【手続補正書】
【提出日】平成23年8月22日(2011.8.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞又は組織の細胞に導入するために、化合物を該細胞又は該組織に送達するための方法であって、
前記方法は、
共役化合物を得るために、前記化合物に操作可能に結合する全送達ペプチド（ＰＯＤ）組成物を提供する工程を含み、
前記ＰＯＤが、タンパク質導入領域（ＰＴＤ）を含み、
前記方法はさらに、
前記細胞又は組織を前記共役化合物と接触させる工程を含み、
前記共役化合物が、前記細胞又は前記組織の細胞に導入されることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記ＰＯＤが、アミノ酸配列（１２２２１１２１）ｘ又は１１１（１２２２１１２１）ｘを有し、中性の小さい残基が数字１として表記され、正電荷残基が数字２として表記され、ｘが１乃至８の全整数である数字記号によって示されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ＰＯＤが、アミノ酸配列（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）ｘ又はＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）ｘを有し、アミノ酸の標準１文字表記によって表され、ｘが１乃至８の全整数であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記ＰＯＤが、アミノ酸配列（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）ｘ又はＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）ｘを有し、ｘが３乃至５の全整数であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、前記接触工程後に、前記共役化合物が細胞膜を破壊せずに前記細胞又は前記組織の細胞に進入することを観察する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１乃至４いずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記共役化合物を細胞質内に局在化させる工程をさらに含むことを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記共役化合物を核内に導入する工程をさらに含むことを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記接触工程前に、哺乳類の非ヒト被験体における疾患を診断、予後、又は治療するための薬剤として前記共役化合物を製剤する工程を含むことを特徴とする請求項１乃至７いずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が、核酸であることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記核酸が、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及び低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物が、抗体を含むタンパク質、ペプチド、脂質、及び炭水化物の群から選択されることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が、低分子量薬物であることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞又は組織が、眼、口腔、生殖器、軟骨性（軟骨細胞）、肝臓、腎臓、神経、脳、上皮、心臓、及び筋肉の群から選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞又は組織が、培養下にあることを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞又は組織が、インビボにあることを特徴とする請求項８または１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記接触工程前に、前記化合物に結合されたＰＯＤ組成物をペグ化する工程を含むことを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
前記ペグ化工程が、１０ｋＤのポリエチレングリコールを追加するためのＰＥＧ試薬と反応する工程を含むことを特徴とする請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記接触工程が、前記細胞又は組織に少なくとも約１マイクロモルの前記共役化合物を提供する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１又は１６記載の方法。
【請求項１９】
前記接触工程が、前記細胞又は組織に少なくとも約４０μｇの前記共役化合物を提供する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１又は１６記載の方法。
【請求項２０】
前記接触工程が、約３７℃で培養する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１又は１６記載の方法。
【請求項２１】
前記接触工程が、経眼、硝子体内、局所、経皮、腹膜内、皮下、及び静脈からなる群から選択される経路によって、前記共役化合物を被験体に投与する工程をさらに含むことを特徴とする請求項８又は１６記載の方法。
【請求項２２】
タンパク質である前記共役化合物を提供する工程が、前記化合物のアミノ酸配列と前記ＰＯＤのアミノ酸配列との遺伝子融合をコードする核酸を合成する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項２３】
前記送達工程は、
前記細胞又は前記組織の細胞を、前記融合をコードする前記核酸に接触させる工程と、
前記核酸を前記細胞又は前記組織の細胞に発現させる工程とをさらに含むことを特徴とする請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記送達工程は、
発現系細胞を、前記融合をコードする前記核酸に接触させる工程と、
前記核酸を前記発現系細胞に発現させる工程と、
融合タンパク質を単離する工程と、
前記細胞又は前記組織の細胞を、単離された融合タンパク質に接触させる工程とをさらに含むことを特徴とする請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
タンパク質である前記共役化合物を提供する工程が、前記化合物を、前記ＰＯＤアミノ酸配列の少なくとも１つのアミノ酸に化学的に共役させる工程をさらに含むことを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項２６】
タンパク質である前記共役化合物が、免疫原又はワクチンを含むことを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項２７】
タンパク質である前記共役化合物を提供する工程が、前記化合物と前記ＰＯＤのアミノ酸配列との融合をコードするアミノ酸配列を化学的に合成する工程を含むことを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項２８】
組織又は細胞への送達のために化合物に共役する組成物であって、
ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）４ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）及び（ＡＲＫＫＡＡＫＡ） ４ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）の群から選択されるアミノ酸配列を含み、
前記化合物に共役された前記組成物が、細胞又は組織の細胞に導入されることを特徴とする組成物。
【請求項２９】
導入活性が、眼、口腔、生殖器、神経性、軟骨性（軟骨細胞）、肝臓、腎臓、上皮、心臓、及び筋肉の群から選択される細胞又は組織の細胞を対象とすることを特徴とする請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】
前記眼細胞又は組織が、網膜、網膜色素上皮、網膜神経節、角膜、視神経、及び胚性網膜からなる群から選択されることを特徴とする請求項２９記載の組成物。
【請求項３１】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をさらに含むことを特徴とする請求項２８乃至３０いずれか記載の組成物。
【請求項３２】
細胞又は組織の細胞への送達のために化合物に共役する組成物であって、
アミノ酸配列ＡＲＫＫＡＡＫＡ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４） 又は ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ） （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含むことを特徴とする組成物。
【請求項３３】
細胞又は組織の細胞への送達のために化合物に共役する組成物であって、
アミノ酸配列ＡＲＫＫＡＡＫＡ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４） 又は ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ） （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含み、
前記アミノ酸配列が、ペグ化していることを特徴とする組成物。
【請求項３４】
共役物を合成するためのキットであって、
容器内に、アミノ酸配列ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ） （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２） 又はＡＲＫＫＡＡＫＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）の少なくとも１つの反復を有するペプチドと、該ペプチドを化合物に共役させるための使用説明書とを含むことを特徴とするキット。
【請求項３５】
共役物を合成するためのキットであって、
容器内に、ペグ化したアミノ酸配列ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ） （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）又はペグ化したＡＲＫＫＡＡＫＡ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）の少なくとも１つの反復を有するペプチドと、該ペプチドを化合物に共役させるための使用説明書とを含むことを特徴とするキット。
【請求項３６】
前記キットが、前記配列を架橋結合する及び前記共役物を合成するための試薬をさらに含むことを特徴とする請求項３４又は３５記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
したがって、本発明の一態様は、細胞又は組織の細胞に導入するために、化合物を該細胞又は該組織に送達するための方法である。本方法は、共役化合物を得るために、化合物に操作可能に結合する全送達ペプチド（ＰＯＤ：peptide for overall delivery）組成物を提供する工程を含み、ＰＯＤが、タンパク質導入領域（ＰＴＤ：protein transduction domain）を含み、本方法はさらに、細胞又は組織を、共役化合物と接触させる工程を含み、共役化合物が細胞又は組織の細胞に導入される。用語「ＰＯＤ（全送達ペプチド）」とは、眼送達用のペプチドとしてそもそも考え出されたものである。しかしながら、ペプチドが、多くの種類の細胞及び組織への各種化合物の送達を向上させることを示すデータを考慮し、本用語は、本明細書では、全ての送達のためのペプチドを意味する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本明細書に提示される本発明のその他の態様は、細胞又は組織への送達のために化合物に共役する組成物である。この組成物は、化合物に共役した組成物が細胞又は組織の細胞に導入されるように、ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）４ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）及び（ＡＲＫＫＡＡＫＡ）４ （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）の群から選択されるアミノ酸配列を含む。導入活性は、例えば、眼、口腔、生殖器、神経性、軟骨性（軟骨細胞）、肝臓、腎臓、上皮、心臓、及び筋肉の群から選択される細胞又は組織の細胞を対象とする。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
また、組織又は細胞への送達のために化合物に共役する組成物が提供され、この組成物は、アミノ酸配列ＡＲＫＫＡＡＫＡ  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４） 又は ＧＧＧ（ＡＲＫＫＡＡＫＡ） （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含む。