【手続補正書】
【提出日】平成23年5月9日(2011.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも二つの可溶性融合タンパク質を含有する可溶性融合タンパク質複合体であって、
第一の融合タンパク質が、（ａ）第一の生物活性ポリペプチドであって、（ｂ）インターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド又はその機能的断片に共有結合しているポリペプチドを含有してなり、
第二の融合タンパク質が、（ｃ）第二の生物活性ポリペプチドであって、（ｄ）可溶性インターロイキン１５受容体α鎖（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はその機能的断片に共有結合しているポリペプチドを含有してなり、
第一の融合タンパク質のＩＬ−１５ドメインが、第二の融合タンパク質の可溶性ＩＬ−１５Ｒａドメインに結合して可溶性の融合タンパク質複合体を形成している、可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２】
第一及び第二の生物活性ポリペプチドのうち一つが、第一の可溶性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はその機能的断片を含有してなる、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３】
別の生物活性ポリペプチドが、請求項２に記載の第一の可溶性ＴＣＲ又はその機能的断片を含有してなり、それによって、結合活性が増大した多価のＴＣＲ融合タンパク質複合体が産生される、請求項２に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項４】
別の生物活性ポリペプチドが、第一の可溶性ＴＣＲとは異なる、第二の可溶性ＴＣＲ又はその機能的断片を含有してなる、請求項２に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項５】
ＴＣＲが特定の抗原の認識について特異的である、請求項２〜４の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項６】
ＴＣＲドメインに対する抗原が、ＭＨＣ分子又はＨＬＡ分子の中で提示されるペプチド抗原を含有してなる、請求項５に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項７】
ペプチド抗原が、腫瘍関連ポリペプチド又はウイルスにコードされたポリペプチドに由来する、請求項６に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項８】
ＴＣＲが、ＴＣＲのａ鎖及びｂ鎖を含有してなるヘテロ二量体である、請求項２〜７の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項９】
ＴＣＲが単鎖ＴＣＲポリペプチドを含有してなる、請求項２〜７の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１０】
単鎖ＴＣＲが、ペプチドリンカー配列によって、ＴＣＲのＶ−ｂ鎖に共有結合しているＴＣＲ Ｖ−ａ鎖を含有してなる、請求項９に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１１】
単鎖ＴＣＲが、ＴＣＲのＶ−ｂ鎖に共有結合している可溶性ＴＣＲ Ｃｂ鎖断片をさらに含有してなる、請求項１０に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１２】
単鎖ＴＣＲが、ＴＣＲのＶ−ａ鎖に共有結合している可溶性ＴＣＲ Ｃａ鎖断片をさらに含有してなる、請求項１０又は１１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１３】
第一の生物活性ポリペプチドが、ＴＣＲαポリペプチド又はその機能的断片を含み、そして第二の生物活性ポリペプチドが、ＴＣＲβポリペプチド又はその機能的断片を含有してなる、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１４】
第一及び第二の生物活性ポリペプチドの一方又は両方が、抗体又はその機能的断片を含有してなる、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１５】
抗体が、特定の抗原の認識について特異的である、請求項１４に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１６】
抗体ドメインに対する抗原が、細胞表面受容体又はリガンドを含有してなる、請求項１５に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１７】
抗原が、ＣＤ抗原、サイトカイン若しくはケモカインの受容体又はリガンド、増殖因子の受容体又はリガンド、細胞接着分子、ＭＨＣ／ＭＨＣ様分子、ＦＣ受容体、Ｔｏｌｌ−様受容体、ＮＫ受容体、ＴＣＲ、ＢＣＲ、陽性／陰性共刺激受容体又はリガンド、細胞死受容体又はリガンド、腫瘍関連抗原、又はウイルスコード抗原を含有してなる、請求項１５又は１６に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１８】
抗体が単鎖抗体又は単鎖Ｆｖである、請求項１４〜１７の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１９】
単鎖抗体が、ポリペプチドリンカー配列によって、免疫グロブリン重鎖可変ドメインに共有結合している免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含有してなる、請求項１８に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２０】
第一の生物活性ポリペプチドが、抗体重鎖ポリペプチド又はその機能的断片を含み、そして第二の生物活性ポリペプチドが、抗体軽鎖ポリペプチド又はその機能的断片を含有してなる、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２１】
ＩＬ−１５ポリペプチドが、天然型ＩＬ−１５ポリペプチドとは異なったアミノ酸配列を含有してなるＩＬ−１５変異体である、請求項１〜２０の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２２】
ＩＬ−１５変異体が、ＩＬ−１５のアゴニスト又はアンタゴニストとして機能する、請求項２１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２３】
ＩＬ−１５変異体が、天然型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に対し増加した結合活性を有するか、又は低下した結合活性を有する、請求項２１又は２２に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２４】
ＩＬ−１５変異体の配列が、天然型ＩＬ−１５配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の変化を有している、請求項２１〜２３の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２５】
アミノ酸の変化が、ＩＬ−１５Ｒβ及び／又はγＣと相互作用するＩＬ−１５のドメインにおけるアミノ酸の置換又は欠失である、請求項２４に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２６】
アミノ酸の変化が、成熟型ヒトＩＬ−１５配列（配列番号：１）の８位、６１位、６５位、７２位、９２位、１０１位、１０８位、又は１１１位における１個又はそれ以上のアミノ酸の置換又は欠失である、請求項２４又は２５に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２７】
アミノ酸の変化が、成熟型ヒトＩＬ−１５配列の８位におけるＤからＮ又はＡへの置換、６１位におけるＤからＡへの置換、６５位におけるＮからＡへの置換、７２位におけるＮからＲへの置換、又は１０８位におけるＱからＡへの置換、又はこれらの置換を組み合わせたものである、請求項２６に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２８】
アミノ酸の変化が、ＩＬ−１５アンタゴニスト活性を有するか、天然型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に対する結合活性が低下しているＩＬ−１５変異体を生じさせる、請求項２７に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２９】
アミノ酸の変化が、成熟型ヒトＩＬ−１５配列の７２位におけるＮからＤへの置換である、請求項２６に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３０】
アミノ酸の変化が、ＩＬ−１５アゴニスト活性を有するか、又は天然型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に対する結合活性が増加しているＩＬ−１５変異体を生じさせる、請求項２９に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３１】
ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドが、ＩＬ−１５ポリペプチドに結合できる、ＩＬ−１５受容体アルファの細胞外ドメインを含有してなる、請求項１〜３０の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３２】
ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドが、ＩＬ−１５ａＳｕｓｈｉドメイン或いはＩＬ−１５ａΔＥ３ドメインを含有してなる、請求項１〜３１の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３３】
第一の生物活性ポリペプチドが、ポリペプチドリンカー配列によって、ＩＬ−１５ポリペプチド（又はその機能的断片）に共有結合している、請求項１〜３２の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３４】
第二の生物活性ポリペプチドが、ポリペプチドリンカー配列によって、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチド（又はその機能的断片）に共有結合している、請求項１〜３３の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３５】
少なくとも一つの可溶性融合タンパク質が、検出可能な標識を含有してなる、請求項１〜３４の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３６】
検出可能な標識が、ビオチン、ストレプトアビジン、酵素若しくはその触媒活性断片、放射性核種、ナノ粒子、常磁性金属イオン、又は蛍光性、リン光性、若しくは化学発光性の分子である、請求項３５に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３７】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の第一の融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項３８】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の第二の融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項３９】
核酸が、融合タンパク質をコードする配列に動作可能に連結しているプロモーター、翻訳開始シグナル、及びリーダー配列をさらに含有してなる、請求項３７又は３８に記載の核酸。
【請求項４０】
請求項３７に記載の核酸を含有してなるＤＮＡベクター。
【請求項４１】
請求項３８に記載の核酸を含有してなるＤＮＡベクター。
【請求項４２】
請求項３７及び３８に記載の核酸を含有してなるＤＮＡベクター。
【請求項４３】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体を製造する方法であって、方法が：
ａ）第一の融合タンパク質をコードする、請求項４０に記載のＤＮＡベクターを第一の宿主細胞に導入すること；
ｂ）細胞又は培地の中で第一の融合タンパク質を発現させるのに十分な条件下で、培地において第一の宿主細胞を培養すること；
ｃ）宿主細胞又は培地から第一の融合タンパク質を精製すること；
ｄ）第二の融合タンパク質をコードする、請求項４１に記載のＤＮＡベクターを第二の宿主細胞の中に導入すること；
ｅ）細胞又は培地の中で第二の融合タンパク質を発現させるのに十分な条件下で、培地において第二の宿主細胞を培養すること；
ｆ）宿主細胞又は培地から第二の融合タンパク質を精製すること；及び
ｇ）第一の融合タンパク質のＩＬ−１５ドメインと、第二の融合タンパク質の可溶性ＩＬ−１５Ｒａドメインとを結合させて、可溶性融合タンパク質複合体を形成させるのに十分な条件下で、第一の融合タンパク質と第二の融合タンパク質を混合すること：
を含有してなる方法。
【請求項４４】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体を製造する方法であって、方法が：
ａ）第一の融合タンパク質をコードする、請求項４０に記載のＤＮＡベクター、及び第二の融合タンパク質をコードする、請求項４１に記載のＤＮＡベクターを、宿主細胞に導入すること；
ｂ）細胞又は培地の中で融合タンパク質を発現させ、かつ、第一の融合タンパク質のＩＬ−１５ドメインと第二の融合タンパク質の可溶性ＩＬ−１５Ｒａドメインとを結合させて可溶性融合タンパク質複合体を形成させるのに十分な条件下で、宿主細胞を培地内で培養すること；及び
ｃ）宿主細胞又は培地から可溶性融合タンパク質複合体を精製すること：
を含有してなる方法。
【請求項４５】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体を製造する方法であって、方法が：
ａ）第一及び第二の融合タンパク質をコードする、請求項４２に記載のＤＮＡベクターを宿主細胞に導入すること；
ｂ）細胞又は培地の中で融合タンパク質を発現させ、かつ、第一の融合タンパク質のＩＬ−１５ドメインと第二の融合タンパク質の可溶性ＩＬ−１５Ｒａドメインとを結合させて可溶性融合タンパク質複合体を形成させるのに十分な条件下で、培地内で宿主細胞を培養すること；及び
ｃ）宿主細胞又は培地から可溶性融合タンパク質複合体を精製すること：
を含有してなる方法。
【請求項４６】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体を含有する、医薬組成物。
【請求項４７】
癌又はウイルス感染症を予防又は治療するための、請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体の生物活性ポリペプチドの少なくとも一つによって認識される抗原を産生する標的細胞を死滅させるための、請求項４６又は４７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
標的細胞が、腫瘍細胞又はウイルス感染細胞である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体のＩＬ−１５ドメインによって認識されるＩＬ−１５Ｒ鎖を産生する免疫細胞をさらに含む、請求項４６〜４９の何れか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
哺乳動物において免疫応答を調節する、請求項４６又は４７に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
細胞又は組織上に提示された抗原を含有してなる細胞若しくは組織を検出するための、請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
抗原が、腫瘍関連又はウイルス関連のペプチド抗原である、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
天然型のＩＬ−１５ポリペプチドとは異なるアミノ酸配列であるアミノ酸配列を含有してなるＩＬ−１５変異体であって、当該ＩＬ−１５変異体が、天然型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に対して増加した、又は低下した結合活性を有する、ＩＬ−１５変異体。
【請求項５５】
ＩＬ−１５変異体がＩＬ−１５のアゴニスト又はアンタゴニストとして機能する、請求項５４に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項５６】
ＩＬ−１５変異体の配列が、天然型ＩＬ−２配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の変化を有する、請求項５４又は５５に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項５７】
アミノ酸の変化が、ＩＬ−１５Ｒβ及び／又はγＣと相互作用するＩＬ−１５のドメインにおけるアミノ酸の置換又は欠失である、請求項５６に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項５８】
アミノ酸の変化が、成熟ヒトＩＬ−１５の配列の８位、６１位、６５位、７２位、９２位、１０１位、１０８位、又は１１１位における１つ又はそれ以上のアミノ酸の置換又は欠失である、請求項５６又は５７に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項５９】
アミノ酸の変化が、成熟型ヒトＩＬ−１５配列の８位におけるＤからＮ又はＡへの置換、６１位におけるＤからＡへの置換、６５位におけるＮからＡへの置換、７２位におけるＮからＲへの置換、又は１０８位におけるＱからＡへの置換、又はこれらの置換を組み合わせたものである、請求項５８に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項６０】
アミノ酸の変化が、ＩＬ−１５アンタゴニスト活性を有するか、又は天然型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に対する結合活性が低下しているＩＬ−１５変異体を生じさせる、請求項５９に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項６１】
アミノ酸の変化が、成熟型ヒトＩＬ−１５配列の７２位におけるＮからＤへの置換である、請求項５８に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項６２】
アミノ酸の変化が、ＩＬ−１５アゴニスト活性を有するか、又は天然型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５ＲβγＣ受容体に対する結合活性が増加しているＩＬ−１５変異体を生じさせる、請求項６１に記載のＩＬ−１５変異体。
【請求項６３】
請求項５４〜６２の何れか一項に記載のＩＬ−１５変異体をコードする核酸。
【請求項６４】
請求項６３に記載の核酸を含有してなるＤＮＡベクター。
【請求項６５】
請求項６４に記載のベクターを含有してなる宿主細胞。
【請求項６６】
請求項５４〜６２の何れか一項に記載のＩＬ−１５変異体を製造する方法であって、方法が、ＩＬ−１５変異体を発現させるのに十分な条件下で、請求項６５に記載の宿主細胞を培養することを含有していて、それによって、ＩＬ−１５変異体を製造する方法。
【請求項６７】
さらに、ＩＬ−１５変異体を精製することを含有している、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
請求項５４〜６２の何れか一項に記載のＩＬ−１５変異体を含有する、哺乳動物における免疫応答を調節する医薬組成物。