(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、抗肥満用組成物。
【請求項２】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、糖尿病の治療又は予防用組成物。
【請求項３】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、脂質異常症の治療又は予防用組成物。
【請求項４】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、高血圧の治療又は予防用組成物。
【請求項５】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、動脈硬化の治療又は予防用組成物。
【請求項６】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、狭心症の治療又は予防用組成物。
【請求項７】
初摘緑茶抽出物を有効成分として含み、
前記初摘緑茶抽出物において、該初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として、ＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が７重量％〜２０重量％であり、カフェインの含量が２．５重量％〜４．５重量％であり、総アミノ酸含量が４．５重量％〜１０重量％であり、
前記初摘緑茶抽出物は、熱水抽出物であり、
前記アミノ酸には、前記初摘緑茶抽出物全体の乾燥重量を基準として２重量％〜５重量％のテアニンが含まれている、心筋梗塞の治療又は予防用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、緑茶抽出物を有効成分として含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
生活様式の変化及び食生活の欧米化により、肥満とともに、脂質異常症（高脂血症）、高血圧、動脈硬化といった体内への脂質蓄積からくる現代人の生活習慣病（成人病）の問題は深刻であり、肥満は、主に高脂肪、高蛋白食品の過食に起因する場合が非常に多い。特に、体重過多は節制された食餌療法が要求されるが、それを実生活において実践するには、多くの困難があることも事実である。また、体重が若干減少したとしても、リバウンド現象等により再び体重が増加する危険性が高い。したがって、体重の維持ないし減量のためには、長い時間をかけての地道な努力と注意が必要である。
【０００３】
体重調節のためには、適切な薬物治療と健康的な運動を通じて体重を落とし、病気を治療する抗肥満療法が必要である。抗肥満療法は、肥大した人やスタイルを整えたいと願う女性らの美容のための体重減量又は体重減量のための食事療法や食事調節をいう。しかしながら、多くの人々が、短時間での体重減量効果を得るために、身体の特定部位の脂肪を吸引する外科的治療を受けたり、漢方薬又は西洋薬を服用したりすることにより副作用が起こるケースもしばしば見られる。
【０００４】
肥満患者の大部分は、原因発生後の治療を中心とするため、すでに肥満症による合併症が誘発された以降である場合が多い。また、症状に応じた治療効果も、老若男女又は個々人によって差があるため、今日の現代人にとっては、予防と治療を兼ねた抗肥満剤の開発がより一層切実である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−０４０７０３７号公報
【特許文献２】韓国特許公開第１０−２００７−０１０３３２４号公報
【特許文献３】韓国特許公開第１０−２００８−００９０８０５号公報
【特許文献４】韓国登録特許第１０−０８２６８６３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の一実施例の目的は、初摘緑茶抽出物を含む組成物を提供することである。
【０００７】
本発明の他の一実施例の目的は、総カテキン含量が２０重量％〜４０重量％である緑茶抽出物を含む組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一実施例に係る組成物は、初摘緑茶抽出物を有効成分として含む。また、他の一実施例において、本発明に係る組成物は、総カテキン含量が２０重量％〜４０重量％である緑茶抽出物を有効成分として含む。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る緑茶抽出物を有効成分として含有する組成物は、肥満等の治療又は予防に効果的である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、茶カテキン、熱水抽出、酒精抽出過程を示す流れ図である。
【図２】図２は、脂肪細胞に対する緑茶抽出物の濃度別脂肪分解能を測定した結果を示したグラフである。
【図３】図３は、緑茶抽出物投与時における、体重変化の過程を示したグラフである。
【図４】図４は、緑茶抽出物投与時における、体重変化の結果を算出したグラフである。
【図５】図５は、緑茶抽出物投与時における、平均体重に対する副睾丸脂肪重量に換算した結果を示したグラフである。
【図６】図６は、緑茶抽出物の臓器及び組織に対する毒性試験結果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に係る組成物は、緑茶抽出物を有効成分として含むことを特徴とする。前記緑茶抽出物を抽出する方法は、特に制限されるものではないが、一実施例において、熱水抽出物又はＣ１〜Ｃ５の低級アルコール抽出物とすることができ、たとえば、熱水抽出物又はエタノール抽出物とすることができ、具体的に、初摘緑茶に対する熱水抽出物とすることができる。たとえば、熱水抽出による初摘緑茶抽出物は、図１による過程を経て抽出することができる。具体的には、緑茶葉投入、熱水抽出、濾過、減圧濃縮及び噴霧乾燥の工程を経て製品化することになる。
【００１２】
一実施例において、本発明に係る組成物は、初摘緑茶抽出物を有効成分として含むことができる。初摘緑茶は味が甘く、渋味や苦味が少ない特徴を有している。これは、同じ時期に採葉されて茶に使用される緑茶葉の標準工程による場合、一般緑茶に比べて、アミノ酸成分が高いためであり、このときのアミノ酸がまさにテアニン（Ｔｈｅａｎｉｎｅ）である。特に、「うまみ」と言われる味の主成分であるテアニンの含量は、人為的にテアニンの含量を高めていない緑茶に比べて約２倍高いということが確認された。この他にも、初摘緑茶の抽出物は、カテキン成分のうち最も核心的なＥＧＣＧ（Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ）の含量が一般緑茶の抽出物に比べて著しく多いものと示されている。
【００１３】
本発明に係る初摘緑茶抽出物は、肥満と関連性の高い成分であるカテキン、カフェイン及びテアニン等の成分が高い含量比で存在するという特徴がある。これらの成分は、人為的な方式ではなく自然のままの状態で存在するため、互いに干渉を引き起こすことなく、卓越した香りとともに、肥満の治療及び予防に優れた効果を発揮する。
【００１４】
本明細書において、「初摘緑茶」とは、初摘茶、春茶又は一番茶等とも呼ばれる緑茶であり、１年のうち一番初めに採葉した緑茶を意味する。韓国では、通常４月から５月の間に初摘緑茶を採葉することになる。一般的に、初摘緑茶は、それ自体が有する特性を最大限生かすために手摘みによる採葉を行うため、毎年収穫される量は非常に少ないだけでなく、その価格もまた非常に高価であるという特徴がある。本発明においては、初摘緑茶に対する相対的な概念として、「一般緑茶」という用語を用いる。一般緑茶とは、初摘緑茶を採葉した後の二、三、四番茶又はそれ以降に採葉した緑茶であり、時期的には、５月以降から秋までに採葉した緑茶のことを意味する。
【００１５】
本発明はまた、緑茶抽出物を有効成分として含有する組成物であって、総カテキン成分が、抽出物全体の重量を基準に、２０重量％〜４０重量％、具体的には、２５重量％〜３５重量％であることを特徴とする組成物を提供する。カテキン成分としては、ＥＧＣ（エピガロカテキン）、ＥＣ（エピカテキン）、ＥＧＣＧ（エピガロカテキンガレート）、ＥＣＧ（エピカテキンガレート）等が含まれる。一実施例において、前記総カテキン成分の含量を満たす緑茶抽出物は、上で説明した初摘緑茶抽出物とすることができる。
【００１６】
人体に及ぼす各種生活習慣病のうち肥満に関連する部分について見てみると、血管内壁に溜まった強い毒性の酸化された低比重リポタンパク質（Ｏｘｉｄ  ＬＤＬ）の生成は、血管内にコレステロール及びコレステリルエステル（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ  ｅｓｔｅｒ）の状態で蓄積され、泡沫細胞（  ｆｏａｍ  ｃｅｌｌ）の形成を通じて動脈硬化の原因の一つとして知られている。茶のカテキン成分は、こうした動脈硬化の原因となるＬＤＬ（Ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｉｄ）の酸化（ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）に対する強力な抑制効果を有する。したがって、本発明に係る緑茶抽出物又は初摘緑茶抽出物を含む組成物は、動脈硬化の治療又は予防用組成物とすることができる。
【００１７】
また、カテキン成分は、血漿及び肝臓のコレステロールを減少させる一方、コレステロールの再吸収抑制作用等が明らかとされており、体内のコレステロール低下や肥満細胞のヒスタミン遊離抑制活性等による抗肥満効果も知られている。したがって、本発明に係る緑茶抽出物又は初摘緑茶抽出物を含む組成物は、抗肥満用組成物とすることができる。
【００１８】
特に、体脂肪増加抑制に対するカテキンの効果は、小腸の消化酵素の作用を妨害して、過剰供給された栄養素の吸収抑制や糞便を通じた排泄作用を助け、体脂肪の蓄積を抑制させることになる。こうした作用は、カテキン成分が血中インスリン濃度を低下させて血液中の血糖値を低くし、体脂肪を抑制させるためである。したがって、本発明に係る緑茶抽出物又は初摘緑茶抽出物を含む組成物は、糖尿病、脂質異常症及び高血圧の治療ないし予防用組成物とすることができる。
【００１９】
カテキン成分のまた別の長所は、優れた解毒作用であり、体内に蓄積された薬剤過用と毒性に起因する害を無力化させる作用が優れている。また、茶等の形態で長期間にわたって飲用した場合にも、副作用がないものと知られている。こうした薬理作用は、化学構造上、カテキンが水酸基（−ＯＨ）を多く含有しており、それによって他の物質と容易に結合してその物質の性質を変化させ、抑制させるためである。
【００２０】
本発明において使用された緑茶抽出物の総カテキン含量は、一般的な従来の緑茶抽出物と比較した場合、相対的に高いと言える。特に、カテキン成分のうち最も核心的な要素といえるＥＧＣＧの含量が、一般の緑茶抽出物に比べ、多くて二倍近く高いものと確認された。一実施例において、本発明に係る緑茶抽出物は、ＥＧＣＧの含量が、抽出物全体の重量を基準に、７重量％〜２０重量％、具体的には、１０重量％〜１５重量％である。
【００２１】
また、他の一実施例において、本発明に係る緑茶抽出物は、カフェインの含量が、抽出物全体の重量を基準に、２．５重量％〜４．５重量％である。これは、脂肪分解に優れた効果を示すカフェインの含量が、一般的な従来の緑茶抽出物に比べて約１．５倍程度高いものである。
【００２２】
緑茶中のアルカロイド成分であるメチルキサンチン（ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎ）誘導体のうち、血管拡張剤及び神経作用剤としても使用されるカフェインの活性作用は、カテキンの抑制作用とテアニン成分の選択的調節作用を受けて、中枢神経系が拡張されるが、続いて抑制作用が現れつつ、速効性の生理作用を引き起こすことになる。このようなカフェインの特徴は、興奮、強心、利尿、解熱、収斂等の多様な薬理学的作用を示すことになる。特にポリフェノール成分とともに人体内にコレステロール含量が多くなることを防止することにより、狭心症、心筋梗塞等を治療又は予防する役割をする。したがって、本発明に係る緑茶抽出物又は初摘緑茶抽出物を含む組成物は、狭心症ないし心筋梗塞の治療又は予防用組成物とすることもできる。
【００２３】
本発明の一実施例に係る緑茶抽出物は、抽出物全体の重量を基準に、４．５重量％〜１０重量％の総アミノ酸をさらに含むことができる。特に、緑茶アミノ酸の半分以上を占めるテアニンは、他の植物体においてはほとんど発見されない緑茶特有の成分である。テアニン成分は、緑茶の味と効能を決定づける重要な成分であり、多様な生理活性効能を有するという報告がされている。たとえば、テアニン成分は、カフェインの興奮作用抑制、緊張緩和、抗ストレス及び免疫促進作用等の効能があることが明らかにされる中、多様な分野において注目されている物質である。一実施例において、本発明に係る緑茶抽出物は、組成物全体の重量を基準に、２重量％〜５重量％、具体的には、２．５重量％〜３．５重量％のテアニンを含有する。
【００２４】
本発明においては、４月〜５月に採葉した済州産初摘緑茶を対象に、熱水抽出した抽出物を利用して実験を実施した。初摘緑茶熱水抽出物を培養された脂肪細胞に濃度依存的に処理をし、培地に露出されたグリセロール（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ）と遊離脂肪酸（Ｆｒｅｅ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄ）の増加量を測定することにより、脂肪分解効果を確認した。その結果、対照群として使用された茶カテキン（含量７０％）よりも、初摘緑茶熱水抽出物が脂肪分解効果に優れるという有意な結果を確保した。
【００２５】
また、マウスを通じた食餌実験を実施した。具体的には、一般飼料を与えた群と高脂肪食を与えた群、高脂肪食と茶カテキンを与えた群、高脂肪食と初摘緑茶熱水抽出物を茶カテキン１／２量で与えた群、高脂肪食と初摘緑茶熱水抽出物を茶カテキンと同量与えた群、最後に、高脂肪食と茶カテキン２倍量の初摘緑茶熱水抽出物を与えた群に分けて、８週間の実験を行った。実験結果を分析してみると、高脂肪食とともに茶カテキンを摂取した群は、特別な減量効果がなかったが、高脂肪食とともに初摘緑茶熱水抽出物を茶カテキンの摂取量と同量で摂取した群及び２倍量摂取した群は、体重が有意に減少した。したがって、本発明に係る初摘緑茶抽出物は、減量に効果的であるという結果を確認した。
【００２６】
一実施例において、本発明に係る緑茶抽出物を含む食品添加剤及び機能性食品等を提供する。
【００２７】
本発明は、前記緑茶抽出物を含む、多様な形態の食品添加剤又は機能性食品を提供する。前記抽出物を含む発酵乳、チーズ、ヨーグルト、ジュース、生菌製剤及び健康補助食品等に加工することができ、その他多様な食品添加剤の形態で使用することができる。
【００２８】
一実施例において、前記緑茶抽出物は、本発明が目的とする主効果を損なわない範囲内において、主効果に相乗効果を与え得る他の成分等を含有することができる。たとえば、物性改善のために、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤、増粘剤、無機塩類、乳化剤及び合成高分子物質等の添加剤をさらに含むことができる。その他にも、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖及び海藻エキス等の補助成分をさらに含むこともできる。前記成分は、剤型又は使用目的に応じて、当業者が困難なく適宜選定して配合することができ、その添加量は、本発明の目的及び効果を損なわない範囲内において選択することができる。たとえば、前記成分の添加量は、組成物全体の重量を基準として、０．０１重量％〜５重量％、より具体的には、０．０１重量％〜３重量％の範囲とすることができる。
【００２９】
本発明に係る抽出物は、溶液、乳化物、粘性型混合物、タブレット、粉末等の多様な形態に剤型化することができ、これは、単純飲用、注射投与、スプレー方式又はスクイーズ方式等の多様な方法で投与することができる。
【００３０】
本発明はまた、前記緑茶抽出物を含む薬学組成物を提供する。本発明に係る抽出物を含む薬学組成物は、体重調節、血糖降下及び血中コレステロール降下の効能が認められる。
【００３１】
本発明に係る抽出物を医薬品に適用する場合には、前記抽出物を有効成分として使用される無機又は有機の担体を加えて、固体、半固体又は液状の形態で経口投与剤あるいは非経口投与剤に製剤化することができる。
【００３２】
前記経口投与のための製剤としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、乳濁剤、シロップ剤、ペレット剤等を挙げることができる。また、前記非経口投与のための製剤としては、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤等を挙げることができる。本発明の有効成分を製剤化するためには、常法に従って実施すれば容易に製剤化することができ、界面活性剤、賦形剤、着色料、香辛料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、その他常用される補助剤を適当に使用することができる。
【００３３】
本発明に係る前記薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下等に投与することができる。
【００３４】
また、前記活性成分の投与量は、治療を受ける対象者の年齢、性別、体重や、治療する特定の疾患又は病理状態、疾患又は病理状態の深刻度、投与経路及び処方者の判断によって変わるであろう。こうした因子に基づく投与量の決定は、当業者の水準内にある。一般的な投与量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜２０００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には、０．５ｍｇ／ｋｇ／日〜１５００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００３５】
（実施形態）
以下、本発明の好ましい実施例等を通じて本発明についてさらに詳述するが、以下の実施例等は、本発明の効果を例示的に確認するためのものであり、本発明のカテゴリがこれらにのみ限定されるものではない。
【００３６】
実施例１：緑茶抽出物の熱水抽出
実験に使用された初摘緑茶は、韓国産済州緑茶を使用した。初摘緑茶を、熱水抽出工程を経て分離・精製した。具体的な熱水抽出工程については、図１に示したとおりである。
【００３７】
図１において、右側のフローチャートは、一般的な茶カテキン抽出工程を示したもの、中央のフローチャートは、熱水抽出工程を示したもの、また、左側のフローチャートは、アルコール抽出工程を示したものである。
【００３８】
本実施例に係る抽出工程は、熱水抽出工程によるものであり、初摘緑茶葉重量比で５倍の溶媒（水）に投入する工程、５０℃〜８０℃、３０分〜１２時間以上で熱水抽出する工程、濾過工程、減圧濃縮工程、及び噴霧乾燥工程を経ることになる。
【００３９】
実験例１：試料の含量分析
実施例１による初摘緑茶抽出物に対する成分含量を確認する実験を行った。具体的には、第三者機関である「健康機能食品院」を通じて、カテキン、アミノ酸及びカフェインの含量を分析した。分析の結果については、下記表１、表２及び表３のとおりである。
【００４０】
【表１】
0006030447.tif 000002
【００４１】
【表２】
0006030447.tif 000003
【００４２】
【表３】
0006030447.tif 000004
【００４３】
前記表１、表２及び表３において示した数値は、抽出物１ｇに対する構成成分の含量を重量％で示したものである。
【００４４】
表１を参照すると、初摘緑茶抽出物は、総アミノ酸の含量が６．１９で、そのうちテアニンの含有量は２．９７と示された。これに対し、一般緑茶抽出物は、総アミノ酸の含量が４．２３で、そのうちテアニンの含量は１．８９と示された。また、総カテキン含量を比較すると、初摘緑茶抽出物は、総カテキンの含量は３０．８５で、そのうちＥＧＣＧの含量は１１．３６と示されたのに対し、一般緑茶抽出物は、総カテキンの含有量は２６．７７であり、そのうちＥＧＣＧの含量は６．３９と示された。また、カフェインの場合、初摘緑茶抽出物の含量が一般緑茶抽出物に比べて２５％程度高いものと示された。
【００４５】
したがって、本願発明の一実施例に係る初摘緑茶抽出物は、一般緑茶抽出物に比べ、総アミノ酸の含量が約１．５倍程度高く、特に、テアニンの含量は２倍近く高いものと示され、総カテキンの含量は、初摘緑茶抽出物が一般緑茶抽出物に比べて約１５％高く、特に、ＥＧＣＧの含有量は２倍程度高いものと示された。また、カフェインは、一般緑茶抽出物に比べ、初摘緑茶抽出物がより高いものと示された。
【００４６】
実験例２：分化した脂肪細胞への処理時における中性脂肪分解能
［ステップ１］脂肪細胞の培養と分化誘導  
マウスの未分化脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞（３Ｔ３−Ｌ１  ａｄｉｐｏｃｙｔｅ、ＡＴＣＣから購入）を、１０％胎児血清（ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ，Ｇｉｂｃｏ  ｃｏ．米国）をＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ，Ｌｏｎｚａ，１２−６０４Ｆ，米国）に添加した培地において培養した。２日に１回ずつ培地を交換しながら、８０％融合するまで、３７℃の１０％ＣＯ２培養器において培養した。その次に、１０％のウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ，Ｇｉｂｃｏ  ｃｏ．米国）、０．５ｍＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（３−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ，Ｓｉｇｍａ  ｃｏ．米国）、１μＭのデキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，Ｓｉｇｍａ  ｃｏ．米国）及び１６７ｎＭのインスリン（ｉｎｓｕｌｉｎ，Ｓｉｇｍａ  ｃｏ．米国）を含む培地において４８時間培養後、その培地を、１０％のウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）と１６７ｎＭのインスリンを含むＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。最後に、１０％のウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）のみを含む培地で４８時間さらに培養し、分化した脂肪細胞を得た。
【００４７】
［ステップ２］分化された脂肪細胞への薬物処置
完全分化を誘導した後、脂肪細胞から培養液を分離してＰＢＳで洗浄した後、２％の遊離脂肪酸ウシ血清アルブミン（Ｆｒｅｅ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ，Ｓｉｇｍａ  ｃｏ．米国）を低濃度のグルコースＤＭＥＭ（Ｗｉｔｈ  １０００ｍｇ／Ｌ  Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ，Ｗｉｔｈｏｕｔ  Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ，Ｗｉｔｈｏｕｔ  ｐｈｅｎｏｌ−ｒｅｄ，ＬＭ００１−０４，Ｗｅｌｇｅｎｅ，韓国）に添加した培地に交換し、２４時間、１０％ＣＯ２培養器で培養した。低濃度グルコースＤＭＥＭ培地に、陽性対照群には茶カテキン製品（７０％，ＰＦＩ  ｃｏ．Ｊａｐａｎ）を、陰性対照群には一般緑茶熱水抽出物（ＢＴＣ，韓国）を、実験群には済州産緑茶から採った初摘緑茶熱水抽出物（Ｂｉｏｌａｎｄ，韓国）を、それぞれ５０ｐｐｍ，１００ｐｐｍ，２００ｐｐｍで処理し、３７℃の１０％ＣＯ２培養器で培養した。
【００４８】
［ステップ３］完全分化された脂肪細胞への薬物処理後の脂肪分解能測定
前記ステップ２で培養された細胞の培地をそれぞれ回収し、マイクロプレート（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ）にそれぞれ５０μｌずつ分注した後、遊離脂肪酸測定キット（Ｒｏｃｈｅ，Ｃａｔ♯．１−３８３−１７５，Ｇｅｒｍａｎｙ）の反応混合物Ａを、サンプルと同量の５０μｌずつを各セクションに分注し、２５℃で１０分間反応させた後、Ｎ−エチル−マレイミド溶液（Ｎ−ｅｔｈｙｌ−ｍａｌｅｉｎｉｍｉｄｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）５μｌを各セクションに分注し、初期吸光度５４６ｎｍで測定した。反応混合物Ｂを各セクションに５μｌずつ分注し、よく混ぜて与えた。その次に、２５℃で１５分間反応させた後、最終吸光度を測定した。ブランク（Ｂｌａｎｋ）の吸光度を基準に最終値から初期値を差し引いた数を、各サンプルの差の値から除いた数値を最終遊離酸の濃度と決定した。結果は、図２に示した。
【００４９】
図２を参照すると、５０ｐｐｍの濃度において、茶カテキン（Ｔｅａ  Ｃａｔｅｃｈｉｎ）は、対照群（Ｍｅｄｉａ）と比較したとき、脂肪の分解能が確認されなかった。それに比べ、一般緑茶熱水抽出物と初摘緑茶熱水抽出物においては、いずれも脂肪酸分解能を確認することができた。また、１００ｐｐｍの濃度においては、初摘緑茶熱水抽出物のみ脂肪分解能があることを確認した。ただし、２００ｐｐｍの濃度においては、３つの群（茶カテキン、一般緑茶、初摘緑茶）すべて、対照群（Ｍｅｄｉａ）に比べて特別な効能を見せなかった。
【００５０】
実験例３：ＤＩＯ（Ｄｉｅｔ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ）モデルにおける血清化学検査
［ステップ１］試料の準備
動物実験に、対照的として使用された茶カテキン（７０％，Ｐｈａｒｍａｆｏｏｄ  Ｉｎｃ．日本）２００ｍｐｋは、毎日、経口投与前にＨＰＬＣグレードＨ２Ｏ（Ｓｉｇｍａ  ｃｏ．米国）に溶かして準備し、実験群に使用された初摘緑茶熱水抽出物（Ｂｉｏｌａｎｄ，  韓国）もまた、１００ｍｐｋ，２００ｍｐｋ，４００ｍｐｋの濃度で、経口投与前にＨＰＬＣグレードＨ２Ｏに溶かして準備した。
【００５１】
［ステップ２］実験群の設定、体重減量及び脂肪分解効果の検証
本実験を行うために、７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを対象に、１群当たり１０匹ずつ準備し、１週間の適応期間を持たせた後、個別に檻に分離して、１２時間の間隔で昼（７時〜１７時）と夜の周期により管理した。群は、１）一般飼料群（一般飼料）、２）高脂肪食餌群（対照群）、３）高脂肪食餌及び茶カテキン２００ｍｐｋ摂取群（茶カテキン）、４）高脂肪食餌及び初摘緑茶熱水抽出物１００ｍｐｋ摂取群（初摘緑茶１００ｍｐｋ）、５）高脂肪食餌及び初摘緑茶熱水抽出物２００ｍｐｋ摂取群（初摘緑茶２００ｍｐｋ）、６）高脂肪食餌及び初摘緑茶熱水抽出物４００ｍｐｋ摂取群（初摘緑茶４００ｍｐｋ）の合計６つの群に分けられ、１日１回ずつ、８週間、一定の時間（午前１０時）に経口投与し、対照群である高脂肪食餌群の１０匹には、同量の水を投与した。
【００５２】
体重は、毎週１回（午前１１時）測定を実施した。投与開始８週後に、実験群と対照群の最終体重を測定して分析した結果は、図３及び４に示した。
【００５３】
図３は、各個体群別に体重の変化の過程を示したものであり、図４は、体重の増加幅を示したものである。図３及び図４をともに参照すると、高脂肪食とともに茶カテキンが与えられた群（茶カテキン）の体重は、開始時の１９．２５±０．６９ｇから、８週後には３３．３３±２．７３ｇに増加し、対照群に比べて、特別な体重減量効果を統計的に確認することができなかった。これに比べ、初摘緑茶抽出物２００ｍｐｋを摂取した群（初摘緑茶２００ｍｐｋ）の体重は、開始時の１９．１２±０．７０ｇから、８週後には３１．５９±１．４６ｇに体重が増加し、また、初摘緑茶抽出物４００ｍｐｋを摂取した群（初摘緑茶４００ｍｐｋ）の体重は、開始時の１９．２４±０．６８ｇから、８週後には３０．５０±２．５０ｇに体重が増加したものと示された。したがって、本発明に係る初摘緑茶抽出物は、統計的に体重増加を抑制する効果があることを確認した。
【００５４】
また、各個体群の副睾丸脂肪の重量を８週目に剖検後、測定した結果、対照群は２．１０２±０．１７０ｇであったが、初摘緑茶抽出物２００ｍｐｋを摂取した群（初摘緑茶２００ｍｐｋ）の副睾丸の重量は１．８６２±０．０９９ｇと確認され、初摘緑茶抽出物４００ｍｐｋを摂取した群（初摘緑茶４００ｍｐｋ）の副睾丸脂肪重量は１．５４３±０．０６９ｇと確認された。これらの結果を平均体重に対する副睾丸重量に換算して計算した。計算の結果は、図５に示した。
【００５５】
図５を参照すると、初摘緑茶熱水抽出物４００ｍｐｋを高脂肪食餌とともに食餌した群（初摘緑茶４００ｍｐｋ）の場合には、副睾丸脂肪の重量が他の群に比べて統計的に有意に減少したことを確認した。これを通じ、本発明に係る初摘緑茶抽出物は、脂肪分解効果があることを知ることができる。
【００５６】
［ステップ３］実験群及び対照群の血清検査
長期毒性実験は、茶カテキン及び初摘緑茶熱水抽出物を多様な濃度で８週間投与して、肥満予防及び治療等の試験に利用されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを対象に実験した。
【００５７】
動物の各臓器（組織）に及ぼす影響を調査するために、茶カテキン及び初摘緑茶熱水抽出物を濃度別に処理した実験群と溶媒のみを投与した対照群の動物から８週後に血液を採取して、ＧＰＴ（ｇｌｕｔａｍａｔｅ−ｐｙｒｕｖａｔｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）及びＢＵＮ（Ｂｌｏｏｄ  Ｕｒｅａ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ）の血液中の濃度をセレクトＥ（Ｓｅｌｅｃｔ  Ｅ，Ｖｉｔａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＮＶ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄ）機器を利用して測定した。測定結果は、図６に示した。
【００５８】
図６を参照すると、ＨＤＬＣ（Ｈｉｇｈ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｉｄ  ｃｏｎｃ）とＬＤＬＣ（Ｌｏｗ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｉｄ  ｃｏｎｃ．）は、正常的に肥満が誘導されたかを確認する指標である。対照群、並びに茶カテキン、初摘緑茶（初摘緑茶１００ｍｐｋ、初摘緑茶２００ｍｐｋ及び初摘緑茶４００ｍｐｋ）を処理した実験群のいずれも、ＨＤＬＣとＬＤＬＣは類似な数値を示した。したがって、一般飼料を摂取した個体群（一般飼料）を除いた、高脂肪食餌を適用した個体群（対照群、茶カテキン、初摘緑茶１００ｍｐｋ、初摘緑茶２００ｍｐｋ及び初摘緑茶４００ｍｐｋ）のすべてにおいて、肥満が正常に誘導されたことを確認することができる。
【００５９】
また、ＧＰＴは、肝臓毒性を確認する指標であり、ＢＵＮは、腎臓毒性を確認する指標である。肝臓毒性と関連したＧＰＴ及び腎臓毒性と関連したＢＵＮは、対照群と比較して、実験群（茶カテキン、初摘緑茶１００ｍｐｋ、初摘緑茶２００ｍｐｋ及び初摘緑茶４００ｍｐｋ）は、特別な差を見せなかった。また、各動物から肝臓と腎臓を摘出し、通常的な組織切片の製作過程を経て、光学顕微鏡で組織学的観察を行ったところ、特異な異常が観察されなかった。したがって、本発明に係る初摘緑茶抽出物は、特別な毒性はないと見られる。
【００６０】
ＧＬＵＣ（ｇｌｕｃｏｓｅ、血糖）指標は、血糖と関連したもので、高い数値は糖尿病を示すこともある。また、ＴＧ（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、中性脂肪）は、コレステロールとともに動脈硬化を引き起こす血中脂肪成分である。また、ＣＨＯＬ（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、コレステロール）は、肥満、肝疾患及び糖尿病の診断を役立つ指標である。図６において、ＧＬＵＣ及びＣＨＯＬともに、初摘緑茶を処理した場合（初摘緑茶１００ｍｐｋ、初摘緑茶２００ｍｐｋ及び初摘緑茶４００ｍｐｋ）に、対照群に比べて濃度依存的に低い数値を示すものと確認された。したがって、本発明に係る組成物は、糖尿病及び肥満の治療及び予防に効果があるということが分かる。
【００６１】
ＴＧ（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、中性脂肪）は、コレステロールとともに動脈硬化を引き起こす血中脂肪成分である。図６においては、対照群に比べて初摘緑茶を投与した実験群（初摘緑茶１００ｍｐｋ、初摘緑茶２００ｍｐｋ及び初摘緑茶４００ｍｐｋ）において、濃度依存的にＴＧ値が著しく低いものと示された。したがって、本発明に係る組成物は、ＣＨＯＬ及びＴＧの数値をいずれも下げる効果があり、これを通じ、脂質異常症、高血圧、動脈硬化、狭心症及び心筋梗塞の治療及び予防にも効果があるものと確認された。
【００６２】
本発明による初摘緑茶抽出物含有組成物は、下記のとおり、様々な剤型に応用可能であるが、これらに限定されるものではない。
【００６３】
［製剤例１］軟質カプセル剤
初摘緑茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、大豆油１８０ｍｇ、紅参抽出物５０ｍｇ、パーム油２ｍｇ、パーム硬化油８ｍｇ、蜜蝋４ｍｇ及びレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法により、１カプセル当たり４００ｍｇずつ充填して軟質カプセルを製造した。
【００６４】
［製剤例２］錠剤
初摘緑茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、ブドウ糖１００ｍｇ、紅参抽出物５０ｍｇ、澱粉９６ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム４ｍｇを混合し、３０％エタノールを４０ｍｇ添加して顆粒を形成した後、６０℃で乾燥し、打錠機を利用して錠剤で打錠した。
【００６５】
［製剤例３］顆粒剤
初摘緑茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、ブドウ糖１００ｍｇ、紅参抽出物５０ｍｇ及び澱粉６００ｍｇを混合し、３０％エタノールを１００ｍｇ添加して顆粒を形成した後、６０℃で乾燥し、顆粒を形成して包に充填した。内容物の最終的な重量は１ｇとした。
【００６６】
［製剤例４］ドリンク剤
初摘緑茶抽出物１００ｍｇ、大豆抽出物５０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、紅参抽出物５０ｍｇ、クエン酸２ｇ及び精製水１８７．８ｇを混合し、瓶に充填した。内容物の最終容量は２００ｍｌとした。
【００６７】
［製剤例５］健康食品の製造
初摘緑茶抽出物              １０００ｍｇ
ビタミン混合物
ビタミンＡアセテート        ７０μｇ
ビタミンＥ                  １．０ｍｇ
ビタミンＢ１                ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２                ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６                ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２              ０．２μｇ
ビタミンＣ                  １０ｍｇ
ビオチン                    １０μｇ
ニコチン酸アミド            １．７ｍｇ
葉酸                        ５０μｇ
パントテン酸カルシウム      ０．５ｍｇ
ミネラル混合物
硫酸第一鉄                  １．７５ｍｇ
酸化亜鉛                    ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム            ２５．３ｍｇ
第一リン酸カリウム          １５ｍｇ
第二リン酸カルシウム        ５５ｍｇ
クエン酸カリウム            ９０ｍｇ
炭酸カルシウム              １００ｍｇ
塩化マグネシウム            ２４．８ｍｇ
前記ビタミン及びミネラル混合物の組成比は、比較的健康食品に適した成分を好ましい実施例として混合組成したが、その配合比を任意に変形実施してもよく、通常の健康食品の製造方法により前記成分を混合した後に顆粒を製造し、通常の方法により健康食品組成物の製造に使用することができる。
【００６８】
［製剤例６］健康飲料の製造
初摘緑茶抽出物              １０００ｍｇ
クエン酸                    １０００ｍｇ
オリゴ糖                    １００ｇ
梅濃縮液                    ２ｇ
タウリン                    １ｇ
精製水を加えた全体          ９００ｍｌ
通常の健康飲料の製造方法により前記成分を混合した後、約１時間、８５℃で攪拌加熱した後、作られた溶液を濾過し、滅菌された２ｌ容器に取得して密封滅菌した後、冷蔵保管してから本発明の健康飲料組成物の製造に使用する。
【００６９】
前記組成比は、比較的嗜好飲料に適した成分を好ましい実施例として混合組成したが、需要階層や需要国、使用用途等、地域的、民族的嗜好度に応じて、その配合比を任意に変形実施してもよい。本発明が属する分野における通常の知識を有する者であれば、前記内容を基に、本発明の範疇内において多様な応用及び変形を行うことが可能であろう。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明に係る緑茶抽出物を有効成分として含有する組成物は、食品及び医薬分野等において多様に活用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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