【手続補正書】
【提出日】平成23年9月22日(2011.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的核酸を検出するためのオリゴヌクレオチドのセットであって、該オリゴヌクレオチドのセットが、
ａ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第１オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’配列が前記標的核酸の第１部分と少なくとも８０％同一であり、蛍光部分が前記第１オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第１オリゴヌクレオチドと、
ｂ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第２オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’ヌクレオチド配列が前記標的核酸の第２部分と少なくとも８０％同一であり、アクセプター部分が前記第２オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第２オリゴヌクレオチドと、を含み、
前記第１オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％同一であり、各前記オリゴヌクレオチドの３’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドに結合する前記蛍光部分と又は前記第２オリゴヌクレオチドに結合する前記アクセプター部分と適合する、蛍光部分又はアクセプター部分では標識されない、オリゴヌクレオチドのセット。
【請求項２】
生体サンプル中の標的核酸の存在又は非存在を検出するための方法であって、該方法が、
（ａ）前記標的核酸が前記サンプル中に存在する場合、蛍光で標識されたアンプリコンを生成するために前記生体サンプルをオリゴヌクレオチドのセットと接触させる工程であって、前記オリゴヌクレオチドのセットが、
ｉ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第１オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’配列が前記標的核酸の第１部分と少なくとも８０％同一であり、蛍光部分が前記第１オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第１オリゴヌクレオチドと、
ｉｉ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第２オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’ヌクレオチド配列が前記標的核酸の第２部分と少なくとも８０％同一であり、アクセプター部分が前記第２オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第２オリゴヌクレオチドと、を含み、前記第１オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％同一であり、各前記オリゴヌクレオチドの３’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドに結合する前記蛍光部分と又は前記第２オリゴヌクレオチドに結合する前記アクセプター部分と適合する、蛍光部分又はアクセプター部分では標識されない、オリゴヌクレオチドのセットである、接触させる工程と、
（ｂ）前記アンプリコンの蛍光を検出する工程と、を含む方法。
【請求項３】
生体サンプル中の少なくとも２つの標的核酸の存在又は非存在を検出するための方法であって、該方法が、
（ａ）前記標的核酸が前記サンプル中に存在する場合、２つの蛍光で標識されたアンプリコンを生成するために前記生体サンプルをオリゴヌクレオチドのセットと接触させる工程であって、前記オリゴヌクレオチドのセットが、
ｉ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第１オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’配列が前記第１標的核酸の第１部分と少なくとも８０％同一であり、蛍光部分が前記第１オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第１オリゴヌクレオチドと、
ｉｉ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第２オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’ヌクレオチド配列が前記第１標的核酸の第２部分と少なくとも８０％同一であり、アクセプター部分が前記第２オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列内で結合し、前記第１オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％同一である、第２オリゴヌクレオチドと、
ｉｉｉ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第３オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第３オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’配列が前記第２標的核酸の第１部分と少なくとも８０％同一であり、蛍光分子が前記第３オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第３オリゴヌクレオチドと、
ｉｖ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第４オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第４オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’ヌクレオチド配列が前記第２標的核酸の第２部分と少なくとも８０％同一であり、アクセプター分子が前記第４オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列内で結合する、第４オリゴヌクレオチドと、を含み、前記第３オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列が、前記第４オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％同一であり、各前記オリゴヌクレオチドの３’ヌクレオチド配列が、前記第１若しくは第３オリゴヌクレオチドに結合する前記蛍光部分と又は前記第２若しくは第４オリゴヌクレオチドに結合する前記アクセプター部分と適合する、蛍光部分又はアクセプター部分では標識されない、オリゴヌクレオチドのセットである、接触させる工程と、
（ｂ）前記アンプリコンの蛍光を検出する工程と、を含む方法。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドのセットを含む、核酸を検出するためのキットであって、前記オリゴヌクレオチドのセットが、
ａ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第１オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’配列が前記標的核酸の第１部分と少なくとも８０％同一であり、蛍光部分が前記第１オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第１オリゴヌクレオチドと、
ｂ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第２オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’ヌクレオチド配列が前記標的核酸の第２部分と少なくとも８０％同一であり、アクセプター部分が前記第２オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第２オリゴヌクレオチドと、を含み、前記第１オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％同一であり、各前記オリゴヌクレオチドの３’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドに結合する前記蛍光部分と又は前記第２オリゴヌクレオチドに結合する前記アクセプター部分と適合する、蛍光部分又はアクセプター部分では標識されない、オリゴヌクレオチドのセットである、キット。
【請求項５】
ポリメラーゼ連鎖反応を蛍光に基づいて監視するための反応混合物であって、前記反応混合物が、オリゴヌクレオチドのセット、ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮＴＰ及びＭｇＣｌ２を含み、前記オリゴヌクレオチドのセットが、
ａ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第１オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’配列が前記標的核酸の第１部分と少なくとも８０％同一であり、蛍光部分が前記第１オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第１オリゴヌクレオチドと、
ｂ）５’及び３’ヌクレオチド配列を含む第２オリゴヌクレオチドであって、前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記３’ヌクレオチド配列が前記標的核酸の第２部分と少なくとも８０％同一であり、アクセプター部分が前記第２オリゴヌクレオチドの５’ヌクレオチド配列内で結合する、第２オリゴヌクレオチドと、を含み、前記第１オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列が、前記第２オリゴヌクレオチドの前記５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％同一であり、各前記オリゴヌクレオチドの３’ヌクレオチド配列が、前記第１オリゴヌクレオチドに結合する前記蛍光部分と又は前記第２オリゴヌクレオチドに結合する前記アクセプター部分と適合する、蛍光部分又はアクセプター部分では標識されない、オリゴヌクレオチドのセットである、反応混合物。
【請求項６】
前記アンプリコンのセンス鎖の５’ヌクレオチド配列は、前記アンプリコンのアンチセンス鎖の５’ヌクレオチド配列の相補体と少なくとも８０％の同一性を有し、前記５’ヌクレオチド配列は前記アンプリコンの各鎖の５’端で始まる、５〜２３ヌクレオチドの長さの配列であり、前記アンプリコンの一方の鎖の前記５’ヌクレオチド配列は蛍光部分で標識され、前記アンプリコンのもう一方の鎖の前記５’ヌクレオチド配列は適合性アクセプター部分で標識される、蛍光で標識されたアンプリコン。