【事件の表示】
　特願２００３−１２６９７１「エンドセリン受容体の遺伝子発現の定量方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１６年１１月２５日出願公開、特開２００４−３２９０６２〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯
　本願は，平成１５年５月２日の出願であって，平成２０年１月３１日付けで拒絶査定がなされ，これに対し平成２０年３月６日に審判請求がなされるとともに，平成２０年４月７日に手続補正がなされ，その後，平成２３年１月６日付けで拒絶理由が通知され，これに対し平成２３年３月１８日に意見書が提出されるとともに手続補正がなされたものである。
　
２．本願発明について
　本願の請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，平成２３年３月１８日の手続補正書により補正された明細書及び図面の記載からみて，以下のとおりのものである。
　
　「【請求項１】　配列番号4に示されるフォワードプライマー、配列番号５に示されるリバースプライマー、及びリポーター蛍光色素及びクエンチャー蛍光色素により標識された、配列番号６に示されるオリゴヌクレオチドからなるプローブを含む、エンドセリン受容体B遺伝子発現の測定用キット。」
　
３．当審の拒絶理由
　一方，当審において平成２３年１月６日付けで通知した拒絶の理由は，この出願の発明は，本願出願前に日本国内または外国において頒布された刊行物に記載された発明又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった発明に基づいて，その発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないというものである。
　
４．引用例
　当審における拒絶の理由で引用例１として引用され，本願出願前に頒布された刊行物であるBiochemical Pharmacology, (2002), Vol. 64, p. 497-505（以下，「引用例１」という。）の４９９頁左欄の「２．４．３　ＥＴＡ及びＥＴＢ受容体ｍＲＮＡの定量のためのリアルタイム定量的ＰＣＲ」の項には，
「リアルタイムの定量的RT-PCRは、パーキン・エルマー・リアルタイムPCR機械(PE，GeneAmp 5700シーケンス検知システム)で，GeneAmp SYBRグリーンPCRキット(PEアプライドバイオシステムズ)を用いて行なわれた。 システムは、自動的にPCR増幅の各サイクル中の蛍光のリアルタイム検知による二本鎖DNAへの蛍光染料の結合をモニターする。 マウスＥＴＡ及びＥＴＢ受容体のための特定のプライマーは下記のように設計された: 
ＥＴＡ受容体　フォワード：　5'-ATT GCC CTC AGC GAA CAC-3'
　　リバース：　　　　　　 5'-CAA CAA AGC AGA AAG ACG GYC-3'
ＥＴＢ受容体　フォワード：　5'-GAT ACG ACA ACT TCC GCT CCA-3'
　　リバース：　　　　　　 5'-GTC CAC GAT GAG GAC AAT GAG-3'
　ハウスキーピング遺伝子である伸長因子-1(EF-1)は，細胞中での一定の量で連続的にmRNAが発現されるが、ハウスキーピング遺伝子であるアクチンβとリアルタイムPCRによりパイロット・スタディとして比較された(データは示されない)。EF-1はこの研究の中で参照として使用された。しかし、両方はテストが等しく、よく一致していた。ネズミEF-1プライマーは下記のように設計された: 
ＥＦ−１　フォワード　 ：　5'-GCA AGC CCA TGT GTG TTG AA-3'
　　リバース：　　　　　　 5'-TGA TGA CAC CCA CAG CAA CTG-3'
　PCR反応は50μLの容量で行なわれ、2分の50°の温度で始められ10分の95°，そして，15 秒95°，1分間60°の40のPCRサイクルが続いた。 解離曲線はリアルタイムPCRの後に実行された。また、非特異性の増幅は現在の研究で検知されなかった。プライマーはすべて、プライマーエクスプレス2.0ソフトウェア(PEアプライドバイオシステムズ)を使用し設計され、GibcoBRLカスタムプライマーズ(ライフ・テクノロジーズ)によって合成された。ＥＴＡ(64 bp)、ＥＴＢ(86 bp)及びEF-1(96 bp)のPCR生成物は、アガロース・ゲル電気泳動で視覚化された。 リアルタイムRT-PCR標準曲線を作るために、RNAトータルの逆転写からのcDNAは、3つの連続する対数濃度(1:0、1:10及び1:100)でのPCR緩衝溶液で薄められた。
　データは・・・・」と記載され，ラットの平滑筋細胞におけるＥＴ受容体の発現量について，上記のプライマーを用いたリアルタイムＲＴ−ＰＣＲの結果が図３に示されている。
　
　当審における拒絶の理由で引用例２として引用され，本願出願前に頒布された刊行物であるAnalytical Biochemistry, (1999), Vol. 271, p. 93-96（以下，「引用例２」という。）は，「競合的逆転写−ポリメラーゼチェインリアクションによるエンドセリンＥＴＡ及びＥＴＢ受容体ｍＲＮＡの定量：多種分析の開発」の表題の論文であり，
　「オリゴヌクレオチドプライマーデザイン。利用できるＥＴＡ及びＥＴＢ受容体の塩基配列はＧｅｎＢａｎｋのデータベースから得られた（表１）。そして種間のホモロジーはＢＬＡＳＴプログラムで比較された。ＰＣＲプライマー配列は，データベースに含まれるすべての種の間で完全なホモロジーの領域の中から選ばれ，コンピューターソフトウェアプログラムＯＬＩＧＯを用いて最適化された。」（９４頁左欄４〜１４行）と記載されるとともに，表１に，マウス，ラット，イヌ，ウシ及びヒトのＥＴＢのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号が記載されている。
　
　当審における拒絶の理由で引用例４として引用され，本願出願前に頒布された刊行物であるThe Journal of Biological Chemistry, (1993), Vol. 268, p. 3463-3470（以下，「引用例４」という。）の，図１，図２には，ヒトＥＴＢ受容体遺伝子のイントロンとエクソンの位置が示されている。
　
５．対比
　本願発明と引用例１に記載された発明を比較すると，両者は「フォワードプライマー、リバースプライマーを含む、エンドセリン受容体Ｂ遺伝子発現の測定」のためのものである点では一致しているが，以下の点で相違している。
　
　相違点１：本願発明のフォワードプライマー及びリバースプライマーは，配列番号４に示されるフォワードプライマー及び配列番号５に示される塩基配列からなるリバースプライマーであるのに対し，引用例１のフォワードプライマー及びリバースプライマーは，異なる配列のものである点。
　相違点２：本願発明は，リポーター蛍光色素及びクエンチャー蛍光色素により標識された、配列番号６に示されるオリゴヌクレオチドからなるプローブを含むのに対し，引用例においてはプローブを用いていない点。
　相違点３：本願発明は，測定用キットであるのに対し，引用例のものはキットとなっていない点。
　
６．判断
相違点１について：
　引用例２には，マウス，ラット及びヒトのＥＴＢ受容体の塩基配列として，Ｕ３２３２９などのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号が記載されているから，当業者は容易にこれらの塩基配列を知ることができ，慣用のPrimer Express Softwareなどを用い，周知のプライマー設計手法を利用して，引用例１のフォワードプライマー及びリバースプライマーに代わるフォワードプライマー及びリバースプライマーを容易に設計できるものである。
　本願発明は，配列番号４及び５に示される塩基配列からなるフォワードプライマー及びリバースプライマーを用いるものであるが，これらは，ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ３２３２９などの塩基配列から当業者が容易に設計できる様々なフォワードプライマー及びリバースプライマーの１つにすぎず，しかも，容易に設計できる、他の様々なフォワードプライマー及びリバースプライマーと比較して，当業者が予測できない程の格別顕著な効果があるものとも明細書の記載からは確認できず，当業者が容易に設計できたものと認められる。
　また，本願発明の配列番号４及び５に示される塩基配列からなるフォワードプライマー及びリバースプライマーは，いずれもイントロンをまたいで設計され，混入したゲノムＤＮＡ由来の蛍光シグナルは検出されず，バックグラウンドが低いものであるが，ＲＴ−ＰＣＲでｍＲＮＡを測定するときに，ゲノムＤＮＡ由来のノイズを減らすために，イントロンをまたぐようにプライマーを設計することは周知の技術であって（例えば，Biochemistry and Molecular Biology International, 40 (1996) p.907-914，Uwe Reinhold, Wolfgang Tilgen「Recent Result in Cancer Research, Minimal residual disease in melanoma: biology, detection, and clinical relevance」Springer (2001) p.191など。），引用例４に記載されるヒトＥＴＢ受容体遺伝子のイントロンとエクソンの位置に基づいて，マウスやラットのイントロンとエクソンの境界を推定し，これをまたぐようにフォワードプライマー及びリバースプライマーを設計することも当業者が容易になしえることであり，本願発明の配列番号４及び５に示される塩基配列からなるフォワードプライマー及びリバースプライマーに，より容易に到達することができる。
　さらに，引用例２にも記載されるように，種を越えて利用できるプライマーを設計しようとすることは周知の課題であって，引用例２に記載されるマウス，ラット，イヌ，ウシ及びヒトのＥＴＢ受容体のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号の塩基配列を用いて，より配列が保存されている部分を用いるようにプライマーを設計することができ，本願発明のフォワードプライマー及びリバースプライマーを，なおさらのこと容易に設計できるものであるし，マウス、ラット及びヒトで利用できることが，格別な効果であることにもならない。
　
相違点２について：
　リポーター蛍光色素及びクエンチャー蛍光色素により標識されたプローブを用いるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲは，例えばＴａｑＭａｎ　プローブとして周知のものであり，引用例１に記載されたリアルタイムＲＴ−ＰＣＲに代えて，リポーター蛍光色素及びクエンチャー蛍光色素により標識されたプローブを用いるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲとすることは当業者が容易になしえることである。
　そして，本願発明のプローブは配列番号６に示されるものであるが，ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ３２３２９などの塩基配列から当業者が容易に設計できる様々なプローブの１つにすぎず，しかも，容易に設計できる、他の様々なプローブと比較して，格別顕著な効果があるものとも明細書の記載からは確認できず，当業者が容易に設計できたものと認められる。
　
相違点３について：
　測定に必要なものをキットとするのは周知の技術に過ぎない。
　
　以上のように，本願発明は，引用例１，２及び４に記載された発明に基づいて，当業者が容易に発明できたものである。
　
　なお，請求人は，平成２３年３月１８日の意見書において，引用例1で使用したRT-PCR法は、インターカレータ法であり，また，引用例2の方法は、競合的ＲＴ−ＰＣＲであるのに対し，本願発明は，プローブを使用するリアルタイムRT-PCR法を指向するものであることを主張しているが，上記したように，ＴａｑＭａｎ　プローブを用いるリアルタイムRT-PCRは周知の技術であって，プローブを使用するリアルタイムRT-PCR法を指向することに，何の創意工夫も認められるものではない。
　また，請求人は，本願発明のプライマーは、増幅サイズが大きすぎたり，２つのプライマーのＴｍ値が異なったり，プライマー内部に相補する配列があったりして，リアルタイムＰＣＲの望ましいプライマーの条件からはかけ離れていることを主張している。ところが，増幅サイズが大きすぎると，高速でリアルタイムＰＣＲを行うと、ＰＣＲ増幅できない場合もあったり，２つのプライマーのＴｍ値が異なると、Ｔｍ値の高いプライマーは非特異的にミスプライミングして特異的増幅を阻害し、逆に、高い温度では、Ｔｍ値の低いプライマーはプライミングできず，最適なアニーリング温度の設定が困難になったり，プライマー内部に相補する配列があると、プライマー自身で二次構造を形成し、鋳型ＤＮＡへのアニーリングが妨げられたり，プライマー間で相補的配列があると、プライマー同士でハイブリッドを形成しＰＣＲ反応効率が低下したりするが，望ましい条件を多少外れたとしても，全く増幅ができなくなるということではないのであり，種を越えて利用しようとしたり，エクソンの境界をまたぐようにして，ノイズを減らそうとする目的との兼ね合いにより，望ましくない条件であったとしても，当業者が適宜採用できるものであって，技術常識からありえないというほどのものではない。また，望ましい条件とすれば，本願発明のプライマーより増幅効率や感度が優れたプライマーが設計できるということがあるとしても，望ましくない条件である本願発明のプライマーが，特許に値するような格別顕著な効果があるということにならない。
　さらに，請求人は，本願発明の測定用キットは、極めて高感度で再現性がよく、迅速かつ正確にＥＴＢＲｍＲＮＡを測定でき，格別顕著な効果を奏することを主張しているが，当業者が容易に設計できる他の様々なプローブ及びプライマーを用いた場合と，何ら具体的な比較をおこなっていないのであるから，格別顕著な効果があるとはいえないものである。
　
７．むすび
　以上のとおりであるから，本願発明は，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　
　したがって，本出願に係る他の請求項について検討するまでもなく，本出願は拒絶すべきものである。
　よって，結論のとおり審決する。