【手続補正書】
【提出日】平成23年10月28日(2011.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
当業者であれば、以下に記載する図が例示のみを目的としたものであることを理解するであろう。各図は、いかなる意味でも本教示の範囲を限定することを意図するものでない。
したがって、本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）
（ａ）マルチプレックス（ｍｕｌｔｐｌｅｘ）増幅反応で分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅する工程であって、該反応の産物は該組内の該共増幅した（ｃｏ−ａｍｐｌｉｆｉｅｄｄ）遺伝子座から増幅された対立遺伝子の混合物であり、該遺伝子座の組は１０個のＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡ；およびＳＴＲ遺伝子座Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ１Ｓ１６５６、Ｄ２２Ｓ１０４５およびＤ２Ｓ４４１からなる群から選択される１つまたは複数を含む、工程；
（ｂ）該混合物中の該増幅された対立遺伝子を評価して該少なくとも１個のＤＮＡサンプル内の該遺伝子座の組で分析された各該遺伝子座に存在する該対立遺伝子を決定する工程を含む、方法。
（項目２）
工程（ａ）の上記遺伝子座の組は上記少なくとも１個のＤＮＡサンプルの供給源（単数または複数）の性別を特定するのに使用され得る遺伝子座をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記ＤＮＡサンプル（単数または複数）の上記供給源はヒトであり、該ヒトの性別の特定に使用する上記遺伝子座はアメロゲニン遺伝子座である、項目２に記載の方法。
（項目４）
上記評価する工程の前に上記増幅された対立遺伝子を分離する工程をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
上記増幅された対立遺伝子はキャピラリーゲル電気泳動により分離される、項目４に記載の方法。
（項目６）
上記共増幅する工程は上記遺伝子座の組内の該遺伝子座それぞれに対して１対のオリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該対のプライマーはそれぞれ上記マルチプレックス反応における該遺伝子座の組の遺伝子座に隣接する、項目１に記載の方法。
（項目７）
オリゴヌクレオチドプライマーの各対の少なくとも１個のプライマーは標識プライマーである、項目６に記載の方法。
（項目８）
上記標識プライマーの標識は蛍光標識である、項目７に記載の方法。
（項目９）
上記共増幅する工程は少なくとも５個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも５個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも５種類の異なる蛍光標識を有する、項目８に記載の方法。
（項目１０）
上記共増幅する工程は少なくとも６個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも６個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも６種類の異なる蛍光標識を有する、項目８に記載の方法。
（項目１１）
上記少なくとも６種類の異なる蛍光標識が、５２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第１の蛍光標識、５５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第２の蛍光標識、５７５ｎｍでその最大の蛍光を放つ第３の蛍光標識、５９０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第４の蛍光標識、６５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第５の蛍光標識および６２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第６の蛍光標識を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
選択された上記遺伝子座の組の各遺伝子座はポリメラーゼ連鎖反応を使用して共増幅される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
分析される上記少なくとも１個のＤＮＡサンプルはヒト組織から調製される、項目１に記載の方法。
（項目１４）
上記ヒト組織は血液、精液、膣細胞、毛髪、唾液、尿、骨、口腔サンプル、胎盤細胞を含む羊水および胎児細胞を含む羊水からなる群の１つまたは複数から選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを含む、キットであって、該遺伝子座の組は共増幅され得；該プライマーは１つまたは複数の容器内にあり；該遺伝子座の組はアメロゲニン遺伝子座と、１０個のＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡと、ＳＴＲ遺伝子座Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ１Ｓ１６５６、Ｄ２２Ｓ１０４５およびＤ２Ｓ４４１からなる群の１つまたは複数とを含む、キット。
（項目１６）
上記キット内の上記オリゴヌクレオチドプライマーはすべて１つの容器内にある、項目１５に記載のキット。
（項目１７）
少なくとも１回のマルチプレックス増幅反応のための試薬をさらに含む、項目１５に記載のキット。
（項目１８）
少なくとも１つのサイズ標準の入った容器をさらに含む、項目１５に記載のキット。
（項目１９）
上記サイズ標準はＤＮＡマーカーである、項目１８に記載のキット。
（項目２０）
上記サイズ標準は遺伝子座特異的対立遺伝子ラダーである、項目１８に記載のキット。
（項目２１）
上記遺伝子座特異的対立遺伝子ラダーのおのおのの格（ｒｕｎｇ）、および上記遺伝子座の組の各遺伝子座に対する少なくとも１個のオリゴヌクレオチドプライマーは、それらに共有結合した蛍光標識を有し、該オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも２個は、該プライマーに共有結合した、上記容器内の他のプライマーと異なる蛍光標識を有する、項目２０に記載のキット。
（項目２２）
上記標識プライマーの少なくとも５個が、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも５種類の異なる蛍光標識を有する、項目２１に記載のキット。
（項目２３）
上記少なくとも５種類の異なる蛍光標識が、５２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第１の蛍光標識、５５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第２の蛍光標識、５７５ｎｍでその最大の蛍光を放つ第３の蛍光標識、５９０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第４の蛍光標識および６５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第５の蛍光標識を含む、項目２２に記載のキット。
（項目２４）
上記標識プライマーの少なくとも６個が、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも６種類の異なる蛍光標識を有する、項目２１に記載のキット。
（項目２５）
上記少なくとも６種類の異なる蛍光標識が、５２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第１の蛍光標識、５５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第２の蛍光標識、５７５ｎｍでその最大の蛍光を放つ第３の蛍光標識、５９０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第４の蛍光標識、６５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第５の蛍光標識および６２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第６の蛍光標識を含む、項目２４に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）マルチプレックス（ｍｕｌｔｐｌｅｘ）増幅反応で分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅する工程であって、該反応の産物は該組内の該共増幅した（ｃｏ−ａｍｐｌｉｆｉｅｄｄ）遺伝子座から増幅された対立遺伝子の混合物であり、該遺伝子座の組は、遺伝子座Ｄ１０Ｓ１２４８を含む、工程；
（ｂ）該混合物中の該増幅された対立遺伝子を評価して該少なくとも１個のＤＮＡサンプル内の該遺伝子座の組で分析された各該遺伝子座に存在する該対立遺伝子を決定する工程を含む、方法。
【請求項２】
工程（ａ）の前記遺伝子座の組は前記少なくとも１個のＤＮＡサンプルの供給源（単数または複数）の性別を特定するのに使用され得る遺伝子座をさらに含み、好ましくは、該ＤＮＡサンプル（単数または複数）の該供給源はヒトであり、該ヒトの性別の特定に使用する該遺伝子座はアメロゲニン遺伝子座である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記評価する工程の前に前記増幅された対立遺伝子を分離する工程をさらに含み、好ましくは、該増幅された対立遺伝子はキャピラリーゲル電気泳動により分離される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記共増幅する工程は前記遺伝子座の組内の該遺伝子座それぞれに対して１対のオリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該対のプライマーはそれぞれ前記マルチプレックス反応における該遺伝子座の組の遺伝子座に隣接する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドプライマーの各対の少なくとも１個のプライマーは標識プライマーであり、好ましくは、該標識プライマーの標識は蛍光標識である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記遺伝子座の組が、ＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡ、Ｄ１Ｓ１６５６、およびＤ１２Ｓ３９１からなる群から選択される１つまたは複数のＳＴＲ遺伝子座をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記共増幅する工程は少なくとも５個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも５個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも５種類の異なる蛍光標識を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記共増幅する工程は少なくとも６個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも６個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも６種類の異なる蛍光標識を有し、好ましくは、該少なくとも６種類の異なる蛍光標識が、５２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第１の蛍光標識、５５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第２の蛍光標識、５７５ｎｍでその最大の蛍光を放つ第３の蛍光標識、５９０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第４の蛍光標識、６５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第５の蛍光標識および６２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第６の蛍光標識を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
選択された前記遺伝子座の組の各遺伝子座はポリメラーゼ連鎖反応を使用して共増幅される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
分析される前記少なくとも１個のＤＮＡサンプルはヒト組織から調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ヒト組織は血液、精液、膣細胞、毛髪、唾液、尿、骨、口腔サンプル、胎盤細胞を含む羊水および胎児細胞を含む羊水からなる群の１つまたは複数から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを含む、キットであって、該遺伝子座の組は共増幅され得；該プライマーは１つまたは複数の容器内にあり；該遺伝子座の組はアメロゲニン遺伝子座、１１個のＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡおよびＤ１Ｓ１６５６を含む、キット。
【請求項１３】
前記キット内の前記オリゴヌクレオチドプライマーはすべて１つの容器内にあり、または該キットが、少なくとも１回のマルチプレックス増幅反応のための試薬をさらに含むか、または少なくとも１つのサイズ標準の入った容器をさらに含み、好ましくは、該サイズ標準はＤＮＡマーカーであるか、または該サイズ標準は遺伝子座特異的対立遺伝子ラダーである、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
前記遺伝子座特異的対立遺伝子ラダーのおのおのの格（ｒｕｎｇ）、および前記遺伝子座の組の各遺伝子座に対する少なくとも１個のオリゴヌクレオチドプライマーは、それらに共有結合した蛍光標識を有し、該オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも２個は、該プライマーに共有結合した、前記容器内の他のプライマーと異なる蛍光標識を有する、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記標識プライマーの少なくとも５個が、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも５種類の異なる蛍光標識を有し、好ましくは、該少なくとも５種類の異なる蛍光標識が、５２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第１の蛍光標識、５５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第２の蛍光標識、５７５ｎｍでその最大の蛍光を放つ第３の蛍光標識、５９０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第４の蛍光標識および６５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第５の蛍光標識を含む、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記標識プライマーの少なくとも６個が、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも６種類の異なる蛍光標識を有し、好ましくは、該少なくとも６種類の異なる蛍光標識が、５２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第１の蛍光標識、５５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第２の蛍光標識、５７５ｎｍでその最大の蛍光を放つ第３の蛍光標識、５９０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第４の蛍光標識、６５０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第５の蛍光標識および６２０ｎｍでその最大の蛍光を放つ第６の蛍光標識を含む、請求項１４に記載のキット。
【請求項１７】
前記遺伝子座の組が、ＳＴＲ遺伝子座D10S1248、D12S391、D22S1045およびD2S441からなる群より選択される１つまたは複数のＳＴＲ遺伝子座をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記遺伝子座の組が、ＳＴＲ遺伝子座Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ２２Ｓ１０４５およびＤ２Ｓ４４１からなる群より選択される１つまたは複数のＳＴＲ遺伝子座をさらに含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１９】
（ａ）マルチプレックス増幅反応で分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅する工程であって、該反応の産物は該組内の該共増幅した遺伝子座から増幅された対立遺伝子の混合物であり、該遺伝子座の組は、１５個のＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡ；Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ１Ｓ１６５６、Ｄ２２Ｓ１０４５およびＤ２Ｓ４４１を含む、工程；
（ｂ）該混合物中の該増幅された対立遺伝子を評価して該少なくとも１個のＤＮＡサンプル内の該遺伝子座の組で分析された各該遺伝子座に存在する該対立遺伝子を決定する工程を含む、方法。
【請求項２０】
（ａ）マルチプレックス増幅反応で分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅する工程であって、該反応の産物は該組内の該共増幅した遺伝子座から増幅された対立遺伝子の混合物であり、該遺伝子座の組は、１５個のＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡ；Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ１Ｓ１６５６、Ｄ２２Ｓ１０４５およびＤ２Ｓ４４１を含み、該遺伝子座の組は該少なくとも１個のＤＮＡサンプルの供給源（単数または複数）の性別を特定するのに使用され得る遺伝子座をさらに含み、好ましくは、該ＤＮＡサンプル（単数または複数）の該供給源はヒトであり、該ヒトの性別の特定に使用する該遺伝子座はアメロゲニン遺伝子座である、工程；
（ｂ）該混合物中の該増幅された対立遺伝子を評価して該少なくとも１個のＤＮＡサンプル内の該遺伝子座の組で分析された各該遺伝子座に存在する該対立遺伝子を決定する工程を含む、方法。
【請求項２１】
前記共増幅する工程は少なくとも６個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも６個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも６種類の異なる蛍光標識を有する、請求項１９および２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
分析される少なくとも１個のＤＮＡサンプルの一組の遺伝子座を共増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを含む、キットであって、該遺伝子座の組は共増幅され得；該プライマーは１つまたは複数の容器内にあり；該遺伝子座の組はアメロゲニン遺伝子座、１５個のＳＴＲ遺伝子座Ｄ１６Ｓ５３９、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ３Ｓ１３５８、Ｄ８Ｓ１１７９、ＦＧＡ、ＴＨ０１、ＶＷＡ；Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ１Ｓ１６５６、Ｄ２２Ｓ１０４５およびＤ２Ｓ４４１を含み、ここで共増幅する工程は少なくとも５個の蛍光標識オリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含み、該少なくとも５個の標識プライマーは、該標識プライマーにそれぞれ共有結合した少なくとも５種類の異なる蛍光標識を有する、キット。