【誤訳訂正書】
【提出日】平成22年12月3日(2010.12.3)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内のＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ）またはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化またはリン酸化に対して、促進を含む調節を行う際に使用するための化合物を同定する方法であって、
（１）供試化合物が、ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性に対して、促進を含む調節を行うかどうかを判定する工程と、
（２）ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性に対して、促進を含む調節を行う化合物を選択する工程とを含み、
前記ＬＫＢ１が、ＳＴＲＡＤおよびＭＯ２５とともに調製物の中にあり、
前記ＭＯ２５が、組み換え核酸から発現された組換え体である、方法。
【請求項２】
前記ＬＫＢ１またはＳＴＲＡＤが、組み換え核酸から発現された組換え体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤ、および過剰発現または組み換え核酸から発現された組換えＭＯ
２５を発現することができる細胞。
【請求項４】
ＭＯ２５をコードする組換え核酸を含む、請求項３に記載の細胞。
【請求項５】
ＬＫＢ１をコードする組換え核酸を含む、請求項３または４に記載の細胞。
【請求項６】
ＳＴＲＡＤをコードする組換え核酸を含む、請求項３から５のいずれか一項に記載の細
胞。
【請求項７】
ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤ、および過剰発現または組み換え核酸から発現された組換えＭＯ
２５を含む細胞。
【請求項８】
組み換え核酸から発現された組換えＬＫＢ１を含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
組み換え核酸から発現された組換えＳＴＲＡＤを含む、請求項７または８に記載の
細胞。
【請求項１０】
請求項３から６のいずれか一項に記載の細胞である、請求項７から９のいずれか一
項に記載の細胞。
【請求項１１】
ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤ、および組み換え核酸から発現された組換えＭＯ２５を含む調製物を製造するための方法であって、請求項７から１０のいずれか一項に記載の細胞から前記調製物を精製する工程を含む方法。
【請求項１２】
前記調製物は組み換え核酸から発現された組み換えＬＫＢ１を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記調製物は組み換え核酸から発現された組み換えＳＴＲＡＤを含む、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記調製物におけるＬＫＢ１：ＳＴＲＡＤ：ＭＯ２５の比率が、１：１：１である、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＬＫＢ１が、請求項１１から１４の方法によって得られたもしくは取得可能な調製物、または請求項３から１０のいずれか一項に記載の細胞の中にある、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１６】
調製物が、ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤおよびＭＯ２５を含む複合体を含む、請求項１から２
及び１１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
細胞内ＬＫＢ１活性を調節するための化合物を同定する方法であって、
（１）供試化合物が、請求項１１から１４または１６のいずれか一項に記載の方法により得られる調製物もしくは複合体の、または請求項３から１０のいずれか一項に記載の細胞内の、ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を調節するかどうかを判定する工程と、
（２）前記ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性を調節する化合物を選択する工程とを含む、方法。
【請求項１８】
前記ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性が、ＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはそれらいずれかの断片を基質として使用して測定される、請求項１または請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１または請求項１１に記載の方法に用いるキットであって、
ＬＫＢ１またはＬＫＢ１をコードする組換えポリヌクレオチドと、ＳＴＲＡＤまたはＳ
ＴＲＡＤをコードする組換えポリヌクレオチドと、ＭＯ２５またはＭＯ２５をコードする
組換えポリヌクレオチドとを含む、キット。
【請求項２０】
請求項１または請求項１１に記載の方法に用いるキットであって、
（１）ＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバー、あるいはＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはそれらの断片をコードする組換えポリヌクレオチドと、
（２）請求項１９に記載のキットまたは請求項３から１０のいずれか一項に記載の細胞とを含む、キット。
【請求項２１】
ＬＫＢ１／ＳＴＲＡＤ／ＭＯ２５複合体の調製方法であって、
（１）その細胞型がＳＴＲＡＤおよびＭＯ２５を発現するものであるかどうかを判定する工程を含む、ＬＫＢ１を過剰発現させるための細胞型を選択する工程と、
（２）その選択された細胞型においてＬＫＢ１を過剰発現させることにより、ＬＫＢ１／ＳＴＲＡＤ／ＭＯ２５複合体を調製する工程とを含む、方法。
【請求項２２】
ＬＫＢ１／ＳＴＲＡＤ／ＭＯ２５複合体の調製方法であって、
（１）請求項２１に記載の方法を用いて細胞内でＬＫＢ１を過剰発現させる工程と、
（２）前記細胞からＬＫＢ１／ＳＴＲＡＤ／ＭＯ２５複合体を調製する工程とを含む、方法。
【請求項２３】
ＰＪＳ（ポイツ−ジェガース症候群）に関連した遺伝子差を同定する方法であって、
（１）ＰＪＳに罹患している患者においてＭＯ２５アイソフォームをコードする遺伝子の配列を調査する工程と、
（２）前記患者での配列とＰＪＳに罹患していない個体からの同等の配列との間の差を同定する工程とを含む、方法。
【請求項２４】
メトホルミンまたはフェンホルミンまたはＡＩＣＡリボシドに類似したメカニズムによってＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーを活性化する化合物を同定する方法であって、請求項１１から１４または１６のいずれか一項に記載の調製物もしくは複合体または請求項３から１０のいずれか一項に記載の細胞によるＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化に対する供試化合物の作用を、ＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化に対するメトフォルミンまたはフェンホルミンまたはＡＩＣＡリボシドの作用と比較し、類似した作用を有する化合物を選択する方法。
【請求項２５】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＡＭＰＫα１またはＡＭＰＫα２ポリペプチドであるまたは、ＡＭＰＫα１もしくはＡＭＰＫα２ポリペプチドを含む、請求項１、１８または２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ
２、ＳＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４または
ＭＥＬＫポリペプチドであるか、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ２、Ｓ
ＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４またはＭＥＬ
Ｋポリペプチドを含む、請求項１、１８または２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＡＭＰＫα１またはＡＭＰＫα２ポリペプチドであるまたは、ＡＭＰＫα１もしくはＡＭＰＫα２ポリペプチドを含む、請求項２０に記載のキット。
【請求項２８】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ
２、ＳＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４または
ＭＥＬＫポリペプチドであるか、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ２、Ｓ
ＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４またはＭＥＬ
Ｋポリペプチドを含む、請求項２０に記載のキット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
さらに、本発明者らは、２つの上流キナーゼ（ＡＭＰＫＫ１およびＡＭＰＫＫ２）のラット肝臓からの分離を記載する。ＡＭＰＫＫ１およびＡＭＰＫＫ２の両方が、ＳＴＲＡＤαおよびＭＯ２５αと複合したＬＫＢ１を含有すること、ならびに両方の活性が、抗ＬＫＢ１抗体で免疫沈降することを明らかにする。さらに、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞から単離された内在性と組換え、両方のＬＫＢ１／ＳＴＲＡＤ／ＭＯ２５複合体が、αサブユニットのＴｈｒ−１７２のリン酸化によりＡＭＰＫを活性化する。本発明者らは、ＡＭＰＫをリン酸化および活性化するＬＫＢ１の能力が、ＳＴＲＡＤおよびＭＯ２５サブユニットの存在により劇的に強化されることを証明する。これは、両サブユニットが、最大活性に不可欠であることを示唆している。最後に、他の細胞型においてＡＭＰＫを活性化する薬物（ＡＩＣＡリボシドおよびフェンホルミン）が、ＬＫＢ１を発現しないＨｅＬａ細胞ではＡＭＰＫを活性化しなかった。しかし、触媒不活性突然変異体ではなく野生型ＬＫＢ１の安定した発現より、これらの薬物によるＡＭＰＫの活性化は回復された。従って、本発明者らは、ＳＴＲＡＤとＭＯ２５の複合体でのＬＫＢ１が、ＡＭＰＫの生理学的活性化因子であることを明らかにする。今や、ＡＭＰＫの生理学的活性化を調節する化合物を同定するためにスクリーンを行うことができるのである。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
本発明の第一の態様は、（１）供試化合物が、ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を調節する、例えば促進するかどうかを判定する工程、および（２）ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を調節する、例えば促進する化合物を選択する工程を含む、細胞内のＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ）またはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化またはリン酸化を調節する、例えば促進する際に使用するための化合物を同定する方法を提供する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
本スクリーニング法において調節／評価されるＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性は、（例えば、実施例において論じるような）ミエリン塩基性タンパク質などの非生理学的基質のリン酸化であってもよい。あるいは、本スクリーニング法において調節／評価されるＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性は、さらに論じるように、ＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはそれらの断片のリン酸化であってもよい。ＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーのリン酸化は、下でおよび実施例においてさらに論じるように、ＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化またはリン酸化を測定することにより評価することができる。例えば、ＬＫＢ１に適切なペプチド基質は、実施例３および４において論じ、それらには、ＮＵＡＫ２  Ｔ−ループペプチド（ＬＫＢｔｉｄｅと呼ぶ）が挙げられる。ＡＭＰＫ活性化は、（例えば）、その発現がＡＭＰＫによって調節されるレポーター遺伝子を使用して評価することができる。ＬＫＢプロテインキナーゼ活性の測定、および／またはＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバー（またはそれらの断片）のリン酸化もしくは活性化の測定に有用であり得る他の技法および試薬は、実施例、例えば実施例４で説明する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
プロテインキナーゼ活性の調節には、プロテインキナーゼ活性の阻害または増大が含まれる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
本発明の方法により同定される化合物は、異なる基質、例えばＡＭＰＫサブファミリーの異なる天然メンバーを異なる程度までリン酸化するプロテインキナーゼの能力を調節することができる。従って、ＡＭＰＫ活性の調節に使用するための化合物をスクリーニングする際、ＡＭＰＫまたはその断片を基質として使用することは、本質的ではないが、好ましい。同様に、特定のＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性の調節に使用するための化合物をスクリーニングする際、このサブファミリーメンバーまたはその断片を基質として使用することは、本質的ではないが好ましい。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９２】
本発明のさらなる態様は、細胞内ＬＫＢ１活性を調節するための化合物を同定する方法を提供するものであり、この方法は、（１）供試化合物が、本発明の上述のいずれかの態様に関連して定義した調製物または複合体または細胞のＬＫＢ１プロテインキナーゼの活性を調節する（例えば増大させる）かどうかを判定する工程、および（２）前記ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性を調節する化合物を選択する工程を含む。ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性は、例えばミエリン塩基性タンパク質を基質として使用して、あるいはＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはそれらの断片（上記の、および実施例３において論じるようなもの）を基質として使用して測定することができる。ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性を調節する、例えば増大させる化合物は、医薬、例えば癌を治療するための医薬において有用であり得る。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９７】
インビボでプロテインキナーゼの活性を調節することができる化合物を同定することが望ましいことは、理解されるであろう。従って、この方法で使用される試薬および条件は、例えば前記ＬＫＢ１と例えばＳＴＲＡＤまたはＭＯ２５ポリペプチドの間の相互作用が、ヒトＬＫＢ１とヒトＳＴＲＡＤおよび／またはＭＯ２５の間の相互作用と実質的に同じになるように選択され得ることは、理解されるであろう。その化合物は、ＬＫＢ１に結合することができるか、ＳＴＲＡＤもしくはＭＯ２５に結合することができることは、理解されるであろう。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９８】
本アッセイのスクリーニング方法において、またはプロテインキナーゼ、例えばＬＫＢ１、のプロテインキナーゼ活性を調節する化合物の能力を測定することができる他のアッセイにおいて試験される化合物は、分子モデリング技術を使用して、例えばコンピュータ技術を使用して、選択されたおよび／または設計（修飾を含む）された化合物であり得る。その選択または設計された化合物を、（まだ合成されていない場合は）合成し、ＬＫＬＢ１に対するその効果、例えばそのプロテインキナーゼ活性に対する効果を試験することができる。その化合物は、本発明のスクリーニング方法で試験することができる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１０】
本発明のさらなる態様は、（１）ＰＪＳ（ポイツ−ジェガース症候群）に罹患している患者においてＳＴＲＡＤまたはＭＯ２５アイソフォームをコードする遺伝子の配列を調査する工程；（２）前記患者の配列とＰＪＳに罹患していない個体からの同等の配列の間の差を同定する工程を含む、ＰＪＳに関連した遺伝子差を同定する方法を提供する。ＬＫＢ１とＳＴＲＡＤおよびＭＯ２５の関連ならびにＬＫＢ１欠失とＰＪＳの関連は、ＭＯ２５またはＳＴＲＡＤの欠損もＰＪＳに関与し得ることを示唆している。候補遺伝子における突然変異を同定する技法、および突然変異体が、疾病と関連しているのか、そのような関連がないのかを調査する技法は、当業者に周知であろう。