【手続補正書】
【提出日】平成23年1月18日(2011.1.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
破壊された、C反応性タンパク質(CRP)またはそのホモログをコードする遺伝子を含むトランスジェニック動物。
【請求項２】
前記CRP遺伝子または前記そのホモログのヘテロ接合型またはホモ接合型破壊を含む、請求項1記載の動物。
【請求項３】
前記CRP遺伝子または前記そのホモログのホモ接合型破壊を含む、請求項1記載の動物であって、前記ホモ接合型破壊が前記動物における機能性CRPタンパク質または前記そのホモログの発現を妨げる、前記請求項1記載の動物。
【請求項４】
前記CRP遺伝子または前記そのホモログが、全身的または組織特異的に破壊された、請求項3記載の動物。
【請求項５】
線虫、ゼブラフィッシュ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌまたはウシである、請求項3記載の動物。
【請求項６】
請求項1から5のいずれか記載の動物由来の器官、組織、細胞、細胞株または細胞下画分。
【請求項７】
前記動物の胚から単離される、請求項6記載の細胞または細胞株。
【請求項８】
前記CRP遺伝子の機能的発現を欠く、請求項3から5いずれか記載の動物由来の器官、組織、細胞、細胞株または細胞下画分。
【請求項９】
請求項3記載の動物を得る方法であって、部位特異的組換え酵素の認識部位に隣接するCRP遺伝子またはそのエクソンを有するトランスジェニック動物が、構成的活性型リコンビナーゼまたは誘導リコンビナーゼを発現するトランスジェニック動物と交配され、
認識部位がLoxPであってもよく、リコンビナーゼがCreであってもよく、
リコンビナーゼが組織特異的プロモーターの転写調節下にあってもよい、前記方法。
【請求項１０】
エクソンが前記CRP遺伝子のエクソン2全体を含む、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
動物のCRP遺伝子に相同なDNA配列に隣接する選択マーカー配列を含むCRP DNAノックアウト構築物であって、前記構築物が前記動物に胎生期に導入されたとき、前記選択マーカー配列が前記マウスにおけるCRP遺伝子を破壊する前記構築物。
【請求項１２】
請求項11記載のCRP DNAノックアウト構築物を含むベクター。
【請求項１３】
炎症性疾患治療薬のスクリーニング方法であって、
(a)請求項3記載の動物である実験動物に試験化合物を投与し;
(b)前記試験化合物への前記実験動物の反応を測定し;
(c)機能性CRP遺伝子を有する対照動物に対して前記実験動物の反応を比較し;
(d)前記動物と前記対照動物との間で観察された反応の差異に基づいて薬剤を選択すること
を含む前記方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３７】
前述の情報および当該技術分野で入手可能な情報を用いて、当業者は本発明を最大限に利用できると考えられる。本明細書に記載されている本発明の精神と範囲から逸脱することなく、変更および修飾を行うことができることは、当業者には明らかであろう。本明細書に記載のトピックの表題は、本願において特定の情報が見出せることの案内を意味するものであって、このようなトピックに関する情報が見出せる本願における唯一の供給元であることを意味するものではない。上記のすべての出版物および特許は、参照により本願に組み込まれる。
以下に本発明の態様を示す。
１．破壊された、C反応性タンパク質(CRP)またはそのホモログをコードする遺伝子を含むトランスジェニック動物。
２．前記CRP遺伝子または前記そのホモログのヘテロ接合型またはホモ接合型破壊を含む、上記1記載の動物。
３．前記CRP遺伝子または前記そのホモログのホモ接合型破壊を含む、上記1記載の動物であって、前記ホモ接合型破壊が前記動物における機能性CRPタンパク質または前記そのホモログの発現を妨げる、前記上記1記載の動物。
４．前記CRP遺伝子または前記そのホモログが、全身的または組織特異的に破壊された、上記3記載の動物。
５．前記CRP遺伝子または前記そのホモログが全身的に破壊された、上記3記載の動物。
６．前記CRP遺伝子または前記そのホモログの生殖系列変異または欠失を含む、上記3記載の動物。
７．前記CRP遺伝子または前記そのホモログの組織特異的変異または欠失を含む、上記3記載の動物。
８．前記CRP遺伝子または前記そのホモログの1以上のエクソンのホモ接合型破壊を含む、上記3記載の動物。
９．野生型CRP遺伝子を有する動物と比較して改変された表現型を含む上記3記載の動物であって、前記改変された表現型が、
(1)LPSチャレンジ後のサイトカイン産生の低下;
(2)α-CD3刺激後のT細胞のサイトカイン産生の低下;
(3)TNP-ficollでの免疫後のT細胞非依存性抗体産生の増加;または
(4)(1)、(2)および(3)の任意の組み合わせ
である、前記上記3記載の動物。
１０．前記改変された表現型が、
(1)LPSチャレンジ後のTNF-αおよびIL-10サイトカイン産生の低下;
(2)α-CD3刺激後のINF-γおよびIL-2産生の低下;
(3)IgM抗体産生の増加;または
(4)(1)、(2)および(3)の任意の組み合わせ
を含む、上記9記載の動物。
１１．線虫、ゼブラフィッシュ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌまたはウシである、上記3記載の動物。
１２．マウスである、上記3記載の動物。
１３．上記1記載の動物由来の器官、組織、細胞、細胞株または細胞下画分。
１４．前記動物の胚から単離される、上記13記載の細胞または細胞株。
１５．前記CRP遺伝子の機能的発現を欠く、上記3記載の動物由来の器官、組織、細胞、細胞株または細胞下画分。
１６．前記動物の肝臓由来の、上記15記載の器官、組織、細胞、細胞株または細胞下画分。
１７．上記3記載の動物を得る方法であって、部位特異的組換え酵素の認識部位に隣接するCRP遺伝子またはそのエクソンを有するトランスジェニック動物が、構成的活性型リコンビナーゼまたは誘導リコンビナーゼを発現するトランスジェニック動物と交配される前記方法。
１８．認識部位がLoxPであり、リコンビナーゼがCreである、上記16記載の方法。
１９．リコンビナーゼが組織特異的プロモーターの転写調節下にある、上記16記載の方法。
２０．エクソンが前記CRP遺伝子のエクソン2全体を含む、上記16記載の方法。
２１．動物のCRP遺伝子に相同なDNA配列に隣接する選択マーカー配列を含むCRP DNAノックアウト構築物であって、前記構築物が前記動物に胎生期に導入されたとき、前記選択マーカー配列が前記マウスにおけるCRP遺伝子を破壊する前記構築物。
２２．上記21記載のCRP DNAノックアウト構築物を含むベクター。
２３．図1に示されるようにCRP標的対立遺伝子を含む、上記21記載のCRP DNAノックアウト構築物。
２４．炎症性疾患治療薬のスクリーニング方法であって、
(a)上記3記載の動物である実験動物に試験化合物を投与し;
(b)前記試験化合物への前記実験動物の反応を測定し;
(c)機能性CRP遺伝子を有する対照動物に対して前記実験動物の反応を比較し;
(d)前記動物と前記対照動物との間で観察された反応の差異に基づいて薬剤を選択すること
を含む前記方法。
２５．前記実験動物がCRPノックアウト動物であり、前記対照動物が前記CRP遺伝子の野生型またはヘテロ接合型欠失を含む、上記24記載の方法。
２６．免疫増強剤のスクリーニング方法であって、
(a)CRPノックアウト動物である実験動物に試験免疫増強剤を投与し;
(b)IL-2、IL-10またはTNF-αである少なくとも1つのサイトカインの、前記実験動物におけるレベルを測定し;
(c)前記実験動物における前記IL-2、IL-10またはTNF-αのレベルを対照動物と比較し;
(d)前記実験動物における前記IL-2、IL-10またはTNF-αの、前記対照動物と比較した上昇に基づいて薬剤を選択すること
を含む前記方法。
２７．実験動物が、炎症性刺激を受けた動物をさらに含む、上記27記載の方法。
２８．免疫抑制剤のスクリーニング方法であって、
(a)CRPノックアウト動物である実験動物に試験免疫抑制剤を投与し;
(b)IL-6である少なくとも1つのサイトカインの、前記実験動物におけるレベルを測定し;
(c)前記実験動物における前記IL-6のレベルを対照動物と比較し;
(d)前記実験動物における前記IL-6の、前記対照動物と比較した低下に基づいて薬剤を選択すること
を含む前記方法。
２９．実験動物が、炎症性刺激を受けた動物をさらに含む、上記28記載の方法。