【手続補正書】
【提出日】平成23年10月13日(2011.10.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｋｒａｓ−２ｂをコードする外因性核酸を、哺乳動物の関節中の標的細胞に導入するための組成物であって、該組成物は、
Ｋｒａｓ−２ｂをコードする外因性核酸を含む合成リポソーム、少なくとも１つのリガンド、およびポリ−ｌ−リジンポリマー足場
を含み、ここで該ポリマー足場は、前記リガンドおよび前記核酸の両方に結合される、組成物。
【請求項２】
前記リポソームは、カチオン性リポソーム、アニオン性リポソーム、および合成脂質ミクロスフェアからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記リガンドは、トランスフェリンである、請求項１または２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリマー足場は、正に荷電したポリマー足場、荷電されていないポリマー足場、ホモポリマー足場、およびポリ−Ｌ−リジン足場からなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記標的細胞はヒト細胞である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記標的細胞は、軟骨膜細胞、軟骨細胞、屈筋腱細胞、腱鞘細胞、腱滑車細胞、もしくは皮膚細胞である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記核酸は、ベクター内に含まれる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
（ｉ）１種以上のＫｒａｓ−２ｂポリペプチドもしくは（ｉｉ）哺乳動物の関節中の標的細胞において１種以上のＫｒａｓ−２ｂポリペプチドを発現できる１種以上のポリヌクレオチド、である治療剤を含む薬学的組成物を含むデバイスであって、該デバイスは、該組成物の滑膜内送達に適している、デバイス。
【請求項９】
哺乳動物において関節を分解から保護するための組成物であって、該組成物は、プロモーターに作動可能に連結された、Ｋｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子を含むベクターを含み、該組成物は、該哺乳動物の該関節における標的細胞に送達されるものであることを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、滑膜内に、筋肉内に、皮下に、そして／もしくは経皮的に導入されるものであることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記標的細胞は、初代軟骨膜細胞、軟骨細胞、屈筋腱細胞、腱鞘細胞、腱滑車細胞、上皮皮膚細胞、皮膚、筋肉、脂肪、線維芽細胞、樹状細胞、有毛細胞、ケラチノサイト、毛幹中の細胞、神経細胞、血管平滑筋細胞、血管壁、免疫細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中球、ＮＴＫ細胞、マクロファージ、単核細胞、骨芽細胞、破骨細胞、肝細胞、心平滑筋細胞、気管支肺胞、他の肺細胞、頬腔細胞、鼻腔細胞、単核骨髄細胞、多核骨髄細胞、脊髄、運動ニューロン、神経節、およびＣＮＳの細胞からなる群より選択される、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記哺乳動物は、ヒトである、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ベクターは、表Ｉに開示されるＫｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子を含む、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記Ｋｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子は、異種構成性プロモーターおよび異種誘導性プロモーターからなる群より選択される異種プロモーターに作動可能に連結される、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物は、リゾレシチン、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ホスファチジルコリン、ホスホリパーゼ、浸透圧ショック、および電気パルスからなる群より選択される透過化因子と組み合わせて、しかし該透過化因子が与えられるよりも後に導入されるものであることを特徴とする、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ベクターは、リガンドにさらに結合されているポリマー足場に結合され、該結合されたリガンド、足場、およびベクターは、合成リポソーム中に被包されている、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記Ｋｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子は、野生型Ｋｒａｓ−２ｂ遺伝子の改変体である、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ベクターは、非ウイルスベクターである、請求項９〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物は、変形性関節症を予防および／もしくは処置するものである、請求項９〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
インビボで、哺乳動物の関節の細胞においてＫｒａｓ−２ｂを発現させるための組成物であって、該組成物は、
Ｋｒａｓ−２ｂをコードするベクターを含み、該組成物は、インビボで、哺乳動物の関節における標的細胞に導入されるものであることを特徴とし、
ここで、該細胞は、該細胞におけるＫｒａｓ−２ｂの発現を可能にする条件下で、インビボで維持される、組成物。
【請求項２１】
変形性関節症を有する哺乳動物を処置するための組成物であって、該組成物は、Ｋｒａｓ−２ｂをコードする発現ベクターを含み、該哺乳動物で発現されるｋｒａｓ−２ｂの量が、１つ以上の変形性関節症の症状を軽減するに有効であることを特徴とする、組成物。
【請求項２２】
前記哺乳動物はヒトである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物は、滑膜内注射によって導入されるものであることを特徴とする、請求項２１または２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物は、２回以上導入されるものであることを特徴とする、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明はさらに、（ｉ）１種以上のＫｒａｓ−２ｂポリペプチドもしくはそのエフェクター、（ｉｉ）哺乳動物の関節における標的細胞において、１種以上のＫｒａｓ−２ｂポリペプチドもしくはそのエフェクターを発現し得る１種以上のポリヌクレオチドである治療剤を含む薬学的組成物を含むデバイスおよびキットを企図し、上記デバイスおよびキットは、上記組成物の滑膜内送達に適している。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
Ｋｒａｓ−２ｂをコードする外因性核酸を、哺乳動物の関節中の標的細胞に導入するための組成物であって、該組成物は、
Ｋｒａｓ−２ｂをコードする外因性核酸を含む合成リポソーム、少なくとも１つのリガンド、およびポリ−ｌ−リジンポリマー足場
を含み、ここで上記ポリマー足場は、前記リガンドおよび前記核酸の両方に結合される、組成物。
（項目２）
前記リポソームは、カチオン性リポソーム、アニオン性リポソーム、および合成脂質ミクロスフェアからなる群より選択される、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記リガンドは、トランスフェリンである、項目１または２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目４）
前記ポリマー足場は、正に荷電したポリマー足場、荷電されていないポリマー足場、ホモポリマー足場、およびポリ−Ｌ−リジン足場からなる群より選択される、項目１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目５）
前記標的細胞はヒト細胞である、項目１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目６）
前記標的細胞は、軟骨膜細胞、軟骨細胞、屈筋腱細胞、腱鞘細胞、腱滑車細胞、もしくは皮膚細胞である、項目１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目７）
前記核酸は、ベクター内に含まれる、項目１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目８）
（ｉ）１種以上のＫｒａｓ−２ｂポリペプチドもしくは（ｉｉ）哺乳動物の関節中の標的細胞において１種以上のＫｒａｓ−２ｂポリペプチドを発現できる１種以上のポリヌクレオチド、である治療剤を含む薬学的組成物を含むデバイスであって、該デバイスは、該組成物の滑膜内送達に適している、デバイス。
（項目９）
哺乳動物において関節を分解から保護するための方法であって、該方法は、該哺乳動物の該関節における標的細胞にベクターを送達する工程を包含し、該ベクターは、プロモーターに作動可能に連結された、Ｋｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子を含む、方法。
（項目１０）
前記ベクターは、滑膜内に、筋肉内に、皮下に、そして／もしくは経皮的に導入される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記標的細胞は、初代軟骨膜細胞、軟骨細胞、屈筋腱細胞、腱鞘細胞、腱滑車細胞、上皮皮膚細胞、皮膚、筋肉、脂肪、線維芽細胞、樹状細胞、有毛細胞、ケラチノサイト、毛幹中の細胞、神経細胞、血管平滑筋細胞、血管壁、免疫細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞、好中球、ＮＴＫ細胞、マクロファージ、単核細胞、骨芽細胞、破骨細胞、肝細胞、心平滑筋細胞、気管支肺胞、他の肺細胞、頬腔細胞、鼻腔細胞、単核骨髄細胞、多核骨髄細胞、脊髄、運動ニューロン、神経節、およびＣＮＳの細胞からなる群より選択される、項目９または１０に記載の方法。
（項目１２）
前記哺乳動物は、ヒトである、項目９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記ベクターは、表１に開示されるＫｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子を含む、項目９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記Ｋｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子は、異種構成性プロモーターおよび異種誘導性プロモーターからなる群より選択される異種プロモーターに作動可能に連結される、項目９〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記ベクターの導入の前に、前記標的細胞は、リゾレシチン、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ホスファチジルコリン、ホスホリパーゼ、浸透圧ショック、および電気パルスからなる群より選択される透過化因子で透過性にされる、項目９〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記ベクターは、リガンドにさらに結合されているポリマー足場に結合され、該結合されたリガンド、足場、およびベクターは、合成リポソーム中に被包されている、項目９〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記Ｋｒａｓ−２ｂをコードする遺伝子は、野生型Ｋｒａｓ−２ｂ遺伝子の改変体である、項目９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記ベクターは、非ウイルスベクターである、項目９〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
変形性関節症を予防および／もしくは処置する、項目９〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
インビボで、哺乳動物の関節の細胞においてＫｒａｓ−２ｂを発現させるための方法であって、該方法は、
Ｋｒａｓ−２ｂをコードするベクターを、インビボで、該哺乳動物の関節における標的細胞に導入する工程；および
該細胞におけるＫｒａｓ−２ｂの発現を可能にする条件下で、該細胞をインビボで維持する工程、
を包含する、方法。
（項目２１）
変形性関節症を有する哺乳動物を処置するための方法であって、該方法は、１つ以上の変形性関節症の症状を軽減するに有効な量のＫｒａｓ−２ｂが、該哺乳動物で発現されるように、Ｋｒａｓ−２ｂをコードする発現ベクターを患者に導入する工程を包含する、方法。
（項目２２）
前記哺乳動物はヒトである、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記発現ベクターは、滑膜内注射によって導入される、項目２１または２２に記載の方法。
（項目２４）
前記発現ベクターは、２回以上導入される、項目２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
アミノ酸置換は、表Ｉに開示される天然に存在する配列のアミノ酸配列に対してなされ得る（例えば、１個、２個、３個、４個もしくは５個〜１０個、２０個もしくは３０個の置換）。保存的置換が行われ得る。保存的アミノ酸置換は、例えば、１個のアミノ酸を、同じクラスの別のアミノ酸で置換する（例えば、ある疎水性アミノ酸（例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、もしくはメチオニン）を、別の疎水性アミノ酸で置換、またはある極性アミノ酸を別の極性アミノ酸で置換する（例えば、アルギニンをリジンで置換、グルタミン酸をアスパラギン酸で置換、もしくはグルタミンをアスパラギンで置換）。１種以上のアミノ酸は、例えば、ポリペプチドから欠失され得、その生物学的活性を顕著に変化させることなく、上記ポリペプチドの構造の改変を生じる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
表Ｉに開示される天然に存在する配列のアミノ酸配列の１種以上のアミノ酸残基は、代わりにもしくはさらに、欠失され得る。１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、２０個もしくは３０個またはそれ以上の残基が、欠失され得る。