(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経変性疾患の処置または予防のための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせ、ここでアロステリックｍＴＯＲ阻害剤が、ＲＡＤ００１であり、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５である、組み合わせ。
【請求項２】
−該ＲＡＤ００１が、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.３ 〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.０〜２.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、２.０〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、
神経変性疾患の処置または予防のための、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項３】
該ＲＡＤ００１が、０．０１〜１０．０ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＡＺＤ−８０５５が、０．０１〜１０．０ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、神経変性疾患の処置または予防のための、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項４】
該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運度神経疾患および末梢神経障害から選択される、神経変性疾患の処置または予防のための、請求項１〜３のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項５】
該ハンチントン疾患の処置または予防のための、請求項４記載の組み合わせ。
【請求項６】
神経変性疾患の同時の、別々の、または逐次的な処置または予防のためのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む、組み合わせ製品であって、該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤がＲＡＤ００１であり、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５である、組み合わせ製品。
【請求項７】
神経変性疾患の同時の、別々の、または逐次的な処置または予防のための、個別調製物または組み合わせ調製物のいずれかとして、１または複数回用量の９０〜１１０ mg ＲＡＤ００１および１６５〜１８５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５； ８０〜１２０ mg ＲＡＤ００１および１５５〜１９５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；７０〜１３０ mg ＲＡＤ００１および１４５〜２０５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；６０〜１４０ mg ＲＡＤ００１および１３５〜２１５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；５０〜１５０ mg ＲＡＤ００１および１２５〜２２５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；５０〜２００ mg ＲＡＤ００１および１００〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；２５〜１７５ mg ＲＡＤ００１および１００ 〜 ２５０ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；１〜２００ mg ＲＡＤ００１および５０〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；１〜３００ mg ＲＡＤ００１および１〜５００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；または１〜５００ mg ＲＡＤ００１および１〜８００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５を含む、請求項６記載の組み合わせ製品。
【請求項８】
神経変性疾患の同時の、別々の、または逐次的な処置または予防のための個別調製物または組み合わせ調製物のいずれかとして、１または複数回用量の１〜３００mg ＲＡＤ００１および１〜５００mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５を含む、請求項６記載の組み合わせ製品。
【請求項９】
該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運動神経疾患および末梢神経障害から選択される、神経変性疾患の同時の、別々の、または逐次的な処置または予防のための、請求項６〜８のいずれか一項記載の組み合わせ製品。
【請求項１０】
該ハンチントン疾患の同時の、別々の、または逐次的な処置または予防のための、請求項９記載の組み合わせ製品。
【請求項１１】
神経変性疾患の処置または予防のための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤、触媒性ｍＴＯＲ阻害剤および医薬上許容し得る担体または希釈剤を含む、医薬組成物であって、ここで、該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤がＲＡＤ００１であり、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５である、医薬組成物。
【請求項１２】
９０〜１１０ mg ＲＡＤ００１および１６５〜１８５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；８０〜１２０ mg ＲＡＤ００１および１５５〜１９５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；７０〜１３０ mg ＲＡＤ００１および１４５〜２０５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；６０〜１４０ mg ＲＡＤ００１および１３５〜２１５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；５０〜１５０ mg ＲＡＤ００１および１２５〜２２５ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；５０〜２００ mg ＲＡＤ００１および１００〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；２５〜１７５ mg ＲＡＤ００１および１００〜２５０ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；１〜２００ mg ＲＡＤ００１および５０〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；１〜３００ mg ＲＡＤ００１および１〜５００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；または１〜５００ mg ＲＡＤ００１および１〜８００ mg ＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；および医薬上許容し得る担体または希釈剤を含む、神経変性疾患の処置または予防のための、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
下記のもの：
−１〜３００mg ＲＡＤ００１；
−１〜５００mgＢＥＺ２３５またはＡＺＤ−８０５５；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤；
を含む、神経変性疾患の処置または予防のための、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１４】
該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運動神経疾患および末梢神経障害から選択される、神経変性疾患の処置または予防のための、請求項１１〜１３のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ハンチントン疾患の処置または予防のための、請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５である、請求項１，２，３または５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１７】
触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５である、請求項６，７，８または１０のいずれか一項に記載の組み合わせ製品。
【請求項１８】
触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５である、請求項１１，１２，１３または１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明は、神経変性疾患、例えばハンチントン疾患の予防または処置において使用するための治療剤の組み合わせ、およびかかる神経変性疾患の予防または処置において使用するためのかかる組み合わせを含む製品および医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類細胞において、ラパマイシン(ｍＴＯＲ)キナーゼの標的は、ｍＴＯＲＣ１複合体またはｍＴＯＲＣ２複合体と記述されるマルチタンパク質複合体として存在しており、栄養素およびエネルギーの利用可能性を感知して、成長因子およびシグナル伝達からの情報を統合する。ラパマイシンなどのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤に対して感受性であるｍＴＯＲＣ１複合体は、ｍＴＯＲ、ＧβＬ、およびｍＴＯＲ調節関連タンパク質(ラプター：ｒａｐｔｏｒ)を含んで構成され、ペプチジル−プロリルイソメラーゼＦＫＢＰ１２タンパク質(ＦＫ５０６-結合タンパク質１Ａ、１２ｋＤａ)と結合する。これに対して、ｍＴＯＲＣ２複合体は、ｍＴＯＲ、ＧβＬ、およびラパマイシン非感受性ｍＴＯＲコンパニオンタンパク質(リクター：ｒｉｃｔｏｒ)を含んで構成され、インビトロでＦＫＢＰ１２タンパク質と結合しない。
【０００３】
ｍＴＯＲＣ１複合体は、成長および増殖制御にとっての成長因子および栄養感受性装置として作動し、タンパク質の翻訳制御に関与することが判ってきた。ｍＴＯＲＣ１は、２つの重要な下流の基質：リボソーマルタンパク質Ｓ６を順次リン酸化するＳ６キナーゼ、およびｅＩＦ４Ｅ制御性のキャップ依存性翻訳を調節する場合に重要な役割を果たす真核生物翻訳開始ファクター４Ｅ結合タンパク質１(４ＥＢＰ１)を介してタンパク質の翻訳を制御する。ｍＴＯＲＣ１複合体は、細胞のエネルギーおよび栄養素の恒常性に応答して細胞増殖を制御しており、ｍＴＯＲＣ１の制御不全は様々なヒトの癌に共通してみられる。ｍＴＯＲＣ２の機能は、Ａｋｔリン酸化を介する細胞生存の調節およびアクチン細胞骨格動態の調節を含む。
【０００４】
ｍＴＯＲＣ１複合体は、ラパマイシンの作用様式のために、アロステリックなｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）および殆どの誘導体に対して感受性であり、これはＦＫＢＰ１２との細胞内複合体の形成およびｍＴＯＲのＦＫＢＰ１２-ラパマイシン結合(ＦＲＢ)ドメインとの結合に関与する。これは、そのスキャッホルドタンパク質ラプター(ｒａｐｔｏｒ)との相互作用を、変化させ、脆弱にし、ｍＴＯＲＣ１の立体構造を変化させて、基質（例えば、Ｓ６Ｋ１）とｍＴＯＲとの接触およびリン酸化を妨害すると考えられている。ラパマイシンおよびラパマイシン類似体(ｒａｐａｌｏｇｕｅｓ)（例えば、ＲＡＤ００１）は、良性および悪性増殖疾患双方に関連のあるｍＴＯＲの過活性化を阻害することによる臨床的妥当性を得た。
【０００５】
ＲＡＤ００１は、あるいはエベロリムス(エベロリムス(Afinitor(登録商標))としても知られており、化学名称(１Ｒ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｒ,１６Ｅ,１８Ｒ,１９Ｒ,２１Ｒ,２３Ｓ,２４Ｅ,２６Ｅ,２８Ｅ,３０Ｓ,３２Ｓ,３５Ｒ)-１,１８-ジヒドロキシ-１２-{(１Ｒ)-２-[(１Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)-４-(２-ヒドロキシエトキシ)-３-メトキシシクロヘキシル]-１-メチルエチル}-１９,３０-ジメトキシ-１５,１７,２１,２３,２９,３５-ヘキサメチル-１１,３６-ジオキサ-４-アザ-トリサイクロ[３０.３.１.０４,９]ヘキサトリアコンタ-１６,２４,２６,２８-テトラエン-２,３,１０,１４,２０-ペンタオンである以下の化学構造を有する：
【化１】
0005957469.tif 000002
【０００６】
エベロリムスは、進行した腎臓癌の処置用のためのＦＤＡ承認医薬であり、腫瘍研究において、その他いくつかのフェーズＩＩＩ臨床試験で依然試験されている。前臨床試験により、エベロリムスは、恐らくラパマイシン感受性ｍＴＯＲＣ１機能の抑制を通じて、インビトロおよびインビボの双方で広範囲の腫瘍細胞系の増殖を阻害することができることが示された。エベロリムスは、ラパマイシンの誘導体としては、ｍＴＯＲＣ１機能の一部を阻害する時、即ちＳ６キナーゼ(Ｓ６Ｋ)および下流のＳ６Ｋ基質Ｓ６の一部を阻害する時に非常に強力なアロステリックｍＴＯＲ阻害剤である。しかし、エベロリムス(および他のラパマイシンアナログ)は、腫瘍の形成および維持における重要な駆動力に関連する４ＥＢＰ１(Ｔ３７/４６)における第一のリン酸化事象を阻害する時には殆どまたは全く効果を示さない。エベロリムス(および、他のラパマイシンアナログ)のようなアロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲＣ２経路またはＡｋｔシグナル伝達のその結果としておこる活性化を阻害する時には効果を殆どまたは全く効果を示さない。アロステリックｍＴＯＲ阻害剤の別の例示は、シロリムス(ラパマイシン、ＡＹ-２２９８９)、４０-[３-ヒドロキシ-２-(ヒドロキシメチル)-２-メチルプロパノエート]-ラパマイシン(テムシロリムスまたはＣＣＩ-７７９とも呼ばれる)およびデフェロリムス(ＡＰ-２３５７３/ＭＫ-８６６９)を含む。
【０００７】
あるいは、触媒的ＡＴＰ-拮抗ｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲキナーゼドメインを直接の標的として、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の双方を標的とすることが判っている。これらは、ラパマイシン耐性ｍＴＯＲＣ１の情報、例えば４ＥＢＰ１-Ｔ３７/４６リン酸化およびキャップ依存性翻訳を調節することから、ラパマイシンとして、かかるアロステリックｍＴＯＲ阻害剤よりも有効なｍＴＯＲＣ１の阻害剤であることが判っている。
【０００８】
ＢＥＺ２３５は、化学名称２-メチル-２-[４-(３-メチル-２-オキソ-８-キノリン-３-イル-２,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-ｃ]キノリン-１-イル)-フェニル]-プロピオニトリルおよび以下の化学構造を有する触媒性ｍＴＯＲ阻害剤である
【化２】
0005957469.tif 000003
。
【０００９】
ＢＥＺ２３５はまた、トシル酸一塩の形態で使用される。ＢＥＺ２３５の合成は、ＷＯ２００６/１２２８０６に記述されている。
【００１０】
触媒性ｍＴＯＲ阻害剤として、ＢＥＺ２３５は、ラパマイシン感受性(Ｓ６Ｋのリン酸化、その後のＳ６のリン酸化)およびラパマイシン非感受性(４ＥＢＰ１のリン酸化)機能の双方を含むｍＴＯＲＣ１複合体の完全な機能を停止できる。ＢＥＺ２３５は、使用される薬剤濃度に従い異なる効果を示す、これによりｍＴＯＲ阻害は、低濃度(１００ｎｍｏｌ/Ｌ未満)で優勢であるが、比較的高濃度(おおよそ５００ｎｍｏｌ/Ｌ)では二つのＰＩ３Ｋ/ｍＴＯＲ阻害が優勢である(Serra et al., 2008)。
【００１１】
文献に記述した別の触媒性ｍＴＯＲ阻害剤は、化学名 {５-[２,４-ビス-((Ｓ)-３-メチル-モルホリン-４-イル)-ピリド[２,３d]ピリミジン-７-イル]-２-メトキシ-フェニル}-メタノールおよび以下の化学構造を有するＣＣＧ１６８(別名、ＡＺＤ-８０５５としても知られる, Chresta et al., 2010)である。
【化３】
0005957469.tif 000004
。
【００１２】
触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の別の例示は、８−(６−メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-ｃ]キノリン-２-オン(ＷＯ２００６/１２２８０６)、Ｋｕ-００６３７９４(Garcia-Martinez et al., 2009)およびＷＹＥ-３５４(Yu et al., 2009)を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ハンチントン疾患(ＨＤ)は、進行性の認知症、運動障害、および人格変化をもたらす皮質および線条体における選択的な神経細胞死を特徴とする。ＨＤにおける主な分子特徴は、疾患の発病および進行と並行しておこる細胞質および核のポリＱ含有物が徐々に出現することである。線条体において、中型有棘神経細胞(ＭＮ)は、ポリＱ含有物の漸進的増加、ＤＡＲＰＰ-３２の低下、および広範囲の軸索変性を示す(The Huntington's Disease Collaborative Research Group. 1993；Davies et al., 1997； Bibb et al., 2000； Luthi-Carter et al., 2000)。線条体変性を追跡するために、ハンチントン疾患に対するエクソビボモデルは、Ｒ６/２ マウスモデルからの皮質線条体切片培養物を用いて開発された。この手法は、界面方法に基づいており、数週間維持できる切片培養物を提供する(Galimberti et al., 2006；Gogolla et al., 2006；Galimberti et al., 2010)。Ｒ６/２切片を、様々な週間にてインビトロで調べた場合、線条体中でポリＱ含有物の漸進的増加、ＤＡＲＰＰ-３２の低下、および広範囲の神経フィラメント損失が見られた。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本明細書に記述されたとおり、変異ハンチントン(ｍＨｔｔ)のクリアランスが、線条体変性を保存するのに十分であるかどうかを調べるために、Ｒ６/２切片にて研究を開始した。特に、ｍＴＯＲ経路を阻害することによって、オートファジーが１４〜２１日(ＤＩＶ)の間にインビトロで誘導されたかどうかを調べた。ｍＴＯＲ阻害により、オートファジーが誘導され、ポリＱ含有物が低下し、ＤＡＲＰＰ−３２および線条体中の神経フィラメントの損失を防止した。驚くべきことに、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤(ＲＡＤ００１)および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤(ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８)の低用量の組み合わせは、２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１および５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５の単剤処置と比べて、相乗効果を発揮した。さらに、２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１/３０ ｎＭ ＢＥＺ２３５のｍＴＯＲ阻害の組合せは、１０倍低いＢＥＺ２３５濃度にて線条体変性を防止した。従って、本明細書に記述した結果は、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の低用量の組み合わせが、Ｒ６/２切片における線条体変性を低下させることを示唆しており、ＨＤ処置のための治療上有利な状況を示している。この予測外の相乗作用により、所与される用量を低下すること、副作用をさらに低減させること、臨床的効果を増強させることが可能となる。
【発明の効果】
【００１５】
ＨＤだけでなく、凝集傾向のあるタンパク質を原因とする他の神経変性疾患もまた、ｍＴＯＲ経路の阻害によるオートファジー誘導により処置され得る。これには、例えばパーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型(マシャド・ジョセフ病としても知られる)、アルツハイマー疾患、スーパーオキシドジムスターゼ１中の変異を原因とする運動神経疾患および末梢ミエリンタンパク質２２中の変異を原因とする末梢神経疾患類がある。オートファジーと神経変性との関連についてのさらなる記述については、Rubinsztein DC et al., 2007 およびSarkar S et al., 2009を参照されたい。
【００１６】
本発明の要約
従って、本発明の第一態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するためのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを提供する。
【００１７】
別の態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の使用に関する。
【００１８】
さらなる態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品における活性な医薬成分としてアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせの使用に関する。
【００１９】
本発明のさらなる局面において、神経変性疾患の処置または予防の必要のある対象において、有効量のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを、かかる対象に投与することを含む、神経変性疾患の処置または予防のための方法が提供される。
【００２０】
本発明の別の態様において、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む、組み合わせ製品が提供される。
【００２１】
本発明の別の態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のもの：
−アロステリックｍＴＯＲ阻害剤；
−触媒性ｍＴＯＲ阻害剤；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤、
を含む、医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせが、Ｒ６/２脳切片中のオートファジーを誘導する。  (Ａ)脳切片における処置に関するスキームの説明。切片を、生後７日目(Ｐ７)に調製し、ＤＩＶ１４からＤＩＶ２１まで、ＲＡＤ００１、ＢＥＺ２３５およびＣＣＧ１６８により処置した。  (Ｂ)ｍＴＯＲＣ１活性(ｐ−Ｓ６ Ｓ２４０/２４４)の生化学的分析、オートファジー誘導(ＬＣ３-ＩＩ/Ｉ転換)およびＢ−アクチン。５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５による処置は、ｐ−Ｓ６ Ｓ２４０/２４４を減少させず、ＬＣ３−ＩＩ/Ｉ転換(ＬＣ３-ＩＩ/Ｉ比率)の増加に対する効果はなかった。しかし、２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１および２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１/５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５は、ｐ−Ｓ６ Ｓ２４０/２４４を低下させ、さらに両方の組み合わせは、ＬＣ３−ＩＩレベルを増加させた。  (Ｃ)ＬＣ３−ＩＩ/Ｉ転換(ＬＣ３−ＩＩ/Ｉ比率)の定量分析。留意すべきは、ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５の組み合わせが、単独の低濃度と比較して、有意なＬＣ３−ＩＩ/Ｉ転換を誘導することである。３００ｎＭ ＢＥＺ２３５および３００ｎＭ ＣＣＧ１６８は、同様の効果を達成し、ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８がＲＡＤ００１との併用にて、オートファジーを誘導することを示した(各症状につきＮ＝５の切片、ｏｎｅ-ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ** ｐ＜０.０１、ポスト・ホック・スチューデントｔ検定、*** ｐ＜０.００１)。
【図２】ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせが、Ｒ６/２脳切片中のポリＱ含有物を低下させる。  ＤＩＶ７からＤＩＶ２１までのポリＱ密度の定量、およびＤＩＶ２１にて異なる処置の下でのポリＱ密度の定量。ＤＩＶ２１ Ｒ６/２ ＤＭＳＯ処理済切片と比較して、ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５の組み合わせは、ポリＱ密度を４０％±１１まで低下させたが、一方２５０ｎＭ ＲＡＤ００１および５０ｎＭ ＢＥＺ２３５の単剤濃度は効果を示さなかった。ＲＡＤ００１/ＣＣＧ１６８の組み合わせはまた、ＤＩＶ２１ Ｒ６/２ ＤＭＳＯ処理済切片と比較して、ポリＱ密度を低下させた(各症状につきＮ＝５切片、ｏｎｅ-ｗａｙ ＡＮＯＶＡ * ｐ＜０.０５、ポスト・ホック・スチューデントｔ検定、*** ｐ＜０.００１)。
【図３】ＤＩＶ２１でＤＡＲＰＰ−３２強度の定量分析により評価したとおり、ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせは、Ｒ６/２脳切片中の線条体変性を防止する。  ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５の組み合わせは、コントロールＲ６/２切片と比較して、８０％±５のＤＡＲＰＰ−３２レベルを保存した。ＲＡＤ００１/ＣＣＧ１６８の組み合わせもまた、ＤＡＲＰＰ-３２レベルの保持時に有効であった(各症状についてＮ＝５切片、ｏｎｅ-ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ** ｐ＜０.０１、ポスト・ホック・スチューデントｔ検定、** ｐ＜０.０１；*** ｐ＜０.００１)。
【図４】ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせは、ＤＩＶ２１時に神経フィラメント強度の定量分析により評価したとおり、Ｒ６/２脳切片中の線条体変性を防止する。  ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５の組み合わせは、コントロールＲ６/２切片と比較して、神経フィラメントレベルの９５％±１２を防止した。ＲＡＤ００１/ＣＣＧ１６８の組み合わせはまた、神経フィラメントレベルを保持時に有効であった(各症状につきＮ＝５切片、ｏｎｅ-ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ** ｐ＜０.０１、ポスト・ホック・スチューデントｔ検定、** ｐ＜０.０１；*** ｐ＜０.００１)。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
（本発明の詳細な説明）
本発明の第一態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するためのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせが提供される。
【００２４】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するためのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせが提供され、ここで該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１−(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-ｃ]キノリン-２-オンから選択される。
【００２５】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせが提供される。
【００２６】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせが提供され、ここで該ＲＡＤ００１またはＣＣＧ１６８は、約１.５ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５は、約２.５ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００２７】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせが提供され、ここで
−該ＲＡＤ００１は、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.３〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.０〜２.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.０〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、の用量で投与される０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００２８】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせが提供され、ここで該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００２９】
別の態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の使用に関する。
【００３０】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の使用に関し、ここで該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される。
【００３１】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の使用に関する。
【００３２】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の使用に関し、ここで該ＲＡＤ００１は、約１.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、約２.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００３３】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の使用に関し、ここで、
−該ＲＡＤ００１は、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.３〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.０〜２.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.０〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００３４】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品製造のための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の使用に関し、ここで該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００３５】
別の態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品において活性な医薬成分としてアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを使用することに関する。
【００３６】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品において、活性な医薬成分としてアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを使用することに関し、ここで該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される。
【００３７】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品において、活性な医薬成分としてＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせを使用することに関する。
【００３８】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品において、活性な医薬成分としてＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせを使用することに関し、ここで該ＲＡＤ００１は、約１.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、約２.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００３９】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品において、活性な医薬成分としてＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせを使用することに関し、ここで、
−該ＲＡＤ００１は、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.３〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.０〜２.０ mg/kg/日の用量で投与される、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.０〜３.０ mg/kg/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００４０】
一実施態様において、本発明は、神経変性疾患の処置または予防のための医薬品において、活性な医薬成分としてＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせを使用することに関し、ここで該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００４１】
本発明のさらなる局面において、神経変性疾患の処置または予防の必要のある対象において、神経変性疾患の処置または予防のための方法を提供するものであり、この方法は、かかる対象に、有効量のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを投与することを含む。
【００４２】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防の必要のある対象において、かかる疾患の処置または予防のための方法が提供されるものであり、この方法は、かかる対象に、有効量のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを投与することを含んでおり、該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤は、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される。
【００４３】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防の必要な対象において、かかる疾患の処置または予防のための方法を提供するものであり、この方法は、有効量のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせをかかる対象に投与することを含む。
【００４４】
一実施態様において、かかる処置または予防の必要な対象において神経変性疾患の処置または予防のための方法が提供され、この方法は、有効量のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせをかかる対象に投与することを含み、該ＲＡＤ００１は、約１.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、約２.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００４５】
一実施態様において、ハンチントン神経変性疾患の処置または予防の必要のある対象において、ハンチントン神経変性疾患の処置または予防のための方法を提供するものであり、この方法は、有効量のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせをかかる対象に投与することを含み、ここで、
−該ＲＡＤ００１は、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.３〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、１.０〜２.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、２.０〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される； 
−該ＲＡＤ００１は、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００４６】
一実施態様において、ハンチントン神経変性疾患の処置または予防の必要のある対象において、ハンチントン神経変性疾患の処置または予防のための方法を提供するものであり、この方法は、有効量のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせをかかる対象に投与することを含む：ここで、該ＲＡＤ００１は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８は、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される。
【００４７】
本発明の別の態様において、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む組み合わせ製品が提供される。
【００４８】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む組み合わせ製品が提供され、ここで該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤は、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される。
【００４９】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８を含む組み合わせ製品が提供される。
【００５０】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において、個別の調製物または組み合わせ調製物のいずれかとして、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、約１００ mg ＲＡＤ００１および約１７５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の１または複数回用量を含む組み合わせ製品が提供される。
【００５１】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において、個別調製物または組み合わせ調製物のいずれかとして、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、９０〜１１０ mg ＲＡＤ００１および１６５〜１８５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；８０〜１２０ mg ＲＡＤ００１および１５５〜１９５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；７０〜１３０ mg ＲＡＤ００１および１４５〜２０５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；６０〜１４０ mg ＲＡＤ００１および１３５〜２１５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；５０〜１５０ mg ＲＡＤ００１および１２５〜２２５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；５０〜２００ mg ＲＡＤ００１および１００〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；２５〜１７５ mg ＲＡＤ００１および１００〜２５０ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；１〜２００ mg ＲＡＤ００１および５０〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；１〜３００ mg ＲＡＤ００１および１〜５００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；または１〜５００ mg ＲＡＤ００１および１〜８００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の１または複数回用量を含む、組み合わせ製品が提供される。
【００５２】
本発明の別の態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−アロステリックｍＴＯＲ阻害剤；
−触媒性ｍＴＯＲ阻害剤；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５３】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択されるアロステリックｍＴＯＲ阻害剤；
−ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される触媒性ｍＴＯＲ阻害剤；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５４】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−ＲＡＤ００１；
−ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５５】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−約１００ mg ＲＡＤ００１；
−約１７５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５６】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−９０〜１１０ mg ＲＡＤ００１；
−１６５〜１８５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５７】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−８０〜１２０ mg ＲＡＤ００１；
−１５５〜１９５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５８】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−７０〜１３０ mg ＲＡＤ００１；
−１４５〜２０５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００５９】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−６０〜１４０ mg ＲＡＤ００１；
−１３５〜２１５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６０】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−５０〜１５０ mg ＲＡＤ００１；
−１２５〜２２５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６１】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−５０〜２００ mg ＲＡＤ００１；
−１００〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６２】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−２５〜１７５ mg ＲＡＤ００１；
−１００〜２５０ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６３】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−１〜２００ mg ＲＡＤ００１；
−５０〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６４】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−１〜３００ mg ＲＡＤ００１；
−１〜５００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６５】
一実施態様において、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、下記のものを含む医薬組成物を提供する：
−１〜５００ mg ＲＡＤ００１；
−１〜８００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤。
【００６６】
本発明の好ましい実施態様において、該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤は経口投与される。
【００６７】
本発明の好ましい別の実施態様において、神経変性疾患は、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運動神経疾患および末梢神経障害から選択される。
【００６８】
本発明のさらなる好ましい別の実施態様において、神経変性疾患は、ハンチントン疾患である。
【００６９】
本明細書において使用する場合、用語「a」、「an」、「the」および本明細書で使用した同様の用語(特に、特許請求の範囲において)は、本明細書中に別途記載が無ければ、または内容に明らかな矛盾がなければ、単数および複数の双方を含むと理解されるべきである。
【００７０】
本明細書において使用する場合、用語、特定の薬剤用量と関連のある「約」とは、＋/−１０％、好ましくは＋/−５％、より好ましくは＋/−２.５％、よりさらに好ましくは＋/−１％の範囲内にある薬剤用量という意味を有する。一例として、約１００ mg 有効成分の公定薬剤用量は、９０〜１１０ mg、好ましくは９５〜１０５ mg、より好ましくは９７.５〜１０２.５ mg、またはさらにより好ましくは９９〜１０１ mg 有効成分/用量を含有し得る。
【００７１】
本明細書において使用する場合、用語「アロステリックｍＴＯＲ阻害剤」は、アロステリック結合部位、例えばｍＴＯＲＣ１複合体のＦＫＢＰ１２-ラパマイシン結合部位(ＦＲＢ)に結合することにより、ｍＴＯＲキナーゼの活性/機能を標的とする、低下させる、または阻害する化合物をいう。アロステリックｍＴＯＲ阻害剤の例示は、シロリムス(ラパマイシン、ＡＹ-２２９８９)、ＲＡＤ００１、４０-[３-ヒドロキシ-２-(ヒドロキシメチル)-２-メチルプロパノエート]-ラパマイシン (テムシロリムスまたはＣＣＩ-７７９とも呼ばれる)およびデフェロリムス(ＡＰ-２３５７３/ＭＫ-８６６９)を含む。本明細書における任意の特定のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤を引用することは、その任意の医薬上許容される塩、立体異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物および多形体も含む。特定の物質が、ｍＴＯＲのアロステリック阻害剤であるかどうかは、当分野では周知の標準的な酵素速度論分析を用いて評価できる(Childs et al., (1976), Fersth A. (1985)およびDixon M. (2000)。特定の物質が、ｍＴＯＲＣ１複合体のＦＲＢに結合することにより、アロステリック阻害剤として機能するかどうかは、時間分解蛍光-蛍光共鳴エネルギー転移法(ＴＲ-ＦＲＥＴ)を用いて評価できる。
【００７２】
本明細書において使用する場合、用語「ＢＥＺ２３５」は、そのあらゆる医薬上許容される塩、立体異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物および多形体も含む。例えば、本発明の一実施態様においては、ＢＥＺ２３５は、そのトシル酸一塩形態で提供される。
【００７３】
本明細書において使用する場合、用語「触媒性ｍＴＯＲ阻害剤」は、そのＡＴＰ結合部位に結合することにより、ｍＴＯＲの触媒性活性/機能を標的、低下、または阻害する化合物をいう。本明細書で使用されるような用語「触媒性ｍＴＯＲ阻害剤」とは、二重触媒性ＰＩ３Ｋ/ｍＴＯＲ阻害剤および選択的触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の双方を含む。触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の例として、ＢＥＺ２３５、８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オン(ＷＯ２００６/１２２８０６)、ＡＺＤ-８０５５、Ｋｕ-００６３７９４(Garcia-Martinez et al., 2009)およびＷＹＥ-３５４(Yu et al., 2009) を含む。本明細書において任意の特定の触媒性ｍＴＯＲ阻害剤はまた、その任意の医薬上許容される塩、立体異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物および多形体を含む。特定の物質がｍＴＯＲの触媒性阻害剤であるか否かは、当分野では周知の標準的な酵素速度論分析を用いて評価できる（Childs et al., (1976), Fersth A. (1985) および Dixon M. (2000)。
【００７４】
本明細書において使用する場合、用語「ＣＣＧ１６８」はまた、あらゆるその医薬上許容される塩、立体異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物および多形体も含む。
【００７５】
本明細書において使用する場合、用語「組み合わせ」とは、神経変性疾患、例えばハンチントン疾患の処置または予防に有用なアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤のあらゆる組み合わせをいう。任意のかかる組み合わせを、同時または連続して投与できる。用語「組み合わせ」とは、「組み合わせ製品」を含む。
【００７６】
本明細書において使用する場合、用語「組み合わせ製品」とは、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の双方を含むあらゆる製品（例えば、有効成分としてアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む組み合わせた固定用量の医薬組成物、あるいは同時、別々、または逐次投与に好適な形態にあるアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の調製物を個別にまたは組み合わせて含むキットの一部）をいう。組み合わせた固定用量の医薬組成物は、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の双方を一つの医薬組成物（例えば、ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８を含む一つのピルまたは錠剤）をいう。
【００７７】
本明細書において使用する場合、対象が、処置「の必要な」対象であるのは、該対象が、該処置により、生物学的利益、医薬的利益、またはクオリティー・オブ・ライフにおける利益を得る場合である。
【００７８】
本明細書において使用する場合、用語「阻害する」、「阻害」または「阻害すること」とは、所定の症状、症候または障害または疾患の低減または抑制をいうか、または生物学的活性または過程の基底活性における有意な低下をいう。
【００７９】
本明細書において使用する場合、用語「ｍｇ/ｋｇ/日」は、１日あたりの対象の体重１kgあたりの化合物ｍｇをいう。
【００８０】
本明細書において使用する場合、用語「アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の調製物」とは、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の医薬組成物を含む。用語「アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の個別調製物」とは、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の個別の調製物をいい、一方で「アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせた調製物」とは、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤双方を含む一つの調製物、例えばアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤双方を含む組み合わせた固定用量の医薬組成物、例えば一つのピルまたは錠剤中のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８をいう。
【００８１】
本明細書において使用する場合、用語「医薬上許容し得る担体」は、当業者にはよく知られた、任意のおよびあらゆる溶媒、分散媒、塗料、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤(例えば、抗生物質、抗真菌剤)、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬剤安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、風味剤、染料など、およびその組み合わせを含む(例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329を参照されたい)。任意の従来の担体が有効成分と相溶し得ない場合を除いて、治療または医薬組成物におけるその使用は検討される。
【００８２】
本明細書において使用する場合、任意の特定疾患または障害の「予防」なる用語は、疾患または障害の任意の症候が顕在化する前の対象に本発明の化合物を投与することをいう。
【００８３】
本明細書において使用する場合、用語「ＲＡＤ００１」はまた、あらゆるその医薬上許容される塩、立体異性体、互変異性体、溶媒和物、水和物および多形体を含む。
【００８４】
本明細書において使用する場合、用語「対象」は、動物を言う。通常、動物は哺乳動物である。対象はまた、例えば、霊長類(例えば、ヒト、男性または女性)、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、鳥などをいう。ある実施態様において、対象は霊長類である。別の他の実施形態において、該対象はヒトである。
【００８５】
本発明の化合物の「治療上有効量」なる用語は、対象の生物学的応答または医薬応答、例えば、酵素またはタンパク質活性の低下または阻害、または症候の改善、症状の緩和、疾患進行の遅延または速度低下、または疾患の予防などを誘起する本発明の化合物の量をいう。
【００８６】
本明細書において使用する場合、任意の疾患または障害の「処置する」、「処置すること」または「処置」なる用語は、一実施態様において、本発明の組み合わせを投与することにより対象における疾患または障害を緩和することをいう(即ち、疾患の進行または少なくとも一つのその臨床的徴候を遅延、停止または低下させること)。別の実施態様において、「処置する」、「処置すること」または「処置」は、患者により認識できないものを含む少なくとも一つの身体的パラメーターを軽減または緩和することをいう。さらに別の実施態様において、「処置する」、「処置すること」または「処置」なる用語は、身体的(例えば、認識できる症状の安定化)または生理的(例えば、物理パラメーターの安定化)のいずれかの、または両方の疾患または障害を調節することをいう。
【００８７】
本明細書において記載した全ての方法は、本明細書に別途記述されるか、または文脈により明らかな矛盾がなければ、任意の好適な順番で実施され得る。本明細書において提供される任意および全ての例示の使用または例示的表現(例えば、「例えば」)は、単に本発明をより良好に説明することを意図するものであり、別途本発明の請求の範囲に対して制限を課すものではない。
【００８８】
本発明の組み合わせ化合物は、同時または連続的に投与され得る。本発明の組み合わせ化合物は、同一または異なる投与経路により、別々に、または同一の医薬組成物中にて一緒に投与されてもよい。
【００８９】
本発明のキットの一部分としては、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の個別または組み合わせた調製物を別々に保持するための手段、例えば、容器、分割ビン、または分割ホイルポケットが含まれる。そのようなキットの例示は、錠剤、カプセルなどの包装のために一般的に使用されるようなブリスターパックである。
【００９０】
本発明のキットは、様々な投薬形態で投与するために、例えば、経口および非経口投与するために、異なる投薬間隔で別々の組成物を投与するために、または互いに別々の組成物を漸増するために使用されてもよい。服薬遵守を補助するために、本発明のキットは、通常、投与のための説明書を含む。
【００９１】
本発明の組み合わせであるアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤は、一緒に併用療法へと得る：(ｉ)医師への組み合わせ製品の販売前に(例えば、キットの場合には)；(ｉｉ)投与直前に医師自身により(または、医師の指導のもと)；または(ｉｉｉ)患者自身において、例えば、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の連続投与期間中。
【００９２】
本発明の医薬組成物は、投与の特定経路、例えば、経口投与、非経口投与、および直腸投与などについて処方されうる。本発明の好ましい実施態様において、該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤は、経口投与される。さらに、本発明の医薬組成物は、固体形態(カプセル、錠剤、ピル、顆粒、粉末または座薬を含むが、これに限定しない)または液体形態(溶液、懸濁液、またはエマルジョンを含むが、これに限定しない)に製造できる。該医薬組成物は、従来の医薬上の操作（例えば、滅菌）を行うことができ、および／または従来の不活性な希釈剤、滑剤、または緩衝剤、ならびに補助剤、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤および緩衝液などを含有できる。
【００９３】
通常、医薬組成物は、下記のものと共に有効成分を含む錠剤またはゼラチンカプセルである：
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；
ｂ）潤滑剤、例えば、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤のために、また
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、スターチペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン；必要であれば、
ｄ）崩壊剤、例えば、スターチ、アガー、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または発泡混合物；および／または
ｅ）吸収剤、着色剤、風味剤および甘味剤。
【００９４】
錠剤は、当業者には既知の方法に従って、フィルム被覆または腸溶被覆され得る。
【００９５】
経口投与のために好適な組成物は、錠剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、硬または軟カプセル、またはシロップまたはエリキシルの形態で有効量の本発明の化合物を含む。経口用途を意図した組成物を、医薬組成物の製造のための当業者には既知の任意の方法に従って製造でき、かかる組成物は、医薬上の外観が美しく味の良い調製物を提供するために、甘味料、風味剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１以上の剤を含有できる。錠剤は、錠剤の製造に好適な非毒性の医薬上許容可能し得る賦形剤と共に混合物中に該有効成分を含有してもよい。これらの賦形剤は、例えば不活性な希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒剤および崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、またはアルギン酸；結合剤、例えばスターチ、ゼラチンまたはアカシア；および 滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク。錠剤は、被覆されていないか、または胃腸管での崩壊および吸収を遅らせる技術により被覆される、これによって、より長い期間にわたり徐放作用が提供される。例えば、徐放性物質、例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートを用いることができる。経口使用のための製剤は、硬ゼラチンカプセル（該有効成分は不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと共に混合される）または軟ゼラチンカプセル（該有効成分は、水または油媒体、例えば落花生油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合される）として存在することができる。
【００９６】
ＢＥＺ２３５を含む個別の医薬組成物は、５、２５または１００ mgのＢＥＺ２３５を含む経口投与のための硬カプセル剤として提供され得る。該賦形剤は、ラクトース、クロスポピドン、ポリビニルピロリドンＫ３０、スターチ、エアロシルおよびステアリン酸マグネシウムであってもよい。５および２５ mg カプセルは、サイズ４の大きさのカプセル剤シェルを用いてもよい；１００ mg カプセル剤は、サイズ１のカプセル剤シェルを用いてもよい。
【００９７】
ＲＡＤ００１は、ＦＤＡ承認薬であり、それ故にＲＡＤ００１を含む好適な個別の医薬組成物を、市販購入し得る。例えば、ＲＡＤ００１を、好適な量のＲＡＤ００１、および賦形剤としてブチル化ヒドロキシトルエン(ＢＨＴ)、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クロスポピドンおよびラクトースを含む錠剤にて経口投与用の錠剤形態で投与できる。ＲＡＤ００１は、好適な量のＲＡＤ００１、および賦形剤としてＢＨＴ、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クロスポピドン、コロイド様無水シリカおよびラクトースを含む分散錠としても投与される。
【００９８】
特定の注射可能な組成物は、等張水溶液または懸濁液であり、座剤は、脂質エマルジョンまたは懸濁液から有利に製造される。該組成物は、滅菌され得る、および／または補助剤、例えば保存料、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶液促進剤、浸透圧を調整するための塩および／または緩衝液を含有し得る。さらに、それらはまた、他の治療上重要な物質を含有し得る。該組成物を、従来の混合方法、顆粒化方法、または被覆方法の各々に従って製造し、有効成分の約０.１-７５％または約１-５０％を含有する。
【００９９】
経皮適用のための好適な組成物は、好適な担体と共に、有効量の本発明の化合物を含む。経皮送達に好適な担体は、宿主の皮膚を介する通過を補助する吸収可能な医薬上許容し得る溶媒を含む。例えば、経皮送達装置とは、支持体類(a backing member)、所望により担体と共に該化合物を含むリザーバー、所望により制御された速度にておよび予め決定された速度にて長時間にわたり化合物を宿主の皮膚に送達するための速度調節バリアー、およびこの装置を皮膚に固定する手段を含む包帯の形態で存在している。
【０１００】
局所適用、例えば、皮膚および眼への局所適用のために好適な組成物は、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル、または噴霧用処方物(例えば、エアゾールなどによる送達のために)を含む。かかる局所送達システムは、皮膚の適用、例えば皮膚癌の処置、例えば日焼けクリーム、ローション、スプレーなどにおける予防的用途のために、特に好適である。このため、それらは、特に、化粧品、当分野では十分知られた処方物を包含する局所にて使用するために好適である。そのようなものは、可溶化剤、安定剤、浸透圧増強剤、緩衝液および保存剤を含有し得る。
【０１０１】
本明細書に使用されるとおり、局所適用はまた、吸入または鼻腔内用途に適する。それらは、乾燥粉末吸入器から乾燥粉末の形態で(混合物として単独で、例えばラクトースとの乾燥混合物、または混合された成分粒子、例えばリン脂質との)、または、好適なプロペラントを使用するか、または使用せずに、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザーまたはネブライザーからエアロゾールスプレー形態で好都合に送達され得る。
【０１０２】
本発明は、さらに、水が特定の化合物の分解を促進する可能性があるため、有効成分としてアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む無水医薬組成物および投薬形態を提供し得る。
【０１０３】
本発明の無水医薬組成物および投薬形態を、無水または低湿度含有成分および低水分量または低湿度条件を用いて製造できる。無水医薬組成物は、その無水性質が維持されるように製造および貯蔵され得る。従って、無水組成物は、水への暴露を防止することが知られている物質を用いて、それらを好適な処方物キット中に含み得るように包装される。好適な包装の例は、次のものを含むが、これらに限定するものではない：密閉ホイル、プラスチック、単位用量容器(例えば、バイアル)、ブリスターパック、およびストリップ包装。
【０１０４】
本発明は、有効成分として本発明の化合物が分解する速度を減少させる１以上の剤を含む医薬組成物および投薬形態をさらに提供する。かかる剤は、本明細書において「安定剤」として引用される。
【０１０５】
本発明の医薬組成物および組み合わせ物のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の投薬量は、対象の種、体重、年齢および個別症状、または処理される疾患の重症度に依存する。当分野の医師、臨床医または獣医は、疾患の進行を防止、処置、または阻害するのに必要な各有効成分の有効量を容易に決定できる。
【０１０６】
上記引用した投薬特性を、有利には、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、または単離臓器、組織、およびその調製物を用いて、インビトロおよびインビボ試験において示すことができる。本発明の組み合わせの化合物は、水溶液などの溶液の形態においてインビトロで、ならびに腸内、非経口、有利には静脈内のいずれかで、例えば、懸濁液または水溶液としてインビボで適用される。ＲＡＤ００１についてのインビトロでの投薬量濃度は、１〜５００ ｎＭ、１００〜３５０ ｎＭ、２００ 〜２００ ｎＭ、または約２５０ ｎＭの範囲であるが、一方でＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８についてのインビトロでの投薬濃度は、１〜２００ ｎＭ、１〜１００ ｎＭ、２５〜７５ ｎＭ、または約５０ ｎＭの範囲であってもよい。インビボでの投薬量濃度は、上記に示される。
【０１０７】
実施例
実施例１：低用量のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせはＲ６/２脳切片においてオートファジーを誘導する
最近の研究は、オートファジーがｍＨｔｔ蓄積にとって重要なクリアランス経路であること、またｍＴＯＲ経路阻害がオートファジーを誘導するのに十分であることを示している。特に、ｍＴＯＲ経路の阻害剤が、ハンチントン病の様々な細胞モデル、ハエ目および動物モデルにおいて、オートファジーを誘導し、ｍＨｔｔ蓄積を低下させて、神経変性を防止することを示した(Ravikumar et al., 2004；Ravikumar et al., 2006；Levine et al., 2008； Sakar et al., 2009)。アロステリックおよび触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がオートファジーを誘導し、線条体変性を防止できるかどうかを評価するために、Ｒ６/２切片を、ＤＩＶ１４〜ＤＩＶ２１まで、ＲＡＤ００１、ＢＥＺ２３５およびＣＣＧ１６８({５-[２,４-ビス-((Ｓ)-３-メチル-モルホリン-４-イル)-ピリド[２,３-ｄ]ピリミジン-７-イル]-２-メトキシ-フェニル}-メタノール)を用いて処理し、ＤＩＶ２１でのｍＴＯＲ活性およびＬＣ３-ＩＩ/Ｉ転換を分析した(図１)。３００ ｎＭ ＢＥＺ２３５および３００ ｎＭ ＣＣＧ１６８はオートファジーを誘導したが、一方で２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１および５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５は効果を示さなかった。興味深いことに、５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５は、２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１および２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１／５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５とは対照的に、ｐ-Ｓ６ Ｓ２４０/２４４のレベルを低下させなかった。驚くべきことに、２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１/５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５および２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１/５０ ｎＭ ＣＣＧ１６８の組み合わせは、２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１および５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５単一濃度と比較して、オートファジーを誘導するのに十分であり、ＢＥＺ２３５およびＣＣＧ１６８が、ＬＣ３-ＩＩレベルを増加する際にＲＡＤ００１と相乗的に働くということを示す(図１)。
【０１０８】
実施例２：ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の低用量の組み合わせは、Ｒ６/２の脳切片中のポリＱ含有物を低下させる
ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５の組み合わせが、ポリＱ含有物の低下において相乗的に働くかどうかを調べるために、ＤＩＶ２１時の処理済Ｒ６/２切片のポリＱ密度を、Ｒ６/２切片中のポリＱ含有物および核の免役組織化学的検出を比較することにより測定した。２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１または５０ ｎＭ ＢＥＺ２３５で処理した切片は、コントロールのＲ６/２と比較して、同様のポリＱ分布を示したが、ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５およびＲＡＤ００１/ＣＣＧ１６８の組み合わせは、ポリＱ密度を低下させた。単一の低濃度ＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５はポリＱ含有物を低下させないが、この組み合わせは有意な効果を示し、Ｒ６/２切片と比べてポリＱ密度を４０％±１１低下させたことを観察した。さらに、有効な単一の３００ ｎＭ ＢＥＺ２３５の濃度は、同様の低下を導き、ＢＥＺ２３５がＲＡＤ００１と共に、ポリＱ密度を低下する際に相乗的に働くことを示唆する(図２)。
【０１０９】
実施例３：
低用量のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８の組み合わせは、Ｒ６/２脳切片中の線条体変性を防止する
ＨＤ進行は、線条体ＤＡＲＰＰ-３２の漸増的損失および軸索変性を特徴とする(The Huntigton's Disease Collaborative Research Group. 1993；Davies et al., 1997；Bibb et al., 2000；Luthi-Carter et al., 2000)。Ｒ６/２切片において、ＤＩＶ２１に開始する線条体ＤＡＲＰＰ-３２および神経フィラメントの漸増的損失を追跡した。それ故に、ＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５の組み合わせが、線条体変性の開始を相乗的に防ぐことができるかどうかを評価するために、ＤＩＶ２１時のＤＡＲＰＰ-３２および神経フィラメント染色を、ＷＴおよびＲ６/２切片中のＤＡＲＰＰ-３２および神経フィラメントの免役組織化学検出により分析した。単一の低濃度のＲＡＤ００１およびＢＥＺ２３５は、ＤＡＲＰＰ-３２および神経フィラメントレベルの保護において有効ではなかった。しかし、この組み合わせは、９５％±１２の神経フィラメントレベルおよび８０％±５のＤＡＲＰＰ-３２レベルを保護した。２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１/３０ ｎＭ ＢＥＺ２３５は、最も低い有効な組み合わせ濃度であった(図３および４)。２５０ ｎＭ ＲＡＤ００１および５０ ｎＭ ＣＣＧ１６８の組み合わせは、ＤＡＲＰＰ-３２および神経フィラメントレベルを保護する際に有効であった。
【０１１０】
結論
これらの結果を合わせると、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせ、例えばＲＡＤ００１/ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８は、相乗的に働いてオートファジーを誘導し、ポリＱ含有物を減少させ、線条体変性を防止することを示しており、驚くべきことに、この組み合わせは、触媒性ｍＴＯＲ阻害剤単独と比べて低濃度で、例えば３００ ｎＭ ＢＥＺ２３５と比べて１０倍低い濃度で有効であることを示す。したがって、低用量のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせは、ＨＤおよび凝集傾向のタンパク質を原因とする他の神経変性疾患を、少量の薬物暴露により治療する機会を提示する。
【０１１１】
実験方法
上記実施例１〜３を、以下の実験方法を用いて行った：
マウスおよび切片の培養物
ヒトのハンチントン・エクソン-１Ｑ２００を発現する遺伝子組み換えマウス(Davies et al., 1997に記述したＲ６/２マウスモデル)を、温度制御された室内で飼育し、１２時間の明/暗サイクルで維持した。食事および水は自由摂取とし、実験を、研究室動物の使用および飼育のための地域承認のガイドラインに従い行った。切片培養物を、ストッピニ(Stoppini)ら(Stoppini et al., 1991 および Gogolla et al., 2006)に記述された方法にしたがって確立し、特別な切断角を利用して、保持された大脳皮質-線条体経路を有する脳切片を作成する。最終的に、切片を選択してＭｉｌｌｉｃｅｌ上に置き(Millipore, PICM03050)、培養培地（１ ml）において、３５℃で５％ＣＯ２にて６ウェルディッシュで培養した。
【０１１２】
ｍＴＯＲ阻害剤による処置
切片を、ＤＩＶ１４〜ＤＩＶ２１の間、様々なｍＴＯＲ阻害剤により処理した。該培養培地を、２日毎に交換して、薬剤を新しい培養培地に加えた。我々は、このプロトコールを使用して、後記ｍＴＯＲ阻害剤の作用を評価した：ＢＥＺ２３５(ＤＭＳＯ中、５０および３００ ｎＭ)、ＲＡＤ００１(ＤＭＳＯ中、２５０ ｎＭ)、ＣＣＧ１６８(ＤＭＳＯ中、３００ ｎＭ)、ＲＡＤ００１＋ＢＥＺ２３５(ＤＭＳＯ中、２５０ １０、２５０ ３０および２５０ ５０ ｎＭ)およびＲＡＤ００１＋ＣＣＧ１６８(ＤＭＳＯ中、２５０および５０ ｎＭ)。
【０１１３】
生化学
切片を、ＰＢＳで洗浄して、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉ(Roche, ＃04693124001)およびＰｈｏｓＳＴＯＰ(Roche, ＃04906837001)を含有する１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ-１００/ＰＢＳ中に溶解した。この溶解液を、超音波処理し、β-アクチン(Sigma, ＃A5441)、ｐＳ６ Ｓｅｒ ２４０/２４４(Cell Signalling, ＃2215)、およびＬＣ３Ｂ(Cell Signalling, ＃2775)についてウェスタンブロッティングにより分析した。イムノブロッドをＥＣＬ検出試薬により発色させた(Amersham Biosciences)。
【０１１４】
免疫組織化学
切片を、４％ＰＦＡ中で１０分間固定して、ＰＢＳで洗浄し、０.３％ トライトンＸ-１００ ２０％ ウマ血清/ＰＢＳ(ブロッキング溶液)中で４時間室温にてブロッキングした。ＤＡＲＰＰ-３２(Cell Signaling, ＃2306S, 1:200)、神経フィラメント(NeuF, Developmental Studies Hybridoma Bank, University of Iowa；＃2H3, 1:200)およびＥＭ４８(Millipore, ＃MAB5374, 1:200)に対する抗体を、ブロッキング溶液中で、４８時間４℃でインキュベートした。その後、切片をＰＢＳで洗浄して、Ａｌｅｘａ ４８８(Invitrogen, 1:500)および二次抗体結合Ａｌｅｘａ ５５５(Invitrogen, 1:500)と共に０.３% Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ-１００/ＰＢＳ中で２時間インキュベートした。最終的に、切片を、ＰＢＳで洗浄して、１０分間ＤＡＰＩと共にインキュベートして(Invitrogen, #D1306 1：10000)、ＰｒｏＬｏｎｇ(Invitrogen, ＃P36934)を用いてガラス皿上に組み込んだ。
【０１１５】
顕微鏡および定量
高分解能画像を、Ｐｌａｎ-Ｎｅｏｆｌｕａｒ ４０ｘ/１.３油浸対物レンズを用いて正立Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ７００共焦点顕微鏡で得た。ポリＱ密度およびＤＡＲＰＰ-３２/ＮｅｕＦシグナル強度の定量のために、各実験について少なくとも３つの、共焦点３Ｄのスタック/薄片を線条体にて得て(５つの切片/症状)、Ｉｍａｒｉｓ ４.２(Bitplane AG)およびＩｍａｇｅ Ｊ ソフトウェアを用いて分析した。
【０１１６】
統計分析
全てのデータを、平均±ＳＥＭとして表した。統計学的分析を、分散分析(ＡＮＯＶＡ)に続いてスチューデントｔ検定により行った(Excel, Microsoft, USA)。有意レベルを、ｐ＜０．０５に設定した。
【０１１７】
ＴＲ−ＦＲＥＴによるｍＴＯＲアッセイ
試薬および機器：ＴＲ−ＦＲＥＴ ｍＴＯＲ結合アッセイ成分を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ(Carlsbad/CA, USA)から購入できる：ＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２(サンプル６９１-１４５-３Ｂ, ４７ μＭ, ＭＷ=３８ＫＤａ)、Ｔｂ３＋−α-ＧＳＴ抗体(Cat. No. PV4216)、専用ＴＲ-ＦＲＥＴ希釈緩衝液 (Cat. No. PV3574)、ＧＦＰ-４ＥＢＰ１(Cat. No. PV4759)、ＤＭＳＯ(Fluka, Cat. No. 41644)。以下の設定にてＢｉｏｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ, Ｗｉｎｏｏｓｋｉ, Ｖｅｒｍｏｎｔ(Witec, Switzerlandから得る)のＳｙｎｅｒｇｙ２マイクロプレートリーダーを使用し得る：検出方法、時間分解蛍光、光源 Ｘｅｎｏｎ ｆｌａｓｈ、読み取りタイプ エンドポイント、読み取り速度 通常、プレート移動後の遅延 １００ msec、収集データ前の遅延 １００ μs、測定値/データポイント１０、データ収集時間 ２００ μｓ、感受性 自動、励起フィルター３４０/３０、発光フィルター５２０/２５および４９５/１０。
【０１１８】
ＴＲ-ＦＲＥＴｍＴＯＲ結合アッセイのための３８４ウェルフォーマットにおける黒色非結合ポリスチレンプレートは、Ｃｏｒｎｉｎｇから入手できる(低容量、丸底、Cat. No. NBS#3676)。
【０１１９】
サンプル阻害剤化合物を、ＤＭＳＯ中の１０ ｍＭ 溶液として新たに調製した。
【０１２０】
１０ ｍＭ ストックの化合物を、最初にＤＭＳＯ、次いでＴＲ-ＦＲＥＴ緩衝液に希釈した。
【０１２１】
アッセイプレート：化合物を３８４-ウェルアッセイプレートに直接希釈して、ＤＭＳＯの終濃度を１％で一定に保持した。希釈化合物を、１０ μＬのＧＦＰ-ＦＫＢＰ-１２、Ｔｂ３+-α-ＧＳＴ抗体およびＧＳＴ-ｍＴＯＲと共に混合した。アッセイプレートの最終容量は２０ μｌである。
【０１２２】
原理：時間分解蛍光-蛍光共鳴エネルギー転移法(ＴＲ-ＦＲＥＴ)は、共鳴により一つの染料中の励起された電子から(ドナー)、隣接する染料の電子への(アクセプター)２つの隣接する染料間のエネルギー移動、その後の光子としての放出を基にした技術である。このエネルギー転移を、アクセプターの蛍光の発光の増加およびドナーの蛍光の発光の低下により検出する。
【０１２３】
ＴＲ-ＦＲＥＴアッセイは、フラッシュランプの励起光源による励起後の遅延時間を導入することにより化合物の自家蛍光または沈殿化合物からの光散乱からの干渉を打開するドナー種として半減期が長いランタニドキレートまたはクリプテートを使用する。結果は、アクセプターおよびドナーの蛍光色素分子の強度の比率(５２０ nm/４９５ nm)として表されることが多い。かかる値の比例性質(ratiometric nature)は、ウェル間のアッセイ容量の差異を訂正し、ならびに着色化合物を原因とする消光効果を訂正する。
【０１２４】
ＴＲ-ＦＲＥＴによるｍＴＯＲ結合アッセイ：阻害剤化合物の希釈物(１０ μＬ)を、１０ μＬのＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２(１０ μＬ)、Ｔｂ３+-α-ＧＳＴ抗体およびＧＳＴ-ｍＴＯＲをＴＲ-ＦＲＥＴ緩衝液中で混合し、読み取る前に光から保護して、６０分間室温でインキュベートした。プレートを、２００ μsのインテグレーション時間および１００ μsの遅延を用いて、Ｓｙｎｅｒｇｙ２読み取り機において読み取った。以下のコントロールは、２％ ＤＭＳＯ(化合物を含まない)を用いるアッセイ、ＧＳＴ-ｍＴＯＲを用いないアッセイ、ＧＦＰ-４ＥＢＰ１(ＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２を含まない)を用いないアッセイを含む基本シグナルを得るために行った。
【０１２５】
ＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２は、ｍＴＯＲＣ１複合体のＦＲＢに結合するアロステリックｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンと複合体を形成した場合に、ｍＴＯＲに結合する。ｍＴＯＲ結合アッセイは、ＧＳＴタグ化ｍＴＯＲを認識するＴｂ３+で標識された特定抗-ＧＳＴ-Ａｂを使用する。ＴＲ-ＦＲＥＴアッセイは、各々５２０ nmおよび４９５ nmのアクセプターおよびドナーの発光をもたらすエネルギーをＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２に転移させるために、ドナー種としてこの長い半減期のＴｂ３+キレートを使用する。結果を、アクセプターおよびドナーの蛍光色素分子の強度の比率として表した。
【０１２６】
ＥＣ５０の決定：
シグモイド型用量−反応曲線(可変スロープ)を、阻害剤濃度にわたって読み取ったアッセイプロットにフィットさせて、各々潜在的なアロステリックなｍＴＯＲ阻害化合物の％阻害のＥＣ５０値を得た。
【０１２７】
ヒトＧＳＴ-ｍＴＯＲおよびＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２の発現および精製
【表１】
0005957469.tif 000005
【０１２８】
ＧＳＴ-ｍＴＯＲ(１３６０-２５４９)：Ｎ末端にタグされたＧＳＴ-ｍＴＯＲおよびＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。組換えヒトＮ末端切除型(アミノ酸１３６０-２５４９)ＧＳＴ-タグ化ｍＴＯＲは、昆虫細胞中で発現され、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得た(ＰＶ４７５３、ＭＷ＝１６３．９ ｋＤａ)。
【０１２９】
Ｈｉｓ-ＧＦＰ-ＦＫＢＰ１２：ＧＦＰ−ＦＫＢＰ１２もまたＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得た(サンプル ６９１-１４５-３Ｂ、４７ μＭ、ＭＷ＝４３ＫＤａ)。
【０１３０】
Ｈｉｓ-ＧＦＰ-４-ＥＢＰ１：ＧＦＰ−４-ＥＢＰ１もまたＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得た(Ｃａｔ. Ｎｏ. ＰＶ４７５９、ＭＷ＝４５ＫＤａ)。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  神経変性疾患の処置または予防において使用するための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせ。
［２］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤が、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［１］記載の組み合わせ。
［３］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤が、ＲＡＤ００１であり、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８である、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２］記載の組み合わせ。
［４］  −該ＲＡＤ００１が、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.３ 〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.０〜２.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.０〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、
神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［３］記載の組み合わせ。
［５］  該ＲＡＤ００１が、約１.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、約２.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［３］記載の組み合わせ。
［６］  該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運度神経疾患および末梢神経障害から選択される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［１］〜［５］のいずれか一項記載の組み合わせ。
［７］  該ハンチントン疾患の処置または予防における使用のための、［６］記載の組み合わせ。
［８］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が経口投与される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［１］〜［７］のいずれか一項記載の組み合わせ。
［９］  神経変性疾患の処置または予防の必要のある対象において、かかる対象に、有効量のアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤の組み合わせを投与することを含む、神経変性疾患の処置または予防するための方法。
［１０］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤が、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される、［９］記載の方法。
［１１］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤がＲＡＤ００１であり、触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８である、［１０］記載の方法。
［１２］  −該ＲＡＤ００１が、１.４〜１.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.３〜１.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.３〜２.７ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.２〜１.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.１〜１.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.１〜２.９ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、１.０〜２.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、２.０〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.８〜２.２ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.８〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.６〜２.４ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.６〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.４〜２.６ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.４〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.２〜２.８ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、１.０〜３.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜３.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、０.５〜４.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、０.０１〜５.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される；または
−該ＲＡＤ００１が、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、０.０１〜１０.０ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、［１１］記載の方法。
［１３］  該ＲＡＤ００１が、約１.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与され、該ＢＥＺ２３５または該ＣＣＧ１６８が、約２.５ ｍｇ/ｋｇ/日の用量で投与される、［１１］記載の方法。
［１４］  該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運動神経疾患および末梢神経障害から選択される、［９］〜［１３］のいずれか一項記載の方法。
［１５］  該神経変性疾患が、ハンチントン疾患である、［１４］記載の方法。
［１６］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が経口投与される、［９］〜［１５］のいずれか一項記載の方法。
［１７］  神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するためのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤および触媒性ｍＴＯＲ阻害剤を含む、組み合わせ製品。
［１８］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤が、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、［１７］に記載の組み合わせ製品。
［１９］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤がＲＡＤ００１であり、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８である、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、［１８］に記載の組み合わせ製品。
［２０］  神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、個別調製物または組み合わせ調製物のいずれかとして、１または複数回用量の９０〜１１０ mg ＲＡＤ００１および１６５〜１８５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８； ８０〜１２０ mg ＲＡＤ００１および１５５〜１９５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；７０〜１３０ mg ＲＡＤ００１および１４５〜２０５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；６０〜１４０ mg ＲＡＤ００１および１３５〜２１５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；５０〜１５０ mg ＲＡＤ００１および１２５〜２２５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；５０〜２００ mg ＲＡＤ００１および１００〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；２５〜１７５ mg ＲＡＤ００１および１００ 〜 ２５０ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；１〜２００ mg ＲＡＤ００１および５０〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；１〜３００ mg ＲＡＤ００１および１〜５００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；または１〜５００ mg ＲＡＤ００１および１〜８００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８を含む、［１９］記載の組み合わせ製品。
［２１］  神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、個別調製物または組み合わせ調製物のいずれかとして、１または複数回用量の約１００ mg ＲＡＤ００１および約１７５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８を含む、［１９］記載の組み合わせ製品。
［２２］  該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運動神経疾患および末梢神経障害から選択される、神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、［１７］〜［２１］のいずれか一項記載の組み合わせ製品。
［２３］  該ハンチントン疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、［２２］記載の組み合わせ製品。
［２４］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が経口投与される、［１７］〜［２３］のいずれか一項記載の神経変性疾患の処置または予防において、同時に、別々に、または逐次的に使用するための、組み合わせ製品。
［２５］  神経変性疾患の処置または予防において使用するための、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤、触媒性ｍＴＯＲ阻害剤および医薬上許容し得る担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
［２６］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤が、ＲＡＤ００１、シロリムス、テムシロリムスおよびデフェロリムスから選択され、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が、ＢＥＺ２３５、ＣＣＧ１６８、Ｋｕ-００６３７９４、ＷＹＥ-３５４および８-(６-メトキシ-ピリジン-３-イル)-３-メチル-１-(４-ピペラジン-１-イル-３-トリフルオロメチル-フェニル)-１,３-ジヒドロ-イミダゾ[４,５-c]キノリン-２-オンから選択される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２５］記載の医薬組成物。
［２７］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤がＲＡＤ００１であり、該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤がＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８である、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２６］記載の医薬組成物。
［２８］  ９０〜１１０ mg ＲＡＤ００１および１６５〜１８５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；８０〜１２０ mg ＲＡＤ００１および１５５〜１９５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；７０〜１３０ mg ＲＡＤ００１および１４５〜２０５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；６０〜１４０ mg ＲＡＤ００１および１３５〜２１５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；５０〜１５０ mg ＲＡＤ００１および１２５〜２２５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；５０〜２００ mg ＲＡＤ００１および１００〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；２５〜１７５ mg ＲＡＤ００１および１００〜２５０ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；１〜２００ mg ＲＡＤ００１および５０〜３００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；１〜３００ mg ＲＡＤ００１および１〜５００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；または１〜５００ mg ＲＡＤ００１および１〜８００ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および医薬上許容し得る担体または希釈剤を含む、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２７］記載の医薬組成物。
［２９］  下記のもの：
−約１００ mg ＲＡＤ００１；
−約１７５ mg ＢＥＺ２３５またはＣＣＧ１６８；および
−医薬上許容し得る担体または希釈剤；
を含む、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２７］記載の医薬組成物。
［３０］  該神経変性疾患が、ハンチントン疾患、パーキンソン疾患、脊髄小脳失調症３型、アルツハイマー疾患、運動神経疾患および末梢神経障害から選択される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２５］〜［２９］のいずれか一項記載の医薬組成物。
［３１］  ハンチントン疾患の処置または予防における使用のための、［３０］記載の医薬組成物。
［３２］  該アロステリックｍＴＯＲ阻害剤および該触媒性ｍＴＯＲ阻害剤が経口投与される、神経変性疾患の処置または予防において使用するための、［２５］〜［３１］のいずれか一項記載の医薬組成物。
【０１３１】
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【図１Ｃ】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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