【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年3月28日(2011.3.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の選択的永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストを含有し、該アンタゴニストが一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する、哺乳動物における眼症状を処置するための医薬組成物であって、該アンタゴニストが、チオフェン−２−カルボン酸（４−フェニル−ブチル）−アミド、１−ベンジル−４−（５−フェニル−［１,３,４］オキサジアゾール−２−イル）−ピリジン、６−イソプロピル−３−メチル−２−｛４−［（４−プロポキシ−ベンジリデン）−アミノ］−ベンジリデン）−シクロヘキサノンおよび３−（２,２,２−トリフルオロアセチルアミノ）−安息香酸２−オキソ−２−フェニル−エチルエステルからなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項２】
前記眼症状が黄斑である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記黄斑が加齢性黄斑変性症である請求項２記載の組成物。
【請求項４】
前記眼症状が網膜変性である請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記眼症状が網膜損傷である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記眼症状が網膜腫瘍である請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記眼症状が視神経症である請求項１記載の組成物。
【請求項８】
前記眼ニューロパシーが緑内障である請求項７記載の組成物。
【請求項９】
前記眼症状が糖尿病性網膜症である請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
前記眼症状が虚血性網膜症である請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．１永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．２永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．３永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．５永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．６永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．７永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１７】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．８永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１８】
前記永続性ナトリウム電流がＮａv１．９永続性電流である請求項１記載の組成物。
【請求項１９】
前記動物がヒトである請求項１記載の組成物。
【請求項２０】
前記有効量が前記眼症状を少なくとも３０％減少させる、請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
前記有効量が前記眼症状を少なくとも５０％減少させる、請求項１記載の組成物。
【請求項２２】
前記有効量が前記眼症状を少なくとも７０％減少させる、請求項１記載の組成物。
【請求項２３】
前記有効量が前記眼症状を少なくとも９０％減少させる、請求項１記載の組成物。
【請求項２４】
前記アンタゴニストが、前記一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも５０倍の選択性を有する請求項１記載の組成物。
【請求項２５】
前記アンタゴニストが、前記一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２００倍の選択性を有する請求項１記載の組成物。
【請求項２６】
前記アンタゴニストが、前記一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも４００倍の選択性を有する請求項１記載の組成物。
【請求項２７】
前記アンタゴニストが、前記一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも６００倍の選択性を有する請求項１記載の組成物。
【請求項２８】
前記アンタゴニストが末梢血管投与または全身投与される請求項１記載の組成物。
【請求項２９】
前記アンタゴニストが徐放性製剤として投与される請求項１記載の組成物。
【請求項３０】
前記アンタゴニストが、生体内分解性デリバリーシステムまたは非生体内分解性デリバリーシステムで投与される請求項１記載の組成物。
【請求項３１】
前記アンタゴニストが経口投与される請求項１記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】神経学的疾患および疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流の選択的アンタゴニストの使用
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は一般に神経学、生理学、生化学および医学の分野に属し、疼痛の処置、特に、神経学的疾患を処置するための持続的ナトリウム電流を選択的に減少させる化合物の治療的使用および慢性疼痛を処置するための持続的ナトリウム電流を選択的に減少させる化合物の治療的使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
すべての細胞の脂質二重膜は、イオンや水の流動に対し不透過度の大きいバリアを形成している。イオンの流動の選択的経路を供するイオンチャネルと称するタンパク質のスーパーファミリーが膜内に存在している。イオンチャネルによって生じる厳密に制御された伝導性は、細胞内シグナル伝達と神経の興奮に必要である。特に、興奮性細胞の脱分極によって開口するイオンチャネルのグループは、電位依存性に分類され、神経、筋肉および心臓組織における電気的活動に関与している。神経においては、電位依存性ナトリウムチャネルを介して流動するイオン電流は、急速なスパイク様の活動電位に関与している。活動電位の間は、ナトリウムチャネルの大部分が非常に短い時間開口する。これらの短時間の開口の結果、永続性のナトリウム電流を生じる。しかし、電位依存性のナトリウムチャネルは、急速には閉じず、比較的長い時間開口したままとなる。したがって、これらのチャネルは持続性（susutained）あるいは永続性（persistent）のナトリウム電流を生じる。一過性のナトリウム電流と永続性のナトリウム電流との間のバランスは、正常な生理学的機能と神経系全体を介する電気的なシグナル伝達の維持に非常に重要である。
【０００３】
永続性のナトリウム電流の異常なレベルによって特徴付けられる状態では、神経がシグナルを不適切に放出する場合に正常な機能が破壊され、例えば、ニューロパシー；低酸素症および虚血；行動障害および認知症；および運動障害および神経変性疾患が挙げられる。例えば、てんかんによるニューロパシーの場合は、様々なタイプの遺伝性てんかんにあるように遺伝子の欠損による生得的に不安定な神経から、または低血糖等の代謝異常またはアルコールによって不安定になった神経から生じる短時間の電気的な「嵐」が起きていることがある。他の場合では、頭部の傷害または脳腫瘍によって引き起こされたてんかん患者のように、異常な放出が脳の局所的な領域から生じていることがある。例えば、脳虚血や心筋虚血のような虚血性傷害の場合では、神経から生じる長期的な電気的活動であり得、そこでは永続的なナトリウムチャネルの発現または活動が増大する。そのような異常な電気的活動は、人を衰弱させる傷害あるいは人の死につながり得る神経死を引き起こし、あるいはその原因となり得る。異常な電気的活動はまた、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症および多発性硬化症等が挙げられるがこれらに限定されない、神経変性障害の原因にもなり得る。
【０００４】
病的な疼痛には、侵害受容性疼痛と神経障害性疼痛が包含される。疼痛の各タイプは、損傷部位や正常な組織に隣接する部位での過感受性によって特徴付けられる。侵害受容性疼痛は、一般に、持続する期間は限られており、可能なオピオイド療法に十分応答するが、神経障害性疼痛は、例えば、切断後によくみられる幻想痛において明らかなように、起こった事象が治癒した後も長く持続し得る。神経障害性疼痛等の慢性疼痛症候群は、様々な原因によって引き起こされ、例えば、外傷性の損傷（例えば、圧縮損傷、脊髄損傷、手足の切断、炎症または外科的処置）；虚血性イベント（例えば卒中）;感染性イベント；毒物被爆（例えば薬物またはアルコール）;または炎症性疾患、新生物の腫瘍、後天性免疫不全症候群(AIDS)または代謝障害等の疾患が挙げられるがこれに限定されない。
【０００５】
現在、永続的なナトリウムチャネル電流の異常なレベルによって特徴付けられる多くの疾患のための処置は、十分でないかあるいは存在していない。例えば、Bergerら, Treatment of Neuropathic 疼痛, 米国特許第5688830号（１９９７年１１月１８日）；Marquessら, Sodium Channel Drugsおよび Uses,米国特許第6479498号（２００２年１１月１２日）；Choiら, Sodium Channel Modulators, 米国特許第6646012号（２００３年１１月１１日)；およびChinnら, Sodium Channel Modulators, 米国特許第6756400号（２００４年６月２９日）等の現在の治療は、永続的な電流を全身的に生じる一般的なナトリウムチャネル調節物質を包含する。そのようなものとして、入手可能なナトリウムチャネルブロック薬の実用性は、例えば麻痺や心不全等の潜在的に有害な副作用によってかなり限定される。
【０００６】
残念ながら、慢性神経障害性疼痛等の慢性疼痛は、一般に、利用可能なオピオイド療法や非ステロイド系抗炎症薬療法には耐性を示す。利用可能な慢性疼痛の薬物治療、例えば三環系抗鬱薬；抗けいれん／抗てんかん薬（カルバマゼピン、フェニトイン、ラモトリジン）；および局所麻酔薬／抗不整脈薬（リドカイン、メキシレチン、トカイニド、フレカイニド）等は、症状を一時的に軽減し、程度を変化させるに過ぎない。しかも、現在の治療には、重大な副作用があり、例えば、認知変化、鎮静作用、吐き気、嘔吐、めまい、運動失調、耳鳴り、麻酔薬の場合中毒等が挙げられる。さらに、神経障害性疼痛や他の慢性疼痛を患っている患者の多くは年配者であり、あるいは利用可能な鎮痛治療に伴う副作用（例えば、心臓毒性、肝不全および白血球減少症）に対する患者の許容度が制限されるような病状を有している。耐え難い副作用をもたらすことなく慢性疼痛を軽減することにおいて、現在の治療の不十分さは、慢性疼痛患者における鬱病と自殺の率が高いことに反映されている。
【０００７】
近年の証拠から、永続性ナトリウム電流の増大は慢性疼痛の基礎となっていると示唆されている。例えば、炎症性疼痛および神経障害性疼痛（例えば、Fernando Cervero & Jennifer M. A. Laird, Role of lon Channels in Mechanisms Controlling Gastrointestinal 疼痛 Pathways, 3 (6）cURR. OPIN. PHARMACOL. 608-612 (2003); Joel A. Blackら, Changes in the Expression of Tetrodotoxin-Sensitive ナトリウムチャネル Within Dorsal Root Ganglia Neurons in Inflammatory 疼痛, 108 (3) 疼痛 237-247 (2004) and  Li Yunruら, Role of Persistent Sodium and  Calcium Currents in Motoneuron Firing and  Spasticity in Chronic Spinal Rats, 91 (2) J.NEUROPHYSIOL. 767-783 (2004)を参照）。しかし、現時点では、異常なレベルのナトリウムチャネル電流により特徴付けられた慢性疼痛の処置は、例えば、Bergerら, Treatment of Neuropathic 疼痛, 米国特許第5688830（１９９７年１１月１８日）；Marquessら, Sodium Channel Drugsおよび Uses, 米国特許第6479498 (２００２年１１月１２日）；Choiら, Sodium Channel Modulators, 米国特許第6646012 (２００３年１１月１１日）；およびChinnら，Sodium Channel Modulators, 米国特許第6756400 (２００４年６月２９日)にあるように、持続性の電流を生じる通常のナトリウムチャネル調節物質を包含する。そのようなものとして、利用可能なナトリウムチャネルブロック薬の有用性は、麻痺や心停止等の潜在的に有害な副作用によって非常に制限される。
【０００８】
このように、例えば、ニューロパシー；低酸素症および虚血；行動障害および認知症；および運動障害および神経変性疾患；および疼痛等、永続性のナトリウム電流の異常慣れベルによって特徴付けられる状態を選択的に処置することができる治療方法のための化合物の新しい用途を同定し、永続性のナトリウム電流の傷害作用から脳を保護することが必要とされている。本発明はこれらの要求を満たし、関連する利点も提供するものである。
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、ヒトを含む哺乳動物における神経学的な疾患および慢性等得痛を処置するための化合物の使用を提供する。１つの態様では、本方法は、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を該哺乳動物へ投与することを包含する。さらなる態様では、本アンタゴニストは、持続性のナトリウム電流と比較して、永続性ナトリウム電流に対して少なくとも５０倍、少なくとも２００倍、少なくとも４００倍、少なくとも６００倍、少なくとも１０００倍の選択性の選択性を有する。本発明の方法によって、ヒトを含むがこれに限定されない様々な哺乳動物を処置することができる。
【００１０】
本発明は、永続性ナトリウム電流の異常なレベルによって特徴付けられる様々な状態を処置するための化合物の使用を提供する。ある特定の態様では、本方法は、アミロイドーシス、自己免疫疾患、麻痺、結合組織障害、てんかんが含まれるがこれに限定されないニュロパシー、およびアルコール依存症、癌、感染症、臓器障害およびビタミン欠乏症等のニューロパシーに伴う状態の処置に関する。さらに他の態様では、本方法は、例えば、脳虚血、心筋虚血、網膜虚血、糖尿病性虚血および体位性虚血等の低酸素症および虚血状態の処置に関する。さらに他の態様では、本方法は、行動障害、認知症、運動障害およびパーキンソン病, アルツハイマー病, ハンチントン病, 筋萎縮性側索硬化症および多発性硬化症が含まれるがこれに限定されない神経変成疾患の処置に関する。さらなる態様では、本方法は、糖尿病性網膜症の処置に関する。さらなる態様では、本方法は、細胞内酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態の処置に関する。さらなる態様では、本方法は、永続性ナトリウム電流の異常なレベルに伴う神経死を減少させるために提供する。他の特定の態様では、本方法は、神経障害性疼痛、炎症性疼痛等の関節痛、内臓痛、術後疼痛、癌または癌治療による疼痛、頭痛、過敏性腸症候群疼痛、線維筋痛、糖尿病性ニューロパシーにより生じる疼痛の処置に関する。
【００１１】
本発明の方法において、様々な選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストが有用である。一態様では、本発明の方法は、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することにより実施される。さらなる態様では、本アンタゴニストは、持続性のナトリウム電流と比較して、永続性ナトリウム電流に対して少なくとも５０倍、少なくとも２００倍、少なくとも４００倍、少なくとも６００倍、少なくとも１０００倍の選択性を有する。
【００１２】
本発明の方法において、様々な選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストが有用である。一態様では、本発明の方法は、持続性のナトリウム電流と比較してＮａv１．３永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的なＮａv１．３アンタゴニストの有効量を投与することにより実施される。さらなる態様では、本アンタゴニストは、持続性のナトリウム電流と比較して、Ｎａv１．３永続性ナトリウム電流に対して少なくとも５０倍、少なくとも２００倍、少なくとも４００倍、少なくとも６００倍、少なくとも１０００倍の選択性を有する。
【００１３】
さらなる態様において、本発明の方法は、選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの開示された構造のクラスに属するいずれかの選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することを包含する。そのような選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストは、
式１：
【化１】
2007504165.tif 000001
［式中、
Ａｒ1は、アリール基であり；
Ａｒ2は、アリール基であり；
Ｙは、不在または
【化２】
2007504165.tif 000002
から選択され；
Ｒ1は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルであり；
Ｒ2およびＲ3は、独立に、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、アリールアルキル、ヒドロキシ、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8炭素環およびＣ1−Ｃ8複素環から選択され；
Ｒ4は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ5およびＲ6は、水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；および
ｎは１〜６の整数である］；
式２：
【化３】
2007504165.tif 000003
［式中、
Ａｒ3はアリール基であり；
Ａｒ4はアリール基であり；
Ｘ1およびＹ1は独立に
【化４】
2007504165.tif 000004
から選択され；
Ｒ5およびＲ6は、独立に水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ8およびＲ9は、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、アリールアルキル、ＣＯＲ12、およびＣＯＣＦ3から選択され；
Ｒ10およびＲ11は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；および
Ｒ12は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択される］；
式３：
【化５】
2007504165.tif 000005
［式中、
Ａｒ5はアリール基であり；
Ａｒ6はアリール基であり；
Ｘ2はＯ、Ｓ、またはＮＲ14であり：
Ｙ2はＮ、ＣＲ15であり；
Ｚ2はＮ、ＣＲ16であり；
Ｒ5およびＲ6は水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ13はハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリールアルキル、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2から選択され；
Ｒ14は水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＣＦ3、ＯＣＨ3、ＮＯ2、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2から選択され；
Ｒ15は水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＣＦ3、ＯＣＨ3、ＮＯ2、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2から選択され；
Ｒ16は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＣＦ3、ＯＣＨ3、ＮＯ2、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2（ｃは０または１〜５の整数）から選択される］；および
式４
【化６】
2007504165.tif 000006
［式中、
ＡＲ7はアリール基であり；
Ｒは、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＮＲ22Ｒ23、およびＯＲ22から選択され；
Ｒ5およびＲ6は、水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ17およびＲ18は独立に、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ19およびＲ20は独立に、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ヒドロキシ、アミノ、およびＣＦ3から選択され；
Ｒ21、Ｒ22、およびＲ23は独立に水素、アリールおよびＣ1−Ｃ8アルキルから選択され；
ａは０または１〜５の整数であり；および
ｍ０または１〜３の整数である］
から選択される式によって示される化合物であるがこれに限定されない。
【００１４】
上記式のいずれかに対応する化合物は、製薬的に許容し得る塩、エステル、アミド、または幾何異性体、立体異性体またはラセミ混合物であってよい。
【００１５】
様々な投与経路のいずれも本発明の方法に従う薬物による疼痛の処置に有用である。具体的な態様では、投与は、末梢投与、全身投与または経口投与で行う。
【００１６】
（発明の詳細な記載）
Ｉ．電位依存性ナトリウムチャネル
神経系の正常な機能においては、ニューロンは刺激を受容することが可能であり、応答して、突起 (軸索)に沿ってそれらのニューロン細胞体 (体細胞)から離れて電気的シグナルを伝搬することが可能である。軸索からシナプス終末へシグナルが伝達され、そこでそのシグナルが、隣接するニューロンまたは他の細胞へと移動する。電位感受性ナトリウムチャネルは、軸索に沿った電気的シグナルの伝搬を媒介するので、神経系の機能において重要な役割を有している。
【００１７】
電位依存性ナトリウムチャネルは、少なくとも９個のαサブユニットと３個のβサブユニットをコードする大きな遺伝子ファミリーに属する。このファミリーに属するものはすべて、細胞膜を介してＮa+イオンを伝導するが、組織における局在、調節において異なっており、少なくとも活性化および不活性かの動力学において部分的に異なっている。例えば、本明細書の一部を構成する、William A. Catterall, From lonic Currents to Molecular Mechanism : The Structure and Function of Voltage-gated Sodium Channels, 26 (1) NEURON 13-25 (2000);および Sanja D. Novakovicら, Regulation ofＮa+Channel Distribution in the Nervous System, 24 (8) TRENDS NEUROSCI. 473-478 (2001)を参照。
【００１８】
一般的に、休止状態では、ナトリウムチャネルは、刺激が細胞を閾値レベルまで脱分極するまで閉じている。この閾値レベルで、ナトリウムチャネルが開口し始め、急速に活動電位が上昇する。通常、活動電位にある間は、ナトリウムチャネルは短時間（１ミリ秒）開口した後、興奮性細胞が休止電位に戻り、ナトリウムチャネルが再度休止状態に入るまで、閉口（不活化）する。
【００１９】
以下にとらわれることを意図するものではないが、電位依存性ナトリウムチャネルのこの振る舞いは以下のように理解することができる。ナトリウムチャネルは主に３つのコンフォメーションあるいは状態をとることができる。休止即ち「閉口」状態は、負の膜電位 (5-60 mV)では支配的である。脱分極が始まると、チャネルが開口し、電流が流れる。脱分極から１ミリ秒以内に休止状態から開口状態への遷移が起こり、膜電位が正になる。最後に、持続的な脱分極の間（＞１〜２ms）に、チャネルが第２の閉口または不活化状態に入る。その後、チャネルが再び開口するには、膜電位が負の値に戻ったとき(再分極)に起きる不活化状態から休止状態へのチャネルの再生が必要である。したがって、膜の脱分極によりナトリウムチャネルが開口するだけでなく、持続的な脱分極の間にナトリウムチャネルの閉口も引き起こす。
【００２０】
ナトリウムチャネルの機能が小さいと持続的な脱分極によっても不活化されなくなる。この不活化されないナトリウム電流は「永続性」ナトリウム電流と呼ばれる。４つのナトリウムチャネル、Ｎａv１．３,Nav1. 5,Nav1. 6およびNav1. 9は、永続性ナトリウム電流を生じることが歴史的に知られている。しかし、近年の証拠では、すべての電位依存性ナトリウムチャネルが永続性ナトリウム電流を生じることが可能であると示唆している。例えば、本明細書の一部を構成する、Abraha Taddese & Bruce P. Bean, Subthreshold Sodium Current from Rapidly Inactivating Sodium Channel Drives Spontaneous Firing ofTubermammillary Neurons, 33 (4) NEURON 587-600 (2002); Michael Tri H. Do & Bruce P. Bean, Subthreshold Sodium Currents and Pacemaking of Subthalamic Neurons : Modulation by Slow Inactivation, 39(1) NEURON 109-120 (2003)を参照。永続性ナトリウム電流を生じるメカニズムは十分に理解されていない。２つの仮説、（１）異なるナトリウムチャネルが一過性および永続性ナトリウム電流を生じる、という仮説と、（２）一過性ナトリウム電流を生じることが可能なナトリウムチャネルが、異なるゲートモードに入り、永続性ナトリウム電流を生じる、という仮説が存在する。永続性ナトリウムチャネルは、通常のナトリウムチャネルと比較してより負の電位で開口し、より正の電位で不活化し得る。例えば、Jacopo Magistretti & Angel Alonso, Biophysical Properties and Slow-voltage Dependent Inactivation of a Sustained Sodium Current in Entorhinal Cortex Layer-11 Principal Neurons : A Whole-Cell and Single-Channel Study 114 (4) J. GEN. PHYSIO. 491-509 (1999)を参照。永続性ナトリウム電流は、−８０ｍＶ程度の負の電位で観察され（例えば、Peter K. Stys, Anoxic and Ischemic Injury of Myelinated Axons in CNS White Matter：From Mechanistic Concepts to Therapeutics, 18(1) J. CEREB. BLOOD FLOW METAB. 2-25 (1998)を参照）、０ｍＶという正の電位で脱分極後数秒間持続することが示されている。例えば、Magistretti & Alonso,前掲, (1999)を参照。このように、永続性ナトリウム電流は一過性のナトリウム電流とは別のものであり、容易に区別することができる。
【００２１】
永続性ナトリウム電流の生理学的な役割は完全には分かっていないが、そのような電流は周期的な振動の発生、シナプス入力の統合、ニューロンの発火パターンの調節およびニューロンの興奮性および発火頻度の調節において機能し得る。例えば、Wayne E. Crill, persistent sodium current in Mammalian Central Neurons 58 ANNU. REV. PHYSIO. 349-362 (1996);および David S. Ragsdale & Massimo Avoli, Sodium channel as Molecular Targets for Antiepileptic Drugs, 26(1) BRAIN RES.BRAIN RES. REV. 16-28 (1998)を参照。異常な永続性ナトリウム電流は、多くの病理学的状態の発生と進行の一因となり得る。例えば、永続性ナトリウム電流は、有害な現象を誘発すると考えられている。例えば、ニューロパシー、心不整脈、てんかん性発作、神経変性および低酸素症および虚血状態下の神経細胞死を包含するがこれに限定されない。例えば、Christoph Lossinら, Molecular Basis of an Inherited てんかん 34 (6) NEURON 877-84 (2002); Peter K. Stys ら, lonic Mechanismsof Anoxic Injury in Mammalian CNS White Matter : Role ofＮa+Channels and Na (+)-Ｃａ+ Exchanger, 12 (2) J. NEUROSCI. 430-439 (1992); Peter K. Stys ら, Noninactivating, Tetrodotoxin-SensitiveＮa+Conductance in Rat 視神経 Axons, 90 (15) PROC. NATL. ACAD. Sci. USA, 6976-6980 (1993);および Giti Garthwaite ら, Mechanisms of Ischaemic損傷 to Central White Matter Axons : A Quantitative Histological Analysis Using Rat 視神経, 94 (4) NEUROSCIENCE 1219-1230 (1999)を参照。このように、異常な永続性ナトリウム電流は、正常な細胞の膜を介するナトリウム勾配の崩壊によって病理学的状態の発生または進行の一因となり得、ナトリウム−カルシウム交換機構が逆に作動し、軸索を損傷する細胞内カルシウムの流動をもたらすことにつながる。例えば、Stys ら, 前掲 (1992)参照。本明細書に開示されているように、異常な永続性ナトリウム電流に伴う疼痛状態は、永続性ナトリウム電流を選択的に阻害または減少させることにより、正常なナトリウム電流機能を損なうことなく処置しうる。
【００２２】
永続性電流の異常な活性は多様な神経学的疾患の基礎となり得るが、基礎にあるメカニズムは同様であると考えられる。異常に増大した永続性ナトリウム電流は、休止膜電位を脱分極するかまたは活動電位の状態での再分極の率を減少させると一般的に理解されている。いずれの作用も、異常なニューロンの挙動が現れる過剰な興奮状態をもたらし得る。この異常なニューロンの挙動により、ニューロンの発火率増大、シナプス入力に対する感受性の増大または異常な反復的または周期的発火パターンをもたらし得る。また、異常に高いレベルの永続性電流は、持続した膜脱分極と同時に細胞内のＮa+の増加を生じると一般に理解されている。この高いレベルのＮa+の流動によって、ナトリウム／カルシウム交換機構が作動し、影響を受けた細胞内で有害なレベルのＣａ2+が蓄積する。異常に高いレベルのＣａ2+は神経細胞の機能不全および神経細胞死をもたらす。このように、神経細胞の膜を介するナトリウムの勾配が崩壊することにより、永続性電流によるナトリウム−カルシウム交換機構の作動の逆転が起こり、生じた細胞内のカルシウムの流動は神経に対して損傷または死をもたらし得る。本明細書に開示するように、異常な永続性ナトリウム電流に伴う状態は、永続性ナトリウム電流を選択的に阻害するか減少させることにより、正常な一過性のナトリウム電流機能を損なうことなく処置することができ、それにより、ニューロンの正常な機能（興奮性）が可能になる。
【００２３】
ＩＩ．神経学的障害および永続性ナトリウム電流
本発明の方法は、哺乳動物における異常なレベルの永続性ナトリウム電流を減少させるまたは除去するために用いることができ、例えば異常なレベルの永続性ナトリウム電流が関わる様々な神経学的状態のいずれかを処置するために用いることができる。永続的なニューロンの発火を伴う神経の機能不全や神経の死を含む神経の攪乱は、当然、中枢神経系および末梢神経系の様々な障害の一因となり得る。したがって、病的でない持続性ナトリウム電流において同様の減少をもたらすことなく、永続性ナトリウム電流を減少させる化合物は、現在用いられている非選択的なナトリウム電流遮断物質が伴う有害な副作用なしに、そのような状態を有効に処置することができる。すべてのナトリウムチャネルは永続性ナトリウム電流を生じることが可能であると考えられ、いずれの状態もその根底にある原因には永続性ナトリウム電流が含まれるので、永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストを用いて非常に広い範囲の神経学的な異常を処置することができる。本発明の方法にしたがって処置することができる状態として、例えば、てんかん、麻痺、結合組織障害およびニューロパシーに関連する状態（アルコール依存症、癌、感染症、臓器障害およびビタミン欠乏症）；低酸素症および虚血（例えば、脳低酸素症／虚血、心筋低酸素症／虚血、心筋虚血、糖尿病性虚血および低酸素症／虚血性網膜症）；および行動障害、認知症、運動障害および神経変性状態（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症および多発性硬化症等）が挙げられるがこれに限定されない。
【００２４】
持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの同定に基づいて、本発明は、永続性ナトリウムチャネルと選択的に拮抗することを包含する治療方法を提供する。ある特定の状態は、相当な副作用にもかかわらず非選択的なナトリウム電流遮断物質で処置されてきたが、本発明の方法は、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を哺乳動物に投与することを包含する。
【００２５】
永続性ナトリウム電流の異常なレベルを阻止または減少させることによって、望ましくない永続性ニューロン発火に関連する様々な状態の進行を止めるかまたは遅らせることができ、病態生理学または症状における改善がみられる。本明細書に用いられる「望ましくないニューロン発火に関連する状態」なる用語は、永続性の膜ナトリウム伝導が、疾病または障害によって生じた機能的変化を引き起こしているまたはその一因となっているような障害を意味する。そのような機能的変化、即ち病態生理学は、神経の損傷（神経死を含む）；望ましくない永続性ニューロン発火；またはその両方を包含する。本明細書において用いられる「減少」なる語は、神経死を参照して用いる場合、望ましくない永続性ニューロン発火または永続性ナトリウム電流の異常なレベルを予防すること、減少させることまたは除去することを意味する。選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストを投与することにより、永続性ナトリウム電流の異常なレベルを減少させることは、神経の機能不全または神経の死が関与する状態を処置するための、例えば永続性ナトリウム電流の異常なレベルまたは細胞内酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態を処置するための有効な方法である。
【００２６】
ＩＩＩ．選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストを用いるニューロパシーの処置
本発明は、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することによりニューロパシーを処置する方法を提供する。ナトリウム電流の異常なレベルは、神経の機能不全または神経の死につながる様々な神経障害性の状態に関連する。本明細書に用いられる「神経障害性の状態」なる語は、神経の損傷をもたらす任意の状態を意味し、例えば、運動神経損傷、感覚神経損傷、自律神経損傷が挙げられる。神経障害性の状態としては、中枢神経系または末梢神経系の異種の状態のグループが挙げられ、頭痛, 疼痛, 炎症性疾患, 運動障害, 腫瘍, 分娩外傷, 発達異常, 神経皮膚障害, 自律神経障害,および 発作性疾患が挙げられるがこれに限定されない。そのようなものとして、神経障害性の状態は、広い範囲の異なる病因（例えば、遺伝的なまたは特発的な、中毒または代謝過程の二次的な）を有し、傷害、外傷、疾病または感染からもたらされ得る。そのような状態は、脳の比較的限定された領域または神経の特定の集まりの異常によって特徴付けられる。種々の神経障害性の状態で影響を受けた特定の細胞集団は、典型的に臨床的な表現型を決定する。
【００２７】
ニューロパシーの例としては、アミロイドーシス；自己免疫障害（例えば、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、Ｉ型糖尿病、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病）；神経に対する外傷または損傷に伴う麻痺のような運動障害（脳麻痺、ベル麻痺、減圧麻痺、錐体外路脳麻痺、鉛麻痺、ラムゼイ・ハント症候群、産科麻痺（Ｅｒｂ麻痺およびＫｌｕｍｐｋｅ麻痺等）、後筋麻痺、シュライブナー麻痺、遅発性正中神経麻痺、遅発性尺骨神経麻痺、および進行性核上麻痺痺；関節炎／結合組織障害（例えば、変形性関節症、慢性関節リウマチ、若年性関節炎、痛風性関節炎；脊椎関節症、強皮症、線維筋痛、骨粗鬆症、雑音過敏、多重化学物質過敏および喘息；ニューロパシーに関連する状態（アルコール依存症、癌、感染症、臓器障害およびビタミン欠乏症；およびてんかん、発作および発作性の状態）が挙げられるが、これに限定されない。当業者は、これらのおよび他の、軽度の、中程度のまたは重度の神経障害性の状態は本発明の方法にしたがって処置し得ると理解する。
【００２８】
非限定的な例として、てんかんは、異常なレベルの永続性ナトリウム電流によって特徴付けることができる状態である。てんかんおよび他の発作性疾患は、中枢神経系の神経の機能不全障害のグループであり、一般に突然の発作、筋肉の収縮および部分的または全体的な意識喪失によって特徴付けられる。てんかんは、少なくとも２回のいわれのない発作によって特徴付けられる。発作は、皮質神経の異常な過度の周期的放電の発現である。発作の臨床的な兆候または症状は、放電している皮質神経の場所と範囲に依存する。脳の主要な機能は、電気的刺激の伝達であるので、そのような発作は、神経学的な傷害の一般的な非特異的な発現であり、疾病は特別なものではない。一生のうち、少なくとも１回のてんかん性発作を経験する可能性のある思われる人は約９％であり、一生のうちてんかんを持っている診断される可能性のある人はおおよそ３％である。しかし、活性なてんかん（Active Epilepsy）の有病率は０．８％に過ぎない。
【００２９】
てんかんは、２つの主要なカテゴリーに分けることができる。部分的に発生する発作は、脳皮質の１つの領域に集中して開始されるが、全体的に発生する発作は、脳の量半球で同時に発生が記録される。いずれかのクラスに当てはめにくい発作もあり、それらは未分類の発作として考えられる。部分的に発生する発作としては、例えば、単純な部分的発作、複合的な部分的発作および二次性全身性強直・間代発作が挙げられる。全身性部分的発作としては、例えば、欠神発作、硬直性発作、間代性発作, ミオクローヌス発作, 原発性全身硬直・間代性発作および硬直性発作が挙げられる。同様に、てんかん性症候群は、局在関連症候群と全身的発生症候群の２つの主要なグループに分類することができる。
【００３０】
活動電位の開始および伝達において重要な役割を担っている電位依存性ナトリウムチャネルは、てんかんの病因に関わっており、Nav1.1Nav1.2,Ｎａv１．３,Nav1. 5,およびNav1. 6が含まれると考えられている。例えば、本明細書の一部を構成するRudiger Kohling, Voltage-gated Sodium Channels in Epilepsy, 43(11) Epilepsia 1278-1295 (2002); Michael M. Segal Sodium Channel and Epilepsy Electrophysiology, 241 NOVARTIS FOUND. SYMP. 173-180 (2002)を参照。てんかんの遺伝的な形質を持っている人を調べることで、その人がNav1.1またはNav1.2に害となる突然変異を持っているかが判明する。例えば、Lossinら、前掲、(2002); Miriam H. Meislerら、 Mutations of Voltage-gated Sodium Channels in Movement Disorders and Epilepsy, 241 NOVARTIS FOUND. SYMP. 72-81 (2002); J. Spampanato ら、Generalized Epilepsy with Febrile Seizures Plus Type 2 Mutation W1204R Alters Voltage-Dependent Gating of Na (V) 1.1 Sodium Channels, 116 (1) NEUROSCIENCE 37-48(2003); Paolo Bonanni ら、Generalized Epilepsy with Febrile Seizures Plus(GEFS+) : Clinical Spectrum in Seven Italian Families Unrelated to SCN1A,SCN1B, and GABRG2 Gene Mutations, 45 (2) EPILEPSIA 149-158 (2004); Berten P. G. M. Ceulemans ら、Clinical Correlations Of Mutations in the SCN1A Gene : from Febrile Seizures to Severe Myoclonic Epilepsy in Infancy, 30 (4) PEDIATR. NEUROL. 236-243 (2004); Goryu Fukuma ら、Mutations of Neuronal Voltage-gatedＮa+Channel Alpha 1 Subunit Gene SCN1A in Core Severe Myoclonic Epilepsy in Infancy (SMEI)および in Borderline SMEI (SMEB), 45 (2) EPILEPSIA 140-148 (2004);および Kazusaku Kamiya ら、A Nonsense Mutation of the Sodium Channel Gene SCN2A in a Patient with Intractable Epilepsy and Mental Decline, 24(11) J. NEUROSCI. 2690-2698 (2004)を参照。さらに、てんかんは、異常なレベルの永続性ナトリウム電流をもたらす脳内の異常な神経の放電によって引き起こされると考えられる。例えば、本明細書の一部を構成するNewton Agrawalら、 Increased Persistent Sodium Currents in Rat Entorhinal Cortex Layer V Neurons in a Post-Status Epilepticus Model of Temporal Lobe Epilepsy, 44 (12) EPILEPSIA1601-1604 (2003);および MartinVreugdenhil ら、Persistent Sodium Currents in Subicular Neurons Isolated from Patients with Temporal Lobe Epilepsy, 19(10) EUR. J.NEUROSCI. 2769-2778 (2004)を参照。Nav1.1およびNav1. 6は両方とも永続性電流を発生することが可能であると考えられている。例えば、本明細書の一部を構成するJoshua P. Klein ら、Dysregulation of Sodium Channel Expression in Cortical Neurons in a Rodent Model of Absence Epilepsy, 1000(1-2) BRAIN RES. 102-109 (2004)を参照。てんかんにおける永続性ナトリウム電流の役割を鑑みれば、選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストは、非選択的なナトリウム電流遮断物質に関連する有害な副作用なしに、てんかんを処置するために有用に使用し得る。
【００３１】
ＩＶ．選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストを用いる低酸素症および虚血の処置
本発明はさらに、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することによる低酸素症または虚血の処置方法を提供する。低酸素症または虚血によって引き起こされた変化の結果として起きる神経の損傷または死は、永続性ナトリウム電流の増大と関連していると考えられている。例えば、本明細書の一部を構成するAnna K. M. Hammarstroem & Peter W. Gage, Hypoxia and Persistent Current, 31 () EUR. BIOPHYS. J. 323-330 (2002)を参照。本明細書において用いられる"低酸素症"は、その間の組織への酸素の供給が減少するか無くなる事象を意味する。低酸素症としては例えば、脳低酸素症, 拡散性低酸素症, 低酸素性低酸素症、細胞低酸素症、虚血性低酸素症、または他のいずれかの偶発的なまたは意図的な組織への酸素供給の減少もしくは消失が挙げられる。本明細書において用いられる「虚血」なる語は、その間の組織への血液供給が減少または完全に妨害される事象を意味する。虚血には、例えば、脳虚血、心筋虚血, 心筋虚血, 糖尿病性虚血, 網膜虚血, 体位性虚血、または他のいずれかの偶発的または意図的な組織への血液供給の減少または完全な妨害が含まれる。血液の組織へのそのような減少または完全な妨害が必然的にその組織への酸素供給の減少または喪失を必然的に意味することは、虚血と低酸素症が一般的に関連している。当業者は、これらのおよび他の、軽度、中程度または重度の低酸素症および虚血状態が本発明の方法にしたがって処置できるということを理解する。
【００３２】
非限定的な例として、脳虚血は、脳に酸素と栄養分を運ぶ血管が血餅または他の物質によって破裂または閉塞すると起きる。この破裂または閉鎖のために、脳の部分の正常な血流とその血流が含む酸素の供給が止まる。酸素が存在しない状態で、影響を受けた脳の領域の神経細胞に有害な変化と死がもたらされる。この神経細胞死は、これら神経細胞によって正常に制御される身体の部分の制御が失われる卒中につながることがある。損傷した神経細胞は修復されないので、卒中のこの破壊的な影響は永久的なものになることが多い。
【００３３】
脳低酸素症または虚血は、CNS外科手術、心臓切開手術またはその間心臓血管系の機能を犠牲にする任意の手術脳への血流の減少をもたらす外傷；脳への血行の減少を引き起こす疾病（慢性硬膜下血腫、海綿状血管腫、動静脈奇形、血管性認知症、頸動脈またはウィリス輪高血圧性脳症、多発性塞栓性梗塞、高血圧性脳症および脳出血等の脳血管疾患を含む）；神経への血流が減少する頭蓋膨潤を引き起こし得る感染症（髄膜炎、ライム脳症、ヘルペス脳炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、脳トキソプラズマ症等）；頭蓋骨損傷等の傷害および神経への血流の減少を引き起こす外傷性脳損傷；および結合組織の過剰増殖に関連する疾病を含む、神経への血流の減少を引き起こす増殖症（種々の線維症、血管増殖障害および良性腫瘍等）の結果起きることがあるがこれに限定されない。中枢神経系の増殖障害には、例えば、小脳星細胞腫および髄芽腫, 上衣腫, 神経膠腫, 胚細胞腫および転移性腺癌、転移性気管支癌, 髄膜腫, 肉腫および 神経芽細胞腫が含まれる。
【００３４】
テトロトキシン (TTX)やリドカイン等のナトリウムチャネル阻害物質と細胞外 Na+イオンは神経を低酸素症および虚血性損傷から保護し、電位依存性ナトリウムチャネル活性が神経における酸素レベルおよび細胞損傷の検出における初期のおよび重要な工程であることを示唆している。その後、これらの酸素を検出するチャネルが永続性電流を発生すること、低酸素／虚血状態がＮa+の異常に高い取込をもたらすこれらの永続性電流チャネルの活性を増大させることが示された。例えば、本明細書の一部を構成するAnna H. K. Hammarstroem & Peter W. Gage、Oxygen-sensing Persistent Sodium Channel in Rat Hippocampus, 529 (1) J. PHYSIO. 107-118 (2000)を参照。Ｎa+の流動によってナトリウム／カリウム交換機構が作動し、有害なレベルのＣａ+が影響を受けた細胞内に蓄積し、細胞死をもたらす。例えば、本明細書の一部を構成するPeter Lipton, Ischemic Cell Death in Brain Neurons, 79 (4) PHYSIO. REV. 1431-1568 (1999)を参照。したがって、選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの適用は、非選択的なナトリウム電流遮断物質に関連する有害な副作用なしに、脳低酸素症または虚血に対する神経保護物質として供することができる。
【００３５】
さらなる非限定的な例として、心筋虚血は、心臓の筋肉組織への不十分な血流によって引き起こされた心臓機能の障害である。血流の減少は、冠動脈が狭くなること（冠動脈硬化）、血栓による妨害（冠状動脈血栓症）、またはそれほど多くはないがびまん性の細動脈および心臓内の他の毛細血管の狭窄に起因し得る。心筋組織への血液供給の深刻な妨害は、同時に酸素の妨害を伴い心筋の壊死につながる(心筋梗塞)。
【００３６】
心臓の低酸素症または虚血後に顕著になる異常なレベルの永続性ナトリウム電流は、心臓発作の引き金となる不整脈に関連する。例えば、Hammarstrm & Gage, 前掲、(2002)参照。例えば、プルキンエ線維や心室筋細胞等の心臓の細胞は、永続性ナトリウム電流を発生する。酸素不在下での心室筋細胞の試験は、低酸素状態の間に永続性ナトリウム電流が増大し、この異常な電流は早期後脱分極、不整脈および心不全の引き金となることを示している。例えば、本明細書の一部を構成する、Y. K. Ju ら、Hypoxia Increases Persistent Sodium Current in Rat Ventricular Myocytes, 497 (2) J. PHYSIO. 337-347 (1996)を参照。さらに、電位依存性ナトリウムチャネル阻害物質であるテトロトキシン (TTX)の適用により、ヒトの心室筋細胞における永続性電流の活動電位持続時間が減少し、同様に心不全患者から単離された心筋細胞における早期後脱分極を阻止した。例えば、本明細書の一部を構成するVictor A. Maltsev ら、Novel, Ultraslow Inactivating Sodium Current in Human Ventricular Cardiomyocytes, 98 (23）Circulation 2545-2552(1998)を参照。
【００３７】
いくつかの電位依存性ナトリウムチャネルは、心臓の特定の領域に局在しており、別の活動を制御していると考えられている。永続性ナトリウムチャネルNav1. 5は、介在版／房室結節にみられ、主に細胞から細胞への活動電位の発生と伝搬に関与していると考えられている。一方、Ｎａv1.1およびＮａv１．３は、横行管/洞房結節において永続性電流を発生し、細胞表面から内部への活動電位の調和と同期において機能すると考えられている。例えば、本明細書の一部を構成するSebastian K. G. Maierら、 An Unexpected Requirement for Brain-Type Sodium Channel for Control of Heart Rate in the Mouse Sinoatrial Node, 100 (6) PROC. NATL. ACAD.Scl. U. S. A. 3507-3512 (2003);および Sebastian K. G. Maier ら、Distinct Subcellular Localization of Different Sodium Channel Alpha and BetaSubunits in Single Ventricular Myoocytes from Mouse Heart, 109(11）Circulation 1421-1427 (2004)を参照。さらに、チャネル活性化を促進するNav1.5におけるミスセンス変異は、心不整脈を有すると診断された人と関連する。例えば、本明細書の一部を構成するIgor Splawski ら、Variant of SCN5A Sodium Channel Implicated in Risk of Cardiac Arrhythima, 297 SCIENCE 1333-1336 (2002)。したがって、上記の脳低酸素症/虚血においてみられるように、永続性ナトリウム電流の増大に起因するＮa+レベルの上昇によって、ナトリウム／カリウム交換機構が異常に高いレベルのＣａ+取り込みを引き起こし、それによって心筋細胞死がもたらされる。このように、選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストは、現在用いられている非選択的ナトリウム電流遮断物質に伴う有害な副作用なしに、脳低酸素症または虚血を予防するために有用に用いることができる。
【００３８】
３つ目の非限定的な例において、網膜虚血は、両眼の一過性または永久に失明することがある血液循環の減少または衰退に起因する網膜内の血液供給の低下である。神経網膜および視神経の虚血は、網膜静脈分枝閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、網膜中心動脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症等の塞栓症；例えば、糖尿病性網膜症等の疾病の結果として；硝子体内外科手術中；例えばキニーネ等の中毒によって；網膜色素変性等の網膜変成、および加齢性黄斑変性症において；炎症中；感染中；または再発性反復性大量出血（例えば、分娩時、胃および十二指腸潰瘍および 肺結核における)からの放血の間に発生し得る。当業者は、本発明の方法をこれらのおよび当分野において知られている他のタイプの虚血を処置するのに使用することができることを理解する。
【００３９】
虚血性網膜症の初期の検眼鏡所見では、局所的虚血の領域と一致する微小な動脈瘤がみられる。例えば、本明細書の一部を構成するThomas W. Gardner ら、Diabetic Retinopathy: More than Meets the Eye, 47(Suppl. 2)SURV.OPHTHALMOL. S253-S262 (2002);および Alistair J. Barder, A New View of Diabetic Retinopathy: A Neurodegenerative Disease of the Eye, 27 (2) PROG. NEUROPSYCHOPHARMACOL.BIOL. PSYCHIATRY. 283-290 (2003)を参照。これらの臨床的な知見と同調してまたはそれに先だって、律動様小波の減少、視覚誘発電位の遅延、およびパターンおよび多局所網膜電図の変化を含む、有意の電気生理学的を観察することができる。例えば、本明細書の一部を構成するErich Lieth ら、Retinal Neurodegeneration : Early Pathology in 糖尿病性, 28(1）cLIN. EXPERIMENT. OPHTHALMOL. 3-8 (2000)を参照。網膜神経節細胞およびその軸索を含む神経網膜の正常なイオン伝導度における変化は、虚血性網膜症と関連している。例えば、本明細書の一部を構成するQuasthoff, (1998)を参照。鍵となる観察には、伝導速度の減少結節 ナトリウムチャネルの機能障害および細胞内Ｎa+濃度の上昇があげられる。例えば、本明細書の一部を構成するTomBrismar, Abnormal Na-Currents in Diabetic Rat Nerve Nodal Membrane, 10 (Suppl. 2) DIABET. MED.110S-112S (1993)を参照。Ｎa+の流入の増大によって、ナトリウム／カリウム交換機能が作動し、神経細胞死の主要な原因である異常に高いレベルの細胞内カルシウムを取り込む。例えば、Lipton, 前掲、(1999)参照。網膜における神経の段階的な喪失は、これらの細胞が通常置き換わらないので、疾患の進行が最終的に不可逆であることを示している。永続性ナトリウム電流を選択的に減少することは、網膜虚血の症状または病態生理を軽減する有効な手段を提供する。したがって、脳低酸素症/虚血における選択的な永続性ナトリウム電流遮断物質の神経保護効果と同様に、本発明は、網膜虚血を予防する方法を開示する。
【００４０】
Ｖ.選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストを用いる神経変性状態の処置
本発明はさらに、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することによる神経変性状態の処置方法を提供する。異常なレベルのナトリウム電流は、様々な神経変性状態に関連する。本明細書において用いられる「神経変性状態または障害」は、神経組織の進行性の喪失によって特徴付けられる状態を意味する。神経変性状態には、中枢または末梢神経系の異常な状態の多様なグループが挙げられ、動障害, 認知症, 神経筋障害, 運動障害, 炎症性疾患および 脱髄疾患が含まれるがこれに限定されない。そのような状態には、多くの頃なる病因（例えば、遺伝的なまたは特発的な、中毒または代謝過程の二次的な等が挙げられるがこれに限定されない）があり傷害、外傷、疾病または感染からもたらされ得る。そのような状態は、脳の比較的限定された領域または神経の特定の集まりの異常によって特徴付けられる。種々の神経障害性の状態で影響を受けた特定の細胞集団は、典型的に臨床的な表現型を決定する。特に、神経変性状態は特定の影響を受けた中枢または末梢神経系の構造の衰退および異常なレベルのナトリウム電流に関連し、その後の細胞内ナトリウムの上昇はこの萎縮の原因または要因となり得る。
【００４１】
神経変性状態の例示としては、運動ニューロン疾患 (ALS), パーキンソン症候群, 広汎性硬化症, 筋萎縮性側索硬化症, 多発性硬化症, 広汎性皮質性小脳萎縮症, レヴィー小体認知症, ピック病, 縁皮質性認知症, 視床変性, 球麻痺, ハンチントン舞踏病, 皮質−線条体−脊椎変性、皮質ベースの神経節変性、大脳小脳皮質変性, 不全対麻痺を伴う家族性認知症、polyglucosan body病, Shy-Drager 症候群,オリーブ橋小脳萎縮症,進行性核上麻痺, 変形性筋失調症, Hallervorden-Spatz 病, Meige 症候群, 家族性振戦, Gilles dela Tourette症候群,有棘赤血球舞踏病,フリードライヒ失調症, Holmes型家族性小脳皮質性萎縮症, AIDSに関連する認知症, Gerstmann-Straussler-Scheinker病,進行性脊髄性筋萎縮,進行性球麻痺,原発性側索硬化症, 遺伝性筋萎縮症,痙性対麻痺,腓骨筋萎縮,肥厚性間質性神経炎,遺伝性多発神経炎性失調、視神経症, 糖尿病性網膜症, アルツハイマー病および眼筋麻痺が挙げられるがこれに限定されない。当業者は、これらの他の、軽度の、中程度のまたは重度の神経変性状態の状態は本発明の方法にしたがって処置し得ると理解する。
【００４２】
非限定的な例示として、多発性硬化症は、異常なレベルの永続性ナトリウム電流によって特徴付けることができる状態である。白質組織を冒す中枢神経系の慢性の炎症性疾患である多発性硬化症(MS)は、米国内で350,000人を超える人が患っており、全世界では１０万人あたり３０人もの人が罹患している。MSは神経組織または軸索の疾患であると考えられている。MSはCNS内でランダムに損傷を引き起こし、病変またはプラークをもたらしCNS軸索において出現する。病変は軸索を隔離している物質であるミエリンの喪失（脱髄）によって特徴付けられる。脱随は軸索の電気的特性に大きく影響し、神経刺激の発生を遅らせるかまたはブロックする。様々な身体機能が、軸索の生理機能に対する有害な作用の結果として影響を受ける。疾患の過程において、軸索は破壊され、MSは神経変性疾患として分類される。発症年齢は２８歳から３５歳の間が多いので、この障害を有する多くの人々が通常は働き盛りの年齢である。現在利用可能な薬物療法は、せいぜい疾患を遅らせるかまたは症状を軽くするに過ぎない。この形態の神経障害を処置するための治療に対する満たされていない必要性が存在するのは明かである。
【００４３】
この神経変性状態は、典型的には、筋肉協調運動の欠失、筋力の低下、言語障害、知覚障害および視力障害がみられる。この状態の動物モデルと同様、多発性硬化症を有する患者において、多発性硬化症の発症によりプルキンエ細胞内のナトリウムチャネルの発現パターンの変化が生じるという証拠が存在する。無調節なナトリウムチャネル発現は多発性硬化症の症状の原因である。例えば、永続性ナトリウム電流は、ナトリウムカルシウム交換機構を逆転させることによりカルシウム介在の軸索傷害を引き起こす。例えば、本明細書の一部を構成するStephen G. Waxman, Sodium Channel as Molecular Targets in Multiple Sclerosis, 39 (2) J. REHABIL. RES. DEV. 233-242 (2002)；および Stephen G. Waxman, lon Channels and Neuronal Dysfunction in Multiple Sclerosis, 59 (9) ARCH. NEUROL. 1377-1380 (2002)を参照。有髄軸索では、電位依存性ナトリウムチャネルNav1.2およびNav1. 6 はランヴィエ絞輪で選択的に凝集する。しかし、いずれも多発性硬化症を有する患者に由来する脱随軸索に沿って発現の変化を示した。さらに、Nav1.6およびナトリウム／カリウム交換機構は多発性硬化症における軸索傷害のマーカーであるβ-APPを発現する軸索内に共存する。したがって、多発性硬化症を有する患者においては, Nav1. 6の分布の変化によって、異常に高いレベルのＮa+流入をもたし、ナトリウム／カリウム交換機構が作動して異常に高いレベルの軸索内カルシウムを取り込み、これらの患者における神経損傷の引き金となる永続性電流を生じると考えられる。例えば、本明細書の一部を構成するMatthew J Craner ら、Molecular Changes inNeurons In Multiple Sclerosis : Altered Axonal Expression of Na, 1. 2および Na, 1. 6 Sodium Channel And Na+lＣａ+ Exchanger, 101 (21) PROC. NATL. ACAD.So. U. S. A. 8168-8173 (2004);および Matthew J Craner ら、Co-Localization of SodiumChannel Na, 1. 6および the Sodium-Calcium Exchanger at Sitesof Axonal Injury in the Spinal Cord in EAE, 127 (2) BRAIN 294-303 (2004)を参照。したがって、この異常に高いレベルの永続性ナトリウム電流を減少することは、多発性硬化症を有する人の処置のための有効な手段を提供する。
【００４４】
非限定的な別の例として、筋萎縮性側索硬化症(ALS)または「運動ニューロン疾患」は、上位運動ニューロンおよび下位運動ニューロンの両方の神経変性障害である。平均の発症年齢は、約５５歳であり、ALSの患者数は、約100,000人である。米国におけるALSの罹患率は１０万人あたり約１１人であり、約30,000人が罹患している。毎年約5,000人、即ち１日に１５人が新たに罹患する。ALSは、下肢および上肢の進行性の衰弱ならびに硬直、筋肉の痙攣および震え、および筋萎縮によって特徴付けられる。ALSは、５年生存率がわすか２０％である不治の病である。現時点では、リルゾールが、この疾患の進行を遅らせるとみられている唯一のＦＤＡ承認薬である。
【００４５】
ALSの病因は、分かっていないが、１つの仮説はグルタミン酸興奮毒性がこの疾患に関連する神経細胞死を引き起こすことを提唱している。興味深いことに、神経の興奮毒性の試験管内モデルにおいて、電位依存性ナトリウムチャネル, NMDA受容体およびグルタミン酸放出は、酸化窒素形成を経由する遅延した神経変性に関わっていることを示した。例えば、本明細書の一部を構成するPaul J. Strijbos ら、 Vicious Cycle Involving Ｎa+ Channels, Glutamate Release, and NMDA Receptors Mediates Delayed Neurodegeneration Through Nitric Oxide Formation, 16 (16) J. NEUROSCI. 5004-5013 (1996)を参照。  グルタミン酸放出は、電位依存性Na+ チャネルの活性化を必要とするため、これらのチャネルの遮断はグルタミン酸の過剰な漏出を防ぐことができると考えられている。ALSのトランスジェニックマウスモデルでは、これらマウスにおける末梢軸索の神経変性に関連する形態学的変化は膜の伝導度および興奮性における変化を伴うことが分かった。Jasna Kriz etal, Altered lonic Conductances in Axons Of Transgenic Mouse Expressing the Human Neurofilament Heavy Gene : A Mouse Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis, 163 (2)EXP. NEUROL. 414-421 (2000). これらの著者は、トランスジェニックマウスの軸索からのナトリウムチャネルの不活化速度が、対照と比較して有意に遅くなることを示唆した。さらに、ＡＬＳについて試験した多くの薬物のうち、この疾患の進行を遅らせると示された薬物 (リルゾール) だけが電位依存性Na チャネルおよびその後のグルタミン酸放出をブロックすることが分かった。例えば、本明細書の一部を構成するA Stefani ら、Differential Inhibition by Riluzole, Lamotrigine, and Phenytoin of Sodium and Calcium Currents in Cortical Neurons: Implications for Neuroprotective Strategies, 147(1)EXP. NEUROL. 115-122 (1997); およびThomas Anger ら、Medicinal Chemistry of Neuronal Voltage-gated Sodium Channel Blockers, 44 (2) J. MED. CHEM. 115-137 (2001)を参照。その後、リルゾールが永続性ナトリウム電流を標的とすることが示された。例えば、本明細書の一部を構成する、Andrea Urbani & Ottorino Belluzzi, Riluzole Inhibits the Persistent SodiumCurrent in Mammalian CNS Neurons, 12(10)EUR. J.NEUROSCI. 3567-3574 (2000);および Francesca Spadoni ら、Lamotrigine Derivatives and Riluzole Inhibit INa, P in Cortical Neurons, 13 (9) NEUROREPORT. 1167-1170 (2002)を参照。したがって、永続性ナトリウム電流は、ALSの進行において役割を担っており、この異常に高い永続性ナトリウム電流を選択的に減少させることでALSを有する人の処置のための有効な手段を提供することができると考えられる。
【００４６】
ＶＩ．選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストを用いる眼症状の処置
本発明はさらに、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することによる眼症状の処置のための方法を提供する。異常なレベルの永続性ナトリウムチャネルによって誘導された望ましくないニューロン発火および神経死は、眼症状における原因または要因である。
【００４７】
眼症状としては、眼または眼の一部分または領域を冒す疾患、栄養物または状態が含まれる。広く言えば、眼は、眼球および眼球を構成する組織と液体、眼周囲筋(斜筋および直筋等)、眼球内または眼球に隣接する視神経の部分を含む。前眼症状は、眼周囲筋、眼瞼または水晶体嚢の後壁の前方に位置する眼球組織または液体、または毛様筋等の、前眼領域が冒されるまたは前眼領域（即ち眼の前部）が関係する疾患、栄養物または状態である。したがって、前眼症状は、主に、結膜、角膜、前房、虹彩、後眼房（網膜の後ろで水晶体嚢の後壁の前）、水晶体、水晶体嚢および前眼領域または部位に血管新生するまたは神経支配する血管または神経に影響を及ぼすまたは関わる。後眼症状は、脈絡または強膜（水晶体嚢の前壁の後ろを経て平面（plane）の後方の位置）、ガラス体、ガラス体、室（chamber）、網膜、視神経（即ち視神経円板）および後眼領域または部位に血管新生するまたは神経支配する血管または神経等の後眼領域または部位を冒すまたは関わる疾患、栄養分または状態である。
【００４８】
よって、後眼部症状には、例えば、黄斑変性症（例えば、非滲出性加齢性黄斑変性症および滲出性加齢性黄斑変性症）；脈絡膜新血管新生；急性黄斑視神経網膜症；黄斑浮腫（例えば、嚢胞様黄斑浮腫および糖尿病性黄斑浮腫）；ベーチェット病、網膜障害、糖尿病性網膜症（増殖性糖尿病性網膜症など）；網膜動脈閉塞性疾患；網膜中心静脈閉塞症；ブドウ膜炎；網膜剥離；後眼部位または位置に影響する眼外傷；眼のレーザー処置に起因するまたは影響される後眼部症状；光線力学的治療に起因するまたは影響される後眼部症状；光凝固；放射線網膜症；網膜上膜性疾患；網膜静脈分枝閉塞症；前部虚血性視神経症；非網膜症性糖尿病性網膜機能不全、網膜色素変性症および緑内障などの疾患が含まれ得る。緑内障は、治療目標が、網膜細胞または視神経細胞の損傷または損失による視覚の損失を防ぐまたは視覚の損失の発生を減少させること（すなわち神経保護）であり得るので、後眼部症状と考えられ得る。
【００４９】
前眼部症状は、例えば、無水晶体症；偽水晶体症；乱視；眼瞼痙攣；白内障；結膜疾患；結膜炎；角膜疾患；角膜腫瘍；ドライアイ症候群；眼瞼疾患；涙器疾患；涙道閉塞；近視；老視；瞳孔障害；屈折障害および斜視などの疾患を含み得る。緑内障処置の臨床的目的は眼の前眼房中の房水の高眼圧を減少させる（すなわち眼内圧を減少させる）ことであり得るので、緑内障も前眼部症状と考えられ得る。
【００５０】
本発明の方法によって処置し得る眼症状の例としては、以下のものが挙げられるがこれに限定されない：
黄斑症および網膜変性症（非滲出性加齢性黄斑変性症（ARMD）、非滲出性加齢性黄斑変性症（ARMD））、脈絡膜新血管新生、糖尿病性網膜症、中心性漿液性網膜症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫）；炎症性疾患（急性多発性小板状色素上皮症、ベーチェット病、散弾状網脈絡膜炎（birdshot retinochoroidopathy）、感染症（梅毒、ライム病、結核症、トキソプラズマ症）、中間部ブドウ膜炎（扁平部炎）、多巣性脈絡膜炎、多発消失性白点症候群（MEWDS）、眼サルコイドーシス、後部強膜炎、匐行性脈絡膜炎（serpignous choroiditis）、網膜下線維症、ブドウ膜炎症候群およびフォークト・小柳・原田症候群、点状脈絡膜内層症、急性後部多発性小板状色素上皮症、急性網膜色素上皮炎、急性黄斑視神経網膜症、血管疾患および滲出性疾患（糖尿病性網膜症、網膜中心動脈閉塞性疾患、網膜中心静脈閉塞、播種性血管内凝固障害、網膜静脈分枝閉塞症、高圧性眼底変化（hypertensive fundus change）、眼虚血症候群、網膜動脈毛細血管瘤、コーツ病、傍中心窩毛細血管拡張症、半側網膜静脈閉塞症（hemi-retinal vein occlusion）、乳頭静脈炎（papillophlebitis）、網膜中心動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、頚動脈疾患（CAD）、霜状分枝血管炎（frosted branch angitis）、鎌状赤血球網膜症および他の異常ヘモグロビン症、網膜色素線条症、家族性滲出性硝子体網膜症、イールズ病）、外傷性、外科的および公害病（交感性眼炎、ブドウ膜網膜疾患、網膜剥離、外傷、網膜レーザー、光線力学的療法、光凝固、外科術中の低灌流、放射線網膜症、骨髄移植網膜症）、増殖性障害（増殖性硝子体網膜症および網膜上膜）、感染性障害（眼ヒストプラズマ症、眼トキソカラ症、推定眼ヒストプラズマ症候群（POHS）、眼内炎、トキソプラズマ症、HIV感染に関連する網膜疾患、HIV感染に関連する脈絡膜疾患、HIV感染に関連するブドウ膜疾患、ウイルス性網膜炎、急性網膜壊死、進行性網膜外層壊死、真菌性網膜疾患、眼梅毒、眼結核症、片側性瀰漫性亜急性視神経網膜炎（diffuse unilateral subacute neuroretinitis）およびハエウジ病）、遺伝障害（網膜色素変性症、網膜ジストロフィーに関連する全身性疾患、先天停止性夜盲、錐体ジストロフィー、スタルガルト病および黄色斑眼底、ベスト病、網膜色素上皮の模様ジストロフィー、X連鎖性網膜分離症、ソースビー眼底変性症、良性中心性黄斑症（benign concentric maculopathy）、ビエッティ結晶性ジストロフィー（Bietti's crystalline dystrophy）、弾性線維性仮性黄色腫）、網膜損傷（黄斑円孔、巨大網膜裂孔）、網膜腫瘍（腫瘍に関連する網膜疾患、RPEの先天性肥大、後部ブドウ膜黒色腫、脈絡膜血管腫、脈絡膜骨腫、脈絡膜転移、網膜および網膜色素上皮の混合性過誤腫、網膜芽細胞腫、眼底の血管増殖性腫瘍（vasoproliferative tumor）、網膜星状細胞腫、眼内リンパ系腫瘍）。
【００５１】
ＶＩＩ．神経学的状態および細胞内酸化窒素
本発明はさらに、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量を投与することによる、異常なレベルの酸化窒素に関連する神経学的状態を処置するための方法を提供する。本明細書において開示するように、選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストは永続性ナトリウム電流を選択的に減少させるのに有用であり、これにより、急性および慢性の神経の傷害に対して神経保護の恩恵をもたらす。そのようなアンタゴニストはまた、細胞内酸化窒素の不適切に高いレベルによって生じる有害な細胞への影響を減少させるのに有用であるので、細胞内酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態を有効に処置することができる。本明細書において用いられる「細胞内酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態」とは、人の細胞内における、酸化窒素の正常な量と比較して増加した酸化窒素量によって特徴付けられる障害を意味する。そのような過剰な量の酸化窒素は、例えば、過剰なまたは無調節の酸化窒素の合成により生じる。
【００５２】
酸化窒素は、少なくとも３つのシステム：酸化窒素が殺腫瘍作用および殺菌作用を媒介する白血球細胞；内皮由来血管弛緩因子活性を示す血管；および神経伝達物質のように機能する神経、においてシグナル伝達分子として機能するフリーラジカルの気体である。神経における通常の役割に加えて、酸化窒素は、病態生理的条件下で神経毒介在物質としても機能し得る。例えば、酸化窒素合成酵素遺伝子を欠失したマウスは、局所的虚血および一時的な広汎な虚血に対して耐性であると分かった。例えば、本明細書の一部を構成するPanahian ら、Attenuated Hippocampal Damage After Global Cerebral Ischemia in Mice Mutant in Neuronal Ntiric Oxide Synthase, 72 (2)NEUROSCIENCE 343-354 (1996)を参照。したがって、酸化窒素は、永続性ナトリウムチャネルを活性化しカルシウムの細胞内過負荷を引き起こすことにより神経死を引き起こし得るが、これに限定されない。非限定的な例として、細胞内酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態には、血管のショック、卒中、糖尿病, 神経変性, 喘息, 関節炎および慢性炎症が含まれる。例えば、Nobuyuki Miyasaka & Yukio Hirata, Nitric Oxide and Inflammatory Arthritides, 61 (21) LIFE Sci. 2073-2081 (1997); Juan P.Bolanos &Angeles Almeida, Roles of Nitric Oxide in Brain Hypoxia-Ischemia 1411 (2-3)BIOCHIM. BIOPHYS. ACTA. 415-436 (1999); Joel E. Barbato & Edith Tzeng Nitric Oxide and Arterial Disease 40(1) J.VASC. SURG.187- 193 (2004); Kevin J. Barnham ら、 Neurogegenerative diseasesおよび Oxidative Stress, 3 (3)NAT. REV. DRUG. Dis. 205-214 (2004); Hossein A. Ghofrani ら、Nitric Oxide Pathway and Phosphodiesterase Inhibitors in Pulmonary Arterial Hypertension, 43 (12 Suppl. S) J. AM.COLL. CARDIO. 68S-72S (2004); Maria A. Moro ら、Role of Nitric Oxide after Brain Ischaemia, 36 (3-4）cELL CALCIUM 265-275 (2004); S A.Mulrennan & A. E. Redington, Nitric Oxide Synthase Inhibition : Therapeutic Potential in Asthma, 3 (2) TREAT.RESPIR. MED. 79-88 (2004); Fabio L. M. Ricciardoloら、Nitric Oxide in Health and Disease of the Respiratory System, 84 (3) PHYSIO. REV. 731-765 (2004);および Sharma S. Prabhakar, Role of Nitric Oxide in Diabetic Nephropathy, 24 (4) SEMIN. NEPHROL. 333-344 (2004)を参照。
【００５３】
酸化窒素は、電位依存性ナトリウムチャネルを介して神経変性と神経毒症状を引き起こしうる。例えば、Garthwaite ら、 前掲、(1999)を参照。例えば、視神経において、酸化窒素供与体の神経破壊作用は、電位依存性Ｎa+チャネルをブロックするＴＴＸ等の化合物により改善されることが示された。例えば、Gita Garthwaite ら、 Nitric oxide Toxicity in CNS White Matter : An in Vitro Study Using Rat optic nerve, 109(1) NEUROSCIENCE 145-155 (2000a);および Gita Garthwaite ら、SolubleGuanylyl Cyclase Activator YC-1 Protects White Matter Axons From Nitric oxide Toxicity and Metabolic Stress, Probably Through Na (+）channel Inhibition, 61 (1) MOL. PHARMACOL. 97-104 (2000b)を参照。したがって、電位依存性Na+ チャネルのブロックは、酸化窒素毒性の傷害作用に対する保護的な方策であると思われる。しかし、正常に急速に不活化するＮa+チャネルはこの方策の標的とはならないようである。例えば、細胞内酸化窒素の内因的または外因的レベルのいずれかの増大によって、中枢神経および心臓細胞において異常な永続性ナトリウム電流がもたらされる。例えば、本明細書の一部を構成するAnna K. M. Hammarstroem & Peter W. Gage, Nitric oxide Increases Persistent Sodium Current in Rat Hippocampal Neurons, 520 (2) J. PHYSIO. 451-461 (1999);および Gerard P. Ahernら、 Induction of Persistent Sodium Current by Exogenousおよび Endogenous Nitric oxide, 275 (37) J. Blot. CHEM. 28810-28815 (2000)を参照。酸化窒素によるこの永続性ナトリウム電流の上方調節は、グアニル酸シクラーゼとは独立で、したがってcGMPの形成とは独立している。例えば, Ahernら、 前掲、(2000)参照。このように、酸化窒素は、永続性ナトリウム電流の活性化または増大によって神経破壊または神経変性の一因となり得る。したがって、酸化窒素によって上方調節された永続性ナトリウム電流のブロックは、細胞内Ｎa+およびこの電流がや区割りを果たす病態生理学的条件下でのその後の神経細胞死に関連するＣａ+ 過剰流入を防止する。このように神経における永続性ナトリウム電流の防止によって、酸化窒素が神経破壊的な役割を担っていると考えられる神経変性疾患を含む急性および慢性の神経傷害の処置において神経保護に役立つ。
【００５４】
永続性ナトリウムチャネル/電流 を標的とすることのさらなる利点は、酸化窒素によって引き起こされる神経破壊経路における最終的な共通のエフェクターであるとみられるということである。例えば、興奮毒性条件下でのNMDA受容体の活性化は、その後で永続性ナトリウム電流が上方調節される過剰な酸化窒素産生（例えば、Strijbos ら、 前掲、(1996)を参照）をもたらす。例えば、Garthwaite ら、 前掲、(2000b)を参照。永続性ナトリウムチャネルの活性化は、その後さらなる膜脱分極 (さらなるグルタミン酸放出につながる)、細胞内Ｃａ+の上昇(NMDA受容体チャネルを経由するＣａ+による)およびナトリウム／カリウム交換機構の逆転につながる。NMDA受容体を経由するＣａ+の上昇およびナトリウム／カリウム交換機構の逆転は、さらなるＣａ+の流入が、神経破壊の有害なサイクルを引き起こす酸化窒素合成酵素をより活性化するので、状況をさらに悪化させるであろう。
【００５５】
異常なレベルの永続性ナトリウム電流または異常なレベルの細胞内酸化窒素によって特徴付けられる状態は、本明細書に記載した方法を含む常套的な方法を用いて同定または確認することができると理解される。また、１またはそれ以上の持続的ナトリウム電流も増大し得ると理解される。同様に、疾患または病理学的状態を有する患者由来する細胞における細胞内酸化窒素のレベルは、正常なまたは疾患を有しない患者に由来する細胞内の細胞内酸化窒素のレベルと比較することができる。細胞内酸化窒素のレベルの増加は、細胞内酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態を有する患者の少なくとも１つの細胞のタイプにおいて典型的に観察される。これら上で記載したものに加え、異常なレベルの永続性ナトリウム電流または異常なレベルの細胞内酸化窒素によって特徴付けられるヒトの状態は、当業者が同定することができる。
【００５６】
ＶＩＩＩ．慢性疼痛および永続性ナトリウム電流
電位依存性ナトリウムチャネル活性の変化が、例えば炎症および神経障害性疼痛等の慢性疼痛において重要な役割を果たしているという有力な証拠がある。例えばMark D. Baker & John N. Wood, Involvement ofＮa+Channels in Pain Pathways, 22(1) TRENDS PHARMACOL. Sci. 27-31 (2001); John N. Wood ら、Sodium Channels in Primary Sensory Neurons : Relationship to Pain States, 241NOVARTIS FOUND. SYMP. 159-168 (2002); Josephine Lai ら、The Role of Voltagegated Sodium Channels in Neuropathic Pain, 13 (3）Curr. OPIN. NEUROBIOL. 291-297 (2003); Philip LoGrasso & Jeffrey McKelvy, Advances in Pain Therapeutics, 7 (4）curr. Opin. Chem. Biol. 452-456 (2003); Phillip J. Birch ら、Strategies to Identify Ion Channel Modulators : Current and Novel Approaches to Target Neuropathic Pain, 9 (9) DRUG Disco. TODAY 410-418 (2004);および Josephine Lai ら、Voltage-gated sodium channels and hyperalgesia, 44 ANNU. REV. PHARMACOL.ToxiCOL. 371-397 (2004) を参照。ナトリウムチャネル発現および／または機能の変化は、末梢神経系および中枢神経系両方において神経の発火パターンに対して計り知れない影響を有する。例えば、感覚性一次求心性神経に対する傷害は、その後の感覚刺激に対する異常な、反復的なまたは過大な応答において、軸索および 樹状突起に沿ってしばしば電位依存性ナトリウムチャネルの急速な再分配をもたらす。そのような過大な応答は、慢性疼痛の特徴である外部の刺激の不在下での自然発生的な疼痛の発生に不可欠であると考えられる。さらに、末端の侵害受容器の活性化の低下した閾値に関連する炎症性疼痛および変化したナトリウムチャネル機能は、この現象の基礎となる側面であると考えられる。同様に末梢神経の損傷から生じる神経障害性疼痛状態は、ナトリウムチャネル活性の変化および異所性活動電位伝播に関連する。
【００５７】
重要なことに、ナトリウムチャネル阻害物質は、慢性疼痛の多くのタイプの処置に臨床上に有効である。例えば、局所麻酔薬（例えばリドカイン、メキシレチン, トカイニドおよび フレカイニド）は、痛みを伴う糖尿病性ニューロパシー、神経痛, 腰椎神経根障害、複合性局所疼痛症候群Ｉ型およびＩＩ型および 外傷性末梢傷害において効果的な救済方法を提供すると報告されている。慢性疼痛の処置するための麻酔薬として用いられる抗けいれん薬（例えば、カルバマゼピンおよび フェニトイン等)は神経痛、三叉神経痛、糖尿病性ニューロパシーを伴う。抗てんかん薬（例えばラモトリジン等)は、三叉神経痛、糖尿病性ニューロパシー、ヘルペス後神経痛、ＩＩ型複合性局所疼痛症候群および幻想痛を伴って用いられる。しかしながら、利用可能なナトリウムチャネルブロック薬有用性は、ナトリウムチャネルαサブユニット間での適切な区別ができないことによりかなり制限される。高い全身濃度は、例えば、筋肉の周期性四肢麻痺、心室細動に起因する心停止、心臓における遅発性の心臓再分極および中枢神経系のてんかん等の破壊的な副作用に関連する。例えば、Baker & Wood, 前掲、(2001);および Laiら、 前掲、(2004)を参照。
【００５８】
近年の証拠により、永続性ナトリウム電流からの増大した活性は、慢性疼痛の基礎となる原因である。例えば、本明細書の一部を構成する、Cervero & Laird, 前掲、(2003); Blackら、 前掲、(2004);および Yunruら、 前掲、(2004)を参照。永続性電流に媒介することが可能なナトリウムチャネルの例は、ＩＩＩ型ナトリウムチャネルＮａv１．３である。病的な疼痛の状況下では、Ｎａv１．３発現は、上方調節され、他のナトリウムチャネルは不随して下方調節される。例えば、成体の齧歯類では、感覚神経に対する損傷は、Ｎａv１．３の上方調節およびNav1. 8およびNav1. 9の下方調節をもたらす。例えば、本明細書の一部を構成するBirchら、 前掲、(2004)を参照。さらに、神経傷害後のこのＮａv１．３上方調節は、基礎となる自発的な活動と思われる膜電位振動の増大と関連する。例えば、本明細書の一部を構成するBryan C. Hainsら、Upregulation of Sodium Channel Na, 1. 3 and Functional Involvement inNeuronal Hyperexcitability Associated With Central Neuropathic Pain After Spinal Cord Injury, 23 (26) J. NEUROSCI. 8881-8892 (2003);および BryanC. Hains ら、Altered Sodium Channel Expression in Second-Order Spinal Sensory Neurons Contributes to Pain after Peripheral Nerve Injury, 24 (20) J.NEUROSCI. 4832-4839 (2004) を参照。正常な電位依存性（持続性）ナトリウム電流における減少との比較における、永続性電流を介在することが可能なナトリウムチャネルの発現または活性における選択的な減少は、永続性ナトリウム電流の増大に関連する状態の処置に有用である。
【００５９】
したがって、慢性疼痛は、永続性ナトリウム電流の増大に関連する状態の例である。本明細書に記載したように、正常の持続性ナトリウム電流の同様に減少を伴わずに永続性ナトリウム電流を減少させる化合物は、非選択的なナトリウム電流遮断物質が通常伴うような有害な副作用を伴うことなく、慢性疼痛を有効に処置し得る。実施例５に開示するように、選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストは、神経障害性疼痛の動物モデルにおいてアロディニアを有効に軽減することができる。したがって、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的な永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストの同定および永続性ナトリウム電流を選択的に拮抗することによる疼痛の処置の有効性の実証に基づいて、本発明は、永続性ナトリウム電流を選択的に拮抗することによる動物における慢性疼痛の処置方法を提供する。本方法では、持続性のナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する選択的な永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストの有効量を動物に投与する。
【００６０】
本発明の方法は、非限定的な例として、神経障害性の、内臓のまたは元来炎症性である疼痛の様々なタイプの慢性疼痛のいずれかを処置するのに有用である。具体的な態様では、本発明の方法は、神経障害性疼痛；内臓痛；術後疼痛；癌または癌治療による疼痛；線維筋痛および炎症性疼痛を処置するのに用いられる。
【００６１】
本明細書において用いられる「疼痛」なる用語は、急性疼痛および慢性疼痛の両方を包含する。本明細書において用いられる「急性疼痛」なる語は、即発的な、一般には高閾値の、切り傷, 挫傷、火傷またはチリペッパーの活性成分であるカプサイシンに暴露したときに経験するような化学的な刺激等による傷害によってもたらされる疼痛を意味する。本明細書において用いられる「慢性疼痛」なる語は、急性疼痛以外の疼痛を意味し、神経障害性疼痛、内臓痛, 炎症性疼痛, 頭痛 疼痛, 筋肉痛および 関連痛が含まれるがこれに限定されない。慢性疼痛は、比較的長期間、例えば、数ヶ月ないし数年続くことが多く、継続性でも断続的でもあることは理解される。
【００６２】
一態様では、本発明の方法は、本明細書において、末梢神経系、中枢神経系またはその両方による、苦痛をもたらす感覚入力を意味する「神経障害性疼痛」を処置するのに用いられる。神経障害性疼痛は、典型的に長期間続くあるいは慢性であり、最初の急性の組織傷害から数日ないし数ヶ月で発症し得る。神経障害性疼痛の症状は、永続性の、自発性の疼痛を伴うと同時に、通常は痛みを伴わない刺激に対する痛みを伴う応答である異痛、通常は軽い不快感である疼痛刺激に対する反応増強である痛覚過敏（チクチクするような痛みなど）、または短い不快感が長時間のひどい痛みになる痛覚過敏が挙げられる。神経障害性の疼痛は一般に麻薬療法には耐性である。神経障害性の疼痛は、急性の組織傷害から生じた刺激の性状なプロセシングによって生じる疼痛である侵害受容性疼痛と区別され得る。神経障害性疼痛とは対照的に、侵害受容性疼痛は通常、その持続は組織修復の期間に限定され、通常は麻薬や非オピオイド性鎮痛薬によって軽減し得る。
【００６３】
本発明の方法は、末梢神経、後根神経節、脊椎、脳幹、視床または大脳皮質の傷害または疾患から選択されるがそれに限定されない、中枢に生じた神経障害性疼痛および末梢に生じた神経障害性疼痛の両方の処置に有用である。本発明の方法により処置することができる神経障害性疼痛の例としては、神経痛（三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、舌咽神経痛、坐骨神経痛、非定型顔面痛等）、除神経後痛症候群（脳または脊椎の傷害、脳卒中後の疼痛、幻想痛、対まひ、末梢神経の傷害、腕神経叢裂離、腰椎神経根障害、ヘルペス後神経痛等）、複合性局所疼痛症候群(CRPS)（反射性交感神経性ジストロフィー(CRPS I型)、灼熱痛（CRPS  II型）等）、ポリニューロパシー疼痛（糖尿病性神経障害、治療誘発性疼痛、乳房切除後症候群等）。本発明の方法は、痛みの原因にかかわらず神経障害性疼痛の処置に有用であることは理解される。非限定的な例として、本発明の方法は、神経腫等の末梢神経障害、神経圧迫、神経の挫滅または伸張、神経の絞扼または不完全な神経のトランスセクション、単ニューロパシーまたはポリニューロパシーから生じる神経障害性疼痛の処置に用いることができる。さらなる非限定的な例として、本発明の方法は、後根神経節圧迫、脊椎の炎症、挫傷、脊椎の腫瘍または半側切断、および脳幹、視床、または大脳皮質の腫瘍または外傷から生じる神経障害性疼痛の処置に有用である。
【００６４】
上記のとおり、本発明の方法は、単ニューロパシー、ポリニューロパシー、複合性局所疼痛症候群または求心路遮断から生じる神経障害性疼痛の処置に有用であり得る。神経障害は、末梢神経系における機能不全または病変であり、臨床的には感覚神経または運動神経の異常によって特徴付けられる。単ニューロパシーなる語には、単一の末梢神経が冒されることが含まれ、一方、ポリニューロパシーなる語にはいくつかの末梢神経が冒されることを意味する。求心路遮断には、身体の部分からの感覚入力の喪失を示し、中枢神経系からの末梢感覚繊維または神経のどちらかの遮断によって引き起こされる。神経障害の原因は知られているまたは知られていない。知られている原因としては、神経障害を引き起こす最も一般的な代謝障害である糖尿病、Ｘ線照射、虚血、血管炎等の疾患または毒性状態の合併症が挙げられる。本発明の方法によって治療することができるポリニューロパシーは、ポリオ後症候群、糖尿病性ニューロパシー、アルコールニューロパシー、アミロイド、トキシン、ＡＩＤＳ、甲状腺機能低下、尿毒症、ビタミン欠乏症、化学療法、２'，３’−ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）治療、ギラン・バレー症候群またはファブリー病から生じうるが、それらに限定されない。本発明の方法は、原因が知られているまたは知られていないこれらの慢性疼痛または他の慢性的な神経障害を処置するのに使用することができることは理解される。
【００６５】
本発明の方法はまた、特定の腰痛（椎間板ヘルニア、骨棘、坐骨神経痛、捻挫、張りや関節の痛みから生じる疼痛）等の過度の筋肉または神経の伸張から生じる慢性的な疼痛を処置するために用いることもできる。本発明の方法はさらに、非限定的な例として、コンピューターでの長時間の労働、重い物や重い機械での作業、または長時間立っている状態、および反復運動障害（ＲＭＤ）等の活動から生じる慢性的な疼痛を処置するために用いることができる。ＲＭＤは慢性疼痛を引き起こす様々な筋肉の状態である。ＲＭＤは、過度の労働、間違った姿勢、筋肉疲労、神経または組織の圧迫、連続した活動または運動、
腕または腰のねじれなどの不自然なまたはぎこちない動作によって生じる摩擦によって引き起こされる。一般的なＲＭＤは、手、手首、肘、肩、首、背中、腰、膝、足、脚および足首に起こるが、手と腕が最も多い。本発明の方法はいずれかのタイプのＲＭＤから生じる慢性的な疼痛を処置するのに用いることができる。本発明の方法はさらに、慢性的な筋肉痛、薬物乱用または薬物離脱に関連する疼痛、および原因が知られているまたは知られていない他のタイプの慢性疼痛を処置するために使用することができる。
【００６６】
同様に、本発明の方法は、炎症性障害、例えば、関節炎／結合組織障害（例えば、変形性関節症、関節リウマチ、若年性関節炎、痛風性関節炎；脊椎関節症、強皮症、線維筋痛等）、自己免疫障害（例えば、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、エリテマトーデス等）、外傷による炎症（挫滅、刺し傷、組織または関節の伸張等）、感染による炎症（結核）または神経性炎症から生じる慢性疼痛を処置するために用いることができる。
【００６７】
本発明の方法はまた、機能性内臓痛（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、胃炎、過敏性腸症候群等）、器官性内臓痛（知覚神経支配に作用する腫瘍によって生じた消化管の外傷、炎症または変性病変）および処置誘発性内臓痛（化学療法または放射線治療に伴う）等の内臓痛を処置するために使用することができる。
【００６８】
本発明の方法は、緊張性頭痛、片頭痛、群発性頭痛、ホルモン頭痛、反跳性頭痛、副鼻腔炎による頭痛、器質性頭痛等が挙げられるがこれに限定されない頭痛から生じる慢性疼痛を処置するために用いることができる。本発明方法は、例えば、ライム病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳおよびハンセン病等の感染から生じる慢性疼痛を処置するために用いることができる。
【００６９】
ＩＸ．選択的永続性ナトリウム電流遮断物質
本発明の方法は、永続性ナトリウム電流を一過性ナトリウム電流に選択的に減少させる化合物を投与するものである。本発明において用いられるように、「選択的な」なる語は、アンタゴニスト等の化合物について本明細書で用いる場合、少なくとも１つの特定の用量で、一過性ナトリウム電流よりも少なくとも２０倍も永続性ナトリウム電流を減少する化合物を意味する。従って、永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物は、例えば、一過性ナトリウム電流と比較して少なくとも２０倍の選択性を有し、例えば、一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも５０倍の選択性、一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して少なくとも１００倍、少なくとも２００倍、少なくとも４００倍、少なくとも６００倍、少なくとも１０００倍の選択性を有し得る。
【００７０】
本明細書において用いられるように、「永続性ナトリウム電流」とは、一過性でない、持続的な脱分極の間活性でありまたは−６０ｍＶよりもより負の電位で活性化し、神経細胞膜の過剰興奮に寄与し得る、ナトリウムチャネル介在の電流を意味する。持続する脱分極は、一過性電流が一般的に不活化する時間よりも長い時間生じる脱分極を意味する。非限定的な例として、持続的な脱分極は、Ｎａｖ１．２等のナトリウムチャネルの一過性電流が一般に不活化する時間よりも長い時間生じる。従って、持続的な脱分極は、少なくとも０．００２秒間、例えば少なくとも０．０１秒間、少なくとも０．１秒間および少なくとも１秒間、持続する脱分極を意味する。
【００７１】
永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物は、例えば、永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストである。本明細書において用いられる「永続性ナトリウムチャネルアンタゴニスト」なる語は、ナトリウムチャネルに結合することによりナトリウムチャネルを介して介在する永続性電流を阻害または減少する化合物を意味する。永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストは、例えば孔入口の永続性ナトリウムチャネルに直接結合し、それによりチャネルを介するイオンの移動が阻害される、または別の部位のチャネルに結合してチャネルのコンフォメーションを変化させチャネルを介するイオンの移動を阻害する等、いずれかのアンタゴニストメカニズムにより作用し得る。選択的な永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストの例としては、式１、２、３および４として開示する構造の異なる有機分子の４つのクラスがある。
【００７２】
永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物は、間接的に、例えば永続性ナトリウムチャネルの減少または発現の下方調節、例えば、一過性ナトリウムチャネルの対応する減少なしに、ポジティブな転写調節因子を不活化するまたはネガティブな転写調節因子を活性化することにより；一過性ナトリウム電流の対応する減少なしに、永続性ナトリウムチャネル機能を不活化するまたは減少する分子（例えば、プロテアーゼ、修飾酵素または他の分子）の発現または活性を増大させることにより；または例えば、一過性ナトリウムチャネルからの下流シグナルを実質的に変えることなしに、永続性ナトリウム電流からの下流シグナルを伝達する分子の発現または活性を減少させることにより、作用し得る。
【００７３】
本明細書に開示されるように、構造が関連しない分子が、一過性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍選択的に永続性ナトリウム電流を減少し、従って、本発明の方法は有用である。例えば、そのような化合物は、例えば、ペプチド、ペプチド模擬分子、核酸、炭化水素または脂質等の天然に存在するか、または非天然の巨大分子である。化合物はさらに、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、小体、二官能性抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、可変領域フラグメント（ＦｖまたはＦｄ）、ＦａｂまたはＦ（ab）2等の抗体またはその抗原結合フラグメントであってよい。化合物はまた、天然に存在する巨大分子の部分的または完全な合成誘導体、アナログまたは模擬分子、または小さな有機または無機分子であってよい。
【００７４】
核酸である選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストは、例えば、アンチセンスヌクレオチド配列、RNA分子、またはアプタマー配列であってよい。アンチセンスヌクレオチド配列は細胞内のヌクレオチド配列に結合し、永続性ナトリウムチャネルの発現のレベルを調節する、または永続性ナトリウムチャネルの発現または活性をコントロールする別の遺伝子の発現を調節し得る。同様に、触媒リボザイム等のＲＮＡ分子は、永続性ナトリウムチャネル遺伝子または永続性ナトリウムチャネルの発現または活性をコントロールする他の遺伝子に結合し発現を改変し得る。アプタマーは、分子標的に結合することが可能な３次元構造を有する核酸配列である（例えば、本明細書の一部を構成する、Sumedha D. Jayasena, Aptamers : An Emerging Class of Molecules That Rival Antibodies in Diagnostics, 45 (9) CLIN参照）。従って、アプタマーは、永続性ナトリウム電流選択的化合物であり得る。
【００７５】
核酸である選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストはまた、二本鎖のＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ干渉法で用いるための二本鎖ＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、サイレントな遺伝子に対し、配列中のホモローガスな二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって開始される転写後のＲＮＡ分解によってサイレントな配列特異的な遺伝子の方法である。ＲＮＡｉに適当な二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、１９のＲＮＡ塩基対を形成する標的となる遺伝子に対応し、各３’末端に２個のヌクレオチドが突き出た約２１個の連続したヌクレオチドのセンスおよびアンチセンス鎖を含む（本明細書の一部を構成するSayda M. Elbashir et al., Duplexes of 21-nucleotide RNAs Mediate RNA Interference in Cultured Mammalian Cells, 411 (6836) NATURE 494-498 (2001); B. L. Bass, RNA Interference. The Short Answer, 411 (6836) NATURE 428-429 (2001); Phillip D. Zamore, RNA Interference : Listening to the Sound of Silence, 8 (9) NAT. STRUCT. Blot. 746-750 (2001)）。約２５〜３０ヌクレオチドのｄｓＲＮＡはまた、ＲＮＡｉにうまく用いられてきた（本明細書の一部を構成するAnton Karabinos et al., Essential Roles for Four Cytoplasmic Intermediate Filament Proteins in Caenorhabditis elegans Development, 98 (14) PROC. NATL. ACAD. So. USA 7863- 7868 (2001)）。ｄｓＲＮＡは、当分野で知られている方法によってｉｎ ｖiｔｒｏで合成し細胞に導入することができる。
【００７６】
抗体である永続性ナトリウムチャネル選択的化合物は、例えば、永続性ナトリウムチャネルに結合し、該チャネルを介するイオンの移動を阻害する、または永続性ナトリウム電流発現または活性を調節する分子の活性をナトリウム電流が減少するように改変する、抗体である。このような化合物が一過性ナトリウム電流の対応する減少が影響されないように選択的結合することは理解される。
小分子である永続性ナトリウムチャネル選択的化合物は、様々な構造を有する。いくつかの実施形態においては、永続性ナトリウム電流の減少に関して非永続性ナトリウム電流に対して少なくとも２０倍の選択性を有する永続性ナトリウム電流を選択的に減少させる化合物、本明細書の以下に示す式により示される有機分子またはその製薬的に許容し得る塩、エステル、アミド、立体異性体、またはラセミ混合物である。図１に開示するように、いくつかの同定された化合物は、一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対して選択的であり、３２倍、３８倍、１１０倍、４５３倍の選択性を有する。
一過性ナトリウム電流に対し永続性ナトリウム電流について少なくとも２０倍の選択性を有するこれらの及び他の化合物、例えば、実施例１、２、３、４および５に記載した方法によって同定された化合物は、本発明の方法に従って慢性疼痛を処置するのに有用でありうる。
【００７７】
一実施形態において、本発明の方法において有用な化合物、または製薬的に許容し得る塩、エステル、アミド、立体異性体またはラセミ混合物は式１の構造を有する：
【化７】
2007504165.tif 000007
［式中、
Ａｒ1は、アリール基であり；
Ａｒ2は、アリール基であり；
Ｙは、不在または
【化８】
2007504165.tif 000008
から選択され；
Ｒ1は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルであり；
Ｒ2およびＲ3は、独立に、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、アリールアルキル、ヒドロキシ、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8炭素環およびＣ1−Ｃ8複素環から選択され；
Ｒ4は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ5およびＲ6は、水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；および
ｎは１〜６の整数である］。
この実施形態の一態様では、Ａｒ1はチエニルまたは置換されたチエニルである。例えば、このチエニルは１またはそれ以上のハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮ、（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されていてもよい。
この実施形態の一態様では、Ａｒ２はフェニルまたは置換されたフェニルである。例えば、このフェニルはハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アリールアルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮおよび（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されていてもよい。
【００７８】
さらなる態様では、本発明の方法において有用な化合物、またはその製薬的に許容し得る塩、エステル、アミド、立体異性体またはラセミ混合物は式２の構造を有する：
【化９】
2007504165.tif 000009
［式中、
Ａｒ3はアリール基であり；
Ａｒ4はアリール基であり；
Ｘ1およびＹ1は独立に
【化１０】
2007504165.tif 000010
から選択され；
Ｒ5およびＲ6は、独立に水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ8およびＲ9は、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、アリールアルキル、ＣＯＲ12、およびＣＯＣＦ3から選択され；
Ｒ10およびＲ11は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；および
Ｒ12は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択される］。
この実施形態の一態様では、Ａｒ3はフェニルまたは置換されたフェニルである。例えば、このフェニルは１またはそれ以上のハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮおよび（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されていてもよい。
この実施形態の一態様では、Ａｒ４は１またはそれ以上のハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アリールアルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮおよび（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されていてもよい。
【００７９】
さらなる実施形態では、本発明の方法において有用な化合物、その製薬的に許容し得る塩、エステル、アミド、立体異性体、またはラセミ混合物は式３の構造を有する：
【化１１】
2007504165.tif 000011
［式中、
Ａｒ5はアリール基であり；
Ａｒ6はアリール基であり；
Ｘ2はＯ、Ｓ、またはＮＲ14であり：
Ｙ2はＮ、ＣＲ15であり；
Ｚ2はＮ、ＣＲ16であり；
Ｒ5およびＲ6は水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ13はハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリールアルキル、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2から選択され；
Ｒ14は水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＣＦ3、ＯＣＨ3、ＮＯ2、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2から選択され；
Ｒ15は水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＣＦ3、ＯＣＨ3、ＮＯ2、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2から選択され；
Ｒ16は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＣＦ3、ＯＣＨ3、ＮＯ2、および（ＣＲ5Ｒ6）ｃＮ（Ｒ7）2（ｃは０または１〜５の整数）から選択される］。
【００８０】
この実施形態の一態様では、Ａｒ5はフェニルまたは置換されたフェニルである。例えば、このフェニルは１またはそれ以上のハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮおよび（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されていてもよい。
【００８１】
この実施形態の一態様では、Ａｒ6はハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アリールアルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮまたは（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されている。
【００８２】
この実施形態のさらなる態様では、  前記Ａｒ6は、
【化１２】
2007504165.tif 000012
から選択される。
【００８３】
さらなる実施形態では、本発明の方法において有用な化合物またはその製薬的に許容し得る塩、エステル、アミド、立体異性体またはラセミ混合物は式４の構造を有する
【化１３】
2007504165.tif 000013
［式中、
ＡＲ7はアリール基であり；
Ｒaは、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ＮＲ22Ｒ23、およびＯＲ22から選択され；
Ｒ5およびＲ6は、水素、フルオロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ7は水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ17およびＲ18は独立に、水素、Ｃ1−Ｃ8アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヒドロキシから選択され；
Ｒ19およびＲ20は独立に、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ8アルキル、ヒドロキシ、アミノ、およびＣＦ3から選択され；
Ｒ21、Ｒ22、およびＲ23は独立に水素、アリールおよびＣ1−Ｃ8アルキルから選択され；
ａは０または１〜５の整数であり；および
ｍは０または１〜３の整数である］。
この実施形態の一態様では、  ＡＲ7は置換されたフェニルである。例えば、このフェニルは、１またはそれ以上の、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル、ＮＯ2、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＯＣＦ2Ｈ、ＣＮおよび（ＣＲ5Ｒ6）cＮ（Ｒ7）2（ここでｃは０または１〜５の整数である）で置換されていてもよい。
【００８４】
さらなる実施形態では、Ｒがアミノまたは
【化１４】
2007504165.tif 000014
である。
【００８５】
さらなる実施形態ではＲ17はイソプロピルであり、一実施形態ではＲ18はメチルである。
本発明の方法において有用な永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストである例示化合物を式１、２、３および４として示す。さらに、図１に示す化合物は、永続性ナトリウム電流について、一過性ナトリウム電流と比較して３２倍、３８倍、１１０倍および４５３倍の選択性を有する。
【００８６】
本明細書において用いられる「アルキル」なる語は、直鎖、分岐鎖、または環状の飽和の脂肪族炭化水素を意味する。例えば、アルキル基は、１〜１２個の炭素（例えば１〜７個の炭素、または１〜４個の炭素）を有しうる。アルキル基の例としてはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチルもしくはヘキシル等が挙げられる。アルキル基は場合により１またはそれ以上の、ヒドロキシル、シアノ、アルコキシ、＝Ｏ、＝Ｓ、ＮＯ2、ハロゲン、ジメチルアミノおよびＳＨから選択される置換基で置換されていてもよい。
【００８７】
本明細書において用いられる「アルケニル」なる語は、直鎖、分岐鎖、または環状の、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する不飽和の脂肪族炭化水素を意味する。例えば、アルケニル基は、１〜１２個の炭素（例えば１〜７個の炭素、または１〜４個の炭素）を有しうる。アルケニル基は場合により１またはそれ以上の置換基で置換されていてもよい。置換基の例としては、ヒドロキシル、シアノ、アルコキシ、＝Ｏ、＝Ｓ、ＮＯ2、ハロゲン、ジメチルアミノおよびＳＨが挙げられる。
【００８８】
本明細書において用いられる「アルキニル」なる語は、直鎖、分岐鎖、または環状の、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する不飽和の脂肪族炭化水素を意味する。例えば、アルキニル基は、１〜１２個の炭素（例えば１〜７個の炭素、または１〜４個の炭素）を有しうる。アルキニル基は場合により１またはそれ以上の置換基で置換されていてもよい。置換基の例としては、ヒドロキシル、シアノ、アルコキシ、＝Ｏ、＝Ｓ、ＮＯ2、ハロゲン、ジメチルアミノおよびＳＨが挙げられる。
【００８９】
本明細書において「アルコキシル」は、「Ｏ−アルキル」基を意味する。
【００９０】
本明細書において「アリール」は、共役パイ電子系を有する少なくとも一つの環を有する芳香族基を意味し、炭素環式アリール、ヘテロ環式アリールおよびビアリール基を含む。アリール基は、ハロゲン、トリハロメチル、ヒドロキシル、ＳＨ、ＯＨ、ＮＯ2、アミン、チオエーテル、シアノ、アルコキシ、アルキルおよびアミノからなる群から選択される一つまたはそれ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００９１】
本明細書において用いられる「アルカリール」は、アリール基に共有結合したアルキルを意味する。好ましくは、アルキルは低級アルキルである。
【００９２】
本明細書において用いられる「炭素環式アリール」は、環原子が炭素であるアリール基を意味する。
【００９３】
本明細書において用いられる「ヘテロ環式アリール」は、１〜３のヘテロ原子を環原子として有し、残りの環原子が炭素であるアリール基を意味する。ヘテロ原子としては、酸素、硫黄および窒素が挙げられる。従って、ヘテロ環式アリール基としては、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロロ、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなどが挙げられる。
【００９４】
本明細書において用いられる「ヒドロカルビル」は、炭素および水素原子のみを有する炭化水素基を意味する。例えば、ヒドロカルビル基は、１〜２０炭素原子（例えば、１〜１２炭素原子または１〜７炭素原子）を有する。
【００９５】
本明細書において用いられる「置換されているヒドロカルビル」は、水素および／または炭素原子の一つまたはそれ以上、しかしすべてではないものが、ハロゲン、窒素、酸素、硫黄またはリン原子またはハロゲン、窒素、酸素、硫黄もしくはリン原子を含む基、例えばフルオロ、クロロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、ホスフェート、チオールなどにより置き換わっているヒドロカルビル基を意味する。
【００９６】
本明細書において用いられる「アミド」は、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｒ’（ここに、Ｒ’はアルキル、アリール、アルキルアリールまたは水素である）を意味する。本明細書において用いられる「チオアミド」は、−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−Ｒ’（ここに、Ｒ’はアルキル、アリール、アルキルアリールまたは水素である）を意味する。本明細書において用いられる「アミン」は、−Ｎ（Ｒ’’）Ｒ’’’基（ここに、Ｒ’’およびＲ’’’はアルキル、アリールおよびアルキルアリールからなる群から独立して選択される）を意味する。本明細書において用いられる「チオエーテル」は、−Ｓ−Ｒ’’（ここに、Ｒ’’はアルキル、アリールまたはアルキルアリールである）を意味する。本明細書において用いられる「スルホニル」は、−Ｓ−Ｒ’’’’（ここに、Ｒ’’’’はアリール、Ｃ（ＣＮ）＝Ｃ−アリール、ＣＨ2ＣＮ、アルキルアリール、スルホンアミド、ＮＨ−アルキル、ＮＨ−アルキルアリールまたはＮＨ−アリールである）。
【００９７】
Ｘ.スクリーニングアッセイ
一過性ナトリウム電流に対し、永続性ナトリウム電流を選択的に減少させる化合物の能力を、様々なアッセイを用いて決定した。このようなアッセイは、例えば、永続性ナトリウム電流を内因的にまたは組換えにより発現する細胞または組織において行うことができ、試験化合物の適用前と適用後の永続性ナトリウム電流および一過性ナトリウム電流を測定する。
【００９８】
ナトリウム電流を測定するための方法は当業者にはよく知られており、例えば、本明細書の一部を構成するJoseph S. Adorante, Inhibition of Noninactivating Na Channels of Mammalian Optic Nerve as a Means of Preventing Optic Nerve Degeneration Associated with Glaucoma, U. S. Patent No. 5,922, 746 (Jul 13,1999) ; Bert Sakmann & Erwin Neher, SINGLE CHANNEL RECORDING (Plenum Press, 2nd ed. 1995); and Tsung-Ming Shih et al., High-level Expression and Detection of lon Channels in Xenopus Oocytes, 529-556 (METHODS IN ENZYMOLOGY: ION CHANNELS PART B, Vol. 293, P. Michael Conn ed. , Academic Press 1998)に記載されている。これらのプロトコルは、当業者の十分範囲内の慣用のプロトコルであり、本明細書に教示されている（例えば、実施例１、２、３、４および５）。ナトリウム電流が開平する速度は急速で、チャネルを介してイオンが移動するスピードが高いので、チャネルの機能は、ミリ秒の時間分解能で１秒間に１００万イオンの速度でイオン流動を測定することが可能な電子生理学的手法を用いて試験することができる。さらに、実施例１、２および３に示したように、選択的永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストまたは他の永続性ナトリウム電流アンタゴニストを同定する方法は、細胞膜電位の光学的測定を可能にするために細胞膜電位の変化に特異的な蛍光染料を用いる。本明細書の以下に記載するように、試験する化合物を、永続性ナトリウム電流を介在することが可能なナトリウムチャネルを発現する、およびカリウムチャネルまたはナトリウム／カリウムＡＴＰアーゼまたはその両方を発現する細胞を含むウェルに加える。
【００９９】
電位依存型色素を用いる測定方法は当分野で周知である。例えばlain D. Johnson, Fluorescent Probes for Living Cells 30 (3) HISTOCHEM. J. 123-140 (1998);および IMAGING NEURONS: A LABORATORY MANUAL (Rafael Yuste,ら、 eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2000)。特に、以下に記載の実施例は、例えば、Jesus E. Gonzalez & Roger Y. Tsien, Improved Indicators of Cell Membrane Potential That Use Fluorescence Resonance Energy Transfer 4 (4）cHEM.Blot. 269-277 (1997); Roger Y. Tsien & Jesus E.Gonzalez, Voltage Sensing by Fluorescence Resonance Energy Transfer, U. S. Patent No. 5661035 (Aug. 26,1997) ; Roger Y. Tsien & Jesus E. Gonzalez & Roger Y. Tsien, Improved Indicators of Cell Membrane Potential That Use Fluorescence Resonance Energy Transfer 4 (4) CHEM. Blot. 269-277 (1997); Roger Y. Tsien & Jesus E. Gonzalez, Voltage Sensing by Fluorescence Resonance Energy Transfer, U. S. Patent No. 5661035 (Aug. 26,1997) ; Roger Y. Tsien & Jesus E. Gonzalez, Detection of Transmembrane Potentials by Optical Methods, U. S. Patent No. 6342379 (Jan. 29,2002) ; Jesus E. Gonzalez & Michael P. Maher, Cellular Fluorescent Indicators and Voltagellon Probe Reader (VIPR) Tools for lon Channel and Receptor Drug Discovery, 8 (5-6) RECEPTORS CHANNELS 283-295, (2002); and Michael P. Maher & Jesus E. Gonzalez, High Throughput Method and System for Screening Candidate Compounds for Activity Against Target lon Channels, U. S. Patent No. 6686193 (Feb. 3,2004)に記載されるように、電位選択的染料によって膜電位の測定において蛍光共鳴エネルギー遷移（FRET）の利用から生じる高い空間時間分解能を利用する。
【０１００】
さらに、本明細書の教示に示すように（例えば実施例２および３参照）、一過性ナトリウム電流に対し、永続性ナトリウム電流に対する選択性を確認することができる。
【０１０１】
天然に存在する細胞や遺伝子操作された細胞を含む様々なタイプの細胞を、in vitroアッセイにおいて用い、永続性ナトリウム電流を検出することができる。非不活性化ナトリウム電流を有する天然に存在する細胞としては、例えば、いくつかのタイプのニューロン（例えば、軸索、小脳プルキンエ細胞、新皮質錐体細胞、視床神経細胞、ＣＡ１海馬錐体細胞、線条体ニューロン、哺乳類のＣＮＳ軸索等）が挙げられる。永続性ナトリウム電流を有する他の天然に存在する細胞は、当業者が本明細書の以下に記載する方法および他の周知の方法を用いて同定することができる。化合物を永続性ナトリウム電流を変化させるその能力について試験するのに用いるための細胞は、マウス、ラット、ブタ、ヤギ、サルまたはヒト等の哺乳類、または永続性ナトリウム電流を介在することが可能なナトリウムチャネルを発現する細胞を含む非哺乳類から得ることができる。
【０１０２】
永続性ナトリウム電流を有する遺伝子操作された細胞は、例えば、Ｎａv１．３等の永続性電流を介在することが可能なナトリウムチャネルをコードするｃＤＮＡを含むことができる；または永続性電流を介在することが可能なナトリウムチャネルの増大した発現、一過性電流を介在するナトリウムチャネルの減少した発現、またはその両方を有するように遺伝し操作した細胞であってもよい。永続性ナトリウム電流の介在することが可能なナトリウムチャネルが内因的に認められるよりも高いレベルでの発現をもたらすのに組換え発現は有用であり、通常はチャンネルが認められない細胞または抽出物における発現も可能にする。１またはそれ以上の組換え核酸発現構築物は一般に、目的のチャネルの１またはそれ以上のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結した、宿主細胞または転写−翻訳系にとって適当なＲＮＡ転写の構成的または誘導的プロモーターを含む。発現構築物はＤＮＡでもＲＮＡであってもよく、場合により、プラスミドまたはウイルスベクター等のベクターに含まれていても良い。永続性ナトリウム電流を介在することが可能ないくつかのナトリウムチャネルを含め、多くのナトリウムチャネルのサブユニットをコードする核酸配列の周知で一般に入手可能な知識に基づいて、当業者は、例えば、本明細書の一部を構成する、Molecular Cloning A Laboratory Manual (Joseph Sambrook & David W. Russell eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd ed. 2001); および CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (Frederick M. Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, 2004)に記載されるような慣用の実験室的方法を用いて、所望のレベルの生物学的に活性な永続性または一過性ナトリウチャンネルを発現させることができる。ナトリウムチャネルのいくつかのファミリーのｃＤＮＡはクローニングされ配列が決定されており、記載されている。例えば、本明細書の一部を構成する、Alan L. Goldin, Diversity of Mammalian Voltage-gated Sodium Channels, 868 ANN. N. Y. ACAD. Scl. 38-50 (1999), William A. Catterall, From lonic Currents to Molecular Mechanisms : The Structure and Function of Voltage-gated Sodium Channels, 26 (1) NEURON 13-25 (2000); John N. Wood & Mark D. Baker, Voltage- gated Sodium Channels, 1 (1) CURR. OPIN. PHARMACOL. 17-21 (2001); and Frank H. Yu & William A. Catterall, Overview of the Voltage-Gated Sodium Channel Family, 4 (3) GENOME BIOL. 207 (2003)。さらに、現在記載されているナトリウムチャネルのヌクレオチド及びタンパク質配列はいずれもGenBankデータベースから一般に入手可能である（本明細書の一部を構成する、National Institutes of Health, National Library of Medicine, http://www. ncbi. nlm. nih. gov/）。
【０１０３】
組換えナトリウムチャネルを発現させるのに用いることができる宿主細胞の例としては、単離された哺乳類の一次細胞、確立した哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ２９３−ＴおよびＰＣ１２等）；両生類細胞（アフリカツメガエル胚、卵母細胞等）及び他の脊椎動物細胞が挙げられる。宿主細胞の例としては、遺伝子操作によりナトリウムチャネルを発現する、昆虫細胞（例えば、ショウジョウバエ）、S. cerevisiae, S. pombe、Pichia pastors等の酵母、原核細胞（大腸菌等）が挙げられる。
【０１０４】
ＸＩ.反応式
本発明の方法に用いられる化合物は、以下の実施例６、７、８および９に記載された具体的な合成反応式等の一般的な合成法によって合成することができる。これらの合成法の修飾は、以下の開示および当分野において一般的に入手可能な知識から合成有機化学に携わる当業者には自明であろう。
【０１０５】
以下に開示する反応式は本発明の方法に用いられる実施例化合物の合成に関する。本明細書に記載した合成法は、具体的には記載されていない本発明の方法において有用な化合物を合成するために、合成有機化学に携わる当業者の技術の範囲内で適合させることができる。反応式１、２、３および４は、それぞれ式１、２、３および４を有する化合物の合成ルートを開示する。実施例６、７、８および９は、それぞれ式１、２、３および４で示した実施例化合物の合成に有用な方法を記載する。
【０１０６】
実施例６、７、８および９に記載の具体的な反応条件は本発明の方法に有用な実施例化合物の合成に関する。実施例６、７、８および９に示した具体的かつ例示的な合成方法はそれぞれ、一般式１〜４の範囲内の具体的化合物を記載するが、そこにおいて用いられる合成プロセスおよび方法は、有機化学者の技術の範囲内で適合させることができ、実施例として本願明細書に具体的に記載されていない本発明の方法において有用な化合物を合成するためにこのような適合を行い用いることができる。
【０１０７】
反応式１
【化１５】
2007504165.tif 000015
【０１０８】
反応式２
【化１６】
2007504165.tif 000016
【０１０９】
反応式３
【化１７】
2007504165.tif 000017
【０１１０】
反応式４
【化１８】
2007504165.tif 000018
【０１１１】
ＸＩＩ．動物モデル
哺乳類におけるナトリウム電流の異常なレベルまたは一酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態を処置における、選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニスト等、永続性ナトリウム電流を選択的に減少させる化合物の効果は、様々な周知の方法を用いて確認することができる。周知の動物モデルは、ニューロン死を減少させるまたはナトリウム電流の異常なレベルによって特徴付けられる状態または細胞内一酸化窒素の異常なレベルによって特徴付けられる状態を処置する、選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニスト等の化合物の能力を決定するのに有用である。虚血は、たとえばルーメン内閉塞、ルーメン外閉塞、血管クリップ、小型流体閉塞、アメロイド閉塞等のいずれかを用いることができる、いくつかの外科的手法を用いていくつかの動物種において誘発させることができる。虚血の動物モデルは当業者にはよく知られており、虚血モデルの例としては、齧歯類、サル、ヒヒ、イヌ、ネズミ、及びウサギモデルが記載されている。例えば、Douglas E. McBean & Paul A. T. Kelly, Rodent Models of Global Cerebral Ischemia : A Comparison of Two-Vessel Occlusion and Four-Vessel Occlusion 30 (4) GEN. PHARMACOL. 431-434 (1998); E. M. Nemoto, Monkey Model of Complete Global Ischemia, 24 (2) STROKE 328-329 (1993); R. F. Spetzler et al., Chronic Reversible Cerebral Ischemia : Evaluation of a New Baboon Model, 7 (3) NEUROSURGERY 257-261 (1980); A. Mitro et al., Method of the Development of Irreversible, Complete Cerebral Ischemia in Dog, 21 (2) NEUROPATOL. POL. 315-321 (1983); T. Yoshimine & T Yanagihara, Regional Cerebral Ischemia by Occlusion of the Posterior Communicating Artery and the Middle Cerebral Artery in Gerbils, 58 (3) J. NEUROSURG. 362-367 (1983); R. Pluta, Experimental Treatment with Prostacyclin of Global Cerebral Ischemia in Rabbit-New Data, 28 (3-4) NEUROPATOL. POL. 205-215 (1990) ; J. Guo & Y. D. Chao, Modification of a Model for Cerebral Ischemia in the Cat : A New Method to Occlude the Middle Cerebral Artery, 25 (1) NEUROSURGERY 49-53 (1989)を参照。
【０１１２】
神経変性障害の動物モデルは当分野においてよく知られており、例えば、アルツハイマー病モデル（アミロイド前駆体タンパク質およびプレセニリン−１の変異体を過剰発現するトランスジェニックマウス等）や動物をアミロイドβ−ペプチドまたは興奮性毒で処置したモデルが挙げられる。パーキンソン病のモデルの例では、トキシンMPTP（１−メチル−４−フェニル−1,2,3,6−テトラヒドロピリジン）を、黒質ドーパミン作動性ニューロンの選択的喪失および関連する運動機能障害をもたらすサルやマウス等の動物に投与する。神経変性疾患モデルは、マウス、ネズミ、ラット、ウサギ、ブタ、ネコ、イヌ、ヒツジおよび霊長類が挙げられるがこれに限定されない様々な動物を用いることができる。例えば、Senile Dementia of Alzheimer Type: Early Diagnosis, Neuropathology and Animal Models (J Traber & W. H. Gispen, eds., Springer Verlag, 1985); CENTRAL NERVOUS SYSTEM DISEASES: INNOVATIVE ANIMAL MODELS FROM LAB TO CLINIC (Dwaine F. Emerich et al., eds. , Humana Press, 1999)を参照。
【０１１３】
選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニスト等の永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物の、神経死または機能不全の程度に対する効果を該化合物を投与しない対照動物と比較して評価するのに有用な評価項目は、部分的には、処置する状態によるが、当業者によく知られている。そのような評価項目としては、例えば、損傷範囲の減少、生理学的機能の改善および行動の改善が挙げられる。
【０１１４】
選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニスト等の永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物の活性はまた、神経損傷の細胞ベースのモデルで確認することもできる。そのような細胞ベースのモデルは、アンタゴニストを動物モデルに用いる前にそのアンタゴニストの活性についてさらなるリードアウトを提供し、培養した神経の死を減少させるのに有用なアンタゴニストまたは他の化合物を同定するのに用いることもできる。細胞ベースのアッセイの例としては、神経が、低酸素症、グルコース除去、酸化的または興奮毒性損傷等の物質または状態に応答するアポトーシスの１またはそれ以上の兆候を示す虚血誘発性神経損傷の細胞モデルが挙げられる。虚血誘発性神経損傷の細胞ベースのモデルの例は当業者に知られており、例えば、Lalitha Tenneti et al., Role of Caspases in N-Methyl-D-Aspartate-Induced Apoptosis in Cerebrocortical Neurons, 71 (3) J. NEUROCHEM. 946-959 (1998); and R. James White & lan J. Reynolds, Mitochondrial Depolarization in Glutamate- Stimulated Neurons : An Early Signal Specific to Excitotoxin Exposure, 16 (18) J. NEUROSCI. 5688-5697 (1996)に記載されている。
【０１１５】
選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニスト等の永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物の神経死または機能不全を減少する能力は、神経細胞破壊の観察可能な兆候または症状を化合物による処置の存在下または非存在下で解析することにより評価することができる。神経のアポトーシス死の開始は、細胞機能および形態に対する観察可能な効果、並びに機能不全またはアポトーシス性の神経を含む組織、器官および動物に対する観察可能な効果を有する。従って、神経損傷の開始因子としては、アポトーシスを誘発する遺伝子の発現の増大等の分子の変化、ミトコンドリア機能の減少等の細胞機能の変化、収縮やブレブ形成等の細胞形態の変化、その程度は損傷の容量や損傷の大きさを含むパラメーターによって評価することができる梗塞または他の損傷の存在等の器官及び組織の機能および形態の変化、運動機能の喪失等の機能の変化、、死亡率の増大、生存率の減少を含む動物モデルにおける生理学的変化、認知症の発症または記憶の喪失等の行動の変化等の観察可能なパラメータが挙げられる。
【０１１６】
神経損傷の指標の減少は、細胞、組織、器官または動物の少なくとも２つの状態における神経損傷の指標と比較することにより、細胞、組織、器官、または動物において評価することができる。即ち、神経損傷の指標の減少は、対照の状態と比較して表すことができる。対照の状態は、例えば、処置をしない、異なる処置の存在下での、正常な動物または当業者が適当であるとした他の状態における、細胞、組織、器官または動物が挙げられる。
【０１１７】
ＸＩＩＩ．疼痛モデル
一過性ナトリウム電流に対して、永続性ナトリウム電流を選択的に減少する化合物の、哺乳類における慢性疼痛を処置する能力は、様々な周知のアッセイを用いて確認することができる。そのようなアッセイとしては、マウス・ライジング・アッセイ、テイル・フリック・アッセイ、坐骨神経結紮アッセイ、ホルマリンテストおよび後根神経節結紮アッセイが挙げられるが、これに限定されない。
【０１１８】
ヒトの鎮痛活性との相関がある様々なクラスの鎮痛化合物の鎮痛活性を検出し、比較するための受け入れられている標準は、マウスにおける酢酸誘発性ライジングの抑制である。例えば、R. Koster et al., Acetic Acid for Analgesic Screening, l8 FED. PROC. 412-416 (1959)参照。マウス・ライジング・アッセイでは、マウスを試験化合物またはビークルの種々の用量で処置した後、設計した観察期間の５分前に酢酸の標準投与用量を腹腔内注射する。酢酸は0.55％溶液として調製し、０．１mL／１０ｇ体重として注射する。スコアリングのため、「身もだえ」は、酢酸の投与から約５分後に開始する観察期間の間の全身の伸張または腹部の収縮によって示される。
【０１１９】
様々な化合物に暴露した後の鎮痛レベルを定義またはモニターするのに用いられている別のモデルはテイル・フリック・アッセイである。例えば、William L. Dewey et al., The Effect of Narcotics and Narcotic Antagonists on the Tail- Flick Response in Spinal Mice, 21 (8) J. PHARM. PHARMACOL. 548-550 (1969)参照。このアッセイでは、装置を使用してマウス、ラットまたはサルの尻尾に光線を当て、尻尾を振る時間を評価することにより、試験することができる。この試験は、弱い鎮痛剤および強い鎮痛剤のスクリーニングに有用であることが分かっている。テイル・フリック・アッセイでは、マウスを様々な用量の試験化合物またはビークルで処置する。投与後の選択した時点で、マウスを保持管に入れて各マウスが、尻尾に当てた光線による熱に反応（テイル・フリック）するめでの時間をテイル・フリック・アッセイ装置（Columbus Instruments, Columbus, OH）で記録する。
【０１２０】
神経障害性疼痛の鎮痛の評価のための受け入れられているモデルは、末梢の神経障害疼痛のChungモデルである。例えば、本明細書の一部を構成する、Sun H. Kim & Jin M. Chung, An Experimental Model for Peripheral Neuropathy Produced by Segmental Spinal Nerve Ligation in the Rat, 50 (3) PAIN 355-363 (1992)を参照。Chungモデルは、脊椎神経結紮法を実施することによる部分的な神経損傷に関する選択的な脊椎神経切断モデルである。この手法のためのプロトコルは、当業者には慣用的でよく知られており、本明細書にも記載されている（例えば、実施例５参照）。
【０１２１】
神経障害性疼痛の鎮痛を評価するための他の受け入れられているモデルは坐骨神経結紮アッセイである。例えば、本明細書の一部を構成するGary J. Bennett and Yi-Kuan Xie, A Peripheral Mononeuropathy in Rat That Produces Disorders of Pain Sensation Like Those Seen in Man, 33 (1) PAIN 87-107 (1988); およびYoun-Woo Lee et al., Systemic and Supraspinal, but not Spinal, Opiates Suppress Allodynia in a Rat Neuropathic Pain Model, 199 (2) NEUROSCI. LETT. 186: 111-114 (1995)参照。坐骨神経結紮アッセイでは、ラットを麻酔して神経結紮法を実施する。一般的に坐骨神経を露出させ、神経の周りを約１ｍｍの間隔でゆるく結んで４つ結紮をつくる。外科処置の１日〜１０週間後に、侵害受容試験を行う。透明なガラスの床を設けたチャンバー内にラットを入れ、床の下から放射熱源を足底表面に当てることにより、侵害的熱に対する反応を測定した。後肢を引っ込めるまでの時間が長くなると鎮痛活性を示すことになる。通常は害のない機械的刺激に対する応答は、ラットをスクリーンフロアを設けたチェンバーに入れ、後肢の足底表面を、屈曲に要する力（ｇ）を較正したグレード化したvon Frey hairで刺激することにより測定した。坐骨神経を結紮したラットは、未処置ラットと比較して低いグラム数の機械的刺激に対し反射的な引っ込め反応を示し、異痛を示す。足の引っ込めるのに要する機械的刺激のグラム数の増大は抗異痛活性を示すものである。
【０１２２】
ホルマリンテストは、炎症性疼痛のモデルとして十分に受け入れられている。例えば、Annika B. Malmberg & Tony L. Yaksh, Antinociceptive Actions of Spinal Nonsteroidal Anti-Inflammatory Agents on the Formalin Test in the Rat, 263 (1) J. PHARMACOL. EXP. THER. 136-146 (1992)参照。ラットを麻酔し、不随意運動の喪失後、ラットの後肢の背面に５％ホルマリン溶液５０μＬを３０ゲージの針を用いて皮下注射した。次いで、観察のため、ラットをそれぞれ開放したPlexiglasチェンバーに入れ、最大１〜２分間の間隔で、不随意活動および正常な運動機能でもってラットは麻酔からの回復を示した。注射した足の後込み(flinching)／足振り動作(shaking)の回数を数えることにより疼痛行動を、数値化した。後込み動作は、１０〜６０分の間隔で５分間おきに、１〜２分、５〜６分の１分間の回数を計測する。注射した足の後込み／足振り動作の阻害は鎮痛活性を示すものである。
【０１２３】
これらアッセイのいずれかを用いて、当業者は、ED50値および平均の標準誤差を受け入れられている数多くの方法により決定することができることを認識する。例えば、本明細書の一部を構成するRoger E. Kirk, EXPERIMENTAL DESIGN : PROCEDURES FOR THE BEHAVIORAL SCIENCES, (Wadsworth Publishing, 3rd ed. 1994)参照。当業者は、上記及び他のよく知られている疼痛のモデルが、選択的な永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストを含め、選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストが慢性疼痛の処置に有用であることを確証するのに有用であることを理解する。
ＸＩＶ．医薬組成物
As disclosed herein a selective persistent sodium current antagonist is administered to a mammal to treat a condition characterized by aberrant levels of sodium current or aberrant levels of intracellular nitric oxide. As used herein, the term"treating,"when used in reference to administering to a mammal an effective amount of a selective persistent sodium current antagonist, means reducing a symptom of a condition characterized by aberrant levels of sodium current or aberrant levels of intracellular nitric oxide, or delaying or preventing onset of a symptom of a condition characterized by aberrant levels of sodium current or aberrant levels of intracellular nitric oxide in the mammal. For example, the term "treating"can mean reducing a symptom of a condition characterized by aberrant levels of sodium current or aberrant levels of intracellular nitric oxide by at least 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90% or 100%. The effectiveness of a selective persistent sodium current antagonist in treating a condition characterized by aberrant levels of sodium current or aberrant levels of intracellular nitric oxide can be determined by observing one or more clinical symptoms or physiological indicators associated with the condition. An improvement in a condition characterized by aberrant levels of sodium current or aberrant levels of intracellular nitric oxide also can be indicated by a reduced need for a concurrent therapy. Those of skill in the art will know the appropriate symptoms or indicators associated with specific conditions and will know how to determine if an individual is a candidate for treatment with a selective persistent sodium current antagonist. In particular, it is understood that those skilled in the art will be able to determine if a condition if characterized by aberrant persistent sodium current, for example, by comparison of levels of persistent sodium channel expression or activity in cells from the individual with a normal control cells.
【０１２４】
本明細書に開示するように、選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストは慢性疼痛を処置するために哺乳類に投与される。本明細書において用いる「慢性疼痛を処置する」なる語は、選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量の哺乳類への投与に言及して用いる場合は、哺乳類において、慢性疼痛の症状の軽減、または慢性疼痛の症状の発症を遅延または防止することを意味する。例えば、「慢性疼痛を処置する」なる語は、慢性疼痛の症状を少なくとも 30%、40%、60%、70%、80%、90%または100%軽減することを意味する。慢性疼痛の治療における選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効性は、疼痛に関連する１以上の臨床症状または生理的指標を観察することによって判定できる。慢性疼痛の軽減はまた、慢性疼痛に対する併用療法の必要性の低下、例えば、鎮痛療法、TENS、反対刺激、発痛点への注射、スプレーおよびストレッチ、または理学療法等の必要性の減少、によっても示される。当業者であれば特定のタイプの慢性疼痛に関連する適当な症状または指標を知っているであろうし、その人が永続性ナトリウム電流アンタゴニストによる処置の候補者であるかどうかを判定する方法を知っているであろう。
【０１２５】
本方法の特定の用途のために投与すべき適当な有効量は当業者によって本明細書において提供する教示を用いて決定されうる。例えば、有効量は上記のアッセイから外挿することができる。当業者であれば、患者の病状を治療過程においてモニターすることができ、投与すべき選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストの有効量はそれにしたがって調整しうることを認識しているであろう。
【０１２６】
本発明はさらに、有効量の永続性ナトリウム電流アンタゴニストを、１またはそれ以上の鎮痛剤が挙げられるがこれに限定されない、１またはそれ以上の他の薬剤とともに投与することによって実施することができる。このような「組合せ」治療において、アンタゴニストは、１またはそれ以上の他の薬剤と、同じまたは異なる医薬組成物において、別個にまたは同時に、そして同じまたは異なる投与経路で、送達することができることは理解される。
【０１２７】
非永続性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流に対し少なくとも２０倍の選択性を有する化合物の例としては、式１、２、３および４で示した化合物が挙げられる。さらに、本発明は、式１、２、３および４から誘導される製薬的に許容し得る塩、エステルおよびアミドを包含する。本発明において有用なアンタゴニストの適当な製薬的に許容し得る塩としては、例えば、製薬的に許容し得る酸（塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸等）の溶液とアンタゴニストの溶液とを混合することにより形成し得る酸付加塩が挙げられるがこれに限定されない。アンタゴニストが酸性部分を有する場合は、適当な製薬的に許容し得るそれらの塩としては、アルカリ金属塩（ナトリウムまたはカリウム塩等）、アルカリ土類塩（カルシウムまたはマグネシウム塩等）および適当な有機リガンドとともに形成される塩（例えば、第四級アンモニウム塩）が挙げられる。代表的な製薬的に許容し得る塩としては以下のものが挙げられるがこれに限定されない：酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カムシレート（ｃａｍｓｙｌａｔｅ）、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシラート、エストラート、エシレート、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレソルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオネート、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシラート、メチルブロミド、メチルニトレート、メチルスルフェート、ムチン酸塩、ナプシレート、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、パモエート（エンボネート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート、トシレート、トリエチオダイドおよびバレリン酸塩。
【０１２８】
従って、本発明において有用なアンタゴニストの官能基は、その化合物の薬学的な有用性を増大させるために修飾することができることは理解される。そのような修飾は、十分、当業者の知識の範囲内であり、示したアンタゴニストのエステル、アミド、Ｎ−オキシド、およびプロドラッグが含まれるがこれに限定されない。アンタゴニストの活性を増大し得る修飾の例としては、例えば、Ｃ1−Ｃ6アルキルエステル（例えば、Ｃ1−Ｃ4アルキルエステル等、アルキル基は直鎖または分岐鎖である）の形成等のエステル化が挙げられる。他の許容し得るエステルとしては、例えば、Ｃ5−Ｃ7シクロアルキルエステルおよびアリールアルキルエステル（例えば、ベンジルエステル等）が挙げられる。このようなエステルは、有機化学の分野で周知の慣用法を用いて本明細書に記載の化合物から調製することができる。
【０１２９】
他の製薬的に許容し得る修飾としては、アミドの形成が挙げられる。有用なアミド修飾としては、例えば、アンモニア、第一級Ｃ1−Ｃ6ジアルキルアミン（ここでアルキル基は直鎖または分岐鎖である）および種々の置換基を有するアリールアミンから得られるものが挙げられる。第二級アミンの場合は、アミンは５員または６員環の形態であってもよい。それらのおよび他のアミドの調製するための方法は当業者にはよく知られている。
【０１３０】
本発明において有用なアンタゴニストが少なくとも１つのキラル中心を有する場合、アンタゴニストは化学的に区別されるエナンチオマーとして存在し得る。さらに、アンタゴニストが２つ以上のキラル中心を有する場合には、化合物はジアステレオマーとして存在する。このような異性体およびその混合物はすべて、記載したアンタゴニストの範囲に含まれる。同様に、アンタゴニストが、互変異性体として存在することが可能な構造的配置を有する場合、そのような互変異性体は記載したアンタゴニストの範囲内に含まれる。さらに、結晶形態において、アンタゴニストは多型として存在し得、溶媒の存在下で、例えば、水または一般的な有機溶媒とともに、アンタゴニストは溶媒和物を形成し得る。このような多型、水和物およびその他の溶媒和物もまた本明細書に記載するアンタゴニストの範囲内に含まれる。
【０１３１】
本発明において有用な選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストまたは他の化合物は通常、製薬的に許容される組成物において投与される。本明細書において用いる、「製薬的に許容される」という用語は、ヒトまたはその他の哺乳類に投与した場合に、有害な、アレルギー性またはその他の有害または望ましくない反応を起こさないあらゆる分子実体または組成物をいう。本明細書において用いる、「製薬的に許容される組成物」という用語は、治療上有効な濃度の活性成分をいう。医薬組成物は患者に単独で投与してもよいし、その他の補助的な活性成分、薬剤、薬物またはホルモンと組みあわせて投与してもよい。医薬組成物は、慣用的な混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、粉砕、乳化、カプセル化、封入、および凍結乾燥が挙げられるがこれに限定されない様々な工程のいずれを用いて製造してもよい。医薬組成物は、無菌溶液、懸濁液、乳濁液、凍結乾燥物、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル、散剤、シロップ、エリキシルまたはその他の投与に好適な投与形態が挙げられるがこれに限定されない様々な形態であってよい。
【０１３２】
本明細書に開示される医薬組成物は、活性成分の製薬的に許容される組成物への加工を促進する製薬的に許容される担体を所望により含んでいてもよい。本明細書において用いる、「薬理学的に許容される担体」という用語は、投与した際に長期または永続する有害作用を実質的に示さないあらゆる担体をいい、以下のようなものを含む：例えば、「薬理学的に許容される媒体、安定化剤、希釈剤、補助剤または賦形剤」。かかる担体は一般に活性化合物と混合されるか、活性化合物を希釈または封入するものであり、固体、半固体、または液体のいずれであってもよい。活性成分は可溶性であってもよいし、所望の担体または希釈剤中の懸濁液として送達してもよいことが理解される。様々な製薬的に許容される担体のいずれも利用することが出来、これらに限定されないが以下が挙げられる：水性媒体例えば、蒸留水、脱イオン水、生理的食塩水; 溶媒; 分散媒; コーティング; 抗細菌および抗真菌剤; 等張剤および吸収遅延剤;またはあらゆるその他の不活性成分。薬理学的に許容される担体の選択は、投与様式に依存しうる。いずれの薬理学的に許容される担体も活性成分と非適合性でない限り、その製薬的に許容される組成物における使用が考えられる。かかる医薬上の担体の特定の使用の非限定的な例は以下に記載されている：Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al.、eds.、Lippincott Williams & Wilkins Publishers、7th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed.、Lippincott、Williams & Wilkins、20th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al.、eds.、McGraw-Hill Professional、10th ed. 2001); およびHandbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al.、 APhA Publications、4th edition 2003)。これらプロトコルは慣用的手法でありあらゆる修飾が当業者の技術範囲内であり、本明細書の教示から得られる。
【０１３３】
さらに、本明細書に開示される医薬組成物は所望により限定的ではないが、以下を含むがこれらに限定されないその他の製薬的に許容される成分を含みうることが考えられる：緩衝剤、保存料、浸透圧調整剤、塩、抗酸化剤、生理学的物質、薬理学的物質、充填剤、乳化剤、湿潤剤、甘味料または香味料など。様々な緩衝剤およびpH調整手段が本明細書に開示される医薬組成物の製造に利用できるが、ただし、その結果得られる製剤は製薬的に許容されるものでなければならない。かかる緩衝剤としては限定的ではないが、酢酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水およびホウ酸緩衝剤が挙げられる。酸または塩基が所望により組成物のpH調整に利用できることが理解される。製薬的に許容される抗酸化剤としては限定的ではないが、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソールおよびブチル化ヒドロキシトルエンが挙げられる。有用な保存料としては限定的ではないが、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、フェニル酢酸第二水銀、フェニル硝酸第二水銀および安定化オキシクロロ組成物、例えば、PURITER（登録商標）が挙げられる。医薬組成物において有用な浸透圧調整剤としては限定的ではないが、塩、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトールまたはグリセリンおよびその他の製薬的に許容される浸透圧調整剤が挙げられる。医薬組成物は塩として提供してもよく、以下を含むがこれらに限定されない多くの酸とともに形成されうる：塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸など。塩は水性またはその他のプロトン性溶媒中に、対応する遊離塩基形態と比べてより可溶性である傾向がある。薬理学分野において知られているこれらおよびその他の物質が本発明に有用な医薬組成物中に含まれうることが理解される。
【０１３４】
本発明の方法において有用なアンタゴニストは、有効量にて哺乳類に投与される。このような有効量は一般に、所望の治療効果を達成するのに必要な最少量であり、例えば、疼痛による不快感を許容可能なレベルまで軽減するまたは疼痛の有意の軽減を達成するのにおよそ必要な量、あるいは他の例としては、神経学的障害（例えば、てんかん、脳低酸素症、脳虚血、多発性硬化症および筋萎縮性側索硬化症等）に関連する症状を軽減するのにおよそ必要な量である。例えば、神経学的障害または慢性疼痛の処置に関して「有効量」なる語は、例えば、疼痛を少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％低下させるのに十分な用量であり得る。このような用量は一般に０．１〜１０００ｍｇ／日の範囲であり、例えば、０．１〜５００ｍｇ／日、０．５〜５００ｍｇ／日、０．５〜１００ｍｇ／日、０．５〜５０ｍｇ／日、０．５〜２０ｍｇ／日、０．５〜１０ｍｇ／日または０．５〜５ｍｇ／日といった範囲であってよく、実際の投与量は、神経学的障害または疼痛の重篤度、患者の年齢および体重、患者の全身健康状態、神経学的障害または疼痛の原因および投与経路を含む関連する状況を考慮して医師により決定される。反復投与を行う場合、投与頻度は、部分的には、アンタゴニストの半減期に依存する。坐薬および例えば経皮パッチ、皮膚表面または皮膚下に適用するための製剤および筋肉内注射用製剤等の徐放性製剤は本発明において有用であり得る。遅効性製剤も本発明の方法に有用でありうることが理解される。永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストを投与する対象は、慢性疼痛を経験しうる任意の哺乳類またはその他の脊椎動物であってよく、例えば、ヒト、霊長類、ウマ、ウシ、イヌ、ネコまたは鳥類が挙げられる。
【０１３５】
様々な投与経路が本発明の方法による神経学的疾患または慢性疼痛の処置に有用であり得る。本発明の方法に有用な医薬組成物は以下に依存する様々な手段によって哺乳類に投与されうる：例えば、処置すべき神経学的障害または慢性疼痛のタイプおよび位置、医薬組成物、または組成物に含まれるその他の化合物および対象の病歴、危険因子および症状。本発明の方法に好適な投与経路には、全身および局所投与の両方が含まれる。非限定的な例として、神経学的障害または慢性疼痛を処置するのに有用な医薬組成物は以下によって投与されうる：経口または皮下ポンプ;経皮パッチ;静脈内、皮下または筋肉内注射;局所ドロップ(drop)、クリーム、ゲルまたは軟膏; インプラントまたは注射される徐放製剤; 生体内分解性または非-生体内分解性送達システム;皮下ミニポンプまたはその他のインプラント装置;くも膜下腔内ポンプまたは注射;または硬膜外注射。生分解性ポリマーおよび使用方法の例示的リストは例えば以下に記載されている：Handbook of biodegradable polymers (Abraham J. Domb et al.、eds.、Overseas Publishers Association、1997); Controlled Drug Delivery: Designing Technologies for the Future (Kinam Park & Randy J. Mrsny eds.、American Chemical Association、2000); Vernom G. Wong、Method for Reducing or Preventing Transplant Rejection in the Eye and Intraocular Implants for Use Therefor、米国特許第6699493号 (Mar. 2、2004); Vernon G. Wong & Mae W. L. Hu、Methods for Treating Inflammation-mediated Conditions of the Eye、米国特許第6726918号(Apr. 27、2004); David A. Weber et al.、Methods and Device for Delivery of Ocular Implants、米国特許公開第US2004/0054374号(Mar. 18、2004); Thierry Nivaggioli et al.、Biodegradable Ocular Implant、米国特許公開第US2004/0137059号(Jul. 15、2004)。投与頻度および持続時間は部分的には所望の治癒度および免疫寛容原性(tolerogizing)組成物の半減期に依存するであろうことが理解される。
【０１３６】
具体的態様において、本発明の方法は選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの末梢投与によって実施される。本明細書において用いる、「末梢投与」または「末梢に投与する」という用語は、薬剤を対象の中枢神経系の外側に導入することを意味する。末梢投与には、脊椎または脳への直接投与以外のあらゆる投与経路が含まれる。したがって、くも膜下腔内および硬膜外投与ならびに頭蓋注射または埋め込みは、「末梢投与」または「末梢に投与する」という用語の範囲外であることが明白である。さらに、いくつかの選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストは血液脳関門を通過でき、末梢投与後に中枢および末梢神経系を介して分布することは明かである。
【０１３７】
末梢投与は局所または全身でありうる。局所投与では、投与部位から遠い領域と比べて局所投与部位自体およびその周囲に医薬組成物が有意に多く送達される。全身投与では、医薬組成物は実質的に対象の全末梢神経系に送達され、組成物の性質に応じて中枢神経系にも送達されうることになる。
【０１３８】
本発明の方法に有用な末梢投与経路にはこれらに限定されないが以下が含まれる：経口投与、局所投与、静脈内またはその他の注射、および埋め込まれたミニポンプまたはその他の徐放 装置または製剤。本発明において有用な医薬組成物は以下のような末梢投与しうるものである：例えば、あらゆる許容される形態での経口投与、例えば、錠剤、液剤、カプセル、散剤など;静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下または非経口注射;経皮拡散または電気泳動;あらゆる許容される形態の局所投与、例えば、ドロップ、クリーム、ゲルまたは軟膏;およびミニポンプまたはその他の埋め込み徐放装置または製剤。
【０１３９】
本発明の様々な実施形態の活性に実質的な影響を及ぼさない修飾もまた、本明細書に記載した定義の範囲に含まれる。従って、以下の実施例は説明を目的とするものであるが、本発明を限定するものではない。
【０１４０】
（実施例）
実施例１
永続性ナトリウム電流の阻害物質の同定のためのハイスループットスクリーニングアッセイ
永続性ナトリウム電流を阻害する化合物を同定するために、プライマリーハイスルプットスクリーニングアッセイを用いた。例えば、本明細書の一部を構成するJoseph S. Adorante et al., High-throughput Screen for Identifying Channel Blockers that Selectively Distinguish Transient from Persistent Sodium Channels, 米国特許出願公開第2002/0077297号(2002年6月20日)を参照。
Ｉ．化合物同定アッセイの概要
永続性ナトリウム電流を変化させる試験化合物の能力を試験するために、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞をNav1. 3ナトリウムチャネルでトランスフェクトし、永続性ナトリウム電流を介在することができるナトリウム電流を発現する細胞を得た。Nav1. 3を発現するＨＥＫ細胞（ＨＥＫ−Nav1. 3）を、Ｎａ+不含培地および生理学的濃度（4.5ｍＭ）のＫ+を含むアッセイプレートウェルに加え、イオン感受性ＦＲＥＴ色素および５μＭの試験化合物またはＤＭＳＯ対照のいずれか一方とともに20分間プレインキュベーションした。次いで、アッセイプレートを電圧／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）（）に移し、ドナーおよびアクセプターＦＲＥＴ色素からの蛍光発光比が１．０になるようにＶＩＰＲを調整した。永続性ナトリウム電流を発生させるために、最初に等張溶液を添加してウェル中のナトリウムとカリウムイオンの濃度をそれぞれ１１０ｍＭおよび１０ｍＭに調整した後、得られたナトリウム依存的な脱分極を測定し、第２にＫ+を添加して最終濃度を８０ｍＭとして、Ｋ+依存的脱分極を測定することにより、二重添加プロトコルをを行った。Ｎａ+依存シグナルをブロックするが、Ｋ+依存シグナルをブロックしない試験化合物をさらなる解析のために選択した。永続性Ｎａ+により生じたＮａ+依存性脱分極を図２に示すように測定した。標識したボックスはＮａ+またはＫ+の適用を示す。丸印は0.1％ＤＭＳＯを添加した対照の応答を示し、△印はＮａ+チャネル阻害物質であるテトラカイン（１０μＭ）の効果を示し、◇は非特異的チャネルブロッカーを適用中の応答を示す。
【０１４１】
このハイスループットアッセイでは、任意のエフェクターにより誘導された膜脱分極を阻害する非特異的な試薬は、Ｎａ+依存の脱分極のみをブロックする真の永続性Ｎａ+電流アンタゴニストから区別されなければならない。従って、Ｋ+依存性脱分極を改変する化合物の能力を決定するカウンタースクリーンを行った。図２に示すように、ビークル（ＤＭＳＯ）単独でのプレインキュベーション後、Ｎａ+およびＫ+の添加は、Ｒｆ／Ｒｉにおける増大によって示されるようにいずれも強い脱分極をもたらした。Ｎａ+チャンネルブロッカーであるテトラカインは、Ｒｆ／ＲｉのＮａ+依存の変化を阻害したがＫ+依存の変化は阻害しなかった。対照的に、Ｎａ+およびＫ+依存脱分極の非特異的な阻害物質は、いずれか一方の添加後のＲｆ／Ｒｉにおける変化をブロックした。このデータは永続性ナトリウム電流の選択的アンタゴニストを記載した方法を用いて同定することができることを示している。
【０１４２】
Ｎａ+依存的脱分極を非選択的に阻害する化合物を排除するために、上記の手順を用いて得られたデータをリードアウトとしてＫ+依存脱分極を用いたカウンタースクリーンについて解析した。プライマリースクリーンからのヒットを選択するために、データをヒストグラムとしてプロットした。Ｎａ+依存の脱分極の阻害をＫ+依存の脱分極の阻害に対してプロットした。これらのデータに基づき、ヒットとしての選択基準は、Ｎａ+依存脱分極の９０％阻害以上であって、Ｋ+依存脱分極の２０％阻害以下である。このプロトコルによって、その効果が不活性であるかまたは非選択的である化合物と、永続性ナトリウム電流を特異的にブロックする化合物とが区別された。
【０１４３】
ＩＩ．溶液
本アッセイに用いた溶液の組成および容量は以下に記載する。本アッセイを用いる溶液の成分の機能は以下のとおりである：（１）ＣＣ２−ＤＭＰＥ：クマリン標識リン脂質共鳴エネルギードナー。この色素は、４０５ｎｍは長の光で励起し、ＦＲＥＴの不在下で４６０ｎｍにて蛍光を発する。（２）ＤｉＳＢＡＣ２（３）またはＤｉＳＢＡＣ６（３）：電場に応じて膜を隔てて区切る移動性共鳴エネルギーアクセプター。これら色素に関する励起スペクトルはクマリンドナーの発光とオーバーラップしており、それらはＦＲＥＴアクセプターとして作用する。これらは５７０ｎｍの範囲の発光スペクトルを有する。（３）ＥＳＳ−ＡＹ１７：は本アッセイを複雑にするバックグラウンド蛍光を減少させる。（４）ＣｄＣｌ２（400μＭ）は細胞の膜電位を負の静止電位に安定化するためプレインキュベーション溶液に含有させ、活性化のために利用可能なＮａ+チャネルの数を最大にした。（５）プレインキュベーションおよびアッセイの間に細胞外Ｃｌ-をＭｅＳＯ3で置き換えた。これはアッセイ中に邪魔なＣｌ-を排除し、永続性Ｎａ+電流によって誘導される電位変化を増幅およびより安定化する。（６）第一のＫ+添加：は実質的な数のＮａ+チャネルを活性化する電位に細胞を脱分極化するように機能する。（７）第２のＫ+添加：この添加は、Ｋ+依存脱分極をもたらし、非特異的なブロッカーを排除するためのカウンタースクリーンとして用いる。
【０１４４】
ＩＩＩ．培養細胞
ＨＥＫ２９３細胞を、１０％ウシ胎児血清(Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA)および１％ペニシリン−ストレプトマイシン(invitrogen, Inc., Carlsbad, CA)を添加した最小必須培地(Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA)にて培養した。HEK-Ｎａv１．３細胞の培地にも、５００ｍｇ／ｍＬのＧ４１８ジェネティシン(Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA) および2 μＭ TTX (Calbiochem, Inc., San Diego, CA)を含有させて選択圧を維持した。細胞はベントキャップフラスコ内で湿度９０％、１０％ＣＯ2にて、約８０％コンフルエントまで培養し、トリプシン処理1: 5 または1: 10により分割した。
【０１４５】
HEK-Nav1. 3細胞を、マトリゲル(Becton-Dickinson ; San Diego, CA)でコーティングした９６ウェルプレート(Becton-Dickinson, San Diego, CA) に40,000細胞(100 pi 培地)／ウェルにて播種し、翌日にアッセイした(16〜20時間)。細胞は、たまに96ウェルプレートにて幾分低い密度(20,000／ウェル）でインキュベーションし、40〜48時間までインキュベーションした。
【０１４６】
ＩＶ．ＨＥＫ−Ｎａv１．３の取り扱いおよび染色
アッセイの約１６〜２４時間前にHEK-Nav1. 3 細胞を９６ウェルのポリリジンコートプレートに40,000／ウェルにて播種した。アッセイの当日に、培地を吸引し、CellWash (Thermo LabSystems, Franklin, MA)を用い、細胞を150μLのBath溶液＃１(BS&num;1)で３回洗浄した。
【０１４７】
20μＭCC2-DMPE溶液は、クマリンストック溶液と１０％プルロニック127を１：１で混合した後、この混合物を適当な体積のＢＳ＃１中に溶解させることにより調製した。最後の洗浄後、50ｍＬの２０μＭCC2-DMPE溶液を、50ｍＬの残りに加え、10μＭのクマリン染色バッファーとした。プレートを暗室で３０〜６０分間室温でインキュベーションした。
【０１４８】
細胞をクマリンで染色している間、TEA-MeS03浴中の10μＭのDiSBAC2(3)溶液を調製した。オキソノールに加え、この溶液は、所望の終濃度の４倍 (例えば、終濃度５μＭであれば２０μＭ）の任意の試験薬物、1.0ｍＭ ESS-AY17および400μＭ  ＣdＣ12を含有した。
【０１４９】
CC2-DMPE染色の３０〜６０分後、細胞を150μＬのTEA-MeS03バッファーで3回洗浄した。浴を取り除いた後、細胞を80μＬのDiSBAC2 (3)溶液に添加し、上記のとおり２０〜３０分インキュベーションした。一般に、各プレートにおける１つのカラム（例えば、カラム１１）におけるウェル、試験薬物を含有せず、ポジティブまたはネガティブコントロールとした。
【０１５０】
インキュベーションが完了したら、細胞をナトリウム加減についてＶＩＰＲで分析する準備ができた。て細胞を刺激するため240μＬのNaMeS03バッファーを加え、薬物濃度を1: 4に希釈し、240μＬのTEA-MeS03バッファーまたは１μＭTTXはポジティブコントロールとして用いた。
【０１５１】
Ｖ．ＶＩＰＲ装置およびデータ処理
マイクロタイタープレートの光学実験は、２つの400ｎｍ励起フィルターおよびそれぞれ青および赤感受性ＰＭＴの放射側に460 nmおよび570 nmフィルターを備えたフィルタースティックを用いて電圧／イオンプローブリーダー(VIPR)にて行った。この装置を、カラム収集モードで動作させ、カラムあたり２または５Ｈｚサンプリングおよび３０秒にて記録した。各ウェルの初発容量は８０ｍＬ；実験中は通常２４０ｍLを各ウェルに加えた。ランプを約２０分かけて温め、各実験の約１０分間前にＰＭＴの電源をオンにした。
【０１５２】
ＶＩＰＲプラットフォーム（Aurora Bioscience, San Diego, CA）での、460および570ｎｍの蛍光発光の変化のレシオメトリック測定は、このアッセイフォーマットが、Na+/K+添加によるHEK-Nav1. 3細胞の脱分極により、強い再現可能な蛍光シグナルをもたらすことを示した。Na+−不含培地における１．０の標準化比率から、Na+−依存脱分極が
2.2を超える460/570比の増大をもたらした（図２）。この比のインターウェル解析は、シグナルの大きさが、ハイスループットスクリーニングにおいて用いるに十分な大きく一貫性のあることを示した。
【０１５３】
データを解析し、460 nm and 580 nmチャネルにおいて測定した強度の標準化した比として報告した。VIPRサンプリングレートを、異なる実験で２〜５Hzで変化させ、ピークのナトリウム応答に対しては高い分解能を得るため5Ｈｚを用いた。これら比の計算プロセスを以下に示す。すべてのプレートについて、カラム１２は、細胞プレートで用いたDiSBAC2 (3)およびESS-AY17濃度と同じ濃度のTEA-MeS03バッファーを含有したが、カラム１２では細胞不含でインキュベーションした。各波長での強度値をスキャンした時間で平均化した。これらの平均値を、すべてのアッセイウェルにおける強度値から差し引いた。サンプル５−１０（ＲＩ）から得られた初期比率は次式から導かれる
【数１】
2007504165.tif 000019
【０１５４】
サンプルｆ（ＲＩ）から得られた初期比率は次式から導かれる
【数２】
2007504165.tif 000020
【０１５５】
最終データを各ウェルの出発比について標準化し、Ｒｆ／Ｒｉとして報告した。Ｎａv１．３永続性電流アッセイのける蛍光応答は、実行開始から約１０秒後にピークに達し、従って、最大比を本アッセイに関するリードアウトとして選択した（図３）。
【０１５６】
ＶＩ．分析再現性と分解能
上記のアッセイフォーマットは、ネガティブコントロール（DMSO ０．１％）およびポジティブコントロール（テトラカイン１０μＭ）の両方を測定することで質の保証が可能である。アッセイの実施中、１０回目毎にプレートをコントロールプレートとした。これらのプレートからのデータを用い、このアッセイ条件がデータを試験化合物から標準化するために最適であることを確認した。図３は複数のアッセイでのコントロールプレートから得た結果を示す。
【０１５７】
図３では、０．１％DMSOまたは１０μＭテトラカインのいずれかを含有するウェルを有するコントロールプレートを、毎回９回目のプレートの後に実施した。Na+−依存の脱分極を測定し、データをヒストグラムにして示した。0. 1% DMSOの存在下で得られた平均の最大応答(Max)および１０μＭテトラカインの存在下で得られた平均の最小応答 (Min)を測定した。クォリティーコントロールのため、データの分散を最大と最小シグナル間の差と比較した。これは、各コントロールプレートについてスクリーニング枠（ｚ）を計算することによって行った。実行したでデータが１．０≧Ｚ≧０．５の場合許容される。
【数３】
2007504165.tif 000021
【０１５８】
永続性ナトリウム電流の阻害物質の選択性に関する適度のスループットスクリーニングアッセイ
実施例１に記載のハイスループットスクリーニングによって得られた化合物を、モデレートスループットスクリーンを用い、一過性ナトリウム電流のブロックに関して、永続性ナトリウム電流のブロックの選択性について試験した。この選択性アッセイはEstim法 (Aurora Bioscience, San Diego, CA)を利用してチャネル活性化を誘導した。このアッセイは、本質的に時間分解能がハイスルプットアッセイよりも高く、シグナル実験においてNa+電流の一過性および永続性成分の両方の測定が可能である。
【０１５９】
Ｉ．化合物選択性分析の概要
Estim法は、ウェルを横断する適当な電圧勾配を適用して（電場刺激、ＥＦＳ）標的細胞におけるイオンチャネルの活性化に用いることができるように電極を備えた９６ウェルプレートを備えている。Nav1. 3チャネルを発現するHEK-293細胞のＥＦＳは急速な脱分極の後、遅れて再分極を生じる。一過性Na+電流は、急速な脱分極をもたらすが、一過性Na+電流は、遅れた再分極を持続させる。永続性電流を生じないチャネルを発現する細胞において同様の実験を行った場合、急速な脱分極のみが認められた。一過性電流のブロックを数値化するため、ピーク応答の大きさを７つの刺激について平均化した。DMSOを含有するリンゲル溶液における応答と１０μＭテトラカインを含有するリンゲル溶液における応答の間の差に対して標準化することにより、平均の応答を活性に変換した。永続性電流活性を曲線下を積分することにより計算した。各化合物について得られた面積をＤＭＳＯコントロールと１０μＭテトラカインの存在下で得られた応答に対して標準化した。
【０１６０】
ＩＩ．細胞培養
アッセイの約１６〜２４時間前に、HEK-Ｎａv１．３細胞を９６ウェルポリリジンコートプレートに60,000／ウェルにて播種した。アッセイの当日に、培地を吸引し、CellWash (Thermo LabSystems, Franklin, MA)を用い、細胞を１５０μＬのHBSSで３回洗浄した。
【０１６１】
ＩＩＩ．ＨＥＫ−Ｎａv１．３の取り扱いおよび染色
20μＭCC2-DMPE溶液は、クマリンストック溶液と１０％プルロニック127を１：１で混合した後、この混合物を適当な体積のＢＳＳＳ中に溶解させることにより調製した。最後の洗浄後、50μＬの２０μＭCC2-DMPE溶液を、50μＬの残りに加え、10μＭのクマリン染色バッファーとした。プレートを暗室で３０分間室温でインキュベーションした。
【０１６２】
細胞をCC2-DMPEで染色している間、ＨＢＳＳ中の0.2μＭのDiSBAC6 (3)溶液を調製した。
【０１６３】
CC2-DMPE染色の３０分後、細胞を150μＬのＨＢＳＳで3回洗浄した。最後に洗浄後、50μＬの0.2μＭ DiSBAC6 (3)溶液を50μＬの残りの浴に加え50ｍＬの残りに加え、10μＭのオキソノール染色バッファーとした。次いで、プレートを暗室で１５分間インキュベーションした。
【０１６４】
DiSBAC6(3)染色の１５分後、１５０μＬのＨＢＳＳで細胞を再度３回洗浄した。最後の洗浄後、５０μＬの1.0μＭESS-AY17溶液を50μＬの残りの浴に加え、0.5μＭESSとした。この溶液はさらに、所望の終濃度の２倍の任意の試験薬物を含有した。プレートを暗室で１５分間インキュベーションした。インキュベーションを完了したら、細胞をEFSNSPリーダーでアッセイした。
【０１６５】
ＩＩＩ．ファーストＦＲＥＴリーダー装置およびデータ処理
マイクロタイタープレートの光学実験は、２つの400ｎｍ励起フィルターおよびそれぞれ青および赤感受性ＰＭＴの放射側に460 nmおよび580 nmフィルターを備えたフィルタースティックを用いてＦＲＥＴリーダーにて行った。この装置を、カラム収集モードで動作させ、カラムあたり１００Ｈｚサンプリングおよび１２秒にて記録した。２秒間で開始し、１Ｈｚにてパルスを７回適用した。ランプを約２０分かけて温め、各実験の約１０分間前にＰＭＴの電源をオンにした。
【０１６６】
データを解析し、460 nm and 580 nmチャネルにおいて測定した強度の標準化した比として報告した。これら比の計算プロセスを以下に示す。すべてのプレートについて、カラム１２は、細胞プレートで用いたＥＳＳ−ＡＹ１７と同じ濃度のＨＢＳＳを含有したが、カラム１２では細胞不含でインキュベーションした。各波長での強度値をスキャンした時間で平均化した。これらの平均値を、すべてのアッセイウェルにおける強度値から差し引いた。サンプル５０−１００（ＲＩ）から得られた初期比率は次式から導かれる
【数４】
2007504165.tif 000022
【０１６７】
サンプルｆ（ＲＩ）から得られた初期比率は次式から導かれる
【数５】
2007504165.tif 000023
【０１６８】
データを各ウェルの初発比に対して標準化し、Rf/Riとして報告した。一過性Na+電流シグナルを、記録中に適用した７つの電気パルスから生じたピークの平均として計算した。永続性Na+電流シグナルは、記録中に適用した７つの電気パルス中のトータルの応答下の面積を積分することにより計算した。選択性は、永続性電流の５０％をブロックするのに必要な試薬濃度（ＩＣ５０）を一過性電流についてのＩＣ５０に対して比較することにより決定した。
【０１６９】
実施例３
永続性ナトリウム電流の阻害物質の選択性の電気生理学的分析
永続性ナトリウム電流に対する試験化合物のブロック選択性を確認するために、全細胞パッチクランプ法を用いて個々の化合物を試験した。
【０１７０】
Navl. 3ナトリウムチャネルでトランスフェクトした一過性及び永続性ナトリウム電流を発現するHEK細胞をカバーガラス上にプレーティングし、Earle塩およびGlutaMAX (Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA)と、10% ウシ胎児血清（熱不活化）(Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA), 0.1 mM MEM 非必須アミノ酸 (Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA), 10 mM HEPES (Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA), 1 % ペニシリン／ストレプトマイシン(Invitrogen, Inc., Carlsbad, CA)を添加したMEM細胞培地で培養した。
【０１７１】
２４〜４８時間インキュベーションした後、培地を取り除き、外部記録溶液（以下参照）で置換した。全細胞パッチクランプ実験は、PULSEソフトウェアを備えたＩＢＭコンパチブルＰＣに接続したEPC10アンプ(HEKA Instruments, Lambrecht, Germany.)を用いて行った。P90ピペット・プラー(Sutter Instrument Co. , Novato, CA) にてホウケイ酸ガラスピペットを先の細いチップに引き延ばし、細胞内の記録溶液で満たされたときに約1.5 Mohmの抵抗まで研磨した(Microforge, Narishige, Japan) (表１)。
【表１】
2007504165.tif 000024
【０１７２】
Ｎａv１．３チャネルを発現するＨＥＫ細胞における永続性および一過性電流を、−９０ｍＶ〜０ｍＶの定電圧から200-msecの脱分極を適用することにより測定した。500 nM TTXの存在下で残存するバックグラウンド電流をすべての配線から差し引いた。薬物をマイクロ潅流システムを用いて細胞周辺に直接潅流させた。
【０１７３】
コントロールの条件下では、脱分極パルスは、永続性電流がより小さく下降する大きな一過性内向き電流を生じ、残りのパルスの間安定に持続した（図４、コントロール）。500 nM TTXの添加により一過性および永続性電流の両方が完全にブロックされた (図４, TTX)。３μＭの実施例化合物１の適用により、より大きな効果が得られた。図４をみると、化合物１は永続性電流を99%ブロックしたのに対し、一過性電流の減少はわずか１６％であった。化合物１の用量−応答解析は、一過性ナトリウム電流と比較して永続性ナトリウム電流のブロックの大きさのレンジが４桁を超えるその有意な選択性を示している（図５）。
【０１７４】
実施例４
てんかん性発作の減少における齧歯類モデル結果における選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストの投与
本試験は、試験プラットホームとして、聴覚原性けいれんマウスを用いて参照化合物（ジアゼパムおよびシパトリジン）に対する化合物１の抗けいれん効果を試験する。
【０１７５】
DBAマウスは、聴覚原性けいれん（ＡＧＳ）のモデルとして文献において十分に確立されている。このマウスは、遺伝子が原因のモデルであり、その状態を作るための処置プロトコルを要しない点において可能性のある治療法を試験するのに非常に魅力的である。負付随する器質性疾患が知られていない遺伝的特発性てんかんとして分類される。
【０１７６】
これらマウスにおけるAGS応答は、進行性の連続する動作からなる。月齢によって変るが発作の持続期間は２〜１５秒である。最初のワイルド・ランニング期は５〜２０秒間で変化する初期のランニング期、次いで１０〜２０秒間継続するワイルド・ランニング期胃分けられる。ワイルド・ランニングは、正向反射の消失とともに強直性／間代性てんかん、呼吸抑制および死へと進行する。
【０１７７】
てんかんの誘発に対する試験化合物の効果を数値化するスコアリングシステムを用いた。行動連鎖を数値に割り当て（表２）、動物が達した最も高い数値をその動物のスコアとした。処置群における１０匹の動物についての平均のスコアとして報告した。
【表２】
2007504165.tif 000025
【０１７８】
動物
雄性DBA/2マウスを産後２１日目にJackson Laboratoriesから入手した。マウスを使用する１または２日前に順応させた。処置の直前に個々のマウスの体重を計測し記録した。生存したマウスを試験の３日以内に安楽死させた。
【０１７９】
発作誘導
マウスを試験チェンバーに入れ (内径25 cm)、初期のワイルド・ランニング期、次いで全身のミオクローヌスおよび直性屈曲と伸張からなる連続性発作応答が得られるまで最大116dBの１１ｋＨｚの純音を約60秒暴露した。応答が見られない場合は５回まで試した。この方法によって、各処置群につき１０匹のマウスが得られ、それらの最大スコアの標準偏差は２５％未満であった。音刺激シグナルは、シグナル発生装置を用いて発生させ、チェンバーの屋根に取り付けた４つの高周波セラミックスピーカーから放射した。音圧が一貫するようチェンバーの較正を毎日行った。後の解析のためにAGS行動をビデオに録画した。
【０１８０】
Ｉ．Ｐ．注射
各処置群につき１０匹のマウスに試験薬物１０ｍＬ／ｋｇ体重を腹腔内注射した。注射は、音刺激の６０分前に行った。
【０１８１】
データ解析
データは正規分布について試験し、(正規分布している場合) ANOVA次いでStudent t testを用いて解析した。データが正規分布していない場合、解析はMann-Whitney rank sum testで行った。p＜．０５を有意とした。
【０１８２】
結果
各群についての平均のAGSスコア（正規分布の）を各処置について表３に示した。完全なけいれん発作を示した対照動物はなかった。５付近のコントロール値はこれらの動物がワイルド・ランニング期に入り、けいれんに進行していないかまたは不定期または軽い強直間代性のけいれんを示しているかのいずれかであることを示している。対照動物は、硬直性の身体の収縮（背中を反らす、後肢の硬直）、ランニングおよびいくらかの身体クローヌス（ひきつけ、震え）を示した。応答は非常に様々で約２０％の動物は、（症状が認められたとしても）ごく軽い症状を示した。死に至る強いＴＣＳ少将を示した対照動物はなかった。
【０１８３】
対照動物において完全なけいれん応答がみられないことはこの試験の能力を限定するものであるが、ＤＢＡマウスにおいて行動応答を音誘発性発作に減少することが知られている化合物(ジアゼパムおよびシパトリジン）は予測した用量で有効であった。化合物１(1 mg/kg)はまた、投与の６０分後に発作応答を有意に減少させた。この時点での、化合物１の予測した血漿濃度は約５μＭで、一過性電流に対しては限定的な効果を有するのみで永続性ナトリウム電流を６０％超減少する濃度であった。このアッセイにおいて高い変動性と減少した治療枠にもかかららず、この濃度で発作応答に対する統計的有意の効果が検出された事実は、化合物１の効果が永続性ナトリウム電流に対する効果に基づくものであることを示している。
【表３】
2007504165.tif 000026
【０１８４】
実施例５
疼痛の減少における齧歯類モデルの結果における永続性ナトリウム電流アンタゴニストの投与
本実施例は、選択的な永続性ナトリウムチャネルアンタゴニストの投与による、神経障害痛の動物モデルにおける異痛の好転について記載する。
【０１８５】
化合物１を、臨床的活性を予測として知られている神経障害痛の齧歯類モデルで試験した。例えばKim & Chung, supra, (1992)参照。２本の脊椎神経を結紮した後、動物は接触等の通常の痛みを伴わない刺激に感受性を示すようになる。異痛と称するこの感受性を好転させる化合物１の能力を、腹腔内投与の３０分後に試験した。図６に示すように、化合物１は、ビークル対照と比較して異痛を８０％軽減した。
【０１８６】
使用した動物モデルは、実験動物の片側のＬ５（場合によりＬ６）脊椎神経を外科的結紮した。外科処置を受けたラットの体重は回復し、正常なラットと同様の一般的活動レベルを示した。但し、これらのラットは、後肢がやや外反し、つま先を合わせるような足に異常を生じた。より重要なことに、外科処置を受けた側の後肢は、約１週間以内に、ヒトにおいてかすかに触れるような感覚を生じるような、低閾値機械的刺激による痛みに敏感になった。通常は痛みを伴わない接触に対するこの感受性は「接触性アロディニア」と称し、少なくとも２カ月は続く。この応答には、刺激から逃れるために処置した後肢を持ち上げることや、足をなめたり、何秒間も空中に保つことも含まれる。これらの応答は対照群には通常みられない。
【０１８７】
外科処置の前にラットを麻酔した。処置する部位を剃毛し、ベタジンまたはノバカインで処置した。第１３胸椎から下に仙骨のほうへ切開した。筋肉組織をL4-S2レベルで脊椎骨（左側）から分離した。L6 脊椎の位置を定め、横突起を小さな骨鉗子で注意深く取り出し、L4-L6脊椎神経を露出させた。L5およびL6脊椎神経を取り出し、6-0絹糸で堅く結紮した。対照として、脊椎神経の結紮は行わずに右側に同じ操作を行った。
【０１８８】
完全に止血したことを確認した後、傷口を縫合した。切開した部位に少量の抗生物質の軟膏を適用し、調節された温度のランプの下で回復用のプラスチックケージにラットを移した。実験の当日、少なくとも外科処置の７日後に、試験群あたり６匹のラットに試験薬物を腹腔内注射により投与した。腹腔内投与については、化合物１を約５０％ＤＭＳＯ中に製剤化し、１ｍL／ｋg体重で投与した。化合物１は１０mg／ｋgで試験した。
【０１８９】
薬物の投与前と投与から３０分後に、細い毛からなる硬さの異なる一連のvon Frey hairを用いて接触性アロディニアを測定した。床が金網のプラスチックケージにラットを入れ、約３０分間順応させた。von Frey hairsをラットの後肢の足底中央部に金網を介して垂直方向にやや曲がるように適用し、その状態を６〜８秒間保った。適用した力は０．４１〜１５．１ｇの範囲と計算された。足を鋭く引っ込めたときは陽性反応とした。正常な動物はこの程度での刺激には応答しないが、外科処置により結紮した足は１〜２ｇのhairに応答して引っ込める。
【０１９０】
要約すると、本実施例で示した結果は、選択的な永続性ナトリウム電流アンタゴニストは哺乳類における疼痛を効果的に軽減するのに用いることができることを示している。
【０１９１】
実施例６
式１で示される代表的な例示化合物の合成
チオフェン−２−カルボン酸（４−フェニル−ブチル）−アミド（化合物１；図１）に例示される式１を有する化合物は以下のとおり合成することができる。チオフェン-２−カルボニル クロリド (147 mg, 1.0mmol), トリエチルアミン (101 mg, 1.0mmol)のジクロロメタン溶液を4−フェニルブチルアミン (149 mg, 1.0mmol)で処理した。反応混合物を反応が起こらなくなるまで攪拌し、ＮaＨＣＯ3水溶液の添加によりクエンチした。有機相を回収し、濃縮して表題化合物を得た。
【０１９２】
実施例７
式２で示される代表的な例示化合物の合成
１−ベンジル−４−（５−フェニル−［１,３,４］オキサジアゾール−２−イル）−ピリジン（化合物２; 図1）に例示される式２を有する化合物は以下のとおり製造することができる。H. Smith Broadbent, etal.,Quinoxalines. I. Preparationおよび Stereochemistry of Decahydroquinoxalines, 82(1) J. AMER. CHEM. Soc. 189-193 (1960)の方法により製造した４−（５−フェニル−［１,３,４］オキサジアゾール−２−イル）−ピリジン(223 mg, 1.0mmol)のクロロホルム溶液を臭化ベンジル(171 mg, 1.0mmol)で処理した。反応物を反応が起こらなくなるまで攪拌し反応混合物を濃縮して表題化合物を得た。
【０１９３】
実施例８
式３で示される代表的な例示化合物の合成
６−イソプロピル−３−メチル−２−｛４−［（４−プロポキシ−ベンジリデン）−アミノ］−ベンジリデン）−シクロヘキサノン（化合物３；図１）に例示される式３を有する化合物を以下のとおり製造することができる。メントン (154 mg, 1.0mmol)および ４−アミノベンズアルデヒド (121 mg, 1.0mmol)のジエチルスルホキシド溶液を水酸化カリウム (56 mg, 1.0mmol)で処理した。反応物を反応がこれ以上起きなくなるまで攪拌し、反応混合物を酢酸エチルおよび水に注いだ。有機相を回収し、乾燥し、濃縮して２−（４−アミノ−ベンジリデン）−６−イソプロピル−３−メチル−シクロヘキサノンを得た。この２−（４−アミノ−ベンジリデン）−６−イソプロピル−３−メチル−シクロヘキサノンをジクロロメタンに溶解し、４−プロポキシベンズアルデヒド (164 mg, 1.0mmol)および無水Na2SO4で処理した。反応混合物を反応が起こらなくなるまで攪拌し、反応混合物を濾過して濃縮して表題化合物を得た。
【０１９４】
実施例９
式４で示される代表的な例示化合物の合成
３−（２,２,２−トリフルオロアセチルアミノ）−安息香酸２−オキソ−２−フェニル−エチルエステル（化合物４；図１）に例示される式４を有する化合物を以下のとおり製造することができる。３−アミノ安息香酸 (137 mg, 1.0mmol)のジクロロメタン溶液を無水トリフルオロ酢酸(420 mg, 2.0mmol)で処理し、反応混合物を反応が起こらなくなるまで攪拌し反応混合物を濃縮して３− (2, 2, ２−トリフルオロ-アセチルアミノ)-安息香酸を得た。３− (2,2, ２−トリフルオロ-アセチルアミノ)-安息香酸 (233 mg, 1.0mmol)および２−ヒドロキシアセトフェノン (136 mg, 1.0mmol)のジエチルホルムアミドおよびジイソプロピルエチルアミン (260 mg, 2.0mmol)中の溶液をHBTU (379 mg, 1.0mmol)で処理し、反応混合物を反応が起こらなくなるまで攪拌した。反応物を酢酸エチルと水に注いだ。有機相を回収し、乾燥し回収して表題化合物を得た。
【０１９５】
実施例１０
てんかんの処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、神経障害を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質  （ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例はてんかんを処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、永続性電流の異常活性により生じる任意の神経障害状態、例えば頭痛、疼痛、炎症性疾患、運動障害、腫瘍、分娩外傷、発育異常、神経皮膚疾患、自律神経障害および発作性疾患等もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０１９６】
患者は、てんかんと診断される神経障害性の症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で数ヶ月間経口処置した。この処置の後にこの患者を再検査したところ、患者のてんかん性発作の軽減が認められた。ＰＳＣＢの投与を繰り返すことにより、てんかん性発作の持続的な軽減が維持された。
【０１９７】
実施例１１
脳低酸素症の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、低酸素症を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質  （ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は脳低酸素症を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、人体の一部分の酸素の喪失により生じる任意の低酸素症、例えば拡散性低酸素症、低酸素性低酸素症、細胞低酸素症、虚血性低酸素症、または他のなんらかの偶然のまたは意図的な組織への酸素供給の減少または中止もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０１９８】
患者は、脳低酸素症と診断される症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で数ヶ月間経口処置した。この処置の後にこの患者を再検査したところ、患者の症状の軽減が認められた。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、これら症状の軽減が維持された。
【０１９９】
実施例１２
心虚血の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、虚血を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質  （ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は心筋虚血を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、人体の一部分の血液の喪失により生じる任意の虚血、例えば脳虚血、心筋虚血、糖尿病虚血、網膜虚血、体位性虚血、または他のなんらかの偶然のまたは意図的な組織への血液供給の減少または完全な閉塞もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２００】
患者は、心筋虚血と診断される症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で数ヶ月間経口処置した。この処置の後にこの患者を再検査したところ、患者の症状の軽減が認められた。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、これら症状の軽減が維持された。
【０２０１】
実施例１３
多発性硬化症の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、多発性硬化症を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
患者は、多発性硬化症と診断される症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で数ヶ月間経口処置した。この処置の後にこの患者を再検査したところ、患者の症状の安定化が認められた。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この疾患の継続性の進行を阻止した。
【０２０２】
実施例１４
筋萎縮性側索硬化症の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、筋萎縮性側索硬化症を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
患者は、筋萎縮性側索硬化症と診断される症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で数ヶ月間経口処置した。この処置の後にこの患者を再検査したところ、患者の症状の安定化が認められた。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この疾患の継続性の進行を阻止した。
【０２０３】
実施例１５
異常な酸化窒素レベルの処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、異常な酸化窒素レベルを処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
患者は、異常な酸化窒素レベルと診断される症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で数ヶ月間経口処置した。この処置の後にこの患者を再検査したところ、患者の症状の安定化が認められた。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、これら症状の軽減が維持された。
【０２０４】
実施例１６
三叉神経痛による神経障害性疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、神経痛性の疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は三叉神経痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、ヘルペス後神経痛、舌咽神経痛、坐骨神経痛および非定型顔面痛等の１またはそれ以上の神経を走る、なんらかの急性の突発性疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
患者は、三叉神経痛と診断される疼痛症状を示す。患者は、その痛みが、顔、目および唇の右側の突然刺すような鋭い痛みであると訴えた。食事中で食べ物を噛もうとしたときに痛みが走り数秒間その痛みは続き、その日に何回も繰り返される。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みが徐々に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２０５】
実施例１７
幻想痛による神経障害性疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、除神経後痛症候群を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は幻想痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、例えば、脳、脊椎または末梢神経への傷害、脳卒中後の疼痛、幻想痛、対まひ、腕神経叢裂離、ヘルペス後神経痛等の人体の一部分からの感覚入力の喪失により生じる何らかの疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２０６】
右腕を切断した患者は、幻想痛と診断される症状を示す。患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みが徐々に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２０７】
実施例１８
化学治療による神経障害性疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、ポリニューロパシー疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は化学療法により誘発された疼痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、例えば、糖尿病性神経障害、治療誘発性疼痛、乳房切除後症候群、ポリオ後症候群、糖尿病、アルコール、アミロイド、トキシン、ＨＩＶ、甲状腺機能低下、尿毒症、ビタミン欠乏、２’,３’−ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、ファブリー病等の２またはそれ以上の末梢神経が関与する何らかの疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２０８】
化学療法を受けている癌患者は化学療法誘発疼痛と診断される症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２０９】
実施例１９
アロディニアの処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、アロディニアを処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
【０２１０】
患者はアロディニアと診断される疼痛症状を示す。患者は前腕に静かに触ると突然焼けるような感覚が生じると訴えた。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２１１】
実施例２０
痛覚過敏の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、痛覚過敏を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
【０２１２】
患者は痛覚過敏と診断される疼痛症状を示す。患者は、テーブルの角などの硬い物に右太ももが軽く当たったときに、座り込む程の激しいうずくような痛みがあると訴えた。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２１３】
実施例２１
痛覚過敏の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、痛覚過敏を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
【０２１４】
患者は痛覚過敏と診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２１５】
実施例２２
偏頭痛による慢性疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、頭痛による疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は片頭痛による疼痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、緊張性頭痛、群発頭痛、ホルモン頭痛、反跳性頭痛、副鼻腔炎による頭痛、器質性頭痛等の頭痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２１６】
患者は片頭痛によるものと診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２１７】
実施例２３
慢性関節リウマチに関連する疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、炎症性疾患による慢性疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は慢性関節リウマチによる慢性疼痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、変形性関節症、痛風性関節炎、脊椎炎、またはエリテマトーデス等の自己免疫疾患等の炎症性疾患による疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２１８】
患者は慢性関節リウマチによるものと診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２１９】
実施例２４
慢性背痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、過度の筋肉の緊張による慢性疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は慢性腰痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、過度の筋肉の緊張による疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２２０】
患者は慢性関節リウマチによるものと診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２２１】
実施例２５
過敏性腸症候群に関連する疼痛に対する永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、慢性の消化管炎症による疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例は過敏性腸症候群に関連する疼痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、クローン病、潰瘍性大腸炎および胃炎等の消化管の炎症による疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２２２】
患者は過敏性腸症候群によるものと診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２２３】
実施例２６
術後疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、術後疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
【０２２４】
患者は外科手術による疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を継続的に投与することにより、この痛みの軽減が約１〜４週間継続して維持された。
【０２２５】
実施例２７
線維筋痛に関連する疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は線維筋痛に関連する疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。
【０２２６】
患者は線維筋痛によるものであると診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を繰り返し投与することにより、この痛みの軽減は維持された。
【０２２７】
実施例２８
手首の反復性行動障害に関連する疼痛の処置のための永続性ナトリウム電流遮断物質の経口投与
本実施例は、反復性行動障害（ＲＭＤ）による疼痛を処置するための、永続性ナトリウム電流遮断物質（ＰＳＣＢ）を含有する医薬的に許容し得る組成物を用いたＰＳＣＢ治療の方法を示す。本実施例はＲＭＤに関連する疼痛を処置するためのＰＳＣＢの使用を示すが、例えば、手、肘、肩、首、背中、腰、膝、足、脚および足首において生じるＲＭＤ誘発性のいずれかの疼痛もまた本発明の方法を用いて処置することができる。
【０２２８】
患者は腰のＲＭＤによるものであると診断される疼痛症状を示す。その患者をＰＳＣＢを含有する治療上有効量の医薬的に許容し得る組成物で処置した。ＰＳＣＢ治療の投与から１日以内に、患者の痛みは実質的に軽減した。ＰＳＣＢ組成物を繰り返し投与することにより、この痛みの軽減が維持された。
【０２２９】
本発明を開示された実施形態を参照して記載したが、当業者は、開示した具体的な実験が単に本発明を説明するものであることを理解する。本発明の精神から逸脱することなしに様々な修飾を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０２３０】
【図１】選択的永続性ナトリウム電流アンタゴニストである４種類の化合物を示す。
【図２】ナトリウム電流遮断物質による永続性電流依存性の脱分極の阻害を示す。このアッセイでは、細胞を８０μLのTEA-MeＳＯ3を含有するウェルに維持し(ナトリウム不含の欄)、これに13ｍＭのＫＭｅＳＯ3を含有する２４０μLのＮaMeSO3緩衝液を加え、Ｋ＋終濃度を１０ｍＭにＮa＋の終濃度を１１０ｍＭにした(ナトリウム／カリウム添加)。これにより、強い脱分極反応を示した。ナトリウム依存性の脱分極が収まった後、さらにＫＭｅＳＯ3をウェルに加え、Ｋ＋の終濃度を８０ｍＭにした（高カリウム添加）。この添加により第２の脱分極応答を生じた。ナトリウム依存性であるがカリウム依存性でない脱分極を減少する化合物を永続性ナトリウム電流遮断物質として選択した。○印は０．１％DMSO添加による対照での応答を示し、△印は、ナトリウムチャネル阻害物質であるテトラカイン（１０μＭ）の効果を示し、◇印は非特異的チャネル遮断物質の適用による応答を示す。
【図３】永続性電流アッセイアンタゴニストのスクリーニング枠（screening window）が決定されるアッセイから得られたデータを示す。「スクリーニング枠」のサイズを決めるために、ナトリウム依存性脱分極に対する応答が、ナトリウム依存性脱分極を完全にブロックする１０μＭのテトラカインの存在下または最大の脱分極が得られる対照の０．１％ＤＭＳＯの存在下で測定されるアッセイから得たデータを調べた。データをヒストグラムと結びつけて、スクリーニング枠（Ｚ）を平均と標準偏差から次式に従い最大および最小値について計算した：Ｚ＝１−（３×ＳＴＤMax＋３×ＳＴＤMin）。ヒストグラムＡ、ＢおよびＣは、３種類の異なるアッセイプレートから得られたデータを示す。実行のためのスクリーニング枠は１．０≧Ｚ≧０．５が適切であるとした。
【図４】３ｍＭの化合物１または５００ｍＭのＴＴＸの添加前および添加後のナトリウム電流の追跡を示す。Ｎａv１．３チャネルを発現するＨＥＫ細胞を３つのチャネルを穿孔パッチモードにてパッチクランプした。電流は、−９０ｍＶの保持電位から０ｍＶまで２００msecの試験パルスによって誘導された。
【図５】化合物１の用量応答曲線を示す。一過性のＮa＋電流のピークの振幅（It）および永続性電流の安定状態のピークの振幅（Ip）を種々の化合物１濃度で測定し、対照電流の振幅に対して標準化した。ブロックの百分率を薬物の濃度に対してプロットした。太線はヒルの式によるデータとの一致を示す。算出されたＥＣ50値およびヒルの係数を以下の通りである：ヒルの勾配、Ｉｔは０．３５４であり、Ｉｐは０．７３３；ＥＣ50、Ｉｔは０．１６７Ｍであり、Ｉｐは３．７１×１０-8Ｍ
【図６】神経障害性疼痛の脊椎神経結紮モデルにおける機械的アロディニア（mechanical アロディニア）の試験におけるPaw Withdrawal Threshold（平均±SEM）に対する腹腔内投与した化合物１の効果を示す。Paw withdrawal threshold (グラム重量)をvon Freyフィラメントによる圧刺激（von Frey filament stimulation）およびDixonの上下法（Dixon's up-down method）を用いて測定した。化合物１またはビークル対照を１０ｍg／ｋgＩＰ投与した後、アロディニア応答をベースライン（０分）、１５分、３０分、６０分および１２０分に対して測定した。非注射ラットと比較したアロディニア軽減の百分率を算出した。各投与につき６匹のラットを用いた。偏差解析によりデータを解析し、アロディニア軽減のDunnett's試験はＰ＜０．０５を有意とした。