【手続補正書】
【提出日】平成22年11月2日(2010.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝臓疾患を予防及び処置する有効量の有効成分として、カワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）から構成される組合せ薬草（combined herbs）の抽出物を含む医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物は、カワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記抽出物は、未精製の抽出物、低級アルコールの不溶性分画抽出物、又は非極性溶媒の可溶性抽出物から選択される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記未精製の抽出物は、蒸留水、メタノール、エタノール等のＣ１−Ｃ４低級アルコール、又はそれらの混合液に可溶性の抽出物である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記低級アルコールの不溶性分画抽出物は、下記ステップ：
エタノール及び水の混合溶液等の低級アルコール溶液で前記未精製の抽出物を抽出し、低級アルコール可溶性分画と低級アルコール不溶性分画とに分画するステップ；及び
該低級アルコールの不溶性分画抽出物を収集するステップ、
によって調製される前記抽出物を含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記非極性溶媒の可溶性抽出物は、下記ステップ：
ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン又は酢酸エチル等の非極性溶媒で前記未精製の抽出物を分画するステップ；及び
前記非極性溶媒の可溶性抽出物を収集するステップ、
によって調製される抽出物を含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記肝臓疾患は、脂肪肝、急性若しくは慢性肝炎、肝腫大、へパトフィマ（hepatophyma）、肝硬変、又は肝臓癌から選択される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
請求項１の医薬組成物に含まれる抽出物を調製するための方法であって、該方法は、
適切な比率（ｗ／ｗ）で請求項１に記載の薬草を洗浄、乾燥及び混合するステップ；
該薬草を微粉砕するステップ；
該微粉砕した組成物を５〜２０倍量の蒸留水、メタノール、エタノール等のアルコール、若しくはそれらの混合液で混合し、１２時間〜４８時間にわたって０〜室温の範囲の温度でアンフルラージュないし冷浸（enfleuraging）するか、又は、１〜２４時間にわたって８０〜１２０℃の温度で２〜５回加熱させるステップ；
減圧下に８０〜１２０℃で前記抽出物を濾過かつ濃縮するステップ；
１０〜６０倍量の水で共沸蒸留による濃縮を１〜５回施し、次いで、凍結乾燥若しくは真空乾燥によって乾燥させて未精製の薬物組成物の乾燥した抽出物の形態を得るステップ、
のステップを含む。
【請求項９】
肝臓疾患を予防及び改善する有効量の有効成分として、肝細胞を保護することにより肝臓疾患の予防又は改善のためのカワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）から構成される組合せ薬草の抽出物を含む機能性健康食品。
【請求項１０】
前記食品はカワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含む請求項９に記載の機能性健康食品。
【請求項１１】
前記抽出物は、未精製の抽出物、低級アルコールの不溶性分画抽出物、又は非極性溶媒の可溶性抽出物から選択される請求項９に記載の機能性健康食品。
【請求項１２】
前記未精製の抽出物は、蒸留水、メタノール、エタノール等のＣ１−Ｃ４低級アルコール、又はそれらの混合液に可溶性の抽出物である請求項１１に記載の機能性健康食品。
【請求項１３】
前記低級アルコールの不溶性分画抽出物は、下記ステップ：
エタノール及び水の混合溶液等の低級アルコール溶液で前記未精製の抽出物を抽出し、低級アルコール可溶性分画と低級アルコール不溶性分画とに分画するステップ；及び
該低級アルコール不溶性分画抽出物を収集するステップ、
によって調製される抽出物を含む請求項１１に記載の機能性健康食品。
【請求項１４】
前記非極性溶媒の可溶性抽出物は、下記ステップ：
ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン又は酢酸エチル等の非極性溶媒で前記未精製の抽出物を分画するステップ；及び
前記非極性溶媒の可溶性抽出物を収集するステップ、
によって調製される抽出物を含む請求項１１に記載の機能性健康食品。
【請求項１５】
前記肝臓疾患は、脂肪肝、急性若しくは慢性肝炎、肝腫大、へパトフィマ（hepatophyma）、肝硬変、又は肝臓癌から選択される請求項９に記載の機能性健康食品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
【課題を解決するための手段】
一の視点において、本発明は以下の好ましい実施形態を有する。
（形態１）
肝臓疾患を予防及び処置する有効量の有効成分として、カワラタケ（Coriolus versicolor）とキバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）から構成される組合せ薬草（combined herbs）の抽出物を含む医薬組成物。
（形態２）
前記医薬組成物は、カワラタケ（Coriolus versicolor）とキバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態３）
前記薬草はさらに、肝臓疾病を予防及び処置するための形態１に規定された組合せ薬草の他に、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）からなる群から選択される少なくとも一つの薬草を含むことが好ましい。
（形態４）
前記医薬組成物は、カワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）及びチョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態５）
前記医薬組成物は、カワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態６）
前記医薬組成物は、カワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態７）
前記抽出物は、未精製の抽出物、低級アルコールの不溶性分画抽出物、又は非極性溶媒の可溶性抽出物から選択されることが好ましい。
（形態８）
前記未精製の抽出物は、蒸留水、メタノール、エタノール等のＣ１−Ｃ４低級アルコール、又はそれらの混合液に可溶性の抽出物であることが好ましい。
（形態９）
前記低級アルコールの不溶性分画抽出物は、下記ステップ：
エタノール及び水の混合溶液等の低級アルコール溶液で前記未精製の抽出物を抽出し、低級アルコール可溶性分画と低級アルコール不溶性分画とに分画するステップ；及び
該低級アルコールの不溶性分画抽出物を収集するステップ、
によって調製される前記抽出物を含むことが好ましい。
（形態１０）
前記非極性溶媒の可溶性抽出物は、下記ステップ：
ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン又は酢酸エチル等の非極性溶媒で前記未精製の抽出物を分画するステップ；及び
前記非極性溶媒の可溶性抽出物を収集するステップ、
によって調製される抽出物を含むことが好ましい。
（形態１１）
前記肝臓疾患は、脂肪肝、急性若しくは慢性肝炎、肝腫大、へパトフィマ（hepatophyma）、肝硬変、又は肝臓癌から選択されることが好ましい。
（形態１２）
前記肝臓疾患は、脂肪肝、肝硬変、又は肝炎から選択されることが好ましい。
（形態１３）
形態１又は３の医薬組成物を調製するための方法であって、該方法は、
適切な比率（ｗ／ｗ）で薬草を洗浄、乾燥及び混合し、あるいは、未精製の薬物組成物を成す段階で追加の薬草を加混合（commixing）するステップ；
該薬草を微粉砕するステップ；
該微粉砕した組成物を５〜２０倍量の蒸留水、メタノール、エタノール等のアルコール、若しくはそれらの混合液で混合し、１２時間〜４８時間にわたって０〜室温の範囲の温度でアンフルラージュないし冷浸（enfleuraging）するか、又は、１〜２４時間にわたって８０〜１２０℃の温度で２〜５回加熱させるステップ；
減圧下に８０〜１２０℃で前記抽出物を濾過かつ濃縮するステップ；
１０〜６０倍量の水で共沸蒸留による濃縮を１〜５回施し、次いで、凍結乾燥若しくは真空乾燥によって乾燥させて未精製の薬物組成物の乾燥した抽出物の形態を得るステップ、
のステップを含む。
（形態１４）
肝臓疾患を予防及び改善する有効量の有効成分として、肝細胞を保護することにより肝臓疾患の予防又は改善のためのカワラタケ（Coriolus versicolor）とキバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）から構成される組合せ薬草の抽出物を含む機能性健康食品。
（形態１５）
前記食品はカワラタケ（Coriolus versicolor）とキバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態１６）
前記食品はさらに、肝臓疾病を予防及び処置するための形態１に規定された組合せ薬草の他に、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）からなる群から選択される少なくとも一つの薬草を含むことが好ましい。
（形態１７）
前記食品はカワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）及びチョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態１８）
前記食品はカワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態１９）
前記食品はカワラタケ（Coriolus versicolor）、キバナオウギ（Astragalus membranaceus Bunge）、チョウセンゴミシ（Schisandra chinensis）及びカワラヨモギ（Artemisia capillaris）を、各薬草の乾燥重量に基づいた混合比（ｗ／ｗ％）が０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０：１の範囲で含むことが好ましい。
（形態２０）
前記抽出物は、未精製の抽出物、低級アルコールの不溶性分画抽出物、又は非極性溶媒の可溶性抽出物から選択されることが好ましい。
（形態２１）
前記未精製の抽出物は、蒸留水、メタノール、エタノール等のＣ１−Ｃ４低級アルコール、又はそれらの混合液に可溶性の抽出物であることが好ましい。
（形態２２）
前記低級アルコールの不溶性分画抽出物は、下記ステップ：
エタノール及び水の混合溶液等の低級アルコール溶液で前記未精製の抽出物を抽出し、低級アルコール可溶性分画と低級アルコール不溶性分画とに分画するステップ；及び
該低級アルコール不溶性分画抽出物を収集するステップ、
によって調製される抽出物を含むことが好ましい。
（形態２３）
前記非極性溶媒の可溶性抽出物は、下記ステップ：
ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン又は酢酸エチル等の非極性溶媒で前記未精製の抽出物を分画するステップ；及び
前記非極性溶媒の可溶性抽出物を収集するステップ、
によって調製される抽出物を含むことが好ましい。
（形態２４）
前記肝臓疾患は、脂肪肝、急性若しくは慢性肝炎、肝腫大、へパトフィマ（hepatophyma）、肝硬変、又は肝臓癌から選択されることが好ましい。
（形態２５）
前記肝臓疾患は、脂肪肝、肝硬変、又は肝炎から選択されることが好ましい。
（形態２６）
肝臓疾患を予防及び処置するための肝保護的な薬剤としての医薬品（medicament）の調製のための形態１又は３に規定の抽出物の使用。
（形態２７）
形態１又は３に規定の抽出物及びそれの薬学的に許容可能なキャリア（carrier）の有効量の哺乳類への投与を含む哺乳類における肝臓疾患を処置する方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５０】
肝障害に対する効果の評価のために、正常群を生理食塩水のみで処置した。急性の肝毒性を誘導し、コントロール群として使用するため、腹腔内に、オリーブ油と、四塩化炭素との混合溶液（１：１）を、１．０ｍｌ／ｋｇの投与量で３日間、各実験ラットに投与した。誘導の１時間後、生理食塩水で懸濁された比較例１に記載の抽出物のいろいろな濃度のもの(concentrations)を、１．０ｍｌ／ｋｇの投与量で３日間経口的にテスト群としてのラットに投与し、また、同量の生理食塩水のみをネガティブコントロールとしてのラットに処置した。誘導の１８時間後、眼窩下静脈（suborbital vena）からの血液サンプルを貯蔵し、２０分間３０００ｒｐｍで遠心分離した。各サンプルの各ＧＯＴ、及びＧＰＴレベルをＢＴ２０００＋装置（BT2000+ apparatus, SEAC Co.）を使用して測定した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６１】
図５及び図６に示すように、オリーブ油、及び四塩化炭素の混合溶液（１：１）で誘導し、その後、生理食塩水のみで処置したコントロール群は、約４８８Ｕ／ＩのＧＯＴレベル、及び２０１．４Ｕ／ＩのＧＰＴレベルを示し、それに対し、Ｈ１で処置した群は約３４７．６Ｕ／ＩのＧＯＴレベルを示し、Ｈ２で処置した群は、約３０４．１Ｕ／ＩのＧＯＴレベルを示し、また、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３で処置した群は、それぞれ１３６．４、９９．２、そして、９７．３Ｕ／ＩのＧＰＴレベルを示した。Ｈ４で処置したテスト群のＧＯＴ、及びＧＰＴのレベルは、Ｈ２、及びＨ３で処置したテスト群のＧＯＴ、及びＧＰＴのレベルと同様ないし、やや強力な処置活性を示した（図５、及び図６参照）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７４】
さらに、実施例１において得られた本発明の抽出物Ｈ１、Ｈ２及びＨ３で処置した群のコラーゲン量は、それぞれ１．８３、１．５、そして、１．３３を示し、それに対し、コントロール群のコラーゲン量は、２．４４を示した（図８参照）。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
図９に示すように、比較例２において調製した各薬草で処置したテスト群は、１％コレステロール、及び３５％アルコールによって誘導された、増加したＧＯＴ、及びＧＰＴレベルを有意に減少できなかったが、それに対し、実施例２において調製した組合せ薬草で処置したテスト群は、ＧＯＴ、及びＧＰＴのレベルを有意に減少し、とりわけ、Ｈ４で処置した群（ＧＯＴ：１３１．２ｍｇ／ｄｌ，ＧＰＴ：８９．６ｍｇ／ｄｌ）は、その中で、アルコール誘導脂肪肝モデルにおけるＧＯＴ、及びＧＰＴの増加したレベルに対して、最も強力な減少効果を示した（図９参照）。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１２】
図１５に示すように、１％コレステロールと３５％アルコールで処置したコントロール群は、何も処置しない正常群に比べて、２倍以上に増加した血中全トリグリセリドレベルを示し、それに対し、比較例２、及び実施例２において調製した抽出物で処置した群は、図１４の結果と同様に、増加した全コレステロールに対して有意な減少効果を示し、とりわけ、ＨＦ２、ＨＦ３、及びＨＦ４で処置した群（ＨＦ２：１６５．５ｍｇ／ｄｌ，  ＨＦ３：１５８．１ｍｇ／ｄｌ，  ＨＦ４：１４３．０ｍｇ／ｄｌ）は、その中で、血中トリグリセリドの増加したレベルに対して、強力な減少効果を示した（図１５参照）。
【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2010513473.tif 000001
【手続補正９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２】
2010513473.tif 000002