(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0005951006.tif 000087
〔式中、
Ａ１は末端カルボキシ基またはカルバモイル基を有するアミノ酸の二価基であり、式Ｉにおける右手側でカルボニルを介して分子の残りに結合しているか、またはＣ１−８−アルカノイルまたはリン酸化ヒドロキシ−Ｃ１−８−アルカノイルであり；
ＸはＡ１のＮを介して結合しており、アシルであるかまたはＡ１がＣ１−８−アルカノイルまたはリン酸化ヒドロキシ−Ｃ１−８−アルカノイルであるならば存在せず；
Ｒ２はＣ１−８−アルキルであり；
Ｒ３はロイシン、イソロイシンまたはバリンの側鎖であり；
Ｒ５はアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ６はヒドロキシアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ７はアミノ酸の側鎖であり；
Ｙは水素またはＣ１−８−アルキルである。〕
の環状デプシペプチド化合物またはその塩を製造するための方法であって、式II
【化２】
0005951006.tif 000088
〔式中、Protは保護基であり、Ｙは式Ｉの化合物について定義したとおりであり、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は、これらの基上の反応性官能基が望まない副反応に参加し得るならば保護された形態で存在する以外、それぞれ式ＩにおけるＸ、Ａ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７に対応する。〕
の化合物を選択的脱保護して、式III
【化３】
0005951006.tif 000089
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は上に定義した意
味を有する。〕
の化合物を得て、
遊離ヒドロキシル基を酸化条件下で反応させて、式IV
【化４】
0005951006.tif 000090
の化合物を形成させて、残った保護基を除去して、式Ｉの化合物またはその塩を得て、所望により、遊離式Ｉの化合物を塩に変換し、式Ｉの化合物の塩を式Ｉの化合物の異なる塩または式Ｉの遊離化合物に変換しおよび／または式Ｉの化合物の脱水類似体を対応する式Ｉの化合物に変換することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の要約
本発明は大環状デプシペプチド類の製造のための方法または工程、新規中間体およびそれらの製造、ならびに関連発明態様に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
環状デプシペプチド類は薬理学において多くの用途がある。一例として、ＷＯ２００９／０２４５２７に開示されているデプシペプチド類は種々の疾患の処置に有用である。例えば、ＷＯ２００９／０２４５２７に記載されている式IIの化合物は、炎症性および／または過剰増殖性および掻痒性皮膚疾患、例えばアトピー性皮膚炎、乾癬、膿疱性乾癬、酒さ、ケロイド、肥大型瘢痕、アクネ、ネザートン症候群または他の掻痒性皮膚疾患、例えば結節性痒疹、高齢者の不特定掻痒ならびに上皮バリア機能不全を伴う他の疾患、例えば老化した皮膚の処置および予防に有用である。
【０００３】
以前はシアノバクテリアであるノストック属から単離されていたノストペプチンＢＮ９２０は、ミクロキスティス属からも単離された。ノストペプチンＢＮ９２０はキモトリプシンを３１nMのＩＣ５０値で阻害した(J. Nat. Prod. 68(9), 1324-7 (2005)参照)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これらの化合物は発酵(粘液細菌であるコンドロミセス・クロカツス(chondromyces croactus)を使用)により、それぞれいわゆるａｈｐ部分構造(ａｈｐ：３−アミノ−６−ヒドロキシ−ピペリジン−２−オン)および対応するデヒドロ−ａｈｐ部分構造(デヒドロ−ａｈｐ：３−アミノ−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリジン−２−オン)(ここでは“脱水物”とも呼ぶ)を含む他のデプシペプチド類と共に製造できる。それ故に、これらの化合物のいずれか一つに関する発酵の収率はかなり低い。
【０００５】
本発明は、このような環状デプシペプチド類を高い収率および／または良好な純度で得ることを可能にする工程または方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明により、多くの異性体が可能である複雑な分子の合成におけるエピマー化、互変異性化などの多くのリスクを考慮して、式Ｉの環状デプシペプチド類を良好な収率および／または必要な立体異性純度で、特にその両者を備えて製造することを可能にする、好ましくは固相ペプチド合成および溶液中の反応の両者を含む、製造工程を見出すことができた。本発明により、副生成物、特にデヒドロ−ａｈｐ部分構造および／またはａｈｐの代わりに５員環を有する所望のａｈｐ含有生成物の類似体を、所望の最終生成物において変換することにより、このような副生成物の量を減らし、かつ、収率を改善することができた。これは収率のさらなる上昇を可能にする。今日まで、この分野で固相ペプチド合成を利用する合成を、我々は知らない。
【０００７】
(ｉ／ａ)第一の態様において、本発明は、式Ｉ
【化１】
0005951006.tif 000002
特に式ＩＡ
【化２】
0005951006.tif 000003
〔式中、
Ａ１は末端カルボキシ基またはカルバモイル基を有するアミノ酸、特にアスパラギンまたはグルタミンの二価基であり、式Ｉにおける右手側(Ｃ末端に対応)でカルボニル(好ましくはそのα−カルボキシル基のカルボニル)を介して分子の残りに結合しているか；またはＣ１−８−アルカノイルまたはリン酸化ヒドロキシ−Ｃ１−８−アルカノイルであり；
ＸはＡ１のＮを介して結合しており、アシルであるかまたはＡ１がＣ１−８−アルカノイルまたはリン酸化ヒドロキシ−Ｃ１−８−アルカノイルであるならば存在せず；
Ｒ２はＣ１−８−アルキル、特にメチルであり；
Ｒ３はアミノ酸、特にロイシン、イソロイシンまたはバリンの側鎖であり；
Ｒ５はアミノ酸、好ましくはフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシンまたはバリンの側鎖であり；
Ｒ６はヒドロキシアミノ酸、特にチロシンの側鎖であり；
Ｒ７はアミノ酸、好ましくはアミノ酸ロイシン、イソロイシンまたはバリンの側鎖であり；
Ｙは水素またはＣ１−８−アルキルである。〕
の環状デプシペプチド化合物またはその塩を製造するための方法または工程に関し、
【０００８】
該方法は、式II
【化３】
0005951006.tif 000004
特に式IIＡ
【化４】
0005951006.tif 000005
〔式中、Protは保護基であり、Ｙは式Ｉの化合物について定義したとおりであり、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は、これらの基上の反応性官能基(例えばアミノ、イミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、スルフヒドリル、アミジノ、グアニジノ、Ｏ−ホスホノ(−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)２)が望まない副反応に参加し得るならば保護された形態で存在する以外、それぞれ式ＩにおけるＸ、Ａ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７に対応する。〕
の化合物を選択的脱保護して、式III
【化５】
0005951006.tif 000006
特に式IIIＡ
【化６】
0005951006.tif 000007
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は直前に定義した意味を有する。〕
の化合物を得て、
【０００９】
遊離ヒドロキシル基を酸化条件下で反応させて、式IV
【化７】
0005951006.tif 000008
特にIVＡ
【化８】
0005951006.tif 000009
の化合物を形成させて、残った保護基を除去して、式Ｉの化合物またはその塩を得て、
所望により、式Ｉまたは特にＩＡの遊離化合物をその塩に変換し、式Ｉの化合物の塩を式Ｉまたは特にＩＡの化合物の別の塩または式Ｉまたは特にＩＡの遊離化合物に変換しおよび／または式Ｉまたは特にＩＡの化合物の脱水類似体および／または５員環類似体を対応する式Ｉまたは特にＩＡの化合物に変換することを含む。
【００１０】
式IIIまたは特にIIIＡの化合物を酸化するための適切な酸化条件は、通常ＩＢＸのＤＭＳＯ溶液(J. Org. Chem. 1995, 60, 7272-7276)；二クロム酸ピリジニウムまたはクロロクロム酸ピリジニウム(Tetrahedron Lett. 1979, 5, 399-402)；塩化オキサリル、ジメチルスルホキシドおよび三級アミン(J. Peptide Sci. 2006, 12, 140-146)、オキソアンモニウム塩類(J. Org. Chem. 1985, 50, 1332-1334)；オキソアンモニウム塩類により触媒されるアルカリ次亜塩素酸アルカリ類(J Org. Chem. 1989, 54, 2970-2972)；オキソアミニウム塩類(Tetrahedron Lett. 1988, 29, 5671-5672)、ＲｕＣｌ２(ＰＰｈ３)３(Tetrahedron Lett. 1981, 22, 1605-1608)；次亜塩素酸ナトリウム存在下のＴＥＭＰＯ(１mol％)(Tetrahedron Lett. 1990, 31, 2177-2180)；ＮａＩＯ４、ＴＥＭＰＯ、ＮａＢｒ(Tetrahedron 2006, 62, 8928-8932)；ＳｉＯ２支持酸化バナジウム(IV)およびｔ−ＢｕＯＯＨ(Advanced Synthesis & Catalysis 2007, 349, 846-848)を使用する。好ましくは、反応を、ＩＢＸのＤＭＳＯ溶液を用いてまたは好ましくは不活性溶媒、例えばテトラヒドロフラン中、ＤＭＳＯの存在下、０〜５０℃、好ましくは２０〜２５℃の温度で行う。
【００１１】
(ii／ａ)本発明のさらなる態様は上記方法または工程に関し、さらに、対応する出発アミノ酸類および側鎖前駆体から、式IVもしくは特にIVＡの化合物を固相ペプチド合成(特に下記式VIIIもしくは特にVIIIＡのオリゴペプチド前駆体について下に示す前駆体XXもしくは特にXXＡまたは下記式XXVもしくは特にXXVＡのオリゴペプチド前駆体について下に示す式XXIVもしくは特にXXIVＡのオリゴペプチド前駆体の合成のために)と液相合成(特に最終生成物について直前に記載した化合物から)の組み合わせにより製造することを含む。
【００１２】
(iii／ａ)本発明のさらなる態様は、上記方法または工程に関し、さらに、上記式IIの化合物の合成のために、式VI
【化９】
0005951006.tif 000010
特にVIＡ
【化１０】
0005951006.tif 000011
〔式中、Protは保護基であり、Ｙは式Ｉの化合物について定義したとおりであり、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
の化合物と、式VII
【化１１】
0005951006.tif 000012
〔式中、Ｘ＊＊はアミノ保護基であるかまたはＸ＊であり、Ｘ＊およびＡ１＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
の酸またはその反応性誘導体を反応させ；Ｘ＊＊がアミノ保護基であるならば、該アミノ保護基Ｘ＊＊を除去して、Ｘ＊の代わりにＨ(水素)が存在する式II(特にIIＡ)の誘導体を得て、対応する酸Ｘ＊−ＯＨ(式中、Ｘ＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである)またはその反応性誘導体を使用して、得られたアミノ基とアシル基Ｘ＊をカップリングさせることを含む。
【００１３】
(iv／ａ)本発明の他の態様は上記の、特に直前の段落における方法または工程に関し、さらに、好ましくは液相化学を使用する、Ｎ末端アミノ基およびＣ末端カルボキシ基を担持する式VIの化合物の直鎖状の、すなわちまだ環化されていない前駆体ペプチドの、該アミノ基および該カルボキシ基からアミド結合の形成を可能にする反応条件下でのラクタム化の下の環化を含む。
【００１４】
溶液中のラクタム化は、通常オリゴマー化および重合を避けるために、極めて低濃度の基質で行う。これにより、反応を行うために大量の溶媒と巨大な反応器が必要となる。例えば、オリゴペプチドのマクロラクタム化は、Yokokawa et al., Tetrahedron 2005, 61, 1459-1480の文献では２mMols／Ｌの濃度で行われる。この困難さは、三級塩基およびカップリング剤を溶解し、この溶液にオリゴペプチド溶液を制御された方法で添加することにより回避できる。オリゴペプチド溶液の制御された、特にゆっくりした添加は、溶液中の活性化オリゴペプチドの永続した低濃度をもたらし、それ故にオリゴマー化および重合を防止する。オリゴペプチド溶液の添加速度は、大環状化の反応速度によって調節できる。大環状化が速い反応ならば、オリゴペプチドの溶液は速く添加できる。大環状化が遅いならば、溶液添加は、活性化オリゴペプチドの永続的低濃度を確実にするために遅くなければならない。それ故にオリゴペプチドの制御された添加は、はるかに少ない溶媒量で、なお、活性化オリゴペプチドの濃度を１０−３mM以下、例えば１０−４〜１０−６mMの範囲またはそれより低く維持しながら反応することを可能にする。オリゴペプチドのカップリング剤溶液への制御された添加を用いるこの変法は本発明の一態様である。
【００１５】
(ｖ／ａ)さらに別の態様において、本発明は、特に直前の段落における方法または工程に関し、直鎖状(本用語は使用するときまだ環状ではないことを意味する)前駆体ペプチドが式VIII
【化１２】
0005951006.tif 000013
特にVIIIＡ
【化１３】
0005951006.tif 000014
〔式中、Prot＊は、存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、直鎖状前駆体ペプチドの合成中の脱保護工程の間安定である保護基(例えばアリルオキシカルボニル)であり、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は上記式VIの化合物について定義したとおりである。〕
の化合物であるとき、さらに、式VIII、特にVIIIＡの化合物の環化後、インサイチュで保護基Prot＊を除去して、式VI、特にVIＡの化合物を得ることを含む。
【００１６】
(vi／ａ)他の態様において、本発明は、特に直前の段落における方法または工程に関し、ここで、式VIII、特にVIIIＡの直鎖状前駆体ペプチドを、対応するアミノ酸類から、固相ペプチド合成および続く使用した固体支持体からの開裂により合成することを含む。
【００１７】
(vii／ａ)本発明の一態様はさらに上記(特に上記段落(vi／ａ))方法または工程に関し、さらに、
変法ａ)において、式IX
【化１４】
0005951006.tif 000015
特に式IXＡ
【化１５】
0005951006.tif 000016
〔式中、Ｒ３＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊は他の結合を開裂せずに樹脂上で除去できるアミノ保護基である。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体と、酸素を介して、固形樹脂ＲＥＳに結合している開裂可能リンカーＬをカップリングさせ(例えば式(Ｘ−Ｌ)ｚ−ＲＥＳ(式中、ＬおよびＲＥＳは直前に定義したとおりであり、Ｘは例えばハロ、例えばクロロであり、ｚは０より大きい数、例えば自然数である)の樹脂との反応により)、
そして保護基Prot＊＊を除去し；
【００１８】
得られる式Ｘ
【化１６】
0005951006.tif 000017
特にＸＡ
【化１７】
0005951006.tif 000018
〔式中、ＲＥＳおよびＲ３＊は式IXの化合物について定義したとおりであり、ｎは０より大きい(例えば自然)数であり、Ｌは開裂可能リンカーである。〕
で表される樹脂結合アミノ酸と、式XI
【化１８】
0005951006.tif 000019
特にXIＡ
【化１９】
0005951006.tif 000020
〔式中、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりであり、Ｒ２＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体をカップリングさせ、
【００１９】
得られる式XII
【化２０】
0005951006.tif 000021
特にXIIＡ
【化２１】
0005951006.tif 000022
〔式中、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりであり、Ｒ２＊およびＲ３＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、ｎ、ＬおよびＲＥＳは式Ｘの化合物について定義したとおりである。〕
で表される樹脂結合ジペプチドと、遊離ヒドロキシ基を介して、式XIII
【化２２】
0005951006.tif 000023
特にXIIIＡ
【化２３】
0005951006.tif 000024
〔式中、Prot＊＊は式IXの化合物について定義したとおりであり、Ｒ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体をカップリングさせ、保護基Prot＊＊を除去するか；
【００２０】
または、変法ｂ)において、式XXVII
【化２４】
0005951006.tif 000025
特に式XXVIIＡ
【化２５】
0005951006.tif 000026
〔式中、Ｒ３＊およびProt＊＊は式IX、特にIXＡの化合物について定義したとおりであり、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりである。〕
のジペプチドまたは該ジペプチドの反応性誘導体と、変法ａ)の下に記載したとおりに得ることができる式Ｘ
【化２６】
0005951006.tif 000027
特にＸＡ
【化２７】
0005951006.tif 000028
〔式中、ＲＥＳおよびＲ３＊は式IXの化合物について定義したとおりであり、ＬおよびＲＥＳは直前に定義したとおりである。〕
を有する固形樹脂ＲＥＳに結合した開裂可能リンカーＬに酸素を介して結合したアミノアシル基をカップリングさせ、保護基Prot＊＊を除去し；
そして、変法ａ)または変法ｂ)の反応後、
【００２１】
(viii／ａ)得られる式XIV
【化２８】
0005951006.tif 000029
特にXIVＡ
【化２９】
0005951006.tif 000030
〔式中、Ｒ２＊、Ｒ３＊およびＲ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりであり、ｎ、ＬおよびＲＥＳは式Ｘの化合物について定義したとおりである。〕
の化合物と、式XV
【化３０】
0005951006.tif 000031
特に式XVＡ
【化３１】
0005951006.tif 000032
〔式中、Ｒ６＊およびＹは上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊は、上記式IXの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体をカップリングさせ、保護基Prot＊＊を除去し；
【００２２】
(ix／ａ)好ましくは得られる式XVI
【化３２】
0005951006.tif 000033
特に式XVIＡ
【化３３】
0005951006.tif 000034
〔式中、Ｙ、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ７＊およびＲ６＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりであり、ｎ、ＬおよびＲＥＳは式Ｘの化合物について定義したとおりである。〕
の化合物と、式XVII
【化３４】
0005951006.tif 000035
特に式XVIIＡ
【化３５】
0005951006.tif 000036
〔式中、Ｒ５＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊は式IXの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体をカップリングさせ、保護基Prot＊＊を除去し、そして好ましくは
【００２３】
(ｘ／ａ)最後に、得られた式XVIII
【化３６】
0005951006.tif 000037
特にXVIIIＡ
【化３７】
0005951006.tif 000038
〔式中、Ｙ、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ７＊、Ｒ６＊およびＲ５＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりであり、ｎ、ＬおよびＲＥＳは上記式Ｘの化合物について定義したとおりである。〕
の化合物と、式XIX
【化３８】
0005951006.tif 000039
特に式XIXＡ
【化３９】
0005951006.tif 000040
〔式中、Protは上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊は式IXの化合物について定義したとおりである。〕
の非天然アミノ酸(＝シントン)または該シントンの活性化誘導体をカップリングさせ、保護基Prot＊＊を除去して、式XX
【化４０】
0005951006.tif 000041
特にXXＡ
【化４１】
0005951006.tif 000042
〔式中、Prot、Ｙ、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ７＊、Ｒ６＊およびＲ５＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊は上記式VIIIの化合物について定義したとおりであり、ｎ、ＬおよびＲＥＳは式Ｘの化合物について定義したとおりである。〕
の化合物を得て、そして
【００２４】
(xi／ａ)式XXにおける固相結合ペプチドを固相Ｌ−ＲＥＳから切断して、上に示す対応する式VIII、特にVIIIＡの化合物を得る。
【００２５】
本発明の他の態様は、セクション(ｉ／ａ)による上記式IIの化合物の合成に関し、好ましくはセクション(ii／ａ)またはより好ましくはセクション(iii／ａ)による反応が先行し；好ましくはセクション(iv／ａ)または好ましくは(ｖ／ａ)による反応が先行し、好ましくはセクション(vi／ａ)による反応が先行し、好ましくはセクション(ｘ／ａ)による反応が先行し、好ましくはセクション(ix／ａ)による反応が先行し、好ましくはセクション(viii／ａ)による反応が先行し、好ましくはセクション(vii／ａ)による反応が先行する。
【００２６】
(ｉ／ｂ)本発明の他の態様は上記方法または工程に関し、上記式IIの化合物の合成のために、好ましくは液相化学を使用する、Ｎ末端アミノ基およびＣ末端カルボキシ基を担持する、式IIの化合物の直鎖状の、まだ環化されてない前駆体ペプチドの、該アミノ基および該カルボキシ基からアミド結合の形成を可能にする反応条件下での、ラクタム化の下の環化を含む。
【００２７】
(ii／ｂ)本発明のさらなる態様は先の段落(ｉ／ｂ)による方法または工程に関し、ここで、直鎖状前駆体ペプチドは式XXV
【化４２】
0005951006.tif 000043
特にXXVＡ
【化４３】
0005951006.tif 000044
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊、Ｒ７＊およびProtは上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
のものである。
【００２８】
(iii／ｂ)他の態様は、先の段落(ii／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XXVの化合物の合成のために、式XXIV
【化４４】
0005951006.tif 000045
特にXXIVＡ
【化４５】
0005951006.tif 000046
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊、Ｒ７＊およびProtは上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数であり、Prot＊＊は保護基Protの並行除去なしに除去でき、かつ生成物を樹脂に残すアミノ保護基である。〕
の化合物を開裂し、(開裂前に、開裂と並行してまたは開裂後に)保護基Prot＊＊を除去して、式XXVの化合物を得ることを含む。
【００２９】
(iv／ｂ)本発明のさらなる態様は、先の段落(iii／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XXIVの化合物の合成のために、式XIX
【化４６】
0005951006.tif 000047
特にXIXＡ
【化４７】
0005951006.tif 000048
〔式中、Protは上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊は上記式XXIVの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の活性化誘導体と、式XXIII
【化４８】
0005951006.tif 000049
特にXXIIIＡ
【化４９】
0005951006.tif 000050
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数である。〕
の化合物をカップリングさせることを含む。
【００３０】
(ｖ／ｂ)さらに本発明のさらなる態様は、先の段落(iv／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XXIIIの化合物の合成のために、式XVII＊
【化５０】
0005951006.tif 000051
特にXVIIＡ＊
【化５１】
0005951006.tif 000052
〔式中、Ｒ５＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊＊は、存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂に残すアミノ保護基である。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体と、式XXII
【化５２】
0005951006.tif 000053
特にXXIIＡ
【化５３】
0005951006.tif 000054
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数である。〕
の化合物をカップリングさせ、保護基Prot＊＊＊を除去することを含む。
【００３１】
(vi／ｂ)さらに別の態様において、本発明は先の段落(ｖ／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XXIIの化合物の合成のために、式XV＊
【化５４】
0005951006.tif 000055
特にXVＡ＊
【化５５】
0005951006.tif 000056
〔式中、Ｒ６＊およびＹは、上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊＊は、存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂に残すアミノ保護基である。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体と、式XXI
【化５６】
0005951006.tif 000057
特にXXIＡ
【化５７】
0005951006.tif 000058
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊およびＲ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数である。〕
の化合物をカップリングさせ、保護基Prot＊＊＊を除去することを含む。
【００３２】
(vii／ｂ)本発明の他の態様は、先の段落(vi／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XXIの化合物の合成のために、式XIII＊
【化５８】
0005951006.tif 000059
特にXIIIＡ＊
【化５９】
0005951006.tif 000060
〔式中、Prot＊＊＊は、存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂に残すアミノ保護基であり、Ｒ７＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体と、式XXVI
【化６０】
0005951006.tif 000061
特にXXVIＡ
【化６１】
0005951006.tif 000062
〔式中、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊およびＲ３＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数である。〕
の化合物のヒドロキシル基を反応させ、保護基Prot＊＊＊を除去することを含む。
【００３３】
(viii／ｂ)さらなる態様において、本発明は、先の段落(vii／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XXVI、特にXXVIＡの化合物の合成のために、式XII＊
【化６２】
0005951006.tif 000063
特にXIIＡ＊
【化６３】
0005951006.tif 000064
〔式中、Prot＊＊＊＊は、上に定義した式IIの化合物に存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂に残す保護基であり、Ｒ２＊およびＲ３＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数である。〕
で表される樹脂結合ジペプチドと、保護基Prot＊＊＊＊の除去後、こうして得た遊離アミノ基を介して、式VII
【化６４】
0005951006.tif 000065
〔式中、Ｘ＊＊はアミノ保護基であるかまたはＸ＊であり、Ｘ＊およびＡ１＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
の酸または該酸の反応性誘導体とカップリングさせ；
Ｘ＊＊がアミノ保護基であるならば、該アミノ保護基Ｘ＊＊を除去して、Ｘ＊の代わりにＨが存在する式IIの誘導体を得て、対応する酸Ｘ＊−ＯＨ(式中、Ｘ＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである)または該酸の反応性誘導体を使用して、得られたアミノ基とアシル基Ｘ＊をカップリングさせることを含む。
【００３４】
(ix／ｂ)本発明のさらに別の態様は、先の段落(viii／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式XIIの化合物の合成のために、式Ｘ
【化６５】
0005951006.tif 000066
特にＸＡ
【化６６】
0005951006.tif 000067
〔式中、Ｒ３＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Ｌは開裂可能リンカーであり、ＲＥＳは固形樹脂であり、ｎは自然数である。〕
で表される樹脂結合アミノ酸と、式XI＊
【化６７】
0005951006.tif 000068
特にXIＡ＊
【化６８】
0005951006.tif 000069
〔式中、Prot＊＊＊＊は存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂に残す保護基であり、Ｒ２＊は上記式IIの化合物について定義したとおりである。〕
のアミノ酸または該アミノ酸の反応性誘導体をカップリングさせることを含む。
【００３５】
(ｘ／ｂ)本発明のさらなる態様は、先の段落(ix／ｂ)による方法または工程に関し、さらに、式Ｘの樹脂結合アミノ酸を得るために、式IX＊
【化６９】
0005951006.tif 000070
特にIXＡ＊
【化７０】
0005951006.tif 000071
〔式中、Ｒ３＊は上記式IIの化合物について定義したとおりであり、Prot＊＊＊は存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂に残すアミノ保護基である。〕
のアミノ酸または式IXの該アミノ酸の反応性誘導体と、固形樹脂ＲＥＳに結合している開裂可能リンカーＬをカップリングさせ、保護基Prot＊＊＊を除去することを含む。
【００３６】
(ｉ／ｃ)本発明の他の態様は、先の段落(ｉ／ａ)〜(ｘ／ｂ)のいずれかによる方法または工程に関し、ここで、記号Ａ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ＸおよびＹまたは対応する保護されていないもしくは保護された基Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊、Ｒ７＊、Ｘ＊およびＹ３は、得られた式Ｉの化合物またはその塩において、
Ａ１が、α−カルボキシ基のカルボニルを介して式ＩにおけるＡ１の右手側のアミノ基に結合し、α−アミノ基を介してＸに結合するＬ−グルタミンの二価残基であるかまたは２Ｓ−(２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシ)−プロピオニルであり；
Ｒ２がメチルであり；
Ｒ３がイソプロピル、イソブチル(使用するとき２−メチル−ｎ−プロピル)またはベンジル、特にイソブチルであり；
Ｒ５がｓｅｃ−ブチルまたはベンジル、特にｓｅｃ−ブチルであり；
Ｒ６が４−ヒドロキシベンジルであり；
Ｒ７がイソプロピルまたはｓｅｃ−ブチル(使用するとき１−メチル−ｎ−プロピル)、特にｓｅｃ−ブチルであり；
ＸがアセチルまたはイソブチリルであるかまたはＡ１が２Ｓ−(２−ヒドロキシ−３−ホスホノオキシ)−プロピオニルであるとき存在せず、
Ｙがメチルである
ように選択する。この段落は、下記で段落ａ)とも呼ぶ。
【００３７】
(ｉ／ｄ)他の特定の態様において、本発明は、上記式Ｉの化合物の脱水物または特に先の段落(ｉ／ｃ)で定義した置換基を有するものを対応する式Ｉの化合物に変換するための方法または工程であり、ここで、脱水物は式Ｖ
【化７１】
0005951006.tif 000072
特にＶＡ
【化７２】
0005951006.tif 000073
〔式中、Ｙ、Ｘ、Ａ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は上記式Ｉの化合物について定義したとおりである。〕
の構造を有するものであるか、または
特に、式Ｉの化合物およびその対応する脱水物および／または副生成物としても形成され得て、式Ｖ＊
【化７３】
0005951006.tif 000074
特に式ＶＡ＊
【化７４】
0005951006.tif 000075
〔式中、Ｙ、Ｘ、Ａ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はそれぞれ上記式Ｉの化合物について定義したとおりである。〕
の構造を有する、式Ｉにおけるａｈｐ構造の代わりに５員環(five-ring)を有するその対応するヘミアミナール類似体の混合物の平衡を式Ｉの化合物に有利にシフトさせる方法または工程に関し、
該方法または工程は、酸水溶液を、反応を起こさせるための反応性溶媒として使用することを含む。この方法は独立して(例えば発酵または生合成の生成物のために)または上におよび下に記載する他の工程または方法に加えて、収率を上げるために、または式Ｖ、特にＶＡの化合物および／または式Ｉにおけるａｈｐ構造の代わりに５員環を有する類似体を対応する式Ｉの化合物に再変換するために使用し得る。
【００３８】
脱水物および／または５員環(five-ring)類似体(常に所望のａｈｐ環に関する)から所望の式Ｉまたは特にＩＡの化合物への、例えば実施例３Ｂ由来の化合物Ａ−脱水物から化合物Ａへの変換について記載する方法は、この群の化合物の直接的な合成を可能にする。現在まで、最終工程としての酸性処理は、生成物の脱水を避けるために回避すべきものであった。
【００３９】
(ｉ／ｅ)本発明のさらなる態様は、先の段落(ｉ／ｄ)による方法に関し、ここで、酸はカルボン酸、特にハロ置換Ｃ１−８アルカン酸、さらに具体的にはトリフルオロ酢酸またはトリクロロ酢酸である。
【００４０】
(ｉ／ｆ)本発明は、さらに別の態様において、式II
【化７５】
0005951006.tif 000076
〔式中、Protは保護基であり、Ｙは最初に上で式Ｉの化合物について定義した通りであるかまたは特に請求項１７で定義したとおりであり、Ｘ＊、Ａ１＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊およびＲ７＊は、これらの基上の反応性官能基が保護された形態で存在する以外、上記式Ｉまたは段落(ｉａ)においてそれぞれ定義したＸ、Ａ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７に対応する。〕
の化合物に関する。
【００４１】
(ｉ／ｇ)さらなる態様において、本発明は、式II、III、IV、Ｖ、VI、VIII、Ｘ、XII、XIV、XVI、XVIII、XIX、XX、XXI、XXII、XXIII、XXIV、XXV、XXVIおよびXXVIIIの化合物および特に式IIＡ、IIIＡ、IVＡ、ＶＡ、VIＡ、VIIIＡ、ＸＡ、XIIＡ、XIVＡ、XVIＡ、XVIIIＡ、XIXＡ、XXＡ、XXIＡ、XXIIＡ、XXIIIＡ、XXIVＡ、XXVＡ、XXVIＡおよびXXVIIIＡの化合物、さらに具体的には実施例に記載する次の化合物からなる群から成る群から選択される新規化合物に関する。
スキーム１の、化合物２、化合物３、化合物４、シントン１；
スキーム２の化合物５；
実施例１Ｂ(２)のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂；
実施例１Ｂ(３)のＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂；
実施例１Ｂ(４)のＦｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂；
実施例１Ｂ(５)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂；
実施例１Ｂ(６)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂；
実施例１Ｂ(７)の生成物であるイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂)；
実施例１Ｂ(８)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂)；
実施例１Ｂ(９)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂)；
実施例１Ｂ(１０)およびスキーム３のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ)；
実施例１Ｂ(１２)のＨ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂；
実施例１Ｂ(１３)のＨ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂；
実施例１Ｂ(１４)イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂；
実施例１Ｂ(１５)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂；
実施例１Ｂ(１６)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂；
実施例１Ｂ(１７)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂；
実施例１Ｂ(１８)のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂ａ；
スキーム３から、化合物６および／または７(後者が好ましい)；
スキーム４から、化合物８および５員環(5-ring)ヘミアミナール異性体；
スキーム５から、前駆体ペプチド２、化合物９、化合物１０(スキーム５に記載されている現在のものの中ではこれが好ましい)および／または化合物１１；
実施例２Ａ(１)のＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ；
実施例２Ａ(２)のＦｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ；
実施例２Ａ(３)のＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ；
実施例２Ａ(４)のＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ；
実施例２Ａ(５)のＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ)；
実施例２Ａ(６)のＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｐｈｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｐｈｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ)；および
実施例２Ａ(７)のＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｐｈｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｐｈｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ)(前駆体ペプチド２)。
【００４２】
次の定義(または既に上に記載した定義も含む)は、前記および後記の一般的な本発明の態様を置き換えて、さらに本発明の態様を定義することができ、１個、２個またはそれ以上もしくは全ての一般的な用語を、このような本発明の態様を定義するためにより具体的な用語と置き換えられる。
【００４３】
末端カルボキシまたはカルバモイル基を有するアミノ酸の二価基は、好ましくはアルファ−カルバモイルまたはカルボキシル−Ｃ１−８置換アミノ酸、特にアスパラギンまたはグルタミンの二価基であり、式Ｉにおけるその右手側で、カルボニル(好ましくはそのα−カルボキシル基のカルボニル)を介して、分子の残りに結合している。
【００４４】
Ｃ１−８−アルカノイルまたはリン酸化ヒドロキシ−Ｃ１−８−アルカノイル(ヒドロキシル基およびホスホノ(−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)２)基の両者を担持するＣ１−８−アルカノイル)であるＡ１は、例えば２,３−ジヒドロキシ−プロパノイル(好ましくはＳ形態)または２−ヒドロキシ−３−ホスホノ−プロパノイル(好ましくはＳ形態)である。
Ｒ２およびＲ２＊は、記載するときＣ１−８−アルキル、特にメチルである。
【００４５】
Ｒ３はアミノ酸、特に天然アミノ酸の側鎖である。好ましくは、分枝鎖でも直鎖でもよいＣ１−８アルキルである。最も具体的には、Ｃ１−８アルキルはｎ−(２−メチル)プロピル(イソブチル)、ｎ−(１−メチルプロピル(ｓｅｃ−ブチル)またはメチル)であり、すなわち、これらの基を有するアミノ酸はロイシン、イソロイシンまたはバリンである。
【００４６】
Ｒ３＊は、反応へ参加させるべきでない反応官能基が存在するならば、保護された形態の対応する側鎖である。好ましくは、特に直前の段落で定義したとおり、分枝鎖でも直鎖でもよいＣ１−８アルキルである。
【００４７】
“アミノ酸の側鎖”は、あらゆる基、例えば、最大２０個の炭素原子を有し、基本構造においてＮ、ＯおよびＳから独立して選択される０〜５個のヘテロ原子が対応する数の炭素原子に置き換わっており、アミノ、イミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、カルバモイル、スルフヒドリル、アミジノ、グアニジノ、Ｏ−ホスホノ(−Ｏ−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)２)から選択される最大３個の置換基で置換されていてよい、例えば単環または多環、直鎖、飽和、不飽和(例えば共役二重結合を有する)または一部飽和の有機基である。好ましくは、側鎖は、２０種の標準アルファ−アミノ酸類であるアルギニン、ヒスチジン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、バリンおよびさらにプロリン(この場合、アルファ−アミノ基を含む分子内環化がある)から選択されるものである。
【００４８】
アミノ酸類について、下表によってその名称または慣習的三文字表記を本明細書では使用する。
【表１】
0005951006.tif 000077
【００４９】
Ｒ５はアミノ酸、好ましくは標準アミノ酸の側鎖である。好ましくは、直鎖でも分枝鎖でもよいＣ１−８アルキルであり、非置換であるかまたはフェニルで置換されている。最も具体的にはベンジル、ｎ−(２−メチル)プロピル、イソブチルまたはメチルであり、すなわち、これらの基を有するアミノ酸はフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシンまたはバリンである。
Ｒ６はヒドロキシアミノ酸、特にチロシンの側鎖である。
【００５０】
Ｒ７はアミノ酸、特に天然アミノ酸の側鎖である。好ましくは、直鎖でも分枝鎖でもよいＣ１−８アルキルである。最も具体的にはｎ−(２−メチル)プロピル(イソブチル)、ｎ−(１−メチル)プロピル(ｓｅｃ−ブチル)またはメチルであり、すなわち、これらの基を有するアミノ酸はロイシン、イソロイシンまたはバリンである。
【００５１】
Ｃ１−８−アルキルは直鎖でも、一カ所以上分枝していてもよく、例えば、ｎ−(２−メチル)プロピル、ｎ−(１−メチル)プロピルまたはメチルであり得る。
【００５２】
全ての化合物は、塩形成基、例えば塩基性基、例えばアミノまたはイミノまたは酸性基、例えばカルボキシルまたはフェノール性ヒドロキシルが存在するとき、遊離形態でまたは塩類としてまたは塩類と遊離形態の混合物として使用できる。それ故に化合物を記載するときは、これは全てのこれらの変種を含む。例えば、塩基性基は酸類、例えばハロゲン化水素酸類、例えばＨＣｌ、硫酸または有機酸類、例えば酢酸と塩類を形成でき、一方酸性基は、陽イオン類、例えばアンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカリまたはアルカリ土類金属塩カチオン、例えばＣａ、Ｍｇ、Ｎａ、ＫまたはＬｉカチオンと塩類を形成できるなど。
【００５３】
“など”は、本明細書で使用するとき、このような用語の前に記載したものに代わるものが当業者には知られ、具体的に記載したものに付け加えられ得るとの事実を意味する。他の態様において、“など”は、この本発明の態様の一つ以上または全てから削除し得る。
【００５４】
保護基Prot、Prot＊、Prot＊＊、Prot＊＊＊、Prot＊＊＊＊および基Ａ＊、Ｒ２＊、Ｒ３＊、Ｒ５＊、Ｒ６＊、Ｒ７＊、Ｘ＊上に存在するあらゆる他の保護基は、本明細書および特許請求の範囲に記載されている限り、オルトゴナルな保護を可能にするように選択される。
【００５５】
オルトゴナルな保護は、複数保護基の脱保護を、所望のときに１個(またはそれ以上であるが、全てではない)、各々、他の保護基または固相合成樹脂上のリンカーを介する樹脂への結合に影響することなく、専用の一連の反応条件を用いて脱保護することを可能にする方法である。換言すると、本方法は、異なる化学機構により除去される種々の保護基を使用し、また、固相ペプチド合成の場合、適当なリンカーを使用する(リンカー−樹脂結合は一体となってカルボキシ保護基として見なすべきである)。
【００５６】
好ましくは、保護基は次のとおりに選択する。
保護基Protは、好ましくはデプシペプチドの本発明による合成中に使用するまたは存在する他の保護基の除去に耐える、例えば穏やかな塩基に耐えるが(Prot＊参照)、フッ素イオン(特に無水条件下)、例えばＢｕ４Ｎ＋Ｆ−(例えばＢｕ４Ｎ＋Ｃｌ−とＫＦ・Ｈ２Ｏ、ＫＦと１８−クラウン−６、ＬｉＦと１８−クラウン−６、ＢＦ３・ジエチルエーテル、ピリジン−ＨＦ、ＨＦのウレア溶液、Ｅｔ３Ｎ(ＨＦ)３(式中、Ｅｔはエチルである)などを使用して、インサイチュで形成されたときも)を使用し、溶媒が例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、クロロホルムおよびテトラヒドロフランから成る群から選択されるとき、除去可能であるように選択する。
【００５７】
好ましくは、Protは、特にシリル基が最大３個の有機基を、炭素(所望によりさらにＳｉ原子を介して)を介する結合により担持するシリル保護基、例えばｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、トリメチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、トリ(ti)−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリス(トリメチルシリル)シリルなどからなる群から選択されるエーテル保護基である。
【００５８】
Prot＊は、存在する他の保護基に影響することなく、また、エステル結合を形成するデプシペプチドまたは樹脂ＲＥＳへのリンカーに影響することなく選択的に開裂でき、直鎖状前駆体ペプチドの合成中の脱保護工程(例えばアリルオキシカルボニルの除去)に安定である、保護基であり、好ましくは、金属ハイドライド類または他の還元剤、例えば(ＰＨ３Ｐ)４Ｐｄ存在下、好ましくはジ−ｎ−ブチルスズハイドライドまたはトリ−ｎ−ブチルスズハイドライド、フェニルシラン、水素化ホウ素ナトリウムまたはジメドンと組み合わせて、適当な溶媒、例えばテトラヒドロフラン中で特異的トリフェニルホスフィン錯体により除去可能である保護基であり、好ましくは保護基Prot＊＊の除去を可能にする条件下では開裂されず、例えばProt＊はＣ３−Ｃ８アルク−２−エニルオキシカルボニル基、例えばアリルオキシカルボニル(Alloc)、１−イソプロピルアリルオキシカルボニル、４−ニトロシンナミルオキシカルボニルおよび３−(３’−ピリジル)プロプ−２−エニルオキシカルボニルから選択される。
【００５９】
Prot＊＊は、他の結合を開裂することなく(リンカーＬを介する結合にカルボキシル基(特にα−カルボキシル基)を介してカルボニルに結合しているアミノ酸またはペプチドの開裂なしに、また既に存在する保護基Protの開裂なしに)樹脂から除去できる保護基であり、特にデプシペプチドまたはデプシペプチド前駆体中のエステル(アミドの代わりに)結合の開裂なしに、保護基Prot＊およびProt用以外の条件下で除去でき、存在するとき、樹脂ＲＥＳへのリンカーを介した結合を保護する保護基であり、好ましくは弱塩基、例えばピペリジン、モルホリン、ジシクロヘキシルアミン、ｐ−ジメチルアミノ−ピリジン、ジイソプロピルアミン、ピペラジン、トリス−(２−アミノエチル)アミンにより、適当な溶媒、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、塩化メチレン中で除去可能であり、Prot＊＊は、例えば、フルオレン−９−イルメトキシカルボニル(Ｆｍｏｃ)；２−(２’または４’−ピリジル)エトキシカルボニルおよび２,２−ビス(４’−ニトロフェニル)エトキシカルボニルから成る群から選択される。
【００６０】
Prot＊＊＊(存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂上に残すアミノ保護基である)およびProt＊＊＊＊(上記定義の式IIの化合物に存在する他の保護基に影響することなく選択的に開裂でき、かつ生成物を樹脂上の残す保護基である)は、好ましくは、Prot＊＊と同様に除去できる保護基であり、例えば、Ｒ＊＊について記載したものから選択される、例えばフルオレン−９−イルメトキシカルボニル(Ｆｍｏｃ)である。
【００６１】
この場合の好ましいオルトゴナル合成方法は、固相ペプチド合成を液相マクロラクタム化およびさらなる化学変換と組み合わせて使用するペプチド合成について一般的に知られたＦｍｏｃ方法の使用を可能にする。
【００６２】
あるいは、例えばＢｏｃ保護基を、ＦｍｏｃであるProt＊＊、Prot＊＊＊およびProt＊＊＊＊の代わりに使用すべきである。
【００６３】
しかしながら、これは種々の側鎖保護基を必要とし、またＮ−メチル−Ｔｙｒのヒドロキシ基を、保護基のオルトゴナリティを維持する種々の方法で保護しなければならない。
【００６４】
存在する他の保護基ならびに存在するとき樹脂ＲＥＳへの結合リンカーは、好ましくはProt＊およびProt＊＊を除去できる条件下で除去不可能であり、例えばＡ＊において、アミドは例えばトリチル(トリフェニルメチル)でＮ保護されており(例えばトリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)で除去可能)；Ｒ６＊において、チロシンヒドロキシはｔ−ブチル−エーテルとして保護でき、またはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、メトキシメチル、Ｂｏｃ(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)または酢酸アリールにより保護されている(ＴＦＡで開裂)。
【００６５】
適当な保護基は当分野で知られており、その導入および除去方法も同様に知られている。例えば、保護基、その導入および除去方法は標準参考書、例えば“Protective Groups in Organic Synthesis”, 3rd ed., T.W. Green and P.G.M. Wuts (Eds.). J. Wiley & Sons, Inc., New York etc. 1999に記載されているものから選択され得る。
【００６６】
保護基Prot、Prot＊、Prot＊＊、Prot＊＊＊、Prot＊＊＊＊および他の保護基は上述のものに限定されない  −  むしろ、それらは、例えば上述し、また下述するようにオルトゴナルな保護に適当なものとなる条件を満たさなければならない。
【００６７】
デプシペプチド(エステル)結合の開裂を避けるために、過剰に塩基性の条件は避けるべきである(しかし、Ｆｍｏｃ開裂について記載した塩基類、例えばピペリジンは通常許容される)。
【００６８】
固相ペプチド合成(ＳＰＰＳ)のための可能な固体支持体について、次のものを記載し得る。
−  スペーサーを伴わないまたは伴うゲル型支持体：これらは官能基が均等に分配された高度に溶媒和されたポリマー類である。このタイプの支持体は最も一般的であり、次のものを含む。
ポリスチレン：例えば１〜２％ジビニルベンゼンと架橋したスチレン；ポリアクリルアミドまたはポリメタクリルアミド：ポリスチレンの親水性代替物として；ポリエチレングリコール(ＰＥＧ)：ＰＥＧ−ポリスチレン(ＰＥＧ−ＰＳ)はポリスチレンも安定であり、ポリマー主鎖から合成の場所を離す；ＰＥＧベースの支持体：ＰＥＧ−ポリプロピレングリコールネットワークまたはＰＥＧとポリアミドまたはポリスチレンから成る(これらは既にスペーサー、ＰＥＧを含む)；
−  表面型支持体：多孔性ガラス、セルロース線維および高度に架橋したポリスチレンを含む、表面官能化のために開発された材料；
−  複合材料：剛性マトリクスにより支持されたゲル型ポリマー類。
【００６９】
通常、これらのゲルは反応基を嘆じし、それに種々の前駆体について上におよび下に記載する記載したリンカーＬが結合できる。例えば、このような基はアミノメチル基、末端ヒドロキシを有するポリエチレングリコール基などを含む。
あらゆるこのような支持体を本発明の態様において使用できる。
【００７０】
ゲル型支持体は他の特定の本発明の態様において使用する、これらのうち、ポリスチレン(ジビニルベンゼン架橋)；ポリアクリルアミドおよびポリメタクリルアミド樹脂が特に好ましい。
可能なリンカーの中で、全ての一般的に知られたおよび適当なものを使用し得る。
【００７１】
可能な本発明の態様における例は、２−メトキシ−４−ベンジルオキシベンジルアルコールリンカー(Sasrin−リンカー、Sasrinはアルコール性ＯＨを介してアミノ酸類またはペプチド類に結合する超酸感受性樹脂を表す)；トリチルリンカーファミリー(例えば、ＯＨを介してアミノ酸類またはペプチド類に結合するトリチル、２Ｃｌ−トリチル)；４−(２,４−ジメトキシフェニルヒドロキシメチル)フェノキシメチル−リンカー(ＯＨを介してアミノ酸類またはペプチド類に結合するRink−酸−リンカー)；またはトリス(アルコキシ)ベンジルエステルリンカー(ＯＨを介してアミノ酸類またはペプチド類に結合するＨＡＬ−リンカー)である。
【００７２】
酸類、特にアミノ酸類またはペプチド類、例えばジペプチド類の反応性誘導体が記載されているとき、それらはインサイチュで形成してよく、またはそのまま使用してよい。
【００７３】
そのまま使用する反応性(または活性)誘導体は、反応すべき酸類のカルボキシ基のアシル−ハライド類、例えばアシル−クロライド類、−フルオライド類または−ニトロフェニルエステル類、例えば２,４−ジニトロフェニルエステル類または酸無水物(対称または例えば酢酸との)である。
【００７４】
インサイチュアミノ酸活性化のために、慣用のカップリング剤を適用し得る。このような反応材は当業者に周知であり、多くの供給源、例えAldrich ChemFiles - Peptide Synthesis (Aldrich Chemical Co., Inc., Sigma-Aldrich Corporation, Milwaukee, WI, USA) Vol. 7 No. 2, 2007 (http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Aldrich/Brochure/al_chemfile_v7_n2.Par.0001.File.tmp/al_chemfile_v7_n2.pdf参照)から購入できる。アミドおよびエステル結合合成のために可能なカップリング剤の中で、次のものを記載し得る。
トリアゾール類、ウロニウムまたはヘキサフルオロホスホニウム誘導体、例えば１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)、１−ヒドロキシ−７−アザ−ベンゾトリアゾール(ＨＯＡｔ)、２−シアノ−２−(ヒドロキシイミノ)酢酸エチル、２−(１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートメタンアミニウム(ＨＡＴＵ)、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(ＰｙＢＯＰ)、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−(ジメチルアミノ)−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(ＢＯＰ)、１−(メシチレン−２−スルホニル)−３−ニトロ−１,２,４−トリアゾール(ＭＳＮＴ)、２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＴＵ)、２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロボラート(ＴＢＴＵ)、２−スクシンイミド−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボラート(ＴＳＴＵ)、２−(５−ノルボルネン−２,３−ジカルボキシミド)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボラート(ＴＮＴＵ)、Ｏ−[(シアノ(エトキシカルボニル)メチリデン)アミノ]−１,１,３,３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロボラート(ＴＯＴＵ)、Ｏ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,３−ジメチル−１,３−ジメチレンウロニウムヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＭＤＵ)、Ｏ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−ビス(テトラメチレン)ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＰｙＵ)、Ｏ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−ビス(ペンタメチレン)ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(ＨＢＰｉｐＵ)、３−ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒドロ−１,２,３−ベンゾトリアジン(ＨＯＤｈｂｔ)、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールおよびその対応するウロニウムまたはホスホニウム塩類、指定ＨＡＰｙＵおよびＡＯＰ、１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ−ジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウムヘキサフルオロホスフェート(ＣＯＭＵ)、クロロトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(ＰｙＣｌｏＰ)など；
カルボジイミド類、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ’−エチルカルボジイミド、１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−エチルカルボジイミド、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−２−モルホリノエチル)カルボジイミドまたはジイソプロピルカルボジイミド(特にカルボン酸基のＯ−アシルウレア形成を介するエステル形成のために)；または
活性エステル形成剤、例えば２−メルカプトベンゾチアゾール(２−ＭＢＴ)、アジド形成剤、例えばジフェニルホスホリルアジド、酸無水物、例えばプロパンホスホン酸無水物、酸ハロゲン化剤、例えば１−クロロ−Ｎ,Ｎ,２−トリメチル−１−プロペニルアミン、クロロ−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−ビス(テトラメチレン)ホルムアミジニウムテトラフルオロボラートまたはヘキサフルオロホスフェート、クロロ−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート、フルオロ−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート、フルオロ−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−ビス(テトラメチレン)ホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート
などまたはこのような反応材の２種以上の混合物。
【００７５】
また式XIIまたはXIIＡの化合物と式XIIIまたはXIIIＡの化合物または式XIII＊またはXIIIＡ＊の化合物と式XXVIまたはXXVIＡの化合物のエステルカップリングのために、対応する反応性カルボキシル化合物を使用でき、またはインサイチュで形成させてよい。ここで、特にＭＳＮＴが、高立体特異性の維持を可能にするために、カップリング剤として好ましい。
【００７６】
本反応は、適当であるとき、弱塩基(例えばＮ−メチルモルホリン、トリアルキルアミン、例えばエチルジイソプロピルアミン、ジ−(アルキル)アミノピリジン、例えばＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジンなど)の存在下(本条件は、式Ｉの化合物の前駆体に存在するエステル基、例えばデプシペプチドエステル基の加水分解を起こさせるほどに塩基性であってはらなないことに注意すべきである)、適当であるときまたは必要であれば適当な溶媒または溶媒混合物、例えばＮ,Ｎ−ジアルキルホルムアミド、例えばジメチルホルムアミド、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、Ｎ−アルキルピロリドン類、例えばＮ−メチルピロリドン、ニトリル類、例えばアセトニトリルまたはさらに芳香族炭化水素、例えばトルエンまたは２種以上の混合物の存在下で行うことができる(ただし、過剰のカップリング剤が存在するならば、水も存在し得る)。温度は環境温度であるかまたはそれより低温または高温、例えば−２０℃〜５０℃の範囲であり得る。
【００７７】
式IX、IXＡ、XI、XIＡ、XIII、XIIIＡ、XV、XVＡ、XVII、XVIIＡ、XXVII(例えば液相合成により得られる)、XVII＊、XVIIＡ＊、XV＊、XVＡ＊、XIII＊、XIIIＡ＊、XI＊、XIＡ＊、IX＊およびIXＡ＊のアミノ酸類は知られているか、または当分野で知られた方法によって合成できるか、または当分野で知られた方法に準じて合成できる。
【００７８】
また、残りの出発物質、例えば式XIXまたはVIIの酸または式XXVIIまたはXXVIIＡのジペプチドは知られているか、または当分野で知られた方法で合成でき、市販されておりおよび／または当分野で知られた方法に準じて合成できる。
【００７９】
例えば、式XIXのシントンは、実施例１Ａ(４)(これは本発明の特異的態様である)に記載のとおりまたはそれに準じて製造できる。中間体化合物１(スキーム１)の合成はTetrahedron 61, 1459-1480 (2005)に記載されている。
【００８０】
ジペプチド類のカップリング反応は、アミノ酸類の遊離形態または活性化形態の対応するカルボン酸基を利用する。
【実施例】
【００８１】
次の実施例は範囲を限定することなく本発明を説明する。
【表２】
0005951006.tif 000078
アミノ酸の略語については、上記表参照。
【００８２】
化合物名
開鎖オリゴペプチド類の名称は、Pure & Appl. Chem. 1984, 56, 595-624に公開されたthe Joint Commission on Biochemical Nomenclature(“International Union of Pure and Applied Chemistry”および“International Union of Biochemistry”)の推奨に由来していている。以前は、単純なペプチド命名規約をこれらの化合物に使用していた。以前の名称を括弧内に示す。
【００８３】
実施例１：化合物Ａの合成
１Ａ  シントン１の合成
(ｉ)別法１：
反応スキーム１：
【化７６】
0005951006.tif 000079
【００８４】
１Ａ(１)  化合物１の製造：
(Ｓ)−ベンジル２−((ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−５−ヒドロキシペンタノエート
化合物１を、R. K. Olson, K. Ramasamy, T. Emery, J. Org. Chem. 1984, 49, 3527に記載された方法に類似する方法により製造した。ＢＯＣ−Ｇｌｕ−ＯＢｚｌ(５０ｇ、１４８.２mmol)をテトラヒドロフラン(８００mL)に溶解し、トリエチルアミン(４７.３ｇ、４６７.４mmol)を添加した。溶液をＩＴが−１０℃になるまで冷却した。クロロギ酸エチル(５１.８ｇ、９８％純度、４６７.８mmol)を、温度を−１０〜−１５℃のＩＴを維持しながらゆっくり添加した。こうして得た懸濁液をさらに１時間撹拌した。ＩＰＣ(ＨＰＬＣ)は出発物質の消失を示した。反応混合物を０℃に暖め、水(８００mL)を０〜５℃で２５〜３０分間以内に添加した。混合物の２相への分離が可視となった。激しい撹拌下、水素化ホウ素ナトリウム(１１.８ｇ、２９９.４mmol)を０〜５℃で１０回に分けて添加した。水素化ホウ素ナトリウムの添加中、水素ガスが発生するために注意が必要であった。反応混合物をさらに５分間、０〜５℃で撹拌し、温度を３０分間以内に２０〜２５℃に上げた。温度上昇中、水素ガスが発生し続けるため、注意が必要であった。反応混合物を、後処理前に１５分間、２０〜２５℃で撹拌した。
後処理のために、水(１２５０mL)を反応混合物に添加し、続いて酢酸エチル(１２５０mL)を添加した。相を分離し、水相を酢酸エチル(６００mL)で抽出した。有機相を合わせ、塩水(２×６００mL)で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下、４０〜４５℃で蒸発させて、５０.８ｇの粗生成物を得た。ＨＰＬＣ純度：９４ａ％。粗生成物を移動相としてヘキサンフラクション／酢酸エチル(７：３〜１：１)を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製した。
収量：４０.８５ｇ(８５.２％)。純度：９８％(ＨＰＬＣ)。ＭＳおよびＮＭＲは提案された構造を確認した。
【００８５】
１Ａ(２)  化合物２の製造：
(Ｓ)−ベンジル２−((ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)５−((ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル)オキシ)ペンタノエート
先の工程からのアルコール(化合物１)(４０.３ｇ、１２４.６mmol)をジメチルホルムアミド(２００mL)に溶解し、イミダゾール(１２.８ｇ、９９.５％純度、１８６.９mmol)を添加した。混合物を、溶液が形成されるまで室温で撹拌した(５〜１０分間)。ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シリル−クロライド(４１.９ｇ、９８％純度、１４９.５mmol)を１０分間以内に滴下し、撹拌をさらに１５分間、室温で続けた。ＩＰＣ(ＨＰＬＣ)は出発物質(アルコール)の消失を示した。
後処理のために、酢酸イソプロピル(４００mL)を反応混合物に添加し、続いて半飽和重炭酸ナトリウム水溶液(４００mL)をゆっくり添加した。添加が発熱性であり、ガス発生が起こるために注意が必要であった。相を分離し、水相を酢酸イソプロピル(４００mL)で抽出した。有機相を合わせ、水(４００mL)で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を４０〜４５℃で減圧下蒸発させた。残渣を一夜、真空で２５℃で乾燥させて、８３.２５ｇの粗生成物を無色油状物として得た。ＨＰＬＣ分析は、８１ａ％の所望の生成物および１８.６ａ％の対応するシラノールを得た。粗生成物をさらに精製することなく次工程で使用した。精製サンプルのＮＭＲおよびＨＲ−ＭＳは案された構造を確認した。ＨＲ−ＭＳ：Ｃ３３Ｈ４３ＮＯ５Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：５６２.２９８３３；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：５７９.３２４８８；[Ｍ＋Ｎａ]＋：５８４.２８０２７。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：５６２.２９８４８；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：５７９.３２４８９；[Ｍ＋Ｎａ]＋：５８４.２７９９５
【００８６】
１Ａ(３)  化合物４の製造：
(Ｓ)−ベンジル２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル)オキシ)ペンタノエート
８３.２５ｇの先の工程からの粗生成物(化合物２の７０ｇ理論収量に対応、１２４.６mmol)をジクロロメタン(６５０mL)に溶解し、トリフルオロ酢酸(３５８.８ｇ、９９％純度、３１１５mmol)を、激しく撹拌している溶液に滴下した。３０分間後のＩＰＣ(ＨＰＬＣ)はＢＯＣ保護基の完全な開裂を示した。反応混合物(透明溶液)をメカニカルスターラーを備えた６Ｌ  ４−頸丸底フラスコに移し、ジクロロメタン(１０００mL)で希釈した。半飽和炭酸ナトリウム水溶液(１８００mL)を、激しく撹拌している溶液にゆっくり添加した。炭酸ナトリウム添加中、強いガス発生が観察されたため、注意が必要であった。添加完了後の水相のｐＨ：９−１０。反応混合物をさらに１５分間撹拌し、相を分離した。水相をジクロロメタン(１０００mL)で抽出し、有機相を合わせて、生成物のジクロロメタン溶液を得た。溶液を、次工程のために、４０〜４５℃で減圧下、約６５０mLの最終容積まで濃縮した。ＨＰＬＣは溶液中の８０.５％の化合物３および１９.５ａ％シラノールの存在を示した。
ＦＭＯＣ化(FMOCylation)のために、飽和重炭酸ナトリウム水溶液(６５０mL)を、激しく撹拌している化合物３の溶液にゆっくり添加し、続いてＦＭＯＣ−クロライド(３６.５５ｇ、９７％純度、１３７mmol)を添加した。ＦＭＯＣ−Ｃｌの添加中ガス発生が観察されたため、注意が必要であった。撹拌を、１５分間、室温で続けた。有機相のＩＰＣ(ＨＰＬＣ)は中間体化合物３の消失と、化合物４への完全な変換を示した。後処理のために、相を分離し、水相をジクロロメタン(６５０mL)で抽出した。有機相を合わせ、水(６５０mL)で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を４０〜４５℃で減圧下に除去して、１１２.６ｇの粗生成物を得た。
粗生成物をエタノール／イソプロパノール／水(８９：５：６；２４００mL)に懸濁し、懸濁液をＩＴ＝５０℃まで加熱して、溶液とした。溶液を４５℃に冷却し、種晶を添加し、温度を１時間以内に２０〜２５℃に冷却し続けた。結晶化が約４０℃で開始した。懸濁液を一夜２０〜２５℃で撹拌し、３０分間以内にＩＴ＝０〜５℃まで冷却し、撹拌をさらに２時間、０〜５℃で続けた。生成物を濾過により単離し、フィルターケーキをエタノール／イソプロパノール／水(８９：５：６；２４０mL)で洗浄し、減圧下乾燥させて、純粋化合物４を得た(ＨＰＬＣによると１００ａ％純度)。収量：６６ｇ(７７.４％)。生成物をＭＳおよびＮＭＲ  ＨＲ−ＭＳで十分に特徴付けした：Ｃ４３Ｈ４５ＮＯ５Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：６８４.３１３９８；[Ｍ＋ＮａＨ４]＋：７０１.３４０５３；[Ｍ＋Ｎａ]＋：７０６.２９５９２。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：６８４.３１３９２；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：７０１.３４０２１；[Ｍ＋Ｎａ]＋：７０６.２９５３９。母液は、ＨＰＬＣによると３０ａ％生成物および２９ａ％シラノールを含む３０.６ｇの泡状物となった。
【００８７】
１Ａ(４)  化合物４からシントン１の製造：
(Ｓ)−２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル)オキシ)ペンタン酸
化合物４(６６ｇ、９６.６mmol)をエタノール／イソプロピルアルコール／水(８９：５：６；３０００mL)に懸濁させ、懸濁液をＩＴが４５℃になるまで暖めて、溶液とした。溶液をＩＴ＝３０℃まで冷却した。アルゴンで不活性化後、パラジウム−触媒(硫酸バリウム上１０％；６.６ｇ)を、アルゴン流下溶液に添加した。生成物を、大気圧よりわずかに高い水素圧下、３０〜３５℃で水素化した。水素化は、ＨＰＬＣによると１.５時間後に完了した。反応混合物をセルロースベースの濾過助剤(Cellflock 40；セルロースベースの濾過助剤)で濾過し、濾過助剤をエタノール／イソプロパノール／水(８９：５：６；６００mL)で洗浄した。溶媒の、減圧下、４５〜５０℃での蒸発により、５９.５８ｇの泡状物を粗生成物として得た。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノール９５：５〜８０：２０を移動相として使用する２個のシリカゲルクロマトグラフィー(２×１kgシリカゲル６０)で精製した。収率：５２ｇ(９０.６％)。生成物をＭＳおよびＮＭＲでで十分に特徴付けした。ＨＲ−ＭＳ：Ｃ３６Ｈ３９ＮＯ５Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：５９４.２６７０３；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：６１１.２９３５８；[Ｍ＋Ｎａ]＋：６１６.２４８９７；実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：５９４.２６７４３；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：６１１.２９３８５；[Ｍ＋Ｎａ]＋：６１６.２４９００。
【００８８】
(ii)別法２：
反応スキーム２：
【化７７】
0005951006.tif 000080
【００８９】
１Ａ(５)  Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＢｚｌから化合物５を経る化合物４のワンポット製造：
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＢｚｌ(５ｇ、１０.８８mmol)をテトラヒドロフラン(８０mL)に溶解し、トリエチルアミン(３.３ｇ、３２.６mmol)を添加した。溶液を−１５℃に冷却し、クロロギ酸エチル(７.３ｇ、６７.２７mmol)を、３０分間かけて、−１２℃で溶液に添加した。こうして得た懸濁液をさらに１時間、−１０〜−１５℃で撹拌し、温度を０℃に上げた。水(８０mL)を、温度を０℃に維持しながら反応混合物に滴下した。水素化ホウ素ナトリウム(計０.８０５ｇ、２１.２７mmol)を３回に分けて(１０分間毎に１回)、０℃で添加し、反応混合物をさらに１時間、０℃で撹拌した。水素ガス発生により注意が必要であった。反応混合物を水(１００mL)で希釈し、酢酸イソプロピル(１５０mL)で抽出し、相を分離した。水相を酢酸イソプロピル(１００mL)で再び抽出し、有機相を合わせた。合わせた有機相を半飽和塩化ナトリウム溶液(２×５０mL)で洗浄し、溶液を減圧下、約５０mLの最終容積まで濃縮した。濃縮溶液を浄化濾過し(clear-filtered)、濾過残渣を酢酸イソプロピル(２０mL)で洗浄した。こうして得た化合物５の溶液を丸底フラスコに移し、イミダゾール(１.４９ｇ、２１.８９mmol)を添加した。混合物を１５分間、ｒｔで撹拌し、ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シリル−クロライド(４.４５ｇ、１６.１９mmol)を添加した。反応混合物を１５時間、ｒｔで撹拌した。後処理のために、懸濁液を酢酸イソプロピル(２０mL)で希釈し、水(３×５０mL)で抽出した。有機相を分離し、溶媒を減圧下蒸発させて、９.９５ｇの粗生成物を得た。粗生成物を移動相として酢酸イソプロピル／ヘキサン(２：８)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、６.５ｇの固体を得て、それをヘキサンに懸濁し、３時間、ｒｔで撹拌した。沈殿を濾過により単離し、５０℃で減圧下に乾燥させて、５.６ｇの化合物４を得た。収率：２工程で７５％。ＨＲ−ＭＳ：Ｃ４３Ｈ４５ＮＯ５Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：６８４.３１３９８；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：７０１.３４０５３；[Ｍ＋Ｎａ]＋：７０６.２９５９２。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：６８４.３１４３０；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：７０１.３４０７３；[Ｍ＋Ｎａ]＋：７０６.２９５７７
【００９０】
１Ａ(６)  クロロギ酸エチルの代わりにクロロギ酸イソプロピルを使用する、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＢｚｌから化合物５を介する化合物４の別のワンポット製造：
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＢｚｌ(６０ｇ、１３０.５７９mmol)をテトラヒドロフラン(５５０mL)に溶解し、トリエチルアミン(４０.８ｇ、４０３.２０２mmol)を添加した。濁った溶液が得られ、幾分沈殿があった。この濁った溶液／懸濁液を滴下漏斗に移し、４.５Ｌリアクター中の予め冷却したクロロギ酸イソブチル(５４.９６ｇ、４０２.４１mmol)のテトラヒドロフラン(３００mL)溶液に−３５〜−３０℃で、添加中この温度を維持しながら添加した。滴下漏斗中の残留物をさらにテトラヒドロフラン(５０mL)で洗浄し、反応混合物を−３５〜−３０℃でさらに２時間撹拌した。水(９６０mL)を４５分間以内に反応混合物に添加し、温度を０℃まで上げた。懸濁液が形成された。水素化ホウ素ナトリウム(１４.４ｇ、３８０.６２５mmol)を１時間以内に０℃で２０回に分けて添加し、反応混合物をさらに１時間、０℃で撹拌した。水素ガス発生により注意が必要であった。
懸濁液をｔ−ブチル−メチルエーテル(６００mL)に注加し、反応フラスコを水(６００mL)で洗浄し、それを生成物混合物(２相)に添加した。相を分離し、水相をｔ−ブチル−メチルエーテル(６００mL)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を水(２×６００mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウム(２００ｇ)で乾燥させ、溶媒を、最終容積が１Ｌとなるまで減圧下で除去した。溶液をジメチル−ホルムアミド(６００ｇ)で希釈し、溶媒を、最終容積が４００mLとなるまで減圧下で除去した。こうして得た化合物５の溶液を丸底フラスコに移した。イミダゾール(１４.４ｇ、２１１.５２４mmol)を化合物５のＤＭＦ溶液に添加し、混合物を５分間、ｒｔで撹拌した。最後に、ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ(３９.６ｇ、１４４.０７mmol)を２０分間、２０〜２５℃で添加し、反応混合物をこの温度でさらに１時間撹拌する。
反応混合物を酢酸エチル(１２００mL)に注加し、混合物を水(７００mL)で抽出した。相を分離し、有機相を水(３×３００mL)で洗浄した。溶媒の減圧下の蒸発により、１０６ｇの粗生成物を得た。
粗生成物(１０６ｇ)をエタノール／イソプロパノール／水(８９：５：６；１２００mL)に４０〜５０℃で添加し、種晶(０.５ｇの化合物４)を添加した。混合物を室温に冷却し、１７時間、ｒｔで撹拌した。懸濁液を−２０℃に冷却し、２時間、−２０℃で撹拌した。生成物を濾過により単離し、フィルターケーキを溶媒混合物エタノール／イソプロパノール／水(８９：５：６；３×２００mL)で洗浄し、４０℃で減圧下に乾燥させて、６６.５ｇの化合物４を得た(２工程で７４.６％収率)。ＨＰＬＣは精製物が＞９９ａ％純度であることを示した。
さらなる生成物が母液から単離可能であり(溶媒蒸発後３４ｇ)、それはＨＰＬＣによると約３０ａ％化合物４を含む。
【００９１】
１Ｂ  ＳＰＰＳによる前駆体ペプチド１の合成
前駆体ペプチド１：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ
【化７８】
0005951006.tif 000081
前駆体ペプチド１を２種の固体支持体を使用して製造している。
【００９２】
設備：
底部に濾布または焼結ガラス濾過プレートを備えた固相合成リアクター。窒素連結管は、濾布または焼結ガラス濾過プレートおよび底部バルブを介するリアクター内容物の排水を可能にする。
【００９３】
１Ｂ(１)  トリチル−リンカーの固体支持体へのカップリング：
２００ｇのアミノメチル−ポリスチレン樹脂(１％ジビニルベンゼンと架橋、アミノメチル基１mmol／ｇ充填)(供給者：Senn Chemicals AG, Dielsdorf/Switzerland)の撹拌とジメチルホルムアミド(１６００mL)およびイソプロパノール(１６００mL)添加を交互に数回繰り返した。ジメチルホルムアミドで最後に２回洗浄後、樹脂を予め調製した４−ヒドロキシ−ジフェニルメチル−安息香酸(９１.３ｇ、３００mmol)、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール一水和物(４５.９ｇ、３００mmol)およびジイソプロピルカルボジイミド(７５.７ｇ、６００mmol)のジメチルホルムアミド(１６００mL)溶液で処理した。反応混合物を１.５時間撹拌し、ニンヒドリン試験を行った。試験ではまだ遊離アミノ基が示され、ジイソプロピルカルボジイミド(７.６ｇ、６０mmol)を添加し、反応物を一夜撹拌した。翌朝のさらなるニンヒドリン試験では陰性であり、反応混合物を濾別した。樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。樹脂を真空で乾燥させて、２５７ｇの乾燥リンカー−樹脂を得た。本物質をさらに分析することなく次合成工程で使用した。
【００９４】
１Ｂ(２)  Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨのカップリング
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の製造
リンカー−樹脂(１９０ｇ、１４７.８mmol)を、トルエン(１４００mL)中での撹拌により膨張させた。溶媒を濾別し、トルエン(１４００mL)およびアセチルクロライド(５３mL、１４７８mmol)の溶液と置き換えた。この混合物を２時間撹拌し、濾別し、同一の混合物と置き換え、それをさらに２時間撹拌して、濾別した。塩素化樹脂をトルエンで２回およびジクロロメタンで３回洗浄した。
丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ(１０４.８ｇ、２９６mmol)およびＮ−メチル−モルホリン(４９mL、４４４mmol)のジクロロメタン(６００mL)溶液を調製した。この溶液を樹脂に添加し、一夜撹拌した。翌朝、溶液を濾別し、樹脂をジクロロメタンとイソプロパノールで交互に洗浄した。樹脂を真空で乾燥させて、２３４.７ｇの乾燥Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂を得た。Ｆｍｏｃ基の負荷は、１８５mmol(理論値の１２５％)の収率を生じる０.７８７mmol／ｇと決定された。外部業者でのアミノ酸分析は＜０.１％Ｄ−Ｌｅｕエナンチオマーを確認した。
【００９５】
１Ｂ(３)  Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨのカップリング
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の製造
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(１４０ｇ、１０９mmol)を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(１１００mL)中での撹拌により膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液での２回連続洗浄により開裂させた。樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことにより、ピペリジン除去の成功が確認された。
樹脂をテトラヒドロフラン(１２００mL)で３回洗浄して、下記カップリング工程のための準備をした。
丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ(１１２.１ｇ、３２８mmol)、ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(５１.２５ｇ、３３４mmol)およびジイソプロピルカルボジイミド(５１mL、６５５mmol)のテトラヒドロフラン(６００mL)溶液を調製した。
溶液を樹脂に添加し、ｐＨを直ぐに確認した(ｐＨ＝６.５)。反応混合物を１.５時間、ニンヒドリン試験が完全な反応を示すまで撹拌した。溶液を濾別し、樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。樹脂の小サンプルを乾燥させ、アミノ酸分析に送り(０.１３％Ｄ−Ｌｅｕ、＜０.１％Ｄ−Ｔｈｒ、＜０.１％Ｌ−アロ−Ｔｈｒ、＜０.１％Ｄ−アロ−Ｔｈｒ)、物質の大部分をさらに乾燥させることなく次工程に付した。
【００９６】
１Ｂ(４)  Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−ＯＨのカップリング
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の調製
先の工程からのＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(１１００mL)中での撹拌により膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液での２回連続洗浄により開裂させた。樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことにより、ピペリジン除去の成功が確認された。
樹脂をテトラヒドロフラン(１１００mL)で３回洗浄して、下記カップリング工程のための準備をした。
丸底フラスコで、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−ＯＨ(１３８.６ｇ、２２６mmol)、ＨＡＴＵ(８６.２ｇ、２２６mmol)およびエチルジイソプロピルアミン(５８.４ｇ、４５２mmol)のジメチルホルムアミド(４００mL)溶液を調製した。
溶液を樹脂に添加し、ｐＨを直ぐに確認した(ｐＨ＝１０)。反応混合物を３時間、ニンヒドリン試験が完全な反応を示すまで撹拌した。溶液を濾別し、樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。
樹脂を真空で乾燥させて、１７０ｇの乾燥Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂を得た。Ｆｍｏｃ基の負荷は、１０２mmol(最後の２工程の理論値の９４％)の収量を示す０.６０mmol／ｇと決定された。外部業者でのアミノ酸分析により次の値が得られた：(０.１３％Ｄ−Ｌｅｕ、＜０.１％Ｄ−Ｔｈｒ、＜０.１％Ｌ−アロ−Ｔｈｒ、＜０.１％Ｄ−アロ−Ｔｈｒ、＜０.８％Ｄ−Ｇｌｎ)。
【００９７】
１Ｂ(５)  イソ酪酸のカップリング
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の調製
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(１６９ｇ、１０１mmol)を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(１３００mL)中での撹拌により膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液(１３００mL)での２回連続洗浄により開裂させた。樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことにより、ピペリジン除去の成功が確認された。
樹脂をテトラヒドロフラン(１１００mL)で３回洗浄して、下記カップリング工程のための準備をした。
丸底フラスコで、イソ酪酸(１７.９ｇ、２０３mmol)、ＰｙＢＯＰ(１０５.５ｇ、２０３mmol)およびエチルジイソプロピルアミン(５２.４ｇ、４０６mmol)のジメチルホルムアミド(５５０mL)溶液を調製した。
溶液を樹脂に添加し、ｐＨを直ぐに確認した(ｐＨ＝９.５)。反応混合物を２.５時間、ニンヒドリン試験が完全な反応を示すまで撹拌した。溶液を濾別し、樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。
本バッチを乾燥およびさらなる分析をすることなく、直接次工程に付した
【００９８】
１Ｂ(６)  Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨのカップリング(エステル化)
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の製造
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(上記工程からの湿物質、１０１mmol)各２０分間ずつ、３回連続ジクロロメタン(１２００mL)中での撹拌により膨張させた。
溶媒を濾別し、ＭＳＮＴ(８８ｇ、２９７mmol)およびＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ(１０５ｇ、２９７mmol)を固体として添加した。ジクロロメタン(５００mL)ならびにＮ−メチルイミダゾール(１８.２ｇ、２２３mmol)およびエチルジイソプロピルアミン(５１.２ｇ、３９６mmol)のジクロロメタン(１００mL)溶液を添加した。反応混合物を２時間、プロセスコントロールのＨＰＬＣが完全な反応を示すまで撹拌した。溶液を濾別し、樹脂を、ジクロロメタンで３回、ジメチルホルムアミドで３回およびイソプロパノールで３回連続的に洗浄した。樹脂を真空で乾燥させて、１７２ｇの乾燥イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂を得た。Ｆｍｏｃ負荷は０.４１８mmol／ｇであることが決定され、それ故に、７２mmol(最後の２工程で７１％)の収量を示す。
【００９９】
１Ｂ(７)  Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチル−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−ＯＨのカップリング
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の製造
(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂)
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(１７２ｇ、７２mmol)を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(１３００mL)中での撹拌により膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液(１４００mL)での２回連続洗浄により開裂させた。樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。ａ桃色がないことにより、ピペリジン除去の成功が確認された。
樹脂をテトラヒドロフラン(１１００mL)で３回洗浄して、下記カップリング工程のための準備をした。
Ｆｍｏｃ−Ｎ−メチル−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−ＯＨ(６８.７ｇ、１４４mmol)およびＨＡＴＵ(５５.１ｇ、１４４mmol)のジメチルホルムアミド(７００mL)溶液を調製し、ペプチド−樹脂に添加し、エチル−ジイソプロピルアミン(３７.５ｇ、２８９mmol)のジメチルホルムアミド(１００mL)溶液を撹拌下に添加した。カップリング溶液直後および反応１時間後のｐＨ確認は同じ結果となった(ｐＨ１０)。溶液を２時間、ニンヒドリン試験が完全な反応を示すまで撹拌した。溶液を濾別し、樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。
本バッチを乾燥およびさらなる分析をすることなく、直接次工程に付した
【０１００】
１Ｂ(８)  Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨのカップリング
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−ＩｌｅＦｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の製造
(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂)
湿イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(７２mmol)を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(１２００mLおよび１３００mL)中での撹拌により膨張させた。Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液(１４００mL)での２回連続洗浄により開裂させた。樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことにより、ピペリジン除去の成功が確認された。
樹脂をテトラヒドロフラン(１１００mL)で３回洗浄して、下記カップリング工程のための準備をした。
丸底フラスコで、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ(１０３.９ｇ、２９４mmol)、ＣＯＭＵ(１２５.９ｇ、２９４mmol)およびエチルジイソプロピルアミン(７６ｇ、５８８mmol)のジクロロメタン(４４０mL)およびジメチルホルムアミド(４４０mL)溶液を調製した。
溶液を樹脂に添加し、反応混合物を２０時間撹拌した。その後ニンヒドリン試験を行い、完全な反応が示された。溶液を濾別し、樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。
樹脂を真空で乾燥させて、１８５.５ｇの乾燥イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂を得た。Ｆｍｏｃ基負荷は０.４０mmol／ｇと決定された。それ故に定量的収量の７４mmolが得られた。
【０１０１】
１Ｂ(９)  シントン１のカップリングおよび最終Ｆｍｏｃ保護基の開裂：
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂の製造
(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂)
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂(３０ｇ、１２mmol)を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(２４０mLおよび２５０mL)中での撹拌により膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液(２５０mL)での２回連続洗浄により開裂させた。樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことにより、ピペリジン除去の成功が確認された。
樹脂をジメチルホルムアミド(２５０mL)で３回洗浄して、下記カップリング工程のための準備をした。
丸底フラスコで、シントン１(１４.６ｇ、２４.６mmol)、ＰｙＢＯＰ(１２.８５ｇ、２４.６mmol)およびエチルジイソプロピルアミン(６.４ｇ、４９.２mmol)のジメチルホルムアミド(１２０mL)溶液を調製した。
溶液を樹脂に添加し、反応混合物を３時間核はンした。その後、ニンヒドリン試験は完全な反応を確認した。溶液を濾別し、樹脂をジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。
得られたペプチド−樹脂を、各３０分間ずつ、２回連続ジメチルホルムアミド(２５０mL)中での撹拌により膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、それぞれ５分間および１５分間、２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液(２５０mL)での２回連続洗浄により開裂させた。ペプチド−樹脂を数回ジメチルホルムアミドとイソプロパノールで交互に洗浄した。
最後に、ペプチド−樹脂をジクロロメタン(２５０mL)で３回洗浄して、ペプチド開裂のための準備をした。
【０１０２】
１Ｂ(１０)  固体支持体からの前駆体ペプチド１の開裂
イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ(＝前駆体ペプチド１)の製造
(以前の名称：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ)
湿イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−リンカー−樹脂に、酢酸(１２５mL)およびジクロロメタン(１２５mL)の混合物を添加し、懸濁液２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、濾液を丸底フラスコに回収した(濾液１)。樹脂をジクロロメタン(２５０mL)で２回洗浄し、洗浄液を濾液１と合わせた。
樹脂を新鮮な酢酸(１２５mL)およびジクロロメタン(１２５mL)でさらに２時間処理した。懸濁液を濾過し、濾液を丸底フラスコに回収した(濾液２)。樹脂をジクロロメタン(２５０mL)で２回洗浄し、洗浄液を濾液２と合わせた。
酢酸(２００mL)およびジクロロメタン(５０mL)を樹脂に添加し、懸濁液一夜撹拌した。懸濁液を濾過し、濾液を濾液３として回収した。
３個の濾液を開裂方法の有効性を評価するために別々に後処理した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、残留酢酸を３回のトルエン(１００mL)との共沸蒸留により除去した。油性残渣を高真空で凍結乾燥機で乾燥させた。収量：濾液１：１２.５ｇ、濾液２：２.１ｇ、濾液３：０.３ｇ
粗製の物質である前駆体ペプチド１をＲＰ−クロマトグラフィーで精製し、フラクションをロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮物を凍結乾燥させた。純度：９８.８％収率：８.５ｇ(最後の２工程で４８％)。生成物を１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＨＲ−ＭＳにより特徴付けした。スペクトルは提案された構造を確認した。ＮＭＲスペクトルは数個の配座の存在を示した。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ１１６Ｎ８Ｏ１３Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１４８５.８５０３９。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１４８５.８４９２９
【０１０３】
塩素化樹脂を使用する前駆体ペプチド１の第二のＳＰＰＳ−合成
１Ｂ(１１)  第一アミノ酸(Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ)の固定化
２−クロロトリチルクロライド樹脂(３０ｇ、Ｌ＝１.２mmol／ｇ；Merck Novabiochem 855017)を乾燥ＤＣＭ(２４０ml)で１０分間膨潤させ、溶媒を排水し、固相リアクターを緩い窒素流下に閉じたままにした。同時に、丸底フラスコでＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ(４２.６ｇ、１２０.８mmol)および乾燥１,４−ジオキサン(１００ml)を撹拌した。溶媒を真空下、４５℃で蒸発させ、２回めの１,４−ジオキサンを添加した。溶媒を再び、無色油状残渣が得られるまで、真空下、４５℃で蒸発させた。この油状残渣に、乾燥ＤＣＭ(１５５mL)およびＤＩＰＥＡ(４０.４mL)を連続的に添加し、溶液を一度に予め膨張させた樹脂に添加し、次いで５分間後、２回目のＤＩＰＥＡ(１６.５mL)を添加した。懸濁液を２時間撹拌し、反応媒体を排水した。潜在的未反応クロライドを消失させるために、２４０mlのＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ(７０／１５／１５、ｖ／ｖ)の消失溶液を添加し、混合物を１０分間撹拌した。０.９５mmol／ｇの負荷が測定された。
【０１０４】
Ｆｍｏｃ開裂の一般的プロトコール：
予め膨張させた樹脂に、２５％ピペリジンのＤＭＦ溶液(２４０ml)を添加し、懸濁液を５分間撹拌し、反応混合物を濾過により除去し、２回目のピペリジンの同溶液を添加し、懸濁液を１５分間撹拌し、溶媒を濾過により除去した。
樹脂洗浄と乾燥：
樹脂を次のとおり洗浄した：
ＤＭＦ(２５０ml)(６×２分間)
２５０mlのＩＰＡ(３×２分間)
２５０mlのＴＢＭＥ(６×２分間)
樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、３５.７ｇのＨ−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１０５】
１Ｂ(１２)：Ｈ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程のＨ−Ｌｅｕ−樹脂(３０ｇ)をＤＭＦ(２７０ml)で３０分間膨張させ、溶媒を排水した。
丸底フラスコ(ＲＢＦ)で、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ(２５.０ｇ、７３.２mmol)、ＢＯＰ(４０.４ｇ、９１.５mmol)およびＤＭＦ(２５０mL)を混合し、混合物を２分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ(１８.９ｇ、１４６.４mmol)を添加した。こうして得た混合物を、予め膨張させたペプチド−樹脂に一度に添加し、反応混合物を２.５時間撹拌した。カイザー試験は陽性であり、それ故に、先に記載した条件によって２回目のカップリングを行った。１.０時間後、カイザー試験は陰性であり、反応は完了したと見なされ、反応媒体を濾過により除去した。
樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＴＢＭＥ(５×２分間)
樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、５２.２ｇのＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂を得て、Ｆｍｏｃ開裂工程の準備ができた。
【０１０６】
Ｆｍｏｃ開裂：
樹脂(５２.２ｇ)をＤＭＦ(２７２ml)に懸濁し、１.０時間撹拌し、溶媒を濾過により除去した。
Ｆｍｏｃ保護基を１Ｂ(１１)において記載したのと同じ方法で開裂し、ペプチド−樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(６×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＴＢＭＥ(６×２分間)
樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、３９.９ｇのＨ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１０７】
１Ｂ(１３)：Ｈ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程のＨ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂(３９.９ｇ)をＤＭＦ(２７０ml)で３０分間膨張させ、溶媒を排水した。
ＲＢＦで、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−ＯＨ(４４.７ｇｇ、７３.２mmol)、ＢＯＰ(４０.４ｇ、９１.５mmol)およびＤＭＦ(２５０ml)を混合した。混合物を２分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ(１８.９ｇ、１４６.４mmol)を添加した。得られた混合物を予め膨張させたＨ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂に一度に添加し、反応混合物を２.５時間撹拌し、カイザー試験は陰性であり、反応は完了したと見なされ、反応媒体を濾過により除去した。
樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
湿ペプチド−樹脂をさらに何の操作もすることなくＦｍｏｃ開裂工程で使用した。
【０１０８】
Ｆｍｏｃ開裂：
ｆｍｏｃ保護基を工程１Ｂ(１１)に記載した方法によって開裂した。次いで樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＴＢＭＥ(５×２分間)
樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、５４.４ｇのＨ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１０９】
１Ｂ(１４)：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程のペプチド−樹脂(５４.４ｇ)をＤＭＦ(２７０ml)で３０分間膨張させ、溶媒を排水した。
ＲＢＦで、イソ酪酸(６.４ｇ、７３.２mmol)、ＰｙＢｏｐ(３８.１ｇ、７３.２mmol)およびＤＭＦ(２３０ml)を混合し、混合物を２分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ(２８.３ｇ、２１９.６mmol)を添加した。溶液を予め膨張させたペプチド−樹脂に一度に添加し、反応混合物を１.５時間撹拌した。カイザー試験は陰性であり、反応は完了したと見なされ、反応媒体を濾過により除去した。
樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＴＢＭＥ(５×２分間)
樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、５５.８ｇのイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１１０】
１Ｂ(１５)：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程由来のペプチド−樹脂(５５.８ｇ)を乾燥ＤＣＭ(２５０ml)に１.０時間懸濁させた。溶媒を濾過により除去し、湿ペプチド−樹脂を穏やかな窒素流下に維持し、温度を０〜５℃に調節した。
ＲＢＦで、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ(５１.７ｇ、１４６.４mmol)および乾燥ジオキサン(１５０ml)を混合した。溶媒を真空下、４５℃で油状残渣が観察されるまで蒸発させた。蒸留工程を繰り返し、残渣に乾燥ＤＣＭ(１５０ml)を添加し、溶液を−１０℃に冷却し、ＭＳＮＴ(４３.３ｇ、１４６.４mmol)を添加し、懸濁液を３分間撹拌し、Ｎ−メチル−イミダゾール(１４.２ｇ、１７３mmol)を添加し、混合物を２分間撹拌し、溶液を１０分間、上記で製造したペプチド−樹脂に滴下した。添加完了後、懸濁液を窒素雰囲気下、２.０時間撹拌した。
樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＣ(４×２分間)
２５０ml  ＤＭＦ(３×２分間)
湿ペプチド−樹脂をさらに何の操作もすることなくＦｍｏｃ開裂工程で使用した。
【０１１１】
Ｆｍｏｃ開裂：
Ｆｍｏｃ保護基を、１Ｂ(１１)に記載する一般的プロトコールによって開裂した。
Ｆｍｏｃ開裂実施後、樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(５×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＴＢＭＥ(５×２分間)
樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、５７.２ｇのイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｏ−Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１１２】
１Ｂ(１６)：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｏ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)ＭｅＮ)−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程由来のペプチド−樹脂(５７.２ｇ)を、ＤＭＦ(２５０ml)に３０分間懸濁させた。膨張のために、溶媒を濾過により除去した。
ＲＢＦで、Ｆｍｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ(ｔＢｕ)−ＯＨ(５２.０ｇ、１０９.８mmol)、ＨＡＴＵ(４１.７ｇ、１０９.８mmol)およびＤＭＦ(２３０ml)を混合し、混合物を２分間撹拌した。ＤＩＰＥＡ(２８.３ｇ、２１９.６mmol)を添加し、溶液を２.０分間撹拌した。得られた溶液を予め膨張させたペプチド−樹脂に添加した。
反応混合物を１.０時間撹拌し、カイザー試験を行った。カイザー試験は陰性であった。反応は完了したと見なされ、反応媒体を濾過により除去した。
ペプチド−樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(１×２分間)
湿ペプチド−樹脂をさらに何の操作もすることなくＦｍｏｃ開裂工程で使用した。
【０１１３】
Ｆｍｏｃ開裂：
Ｆｍｏｃ保護基を、１Ｂ(１１)で使用した一般的プロトコールによって開裂した。
Ｆｍｏｃ開裂実施後、樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(５×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(１×２分間)
２５０ml  ＤＭＦ(５×２分間)
得られたイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂を乾燥させずに次工程で使用した。
【０１１４】
１Ｂ(１７)：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂を、ＤＭＦ(２７０ml)で３０分間膨張させ、溶媒を排水した。
丸底フラスコで、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ(３８.８ｇ、１０９.８mmol)、ＨＡＴＵ(４１.７ｇ、１０９.８mmol)およびＤＭＦ(２５０mL)を混合し、混合物を２分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ(２８.３ｇ、２１９.６mmol)を添加した。溶液を予め膨張させたペプチド−樹脂に一度に添加し、反応混合物を２.０時間撹拌し、クロラニル事件は陽性であり、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨとの２回目のカップリングを行った。２回目のカップリング３時間後、ペプチド−樹脂を濾過により単離した。
ペプチド−樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
湿ペプチド−樹脂をさらに何の操作もすることなくＦｍｏｃ開裂工程で使用した。
【０１１５】
Ｆｍｏｃ開裂：
Ｆｍｏｃ保護基を１Ｂ(１１)に記載したのと同じ方法で除去し、ペプチド−樹脂を次のとおり洗浄した。
２５０ml  ＤＭＦ(５×２分間)
２５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
２５０ml  ＴＢＭＥ(４×２分間)
ペプチド−樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、６７.０ｇのイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１１６】
１Ｂ(１８)：イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂のＳＰＰＳ合成
先の工程のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂(３３.５ｇ)をＤＭＦ(１５０ml)に３０分間懸濁させ、溶媒を排水した。ＲＢＦで、Ｆｍｏｃ−シントン１−ＯＨ(３４.３ｇ、５７.８mmol)、ＰｙＢｏｐ(３０.０ｇ、５７.７mmol)およびＤＭＦ(１１３ml)を混合し、混合物を２分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ(１４.９ｇ、１１５.２mmol)を添加した。溶液を予め膨張させたペプチド−樹脂に一度に添加し、反応混合物を２.０時間撹拌した。反応媒体を濾過により除去した。
ペプチド−樹脂を次のとおり洗浄した。
１５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
１５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
１５０ml  ＤＭＦ(４×２分間)
湿ペプチド−樹脂をさらに何の操作もすることなくＦｍｏｃ開裂工程で使用した。
【０１１７】
Ｆｍｏｃ開裂：
Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジン溶液(１５０ml)を使用する以外１Ｂ(１１)と同じ方法で除去し、ペプチド−樹脂を次のとおり洗浄した。
１５０ml  ＤＭＦ(５×２分間)
１５０ml  ＩＰＡ(３×２分間)
１５０ml  ＴＢＭＥ(４×２分間)
ペプチド−樹脂を一夜、真空下、４０℃で乾燥させて、３６.０ｇのイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂を得た。
【０１１８】
１Ｂ(１９)：別のＳＰＰＳ合成：固体支持体からのペプチドの開裂
先の工程のイソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−樹脂(２９.７５ｇ)を、乾燥ＤＣＭ(３５０ml)で１.０時間処理し、溶媒を濾過により除去し、３５０mlの３０％ｖ／ｖ  ＨＦＩＰのＤＣＭ溶液を添加した。混合物を１０分間撹拌し、溶媒を濾過により除去し、別にとっておいた。湿樹脂に２回目の同ＨＦＩＰ溶液を添加し、溶液を１０分間撹拌し、溶媒を濾過により除去し、先の溶液と共に貯蔵した。樹脂をＤＣＭ(３５０ml)で３回洗浄し、洗浄液を開裂溶液と合わせた。
合わせた溶液を油性残渣が観察されるまで真空下で濃縮し、トルエン(２００ml)を添加し、溶媒を減圧下、４５℃で、油性残渣が得られるまで蒸発させた。３５０mlのヘキサンを添加し、懸濁液を２時間撹拌した。溶媒を濾過により除去し、フィルターケーキをヘキサン(５０ml)で洗浄し、湿ケーキを一夜、真空下、３５℃で乾燥させて、１９.２４ｇの粗前駆体ペプチド１(＝イソブチリル−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｉｌｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｉｌｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ)を得た。
粗前駆体ペプチド１(６.０ｇ)の一部をＲＰ−クロマトグラフィーで精製し、生成物フラクションをロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮物を凍結乾燥させて、２.２ｇの純粋前駆体ペプチド１を９９.３％ａ純度で得た。生成物含有副フラクションを同様に処理して、さらに１.２５ｇの低純度前駆体ペプチドを７１.４％ａ純度で得た。粗前駆体ペプチド１(１９.２４ｇ)の全量について外挿し、これは、主フラクションからの７.０５ｇの純粋前駆体ペプチド１および副フラクションからのさらに４.０１ｇの前駆体ペプチド１(７１.４％ａ純度で)に対応する。
【０１１９】
１Ｃ  化合物８の液相合成
【化７９】
0005951006.tif 000082
【０１２０】
１Ｃ(１)  化合物６の合成
(Ｓ)−Ｎ１−((３Ｓ,６Ｓ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,１９Ｒ)−６−(４−(ｔｅｒｔ−ブトキシ)ベンジル)−３,９−ジ((Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル)−１２−(３−ヒドロキシプロピル)−１５−イソブチル−７,１９−ジメチル−２,５,８,１１,１４,１７−ヘキサオキソ−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６−ペンタアザシクロノナデカン−１８−イル)−２−イソブチラミド−Ｎ５−トリチルペンタンジアミド
前駆体ペプチド１(１.９ｇ、１.２８mmol)のアセトニトリル(１２０mL)中の濁った溶液／懸濁液を、９０分間かけて、撹拌中のＨＡＴＵ(９７２mg、２.５６mmol)およびＤＭＡＰ(４６８.６mg、３.８４mmol)のアセトニトリル(１００mL)中の混合物に３５℃で添加した。滴下漏斗をアセトニトリル(３０mL)で洗浄した。懸濁液添加後のＩＰＣ(ＨＰＬＣ)は、前駆体ペプチドの不在および環化の完了を示した。後処理のために、溶媒を約５０mLの最終容積となるまで減圧下蒸発させ、残渣を酢酸イソプロピル(２５０ｍｌ)で希釈した。有機相を水(２×１００mL)で抽出し、溶媒を減圧下蒸発させて、２.３ｇの粗生成物を得た。粗生成物を移動層として酢酸エチルを使用するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、１.７９ｇ(１.２２mmol)の化合物６を泡状物として得た。収率：９５％。生成物を１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＨＲ−ＭＳで特徴付けした。スペクトルは提案された構造を確認した.ＮＭＲスペクトルは数個の配座の存在を示した。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ１１４Ｎ８Ｏ１２Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１４６７.８３９８３；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１４８４.８６６３７；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１４８９.８２１７７。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１４６７.８３９８４；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１４８４.８６５５５；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１４８９.８２０７３
【０１２１】
化合物６の合成のための２個めの実施例(１５ｇ規模)
前駆体ペプチド１(１５.０ｇ)のｔ−ブチル−メチル−エーテル(７５０mL)溶液を、１.５時間かけて、予め冷却したＤＭＡＰ(２.８０ｇ)およびＨＡＴＵ(５.８７ｇ)のアセトニトリル(３７５mL)溶液に０℃で添加した。反応混合物をさらに３０分間、室温で撹拌した。反応混合物をｔ−ブチル−メチル−エーテル(７５０mL)で希釈し、半飽和ＮａＣｌ水溶液(１５００mL)に注加した。相を分離し、有機相を再び半飽和ＮａＣｌ水溶液(１５００mL)で抽出した。有機相を分離し、溶媒を、最終容積約１７５mLまで減圧下、一部蒸発させた。この溶液を移動層としてｔ−ブチル−メチル−エーテルを使用するシリカゲル(２２５ｇシリカゲルのカラム)で濾過した。溶媒の蒸発および真空で４０〜４５℃での乾燥により、化合物６をＨＰＬＣによると９７.５３％純度で得た。収量：１４.１９ｇ(９５.７％)
【０１２２】
１Ｃ(２)  化合物７の合成
(Ｓ)−Ｎ１−((３Ｓ,６Ｓ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,１９Ｒ)−６−(４−(ｔｅｒｔ−ブトキシ)ベンジル)−３,９−ジ((Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル)−１２−(３−((ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル)オキシ)プロピル)−１５−イソブチル−７,１９−ジメチル−２,５,８,１１,１４,１７−ヘキサオキソ−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６−ペンタアザシクロノナデカン−１８−イル)−２−イソブチラミド−Ｎ５−トリチルペンタンジアミド
化合物６(１.７９ｇ、１.２２mmol)をテトラヒドロフラン(６０mL)に溶解し、Ｅｔ３Ｎ(ＨＦ)３(６.６２ｇ、４１.１mmol)を室温で添加した。反応混合物を室温で８.５時間撹拌し、酢酸イソプロピル(２００mL)で希釈し、得られた溶液／懸濁液を激しく撹拌している飽和ＮａＨＣＯ３水溶液にゆっくり添加した。有機相を分離し、水(１００mL)で抽出した。溶媒の減圧下の蒸発により、１.８６ｇの粗生成物を得て、それを移動相として酢酸エチル／イソプロパノール(９５：５)を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、１.２４ｇ(１.００mmol)の化合物７を得た。収率：８２％
生成物はＩＲ、ＮＭＲおよびＭＳで十分に特徴付けした。スペクトルは提案された構造を確認した。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ６９Ｈ９６Ｎ８Ｏ１２の計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２９.７２２０５；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２４６.７４８６０；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２５１.７０３９９。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２９.７２１２８；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２４６.７４７８０；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２５１.７０３１０
【０１２３】
化合物７の製造のための２個目の実施例(１４ｇ規模)
化合物６(１４.０ｇ、９.５３７mmol)をテトラヒドロフラン(２２０mL)に溶解し、ｔ−ブチル−メチル−エーテル(１１６mL)を添加した。溶液をＥｔ３Ｎ(ＨＦ)３(２３.０５ｇ)で１０分間以内のゆっくりした添加により処理した。反応混合物を２４時間、室温で撹拌した。後処理のために、反応混合物をｔ−ブチル−メチル−エーテル(５７０mL)で希釈し、混合物を半飽和ＮａＨＣＯ３水溶液(６３２mL)に注加した。二相混合物を３０分間撹拌し、相を分離した。有機相を水(２８０mL)で抽出した。両水相をｔ−ブチル−メチル−エーテル(３８０mL)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を無水ＭｇＳＯ４(８.０ｇ)で乾燥させ、溶媒を、最終容積約１００mLまで、減圧下、一部蒸発させた。トルエン(１４０mL)を添加し、溶媒を再び最終容積８０mLまで蒸発させた。この溶液をｔ−ブチル−メチル−エーテル(７０mL)で希釈し、生成物を、３０分間のヘプタン(１４０mL)のゆっくりした添加により沈殿させた。形成した懸濁液を５０〜５５℃に加熱し、３０分間、この温度で撹拌した。懸濁液を３０分間以内に０℃に冷却し、０℃で２時間撹拌し、生成物を濾過により単離した。生成した白色沈殿を真空で乾燥させて、１１.０８ｇの化合物７(９４.５％収率)を得た。生成物のＨＰＬＣは９７ａ％純度を示した。
【０１２４】
１Ｃ(３)  化合物８の合成(構造については反応スキーム４参照)
(Ｓ)−Ｎ１−((３Ｓ,６Ｓ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,１９Ｒ)−６−(４−(ｔｅｒｔ−ブトキシ)ベンジル)−３,９−ジ((Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル)−１５−イソブチル−７,１９−ジメチル−２,５,８,１１,１４,１７−ヘキサオキソ−１２−(３−オキソプロピル)−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６−ペンタアザシクロノナデカン−１８−イル)−２−イソブチラミド−Ｎ５−トリチルペンタンジアミド
化合物７(１.２ｇ、０.９８mmol)をテトラヒドロフラン(１９０mL)およびジメチルスルホキシド(６２mL)の混合物に溶解した。１−ヒドロキシ−１,２−ベンズヨードキソール−３(１Ｈ)−オン１−オキシド(ＩＢＸ)(２.４２ｇ、４５％ｇ／ｇ、３.９mmol)を添加し、溶液を約４.５時間撹拌し、その後ＨＰＬＣは出発物質(化合物７)の消失を示した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液(３００mL)に注加し、ジクロロメタン(２×３００mL)で抽出した。有機相を合わせ、水(２×３００mL)で洗浄した。溶媒の減圧下の蒸発により、２.３１ｇの粗生成物を泡状物として得た。粗生成物を酢酸エチル／イソプロパノール(９５：５)を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、ＬＣ−ＭＳで所望の質量を有する少なくとも２種の生成物を含む１.１６ｇの生成物混合物を得た。生成物混合物をそのまま次工程で使用した。
ＨＲ−ＭＳ(主異性体)：Ｃ６９Ｈ９４Ｎ８Ｏ１２の計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２７.７０６４０；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２４４.７３２９５；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４９.６８８３４。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２７.７０５９９；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２４４.７３２００；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４９.６８７３３
ＨＲ−ＭＳ(副異性体)：Ｃ６９Ｈ９４Ｎ８Ｏ１２の計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２７.７０６４０；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２４４.７３２９５；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４９.６８８３４。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２７.７０５９８；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２４４.７３１９８；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４９.６８７５１
【０１２５】
化合物８の合成のための２番目の実施例(１０ｇ規模)
化合物７(１０.０ｇ、８.１３mmol)をテトラヒドロフラン(１２７mL)およびジメチルスルホキシド(４２mL)に溶解した。この溶液に、１−ヒドロキシ−１,２−ベンズヨードキソール−３(１Ｈ)−オン１−オキシド(ＩＢＸ)(１５.１８ｇ、４５％ｍ／ｍ、２４.４mmol)を室温で激しく撹拌したながら添加した。反応混合物を１６時間、室温で撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３水溶液(５００mL)に注加し、酢酸エチル(２５０mL)を添加した。二相混合物を３０分間撹拌し、相を分離した。有機相を半飽和ＮａＣｌ水溶液(２５０mL)で洗浄し、相を分離した。水相を酢酸エチル((２５０mL)で抽出し、有機相を合わせた。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を一部蒸発させて、約５０ｇ溶液を得た。この溶液を移動相として酢酸エチル／メタノール(９８：２ｖ／ｖ)を使用してシリカゲルカラム(１００ｇシリカゲル)を流した。こうして得た生成物溶液(５３７.４ｇ)をトルエン(１３５mL)で処理し、得られた溶液を溶媒を、一部４５℃で減圧下に蒸発させることにより、最終重量１１２ｇまで濃縮した。得られた溶液を０℃に冷却し、ヘプタン(１３５mL)を３０分間かけて添加した。こうして得た懸濁液を１時間、０℃で撹拌し、生成物を濾過により単離し、ヘプタン(２×３０mL)で洗浄した。最後に生成物を真空で、４５℃で一夜乾燥させて、８.８２４ｇの化合物８およびそのヘミアミナール−異性体の混合物を得た。収率：８８.４％
【０１２６】
１Ｄ  化合物Ａの合成
(Ｓ)−Ｎ１−((２Ｓ,５Ｓ,８Ｓ,１１Ｒ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,２１Ｒ)−２,８−ジ−(Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル−２１−ヒドロキシ−５−(４−ヒドロキシベンジル)−１５−イソブチル−４,１１−ジメチル−３,６,９,１３,１６,２２−ヘキサオキソ−１０−オキサ−１,４,７,１４,１７−ペンタアザビシクロ[１６.３.１]ドコサン−１２−イル)−２−イソブチラミドペンタンジアミド
【化８０】
0005951006.tif 000083
【０１２７】
化合物８(２.０ｇ)をジクロロメタン(４００mL)に溶解し、溶液を０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸(１１５.９ｇ)をこの撹拌している溶液に０℃で添加し、反応混合物を４時間、０℃で撹拌した。ジクロロメタン(４００mL)をこの温度で添加し、水(２０ｇ)を添加した。反応混合物を室温に暖め、撹拌をさらに５時間、室温で続けた。後処理のために、反応混合物を撹拌している酢酸ナトリウム(１６５.１ｇ)の水(８００mL)溶液に注加し、酢酸エチル(４００mL)を添加して、溶液を得た。上層(水相)を除去し、下有機相(ジクロロメタン相)を水(２×２００mL)で洗浄した。水相を酢酸エチル(２００mL)で抽出し、有機相を合わせた。溶媒を減圧下で除去して、粗化合物Ａを５員および６員環(5- and 6-ring)異性体混合物として(反応スキーム５参照)、トリチルアルコールおよび反応の他の副生成物と共に得た。
粗生成物を、移動相としてアセトニトリル／水の勾配を用いるＲＰ−シリカクロマトグラフィーKromasil 100-10-C8で精製した。生成物含有フラクションを蒸発させてアセトニトリルを除去し、沈殿を酢酸エチルに溶解し、溶媒を減圧下で除去して、０.８９５ｇの化合物Ａを得た；収率：５９.１％。生成物をＮＭＲおよびＭＳにより十分に特徴付けし、本生成物のスペクトルは発酵由来の化合物Ａのものと同一であった。
【０１２８】
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ４６Ｈ７２Ｏ１２Ｎ８の計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：９２９.５３４２５；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：９４６.５６０８０；[Ｍ＋Ｎａ]＋：９５１.５１６１９。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：９２９.５３４４５；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：９４６.５６１２９；[Ｍ＋Ｎａ]＋：９５１.５１６２４
1H-NMR (600 MHz, d6-DMSO) δH:-0.11 (3H, d, J=6.2Hz), 0.64 (4H, m), 0.77 (3H, d, J=6.2Hz), 0.81 (3H, t, J=7.3Hz), 0.84 (3H, d, J=7.0 Hz), 0.88 (3H, d, J=6.6Hz), 1.02 (3H, d, J=6.7Hz), 1.02 (1H, m), 1.03 (3H, d, J=6.7Hz), 1.09 (1H, m), 1.20 (3H, d, J=6.2Hz), 1.24 (1H, m), 1.39 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.75 (6H, m), 1.83 (1H. m), 1.92 (1H, m), 2.12 (2H, m), 2.47 (1H, m), 2.58 (1H, m), 2.67 (1H, m), 2.71 (3H, s), 3.16 (1H, d, J=14.2Hz), 4.30 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.42 (1H, d, J=10.6Hz), 4.45 (1H, m), 4.61 (1H, d, J=9.2Hz), 4.71 (1H, dd, J=9.5, 5.5Hz), 4.93 (1H, s), 5.05 (1H, dd, J=11.4, 2.6 Hz), 5.48 (1H, m), 6.07 (1H, d, J=2.6Hz), 6.64 (2H, d, J=8.4Hz), 6.73 (1H, s), 6.99 (2H, d, J=8.4Hz), 7.25 (1H, s), 7.35 (1H, d, J=9.2Hz), 7.64 (1H, d, J=9.5Hz), 7.73 (1H, d, J=9.2Hz), 8.01 (1H, d, J=7.7Hz), 8.42 (1H, d, J=8.8Hz), 9.17 (1H, s)
13C-NMR (150 MHz, d6-DMSO) δC:10.35, CH3;11.21 CH3;13.85, CH3;16.00, CH3;17.68, CH3;19.52, 2 x CH3;20.89, CH3;21.75, CH2;23.30, CH3;23.74, CH2;24.21, CH;24.48, CH2;27.35, CH2;29.78, CH2;30.08, CH3;31.49, CH2;33.18, CH;33.24, CH2;33.76, CH, 37.41, CH;39.23, CH2;48.84, CH;50.69, CH;52.11, CH;54.17 CH;54.70, CH;55.31, CH;60.66, CH;71.89, CH;73.97, CH;115.32, 2 x CH;127.34, Cq;130.37, 2 x CH;156.27, Cq;169.12, Cq;169.29, Cq;169.37, Cq;169.79 Cq;170.65, Cq;172.40, Cq;172.53, Cq;173.87 Cq;176.38, Cq
【０１２９】
化合物Ａの合成の第２実施例(８.５ｇ規模)
化合物８(８.５ｇ、６.９２４mmol)をジクロロメタン(５９５mL)に溶解し、溶液を０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸(１２７.５mL)のジクロロメタン(１２７.５mL)溶液を冷却した溶液に、温度を０〜５℃に維持しながら添加した。反応混合物を５.５時間、０℃で撹拌し、ジクロロメタン(８５０mL)で希釈し、水(４２.５mL)を添加した。反応混合物を室温に暖め、１７.５時間、室温で撹拌した。後処理のために、反応混合物を撹拌している、酢酸ナトリウム水溶液(７２２ｇ水中１６９ｇ酢酸ナトリウム)および酢酸エチル(７００mL)の二相混合物に添加した。相を分離し、有機相を再び酢酸ナトリウム水溶液(７２２ｇ水中１６９ｇ酢酸ナトリウム)で洗浄した。相を分離し、有機相を水(２×８５０mL)で洗浄した。個々の水相を酢酸エチル(７００mL)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を４０〜４５℃で減圧下一部蒸発させて、１８７ｇの薄懸濁液を得た。ヘプタン(１８７ｇ)を１５分間以内に添加し、形成した懸濁液を０℃に冷却した。懸濁液を１時間、０℃で撹拌し、生成物を濾過により単離した。粗生成物を真空で４０℃で乾燥させて、５.６５ｇの粗化合物Ａを得た。粗収率：８７.８％。
０.９６ｇの粗生成物を、移動相としてアセトニトリル／水の勾配を使用するＲＰ−シリカクロマトグラフィーKromasil 100-10-C8で精製した。生成物含有フラクションを蒸発させてアセトニトリルを除去し、沈殿を酢酸エチルに溶解し、溶媒を一部減圧下で除去して、４０ｇの溶液を得た。ヘプタン(４０ｇ)を撹拌している溶液に３０分間、室温で添加し、得られた懸濁液を室温でさらに２時間撹拌した。生成物を濾過により単離し、酢酸エチル／ヘプタン(１：１、２×１０mL)で洗浄した。生成物を真空で、４０〜４５℃で１６時間乾燥させて、０.７０２ｇの化合物Ａを得た。ＲＰ−クロマトグラフィーおよび析出後の収率：６４％
【０１３０】
実施例２：化合物Ｂの合成(ノストペプチンＢＮ９２０)
(Ｓ)−２−アセトアミド−Ｎ１−((１Ｓ,２Ｓ,５Ｓ,８Ｓ,１１Ｒ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,２１Ｒ)−２−ベンジル−２１−ヒドロキシ−５−(４−ヒドロキシベンジル)−１５−イソブチル−８−イソプロピル−４,１１−ジメチル−３,６,９,１３,１６,２２−ヘキサオキソ−１０−オキサ−１,４,７,１４,１７−ペンタアザビシクロ[１６.３.１]ドコサン−１２−イル)ペンタンジアミド
【化８１】
0005951006.tif 000084
【０１３１】
２Ａ  ＳＰＰＳによる前駆体ペプチド２の合成：
Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｐｈｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ
設備：２５０mlフリットガラスリアクターならびに自動溶媒送達、振盪および反応材の吸入のための連結管を備えたをペプチド合成装置。
【０１３２】
２Ａ(１)  Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓの合成
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ−樹脂(１８.７ｇ負荷０.３７mmol／ｇ(Rapp Polymere GmBH, Tuebingen/Germanyから供給))を、３０分間振盪させることによりＤＭＦ中で膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂を数回ＤＭＦとイソプロパノールで交互に洗浄後、塩基類の完全な除去をフェノールフタレインおよび水を最後の洗浄工程で添加して桃色とならないことにより確認した。
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＨ(４.７ｇ)、ＨＡＴＵ(５.２６ｇ)およびＤＩＰＥＡ(１.８ｇ)をＤＭＦ(５０ml)に溶解させた。５分間撹拌後、さらにＤＩＰＥＡ(１.８ｇ)を添加した。ｐＨ(＞１１)確認後、混合物を脱保護樹脂に添加し、２時間振盪した。実施したカイザー試験の結果はＯＫであり、樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。乾燥後、樹脂重量は１９.０１ｇであった。小サンプルを開裂させ、ＨＰＬＣで確認した。単一主ピークは変換の成功を示した。
【０１３３】
２Ａ(２)  Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓの合成
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ−樹脂(１９.０１ｇ、６.６mmol)をＤＭＦ中で予め膨張させ、Ｆｍｏｃ保護基を２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂を数回ＤＭＦとイソプロパノールで交互に洗浄後、塩基類の完全な除去をフェノールフタレインおよび水を最後の洗浄工程で添加して桃色とならないことにより確認した。
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−ＯＨ(８.０７ｇ)、ＨＡＴＵ(５.０１ｇ)およびＤＩＰＥＡ(３.４ｇ)をＤＭＦ(５０ml)に溶解した。ｐＨ(＞１１)確認後、混合物を脱保護樹脂に添加し、１.５時間振盪させた。実施したカイザー試験の結果はＯＫであり、樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。得られた樹脂を次の下記工程で直接使用し、小サンプルのみを開裂させ、ＨＰＬＣで確認した。単一主ピークは変換の成功を示した。
【０１３４】
２Ａ(３)  Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓの合成
上記のＦｍｏｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ樹脂を、ＤＭＦ中で１０分間振盪することによりＤＭＦで再膨張させた。Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことによりピペリジン除去成功を確認した。
酢酸(０.７７４ｇ)、ＰｙＢＯＰ(６.７０７ｇ)およびＤＩＰＥＡ(３.３３ｇ)をＤＭＦ(５０ml)に溶解した。ｐＨ(＞１１)確認後、混合物を脱保護樹脂に添加し、２.５時間振盪させた。実施したカイザー試験の結果はＯＫであり、樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。得られた樹脂を次の下記工程で直接使用し、小サンプルのみを開裂させ、ＨＰＬＣで確認した。単一主ピークは変換の成功を示した。
【０１３５】
２Ａ(４)  Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ)の合成(側鎖エステル化)
上記からのＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ樹脂を、ＤＭＦ中で１０分間振盪することによりＤＭＦで再膨張させた。
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ(８.７ｇ)およびＤＩＰＥＡ(８.３ｇ)をＤＣＭ(２５ml)に溶解した。並行してＭＳＮＴ(２.７６ｇ)を別のＤＣＭ(２５ml)に溶解した。両溶液を合わせ、３分間の前活性化後、ペプチド樹脂に付加し、２時間振盪した。樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。得られた樹脂を次の下記工程で直接使用し、小サンプルのみを開裂させ、ＨＰＬＣで確認した。単一主ピークは変換の成功を示した。
【０１３６】
２Ａ(５)  Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ)の合成
上記からのＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ樹脂を、ＤＭＦ中で１０分間振盪することによりＤＭＦで再膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことによりピペリジン除去成功を確認した。
６.１ｇのＦｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−ＯＨ、４.８ｇのＨＡＴＵおよび３.３ｇのＤＩＰＥＡをＤＭＦ(５０ml)に溶解した。ｐＨ(＞１１)確認後、混合物を脱保護樹脂に添加し、２.５時間振盪させた。実施したカイザー試験の結果はＯＫであり、樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。得られた樹脂を次の下記工程で直接使用した。少量のサンプルを開裂させ、ＨＰＬＣで確認したところ、単一主ピークは変換の成功を示した。
【０１３７】
２Ａ(６)  Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｐｈｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｐｈｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ)の合成
上記からのＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ樹脂を、ＤＭＦ中で１０分間振盪することによりＤＭＦで再膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色がないことによりピペリジン除去成功を確認した。
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ(９.６６ｇ)、ＨＡＴＵ(９.４８ｇ)およびＤＩＰＥＡ(６.４ｇ)をＤＭＦ(１００ml)に溶解した。ｐＨ(＞１１)確認後、混合物を脱保護樹脂に添加し、２時間振盪した。実施したカイザー試験の結果はＯＫであり、樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。得られた樹脂を次の下記工程で直接使用し、小サンプルのみを開裂させ、ＨＰＬＣで確認した。単一主ピークは変換の成功を示した。
【０１３８】
２Ａ(７)  Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｐｈｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ(以前の名称：Ａｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｎ−ｍｅ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−Ｐｈｅ−シントン１−Ｈ)−Ｌｅｕ−ＯＨ)(＝前駆体ペプチド２)の合成
上記からのＡｃ−Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)−Ｔｈｒ(Ｖａｌ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)Ｍｅ−Ｐｈｅ−Ｆｍｏｃ)−Ｌｅｕ−Ｔｒｔ−Tentagel−Ｓ樹脂を、ＤＭＦ中で１０分間振盪することによりＤＭＦで再膨張させた。
Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。フェノールフタレインおよび水を最終洗浄溶液のサンプルに添加した。桃色の発色がないことによりピペリジン除去成功を確認した。
シントン１(６.７７ｇ)、ＰｙＢＯＰ(５.９ｇ)およびＤＩＰＥＡ(２.９５ｇ)をＤＭＦ(１００ml)に溶解した。ｐＨ(＞１１)確認後、混合物を脱保護樹脂に添加し、２時間振盪した。実施したカイザー試験の結果はＯＫであり、樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールでの交互の洗浄により洗浄した。ＨＰＬＣ確認のために小サンプルを取った後、Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液でそれぞれ５分間および１５分間の２連続処理により開裂させた。樹脂をＤＭＦおよびイソプロパノールで数回交互に洗浄することにより洗浄した。最後に樹脂をＤＣＭで２回洗浄した。樹脂からの合成ペプチドの開裂を、８０％の酢酸のＤＣＭ溶液の混合物中、一夜振盪させることにより達成した。得られたペプチド溶液を濾別し、樹脂をＤＣＭで２回洗浄した。合わせた濾液を蒸発させ、最後に勾配システムを使用するＲＰ−クロマトグラフィーにより精製した。回収したフラクションをＨＰＬＣで分析し、純粋フラクションを貯留し、蒸発させ、最後に凍結乾燥させた。
収量：３.５４ｇ(４２％)前駆体ペプチド２。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ１０８Ｎ８Ｏ１３Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋＝１４７７.７８７７９；実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋＝１４７７.７８６９１
【０１３９】
２Ｂ  化合物Ｂの合成
(Ｓ)−２−アセトアミド−Ｎ１−((１Ｓ,２Ｓ,５Ｓ,８Ｓ,１１Ｒ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,２１Ｒ)−２−ベンジル−２１−ヒドロキシ−５−(４−ヒドロキシベンジル)−１５−イソブチル−８−イソプロピル−４,１１−ジメチル−３,６,９,１３,１６,２２−ヘキサオキソ−１０−オキサ−１,４,７,１４,１７−ペンタアザビシクロ[１６.３.１]ドコサン−１２−イル)ペンタンジアミド
【０１４０】
２Ｂ(０)  化合物９の合成
(Ｓ)−２−アセトアミド−Ｎ１−((３Ｓ,６Ｓ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,１９Ｒ)−９−ベンジル−６−(４−(ｔｅｒｔ−ブトキシ)ベンジル)−１２−(３−((ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル)オキシ)プロピル)−１５−イソブチル−３−イソプロピル−７,１９−ジメチル−２,５,８,１１,１４,１７−ヘキサオキソ−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６−ペンタアザシクロノナデカン−１８−イル)−Ｎ５−トリチルペンタンジアミド
化合物Ｂを得るための前駆体ペプチド２のラクタム化は、化合物６の製造について記載したものと類似の条件下で行った。生成物、化合物９、はＩＲ、ＮＭＲおよびＭＳで十分に特徴付けした。スペクトルは提案された構造を確認した。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ８５Ｈ１０６Ｎ８Ｏ１２Ｓｉの計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１４５９.７７７２３；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１４７６.８０３７７。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１４５９.７７７１９；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１４７６.８０２９１
【０１４１】
２Ｂ(１)  化合物１０の合成
(Ｓ)−２−アセトアミド−Ｎ１−((３Ｓ,６Ｓ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,１９Ｒ)−９−ベンジル−６−(４−(ｔｅｒｔ−ブトキシ)ベンジル)−１２−(３−ヒドロキシプロピル)−１５−イソブチル−３−イソプロピル−７,１９−ジメチル−２,５,８,１１,１４,１７−ヘキサオキソ−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６−ペンタアザシクロノナデカン−１８−イル)−Ｎ５−トリチルペンタンジアミド
化合物１０を得るための脱シリル化反応は、化合物７の製造について記載したものと類似の条件下で行った。生成物はＩＲ、ＮＭＲおよびＭＳで十分に特徴付けした。スペクトルは提案された構造を確認した。
ＨＲ−ＭＳ：の計算値Ｃ６９Ｈ８８Ｎ８Ｏ１２：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２１.６５９４５；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２３８.６８６０；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４３.６４１３９。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２２１.６５８９４；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２３８.６８５１８；{Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４３.６４００１
【０１４２】
２Ｂ(２)  化合物１１(アルデヒド)の合成
(Ｓ)−２−アセトアミド−Ｎ１−((３Ｓ,６Ｓ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,１９Ｒ)−９−ベンジル−６−(４−(ｔｅｒｔ−ブトキシ)ベンジル)−１５−イソブチル−３−イソプロピル−７,１９−ジメチル−２,５,８,１１,１４,１７−ヘキサオキソ−１２−(３−オキソプロピル)−１−オキサ−４,７,１０,１３,１６−ペンタアザシクロノナデカン−１８−イル)−Ｎ５−トリチルペンタンジアミド
化合物１１を得るための化合物１０の酸化は、化合物８の製造について記載したものと類似の条件下で行った。ＬＣ−ＭＳ分析は所望の質量を伴う数個のピークを示し、アルデヒド、５員環(5-ring)−ヘミアミナールおよび６員環(6-ring)−ヘミアミナールの混合物の存在を示した。混合物をそのまま次工程で使用した。ＨＲ−ＭＳ(主ピーク)：の計算値Ｃ６９Ｈ８６Ｎ８Ｏ１２：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２１９.６４３８０；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２３６.６７０３５；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４１.６２５７４。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：１２１９.６４４０４；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：１２３６.６７０５３；[Ｍ＋Ｎａ]＋：１２４１.６２５２４
【０１４３】
２Ｂ(３)  化合物１１から化合物Ｂ(ノストペプチンＢＮ９２０)の合成
(Ｓ)−２−アセトアミド−Ｎ１−((１Ｓ,２Ｓ,５Ｓ,８Ｓ,１１Ｒ,１２Ｓ,１５Ｓ,１８Ｓ,２１Ｒ)−２−ベンジル−２１−ヒドロキシ−５−(４−ヒドロキシベンジル)−１５−イソブチル−８−イソプロピル−４,１１−ジメチル−３,６,９,１３,１６,２２−ヘキサオキソ−１０−オキサ−１,４,７,１４,１７−ペンタアザビシクロ[１６.３.１]ドコサン−１２−イル)ペンタンジアミド
化合物１１(１.０ｇ、０.８２mmol)をジクロロメタン(２００mL)に溶解した。トリフルオロ酢酸(５７.８ｇ)を１５〜２５℃で１０分間かけて添加し、反応混合物を４５時間、室温で撹拌した。反応混合物をジクロロメタン(２００mL)で希釈し、水(１０mL)を添加した。撹拌をさらに２４時間、室温で続けた。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液(７００mL)に２０分間以内に注加し、ジクロロメタン(５００mL)、イソプロパノール(５０mL)および水(５００mL)を逐次的に添加した。相を分離し、水相をイソプロパノール(５０mL)のジクロロメタン(５００mL)溶液で抽出した。相を再び分離し、水相をジクロロメタン(５×３００mL)で数回抽出した。有機相を合わせ、溶媒を減圧下で蒸発させて、所望のノストペプチンＢＮ９２０をトリチルアルコールおよび反応の他の副生成物と共に含む粗生成物混合物(１.０ｇ)を得た。粗生成物を移動相としてジクロロメタン／イソプロパノールを用いる
シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、純粋ノストペプチンＢＮ９２０(２１２mg、９７％(Ａ)純度)を得た。低純度フラクションの回収により、さらに９０％(Ａ)純度の４０２mgの生成物を得た。全フラクションからの収量：６１４mg(８１％)。生成物はＩＲ、ＮＭＲおよびＭＳで十分に特徴付けした。スペクトルは提案された構造を確認した。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ４６Ｈ６４Ｎ８Ｏ１２の計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋：９２１.４７１６５；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：９３８.４９８２０；[Ｍ＋Ｎａ]＋：９４３.４５３５９。実測値：[Ｍ＋Ｈ]＋：９２１.４７１６７；[Ｍ＋ＮＨ４]＋：９３８.４９８６１；[Ｍ＋Ｎａ]＋：９４３.４５３３７
【０１４４】
実施例３：平衡のシフト
反応スキーム４は、化合物Ａの脱水物形態の存在を示す。本発明により、これが、次の反応スキームに記載する脱水物形態の水和のための単純な方法を使用して容易に化合物Ａに(戻り)変換できることが判明した。
【化８２】
0005951006.tif 000085
【０１４５】
これは、あらゆるタイプの化合物Ａの合成(本願明細書に記載のような化学合成またはＷＯ２００９／０２４５２７におけるような発酵の使用)における収率改善を可能とする。
【０１４６】
例えば、ａｈｐサブユニットを含む化合物、例えば実施例１の化合物Ａにおける酸感受性保護基の開裂中、大量の対応する脱水副生成物の形成が観察される。この副生成物は通常例えばクロマトグラフィーにより分離され、廃棄される。これによりこの工程における価値ある生成物の喪失および低収率に至る。例えば、化合物８の酸化生成物が、トリチル−およびｔ−ブチル保護基の開裂のために酸性条件に付されたとき(スキーム４)、相当量の化合物Ａ−脱水物が副生成物として形成される。酸濃度および反応条件によって、化合物Ａ−脱水物は、この生成物混合物の主生成物として形成されることさえあり得る。
例えば、１：２の化合物Ａ／化合物Ａ−脱水物比が、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン(５：９５  ｖ／ｖ)を酸化工程後の保護基開裂に使用したとき観察される(実施例１)。
【０１４７】
それ故に、脱水物副生成物を所望の生成物に変換する方法が探索された。本発明により、これが、明確に定義された条件下、水の存在下での生成物混合物の酸触媒平衡化により達成できることが判明した。実施例１の反応混合物への水の添加と、続く室温で１９時間の撹拌により、化合物Ａ／化合物Ａ−脱水物比が約９６：４である生成物混合物を得た。それ故に、酸触媒脱保護工程(スキーム４)後の反応混合物への水の添加は、無水条件下での化合物Ａ／化合物Ａ−脱水物形態(１：２)の比を、水添加および平衡化後の９６：４に変えた。
【０１４８】
酸性脱保護条件下での化合物Ａからの化合物Ａ−脱水物の形成は、トリフルオロ酢酸のＤＣＭ溶液を使用する純粋化合物Ａから化合物Ａ−脱水物への変換により確認された。化合物Ａを、３３％(ｖ／ｖ)ＴＦＡのＤＣＭ溶液で２時間、室温で処理することにより、ＨＰＬＣによると７８：２２の化合物Ａ−脱水物／化合物Ａ比の生成物混合物となった。脱水は、水吸収剤、例えばモレキュラー・シーブを反応混合物に添加したとき、＞９５％変換率までなり得る。それ故に、モレキュラー・シーブ存在下でのＴＦＡ／ＤＣＭの１：２混合物中での純粋化合物Ａの撹拌は、脱水生成物を、定量的粗収率および約９６面積％ＨＰＬＣ純度(実施例３Ｂ)でもたらす。粗生成物中に、なお約４面積％の化合物Ａが存在する。
実施例３Ｂ由来の化合物Ａ−脱水物から化合物Ａへの変換は、化合物Ａ−脱水物を、トリフルオロ酢酸および水の存在下、ジクロロメタン中で撹拌することにより証明された(実施例３Ｃ)。こうして得た生成物は、ＨＰＬＣによると、９５.６面積％の化合物Ａとわずか４.４面積％の化合物Ａ−脱水物を含む。
【０１４９】
【化８３】
0005951006.tif 000086
【０１５０】
実施例３の実験詳細
３Ａ：
酸化からの生成物混合物(２３mg)(化合物８およびそれ由来の環状アミナール類)をＤＣＭ(５.７mL)に溶解し、ＴＦＡ(０.３mL)を溶液に激しい撹拌下に添加した。反応混合物を５時間、室温で、ＩＰＣ(ＨＰＬＣ)が保護基の完全な開裂を示すまで撹拌した。１：２比の化合物Ａおよび化合物Ａ−脱水物がさらなる副生成物と共に反応混合物中に存在した。反応混合物をＤＣＭ(５.７mL)で希釈し、激しく撹拌している溶液を水(０.２３mL)で処理した。室温で、１９時間撹拌後のＨＰＬＣは、化合物Ａ／化合物Ａ−脱水物の９６：４比を示した。
後処理のために、反応混合物を酢酸ナトリウム(１.６２ｇ)の水(２３mL)溶液に注加し、酢酸エチル(３５mL)を添加した。相を分離し、有機相を水(２×２５mL)で抽出した。水相を酢酸エチル(３５mL)で抽出し、有機相を合わせた。溶媒を減圧下に蒸発させて、２２mgの粗生成物を泡状物として得た。粗生成物を酢酸エチル／メタノール９５：５〜９０：１０を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、９６.８面積％純度の化合物Ａを、１.８面積％の５員環(5-ring)異性体と共に得た。
【０１５１】
３Ｂ：
化合物Ａ(２５０mg)をジクロロメタン(１０mL)に溶解し、トリフルオロ酢酸(５mL)を添加し、モレキュラー・シーブ(１ｇ)を添加した。１時間後のＩＰＣ(ＨＰＬＣ)は、化合物Ａ／化合物Ａ−脱水物の１７：８３比を示した。反応混合物を合計７２時間、室温で撹拌した。後処理のために、モレキュラー・シーブを濾過により除去し、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注加した。水相を酢酸エチル(５０mL)で抽出した。有機相を水(２０mL)で洗浄し、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を真空で乾燥させて、定量的収量(２４５mg)の粗生成物を泡状物として得た。粗生成物のＨＰＬＣ分析は、約４：９６面積％比での化合物Ａ／化合物Ａ−脱水物の存在を示した。
ＨＲ−ＭＳ：Ｃ４６Ｈ７０Ｎ８Ｏ１１の計算値：[Ｍ＋Ｈ]＋＝９１１.５２３６８、[Ｍ＋ＮＨ４]＋＝９２８.５５０２３、[Ｍ＋Ｎａ]＋＝９３３.５０５６３；実測値[Ｍ＋Ｈ]＋＝９１１.５２３７２、[Ｍ＋ＮＨ４]＋＝９２８.５５０２９、[Ｍ＋Ｎａ]＋＝９３３.５０５３８。化合物Ａ−脱水物の構造を１Ｈ−ＮＭＲで確認した。
1H-NMR (600 MHz, d6-DMSO) δH:0.06 (3H, d, J=6.6 Hz), 0.67 (3H, t, J=7.3 Hz), 0.70 (3H, d, J=7.0 Hz), 0.77 (3H, d, J=6.6 Hz), 0.81 (1H, m), 0.87 (6H, m), 1.00 (3H, d, J=7.0 Hz), 1.02 (3H, d, J=7.0 Hz), 1.06 (1H, m), 1.16 (3H, d, J=6.5 Hz), 1.17 (1H, m), 1.30 (1H, m), 1.41 (1H, m), 1.53 (1H, m), 1.74 (2H, m), 1.91 (2H, m), 2.01 (1H, m), 2.11 (2H, m), 2.45 (3H, m), 2.73 (3H, s), 2.74 (1H, m), 3.18 (1H, m), 4.32 (2H, m), 4.50 (1H, m), 4.54 (1H, m), 4.64 (1H, d, J=9.5 Hz), 4.77 (1H, d, J=11.0 Hz), 5.18 (1H, m), 5.26 (1H, m), 5.42 (1H, q, J=6.6 Hz), 6.25 (1H, d, J=7.3 Hz), 6.32 (1H, d, J=7.7 Hz), 6.67 (2H, d, J=8.4 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.25 (1H, s), 7.30 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.89 (1H, d, J=9.2 Hz), 7.98 (1H, d, J=8.1 Hz), 8.50 (1H, d, J=8.4 Hz), 9.24 (1H, s)
【０１５２】
３Ｃ：
実施例３Ｂからの化合物Ａ−脱水物(１１０mg)をＤＣＭ(２０mL)に溶解した。ＴＦＡ(１ｇ)および水(０.２mL)を添加し、反応混合物を２０時間、室温で撹拌した。後処理のために、反応混合物を酢酸エチル(５０mL)に注加し、酢酸エチル溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液(５０mL)で抽出した。有機相を水(２０mL)で抽出し、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチル／イソプロパノール９：１(２０mL)に溶解し、溶液を０.４５マイクロメートルフィルターで、浄化濾過した。溶媒を減圧下蒸発させ、残渣を真空で４５℃で乾燥させて、１００mgの粗生成物を得た。ＨＰＬＣ分析は、約９５.６面積％の化合物Ａおよび約４.４面積％の化合物Ａ−脱水物の存在を示した。