(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（ＩＩ）を有するチューブリシン化合物、並びにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、立体異性体、立体異性体混合物及び多形体：
【化１】
0005907513.tif 000021
（式中、
Ｗは、ＯＲ１３又はＮＲ１４Ｒ１５から選択される基であり、
ＹはＨ、−ＣＨ２−、ＮＨ、ＮＭｅ、硫黄原子又は酸素原子であり、
ＺはＯＲ１６、ＮＲ１７Ｒ１８、又は
【化２】
0005907513.tif 000022
から選択される基であり、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５は各々独立して、Ｈ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表す。
Ｒ１２はＨ、アシル基（Ｃ（Ｏ）Ｒ）、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリールであり、ここで、Ｒは置換された若しくは非置換のアルキル、置換された若しくは非置換のシクロアルキル、又は置換された若しくは非置換のアリールであり、
Ｒ１９は２位及び／又は３位及び／又は４位、及び／又は５位、及び／又は６位で、又は任意の組合せで、Ｈ、ハロゲン、ニトロ、アミン、モノアルキルアミン又はジアルキルアミン基、ヒドロキシル、アルキルオキシ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表し、
Ｒ２２はＯＨ、ＮＨ２、アルキルオキシ、アルキルアミノ若しくはジアルキルアミノ基、又はリンカーを表し、
Ｖは硫黄原子又は酸素原子、−ＣＨ２−、ＮＨ又はＮＨ−アルキル基である）。
【請求項２】
Ｙが酸素原子である、請求項１に記載のチューブリシン化合物。
【請求項３】
Ｚがチューブフェニルアラニル（Ｔｕｐ）である、請求項１又は２に記載のチューブリシン化合物。
【請求項４】
ＷがＮＲ１４Ｒ１５である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物。
【請求項５】
以下の一般式（ＩＩＩ）を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物：
【化３】
0005907513.tif 000023
（式中、
Ｒ’はＨ又はメチル基であり、
Ｒ１４、Ｒ１５及びＺは上記のように定義される）。
【請求項６】
前記化合物が、
【化４】
0005907513.tif 000024
である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物。
【請求項７】
前記化合物が、
（ｉ）標的指向送達のための生体分子、又は、
（ｉｉ）前記化合物の溶解性、浸透、検出、放出又は選択性を改善することができる分子部分、
にコンジュゲートする、請求項１〜６のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物。
【請求項８】
前記生体分子がペプチド、機能タンパク質、酵素、抗原、抗体、（オリゴ）糖、（多）糖、核酸、ホルモン若しくはホルモン受容体結合体、又はビタミンである、請求項７に記載のチューブリシン化合物。
【請求項９】
前記分子部分がポリエチレングリコール、ポリアミン、ポリグアニジン、色素、受容体リガンド又はポリマーから選択される、請求項７に記載のチューブリシン化合物。
【請求項１０】
医薬用途、農業用途、バイオツール用途又は化粧用途のための請求項１〜９のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物の使用。
【請求項１１】
１つ又は複数の請求項１〜９のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物と、必要に応じて１つ又は複数の薬学的に許容される担体、アジュバント及び／又は希釈剤とを含む医薬製剤。
【請求項１２】
増殖性障害の治療に使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載のチューブリシン化合物。
【請求項１３】
下記に示されるように、一般式（ＩＶ）を有する化合物を第三級アミド結合の生成のためにウギ型反応によって生成する方法：
【化５】
0005907513.tif 000025
（式中、
ＹはＨ、−ＣＨ２−、ＮＨ、ＮＭｅ、硫黄原子又は酸素原子であり、
ＺはＯＲ１６、ＮＲ１７Ｒ１８、又は
【化６】
0005907513.tif 000026
から選択される基であり、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５は各々独立して、Ｈ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表す。
Ｒ１２はＨ、アシル基（Ｃ（Ｏ）Ｒ）、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリールであり、ここで、Ｒは置換された若しくは非置換のアルキル、置換された若しくは非置換のシクロアルキル、又は置換された若しくは非置換のアリールであり、
Ｒ１４及びＲ１６は置換された若しくは非置換のアルキル、置換された若しくは非置換のシクロアルキル、置換された若しくは非置換のアリール、置換された若しくは非置換のヘテロアリール、置換された若しくは非置換のヘテロアルキル、又は通常のＯ−保護基であり、
Ｒ１９は２位及び／又は３位及び／又は４位、及び／又は５位、及び／又は６位で、又は任意の組合せで、Ｈ、ハロゲン、ニトロ、アミン、モノアルキルアミン又はジアルキルアミン基、ヒドロキシル、アルキルオキシ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表し、
Ｒ２２はＮＨ２、アルキルオキシ、アルキルアミノ若しくはジアルキルアミノ基、又はリンカーを表し、
Ｖは硫黄原子又は酸素原子、−ＣＨ２−、ＮＨ又はＮＨ−アルキル基である）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のチューブリシン化合物（チューブリシン類似体）及びその医薬製剤に関する。本発明は医薬用途、農業用途、バイオツール用途又は化粧用途のためのかかる化合物の使用に更に関する。特に、この新規のチューブリシン類似体は細胞静止作用を示し、したがって増殖性障害の治療に使用することができる。本発明によるチューブリシン類似体（いわゆるチューブギ（tubugis））の第三級アミド部分は、ウギ型反応によって生成する。
【背景技術】
【０００２】
微小管重合を強く阻害する新規の種類の抗有糸分裂テトラペプチドであるチューブリシンは、粘液細菌培養物から初めて単離された（非特許文献１）。タキソール又はビンブラスチンのような既知の化学療法薬を２０倍〜１０００倍上回る、ナノモル濃度〜ピコモル濃度の範囲の成長阻害係数（ＧＩ５０）、及び多剤耐性細胞株に対する高い細胞毒性活性のために、チューブリシンは新規の抗がん剤の開発にとって非常に興味深い手がかりとなっている（非特許文献２）。
【０００３】
【化１】
0005907513.tif 000002
【０００４】
式（Ｉ）のチューブリシンＤは、この細胞毒素ファミリーの最も強力なメンバーである。構造的には、チューブリシンは、式（Ｉ）に表されるように、このテトラペプチドの基本構造を構成する以下の４つのアミノ酸からなっている：Ｃ末端のチューブフェニルアラニン（Ｔｕｐ）又はチューブチロシン（Ｔｕｔ）、中心コアである複雑なチューブバリン（Ｔｕｖ）、Ｌ−イソロイシン（Ｉｌｅ）、及びＮ末端アミノ酸である疎水性Ｄ−Ｎ−メチルピペコリン酸（Ｍｅｐ）。分子の中央部を極めて込み入ったものにする、独自のアミドであるＮ，Ｏ−アセタールエステル官能基も存在する。概して、この官能基を保有する天然のチューブリシンは、最も大きい細胞毒性活性を有する。
【０００５】
合成の観点からすれば、この希少な化学モチーフは大きな問題であり、チューブリシンの全合成において僅かな基の導入しか成功していない（非特許文献３及び非特許文献４）。これまでに、チューブリシン（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９）並びにチューブリシンの類似体及び／又はコンジュゲート（特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、特許文献１７、特許文献１８、特許文献１９、特許文献２０、特許文献２１）を合成する幾つかの方法が提案されている。
【０００６】
しかしながら、合成の問題のために、これらの方法は概して、比較的少量でしかチューブリシン及び／又はそれらの類似体をもたらさない。加えて、極めて毒性の強い求電子試薬を、チューブリシン及び／又はそれらの類似体の調製時に使用する必要がある。さらに、Ｎ，Ｏ−アセタール官能基を有しないチューブリシンの類似体は一般に、例えばチューブリシンＤと比較して低い細胞毒性活性を示す。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】独国特許出願公開第１０００８０８９号
【特許文献２】独国特許出願公開第１０２５４４３９号
【特許文献３】独国特許出願公開第１９６３８８７０号
【特許文献４】欧州特許第１５６２９７９号
【特許文献５】欧州特許出願公開第２０２８１８５号
【特許文献６】米国特許出願公開第２００５／０２３９７１３号
【特許文献７】独国特許出願公開第１０２３０８７２号
【特許文献８】国際公開第２００４／０４６１７０号
【特許文献９】国際公開第２００９／０５５５６２号
【特許文献１０】独国特許出願公開第１０２３０８７４号
【特許文献１１】独国特許出願公開第１０２３０８７５号
【特許文献１２】独国特許出願公開第１０３０５５３１号
【特許文献１３】独国特許出願公開第１０２００４０３０２２７号
【特許文献１４】米国特許出願公開第２０１０／００４８４９０号
【特許文献１５】国際公開第２００４／００５２６９号
【特許文献１６】国際公開第２００４／００５３２６号
【特許文献１７】国際公開第２００４／００５３２７号
【特許文献１８】国際公開第２００８／１３８５６１号
【特許文献１９】国際公開第２００９／０１２９５８号
【特許文献２０】国際公開第２００９／１３４２７９号
【特許文献２１】国際公開第２０１０／０３４７２４号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】F. Sasse et al. J. Antibiot. 2000, 53, 879
【非特許文献２】H. Steinmetz atal., Angew. Chem., Int. Ed. 2004, 43, 4888
【非特許文献３】H. M. Peltier et al. J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 16019
【非特許文献４】O. Pando et al. Org. Lett., 2009, 11, 5567
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明の目的は、毒性の高い求電子試薬の使用を回避しながら、高収率で容易に合成することができる細胞毒性の高いチューブリシン化合物の新たな生成を提供することである。この新たな化合物は、標的指向送達のための生体分子、及び／又は溶解性、浸透、放出若しくは選択性（例えば組織選択性）を改善することができる分子部分とコンジュゲートを形成することが可能である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の課題は、特許請求の範囲において特徴付けられる実施の形態によって解決される。
【００１１】
特に、本発明は、以下の一般式（ＩＩ）の第三級テトラペプチド構造（いわゆるチューブギ）を有するチューブリシン類似体、並びにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、プロドラッグ、代謝産物、立体異性体、立体異性体混合物及び多形体：
【００１２】
【化２】
0005907513.tif 000003
【００１３】
（式中、
Ｗは、ＯＲ１３又はＮＲ１４Ｒ１５から選択される基であり、
Ｘは、置換された５員又は６員の芳香環（アリーレン）又は芳香族複素環（ヘテロアリーレン）、好ましくはチアゾール又はオキサゾールであり、
ＹはＨ、−ＣＨ２−、ＮＨ、ＮＭｅ、硫黄原子又は酸素原子、好ましくは酸素原子であり、
ＺはＯＲ１６、ＮＲ１７Ｒ１８、又は
【００１４】
【化３】
0005907513.tif 000004
【００１５】
から選択される基であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５は各々独立して、Ｈ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表し、Ｒ１及びＲ３又はＲ１及びＲ２が結合して、窒素原子とともに５員ピロリジン環又は６員ピペリジン環を形成していてもよく、
Ｒ１２はＨ、アシル基（Ｃ（Ｏ）Ｒ）、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリールであり、ここで、Ｒは置換された若しくは非置換のアルキル、置換された若しくは非置換のシクロアルキル、又は置換された若しくは非置換のアリールであり、
Ｒ１９は２位及び／又は３位及び／又は４位、及び／又は５位、及び／又は６位で、又は任意の組合せで、Ｈ、ハロゲン、ニトロ、アミン、モノアルキルアミン又はジアルキルアミン基、ヒドロキシル、アルキルオキシ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表し、
Ｒ２２はＯＨ、ＮＨ２、アルキルオキシ、アルキルアミノ若しくはジアルキルアミノ基、又はリンカーを表し、
Ｖは硫黄原子又は酸素原子、−ＣＨ２−、ＮＨ又はＮＨ−アルキル基である）を提供する。
【００１６】
本発明は、標的指向送達のための生体分子にコンジュゲートした式（ＩＩ）のチューブギにも関する。生体分子は、ペプチド、機能タンパク質、酵素、抗原、抗体、（オリゴ）糖、（多）糖、核酸、ホルモン若しくはホルモン受容体結合体、又はビタミンと定義される。コンジュゲーションは、リンカーによって媒介されていてもよい。
【００１７】
本発明は、チューブギの溶解性、浸透、検出、放出又は選択性（例えば組織選択性）を改善することができる分子部分にコンジュゲートした式（ＩＩ）のチューブギにも関する。かかる部分は例えば、それらのサイズ及び形態のために特定の組織によって優先的に捕捉され、及び／又は規定の放出を可能にする、ポリエチレングリコール、ポリアミン、ポリグアニジン、色素若しくは受容体リガンド、又はポリマーである。コンジュゲーションは、リンカーによって媒介されていてもよい。
【００１８】
本発明の１つの実施の形態では、かかるリンカーはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ２、ＳＯ３Ｈ、ＣＮ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、Ｃ１〜８アルキル基及びＣ１〜６アリール基、又はそれらの組合せからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で必要に応じて置換された、脂肪族鎖−（ＣＨ２）ｎ−（ｎは１〜１２の整数である）、オリゴエチレングリコール−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−（ｎは１〜１２の整数である）、合成ポリ（エチレングリコール）、又はフェニレン環を含み得る。リンカー基が、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ポリグリセロール（ＰＧ）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）及びＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー、並びにそれらの組合せからなる群から選択される合成ポリマーを含有することが特に好ましい。リンカー基が、例えば１０００Ｄａ〜５００００Ｄａの範囲の質量を有するＰＥＧを含むことが特に好ましい。ＰＥＧが２０００Ｄａ〜２００００Ｄａの範囲内の質量を有することがより好ましい。かかるリンカー基の例は、構造ＳｕＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＥＧ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−Ｔｒｔを有する市販のＰＥＧの保護メルカプト誘導体から誘導することができる。この基は、構造−ＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＰＥＧ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−を有するリンカー基の単位へと変換することができる。
【００１９】
リンカーは、鎖内の任意の化学的に好適な位置に、ジスルフィド（還元開裂又は塩基性−求核開裂）、酸感受性エステル基若しくは塩基感受性エステル基（それぞれ酸性開裂又は塩基性／求核開裂）、又はアセタール部分若しくはヘテロアセタール部分（酸性開裂、又はＯ／Ｓアセタール及びＳ／Ｓアセタールについては同様に酸化開裂）のような切断可能な部分を含有してもよく、切断可能な部分は或る特定のｐＨ、又はかかる開裂をｉｎ  ｖｉｖｏで促進する酵素に対して特異的に応答するように設計することができる。
【００２０】
したがって、本発明においては、ポリエチレングリコールをリンカー、及びチューブギの溶解性、浸透、放出又は選択性（例えば組織選択性）を改善することができる分子部分とすることができる。
【００２１】
さらに、本発明は、製薬用途、医薬用途、農業用途、バイオツール用途又は化粧用途のための上記に定義されるチューブギ、並びにその配合物及び／又はコンジュゲートの使用を提供する。特に、本発明のチューブギ、並びにその配合物及び／又はコンジュゲートは、任意のタイプの細胞を死滅させる必要のある用途で使用することができる。好ましくは、チューブギ、並びにその配合物及び／又はコンジュゲートは、異常な細胞増殖を阻害するために、特にがんのような増殖性障害の治療のために使用される。
【００２２】
本発明は、一般式（ＩＶ）を有する化合物を第三級アミド結合の生成のためにウギ型反応によって生成する方法にも関する（図１を参照されたい）：
【００２３】
【化４】
0005907513.tif 000005
【００２４】
（式中、
Ｘは、置換された５員又は６員の芳香環（アリーレン）又は芳香族複素環（ヘテロアリーレン）、好ましくはチアゾール又はオキサゾールであり、
ＹはＨ、−ＣＨ２−、ＮＨ、ＮＭｅ、硫黄原子又は酸素原子、好ましくは酸素原子であり、
ＺはＯＲ１６、ＮＲ１７Ｒ１８、又は
【００２５】
【化５】
0005907513.tif 000006
【００２６】
から選択される基であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２３、Ｒ２４及びＲ２５は各々独立して、Ｈ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表し、Ｒ１及びＲ３が結合して、窒素原子とともに５員ピロリジン環又は６員ピペリジン環を形成していてもよく、
Ｒ１２はＨ、アシル基（Ｃ（Ｏ）Ｒ）、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリールであり、ここで、Ｒは置換された若しくは非置換のアルキル、置換された若しくは非置換のシクロアルキル、又は置換された若しくは非置換のアリールであり、
Ｒ１４及びＲ１６は置換された若しくは非置換のアルキル、置換された若しくは非置換のシクロアルキル、置換された若しくは非置換のアリール、置換された若しくは非置換のヘテロアリール、置換された若しくは非置換のヘテロアルキル、又は通常のＯ保護基であり、
Ｒ１９は２位及び／又は３位及び／又は４位、及び／又は５位、及び／又は６位で、又は任意の組合せで、Ｈ、ハロゲン、ニトロ、アミン、モノアルキルアミン又はジアルキルアミン基、ヒドロキシル、アルキルオキシ、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のシクロアルキル、置換された又は非置換のアリール、置換された又は非置換のヘテロアリール、置換された又は非置換のヘテロアルキルを表し、
Ｒ２２はＮＨ２、アルキルオキシ、アルキルアミノ若しくはジアルキルアミノ基、又はリンカーを表し、
Ｖは硫黄原子又は酸素原子、−ＣＨ２−、ＮＨ又はＮＨ−アルキル基である）。
【００２７】
本発明によると、重要な工程としてウギ型反応を用いて、式（Ｉ）に示されるような天然のチューブリシンの不安定なＮ，Ｏ−アセタール官能基の代わりにペプチド骨格を導入することが、驚くべきことに、細胞毒性活性を保持しながらバイオアベイラビリティが改善した第三級テトラペプチド（チューブギ）の新たな生成をもたらすことが見出された。さらに、チューブギはチューブリシンよりも良好な加水分解安定性を示す。ウギ４成分反応（Ｕｇｉ−４ＣＲ）は、Ｎ−置換ジペプチド骨格を得るための第一級アミン、オキソ成分、カルボン酸及びイソシアニドのワンポット縮合である。Ｕｇｉ−４ＣＲは、図１に示されるような副生成物として水のみを生じる高原子効率的なワンポット手順において、異なるカルボキシ成分、オキソ成分、イソシアノ成分又はアミノ成分を使用する可能性によって生じる分子多様性及び複雑性の両方を導入する、非常に直接的な方法をもたらす。更なる例示のために、本発明によるチューブギの合成時の逐次多重多成分反応の例を図２に示す。
【００２８】
本発明によると、Ｙが酸素原子であり、Ｘがチアゾール又はオキサゾール、特にチアゾールである、一般式（ＩＩ）のチューブギが好ましい。式（ＩＩ）中のＲ１及びＲ３が結合して、窒素原子とともにピペリジン部分を形成する本発明によるチューブギ化合物が更により好ましい。別の実施の形態では、Ｚは好ましくはチューブフェニルアラニル（Ｔｕｐ）又はチューブチロシル（Ｔｕｔ）であり、より好ましくはＺはチューブフェニルアラニル（Ｔｕｐ）である。更なる実施の形態では、Ｗは好ましくはＮＲ１４Ｒ１５である。本発明による更により好ましい実施の形態では、上記式（ＩＩ）において、Ｘはチアゾール部分又はオキサゾールであり、Ｒ１及びＲ３は結合してピペリジン部分を形成し、Ｚはチューブフェニルアラニル（Ｔｕｐ）であり、ＷはＮＲ１４Ｒ１５である。
【００２９】
本発明によると、以下の式（ＩＩＩ）を有する化合物が特に好ましい：
【００３０】
【化６】
0005907513.tif 000007
【００３１】
（式中、
Ｒ’はＨ又はメチル基であり、
Ｒ１４、Ｒ１５及びＺは上記のように定義され、Ｚがチューブフェニルアラニル（Ｔｕｐ）であることが最も好ましい）。
【００３２】
本発明によると、本明細書で下記に与えられる化合物Ａ〜化合物Ｈ、特に化合物Ａ、化合物Ｂ及び化合物Ｄが更により好ましい。
【００３３】
【化７】
0005907513.tif 000008
【００３４】
本発明による一般式（ＩＩ）又は一般式（ＩＩＩ）のチューブギはそれぞれ、この種類の天然物関連の化合物の多重多成分反応に基づく合成の最初の実例である。
【００３５】
以下は、本明細書及び特許請求の範囲において使用される用語の定義である。本明細書の基又は用語について与えられる最初の定義は、本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、他に指定のない限り、個々に又は別の基の一部として、その基又は用語に適用される。
【００３６】
「アルキル」という用語は、１個〜１２個の炭素原子、好ましくは１個〜８個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を指す。低級アルキル基、すなわち炭素原子数１〜４のアルキル基が最も好ましい。
【００３７】
「置換（された）アルキル」という用語は、ハロ（例えばトリフルオロメチル）、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、ニトロ、シアノ、オキソ（＝Ｏ）、ＯＲａ、ＳＲａ、（＝Ｓ）、−ＮＲａＲｂ、−Ｎ（アルキル）３＋、−ＮＲａＳＯ２、ＮＲａＳＯ２Ｒｃ、−ＳＯ２Ｒｃ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＳＯ２ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ（ＯＨ）２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、−ＣＯ２Ｒａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１〜４アルキレン）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ（ＳＯ２）Ｒｂ、−ＣＯ２（Ｃ１〜４アルキレン）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣＯ２Ｒｂ、−ＮＲａ（Ｃ１〜４アルキレン）ＣＯ２Ｒｂ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−アルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロ及び／又はヘテロアリール（ここで、Ｒａ及びＲｂは水素、アルキル、アルケニル、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（アルキル）、Ｃ３〜７シクロアルキル、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、ナフチル、４員〜７員のヘテロシクロ、若しくは５員若しくは６員のヘテロアリールから選択されるか、又は同じ窒素原子に結合する場合、連結してヘテロシクロ若しくはヘテロアリールを形成してもよく、ＲｃはＲａ及びＲｂと同じ基から選択されるが、水素ではない）からなる群から選択される１つ、２つ又は３つの置換基を有する上記に定義されるアルキル基を指す。
【００３８】
「アルキル」という用語が、「アリールアルキル」のように別の基とともに使用される場合、この接続は、より具体的には置換アルキルが含有する置換基の少なくとも１つを定義する。例えば、「アリールアルキル」は、置換基の少なくとも１つがベンジル等のアリールである、上記に定義される置換アルキル基を指す。
【００３９】
「アルケニル」という用語は、２個〜１２個の炭素原子、及び少なくとも１つの二重結合を有する直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を指す。１つの二重結合を有する炭素原子数２〜６のアルケニル基が最も好ましい。
【００４０】
「アルキニル」という用語は、２個〜１２個の炭素原子、及び少なくとも１つの三重結合を有する直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を指す。１つの三重結合を有する炭素原子数２〜６のアルキニル基が最も好ましい。
【００４１】
「アルキレン」という用語は、１個〜１２個の炭素原子、好ましくは１個〜８個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の二価の炭化水素基を指す。低級アルキレン基、すなわち炭素原子数１〜４のアルキレン基が最も好ましい。「アルケニレン」及び「アルキニレン」という用語はそれぞれ、上記に定義されるアルケニル基及びアルキニル基の二価基を指す。
【００４２】
置換されたアルケニル基、アルキニル基、アルキレン基、アルケニレン基又はアルキニレン基に言及する場合、これらの基は、置換アルキル基について上記に定義される１つ〜３つの置換基で置換されている。
【００４３】
「シクロアルキル」という用語は、置換アルキル基について上記に与えられる置換基の群から選択される０、１つ、２つ又は３つの置換基を有する環を含む。「シクロアルキル」という用語は、それと縮合した第２の環（例えばベンゾ環、ヘテロシクロ環又はヘテロアリール環を含む）を有するか、又は炭素原子数３若しくは４の炭素−炭素橋を有する環も含む。したがって、「シクロアルキル」という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含む。
【００４４】
「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、クロロ、ブロモ、フルオロ及びヨードを指す。
【００４５】
「ハロアルキル」という用語は、１つ又は複数のハロ置換基を有する置換アルキルを意味する。例えば、「ハロアルキル」は、モノフルオロメチル、ビフルオロメチル及びトリフルオロメチルを含む。
【００４６】
「ハロアルコキシ」という用語は、１つ又は複数のハロ置換基を有するアルコキシ基を意味する。例えば、「ハロアルコキシ」はＯＣＦ３を含む。
【００４７】
「アリール」という用語は、特にフェニル、ビフェニル、１−ナフチル及び２−ナフチルを指す。「アリール」という用語は、置換アルキル基について上記に定義される群から選択される０、１つ、２つ又は３つの置換基を有する環を含む。好ましいアリール基は、必要に応じて置換されたフェニルである。
【００４８】
「ヘテロシクロ」又は「複素環式」という用語は、環の少なくとも１つが少なくとも１つのヘテロ原子（Ｏ、Ｓ又はＮ）を有する、置換された及び非置換の非芳香族の３員〜７員の単環基、７員〜１１員の二環基及び１０員〜１５員の三環基を指す。ヘテロ原子を含有するヘテロシクロ基の各々の環は、１個若しくは２個の酸素原子若しくは硫黄原子、及び／又は１個〜４個の窒素原子を含有することができる（ただし、各々の環中のヘテロ原子の総数は４個以下であり、更に、環は少なくとも１つの炭素原子を含有する）。二環基及び三環基を完成させる縮合環は、炭素原子のみを含有するものであってもよく、飽和、部分飽和又は不飽和であり得る。窒素原子及び硫黄原子は必要に応じて酸化されていてもよく、窒素原子は必要に応じて四級化されていてもよい。ヘテロシクロ基は、任意の利用可能な窒素原子又は炭素原子に結合することができる。例示的な単環基としては、アゼチジニル、ピロリジニル、オキセタニル、イミダゾリニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、ピペラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジル、２−オキソピロロジニル、２−オキソアゼピニル、アゼピニル、４−ピペリドニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、１，３−ジオキソラン等が挙げられる。
【００４９】
実施例を参照して、本発明を更により詳細に説明する。しかしながら、本発明がこのような特定の実施例に決して限定されないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】一般式（ＩＶ）を有する化合物を第三級アミド結合の生成のためにウギ型反応によって生成する方法を示す。
【図２】本発明によるチューブギの合成時の逐次多量多成分反応の例を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
細胞培養及び細胞毒性：
ヒト前立腺がん細胞株（ＰＣ−３）及びヒト結腸がん細胞株（ＨＴ−２９）を、ドイツ微生物コレクション（German Collection of Microorganisms）から入手した。全ての細胞株を、それらのそれぞれの寄託者によって推奨される条件下で培養した。ＰＣ−３細胞株及びＨＴ−２９細胞株の両方に対する細胞毒性及びＧＩ５０の決定を、ＭＴＴ細胞増殖アッセイ（D. A. Scudiero et al. Cancer. Res. 48, 4827-4833 (1988)）を用いて行った。両方の細胞株を、１０％のウシ胎仔血清、１％のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン及び１．６％のｈｅｐｅｓ（１Ｍ）を添加したＲＰＭＩ  １６４０培地中で維持した。ＰＣ−３細胞株については１ウェル当たり５００個の細胞、ＨＴ−２９細胞株については１ウェル当たり１５００個〜２０００個の細胞を、９６ウェル細胞培養プレート（TPP，Trasadingen，Switzerland）に一晩播種し、各々の阻害剤の段階希釈物に３日間曝露した。ホルマザン塩の形成を、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）リーダー（DYNEX technologiesのＭＲＸ  ＴＣ  ＩＩ）を用いて４９０ｎｍで測定した。各々の化合物から、４つの独立した反復試験区（replicates）を作製した。
Ｕｇｉ−４ＣＲ反応の基本手順：
遊離アミン（０．２４ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ溶液（３ｍｌ）に、カルボニル成分（０．２４ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ懸濁液（３ｍｌ）を、シリンジポンプを用いて２時間かけてゆっくりと添加した。続いて、酸成分（０．６ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加し、反応混合物を１０分間撹拌した後、イソシアニド成分（０．２４ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ溶液（３ｍｌ）を、シリンジポンプを用いて３時間かけて添加した。反応混合物を更に６時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによって、式（ＩＶ）を有する化合物が得られた。
Ｍｅｐ−Ｉｌｅ−ＯＨ  １ｂの調製：
【００５２】
【化８】
0005907513.tif 000009
【００５３】
イソロイシンイソシアニドの４−メチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［２．２．２］オクチル（ＯＢＯ）エステル（２２５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（７ｍｌ）に、新たに調製したΔ１−ピペリデインのエタノール溶液（最大濃度０．４Ｍ、２０ｍｌ）を添加した。その後、ＣＦ３ＣＯＯＨ（１０１μｌ、１．５ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を１５時間撹拌した。続いて、追加量のＣＦ３ＣＯＯＨ（１０１μｌ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、３０分間にわたって撹拌を続けた。次いで、溶媒を減圧下で除去して、得られた油をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ混合物（１０ｍｌ、４：１（ｖ／ｖ））に溶解した。次いで、ＮａＯＨ（４００ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）の水溶液（１５ｍｌ）を添加し、反応混合物を１．５時間撹拌した。次いで、ｐＨが７〜８に達するまで反応混合物を濃ＨＣｌ水溶液（３７％）で処理した。その後、この塩基性混合物をＤＯＷＥＸ  ５０Ｗ  Ｘ２（Ｈ＋形態）樹脂で中和し、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた粗生成物を、更に精製することなく次の工程に使用した。
【００５４】
上記で得られた油を、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ混合物（２０ｍｌ、３：１（ｖ／ｖ））に溶解した。パラホルムアルデヒド（３００ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）及び２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１０６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ  Ｐｄ）を添加した。反応混合物を水素雰囲気下で１６時間にわたって撹拌した後、セライト濾過した。次いで、溶媒を減圧下で除去した。得られたジアステレオマー混合物（およそ１：１の比率）を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ３ＣＯＯＥｔ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、７／２／１）によって分割した。この２つのジアステレオマーを別個に回収し、それらの画分を別々に濃縮し、０．２２μｍのＲＣシリンジフィルターを用いて濾過した。次いで、溶媒を減圧下で除去した。得られた油を別のフラスコに入れ、それぞれＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（６ｍｌ、１：１（ｖ／ｖ））に溶解した。次いで、両方の溶液を、ｐＨが２となるまで濃ＨＣｌ水溶液（３７％）で酸性化した。撹拌を５分間続けた。その後、いずれの場合にもＴＨＦを減圧下で除去した。得られた水溶液をｎ−ブタノール（３×３ｍｌ）で抽出した。別個に回収した有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。次いで、この２つの固体を高真空下で２時間かけて乾燥させて、１０５ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ、全収率３６％）のより低極性のジアステレオマー１ａ（Ｒｆ＝０．３８（ＣＨ３ＣＯＯＥｔ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、５／４／１））、及び９１ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ、全収率３１％）のより高極性のジアステレオマー１ｂ（Ｒｆ＝０．１７（ＣＨ３ＣＯＯＥｔ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、５／４／１））を得た。ジアステレオマー１ａ及びジアステレオマー１ｂの絶対立体化学帰属を、それらのそれぞれのＲｆ及び比旋光度の値を、４工程の古典的ペプチドカップリングによって合成したＭｅｐ−Ｉｌｅｕ−ＯＨの塩酸塩の値と比較することによって行った。両方のジアステレオマーのスペクトルの比較では、顕著な差は見られなかった。ＮＭＲスペクトルはｐＨに依存することが証明された。天然の立体化学を有するジアステレオマー１ｂについては以下のとおりである：１Ｈ−ＮＭＲ（３９９．９ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ＝０．９２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．９７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．２６〜１．３６（ｍ，１Ｈ），１．４３〜１．５４（ｍ，１Ｈ），１．６３〜１．９９（ｍ，６Ｈ），２．１２〜２．１６（ｍ，１Ｈ），２．８３（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３／２．６Ｈｚ），３．５０〜３．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ），４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７／２．９Ｈｚ），４．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）ｐｐｍ。Ｃ１３Ｈ２５Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：２５７．１８６１、実測値：２５７．１８６３。
化合物２：
【００５５】
【化９】
0005907513.tif 000010
【００５６】
Ｎ−Ｂｏｃチューブバリンエチルエステル（８２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍｌ）に、ＴＢＤＳＣｌ（８３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、２．５当量）及びイミダゾール（２．５当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温に戻し、一晩撹拌し、エーテル（３ｍｌ）で希釈した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×５ｍｌ）及びブライン（２×５ｍｌ）で洗浄した。層を分離し、有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して乾燥させた。得られた粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）に溶解し、溶液を０℃で冷却し、ＴＦＡ（０．２５ｍｌ）を添加した。混合物を撹拌し、反応の進行を、出発物質が消費されるまで（およそ４時間）ＴＬＣによって注意深くモニタリングした。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、得られた油をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）に再溶解した。形成された溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×５ｍｌ）及びブライン（３×５ｍｌ）で洗浄した。層を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。この粗物質を、更に精製することなく次の工程に使用した。
【００５７】
上記で得られた遊離アミンの乾燥ＭｅＯＨ溶液（３ｍｌ）に、ホルムアルデヒド（７．２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ懸濁液（３ｍｌ）を、シリンジポンプを用いて２時間かけてゆっくりと添加した。続いて、１ｂ（１５４ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１０分間撹拌した後、ｎ−ブチルイソシアニド（２７μｌ、０．２４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（３ｍｌ）を、シリンジポンプを用いて３時間かけて添加した。反応混合物を更に６時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ、３０：１：０．３（ｖ／ｖ／ｖ））によって、６９ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ、３工程の収率４１％）のペプトイド２が黄色の油として得られた。この配座異性体混合物をＮＭＲによって観察した（推定比４：１）。帰属シグナルは主要な配座異性体に属する。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝−０．０７（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．１７（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．７８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），０．９３（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９８（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．１４（ｍ，１Ｈ），１．３１〜１．３５（ｍ，３Ｈ），１．３９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），１．４４〜１．５１（ｍ，４Ｈ），１．５９〜１．６９（ｍ，５Ｈ），１．９８〜２．０９（ｍ，３Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．４４〜２．４６（ｍ，１Ｈ），２．８７〜２．８８（ｍ，２Ｈ），３．２１〜３．２５（ｍ，１Ｈ），３．２９〜３．３３（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ），４．３５〜４．４５（ｍ，６Ｈ），５．１０（ｍ，１Ｈ），７．０（ｄ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ３７Ｈ６８Ｎ５Ｏ６ＳＳｉ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：７３８．４６５４、実測値：７３８．４６５８。
化合物３：
【００５８】
【化１０】
0005907513.tif 000011
【００５９】
Ｎ−Ｂｏｃチューブバリンエチルエステル（７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、ＴＢＤＳＣｌ（７２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）で処理し、続いてＢｏｃ脱保護、並びにホルムアルデヒド（２１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、１ｂ（１２３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及びイソプロピルイソシアニド（１９μｌ、０．２０ｍｍｏｌ）を用いたＵｇｉ−４ＣＲを、ペプトイド２の合成について記載されるのと同様の方法で行い、４９ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ、３工程の収率３５％）のペプトイド３を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ、３０：１：０．３（ｖ／ｖ／ｖ））後に黄色の油として得た。配座異性体混合物をＮＭＲによって観察した（推定比２：１）。帰属シグナルは配座異性体混合物に属する。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝−０．０９（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），−０．０８（ｓ，１．５Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．１５（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．１７（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．７８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．８４〜０．８８（ｍ，９Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），０．９３（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９５（ｓ，４．５Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９８（ｔ，４．５Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０８（ｄ，１．５Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．１３〜１．１６（ｍ，６Ｈ），１．１９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．３９（ｔ，４．５Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．６０〜１．７１（ｍ，５Ｈ），１．７８〜１．８７（ｍ，３Ｈ），１．９８〜２．０３（ｍ，３Ｈ），２．０５（ｓ，１．５Ｈ），２．０６〜２．１３（ｍ，２Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．４０〜２．５１（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），２．８５〜２．９３（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），３．６４（ｄ，１．５Ｈ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ），３．７９〜３．８６（ｂｒ  ｍ，０．５Ｈ），３．９３〜４．０（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），４．０４〜４．１５（ｍ，２．５Ｈ），４．３４〜４．４６（ｍ，６Ｈ），４．６４（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．１５（ｍ，１Ｈ），５．２０（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝９．７／１．９Ｈｚ），８．０７（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，０．５Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ３６Ｈ６６Ｎ５Ｏ６ＳＳｉ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：７２４．４４９８、実測値：７２４．４４８６。
ジアステレオマー混合物４：
【００６０】
【化１１】
0005907513.tif 000012
【００６１】
Ｎ−Ｂｏｃチューブバリンエチルエステル（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を、ＴＢＤＳＣｌ（１０１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）で処理し、続いてＢｏｃ脱保護、並びにエタノール（９μｌ、０．３ｍｍｏｌ）、１ｂ（１７４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）及びｎ−ブチルイソシアニド（３４μｌ、０．３ｍｍｏｌ）を用いたＵｇｉ−４ＣＲを、化合物２の合成について記載されるのと同様の方法で行い、１０５ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ、３工程の収率５２％）のジアステレオマー混合物４を、フラッシュカラムクロマトグラフィー後に黄色の油として得た。各々のジアステレオマーの２つの配座異性体はＮＭＲによって区別することができる。帰属シグナルは全混合物に属する。１Ｈ−ＮＭＲ（３９９．９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝−０．１８〜０．１５（ｍ，２１Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．２５（ｓ，３Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．８１〜０．９５（ｍ，７２Ｈ），０．９６〜１．１７（ｍ，２８Ｈ），１．２２〜１．４２（ｍ，３２Ｈ），１．４８〜１．９０（ｍ，２８Ｈ），１．９２〜２．０９（ｍ，８Ｈ），２．１６〜２．１９（ｍ，１２Ｈ），２．２２〜２．４８（ｍ，８Ｈ），２．８１〜２．９４（ｍ，４Ｈ），３．０〜３．１１（ｍ，４Ｈ），３．１８〜３．３４（ｍ，７Ｈ），３．４０〜３．５１（ｍ，１Ｈ），３．８２〜４．０１（ｍ，４Ｈ），４．０７〜４．１３（ｍ，２Ｈ），４．２０〜４．４２（ｍ，１０Ｈ），４．４６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５４〜４．６０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．６５〜４．７０（ｍ，２Ｈ），４．７３〜４．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．９５〜５．０４（ｍ，２Ｈ），５．２５〜５．２８（ｍ，１Ｈ），５．３６〜５．４０（ｍ，１Ｈ），８．０４〜８．１４（４ｓ，４Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ３８Ｈ７０Ｎ５Ｏ６ＳＳｉ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：７５２．４８１１、実測値：７５２．４８０５。
化合物５、化合物６及び化合物７のための基本手順：
化合物５：
【００６２】
【化１２】
0005907513.tif 000013
【００６３】
シリルエーテル２（２４ｍｇ、３２．８μｍｏｌ）をＴＦＡ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（２ｍｌ、２：２：１（ｖ／ｖ／ｖ））に溶解し、室温で３６時間にわたって撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、得られた油をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、これを蒸留して、ＴＦＡを共沸除去した。この手順を数回繰り返した。その後、粗物質をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１ｍｌ、２：１（ｖ／ｖ））に溶解し、ＬｉＯＨ（２．０ｍｇ、８２μｍｏｌ、２．５当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温に戻し、８時間撹拌し、１０％ＮａＨＳＯ４を用いてｐＨ４まで酸性化した。混合物をＥｔＯＡｃ（１ｍｌ）で希釈し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（３×２ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を減圧下で濃縮した。得られた酸を０．２Ｍのペンタフルオロフェノール（ＰＦＰ、１．４ｍｇ、７．３μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ、１．１μｌ、７．３μｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に０℃で添加した。溶液を室温に戻し、４時間撹拌した。その後、溶媒を減圧下で除去した。ＥｔＯＡｃ（１ｍｌ）を混合物に添加し、得られた懸濁液を吸引濾過すると、所望の活性酸が濾液中に得られた。ＥｔＯＡｃを減圧下で除去し、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）、続いてチューブフェニルアラニンメチルエステルの塩酸塩（２５ｍｇ、９８．４μｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１７μｌ、９８．４μｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌した後、ＤＭＦを減圧下で除去した。逆相ＨＰＬＣでの粗生成物の精製によって、１５ｍｇ（１９μｍｏｌ、全収率５８％）のメチルエステル５が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８３〜０．９０（ｍ，６Ｈ），０．９４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．９８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ），１．０７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），１．１５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．２２（ｍ，１Ｈ），１．３４〜１．４２（ｍ，５Ｈ），１．５４〜１．８１（ｍ，８Ｈ），２．０〜２．１０（ｍ，５Ｈ），２．２０〜２．３５（ｍ，２Ｈ），２．５８〜２．６４（ｍ，１Ｈ），２．７４〜２．８０（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），２．８５〜２．８９（ｍ，１Ｈ），２．９８〜３．０１（ｍ，１Ｈ），３．０５〜３．１０（ｍ，１Ｈ），３．２１〜３．２５（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｍ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．７２〜３．７７（ｍ，１Ｈ），４．３０（ｍ，１Ｈ），４．３９（ｍ，１Ｈ），４．５５〜４．６７（ｂｒ  ｍ，２Ｈ），５．０９〜５．１９（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，４Ｈ），７．３７（ｍ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ４２Ｈ６７Ｎ６Ｏ７Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：７９９．４７８６、実測値：７９９．４７８６。
化合物６：
【００６４】
【化１３】
0005907513.tif 000014
【００６５】
化合物５の合成について記載される方法と同様に、シリルエーテル３（１７ｍｇ、２４μｍｏｌ）を初めに酸加水分解に供し、続いてエチルエステルの開裂及びチューブフェニルアラニンメチルエステルの塩酸塩（１５ｍｇ、６０μｍｏｌ）とのカップリングを行った。逆相ＨＰＬＣでの粗生成物の精製によって、１０ｍｇ（１３μｍｏｌ、全収率５５％）のメチルエステル６が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝０．９５〜０．９９（ｍ，９Ｈ），１．０６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．０８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．１５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），１．１８（ｍ，１Ｈ），１．４３〜１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５４〜１．７２（ｍ，６Ｈ），１．７９〜１．８２（ｍ，２Ｈ），１．９７〜２．０３（ｍ，３Ｈ），２．０６〜２．１２（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．５１〜２．５３（ｍ，１Ｈ），２．５８〜２．６４（ｍ，１Ｈ），２．８５〜２．８８（ｍ，１Ｈ），２．９３〜２．９５（ｍ，１Ｈ），２．９７〜３．０１（ｍ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．７５〜３．７９（ｍ，１Ｈ），３．９３〜３．９８（ｍ，１Ｈ），４．２９（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），４．３８（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｍ，１Ｈ），４．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ），５．１８（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，４Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ４１Ｈ６５Ｎ６Ｏ７Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：７８５．４６３０、実測値：７８５．４６３０。
ジアステレオマー混合物７：
【００６６】
【化１４】
0005907513.tif 000015
【００６７】
化合物５の合成について記載される方法と同様に、ジアステレオマー混合物４（１６ｍｇ、２２μｍｏｌ）を初めに酸加水分解に供し、続いてエチルエステルの開裂及びチューブフェニルアラニンメチルエステルの塩酸塩（１４ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）とのカップリングを行った。逆相ＨＰＬＣでの粗生成物の精製によって、２２ｍｇ（５４μｍｏｌ、３工程の収率６２％）のメチルエステル７が得られた。予想したとおり、配座異性体混合物はＮＭＲによってはっきりと見ることができる（推定比１：１）。帰属シグナルは全混合物に属する。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．９０（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．９３〜０．９６（ｍ，９Ｈ），１．０２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．０４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．０８（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．１２〜１．１４（ｍ，６Ｈ），１．１５〜１．１９（ｍ，２Ｈ），１．３６〜１．４２（ｍ，１０Ｈ），１．４９〜１．７０（ｍ，１６Ｈ），１．７４〜１．８８（ｍ，６Ｈ），１．９４〜２．０６（ｍ，６Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｍ，２Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．３６〜２．４０（ｍ，２Ｈ），２．５３〜２．６２（ｍ，２Ｈ），２．８３〜２．９２（ｍ，４Ｈ），２．９５〜３．０１（ｂｒ  ｍ，２Ｈ），３．０６〜３．２０（ｍ，４Ｈ），３．２６（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．８８〜４．０１（ｍ，２Ｈ），４．２７〜４．４４（ｍ，４Ｈ），５．０３（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｍ，１Ｈ），５．２１（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｍ，８Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ４３Ｈ６９Ｎ６Ｏ７Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：８１３．４９４３、実測値：８１３．４９４１。
チューブギＡ、チューブギＢ及びチューブギＤのための基本手順：
チューブギＡ：
【００６８】
【化１５】
0005907513.tif 000016
【００６９】
ＬｉＯＨ（１．４ｍｇ、５７μｍｏｌ、７．５当量）を、メチルエステル５（６．１ｍｇ、７．６μｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ溶液（１ｍｌ、２：１（ｖ／ｖ））に０℃で添加した。反応混合物を室温に戻し、５日間にわたって撹拌し、１０％ＮａＨＳＯ４水溶液を用いてｐＨ４まで酸性化した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（２ｍｌ）で希釈し、層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（３×２ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を減圧下で濃縮した。次いで、残渣を１ｍｌのピリジンに溶解し、溶液を０℃に冷却した。無水酢酸（５．８μｌ、６１μｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温に戻し、一晩撹拌し、０℃に冷却した。その後、１ｍｌのＨ２Ｏを添加した。撹拌を更に３０分間続けた後、溶媒を減圧下で除去した。分取逆相ＨＰＬＣでの粗生成物の精製によって、５．１ｍｇ（６．２μｍｏｌ、全収率８２％）のチューブギＡを淡黄色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：Ｔｕｐδ＝１．１６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，ＣＨ３−１０），１．６４（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−３），１．９９（ｍ，１Ｈ，ＣＨａ−３），２．５３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−２），２．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５／６．６Ｈｚ，ＣＨｂ−５），２．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５／７．３Ｈｚ，ＣＨａ−５），４．３６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−４），７．１５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−９），７．２２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−７，ＣＨ−７’），７．２２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−８，ＣＨ−８’）ｐｐｍ。Ｔｕｖδ＝０．７８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ３−１０）ａ），０．８６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ３−１６），１．０７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ３−９）ａ），１．３１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ３−１５），１．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−１４），１．７８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−８），１．９２（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−６），２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．１／１３．６／１１．５Ｈｚ，ＣＨａ−６），２．１５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＯ），３．１１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５／７．０Ｈｚ，ＣＨｂ−１３），３．２４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５／７．０Ｈｚ，ＣＨａ−１３），３．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．７Ｈｚ，ＣＨｂ−１１），４．５８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＣＨ−７），４．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．７Ｈｚ，ＣＨａ−１１），６．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５／１．９Ｈｚ，ＣＨ−５），８．０５（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−３）ｐｐｍ。Ｌ−Ｉｌｅδ＝０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ３−５），０．９８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ３−６），１．１４（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−４），１．５７（ｍ，１Ｈ，ＣＨａ−４），２．０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），４．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，ＣＨ−２）ｐｐｍ。Ｄ−Ｍｅｐδ＝１．３６（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−４），１．５９（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−３），１．６１（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−５），１．７０（ｍ，１Ｈ，ＣＨａ−５），１．８０（ｍ，１Ｈ，ＣＨａ−４），１．８５（ｍ，１Ｈ，ＣＨａ−３），２．２６（ｍ，１Ｈ，ＣＨｂ−６），２．２８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−７），２．７８（ｂｒ  ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，ＣＨ−２），３．０３（ｂｒ  ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨａ−６）ｐｐｍ。Ｃ４３Ｈ６７Ｎ���Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：８２７．４７３５、実測値：８２７．４７４６（ａ）＝互換的帰属）。
チューブギＢ：
【００７０】
【化１６】
0005907513.tif 000017
【００７１】
チューブギＡの合成について記載される方法と同様に、メチルエステル６（４．９ｍｇ、６．３μｍｏｌ）を塩基性加水分解に供し、続いて第二級アルコールのアセチル化を行い、分取逆相ＨＰＬＣでの精製後に４．４ｍｇ（５．４μｍｏｌ、全収率８６％）のチューブギＢを黄色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ＝０．８０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．１４（ｍ，１Ｈ），１．１７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．１８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．４２〜１．４５（ｍ，１Ｈ），１．５７〜１．６１（ｍ，２Ｈ），１．６３〜１．６９（ｍ，３Ｈ），１．７７〜１．８６（ｍ，３Ｈ），１．９５（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｍ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．３２〜２．３７（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．４９〜２．５６（ｍ，１Ｈ），２．８５〜２．９４（ｍ，２Ｈ），３．０６（ｍ，１Ｈ），３．１６（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．９Ｈｚ），３．９６（ｍ，１Ｈ），４．３７（ｍ，１Ｈ），４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．５７（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ），６．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４／１．８Ｈｚ），７．１７（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｍ，４Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ４２Ｈ６５Ｎ６Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：８１３．４５７９、実測値：８１３．４５８５。
チューブギＤ（ジアステレオマー混合物）：
【００７２】
【化１７】
0005907513.tif 000018
【００７３】
チューブギＡの合成について記載される方法と同様に、化合物７の混合物（８．６ｍｇ、１０．６μｍｏｌ）を初めに塩基性加水分解に供し、続いて第二級アルコールのアセチル化（触媒量のＤＭＡＰを添加した）を行い、分取逆相ＨＰＬＣでの精製後に６．３ｍｇ（７．５μｍｏｌ、全収率７１％）のチューブギＤをジアステレオマー混合物として得た。各々のジアステレオマーの２つの配座異性体はＮＭＲによって区別することができる。帰属シグナルは全混合物に属する。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ＝０．８７〜０．９５（ｍ，３６Ｈ），０．９７〜１．０７（ｍ，２４Ｈ），１．１２〜１．１７（ｍ，１６Ｈ），１．２７〜１．３９（ｍ，１２Ｈ），１．４４〜１．５２（ｍ，８Ｈ），１．５７〜１．７７（ｍ，４０Ｈ），１．８２〜１．９５（ｍ，８Ｈ），１．９６〜２．０７（ｍ，８Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．２６〜２．３５（ｍ，８Ｈ），２．５０〜２．６０（ｍ，１６Ｈ），２．８６〜２．９６（ｍ，１２Ｈ），３．１０〜３．２７（ｍ，１２Ｈ），３．９５〜４．０１（ｍ，４Ｈ），４．３５（ｍ，８Ｈ），６．０５（ｍ，２Ｈ），６．２６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．６／２．２Ｈｚ），７．１４（ｍ，４Ｈ），７．２２（ｍ，１６Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ４４Ｈ６９Ｎ６Ｏ８Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：８４１．４８９２、実測値：８４１．４８７９。
【００７４】
チューブギＡ、チューブギＢ及びチューブギＤの生物活性を、チューブリシンＡ及びタキソールを参照化合物として用いてヒトがん細胞株に対して評価した。表１に示されるように、チューブギＡ、チューブギＢ及びチューブギＤは、チューブリシンＡとほぼ同一な（実験の誤差限界内の僅かな差）細胞毒性活性を伴う顕著な生物学的プロファイルを示した。
【００７５】
【表１】
0005907513.tif 000019
【００７６】
チューブギＨ（ジアステレオマー混合物）：
【００７７】
【化１８】
0005907513.tif 000020
【００７８】
Ｎ−Ｂｏｃチューブバリンエチルエステル（７４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２／ＴＦＡ（３ｍＬ、４：１（ｖ／ｖ））に溶解した。混合物を室温で１時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。得られた油をＣＨ２Ｃｌ２に再溶解し、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×５ｍＬ）及びブライン（３×５ｍＬ）で洗浄した。層を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を更に精製することなく次の工程に使用した。
【００７９】
上記で得られた遊離アミンのＭｅＯＨ溶液（３ｍＬ）に、ホルムアルデヒド（６．０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ懸濁液（３ｍＬ）を、シリンジポンプを用いて２時間かけてゆっくりと添加した。続いて、Ｍｅｐ−Ｉｌｅｕ−ＯＨ（１１２ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１０分間撹拌した後、アームストロングイソシアニド（２１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（３ｍＬ）を、シリンジポンプを用いて３時間かけて添加した。反応混合物を更に４８時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ、３０：１：０．３（ｖ／ｖ／ｖ）→ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ、１５：１：０．３（ｖ／ｖ／ｖ））によって、重要中間体８を含有する化合物の混合物が得られた。Ｃ３３Ｈ５４Ｎ５Ｏ６Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：６４８．３７８９、実測値：６４８．３７８７、及びＣ２８Ｈ４３Ｎ４Ｏ５Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：５４７．２９４９、実測値：５４７．２９５３。この混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製しようと何度か試みたが、成功しなかった。このため、混合物をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ、２：１（ｖ／ｖ））に溶解し、ＬｉＯＨ（１１．９ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を６時間撹拌し、徐々に室温に戻した。その後、３７％ＨＣｌ水溶液を用いてｐＨ７〜ｐＨ８まで酸性化した後、水性緩衝溶液を用いて（すなわち、緩衝溶液での混合物の希釈によって）ｐＨ６．８まで弱酸性化した。混合物をｎ−ブタノール（３×２０ｍＬ）で抽出し、層を分離し、合わせた有機相を減圧下で濃縮して粗物質を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。
【００８０】
化合物５の合成について記載される方法と同様に、上記で得られた酸を、ＤＩＣ／ＰＦＰプロトコルに続いて、チューブフェニルアラニン（Ｔｕｐ）メチルエステルの塩酸塩（２２．５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）とカップリングし、逆相ＨＰＬＣ精製後に、ペプトイド９（８．０ｍｇ、９．８μｍｏｌ）を得た。Ｃ４４Ｈ６７Ｎ６Ｏ７Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：８２３．４７９５、実測値：８２３．４７８９。続いて、得られた油を４Ｎの市販のＨＣｌのジオキサン溶液（２ｍＬ）に溶解し、混合物を１時間撹拌した。その後、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、撹拌を更に３時間続けた（代替的に、変換可能なウギ−アームストロング−アミドの加水分解を、中間体８等の中間体の段階で行うこともできる）。溶媒を減圧下で除去し、残渣をピリジン（４．０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。無水酢酸（８４μＬ、０．９０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌し、徐々に室温に戻した。溶媒を減圧下で除去し、粗混合物を逆相ＨＰＬＣ精製に供して、６．３ｍｇのチューブギＨ（７．９μｍｏｌ、全収率４．０％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５９９．８ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，代表的なシグナル）：δ＝０．７９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．９８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．０１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．１４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１．１８〜１．２３（ｍ，１Ｈ），１．３８（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．６３（ｄ，１Ｈ），４．３５（ｍ，１Ｈ），４．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），４．５８（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），４．８３（重複シグナル），６．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６／１．９Ｈｚ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｍ，４Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。Ｃ４１Ｈ６２Ｎ５Ｏ９Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についてのＨＲＭＳ計算値：８００．４２７７、実測値：８００．４２８０。
【００８１】
要約すると、本発明は、ＧＩ５０値がナノモル範囲及び高ピコモル範囲の新たな種類の細胞毒性チューブリシン類似体（チューブギ）の簡潔かつ確実な合成を提供する。最も活性の高い天然のチューブリシン上に存在する希少かつ不安定なＮ，Ｏ−アセタール官能基を、細胞毒性活性を保持又は更には改善しながら、はるかに安定なｔｅｒｔ−ペプチド骨格によって置き換えた。
【図１】
0005907513.tif 000027
【図２】
0005907513.tif 000028