(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）
【化１】
0005920936.tif 000022
［式中、
ｎは、０〜８であり、
ｐは、０又は１であり、
Ｒ３は、［（Ｌ）ｐ−Ｑ］、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基はＣ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ基及びシリル基からなる群から独立に選択される１つ又は複数の置換基で独立に場合によって置換されており、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は場合によって置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、シリル基は式（Ｒ４）３Ｓｉ−により表され、ここで、Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基及びＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基からなる群から独立に選択され、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は場合によって置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、
Ｌは、線状又は分枝状Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２４シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２４シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルケニレン基、Ｃ９〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキニレン基から選択される連結基であり、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキル（ヘテロ）アリーレン基、（ヘテロ）アリールアルキレン基、（ヘテロ）アリールアルケニレン基及び（ヘテロ）アリールアルキニレン基はＣ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ５〜Ｃ１２シクロアルケニル基、Ｃ８〜Ｃ１２シクロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ及びシリル基からなる群から独立に選択される１つ又は複数の置換基で場合によって置換されており、ここで、シリル基は式（Ｒ４）３Ｓｉ−により表すことができ、ここで、Ｒ４は、上の通りに定義され、
Ｑは、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基、−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ６）２、−Ｃ≡ＣＲ６、−［Ｃ（Ｒ６）２Ｃ（Ｒ６）２Ｏ］ｑ−Ｒ６（ここで、ｑは１〜２００の範囲にある）、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−Ｓ（Ｏ）Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ６、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）２、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ６、−ＯＳ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ６、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ６）（ＯＲ６）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ６）２、−Ｓｉ（Ｒ６）３、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される官能基であり、ここで、Ｘは、酸素又は硫黄であり、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アリール基、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基及びＣ１〜Ｃ１２アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ６は、上で定義した通りであり、アルキル基、アリール基、アルキルアリール基及びアリールアルキル基は場合によって置換されている］
の化合物。
【請求項２】
式（ＩＩａ）の化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｐが１であり、ＬがＣＨ２である、請求項１又は請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｑが−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、Ｒ６が請求項１で定義した通りである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｑが−ＯＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が水素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が水素又は［（Ｌ）ｐ−Ｑ］である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
ｎが０である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｑが−ＯＨであり、Ｒ１が水素であり、Ｒ３が水素又は［（Ｌ）ｐ−Ｑ］であり、ｎが０である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲート。
【請求項１１】
標識がフルオロフォア、ビオチン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、放射性同位体、ステロイド、医薬化合物、脂質、ペプチド、グリカン、ヌクレオチド及びペプチドタグを含む群から選択される、請求項１０に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
（ａ）式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）
【化２】
0005920936.tif 000023
［式中、
ｎ＝０〜８であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アリール基、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基及びＣ１〜Ｃ１２アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、ここで、アルキル基、アリール基、アルキルアリール基及びアリールアルキル基は場合によって置換されており、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択される］
のシクロオクタジエンをシクロプロパン化して、二環式シクロオクテン化合物を生成するステップと、
（ｂ）得られた二環式シクロオクテン化合物を臭素化して、二環式シクロオクタン化合物を生成するステップと、
（ｃ）得られた二環式シクロオクタン化合物を脱臭化水素して、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物を生成するステップと
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物を調製する方法。
【請求項１３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、請求項１０又は請求項１１に記載のコンジュゲートが１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む化合物と反応する、標的分子の修飾の方法。
【請求項１４】
１，３−双極子を含む化合物が、アジドを含む化合物、ニトロンを含む化合物又はニトリルオキシドを含む化合物である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、標的分子の生体直交的標識化、画像化又は修飾のための、請求項１０又は請求項１１に記載のコンジュゲートの使用。
【請求項１６】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１０又は請求項１１に記載のコンジュゲートを含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、縮合シクロオクチン化合物、及びそれらの調製の方法に関する。本発明による縮合シクロオクチン化合物は、無金属クリック反応において使用することができる。したがって、本発明はさらに、縮合シクロオクチンコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）と１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む標的分子との反応による標的分子の修飾の方法に関する。本発明はまた、標的分子の生体直交的標識化、画像化又は修飾におけるシクロオクチンコンジュゲートの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
「化学生物学」の急速に拡大しつつある分野における画期的な発展は、生体系における化学に関連している。生体系における化学は、本質的に温和であるが非常に迅速且つ高収率であるので水中及び生体分子官能基の近くでほぼ生理的ｐＨで機能する化学反応に関係する。そのような反応は、「生体直交化学」という用語のもとに分類することができる。生体直交化学の分野において、２つの主な課題があり、第１は、適切な化学の発展であり、第２は、生存生物（ｉｎ  ｖｉｖｏ）におけるその適用である。
【０００３】
化学の分野において、複雑な有機分子の構築に適用することができる化学反応の莫大なツールボックスが利用可能である。しかし、圧倒的多数のそのような反応は厳密に無水条件下で、言い換えれば、水の完全な非存在下でのみ行うことができる。それでもかなり少数の化学反応は水中又は水の存在下で行うことができるが、関係する化学物質への生存生物に存在する他の化合物の妨害を排除することができないため、これらの反応のほとんどは依然として、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてのみ適用することができる。現在のところ、ほんの一部の化学反応が、生存生物に存在する他の官能基と完全に適合性がある。
【０００４】
そのような反応の例は、「クリック反応」として公知の反応の１つである、環状アルキンとアジドとの付加環化である。この反応は、生体分子（例えば、タンパク質、脂質、グリカンなど）の生体直交的標識化及び画像化、プロテオミクス並びに材料科学のための多目的ツールになった。本質的には、２つの別個の分子実体、すなわち、アジドを有するものとひずんだシクロアルキンを有するものとが、ひずみ促進アジド−アルキン付加環化（ＳＰＡＡＣ）と呼ばれる反応により自発的に単一分子に化合する。生体直交的標識化に関するＳＰＡＡＣの能力は、単離された環状アルキン又はアジドが例えば、アミン、チオール、酸又はカルボニルなどの生体官能基に対して完全に不活性であるが、相まって、安定なトリアゾールコンジュゲートをもたらす迅速で不可逆的な付加環化を受けるという事実にある。例えば、栄養要求性細菌における発現、遺伝子工学又は化学的変換により得られたアジド修飾タンパク質は、アジド−タンパク質をシクロオクチンコンジュゲートとともに単に撹拌することにより、ビオチン、フルオロフォア、ＰＥＧ鎖又は他の官能基により手際よく標識することができる。さらに、小さいサイズのアジドは、化学リポーター戦略による特定の生体分子の画像化におけるＳＰＡＡＣの適用に非常に有用であることが証明された。
【化１】
0005920936.tif 000002
【０００５】
アジドのほかに、シクロオクチンもニトロン及びニトリルオキシドなどの他の双極子との高い反応性を示す。例えば、ひずみ促進アルキン−ニトロン付加環化（ＳＰＡＮＣ）がタンパク質のＮ末端修飾に適用された。
【０００６】
ＳＰＡＡＣ及びＳＰＡＮＣ付加環化反応（スキーム１）は、自発的に、したがって（金属）触媒の非存在下で進行し、これらの付加環化及び選択されたわずかなさらなる付加環化は、「無金属クリック反応」とも呼ばれている。
【０００７】
いくつかの環状アルキン及び生体直交的標識化におけるそれらの適用は、従来技術において記述されている。参照により組み込まれている米国特許出願公開第２００９／００６８７３８号は、修飾シクロアルキン化合物、及び生理的条件下で行うことができる付加環化反応による生体分子の修飾におけるそれらの使用に関する。付加環化は、修飾シクロアルキン、例えば、ジフルオロ化シクロオクチン化合物ＤＩＦＯ、ＤＩＦＯ２及びＤＩＦＯ３などを標的生体分子上のアジド部分と反応させて、共有結合的に修飾された生体分子を生成することを伴う。フッ化物置換がアジドとの付加環化に対して加速効果を有することが観察された。例えば、ＤＩＦＯ３は、非フッ素化系についての２．４×１０−３Ｍ−１ｓ−１の最大値と比べて最大κ＝７６×１０−３Ｍ−１ｓ−１の著しく改善された反応速度定数を示す。
【化２】
0005920936.tif 000003
【０００８】
シクロオクチンがアリール基に縮合したシクロオクチン（ベンゾ環化された（ｂｅｎｚａｎｎｕｌａｔｅｄ）系）は、参照により組み込まれている国際公開第２００９／０６７６６３号パンフレットに開示されており、アジドとの付加環化におけるこれらのジベンゾシクロオクチン化合物ＤＩＢＯの反応速度がさらに改善される（κ＝０．１２Ｍ−１ｓ−１）。
【０００９】
アザジベンゾシクロオクチンＤＩＢＡＣは、参照により組み込まれているｖａｎ  Ｄｅｌｆｔら（Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２０１０年、４６巻、９７〜９９頁）により開発されたが、アジドとの付加環化におけるさらに改善された反応速度（κ＝０．３１Ｍ−１ｓ−１）を示す。
【００１０】
最近、他のベンゾ環化された系であるビアリールアザシクロオクチノンＢＡＲＡＣが、参照により組み込まれているＢｅｒｔｏｚｚｉら（Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  ２０１０年、１３２巻、３６８８〜３６９０頁）により報告された。アミド官能基を環に置くことにより、ＢＡＲＡＣのアジドとの付加環化の反応速度が著しく改善された（κ＝０．９６Ｍ−１ｓ−１）。
【００１１】
ＤＩＢＯ及びＤＩＢＡＣはまた、両方が参照により組み込まれている、Ｐｅｚａｃｋｉ（Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２０１０年、４６巻、９３１〜９３３頁）及びｖａｎ  Ｄｅｌｆｔ（Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ２０１０年、４９巻、３０６５〜３０６８頁）により記載されたようにニトロンとの迅速な付加環化を受け、反応速度定数がアジドより最大３００倍高いことが見出された。
【化３】
0005920936.tif 000004
【００１２】
しかし、従来技術において公知の生体直交的標識化のためのシクロオクチンプローブは、いくつかの欠点がある。まず第１に、ＤＩＢＡＣのみが市販されているという事実によって広範な適用が阻まれている。合成による調製には、高度な化学の専門知識を必要とする。さらに、現在利用可能なプローブの合成は、冗長なもの（ＤＩＦＯ２については８つの化学的ステップ、ＤＩＦＯ３については１０ステップ、ＤＩＢＡＣについては９ステップ）であり、及び／又は低収率なもの（ＤＩＢＯについては総収率１０％）である。第３に、ＤＩＢＯ及びＤＩＢＡＣにおける２つのベンゾ環化されたアリール部分（ｂｅｎｚａｎｎｕｌａｔｅｄ  ａｒｙｌ  ｍｏｉｅｔｙ）の存在は、かなりの立体反発及び親油性の両方を与える。ＤＩＢＯ及びＤＩＢＡＣの親油性は、ファンデルワールス相互作用による非特異的タンパク質結合をもたらし得、これは望ましくない。
【００１３】
したがって、アジド、ニトロン及び他の１，３−双極子との１，３−双極子付加環化などの無金属クリック反応において使用するための、容易にアクセスでき反応性の新規な生体直交的プローブの明らかな要求が存在する。
【発明の概要】
【００１４】
第１の態様において、本発明は、以下の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）
【化４】
0005920936.tif 000005
［式中、
ｍは、０又は１であり、
ｎは、０〜８であり、
ｐは、０又は１であり、
Ｚは、Ｎ又はＣ（Ｒ３）であり、ここで、Ｒ３は、［（Ｌ）ｐ−Ｑ］、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基はＣ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ基及びシリル基からなる群から独立に選択される１つ又は複数の置換基で独立に場合によって置換されており、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は場合によって置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、シリル基は式（Ｒ４）３Ｓｉ−により表され、ここで、Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基及びＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基からなる群から独立に選択され、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は場合によって置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、
Ｙは、Ｏ、Ｃ（Ｏ）又はＣ（Ｒ５）２であり、ここで、Ｒ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、アルキル基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は場合によって置換されており、
場合によって、ｍ＝１である場合、Ｙ及びＺは、ＹとＺとを接続している結合と一緒に環状アルキル基又は（ヘテロ）アリール基を形成し、ここで、環状アルキル基及び（ヘテロ）アリール基は場合によって置換されており、ただし、Ｙ及びＺが（ヘテロ）アリール基を形成する場合、基−（Ｌ）ｐ−Ｑは、（ヘテロ）アリール基上の置換基であり、
Ｌは、線状又は分枝状Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２４シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２４シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルケニレン基、Ｃ９〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキニレン基から選択される連結基であり、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキル（ヘテロ）アリーレン基、（ヘテロ）アリールアルキレン基、（ヘテロ）アリールアルケニレン基及び（ヘテロ）アリールアルキニレン基はＣ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ５〜Ｃ１２シクロアルケニル基、Ｃ８〜Ｃ１２シクロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ及びシリル基からなる群から独立に選択される１つ又は複数の置換基で場合によって置換されており、ここで、シリル基は式（Ｒ４）３Ｓｉ−により表すことができ、ここで、Ｒ４は、上の通りに定義され、
Ｑは、水素、ハロゲン、Ｒ６、−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ６）２、−Ｃ≡ＣＲ６、−［Ｃ（Ｒ６）２Ｃ（Ｒ６）２Ｏ］ｑ−Ｒ６（ここで、ｑは１〜２００の範囲にある）、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−Ｓ（Ｏ）Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ６、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）２、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ６、−ＯＳ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ６、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ６）（ＯＲ６）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ６）２、−Ｓｉ（Ｒ６）３、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される官能基であり、ここで、Ｘは、酸素又は硫黄であり、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アリール基、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基及びＣ１〜Ｃ１２アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ６は、上で定義した通りであり、アルキル基、アリール基、アルキルアリール基及びアリールアルキル基は場合によって置換されている］
の化合物に関する。
【００１５】
本発明はさらに、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び／又は（Ｉｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしている、シクロオクチンコンジュゲートなどのコンジュゲートに関する。
【００１６】
本発明の他の態様は、
（ａ）以下の式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）
【化５】
0005920936.tif 000006
［式中、
ｎ＝０〜８であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アリール基、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基及びＣ１〜Ｃ１２アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、ここで、アルキル基、アリール基、アルキルアリール基及びアリールアルキル基は場合によって置換されており、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択される］のシクロオクタジエンに縮合３又は４員環を導入して、二環式シクロオクテン化合物を生成するステップと、
（ｂ）得られた二環式シクロオクテン化合物を臭素化して、二環式シクロオクタン化合物を生成するステップと、
（ｃ）得られた二環式シクロオクタン化合物を脱臭化水素するステップと
を含む、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物を調製する方法を提供することである。
【００１７】
本発明はまた、本発明によるコンジュゲートが１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む化合物と反応する、標的分子の修飾の方法に関する。
【００１８】
本発明のさらに他の態様は、標的分子の生体直交的標識化、画像化又は例えば、表面修飾などの修飾のための、本発明によるコンジュゲートの使用である。
【００１９】
最後に、本発明は、薬学的に許容される担体をさらに含む、本発明によるコンジュゲートを含む組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】アジド標識キャプシドタンパク質とＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５にコンジュゲートしているシクロオクチンとのＳＰＡＡＣ反応（左）及びブランク反応（右）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。
【図２】Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５にコンジュゲートしているシクロオクチンにより官能基化されたキャプシドタンパク質のＥＳＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す図である。
【図３】Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５にコンジュゲートしているシクロオクチンにより官能基化されたキャプシドタンパク質のＦＰＬＣ分析を示す図である。
【図４】フローサイトメトリーにより決定された、Ａｃ４ＭａｎＮＡｚの代謝的取込み、ＤＩＢＯ−又はＢＣＮ−ビオチンによる標識化及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによる検出の後の完全なＭＶ３細胞における細胞表面蛍光を示す図である。
【図５】Ａｃ４ＭａｎＮＡｚの代謝的取込み、ＤＩＢＯ−又はＢＣＮ−ビオチンによる標識化及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによる検出の後のＭＶ３細胞の蛍光強度及び細胞生存率を示す図である。
【図６】Ａｃ４ＭａｎＮＡｚ（５０μＭ）の非存在下又は存在下であらかじめ培養された標識細胞、ＤＩＢＯ−又はＢＣＮ−ビオチンによる標識化、及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによる検出の代表的な共焦点像を示す図である。
【発明の詳細な説明】
【００２１】
定義
本明細書及び特許請求の範囲において使用されている「含む」という動詞及びその語形変化は、当語の後の項目が含まれるが、具体的に言及されていない項目が除外されないという意味を持つようにその非限定的な意味で使用されている。
【００２２】
さらに、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による要素への言及は、文脈上要素が１つのみ存在することが要求されない限り、２つ以上の要素が存在するという可能性を除外しない。したがって、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は、通常「少なくとも１つ」を意味する。
【００２３】
本明細書及び特許請求の範囲において開示されている化合物は、縮合シクロオクチン化合物、すなわち、第２の環構造がシクロオクチン部分に縮合しているシクロオクチン化合物と記述することができる。縮合シクロオクチン化合物におけるシクロオクチン部分の三重結合は、３つの可能な位置、すなわち、シクロオクチン部分の２、３又は４位（「ＩＵＰＡＣ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｒｕｌｅ  Ａ３１．２に準拠した番号付け）のいずれか１つに位置していてもよい。本明細書及び特許請求の範囲における任意の縮合シクロオクチン化合物の記述は、シクロオクチン部分の３つの個別の位置異性体のすべてを含むことを意味する。
【００２４】
本明細書及び特許請求の範囲において開示されている化合物は、１つ又は複数の不斉中心を含む可能性があり、化合物の異なるジアステレオマー及び／又は鏡像異性体が存在する可能性がある。本明細書及び特許請求の範囲における任意の化合物の記述は、特に断らない限り、すべてのジアステレオマー及びそれらの混合物を含むことを意味する。さらに、本明細書及び特許請求の範囲における任意の化合物の記述は、特に断らない限り、個々の鏡像異性体及び鏡像異性体の任意の混合物、ラセミ体などの両方を含むことを意味する。化合物の構造を特定の鏡像異性体として表現する場合、本出願の発明がこの特定の鏡像異性体に限定されないことを理解されたい。
【００２５】
化合物は、種々の互変異性型で存在し得る。本発明による化合物は、特に断らない限り、すべての互変異性型を含むことを意味する。
【００２６】
本明細書及び特許請求の範囲において開示されている化合物はさらに、エキソ及びエンド位置異性体として存在し得る。特に断らない限り、本明細書及び特許請求の範囲における任意の化合物の記述は、化合物の個々のエキソ及び個々のエンド位置異性体並びにそれらの混合物の両方を含むことを意味する。
【００２７】
さらに、本明細書及び特許請求の範囲において開示されている化合物は、シス及びトランス異性体として存在し得る。特に断らない限り、本明細書及び特許請求の範囲における任意の化合物の記述は、化合物の個々のシス及び個々のトランス異性体並びにそれらの混合物の両方を含むことを意味する。例として、化合物の構造をシス異性体として表現する場合、対応するトランス異性体又はシス及びトランス異性体の混合物が本出願の発明から除外されないことを理解されたい。
【００２８】
非置換アルキル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ＋１を有し、線状又は分枝状であり得る。非置換アルキル基は、環状部分も含有し得、したがって、付随一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有する。場合によって、アルキル基は、本文書でさらに指定した１つ又は複数の置換基により置換されている。適切なアルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｔ−ブチル、１−ヘキシル、１−ドデシルなどを含むが、これらに限定されない。
【００２９】
非置換アルケニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有し、線状又は分枝状であり得る。適切なアルケニル基の例は、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、ペンテニル、デセニル、オクタデセニル及びエイコセニルなどを含むが、これらに限定されない。非置換アルケニル基は、環状部分も含有し得、したがって、付随一般式ＣｎＨ２ｎ−３を有する。
【００３０】
非置換アルケンは、一般式ＣｎＨ２ｎを有し、一方、非置換アルキンは、一般式ＣｎＨ２ｎ−２を有する。
【００３１】
アリール基は、少なくとも６個の炭素原子を含み、単環、二環及び多環構造を含み得る。場合によって、アリール基は、本文書でさらに指定した１つ又は複数の置換基により置換されていてもよい。アリール基の例としては、例えば、フェニル、ナフチル、アントラシルなどの基がある。
【００３２】
アリールアルキル基及びアルキルアリール基は、少なくとも７個の炭素原子を含み、単環及び二環構造を含み得る。場合によって、アリール基は、本文書でさらに指定した１つ又は複数の置換基により置換されていてもよい。アリールアルキル基は、例えば、ベンジルなどである。アルキルアリール基は、例えば、４−ｔ−ブチルフェニルなどである。
【００３３】
アリール基を（ヘテロ）アリール基と表示する場合、当表記法は、アリール基及びヘテロアリール基を含むことを意味する。同様に、アルキル（ヘテロ）アリール基は、アルキルアリール基及びアルキルヘテロアリール基を含むことを意味し、（ヘテロ）アリールアルキル基は、アリールアルキル基及びヘテロアリールアルキル基を含むことを意味する。
【００３４】
ヘテロアリール基は、酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む。
【００３５】
縮合シクロオクチン化合物
シクロアルキンの反応性が環のサイズの減少に伴って増加するという事実に基づいて、８個未満の炭素原子を有するシクロアルキンのコンジュゲートは、生体直交化学における用途にとって非常に関心があるものと思われる。残念なことに、現在までのところ、シクロヘプチン及びより小さい環は、理想的な１８０°のＣ−Ｃ・Ｃ角からの逸脱の結果としてのひずみの増加に起因して、純粋な形で単離することができない。
【００３６】
ひずみエネルギーを増加させる代替法は、国際公開第２００９／０６７６６３号パンフレットによるＤＩＢＯについての戦略である、アリール基へのシクロオクチンのベンゾ環化によるものである。ひずみエネルギーは、環への他のｓｐ２型原子の導入によってさらに増大させることができ、これは、のｖａｎ  ＤｅｌｆｔによるＤＩＢＡＣについての、及びＢｅｒｔｏｚｚｉによるＢＡＲＡＣについてのアプローチである。しかし、上述のように、シクロオクチンにおける２つのアリール部分の存在は、かなりの立体反発を生じさせるだけでなく、シクロオクチン化合物の親油性も増大させ、これは望ましくない。
【００３７】
本発明者らは、さらなる環ひずみを誘導する非常に効率的な方法は、縮合シクロオクチン化合物、より特にそれぞれビシクロ［６．１．０］ノニン及びビシクロ［６．２．０］デシン系を生じさせる、３又は４員環へのシクロオクチンの縮合を必要とすることを見出した。これらの二環系は、相対的安定性と１，３−双極子との（３＋２）付加環化及び１，３−（ヘテロ）ジエンとの（ヘテロ）ディールス−アルダー反応における高い反応性とを兼ね備えるので、驚くべきことに生体直交的プローブとして十分に適している。さらに、縮合３又は４員環構造は、環ひずみを与えることは別として、官能基及び／又は標識へのコンジュゲートのためのハンドルの位置決めにも完全に適しており、標的分子の生体直交的標識化、画像化及び／又は修飾、例えば、表面修飾などの用途のために好都合に官能基化することができる。
【００３８】
したがって、第１の態様において、本発明は、以下の一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）
【化６】
0005920936.tif 000007
［式中、
ｍは、０又は１であり、
ｎは、０〜８であり、
ｐは、０又は１であり、
Ｚは、Ｎ又はＣ（Ｒ３）であり、ここで、Ｒ３は、［（Ｌ）ｐ−Ｑ］、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基はＣ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ基及びシリル基からなる群から独立に選択される１つ又は複数の置換基で独立に場合によって置換されており、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は場合によって置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、シリル基は式（Ｒ４）３Ｓｉ−により表され、ここで、Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基及びＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基からなる群から独立に選択され、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は場合によって置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、
Ｙは、Ｏ、Ｃ（Ｏ）又はＣ（Ｒ５）２であり、ここで、Ｒ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、アルキル基はＯ、Ｎ及びＳからなる群から選択される複数のヘテロ原子のうちの１個により場合によって中断されており、ここで、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は場合によって置換されており、
場合によって、ｍ＝１である場合、Ｙ及びＺは、ＹとＺとを接続している結合と一緒に環状アルキル基又は（ヘテロ）アリール基を形成し、ここで、環状アルキル基及び（ヘテロ）アリール基は場合によって置換されており、ただし、Ｙ及びＺが（ヘテロ）アリール基を形成する場合、基−（Ｌ）ｐ−Ｑは、（ヘテロ）アリール基上の置換基であり、
Ｌは、線状又は分枝状Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２４シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２４シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルケニレン基、Ｃ９〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキニレン基から選択される連結基であり、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキル（ヘテロ）アリーレン基、（ヘテロ）アリールアルキレン基、（ヘテロ）アリールアルケニレン基及び（ヘテロ）アリールアルキニレン基はＣ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ５〜Ｃ１２シクロアルケニル基、Ｃ８〜Ｃ１２シクロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ及びシリル基からなる群から独立に選択される１つ又は複数の置換基で場合によって置換されており、ここで、シリル基は式（Ｒ４）３Ｓｉ−により表すことができ、ここで、Ｒ４は、上の通りに定義され、
Ｑは、水素、ハロゲン、Ｒ６、−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ６）２、−Ｃ≡ＣＲ６、−［Ｃ（Ｒ６）２Ｃ（Ｒ６）２Ｏ］ｑ−Ｒ６（ここで、ｑは１〜２００の範囲にある）、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−Ｓ（Ｏ）Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ６、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ６、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）２、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ６、−ＯＳ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ６、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ６）（ＯＲ６）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ６）２、−Ｓｉ（Ｒ６）３、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される官能基であり、ここで、Ｘは、酸素又は硫黄であり、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アリール基、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基及びＣ１〜Ｃ１２アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ６は、上で定義した通りであり、アルキル基、アリール基、アルキルアリール基及びアリールアルキル基は場合によって置換されている］
の化合物に関する。
【００３９】
本発明による縮合シクロオクチン化合物の利点は、それらが容易に合成される点である。さらなる利点は、それらが分子の様々な部分の単純で簡単な修飾に適していることである。
【００４０】
式（Ｉａ）の縮合シクロオクチン化合物が好ましい。この化合物において、三重結合は、シクロオクチン部分の４位、すなわち、縮合３又は４員環の反対側に位置している。これは、シクロオクチン化合物上の置換基の性質によって、（Ｉａ）にとって可能な潜在的位置異性体の数の減少をもたらし得る。
【００４１】
式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）の化合物において、Ｚ上の−［（Ｌ）ｐ−Ｑ］置換基は、シクロオクチン環に対してエキソ又はエンド位に配置されていてもよい。２つのＲ１置換基は、互いに対してシス又はトランス位にあり得る。
【００４２】
好ましくは、Ｑは、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、ここで、Ｘ及びＲ６は、上で定義した通りである。より好ましくは、Ｘは酸素である。最も好ましくは、Ｑは、−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される。さらに、官能基Ｑは、場合によってマスク又は保護されていてもよい。Ｒ６基は、互いに独立に選択することができ、これは、例えば、−Ｎ（Ｒ６）２置換基に存在する２つのＲ６基は、互いに異なり得ることを意味する。
【００４３】
１つの実施形態において、ｐは０である、すなわち、ＱはＺに直接結合している。他の実施形態において、ｐは１である。さらに他の実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２である。
【００４４】
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。
【００４５】
他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ２は、電子求引基、すなわち、ハメット置換基定数σについて正の値を有する基である。適切な電子求引基は、当業者に公知であり、例えば、ハロゲン（特にＦ）、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、置換Ｃ１〜Ｃ１２アリール基又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基を含み、ここで、置換基は電子求引基である。好ましくは、置換アルキル基、アリール基及びアルキルアリール基は、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基（例えば、−ＣＦ３など）、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アリール基（例えば、−Ｃ６Ｆ５など）又はフッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基（例えば、−［３，５−（ＣＦ３）２（Ｃ６Ｈ３）］など）である。
【００４６】
ｍ＝０でありＺ＝ＣＲ３である化合物
本発明が関する化合物の特定のクラスは、シクロオクチン部分が３員環構造に縮合している式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）による化合物のクラスである。したがって、本発明の好ましい実施形態において、上で定義したｍは、０である。
【００４７】
さらなる好ましい実施形態において、Ｚは、Ｃ（Ｒ３）であり、ここで、Ｒ３は、上で定義した通りである。したがって、本発明はまた、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）による化合物に関し、ここで、化合物は、以下の式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）
【化７】
0005920936.tif 000008
［式中、ｎ、ｐ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｌ及びＱは、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）の化合物について上で定義した通りである］
の化合物である。
【００４８】
既に上で述べたように、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び（ＩＩｃ）の化合物における−［（Ｌ）ｐ−Ｑ］置換基は、シクロオクチン環に対してエキソ又はエンドに配置されていてもよく、２つのＲ１置換基は、互いに対してシス又はトランス位に配置されていてもよい。好ましい実施形態において、Ｒ１置換基は、シス位にある。
【００４９】
１つの実施形態において、ｐは０である、すなわち、Ｑはシクロプロピル環に直接結合している。他の実施形態において、ｐは１である。さらに他の実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２である。
【００５０】
また、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）の化合物において、ｐが０である場合及びｐが１である場合の両方について、Ｑは、好ましくは、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、ここで、Ｘ及びＲ６は、上で定義した通りである。より好ましくは、Ｘは酸素である。最も好ましくは、Ｑは、−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される。さらに、官能基Ｑは、場合によってマスク又は保護されていてもよい。Ｒ６基は、互いに独立に選択することができ、これは、例えば、−Ｎ（Ｒ６）２置換基に存在する２つのＲ６基は、互いに異なり得ることを意味する。好ましい実施形態において、Ｑは、−ＯＲ６、好ましくは−ＯＨである。他の好ましい実施形態において、Ｑは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６である。
【００５１】
他の好ましい実施形態において、Ｒ３は、水素又は［（Ｌ）ｐ−Ｑ］である。
【００５２】
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。
【００５３】
他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ２は、電子求引基、すなわち、ハメット置換基定数σについて正の値を有する基である。適切な電子求引基は、当業者に公知であり、例えば、ハロゲン（特にＦ）、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、置換Ｃ１〜Ｃ１２アリール基又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基を含み、ここで、置換基は電子求引基である。好ましくは、置換アルキル基、アリール基及びアルキルアリール基は、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基（例えば、−ＣＦ３など）、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アリール基（例えば、−Ｃ６Ｆ５など）又はフッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基（例えば、−［３，５−（ＣＦ３）２（Ｃ６Ｈ３）］など）である。
【００５４】
式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び（ＩＩｃ）の化合物のうち、式（ＩＩａ）の化合物が好ましく、その理由は、それらが対称軸又は対称面を有し得、それにより、形成され得る潜在的位置異性体の数が減少するからである。
【００５５】
ｐが１であり、ＬがＣＨ２であり、Ｑが−ＯＨであり、Ｒ１が水素であり、Ｒ３が水素又は［（Ｌ）ｐ−Ｑ］であり、ｎが０である実施形態が特に好ましい。
【００５６】
ｍ＝０でありＺ＝Ｎである化合物
本発明はまた、ｍが０であり、ＺがＮである一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物に関する。これらの化合物は、以下の一般式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）又は（ＩＩＩｃ）を有する。
【化８】
0005920936.tif 000009
式中、ｎ、ｐ、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ及びＱは、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）の化合物について上で定義した通りである。
【００５７】
２つのＲ１置換基は、互いに対してシス又はトランス位に配置されていてもよい。好ましい実施形態において、Ｒ１置換基は、シス位にある。
【００５８】
１つの実施形態において、ｐは０である、すなわち、ＱはＮに直接結合している。他の実施形態において、ｐは１である。さらに他の実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２である。
【００５９】
また、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）又は（ＩＩＩｃ）の化合物において、ｐが０である場合及びｐが１である場合の両方について、Ｑは、好ましくは、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、ここで、Ｘ及びＲ６は、上で定義した通りである。より好ましくは、Ｘは酸素である。最も好ましくは、Ｑは、−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される。さらに、官能基Ｑは、場合によってマスク又は保護されていてもよい。Ｒ６基は、互いに独立に選択することができ、これは、例えば、−Ｎ（Ｒ６）２置換基に存在する２つのＲ６基は、互いに異なり得ることを意味する。
【００６０】
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。
【００６１】
他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ２は、電子求引基、すなわち、ハメット置換基定数σについて正の値を有する基である。適切な電子求引基は、当業者に公知であり、例えば、ハロゲン（特にＦ）、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、置換Ｃ１〜Ｃ１２アリール基又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基を含み、ここで、置換基は電子求引基である。好ましくは、置換アルキル基、アリール基及びアルキルアリール基は、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基（例えば、−ＣＦ３など）、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アリール基（例えば、−Ｃ６Ｆ５など）又はフッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基（例えば、−［３，５−（ＣＦ３）２（Ｃ６Ｈ３）］など）である。
【００６２】
式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）及び（ＩＩＩｃ）の化合物のうち、式（ＩＩＩａ）の化合物が好ましく、その理由は、それらが対称要素を有し、それにより、形成され得る潜在的位置異性体の数が減少するからである。
【００６３】
ｍ＝１でありＺ＝Ｃ（Ｒ３）である化合物
さらに、本発明は、ｍが１であり、ＺがＣ（Ｒ３）である一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物に関し、これらの化合物は、以下の一般式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）又は（ＩＶｃ）を有する。
【化９】
0005920936.tif 000010
式中、Ｙは、Ｏ、Ｃ（Ｏ）又はＣ（Ｒ５）２であり、ｎ、ｐ、Ｌ、Ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ５は、上で定義した通りである。
【００６４】
また、式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）及び（ＩＶｃ）の化合物において、−［（Ｌ）ｐ−Ｑ］置換基は、シクロオクチン環に対してエキソ又はエンドに配置されていてもよく、２つのＲ１置換基は、互いに対してシス又はトランス位に配置されていてもよい。
【００６５】
上に示した式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）及び（ＩＶｃ）の化合物において、Ｚ基、すなわち、Ｒ３及び−［（Ｌ）ｐ−Ｑ］置換基に結合したＣ原子は、縮合シクロオクチン化合物の９位に位置している。しかし、このＺ基が縮合ビシクロデシン化合物の１０位に配置されている（ＩＶｂ）及び（ＩＶｃ）の位置異性体も含まれ、それにより、−［（Ｌ）ｐ−Ｑ］置換基がエキソ又はエンド位に配置されていてもよい。
【００６６】
１つの実施形態において、ｐは０である、すなわち、Ｑはシクロブチル環に直接結合している。他の実施形態において、ｐは１である。さらに他の実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２である。
【００６７】
また、式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）又は（ＩＶｃ）の化合物において、ｐが０である場合及びｐが１である場合の両方において、Ｑは、好ましくは、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、ここで、Ｘ及びＲ６は、上で定義した通りである。より好ましくは、Ｘは酸素である。最も好ましくは、Ｑは、−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される。さらに、官能基Ｑは、場合によってマスク又は保護されていてもよい。Ｒ６基は、互いに独立に選択することができ、これは、例えば、−Ｎ（Ｒ６）２置換基に存在する２つのＲ６基は、互いに異なり得ることを意味する。
【００６８】
好ましい実施形態において、ＹはＯである。他の好ましい実施形態において、ＹはＣ（Ｏ）である。ＹがＯである場合及びＹがＣ（Ｏ）である場合の両方について、Ｒ１が水素であることが好ましい。
【００６９】
他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ２は、電子求引基、すなわち、ハメット置換基定数σについて正の値を有する基である。適切な電子求引基は、当業者に公知であり、例えば、ハロゲン（特にＦ）、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、置換Ｃ１〜Ｃ１２アリール基又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基を含み、ここで、置換基は電子求引基である。好ましくは、置換アルキル基、アリール基及びアルキルアリール基は、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基（例えば、−ＣＦ３など）、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アリール基（例えば、−Ｃ６Ｆ５など）又はフッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基（例えば、−［３，５−（ＣＦ３）２（Ｃ６Ｈ３）］など）である。
【００７０】
式（ＩＶａ）の化合物が好ましい。この化合物において、三重結合は、シクロオクチン部分の４位、すなわち、縮合シクロブチル環の反対側に位置している。
【００７１】
ｍ＝１でありＺ＝Ｎである化合物
本発明はまた、ｍが１であり、ＺがＮである一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物に関する。これらの化合物は、以下の一般式（Ｖａ）、（Ｖｂ）又は（Ｖｃ）を有する。
【化１０】
0005920936.tif 000011
式中、Ｙは、Ｃ（Ｏ）又はＣ（Ｒ５）２であり、ｎ、ｐ、Ｌ、Ｑ、Ｒ１、Ｒ２及びＲ５は、上で定義した通りである。
【００７２】
ここで示した式（Ｖａ）、（Ｖｂ）又は（Ｖｃ）による化合物において、４員環のＮ原子は、二環系の９位に配置されている。しかし、本発明はまた、４員環のＮ原子が二環系の１０位に配置されている式（Ｖｂ）又は（Ｖｃ）の位置異性体に関する。さらに、２つのＲ１置換基は、互いに対してシス又はトランスに配置されていてもよい。
【００７３】
１つの実施形態において、ｐは０である、すなわち、Ｑは４員環に直接結合している。他の実施形態において、ｐは１である。さらに他の実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２である。
【００７４】
また、式（Ｖａ）、（Ｖｂ）又は（Ｖｃ）の化合物において、ｐが０である場合及びｐが１である場合の両方について、Ｑは、好ましくは、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、ここで、Ｘ及びＲ６は、上で定義した通りである。より好ましくは、Ｘは酸素である。最も好ましくは、Ｑは、−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される。さらに、官能基Ｑは、場合によってマスク又は保護されていてもよい。Ｒ６基は、互いに独立に選択することができ、これは、例えば、−Ｎ（Ｒ６）２置換基に存在する２つのＲ６基は、互いに異なり得ることを意味する。
【００７５】
ＹがＣ（Ｒ５）２である場合、Ｒ５は、好ましくは水素である。ＹがＣ（Ｒ５）２である場合及びＹがＣ（Ｏ）である場合の両方について、Ｒ１が水素であることが好ましい。
【００７６】
他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ２は、電子求引基、すなわち、ハメット置換基定数σについて正の値を有する基である。適切な電子求引基は、当業者に公知であり、例えば、ハロゲン（特にＦ）、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、置換Ｃ１〜Ｃ１２アリール基又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基を含み、ここで、置換基は電子求引基である。好ましくは、置換アルキル基、アリール基及びアルキルアリール基は、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基（例えば、−ＣＦ３など）、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アリール基（例えば、−Ｃ６Ｆ５など）又はフッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基（例えば、−［３，５−（ＣＦ３）２（Ｃ６Ｈ３）］など）である。
【００７７】
上で説明したように、三重結合がシクロオクチン部分の４位、すなわち、縮合シクロブチル環の反対側に位置している式（Ｖａ）の化合物が好ましい。
【００７８】
ｍ＝１でありＹ及びＺが環状アルキル又は（ヘテロ）アリール基を形成する化合物
本発明はまた、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物に関し、ここで、ｍ＝１である場合、Ｙ及びＺは、ＹとＺとを接続している結合と一緒に環状アルキル基又は（ヘテロ）アリール基を形成し、ここで、環状アルキル基及び（ヘテロ）アリール基は場合によって置換されており、ただし、Ｙ及びＺが（ヘテロ）アリール基を形成する場合、基−（Ｌ）ｐ−Ｑは（ヘテロ）アリール基上の置換基である。
【００７９】
環状基がアリール基、特に、以下の式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）及び（ＶＩｃ）におけるようなベンゾ環化されたアリール基が好ましい。
【化１１】
0005920936.tif 000012
式中、ｐ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ及びＱは、上で定義した通りである。
【００８０】
−（Ｌ）ｐ−Ｑ置換基は、ベンゾ環化されたアリール基のオルト又はメタ位のいずれかに配置されていてもよく、また式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）及び（ＶＩｃ）の化合物においてＲ１置換基は、互いに対してシス又はトランスに配置されていてもよい。
【００８１】
１つの実施形態において、ｐは０である、すなわち、Ｑはアリール基に直接結合している。他の実施形態において、ｐは１である。さらに他の実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２である。
【００８２】
Ｑは、好ましくは、ｐが０である場合及びｐが１である場合の両方について、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＣＸ、−ＸＣＮ、−ＸＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｒ６）２ＸＲ６、−Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｃ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｒ６、−ＸＣ（Ｘ）ＸＲ６、−ＸＣ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）ＸＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｘ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択され、ここで、Ｘ及びＲ６は上で定義した通りである。より好ましくは、Ｘは、酸素である。最も好ましくは、Ｑは、−ＯＲ６、−Ｎ（Ｒ６）２、−＋Ｎ（Ｒ６）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ６及び−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２からなる群から選択される。さらに、官能基Ｑは、場合によってマスク又は保護されていてもよい。Ｒ６基は、互いに独立に選択することができ、これは、例えば、−Ｎ（Ｒ６）２置換基に存在する２つのＲ６基は、互いに異なり得ることを意味する。
【００８３】
好ましい実施形態において、Ｒ１は、水素である。他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ２は、電子求引基、すなわち、ハメット置換基定数σについて正の値を有する基である。適切な電子求引基は、当業者に公知であり、例えば、ハロゲン（特にＦ）、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、置換Ｃ１〜Ｃ１２アリール基又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基を含み、ここで、置換基が電子求引基である。好ましくは、置換アルキル基、アリール基及びアルキルアリール基は、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基（例えば、−ＣＦ３など）、フッ化Ｃ１〜Ｃ１２アリール基（例えば、−Ｃ６Ｆ５など）又はフッ化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基（例えば、−［３，５−（ＣＦ３）２（Ｃ６Ｈ３）］など）である。
【００８４】
上で説明したように、三重結合がシクロオクチン部分の４位に位置している式（ＶＩａ）の化合物が好ましい。
【００８５】
コンジュゲート
本発明による縮合シクロオクチン化合物は、無金属クリック反応において使用するのに非常に適しており、したがって、これらの化合物は、広範囲の標的分子の生体直交的標識化、画像化及び／又は表面修飾を含む修飾などの用途における多目的ツールである。本発明の一態様は、本発明による式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び／又は（Ｉｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲートを提供することである。
【００８６】
「標識」という用語は、本発明による式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）の化合物にコンジュゲートすることができる任意の同定タグを指す。多種多様の異なる用途のための多種多様の標識が当技術分野で公知である。特定の用途によって、その特定の用途のための適切な標識を選択することができる。特定の用途のための適切な標識は、当業者に公知であり、すべての種類のフルオロフォア、ビオチン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、放射性同位体、ステロイド、医薬化合物、脂質、ペプチド、グリカン（オリゴ及び多糖を含む）、ヌクレオチド（オリゴ及びポリヌクレオチドを含む）及びペプチドタグを含むが、これらに限定されない。適切なフルオロフォアの例は、例えば、すべての種類のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５）、シアニン染料（例えば、Ｃｙ３又はＣｙ５）、クマリン誘導体、フルオレセイン、ローダミン、アロフィコシアニン、クロモマイシンなどである。適切なペプチドタグの例は、ＦＬＡＧ又はＨＩＳタグを含む。適切なグリカンの例は、コンカナバリンである。好ましくは、標識は、フルオロフォア、ビオチン、ポリエチレングリコール鎖、ポリプロピレングリコール鎖、混合ポリエチレン／ポリプロピレングリコール鎖、放射性同位体、ステロイド、医薬化合物、脂質、ペプチド、グリカン、ヌクレオチド及びペプチドタグを含む群から選択される。
【００８７】
官能基Ｑは、直接的に又はリンカー若しくは連結単位を介して間接的に標識に接続していてもよい。連結単位は、当技術分野で周知であり、一般構造Ｑ−Ｓ−Ｑを有し、ここで、Ｑは、上で定義した通りであり、Ｓは、線状又は分枝状Ｃ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基、Ｃ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から選択される。場合によって、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、場合によって、前記基は、１個又は複数のヘテロ原子、好ましくは１〜１００個のヘテロ原子により中断されていてもよく、前記ヘテロ原子は、好ましくはＯ、Ｓ及びＮＲ６からなる群から選択され、ここで、Ｒ６は、上で定義した通りである。最も好ましくは、ヘテロ原子はＯである。
【００８８】
適切な連結単位の例は、（ポリ）エチレングリコールジアミン（例えば、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン又はより長いエチレングリコール鎖を含む同等物など）、ポリエチレングリコール又はポリエチレンオキシド鎖、ポリプロピレングリコール又はポリプロピレンオキシド鎖、１，ｘ−ジアミノアルカンを含むが、これらに限定されず、ここで、ｘは、アルカンなどにおける炭素原子の炭素原子の数である。他のクラスの適切なリンカーは、開裂性リンカーを含む。開裂性リンカーは、当技術分野で周知である。
【００８９】
好ましい実施形態において、本発明は、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び／又は（ＩＩｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲートに関する。さらなる好ましい実施形態において、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び／又は（ＩＩｃ）のコンジュゲートされた化合物は、ｐが１であり、ＬがＣＨ２である化合物である。Ｒ１及び／又はＲ３は、好ましくはＨである。他の実施形態において、ｎは０である（Ｑ、ｎ、ｐ、Ｌ、Ｒ１及びＲ３は、上で定義した通りである）。最も好ましくは、ｐは１であり、ＬはＣＨ２であり、Ｒ１はＨであり、Ｒ３はＨであり、ｎは０である。
【００９０】
他の実施形態において、本発明は、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）及び／又は（ＩＩＩｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲートに関する。さらなる実施形態において、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）及び／又は（ＩＩＩｃ）のコンジュゲートされた化合物は、ｐが１であり、ＬがＣＨ２である化合物である。さらに他の実施形態において、ｐが０であり、したがって、官能基ＱがＮ原子に直接結合している。Ｒ１は、好ましくはＨである。他の実施形態において、ｎは０である（Ｑ、ｎ、ｐ、Ｌ、Ｒ１及びＲ３は、上で定義した通りである）。最も好ましい実施形態において、ｐは１であり、ＬはＣＨ２であり、Ｒ１はＨであり、ｎは０である。代替の最も好ましい実施形態において、ｐは０であり、Ｒ１はＨであり、ｎは０である。
【００９１】
さらに他の実施形態において、本発明は、式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）及び／又は（ＩＶｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲートに関する。好ましい実施形態において、式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）及び／又は（ＩＶｃ）のコンジュゲートされた化合物は、ｐが１であり、ＬがＣＨ２である化合物である。Ｒ１及び／又はＲ３は、好ましくはＨであり、Ｙは、好ましくはＣ（Ｏ）又はＯである。他の実施形態において、ｎは０である（Ｑ、ｎ、ｐ、Ｌ、Ｒ１及びＲ３は、上で定義した通りである）。最も好ましい実施形態において、ＹはＯ又はＣ（Ｏ）であり、ｐは１であり、ＬはＣＨ２であり、Ｒ１はＨであり、Ｒ３はＨであり、ｎは０である。他の最も好ましい実施形態において、ＹはＯ又はＣ（Ｏ）であり、ｐは０であり、Ｒ１はＨであり、Ｒ３はＨであり、ｎは０である。
【００９２】
さらに、本発明は、式（Ｖａ）、（Ｖｂ）及び／又は（Ｖｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲートに関する。好ましい実施形態において、式（Ｖａ）、（Ｖｂ）及び／又は（Ｖｃ）のコンジュゲートされた化合物は、ｐが１であり、ＬがＣＨ２である化合物である。Ｒ１は、好ましくはＨである。Ｙは、好ましくはＣ（Ｏ）である。他の実施形態において、ｎは０である（Ｑ、ｎ、ｐ、Ｌ、Ｙ、Ｒ１及びＲ３は、上で定義した通りである）。最も好ましい実施形態において、ＹはＣ（Ｏ）であり、ｐは１であり、ＬはＣＨ２であり、Ｒ１はＨであり、ｎは０である。他の最も好ましい実施形態において、ＹはＣ（Ｏ）であり、ｐは０であり、Ｒ１はＨであり、ｎは０である。
【００９３】
本発明はまた、式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）及び／又は（ＶＩｃ）の化合物が官能基Ｑを介して標識にコンジュゲートしているコンジュゲートに関する。好ましい実施形態において、Ｒ１はＨである。他の好ましい実施形態において、ｐは０である、すなわち、Ｑはアリール基に直接結合している。
【００９４】
本発明はまた、標的分子の生体直交的標識化、画像化又は例えば、表面修飾などの修飾のための、本発明によるコンジュゲートの使用に関する。
【００９５】
合成方法
本発明のさらなる態様は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）の化合物の合成方法を提供することである。したがって、本発明は、
（ａ）以下の式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）
【化１２】
0005920936.tif 000013
［式中、
ｎ＝０〜８であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、
Ｒ２は、ハロゲン、−ＯＲ６、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ６、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アリール基、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルアリール基及びＣ１〜Ｃ１２アリールアルキル基からなる群から独立に選択され、ここで、アルキル基、アリール基、アルキルアリール基及びアリールアルキル基は場合によって置換されており、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立に選択される］
のシクロオクタジエンに縮合３又は４員環を導入して、二環式シクロオクテン化合物を生成するステップと、
（ｂ）得られた二環式シクロオクテン化合物を臭素化して、二環式シクロオクタン化合物を生成するステップと、
（ｃ）得られた二環式シクロオクタン化合物を脱臭化水素して、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物を生成するステップと
を含む、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）の化合物を調製する方法に関する。
【００９６】
ステップ（ａ）における式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）のシクロオクタジエンは、シス，シス−又はシス，トランス−シクロオクタジエンであり得る。１つの実施形態において、シクロオクタジエンは、シス，シス−シクロオクタジエンである。第２の実施形態において、シクロオクタジエンは、シス，トランス−シクロオクタジエンである。言い換えれば、Ｒ１置換基を含む二重結合は、Ｅ又はＺ立体配置を有し得る。
【００９７】
好ましい実施形態において、Ｒ１はＨである。他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ１はＨであり、ｎは０である。
【００９８】
官能基Ｑは、合成方法における任意の箇所で導入することができる。例えば、官能基は、二環式シクロオクテン化合物の生成であるステップ（ａ）中に導入することができる。官能基はまた、追加のステップにおいて、例えば、臭素化ステップ（ｂ）の前若しくは後又は脱臭化水素ステップ（ｃ）の後に導入することができる。当業者に明らかなように、官能基の導入に用いられる戦略は、導入する必要がある特定の官能基の性質に完全に依存する。
【００９９】
明らかに、式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）のシクロオクタジエンへの縮合３又は４員環の導入である、ステップ（ａ）に最適な方法は、導入される３又は４員環の種類に依存する。Ｎ原子を含む３員環は、例えば、ニトレンを含む化合物との反応によりシクロオクタジエンに縮合して、式（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）又は（ＩＩＩｃ）の化合物を生成することができる。ＹがＣ（Ｏ）である式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）又は（ＩＶｃ）の化合物を生成するためのシクロオクタジエンへの４員環の導入は、例えば、シクロオクタジエンとケトンを含む化合物との反応により達成することができる。ＹがＣ（Ｏ）である式（Ｖａ）、（Ｖｂ）又は（Ｖｃ）の化合物、すなわち、β−ラクタムを含む化合物を生成するためのシクロオクタジエンへのＮ原子を含む４員環の導入は、シクロオクタジエンと（活性化）イソシアネートとの反応により達成することができる。その後の水素化が、ＹがＣＨ２である式（Ｖａ）、（Ｖｂ）又は（Ｖｃ）の化合物をもたらす。式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）又は（ＶＩｃ）の化合物は、例えば、シクロオクタジエンと（置換）ベンザイン化合物との反応により調製することができる。
【０１００】
シクロオクテン化合物の臭素化であるステップ（ｂ）及びシクロオクタン化合物の脱臭化水素であるステップ（ｃ）は、当業者に周知である標準的な有機変換であるとみなされる。
【０１０１】
本発明者らは、例えば、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）の化合物がすぐに入手できる出発物質から良好な収率で容易に且つ迅速に調製することができることを見出した。したがって、本発明はまた、
（ａ）以下の式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）
【化１３】
0005920936.tif 000014
［式中、ｎ、Ｒ１及びＲ２は、上で定義した通りである］
のシクロオクタジエンをシクロプロパン化して、二環式シクロオクテン化合物を生成するステップと、
（ｂ）得られた二環式シクロオクテン化合物を臭素化して、二環式シクロオクタン化合物を生成するステップと、
（ｃ）得られた二環式シクロオクタン化合物を脱臭化水素して、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）の化合物を生成するステップと
を含む、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩｃ）の化合物を調製する方法に関する。
【０１０２】
ステップ（ａ）における式（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）又は（ＶＩＩｃ）のシクロオクタジエンは、シス，シス−又はシス，トランス−シクロオクタジエンであり得る。１つの実施形態において、シクロオクタジエンは、シス，シス−シクロオクタジエンである。他の実施形態において、シクロオクタジエンは、シス，トランス−シクロオクタジエンである。言い換えれば、Ｒ１置換基を含む二重結合は、Ｅ又はＺ立体配置を有し得る。
【０１０３】
好ましい実施形態において、Ｒ１はＨである。他の好ましい実施形態において、ｎは０である。さらに他の好ましい実施形態において、Ｒ１はＨであり、ｎは０である。
【０１０４】
この場合においても、官能基Ｑは、追加のステップにおいて、例えば、臭素化ステップ（ｂ）の前若しくは後又は脱臭化水素ステップ（ｃ）の後に導入することができる。シクロオクタジエンのシクロプロパン化であるステップ（ａ）は、例えば、カルベン、カルベノイド又はカルベン前駆体とシクロオクタジエンとの反応によって、場合によって触媒の存在下で、達成することができる。ステップ（ｂ）及び（ｃ）は、当業者に周知である標準的な有機変換である。
【０１０５】
例として、ｐが１であり、ＬがＣＨ２であり、ＱがＯＨであり、ｎが０であり、Ｒ１及びＲ２がＨである式エンド−（ＩＩａ）の化合物（エンド−９−（ヒドロキシメチル）ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン）は、非常に短時間（１〜２日のみ）で４ステップのみで良好な収率で合成することができる。本発明による合成方法のさらに他の利点は、クロマトグラフィー精製の必要が限られており、したがって、全合成に必要な総時間が削減されることである。
【０１０６】
標的分子の修飾
本発明によるコンジュゲートは、例えば、タンパク質、脂質及びグリカンなどの標的分子の生体直交的標識化、画像化又は表面修飾を含む修飾において成功裏に適用される。したがって、本発明はまた、本発明によるコンジュゲートが１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む化合物と反応する、標的分子の修飾の方法に関する。例として、シクロアルキンとアジド（ＳＰＡＡＣ）又はニトロン（ＳＰＡＮＣ）とのひずみ促進付加環化をスキーム１に示した。シクロオクチンと１，３−（ヘテロ）ジエンとの反応は、（ヘテロ）ディールス−アルダー反応として公知である。これらの反応は、無金属クリック反応とも呼ばれている。
【０１０７】
１，３−双極子化合物は、当技術分野で周知（例えば、Ｆ．Ａ．  Ｃａｒｅｙ及びＲ．Ｊ．  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｐａｒｔ  Ａ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、第３版、１９９０年、６３５〜６３７頁参照）であり、ニトリルオキシド、アジド、ジアゾメタン、ニトロン、ニトリルアミンなどを含む。好ましくは、１，３−双極子を含む化合物は、アジドを含む化合物、ニトロンを含む化合物又はニトリルオキシドを含む化合物である。
【０１０８】
（ヘテロ）ディールス−アルダー反応及び１，３−（ヘテロ）ジエンも現状技術において周知である。１，３−ジエンの例は、とりわけ、１，３−ブタジエン、１，３−シクロペンタジエン、１，３−シクロヘキサジエン、フラン、ピロール及びそれらの置換変種を含む。１，３−ヘテロジエンの例は、とりわけ、１−オキサ−１，３−ブタジエン、１−アザ−１，３−ブタジエン、２−アザ−１，３−ブタジエン、３−アザ−１，３−ブタジエン及びそれらの置換変種を含む。
【０１０９】
多種多様の標的分子、すなわち、１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む化合物は、本発明による方法により修飾することができる。適切な標的分子は、当技術分野で周知であり、例えば、タンパク質、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、酵素、ホルモンなどの生体分子を含むが、これらに限定されない。原則として、１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む任意の化合物が標的分子として適切であり得る。
【０１１０】
本発明による標的分子の修飾の方法の用途は、診断及び治療的用途、生細胞、例えば、ＭＶ３細胞、線維芽細胞、ジャーカット、ＣＨＯ又はＨＥＫ細胞の細胞標識化、生体高分子（タンパク質、脂質、核酸、グリカン）の修飾、質量分析のためのタンパク質及びグリカンの濃縮、ポリマーの特性の調整、表面修飾などを含むが、これらに決して限定されない。
【０１１１】
１つの実施形態において、コンジュゲートの反応はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて行われる。好ましい実施形態において、反応はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、すなわち、生理的条件下で行われる。
【０１１２】
標的分子の修飾において適用される本発明によるコンジュゲートは、上で極めて詳細に記述されている。これらのコンジュゲートの大きい利点の１つは、それらがｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの両方において適用することができることである。さらに、ここで述べたコンジュゲートは、望ましくない非特異的な親油性相互作用を受けることがより少なく、無金属クリック反応において良好な反応速度を示す。他の利点は、ここで述べたコンジュゲートが容易に合成され、コンジュゲートの様々な部分の単純で簡単な修飾に適していることである。これにより、特定の用途のためのコンジュゲートを「微調整」し、この用途のための反応速度を最適化することが可能となる。
【０１１３】
好ましい実施形態において、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び／若しくは（ＩＩｃ）の化合物又は上述のようなそのコンジュゲートは、１，３−双極子又は１，３−（ヘテロ）ジエンを含む化合物と反応する。例えば、水性条件での（ＩＩａ）とベンジルアジドとの付加環化は、優れた反応速度（溶媒によってκ＝０．０９〜０．２８Ｍ−１ｓ−１）で対応するトリアゾール付加体に迅速に且つ手際よく進行する。（ＩＩａ）とＣ−ベンジルアミド−Ｎ−メチルニトロンとの付加環化についての反応速度はさらに高い（κ＝１．２５Ｍ−１ｓ−１）。驚くべきことに、反応速度は、エキソ−（ＩＩａ）及びエンド−（ＩＩａ）の両方について同様であり、これにより、化合物（ＩＩａ）のＣ−９位における立体化学が反応性に対してほとんど影響を及ぼさないことがわかる。したがって、本発明によるエキソ−及びエンド−化合物の混合物は、エキソ−及びエンド−化合物の分離の必要を回避しながら、さらには本発明による化合物の合成をさらに単純化しながら、いくつかの用途において適用することができる。
【０１１４】
本発明による方法のさらなる用途は、例えば、（ＩＩａ）がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５とコンジュゲートしているフルオロフォアコンジュゲートの、単一アジドを含有するウイルスプラスミドタンパク質へのライゲーション、及び化学リポーター戦略による細胞表面グリカンの検出を含む。
【０１１５】
医薬組成物
最後に、本発明は、薬学的に許容される担体をさらに含む、本発明によるコンジュゲートを含む組成物に関する。多種多様の適切な薬学的に許容される担体が当技術分野で公知である（例えば、Ｒ．Ｃ．  Ｒｏｗｅ、Ｐ．Ｊ．  Ｓｈｅｓｋｅｙ及びＰ．Ｊ．  Ｗｅｌｌｅｒ（編）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第４版、２００３年参照）。
【実施例】
【０１１６】
実施例１：エキソ−及びエンド−ＩＩａ．２の合成
【化１４】
0005920936.tif 000015
【０１１７】
第１のステップにおいて、ジアゾ酢酸エチルを酢酸ロジウムの存在下で大過剰（８当量）の１，５−シクロオクタジエンのジクロロメタン中溶液に徐々に加えて、２：１の比のジアステレオマー化合物エキソ−ＩＩａ．１及びエンド−ＩＩａ．１を得た（８２％の総合収率）。シリカゲルによる簡単な分離の後、還元、臭素化及び脱離の簡単な３ステップ操作に従って最初にＩＩａ．１のエンド異性体をアルコールＩＩａ．２に変換した。したがって、ＬｉＡｌＨ４によるエンド−ＩＩａ．１のエステル還元（３０分）により、中間体の精製（３０分）なしに臭素化するのに十分に純粋である粗中間体アルコール（３０分）を得た。ＤＩＢＯの合成におけるように、アルコールの一時的な保護は必要でないことに留意されたい。最後に、得られたジブロミドをＴＨＦ中過剰のＫＯｔＢｕに供して（０℃・還流、２時間）、エンド−ＩＩａ．１からの３ステップでの６１％単離収率で所望の９−（ヒドロキシメチル）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−インであるエンド−ＩＩａ．２を得た。１回のクロマトグラフィー精製のみを用いて１日で実施することができる同様な一連の事象により、ＩＩａ．２のジアステレオマーエキソ異性体を５３％で得た。
【０１１８】
実施例２：反応速度
原型的なアジドであるベンジルアジドとの付加環化についての反応速度を検討した。したがって、化合物エンド−ＩＩａ．２をＣＤ３ＣＮとＤ２Ｏとの３：１混合物に溶解させ、１８ｍＭの最終濃度でベンジルアジドと混合した。化学変換は、プロトンＮＭＲを用いて診断ピークの積分により追跡され、エンド−ＩＩａ．２が迅速に且つ手際よく反応して予測されたトリアゾール付加体が得られたことを示した。二次反応速度の計算により、０．１２Ｍ−１ｓ−１の速度定数が示された。０．１０Ｍ−１ｓ−１という同様な値がエキソ−ＩＩａ．２について求められ、これにより、Ｃ−９位における立体化学が反応性にほとんど影響を及ぼさず、エンド立体配置化合物についての速度がわずかに高いことが示された。ＣＤ３ＣＮとＤ２Ｏとの１：２混合物中の同じ付加環化反応がエンド−ＩＩａ．２及びエキソ−ＩＩａ．２についてそれぞれ０．２８及び０．２５Ｍ−１ｓ−１の速度定数を示したため、著しい溶媒効果が認められた。
【０１１９】
実施例３：ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン（ＢＣＮ）コンジュゲート
【化１５】
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【０１２０】
ビオチンにコンジュゲートしているＢＣＮ（ＩＩａ．４）
エンド−ＩＩａ．１のアルコール部分をＩＩａ．３におけるようなｐ−ニトロフェニル（ｐＮＰ）カルボネートに変換した。ビオチン−（ＰＯＥ）３−ＮＨ２とのその後の反応により、ＢＣＮ−ビオチンコンジュゲートＩＩａ．４（収率６９％）が得られた。
【０１２１】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５にコンジュゲートしているＢＣＮ（ＩＩａ．６）
別法として、化合物ＩＩａ．３を１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタンと反応させて、アミノ末端ＢＣＮプローブＩＩａ．５を得て、これを、市販のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５ヒドロキシスクシンイミドエステルとの反応によりフルオロフォアコンジュゲートＩＩａ．６に変換した。
【０１２２】
別法として、化合物ＩＩａ．３を１，５−ジアミノペンタンと反応させて、より親油性の高いアミノ末端ＢＣＮプローブを得た。
【０１２３】
実施例４：ＩＩａ．６とアジド標識キャプシドタンパク質との反応（ＳＰＡＡＣ標識化）
１分子当たり単一アジド官能基のみを含有するようにキャプシドタンパク質を調製した（これは、キャプシドの集合の後にキャプシドの内表面に位置する）。タンパク質を１ｍｇ／ｍｌの濃度で緩衝液（５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．５；１Ｍ  ＮａＣｌ）に溶解させた。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５−ＢＣＮコンジュゲートＩＩａ．６を水に溶解させ、４当量のコンジュゲートをタンパク質溶液に加えた。反応混合物を分析の前に室温で３時間インキュベートした。
【０１２４】
反応生成物を１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分析し、クーマシーブルーによる染色の前のその蛍光像を記録した。図１に反応生成物（左）及びブランク反応（右）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。図１の上部にクーマシーブルー染色を示し、下部にクーマシーブルーによる染色の前の蛍光像を示す。これらの結果は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５−ＢＣＮコンジュゲートがキャプシドタンパク質に取り込まれたことを明確に示している。
【０１２５】
質量分析については、粗反応混合物をｍｉｌｌｉＱ中０．１％ＴＦＡに対して透析した後、これをＪＥＯＬ  ＡｃｃｕＴＯＦでエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）により分析した。図２にＩＩａ．６と反応したキャプシドタンパク質のＥＳＩ−ＴＯＦ質量スペクトルを示す。ピークＢは、未反応キャプシドタンパク質の質量に対応しており、一方ピークＡは、反応生成物に対応している。ピーク間の質量差は、１１３５．１（予測１１３５）であり、これは、キャプシドタンパク質における単一アジドが、１１３５の質量を有するＢＣＮ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５５５コンジュゲートと有効に反応したことを示す。
【０１２６】
官能基化キャプシドタンパク質の自己集合特性を試験するために、粗反応混合物をｐＨ５．０の緩衝液（５０ｍＭ  ＮａＯＡｃ；１Ｍ  ＮａＣｌ；１０ｍＭ  ＣａＣｌ２）に対して透析した。これにより、２８ｎｍのサイズの球状粒子の形成が誘発されるべきである（参照により組み込まれているＢ．Ｊ．Ｍ．  Ｖｅｒｄｕｉｎ、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  １９７４年、４５巻、５０〜５４頁）。透析によるキャプシドの集合の後、反応混合物をＦＰＬＣにより分析した。Ｓｕｐｅｒｐｏｓｅ  ６カラム上のサイズ排除分析を図３に示す。１．２ｍｌの溶出容量における２８０ｎｍでの吸収ピークは、２８ｎｍのサイズのキャプシドの形成を示し、５５５ｎｍでの重複吸収度は、Ａｌｅｘａ染料、したがってＩＩａ．６がキャプシドに存在することを示す。
【０１２７】
実施例５：ＩＩａ．２とニトロン標識ＦＲＡＴｔｉｄｅタンパク質との反応（ＳＰＡＮＣ標識化）
ＦＲＡＴｔｉｄｅ（１５．６μｇ、３．４ｎｍｏｌ、３４μＭ）を０．１Ｍ  ＮＨ４ＯＡｃ緩衝液ｐＨ６．９（１００μＬ）に溶解させ、ＮａＩＯ４（１．１μｇ、５．５ｎｍｏｌ、４８μＭ）を加えた。反応が室温で４０分間起こるようにし、ｐ−メトキシベンゼンチオール（９．２μｇ、６６．０ｎｍｏｌ、５６５μＭ）を加えた。混合物を２５℃で２時間振とうし、ｐ−アニシジン（１３．５μｇ、１０９．３μｍｏｌ、８４５μＭ）、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１８．２μｇ、２１８．６ｎｍｏｌ、１．５ｍＭ）及びＢＣＮ−ＯＨ  ＩＩａ．２（４１．１μｇ、２７３．３ｎｍｏｌ、１．８ｍＭ）を加えた。最後に、反応混合物を２５℃で２４時間振とうして、所望のコンジュゲートを得た。
【０１２８】
反応の進行を質量分析（Ａｃｃｕ−ＴＯＦ）によりモニターした。ＦＲＡＴｔｉｄｅタンパク質に対応する４５３３．８Ｄａにおける分子イオンピークは、過ヨウ素酸ナトリウムによる処理により消失したが、メチルヘミアセタールに対応する４５３４．８における分子イオンピークは、出現した。Ｎ−メチルヒドロキシルアミン及びＢＣＮ−ＯＨによる処理により、ＢＣＮ−ＯＨ  ＩＩａ．２と反応したＦＲＡＴｔｉｄｅタンパク質ニトロン誘導体に対応する４６８１．４Ｄａにおける分子イオンピークが主ピーク（デコンボリューション後）として出現した。
【０１２９】
実施例６：細胞表面標識化
生体直交的標識化の目的に対するビオチンコンジュゲートＩＩａ．４の有用性を、化学リポーター戦略による細胞表面グリカンの検出により検討した。Ｎ−アジドアセチルマンノサミン（ＭａｎＮＡｚ）をＭＶ３細胞に代謝的に取り込み、ＦＡＣＳ及び共焦点顕微鏡法により検出した。
【０１３０】
細胞培養手順
浸潤性及び転移性ヒト黒色腫細胞（ＭＶ３）を、５％ＣＯ２水飽和雰囲気中１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン（それぞれ５０Ｕ／ｍｌ）を含有する培地ＲＰＭＩ  １６４０中で維持した。
【０１３１】
細胞表面アジド標識化
ＭＶ３細胞をＡｃ４ＭａｎＮＡｚ（５０μＭ）の非存在下又は存在下で６日間培養した。培地及び化合物の交換を３日後に行った。高度な研究の前に明視野顕微鏡を用いて細胞付着及び形態を分析した。生細胞標識化のために、細胞をＥＤＴＡ（１ｍＭ）により脱離させ、３回洗浄し、遠心分離し（ＰＢＳ、３００ｘＧｒｐｍ、５分、４℃）、ＰＢＳに再懸濁し、ＢＣＮ−ビオチン（ＩＩａ．４）（６０μＭ）、ＤＩＢＯ−ビオチン（６０μＭ）又は緩衝液中でインキュベートし（１時間、２０℃）、３回洗浄し（ＰＢＳ、３００ｘＧ、２分、４℃）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジン（５μｇ／ｍｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；最終容量２００μｌ）を含有する氷冷ＰＢＳに再懸濁した。インキュベーション（３０分、４℃）の後、細胞を３回洗浄し、さらなる生物学的分析のためにＰＢＳ（２００μｌ、４℃）に再懸濁した。
【０１３２】
フローサイトメトリー
フローサイトメトリーは、４８８ｎｍアルゴンレーザーを使用したＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳ−Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで行い、データをＦＣＳ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）により分析した。試料ごとに、２ｘ１０４個の形態学的に完全な細胞をヨウ化プロピジウム（２．５μｇ／ｍｌ）の存在下で分析した。
【０１３３】
図４にＡｃ４ＭａｎＮＡｚの代謝的取込み、ＤＩＢＯ−又はＢＣＮ−ビオチンによる標識化及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによる検出の後の完全なＭＶ３細胞における細胞表面蛍光を示す。フローサイトメトリーによる分析により、ＢＣＮ−ビオチン又はＤＩＢＯ−ビオチンによる標識化及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによるその後の検出の場合、蛍光強度において１００倍を超える増加が示されており、細胞をＡｃ４ＭａｎＮＡｚとともにインキュベートしない場合の蛍光のバックグラウンドレベルは無視できることが示されている。
【０１３４】
図５にＡｃ４ＭａｎＮＡｚの代謝的取込み、ＤＩＢＯ−又はＢＣＮ−ビオチンによる標識化及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによる検出の後のＭＶ３細胞の蛍光強度及び細胞生存率を示す。図５Ａに４回の独立した実験からの緑色蛍光（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８）についての平均強度及び標準偏差（ＳＤ）を示し、図５Ｂにグリカン標識化後の完全な細胞の生存率を示す。緑色蛍光（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８）及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）標識を使用した。数は、ＰＩ陰性生存細胞の百分率を示す。図５Ａから、ＢＣＮ及びＤＩＢＯの両方が、Ａｃ４ＭａｎＮＡｚに前曝露された細胞を有効に標識しており、ＢＣＮ−ビオチンによる標識化の効率がより高いと結論することができる。図５Ｂから、細胞が、無処理、ＢＣＮによる処理済み又はＤＩＢＯによる処理済みであるかにかかわりなく、高い生存率（すべての場合に＞９８％）を示したことがわかる。
【０１３５】
共焦点顕微鏡法
細胞表面グリカンをＢＣＮ−ビオチン又はＤＩＢＯ−ビオチンにより、次にＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンにより標識した。標識化後、細胞を通常の培地に再懸濁し、６ウエルプレートに移し、３７℃で３０分間インキュベートした。ＭＶ３細胞の生細胞画像化を、室温でアルゴン４８８レーザー、励起４８８ｎｍ、発光５２０ｎｍ、及び倍率４０倍を用いてＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ１０００共焦点レーザー走査顕微鏡で行った。
【０１３６】
図６にＡｃ４ＭａｎＮＡｚ（５０μＭ）の非存在下又は存在下であらかじめ培養した標識細胞の代表的な共焦点像を示す。共焦点像は、ＭＶ３細胞の細胞表面が、細胞のＡｃ４ＭａｎＮＡｚとのインキュベーション、及びＢＣＮ−ビオチン又はＤＩＢＯ−ビオチンによる、次いでＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートストレプトアビジンによる細胞表面グリカンのその後の検出により蛍光を発するようになるが、Ａｃ４ＭａｎＮＡｚとのインキュベーションなしでは蛍光を発するようにならないことを明確に示している。
【０１３７】
実施例７：ＩＩａ．７の合成
【化１６】
0005920936.tif 000017
【０１３８】
（１Ｒ，８Ｓ，Ｚ）−ジエチルビシクロ［６．１．０］ノナ−４−エン−９，９−ジカルボキシレート（ＩＩａ．８）
【化１７】
0005920936.tif 000018
【０１３９】
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中１，５−シクロオクタジエン（５．２７ｍＬ、４３．０ｍｍｏｌ）及びＲｈ２（ＯＡｃ）４（１００ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中ジアゾマロン酸ジエチル（１．０ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）の溶液を１滴ずつ３時間で加えた。この溶液を室温で２４時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を蒸発させ、過剰のシクロオクタジエンをシリカで満たされたガラスフィルターによるろ過により除去した（溶出液：ヘプタン）。ろ液を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘプタン、１：１０）により精製して、ＩＩａ．８（１．０３ｇ、７２％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ５．６５〜５．５７（ｍ，２Ｈ）、４．１０（２ｘｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ）、２．４１〜２．２９（ｍ，２Ｈ）、２．１５〜２．０６（ｍ，３Ｈ）、１．８３〜１．７０（ｍ，３Ｈ）、１．３１〜１．２３（２ｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１４０】
（１Ｒ，８Ｓ，Ｚ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−エン−９，９−ジイルジメタノール（ＩＩａ．９）
【化１８】
0005920936.tif 000019
【０１４１】
Ｅｔ２Ｏ（１０ｍＬ）中ＬｉＡｌＨ４（１０３ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｅｔ２Ｏ（１０ｍＬ）中ＩＩａ．８（４００ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で１滴ずつ加えた。灰色の固体が白色になるまで、水を注意深く加えた。次いで、Ｎａ２ＳＯ４（２ｇ）を加え、固体をろ別し、Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で十分に洗浄した。ろ液を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘプタン、３：１）により精製して、ＩＩａ．９を白色固体（１９０ｍｇ、６９％）として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ５．６６〜５．５８（ｍ，２Ｈ）、３．８８（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．５８（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．４３〜２．３５（ｍ，２Ｈ）、２．２０〜１．９９（ｍ，６Ｈ）、１．７１〜１．５７（ｍ，２Ｈ）、０．９５〜０．８８（ｍ，２Ｈ）。
【０１４２】
（（１Ｒ，８Ｓ，）−４，５−ジブロモビシクロ［６．１．０］ノナン−９，９−ジイル）ジメタノール（ＩＩａ．１０）
【化１９】
0005920936.tif 000020
【０１４３】
ジオールＩＩａ．９（１４５ｍｇ、０．７９６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解させた。０℃でＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中Ｂｒ２（４５μＬ、０．８７５ｍｍｏｌ）の溶液を黄色が持続するまで１滴ずつ加えた。反応混合物を１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５ｍＬ）によりクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘプタン、５：１）により精製して、ＩＩａ．１０（２３５ｍｇ、８６％）を白色固体として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ４．８７〜４．７８（ｍ，２Ｈ）、３．９６〜３．８８（ｍ，２Ｈ）、３．６０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．７５〜２．６３（ｍ，２Ｈ）、２．３２〜２．２２（ｍ，３Ｈ）、２．２０〜２．１３（ｍ，１Ｈ）、２．０５〜１．９４（ｍ，２Ｈ）、１．７４〜１．５７（ｍ，２Ｈ）、１．１３〜０．９９（ｍ，２Ｈ）。
【０１４４】
（１Ｒ，８Ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９，９−ジイルジメタノール（ＩＩａ．７）
【化２０】
0005920936.tif 000021
【０１４５】
ＴＨＦ（５ｍＬ）中ジブロミドＩＩａ．１０（１００ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯｔＢｕの溶液（１．２９ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ、１．２９ｍｍｏｌ）を０℃で１滴ずつ加えた。次いで、溶液を１．５時間再還流した。室温に冷却した後、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２０ｍＬ）によりクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲル上カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＩＩａ．７（２４ｍｇ、４６％）を白色固体として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ３．８９（ｂｓ，２Ｈ）、３．６３（ｂｓ，２Ｈ）、２．５８（ｂｓ，２Ｈ）、２．３４〜２．２０（ｍ，６Ｈ）、１．６８〜１．５９（ｍ，２Ｈ）、０．８９〜０．８２（ｍ，２Ｈ）。
【図１】
0005920936.tif 000024
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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