(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0006046694.tif 000210
（式中、
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜4アルキル、シクロプロピルまたはＣ1〜6アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、トリフルオロメチルであり、
Ｒ2は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ1〜6アルキル、ジ−（Ｃ1〜6）アルキルアミノ、Ｃ1〜6アルキルアミノ、Ｃ1〜6アルコキシ、Ｃ3〜6シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ1〜8アルキル、（Ｃ1〜4）アルコキシ−（Ｃ1〜4）アルキル、Ｃ3〜7シクロアルキル、Ｃ4〜7複素環、芳香族、二環式複素環、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルであり、
Ｒ3は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルコキシまたはＣ3〜6シクロアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ4〜8アルキル、Ｃ4〜8アルコキシ、Ｃ2〜6アルケニルまたはＣ2〜6アルキニルである）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物または多形であって、但し、以下の化合物
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（４−ヒドロキシブチルアミノ）ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（５−ヒドロキシペンチルアミノ）ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（６−ヒドロキシヘキシルアミノ）ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシ（エチルアミノ））ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−１−メチル（エチルアミノ））ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（３，４−ジヒドロキシブチルアミノ）ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（４−ヒドロキシペンチルアミノ）ピリミジン、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル−アミノ）ピリミジン、および、
２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（１−エチル−２−ヒドロキシエチルアミノ）ピリミジンＨＣｌ、
を除く、上記化合物。
【請求項２】
Ｒ3がブチルまたはペンチルであり、Ｒ2およびＲ1が前述の通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
Ｒ3がヒドロキシルで置換されたＣ4〜8アルキルであり、Ｒ2およびＲ1が前述の通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｒ3が、ヒドロキシルで置換されたＣ4〜8アルキルであるとき、次のうちの１つである、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
【化２】
0006046694.tif 000211
【請求項５】
Ｒ1が水素または−ＣＨ3であり、Ｒ2およびＲ3が前述の通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
次式：
【化４】
0006046694.tif 000212
または
【化５】
0006046694.tif 000213
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物または多形を、１種以上の薬学的に許容される医薬品添加物、賦形剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項８】
医薬として使用される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形、または請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピリミジン誘導体、それらの製造方法、医薬組成物、およびＨＢＶまたはＨＣＶのようなウイルス感染の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、トール様受容体（ＴＬＲ）の調節または受容体活性化作用が関与する、ウイルス感染、免疫または炎症性疾患の治療におけるピリミジン誘導体の使用に関する。トール様受容体は、細胞外ロイシンリッチドメインと、保存領域を含む細胞質伸長（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）とを特徴とするＩ型（ｐｒｉｍａｒｙ）細胞膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、ある種の免疫細胞の細胞表面に発現するこれらのＴＬＲにより病原体関連分子パターンを認識することができる。外来の病原体を認識すると、サイトカインの産生と食細胞上の共刺激分子のアップレギュレーションが活性化される。これは、Ｔ細胞挙動の調節に繋がる。
【０００３】
大部分の哺乳動物種は１０〜１５種類のトール様受容体を有すると推定されてきた。ヒトおよびマウスで合わせて１３種類のＴＬＲ（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と称される）が同定されており、他の哺乳動物種でもこれらの多くと同等の形態が発見されてきた。しかし、ヒトで発見された特定のＴＬＲの同等物が全ての哺乳動物に存在するわけではない。例えば、ヒトのＴＬＲ１０と類似のタンパク質をコードする遺伝子がマウスに存在するが、過去のある時点でレトロウイルスによって損傷を受けたように見受けられる。他方、マウスはＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、およびＴＬＲ１３を発現するが、そのどれもヒトには現れない。他の哺乳動物がヒトには見られないＴＬＲを発現することもある。トラフグ属のフグ（Ｔａｋｉｆｕｇｕ  ｐｕｆｆｅｒｆｉｓｈ）に見られるＴＬＲ１４によって示されるように、他の非哺乳動物種が、哺乳動物とは異なるＴＬＲを有することもある。これにより、ヒトの自然免疫のモデルとして実験動物を使用する方法が複雑になることがある。
【０００４】
トール様受容体に関する詳細な概説については、次の雑誌論文を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ  Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４．
【０００５】
国際公開第２００６／１１７６７０号パンフレットのプリン誘導体、国際公開第９８／０１４４８号パンフレットおよび国際公開第９９／２８３２１号パンフレットのアデニン誘導体、ならびに国際公開第２００９／０６７０８１号パンフレットのピリミジン類などのトール様受容体に対する活性を示す化合物が以前記載された。
【０００６】
しかし、従来技術の化合物と比較して、好ましい選択性、より高い効力、より高い代謝安定性、および改善された安全性を有する、新規なトール様受容体調節剤が強く求められている。
【０００７】
特定のウイルス感染の治療では、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の場合のように、インターフェロン（ＩＦＮα）を定期的に注射投与することができる（Ｆｒｉｅｄ  ｅｔ．ａｌ．Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｆａ  ｐｌｕｓ  ｒｉｂａｖｉｒｉｎ  ｆｏｒ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００２；３４７：９７５−８２）。経口投与可能な低分子ＩＦＮ誘導
物質は、免疫原性の低下と投与の簡便性という利点を提供し得る。従って、新規なＩＦＮ誘導物質は、ウイルス感染の治療に有効となり得る新種の薬物である。抗ウイルス作用を有する低分子ＩＦＮ誘導物質の文献中の例については、Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．；Ｄｅｓｃａｍｐｓ，Ｊ．；Ｄｅ  Ｓｏｍｅｒ，Ｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９７８，２００，５６３−５６５を参照されたい。
【０００８】
ＩＦＮαはまた、ある種の癌の治療では他の薬物と併用投与される（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４６，  ２８４９−５７，ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９２，５２，１０５６）。ＴＬＲ７／８アゴニストは、明白なＴｈ１反応を誘導することができるため、ワクチンアジュバントとしても重要である（Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２０１０，６，３２２−３３５；Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２００９，５，３８１−３９４）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明により、式（Ｉ）
【化１】
0006046694.tif 000002
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物または多形が提供され、式中、
Ｒ１は、水素、メチル、Ｃ１〜２アルキル、シクロプロピル、メトキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、トリフルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、
Ｒ２は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜６アルキル、ジ−（Ｃ１〜６）アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ１〜８アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシ−（Ｃ１〜４）アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ４〜７複素環、芳香族、二環式複素環、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルであり、
Ｒ３は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシまたはＣ３〜６シクロアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ４〜８アルキル、Ｃ４〜８アルコキシ、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ２〜６アルキニルである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
第１の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ３はブチルまたはペンチルであり、Ｒ２およびＲ１は前述の通りである）の化合物を提供する。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ３はヒドロキシルで置換されたＣ４〜８アルキルであり、Ｒ２およびＲ１は前述の通りである）の化合物に関する。
【００１２】
別の実施形態は、式（Ｉ）（式中、Ｒ３は、ヒドロキシルで置換されたＣ４〜８アルキルである場合、次、
【化２】
0006046694.tif 000003
のうちの１つである）の化合物に関する。
【００１３】
さらに、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１は水素または−ＣＨ３であり、Ｒ２およびＲ３は前述の通りである）の化合物も提供する。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ２は、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトリル、複素環またはエステルで置換されたアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであり、Ｒ１およびＲ３は前述の通りである）の化合物を提供する。
【００１５】
別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ２は、Ｃ１〜３アルキル、アルコキシ、カルボン酸エステルまたはカルボン酸アミドでさらに置換されているアリール、複素環、またはヘテロアリールで置換されたＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１およびＲ３は前述の通りである）の化合物に関する。
【００１６】
さらに、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ２は、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトリル、複素環またはエステルでさらに置換されていてもよい次の例のうちの１つである）の化合物に関する。
【化３】
0006046694.tif 000004
【００１７】
本発明の好ましい化合物は：
【化４】
0006046694.tif 000005
である。
【００１８】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩、その互変異性体、溶媒和物または多形は、医薬としての、特に、トール様受容体（とりわけＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８）活性の調節剤としての活性を有する。
【００１９】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形を１種以上の薬学的に許容される医薬品添加物、賦形剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
さらに、本発明による式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形、または前記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を含む医薬組成物は、医薬として使用することができる。
【００２１】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形、または、前記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する障害または疾患の治療に適宜使用できることである。
【００２２】
「アルキル」という用語は、指定された数の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の飽和脂肪族炭化水素を指す。
【００２３】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。
【００２４】
「アルケニル」という用語は、少なくとも２個の炭素原子と少なくとも１個の炭素−炭素二重結合からなる前述のアルキルを指す。
【００２５】
「アルキニル」という用語は、少なくとも２個の炭素原子と少なくとも１個の炭素−炭素三重結合からなる前述のアルキルを指す。
【００２６】
「シクロアルキル」という用語は、指定された数の炭素原子を含む炭素環を指す。
【００２７】
「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、「アリール」という用語について記載する芳香環構造を意味する。
【００２８】
「アリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択される１個または２個のヘテロ原子を任意選択により含む、芳香環構造を意味する。前記芳香環構造は、４、５、６または７個の環原子を有してもよい。特に、前記芳香環構造は、５個または６個の環原子を有してもよい。
【００２９】
「二環式複素環」という用語は、縮合した２個の芳香環で構成された、「アリール」という用語について前述した芳香環構造を意味する。各環は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択されるヘテロ原子で任意選択により構成される。
【００３０】
アリールアルキル」という用語は、アルキル基で任意選択により置換された、「アリール」という用語について前述した芳香環構造を意味する。
【００３１】
「ヘテロアリールアルキル」という用語は、アルキル基で任意選択により置換された、「ヘテロアリール」という用語について前述した芳香環構造を意味する。
【００３２】
「アルコキシ」という用語は、例えば、メトキシ基またはエトキシ基のような、酸素に単結合したアルキル（炭素と水素の鎖）基を指す。
【００３３】
複素環は、飽和または部分飽和であり、エチルオキサイド、テトラヒドロフラン、ジオキサンまたは他の環状エーテルを含む分子を指す。窒素を含む複素環としては、例えば、アゼチジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびピロリジン等が挙げられる。他の複素環としては、例えば、チオモルホリン、ジオキソリニル、および環状スルホンが挙げられる。
【００３４】
ヘテロアリール基は、芳香族の性質を有する複素環基である。これらは、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１個以上のヘテロ原子を含む単環、二環、または多環である。ヘテロアリール基は、例えば、イミダゾリル、イソキサゾリル、フリル、オキサゾリル、ピロリル、ピリドニル、ピリジル、ピリダジニル、またはピラジニルであってもよい。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩には、その酸付加塩および塩基塩が含まれる。好適な酸付加塩は、無毒の塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、無毒の塩を形成する塩基から形成される。
【００３６】
本発明の化合物は、溶媒和していない形態および溶媒和した形態で存在することもできる。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物および１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば、エタノールを含む分子錯体を説明するのに使用される。
【００３７】
「多形」という用語は、２つ以上の形態または結晶構造で存在する本発明の化合物の能力を指す。
【００３８】
本発明の化合物は、結晶性または非晶質の生成物として投与することができる。それらは、例えば、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾固などの方法で、固体プラグ（ｓｏｌｉｄ  ｐｌｕｇｓ）、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で投与されても、または本発明の１種以上の他の化合物と併用投与されても、または他の１種以上の薬物と併用投与されてもよい。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される医薬品添加物と共に製剤として投与される。「医薬品添加物」という用語は、本明細書では、本発明の化合物以外の任意の成分を説明するのに使用される。医薬品添加物の選択は、主に、特定の投与方法、溶解性および安定性に対する医薬品添加物の効果、ならびに剤形の種類などの要因に依存する。
【００３９】
本発明の化合物またはその任意の部分群を、投与の目的で、様々な医薬形態に製剤化することができる。適切な組成物として、薬物を全身投与するのに通常使用される全ての組成物を挙げることができる。本発明の医薬組成物を製造するために、有効成分として、特定の化合物、任意選択により付加塩の形態の特定の化合物を有効量、薬学的に許容される担体と均質に混合した状態に配合するが、その担体は投与に望ましい製剤の形態に応じて非常に様々な形態を取り得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口投与、経腸投与、または経皮投与に好適な単位剤形であることが望ましい。例えば、経口剤形の組成物の製造において、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、および溶液剤などの経口液体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、およびアルコール等；または、散剤、丸剤、カプセル剤、および錠剤の場合、デンプン、糖類、カオリン、賦形剤、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤等の固体担体などの、通常の医薬媒体のいずれかを使用することができる。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口単位剤形であり、この場合、明らかに固体医薬担体が使用される。使用直前に、液体の形態に変換できる固体の形態の製剤も含まれる。経皮投与に好適な組成物では、担体は、浸透促進剤および／または好適
な湿潤剤を任意選択により含み、これに、皮膚に対する顕著な有害作用を生じさせない任意の種類の好適な添加剤が少量、任意選択により配合される。前記添加剤は皮膚への投与を促進し得るおよび／または所望の組成物の製造に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮パッチとして、スポット・オン製剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、軟膏として投与することができる。本発明の化合物は、このような方法で投与されるように当該技術分野で使用される方法および製剤で、吸入または吸送により投与することもできる。従って、一般に、本発明の化合物は、溶液剤、懸濁剤または乾燥粉末の形態で肺に投与することができる。
【００４０】
投与の容易さと投与量の均一性のため、前述の医薬組成物を単位剤形に製剤化することがとりわけ有利である。本明細書で使用する場合、単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の有効成分を、必要な医薬担体と共に含有する。このような単位剤形の例としては、錠剤（割線入り錠剤およびコーティング錠を含む）、カプセル剤、丸剤、散剤分包（ｐｏｗｄｅｒ  ｐａｃｋｅｔｓ）、カシェ剤、坐剤、注射用溶液剤または懸濁剤等、およびこれらのそれぞれの倍数（ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ）がある。
【００４１】
感染疾患を治療する当業者は、下記に示す試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効治療１日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を、１日を通して２、３、または４以上の部分用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅｓ）として適切な間隔を空けて投与することが適切な場合がある。前記部分用量は、例えば、単位剤形当たり有効成分を１〜１０００ｍｇ、特に５〜２００ｍｇ含有する単位剤形として製剤化されてもよい。
【００４２】
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重、および全身健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、治療される対象の反応に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、前記有効量を増減し得ることが明らかである。従って、前述の有効量の範囲は、ガイドラインに過ぎず、決して本発明の範囲または使用を制限するものではない。
【００４３】
化合物の製造
式（Ｉ）（式中、Ｒ１は水素原子である）の化合物はスキーム１に従って製造される。
【化５】
0006046694.tif 000006
【００４４】
スキーム１のタイプＡの化合物は、
（ｉ）複素環式アルコールとハロゲン化エステルおよび好適な塩基、例えば、炭酸カリウム、炭酸セシウム、または水素化ナトリウムとの反応。スキーム２ａに示す実施例。
（ｉｉ）好適な塩基、例えば、水素化ナトリウムを使用した、アルコールまたはヒドロキシエステル、例えば、酢酸２−ヒドロキシエチルと、ハロゲン化アルキルとの反応。スキーム２ｂに示す実施例。
のいずれかで製造される。
【化６】
0006046694.tif 000007
【００４５】
式（Ｉ）（式中、Ｒ１はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり、Ｒ２はアリールまたはヘテロアリールである）の化合物は、下記のスキーム３のように製造される。例えば、塩化チオニルを使用して、β−ケトエステル（Ｅ）を塩素化し、２−クロロ−β−ケトエステル中間体（Ｆ）を得ることができる。フェノールまたは複素芳香族アルコール（Ｒ２ＯＨ）を等モル比の水酸化ナトリウム水溶液と化合さ
せる。次いで、減圧下で溶媒を除去し、Ｒ２のフェノール塩または複素芳香族アルコール塩を得る。文献の手順に従ってこの塩を２−クロロ−β−ケトエステル中間体（Ｆ）と化合させ、中間体Ｇを得る。次いで、塩基と共にまたは塩基なしで、中間体Ｇを炭酸グアニジンと、適切な溶媒、例えば、エタノール中で化合させる。次いで、中間体Ｈをオキシ塩化リンと反応させてクロロピリミジン中間体（Ｊ）を生成する。次いで、過剰なアミンおよび任意選択により過剰な有機塩基、例えば、トリエチルアミンの存在下、高温で（Ｊ）を加熱する結果として生成物が生成する。これは当業者に既知の方法を使用する一般的スキームであり、例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｖｏｌｕｍｅ  ３３，ｐ．４３（１９５３）を参照されたい。
【化７】
0006046694.tif 000008
【００４６】
式（Ｉ）（式中、Ｒ１はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり、Ｒ２は芳香族または脂肪族である）の化合物は、スキーム４に従って製造することができる。この反応スキームは、塩化アシルがエステル中間体Ａ（スキーム１に示す）と反応してスキーム３のような中間体（Ｇ）を生成する、交差クライゼン（ｃｒｏｓｓｅｄ−Ｃｌａｉｓｅｎ）反応で開始する。反応スキームは、中間体Ｇから、スキーム
３と同じ生成経路に従う。これは当業者に既知の方法を使用する一般的スキームであり、例えば、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｖｏｌｕｍｅ  １２７，ｐａｇｅ  ２８５４（２００５）を参照されたい。
【実施例】
【００４７】
実験部分
中間体Ａ−１の合成。
【化８】
0006046694.tif 000009
グリコール酸エチル［６２３−５０−７］（２５０．００ｇ、２．４０ｍｏｌ）、ＮａＨ（１０５．６５ｇ、２．６４ｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムアイオダイド（ＴＢＡＩ）（８８．７０ｇ、２４０．１４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２Ｌ）に混合し、その混合物に、臭化ベンジル（４５１．８０ｇ、２．６４ｍｏｌ）を０℃で滴下した。得られた混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１Ｌ）で反応停止し、水層を酢酸エチル（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水（１Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝６：１）で精製し、中間体Ａ−１（２００ｇ）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ４００ＭＨｚ）δ  ｐｐｍ  ７．３７−７．２７（ｍ，５Ｈ）；４．６２（ｓ，２Ｈ），４．２４−４．１９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）；４．０７（ｓ，２Ｈ）；１．２９−１．２５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．
【００４８】
中間体Ｂ−１の製造手順。
【化９】
0006046694.tif 000010
ＮａＨ（４５．３０ｇ、１．１３ｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１．２Ｌ）に懸濁し、その撹拌懸濁液にギ酸エチル（１１４．４２ｇ、１．５４ｍｏｌ）を添加した。懸濁液を氷浴中で冷却した後、無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の化合物Ａ−１（２００ｇ、１．０３ｍｏｌ）を滴下漏斗で滴下した。白色混合物を０℃〜室温で５時間撹拌した。この時間中、反応は発熱性であり、黄色になった。別のフラスコ中で、炭酸グアニジン［５９３−８５−１］（１１１．３１ｇ、０．６１８ｍｏｌ）を、Ｎａ（２８．４１ｇ、１．２４ｍｏｌ）を無水エタノール（７５０ｍＬ）に室温で慎重に添加することにより新たに製造したナトリウムエトキシド溶液で処理した。次いで、１時間撹拌した後に得られたオフホワイトのスラリーを、上記で製造した黄色の溶液に添加した。得られた淡黄色の反応混合物を１５時間加熱還流した。溶媒を除去した後、粗製残留物を水（１．５Ｌ）に溶解した。混合物を酢酸でｐＨ＝５に調節した。固体を回収し、水およびエタノールで十分に洗浄して、中間体Ｂ−１（１６０ｇ）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ４．９０（ｓ，２Ｈ），６．３３（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．２９−７．４２（ｍ，５Ｈ），１１．２１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【００４９】
中間体Ｃ−１の製造手順。
反応スキーム：
【化１０】
0006046694.tif 000011
中間体Ｂ−１（１６０ｇ、０．７４ｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（９００ｍＬ）懸濁液を、Ｎ２下で撹拌しながら１００℃に５時間加熱した。反応混合物を室温に冷却した。過剰のＰＯＣｌ３を減圧留去し、油状残留物を冷飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２Ｌ）に注ぎ入れ、それを３０分間撹拌した。混合物を酢酸エチル（３×１．５Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を分離し、飽和食塩水（１Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を濃縮して中間体Ｃ−１（７０ｇ）を黄色個体として得た。生成物をさらに精製することなく次の工程に使用した。
【００５０】
化合物１の製造手順。
【化１１】
0006046694.tif 000012
Ｃ−１（７０．００ｇ、２９７．０３ｍｍｏｌ）のエタノール（１．４Ｌ）懸濁液に、ｎ−ブチルアミン（２１７．２４ｇ、２．９７ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６０．１１ｇ、５９４．０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで、石油エーテルから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、１（２６ｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ０．９６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３２−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．５２−１．６１（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．４６（ｍ，５Ｈ）
【化１２】
0006046694.tif 000013
【００５１】
中間体Ｄ−１の製造。
磁気撹拌子を備えた１００ｍＬ丸底フラスコに、無水酢酸（４０ｍＬ）中の１（１ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）を入れた。黄色溶液を１５時間還流撹拌した。溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。最良の画分を回収し、溶媒を減圧留去して、白色固体、Ｄ−１を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ２４Ｎ４Ｏ３の分析計算値：３５６．１９；実測値３５７［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３１−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５０−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，６Ｈ），３．４４（ｍ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），５．４１−５．５２（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｍ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，５Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ）
【００５２】
中間体Ｄ−２の製造。
【化１３】
0006046694.tif 000014
方法Ａ。磁気撹拌子を備えた２５０ｍＬエルレンマイヤーフラスコに中間体Ｄ−１（１ｇ）およびエタノール（１００ｍＬ）を入れた。フラスコに窒素を注入した後、１０％Ｐｄ−炭素（１００ｍｇ）を添加した。フラスコを密封し、大気を除去して、水素で置換した。反応を室温で１５時間撹拌した。充填されたセライトで不均質混合物を濾過し、濾液の溶媒を減圧留去して、Ｄ−２を定量的収量で得た。
【００５３】
方法Ｂ。出発原料の０．１Ｍメタノール溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃカートリッジを備えたＨ−ｃｕｂｅに０．５ｍＬ／分および水素圧３０バールで流した。ＬＣ−ＭＳは完全な変換を示す。溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし；溶媒を減圧留去して、白色固体、Ｄ−２を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１２Ｈ１８Ｎ４Ｏ３の分析計算値：２６６．１４；実測値２６７［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．８７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．２８（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１５（ｓ，６Ｈ），３．２０−３．３７（ｍ，２Ｈ），７．０２−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），１０．２７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）
【００５４】
中間体Ｄ−３の製造。
【化１４】
0006046694.tif 000015
１００ｍＬ丸底フラスコに、１（１ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７．５ｇ）、およびアセトニトリル（５０ｍＬ）を入れた。黄色の溶液を１６時間還流撹拌した。溶媒を減圧留去した。残留物をシリカクロマトグラフィーで、事前に充填された８０ｇシリカカラムおよびヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用し、２５４ｎｍで自動回収して精製した。最良の画分をプールし、黄色油状物、Ｄ−３を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２５Ｈ３６Ｎ４Ｏ５の分析計算値：４７２．２６９；実測値４７３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３３−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ），１．５０−１．６５（ｍ，２Ｈ），３．３５−３．５１（ｍ，２Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），５．３１−５．３８（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．４８（ｍ，５Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ）
【００５５】
中間体Ｄ−４の製造。
【化１５】
0006046694.tif 000016
中間体Ｄ−４は、中間体Ｄ−２の製造手順に従い、方法ＡまたはＢを使用して製造する。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１８Ｈ３０Ｎ４Ｏ５の分析計算値：３８２．２２２；実測値３８３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３９（ｓ，１８Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．６４（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．５１（ｍ，２Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ）
【００５６】
化合物２の製造。
【化１６】
0006046694.tif 000017
３０ｍＬバイアルに、中間体Ｄ−４（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）、１−（３−ブロモプロピル）−４−メトキシベンゼン（１３０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（５０８ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）を入れた。反応を室温で１５時間撹拌した。固体を濾過により除去した。濾液の溶媒を減圧留去し、粗製物をメタノール中で再構成し、それにＨＣｌ（６Ｍイソプロパノール溶液）を添加し、反応を室温で１５時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、粗製物を逆相分離により精製し、２を遊離塩基として得た。
【００５７】
中間体Ｇ−１の製造。
【化１７】
0006046694.tif 000018
Ａ−１（６０ｇ、３０９ｍｍｏｌ、１当量）および１−メチルイミダゾール（３０．４ｇ、３７０ｍｍｏｌ、１．２当量）をＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）に溶解し、その撹拌溶液に塩化アセチル（２４．３ｇ、３０９ｍｍｏｌ、１当量）を−４５℃、Ｎ２下で添加した。２０分間撹拌した後、ＴｉＣｌ４（２１０ｇ、１．０８ｍｏｌ、３．５当量）およびトリブチルアミン（２３０ｇ、１．２４ｍｏｌ、４当量）を混合物に−４５℃、Ｎ２下で添加し、−４５℃、Ｎ２下で５０分間撹拌し続けた。終了後、水と酢酸エチルを添加した。有機層を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、淡黄色油状物、Ｇ−１を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），４．２７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４１（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．４３（ｍ，５Ｈ）
【００５８】
中間体Ｈ−１の製造。
【化１８】
0006046694.tif 000019
２０ｍＬマイクロ波用バイアルに、中間体Ｇ−１（５００ｍｇ，２．１２ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、および炭酸グアニジン（２００ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）を入れた。バイアルを密封し、撹拌しながら１２０℃で４時間反応させた。溶媒を減圧留去した。水（２５ｍＬ）を添加した。酢酸を慎重に添加することにより混合物をｐＨ＝５にした。沈殿物を濾過により単離して、白色固体、Ｈ−１を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．８８（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），６．３８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．２４−７．４９（ｍ，５Ｈ），１１．１６（ｓ，１Ｈ）
【００５９】
中間体Ｇ−２の製造。
【化１９】
0006046694.tif 000020
工程１。ナトリウムフェノラートは、１Ｌ丸底フラスコ内の等モル部のフェノールと水酸化ナトリウムをロータリーエバポレータで蒸発させることにより製造した。水の共沸除去にトルエンを使用した。
【００６０】
工程２。攪拌機と、滴下漏斗と、乾燥管を有する還流冷却器とを備えた２Ｌ三口フラスコに、工程１で製造したナトリウムフェノラート（１１６ｇ、１ｍｏｌ）とトルエン（１Ｌ）を入れた。懸濁液を加熱還流した後、撹拌しながらα−クロロアセト酢酸エチル（１６５ｇ、１ｍｏｌ）を滴下漏斗で添加し、反応を４時間加熱還流し続けた。淡褐色の懸濁液を室温に冷却し、水（２×５００ｍＬ）で抽出し、乾燥する（無水硫酸マグネシウム）。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物を精製することなく次の工程に使用する。
【００６１】
中間体Ｈ−２の製造。
【化２０】
0006046694.tif 000021
磁気撹拌子および還流冷却器を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、中間体Ｇ−２（１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、エタノール（５０ｍＬ）、および炭酸グアニジン［５９３−８５−１］（２０３ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５時間還流する。溶媒を減圧留去した。水（２５ｍＬ）を添加した。酢酸を慎重に添加することにより、混合物をｐＨ＝５にした。沈殿物を濾過により単離して、白色固体、Ｈ−２を得た。これをさらに精製することなく次の工程に使用する。
【００６２】
中間体Ｊ−１の製造。
【化２１】
0006046694.tif 000022
磁気撹拌子および還流冷却器を備えた５０ｍＬの丸底フラスコに、中間体Ｈ−２（５００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ３（２０ｍＬ）を添加した。懸濁液を撹拌しながら６時間加熱還流した。溶媒を減圧留去し、粗製褐色油状物、Ｊ−１を得た。それ以上精製を行わなかった。化合物をそのまま後の工程に使用した。
【００６３】
３の製造。
【化２２】
0006046694.tif 000023
磁気撹拌子を備えた５０ｍＬ封管に、中間体Ｊ−１（１５０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルアミン（７０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、塩基性アルミナ（１００ｍｇ）、
およびジオキサン（１０ｍＬ）を入れた。管を密封し、１２０℃の油浴に入れ、反応を撹拌しながら１５時間加熱した。容器を室温に冷却し、蓋を慎重に取り外した。内容物を丸底フラスコに注ぎ入れ、溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから５％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して、３を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１５Ｈ２０Ｎ４Ｏの分析計算値：２７２．１６；実測値２７３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．８０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．２０（ｄｑ，Ｊ＝１５．０，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．３３−１．４７（ｍ，２Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），３．２０−３．３４（ｍ，２Ｈ），４．７４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．７９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．７８−６．８４（ｍ，２Ｈ），６．９１−７．０１（ｍ，１Ｈ），７．１８−７．２８（ｍ，２Ｈ）
【００６４】
４の製造。
【化２３】
0006046694.tif 000024
工程１。
２０ｍＬマイクロ波用バイアルに、市販の２，４−ジクロロ−５−メトキシピリミジン（３００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、およびｎ−ブチルアミン（０．１６６ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルを密封した後、マイクロ波で１０分間、１２０℃で加熱した。ＬＣ−ＭＳは完全な変換を示す。溶媒を減圧留去した。粗製物をそのまま工程２に使用する。
【００６５】
工程２。
工程１の化合物をアンモニア水（１０ｍＬ）と共に２０ｍＬ圧力容器に入れ、これに炭酸水素アンモニウム（２００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびＣｕＯ（２４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。容器を密封し、混合物を撹拌しながら１２０℃に２４時間加熱した。反応混合物をジクロロメタン：メタノール（９：１）５ｍＬで３回抽出し、揮発性物質を減圧留去した。化合物をシリカで濾過し、ジクロロメタン：メタノール、９：１で溶出し、揮発性物質を減圧留去した。残留物を逆相クロマトグラフィーで精製した。
ＬＣ／ＭＳ：Ｃ９Ｈ１６Ｎ４Ｏの分析計算値：１９６．１３；実測値１９７［Ｍ＋Ｈ］＋１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３５−１．４８（ｍ，２Ｈ），１．５６−１．６８（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．５２（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），５．９７（ｓ，２Ｈ），７．０７−７．１４（ｍ，１Ｈ）
【００６６】
５の製造。
【化２４】
0006046694.tif 000025
工程１。
１６×１００試験管に、中間体Ｄ−２（１８０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）、ヨウ化プロピル（１１１ｍｇ、０．６５６ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（３２０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を入れた。反応を室温で１５時間撹拌した。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して、白色固体を得た。
【００６７】
工程２。
１０ｍＬマイクロ波用バイアルに、上記の白色固体（１００ｍｇ）、水酸化アンモニウム（１ｍＬ）およびエタノール（１ｍＬ）を入れた。バイアルを密封し、撹拌しながら１７５℃に１０分間加熱した。ＬＣ−ＭＳは生成物への完全な変換を示す。溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、無色油状物を得た。１当量のＨＣｌ（５Ｎ〜６Ｎ  ＨＣｌイソプロパノール溶液を使用）を添加することにより白色固体、５を得た。
ＬＣ／ＭＳ：Ｃ１１Ｈ２０Ｎ４Ｏの分析計算値：２２４．１６；実測値２２５［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．３５（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．６９−１．７５（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），８．２８−８．３７（ｍ，１Ｈ）
【００６８】
ＡＡ−９を製造するための合成スキーム。
【化２５】
0006046694.tif 000026
【００６９】
中間体ＡＡ−３の合成
【化２６】
0006046694.tif 000027
バレルアルデヒド（４３ｇ、５００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１Ｌ）溶液に、ＡＡ−２（２００ｇ、５３２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を石油エーテルで希釈し、濾過した。濾液の溶媒を減圧留去し、残留物をシリカクロマトグラフィーで、石油エーテルから３％酢酸エチル／石油エーテルへの勾配を使用して精製し、ＡＡ−３（９０ｇ）を無色油状物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ｐｐｍ  
６．８１−６．７７（ｍ，１Ｈ），５．６８−５．６４（ｔｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．１１−２．０９（ｍ，２Ｈ），１．４０６（ｓ，９Ｈ），１．３８−１．２６（ｍ，４Ｈ），０．８５−０．８１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
【００７０】
化合物ＡＡ−５の合成
【化２７】
0006046694.tif 000028
ＡＡ−４（１６５ｇ、７８１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に−７８℃でｎ−ブチルリチウム（２９０ｍＬ、７２５ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌した後、ＴＨＦ（４００ｍＬ）中のＡＡ−３（９０ｇ、４８８．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応−７８℃で２時間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で反応停止し、室温に加温した。生成物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィーで、５％酢酸エチル／石油エーテルで溶出して精製し、無色油状物、ＡＡ−５（１３２ｇ）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ｐｐｍ  ７．３６−７．１６（ｍ，１０Ｈ），３．７５−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．３９（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３３−３．１５（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４７−１．３７（ｍ，２Ｈ），１．３２（ｓ，９Ｈ），１．２６−１．１７（ｍ，７Ｈ），０．８３−０．７９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
【００７１】
ＡＡ−６の合成
【化２８】
0006046694.tif 000029
ＡＡ−５（１３０ｇ、３２８  ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５Ｌ）に溶解し、ＬＡＨ（２０ｇ、５２６ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ添加した。得られた混合物を同じ温度で２時間撹拌した後、室温に加温した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で反応停止した。生成物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濃縮して、粗製ＡＡ−６（１００ｇ）を得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ｐｐｍ  ７．３３−７．１４（ｍ，１０Ｈ），３．９１−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．８０−３．７７（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６３−３．６０（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４３−３．４２（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．１０（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．６３（ｍ，２Ｈ），１．６５−１．２８（ｍ，１０Ｈ），０．８９−０．８１（ｍ，３Ｈ）．
【００７２】
ＡＡ−９の合成
【化２９】
0006046694.tif 000030
ＡＡ−６（３８ｇ、１１６．７５ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃのメタノール（２００ｍＬ）溶液を５０ＰＳＩの水素下、５０℃で２４時間水素化した。反応混合物を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物ＡＡ７（１７ｇ）を得た。
【００７３】
粗生成物をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２６．１７ｇ、２５９．１ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（８４．７ｇ、１９４．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をジクロロメタンと水との間で分配した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで、２０％酢酸エチル／石油エーテルで溶出して精製し、ＡＡ−８（１３ｇ）を無色油状物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ｐｐｍ  ４．０８−４．０３（ｂｒ，１Ｈ），３．６８（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５５（ｍ，２Ｈ），３．２０−２．９０（ｂｒ，１Ｈ），１．８０−１．７３（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．１７（ｍ，１５Ｈ），０．８５−０．８２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．
【００７４】
ＡＡ−８（４２ｇ、０．１８２ｍｏｌ）をジオキサン（２００ｍＬ）に溶解し、ジオキサン／ＨＣｌ（４Ｍ、２００ｍＬ）を０℃で添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を得た。ジクロロメタン／石油エーテル混合物（５０ｍＬ、１：１、ｖ／ｖ）を粗生成物に添加し、上清をデカントした。この手順を２回繰り返し、油状物、ＡＡ−９（２６．６ｇ）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ｐｐｍ  ８．０４（ｓ，３Ｈ），３．６０−３．４９（ｍ，２Ｈ），３．１６−３．１５（ｍ，１Ｈ），１．７１−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３３−１．２６（ｍ，４Ｈ），０．９０−０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．
【００７５】
ＡＡ−１０の製造
【化３０】
0006046694.tif 000031
ＡＡ−１０は、バレルアルデヒドの代わりにブチルアルデヒドを使用し、ＡＡ−９の製造に従って製造した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ｐｐｍ８．０７（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｂｒ，１Ｈ），３．５７−３．４５（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．１２（ｍ，１Ｈ），１．７０−１．６４（ｍ，２Ｈ），１．５６−１．４９（ｍ，２Ｈ），１．３８−１．３０（ｍ，２Ｈ），０．９０−０．８０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．
【００７６】
７４の製造
【化３１】
0006046694.tif 000032
工程１。３，４−ジメトキシ桂皮酸（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。この溶液にＮ２雰囲気下でラネーニッケルを添加した。反応混合物を水素雰囲気に暴露し、室温で１５時間撹拌した。珪藻土を充填したカートリッジで反応混合物を濾過し、濾液の溶媒を減圧留去した。残留物を次の工程にそのまま使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１１Ｈ１４Ｏ４の分析計算値：２１０．０９；実測値２０９［Ｍ−Ｈ］
【００７７】
【化３２】
0006046694.tif 000033
工程２。３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロピオン酸をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。ボランジメチルスルフィド錯体（２Ｍジエチルエーテル溶液、２０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。メタノールをゆっくり添加し、反応混合物を反応停止させた後、シリカを添加し、揮発性物質を減圧留去した。残留物をシリカで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、生成物を油状物として得た。これをそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１１Ｈ１６Ｏ３の分析計算値：１９６．１１；実測値１９５［Ｍ−Ｈ］
【００７８】
【化３３】
0006046694.tif 000034
工程３。３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロパン−１−オール（３．８ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．８ｍＬ、２７．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解した後、メタンスルホニルクロライド（１．５ｍＬ、１９．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜振盪した。揮発性物質を減圧留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、生成物を透明な油状物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．９１−２．０１（ｍ，２Ｈ），２．５８−２．６４（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７１−６．７６（ｍ，１Ｈ），６．８１−６．８９（ｍ，２Ｈ）
【００７９】
【化３４】
0006046694.tif 000035
工程４。Ｄ−４（４００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５１１ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）およびメタンスルホン酸３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロピル（４３０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のアセトン（５０ｍＬ）溶液を５０℃に１５時間加熱した。反応混合物を遠心分離機に入れ、上清をデカントした後、蒸発乾固した。残留物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。生成物を含入する画分をプールし、溶媒を減圧留去して、Ｄ−５を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２９Ｈ４４Ｎ４Ｏ７の分析計算値：５６０．３２；実測値５６１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８０】
【化３５】
0006046694.tif 000036
工程５。ｂｏｃで保護された化合物をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、６Ｍ  ＨＣｌイソプロパノール溶液（３ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。揮発性物質を減圧留去した。エーテル（５ｍＬ）を添加して、沈殿を生成し、７４を濾過により単離した後、真空オーブンで１５時間乾燥した。
【００８１】
７５の製造
【化３６】
0006046694.tif 000037
工程１。中間体Ｂ−２は、中間体Ｂ−１の製造について記載した方法に従って製造した。
【００８２】
工程２。Ｂ−２（１ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（５．４ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）溶液に、ＢＯＰ（２．０８ｇ、４．７１ｍｍｏｌ）を添加すると、反応混合物は透明になり、これを室温で１５分間撹拌した。ＡＡ−９（９１０ｍｇ、５．４３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で２日間撹拌した。揮発性物質を減圧留去し、残留物をシリカで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去した。粗製物をジクロロメタン（２ｍＬ）中で再構成した後、ＨＣｌジエチルエーテル溶液を添加して、ＨＣｌ塩を生成した。沈殿物を濾過により単離し、真空オーブンで乾燥して、化合物７５を得た。
【００８３】
７６の製造
【化３７】
0006046694.tif 000038
工程１。５００ｍＬのテフロン（ｔｅｆｌｏｎ）コート圧力容器内でアセトニトリル（２００ｍＬ）にＣ−１（２ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）、Ｌ−ノルバリノール（ｎｏｒｖａｌｉｎｏｌ）（１．７５ｇ、１７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（５．８５ｍＬ、３４ｍｍｏｌ）を溶解し、１３０℃に１５時間加熱した。混合物を室温に冷却し、揮発性物質を減圧留去し、粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、中間体Ｄ−６を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２の分析計算値：３０２．１７；実測値３０３［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８４】
【化３８】
0006046694.tif 000039
工程２。２５０ｍＬの丸底フラスコ内で無水酢酸（１００ｍＬ）にＤ−６（２ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）を入れ、これを４時間加熱還流した。揮発性物質を減圧留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、黄色油状物、Ｄ７を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２２Ｈ２８Ｎ４Ｏ５の分析計算値：４２８．２１；実測値４２９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８５】
【化３９】
0006046694.tif 000040
工程３。Ｄ−８は、中間体Ｄ−２の製造方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１５Ｈ２２Ｎ４Ｏ５の分析計算値：３３８．１６；実測値３３９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８６】
【化４０】
0006046694.tif 000041
工程４。中間体Ｄ−９は、実施例７５に記載の方法に従って中間体Ｄ−４から製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１５Ｈ２２Ｎ４Ｏ５の分析計算値：３３８．１６；実測値３３９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８７】
【化４１】
0006046694.tif 000042
工程５。化合物５の工程２に記載の方法に従ってＤ−９の脱保護を行い、７６を得た。
【００８８】
化合物７７の製造
【化４２】
0006046694.tif 000043
工程１。Ｄ−１０は、実施例５の製造方法に従ってＤ−４から製造し、シリカカラムでヘプタンから酢酸エチルへの勾配を用いて精製した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２７Ｈ３８Ｎ４Ｏ７の分析計算値：５３０．２７；実測値５３１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３７（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．５３−１．６２（ｍ，２Ｈ），３．４０−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．９５（ｍ，３Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），５．３３（ｓ，１Ｈ），７．４６−７．５２（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ）
【００８９】
【化４３】
0006046694.tif 000044
工程２。Ｄ−１０（２．１４ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）に溶解した。水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、５．８７ｍＬ、５．８７ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）を反応混合物に滴下し、沈殿した塩を濾過により除去し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を蒸発乾固し、粗製Ｄ−１１をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２１Ｈ３０Ｎ４Ｏ４の分析計算値：４０２．２３；実測値４０３［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９０】
【化４４】
0006046694.tif 000045
工程３。Ｄ−１１（１．５７ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、それにＨＣｌ（６Ｍイソプロパノール溶液、５０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。揮発性物質を減圧留去し、粗製物をシリカカラムで、ジクロロメタンから１０％ジクロロメタン／メタノールへの勾配を使用して精製し、７７を油状物として得たが、これは放置すると凝固した。
【００９１】
７８の製造
【化４５】
0006046694.tif 000046
工程１。Ｄ−４（０．５ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、３−ピリダジニルメタノール（１５８ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３７７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、ＤＩＡＤ（０．２８ｍＬ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下した。添加後、反応混合物を周囲温度で３時間撹拌した。溶媒を水（１０ｍＬ）で反応停止し、１０分間撹拌し、揮発性物質を減圧留去した。水層をジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせ、溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。最良の画分を合わせ、溶媒を減圧留去して、Ｄ−１２を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２３Ｈ３４Ｎ６Ｏ５の分析計算値：４７４．２６；実測値４７５［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９２】
【化４６】
0006046694.tif 000047
工程２。Ｄ−１１（６２０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、それにＨＣｌ（６Ｍイソプロパノール溶液、１０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。揮発性物質を減圧留去し、残留物を逆相クロマトグラフィーで精製し、７８を得た。
【００９３】
７９の製造
【化４７】
0006046694.tif 000048
工程１。５００ｍＬフラスコ内で、無水酢酸（３００ｍＬ）にＢ−１（３０ｇ、１３８ｍｍｏｌ）および硫酸（３ｍＬ）を混合し、この混合物を９０℃に３時間加熱した。反応を室温に冷却し、沈殿物を濾過により単離し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、５０℃で減圧乾燥して、白色固体、Ｂ−５を得た。
【００９４】
【化４８】
0006046694.tif 000049
工程２。４００ｍＬ  ｍｕｌｔｉｍａｘ反応器内で、アセトニトリル（２４４ｍＬ）にＢ−５（２１．８ｇ、８４ｍｍｏｌ）を混合し、この混合物を３０℃で、穏やかな窒素流下で撹拌した。塩化ホスホリル（１８．１４ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）を５分間にわたり滴下した。添加後、反応混合物を４５℃に加熱し、混合物を１５分間撹拌した後、ＤＩＰＥＡ（３３ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）を１．５時間にわたりゆっくり添加した。終了する（ＬＣ−ＭＳで監視）まで反応を４５℃で撹拌した。２Ｌフラスコ内で酢酸ナトリウム（６５
ｇ）の水（７３２ｍＬ）溶液を３５℃に加熱し、この溶液に反応混合物を５分間にわたり少量ずつ入れた（ｐｏｒｔｉｏｎｅｄ）。外部冷却浴で温度を３５〜４０℃に維持する。混合物を周囲温度に到達させ、１時間撹拌し続けた。沈殿物を濾過により単離し、水で洗浄し、５０℃で減圧乾燥し、Ｃ−２を固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１３Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ２の分析計算値：２７７．０６；実測値２７８［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ２．１１（ｓ，３Ｈ），５．３１（ｓ，２Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．５１（ｍ，２Ｈ），８．５９（ｓ，１Ｈ），１０．６５（ｓ，１Ｈ）
【００９５】
【化４９】
0006046694.tif 000050
工程３。中間体Ｃ−２（５．９ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）、メチル（２Ｓ）−２−アミノヘキサノエート（５．７９ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１４．８ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）溶液を４日間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧留去した。残留物をジクロロメタンに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を乾燥（硫酸マグネシウム）した後、シリカカラムでジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して直接精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、Ｄ−１３を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ４の分析計算値：３８６．２０；実測値３８７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９６】
【化５０】
0006046694.tif 000051
工程２。Ｄ−１３（３．７ｇ、９．５７ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、９．６ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）を反応混合物に滴下し、沈殿した塩を濾過により除去し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分を合わせて、溶媒を減圧留去し、
Ｄ−１４を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ２６Ｎ４Ｏ３の分析計算値：３５８．２０；実測値３５９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９７】
【化５１】
0006046694.tif 000052
工程３。Ｄ−１５は、中間体Ｄ−２について記載した方法に従って製造した。精製することなく次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１２Ｈ２０Ｎ４Ｏ３の分析計算値：２６８．１５；実測値２６９［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９８】
【化５２】
0006046694.tif 000053
工程４。Ｄ−１５（２１０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（７６５ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍＬ）に混合し、この混合物を撹拌しながら６０℃に加熱した後、５−（クロロメチル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール（１１３ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。固体を濾過により除去し、溶媒を減圧留去した。粗製Ｄ−１６をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１８Ｈ２８Ｎ６Ｏ３の分析計算値：３７６．２２；実測値３７７［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９９】
【化５３】
0006046694.tif 000054
工程５。３０ｍＬガラス管に、Ｄ−１６（２９５ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびＮａＯＣＨ３（３０％メタノール溶液、２ｍＬ）およびメタノール（２０ｍＬ）を入れ、混合物を６０℃で終夜撹拌した。反応混合物を逆相液体クロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ
Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  １０ｍｍ、３０×１５０ｍｍ。移動相０．２５％ＮＨ４ＯＡｃ水溶液、メタノール）で精製し、７９を遊離塩基として得た。
【０１００】
８０の製造
【化５４】
0006046694.tif 000055
工程１。中間体Ｄ−１７は、Ｄ−１５のアルキル化によるＤ−１６に使用した方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ２４Ｎ６Ｏ３の分析計算値：３８４．１９；実測値３８５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０１】
【化５５】
0006046694.tif 000056
工程２。３０ｍＬガラス管内で、Ｄ−１７（３０１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびＮａＯＣＨ３（３０％メタノール溶液、２ｍＬ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、６０℃で終夜撹拌した。水１０ｍＬを反応混合物に添加し、それを６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を逆相液体クロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ
１０ｍｍ、３０×１５０ｍｍ。移動相０．２５％ＮＨ４ＯＡｃ水溶液、メタノール）で精製し、８０を粉末として得た。
【０１０２】
８１の製造
【化５６】
0006046694.tif 000057
中間体Ｃ−２（２ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、ＡＡ−９（３．０２ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７５ｍＬ）溶液を６時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧留去した。残留物をジクロロメタンに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層をシリカカートリッジにロードし、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を適用した。生成物を含有する画分を蒸発乾固し、白色粉末、Ｄ−１８を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２０Ｈ２８Ｎ４Ｏ３の分析計算値：３７２．２２；実測値３７３［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．７７−０．９２（ｍ，３Ｈ）１．１５−１．３６（ｍ，４Ｈ）１．４２−１．７２（ｍ，４Ｈ）２．１２（ｓ，３Ｈ）３．３５−３．４２（ｍ，２Ｈ）４．１１−４．２４（ｍ，１Ｈ）４．３５−４．５２（ｍ，１Ｈ）６．４２（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）７．４２（ｓ，１Ｈ）９．６３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【０１０３】
【化５７】
0006046694.tif 000058
Ｄ−１９は、中間体Ｄ−２に使用した方法に従って、Ｄ−１８から製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１３Ｈ２２Ｎ４Ｏ３の分析計算値：２８２．１；実測値２８３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０４】
【化５８】
0006046694.tif 000059
Ｄ−２０は、Ｄ−１７の製造方法に従ってＤ−１９から製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ３０Ｎ６Ｏ３の分析計算値：３９０．２４；実測値３９１［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０５】
【化５９】
0006046694.tif 000060
８１は、化合物７９の製造方法に従ってＤ−２０から製造した。
【０１０６】
８２の製造
【化６０】
0006046694.tif 000061
工程１。中間体Ｂ−３は、Ｂ−１について記載した方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１３Ｈ１５Ｎ３Ｏ２の分析計算値：２４５．１２；実測値２４６［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．７９−１．９３（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．５４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．１１−７．２１（ｍ，３Ｈ），７．２２−７．２９（ｍ，３Ｈ），１１．４６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）
【０１０７】
【化６１】
0006046694.tif 000062
工程２。２５０ｍＬの丸底フラスコ内で、ＰＯＣｌ３（１５０ｍＬ）にＢ−３（１５ｇ、６１．１５ｍｍｏｌ）を混合し、この混合物を加熱還流し、２時間撹拌した。反応を冷却し、溶媒を減圧留去した。残留画分をジイソプロピルエーテルでトリチュレートした。生成した沈殿物を濾過により単離し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、５０℃で減圧乾燥して、固体、Ｃ−３を得、これをそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１３Ｈ１４ＣｌＮ３Ｏの分析計算値：２６３．０８；実測値２６４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０８】
【化６２】
0006046694.tif 000063
工程３。２０ｍＬ管に、Ｃ−３（０．４５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、Ｌ−２−アミノヘキサン酸−メチルエステルＨＣｌ（０．４８ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．１８ｍＬ、６．８２ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（５ｍＬ）を入れた。管を密封し、マイクロ波で１．５時間１２０℃で加熱した。反応を冷却し、溶媒を減圧留去した。
【０１０９】
粗混合物を分取ＨＰＬＣにより（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）で精製した。移動相（０．２５％ＮＨ４ＯＡｃ水溶液、メタノール）、所望の画分を回収し、蒸発乾固した。残留画分をジクロロメタン／メタノールの混合物に溶解し、酸変性固相抽出カートリッジ（ＳＣＸ）上に注いだ。ＮＨ３の７Ｎメタノール溶液を使用して、生成物を溶離した。回収した溶液を減圧濃縮し、所望の固体、８２を得た。
【０１１０】
８３の製造
【化６３】
0006046694.tif 000064
工程１。中間体Ｂ−４は、Ｂ−１の製造方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１４Ｈ１７Ｎ３Ｏ３の分析計算値：２７５．１３；実測値２７６［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ３．６３（ｄｄ，Ｊ＝５．４，３．９Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝５．４，３．６Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），６．３３（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．２２−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３６（ｍ，４Ｈ），１０．７１−１１．５８（ｍ，１Ｈ）
【０１１１】
【化６４】
0006046694.tif 000065
工程２。２５０ｍＬの丸底フラスコに、Ｂ−４（１０ｇ、３８．２７ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ３（７５ｍＬ）を入れた。混合物を加熱還流し、５時間撹拌した。反応混合物を室温に到達させ、１５時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。粗製Ｃ−４をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１２Ｈ１２ＣｌＮ３Ｏ２の分析計算値：２６５．０６；実測値２６６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１２】
【化６５】
0006046694.tif 000066
工程３。５０ｍＬ管に、アセトニトリル（４０ｍＬ）中のＣ−４（１０ｇ、３５．７５ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルアミン（１０．６ｍＬ、１０７．２５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３０．８ｍＬ、１７８．７５ｍｍｏｌ）を入れた。混合物をマイクロ波照射して１２０℃に３時間加熱した。合わせた反応混合物を減圧濃縮し、残留油状物をジクロロメタンに溶解し、１Ｎ  ＨＣｌおよび水で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去し、赤茶色の泡状物、８３を得た。
【０１１３】
８４の製造
【化６６】
0006046694.tif 000067
工程１。５００ｍＬの丸底フラスコに、８３（１３．５ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ無水物（２７．９４ｇ、１２８ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１５０ｍＬ）を入れた。黄色溶液を１６時間還流撹拌した。溶媒を減圧留去した。残留画分をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および水で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去して、油状物、Ｄ−２０を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２２Ｈ３２Ｎ４Ｏ４の分析計算値：４１６．２４；実測値４１７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１４】
【化６７】
0006046694.tif 000068
工程２。１Ｌエルレンマイヤーに、Ｎ２気流下でメタノール（３５０ｍＬ）に１０％Ｐｄ／Ｃ（４ｇ）を懸濁した後、Ｄ−２０（１４．３ｇ、３４．３３ｍｍｏｌ）を添加した。１当量の水素が吸収されるまで、混合物を水素雰囲気下、５０℃で撹拌した。充填されたデカライトで濾過することにより触媒を除去した。濾液の溶媒を減圧留去し、油状物、Ｄ−２１を得た。残留物をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１５Ｈ２６Ｎ４Ｏ４の分析計算値：３２６．２０；実測値３２７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１５】
【化６８】
0006046694.tif 000069
工程３。１Ｌ丸底フラスコに、Ｄ−２１（８．７ｇ、２６．６６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．４１ｍＬ、５３．３１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３００ｍＬ）溶液を周囲温度で撹拌し、メタンスルホニルクロライド（３．１ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。粗製物を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機層を合わせ、乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を蒸発乾固し、Ｄ−２２を油状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１６Ｈ２８Ｎ４Ｏ６Ｓの分析計算値：４０４．１７；実測値４０５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１６】
【化６９】
0006046694.tif 000070
工程４。３０ｍＬガラス管に、アセトニトリル（１０ｍＬ）中の４−ヒドロキシピリジン（９４ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（０．８ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）の混合物を入れた。バイアルを密封し、周囲温度で１時間振盪した。Ｄ−２２（４００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液として反応混合物に添加し、室温でさらに１８時間振盪した。炭酸セシウム（３２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１日間振盪した。溶媒を減圧留去し、粗製物をジクロロメタン／メタノール、９５／５の混合物で処理し、１時間振盪した後、充填したシリカ２ｇで濾過した。濾液を減圧濃縮し、Ｄ−２３をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２０Ｈ２９Ｎ５Ｏ４の分析計算値：４０３．２２；実測値４０４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１７】
【化７０】
0006046694.tif 000071
工程５。７８の脱保護に使用した方法を用いてＤ−２３を脱保護し、８４を得た。
【０１１８】
８５の製造
【化７１】
0006046694.tif 000072
工程１。磁気撹拌子を備えた２５０ｍＬ丸底フラスコに、アセトニトリル（２０ｍＬ）中のＤ−４（０．３５ｇ、５．２３ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（０．８９ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を入れた。混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。ハロゲン化アルキル（０．１９ｇ、１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液を添加し、反応混合物を室温で１日間撹拌した。反応を終了し、塩を濾過により除去した。濾液を減圧濃縮し、粗製物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、中間体Ｄ−２４を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２４Ｈ３７Ｎ７Ｏ７の分析計算値：５３５．２８；実測値５３６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１９】
【化７２】
0006046694.tif 000073
工程２。１００ｍＬエルレンマイヤーフラスコに、窒素ガスのブランケット下、チオフェン（０．２５ｍＬ）およびメタノール（２０ｍＬ）にＰｔ／Ｃ、５％（１００ｍｇ）を懸濁した後、Ｄ−２４（１３０ｍｇ、０．２４  ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃、水素雰囲気下で撹拌した。充填されたデカライトで濾過することにより触媒を除去した。濾液の溶媒を減圧留去し、Ｄ−２５を油状物として得、これをそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２４Ｈ３９Ｎ７Ｏ５の分析計算値：５０５．３０；実測値５０６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２０】
【化７３】
0006046694.tif 000074
工程３。７８の製造に使用した方法に従って中間体Ｄ−２５を脱保護し、８５を得た。
【０１２１】
８６の製造
【化７４】
0006046694.tif 000075
工程１。１００ｍＬの丸底フラスコに、アジ化ナトリウム（６．８５ｇ、１０３．７６ｍｍｏｌ）の水（１２．５ｍＬ）溶液、次いでピルビン酸クロロメチル（１０．６ｇ、７０．３８ｍｍｏｌ）を入れ、９０℃で１６時間激しく撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去し、Ａ−２を油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｃ６Ｈ１１Ｎ３Ｏ２の分析計算値：１５７．０９；実測値１５８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２２】
【化７５】
0006046694.tif 000076
工程２。２５ｍＬ管に、Ｄ−２６（１００ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）、Ａ−２（３７．９ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）、ｔ−ブタノール（２．５ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）を入れた。管を密封し、混合物を周囲温度で撹拌した。硫酸銅（ＩＩ）五水和物（３ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＬ−アスコルビン酸ナトリウム塩（１５．５ｍｇ、０．
０７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、水（２．５ｍＬ）を添加した。沈殿物を濾過により単離し、水で洗浄し、６０℃で減圧乾燥し、白色粉末、Ｄ−２７を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２７Ｈ４３Ｎ７Ｏ７の分析計算値：５７７．３２；実測値５７８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２３】
【化７６】
0006046694.tif 000077
工程３。１００ｍＬの丸底フラスコ内で、ＨＣｌ（５ｍＬ  ６Ｍイソプロパノール溶液）およびジクロロメタン（５ｍＬ）にＤ−２７（０．１ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を混合し、この混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応を６５℃に加熱し、さらに１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。
【０１２４】
粗生成物を逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）で精製した。移動相（０．２５％  ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、メタノール）、所望の画分を回収し、蒸発させ、メタノールに溶解し、ＨＣｌの２Ｍエーテル溶液で処理した。固体を濾過により単離し、８６をＨＣｌ塩として得た。
【０１２５】
８７の製造
【化７７】
0006046694.tif 000078
工程１。１００ｍＬの丸底フラスコに、Ｃ−２（５００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、ＡＡ−１０（６９２ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７５ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）溶液を入れた。混合物を撹拌しながら８０℃に１６時間加熱した。反応を冷却し、溶媒を減圧留去した。粗製物をジクロロメタンに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を除去し、油状物、Ｄ−２８を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ２６Ｎ４Ｏ３の分析計算値：３５８．２０；実測値３５９［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．８５（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，３Ｈ）１．１９−１．３７（ｍ，２Ｈ）１．３８−１．５３（ｍ，１Ｈ）１．５３−１．７５（ｍ，３Ｈ）２．１３（ｓ，３Ｈ）３．３８−３．４８（ｍ，２Ｈ）４．１９−４．３１（ｍ，１Ｈ）５．１６（ｓ，２Ｈ）６．６９（ｄ，Ｊ＝９．１５Ｈｚ，１Ｈ）７．２９−７．４１（ｍ，３Ｈ）７．４５−７．５３（ｍ，２Ｈ）７．６６（ｓ，１Ｈ）９．７７（ｓ，１Ｈ）
【０１２６】
【化７８】
0006046694.tif 000079
工程２。Ｄ−２９は、Ｄ−２１の製造に使用した方法に従って製造した。ＴＨＦを添加し、Ｄ−２９の溶解性を増加させた。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１２Ｈ２０Ｎ４Ｏ３の分析計算値：２６８．１５；実測値２６９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２７】
【化７９】
0006046694.tif 000080
工程３。２５０ｍＬの丸底フラスコ内で、ＤＭＦ（８０ｍＬ）中のＤ−２９（５ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１８．２ｇ、５５．９ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。混合物を６０℃に加熱し、２−クロロメチル−３，４−ジメトキシピリジン塩酸塩（３．９７ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。反応を冷却し、塩を濾過により除去した。反応混合物を減圧濃縮し、Ｄ−３０をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ２０Ｈ２９Ｎ５Ｏ５の分析計算値：４１９．２２；実測値４２０［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．８３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．１８−１．３２（ｍ，２Ｈ），１．４１−１．７１（ｍ，４Ｈ），２
．１４（ｓ，３Ｈ），３．３４−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），４．１７−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），９．７５（ｓ，１Ｈ）
【０１２８】
【化８０】
0006046694.tif 000081
工程４。８７は、７９の製造に使用したのと同じ方法に従って、中間体Ｄ−１６から製造した。８７を、逆相クロマトグラフィー（Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＨＳ  ＢＤＳ、移動相（０．２５％炭酸水素アンモニウム水溶液９０％、アセトニトリル１０％から、０．２５％炭酸水素アンモニウム水溶液０％、アセトニトリル１００％への勾配）で精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、メタノール中で再構成し、ＨＣｌの２Ｍエーテル溶液で処理した後、減圧濃縮し、白色固体、８７のＨＣｌ塩を得た。
【０１２９】
【化８１】
0006046694.tif 000082
逆相液体クロマトグラフィーで８７のＨＣｌ塩を単離すると、同時に８８が低収量で単離された。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して、白色固体、８８を得た。
【０１３０】
８９の製造
【化８２】
0006046694.tif 000083
工程１。１００ｍＬの丸底フラスコに、ＡＡ−８（２ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（６ｍＬ）、イソシアン酸エチル（１．６ｍＬ、１０．３８ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（２１ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、ＡＡ−１２をさらに精製することなく後の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１５Ｈ３０Ｎ２Ｏ４の分析計算値：３０２．２２；実測値３０３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３１】
【化８３】
0006046694.tif 000084
工程２。１００ｍＬの丸底フラスコに、粗製ＡＡ−１２（２．６１ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（３０ｍＬ）を入れた。この溶液に、ＨＣｌ（２０ｍＬ、４Ｍジオキサン溶液）を添加した。反応を室温で３時間撹拌した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１０Ｈ２２Ｎ２Ｏ２の分析計算値：２０２．１７；実測値２０３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３２】
【化８４】
0006046694.tif 000085
工程３。磁気撹拌子を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−ピリミジン（５００ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ）、無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）、ＡＡ−１３（１．２７ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）、ＤＢＵ（２．１２ｍＬ、１４．１７ｍｍｏｌ）、およびＢＯＰ（１．９６ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で３０分間、その後、５０℃で１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、残留物を飽和食塩水と酢酸エチルとの間で分配した。有機層を合わせ、乾燥し（硫酸マグネシウム）、
固体を濾過により除去して、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物を逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ。移動相０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、メタノール）で精製し、最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、８９を得た。
【０１３３】
２６４の製造
【化８５】
0006046694.tif 000086
工程１。ＡＡ−１４は、ＡＡ−１０の製造手順に従い、適切な出発アルデヒドを使用して製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ７Ｈ１７ＮＯの分析計算値：１３１．１３；実測値１３２［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．８１−０．８９（ｍ，６Ｈ），１．１５−１．２５（ｍ，２Ｈ），１．３３−１．４７（ｍ，１Ｈ），１．５４−１．６９（ｍ，２Ｈ），２．７１（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ），２．８８−２．９８（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．８０（ｍ，２Ｈ）
【０１３４】
【化８６】
0006046694.tif 000087
工程２。Ｃ−５は、Ｃ−２の製造に使用した方法に従って、入手可能な出発原料から製造した。粗製物をさらに精製することなく使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ５Ｈ６ＣｌＮ３Ｏの分析計算値：１５９．０２；実測値１６０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３５】
【化８７】
0006046694.tif 000088
工程３。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１４と化合させ、２６４を得た。
【０１３６】
２７８の製造
【化８８】
0006046694.tif 000089
工程１。ＡＡ−１５は、ＡＡ−１０の製造手順に従い、適切な出発アルデヒドを使用して製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ７Ｈ１７ＮＯの分析計算値：１３１．１３；実測値１３２［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．８１−０．８９（ｍ，６Ｈ），１．０５−１．２０（ｍ，１Ｈ），１．２７−１．４０（ｍ，１Ｈ），１．４３−１．７７（ｍ，３Ｈ），３．０５−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．４４−３．５７（ｍ，２Ｈ），４．８２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１８．６Ｈｚ，２Ｈ）
【０１３７】
【化８９】
0006046694.tif 000090
工程２。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１５と化合させ、２７８を得た。
【０１３８】
２９５の製造
【化９０】
0006046694.tif 000091
工程１。Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２０１０，Ｖｏｌ．１１０，Ｎｏ．６，３６００−３７４０に概説する手順に従って、ＡＡ−１６を製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ８Ｈ１７Ｎの分析計算値：１２７．１４；実測値１２８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３９】
【化９１】
0006046694.tif 000092
工程２。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１６と化合させ、２９５を得た。
【０１４０】
３０４の製造
【化９２】
0006046694.tif 000093
工程１。Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２０１０，Ｖｏｌ．１１０，Ｎｏ．６，３６００−３７４０に概説する手順に従って、ＡＡ−１７を製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ８Ｈ１９ＮＯの分析計算値：１４５．１５；実測値１４６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４１】
【化９３】
0006046694.tif 000094
工程２。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１７と化合させ、３０４を得た。
【０１４２】
【表１】
0006046694.tif 000095
【０１４３】
【表２】
0006046694.tif 000096
【０１４４】
【表３】
0006046694.tif 000097
【０１４５】
【表４】
0006046694.tif 000098
【０１４６】
【表５】
0006046694.tif 000099
【０１４７】
【表６】
0006046694.tif 000100
【０１４８】
【表７】
0006046694.tif 000101
【０１４９】
【表８】
0006046694.tif 000102
【０１５０】
【表９】
0006046694.tif 000103
【０１５１】
【表１０】
0006046694.tif 000104
【０１５２】
【表１１】
0006046694.tif 000105
【０１５３】
【表１２】
0006046694.tif 000106
【０１５４】
【表１３】
0006046694.tif 000107
【０１５５】
【表１４】
0006046694.tif 000108
【０１５６】
【表１５】
0006046694.tif 000109
【０１５７】
【表１６】
0006046694.tif 000110
【０１５８】
【表１７】
0006046694.tif 000111
【０１５９】
【表１８】
0006046694.tif 000112
【０１６０】
【表１９】
0006046694.tif 000113
【０１６１】
【表２０】
0006046694.tif 000114
【０１６２】
【表２１】
0006046694.tif 000115
【０１６３】
【表２２】
0006046694.tif 000116
【０１６４】
【表２３】
0006046694.tif 000117
【０１６５】
【表２４】
0006046694.tif 000118
【０１６６】
【表２５】
0006046694.tif 000119
【０１６７】
【表２６】
0006046694.tif 000120
【０１６８】
【表２７】
0006046694.tif 000121
【０１６９】
【表２８】
0006046694.tif 000122
【０１７０】
【表２９】
0006046694.tif 000123
【０１７１】
【表３０】
0006046694.tif 000124
【０１７２】
【表３１】
0006046694.tif 000125
【０１７３】
【表３２】
0006046694.tif 000126
【０１７４】
【表３３】
0006046694.tif 000127
【０１７５】
【表３４】
0006046694.tif 000128
【０１７６】
【表３５】
0006046694.tif 000129
【０１７７】
【表３６】
0006046694.tif 000130
【０１７８】
【表３７】
0006046694.tif 000131
【０１７９】
【表３８】
0006046694.tif 000132
【０１８０】
【表３９】
0006046694.tif 000133
【０１８１】
【表４０】
0006046694.tif 000134
【０１８２】
【表４１】
0006046694.tif 000135
【０１８３】
【表４２】
0006046694.tif 000136
【０１８４】
【表４３】
0006046694.tif 000137
【０１８５】
【表４４】
0006046694.tif 000138
【０１８６】
【表４５】
0006046694.tif 000139
【０１８７】
【表４６】
0006046694.tif 000140
【０１８８】
【表４７】
0006046694.tif 000141
【０１８９】
【表４８】
0006046694.tif 000142
【０１９０】
【表４９】
0006046694.tif 000143
【０１９１】
【表５０】
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【０１９２】
【表５１】
0006046694.tif 000145
【０１９３】
【表５２】
0006046694.tif 000146
【０１９４】
【表５３】
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【０１９５】
【表５４】
0006046694.tif 000148
【０１９６】
【表５５】
0006046694.tif 000149
【０１９７】
【表５６】
0006046694.tif 000150
【０１９８】
【表５７】
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【０１９９】
【表５８】
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【０２００】
【表５９】
0006046694.tif 000153
【０２０１】
【表６０】
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【０２０２】
【表６１】
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【０２０３】
【表６２】
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【０２０４】
【表６３】
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【０２０５】
【表６４】
0006046694.tif 000158
【０２０６】
分析方法。
化合物は全て、ＬＣ−ＭＳで特性評価した。次のＬＣ−ＭＳ方法を使用した：
【０２０７】
方法Ａ。ＰＤＡ検出器（２１０〜４００ｎｍ）およびデュアルモードイオン源ＥＳ＋／−を有するＷａｔｅｒｓ  ＳＱＤを備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ。使用したカラムは、Ｈａｌｏ  Ｃ１８、２．７μｍ、２．１×５０ｍｍであり、これを５０℃に加熱した。ギ酸水溶液（０．１％）９５％／アセトニトリル５％から、アセトニトリル１００％への勾配を１．５分間にわたり傾斜させ、０．６分間維持した後、ギ酸水溶液（０．１％）１００％に０．５分間戻した。流速は０．６ｍＬ／分であった。
【０２０８】
【表６５】
0006046694.tif 000159
【０２０９】
【表６６】
0006046694.tif 000160
【０２１０】
方法Ｄ。逆相ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）を、架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ，２．１×５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ）で流速０．８ｍｌ／分にて行った。２種類の移動相（１０ｍＭ酢酸アンモニウムＨ２Ｏ溶液／アセトニトリル、９５／５；移動相Ｂ：アセトニトリル）を使用して、Ａ９５％およびＢ５％から１．３分でＡ５％およびＢ９５％への勾配条件を実施し、０．７分間維持した。注入量０．７５μｌを使用した。コーン電圧は、正イオンモードでは３０Ｖであり、負イオンモードでは３０Ｖであった。
【０２１１】
方法Ｅ。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘカラム（ＸＢ−Ｃ１８  ５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．２．６ｕ）を使用し、３５℃に維持。ＭＳ検出：ＡＰＩ−ＥＳ正イオン化モード、質量範囲１００〜１２００。ＰＤＡ検出（λ＝１９０〜４００ｎｍ）。２μＬ注入で次の勾配を使用した：
【０２１２】
【表６７】
0006046694.tif 000161
【０２１３】
方法Ｆ。ＹＭＣ  ＯＤＳ−ＡＱ  Ｃ−１８；５０×４．６ｍｍ、ＩＤ＝３μｍを使用し、３５℃に維持。ＭＳ検出：ＡＰＩ−ＥＳ正イオンモード、質量範囲１００〜１４００。ＰＤＡ検出（λ＝１９０〜４００ｎｍ）。２μＬ注入で次の勾配を使用した：
【０２１４】
【表６８】
0006046694.tif 000162
【０２１５】
方法Ｇ。脱気装置付きクォータナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン（４０
℃に設定）を備えるＡｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ２７９０（Ｗａｔｅｒｓ）システム。カラムからの流れをＭＳ分光計に分岐した。ＭＳ検出器はエレクトロスプレーイオン源と共に構成された。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン源温度は１４０℃に維持した。窒素をネブライザーガスとして使用した。Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム（３．５μｍ，４．６×１００ｍｍ）、流速１．６ｍＬ／分。３種類の移動相（移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム９５％＋アセトニトリル５％；移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相Ｃ：メタノール）を使用して、Ａ１００％から６．５分でＢ５０％およびＣ５０％に、０．５分でＢ１００％に変化させ、１分間Ｂ１００％の勾配条件を実施し、１．５分間Ａ１００％と再平衡化させた。１０μｌの注入量を使用した。
【０２１６】
方法Ｈ。逆相ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）を架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ，２．１×５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ）で、流速０．８  ｍＬ／分にて行った。２種類の移動相（移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウムＨ２Ｏ溶液／アセトニトリル、９５／５；移動相Ｂ：アセトニトリル）を使用して、Ａ９５％およびＢ５％から１．３分でＡ５％およびＢ９５％に変化させる勾配条件を実施し、０．２分間維持した。注入量０．５μｌを使用した。コーン電圧は、正イオンモードでは１０Ｖであり、負イオンモードでは２０Ｖであった。
【０２１７】
式（Ｉ）の化合物の生物活性
生物学的アッセイの説明
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８活性の評価
ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構成体で一過性トランスフェクションを行ったＨＥＫ２９３細胞を使用する細胞レポーターアッセイで、化合物のヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８活性化能力を評価した。一例では、ＴＬＲ発現構成体は、各野生型配列、またはＴＬＲの第２のロイシンリッチリピートに欠失がある突然変異体配列を発現する。このような突然変異ＴＬＲタンパク質は、アゴニスト活性化をより受け易いことが以前示された（米国特許第７４９８４０９号明細書）。
【０２１８】
簡潔に言えば、ＨＥＫ２９３細胞を培養培地（１０％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミンを補ったＤＭＥＭ）中で増殖させた。１０ｃｍ皿内で細胞のトランスフェクションを行うために、トリプシン−ＥＤＴＡで細胞を剥離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（７５０ｎｇ）、ＮＦκＢ−ｌｕｃプラスミド（３７５ｎｇ）およびトランスフェクション試薬の混合物でトランスフェクションを行い、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で４８時間インキュベートした。次いで、トランスフェクション細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、ＰＢＳ中で洗浄し、１．６７×１０５細胞／ｍＬの密度になるように培地に再懸濁した。次いで、４％ＤＭＳＯ中の化合物１０μＬが既に存在する３８４ウェルプレートの各ウェルに細胞３０マイクロリットルを分注した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、Ｓｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）１５μｌを各ウェウルに添加することによりルシフェラーゼ活性を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを行った。クワドルプリケート（ｑｕａｄｒｕｐｌｉｃａｔｅｓ）で行った測定から用量反応曲線を生成した。アッセイの標準偏差を少なくとも２倍上回る効果をもたらす濃度と定義される最低有効濃度（ＬＥＣ）値を各化合物について測定した。
【０２１９】
３８４ウェルプレート内で、同様の一連の希釈を行った化合物を、ＣＭＶ−ＴＬＲ７構成体単独（１．６７×１０５細胞／ｍＬ）でトランスフェクションを行った細胞１ウェル当たり３０μＬと共に使用して、化合物の毒性を並行測定した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１ウェル当たりＡＴＰ  ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）１５μＬを添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取ることにより、細胞生存度を測定した。データ
はＣＣ５０として報告した。
【０２２０】
ＨＣＶレプリコン複製の抑制
ヒトＴＬＲ７を活性化すると、ヒト血液中に存在する血漿細胞様樹枝状細胞によるインターフェロンの堅調な産生が起こる。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から調整培地でインキュベートした時のＨＣＶレプリコンシステムの抗ウイルス活性を調べることにより、化合物のインターフェロン誘導能力を評価した。ＨＣＶレプリコンアッセイは、Ｌｏｈｍａｎｎら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９９）２８５：１１０−１１３；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００３）７７：３００７−１５  ３０１９）により記載のバイシストロニックな発現構成体に基づき、Ｋｒｉｅｇｅｒら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５：４６１４−４６２４）により記載された変更を行った。アッセイは、レポーター遺伝子（ホタル−ルシフェラーゼ）および選択可能なマーカー遺伝子（ｎｅｏＲ、ネオマイシンリン酸転移酵素）により始まる、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）由来の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）から翻訳されるＨＣＶ１ｂ型の野生型ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域を含むバイシストロニックな発現構成体をコードするＲＮＡを有する、安定トランスフェクション細胞株Ｈｕｈ−７  ｌｕｃ／ｎｅｏを使用した。構成体は、ＨＣＶ１ｂ型由来の５’および３’ＮＴＲ（非翻訳領域）に隣接する。Ｇ４１８（ｎｅｏＲ）の存在下でのレプリコン細胞の継代培養は、ＨＣＶ  ＲＮＡの複製に依存する。とりわけルシフェラーゼをコードする、ＨＣＶ  ＲＮＡを自律的に且つ高レベルに複製する安定トランスフェクションレプリコン細胞を、調整細胞培養培地のプロファイリングに使用した。
【０２２１】
簡潔に言えば、ＰＢＭＣは、標準的Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離手順を使用して、少なくとも２つのドナーのバフィーコートから製造した。単離されたＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清を補ったＲＰＭＩ培地に再懸濁し、化合物（全量７０μＬ）の入った３８４ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェルを分注した。終夜インキュベートした後、３０μＬ中２．２×１０３レプリコン細胞／ウェルの入った（前日に播種した）３８４ウェルプレートに上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイすることにより複製を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定した。Ｈｕｈ７−ｌｕｃ／ｎｅｏ細胞に対する各化合物の抑制活性を、ＥＣ５０値として報告したが、これはＰＢＭＣに適用するとルシフェラーゼ活性が５０％低下する化合物濃度と定義され、これはまた、所定量のＰＢＭＣ培養培地を移した時のレプリコンＲＮＡの複製の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。
【０２２２】
式（Ｉ）の化合物の生物活性。前述のＨＥＫ  ２９３  ＴＯＸアッセイで、化合物は全て＞２４ｕＭのＣＣ５０を示した。
【０２２３】
ＩＳＲＥプロモーターエレメントの活性化
ＰＢＭＣから調整培地によるインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）の活性化を測定することにより、化合物のＩＦＮ−Ｉ誘導能力も評価した。配列ＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＣＴのＩＳＲＥエレメントはＳＴＡＴ１−ＳＴＡＴ２−ＩＲＦ９転写因子に対する応答性が高く、それはＩＦＮ−Ｉがその受容体ＩＦＮＡＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰＴ３３７２−５Ｗ）に結合すると活性化される。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のプラスミドｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃ（ｒｅｆ．６３１９１３）は、このＩＳＲＥエレメントを５コピー、その後、ホタルルシフェラーゼＯＲＦを含有する。ｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃで安定トランスフェクションを行ったＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ）は、調整ＰＢＭＣ細胞培養培地のプロファイルに合うように樹立された。
【０２２４】
簡潔に言えば、ＰＢＭＣは、標準的Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離手順を使用して、少なくとも
２つのドナーのバフィーコートから製造された。単離されたＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清を補ったＲＰＭＩ培地に再懸濁し、化合物（全量７０μＬ）の入った３８４ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェルを分注した。終夜インキュベートした後、３０μＬ中５×１０３ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞／ウェルの入った（前日に播種した）３８４ウェルプレートに上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイすることによりＩＳＲＥエレメントの活性を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定した。ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞に対する各化合物の刺激活性をＬＥＣ値として報告したが、これはＰＢＭＣに適用するとアッセイの標準偏差を少なくとも２倍上回るルシフェラーゼ活性が得られる化合物濃度と定義された。ＬＥＣはまた、所定量のＰＢＭＣ培養培地を移した時のＩＳＲＥ活性の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。
【０２２５】
所与の化合物について、このアッセイから得られたＬＥＣ値は、「ＨＣＶ複製抑制のアッセイ」から得られたＥＣ５０値と同じ範囲であった。従って、２つのアッセイのどちらかで測定された、ＰＢＭＣでＩＦＮ−Ｉを誘導する化合物の能力を比較することが可能である。
【０２２６】
【表６９】
0006046694.tif 000163
【０２２７】
【表７０】
0006046694.tif 000164
【０２２８】
【表７１】
0006046694.tif 000165
【０２２９】
【表７２】
0006046694.tif 000166
【０２３０】
【表７３】
0006046694.tif 000167
【０２３１】
【表７４】
0006046694.tif 000168
【０２３２】
【表７５】
0006046694.tif 000169
【０２３３】
【表７６】
0006046694.tif 000170
【０２３４】
【表７７】
0006046694.tif 000171
【０２３５】
【表７８】
0006046694.tif 000172
【０２３６】
【表７９】
0006046694.tif 000173
【０２３７】
【表８０】
0006046694.tif 000174
【０２３８】
【表８１】
0006046694.tif 000175
【０２３９】
【表８２】
0006046694.tif 000176
【０２４０】
【表８３】
0006046694.tif 000177
【０２４１】
【表８４】
0006046694.tif 000178
【０２４２】
【表８５】
0006046694.tif 000179
【０２４３】
【表８６】
0006046694.tif 000180
【０２４４】
【表８７】
0006046694.tif 000181
【０２４５】
【表８８】
0006046694.tif 000182
【０２４６】
【表８９】
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【０２４７】
【表９０】
0006046694.tif 000184
【０２４８】
【表９１】
0006046694.tif 000185
【０２４９】
【表９２】
0006046694.tif 000186
【０２５０】
【表９３】
0006046694.tif 000187
【０２５１】
【表９４】
0006046694.tif 000188
【０２５２】
【表９５】
0006046694.tif 000189
【０２５３】
【表９６】
0006046694.tif 000190
【０２５４】
【表９７】
0006046694.tif 000191
【０２５５】
【表９８】
0006046694.tif 000192
【０２５６】
【表９９】
0006046694.tif 000193
【０２５７】
【表１００】
0006046694.tif 000194
【０２５８】
【表１０１】
0006046694.tif 000195
【０２５９】
【表１０２】
0006046694.tif 000196
【０２６０】
【表１０３】
0006046694.tif 000197
【０２６１】
【表１０４】
0006046694.tif 000198
【０２６２】
【表１０５】
0006046694.tif 000199
【０２６３】
【表１０６】
0006046694.tif 000200
【０２６４】
【表１０７】
0006046694.tif 000201
【０２６５】
【表１０８】
0006046694.tif 000202
【０２６６】
【表１０９】
0006046694.tif 000203
【０２６７】
【表１１０】
0006046694.tif 000204
【０２６８】
【表１１１】
0006046694.tif 000205
【０２６９】
【表１１２】
0006046694.tif 000206
【０２７０】
【表１１３】
0006046694.tif 000207
【０２７１】
【表１１４】
0006046694.tif 000208
【０２７２】
【表１１５】
0006046694.tif 000209