【手続補正書】
【提出日】平成23年3月8日(2011.3.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コード領域に作動可能に連結されたｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする核酸分子を含む調節可能な遺伝子発現構築物であって、該リボスイッチが該ＲＮＡの発現を調節し、該リボスイッチと該コード領域とが異種である、構築物。
【請求項２】
（ａ）前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインと該発現プラットフォームドメインとが異種であるか、または
（ｂ）前記リボスイッチが２つ以上のアプタマードメインおよび１つの発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインのうちの少なくとも１つと該発現プラットフォームドメインとが異種である、
請求項１に記載の構築物。
【請求項３】
少なくとも２つの前記アプタマードメインが協同的結合を示す、請求項２に記載の構築物。
【請求項４】
天然に存在するｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの非天然誘導体である、リボスイッチ。
【請求項５】
（ａ）前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインと該発現プラットフォームドメインとが異種であるか、
（ｂ）前記リボスイッチが１つまたは複数のさらなるアプタマードメインをさらに含むか、
（ｃ）前記リボスイッチがトリガー分子によって活性化された場合にシグナルを生成するか、または
前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインと該発現プラットフォームドメインとが異種であることと、前記リボスイッチが１つまたは複数のさらなるアプタマードメインをさらに含むことと、前記リボスイッチがトリガー分子によって活性化された場合にシグナルを生成することとの組み合わせである、
請求項４に記載のリボスイッチ。
【請求項６】
少なくとも２つの前記アプタマードメインが協同的結合を示す、請求項５に記載のリボスイッチ。
【請求項７】
目的の化合物を検出する方法であって、サンプルをリボスイッチと接触させる工程を含み、該リボスイッチが該目的の化合物によって活性化され、該目的の化合物によって活性化された場合に該リボスイッチがシグナルを生成し、該サンプルが該目的の化合物を含む場合に該リボスイッチがシグナルを生成し、該リボスイッチがｐｒｅＱ１応答性リボスイッチまたはｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの誘導体を含む、方法。
【請求項８】
（ａ）前記目的の化合物によって活性化された場合に前記リボスイッチが高次構造を変化させ、該高次構造の変化によって高次構造依存性標識を介してシグナルが生成されるか、または
（ｂ）該高次構造の変化によって該リボスイッチに連結したＲＮＡの発現が変化し、該発現の変化によってシグナルを生成する
請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記シグナルが、前記リボスイッチに連結した前記ＲＮＡから発現したレポータータンパク質によって生成される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）リボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子の遺伝子発現の阻害について化合物
を試験する工程であって、該阻害が該リボスイッチを介し、該リボスイッチがｐｒｅＱ１応答性リボスイッチまたはｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの誘導体を含む、試験する工程、
（ｂ）工程（ａ）で遺伝子発現を阻害した化合物と細菌細胞との接触によって遺伝子発現を阻害する工程であって、該細菌細胞がリボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子を含み、該化合物が該リボスイッチへの結合によって該遺伝子の発現を阻害する、阻害工程
を含む、方法。
【請求項１１】
ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを同定する方法であって、該方法が、
ｐｒｅＱ１の存在下および非存在下でのＲＮＡ分子のインライン自発切断（ｉｎ−ｌｉｎｅ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｃｌｅａｖａｇｅ）を評価する工程であって、該ＲＮＡ分子がｐｒｅＱ１によって調節される遺伝子によってコードされ、
該ＲＮＡ分子のインライン自発切断パターンの変化がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを示す、工程
を含む、方法。
【請求項１２】
細胞中の遺伝子発現を阻害するための組成物であって、
化合物を含み、
該化合物が式Ｉ：
【化１９】
2010521978.tif 000001
（式中、
Ｒ１は、ＣＨ、Ｎ、Ｃ−ＮＨ２、Ｃ−ＣＨ２−ＮＨ２、Ｃ−ＣＮ、Ｃ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ−ＣＨ＝ＮＨ、Ｃ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２、またはＣ−水素結合供与体である）
の構造を有し、
該細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子を含み、該化合物が、該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチへの結合によって該遺伝子の発現を阻害する、組成物。
【請求項１３】
前記細胞が遺伝子発現の阻害が必要であると同定されているか、
前記細胞が細菌細胞であるか、
前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害するか、または
前記細胞が遺伝子発現の阻害が必要であると同定されていることと、前記細胞が細菌細胞であることと、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害することとの組み合わせである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が被験体への投与のためのものであることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記細胞が前記被験体中の細菌細胞であり、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害するか、
前記被験体が細菌感染を有するか、
前記細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むか、または
前記細胞が前記被験体中の細菌細胞であり、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害することと、前記被験体が細菌感染を有することと、前記細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むこととの組み合わせである、
請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が別の抗菌化合物をさらに含むか、または
前記化合物がバイオフィルム中の細菌増殖を阻害する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１７】
ｐｒｅＱ１の産生方法であって、該方法は、
（ａ）ｐｒｅＱ１を産生することができる変異細菌細胞を培養する工程であって、該変異細菌細胞が該ｐｒｅＱ１リボスイッチの変異を含み、該変異を持たない細胞と比較して、該変異が、該変異細菌細胞によるｐｒｅＱ１産生を増加させる、培養工程、
（ｂ）該細胞培養物からｐｒｅＱ１を単離し、それにより、ｐｒｅＱ１を産生する工程、
を含む、方法。
【請求項１８】
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異を含まない細菌細胞の培養と比較して、ｐｒｅＱ１産生量が少なくとも１０％増加するか、または
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異を含まない細菌細胞の培養と比較して、ｐｒｅＱ１産生量が少なくとも２５％増加する、
請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異がノックアウト変異である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ｐｒｅＱ１リボスイッチの変異を含む細菌細胞であって、該変異を持たない細胞と比較した場合に、該変異が、該変異を含む細菌細胞によるｐｒｅＱ１産生を測定可能な程度に増加させる、細菌細胞。
【請求項２１】
細菌細胞増殖を阻害するための組成物であって、該組成物は、ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチに結合する化合物を含み、該細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子を含み、該化合物が該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチへの結合によって細菌細胞増殖を阻害し、それにより、ｐｒｅＱ１産生が制限される、組成物。
【請求項２２】
前記組成物により、該組成物と接触しない細胞と比較して、細菌細胞増殖が少なくとも１０％減少する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が被験体への投与のためのものであることを特徴とする、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記細胞が被験体中の細菌細胞であり、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害するか、
前記被験体が細菌感染を有するか、
前記組成物が別の抗菌化合物をさらに含むか、または
前記細胞が被験体中の細菌細胞であり、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害することと、前記被験体が細菌感染を有することと、前記組成物が別の抗菌化合物をさらに含むこととの組み合わせである、
請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
サンプル中のｐｒｅＱ１を検出する方法であって、該方法は、
ａ．ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを該サンプルと接触させる工程、および
ｂ．ｐｒｅＱ１と該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチとの間の相互作用を検出する工程であって、ｐｒｅＱ１と該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチとの間の相互作用がｐｒｅＱ１の存在を示す、検出工程、
を含む、方法。
【請求項２６】
前記ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを標識する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
細胞中のリボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子の遺伝子発現を阻害するための組成物であって、該組成物は、該遺伝子の遺伝子発現の阻害について化合物を試験することによって該遺伝子の遺伝子発現を阻害する化合物として同定された化合物を含み、該阻害が該リボスイッチを介し、該リボスイッチがｐｒｅＱ１応答性リボスイッチまたはｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの誘導体を含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
コード領域に作動可能に連結されたｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする核酸分子を含む調節可能な遺伝子発現構築物であって、リボスイッチがＲＮＡの発現を調節し、リボスイッチとコード領域とが異種である、構築物を本明細書中に開示する。リボスイッチはアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むことができ、アプタマードメインと発現プラットフォームドメインとは異種である。リボスイッチは２つ以上のアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むことができ、少なくとも１つのアプタマードメインと発現プラットフォームドメインとは異種である。少なくとも２つのアプタマードメインは協同的結合を示すことができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
天然に存在するｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの非天然誘導体であるリボスイッチも、本明細書中に開示する。リボスイッチはアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むことができ、アプタマードメインと発現プラットフォームドメインとは異種である。リボスイッチは１つまたは複数のさらなるアプタマードメインをさらに含むことができる。少なくとも２つのアプタマードメインは協同的結合を示すことができる。リボスイッチをトリガー分子によって活性化することができ、トリガー分子によって活性化された場合にリボスイッチはシグナルを生成する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
本明細書中に組み込まれ、且つ本明細書の一部を構成する添付の図面は、開示の方法および組成物のいくつかの実施形態を例示し、記載と共に、開示の方法および組成物の原理を説明するのに役立つ。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
コード領域に作動可能に連結されたｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする核酸分子を含む調節可能な遺伝子発現構築物であって、該リボスイッチが該ＲＮＡの発現を調節し、該リボスイッチと該コード領域とが異種である、構築物。
（項目２）
前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインと該発現プラットフォームドメインとが異種である、項目１に記載の構築物。
（項目３）
前記リボスイッチが２つ以上のアプタマードメインおよび１つの発現プラットフォームドメインを含み、少なくとも１つの該アプタマードメインと該発現プラットフォームドメインとが異種である、項目１に記載の構築物。
（項目４）
少なくとも２つの前記アプタマードメインが協同的結合を示す、項目３に記載の構築物。
（項目５）
天然に存在するｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの非天然誘導体である、リボスイッチ。
（項目６）
前記リボスイッチがアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含み、該アプタマードメインと該発現プラットフォームドメインとが異種である、項目５に記載のリボスイッチ。
（項目７）
前記リボスイッチが１つまたは複数のさらなるアプタマードメインをさらに含む、項目６に記載のリボスイッチ。
（項目８）
少なくとも２つの前記アプタマードメインが協同的結合を示す、項目７に記載のリボスイッチ。
（項目９）
前記リボスイッチがトリガー分子によって活性化され、該トリガー分子によって活性化された場合に該リボスイッチがシグナルを生成する、項目５に記載のリボスイッチ。
（項目１０）
目的の化合物を検出する方法であって、サンプルをリボスイッチと接触させる工程を含み、該リボスイッチが該目的の化合物によって活性化され、該目的の化合物によって活性化された場合に該リボスイッチがシグナルを生成し、該サンプルが該目的の化合物を含む場合に該リボスイッチがシグナルを生成し、該リボスイッチがｐｒｅＱ１応答性リボスイッチまたはｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの誘導体を含む、方法。
（項目１１）
前記目的の化合物によって活性化された場合に前記リボスイッチが高次構造を変化させ、該高次構造の変化によって高次構造依存性標識を介してシグナルが生成される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記目的の化合物によって活性化された場合に前記リボスイッチが高次構造を変化させ、該高次構造の変化によって該リボスイッチに連結したＲＮＡの発現が変化し、該発現の変化によってシグナルを生成する、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記シグナルが、前記リボスイッチに連結した前記ＲＮＡから発現したレポータータンパク質によって生成される、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
（ａ）リボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子の遺伝子発現の阻害について化合物
を試験する工程であって、該阻害が該リボスイッチを介し、該リボスイッチがｐｒｅＱ１応答性リボスイッチまたはｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの誘導体を含む、試験する工程、
（ｂ）工程（ａ）で遺伝子発現を阻害した化合物と細胞との接触によって遺伝子発現を阻害する工程であって、該細胞がリボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子を含み、該化合物が該リボスイッチへの結合によって該遺伝子の発現を阻害する、阻害工程
を含む、方法。
（項目１５）
ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを同定する方法であって、該方法が、
ｐｒｅＱ１の存在下および非存在下でのＲＮＡ分子のインライン自発切断（ｉｎ−ｌｉｎｅ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｃｌｅａｖａｇｅ）を評価する工程であって、該ＲＮＡ分子がｐｒｅＱ１によって調節される遺伝子によってコードされ、
該ＲＮＡ分子のインライン自発切断パターンの変化がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを示す、工程
を含む、方法。
（項目１６）
遺伝子発現を阻害する方法であって、
（ａ）化合物を細胞と接触させる工程を含み、
（ｂ）該化合物が式Ｉ：
【化１９】
2010521978.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、ＣＨ、Ｎ、Ｃ−ＮＨ２、Ｃ−ＣＨ２−ＮＨ２、Ｃ−ＣＮ、Ｃ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ−ＣＨ＝ＮＨ、Ｃ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２、またはＣ−水素結合供与体である）
の構造を有し、
該細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子を含み、該化合物が、該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチへの結合によって該遺伝子の発現を阻害する、方法。
（項目１７）
前記細胞が遺伝子発現の阻害が必要であると同定されている、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記細胞が細菌細胞である、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記化合物が前記細菌細胞を死滅させるかもしくは前記細菌細胞の増殖を阻害する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記化合物および前記細胞が被験体への該化合物の投与によって接触する、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記細胞が前記被験体中の細菌細胞であり、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害する、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記被験体が細菌感染を有する、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記化合物を別の抗菌化合物と組み合わせて投与する、項目１６に記載の方法。
（項目２５）
前記化合物がバイオフィルム中の細菌増殖を阻害する、項目１６に記載の方法。
（項目２６）
ｐｒｅＱ１の産生方法であって、該方法は、
（ａ）ｐｒｅＱ１を産生することができる変異細菌細胞を培養する工程であって、該変異細菌細胞が該ｐｒｅＱ１リボスイッチの変異を含み、該変異を持たない細胞と比較して、該変異が、該変異細菌細胞によるｐｒｅＱ１産生を増加させる、培養工程、
（ｂ）該細胞培養物からｐｒｅＱ１を単離し、それにより、ｐｒｅＱ１を産生する工程、
を含む、方法。
（項目２７）
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異を含まない細菌細胞の培養と比較して、前記ｐｒｅＱ１産生量が少なくとも１０％増加する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異を含まない細菌細胞の培養と比較して、前記ｐｒｅＱ１産生量が少なくとも１０％増加する、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異を含まない細菌細胞の培養と比較して、前記ｐｒｅＱ１産生量が少なくとも２５％増加する、項目２６に記載の方法。
（項目３０）
前記ｐｒｅＱ１リボスイッチの前記変異がノックアウト変異である、項目２６に記載の方法。
（項目３１）
ｐｒｅＱ１リボスイッチの変異を含む細菌細胞であって、該変異を持たない細胞と比較した場合に、該変異が、該変異を含む細胞によるｐｒｅＱ１産生を測定可能な程度に増加させる、細菌細胞。
（項目３２）
細菌細胞増殖を阻害する方法であって、該方法は、該細胞をｐｒｅＱ１応答性リボスイッチに結合する化合物と接触させる工程であって、該細胞がｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子を含み、該化合物が該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチへの結合によって該細菌細胞増殖を阻害し、それにより、ｐｒｅＱ１産生が制限される、工程を含む方法。
（項目３３）
前記化合物と接触しない細胞と比較して、細菌細胞増殖が少なくとも１０％減少する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
被験体への前記化合物の投与によって、該化合物および前記細胞を接触させる、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
前記細胞が前記被験体中の細菌細胞であり、前記化合物が該細菌細胞を死滅させるかもしくは該細菌細胞の増殖を阻害する、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体が細菌感染を有する、項目３３に記載の方法。
（項目３７）
前記化合物を別の抗菌化合物と組み合わせて投与する、項目３２に記載の方法。
（項目３８）
サンプル中のｐｒｅＱ１を検出する方法であって、該方法は、
ａ．ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを該サンプルと接触させる工程、および
ｂ．該ｐｒｅＱ１と該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチとの間の相互作用を検出する工程であって、該ｐｒｅＱ１と該ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチとの間の相互作用が該ｐｒｅＱ１の存在を示す、検出工程、
を含む、方法。
（項目３９）
前記ｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを標識する、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
遺伝子の遺伝子発現の阻害について化合物を試験することによって該遺伝子の遺伝子発現を阻害する化合物として同定された化合物と細胞との接触によってリボスイッチを含むＲＮＡをコードする遺伝子の遺伝子発現を阻害する工程を含む方法であって、該阻害が該リボスイッチを介し、該リボスイッチがｐｒｅＱ１応答性リボスイッチまたはｐｒｅＱ１応答性リボスイッチの誘導体を含む、方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
Ａ．リボスイッチ
リボスイッチは、発現するＲＮＡ分子の一部であり、トリガー分子によって結合した場合に状態が変化する発現調節エレメントである。リボスイッチを、典型的には、以下の２つの個別のドメインに分けることができる：１つは標的に選択的に結合するドメイン（アプタマードメイン）および他は遺伝子調節に影響を及ぼすドメイン（発現プラットフォームドメイン）である。遺伝子発現が代謝産物依存性にアロステリック調節されるこれらの２ドメイン間の動的相互作用がもたらされる。単離および組換えリボスイッチ、かかるリボスイッチを含む組換え構築物、かかるリボスイッチに作動可能に連結された異種配列、かかるリボスイッチを保有する細胞およびトランスジェニック生物、リボスイッチ組換え構築物、ならびに異種配列に作動可能に連結されたリボスイッチを開示する。異種配列は、例えば、目的のタンパク質またはペプチド（レポータータンパク質またはペプチドが含まれる）をコードする配列であり得る。好ましいリボスイッチは、天然に存在するリボスイッチ（天然に存在するｐｒｅＱ１リボスイッチなど）であるか、天然に存在するリボスイッチに由来する。リボスイッチは、人工アプタマーを含むか、任意選択的に排除することができる。例えば、人工アプタマーには、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ進化および／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択を介してデザインまたは選択されるアプタマーが含まれる。リボスイッチは、天然に存在するリボスイッチのコンセンサス配列（ｐｒｅＱ１リボスイッチのコンセンサス配列など）を含むことができる。ｐｒｅＱ１リボスイッチのコンセンサス配列を、図１および図３ａに示す。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
異種アプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むキメラリボスイッチを開示する。すなわち、キメラリボスイッチは、ある供給源由来のアプタマードメインおよび別の供給源由来の発現プラットフォームドメインから構成される。異種供給源は、例えば、異なる特異的リボスイッチ、異なるリボスイッチ型、または異なるリボスイッチクラスに由来し得る。異種アプタマーは、非リボスイッチアプタマーにも由来し得る。異種発現プラットフォームドメインは、非リボスイッチ供給源にも由来し得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
コード領域に作動可能に連結されたｐｒｅＱ１応答性リボスイッチを含むＲＮＡをコードする核酸分子を含む調節可能な遺伝子発現構築物であって、リボスイッチがＲＮＡの発現を調節し、リボスイッチとコード領域とが異種である、構築物を開示する。リボスイッチはアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むことができ、アプタマードメインと発現プラットフォームドメインとは異種である。リボスイッチは２つ以上のアプタマードメインおよび発現プラットフォームドメインを含むことができ、アプタマードメインの少なくとも１つと発現プラットフォームドメインとは異種である。少なくとも２つのアプタマードメインは協同的結合を示すことができる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
異種リボスイッチおよびコード領域を含むＲＮＡ分子を開示する。すなわち、かかるＲＮＡ分子は、ある供給源由来のリボスイッチおよび別の供給源由来のコード領域から構成される。異種供給源は、例えば、異なるＲＮＡ分子、異なる転写物、異なる遺伝子由来のＲＮＡまたは転写物、異なる細胞由来のＲＮＡまたは転写物、異なる生物由来のＲＮＡまたは転写物、異なる種由来のＲＮＡまたは転写物、天然の配列および人工または操作された配列、特異的リボスイッチ、異なるリボスイッチ型、または異なるリボスイッチクラスに由来し得る。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５１】
２．ウイルスプロモーターおよびエンハンサー
哺乳動物宿主細胞中のベクターからの転写を調節する好ましいプロモーターを、種々の供給源（例えば、ポリオーマ、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、および最も好ましくはサイトメガロウイルスなどのウイルスゲノム）、または異種哺乳動物プロモーター（例えば、βアクチンプロモーター）から得ることができる。ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターを、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含むＳＶ４０制限フラグメントとして得ることが都合が良い（Ｆｉｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７３：  １１３（１９７８））。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターを、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限フラグメントとして得ることが都合が良い（Ｇｒｅｅｎｗａｙ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １８：  ３５５−３６０（１９８２））。勿論、宿主細胞または関連種由来のプロモーターも本明細書中で有用である。