【手続補正書】
【提出日】平成21年11月26日(2009.11.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a）軽鎖が、選択された抗原特異的な抗体の可変（VL）領域のアミノ酸配列およびIgの定常（CL）領域のアミノ酸配列を含み、IgG1サブタイプの場合、定常（CL）領域のアミノ配列が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、またはヒトに投与された場合に、同一のIgの定常（CL）領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合または共有結合の形成に関与できるアミノ酸を含まないように改変されており、かつ
b）重鎖が、選択された抗原特異的な抗体の可変（VH）領域のアミノ酸配列およびヒトIgの定常（CH）領域のアミノ酸配列を含み、定常（CH）領域のアミノ酸配列は、ヒンジ領域および、Igサブタイプによって必要とされる、CH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下でまたはヒトに投与された場合に、同一のヒトIgの定常（CH）領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合または共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合の形成に関与するアミノ酸残基を含まないように改変されている、
軽鎖および重鎖を含む一価抗体。
【請求項２】
ヒトIgが、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、またはIgD抗体、例えばIgG1、IgG2、またはIgG4抗体である、請求項1記載の一価抗体。
【請求項３】
a）軽鎖が、選択された抗原特異的な抗体の可変（VL）領域のアミノ酸配列およびIgの定常（CL）領域のアミノ酸配列を含み、かつ
b）重鎖が、選択された抗原特異的な抗体の可変（VH）領域のアミノ酸配列およびヒトIgG4の定常（CH）領域のアミノ酸配列を含み、重鎖のアミノ酸配列は、ヒンジ領域に対応する領域に存在するいずれのアミノ酸残基もポリクローナルヒトIgGの存在下でまたはヒトに投与された場合に、同一のヒトIgG4の定常（CH）領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとの安定なジスルフィド結合の形成に関与できないように改変されている、
軽鎖および重鎖を含む一価抗体。
【請求項４】
CL領域がヒトIgGのカッパ軽鎖の定常領域である、請求項1〜3のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項５】
CL領域がヒトIgGのラムダ軽鎖の定常領域である、請求項1〜3のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項６】
軽鎖および重鎖が一つまたは複数のジスルフィド結合またはアミド結合を通じて相互に接続されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項７】
重鎖のアミノ酸配列が、ヒンジ領域に対応する領域がシステイン残基を含まないよう改変されている、請求項1〜6のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項８】
重鎖のアミノ酸配列が、任意のシステイン残基を含むヒンジ領域に対応する領域のアミノ酸残基の少なくとも一つが欠失および／または他のアミノ酸残基で置換されるよう改変されている、請求項1〜7のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項９】
重鎖がヒトIgG4の重鎖であり、重鎖のアミノ酸配列は、重鎖がSEQ ID NO: 14の配列の少なくともアミノ酸残基106〜109に対応するアミノ酸残基が欠失されたCH領域を含むよう改変されている、請求項8記載の一価抗体。
【請求項１０】
重鎖がヒトIgG4の重鎖であり、重鎖のアミノ酸配列は、重鎖がSEQ ID NO: 14の配列の少なくともアミノ酸残基99〜110に対応するアミノ酸残基が欠失されたCH領域を含むよう改変されている、請求項8または9記載の一価抗体。
【請求項１１】
ヒンジ領域全体が欠失されている、請求項8〜10のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１２】
重鎖がSEQ ID NO: 16のアミノ酸配列を含む、請求項8記載の一価抗体。
【請求項１３】
重鎖がヒトIgG4の重鎖であり、重鎖のアミノ酸配列は、重鎖がSEQ ID NO: 14の配列のアミノ酸残基106および109に対応するアミノ酸残基がシステイン以外のアミノ酸残基で置換されたCH領域を含むよう改変されている、請求項8記載の一価抗体。
【請求項１４】
VEGF、cMet、CD20、CD38、IL-8、CD25、CD74、FcαRI、FcεRI、アセチルコリン受容体、fas、fasL、TRAIL、肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルスのエンベロープE2、組織因子、組織因子および第VII因子の複合体、EGFr、CD4、ならびにCD28から選択される標的に結合する、請求項1〜13のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１５】
ポリクローナルヒトIgGの存在下で一価形態にある、請求項1〜14のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１６】
ヒトに投与された場合に一価形態にある、請求項1〜14のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１７】
ヒトIgが、SEQ ID NO: 19に示されるアミノ酸のCH領域を有するIgG1であり、CH3領域が以下のアミノ酸置換がなされるよう改変されている、請求項1記載の一価抗体：292位のLys（K）がArg（R）により置換されている。
【請求項１８】
ヒトIgがIgG1であり、CL領域は、106位の末端システイン残基が別のアミノ酸残基で置換されるかまたは除去されるよう改変されている、SEQ ID NO: 18に示されるアミノ酸配列を有するカッパ軽鎖CLである、請求項17記載の一価抗体。
【請求項１９】
ヒトIgがIgG1であり、CL領域は、104位のシステイン残基が別のアミノ酸残基で置換されるかまたは除去されるよう改変されている、SEQ ID NO: 17に示されるアミノ酸配列を有するラムダ軽鎖CLである、請求項17記載の一価抗体。
【請求項２０】
ヒトIgが、SEQ ID NO: 19に示されるアミノ酸のCH領域を有するIgG1であり、CH1領域は14位のSer（S）がシステイン残基により置換されるよう改変されている、請求項17記載の一価抗体。
【請求項２１】
ヒトIgがSEQ ID NO: 20に示されるアミノ酸のCH領域を有するIgG2であり、CH3領域が以下の一つまたは複数のアミノ酸置換がなされるよう改変されている、請求項1記載の一価抗体：234位のArg（R）がGln（Q）により置換されている；276位のMet（M）がVal（V）により置換されている；288位のLys（K）がArg（R）により置換されている；298位のGln（Q）がGlu（E）により置換されている；および324位のPro（P）がLeu（L）により置換されている。
【請求項２２】
ヒトIgが、SEQ ID NO: 21に示されるアミノ酸のCH領域を有するIgG3であり、CH3領域が以下の一つまたは複数のアミノ酸置換がなされるよう改変されている、請求項1記載の一価抗体：285位のArg（R）がGln（Q）により置換されている；314位のSer（S）がAsn（N）により置換されている；322位のAsn（N）がLys（K）により置換されている；327位のMet（M）がVal（V）により置換されている；339位のLys（K）がArg（R）により置換されている；349位のGln（Q）がGlu（E）により置換されている；352位のIle（I）がVal（V）により置換されている；365位のArg（R）がHis（H）により置換されている；366位のPhe（F）がTyr（Y）により置換されている；および375位のPro（P）がLeu（L）により置換されている。
【請求項２３】
合成抗原ペプチド(Tyr, Glu)-Ala-Lysに特異的に結合しない、請求項1〜22のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項２４】
作製された一価抗体がヒト抗体である、請求項1〜23のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項２５】
以下の工程を含む、請求項1〜24のいずれか一項記載の一価抗体の調製方法：
a）一価抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養する工程；および
b）宿主細胞培養物から一価抗体を回収する工程。
【請求項２６】
以下の工程を含む、一価抗体の作製方法：
i）選択された抗原特異的な抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列およびIgの定常CL領域をコードするヌクレオチド配列を含む、一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、選択された抗原特異的な抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列およびIgのCL領域をコードするヌクレオチド配列が機能的に連結されており、IgG1サブタイプの場合、CL領域をコードするヌクレオチド配列は、CL領域がポリクローナルヒトIgGの存在下で、またはヒトに投与された場合に、同一のCL領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとジスルフィド結合または共有結合を形成できるアミノ酸を含まないように改変されている、工程；
ii）選択された抗原特異的な抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列およびヒトIgの定常CH領域をコードするヌクレオチド配列を含む、一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、CH領域をコードするヌクレオチド配列は、ヒンジ領域に対応する領域および、Igサブタイプによって必要とされる、CH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、またはヒトに投与された場合に、同一のヒトIgのCH領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合または共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合の形成に関与するアミノ酸残基を含まないように改変されており、選択された抗原特異的な抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列およびIgのCH領域をコードするヌクレオチド配列が機能的に連結されている、工程；
iii）一価抗体を作製するための細胞発現系を提供する工程；
iv）（i）および（ii）の核酸構築物を(iii）の細胞発現系の細胞中で共発現させることによって一価抗体を作製する工程。
【請求項２７】
以下の工程を含む、一価抗体の作製方法：
i）選択された抗原特異的な抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列およびIgの定常（CL）領域をコードする核酸配列を含む、一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、選択された抗原特異的な抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列およびIgのCL領域をコードする核酸配列が機能的に連結されている、工程；
ii）選択された抗原特異的な抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列およびヒトIgG4のCH領域をコードする核酸配列を含む、一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、重鎖をコードする核酸配列が、重鎖のヒンジ領域に対応する領域がポリクローナルヒトIgGの存在下で、またはヒトに投与された場合に、同一のヒトIgG4の定常（CH）領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合の形成に関与できるアミノ酸残基を含まないように改変されており、選択された抗原特異的な抗体のVH領域をコードする核酸およびIgG4のCH領域をコードする核酸が機能的に連結されている、工程；
iii）一価抗体を作製するための細胞発現系を提供する工程；
iv）（i）および（ii）の核酸構築物を(iii）の細胞発現系の細胞中で共発現させることによって一価抗体を作製する工程。
【請求項２８】
以下を含む、薬学的用途用の一価抗体の発現のための核酸構築物：
i）IgG4のCH領域をコードする核酸配列であって、CH領域においてヒンジ領域に対応する領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、またはヒトに投与された場合に、CH領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含むペプチドとの安定なジスルフィド結合の形成に関与できるアミノ酸残基を含まないように改変されている、核酸配列、または
ii）ヒトIgの定常CH領域をコードするヌクレオチド配列であって、ヒンジ領域に対応する領域および、Igサブタイプによって必要とされる、CH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、またはヒトに投与された場合に、同一のヒトIgのCH領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合または共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合の形成に関与するアミノ酸残基を含まないように改変されている、ヌクレオチド配列、または
iii)それらに相補的な配列。
【請求項２９】
CH領域をコードする核酸配列は、ヒンジ領域に対応する領域がシステイン残基を含まないよう改変されている、請求項28記載の核酸構築物。
【請求項３０】
抗原特異的な抗体のVH領域をコードする核酸配列またはそれに相補的な配列を含む、請求項28または29記載の核酸構築物。
【請求項３１】
VH領域をコードする核酸配列が、CH領域をコードする核酸配列またはそれに相補的な配列に機能的に連結されている、請求項30記載の核酸構築物。
【請求項３２】
請求項28〜31のいずれか一項記載の核酸構築物を含み、かつ該核酸構築物が抗体の軽鎖をコードしない場合は抗体の軽鎖をコードする核酸配列を含む核酸構築物も含む宿主細胞を培養してポリペプチドを発現させる工程、および細胞培養物から抗体を回収する工程を含む、請求項1〜24のいずれか一項記載の一価抗体の、調製方法。
【請求項３３】
請求項28〜31のいずれか一項記載の核酸構築物を含む宿主細胞。
【請求項３４】
治療部分に抱合された、請求項1〜24のいずれか一項記載の一価抗体を含む、免疫抱合体（immunoconjugate）。
【請求項３５】
a）軽鎖が、選択された抗原特異的な抗体の可変（VL）領域のアミノ酸配列およびIgの定常（CL）領域のアミノ酸配列を含み、かつ
b）重鎖が、選択された抗原特異的な抗体の可変（VH）領域のアミノ酸配列およびヒトIgG4の定常（CH）領域のアミノ酸配列を含み、重鎖のアミノ酸配列は、ヒンジ領域に対応する領域に存在するいずれのアミノ酸残基も、同一のヒトIgG4の定常（CH）領域のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合の形成に関与できないように改変されている、
軽鎖および重鎖を含む、医薬として使用するための一価抗体。
【請求項３６】
医薬として使用するための、請求項1〜24のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項３７】
抗体が所与の標的または標的エピトープに特異的に結合し、該標的または標的エピトープに対する抗体の結合が疾患の処置に有効である、癌、細胞増殖障害、自己免疫障害、炎症障害、および／または血管新生障害を処置するための医薬として使用するための請求項36記載の一価抗体。
【請求項３８】
薬学的組成物の調製のための、請求項1〜24のいずれか一項記載の一価抗体の使用。
【請求項３９】
薬学的組成物が癌または炎症状態の処置のために調製される、請求項38記載の使用。
【請求項４０】
請求項1〜24のいずれか一項記載の一価抗体および一つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含む、薬学的組成物。
【請求項４１】
一つまたは複数のさらなる治療剤をさらに含む、請求項40記載の薬学的組成物。