【事件の表示】
　特願２００６−５１４２５７「クロマトグラフィーアッセイシステム」拒絶査定不服審判事件〔平成１６年１１月１８日国際公開、ＷＯ２００４／０９９３８３、平成１８年１１月　９日国内公表、特表２００６−５２５５２７〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本願は，平成１６年５月３日（優先権主張日：平成１５年（２００３年）５月２日，米国）の国際出願であって，平成２１年７月１３日付けで拒絶査定がなされ，これに対し，平成２１年１１月３０日に拒絶査定に対する審判請求がなされるとともに，同日付けで手続補正がなされたものである。
　
II．平成２１年１１月３０日付けの手続補正についての補正却下の決定
［補正却下の決定の結論］
　　平成２１年１１月３０日付けの手続補正を却下する。
［理由］
１．補正後の請求項１に記載された発明
　　本件補正により，補正前の特許請求の範囲（平成２１年４月２６日付けの手続補正書により補正されたもの。）の請求項１は，次のとおりに補正された。（下線は補正箇所を示す。）
「　【請求項１】
　少なくとも１つのリザーバ領域および１つのウイッキング膜を備え，特異的結合パートナー及び
単一粒子中に３０，００００〜１，０００，０００個のユーロピウム（III）を含む
側方流動アッセイ形式の
　
　上記補正は，請求項１に記載した発明を特定するために必要な事項である（i）補正前の「ランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレート」を，「単一粒子中に３０，００００〜１，０００，０００個のユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレート」と限定し，（ii）「検体検出装置」を，「側方流動アッセイ形式の検体検出装置」と限定するものであるから，平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる（以下，「平成１８年改正前」という。）特許法第１７条の２第４項第２号の特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　
　そこで，補正後の請求項１に記載された発明（以下，「補正発明」という。）が特許出願の際に独立して特許を受けることができるものであるか（平成１８年改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するか）について以下に検討する。
　
２．引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用され，本願優先権主張日前に頒布された刊行物である特開２００３−８３９７０号公報（以下，「刊行物１」という。）には，「試験片を用いた被検物質の測定方法及び装置」について，図面とともに次の記載がある。
　また，本願優先権主張日前に頒布された刊行物であって，本願明細書に蛍光標識についての従来技術を示す文献として例示されている（段落【０００８】）Ｈａｒｒｉ　Ｈａｒｍａ，　Ｔｅｒｏ　Ｓｏｕｋｋａ　＆　Ｔｉｍｏ　Ｌｏｖｇｒｅｎ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　，４７：３，ｐｐ．５６１−５６８（２００１）（当審注：「Ｈａｒｍａ」の２つのａの上には「・・」が付く。また，「Ｌｏｖｇｒｅｎ」のｏの上には「・・」が付く。）には，図面とともに次の記載がある。
　
（１）刊行物１記載の事項
（１ａ）第２頁左欄〜右欄
「【特許請求の範囲】
【請求項１】  以下の各ステップを含む，液体試料中の被検物質の濃度を測定する方法；
（Ａ）毛管現象により液体試料を展開することができる領域を少なくとも一部に有し，第１，第２及び第３の領域がこの順序に設定された担体と，
担体上の第１の領域に，液体とともに展開可能に担持され，検出可能な標識を有する，被検物質に特異的に結合する第１の物質と，
担体上の第２の領域に固定された，被検物質に特異的に結合する第２の物質とを有する試験片に，液体試料を展開させ，
（Ｂ）第１の領域で被検物質と第１の物質とを結合させ，
第２の領域で被検物質と第２の物質を結合させて，被検物質を第２の領域にトラップし，
第３の領域に，第２の領域でトラップされなかった被検物質及び第１の物質を保留させ，
（Ｃ）第２の領域，及び担体の第２の領域以外の領域の一部または全部において，標識を検出し，
（Ｄ）第２の領域における標識の検出結果を，担体の第２の領域以外の領域の一部または全部における標識の検出結果を用いて補正して，被検物質の濃度を算出する。
　　　　　（中略）
【請求項８】  毛管現象により液体試料を展開することができる領域を少なくとも一部に有し，第１，第２及び第３の領域がこの順序に設定された担体と，担体上の第１の領域に，液体とともに展開可能に担持され，検出可能な標識を有する第１の物質と，担体上の第２の領域に固定された，被検物質に特異的に結合する第２の物質とを有し，前記第１の物質は，被検物質に特異的に結合するか，又は被検物質と競合して第２の物質に特異的に結合する試験片を用いて，液体試料中の被検物質の濃度を測定するための装置であって，
試験片の第１の領域から第３の領域までの標識を光学的に検出する検出器と，
第２の領域において検出された標識の量を，担体の第２の領域以外の領域の一部または全部において検出された標識の量に基づいて補正する補正手段とを備えた装置。」
　
（１ｂ）第２頁右欄〜第３頁左欄
「【０００２】
【従来の技術】従来より，簡易な定性免疫分析法として，イムノクロマトグラフィーが知られている。この方法は，被検物質に特異的に結合する標識化された第１の抗体又は抗原を，液体とともに展開可能に保持するリリース部位と，被検物質に特異的に結合する第２の抗体又は抗原が固定化された捕捉部位とを有する試験片を用い，被検物質を含む液体試料をリリース部位に接触させて，第１の抗体又は抗原と被検物質を結合させるとともに，液体を試験片の担体上に展開させ，第１の抗体又は抗原と被検物質が結合した複合体を，固定化された第２の抗体又は抗原に結合させることにより試験片上の捕捉部位に捕捉し，捕捉部位における標識を検出することによって，被検物質の存在や量を測定する方法である。
【０００３】また，イムノクロマトグラフィーを用いた定量分析法として，ソマーら（特開平８−２４０５９１号公報）は，抗体を結合した金ゾルの反射率を捕捉部位の位置で読み取る方法を開示している。さらに，本川ら（特開平８−３３４５１１号公報）は，イムノクロマトグラフィーを用いた定量分析法として，捕捉部位における免疫分析のラベル剤の量を細かい階調で読み取ることにより，定量精度を向上させる方法を開示している。」
　
（１ｃ）第３頁右欄〜第４頁左欄
「【０００８】
【発明の実施の形態】以下，本発明を詳細に説明する。本発明の方法は，液体試料中の被検物質の濃度を試験片，具体的にはイムノクロマトグラフィーを用いて測定する方法を改良したものである。本発明を適用することができる被検物質は，それに対して特異的に結合する物質が２種類存在するものであれば，特に制限されない。例えば，一般的なイムノクロマトグラフィー等の試験片により測定可能な物質が挙げられ，より具体的には，例えば，タンパク質，有機物質，脂質，糖，ペプチド，ホルモン，核酸，ウィルス等が挙げられる。」
　
（１ｄ）第４頁左欄〜右欄
「【００１０】＜１＞ステップ（Ａ）及び（ａ）
このステップでは，毛管現象により液体試料を展開することができる領域を少なくとも一部に有し，第１，第２及び第３の領域がこの順序に設定された担体と，担体上の第１の領域に，液体とともに展開可能に担持され，検出可能な標識を有する第１の物質と，担体上の第２の領域に固定された，被検物質に特異的に結合する第２の物質とを有する試験片を用いる。サンドイッチ法においては，前記第１の物質としては，被検物質に特異的に結合する物質が用いられる。また，競合法においては，被検物質と競合して第２の物質に特異的に結合する物質が用いられる。本明細書において，前記第１の領域及び第２の領域は，それぞれリリース部位，及び捕捉部位ともいう。
【００１１】上記試験片は，通常イムノクロマトグラフィーに用いられる試験片と同様にして製造することができる。本発明に用いる試験片の一例を，図１に示す。この試験片は，試料適用部位，リリースパッド（標識した第１の物質を担持する部材），クロマトグラフィー媒体，及び吸収パッドを，各々一部が重なるように張り合わせられて，担体を構成している。ポリビニルアルコールコート・グラスファイバは，試料を適用する部位を構成する。リリースパッドには，標識した第１の物質を担持するリリース部位が設定されている。クロマトグラフィー担体には，第２の物質を固定した捕捉部位が設定されている。第２の領域と第３の領域は，図２に示すように，同一のメンブレン上にあってもよい。
【００１２】試料適用部位は，その上に液体試料を滴下するか，あるいは試料適用部位を液体試料に浸漬させる等して，液体試料をリリース部位及びクロマトグラフィー媒体まで展開させるためのものである。試料適用部位には，ポリビニルアルコールコート・グラスファイバ，セルロースメンブレン等を用いることができる。
【００１３】リリースパッドは，その一部又は全体に設定されたリリース部位に，被検物質に特異的に結合する第１の物質を，液体試料とともに展開可能に担持することができるものであればよく，グラスファイバ等が挙げられる。市販の素材（例えば，コンジュゲート・リリース，Ｆ０７５−１７，　Ｗｈａｔｍａｎ社）を用いてもよい。
【００１４】クロマトグラフィー媒体は，その上に設定された捕捉部位に，被検物質に特異的に結合する第２の物質を固定化することができ，さらに，第１の物質が保持する標識の検出を妨げないものであって，毛管現象により液体試料を展開することができるものであれば，特に制限されない。通常，溶媒に不溶性の多孔性物質が用いられる。具体的には例えば，ガラスやシリカなどの無機繊維からなる濾紙，又は，ニトロセルロース等の変性セルロースからなる濾紙が挙げられる。単なるセルロースからなる濾紙も使用できるが，第１の物質を着色粒子で標識する場合には，セルロース分子などに着色粒子が捕捉されやすく，シグナルが不鮮明となる場合がある。」
　
（１ｅ）第４頁右欄
「【００１６】担体のリリース部位には，検出可能な標識を有する第１の物質を担持させておく。第１の物質は，リリースパッドの表面に担持させても，リリースパッドの内部に染み込ませてもよい。第１の物質は例えば，サンドイッチ法においては，被検物質がタンパク質，ペプチド等の抗原の場合には，それに結合する抗体が挙げられ，被検物質が抗体である場合には，それに対する抗原又は当該抗体の調製に用いた動物のイムノグロブリンに結合する抗体等が挙げられる。
【００１７】競合法においては，被検物質がタンパク質，ペプチド等の抗原の場合には，それに結合する抗体と競合的に結合する他の抗原が挙げられ，被検物質が抗体である場合には，それに結合する抗原と競合的に結合する他の抗体が挙げられる。どちらの方法においても，抗体としては，イムノグロブリン分子であってもよく，その派生物であるＦ（ａｂ’）２，Ｆａｂ’，Ｆａｂ等の断片であってもよい。その他，第１の物質としては，被検物質に結合性を有する核酸，人工ポリマ，糖質，脂質，無機物質又は有機配位子，ウィルス，各種薬物等が挙げられる。」
　
（１ｆ）第４頁右欄〜第５頁左欄
「【００１８】第１の物質は，検出可能な標識物質を用いて標識される。標識物質としては，被検物質に結合したまま担体上を展開することができ，被検物質が第２の物質により捕捉部位に捕捉されたときに，被検物質とともに捕捉部位に留まるものであって，何らかの手段によって検出可能なものである限り，特に制限されない。例えば，色素，発光物質，生物発光物質，蛍光物質，発色反応を触媒する酵素等が挙げられる。
【００１９】また，標識物質は，単独で用いてもよいし，複数種を組み合わせて用いてもよい。例えば，目視による定性的な検出が可能な標識物質で標識した第１の物質と，光学系機器を用いて定量的な検出が可能な標識物質で標識した第１の物質を混合して用いることができる。具体的には，色素と蛍光体を封入したラテックスのミクロカプセルを用いる方法や，金コロイドで標識した第１の物質と蛍光物質で標識した第１の物質を混合して用いる方法等が挙げられる。あるいは，フルオロセインのように，蛍光性を有する色素を用いると，目視による検出と，蛍光による機器分析が可能となる。さらに，標識物質として，ユーロピウム（Ｅｕ）錯体を封入したラテックスと，カラーラテックスを用い，これらに第１の物質を結合させたものを混合して用いると，目視及び蛍光の測定が可能になる。すなわち，Eu錯体は白色であるため白い試験片上では見えないが，カラーラテックスと混合することにより，目視による検出が可能となる。」
　
（１ｇ）第５頁左欄〜右欄
「【００２１】第２の物質は，例えば，被検物質がタンパク質，ペプチド等の抗原の場合には，それに結合する抗体が，被検物質が抗体である場合には，それに対する抗原又は当該抗体の調製に用いた動物のイムノグロブリンに結合する抗体等が挙げられる。抗体としては，イムノグロブリン分子であってもよく，その派生物であるＦ（ａｂ’）２，Ｆａｂ’，Ｆａｂ等の断片であってもよい。その他，第２の物質としては，被検物質に結合性を有する核酸，人工ポリマ，糖質，脂質，無機物質又は有機配位子，ウィルス，各種薬物等が挙げられる。第２の物質は，被検物質に第１の物質が結合する部位と異なる部位に結合するものであることが好ましい。例えば，被検物質がタンパク質，ペプチド等である場合は，第１の物質及び第２の物質は，それぞれエピトープが異なる抗体を用いる。また，第１の物質をモノクローナル抗体とし，第２の物質をポリクローナル抗体とすることもできる。
【００２２】通常，第２の物質は，試験片の長手方向に対して直角となるように，帯状に固定される。クロマトグラフィー媒体としてニトロセルロースを用いる場合は，第２の物質がタンパク質又は核酸等であれば，その溶液を捕捉領域に滴下することによって，固定することができる。クロマトグラフィー担体の捕捉領域以外の領域は，ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等を用いてブロッキングし，第１の物質の非特異的吸着を防止することが好ましい。」
　
（１ｈ）第７頁左欄〜右欄
「【００４０】
【実施例】以下に，本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。
【実施例１】粒径０．２１μｍのＥｕ（ユーロピウム）錯体を含むポリスチレン粒子（ＥｕＬＴＸ，Ｃｅｒａｄｙｎｅ社製）を，０．０５　Ｍ　ＭＥＳ（ｐＨ　６．０）にて希釈し，１％懸濁液２ｍＬを調製した。この懸濁液に，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）０．６３ｍｇを加え，室温で１時間反応させた。その後，遠心分離により，未反応のＥＤＣを除去し，粒子を洗浄した後，０．０５　Ｍ　ＭＥＳ（ｐＨ　７．０）でＥｕＬＴＸを分散させた後，抗ヒトＦＳＨ（濾胞刺激ホルモン）−αサブユニット抗体（Ｍｅｄｉｘ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　Ｏｙ　Ａｂ社）０．８ｍｇを加え，室温で１時間反応させた。反応液を遠心し，未反応の抗体を除去し，ＢＳＡ含有トリス緩衝液（０．３％　ＢＳＡ，　０．１　Ｍ　Ｔｒｉｓ，　ｐＨ　８．０）を加え，ＥｕＬＴＸを安定化した。室温で３０分攪拌した後，遠心し，精製水でＥｕＬＴＸを洗浄した。洗浄後，０．０５％アジ化ナトリウム液にＥｕＬＴＸを分散させ，抗ヒトＦＳＨ−αサブユニット抗体固定化ＥｕＬＴＸ（Ａｂ−ＥｕＬＴＸ）を作製した。抗体固定化時の未結合抗体濃度は０．１５ｍｇ／ｍＬであった。したがって，抗体の固定化率は　（０．４０−０．１５）／０．４０×１００％＝６２．５％　であった。尚，ＦＳＨのαサブユニットは，ＴＳＨのαサブユニットと共通構造を有しており，抗ＦＳＨ−αサブユニット抗体は，ＴＳＨに結合することができるため，抗ＴＳＨ抗体として機能する。
【００４１】孔径８μｍのポリエステルサポート付きニトロセルロースメンブレン（Ｗｈａｔｍａｎ社）を，４ｍｍ×２０ｍｍに切断し，中央に１．１　ｍｇ／ｍＬの抗ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）抗体（マウスＩｇＧ，Ｍｅｄｉｘ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ　Ｏｙ　Ａｂ社）を１μＬ固定化し，１０％　ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ社）でブロッキングした後，メンブレンを洗浄し，乾燥させた。
【００４２】ラベル剤のリリース部位を設けるリリースパッドには，コンジュゲート・リリース（Ｆ０７５−１７，　Ｗｈａｔｍａｎ社）を４ｍｍ×５ｍｍに切断したものを用い，これに前記で調製したＡｂ−ＥｕＬＴＸを１００倍に希釈した懸濁液を滴下し，乾燥させた。
【００４３】試料を適用する部位には，ポリビニルアルコールをコートしたグラスファイバ（ＧＦ／ＡＶＡ，　Ｗｈａｔｍａｎ社）を４　ｍｍ×２０ｍｍに切断したものを用いた。また余分な水分やラベル剤を吸収する吸収パッドとしては，アブソーベント（１７Ｃｈｒ，　Ｗｈａｔｍａｎ社）を４ｍｍ×２０ｍｍに切断して用いた。この４つのパーツを，図１のように重ね，裏側から透明粘着テープで接合し，ストリップ状の試験片１を作製した。１１が試料適用部位，１２がリリースパッド，１３がラベル剤のリリース部位，１４がニトロセルロースメンブレン，１５が捕捉部位，１６が余分な水分やラベル剤を吸収する吸収パッドであり，それぞれの重なりは２ｍｍである。」
　
　そして，図１，２には，上記記載（１ｄ）に対応する，試料適用部位上に滴下するか，あるいは試料適用部位を液体試料に浸漬させる等して適用された液体試料を，一部重なったリリース部位及びクロマトグラフィー媒体まで試験片の長手方向へと展開させる試験片が図示されている。
　
　これらの記載からみて，刊行物１には次の発明が記載されている。
「試料適用部位とリリースパッドとクロマトグラフィー媒体と吸収パッドをこの順序でそれぞれ重なりあって有する試験片であって，被検出物質に特異的に結合する第１の物質及びユーロピウム錯体を含む標識粒子がリリースパッドに含浸されており，クロマトグラフィー媒体には被検出物質に特異的に結合する第２の物質である抗体が固定されている，試料適用部位上に滴下して適用された液体試料を，一部重なったリリース部位及びクロマトグラフィー媒体まで試験片の長手方向へと展開させる試験片。」（以下，「刊行物１発明」という。）
　
（２）刊行物２記載の事項
　なお，翻訳は当審にてしたものである。
（２ａ）５６１頁左欄１〜３１行
「背景：　ナノ粒子に基づいた検知技術には，従来の生化学の分析と同様に小型での検知感度を改善する可能性がある。私たちは，生化学の分析の検出限界を改善し，かつマイクロプレート・フォーマット方法の個々の分子を視覚化するために，ユーロピウム（III）ナノ粒子および時間分解蛍光測定法の使用に関連する検知技術を導入する。
　
方法：　ストレプトアビジンは，β−ジケトンで捕捉された＞３００００ユーロピウム分子を含んでいる１０７ｎｍのナノ粒子上に共有結合で被覆された。モデルアッセイシステムでは，これらのナノ粒子は，マイクロタイタープレート・フォーマットでビオチン付加された前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）を追跡するために使用された。
　
結果：　ビオチン付加されたＰＳＡの検出限界（ゼロ校正液の平均＋３ＳＤ）は，ＰＳＡの１０ｆｍｏｌ／Ｌあるいは６０ｚｅｐｔｏｍｏｌｅｓ（６０×１０−２１モル）に対応する，０．３８ｎｇ／Ｌであった。さらに，個々のＰＳＡの分子を表わす単一のナノ粒子は，×１０対物レンズを使用する時間分解蛍光顕微鏡で，同じマイクロタイターウエル中で視覚化された。高い比放射能を有する単一のナノ粒子も，標準時間分解プレート蛍光光度計によって溶液中で検出された。
　
結論：　汎用のストレプトアビジン−被覆ユーロピウム（III）ナノ粒子ラベルは，溶液中あるいは固相上のいずれでも任意のビオチン付加された分子の検出に適している。
ユーロピウム（III）ナノ粒子ラベル化技術は，検出感度を改善するために，組織化学および細胞化学と同様に，免疫化学および多重アナライトＤＮＡチップ分析のような，現代の生化学分析の多くの領域に適用可能である。
　
（２ｂ）５６２頁左欄２６行〜５６３頁左欄１６行
「　　材料と方法
ナノ粒子
直径１０７，２１０，および４０８ｎｍ（１％の固体）のユーロピウム・キレート化合物（β−ジケトン）−組込みポリスチレンナノ粒子が，Ｓｅｒａｄｙｎ社から得られた。ナノ粒子は，共有結合生体コンジュゲーションのために表面上にカルボキシル基を含んでいた。
　単一のナノ粒子中のユーロピウム（III）イオンの数は，１ｍＬ／ＬのトリトンＸ−１００溶液あるいは増強溶液（ＤＥＬＦＩＡ；　パーキン・エルマー・ライフサイエンス）にナノ粒子を加えることにより決定された。Ｖｉｃｔｏｒ１４２０マルチラベルカウンターによって得られた信号は，増強溶液でのユーロピウム校正液と比較された。
　１ｍｌ／Ｌ　トリトンＸ−１００中のナノ粒子（３ｐｍｏｌ／Ｌ）の時間分解蛍光励起および放射スペクトル，および増強溶液中のユーロピウム・イオン（１ｎｍｏｌ／Ｌ）のスペクトルは，ＬＳ５分光蛍光光度計（パーキン・エルマー・インスツルメンツ）で測定された。
　
ストレプトアビジンでのナノ粒子のコーティング
ナノ粒子は，Ｎａｎｏｓｅｐマイクロ多孔性遠心フィルター（３００ｋＤａカットオフ；Ｐａｌｌ　Ｆｉｌｔｒｏｎ）上で，１０ｎｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液，ｐＨ７．０で予備洗浄された。リン酸緩衝液が粒子に加えられ，そして溶液は５分間，８０Ｗでチップソニケーター（Ｌａｂｓｏｎｉｃ　Ｕ；　Ｂ．Ｂｒａｕｎ）で超音波処理された。ナノ粒子の表面上のカルボキシル基は，１０ｎｍｏｌ／Ｌ　のＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミドとＮ−ヒドロキシスルホサクシイミド（Ｆｌｕｋａ）で３０分間活性化された。活性化された粒子は，１０ｎｍｏｌ／Ｌ炭酸塩バッファー，ｐＨ９．０で一度洗浄され，そして１５μｍｏｌ／Ｌのストレプトアビジンが加えられた。２時間インキュベーションした後，ストレプトアビジン被覆粒子は，２ｎｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ−ＨＣｌ溶液，ｐＨ７．０で５回洗浄されて，４℃で貯槽された。
　
溶液中のナノ粒子の検出限界
異なる寸法の粒子の検出限界が，Ｖｉｃｔｏｒ１４２０マルチラベルカウンター（パーキンエルマー・ライフサイエンス）で決定された。ナノ粒子は，１ｍＬ／ＬのトリトンＸ−１００溶液あるいは増強溶液中に希釈されて，ナノ粒子溶液の２００μＬアリコートが監視された。検出の下限は，粒子を含まない希釈液の信号（＋３ＳＤ）から計算された。
　
ＰＳＡイムノアッセイ
ＰＳＡ（１００μｇ；スウェーデン，Ｍａｌｍｏ（当審注：「Ｍａｌｍｏ」のｏの上には，〜が付されている。），ルンド大学病院，Ｈ．Ｌｉｌｊａ博士によって提供）は５００μＬの５０ｎｍｏｌ／Ｌ炭酸塩バッファー，ｐＨ９．８中の６０μｍｏｌ／Ｌ　ビオチンイソチオシアン酸塩（パーキン・エルマー・ライフサイエンス）で２．５時間ビオチン付加された。ビオチン付加されたＰＳＡは，ＮＡＰ−５およびＮＡＰ−１０カラム（トリス緩衝液で溶離された）上で結合されなかったビオチンから分離された。ＰＳＡアッセイは抗−ＰＳＡマイクロタイタープレート［モノクローナル抗体（ｍＡｂ）−Ｈ１１７；パーキン・エルマー・ライフサイエンス］上で実行された。２段階アッセイでは，ビオチン付加されたＰＳＡの５μＬが，３０μＬの市販アッセイ緩衝液（パーキン・エルマー・ライフサイエンス）中で最初に４０分間インキュベートされた。洗浄工程後に，２×１０８ストレプトアビジン被覆ナノ粒子が，４０μＬのウエルに加えられた（室温で４時間インキュベーション）。最終洗浄後，アナライトの量は，Ｖｉｃｔｏｒ１４２０蛍光光度計を用いて時間分解モードで，マイクロタイターウエルの表面上で直接検出された。アッセイの検出限界は，ゼロ校正液＋３ＳＤに対する信号に基づいて計算された。」
　
（２ｃ）５６４頁左欄下から４行〜５６５頁右欄５行）
「　　結果と議論
ナノ粒子
単一のナノ粒子中のユーロピウム（III）イオンの数は，１ｍＬ／ＬトリトンＸ−１００溶液あるいは増強溶液中の既知数の粒子の信号を，ユーロピウム（IIＩ）校正液（増強溶液中の）と比較することにより決定された。私たちは，１０７ｎｍの単一のナノ粒子中に３．１×１０４キレート化ユーロピウム（III）イオンを見つけた。それは使用される溶液：キレーティング増強溶液あるいは非増強トリトンＸ−１００溶液に依存しなかった。したがって，信号は，もっぱらナノ粒子から発し，溶液中の自由なユーロピウム（III）イオンからは発生しなかった。直径２１０と４０８ｎｍのより大きなナノ粒子の中のキレート化ユーロピウム（III）イオンの数は，それぞれ２．５×１０５と２×１０６であった。図１は，キレーティング配位子が両方の溶液で同じだったので，増強溶液中のユーロピウム（III）イオンあるいはトリトンＸ−１００の溶液中のナノ粒子の励起と放射のスペクトルに重要な違いが観察されなかったことを示す。励起スペクトルの遠紫外線領域の違いは，ナノ粒子のポリスチレン・ポリマーマトリクスの吸光度に帰することができる。測定されたスペクトルに加えて，減衰時間が，増強溶液中のユーロピウム（III）と同様に１ｍＬ／ＬトリトンＸ−１００溶液中の１０７ｎｍのナノ粒子について決定された。〜７２０μｓの減衰時間が両方の溶液について測定された。それは，２つのシステムでのユーロピウム（III）イオンの同定的同等サイト占有を示している。
　ランタニドキレートの信号は，急速に減衰する発蛍光団の信号より１０００倍低いと知られている。その理由は主として，放射光が一時的に分解されるので，放射された光の一部分しか集光されないからである。ナノ粒子の中のキレート化されたユーロピウム（III）イオン濃度は，〜８０ｍｍｏｌ／Ｌだった。急速に減衰する発蛍光団に適用された時，それは内部−フィルタ効果を引き起こすだろう（１１）。急速に減衰する発蛍光団がμモル濃度で自己−消光することは珍しくないことではない。しかしながら，ランタニドキレート化合物が使用される場合，そのような効果は高（ミリモル）濃度においてさえ見つかっていない。したがって，時間分解される放射に起因する信号ロスは，高濃度のランタニドキレート化合物を含んでいるナノ粒子の使用によって，有効に補償することができる。
　ナノ粒子の検出限界は，２００μｌの１ｍＬ／ＬトリトンＸ−１００溶液中で標準時間分解プレート蛍光光度計を用いて測定された。図２に示されるように，１つの単一４０８ｎｍのナノ粒子が溶液中で検出された。そして，２１０ｎｍと１０７ｎｍの粒子に対する検出限界は，それぞれ８と７５であった。」
　
（２ｄ）５６７頁左欄３行〜５６７頁右欄２５行
「ＰＳＡのイムノアッセイ
モデルＰＳＡアッセイは，ＰＳＡ−特異的ｍＡｂ［ｍＡｂ−Ｈ１１７（１２）］で覆われたマイクロプレート上で行なわれた。ビオチン付加されたＰＳＡは，第１アッセイ段階でインキュベートされ，次いでストレプトアビジン−被覆１０７ｎｍのナノ粒子と共に第２インキュベーションされた。ＰＳＡが直接的表面検出のためにプレートの底上で反応することを私たちが望んだので，アナライト反応容積は小さかった（３０μＬ）。このコンセプトでは，付加的な増強ステップは必要ではなかった。図５は，ＰＳＡアッセイの希釈曲線を示す。応答は３桁以上の強さで線形であった。検出下限は，ＰＳＡ分子の１０ｆｍｏｌ／Ｌあるいは６０ｚｅｐｔｏｍｏｌｅｓ（６０×１０−２１モル）に対応する，０．３８ｎｇ／Ｌであった。これは，マイクロタイタープレート−ベースＰＳＡアッセイで以前に報告された分子量より１０倍以上低い（５μＬサンプルに対して０．３８ｎｇ／Ｌ対５０μＬサンプルに対して１ｎｇ／Ｌ）（１３）。アナライトがビオチン付加されているので，本ＰＳＡアッセイセットアップは真のアッセイと考えることができない。
　真の非競合的サンドイッチＰＳＡアッセイを行なうために，私たちは第２ＰＳＡ−特異的　ｍＡｂ（ｍＡｂ−５Ａ１０）をビオチン付加した。この研究（１４）はここで示された研究の継続であった。検出限界は１．６ｎｇ／Ｌであった。この分析コンセプトは付加的なトレーサー分子，ビオチン付加したｍＡｂ−５Ａ１０によって発生された非特異性結合の増加に苦しんだが，検出限界は本アッセイのそれより著しく低くはない。アナライト濃度に対応する表面−結合ビオチン付加ｍＡｂとストレプトアビジン被覆ナノ粒子のインキュベーション時間は，短く，５分だった。私たちは，さらにサンドイッチ型アッセイフォーマットにおけるナノ粒子の動力学を理論的および実験的に研究し，そして可溶性の生体特異的結合反応物（Ｓｏｕｋｋａ　Ｔ，Ｈａｒｍａ　Ｈ，Ｐａｕｋｋｕｎｅｎ　Ｊ．，Ｌｏｖｇｒｅｎ　Ｔ．（当審注：「Ｈａｒｍａ」の２つのａの上には「・・」が付く。また，「Ｌｏｖｇｒｅｎ」のｏの上には「・・」が付く。）多価ナノ粒子−抗体バイオコンジュゲートに基づいたイムノアッセイは動的に増強された１価の結合親和力を利用する。出版用に提出）と比較した場合，ナノ粒子に対する，表面−結合された抗体，またはストレプトアビジンのような，他の生体特異的結合反応物の数を制限することが，増強された結合速度定数を生じることを見出した。
　図６に，ビオチン付加されたＰＳＡ希釈曲線（上述）について測定された同一のマイクロタイターウエルの画像が，１０倍対物レンズと４５ｓ露出時間を使用する時間分解蛍光光度計顕微鏡で撮影された。個別のナノ粒子の計算された数は，０．８ｎｇ／Ｌの検出加減を有する希釈曲線を作成する，予期されたものとしてのＰＳＡ濃度から得られた。それは，標準時間分解プレート蛍光光度計を用いて測定された結果とよく一致していた。この技術を使用すると，アッセイの粒子限界は非特的結合によって限定されるけれど，個別のＰＳＡ分子のイメージングが可能であり，単一の粒子が原則として検出される。
　検出下限において，３５０００ＰＳＡ分子が検出された。また，従って，顕微鏡のプローブ領域（×１０対物レンズ；１．３ｍｍ２）では，ＰＳＡ分子を表わす６５０のナノ粒子が見つけられたに違いない（３０μL容積用の評価領域は７０ｍｍ２だった）。しかしながら，顕微鏡画像で見つかったナノ粒子の数は，検出下限での評価量の＜５％であった。明らかに，ナノ粒子の大きなサイズは，表面上のすべてのＰＳＡ分子へのナノ粒子のアクセスを多少制限し，そして，ＰＳＡの第一級アミンを通じてのビオチンのランダム結合が，また立体障害的妨害を引き起こすようであった。さらに，見たところでは，非常に少量のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンの破片が溶液中に存在した。１つのアッセイ中のストレプトアビジン総数が約１０の１１乗のオーダーだった場合，いくらかの四量体ストレプトアビジン分子あるいはストレプトアビジン破片がナノ粒子表面から解離されたと想像することは難しくない。可溶性ストレプトアビジン分子は，ビオチン付加されたアナライトと急速にそして制限されたアクセシビリティなしに結合する。従来のアッセイにおいて，これらのアッセイの感度が非常に少量のアナライトを認識することができなかったので，ストレプトアビジンの解離は検出できなかったであろう。もしもＰＳＡ検出の低減された効率に影響を及ぼすこれらの因子がコントロールできるならば，検出下限において１０倍以上の改良に恐らく到達できるだろう。」
　
（２ｅ）５６７頁右欄下から１４行〜５６８頁左欄８行
「結論として，私たちは，ナノサイズ化されたユーロピウム（III）粒子に基づいた検出技術を導入してきた。ビオチン付加されたＰＳＡは，標準時間分解プレート蛍光光度計を使用するマイクロタイタープレート・フォーマットにおいて６０ｚｅｐｔｏｍｏｌｅｓの検出限界で検出された。また，個々のＰＳＡ分子は時間分解顕微鏡で視覚化された。明らかに，マイクロアレイとマイクロスポット技術は，細胞化学および組織化学のような画像技術と同様に，生化学分析，例えばｍＲＮＡ発現における微妙な変化の検出といった生物化学的分析におけるこれらの強い時間分解蛍光性ラベルの使用から利益を得ることができる。テルビウム（III），サマリウム（III），あるいはジスプロシウム（III）は，すべてよく知られ，キレート化配位子とともに溶液中で特徴づけら，ナノ粒子上でユーロピウム（III）の代わりに使用できるので，多重測定がまた，電流ラベリング技術を用いて行なうことができる。時間分解ラベリング技術が改善し，そいてこの数年にわたってよりよく知られているようになったので，検出技術は，さらに機器メーカー間のより多くの興味を獲得してきた。従って，現在のナノ粒子アプローチのような高感度の時間分解ラベリング技術が，任意の標準的実験室においても，容易に実施することができる。」
　
３．対比・判断
（１）刊行物１発明との対比
ア．刊行物１発明の「リリースパッド」，「クロマトグラフィー媒体」および「試験片」は，その構造及び機能からみて，それぞれ，補正発明の「リザーバ領域」，「ウイッキング膜」および「検体検出装置」に相当する。
　よって，刊行物１発明の「試料適用部位とリリースパッドとクロマトグラフィー媒体と吸収パッドをこの順序でそれぞれの重なりあって有する試験片」は，補正発明の「少なくとも１つのリザーバ領域および１つのウイッキング膜を備え」ているということができる。
　
イ．刊行物１発明の「被検出物質に特異的に結合する第１の物質」は，その機能からみて補正発明の「特異的結合パートナー」に相当する。また，刊行物１発明の「ユーロピウム錯体」は，ユーロピウムを含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートの一種であり，該ユーロピウム錯体を含む標識粒子が，リリースパッドに含浸されているものである。
　そうすると，刊行物１発明の「被検出物質に特異的に結合する第１の物質及びユーロピウム錯体を含む標識粒子がリリースパッドに含浸されて」いることと，補正発明の「特異的結合パートナー及び単一粒子中に３０，００００〜１，０００，０００個のユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレートを含む標識粒子が，前記リザーバ領域に含浸されて」いることとは，「特異的結合パートナー及びユーロピウムを含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートを含む標識粒子が，前記リザーバ領域に含浸されて」いる点で共通する。
　
ウ．刊行物１発明の「被検出物質に特異的に結合する第２の物質である抗体」は，補正発明の「生物学的成分」に相当する。
　そうすると，刊行物１発明の「クロマトグラフィー媒体には被検出物質に特異的に結合する第２の物質である抗体が固定されている」ことは，補正発明の「および少なくとも１つの化学成分又は生物学的成分が前記ウイッキング膜上に固定化されている」ことに相当する。
　
エ．本願明細書の段落【００４３】〜【００４５】に試験デバイスの説明が記載されており，試験デバイスに１又は２滴の試料を加えた後に，試験デバイスを横切って運ばれることが記載されており，段落【００４６】に「 例えば，側方流動アッセイの形式のクロマトグラフィーアッセイは，増幅システムである。液体試料中の標的抗原は，毛管力により膜を通って移動するとき，膜上に固定された高親和性抗体によって次第に濃縮される。」と記載されている。
　他方，刊行物１発明の「試料適用部位上に滴下して適用された液体試料を，一部重なったリリース部位及びクロマトグラフィー媒体まで試験片の長手方向へと展開させる試験片」は，試料を滴下し後に，長手方向，すなわち，側方に展開させるものであり，試料の流れの方向からみて，上記本願明細書に記載された側方流動アッセイの形式に属するものということができる。
　よって，刊行物１発明の「試料適用部位上に滴下して適用された液体試料を，一部重なったリリース部位及びクロマトグラフィー媒体まで試験片の長手方向へと展開させる試験片」は，補正発明の「側方流動アッセイ形式の試験片」に相当する。
　
　補正発明と刊行物１発明とを対比すると，両者は，次の点：
（一致点）
「　少なくとも１つのリザーバ領域および１つのウイッキング膜を備え，特異的結合パートナー及びユーロピウムを含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートを含む標識粒子が，前記リザーバ領域に含浸されており，および少なくとも１つの生物学的成分が前記ウイッキング膜上に固定化されている，側方流動アッセイ形式の検体検出装置。」
である点で一致し，次の点で相違する。
　
（相違点１）
　ユーロピウムが，補正発明においては「ユーロピウム（III）」，すなわち３価のユーロピウムであるのに対し，刊行物１発明ではユーロピウムが「ユーロピウム（III）」であるか不明な点。
　
（相違点２）
　標識粒子が，補正発明においては「単一粒子中に３０，００００〜１，０００，０００個のユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレートを含む標識粒子」であるのに対し，刊行物１発明は，標識粒子が何個のユーロピウムを含んでいるか不明な点。
　　
（２）相違点についての検討
（相違点１について）
　ユーロピウムは，２価の酸化数もとり得るものの，化合物においては３価の酸化状態が普通であるし，蛍光を発する物質の場合も３価の酸化状態のものが従来から普通に存在する。（刊行物Ａ：「化学大事典９」共立出版（株），１９９３年６月１日縮刷版第３４刷発行，「ユーロピウム」，「ユーロピウム化合物」の項）
　そして，ユーロピウムは，刊行物Ｂ：特開平４−１２２７８７号公報第１頁右下欄３行〜第２頁左上欄５行に，「希土類元素の発光を利用した，希土類元素キレートに代表される
希土類元素含有有機化合物発光物質に関しては
有機カルボン酸と希土類元素から成る発光物質などが提案されている
赤色の発光色を示す３価のユウロピウム
　一方，
青色の発光色を有する，２価のユウロピウム（以下，Ｅｕ（II）と記す）を利用した有機化合物発光物質に関しては，その例が少ない。
無機化合物中ではＥｕ（II）が安定に存在するが，これに対し，有機化合物中では，Ｅｕ（II）を安定な付活剤として固定することが困難な為と考えられる。
これは，実用上極めて不安定な発光物質と見なされる
　そうすると，有機物質であるユーロピウムキレートは，青色の発光色を有する２価，赤色の発光色を示す３価のものが双方とも存在するが，３価の方が一般的であることが分かる。
　そして，生化学分析の分野において蛍光標識としてユーロピウムを含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートとして，ユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートが普通に使用されていることが，下記刊行物Ｃ〜Ｅに記載されているように本願優先権主張日前から周知の技術的事項となっている。
刊行物Ｃ：２０００−２４９７０３号公報，特に請求項７，第３頁右欄〜第４頁右欄の段落【００１５】〜【００２２】，
刊行物Ｄ：特開２０００−３４５０５２号公報，特に請求項８，第７頁左欄１行〜右欄１４行の【化１２】，【化１３】を含む記載，第１１頁左欄の【００４６】〜【００４７】，第１３頁左欄の【００５６】，
刊行物Ｅ：特表２００２−５０６９７３号公報，特に第１３頁〜第１５頁の【０００４】〜【０００８】等参照）。
　以上のことを総合すると，刊行物１発明における「ユーロピウム錯体」，すなわち「ユーロピウムを含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレート」に，「ユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレート」が包含されていないと考える事情は技術常識からみて特に存在せず，刊行物１には「ユーロピウム（II）又は（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレート」が記載されているものと認められ，上記相違点１は，実質的には相違点ではない。
　
（相違点２について）
　イムノアッセイに使用される蛍光標識粒子としての「ユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートを含む標識粒子」に，単一粒子中に３１，０００個〜２，０００，０００個のユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートを含むものがあることは，本願明細書の一般背景および技術水準を示すものとして提示されている上記刊行物２にも記載されており，本願優先権主張日前に公知で入手可能なものであるし，この標識粒子を使用して検出感度を改善することが記載されている（前記記載（２ａ），（２ｃ），（２ｄ）参照）。
　
　上記刊行物２には，ユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートを含む標識粒子を，刊行物１の試験片のような側方流動アッセイ形式の検体検出装置において使用することは記載されていないが，記載事項（２ａ）に「ユーロピウム（III）ナノ粒子ラベル化技術は，検出感度を改善するために，組織化学および細胞化学と同様に，免疫化学および多重アナライトＤＮＡチップ分析のような，現代の生化学分析の多くの領域に適用可能である。」と様々なバイオ分野の検出に適用可能であることが示唆されている。そして，ユーロピウムを含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートを含む標識粒子を側方流動アッセイ形式の検体検出装置において使用することは，刊行物１に記載されている事項である（前記記載（１ｆ），（１ｈ）参照）から，刊行物１発明において使用する標識粒子として，刊行物２に教示されている単一粒子中のユーロピウム（III）の数の範囲内の，単一粒子中に３０，００００〜１，０００，０００個のユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレートを含む標識粒子を使用してみようとすることは，当業者が困難性なくなし得たことといえる。
　そして，刊行物２に記載のユーロピウム（III）の個数は，単一粒子中に３１，０００個〜２，０００，０００個であり，補正発明の「３０，００００〜１，０００，０００個」を包含するものである。本願発明の詳細な説明には，「３０，００００〜１，０００，０００個」とすることに臨界的意義を見いだすような記載はなく，また，本願優先権主張日前の技術常識を参酌しても臨界的意義を見いだせないから，補正発明において「３０，００００〜１，０００，０００個」としたことは，標識の使用形態や必要とされる検出感度等を考慮して，刊行物２に記載の個数の範囲から，適宜な個数の範囲を選んだものといえ，刊行物１発明に刊行物２に記載の技術的事項を適用する際に当業者が適宜決め得る単なる設計的事項にすぎない。
　
　そして，補正発明のそれによる検出感度の改善等の効果も，刊行物２の記載からみて検出感度の向上，改善を期待できる標識粒子であるから，当業者が予測し得る範囲内の事項である。
　
４．独立要件について
　したがって，補正発明は，上記刊行物１，２に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により，特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。
　
５．まとめ
　以上のとおりであるから，本件補正は，平成１８年改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するので，特許法第１５９条第１項の規定において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により，却下すべきものである。
　
III．本願発明について
１．本願発明
　平成２1年１１月３０日付けの手続補正は上記のとおり却下されたので，本願の請求項１ないし２０に係る発明は，平成２１年４月２６日付けの手続補正書で補正された特許請求の範囲の請求項１ないし２０に記載されたとおりのものと認められ，そして，その請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，次の事項により特定されるものである。
「【請求項１】
　少なくとも１つのリザーバ領域および１つのウイッキング膜を備え，特異的結合パートナー及びランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレートを含む標識粒子が，前記リザーバ領域に含浸されており，および少なくとも１つの化学成分又は生物学的成分が前記ウイッキング膜上に固定化されている，検体検出装置。」
　
２．引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用した刊行物１の記載事項は，前記II．２．（１）に記載したとおりである。
　
３．本願発明について
（１）本願発明と刊行物１発明との対比
　本願発明は，前記II．１．において検討した補正発明の（ｉ）「ランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレート」を，「単一粒子中に３０，００００〜１，０００，０００個のユーロピウム（III）を含むランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレート」と限定し，（ii）「検体検出装置」を，「側方流動アッセイ形式の検体検出装置」と限定する構成がないものである。
　
　本願発明と刊行物１発明とを対比すると，両者は，前記II．３．（１）において検討したように，刊行物１発明の「リリースパッド」，「クロマトグラフィー媒体」および「試験片」は，その構造及び機能からみて，それぞれ，本願発明の「リザーバ領域」，「ウイッキング膜」および「検体検出装置」に相当する。
　そして，刊行物１発明の「被検出物質に特異的に結合する第１の物質」は，補正発明の「特異的結合パートナー」に相当し，刊行物１発明の「被検出物質に特異的に結合する第２の物質である抗体」は「生物学的成分」である。
　また，ユーロピウム錯体は，ランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）キレートの一種であるから，補正発明と刊行物１発明とを対比すると，両者は，次の点：
（一致点）
「　少なくとも１つのリザーバ領域および１つのウイッキング膜を備え，特異的結合パートナー及びユーロピウムキレートを含む標識粒子が，前記リザーバ領域に含浸されており，および少なくとも１つの生物学的成分が前記ウイッキング膜上に固定化されている，検体検出装置。」
である点で一致し，次の点で一応相違する。
（相違点１）
　標識粒子におけるユーロピウムが，「ランタニド（ｌａｎｔｈａｎｉｄｅ）（III）キレート」を用いる本願発明においては「ユーロピウム（III）」，すなわち３価のユーロピウムであるのに対し，刊行物１発明ではユーロピウムが「ユーロピウム（III）」であることが記載されていない点。
　
（２）相違点１について検討
　上記相違点１について検討すると，補正発明の相違点１について前記II．３．（２）において検討したとおり，実質的には相違点ではないから，本願発明は，上記刊行物１に記載された発明である。
　
４．むすび
　以上のとおり，本願発明は，刊行物１に記載された発明であるから，特許法第２９条第１項第３号の規定により特許を受けることができない。
　したがって，他の請求項に係る発明について検討するまでもなく拒絶すべきものである。
　よって，結論のとおり審決する。