【手続補正書】
【提出日】平成23年3月24日(2011.3.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体の心血管の健康状態を判定する方法であって、
（ａ）前記個体から得られる血液試料の心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）の血清または血漿濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記測定濃度を、対応する変動係数（ＣＶ）が１０％以下での正常な個体群におけるｃＴｎＩの９９パーセンタイル濃度を示す所定の閾値濃度と比較する工程と、
（ｃ）前記ｃＴｎＩ濃度が前記閾値濃度より大きい場合には前記個体において心臓損傷があると判定する工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
前記ｃＴｎＩ閾値濃度が約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、または約１０ｐｇ／ｍｌである場合には心臓損傷があると判定する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ストレス試験中またはストレス試験後の少なくとも１つにおいて血液試料が採取される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
以前の心臓事象について患者を評価する方法であって、
（ａ）前記個体から血液試料を取得する工程と、
（ｂ）前記試料中のｃＴｎＩ濃度を検出する工程と、
（ｃ）前記ｃＴｎＩの検出レベルが約７ｐｇ／ｍｌより大きい場合には前記患者が心臓事象を受けている疑いがあると判定する工程と
を含む、方法。
【請求項５】
前記ｃＴｎＩの検出レベルが約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、または約１０ｐｇ／ｍｌより大きい場合には前記患者が心臓事象を受けている疑いがある、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ｃＴｎＩの測定によってヒト患者における心筋の健康状態を測定するためのアッセイであって、改善が約１〜７ｐｇ／ｍｌの血清濃度をｃＴｎＩの正常濃度として用いることを含む、アッセイ。
【請求項７】
心筋梗塞の臨床的兆候のある前記患者を救急処置室に収容してから約５時間以内に行われる、請求項６に記載のアッセイ。
【請求項８】
治療介入の必要な患者の早期の同定は、患者が約１〜７ｐｇ／ｍｌの正常な血清濃度と約４０ｐｇ／ｍｌとの間の上昇したｃＴｎＩを有することを同定することによって行われる、請求項６に記載のアッセイ。
【請求項９】
４８時間の期間中の異なる時点で採取される同じ患者の試料に対して最大約４８時間にわたって定期的に行われる、請求項６に記載のアッセイ。
【請求項１０】
個体における診断、予後診断、又は治療方法を決定する方法であって、
（ａ）前記個体から得られる試料中の心筋トロポニンの濃度を決定するかまたは前記個体から得られる一連の試料中の心筋トロポニンの濃度を決定する工程であって、前記試料中の前記心筋トロポニンの検出限界が約２０ｐｇ／ｍｌ未満である心筋トロポニンアッセイによって前記濃度を判定する工程と、
（ｂ）前記試料中の前記濃度または前記一連の試料中の前記濃度と所定の閾値濃度との比較に基づいて診断、予後診断、または治療方法を決定する工程であって、前記閾値濃度が、１０％以下のＣＶでの正常な個体群におけるトロポニンの９９パーセンタイル濃度として判定され、前記試料濃度が前記閾値濃度より大きい場合には診断、予後診断、又は治療方法を決定する工程と
を含む、方法。
【請求項１１】
工程（ｂ）が、前記濃度または一連の濃度を前記濃度の正常値と比較することと、前記濃度または一連の濃度を所定の閾値レベルと比較することと、前記濃度または一連の濃度をベースライン値と比較することと、前記一連の濃度について濃度の変化率を決定することとからなる群から選択される分析を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
心臓ストレス試験中または心臓ストレス試験後に少なくとも１つの試料が採取される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記心筋トロポニンが、心筋トロポニンＩおよび心筋トロポニンＴからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
個体における心臓損傷を判定する方法であって、
（ａ）８時間未満の間隔で前記個体から一連の血液試料を取得する工程と、
（ｂ）各試料中のｃＴｎＩレベルを検出する工程と、
（ｃ）前記一連の試料中のｃＴｎＩ検出レベルを正常な集団における約７ｐｇ／ｍｌ以下のｃＴｎＩレベルと比較する工程と、
（ｄ）前記一連の血液試料中の２つ以上の試料中のｃＴｎＩレベルが正常な集団における約７ｐｇ／ｍｌのｃＴｎＩレベルより大きい場合には前記個体における心臓損傷があると判定する工程と
を含む、方法。
【請求項１５】
（ｄ）前記ｃＴｎＩの検出レベルが前記一連の血液試料を通して閾値レベルを上回るが減少している合には、心臓損傷が治癒しつつあると判定することと、前記ｃＴｎＩの検出レベルが前記一連の血液試料を通して閾値レベルを上回りかつ増加している場合には、心臓損傷が悪化しつつあると判定することとをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記個体は、あり得る心臓事象および心臓毒性の少なくとも１つについて評価される患者である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｃＴｎＩの閾値レベルが、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、または約１０ｐｇ／ｍｌである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
個体の心血管の健康状態を判定する方法であって、
（ａ）ストレス試験を行う前に血液試料の心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）の血清または血漿濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記個体に対してストレス試験を行う工程と、
（ｃ）前記ストレス試験中または前記ストレス試験後に採取された血液試料のストレス誘発されたｃＴｎＩ濃度を測定する工程と、
（ｄ）前記ストレス試験前および前記ストレス試験中または前記ストレス試験後に前記ｃＴｎＩ濃度を互いに、および正常な集団における約７ｐｇ／ｍｌ以下のｃＴｎＩ濃度と比較する工程と
を含む、方法。
【請求項１９】
前記ストレス試験中または前記ストレス試験後に血液試料が採取される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記個体が、あり得る心臓事象および心臓毒性の少なくとも１つについて評価される患者である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
ヒト患者における心筋損傷について試験する方法であって、
（ａ）前記個体から得られる血液試料の心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）の血清または血漿濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記測定濃度を、対応する変動係数（ＣＶ）が１０％以下での正常な個体群における９９パーセンタイル濃度のｃＴｎＩを示す所定の閾値濃度と比較する工程と、
（ｃ）前記ｃＴｎＩ濃度が前記閾値濃度より大きい場合には前記個体における心筋損傷があると判定する工程と
を含む、方法。
【請求項２２】
前記ｃＴｎＩの閾値濃度が約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、または約１０ｐｇ／ｍｌである場合には心筋の損傷があると判定する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
個体における心臓損傷を判定する方法であって、
（ａ）前記個体から血液試料を取得する工程と、
（ｂ）前記試料中のｃＴｎＩ濃度を検出する工程と、
（ｃ）前記ｃＴｎＩの検出濃度を正常な集団における約７ｐｇ／ｍｌ以下のｃＴｎＩ濃度と比較する工程であって、前記ｃＴｎＩの検出レベルが正常な集団における約７ｐｇ／ｍｌのｃＴｎＩレベルより大きい場合には前記個体が心臓損傷を受けている疑いがある工程と
を含む、方法。
【請求項２４】
前記個体が、あり得る心臓事象および心臓毒性の少なくとも１つについて評価される患者である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
試料中のトロポニンの単一分子またはその断片もしくは複合体の有無を判定するための方法であって、
ｉ）前記分子、断片、または複合体を、存在する場合には標識で標識する工程と、
ｉｉ）前記標識の有無を検出する工程であって、前記標識の存在の検出は前記試料中のトロポニンの前記単一分子、断片、または複合体の存在を示す工程と
を含む方法。
【請求項２６】
前記トロポニンがトロポニンの心筋アイソフォームである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記トロポニンが心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）および心筋トロポニンＣ（ｃＴｎＣ）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記トロポニンがｃＴｎＩである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記検出工程において約５０ｐｇ／ｍｌ未満の検出限界でトロポニンの前記単一分子を検出することが可能である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記トロポニンを約２０ｐｇ／ｍｌ未満の検出レベルで検出することが可能である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記標識が蛍光部分を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記蛍光部分が該部分の励起波長で発光するレーザーによって刺激されたときに少なくとも約２００個の光子を放出することができ、前記レーザーは前記蛍光部分を含む直径約５ミクロン以上のスポットに集束され、前記レーザーによって前記スポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記標識が前記トロポニン分子、断片、または複合体の結合相手をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
前記結合相手が前記トロポニン分子、断片、または複合体に特異的な抗体を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記標識が蛍光部分を含み、工程ｉｉ）が前記標識を単一分子検出器に通過させることを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
前記単一分子検出器が、
ａ）前記蛍光部分を刺激するための電磁放射線源、
ｂ）前記蛍光部分を通過させるためのキャピラリーフローセル、
ｃ）前記キャピラリーフローセル内で前記蛍光部分を移動するための原動力源、
ｄ）前記電磁放射線源から放出される電磁放射線を受け取るための、前記キャピラリーフローセル内に画定されるインタロゲーション空間、
ｅ）前記刺激された蛍光部分の電磁気特性を測定するための、前記インタロゲーション空間に作動可能に接続された電磁放射線検出器、および
ｆ）前記インタロゲーション空間および前記検出器の間に位置し、０．６以上の開口数を有する顕微鏡対物レンズ
を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
個体において診断、予後診断、または治療方法を決定するための方法であって、
ｉ）前記個体から得られる試料中の心筋トロポニンの濃度を決定するかまたは一連の試料中の心筋トロポニンの濃度を決定する工程であって、前記試料中の前記心筋トロポニンの検出限界が約５０ｐｇ／ｍｌ未満である心筋トロポニンアッセイで前記濃度を決定する工程と、
ｉｉ）前記試料中の前記濃度または前記一連の試料中の前記濃度に基づいて、前記個体において診断、予後診断、または治療方法を決定する工程と
を含む方法。
【請求項３８】
工程ｉｉ）が、前記濃度または一連の濃度を前記濃度の正常値と比較することと、前記濃度または一連の濃度を所定の閾値レベルと比較することと、前記濃度または一連の濃度をベースライン値と比較することと、前記一連の濃度について濃度の変化率を決定することとからなる群から選択される分析を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
工程ｉｉ）が、前記試料中の前記トロポニン濃度を所定の閾値濃度と比較して、試料濃度が閾値レベルよりも高い場合は診断、予後診断、または治療方法を決定することを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記閾値濃度が、正常な個体群におけるトロポニンの９９パーセンタイル濃度を決定し、前記閾値濃度を前記９９パーセンタイル濃度で設定することによって決定される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
心臓ストレス試験中または心臓ストレス試験後に少なくとも１つの試料を採取する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記心筋トロポニンが心筋トロポニンＩおよび心筋トロポニンＴからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
前記心筋トロポニンが心筋トロポニンＩである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
前記心筋トロポニンの濃度が全心筋トロポニンの濃度である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記心筋トロポニンの濃度が心筋トロポニン複合体、心筋トロポニン断片、リン酸化心筋トロポニン、酸化心筋トロポニン、またはそれらの組合せの濃度である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記心筋トロポニンの濃度を全心筋トロポニンと比較する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記診断、予後診断、または治療方法が心筋梗塞の診断、予後診断、または治療方法である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４８】
前記診断、予後診断、または治療方法が心筋梗塞の危険度レベルについての危険度階層化を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記濃度または一連の濃度は、前記個体によって心筋虚血症もしくは梗塞またはその可能性を示す１つ以上の症状が医療従事者に示された時点またはそれに近い時点で決定される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記１つ以上の症状が胸部痛、胸部圧、腕部痛、異常なＥＫＧ、異常な酵素レベル、および息切れからなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記濃度をトロポニンの単一分子またはその複合体もしくは断片を検出することを含む方法により決定する、請求項３７に記載の方法。
【請求項５２】
前記トロポニンまたはトロポニン複合体を蛍光部分を含む標識で標識することを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記蛍光部分が該部分の励起波長で発光するレーザーによって刺激されたときに少なくとも約２００個の光子を放出することができ、前記レーザーは前記蛍光部分を含む直径５ミクロンのスポットに集束され、前記レーザーによって前記スポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である、請求項３７に記載の方法。
【請求項５４】
工程ｉ）が前記個体の別の指標を評価することをさらに含み、工程ｉｉ）が、前記トロポニン濃度および前記試料中の前記非トロポニンマーカーの前記別の指標の評価に基づいて、あるいは前記一連の試料中の前記濃度に基づいて、前記個体における診断、予後診断、または治療方法を決定することを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項５５】
前記別の指標が心筋虚血症または梗塞の臨床的な指標である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記別の指標が前記試料中または前記一連の試料中の１つ以上の非トロポニンマーカーの濃度である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記１つ以上のマーカーが心虚血のマーカーまたは炎症のマーカーおよびプラーク不安定性のマーカーである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記１つ以上の心虚血マーカーが、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）およびその心筋分画ＣＫ心筋バンド（ＭＢ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、α−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ、ミオグロビン、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ、グリコーゲンホスホリラーゼＢＢ、未結合の遊離脂肪酸、心臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｈ−ＦＡＢＰ）、虚血修飾アルブミン、ミオシン軽鎖１、ミオシン軽鎖２からなる群から選択される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記１つ以上のマーカーが心筋傷害の１つ以上の特異的マーカーを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記診断、予後診断、または治療方法が心筋梗塞ではない状態の診断、予後診断、または治療方法である、請求項３７に記載の方法。
【請求項６１】
前記状態が心臓毒性である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記心臓毒性が前記個体への薬剤投与に関連する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記状態が、急性リウマチ熱、アミロイド沈着症、心臓外傷（挫傷、切除、ペーシング、ファイヤリング、電気除細動、カテーテル挿入および心臓手術を含む）、再かん流傷害、うっ血性心不全、末期腎不全、ＩＩ型糖原貯蔵症（ポンペ病）、心臓移植、輸血性ヘモシデローシスによる異常ヘモグロビン症、妊娠性高血圧を含む高血圧、しばしば不整脈を伴う低血圧症、甲状腺機能低下症、心筋炎、心膜炎、手術後の非心臓手術、肺動脈塞栓症、および敗血症からなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
蛍光部分に結合されたトロポニンアイソフォームの結合相手を含むトロポニンアイソフォームの検出のための組成物であって、前記蛍光部分は該部分の励起波長で発光するレーザーによって刺激されたときに少なくとも約２００個の光子を放出することができ、前記レーザーは蛍光部分を含む直径約５ミクロン以上のスポットに集束され、前記レーザーによって前記スポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である組成物。
【請求項６５】
前記結合相手が前記トロポニンアイソフォームに対する抗体を含む、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
前記トロポニンアイソフォームが心筋アイソフォームである、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６９】
前記心筋アイソフォームがｃＴｎＩおよびｃＴｎＴからなる群から選択される、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記心筋アイソフォームがｃＴｎＩである、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記抗体がトロポニン分子の特定の領域に特異的である、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
前記抗体が心筋トロポニンＩのアミノ酸２７〜４１を含む領域に特異的である、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記蛍光部分が少なくとも１つの置換インドリウム環系を含む分子を含み、前記インドリウム環の３位炭素上の置換基は化学反応性基または共役基を含む、請求項６４記載の組成物。
【請求項７４】
前記蛍光部分がＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５３２、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０、またはＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００からなる群から選択される色素を含む、請求項６４に記載の組成物。
【請求項７５】
前記蛍光部分がＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７を含む、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
心筋トロポニンの濃度の決定のための一組の標準品を含む組成物であって、少なくとも１つの標準品は約１０ｐｇ／ｍｌ未満の心筋トロポニン濃度である組成物。
【請求項７７】
蛍光色素部分に結合された心筋トロポニンに対する抗体を含む組成物を含むキットであって、前記蛍光色素部分は該部分の励起波長で発光するレーザーによって刺激されたときに少なくとも約２００個の光子を放出することができ、前記レーザーは蛍光部分を含む直径約５ミクロン以上のスポットに集束され、前記レーザーによって前記スポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下であり、前記組成物は好適な包装材で包装される、キット。
【請求項７８】
前記心筋トロポニンが心筋トロポニンＩまたは心筋トロポニンＴである、請求項７７に記載のキット。
【請求項７９】
前記心筋トロポニンが心筋トロポニンＩである、請求項７７に記載のキット。
【請求項８０】
説明書をさらに含む、請求項７７に記載のキット。
【請求項８１】
固体支持体に結合される前記心筋トロポニンＩについての捕捉抗体を含む組成物をさらに含む、請求項７７に記載のキット。
【請求項８２】
前記固体支持体がマイクロタイタープレートまたは常磁性微小粒子を含む、請求項８１に記載のキット。
【請求項８３】
洗浄用緩衝液、アッセイ用緩衝液、溶出用緩衝液、およびキャリブレーター用希釈液からなる群から選択される構成要素をさらに含む、請求項７７に記載のキット。
【請求項８４】
前記心筋トロポニンの標準品をさらに含む、請求項７７に記載のキット。