【手続補正書】
【提出日】平成22年8月10日(2010.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのドナー部分と、少なくとも１つのアクセプター部分とを含む共鳴エネルギー転移（ＲＥＴ）ペア部分を含むホスフェート結合タンパク質であって、
結合がＲＥＴの変化を生じさせる、ホスフェートと結合できるホスフェート結合タンパク質。
【請求項２】
ＲＥＴが増加する、請求項１記載のタンパク質。
【請求項３】
ＲＥＴが減少する、請求項１のタンパク質。
【請求項４】
前記ホスフェートが無機ホスフェート（Ｐｉ）である、請求項１記載のタンパク質。
【請求項５】
前記ホスフェートと結合するとタンパク質の高次構造変化によってＲＥＴの変化が生じる、請求項１記載のタンパク質。
【請求項６】
前記ホスフェートを放出するとタンパク質の高次構造変化によってＲＥＴの変化が生じる、請求項１記載のタンパク質。
【請求項７】
前記ホスフェートと結合すると少なくとも２つの部分の間の距離が変化する、請求項１記載のタンパク質。
【請求項８】
前記ホスフェートと結合すると少なくとも２つの部分の間の配向が変化する、請求項１記載のタンパク質。
【請求項９】
ＲＥＴペアが、時間分解ＲＥＴ可能である、請求項１記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記少なくとも１つのアクセプター部分が、フルオレセイン、ローダミン、ＧＦＰ、ＧＦＰ誘導体、蛍光タンパク質、ＦＩＴＣ、５−カルボキシフルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、７−ヒドロキシクマリン−３−カルボキサミド、６−クロロ−７−ヒドロキシクマリン−３−カルボキサミド，フルオレセイン−５−イソチオシアネート、ジクロロトリアジニルアミノフロレセイン、テトラメチルローダミン−５−イソチオシアネート、テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート、５−カルボキシフルオレセインのスクシニミジルエステル、６−カルボキシフルオレセインのスクシニミジルエステル、５−カルボキシテトラメチルローダミン、６−カルボキシメチルローダミン、７−アミノ−４−メチルクマリン−３−酢酸、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、６−ＩＡＦ、５−ＩＡＦ、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬマレイミド、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬヨードアセタミド、フルオレセイン−５−マレイミド、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ４８８ヨードアセタミド、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ４８８マレイミド及び５−（ブロモメチル）フルオレセインからなる群から選択される、請求項１記載のタンパク質。
【請求項１１】
前記ドナー部分が、発光金属錯体を含む、請求項１記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記発光金属錯体が、有機アンテナ部分、金属リガンド部分及びランタニド金属イオンを含む、請求項１１記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記発光金属錯体が、ランタニド金属錯体である、請求項１２記載のタンパク質。
【請求項１４】
前記ランタニド金属錯体が、有機アンテナ部分、金属リガンド部分及びランタニド金属イオンを含む、請求項１３記載のタンパク質。
【請求項１５】
前記ランタニド金属イオンが、Ｓｍ（ＩＩＩ）、Ｒｕ（ＩＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｔｂ（ＩＩＩ）及びＤｙ（ＩＩＩ）からなる群から選択される、請求項１４記載のタンパク質。
【請求項１６】
前記ランタニドイオンが、ユーロピウムイオンである、請求項１４記載のタンパク質。
【請求項１７】
前記ランタニドイオンが、テルビウムイオンである、請求項１４記載のタンパク質。
【請求項１８】
前記有機アンテナ部分が、ローダミン５６０、フルオレセイン５７５、フルオレセイン５９０、２−キノロン、４−キノロン、４−トリフルオロメチルクマリン（ＴＦＣ）、７−ジエチル−アミノ−クマリン−３−カルボヒドラジド、７−アミノ−４−メチル−２−クマリン（カルボスチリル１２４）、７−アミノ−４−メチル−２−クマリン（クマリン１２０）、７−アミノ−４−トリフルオロメチル−２−クマリン（クマリン１２４）及びアミノメチルトリメチルソラレンからなる群から選択される、請求項１４記載のタンパク質。
【請求項１９】
金属リガンド部分が、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＴＨＡ、ＤＯＴＡ、ＮＴＡ、ＨＤＴＡ、ＤＴＰＰ、ＥＤＴＰ、ＨＤＴＰ、ＮＴＰ、ＤＯＴＰ、ＤＯ３Ａ、ＤＯＴＡＧＡ及びＮＯＴＡからなる群から選択される金属キレート化部分である、請求項１４記載のタンパク質。
【請求項２０】
ランタニド金属錯体が、以下の構造を有する、請求項１３記載のタンパク質：
−Ｌｎ−Ａ−Ｓｎ−ＣＭ、又は、−Ｌｎ−ＣＭ−Ｓｎ−Ａ；
式中、Ａが有機アンテナ部分を表し、Ｌがリンカーを表し、Ｓがスペーサーを表し、ｎが０又は１であってもよく、Ｃが金属キレート化部分を表し、かつＭがＣに配位するランタニド金属イオンを表す。
【請求項２１】
前記発光金属錯体がＣＳ１２４−ＤＴＰＡ−Ｐｈｅ−ＮＣＳ−Ｔｂ又はＣＳ１２４−ＤＴＰＡ−ＥＭＣＨ−Ｔｂを含む、請求項１１記載のタンパク質。
【請求項２２】
前記タンパク質が、少なくとも１つの非天然システインアミノ酸を有する、請求項１記載のタンパク質。
【請求項２３】
第１若しくは第２の部分が、非天然システインアミノ酸に結合する、請求項２２記載のタンパク質。
【請求項２４】
前記タンパク質が、少なくとも２つの非天然システインアミノ酸を有する、請求項１記載のタンパク質。
【請求項２５】
第１及び第２の部分が、非天然システインアミノ酸に結合する、請求項２４記載のタンパク質。
【請求項２６】
前記ＰＢＰのアミノ酸配列が、ｐｈｏＳ遺伝子に由来する、請求項１記載のタンパク質。
【請求項２７】
Ａ４７Ｃ、Ａ１９７Ｃ、Ｑ２０１Ｃ及びＥ２６８Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項２６記載のタンパク質。
【請求項２８】
少なくとも２つの非天然システインアミノ酸を有し、Ａ４７Ｃ、Ａ１９７Ｃ、Ｑ２０１Ｃ及びＥ２６８Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項２６記載のタンパク質。
【請求項２９】
少なくとも２つの非天然システインアミノ酸を有し、Ａ１９７Ｃ／Ｅ２６８Ｃ、Ａ４７Ｃ／Ａ１９７Ｃ、Ａ４７Ｃ／Ｅ２６８Ｃ、Ｑ２０１Ｃ／Ｅ２６８Ｃ、Ａ４７Ｃ／Ｑ２０１Ｃ及びＡ１９７Ｃ／Ｑ２０１Ｃからなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む、請求項２６記載のタンパク質。
【請求項３０】
前記ホスフェート結合タンパク質が、配列番号：１又は配列番号：２に対して９０％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１記載のタンパク質。
【請求項３１】
前記少なくとも１つのドナー部分が、アミン結合又はチオール結合を介して、ホスフェート結合タンパク質に連結される、請求項１記載のタンパク質。
【請求項３２】
前記少なくとも１つのアクセプター部分が、アミン結合又はチオール結合を介して、ホスフェート結合タンパク質に連結される、請求項１記載のタンパク質。
【請求項３３】
（ａ）前記第１のサンプルと、請求項１から３２のいずれか１項記載のタンパク質とを接触させる段階と、
（ｂ）（ａ）を、ＲＥＴペアのドナー部分を励起する波長の光に曝露する段階と、
（ｃ）ＲＥＴペアのアクセプター部分からの放出を測定する段階と
を含む、第１のサンプル中のホスフェートを測定する方法。
【請求項３４】
（ｉ）第２のサンプルと、請求項１から３２記載のいずれか１項記載のタンパク質とを接触させる段階であって、前記第２のサンプルが既知量のホスフェートを含む段階と、
（ｉｉ）（ｉ）を、ＲＥＴペアのドナー部分を励起する波長の光に曝露する段階と、
（ｉｉｉ）ＲＥＴペアのアクセプター部分からの放出を測定する段階と
を更に含む、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
（ｉ）複数のサンプルを別々に、請求項１から３２に記載のタンパク質と接触させる段階であって、前記複数のサンプルが既知量のホスフェートを含む段階と、
（ｉｉ）（ｉ）を、ＲＥＴペアのドナー部分を励起する波長の光に曝露する段階と、
（ｉｉｉ）各サンプルにおける、ＲＥＴペアのアクセプター部分からの放出を測定する段階と
を更に含む、請求項３３から３４のいずれか１項記載の方法。
【請求項３６】
ａ）前記化合物とホスホジエステラーゼ基質（例えばｃＡＭＰ）とを接触させる段階と、
ｂ）（ａ）を、もはや基質上のリン酸ジエステル結合の一部でないホスフェートを除去できるホスファターゼと接触させる段階と、
ｃ）（ｂ）を、修飾ＰＢＰと接触させる段階と、
ｄ）蛍光を測定する段階と
を含む、化合物のホスホジエステラーゼ活性を測定する方法。
【請求項３７】
ａ）前記化合物と、ホスホジエステラーゼ基質（例えばｃＡＭＰ）とを接触させる段階と、
ｂ）（ａ）と、もはや基質上のリン酸ジエステル結合の一部でないホスフェートを除去できるホスファターゼとを接触させる段階と、
ｃ）（ｂ）と、請求項１から３２のいずれか１項記載のホスフェート結合タンパク質とを接触させる段階と、
ｄ）ＲＥＴを測定する段階と
を含む、化合物のホスホジエステラーゼ活性を測定する方法。
【請求項３８】
ａ）前記化合物と、キナーゼ活性測定用のリン酸化基質とを接触させる段階と、
ｂ）（ａ）と、前記化合物のキナーゼ活性によって追加されたホスフェートを除去できるホスファターゼとを接触させる段階と、
ｃ）（ｂ）と、ＲＥＴペアを含む修飾ＰＢＰとを接触させる段階と、
ｄ）ＲＥＴを測定する段階と
を含む、化合物のキナーゼ活性を測定する方法。
【請求項３９】
ａ）前記化合物と、キナーゼ活性測定用のリン酸化基質と、化合物のキナーゼ活性によって追加されるホスフェートを除去できるホスファターゼと、ＲＥＴペアを含む修飾ＰＢＰとを含む溶液と、
ｂ）ＲＥＴを測定する段階と
を含む、化合物のキナーゼ活性を測定する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
幾つかの実施形態では、ドナー部分はＧＦＰでない。幾つかの実施形態では、ドナー部分はエクオリンタンパク質でない。幾つかの実施形態では、ドナー部分はタンパク質でない。幾つかの実施形態では、アクセプター部分はＧＦＰでない。幾つかの実施形態では、アクセプター部分はエクオリンタンパク質でない。幾つかの実施形態では、アクセプター部分はタンパク質でない。
[請求項101]
少なくとも1つのドナー部分と、少なくとも1つのアクセプター部分とを含む共鳴エネルギー転移(RET)ペア部分を含むホスフェート結合タンパク質であって、
結合がRETの変化を生じさせる、ホスフェートと結合できるホスフェート結合タンパク質。
[請求項102]
RETが増加する、請求項101記載のタンパク質。
[請求項103]
RETが減少する、請求項101のタンパク質。
[請求項104]
前記ホスフェートが無機ホスフェート(Pi)である、請求項101記載のタンパク質。
[請求項105]
前記ホスフェートと結合するとタンパク質の高次構造変化によってRETの変化が生じる、請求項101記載のタンパク質。
[請求項106]
前記ホスフェートを放出するとタンパク質の高次構造変化によってRETの変化が生じる、請求項101記載のタンパク質。
[請求項107]
前記ホスフェートと結合すると少なくとも2つの部分の間の距離が変化する、請求項101記載のタンパク質。
[請求項108]
前記ホスフェートと結合すると少なくとも2つの部分の間の配向が変化する、請求項101記載のタンパク質。
[請求項109]
RETペアが、時間分解RET可能である、請求項101記載のタンパク質。
[請求項110]
前記少なくとも1つのアクセプター部分が、フルオレセイン、ローダミン、GFP、GFP誘導体、蛍光タンパク質、FITC、5-カルボキシフルオレセイン、6-カルボキシフルオレセイン、7-ヒドロキシクマリン-3-カルボキサミド、6-クロロ-7-ヒドロキシクマリン-3-カルボキサミド,フルオレセイン-5-イソチオシアネート、ジクロロトリアジニルアミノフロレセイン、テトラメチルローダミン-5-イソチオシアネート、テトラメチルローダミン-6-イソチオシアネート、5-カルボキシフルオレセインのスクシニミジルエステル、6-カルボキシフルオレセインのスクシニミジルエステル、5-カルボキシテトラメチルローダミン、6-カルボキシメチルローダミン、7-アミノ-4-メチルクマリン-3-酢酸、Alexa Fluor488、Alexa Fluor633、Alexa Fluor647、6-IAF、5-IAF、BODIPY FLマレイミド、BODIPY FLヨードアセタミド、フルオレセイン-5-マレイミド、Oregon Green 488ヨードアセタミド、Oregon Green 488マレイミド及び5-(ブロモメチル)フルオレセインからなる群から選択される、請求項101記載のタンパク質。
[請求項111]
前記ドナー部分が、発光金属錯体を含む、請求項101記載のタンパク質。
[請求項112]
前記発光金属錯体が、有機アンテナ部分、金属リガンド部分及びランタニド金属イオンを含む、請求項111記載のタンパク質。
[請求項113]
前記発光金属錯体が、ランタニド金属錯体である、請求項112記載のタンパク質。
[請求項114]
前記ランタニド金属錯体が、有機アンテナ部分、金属リガンド部分及びランタニド金属イオンを含む、請求項113記載のタンパク質。
[請求項115]
前記ランタニド金属イオンが、Sm(III)、Ru(III)、Eu(III)、Gd(III)、Tb(III)及びDy(III)からなる群から選択される、請求項114記載のタンパク質。
[請求項116]
前記ランタニドイオンが、ユーロピウムイオンである、請求項114記載のタンパク質。
[請求項117]
前記ランタニドイオンが、テルビウムイオンである、請求項114記載のタンパク質。
[請求項118]
前記有機アンテナ部分が、ローダミン560、フルオレセイン575、フルオレセイン590、2-キノロン、4-キノロン、4-トリフルオロメチルクマリン(TFC)、7-ジエチル-アミノ-クマリン-3-カルボヒドラジド、7-アミノ-4-メチル-2-クマリン(カルボスチリル124)、7-アミノ-4-メチル-2-クマリン(クマリン120)、7-アミノ-4-トリフルオロメチル-2-クマリン(クマリン124)及びアミノメチルトリメチルソラレンからなる群から選択される、請求項114記載のタンパク質。
[請求項119]
金属リガンド部分が、EDTA、DTPA、TTHA、DOTA、NTA、HDTA、DTPP、EDTP、HDTP、NTP、DOTP、DO3A、DOTAGA及びNOTAからなる群から選択される金属キレート化部分である、請求項114記載のタンパク質。
[請求項120]
ランタニド金属錯体が、以下の構造を有する、請求項113記載のタンパク質:
-Ln-A-Sn-CM、又は、-Ln-CM-Sn-A;
式中、Aが有機アンテナ部分を表し、Lがリンカーを表し、Sがスペーサーを表し、nが0又は1であってもよく、Cが金属キレート化部分を表し、かつMがCに配位するランタニド金属イオンを表す。
[請求項121]
前記発光金属錯体がCS124-DTPA-Phe-NCS-Tb又はCS124-DTPA-EMCH-Tbを含む、請求項111記載のタンパク質。
[請求項122]
前記タンパク質が、少なくとも1つの非天然システインアミノ酸を有する、請求項101記載のタンパク質。
[請求項123]
第1若しくは第2の部分が、非天然システインアミノ酸に結合する、請求項122記載のタンパク質。
[請求項124]
前記タンパク質が、少なくとも2つの非天然システインアミノ酸を有する、請求項101記載のタンパク質。
[請求項125]
第1及び第2の部分が、非天然システインアミノ酸に結合する、請求項124記載のタンパク質。
[請求項126]
少なくとも1つ又は少なくとも2つの非天然システインアミノ酸が、前記システインアミノ酸の置換又は挿入によってタンパク質に導入される、請求項122から125のいずれか1項記載のタンパク質。
[請求項127]
前記PBPのアミノ酸配列が、phoS遺伝子に由来する、請求項101記載のタンパク質。
[請求項128]
前記phoS遺伝子によってコードされるアミノ酸配列が、配列番号:1又は配列番号:2の配列である、請求項127記載のタンパク質。
[請求項129]
前記タンパク質が、少なくとも1つの非天然システインアミノ酸を有する、請求項127記載のタンパク質。
[請求項130]
A47C、A197C、Q201C及びE268Cからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項127記載のタンパク質。
[請求項131]
前記タンパク質が、少なくとも2つの非天然システインアミノ酸を有する、請求項127記載のタンパク質。
[請求項132]
A47C、A197C、Q201C及びE268Cからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、請求項131記載のタンパク質。
[請求項133]
A197C/E268C、A47C/A197C、A47C/E268C、Q201C/E268C、A47C/Q201C及びA197C/Q201Cからなる群から選択される少なくとも2つのアミノ酸置換を含む、請求項131記載のタンパク質。
[請求項134]
第1若しくは第2の部分が、非天然システインアミノ酸に結合する、請求項127記載のタンパク質。
[請求項135]
第1及び第2の部分が、非天然のシステインアミノ酸に結合する、請求項127記載のタンパク質。
[請求項136]
前記ホスフェート結合タンパク質が、配列番号:1又は配列番号:2に対して90%の相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項101記載のタンパク質。
[請求項137]
前記ホスフェート結合タンパク質が、少なくとも1つの非天然システインアミノ酸を含む、請求項136記載のタンパク質。
[請求項138]
前記少なくとも1つのドナー部分が、アミン結合又はチオール結合を介して、ホスフェート結合タンパク質に連結される、請求項101記載のタンパク質。
[請求項139]
前記少なくとも1つのアクセプター部分が、アミン結合又はチオール結合を介して、ホスフェート結合タンパク質に連結される、請求項101記載のタンパク質。
[請求項140]
(a)前記第1のサンプルと、請求項101から139のいずれか1項記載のタンパク質とを接触させる段階と、
(b)(a)を、RETペアのドナー部分を励起する波長の光に曝露する段階と、
(c)RETペアのアクセプター部分からの放出を測定する段階と
を含む、第1のサンプル中のホスフェートを測定する方法。
[請求項141]
前記RETペアのドナー部分からの放出を測定する段階を含む、請求項140記載の方法。
[請求項142]
前記RETペアのドナー部分とアクセプター部分との放出の比率を算出する段階を含む、請求項141記載の方法。
[請求項143]
(i)第2のサンプルと、請求項101から139記載のいずれか1項記載のタンパク質とを接触させる段階であって、前記第2のサンプルが既知量のホスフェートを含む段階と、
(ii)(i)を、RETペアのドナー部分を励起する波長の光に曝露する段階と、
(iii)RETペアのアクセプター部分からの放出を測定する段階と
を更に含む、請求項140から142のいずれか1項記載の方法。
[請求項144]
(ii)において、RETペアのドナー部分からの放出を測定する段階を含む、請求項143記載の方法。
[請求項145]
(ii)において、RETペアのドナー部分とアクセプター部分との放出の比率を算出する段階を含む、請求項144記載の方法。
[請求項146]
(i)複数のサンプルを別々に、請求項101から139に記載のタンパク質と接触させる段階であって、前記複数のサンプルが既知量のホスフェートを含む段階と、
(ii)(i)を、RETペアのドナー部分を励起する波長の光に曝露する段階と、
(iii)各サンプルにおける、RETペアのアクセプター部分からの放出を測定する段階と
を更に含む、請求項140から145のいずれか1項記載の方法。
[請求項147]
第1のサンプルのホスフェートの量が、第1のサンプルからの放出と、前記複数のサンプルからの放出とを比較することにより測定される、請求項146記載の方法。
[請求項148]
(iii)において、RETペアのドナー部分からの放出を測定する段階を含む、請求項147記載の方法。
[請求項149]
(iii)における、RETペアのドナー部分とアクセプター部分との放出の比率を算出する段階を含む、請求項148記載の方法。
[請求項150]
複数の時点において、放出の測定がなされる、請求項101から149のいずれか1項記載の方法。
[請求項151]
a)前記化合物とホスホジエステラーゼ基質(例えばcAMP)とを接触させる段階と、
b)(a)を、もはや基質上のリン酸ジエステル結合の一部でないホスフェートを除去できるホスファターゼと接触させる段階と、
c)(b)を、修飾PBPと接触させる段階と、
d)蛍光を測定する段階と
を含む、化合物のホスホジエステラーゼ活性を測定する方法。
[請求項152]
前記修飾PBPが、1つの蛍光標識を含み、ホスフェートと結合している場合の前記PBPの蛍光が、それがホスフェートと結合していない場合の蛍光と異なる、請求項151記載の方法。
[請求項153]
a)前記化合物と、ホスホジエステラーゼ基質(例えばcAMP)とを接触させる段階と、
b)(a)と、もはや基質上のリン酸ジエステル結合の一部でないホスフェートを除去できるホスファターゼとを接触させる段階と、
c)(b)と、請求項101から139のいずれか1項記載のホスフェート結合タンパク質とを接触させる段階と、
d)RETを測定する段階と
を含む、化合物のホスホジエステラーゼ活性を測定する方法。
[請求項154]
(c)を、ドナー部分を励起する1つ以上の波長の光に曝露する、請求項153記載の方法。
[請求項155]
(a)、(b)及び(c)が同時に実施される、請求項153又は154記載の方法。
[請求項156]
RETの測定が、リアルタイムで、又は動態的測定としてなされる、請求項152から155のいずれか1項記載の方法。
[請求項157]
(a)、(b)、(c)又はそれらのいずれかの組み合わせが、ホスフェートモップを含有する、請求項152から156のいずれか1項記載の方法。
[請求項158]
(a)が、前記化合物のホスホジエステラーゼ活性の潜在的モジュレータを含有する、請求項152から157のいずれか1項記載の方法。
[請求項159]
RETが、(a)、(b)、又は(a)及び(b)において測定される、請求項152から158のいずれか1項記載の方法。
[請求項160]
コントロール反応を更に含む、請求項152から159のいずれか1項記載の方法。
[請求項161]
a)前記化合物と、キナーゼ活性測定用のリン酸化基質とを接触させる段階と、
b)(a)と、前記化合物のキナーゼ活性によって追加されたホスフェートを除去できるホスファターゼとを接触させる段階と、
c)(b)と、RETペアを含む修飾PBPとを接触させる段階と、
d)RETを測定する段階と
を含む、化合物のキナーゼ活性を測定する方法。
[請求項162]
(c)を、ドナー部分を励起する1つ以上の波長の光に曝露する、請求項161記載の方法。
[請求項163]
(a)、(b)及び(c)が、同時に実施される、請求項161から162のいずれか1項記載方法。
[請求項164]
RETがリアルタイムで、又は動態的測定として測定される、請求項161から163のいずれか1項記載の方法。
[請求項165]
(a)、(b)、(c)又はそれらのいずれかの組み合わせが、ホスフェートモップを含有する、請求項161から164のいずれか1項記載の方法。
[請求項166]
(a)が、化合物のキナーゼ活性の潜在的モジュレータを含有する、請求項161から165のいずれか1項記載の方法。
[請求項167]
RETが、(a)、(b)、又は(a)及び(b)において測定される、請求項161から166のいずれか1項記載の方法。
[請求項168]
コントロール反応を更に含む、請求項161から167のいずれか1項記載の方法。
[請求項169]
a)前記化合物と、キナーゼ活性測定用のリン酸化基質と、化合物のキナーゼ活性によって追加されるホスフェートを除去できるホスファターゼと、RETペアを含む修飾PBPとを含む溶液と、
b)RETを測定する段階と
を含む、化合物のキナーゼ活性を測定する方法。
[請求項170]
RETが、リアルタイムで、又は動態的測定として測定される、請求項169記載の方法。
[請求項171]
(a)が、ホスフェートモップを含有する、請求項169から170のいずれか1項記載の方法。
[請求項172]
コントロール反応を更に含む、請求項169から171のいずれか1項記載の方法。