(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＩ：
【化１４】
0005946454.tif 000019
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｒ１は、ハロゲンもしくはトリフルオロメチルで置換され、かつさらに、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で場合により置換されているフェニルであり；そして
Ｒ２は、２−オキソ−ピロリジン−１−イルメチルまたはスルファモイルフェニルである、
化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が、フルオロフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、２−フルオロフェニルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、２−オキソ−ピロリジン−１−イルメチルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、スルファモイルフェニルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、４−スルファモイルフェニルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
式ＩＩＩ：
【化１５】
0005946454.tif 000020
を有する、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項８】
式ＩＶ：
【化１６】
0005946454.tif 000021
を有する、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項９】
医薬として使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物。
【請求項１０】
神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置に有用な医薬として使用するための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記医薬が、神経保護薬である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記医薬が、神経細胞の再生に有用である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
前記医薬が、神経亢進薬である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
前記医薬が、神経疾患または精神疾患の予防または処置に有用である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
前記医薬が、神経疾患、神経炎症、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障、末梢神経障害、および癌から選択される疾患の予防または処置に有用である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１６】
前記医薬が、神経変性障害の疾患の予防または処置に有用である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記医薬が、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症、および脊髄性筋委縮症から選択される疾患の予防または処置に有用である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記医薬が、多発性硬化症および視神経脊髄炎から選択される疾患の予防または処置に有用である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記医薬が、糖尿病性神経障害およびＡＩＤＳ神経障害から選択される疾患の予防または処置に有用である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２０】
前記医薬が、膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫から選択される疾患の予防または処置に有用である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２１】
前記医薬が、多発性硬化症の処置に有用である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２２】
前記医薬が、アルツハイマー病の処置に有用である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２３】
前記医薬が、パーキンソン病の処置に有用である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２４】
前記医薬が、緑内障の処置に有用である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２５】
前記医薬が、神経再生薬である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２６】
前記医薬が、免疫修飾薬である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記医薬が、神経保護効果と免疫修飾効果を併せ持つ、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２８】
治療有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物と薬学的に受容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項２９】
神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３０】
神経保護用医薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３１】
神経細胞の再生のための医薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
神経疾患または精神疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３３】
神経疾患、神経炎症、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障、末梢神経障害、および癌から選択される疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３４】
神経変性障害の疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３５】
筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症から選択される疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
多発性硬化症および視神経脊髄炎から選択される疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３７】
糖尿病性神経障害およびＡＩＤＳ神経障害から選択される疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３８】
膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫から選択される疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３９】
前記疾患が多発性硬化症である、請求項３６に記載の使用。
【請求項４０】
前記疾患がアルツハイマー病である、請求項３５に記載の使用。
【請求項４１】
前記疾患がパーキンソン病である、請求項３５に記載の使用。
【請求項４２】
前記疾患が緑内障である、請求項３３に記載の使用。
【請求項４３】
神経再生薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項４４】
免疫修飾薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項４５】
神経保護効果と免疫修飾効果を併せ持つ医薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項４６】
神経亢進薬の製造における活性成分としての、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項４７】
神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項４８】
神経保護のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項４９】
前記神経保護が、さらに免疫修飾を含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
神経細胞を再生させるための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５１】
神経疾患、神経炎症、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障、末梢神経障害、および癌から選択される疾患の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５２】
神経変性障害の疾患の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５３】
筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症から選択される疾患の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５４】
多発性硬化症および視神経脊髄炎から選択される疾患の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５５】
糖尿病性神経障害およびＡＩＤＳ神経障害から選択される疾患の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５６】
膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫から選択される疾患の予防または処置のための組成物であって、有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物または有効量の請求項２８に記載の医薬組成物を含む、組成物。
【請求項５７】
前記疾患が、多発性硬化症である、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５８】
前記疾患が、アルツハイマー病である、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５９】
前記疾患が、パーキンソン病である、請求項５３に記載の組成物。
【請求項６０】
前記疾患が、緑内障である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項６１】
有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、神経成長因子または神経成長因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患を、該刺激が欠如している哺乳動物において処置するための組成物。
【請求項６２】
神経成長因子または神経成長因子受容体の活性を刺激することに使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物。
【請求項６３】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、神経成長因子受容体活性を刺激するための組成物。
【請求項６４】
前記神経成長因子受容体が、ＴｒｋＡ受容体またはｐ７５受容体である、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、ニューロトロフィン因子またはニューロトロフィン因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患を、該刺激が欠如している哺乳動物において処置するための組成物。
【請求項６６】
ニューロトロフィン因子またはニューロトロフィン因子受容体の活性を刺激することに使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物。
【請求項６７】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、ニューロトロフィン因子受容体活性を刺激するための組成物。
【請求項６８】
有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、脳由来神経栄養因子または脳由来神経栄養因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患を、該刺激が欠如している哺乳動物において処置するための組成物。
【請求項６９】
脳由来神経栄養因子または脳由来神経栄養因子受容体の活性を刺激することに使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物。
【請求項７０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、脳由来神経栄養因子受容体活性を刺激するための組成物。
【請求項７１】
前記脳由来神経栄養因子受容体が、ＴｒｋＢ受容体またはｐ７５受容体である、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩と薬学的に受容可能な担体とを混合することを含む、医薬組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０１０年８月３１日に出願された米国仮出願第６１／３７８，８２３号（この全体は、参考として本明細書に援用される）の先の出願日の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、神経障害、精神障害および加齢の治療分野に適用される。詳細には、本発明は、ニューロトロフィン（神経成長因子（ＮＧＦ）または脳由来成長因子（ＢＤＮＦ））受容体の小分子アゴニストの神経保護効果、およびこれらのアゴニストの医薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
加齢、神経障害および精神障害は、神経細胞の死滅および損傷の原因となる。神経系に対する頻繁な関連性のある傷害は、数ある中でも神経変性、虚血、炎症、免疫応答、外傷および癌に起因し得る。これらの結果として、神経細胞は数分もしくは数時間以内に死滅するか、損なわれた状態でこの初期傷害を生き延び、その損なわれた状態が神経変性を活性化して結局は同様に細胞死に至る。
【０００４】
基礎的運動技能を可能にし、感知する点での神経系の重要性にかんがみて、神経系を保護するための治療の武器を発見することへの関心が存在する。
【０００５】
神経保護は、神経系、その細胞、構造および機能の保持、回復、治癒または再生に主眼が置かれている（非特許文献１）。神経保護の目的は、神経系への原傷害の影響を予防するもしくは最小にすること、または軸索、ニューロン、シナプスおよび樹状突起傷害の原因となる内因性もしくは外因性侵害性プロセスの結果を予防するもしくは最小にすることである。
【０００６】
一般に、処置戦略は、単一の提案損傷因子の修飾に基づくことが多い。このような処置は、非常に限定された動物モデルでは有益であることを証明できるが、遺伝学的に多岐にわたる集団におけるより様々な損傷重症度を伴うより複雑なヒト障害で意図した効果を生ずることを立証する可能性は低い（非特許文献２）。重要なことに、ニューロン死の推定メカニズム、例えば酸化ストレス、ミトコンドリア機能不全、タンパク質凝集、アポトーシスおよび炎症、は複雑でもあり多様でもあるので（非特許文献３）、多発損傷メカニズムに対して多くの潜在的効果を持つ単一の化合物が望ましい。
【０００７】
次のクラスを含む幾つかの神経保護薬（ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｄｒｕｇ）が調査されている：抗炎症薬、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸塩（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）アンタゴニスト、デキサナビノール、ナトリウムチャネル遮断薬、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、成長因子、糖質コルチコイド、カフェイノール、オピオイドアンタゴニスト、アポトーシス阻害剤、フリーラジカルトラッパー／スカベンジャー、エリスロポエチン、カルシウムチャネル遮断薬、硫酸マグネシウム、およびスタチン。
【０００８】
二次的な生化学的傷害および細胞死を制限するこれらの薬物の能力は、期待外れであった（非特許文献２）。
【０００９】
ニューロトロフィンは、末梢および中枢神経系の発生および維持を調節する成長因子である（ＬｅｗｉｎおよびＢａｒｄｅ、１９９６）。神経成長因子（ＮＧＦ）は、ニューロトロフィンファミリーの最初に発見され、最も良く特性づけされているメンバーであり、このファミリーには他の構造的に関連のあるタンパク質、例えば脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）が含まれる。神経成長因子（ＮＧＦ）は、ニューロンの生存、分化および成長に非常に重要な役割を果たす（Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ、１９８７）と共にチロシンキナーゼ受容体ＴｒｋＡおよびｐ７５受容体という２つの異なる細胞受容体に結合する（Ｃｈａｏ、２００３）、ニューロトロフィンファミリーからのホモ二量体である。ＮＧＦ−ＴｒｋＡ結合は、該受容体の固有チロシンキナーゼを活性化し、それに起因してＴｒｋＡおよび付随するシグナル伝達パートナーがリン酸化され、その結果、細胞生存または分化の促進が活性化される（ＫａｐｌａｎおよびＭｉｌｌｅｒ、２０００）。ｐ７５受容体は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである。細胞環境およびリガンドのタイプに依存して、ｐ７５は、生存促進シグナルの伝達因子としての役割を果たすこともあり、アポトーシス促進シグナルの伝達因子としての役割を果たすこともあり、または分化促進シグナルの伝達因子としての役割を果たすこともある（Ｂａｒｋｅｒ、１９９８；Ｒａｂｉｚａｄｅｈら、１９９９；Ｚａｃｃａｒｏら、２００１；ＳａｒａｇｏｖｉおよびＺａｃｃａｒｏ、２００２）。したがって、代謝経路に依存して、ＴｒｋＡ受容体またはｐ７５受容体のいずれかへの結合がシグナルを誘発し得、該シグナルは、考えられる細胞タイプに依存して曖昧に分化および／または細胞生存に結びつけられる。ニューロトロフィンは、２つの主要シグナル伝達経路、すなわち、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）−ＡＫＴ経路およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）−ＭＥＫ経路（両方の経路がアポトーシスの阻害に関与する）によって作用する。神経栄養因子が成熟ニューロンに対して、特に損傷および変性細胞に対して作用することも公知である（Ｌｉｎｄｖａｌｌら、１９９４；ＴｕｓｚｙｎｓｋｉおよびＧａｇｅ、１９９５；Ｌｙｋｉｓｓａｓら、２００７；Ｓｏｎｇら、２００９）。
【００１０】
幾つかの疾患のための治療薬としてのＮＧＦの可能性が幾人かの研究者によって示されている。かかる疾患としては、神経変性障害、神経炎症および一定のタイプの癌、多発性硬化症、視神経脊髄炎、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症、脊髄性筋委縮症、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障または末梢神経障害（糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害）が挙げられる（Ｌｏｎｇｏら、２００７；Ｓｃｈｕｌｔｅ−Ｈｅｒｂｒｕｅｇｇｅｎ、２００７；Ｓｈｉ、２００７；Ｈｅｌｌｖｅｇ、２００８；Ｓｈｏｖａｌ、２００５；Ａｐｆｅｌ、２００２；Ａｎａｎｄ、２００４）。ＮＧＦは、ＣＮＳ炎症中、ＣＮＳ特権の維持に寄与する有意な免疫調節特性を有する（ＶｉｌｌｏｓｌａｄａおよびＧｅｎａｉｎ、２００４）。マーモセットにおいて実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）中にＮＧＦは、持続注入により脳室内投与されたとき、臨床症状の発症を阻害することができた。これは、どうやら、ＣＮＳ浸潤減少をもたらす免疫抑制性微小環境をＮＧＦがＣＮＳ内で誘導できるためのようであった（Ｖｉｌｌｏｓｌａｄａら、２０００）。ＮＧＦは、ニューロンおよび乏突起膠細胞内でのその神経保護特性に加えて、自己免疫脱髄中に免疫抑制を誘導するという所見により、ＭＳのようなＣＮＳ炎症性疾患の処置の非常によい候補になっている。しかし、ＮＧＦは、血液脳関門（ＢＢＢ）を横断できない（ＰｏｄｕｓｌｏおよびＣｕｒｒａｎ、１９９６）ため、ならびにその短い半減期およびその副作用（Ａｐｆｅｌ、２００２）のため、理想的な候補薬ではない。ＮＧＦアゴニスト活性を有し、より良好な薬物動態を有し、副作用がより少ない小分子の探索に大きな努力がはらわれてきた。この目的を達するために、種々のアプローチが試みられてきた（ＰｏｄｕｓｌｏおよびＣｕｒｒａｎ、１９９６；Ｌｏｎｇｏら、１９９７；Ｍａｌｉａｒｔｃｈｏｕｋら、２０００ａ；Ｍａｌｉａｒｔｃｈｏｕｋら、２０００ｂ；ＰｅｌｅｓｈｏｋおよびＳａｒａｇｏｖｉ、２００６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｖａｊｄａ  ＦＪ．  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．（２００２）Ｊａｎ；９（１）：４〜８
【非特許文献２】Ｆａｄｅｎ  ＡＩ，  Ｓｔｏｉｃａ  Ｂ．  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ：  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．  Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ．（２００７）Ｊｕｎ；６４（６）：７９４〜８００
【非特許文献３】Ｙｏｕｄｉｍ  ＭＢ，  Ｂｕｃｃａｆｕｓｃｏ  ＪＪ．  Ｍｕｌｔｉ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｖａｒｉｏｕｓ  ＣＮＳ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．（２００５）Ｊａｎ；２６（１）：２７〜３５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
然るが故に、好ましくは多くの潜在的効果を有するがＮＧＦの前記欠点のない、神経保護特性を有する薬、特にＮＧＦミメティクスが必要とされ続けている。本発明者は、当該技術分野において開示されているものとは異なる化合物のファミリーを開発した。本発明の化合物のファミリーは、ニューロトロフィン（ＮＧＦ、ＢＤＮＦ）のペプチドミメティクス、ならびにＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびｐ７５特異的受容体のアゴニストである。本発明の化合物の一部は、例として、細胞生存をＮＧＦ自体よりいっそう高度に促進する。本発明の化合物は、ニューロトロフィンのペプチドミメティクスと考えられ、すべてがＮ−アルキルグリシン三量体構造を共有する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、下の一般式Ｉ〜Ｖのペプドイド化合物ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩およびプロドラッグの、ニューロトロフィン受容体、特に神経成長因子（ＮＧＦ）受容体および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）受容体、のアゴニストとしての使用に関する。
【００１４】
本発明において有用な化合物は、これまで報告されていない。したがって、本発明の１つの態様は、式Ｉ〜Ｖの新規化合物ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩およびプロドラッグに関する。
【００１５】
本発明のもう１つの態様は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩およびプロドラッグの、ＮＧＦ受容体のアゴニストとしての使用に関する。本発明のもう１つの態様は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に許容され得る塩およびプロドラッグの、ＢＤＮＦ受容体のアゴニストとしての使用に関する。
【００１６】
本発明のさらなる態様は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはそれらの薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグの、医薬としての使用に関する。本発明の１つの態様において、前記医薬は、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置に使用するためのものである。本発明の１つの態様において、前記医薬は、神経保護に使用するためのものである。本発明の１つの態様において、前記医薬は、神経細胞の再生に使用するためのものである。本発明の１つの態様において、前記医薬は、神経増強に使用するためのものである。本発明の１つの態様において、前記医薬は、神経疾患または精神疾患の予防または処置に使用するためのものである。本発明の１つの態様において、前記医薬は、神経疾患、優先的に神経変性障害（例えば、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症）、神経炎症（例えば、多発性硬化症または視神経脊髄炎）、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障、末梢神経障害（例えば、糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害）、および癌（例えば、膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫）から成る群より選択される疾患の予防または処置に使用するためのものである。
【００１７】
本発明のさらなる態様は、多発性硬化症を処置するための医薬として使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００１８】
本発明のさらなる態様は、神経再生薬である医薬として使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００１９】
本発明のさらなる態様は、免疫修飾薬である医薬として使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００２０】
本発明のさらなる態様は、神経保護効果と免疫修飾効果を併せ持つ医薬として使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、治療有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグと、薬学的に受容可能な担体とを含む、医薬組成物を提供することである。
【００２２】
本発明のさらなる態様は、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷を予防または処置するための医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２３】
本発明のさらなる態様は、神経保護をもたらすための医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２４】
本発明のさらなる態様は、神経細胞の再生のための医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２５】
本発明のさらなる態様は、神経疾患または精神疾患を予防または処置するための医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２６】
本発明のさらなる態様は、神経疾患、優先的に神経変性障害（例えば、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症）、神経炎症（例えば、多発性硬化症または視神経脊髄炎）、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障、末梢神経障害（例えば、糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害）、および癌（例えば、膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫）から成る群より選択される疾患を予防または処置するための医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２７】
本発明のさらなる態様は、多発性硬化症を予防または処置するための医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２８】
本発明のさらなる態様は、神経再生薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００２９】
本発明のさらなる態様は、免疫修飾薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００３０】
本発明のさらなる態様は、神経保護効果と免疫修飾効果を併せ持つ医薬の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００３１】
本発明のさらなる態様は、神経亢進薬（ｎｅｕｒｏｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｄｒｕｇ）の製造における、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの使用を提供することである。
【００３２】
本発明のさらなる態様は、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷を予防または処置するための方法を提供することであり、この方法は、前記予防または処置を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ、あるいは式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【００３３】
本発明のさらなる態様は、神経保護をもたらすための方法を提供することであり、この方法は、神経保護を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ、あるいは式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【００３４】
本発明のさらなる態様は、免疫修飾をもたらすための方法を提供することであり、この方法は、免疫修飾を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ、あるいは式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【００３５】
本発明のさらなる態様は、神経細胞を再生するための方法を提供することであり、この方法は、神経細胞の再生を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ、あるいは式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【００３６】
本発明のさらなる態様は、神経疾患、優先的に神経変性障害（例えば、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症）、神経炎症（例えば、多発性硬化症または視神経脊髄炎）、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障、末梢神経障害（例えば、糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害）、および癌（例えば、膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫）から成る群より選択される疾患を予防または処置するための方法を提供することであり、この方法は、前記予防または処置を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ、あるいは式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【００３７】
本発明のさらなる態様は、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病または緑内障を予防または処置するための方法を提供することであり、この方法は、前記予防または処置を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ、あるいは式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを含む有効量の医薬組成物を投与することを含む。
【００３８】
本発明のさらなる態様は、ニューロトロフィンまたはニューロトロフィン受容体の活性に対する刺激に応答する疾患をその刺激が欠如している哺乳動物において処置する方法を提供することであり、この方法は、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを投与することを含む。
【００３９】
本発明のさらなる態様は、ニューロトロフィンまたはニューロトロフィン受容体の活性を刺激することに使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００４０】
本発明のさらなる態様は、ニューロトロフィン受容体活性に対する刺激を必要とする被験体においてニューロトロフィン受容体活性を刺激する方法を提供することであり、この方法は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを前記被験体に投与することを含む。１つの実施形態において、前記ニューロトロフィン受容体は、ＴｒｋＡ受容体、ＴｒｋＢ受容体またはｐ７５受容体である。
【００４１】
本発明のさらなる態様は、神経成長因子または神経成長因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患をその刺激が欠如している哺乳動物において処置する方法を提供することであり、この方法は、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを投与することを含む。
【００４２】
本発明のさらなる態様は、神経成長因子または神経成長因子受容体の活性を刺激することに使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００４３】
本発明のさらなる態様は、神経成長因子受容体活性に対する刺激を必要とする被験体において神経成長因子受容体活性を刺激する方法を提供することであり、この方法は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを前記被験体に投与することを含む。１つの実施形態において、前記神経成長因子受容体は、ＴｒｋＡ受容体またはｐ７５受容体である。
【００４４】
本発明のさらなる態様は、脳由来神経栄養因子または脳由来神経栄養因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患をその刺激が欠如している哺乳動物において処置する方法を提供することであり、この方法は、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを投与することを含む。
【００４５】
本発明のさらなる態様は、脳由来神経栄養因子または脳由来神経栄養因子受容体の活性を刺激することに使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを提供することである。
【００４６】
本発明のさらなる態様は、脳由来神経栄養因子受容体活性に対する刺激を必要とする被験体において脳由来神経栄養因子受容体活性を刺激する方法を提供することであり、この方法は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはプロドラッグを前記被験体に投与することを含む。１つの実施形態において、前記神経成長因子受容体は、ＴｒｋＢ受容体またはｐ７５受容体である。
【００４７】
本発明のさらなる態様は、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグと薬学的に受容可能な担体とを混合することを含む、医薬組成物の調製方法を提供することである。
【００４８】
本発明の追加の実施形態および利点を後に続く説明の中である程度述べることとし、その説明から本発明の追加の実施形態および利点が出てくるであろうし、または本発明の実施によって本発明の追加の実施形態および利点を知ることができる。本発明の実施形態および利点は、特に添付の請求項で指摘する要素および組み合わせによって実現され、達成されるであろう。
【００４９】
上記の発明の概要および下記の発明を実施するための形態は、両方とも、単に例示的および説明的なものであり、請求項記載の本発明を制限するものではないことを理解すべきである。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
式Ｉ：
【化１３】
0005946454.tif 000002
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグであって、ここで、
Ｒ１は、ハロゲンもしくはトリフルオロメチルで置換され、かつさらに、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で場合により置換されているフェニルであり；または
Ｒ１は、ピロリジン−１−イルであり；
Ｒ２は、２−オキソ−ピロリジン−１−イルメチルまたはスルファモイルフェニルであり；そして
Ｒ３は、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、２−メチルプロピル、ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチルおよび１−メチルペンチルから選択される、
化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目２）
Ｒ３が２−メチルプロピルであり、式ＩＩ：
【化１４】
0005946454.tif 000003
を有し、ここで、Ｒ１およびＲ２が項目１において定義したとおりである、項目１に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目３）
Ｒ１が、フルオロフェニルであり、およびＲ２が、項目１において定義したとおりである、項目１または２に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ１が、２−フルオロフェニルである、項目３に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ１が、ピロリジン−１−イルである、項目１または２に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ２が、２−オキソ−ピロリジン−１−イルメチルである、項目１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ２が、スルファモイルフェニルである、項目１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ２が、４−スルファモイルフェニルである、項目７に記載の化合物。
（項目９）
式ＩＩＩ：
【化１５】
0005946454.tif 000004
を有する、項目２に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目１０）
式ＩＶ：
【化１６】
0005946454.tif 000005
を有する、項目２に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目１１）
式Ｖ：
【化１７】
0005946454.tif 000006
を有する、項目２に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目１２）
医薬として使用するための、項目１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目１３）
神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置に有用な医薬として使用するための、項目１２に記載の化合物。
（項目１４）
上記医薬が、神経保護薬である、項目１２に記載の化合物。
（項目１５）
上記医薬が、神経細胞の再生に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目１６）
上記医薬が、神経亢進薬である、項目１２に記載の化合物。
（項目１７）
上記医薬が、神経疾患または精神疾患の予防または処置に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目１８）
上記医薬が、神経疾患、優先的に神経変性障害、例えば筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症、脊髄性筋委縮症；神経炎症、例えば多発性硬化症または視神経脊髄炎；大うつ病性障害；統合失調症；緑内障；末梢神経障害、例えば糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害；ならびに癌、例えば膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫から選択される疾患の予防または処置に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目１９）
上記医薬が、多発性硬化症の処置に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目２０）
上記医薬が、アルツハイマー病の処置に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目２１）
上記医薬が、パーキンソン病の処置に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目２２）
上記医薬が、緑内障の処置に有用である、項目１２に記載の化合物。
（項目２３）
上記医薬が、神経再生薬である、項目１２に記載の化合物。
（項目２４）
上記医薬が、免疫修飾薬である、項目１２に記載の化合物。
（項目２５）
上記医薬が、神経保護効果と免疫修飾効果を併せ持つ、項目１２に記載の化合物。
（項目２６）
治療有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物と薬学的に受容可能な担体とを含む医薬組成物。
（項目２７）
神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目２８）
神経保護用医薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目２９）
神経細胞の再生のための医薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目３０）
神経疾患または精神疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目３１）
神経疾患、優先的に神経変性障害、例えば筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症；神経炎症、例えば多発性硬化症または視神経脊髄炎；大うつ病性障害；統合失調症；緑内障；末梢神経障害、例えば糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害；ならびに癌、例えば膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫から選択される疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目３２）
上記疾患が多発性硬化症である、項目３１に記載の使用。
（項目３３）
上記疾患がアルツハイマー病である、項目３１に記載の使用。
（項目３４）
上記疾患がパーキンソン病である、項目３１に記載の使用。
（項目３５）
上記疾患が緑内障である、項目３１に記載の使用。
（項目３６）
神経再生薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目３７）
免疫修飾薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目３８）
神経保護効果と免疫修飾効果を併せ持つ医薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目３９）
神経亢進薬の製造における活性成分としての、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目４０）
神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置の方法であって、該予防または処置を必要とする被験体に有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または有効量の項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
（項目４１）
神経保護の方法であって、神経保護を必要とする被験体に有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または有効量の項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
（項目４２）
神経保護を必要とする被験体に有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または有効量の項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含み、さらに免疫修飾を含む、項目４１に記載の神経保護の方法。
（項目４３）
神経細胞を再生させる方法であって、該再生を必要とする被験体に有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または有効量の項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
（項目４４）
神経疾患、優先的に神経変性障害、例えば筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症および脊髄性筋委縮症；神経炎症、例えば多発性硬化症または視神経脊髄炎；大うつ病性障害；統合失調症；緑内障；末梢神経障害、例えば糖尿病性神経障害またはＡＩＤＳ神経障害；ならびに癌、例えば膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、神経鞘腫、神経芽腫、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌および食道癌腫から選択される疾患の予防または処置方法であって、該予防または処置を必要とする被験体に有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または有効量の項目２６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
（項目４５）
上記疾患が、多発性硬化症である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
上記疾患が、アルツハイマー病である、項目４４に記載の方法。
（項目４７）
上記疾患が、パーキンソン病である、項目４４に記載の方法。
（項目４８）
上記疾患が、緑内障である、項目４４に記載の方法。
（項目４９）
有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む、神経成長因子または神経成長因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患を、該刺激が欠如している哺乳動物において処置する方法。
（項目５０）
神経成長因子または神経成長因子受容体の活性を刺激することに使用するための、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目５１）
項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む、神経成長因子受容体活性に対する刺激を必要とする被験体において神経成長因子受容体活性を刺激する方法。
（項目５２）
上記神経成長因子受容体が、ＴｒｋＡ受容体またはｐ７５受容体である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む、ニューロトロフィン因子またはニューロトロフィン因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患を、該刺激が欠如している哺乳動物において処置する方法。
（項目５４）
ニューロトロフィン因子またはニューロトロフィン因子受容体の活性を刺激することに使用するための、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目５５）
項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む、ニューロトロフィン因子受容体活性に対する刺激を必要とする被験体においてニューロトロフィン因子受容体活性を刺激する方法。
（項目５６）
有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む、脳由来神経栄養因子または脳由来神経栄養因子受容体の活性に対する刺激に応答する疾患を、該刺激が欠如している哺乳動物において処置する方法。
（項目５７）
脳由来神経栄養因子または脳由来神経栄養因子受容体の活性を刺激することに使用するための、項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグ。
（項目５８）
項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む、脳由来神経栄養因子受容体活性に対する刺激を必要とする被験体において脳由来神経栄養因子受容体活性を刺激する方法。
（項目５９）
上記脳由来神経栄養因子受容体が、ＴｒｋＢ受容体またはｐ７５受容体である、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
有効量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグと薬学的に受容可能な担体とを混合することを含む、医薬組成物の調製方法。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１Ａ】図１は、ＰＣ１２細胞系での用量応答分化アッセイにおけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１に関する実施例２の結果の図示である。図１Ａは、Ｇ７９の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｂは、Ｇ８０の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｃは、Ｇ８１の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｄは、用量応答分化アッセイにおける分化細胞数を示す。図１Ｅは、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率を示す。データは、各二重反復での少なくとも３回の実験の平均±ＳＥＭである。
【図１Ｂ】図１は、ＰＣ１２細胞系での用量応答分化アッセイにおけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１に関する実施例２の結果の図示である。図１Ａは、Ｇ７９の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｂは、Ｇ８０の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｃは、Ｇ８１の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｄは、用量応答分化アッセイにおける分化細胞数を示す。図１Ｅは、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率を示す。データは、各二重反復での少なくとも３回の実験の平均±ＳＥＭである。
【図１Ｃ】図１は、ＰＣ１２細胞系での用量応答分化アッセイにおけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１に関する実施例２の結果の図示である。図１Ａは、Ｇ７９の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｂは、Ｇ８０の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｃは、Ｇ８１の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｄは、用量応答分化アッセイにおける分化細胞数を示す。図１Ｅは、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率を示す。データは、各二重反復での少なくとも３回の実験の平均±ＳＥＭである。
【図１Ｄ】図１は、ＰＣ１２細胞系での用量応答分化アッセイにおけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１に関する実施例２の結果の図示である。図１Ａは、Ｇ７９の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｂは、Ｇ８０の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｃは、Ｇ８１の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｄは、用量応答分化アッセイにおける分化細胞数を示す。図１Ｅは、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率を示す。データは、各二重反復での少なくとも３回の実験の平均±ＳＥＭである。
【図１Ｅ】図１は、ＰＣ１２細胞系での用量応答分化アッセイにおけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１に関する実施例２の結果の図示である。図１Ａは、Ｇ７９の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｂは、Ｇ８０の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｃは、Ｇ８１の存在下で分化したＰＣ１２細胞の画像の図示である。図１Ｄは、用量応答分化アッセイにおける分化細胞数を示す。図１Ｅは、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率を示す。データは、各二重反復での少なくとも３回の実験の平均±ＳＥＭである。
【図２】図２は、ＲＮ２２細胞生存の促進におけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の効果を示す。各二重反復での３回の実験の平均±Ｓ．Ｅ．の図示である。ストレス対照に対して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１（ＡＮＯＶＡ）。
【図３−１】図３は、分泌促進活性アッセイ（図３Ａ）、相乗的活性アッセイ（図３Ｂ）、ＴｒｋＡ活性化アッセイ（図３Ｃ）、ＬＹ２９４００２の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｄ）、およびＰＤ９８０５９の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｅ）におけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の効果の図示である。図３Ｆ〜３Ｊは、図３Ａ〜３Ｅに図示されている効果を、それぞれ、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率として示す。
【図３−２】図３は、分泌促進活性アッセイ（図３Ａ）、相乗的活性アッセイ（図３Ｂ）、ＴｒｋＡ活性化アッセイ（図３Ｃ）、ＬＹ２９４００２の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｄ）、およびＰＤ９８０５９の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｅ）におけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の効果の図示である。図３Ｆ〜３Ｊは、図３Ａ〜３Ｅに図示されている効果を、それぞれ、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率として示す。
【図３−３】図３は、分泌促進活性アッセイ（図３Ａ）、相乗的活性アッセイ（図３Ｂ）、ＴｒｋＡ活性化アッセイ（図３Ｃ）、ＬＹ２９４００２の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｄ）、およびＰＤ９８０５９の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｅ）におけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の効果の図示である。図３Ｆ〜３Ｊは、図３Ａ〜３Ｅに図示されている効果を、それぞれ、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率として示す。
【図３−４】図３は、分泌促進活性アッセイ（図３Ａ）、相乗的活性アッセイ（図３Ｂ）、ＴｒｋＡ活性化アッセイ（図３Ｃ）、ＬＹ２９４００２の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｄ）、およびＰＤ９８０５９の存在下でのシグナル伝達阻害アッセイ（図３Ｅ）におけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の効果の図示である。図３Ｆ〜３Ｊは、図３Ａ〜３Ｅに図示されている効果を、それぞれ、ＮＧＦ誘導分化を基準にして算出された分化細胞の百分率として示す。
【図４−１】図４は、緑内障モデルにおけるＧ７９の結果の図示である。図４Ａは、対照、プラセボ、２００μｇ／ｍＬ  ＮＧＦ、２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９および４００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９についての網膜神経節細胞の計数値を示す。図４Ｂは、対照、プラセボ、２００μｇ／ｍＬ  ＮＧＦ、２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９および４００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９での処置後の網膜切片を示す。図４Ｃは、対照、プラセボ、２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９、チモロール、および２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９とチモロールについての網膜神経節細胞の計数値を示す。
【図４−２】図４は、緑内障モデルにおけるＧ７９の結果の図示である。図４Ａは、対照、プラセボ、２００μｇ／ｍＬ  ＮＧＦ、２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９および４００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９についての網膜神経節細胞の計数値を示す。図４Ｂは、対照、プラセボ、２００μｇ／ｍＬ  ＮＧＦ、２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９および４００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９での処置後の網膜切片を示す。図４Ｃは、対照、プラセボ、２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９、チモロール、および２００μｇ／ｍＬ  Ｇ７９とチモロールについての網膜神経節細胞の計数値を示す。
【図５】図５は、パーキンソン病モデル（図５Ａ）および酸化ストレスモデル（図５Ｂ）におけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の結果の図示である。
【図６】図６は、１００ｎｇ／ｍＬのＧ７９で処置したＰＣ１２細胞のウエスタンブロット分析の結果の蛍光体画像の図示である。
【図７】図７は、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のリン酸化によって活性化される細胞内経路を示す。
【図８】図８は、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術により試験した、リンタンパク質ＡＴＦ−２、ＨＳＰ−２７、ＪＮＫおよびＳＴＡＴ−１の活性化レベルに対するＧ７９およびＢＤＮＦの効果の図示である。
【図９】図９は、実施例１３のサイトメトリー結合アッセイにおけるＧ７９の効果の図示である。図９Ａは、ＰＣ１２（ＮＧＦ／Ｇ７９−ＦＩＴＣ）での競合アッセイにおける平均チャネル蛍光（ＭＣＦ）を示している。図９Ｂは、抗ＴｒｋＡ抗体を伴うＰＣ１２での競合アッセイ（ＮＧＦ／Ｇ７９−ＦＩＴＣ）におけるＭＣＦを示す。図９Ｃは、抗ｐ７６抗体を伴うＰＣ１２での競合アッセイ（ＮＧＦ／Ｇ７９−ＦＩＴＣ）におけるＭＣＦを示す。図９Ｄは、ＳＨ−ＳＹ５Ｙでの競合アッセイ（ＢＤＮＦ／Ｇ７９−ＦＩＴＣ）におけるＭＣＦを示す。
【図１０】図１０は、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおけるＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の結果の図示である。
【図１１】図１１は、ＭＳのｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける予防的適用でのＧ７９、ガンボグアミド（ｇａｍｂｏｇｉｃ  ａｍｉｄｅ）およびキサリプロデンについての、Ｇ７９またはガンボグアミドの腹腔内注射後（図１１Ａ）およびキサリプロデンの経口投与後（図１１Ｂ）の結果を示す。
【図１２】図１２は、ＭＳのｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける治癒的適用でのＧ７９、ガンボグアミドおよびキサリプロデンについての経口投与後の結果を示す。
【図１３】図１３は、４８時間にわたる酵素ｉＮＯＳの導入におけるＧ７９の効果の結果の図示である。
【図１４】図１４は、神経炎症のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおけるＧ７９の結果の図示である。図１４Ａは、小脳の器官型培養（ｏｒｇａｎｉｔｙｐｉｃ  ｃｕｌｔｕｒｅ）でのＴＮＦαの生産を示し、図１４Ｂは、器官型小脳培養でのＩＬ−１βの生産を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明の１つの態様は、式Ｉ〜Ｖの化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグの、ニューロトロフィン受容体のアゴニスト、ならびに特に、神経成長因子（ＮＧＦ）受容体および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）受容体のアゴニストとしての使用に基づく。この特性にかんがみて、式Ｉ〜Ｖの化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグは、ニューロトロフィン受容体、および特に、神経成長因子もしくは神経成長因子受容体、または脳由来神経栄養因子もしくは脳由来神経栄養因子受容体に対する刺激に応答する疾患の予防または処置に有用である。
【００５２】
式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物は、ＰＣ１２細胞の分化を誘導することおよびＲＮ２２細胞の細胞生存を促進することにより良好なＮＧＦ様活性を「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」で示し、したがって、神経保護特性を有する。
【００５３】
本発明のこの態様において有用な化合物は、式Ｉによって表される化合物：
【００５４】
【化１】
0005946454.tif 000007
（式中、
Ｒ１は、ハロゲンもしくはトリフルオロメチルで置換され、かつさらに、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で場合により置換されているフェニルであり；または
Ｒ１は、ピロリジン−１−イルであり；
Ｒ２は、２−オキソ−ピロリジン−１−イルメチルまたはスルファモイルフェニルであり；および
Ｒ３は、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、２−メチルプロピル、ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチルおよび１−メチルペンチルから選択される）
ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグである。
【００５５】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１がフルオロフェニルである式Ｉの化合物である。１つの実施形態において、前記フルオロフェニル基は、２−フルオロフェニル、３−フルオロフェニルまたは４−フルオロフェニルである。好ましくはＲ１は、２−フルオロフェニルである。１つの実施形態において、前記フルオロフェニル基は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；好ましくは、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜４）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；さらに好ましくは、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチルおよびトリフルオロメチルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で、さらに置換されている。
【００５６】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１がクロロフェニルである式Ｉの化合物である。１つの実施形態において、前記クロロフェニル基は、２−クロロフェニル、３−クロロフェニルまたは４−クロロフェニルである。１つの実施形態において、Ｒ１は、２−クロロフェニルである。１つの実施形態において、前記クロロフェニル基は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；好ましくは、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜４）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；さらに好ましくは、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチルおよびトリフルオロメチルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で、さらに置換されている。
【００５７】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１がブロモフェニルである式Ｉの化合物である。１つの実施形態において、前記ブロモフェニル基は、２−ブロモフェニル、３−ブロモフェニルまたは４−ブロモフェニルである。１つの実施形態において、Ｒ１は、２−ブロモフェニルである。１つの実施形態において、前記ブロモフェニル基は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；好ましくは、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜４）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；さらに好ましくは、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチルおよびトリフルオロメチルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で、さらに置換されている。
【００５８】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１がヨードフェニルである式Ｉの化合物である。１つの実施形態において、前記ヨードフェニル基は、２−ヨードフェニル、３−ヨードフェニルまたは４−ヨードフェニルである。１つの実施形態において、Ｒ１は、２−ヨードフェニルである。１つの実施形態において、前記ヨードフェニル基は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；好ましくは、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜４）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；さらに好ましくは、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチルおよびトリフルオロメチルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で、さらに置換されている。
【００５９】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１がトリフルオロメチルフェニルである式Ｉの化合物である。１つの実施形態において、前記トリフルオロメチルフェニル基は、２−トリフルオロメチルフェニル、３−トリフルオロメチルフェニルまたは４−トリフルオロメチルフェニルである。有用な化合物としては、Ｒ１が２−トリフルオロメチルフェニルであるものが挙げられる。１つの実施形態において、前記トリフルオロメチルフェニル基は、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ１〜６）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜６）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；好ましくは、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシおよびハロ（Ｃ１〜４）アルキルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基；さらに好ましくは、ハロゲン、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチルおよびトリフルオロメチルから成る群より選択される１つまたは２つの置換基で、さらに置換されている。
【００６０】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１がピロリジン−１−イルである式Ｉの化合物である。
【００６１】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ２が２−オキソ−ピロリジン−１イル−メチルである式Ｉの化合物である。
【００６２】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ２がスルファモイルフェニルである式Ｉの化合物である。１つの実施形態において、前記スルファモイルフェニル基は、２−スルファモイルフェニル、３−スルファモイルフェニルまたは４−スルファモイルフェニルである。好ましくは、Ｒ２は、４−スルファモイルエチルである。
【００６３】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、式ＩＩを有する、Ｒ３が２−メチルプロピルである式Ｉの化合物：
【００６４】
【化２】
0005946454.tif 000008
（式中、Ｒ１およびＲ２は、式Ｉについて上で定義したとおりである）
ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグである。
【００６５】
１つの実施形態での本発明において有用な化合物は、Ｒ１が、下記のような２−フルオロフェニルまたはピロリジン−１−イルであり、Ｒ２が、下記のような２−オキソ−ピロリジン−１−イルメチルまたは４−スルファモイルフェニルである式Ｉ〜ＩＩの化合物、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグである：
【００６６】
【化３】
0005946454.tif 000009
本発明により好ましい化合物は、下記の式ＩＩＩ〜Ｖのいずれかによって表される式Ｉの化合物、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグである：
式ＩＩＩ：
【００６７】
【化４】
0005946454.tif 000010
［Ｎ−（２−（２’−フルオロフェニル）エチル）グリシル］−［Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシル］−Ｎ−［３−（２’−オキソピロリジニル）プロピル］グリシンアミド（Ｇ７９）；
式ＩＶ：
【００６８】
【化５】
0005946454.tif 000011
［Ｎ−（２−（２’−フルオロフェニル）エチル）グリシル］−［Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシル］−Ｎ−［２−（４’−スルファモイルフェニル）エチル］グリシンアミド（Ｇ８０）；および
式Ｖ：
【００６９】
【化６】
0005946454.tif 000012
［Ｎ−（２−（１−ピロリジニル）エチル）グリシル］−［Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシル］−Ｎ−［２−（４’−スルファモイルフェニル）エチル］グリシンアミド（Ｇ８１）、ならびに
これらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグ。
【００７０】
１つの実施形態において、式Ｉの化合物は、式ＩＩＩの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグである。
【００７１】
１つの実施形態において、式Ｉの化合物は、式ＩＶの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグである。
【００７２】
１つの実施形態において、式Ｉの化合物は、式Ｖの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグである。
【００７３】
有用なハロゲン基としては、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素が挙げられる。
【００７４】
有用なアルキル基は、直鎖および分岐Ｃ１〜６アルキル基、さらに好ましくは直鎖Ｃ１〜４アルキル基および分岐鎖Ｃ１〜４アルキル基から選択される。典型的なＣ１〜６アルキル基としては、数ある中でも、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、３−ペンチル、ヘキシルが挙げられる。
【００７５】
有用なハロ（Ｃ１〜６）アルキル基としては、１個以上のフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子によって置換されている任意の上述のＣ１〜６アルキル基（例えば、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、１，１−ジフルオロエチルおよびトリクロロメチル基）が挙げられる。好ましくは、前記ハロ（Ｃ１〜６）アルキル基は、トリフルオロメチルである。
【００７６】
有用なＣ１〜６アルコキシ基としては、上述のＣ１〜６アルキル基の１つによって置換されている酸素（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびペンチルオキシ）が挙げられる。
【００７７】
式ＩＩＩ〜Ｖの化合物は、ストレス誘導後にＰＣ１２細胞における分化およびＲＮ２２細胞の生存を誘導することが判明した。式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の作用メカニズムを調査した。それに応じて、培養でＮＧＦと共に式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の効果を試験した。前記化合物がリガンドとして働くか、またはＮＧＦによって誘導される経路に干渉するならば、該化合物は、ＮＧＦの活性を阻害することができる。そうではなく、前記化合物が相加効果を生じさせるならば、該化合物は、平行メカニズムによって働くことができる。結果として、本発明者らは、Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１が、ＮＧＦとの併用で相加的効果を生じさせないことを発見した。前記化合物のみでの処置を併用処置と比較した場合、分化細胞数に大差はない。これは、式ＩＩＩ〜Ｖの化合物がＮＧＦ経路と同じ経路で作用することを意味する。ＮＧＦ神経栄養性応答の低減は、ＮＧＦの部分アゴニストのプロフィールに対応する。
【００７８】
式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の細胞表面への結合をより良く理解するために、細胞外ドメインにおけるＮＧＦに対するＴｒｋＡの結合部位を遮断する抗体抗ＴｒｋＡの存在下で、ＰＣ１２細胞をＮＧＦまたはこれらの化合物で処置した。したがって、ペプチドミメティクスが、前記結合部位を活性化することによってそれらの活性を発揮するならば、この抗体の存在はそれらの活性を妨げることとなる。そうではなく、ＮＧＦ経路に対する活性が維持されるならば、それは、ニューロトロフィンペプチドミメティクスが、ＴｒｋＡの結合部位とは異なる該分子の他の箇所でＴｒｋＡを活性化することによってそれらの活性を発揮することを示すこととなる。結果は、培養物に抗体抗ＴｒｋＡを加えることによりＮＧＦ神経栄養活性は低減されたが、前記化合物のみでの処置または抗体と併用での前記化合物での処置の間の分化率に殆ど差がなかったことを示す。これは、前記化合物の活性が、ＴｒｋＡ受容体の細胞外部分への結合によって媒介されないことを示唆し得る。しかし、この結果は、式ＩＩＩ〜Ｖの化合物が、ＴｒｋＡの細胞内部分にまたは細胞内シグナル伝達経路の他のメンバーに結合することを除外するものではない。Ｇ７９がニューロトロフィン受容体への結合についてＮＧＦおよびＢＤＮＦと競合することも判明した。この効果は、実験に用いた細胞系の細胞表面ではるかに高度に発現されるｐ７５受容体に対する競合に起因し得る。
【００７９】
式ＩＩＩ〜Ｖの化合物が、分泌促進剤として作用して、ＮＧＦ合成のアップレギュレーションによりそれらの効果を誘導し得る可能性も考慮した。抗体抗ＮＧＦと共にＮＧＦで処理することによりＰＣ１２細胞の分化の低減が誘導されるが、同抗体の存在下でＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１によって誘導される分化率は、該化合物のみでの処理と比較して差がないことが判明した。このため、Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１は、分泌促進剤として作用しない。
【００８０】
式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の作用メカニズムを研究するために、これらの分子の神経栄養活性が、２つの主なＴｒｋＡシグナル伝達経路であるＡＫＴおよびＥＲＫ活性化に依存するかどうかを調査した。阻害剤ＬＹ２９４００２およびＰＤ９８０５９と併用でのＮＧＦによる処置がＮＧＦのみでの処置と比較してＰＣ１２細胞における分化率を低減させるように、前記阻害剤と併用でのＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１による分化率もこれらの化合物のみでの処置と比較して低減されることが判明した。
【００８１】
結論として、本発明のＮＧＦ様小分子は、ＮＧＦ合成を活性化せずに分化を誘導する。前記小分子はまた、ＴｒｋＡの細胞外部分に結合することなく、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴおよびＭＡＰＫ／ＥＲＫ  ＴｒｋＡ経路の活性化によって作用する。
【００８２】
ニューロトロフィン経路を活性化する式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の能力を、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイと共に、Ｐｉ３ＫおよびＭＡＰキナーゼ経路の阻害剤の存在下での分化アッセイで試験した。結果によると、化合物Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１は、ニューロトロフィン経路を活性化する。例えば、ＨＳＰ−２７などの熱ショックタンパク質を種々の薬剤および神経栄養因子によって活性化することができる（Ｌｉｕ  Ｈ．ら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、８６、１５５３−１５６３、２００３；Ｙｕａｎ  Ｙら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５８６、１００−１０５、２００８；Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ  ＡＭら、Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ、４２、１２４−１３２、２０１０）。行った試験により、ＨＳＰ−２７は、ＮＧＦと同様に、Ｇ７９  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激後に有意に活性化されることが証明される。
【００８３】
神経変性疾患のｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを用いて式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の効果も試験した。ＰＤ、ＡＬＳおよび神経炎症のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいてＧ７９の神経保護効果を証明した。また、Ｇ７９は、ＭＳと緑内障両方の動物モデルにおいて、ＥＡＥに罹患した動物の臨床スコアを向上させ、緑内障の眼内のＲＧＣの細胞死を低減させる有益な効果を示した。式ＩＩＩ〜Ｖの化合物の血液脳関門（ＢＢＢ）の貫通も試験した。これらの結果によると、Ｇ７９は、能動輸送によるＢＢＢのより良好な貫通を示し、これは、Ｇ８０およびＧ８１より良好なＧ７９のプロフィールの説明となる。この輸送形態は、受動輸送と比較して、薬物のより特異的な送達および脳内での耐久性を保証する。
【００８４】
最後に、これらの結果は、ニューロトロフィン様分子が神経変性疾患の処置のためのニューロトロフィン自体の有益効果を保持し、さらには強化する、脳へのニューロトロフィンの送達の問題を克服する良好な治療戦略を提供できることを示す。
【００８５】
用語「プロドラッグ」は、本明細書において用いる場合、個体に投与されたときに式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩を直接または間接的に該個体に供給することができる、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物から誘導される任意の化合物、例えば、そのエステル、アミド、リン酸塩などを含む。好ましくは、前記誘導体は、個体に投与されたときに式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物のバイオアベイラビリティーを増加させる、または式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物の生体区画内での放出を促進する化合物である。前記誘導体の種類は、それを個体に投与できるのであれば、およびそれが式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物を個体の生体区画内に供給するのであれば、重要ではない。前記プロドラッグの調製は、当業者に公知の従来の方法によって行うことができる。好適なプロドラッグ誘導体の選択および調製についての従来の手順は、例えば、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）に記載されている。式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物のプロドラッグの一例は、リポソームへのそれらの封入であり得る。この手順により、ペプトイドを適切なリポソーム前駆体（レシチンのようなリン脂質と、コレステロールと、水の組み合わせ）で処理して封入することができる。ペプトイドの親油性に依存して、化合物は、リポソームの親油性部分にまたは水性の内部に保持されることとなる。治療用ポリマーに関しては、末端カルボキサミドの位置選択的加水分解後に作られる共有結合によって、ペプトイドをポリマーに付けることができるだろう。この加水分解は、アミノまたはヒドロキシルと縮合され得る遊離カルボン酸を、ポリマーの活性化基にする。
【００８６】
用語「薬学的に受容可能な」は、化合物または化合物の組み合わせが、製剤の他の成分と十分に相溶性であり、業界基準によって許容され得るレベル以下では患者に有害でないことを意味する。
【００８７】
治療的使用のために、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物の塩は、その対イオンが薬学的に受容可能なものである。
【００８８】
用語「塩」は、本明細書において用いる場合、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物が形成できる任意の安定した塩を含むことを意図したものである。薬学的に受容可能な塩が好ましい。医薬的に許容され得ない塩は、薬理活性を有する化合物の調製に有用であり得る中間体を指すので、医薬的に許容され得ない塩も本発明の範囲に包含される。
【００８９】
塩は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物の塩基形態を、無機酸、例えば塩酸または臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸およびこれらに類する酸；または有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（すなわち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（すなわち、ヒドロキシブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸およびこれらに類する酸などのような、適切な酸で処理することによって簡便に得ることができる。
【００９０】
薬学的に受容可能な塩は、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物の塩基形態を、例えば塩酸、臭化水素酸およびこれらに類するもの、硫酸、硝酸、リン酸ならびにこれらに類するものをはじめとする無機酸；または例えば酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、２−ヒドロキシプロパン酸、２−オキソプロパン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、２−ヒドロキシ−１，２，３−プロパン−トリカルボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−メチルベンゼン−スルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、２−ヒドロキシ安息香酸、４−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸およびこれらに類する酸のような、薬学的に受容可能な適切な酸で処理することによって得ることができる。
【００９１】
逆に、前記塩形態をアルカリでの処理により遊離塩基形態に転化させることができる。
【００９２】
本発明のために、用語「医薬組成物」は、完全にまたは一部分その治療効果（例えば、薬効）の原因であると考えられる活性化合物として本発明の化合物の少なくとも１つまたはそれらの組み合わせを含む、および賦形剤または担体などとして少なくとも１つの薬学的に受容可能な非活性成分を場合によりさらに含むことがある、任意の組成物を意味する。
【００９３】
用語「予防すること」は、かかる用語が適用される疾患、障害もしくは状態が、または疾患、障害もしくは状態に随伴する１つ以上の症状が生じないようにすること、存在しないようにすること、あるいはかかる用語が適用される疾患、障害もしくは状態の、または疾患、障害もしくは状態に随伴する１つ以上の症状の発症または再発を遅延させることを指す。「予防すること」を直ぐ上で定義したが、用語「予防」は、予防する行為を指す。
【００９４】
用語「処置すること」は、本明細書において用いる場合、かかる用語が適用される障害もしくは状態を、またはかかる障害もしくは状態の１つ以上の症状を逆転すること、緩和すること、あるいはかかる用語が適用される障害もしくは状態を、またはかかる障害もしくは状態の１つ以上の症状の進行を抑制することを指す。「処置すること」を直ぐ上で定義したが、用語「処置」は、処置する行為を指す。
【００９５】
用語「被験体」は、動物、特に、哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ガチョウおよびヒトを意味する。特に好ましい被験体は、両方の性別のヒトを含めて、哺乳動物である。
【００９６】
式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグの「有効量」は、１日あたり０．０１ｍｇから５０ｇ、１日あたり０．０２ｍｇから４０ｇ、１日あたり０．０５ｍｇから３０ｇ、１日あたり０．１ｍｇから２０ｇ、１日あたり０．２ｍｇから１０ｇ、１日あたり０．５ｍｇから５ｇ、１日あたり１ｍｇから３ｇ、１日あたり２ｍｇから２ｇ、１日あたり１ｍｇから１．５ｇ、１日あたり１０ｍｇから１ｇ、１日あたり１０ｍｇから５００ｍｇの範囲であり得る。
【００９７】
神経細胞には、脳、脊髄、視神経、網膜および末梢神経節の任意の領域からの細胞が含まれる。ニューロンには、海馬、小脳、脊髄、皮質（例えば、運動または体性感覚皮質）、線条、基底前脳（コリン作動性ニューロン）、腹側中脳（黒質の細胞）、および青斑（中枢神経系の神経アドレナリン（ｎｅｕｒｏａｄｒｅｎａｌｉｎｅ）細胞）をはじめとする、胚、胎児または成体神経組織におけるものが含まれる。
【００９８】
本発明は、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグの使用も包含する。言い換えると、本発明は、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置に使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグに関する。同様に、本発明は神経保護の方法に関し、この方法は、神経保護を必要とする被験体に有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む。
【００９９】
本発明の１つの実施形態において、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグは、化学物質、例えば酸化ストレス状態、毒性物質、感染性生物、放射線、外傷性傷害、低酸素、虚血、異常ミスフォールドタンパク質、興奮毒、フリーラジカル、小胞体ストレス因子、ミトコンドリアストレス因子（電子伝達系の阻害因子を含むが、これに限定されない）、ゴルジ体アンタゴニスト、軸索傷害または喪失、脱髄、炎症、病的ニューロンバースト（痙攣）から選択される（しかしこれらに限定されない）、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷に関連した１つ以上の、好ましくは２つ以上の病的または有害な状態の予防または処置に使用することができる。また好ましくは、本発明の使用および方法は、原因に関係なく、神経細胞の死滅または神経細胞の損傷の予防または処置に関する。
【０１００】
用語「神経保護」、「神経保護の」または「神経保護効果」は、ニューロンおよび膠細胞をはじめとする神経細胞の死もしくは傷害を予防するもしくは低減させる能力、または例えば脳、中枢神経系もしくは末梢神経系に対して病的または有害な状態であった後、神経細胞を救助する、蘇生させるもしくは復活させる能力を指す。したがって、この神経保護効果は、ニューロン機能を維持または回復させるニューロン細胞に授けられている能力を含む。この神経保護効果は、ニューロン細胞の細胞膜を安定させ、またはニューロン細胞機能の正常化に役立つ。この神経保護効果は、ニューロン細胞の生存度または機能の喪失を予防する。この神経保護効果は、細胞死をもたらすニューロンの漸進的劣化の抑制を含む。この神経保護効果は、ストレスからのニューロンの任意の検出可能な保護を指す。神経保護には、神経細胞の再生、すなわち、疾患または外傷後の神経細胞集団の再成長が含まれる。
【０１０１】
現在、神経および精神疾患の大部分には、「疾患修飾薬」と呼ばれる、該疾患の経過を停止させるまたは向上させることを目的とした特定の処置剤がない。これは、かかる疾患に一般的であるが疾患の経過を変化させない対症療法と対照をなす。神経保護薬は、脳疾患の処置のための疾患修飾薬（ＤＭＤ）である。
【０１０２】
然るが故に、１つの実施形態において、本発明は、神経細胞の再生のための医薬の製造における活性成分としての、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグの使用に関する。言い換えると、本発明は、神経細胞の再生に使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグに関する。同様に、本発明は、神経細胞を再生させる方法に関し、この方法は、神経細胞の再生を必要とする被験体に有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む。
【０１０３】
例えば、ニューロン死の遅延または予防を測定することによって、例えば、大脳皮質培養物におけるストレス後のアポトーシスニューロン数の低減などにより、神経保護を直接判定することができる。例えば、かかるストレス後の神経系の組織または器官の損傷または機能喪失の重症度または程度を測定することによって、例えば、中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）または再灌流傷害後の脳梗塞のサイズの減少を測定することなどによって、神経保護を直接判定することもできる。また、神経保護は、磁気共鳴画像診断法（脳容積の測定、トラクトグラフィー、分光法によるＮ−アセチル−アスパラギン酸塩レベルの測定、光コヒーレントトモグラフィー（ｏｐｔｉｃ  ｃｏｈｅｒｅｎｔ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ））によって同定することができる。あるいは、ニューロンの保護についての１つ以上の生物学的メカニズムの活性化の検出（Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２経路の活性化の検出を含むがこれに限定されない）または１つ以上のフェーズ２酵素（ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）を含むがこれに限定されない）の誘導の検出によって、神経保護を間接的に判定することができる。ニューロン保護の検出および測定方法を下の実施例で提供するが、他のかかる方法は当該技術分野において公知である。
【０１０４】
本発明における式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩および／またはプロドラッグを利用する様々な使用および方法は、急性投与、すなわち損傷から数分乃至はおよそ数時間以内に行われるもの、または慢性神経もしくは精神疾患に好適な慢性投与を含む。
【０１０５】
神経保護についてのまたは神経細胞の死滅もしくは損傷の予防もしくは処置についての様々な使用および方法に関する本発明の１つの実施形態では、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグを神経疾患または精神疾患を有する被験体に投与する。
【０１０６】
神経疾患は、脳、脊髄、脳神経、末梢神経、神経根、自律神経系、神経筋接合部および筋肉の障害を含む、中枢および末梢神経系の障害である。
【０１０７】
本発明による予防および／または処置の対象であり得る中枢および末梢神経系の疾患としては、透明中隔欠損、酸リパーゼ疾患、酸マルターゼ欠損、後天性てんかん性失語症、急性散在性脳脊髄炎、アディー瞳孔、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、脳梁欠損症、失認、アイカルディ症候群、アイカルディ−ゴーシェ症候群、ＡＩＤＳ−神経合併症、アレキサンダー病、アルパーズ病、交叉性片麻痺、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質症候群、失語症、失行、クモ膜嚢胞、クモ膜炎、アーノルド−キアリ奇形、動静脈奇形、アスペルガー症候群、運動失調症、毛細血管拡張性運動失調症、運動失調症および小脳または脊髄小脳変性症、心房細動および脳卒中、注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）、自閉症、自律神経機能不全、背部痛、バース症候群、バッテン病、ベッカー型筋強直症、ベーチェット病、ベル麻痺、良性本態性眼瞼痙攣、良性限局性筋萎縮症、良性頭蓋内圧亢進、ベルンハルト・ロート症候群、ビンスワンガー病、眼瞼痙攣、ブロッホ−サルズバーガー症候群、腕神経叢分娩時損傷腕神経叢損傷、ブラッドバリー−エグルストン症候群、脳および脊髄腫瘍、脳動脈瘤、脳梗塞、脳虚血、脳損傷、ブラウン−セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、ＣＡＤＡＳＩＬ、カナヴァン病、手根管症候群、カウザルギー、海綿腫、海綿状血管腫、海綿状奇形、中心性頚髄症候群、中心性脊髄症候群、中枢痛症候群、橋中心髄鞘崩壊、頭部障害、セラミダーゼ欠損症、小脳変性症、小脳形成不全、脳動脈瘤、脳動脈硬化症、脳萎縮、脳性脚気、脳海綿状奇形、脳性巨人症、脳低酸素症、脳性麻痺、脳・眼・顔・骨格症候群、シャルコ−マリー−トゥース病、キアリ奇形、コレステロールエステル貯蔵病、舞踏病、有棘赤血球舞踏病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性起立性調節障害、慢性疼痛、コケイン症候群ＩＩ型、コフィン−ローリー症候群、ＣＯＦＳ、コルポセファリー、昏睡、複合性局所疼痛症候群、先天性両側顔面神経麻痺、先天性筋無力症、先天性ミオパチー、先天性海綿状血管奇形、大脳皮質基底核変性症、頭蓋動脈炎、頭蓋縫合早期癒合症、クロイツフェルト・ヤコブ病、蓄積外傷疾患、クッシング症候群、巨細胞封入体病、サイトメガロウイルス感染症、ダンシングアイズ・ダンシングフィート症候群（Ｄａｎｃｉｎｇ  Ｅｙｅｓ−Ｄａｎｃｉｎｇ  Ｆｅｅｔ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ダンディー−ウォーカー症候群、ドーソン病、ドゥ・モルシェ症候群、パーキンソン病に対する深部脳刺激、デジュリン−クルンプケ（Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｋｌｕｍｐｋｅ）麻痺、認知症、多発梗塞性認知症、意味性認知症、皮質下認知症、レヴィ小体を伴う認知症、歯状核小脳性運動失調症（Ｄｅｎｔａｔｅ  Ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  Ａｔａｘｉａ）、歯状核赤核委縮症、皮膚筋炎、発達性協調運動障害、デビック症候群、糖尿病性神経障害、びまん性硬化症、ドラベ症候群、自律神経異常症、書字障害、難読症、嚥下障害、統合運動障害、ミオクローヌス性小脳性協働収縮異常症、進行性小脳性協働収縮異常症、ジストニア、早期乳児てんかん性脳症、トルコ鞍空洞症候群、脳炎、嗜眠性脳炎、脳瘤、脳症；頭蓋��石灰化および慢性脳脊髄液リンパ球増多を伴う家族性乳児脳症；クリー脳炎；Ｐｓｅｕｄｏ−ＴＯＲＣＨ症候群；偽性トキソプラズマ症候群（Ｐｓｅｕｄｏｔｏｘｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、脳三叉神経領域血管腫症、てんかん、てんかん性片麻痺、エルプ−デュセンヌおよびデジュリン−クルンプケ麻痺、エルプ麻痺、本態性振戦、橋外髄鞘崩壊症、ファブリ病、ファール症候群、失神、家族性自律神経障害、家族性血管腫、家族性特発性基底核石灰化症、家族性周期性四肢麻痺、家族性痙性対麻痺、ファーバー病、熱性痙攣、線維筋性異形成症、フィッシャー症候群、ぐにゃぐにゃ乳児症候群、下垂足、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭型認知症、ガングリオシドーシス、ゴーシェ病、ゲルストマン症候群、ゲルストマン−シュトロイスラー−シェインカー病、巨大軸索ニューロパチー、巨細胞性動脈炎、巨細胞性封入体病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、舌咽神経痛、グリコーゲン蓄積症、ギラン−バレー症候群、ハラーフォルデン−シュパッツ病、頭部損傷、頭痛、持続性片側片頭痛、片側顔面攣縮、交代性片麻痺、遺伝性神経障害、遺伝性対麻痺、遺伝性多発神経炎性運動失調症、帯状ヘルペス、耳帯状ヘルペス、平山症候群、ホームズ−アディー症候群、全前脳胞症、ＨＴＬＶ−１関連脊髄症、ヒューズ症候群、ハンティングトン病、水無脳症、水頭症、正常圧水頭症、水脊髄症、高コルチゾール症、過眠症、筋緊張亢進、筋緊張低下、低酸素症、免疫介在性脳脊髄炎、封入体筋炎、色素失調症、乳児筋緊張低下、乳児神経軸索ジストロフィー、乳児フィタン酸蓄積症、乳児レフサム病、乳児痙攣、炎症性筋疾患、後頭孔脳脱出症、腸性脂肪異栄養症、頭蓋内嚢胞、頭蓋内圧亢進、アイザック症候群、ジュベール症候群、カーンズ−セイヤー症候群、ケネディ病、キンスブルン症候群、クライネ−レヴィン症候群、クリッペル−フェイユ症候群、クリッペル−トレノネー症候群（ＫＴＳ）、クリューヴァー−ビューシー症候群、コルサコフ健忘症候群、クラッベ病、クーゲルベルク−ヴェランダー病、クールー、ランバート−イートン筋無力症症候群、ランドー−クレフナー症候群、外側大腿皮神経絞扼、延髄外側症候群、学習障害、リー病、レノックス−ガストー症候群、レッシュ−ナイハン症候群、白質ジストロフィー、レヴァイン−クリチュリー症候群、レヴィ小体認知症、脂質蓄積症、脂質蛋白症、滑脳症、閉じ込め症候群、ルー・ゲーリック病、狼瘡−神経学的後遺症、ライム病−神経学的合併症、マシャド−ジェセフ病、巨大頭蓋症、巨脳症、メルカーソン−ローゼンタール症候群、髄膜炎、髄膜炎と脳炎、メンケス病、異常感画成大腿痛、異染性白質ジストロフィー、小頭症、片頭痛、ミラー・フィッシャー症候群、軽度認知障害、ミニ脳卒中、ミトコンドリアミオパチー、メービウス症候群、単肢筋萎縮症、運動ニューロン疾患、もやもや病、ムコ脂質症、ムコ多糖症、多巣性運動神経障害、多発梗塞性認知症、多発性硬化症、多系統萎縮症；起立性低血圧を伴う多系統萎縮症；筋ジストロフィー、先天性筋無力症、重力筋無力症、髄鞘崩壊性広汎性硬化症、乳児のミオクローヌス脳症、ミオクローヌス、ミオパチー、先天性ミオパチー、甲状腺中毒性ミオパチー、筋強直症、先天性筋強直症、ナルコレプシー、神経有棘赤血球症、脳内鉄蓄積を伴う神経変性、神経線維腫症、神経弛緩薬性悪性症候群、ＡＩＤＳの神経学的合併症、ライム病の神経学的合併症、サイトメガロウイルス感染症の神経学的結果、ポンぺ病の神経症状、狼瘡の神経学的後遺症、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、神経元セロイドリポフスチン沈着症、ニューロン遊走障害、遺伝性ニューロパチー、神経サルコイドーシス、神経毒性、海綿状母斑、ニーマン−ピック病、正常圧水頭症、後頭神経痛、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、オプソクローヌスミオクローヌス、起立性低血圧、オサリバン−マクラウド症候群、過用症候群、慢性疼痛、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症、傍腫瘍性症候群、錯感覚、パーキンソン病、発作性舞踏アテトーゼ、発作性片側頭痛、パリー−ロンベルク、ペリツェウス−メルツバッハ病、ペナ・ショケイア症候群ＩＩ型、神経周囲嚢胞、周期性四肢麻痺、末梢性ニューロパチー、脳室周囲白質軟化症、遷延性植物状態、広汎性発達障害、フィタン酸蓄積症、ピック病、神経圧迫（Ｐｉｎｃｈｅｄ  Ｎｅｒｖｅ）、梨状筋症候群、下垂体腫瘍、多発性筋炎、ポンぺ病、孔脳症、ヘルペス後神経痛、感染後脳脊髄炎、ポリオ後症候群、体位性低血圧、起立性頻拍症候群、体位性頻脈症候群、原発性歯状核萎縮、原発性側索硬化症、原発性進行性失語症、プリオン病、進行性顔面片側萎縮、進行性歩行性運動失調症、進行性多巣性白質脳症、進行性硬化性灰白質ジストロフィー、進行性核上性麻痺、相貌失認、偽性脳腫瘍、ラムゼイ・ハント症候群Ｉ（以前はミオクローヌス性小脳性共同運動障害、進行性小脳性共同運動障害、歯状核赤核変性症またはラムゼイ・ハント小脳症候群として公知）、ラムゼイ・ハント症候群ＩＩ（以前は耳帯状ヘルペスとして公知）、ラムッセン脳炎、反射性交換神経性ジストロフィー症候群、レフスム病、乳児レフスム病、反復性運動障害、反復性ストレス損傷、下肢静止不能症候群、レトロウイルス関連脊髄症、レット症候群、ライ症候群、リウマチ性脳炎、ライリー−デイ症候群、仙骨神経根嚢胞、聖ヴァイタス舞踏、唾液腺病、サンドホフ病、シルダー病、裂脳症、ザイテルベルガー病、発作性障害、意味性認知症、意味性認知症、眼中隔異形成、乳児重症ミオクローヌスてんかん（ＳＭＥＩ）、揺さぶられっ子症候群、帯状疱疹、シャイ−ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、睡眠時無呼吸症、睡眠病、ソトス症候群、痙縮、二分脊椎、脊髄梗塞、脊髄損傷、脊髄腫瘍、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳萎縮症、脊髄小脳変性症、スティール−レチャードソン−オルシェウスキィ症候群、全身硬直症候群、線条体黒質変性症、脳卒中、スタージ−ウェーバー症候群、亜急性硬化性全脳炎、皮質下動脈硬化症性脳症、ＳＵＮＣＴ頭痛、嚥下障害、シデナム舞踏病、失神、梅毒性脊髄硬化症、脊髄水空洞症、脊髄空洞症、全身性エリテマトーデス、脊髄ろう、遅発性ジスキネジー、ターロヴ嚢胞、テイ−サックス病、側頭動脈炎、係留脊髄症候群、トムゼン筋緊張症、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパチー、疼痛性チック、トッド麻痺、トゥレット症候群、一過性脳虚血発作、伝播性海綿状脳症、横断性脊髄炎、外傷性脳損傷、振戦、三叉神経痛、熱帯性痙性���全対麻痺、トロイアー症候群、結節性硬化症、血管拡張性腫瘍（Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｒｅｃｔｉｌｅ  Ｔｕｍｏｒ）；中枢および末梢神経系の血管炎症候群；フォン・エコノモ病、フォン・ヒッペル−リンダウ病（ＶＨＬ）、フォン・レックリングハウゼン病、ワインベルク症候群、ウェルトニッヒ−ホフマン病、ウェウニッケ−コルサコフ脳症、ウェスト症候群、むち打ち、ウイップル病、ウイリアムズ症候群、ウイルソン病、ウォルマン病、Ｘ染色体性球脊髄性筋萎縮症、ツェルウェーガー症候群、視神経炎、慢性疲労症候群、線維筋痛症（ｆｉｂｒｏｍｉａｌｇｉａ）；精神疾患、例えば気分障害、大うつ病、双極性症候群、精神病（ｐｓｙｃｏｓｉｓ）、統合失調症（ｅｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）、強迫性障害など；中毒性または薬物乱用疾患、例えばアルコール中毒および薬物乱用；脳症、例えば肝性脳症が挙げられるが、臨床像の知識は進歩するのでこれらに限定されない。
【０１０８】
本発明による予防および／または処置の対象であり得る精神障害は、アメリカ精神医学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）により出版されたＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、第４版（ＤＳＭ−ＩＶ）に列記されているものを含み、小児と成人の両方についてのすべての精神健康障害を包含する。特に、精神障害としては、急性ストレス障害；詳細不明の適応障害；不安を伴う適応障害；抑うつ気分を伴う適応障害；行為の障害を伴う適応障害；不安と抑うつ気分の混合を伴う適応障害；情動と行為の混合した障害を伴う適応障害；パニック障害の病歴のない広場恐怖症；神経性食欲不振症；反社会性人格障害；一般身体疾患による不安障害；特定不能の不安障害；回避性人格障害；特定不能の双極性障害；１番最近のエピソードが抑うつエピソードであり、完全寛解にある、双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつエピソードであり、部分寛解にある、双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつエピソードである、軽度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつエピソードである、中等度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつエピソードであり、精神病的特徴を伴う、重度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつエピソードであり、精神病的特徴を伴わない、重度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが躁病エピソードである、詳細不明の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが躁病エピソードであり、完全寛解にある、双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが躁病エピソードである、部分寛解にある、双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが躁病エピソードであり、軽度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつである、中等度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが躁病エピソードであり、精神病的特徴を伴う、重度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが躁病エピソードであり、精神病的特徴を伴わない、重度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードである、詳細不明の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードであり、完全寛解にある、双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードであり、部分寛解にある、双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードである、軽度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが抑うつである、中等度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードであり、精神病的特徴を伴う、重度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードであり、精神病的特徴を伴わない、重度の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが混合エピソードである、詳細不明の双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが特定されていない双極性障害Ｉ型；１番最近のエピソードが軽躁病エピソードである、双極性障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがあり、完全寛解にある双極性障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがあり、部分寛解にある双極性障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがある、軽度の双極性障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがある、中等度の双極性障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがあり、精神病的特徴を伴う、重度の双極��障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがあり、精神病的特徴を伴わない、重度の双極性障害Ｉ型；単一の躁病エピソードがある、特定されていない双極性障害Ｉ型；双極性障害ＩＩ型；身体醜形障害；境界性人格障害；呼吸関連睡眠障害；短期精神病性障害；神経性過食症；概日リズム睡眠障害；転換性障害；気分循環障害；妄想性障害；依存性人格障害；離人症性障害；特定不能の抑うつ障害；解離性健忘；特定不能の解離性障害；解離性遁走；解離性同一性障害；性交困難症；特定不能の睡眠異常；別の障害に関連した睡眠異常；気分変調性障害；特定不能の摂食障害；露出症；身体疾患による女性性交疼痛症；身体疾患による女性性的欲求低下障害；女性オルガズム障害；女性性的興奮障害；フェティシズム；窃触症；青年または成人の性同一性障害；小児の性同一性障害；特定不能の性同一性障害；全般性不安障害；演技性人格障害；性的欲求低下障害；心気症；特定不能の衝動調節障害；別の障害に関連した不眠症；間欠性爆発性障害；窃盗癖；完全寛解にある、再発性大うつ病性障害；部分寛解にある、再発性大うつ病性障害；再発性で軽度の大うつ病性障害；再発性で中等度の大うつ病性障害；精神病的特徴を伴う、再発性で、重度の大うつ病性障害；精神病的特徴を伴わない、再発性で、重度の大うつ病性障害；再発性の、詳細不明の大うつ病性障害；単一のエピソードがあり、完全寛解にある大うつ病性障害；単一のエピソードがあり、部分寛解にある大うつ病性障害；単一のエピソードがある、軽度の大うつ病性障害；単一のエピソードがある、中等度の大うつ病性障害；単一のエピソードがあり、精神病的特徴を伴う、重度の大うつ病性障害；単一のエピソードがあり、精神病的特徴を伴わない、重度の大うつ病性障害；単一のエピソードがある、詳細不明の大うつ病性障害；身体疾患による男性性交疼痛症；男性勃起障害；身体疾患による男性勃起障害；身体疾患による男性性的欲求低下障害；男性オルガズム障害；身体疾患による気分障害；自己愛性人格障害；ナルコレプシー；悪夢障害；強迫性障害；強迫性人格障害；身体疾患による他の女性性機能不全；身体疾患による他の男性性機能不全；精神的要因と身体疾患の両方に関連した疼痛障害；精神病的特徴を伴う疼痛障害；広場恐怖症を伴うパニック障害；広場恐怖症を伴わないパニック障害；妄想性人格障害；特定不能の性的倒錯；特定不能脳睡眠時随伴症；病的賭博；小児性愛；特定不能の人格障害；外傷後ストレス障害；早漏；原発性過眠症；原発性不眠症；  妄想を伴う、身体疾患による精神病性障害；幻覚を伴う、身体疾患による精神病性障害；特定不能の精神病的障害；放火癖；分裂感情障害；分裂性人格障害；緊張病型統合失調症；破瓜型統合失調症；妄想型統合失調症；残遺型統合失調症；鑑別不能型統合失調症；統合失調症様障害；統合失調症型人格障害；性嫌悪障害；特定不能の性障害；特定不能の性機能不全；性的マゾヒズム；性的サディズム；共有精神病性障害；身体疾患による、過眠症型睡眠障害；身体疾患による、不眠症型睡眠障害；身体疾患による、混合型睡眠障害；身体疾患による、睡眠時随伴症型睡眠障害；睡眠時驚愕症；睡眠時遊行障害；社会恐怖；身体化障害；特定不能の身体表現性障害；特定の恐怖；服装倒錯フェティシズム；トリコシロマニー；鑑別不能型身体表現性障害；膣痙；および窃視症から選択される障害が挙げられる。
【０１０９】
好ましくは、ＮＧＦまたは他のニューロトロフィンが、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよび／またはｐ７５経路のいずれかによる細胞分化および細胞生存に対するそれらの改善された効果のため、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏいずれかで有効であることが当該技術分野の現状で立証されている疾患の処置に、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグを使用することができる。したがって、神経変性障害、例えば筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症、脊髄性筋委縮症；神経炎症、例えば多発性硬化症および視神経脊髄炎；大うつ病性障害；統合失調症；緑内障；または末梢神経障害、例えば糖尿病性もしくはＡＩＤＳ神経障害の中から選択される神経疾患の処置に、本発明に包含される化合物を使用することができる。さらに、ＮＧＦ細胞分化活性を修飾することおよび細胞増殖を停止させることによる癌の処置に、本発明の化合物を指示することもできる。ＮＧＦが、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５経路のいずれかによる細胞分化および細胞生存に対するそれらの改善された効果のため、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏいずれかで有効であることが当該技術分野の現状で立証されている癌タイプには、以下のものを挙げることができる：膠芽腫、星状細胞腫、髄芽種、神経鞘腫、神経芽種、髄膜腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、骨肉腫、肝細胞癌、卵巣癌腫、肺腺癌または食道癌腫。
【０１１０】
本発明の１つの実施形態における神経保護のまたは神経細胞の死滅もしくは損傷の予防または処置の様々な使用および方法では、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグを健常被験体、好ましくは１８歳より高齢の健常被験体、さらに好ましくは４５歳より高齢の健常被験体、さらにいっそう好ましくは５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００歳より高齢の健常被験体に投与する。
【０１１１】
用語「健常被験体」は、その普通の意味はもちろん、神経疾患または精神疾患以外の１つ以上の病的状態に罹患していることがある被験体も含むことを意図したものである。
【０１１２】
式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグの神経保護特性は、結果として、ニューロン細胞死または傷害に起因する神経系機能の様々な障害の部分的なまたは完全な予防または処置を有する。したがって、本発明は、さらに、神経疾患または精神疾患の予防または処置のための医薬の製造における活性成分としての、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグの使用に関する。言い換えると、本発明は、神経疾患または精神疾患の予防または処置に使用するための、式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグにも関する。同様に、本発明は、神経疾患または精神疾患の予防または処置方法も関し、この方法は、前記予防または処置を必要とする被験体に、有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物またはその薬学的に受容可能な塩もしくはプロドラッグを投与することを含む。前記神経疾患または精神疾患は、上に列記したもののいずれか１つであり得る。
【０１１３】
好ましくは、前記神経疾患または精神疾患は、神経変性障害、炎症および一定のタイプの癌、多発性硬化症、視神経脊髄炎、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、フリードライヒ運動失調症、ハンティングトン病、レヴィ小体を伴う認知症、脊髄性筋委縮症、大うつ病性障害、統合失調症、緑内障または末梢神経障害（糖尿病性もしくはＡＩＤＳ神経障害）から選択される。
【０１１４】
本発明のもう１つの目的は、神経亢進薬としての式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグの使用、または神経亢進薬を製造するための使用である。
【０１１５】
神経亢進薬としては、学習および記憶、注意力、気分、コミュニケーションスキルならびに性行為を改善するものが挙げられる。神経亢進薬の例は、長期シナプス増強（ＬＴＰ）もしくは長期抑圧（ＬＴＤ）、カルシウムチャネルの修飾、またはｃＡＭＰ応答配列結合（ＣＲＥＢ）タンパク質を標的にするものである。ｃＡＭＰは、サイクリックアデノシン一リン酸（ｃｙｃｌｉｃ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）の頭文字である。神経亢進薬の特定の例は、ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばロリプラム；ドネペジル；ＮＭＤＡグルタミン酸受容体のアゴニスト、例えばＤ−シクロセリン；アンパカイン；モダフィニル；メチルフェニデートである。
【０１１６】
本発明の医薬組成物を、その所期の目的を達成する任意の手段によって投与することができる。例えば、投与は、経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、経鼻、経粘膜、直腸または頬側経路であり得る。１つの実施形態では、本組成物を経口投与する。
【０１１７】
式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグを投与のために様々な剤型に製剤することができる。適切な組成物として、全身投与薬に通常用いられるすべての組成物、例えば、任意の固体組成物（例えば、錠剤、カプセル、顆粒など）または液体組成物（例えば、溶液、懸濁液、エマルジョンなど）を挙げることができる。式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物の医薬組成物を調製するために、活性成分としての有効量の式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物（場合により塩形態もしくはプロドラッグのもの）を、薬学的に受容可能な担体と併せて均質混合物にすることができ、この担体は、投与に望まれる調製物の形態に依存して様々な形態をとることができる。経口投与、直腸投与、経皮投与、髄腔内投与、静脈内投与または非経口注射による投与に特に好適な単位剤形のこれらの医薬組成物が望ましい。例えば、経口剤形の組成物を調製する際、任意の通例の製薬用媒体、例えば、経口液体調製物、例えば懸濁液、シロップ、エリキシル、エマルジョンおよび溶液、の場合には水、グリコール、油、アルコールおよびこれらに類するもの；または粉末、ピル、カプセルおよび錠剤の場合には固体担体、例えばデンプン、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤およびこれらに類するもの、などを用いることができる。投与の容易さのため、錠剤およびカプセルが最も有利な経口投薬単位形の代表であり、この場合は明らかに固体製薬用担体が用いられる。非経口組成物については、通常、担体は、少なくとも大部分、滅菌水を含むが、例えば可溶性を補助するために他の成分を含むこともある。例えば、担体が食塩液、グルコース溶液または食塩液とグルコース溶液の混合物を含む注射用溶液を調製することができる。注射用懸濁液を調製することもでき、この場合は適切な液体担体、懸濁化剤およびこれらに類するものを用いることができる。使用直前に液体形調製物に変換することを意図したものである固体形調製物も含まれる。経皮投与に好適な組成物の場合、担体は、皮膚に対する有意な有害効果を誘導しない任意の種類の小率の好適な添加剤と場合によっては併せて、浸透増進剤もしくは好適な湿潤剤または両方を場合によっては含む。薬物投与のための種々の剤型およびそれらの調製についての総説は、書籍「Ｔｒａｔａｄｏ  ｄｅ  Ｆａｒｍａｃｉａ  Ｇａｌｅｎｉｃａ」、ｄｅ  Ｃ．  Ｆａｕｌｉ  ｉ  Ｔｒｉｌｌｏ、第１０版、１９９３、Ｌｕｚａｎ  ５，Ｓ．Ａ．ｄｅ  Ｅｄｉｃｉｏｎｅｓにおいて見つけることができる。
【０１１８】
投与の容易さおよび剤形の均一性のため単位剤形の上述の医薬組成物を製剤することが特に有利である。本明細書において用いる場合の単位剤形は、必要な製薬用担体と共同で所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性成分を各単位が含む、単位投薬物として好適な物理的に別個の単位を指す。かかる単位剤形の例は、錠剤（割線入り錠剤またはコーティング錠を含む）、カプセル、ピル、坐剤、粉末パケット、ウエハース、注射用溶液または懸濁液およびこれらに類するもの、ならびにこれらの分離された多数のものである。
【０１１９】
単位剤形を含めて本発明による組成物は、約０．１％から７０％、または約０．５％から５０％、または約１％から２５％、または約５％から２０％の範囲である量の活性成分を含有することができ、残部は担体を含み、前述の百分率は、その組成物または剤形の総重量に対するｗ／ｗである。
【０１２０】
投与すべき式Ｉ〜Ｖの任意の式の化合物、その薬学的に受容可能な塩またはプロドラッグの用量は、個々の症例に依存し、また慣例によるとおり至適効果のために個々の症例の状態に適応させなければならない。したがって、前記用量は、もちろん、治療または予防のために各場合に用いられる化合物の投与頻度ならびに作用の効力および継続時間に依存するが、疾患および症状の性質および重症度、ならびに処置を受ける被験体の性別、年齢、体重、併用投薬物および個々の応答性にも、ならびにその治療が急性であるか、予防的であるかにも依存する。用量を体重の関数で適応させてもよいし、または周期的適用に適応させてもよい。日用量を１日１回投与してもよいし、または倍数量、例えば１日２回、１日３回もしくは１日４回で投与してもよい。
【０１２１】
化合物の合成
本開示にかんがみて当業者に公知の方法を用いて本発明の化合物を調製することができる。例えば、本発明の化合物をＭａｓｉｐら、２００５に記載されているように調製することができる。
【０１２２】
化合物の試験
実施例において説明する試験に加えて、本発明の化合物をアルツハイマー病ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルについては次のように試験することができる：ヒト神経芽腫細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙを使用して、アルツハイマー病における被験化合物の神経保護効果を研究する。前記細胞を異なる濃度（２０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬ）の被験化合物と被験化合物（１００ｎｇ／ｍＬ）とで３時間、前処置する。その後、アミロイドベータフィブリル（１００μＭ）を添加し、２４時間インキュベートする。生存細胞数を翌日、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイによって判定する。
【０１２３】
本発明の化合物によるＴｒｋＡ、ＩκＢαおよびＳＡＰＫ／ＪＮＫリン酸化の誘導を次のように試験することができる：ＴｒｋＡの活性化は、ＮＧＦ応答性ニューロンおよびＰＣ１２細胞の分化および生存につながるシグナル伝達カスケードにおける最初の事象である（ＧｒｅｅｎｅおよびＴｉｓｃｈｌｅｒ、１９７６；Ｃｈａｏ、２００３；ＨｕａｎｇおよびＲｅｉｃｈａｒｄｔ、２００３）。ＮＧＦ様ペプトイドの神経栄養活性が、ＴｒｋＡ受容体との相互作用によって媒介されるかどうかを評価するために、ＰＣ１２細胞においてＴｒｋＡリン酸化を誘導するそれらの能力を分析することができる。ＰＣ１２細胞分化に対して有効であった濃度範囲でペプトイドの活性を試験することができる。
【０１２４】
ウエスタンブロット分析：サブコンフルエントな細胞を、２％ＦＢＳおよび１％ＨＳを含有する培地で一晩成長させ、指示された時点で１００ｎｇ／ｍＬのＮＧＦまたはＮＧＦ様小化学物質で刺激する。その後、細胞を冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、ＳＤＳサンプルバッファー（β−メルカプトエタノールおよび２ｍＭ  ＰＭＳＦを含有）中で短時間、超音波処理する。溶解産物（２００μｇの全タンパク質）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ニトロセルロース（Ｗｈａｔｍａｎ、ドイツ国Ｄａｓｓｅｌ）に転写する。ＴＢＳＴバッファー（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ／０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０）中５％脱脂乳でのブロッキング後、抗ｐ−ＴｒｋＡ（Ｔｙｒ４９０）抗体（１：１０００）、抗ＴｒｋＡ抗体（１：１０００）、抗ｐ−ＩκＢα（Ｓｅｒ３２／３６）（５Ａ５）マウス抗体（１／１０００）、抗ＩκＢα（Ｌ３５Ａ５）マウス抗体（１：１０００）、抗ｐ−ＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｔｈｒ１８３／Ｔｒｙ１８５）抗体（１：１０００）または抗ＳＡＰＫ／ＪＮＫ抗体（１／１０００）（これらのすべてがＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇからのものである）で一晩、４℃でブロットをプローブし、その後、ＨＲＰコンジュゲートＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に１時間、室温（ＲＴ）でインキュベートする。増強化学発光（ＥＣＬ）系（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用して、リン酸化された化学種の検出を行う。
【０１２５】
本発明の化合物がｐ７５を活性化するかどうかを調査するために、ＰＣ１２およびＲＮ２２細胞系においてＮＦ−κＢ経路（Ｂｏｎｉｚｚｉ  Ｇ、Ｋａｒｉｎ  Ｍ．、２００４）およびＳＡＰＫ／ＪＮＫ経路（細胞死）の活性化を分析することができる。ＲＮ２２細胞は、高レベルのｐ７５受容体メッセージおよびタンパク質を発現するが、ＴｒｋＡ発現は検出不能である（Ｇｅｎｔｒｙら、２０００）。ＮＦ−κＢは、ホモまたはヘテロ二量体から成る二量体形態で転写調節因子として機能的に活性であり、基本型ＮＦ−κＢ二量体はｐ６５およびｐ５０サブユニットから成る。ＮＦ−κＢの活性化は、主として、ＩκＢタンパク質（ＮＦ−κＢ二量体に結合している阻害性タンパク質の１ファミリー）の分解によって発生する。活性化刺激に応答して、前記阻害性タンパク質はリン酸化され、これにより該阻害性タンパク質は、ユビキチン化およびその後の分解の標的になる。前記阻害性ファミリーのメンバーの１つ、ＩκＢαは、大部分のＮＦ−κＢ活性化因子に応答して分解される（Ｇｈｏｓｈら、１９９８）。ＮＧＦおよび異なる選択ペプトイドに応答してのＮＦ−κＢ活性化を検査するために、ＮＧＦおよびペプトイドで様々な時間にわたって処置したＲＮ２２およびＰＣ１２細胞からの全細胞抽出物のウエスタンブロットを、抗体抗ホスホ−ＩκＢαでプローブする。
【０１２６】
幾つかのニューロン系において、ＪＮＫ活性化は、プログラム細胞死の誘導と因果的に結び付けられている（Ｂｈａｋａｒら、２００３）。培養では、ｐ７５によるＮＧＦシグナル伝達がＮＦ−ＫｂとＪＮＫの両方の活性化をもたらし、その結果、最終的にプログラム細胞死となった（Ｙｏｏｎら、１９９８）。ＲＮ２２細胞におけるＪＮＫの活性を検査するために、抗体抗−ホスホ−ＳＡＰＫ／ＪＮＫを用いてウエスタンブロットを行って、この経路の活性化を評価することができる。
【０１２７】
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）におけるニューロトロフィンペプチドミメティクス（例えば、ＮＧＦミメティックペプトイド）の効果は、次のように評価することができる：
動物、実験的自己免疫性脳脊髄炎導入、および処置。実験は、バルセロナ大学動物実験委員会（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂａｒｃｅｌｏｎａ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ）により承認された。以前に記載された（Ｐａｌａｃｉｏｓら、２００７）ように、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中の５０μｇの結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（Ｈ３７Ｒａ株；Ｄｉｆｃｏ、ミシガン州デトロイト）で乳化させた３００μｇのミエリン乏突起細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド３５−５５（Ｓｐｉｋｅｍ、フィレンツェ）を用いて、Ｈａｒｌａｎからの雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８〜１２週齢）の両後足の肉趾に免疫処置を施す。免疫処置時および２日後にマウスに百日咳毒素（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｔｏｘｉｎ）（Ｓｉｇｍａ）（５００ｎｇ）を腹腔内注射する。マウスを計量し、盲検観察者が毎日、疾患の臨床徴候について点検する。ＥＡＥの疾患重症度を次の尺度によって評価する：０＝正常；０．５＝軽度のだらりとした尾；１＝だらりとした尾；２＝後肢の軽度の不全対麻痺（ｐａｒａｐｅｓｉｓ）、不安定歩行；３＝中等度の不全対麻痺（ｐａｒａｐｅｓｉｓ）、随意運動まだ可能；４＝対麻痺または四肢不全麻痺；５＝瀕死状態。臨床研究について示すデータは、指示された動物数で行った２回の独立した実験（Ｍｏｒｅｎｏら、２００６）の代表である。
【０１２８】
５％ＤＭＳＯを伴う水で被験化合物を調製する。免疫処置後に開始して毎日腹腔内注射により被験化合物（２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇ）またはプラセボ（水＋５％ＤＭＳＯ）でマウスを処置する。この研究の終了時、マウスに麻酔をし、０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．６）中４％のパラホルムアルデヒドで心臓内灌流を施す。脳、脊髄および脾臓を切開し、固定するか、使用するまで冷凍する。この研究に含めたすべてのマウスから血清を採取し、トランスアミナーゼレベルを測定する。
【０１２９】
ニューロトロフィンペプチドミメティクス（例えば、ＮＧＦ様ペプトイド）の「ｉｎ  ｖｉｖｏ」での効果を評価するために、ＭＳの動物モデルにおいてニューロトロフィンペプチドミメティクス（例えば、ＮＧＦミメティックペプトイド）の効果を研究することができる。ＭＯＧ３５−５５ペプチドでの免疫処置を施したＣ５７ＢＬ／６マウスを異なる化合物濃度の被験化合物で第０日から第２５日まで毎日腹腔内処置する。ＣＮＳおよび末梢炎症における本発明の化合物の効果は、次のように試験することができる。
【０１３０】
リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応。死亡時に得たマウスからの脳および脊髄をＲＮＡ溶解バッファー中で均質化する。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州Ｃｈａｔｗｗｏｒｔｈ）単離システムを使用して全ＲＮＡを抽出し、これはＲＮａｓｅ−Ｆｒｅｅ  ＤＮａｓｅ  Ｓｅｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ）を使用するＤＮａｓｅ処理を含む。Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ａｒｃｈｉｖｅ  Ｋｉｔ；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティー）を使用して、全ＲＮＡ（３５μｇ）を逆転写する。リアルタイム反応を２５℃で１０分間、続いて３７℃で２時間行い、最終的に４℃で保存する。プライマーおよび標的特異的蛍光標識ＴａｑＭａｎプローブは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｓｓａｙ）から購入することができる。例えば、ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用することができる。０．９μＭの各プライマーと０．２５μＭのプローブと２０ｎｇの相補的ＤＮＡを使用して、ＤＮＡ  Ｅｎｇｉｎｅ  Ｏｐｔｉｃｏｎ  ２  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、マサチューセッツ州ウォータータウン）で相補的ＤＮＡの増幅を行う。反応条件は、５０℃で最初の２分、続いて９５℃で１０分および４０サイクルの９５℃で１５秒＋６０℃で１分。各サンプルを三重反復で実行し、各プレートの異なるウェルで標的および内在性対照を増幅する。試験した遺伝子の発現をハウスキーピング遺伝子１８ｒＲＮＡのレベルを基準にして定量する（Ｐａｌａｃｉｏｓら、２００８）。
【０１３１】
免疫組織化学。脳および脊髄のパラホルムアルデヒド固定、パラフィン包埋切片を用いて組織学的評価を行う。切片（１０μｍ厚）をヘマトキシリンおよびＬｕｘｏｌ  Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅで染色して、炎症および脱髄を評価する。炎症および脱髄についての半定量的組織学的評価を行い、次の尺度を用いて盲検的に採点する：０＝正常；１＝１から３／切片  極微の脱髄を伴う血管周囲カフ；２＝中等度脱髄を伴う３から１０の血管周囲カフ／切片；３＝広範にわたる血管周囲カフ、大きいコンフルエントな病変を伴う広範囲脱髄（Ｖｉｌｌｏｓｌａｄａら、２００１）。
【０１３２】
脳および脊髄の１０μｍパラフィン包埋切片を用いて、前に記載された（Ｖｉｌｌｏｓｌａｄａら、２００１）ように免疫組織化学的手順を行う。一次抗体をＭＣＡ５００（Ｓｅｒｏｔｅｃからのラット抗マウスＣＤ３）については１／１０００およびＭＣＡ１１０７（Ｓｅｒｏｔｅｃからのラット抗マウスＣＤ４）については１／５００の濃度で添加する。切片を一次抗体なしでインキュベートすることにより、または免疫反応を生じさせなかった対応するアイソタイプ対照を使用することにより、免疫反応の特異性を判定する。
【０１３３】
増殖アッセイ。細胞増殖における被験化合物の効果のｉｎ  ｖｉｔｒｏ評価のために、免疫処置を施していないナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスから脾細胞を採取する。脾細胞増殖アッセイを、以前に記載された（Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｆｏｒｅｒｏら、２００８）ように行う。
【０１３４】
末梢免疫応答における被験化合物の効果を評価するために、ナイーブマウスの脾細胞内の免疫抗原（ＭＯＧ）に対する増殖応答、ならびにプラセボおよび処置マウスからの脾臓細胞内のサイトカインのプロフィールを評価する。インターロイキン２（ＩＬ２）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）およびインターロイキン１０（ＩＬ１０）の遺伝子発現をプラセボおよび処置マウスからの脾細胞での実験終了時に定量的逆転写酵素ＰＣＲによって調査することができる。
【０１３５】
統計解析。ＥＡＥスコアを比較するために両側マン−ホイットニーＵ検定、疾患発生率を比較するためにカイ２検定、およびＥＡＥ発症日の差のためにカプラン−マイヤー曲線を用いて、統計解析を行うことができる。０．０５未満のｐ値は有意差を示すと考える。ＳＰＳＳ  １６．０統計プログラム（ＳＰＳＳ、イリノイ州シカゴ）を使用して統計的評価を行う。
【０１３６】
以下の実施例は、本発明の化合物、組成物および方法を例証するものであるが、限定するものではない。臨床治療の際に通常遭遇する、および本開示にかんがみて当業者には明らかである、様々な条件およびパラメーターの好適な変更および適応は、本発明の精神および範囲内である。
【実施例】
【０１３７】
実施例１
コンビナトリアルケミストリーによるＮＧＦアゴニストの設計
概略。溶媒、アミンおよび他の試薬を商品供給業者から購入し、さらに精製せずに使用した。マイクロ波照射下で行う反応は、ジムロート冷却器を装着した１００ｍＬ丸底フラスコで行った。このフラスコをＣＥＭ  Ｍｏｄｅｌ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ装置の単一モードキャビティに導入した。ＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎ  Ｉｎｏｖａ  ５００装置（１Ｈ  ＮＭＲ、５００ＭＨｚ；１３Ｃ  ＮＭＲ、１２５ＭＨｚ）でおよびＵｎｉｔｙ  ３００装置（１Ｈ  ＮＭＲ、３００ＭＨｚ；１３Ｃ  ＮＭＲ、７５ＭＨｚ）で記録した。適切な場合には、化合物の１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲピークの割り当てをｇＤＱＣＯＳＹおよびｇＨＳＱＣ実験によって確認した。異なる配座異性体の存在が非常に複雑なスペクトルをもたらす；下に与える吸収は、サンプル中に存在する主配座異性体を指す。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｓｅｒｉｅｓ  １１００（ＵＶ検出器１３１５Ａ）モジュラーシステムを用い、逆相Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  Ｃ８（２５×０．４６ｃｍ、５μｍ）カラムを使用し、移動相としてＣＨ３ＣＮ−バッファーギ酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ＝５．０）混合物を１ｍＬ／分で用い、２２０ｎｍでモニターすることによって行った。半分取ＲＰ−ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ（米国マサチューセッツ州ミルフォード）システムで行った。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ−ＦＡＢ）は、ＩＱＡＣ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ  ｄｅ  Ｑｕｉｍｉｃａ  Ａｖａｎｚａｄａ  ｄｅ  Ｃａｔａｌｕｎａ−（スペイン）で行った。
【０１３８】
個々のペプトイドの合成。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイのための個々のペプトイドＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１の合成は、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎグループによって報告された基礎手順（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら、１９９２）に従って、しかし多少変更して、行った。
【０１３９】
フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護ＲｉｎｋアミドリンカーＡＭ  ＲＡＭを担持している１％架橋ポリスチレン（ｐｏｌｙｓｔｅｒｅｎｅ）樹脂（０．７９ｍｍｏｌ／ｇ、Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒ；ドイツ国）を用いて合成を行った。マグネティックスターラーを備えている１００ｍＬ丸底フラスコに５０ｍＬ  ＤＭＦ中の４ｇの樹脂の懸濁液を入れた。その懸濁液を５分間、２０℃で撹拌し、ポリエチレン多孔質プラックを備えている６０ｍＬポリプロピレン製シリンジによる濾過によって溶媒を除去した。その後、樹脂を再び反応フラスコに移した。
【０１４０】
１．Ｆｍｏｃ脱保護。ＤＭＦ中２０％ピペリジンの６０ｍＬの溶液を、前記樹脂が入っている丸底フラスコに添加した。その混合物を５分間、６０℃および１５０Ｗでマイクロ波により活性化しながら反応させた。樹脂を６０ｍＬシリンジで排液し、４０ｍＬ  ＤＭＦで洗浄した。この処理を二重反復で行った。その後、樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×４０ｍＬ）、ｉＰｒＯＨ（３×４０ｍＬ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（３×４０ｍＬ）で洗浄した。最後に、その樹脂を２分間排液し、反応フラスコに移した。ＴＮＢＳ試験（陽性の場合は赤色）を用いることによって脱保護をモニターした。
【０１４１】
２．第一のアシル化。５０ｍＬのＤＭＦ中の５当量のブロモ酢酸（２．２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）および５当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（２．５ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液で前記樹脂を処理した。マイクロ波照射（５分、６０℃、１５０Ｗ）しながらアシル化反応を行った。その後、シリンジを使用して樹脂を濾過し、４０ｍＬのＤＭＦで洗浄した。反応を二重反復で行った。その後、樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×４０ｍＬ）、ｉＰｒＯＨ（３×４０ｍＬ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（３×４０ｍＬ）で洗浄した。次に、その樹脂を２分間排液し、第一級アミンの不在をＴＮＢＳ試験によって評価した。
【０１４２】
３．第一のアミノ化カップリング。５０ｍＬ  ＤＭＦ中の前記アシル化樹脂の懸濁液を最終化合物に応じて好適な第一級アミン［５当量（２．２ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）の２．２ｍＬ  １−（３−アミノプロピル）−２−ピロリジノン、または５当量（３．２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホンアミド］で処理した。マイクロ波照射（７分、８０℃、１５０Ｗ）しながら反応を行った。反応を二重重複で行い、処理と処理の間にシリンジにより樹脂を洗浄し、排液した。最後に、樹脂を２分間排液し、フラスコに移した。アミンの組み込みをクロラニル試験（第二級アミンは緑色）によって確認した。
【０１４３】
４．第二および第三のアシル化工程。これらの工程は、第一のアシル化工程と同様に行った。この場合、反応を完了させるのに２回のアシル化処理で十分であった。
【０１４４】
５．第二および第三のアミノ化カップリング工程。これらの工程は、第一のアミノ化工程と同様に行ったが、対応する第一級アミンを使用した。したがって、５当量（１．８ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）の２−メチル−１−プロパンアミンを第二のアミノ化カップリングに使用した。第三のアミノ化カップリングには、５当量（２．０ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）の２−（２−フルオロフェニル）エタンアミンまたは５当量（２．０ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）の２−（１−ピロリジニル）エタンアミンを、対応するペプトイドの組成に応じて使用した。
【０１４５】
６．切断。前記樹脂を排液した後、それを４アリコートに分け、それぞれのものを２０ｍＬの切断カクテル（６０：４０：２（ｖ／ｖ／ｖ）  ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ）で処理した。それらの混合物を３０分間、２０℃で撹拌し、ポリエチレン多孔質プラックを備えている１０ｍＬポリプロピレン製シリンジによって濾過した。濾液を２５０ｍＬフラスコに収集し、溶媒を減圧下で除去した。最後に、各ペプトイドの場合に得られた黄色油残留物をＨ２Ｏ／ＡＣＮ混合物に再び溶解し、凍結乾燥させて、１．２５〜１．８０ｇの期待粗製ペプトイドをＨＰＬＣにより８５％より高い純度で得た。
【０１４６】
７．精製および化学的特性づけ。Ｗａｔｅｒ  ＰｒｅＰａｃｋ（登録商標）−Ｃ１８（４７×３００ｍｍ、１５〜２０μｍ）カラムを使用し、０．１％ＴＦＡを含有するＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ混合物を移動相として用い、６０ｍＬ／分の流量を用いて、半分取ＨＰＬＣによって化合物を精製した。最終化合物をＨＰＬＣにより９８％以上の純度で得た。得た量は、１０．６４ｍｇのＧ７９（純度９９％；ＨＰＬＣ）、７．５５ｍｇのＧ８０（純度９９％；ＨＰＬＣ）、および１２．６８ｍｇのＧ８１（純度９９％；ＨＰＬＣ）であった。
【０１４７】
［Ｎ−（２−（２’−フルオロフェニル）エチル）グリシル］−［Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシル］−Ｎ−［３−（２’−オキソピロリジニル）プロピル］グリシンアミド（Ｇ７９）。化学式：Ｃ２５Ｈ３８ＦＮ５Ｏ４；分子量４９１．５９８７。
【０１４８】
［Ｎ−（２−（２’−フルオロフェニル）エチル）グリシル］−［Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシル］−Ｎ−［２−（４’−スルファモイルフェニル）エチル］グリシンアミド（Ｇ８０）。化学式：Ｃ２６Ｈ３６ＦＮ５Ｏ５Ｓ；分子量５４９．６５８。
【０１４９】
［Ｎ−（２−（１−ピロリジニル）エチル）グリシル］−［Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシル］−Ｎ−［２−（４’−スルファモイルフェニル）エチル］グリシンアミド（Ｇ８１）。化学式：Ｃ２４Ｈ４０Ｎ６Ｏ５Ｓ；分子量５２４．６７６６。
【０１５０】
実施例２
ＰＣ１２細胞系における用量応答分化アッセイ
細胞培養：２．５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１５％のウマ血清（ＨＳ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補足したハムＦ１２培地中でＰＣ１２培養物のストックを維持した。細胞培養を５％ＣＯ２、３７℃で維持した。
【０１５１】
ＰＣ１２細胞の分化を、異なる試験濃度（２−２０−１００ｎｇ／ｍＬおよび２−２０−５０μｇ／ｍＬ）のすべての被験化合物（Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１）で該細胞を処置することによって評価した。先ず、細胞をコラーゲン被覆２４ウェルプレートにプレーティングし、培地中の２．５％ＦＢＳで脱分化させる。７２時間後、被験化合物を添加し、ＮＧＦ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ；１００ｎｇ／ｍＬ）を分化の陽性対照として添加する。長さが２細胞体より大きいニューライト突起を有する分化細胞の数を３日処置後に計数する。１００の細胞を有するランダムに選択した３視野に関して細胞計数を行う。
【０１５２】
化合物Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１は、ＰＣ１２細胞の分化を誘導する（図１Ａ〜１Ｄ）。ＮＧＦ陽性対照は、１００細胞の視野内の１６．１±１．９の細胞の分化を誘導する。Ｇ７９は、対照ＰＣ１２未処理細胞と比較して、用量依存的様式（２−２０−１００ｎｇ／ｍＬおよび２−２０μｇ／ｍＬ）で有意に分化を誘導する。最もよく効く濃度は、２０μｇ／ｍＬである（細胞数：１１．３±２．６８）。５０μｇ／ｍＬでは分化細胞数が減少する。
【０１５３】
Ｇ８０は、ＰＣ１２細胞において非常に長いニューライトで良好な分化を誘導する。最もよく効く濃度は、２０ｎｇ／ｍＬである。Ｇ８１は、対照ＰＣ１２未処理細胞と比較して、１００ｎｇ／ｍＬまで用量依存的様式で有意に分化を誘導し、１００ｎｇ／ｍＬが最もよく効く濃度である（細胞数：９．２±３．９）。より高い濃度については分化細胞数が減少する。ＮＧＦ誘導分化を基準にして分化細胞の百分率を計算する（図１Ｅ）。
【０１５４】
実施例３
生存アッセイ
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１ニューロトロフィンペプチドミメティクスは細胞生存を促進する。
【０１５５】
細胞培養。１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを伴うダルベッコ変性イーグル培地（ＤＭＥＭ）でラットシュワン細胞腫（ｓｃｈｗａｎｎｏｍｅ）細胞系ＲＮ２２を培養した。細胞培養を５％ＣＯ２、３７℃で維持した。
【０１５６】
ＲＮ２２を、血清を伴わない培地中３０，０００細胞／ウェルの濃度で、２４ウェルプレートにプレーティングした。２４時間後、被験化合物Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１を異なる濃度（１−１０−５０ｎｇ／ｍＬおよび１−１０μｇ／ｍＬ）で添加し、ＮＧＦを生存の陽性対照として使用した。次いで細胞を２時間インキュベートした。１５０μｇ／ｍＬの最終濃度で硫酸銅（ＣｕＳＯ４）を用いて酸化ストレスを誘導した。一晩のインキュベーションの後、ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）添加後に吸光度を読み取ることにより、細胞生存度を判定した。
【０１５７】
ＮＧＦ誘導分化を基準にして生存細胞の百分率を計算した（図２）。Ｇ７９は、試験したすべての濃度（１−１０−５０ｎｇ／ｍＬおよび１−１０μｇ／ｍＬ）で細胞生存度を増加させ、１０ｎｇ／ｍＬが最もよく効く濃度であった（無ストレス対照に対する％として、９８．１１％の細胞生存度）。Ｇ８０は、試験したすべての濃度（１−１０−５０ｎｇ／ｍＬおよび１−１０μｇ／ｍＬ）で細胞生存度を増加させ、５０ｎｇ／ｍＬが最もよく効く濃度であった（無ストレス対照に対する％として、９９．８６％の細胞生存度）。Ｇ８１は、試験したすべての濃度（１−１０−５０ｎｇ／ｍＬおよび１−１０μｇ／ｍＬ）で細胞生存度を増加させ、５０ｎｇ／ｍＬが最もよく効く濃度であった（無ストレス対照に対する％として、１０１．８６％の細胞生存度）。
【０１５８】
実施例４
分泌促進活性アッセイ；
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１はＮＧＦ分泌を誘導しない。
【０１５９】
被験化合物（Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１）が分泌促進剤として作用して、ＮＧＦの合成により神経栄養活性を誘導するかどうかを評価するために、２．５％ＦＢＳのみが入っているコラーゲン被覆２４ウェルプレートにＰＣ１２細胞をプレーティングし、７２時間後、被験化合物（１００ｎｇ／ｍＬのそれぞれのもの）と抗体抗ＮＧＦ（１μｇ／ｍＬ、ＡｂＣａｍ）とで細胞を処置した。３日の処置後に分化を評価した。１００の細胞を有するランダムに選択した３視野に関して細胞計数を行った。
Ｇ７９、Ｇ８０またはＧ８１と抗体抗ＮＧＦとでの処置は、被験化合物のみによって誘導される分化と同様にＰＣ１２の分化を誘導する（図３Ａ）。ＮＧＦによる分化細胞数は、抗ＮＧＦ抗体の添加によって減少される（１２．８±６．３対２０．７±７．１）が、分化細胞数は、被験化合物のみでの処置と本化合物および抗ＮＧＦ抗体での処置とを比較して、全く同様の結果になる。各視野について分化細胞数を得たＧ７９／抗ＮＧＦ処置は、Ｇ７９のみでの処置についての１１．５±２．８に対して１８．８±４．９という結果になり；Ｇ８０／抗ＮＧＦについては、Ｇ８０のみでの処置についての１５．１±６．３に対して１４．１±１．８であり；Ｇ８１／抗ＮＧＦについては、１４．１±３．３に対して１５．５±４．１である。ＮＧＦ誘導分化を基準にして分化細胞の百分率を計算する（図３Ｆ）。
【０１６０】
実施例５
相乗的活性アッセイ
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１はＮＧＦと相乗的活性を有さない。
【０１６１】
小分子Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１が、ＮＧＦの最大活性に干渉するかどうか、または相加的効果をもたらすかどうかを評価するために、２．５％ＦＢＳが入っているコラーゲン被覆２４ウェルプレートにＰＣ１２細胞をプレーティングし、７２時間後、該小化学物質（１００ｎｇ／ｍＬのそれぞれのもの）と１００ｎｇ／ｍＬの濃度のＮＧＦとを併用して処置した。同じ実験で、対照として、ＰＣ１２細胞を前記小分子のみまたはＮＧＦのみで処置した。３日の処置後に分化細胞数を評価した。１００の細胞を有するランダムに選択した３視野に関して細胞計数を行った。
【０１６２】
結果を図３Ｂに示す。Ｇ７９、Ｇ８０またはＧ８１分子とＮＧＦとでの処置はＮＧＦの活性を減少させ、結果として、この併用処置ＮＧＦ／Ｇ７９−Ｇ８０−Ｇ８１で分化細胞数は減少した。この実験ではＮＧＦ分化細胞の数が２０±７．１という結果になるが、処置ＮＧＦ／Ｇ７９によって得られる分化細胞の数は、１１．３±２．６という結果になる。処置ＮＧＦ／Ｇ８０では、得られる分化細胞の数が１３±５．９である。処置ＮＧＦ／Ｇ８１では、得られる分化細胞の数が１３．３±３．８である。総合すると、これらの結果により、Ｇ７９、Ｇ８０またはＧ８１がＮＧＦと相加的、相乗的または拮抗的効果を有し得ることはあり得ない。ＮＧＦ誘導分化を基準にして分化細胞の百分率を計算する（図３Ｇ）。
【０１６３】
実施例６
受容体活性化アッセイ
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１が、ＴｒｋＡの細胞外部分（結合部位）への結合によって作用することができ、チロシンキナーゼ受容体を活性化することができるという仮説を、該小化学物質とチロシンキナーゼ阻害剤である抗体抗ＴｒｋＡまたはＫ２５２ａとを併用してＰＣ１２細胞を処置することによって試験した。このために、２．５％ＦＢＳが入っているコラーゲン被覆２４ウェルプレートにＰＣ１２細胞をプレーティングし、７２時間後、前記小分子のみと共に、または抗ＴｒｋＡ抗体（ＡｂＣａｍ、１：２０００）もしくはＫ２５２ａと併用で前記小分子と共にインキュベートした。ＮＧＦ（１００ｎｇ／ｍＬ）を対照として使用し、単独でまたは抗ＴｒｋＡ抗体もしくはＫ２５２ａと併用で添加した。３日の処置後に分化細胞数を評価した。１００の細胞を有するランダムに選択した３視野に関して細胞計数を行った。結果を図３Ｃに示す。
【０１６４】
Ｇ７９、Ｇ８０またはＧ８１分子と抗体抗ＴｒｋＡとでの処置は、ＰＣ１２細胞の分化を阻害しなかった。ＮＧＦによる分化細胞数は、抗ＴｒｋＡの添加によって減少される（１２．８±６．３対２０．７±７．１）が、分化細胞数は同様の結果となる。Ｇ７９／抗ＴｒｋＡ処置は、ＰＣ１２細胞の分化を誘導した：Ｇ７９のみでの処置についての１１．５±２．８に対して１９．６±８．１；Ｇ８０／抗ＴｒｋＡについては、Ｇ８０のみでの処置についての１５．１±６．３に対して１４．６±４．１であり；Ｇ８１／抗ＴｒｋＡについては、１４．１±３．３に対して１６．５±５．９である。ＮＧＦ誘導分化を基準にして分化細胞の百分率を計算する（図３Ｈ）。
【０１６５】
実施例７
シグナル伝達阻害アッセイ
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１はＮＧＦ分化経路を活性化する。
【０１６６】
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１によって誘導される伝達経路がＡＫＴおよびＥＲＫ活性化を含むかどうかを評価するために、ＰＣ１２細胞を、ＰＩ３Ｋ（ＡＫＴの上流活性化因子）の阻害剤であるＬＹ２９４００２、およびＭＡＰＫキナーゼ（ＥＲＫの上流活性化因子）の阻害剤であるＰＤ９８０５９の存在下で、被験化合物で処置した。このために、２．５％ＦＢＳが入っているコラーゲン被覆２４ウェルプレートにＰＣ１２細胞をプレーティングし、７２時間後、前記小分子をＬＹ２９４００２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、１０μＭ）またはＰＤ９８０５９（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、５０μＭ）と併用して細胞を処理した。ＮＧＦ（１００ｎｇ／ｍＬ）を対照として使用し、単独でまたは前記阻害剤と併用で添加した。
【０１６７】
Ｇ７９、Ｇ８０またはＧ８１がＴｒｋＡシグナル伝達経路を修飾するかどうかを評価するために、ＡＫＴおよびＥＲＫ経路の阻害剤を使用した。ＮＧＦ＋ＬＹ２９４００２での処置（図３Ｄ）は、ＮＧＦのみと比較して分化細胞数を減少させた（６．８±２．７対２０．７±７．１）。同じように、Ｇ７９＋ＬＹ２９４００２での処置は、Ｇ７９のみと比較して分化細胞数を減少させた（５．２８±２．５４対１１．５±２．８）。Ｇ８０＋ＬＹ２９４００２での処置は、Ｇ８０のみと比較して分化細胞数を減少させた（８．５±２．６対１５．１±６．３）。Ｇ８１＋ＬＹ２９４００２での処置は、Ｇ８１のみと比較して分化細胞数を減少させた（６．６±４．０２対１４．１±３．３）。ＮＧＦ誘導分化を基準にして分化細胞の百分率を計算する（図３Ｉ）。
ＮＧＦ＋ＰＤ９８０５９での処置（図３Ｅ）は、ＮＧＦのみと比較して分化細胞数を減少させた（２．１±１．９対２０．７±７．１）。同じように、Ｇ７９＋ＰＤ９８０５９での処置は、Ｇ７９のみと比較して分化細胞数を減少させた（３．１±１．０６対１１．５±２．８）。Ｇ８０＋ＰＤ９８０５９での処置は、Ｇ８０のみと比較して分化細胞数を減少させた（４±２．３対１５．１±６．３）。Ｇ８１＋ＰＤ９８０５９での処置は、Ｇ８１のみと比較して分化細胞数を減少させた（１．６±１．１対１４．１±３．３）。ＮＧＦ誘導分化を基準にして分化細胞の百分率を計算する（図３Ｊ）。
【０１６８】
実施例８
結合アッセイ
被験化合物Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１のＴｒｋＡまたはｐ７５受容体による結合を細胞ベースの競合ＥＬＩＳＡによって試験することができる。先ず、ＰＣ１２細胞を９６ウェルプレート（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に接種し、８５〜９０％のコンフルエンシーになるまでインキュベートする。被験化合物のＴｒｋＡ受容体への結合を試験するために、ＰＣ１２表面で発現されるｐ７５受容体を、該受容体の細胞外ドメインを結合するブロッキング抗体抗ｐ７５（ＡｂＣａｍ）の結合によって阻害する。一定濃度のそれぞれ１つの前記小分子を競合因子として伴うまたは伴わない、異なる漸増濃度（０．０１−０．１−１ｎＭ）のＮＧＦと共に、４５分間、細胞をインキュベートする。冷ＰＢＳでの１回の洗浄の後、細胞を１５分間、ＰＦＡ  ４％で固定する。その後、細胞をＰＢＳで洗浄し、抗体抗ＮＧＦ（１μｇ／ｍＬ）と共に１時間、室温でインキュベートする。細胞をＰＢＳで２回すすぎ、二次抗体抗ＮＧＦと共に１時間、室温でインキュベートする（１：５００；ＤｙＬｉｇｈｔ  ４８８コンジュゲート抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）。細胞を洗浄し、分光光度計によって４８８ｎｍで蛍光を読み取る。
【０１６９】
実施例９
緑内障モデル
Ｇ７９は緑内障の動物モデルのニューロン死を予防する。
【０１７０】
１２匹のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（４月齢）をイソブタンで麻酔し、右眼の強膜上静脈に高張食塩液注射をした。眼圧（ＩＯＰ）を手術前に測定し、ＴｏｎｏＬａｂを使用して７週間、週１回、モニターした。緑内障誘導１週間後に結膜（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｅ）への局所適用によるＧ７９での処置を開始した。２つの異なる実験を行った。
【０１７１】
第一の実験では、Ｇ７９を生理溶液に２つの異なる濃度（２００μｇ／ｍＬおよび４００μｇ／ｍＬ）で溶解し、使用した。ＮＧＦを陽性対照とし使用し（２００μｇ／ｍＬ）、前記すべての分子を溶解するために使用した生理溶液をプラセボとして施した。ラットを４群に分けた（各群にラット３匹）：緑内障−Ｇ７９  ２００μｇ／ｍＬ；緑内障−Ｇ７９  ４００μｇ／ｍＬ；緑内障−ＮＧＦ；緑内障−プラセボ。緑内障を有さない対照として左眼を使用した。両方の実験において、緑内障誘導の７週間後に麻酔薬の過剰投与によってラットを屠殺し、ラットの眼を採取し、４％のＰＦＡで固定した。それらの眼をパラフィンに含め、組織学的研究（ヘマトキシリン−エオシン染色）に使用するために２０μｍ切片に切断した。各眼についての異なる１０視野に関して網膜神経節細胞（ＲＧＣ）数の細胞計数をランダムに行った。
【０１７２】
５週間、高眼圧を誘導したラットの眼内に高張液を注射した。ＮＧＦ（２００μＭ／ｍＬ）、Ｇ７９（２００−４００μＭ／ｍＬ）またはプラセボの点眼剤でラットを５週間、毎日、処置した。緑内障を有し、プラセボ（食塩水）で処置したラットは、対照と比較して網膜神経節細胞数の有意な減少を有する。対照的に、ＮＧＦ滴剤で処置したラットならびにＧ７９で処置したラットは、神経節細胞の有意な保護を有する（図４Ａ）。これらの結果は、Ｇ７９処置が網膜神経節細胞（ＲＧＣ）に対して神経保護を発揮することを示唆している。
【０１７３】
第二の実験では、２００μｇ／ｍＬの濃度のＧ７９を使用した。この第二の実験の目的は、眼圧を低下させることによって効く緑内障の最も一般的な治療薬であるチモロールとＧ７９の有効性の比較であった。またこの実験では、Ｇ７９とチモロールでの組み合わせ処置（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を行った。各群にラット４匹を有する４群にラットを分けた：緑内障−Ｇ７９（２００μｇ／ｍＬ）（ｎ＝４）；緑内障−チモロール（ｎ＝４）；緑内障−Ｇ７９／チモロール（ｎ＝４）；緑内障−プラセボ（ｎ＝４）。緑内障を有さない対照として左眼を使用した。緑内障のＩＯＰのための現行治療薬、すなわちチモロール、とＧ７９を比較した結果を図４Ｃに示す。ＩＯＰ誘導は、ＲＧＣ数を有意に低減させ、この低減は、対照眼（Ｃ）（ｐ＜０．０００１）と比較しておよびすべてのタイプの試験処置（ｐ＜０．０００１）と比較して有意であった。この併用処置は、ＲＧＣの保護に相加的効果を発揮しなかった（＊＊ＧＬ／チモロール＋Ｇ７９対対照（Ｃｔｒ）ｐ＝０．０２；§ＧＬ／チモロール対ＧＬ／チモロール＋Ｇ７９  ｐ＝０．００３）。
【０１７４】
実施例１０
パーキンソン病ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデル（ＭＰＰストレス）
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１はパーキンソン病のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいてニューロン死を予防する。
【０１７５】
細胞培養：１０％ＦＢＳ、２ｎＭ  Ｌ−グルタミンおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補足した、５０％ハムＦ１２培地および５０％ＥＭＥＭ培地での培養で、ヒト神経芽腫細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙを維持した。３７℃で９５％空気およびＣＯ２の加湿雰囲気で細胞培養を維持した。
【０１７６】
ヒト神経芽腫細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙを使用して、パーキンソン病における前記小分子の神経保護効果を研究した。レチノイン酸でのニューロン表現型への分化後、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、３時間、異なる濃度（２０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬ）の被験化合物でまたは陽性対照としてのＢＤＮＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）で前処置した。その後、１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）（１００μＭ）を添加し、２４時間インキュベートした。翌日、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイによって生存細胞数を判定した。
【０１７７】
酸化ストレスによりニューロンを傷害するＭＰＴＰに、ヒト神経芽腫細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙを曝露した。細胞を５週間、毎日、ＢＤＮＦ、Ｇ７９、Ｇ８０、Ｇ８１またはプラセボで処置した。プラセボ（食塩水）で処置した細胞は、対照と比較して細胞の有意な喪失を有する。対照的に、Ｇ７９で前処置した細胞ばかりでなくＢＤＮＦで前処置した細胞も、ニューロン細胞の有意な保護を有する（図５Ａ）。
【０１７８】
実施例１１
ヒト細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙにおける酸化ストレス
ヒト神経芽腫細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙを使用して、酸化ストレスにおける被験化合物Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１の神経保護効果を研究した。細胞を、３時間、異なる濃度（２０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬ）の被験化合物でまたは陽性対照としてのＢＤＮＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）で前処置した。その後、Ｈ２Ｏ２（１００μＭ）を添加し、２４時間インキュベートした。生存細胞数をＭＴＴアッセイによって判定した。ＳＨ−ＳＹ５Ｙニューロン細胞系に酸化ストレスを誘導するためにＨ２Ｏ２を使用したとき、Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１の保護効果が見出され、Ｇ７９の抗酸化効果はＢＤＮＦより強かった（図５Ｂ）。図５Ｂでは、ＢＤＮＦ細胞生存度を１００％と見なした。Ｈ２Ｏ２ストレスは、細胞生存度の百分率の減少を誘導した（無ストレス対照対Ｈ２Ｏ２ストレス＝１００±２％対９５．９±０．５％）。Ｇ８０およびＧ８１と比較して、Ｇ７９は、２０ｎｇ／ｍＬの濃度で、より良好な保護を発揮するものである（ＢＤＮＦ対Ｇ７９＝１００±２．６対１０７．４±５．８）。
【０１７９】
実施例１２
ウエスタンブロット分析およびＬｕｍｉｎｅｘシグナル伝達アッセイ
Ｇ７９はニューロトロフィン経路を活性化する
ウエスタンブロット分析：ニューロトロフィン受容体ＴｒｋＡおよびＴｒｋＢ活性化（リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ））を次のようにウエスタンブロットによって評価した：２４ウェルプレートで成長しているＰＣ１２細胞を低血清培地（０．５％ＦＢＳ）で処置して基底レベルのリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ）を低減した。２４時間後、ＰＣ１２細胞をＧ７９（１００ｎｇ／ｍＬ）で処置し、その後、回収し、５−１５−３０−６０分の時点で３００μＬの氷冷溶解バッファー（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）に溶解した。超音波処理後、細胞破壊片を遠心分離（１４０００ｒｐｍ、１０分間）によって除去し、同量の上清（３０〜３５μｇ／ウェル）を加え、１０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）によって分離し、その後、ＰＶＤＦ膜にエレクトロブロットした。膜を５％脱脂乳によってブロックし、その後、逐次的に一次抗体［ホスホ−ＴｒｋＡ、Ｔｙｒ４９０（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）またはホスホ−ＴｒｋＢ、Ｔｙｒ５１５（ＮｏｖｕｓＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）］１：１０００と共に一晩、そして二次抗体１：２０００と共に１時間、室温でインキュベートした。ブロットを化学発光システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）によって可視化のために処理し、Ｋｏｄａｋフィルムに露出してフルオログラフィー像を可視化した。図６に示すように、両方の受容体が５分後には既にリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｅｄ）されていた。
【０１８０】
Ｌｕｍｉｎｅｘシグナル伝達アッセイ：１０−Ｐｌｅｘ  ＭＡＰＫ／ＳＡＰＫ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−Ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用し、ヒト神経芽腫細胞系ＳＨ−ＳＹ５Ｙを使用して、Ｌｕｍｉｎｅｘシグナル伝達アッセイを行った。この細胞系は、ＴｒｋＢ受容体を発現し、ＭＡＰＫ／ＳＡＰＫシグナル伝達経路は典型的にチロシンキナーゼ受容体によって活性化される。前記キットに含まれているリンタンパク質は、次のとおりである：ＥＲＫ／ＭＡＰキナーゼ（Ｔｈｒ１８５／Ｔｙｒ１８７）；ＳＴＡＴ−１（Ｔｙｒ７０１）；ＪＮＫ（Ｔｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５）；ＭＥＫ−１（Ｓｅｒ２１２）；ＡＴＦ−２（Ｔｈｒ６９／７１）；ｐ５３（Ｓｅｒ１５）；ＨＳＰ２７（Ｓｅｒ７８）；ｃ−Ｊｕｎ（Ｓｅｒ７３）；ｐ３８（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）、ｐ７０  Ｓ６キナーゼ（Ｔｈｒ４１２）；ＩｋＢα（Ｓｅｒ３２）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入）。
【０１８１】
細胞を増殖させ、その後、２４ウェルプレートに接種した（３０，０００細胞／ウェル）。２４時間後、細胞を、２つの異なる濃度のＮＧＦ受容体アゴニストＧ７９：１００ｎｇ／ｍＬおよび２０μｇ／ｍＬで処置した。培地にＧ７９を添加した後、細胞を前記キットの溶解バッファー中に次の時点で収集した：３０分、１時間、２時間、および６時間。この要領でアッセイを行って、処置細胞と陰性対照として使用した未処理細胞（未刺激ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞）とを比較することにより時間効果と用量効果の両方を評価した。文献にて公知の最もよく効く濃度である濃度２０ｎｇ／ｍＬで、陽性対照としてＢＤＮＦを使用した。Ｌｕｍｉｎｅｘプレート内のウェルに各サンプルを二重反復で添加した。すべてのサンプルを添加した後、Ｌｕｍｉｎｅｘキットに含まれているリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ）の特異的陽性および陰性対照を添加した。バックグラウンド対照としてアッセイバッファーも二重反復で添加した。
【０１８２】
図７は、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ）によって活性化される細胞内経路を示す。円の中に活性化される因子があり、一方、灰色の円の中に被験因子がある。ＳＹ−ＳＹ５Ｙ細胞系についての幾つかの経路のリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ）におけるその効果を、ＬｕｍｉｎｅｘからのｘＭＡＰアッセイを用いて評価した。図８は、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術によって試験したリンタンパク質の活性化レベルを示す。活性化レベルを中央値蛍光強度（ＭＦＩ）として表す。Ｌｕｍｉｎｅｘ技術によって試験すると、ＡＴＦ−２、ＨＳＰ−２７、ＪＮＫおよびＳＴＡＴ−１は、未刺激対照と比較して修飾され、有意にリンが活性化される結果となった。図８は、異なる時点でのＧ７９処置とＢＤＮＦ処置両方についてのＭＦＩのグラフを示す。
【０１８３】
ＡＴＦ−２は、Ｇ７９処置（２０μｇ／ｍＬ）後６時間の時点で、未刺激対照と比較して有意に活性化された（＊ｐ＜０．０５）。ＢＤＮＦ対照は、処置後２時間の時点で有意なＡＴＦ−２活性化を示す（§ｐ＜０．０５）。ＨＳＰ−２７は、（２０μｇ／ｍＬと１００ｎｇ／ｍＬの両方での）Ｇ７９処置後１時間の時点で、未刺激対照と比較して有意に活性化された（＊ｐ＜０．０５）。ＢＤＮＦは、ＨＳＰ−２７を活性化しない。ＪＮＫは、２０μｇ／ｍＬと１００ｎｇ／ｍＬの両方での）Ｇ７９処置後６時間の時点で、未刺激対照と比較して有意に活性化された（＊および§ｐ＜０．０５）。ＢＤＮＦ対照は、処置後２時間の時点で有意なＪＮＫ活性化を示した（
【０１８４】
【化７】
0005946454.tif 000013
ｐ＜０．０５）。ＳＴＡＴ−１は、Ｇ７９処置後６時間の時点で、未刺激対照と比較して有意に活性化された（＊ｐ＜０．０５）。ＢＤＮＦは、ＳＴＡＴ−１を活性化しなかった。
【０１８５】
実施例１３
サイトメトリー結合アッセイ
Ｇ７９は、ニューロトロフィン受容体への結合についてＮＧＦおよびＢＤＮＦと競合する
ＴｒｋＡ受容体（ＰＣ１２細胞）およびＴｒｋＢ受容体（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）へのＧ７９の結合を評価するために、本発明者らは、フローサイトメトリーによる競合結合アッセイを行った。ｐ７５とＴｒｋＡ間の結合競合を評価するために、ＴｒｋＡ受容体とｐ７５受容体の両方を発現するＰＣ１２細胞を通常の増殖培地で培養した。トリプシン溶液によって細胞を剥離させた後、２００，０００細胞／ウェルを後続のインキュベーション用のチューブに添加した。１本のチューブには対照未処理細胞が入っている。他のチューブにおいて、異なる濃度のＮＧＦ（０−１０−２０−５０−１００ｎｇ／ｍＬ）と共に細胞を４５分間プレインキュベートした。このＮＧＦは、ＴｒｋＡ受容体とｐ７５受容体の両方を直接結合することができ、それによって、Ｇ７９の潜在的結合がそれらの受容体について競合する場合には、Ｇ７９の潜在的結合を遮断することができる。その後、細胞を洗浄することなく、Ｇ７９のＦＩＴＣ蛍光コンジュゲート（１００ｎｇ／ｍＬ）を添加し、次いで細胞を１時間インキュベートした。サンプルをサイトメーター（ＦＣＡＳｃａｎ）で読み取った。
【０１８６】
両方の受容体に対する結合を別々に検出するために、細胞の（ＮＧＦインキュベーション前に）遮断抗体との事前のインキュベーションを行った。細胞を遮断抗体抗ｐ７５（１：１００；Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔ．）と共に１時間プレインキュベートして、ＴｒｋＡに対する結合を検出した、または細胞を遮断抗体抗ＴｒｋＡ（１：２００；ＡｂＣａｍ）と共にプレインキュベートして、ｐ７５に対する結合を検出した。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞系を用いて同じ実験プロトコルを繰り返して、これらの細胞へのＴｒｋＢおよびｐ７５との結合を検出した。この場合、ＢＤＮＦをＴｒｋＢおよびｐ７５に対する結合についての競合因子として使用した。Ｇ７９−ＦＩＴＣ結合によって生成される細胞表面蛍光の測度である平均チャネル蛍光（ＭＣＦ）としてすべての結果を表す。
【０１８７】
図９Ａは、シグナル（ＭＣＦ）が漸増濃度のＮＧＦの存在下で減少することを示し、これは、Ｇ７９が同じＮＧＦ−受容体に対する結合について競合することを意味する。ｐ７５に対する結合を評価するために、細胞を抗ＴｒｋＡ抗体とプレインキュベートし、シグナル（ＭＣＦ）が依然として減少することが判明した。これは、Ｇ７９がｐ７５受容体に結合できたことを示す（図９Ｂ）。ＴｒｋＡに対する結合を評価するための抗体抗ｐ７５とのプレインキュベーションは、シグナル（ＭＣＦ）を変化させなかった。これは、Ｇ７９がＴｒｋＡへの結合についてＮＧＦと競合しないようであることを意味する（図９Ｃ）。しかし、この結果は、はるかに多いｐ７５の存在（１細胞あたり〜７５０００受容体）に比べて、細胞表面の非常に少量のＴｒｋＡの存在による影響を受けた可能性があった。同様に、Ｇ７９のＴｒｋＢへの結合を、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞系を使用して評価した（図９Ｄ）。この場合、シグナル（ＭＣＦ）は、漸増濃度のＢＤＮＦの存在下で減少した。これは、Ｇ７９がその受容体の一方に関してＢＤＮＦと競合することを示す。
【０１８８】
実施例１４
筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）のＩｎ  ｖｉｔｒｏモデル
Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１はＡＬＳのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて神経保護性である
細胞培養：１０％熱不活化ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補足したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）でマウス運動ニューロン様細胞ＮＣＳ−３４を培養した。３７℃で９５％空気およびＣＯ２の加湿雰囲気で細胞培養を維持した。
【０１８９】
運動ニューロンにおける栄養不足ストレスは、以前にＭａｓａｈｉｔｏ  Ｔ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．６５（８）：８１６−８２５（２００６）に記載されているように行った。ＡＬＳに対する栄養ストレス状態の影響を評価するために、血清枯渇を用いてアポトーシスの存在を調査した。ＮＳＣ−３４細胞を２４ウェルのポリリシン処理プレートに３０，０００細胞／ウェルで接種し、２４時間、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中で、様々な用量のＧ７９、Ｇ８０およびＧ８１（２０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ）、およびＧ−ＣＳＦ（２μｇ／ｍＬ）またはＢＤＮＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）（Ｇ−ＣＳＦおよびＢＤＮＦの両方を陽性対照として使用した）と共にプレインキュベートした（Ｍａｓａｈｉｔｏ  Ｔ．ら、同書；Ｅｌｌｉｏｔ  Ｊ．Ｌ．、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ６：３１０−３２０（１９９９））。その後、培地を除去し、ＦＢＳを伴わない新たなＤＭＥＭで置換した。４８時間後、前に説明したとおりのＭＴＴアッセイによって細胞生存度をアッセイした。
【０１９０】
図１０に示すように、Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１は、血清枯渇で攻撃された運動ニューロンに対して神経保護を発揮した。ストレスなしの対照に対する百分率として細胞生存度を表す。Ｇ７９は、１００ｎｇ／ｍＬの濃度で最高神経保護効果を示し、ストレス対照と比較して細胞生存度が有意に増加した（９８．１１±６．１４％対６９．６４±１０．１２％；ｐ＝０．０２）。Ｇ７９も、両方の陽性対照、Ｇ−ＣＳＦおよびＢＤＮＦ、と比較して、有意ではないにせよ細胞生存度増加を示した（Ｇ−ＣＳＦ細胞生存度：７６．５０±８．３％；ＢＤＮＦ細胞生存度：８０．６２±５．２）。
【０１９１】
実施例１５
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル
Ｇ７９は多発性硬化症（ＭＳ）の動物モデルを改善する
予防的試験（疾患の誘導時に治療を開始する）および治癒的試験（動物が疾患に既に罹患しているときに治療を開始する）を行うことにより、ＭＳ、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、の動物モデルにおいてＧ７９の効果を試験した。Ｐａｌａｃｉｏｓら、２００７に以前に記載されたように、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中の５０μｇの結核菌（Ｈ３７Ｒａ株；Ｄｉｆｃｏ、ミシガン州デトロイト）で乳化させた３００μｇのミエリン乏突起細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド３５−５５（Ｓｐｉｋｅｍ、フィレンツェ）を用いて、Ｈａｒｌａｎからの雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８〜１２週齢）の両後足の肉趾に免疫処置を施した。免疫処置時および２日後にマウスに百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ）（５００ｎｇ）を腹腔内注射した。マウスを計量し、盲検観察者が毎日、疾患の臨床徴候について点検した。ＥＡＥ疾患重症度を次の尺度によって３０日間評価した：０＝正常；０．５＝軽度のだらりとした尾；１＝だらりとした尾；２＝後肢の軽度の不全対麻痺、不安定歩行；３＝中等度の不全対麻痺、随意運動まだ可能；４＝対麻痺または四肢不全麻痺；５＝瀕死状態。この研究の終了時にマウスに麻酔をし、０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．６）中４％のパラホルムアルデヒドで心臓内灌流を施した。脳、脊髄および脾臓を切開し、固定するか、使用するまで冷凍した。この研究に含めたすべてのマウスから血清も採取した。この手順は、バルセロナ大学動物実験委員会により承認された。
【０１９２】
ニューロトロフィン経路を標的にする他の薬物（ガンボグアミドおよびキサリプロデン）と比較して、またはＭＳの処置用のファーストライン療法の１つ、すなわちグラチラマー酢酸塩、と比較する、Ｇ７９の予防的効果と治癒的効果の両方を評価するための２つの異なる実験を行った。
【０１９３】
予防的試験については、１０匹のマウスを４０ｍｇ／ｋｇの濃度のＧ７９の腹腔内注射で処置し、１０匹のマウスを１００ｍｇ／ｋｇの濃度のＧ７９の腹腔内注射で処置し、１０匹のマウスを２ｍｇ／ｋｇの濃度のガンボグアミドの腹腔内注射で処置し、１０匹のマウスを１０ｍｇ／ｋｇの濃度のキサリプロデンの経口投与で処置した。ガンボグアミドとキサリプロデンの両方を異なる百分率のＤＭＳＯで希釈したので、５匹のマウスをプラセボ（生理溶液＋１％ＤＭＳＯ）の腹腔内注射で処置し、残りの５匹のマウスを経口プラセボ（生理溶液＋２．５％ＤＭＳＯ）でそれぞれ処置した。これらの処置を免疫処置日後に開始して毎日行った。
【０１９４】
治癒的試験については、ストレスがマウスの臨床スコアの発現に深刻な影響を及ぼし得るので、経口投与と腹腔内注射間の不一致を低減させるためにすべての処置を腹腔内処置によって行った。この研究のために、８匹のマウスを４０ｍｇ／ｋｇの濃度のＧ７９で処置し、８匹のマウスを１００ｍｇ／ｋｇの濃度のＧ７９で処置し、８匹のマウスを２ｍｇ／ｋｇの濃度のガンボグアミドで処置し、８匹のマウスを１０ｍｇ／ｋｇの濃度のキサリプロデンで処置し、８匹のマウスを５ｍｇ／ｋｇの濃度のグラチラマー酢酸塩で処置し、８匹のマウスをプラセボ（生理溶液＋２．５％ＤＭＳＯ）で処置した。これらの処置を、スコア２での臨床スコアの増加後（このスコアでの第２日の後）に開始して毎日行った。
【０１９５】
図１１Ａおよび図１１Ｂは、ＭＳのｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおけるＧ７９の予防的適用（疾患誘導の当日に治療開始）の結果を示す。これらの図形は、ＥＡＥに罹患させ、免疫処置日から異なる薬物で処置したマウスの臨床スコアを示す。図１１Ａにおいて、Ｇ７９で処置したマウスは、有意ではないが疾患存在の遅延を示す。特に、１００ｍｇ／ｋｇの濃度は、疾患の遅延に、より有効であった。Ｇ７９  １００ｍｇ／ｋｇで処置したマウスの、第３０日の最終臨床スコアは、プラセボで処置したマウスと比較しても低かった。
【０１９６】
図１２は、治癒的試験の結果を示す。１００ｍｇ／ｋｇの用量のＧ７９は、臨床スコアの改善に最高の治療効果を示す。特にＧ７９は、第１６日と第２３日の間で、プラセボと比較して臨床スコアを有意に低下させた（第１６日：Ｇ７９スコア  ２．８±１．２対プラセボスコア  ４±０．７、ｐ＝０．０１；第１９日：Ｇ７９スコア  １．７５±１対プラセボスコア  ３．３±０．５、ｐ＝０．００３；Ｇ７９スコア  １．６±０．８対プラセボスコア  ２．８±０．８、ｐ＝０．０２）。Ｇ７９  １００ｍｇ／ｋｇは、他の被験処置剤（ガンボグアミド、キサリプロデン、グラチラマー酢酸塩）と比較しても良好な治療効果を発揮した。
【０１９７】
実施例１６
神経炎症ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデル
Ｇ７９は神経炎症のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて神経炎症を低減させる
脳炎症は、多くの神経疾患に共通のプロセスであり、これはＭＳの症例で顕著である。脳炎症におけるＧ７９の効果を評価するために、神経炎症のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて、内毒素で攻撃した器官型小脳培養物を用いて、Ｇ７９の効果を試験した。先ず、一酸化窒素を生産して炎症を促進する酵素ｉＮＯＳの誘導におけるＧ７９の効果を試験した。図１３に示すように、Ｇ７９は、ｉＮＯＳの発現を減少させた。Ｇ７９で前処置したサンプルは、ＬＰＳでの攻撃の２４時間後、プラセボ未処置サンプルと比較してｉＮＯＳの発現の減少を示した。
【０１９８】
炎症促進性サイトカインの放出におけるＧ７９の効果に関しては、ＬＰＳで攻撃した器官型小脳培養物からの上清中のＴＮＦαおよびＩＬ−１βのレベルを試験した。図１４Ａは、小脳器官型培養物中のＴＮＦαの生産を示す。ＴＮＦαの生産は、Ｇ７９で前処置した器官型培養物では６および１２時間の時点でプラセボと比較して低減された。図１４Ｂは、小脳器官型培養物におけるＩＬ−１βの生産を示す。Ｇ７９での前処置は、ＩＬ−１βの放出に影響を及ぼさなかった。
【０１９９】
小脳器官型スライス培養での神経炎症のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデル：新生仔マウス（生後８日（Ｐ８））を麻酔剤腹腔内注射後に断頭し、全脳を無菌的に除去した。脳の残部から小脳を分離し、金属製ビブラトームプレートに載せた。小脳をそのプレートの表面に取り付けたら、ビブラトームを使用して４００μｍ矢状切片を切り取った。その後、器官型培養培地（アール塩、２５％ハンクス緩衝塩類溶液、２５％不活化ウマ血清、５ｍｇ／ｍＬ  グルコース、０．２５ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび２５μｇ／ｍＬ  ペニシリン／ストレプトマイシンを伴う５０％基礎培地中、５％ＣＯ２）が入っている細胞培養プレートに、プラスチック製パスツールピペットで、それらのスライスを移した。各スライスを分離および単離した後に、０．４μｍの細孔を有する３０ｍｍ培養プレートインサート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）および１ｍＬの完全培養培地が収容されている６ウェルプレートにそれらの小脳スライスを移し（各ウェルに３スライス）、少なくとも２時間の３７℃および５％ＣＯ２でのインキュベーションによってプレコンディショニングし、インサートの下の各ウェルに添加した。それらの６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２下で保持し、２日毎に培地の半量を置換した。かかる条件での１週間の培養後、すべての実験を行った。
【０２００】
１週間の器官型小脳培養後、各ウェルの培地を新たな培地で置換し、Ｇ７９（１００ｎｇ／ｍＬ）またはプラセボ（生理溶液）をウェルに添加し、１時間インキュベーション状態で保持した。その後、リポ多糖類（ＬＰＳ）（１５μｇ／ｍＬ）を添加し、インキュベーション状態で保持した。スライスおよび器官型培養培地を０時間、１時間、３時間、６時間、１２時間、２４時間および４８時間という異なる時点で回収した。各時点について、対照の未処置スライス、ＬＰＳ／プラセボ処置スライスおよびＬＰＳ／Ｇ７９処置スライスを得た。ＲＮＡ抽出のためにスライスを３回の異なる実験で収集した。このために、スライスをＲＮＡ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）に直接回収し、同バッファー中、−２０℃で凍結させた。他の３回の異なる実験では、免疫蛍光のためにスライスを回収し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で４５分間、室温で固定した。すべての実験において、器官型培養培地を収集し、ＥＬＩＳＡアッセイのために−２０℃で保存した。
【０２０１】
リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応：前記ＬＰＳ刺激実験から収集した器官型スライスをＲＮＡ溶解バッファーで均質化した。ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州Ｃｈａｔｗｗｏｒｔｈ）単離システムを使用して全ＲＮＡを抽出し、これはＲＮａｓｅ−Ｆｒｅｅ  ＤＮａｓｅ  Ｓｅｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ）を使用するＤＮａｓｅ処理を含んだ。Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ａｒｃｈｉｖｅ  Ｋｉｔ；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティー）を使用して、全ＲＮＡ（３５μｇ）を逆転写した。リアルタイム反応を２５℃で１０分間、続いて３７℃で２時間行い、最終的に４℃で保存した。プライマーおよび標的特異的蛍光標識ＴａｑＭａｎプローブは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｓｓａｙ）から購入した。ｉＮＯＳの遺伝子用のプライマーを使用した。ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。０．９μＭの各プライマーと０．２５μＭのプローブと２０ｎｇの相補的ＤＮＡを使用して、ＤＮＡ  Ｅｎｇｉｎｅ  Ｏｐｔｉｃｏｎ  ２  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、マサチューセッツ州ウォータータウン）で相補的ＤＮＡの増幅を行った。反応条件は、次のとおりであった：５０℃で最初の２分、続いて９５℃で１０分、そして４０サイクルの９５℃で１５秒＋６０℃で１分。各サンプルを三重反復で実行し、各プレートの同じウェルで標的および内在性対照を増幅した。試験した遺伝子の発現をハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨのレベルを基準にして定量した。
【０２０２】
ＥＬＩＳＡアッセイ：小脳器官型培養培地からの上清を使用して、ＩＬ−１−βおよびＴＮＦ−αなどのサイトカイン生産をＥＬＩＳＡによりアッセイした。ＩＬ−１−βについては、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ＩＬ−１−βキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を使用し、ＴＮＦ−αについては、マウスＴＮＦ−α用ＥＬＩＳＡ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔキット（Ｐｅｐｒｏｔｅｃ）を使用した。すべてのＥＬＩＳＡアッセイをその製造業者の指示書に従って行った。
【０２０３】
実施例１７
血液脳関門（ＢＢＢ）を介した輸送
血液脳関門を横断する化合物Ｇ７９、Ｇ８０およびＧ８１の能力を、２つのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを使用して試験した。受動輸送は、ＰＡＭＰＡ（平行人工膜透過性アッセイ）モデルを使用して試験し、能動輸送は、ＢＢＥＣと星状細胞を共培養することによるＢＢＢのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを使用して試験した。結果として、Ｇ７９は、ＰＡＭＰＡモデルにおいて良好な横断能力を有する他の薬物、例えばプロパノロールおよびカルバマゼピンと比較して、ＰＡＭＰＡモデルにおいてＢＢＢを横断できなかった（有効透過率（ｐｅ）プロパノロール＝１１．５；ｐｅ  カルバマゼピン＝１０．３；ｐｅ  Ｇ７９＝０×１０−６ｃｍ／秒）。対照的に、ＢＢＢのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞モデルでは、３分子すべてが、能動輸送によるＢＢＢの中等度から高度の横断を提示した（ｐｅ  Ｇ７９＝４．１；ｐｅ  Ｇ８０＝２．８；ｐｅ  Ｇ８１＝２．１×１０−６ｃｍ／秒）。
【０２０４】
平行人工膜透過性アッセイ（ＰＡＭＰＡ）アッセイ：ＰＡＭＰＡを受動ＢＢＢ透過性のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルとして使用する。フィルター上に固定された人工膜をドナーおよびアクセプター区画の間に配置する。試験開始時、薬物をドナー区画に導入する。透過時間の後、ＵＶ分光法を用いてドナーおよびアクセプター区画内の薬物濃度を測定する。その結果、ＵＶ発色団を有する任意の化合物の透過性をこの方法によって判定することができる。
【０２０５】
被験化合物ストック溶液をｐＨ７．４の汎用バッファーで２００倍希釈し、ドナーウェルに添加した。フィルター膜にドデカン中のＰＢＬを被覆し、アクセプターウェルにｐＨ７．４バッファーを充填した。アクセプターフィルタープレートをドナープレート上に注意深く載せて「サンドイッチ」（底部の被験化合物を有する水性ドナーと、中央部の人口脂質膜と、最上部の水性アクセプターとから成る）を作った。被験化合物は、ドナーウェルから脂質膜を通ってアクセプターウェルへと拡散した。この「サンドイッチ」を乱さずに１８時間放置し、この間に透過が発生した。ＵＶプレートリーダーを使用してアクセプター、ドナーおよび参照ウェル内の被験化合物の濃度を判定した。ｐＩＯＮ  ＰＳＲ４ｐソフトウェアを使用することにより、各化合物の有効透過率（Ｐｅ）を計算した。サンプルを三重反復で分析し、３回の実行の平均値を報告した。品質管理基準物質を各サンプルセットと共に実行して、その分析セットの一貫性をモニターした。
【０２０６】
血液脳関門（ＢＢＢ）を介した輸送の細胞ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデル：血液脳内皮細胞（ＢＢＥＣ）と新生仔ラット星状細胞の共培養を用いることにより、細胞ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを確立した。簡単に言うと、細胞共培養（０．３３ｃｍ２の表面積および０．４μｍの孔径を有する、２４ウェルのポリカーボネート製トランスウェル、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ）前に、プレートインサートの上面にＩＶ型コラーゲンおよびフィブロネクチンを被覆した。次に、それらのインサートを裏返して大型ペトリ皿の中に置き、４０μＬの懸濁液（おおよそ４５，０００の星状細胞を含有）を各フィルターの底部に入れた。そのペトリ皿を１時間、インキュベーターの中に置き、４０μＬの新たなＤＭＥＭ＋Ｓを各フィルターの底部に１５分毎に追加した。その後、インサートをプレートに戻し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。この時間の後、ＢＢＥＣ接種の２時間前に、１２５μｇ／ｍＬのヘパリンを補足したＤＭＥＭ＋Ｓにより培地を置換した。２時間後、細胞をインサートに接種した（１フィルターあたり４５，０００細胞）。そのプレートをインキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２でさらに３日間保持した。３日の共培養の後、ｃＡＭＰおよびＲＯ−２１−１７２４を補足したＤＭＥＭ＋Ｓにより培地を置換し、３７℃および５％ＣＯ２で保持した。培養第８日における経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）測定は、この系の輸送研究の準備が整っていることを示した。モデルの成熟度を検証するために、並行してｉｎ  ｖｉｔｒｏ関門の完全性マーカーとしてルシファーイエロー（ＬＹ）を用いて透過性アッセイを行った。透過性アッセイ中、サンプルを２０μＭ濃度のＬＹと共にインキュベートして、アッセイ中の細胞単層の完全性を評価した。
【０２０７】
オーム計Ｍｉｌｌｉｃｅｌ  ＥＲＳシステム（ＭＥＲＳ  ０００  ０１、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用することによってＴＥＥＲを判定した。ＴＥＥＲ測定によって、８日の共培養による機能的にインタクトなｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＢＢＢの形成が確認される。ＴＥＥＲ値は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＢＢＢの堅固さまたは完全性を表す。すべてのウェルについてのＴＥＥＲ値（平均±ＳＤ）が１４１±５．７オーム／ｃｍ２であった。
【０２０８】
Ｐａｐｐ＝（ｄＱ／ｄｔ）＊（１／Ａ）＊（１／Ｃ０）（ｃｍ／秒）      （１）
上の方程式（１）中、（ｄＱ／ｄｔ）は、時間の関数でのアクセプター区画内に存在する化合物の量（ｎｍｏｌ／秒）であり、Ａは、インサートの表面積（ｃｍ２）であり、およびＣ０は、ドナー区画に適用した化合物の初期濃度（ｎｍｏｌ／ｍＬ）である。
【０２０９】
輸送研究中、化合物をＬＹ（２０μＭ）と共培養して、輸送アッセイ中の細胞膜の完全性を確実にした。
【０２１０】
今、本発明を十分に説明したが、本発明またはその任意の実施形態の範囲に影響を及ぼすことなく、広いおよび等価の条件、製剤および他のパラメーター範囲内で本発明を行うことができることは、当業者には理解されるであろう。
【０２１１】
本発明の他の実施形態は、本明細書の考慮および本明細書に開示する本発明の実施から当業者に明らかになるだろう。本明細書および実施例は単に例示的なものと見なされることを意図しており、後続の請求項によって本発明の真の範囲および精神を示す。
【０２１２】
本明細書に引用するすべての特許および出版物は、それら全体が参照により本明細書に完全に援用されている。
【０２１３】
【化８】
0005946454.tif 000014
【０２１４】
【化９】
0005946454.tif 000015
【０２１５】
【化１０】
0005946454.tif 000016
【０２１６】
【化１１】
0005946454.tif 000017
【０２１７】
【化１２】
0005946454.tif 000018
【図１Ａ】
0005946454.tif 000022
【図１Ｂ】
0005946454.tif 000023
【図１Ｃ】
0005946454.tif 000024
【図１Ｄ】
0005946454.tif 000025
【図１Ｅ】
0005946454.tif 000026
【図２】
0005946454.tif 000027
【図３−１】
0005946454.tif 000028
【図３−２】
0005946454.tif 000029
【図３−３】
0005946454.tif 000030
【図３−４】
0005946454.tif 000031
【図４−１】
0005946454.tif 000032
【図４−２】
0005946454.tif 000033
【図５】
0005946454.tif 000034
【図６】
0005946454.tif 000035
【図７】
0005946454.tif 000036
【図８】
0005946454.tif 000037
【図９】
0005946454.tif 000038
【図１０】
0005946454.tif 000039
【図１１】
0005946454.tif 000040
【図１２】
0005946454.tif 000041
【図１３】
0005946454.tif 000042
【図１４】
0005946454.tif 000043