【手続補正書】
【提出日】平成23年3月17日(2011.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステムおよびループを形成するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド構築物であって、
ループが標的の発現を調節する第１のヌクレオチド配列を含み、
ステムが標的の発現を調節する第２のヌクレオチド配列を含み、
第１のヌクレオチド配列により調節される標的と第２のヌクレオチド配列により調節される標的が同一であっても異なっていてもよいヌクレオチド構築物。
【請求項２】
標的の発現を調節する第２のヌクレオチド配列が、ＲＮＡｉ経路を通じて標的の発現を調節する、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項３】
標的の発現を調節する第１のヌクレオチド配列が、発現のアンチセンス調節を介して前記標的の発現を調節する、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項４】
プロモーターに作動可能に連結された対象の遺伝子をさらに含み、ループが標的の発現を調節するヌクレオチド配列を含んでも含まなくてもよい、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項５】
プロモーターに作動可能に連結された対象の遺伝子がループ内に位置している、請求項４に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項６】
ループ中に１つまたは複数のスプライス部位をさらに含む、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項７】
ループが、標的の発現を調節する２つ以上のヌクレオチド配列を含有する、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項８】
標的の発現を調節する各ヌクレオチド配列が、同一標的の発現を調節してもよく、異なる標的の発現を調節してもよい、請求項７に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項９】
ステムが、標的の発現を調節する２つ以上のヌクレオチド配列を含有する、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１０】
標的の発現を調節する各ヌクレオチド配列が、同一標的の発現を調節してもよく、異なる標的の発現を調節してもよい、請求項９に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１１】
ステムが、１つまたは複数の標的の発現を調節する１つまたは複数のヌクレオチド配列を含有し、ループが、１つまたは複数の標的の発現を調節する１つまたは複数のヌクレオチド配列を含有する、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１２】
ヌクレオチド配列がＰＮＡを含む、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１３】
ＰＮＡが、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシンＰＮＡ、シクロヘキシルＰＮＡ、レトロ−インベルソＰＮＡ、ホスホンＰＮＡ、プロピニルＰＮＡ、およびアミノプロリンＰＮＡからなる群から選択される、請求項１２に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１４】
ヌクレオチド配列が、Ｆｍｏｃおよび／またはｔＢｏｃプロセスにより合成される、請求項１２に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１５】
ヌクレオチド配列が合成塩基を含む、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１６】
合成塩基が、２’−Ｏ−メチル、モルフォリノ、ホスホロチオエート、および閉じ込め塩基からなる群から選択される、請求項１５に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１７】
ヌクレオチド配列が改変された糖を含む、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１８】
改変された糖が、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−アルキルリボース、および２’−Ｏ−アリルリボースからなる群から選択される、請求項１７に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項１９】
標的が、遺伝子、オリゴヌクレオチド配列、および／またはタンパク質である、請求項１に記載のヌクレオチド構築物。
【請求項２０】
プロモーターに作動可能に連結された請求項１に記載のヌクレオチド構築物を含むベクター。
【請求項２１】
プロモーターが、ウイルスプロモーター、レトロウイルスプロモーター、哺乳動物プロモーター、植物プロモーター、細菌プロモーター、構成的プロモーター、調節性プロモーター、真菌プロモーター、酵母プロモーター、および昆虫プロモーターからなる群から選択される、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
植物プロモーターが、アラビドプシス、ヒマワリ、ワタ、ナタネ、トウモロコシ、コムギ、トウゴマ、ヤシ、タバコ、ピーナッツ、モロコシ、サトウキビ、およびダイズにおいて同定されるプロモーターからなる群から選択される、請求項２１に記載のベクター。
【請求項２３】
ベクターが、プラスミド、コスミド、レトロウイルスベクター、アグロバクテリウム、ウイルスベクター、細菌ベクター、酵母ベクター、真核生物ベクター、植物ベクター、および哺乳動物ベクターからなる群から選択される、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２４】
プロモーターに作動可能に連結された請求項１に記載のヌクレオチド構築物のゲノムへの組込みを促進する配列をさらに含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２５】
標的の発現を調節する方法であって、
請求項１に記載のヌクレオチド構築物を細胞に提供すること、および
前記細胞を培養することを含む方法。
【請求項２６】
細胞が、原核生物、真核生物、細菌、アグロバクテリウム、酵母、植物、哺乳動物、およびヒトの細胞からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
植物細胞が、アラビドプシス、ヒマワリ、ワタ、ナタネ、トウモロコシ、コムギ、トウゴマ、ヤシ、タバコ、ピーナッツ、モロコシ、サトウキビ、およびダイズの細胞において同定されるプロモーターからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
標的が、遺伝子、オリゴヌクレオチド配列、および／またはタンパク質である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
標的の発現を調節する方法であって、
請求項２０に記載のベクターを含むベクターを細胞に提供すること、および
前記細胞中の前記ベクターから請求項１に記載のヌクレオチド構築物を発現することを含む方法。
【請求項３０】
標的が、遺伝子、オリゴヌクレオチド配列、および／またはタンパク質である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
細胞が、原核生物、真核生物、細菌、アグロバクテリウム、酵母、植物、哺乳動物、およびヒトの細胞からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
植物細胞が、アラビドプシス、ヒマワリ、ワタ、ナタネ、トウモロコシ、コムギ、トウゴマ、ヤシ、タバコ、ピーナッツ、モロコシ、サトウキビ、およびダイズの細胞からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１に記載のヌクレオチド構築物ならびに薬学的に許容できる担体、希釈剤、および／またはアジュバンドを含む薬物。
【請求項３４】
請求項２０に記載のベクターならびに薬学的に許容できる担体、希釈剤、および／またはアジュバンドを含む薬剤組成物。
【請求項３５】
請求項１に記載のヌクレオチド構築物を含む細胞。
【請求項３６】
細胞が、原核生物、真核生物、細菌、アグロバクテリウム、酵母、植物、哺乳動物、およびヒトの細胞からなる群から選択される、請求項３５に記載の細胞。
【請求項３７】
植物が、アラビドプシス、ヒマワリ、ワタ、ナタネ、トウモロコシ、コムギ、トウゴマ、ヤシ、タバコ、ピーナッツ、モロコシ、サトウキビ、およびダイズからなる群から選択される、請求項３６に記載の細胞。
【請求項３８】
標的を調節するための構築物を作製する方法であって、
塩基対合して構築物中にステム−ループ構造を形成することができる第１と第２の配列と、第１と第２の配列の間に配置された第３の配列とを組み合わせて単一核酸配列にすることを含み、
前記第１と第２の配列が塩基対合すると、ｓｉＲＮＡを生成することができ、前記第３の配列が、第１と第２の配列を互いに安定的に対合させるのに十分な長さであり、
前記第３の配列が、アンチセンス抑制を通じて標的を調節することができる配列を含む、方法。
【請求項３９】
プロモーターに作動可能に連結された対象の遺伝子を含む第４の配列を、第１と第２の配列と組み合わせることをさらに含み、第３の配列が存在しても存在しなくてもよい、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
第４の配列が第１と第２の配列の間に配置されている、請求項３８に記載の方法。