【手続補正書】
【提出日】平成23年3月16日(2011.3.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における脈管の損傷を修復するための無菌の薬理組成物であって、
脈管の損傷が疾病による急性心筋梗塞であり、該対象が脈管再生された患者であり、
該無菌の薬理組成物が、下記(a)及び(b)を含み：
(a) 治療上有効な量の、無菌の化学走性造血幹細胞生成物、ここで該化学走性造血幹細胞生成物は、CD34+細胞に富む、自己由来の単核細胞の増殖されていない単離された集団であって、CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を更に含む集団を含む、および
(b) 安定化量の血清、ここで安定化量とは、20%(v/v)よりも高いことを意味する、
更に、カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性を持つ幹細胞生成物を取得した後、少なくとも24時間にわたって、
（i）少なくとも70％の細胞がCD34+細胞であり、
（ii）CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を含み、
（iii）少なくとも70％が生存を示し、及び
（iv）インビトロにおいて造血コロニーを形成することができることを特徴とする、上記薬理組成物。
【請求項２】
カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性造血幹細胞生成物を取得した後、少なくとも24時間にわたって、
(v)CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団のCXCR-4仲介化学走性活性の少なくとも2％を維持する、請求項１記載の薬理組成物。
【請求項３】
カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性を持つ幹細胞生成物を取得した後、少なくとも48時間にわたって、
(i)インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有し、
(ii)CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団のCXCR-4仲介化学走性活性の少なくとも2％を維持する、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性を持つ幹細胞生成物を取得した後、、少なくとも72時間にわたって、
(i)インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有し、
(ii)CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団のCXCR-4仲介化学走性活性の少なくとも2％を維持する、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
該化学走性造血幹細胞生成物が、自己骨髄吸引物の細胞性成分から精製されたものである、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
治療上有効量の化学走性造血幹細胞生成物が、CXCR-4仲介化学走性活性を有する、少なくとも0.5×106個のCD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
該組成物が、該カテーテルを通して、梗塞関連動脈に、血管内投与されるように処方されることを特徴とする、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
該カテーテルが、流量調節型カテーテルである、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
該カテーテルが、バルーン式カテーテルである、請求項７記載の組成物。
【請求項１０】
該カテーテルが、少なくとも約0.36mmなる内径を持つ、請求項７記載の組成物。
【請求項１１】
該組成物が、該カテーテルを通して、心筋に投与されるように処方されることを特徴とする、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
該薬理組成物が、更に(c)少なくとも1種の適合性活性薬剤をも含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
該化学走性造血性幹細胞生成物の無菌性が、以下の諸工程を含む方法によって確認されるものであることを特徴とする、請求項１記載の無菌の薬理組成物：
(a) 該細胞生成物を遠心分離処理して、(i)CD34+細胞に富む、単核細胞の単離された集団を含有するペレットを含む、分離された細胞生成物、および(ii)上澄を生成する工程；
(b) 該分離された細胞生成物の細胞ペレットを乱すことなしに、該分離された細胞生成物の上澄を取出す工程；
(c) 該分離された細胞生成物の上澄の、無菌性を分析し、それにより、化学走性造血細胞生成物を消耗することなく、該分離された細胞生成物の、該細胞ペレットの無菌性を決定する工程。
【請求項１４】
請求項１に記載の薬理組成物を製造する方法であって、
(a) 無菌条件下で、対象から、CD34+細胞と、CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団とを含む化学走性細胞製剤を取得する工程；
(b) 場合により、製剤(a)を処理設備に輸送する工程；
(c) 製剤(a)から、CXCR-4仲介化学走性活性を持ちかつCD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を含む、CD34+単核細胞の単離された集団を含む化学走性造血幹細胞生成物を得るように、CD34+細胞を無菌的に精製する工程；
ここで、工程(c)は取得工程（a）の完了後、約12〜24時間以内に開始する；
(d) 該化学走性造血幹細胞生成物の無菌性を確認する工程；
(e) 該化学走性造血幹細胞生成物を無菌的に製剤化し、薬理組成物を製造する工程；
ここで前記製剤化は、少なくとも20％(v/v)の血清と化学走性造血幹細胞生成物とを組み合わせることを含み、
(f) 該化学走性造血幹細胞生成物を消耗することなく、該薬理組成物の無菌性を確認する工程；
(g) 該対象に注入するのに適したものとして、該無菌薬理組成物を放出する工程；
ここで、工程（a）の完了後、少なくとも約48時間以内に、対象に対して無菌薬理組成物の注入をすべき場合にのみ工程(g)を行う；
(h) 該薬理組成物の治療上有効な量を、脈管内放出装置に予め装填する工程；および
(i) 場合により、該治療上有効な量の該無菌薬理組成物を含む該放出装置を、該対象に脈管内投与するための、心臓カテーテル処置設備に輸送する工程、
を含む、上記製造方法。
【請求項１５】
場合によって、更に工程(a)と(b)との間で、該取得した製剤を保存する段階をも含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
該化学走性造血幹細胞製剤の取得工程(a)が、微細-骨髄収穫技術である、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
該微細-骨髄収穫技術が、更に以下の諸工程：
(i) 該対象から骨髄を収穫するのに先立って、収穫用シリンジに、予めヘパリンを装入する工程；
(ii) 該対象の左後部腸骨稜および右後部腸骨稜から、該収穫用シリンジおよび微細-骨髄収穫技術を利用して、該骨髄を吸入して、収穫した骨髄を形成する工程；および
(iii) 該収穫した骨髄を、収集バッグに注入する工程；
を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
該輸送工程(b)が、更に以下の諸工程：
(i) 取得した化学走性造血幹細胞製剤を収集バッグに収容する工程；
(ii) 該収集バッグを、第二のバッグに収容する工程；
(iii) 開放式搬送容器を用意する工程；
(iv) 該収集バッグを含む該第二のバッグを、開放式搬送容器内に収容する工程；
(v) 該搬送容器を封止する工程；および
(vi) 該搬送容器を上記処理設備に搬送する工程；
をも含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
該薬理組成物の無菌性を確認する工程(f)が、更に以下の諸工程：
(i) 該処方された細胞生成物を遠心分離処理に掛けて、(a')CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を含む、CD34+単核細胞の単離された集団を含む、細胞ペレットを含有する、分離された細胞生成物および(b')上澄を製造する工程；
(ii) 該分離された細胞生成物の該上澄を、該分離された細胞生成物の該細胞ペレットを乱すことなしに、無菌的に取出す工程；
(iii) 該分離された細胞生成物の該上澄が、微生物により汚染されているか否かを分析し、それにより幹細胞生成物を消耗することなしに該分離された細胞生成物の該細胞ペレットの無菌性を決定する工程；
を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２０】
治療上有効量の工程(h)の薬理組成物が、CXCR-4仲介化学走性活性を有する、少なくとも0.5×106個のCD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２１】
工程(h)において予め装填された該脈管内放出装置が、
(i) 無菌四方型ストップコックに取付けられた注入シリンジ、；
(ii) 該無菌四方型ストップコックに取付けられた、洗浄溶液を含有する洗浄シリンジ；および
(iii) 該薬理組成物を該対象に放出するための、該無菌四方型ストップコックによって、該放出装置に取付けられたカテーテル；
を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２２】
該カテーテルが、流量調節カテーテルである、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
該カテーテルが、バルーン膨張式カテーテルである、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
該カテーテルが、少なくとも約0.36mmなる内径を持つ、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
脈管の損傷を治療及び／又は予防処置するための薬剤の製造における、化学走性造血幹細胞生成物を含む無菌の薬理組成物の使用であって、
脈管の損傷が疾病による急性心筋梗塞であり、
前記処置が、カテーテルを介して、治療上有効な量の無菌の薬理組成物を投与することを含み、前記投与が、梗塞形成領域における炎症性サイトカインのカスケード生産のピーク後であって、前記梗塞形成領域に心筋の瘢痕形成完了前の特定の間隔で行われ、
前記化学走性造血幹細胞生成物が、
(a) 増殖されていない単離された、CD34+細胞に富む自己由来の単離された単核細胞の集団であって、CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を更に含む集団、および
(b) 安定化量の血清、ここで安定化量とは、20%(v/v)よりも高いことを意味する、
を含み、
前記無菌の薬理組成物が、カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性を持つ幹細胞生成物を取得した後、少なくとも24時間にわたって、
（i）少なくとも70％の細胞がCD34+細胞であり、
（ii）CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を含み、
（iii）少なくとも70％が生存率を示し、かつ
（iv）インビトロにおいて造血コロニーを形成することができることを特徴とする薬理組成物である、上記使用。
【請求項２６】
前記無菌の薬理組成物が、カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性造血幹細胞生成物を取得した後、少なくとも24時間にわたって、
(v)CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団のCXCR-4仲介化学走性活性の少なくとも2％を維持する、請求項２５記載の使用。
【請求項２７】
前記化学走性造血幹細胞生成物が、カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性を持つ幹細胞生成物を取得した後、少なくとも48時間にわたって、
(i)インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有し、
(ii)CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団のCXCR-4仲介化学走性活性の少なくとも2％を維持する、請求項２５記載の使用。
【請求項２８】
前記化学走性造血幹細胞生成物が、カテーテル通過後、インビトロ試験を行うと、化学走性活性を持つ幹細胞生成物を取得した後、少なくとも72時間にわたって、
(i)インビトロにおいて造血コロニーを形成する能力を有し、
(ii)CXCR-4仲介化学走性活性を有し、CD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団のCXCR-4仲介化学走性活性の少なくとも2％を維持する、請求項２５記載の使用。
【請求項２９】
治療上有効量の化学走性造血幹細胞生成物が、CXCR-4仲介化学走性活性を有する、少なくとも0.5×106個のCD34+/CXCR-4+の能力を有する細胞亜集団を含む、請求項２５記載の使用。
【請求項３０】
該非経口投与が、該カテーテルを通して、梗塞関連動脈に、該無菌の薬理組成物を血管内投与し、カテーテルが血管内放出装置の一部であることを特徴とする、請求項２５記載の使用。
【請求項３１】
該脈管内放出装置が、
(i) 無菌四方型ストップコックに取付けられた、薬理組成物を含む注入シリンジ；
(ii) 該無菌四方型ストップコックに取付けられた、洗浄溶液を含有する洗浄シリンジ；および
(iii) 該薬理組成物を該対象に放出するための、該無菌四方型ストップコックにより該放出装置に取付けられたカテーテル；
を含む、請求項３０記載の使用。
【請求項３２】
該カテーテルが、流量調節型カテーテルである、請求項２５記載の使用。
【請求項３３】
該カテーテルが、バルーン式カテーテルである、請求項２５記載の使用。
【請求項３４】
該カテーテルが、少なくとも約0.36mmなる内径を持つ、請求項２５記載の使用。
【請求項３５】
該特定の間隔は、梗塞形成後少なくとも5日であり、かつ梗塞形成後14日未満である、請求項２５記載の使用。
【請求項３６】
該無菌の薬理組成物が、該カテーテルを通して、心筋に投与されることを特徴とする、請求項２５記載の使用。
【請求項３７】
該無菌の薬理組成物が、更に(c)少なくとも1種の適合性活性薬剤を含む、請求項２５記載の使用。
【請求項３８】
少なくとも１つの相溶性の活性成分が、アンギオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤、β-遮断剤、利尿剤、抗-不整脈薬、抗-狭心症薬、血管作動薬、抗-凝血薬、フィブリン溶解剤、および高コレステロール血症薬からなる群から選択される、請求項３７記載の使用。