【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年2月25日(2011.2.25)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする単離セリンプロテアーゼ。
【請求項２】
前記セリンプロテアーゼが、セルロモナス株６９Ｂ４から得られることを特徴とする請求項１に記載の単離セリンプロテアーゼ。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のセリンプロテアーゼのアミノ酸配列中の配列番号５１又は５２で示されるペプチドに対する抗体と免疫学的交叉反応性を有する単離セリンプロテアーゼ。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のセリンプロテアーゼと８０％以上のアミノ酸同一性を有する単離セリンプロテアーゼ。
【請求項５】
配列番号８で示されるアミノ酸配列の１４、１６、３５、７９、１２３、１２７、１５９、および１７９からなる群から選択される位置における少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸で置換されているアミノ酸配列を含む単離セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項６】
前記セリンプロテアーゼ変異体が、Ｒ１４Ｌ、Ｒ１６Ｉ、Ｒ１６Ｌ、Ｒ１６Ｑ、Ｒ３５Ｆ、Ｒ７９Ｔ、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１２３Ｑ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、およびＲ１７９Ｑからなる群から選択される少なくとも一つの突然変異を含むことを特徴とする請求項５に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項７】
前記セリンプロテアーゼ変異体が、Ｒ１６Ｑ／Ｒ３５Ｆ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１２３Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔ／Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔからなる群から選択される多数突然変異を含むことを特徴とする請求項６に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項８】
前記セリンプロテアーゼ変異体が、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１７９Ｑの突然変異を含むことを特徴とする請求項６に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項９】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｔ３６Ｉ、Ａ３８Ｒ、Ｎ１７０Ｙ、Ｎ７３Ｔ、Ｇ７７Ｔ、Ｎ２４Ａ、Ｔ３６Ｇ、Ｎ２４Ｅ、Ｌ６９Ｓ、Ｔ３６Ｎ、Ｔ３６Ｓ、Ｅ１１９Ｒ、Ｎ７４Ｇ、Ｔ３６Ｗ、Ｓ７６Ｗ、Ｎ２４Ｔ、Ｎ２４Ｑ、Ｔ３６Ｐ、Ｓ７６Ｙ、Ｔ３６Ｈ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ７８Ａ、Ｓ１８７Ｐ、Ｒ１７９Ｖ、Ｎ２４Ｖ、Ｖ９０Ｐ、Ｔ３６Ｄ、Ｌ６９Ｈ、Ｇ６５Ｐ、Ｇ６５Ｒ、Ｎ７Ｌ、Ｗ１０３Ｍ、Ｎ５５Ｆ、Ｇ１８６Ｅ、Ａ７０Ｈ、Ｓ７６Ｖ、Ｇ１８６Ｖ、Ｒ１５９Ｆ、Ｔ３６Ｙ、Ｔ３６Ｖ、Ｇ６５Ｖ、Ｎ２４Ｍ、Ｓ５１Ａ、Ｇ６５Ｙ、Ｑ７１Ｉ、Ｖ６６Ｈ、Ｐ１１８Ａ、Ｔ１１６Ｆ、Ａ３８Ｆ、Ｎ２４Ｈ、Ｖ６６Ｄ、Ｓ７６Ｌ、Ｇ１７７Ｍ、Ｇ１８６Ｉ、Ｈ８５Ｑ、Ｑ７１Ｋ、Ｑ７１Ｇ、Ｇ６５Ｓ、Ａ３８Ｄ、Ｐ１１８Ｆ、Ａ３８Ｓ、Ｇ６５Ｔ、Ｎ６７Ｇ、Ｔ３６Ｒ、Ｐ１１８Ｒ、Ｓ１１４Ｇ、Ｙ７５Ｉ、Ｉ１８１Ｈ、Ｇ６５Ｑ、Ｙ７５Ｇ、Ｔ３６Ｆ、Ａ３８Ｈ、Ｒ１７９Ｍ、Ｔ１８３Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ６４Ｗ、Ｙ７５Ｆ、Ｇ７７Ｓ、Ｎ２４Ｌ、Ｗ１０３Ｉ、Ｖ３Ｌ、Ｑ８１Ｖ、Ｒ１７９Ｄ、Ｇ５４Ｒ、Ｔ３６Ｌ、Ｑ７１Ｍ、Ａ７０Ｓ、Ｇ４９Ｆ、Ｇ５４Ｌ、Ｇ５４Ｈ、Ｇ７８Ｈ、Ｒ１７９Ｉ、Ｑ８１Ｋ、Ｖ９０Ｉ、Ａ３８Ｌ、Ｎ６７Ｌ、Ｔ１０９Ｉ、Ｒ１７９Ｎ、Ｖ６６Ｉ、Ｇ７８Ｔ、Ｒ１７９Ｙ、Ｓ１８７Ｔ、Ｎ６７Ｋ、Ｎ７３Ｓ、Ｅ１１９Ｋ、Ｖ３Ｉ、Ｑ７１Ｈ、Ｉ１１Ｑ、Ａ６４Ｈ、Ｒ１４Ｅ、Ｒ１７９Ｔ、Ｌ６９Ｖ、Ｖ１５０Ｌ、Ｑ７１Ａ、Ｇ６５Ｌ、Ｑ７１Ｎ、Ｖ９０Ｓ、Ａ６４Ｎ、Ｉ１１Ａ、Ｎ１４５Ｉ、Ｈ８５Ｔ、Ａ６４Ｙ、Ｎ１４５Ｑ、Ｖ６６Ｌ、Ｓ９２Ｇ、Ｓ１８８Ｍ、Ｇ７８Ｄ、Ｎ６７Ａ、Ｎ７Ｓ、Ｖ８０Ｈ、Ｇ５４Ｋ、Ａ７０Ｄ、Ｐ１１８Ｈ、Ｄ２Ｇ、Ｇ５４Ｍ、Ｑ８１Ｈ、Ｄ２Ｑ、Ｖ６６Ｅ、Ｒ７９Ｐ、Ａ３８Ｎ、Ｎ１４５Ｅ、Ｒ１７９Ｌ、Ｔ１０９Ｈ、Ｒ１７９Ｋ、Ｖ６６Ａ、Ｇ５４Ａ、Ｇ７８Ｎ、Ｔ１０９Ａ、Ｒ１７９Ａ、Ｎ７Ａ、Ｒ１７９Ｅ、Ｈ１０４Ｋ、Ａ６４Ｒ、およびＶ８０Ｌからなる群から選択される少なくとも一つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１０】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｈ８５Ｒ、Ｈ８５Ｌ、Ｔ６２Ｉ、Ｎ６７Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｎ２４Ｆ、Ｔ４０Ｖ、Ｔ８６Ａ、Ｇ６３Ｖ、Ｇ５４Ｑ、Ａ６４Ｆ、Ｇ７７Ｙ、Ｒ３５Ｆ、Ｔ１２９Ｓ、Ｒ６１Ｍ、Ｉ１２６Ｌ、Ｓ７６Ｎ、Ｔ１８２Ｖ、Ｒ７９Ｇ、Ｔ１０９Ｐ、Ｒ１２７Ｆ、Ｒ１２３Ｅ、Ｐ１１８Ｉ、Ｔ１０９Ｒ、１７１Ｓ、Ｔ１８３Ｋ、Ｎ６７Ｔ、Ｐ８９Ｎ、Ｆ１Ｔ、Ａ６４Ｋ、Ｇ７８Ｉ、Ｔ１０９Ｌ、Ｇ７８Ｖ、Ａ６４Ｍ、Ａ６４Ｓ、Ｔ１０Ｇ、Ｇ７７Ｎ、Ａ６４Ｌ、Ｎ６７Ｄ、Ｓ７６Ｔ、Ｎ４２Ｈ、Ｄ１８４Ｆ、Ｄ１８４Ｒ、Ｓ７６Ｉ、Ｓ７８Ｒ、Ａ３８Ｋ、Ｖ７２Ｉ、Ｖ３Ｔ、Ｔ１０７Ｓ、Ａ３８Ｖ、Ｆ４７Ｉ、Ｎ５５Ｑ、Ｓ７６Ｅ、Ｐ１１８Ｑ、Ｔ１０９Ｇ、Ｑ７１Ｄ、Ｐ１１８Ｋ、Ｎ６７Ｓ、Ｑ１６７Ｎ、Ｎ１４５Ｇ、Ｉ２８Ｌ、Ｉ１１Ｔ、Ａ６４Ｉ、Ｇ４９Ｋ、Ｇ４９Ａ、Ｇ６５Ａ、Ｎ１７０Ｄ、Ｈ８５Ｋ、Ｓ１８５Ｉ、Ｉ１８１Ｎ、Ｖ８０Ｆ、Ｌ６９Ｗ、Ｓ７６Ｒ、Ｄ１８４Ｈ、Ｖ１５０Ｍ、Ｔ１８３Ｍ、Ｎ６７Ｑ、Ｓ５１Ｑ、Ａ３８Ｙ、Ｔ１０７Ｖ、Ｎ１４５Ｔ、Ｑ７１Ｆ、Ａ８３Ｎ、Ｓ７６Ａ、Ｎ６７Ｒ、Ｔ１５１Ｌ、Ｔ１６３Ｌ、Ｓ５１Ｆ、Ｑ８１Ｉ、Ｆ４７Ｍ、Ａ４１Ｎ、Ｐ１１８Ｅ、Ｎ６７Ｙ、Ｔ１０７Ｍ、Ｎ７３Ｈ、６７Ｖ、Ｇ６３Ｗ、Ｔ１０Ｋ、Ｉ１８１Ｇ、Ｓ１８７Ｅ、Ｔ１０７Ｈ、Ｄ２Ａ、Ｌ１４２Ｖ、Ａ１４３Ｎ、Ａ８Ｇ、Ｓ１８７Ｌ、Ｖ９０Ａ、Ｇ４９Ｌ、Ｎ１７０Ｌ、Ｇ６５Ｈ、Ｔ３６Ｃ、Ｇ１２Ｗ、Ｓ７６Ｑ、Ａ１４３Ｓ、Ｆ１Ａ、Ｎ７Ｈ、Ｓ１８５Ｖ、Ａ１１０Ｔ、Ｎ５５Ｋ、Ｎ６７Ｆ、Ｎ７Ｉ、Ａ１１０Ｓ、Ｎ１７０Ａ、Ｑ８１Ｄ、Ａ６４Ｑ、Ｑ７１Ｌ、Ａ３８Ｉ、Ｎ１１２Ｉ、Ｖ９０Ｔ、Ｎ１４５Ｌ、Ａ６４Ｔ、Ｉ１１Ｓ、Ａ３０Ｓ、Ｒ１２３Ｉ、Ｄ２Ｈ、Ｖ６６Ｍ、Ｑ７１Ｒ、Ｖ９０Ｌ、Ｌ６８Ｗ、Ｎ２４Ｓ、Ｒ１５９Ｅ、Ｖ６６Ｎ、Ｄ１８４Ｑ、Ｅ１３３Ｑ、Ａ６４Ｖ、Ｄ２Ｎ、Ｇ１３Ｍ、Ｔ４０Ｓ、Ｓ７６Ｋ、Ｇ１７７Ｓ、Ｇ６３Ｑ、Ｓ１５Ｆ、Ａ８Ｋ、Ａ７０Ｇ、およびＡ３８Ｇからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１１】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｒ３５Ｅ、Ｒ３５Ｄ、Ｒ１４Ｅ、Ｒ１４Ｄ、Ｑ１６７Ｅ、Ｇ４９Ｃ、Ｓ１５Ｒ、Ｓ１５Ｈ、Ｉ１１Ｗ、Ｓ１５Ｃ、Ｇ４９Ｑ、Ｒ３５Ｑ、Ｒ３５Ｖ、Ｇ４９Ｅ、Ｒ１２３Ｄ、Ｒ１２３Ｙ、Ｇ４９Ｈ、Ａ３８Ｄ、Ｒ３５Ｓ、Ｆ４７Ｒ、Ｒ１２３Ｃ、Ｔ１５１Ｌ、Ｒ１４Ｔ、Ｒ３５Ｔ、Ｒ１２３Ｅ、Ｇ４９Ａ、Ｇ４９Ｖ、Ｄ５６Ｌ、Ｒ３５Ｎ、Ｒ３５Ａ、Ｇ１２Ｄ、Ｒ３５Ｃ、Ｒ１２３Ｎ、Ｔ４６Ｖ、Ｒ１２３Ｈ、Ｓ１５５Ｃ、Ｔ１２１Ｅ、Ｒ１２７Ｅ、Ｓ１１３Ｃ、Ｒ１２３Ｔ、Ｒ１６Ｅ、Ｔ４６Ｆ、Ｔ１２１Ｌ、Ａ３８Ｃ、Ｔ４６Ｅ、Ｒ１２３Ｗ、Ｔ４４Ｅ、Ｎ５５Ｇ、Ａ８Ｇ、Ｅ１１９Ｇ、Ｒ３５Ｐ、Ｒ１４Ｇ、Ｆ５９Ｗ、Ｒ１２７Ｓ、Ｒ６１Ｅ、Ｒ１４Ｓ、Ｓ１５５Ｗ、Ｒ１２３Ｆ、Ｒ１２３Ｓ、Ｇ４９Ｎ、Ｒ１２７Ｄ、Ｅ１１９Ｙ、Ａ４８Ｅ、Ｎ１７０Ｄ、Ｒ１５９Ｔ、Ｓ９９Ａ、Ｇ１２Ｑ、Ｐ１１８Ｒ、Ｆ１６５Ｗ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ３５Ｈ、Ｇ１２Ｎ、Ａ２２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｒ１６Ｔ、Ｙ５７Ｇ、Ｔ１００Ａ、Ｔ４６Ｙ、Ｒ１５９Ｅ、Ｅ１１９Ｒ、Ｔ１０７Ｒ、Ｔ１５１Ｃ、Ｇ５４Ｃ、Ｅ１１９Ｔ、Ｒ６１Ｖ、Ｉ１１Ｅ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ６１Ｍ、Ｓ１５Ｅ、Ａ２２Ｓ、Ｒ１６Ｃ、Ｔ３６Ｃ、Ｒ１６Ｖ、Ｌ１２５Ｑ、Ｍ１８０Ｌ、Ｒ１２３Ｑ、Ｒ１４Ａ、Ｒ１４Ｑ、Ｒ３５Ｍ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、Ｎ１１２Ｐ、Ｇ１２４Ｄ、Ｒ１７９Ｅ、Ｇ４９Ｌ、Ａ４１Ｄ、Ｇ１７７Ｄ、Ｒ１２３Ｖ、Ｅ１１９Ｖ、Ｔ１０Ｌ、Ｔ１０９Ｅ、Ｒ１７９Ｄ、Ｇ１２Ｓ、Ｔ１０Ｃ、Ｇ９１Ｑ、Ｓ１５Ｙ、Ｓ１５５Ｙ、Ｒ１４Ｃ、Ｔ１６３Ｄ、Ｔ１２１Ｆ、Ｒ１４Ｎ、Ｆ１６５Ｅ、Ｎ２４Ｅ、Ａ４１Ｃ、Ｒ６１Ｔ、Ｇ１２Ｉ、Ｐ１１８Ｋ、Ｔ４６Ｃ、Ｉ１１Ｔ、Ｒ１５９Ｄ、Ｎ１７０Ｃ、Ｒ１５９Ｖ、Ｓ１５５Ｉ、Ｉ１１Ｑ、Ｄ２Ｐ、Ｔ１００Ｒ、Ｒ１５９Ｓ、Ｓ１１４Ｃ、Ｒ１６Ｄ、およびＰ１３４Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１２】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｓ９９Ｇ、Ｔ１００Ｋ、Ｒ１２７Ａ、Ｆ１Ｐ、Ｓ１５５Ｖ、Ｔ１２８Ａ、Ｆ１６５Ｈ、Ｇ１７７Ｅ、Ａ７０Ｍ、Ｓ１４０Ｐ、Ａ８７Ｅ、Ｄ２Ｉ、Ｒ１５９Ｋ、Ｔ３６Ｖ、Ｒ１７９Ｃ、Ｅ１１９Ｎ、Ｔ１０Ｙ、Ｉ１７２Ａ、Ａ８Ｔ、Ｆ４７Ｖ、Ｗ１０３Ｌ、Ｒ６１Ｋ、Ｄ２Ｖ、Ｒ１７９Ｖ、Ｄ２Ｔ、Ｒ１５９Ｎ、Ｅ１１９Ａ、Ｇ５４Ｅ、Ｒ１６Ｑ、Ｇ４９Ｓ、Ｒ１６Ｉ、Ｓ５１Ｌ、Ｓ１５５Ｅ、Ｓ１５Ｍ、Ｒ１７９Ｉ、Ｔ１０Ｑ、Ｇ１２Ｈ、Ｒ１５９Ｃ、Ｒ１７９Ｔ、Ｔ１６３Ｃ、Ｒ１５９Ａ、Ａ１３２Ｓ、Ｎ１５７Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｌ１４１Ｍ、Ａ４１Ｔ、Ｒ１２３Ｍ、Ｒ１４Ｍ、Ａ８Ｒ、Ｑ８１Ｐ、Ｎ２４Ｔ、Ｔ１０Ｄ、Ａ８８Ｆ、Ｒ６１Ｑ、Ｓ９９Ｋ、Ｒ１７９Ｙ、Ｔ１２１Ａ、Ｎ１１２Ｅ、Ｓ１５５Ｔ、Ｔ１５１Ｖ、Ｓ９９Ｑ、Ｔ１０Ｅ、Ｓ９２Ｔ、Ｔ１０９Ｋ、Ｔ４４Ｃ、Ｒ１２３Ａ、Ａ８７Ｃ、Ｓ１５Ｆ、Ｓ１５５Ｆ、Ｄ５６Ｆ、Ｔ１０Ｆ、Ａ８３Ｈ、Ｒ１７９Ｈ、Ｔ１２１Ｄ、Ｇ１３Ｄ、Ｐ１１８Ｃ、Ｇ４９Ｆ、Ｑ１７４Ｃ、Ｓ１１４Ｅ、Ｔ８６Ｅ、Ｆ１Ｎ、Ｔ１１５Ｃ、Ｒ１２７Ｃ、Ｒ１２３Ｋ、Ｖ６６Ｎ、Ｇ１２Ｙ、Ｓ１１３Ａ、Ｓ１５Ｎ、Ａ１７５Ｔ、Ｒ７９Ｔ、Ｒ１２３Ｇ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｎ、Ｒ１２３Ｉ、Ｐ１１８Ａ、Ｓ１８７Ｅ、Ｎ１１２Ｄ、Ａ７０Ｇ、Ｅ１１９Ｌ、Ｅ１１９Ｓ、Ｒ１５９Ｍ、Ｒ１４Ｈ、Ｒ１７９Ｆ、Ａ６４Ｃ、Ａ４１Ｓ、Ｒ１７９Ｗ、Ｎ２４Ｇ、Ｔ１００Ｑ、Ｐ１１８Ｗ、Ｑ８１Ｇ、Ｇ４９Ｋ、Ｒ１４Ｌ、Ｎ５５Ａ、Ｒ３５Ｋ、Ｒ７９Ｖ、Ｄ２Ｍ、Ｔ１６０Ｄ、Ａ８３Ｄ、Ｒ１７９Ｌ、Ｓ５１Ａ、Ｇ１２Ｐ、Ｓ９９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｓ１８８Ｅ、Ｔ１０Ｍ、Ｌ１２５Ｍ、Ｔ１１６Ｎ、Ａ７０Ｐ、Ｑ１７４Ｓ、Ｇ６５Ｄ、Ｓ１１３Ｄ、Ｅ１１９Ｑ、Ａ８３Ｅ、Ｎ１７０Ｌ、Ｑ８１Ａ、Ｓ５１Ｃ、Ｐ１１８Ｇ、Ｑ１７４Ｔ、Ｉ２８Ｖ、Ｓ１５Ｇ、およびＴ１１６Ｇからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１３】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｇ２６Ｉ、Ｇ２６Ｋ、Ｇ２６Ｑ、Ｇ２６Ｖ、Ｇ２６Ｗ、Ｆ２７Ｖ、Ｆ２７Ｗ、Ｉ２８Ｐ、Ｔ２９Ｅ、Ｔ１２９Ｗ、Ｔ４０Ｄ、Ｔ４０Ｑ、Ｒ４３Ｄ、Ｐ４３Ｈ、Ｐ４３Ｋ、Ｐ４３Ｌ、Ａ２２Ｃ、Ｔ４０Ｈ、Ｐ８９Ｗ、Ｇ９１Ｌ、Ｓ１８Ｅ、Ｆ５９Ｋ、Ａ３０Ｍ、Ａ３０Ｎ、Ｇ３１Ｍ、Ｃ３３Ｍ、Ｇ１６１Ｌ、Ｇ１６１Ｖ、Ｐ４３Ｎ、Ｇ２６Ｅ、Ｎ７３Ｐ、Ｇ８４Ｃ、Ｇ８４Ｐ、Ｇ４５Ｖ、Ｃ３３Ｌ、Ｙ９Ｅ、Ｙ９Ｐ、Ａ１４７Ｅ、Ｃ１５８Ｈ、Ｉ２８Ｗ、Ａ４８Ｐ、Ａ２２Ｓ、Ｔ６２Ｒ、Ｓ１３７Ｒ、Ｓ１５５Ｐ、Ｓ１５５Ｒ、Ｇ１５６Ｉ、Ｇ１５６Ｌ、Ｑ８１Ａ、Ｒ９６Ｃ、Ｉ４Ｄ、Ｉ４Ｐ、Ａ７０Ｐ、Ｃ１０５Ｅ、Ｃ１０５Ｇ、Ｃ１０５Ｋ、Ｃ１０５Ｍ、Ｃ１０５Ｎ、Ｃ１０５Ｓ、Ｔ１２８Ａ、Ｔ１２８Ｖ、Ｔ１２８Ｇ、Ｓ１４０Ｐ、Ｇ１２Ｄ、Ｃ３３Ｎ、Ｃ３３Ｅ、Ｔ１６４Ｇ、Ｇ４５Ａ、Ｇ１５６Ｐ、Ｓ９９Ａ、Ｑ１６７Ｌ、Ｓ１５５Ｗ、Ｉ２８Ｔ、Ｒ９６Ｆ、Ａ３０Ｐ、Ｒ１２３Ｗ、Ｔ４０Ｐ、Ｔ３９Ｒ、Ｃ１０５Ｐ、Ｔ１００Ａ、Ｃ１０５Ｗ、Ｓ１５５Ｋ、Ｔ４６Ｙ、Ｒ１２３Ｆ、Ｉ４Ｇ、Ｓ１５５Ｙ、Ｔ４６Ｖ、Ａ９３Ｓ、Ｙ５７Ｎ、Ｑ８１Ｓ、Ｇ１８６Ｓ、Ｇ３１Ｈ、Ｔ１０Ｙ、Ｇ３１Ｖ、Ａ８３Ｈ、Ａ３８Ｄ、Ｒ１２３Ｙ、Ｒ７９Ｔ、Ｃ１５８Ｇ、Ｇ３１Ｙ、Ｑ８１Ｐ、Ｒ９６Ｅ、Ａ３０Ｙ、Ｒ１５９Ｋ、Ａ２２Ｔ、Ｔ４０Ｎ、Ｙ５７Ｍ、Ｇ３１Ｎ、Ｑ８１Ｇ、Ｔ１６４Ｌ、Ｔ１２１Ｅ、Ｔ１０Ｆ、Ｑ１４６Ｐ、Ｒ１２３Ｎ、Ｖ３Ｒ、Ｐ４３Ｇ、Ｑ８１Ｈ、Ｑ８１Ｄ、Ｇ１６１Ｉ、Ｃ１５８Ｍ、Ｎ２４Ｔ、Ｔ１０Ｗ、Ｔ１２８Ｓ、Ｔ１６０Ｉ、Ｙ１７６Ｐ、Ｓ１５５Ｆ、Ｔ１２８Ｃ、Ｌ１２５Ａ、Ｐ１６８Ｙ、Ｔ６２Ｇ、Ｆ１６６Ｓ、Ｓ１８８Ａ、Ｑ８１Ｆ、Ｔ４６Ｗ、Ａ７０Ｇ、およびＡ３８Ｇからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１４】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｓ１８８Ｅ、Ｓ１８８Ｖ、Ｙ１１７Ｋ、Ｙ１１７Ｑ、Ｙ１１７Ｒ、Ｙ１１７Ｖ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１２３Ｌ、Ｔ８６Ｓ、Ｒ１２３Ｉ、Ｑ８１Ｅ、Ｌ１２５Ｍ、Ｈ３２Ａ、Ｓ１８８Ｔ、Ｎ７４Ｆ、Ｃ３３Ｄ、Ｆ２７Ｉ、Ａ８３Ｍ、Ｑ７１Ｙ、Ｒ１２３Ｔ、Ｖ９０Ａ、Ｆ５９Ｗ、Ｌ１４１Ｃ、Ｎ１７０Ｅ、Ｔ４６Ｆ、Ｓ５１Ｖ、Ｇ１６２Ｐ、Ｓ１８５Ｒ、Ａ４１Ｓ、Ｒ７９Ｖ、Ｔ１５１Ｃ、Ｔ１０７Ｓ、Ｔ１２９Ｙ、Ｍ１８０Ｌ、Ｆ１６６Ｃ、Ｃ１０５Ｔ、Ｔ１６０Ｅ、Ｐ８９Ａ、Ｒ１５９Ｔ、Ｔ１８３Ｐ、Ｓ１８８Ｍ、Ｔ１０Ｌ、Ｇ２５Ｓ、Ｎ２４Ｓ、Ｅ１１９Ｌ、Ｔ１０７Ｌ、Ｔ１０７Ｑ、Ｇ１６１Ｋ、Ｇ１５Ｑ、Ｓ１５Ｒ、Ｇ１５３Ｋ、Ｇ１５３Ｖ、Ｓ１８８Ｇ、Ａ８３Ｅ、Ｇ１８６Ｐ、Ｔ１２１Ｄ、Ｇ４９Ａ、Ｓ１５Ｃ、Ｃ１０５Ｙ、Ｃ１０５Ａ、Ｒ１２７Ｆ、Ｑ７１Ａ、Ｔ１０Ｃ、Ｒ１７９Ｋ、Ｔ８６Ｉ、Ｗ１０３Ｎ、Ａ８７Ｓ、Ｆ１６６Ａ、Ａ８３Ｆ、Ｒ１２３Ｑ、Ａ１３２Ｃ、Ａ１４３Ｈ、Ｔ１６３Ｉ、Ｔ３９Ｖ、Ａ９３Ｄ、Ｖ９０Ｍ、Ｒ１２３Ｋ、Ｐ１３４Ｗ、Ｇ１７７Ｎ、Ｖ１１５Ｉ、Ｓ１５５Ｔ、Ｔ１１０Ｄ、Ｇ１０５Ｌ、Ｎ１７０Ｄ、Ｔ１０７Ａ、Ｇ８４Ｖ、Ｇ８４Ｍ、Ｌ１１１Ｋ、Ｐ１６８Ｉ、Ｇ１５４Ｌ、Ｔ１８３Ｉ、Ｓ９９Ｇ、Ｓ１５Ｔ、Ａ８Ｇ、Ｓ１５Ｎ、Ｐ１８９Ｓ、Ｓ１８８Ｃ、Ｔ１００Ｑ、Ａ１１０Ｇ、Ａ１２１Ａ、Ｇ１２Ａ、Ｒ１５９Ｖ、Ｇ３１Ａ、Ｇ１５４Ｒ、Ｔ１８２Ｌ、Ｖ１１５Ｌ、Ｔ１６０Ｑ、Ｔ１０７Ｆ、Ｒ１５９Ｑ、Ｇ１４４Ａ、Ｓ９２Ｔ、Ｔ１０１Ｓ、Ａ８３Ｒ、Ｇ１２ＨＭ、Ｓ１５Ｈ、Ｔ１１６Ｑ、Ｔ３６Ｖ、Ｇ１５４、Ｑ８１Ｃ、Ｖ１３０Ｔ、Ｔ１８３Ａ、Ｐ１１８Ｔ、Ａ８７Ｅ、Ｔ８６Ｍ、Ｖ１５０Ｎ、およびＮ２４Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１５】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｔ３６Ｉ、Ｉ１７２Ｔ、Ｎ２４Ｅ、Ｎ１７０Ｙ、Ｇ７７Ｔ、Ｇ１８６Ｎ、Ｉ１８１Ｌ、Ｎ７３Ｔ、Ａ３８Ｒ、Ｎ７４Ｇ、Ｎ２４Ａ、Ｇ５４Ｄ、Ｓ７６Ｄ、Ｒ１２３Ｅ、１５９Ｅ、Ｎ１１２Ｅ、Ｒ３５Ｅ、Ｒ１７９Ｖ、Ｒ１２３Ｄ、Ｎ２４Ｔ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１４Ｌ、Ａ３８Ｄ、Ｖ９０Ｐ、Ｒ１４Ｑ、Ｒ１２３Ｉ、Ｒ１７９Ｄ、Ｓ７６Ｖ、Ｒ７９Ｇ、Ｒ３５Ｌ、Ｓ７６Ｅ、Ｓ７６Ｙ、Ｒ７９Ｄ、Ｒ７９Ｐ、Ｒ３５Ｑ、Ｒ１７９Ｎ、Ｎ１１２Ｄ、Ｒ１７９Ｅ、Ｇ６５Ｐ、Ｙ７５Ｇ、Ｖ９０Ｓ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ３５Ｆ、Ｒ１２３Ｆ、Ａ６４Ｉ、Ｎ２４Ｑ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１７９Ｉ、Ｎ１７０Ｄ、Ｒ３５Ａ、Ｒ１５９Ｆ、Ｔ１０９Ｅ、Ｒ１４Ｄ、Ｎ６７Ｄ、Ｇ４９Ａ、Ｎ１１２Ｑ、Ｇ７８Ｄ、Ｔ１２１Ｅ、Ｌ６９Ｓ、Ｔ１１６Ｅ、Ｖ９０Ｉ、Ｔ３６Ｓ、Ｔ３６Ｇ、ｎ１４５Ｅ、Ｔ８６Ｄ、Ｓ５１Ｄ、Ｒ１７９Ｋ、Ｔ１０７Ｅ、Ｔ１２９Ｓ、Ｌ１４２Ｖ、Ｒ７９Ａ、Ｒ７９Ｅ、Ａ３８Ｈ、Ｔ１０７Ｓ、Ｒ１２３Ａ、Ｎ５５Ｅ、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１５９Ｎ、Ｇ６５Ｄ、Ｒ１４Ｎ、Ｇ６５Ｑ、Ｒ１２３Ｑ、Ｎ２４Ｖ、Ｒ１４Ｇ、Ｔ１１６Ｑ、Ａ３８Ｎ、Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１７９Ｙ、Ａ８３Ｅ、Ｎ１１２Ｌ、Ｓ９９Ｎ、Ｇ７８Ａ、Ｔ１０Ｎ、Ｈ８５Ｑ、Ｒ３５Ｑ、Ｎ２４Ｌ、Ｎ２４Ｈ、Ｇ４９Ｓ、Ｒ７９Ｌ、Ｓ７６Ｔ、Ｓ７６Ｌ、Ｇ６５Ｓ、Ｎ５５Ｆ、Ｒ７９Ｖ、Ｇ６５Ｔ、Ｒ１２３Ｎ、Ｔ８６Ｅ、Ｙ７５Ｆ、Ｆ１Ｔ、Ｓ７６Ｎ、Ｓ９９Ｖ、Ｒ７９Ｔ、Ｎ１１２Ｖ、Ｒ７９Ｍ、Ｔ１０７Ｖ、Ｒ７９Ｓ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ６５Ｖ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１５９Ｄ、Ｔ１０７Ｈ、Ｈ８５Ｔ、Ｒ３５Ｔ、Ｔ３６Ｎ、Ｑ８１Ｅ、Ｒ１２３Ｈ、Ｓ７６Ｉ、Ａ３８Ｆ、Ｖ９０Ｔ、およびＲ１４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１６】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｇ６５Ｌ、Ｓ９９Ｄ、Ｔ１０７Ｍ、Ｓ１１３Ｔ、Ｓ９９Ｔ、Ｇ７７Ｓ、Ｒ１４Ｍ、Ａ６４Ｎ、Ｒ６１Ｍ、Ａ７０Ｄ、Ｑ７１Ｇ、Ａ９３Ｄ、Ｓ９２Ｇ、Ｎ１１２Ｙ、Ｓ１５Ｗ、Ｒ１５９Ｋ、Ｎ６７Ｇ、Ｔ１０Ｅ、Ｒ１２７Ｈ、Ａ６４Ｙ、Ｒ１５９Ｃ、Ａ３８Ｌ、Ｔ１６０Ｅ、Ｔ１８３Ｅ、Ｒ１２７Ｓ、Ａ８Ｅ、Ｓ５１Ｑ、Ｎ７Ｌ、Ｇ６３Ｄ、Ａ３８Ｓ、Ｒ３５Ｈ、Ｒ１４Ｋ、Ｔ１０７Ｉ、Ｇ１２Ｄ、Ａ６４Ｌ、Ｓ７６Ｗ、Ａ４１Ｎ、Ｒ３５Ｍ、Ａ６４Ｖ、Ａ３８Ｙ、Ｔ１８３Ｉ、Ｗ１０３Ｍ、Ａ４１Ｄ、Ｒ１２７Ｋ、Ｔ３６Ｄ、Ｒ６１Ｔ、Ｇ６５Ｙ、Ｇ１３Ｓ、Ｒ３５Ｙ、Ｒ１２３Ｔ、Ａ６４Ｈ、Ｇ４９Ｈ、Ａ７０Ｈ、Ａ６４Ｆ、Ｒ１２７Ｙ、Ｒ６１Ｅ、Ａ６４Ｐ、Ｔ１２１Ｄ、Ｖ１１５Ａ、Ｒ１２３Ｙ、Ｔ１０１Ｓ、Ｔ１８２Ｖ、Ｈ８５Ｌ、Ｎ２４Ｍ、Ｒ１２７Ｅ、Ｎ１４５Ｄ、Ｑ７１Ｈ、Ｓ７６Ｑ、Ａ６４Ｔ、Ｇ４９Ｆ、Ａ６４Ｑ、Ｔ１０Ｄ、Ｆ１Ｄ、Ａ７０Ｇ、Ｒ３５Ｗ、Ｑ７１Ｄ、Ｎ１２１Ｉ、Ａ６４Ｍ、Ｔ３６Ｈ、Ａ８Ｇ、Ｔ１０７Ｎ、Ｒ３５Ｓ、Ｎ６７Ｔ、Ｓ９２Ａ、Ｎ１７０Ｌ、Ｎ６７Ｅ、Ｓ１１４Ａ、Ｒ１４Ａ、Ｒ１４Ｓ、Ｑ８１Ｄ、Ｓ５１Ｈ、Ｒ１２３Ｓ、Ａ９３Ｓ、Ｒ１２７Ｆ、Ｉ１９Ｖ、Ｔ４０Ｖ、Ｓ１８５Ｎ、Ｒ１２３Ｇ、Ｒ１７９Ｌ、Ｓ５１Ｖ、Ｔ１６３Ｄ、Ｔ１０９Ｉ、Ａ６４Ｓ、Ｖ７２Ｉ、Ｎ６７Ｓ、Ｒ１５９Ｓ、Ｈ８５Ｍ、Ｔ１０９Ｇ、Ｑ７１Ｓ、Ｒ６１Ｈ、Ｔ１０７Ａ、Ｑ８１Ｖ、Ｖ９０Ｎ、Ｔ１０９Ａ、Ａ３８Ｔ、Ｎ１４５Ｔ、Ｒ１５９Ａ、Ａ１１０Ｓ、Ｑ８１Ｈ、Ａ４８Ｅ、Ｓ５１Ｔ、Ａ６４Ｗ、Ｒ１５９Ｌ、Ｎ６７Ｈ、Ａ９３Ｅ、Ｔ１１６Ｆ、Ｒ６１Ｓ、Ｒ１２３Ｖ、Ｖ３Ｌ、およびＲ１５９Ｙからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１７】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｔ３６Ｉ、Ｐ８９Ｄ、Ａ９３Ｔ、Ａ９３Ｓ、Ｔ３６Ｎ、Ｎ７３Ｔ、Ｔ３６Ｇ、Ｒ１５９Ｆ、Ｔ３６Ｓ、Ａ３８Ｒ、Ｓ９９Ｗ、Ｓ７６Ｗ、Ｔ３６Ｐ、Ｇ７７Ｔ、Ｇ５４Ｄ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１５９Ｅ、Ｈ８５Ｑ、Ｔ３６Ｄ、Ｓ７６Ｌ、Ｓ９９Ｎ、Ｙ７５Ｇ、Ｓ７６Ｙ、Ｒ１２７Ｓ、Ｎ２４Ｅ、Ｒ１２７Ｑ、Ｄ１８４Ｆ、Ｎ１７０Ｙ、Ｎ２４Ａ、Ｓ７６Ｔ、Ｈ８５Ｌ、Ｙ７５Ｆ、Ｓ７６Ｖ、Ｌ６９Ｓ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１２７Ｋ、Ｇ６５Ｐ、Ｎ７４Ｇ、Ｒ１５９Ｈ、Ｇ６５Ｑ、Ｇ１８６Ｖ、Ａ４８Ｑ、Ｔ３６Ｈ、Ｎ６７Ｌ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ１２７Ｌ、Ｔ３６Ｙ、Ｓ７６Ｉ、Ｓ１１４Ｇ、Ｒ１２７Ｈ、Ｓ１８７Ｐ、Ｖ３Ｌ、Ｇ７８Ｄ、Ｒ１２３Ｉ、Ｉ１８１Ｑ、Ｒ３５Ｆ、Ｈ８５Ｒ、Ｒ１２７Ｙ、Ｎ６７Ｓ、Ｑ８１Ｐ、Ｒ１２３Ｆ、Ｒ１５９Ｎ、Ｓ９９Ａ、Ｓ７６Ｄ、Ａ１３２Ｖ、Ｒ１２７Ｆ、Ａ１４３Ｎ、Ｓ９２Ａ、Ｎ２４Ｔ、Ｒ７９Ｐ、Ｓ７６Ｎ、Ｒ１４Ｍ、Ｇ１８６Ｅ、Ｎ２４Ｑ、Ｎ６７Ａ、Ｒ１２７Ｔ、Ｈ８５Ｋ、Ｇ６５Ｔ、Ｇ６５Ｙ、Ｒ１７９Ｖ、Ｙ７５Ｉ、Ｉ１１Ｑ、Ａ３８Ｌ、Ｔ３６Ｌ、Ｒ１５９Ｙ、Ｒ１５９Ｄ、Ｎ２４Ｖ、Ｇ６５Ｓ、Ｎ１５７Ｄ、Ｇ１８６Ｉ、Ｇ５４Ｑ、Ｎ６７Ｙ、Ｒ１２７Ｇ、Ｓ７６Ａ、Ａ３８Ｓ、Ｔ１０９Ｅ、Ｖ６６Ｈ、Ｔ１１６Ｆ、Ｒ１２３Ｌ、Ｇ４９Ａ、Ａ６４Ｈ、Ｔ３６Ｗ、Ｄ１８４Ｈ、Ｓ９９Ｄ、Ｇ１６１Ｋ、Ｐ１３４Ｅ、Ａ６４Ｆ、Ｎ６７Ｇ、Ｓ９９Ｔ、Ｄ２Ｑ、Ｓ７６Ｅ、Ｒ１６Ｑ、Ｇ５４Ｎ、Ｎ６７Ｖ、Ｒ３５Ｌ、Ｑ７１Ｉ、Ｎ７Ｌ、Ｎ１１２Ｅ、Ｌ６９Ｈ、Ｎ２４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｒ１６Ｌ、Ｎ２４Ｍ、Ａ６４Ｙ、Ｓ１１３Ａ、Ｈ８５Ｆ、Ｒ７９Ｇ、Ｉ１１Ａ、Ｔ１２１Ｄ、Ｒ６１Ｖ、およびＧ６５Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１８】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｎ６７Ｑ、Ｓ１８７Ｑ、Ｑ７１Ｈ、Ｔ１６３Ｄ、Ｒ６１Ｋ、Ｒ１５９Ｖ、Ｑ７１Ｆ、Ｖ３１Ｆ、Ｖ９０Ｉ、Ｒ７９Ｄ、Ｔ１６０Ｅ、Ｒ１２３Ｑ、Ａ３８Ｙ、Ｓ１１３Ｇ、Ａ８８Ｆ、Ａ７０Ｇ、Ｉ１１Ｔ、Ｇ７８Ａ、Ｎ２４Ｌ、Ｓ９２Ｇ、Ｒ１４Ｌ、Ｄ１８４Ｒ、Ｇ５４Ｌ、Ｎ１１２Ｌ、Ｈ８５Ｙ、Ｒ１６Ｎ、Ｇ７７Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｖ８０Ｌ、Ｇ６５Ｖ、Ｔ１２１Ｅ、Ｑ７１Ｄ、Ｒ１６Ｇ、Ｐ８９Ｎ、Ｎ４２Ｈ、Ｇ４９Ｆ、Ｉ１１Ｓ、Ｒ６１Ｍ、Ｒ１５９Ｃ、Ｇ６５Ｒ、Ｔ１８３Ｉ、Ａ９３Ｄ、Ｌ１１１Ｅ、Ｓ５１Ｑ、Ｇ７８Ｎ、Ｎ６７Ｔ、Ａ３８Ｎ、Ｔ４０Ｖ、Ａ６４Ｗ、Ｒ１５９Ｌ、Ｔ１０Ｅ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１２３Ｅ、Ｖ９０Ｐ、Ａ６４Ｎ、Ｇ１６１Ｅ、Ｈ８５Ｔ、Ａ８Ｇ、Ｌ１４２Ｖ、Ａ４１Ｎ、Ｓ１８５Ｉ、Ｑ７１Ｌ、Ａ６４Ｔ、Ｒ１６Ｉ、Ａ３８Ｄ、Ｇ５４Ｍ、Ｎ１１２Ｑ、Ｒ１６Ａ、Ｒ１４Ｅ、Ｖ８０Ｈ、Ｎ１７０Ｄ、Ｓ９９Ｇ、Ｒ１７９Ｎ、Ｓ１５Ｅ、Ｇ４９Ｈ、Ａ７０Ｐ、Ａ６４Ｓ、Ｇ５４Ａ、Ｓ１８５Ｗ、Ｒ６１Ｈ、Ｔ１０Ｑ、Ａ３８Ｆ、Ｎ１７０Ｌ、Ｔ１０Ｌ、Ｎ６７Ｆ、Ｇ１２Ｄ、Ｄ１８４Ｔ、Ｒ１４Ｎ、Ｓ１８７Ｅ、Ｒ１４Ｐ、Ｎ１１２Ｄ、Ｓ１４０Ａ、Ｎ１１２Ｇ、Ｇ４９Ｓ、Ｌ１１１Ｄ、Ｎ６７Ｍ、Ｖ１５０Ｌ、Ｇ１２Ｙ、Ｒ１２３Ｋ、Ｐ８９Ｖ、Ｖ６６Ｄ、Ｇ７７Ｎ、Ｓ５１Ｔ、Ａ８Ｄ、Ｉ１８１Ｈ、Ｔ８６Ｎ、Ｒ１７９Ｄ、Ｎ５５Ｆ、Ｎ２４Ｓ、Ｄ１８４Ｌ、Ｒ６１Ｓ、Ｎ６７Ｋ、Ｇ１８６Ｌ、Ｆ１Ｔ、Ｒ１５９Ａ、Ｉ１１Ｌ、Ｒ６１Ｔ、Ｄ１８４Ｑ、Ａ９３Ｅ、Ｑ７１Ｔ、Ｒ１７９Ｅ、Ｌ６９Ｗ、Ｔ１６３Ｉ、Ｓ１８８Ｑ、Ｌ１２５Ｖ、Ａ３８Ｖ、Ｒ３５Ａ、Ｐ１３４Ｇ、Ａ６４Ｖ、Ｎ１４５Ｄ、Ｖ９０Ｔ、およびＡ１４３Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項１９】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｔ３６Ｉ、Ｎ１７０Ｙ、Ａ３８Ｒ、Ｒ７９Ｐ、Ｇ７７Ｔ、Ｌ６９Ｓ、Ｎ７３Ｔ、Ｓ７６Ｖ、Ｓ７６Ｙ、Ｒ１７９Ｖ、Ｔ３６Ｎ、Ｎ５５Ｆ、Ｒ１５９Ｆ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ６５Ｐ、Ｌ６９Ｈ、Ｔ３６Ｇ、Ｇ１７７Ｍ、Ｎ２４Ｅ、Ｎ７４Ｇ、Ｒ１５９Ｅ、Ｔ３６Ｓ、Ｙ７５Ｇ、Ｓ７６Ｉ、Ｓ７６Ｄ、Ａ８Ｒ、Ａ２４Ａ、Ｖ９０Ｐ、Ｒ１５９Ｃ、Ｇ６５Ｑ、Ｔ１２１Ｅ、Ａ８Ｖ、Ｓ７６Ｌ、Ｔ１０９Ｅ、Ｒ１７９Ｍ、Ａ８Ｔ、Ｔ１０７Ｎ、Ｇ１８６Ｅ、Ｓ７６Ｗ、Ｒ１２３Ｅ、Ａ３８Ｆ、Ｔ３６Ｐ、Ｎ６７Ｇ、Ｙ７５Ｆ、Ｓ７６Ｎ、Ｒ１７９Ｉ、Ｓ１８７Ｐ、Ｎ６７Ｖ、Ｖ９０Ｓ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１７９Ｙ、Ｒ３５Ｆ、Ｎ１４５Ｓ、Ｇ６５Ｓ、Ｒ６１Ｍ、Ｓ５１Ａ、Ｒ１７９Ｎ、Ｒ１２３Ｄ、Ｎ２４Ｔ、Ｎ５５Ｅ、Ｒ７９Ｃ、Ｇ１８６Ｖ、Ｒ１２３Ｉ、Ｇ１６１Ｅ、Ｇ６５Ｙ、Ａ３８Ｓ、Ｒ１４Ｌ、Ｖ９０Ｉ、Ｒ７９Ｇ、Ｎ１４５Ｅ、Ｎ６７Ｌ、Ｒ１２７Ｓ、Ｒ１５０Ｙ、Ｍ１８０Ｄ、Ｎ６７Ｔ、Ａ９３Ｄ、Ｔ１２１Ｄ、Ｑ８１Ｖ、Ｔ１０９Ｉ、Ａ９３Ｅ、Ｔ１０７Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｌ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１５９Ｄ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ７９Ｅ、Ｒ１２３Ｆ、Ｒ７９Ｄ、Ｔ３６Ｄ、Ａ６４Ｎ、Ｌ１４２Ｖ、Ｔ１０９Ａ、Ｉ１７２Ｖ、Ａ８３Ｎ、Ｔ８５Ａ、Ｒ１７９Ｄ、Ａ３８Ｌ、Ｉ１２６Ｌ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１２７Ｌ、Ｌ６９Ｗ、Ｒ１２７Ｋ、Ｇ６５Ｔ、Ｒ１２７Ｈ、Ｐ１３４Ａ、Ｎ６７Ｄ、Ｒ１４Ｍ、Ｎ２４Ｑ、Ａ１４３Ｎ、Ｎ５５Ｓ、Ｎ６７Ｍ、Ｓ５１Ｄ、Ｓ７６Ｅ、Ｔ１６３Ｄ、Ａ３８Ｄ、Ｒ１５９Ｋ、Ｔ１８３Ｉ、Ｇ６３Ｖ、Ａ８Ｓ、Ｔ１０７Ｍ、Ｈ８５Ｑ、Ｎ１１２Ｅ、Ｎ６７Ｆ、Ｎ６７Ｓ、Ａ６４Ｈ、Ｔ８６Ｉ、Ｐ１３４Ｅ、Ｔ１８２Ｖ、Ｎ６７Ｙ、Ａ６４Ｓ、Ｇ７８Ｄ、Ｖ９０Ｔ、Ｒ６１Ｔ、Ｒ１６Ｑ、Ｇ６５Ｒ、Ｔ８６Ｌ、Ｖ９０Ｎ、Ｒ１５９Ｑ、Ｇ５４Ｉ、Ｓ７６Ｃ、Ｒ１７９Ｅ、Ｖ６６Ｄ、Ｌ６９Ｖ、Ｒ１２７Ｙ、Ｒ３５Ｌ、Ｒ１４Ｅ、およびＴ８６Ｆからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２０】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｇ１８６Ｉ、Ａ６４Ｑ、Ｔ１０９Ｇ、Ｇ６４Ｌ、Ｎ２４Ｌ、Ａ８Ｅ、Ｎ１１２Ｄ、Ａ３８Ｈ、Ｒ１７９Ｗ、Ｓ１１４Ｇ、Ｒ１２３Ｌ、Ａ８Ｌ、Ｔ１２９Ｓ、Ｎ１７０Ｄ、Ｒ１５９Ｎ、Ｎ６７Ｃ、Ｓ９２Ｃ、Ｔ１０７Ａ、Ｇ５４Ｅ、Ｔ１０７Ｅ、Ｔ３６Ｖ、Ｒ１２７Ｔ、Ａ８Ｎ、Ｈ８５Ｌ、Ａ１１０Ｓ、Ｎ１７０Ｃ、Ａ６４Ｒ、Ａ１３２Ｖ、Ｔ３６Ｙ、Ｇ６３Ｄ、Ｗ１０３Ｍ、Ｔ１５１Ｖ、Ｒ１２３Ｐ、Ｗ１０３Ｙ、Ｓ７６Ｔ、Ｓ１８７Ｔ、Ｒ１２７Ｆ、Ｎ６７Ａ、Ｐ１７１Ｍ、Ａ７０Ｓ、Ｒ１５９Ｈ、Ｓ７６Ｑ、Ｌ１２５Ｖ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ４９Ｌ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ１４Ｑ、Ａ８３Ｉ、Ｖ９０Ｌ、Ｔ１８３Ｅ、Ｒ１５９Ａ、Ｔ１０１Ｓ、Ｇ６５Ｄ、Ｇ５４Ａ、Ｔ１０７Ｑ、Ｑ７１Ｍ、Ｔ８６Ｅ、Ｎ２４Ｍ、Ｎ５５Ｑ、Ｒ６１Ｖ、Ｐ１３４Ｄ、Ｒ９６Ｋ、Ａ８８Ｆ、Ｎ１４５Ｑ、Ａ６４Ｍ、Ａ６４Ｔ、Ｎ２４Ｖ、Ｓ１４０Ａ、Ａ８Ｈ、Ａ６４Ｉ、Ｒ１２３Ｑ、Ｔ１８３Ｑ、Ｎ２４Ｈ、Ａ６４Ｗ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ１２９Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｔ４０Ｖ、Ｉ１１Ｔ、Ａ３８Ｎ、Ｎ１４５Ｇ、Ａ１７５Ｔ、Ｇ７７Ｑ、Ｔ１０９Ｈ、Ａ８Ｐ、Ｒ３５Ｅ、Ｔ１０９Ｎ、Ａ１１０Ｔ、Ｎ６７Ｑ、Ｇ６３Ｐ、Ｈ８５Ｒ、Ｓ９２Ｇ、Ａ１７５Ｖ、Ｓ５１Ｑ、Ｇ６３Ｑ、Ｔ１１６Ｆ、Ｇ６５Ａ、Ｒ７９Ｌ、Ｎ１４５Ｐ、Ｌ６９Ｑ、Ｑ１４６Ｄ、Ａ８３Ｄ、Ｆ１６６Ｙ、Ｒ１２３Ａ、Ｔ１２１Ｌ、Ｒ１２３Ｈ、Ａ７０Ｐ、Ｔ１８２Ｗ、Ｓ７６Ａ、Ａ６４Ｆ、Ｔ１０７Ｈ、Ｇ１８６Ｌ、Ｑ８１Ｉ、Ｒ１２３Ｋ、Ａ６４Ｌ、Ｎ６７Ｒ、Ｖ３Ｌ、Ｓ１８７Ｅ、Ｓ１６１Ｋ、Ｔ８６Ｍ、Ｉ４Ｍ、Ｇ７７Ｎ、Ｇ４９Ａ、Ａ４１Ｎ、Ｇ５４Ｍ、Ｔ１０７Ｖ、Ｑ８１Ｅ、Ａ３８Ｉ、Ｔ１０９Ｌ、Ｔ１８３Ｋ、Ａ７０Ｇ、Ｑ７１Ｄ、Ｔ１８３Ｌ、Ｑ８１Ｈ、Ａ６４Ｖ、Ａ９３Ｑ、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ５１Ｆ、Ｇ１８６Ｐ、Ｇ１８６Ｔ、Ｒ１５９Ｌ、Ｐ１３４Ｇ、Ｎ１４５Ｔ、Ｎ５５Ｖ、Ｖ６６Ｅ、Ｒ１５９Ｖ、Ｙ１７６Ｌ、およびＲ１６Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２１】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
Ｔ３６Ｉ、Ｎ７３Ｔ、Ｐ１３４Ｒ、Ｇ７７Ｔ、Ｎ２４Ｅ、Ｐ１３４Ｅ、Ｐ１３４Ｌ、Ｎ２４Ｔ、１５９Ｆ、Ｌ６９Ｓ、Ｔ１０Ｇ、Ｇ１８６Ｓ、Ｓ１４０Ａ、Ｔ３６Ｓ、Ｎ１１２Ｓ、Ｎ２４Ｑ、Ｔ３６Ｇ、Ｐ１３４Ｈ、Ｇ３４Ａ、Ｎ２４Ａ、Ａ３８Ｔ、Ｅ１１９Ｒ、Ｇ１８６Ｅ、Ｒ１４Ｍ、Ｓ７６Ｗ、Ｔ１０Ａ、Ａ３８Ｆ、Ｌ１４２Ｖ、Ｎ１７０Ｙ、Ｐ１３４Ｖ、Ａ２２Ｖ、Ｓ７６Ｖ、Ｔ１８２Ｖ、Ｓ７６Ｙ、Ｉ１１Ａ、Ｉ１１Ｓ、Ｓ１１８Ａ、Ｇ１８６Ｖ、Ｌ６９Ｈ、Ｉ１１Ｔ、Ｔ３６Ｎ、Ｇ６５Ｖ、Ｇ４９Ｆ、Ｖ９０Ｉ、Ｒ１７９Ｖ、Ｒ１６Ｋ、Ｔ１６３Ｉ、Ｒ１２７Ｆ、Ｒ１５９Ｋ、Ｎ２４Ｌ、Ｑ７１Ｉ、Ｓ１５Ｇ、Ｓ１５Ｆ、Ｒ１４Ｇ、Ｓ９９Ｎ、Ｔ１０Ｌ、Ｓ１５Ｅ、Ｔ１０７Ｒ、Ｆ１６６Ｙ、Ｇ４９Ａ、Ｖ９０Ｐ、Ｐ１３４Ｄ、Ｑ１６７Ｎ、Ｓ７６Ｄ、Ｓ５１Ａ、Ｖ８０Ａ、Ｖ１５０Ｌ、Ｎ７４Ｇ、Ｔ１０７Ｋ、Ｓ７６Ｌ、Ｎ２４Ｖ、Ｇ１２Ｉ、Ｓ９９Ｖ、およびＲ１６Ｎからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２２】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
非置換のＡｒｇ１４、Ｓｅｒ１５、Ａｒｇ１６、Ｃｙｓ１７、Ｈｉｓ３２、Ｃｙｓ３３、Ｐｈｅ５２、Ａｓｐ５６、Ｔｈｒ１００、Ｖａｌ１１５、Ｔｈｒ１１６、Ｔｙｒ１１７、Ｐｒｏ１１８、Ｇｌｕ１１９、Ａｌａ１３２、Ｇｌｕ１３３、Ｐｒｏ１３４、Ｇｌｙ１３５、Ａｓｐ１３６、Ｓｅｒ１３７、Ｔｈｒ１５１、Ｓｅｒ１５２、Ｇｌｙ１５３、Ｇｌｙ１５４、Ｓｅｒ１５５、Ｇｌｙ１５６、Ａｓｎ１５７、Ｔｈｒ１６４、およびＰｈｅ１６５を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２３】
前記セリンプロテアーゼ変異体の触媒トリアッドが、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
非置換のＨｉｓ３２、Ａｓｐ５６、およびＳｅｒ１３７を含むことを特徴とする請求項２２に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２４】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
非置換のＣｙｓ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｕ１３３、Ｐｒｏ１３４、Ｇｌｙ１３５、Ｔｈｒ１５１、Ｓｅｒ１５２、Ｇｌｙ１５３、Ｇｌｙ１５４、Ｓｅｒ１５５、Ｇｌｙ１５６、Ａｓｎ１５７およびＧｌｙ１６２、Ｔｈｒ１６３、およびＴｈｒ１６４を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２５】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、
前記セリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列が、配列番号８で示されるアミノ酸配列の位置に基づいて、
非置換のＰｈｅ５２、Ｔｙｒ１１７、Ｐｒｏ１１８、およびＧｌｕ１１９を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２６】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス株６９Ｂ４由来単離セリンプロテアーゼのセリンプロテアーゼ変異体であり、前記セリンプロテアーゼ変異体が、３つのジスルフィド結合を含む前記セリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２７】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善されたカゼイン加水分解能を有することを特徴とする請求項９または１０に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２８】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善されたケラチン加水分解能を有することを特徴とする請求項１５または１６に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項２９】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べてドデシルベンゼンスルホン酸又はその塩類の安定性を向上させていることを特徴とする請求項５、６、７、８、１１、１２のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項３０】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて熱安定性を向上させていることを特徴とする請求項１３又は１４に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項３１】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善された洗浄性能を有することを特徴とする請求項１７又は１８に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項３２】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善された低いｐＨ条件での洗浄性能を有することを特徴とする請求項１９又は２０に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項３３】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べてスクランブルエッグ試験における改善された洗浄性能を有することを特徴とする請求項２１に記載のセリンプロテアーゼ変異体。
【請求項３４】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善されたカゼイン加水分解能を有することを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項３５】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善されたケラチン加水分解能を有することを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項３６】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べてドデシルベンゼンスルホン酸又はその塩類の安定性を向上させていることを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項３７】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて熱安定性を向上させていることを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項３８】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善された洗浄性能を有することを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項３９】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べて改善された低いｐＨ条件での洗浄性能を有することを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項４０】
野生型セルロモナス株６９Ｂ４由来セリンプロテアーゼと比べてスクランブルエッグ試験における改善された洗浄性能を有することを特徴とする請求項３又は４に記載のセリンプロテアーゼ。
【請求項４１】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を含む組成物。
【請求項４２】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項４３】
請求項４２に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項４４】
前記宿主種細胞が、バチルス種（Bacillussp.）、ストレプトマイセス種（Streptomycessp.）、アスペルジルス種（Aspergillussp.）、およびトリコデルマ種（Trichodermasp.）からなる群から選択される請求項４３に記載の宿主細胞。
【請求項４５】
請求項４４に記載の宿主細胞により生産されるセリンプロテアーゼ。
【請求項４６】
請求項３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを含む組成物。
【請求項４７】
請求項３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
【請求項４８】
請求項４７に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項４９】
前記宿主細胞が、バチルス種、ストレプトマイセス種、アスペルジルス種、およびトリコデルマ種からなる群から選択されることを特徴とする請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
請求項４９に記載の宿主細胞により生産されるセリンプロテアーゼ。
【請求項５１】
配列番号１、２、３、および４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列によりコードされることを特徴とする請求項１又は２に記載のセリンプロテアーゼを含む組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
【請求項５３】
請求項１又は２に記載のセリンプロテアーゼをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
【請求項５４】
請求項５２又は５３に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項５５】
前記宿主細胞が、バチルス種、ストレプトマイセス種、アスペルジルス種、およびトリコデルマ種からなる群から選択されることを特徴とする請求項５４に記載の宿主細胞。
【請求項５６】
請求項５５に記載の宿主細胞により生産されるセリンプロテアーゼ。
【請求項５７】
（ｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列をコードする配列番号４で示されるヌクレオチド配列、または
（ｉｉ）前記配列番号４で示されるヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列
からなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項５８】
（ｉ）請求項３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼをコードするヌクレオチド配列、または
（ｉｉ）前記セリンプロテアーゼをコードするヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列
からなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項５９】
（ｉ）請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体をコードするヌクレオチド配列、または
（ｉｉ）前記セリンプロテアーゼ変異体をコードするヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列
からなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項６０】
請求項５７から５９のいずれか一つに記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項６１】
請求項６０に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項６２】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含み、プロテアーゼ活性を有する酵素を生産する方法であって、
（ａ）前記アミノ酸配列をコードする配列番号４で示されるポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、
（ｂ）前記プロテアーゼ活性を有する酵素を生産するために宿主細胞に好適な条件下で形質転換宿主細胞を培養する工程、および
（ｃ）前記プロテアーゼ活性を有する酵素を回収する工程
を含むことを特徴とする方法。
【請求項６３】
請求項３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを生産する方法であって、
（ａ）前記セリンプロテアーゼをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、
（ｂ）前記セリンプロテアーゼを生産するために宿主細胞に好適な条件下で形質転換宿主細胞を培養する工程、および
（ｃ）前記セリンプロテアーゼを回収する工程
を含むことを特徴とする方法。
【請求項６４】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を生産する方法であって、
（ａ）前記セリンプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、
（ｂ）前記セリンプロテアーゼ変異体を生産するために宿主細胞に好適な条件下で形質転換宿主細胞を培養する工程、および
（ｃ）前記セリンプロテアーゼ変異体を回収する工程
を含むことを特徴とする方法。
【請求項６５】
前記宿主細胞が、ストレプトマイセス、アスペルジルス、トリコデルマ、およびバチルス種からなる群から選択されることを特徴とする請求項６２から６４のいずれか一つに記載の方法。
【請求項６６】
配列番号８で示されるアミノ酸配列をコードする配列番号４で示されるポリヌクレオチド配列に基づいて、配列番号４５から５０からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなるプローブであり、前記プローブは蛋白分解活性を有する酵素をコードする核酸配列を検出するために用いられ、および前記核酸配列はミクロコシニアエの構成種から得られることを特徴とするプローブ。
【請求項６７】
前記ミクロコシニアエがセルロモナス種であることを特徴とする請求項６６に記載のプローブ。
【請求項６８】
前記セルロモナスがセルロモナス株６９Ｂ４であることを特徴とする請求項６７に記載のプローブ。
【請求項６９】
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセリンプロテアーゼを含む洗浄組成物。
【請求項７０】
前記セリンプロテアーゼがセルロモナス株６９Ｂ４から得られることを特徴とする請求項６９に記載の洗浄組成物。
【請求項７１】
請求項３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項７２】
請求項６９又は７０に記載のセリンプロテアーゼのアミノ酸配列中の配列番号５１又は５２で示されるペプチドに対する抗体と免疫学的交叉反応性を有するセリンプロテアーゼを含む洗浄組成物。
【請求項７３】
請求項９から２６のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を含む洗浄組成物。
【請求項７４】
請求項５に記載のセリンプロテアーゼ変異体を含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項７５】
前記セリンプロテアーゼ変異体が、Ｒ１４Ｌ、Ｒ１６Ｉ、Ｒ１６Ｌ、Ｒ１６Ｑ、Ｒ３５Ｆ、Ｒ７９Ｔ、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１２３Ｑ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、およびＲ１７９Ｑからなる群から選択される少なくとも１つの突然変異を含むことを特徴とする請求項７４に記載の洗浄組成物。
【請求項７６】
前記セリンプロテアーゼ変異体が、組合せＲ１６Ｑ／Ｒ３５Ｆ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１２３Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔ／Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔからなる群から選択される突然変異の組合せを含むことを特徴とする請求項７５に記載の洗浄組成物。
【請求項７７】
前記セリンプロテアーゼ変異体が突然変異Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１７９Ｑを含むことを特徴とする請求項７５に記載の洗浄組成物。
【請求項７８】
請求項２７から３３記載のセリンプロテアーゼ変異体を含む洗浄組成物。
【請求項７９】
洗浄有効量の蛋白分解酵素を含む洗浄組成物であり、前記酵素が、配列番号８で示されるアミノ酸配列を含み、及び適切な洗浄製剤を含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項８０】
洗浄有効量の蛋白分解酵素を含む洗浄組成物であり、前記酵素が、請求項３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼのアミノ酸配列を含み、及び適切な洗浄製剤を含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項８１】
洗浄有効量の蛋白分解酵素を含む洗浄組成物であり、前記酵素が、５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体のアミノ酸配列を含み、及び適切な洗浄製剤を含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項８２】
プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ（mannanases）、ペクチナーゼ、クチナーゼ（cutinases）、オキシドレダクターゼ、ヘミセルラーゼ、およびセルラーゼからなる群から選択される一つ以上の追加の酵素または酵素誘導体をさらに含むことを特徴とする請求項７９から８１のいずれか一つに記載の洗浄組成物。
【請求項８３】
請求項１、２、３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼおよび少なくとも１つの安定化剤を含む組成物。
【請求項８４】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体および少なくとも１つの安定化剤を含む組成物。
【請求項８５】
前記安定化剤が、ホウ砂、グリセロール、および競合阻害剤からなる群から選択されることを特徴とする請求項８３又は８４に記載の組成物。
【請求項８６】
前記競合阻害剤が、セリンプロテアーゼをアニオン性界面活性剤に安定化することを特徴とする請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
セリンプロテアーゼが自己消化に安定なセリンプロテアーゼであることを特徴とする請求項８３又は８４に記載の組成物。
【請求項８８】
請求項１、２、３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを０．０００１重量％以上含み、任意に添加成分を含む洗浄組成物。
【請求項８９】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を０．０００１重量％以上含み、任意に添加成分を含む洗浄組成物。
【請求項９０】
前記組成物が添加成分を含むことを特徴とする請求項８８又は８９に記載の洗浄組成物。
【請求項９１】
前記組成物が、３から５の実質ｐＨの組成物を提供するのに十分量のｐＨ調整剤を含み、ここで前記組成物が３から５のｐＨで加水分解する物質を実質的に含まないことを特徴とする請求項８８又は８９に記載の洗浄組成物。
【請求項９２】
前記加水分解する物質が界面活性化物質を含むことを特徴とする請求項９１に記載の洗浄組成物。
【請求項９３】
前記洗浄組成物が液体組成物であることを特徴とする請求項９１に記載の洗浄組成物。
【請求項９４】
前記界面活性化物質がエチレンオキサイド部分を含むアルキル硫酸ナトリウム界面活性剤を含むことを特徴とする請求項９２に記載の洗浄組成物。
【請求項９５】
請求項１、２、３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のプロテアーゼの少なくとも１つを含む洗浄組成物であって、３から５の実質ｐＨの組成物を提供するのに十分量のｐＨ調整剤を含み、ここで前記組成物が３から５のｐＨで加水分解する物質を実質的に含まないことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項９６】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体の少なくとも１つを含む洗浄組成物であって、３から５の実質ｐＨの組成物を提供するのに十分量のｐＨ調整剤を含み、ここで前記組成物が３から５のｐＨで加水分解する物質を実質的に含まないことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項９７】
前記加水分解する物質が界面活性化物質を含むことを特徴とする請求項９５又は９６に記載の洗浄組成物。
【請求項９８】
前記洗浄組成物が液体組成物であることを特徴とする請求項９５又は９６に記載の洗浄組成物。
【請求項９９】
前記界面活性化物質がエチレンオキサイド部分を含むアルキル硫酸ナトリウム界面活性剤を含むことを特徴とする請求項９７に記載の洗浄組成物。
【請求項１００】
前記組成物が好適な添加成分を含むことを特徴とする請求項９１に記載の洗浄組成物。
【請求項１０１】
前記組成物が好適な添加成分を含むことを特徴とする請求項９５又は９６に記載の洗浄組成物。
【請求項１０２】
前記組成物が０．００１から０．５重量％の請求項１、２、３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを含むことを特徴とする請求項９１に記載の洗浄組成物。
【請求項１０３】
前記組成物が０．００１から０．５重量％の請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を含むことを特徴とする請求項９１に記載の洗浄組成物。
【請求項１０４】
前記組成物が０．０１から０．１重量％の請求項１、２、３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを含むことを特徴とする請求項１０２に記載の洗浄組成物。
【請求項１０５】
前記組成物が０．０１から０．１重量％の請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を含むことを特徴とする請求項１０３に記載の洗浄組成物。
【請求項１０６】
ａ）布地を含む表面および／または製品を、請求項９０に記載の洗浄組成物、および／または請求項９４に記載の洗浄組成物に接触させる工程、および
ｂ）前記表面または製品を洗浄し、すすぐ工程
を含む洗浄方法。
【請求項１０７】
ａ）布地を含む表面および／または製品を、請求項９５又は９６に記載の洗浄組成物、および／または請求項９７に記載の洗浄組成物に接触させる工程、および
ｂ）前記表面または製品を洗浄し、すすぐ工程
を含む洗浄方法。
【請求項１０８】
請求項１、２、３、４、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼを含む動物飼料。
【請求項１０９】
請求項５から３３のいずれか一つに記載のセリンプロテアーゼ変異体を含む動物飼料。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本願は、２００３年１１月１９日に出願された審査中の米国仮特許出願第６０／５２３，６０９号について米国特許法第１１９条の優先権を主張する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
本発明は、新規なセリンプロテアーゼ、これらの酵素をコードする新規な遺伝子材料、およびセルロモナス類（ C e l l u l o m o n a s   s p p .）であって、これらに限定されない類を含むミクロコシニアエ類（ M i c r o c o c c i n e a e   s p p .）から得られる蛋白分解性タンパク質及びこれらにより開発される変異タンパク質を提供する。特に、本発明は、セルロモナス類から得られたプロテアーゼ組成物、該プロテアーゼをコードするＤＮＡ、該プロテアーゼをコードするＤＮＡを含むベクター、該ベクターＤＮＡで形質転換させた宿主細胞、および該宿主細胞で生産された酵素を提供する。また、本発明は、セルロモナス類（Cellulomonas spp.）を含むが、これらに限定されない類を含むミクロコシニアエ類（Micrococcineae spp.）から得られるプロテアーゼを含む、洗浄組成物（例えば、界面活性剤組成物）、動物食餌組成物、および織物および皮革の加工用組成物を提供する。別な態様において、本発明は、ここで記載された野生型プロテアーゼに由来するミュータント（すなわち、変異）プロテアーゼを提供する。これらのミュータント・プロテアーゼも多くの応用に用いられる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
セリンプロテアーゼは、広範囲な特異性および生物学的機能を有する多様なクラスの酵素を含むカルボニル・ヒドロラーゼのサブ・グループである（例えば、ストラウド（Stroud）著、Sci. Amer.、１３１巻、７７〜８８頁を参照）。その機能的多様性にも拘わらず、セリンプロテアーゼの触媒機構は少なくとも２つの遺伝的に異なる属の酵素により研究されてきた。これらの酵素は、１）サブチリシン（Ｓ．subtilisins）、２）哺乳類キモトリプシン関連および同属の細菌セリンプロテアーゼ（例えば、トリプシンおよびグリセウス（Ｓ．griseus）トリプシン）である。これらの２つのセリンプロテアーゼ属は極めて類似の触媒機構を示す（例えば、クラウト（Kraut）著、Ann. Rev. Biochem.、４６巻、３３１〜３５８頁、１９７７年）。さらに、一次構造は関連ないが、これら２つの酵素属の三次構造は、触媒性の保存されたセリン、ヒスチジン、およびアスパラギン酸からなるアミノ酸のトリアッドをともに有する。サブチリシンおよびキモトリプシン関連セリンプロテアーゼはともにアスパラギン酸を含む触媒性トリアッドを有する。サブシチリシン関連プロテア−ゼにおいて、アミノ末端からカルボキシ末端へ読むと相対配列はアスパラギン酸−ヒスチジン−セリンである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
本発明は、新規なセリンプロテアーゼ、これらの酵素をコードする新規な遺伝子材料、およびセルロモナス類（ C e l l u l o m o n a s   s p p .） や、その他の類を含むミクロコシニアエ類（ M i c r o c o c c i n e a e   s p p .）から得られる蛋白分解性タンパク質及びこれらにより開発される変異たんぱく質を提供する。特に、本発明は、セルロモナス類から得られたプロテアーゼ組成物、該プロテアーゼをコードするＤＮＡ、該プロテアーゼをコードするＤＮＡを含むベクター、該ベクターＤＮＡで形質転換させた宿主細胞、および該宿主細胞で生産された酵素を提供する。また、本発明は、セルロモナス類（Cellulomonas spp.）を含むが、これらに限定されない類を含むミクロコシニアエ類（Micrococcineae spp.）から得られるプロテアーゼを含む、洗浄組成物（例えば、界面活性剤組成物）、動物食餌組成物、および織物および皮革の加工用組成物を提供する。別な態様において、本発明は、ここで記載された野生型プロテアーゼに由来するミュータント（すなわち、変異）プロテアーゼを提供する。これらのミュータント・プロテアーゼも多くの応用に用いられる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
本発明は、ミクロコシニアエ類の仲間から得られた単離されたセリンプロテアーゼを提供する。ある態様において、プロテアーゼはセルロモナジン（cellulomonadins）である。ある好ましい態様において、プロテアーゼはセルロモナス（cellulomonas）、オエルスコビア（Oerskovia）、セルロシミクロビウム（cellulosimicrobium）、キシラニバクテリウム（Xylanibacterium）、およびプロミクロモノスポラ（Promicromonospora）で構成される群のなかから選択される微生物から得られる。ある特に好ましい態様において、プロテアーゼはセルロモナス６９Ｂ４から得られる。更なる態様において、プロテアーゼは配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む。更なる態様において、本発明は、配列番号８を含むセリンプロテアーゼと少なくとも４５％の同一性を含む単離セリンプロテアーゼを提供する。ある態様において、単離セリンプロテアーゼは、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも５５％、より好ましくは少なくとも６０％、更により好ましくは少なくとも６５％、更により好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、更により好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは８５％、更により好ましくは９０％、更により好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは９９％の同一性を有する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
また本発明は、ミクロコシニアエ類から得られたセリンプロテアーゼと免疫交叉性を有する単離セリンプロテアーゼを含む組成物を提供する。ある好ましい態様において、前記セリンプロテアーゼはセルロモナス６９Ｂ４から得られたセリンプロテアーゼと免疫交叉性を有する。別な態様において、前記セリンプロテアーゼは配列番号８で示されるアミノ酸を含むセリンプロテアーゼと免疫交叉性を有する。更なる態様において、前記セリンプロテアーゼはミクロコシニアエ類、セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼ、および／または配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセリンプロテアーゼから得られたいずれか任意のセリンプロテアーゼの断片（すなわち、部位）と免疫交叉性を有する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
ある態様において、本発明は配列番号８で示されるアミノ酸配列を提供する。ここで前記配列は、２，８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２４、２６、３１、３３、３５、３６、３８、３９、４０、４３、４６、４９、５１、５４、６１、６４、６５、６７、７０、７１、７６、７８、７９、８１、８３、８５、８６、９０、９３、９９、１００、１０５、１０７、１０９、１１２、１１３、１１６、１１８、１１９、１２１、１２３、１２７、１４５、１５５、１５９、１６０、１６３、１６５、１７０、１７４、１７９、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、および１８８位を含む群から選択される少なくとも一つのアミノ酸の位置における置換を含む。別な態様において、前記配列は、１、４、２２、２７、２８、３０、３２、４１、４７、４８、５５、５９、６３、６６、６９、７５、７７、８０、８４、８７、８８、８９、９２、９６、１１０、１１１、１１４、１１５、１１７、１２８、１３４、１４４、１４３、１４６、１５１、１５４、１５６、１５８、１６１、１６６、１７６、１７７、１８１、１８２、１８７、および１８９位を含む群から選択される少なくとも一つのアミノ酸の位置における置換を含む。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
ある好ましい態様において、本発明は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおける位置と同様な位置におけるアミノ酸の少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。別な態様において、本発明は配列番号８の少なくとも一部分を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおける位置と同様な位置におけるアミノ酸の少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。ある態様において、前記置換は配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおける２，８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２４、２６、３１、３３、３５、３６、３８、３９、４０、４３、４６、４９、５１、５４、６１、６４、６５、６７、７０、７１、７６、７８、７９、８１、８３、８５、８６、９０、９３、９９、１００、１０５、１０７、１０９、１１２、１１３、１１６、１１８、１１９、１２１、１２３、１２７、１４５、１５５、１５９、１６０、１６３、１６５、１７０、１７４、１７９、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、および１８８位と同様な位置における置換である。別な態様において、前記置換は配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおける１、４、２２、２７、２８、３０、３２、４１、４７、４８、５５、５９、６３、６６、６９、７５、７７、８０、８４、８７、８８、８９、９２、９６、１１０、１１１、１１４、１１５、１１７、１２８、１３４、１４４、１４３、１４６、１５１、１５４、１５６、１５８、１６１、１６６、１７６、１７７、１８１、１８２、１８７、および１８９位と同様な位置における置換である。ある好ましい態様において、配列番号８を含むアミノ酸配列を含む前記プロテアーゼ変異体は、１４、１６、３５、３６、６５、７５、７６、７９、１２３、１２７、１５９、および１７９からなる群から選択される位置における少なくとも１つのアミノ酸が他のアミノ酸で置換されている。ある特に好ましい態様において、前記プロテアーゼはＲ１４Ｌ、Ｒ１６Ｉ、Ｒ１６Ｌ、Ｒ１６Ｑ、Ｒ３５Ｆ、Ｔ３６Ｓ、Ｇ６５Ｑ、Ｙ７５Ｇ、Ｎ７６Ｌ、Ｎ７６Ｖ、Ｒ７９Ｔ、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１２３Ｑ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、およびＲ１７９Ｑからなる群から選択される少なくとも一つの変異含む。ある別な好ましい態様において、前記プロテアーゼはＲ１６Ｑ／Ｒ３５Ｆ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１２３Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔ／Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔからなる群から選択される多変異を含む。ある特に好ましい態様において、前記プロテアーゼは以下に示すＲ１２３Ｌ、Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１７９Ｑ変異を含む。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
また本発明は、Ｒ３５Ｅ、Ｒ３５Ｄ、Ｒ１４Ｅ、Ｒ１４Ｄ、Ｑ１６７Ｅ、Ｇ４９Ｃ、Ｓ１５Ｒ、Ｓ１５Ｈ、Ｉ１１Ｗ、Ｓ１５Ｃ、Ｇ４９Ｑ、Ｒ３５Ｑ、Ｒ３５Ｖ、Ｇ４９Ｅ、Ｒ１２３Ｄ、Ｒ１２３Ｙ、Ｇ４９Ｈ、Ａ３８Ｄ、Ｒ３５Ｓ、Ｆ４７Ｒ、Ｒ１２３Ｃ、Ｔ１５１Ｌ、Ｒ１４Ｔ、Ｒ３５Ｔ、Ｒ１２３Ｅ、Ｇ４９Ａ、Ｇ４９Ｖ、Ｄ５６Ｌ、Ｒ３５Ｎ、Ｒ３５Ａ、Ｇ１２Ｄ、Ｒ３５Ｃ、Ｒ１２３Ｎ、Ｔ４６Ｖ、Ｒ１２３Ｈ、Ｓ１５５Ｃ、Ｔ１２１Ｅ、Ｒ１２７Ｅ、Ｓ１１３Ｃ、Ｒ１２３Ｔ、Ｒ１６Ｅ、Ｔ４６Ｆ、Ｔ１２１Ｌ、Ａ３８Ｃ、Ｔ４６Ｅ、Ｒ１２３Ｗ、Ｔ４４Ｅ、Ｎ５５Ｇ、Ａ８Ｇ、Ｅ１１９Ｇ、Ｒ３５Ｐ、Ｒ１４Ｇ、Ｆ５９Ｗ、Ｒ１２７Ｓ、Ｒ６１Ｅ、Ｒ１４Ｓ、Ｓ１５５Ｗ、Ｒ１２３Ｆ、Ｒ１２３Ｓ、Ｇ４９Ｎ、Ｒ１２７Ｄ、Ｅ１１９Ｙ、Ａ４８Ｅ、Ｎ１７０Ｄ、Ｒ１５９Ｔ、Ｓ９９Ａ、Ｇ１２Ｑ、Ｐ１１８Ｒ、Ｆ１６５Ｗ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ３５Ｈ、Ｇ１２Ｎ、Ａ２２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｒ１６Ｔ、Ｙ５７Ｇ、Ｔ１００Ａ、Ｔ４６Ｙ、Ｒ１５９Ｅ、Ｅ１１９Ｒ、Ｔ１０７Ｒ、Ｔ１５１Ｃ、Ｇ５４Ｃ、Ｅ１１９Ｔ、Ｒ６１Ｖ、Ｉ１１Ｅ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ６１Ｍ、Ｓ１５Ｅ、Ａ２２Ｓ、Ｒ１６Ｃ、Ｔ３６Ｃ、Ｒ１６Ｖ、Ｌ１２５Ｑ、Ｍ１８０Ｌ、Ｒ１２３Ｑ、Ｒ１４Ａ、Ｒ１４Ｑ、Ｒ３５Ｍ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、Ｎ１１２Ｐ、Ｇ１２４Ｄ、Ｒ１７９Ｅ、Ｇ４９Ｌ、Ａ４１Ｄ、Ｇ１７７Ｄ、Ｒ１２３Ｖ、Ｅ１１９Ｖ、Ｔ１０Ｌ、Ｔ１０９Ｅ、Ｒ１７９Ｄ、Ｇ１２Ｓ、Ｔ１０Ｃ、Ｇ９１Ｑ、Ｓ１５Ｙ、Ｓ１５５Ｙ、Ｒ１４Ｃ、Ｔ１６３Ｄ、Ｔ１２１Ｆ、Ｒ１４Ｎ、Ｆ１６５Ｅ、Ｎ２４Ｅ、Ａ４１Ｃ、Ｒ６１Ｔ、Ｇ１２Ｉ、Ｐ１１８Ｋ、Ｔ４６Ｃ、Ｉ１１Ｔ、Ｒ１５９Ｄ、Ｎ１７０Ｃ、Ｒ１５９Ｖ、Ｓ１５５Ｉ、Ｉ１１Ｑ、Ｄ２Ｐ、Ｔ１００Ｒ、Ｒ１５９Ｓ、Ｓ１１４Ｃ、Ｒ１６Ｄ、およびＰ１３４Ｒからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。別な態様において、前記プロテアーゼ変異体は、Ｓ９９Ｇ、Ｔ１００Ｋ、Ｒ１２７Ａ、Ｆ１Ｐ、Ｓ１５５Ｖ、Ｔ１２８Ａ、Ｆ１６５Ｈ、Ｇ１７７Ｅ、Ａ７０Ｍ、Ｓ１４０Ｐ、Ａ８７Ｅ、Ｄ２Ｉ、Ｒ１５９Ｋ、Ｔ３６Ｖ、Ｒ１７９Ｃ、Ｅ１１９Ｎ、Ｔ１０Ｙ、Ｉ１７２Ａ、Ａ８Ｔ、Ｆ４７Ｖ、Ｗ１０３Ｌ、Ｒ６１Ｋ、Ｄ２Ｖ、Ｒ１７９Ｖ、Ｄ２Ｔ、Ｒ１５９Ｎ、Ｅ１１９Ａ、Ｇ５４Ｅ、Ｒ１６Ｑ、Ｇ４９Ｓ、Ｒ１６Ｉ、Ｓ５１Ｌ、Ｓ１５５Ｅ、Ｓ１５Ｍ、Ｒ１７９Ｉ、Ｔ１０Ｑ、Ｇ１２Ｈ、Ｒ１５９Ｃ、Ｒ１７９Ｔ、Ｔ１６３Ｃ、Ｒ１５９Ａ、Ａ１３２Ｓ、Ｎ１５７Ｄ、Ｇ１３Ｅ、Ｌ１４１Ｍ、Ａ４１Ｔ、Ｒ１２３Ｍ、Ｒ１４Ｍ、Ａ８Ｒ、Ｑ８１Ｐ、Ｎ２４Ｔ、Ｔ１０Ｄ、Ａ８８Ｆ、Ｒ６１Ｑ、Ｓ９９Ｋ、Ｒ１７９Ｙ、Ｔ１２１Ａ、Ｎ１１２Ｅ、Ｓ１５５Ｔ、Ｔ１５１Ｖ、Ｓ９９Ｑ、Ｔ１０Ｅ、Ｓ９２Ｔ、Ｔ１０９Ｋ、Ｔ４４Ｃ、Ｒ１２３Ａ、Ａ８７Ｃ、Ｓ１５Ｆ、Ｓ１５５Ｆ、Ｄ５６Ｆ、Ｔ１０Ｆ、Ａ８３Ｈ、Ｒ１７９Ｈ、Ｔ１２１Ｄ、Ｇ１３Ｄ、Ｐ１１８Ｃ、Ｇ４９Ｆ、Ｑ１７４Ｃ、Ｓ１１４Ｅ、Ｔ８６Ｅ、Ｆ１Ｎ、Ｔ１１５Ｃ、Ｒ１２７Ｃ、Ｒ１２３Ｋ、Ｖ６６Ｎ、Ｇ１２Ｙ、Ｓ１１３Ａ、Ｓ１５Ｎ、Ａ１７５Ｔ、Ｒ７９Ｔ、Ｒ１２３Ｇ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｎ、Ｒ１２３Ｉ、Ｐ１１８Ａ、Ｓ１８７Ｅ、Ｎ１１２Ｄ、Ａ７０Ｇ、Ｅ１１９Ｌ、Ｅ１１９Ｓ、Ｒ１５９Ｍ、Ｒ１４Ｈ、Ｒ１７９Ｆ、Ａ６４Ｃ、Ａ４１Ｓ、Ｒ１７９Ｗ、Ｎ２４Ｇ、Ｔ１００Ｑ、Ｐ１１８Ｗ、Ｑ８１Ｇ、Ｇ４９Ｋ、Ｒ１４Ｌ、Ｎ５５Ａ、Ｒ３５Ｋ、Ｒ７９Ｖ、Ｄ２Ｍ、Ｔ１６０Ｄ、Ａ８３Ｄ、Ｒ１７９Ｌ、Ｓ５１Ａ、Ｇ１２Ｐ、Ｓ９９Ｈ、Ｎ４２Ｄ、Ｓ１８８Ｅ、Ｔ１０Ｍ、Ｌ１２５Ｍ、Ｔ１１６Ｎ、Ａ７０Ｐ、Ｑ１７４Ｓ、Ｇ６５Ｄ、Ｓ１１３Ｄ、Ｅ１１９Ｑ、Ａ８３Ｅ、Ｎ１７０Ｌ、Ｑ８１Ａ、Ｓ５１Ｃ、Ｐ１１８Ｇ、Ｑ１７４Ｔ、Ｉ２８Ｖ、Ｓ１５Ｇ、およびＴ１１６Ｇからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む。ある好ましい態様において、これらの変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べてＬＡＳ安定性を向上させている。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
また本発明は、Ｇ２６Ｉ、Ｇ２６Ｋ、Ｇ２６Ｑ、Ｇ２６Ｖ、Ｇ２６Ｗ、Ｆ２７Ｖ、Ｆ２７Ｗ、Ｉ２８Ｐ、Ｔ２９Ｅ、Ｔ１２９Ｗ、Ｔ４０Ｄ、Ｔ４０Ｑ、Ｒ４３Ｄ、Ｐ４３Ｈ、Ｐ４３Ｋ、Ｐ４３Ｌ、Ａ２２Ｃ、Ｔ４０Ｈ、Ｐ８９Ｗ、Ｇ９１Ｌ、Ｓ１８Ｅ、Ｆ５９Ｋ、Ａ３０Ｍ、Ａ３０Ｎ、Ｇ３１Ｍ、Ｃ３３Ｍ、Ｇ１６１Ｌ、Ｇ１６１Ｖ、Ｐ４３Ｎ、Ｇ２６Ｅ、Ｎ７３Ｐ、Ｇ８４Ｃ、Ｇ８４Ｐ、Ｇ４５Ｖ、Ｃ３３Ｌ、Ｙ９Ｅ、Ｙ９Ｐ、Ａ１４７Ｅ、Ｃ１５８Ｈ、Ｉ２８Ｗ、Ａ４８Ｐ、Ａ２２Ｓ、Ｔ６２Ｒ、Ｓ１３７Ｒ、Ｓ１５５Ｐ、Ｓ１５５Ｒ、Ｇ１５６Ｉ、Ｇ１５６Ｌ、Ｑ８１Ａ、Ｒ９６Ｃ、Ｉ４Ｄ、Ｉ４Ｐ、Ａ７０Ｐ、Ｃ１０５Ｅ、Ｃ１０５Ｇ、Ｃ１０５Ｋ、Ｃ１０５Ｍ、Ｃ１０５Ｎ、Ｃ１０５Ｓ、Ｔ１２８Ａ、Ｔ１２８Ｖ、Ｔ１２８Ｇ、Ｓ１４０Ｐ、Ｇ１２Ｄ、Ｃ３３Ｎ、Ｃ３３Ｅ、Ｔ１６４Ｇ、Ｇ４５Ａ、Ｇ１５６Ｐ、Ｓ９９Ａ、Ｑ１６７Ｌ、Ｓ１５５Ｗ、Ｉ２８Ｔ、Ｒ９６Ｆ、Ａ３０Ｐ、Ｒ１２３Ｗ、Ｔ４０Ｐ、Ｔ３９Ｒ、Ｃ１０５Ｐ、Ｔ１００Ａ、Ｃ１０５Ｗ、Ｓ１５５Ｋ、Ｔ４６Ｙ、Ｒ１２３Ｆ、Ｉ４Ｇ、Ｓ１５５Ｙ、Ｔ４６Ｖ、Ａ９３Ｓ、Ｙ５７Ｎ、Ｑ８１Ｓ、Ｇ１８６Ｓ、Ｇ３１Ｈ、Ｔ１０Ｙ、Ｇ３１Ｖ、Ａ８３Ｈ、Ａ３８Ｄ、Ｒ１２３Ｙ、Ｒ７９Ｔ、Ｃ１５８Ｇ、Ｇ３１Ｙ、Ｑ８１Ｐ、Ｒ９６Ｅ、Ａ３０Ｙ、Ｒ１５９Ｋ、Ａ２２Ｔ、Ｔ４０Ｎ、Ｙ５７Ｍ、Ｇ３１Ｎ、Ｑ８１Ｇ、Ｔ１６４Ｌ、Ｔ１２１Ｅ、Ｔ１０Ｆ、Ｑ１４６Ｐ、Ｒ１２３Ｎ、Ｖ３Ｒ、Ｐ４３Ｇ、Ｑ８１Ｈ、Ｑ８１Ｄ、Ｇ１６１Ｉ、Ｃ１５８Ｍ、Ｎ２４Ｔ、Ｔ１０Ｗ、Ｔ１２８Ｓ、Ｔ１６０Ｉ、Ｙ１７６Ｐ、Ｓ１５５Ｆ、Ｔ１２８Ｃ、Ｌ１２５Ａ、Ｐ１６８Ｙ、Ｔ６２Ｇ、Ｆ１６６Ｓ、Ｓ１８８Ａ、Ｑ８１Ｆ、Ｔ４６Ｗ、Ａ７０Ｇ、およびＡ３８Ｇからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。別な態様において、前記プロテアーゼ変異体は、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ１８８Ｖ、Ｙ１１７Ｋ、Ｙ１１７Ｑ、Ｙ１１７Ｒ、Ｙ１１７Ｖ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１２３Ｌ、Ｔ８６Ｓ、Ｒ１２３Ｉ、Ｑ８１Ｅ、Ｌ１２５Ｍ、Ｈ３２Ａ、Ｓ１８８Ｔ、Ｎ７４Ｆ、Ｃ３３Ｄ、Ｆ２７Ｉ、Ａ８３Ｍ、Ｑ７１Ｙ、Ｒ１２３Ｔ、Ｖ９０Ａ、Ｆ５９Ｗ、Ｌ１４１Ｃ、Ｎ１７０Ｅ、Ｔ４６Ｆ、Ｓ５１Ｖ、Ｇ１６２Ｐ、Ｓ１８５Ｒ、Ａ４１Ｓ、Ｒ７９Ｖ、Ｔ１５１Ｃ、Ｔ１０７Ｓ、Ｔ１２９Ｙ、Ｍ１８０Ｌ、Ｆ１６６Ｃ、Ｃ１０５Ｔ、Ｔ１６０Ｅ、Ｐ８９Ａ、Ｒ１５９Ｔ、Ｔ１８３Ｐ、Ｓ１８８Ｍ、Ｔ１０Ｌ、Ｇ２５Ｓ、Ｎ２４Ｓ、Ｅ１１９Ｌ、Ｔ１０７Ｌ、Ｔ１０７Ｑ、Ｇ１６１Ｋ、Ｇ１５Ｑ、Ｓ１５Ｒ、Ｇ１５３Ｋ、Ｇ１５３Ｖ、Ｓ１８８Ｇ、Ａ８３Ｅ、Ｇ１８６Ｐ、Ｔ１２１Ｄ、Ｇ４９Ａ、Ｓ１５Ｃ、Ｃ１０５Ｙ、Ｃ１０５Ａ、Ｒ１２７Ｆ、Ｑ７１Ａ、Ｔ１０Ｃ、Ｒ１７９Ｋ、Ｔ８６Ｉ、Ｗ１０３Ｎ、Ａ８７Ｓ、Ｆ１６６Ａ、Ａ８３Ｆ、Ｒ１２３Ｑ、Ａ１３２Ｃ、Ａ１４３Ｈ、Ｔ１６３Ｉ、Ｔ３９Ｖ、Ａ９３Ｄ、Ｖ９０Ｍ、Ｒ１２３Ｋ、Ｐ１３４Ｗ、Ｇ１７７Ｎ、Ｖ１１５Ｉ、Ｓ１５５Ｔ、Ｔ１１０Ｄ、Ｇ１０５Ｌ、Ｎ１７０Ｄ、Ｔ１０７Ａ、Ｇ８４Ｖ、Ｇ８４Ｍ、Ｌ１１１Ｋ、Ｐ１６８Ｉ、Ｇ１５４Ｌ、Ｔ１８３Ｉ、Ｓ９９Ｇ、Ｓ１５Ｔ、Ａ８Ｇ、Ｓ１５Ｎ、Ｐ１８９Ｓ、Ｓ１８８Ｃ、Ｔ１００Ｑ、Ａ１１０Ｇ、Ａ１２１Ａ、Ｇ１２Ａ、Ｒ１５９Ｖ、Ｇ３１Ａ、Ｇ１５４Ｒ、Ｔ１８２Ｌ、Ｖ１１５Ｌ、Ｔ１６０Ｑ、Ｔ１０７Ｆ、Ｒ１５９Ｑ、Ｇ１４４Ａ、Ｓ９２Ｔ、Ｔ１０１Ｓ、Ａ８３Ｒ、Ｇ１２ＨＭ、Ｓ１５Ｈ、Ｔ１１６Ｑ、Ｔ３６Ｖ、Ｇ１５４、Ｑ８１Ｃ、Ｖ１３０Ｔ、Ｔ１８３Ａ、Ｐ１１８Ｔ、Ａ８７Ｅ、Ｔ８６Ｍ、Ｖ１５０Ｎ、およびＮ２４Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有する。ある好ましい態様において、これらの変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べて熱安定性を向上させている。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
また本発明は、Ｔ３６Ｉ、Ｉ１７２Ｔ、Ｎ２４Ｅ、Ｎ１７０Ｙ、Ｇ７７Ｔ、Ｇ１８６Ｎ、Ｉ１８１Ｌ、Ｎ７３Ｔ、Ａ３８Ｒ、Ｎ７４Ｇ、Ｎ２４Ａ、Ｇ５４Ｄ、Ｓ７６Ｄ、Ｒ１２３Ｅ、１５９Ｅ、Ｎ１１２Ｅ、Ｒ３５Ｅ、Ｒ１７９Ｖ、Ｒ１２３Ｄ、Ｎ２４Ｔ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１４Ｌ、Ａ３８Ｄ、Ｖ９０Ｐ、Ｒ１４Ｑ、Ｒ１２３Ｉ、Ｒ１７９Ｄ、Ｓ７６Ｖ、Ｒ７９Ｇ、Ｒ３５Ｌ、Ｓ７６Ｅ、Ｓ７６Ｙ、Ｒ７９Ｄ、Ｒ７９Ｐ、Ｒ３５Ｑ、Ｒ１７９Ｎ、Ｎ１１２Ｄ、Ｒ１７９Ｅ、Ｇ６５Ｐ、Ｙ７５Ｇ、Ｖ９０Ｓ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ３５Ｆ、Ｒ１２３Ｆ、Ａ６４Ｉ、Ｎ２４Ｑ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１７９Ｉ、Ｎ１７０Ｄ、Ｒ３５Ａ、Ｒ１５９Ｆ、Ｔ１０９Ｅ、Ｒ１４Ｄ、Ｎ６７Ｄ、Ｇ４９Ａ、Ｎ１１２Ｑ、Ｇ７８Ｄ、Ｔ１２１Ｅ、Ｌ６９Ｓ、Ｔ１１６Ｅ、Ｖ９０Ｉ、Ｔ３６Ｓ、Ｔ３６Ｇ、Ｎ１４５Ｅ、Ｔ８６Ｄ、Ｓ５１Ｄ、Ｒ１７９Ｋ、Ｔ１０７Ｅ、Ｔ１２９Ｓ、Ｌ１４２Ｖ、Ｒ７９Ａ、Ｒ７９Ｅ、Ａ３８Ｈ、Ｔ１０７Ｓ、Ｒ１２３Ａ、Ｎ５５Ｅ、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１５９Ｎ、Ｇ６５Ｄ、Ｒ１４Ｎ、Ｇ６５Ｑ、Ｒ１２３Ｑ、Ｎ２４Ｖ、Ｒ１４Ｇ、Ｔ１１６Ｑ、Ａ３８Ｎ、Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１７９Ｙ、Ａ８３Ｅ、Ｎ１１２Ｌ、Ｓ９９Ｎ、Ｇ７８Ａ、Ｔ１０Ｎ、Ｈ８５Ｑ、Ｒ３５Ｑ、Ｎ２４Ｌ、Ｎ２４Ｈ、Ｇ４９Ｓ、Ｒ７９Ｌ、Ｓ７６Ｔ、Ｓ７６Ｌ、Ｇ６５Ｓ、Ｎ５５Ｆ、Ｒ７９Ｖ、Ｇ６５Ｔ、Ｒ１２３Ｎ、Ｔ８６Ｅ、Ｙ７５Ｆ、Ｆ１Ｔ、Ｓ７６Ｎ、Ｓ９９Ｖ、Ｒ７９Ｔ、Ｎ１１２Ｖ、Ｒ７９Ｍ、Ｔ１０７Ｖ、Ｒ７９Ｓ、Ｇ５４Ｅ、Ｇ６５Ｖ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１５９Ｄ、Ｔ１０７Ｈ、Ｈ８５Ｔ、Ｒ３５Ｔ、Ｔ３６Ｎ、Ｑ８１Ｅ、Ｒ１２３Ｈ、Ｓ７６Ｉ、Ａ３８Ｆ、Ｖ９０Ｔ、およびＲ１４Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。別な態様において、前記プロテアーゼ変異体は、Ｇ６５Ｌ、Ｓ９９Ｄ、Ｔ１０７Ｍ、Ｓ１１３Ｔ、Ｓ９９Ｔ、Ｇ７７Ｓ、Ｒ１４Ｍ、Ａ６４Ｎ、Ｒ６１Ｍ、Ａ７０Ｄ、Ｑ７１Ｇ、Ａ９３Ｄ、Ｓ９２Ｇ、Ｎ１１２Ｙ、Ｓ１５Ｗ、Ｒ１５９Ｋ、Ｎ６７Ｇ、Ｔ１０Ｅ、Ｒ１２７Ｈ、Ａ６４Ｙ、Ｒ１５９Ｃ、Ａ３８Ｌ、Ｔ１６０Ｅ、Ｔ１８３Ｅ、Ｒ１２７Ｓ、Ａ８Ｅ、Ｓ５１Ｑ、Ｎ７Ｌ、Ｇ６３Ｄ、Ａ３８Ｓ、Ｒ３５Ｈ、Ｒ１４Ｋ、Ｔ１０７Ｉ、Ｇ１２Ｄ、Ａ６４Ｌ、Ｓ７６Ｗ、Ａ４１Ｎ、Ｒ３５Ｍ、Ａ６４Ｖ、Ａ３８Ｙ、Ｔ１８３Ｉ、Ｗ１０３Ｍ、Ａ４１Ｄ、Ｒ１２７Ｋ、Ｔ３６Ｄ、Ｒ６１Ｔ、Ｇ６５Ｙ、Ｇ１３Ｓ、Ｒ３５Ｙ、Ｒ１２３Ｔ、Ａ６４Ｈ、Ｇ４９Ｈ、Ａ７０Ｈ、Ａ６４Ｆ、Ｒ１２７Ｙ、Ｒ６１Ｅ、Ａ６４Ｐ、Ｔ１２１Ｄ、Ｖ１１５Ａ、Ｒ１２３Ｙ、Ｔ１０１Ｓ、Ｔ１８２Ｖ、Ｈ８５Ｌ、Ｎ２４Ｍ、Ｒ１２７Ｅ、Ｎ１４５Ｄ、Ｑ７１Ｈ、Ｓ７６Ｑ、Ａ６４Ｔ、Ｇ４９Ｆ、Ａ６４Ｑ、Ｔ１０Ｄ、Ｆ１Ｄ、Ａ７０Ｇ、Ｒ３５Ｗ、Ｑ７１Ｄ、Ｎ１２１Ｉ、Ａ６４Ｍ、Ｔ３６Ｈ、Ａ８Ｇ、Ｔ１０７Ｎ、Ｒ３５Ｓ、Ｎ６７Ｔ、Ｓ９２Ａ、Ｎ１７０Ｌ、Ｎ６７Ｅ、Ｓ１１４Ａ、Ｒ１４Ａ、Ｒ１４Ｓ、Ｑ８１Ｄ、Ｓ５１Ｈ、Ｒ１２３Ｓ、Ａ９３Ｓ、Ｒ１２７Ｆ、Ｉ１９Ｖ、Ｔ４０Ｖ、Ｓ１８５Ｎ、Ｒ１２３Ｇ、Ｒ１７９Ｌ、Ｓ５１Ｖ、Ｔ１６３Ｄ、Ｔ１０９Ｉ、Ａ６４Ｓ、Ｖ７２Ｉ、Ｎ６７Ｓ、Ｒ１５９Ｓ、Ｈ８５Ｍ、Ｔ１０９Ｇ、Ｑ７１Ｓ、Ｒ６１Ｈ、Ｔ１０７Ａ、Ｑ８１Ｖ、Ｖ９０Ｎ、Ｔ１０９Ａ、Ａ３８Ｔ、Ｎ１４５Ｔ、Ｒ１５９Ａ、Ａ１１０Ｓ、Ｑ８１Ｈ、Ａ４８Ｅ、Ｓ５１Ｔ、Ａ６４Ｗ、Ｒ１５９Ｌ、Ｎ６７Ｈ、Ａ９３Ｅ、Ｔ１１６Ｆ、Ｒ６１Ｓ、Ｒ１２３Ｖ、Ｖ３Ｌ、およびＲ１５９Ｙからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有する。ある好ましい態様において、これらの変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べてケラチン加水分解活性を向上させている。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
また本発明は、Ｔ３６Ｉ、Ｐ８９Ｄ、Ａ９３Ｔ、Ａ９３Ｓ、Ｔ３６Ｎ、Ｎ７３Ｔ、Ｔ３６Ｇ、Ｒ１５９Ｆ、Ｔ３６Ｓ、Ａ３８Ｒ、Ｓ９９Ｗ、Ｓ７６Ｗ、Ｔ３６Ｐ、Ｇ７７Ｔ、Ｇ５４Ｄ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１５９Ｅ、Ｈ８５Ｑ、Ｔ３６Ｄ、Ｓ７６Ｌ、Ｓ９９Ｎ、Ｙ７５Ｇ、Ｓ７６Ｙ、Ｒ１２７Ｓ、Ｎ２４Ｅ、Ｒ１２７Ｑ、Ｄ１８４Ｆ、Ｎ１７０Ｙ、Ｎ２４Ａ、Ｓ７６Ｔ、Ｈ８５Ｌ、Ｙ７５Ｆ、Ｓ７６Ｖ、Ｌ６９Ｓ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１２７Ｋ、Ｇ６５Ｐ、Ｎ７４Ｇ、Ｒ１５９Ｈ、Ｇ６５Ｑ、Ｇ１８６Ｖ、Ａ４８Ｑ、Ｔ３６Ｈ、Ｎ６７Ｌ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ１２７Ｌ、Ｔ３６Ｙ、Ｓ７６Ｉ、Ｓ１１４Ｇ、Ｒ１２７Ｈ、Ｓ１８７Ｐ、Ｖ３Ｌ、Ｇ７８Ｄ、Ｒ１２３Ｉ、Ｉ１８１Ｑ、Ｒ３５Ｆ、Ｈ８５Ｒ、Ｒ１２７Ｙ、Ｎ６７Ｓ、Ｑ８１Ｐ、Ｒ１２３Ｆ、Ｒ１５９Ｎ、Ｓ９９Ａ、Ｓ７６Ｄ、Ａ１３２Ｖ、Ｒ１２７Ｆ、Ａ１４３Ｎ、Ｓ９２Ａ、Ｎ２４Ｔ、Ｒ７９Ｐ、Ｓ７６Ｎ、Ｒ１４Ｍ、Ｇ１８６Ｅ、Ｎ２４Ｑ、Ｎ６７Ａ、Ｒ１２７Ｔ、Ｈ８５Ｋ、Ｇ６５Ｔ、Ｇ６５Ｙ、Ｒ１７９Ｖ、Ｙ７５Ｉ、Ｉ１１Ｑ、Ａ３８Ｌ、Ｔ３６Ｌ、Ｒ１５９Ｙ、Ｒ１５９Ｄ、Ｎ２４Ｖ、Ｇ６５Ｓ、Ｎ１５７Ｄ、Ｇ１８６Ｉ、Ｇ５４Ｑ、Ｎ６７Ｙ、Ｒ１２７Ｇ、Ｓ７６Ａ、Ａ３８Ｓ、Ｔ１０９Ｅ、Ｖ６６Ｈ、Ｔ１１６Ｆ、Ｒ１２３Ｌ、Ｇ４９Ａ、Ａ６４Ｈ、Ｔ３６Ｗ、Ｄ１８４Ｈ、Ｓ９９Ｄ、Ｇ１６１Ｋ、Ｐ１３４Ｅ、Ａ６４Ｆ、Ｎ６７Ｇ、Ｓ９９Ｔ、Ｄ２Ｑ、Ｓ７６Ｅ、Ｒ１６Ｑ、Ｇ５４Ｎ、Ｎ６７Ｖ、Ｒ３５Ｌ、Ｑ７１Ｉ、Ｎ７Ｌ、Ｎ１１２Ｅ、Ｌ６９Ｈ、Ｎ２４Ｈ、Ｇ５４Ｉ、Ｒ１６Ｌ、Ｎ２４Ｍ、Ａ６４Ｙ、Ｓ１１３Ａ、Ｈ８５Ｆ、Ｒ７９Ｇ、Ｉ１１Ａ、Ｔ１２１Ｄ、Ｒ６１Ｖ、およびＧ６５Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。別な態様において、前記プロテアーゼ変異体は、Ｎ６７Ｑ、Ｓ１８７Ｑ、Ｑ７１Ｈ、Ｔ１６３Ｄ、Ｒ６１Ｋ、Ｒ１５９Ｖ、Ｑ７１Ｆ、Ｖ３１Ｆ、Ｖ９０Ｉ、Ｒ７９Ｄ、Ｔ１６０Ｅ、Ｒ１２３Ｑ、Ａ３８Ｙ、Ｓ１１３Ｇ、Ａ８８Ｆ、Ａ７０Ｇ、Ｉ１１Ｔ、Ｇ７８Ａ、Ｎ２４Ｌ、Ｓ９２Ｇ、Ｒ１４Ｌ、Ｄ１８４Ｒ、Ｇ５４Ｌ、Ｎ１１２Ｌ、Ｈ８５Ｙ、Ｒ１６Ｎ、Ｇ７７Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｖ８０Ｌ、Ｇ６５Ｖ、Ｔ１２１Ｅ、Ｑ７１Ｄ、Ｒ１６Ｇ、Ｐ８９Ｎ、Ｎ４２Ｈ、Ｇ４９Ｆ、Ｉ１１Ｓ、Ｒ６１Ｍ、Ｒ１５９Ｃ、Ｇ６５Ｒ、Ｔ１８３Ｉ、Ａ９３Ｄ、Ｌ１１１Ｅ、Ｓ５１Ｑ、Ｇ７８Ｎ、Ｎ６７Ｔ、Ａ３８Ｎ、Ｔ４０Ｖ、Ａ６４Ｗ、Ｒ１５９Ｌ、Ｔ１０Ｅ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１２３Ｅ、Ｖ９０Ｐ、Ａ６４Ｎ、Ｇ１６１Ｅ、Ｈ８５Ｔ、Ａ８Ｇ、Ｌ１４２Ｖ、Ａ４１Ｎ、Ｓ１８５Ｉ、Ｑ７１Ｌ、Ａ６４Ｔ、Ｒ１６Ｉ、Ａ３８Ｄ、Ｇ５４Ｍ、Ｎ１１２Ｑ、Ｒ１６Ａ、Ｒ１４Ｅ、Ｖ８０Ｈ、Ｎ１７０Ｄ、Ｓ９９Ｇ、Ｒ１７９Ｎ、Ｓ１５Ｅ、Ｇ４９Ｈ、Ａ７０Ｐ、Ａ６４Ｓ、Ｇ５４Ａ、Ｓ１８５Ｗ、Ｒ６１Ｈ、Ｔ１０Ｑ、Ａ３８Ｆ、Ｎ１７０Ｌ、Ｔ１０Ｌ、Ｎ６７Ｆ、Ｇ１２Ｄ、Ｄ１８４Ｔ、Ｒ１４Ｎ、Ｓ１８７Ｅ、Ｒ１４Ｐ、Ｎ１１２Ｄ、Ｓ１４０Ａ、Ｎ１１２Ｇ、Ｇ４９Ｓ、Ｌ１１１Ｄ、Ｎ６７Ｍ、Ｖ１５０Ｌ、Ｇ１２Ｙ、Ｒ１２３Ｋ、Ｐ８９Ｖ、Ｖ６６Ｄ、Ｇ７７Ｎ、Ｓ５１Ｔ、Ａ８Ｄ、Ｉ１８１Ｈ、Ｔ８６Ｎ、Ｒ１７９Ｄ、Ｎ５５Ｆ、Ｎ２４Ｓ、Ｄ１８４Ｌ、Ｒ６１Ｓ、Ｎ６７Ｋ、Ｇ１８６Ｌ、Ｆ１Ｔ、Ｒ１５９Ａ、Ｉ１１Ｌ、Ｒ６１Ｔ、Ｄ１８４Ｑ、Ａ９３Ｅ、Ｑ７１Ｔ、Ｒ１７９Ｅ、Ｌ６９Ｗ、Ｔ１６３Ｉ、Ｓ１８８Ｑ、Ｌ１２５Ｖ、Ａ３８Ｖ、Ｒ３５Ａ、Ｐ１３４Ｇ、Ａ６４Ｖ、Ｎ１４５Ｄ、Ｖ９０Ｔ、およびＡ１４３Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有する。ある好ましい態様において、これらの変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べてＢＭＩ能を向上させている。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
また本発明は、Ｔ３６Ｉ、Ｎ１７０Ｙ、Ａ３８Ｒ、Ｒ７９Ｐ、Ｇ７７Ｔ、Ｌ６９Ｓ、Ｎ７３Ｔ、Ｓ７６Ｖ、Ｓ７６Ｙ、Ｒ１７９Ｖ、Ｔ３６Ｎ、Ｎ５５Ｆ、Ｒ１５９Ｆ、Ｇ５４Ｄ、Ｇ６５Ｐ、Ｌ６９Ｈ、Ｔ３６Ｇ、Ｇ１７７Ｍ、Ｎ２４Ｅ、Ｎ７４Ｇ、Ｒ１５９Ｅ、Ｔ３６Ｓ、Ｙ７５Ｇ、Ｓ７６Ｉ、Ｓ７６Ｄ、Ａ８Ｒ、Ａ２４Ａ、Ｖ９０Ｐ、Ｒ１５９Ｃ、Ｇ６５Ｑ、Ｔ１２１Ｅ、Ａ８Ｖ、Ｓ７６Ｌ、Ｔ１０９Ｅ、Ｒ１７９Ｍ、Ａ８Ｔ、Ｔ１０７Ｎ、Ｇ１８６Ｅ、Ｓ７６Ｗ、Ｒ１２３Ｅ、Ａ３８Ｆ、Ｔ３６Ｐ、Ｎ６７Ｇ、Ｙ７５Ｆ、Ｓ７６Ｎ、Ｒ１７９Ｉ、Ｓ１８７Ｐ、Ｎ６７Ｖ、Ｖ９０Ｓ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１７９Ｙ、Ｒ３５Ｆ、Ｎ１４５Ｓ、Ｇ６５Ｓ、Ｒ６１Ｍ、Ｓ５１Ａ、Ｒ１７９Ｎ、Ｒ１２３Ｄ、Ｎ２４Ｔ、Ｎ５５Ｅ、Ｒ７９Ｃ、Ｇ１８６Ｖ、Ｒ１２３Ｉ、Ｇ１６１Ｅ、Ｇ６５Ｙ、Ａ３８Ｓ、Ｒ１４Ｌ、Ｖ９０Ｉ、Ｒ７９Ｇ、Ｎ１４５Ｅ、Ｎ６７Ｌ、Ｒ１２７Ｓ、Ｒ１５０Ｙ、Ｍ１８０Ｄ、Ｎ６７Ｔ、Ａ９３Ｄ、Ｔ１２１Ｄ、Ｑ８１Ｖ、Ｔ１０９Ｉ、Ａ９３Ｅ、Ｔ１０７Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｌ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１５９Ｄ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ７９Ｅ、Ｒ１２３Ｆ、Ｒ７９Ｄ、Ｔ３６Ｄ、Ａ６４Ｎ、Ｌ１４２Ｖ、Ｔ１０９Ａ、Ｉ１７２Ｖ、Ａ８３Ｎ、Ｔ８５Ａ、Ｒ１７９Ｄ、Ａ３８Ｌ、Ｉ１２６Ｌ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１２７Ｌ、Ｌ６９Ｗ、Ｒ１２７Ｋ、Ｇ６５Ｔ、Ｒ１２７Ｈ、Ｐ１３４Ａ、Ｎ６７Ｄ、Ｒ１４Ｍ、Ｎ２４Ｑ、Ａ１４３Ｎ、Ｎ５５Ｓ、Ｎ６７Ｍ、Ｓ５１Ｄ、Ｓ７６Ｅ、Ｔ１６３Ｄ、Ａ３８Ｄ、Ｒ１５９Ｋ、Ｔ１８３Ｉ、Ｇ６３Ｖ、Ａ８Ｓ、Ｔ１０７Ｍ、Ｈ８５Ｑ、Ｎ１１２Ｅ、Ｎ６７Ｆ、Ｎ６７Ｓ、Ａ６４Ｈ、Ｔ８６Ｉ、Ｐ１３４Ｅ、Ｔ１８２Ｖ、Ｎ６７Ｙ、Ａ６４Ｓ、Ｇ７８Ｄ、Ｖ９０Ｔ、Ｒ６１Ｔ、Ｒ１６Ｑ、Ｇ６５Ｒ、Ｔ８６Ｌ、Ｖ９０Ｎ、Ｒ１５９Ｑ、Ｇ５４Ｉ、Ｓ７６Ｃ、Ｒ１７９Ｅ、Ｖ６６Ｄ、Ｌ６９Ｖ、Ｒ１２７Ｙ、Ｒ３５Ｌ、Ｒ１４Ｅ、およびＴ８６Ｆからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体を提供する。別な態様において、前記プロテアーゼ変異体は、Ｇ１８６Ｉ、Ａ６４Ｑ、Ｔ１０９Ｇ、Ｇ６４Ｌ、Ｎ２４Ｌ、Ａ８Ｅ、Ｎ１１２Ｄ、Ａ３８Ｈ、Ｒ１７９Ｗ、Ｓ１１４Ｇ、Ｒ１２３Ｌ、Ａ８Ｌ、Ｔ１２９Ｓ、Ｎ１７０Ｄ、Ｒ１５９Ｎ、Ｎ６７Ｃ、Ｓ９２Ｃ、Ｔ１０７Ａ、Ｇ５４Ｅ、Ｔ１０７Ｅ、Ｔ３６Ｖ、Ｒ１２７Ｔ、Ａ８Ｎ、Ｈ８５Ｌ、Ａ１１０Ｓ、Ｎ１７０Ｃ、Ａ６４Ｒ、Ａ１３２Ｖ、Ｔ３６Ｙ、Ｇ６３Ｄ、Ｗ１０３Ｍ、Ｔ１５１Ｖ、Ｒ１２３Ｐ、Ｗ１０３Ｙ、Ｓ７６Ｔ、Ｓ１８７Ｔ、Ｒ１２７Ｆ、Ｎ６７Ａ、Ｐ１７１Ｍ、Ａ７０Ｓ、Ｒ１５９Ｈ、Ｓ７６Ｑ、Ｌ１２５Ｖ、Ｇ５４Ｑ、Ｇ４９Ｌ、Ｒ１４Ｉ、Ｒ１４Ｑ、Ａ８３Ｉ、Ｖ９０Ｌ、Ｔ１８３Ｅ、Ｒ１５９Ａ、Ｔ１０１Ｓ、Ｇ６５Ｄ、Ｇ５４Ａ、Ｔ１０７Ｑ、Ｑ７１Ｍ、Ｔ８６Ｅ、Ｎ２４Ｍ、Ｎ５５Ｑ、Ｒ６１Ｖ、Ｐ１３４Ｄ、Ｒ９６Ｋ、Ａ８８Ｆ、Ｎ１４５Ｑ、Ａ６４Ｍ、Ａ６４Ｔ、Ｎ２４Ｖ、Ｓ１４０Ａ、Ａ８Ｈ、Ａ６４Ｉ、Ｒ１２３Ｑ、Ｔ１８３Ｑ、Ｎ２４Ｈ、Ａ６４Ｗ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ１２９Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｔ４０Ｖ、Ｉ１１Ｔ、Ａ３８Ｎ、Ｎ１４５Ｇ、Ａ１７５Ｔ、Ｇ７７Ｑ、Ｔ１０９Ｈ、Ａ８Ｐ、Ｒ３５Ｅ、Ｔ１０９Ｎ、Ａ１１０Ｔ、Ｎ６７Ｑ、Ｇ６３Ｐ、Ｈ８５Ｒ、Ｓ９２Ｇ、Ａ１７５Ｖ、Ｓ５１Ｑ、Ｇ６３Ｑ、Ｔ１１６Ｆ、Ｇ６５Ａ、Ｒ７９Ｌ、Ｎ１４５Ｐ、Ｌ６９Ｑ、Ｑ１４６Ｄ、Ａ８３Ｄ、Ｆ１６６Ｙ、Ｒ１２３Ａ、Ｔ１２１Ｌ、Ｒ１２３Ｈ、Ａ７０Ｐ、Ｔ１８２Ｗ、Ｓ７６Ａ、Ａ６４Ｆ、Ｔ１０７Ｈ、Ｇ１８６Ｌ、Ｑ８１Ｉ、Ｒ１２３Ｋ、Ａ６４Ｌ、Ｎ６７Ｒ、Ｖ３Ｌ、Ｓ１８７Ｅ、Ｓ１６１Ｋ、Ｔ８６Ｍ、Ｉ４Ｍ、Ｇ７７Ｎ、Ｇ４９Ａ、Ａ４１Ｎ、Ｇ５４Ｍ、Ｔ１０７Ｖ、Ｑ８１Ｅ、Ａ３８Ｉ、Ｔ１０９Ｌ、Ｔ１８３Ｋ、Ａ７０Ｇ、Ｑ７１Ｄ、Ｔ１８３Ｌ、Ｑ８１Ｈ、Ａ６４Ｖ、Ａ９３Ｑ、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ５１Ｆ、Ｇ１８６Ｐ、Ｇ１８６Ｔ、Ｒ１５９Ｌ、Ｐ１３４Ｇ、Ｎ１４５Ｔ、Ｎ５５Ｖ、Ｖ６６Ｅ、Ｒ１５９Ｖ、Ｙ１７６Ｌ、およびＲ１６Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有する。ある好ましい態様において、これらの変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べて、低ｐＨ条件でＢＭＩ能を向上させている。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
また本発明は、配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおけるある位置に相当する位置において起こる少なくとも１つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する単離プロテアーゼ変異体を提供する。ここで、前記プロテアーゼのアミノ酸は、Ａｒｇ１４、Ｓｅｒ１５、Ａｒｇ１６、Ｃｙｓ１７、Ｈｉｓ３２、Ｃｙｓ３３、Ｐｈｅ５２、Ａｓｐ５６、Ｔｈｒ１００、Ｖａｌ１１５、Ｔｈｒ１１６、Ｔｙｒ１１７、Ｐｒｏ１１８、Ｇｌｕ１１９、Ａｌａ１３２、Ｇｌｕ１３３、Ｐｒｏ１３４、Ｇｌｙ１３５、Ａｓｐ１３６、Ｓｅｒ１３７、Ｔｈｒ１５１、Ｓｅｒ１５２、Ｇｌｙ１５３、Ｇｌｙ１５４、Ｓｅｒ１５５、Ｇｌｙ１５６、Ａｓｎ１５７、Ｔｈｒ１６４、およびＰｈｅ１６５を含む。ある態様において、前記プロテアーゼの触媒トリアッドはＨｉｓ３２、Ａｓｐ５６、およびＳｅｒ１３７を含む。別な態様において、前記プロテアーゼはＣｙｓ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｕ１３３、Ｐｒｏ１３４、Ｇｌｙ１３５、Ｔｈｒ１５１、Ｓｅｒ１５２、Ｇｌｙ１５３、Ｇｌｙ１５４、Ｓｅｒ１５５、Ｇｌｙ１５６、Ａｓｎ１５７およびＧｌｙ１６２、Ｔｈｒ１６３、およびＴｈｒ１６４を含む。ある好ましい態様において、前記プロテアーゼのアミノ酸配列はＰｈｅ５２、Ｔｙｒ１１７、Ｐｒｏ１１８、およびＧｌｕ１１９を含む。ある特定の好ましい態様において、前記プロテアーゼのアミノ酸配列は、Ｇｌｙ１５４から基質主鎖への主鎖−主鎖水素結合を有する。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
幾つかの態様において、本発明のプロテアーゼは３つのジスルフィド結合を含む。ある好ましい態様において、前記ジスルフィド結合はＣ１７とＣ３８、Ｃ９５とＣ１０５、およびＣ１３１とＣ１５８の間に位置する。ある特定の好ましい態様において、前記ジスルフィド結合は配列番号８のＣ１７とＣ３８、Ｃ９５とＣ１０５、およびＣ１３１とＣ１５８の間に位置する。別なプロテアーゼ変異体の態様において、前記ジスルフィド結合は配列番号８におけるジスルフィド結合に相当する位置にある。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
また本発明は、配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおけるある位置に相当する位置において起こる少なくとも１つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する単離プロテアーゼ変異体を提供する。ここで、前記変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べてその基質特異性を変化させている。ある更に好ましい態様において、前記変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べてｐＩを変化させている。更に好ましい態様において、前記変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べて安定性が向上している。更により好ましい態様において、前記変異体は変化した表面特性を示す。ある特定の好ましい態様において、前記変異体は野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べて変化した表面特性を示す。更に特定の好ましい態様において、前記変異体は１、２、４、７、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２２、２４、２５、３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５９、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７１、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９５、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２３、１２４、１２６、１２７、１２８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３７、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、および１８４からなる群から選択された少なくとも1つの位置における置換変異を含む。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
また本発明は、配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおけるある位置に相当する位置において起こる少なくとも１つのアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。更なる態様において、本発明はこれらの発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。ある特に好ましい態様において、前記宿主種細胞はバチルス属（Bacillus sp.）、ストレプトマイセス属（Streptomyces sp.）、アスペルジルス属（Aspergillus sp.）、およびトリコデルマ属（Trichoderma sp.）からなる群から選択される。また本発明は前記宿主細胞により生産されるセリンプロテアーゼを提供する。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
また本発明は、（ｉ）配列番号４と７０％以上の同一性を有するか、（ｉｉ）中程度から高度にストリンジェントな条件下で配列番号４で示されるヌクレオチド配列から誘導されるプローブをハイブリダイゼーションにより生成することができるか、または（ｉｉｉ）配列番号４で示されるヌクレオチド配列に相補的である、ヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの態様において、本発明は少なくとも１つのそのようなポリヌクレオチドをコードする発現ベクターを提供する。更なる態様において、本発明はこれらの発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。ある特に好ましい態様において、前記宿主細胞はバチルス属、ストレプトマイセス属、アスペルジルス属、およびトリコデルマ属からなる群から選択される。また本発明は、前記宿主細胞により生産されるセリンプロテアーゼを提供する。更なる態様において、本発明は配列番号４において示される少なくとも一部分の配列に相補的なポリヌクレオチドを提供する。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
また本発明は、プロテアーゼ活性を有する酵素を生産する方法であって、配列番号４と７０％以上の同一性を有するポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程と、宿主細胞に好適な条件下で形質転換宿主細胞を培養する工程とを含む方法を提供する。ある態様において、前記宿主細胞はストレプトマイセス属、アスペルジルス属、トリコデルマ属、およびバチルス属からなる群から選択される。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
また本発明は、配列番号４の対応する断片に実質的に同一な４〜１５０のヌクレオチド配列を含むプローブを提供する。ここで、前記プローブは蛋白分解活性を有する酵素をコードする核酸配列を検出するために用いられ、ここで前記核酸配列はミクロコシニアエのなかまから得られる。ある態様において、このミクロコシニアエはセルロモナス属である。ある好ましい態様において、このセルロモナス属はセルロモナス株６９Ｂ４である。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
また本発明は、ミクロコシニアエのなかまから得られる少なくとも１つのセリンプロテアーゼを含む洗浄組成物を提供する。幾つかの態様において、少なくともひとつのプロテアーゼがセルロモナス、エルスコビア、セルロシミクロビウム、キシラニバクテリウム、およびプロミクロモノスポラからなる群から選択される生物から得られる。幾つかの好ましい態様において、前記プロテアーゼはセルロモナス６９Ｂ４から得られる。ある特に好ましい態様において、少なくとも１つのプロテアーゼは配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの更なる態様において、本発明は配列番号８を含むセリンプロテアーゼと４５％以上のアミノ酸同一性を含む単離セリンプロテアーゼを提供する。幾つかの態様において、前記単離セリンプロテアーゼは、５０％以上、好ましくは５５％以上、より好ましくは６０％以上、更により好ましくは６５％以上、もっとより好ましくは７０％以上、より好ましくは７５％以上、更により好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、更により好ましくは９０％以上、もっとより好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％同一性を含む。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
更に本発明は、少なくとも１つのセリンプロテアーゼを含む洗浄組成物であって、少なくとも１つの前記セリンプロテアーゼがミクロコシニアエのなかまから得られるセリンプロテアーゼと免疫交叉反応性を有することを特徴とする洗浄組成物を提供する。幾つかの好ましい態様において、前記セリンプロテアーゼはセルロモナス６９Ｂ４から得られるセリンプロテアーゼと免疫交叉反応性を有する。別な態様において、前記セリンプロテアーゼは配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセリンプロテアーゼと免疫交叉反応性を有する。より更なる態様において、前記セリンプロテアーゼは、ミクロコシニアエ、セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼ、および／または配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセリンプロテアーゼの任意のいずれかの断片（すなわち、部分）と交叉反応性を有する。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
更に本発明は、少なくとも１つのセリンプロテアーゼを含む洗浄組成物であって、このプロテアーゼが配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおけるある位置に相当する位置で起こる少なくとも１つの置換を含むアミノ酸配列を有する変異体プロテアーゼであることを特徴とする洗浄組成物を提供する。幾つかの態様において、前記置換は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおいて位置２、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、２４、２６、３１、３３、３５、３６、３８、３９、４０、４３、４６、４９、５１、５４、６１、６４、６５、６７、７０、７１、７６、７８、７９、８１、８３、８５、８６、９０、９３、９９、１００、１０５、１０７、１０９、１１２、１１３、１１６、１１８、１１９、１２１、１２３、１２７、１４５、１５５、１５９、１６０、１６３、１６５、１７０、１７４、１７９、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、および１８８に相当する位置で起こる。別な態様において、前記置換は配列番号８で示されるアミノ酸配列を含むセルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼにおいて位置１、４、２２、２７、２８、３０、３２、４１、４７、４８、５５、５９、６３、６６、６９、７５、７７、８０、８４、８７、８８、８９、９２、９６、１１０、１１１、１１４、１１５、１１７、１２８、１３４、１４４、１４３、１４６、１５１、１５４、１５６、１５８、１６１、１６６、１７６、１７７、１８１、１８２、１８７、および１８９に相当する位置で起こる。更なる態様において、前記プロテアーゼは配列番号８示されるものに相当するアミノ酸配列において位置１４、１６、３５、３６、６５、７５、７６、７９、１２３、１２７、１５９、および１７９における少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。より更なる態様において、前記プロテアーゼは、Ｒ１４Ｌ、Ｒ１６Ｉ、Ｒ１６Ｌ、Ｒ１６Ｑ、Ｒ３５Ｆ、Ｔ３６Ｓ、Ｇ６５Ｑ、Ｙ７５Ｇ、Ｎ７６Ｌ、Ｎ７６Ｖ、Ｒ７９Ｔ、Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１２３Ｑ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１２７Ｋ、Ｒ１２７Ｑ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、およびＲ１７９Ｑからなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む。更に追加的な態様において、前記プロテアーゼは、組合せＲ１６Ｑ／Ｒ３５Ｆ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ１２３Ｌ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１５９Ｑ、Ｒ１４Ｌ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１２３Ｌ／Ｒ１２７Ｑ／Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔ／Ｒ１２７Ｑ、およびＲ１６Ｑ／Ｒ７９Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む。幾つかの特に好ましい態様において、前記変異セリンプロテアーゼは配列番号８におけるアミノ酸位置に対応する少なくとも１つの置換を含む。ここで、前記変異体プロテアーゼは野生型セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼと比べて、ケラチン加水分解、熱安定性、カゼイン活性、ＬＡＳ安定性、および洗浄からなる群から選択される少なくとも１つの特性において向上した性能を有する。幾つかの態様において、前記変異体プロテアーゼは配列番号５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、および７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別な態様において、前記変異体プロテアーゼのアミノ酸配列は配列番号５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、および７７からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列によりコードされる。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
また本発明は、蛋白分解酵素の洗浄有効量を含む洗浄組成物であって、前記酵素が配列番号４と７０％以上同一なアミノ酸配列を含むことを特徴とする洗浄組成物、および好適な洗浄製剤を提供する。幾つかの好ましい態様において、前記洗浄組成物は、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ（mannanases）、ペクチナーゼ、クチナーゼ（cutinases）、オキシドレダクターゼ、ヘミセルラーゼ、およびセルラーゼからなる群から選択される一つ以上の追加の酵素または酵素誘導体をさらに含む。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
また本発明は、ミクロコシニアエのなかまから得られる少なくとも１つのセリンプロテアーゼを含む組成物を提供する。ここで、前記組成物は少なくとも１つの安定化剤をさらに含む。幾つかの態様において、前記安定化剤はホウ砂およびグリセロールからなる群から選択される。幾つかの態様において本発明は、本発明の前記酵素をアニオン性界面活性剤に安定化させるために好適な競合阻害剤を提供する。幾つかの態様において、少なくとも１つのプロテアーゼが、セルロモナス、エルスコビア、セルロシミクロビウム、キシラニバクテリウム、およびプロミクロモノスポラからなる群から選択される生物から得られる。幾つかの好ましい態様において、前記プロテアーゼはセルロモナス６９Ｂ４から得られる。幾つかの特に好ましい態様において、少なくとも１つのプロテアーゼは配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
追加的に本発明は、少なくとも１つの酸安定酵素を含む洗浄組成物であって、約３から約５の実質ｐＨの組成物を提供するのに十分量のｐＨ調整剤を含み、ここで前記組成物は約３から約５のｐＨで加水分解する物質を実質的に含まないことを特徴とする洗浄組成物を提供する。更なる態様において、前記加水分解する物質は表面活性化物質を含む。幾つかの好ましい態様において、前記洗浄組成物は液体組成物である。さらに追加的な態様において前記表面活性化物質はエチレンオキサイド部分を含むアルキル硫酸ナトリウム界面活性剤を含む。幾つかの態様において、前記組成物は好適な添加成分を含む。幾つかの好ましい態様において、前記組成物は約０．００１から約０．５重量％のＡＳＰを含む。あるいは、幾つかの好ましい態様において、前記組成物は約０．０１から約０．１重量％のＡＳＰを含む。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
また本発明は、ａ）繊維を含む表面および／または製品を、本発明のセリンプロテアーゼを適当量含む洗浄組成物に接触させる工程、ｂ）任意に、物質の表面を洗浄および／またはすすぐ工程を含む洗浄方法を提供する。別な態様において、本発明で提供される任意の好適な組成物はこれらの方法に使用される。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
本発明は、配列番号８で示されるアミノ酸配列をもつ、蛋白分解活性を有する単離ポリペプチド（例えば、プロテアーゼ）を提供する。幾つかの態様において、本発明は配列番号８で示される配列と約４０％から９８％の同一性を有する単離ポリペプチドを提供する。幾つかの好ましい態様において、本発明は配列番号８で示される配列と約５０％から９５％の同一性を有する単離ポリペプチドを提供する。幾つかの追加的な好ましい態様において、本発明は配列番号８で示される配列と約６０％から９０％の同一性を有する単離ポリペプチドを提供する。さらに追加的な態様において、本発明は配列番号８で示される配列と約６５％から８５％の同一性を有する単離ポリペプチドを提供する。幾つかの特に好ましい態様において、本発明は配列番号８で示される配列と約９０％から９５％の同一性を有する単離ポリペプチドを提供する。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
別な態様において、前記プロテアーゼはエルスコビア種に由来する。幾つかの好ましい態様において、前記エルスコビア種は、エルスコビア・ジエネンシス（jenensis）、エルスコビア・パウロメタボラ（paurometabola）、エルスコビア・エンテロフィラ（enterophila）、エルスコビア・トゥルバタ（turbata）、およびエルスコビア・トゥルバタ株ＤＳＭ２０５７７から選択される。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
さらに本発明は、配列番号８と４０％以上同一なアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含むプロテアーゼをコードする単離ポリペプチドを提供する。幾つかの態様において、前記プロテアーゼは配列番号８と５０％以上同一なアミノ酸配列を有する。幾つかの態様において、配列番号８と６０％以上同一なアミノ酸配列を有する。幾つかの態様において、配列番号８と７０％以上同一なアミノ酸配列を有する。幾つかの態様において、配列番号８と８０％以上同一なアミノ酸配列を有する。幾つかの態様において、配列番号８と９０％以上同一なアミノ酸配列を有する。幾つかの態様において、配列番号８と９５％以上同一なアミノ酸配列を有する。また本発明は、上述のように提供される任意のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
さらに本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼが宿主細胞で発現されるように本発明の発現ベクターで形質転換した宿主細胞を提供する。幾つかの態様において、前記宿主細胞は細菌であり、他の態様においては真菌である。幾つかの好ましい態様において、細菌宿主細胞は、バチルスおよびストレプトマイセス属からなる群から選択される。幾つかの別な好ましい態様において、前記真菌宿主細胞はトリコデルマ属のなかまであり、他の別な好ましい態様において、前記真菌宿主細胞はアスペルジルス属のなかまである。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
また本発明は、（ｉ）配列番号３または４と７０％以上の同一性、または（ｉｉ）中程度から高度のストリンジェントな条件下で配列番号３または４で開示されたヌクレオチド配列に由来するプローブとハイブリダイズできる、または（ｉｉｉ）配列番号３または４で開示されたヌクレオチド配列と相補的である、ヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの態様において、本発明はそのようなポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。更なる態様において、本発明はそのようなベクターで形質転換した宿主細胞を提供する。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
さらに本発明は、プロテアーゼ活性を有する少なくとも１つの酵素を製造する方法であって、配列番号４と７０％以上同一性を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、前記プロテアーゼを生産する宿主細胞に好適な条件下で形質転換細胞を培養する工程、および前記プロテアーゼを回収する工程を含む方法を提供する。幾つかの好ましい態様において前記宿主細胞はストレプトマイセス種であり、他の態様において前記宿主細胞はバチルス種、トリコデルマ種、および／またはアスペルジルス種である。幾つかの態様において、前記ストレプトマイセス種はストレプトマイセス・リビダンス（lividans）である。別な態様において、前記宿主細胞はトリコデルマ・リーセイ（T.reesei）である。更なる態様において、前記アスペルジルス種はアスペルジルス・ニジェ（A.niger）である。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
さらに本発明は、配列番号１、２、３、または４の断片に実質的に同一なポリヌクレオチドを含む少なくとも１つのプローブを提供する。ここで、前記プローブは蛋白分解活性をもつ酵素をコードする核酸配列を検出するために用いられ、前記核酸配列は細菌試料から得られる。幾つかの態様において、前記細菌試料はセルロモナス種である。幾つかの好ましい態様において、前記細菌試料はセルロモナス株６９Ｂ４である。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
さらに本発明は、本発明において提供される少なくとも１つのプロテアーゼを含む組成物を提供する。幾つかの好ましい態様において、前記組成物は洗浄組成物である。幾つかの態様において、本発明は、配列番号８と４０％以上の配列同一性、配列番号８と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの洗浄有効量のプロテアーゼを含む洗浄組成物を提供する。幾つかの態様において、前記洗浄組成物はさらに少なくとも１つの好適な洗浄添加物を含む。幾つかの態様において、前記プロテアーゼはセルロモナス種に由来する。幾つかの好ましい態様において、前記セルロモナス種は、セルロモナス・フィミ、セルロモナス・ビアゾテア、セルロモナス・セラシア、セルロモナス・ホミニス、セルロモナス・フラビゲナ、セルロモナス・ペルシカ、セルロモナス・イラネンシス、セルロモナス・ゲリダ、セルロモナス・フミラタ、セルロモナス・トゥルバタ、セルロモナス・ウダ、およびセルロモナス株６９Ｂ４（ＤＳＭ１６０３５）から選択される。幾つかの特に好ましい態様において、前記セルロモナス種はセルロモナス株６９Ｂ４である。より更なる態様において、前記洗浄組成物は、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、およびセルラーゼからなる群から選択される一つ以上の追加の酵素または酵素誘導体をさらに含む。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
また本発明は、配列番号８と４５％以上の配列同一性、配列番号８と６０％以上の配列同一性、配列番号８と７５％以上の配列同一性、配列番号８と９０％以上の配列同一性、配列番号８と９５％以上の配列同一性、および／または配列番号８と配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離天然由来プロテアーゼを提供する。ここで、前記プロテアーゼはセルロモナス種から単離される。幾つかの態様において、前記プロテアーゼはセルロモナス株６９Ｂ４（ＤＳＭ１６０３５）から単離される。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
追加的な態様において、本発明は、本発明のセリンプロテアーゼの遺伝工学的変異体を提供する。幾つかの態様において前記遺伝工学的変異体は組換えＤＮＡ技術を用いて遺伝的に改変されており、他の態様において前記変異体は天然由来である。さらに本発明は類似酵素の遺伝工学的変異体も含む。幾つかの態様において前記遺伝工学的変異体類似プロテアーゼは組換えＤＮＡ技術を用いて遺伝的に改変されており、他の態様において前記変異体類似プロテアーゼは天然由来である。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
さらに本発明は、（ｉ）配列番号９と７０％以上の配列同一性を有する、または（ｉｉ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で配列番号９をコードするポリペプチド配列由来のプローブとハイブリダイズできる、または（ｉｉｉ）配列番号９で示されるポリペプチド配列に相補的な、シグナルペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを提供する。更なる態様において、本発明は上述のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。より追加的な態様において、前記ベクターにより形質転換された宿主細胞が提供される。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
また本発明は、（ａ）配列番号４と７０％以上の配列同一性を有するポリヌクレオチド、配列番号４と９５％以上の配列同一性を有するポリヌクレオチド、および／または配列番号４のポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、を含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、（ｂ）宿主細胞が前記プロテアーゼを生産するのに好適な条件下で前記形質転換宿主細胞を培養する工程、（ｃ）前記プロテアーゼを回収する工程を含むプロテアーゼ生産方法を提供する。幾つかの態様において、前記宿主細胞はバチルス種（例えば、バチルス・スブチリス、バチルス・クラウシ（clausii）、またはバチルス・リケニフォルミス（licheniformis））である。別な態様において、前記宿主細胞はストレプトマイセス種（例えば、ストレプトマイセス・リビダンス）である。追加的な態様において、前記宿主細胞はトリコデルマ種（例えば、トリコデルマ・リーセイ）である。更なる態様において、前記宿主細胞はアスペルジルス種（例えば、アスペルジルス・ニジェ）である。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
理解されるように、本発明の利点はセリンプロテアーゼ活性を有するタンパク質をコードする更なるポリヌクレオチドを単離することを可能にするポリヌクレオチドが単離されたことであり、ここでその背景は本発明のセルモナス・プロテアーゼと本質的に同様である。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
本発明は、配列番号８で示されるアミノ酸配列をもつ、蛋白分解活性を有する単離ポリペプチド（例えば、プロテアーゼ）を提供する。幾つかの態様において、本発明は配列番号８で示される配列と約４０％から９８％の同一性を有する単離ポリペプチドを提供する。幾つかの好ましい態様において、前記ポリペプチドは配列番号８で示される配列と約５０％から９５％の同一性を有する。幾つかの追加的な好ましい態様において、前記ポリペプチドは配列番号８で示される配列と約６０％から９０％の同一性を有する。さらに追加的な態様において、前記ポリペプチドは配列番号８で示される配列と約６５％から８５％の同一性を有する。幾つかの特に好ましい態様において、前記ポリペプチドは配列番号８で示される配列と約９０％から９５％の同一性を有する。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
別な態様において、前記プロテアーゼはエルスコビア種由来である。幾つかの好ましい態様において、前記エルスコビア種は、エルスコビア・ジエネンシス、エルスコビア・パウロメタボラ、エルスコビア・エンテロフィラ、エルスコビア・トゥルバタ、およびエルスコビア・トゥルバタ株ＤＳＭ２０５７７から選択される。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
さらに本発明は、配列番号８と４０％以上のアミノ酸配列同一性を含むアミノ酸配列を含むプロテアーゼをコードする単離ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの態様において、前記プロテアーゼは配列番号８と５０％以上のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの態様において、配列番号８と６０％以上のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの態様において、配列番号８と７０％以上のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの態様において、配列番号８と８０％以上のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの態様において、配列番号８と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの態様において、配列番号８と９５％以上のアミノ酸配列同一性を有する。また本発明は、上述のように提供される任意のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
さらに本発明は、少なくとも１つのプロテアーゼが宿主細胞で発現されるように本発明の発現ベクターで形質転換した宿主細胞を提供する。幾つかの態様において、前記宿主細胞は細菌であり、他の態様においては真菌である。幾つかの好ましい態様において、前記細菌宿主細胞は、バチルスおよびストレプトマイセス属からなる群から選択される。幾つかの別な好ましい態様において、前記真菌宿主細胞はトリコデルマ属のなかまであり、他の別な好ましい態様において、前記真菌宿主細胞はアスペルジルス属のなかまである。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
また本発明は、（ｉ）配列番号３または４と７０％以上の同一性、または（ｉｉ）中程度から高度のストリンジェントな条件下で配列番号３または４で開示されたヌクレオチド配列に由来するプローブとハイブリダイズできる、または（ｉｉｉ）配列番号３または４で開示されたヌクレオチド配列と相補的である、ヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの態様において、本発明はそのようなポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。更なる態様において、本発明はそのようなベクターで形質転換した宿主細胞を提供する。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
さらに本発明は、プロテアーゼ活性を有する少なくとも１つの酵素を製造する方法であって、配列番号４と７０％以上の同一性を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、前記プロテアーゼを生産する宿主細胞に好適な条件下で形質転換細胞を培養する工程、および前記プロテアーゼを回収する工程を含む方法を提供する。幾つかの好ましい態様において前記宿主細胞はストレプトマイセス種であり、他の態様において前記宿主細胞はバチルス種、トリコデルマ種、および／またはアスペルジルス種である。幾つかの態様において、前記ストレプトマイセス種はストレプトマイセス・リビダンスである。別な態様において、前記宿主細胞はトリコデルマ・リーセイである。更なる態様において、前記アスペルジルス種はアスペルジルス・ニジェである。
また本発明は、本発明で提供されるプロテアーゼをコードするＤＮＡの断片（すなわち、部分）を提供する。これらの断片は、セルロモナス６９Ｂ４から、または蛋白分解活性を有するそれらのセグメントから本発明で記載される成熟プロテアーゼ酵素をコードするポリヌクレオチドを単離または同定するために用いることができる部分長ＤＮＡを得るために用いられる。幾つかの態様において、配列番号１で提供されるＤＮＡの部分は、他種から、特に蛋白分解活性を有するプロテアーゼまたはそれらの部分をコードするミクロコシニアエ種から、ＤＮＡの相同性断片を得るのに用いられる。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
さらに本発明は、配列番号１、２、３、または４の断片に実質的に同一なポリヌクレオチドを含む少なくとも１つのプローブを提供する。ここで、前記プローブは蛋白分解活性をもつ酵素をコードする核酸配列を検出するために用いられ、前記核酸配列は細菌試料から得られる。幾つかの態様において、前記細菌試料はセルロモナス種である。幾つかの好ましい態様において、前記細菌試料はセルロモナス株６９Ｂ４である。
さらに本発明は、本発明において提供される少なくとも１つのプロテアーゼを含む組成物を提供する。幾つかの好ましい態様において、前記組成物は洗浄組成物である。幾つかの態様において、本発明は、配列番号８と４０％以上の配列同一性、配列番号８と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの洗浄有効量のプロテアーゼを含む洗浄組成物を提供する。幾つかの態様において、前記洗浄組成物はさらに少なくとも１つの好適な洗浄添加物を含む。幾つかの態様において、前記プロテアーゼはセルロモナス種に由来する。幾つかの好ましい態様において、前記セルロモナス種は、セルロモナス・フィミ、セルロモナス・ビアゾテア、セルロモナス・セラシア、セルロモナス・ホミニス、セルロモナス・フラビゲナ、セルロモナス・ペルシカ、セルロモナス・イラネンシス、セルロモナス・ゲリダ、セルロモナス・フミラタ、セルロモナス・トゥルバタ、セルロモナス・ウダ、およびセルロモナス株６９Ｂ４（ＤＳＭ１６０３５）から選択される。幾つかの特に好ましい態様において、前記セルロモナス種はセルロモナス株６９Ｂ４である。より更なる態様において、前記洗浄組成物は、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、およびセルラーゼからなる群から選択される一つ以上の追加の酵素または酵素誘導体をさらに含む。
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
また本発明は、配列番号８と４５％以上の配列同一性、配列番号８と６０％以上の配列同一性、配列番号８と７５％以上の配列同一性、配列番号８と９０％以上の配列同一性、配列番号８と９５％以上の配列同一性、および／または配列番号８と配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離天然由来プロテアーゼを提供する。ここで、前記プロテアーゼはセルロモナス種から単離される。幾つかの態様において、前記プロテアーゼはセルロモナス株６９Ｂ４（ＤＳＭ１６０３５）から単離される。
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
追加的な態様において、本発明は、本発明のセリンプロテアーゼの遺伝工学的変異体を提供する。幾つかの態様において前記遺伝工学的変異体は組換えＤＮＡ技術を用いて遺伝的に改変されており、他の態様において前記変異体は天然由来である。さらに本発明は類似酵素の遺伝工学的変異体も含む。幾つかの態様において前記遺伝工学的変異体類似プロテアーゼは組換えＤＮＡ技術を用いて遺伝的に改変されており、他の態様において前記変異体類似プロテアーゼは天然由来である。
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
さらに本発明は、（ｉ）配列番号９と７０％以上の配列同一性を有する、または（ｉｉ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で配列番号９をコードするポリペプチド配列由来のプローブとハイブリダイズできる、または（ｉｉｉ）配列番号９で示されるポリペプチド配列に相補的な、シグナルペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを提供する。更なる態様において、本発明は上述のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。より追加的な態様において、前記ベクターにより形質転換された宿主細胞が提供される。
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
また本発明は、（ａ）配列番号４と７０％以上の配列同一性を有するポリヌクレオチド、配列番号４と９５％以上の配列同一性を有するポリヌクレオチド、および／または配列番号４のポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、を含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換させる工程、（ｂ）宿主細胞が前記プロテアーゼを生産するのに好適な条件下で前記形質転換宿主細胞を培養する工程、（ｃ）前記プロテアーゼを回収する工程を含むプロテアーゼ生産方法を提供する。幾つかの態様において、前記宿主細胞はバチルス種（例えば、バチルス・スブチリス、バチルス・クラウシ、またはバチルス・リケニフォルミス）である。別な態様において、前記宿主細胞はストレプトマイセス種（例えば、ストレプトマイセス・リビダンス）である。追加的な態様において、前記宿主細胞はトリコデルマ種（例えば、トリコデルマ・リーセイ）である。更なる態様において、前記宿主細胞はアスペルジルス種（例えば、アスペルジルス・ニジェ）である。
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
理解されるように、本発明の利点はセリンプロテアーゼ活性を有するタンパク質をコードする更なるポリヌクレオチドを単離することを可能にするポリヌクレオチドが単離されたことであり、ここでその背景は本発明のセルモナス・プロテアーゼと本質的に同様である。
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１４】
発明の詳細な説明
本発明は、新規なセリンプロテアーゼ、これらの酵素をコードする新規な遺伝子材料、およびセルロモナス種を含むが、これに限定されないミクロコシニアエ種から得られる蛋白分解性タンパク質、およびそれら由来の変異体タンパク質を提供する。特に本発明は、セルロモナス種から得られたプロテアーゼ組成物、ＤＮＡがコードするプロテアーゼ、該ＤＮＡがコードするプロテアーゼを含むベクター、前記ベクターＤＮＡにより形質転換した宿主細胞、および該宿主細胞により生産された酵素を提供する。また本発明は、セルロモナス種を含むが、これに限定されないミクロコシニアエ種から得られる洗浄組成物（例えば、洗剤組成物）、動物飼料組成物、並びに繊維および皮革加工組成物を提供する。別な態様において、本発明は、本発明で記載される野生型プロテアーゼ由来のミュータント（すなわち、変異体）プロテアーゼを提供する。これらのミュータント・プロテアーゼも多くの応用に用いられる。
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２５】
本発明で用いられるように、「ＡＳＰプロテアーゼ」、「Ａｓｐプロテアーゼ」、および「Ａｓｐ」という用語は本発明で記載されるセリンプロテアーゼのことをいう。幾つかの好ましい態様において、Ａｓｐプロテアーゼはセルロモナス６９Ｂ４株から得られる６９Ｂ４プロテアーゼとして本発明において設計されたプロテアーゼである。したがって、好ましい態様において、「６９Ｂ４プロテアーゼ」という用語は、配列番号８で示されるアミノ酸配列に実質的に同一なアミノ酸配列を有するセルロモナス６９Ｂ４（DSM１６０３５）株由来の天然発生成熟タンパク質のことをいう。別な態様において、本発明はＡＳＰプロテアーゼの部分を提供する。
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２６】
「セルロモナス・プロテアーゼ相同体」という用語は、そのような天然発生プロテアーゼをコードするセルロモナス６９Ｂ４株またはポリヌクレオチド配列由来の天然プロテアーゼと実質的に同一なアミノ酸配列を有する天然発生プロテアーゼであり、このプロテアーゼはそのような核酸でコードされるセリンプロテアーゼの機能特性を保持しているもののことをいう。幾つかの態様において、これらのプロテアーゼ相同体は「セルロモナディン」と呼ばれる。
【誤訳訂正５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３１】
本発明において互換的に用いられる「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドのポリマー状形態である、リボヌクレオチド、またはデオキシヌクレオチドの両方のことをいう。これらの用語には、一本鎖、二本鎖、または三本鎖ＤＮＡ、遺伝子ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、並びにプリンおよびピリミジン塩基、または他の天然の、化学的、生化学的に修飾された非天然または誘導化塩基が含まれるが、これらに限定されない。以下にポリヌクレオチドの非限定的な具体例を示す。すなわち、遺伝子、遺伝子断片、クロモソーム断片、ＥＳＴ、エクソン、イントロン、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボゾーム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意配列の単離ＤＮＡ、任意配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマーである。幾つかの態様において、ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体のような修飾ヌクレオチド、ウラシル、フルオロリボースおよびチオエート（thioate）のような他の糖および結合基、およびヌクレオチド分枝を含む。別な態様において、ヌクレオチド配列は非ヌクレオチド成分により分断されている。
【誤訳訂正５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３２】
本発明で用いられるように、「ＤＮＡ構築体（construct）」および「形質転換（transforming）ＤＮＡ」という用語は、宿主細胞または生物体に配列を導入するために用いられるＤＮＡのことをいう。このＤＮＡは、当業者に既知のin vitro ＰＣＲまたは任意の他の適切な技術によって生成することができる。特に好ましい態様において、前記ＤＮＡ構築体は関心のある配列（例えば、導入配列として）を含む。幾つかの態様において、前記配列は、制御因子（例えば、プロモータ等）のような追加的な因子に人的に結合されている。前記ＤＮＡ構築体はさらに選択可能マーカーを含むことができる。さらにホモロジー・ボックスを脇に備えた導入配列を含むことができる。更なる態様において、前記形質転換ＤＮＡは、末端に追加した他の非相同性の配列（例えば、挿入配列（stuffer sequence）または隣接配列（flanks））を含む。幾つかの態様において、導入配列の末端は、形質転換ＤＮＡが閉環を形成するように閉じられている。前期形質転換配列は野生型でも変異体または修飾体でもよい。幾つかの態様において、前記ＤＮＡ構築体は非相同性配列を含む。一旦ＤＮＡ構築体がin vitroで組立てられると、これを、１）異種配列を宿主細胞の所望の標的配列に挿入するため、２）宿主細胞クロモソームのある領域に突然変異を誘発させるため（すなわち、内生配列を異種配列で置換するため）、３）標的遺伝子を除去し、および／または宿主細胞に複製プラスミドを導入するために用いることができる。
【誤訳訂正５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３６】
本発明で用いられるように、細胞に核酸を導入するという文脈において「導入される」という用語は、細胞に核酸を移転させるのに好適な任意の方法のことをいう。そのような導入のための方法には、プロトプラスト融合、トランスフェクション（transfection）、形質転換（transformation）、接合（conjugation）、および形質導入（transduction）が含まれるが、これらに限定されない（例えば、ハードウッド他編「バチルス」（プレナム出版）中のフェラーリ他著「遺伝学」、５７−７２頁、１９８９年を参照されたい。）。
【誤訳訂正６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４３】
本発明で用いられるように、「相同性（homologous）遺伝子」という用語は、互いに対応し、互いに同一か非常に類似している、異なっているが通常関連する種から得られる一対の遺伝子のことをいう。この用語は、遺伝的複製により分離されてきた遺伝子（例えば、パラログ遺伝子）と同様に種形成（すなわち、新種の発生）により分離した遺伝子（オーソログ遺伝子）を含む。
【誤訳訂正６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４４】
本発明で用いられるように、「オーソログ」および「オーソログ遺伝子」は、共通の先祖遺伝子（すなわち、相同性遺伝子）から種形成により進化してきた異種の遺伝子のことをいう。具体的には、オーソログ遺伝子は進化過程の間に同様の機能を保持した。オーソログ遺伝子の同定は新しくシークエンスされたゲノムにおける遺伝子機能の信頼性のある予測に用いられる。
【誤訳訂正６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４６】
本発明で用いられるように、「相同性」は、同一性が好ましいが、配列類似性または同一性のことをいう。この相同性は当該技術分野で既知の標準技術を用いて決定される（例えば、スミスおよびウォーターマン著、アドバンスト・アプライド・マスマティクス（Adv.Appl.Math.）、２巻、４８２頁、１９８１年；ニードルマンおよびウンシュ（Wunsch）著、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J.Mol.Biol.）、４８巻、４４３頁、１９７０年；ウィスコンシン・ジェネティクス・ソフトウエア・パッケージ（ジェネティクス・コンピュータ・グループ社、マディソン、ウィスコンシン州）におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡのようなプログラム；およびドブリュー（Devereux）他著、ニュクレイック・アシッド・リサーチ（Nucl.Acid.Res.）、１２巻、３８７−３９５頁、１９８４年）。
【誤訳訂正６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４７】
本発明で用いられるように、「類似体配列」はセルロモナス６９Ｂ４株プロテアーゼに基づく遺伝子と実質的に同じ遺伝子の機能をもつものをいう。追加的に、類似体遺伝子はセルロモナス６９Ｂ４株プロテアーゼ配列と少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む。あるいは、類似体配列はセルロモナス６９Ｂ４株プロテアーゼ領域に認められる遺伝子の７０〜１００％のアラインメント（alignment）を有し、および／またはセルロモナス６９Ｂ４株クロモソームにおける遺伝子と一致する領域に認められる少なくとも５〜１０の遺伝子を有する。追加的な態様において、上記特性のうちの１つ以上が前記配列に適用される。類似体配列は配列アラインメント（alignment）の既知の方法により決定される。通常用いられるアラインメント方法はＢＬＡＳＴである。もっとも、前述または後述するように配列アラインメントに用いられる他の方法もある。
【誤訳訂正６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４９】
他の有用なアルゴリズムの具体例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、アルツール（Altschul）他により記述されている（アルツール他著、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー、２１５巻、４０３−４１０頁、１９９０年；およびカーリン（karlin）他著、プロシーデングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・サイエンス（Poc.Natl.Acad.Sci.）ＵＳＡ、９０巻、５８７３−５８８７頁、１９９３年）。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムはＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２プログラムである（アルツール他著、メソッド・オブ・エンザイモロジー（Meth.Enzymol.）、２６６巻、４６０−４８０頁、１９９６年）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は幾つかの検索パラメータを用い、これらのほとんどはデフォルト値に設定されている。調整可能なパラメータは以下の値に設定される。すなわち、オーバラップ・スパン＝１、オーバラップ・フラクション＝０．１２５、ワード・スレショールド（word threshold）（Ｔ）＝１１である。ＨＳＰ ＳおよびＨＳＰ Ｓ２パラメータは動的な値であり、配列の特定の構成、および関心のある配列を検索する特定のデータベースの構成に依存してプログラム自体により設定される。しかしながら、これらの値は感度を上げるために調整される。％アミノ酸配列同一性値は、アラインされる領域における一致する同一な残基数を「より長い」配列の残基総数で除することにより決定される（アラインメント・スコアを最大化するためにＷＵ−Ｂｌａｓｔ−２により導入されるギャップは無視される）。
【誤訳訂正６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５０】
したがって、「パーセント（％）核酸配列同一性」は出発配列（すなわち、関心のある配列）の核酸残基と同一な候補配列における核酸残基の百分率として定義される。このましい方法は、オーバラップ・スパンおよびオーバラップ・フラクションがそれぞれ１および０．１２５に設定され、デフォルト・パラメータに設定されたＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２のＢＬＡＳＴＮモジュールを利用する。
【誤訳訂正６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５２】
中程度から高度にストリンジェントなハイブリダイゼーションまたは洗浄条件下において２つの配列が特異的に相互にハイブリダイズするなら、ある核酸配列は対照核酸配列に「選択的にハイブリダイズする」と考えられる。ハイブリダイゼーション条件は複合体またはプローブに結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）に基づいている。例えば、「最大ストリンジェンシー」典型的には約Ｔｍ−５℃（プローブのＴｍの５℃下）で起こり、「高度ストリンジェンシー」はＴｍより約５−１０℃下であり、「中程度ストリンジェンシー」はプローブのＴｍより約１０−２０℃下であり、「低度ストリンジエンシー」はＴｍより約２０−２５℃下である。機能的に最大のストリンジェンシー条件はハイブリダイゼーション・プローブと厳格な同一性（strict identity）またはほぼ厳格な同一性（near-strict identity）を有する配列の同定のために用いることができ、一方、中程度または程度ストリンジェントのハイブリダイゼーションはポリヌクレオチド配列の相同体の検出または同定に用いることができる。
【誤訳訂正６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５４】
本発明で用いられるように、「組換え体」には、異種核酸配列の導入により改変され、その細胞がそのように改変された細胞由来の、細胞またはベクターのことをいうことが含まれる。したがって、例えば、故意の人為的な介在により発現され、または全く発現されない条件下において、組換え細胞は細胞の自然な（非遺伝子組換えの）状態では同一の形態で認められない遺伝子を発現するか、または他の異常に発現した自然な遺伝子を発現する。「遺伝子組換え」、「遺伝子組換えする」、および「遺伝子組換え」された核酸を生成するということは、一般的に構築がキメラ遺伝子を生じる２以上の核酸断片の構築のことをいう。
【誤訳訂正６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５５】
好ましい態様において、突然変異ＤＮＡ配列は１つ以上のコドンにおいて部位飽和突然変異（site saturation mutagenesis）を伴い生じる。他の好ましい態様において、部位飽和突然変異は２以上のコドンに対して起こる。更なる態様において、突然変異ＤＮＡ配列は、５０％より高い、５５％より高い、６０％より高い、６５％より高い、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、９５％より高い、９８％より高い、野生型との相同性を有する。別な態様において、突然変異ＤＮＡは、例えば放射線、ニトロソグアニジンなどのような任意の既知の突然変異操作を用いてin vivoで発生する。所望のＤＮＡ配列はつぎに単離され、本発明において提供される方法において用いられる。
【誤訳訂正６９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６６】
本発明で用いられるように、「プライマー」という用語は、精製された制限消化物に当然に生じ、または合成的に生産したの如何を問わず、核酸一本鎖に相補的なプライマー延長生成物の合成が誘導される条件下に置かれた時に（すなわち、ヌクレオチドおよびＤＮＡポリメラーゼのような誘導剤の存在下で、適当な温度およびｐＨにおいて）合成開始点として働くことができるオリゴヌクレオチドのことをいう。前記プライマーは増幅の最大の効果のために好ましくは一本鎖であるが、あるいは、二本鎖であることもできる。二本鎖である場合には、前記プライマーは延長生成物を調製ために用いられる前にその二本鎖を分離するために処理される。前記プライマーは、誘導剤存在下において延長生成物の合成を開始するのに十分な長さを有さなければならない。前記プライマーの正確な長さは、温度、プライマー源、および使用方法を含む多くの要因に依存することになる。
【誤訳訂正７０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６７】
本発明で用いられるように、「プローブ」という用語は、精製された制限消化物に当然に生じ、または遺伝子組換え的またはＰＣＲ増幅により合成的に生産したの如何を問わず、関心のある他のオリゴヌクレオチドをハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチドのことをいう。プローブは一本鎖でも二本鎖でもよい。プローブは検出、同定、および特定遺伝子配列の単離に有用である。本発明で用いられる任意のプローブは、酵素（例えば、酵素に基づく組織化学的アッセイと同様にＥＬＩＳＡ）、蛍光、放射活性、および発光系を含むが、これらに限定されない任意の検出系で検出できるように任意の「レポーター分子」で標識されることになると考えられる。本発明は如何なる特定の検出系または標識にも限定されることを意図していない。
【誤訳訂正７１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７２】
本発明で用いられるように、「ＰＣＲ生成物」、「ＰＣＲ断片」、および「増幅生成物」という用語は変性、アニーリング及びエクステンションのＰＣＲ段階の二以上のサイクルが完了後、得られる化合物の混合物をいう。これらの用語は一以上の標的配列の一以上のセグメントの増幅の場合も含む。
本発明にて用いるように、「ＲＴ−ＰＣＲ」という用語は、ＲＮＡ配列の複製および増幅のことをいう。この方法において、米国特許５，３２２，７７０号に記述されるように（本発明に参照により取り込まれる）、温度安定なポリメラーゼが採用される１酵素操作を最もよく用いて、逆転写はＰＣＲと組み合わされている。ＲＴ−ＰＣＲにおいて、前記ＲＮＡ鋳型はポリメラーゼの逆転写酵素活性のためにｃＤＮＡに変換され、つぎにポリメラーゼの重合活性を用いて増幅される（すなわち、他のＰＣＲ法におけるように）。
【誤訳訂正７２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７６】
「相同性組換え」は、同一またはほぼ同一なヌクレオチド配列の部位における、２つのＤＮＡ分子または対のクロモソームの間のＤＮＡ断片の交換のことを意味する。好ましい態様において、クロモソーム組み込みは相同性組換えである。
【誤訳訂正７３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７７】
「相同性配列」は本発明において、比較のための最適な位置合わせが行われる時に、他の核酸またはポリペプチド配列と、１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８８％、８５％、８０％、７５％、または７０％同一な配列を有する核酸またはポリペプチド配列のことを意味するように用いられる。幾つかの態様において相同性配列は８５％から１００％の配列同一性を有し、一方、他の態様において９０％から１００％の配列同一性が存在する。またより好ましい態様において、９５％から１００％の配列同一性が存在する。
【誤訳訂正７４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８０】
本発明で用いられるように、「相同タンパク質」という用語は、未処理または細胞に自然に生成するタンパク質またはポリペプチドのことをいう。好ましい態様において前記細胞はグラム陽性細胞であり、一方、特に好ましい態様において、前記細胞はバチルス宿主細胞である。別な態様において前記相同タンパク質は他の生物体により生成された未処理のタンパク質であり、Ｅ．コーリ、ストレプトマイセス、トリコデルマ、およびアスペルジルスが含まれるが、これらに限定されない。本発明は組換えＤＮＡ技術を介して相同タンパク質を生成する宿主細胞を含む。
【誤訳訂正７５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８５】
「調節領域」または「調節配列」または「発現制御配列」という用語は、コードされたアミノ酸配列の発現を奏功させるポリペプチド鎖のアミノ酸配列をコードする、ＤＮＡのポリヌクレオチド配列に操作可能に結合されているＤＮＡのポリヌクレオチド配列のことをいう。調節配列はアミノ酸をコードする操作可能に結合されたポリヌクレオチド配列の発現を阻害、抑制、または促進することができる。
【誤訳訂正７６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９３】
タンパク質またはペプチドの「成熟」形態とは、タンパク質またはペプチドの最終的な機能形態のことをいう。例えば、本発明のプロテアーゼの成熟形態は少なくとも配列番号８の残基位置１−１８９に同一なアミノ酸配列を含む。
【誤訳訂正７７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９５】
「自然に生成する酵素」とは、自然状態で認められるものに同一な非改変のアミノ酸配列を有する酵素のことをいう。自然に生成する酵素には、特定の微生物において自然に発現され、認められる未処理酵素が含まれる。
【誤訳訂正７８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９８】
「機能的な誘導体」という用語は、セリンプロテアーゼをコードする核酸の機能的な特徴を有する核酸誘導体のことをいう。本発明のセリンプロテアーゼをコードする核酸の機能的な誘導体は自然発生、合成的または遺伝子組換え的に生産された核酸または断片を含み、本発明のセリンプロテアーゼの特徴をコードする。本発明にしたがってセリンプロテアーゼをコードする野生型の核酸は自然発生アレル（allele）および当該技術分野で知られている遺伝コードの縮重に基づく相同体を含む。
【誤訳訂正７９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９９】
２つの核酸またはポリペプチド配列という文脈における「同一の」という用語は、以下の配列比較または分析アルゴリズムのいずれかを用いて測定した、最大一致の位置合わせの場合に、同一である２つの配列における残基のことをいう。
【誤訳訂正８０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２００】
「最適アラインメント」という用語は最高のパーセント同一性スコアを与えるアラインメントのことをいう。
【誤訳訂正８１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０１】
２つのアミノ酸、ポリヌクレオチドおよび／または遺伝子配列（適当な場合に）に関連して、「パーセント配列同一性」、「パーセントアミノ酸配列同一性」、および／または「パーセント核酸／ポリヌクレオチド配列同一性」とは、配列が最適アラインメントされるときに２つの配列における同一な残基のパーセンテージのことをいう。したがって、８０％アミノ酸配列同一性は２つの最適アラインメントされたポリペプチド配列において８０％のアミノ酸が同一であることをいう。
【誤訳訂正８２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０２】
したがって、２つの核酸またはポリペプチド配列という文脈における「実質的に同一の」という用語は、標準パラメータを使用したプログラムまたはアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＣＬＵＳＴＡＬ）を用いて参照配列と比較するときに、７０％以上の配列、好ましくは７５％以上、好ましくは８０％以上、好ましくは８５％以上、好ましくは９０％以上、好ましくは９５％以上、好ましくは９７％以上、好ましくは９８％以上、および好ましくは９９％以上の配列同一性を含むポリヌクレオチドまたはポリペプチドのことをいう。２つのポリペプチドが実質的に同一であることが示されると、第一ポリペプチドは第二ポリペプチドと免疫学的に交差反応性であるといえる。具体的には、保存的アミノ酸置換により異なるポリペプチドは免疫学的に交差反応性である。したがって、例えば２つのポリペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合には、あるポリペプチドは第二のポリペプチドと実質的に同一である。また、２つの核酸配列が実質的に同一であるということが示されると、その２つの分子はストリンジェントな条件下で（例えば、中程度から高度ストリンジェンシーの範囲内で）、互いにハイブリダイズする。
【誤訳訂正８３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０３】
この文脈における「等価(equivalent)」という言い方は、中程度から最大のストリンジェンシー条件下で、配列番号１に示される配列を有するポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドによりコードされるセリンプロテアーゼのことをいう。例えば、等価であるということは等価な成熟セリンプロテアーゼが配列番号８のアミノ酸配列を有する成熟セルロモナス・セリンプロテアーゼに対して、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、および／または９９％以上の配列同一性を含むことを意味する。
【誤訳訂正８４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０７】
本発明で用いられるように、「コンビナトリアル突然変異（combinatorial mutagenesis）」という用語は出発配列の変異体ライブラリが発生する方法のことをいう。これらのライブラリにおいて前記変異体は予め定義された突然変異のセットから選択される一つまたは幾つかの突然変異を含む。さらに前記方法は予め定義された突然変異のセットには含まれないランダム突然変異を導入する手段を提供する。幾つかの態様において、前記方法は米国特許出願０９／６９９，２５０号(２０００年１０月２６日出願)に示される方法を含み、本文献は参照により本発明に取り込まれる。別な態様において、コンビナトリアル突然変異法は市販のキット(例えば、クイックチェンジR マルチサイト、ストラタジーン社、サンジエゴ、カリフォルニア州)を含む。
【誤訳訂正８５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０８】
本発明で用いられるように、「変異体ライブラリ」という用語は、ほとんどのゲノムの中で同一であるが、ひとつ以上の遺伝子の異なる相同体を含む多数の細胞のことをいう。そのようなライブラリは、例えば改善された特徴をもつ遺伝子またはオペロンを同定するために用いることができる。
【誤訳訂正８６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１０】
本発明で用いられるように、「多配列アラインメント」（「ＭＳＡ」）という用語はアルゴリズム（例えば、ClustalＷ）を用いて位置あわせされる出発遺伝子の多数の相同体の配列のことをいう。
【誤訳訂正８７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１６】
本発明で用いられるように、「増強コンビナトリアル・コンセンサス突然変異（ＣＣＭ）ライブラリ」という用語は、初期の回のＣＣＭ突然変異およびスクリーニングからのスクリーニングおよび／またはシークエンシング結果に基づいて設計および構築されたＣＣＭライブラリのことをいう。幾つかの態様において、前記増強ＣＣＭライブラリは初期の回のＣＣＭから得られるイニシャル・ヒットの配列に基づいている。更なる態様において、増強ＣＣＭは初期の回の突然変異およびスクリーニングからのイニシャル・ヒットでしばしば観察された突然変異が好ましいように設計されている。幾つかの好ましい態様において、これは能力低下突然変異をコードするプライマーを除くことにより、または初期ＣＣＭライブラリで用いられる他のプライマーと比較して能力増強突然変異をコードするプライマー濃度を増加させることにより達成される。
【誤訳訂正８８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２３】
変化した特性を有する核酸またはタンパク質を得るためのスクリーニング操作が、突然変異核酸の発生がその修飾の促進を意図している出発物質の特性に依存することは当業者にとっては明らかであろう。したがって当業者は、本発明が任意の特性に限定されず、以下の特性の記載が具体的な実施例のみを挙げているにすぎないことを理解できる。任意の特性についてのスクリーニング方法は一般的に当該技術分野において記載されている。例えば、その変化が変異を示す結合、ｐＨ、特異性等を突然変異の前後において測定することができる。好ましくはスクリーニングは、多数サンプルが同時にスクリーニングされることを含むハイスループット様式で、チップを利用するアッセイ、ファージディスプレイ、および多数基質および／または指標を含むがこれらに限定されずに実施される。
【誤訳訂正８９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２５】
本発明で用いられるように、「標的ランダム化」という用語は１つ以上の位置がランダム化される複数の配列を生成する過程のことをいう。幾つかの態様において、ランダム化は完全である（すなわち、四つのヌクレオチドＡ、Ｔ、Ｇ、およびＣの全てがランダム化位置で生じる）。別な態様において、ヌクレオチドのランダム化は四つのヌクレオチドのサブセットに限られている。標的ランダム化は、関心のある１つ以上のタンパク質をコードしている１つ以上の配列のコドンに適用できる。発現の際に、結果として生じるライブラリは、ランダム化されたコドンのランダム化スキームにより決定できる、１つ以上のアミノ酸位置が２０全てのアミノ酸またはアミノ酸サブセットの混合物を含むことができるタンパク質母集団を生成する。幾つかの態様において、標的ランダム化から生じる母集団の個々の構成要素は、標的またはランダム挿入もしくはコドンの削除のためにアミノ酸の構成で異なる。更なる態様において、合成アミノ酸が生成されるタンパク質母集団に含まれる。幾つかの好ましい態様において、標的ランダム化から生じる母集団の大多数の構成要素は出発遺伝子よりもコンセンサス配列に相同な配列が多い。幾つかの態様において、前記配列は１つ以上の関心のあるタンパク質をコードする。別な態様において、前記タンパク質は異なる生物学的機能を有する。幾つかの好ましい態様において、前記外来配列は少なくとも１つの選択可能なマーカーを含む。
【誤訳訂正９０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２６】
「修飾配列」および「修飾遺伝子」という用語は、自然発生の核酸配列の削除、挿入または分断を含む配列と本発明で呼ばれるものに互換的に用いられる。幾つかの好ましい態様において、修飾配列の発現生産物は短縮タンパク質（例えば、もしその修飾か削除または分断ならば）である。幾つかの特に好ましい態様において、前記短縮タンパク質は生物学的活性を保持する。別な態様において、修飾配列の発現生産物は延長タンパク質（例えば、核酸配列への挿入を含む修飾）である。幾つかの態様において、挿入により短縮タンパク質（例えば、挿入が停止コドンの生成を生じる場合）が生じる。したがって、挿入により発現生産物として短縮タンパク質または延長タンパク質のいずれかが生じる。
【誤訳訂正９１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２８】
「突然変異誘発性（mutagenic）プライマー」または「突然変異誘発性オリゴヌクレオチド」（本発明で互換的に用いられる）は、鋳型配列の一部分に相当し、それらにハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチド組成物のことをいうことを意図している。突然変異誘発性プライマーに関して、このプライマーは鋳型核酸に正確にマッチせず、プライマーにおける一つ以上のミスマッチは核酸ライブラリに所望の突然変異を導入することに用いられる。本発明で用いられるように、「非突然変異誘発性プライマー」または「非突然変異誘発性オリゴヌクレオチド」は、鋳型核酸に性格にマッチするオリゴヌクレオチド組成物のことをいう。本発明の１つの態様において、突然誘発性プライマーのみが用いられる。本発明の他の好ましい態様において、前記プライマーは、突然変異誘発性プライマーが含まれる１つ以上の領域についてオリゴヌクレオチド混合物に非突然誘発性プライマーも含まれるように設計される。少なくとも１つの突然変異誘発性プライマーに相当する突然変異誘発性プライマーおよび非突然変異誘発性プライマーの混合物を加えることにより、様々な組み合わせの突然変異パターンが存在する結果としての核酸ライブラリを生産することが可能である。例えば、突然変異核酸ライブラリのある構成要素がある部位でその前駆体配列を保持する一方で、他の構成要素がそのような部位で突然変異であることが望ましいならば、前記非突然変異誘発性プライマーは一定の残基のための核酸ライブラリの範囲内で特定レベルの非突然変異構成要素を得る能力を提供する。本発明の方法は、一般的に１０−５０塩基長の、より好ましくは１５−４５塩基長の突然変異誘発性および非突然変異誘発性オリゴヌクレオチドを用いる。しかしながら、望ましい結果の突然変異を得るために１０塩基長より短いか、５０塩基長よりも長いかいずれかのプライマーを用いることが必要かもしれない。対応する突然変異誘発性および非突然変異誘発性プライマーに関して、対応するオリゴヌクレオチドが同じ長さである必要はなく、加えられる突然変異に相当する領域で重なりがあることのみが必要である。
【誤訳訂正９２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３４】
「酸化安定な」という用語は、本発明の蛋白分解、加水分解、洗浄または他の工程、例えば漂白剤または酸化剤に曝され、または接触する間の一般的な条件下に一定時間にわたって特定量の酵素活性を保持する本発明のプロテアーゼのことをいう。幾つかの態様において、前記プロテアーゼは漂白剤または酸化剤に例えば１分、３分、５分、８分、１２分、１６分、２０分など以上の一定時間にわたって曝され、または接触した後に５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上の蛋白分解活性を保持する。幾つかの態様において、前記安定性は実施例に記載されるように測定される。
【誤訳訂正９３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３９】
本発明で用いられるように、「洗浄組成物」には、特記しない限り、顆粒状または粉状の形態の全目的または「重質洗剤（heavy-duty）」の洗濯剤、特に洗浄洗剤；ゲルまたはペースト状の形態の全目的の洗濯剤、特にいわゆる重質洗剤の液体タイプ；液体のきめ細かい織物洗剤；食器手洗い洗剤または軽質の食器手洗い洗剤、特に多泡タイプのもの；家庭用の様々な錠剤、顆粒状、液体およびすすぎ用タイプおよび組織用仕様を含む食器機械洗い洗剤；抗菌手洗いタイプ、洗浄棒、口洗い、義歯洗い、車またはカーペットシャンプー、風呂洗剤を含む液体洗浄剤および消毒剤；ヘアシャンプーおよびヘアリンス；シャワーゲル、バスフォームおよび金属洗浄剤が、漂白添加物および「汚れとり（stain-stick）」または前処理タイプと同様に含まれる。
【誤訳訂正９４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５７】
II．セリンプロテアーゼ酵素およびセリンプロテアーゼ酵素をコードする核酸
本発明は、プロテアーゼをコードするアミノ酸配列をコードする単離ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの態様において、これらのポリヌクレオチドは配列番号６−８で示されるアミノ酸配列（例えば、基質のペプチド結合の加水分解を触媒する成熟プロテアーゼを含む、蛋白分解活性を有するポリヌクレオチドによりコードされたアミノ酸配列の少なくとも一部分）に６５％以上のアミノ酸配列同一性、好ましくは７０％以上のアミノ酸配列同一性、より好ましくは７５％以上のアミノ酸配列同一性、さらにより好ましくは８０％以上のアミノ酸配列同一性、より好ましくは８５％以上のアミノ酸配列同一性、さらにより好ましくは９０％以上のアミノ酸配列同一性、より好ましくは９２％以上のアミノ酸配列同一性、もっとより好ましくは９５％以上のアミノ酸配列同一性、より好ましくは９７％以上のアミノ酸配列同一性、さらにより好ましくは９８％以上のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは９９％以上のアミノ酸配列同一性、および／または同定された洗浄条件下で明示的に同等な又は増強された洗浄性能を含む。
【誤訳訂正９５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５８】
幾つかの態様において、パーセント同一性（アミノ酸配列、核酸配列、遺伝子配列）は、配列のアライン、アラインされた２つの配列間の一致する正確な数の計数、より短い配列長への分割、およびその結果に１００を乗じることによる、２つの分子間配列情報の直接比較により決定される。これらの分析には、上述のような簡単に利用できるコンピュータプログラムが用いられる。ヌクレオチド配列の同一性を決定するためのプログラムは、ウィスコンシン・アナリシス・パッケージのバージョン８（ジェネティック・コンピュータ・グループ、マディソン、ウィスコンシン州）中で、スミスおよびウォーターマン・アルゴリズムにも依存する、例えばＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＧＡＰプログラムを利用できる。これらのプログラムは製造元により推奨され、上記のウィスコンシン・アナリシス・パッケージにおいて記載されるデフォルト・パラメータとともに容易に利用される。
【誤訳訂正９６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６２】
幾つかの好ましい態様において、本発明は配列番号１で示される約１６２１塩基対長のポリヌクレオチドを含む。開始コドン配列番号１において太字で示されている。本発明の他の態様において、これらのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、もし発現すると配列番号９の１−２８アミノ酸をコードするシグナル配列（配列番号５の１−８４ヌクレオチド）、Ｎ末端プロ配列（配列番号６の２９−１９８アミノ酸残基をコードする８４−５９４ヌクレオチド）、成熟プロテアーゼ配列（配列番号８の１−１８９アミノ酸残基をコードする配列番号２の５９５−１１６１ヌクレオチド）、およびＣ末端プロ配列（配列番号６の３８８−４９５アミノ酸残基をコードする１１６２−１４８６ヌクレオチド）をコードすると信じられている１４８５塩基対部分（配列番号２の１−１４８５残基）を含む。あるいは、前記シグナルペプチド、Ｎ末端プロ配列、成熟セリンプロテアーゼ配列、およびＣ末端プロ配列は、１−１８９と番号がつけられた配列番号６の成熟プロテアーゼのアミノ酸残基、すなわち、シグナルペプチド（−１９８〜−１７１残基）、Ｎ末端プロ配列（−１７１〜−１）、成熟セリンプロテアーゼ配列（１〜１８９）、およびＣ末端プロ配列（１９０〜２９８）に関して番号が付けられる。本発明の他の態様において、蛋白分解活性を有するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドおよび前駆体プロテアーゼをコードする配列番号２の部分の１〜１４８５ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む。本発明の他の態様において、アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは前駆体セルロモナス・プロテアーゼ（配列番号３）をコードするポリヌクレオチドの１〜１４１２ヌクレオチドの配列を含む。さらに他の態様において、アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは成熟セルロモナス・プロテアーゼ（配列番号４）をコードするポリヌクレオチドの部分の１〜５８７ヌクレオチドの配列を含む。
【誤訳訂正９７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６３】
当業者によって理解されるように、遺伝子コードの縮重のために様々なポリヌクレオチド配列番号６、７，および／または８のそれぞれにおいて提供されるシグナルペプチド、前駆体プロテアーゼおよび／または成熟プロテアーゼ、または上述の％配列同一性を有するプロテアーゼをコードすることができる。本発明の他の態様は、シグナルペプチドおよび前駆体プロテアーゼ、前駆体プロテアーゼ、および／または成熟プロテアーゼをそれぞれコードする配列番号２、３、および／または４それぞれのポリヌクレオチド配列に７０％以上の同一性、７５％以上の同一性、８０％以上の同一性、８５％以上の同一性、９０％以上の同一性、９２％以上の同一性、９５％以上の同一性、９７％以上の同一性、９８％以上の同一性、および９９％以上の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【誤訳訂正９８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６４】
追加の態様において、本発明は、コードされた断片が蛋白分解活性を保持する限りプロテアーゼをコードするＤＮＡの断片または部分を提供する。本発明の他の態様は、前駆体プロテアーゼをコードする配列番号２のポリヌクレオチド配列、または配列番号１の１８５−１６７２残基の２０％以上の配列長、３０％以上の配列長、４０％以上の配列長、５０％以上の配列長、６０％以上の配列長、７０％以上の配列長、７５％以上の配列長、８０％以上の配列長、８５％以上の配列長、９０％以上の配列長、９２％以上の配列長、９５％以上の配列長、９７％以上の配列長、９８％以上の配列長、および９９％以上の配列長を有するポリヌクレオチドを含む。別な態様において、これらの配列長の断片または部分は、組換えＤＮＡにおけるＤＮＡ配列（例えば、米国特許６，１３２，９７０号を参照されたい）のシャフリングに有用な配列長の隣接部分である。
【誤訳訂正９９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６７】
幾つかの態様において、ＤＮＡ断片は電気泳動的に分離され、ゲルから切り出され、ゲルの寒天マトリックスから回収される。好ましい態様において、このＤＮＡの精製断片は次に標識化され（例えば、製造者の説明にしたがってメガプリム（Megaprime）標識システムを用いて）ＤＮＡ中に32Ｐを取り込む。標識プローブは所定の時間（例えば、５分）９５℃まで加熱することにより変性され、直ちに膜およびハイブリダイゼーション前処理溶液に添加される。ハイブリダイゼーション反応は、穏やかな振とうまたは回転を行い、適切な時間および適切な条件下（例えば、１８時間、３７℃）で進行する。前記膜は浸漬し（例えば、ＳＳＣ／０．３％ＳＤＳ中２回）、次に緩やかに撹拌して適切な洗浄液で洗浄する。望ましいストリンジェンシーは膜（フィルター）が洗浄される条件に依存する。幾つかの態様において「低度ストリンジェンシー」条件は２０℃で１５分間０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ溶液中で洗浄することを含み、他の態様において「中程度ストリンジェンシー」条件は３７℃で３０分間０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ溶液中でさらに洗浄することを含み、他の態様において「高度ストリンジェンシー」条件は３７℃で４５分間０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ溶液中でさらに洗浄することを含み、さらに他の態様において「最大ストリンジェンシー」条件は３７℃で６０分間０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ溶液中でさらに洗浄することを含む。したがって、本発明の様々な態様は中程度、高度および／または最大ストリンジェンシー条件下において配列番号１、２、３、４、および／または５で示されるヌクレオチド配列に由来するプローブにハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドを提供する。
【誤訳訂正１００】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６８】
洗浄後、前記膜は乾燥され、結合プローブが検出される。もし32Ｐまたは他の放射性同位体が標識化剤として用いられるなら、結合プローブはオートラジオグラフィーにより検出される。他のプローブを可視化するための他の技術は当業者に周知である。結合プローブの検出は核酸配列が望ましい相同性を有することを示し、ゆえに配列番号１、２、３、４、および／または５に同一であり、本発明に包含される。したがって、本発明は、配列番号１、２、３、４、および／または５の核酸配列の部分または全部とゲノムまたはｃＤＮＡ起源のいずれかの他の核酸とのハイブリダイゼーションを含む本発明により包含されるプロテアーゼをコードする核酸の検出方法を提供する。
【誤訳訂正１０１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６９】
前述のように他の態様において、ハイブリダイゼーション条件は核酸結合複合体の溶融温度（Ｔｍ）に基づき、以下で定義される「ストリンジェンシー」を含む。「最大ストリンジェンシー」は典型的には約Ｔｍ５℃（プローブのＴｍの５℃下）で生じ、「高度ストリンジェンシー」はＴｍより約５℃から１０℃下、「中程度ストリンジェンシー」はＴｍより約１０℃から２０℃下、および「低度ストリンジェンシー」はＴｍより約２０℃から２５℃下で生じる。当業者に知られているように、中程度、高度および／または最大ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、ポリヌクレオチド配列ホモログまたは等価なポリヌクレオチド配列を同定または検出するために条件が最適化されるように選択される。
【誤訳訂正１０２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７１】
更なる態様において、本発明はシグナル配列をさらにコードするポリヌクレオチド配列を提供する。幾つかの態様において、配列番号５と６５％以上の配列同一性、７０％以上の配列同一性、好ましくは７５％以上の配列同一性、より好ましくは８０％以上の配列同一性、より更に好ましくは８５％以上の配列同一性、さらにより好ましくは９０％以上の配列同一性、より好ましくは９５％以上の配列同一性、より好ましくは９７％以上の配列同一性、９８％以上の配列同一性、および最も好ましくは９９％以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むシグナル活性を有するポリヌクレオチドを含む。したがって、これらの態様において本発明は、推定シグナル配列、および中程度、高度および／または最大ストリンジェンシー条件下において配列番号５で開示されるヌクレオチド配列由来のプローブにハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドを提供する。ここで前記シグナル配列は本発明のポリヌクレオチドによりコードされるシグナル配列と実質的に同じシグナル活性を有する。
【誤訳訂正１０３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７５】
本発明の更なる側面には、配列番号６（すなわち、前記シグナルおよび前駆体プロテアーゼ）、配列番号７（すなわち、前記前駆体プロテアーゼ）、および／または配列番号８（すなわち、成熟プロテアーゼ）のアミノ酸配列に６５％のアミノ酸配列同一性、７０％以上のアミノ酸配列同一性、８０％以上のアミノ酸配列同一性、８５％以上のアミノ酸配列同一性、９０％以上のアミノ酸配列同一性、９５％以上のアミノ酸配列同一性、９７％以上のアミノ酸配列同一性、９８％以上のアミノ酸配列同一性、および９９％以上のアミノ酸配列同一性を含む蛋白分解活性を有するポリペプチドが含まれる。これらのポリペプチドの蛋白分解活性は当該技術分野で既知の方法を用いて測定され、これらの方法には洗剤機能を評価するために用いられる方法が含まれる。更なる態様において、前記ポリペプチドは単離される。本発明の更なる態様において、前記ポリペプチドは配列番号６、７、または８のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列に同一なアミノ酸配列を含む。幾つかの更なる態様において、前記ポリペプチドは配列番号６、７、または８の部分と同一である。
【誤訳訂正１０４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７７】
更なる態様において、本発明は、アミノ酸配列相同性研究で同定されたミクロコシネアエを含むが、これに限定されない菌種由来の前述の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび／またはプロテアーゼを提供する。幾つかの態様において、前駆体ミクロコシネアエ・プロテアーゼのアミノ酸残基は、それがセルロモナス６９Ｂ４株（すなわち、同じ又は類似の化学的に結合、反応、および相互作用する機能的な性能を有する）における残基の特定の残基または部分に相同（すなわち、一次または三次構造のいずれかにおいて位置が対応する）または類似のいずれかであるならば、セルロモナス６９Ｂ４株の残基に相当する。
【誤訳訂正１０５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７９】
例えば、幾つかの態様において、セルロモナス株６９Ｂ４、および前述の他のミクロコシネアエ種由来のプロテアーゼのアミノ酸配列は、アミノ酸配列間の相同性の最大量を提供するためにアラインされる。これらの配列の比較により各配列に数多くの保存された残基が存在することが示される。問題の前駆体または成熟ミクロコシネアエ・プロテアーゼにおいて同定されるアミノ酸に相当する残基位置を確立するために同定され、用いられる残基が存在する。
【誤訳訂正１０６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８０】
これらの保存された残基はミクロコシネアエ相同体（例えば、セルロモナス・セラシア（ＤＳＭ２０１１８）および／または本発明におけるセルロモナス相同体）における１つ以上のセルロモナス株６９Ｂ４プロテアーゼの対応するアミノ酸残基を確かめるために用いられる。これらの特定のアミノ酸配列は、保存された残基の最大相同性を生成するためにセルロモナス株６９Ｂ４プロテアーゼの配列とアラインされる。このアラインメントによって、セルロモナス種と比較してセルロモナス株６９Ｂ４の配列および特定の残基位置が認められる。したがって、触媒的トリアッド（例えば、セルロモナス株６９Ｂ４プロテアーゼにおける）についての相当するアミノ酸は他のミクロコシネアエ種において同定可能である。本発明の幾つかの態様において、前記プロテアーゼ相同体は配列番号８のＨｉｓ３２／Ａｓｐ５６／Ｓｅｒ１３７の相当するものを含む。
【誤訳訂正１０７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８２】
本発明は様々な起源から得られたプロテアーゼを包む。幾つかの好ましい態様において前記プロテアーゼは細菌から得られ、一方他の態様において前記プロテアーゼは真菌から得られる。
【誤訳訂正１０８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８３】
幾つかの特に好ましい態様において、細菌源はミクロコシネアエ亜目のなかまから選択される。幾つかの態様において、細菌源はプロミクロモノスポラシアエ科である。幾つかの好ましい態様において、前記プロミクロモノスポラシアエ種は、プロミクロモノスポラ・シトレア（Promicromonospora citrea）（ＤＳＭ４３１１０）、プロミクロモノスポラ・スクモエ（Promicromonospora sukumoe）（ＤＳＭ４４１２１）、プロミクロモノスポラ・アエロラタ（Promicromonospora aerolata）（ＣＣＭ７０４３）、プロミクロモノスポラ・ビンドボネンシス（Promicromonospora vindobonensis）（ＤＳＭ７０４４）、ミセリゲネランス・キシリゴウエンス（Myceligenerans xiligouense）（ＤＳＭ１５７００）、イソプテリコラ・バリアビリス（Isoptericola variabilis）（ＤＳＭ１０１７７、basonym Cellulosimicrobium variabile）、セルロシミクロビウム・セルランス（ＤＳＭ２０４２４、basonym Nocardia cellulans, Cellulomonas cellu;ans）、セルロシミクロビウム・フンケイ（Cellulosimicrobium funkei）、キシラニモナス・セルシリティカ（Xylanimonas cellulosilytica）（ＬＭＧ２０９９０）、キシラニバクテリウム・ウルミ（Xylanibacterium ulmi）（ＬＭＧ２１７２１）、およびキシラニミクロビウム・パクノダエ（Xylanimicrobium pachnodae）（ＤＳＭ１２６５７、basonym Promicromonospora pachnodae）を含み、これらからなる群から選択される。他の特定の好ましい態様において、前記細菌源はセルロモナダシアエ科（Cellulomonadaceae）である。幾つかの好ましい態様において、前記セルロモナダシアエ種は、セルロモナス・フィミ（ＡＴＣＣ４８４、ＤＳＭ２０１１３）、セルロモナス・ビアゾテア（ＡＴＣＣ４８６、ＤＳＭ２０１１２）、セルロモナス・セラシア（ＡＴＣＣ４８７、２１６８１、ＤＳＭ２０１１８）、セルロモナス・デンベレンシス（Cellulomonas denverensis）、セルロモナス・ホミニス（ＤＳＭ９５８１）、セルロモナス・フラビゲナ（ＡＴＣＣ４８２、ＤＳＭ２０１０９）、セルロモナス・ペルシカ（ＡＴＣＣ７００６４２、ＤＳＭ１４７８４）、セルロモナス・イラネンシス（ＡＴＣＣ７００６４３、ＤＳＭ１４７８５）、セルロモナス・フェルメンタンス（ＡＴＣＣ４３２７９、ＤＳＭ３１３３）、セルロモナス・ゲリダ（ＡＴＣＣ４８８、ＤＳＭ２０１１１、ＤＳＭ２０１１０）、セルロモナス・フミラタ（ＡＴＣＣ２５１７４、basonym Actinomyces humiferus）、セルロモナス・ウダ（ＡＴＣＣ４９１、ＤＳＭ２０１０７）、セルロモナス・キシラニリティカ（ＬＭＧ２１７２３）、セルロモナス・セプティカ（Cellulomonas septica）、セルロモナス・パラホミニス（Cellulomonas parahominis）、エルスコビア・トゥルバタ（ＡＴＣＣ２５８３５、ＤＳＭ２０５７７、synonym Cellulomonas turbata）、エルスコビア・ジエネンシス（ＤＳＭ４６０００）、エルスコビア・エンテロフィラ（ＡＴＣＣ３５３０７、ＤＳＭ４３８５２、basonym Promocromonospora enterophila）、エルスコビア・パウロメタボラ（ＤＳＭ１４２８１）、およびセルロモナス株６９Ｂ４（ＤＳＭ１６０３５）を含み、これらからなる群から選択される。更なる態様において、前記細菌源はまた、テルモビフィダ（Thermobifida）種、ラロバクター（Rarobacter）種、および／またはリゾバクター（Lysobacter）種を含み、これからなる群から選択される。さらに追加的な態様において、テ���モビフィダ種はテルモビフィダ・フスカ（Thermobifida fusca、basonym Thermomonospora fusca）（ｔｆｐＡ、ＡＡＣ２３５４５、ラオ（Lao）他著、アプライド・エンバイロンメンタル・マイクロバイオロジー（Appl. Environ. Microbiol.）、６２巻、４２５６−４２５９頁、１９９６年を参照されたい）である。別な態様において、ラロバクター種はラロバクター・フェシタビドゥス（Rarobacter faecitabidus）（ＲＰＩ、Ａ４５０５３、例えば、シモア（Shimoi）他著、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６７巻、２５１８９−２５１９５頁、１９９２年を参照されたい）である。さらに他の態様において、リゾバクター種はリゾバクター・エンジモゲネス（Lysobacter enzymogenes）である。
【誤訳訂正１０９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８８】
類似マトリクスは、ＴＡＸＰＡＫ中のＲＴＢＮＳＩＭプログラムを用いる、陰性一致（スニースおよびソーカル、前述、１３５−１３６頁）を許容するオプションを含むゴワ係数(ＳＧ)を用いて全ての株の対について構築した。主要な分析機器および本発明において示される分類データのほとんどが基づくものとして、ゴワ係数は全てのタイプの性質またはデータ、すなわち、２つの状態、多状態（命令され、質的な）、および量的なものに適用できるため、類似マトリクスを生成するための多係数を超えて選択された。
【誤訳訂正１１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９４】
主にＳG／ＵＰＧＭＡ法により生成された全てのクラスター（特に新しい細菌のクラスター）はＳj／ＵＰＧＭＡ法（共表現的相関、０．７９５）、およびＳSM／ＵＰＧＭＡ法（共表現的相関、０．８１４）により作成されるデンドログラムにおいて回収される。これらの形質転換の主な効果は、アルカリ性バチルス種および新しいアルカリ性菌と、後者の特異性との間の分離を協調するのにさらに役立つ単一の大きなクラスターにおける全てのバチルス株を集めることであった。これらの方法論に基づいて、６９Ｂ４はクラスター２細菌と見なされる。
【誤訳訂正１１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９５】
本発明の他の側面において、前記ポリヌクレオチドはセルロモナス６９Ｂ４株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子ヌクレオチド配列と７０％、８０％、８５％、８８％、９０％、９２％、９５％、９８％以上同一な１６ＳｒＲＮＡ遺伝子ヌクレオチドを有する細菌に由来する１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の配列は受託番号Ｘ９２１５２でジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）に寄託されている。
【誤訳訂正１１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９７】
６９Ｂ４株はセルロモナダシアエ科のセルロモナスおよびエルスコビアのなかまへの緊密な１６ＳｒＤＮＡの関係を示す。この緊密な関係は、６９Ｂ４株１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列に、セルロモナス６９Ｂ４株（例えば、それぞれ９６％および９５％同一性）の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列が９５％以上の配列同一性を有するＣ．セラシア（ＤＳＭ２０１１８）およびＣ．フィミ（ＤＳＭ２０１１３）と信じられている。
【誤訳訂正１１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９８】
本発明の幾つかの好ましい態様において、セルロモナス種はセルロモナス６９Ｂ４株（ＤＳＭ１６０３５）である。この株は、１９８８年１０月１０日に収集されたケニア、アカシアキャンプ（Acacia Camp）（緯度０°１２’Ｎ、経度３６°０７’Ｅ）のポゴリア湖の沿岸地域からの沈殿物および水試料から初めて単離された。この水は温度３３℃、ｐＨ１０．５で４４ｍＳ／ｃｍの伝導度を有した。セルロモナス６９Ｂ４株は以下の述べるように表現型の特徴を有することが同定された。新鮮カルチャーはグラム陽性、細く、概してまっすぐ、棒状の細菌であり、約０．５−０．７μｍ×１．８−４μm大であった。他のカルチャーは主に短い棒状および球状の細胞であった。細胞は時折ペアになり、またはＶ字型になったが、主な分枝は認められなかった。内生胞子は検出されなかった。アルカリ性のＧＡＭ寒天上で、この株は３７℃２−３日のインキュベーション後に直径約２ｍｍで、全体の周辺部を有する、不透明な、きらりと光る、薄黄色の、球状および凸状またはドーム状のコロニーを形成する。これらのコロニーは、白金耳で擦ると凝集する傾向をもつ粘性のぬるぬるしたものである。中性のトリプトン（Trypton）大豆寒天上では、株成長はあまり活発ではなく、半透明の黄色いコロニーで、一般に１ｍｍ未満の直径を有する。このカルチャーは、厳しい嫌気性条件下で成長することができたので、条件的に嫌気性であった。しかしながら、嫌気性条件下の成長は好気性条件下の成長と比べて著しく低下した。またこの株は標準オキシダーゼ、ウレアーゼ、アミノペプチダーゼ、およびＫＯＨ試験で陰性と思われた。さらに、生物体はカタラーゼ陽性でアリカリ条件下でＤＮアーゼが産生されたが、ナイトレートは減少しなかった。成長のための好ましい温度範囲は２０−３７℃であり、最適温度は約３０−３７℃であった。１５℃または４５℃において成長は認められなかった。
【誤訳訂正１１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０４】
一定種の生物体内に自然に生じる酵素の配列には多様性があり得るが、同種の生物体により生産される特定のタイプの酵素は、一般的に一定の条件下（例えば、温度、ｐＨ、水の硬度、酸化的条件、キレート条件、および濃度等）における基質特異性および／または蛋白分解活性のレベルに関して実質的に同一である。したがって、本発明の目的に関して、セルロモナスの他の株および種も本発明のセルロモナス・プロテアーゼを生産し、よって本発明のプロテアーゼのための有用な源を提供することが考えられる。実際、本発明で示すように、ミクロコシネアエの他のなかまが本発明に利用されることが考えられる。
【誤訳訂正１１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０５】
幾つかの態様において本発明の蛋白分解性ポリペプチドは物理化学的に特徴付けられ、一方、他の態様においてそれらはそれらの機能に基づいて特徴付けられ、更なる態様においてそれらは両方の特性のセットを用いて特徴付けられる。物理化学的な特徴づけは、ＳＤＳ電気泳動、ゲル濾過、アミノ酸組成、マススペクトロメトリー（例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ、ＬＣ−ＥＳ−ＭＳ／ＭＳ等）、およびタンパク質の分子量を決定する沈降法、タンパク質のＰＩを決定する等電点電気泳動、タンパク質のアミノ酸配列を決定するアミノ酸シークエンシング、タンパク質の三次構造を決定する結晶学的研究、およびタンパク質に存在する抗原性エピトープを決定する抗体結合のような周知の技術に利点がある。
【誤訳訂正１１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１０】
ＩＩＩ．本発明のミクロコシネアエ（例えばセルロモナス）プロテアーゼをコードするポリヌクレオチドの取得
幾つかの態様において、本発明のプロテアーゼをコードする核酸は当該技術分野で既知の標準的な操作、例えばクローンされたＤＮＡ（ＤＮＡ「ライブラリ」）、化学合成、ｃＤＮＡクローニング、ＰＣＲ、ゲノムＤＮＡまたはその断片または細菌または真菌種のような所望の細胞から精製されたもののクローニングにより得られる（例えば、サムブルック他著、前述、１９８９年；グローバーおよびヘイムズ編「ＤＮＡクローニング：実践的アプローチ」、１巻および２巻、第二版を参照されたい）。ポリヌクレオチド配列の合成は自動化シンセサイザーの利用（例えば、ニードハム−バンデバンター（Needham-VanDevanter）他著、核酸研究（Nucl. Acids res.）、１２巻、６１５９−６１６８頁、１９８４年を参照されたい）を含み、当該技術分野（例えば、ビューケージ（Beaucage）およびカルザース（Caruthers）著、テトラヘドロン・レター、２２巻、１８５９−１８６２頁、１９８１年を参照されたい）において周知である。ＤＮＡ配列はまた注文製造し、様々な市販資源から注文することもできる。本発明に詳細に記載されているように、幾つかの態様において、ゲノムＤＮＡ由来の核酸配列はコード領域に加えて調節領域を含む。
【誤訳訂正１１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１１】
ゲノムＤＮＡからの遺伝子の分子クローニングを含む幾つかの態様において、ＤＮＡ断片が生成され、それらの幾つかは少なくとも所望の遺伝子の部分を含む。幾つかの態様において、前記ＤＮＡは様々な制限酵素を用いて特定部位で開裂される。幾つかの別な態様において、ＤＮアーゼ（DNAse）はＤＮＡを断片化するためにマグネシウムの存在下で用いられ、または前記ＤＮＡは物理的に切断される（例えば、音波照射（sonication）により）。生成した直線状ＤＮＡは次にその大きさに従って分離され、アガロースおよびポリアクリルアミド電気泳動、ＰＣＲおよびカラムクロマトグラフィーを含むが、これらに限定されない標準技術により増幅される。
【誤訳訂正１１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１５】
前記により、本発明で提供され、配列番号１−５に示されるポリヌクレオチド配列に基づくポリヌクレオチド配列は他種から、特にプロテアーゼ６９Ｂ４により発現されるセリンプロテアーゼ活性を有する酵素をコードする細菌から同一または相同なポリヌクレオチド断片を得るために有用であることが明らかとなる。
【誤訳訂正１１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１７】
一般的に、遺伝子をクローニングし、前記遺伝子に領域（領域をコードする外因性のものの多数コピーを含む）をコードする外因性プロテアーゼを導入するための標準的な操作は、セルロモナス６９Ｂ４プロテアーゼ誘導体またはそれらの相同体を得るために用いられる。実際、実施例を含む本発明の明細書はそのような示唆を提供している。しかしながら、当該技術分野で既知の追加の方法も好適である（例えば、サムブルック他著、前述、１９８９年；アウスベル（Ausubel）他著、前述、１９９５年、およびハーウッド（Harwood）およびカティング（Cutting）編、「バチルスのための分子生物的方法」、ジョンウィリー・アンド・サン社、１９９０年；およびＷＯ９６／３４９４６を参照されたい）。
【誤訳訂正１２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２１】
別な態様において、プロテアーゼをコードする本発明の核酸構築体は確立された標準的な方法により合成的に調製される（例えば、ビューケージ（Beaucage）およびカルザース（Caruthers）著、テトラヘドロン・レター、２２巻、１８５９−１８６２頁、１９８１年；マチス（Matthes）他著、エンボ・ジャーナル（EMBO J.）、３巻、８０１−８０５頁、１９８４年を参照されたい）。ホスホアミダイト法にしたがって、オリゴヌクレオチドは合成され（例えば、自動ＤＮＡシンセサイザーにおいて）、精製され、アニールされ、結合された適切なベクターにおいてクローンされる。
【誤訳訂正１２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２３】
更なる態様において、本発明は、本発明の１つ以上のＤＮＡ構築体を含むベクターを提供する。幾つかの態様において、本発明は組換えベクターを含む。宿主細胞ゲノムに組み込まれた（一時的にまたは安定的に）ベクターと同様に自律的に複製されたベクターも含めて、任意の適切なベクターが本発明に利用されるものと考えられる。実際、広範な種類のベクター、および真菌（カビおよび酵母）、細菌、昆虫および植物細胞におけるクローニング、形質転換および発現に好適な発現カセットは当業者に知られている。具体的には、前記ベクターまたはカセットは、核酸の転写および翻訳を指令する配列、選択可能なマーカー、および自律的な複製または染色体組み込みを許容する配列を含む。幾つかの態様において、好適なベクターは転写開始制御を備える遺伝子の５’領域および転写終止を制御するＤＮＡ断片の３’領域を含む。これらの制御領域は、選択された制御領域が宿主細胞で機能できる限り、同種または異種遺伝子由来のものでよい。
【誤訳訂正１２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２４】
前記ベクターは好ましくは、本発明のプロテアーゼをコードするＤＮＡ配列がＤＮＡ転写に必要とされる追加的な部分に操作可能に結合された発現ベクターである。幾つかの好ましい態様において、前記発現ベクターはプラスミドまたはウィルスＤＮＡに由来し、または別な態様において両方の要素を含む。具体的なベクターには、本発明の実施例に記載される全てのベクターのみならず、ｐＳＥＧＣＴ、ｐＳＥＡＣＴ、および／またはｐＳＥＡ４ＣＴが含まれるが、これらに限定されない。そのようにベクターの構築は本発明において記載され、方法は当該技術分野で周知である（例えば、米国特許６，２８７，８３９号、およびＷＯ０２／５０２４５号を参照されたい）。幾つかの好ましい態様において、前記ベクターｐＳＥＧＣＴ（約８３０２塩基、図５を参照されたい）は、本発明で記載されるポリヌクレオチド（例えば、ｐＳＥＧ６９Ｂ４Ｔ、図６を参照されたい）を含むベクター構築に用いられる。別な好ましい態様において、前記ベクターｐＳＥＡ４６９Ｂ４ＣＴ（図７を参照されたい）は、本発明で記載されるポリヌクレオチドを含むベクターの構築に用いられる。実際、本発明で記載される全てのベクターは本発明において用いられることが意図されている。
【誤訳訂正１２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２５】
幾つかの態様において、転写に必要とされる追加的な部分には、当該技術分野で知られている調節部分（例えば、プロモータ、分泌部分、インヒビター、全体レギュレーター）が含まれる。１つの具体例には、選択される宿主細胞において転写活性を示し、宿主細胞の同種または異種のいずれかのタンパク質をコードする遺伝子由来の任意のＤＮＡが含まれる。具体的には、細菌宿主細胞において用いるのに好適なプロモータの例には、バチルス・ステアロテルモフィリスのマルトース源性アミラーゼ遺伝子、バチルス・アミロリケファシエンス（ＢＡＮ）アミラーゼ遺伝子、バチルス・スブチリスのアルカリプロテアーゼ遺伝子、バチルス・クラウシのアルカリプロテアーゼ遺伝子、バチルス・プミリス（pumilis）キシロシダーゼ遺伝子、バチルス・スリンジエンシスｃｒｙＩＩＩＡ、およびバチルス・リケニフォルミスのフルファ−アミラーゼ遺伝子のプロモータが含まれるが、これらに限定されない。追加的なプロモータには、本発明で記載されるようにＡ４プロモータが含まれる。本発明で用いられる他のプロモータには、大腸菌（E. coli）のｌａｃ、ｔｒｐ、またはｔａｃプロモータばかりでなく、ファージラムダＰRまたはＰLプロモータが含まれるが、これらに限定されない。
【誤訳訂正１２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２９】
細菌細胞からの分泌を含む幾つかの態様において、前記シグナルペプチドは自然発生のシグナルペプチドまたはそれらの機能部分であり、一方他の態様においては合成ペプチドである。好適なシグナルペプチドには、バチルス・リケニフォルミスのアルファ−アミラーゼ、バチルス・クラウシのアルカリプロテアーゼ、およびバチルス・アミロリケファシエンスのアミラーゼ由来の配列が含まれるが、これらに限定されない。１つの好ましいシグナル配列は、本発明で記載されるようにセルロモナス株６９Ｂ４由来のシグナルペプチドである。したがって、幾つかの特に好ましい態様において、前記シグナルペプチドは本発明に記載される由来のシグナルペプチドを含む。このシグナルは、６９Ｂ４プロテアーゼおよび／または異種のＤＮＡ配列（例えば、他の野生型プロテアーゼ、ＢＰＮ’変異体プロテアーゼ、ＧＧ３６変異体プロテアーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、マンナナーゼ等のような第二プロテアーゼ）の分泌を容易にするのに用いられる。幾つかの態様において、これらの第二酵素は当該技術分野で知られているＤＮＡ配列および／またはアミノ酸配列（例えば、ＷＯ９８／２２５００号、ＷＯ９２／０５２４９号、ＥＰ０３０５２１６Ｂ１号、およびＷＯ９４／２５５７６号と同様に米国特許６，４６５，２３５号、６，２８７，８３９号、５，９６５，３８４号、および５，７９５，７６４号を参照されたい）によってコードされる。さらに、幾つかの態様において、前記シグナル配列ペプチドはまた、そのような内因性にコードされたプロテアーゼを活性化および分泌するために内因性配列に操作可能に結合される。
【誤訳訂正１２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３１】
Ｖ．宿主細胞
上記に示されるように、幾つかの態様において、本発明はまた、上述のベクターで形質転換される宿主細胞を提供する。幾つかの態様において、宿主細胞に導入される本発明の１つ以上のプロテアーゼをコードするポリヌクレオチドは同種であり、一方他の態様において、前記ポリヌクレオチドは宿主に対して異種である。前記ポリヌクレオチドが宿主細胞に対して同種である（例えば、宿主細胞によって生産される未処理プロテアーゼの追加的なコピーを導入する）幾つかの態様において、それは他の同種または異種のプロモータ配列に連結している。別な態様において、他の分泌シグナル配列、および／または終止配列は本発明において用いられる。したがって、幾つかの態様において、前記ポリペプチドＤＮＡ配列は、同種ポリペプチド配列の多数のコピー、他の生物体からの異種ポリペプチド配列、または１つ以上の合成ポリペプチド配列を含む。実際、本発明は任意の特定の宿主細胞および／またはベクターに限定されることを意図していない。
【誤訳訂正１２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３３】
本発明に用いられる細菌宿主細胞の具体例には、エンテロバクテリアシアエ（例えば、エシェリヒア・コリ）のなかまのようなグラム陰性菌と同様に、バチルス、ストレプトマイセス、およびテルモビフィダ（Thermobifida）のようなグラム陽性菌、例えばＢ．スブチリス、Ｂ．リケニフォルミス、Ｂ．レントゥス、Ｂ．ブレビス、Ｂ．ステアロテルモフィルス、Ｂ．クラウシ、Ｂ．アミロリケファシエンス、Ｂ．コアグランス、Ｂ．シルクランス、Ｂ．ラウトゥス、Ｂ．メガテリウム、Ｂ．スリンジエンシス、Ｓ．グリセウス、Ｓ．リビダンス、Ｓ．コエリコロル、Ｓ．アベルミティリスおよびＴ．フスカ株が含まれるが、これらに限定されない。幾つかの特に好ましい態様において、前記宿主細胞はＢ．スブチリス、Ｂ．クラウシ、および／またはＢ．リケニフォルミスである。追加の好ましい態様において、前記宿主細胞はＳ．リビダンス（例えば、ＴＫ２３および／またはＴＫ２１）株である。当該技術分野で知られているプロトプラスト形質転換、コンピテント（competent）細胞の利用等を含むがこれらに限定されない、細菌の形質転換ために好適な任意の方法が本発明において用いられる。幾つかの態様において、米国特許５，２６４，３６６号（参照により本明細書に取り込まれる）で提供される方法は本発明において用いられる。Ｓ．リビダンスについて、形質転換およびタンパク質発現のための１つの好ましい手段はフェルナンデス−アバロス（Fernandez-Abalos）他によって記述されている（フェルナンデス−アバロス他著、マイクロバイオロジー、１４９巻、１６２３−１６３２頁、２００３年を参照されたい；ホップウッド（Hopwood）他著、ストレプトマイセスの遺伝子操作、ラボラトリーマニュアル、イニス、１９８５年も参照されたい；両文献とも参照により本発明に取り込まれる）。もちろん、本発明の実施例に記載される方法は本発明において用いられる。
【誤訳訂正１２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３５】
幾つかの態様において、特定のプロモータおよびシグナル配列は本発明の１つ以上のプロテアーゼの効果的な形質転換および発現を提供するために必要である。したがって、バチルス宿主細胞の利用を含む幾つかの好ましい態様において、前記ａｐｒＥプロモータは既知のバチルス由来シグナルおよび他の調節配列と組み合わせて用いられる。アスペルジルスにおける発現を含む幾つかの好ましい態様において、前記ｇｌａＡプロモータが用いられる。ストレプトマイセス宿主細胞を含む幾つかの態様において、アクチノプラネス・ミスウリエンシス（Actinoplanes missouriensis）のグルコース・イソメラーゼ（ＧＩ）プロモータが用いられ、一方他の態様において前記Ａ４プロモータが用いられる。
【誤訳訂正１２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３６】
Ｅ．コリのような細菌における発現を含む幾つかの態様において、前記プロテアーゼは細胞質、典型的には不溶性顆粒（すなわち、封入体）として保持される。しかしながら、他の態様において、前記プロテアーゼは細菌分泌配列により細胞周辺くう（periplasmic space）へと向けられる。前者の場合、細胞が融解し、変性剤を希釈することによりプロテアーゼが再びホールドした後で顆粒が回収され変性される。後者の場合、細胞周辺くうの中身を放出し、プロテアーゼを回収するために細胞を破砕する（例えば、音波照射または浸透ショックにより）ことによりプロテアーゼは細胞周辺くうから回収される。
【誤訳訂正１２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４０】
したがって、本発明のプロテアーゼは多くの産業利用において、特に洗浄、殺菌、動物飼料、および織物／皮革産業において使用される。いくつかの態様において、本発明の１つ以上のプロテアーゼは洗剤、ビルダー（builder）、漂白剤および他の従来からの成分と組み合わせて、例えば洗濯洗剤（粉体および液体の両方）、洗濯前の浸漬、全ての織物漂白、自動食器洗い洗剤（液体および粉体の両方）、家庭用洗浄剤、特に棒および液体石鹸利用、および配水管開通剤のような洗濯および他の洗浄技術に有用な様々な新規の洗浄組成物を生産する。さらに、前記プロテアーゼはそのような物質を洗浄組成物の水溶液と接触させることにより、他の製品と同様にコンタクトレンズの洗浄に用いられる。さらに、これらの天然生成のプロテアーゼは、例えばペプチド、加水分解汚水処理、織物利用、医療用機器洗浄、生体膜除去に、およびタンパク質生産における溶融−開裂酵素としてなど用いることができる。用いられる設定において一つ以上のプロテアーゼがそれらの機能を維持する限り、これらの製品の組成物は本発明において決定的ではない。いくつかの態様において、前記組成物は、洗浄有効量のプロテアーゼ酵素製剤を含むプロテアーゼまたは酵素組成物をそのような組成物の技術的に認められた量の従来成分と混合することにより容易に調製される。
【誤訳訂正１３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４２】
本発明の酵素はまた洗浄添加物製品にも用いられる。本発明の酵素を含む洗浄添加物製品は追加の漂白効果が望まれる洗濯過程に含まれることに理想的に適している。そのような例には、低温溶液洗浄利用が含まれ得るが、これに限定されない。前記添加物製品は、その最も単純な形態としてはＡＳＰを含む１つ以上のプロテアーゼである。過酸化物源が用いられ、上昇した漂白効果が望まれる場合には、そのような添加物は洗浄過程に添加するための用量形態で包装することができる。そのような単回用量形態は、丸薬、錠剤、ゲルキャップ（gelcap）、または予め測定した粉体または液体のような他の単回用量単位を含むことができる。充填剤または担体物質はそのような組成物の用量を増加させるために含まれ得る。好適な充填剤または担体には、タルク、粘土等と同様に様々な硫酸、炭酸およびケイ酸の塩が含まれるが、これらに限定されない。液体組成物用の充填剤または担体物質は水またはポリオールまたはジオールを含む低分子量の一級または二級アルコールであり得る。そのようなアルコールには、メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールが含まれるが、これらに限定されない。前記組成物はそのような物質を約５％から９０％含むことができる。酸性充填剤はｐＨを低下させるために用いることができる。あるいは、前記洗浄添加物は以下に定義する活性酸素源または以下に完全に定義される補助成分を含むことができる。
【誤訳訂正１３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４５】
好適な低ｐＨ洗浄組成物は典型的に約３〜約５の実質ｐＨを有し、典型的にはそのようなｐＨ環境において加水分解する界面活性剤を含まない。そのような界面活性剤には、１つ以上エチレンオキシド部分またはさらに約１〜１６モルのエチレンオキシドを含むアルキル硫酸ナトリウム界面活性剤が含まれる。そのような洗浄組成物は典型的に、約３〜約５の実質ｐＨをもつそのような洗浄組成物を提供するために、水酸化ナトリウム、モノエタノールアミンまたは塩酸のような十分な量のｐＨ調整剤を含む。そのような組成物は典型的に１つ以上の酸安定な酵素を含む。前記組成物は液体でも固体でもよい。そのような液体組成物のｐＨは実質ｐＨとして測定される。そのような固体組成物のｐＨは、溶媒が蒸留水である場合の前記組成物の１０％固体溶液として測定される。これらの態様において、全てのｐＨ測定は２０℃で行われる。
【誤訳訂正１３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４８】
前記カプセル化材料は、炭水化物、天然または合成ゴム、キチンまたはキトサン、セルロースまたはセルロース誘導体、ケイ酸類、燐酸類、ホウ酸類、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、パラフィンワックス、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。カプセル化材料が炭水化物の場合、それは典型的には、単糖、オリゴ糖、多糖、およびこれらの組み合わせからなる群から選択できる。具体的には、カプセル化材料は澱粉である。好適な澱粉はＥＰ０９２２４９９号、ＵＳ４，９７７，２５２号、ＵＳ５，３５４，５５９号およびＵＳ５，９３５，８２６号に記述されている。
【誤訳訂正１３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５９】
更なる具体例として、異なる地域は典型的には異なる水の硬度を有する。水の硬度は通常、グレーン／ガロン混合Ｃａ2+／Ｍｇ2+という用語で記述される。硬度は水の中のカルシウム（Ｃａ2+）およびマグネシウム（Ｍｇ2+）の量の測定値である。米国のほとんどの水は硬いが、硬度は変動する。中度に硬い（６０−１２０ｐｐｍ）から硬い（１２１−１８１ｐｐｍ）水は６０〜１８１ｐｐｍ（parts per million）（ｐｐｍからグレーン／米国ガロンへの変換については、１７．１でｐｐｍ＃を除したものがグレーン／ガロンに等しい）の硬度の物質である。
【誤訳訂正１３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６０】
【表１】
2007515164.tif 000001
【誤訳訂正１３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６１】
ヨーロッパの水の硬度は典型的には１０．５（例えば、１０．５〜２０．０）グレーン／ガロン混合Ｃａ2+／Ｍｇ2+（例えば、約１５グレーン／ガロン混合Ｃａ2+／Ｍｇ2+）である。北アメリカの水の硬度は典型的には日本の水の硬度よりも硬いが、ヨーロッパの水の硬度よりも軟らかい。例えば、北アメリカの水の硬度は３〜１０グレーンの間、３〜８グレーン、または約６グレーンであり得る。日本の水の硬度は典型的には北アメリカの水の硬度より軟らかく、通常４未満であり、例えば３グレーン／ガロン混合Ｃａ2+／Ｍｇ2+である。
【誤訳訂正１３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６３】
幾つかの好ましい態様において、本発明はプロテアーゼの相同体および変異体ばかりでなく、ＡＳＰプロテアーゼを提供する。これらのプロテアーゼは布地および織物からタンパク質に基づく汚れを洗浄するために望ましい任意の利用に用いられる。
【誤訳訂正１３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３６６】
従来の洗浄組成物への本発明のプロテアーゼの追加は、いかなる特定の使用限定も生じない。言い換えれば、任意の洗剤に好適な温度およびｐＨも、ｐＨが本発明で設定された範囲内である限り本発明の組成物に適し、前記温度は記載されたプロテアーゼの変性温度以下である。さらに、本発明のプロテアーゼは、洗剤、さらにビルダーおよび安定化剤のいずれか一つまたはその組み合わせを含まない洗浄組成物に用いられる。
【誤訳訂正１３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７０】
本発明の幾つかの態様において、スブチリシン・プロテアーゼと比べると異なるｐＨで修飾された酵素活性を示す自然発生のプロテアーゼが提供される。ｐＨ−活性プロフィールは酵素活性に対するｐＨのプロットであり、実施例で記載されるようにおよび／または当該技術分野の既知の方法で構築される。幾つかの態様において、広いプロフィールを有する（すなわち、匹敵するスブチリシン・プロテアーゼよりもpＨ範囲でより高い活性を有するもの）自然発生のプロテアーゼを得ることが望ましい。他の態様において、前記酵素はいかなるｐＨでも有意により高い活性を持たない、またはより鋭いプロフィールをもつ自然発生の相同体である（すなわち、一定のｐＨでスブチリシンと比べて増強した活性を有し、かつ他のｐＨでより低い活性を有するもの）。したがって、様々な態様において、本発明のプロテアーゼは異なる至適ｐＨおよび／または範囲を有する。本発明は任意の特定のｐＨまたはｐＨ範囲に限定されることを意図していない。
【誤訳訂正１３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７２】
幾つかの態様において、本発明のプロテアーゼに加えて好ましい洗浄組成物は、洗浄性能および／または織物ケアの利点を提供する１つ以上の追加の酵素または酵素誘導体を含む。そのような酵素には、他のプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、オキシダーゼ（例えば、ラッカーゼ（laccases））、および／またはマンナナーゼが含まれるが、これらに限定されない。
【誤訳訂正１４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３７３】
アルカリ溶液での使用に適する任意の他のプロテアーゼは本発明の組成物に用いられる。好適なプロテアーゼには、動物、野菜、または微生物起源のものが含まれる。特に好ましい態様において、微生物プロテアーゼが用いられる。幾つかの態様において、前記プロテアーゼはセリンプロテアーゼであり、好ましくはアルカリ微生物プロテアーゼまたはトリプシン様プロテアーゼである。アルカリプロテアーゼの具体例にはスブチリシンが含まれ、特にバチルス由来のもの（例えば、スブチリシン、レントゥス、アミロリケファシエンス、スブチリシン・カールスバーク、スブチリシン３０９、スブチリシン１４７およびスブチリシン１６８）が含まれる。追加的な具体例には、ＵＳＲＥ３４，６０６号、ＵＳ５，９５５，３４０号、５，７００，６７６号、６，３１２，９３６号、および６，４８２，６２８号に記載のものが含まれ、これらは参照により本発明に取り込まれる。追加的なプロテアーゼの具体例には、トリプシン（例えば、ブタまたはウシ由来）、およびＷＯ８９／０６２７０号で記載されるフサリウム（Fusarium）プロテアーゼが含まれるが、これらに限定されない。好ましい市販で入手可能なプロテアーゼ酵素には、マクサターゼ（MAXATASE：登録商標）、マクサカル（MAXACAL：商標）、マクサペム（MAXAPEM：商標）、オプティクレアン（OPTICLEAN：登録商標）、オプティマーゼ（OPTIMASE：登録商標）、プロペラーゼ（PROPERASE：登録商標）、プラフェクト（PURAFECT：登録商標）およびプラフェクトＯＸＰ（PURAFECT：登録商標）（以上、ジェネンコー社製）の商品名で販売されているもの、アルカラーゼ（ALCALASE：登録商標）、サビナーゼ（SAVINASE：登録商標）、プリマーゼ（PRIMASE：登録商標）、デュラジム（DURAZYM：商標）、リラーゼ（RELASE：登録商標）およびエスペラーゼ（ESPERASE：登録商標）（以上、ノボザイム社製）の商品名で販売されているもの、およびＢＬＡＰ（商標）（ヘンケル社製、Kommanditgesellschaft auf Aktien、ジュッセルドルフ、ドイツ）が含まれる。様々なプロテアーゼは、ＷＯ９５／２３２２１号、ＷＯ９２／２１７６０号、およびＵＳ５，８０１，０３９号、５，３４０，７３５号、５，５００，３６４号、５，８５５，６２５号に記載されている。追加のＢＰＮ’変異体（「ＢＰＮ’−ｖａｒ１」および「ＢＰＮ−変異体１」）はＵＳＲＥ３４，６０６号に記載されている。追加のＧＧ−３６変異体（本発明で言及される「Ｇ３６−ｖａ．１」および「ＧＧ３６−変異体１」）はＵＳ５，９５５，３４０号および５，７００，６７６号に記載されている。更なるＧＧ３６−変異体はＵＳ６，３１２，９３６号６，４８２，６２８号に記載されている。本発明の１つの側面において、本発明の洗浄組成物は、組成物中０．００００１％〜１０％の追加プロテアーゼの重量レベルで追加プロテアーゼ酵素および組成物の重量で９９．９９９％〜９０．０％の洗浄補助物質を含む。本発明の他の態様において、本発明の洗浄組成物はまた、組成物の重量で０．０００１％〜１０％、０．００１％〜５％、０．００１％〜２％、０．００５％〜０．５％の６９Ｂ４プロテアーゼ（またはその相同体または変異体）のレベルのプロテアーゼ、および洗浄補助物質を含む洗浄組成物のバランス（例えば、９９．９９９��％〜９０．０％、９９．９９９％〜９８％、９９．９９５％〜９９．５％）を含む。
【誤訳訂正１４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３８６】
幾つかの態様において、ペルオキシダーゼは過酸化水素またはその発生源（例えば、過炭酸、過ホウ酸、または過硫酸）と組み合わせて用いられる。別な態様において、オキシダーゼは酸素と組み合わせて用いられる。両タイプの酵素は「溶液漂白」のために用いられ（すなわち、織物が洗濯溶液中でともに洗濯されるときに、染色された織物から他の織物に布地の染料が移動するのを防ぐため）、好ましくは増強剤（例えば、ＷＯ９４／１２６２１号およびＷＯ９５／０１４２６号を参照されたい）とともに用いられる。好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼには細菌または真菌起源のものが含まれるが、これらに限定されない。化学的または遺伝子的に修飾された変異体は幾つかの態様に含まれる。
【誤訳訂正１４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３９９】
別な態様において、本発明は本発明で提供される１つ以上のプロテアーゼを含む硬い表面洗浄組成物を提供する。したがって、幾つかの態様において、本発明の１つ以上のプロテアーゼを含む組成物はＵＳ６，６１０，６４２号、６，３７６，４５０号、および６，３７６，４５０号に記載されたもののように硬い表面洗浄組成物である。
【誤訳訂正１４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０５】
界面活性剤
本発明にしたがって前記洗浄組成物は界面活性剤または界面活性剤系を含むことができる。ここで、前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、両性イオン界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤、およびこれらの混合物から選択することができる。約３〜約５の実質ｐＨを有する組成物のような低ｐＨ洗浄組成物の場合、典型的にはエトキシ化硫酸アルキルを含まない組成物が、そのような界面活性剤はそのような組成物の酸性内容によって加水分解されることはないと考えられているため、望ましい。
【誤訳訂正１４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４０８】
ビルダーには、メリト酸（mellitic acid）、コハク酸、クエン酸、オキシジクエン酸、ポリマレイン酸、ベンゼン−１，３，５−トリカルボン酸、カルボキシメチロキシコハク酸、およびそれらの可溶塩のようなポリカルボキシレートと同様に、アルカリ金属、ポリ燐酸のアンモニウムおよびアルカノールアンモニウム塩、珪酸アルカリ金属、炭酸アルカリ土類金属およびアルカリ金属、アルミニウム珪酸ビルダーポリ炭酸化合物、ヒドロキシポリカルボン酸エーテル、無水マレイン酸とエチレンまたはビニルメチルエーテルとのコポリマー、１，３，５−トリヒドロキシベンゼン−２，４，６−トリスルホン酸、およびカルボキシメチロキシコハク酸、様々なアルカリ金属、エチレンジアミン四酢酸およびニトロ三酢酸のようなポリ酢酸のアンモニウムおよび置換アンモニウム塩が含まれるが、これらに限定されない。
【誤訳訂正１４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１７】
触媒金属錯体
本発明の洗浄組成物は触媒金属錯体を含むことができる。金属含有漂白触媒の１つのタイプは、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、またはマグネシウムカチオンのような明確な漂白触媒活性を有する遷移金属カチオン、亜鉛またはアルミニウムカチオンのようなほとんど又は全く漂白触媒活性をもたない補助金属カチオン、および特にエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）およびそれらの水溶性塩のような触媒および補助金属カチオンについて明確な安定定数を有する金属封鎖剤（sequestrate）含む触媒系である。そのような触媒はＵＳ４，４３０，２４３号に開示されている。
【誤訳訂正１４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２６】
幾つかの別な態様において、穀物由来の担体（例えば、製粉された小麦またはトウモロコシ）は適当な活性を有する酵素に一時に又は連続的にしみ込まされる。例えば、幾つかの態様において、製粉された小麦担体は初めにキシラナーゼに噴霧され、次にプロテアーゼに、任意にβ−グルコシダーゼに噴霧される。また本発明は、酵素飼料添加物として用いられるため、これらのしみ込んだ担体も包含する。好ましい態様において、これらのしみ込んだ担体は本発明の１つ以上のプロテアーゼを含む。
【誤訳訂正１４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４２９】
別な態様において、本発明の酵素飼料添加物は所望の比の量で所望の１つ以上の酵素を生産する遺伝子組換え微生物の構築を含む。幾つかの態様において、本発明の１つ以上のプロテアーゼをコードする遺伝子のコピー数を増加させることにより、および／または１つ以上のプロテアーゼをコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結した適切に強力なプロモータを用いることにより、これは達成される。更なる態様において、前記遺伝子組換え微生物株は、望まれる場合には特定の酵素活性の欠損（例えば、セルラーゼ、エンドクルカナーゼ等）を有する。
【誤訳訂正１４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３０】
追加的な態様において、本発明で提供される酵素飼料添加物はまた、１つ以上のキシラナーゼ、α−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ、および／またはリパーゼを含むがこれらに限定されない他の酵素を含む。幾つかの態様において、望ましい活性を有する酵素は、穀物由来の担体しみ込ませる前か、あるいはそのような酵素がそのような穀物由来の担体に一時に又は連続的にしみ込まされるかいずれかによりキシラナーゼおよびプロテアーゼと混合される。前記担体は次に最終的な飼料を調製するため穀物由来の飼料と順に混合される。別な態様において、前記酵素飼料添加物は個々の酵素活性の溶液として調製され、次にペレットまたはマッシュとして予め形成された飼料物質と混合される。
【誤訳訂正１４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３２】
幾つかの態様において、前記穀物由来の飼料は２５重量％以上、またはより好ましくは３５重量％以上の小麦またはトウモロコシまたはこれらの穀物両方の混合物を含む。さらに前記飼料は、飼料がｋｇあたり１００〜１００，０００単位のプロテアーゼ活性を含むような量で、飼料がプロテアーゼを含むような量で、プロテアーゼ（すなわち、本発明の１つ以上のプロテアーゼ）を含む。
【誤訳訂正１５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４３９】
上記に示されるように、本発明はデルヘイプロセス（例えば、ＤＥ−Ａ−４３ ３２ ６９２を参照されたい）のような方法に関連して用いられる。このプロセスにおいて、羊毛の抗縮充性を改善するために前記羊毛は可溶性タングステン酸塩の存在下てせ過酸化水素水溶液中で処理され、次に任意に合成ポリマーの溶液または分散液で処理される。この方法において前記羊毛は、２〜６０％（ｗ／ｗ）、好ましくは８〜２０％（ｗ／ｗ）の触媒（好ましくはＮａ2ＷＯ4）の存在下、および非イオン性浸潤剤（wetting agent）の存在下で過酸化水素（０．１〜３５％（ｗ／ｗ）、好ましくは２〜１０％（ｗ／ｗ））水溶液中で処理される。好ましくは、前記処理はｐＨ８〜１１、室温で行われる。処理時間は過酸化水素および触媒の濃度に依存するが、好ましくは２分以下である。酸化処理の後、前記羊毛は水にすすがれる。残留した過酸化水素の除去のため、および任意に漂白を追加するため、前記羊毛はさらに還元剤（例えば、亜硫酸塩、亜燐酸塩等）の酸性溶液中で処理される。
【誤訳訂正１５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４０】
幾つかの態様において、前記酵素処理は約１分および約１２０分の間の時間で行われる。この工程は、好ましくは約２０℃および約６０℃の間の温度で、より好ましくは約３０℃および約５０℃の間の温度で行われる。あるいは、前記羊毛は酵素水溶液に浸され又は埋め込まれ、次に慣例的な温度および圧力で、典型的には約３０秒〜約３分蒸気に晒される。幾つかの好ましい態様において、前記蛋白分解酵素処理は緩衝液を含んでもよい酸性または中性またはアルカリ性の溶媒中で行われる。
【誤訳訂正１５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４１】
別な態様において、前記酵素処理工程は1つ以上の慣例的なアニオン性、非イオン性（例えば、ドバノール；ヘンケル社）またはカチオン性界面活性剤の存在下で行われる。更なる態様において、前記羊毛または動物毛物質は蛋白分解酵素による処理の前または同時のいずれかに超音波処理に付される。幾つかの好ましい態様において、前記超音波処理は約５０℃の温度で約５分行われる。幾つかの好ましい態様において前記酵素処理工程で用いられる蛋白分解酵素の量は羊毛または動物毛物質の重量に基づいて約０．２ｗ／ｗ％および約１０ｗ／ｗ％の間である。幾つかの態様において、処理工程の数にしたがって、前記酵素処理は羊毛または動物毛物質の染色および／または擦り洗いの間に、染色、漱ぎ、および／または擦り洗いバスにプロテアーゼを添加することにより簡単に行われる。幾つかの態様において酵素処理はプラズマ処理の後に行われるが、他の態様においては前記２つの処理工程は反対の順に行われる。
【誤訳訂正１５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４４】
皮革および皮膚は通常、塩漬けまたは乾燥の生皮革または皮膚の形態で皮革工場に納入される。皮革または皮膚の革製品への加工には浸漬、脱毛およびアルカリ液浸漬を含む数種の異なる加工工程が含まれる。これらの工程はウェット加工で構成され、ビームハウス（beamhouse）で行われる。本発明のプロテアーゼを利用する酵素処理は皮加工に含まれる過程の任意の時点で利用できる。しかしながら、プロテアーゼは通常ウェット加工（すなわち、浸漬、脱毛および／またはベイティング（bating）の間）の間で用いられる。したがって、幾つかの好ましい態様において、本発明の１つ以上のプロテアーゼを用いる前記酵素処理はウェット加工段階で発生する。
【誤訳訂正１５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４５】
幾つかの態様において、本発明の浸漬工程は慣例的な浸漬条件（例えば、ｐＨ６．０〜１１の範囲のｐＨで）で行われる。幾つかの好ましい態様において、ｐＨ範囲はｐＨ７．０〜１０．０である。別な態様において前記温度は２０〜３０℃の範囲内であり、一方他の態様において好ましくは２４〜２８℃の範囲内である。より更なる態様において前記反応時間は２〜２４時間の範囲内であり、一方好ましい範囲は４〜１６時間である。追加的な態様において、界面活性剤（tensides）および／または防腐剤は所望の場合に用いられる。
【誤訳訂正１５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４４６】
第２相のベイティング工程は通常、ベイト（bate）自体の添加により開始される。幾つかの態様において、前記酵素処理はベイティングの間に行われる。幾つかの好ましい態様において、前記酵素処理は脱灰後、ベイティングの間に行われる。幾つかの態様において、本発明のベイティング工程は慣例的な条件（例えば、ｐＨ６．０〜９．０の範囲のｐＨで）を用いて行われる。幾つかの好ましい態様において、前記ｐＨ範囲は６．０〜８．５である。更なる態様において前記温度は２０〜３０℃の範囲内であり、一方他の態様において好ましくは２５〜２８℃の範囲内である。幾つかの態様において前記反応時間は２０〜９０分の範囲内であり、一方他の態様においてそれは４０〜８０分の範囲である。皮製品の製造工程は当業者に周知である（例えば、ＷＯ９４／０６９４２９号、ＷＯ９０／１１２１１８９号、ＵＳ３，８４０，４３３号、ＥＰ５０５９２０号、ＧＢ２２３３６６５号、およびＵＳ３，９８６，９２６号を参照されたい。これらは参照により本発明に取り込まれる）。
【誤訳訂正１５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５１】
以下に示す実験的な開示において、以下の省略記号が適用される。すなわち、PI(プロテイナーゼ阻害剤),ppm(parts  per  million);  M(モル);  mM(ミリモル);  μM(マイクロモル);  nM (ナノモル);  mol(モル);  mmol(ミリモル);  μmol(マイクロモル);  nmol(ナノモル);  gm(グラム);  mg(ミリグラム);  μg(マイクログラム);  pg(ピコグラム);  L(リットル);  ml  and  mL(ミリリットル);  μl  and  μL (マイクロリットル);  cm(センチメータ);  mm(ミリメータ);  μm(マイクロメータ);  nm(ナノメータ);  U(単位);  V(ボルト);  MW(分子量);  sec(秒);  min(s)(分);  h(s)  and   hr(s)(時間);  ℃(摂氏度);  QS(十分な量、quantity  sufficient);  ND(行われず、not  done);  NA(該当なし、not  applicable);  rpm(１分間当たりの回転数);  H20(水、water);  dH20(脱イオン水、deionized  water);  HCl(塩酸);  aa(アミノ酸);  bp(塩基対);  kb(キロ塩基対);  kD(キロダルトン、kilodaltons);  cDNA (コピー又は相補ＤＮＡ、copy  or  complementary  DNA);  DNA(デオキシリボ核酸、deoxyribonucleic acid);  SSDNA(単鎖ＤＮＡ、single  stranded  DNA);  dsDNA(二重鎖ＤＮＡ、double stranded  DNA);  dNTP (デオキシリボ核酸三燐酸、deoxyribonucleotide  triphosphate);  RNA(リボ核酸、ribonucleic  acid);  MgCl2(塩化マグネシウム);  NaCl(塩化ナトリウム);  w/v(重量／容量);  v/v(容量／容量);  g(gravity);  OD(光学密度);  ダルベッコリン酸緩衝溶液(DPBS);  SOC(バクト-トリプトン、バクテリア酵母抽出物、10mM  NaCl;  2.5mM  KCl);  テリフィック・ブロス、Terrific Broth (TB;  12g/l  Bacto  Tryptone,  24g/l  glycerol, 2.31g/l  KH2PIO4,  and  12.54g/l [K2HP04];  OD280(280nmにおける光学密度);  OD600(600nmにおける光学密度);  A405(405nmにおける吸光度);  Vmax(酵素触媒反応における最大初期速度);  PAGE(ポリアクリルアミドゲル電気泳動);  PBS(リン酸緩衝生理食塩水 [150mM  NaCl, 10mMリン酸ナトリウム緩衝液pH7.2]);  PBST(PBS+0.25TWEENR 20);  PEG(ポリエチレングリコール);  PCR(ポリメラーゼ・チェイン反応); RT-PCR (逆転写PCR);  SDS(ドデシル硫酸ナトリウム);  Tris(トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン);  HEPES(N-[2-ヒドロキシエチル]ピペリジン-N-[2-エタン硫酸]);  HBS(HEPES緩衝生理食塩水);SDS  (ドデシル硫酸ナトリウム);  Tris-HCI(tris-塩酸);  Tricine(N-[トリス-(ヒドロキシメチル)-メチル]-グリシン);  CHES(2-(N-シクロ-ヘキシルアミノ)エタン硫酸);  TAPS(3-{[トリス-(ヒドロキシメチル)-メチル]-アミノ}-プロパン硫酸);  CAPS(3-(シクロ-ヘキシルチミノ)-プロパン硫酸);  DMSO(ジメチルスルホキシド);  DTT(1,4-ジチオ-DL-スレイトール);  SA(シナピン酸、sinapinic  acid(s,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシ桂皮酸);  TCA(トリクロロ酢酸);  Glut  and  GSH(還元グルタチオン);  GSSG(酸化グルタチオン);  TCEP(トリス[2-カルボキシエチル]ホスフィン);  Ci(キューリー、Curies);  mCi(ミリキューリー); μCi (マイクロキューリー);  HPLC(高速液体クロマトグラフィー);  RP-HPLC(逆相高速液体クロマトグラフィー);  TLC(薄層クロマトグラフィー);  MALDI-TOF(マトリクス支援レーザー解離／イオン化時間飛行型質量分析);  Ts(トシル);  Bn(ベンジル);  Ph(フェニル);  Ms(メシル);  Et(エチル);  Me(メチル);  Taq(Thermus  aquaticus  DNAポリメラーゼ);  Klenow(DNAポリメラーゼI  large(Klenow)断片);  rpm(１分間当たりの回転数);  EGTA(エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル);  N,N,N',N'-四酢酸);  EDTA(エチレンジアミン四酢酸);bla(β-ラクタマーゼ又はアンピシリン耐性遺伝子);  HDL(重質（heavy  duty）液体洗剤、すなわち、洗濯洗剤);  ＭＪリサーチ社(MJ Research、Reno、NV);  ベースクリ��社(Baseclear BV  Inc.、Leiden、the  Netherlands);  パーセプティブ社(PerSeptive  Biosystems、Framingham、MA);  サーモ・フィネガン社(ThermoFinnigan、 San  Jose、CA);  アルゴ社(Argo  BioAnalytica、Morris  Plains、NJ);  サイツＥＫＳ社(SeitzSchenk  Filtersystems  GmbH、Bad  Kreuznach、Germany);  ポール社(Pall Corp.、East  Hills、NY);  スペクトラム社(Spectrum  Laboratories、Dominguez  Rancho、CA);  モレキュラー・ストラクチャ社(Molecular  Structure  Corp.、WoodIands、TX);  アクセルリス社  (Accelrys  Inc.、San  Diego、CA);  ケミカル・コナンピューティング社(Chemical  Computing  Corp.、Montreal、Canada);  ニュー・ブランズウィック社(New  Brunswick  Scientific  Co.、Edisan、 NJ);  ＣＦＴ社(Center  for  Test  Materials、Vlaardingeng、the  Netherlands);  プロクター＆ギャンブル社(Procter  &  Gamble  Inc.、Cincinnati、OH);  ＧＥヘルスケア社(GE  Healthcare、Chalfont  St.Giles、United  Kingdom);  ＤＮＡ２．０社(DNA2.0、Menlo  Park、CA);  オキソイド社(Oxoid、Basingstoke、Hampshire、UK);  メガザイム社(Megazyme  International  lreland  Ltd.、Bray  Business  Park、Bray、Co.、Wicklow、Ireland);  フィンザイム社(Finnzymes  Oy、Espoo、Finland);  ケルコ社(CP  Kelco、Wilmington、DE);  コーニング社  (Corning  Life  Sciences、Corning、NY);  ＮＥＮ社(NEN  Life  Science  Products、Boston、MA);  ファーマＡＳ社(Pharma  AS、Oslo、Norway);  ディナル社(Dynal、Oslo、Norway);  バイオ・シンセシス社(Bio-Synthesis、Lewisville、TX);  ＡＴＣＣ(American  Type  Culture  Collection、Rockville、MD);  ギブコ／ＢＲＬ社(Gibco/BRL、Grand  Island、NY);  シグマ社(Sigma  Chemical  Co.、St.Louis、MO);  ファルマシア社(Pharmacia  Biotech、Piscataway、NJ); ＮＣＢＩ(National  Center  for  Biotechnology  Information);  アプライド・バイオシステムズ社(Applied  Biosystems、Foster  City、CA);  ＢＤバイオサイエンス・アンド・クローンテック社(BD  Biosciences  CLONTECH  Laboratories、Palo  Alto、CA);  オペロン・テクノロジーズ社(Operon  Technologies  Inc.、Alameda、CA);  ＭＷＧバイオテック社(MWG  Biotech、High  Point、NC);  オリゴズＥｔｃ社(Oligos  Etc  Inc.、Wilsonville、OR);  バケム社(Bachem  Biosdience  Inc.、King  of  Prussia、PA);  ディフコ社(Difco  Laboratories、Detroit、MI);  メディアテック社(Mediatech、Herndon、VA);  サンタ・クルツ社(Santa  Cruz  Biotechnology  Inc.、Santa  Cruz、CA);  オキソイド社(Oxo
id  Inc.、Ogdensburg、NY);  ワシントン社(Worthington  Biochemical  Corp.、Freehoid、NJ);  ギブコＢＲＬ社(Life  Technologies  Inc.、Gaithersburg、MD);  ミリポア社(Millipore、Billerica、MA);  バイオ・ラッド社(Bio-Rad、Hercules、CA);  インビトロジェン社(Invitrogen  Corp.、San  Diego、CA);  ＮＥＢ社(New  England  Biolabs、Beverly、MA);  シグマ社(Sigma  Chemical  Co.、St.Louis、MO);  ビアース社(Pierce  Biotechnology、Rockford、IL);  株式会社タカラ(Takara  Bio  Inc.、Otsu、Japan);  ロシュ社(Hoffmann-La  Roche、Basel、Switzerland);  ＥＭサイエンス社(EM  Science、Gibbstown、NJ);  キアジェン社(Qiagen  Inc.、Valencia、CA);  バイオデザイン社(Biodesign  Intl.、Saco、Maine);  アプタジェン社(Aptagen  Inc.、Herndon、VA);  ソーバル社(Sorvall  brand、from  Kendro  Laboratory  Products、Asheville、NC);  モレキュラー・デバイシーズ社(Molecular  Devices  Corp.、Sunnyvale、CA);  Ｒ＆Ｄシステムズ社(R&D  Systems、Minneapolis、MN);  ストラタジーン社(Stratagene  Cloning  Systems、La  Jolia、CA);  マーシュ社(Marsh  Biosciences、Rochester、NY);  バイオ・テック社(Bio-Tek  Instruments、Winooski、VT);  バイオコア社(Biacore  Inc.、Piscataway、NJ);  ペプロテック社(PeproTech、Rocky  Hill、NJ);  シンペプ社(SynPep、Dublin、CA);  ニュー・オブシェクティブ社(New  Objective  brand;  Scientific;  I
nstrument  Services  Inc.、Ringoes、NJ);  ウォーターズ社(Waters  Inc.、Milford、MA);  マトリクス・サイエンス社(Matrix  Science、Boston、MA);  ディオネックス社(Dionex  Corp.、Sunnyvale、CA);モンサント社(Monsanto  Co.、St.Louis、MO);  ウィンターシャル社(Wintershall  AG、Kassel、Germany);  ＢＡＳＦ社(BASF  Co.、Florham  Park、NJ);  ハンツマン社(Huntsman  etrochemical  Corp.、Salt  Lake  City、UT);  エニケム社(Enichem  iberica、Barcelona、Spain);  フルカ・ヘミー社(Fluka  Chemie  AG、Buchs、Switzerland);ギスト・ブロケイズ社(Gist-Brocades、NV、Delft、the Netherlands);  ダウ・コーニング社(DOW  Corning  Corp.、Midland、Ml);およびマイクロソフト社(Microsoft  Inc.、Redmond、WA)
【誤訳訂正１５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４５５】
Ａ． ９６‐ウエルマイクロタイタープレートにおけるタンパク質含有量決定のためのTCAアッセイ
このアッセイは、230RPMでの振動および加湿エアレーションを伴いながら4日間、33度で培養されたマイクロタイタープレートからろ過された培養上清液を用いて開始された。新鮮な96‐ウエル平底プレートがアッセイに使用された。最初に100μL/wellの0.25 N HClがウエルに入れられた。次に、50μLのろ過された培養ブロスがウエルに加えられた。ブランクリーディングを提供するために、405nm（プレートリーダーで、５秒のミキシングモードを使用）での光散乱／吸光度が、次に決定された。
【誤訳訂正１５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６２】
方法：
インキュベーションに先立って、ケラチンが一回に少しづつ100μmのふるいでふるいにかけられた。次に、10ｇの、100μmより小さいケラチンが8.2までpHを一定間隔で調整されながら、室温で20分以上洗剤液の中で攪拌された。最後に、懸濁液が室温で20分間遠心分離された（Sorvall、GSA roter、13,000 rpm）。次に、この手順が繰り返された。最後に、湿性の沈殿物が総容積200mlまで洗剤において懸濁され、その懸濁液はピペットの間、攪拌され続けた。インキュベーションに先立って、マイクロタイタープレート（MTPｓ）は、バイオヒットのマルチチャネルピペットおよび1200μlのチップを用いて、ウエル1つ当たり200μlの基質で満たされた（200μlの6分注し、また、チップ中のケラチンの沈殿を無効にするように、可能な限り速やかに分注された）。次に、10μlのろ過された培養液が基質を含むMTPsに加えられた。プレートはテープで覆われ、インキュベーターに置かれ、350rpmで3時間にわたり20℃でインキュベートされた（ イノバ 4330〔New Brunswick〕）。培養に続いて、プレートは3000 rpmで3分間遠心分離機にかけられた（iSigma 6K 15 centrifuge ）。インキュベーターから第一番目のプレートを除去する前の約15分間に、TNBS試薬は試薬Ａの50mlにつき1mlのTNBS溶液を混合することによって調製された。
【誤訳訂正１５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６５】
Ｄ． プロテアーゼの性能試験のためのマイクロスウォッチアッセイ
これらのアッセイで使用された全ての洗剤は酵素を含んでなかった。
【誤訳訂正１６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４６９】
３．冷水液体洗剤（米国の条件）：
ミリQ水は6gpgの水の硬度（Ca/Mg=3/1）に調整され、1.60 g/l TIDE（登録商標）LVJ-1洗剤を加え、および洗剤液は15分以上勢いよく攪拌する。5mMのHepes バッファーを加え、pHは8.2に設定する。洗剤はアッセイで使用される前に、0.22μmのフィルター（例えば、ナルゲン・トップボトルフィルター）を通してろ過された。
【誤訳訂正１６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７２】
漂白剤の固定化 （“Superfixed”）：
10Lの水を含んだ10Lのステンレス鋼ビーカーにおいて、ヨーロッパ条件（＝Super fixed）で使用されるスウォッチの固定化のために、水が60℃に加熱された。日本条件およびその他の条件のために、スウォッチが室温（=3K）で固定化された。次に、10mlの30%過酸化水素（１ml/LのH2O2、H2O2の終末濃度は300ppm）が加えられた。次に、100スウォッチ（10スウォッチ/L）が溶液に加えられた。溶液は、時々攪拌および温度を測定しながら30分間放置されておかれた。スウォッチは7-8倍の冷水ですすがれ、乾燥のためにベンチに置かれた。スウォッチの彎曲を防ぐように、タオルがスウォッチの表面に置かれた。３Kのスウォッチについて、この手順が繰り返される（水が加熱されなかったおよび10×量の過酸化水素が加えられたことを除外して）。
【誤訳訂正１６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７３】
別の固定化 （「３K」スウォッチ固定化）：
この特別なスウォッチ固定化は室温で行われたが、加えられた30% のH2O2の量は、スーパーフィクススウォッチ固定化において10×以上である。気泡形成（泡立ち）は明らかであり、従ってこれを説明するためにより大きなビーカーを使用することが必要である。最初に、8リッターの蒸留水が10L のビーカーに入れられ、80mlの30%過酸化水素が加えられる。水と過酸化物は柄杓を使って充分に混合される。次に、均一な固定化を保障するために、40ピースのEMPA 116スウォッチが、溶液に加えられる前に、ファン（fan）に拡げられた。スウォッチは最初の5分は連続的に、残り25分は時々、30分間にわたり溶液中でかき混ぜられた。溶液は廃棄され、スウォッチは毎回およそ6リッターの蒸留水を用いて６回濯がれた。スウォッチは乾燥させるためにペーパータオルの表面に置かれた。空気乾燥されたスウォッチは、エクスパルション・プレス（expulsion press）上の1/４のサーキュラ・ダイ(circular die)を用いて穴をあけられた。シングルマイクロスウォッチが、表面積全体を露出するために96ウエルのマイクロタイタープレートの各ウエルに垂直に置かれた（すなわち、ウエルの底に広げるのでなく）。
【誤訳訂正１６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７５】
試験方法
インキュベーターが望ましい温度で設置された。望ましい温度は、液体状の冷水に対しては20℃、低ｐHの液体状に対しては30℃、ヨーロッパ条件に対しては40℃、日本および北米条件に対しては20℃であった。前処理および事前カットされたスウォッチは、上述のように、96ウエル MTPのウエルに入れられた。酵素サンプルは必要に応じて、10 mMのNaCL、0.005% TWEEN（登録商標）-80溶液において、20×望ましい濃度まで希釈された。洗剤液が上述のように調製された。次に、190μlの洗剤液がMTPの各ウエルに加えられた。この混合のために、10μlの酵素溶液が各ウエルに加えられた（総容積200μl/ウエル供給するまで）。MTPはプレートシーラーを用いて密封され、350 rpmで攪拌されながら60分間インキュベータに置かれた。適切な条件下でのインキュベーションに続いて、各ウエルから100μlの溶液が除去され、新鮮なMTPの中に置かれた。100μlの溶液／ウエルを含む新しいMTPは、MTPリーダーで405 nmで解読された。マイクロスウォッチおよび洗剤を含むが酵素は含まない対照同様、ブランク対照も含まれた。
【誤訳訂正１６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７７】
BMI性能の計算：
得られた吸光度値は、ブランク値（酵素がない場合はマイクロスウォッチのインキュベーション後に得られた）について修正された。結果として得られた吸光度は、加水分解活性の尺度であった。各サンプル（変異体）について性能指数が計算された。性能指数は、同一のタンパク質濃度における変異体の性能（実行値）と標準酵素（理論値）を比較する。さらに理論値は、標準酵素のラングミュア式のパラメータを使って計算できる。性能指数（PI）が1より大きい場合（ PI＞１）は、より良い変異体（ 標準〔例えば、野生型〕と比較した場合）と同定し、他方、PIが１である場合（ PI＝１）は、変異体は標準と同じように機能すると同定し、およびPIが１より小さい場合（ PI＜１）は、変異体は標準よりも低く機能すると同定する。従って、PIは一定の環境の下での使用に関してあまり望ましくない変異体だけでなく成功しそうなものも同定する。
【誤訳訂正１６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７８】
Ｄ．ジメチルカゼイン加水分解アッセイ（96ウエル）
このアッセイ系において、使用された化学製品および洗剤は以下の通り：
ジメチルカゼイン（DMC）： シグマ社製 C-9801
TWEEN（登録商標） ‐80： シグマ社製 P-8074
PIESバッファー（遊離酸）： シグマ社製 P-1851； 15.1gが約960mlの水に溶解される；pHが４N NaOHを用いて7.0に調整される、１ml 5%のTWEEN（登録商標）‐80が加えられ容積は1000 mlにする。PIPESの終末濃度およびTWEEN（登録商標）‐80の終末濃度は、それぞれ50mMおよび0.005%である。
ピクリルスルホン酸（TNBS） シグマ社製 P-2297（5%水溶液）
洗剤 Ａ 45.4g Na2B4O7.10 H2O ( メルク社製 6308 )および15mlの4N NaOHが一緒に終末容積1000mlまで溶解される（ 必要に応じて、加熱することによって）。
洗剤 B 35.2g NaH2PO4.H2O ( メルク社製 6346 )および0.6gのNa2SO3( メルク社製 6657 )が一緒に終末容積1000mlまで溶解される。
【誤訳訂正１６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７９】
方法：
基質を調製するために、４ｇのDMCが400 ml PIPESバッファに溶解された。ろ過された培養液の上清がPIPESバッファにおいて希釈された：成長板（growth plate）の対照の終末濃度は、20ppmであった。次に各10μlの希釈された上清がMTPのウエルにおける200μlの基質に加えられた。次にMTPプレートがテープで覆われ、数秒間振動させられ、そして攪拌しないで2時間ほど37℃のオーブンに置かれた。
【誤訳訂正１６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８０】
オーブンから第一プレートを除去する前に約15分間、TNBS試薬が試薬A 50 mlにつきTNBS溶液1mlを混合することによって調製された。MTPｓはウエル1つにつき60μｌのTNBS試薬Aで満たされた。インキュベートされたプレートは数秒間振動させられ、その後10μlがTNBS試薬Aを有するMTPsへ移された。プレートがテープで覆われ、室温で、500 rpmでベンチシェーカー（ BMG サーモスター）において20分間振動させられた。200μlの試薬Ｂがウエルに加えられ、シェーカーで1分間混合され、および、405 nmでの吸光度がMTP リーダーを用いて決定された。
【誤訳訂正１６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８１】
ジメチルカゼイン加水分解活性の計算：
得られた吸光度値はブランク値（酵素がない基質）に関して修正された。結果として得られた吸光度は、加水分解活性の尺度である。（任意の）サンプルの比活性度は吸光度で除して計算され、タンパク質濃度が決定される。
【誤訳訂正１６９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８３】
方法：
ろ過された培養液の上清がPIPESバッファにおいて（成長板（growth plate）の対照の終末濃度に基づいて）20ppmに希釈された。次に、各50μlの希釈された上清がMTPの空のウエルに入れられた。MTPプレートは90分間、60℃および400 rpmで、iEMS インキュベータ／シェーカーHT( サーモラボシステム社)においてインキュベートされた。プレートは氷上で5分間冷却された。次に、１0μlの溶液が200μlのジメチルカゼイン基質／ウエルを含んだ新鮮なMTPに加えられた。このMTPプレートがテープで覆われ、数秒間振動させられ、そして攪拌しないで2時間ほど37℃のオーブンに置かれた。DMC加水分解アッセイで使用されたものと同じ検出方法が用いられた。
【誤訳訂正１７０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８５】
Ｆ． ＬＡＳ安定性アッセイ
LAS安定性は0.06％ のLAS (ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム)の存在下で、試験タンパクのインキュベーション後に計測され、および残存活性はAAPFアッセイを使用して測定された。
【誤訳訂正１７１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８６】
試薬：
ドデシルベンゼンスルホン酸、ナトリウム塩（＝LAS）：シグマ社製 D-2525
TWEEN（登録商標）‐80：シグマ社製 Ｐ-8074
トリス・バッファ（遊離酸）：：シグマ社製 Ｔ-1378）；6.35ｇが約960mlの水に溶解される；pHは4H HClで8.2に調整される。トリスの終末濃度は52.5mMである。
LAS原液：MQ水で10.5%のLAS溶液を調整する（＝MQ 100 mlにつき10.5ｇ）。
トリス・バッファ−100 mM / pH 8.6 ( 100mM トリス/ 0.005% Tween80 )
トリス−カルシウム・バッファ pH8.6 ( 100mM トリス/ 10mM CaCI2/0.005% Tween80 )
【誤訳訂正１７２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８８】
方法：
10μl、0.063%のLAS溶液がpH8.5、52.5mMのトリス・バッファで調製された。100mg/mlのAAPF原液（ DMSO内の）の1mlをpH8.6、100 ml(100ｍM)のトリス・バッファに加えることにより、AAPFの希釈標準溶液が調製された。上清を希釈するために、平底プレートに希釈バッファが充填され、上清のアリコートが加えられ、十分に混合された。希釈率は成長板（AAPF 活性）においてASP-対照の濃度によって決まった。望ましいタンパク濃度は80 ppmであった。
【誤訳訂正１７３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４８９】
希釈された上清の10μlが、190μl、0.063％のLASバッファ／ウエルに加えられた。MTPはテープで密封され、数秒間振動させられ、そして200 rpmの攪拌で、60分間、25℃でインキュベータ（イノバ 4230）に置かれた。初期活性（t=10分）は10分間のインキュベーションの後、各ウエル内の10μlの混合物を、190μlのAAPF希釈標準溶液を含む新鮮なMTPに導入することにより測定された。これらの溶液は十分に混合され、AAPF活性はMTPリーダー（25℃で、5分間に20リーディング）。
【誤訳訂正１７４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９０】
最終活性（ｔ＝60分）は、60分のインキュベーション後にインキュベーションプレートから別の10μlの溶液を除去することによって測定された。次に、AAPF活性が上記のとおり測定された。計算は次のとおり行われた：残存活性のパーセンテージは、〔t-60値〕＊100／〔t-10値〕。
【誤訳訂正１７５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５０７】
精製
培養液ブロスから分離された細胞は、８K分子量カットオフ（MWCO）スペクトラ−Por７(スペクトラム)透析チュービングを使用して、pH 5.4、1mM CaCl220mM(2-(4-モルホリノ)-エタンスルフォン酸（「MES」）に対して透析された。透析は一晩またはサンプルの伝導率がMESバッファの伝導率と等しいまたはより小さくなるまで行われた。透析された酵素サンプルは、10×100mm（7.845mL）ポロス高密度スルフォ−プロピル（HS）20 (20ミクロン) 陽イオン交換カラム（パーセプティヴ バイオシステムズ社製）を備えたバイオキャド・ビジョン（バイオシステムズ社出願）を使用して精製された。5mL/minに予め平衡化されたカラムへの酵素の充填の後、カラムは25カラム容積において、25mM MES、pH6.2、1mM CaCl2から25mM(N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N’-[2-エタン]硫酸[C8H18N2O4S、CAS # 7365-45-9])(「HEPES」)、pH8.0、1mM CaCl2までのpH勾配で、40mL/minで洗浄された。画分（8mL）は運転の間集められた。５カラムの容積について洗浄工程はPH 8.0が維持され、次に、酵素は勾配（35カラム容積における同じバッファにおいて0-100mM NaCl）を利用して溶出された。画分におけるプロテアーゼ活性はpNAアッセイ（sAAPF - pNA; デルマル他、前述）を使用してモニターされた。40mM NaClに溶出されたプロテアーゼ活性は、20mM MES、pH 5.8、1mM CaCl2まで濃縮され、バッファは交換された（5K MWCO VIVA サイエンス20mL濃縮器を使用して）。この材料は、酵素のさらなる性質決定に使用された。
【誤訳訂正１７６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５１６】
セリンプロテアーゼ遺伝子断片のPCR 増幅
セルロモナス 種. 単離 69B4 ゲノムDNAは、上述したプライマーを使用して推定セリンプロテアーゼ遺伝子断片のPCR増幅のための鋳型として使用された。PCRはハイフィデリティプラチナTaqポリメラーゼを使用して実施された（目録番号11304-102；インビトロゲン社）。条件は個々の実験によって決定されたが、典型的には、30サイクルがサーマルサイクラーで行われた（MJリサーチ社）。成功的な増幅は、1%のアガロースでのPCR反応の電気泳動法によって検証された。プライマーTTGWXCGT−FWおよびGDSGGX−RVを用いてセルロモナス種. 69B4から増幅されたPCR生成物は、製造説明書に従ってキアクィックスピンゲル抽出キットを使用したゲル抽出によって精製された（目録番号28704；キアジェン社）。精製されたPCR生成物は、製造説明書に従って市販のｐCR２.1TOPOベクターシステム（インビトロゲン社製）にクローンされ、コンピテントE.コーリTOP10細胞に形質転換された。組み換えプラスミドを含むコロニーは青／白選択を使用して視覚化された。組み換え形質転換体の迅速なスクリーニングのために、プラスミドDNAが、推定陽性（すなわち白）コロニーの培養液から調製された。DNAはキアジェン社プラスミド精製キットを使用して分離され、ベースクリアによって配列決定された。177bpのDNA挿入断片を含むクローンの1つは、種々のストレプトマイセス種のいくつかのストレプトグリシンのようなプロテアーゼと、さらにまた、他の細菌種からのセリンプロテアーゼと幾つかの相同性を示した。この177bp断片の配列をコードするDNAおよびタンパク質は、図１３に示される。
【誤訳訂正１７７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５２１】
セルロモナス種. 69B4の染色体DNAは、制限酵素Apal、BamHl、BssHll、Kpnl、Narl、Ncol、Nhel、Pvul、SallまたはSstllを用いて消化され、製造説明書に従って、キアゲン社製PCR精製キットを使用して精製され、およびT4 DNAリガーゼ（インビトロゲン社製）を使用して自己結合された。連結反応混合物はキアゲン社製PCR精製キットを使用して精製され、およびPCRは69B4int−RV1および69 B4int−FW２プライマーを用いて実施された。DNA断片上のPCRはNcolで消化され、次に自己結合され、約1.3kbのPCR生成物となった。DNA配列分析（ベースクリア）は、このDNA配列がセルロモナスからのストレプトグリシン様プロテアーゼ遺伝子の主要な部分を包含することを明らかにした。このプロテアーゼは、「69B4プロテアーゼ」と命名され、および、セルロモナス69B4プロテアーゼをコードする遺伝子は「asp遺伝子」と命名された。asp遺伝子の全体配列は、69B40int−FW2プライマーおよびその他のプライマー：69B4−for4(5’AAC GGC GGG TTC ATC ACC GCC GGC CAC TGC GGC C37( 配列番号 16 ))を用いた追加的な逆方向PCR反応によって得られた。セルロモナス種. 69B4のゲノムDNAの断片を消化し、自己結合するNcol、BssHll、 ApalおよびPvul上のこれらのプライマーを有する逆方向PCRは、asp遺伝子の全体配列の同定をもたらす。
【誤訳訂正１７８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５２７】
【表１１】
2007515164.tif 000002
【誤訳訂正１７９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５３２】
以下の配列は、セルロモナス系69B4（DSM 16035）由来の前駆体プロテアーゼおよびシグナル配列のアミノ酸配列（配列番号６）であり、次の配列を含む。すなわち、配列番号１、２、３および４に記載のDNA配列によってコードされた、シグナル配列[セグメント 1a-c ]（ 残基1-28 [-198から-171]）、N末端プロ配列 [セグメント 2a-r ]（ 残基29-198 [-170から-1]）、成熟プロテアーゼ [セグメント 3a-t ]（ 残基199-387 [1から-189]）、およびC末端プロ配列 [セグメント 4a-l ]（ 残基388-495[190-398] ）である。成熟プロテアーゼアミノ酸配列のN末端配列は太字である。
【誤訳訂正１８０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５４７】
トリプティックマップが、本発明で説明されたように改変された技術的に既知の方法（クリスチャンソン他、Anal．Biohem．223：119-29[1994年]）を使用して作成された。
10-50μgのプロテアーゼを含むプロテアーゼ溶液は、1.5mlのマイクロチューブ内の冷水を用いて１：１に希釈された。1.0のN HClが0.1 N HClの終末濃度になるまで加えられ、完全に混合され、氷上で10分間インキュベートされた。次に、50%のトリクロロ酢酸（「TCA」）が10%TCAの終末濃度まで加えられ、混合された。サンプルは氷上で10分間インキュベートされ、2分間遠心分離機にかけられ、上清は廃棄された。次に、1mlの90%冷アセトンが、再懸濁したペレットに加えられた。その結果得られたサンプルは、次に1分間遠心分離機にかけられ、上清は迅速に移され、残った液体は真空吸引によって除去された。乾燥ペレットは0.65mlのアンモニウム重炭酸塩溶液（重炭酸塩の終末濃度：0.5M）内の12μlの8.0M尿素溶液（480mg尿素[ロシュ社製、目録 #1685899 ]）に溶解され、そして37℃で3-5分間インキュベートされた。溶液は、48μlのn-オクチル-ベータ‐D-グルコピラノシド溶液（「ｏ-water」）(200mlの水中に200mgのn-オクチル-ベータ‐D-グルコピラノシド[C14H28O6、f.w. 292.4])を用いてゆっくりと希釈された。次に、2.0μlのトリプシン（1mM HCl中に2.5mg/ml）が加えられ、混合物は37℃で15分間インキュベートされた。蛋白質分解反応は6μlの10%のトリフルオロ酢酸（「TFA」）を用いて停止された。不溶性物質および気泡が、1分間の遠心分離によってサンプルから除去された。トリプシン消化物が2.1×150mmC-18カラムのRP-HPLC（5μl粒子サイズ、300オングストローム細孔サイズ）によって分離された。溶離グラディエントが、水中の0.1%（v/v）TFAおよび流速0.2ml-minのアセトニトリル中の0.08%（v/v）TFAから形成された。カラム分画は50℃まで加熱された。ペプチド溶離は215nmでモニターされ、データは215nmおよび280nmで集められた。サンプルは次に、サーベイヤーHPLCを備えたLCQアドバンテージ質量分光器（両方ともテルモ・フィニガン社製）によって分析された。LCQ質量分光器は次の設定で操作された：スプレー電圧：4.5kV、毛細管温度：225℃。データ加工は、ターボSEQUESTおよびXcalibur(テルモ・フィニガン社製)を使用して行なわれた。典型的な消化部分の配列は、アルゴ・バイオアナリティカ社によっても部分的に行なわれた。
【誤訳訂正１８１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５４８】
完全なasp遺伝子配列の分析は、それが495アミノ酸（配列番号６）のプロ配列プロテアーゼをコードすることを明らかにした。最初の28アミノ酸はシグナル・ペプチドを形成することが予想された。セルロモナス系69B4によって形成された場合、69B4プロテアーゼの成熟鎖の質量は18764の分子重量を有す（MALDI-TOFによって計測された）。成熟鎖のN-末端の配列もMALDI-TOF分析で計測され、FDVIGGNAYTIGGR(配列番号17)の配列で始まる。69B4プロテアーゼは、いくつかの他の酵素を用いて生じることが知られている。NH2-およびCOOH末端プロ配列を備えた独特の前駆体構造を有すると考えられている(例えば、T.アクアチクスアクアリシン l、例えば、リー他、FEMS Microbiol.Lett.、1:69-74[1994年]；坂本（Sakamoto）他、Biosci.Biotechnol.Biochem、59：1438-1443 [1995年]；坂本他、Appl. Microbiol. Biotechnol、45:94-101[1996年]；キム他、Biochem. Biophys. Res. Commun, 231:535-539 [1997年]；およびOledzka他、Protein. Expr. Purific.、29:223-229[2003年]を参照されたい)。配列番号８において示されたように、成熟69B4プロテアーゼの予想粒子重量は18776.42であり、それはセルロモナス種.69B4(すなわち18764)から分離された蛋白質分解活性を有する精製した酵素の分子重量に明確に一致した。
69B4プロテアーゼにおけるCOOHの末端プロ配列の予測はまた、以下に提供されるT.アクアチクスアクアリシン lを有する69B4プロテアーゼのアラインメントにも基づいていた。このアラインメントにおいてセルロモナス69B4シグナル配列のアミノ酸配列および前駆体プロテアーゼは、シグナル配列およびサーマス・アクアチクス社製の前駆体プロテアーゼアクアリシン lとアラインされる（アクアリシン lのCOOH-末端プロ配列は下線を引かれ、太字である。
【誤訳訂正１８２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５０】
蛋白質分解活性を有するセルロモナス種.69B4からの精製酵素の３つの内部ペプチドの配列は、MALDI-TOF分析によって決定された。3つ全てのペプチドは、正しいプロテアーゼ遺伝子の同定を確認する分離されたaps遺伝子の翻訳生成物においても同定された(上述の配列番号１を参照願いたい)。
【誤訳訂正１８３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５１】
Aspおよびストレプトグリシン間のパーセント同一性の比較
Asp遺伝子（成熟鎖）の推定ポリペプチド生成物は、実施例３で説明したように設定したBLASTプログラムを用いた他のセリンプロテアーゼとの相同分析に使用された。予備的な分析は約44‐48%からの同一性を示した（以下の表4−1を参照）。翻訳配列分析とともに、これらの結果は、asp遺伝子がストレプトグリシン的なセリンプロテアーゼの成熟鎖と50%以下の配列同一性を有すプロテアーゼをコードすることの証拠を提供した。ストレプトマイセス・グリセウスのストレプトグリシン A、ストレプトグリシン B、ストレプトグリシン C、ストレプトグリシン Dを有するaspのアラインメントは、以下に示される。このアラインメントにおいて、セルロモナス69B4成熟プロテアーゼ（「69B4成熟」）のアミノ酸配列は、ストレプトグリシン C(“Sq‐ストレプトグリシンC‐成熟”）、ストレプトグリシン B(“Sq‐ストレプトグリシンB成熟”)、ストレプトグリシン A(“Sq‐ストレプトグリシンA成熟”)、ストレプトグリシン D(“Sq‐ストレプトグリシンD成熟”)およびコンセンサス残基の成熟プロテアーゼアミノ酸配列とアラインされる。
【誤訳訂正１８４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５３】
【表２３】
2007515164.tif 000003
【誤訳訂正１８５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５８】
実施例５
ＰＣＲによる69B4プロテアーゼの新相同体のスクリーニング
この実施例において、69B4プロテアーゼの新相同体のスクリーニングのために使用された方法が説明される。ミクロコシニアエ（ M i c r o c o c c i n e a e）亜目の細菌系、具体的には、セルロモナダシアエ科およびプロミクロモノスポラシアエからのものは、ドイツの培養細胞保存機関DSMZ ( Braunschweig) からオーダーされ、凍結乾燥した培養物の形で入手された。追加的な菌株は、ベルギー微生物保存機関、BCCM（商標）／LMG(ゲント大学)から入手された。凍結乾燥したアンプルはDSMZの取扱説明書に従って開封され、材料は1時間かけて無菌生理食塩水（1.5ml）を用いて再水和した。十分に混合された、再水和された細胞懸濁液（300μl）が、続くPCRのために無菌エッペンドルフ管に移された。
【誤訳訂正１８６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６２】
【表２６】
2007515164.tif 000004
【誤訳訂正１８７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６７】
【表２７】
2007515164.tif 000005
【誤訳訂正１８８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６９】
図２はASPプロテアーゼの系統発生系図を示す。このプロテアーゼの系統発生は、タンパク質のキモトリプシンスーパーファミリーの同種の構成種の成熟配列からの多様なアプローチによって検査され、顕著な成熟配列であるASP相同体が推定された。技術的に既知であるタンパク質距離法（例えば、木村、『分子進化の中立説』（The Neutral Theory of Molecular Evolution）、ケンンブリッジ大学出版、ケンブリッジ、UK[1983年]を参照されたい）を使用して、同種の系図が、ギャップを含めてもまたは除外しても得られた。図２の系統発生系図（phylogenetic tree）は、TREECONW v.1.3b(Van de Peer and De Wachter、Comput. Appl. Biosci.、10:569−570[1994年])を使用し、アラインされた配列からネイバージョイングアルゴリズム（Saitou and Nei、Mol.Bio.Evol.、4:406-425[1987年]）によりinferされたtree topologを用いて作成された。この系図(this tree)に示されているように、データは、相同的なプロテアーゼ（「cellulomonadaceae」）のAPS系列はタンパク質の分離したサブファミリーを形成することを示す。図２において、括弧内に示された数字は、本発明で提供された配列に対応する。
【誤訳訂正１８９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５８０】
電気泳動法
SDS-PAGEが、５分間にわたり100V及び２００Ｖ一定でMES-SDSランニングバッファーを用いてNuPAGE 10% Bis-Tris ゲル（インビトロゲン）を使用し、２回行なわれた。可能であれば、25μLのサンプルが各スロットに装着された。各組みの一つのゲルがクマシーブルーに染色され、その他のゲルは、ベーリンガーマンハイム発色ウエスタンブロットプロトコル（ロシュ社製）を使用した免疫ブロットに使われた。
【誤訳訂正１９０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５８２】
PAGEゲルは、脱イオン水の中で簡単に洗浄され、トランスファーバッファに浸されたブロッティングパッドに移され、予め湿らされたPVDFメンブランおよび予め浸されたブロッティングパッドを用いてカバーされた。ブロットは、トランスファーバッファにおいて、2時間半から3時間、400ｍAに一定にされて行なわれた。メンブランは、トリスバッファ生理食塩水（TBS）（0.5Mトリス、0.15M NaCl、pH7.5）の中で簡単に洗浄された（２×）。非特異的抗体結合は、一晩4℃でマレイン酸溶液（100mMのマレイン酸、150ｍM のNaCl、pH7.5）における1% v/vマウス／ラビットブロッキング試薬（ロシュ社製）でメンブランをインキュベートすることによって、防止された。
【誤訳訂正１９１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５８４】
【表３２】
2007515164.tif 000006
【誤訳訂正１９２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６１８】
逆PCR
逆PCRは、PCRにより示されるサブオーダー、ミクロコシネア（Micrococcineae）細菌の菌株の染色体DNAから得られる完全長のセリンプロテアーゼ遺伝子を決定するため、又は本明細書に記載されている新しいセルロモナス(Cellulomonas)種６９B4の新しい相同体を免疫ブロットするのに用いられた。
【誤訳訂正１９３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６１９】
消化されたDNAはPCR精製キット(Qiagen, Catalogue # 28106)を用いて精製され、製造者(Invitrogen)の指示に従いT4 DNAリガーゼにより自己結合された。連結反応混合物はPCR精製キット(Qiagen)により精製され、PCRは以下のリストから選択されるプライマにより実行された。
【誤訳訂正１９４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６２２】
ゲノム末端の急速増幅を用いる遺伝子ウオーキング法
（Genome Walking Using Rapid Amplifiation of Genomic Ends(RAGE)）
その技術分野で知られているゲノムウオーキング法（Genome Walking methology）(RAGE)が、PCRにより示されるサブオーダ、ミクロコシネア（Micrococcineae）細菌の菌株の染色体DNAから得られる完全長のセリンプロテアーゼ遺伝子の決定、又はセルロモナス(Cellulomonas)種６９B4プロテアーゼの新しい相同物を免疫ブロットするのに用いられた。RAGEは、Universal GenomeWalker (商標) Kit (BD Biosciences Clontech)を用い、製造者の手順に幾らかの変更を加え(BD Biosciences ユーザマニュアル PT3042-1, Version # PR03300)実施した。製造者の手順の変更には、テンプレートDNAのGC容量が高いため全50μL容量中の反応混合物にDMSO(3μL)を加え、そして、PCR反応にAdvantage (商標)−GC Genomic Polymerase Mix (BD Biosciences Clontech)を用いたことを含み、以下の手順により実施した。
【誤訳訂正１９５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６２３】
ＰＣＲ１ ＰＣＲ２
９９℃−０．０５秒
９４℃−０．２５秒／７２℃−３．００分 ７サイクル ４サイクル
９４℃−０．２５秒／６７℃−４．００分 ３９サイクル ２４サイクル
６７℃−７．００分
１５℃−１．００分
【誤訳訂正１９６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６２６】
PCR製品はpCR4-TOPO TA クローンベクター (Invitrogen)にサブクローンされ、大腸菌Top10 ワンショット エレクトロコンピテント細胞（electrocompetent cell）(Invitrogen) に形質転換された。形質転換細胞は、100μg/mlのアンピシリンを含む２ｘTY培養体中で培養された（37℃、260 rpm, 16 時間）。分離されたプラスミドDNA(Qiagen Qiaprep pDNA分離キットを用いて分離) BaseClearを用いて配列が決められた。
【誤訳訂正１９７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６３２】
【表６３】
2007515164.tif 000007
【誤訳訂正１９８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６４２】
これらのステップの詳細は以下に記す。既に実施例6に記載の様に、濃縮培養サンプル（約200ml）が500ml の1 Ｍ CaCl2に加えられ、14,000rpmで5分間遠心分離された（モデル 5415C Eppendorf）。上澄みは氷で冷やされ、１規定（N）の塩酸200mlにより酸性化された。5分後、200mlの50％トリクロロ酢酸が加えられ、サンプルは14,000rpmで4分間遠心分離された（モデル 5415C Eppendorf）。上澄みは取り除かれ、ペレットがまず水で、その後90％アセトンで洗浄された。ペレットは、スピード真空乾燥された後2倍のタンパク質調製（Protein Preparation）(Tris-Glycine Sample Buffer; Novex) 緩衝液に溶解され、SDS-PAGEゲルに付される前に等倍（１＋１）の水で希釈された。SDS-PAGEはNuPAGE MES SDS ランニング緩衝液が加えられた。SDS-PAGEゲル（1 mm NuPAGE 10% Bis-Tris; Novex）は展開され（developed）その技術分野の標準的手順に従い染色された。SDS-PAGEに従い、ASP相同体に対応するバンドは切除され、その技術分野の標準的手順に従い質量分光分析によるペプチド配列決定のプロセスに付された。
【誤訳訂正１９９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６４３】
ペプチドマッピング及び配列決定は毛細管液体クロマトグラフィーエレクトロスプレイ・タンデム質量分析（capillary liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometry）(nanoLC-ELI-MS/MS)を用いて行われた。この分析システムは毛細管HPLCシステム（モデルCapLC Waters）及び質量分光分析器（モデルQtof Ultima API ; Waters）よりなる。ペプチドはプレカラム（PrepMap 100 C、18, 5um, 100A 300um IDx1mm ; Dionex）に入れられ、0-100%の勾配で、流量200nL/分（ポンプ流量5uL/分から静的分割（static split）により発生させる）の溶媒Bを 45分掛けて、毛細管カラムでクロマトグラフ分析(BiobasicＣ18 75um x 10cm; New Objectives)を行った。溶媒Aは水に0.1%のギ酸を含み、溶媒Bはアセトニトリルに0.1%のギ酸を含む。質量分光分析は次にパラメータにより実施した：スプレイ電圧3.1kv, デソラヴェイション（desolavation）ゾーン 150℃、質量スペクトル400−1900m/zより取得、解像度 v−モード6000。タンデムMSスペクトルは、2つの最強度ピークを選び、及び質量依存衝突エネルギー（販売者指定の通り）及び2.5X10-5トールの衝突ガス（アルゴン）により断片化されたモードに依存するデータより取得した。
【誤訳訂正２００】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６４６】
実施例９
ストレプトマイセス リビダンス（Streptomyces lividans）におけるプロテアーゼ生産
この実施例は、Ｓ．リビダンによるプロテアーゼの生産方法を開発する実験について記載する。このようにしてタンパク質分解活性を持つポリペプチドをコードするポリペプチド含むプラスミドが構築され、プラスミドは、ストレプトマイセス リビダンス宿主細胞を形質転換するために適したベクターを用いた。この形質転換に用いられる方法は、米国特許番号6,287,839及びＷＯ02/50254により十分に記述されており、これらの文献は引用により本明細書に組み入れられる。
【誤訳訂正２０１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６４８】
実験において新たに開発されたプラスミドはpSEA469B4CTと呼ばれる（図7を参照）。
pSEG69B4Tプラスミドと同様に、あるpSEGCTプラスミドベクターはこのプラスミドを構築するために用いられた。pSEA469B4CTを作るために、アスペルギラス ニジェール（Aspergillus niger）(塩基調整配列) ("A4")プロモータが、69B4プロテアーゼをコードする構造遺伝子に動作可能なようにリンクされ、プロテアーゼの発現の推進に用いられた。Ａ４プロモータとCel A（ストレプトマイセス コエリコーロール（Streptomyces coelicolor）シグナル配列の融合、asp-N末端プロ配列とasp成熟配列との融合は、融合−ＰＣＲ技術によりXbal−BamHI断片として構築された。断片はXbal及びBamHIにより消化されたpSEA4 GCTプラスミドに結合され、pSEA469B4CTプラスミドとなった(図 7を参照)。
A4（アスペルギラス ニジェール（Aspergillus niger））プロモータ領域の配列は次の通りである：
【誤訳訂正２０２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６５１】
形質転換された培養体は２つの発酵培養体を提供するために膨張させた。種々の時点で発酵液のサンプルが分析のため取り出された。この実験で、クローンを旨く行うためにスキムミルクの手法が使われた。この方法では、30μlの振盪フラスコ上澄みがスキムミルク寒天プレートにあけたパンチ孔に入れられ、３７℃で培養された。培養プレートは、一夜培養の後に視認によりかさ（halos）の存在の有無が確認された。この実験で又、同じサンプルについてプロテアーゼ活性及び分子量(SDS-PAGE)のアッセイがなされた。発酵の最後にSDS-PAGEにより完全長のプロテアーゼが観察された。
【誤訳訂正２０３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６６４】
プライマーはMWG 及び Invitrogenから入手した。Invitrogen Platinum Taq DNA polymerase High Fidelity (Cat. No. 11304-029)が、Invitrogenの指示する手順に従い、PCR増幅(0. 2 μM プライマ, 25以上30サイクルまで)に用いられた。ASP発現カセットと宿主ベクターとのリガーゼ反応はInvitrogen T4 DNA リガーゼ (Cat. No. 15224-025)を用いて、付着端の一般的クローンにおいて推奨されているInvitrogenの手順により完成された。
【誤訳訂正２０４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６６５】
p2JM103-ASPベクターを持つバシルス スブテリス（ΔaprE、ΔnprE、oppA、ΔspollE、ΔdegUHy32、ΔamyE (xyIR, pxylA-comK)）形質転換細胞又はｐHPLT-ASPベクターの一つの選択的増殖は25ml のSynthetic Maxatase Medium (SMM)と、0.5g/l CaCl2に代わり、0.97g/l のCaCl2. 6H20合を含み（米国特許番号 5,324, 653を参照。この文献は引用により本明細書に組み入れられる）、25mg/Lクロラムフェニコール又は20 mg/Lのネオマイシンを含む振盪フラスコで行われた。この成長の結果、タンパク質分解活性を持つ分泌性ASPプロテアーゼが生成された。しかしながら、ゲル分析はNuPage Novex 10% Bis- Trisゲル (Invitrogen, Cat. No. NP0301 BOX)を用いて実施された。分析用サンプルの準備のため、2容量の上澄みが1容量 1Ｍ HCL、1容量４ｘLDSサンプル緩衝液(Invitrogen, Cat. No. NP0007)、及び1％PMSF (20 mg/ml)と混合され、そして70℃で10分過熱された。その後、25μLの各サンプルは、10μL SeeBlueプラス2つの事前に染色されたタンパク質標準と共にゲルに載せられた(Invitrogen, Cat. No. LC5925)。その結果は明らかに、本実施例に記載のaspクローン化戦略は全て、バシルス スブテリスにより十分な量の活性Aspが生成されることを示している。
【誤訳訂正２０５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６６６】
さらに、同じ発酵液のサンプルについて以下のアッセイがなされた：10μlの希釈上澄みが取られ、190μlのAAPF基質溶液に加えられた（濃度は、0.1 M Tris/0.005% TWEENS, pH 8.6中、1mg/ml）。生成されるASPの濃度の測定のため、ｐ-ニトロアニリンの放出による吸光度の増加率を410nmでモニターした（25℃）。これらの結果によると、全ての構築体は測定可能なASPプロテアーゼを生成することを示していた。
【誤訳訂正２０６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６６９】
これらのPCRに対して次の条件が適用された：94℃で２分、続いて94℃で45秒、60℃で30秒、及び68℃で2分、30秒を25サイクル、続いて68℃で5分行う。PCRの生成物はE-gel (Invitrogen) に置かれ、切除され、そしてゲル摘出キット(Qiagen)により精製された。pHPLTベクターを持つ自生ASPを含むこの断片のリガーゼ反応は、T4 DNA Ligase（NEB）を用いて結合させることにより完成し、そして直接バシルス スブテリス（ΔaprE、ΔnprE、oppA、ΔspollE、ΔdegUHy32、ΔamyE (xyIR, pxylA-comK)）に形質転換された。バシルス スブテリスへの形質転換はWO 02/14490 A2に記載の通りに実施された。この文献は引用により本明細書に組み入れられる。
【誤訳訂正２０７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６７０】
Aspタンパク質は振盪フラスコにおいて、以下の成分を含む培養体中において37℃で成長させることにより生成した：0.03 g/L MgSO4, 0.22 g/L K2HPO4, 21.3 g/L NA2HPO4*7H2O, 6.1 g/L NAH2PO4*H2O, 3.6 g/L 尿素, 7 g/L 大豆かす, 70 g/L マルトリン（Maltrin） M150, 及び42 g/L グルコース, 最終pHはpH7.5であった。この実験では、合成遺伝子カセットを持つ宿主の生成レベルは自生遺伝子カセットを持つ宿主よりも3倍高かった。
さらに追加実験において、ASPの発現が、sacBプロモータ及びaprEシグナルペプチドを用いてバシルス スブテリスにおいて調査された。遺伝子は、TGOポリメラーゼ(Roche)及び以下のプライマーを用いて、合成asp遺伝子を含むプラスミドから増幅された：
【誤訳訂正２０８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６７６】
これらのPCRに対して次の条件が適用された：
94℃で２分、続いて94℃で45秒、60℃で30秒、及び68℃で2分、30秒を25サイクル、そして68℃で5分行う。PCRの結果生成物はE-gel (Invitrogen) に置かれ、切除され、そしてゲル摘出キット(Qiagen)により精製された。
精製された融合物は切断され（EcoRI/HindIII）、結合されて(T4 DNA Ligase, NEB)、強力な転写終結部分をもつEcoRI/HindIII pJH101 (Ferrari et.al., J. Bacteriol., 152: 809-814 [1983] )ベクターに入れられた。
連結反応混合物はコンピテント大腸菌細胞に形質転換され（トップ10ケミカルコンピテントセル、インビトロジェン）、プラスミドを回収するためプラスミド準備液が作られた（Qiagen spin-prep）。
【誤訳訂正２０９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６８１】
asp遺伝子発現が9つのプロテアーゼを欠失するバシルス スブテリス宿主において調査された。プラスミドpHPLT-ASP-C1-2（表10−2及び図９を参照）はバシルス スブテリス（ΔaprE、ΔnprE、Δepr, ΔispA, Δbpr, Δvpr, ΔwprA, Δmpr-ybfj, ΔnprB）及び（degUHy32、oppA、ΔspollE3501、amyE (xyIRPxylA-comK-ermC)）に形質転換された。形質転換はその技術分野で知られている方法により実施された（WO 02/14490を参照願いたい。本文献は引用により本明細書に組み入れられる）。Aspタンパク質は、MOPSベースの合成培地であるMBD培養体で37℃で、振盪フラスコにより成長させ生成された。MBD培養体は基本的にその技術分野で知られている（Neidhardt et al., J. Bacteriol., 119: 736-747 [1974] を参照）方法により作られたが、ベース培養体からNH4Cl2, FeSO4, CaCl2が除かれ、3 mM K2HPO4が用いられた。ベース培養体は更に60 mM 尿素、75 g/L グルコース、及び1% ソイトーン（soytone）が追加されたものである。
【誤訳訂正２１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６８７】
【表８０】
2007515164.tif 000008
【誤訳訂正２１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６８９】
表11-1において、pMAX4はWO 88/06623に記載のテンプレートを指す。本文献は引用により本明細書に組み入れられる。PCR断片3F3R, 6F6R, 27F27RはBamHl及びHindIIIの両方により消化された。消化されたPCR断片はT4リガーゼ(Invitrogen) により結合されBamHl及びHindIIIにより開かれたプラスミドpHPLT-ASP-C1-2（表１８を参照）となった。連結反応生成物はコンピテントバシルス スブテリス細胞（ΔaprE、ΔnprE、oppA、ΔspollE、degUHy32、ΔamyE (xyIR, pxylA-comK)）（WO 02/14490を参照。本文献は引用により本明細書に組み入れられる）に形質転換され、ネオマイシン（20 mg/l）上で選定された。ネオマイシンを含むHeart Infusion寒天プレートは抗ネオマイシン群を同定するために用いられた。バシルス スブテリス形質転換細胞のDNAは、製造者指示に従いQiagenプラスミド分離キットを用いて分離され、同じ試験管中で共にNcol+Hpalにより消化された後に、そのパターンに基づき融合したMAXACALプロテアーゼ−Asp断片の外見がテストされた。この実施例で使用された制限酵素（即ち、BamHl、HindIII、Ncol、及びHpal）は全てNEBから購入し、供給者の指示に従い用いた。バシルス スブテリス形質転換細胞のDNAは、２つの制限酵素（Ncol+Hpal）により２帯（band）を示したものをプロテアーゼ陰性のバシルス クラウシ株PBT142プロトプラスト細胞（これ等はPB92に由来する）を形質転換するのに用いた。
【誤訳訂正２１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６９３】
これらの３つの株は100ml Synthetic Maxatase Medium (SMM) (米国特許番号5,324, 653を参照。本文献は引用により本明細書に組み入れられる)を含む振盪フラスコで発酵された。しかし0.97g/l CaC12・6H2Oに代えて,0.5 g/l CaC12が使用された。また、0.5 ml/l アンチフォーム（antiform）5693に代えて、0.25ml/l Basildonが用いられた。100 ml SSM振盪フラスコは20 mg/lのネオマイシンを含む10 ml TSB (Tryptone Soya Broth) 中にリーダー構築を含む３つのバシルス クラウシ株の前培養液0.2 mlで移植された。プロテアーゼ生成値は振盪フラスコで3日成長させた後に、AAPFアッセイにより（上記の通り）測定された。その結果、これらの構築はタンパク質分解活性によりプロテアーゼを発現させることができることを示した。
【誤訳訂正２１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６９５】
バシルス アルカロフィルス（alcalophilus）（ここでは、バシルス クラウシである）染色体における異種（heterologous）DNAの安定的な組込みについては幾つかの刊行物に記載されている（WO 88/06623、及び上記Van der Laan et al.,を参照）。
特許WO 88/06623に記載のMAXACALプロテアーゼ遺伝子の一又は二のコピーをバシルス アルカロフィルス（alcalophilus）（ここでは、バシルス クラウシである）の染色体中に組み込む手順は、asp遺伝子の少なくとも1つのコピーをバシルス クラウシPBT142の染色体に組み込むのに用いられた。しかし、pE194-neoの派生物であるpENM#3 (図19を参照)は、（MAXACALプロテアーゼ遺伝子を含むpMAX4を作るため）組み込みベクターpE194-neoに代わって用いられた。組み込みベクターpENM#3において、AspリーダーPCR生成物27F27Rは、MAXACALプロテアーゼ遺伝子の５’及び３’隣接領域の間のユニーク平滑末端部位Hpalにおいてクローンされた。したがって、27F27Rは以下の通り平滑末端とされた：まず最初にHpal（５’末端）により消化され、Qiagen PCR精製キットにより精製され、そしてHindIII（３’末端）により消化された。この処理された断片27F27RはHindIII消化の後再び精製され（同じQiagenキットを用い）そしてＴ4ポリメラーゼ(Invitrogen) を用いてdNTPにより満たされ、そして再度Qiagenキットにより精製された。Hpalにより開かれたpENM#3及び平滑末端のPCR生成物27F27Rは、T4リガーゼ(Invitrogen)により結合された。連結反応生成物は直接バシルス クラウシ PBT142プロトプラストに形質転換され、そして20mg/lのネオマイシンを含むHI寒天プレート上でレプリカ培養の後選別された。組み込みベクターにおけるasp遺伝子の正当な配向が確認をされた2つの形質転換細胞は同定され、特許WO 88/06623に記載の組み込み手順に組み入れられた。選別はMAXACALプロテアーゼ遺伝子座への組み込みのため、2 mg/l 及び 20mg/l ネオマイシンを使い、及び非正統遺伝子座でなされた。これらの結果より、バシルス クラウシは又Aspプロテアーゼの発現宿主としても適していることが分かる。
【誤訳訂正２１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０６９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０６９９】
これらのプライマはMWG Biotechより入手した. PCR反応は通常はアニール温度55℃で、高度再生プラチナTaqポリメラーゼ（High Fidelity Platinum Taq polymerase）(Invitrogen) を用いて熱サイクル器で30サイクル行うことにより実施された。PCR-IはpHPLT上で、プライマpHPLT-Bglll_FW、及び融合C1_RVをテンプレートとして使用することにより実施した。PCR-II はプラスミドpHPLT-ASP-C1-2上でプライマ融合C1_FW及びpHPLT-Hindlll_RVにより実施した。PCR-I 及びPCR-IIの断片はプライマpHPLT-Bglll_FW及びpHPLT-HindLLL_RVにより融合PCRに集められた。最終のPCR断片は、Qiagen PCR精製キットを用い精製され、Bglll及びHindlllにより消化され、そして製作者の指示に従ってT 4DNAリガーゼにより結合され、Bglll及びHindlllにより消化されたpHPLTに取り入れられた。連結反応混合物はその技術分野で知られているバシルス スブテリス株OS14に形質転換された（米国特許出願番号20020182734 及び WO 02/14490を参照。本文献は引用により本明細書に組み入れられる）。正しい形質転換細胞はスキムミルクプレートにかさ（halo）を作り出し、その一つがプラスミドpHPLT-ASP-C1を分離するために選択された。このプラスミドは技術分野で知られているプロトプラスト形質転換法によりバシルス リチェニフォルミス宿主BML780 （BRA7 派生物, cat-, amyL-, spo-, aprL-、endoGluC-）に導入された (Pragai et al., Microbiol., 140: 305-310 [1994] を参照)。 抗ネオマイシン形質転換細胞はスキムミルク上ででかさ（halo）を形成したが、一方pHPLT-ASP-C1を持たない親株は、かさを形成しなかった。これにより、ASPプロテアーゼの発現がLATプロモータにより推進され、それがハイブリッドシグナルペプチド（MRSKKRTVTRALA VATAAATLLAGGMAAQA:配列番号135）に融合される場合には、バシルス リチェニフォルミスはASPプロテアーゼの発現および分泌を可能にすることが分る。
【誤訳訂正２１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７０２】
精製の後に、PCR製品はPsfl-Hpalにより消化され、Psfl及びHpal消化のpHPLTに結合され、そしてバシルス スブテリス株OS14に形質転換された。プラスミドpHPLT-ASP-C3は、スキムミルクプレートに比較的（他の形質転換細胞と比べ）大きなかさを作っている抗ネオマイシン物質から分離された。プラスミドDNAはQiagen プラスミド精製キットを用い分離され、BaseClearにより配列が決定された。
【誤訳訂正２１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７０６】
PCR生成物は、上記の通り、Xholにより消化され、Xhol-消化plCatH(図20を参照)に結紮され、そしてバシルス スブテリス株OS14に形質転換された。ASP発現クローンから得られるプラスミド（スキムミルク上のかさ（halo）の形成により判断した）は分離され、plCatH-ASPc3と命名された。BaseClearによるＤＮＡ配列決定により、plCatH-ASPc3のASPC3カセットでは他の変異は導入されていないことが確認された。プラスミドは更に、許容される温度（37℃）でBML780に形質転換され、1つの抗ネオマイシン（neoR）及び抗クロラムフェニコール(capR)形質転換細胞が選定され、BML780（plCatH-ASPc3）と名付けられた。BML780（plCatH-ASPc3）中のプラスミドは、クロラムフェニコールを含む培養体において、非許容温度（50℃）で株を成長されることにより、バシルス リチェニフォルミス ゲノム上のcat 領域に組み込まれた。
【誤訳訂正２１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７０７】
1つの抗capRクローンが選定され、BML780-plCatH-ASPc3と名付けられた。BML780-plCatH-ASPc3は、再び、ベクター配列をループ外に置く（loop out）ため抗生物質を使わないで許容温度において数世代育成され、1つのネオマイシンに敏感な（neoS）capRクローンが選定された。
【誤訳訂正２１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７１１】
ASPc4 PCR生成物は、ASPc3の場合について上記で述べたと同様、精製され、Xholにより消化され、Xholにより消化されたplCatHに結合され、バシルス スブテリスOS14に形質転換された。プラスミドはneoR、 capRクローンから分離され、plCatH-ASPc4と命名された。上記のASPc 3についての記載と同様に、plCatH-ASPc4はBML780に形質転換され、ゲノムに組み入れられ、ベクター配列が切除され、cat- ASPc4カセットが増殖された。ASPc4カセットを持つ株はASPc3カセットを持つ株より、スキムミルクプレート上でより小さなかさを作っていないが、このことは成熟ASPのＣ末端の極性はASPの生成、分泌及び/又はバシルスでの安定に重要な要因となっていないことを示唆する。しかし、本発明はこの特殊な方法に限定されるものではない。
【誤訳訂正２１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７１４】
ASPc5は、ASPc3の場合について上記で述べたと同様、精製され、Xholにより消化され、Xholにより消化されたplCatHに結合され、バシルス スブテリスOS14に形質転換された。プラスミドはneoR、capRクローンから分離され、plCatH- ASPc５と命名された。DNA配列から、PCRによってはasp遺伝子に望まないいかなる変異も導入されていないことが確認された。plCatH- ASPc5はBML780に形質転換され、ゲノムに組み入れられ、ベクター配列が切除され、そして上で述べたASPc3の構築と同様に、cat-ASPc5カセットが増幅された。ASPc5構築を持つバシルス スブテリス株は、又スキムミルクプレート上でかさ（halo）を形成することが観察された。これによりASPの自生シグナルペプチドがバシルス種において分泌シグナルとしての機能を持つことが確認された。
【誤訳訂正２２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７２１】
構築の後、異なるプラスミドは、その技術分野で知られているバイオリスティクローン（biolistic）形質転換法を用いてcbhl, cbh2, egl1、及び egl２遺伝子に断絶のあるトリコデルマ リーセイ（Trichoderma reesei）株に形質転換された。安定した形質転換細胞が形態に基づいてスクリーンされた。各構築に対して１０の安定した形質転換細胞がスクリーンされ、振盪フラスコにとられた。最初に使用された接種物培養体は30g/L α-ラクトース、6.5g/L (NH4)2SO4、 2g/L KH2PO4、0.3g/L Mg SO4・7H20、0.2g/L CaCl2、1ml/L 1000X T. reesei トレース塩（Trace Salts）、 2 mL/L 10% Tween-80, 22.5 g/L Proflo, 及び0.72g/L CaC03,を含み、そこで形質転換細胞を約４８時間成長させた。この培養期間の後に、10％の培養液がその技術分野で知られている最小培養体を含み、発現を誘発するための16g/Lのラクトースを加えたフラスコに移された（Foreman et al., J. Biol. Chem. , 278:31988-31997 [2003]を参照）。フラスコは28℃のシェイカーに置かれた。4日間置いたサンプルが4-12%NuPAGE ゲルに置かれ、Coomassie Blueで着色された。5日後に、プロテアーゼ活性が190μlのAAPF基質液（濃度0.1 M Tris/0. 005% TWEEN, pH 8.6中で1mg/ml）に10μlの上澄み液を加えて測定された。ｐニトロアニリンの放出による吸光率の増加を410nm波長でモニターした(25℃)。
【誤訳訂正２２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７２９】
構築の後、異なるプラスミド及びヘルパープラスミド(HM 396 pAPDI)が、その技術分野でよく知られているプロトプラスト形質転換法によりアスペルギルス ニジェール 変異体 アワモリ(Delta Ap4 株)に形質転換された。安定した形質転換細胞が形態に基づきスクリーニングされた。各10の安定した構築が振盪フラスコでスクリーニングされた。この期間の後に、発現を誘引するために、株を含む寒天の一片が、RoboSoy培養体、或いは12g/l Tryptone, 8 g/l Soytone, 15g/l 硫酸アンモニウム、12.1 g/l NaH2PO4・H20, 2.19 g/l Na2HPO4, 5 ml 20% MgSO4・7H20, 10 ml 10% Tween 80, 500ml 30% Maltose 及び 50 ml 1 M 硫酸塩緩衝液pH 5.8 及び2 ウリジンuridineを含む振盪フラスコに移された。フラスコは28℃のシェーカーに置かれた。4日間置いたサンプルがNuPAGE 10% Bis Trisｔタンパク質ゲルに置かれ、Coomassie Blueで着色された。5日後のサンプルは、AAPFを用いてプロテアーゼ活性が測定された。
【誤訳訂正２２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７３５】
189 asp部位飽和突然変異ライブラリーの構築は、pHPLT-ASP-c１-2発現ベクターをテンプレートとして、及び表15−1にリストされたプライマを用いて完成された。これらの実験で用いた突然変異プライマは、変異を受け、そしてその位置でヌクレオチドのランダム組込みが保証されるAsp成熟配列のコドンに対応する位置において、全て三重DNA配列コードNNS (N = A, C, T 又は G 及び S = C 又は G)をもっている。各SSMライブラリーの構築は、pHPLT-Bglll_FWプライマ及び特定逆突然変異プライマ、及びpHPLT-Bglll _RV及び特定フォワード突然変異プライマ（突然変異プライマと同等位置）を用いる2つのＰＣＲ増幅により開始された。プラチナTaqDNAポリメラーゼハイフィデリティ（Cat. No. 11304-029 Invitrogen）が、Invitrogenにより提供された手順に従いPCR増幅のために用いられた(0.2 μM プライマ, 20 から 30 サイクル)。簡潔に言えば、両方とも同じコドンを標的とし、両方の特定のPCR混合物の増幅されたDNA断片1μLが、48μlの新しいPCR反応液に、pHPLT-Bglll-FW 及びpHPLT-Bglll-RVと共に加えられた。この融合PCR増幅 (22サイクル)により特定Asp 成熟コドンがランダムに変異し、両端にユニークBglll 制限部位を持った直線pHPLT-ASP-c１-2 DNA断片が得られた。このDNA断片の精製(Qiagen PCR 精製キットCat. No. 28106)、Bglllによる消化、追加の精製ステップの実施、及び連結反応（Invitrogen T4 DNA Ligase (Cat. No. 15224-025)）により、続いてバシルス スブテリス（ΔaprE、ΔnprE、oppA、ΔspollE、degUHy32、ΔamyE (xyIR, pxylA-comK)）に形質転換される環状で且つ多重結合を持つDNAが生成された。各ライブラリーにおいて、37℃で一夜培養の後、96のシングルコロニーが、20 mg/Lネオマイシンを含むHeart Infusion寒天プレートから取り出され、そして20 mg/Lネオマイシン及び1.25g/Lイースト菌エキス（エキス培地製剤についてはWO 03/062380を参照。本文献は引用により本明細書に組み入れられる）を含むMOPS培養体中で37℃で4日間成長させ、配列分析（BaseClear）、及びスクリーニング目的のためのプロテアーゼ発現がなされた。ライブラリーの数は1から189までに亙り、各数字は、ランダムに変異された成熟aspのコドンの番号である。選定の後、各ライブラリーは最大20のAspプロテアーゼ変異体を含んでいた。
【誤訳訂正２２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７３６】
【表９３】
2007515164.tif 000009
【誤訳訂正２２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７４４】
【表１０１】
2007515164.tif 000010
【誤訳訂正２２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７５３】
2のライブラリーを構築するためにクイックチェンジ(QuikChange)(登録商標)多重部位特異的変異誘発(QCMS)キット(ストラタジェン(Stratagene))を用いた。2のライブラリーを作成するために用いた5’末端をリン酸化したプライマーを表16-1に示す。HPLC、PAGE又は任意の他の方法を用いて精製されたプライマーはプライマー取り込みエラー(primer-containing error)を有意に減らすだけでなく、全長プライマーの取り込みにおいても良い結果を与えることを特記する。しかしながら、おそらく得られた１２％のクローン産物が望ましくない変異を有することになるので、これらの実験中、精製されたプライマーを使用しなかった。
【誤訳訂正２２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７５６】
ミニプレップ(Miniprep)DNAを、ｐＨＰＬＴ−ＡＳＰ−Ｃ１−２プラスミド有するバチルス細胞から調製した。このキットに付属のP1緩衝液250μLを添加した後、100μLの10mg/mlリゾザイムを添加する追加工程を伴い、キアゲンスピンミニプレｐップ(Qiagen spin miniprep)DNAキットをプラスミドＤＮＡの調製に用いた。このサンプルを、キアゲンミニプレップ(Qiagen miniprep)キットマニュアルに記載されている残りの工程を行った後に、37℃で15分間、振とうしながらインキュベートした。ミニプレップ(Miniprep)DNAはこのキットに付属のEB緩衝液30μLで溶出した。
【誤訳訂正２２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７５７】
次に、pHPLT-ASP-C1-2プラスミドDNAを、NEBより市販されているdam+メチルラーゼキット(NEBカタログ＃MO222S)を用いてin vitroでメチル化した。簡単に説明すると、25μLのミニプレップDNA(約1-2μg)を20μLの10×NBE dam+メチル化緩衝液、0.5μLのS-アデノシルメチオニン(80μM)、4μLのdamメチラーゼ及び150.5μの脱イオン水と共にインキュベートした。反応は37℃で4時間行った。次いで、このDNAをキアゲン(Qiagen)PCR精製キットを用いて精製した。メチル化されたDNAはキットに付属の40μLのEB緩衝液を用いて溶出した。DNAのメチル化を確認するために、2μLのMbol(NEB;この酵素はメチル化されていないGATC部位を切る)、あるいは2μLのDpnl(ロシュ;この酵素はメチル化されたGATC部位を切る)を含む20μLの反溶液中で4μLの精製、メチル化DNAの消化を行った。この反応を37℃で2時間行い、反応物を1.2% Eゲル(インビトロジェン)上で解析した。Dpnlで消化したサンプルでは小さな分子量のDNAスメア/ラダーが観察されたが、Mbolで消化したサンプルにおいてはインタクトDNAのみが確認された。このことは、pHPLT-ASP-C1-2プラスミドが確実にメチル化されていることを示す。
【誤訳訂正２２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７５９】
バチルスが形質転換するには二本鎖(多重結合型)ＤＮＡが必要であることから、大腸菌を経ずにバチルス細胞の中でＤＮＡライブラリーを直接形質転換するために、DNAライブラリー(一本鎖QCMS生成物)をTempliPhiキット(アマシャム カタログ＃25-6400)を用いて増幅した。この目的のために、TempliPhiキットのサンプル緩衝液5μLで95℃、3分間加熱することにより1μLのアルギニン又はシステインQCMS反応生成物のDNAを変性させた。この反応物を冷却するために氷上に2分間置き、その後、短時間で遠沈した。次にTempliPhiキットの5μLの反応緩衝液及び0.2μLのphi29ポリメラーゼを添加した。エムジェーリサーチ(MJ Reserch)PCRマシンで30℃、4時間インキュベートすることにより反応を行った。PCRマシンにおいて10分間65℃でインキュベートすることによりphi29酵素を失活させた。
このライブラリーをバチルスの中へ形質転換させるために、0.5μLのTempliPhi増幅反応生成物を100μLのcomKコンピテント細胞と共に、37℃で1時間激しく撹拌することにより混合した。形質転換体を105倍まで連続的に希釈し、各希釈物の50μLを10ppmのネオマイシン及び1.6％スキムミルクを含むLAプレート上で平板培養した。各ライブラリーから24のクローンを配列決定のために選択した。すなわち、コロニーを20μLの滅菌脱イオン水に再懸濁し、その後このうちの2μLを、総容量が25μLになるようにレディータック(Ready Taq)ビーズ(Amersham)と共にPCRに用いた。プライマーASPF1及びASPR4を0.5μLの濃度になるように添加した。PCRサイクルの条件は94℃、4分間の後に、94℃、1分間、56℃、1分間及び72℃、1分間を30サイクル行い、その後に72℃を7分間行った。1.5kbフラグメントが各ケースにおいて得られ、キアゲン(Qiagen)PCR精製キットを用いて生成物を精製した。精製されたPCR生成物をASPF４及びASPF4プライマーを用いて配列決定した。
【誤訳訂正２２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７６５】
重要なことは、この活性の結果はシステイン残基に変異を有する変異体が生産したASPプロテアーゼはとても低いかあるいは、活性がないことを示しており、このことはジスルフィド架橋(disulfide bridges)が分子の安定性に重要な役割を有することを示している。しかしながら、本発明は任意の特定のメカニズムに限定することを意図しない。
【誤訳訂正２３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７８８】
この構築体は、βシートから成る大部分と、2の短いα-ヘリックス及びC末端に向かっているより長いヘリックスが見られた。これらの間の接合部分となる2セットのβシートが存在した。活性部位は、この接合部分に形成されている割れ目 (clift)の中に見られた。触媒トリアッドはHis 32、Asp 56、及びSer 137から形成されている。表19-1はASPの同定された原子座標を示す。
【誤訳訂正２３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７９０】
初期設定のディーエスモデリング(DS Modeling)プログラム(アクセルリス)を用いて、上で提供された結晶座標からASPの表面接触可能残基を決定した。ASPのトータル表面接触可能性(SA)は8044.777オングストロームであることがわかった。表19-2は、溶媒に接触可能なアミノ酸の総表面のパーセンテージであるトータルSA、側鎖SA、及びパーセントSASを提供する。
【誤訳訂正２３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７９５】
実施例20
ASP活性部位の酵素基質モデリング及びマッピング
この実施例では、酵素基質のモデリング及びASP活性部位のマッピング方法を説明する。ASP活性部位の予備検査において、Trp Tyr及びPheの側鎖等の大きな疎水基質に蓄積するのに十分大きいP1結合ポケットが明らかになった。
【誤訳訂正２３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７９６】
七面鳥第３ドメインのオボムコイドインヒビター(pdb code 2SGB)を用いてストレプトグリシンAの結晶構造が決定された。ASPの活性部位におけるインヒビターを認識するMOE(ケミカルコンピューティンググループ)を用いて2SGBをASPに整列させた。
【誤訳訂正２３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７９７】
S4からS2’結合部位における結合に対応するASP中のヘキサ-ペプチド結合と定義される結合以外の、全2SGB座標が除去された。プロASPタンパク質は成熟プロテアーゼ酵素を放出するためにプロドメイン-成熟ドメイン結合を自己切断する。プロドメインの最後の4残基はS1-S4部位で占められ、成熟プロテアーゼの最初の2残基はS1’及びS2’部位で占められていることが予測された。このことから、in-silicoにおいて、活性部位のヘキサペプチドをPRTMD配列に変更する(配列番号630)。
【誤訳訂正２３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７９８】
初期の基質結合モデルの構造の検討から、Gly135及びAsp136の骨格アミドはオキシ-アニオンホールを形成することが予測される。しかしながら、Gly135のアミドニトロゲンはこれとは違った方向にある。ストレプトグリシンAとの比較によりこのことを確認した。従って、ASPの中の形態変化がオキシ-アミンホールに必要であることが予測された。しかしながら、本発明を特定のメカニズム、又は仮説に限定することは意図しない。134と135残基の間のペプチド骨格はストレプトグリシンA構造の中の構造的に等しいものへ、同じ長さで置換された。この酵素基質モデルは、その後エネルギーが最小化された。
【誤訳訂正２３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０７９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０７９９】
モデル基質の6Å内の残基は、プログラムQUANTAの中の近似ツールを用いて決定された。これらの残基はArg14、Ser15、Arg16、Cys17、 His32、Cys33、Phe52、 Asp56、Thr100、Val115、Thr116、Tyr117、Pro118、Glu119、Ala132、Glu133、Pro134、Gly135、Asp136、Ser137、Thr151、Ser152、Gly153、Gly154、Ser155、 Gly156、Asn157、Thr164、Phe165であると同定された。これらのうちのHis32、Asp56及びSer137は触媒トリアッドを形成していた。
【誤訳訂正２３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８０２】
実施例21
ASPの酸化安定性
この実施例はASPプロテアーゼ及び変異体プロテアーゼの酸化安定性を決定するために行った試験について説明する。セルロモナス(Cellulomoans)69B4プロテアーゼの酸化に対する安定性はBPN'-変異体プロテアーゼ (BPN'-変異体 1; ジェネンコー; この酵素についてはRE 34,606 [参照により本明細書に援用する]参照のこと); GG36 変異体プロテアーゼ(GG36-変異体1; ジェネンコー; 例えば、本明細書に援用する米国特許5,955, 340 及び5,700, 676参照のこと)及び ピュアファクト(PURAFECT)プロテアーゼ(ジェネンコー)の酸化に対する安定性と比較した。
【誤訳訂正２３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８０４】
酵素活性は以下のように測定した。50μLのインキュベーション混合物を0.1Mトリス緩衝液、pH 8.6の950μLと合わせ、10μLのサンプルを採取し、990μLのAADF基質溶液(0.1 M Tris/0.005%TWEEN(登録商標)中に 1 mg/mlの濃度;pH 8.6)を添加した。p-ニトロアニリンに依存する吸光度410nmにおける増加率をモニターした。これらのプロテアーゼから得られた結果を図31に示す。このグラフが示すように、プロテアーゼ69B4はスブチリシンプロテアーゼに対して酸化条件下での安定性が高くなっていた。
【誤訳訂正２３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８１４】
TNBSアッセイを以下のように行った。試薬緩衝液A(2.4g NaOH、45.4g Na2B407・10H20 を加熱して1000mlに溶解)中に1 mg/ml のTNBS(5％、2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸/シグマ-P2297)を含む溶液を調製した。その後、1ウェル当たり60μLのアリコートを96ウェルプレートに中に移し、10μLの上で述べたインキュベーション混合物を各ウェルに添加し20分間室温で混合した。その後、反応を止めるために200μLの試薬B(2000 ml中 70.4 g NaH2PO4・H20 及び1.2 g Na2SO3)を各ウェルに添加し混合した。スペクトラマックス(Spectra Max) 250 MTPリーダーにおいて、405 nmの吸光度を測定した。吸光度の値はブランク(酵素を含まない溶液)で補正した。表24-1に示すデータは６９Ｂ４プロテアーゼが既知の変異体(BPN‘変異体-1及びGG36変異体-1)プロテアーゼと比較して相当する基質加水分解能力を有することを示す。
【誤訳訂正２４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８１５】
図35に示すように、本発明のセリンプロテアーゼによるDMC基質の加水分解が高く、ｐＨ７乃至１２の幅広いｐＨの範囲で最適なＤＭＣ加水分解活性を有することが明らかである。
【誤訳訂正２４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８２３】
【表１６１】
2007515164.tif 000011
【誤訳訂正２４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８２６】
トリスHCl、pH 8.6の中に溶解したLAS中でインキュベーションされた野生型ASPは失活することが確認された(以下の表27-1参照のこと)。更なる研究は、失活が急速であることを示した(表27-2参照のこと)。LASは負電荷分子であるので、ASPの正電荷のアミノ酸側鎖を伴うLASの静電気引力が、LAS感受性の原因とであるという仮説が導かれる。この仮説を確認するために、(リジン残基を含まない野生型ASPの)アルギニン残基を他のアミノ酸で突然変異させた。
【誤訳訂正２４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８２８】
HDL洗剤の中に使われているもう一つのアニオン界面活性剤はAESである。野生型ASPは高濃度のAESの中においては不安定であることがわかった(表27-5参照のこと)。変異体SAP R18はAES中において野生型よりもより安定であることがわかった(表27-5参照のこと)。5 ％ AESによる活性の失活の割合はASPR18変異体よりも野生型の方が高いことがわかった(表27-6参照のこと)。これらの結果は、ASPのアルギニン残基の置換が通常のアニオン洗剤におけるASPの安定性を改善することを示した。本発明を特定のアニオン洗剤又は変異体に限定することは意図しない。すなわち、洗剤の他に各種アニオン洗剤及び各種ASP変異体を本発明に用いることを意図する。
【誤訳訂正２４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８３６】
(0.35μｇ/μLの濃度における)ASPは、0.1 ％ LAS(ドデシルベンゼンスルホン酸)を含む又は含まない100 mMトリスpH 8.6中でインキュベート(4℃)された。アリコートを0乃至30分間のインキュベーション時間の各ポイントで添加し、最終濃度が1％になるようにTAFを添加して自己分解を停止した。エレクトロスプレイ タンデム マス スペクトロメトリ(LC-ESI-MS/MS)を装備した液体クロマトフィーによりアリコート(10μL)を解析した。HPLCシステム(モデル1100、アライントテクノロジーズ(Agilent Technologies))、逆相カラム(バイダック(Vydac)C4、0.3mmID×150mm)と5μL/mlの流量で60分間で0乃至100％溶媒Bのグラジエント(250μL/分のポンプ流量からスタティックスプリット(static split)を用いて計算)とを用いてペプチドを解析した。溶媒Aは水の中に0.1％のギ酸を含み、溶媒Bはアセトニトリル中0.1％のギ酸を含む。
【誤訳訂正２４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８３７】
マススペクトルは、イオントラップマススペクトロメータ(モデルLCQクラシック、テルモ)を用いて行った。このマススペクトロメーターは、最適検出域が785のm/Zに調整されており、2.5 kVスプレーボルテージ及び250 ℃のキャピラリー温度で操作された。マススペクトルは500ミリ秒の注入時間及び5ミクロスキャン(microscan)を必要とする。タンデムマススペクトルはデータ依存モードにおいて、35 ％の標準化された衝突エネルギーを用いて、最も強いピークを選択し、分割する。ペプチドの相対的定量化のために、ピークエリアを市販のソフトウェアを用いて決定した。自己分解ペプチドの同定はASP配列を含むデータベース上でデータベースサーチプログラム(TurboSequset、 テルモ)を実行することにより行った。酵素の選択を行わず、10000のスレッシュホールド、dtaファイルパラメータ（１．７のペプチドｍ／ｚ  エラー、グループ１１、最小イオンカウント１５）、及びデータベースパラメーター(2.2のペプチドエラー、0.0のMS/MSエラー、両B.Yイオン)でデータベースの検索を行った。
【誤訳訂正２４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８４２】
【表１６９】
2007515164.tif 000012
【誤訳訂正２４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８４５】
実施例30
変異ASPの試験
上で説明する試験に加えて、各種ASPの変異体に対する試験も行われた。これらの試験には実施例1で示す方法が用いられた。以下の表において、「変異体コード」は野生型アミノ酸、アミノ酸配列の位置、及び置換アミノ酸を示す(すなわち、「F001A」は特定の変異体において、アミノ酸配列の1の位置に置けるフェニルアラニンがアラニンに置換されていることを示す)。
【誤訳訂正２４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８５４】
BMI-低pHパフォーマンスアッセイ
以下の表(表30-5)は、低pH条件下でマイクロスウォッチアッセイ(microswatch assay)の基質に対するタイド(TIDE)(登録商標)を用いて選択された変異体の活性を示す(プロテアーゼパフォーマンス試験に対するマイクロスウォッチアッセイ(microswatch assay)を参照のこと)。この表は、上で説明したように計算したときにWT酵素と比較して改善された性能を示す変異体のパフォーマンスインデックスを示す。1以上のパフォーマンスインデックスを示す変異体は、改善されたパフォーマンスを有する。
【誤訳訂正２４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８６５】
更なる例において、地域が異なると水硬度も異なる。水硬度は、通常、Ca2+/Mg2+の混合物の1ガロン当たりのグレーン数で表す。硬度は水の中のカルシウム(Ca2+)及びマグネシウム(Mg2+)の量の測定値である。米国の大部分の水は硬水であるが、地域により硬度は変動する。中程度の硬度(60-120 ppm)乃至高い硬度(121-181 ppm)を有する水は60乃至17.1 ppmのミネラル硬度を有する(すなわち、ppmを17.1で除した値がUSガロン当たりのグレーン数への換算値となる)。表31-1に水硬度の幅を示す。
【誤訳訂正２５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８６６】
【表１９８】
2007515164.tif 000013
【誤訳訂正２５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８６７】
ヨーロッパの水硬度は、通常Ca2+/Mg2+混合物が、ガロンあたり10.5(例えば、10.5乃至20.0) グレーン以上である。北米の水硬度は通常日本の水硬度よりも高いが、ヨーロッパの水硬度よりも低い。例えば、北米水硬度は3乃至10グレーン、3乃至8グレーン、又は約6グレーンである。日本の水硬度は通常北米よりも低く、通常4未満、例えば、混合Ca2+/Mg2+が1ガロン当たり3グレーンである。
【誤訳訂正２５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８６９】
本明細書で述べるように、このプロテアーゼ変異体はマイクロスウォッチアッセイを用いて、異なる洗剤タイプ及び異なる洗浄条件で性能をテストする(上で開示した、参照により本明細書に援用される米国継続出願09/554,992及び国際公開公報99/34011参照のこと)。プロテアーゼは同様に他の土壌基質に対しても試験された。
【誤訳訂正２５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８７１】
ASPのプロテアーゼサンプルは、0.005 % Tween(登録商標)-80中10 mMのNaClで希釈し、10 ppm(タンパク質)の濃度とした。「北米洗浄条件」を提供するために、漂白剤を含まないタイド(TIDE)(登録商標)洗濯洗剤(プロクター＆ギャンブル)を脱イオン水1リットルあたり1グラムの濃度で溶解し、カルシウム及びマグネシウムの濃縮ストック溶液を、1ガロンあたり6グレーンになるように添加した。「ヨーロッパ洗浄条件」を提供するために、脱イオン水1リットル当たり7.6グラムの漂白剤を含まないアリエール(登録商標)レギュラー洗濯洗剤(プロクター＆ギャンブル)溶液を調整し、カルシウム及びマグネシウムのストック溶液を最終水硬度が1ガロン当たり15グレーンになるように添加した。「日本洗浄条件」を提供するために、脱イオン水1リットル当たり0.67グラムの漂白剤を含まないピュアークリーン洗濯洗剤(プロクター＆ギャンブル)を調製し、カルシウム及びマグネシウムの濃縮ストック溶液を1ガロンあたり3グレーンの最終水硬度になるように添加した。
【誤訳訂正２５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８７２】
「アメリカの洗剤製剤を用いて日本の洗浄条件」を提供するために、漂白剤を含まない洗剤組成物IIIを0.66グラムを1リットルの脱イオン水を用いて調製し、カルシウム及びマグネシウムの濃縮ストック溶液を最終水硬度を1ガロン当たり3グレーンになるように添加した。
【誤訳訂正２５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８７５】
【表１９９】
2007515164.tif 000014
【誤訳訂正２５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８７７】
図26に記載するように、北米条件下では、液体タイド(TIDE)(登録商標)洗剤において、同じ条件下におけるピユアフェクト(PURAFECT)(登録商標)、リラース(RELASETM)及びオプティマス(OPTIMASETM)プロテアーゼと比較してASPプロテアーゼの洗浄性能が高められていることが示された。日本洗浄条件下で洗浄組成物III粉末(0.66 g/l)を用いた試験では、ASPは、同じ条件においてPURAFECT(登録商標)、リラース(RELASETM)及びオプティマス(OPTIMASETM)プロテアーゼと比較して同じかまたはより高い洗浄能力を示した(図27参照のこと)。ヨーロッパ洗浄条件下において、アリエール(登録商標)レギュラー粉末洗剤を用いた試験において、同じ条件下でPURAFECT(登録商標)、リラース(RELASETM)及びオプティマス(OPTIMASETM)プロテアーゼと比較してASPプロテアーゼは高められた洗浄性能を示した。両テストにおいて、ASP及びオプティマス(OPTIMASETM)は、ピュアフェクト(PURAFECT(登録商標))及びリラース(RELASETM)と比較して2乃至10倍の吸光度を示した。日本の条件下において、ピュアクリーン(PURE CLEAN)粉末洗剤(図29参照のこと)において、ASPプロテアーゼは同じ条件下でピュアフェクト(PURAFECT(登録商標))、リラース(RELASETM)及びオプティマス(OPTIMASETM)プロテアーゼと比較してかなり高い洗浄性能を示した。
【誤訳訂正２５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８８４】
【表２０２】
2007515164.tif 000015
【誤訳訂正２５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８８６】
【表２０３】
2007515164.tif 000016
【誤訳訂正２５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８８７】
【表２０４】
2007515164.tif 000017
【誤訳訂正２６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０８８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０８８９】
【表２０５】
2007515164.tif 000018
【誤訳訂正２６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９０１】
【表２０９】
2007515164.tif 000019
【誤訳訂正２６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９０３】
【表２１０】
2007515164.tif 000020
【誤訳訂正２６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９０４】
表36-7は、コンパクト濃縮食器洗浄洗剤組成物を提供する。
【誤訳訂正２６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９０５】
表36-7に示す組成物のｐＨは約９．６から約１１．３である。
【誤訳訂正２６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９０６】
【表２１１】
2007515164.tif 000021
【誤訳訂正２６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９０８】
【表２１２】
2007515164.tif 000022
【誤訳訂正２６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９１０】
【表２１３】
2007515164.tif 000023
【誤訳訂正２６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０９１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０９１１】
実施例37
ASPを含む動物飼料
本発明はASPを含む動物飼料も提供する。この例において、家禽に適した飼料がそのような飼料の1つとして提供される。しかしながら、本発明のプロテアーゼは多くの飼料用製剤に使用することができるので、本発明をこの特定の飼料用製剤に限定することは意図しない。本発明の飼料は家畜(例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ等)だけでなく、愛玩動物(例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ゲッ歯動物等)含むがこれらに限定されない任意の動物への投与に適している。以下の表は、3週齢までのシチメンチョウのヒナに投与するのに適したマッシュ、すなわち、トウモロコシベースのスターターフィードを示す。