【手続補正書】
【提出日】平成23年8月24日(2011.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、対象の疾患または障害の時にモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、
1)
(a)改変された細胞を作製するために、前記ポリヌクレオチドを対象の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；および
(c)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、前記対象が疾患または障害を有することが示される、
対象における疾患または障害を診断する方法、または
2)
(a)前記ポリヌクレオチドを含むように改変された対象の細胞にリガンドを投与する工程；および
(b)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における疾患または障害の進行が示される、
対象における疾患または障害の進行をモニタリングする方法
における使用のための、前記遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド。
【請求項２】
1)
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、対象の疾患または障害の時にモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を対象の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(c)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、前記対象が疾患または障害を有することが示される、
対象における疾患または障害を診断するエクスビボの方法であるか、または
2)
(a)前記ポリヌクレオチドを含むように改変された対象の細胞にリガンドを投与する工程；および
(b)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における疾患または障害の進行が示され、かつ
前記対象の前記改変された細胞が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、対象の疾患または障害の時にモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を含む、
対象における疾患または障害の進行をモニタリングするエクスビボの方法。
【請求項３】
改変された細胞を作製するために、対象から単離された細胞にポリヌクレオチドが導入され、かつ改変された細胞が、前記対象に再導入される、請求項1記載の使用のためのポリヌクレオチド。
【請求項４】
疾患または障害の進行をモニタリングする方法が、前記ポリヌクレオチドを対象の細胞に導入する前に該対象に処置を施す工程を含み、
レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、該処置の有効性が示される、
請求項1記載の使用のためのポリヌクレオチド。
【請求項５】
疾患または障害の進行をモニタリングする方法が、前記ポリヌクレオチドを非自己細胞に導入する工程、および該改変された非自己細胞を対象に導入する工程を含み、
レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、処置の有効性が示される、
請求項1記載の使用のためのポリヌクレオチド。
【請求項６】
改変された細胞が、対象への導入の前にバリアによって取り囲まれる、請求項5記載の使用のためのポリヌクレオチド。
【請求項７】
改変された細胞が、臓器または組織の移植片の細胞であり、
疾患を診断することが、臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶を検出することを含み、
レポーター遺伝子の発現によって、移植片拒絶が検出されたことが示される、
請求項1記載の使用のためのポリヌクレオチド。
【請求項８】
改変された細胞が、臓器または組織の移植片の細胞であり、
疾患を診断することが、臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶を検出することを含み、
レポーター遺伝子の発現によって、移植片拒絶が検出されたことが示される、
請求項2記載の方法。
【請求項９】
方法が、改変された細胞からのレポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程をさらに含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、対象における移植片拒絶についての拒絶または進行が示される、
請求項7記載の使用のためのポリヌクレオチドまたは請求項8記載の方法。
【請求項１０】
遺伝子スイッチが、エクジソン受容体(EcR)に基づく遺伝子スイッチである、前記請求項のいずれか一項記載の使用のためのポリヌクレオチドまたは方法。
【請求項１１】
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
ポリヌクレオチドが移植前および移植後に細胞に導入される、請求項7記載の方法。
【請求項１５】
対象における疾患または障害を診断するための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
【請求項１６】
対象における疾患または障害に対する処置の有効性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の有効性が示される、
方法。
【請求項１７】
対象における疾患または障害に対して施された処置の潜在的な毒性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、毒性条件に曝されている細胞に見出される因子によりモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の毒性が示される、
方法。
【請求項１８】
疾患または障害に対する処置のために対象に投与されている因子のレベルをモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、処置のために投与されている前記因子によりモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルによって、処置のために投与されている因子のレベルが示される、
方法。
【請求項１９】
疾患または障害に対する処置のために対象に投与されている因子のレベルをモニタリングするための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、処置のために投与されている前記因子によってモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
【請求項２０】
臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶を検出する方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列であり、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、該少なくとも一つの転写因子配列、および
(2)該リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチド
を前記臓器または組織の移植片の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(c)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、移植片拒絶が検出されたことが示される、
方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明は、例えば、遺伝子スイッチ構築物、ベクター、リガンド等を含む、本発明の方法を実施するためのキットにも関する。一つの態様において、キットは、本発明のポリヌクレオチドを含んでいてもよい細胞(例えば、自己細胞または非自己細胞)を含み得る。
[請求項1001]
対象における疾患または障害を診断する方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(c)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、前記対象が前記疾患または障害を有することが示される、
方法。
[請求項1002]
対象から単離された細胞においてエクスビボで実施される、請求項1001記載の方法。
[請求項1003]
改変された細胞を作製するために、対象から単離された細胞にポリヌクレオチドが導入され、かつ改変された細胞が、前記対象に再導入される、請求項1001記載の方法。
[請求項1004]
インビボで実施される、請求項1001記載の方法。
[請求項1005]
遺伝子スイッチが、エクジソン受容体(EcR)に基づく遺伝子スイッチである、請求項1001記載の方法。
[請求項1006]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1005記載の方法。
[請求項1007]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1006記載の方法。
[請求項1008]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1007記載の方法。
[請求項1009]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1006記載の方法。
[請求項1010]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1001記載の方法。
[請求項1011]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1010記載の方法。
[請求項1012]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1010記載の方法。
[請求項1013]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1010記載の方法。
[請求項1014]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1010記載の方法。
[請求項1015]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーター(inducible promoter)に機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1001記載の方法。
[請求項1016]
対象における疾患または障害を診断するための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1017]
対象における疾患または障害を診断する方法であって、該方法が、
(a)前記対象の改変された細胞にリガンドを投与する工程；および
(b)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、前記対象が疾患または障害を有することが示され、かつ
前記対象の前記改変された細胞が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、
方法。
[請求項1018]
対象における疾患または障害を診断する方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を非自己細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞を前記対象に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、前記対象が前記疾患または障害を有することが示される、
方法。
[請求項1019]
対象における疾患または障害の進行をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(c)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における前記疾患または障害の進行が示される、
方法。
[請求項1020]
対象から単離された細胞においてエクスビボで実施される、請求項1019記載の方法。
[請求項1021]
改変された細胞を作製するために、対象から単離された細胞にポリヌクレオチドが導入され、かつ改変された細胞が、前記対象に再導入される、請求項1019記載の方法。
[請求項1022]
インビボで実施される、請求項1019記載の方法。
[請求項1023]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1019記載の方法。
[請求項1024]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1023記載の方法。
[請求項1025]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1024記載の方法。
[請求項1026]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1025記載の方法。
[請求項1027]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1024記載の方法。
[請求項1028]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1019記載の方法。
[請求項1029]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1028記載の方法。
[請求項1030]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1028記載の方法。
[請求項1031]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1028記載の方法。
[請求項1032]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1028記載の方法。
[請求項1033]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1019記載の方法。
[請求項1034]
対象における疾患または障害の進行をモニタリングするための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1035]
対象における疾患または障害の進行をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記対象の改変された細胞にリガンドを投与する工程；および
(b)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における前記疾患または障害の進行が示され、かつ
前記対象の前記改変された細胞が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、
方法。
[請求項1036]
対象における疾患または障害の進行をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を非自己細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞を前記対象に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における前記疾患または障害の進行が示される、
方法。
[請求項1037]
対象における疾患または障害に対する処置の有効性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の有効性が示される、
方法。
[請求項1038]
工程(b)が工程(a)の前に実施される、請求項1037記載の方法。
[請求項1039]
レポーター遺伝子発現の基線レベルが工程(a)の前に決定される、請求項1038記載の方法。
[請求項1040]
対象から単離された細胞においてエクスビボで実施される、請求項1037記載の方法。
[請求項1041]
改変された細胞を作製するために、対象から単離された細胞にポリヌクレオチドが導入され、かつ改変された細胞が、前記対象に再導入される、請求項1037記載の方法。
[請求項1042]
インビボで実施される、請求項1037記載の方法。
[請求項1043]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1037記載の方法。
[請求項1044]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1043記載の方法。
[請求項1045]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1044記載の方法。
[請求項1046]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1045記載の方法。
[請求項1047]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1044記載の方法。
[請求項1048]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1037記載の方法。
[請求項1049]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1048記載の方法。
[請求項1050]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1048記載の方法。
[請求項1051]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1048記載の方法。
[請求項1052]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1048記載の方法。
[請求項1053]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1037記載の方法。
[請求項1054]
対象における疾患または障害に対する処置の有効性をモニタリングするための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1055]
対象における疾患または障害に対する処置の有効性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)前記対象の改変された細胞にリガンドを投与する工程；および
(c)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の有効性が示され、かつ
前記対象の前記改変された細胞が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、
方法。
[請求項1056]
対象における疾患または障害に対する処置の有効性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、前記対象の前記疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を非自己細胞に導入する工程；
(b)前記対象に前記改変された細胞を導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の有効性が示される、
方法。
[請求項1057]
対象における疾患または障害に対して施された処置の潜在的な毒性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、毒性条件に曝されている細胞に見出される因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の毒性が示される、
方法。
[請求項1058]
工程(b)が工程(a)の前に実施される、請求項1057記載の方法。
[請求項1059]
レポーター遺伝子発現の基線レベルが工程(a)の前に決定される、請求項1058記載の方法。
[請求項1060]
対象から単離された細胞においてエクスビボで実施される、請求項1057記載の方法。
[請求項1061]
改変された細胞を作製するために、対象から単離された細胞にポリヌクレオチドが導入され、かつ改変された細胞が、前記対象に再導入される、請求項1057記載の方法。
[請求項1062]
インビボで実施される、請求項1057記載の方法。
[請求項1063]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1057記載の方法。
[請求項1064]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1063記載の方法。
[請求項1065]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1064記載の方法。
[請求項1066]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1065記載の方法。
[請求項1067]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1064記載の方法。
[請求項1068]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1057記載の方法。
[請求項1069]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1068記載の方法。
[請求項1070]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1068記載の方法。
[請求項1071]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1068記載の方法。
[請求項1072]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1068記載の方法。
[請求項1073]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1057記載の方法。
[請求項1074]
対象における疾患または障害に対して施された処置の潜在的な毒性をモニタリングするための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、毒性条件に曝されている細胞に見出される因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1075]
対象における疾患または障害に対して施された処置の潜在的な毒性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)前記対象の改変された細胞にリガンドを投与する工程；および
(c)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の毒性が示され、かつ
前記対象の前記改変された細胞が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、毒性条件に曝されている細胞に見出される因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、
方法。
[請求項1076]
対象における疾患または障害に対して施された処置の潜在的な毒性をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、毒性条件に曝されている細胞に見出される因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を非自己細胞に導入する工程；
(b)前記対象に前記改変された細胞を導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記処置の毒性が示される、
方法。
[請求項1077]
疾患または障害に対する処置のために対象に投与されている因子のレベルをモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、処置のために投与されている前記因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルによって、処置のために投与されている因子のレベルが示される、
方法。
[請求項1078]
工程(b)が工程(a)の前に実施される、請求項1077記載の方法。
[請求項1079]
レポーター遺伝子発現の基線レベルが工程(a)の前に決定される、請求項1078記載の方法。
[請求項1080]
工程(d)において検出されたレポーター遺伝子発現のレベルに基づいて、投与される因子の量を変更する工程をさらに含む、請求項1077記載の方法。
[請求項1081]
対象から単離された細胞においてエクスビボで実施される、請求項1077記載の方法。
[請求項1082]
改変された細胞を作製するために、対象から単離された細胞にポリヌクレオチドが導入され、かつ改変された細胞が、前記対象に再導入される、請求項1077記載の方法。
[請求項1083]
インビボで実施される、請求項1077記載の方法。
[請求項1084]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1077記載の方法。
[請求項1085]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1084記載の方法。
[請求項1086]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1085記載の方法。
[請求項1087]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1086記載の方法。
[請求項1088]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1085記載の方法。
[請求項1089]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1077記載の方法。
[請求項1090]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1089記載の方法。
[請求項1091]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1089記載の方法。
[請求項1092]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1089記載の方法。
[請求項1093]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1089記載の方法。
[請求項1094]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1089記載の方法。
[請求項1095]
疾患または障害に対する処置のために対象に投与されている因子のレベルをモニタリングするための改変された細胞を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、処置のために投与されている前記因子によってモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記対象の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1096]
疾患または障害に対する処置のために対象に投与されている因子のレベルをモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記処置を前記対象に施す工程；
(b)前記対象の改変された細胞にリガンドを投与する工程；および
(c)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルによって、処置のために投与されている因子のレベルが示され、かつ
前記対象の前記改変された細胞が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、処置のために投与されている前記因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む、
方法。
[請求項1097]
対象における疾患または障害に対して対象に投与されている因子のレベルをモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、処置のために投与されている前記因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を非自己細胞に導入する工程；
(b)前記対象に前記改変された細胞を導入する工程；
(c)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(d)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルによって、処置のために投与されている因子のレベルが示される、
方法。
[請求項1098]
臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶を検出する方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記臓器または組織の移植片の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(c)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、移植片拒絶が検出されたことが示される、
方法。
[請求項1099]
ポリヌクレオチドが移植前に細胞に導入される、請求項1098記載の方法。
[請求項1100]
ポリヌクレオチドが移植後に細胞に導入される、請求項1098記載の方法。
[請求項1101]
遺伝子スイッチが、エクジソン受容体(EcR)に基づく遺伝子スイッチである、請求項1098記載の方法。
[請求項1102]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1101記載の方法。
[請求項1103]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1102記載の方法。
[請求項1104]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1103記載の方法。
[請求項1105]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1102記載の方法。
[請求項1106]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1098記載の方法。
[請求項1107]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1106記載の方法。
[請求項1108]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1106記載の方法。
[請求項1109]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1106記載の方法。
[請求項1110]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1106記載の方法。
[請求項1111]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1098記載の方法。
[請求項1112]
対象における移植片拒絶を検出するための臓器または組織の移植片を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記臓器または組織の移植片の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1113]
臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶を検出する方法であって、該方法が、
(a)前記対象にリガンドを投与する工程；および
(b)レポーター遺伝子発現を検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現によって、移植片拒絶が検出されたことが示され、かつ
前記臓器または組織の移植片が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む一つまたは複数の細胞を含む、
方法。
[請求項1114]
臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶の進行をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記臓器または組織の移植片の細胞に導入する工程；
(b)前記改変された細胞にリガンドを投与する工程；ならびに
(c)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における前記移植片拒絶の進行が示される、
方法。
[請求項1115]
ポリヌクレオチドが移植前に細胞に導入される、請求項1114記載の方法。
[請求項1116]
ポリヌクレオチドが移植後に細胞に導入される、請求項1114記載の方法。
[請求項1117]
遺伝子スイッチが、エクジソン受容体(EcR)に基づく遺伝子スイッチである、請求項1114記載の方法。
[請求項1118]
リガンドがEcRリガンド結合ドメインに結合する、請求項1117記載の方法。
[請求項1119]
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項1118記載の方法。
[請求項1120]
リガンドが、RG-115819、RG-115830、およびRG-115932からなる群より選択される、請求項1119記載の方法。
[請求項1121]
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項1118記載の方法。
[請求項1122]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1114記載の方法。
[請求項1123]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1122記載の方法。
[請求項1124]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1122記載の方法。
[請求項1125]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1122記載の方法。
[請求項1126]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1122記載の方法。
[請求項1127]
ポリヌクレオチドのうちの一つが、誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1114記載の方法。
[請求項1128]
対象における移植片拒絶の進行をモニタリングするための臓器または組織の移植片を調製する方法であって、
改変された細胞を作製するために、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を前記臓器または組織の移植片の細胞に導入する工程
を含む方法。
[請求項1129]
臓器または組織の移植片を受け取った対象における移植片拒絶の進行をモニタリングする方法であって、該方法が、
(a)前記対象にリガンドを投与する工程；および
(b)レポーター遺伝子発現を少なくとも2回検出する工程
を含み、
前記レポーター遺伝子の発現のレベルの変化によって、前記対象における前記移植片拒絶の進行が示され、かつ
前記臓器または組織の移植片が、
(1)診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された少なくとも一つの転写因子配列を含む、遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該少なくとも一つの転写因子配列が、リガンド依存性転写因子をコードし、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド、および
(2)前記リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をコードするポリヌクレオチド
を含む一つまたは複数の細胞を含む、
方法。
[請求項1130]
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該遺伝子スイッチが、診断用スイッチプロモーターに機能的に連結された、リガンド依存性転写因子をコードする少なくとも一つの転写因子配列を含み、該プロモーターの活性が、疾患または障害の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド。
[請求項1131]
リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をさらにコードする、請求項1130記載のポリヌクレオチド。
[請求項1132]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1130記載のポリヌクレオチド。
[請求項1133]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1130記載のポリヌクレオチド。
[請求項1134]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1133記載のポリヌクレオチド。
[請求項1135]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1133記載のポリヌクレオチド。
[請求項1136]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1133記載のポリヌクレオチド。
[請求項1137]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1133記載のポリヌクレオチド。
[請求項1138]
誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1130記載のポリヌクレオチド。
[請求項1139]
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該遺伝子スイッチが、診断用スイッチプロモーターに連結された、リガンド依存性転写因子をコードする少なくとも一つの転写因子配列を含み、該プロモーターの活性が、毒性条件に曝されている細胞に見出される因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド。
[請求項1140]
リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をさらにコードする、請求項1139記載のポリヌクレオチド。
[請求項1141]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1139記載のポリヌクレオチド。
[請求項1142]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1139記載のポリヌクレオチド。
[請求項1143]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1142記載のポリヌクレオチド。
[請求項1144]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1142記載のポリヌクレオチド。
[請求項1145]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1142記載のポリヌクレオチド。
[請求項1146]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1142記載のポリヌクレオチド。
[請求項1147]
誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1139記載のポリヌクレオチド。
[請求項1148]
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該遺伝子スイッチが、診断用スイッチプロモーターに連結された、リガンド依存性転写因子をコードする少なくとも一つの転写因子配列を含み、該プロモーターの活性が、処置のために対象に投与される因子によりモジュレートされる、ポリヌクレオチド。
[請求項1149]
リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をさらにコードする、請求項1148記載のポリヌクレオチド。
[請求項1150]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1148記載のポリヌクレオチド。
[請求項1151]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1148記載のポリヌクレオチド。
[請求項1152]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1151記載のポリヌクレオチド。
[請求項1153]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1151記載のポリヌクレオチド。
[請求項1154]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1151記載のポリヌクレオチド。
[請求項1155]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1151記載のポリヌクレオチド。
[請求項1156]
誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1148記載のポリヌクレオチド。
[請求項1157]
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドであって、該遺伝子スイッチが、診断用スイッチプロモーターに連結された、リガンド依存性転写因子をコードする少なくとも一つの転写因子配列を含み、該プロモーターの活性が、移植片拒絶の時にモジュレートされる、ポリヌクレオチド。
[請求項1158]
リガンド依存性転写因子により活性化されるプロモーターに連結されたレポーター遺伝子をさらにコードする、請求項1157記載のポリヌクレオチド。
[請求項1159]
遺伝子スイッチが、EcRに基づく遺伝子スイッチである、請求項1157記載のポリヌクレオチド。
[請求項1160]
遺伝子スイッチが、第一の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第一の転写因子配列、および第二の診断用スイッチプロモーターの制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によりコードされたタンパク質が、リガンド依存性転写因子として機能するタンパク質複合体を形成するように相互作用する、請求項1157記載のポリヌクレオチド。
[請求項1161]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが異なる、請求項1160記載のポリヌクレオチド。
[請求項1162]
第一の診断用スイッチプロモーターと第二の診断用スイッチプロモーターが同一である、請求項1160記載のポリヌクレオチド。
[請求項1163]
第一の転写因子配列が、ヘテロ二量体パートナーおよびトランス活性化ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1160記載のポリヌクレオチド。
[請求項1164]
第二の転写因子配列が、DNA結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含むタンパク質をコードする、請求項1160記載のポリヌクレオチド。
[請求項1165]
誘導性プロモーターに機能的に連結された致死ポリペプチドをさらにコードする、請求項1157記載のポリヌクレオチド。
[請求項1166]
請求項1130、1139、1148、または1157のいずれか一項記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
[請求項1167]
プラスミドベクターである、請求項1166記載のベクター。
[請求項1168]
ウイルスベクターである、請求項1166記載のベクター。
[請求項1169]
請求項1130、1139、1148、または1157のいずれか一項記載のポリヌクレオチドを含むキット。
[請求項1170]
請求項1166記載のベクターを含むキット。