【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年2月1日(2011.2.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
2009518354.tif 000001
[上式中、Ｒ１はエチル、イソプロピル、イソブチル及びｎ−プロピルからなる群から選択される]
の化合物、その水和物、溶媒和物及び酸付加塩。
【請求項２】
Ｒ１がエチル又はイソプロピルである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がイソプロピルであり、化合物が塩酸塩又は硫酸塩である請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がイソプロピルであり、化合物が塩酸塩である請求項１から３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１から４の何れか一項に記載の化合物を含有する医薬。
【請求項６】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のウイルスによって介在される疾患の治療用である、請求項５に記載の医薬。
【請求項７】
医薬がそれを必要としている患者に対し、治療的有効投与量で投与されることを特徴とする請求項５又は６に記載の医薬。
【請求項８】
医薬がそれを必要としている患者に対し、０．１から１０ｇ／日の間の用量で投与されることを特徴とする請求項５から７の何れか一項に記載の医薬。
【請求項９】
医薬が更に少なくとも一の免疫系モジュレーター及び／又はＨＣＶの複製を阻害する少なくとも一の抗ウイルス剤と共に投与されることを特徴とする請求項５から８の何れか一項に記載の医薬。
【請求項１０】
少なくとも一の薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤と混合された請求項１から４の何れか一項に記載の化合物の治療的有効量を含んでなる医薬組成物。
【請求項１１】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のウイルスによって介在される疾患の治療用である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
治療的有効投与量が０．１から１０g／日の間であることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
少なくとも一の免疫系モジュレーター及び／又はＨＣＶの複製を阻害する少なくとも一の抗ウイルス剤を更に含んでなる請求項１０から１２の何れか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
2009518354.tif 000002
[上式中、Ｒ１はエチル、イソプロピル、イソブチル及びｎ−プロピルからなる群から選択される]
で示される、塩基性反応条件下におけるＯ-アシルヌクレオシドＩを得るためのヌクレオシドＩＩの選択的Ｏ-アシル化の方法であって、
（ｉ）ＩＩとＤＭＡＰを不均一水性溶媒混合物に溶解し、ｐＨを約７．５から約１２に調節するために水性塩基を加え、
（ｉｉ）任意で、２相性反応混合物を生成するために、十分な飽和ＮａＣｌ水溶液を加え、
（ｉｉｉ）アシル化剤と、ｐＨを約７．５から約１２に維持するために十分な付加的な塩基を加え、
（ｉｖ）反応を監視し、変換が十分なレベルに達した時に前記アシル化剤と前記塩基の添加を中止し、
（ｖ）任意で、Ｏ-アシルヌクレオシドの酸付加塩を形成するために、Ｏ-アシルヌクレオシドを薬学的に許容可能な酸と接触させる
工程を含んでなる方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】抗ウイルスヌクレオシド
【発明の開示】
【０００１】
本発明はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡ依存ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤のプロドラッグであるアシル化ヌクレオシドを提供する。これらの化合物は経口投与されると直ぐに胃腸管から吸収され、効率よく血中で元のヌクレオシドに戻る。これらのプロドラッグはＲＮＡ依存ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、及び哺乳類のＣ型肝炎感染の治療に有用である。
本発明は、ＨＣＶ複製の阻害剤であるヌクレオシドプロドラッグに関する。特に、本発明は、ヌクレオシドが経口投与された場合に、改良された薬物吸収を提供するアシル化ピリミジンヌクレオシド化合物の使用に関する。
Ｃ型肝炎ウイルスは重大な健康問題であり、世界中で慢性肝疾患の主要原因である(Boyer, N. 等、J. Hepatol. 2000 32:98-112)。ＨＣＶに感染した患者は、肝硬変及び続く肝細胞癌を発現する危険な状態にあり、それ故、ＨＣＶは肝臓移植の主要な適応症である。世界保健機構によれば、世界中に２億人以上の感染者がおり、毎年少なくとも３〜４百万人が感染している。一度感染すると、約２０％の人々はウイルスを消滅させるが、残りはＨＣＶを彼等の肝臓の残部に有している。慢性的に感染した者の１０から２０パーセントは、肝臓を破壊する肝硬変又は癌を最終的に発現する。ウイルス性疾患は汚染された血液及び血液製剤、汚染された針によって非経口的に、又は性的に、感染した母親又は病原体保有者である母親から彼女らの子供に垂直的に感染する。ＨＣＶ感染の現行の治療は、組換えインターフェロン-α単独による、又はヌクレオシド類似体のリバビリンと組み合わせた免疫治療に限られており、抵抗性が急速に発達するので臨床効果は限られている。慢性ＨＣＶ感染と効果的に戦える改良された治療薬は緊急の課題である。
【０００２】
ＨＣＶは、フラビウイルス属、ペスチウイルス属及びＣ型肝炎を含むヘパシウイルス属を含むフラビウイルス科のウイルスの一員に分類されている(Rice, C. M., Flaviviridae: The viruses and their replication, Fields Virology編集、Fields, B. N., Knipe, D. M., 及びHowley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa., 第３０章、931-959頁、1996年)。ＨＣＶは約９．４ｋｂのプラス鎖の一本鎖ＲＮＡゲノムを含むエンベロープウイルスである。
ウイルスのゲノムは、5'-非翻訳領域（ＵＴＲ）、約３０１１アミノ酸のポリタンパク質前駆体をコードする長いオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、及び短い3'ＵＴＲからなる。5'ＵＴＲはＨＣＶゲノムの最も高度に保存された部分であり、ポリタンパク質の翻訳の開始と調節に重要である。
ＨＣＶの遺伝子解析により、ＤＮＡ配列の相違が＞３０％である６つの主要な遺伝子型を同定した。各遺伝子型は、ヌクレオチド配列が２０〜２５％の相違を示す、より近縁な亜型の系統を含む(Simmonds, P. 2004 J. Gen. Virol. 85:3173-88)。３０を超える亜型が分類されている。米国では、感染者の約７０％が１ａ型と１ｂ型感染を有する。１ｂ型はアジアで最も蔓延している(X. Forns 及びJ. Bukh, Clinics in Liver Disease 1999 3:693-716; J. Bukh 等, Semin. Liv. Dis. 1995 15:41-63)。残念ながら、１型感染は２型又は３型の遺伝子型のどちらよりも治療に抵抗性がある (N. N. Zein, Clin. Microbiol. Rev., 2000 13:223-235)。
【０００３】
ペスチウイルスとヘパシウイルスのＯＲＦの非構造タンパク質部位の遺伝的構成とポリタンパク質プロセシングは非常に似ている。プラス鎖のＲＮＡウイルスはウイルス複製に必要である全てのウイルス性タンパク質をコードする単一の大きなＯＲＦを有する。これらのタンパク質は、成熟したウイルス性タンパク質を生じるために、細胞性とウイルスにコードされた両方のタンパク質分解酵素によって、翻訳と同時に及び翻訳後にプロセスされるポリタンパク質として発現する。ウイルスのゲノムＲＮＡの複製に関与するウイルス性タンパク質は、カルボキシ末端の近似内に位置する。ＯＲＦの３分の２は、非構造（ＮＳ）タンパク質と呼ばれる。ペスチウイルスとヘパシウイルスの両方の場合で、成熟した非構造（ＮＳ）タンパク質は、非構造タンパク質コーディング領域のアミノ末端から、ＯＲＦのカルボキシ末端の順番で、ｐ７、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂからなる。
ペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳタンパク質は特異的なタンパク質機能に特有の配列ドメインを共有する。例えば、両方のグループのウイルスのＮＳ３タンパク質は、セリンプロテアーゼとヘリカーゼに特有のアミノ酸配列モテーフを有する(Gorbalenya等、Nature 1988 333:22; Bazan及び Fletterick、Virology 1989 171:637-639; Gorbalenya等、Nucleic Acid Res. 1989 17.3889-3897)。同様に、ペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳ５Ｂタンパク質はＲＮＡ特異的ＲＮＡポリメラーゼに特有のモチーフを有する(Koonin, E. V.及びDolja, V. V. Crit. Rev. Biochem. Molec. Biol. 1993 28:375-430)。
【０００４】
ウイルスの生活環におけるペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳタンパク質の実際の役割と機能は、直接的に相似である。両方の場合において、ＮＳ３セリンプロテアーゼはＯＲＦにおいてその位置の下流のポリタンパク質前駆体の全てのタンパク質分解性プロセッシングに関与する(Wiskerchen及びCollett、Virology 1991 184:341-350; Bartenschlager等、J. Virol. 1993 67:3835-3844; Eckart等、Biochem. Biophys. Res. Comm. 1993 192:399-406; Grakoui等、J. Virol. 1993 67:2832-2843; Grakoui等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993 90:10583-10587; Ilijikata等、J. Virol. 1993 67:4665-4675; Tome等、J. Virol. 1993 67:4017-4026)。両方の場合において、ＮＳ４Ａタンパク質はＮＳ３セリンプロテアーゼの補因子として働く(Bartenschlager等、J. Virol. 1994 68:5045-5055; Failla等、J. Virol. 1994 68: 3753-3760; Xu等、J Virol. 1997 71:53 12-5322)。また、両ウイルスのＮＳ３タンパク質はヘリカーゼとして機能する(Kim等、Biochem. Biophys. Res. Comm. 1995 215: 160-166; Jin and Peterson Arch. Biochem. Biophys. 1995, 323:47-53; Warrener及びCollett J. Virol. 1995 69:1720-1726)。最後に、ペスチウイルスとヘパシウイルスのＮＳ５Ｂタンパク質は推定ＲＮＡ特異的ＲＮＡポリメラーゼ活性を有する(Behrens等、EMBO 1996 15:12-22; Lechmann等、J. Virol. 1997 71:8416-8428; Yua等、Biochem. Biophys. Res. Comm. 1997 232:231-235; Hagedorn, PCT WO 97/12033; Zhong等、J. Virol. 1998 72:9365-9369)。
【０００５】
現在、ＨＣＶ感染の治療に有用な認可された治療の数は限られている。新規及び既存のＨＣＶ治療の治療学的アプローチとＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は以下に総説されている：R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999 19:5; Di Besceglie, A. M. and Bacon, B. R., Scientific American, October: 1999 80-85; G. Lake-Bakaar, Current and Future Therapy for Chronic Hepatitis C Virus Liver Disease, Curr. Drug Targ. Infect Dis. 2003 3(3):247-253; P. Hoffmann等, Recent patents on experimental therapy for hepatitis C virus infection (1999-2002), Exp. Opin. Ther. Patents 2003 13(11):1707-1723; F. F. Poordad等、Developments in Hepatitis C therapy during 2000-2002, Exp. Opin. Emerging Drugs 2003 8(1):9-25; M. P. Walker等, Promising Candidates for the treatment of chronic hepatitis C, Exp. Opin. Investig. Drugs 2003 12(8):1269-1280; S.-L. Tan等, Hepatitis C Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev. Drug Discov. 2002 1:867-881; R. De Francesco等、Approaching a new era for hepatitis C virus therapy: inhibitors of the NS3-4A serine protease and the NS5B RNA-dependent RNA polymerase, Antiviral Res. 2003 58:1-16; Q. M. Wang等、Hepatitis C virus encoded proteins: targets for antiviral therapy, Drugs of the Future 2000 25(9):933-8-944; J. A. Wu 及びZ. Hong, Targeting NS5B-Dependent RNA Polymerase for Anti-HCV Chemotherapy Cur. Drug Targ.-Inf. Dis .2003 3:207-219。
上記総説は、開発工程の様々な段階における化合物を挙げている。同じ又は異なる標的に向かう２つ又は３つの薬剤の併用療法は、ウイルスの抵抗性系統の発生を回避又は遅延させるための標準的治療になっており、上の総説に開示されている化合物は本発明の化合物との併用療法に使用されてもよく、これらの総説は本明細書にそのまま援用される。
2009518354.tif 000003
【０００６】
リバビリン(1a; 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-ジヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-テトラヒドロ-フラン2-イル)-1H-[1,2,4]トリアゾール-3-カルボン酸アミド; ピラゾレ（VIRAZOLE）（登録商標）)は、合成の非インターフェロン誘導性、広域性抗ウイルス性ヌクレオシド類似体である。リバビリンは、フラビウイルス科を含む複数のＤＮＡ及びＲＮＡウイルスに対して生体内で活性を有する(Gary L. Davis, Gastroenterology 2000 118:S104-S114)。単独治療では、リバビリンは患者の４０％において、血清アミノ転移酵素レベルを正常値に下げるが、ＨＣＶ-ＲＮＡの血清レベルを下げない。また、リバビリンは重度の毒性を示し、貧血を誘発することが知られている。リバビリンはイノシン１リン酸脱水素酵素の阻害剤である。リバビリンはＨＣＶに対する単独治療では認可されていないが、該化合物はインターフェロンα−２ａ及びインターフェロンα−２ｂとの併用療法では認可されている。ビラミジン１ｂは肝細胞で１ａに変換されるプロドラッグである。
【０００７】
インターフェロン類（ＩＦＮｓ）は１０年近くの間、慢性肝炎の治療に使用されてきた。ＩＦＮｓはウイルス感染に応答した免疫細胞によって産生される糖タンパク質である。インターフェロンには２つの別の型が認知されている：１型は複数のインターフェロンアルファ及び１つのインターフェロンβを含み、２型はインターフェロンγを含む。１型インターフェロンは主に感染した細胞で産生され、周辺の細胞を新規の感染から保護する。ＩＦＮｓはＨＣＶを含む多くのウイルスのウイルス複製を阻害し、Ｃ型肝炎感染の単独治療として使用された場合には、ＩＦＮは血清ＨＣＶ-ＲＮＡを検出不可能なレベルまで抑制する。加えて、ＩＦＮは血清アミノ転移酵素レベルを正常化する。残念なことに、ＩＦＮの効き目は一時的である。治療の中止は結果として７０％の再発率となり、わずか１０−１５％が正常な血清アラニン転移酵素レベルに対する保持されたウイルス反応を示す(L.-B. Davis, 上掲)。
【０００８】
早期ＩＦＮ治療の１つの制限は、血液からのタンパク質の迅速なクリアランスである。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によるＩＦＮの化学的誘導体化は、実質的に改良された薬物動態学的特性を有するタンパク質を生じる。ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）はインターフェロンα-２ａと４０ｋＤ分岐状モノエトキシＰＥＧのコンジュゲートであり、及びＰＥＧ-ＩＮＴＯＲＯＮ（登録商標）はインターフェロンα-２ｂと１２ｋＤモノエトキシＰＥＧのコンジュゲートである(B. A. Luxon等, Clin. Therap. 2002 24(9):13631383; A. Kozlowski と J. M. Harris, J. Control. Release, 2001 72:217-224)。
【０００９】
インターフェロンα-２ａ及びインターフェロンα-２ｂはＨＣＶ治療のための単独治療として現在認可されている。ＲＯＦＥＲＯＮ-Ａ（登録商標） (ロッシュ）はインターフェロンα-２ａの組換え型の製剤である。ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標）はインターフェロンα-２ａのペグ化（すなわち、ポリエチレングリコール修飾型）製剤である。ＩＮＴＲＯＮ−Ａ（登録商標）（シェリング社）のインターフェロンα−２ｂの組換え型の製剤であり、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）（シェリング社）はインターフェロンα-２ｂのペグ化製剤である。
【００１０】
インターフェロンαの他の型に加えてインターフェロンβ、γ、τ、ωが現在ＨＣＶ治療の臨床開発中である。例えば、インターミューン社のＩＮＦＥＲＧＥＮ（登録商標）（インターフェロンアルファコン-１））、Viragen社のＯＭＮＩＦＥＲＯＮ（登録商標）（天然型インターフェロン）、Human Genome Sciences社のＡＬＢＵＦＥＲＯＮ（登録商標）、Ares-Serono社のＲＥＢＩＦ（登録商標） (インターフェロンβ-１ａ)、バイオメディシン社のオメガインターフェロン、Amarillo Biosciences社の経口インターフェロン、及びインターミューン社のインターフェロンγ、インターフェロンτ及びインターフェロンγ-１ｂが開発中である。
【００１１】
ＨＣＶのリバビリンとインターフェロン-αの併用療法は現在の最適な療法を代表する。リバビリンとＰＥＧ-ＩＦＮ（下記）の併用は患者の５４−５６％においてウイルス反応を維持する結果となる。ＳＶＲは２型及び３型のＨＣＶの８０％にアプローチする（Walker,上掲）。残念ながら、併用は臨床上の問題となる副作用をも生じる。うつ病、インフルエンザ様の症状及び皮膚反応はＩＦＮ-αの皮下注射と関連し、溶血性貧血はリバビリンの持続的治療に関係する。
【００１２】
Ｃ型肝炎ウイルスの治療のための前臨床又は臨床開発における他の高分子化合物は現在、以下のものを含む：シェリング・プラウ社のインターロイキン-１０、Intemeuron社のＩＰ-ＳＯ１、Vertex社のＭｅｒｉｍｅｂｏｄｉｂ (VX-497) 、ＲＰＩ社のＨＥＰＴＡＺＹＭＥ（登録商標）、Idun Pharma.社のＩＤＮ-６５５６、ＸＴＬ社のＸＴＬ-００２、シロン社のＨＣＶ／ＭＦＳ９、ＮＡＢＩ社のＣＩＶＡＣＩＲ（登録商標）（Ｃ型肝炎免疫グロブリン）、SciClone社のZADAXIN（登録商標） (チモシンα-l)、SciClone社のチモシンplusペグ化インターフェロン、ＣＥＰＬＥＮＥ（登録商標）；Innogenetics社のＥ２に対する治療ワクチン、Intercell社の治療ワクチン、Epimmune/Genencor社による治療ワクチン、メリックス社の治療ワクチン、Tripep社による治療ワクチンであるＣｈｒｏｎ-ＶａｃＣ。 
【００１３】
他の高分子アプローチはＨＣＶ  ＲＮＡを標的にしたリボザイムを含む。リボザイムは、ＲＮＡの配列特異的切断を触媒するエンドヌクレアーゼ活性を有する、天然に生じる分子である。代替アプローチはＲＮＡに結合し、RNaseH介在型切断を刺激するアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用である。
【００１４】
抗ＨＣＶ治療として、薬剤開発のための数多くの潜在的分子標的が同定されており、限定するものではないが、ＮＳ２-ＮＳ３自己プロテアーゼ、Ｎ３プロテアーゼ、Ｎ３ヘリカーゼ及びＮＳ５Ｂポリメラーゼを含む。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、一本鎖のプラス鎖ＲＮＡゲノムの複製に絶対的に不可欠であり、この酵素は医薬化学者の顕著で重要な関心を引いている。
【００１５】
ＮＳ５Ｂポリメラーゼのヌクレオシド阻害剤は連鎖停止を生じる非天然基質としても、ポリメラーゼに結合するヌクレオチドと競合する拮抗阻害剤としても働きうる。連鎖停止として機能するには、ヌクレオシド類似体は細胞に取り込まれ、生体内で三リン酸に変換されて、ポリメラーゼヌクレオシド結合部位を競合する必要がある。この三リン酸への変換は、細胞性キナーゼによって通常介在され、潜在的ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤に付加的な構造的要件を与える。残念ながら、このためＨＣＶ複製の阻害剤としてのヌクレオシドの直接的評価はインサイツのリン酸化が可能な細胞ベースのアッセイに限定される。
【００１６】
2009518354.tif 000004
２００１年１１月２９日公開のWO01/90121において、J.-P. Sommadossi及びP. Lacollaは式２及び３の１'-アルキル-及び２'-アルキルヌクレオシドの抗ＨＣＶポリメラーゼ活性を開示し、例示している。２００１年１２月６日公開のWO01/92282において、J.-P. Sommadossi及びP. Lacollaは式２及び３の１'-アルキル-及び２'-アルキルヌクレオシドによるフラビウイルス属及びペスチウイルス属のウイルスの治療を開示し、例示する。２００３年４月３日公開のWO03/026675において、G. Gosselin はフラビウイルス属及びペスチウイルス属のウイルスの治療のための４'-アルキルヌクレオシド４を開示する。
２００４年１月８日公開のWO2004003000において、J.-P. Sommadossi等は、１'-、２'-、３'-及び４'- 置換β-Ｄ及びβ-Ｌヌクレオシドの２'-及び３'-プロドラッグを開示する。２００４年１月８日公開のWO2004/002422において、フラビウイルス科感染の治療用の２'-Ｃ-メチル-３'-Ｏ-バリンエステルリボフラノシルシチジンを開示する。アイデニクス社はシチジン類似体２（Ｂ＝シチジン）のバリンエステルであると考えられる関連化合物ＮＭ２８３に関する臨床試験を報告した。２００４年１月８日公開WO2004/002999において、J.-P. Sommadossi等は、ＨＣＶ感染を含むフラビウイルス感染治療のための１'、２'、３'、又は４'分枝型ヌクレオシドの２'-及び３'-プロドラッグのシリーズを開示する。
２００４年１月３日公開WO2004/046331において、J.-P. Sommadossi等は２'-分枝状ヌクレオシド及びフラビウイルス科の変異体を開示する。２００３年４月３日公開WO03/026589において、G. Gosselin等は４'-修飾型ヌクレオシドを使用したＣ型肝炎ウイルスの治療の方法を開示する。２００５年２月３日公開のWO2005009418において、R. Storer等はＨＣＶを含むフラビウイルス科によって引き起こされる疾患の治療のためのプリンヌクレオシド類似体を開示する。
【００１７】
他の特許出願はＣ型肝炎感染治療の為の特定のヌクレオシド類似体の使用を開示する。２００１年５月１０日公開WO01/32153において、R.Storerはウイルス性疾患を治療するためのヌクレオシド誘導体を開示する。２００１年８月２３日公開WO01/60315において、H. Ismaili等はヌクレオシド化合物によるフラビウイルス感染の治療と予防の方法を開示する。２００２年３月７日公開のWO02/18404において、R. Devos等はＨＣＶウイルス治療のための４'-置換ヌクレオチドを開示する。２００１年１０月２５日公開のWO01/79246において、K. A. Watanabeはウイルス性疾患の治療のための２'-又は３'-ヒドロキシメチルヌクレオシド化合物を開示する。２００２年４月２５日公開のWO02/32920および２００２年６月２０日公開のWO02/48165において、L. Stuyver等はウイルス性疾患の治療のためのヌクレオシド化合物を開示する。
【００１８】
2009518354.tif 000005
２００３年１２月２４日公開WO03/105770において、B. Bhat等はＨＣＶ感染の治療に有用な炭素環ヌクレオシド誘導体のシリーズを開示する。２００３年１月２２日公開のWO2004/005712において、B. Bhat等はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害するヌクレオシド化合物を開示する。この公報で開示されたヌクレオシド類は主として２'-メチル-２'-ヒドロキシ置換ヌクレオシド類である。２００２年７月２５日公開WO2002/057425において、S. S. Carroll等はＲＮＡ依存性ウイルスポリメラーゼを阻害するヌクレオシド誘導体とＨＣＶ感染の治療方法を開示する。２００２年７月２５日公開WO02/057287において、S. S. Carroll等は２α-メチル及び２β-メチルリボース誘導体であって、該基は任意に置換された７Ｈ-ピロロ［２,３-ｄ］ピリミジンラジカル６である。同じ出願は３β-メチルヌクレオシドの一例を開示する。S.S. Carroll等(J. Biol. Chem. 2003 278(14):11979-11984)は２'-O-メチルシチジン（６ａ）によるＨＣＶポリメラーゼの阻害を開示する。２００４年１月２９日公開のWO2004/009020において、D. B. Olsen等はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤としてチオヌクレオシド誘導体のシリーズを開示する。
【００１９】
ＰＣＴ公開番号WO99/43691（エモリー大学、発明の名称「２'-フルオロヌクレオシド」）はＨＣＶを治療するための特定の２'-フルオロヌクレオシドの使用を開示する。米国特許番号6,348,587（エモリー大学、発明の名称「２'-フルオロヌクレオシド」）は、Ｂ型肝炎、ＨＣＶ、ＨＩＶ及び異常細胞増殖の治療に有用な２'-フルオロヌクレオシド族を開示する。２'フルオロ置換体の両配置を開示する。
【００２０】
Eldrup等（第１６回国際抗ウイルス研究学会（２００３年４月２７日、サバンナ、ジョージア州、口頭セッションＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、フラビウイルス科）はＨＣＶの抑制のための２'-修飾型ヌクレオシドの構造活性相関関係を記載する。Bhat等（第１６回国際抗ウイルス研究学会（第１６回国際抗ウイルス研究学会、Ａ７５頁、２００３年４月２７日、サバンナ、ジョージア州、口頭セッションＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、フラビウイルス科）はＨＣＶ  ＲＮＡ複製の潜在的阻害剤としてのヌクレオシド類似体の合成と薬物動態特性を記載する。著者は２'-修飾型ヌクレオシドが細胞ベースのレプリコンアッセイにおいて潜在的阻害活性を示すことを報告する。
Olsen等（第１６回国際抗ウイルス研究学会（第１６回国際抗ウイルス研究学会、Ａ７６頁、２００３年４月２７日、サバンナ、ジョージア州、口頭セッションＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、フラビウイルス科）は、また、ＨＣＶ  ＲＮＡ複製における２'-修飾型ヌクレオシドの効果を記載する。
ＨＩＶ逆転写の非ヌクレオシドアロステリック阻害剤は単独で、ヌクレオシド阻害剤と組合わせて、プロテアーゼ阻害剤と組合わせて、効果的療法であると立証されている。非ヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤の複数のクラスが記載されており、ベンゾイミダゾール類(H. Hashimoto等、WO 01/47833, H. Hashimoto等、WO 03/000254, P. L. Beaulieu等、WO 03/020240 A2; P. L. Beaulieu等、US 6,448,281 B1; P. L. Beaulieu等、WO 03/007945 A1); インドール類 (P. L. Beaulieu等、WO 03/0010141 A2); ベンゾチアジアジン類、例えば７, (D. Dhanak等、WO 01/85172 A1; D. Dhanak等、WO 03/037262 A2; K. J. Duffy等、WO03/099801 A1, D.Chai 等、WO 2004052312, D.Chai等、WO2004052313, D.Chai等、WO02/098424, J. K. Pratt 等、WO 2004/041818 A1; J. K. Pratt等、WO 2004/087577 A1)、チオフェン類、例えば８, (C. K. Chan等、WO 02/100851)；
2009518354.tif 000006
ベンゾチオフェン類(D. C. Young及びT. R. Bailey WO 00/18231); β-ケトピルベート (S. Attamura等、US 6,492,423 B1, A. Attamura等、WO 00/06529); ピリミジン(C. Gardelli等、WO 02/06246 A1); ピリミジンジオン類 (T. R. Bailey及びD. C. Young WO 00/13708); トリアジン類(K.-H. Chung等、WO 02/079187 A1); ローダニン誘導体 (T. R. Bailey及びD. C. Young WO 00/10573, J. C. Jean等、WO 01/77091 A2); ２,４-ジオキソピラン類 (R. A. Love等、EP 256628 A2); フェニールアラニン誘導体 (M. Wang等、J. Biol. Chem. 2003 278:2489-2495)を含む様々な開発段階にある。
【００２１】
ＮＳ３プロテアーゼは新規抗ＨＣＶ療法の発見のための重要な標的として現れた。１９９８年５月２８日公開のWO98/22496において、M. R. Attwood等はプロテアーゼの作用機序に根ざした活性部位阻害剤を開示している(M.R. Attwood等, Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999 10:259-273; M.R. Attwood 等, Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents, ドイツ特許公開DE 19914474)。１９９８年４月３０日公開のWO98/17679において、R. D. Tung等はＮＳ３プロテアーゼにおける作用機序に根ざしたペプチド阻害剤を開示した。
１９９９年２月１８日公開のWO99/07734及び１９９９年８月９日公開のWO00/09543において、 M Llinas-Brunet等はプロテアーゼのペプチド阻害剤を開示する。２０００年１０月１２日公開のWO00/59929において、Y. S. Tsantrizos等はＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼの強力な阻害剤である大環状トリペプチド類を開示する。ベーリンガーインゲルハイムによる関連特許の一系列は、関連するプロテアーゼ阻害剤を開示し、トリペプチド誘導体ＢＩＬＮ２０６１の同定へ導く (M. Llinas-Brunet等、Biorg. Med. Chem. Lett. 2000 10(20):2267-70; J. Med Chem.2004 47(26):6584-94; J. Med. Chem. 2004 47(7):1605-1608; Angew. Chem. Int. Ed. Eng. 2003 42(12):1356-60)。
【００２２】
ブリストルマイヤーズスクイブ社により同定された他のトリペプチド阻害剤が、とりわけ、２００３年１２月４日公開のWO03/099274、２００４年４月２２日公開のWO2004/032827、２００３年７月３日公開のWO03/053349、２００５年５月２６日公開のWO2005/046712、２００５年６月９日公開WO2005/051410において開示されている。２００４年８月２６日公開のWO2004/072234及び２００４年１１月４日公開WO2004/093798において、更なるトリペプチドプロテアーゼ阻害剤がエナンタ製薬によって開示されている。２００５年４月２８日公開のWO2005/037214において、L. M. Blatt等はＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼを阻害する、更に他のトリペプチド誘導体を開示する。２００５年４月７日公開のWO2005/030796において、S. Venkatraman等は大環状阻害剤を開示する。２００５年６月３０日公開のWO2005/058821において、F. Velazquez等はＨＣＶ  ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼの阻害剤を開示する。２００２年６月２０日公開のWO02/48172において、Z. ZhuはＮＳ３プロテアーゼの阻害剤としてジアリールペプチドを開示する。共に２００２年１月３１日公開のWO02/08187及びWO02/08256において、A. Saksena等は、ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼのペプチド阻害剤を開示する。２００２年１月３１日公開のWO02/08251において、M. Lim-Wilby等はＮＳ３プロテアーゼのペプチド阻害剤を開示する。１９９９年１２月２１日公開のUS6,004,933において、L. W. Spruce等はＨＣＶエンドペプチダーゼを含むシステインプロテアーゼを阻害する複素環ペプチド誘導体を開示する。
【００２３】
ＲＤ３-４０８２及びＲＤ３-４０７８（前者はアミドが１４炭素鎖で置換され、後者はパラ-フェノキシフェニル基を処理する）を含む、２,４,６-トリヒドロキシ-３-ニトロ-ベンズアミド誘導体のような非基質性ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤もまた研究されている。
ＳＣＨ６８６３１、フェナンスレンキノン、はＨＣＶプロテアーゼ阻害剤である（Chu M. 等、Tetrahedron Lett. 1996 37:7229-7232）。同じ著者による別の例では、菌類のペニシリウム・グリセオフルバムから単離されたＳＣＨ３５１６３３がプロテアーゼ阻害剤として同定された（Chu M.等、Bioorg.  Med. Chem. Lett. 1999 9:1949-1952）。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ酵素に対するナノモル活性はマクロ分子エグリンｃに基づいた選択的阻害剤の設計によって達成された。ヒルから単離されたエグリンｃは、S. griseusプロテアーゼＡ及びＢ、α-キモトリプシン、キマーゼ及びサブチリジンのような複数のセリンプロテアーゼの強力な阻害剤である(Qasim M. A等, Biochemistry 1997 36:1598-1607）。
【００２４】
ＮＳ３／４Ａ融合タンパク質とＮＳ５Ａ／５Ｂ基質による逆相ＨＰＣＬアッセイにおいて適切な阻害作用を示すチアゾリジン誘導体(Sudo K.等、Antiviral Research 1996 32:9-18)、特にＲＤ-１-６２５０化合物は、長いアルキル鎖ＲＤ４  ６２０５及びＲＤ４  ６１９３によって置換された融合シンナモイル部分を有する。チアゾリジン及びベンズアニリドはN. Kakiuchi等（FEBS Let. 1998 421:217-220）及び N. Takeshita等（Anal. Biochem. 1997 247:242-246）によって同定された。
【００２５】
ＨＣＶのＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤としてのイミダゾリジノンは、２００２年１月３１日公開のシェリング社のWO02/08198及び２００２年６月２０日公開のブリストル-マイヤーズスクイブ社のWO02/48157において公開されている。２００２年６月２０日公開のWO02/48116において、P. Glunz等はＮＳプロテアーゼのピリミジノン阻害剤を開示する。
【００２６】
抗ＨＣＶのための他の酵素性の標的はＨＣＶ  ＩＲＥＳ部位（内部リボソーム侵入部位）とＨＣＶヘリカーゼを含む。ＩＲＥＳ阻害剤はイムソル、ライゲル製薬（Ｒ８０３）によって、及びアナディス社(ANA245及びANA246）によって報告されている。Vertex社はＨＣＶヘリカーゼ阻害剤を開示する。
【００２７】
耐性突然変異系統を抑制できる併用療法は、抗ウイルス性化学療法の十分に確立されたアプローチになっている。本願明細書で開示するヌクレオシド阻害剤は他のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤及びＨＣＶプロテアーゼ阻害剤と組合わせることができる。ＨＣＶドラッグの他のクラスとしては、ウイルス侵入阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、ＩＲＥＳ阻害剤、リボザイム及び抗ウイルスオリゴヌクレオチドが現れ、開発されており、またそれらは併用療法のための優れた候補となる。インターフェロン誘導体はすでに成功裏にリバビリンと組合わせられており、インターフェロン及び化学修飾型インターフェロンは本願明細書で開示されたヌクレオシドとの組合わせに有用である。
【００２８】
ヌクレオシド誘導体は多くの場合、強力な抗ウイルス（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、単純ヘルペス、ＣＭＶ）剤及び抗癌化学療法剤である。残念なことに、それらの実際的な有用性は２つの要因によって限定されることが多い。第一に、劣った薬理学的特性は消化管からのヌクレオシド吸収とヌクレオシド誘導体の細胞間濃度をしばしば制限し、第二に最適以下の物理的特性は有効成分の供給を促進するために用いられうる製剤の選択肢を限定する。
【００２９】
Albertは本来備わっている生物学的活性を欠いているが、活性な医薬成分に代謝的に変換が可能である化合物を記載するためにプロドラッグなる用語を取り入れた(A. Albert, Selective Toxicity, Chapman and Hall, London, 1951）。プロドラッグは最近再検討されている(P. Ettmayer等, J. Med Chem. 2004 47(10):2393-2404; K. Beaumont等, Curr. Drug Metab. 2003 4:461-485; H. Bundgaard, Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities in Design of Prodrugs, H. Bundgaard (ed) Elsevier Science Publishers, Amersterdam 1985; G. M. Pauletti等、Adv. Drug Deliv. Rev. 1997 27:235-256;R. J. Jones及びN. Bischofberger, Antiviral Res. 1995 27; 1-15 and C. R. Wagner等, Med. Res. Rev. 2000 20:417-45)。代謝的変換が特異的酵素、多くの場合加水分解酵素によって触媒されうる一方で、活性化合物は非特異的化学的プロセスによっても再生されうる。
【００３０】
製薬的に許容可能なプロドラッグは、本発明の化合物を形成するために受容者で代謝された、例えば加水分解された又は酸化された化合物をいう。生物変換は毒性学的傾向を有する断片の形成を避けるべきである。プロドラッグの典型例には活性化合物の機能部位に結合する生物学的に変化しやすい保護基を有する化合物を含む。糖部位において水酸基のアルキル化、アシル化又は他の親油性修飾はプロヌクレオチドの設計に使用される。これらのプロヌクレオチドは活性化合物を生成するために、生体内で加水分解又は脱アルキル化されうる。
【００３１】
経口投与による生体内利用性を制限する要因は胃腸管からの吸収と消化管壁と肝臓による第一通過排出である。胃腸管からの経細胞吸収の最適化はゼロより大きいＤ(7.4)を要求する。しかしながら、分配係数の最適化は成功を保証するものではない。プロドラッグは腸細胞における能動排出輸送体を避けなければならないであろう。腸細胞における細胞内代謝は腸管内腔へ後方側に排出ポンプによる代謝産物の能動輸送又は受動輸送に結果としてなりうる。また、プロドラッグは標的細胞又は受容体に達する前の血液中の不必要な生物変換に抵抗しなければならない。
【００３２】
推定プロドラッグは、分子に存在する化学官能性に基づいて合理的に設計しうる一方で、活性化合物の化学的修飾は親化合物には存在しない望ましくない物理学的、化学的、生物学的特性を示しうる完全に新しい分子実態を産生する。代謝産物の同定のための規制条件は、複数の経路が代謝産物の複数性を導くならば、問題となるかもしれない。従って、プロドラッグの同定は未確定で困難な課題を残している。さらに、潜在的プロドラッグの薬物動態学的評価は困難でコスト高な試みとなる。動物モデルによる薬物動態学的な結果をヒトに外挿することは困難である。
【００３３】
本発明の目的はＣ型肝炎ウイルスに感染した宿主の治療用の新規化合物、方法及び組成物の提供である。
本発明は4-アミノ-1-((2R,3R,4R,5R)-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル)-1H-ピリミジン-2-ワン ((2R)2'-デオキシ-2-メチル-2-フルオロ-シチジンとも呼ばれる)のジアシル誘導体を対象とする。本発明の化合物は式Ｉに記載の構造を有する。
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[上式中、Ｒ１はＣ２-５非分枝状又は分枝状アルキル、Ｃ２-５非分枝状又は分枝状アルケニル、Ｃ２-５非分枝状又は分枝状アルキニル、Ｃ２-５低級ハロアルキル、Ｃ３-６シクロアルキル、及びＣ２-４アルコキシからなる群から選択される]
のその化合物、水和物、溶媒化合物及び酸付加塩。
【００３４】
本発明の化合物はＨＣＶによって介在される疾患の治療に有用である。
更に本発明は、本発明の化合物と該化合物を含む医薬組成物によるＨＣＶの治療方法を含む。
本発明の一実施態様には、Ｒ１が上に記載の通りである式Ｉに記載の化合物が提供される。
本発明の別の実施態様には、Ｒ１がエチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル又はイソブチルである式Ｉに記載の化合物が提供される。
本発明のさらに別の実施態様には、Ｒ１がエチル又はイソプロピルである式Ｉに記載の化合物が提供される。
本発明のまた別の実施態様には、Ｒ１がイソプロピルである式Ｉに記載の化合物の塩酸塩又は硫酸塩が提供されている。
本発明の更なる実施態様には、Ｒ１がイソプロピルである式Ｉに記載の化合物の塩酸塩が提供されている。
本発明のまた別の実施態様には、Ｒ１がエトキシ、n-プロポキシ又はイソプロポキシである式Ｉに記載の化合物が提供されている。
本発明のまた更なる実施態様には、治療、特にＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療に使用する式Ｉに記載の化合物が提供されている。
本発明のまた別の実施態様には、ＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療のための医薬の調製における式Ｉに記載の化合物の使用が提供されている。
【００３５】
式Ｉに記載の化合物は、特に、必要としている患者に対し、治療的有効投与量で、好ましくは０．１から１０ｇ／日の間の用量で、より好ましくは０．５から７ｇ／日の間の用量で、さらにより好ましくは１．０から６．０ｇ／日の間の用量で投与される医薬の調製のために使用されうる。
式Ｉに記載の化合物は、インターフェロン、化学的に誘導化されたインターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子のような少なくとも一の免疫系モジュレーターの治療的有効投与量、及び／又はＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、ＨＣＶプライマーゼ阻害剤又はＨＣＶ融合阻害剤のようなＨＣＶの複製を阻害する少なくとも一の抗ウイルス剤を更に含んでもよい医薬の調製に更に使用されうる。
本発明の更に別の実施態様では、上記の式Ｉに記載の化合物の治療的有効投与量を必要とする患者に投与することを含む、ＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療方法が提供されている。
本発明の更に別の実施態様では、上記の式Ｉに記載の化合物の０．１から１０ｇ／日の用量を必要とする患者に投与することを含む、ＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療方法が提供されている。
また別の実施態様では用量は０．５から７ｇ／日の間あり、さらなる実施態様では１．０から６．０ｇ／日の間である。
【００３６】
本発明の別の実施態様では、上記の式Ｉに記載の化合物の治療的有効投与量及び免疫系モジュレーターの治療的有効投与量及び／又はＨＣＶの複製を阻害する少なくとも一の抗ウイルス剤を、必要としている患者に併用投与することを含んでなるＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療方法が提供されている。
本発明の別の実施態様では、上記の式Ｉに記載の化合物の治療的有効投与量及び免疫系モジュレーターがインターフェロン又は化学的に誘導化されたインターフェロンである免疫系モジュレーターの治療的有効投与量を、必要としている患者に併用投与することを含んでなるＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療方法が提供されている。
本発明の別の実施態様では、上記の式Ｉに記載の化合物の治療的有効投与量及び治療的有効投与量の少なくとも一の他の抗ウイルス化合物を、必要としている患者に併用投与することを含んでなるＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療方法が提供されている。
本発明の別の実施態様では、上記の式Ｉに記載の化合物の治療的有効投与量及び、化合物がＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、非ヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、ＨＣＶプライマーゼ阻害剤又はＨＣＶ融合阻害剤である治療的有効投与量の少なくとも一の他の抗ウイルス化合物を、必要としている患者に併用投与することを含んでなるＨＣＶウイルスによって介在される疾患の治療方法が提供されている。
本発明の別の実施態様では、少なくと一の薬学的に許容可能な担体、希釈剤及び賦形剤と混合された上記の式Ｉに記載の化合物を含んでなる医薬組成物が提供されている。
本発明の別の実施態様では、請求項１５に列挙し、実施例に例示した工程（ｉ）-（ｖ）を含む、上記の式Ｉに記載の化合物の調製方法が提供されている。該方法は、ＤＭＡＰの存在で本願明細書に記載のアシル化剤及び少なくとも約７．５のｐＨに溶液を維持するための十分な塩基で均一又は二相状態でありうる塩基性水性有機溶媒中でＩを処理することを含む。本願の方法は、複素環塩基の随伴反応なしのアシル化を可能にする。
【００３７】
本願明細書で使用される場合「任意の」又は「任意に」なる用語は、続いて記載される事象又は状況が起こりうるが必ずしも起こる必要のないこと、および事象又は状況が起こる場合と起こらない場合を含む記述であることを意味する。例えば、「任意に結合」は結合があってもなくてもよく、単一の、二重の、三重の結合を含む記述であることを意味する。
本願明細書で使用される場合「独立して」なる用語は、同じ化合物の範囲内で同じか又は異なる定義を有する可変要素の存在又は欠如とは無関係に、どれか一つの例に適用される可変要素を示す。従って、Ｒが２回出現し、独立に炭素又は窒素と定義される化合物において、両Ｒは炭素であり得、両Ｒは窒素であり得、又は一つのＲが炭素で他方が窒素であり得る。
本願明細書で使用される場合「アルケニル」なる用語は、１つ又は２つのオレフィン２重結合（好ましくは、１つのオレフィン２重結合）を有する２から１０の炭素原子を有する非置換炭化水素鎖基を意味する。本願明細書で使用される場合「Ｃ2-10アルケニル」は２から１０の炭素からなるアルケニルを指す。例は、 ビニル、1-プロペニル、2-プロペニル(アリル)又は2-ブテニル (クロチル)である。
本願明細書で使用される場合「アルキル」なる用語は、１から１０の炭素原子を含む非
分枝状又は分枝状鎖の、飽和した一価の炭化水素残基を意味する。本願明細書で使用される場合「低級アルキル」なる用語は、１から６の炭素原子を含む直鎖状又は分枝状鎖の炭化水素残基を意味する。本願明細書で使用される場合「Ｃ1-10アルキル」は１から１０の炭素からなるアルキルを示す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチル又はペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びオクチルを含む低級アルキル基を含むが、限定されるものではない。「アラルキル、アルキルまたは(ヘテロアリール)アルキル」なる用語は、任意アリール基又はヘテロアリール基のそれぞれで置換されたアルキル基を示す。
本願明細書で使用される場合「アルキニル」なる用語は、２から１０の炭素原子、好ましくは２から５の炭素原子を有し、１つの三重結合を有する非分枝状又は分枝状炭化水素鎖基を意味する。本願明細書で使用される場合「Ｃ２-１０アルキニル」なる用語は、２から１０の炭素からなるアルキニルを示す。例は、エチニル、1-プロピニル、2-プロピニル、1-ビチニル、2-ビチニル又は3-ビチニルである。 
【００３８】
本願明細書で使用される場合「シクロアルキル」なる用語は、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチルのような３から８の炭素原子を含む飽和した環状炭素を意味する。本願明細書で使用される場合「Ｃ３-７シクロアルキル」は 環状炭素の３から７の炭素からなるシクロアルキルを示す。
本願明細書で使用される場合「ハロアルキル」なる用語は、１，２，３，又はそれ以上の水素原子がハロゲンによって置換された上記の非分枝状又は分枝状鎖アルキル基を意味する。本願明細書で使用される場合「Ｃ１-３ハロアルキル」は１から３の炭素および１-８ハロゲン置換基からなるハロアルキルを示す。例は、1-フルオロメチル、1-クロロメチル、1-ブロモメチル、1-ヨードメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリブロモメチル、トリヨードメチル、1-フルオロエチル、1-クロロエチル、1-ブロモエチル、1-ヨードエチル、2-フルオロエチル、2-クロロエチル、2-ブロモエチル、2-ヨードエチル、2,2-ジクロロエチル、3-ブロモプロピル又は2,2,2-トリフルオロエチルである。
本願明細書で使用される場合「アルコキシ」なる用語は、アルキルが上記のとおりである-O-アルキル基を意味する。例は、メトキシ、エトキシ、n-プロピルオキシ、i-プロピルオキシ、n-ブチルオキシ、i-ブチルオキシ、t-ブチルオキシである。本願明細書で使用される場合「低級アルコキシ」は、先に定義した「低級アルキル」を有する「アルコキシ」基を意味する。「Ｃ１-１０アルコキシ」はアルキルがＣ１-１０である-O-アルキルを示す。
【００３９】
本願明細書で使用される場合「ジアシル」誘導体なる用語は、3'- 及び5'-ヒドロキシが、エステル-ＯＣ(＝Ｏ)Ｒ１ 及び ＯＣ(＝Ｏ)Ｒ２［Ｒ１及びＲ２が請求項１に定義した通りである］由来である上記の誘導化ヌクレオシド化合物を示す。
本願明細書で使用される場合「アシル化剤」なる用語は、無水物、酸ハロゲン化物、クロロカルボニルアルコキシド (例、クロロ炭酸エチル）か、N-保護アルファアミノ酸の活性化誘導体のどちらかを示す。 本願明細書で使用される場合「無水物」なる用語は、Ｒ１が請求項１に記載の通りである、一般構造Ｒ１Ｃ(Ｏ)-Ｏ-Ｃ(Ｏ)Ｒ１の化合物を示す。本願明細書で使用される場合「酸ハロゲン化物」なる用語はＸがハロゲンである一般構造Ｒ１Ｃ(Ｏ)Ｘの化合物を示す。「アシルイミダゾール」なる用語は、ＸがN-イミダゾールである一般構造Ｒ１Ｃ(Ｏ)Ｘの化合物を示す。本願明細書で使用される場合、化合物の「活性化誘導体」なる用語は、元の化合物の反応性が中程度でしかないか又は非反応性である時に、所望の化学反応において化合物に活性を与える、元の化合物の一過性反応形態を示す。活性化は、他の試薬とより反応しやすい活性化形態を与える、元の化合物よりも高い自由エネルギーを有する分子内の化学的グルーピング又は誘導体の形成によって達成される。本発明において、カルボキシ基の活性化は特に重要であり、以下により詳細に記載するように、カルボキシ基を活性化するグルーピング又は活性化剤に対応する。特に、本発明の関心はカルボン酸無水物又はカルボン酸塩化物である。
【００４０】
本願明細書で使用される場合「不均一水性溶媒混合物」なる表現は、２相性又は不均一混合物をつくる水と有機性共溶媒の混合物をいう。この不均一水性溶媒混合物は、限定的水性溶解性を有する共溶媒、又は水相における共溶媒の溶解性の制限を調整することが可能な水性化合物のイオン強度から結果として生じうる。
「水酸化アルカリ金属」はＭがリチウム、ナトリウム、カリウム又はセシウムである式ＭＯＨの化合物を示し、「アルカリ金属の炭酸水素塩」はＭがナトリウム又はカリウムであるＭＨＣＯ３基を示し、「炭酸アルカリ金属」はＭがナトリウム又はカリウムであるＭ２ＣＯ３基を示す。当業者は所望の範囲のｐＨを維持するために使用されてもよい他の塩基類及び本発明の範囲内にある他の塩基類を理解する。
【００４１】
本願明細書で使用される略称には、アセチル(Ac)、酢酸(HOAc)、1-N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)、雰囲気(Atm)、高速液状クロマトグラフィー(HPLC)、メチル (Me), tert-ブトキシカルボニル(Boc)、アセトニトリル(MeCN)、ジ-tert-ブチルピロ炭酸塩又は無水boc (BOC2O)、塩酸1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド(EDCI)、ベンジル(Bn)、ブチル (Bu)、メタノール(MeOH)、ベンジルオキシカルボニル(cbz又はZ)、融点(mp)、カルボニルジイミダゾール(CDI), MeSO2- (mesyl又はMs), 1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン(DABCO)、質量スペクトル(ms)、メチルt-ブチルエーテル(MTBE)、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノン-5-エン(DBN)、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン(DBU)、N-メチルモルホリン(NMM)、N-メチルピロリドン(NMP)、1,2-ジクロロエタン(DCE)、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、二クロム酸ピリジニウム(PDC)、ジクロロメタン(DCM)、プロピル(Pr)、ポンド／平方インチ(psi), ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA, ヒューニッヒ塩基)、ピリジン(pyr)、室温（rt又はRT）、N,N-ジメチルアセトアミン(DMA), tert-ブチルジメチルシリル又は t-BuMe2Si(TBDMS), 4-N,N-ジメチルアミノピリジン(DMAP)、トリエチルアミン(Et3N又はTEA)、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、トリフルオロ酢酸(TFA)、薄層クロマトグラフィー(TLC)、酢酸エチル(EtOAc)、テトラヒドロフラン(THF)、ジエチルエーテル (Et2O)、トリメチルシリル又はMe3Si (TMS)、エチル (Et)、p-トルエンスルホン酸1水和物(TsOH又はpTsOH)、4-Me-C6H4SO2-又はトシル(Ts)、イソプロピル (i-Pr)、N-ウレタン-N-カルボキシ無水物(UNCA)、エタノール(EtOH)を含む。接頭語である、正常(n)、イソ (i-)、第２(sec-)、第３(tert-)およびネオを含む従来の命名は、アルキル部位と共に使用される場合、慣用の意味を有する(J. Rigaudy及びD. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979年、Pergamon Press、オックスホード)。
【００４２】
本発明により包含され、本発明の範囲の代表的化合物の例を表Ｉに示す。後に続くこれらの例及び調製は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施できるように提供する。それらは本発明の範囲を制限するものとして考慮されるべきではなく、単にその例示及び代表例でしかない。
一般に、この出願で使用される命名法は、ＩＵＰＡＣ体系名を作出するためのコンピューター化システムであるBeilstein InstituteのAUTONOMTM v.4.0に基づいている。図示された構造と構造に与えられた名前に矛盾があるならば、図示された構造により重きを与えられるべきである。加えて、構造の立体化学又は構造の一部が、例えば太線又は点線によって示されていないならば、その構造又は構造の一部はその全ての立体化学を包含すると解釈されるべきである。これらの環構造の番号付け方式は以下の通りである。
2009518354.tif 000008
【００４３】
（化合物及び調製）
(2R)-2'-デオキシ-2'-フルオロ-2'-C-メチルシチジンのHCVポリメラーゼ阻害性活性は開示されている(J. L. Clark等、J. Med. Chem. 2005 48(17):5504-8; J. Clark 米国公開番号2005/0009737、両刊行物は本明細書にそのまま援用される)。臨床現場において、ＨＣＶポリメラーゼを直ちに阻害するために高用量のＩ-６が初期投与され、それによってウイルスが突然変異し耐性系統を選出する機会を最小にする状況下にウイルスレベルを下げることが望ましいであろう。十分に高いレベルは親ヌクレオシドによって達成することは難しいかもしれない。プロドラッグは、化合物の薬物動態学的及び物理的特性を改良し、それによって生体内利用性を最適化する一戦略を提供する。米国公開2005/0009737は2'-デオキシ-2'-フルオロ-2'-メチルヌクレオシドのヌクレオシドプロドラッグの一般的なアプローチを示唆する。プロドラッグ候補を思い描くことは一見単純である一方で、好適な物理化学的及び薬力学的特性、生体内の変換、及び安全プロフィールを有する化合物の同定は、膨大な実験を必要とする複雑な多くの専門分野にわたる取り組みである。経口送達のためのプロドラッグの同定のハードルは、投与後の活性部位の迅速で効率的な放出と同時に十分な水性溶解性、親油性および化学的安定性を維持することを含む。加えて、重大な非エステラーゼ代謝および輸送体仲介によるプロドラッグのクリアランスは最小限化されなければならない(K. Beaumont等、Curr. Drug Metab. 2003 4(6):461-485)。またチトクロームＰ４５０酵素の阻害又は誘導は望ましくない有害な薬物−薬物相互作用を生じうる。表Ｉに図示したＩ-６の低級アルキルジエステルは驚くべきことにＩ-６の生体内利用性を顕著に改良することが見いだされた。潜在的プロドラッグの薬物動態学的挙動は種内のアーティファクトによって生じることがある種内のばらつき及び遺伝的多型を最小限にすることを試みるためにラットとサルの両方で評価した。酵素的変換がエステル結合の加水分解に関与する範囲において、プロドラッグに対する特異的親和性は、変換を触媒できるエステラーゼ及び／又はペプチダーゼの特異的構造に依存してもよい。ラットのエステラーゼ活性はヒトよりも顕著に高いことは頻繁に示されている (J. A. Fix等、Pharm. Res. 1990 7(4):384-387; W. Li等、Antimicrob. Agents Chemother 1998 42(3):647-653)。別の潜在的に重要なパラメーターはデアミナーゼによるシチジン基のウリジンへの生物変換であった。シチジン及びウリジンの三リン酸はポリメラーゼ阻害剤であるが、生体内においてウリジンのリン酸化はシチジンに比較して不十分である。従って、増大したウリジンレベルは望ましくないと考慮される。ＨＣＶレプリコンにおいてウリジン誘導体により呈された有効性の欠如が報告されている(J. Clark等、J. Med. Chem., 上掲)。
2009518354.tif 000009
【００４４】
驚くべきことに、Ｉ-６のＣ２-５アルキルジエステルは優れたプロドラッグ特性を示すことを現在見出している。フッ素化ヌクレオシドの実質的により高いレベルはラット及びサルの両方の血中で観察されている。さらに、ヌクレオシドがジエステルとして投与された場合は、フッ素化基におけるウリジンに対するシチジンの割合は両種においてより高い。さらに、ジエステルは２つの異なるモノエステル及び非エステル化ヌクレオシドを形成することができる。全種類が有意な濃度で血中に存在するならば、この状況の薬物動態学的解析は複雑である。多数の代謝産物が血中に存在することはプロドラッグが安全であることを確立するための追加の負荷を与える。驚くべきことに、両エステルの加水分解は相当に容易で、親ヌクレオシドに加えて血中で観察された唯一顕著な代謝産物が、Ｉ-６に迅速に変換される3'-モノエステルである。ヒト被験者で潜在的挙動をさらに評価するために、Ｃａｃｏ-２細胞を介した輸送が推定プロドラッグのために評価された。Ｃａｃｏ-２細胞は、分子の潜在的吸収／透過性を評価するために一般的に使用される(G. Gaviraghi等、 Pharmacokinetic optimization in drug research. Biological, Pharmacokinetic and Computational Strategies. B. Testa等編 Wiley Interscience VCH, チューリッヒ、2001年 3-14頁)。Ｃａｃｏ-２細胞透過性はＩ-６のＣ２-５アルキルジエステルが許容可能であることが発見された。生体内の生体内輸送において効率的であることに加えて、経口投与のためのプロドラッグは、また、薬物を製剤化するための適切な物理化学的特性を示し、望ましい生体内輸送が生じ得る区画内へ胃腸管からの吸収を確保しなければならない。特に関連するものは、水溶性、部分係数、胃腸液中での安定性である。これらのパラメータは表２に表示する。
【００４５】
2009518354.tif 000010
油／水部分係数ＰＯ／Ｗ(ｃｌｏｇＰは算出したＰＯ／Ｗ)は経口投与される薬剤の重要な特性である。製剤原料は、胃腸において内皮細胞と接触するために、製剤中及び胃腸（ＧＩ）管液中に溶けるための十分な水溶性及びこれらの細胞の脂質二層膜を通して最終的には血中に横断するための十分な脂溶性を有しなければならない。経口投与の生体内利用性を有する化合物のｌｏｇＰの至適範囲は、本発明の化合物によって示された１から３の間である。
本願明細書で使用する場合、ＰＯ／Ｗなる表記はオクタノール／水の部分係数を示す。明細書で使用する場合、ｃｌｏｇＰなる表記は、計算されたＰＯ／Ｗを示す。ＰＯ／Ｗを計算するコンピュータプログラムは医薬および薬剤の化学者にとって容易に入手可能である。分配係数なる用語は、オクタノールと緩衝水性溶液間の実験的に決定された部分係数を示す。部分係数と分配係数は通常似ているが、後者は水性溶液のｐHの関数であり、一方ＰＯ／ＷはｐHに独立である。  
経口的に投与されるプロドラッグの水への溶解性は、最適な製剤の場合、少なくとも０．１mg／ｍｌを超えるべきであり、人工胃液及び人工腸液中での半減期は、胃を横断して腸で吸収される十分な時間を与えるためにそれぞれ１−２時間及び２−４時間である。
本発明の化合物は水性有機溶媒でＩ-６のアシル化による一工程で簡便に調製される。溶媒は不均一水性溶液か２相溶液のどちらかであってよい。水性有機溶媒のｐHはアシル化によって産生される酸を中和するために塩基の添加によって７．５より上を維持する。塩基はアルカリ又はアルカリ金属水酸化物又は三級アミンのどれかであってよい。反応は、アシル化の触媒として当業界で知られるＤＭＡＰの存在下で実施される。本発明の利点は、複素環の塩基のアシル化なしに所望の生成物を得ることができることである。保護基は要求されないので、保護／脱保護工程の必要がない。方法は付記する実施例に記載する。
【００４６】
（用量及び投与）
本発明の化合物は、広範囲の種々の経口投与形態及び担体に製剤化されてもよい。経口投与は錠剤、コーティング錠、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、溶液剤、乳剤、シロップ剤又は懸濁剤の形態を取りうる。他の投与経路の中では座薬投与によって投与される時、本発明の化合物は効果的である。投与の最も簡便な方法は、通常は、疾患の重篤度及び抗ウイルス性薬物療法に対する患者の応答によって調節できる一日量療法である。本発明の化合物は、薬学的に使用可能な塩に加えて、１以上の通常の賦形剤、担体又は希釈剤と共に、医薬組成物および投薬単位の形態にされてもよい。医薬組成物および投薬単位の形態は、付加的な活性化合物があってもなくても、通常の割合の通常の成分から成ってもよく、投薬単位の形態は、使用される所望の一日量の範囲に比例した活性成分の任意の適切な有効量を含んでもよい。医薬組成物は、錠剤又は充填されたカプセル、半固形剤、粉剤、持続解放性配合物のような固形剤、又は懸濁剤、乳剤又は充填されたカプセル剤のような液剤を使用してもよく、又は直腸又は膣投与用の座薬の形態でもよい。典型的な調剤は約５％から約９５％の活性化合物(w/w)を含有する。
【００４７】
「調剤」又は「用量形態」なる用語は、活性化合物の固体及び液体製剤の両方を含むことを意図するものであり、当業者は活性成分が所望の用量及び薬物動態学的パラメータによって異なる調剤として存在しうることを理解する。
本願明細書で使用する場合「賦形剤」なる用語は、医薬組成物を調製するために使用される化合物を示し、一般に安全で、非毒性であり、及び生物学的でもその他望ましくないものでもなく、ヒトへの医薬用途に加えて獣医学的使用に許容可能である賦形剤を含む。本発明の化合物は単独で投与されてもよいが、通常、目的の投与経路及び標準的製薬実務に関して選択された一以上の適切な製薬学的賦形剤、希釈剤又は担体と混合して投与される。
【００４８】
活性成分の「薬学的に許容可能な塩」形態は、初めに非塩の形態にない活性成分の所望の薬物動態学的特性を与えてもよく、体内での治療活性に関して活性成分の薬力学を更に高めさえしてもよい。本願明細書で使用される場合、化合物の「薬学的に許容可能な塩」なる語句は、薬学的に許容可能であって親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。そのような塩は（１）酸付加塩、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸及びその他のような無機酸と形成されるもの、又はグリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン- ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、樟脳スルホン酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、サリチル酸、ムコン酸及びその類のような有機酸と形成されるものを含む。薬学的に許容可能な塩の全ての参照は、ここで定義する同じ酸付加塩の溶媒付加形態（溶媒和物）又は結晶形態（多形）を含むと理解されなければならない。
【００４９】
固体形態の製剤は、粉剤、錠剤、ピル、カプセル、座薬、分散粒剤を含む。固体担体は希釈剤、香味料、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、結合剤、保存料、錠剤崩壊剤又はカプセル化材としても働きうる１以上の物質であってもよい。粉剤において、担体は、通常微粉化した活性成分との混合物である微粉化固体である。錠剤において、通常活性成分は、適切な割合で必要な結合能力を有する担体と混合され、所望の形と大きさに圧縮される。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバター、及びその類を含む。固体形態の製剤は、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定剤、緩衝液、人工及び天然甘味料、分散剤、贈粘剤、可溶化剤及びその類を含んでもよい。
【００５０】
液体製剤もまた、経口投与に適切であり、液体製剤は乳剤、シロップ剤、エリキシル剤及び水性懸濁剤を含む。これらは、使用の直前に液体形態製剤に変換することを目的とする固体形態製剤を含む。乳剤は溶液中、例えば水性プロピレングリコール溶液中で調製されてもよく、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン又はアラビアゴムのような乳化剤を含んでもよい。水性懸濁剤は、微粉化された活性成分を、天然又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボシメチルセルロースナトリウム及びその他のよく知られた懸濁剤のような粘ちょう物質と共に、水中に分散させることによって調製されうる。
【００５１】
本発明の化合物は座薬として投与されるように製剤化されてよい。脂肪酸グリセリド又はカカオバターのような低融点ワックスは最初に融解され、活性生物は例えば撹拌によって均一に分散させる。融解した均一な混合物は、その後都合のよい大きさの型に注がれ、冷却させて凝固させる。本発明の化合物は膣投与のために調製されてもよい。活性成分に加えて、当分野で知られている担体を含む、膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡又はスプレーが適している。
製剤担体、希釈剤及び賦形剤を伴う適切な製剤は、Remington（The Science and Practice of Pharmacy 1995, E. W. Martin編, Mack Publishing Company, 第１９版, イーストン, ペンシルバニア）に記載されている。製薬学の熟練した科学者は、本発明の化合物を不安定化させることなしに、又は治療活性を落とすことなしに、特定の投与経路用の多数の製剤を提供するために、本願明細書の教示の範囲内で製剤を変えてもよい。  
水およびその他のベヒクルへの溶解性を向上させるための本発明の化合物の修飾は、例えば、マイナーな修飾（例、塩型の製剤）によって簡単に達成されてよく、それは十分に当業者の技術の範囲内にある。患者における有効作用の最大化のために本発明の化合物の薬物動態を管理するために、投与経路及び特定化合物の投与計画を変えることも、また十分に当業者の技術の範囲内にある。
本願明細書で使用する場合「治療的有効投与量」なる用語は、一患者において疾患の症状を軽減するために必要とされる量である。用量は各々の特定の場合で、個々の要求に調整される。用量は、治療される疾患の重篤度、患者の年齢及び通常の健康状態、治療する患者が用いる他の医薬、投与の経路と形態、及び携わっている医療担当者の好みと経験のような多数の要因に依存する幅広い制限の範囲内で変化する。経口投与の場合、単独療法及び／又は併用療法において、約０．１と約１０ｇ／日の間の一日量が適当であるべきである。好ましい一日量は約０．５と約７．５ｇ／日の間であり、より好ましくは約１．５と約６．０ｇ／日の間である。通常、治療は、迅速にウイルスを減らし除外するために大量の最初の「初回投与量」で開始され、続いて感染の盛り返しを防ぐために十分なレベルに用量を減らす。本願明細書に記載する疾患を治療すること関する当業者は、過度の実験なしに個人の知識、経験及び本願の開示によって、所定の疾患および患者のための、本発明の化合物の治療的有効投与量を確かめることができる。
【００５２】
治療効果は、血清タンパク質のようなタンパク質レベル（例、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノ転移酵素（例、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、5'-ヌクレオシダーゼ、g-グルタミニルトランスペプチダーゼ等)、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、及び胆汁酸の合成を含む肝臓機能の試験から確かめることができるがこれに限定されるものではなく、糖代謝、アミノ酸及びアンモニア代謝を含む肝臓の代謝機能の試験から確かめることができるがこれに限定されるものではない。あるいは、治療の有効性はＨＣＶ-ＲＮＡの測定によって監視してもよい。これらの試験の結果により、用量は最適化される。
【００５３】
本発明の実施態様において、活性化合物又は塩は、リバビリン、他のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶ非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤又はＨＣＶ融合阻害剤のような他の抗ウイルス剤と組合わせて投与されうる。活性化合物又はその誘導体又は塩が他の抗ウイルス剤と組合わせて投与される場合、活性は親化合物以上に増加してもよい。治療が併用療法である場合、該投与はヌクレオシド誘導体の投与と同時でも又は連続してもよい。本願明細書で使用される場合「同時投与」は、従って、同じ時間又は異なる時間における薬剤の投与を含む。同時の２以上の薬剤の投与は、２以上の活性生物を含有する単一製剤によって、又は単一の活性剤を有する２以上の投与形態の連続的な同時投与によって達成されうる。本願明細書で引用する治療は、既存症状の治療に加えて、予防的治療にまで拡張できることが理解される。さらに、ＨＣＶ感染の「治療」なる用語は、本願明細書で使用される場合、疾患又はＨＣＶ感染に付随する又は介在される状態又はその臨床症状の治癒的又は予防的治療をまた含む。
【実施例】
【００５４】
（実施例１）
プロピオン酸 (2R,3R,4R,5R)-5-(4-アミノ-2-オキソ-2H-ピリミジン-1-イル)-4-フルオロ-4-メチル-3-プロピオニルオキシ-テトラヒドロ-フラン-2イルメチルエステル (Ｉ-３)
2009518354.tif 000011
Ｉ-６(30 g, 0.116 mol)、ＤＭＡＰ(1.4 g, 11.57 mmol)のＴＨＦ(300 mL)溶液と水(150 mL）の懸濁液に、ＴＥＡ(35.1 g, 0.347 mol)を加えて、透明な溶液（ｐＨ約１１）を得た。反応混合物は５−１０℃に冷却し、撹拌された２相性反応溶液に無水プロピオン酸(30.1 g, 0.231 mol)を滴下で加えた。ｐＨは監視され、ＫＯＨ溶液の同時添加によって約１１−１２に維持した。反応の進行はＨＰＬＣ分析によって監視され、塩化プロピオニルを加えた後に、約５２％のジエステル、３０％のモノエルテル及び１５％の出発物質があった。追加の無水プロピオン酸(45.2 g, 0.347 mol)を、上記の状況下で滴下で加えた。反応混合物は、撹拌せずに一晩静置した。有機相のＨＰＬＣは、約９６％のジエステル及び約２％のモノエステルを示した。相を分離し、水相は２回ＴＨＦ(100 mL)で抽出した。まとめた有機相は塩水で洗浄した。有機相は濾過し、蒸発させ、残留物を水（約500 mL）に溶解し、その後ＩＰＡ（約100 mL）で希釈した。得られた混合物は撹拌により周囲温度までゆっくりと冷却した。得られた沈殿物は濾過し、水とヘプタンで洗浄し、減圧下約６０℃で約６０時間乾燥し、Ｉ-３を３．４５ｇ（８０．３％）得、それはＨＰＬＣで９８．７５％の純度であった。
【００５５】
（実施例２）
イソブチル酸 (2R,3R,4R,5R)-5-(4-アミノ-2-オキソ-2H-ピリミジン-1-イル)-4-フルオロ-3-イソブチリルオキシ-4-メチル-テトラヒドロキシ-フラン-2-イルメチルエステル(Ｉ-２)
2009518354.tif 000012
Ｉ-６(970 g, 3.74 mol)とＤＭＡＰ(50 g, 0.412 mol)のＴＨＦ(10 L)溶液の氷冷懸濁液にＴＥＡ (2.3 kg, 16.5 mol)と水(7 L)を加えて、透明な溶液を生成した。塩化イソブチリル（３等価量）を、撹拌した該混合物に、温度を約０℃に維持しながらゆっくりと加えた。追加の塩化イソブチリルの１．２等価量、更に０．７等価量を、反応が本質的に完了まで進行したことをＨＰＬＣが示すまで加えた(計約1.95 kg)。反応混合物は、濃塩酸でｐＨ約６．４まで酸性化し、有機相はＥｔＯＡｃ(2 × 10 L)で洗浄した。まとめた抽出物は水(1 x 15 L)で洗浄した。有機相は濾過し、減圧下で濃縮した。残留物はＩＰＡ（約20 kg）に溶解し、ヘプタン(14.2 kg)を加えた。溶液は約７４−７５℃まで熱し、透明な溶液を生成し、そして約５Ｌを蒸留によって除去した。得られた溶液は室温までゆっくりと冷却した。沈殿物は約４２−４３℃で形成した。冷却は５℃までゆっくりと続けて、その後一晩撹拌した。得られた個体は濾過し、濾過物はＩＰＡ／ヘプタン(1:8)混合物(13.4 kg)で洗浄し、減圧下約６０−７０℃で乾燥し、１．２９５ｋｇ（８６．６５％）のＩ-２を得て、それはＨＰＬＣで９９．４５％の純度であった。
【００５６】
（実施例３）
カルボン酸(2R,3R,4R,5R)-5-(4-アミノ-2-オキソ-2H-ピリミジン-1-イル)-4-フルオロ-2-イソブトキシカルボニルオキシメチル-4-メチル-テトラヒドロキシ-フラン-3-イルエステルイソブチルエステル(Ｉ-４)
2009518354.tif 000013
Ｉ-６(700 mg）とＤＭＡＰ(33 mg)のＴＨＦ(7 mL)溶液の懸濁液は塩水(7 mL)で希釈した。希釈したＮａＯＨをｐＨが約１１になるまで加えた。反応混合物は氷浴で冷却し、必要に応じてＮａＯＨを添加することによってｐＨを約１１に維持し、撹拌された２相性反応混合物にクロロギ酸イソブチル(1.11 g)を滴下で加えた。ＨＰＬＣ分析は、ほとんどがジカルボネートであり、約１５％のモノカルボネートが混入していることを示した。追加のクロロギ酸イソブチルの１等価量を氷冷した溶液に滴下で加えた。ＨＰＬＣは完全に近い変換を示した。得られた混合物は室温で一晩静置した。ＥｔＯＡｃ(約50 mL)を加え、水相のｐＨを濃ＨＣＬでｐＨ約７．５に調節した。相を分離し、有機相は水(3×)で洗浄し、蒸発乾燥し、無色固体（約1.22 g）を得た。固体は熱アセトンに溶解し、透明な溶液を得て、室温までゆっくりと冷却し、固体の塊を生成した。固体はＩＰＡ(約20 mL)で希釈し、スラリーを生成し、それを濾過し、その後ＩＰＡとヘプタンで連続して洗浄し、その後乾燥して０．８５ｇ（６８．５％）のＩ-４を得て、それはＨＰＬＣで９７．５％の純度であった。
【００５７】
（実施例４）
カルボン酸(2R,3R,4R,5R)-5-(4-アミノ-2-オキソ-2H-ピリミジン-1-イル)-4-フルオロ-4-メチル-2-プロポキシカルボニルオキシメチル-テトラヒドロキシ-フラン-3-イルエステルプロピルエステル；塩酸塩 (Ｉ-５)
Ｉ-６(700 mg, 2.70 mmol)とＤＭＡＰ(33 mg, 0.27 mmol)のＴＨＦ(7 mL)溶液と希釈した塩水(7 mL)の懸濁液に希釈したＫＯＨを加えて、ｐＨを約１１に調整した。反応溶液は約５℃まで冷却し、クロロギ酸n-プロピル(1.0 g)を撹拌した２相性反応混合物に滴下で加えた。ＨＰＬＣ解析は所望の生成物に伴って約２０％のモノカーボネートがあることを示した。その冷たい溶液に、２回の追加量のクロロギ酸プロピル (2 ×1 等価量) を、ＨＰＬＣが反応は完了まで進んだことを示すまで加えた。反応混合物はＥｔＯＡｃ(30 mL)で希釈し、水相のｐＨは濃塩酸で約６．５に調整した。相を分離し、有機相を水(3×)で洗浄し、蒸発乾燥で無色固体（約1.1 g）を得た。熱いＩＰＡ溶液を４ＮのＨＣｌで酸性化し、蒸発乾燥した。得られた固体は熱いＥｔＯＨ（約115 mL）に再溶解し、室温で一晩乾燥した。固体塊が生成され、それを濾過し、残留物をＭｅＯＨ/ヘプタン (1:1)で洗浄した。残った固体は約６０℃減圧下で乾燥し、０．３２５ｇ（２５．８％）のＩ-５を得て、ＨＰＬＣアッセイで９７．５％の純度にした。
【００５８】
（実施例５）
ラットにおける薬物動態学的パラメータの測定
体重２００−２５０ｇの無処置の雄ＩＧＳウィスターハン  ラットCr：WI(GLx/BRL/Han) IGS BR (ハノーバ-ウィスター)ラットを用いた。ラット３個体のグループを、実験化合物の各用量レベルに使用した。実験の間、動物は固形飼料と水に正常に接近できようにした。試験物質は、Ｉ-６の１０ｍｇ／ｋｇの相当用量で、Captex355EP、Capmul MCM、ＥｔＯＨ及びプロピレングリコール(30:20:20:30)を含む水性懸濁剤として製剤され、経管栄養により経口投与された。血液試料は(0.3 mL)は処置されたラットから０．２５、０．５、１、３、５、及び８時に頸部カニューレから、２４時に心穿刺により採取した。サンプリング手順の間、試料は氷上に置き、シュウ酸カリウム／ＮａＦを試料に加えた。試料はすぐに−４℃で冷却遠心機で遠心し、血漿試料は分析まで−８０℃フリーザーで保管した。血漿のアリコート(0.05 mL)を０．１ｍＬのアセトニトリルと混合した。内部基準（水で0.05 mL)及び０．０２ｍＬのブランク溶媒を加えた。キャリブレーション基準のセットは、未処置ラットの血漿の０．０５-ｍＬアリコートに、０．１ｍＬのアセトニトリル、メタノール：水（１：１）中の基準溶液の０．０２-ｍＬアリコート、及び水中の内部基準の０．０５-ｍＬアリコートを混合することによって調製した。各血漿試料およびキャリブレーション基準は、十分に混合し、その後３０００ｒｐｍで５分間遠心し、タンパク質を沈殿させた。遠心による上清 (各100μL)は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析用の水性の移動相２００μＬを含む９６穴プレートに移した。
【００５９】
試料分析：
プロドラッグは、タンデム型質量分析(ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ)の高性能液体クロマトグラフィーを使用して解析した。Thermo Aquasil C18  4.6×50 mmカラム（５μＭ）を分離に使用した。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法をイオン化工程に使用した。移動相Ａは５ｍＭの酢酸アンモニウム水溶液に０．１％ギ酸を含み、移動相ＢはＭｅＯＨに０．１％ギ酸を含む。溶出は、流速１ｍＬ／ｍｉｎで、以下に示す勾配で行った。
2009518354.tif 000014
【００６０】
（実施例６）
サルにおける薬物動態学的パラメータの測定
体重８−１０ｋｇの３個体の雄のカニクイザルを用いた。実験の間、動物は固形飼料と水に正常に接近できようにした。薬物投与時の動物体重及び動物の有害反応を記録した。試験物質は、Ｉ-６の１０ｍｇ／ｋｇの相当用量で、ヒプロメロース (2910, 50 cps), USP, ポリソルベート８０, NF, ベンジルアルコール, NF (5.0, 4.0及び9.0 mg/mL) 及び精製水 (1.0 mLにするための十分量)を含む水性懸濁剤として製剤され、０．５ｍＬ／ｋｇが経管栄養により経口投与された。血液試料は(０．５−１．０ｍＬ)は０、０．０８３、０．２５、０．５、１、３、５、８及び２４時に採取した。試料操作及び分析はラット実験で記載したとおりに実施した。５ｍＬの尿試料を各サルから投与前に、及び０−８時に採取した。尿試料は−８０℃に保管し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで解析した。標準曲線はＮａＦとシュウ酸カリウムを含むブランクのサル血漿で調製した。
【００６１】
（実施例７）
Ｃａｃｏプロトコル
材料：
Krebs-Henseleitバッファー、塩化カルシウム二水和物、及び重炭酸ナトリムの粉末はシグマ（セントルイス、ＭＯ）から購入した。Ｃａｃｏ-２細胞はロッシュバーゼルから入手した。DMEM/high培地、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタン-スルホン酸(HEPES)、及びウシ血清はＪＲＢバイオサイエンス（レネクサ, ＫＳ）から入手した。MEM 可欠アミノ酸、Ｌ-グルタミン、ペニシリン、及びストレプトマイシンはGIBCO Labs, Life Tech. LLC (グランドアイランド, NY)から入手した。スナップウェル細胞培養インサート(直径6.5 mm、1.12 cm2、孔サイズ0.4m)はコスター（Cambridge, MA）から入手した。
細胞培養：
細胞は７５-ｃｍ２フラスコで増殖させ、３７℃で、５％ＣＯ２及び９５％空気の雰囲気中で維持した。培養培地は、５％ウシ血清、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％ＭＥＭ可欠アミノ酸、１％Ｌ-グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００ｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したDMEM/high培地からなる。培養は、１−３のスプリット比で毎週、継代した。透過性解析用に、継代数１１０−１２０のＣａｃｏ-２細胞をスナップウェルインサートのトランスウェルポリカーボネートフィルター上に４００，０００細胞／ｃｍ２の密度で撒き、使用前７日間培養した。
Krebs-Henseleit バッファー： 
１０ｍＭグルコース及び２．５ｍＭのＣａＣＬ２を含むｐＨ６．５及び７．４のKrebs-Henseleit重炭酸バッファーを同封の指示書に従って調製した。粉状塩は、必要量の約９０％のミリポア水に定量的に溶解した。塩化カルシウム及び重炭酸ナトリウムは１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨによるｐＨ調節前に加えた。追加のミリポア水を加えて、溶液を最終量にした。溶液は０．２２ミクロンの孔隙率を有する膜を使用して濾過によって滅菌し、使用まで冷蔵庫（〜２０℃）で保管した。
細胞の調製：
分化した細胞は細胞培養コア施設から入手し、３７℃で、５％ＣＯ２及び９５％空気の雰囲気中で平衡化させた。Ｃａｃｏ−２単層を含むスナップウェルインサートは３７℃の平衡化Krebs-Henseleit ｐＨ７．４バッファーですすいだ。
方法：
細胞インサートは拡散チャンバーとして利用した。頂部および底側部チャンバーのKrebs-HenseleitバッファーのｐＨはそれぞれ６．５及び７．４であり、頂部側の初期濃度は１００ｍＭであった。頂部チャンバーの試験化合物を有する細胞は、３７℃で、５％ＣＯ２及び９５％空気の雰囲気中で約３０分間、予備インキュベーションした。実験は、ｐＨ６．５のKrebs-Henseleitバッファー中の１００μＭの化合物を有する細胞インサートを、底側部チャンバーの予備平衡化バッファーを有する新しいプレート中に移すことで、開始した。０分時の供与側、３０分時の供与側と受取側の両方からの試料を解析した。
実験後のコントロール：
ルシファーイエローは、拡散系の機能を評価するために使用した。試験化合物の最終サンプリングに続いて、ルシファーイエローは初期濃度１００Ｍを与えるように頂部チャンバーに加えた。６０分のインキュベーション後、２５０ｍＬを底側部チャンバーから取って、解析した。
透過係数（Ｐａｐｐ）の計算：
Ｐａｐｐは以下の式を使用して計算した：
2009518354.tif 000015
上式中、Ｖは受取溶液の用量（ｃｍ３）であり、Ａはスナップインサートの表面積（ｃｍ２）であり、Ｃｏは初期濃度(ｎＭ)であり、及びｄＣ／ｄｔは時間による受取チャンバーの濃度の変化、すなわち受取チャンバーv.s.時間における濃度勾配(ｎＭ／ｍｉｎ)である。各サンプリング時点の濃度は、実験によって除去したアリコート又は新しいプレートへの供与インサートの移動を補うために補正した。
【００６２】
（実施例８）
複数の経路を介して投与される目的の化合物の医薬組成物は実施例８に記載の通り調製された。
経口投与用の湿潤顆粒の組成（Ａ）：
2009518354.tif 000016
成分は混合され、顆粒化され、約５００ｍｇの活性化合物を含有する硬ゼラチンカプセルに製剤される。
経口投与用組成物（Ｂ）：
2009518354.tif 000017
成分は水のような溶媒を使用して組合わされ、顆粒化される。製剤はその後乾燥されて、適切な錠剤機で約５００ｍｇの活性化合物を含有する錠剤に製剤される。  
経口投与用組成物（Ｃ）
2009518354.tif 000018
成分は経口投与用懸濁剤を調製するために混合される。
座薬製剤（Ｄ）：
2009518354.tif 000019
成分は共に溶解され、スチームバス上で混合され、総重量２．５ｇを含むように型に注入される。
【００６３】
先の記載又は請求の範囲で開示された特徴は、該特徴を必要に応じて別々に又は任意の組み合わせによって本発明を多様な形態で実現するために利用されてもよい特異的形態又は開示された機能を実行する手段に関して、又は開示された結果を達成するための方法又はプロセスを表す。
以上の発明は図示及び例によって、明確性と理解の目的で、詳細に記載されている。添付の請求項の範囲内で実施されてもよい変更と修飾は当業者にとって明確である。そのため、上の記載は制限的でなく例示である。そのため、発明の範囲は上の記載の参照なしに決定されるべきであって、代わりに添付の請求の範囲を参照して決定されるべきであり、該請求の範囲は均等の全範囲にまでわたるものである。
本願で引用した全特許、特許出願及び公報は、それぞれ特許、特許出願又は公報が個々に記載されたものとして、本願明細書に完全に援用される。