【手続補正書】
【提出日】平成23年3月28日(2011.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a) 少なくとも第一のオリゴヌクレオチド成分および第二のオリゴヌクレオチド成分が標的の存在下で自己組織化して、リガーゼ活性を有する触媒的に活性な多成分核酸酵素(MNAzymeリガーゼ)を含む少なくとも第一の核酸酵素を形成できる、少なくとも第一の核酸複合体の少なくとも二つまたはそれ以上のオリゴヌクレオチド成分および少なくとも一つの基質を提供する工程、
(b) 少なくとも一つの標的を含有すると推定される試料と二つまたはそれ以上のオリゴヌクレオチド成分および少なくとも一つの基質とを、
(1) 該少なくとも一つの触媒的に活性なMNAzymeリガーゼの自己組織化、および
(2) 該少なくとも一つのMNAzymeリガーゼの触媒活性
を可能にする条件の下で接触させる工程、ならびに
(c) 該少なくとも一つのMNAzymeリガーゼの触媒活性の存在を判定する工程であって、該触媒活性の存在が該少なくとも一つの標的の存在を示す、工程
を含む、少なくとも一つの標的の存在を検出するための方法。
【請求項２】
(a) 第一の核酸酵素の形成を助長するのに標的との会合を必要とする成分を含み、少なくとも一つの基質をさらに含む第一の核酸複合体を提供する工程、ならびに
(b) 第一の核酸酵素により触媒される反応の産物と会合できる第二の核酸複合体の少なくとも一つの成分を提供する工程、および第二の核酸酵素として機能できる第二の核酸複合体を形成させる工程
を含む、標的の検出のための方法であって、
該核酸酵素の少なくとも一つがリガーゼ活性を有し、かつ該核酸酵素の少なくとも一つがMNAzymeであり、該方法が、
(i) 標的を含有すると推定される試料と第一の核酸複合体とを接触させる工程であって、該標的が第一の核酸複合体と会合して該第一の核酸酵素の形成を助長する、工程、および
(ii) 第一の核酸酵素により触媒される反応の産物と該第二の核酸複合体の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該第二の核酸酵素として機能する第二の核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一もしくは第二の核酸酵素の少なくとも一方またはその両方の活性が該標的の存在を示す、方法。
【請求項３】
第一もしくは第二の核酸酵素またはその両方により触媒される反応の産物と会合できる第三の核酸複合体の少なくとも一つの成分を提供する工程、および
第三の核酸酵素として機能できる第三の核酸複合体を形成させる工程
をさらに含む方法であって、該方法が、
第一もしくは第二の核酸酵素またはその両方により触媒される反応の産物と該第三の核酸複合体の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該第三の核酸酵素として機能する第三の核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一、第二、もしくは第三の核酸酵素またはそれらの任意の組み合わせの活性が該標的の存在を示す、請求項2記載の方法。
【請求項４】
第一、第二、または第三の核酸酵素のうちの少なくとも一つの産物と会合できる少なくとも一つのさらなる核酸複合体の少なくとも一つの成分を提供する工程、および
少なくとも一つのさらなる核酸酵素として機能できる少なくとも一つのさらなる核酸複合体を形成させる工程
をさらに含む方法であって、該方法が、
該第一、第二、または第三の核酸酵素のうちの少なくとも一つにより触媒される反応の産物と該少なくとも一つのさらなる核酸複合体の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該少なくとも一つのさらなる核酸酵素として機能する少なくとも一つのさらなる核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一、第二、第三の核酸酵素もしくは少なくとも一つのさらなる核酸酵素またはそれらの任意の組み合わせの活性が該標的の存在を示す、請求項3記載の方法。
【請求項５】
核酸酵素の少なくとも一つが切断活性を有する、請求項2〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
少なくとも第二の核酸酵素がリガーゼ活性を有する、請求項2〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
第一の核酸酵素がMNAzymeである、請求項2〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
核酸酵素の少なくとも一つがDNAzymeである、請求項2〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
前記核酸酵素のいずれか一つにより触媒される反応の産物が、組織化助長因子、パートザイム、基質、DNAzyme、スタビライザーアーム、またはそれらの成分からなる群より選択される、請求項2〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
前記成分の少なくとも一つが少なくとも一つのアプタマーをさらに含み、かつ方法が第一の核酸複合体の少なくとも一つの組織化助長因子および少なくとも一つの組織化阻害因子を提供する工程をさらに含み、標的が該アプタマーと会合し、該第一の核酸複合体が第一の核酸酵素として機能することを可能にする、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
核酸酵素の少なくとも一つ、またはそれらの任意の組み合わせにより触媒される反応の産物が、前記の核酸複合体の少なくとも一つのうちの少なくとも一つの成分と会合し、それによってさらに前記の核酸酵素として機能する該前記の核酸複合体のうちのさらに少なくとも一つの形成を可能にする、請求項2〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記標的が、同定される、検出される、または定量化される標的である、請求項1〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
DNAzymeが、DNAzymeリガーゼ7Z81、7Z48、7Q10、および9DB1からなる群より選択されるDNAzymeリガーゼである、請求項8記載の方法。
【請求項１４】
核酸の対が
2010523088.tif 000001
からなる群より選択される、MNAzymeリガーゼのためのパートザイム対に組み入れられる触媒コア配列としての単離された核酸の対の使用。
【請求項１５】
核酸の対が
2010523088.tif 000002
からなる群より選択される、パートザイム対に組み入れられる触媒コア配列としての単離された核酸の対を含むMNAzymeリガーゼ。
【請求項１６】
(a) 複数の第一の核酸酵素の形成を助長するのに複数の標的のうちの一つとの会合を必要とする成分を各々が含み、少なくとも一つの基質を各々がさらに含む、複数の第一の核酸複合体を提供する工程、ならびに
(b) 複数の第一の核酸酵素により触媒される反応の複数の産物と会合できる複数の第二の核酸複合体の各々の少なくとも一つの成分を提供し、かつ複数の第二の核酸酵素として機能できる複数の第二の核酸複合体を形成させる工程であって、該核酸酵素の少なくとも一つがリガーゼ活性を有し、かつ該核酸酵素の少なくとも一つがMNAzymeである、工程
を含む、複数の標的の検出のための方法であって、該方法が、
(i) 該複数の標的が該複数の第一の核酸複合体と会合して該複数の第一の核酸酵素の形成を助長する、該複数の標的を含有すると推定される試料と複数の第一の核酸複合体とを接触させる工程、および
(ii) 複数の第一の核酸酵素により触媒される反応の複数の産物と複数の第二の核酸複合体の各々の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該複数の第二の核酸酵素として機能する複数の該第二の核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一もしくは第二のまたはその両方の核酸酵素の活性が該複数の標的の存在を示す、方法。
【請求項１７】
多成分核酸酵素リガーゼ(MNAzymeリガーゼ)基質としての少なくとも二つのオリゴヌクレオチドの使用であって、MNAzymeリガーゼの基質アームによる該基質の結合の後に、該基質がMNAzymeリガーゼにより修飾される、使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１８】
本発明の別の局面においては、以下の工程:
(a) DNAzyme由来の触媒コア配列を分ける工程
(b) 得られた部分的触媒コア配列をパートザイムに組み入れる工程
(c) MNAzyme活性を検出して、該パートザイムにおける該部分的触媒コア配列のどの組み合わせが活性なMNAzymeの形成に適合するかを判定する工程
を含む、パートザイムに組み入れることによって、機能的に活性なMNAzymeをもたらす部分的触媒コア配列に分けるのにDNAzyme触媒コア配列内のどの位置が適しているかを同定するための方法が提供される。
[請求項1001]
(a) 少なくとも第一のオリゴヌクレオチド成分および第二のオリゴヌクレオチド成分が標的の存在下で自己組織化して、リガーゼ活性を有する触媒的に活性な多成分核酸酵素(MNAzymeリガーゼ)を含む少なくとも第一の核酸酵素を形成できる、少なくとも第一の核酸複合体の少なくとも二つまたはそれ以上のオリゴヌクレオチド成分および少なくとも一つの基質を提供する工程、
(b) 少なくとも一つの標的を含有すると推定される試料と二つまたはそれ以上のオリゴヌクレオチド成分および少なくとも一つの基質とを、
(1) 該少なくとも一つの触媒的に活性なMNAzymeリガーゼの自己組織化、および
(2) 該少なくとも一つのMNAzymeリガーゼの触媒活性
を可能にする条件の下で接触させる工程、ならびに
(c) 該少なくとも一つのMNAzymeリガーゼの触媒活性の存在を判定する工程であって、該触媒活性の存在が該少なくとも一つの標的の存在を示す、工程
を含む、少なくとも一つの標的の存在を検出するための方法。
[請求項1002]
(a) 第一の核酸酵素の形成を助長するのに標的との会合を必要とする成分を含み、少なくとも一つの基質をさらに含む第一の核酸複合体を提供する工程、ならびに
(b) 第一の核酸酵素により触媒される反応の産物と会合できる第二の核酸複合体の少なくとも一つの成分を提供する工程、および第二の核酸酵素として機能できる第二の核酸複合体を形成させる工程
を含む、標的の検出のための方法であって、
該核酸酵素の少なくとも一つがリガーゼ活性を有し、かつ該核酸酵素の少なくとも一つがMNAzymeであり、該方法が、
(i) 標的を含有すると推定される試料と第一の核酸複合体とを接触させる工程であって、該標的が第一の核酸複合体と会合して該第一の核酸酵素の形成を助長する、工程、および
(ii) 第一の核酸酵素により触媒される反応の産物と該第二の核酸複合体の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該第二の核酸酵素として機能する第二の核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一もしくは第二の核酸酵素の少なくとも一方またはその両方の活性が該標的の存在を示す、方法。
[請求項1003]
第一もしくは第二の核酸酵素またはその両方により触媒される反応の産物と会合できる第三の核酸複合体の少なくとも一つの成分を提供する工程、および
第三の核酸酵素として機能できる第三の核酸複合体を形成させる工程
をさらに含む方法であって、該方法が、
第一もしくは第二の核酸酵素またはその両方により触媒される反応の産物と該第三の核酸複合体の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該第三の核酸酵素として機能する第三の核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一、第二、もしくは第三の核酸酵素またはそれらの任意の組み合わせの活性が該標的の存在を示す、請求項1002記載の方法。
[請求項1004]
第一、第二、または第三の核酸酵素のうちの少なくとも一つの産物と会合できる少なくとも一つのさらなる核酸複合体の少なくとも一つの成分を提供する工程、および
少なくとも一つのさらなる核酸酵素として機能できる少なくとも一つのさらなる核酸複合体を形成させる工程
をさらに含む方法であって、該方法が、
該第一、第二、または第三の核酸酵素のうちの少なくとも一つにより触媒される反応の産物と該少なくとも一つのさらなる核酸複合体の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該少なくとも一つのさらなる核酸酵素として機能する少なくとも一つのさらなる核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一、第二、第三の核酸酵素もしくは少なくとも一つのさらなる核酸酵素またはそれらの任意の組み合わせの活性が該標的の存在を示す、請求項1003記載の方法。
[請求項1005]
核酸酵素の少なくとも一つが切断活性を有する、請求項1002〜1004のいずれか一項記載の方法。
[請求項1006]
少なくとも第二の核酸酵素がリガーゼ活性を有する、請求項1002〜1005のいずれか一項記載の方法。
[請求項1007]
第一の核酸酵素がMNAzymeである、請求項1002〜1006のいずれか一項記載の方法。
[請求項1008]
核酸酵素の少なくとも一つがDNAzymeである、請求項1002〜1007のいずれか一項記載の方法。
[請求項1009]
前記核酸酵素のいずれか一つにより触媒される反応の産物が、組織化助長因子、パートザイム、基質、DNAzyme、スタビライザーアーム、またはそれらの成分からなる群より選択される、請求項1002〜1008のいずれか一項記載の方法。
[請求項1010]
標的が核酸である、請求項1001〜1009のいずれか一項記載の方法。
[請求項1011]
前記成分の少なくとも一つが少なくとも一つのアプタマーをさらに含み、かつ方法が第一の核酸複合体の少なくとも一つの組織化助長因子および少なくとも一つの組織化阻害因子を提供する工程をさらに含み、標的が該アプタマーと会合し、該第一の核酸複合体が第一の核酸酵素として機能することを可能にする、請求項1001〜1010のいずれか一項記載の方法。
[請求項1012]
標的が非核酸標的である、請求項1011記載の方法。
[請求項1013]
核酸酵素の少なくとも一つ、またはそれらの任意の組み合わせにより触媒される反応の産物が、前記の核酸複合体の少なくとも一つのうちの少なくとも一つの成分と会合し、それによってさらに前記の核酸酵素として機能する該前記の核酸複合体のうちのさらに少なくとも一つの形成を可能にする、請求項1002〜1012のいずれか一項記載の方法。
[請求項1014]
(a) 第一のMNAzymeのための成分、少なくとも第一のMNAzyme基質、第一のDNAzymeリガーゼ、第一のDNAzymeリガーゼ基質、第二の組織化助長因子、少なくとも第二のMNAzyme基質、および第二のMNAzymeのための第一のパートザイムを提供する工程
を含む、カスケードを用いて第一の組織化助長因子を検出するための方法であって、該方法が、
(b) 該第一の組織化助長因子と該第一のMNAzymeのための成分とを、該第一のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下で会合させ、このようにして該第一のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって該第一のMNAzyme基質の修飾を可能とする工程
を含み、
第一のMNAzyme基質の修飾が第二のDNAzymeリガーゼ基質の産生をもたらし、かつ
第一のDNAzymeリガーゼが第一および第二のDNAzymeリガーゼ基質と組織化し、かつ
DNAzymeリガーゼの触媒活性が第二のMNAzymeのための第二のパートザイムを産生し、かつ
第二のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下での該第二のMNAzymeのための第二のパートザイムと該第二の組織化助長因子との会合、および第二のMNAzymeのための第一のパートザイムとの会合が、該第二のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって少なくとも第二のMNAzyme基質の修飾を可能とし、該基質のいずれかのまたはそれらの組み合わせの修飾が該第一の組織化助長因子の存在を示す、方法。
[請求項1015]
(a) 第一のMNAzymeのための成分、少なくとも第一のMNAzyme基質、DNAzymeリガーゼ、第一のDNAzymeリガーゼ基質、少なくとも第二のMNAzyme基質、ならびに第二のMNAzymeのための第一および第二のパートザイムを提供する工程
を含む、カスケードを用いて第一の組織化助長因子を検出するための方法であって、該方法が、
(b) 該第一の組織化助長因子と該第一のMNAzymeのための成分とを、該第一のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下で会合させ、このようにして該第一のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって該第一のMNAzyme基質の修飾を可能とする工程
を含み、
第一のMNAzyme基質の修飾が第二のDNAzymeリガーゼ基質の産生をもたらし、かつ
第一のDNAzymeリガーゼが第一および第二のDNAzymeリガーゼ基質と組織化し、かつ
DNAzymeリガーゼの触媒活性が第二のMNAzymeのための第二の組織化助長因子を産生し、かつ
該第二のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下での該第二の組織化助長因子と該第二のMNAzymeのための第一および第二のパートザイムとの会合が該第二のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって少なくとも第二のMNAzyme基質の修飾を可能とし、該基質のいずれかのまたはそれらの組み合わせの修飾が該第一の組織化助長因子の存在を示す、方法。
[請求項1016]
第二のMNAzymeにより触媒される反応の産物が、第三の核酸酵素の機能を可能にするために必要な成分である、請求項1014または1015記載の方法。
[請求項1017]
第三の核酸酵素により触媒される反応の産物が、第二のMNAzymeもしくはDNAzymeリガーゼ、またはその両方により触媒される反応に関与する成分である、請求項1016記載の方法。
[請求項1018]
(a) 第一のMNAzymeのための成分、少なくとも第一のMNAzyme基質、リガーゼ活性を有する第二のMNAzymeのための成分、第二のMNAzymeのための第二の組織化助長因子、第二のMNAzyme基質、第三のMNAzymeのための第三の組織化助長因子、少なくとも第三のMNAzyme基質、ならびに第三のMNAzymeのための第一のパートザイムを提供する工程
を含む、カスケードを用いて第一の組織化助長因子を検出するための方法であって、該方法が、
(b) 該第一の組織化助長因子と該第一のMNAzymeのための成分とを、該第一のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下で会合させ、このようにして該第一のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって該第一のMNAzyme基質の修飾を可能とする工程
を含み、
第一のMNAzyme基質の修飾が、第四のMNAzyme基質の産生をもたらし、かつ
第二のMNAzyme組織化助長因子が、第二および第四のMNAzyme基質との第二のMNAzymeのための成分の組織化を助長し、かつ
第二のMNAzymeの触媒リガーゼ活性が、第三のMNAzymeのための第二のパートザイムを産生し、かつ
第三のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下での、第三のMNAzymeのための該第一および第二のパートザイムと該第三の組織化助長因子との会合が、該第三のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって少なくとも第三のMNAzyme基質の修飾を可能とし、該基質のいずれかのまたはそれらの組み合わせの修飾が該第一の組織化助長因子の存在を示す、方法。
[請求項1019]
(a) 第一のMNAzymeのための成分、少なくとも第一のMNAzyme基質、リガーゼ活性を有する第二のMNAzymeのための成分、第二のMNAzymeのための第二の組織化助長因子、第二のMNAzyme基質、第三のMNAzymeのための第一および第二のパートザイム、ならびに少なくとも第三のMNAzyme基質を提供する工程
を含む、カスケードによる第一の組織化助長因子の検出のための方法であって、該方法が、
(b) 該第一の組織化助長因子と該第一のMNAzymeのための成分とを、該第一のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下で会合させ、このようにして該第一のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって該第一のMNAzyme基質の修飾を可能とする工程
を含み、
該第一のMNAzyme基質の修飾が第四のMNAzyme基質の産生をもたらし、かつ
第二のMNAzyme組織化助長因子が第二および第四のMNAzyme基質との該第二のMNAzymeのための成分の組織化を助長し、かつ
第二のMNAzymeの触媒リガーゼ活性が第三のMNAzymeのための第三の組織化助長因子を産生し、ならびに
第三のMNAzymeの触媒活性を可能にする条件の下での、第三のMNAzymeのための該第一および第二のパートザイムと該第三の組織化助長因子との会合が、該第三のMNAzymeの触媒活性を助長し、それによって少なくとも第三のMNAzyme基質の修飾を可能とし、該基質のうちのいずれか一つのまたはそれらの組み合わせの修飾が該第一の組織化助長因子の存在を示す、方法。
[請求項1020]
第三のMNAzymeにより触媒される反応の産物が、第四の核酸酵素の機能を可能にするために必要な成分である、請求項1018または1019記載の方法。
[請求項1021]
第四の核酸酵素により触媒される反応の産物が、第二もしくは第三のMNAzymeまたはその両方により触媒される反応に関与する成分である、請求項1020記載の方法。
[請求項1022]
前記基質のうちのいずれか一つのまたはそれらの組み合わせの修飾が、検出可能な作用をもたらす、請求項1014〜1021のいずれか一項記載の方法。
[請求項1023]
少なくとも一つの基質の修飾が、核酸の切断、核酸の連結、核酸のリン酸化、核酸のキャッピング、アミノ酸のアデニル化、補因子合成、RNA重合、鋳型依存性の重合、RNA-タンパク質の結合、アルドール反応、アルコール酸化、アルデヒド還元、プリンおよびピリミジンのヌクレオチド合成、アルキル化、アミド合成、尿素合成、ペプチド結合の形成、ペプチジル-RNA合成、アシル転移、アミノアシル化、炭酸加水分解、ホスホロチオエートアルキル化、ポルフィリンメタル化、炭素-炭素結合の形成、Pdナノ粒子の形成、ビフェニル異性化、エステル結合の形成、アミド結合の形成、DNA脱グリコシル化、チミン二量体光回復(photoreversion)、ならびにホスホロアミダイト切断からなる群より選択される、請求項1014〜1022のいずれか一項記載の方法。
[請求項1024]
第一の組織化助長因子が、同定される、検出される、または定量化される標的である、請求項1014〜1023のいずれか一項記載の方法。
[請求項1025]
DNAzymeリガーゼが、DNAzymeリガーゼ7Z81、7Z48、7Q10、および9DB1からなる群より選択される、請求項1014〜1017のいずれか一項記載の方法。
[請求項1026]
第二のMNAzymeの産物が第二のDNAzymeリガーゼ基質であり、DNAzymeリガーゼが第一および第二のDNAzymeリガーゼ基質の連結を助長し、それによって第二のMNAzymeのためのさらなる第二のパートザイムを産生する、請求項1014記載の方法。
[請求項1027]
第二のMNAzymeの産物が第二のDNAzymeリガーゼ基質であり、DNAzymeリガーゼが第一および第二のDNAzymeリガーゼ基質の連結を助長し、それによって第二のMNAzymeのためのさらなる第二の組織化助長因子を産生する、請求項1015記載の方法。
[請求項1028]
第三のMNAzymeの産物が第四のMNAzyme基質であり、第二のMNAzymeが第二および第四のMNAzyme基質の連結を助長し、それによって第三のMNAzymeのためのさらなる第二のパートザイムを産生する、請求項1018記載の方法。
[請求項1029]
第三のMNAzymeの産物が第四のMNAzyme基質であり、第二のMNAzymeが第二および第四のMNAzyme基質の連結を助長し、それによって第三のMNAzymeのためのさらなる第三の組織化助長因子を産生する、請求項1019記載の方法。
[請求項1030]
核酸の対が
2010523088.tif 000003
からなる群より選択される、MNAzymeリガーゼのためのパートザイム対に組み入れられる触媒コア配列としての単離された核酸の対の使用。
[請求項1031]
核酸の対が
2010523088.tif 000004
からなる群より選択される、パートザイム対に組み入れられる触媒コア配列としての単離された核酸の対を含むMNAzymeリガーゼ。
[請求項1032]
二つの基質を連結するためのMNAzymeリガーゼの使用であって、MNAzymeリガーゼの基質アームによる該基質の結合の後に、該基質がMNAzymeリガーゼにより連結されて産物を形成する、使用。
[請求項1033]
少なくとも一つの核酸複合体の成分と会合する、請求項1032記載の産物。
[請求項1034]
組織化助長因子、パートザイム、基質、DNAzyme、スタビライザーアーム、活性阻害因子、組織化阻害因子、またはそれらの成分からなる群より選択される、請求項1032または1033記載の産物。
[請求項1035]
カスケードに関与しうる、請求項1032〜1034のいずれか一項記載の産物。
[請求項1036]
少なくとも一つの基質が、核酸酵素により触媒される反応の産物である、請求項1032記載の使用。
[請求項1037]
(a) 複数の第一の核酸酵素の形成を助長するのに複数の標的のうちの一つとの会合を必要とする成分を各々が含み、少なくとも一つの基質を各々がさらに含む、複数の第一の核酸複合体を提供する工程、ならびに
(b) 複数の第一の核酸酵素により触媒される反応の複数の産物と会合できる複数の第二の核酸複合体の各々の少なくとも一つの成分を提供し、かつ複数の第二の核酸酵素として機能できる複数の第二の核酸複合体を形成させる工程であって、該核酸酵素の少なくとも一つがリガーゼ活性を有し、かつ該核酸酵素の少なくとも一つがMNAzymeである、工程
を含む、複数の標的の検出のための方法であって、該方法が、
(i) 該複数の標的が該複数の第一の核酸複合体と会合して該複数の第一の核酸酵素の形成を助長する、該複数の標的を含有すると推定される試料と複数の第一の核酸複合体とを接触させる工程、および
(ii) 複数の第一の核酸酵素により触媒される反応の複数の産物と複数の第二の核酸複合体の各々の少なくとも一つの成分とを接触させ、それにより該複数の第二の核酸酵素として機能する複数の該第二の核酸複合体の形成を可能にする工程
を含み、
第一もしくは第二のまたはその両方の核酸酵素の活性が該複数の標的の存在を示す、方法。
[請求項1038]
複数の第一または第二の核酸酵素のいずれか一つにより触媒される反応の産物の少なくとも一つが、少なくとも一つのさらなる核酸酵素の機能を可能とするのに必要な成分である、請求項1037記載の方法。
[請求項1039]
核酸酵素のいずれか一つにより触媒される反応の産物の少なくとも一つが、前記の核酸複合体のいずれか一つのうちの成分と会合し、それによって核酸複合体の少なくとも一つがさらなる核酸酵素として機能することを可能にする、請求項1037または1038記載の方法。
[請求項1040]
多成分核酸酵素リガーゼ(MNAzymeリガーゼ)基質としての少なくとも二つのオリゴヌクレオチドの使用であって、MNAzymeリガーゼの基質アームによる該基質の結合の後に、該基質がMNAzymeリガーゼにより修飾される、使用。
[請求項1041]
(a) 少なくとも二つの核酸酵素複合体の形成を助長するのに標的の少なくとも一つとの会合を必要とする成分を各々が含む、少なくとも二つの核酸複合体を提供する工程、および
(b) 該少なくとも二つの標的を含有すると推定される試料と該少なくとも二つの核酸複合体とを接触させる工程
を含む、少なくとも二つの標的の検出のための方法であって、該標的が該核酸複合体と会合して該核酸酵素複合体の形成を助長し、各核酸酵素複合体の活性により生成される少なくとも一つの産物がさらなる核酸酵素複合体の形成に必要であり、かつ
さらなる核酸酵素複合体の活性が該少なくとも二つの標的の存在を示す、方法。
[請求項1042]
核酸酵素複合体の少なくとも一つがリガーゼ活性を有する、請求項1041記載の方法。
[請求項1043]
核酸酵素複合体の少なくとも一つがMNAzyme複合体である、請求項1041記載の方法。