【手続補正書】
【提出日】平成23年1月28日(2011.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化５５】
2010520855.tif 000001
［式中、
αは、１≦α≦７の整数であり；
βは、１≦β≦７の整数であり；
δは、２≦δ≦５の整数であり；
Ａは、ＣＯ2Ｈ、活性化ＣＯ2Ｈ、ＮＨ2、ＮＣＯ、ＣＨＯ、マレイミドまたはビニルスルホンのいずれかであり；
Ｅは、ＮＨ2、ＣＯ2Ｈ、ＣＨＯ、マレイミドまたはＮＨＢｏｃのいずれかである］
を有するリンカー部分化合物。
【請求項２】
α＝β＝１または２であり；
δ＝３であり；
Ａが、ＣＯ2Ｈまたは活性化ＣＯ2Ｈのいずれかであり；
Ｅが、ＮＨＢｏｃである、請求項１に記載のリンカー部分化合物。
【請求項３】
以下の構造：
【化５６】
2010520855.tif 000002
［式中、
κは、０≦κ≦８の整数であり；
ρは、０≦ρ≦８の整数であり；
τは、２≦τ≦５の整数であり；
Ａは、ＮＨＲまたはＮＲＢｏｃのいずれかであり；
Ｒは、アルキルであり；
Ｅは、ＮＨ2、ＣＯ2Ｈ、活性化ＣＯ2Ｈ、ＣＨＯ、マレイミドまたはＮＲＢｏｃのいずれかであり、ここで、Ｒは、Ｈまたはアルキルである］
を有するリンカー部分化合物。
【請求項４】
κ＝ρ＝０であり；
τ＝３であり；
Ａが、ＮＨＢｏｃであり；
Ｒが、ＣＨ3であり；
Ｅが、ＣＯ2ＨまたはＣＯＮＨＳである、請求項３に記載のリンカー部分化合物。
【請求項５】
以下の構造：
【化５７】
2010520855.tif 000003
［式中、
χは、１≦χ≦４の整数であり；
φは、１≦φ≦４の整数であり；
γは、２≦γ≦８の整数であり；
ηは、２≦η≦８の整数であり；
Ａは、ＣＯ2Ｈ、活性化ＣＯ2Ｈ、ＮＨ2、ＮＣＯ、ＣＨＯ、マレイミドまたはビニルスルホンのいずれかであり；
Ｂは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｃは、ＣＯ（ＣＨ2）σＣＯまたは（ＣＨ2）σのいずれかであり；
Ｄは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｅは、ＮＨ2、ＮＨＢｏｃ、ＣＯ2Ｈ、ＣＨＯまたはマレイミドのいずれかであり；
σは、２≦σ≦５の整数である］
を有するリンカー部分化合物。
【請求項６】
χ＝１であり；
φ＝１であり；
γが、２≦γ≦３の整数であり；
ηが、２≦η≦３の整数であり；
Ａが、ＣＯ2Ｈまたは活性化ＣＯ2Ｈのいずれかであり；
Ｂが、Ｎであり；
Ｃが、ＣＯ（ＣＨ2）σＣＯまたは（ＣＨ2）σであり；
Ｄが、Ｎであり；
Ｅが、ＮＨＢｏｃであり；
σが、２≦σ≦３の整数である、請求項５に記載のリンカー部分化合物。
【請求項７】
以下の構造：
【化５８】
2010520855.tif 000004
［式中、
λは、１≦λ≦４の整数であり；
μは、１≦μ≦４の整数であり；
Ａは、ＣＯ2Ｈ、活性化ＣＯ2Ｈ、ＮＨ2、ＮＣＯ、ＣＨＯ、マレイミドまたはビニルスルホンのいずれかであり；
Ｂは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｇは、（ＣＨ2）ν、ＣＯまたはＣＯＣＨ2ＯＣＨ2ＣＯのいずれかであり；
Ｅは、ＮＨ2、ＮＨＢｏｃ、ＣＯ2Ｈ、ＣＨＯまたはマレイミドのいずれかであり；
Ｘは、ＣＯ、結合またはＣＯＮＨのいずれかであり；
Ｙは、ＣＯ、結合またはＮＨＣＯのいずれかであり；
νは、２≦ν≦４の整数である］
を有するリンカー部分化合物。
【請求項８】
λが、１≦λ≦３の整数であり；
μ＝２であり；
Ａが、ＣＯ2Ｈまたは活性化ＣＯ2Ｈのいずれかであり；
Ｂが、Ｎであり；
Ｇが、（ＣＨ2）ν、ＣＯまたはＣＯＣＨ2ＯＣＨ2ＣＯのいずれかであり；
Ｅが、ＮＨまたはＮＨＢｏｃであり；
Ｘが、ＣＯまたは結合であり；
Ｙが、ＣＯまたは結合であり；
ν＝２である、請求項７に記載のリンカー部分化合物。
【請求項９】
ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化５９】
2010520855.tif 000005
［式中、
αは、１≦α≦７の整数であり；
βは、１≦β≦７の整数であり；
δは、２≦δ≦５の整数であり；
Ａは、ＣＯ、ＮＨ、ＮＣＯ、ＳＯ2ＣＨ2ＣＨ2のいずれかであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯのいずれかである］
を有する化合物。
【請求項１０】
α＝β＝１または２であり；
δ＝３であり；
Ａが、ＣＯであり；
Ｅが、ＮＨである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
（ａ）ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６０】
2010520855.tif 000006
［式中、
αは、１≦α≦７の整数であり；
βは、１≦β≦７の整数であり；
δは、２≦δ≦５の整数であり；
Ａは、ＣＯ、ＮＨ、ＮＣＯ、ＳＯ2ＣＨ2ＣＨ2のいずれかであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯのいずれかである］
を有する化合物と、
（ｂ）１種または複数の製薬上許容される希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と
を含む薬剤組成物。
【請求項１２】
α＝β＝１または２であり；
δ＝３であり；
Ａが、ＣＯであり；
Ｅが、ＮＨである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６１】
2010520855.tif 000007
［式中、
κは、０≦κ≦８の整数であり；
ρは、０≦ρ＜８の整数であり；
τは、２≦τ≦５の整数であり；
Ａは、ＮＨまたはＮＲであり；
Ｒは、アルキルであり；
Ｅは、ＮＨ、ＣＯまたはＮＲのいずれかであり、ここで、Ｒは、Ｈまたはアルキルである］
を有する化合物。
【請求項１４】
κ＝ρ＝０であり；
τ＝３であり；
Ａが、ＮＨＲまたはＮＲのいずれかであり；
Ｒが、ＣＨ3であり；
Ｅが、ＣＯである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
（ａ）ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６２】
2010520855.tif 000008
［式中、
κは、０≦κ≦８の整数であり；
ρは、０≦ρ＜８の整数であり；
τは、２≦τ≦５の整数であり；
Ａは、ＮＲであり；
Ｒは、アルキルであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯ2のいずれかである］
を有する化合物と、
（ｂ）１種または複数の製薬上許容される希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と
を含む薬剤組成物。
【請求項１６】
κ＝ρ＝０であり；
τ＝３であり；
Ａが、ＮＲであり；
Ｒが、ＣＨ3であり；
Ｅが、ＣＯである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６３】
2010520855.tif 000009
［式中、
χは、１≦χ≦４の整数であり；
φは、１≦φ≦４の整数であり；
γは、２≦γ≦８の整数であり；
ηは、２≦η≦８の整数であり；
Ａは、ＣＯ、ＮＨ、ＮＣＯまたはＳＯ2ＣＨ2ＣＨ2のいずれかであり；
Ｂは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｃは、ＣＯ（ＣＨ2）σＣＯまたは（ＣＨ2）σであり；
Ｄは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯのいずれかであり；
σは、２≦σ≦５の整数である］
を有する化合物。
【請求項１８】
χ＝１であり；
φ＝１であり；
γが、２≦γ≦３の整数であり；
ηが、２≦η≦３の整数であり；
Ａが、ＣＯであり；
Ｂが、Ｎであり；
Ｃが、ＣＯ（ＣＨ2）σＣＯまたは（ＣＨ2）σであり；
Ｄが、Ｎであり；
Ｅが、ＮＨであり；
σが、２≦σ≦３の整数である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
（ａ）ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６４】
2010520855.tif 000010
［式中、
χは、１≦χ≦４の整数であり；
φは、１≦φ≦４の整数であり；
γは、２≦γ≦８の整数であり；
ηは、２≦η≦８の整数であり；
Ａは、ＣＯ、ＮＨ、ＮＣＯまたはＳＯ2ＣＨ2ＣＨ2のいずれかであり；
Ｂは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｃは、ＣＯ（ＣＨ2）σＣＯまたは（ＣＨ2）σであり；
Ｄは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯのいずれかであり；
σは、２≦σ≦５の整数である］
を有する化合物と、
（ｂ）１種または複数の製薬上許容される希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と
を含む薬剤組成物。
【請求項２０】
χ＝１であり；
φ＝１であり；
γが、２≦γ≦３の整数であり；
ηが、２≦η≦３の整数であり；
Ａが、ＣＯであり；
Ｂが、Ｎであり；
Ｃが、ＣＯ（ＣＨ2）σＣＯまたは（ＣＨ2）σであり；
Ｄが、Ｎであり；
Ｅが、ＮＨであり；
σが、２≦σ≦３の整数である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６５】
2010520855.tif 000011
［式中、
λは、１≦λ≦４の整数であり；
μは、１≦μ≦４の整数であり；
Ａは、ＣＯ、ＮＨ、ＮＣＯまたはＳＯ2ＣＨ2ＣＨ2のいずれかであり；
Ｂは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｇは、（ＣＨ2）ν、ＣＯまたはＣＯＣＨ2ＯＣＨ2ＣＯであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯのいずれかであり；
Ｘは、ＣＯ、結合またはＣＯＮＨのいずれかであり；
Ｙは、ＣＯ、結合またはＮＨＣＯのいずれかであり；
νは、２≦ν≦４の整数である］
を有する化合物と、
（ｂ）１種または複数の製薬上許容される希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体。
【請求項２２】
λが、１≦λ≦３の整数であり；
μ＝２であり；
Ａが、ＣＯであり；
Ｂが、Ｎであり；
Ｇが、（ＣＨ2）ν、ＣＯまたはＣＯＣＨ2ＯＣＨ2ＣＯであり；
Ｅが、ＮＨであり；
Ｘが、ＣＯまたは結合であり；
Ｙが、ＣＯまたは結合であり；
ν＝２である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
（ａ）ペプチド部分、リンカー部分および水溶性ポリマー部分を含む化合物であって、リンカー部分が、ペプチド部分と水溶性ポリマー部分の間にあり、以下の構造：
【化６６】
2010520855.tif 000012
［式中、
λは、１≦λ≦４の整数であり；
μは、１≦μ≦４の整数であり；
Ａは、ＣＯ、ＮＨ、ＮＣＯまたはＳＯ2ＣＨ2ＣＨ2のいずれかであり；
Ｂは、ＣＨまたはＮのいずれかであり；
Ｇは、（ＣＨ2）ν、ＣＯまたはＣＯＣＨ2ＯＣＨ2ＣＯであり；
Ｅは、ＮＨまたはＣＯのいずれかであり；
Ｘは、ＣＯ、結合またはＣＯＮＨのいずれかであり；
Ｙは、ＣＯ、結合またはＮＨＣＯのいずれかであり；
νは、２≦ν≦４の整数である］
を有する化合物と、
（ｂ）１種または複数の製薬上許容される希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と
を含む薬剤組成物。
【請求項２４】
λが、１≦λ≦３の整数であり；
μ＝２であり；
Ａが、ＣＯであり；
Ｂが、Ｎであり；
Ｇが、（ＣＨ2）ν、ＣＯまたはＣＯＣＨ2ＯＣＨ2ＣＯのいずれかであり；
Ｅが、ＮＨであり；
Ｘが、ＣＯまたは結合であり；
Ｙが、ＣＯまたは結合であり；
ν＝２である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
水溶性ポリマー部分が、ポリ（エチレングリコール）部分である、請求項９から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
ポリ（エチレングリコール）部分の各々の分子量が２０ｋＤａである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
ポリ（エチレングリコール）部分が直鎖である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
ポリ（エチレングリコール）部分の各々が１０〜３０ｋＤａの分子量を有する、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
ポリ（エチレングリコール）部分が、１．２０未満の多分散値（ＭW／Ｍn）を有する、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３０】
ペプチド部分が、単一のペプチドを含むペプチド単量体である、請求項９から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
ペプチド部分が、リンカー部分によって連結された２種のペプチドを含むペプチド二量体である、請求項９から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
各ペプチドが、５０個以下のアミノ酸単量体を含む、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３３】
各ペプチドが、５０個以下のアミノ酸単量体を含む、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３４】
ポリ（エチレングリコール）部分が、少なくとも１つの直鎖ポリ（エチレングリコール）鎖を含む、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３５】
各ポリ（エチレングリコール）鎖が、１０〜３０ｋＤａの分子量を有する、請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
ペプチド部分が、エリスロポエチン受容体と結合する１種または複数のペプチドを含む、請求項９から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
ペプチド部分が、配列番号：１〜２７のうちの１つである、請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｎ末端リジン残基をさらに含み、リジン残基のεアミノ基がリンカー部分化合物と共有結合している、請求項３６に記載の化合物。
【請求項３９】
エリスロポエチン受容体（ＥＰＯ−Ｒ）と結合し、これを活性化する化合物であって、次式：
【化６７】
2010520855.tif 000013
［式中、
（ｉ）ペプチド二量体の各ペプチド単量体において、各アミノ酸は標準一文字略語で示されており、ＡｃＧは、Ｎ−アセチルグリシンであり、１−Ｎａｌは、１−ナフチルアラニンであり、ＭｅＧは、Ｎ−メチルグリシンであり；
（ｉｉ）ペプチド二量体の各ペプチド単量体は、各単量体の２つのシステイン（Ｃ）残基間に分子内ジスルフィド結合を含み；
（ｉｉｉ）ＰＥＧは、合わせて約１０，０００〜約６０，０００ダルトンの分子量を有する、２つの直鎖ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む］
を有する、
ペプチド二量体（配列番号：５）を含む化合物。
【請求項４０】
エリスロポエチン受容体（ＥＰＯ−Ｒ）と結合し、これを活性化する化合物であって、次式：
【化６８】
2010520855.tif 000014
を有する、
ペプチド二量体（配列番号：１６）を含む化合物。
【請求項４１】
エリスロポエチン受容体（ＥＰＯ−Ｒ）と結合し、これを活性化する化合物であって、次式：
【化６９】
2010520855.tif 000015
を有する、
ペプチド二量体（配列番号：１６）を含む化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９８】
［実施例１１］
四官能性リンカーを用いるペプチドのＣ末端二量体化およびその後のＰＥＧ化
以下のコンジュゲート（化合物Ｖ）を、異なるペプチド単量体を用いた（配列Ａｃ−ＧＧＬＹＡＣＨＹＧＰＩＴ（Ｎａｌ）ＶＣＱＰＬＲ（ＭｅＧ）Ｋ、配列番号：２３を用いて）点を除いて、実施例１０の手順に従って調製した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０７】
【化３８】
2010520855.tif 000016
実施例１０のペプチド合成および二量体化手順をたどって、化合物ＩＸ（配列番号：２４のペプチドを出発材料として用いて）を、９５ｍｇの白色固体として調製した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０９】
【化３９】
2010520855.tif 000017
ペプチド合成：
直鎖ペプチドＡｃ−Ｋ−Ｇ−Ｇ−Ｌ−Ｙ−Ａ−Ｃ−Ｈ−Ｍ−Ｇ−Ｐ−Ｉ−Ｔ−１Ｎａｌ−Ｖ−Ｃ−Ｑ−Ｐ−Ｌ−Ｒ−Ｓａｒ−アミド（７−１５ジスルフィド、配列番号：２５）を、実施例３と同様、標準Ｆｍｏｃアミノ酸を用いて調製した。ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／チオアニソール／水の８５／１０／２．５／２．５混合物を用いて、樹脂からのペプチドの切断を実施し、得られたペプチドを、冷エーテルから沈殿させた。ＡＣＮ／水／ＴＦＡ勾配を用いるＣ１８での精製によって、純粋な単量体ペプチドが得られた。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１３】
【化４０】
2010520855.tif 000018
実施例１０のペプチド合成、二量体化およびＰＥＧ化手順をたどって、上記のコンジュゲート（化合物ＸＩ、配列番号：２６を出発材料として用いて）を調製することができる。位置１のグリシンは、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）などの直交（orthogonal）Ｎ末端保護基を用いる。切断および二量体化後、Ａｌｌｏｃ基を、（Ｐｈ3）4Ｐｄを、ＨＯＡｃおよびＮ−メチルモルホリンとともに用いて除去する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１５】
【化４１】
2010520855.tif 000019
実施例１０の手順をたどって、上記のコンジュゲート（化合物ＸＩＩ、配列番号：２７を出発材料として用いて）を調製することができる。位置１６のリジンは、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）などの直交側鎖保護基を用い、位置１のグリジンは、Ａｌｌｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを用いる。切断および二量体化後、２つのＡｌｌｏｃ基を、（Ｐｈ3）4Ｐｄを、ＨＯＡｃおよびＮ−メチルモルホリンとともに用いて除去する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４６】
【化５３】
2010520855.tif 000020
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４８】
【化５４】
2010520855.tif 000021