【手続補正書】
【提出日】平成23年2月9日(2011.2.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸（以後、ＨＡ）誘導体またはその塩であって、該誘導体は、Ｄ−グルクロン残基のカルボキシ基の一部がヒドラジド基に直接的に変換されたものである、ヒアルロン酸誘導体またはその塩。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸誘導体は、式：
ＨＡ−ＣＯ−ＮＲ１−ＮＨＲ２
［式中、Ｒ１およびＲ２は、同じであるかまたは異なり、それぞれは、任意にハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、チオアルキル、ニトロ、シアノ、ＣＦ3、ＣＯＮＨ2、および−ＮＨ−ＮＨ2からなる群より選択される１つ以上のラジカルにより置換されていてもよいＨ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニル、Ｃ2−Ｃ10アルキニル、Ｃ6−Ｃ14アリール、アルカリル、アラルキル、またはヘテロ環であり、および／または、Ｃ1−Ｃ20アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニル、Ｃ2−Ｃ10アルキニルのそれぞれは、ＯもしくはＳもしくは基Ｎ+Ｒ３Ｒ４により中断されていてもよく、ここでＲ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なり；それぞれは、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニル、Ｃ6−Ｃ14アリールである］
により表わされる未架橋の化合物である、請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸誘導体は、式ＨＡ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ2により表わされる、未架橋の、水溶性化合物であり、さらにＮ−アシル尿素基を含んでもよい、請求項２に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸誘導体は、
Ｄ−グルクロン残基のヒドラジド基の一部と、Ｄ−グルクロン残基のカルボキシ基の一部との反応により形成される架橋化化合物であり、該カルボキシ基は、カルボジイミドにより活性化され、このことにより式ＨＡ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＨＡにより表わされる架橋化化合物を生じるものであるか、
架橋化化合物であり、Ｄ−グルクロン残基のカルボキシ基の一部が、ヒドラジンを介して、Ｄ−グルクロン残基のカルボキシ基の別の一部と連結されて、式ＨＡ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＨＡにより表わされる架橋化化合物を生じるものであるか、
アミン特異的なまたはアミン反応性の同種二官能性または異種二官能性のリンカーＹを介して、Ｄ−グルクロン残基のヒドラジド基の一部と、Ｄ−グルクロン残基のヒドラジド基の別の一部との反応により形成される架橋化化合物であり、該架橋化ヒアルロン酸誘導体は、式：ＨＡ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ−Ｙ−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−ＨＡ［式中、Ｙは、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、脂環式、またはヘテロ環式の鎖である］により表わされるか、および／または
アミン特異的なまたはアミン反応性の多官能性リンカーと、ヒドラジド基の一部との反応を介して共有結合的に架橋されたものである、請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項５】
多官能性リンカーはポリアルデヒドである、請求項４に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項６】
ポリアルデヒドは、酸化ゼラチンおよび酸化コラーゲンからなる群より選択され、該コラーゲンは、天然、変性、または誘導体化コラーゲンの任意のタイプから選択される、請求項５に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項７】
前記架橋されたヒアルロン酸誘導体は、さらなる誘導体化に利用可能な未架橋のヒドラジド基をさらに含む、請求項４〜６のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項８】
前記ヒアルロン酸誘導体は、薬理学的または生物学的に活性な薬剤、例えば抗生物質、抗感染薬、抗微生物剤、抗ウイルス剤、細胞増殖抑制剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、創傷治癒剤、麻酔薬、コリン作動薬、コリン拮抗薬、アドレナリン作動薬、アドレナリン拮抗薬、抗血栓剤、抗凝血剤、止血剤、線維素溶解剤、血栓溶解剤、増殖因子、サイトカイン、抗体、タンパク質、タンパク質フラグメント、ポリペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、および高分子からなる群より選択される薬理学的または生物学的に活性な薬剤と結合されている、請求項１〜７のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項９】
前記ヒアルロン酸は、約８００〜約４，０００，０００Ｄａの平均分子量を有する、請求項１〜８のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項１０】
前記ヒアルロン酸誘導体は、Ｄ−グルクロン基のカルボキシ部分の約０．５％から７０％がヒドラジド基に直接的に変換されている、請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項１１】
少なくともヒドラジド基の一部は、ヒドラジド官能基との共有結合を形成し得る官能基を有する検出可能な標識、例えば蛍光標識、リン光性標識、親和性標識、電子スピン共鳴（ＥＳＲ）標識、金属および半導体ナノ粒子、スペクトル比色標識、タンパク質、酵素、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチド、高分子ビーズからなる群より選択される検出可能な標識と共有結合されている、請求項３に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項１２】
検出可能な標識は、以下の非限定的リスト：フルオレセイン、カルボキシフルオレセイン、フルオレセインジクロロトリアジン（５−ＤＴＡＦ）、ナフトフルオレセイン、式：ＨＡ−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−フルオレセインにより表わされるフルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）の誘導体、ローダミン、ローダミングリーン、テトラメチルローダミン、テキサスレッド、ペリレン、ピレン、アントラセン、ナフタレン（例えば、ダンシル）、スチルベン、（ビス）−ベンゾキサゾール、クマリン誘導体（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）誘導体）、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）−誘導体、ピリジルオキサゾール、ジキソゲニン、フェノキサジン、トリアリールメタン、キサンテン、フラビン、ポルフィリン、シアニン、ナフトシアニン、ランタニド−錯体、遷移金属錯体、ＵＶ光線で励起可能なミクロスフェア、緑色蛍光タンパク質から選択される蛍光標識である、請求項１１に記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項１３】
前記ヒアルロン酸誘導体は、ヒドロゲルの形態にある、請求項４〜１０のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体を含み、薬学的に許容される担体をさらに含んでもよく、および／または化学的に結合されるかまたは結合されていない薬理学的に活性な薬剤をさらに含んでもよく、薬理学的に活性な薬剤の徐放または持続性放出を提供できるものであってもよい、医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体を含み、化粧品に許容される担体をさらに含み、化粧薬剤をさらに含んでもよい、化粧品組成物。
【請求項１６】
天然のまたは合成の高分子、タンパク質、またはポリペプチドからなる群より選択される追加の成分をさらに含む、請求項４〜７のいずれかに記載の架橋化ヒアルロン酸誘導体を含む組成物。
【請求項１７】
組織工学のための、足場材料として使用するための、請求項４〜７のいずれかに記載の架橋化ヒアルロン酸誘導体を含む組成物であって、足場材料が細胞を伴っていてもよい、組成物。
【請求項１８】
請求項１１に記載の標識化ヒアルロン酸誘導体を製造する方法であって、請求項１〜１０のいずれかに記載のＨＡ誘導体と、アミン特異的なまたはアミン反応性の基を含有する検出可能な標識、例えばアミン特異的なまたはアミン反応性の基を含有する蛍光標識、例えばフルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）とを反応させる工程を含む方法。
【請求項１９】
未架橋の水溶性の形態である、請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体を製造する方法であって、カルボジイミド、例えば１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸（ＥＤＣ）により活性化されたヒアルロン酸と、ヒドラジンまたは式ＨＮＲ１−ＮＨＲ２の置換ヒドラジンとを、３．５−７．５のｐＨ範囲にて、好ましくは５．５−６．２にて、より好ましくはｐＨ５．７−５．９にて反応させる工程を含む方法。
【請求項２０】
反応は、水性緩衝液中で、または水性緩衝液と水混和性有機溶媒、例えば二極性非プロトン性溶媒、例えばジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１−メチル−２−ピロリドン、１，１，３，３−テトラメチル尿素、ヘキサメチルホスホルアミド、およびアセトニトリルからなる群より選択される二極性非プロトン性溶媒との混合液中で行われる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
反応は、ヒアルロン酸と、カルボジイミドと、ヒドラジンまたは置換ヒドラジンとの混合物の反応により一工程で行われる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
請求項４に記載のヒアルロン酸誘導体を製造する方法であって、ヒドラジド官能化ヒアルロン酸と、カルボジイミドとを、３．５−７．０のｐＨ範囲にて、好ましくは４．０−５．０にて、より好ましくは約４．７５にて活性化する工程、またはカルボジイミドにより活性化されたヒアルロン酸と、ヒドラジンとを、３．５−７．０のｐＨ範囲にて、好ましくは４．０−５．０にて、より好ましくは約４．７５にて反応させる工程を含む方法。