【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年1月7日(2011.1.7)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、薬剤または化合物を血管系に対する影響について試験する方法：
培地をペトリ皿に添加する工程；
該培地へ薬剤または化合物を添加する工程；
多孔質膜の第１の面上に第１の細胞型をプレーティングする工程； 
該多孔質膜の第２の面上に第２の細胞型をプレーティングする工程、ここで、該多孔質膜は、該第１の面が該ペトリ皿の表面に対して近接し、かつ間隔が空くよう、該ペトリ皿中に保持されており、それによって該ペトリ皿内に該第１の細胞型を含む下部容積および該第２の細胞型を含む上部容積を規定し、該多孔質膜は該培地の流体連絡および物理的相互作用および第１の細胞型の細胞と第２の細胞型の細胞との間の連絡を許容することに適応しており、全ての細胞型は培地の中にある；
灌流によって、培地を該上部容積へ入れる工程および該上部容積から出す工程；
灌流によって、培地を該下部容積へ入れる工程および該下部容積から出す工程；
プレーティングされた第２の細胞型にせん断力を適用する工程、ここで、該せん断力は血行力学的流動装置により誘導される培地の流動によって生じ、該流動は血行力学的流動を模倣する； および
該せん断力を一定の時間適用した後の第１の細胞型および第２の細胞型のうちの少なくとも一つを、該せん断力を該一定の時間適用した後の第１の細胞型および第２の細胞型のうちの少なくとも一つであって培地が該薬剤または化合物を含有していないものと比較して、第１の細胞型および第２の細胞型のうちの少なくとも一つに対する該薬剤または化合物の影響を決定する工程。
【請求項２】
せん断力を適用している間またはせん断力を適用する前に該薬剤または化合物を培地へ添加するか、該薬剤または化合物を該上部容積および該下部容積の少なくとも一つの中へ灌流させるか、または該薬剤または化合物が第２の細胞型に隣接している血管ステント材料から溶出する、請求項１の方法。
【請求項３】
該薬剤または化合物が、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、タキサン、チロシンキナーゼ阻害剤、低分子量ヘパリン、抗血栓形成剤、カルシウムチャンネルブロッカー、抗血小板剤、抗凝固剤、キレート剤、抗炎症剤、rho キナーゼ阻害剤、PDGF 阻害剤、コレステロール降下剤、抗再狭窄剤、抗生物質、抗腫瘍剤、抗高血圧剤、合成多糖、HDL を上昇させる剤、セレコキシブ、パクリタキセル、イマチニブ、エノキサパリン、ビバリルジン、ジピリダモール、ウロキナーゼ、r-ウロキナーゼ、r-プロウロキナーゼ、レテプラーゼ、アルテプラーゼ、ストレプトキナーゼ、rt-PA、TNK-rt-PA、モンテプラーゼ、スタフィロキナーゼ、パミテプラーゼ、未分画のヘパリン、APSAC、アムロジピン、ニフェジピン、クロピドグレル、アブシキシマブ、チロフィバン、オルボフィバン、ゼミロフィバン、シブラフィバン、ロキシフィバン、チクロピジン、フォンダパリヌクス、ペニシラミン、トリエチレンテトラミン ジヒドロクロライド、EDTA、DMSA、デフェロキサミン メシレート、バチマスタット、ロフェコキシブ、Y27632、AG1295、スタチン、アクチノマイシン-D、c-myc アンチセンス、デキサメタゾン、ACE 阻害剤、アトルバスタチン、シロリムス、タクロリムス、エベロリムス、ワートマニン、放射性造影剤、放射性同位体、プロドラッグ、抗体断片、抗体、生細胞、治療薬送達ミクロスフェアもしくはミクロビーズ、またはこれらの組み合わせであるか； 該化合物が該細胞型におけるタンパク質または遺伝子の機能を阻害し、活性化しまたは変化させることができるか； または、該化合物がナノポーラス金属、ポリマーまたは炭素材料を含む血管ステント材料であり、該方法が細胞型のうちの少なくとも一つを、該血管ステント材料との適合性、該血管ステント材料への細胞接着または該血管ステント材料による表現型調節について試験する工程をさらに含む、請求項１の方法。
【請求項４】
該第１の細胞型および 第２の細胞型のうちの少なくとも一つを、該薬剤または化合物によって生じる毒性、炎症、透過性、適合性、細胞接着または表現型調節について解析するか； または、培地をサイトカインまたは体液性因子の分泌について解析する、請求項１の方法。
【請求項５】
第１の細胞型および第２の細胞型のうちの少なくとも一つが薬剤毒性または病態生理学的エンドポイントに連鎖する同定された遺伝子型を有する１以上の患者からの血管細胞または器官細胞であるか； 第１の細胞型および第２の細胞型のうちの少なくとも一つが薬剤毒性または病態生理学的エンドポイントに連鎖する一塩基多型を有する１以上の患者からの血管細胞または器官細胞であるか； 第１の細胞型が腎細胞、気道の細胞または血液脳関門の細胞であり、かつ、第２の細胞型が血管細胞であるか； または、第１の細胞型が平滑筋細胞、グリア細胞、アストロサイト、ニューロンまたは上皮性有足細胞であり、かつ、第２の細胞型が内皮細胞である、請求項１の方法。
【請求項６】
血行力学的流動が前もって測定された血行力学的パターンに由来するか； 血行力学的流動がヒト由来の前もって測定された血行力学的パターンに由来するか； 血行力学的流動が経時変化するものであるか； 血行力学的流動が、ヒト由来であり、かつ、動脈、静脈または器官からのものである前もって測定された血行力学的パターンに由来するか； または、血行力学的流動が、ヒト由来であり、病的状態を有する患者由来である前もって測定された血行力学的パターンに由来する、請求項１の方法。
【請求項７】
以下の工程をさらに含む、請求項１の方法：
血行力学的パターンを一連の電子的指示へとモデル化する工程； および
該一連の電子的指示に基づいて、プレーティングされた第２の細胞型にせん断力を適用する工程、ここで、該血行力学的パターンは超音波データまたは磁気共鳴画像(MRI)データの解析から得られてもよい。
【請求項８】
第３の細胞型をペトリ皿の表面上にプレーティングする工程または第３の細胞型を下部容積中の培地に懸濁する工程のいずれかをさらに含み、該第３の細胞型が平滑筋細胞、グリア細胞、アストロサイト、ニューロン、マクロファージまたは白血球であってもよいか； または、第１の細胞型および第３の細胞型が気道の細胞または血液脳関門の細胞であってもよく、かつ、第２の細胞型が血管細胞であってもよい、請求項１の方法。
【請求項９】
血行力学的流動を模倣するための以下を含む装置によって、細胞培養中にせん断力を適用する、請求項１の方法：
一連の電子的指示を受け取るための電子コントローラー；
該電子コントローラーによって操作されるモーター； および
該モーターによって駆動されるよう該モーターへ操作可能に接続しているせん断力適用器。
【請求項１０】
該せん断力適用器が、モーターに取付けられたコーンを含むか； または、該装置が、上部容積および下部容積を規定するペトリ皿の部分内に入口および出口をさらに含む、請求項９の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
アテローム発生における内皮に対するせん断応力の役割を理解するため、EC を様々なせん断応力条件に曝すインビトロのモデルが広範に研究されてきた。EC は流動パターンにおける変動を識別することができ、かつ、せん断応力の大きさおよび血行動態の経時変化する特徴の両方に対し感受性であるため、インビボの流動環境を模倣(emulating)することは、内皮のインビボの表現型を再現すること(recapitulating)に対して大きな影響を有すると思われる。加えて、あらゆる型の流動の存在下における EC と SMC の複雑な相互作用および交差連絡を示した研究はほとんどなく、文献によって古典的に定義されているような、インビボ由来のヒトの内皮に対する血行力学的な力がどのように SMC 表現型転換を調節するかについて調べた既知の研究は今日まで存在しない。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
本発明の別の側面は、市販のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））（人工の多孔質膜を含む共培養皿）、例えば 75mm-直径のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））を取込むことに向けられている。これは、２つ、３つまたはそれより多くの異なる細胞型を培養皿環境の中で物理的に分離することを可能にし、一方で内側の細胞表面は、シミュレートされた血行力学的流動パターンに曝される。他の重要な改変は、共培養モデルの内側および外側チャンバーの両方へ、培地、薬剤等を別々に且つ独立して供給するための流入管および流出管を含む。外部部品が、生理学的な温度および気体濃度を制御するために用いられる。人工のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜およびペトリ皿の底面による接着細胞の物理的分離は、各々の細胞層または表面を、一連の生物学的解析(すなわち、タンパク質、遺伝子等)のために別々に単離することを可能にする。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
膜の反対側で培養された別の細胞型を伴うかまたは伴わない状態での、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の内側表面に対する血行力学的流動パターンの曝露。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））皿の底面上で培養された別の細胞型を伴うかまたは伴わない状態での、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の内側表面に対する血行力学的流動パターンの曝露。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
膜の反対側で培養された別の細胞型を伴うかまたは伴わない状態で、且つトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））皿の底面上で培養された第３の細胞型を伴うかまたは伴わない状態での、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の内側表面に対する血行力学的流動パターンの曝露。第３の細胞は、炎症性の細胞接着アッセイのための単球またはマクロファージを含み得る。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
膜の反対側で培養された別の細胞型を伴うかまたは伴わない状態で、且つトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の内表面の培地中に浮遊した状態の第３の細胞型を伴うかまたは伴わない状態での、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の内側表面に対する血行力学的流動パターンの曝露。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
内側(上側)チャンバーおよび外側(下側)チャンバーの両方のための流入管および流出管を所定の位置に保つために用いられるクランプは、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））の側面上に乗っている。これは、流動環境を乱すことなく、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））の上側および/または下側チャンバーの培地、生化学的化合物アゴニスト、アンタゴニスト等を別々に灌流により出入り(perfuse in and out)させるために用いられる。実験から抽出された培地は、いずれかの層からのサイトカインまたは体液性因子の分泌をさらに試験するために用いられ得る。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
装置は、胚の血管発達から成人におけるアテローム性動脈硬化の重症例までの全ての局面を研究するための、血管の生物模倣型細胞培養モデルとして用いることができる。例えば、内皮細胞は内側表面にプレーティングすることができ、および/または平滑筋細胞はトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の反対側にプレーティングすることができ、および/またはマクロファージ(または白血球)は上側または下側チャンバー中にプレーティングすることができる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
装置は、血行力学的条件下での血管ステント材料からの細胞の適合性、細胞接着および表現型調節を試験するために用いることができる。例えば、内皮および/または平滑筋細胞は、装置の固定された表面上に乗せられた材料に隣接して、該材料の上部に、または該材料の下に播種し得る。材料は、これらに限定されないが、金属性ナノポーラス金属、ポリマー、生分解性ポリマー、炭素表面、引っ掻き傷のある(scratched)もしくはエッチングされた(etched)表面を含む。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
装置は、血液脳関門の研究のための血管の生物模倣型細胞培養モデルとして用いることができる。例えば、内皮細胞は、内側表面にプレーティングすることができ、および/またはグリア細胞および/またはアストロサイトおよび/またはニューロンは、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の反対側および/またはペトリ皿の底面にプレーティングすることができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
装置は、喘息の発生および進行の研究のための気道の生物模倣型細胞培養モデルとして用いることができる。例えば、上皮細胞は、内側表面にプレーティングすることができ、および/または平滑筋細胞は、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の反対側にプレーティングすることができ、および/またはマクロファージ(または白血球)は、下側チャンバー中にプレーティングすることができる。律動的な呼吸パターンは、コーンの動きによって分泌のためによく近接して、および/またはコーンと上皮の表面の間の人工粘膜層によって、模倣される。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
装置は、患者の薬剤治療を模倣する特定の体液性環境を作り出すために用いることができ、その後、患者の薬剤治療と併せて既知または未知の薬剤化合物の適合性を決定することができる。例えば、装置は、培地中に薬剤リピトール(LIPITOR)(登録商標)（アトルバスタチン）を伴った状態で特定の時間動かすことができ、次いで、毒性、炎症(例えば単球接着、炎症性サイトカイン放出、炎症性遺伝子誘導)および透過性の変化を決定するために、未知の薬剤を添加することができる。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
本発明の一つの態様は、血行力学的パターンを培養状態の細胞に適用する方法であり、前記方法は、第１のセットの細胞をトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））上にプレーティングする工程、第２のセットの細胞を前記トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））上にプレーティングする工程、ここで前記第１のセットの細胞は前記第２のセットの細胞から分離され、流体を前記トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））に添加する工程; および一定期間、前記流体の回転を起こす工程を含み、これによって前記培地は前記第２のセットの細胞にせん断力を及ぼす。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
本発明の別の態様は、血行力学的パターンを培養状態の細胞に適用する方法であり、前記方法は、対象の血行力学的パターンをモニターする工程; 前記血行力学的パターンを電子的指示のセットへとモデル化する工程; および前記電子的指示に基づいて、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））上の細胞の複数のセットに対してせん断応力をもたらすために装置を使用する工程を含む。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
本発明の別の態様は、電子コントローラー; 前記電子コントローラーを介して操作されるモーター; 前記モーターによって回転させられる、前記モーターに接続したコーン; 膜を備えたトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））、ここで前記コーンは前記トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））中の培地に少なくとも部分的に浸され、前記コーンは前記培地に対して回転力を及ぼす; 前記トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））に培地を添加するための流入管; および前記トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））から培地を回収するための流出管を含む血行力学的流動装置である。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
図の簡単な説明
【図１】図 1 は、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））上の EC/SMC プレーティングの代表的な図を提供する;
【図２】図 2 は、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））培養皿に適合するよう改変されたコーンおよびプレート流動装置の図を提供する;
【図３】図 3 は、ヒト総頚動脈(CCA)および内頚動脈洞(ICS)の MRI から得られる代表的な血行力学的流動パターンを示すグラフを提供する。かかる代表的な MRI も示される;
【図４】図 4 は、EC 播種後２４時間での EC および SMC の代表的なコンフルエントな層を示す;
【図５】図 5 は、F-アクチンおよび FM 4-64 について染色された代表的な横断面または膜の細孔内での細胞プロセスを示す微分干渉によって可視化された代表的な横断面を示す;
【図６】図 6 は、EC/SMC の形態および配向の代表的な免疫蛍光画像を示す;
【図７】図 7 は、EC および SMC についての形状因子(shape factor)(SF)の代表的な規準化されたヒストグラムプロットを示す;
【図８】図 8 は、アテローム保護性の流れの方向(0°)と比較しての、SMC および EC についての方向の平均角度を示す;
【図９】図 9 は、流れの方向と比較しての SMC の方向(または角度)の配向ヒストグラムを示す;
【図１０】図 10 は、規準化された遺伝子発現を明示する代表的なグラフを示す;
【図１１】図 11 は、規準化された mRNA 発現の代表的なグラフを示す;
【図１２】図 12 は、代表的なタンパク質解析の結果を示す;
【図１３】図 13 は、規準化された mRNA 発現の代表的なグラフを示す;
【図１４】図 14 は、規準化された mRNA 発現の代表的なグラフを示す;
【図１５】図 15 は、代表的なブロット解析の結果を示す;
【図１６】図 16 は、アテローム易発性およびアテローム保護性の流動調整された培地上で行われた IL-8 についての代表的な ELISA 解析の結果を示す;
【図１７】図 17 は、規準化された mRNA 発現の代表的なグラフを示す;
【図１８】図 18 は、膜の表面の代表的な走査型電子顕微鏡写真を示す; および
【図１９】図 19 は、代表的な濃縮倍率(fold enrichment)のグラフを示す。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
本発明の共培養過程からの結果は、血行動態が血管の EC および SMC 準備刺激をアテローム生成促進性の応答へ向けて誘導するという仮説を支持し、それ故、初期のアテローム硬化性現象の研究のための生理学的に関連する新しい生物模倣型血管モデルとしての共培養系の使用を確証する。これらの結果は、これまでに発表されたアテローム性動脈硬化に関連するインビボおよびインビトロの流動研究と一致する(図 10 を参照)。さらに、これまでの EC および SMC のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））共培養モデルは、少数の流動研究を除いて静的な(static-type)実験に制限されており、生理学的に関連するヒト由来の血行力学的流動パターンを採用した既知の研究は無い。脈管構造中の領域をインビボで正確に比較するためのより生理学的に関連するモデルをもたらし、古典的な SMC 分化マーカーに焦点を合わせた本発明の過程は、２つの血行力学的流動パターンを直接的に比較することによってこれらの制限を乗り越える。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
初期のアテローム発生の間に SMC 表現型調節を制御する、EC から分泌される１または複数のサイトカイン/マイトジェンは、未だ解明される必要があり、候補、例えば PDGF-BB、IL-1 および IL-8 を含む。EC が、アテローム易発性の流動の後、IL-8 mRNA の産生および IL-8 の分泌を増大させることをここに示す。実際、IL-8 は、SMC において遊走性の表現型の誘導を刺激し得る。そのため、EC による IL-8 分泌は、SMC がより総合的な(synthetic)表現型を調節する１つのメカニズムであり得る。興味深いことに、アポリポタンパク質 E -/- マウスにおける最近の研究は、実験的に誘導された低いせん断応力が、増殖関連タンパク質(Gro)-α mRNAの増加をもたらすことを示した。しかし、本研究の生体内の性質を考えると、Gro-α mRNA の変化が EC におけるものか、SMC におけるものか、またはその両方におけるものかは決定されていなかった。Gro-α は IL-8 と同じ受容体に結合するが、IL-8 のマウスのホモログは存在しない。そのため、ヒト共培養モデルは、EC 由来の IL-8 の SMC に対する役割を調べるのに理想的であり、今後の研究は、かかる相互連絡(cross-communication)メカニズムの相対的寄与を確立するために進行している。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
図 1 に示される通り、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））100 が、血行力学的流動過程において用いられる。トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））は、複数の細胞 110、120 が並行して試験されるのを可能にし、また、多孔質の界面を提供する。共培養へプレーティングするための代表的な過程も知られている; しかし、この過程は、当業者に利用可能な過程によって変更され得る。この態様において、SMC 110 は最初の時点でプレーティングされ、その後にトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））が反転させられる。SMC 110 が２４から４８時間の間インキュベートされ、その後に EC 120 がトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））上にプレーティングされ、インキュベートされる。トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））が挿入されるペトリ皿の底は、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜 170 に直接プレーティングされた細胞型のように、追加の細胞型または同じ細胞型をプレーティングするための第３の表面としても働き得る。EC 120 がインキュベートされた後、せん断力を適用するためにモーターおよびコーン装置のコーン 140 が用いられる。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
図 2 に示される通り、モーターおよびコーン装置 200 は、細胞に対してせん断力を適用するために用いられる。モーター 230 は、コーン 240 を正確な回転速度で回転させ、いずれかの方向(すなわち時計回りまたは反時計回り)に回転をもたらすことができる。この回転力は、コーンによって液体培地へ適用される。今度はこの培地が、培養プレート 250 中のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜 270 上の細胞 260 へせん断力を直接的に適用する。ソフトウェアが、コーンの連続的な動きを制御するためにプログラムされる。このソフトウェアファイルがモーターコントローラーユニットにアップロードされ、次いで、プログラムされたタスクを実行するために、情報がモーターに直接送られる。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
一つの態様において、装置は、血行力学的条件下における血管ステント材料からの細胞の適合性、細胞接着および表現型調節を試験するために用いられ得る。例えば、内皮および/または平滑筋細胞は、装置の固定された表面上に乗せられた材料に隣接して、該材料の上部に、または該材料の下に播種し得る。材料は、これらに限定されないが、金属性ナノポーラス金属、ポリマー、生分解性ポリマー、炭素表面、引っ掻き傷のあるもしくはエッチングされた表面を含む。これらの材料は、非分解性ポリマーもしくはコポリマー、例えばポリエチレン酢酸ビニル共重合体(polyethylene-co-vinyl acetate)(PEVA)およびポリメタクリル酸 n-ブチルをさらに含み、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））表面上に被覆することができる。これらの材料は、生分解性ポリマーまたはコポリマー、例えばポリ乳酸 グリコール酸(PLGA)もしくはホスホリルコリンをさらに含み、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））表面上に被覆することができる。これらの材料は、ナノポーラス表面修飾、例えばセラミック、金属または他の材料をさらに含み、ナノポーラス表面修飾としてトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））表面に添加することができる。これらの材料は、ミクロポーラス表面修飾、例えばセラミック、金属、物理的エッチング(例えば砂の吹き付け)またはミクロポーラス表面修飾を形成するためにトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））表面に付加される他の材料をさらに含む。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
本発明の別の態様において、装置は、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の１または両方の面にプレーティングされた細胞と共に動作し得る。トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の膜部分は、様々な空隙率および厚さを有するあらゆる生物学的なまたは合成の材料を含み得る。同様に、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜を保持および支持する構造は、あらゆる合成の材料で作られ得る。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））共培養プレーティング条件
図 1 に示される通り、多孔質のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜(厚さ 10 μmで、孔の直径 0.4 μmのポリカーボネート、no. 3419、Corning)を、上面および底面について、0.1% ゼラチンで最初に被覆した。トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））を反転させ、SMC を 2 時間の間、底面上に 10,000 細胞/cm2 の密度でプレーティングした。次いでトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））を元に戻し、４８時間の間、ウェルを低血清増殖培地(2% FBS、2 mM L-グルタミンおよび 100 U/ml ペニシリン-ストレプトマイシンが補充された M199)中に保持した。次いで、同じ培地条件のもとでさらに２４時間の間、EC を膜の上面に 80,000 細胞/cm2 の密度でプレーティングした。血行力学的流動実験のために、２つの皿を並行して調製した。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
共培養の血行力学的流動装置および流動パターン
図 2 に示される通り、ヒトの循環からモデル化された動脈の流動パターンを用いるこの過程の新規な共培養インビトロモデルを、ヒト EC に適用した。コーンおよびプレート装置の一つのバージョンは、コーンが(タイミングベルト接続を介して一方の側へ向かうのではなく)モーターによって直接的に駆動される直接駆動である。このモデルを、75-mm-直径のトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））共培養皿(厚さが 10 μmで、孔の直径が 0.4 μmのポリカーボネート、Corning)を組み込むよう改変した。さらなる改変は、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））皿を安全に保持するための土台、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））区画の内側にフィットするためのより小さなコーン(直径が 71.4 mmでコーン角度が 1°) ならびに EC および SMC 層の両方に対して連続的に培地を交換するための培養流動環境への直接的接近手段を提供する、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））の内側および外側チャンバーの両方についての流入管および流出管のための特別な取付けブラケットを含んだ。コーンの回転を介して、系は EC/SMC 共培養の EC 層に対して血行力学的せん断応力をかける。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
この過程で用いられる血行力学的流動パターンは、それぞれアテローム保護性の(CCA)およびアテローム易発性の(ICS)せん断応力パターンをインビトロで最善にシミュレートするために、ヒトの総頚動脈(CCA)および内頚動脈洞(ICS)の MRI から得られた。２つの血行力学的流動条件を、各々の EC/SMC 亜集団について並行して実行した。図 3 は、総頚動脈(CCA; アテローム保護性、右、310)および内頚動脈洞(ICS; アテローム易発性、320)からのヒトの血行力学的流動特性(左)が、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））の EC 表面に対して課された事を示す。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
リアルタイム RT-PCR
２４時間の血行力学的流動パターンの適用の後、SMC および EC を、Ca2+/Mg2+ を伴う PBS で２回リンスした。膜を保持皿から取り除き、反転させた。小さく柔軟な細胞スクレーパーを用いて、SMC を 皿の中心へ向かって穏やかに掻き集めた。次いで、1 ml のPBS を用いて細胞を無菌の表面上へすすぎ落とし、その後、細胞を氷上で微量遠心管に移した。膜を反転させ、無菌の表面上に平らに置き、EC を 1 ml のPBS 中で掻き集めた後、氷上で別々の微量遠心管に移した。管を遠心し、PBS を除去した。TRIZOL（登録商標）試薬 (Invitrogen)（フェノールおよびグアニジンイソチオシアネートの単相性(monophasic)溶液）を用いて全 RNA を抽出し、ISCRIPT（商標）cDNA 合成キット(Bio-Rad)を用いて逆転写した。BEACON DESIGNER（商標）2.0（プライマー設計ソフトウェア）を用いて、平滑筋α-アクチン(SMαA)、ミオカルディン、平滑筋ミオシン重鎖(SMMHC)、VCAM-1、単球走化性タンパク質-1 (MCP-1)、内皮型一酸化窒素合成酵素(eNOS)、アンジオポエチン(angiopoiten)受容体 Tie2、IL-8 およびクルッペル様転写因子(KLF2 および KLF4)についてプライマーを設計した。表 1 は、各々のヒト遺伝子について用いられたセンスおよびアンチセンスプライマーを示す。mRNA の発現を、AMPLITAQ GOLD（登録商標）（反応が最適なアニーリング温度に達すると活性化される改変 Taq DNA ポリメラーゼ）(Applied Biosystems)、SYBR（登録商標）GREEN (PCR サイクルの間、PCR 産物が蓄積する最中に該 PCR 産物を検出するために用いられる特異的２本鎖 DNA 結合色素) (Invitrogen) および ICYCLER（登録商標）(リアルタイム PCR 検出システム) (Bio-Rad)を用いるリアルタイム RT-PCR を介して解析した。
【表１】
2010515458.tif 000001
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
ウエスタンブロット解析
血管の SMC および EC を、リアルタイム PCR で記載した通りに回収し、RIPA バッファー(1% ノニデット P-40、Na-デオキシコーレート、1 mM EDTA、1 mM PMSF、1 mM Na3VO4、1 mM NaF、1 μg/ml アプロチニン、1 μg/ml ロイペプチン および 1 μg/ml ペプスタチン)中で溶解した。全タンパク質ライセートを、7.5% SDS-PAGE ゲル上で分離し、ポリビニル誘導体膜上にブロットした。一次抗体 [SMαA (Sigma、1:1,000)、eNOS (BD Transduction Laboratories、0.1 μg/ml)、VCAM-1 (R&D Systems、1:500) および PCNA (Cell Signaling、1:1,000)] を、室温で１時間または 4 ℃で一晩、ブロットと共にインキュベートした。セイヨウワサビ ペルオキシダーゼ結合 二次抗体 [ヤギ 抗ウサギ、ヤギ 抗マウス (Santa Cruz Biotechnology、1:5,000) および ロバ 抗ヤギ (1:5,000)] を、室温で１時間、ブロットと共にインキュベートした。ALPHAIMAGER（商標）8900（ゲルイメージングシステム）および ALPHAEASEFC（商標）ソフトウェア（画像解析ソフトウェア）を、それぞれブロット画像の獲得および濃度測定解析のために用いた。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
ELISA
共培養されたトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））を調製し、異なる血行力学的環境に曝露した。4、8、12 および 24 時間後に、膜の各チャンバーについて、流動実験の間を通じて灌流された培地を氷上で回収した(すなわち、アテローム易発性およびアテローム保護性の流動からの EC および SMC 培養上清)。その後、ELISA (GE Healthcare)を介して IL-8 分泌タンパク質についてアッセイされるまで、サンプルを -80℃で保管した。タンパク質の濃度を、分光光度計を用いて 450 nm で決定し、１時間あたりの回収された培地の体積に対して規準化した。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
クロマチン免疫沈降アッセイ
流動パターンの適用後、クロマチン免疫沈降(ChIP)を、タンパク質:DNA 相互作用の定量的解析を可能にする改変を伴って、前述の通りに行った。各実験からの流出培地に 1% ホルムアルデヒドを補充し、次いで、24 時間の流動の後すぐに 10 分間、細胞と共にインキュベートした。抗体は、ウサギ ポリクローナル 抗血清応答因子(SRF; Santa Cruz Biotechnology、5 μg/ml) および 抗ヒストン H4 アセチル化 (Upstate Biotechnologies、5 μg/ml) を包含した。回収された DNA を、製造者の推奨にしたがって、PICOGREEN（登録商標）試薬（２本鎖 DNA を定量するための蛍光性核酸染色剤）(Molecular Probes) を用いて蛍光によって定量化した。リアルタイム PCR を、ChIP 実験からの 1 ng のゲノム DNA について、小さな改変を伴って前述の通りに行った。リアルタイム PCR プライマーを、SMαA、SMMHC、c-fos CArG の 5'- CC(a/T)6GG (CArG) エレメントに隣接するように設計した。表 1 は、ChIP 解析のために用いたプライマーを示す。タンパク質:DNA 相互作用/濃縮の定量化を、以下の式によって決定した: 2(Ct Ref - Ct IP) - 2(Ct Ref - Ct 抗体なし対照)、ここで、Ct Ref は基準閾値サイクル(Ct)であり、Ct IP は免疫沈降物の Ct である。ChIP データは、一緒にプールされ２つ１組で解析された５から６の独立した実験を代表する。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
免疫蛍光
免疫蛍光(IF)のために、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜を、表面調製物(en face preparation)および横断面の両方について、4% パラホルムアルデヒド中で固定した。表面調製物を、0.2% Triton X-100 中で透過処理した。SMC のための一次抗体を、１切れのパラフィルム(PARAFILM（登録商標）)(自己密封性で、成形可能かつ柔軟なフィルム)上にピペットで滴下し [Cy3-SMαA (Sigma、4 μg/ml) および SMMHC (Biomedical Technologies、1:100)]、サンプル ウェルを上に置いた。次いで、EC のための一次抗体 [血管内皮カドヘリン(VE-cad; Santa Cruz Biotechnology、2 μg/ml)] をウェルの内側へ直接添加し、両方の抗体を同時に１時間インキュベートした。同様に、二次抗体 [Cy2 ロバ 抗ヤギ (Jackson ImmunoResearch、4 μg/ml) および ALEXA FLUOR（登録商標）546 (オレンジの発光色を有する蛍光色素)ヤギ 抗ウサギ (Molecular Probes、6 μg/ml)] を必要なだけサンプルに添加し、1 時間インキュベートした。4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール(DAPI; Molecular Probes)と共に PROLONG（登録商標）GOLD Antifade 試薬（退色防止剤）を大きなカバースリップに添加し、その上にウェルを降ろすことによって、サンプルをマウントした。DAPI の別の液滴をウェルの内側に添加し、22-mm-直径のカバースリップを上に置いて、凝固させた。画像化を可能にするため、マウントされたサンプルからメスを用いて保持ウェルを取り除いた。z-軸を通して EC 層から SMC 層まで表面サンプル(en face sample)を画像化するために、共焦点顕微鏡法を用いた (Nikon ECLIPSE（商標）Microscope TE2000-E2 および Melles Griot Argon Ion Laser System no. 35-IMA-840)。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
横断面を調製するため、EC/SMC 培養を、上記の方法を用いてファロイジン-488 (Molecular Probes) または FM 4-64FX (Molecular Probes)で染色し、30% スクロース中に一晩浸漬し、OCT 化合物中で凍結させ、クライオスタットを用いて 5μm厚の切片にスライスした後、共焦点顕微鏡法による評価のためにマウントした。IF 染色されたサンプルを、前述の通りに、共焦点顕微鏡および微分干渉を用いて、静止状態におけるトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の細孔内での細胞間相互作用について解析した。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
３つの独立した実験にわたって、少なくとも３つの顕微鏡視野(microscopy field)を獲得した。METAMORPH（登録商標）ソフトウェア(即ち、画像取得および解析ソフトウェア)を、流動の方向に対して解析された各々の細胞について配向の角度および形状因子(SF)を決定するために用いた。細胞型の伸長を決定するため、EC の VE-cad (図 6) および β-カテニン(示さず)について(CCA: n = 111 および ICS: n = 53) ならびに SMC の SMαA (図 6)、SMMHC および β-カテニン(示さず)について(CCA: n = 64 and ICS: n = 25)染色された境界の輪郭を描き、面積および周囲長(perimeter)の測定を出力した。SF を、以下の式を用いて算出した: SF = (4πA)/P2、ここで、A は細胞の面積であり、P は周囲長である。ヒストグラム範囲における各々の SF ビンに関して、規準化された頻度を得るため、全範囲にわたって、ビンあたりの細胞数を分析された全細胞数に対して規準化した。各条件について SF の分布を示すため、ヒストグラムをプロットした(図 7 を参照)。配向の角度については、両方の流動パターンからの流動の方向におよび  SMC の長軸に沿って線を描き (CCA: n = 119 and ICS: n = 104)、EC はアテローム保護性の流動についてのみ線を描いた (CCA: n = 124)。２つの線の間の角度を、流動方向に対する配向角度として測定し、同じ配向を持つ細胞の頻度が棒の長さとして表されるようヒストグラムをプロットした。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
代表的な結果
EC/SMC共培養プレーティングおよび増殖条件の最適化 
ヒト EC および SMC のプレーティングのための共培養条件を、各々の細胞型が血行力学的流動の適用の前にコンフルエンスに達するよう最適化した。図 4 は、EC 播種後２４時間の EC および SMC のコンフルエントな層を示す。より具体的には、図 4 は、コンフルエントな状態を示す２４時間共培養された EC (左) および SMC (右) を示す (上、表面(en face)画像; 下、横断面)。EC は、VE-cad の連続的な末梢性の染色によって示される通り、接着結合を形成し、その古典的な多角形の形態を保持したが、一方で SMC は伸長し、典型的な“起伏(hill and valley)”形成においてランダムに配向した。単独でプレーティングされた SMC においては、低血清培地 (10% FBS と比較して 2% FBS) が SMC マーカー SMαA およびミオカルディンの mRNA 発現を増大させ、より分化した SMC 表現型を示した (2% FBS での規準化された遺伝子発現: SMA、2.51 ± 0.36 およびミオカルディン、2.07 ± 0.05; 10% FBS での規準化された遺伝子発現: SMA、0.69 ± 0.23 およびミオカルディン、0.54 ± 0.14; 図 10 を参照)。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
マウスの共培養モデルは、EC および SMC がトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の線状細孔(linear pore)を通したギャップ結合を介して物理的に相互作用および連絡することを最近明らかにした。このモデルは、ギャップ結合および物理的ヘテロ細胞接着を介するイオン性連絡の手段を作り出し、生体内で血管壁内に存在する筋内皮結合(myoendothelial junction)を模倣する。EC/SMC 物理的相互作用が本発明者らのヒト共培養モデルにおいて形成されるかどうか決定するため、トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の横断面を F-アクチンまたは FM 4-64FX について IF 標識し、共焦点および位相差顕微鏡法を用いて解析した。図 5 に示される結果は、ヘテロ細胞相互作用を確立する、細孔内における細胞過程が存在することを実証する。横断面は、F-アクチン (上) および FM 4-64 (中) について染色され、または微分干渉によって可視化され (下)、膜細孔 510、520、530 内における細胞過程を示した。３つの独立した実験からの代表的な画像を示す。表面(en face)画像上の棒は 50 μmに等しく; 横断面上の棒は 10 μm に等しい。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
アテローム易発性の流動に曝されたトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））上の SMC は、アテローム保護性の流動に曝された SMC (SF = 0.31 ± 0.018; 図 6 および 7) よりも、伸長において有意だが小さな増大を示した(SF = 0.26 ± 0.009)。興味深い事に、アテローム保護性の流動における SMC は、一貫して流動の方向に対しより垂直の配向に向かって整列し(図 8 および 9)、一方、対照的に、アテローム易発性条件下の SMC は、よりランダムであまり調和していない配向を示した(それぞれ -47.9 ± 1.3°対 -13.1 ± 5.0°、P < 0.0001)。図 6 は、流動に対する SMC 配向の代表的な画像を示し、図 9 は、SMC 配向のヒストグラム分布を示す。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
SMC 応答に対する、流動に誘導される EC の影響について制御するため、SMC を、単一培養において２つの条件下でプレーティングした: 図 17 に示される通り、1) トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の存在下におけるトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））保持皿の底面上(SMC D) または 2) トランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の底面上(SMC T)。各々の条件について、EC の無い状態でトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））膜の上面に流動を適用した。サンプルのリアルタイム RT-PCR 解析は、SMαA および VCAM-1 に関しては各々の条件間で有意差が存在し、ミオカルディンに関しては存在しないことを示した(図 17)。VCAM-1 は、両方の条件に関して、アテローム易発性の流動によってかなり誘導された唯一の遺伝子であった。EC が存在する状態の実験においては観察されなかった、SMC T 条件について導入された潜在的な交絡因子は、流動が適用されているトランズウェル（TRANSWELL（登録商標））の上面へ多孔質膜を通して突出するという平滑筋細胞の過程であった(図 18)。各々の条件間(SMC D 対 SMC T)の有意な変化は、SMC のその局所環境に対する感受性を示す。このため、本研究に関して、両方の細胞型の存在下で適用された２つの別々の流動パターン間の比較は、血行力学的共培養環境の全ての特性(例えば、培地交換、実験セットアップ、培養時間およびヘテロ細胞の存在)について制御するための最も頑強な方法であった。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７９】
薬剤
薬剤は、アクチノマイシン-D、バチマスタット(batimistat)、c-myc アンチセンス、デキサメタゾン、パクリタキセル、タキサン、シロリムス、タクロリムスおよびエベロリムス、未分画のヘパリン、低分子量ヘパリン、エノキサパリン(enoxaprin)、ビバリルジン、チロシンキナーゼ阻害剤、グリベック(GLEEVEC（登録商標）)(イマチニブ)、ワートマニン、PDGF 阻害剤、AG1295、rho キナーゼ阻害剤、Y27632、カルシウムチャンネルブロッカー、アムロジピン、ニフェジピン、および ACE 阻害剤、合成多糖、チクロピジン(ticlopinin)、ジピリダモール、クロピドグレル、フォンダパリヌクス、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、r-ウロキナーゼ、r-プロウロキナーゼ、rt-PA、APSAC、TNK-rt-PA、レテプラーゼ、アルテプラーゼ、モンテプラーゼ、ラノテプラーゼ(lanoplase)、パミテプラーゼ、スタフィロキナーゼ、アブシキシマブ、チロフィバン、オルボフィバン(orbofiban)、ゼミロフィバン、シブラフィバン(sibrafiban)、ロキシフィバン(roxifiban)、抗再狭窄剤、抗血栓形成剤、抗生物質、抗血小板剤、抗凝固剤、抗炎症剤、抗腫瘍剤、抗高血圧剤、キレート剤、ペニシラミン、トリエチレンテトラミン ジヒドロクロライド、EDTA、DMSA (サクシマー)、デフェロキサミン メシレート、コレステロール降下剤、スタチン、HDL を上昇させる剤、シクロオキシゲナーゼ(cyclyoxygenase)阻害剤、セレブレックス(CELEBREX（登録商標）)(セレコキシブ)、ビオックス(VIOXX（登録商標）)(ロフェコキシブ)、放射性造影剤、放射性同位体、プロドラッグ、抗体断片、抗体、生細胞、治療薬送達ミクロスフェアもしくはミクロビーズ、ならびにそれらのあらゆる組み合わせを含む群から選択され得る。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2010515458.tif 000002
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２】
2010515458.tif 000003
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３】
2010515458.tif 000004
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図４】
2010515458.tif 000005
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図６】
2010515458.tif 000006
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図７】
2010515458.tif 000007
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図８】
2010515458.tif 000008
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図９】
2010515458.tif 000009
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１１】
2010515458.tif 000010
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１２】
2010515458.tif 000011
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１３】
2010515458.tif 000012
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１４】
2010515458.tif 000013
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１５】
2010515458.tif 000014
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１６】
2010515458.tif 000015
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１７】
2010515458.tif 000016
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１８】
2010515458.tif 000017