【手続補正書】
【提出日】平成23年6月10日(2011.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変されたN-グリコシル化プロファイルを有する対象タンパク質を合成する方法であって、植物、植物の部分又は植物細胞内に、ベータ-1,4ガラクトシルトランスフェラーゼ（GalT）の触媒ドメインと融合されたN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（GNT1）のCTSドメインを含むハイブリッドタンパク質GNT1-GalTをコードする第一のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第一の調節領域と機能的に連結された第一のヌクレオチド配列、及び対象タンパク質をコードするための第二のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第二の調節領域と機能的に連結された第二のヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列を導入する工程、並びに前記第一及び第二のヌクレオチド配列を一過性に同時発現させて、前記改変されたN-グリコシル化プロファイルを有するグリカンを含む対象タンパク質を合成する工程、を含む方法。
【請求項２】
前記対象タンパク質が、植物の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記第一の調節領域が、第一のプラストシアニンプロモーター又は第一の35Sプロモーターであり、前記第二の調節領域が、第二のプラストシアニンプロモーター又は第二の35Sプロモーターである、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
第三のヌクレオチド配列が前記植物中で発現され、前記第三のヌクレオチド配列がサイレンシングのサプレッサーをコードし、前記第三のヌクレオチド配列が前記植物中で活性な第三の調節領域と機能的に連結される、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記第三の調節領域がプラストシアニンプロモーター又は35Sプロモーターである、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
第三のヌクレオチド配列が前記植物中で発現され、前記第三のヌクレオチド配列がサイレンシングのサプレッサーをコードし、前記第三のヌクレオチド配列が前記植物中で活性な第三の調節領域と機能的に連結される、請求項3に記載の方法。
【請求項７】
前記第三の調節領域が第三のプラストシアニンプロモーター又は第三の35Sプロモーターである、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
前記対象タンパク質が、抗体、抗原又はワクチンである、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
対象タンパク質をコードする前記第二のヌクレオチド配列が、前記植物中で活性な調節領域2Aと機能的に連結されたヌクレオチド配列2A、及び前記植物中で活性な調節領域2Bと機能的に連結されたヌクレオチド配列2Bを含み、かつ、2A及び2Bの各々によってコードされた生成物が結合して抗体を生成する、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
前記調節領域2Aがプラストシアニンプロモーターであり、前記調節領域2Bがプラストシアニンプロモーターである、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
配列番号:17のヌクレオチド１〜１０６２（GNT1-GalT）を含む核酸であって、前記ヌクレオチド配列が、対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする、前記核酸。
【請求項１２】
配列番号:14（GalT）を含む第一の核酸配列を含む核酸であって、前記第一の核酸配列が、対象のタンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードし、前記第一の核酸配列が、プラストシアニンプロモーターを含む第二の核酸配列と機能的に連結される、前記核酸。
【請求項１３】
改変されたN-グリコシル化プロファイルを有する対象タンパク質を合成する方法であって、植物、植物の部分又は植物細胞内で、ハイブリッドタンパク質（GNT1-GnT-III）をコードし、かつN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII（GnT-III）の触媒ドメインと融合されたN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（GNT1）のCTSドメインを含む第一のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第一の調節領域と機能的に連結された第一のヌクレオチド配列、及び対象タンパク質をコードする第二のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第二の調節領域と機能的に連結された第二のヌクレオチド配列を含む核酸を一過性に同時発現させる工程、並びに前記第一及び第二のヌクレオチド配列を同時発現させて、前記改変されたN-グリコシル化プロファイルを有するグリカンを含む対象タンパク質を合成する工程、を含む方法。
【請求項１４】
配列番号:26のヌクレオチド1〜1641（GNT1-GnT-III）を含む核酸であって、ヌクレオチド配列が対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする、前記核酸。
【請求項１５】
配列番号:16のヌクレオチド1〜1460（GnT-III）を含む第一の核酸配列を含む核酸であって、前記第一の核酸配列が、対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードし、前記第一の核酸配列が、プラストシアニンプロモーターを含む第二の核酸配列と機能的に連結される、前記核酸。
【請求項１６】
更に、植物、植物の部分又は植物細胞内に、ベータ-1,4ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする第三のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第三の調節領域と機能的に連結された第三のヌクレオチド配列を導入する工程、並びに前記第一、第二及び第三のヌクレオチド配列を一過性に同時発現させて、前記改変されたN-グリコシル化プロファイルを有するグリカンを含む対象タンパク質を合成する工程、を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１７】
改変されたN-グリコシル化プロファイルを有する対象タンパク質を合成する方法であって、植物、植物の部分又は植物細胞内で、N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII（GnT-III）の触媒ドメインと融合されたN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（GNT1）のCTSドメインを含むハイブリッドタンパク質GNT1-GnT-IIIをコードする第一のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第一の調節領域と機能的に連結された第一のヌクレオチド配列、N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIIIをコードする第二のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第二の調節領域と機能的に連結された第二のヌクレオチド配列、及び対象タンパク質をコードするための第三のヌクレオチド配列であって、前記植物中で活性な第三の調節領域と機能的に連結された第三のヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列を一過性に同時発現させる工程、並びに前記第一、第二及び第三のヌクレオチド配列を同時発現させて、前記改変されたN-グリコシル化プロファイルを有するグリカンを含む対象タンパク質を合成する工程、を含む方法。
【請求項１８】
ベータ-1,4ガラクトシルトランスフェラーゼの触媒ドメインと融合されたN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼのCTSドメインを含むハイブリッドタンパク質GNT1-GalTであって、配列番号:18の配列のアミノ酸１〜３５４を含む、前記ハイブリッドタンパク質。
【請求項１９】
N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIIIの触媒ドメインと融合されたN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼのCTSドメインを含むハイブリッドタンパク質GNT1-GnT-IIIであって、配列番号:20のアミノ酸配列を含む、前記ハイブリッドタンパク質。
【請求項２０】
請求項11に記載のヌクレオチド配列を含む植物、植物細胞又は種子。
【請求項２１】
請求項12に記載のヌクレオチド配列を含む植物、植物細胞又は種子。
【請求項２２】
請求項14に記載のヌクレオチド配列を含む植物、植物細胞又は種子。
【請求項２３】
請求項15に記載のヌクレオチド配列を含む植物、植物細胞又は種子。
【請求項２４】
請求項18に記載のハイブリッドタンパク質を含む植物、植物細胞又は種子。
【請求項２５】
請求項19に記載のハイブリッドタンパク質を含む植物、植物細胞又は種子。
【請求項２６】
前記対象タンパク質が抗体であり、かつ、植物の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項1に記載の方法。
【請求項２７】
合成された対象タンパク質が、フコシル化、キシロシル化又はその両方を欠いている、請求項1に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象タンパク質が、植物の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項13に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象タンパク質が、植物の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項16に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象タンパク質が、植物の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項17に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象タンパク質が抗体であり、かつ、葉の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項13に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象タンパク質が抗体であり、かつ、葉の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項16に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象タンパク質が抗体であり、かつ、葉の新鮮重量1kg当たり1.5gに達する量合成される、請求項17に記載の方法。
【請求項３４】
合成された対象タンパク質が、フコシル化、キシロシル化又はその両方を欠いている、請求項13に記載の方法。
【請求項３５】
合成された対象タンパク質が、フコシル化、キシロシル化又はその両方を欠いている、請求項16に記載の方法。
【請求項３６】
合成された対象タンパク質が、フコシル化、キシロシル化又はその両方を欠いている、請求項17に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
したがって、配列番号:17（GNT1-GalT）のヌクレオチド1−1062を含むか、又は配列番号:17のヌクレオチド1−102と約80%から100%同一性を示すヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列が提供され、このヌクレオチド配列は対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする。前記配列は植物に対して最適化することができる。さらにまた、配列番号:14（GalT）のヌクレオチド1−1224を含むか、又は配列番号:14のヌクレオチド1−1224と約80%から100%同一性を示す配列を含む核酸を含むヌクレオチド配列が提供され、この核酸配列は対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする。前記配列は植物に対して最適化することができる。前記配列同一性は以下のパラメータ（プログラム：blastn；データベース：nr；Expect 10；フィルター：低複雑度；アラインメント：ペア毎；ワードサイズ：11）を用いて測定することができる。
さらに、配列番号:18（GNT1-GalT；図5e）又は配列番号:15（GalT；図5c）に示されるアミノ酸配列もまた開示される。
配列番号:26（GNT1-GnT-III）のヌクレオチド1−1641を含むか、又は配列番号:26のヌクレオチド1−1641と約80%から100%同一性を示すヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を有する核酸が提供され、この核酸配列は対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする。前記配列は植物に対して最適化することができる。さらにまた、配列番号:26のヌクレオチド232−1641（GnT-III；又は配列番号:16のヌクレオチド1−1460）を含むか、又は配列番号:26のヌクレオチド232−1641（又は配列番号:16のヌクレオチド1−1460）と約80%から100%同一性を示す配列を含む核酸配列を含むヌクレオチド配列が提供され、この核酸配列は対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする。前記配列は植物に対して最適化することができる。前記配列同一性は以下のパラメータ（プログラム：blastn；データベース：nr；Expect 10；フィルター：低複雑度；アラインメント：ペア毎；ワードサイズ：11）を用いて測定することができ、このヌクレオチド配列は対象タンパク質のグリコシル化を改変するタンパク質をコードする。
さらに、配列番号:20（GNT1-GnT-III；図5i）又は配列番号:19（GnT-III；図5k）に示されるアミノ酸配列もまた開示される。