮスコア７．７と比較し、３．４製剤〜３．７製剤の平均ＲＩＮスコアは約６．４７〜６．８３範囲であった。
【０１３８】
３．４製剤（表３）と混合後に室温で貯蔵した血液試料中のＲＮＡ安定化を、βアクチン発現を参照標準として使用して、０、１、３および７日間後、検出可能（すなわち、安定した）ヒトＦＯＳおよびＩＬ−１β遺伝子転写物レベル変化のＲＴ−ｑＰＣＲ分析によって評価した。安定化添加物を含まない第１セットの対照試料を−８０℃で貯蔵し、第２セットの対照試料（やはり添加物なし）を室温で貯蔵した。ＦＯＳとＩＬ−１β遺伝子転写レベルの両方において、３．４製剤中で貯蔵した試料由来のＲＮＡから得られたＲＴ−ｑＰＣＲ結果は、各時点で−８０℃対照試料から得られたものに実質的に類似していた。対照的に、室温の対照試料から得られたｑＰＣＲ結果により、不自然に上昇したＦＯＳ発現（例えば、理論に束縛されないが、非ＦＯＳコーディングＲＮＡ種のバイアス分解に起因する）およびＩＬ−１β発現の広範な経時的変動について示唆された。
【０１３９】
実施例１１
冷蔵せずに貯蔵したヒト血液試料中のＲＮＡおよびＤＮＡの安定化
単独ドナーからのヒト完全血を３．４製剤中で室温で３日間または７日間（表３、製剤対血液比率３：１、図８Ｃ〜８Ｄ）または安定剤の不在下で３日間（非保護、図８Ａ）貯蔵した。対照血液アリコートを−８０℃で７日間貯蔵した。８９遺伝子パネルの遺伝子発現変化を３回分析し、採血時点の遺伝子発現レベルと比較して、ΔΔＣｑ方法ならびにハウスキーピング遺伝子としてＲＰＬ１３ＡおよびＧＡＰＤＨを使用した。０時点および特定試験時点で同じ発現レベルの遺伝子は、線形プロット上に位置した（図８Ａ〜Ｄ）。２倍超明らかに上方制御した遺伝子が線形プロットの上に現れ（図８Ａ〜Ｄ）、２倍超明らかに下方制御した遺伝子が線形プロットの下に現れる（図８）ように、散布プロット上の境界を２倍に設定した。遺伝子の略語を図８に示す。
【０１４０】
上記のヒトＦＯＳおよびＩＬ−１β遺伝子転写物と比較した、遺伝子転写物の大パネルの、室温で貯蔵した完全血試料中の明らかな遺伝子発現安定性のＲＴ−ｑＰＣＲ分析について表５に要約する。ヒト完全血を単独ドナーから収集して、３．４製剤（表３）中で（製剤対血液比率３：１）、ＰＡＸｇｅｎｅ（商標）（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）中で、または安定剤を添加せず（非保護）、室温で貯蔵した。対照血液アリコートを安定剤なしで−８０℃で貯蔵した。採血時点（０時点）の遺伝子発現レベルと比較して、各条件の３倍試料、ΔΔＣｑ方法ならびにハウスキーピング遺伝子としてＲＰＬ１３ＡおよびＧＡＰＤＨを使用して、８９遺伝子パネルの明らかな遺伝子発現の変化を分析した。
【表５】
0005933544.tif 000197
ＲＴ−ＱＰＣＲ概要
【０１４１】
別々の実験において、室温で１２日間貯蔵したヒト血液試料から収集したＲＮＡのＲＮＡ完全性（ＲＩＮ）スコアを上記のとおり決定した。結果を図９に示す。本明細書に記載の３．４製剤、３．２０製剤もしくは３．２２製剤（表３参照）、またはＰＡＸｇｅｎｅ（商標）を含む血液試料から収集したＲＮＡの完全性を、室温で非保護で（すなわち、添加物なしで）貯蔵された血液から抽出したＲＮＡの完全性、および−２０℃で冷凍貯蔵した対照試料由来のＲＮＡと比較した。ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ（商標）キット（Ａｍｂｉｏｎ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）を使用して総ＲＮＡを抽出し、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒおよびＲＮＡ  ６０００  Ｎａｎｏキットを使用してＲＮＡ完全性を分析した。ＲＩＮスコアを図９に示す。
【０１４２】
別の試験において、単独ドナーから採血して、アリコートし、非保護（すなわち、安定剤としてのいずれの添加物もなく）か、または３．２０製剤、３．２１製剤、３．２３製剤、３．２４製剤、３．２５製剤（表３参照）中で、またはＰＡＸｇｅｎｅ（商標）中のいずれかで室温で貯蔵した。対照血液アリコートを−８０℃で冷凍貯蔵した。収集時点（「０時点」）および指定温度で７日間貯蔵後に試料からＲＮＡを抽出した。ＲＴ−ｑＰＣＲ分析を本質的に上記のとおり実施し、「０」時点の明らかな発現レベルと比較して、貯蔵後、試料中のＦＯＳおよびＩＬ−１βをコードする遺伝子の明らかな発現における変化を特性化する。ヒトβアクチンを本分析の参照遺伝子として使用した。結果を図１０に提示する。
【０１４３】
７日間ではなく１４日間貯蔵した試料について類似の分析を実施し、ＩＬ−１６および１８Ｓ  ｒＲＮＡを含む一連の遺伝子に拡張した。単独ドナーから採血して、アリコートし、非保護（すなわち、安定剤としてのいずれの添加物もなく）か、または３．２０製剤、３．２１製剤、３．２３製剤、３．２４製剤、３．２５製剤（表３参照）中で、またはＰＡＸｇｅｎｅ（商標）中のいずれかで室温で貯蔵した。対照血液アリコートを−８０℃で冷凍貯蔵した。収集時点（「０時点」）および指定温度で１４日間貯蔵後に試料からＲＮＡを抽出した。ＲＴ−ｑＰＣＲ分析を本質的に上記のとおり実施し、「０」時点の明らかな発現レベルと比較して、貯蔵後、試料中のＦＯＳ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１６および１８Ｓ  ｒＲＮＡをコードする遺伝子の明らかな発現における変化を特性化する。ヒトβアクチンを本分析の参照遺伝子として使用した。結果を図１１に提示する。
【０１４４】
実施例１２
冷蔵せずに６ヶ月超貯蔵したヒト血液試料中のＤＮＡの安定化
単独ドナー由来の血液をマイクロフュージ試験管中に１００μＬ／試験管でアリコートした。試験管に３．２６製剤、３．２７製剤、３．２８製剤、３．２９製剤、３．３０製剤、３．３１製剤および３．３２製剤（表３参照）の１つを２０μＬ入れてから、血液とボルテックス混合した（すなわち、１つの安定剤部分対５つの血液部分（ｖ／ｖ））。対照血液アリコート（１００μＬ）も室温で非保護で（すなわち、安定剤を添加せず）貯蔵し、さらなる対照血液アリコートを−２０℃で冷凍貯蔵した。試験管（−２０℃対照群以外）を実験室の実験台上で外界室温で１８９日間貯蔵した。貯蔵期間後、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）製ＱｉａＡｍｐ（商標）ミニキットを製造業者の説明書に従い使用して全試験管を抽出した。抽出したＤＮＡを臭化エチジウムを含む０．８％アガロースゲルにて電気泳動により分析して、ゲノムＤＮＡの完全性を評価した。３．２６製剤、３．２７製剤、３．３１製剤および３．３２製剤中で室温で貯蔵された試料において、−２０℃対照試料に見られるバンドの分解度および強度と比較して有利に十分分解したバンドが観察された。室温で貯蔵された非保護試料において著しい分解が示された。
【０１４５】
文脈上、他の解釈を要さない限り、本明細書および特許請求の範囲を通して、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語ならびに「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのその変形は、オープンの、包括的意味である「が挙げられるが、これらに限定されない」として解釈される。
【０１４６】
本明細書を通して「１つの実施形態」または「実施形態」または「態様」という参照は、実施形態に関連して記載された特定の特徴、構造または特徴は本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書の様々な箇所における「１つの実施形態では」または「実施形態では」という語句の出現は、すべての同じ実施形態を参照している必要はない。さらに、特定の特性、構造、または特徴は、１つまたは複数の実施形態において任意の適切な様式で併合され得る。
【０１４７】
上記の様々な実施形態は、併合してさらなる実施形態を得ることができる。本明細書に参照されるおよび／または出願データシートに列挙される米国特許、米国特許出願刊行物、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許文献はすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。様々な特許、出願および刊行物の概念の適用が必要な場合、実施形態の態様を修正してさらなる実施形態を得ることができる。
【０１４８】
上の詳細な説明を考慮して、実施形態にはこれらおよび他の変更を加えることができる。一般的に、以下の特許請求の範囲に使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲に開示する具体的な実施形態に特許請求の範囲が限定されるものと解釈すべきではなく、かかる特許請求の範囲の権利が与えられる等価物の全範囲と共にすべての可能な実施形態を含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【０１４９】
前述から、本発明の具体的な実施形態は例証目的のために本明細書に記載されているが、本発明の真意および範囲から逸脱せずに様々な修正を行い得ることが理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲以外のものに限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
0005933544.tif 000206
【図８Ｂ】
0005933544.tif 000207
【図８Ｃ】
0005933544.tif 000208
【図８Ｄ】
0005933544.tif 000209
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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