(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症、肝硬変およびアルコール性脂肪性肝臓症から選択される肝臓障害、肺線維症および肺転移から選択される肺障害の処置に用いられる、式（Ｉ）の化合物、それらの互変異性型、立体異性体、多形、水和物、溶媒和物、または薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
【化１】
0005957452.tif 000014
［式中、−−−−は任意選択の結合を表し；Ｗは、Ｏを表し；Ｙは、ＮＲ4を表し；ここでＲ4は、水素、アルキルから選択される置換型または非置換型の基、対イオンまたは−ＣＨ2ＣＯＲ6を表し；ここでＲ6は、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＨＯＨまたはＯＲ18を表し；ここでＲ18はアルキル基であり；Ｚは、Ｓを表し；Ｒ1は、ＯまたはＳを表し；Ｒ2およびＲ3は、独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、アルキル、ハロアルキルまたはアルコキシを表し；
Ｒは、ＵまたはＶのいずれかを表し；ここでＵは、−ＣＯＲ10を表し；Ｒ10は、−ＯＲ11を表し；ここでＲ11は、水素、アルキルから選択される置換型もしくは非置換型の基、または対イオンを表し；
Ｖは；
【化２】
0005957452.tif 000015
を表し、Ｒ7は−ＯＲ14を表し、ここでＲ14は、水素、アルキルから選択される置換型もしくは非置換型の基、または対イオン；Ｒ8およびＲ9は、独立して水素、またはアルキルから選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；
ｐおよびｑは、１〜３から選択される整数である］
【請求項２】
式（Ｉ）の化合物が、
ｉ．メチル（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパノエートまたはその塩；
ｉｉ．（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパン酸またはその塩、および  ｉｉｉ．（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）酢酸またはその塩
から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム、カリウムまたはマグネシウム塩から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が、メチル（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパノエートの塩酸塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパン酸の塩酸塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
式（Ｉ）の化合物が、（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）酢酸である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が、（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）酢酸の二ナトリウム塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症、肝硬変およびアルコール性脂肪性肝臓症から選択される肝臓障害を処置するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨを処置するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
肺転移および肺線維症から選択される肺障害を処置するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
マトリックスメタロプロテイナーゼ２を阻害するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ｉ．メチル（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパノエートまたはその塩；
ｉｉ．（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパン酸またはその塩、および  ｉｉｉ．（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）酢酸またはその塩
から選択される化合物を含む、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨを処置するための医薬組成物。
【請求項１３】
ｉ．メチル（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパノエートまたはその塩；
ｉｉ．（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパン酸またはその塩、および  ｉｉｉ．（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）酢酸またはその塩
から選択される化合物を含む、肺線維症を処置するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書では、肝臓障害、例えば非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）；糖尿病合併症、例えばマクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）の血管合併症；ならびに心血管疾患、例えばアテローム硬化症、再狭窄、高血圧、血管けいれんおよび心肥大の予防処置および処置に用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
本明細書で、式（Ｉ）の化合物、それらの誘導体、類似体、互変異性型、立体異性体、多形、水和物、溶媒和物、薬学的に許容されるその塩、組成物、代謝産物およびプロドラッグを用いるＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置方法が開示される。
【化１】
0005957452.tif 000002
【背景技術】
【０００２】
非アルコール依存患者または他の既知の肝疾患の病歴のない者における脂肪性肝臓症は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）であり、その進行型は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と呼ばれる（J.Gastrointestin. Liver. Dis., 2007, 16, 39-46）。ＮＡＳＨは、インスリン抵抗性、脂肪症および小葉中心付近の線維症の有るか無い壊死炎症を特徴とする。ＮＡＳＨの有効な処置であることが決定的に明らかにされている薬理学的療法はない（New England Journal of Medicine, 2006, 355, 2297-2307）。
【０００３】
ＮＡＳＨの病因は、肝トリグリセリド蓄積（第１のヒット）と、続く脂肪性肝炎につながる酸化的ストレスおよびサイトカイン発現の発生（第２のヒット）からなる２ヒット過程としてしばしば概念化される。以下を含む複数の代謝過程が、肝細胞性トリグリセリド蓄積をもたらすことができる：（１）過剰な食事摂取量。食事トリグリセリドは、カイロミクロンの形で肝臓に送達される。さらに、脂肪として脂肪組織に保存される食事カロリーは、リポタンパク粒子および遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の形で肝臓に送達することができる脂肪酸およびトリグリセリドの供給源に相当する。（２）肝臓での脂肪酸およびトリグリセリドの新規合成から生じる脂質生成速度の増加。（３）肝臓での脂肪酸のβ酸化速度の低下。（４）肝臓からの超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）としてのコレステロールエステルおよびトリグリセリドの搬出速度の低下。インスリン抵抗性は、脂肪分解の増加ならびに脂肪組織での脂肪酸の食後の取り込みおよび貯蔵の減少と関連し、肝臓への脂肪酸流動の増加につながる。次に、増加する肝臓脂肪含有量は、肝インスリン抵抗性に寄与する。高インスリン血症はステロール調節エレメント結合タンパク質１ｃ（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）の発現を誘導し、高血糖は炭水化物応答エレメント結合タンパク質（ＣｈＲＥＢＰ）を活性化するが、その両方は肝脂肪酸合成を増加させる（World J Gastroenterol., 2008, 14(1), 22-28）。
【０００４】
サイトカインは、ＮＡＳＨの病因での「第２のヒット」のための魅力的な候補である。
それらは、肝細胞死／アポトーシス（腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α））、好中球化学向性（ＩＬ−８）および肝星状細胞活性化（ＴＮＦ−α、形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β））を含むＮＡＳＨの全ての古典的組織学的特徴を生成することが可能である。さらに、ＮＡＳＨ患者は肥満対照と比較して肝臓および脂肪組織の両方でＴＮＦαおよびｍＲＮＡの発現の増加を有することが示され、この過剰発現は組織学的重症度と相関した（Current science, 2006, 90(5), 10）。
【０００５】
ＮＡＦＬＤとメタボリックシンドロームの強力な関連性を示唆し、肥満および糖尿病がＮＡＦＬＤの発達の２つの主要な危険因子であるとみなすのに十分な先行文献がある。メタボリックシンドロームおよびＮＡＦＬＤを有する患者は、脂肪肝のない患者と比較して心血管疾患による死亡のより高い危険を示し（Nature Reviews Drug Discovery, 2009, 8, 361-367）、ＮＡＦＬＤは２型糖尿病の開始の予測因子である。これらの段階的な多因子事象では、インスリンおよびインスリン抵抗性が基本的な役割を演ずる。実際、インスリン抵抗性はＮＡＦＬＤ患者のおよそ９８％に存在する。これらの病態生理学的事象に基づいて、ＮＡＦＬＤの処置は筋肉および脂肪組織での脂質の代謝を調節するべきで、したがって、インスリン抵抗性の矯正を通して肝臓へのＦＦＡの流入を低減し、および／またはＦＦＡの新合成を阻止するために脂質および炭水化物の肝内代謝を変更するべきである（Expert. Opin. Emerging. Drugs., 2008, 13, 1-14）。
ＮＡＦＬＤは、いくつかの理由のために特別な課題を提示する。疾患の正確な有病率は知られていないが、多発している状態（肥満、２型糖尿病、異脂肪血症）とのその関連性は、非常に多くの対象に危険があることを示唆する。正常な酵素レベルの対象にも進行性の肝疾患が存在することがあるので、アラニンアミノ基転移酵素のようなＮＡＦＬＤマーカーは普遍的に受け入れられない。高齢のＮＡＦＬＤ患者は複数の代謝性障害を有することがあり、彼らの最終的な予後診断は肝疾患よりもメタボリックシンドロームの心血管合併症によって厳格に調節される（Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, 2004, 18, 1105-1116）。
【０００６】
実際には脂肪性肝臓症またはＮＡＳＨを処置するための特定の薬剤は利用できないが、抗糖尿病性／インスリン感作剤（メトホルミン、ピオグリタゾンおよびロジグリタゾン）、抗高脂血症剤（クロフィブラート、ゲムフィブロジル、アトルバスタチン、プラバスタチンおよびプロブコール）、肥満防止薬（オルリスタット）および細胞保護剤（ウルソデオキシコール酸、ＵＤＣＡ）を用いて行われたヒト試験に関する報告がある（Expert. Opin. Emerging. Drugs. 2008, 13, 1-14）。ロジグリタゾン（４８週間、４ｍｇを１日２回）で行われた臨床試験は、肝細胞膨張、インスリン感受性および平均血清アミノ基転移酵素レベルの有意な改善を示したが、患者の６７％で体重増加が起こり、中央体重増加は７．３％であった（Hepatology, 2003, 38, 1008-1017）。ＮＡＳＨ患者で別の試験的研究がピオグリタゾンで行われ、そこでは、患者は毎日３０ｍｇのピオグリタゾンで４８週間処置された。組織学的特徴に改善があったけれども、主要な副作用は体重増加および体脂肪の増加であった（Hepatology 2004, 39, 188-196）。
【０００７】
無作為化プラセボ対照試験がベタイン（コリンの食事からの供給源の酸化に由来する）で実行され、そこでは、ＮＡＳＨ患者が毎日２０ｇのベタインを１２カ月間受けた。しかし、この処置は、低減された血清抗酸化状態、インスリン抵抗性およびアディポネクチンレベルを改善することができなかった（Hepatology, 2009, 50(6), 1818-1826）。メトホルミンを含む試験的研究が行われた（４８週間、患者は２ｇ／日を受けた）。体重減少とＮＡＳＨ活動指数の改善の間に顕著な関連があった。さらに、インスリン感受性の改善もあったが、それは組織学的変化と相関しなかった。体重減少およびアラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）レベルの改善は療法の期間中続いたが、処置を停止した直後に体重増加が起こり、続いてアミノ基転移酵素レベルの増加が起こった（Aliment Pharmacol Ther., 2008, 29, 172-192）。
【０００８】
アトルバスタチン（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤）で実行された予備臨床試験は、他のいかなる薬剤も示さなかった総コレステロール（ＴＣ）およびトリグリセリド（ＴＧ）レベルの改善を示した。これは、ＮＡＳＨを有する肥満／異脂肪血症患者で第１の選択肢であるようである。しかし、血糖レベルおよび肥満度指数（ＢＭＩ）では有意な改善を示さなかった。ペントキシフィリン（ＰＤＥ４阻害剤）による別の予備臨床試験は、他の生化学パラメータに干渉することなく、処置の１０週後にＡＬＴおよびγグルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）の速く大きい減少を示し、この効果は監視の全期間中安定したままであった。しかし、これも血糖レベルおよびＢＭＩを有意に改善しなかった（J Gastrointestin Liver Dis, 2007, 16, 39-46）。
肥満防止薬オルリスタット（胃およびすい臓のリパーゼの可逆的阻害剤、トリグリセリド吸収をブロックして体重減少を促進する）による小さな試験的研究では、アミノ基転移酵素の改善を示したが、血清グルコースおよび脂質プロファイルの変化は統計的に有意でなかった（Aliment Pharmacol Ther, 2004, 20, 623-628）。
【０００９】
ＮＡＦＬＤは、全ての年齢群および民族を含む一般集団で約１４〜３０％の高い有病率を有するが、ＮＡＳＨの発生は約３％である。イタリアでの最近の疫学調査は、ＮＡＦＬＤの発生率が安定した上昇傾向にあることを示している。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ患者は、大部分は肥満、糖尿病および異脂肪血症と関連している（Expert Opinion on Emerging Drugs 2008, 13, 1-14）。任意の単一の化合物が全ての３つの適応症、すなわち肥満、糖尿病および異脂肪血症に対する効果を有するならば、それはＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨのための正しい選択であるだろう。したがって、全ての３つの適応症に対処する薬剤の開発は、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置のために有益になる。
ＮＡＳＨは、特定の薬剤を用いる患者とも関連している。例えば、タモキシフェンは乳癌初期のエストロゲン受容体陽性患者で抗エストロゲン剤として世界中で用いられる。タモキシフェンへの曝露の結果として非肥満性乳癌患者の１／３で広範囲の脂肪性肝臓症が観察され、これらの患者の一部はＮＡＳＨを発症さえした（Internal Medicine, 2002, 41(5), 345-350）。
ＮＡＦＬＤは、軽度または重度の中央肥満を有する個体および２型糖尿病または異脂肪血症の対象で広く一般的である（The Journal of Medicine, 2004, 62, 217）。上記のことから、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置のための特定の薬剤がないことは現在明らかである。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨを処置するために試みられた他の市販薬剤は、副作用を起こした。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置に関わる、満たされていない必要性があることが現在明白であり、前記のような望ましくない副作用を示すことなく、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨをかなり処置することができる化合物を特定することが不可避である。
【００１０】
肝臓線維症の進行が、非アルコール性脂肪性肝炎患者の３分の１で見出された（Hepatology, 2004, 40, 820-826）。現在市場に出ている従来の抗線維化および抗炎症薬剤は効力を欠くか、あまりに多くの副作用を引き起こすので、この慢性疾患をそれらでうまく処置することができない。肝星状細胞（ＨＳＣ）を標的にする抗線維化剤は、それらの治療ポテンシャルを増加させる有望な戦略とみなされている。ＨＳＣは、全てのヒト肝細胞の５〜８％、およびシヌソイド細胞の容積の１３％に相当する。星状細胞は、内皮障壁下の類洞周囲のディッセ腔に位置する。急性または慢性の肝臓損傷の後、ＨＳＣは活性化されて、筋線維芽細胞表現型につながる分化転換過程を経る。刺激の結果、細胞は活性化星状細胞への分化転換を開始し、それは肝臓でコラーゲンを含む線維形成因子を分泌する。コラーゲン分泌は、活性化ＨＳＣの顕著な特性である。活性化ＨＳＣによるコラーゲンの過剰生産は、肝臓線維症の発達で重要な段階である。したがって、活性化ＨＳＣが肝臓線維症の進行を予防するための主要な細胞標的とみなされていることは意外でない。実際、現在評価中の抗線維化処置の大部分は、ＨＳＣの活性化、増殖または合成生成物を阻害することを目的とする（J Gastroenterol, 2000, 35, 665-662）。コラーゲンの病的蓄積を特徴とする線維症は、多くの慢性疾患の重要な特徴としてますます認識され、前述のように、肝臓線維症の処置で用いられる市販の従来の抗線維化および抗炎症薬剤は必要な効力を欠くか副作用を示すので、前述の欠点に対処する薬剤を開発する必要性がある。
【００１１】
糖尿病合併症は、マクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）の血管合併症に分けることができ、例えばポリオール（例えば、ソルビトール）の蓄積、フリーラジカル過酸化およびリシン残基の部位でのタンパク質のグルコシル化に起因することができる。高血糖は、糖尿病合併症に寄与すると考えられるいくつかの生化学異常を引き起こす。細胞内のグルコース濃度の増加は、アルドースレダクターゼ、グルコースをソルビトールに変換する酵素を活性化する。（The Journal of the American Medical Association, 2002, 288, 2579-88）。ソルビトールへのグルコースの還元はエネルギー依存的な過程であり、過度の酵素活性は酸化的ストレスを生じ、それは細胞の機能不全および傷害を引き起こす。グルコースはタンパク質に非酵素的に結合し、結果として細胞の機能不全および傷害を引き起こすことができる糖化最終産物が形成される。細胞内シグナル伝達で役割を果たすタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）の活性化は遺伝子発現およびタンパク質機能を変更することができ、結果として細胞の傷害および機能不全をもたらす。アルドースレダクターゼ経路、糖化最終産物経路およびＰＫＣ経路は、互いに関係する。これらの経路の全ては、糖尿病合併症と関連する網膜血管内皮細胞の機能不全および傷害、異常な細胞の増殖および生存、血管透過性増加、変化した血流、虚血、異常な血管形成、および基底マトリックス肥厚に寄与すると考えられる。これらの経路は、糖尿病合併症の療法の標的である。
【００１２】
炎症誘発性核転写因子（核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）、活性化タンパク質１（ＡＰ−１））の上方制御は、炎症性インターロイキン、増殖因子、誘導可能な一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）およびタンパク質分解酵素などの炎症性分子の発現および生成をもたらすことができる。これらの分子は角膜での新血管形成と関連付けられ、前述の転写因子が血管新生変化を阻害するために適する標的である可能性を示唆した（Recent Prog. Horm. Res., 2001, 56, 239-263; J. Mol. Med., 2001, 79, 30-47; J. Clin. Invest., 2002, 110, 923-932; J. Endocrinol., 2001, 169, 453-459; J. Biol. Chem., 2000, 275, 4541-4544; J. Endocrinol., 2001, 169, 461-464）。コンピューターツールを用いる多重配列整列を使用した最近の研究（Medical Hypotheses, 2008, 70, 148-155）は、糖尿病合併症の病因におけるアルドースレダクターゼ、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、亜酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、ＡＧＥのための糖化最終産物受容体（ＡＧＥ−ＲＡＧＥ）、アンギオポエチンおよびサイトカインの間の密接な関連性を示唆し、したがって、この状態との取組みにおいて多角的な手法が有効である。さらに、ＴＮＦ−αはＩ型患者での増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）の血清マーカーであり（J. Diab. Comp., 2008, 22, 309-316）、糖尿病合併症の処置のための有益な手段としてのリポ多糖（ＬＰＳ）誘導ＴＮＦ−αの阻害を示唆している。
【００１３】
糖尿病合併症が生じた場合、研究は疾患の病因への複数の機構の関与を裏づけており、したがって、単一の作用機構を標的にすることは糖尿病合併症の長期処置では有効でないかもしれない。したがって、糖尿病合併症を処置するための化合物は、それらに限定されないがアルドースレダクターゼ、ｉＮＯＳ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６を含む複数の標的を攻撃することを必要とし、したがって、これらの条件を満たす新しい分子の必要性がある。
【００１４】
ＵＳ６７９４４０１Ｂ２は、式（ＩＩ）の化合物、
【化２】
0005957452.tif 000003
その互変異性型、その立体異性体、その多形、その薬学的に許容される塩、その薬学的に許容される溶媒和物を開示し、式中、−−−は任意選択の二重結合を表し；Ｙは、Ｏ、ＳまたはＮＲを表し、ここでＲは水素またはアルキルを表し；Ｚは、ＯまたはＳを表し；Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は同じであるか異なってもよく、独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、アルキルまたはアルコキシを表し；Ａは結合、または、アリール、ヘテロシクリルおよびヘテロアリール環から選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；Ｘは、α−アミノカルボン酸、またはそのα側鎖を通してＡもしくはＹに結合しているα−アミノカルボン酸誘導体を表す。
【００１５】
ＵＳ７５２１４６５Ｂ２は、式（ＩＩＩ）の化合物、
【化３】
0005957452.tif 000004
それらの類似体、それらの互変異性型、それらの立体異性体、それらの多形、それらの薬学的に許容される塩、それらの薬学的に許容される溶媒和物を開示し、式中、−−−−は任意選択の結合を表し；Ｗは、ＯまたはＳを表し；Ｚは、ＣＲ10、ＯまたはＳを表し；Ｇは、Ｏ、Ｓを表すか、Ｒ10と一緒に、Ｏ、ＳまたはＮから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含む５員または６員の芳香族環系もしくは芳香族複素環系を形成し；ｎは、１を表す。Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、水素、ハロゲン；ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、直鎖状または分枝状（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基から選択される置換型または非置換型の基；（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基から選択される。Ｒ6およびＲ7は同じであるか異なってもよく、独立してＨ、アルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよびＣＯＲ12から選択される置換型または非置換型の基を表し；ここでＲ12は、アルキル、アルケニル、アリール、アルケニルオキシ、アリールオキシ、アルコキシ、アラルキルおよびアラルコキシから選択される置換型または非置換型の基を表す。Ｒ8は−ＯＲ13またはＮＲ14Ｒ15を表し、ここでＲ13は水素、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよび対イオンから選択される置換型または非置換型の基を表し；Ｒ14およびＲ15は同じであるか異なってもよく、独立して水素、アルキル、アルケニルおよびアリールから選択される基を表す。Ｒ1は水素、アルキル、アリール、アルケニル、対イオンおよび−ＣＨ2ＣＯＯＲから選択される置換型または非置換型の基を表し；ここでＲはＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキルを表す。Ｒ10は、任意選択でＧと一緒に、フェニル、フリル、ピロリル、ピリジルなどの５員または６員の芳香族環系または芳香族複素環系を形成する。
【００１６】
ＵＳ７７８１４６４Ｂ２は、式（ＩＶ）の化合物、
【化４】
0005957452.tif 000005
それらの薬学的に許容される塩を開示し、式中、「−−−−」は任意選択の結合を表し；Ｖは、ＣＨまたはＮを表し；Ｙは、ＯまたはＳを表し；Ｗは、ＯまたはＮＲ8を表し；Ｒ8は、水素または置換型もしくは非置換型の直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基から選択され；Ｘは、ＣＲ9、ＯまたはＳを表し；ここでＲ9は水素であるか、またはＲ9はＺと一緒に、Ｏ、ＳまたはＮから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含む５員または６員の芳香族環系もしくは芳香族複素環系を形成し；ＺはＯ、Ｓを表すか、あるいはＲ9と一緒に、Ｏ、ＳまたはＮから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含む５〜６員の芳香族環系もしくは芳香族複素環系を形成し；Ｒ1およびＲ2は同じか異なってよく、独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、ＣＯＲ10、直鎖状または分枝状（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基および（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基から選択される置換型または非置換型の基から選択され；Ｒ10は、−ＯＲ11またはＮＲ12Ｒ13を表し；ここでＲ11、Ｒ12およびＲ13はそこで定義される通りであり；Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6はそこで定義される通りであり；Ｒ7は、水素、アルキル、アルケニル、−ＣＨ2ＣＯＯＲ、アリール基および対イオンなどの置換型または非置換型の基を表し；ここでＲはＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表す。
【００１７】
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物は、一般式（Ｉ）によって表される。
【化５】
0005957452.tif 000006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
目的
本明細書での目的は、肝臓障害および関連疾患、線維症ならびにマクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）血管合併症などの糖尿病合併症の予防処置および処置で使用するための、式（Ｉ）の化合物を提供することであり；式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む。
【００１９】
本明細書での別の目的は、肝臓障害および関連疾患、線維症ならびにマクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）血管合併症などの糖尿病合併症の予防処置および処置の方法であり；式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む。
別の目的は、肝臓障害および関連疾患；肺障害および関連疾患；糖尿病合併症および心血管疾患；の処置で使用するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；ＮＡＦＬＤ（非アルコール性脂肪肝疾患）、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）、肝線維症、肝硬変およびアルコール性脂肪性肝炎の処置で使用するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；虚血性心疾患、脳血管障害、末梢血管疾患、白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障の処置で使用するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；アテローム硬化症、再狭窄、高血圧、血管けいれんおよび心肥大の処置で使用するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；乾癬、肺転移、肺線維症、強皮症、多嚢胞卵巣症候群および閉塞性無呼吸の処置で使用するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害および糖尿病白内障の処置で使用するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；血漿または肝臓のトリグリセリドレベルを低減し、血漿グルコースレベルを低減するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ｉＮＯＳ、マトリックスメタロプロテイナーゼ２またはアルドースレダクターゼを阻害するための式（Ｉ）の化合物を提供すること；前記疾患を処置するための医薬組成物を提供するか、少なくとも有益な選択肢を大衆に提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本明細書で、処置方法、または式（Ｉ）の化合物、それらの誘導体、類似体、互変異性型、立体異性体、多形、水和物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、薬学的に許容される組成物、代謝産物およびそのプロドラッグの使用が記載される。
【化６】
0005957452.tif 000007
【００２１】
詳細には、本明細書で、肝臓障害および関連疾患、肺障害および関連疾患、ならびにマクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）の血管合併症などの糖尿病合併症の処置での使用のための式（Ｉ）の化合物、それらの誘導体、類似体、互変異性型、立体異性体、多形、水和物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、薬学的に許容される組成物、代謝産物およびそのプロドラッグが提供され、式中、−−−−は任意選択の結合を表し；Ｗは、ＯまたはＳを表し；Ｙは、ＮＲ4、ＳまたはＯを表し；ここでＲ4は水素、アルキル、アルケニル、アリール、対イオンおよび−ＣＨ2ＣＯＲ6から選択される置換型または非置換型の基を表し；ここでＲ6は、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＨＯＨまたはＯＲ18を表し；ここでＲ18はアルキル基であり；Ｚは、ＣＲ5またはＳを表し；Ｒ1は、Ｏ、Ｓを表すか、あるいはＲ5と一緒に、炭素原子またはＯ、ＳもしくはＮから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含む縮合５員または６員の芳香族環系もしくは芳香族複素環系を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、アルキル、ハロアルキルまたはアルコキシを表し；
Ｒは、ＵまたはＶのいずれかを表し；Ｕは、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、−ＣＯＲ10、または直鎖状もしくは分枝状の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基および（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基から選択される置換型か非置換型の基を表し；Ｒ10は、−ＯＲ11または−ＮＲ12Ｒ13を表し；ここでＲ11は、水素、対イオン、またはアルキル、アルケニル、アリール、アラルキルおよびヘテロアリールから選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；Ｒ12およびＲ13は、独立して水素、またはアルキル、アルケニル、アリールおよびヘテロアリールから選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；またはＲ12およびＲ13はヘテロ脂肪族または芳香族複素環を一緒に形成し；
【００２２】
Ｖは、
【化７】
0005957452.tif 000008
を表し、Ｒ7は、−ＯＲ14を表し；ここでＲ14は、水素、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、対イオン；および−ＮＲ15Ｒ16から選択される置換型または非置換型の基を表し；ここでＲ15およびＲ16は、独立して水素、またはアルキル、アルケニル、アリールおよびヘテロアリールから選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；Ｒ8およびＲ9は、独立して水素、−ＣＯＲ17またはアルキル、アルケニル、アリールおよびヘテロアリールから選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；ここでＲ17は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルケニルオキシ、アリールオキシ、アルコキシおよびアラルコキシから選択される置換型または非置換型の基を表し；ｐおよびｑは、１〜３から選択される整数である。
好ましい一実施形態では、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨならびにＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ関連の障害および状態の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
【００２３】
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
さらに別の実施形態では、式（Ａ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、肝線維症および肝硬変の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ関連の疾患で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
さらに別の実施形態では、心血管疾患、例えばアテローム硬化症、再狭窄、高血圧、血管けいれんおよび心肥大の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
さらに別の実施形態では、糖尿病合併症、例えばマクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）の血管合併症の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
さらに別の実施形態では、肺障害および関連疾患、肺線維症および肺転移の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が提供される。
さらに別の実施形態では、乾癬および強皮症の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が提供される。
さらに別の実施形態では、ＩＬ−６、アルドースレダクターゼ、ｉＮＯＳ、マトリックスメタロプロテイナーゼ２およびＴＮＦ−α阻害活性を有する式（Ｉ）の化合物が提供される。
さらに別の実施形態では、血漿または肝臓のトリグリセリドレベルおよび血漿グルコースレベルを低減するための式（Ｉ）の化合物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】食餌誘導肥満（ＤＩＯ）／ＮＡＦＬＤマウスにおける体重に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける体重に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図３】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける肝臓    に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図４】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける肝臓ＴＧレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図５】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおけるグルコースレベル（空腹時）に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図６】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける肝臓組織病理に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果の格付けを表す図。
【図７】７ａ〜７ｈは、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデルにおける肝臓の組織病理的変化に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図８】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける体重増加に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図９】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおけるグルコースレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１０】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおけるＡＬＴレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１１】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの肝臓トリグリセリドに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１２】過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける肝細胞空胞化に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１３】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの肝臓組織病理に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１４】ＨＣ−ＨＦ（高コレステロール−高脂肪）食で飼育されたハムスターにおけるトリグリセリドレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１５】ＨＣ−ＨＦ食で飼育されたハムスターにおけるＮＥＦＡレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１６】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける体重増加に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１７】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける血漿アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１８】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける血漿ＡＬＴに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図１９】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける肝細胞膨張に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２０】ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける脂肪性肝臓症に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２１】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの肝臓組織病理に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２２】ＤＩＯマウスにおけるＨＯＭＡ−ＩＲに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２３】ｎＳＴＺ処理ラットにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの体重増加に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２４】ｎＳＴＺ処理ラットにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの肝臓空胞化（脂肪症）に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果の格付けを表す図。
【図２５】ｎＳＴＺ処理ラットにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの肝臓空胞化（脂肪症）に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２６】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるブレオマイシン誘導肺線維症での肺組織病理に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２７】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるブレオマイシン誘導肺線維症での肺組織病理（Ｈ＆Ｅ染色）に及ぼす式（Ａ）の化合物を示す図。
【図２８】リポ多糖（ＬＰＳ）で刺激したＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおけるＴＮＦ−αレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図２９】ＨＣ−ＨＦ食で飼育されたハムスターにおける血漿ＴＧに及ぼす式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩の効果を示す図。
【図３０】過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける肝細胞膨張に及ぼす式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩の効果を示す図。
【図３１】過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける微細空胞化に及ぼす式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩の効果を示す図。
【図３２】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨでの肝臓組織病理に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【図３３】マウスの急性アルコール誘導高トリグリセリド血症における血漿ＴＧに及ぼす式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩の効果を示す図。
【図３４】３Ｔ３−Ｌ１マウス線維芽細胞における脂質生成に及ぼす式（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の効果を示す図。
【図３５】(a)と(b)は、ウエスタンブロット法を用いる式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物で処理されたＨＳＣからのコラーゲン分泌の推定を示す図。
【図３６】式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物によるＨＳＣでのアポトーシスの誘導を示す図。
【図３７】式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物によるアポトーシスの誘導はＨＳＣ選択的であることを示す図。
【図３８】ｉＮＯＳ生成に及ぼす阻害作用を示す図。
【図３９】脂肪の少ない雄ｏｂ／ｏｂ対照マウスにおけるビヒクル（ｎ＝５）および式（Ａ）の化合物（５０ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝４）の１０日間の経口投与後の血清ＴＮＦ−αレベル（ｐｇ／ｄＬ）を示す図。
【図４０】脂肪の少ない雄ｏｂ／ｏｂ対照マウスにおけるビヒクル（ｎ＝５）および式（Ａ）の化合物（５０ｍｇ／ｋｇ／日、ｎ＝４）の１０日間の経口投与後の血清ＩＬ−６レベル（ｐｇ／ｄＬ）を示す図。
【図４１】ＳＴＺ誘導糖尿病ラットにおけるレンズ核変性に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本明細書で、肝臓障害および関連疾患、線維症、ならびにマクロ（虚血性心疾患、脳血管障害および末梢血管疾患）およびミクロ（白内障、網膜症、腎症、神経障害、黄斑症および緑内障）の血管合併症などの糖尿病合併症の予防処置および処置での使用のための、式（Ｉ）
【化８】
0005957452.tif 000009
の化合物、それらの誘導体、類似体、互変異性型、立体異性体、多形、水和物、溶媒和物、薬学的に許容される塩、薬学的に許容される組成物、代謝産物およびプロドラッグが記載され、
式中、−−−−は任意選択の結合を表し；Ｗは、ＯまたはＳを表し；Ｙは、ＮＲ4、ＳまたはＯを表し；
ここでＲ4は、水素、またはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基；エテニル、プロペニル、ブテニルなどのアルケニル基；フェニル、ナフチルなどのアリール基から選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；対イオンは、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋなどのアルカリ金属から選択されるか、−ＣＨ2ＣＯＲ6であり；ここでＲ6は、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＨＯＨまたは−ＯＲ18を表し；ここでＲ18はアルキル基であり；Ｚは、ＣＲ5、ＯまたはＳを表し；Ｒ1は、Ｏ、Ｓから選択されるか、Ｒ5と一緒に、フェニル、ナフチル、フリル、ピロリル、ピリジルなどの炭素原子またはＯ、ＳもしくはＮから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含む縮合５員または６員の芳香族環系もしくは芳香族複素環系を形成する。
【００２６】
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5によって表される適する基は、水素、ハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素；ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基；クロロメチル、クロロエチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、ジクロロメチル、ジクロロエチルなどの、１つ、２つ、３つまたは４つのハロゲン原子によって置換されたアルキル基から選択されるハロアルキル基；およびメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどの（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ基から選択される。
【００２７】
Ｒは、ＵまたはＶのいずれかを表し；Ｕは、水素、ハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素；ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、ホルミル、アミノ、−ＣＯＲ10、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基；メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどの（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基；Ｒ10は、−ＯＲ11または−ＮＲ12Ｒ13を表し；ここでＲ11は、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基を表し；エテニル、プロペニル、ブテニルなどの（Ｃ2−Ｃ20）アルケニル基；フェニル、ナフチルなどの５〜１４員の一、二または三環系を含むアリール基；ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピルなどのアラルキル基；ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、キノリニル、ジヒドロキノリニル、テトラヒドロキノリニル、イソキノリニル、ジヒドロイソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどの５〜１４員の一、二または三環系を含むヘテロアリール基、およびまたはナトリウム、カリウムまたはマグネシウムなどの対イオン；から選択され、
Ｒ12およびＲ13は同じか異なってよく、独立して水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基；エテニル、プロペニル、ブテニルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ2−Ｃ20）アルケニル基；フェニル、ナフチルなどのアリール基；ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾジオキソリル、キノリニルなどのヘテロアリール基を表すか、Ｒ12およびＲ13は、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、アゼチジニル、ピロール、ピラゾール、トリアゾールおよびテトラゾールなどの置換されてもよいヘテロ脂肪族または芳香族複素環を一緒に形成し；
【００２８】
Ｖは、
【化９】
0005957452.tif 000010
またはその塩を表し；Ｒ7は、−ＯＲ14または−ＮＲ15Ｒ16を表し；
Ｒ14によって表される適する基は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基；エテニル、プロペニル、ブテニルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ2−Ｃ4）アルケニル基；フェニル、ナフチルなどのアリール基；ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピルなどのアラルキル基；ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾジオキソリル、キノリニルなどのヘテロアリール基；から選択され、対イオンは、Ｌｉ、ＮａおよびＫなどのアルカリ金属；ＣａおよびＭｇなどのアルカリ土類金属；アンモニウムまたは置換されたアンモニウム塩、ジエタノールアミン、α−フェニルエチルアミン、ベンジルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピリジン、ヒドロキシエチルピロリジン、ヒドロキシエチルピペリジン、コリンアルミニウム、トロメタミンなどの異なる塩基の塩から選択される。
【００２９】
Ｒ8およびＲ9によって表される適する基は、Ｈ、ＣＯＲ15、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基；エテニル、プロペニル、ブテニルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ2−Ｃ4）アルケニル基；フェニル、ナフチルなどのアリール基、およびピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニルなどのヘテロアリール基から選択される。
【００３０】
Ｒ15およびＲ16によって表される適する基は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ1−Ｃ4）アルキル基から選択される置換型もしくは非置換型の基；エテニル、プロペニル、ブテニルなどの直鎖状であるか分枝状の（Ｃ2−Ｃ4）アルケニル基；フェニル、ナフチルなどのアリール基；ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピロリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾジオキソリル、キノリニルなどのヘテロアリール基；メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシなどのアルコキシ基；フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシなどのアラルコキシ基、およびフェノキシ、ナフトキシなどのアリールオキシル基から選択される。
【００３１】
置換される場合、置換基には、限定されずに、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などのハロゲン；ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アジド、ニトロソ、アミノ、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロオキサメート、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シクロアルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、アシロキシ、アシロキシアシル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロシクリルカルボニル、アリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、スルファモイル、アルコキシアルキル基およびカルボン酸ならびにカルボキサミドおよびカルボキサミドアルキルなどのその誘導体から選択される１つまたは複数の置換基を含めることができる。
ｐおよびｑは整数であり、１〜３から選択される。
【００３２】
本明細書で、式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、肝臓障害、肺障害、糖尿病合併症、心血管および関連疾患の処置で用いるための式（Ｉ）の化合物が提供される。
本明細書で、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨならびにＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ関連の障害および状態の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物が記載される。
本明細書で、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置で用いられる式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
本明細書で、式（Ａ）の化合物の治療的有効量を投与することを含む、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置で用いられる式（Ｉ）の化合物がさらに提供される。
肝脂肪酸トリグリセリドおよびリン脂質合成は、急性および慢性のエタノール消費の後に加速される。強化される脂質生成は、脂肪酸シンターゼ、アシルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、ＡＴＰクエン酸リアーゼ（ＡＣＬ）、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼおよびリンゴ酸酵素を含むリポゲネシス酵素のより高い発現の反映であり、それによって脂肪の蓄積を強化する。これらの酵素は、転写因子、ステロール調節エレメント結合タンパク質−１（ＳＲＥＢＰ−１）によって調節される遺伝子によってコードされる。アルコール誘導脂肪症をもつ個体は、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、肝線維症、肝硬変、さらに肝細胞癌の発生を起こしやすい（World J Gastroenterol 2007, 13, 4974-4978）。
【００３３】
本明細書で、肝線維症、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、肝硬変、肝細胞癌、肺障害、肺線維症、肺転移および乾癬の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
ＮＡＦＬＤは、古典的心血管危険因子、多嚢胞卵巣症候群（ＰＣＯＳ）および閉塞性睡眠中無呼吸（ＯＳＡ）と緊密に関連している（Journal of Hepatology, 2008, 48, S104-S112）。
本明細書で、多嚢胞卵巣症候群、閉塞性無呼吸、強皮症乾癬などのＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨとの関連疾患を処置するのに用いられる式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
本明細書で、肺障害および関連疾患、例えば肺線維症および肺転移の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
本明細書で、乾癬の処置で用いられる式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
本明細書で、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ｉＮＯＳ、アルドースレダクターゼおよびマトリックスメタロプロテイナーゼ２を阻害するための式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
本明細書で、血漿または肝臓のトリグリセリドレベルおよび血漿グルコースレベルを低減するための式（Ｉ）の化合物がさらに記載される。
【００３４】
用語「類似体」は、親構造と１つまたは複数のＣ、Ｎ、ＯまたはＳ原子が異なる化合物を含む。したがって、親構造のＮ原子の１つがＳ原子と交換される化合物は、前者の類似体である。
用語「立体異性体」は、原子が空間で配列される方法でお互いに異なるが、それ以外では化学式および構造が同一である異性体を含む。立体異性体は、鏡像異性体およびジアステレオ異性体を含む。
用語「互変異性体」は、平衡している化合物の容易に相互交換可能な異性形を含む。ケト−エノール互換異性が例である。
用語「多形」は、化学的に同一の構造を有する化合物の結晶学的に異なる形を含む。
用語「薬学的に許容される溶媒和物」は、溶媒分子と溶質化合物の分子またはイオンとの組合せを含む。
用語「誘導体」は、１つまたは複数の官能基を変換する単一の化学的過程、例えば酸化、水素化、アルキル化、エステル化、ハロゲン化などによって、式（Ｉ）の化合物、その類似体、互変異型、立体異性体、多形、水和物、薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物から得られる化合物を指す。
【００３５】
本発明の薬学的に許容される塩には、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋなどのアルカリ金属；Ｃａ、Ｍｇなどのアルカリ土類金属；ジエタノールアミン、α−フェニルエチルアミン、ベンジルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピリジン、ヒドロキシエチルピロリジン、ヒドロキシエチルピペリジン、コリンなどの有機塩基の塩、アンモニウムまたは置換されたアンモニウム塩、アルミニウム塩が含まれる。塩には、グリシン、アラニン、シスチン、システイン、リシン、アルギニン、フェニルアラニン、グアニジンなどのアミノ酸塩も含まれる。適切な場合、塩には、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩、硼酸塩、ハロゲン化水素、酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、パルモ酸塩、メタンスルホン酸塩、トシル酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ヒドロキシナフトエート、ベンゼンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アスコルビン酸塩、グリセロリン酸、ケトグルタル酸塩などである酸付加塩を含めることができる。薬学的に許容される溶媒和物は、水和物であるか、アルコールなどの他の結晶化溶媒を含むことができる。
【００３６】
記載された用語は、特許全体で同じ意味が適用される。本発明の特に好ましい化合物には、以下のものが含まれる：
１．メチル（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパノエートまたはその塩；
２．（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）プロパン酸またはその塩、および
３．（４−｛４−［（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル］フェノキシ｝フェニル）酢酸またはその塩。
【００３７】
薬学的に許容される塩は、エーテル、テトラヒドロフラン、メタノール、ｔ−ブタノール、ジオキサン、イソプロパノール、エタノールなどの溶媒中で、式（Ｉ）の化合物を１〜１０等量の水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、水素化ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムなどの塩基と反応させることによって調製される。溶媒の混合物を用いることもできる。有機塩基、例えばジエタノールアミン、α−フェニルエチルアミン、ベンジルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピリジン、ヒドロキシエチルピロリジン、ヒドロキシエチルピペリジン、コリン、グアニジン、アンモニウム、置換されたアンモニウム塩およびアルミニウム塩、ならびにグリシン、アラニン、シスチン、システイン、リシン、アルギニン、フェニルアラニンなどのアミノ酸などをアミノ酸塩の調製のために用いることができる。あるいは、適用できる場合には、酢酸エチル、エーテル、アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどの溶媒中での、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、酢酸、クエン酸、マレイン酸、サリチル酸、ヒドロキシナフトエ酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、コハク酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、酒石酸、シュウ酸などの酸による処理によって酸付加塩が調製される。溶媒の混合物を用いることもできる。
【００３８】
本発明の化合物は、互変異型で存在することができる基を含むことができることに注意すべきであり、本明細書では１つの形が指名、記載、提示および／または特許請求されるけれども、全ての形がそのような名前、記載、提示および／または請求項に本来含まれるものとする。
本発明の一部を形成する化合物の立体異性体は、可能な場合には工程で反応物をそれらの単一の鏡像異性形で用いることにより、または試薬もしくは触媒の存在下で反応をそれらの単一の鏡像異性形で行うことにより、または従来の方法によって立体異性体の混合物を分解することによって、調製することができる。好ましい方法のいくつかには、適用可能な限り、微生物分解を用いて、マンデル酸、カンフルスルホン酸、酒石酸、乳酸などのキラル酸で形成されるジアステレオマー塩を分解すること、またはブルシン、キナアルカロイド、それらの誘導体などのキラル塩基の使用によるものが含まれる。
式（Ｉ）の化合物のプロドラッグも、本発明によって企図される。プロドラッグは、患者へのプロドラッグの投与の後に、加水分解、代謝などのｉｎ  ｖｉｖｏでの生理的作用を通して、本発明の化合物に化学的に改変される活性または不活性の化合物である。プロドラッグの作製、使用に必要な適合性および技術は、当業者に周知である。
【００３９】
本発明の一部を形成する一般式（Ｉ）の化合物の様々な多形は、異なる条件の下での式（Ｉ）の化合物の結晶化によって調製することができる。例えば、再結晶のための異なる常用溶媒、またはそれらの混合物を用いること；異なる温度での結晶化；結晶化の間の、非常に速くから非常に遅くまでの様々なモードでの冷却。化合物を加熱または溶融し、続いて徐々にまたは直ちに冷却することによって、多形を得ることもできる。多形の存在は、固体プローブＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、ラマン分光法、示差走査熱量測定および粉体Ｘ線回折または他のそのような技術で判定することができる。
本発明の一部を形成する式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される溶媒和物は、従来の方法、例えば式（Ｉ）の化合物を、水、メタノール、エタノール、溶媒の混合物、例えばアセトン／水、ジオキサン／水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／水などの溶媒、好ましくは水に溶解して、異なる結晶化技術を用いる再結晶によって調製することができる。
本発明は、肝臓障害、例えばＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤ、肝線維症、肝硬変、脂肪性肝炎など、および心血管疾患、多嚢胞卵巣症候群、閉塞性無呼吸などの関連疾患；乾癬；肺障害、例えば肺線維症など、および肺転移などの関連疾患；ならびに糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、糖尿病白内障などの糖尿病合併症の処置および／または予防処置に有益である、上で定義される一般式（Ｉ）の化合物、それらの誘導体、類似体、互変異型、立体異性体、多形、水和物、代謝産物、プロドラッグ、薬学的に許容される塩、薬学的に許容される溶媒和物の１つまたは複数を、通常の医薬用の担体、希釈剤などと一緒に含む医薬組成物も提供する。
【００４０】
医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、溶液剤、懸濁剤などの通常使用される形であってよく、適する固体もしくは液体の担体もしくは希釈剤中に、または注射可能な溶液もしくは懸濁液を形成する適する滅菌媒体中に、香味剤、甘味剤などを含むことができる。組成物は、当技術分野で公知の方法によって調製することができる。組成物中の有効成分の量は、７０重量％未満であってよい。そのような組成物は、１〜２５重量％、好ましくは１〜１５重量％の活性化合物を一般に含有し、組成物の残りは薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤または溶媒である。適切な薬学的に許容される担体には、固体充填剤または希釈剤、および無菌の水性または有機の溶液が含まれる。
【００４１】
一般に、患者の特定の状態を処置するための有効用量は、状態または疾患の症状または適応症を軽減するように、処置の間に医師が容易に決定し、調整することができる。一般に、有効な結果を得るために、活性化合物の約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の日用量が投与に適当である。日用量は、単一の用量で投与するか、いくつかの用量に分けることができる。場合によっては、個体の応答によって、初期の処方日用量から上方または下方にずらす必要があるかもしれない。一般的な医薬用製剤は、通常１用量につき約０．２〜５００ｍｇの式Ｉの活性化合物および／またはその薬学的に活性な塩もしくは溶媒和物を含む。
本発明の化合物は唯一の活性医薬用薬剤として投与することができるが、それらは本発明の１つまたは複数の化合物または他の治療薬と一緒に用いることもできる。併用で投与される場合、治療薬は同時にまたは異なる時間に与えられる別々の組成物として調剤することができるか、治療薬を単一の組成物として与えることができる。
【００４２】
用語「治療的有効量」または「有効量」は、そのような処置を必要とする哺乳動物に単独で、または他の療法と一緒に投与されるときに、下で定義されるような処置を実行するのに十分である、式（Ｉ）の化合物または化合物の混合物の量を指す。
本明細書で用いられる用語「動物」は、全ての哺乳動物、特にヒトを含むものとする。そのような動物は、本明細書で、処置を必要とする対象または患者とも呼ばれる。治療的有効量は、処置される対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、選択される式（Ｉ）の特定の化合物、従う投薬療法、投与のタイミング、投与方法などによって異なり、その全ては当業者が容易に判定することができる。
本明細書に記載される用語「肝炎」は、肝臓の炎症を指す。本明細書に記載される用語「脂肪性肝臓症」は、肝臓の細胞／肝細胞の細胞質での脂肪液滴またはトリグリセリドの蓄積を指す。本明細書に記載される用語「肝細胞空胞化」は、様々なサイズの空胞を含む肝臓細胞／肝細胞を指す。
本明細書に記載される用語「肝細胞膨張」は、脂肪性肝炎で特に見出される細胞の腫張および拡張と関連する肝細胞変性の特殊な形を指す。
【００４３】
用語「糖尿病合併症」には、それらに限定されないが、ミクロおよびマクロの血管合併症が含まれ、糖尿病（高血糖）によって誘発される疾患を指す。
用語「心血管疾患」は、心臓および循環系の疾患を指す。
用語「予防処置」または「予防」は、疾患を予防すること、すなわち疾患の臨床症状を引き起こさないようにすることを意味する。
用語「処置」／「処置する」は、以下を含む、哺乳動物の疾患の任意の処置を意味する：（ａ）疾患を阻害すること、すなわち臨床症状の発生を減速または停止すること；および／または（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち臨床症状の退行を引き起こすこと。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「使用のための化合物（複数可）」は、以下の任意の１つまたは複数を包含する：（１）化合物（複数可）の使用、（２）化合物（複数可）の使用方法、（３）処置での使用、（４）処置／処置することのための医薬組成物／医薬の製造のための使用、または（５）それを必要とする対象に活性化合物の有効量を投与することを含む、処置／処置すること／予防すること／低減すること／阻害することの方法。
上記記載から、当業者は本発明の本質的な特徴を容易に確かめることができ、その精神および範囲を逸脱しない範囲で、様々な使用および条件にそれを適合させるために本発明の様々な変更および改変を加えることができる。
本発明は、下で与えられる例によって提供され、それらは例示としてだけ提供され、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきでない。当業者に明らかである変形および変更は、本発明の範囲および性質の範囲内であるものとする。
本発明の範囲内に含まれる化合物は、下の表１で提供される。
【００４５】
【表１】
0005957452.tif 000011
式（Ｉ）および（Ａ）〜（Ｃ）の化合物またはその塩は、ＵＳ６７９４４０１Ｂ２、ＵＳ７５２１４６５Ｂ２およびＵＳ７７８１４６４Ｂ２に記載の方法によって調製することができる。
【００４６】
生物学的試験
１．ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの主要な特徴に及ぼす式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）の化合物およびそれらの塩の効果を調べるため、過栄養食、ブレオマイシンおよびリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて、関連動物モデルを育てた。
【００４７】
実験１：ＤＩＯ／ＮＡＦＬＤマウスにおける体重に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果
過栄養食を与えることによって、げっ歯類肥満およびＮＡＦＬＤモデルを育てた。このモデルは、ヒト肥満およびＮＡＦＬＤのいくつかの特徴をシミュレートしている。これらの特徴を、以下に述べる通り処置した。週齢６〜８週、体重１６〜２２ｇの範囲の、３０匹のＣ５７ＢＬ／６雄のマウスをこの実験に使用した。動物を２つのグループに分けた。第１のグループ（ｎ＝８、ｎは、動物の数を指す）は、固形飼料の餌（Ｎｕｔｒｉ  Ｌａｂ（登録商標）Ｒｏｄｅｎｔ、Ｔｅｔｒａｇｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｂａｎｇａｌｏｒｅ）を与える正常対照として扱い、第２のグループ（ｎ＝２０）には、９０日間、６０Ｋｃａｌ％高脂肪の食餌（ＨＦＤ）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、Ｃａｔ＃Ｄ１２４９２、青色色素付）を投与した。動物はその体重に基づき選択した。通常の固形飼料の食餌（ｎ＝８）を与える動物は、正常対照（グループＩ）とし、ＨＦＤを与える動物は、ＤＩＯ／ＮＡＦＬＤ対照（グループＩＩ）（ｎ＝１０）と、式（Ａ）の化合物１００ｍｇ／ｋｇを２８日間処置したグループＩＩＩ（ｎ＝９）の２つのグループに分割した。この期間中、動物の体重および餌の摂取量を毎日記録した。
【００４８】
実験２：ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける式（Ａ）の化合物の効果
過栄養食を与えることによって、げっ歯類ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデルを育てた。このモデルは、ヒトＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨのいくつかの特徴をシミュレートしている。これらの特徴を、以下に述べる通り処置した。週齢６〜８週、および体重１６〜３６ｇの範囲の、５０匹のＣ５７ＢＬ／６雄のマウスをこの実験に使用した。動物を２つのグループに分け、正常対照として扱う第１のグループ（ｎ＝１０）には、固形飼料の餌（Ｎｕｔｒｉ  Ｌａｂ（登録商標）Ｒｏｄｅｎｔ、Ｔｅｔｒａｇｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｂａｎｇａｌｏｒｅ）を与え、第２のグループ（ｎ＝４０）には、６０Ｋｃａｌ％ＨＦＤ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、Ｃａｔ＃Ｄ１２４９２、青色色素付）および４０％高フルクトース液（ＨＦＬ）を６０日間与えた。４５日後、疾患誘導グループおよび正常対照グループから動物を２匹屠殺した。肝臓組織病理検査を行うことによって、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの誘導を確認した。通常の固形飼料の食餌を与える動物は、正常対照（グループＩ）とし、ＨＦＤおよびＨＦＬを与える動物は、３つのグループ（ｎ＝６〜８）、すなわちＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ対照（グループＩＩ）、グループＩＩＩおよびグループＩＶに分け、グループＩＩＩおよびグループＩＶには、式（Ａ）の化合物およびメトホルミンを２８日間、１００および３５０ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏ投与した。２８日目に動物を１２時間絶食させ、２９日目に血液を採取し、血漿を分離し、生化学的分析および化合物濃度分析に使用した。次いで動物を屠殺した。肝臓を採取し、秤量した。肝臓組織は、化合物濃度分析、トリグリセリドの推定および組織病理検査に使用した。肝臓の肉眼的所見も観察した。
【００４９】
実験３：ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおける式（Ａ）の化合物の効果
実験−２つのプロトコルに従った。ここでは、式（Ａ）の化合物を他の抗糖尿病性化合物と比較した（図８〜１３）。
【００５０】
実験４：高コレステロール−高脂肪食（ＨＣ−ＨＦ）で飼育されたハムスターにおける式（Ａ）の化合物の効果
ヒトにおける異脂肪血症の特徴をシミュレートするフルクトース液（１０％）を有する過栄養食を与えることによって、異脂肪血症のハムスターを育てた。これらの特徴を、以下に述べる通り処置した。週齢１４〜１６週、体重１００〜１６０ｇの範囲の、３０匹の雄のＧｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎハムスターをこの実験に使用した。動物を２つのグループに分けた。第１のグループ（ｎ＝７）は正常対照として扱い、固形飼料の餌（Ｎｕｔｒｉ  Ｌａｂ（登録商標）Ｒｏｄｅｎｔ、Ｔｅｔｒａｇｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｂａｎｇａｌｏｒｅ）を与え、第２のグループ（ｎ＝２３）には、ＨＣ−ＨＦ食餌（自家製）を与えた。この食餌の組成は、コーン油１１．５０％、ヤシ油１１．５０％、コレステロール０．５０％、ナトリウムコレート０．２５％およびＮｕｔｒｉ  Ｌａｂ（登録商標）の餌７６．２５％であり、動物には飲料水中１０％フルクトースを与えた。１４日後、動物は、生化学的パラメータの推定のため、すなわち、トリグリセリド（ＴＧ）、全コレステロール（ＴＣ）およびグルコースを推定するために血を抜き取ることによって、疾患の誘導を確認した。生化学的パラメータに基づき、動物をグループ分けした。通常の固形飼料の食餌（ｎ＝７）を与える動物は、正常対照（グループＩ）とし、フルクトース液（１０％）と共に過栄養食を与える動物は、３つのグループ、すなわち疾患対照（グループＩＩ）（ｎ＝７）、グループＩＩＩ（ｎ＝８）およびグループＩＶ（ｎ＝８）に分け、グループＩＩＩおよびグループＩＶには、式（Ａ）の化合物を２８日間、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏを投与した。この期間中、動物の体重を毎日記録した。動物を４時間絶食させ、処置の１６日目および２８日目に血を抜き取り、血漿と血清を分離し、生化学的分析、すなわち、ＴＧ、ＴＣ、血漿グルコースおよび非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）についての分析に使用した。
【００５１】
実験５：Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨに及ぼす式（Ａ）の化合物の用量反応
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデルを育てるため、実験２で述べた同じプロトコルに従った。誘導期間の終わりに、動物を以下の通りグループ分けした。通常の固形飼料の食餌（ｎ＝９）を与える動物は、正常対照（グループ１）とし、ＨＦＤおよびＨＦＬを与える動物は、４つのグループ（ｎ＝９〜１２）、すなわちＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ対照（グループＩＩ）、グループＩＩＩ、ＩＶ、およびＶに分け、グループＩＩＩ、ＩＶ、およびＶには、式（Ａ）の化合物を２８日間、１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏ．投与した。処置から２８日後、動物を１２時間絶食させ、生化学的推定のため血液を採取した。採血後、動物を屠殺し、肝臓を採取し、秤量した。肝臓組織を化合物濃度分析、ＴＧ推定および組織病理検査に使用した。肝臓の肉眼的所見も観察した。
【００５２】
実験６：食餌誘導肥満の（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスにおけるインスリン耐性試験（ＩＴＴ）に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果
６０Ｋｃａｌ％高脂肪の食餌を与えることによって、インスリン抵抗性を有する肥満の動物モデルを育てた。このモデルは、ヒト肥満およびインスリン抵抗性のいくつかの特徴をシミュレートしている。これらの特徴を、以下に述べる通り処置した。週齢６〜８週、体重１６〜２２ｇの範囲の、３０匹のＣ５７ＢＬ／６雄のマウスを使用した。動物を２つのグループに分けた。第１のグループ（ｎ＝１０）は、固形飼料の餌（Ｎｕｔｒｉ  Ｌａｂ（登録商標）Ｒｏｄｅｎｔ、Ｔｅｔｒａｇｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｂａｎｇａｌｏｒｅ）を与えた正常対照として扱い、第２のグループ（ｎ＝２５）には６０Ｋｃａｌ％高脂肪の食餌（ＨＦＤ）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、Ｃａｔ＃Ｄ１２４９２、青色色素付）を１２０日間与えた。誘導期間の終わりに、さらなる実験のため、インスリン抵抗性に基づき動物を選択した。通常の固形飼料の食餌（ｎ＝１０）を与える動物を、正常対照（グループＩ）とし、ＨＦＤを与える動物をさらに２つのグループ（ｎ＝６〜７）、すなわちＤＩＯ対照（グループＩＩ）と、式（Ａ）の化合物３０ｍｇ／ｋｇを２８日間投与するグループＩＩＩに分けた。この期間中、体重および餌の摂取量を毎日記録した。第２８日目に動物を１２時間の絶食の対象とし、ＩＴＴを実施した。３日の期間の後、動物を再び１２時間の絶食の対象とし、血液を採取し、生化学的分析用に血漿または血清を分離した。
【００５３】
実験７：ストレプトゾトシン（ｎＳＴＺ）を投与した新生仔ラットにおける過栄養食誘導ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨに及ぼす式（Ａ）の化合物の用量反応
過栄養食を、ｎＳＴＺを投与したラットに与えることによってげっ歯類ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデルを育てた。このモデルは、ヒトＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨのいくつかの特徴をシミュレートしている。インスリン抵抗性を発症させるために、生後１日の雄のＷｉｓｔａｒラットの子にストレプトゾトシン（ＳＴＺ）１００ｍｇ／ｋｇまたは通常の生理食塩水（ｉ．ｐ．）のいずれかを注射した。処置から２１日後、ＳＴＺを投与した動物を２つのグループに分け、標準固形飼料の食餌、またはＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨを誘導させるための飲料水中に４０％フルクトースを含む６０Ｋｃａｌ％高脂肪の食餌のいずれかを３カ月与えた。生理食塩水を投与した動物は、標準固形飼料食で飼育された。誘導から４５日後および６０日後、誘導グループから１匹の動物を屠殺し、肝臓組織病理検査を行うことによって、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの誘導を確認した。９０日の誘導期間後、動物を以下のグループに分けた。標準固形飼料の食餌を与える動物は、正常対照（グループＩ、ｎ＝９）およびｎＳＴＺ対照（グループＩＩ、ｎ＝７）として維持した。疾患誘導グループは、４つのグループ、すなわちＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ対照（グループＩＩＩ、ｎ＝９）ならびにグループＩＶ（ｎ＝７）、グループＶ（ｎ＝８）およびグループＶＩ（ｎ＝９）にさらに分け、グループＩＶ、グループＶおよびグループＶＩには、式（Ａ）の化合物を４８日間、体重１ｋｇにつき１、３および１０ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏ．投与した。実験期間中は毎日体重、餌および水摂取量を記録した。３１日目および４８日目には動物を１２時間絶食させ、３２日目および４９日目に血液を採取し、血漿を分離し、生化学的分析および化合物濃度分析のために使用した。４９日目、採血後、動物を屠殺した。肝臓および脂肪体を採取し、秤量した。化合物濃度分析、ＴＧ推定、ならびに組織病理検査および発現実験に肝臓組織を使用した。肝臓の肉眼的所見も観察した。
【００５４】
実験８：Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるブレオマイシン誘導肺線維症に及ぼす式（Ａ）の化合物の効果（予防処置）
メスのＣ５７ＢＬ／６マウスをこの実験に使用した。動物をその体重に基づき４つのグループに分けた。線維症を誘導するため、グループＩＩ（疾患対照）、グループＩＩＩおよびグループＩＶには０．１Ｕ／動物（量５０μＬ）のブレオマイシンを気管内投与し、その一方でグループＩ（正常対照）には生理食塩水のみを与えた。ブレオマイシン投与グループＩＩＩおよびグループＩＶの動物にはペントキシフィリン（２０ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）および式（Ａ）の化合物（１００ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）をそれぞれ投与したのに対して、グループＩおよびブレオマイシン投与グループＩＩの動物には、ブレオマイシン投与前の７日間およびブレオマイシン投与後の１４日間の間ビヒクルを与えた。体重、餌および液体摂取量ならびに死亡率を記録した。実験の終わりに、動物の血を抜き取り、生化学的パラメータ推定のため血漿を超低温槽（−８０℃）内に保存した。次いで、動物を屠殺し、肺組織を採取し、秤量した。発現実験および薬物濃度分析のため、右肺組織を超低温槽（−８０℃）内に保存した。左肺組織は、ゆっくりとした点滴によりホルマリン（１０％）中に固定し、次いでこれに浸し、組織病理検査用にホルマリン（１０％）中で保存した。
【００５５】
実験９：ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨマウスにおけるリポ多糖（ＬＰＳ）誘導ＴＮＦ−αレベルに及ぼす式（Ａ）の化合物の効果
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデルを育てるため、実験２で述べた同じプロトコルに従った。誘導後、動物を以下の通りさらにグループ分けした。通常の固形飼料の食餌（ｎ＝１０）を与える動物は、正常対照（グループＩ）とし、ＨＦＤおよびＨＦＬを与える動物は、さらに２つのグループ、すなわち疾患対照（グループＩＩ）（ｎ＝１０）と処置グループ（グループＩＩＩ）（ｎ＝９）に分けた。処置期間は２８日であった。この期間中グループＩおよびグループＩＩの動物には、ビヒクルとして水を与え、グループＩＩＩの動物には、式（Ａ）の化合物１００ｍｇ／ｋｇを経口投与した。２７日目には動物を１２時間絶食させ、２８日目には６０分間の処置後、動物を腹腔内経路によりＬＰＳ（５００μｇ／動物）を投与した。次いで９０分間のＬＰＳの投与後、採血を行い、血漿と血清を分離し、さらなる分析用に超低温槽内で、−８０℃で保存した。採血後、動物を屠殺した。肝臓、鼠径部および精巣上体の脂肪を採取し、秤量した。
【００５６】
実験１０：ＨＣ−ＨＦ食餌で飼育されたハムスターにおける式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩の効果
実験４に述べたようなプロトコルで異脂肪血症モデルを育てた。１４日後、疾患の誘導を確認するための生化学的パラメータの推定用に動物の血を抜き取った。誘導期間後、動物を以下の通りグループ分けし、通常の固形飼料の食餌（ｎ＝６）を与える動物を正常対照（グループＩ）とし、フルクトース液（１０％）と共に過栄養食を与える動物は、さらに３つのグループ、すなわち疾患対照（グループＩＩ）（ｎ＝７）、グループＩＩＩ（ｎ＝７）およびグループＩＶ（ｎ＝７）に分け、グループＩＩＩおよびグループＩＶには、式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩を２８日間、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏ投与した。この期間中、動物の体重を毎日記録した。１４日目および２８日目に動物を４時間絶食させ、血を抜き取り、血漿および血清を分離し、生化学的分析に使用した。
【００５７】
実験１１：マウスにおけるＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨに及ぼす式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩の効果
ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨモデルを育てるために、実験２で述べた同じプロトコルに従った。誘導期間の終わりに、動物を以下の通りグループ分けした。通常の固形飼料の食餌を与える動物（ｎ＝８）を正常対照（グループＩ）とし、ＨＦＤおよびＨＦＬを与える動物をさらに３つのグループ（ｎ＝９）、すなわちＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ対照（グループＩＩ）、グループＩＩＩおよびグループＩＶに分け、グループＩＩＩおよびグループＩＶには式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩を２８日間、１００および３０ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏ投与した。２８日目に、動物を１２時間絶食させ、２９日目に血液を採取し、血漿を分離し、生化学的分析および化合物濃度分析に使用した。採血後、動物を屠殺した。肝臓を採取し、秤量した。肝臓組織を組織病理検査に使用した。肝臓の肉眼的所見も観察した。
【００５８】
実験１２：マウスにおける急性アルコール誘導高トリグリセリド血症に及ぼす式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩
週齢６〜８週、および体重２２〜２８ｇの範囲の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスをこの実験に使用した。動物を４つのグループ（ｎ＝８）に分け、通常の固形飼料の餌（Ｎｕｔｒｉ  Ｌａｂ（登録商標）Ｒｏｄｅｎｔ、Ｔｅｔｒａｇｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．、Ｂａｎｇａｌｏｒｅ）および飲料水を与えた。グループＩおよびグループＩＩの動物は、ビヒクルを投与した正常対照および疾患対照とした。グループＩＩＩ（ｎ＝８）およびグループＩＶ（ｎ＝８）の動物には式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩を７日間、１００および３０ｍｇ／ｋｇをそれぞれｐ．ｏ投与した。７日目に、化合物の投与から１時間後、グループＩＩ、グループＩＩＩおよびグループＩＶの動物に４０％アルコール（１０ｍｌ／ｋｇｂ．ｗ）をｐ．ｏ．投与した。投与から１８時間後、動物の血を抜き取り、血漿を分離し、生化学的パラメータ分析に使用した。
【００５９】
生化学的パラメータ
グルコース、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＣ、ＴＧ（臨床用化学物質アナライザーＥｒｂａ  ＸＬ３００）、インスリン（Ｌｉｎｃｏ（登録商標）−ＣＡ、製品コード：ＥＺＲＭＩ−１３Ｋ）およびＴＮＦα（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＵＫ．製品コード：ＲＰＮ２７１８）などのパラメータを、市販のキットを用いて測定した。市販のＮＥＦＡＣキット（製品コードＮｏ：２７９−７５４０１、和光純薬工業株式会社、日本）を用いて、血清中のＮＥＦＡを測定した。
【００６０】
肝臓トリグリセリド：肝臓脂質を、Folchら（Journal of Biological Chemistry, 1957, 497)およびPurushotham Aら(Journal of Lipid Research, 2007, 48, 444-452）に記載されている方法により抽出した。標準的市販キットを用いてＴＧを推定した。
肝臓組織病理：
肝臓試料を１０％ホルマリンで固定し、パラフィンの中に包埋した。長さ５μｍの切片を切断し、ヘマトキシリンおよびエオシン（ＨＥ）で着色した。分析系（株式会社ニコン、ＥＣＬＩＰＳＥ−Ｅ２００、日本）を用いて肝臓組織像を調べた（Ｃａｒｓｏｎ  ＦＬ．，１９９６）。
【００６１】
式（Ａ）の化合物を投与した動物は、体重および空腹時血糖の減少ならびに肝脂肪症を示した。これらの特徴に及ぼすこの化合物の効果は、メトホルミン、ビルダグリプチン（Ｖｉｌａｄａｇｌｉｐｔｉｎ）およびロシグリタゾンなど他の標準的化合物より良好である。
式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩を投与した疾患モデルは、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの主要な特徴に対して有意な影響を示した。具体的にマウスは、該当する、未処置の疾患対照と比較して、体重（図１、２、８、１６および２３）、グルコース（図５および９）、ＡＳＴ（図１７）、ＡＬＴ（図１０および１８）、ＴＮＦ−αレベル（図２８）の減少、ＨＯＭＡ−ＩＲ（図２２）の改善および肝臓組織病理（肝脂肪症）（図６、７、１２、１３、１９、２０、２１、２４、２５、３０、３１および３２）の改善を示した。式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩を投与した、異脂肪血症ハムスターは、ＴＧおよびＮＥＦＡにおける有意な減少（図１４、１５および２９）を示した。ブレオマイシン誘導線維症の場合、処置した式（Ａ）の化合物は、線維症の形成を有意に阻止した（図２６および２７）。式（Ａ）の化合物および式（Ｃ）の化合物の二ナトリウム塩を投与した、急性アルコール誘導高トリグリセリド血症のマウスは、ＴＧの有意な減少を示した（図３３）。これら特徴に及ぼすこの化合物の効果は、メトホルミン、ビルダグリプチンおよびロシグリタゾンなど他の標準的化合物より良好であった。
【００６２】
総合すれば、式（Ａ）の化合物は、肥満、インスリン抵抗性、異脂肪血症および線維症などの他の主要な特徴に及ぼす効果に加えて、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの特徴である肝脂肪症に対して顕著な効果を示した。この化合物は、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置に対して興味深い療法となり得る。
【００６３】
データ解析：
値は、平均±ＳＥとして表現されている。グラフは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）（バージョン４）を用いて作成した。ｔ−試験またはＤｕｎｎｅｔｔ事後テストを用いた一元配置分散分析法またはＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後テストを用いた二元配置分散分析法を用いて統計分析を行った。結果は、Ｐ＜０．０５の場合有意であるとみなされた。
式（Ａ）の化合物はまた、ＴＮＦ−αなどの炎症誘発性サイトカインに対して有意な効果を有し、したがって乾癬などの疾患の処置に有用である。
【００６４】
実験１３：３Ｔ３−Ｌ１マウス線維芽細胞における脂質生成に及ぼす式（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の効果
１０％ウシ胎児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有する、総量１ｍＬのダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ培地）内において、２４ウェル組織培養物プレートに１０，０００細胞／ウェルの濃度で３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞を播種した。ＣＯ2インキュベーター内で、３７℃で一晩インキュベーション後、ビヒクル（０．０１％ＤＭＳＯ）、ロシグリタゾン（１μＭ、１０μＭ）および異なる濃度の式（Ａ）の化合物（１μＭ、１０μＭ）、式（Ｂ）の化合物（１μＭ、１０μＭ）および式（Ｃ）の化合物（１μＭ、１０μＭ）を細胞に投与することによって、脂質生成の特性について試験した。２日の期間が終了するごとに、培地内容物を新鮮な培地および薬物に置き換えた。この工程を７日間行った。処置から７日後、細胞を１０％ホルマリン中に４０℃で１時間固定し、オイルレッドＯ溶液で１０分間着色し、１Ｘ  ＰＢＳで６回洗浄することによって、過剰の染色を取り除いた。プレートを乾燥させ、ニコンＥ２００顕微鏡を用いて、４０×対物レンズ下で視覚化し、ニコンＤＸＭ  １２００Ｃデジタルカメラで撮像した。画像を図３４に提示する。
ロシグリタゾンを１μＭまたは１０μＭで投与した細胞中に観察された赤色の顔料は、オイルレッドＯで着色した細胞内の脂質であり、脂質生成を示している（図３４、ロシグリタゾン１μＭおよび１０μＭ）。ロシグリタゾンとは異なり、１μＭまたは１０μＭの式（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の化合物は、処置から７日後、３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞における脂質生成を誘導しなかった（図３４，式（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の化合物とロシグリタゾンとを比較）。したがって、データは、式（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の化合物は、３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞における脂質生成を誘導しないことを示している。
【００６５】
実験１４：活性化肝星状細胞（ＨＳＣ）におけるコラーゲン１型分泌に及ぼす式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物の効果
ＨＳＣ細胞に薬物を投与し、一晩インキュベートした。馴化培地を取り出し、ＴＣＡ−アセトン法を用いて分泌されたタンパク質を抽出した。細胞をウエスタンブロット分析用に採取し、１％のＳＤＳを試料に添加した。ポリクローナル抗体とコラーゲン１型（Ａｂｃａｍ；ＡＢ２９２）の１：５００希釈物およびヤギ抗−ウサギＩｇＧ西洋わさびペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ  ＧＥＮＥＩ）の１：１０００希釈物を用いてタンパク質を検出した。基質ＴＭＢ／Ｈ2Ｏ2を用いてブロットを育てた。β−アクチンハウスキーピング遺伝子発現レベルを用いて、添加の制御を実施した。
【００６６】
活性化肝星状細胞によるコラーゲン分泌は、式（Ｂ）および（Ｃ）の化合物での処置により著しく低減した。
本発明の化合物は、活性化肝星状細胞におけるコラーゲン１型の阻害を示した（図３５ａおよび３５ｂ）。この効果は、同じ濃度での試験化合物ペントキシフィリンに匹敵するものであった。したがって本化合物は、抗線維性の特性を有し、病態がコラーゲン遺伝子発現のモジュレーションを含む、肝線維症および他の線維性疾患（例：肺線維症、腎臓線維症、心臓線維症、強皮症など）の処置に有用である。
【００６７】
実験１５：肝星状細胞（ＬＸ２）におけるアポトーシスの誘導
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）は、異なる実験系においてアポトーシスを測定するために広く使用されてきた（Eur. J. Pharmacol., 2003, 473, 117-125; Br. J. Pharmacol., 2009, 158, 1720-1734）。ＬＸ２細胞にビヒクル（ＤＭＳＯ）、スタウロスポリン（０．１ｎＭ）、式（Ｂ）の化合物（２μＭ）、式（Ｃ）の化合物（２μＭ）を８時間投与し、続いてヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を１０分間投与した。次に、細胞をＰＢＳで２回洗浄することによって、未結合のＰＩを取り除き、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７１顕微鏡に適応させたＤＰ７１カメラで蛍光画像を取得した。アポトーシス細胞をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色で検出し、フィールドごとのアポトーシス細胞の％を推定した。ＰＩ陽性細胞の数および細胞総数を画像からカウントし、フィールドごとのアポトーシス細胞のパーセンテージとしてプロットした。
【００６８】
未処置の対照またはビヒクル対照と比較して、化合物はＬＸ２細胞における有意なアポトーシス誘導を示している。データは、化合物（Ｂ）および化合物（Ｃ）で処置下のＨＳＣのアポトーシスの増加を示した（ビヒクル（ＤＭＳＯ）と比較（Ｐ＜０．０１））。２μＭの化合物（Ｂ）での処置について、６±０．４０％の細胞がアポトーシスであることが判明した。これに対して、化合物（Ｃ）での処置については、７．５±０．６４％のＬＸ２細胞がアポトーシスであった。これらの値は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）を投与した細胞において誘導されたアポトーシスよりも有意に高かった。この実験において、公知の強力なアポトーシスインデューサーであるスタウロスポリン（ｓｔａｕ）は、ＬＸ２細胞において約２３％アポトーシスを示した。したがって、この実験からのデータは、式（Ｂ）の化合物および式（Ｃ）の化合物は、ＨＳＣにおいてアポトーシスを誘導することを示している。結果を図３６に提供する。
【００６９】
実験１６：肝星状細胞（ＬＸ２）における選択的アポトーシス誘導。
採用された方法は、上記実験７と同じである。結果を図３７に示す。
アポトーシス細胞を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色で検出し、フィールドごとのアポトーシス細胞の％を推定した。データは、化合物（Ｂ）および化合物（Ｃ）で処置下の肝星状細胞（ＬＸ２）のアポトーシスの有意な増加を示した。しかし、式（Ｂ）または（Ｃ）の化合物で処置下の、ヒト内皮細胞（ＥＣＶ３０４）、皮膚生検から単離したヒト線維芽細胞、またはヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）については、有意なアポトーシスが観察されなかった（ビヒクル（ＤＭＳＯ）と比較（Ｐ＜０．０１））。
未処置の対照またはビヒクル対照と比較して、化合物は、肝星状細胞における有意なアポトーシス誘導を示している。しかし、式（Ｂ）または（Ｃ）の化合物のいずれかを投与した肝細胞、皮膚生検から単離したヒト線維芽細胞、および上皮細胞は、ビヒクル対照（ＤＭＳＯ）と比較して有意なアポトーシスを示さなかった。したがって、この実験からのデータは、式（Ｂ）および（Ｃ）の両化合物のアポトーシス作用は、ＨＳＣに選択的であることを示している。
肝臓における肝星状細胞アポトーシスの選択的誘導は、肝疾患の回復、特に肝線維症の回復を促進または増強することができる。したがって、本化合物は、肝臓内の肝星状細胞アポトーシスを選択的に誘導することによって肝疾患を処置するための方法を提供する。
【００７０】
２．糖尿病合併症
アルドースレダクターゼ：ラットの水晶体アルドースレダクターゼを使用する。試験化合物および／またはビヒクルを、３０００μｇ／ｍｌ酵素（J. Enzyme Inhib. 1993, 7, 249-256; Biol. Pharm. Bull. 1994, 17, 458-459）および０．２ｍＭ  ＮＡＤＰＨと共にリン酸塩緩衝液ｐＨ６．２中で、２５℃で１５分間プレインキュベートする。１０ｍＭ  ＤＬ−グリセルアルデヒドの添加により反応を開始させ、もう２０分間インキュベートする。ＮＡＤＰＨの残留量の測定を分光光度法で読む。化合物を１０μＭでスクリーニングする。酵素活性はロットによって異なることがあるので、使用する濃度を必要に応じて調整する。標準的対照化合物は、Ｑｕｅｒｃｉｔｉｎであり、これを各実験においていくつかの濃度で試験することによって、競合曲線を得る。この競合曲線からそのＩＣ50を計算する（表２）。
【００７１】
【表２】
0005957452.tif 000012
【００７２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験で得た結果に基づき、化合物Ａ、ＢおよびＣは、アルドースレダクターゼの中程度に強力な阻害剤であると結論づけることができる。ＩＣ50値は、Ｓｏｒｂｉｎｉｌ（２μＭ）に匹敵し、これは、アルドースレダクターゼの阻害に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の可能性および糖尿病合併症の処置の可能性を示唆するものである（Biochemical Pharmacology, 1986, 35, 2955-2959）。
【００７３】
ｉＮＯＳの阻害：
式（Ａ）の化合物またはロシグリタゾンを最初に１時間インキュベートし、次いでＬＰＳ、１μｇ／ｍＬを６時間投与した。アッセイの終わりに、細胞可溶化液を抗ｉＮＯＳ抗体と共に精査した。
式（Ａ）の化合物は、これら細胞内でのｉＮＯＳ生成を阻害する（図３８）。この結果に基づき、式（Ａ）の化合物は、等しい濃度（３０μＭ）でのロシグリタゾンよりも優れた活性を有する強力なｉＮＯＳ阻害剤であることが結論づけられる。ｉＮＯＳは、糖尿病合併症の病態に関わっているので、式（Ａ）の化合物は、ｉＮＯＳの上昇が原因の新血管新生の発生における保護作用を有することが予測される。
ｉｎ  ｖｉｖｏでの、ＬＰＳ誘導ＴＮＦ−αの阻害およびＩＬ−６の阻害
この実験は、マウスが週齢１０〜１１週の時に行われた。０日目にマウスの体重を測定し、グループの平均体重が同じになるように、それぞれ６匹ずつのマウスを２つのグループに割り振った。マウスには、ビヒクル（脱イオン水、グループ１）または式（Ａ）の化合物（５０ｍｇ／ｋｇ；グループ２）のいずれかを、毎日９：３０〜１０：３０ＡＭの間に、１０日間の間経口投与した。実験３、７および１０日目に、ビヒクルまたは薬物投与前に体重を測定した。１０日目に、マウスにＬＰＳ、４００μｇ／ｋｇをＩＰ投与した。１時間後、マウスに、ビヒクルまたは式（Ａ）の化合物のいずれかを経口投与した。さらに９０分間後、マウスを二酸化炭素による窒息で安楽死させた。心臓穿刺により血液を採取し、処理して血清を得た。ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６サイトカインのｅｘ  ｖｉｖｏ分析用に血清を−８０℃で保存した。
【００７４】
血清のＴＮＦ−αイムノアッセイ：
マウスのＴＮＦ−αイムノアッセイキットであるＱｕａｎｔｉｋｉｎｅを用いて、各群のマウスの血清ＴＮＦ−α濃度を求めた。アッセイについては、製造者の指示書に従った。ビヒクルおよび式（Ａ）の化合物を投与したマウスの両グループからの血清試料を、Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ希釈液中で１：２０に希釈した。マイクロプレートリーダーを用いて、各ウェルの光学密度を４５０ｎｍで読んだ（図３９）。
【００７５】
血清のＩＬ−６イムノアッセイ：
マウスＩＬ−６イムノアッセイキットであるＱｕａｎｔｉｋｉｎｅを用いて、各群のマウスの血清ＩＬ−６濃度を求めた。アッセイについては、製造者の指示書も従った。ビヒクル投与したマウスのグループからの血清試料をＣａｌｉｂｒａｔｏｒ希釈液中で１：２００に希釈した。処置グループのマウスからの血清試料をＣａｌｉｂｒａｔｏｒ希釈液中で１：１００に希釈した。各ウェルの光学密度を、４５０ｎｍ、マイクロプレートリーダーで読んだ（図４０）。
【００７６】
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導Ｉ型糖尿病のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおけるレンズ核変性の改善：
ＳＴＺをＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに注射することによって動物モデルを育て、１０週間維持して糖尿病合併症を発症させた。はじめに動物は高血糖性となり、慢性的に糖尿病および糖尿病合併症のいくつかの特徴を発症した。これは、ヒト糖尿病および合併症をシミュレートしている。これらの特徴を、以下に述べる通り処置した。週齢６〜８週、体重１５０〜１９０ｇの範囲の間の４０匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットをこの実験に使用した。動物を２つのグループに分けた。第１のグループ（ｎ＝１０）には、通常の生理食塩水を注射し、正常対照とし、第２のグループ（ｎ＝３０）にはＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）、（Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ）を投与した。毎週、体重を記録し、血糖計（Ｃｏｎｔｏｕｒ  ＴＳ、Ｂａｙｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ．）を用いて毎月血糖を記録した。白内障の変化について毎週眼を検査した。糖尿病誘導から１０週間後、血糖値レベルおよび白内障の重症度に基づき動物をグループ分けした。第１のグループは、正常対照（ｎ＝１０）とした。白内障を有する糖尿病の動物を２つのグループに分け、第２のグループを疾患対照（ｎ＝９）とし、第３のグループには、式（Ａ）の化合物（ｎ＝１０）を１００ｍｇ／ｋｇの用量で２カ間投与した。実験の最終日、動物を１２時間絶食させ、翌日血液を採取し、血漿を分離し、生化学的分析に使用した。次いで動物を屠殺した。両眼を採取し、組織病理検査に使用した。
式（Ａ）の化合物の経口投与は、糖尿病合併症の主要特徴のそれぞれに影響を与えた。具体的には、マウスは、ＴＮＦ−αの減少（図３９）およびＩＬ−６の減少（図４０）を示した。式（Ａ）の化合物を投与したラットは、レンズ核変性の有意な改善を示した（図４１）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏの場合、式（Ａ）の化合物は、アルドースレダクターゼ活性およびｉＮＯＳ生成の減少を示した（図３８）。
データ解析：
値は、平均±ＳＥとして表現されている。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）（バージョン３）を用いてグラフを作成した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）を用いて、Ｗｅｌｃｈ補正による、対応のない両側検定およびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後テストを用いた二元配置分散分析法により統計分析を行った。ｐ＜０．０５の場合、結果は有意であるとみなされた。
【００７７】
３．マトリックスメタロプロテイナーゼ−２（ＭＭＰ−２）阻害活性（１０μＭ）
ＭＭＰ−２酵素は、肺転移に関わり、この阻害は、肺転移を阻止または処置するのに有用である（Journal of Ethnopharmacology 2011, 133, 426-433)。本発明の化合物は、ＭＭＰ−２活性を阻害することが知られており、したがって肺転移を阻止または処置するのに有用である（表３）。
【表３】
0005957452.tif 000013
【図１】
0005957452.tif 000016
【図２】
0005957452.tif 000017
【図８】
0005957452.tif 000018
【図１６】
0005957452.tif 000019
【図２３】
0005957452.tif 000020
【図３６】
0005957452.tif 000021
【図３７】
0005957452.tif 000022
【図４１】
0005957452.tif 000023
【図３】
0005957452.tif 000024
【図４】
0005957452.tif 000025
【図５】
0005957452.tif 000026
【図６】
0005957452.tif 000027
【図７】
0005957452.tif 000028
【図９】
0005957452.tif 000029
【図１０】
0005957452.tif 000030
【図１１】
0005957452.tif 000031
【図１２】
0005957452.tif 000032
【図１３】
0005957452.tif 000033
【図１４】
0005957452.tif 000034
【図１５】
0005957452.tif 000035
【図１７】
0005957452.tif 000036
【図１８】
0005957452.tif 000037
【図１９】
0005957452.tif 000038
【図２０】
0005957452.tif 000039
【図２１】
0005957452.tif 000040
【図２２】
0005957452.tif 000041
【図２４】
0005957452.tif 000042
【図２５】
0005957452.tif 000043
【図２６】
0005957452.tif 000044
【図２７】
0005957452.tif 000045
【図２８】
0005957452.tif 000046
【図２９】
0005957452.tif 000047
【図３０】
0005957452.tif 000048
【図３１】
0005957452.tif 000049
【図３２】
0005957452.tif 000050
【図３３】
0005957452.tif 000051
【図３４】
0005957452.tif 000052
【図３５】
0005957452.tif 000053
【図３８】
0005957452.tif 000054
【図３９】
0005957452.tif 000055
【図４０】
0005957452.tif 000056