【手続補正書】
【提出日】平成23年1月7日(2011.1.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
宿主細胞の周辺質の中へ関心対象のポリペプチドの分泌をもたらすことのできる組換え発現系で形質転換された宿主細胞を発酵させることであって、前記発酵が、関心対象の前記ポリペプチドが前記宿主細胞の周辺質の中に分泌されるような条件下、発酵培地で行われることと；
連続的な浸透圧ショックを前記発酵培地中に含まれる前記宿主細胞に加えることにより、関心対象のポリペプチドを前記周辺質から抽出することと
を含む、関心対象の組換えポリペプチドを調製するための方法。
【請求項２】
連続的な浸透圧ショックを前記宿主細胞に加えることが、
細胞を含む第１の溶液を準備することと；
第２の溶液を準備することであって；
前記第１の溶液のモル浸透圧濃度が、前記第２の溶液の浸透圧よりも高いことと；
前記第１の溶液を含む第１の流体流を生成することと；
前記第２の溶液を含む第２の流体流を生成することと；
前記第１および第２の流体流を混合して第３の流体流とすることと
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記連続的な浸透圧ショックが、高モル濃度のスラリーと低モル濃度のショックバッファの連続混合を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記高モル濃度のスラリーが、高い糖もしくは塩濃度からなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記低モル濃度のショックバッファが、５〜９のｐＨを有する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞から浸透圧が放出される前または後に熱交換器を運用する(administering)ことをさらに含む、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記細胞から浸透圧が放出される前または後に溶媒を投与する(administering)ことをさらに含む、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記細胞から浸透圧が放出される前または後に化学的処置を施す(administering)ことをさらに含む、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
浸透圧によって細胞にショックを与えるための装置であって、前記装置が、
第１および第２のリザーバと；
第１の溶液中の細胞を含有する前記第１のリザーバと；
第２の溶液を含有する前記第２のリザーバとを備え；
前記第１の溶液は、前記第２の溶液の浸透圧よりも高く；
前記第１の溶液および前記細胞を含む第１の流体流を生成するための手段と；
前記第２の溶液を含む第２の流体流を生成するための手段と；
前記第１および第２の流体流を混合して第３の流体流とするための手段と
を備える、装置。
【請求項１０】
前記第１のリザーバが、バイオリアクターである、請求項９に記載の装置。
【請求項１１】
前記細胞が、微生物細胞、植物細胞、動物細胞、昆虫細胞、真菌細胞、細菌細胞、哺乳類細胞、および酵母細胞からなる群より選択される、請求項９または１０に記載の装置。
【請求項１２】
前記細胞が、シュードモナス属の種(Pseudomonas sp.)、大腸菌(E. coli)、クレブシエラ属の種(Klebsialla sp.)、サッカロマイセス属の種(Saccharomyces sp.)、ピキア属の種(Pichia sp.)、およびハンゼヌラ属の種(Hansenuela sp.)からなる群より選択される、請求項９または１０に記載の装置。
【請求項１３】
前記細胞が、細胞膜周辺腔を有する、請求項９または１０に記載の装置。
【請求項１４】
前記細胞が、関心対象のタンパク質を産生する、請求項９または１０に記載の装置。
【請求項１５】
前記第１の溶液が、前記第１の溶液中に０．５Ｍ〜１０Ｍのモル濃度で存在する第１の溶質セットを含み、前記第１の溶質セットが少なくとも１種類の溶質を含む、請求項９から１４のいずれかに記載の装置。
【請求項１６】
前記第２の溶液が、前記第２の溶液中に０Ｍ〜１Ｍのモル濃度で存在する第２の溶質セットを含み、前記第２の溶質セットが少なくとも１種類の溶質を含む、請求項９から１５のいずれかに記載の装置。
【請求項１７】
前記第２の溶質セットが、グリセロール、糖、または塩を含む、請求項１６に記載の装置。
【請求項１８】
前記糖または前記塩が、グルコース、スクロース、ナトリウムクロライド、ナトリウムスルフェート、ナトリウムホスフェート、ナトリウムニトラート、カリウムクロライド、カリウムスルフェート、カリウムホスフェート、カリウムニトラート、マグネシウムクロライド、マグネシウムスルフェート、マグネシウムホスフェート、マグネシウムニトラート、カルシウムクロライド、カルシウムスルフェート、カルシウムホスフェート、カルシウムニトラート、アンモウニウムスルフェート、およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１７に記載の装置。
【請求項１９】
前記第２の溶質セットが、スクロースまたはナトリウムクロライドを含む、請求項１６に記載の装置。
【請求項２０】
第１の流体流を生成するための前記手段および第２の流体流を生成するための前記手段が、前記第１のリザーバおよび／または第２のリザーバ中の孔に付加された管および／またはパイプを含む、請求項９から１９のいずれかに記載の装置。
【請求項２１】
前記第１および第２の流体流を混合するための前記手段が、Ｔ継手を含む、請求項９から２０のいずれかに記載の装置。
【請求項２２】
前記Ｔ継手が、
第１の入口、第２の入口および出口を備え；
前記第１の入口および前記出口が、実質的に一直線の流路を形成し；
前記第２の入口が、前記実質的に一直線の流路に対してほぼ直角に、前記実質的に一直線の流路への入口をもたらし；
前記第１の流体流が、前記第２の入口を通って前記Ｔ継手に入り；かつ
前記第２の流体流が、前記第１の入口を通って入る、請求項２１に記載の装置。
【請求項２３】
混合器をさらに含む、請求項に９から２２のいずれかに記載の装置。
【請求項２４】
前記混合器がスタティックミキサーを含む、請求項２３に記載の装置。
【請求項２５】
遠心機、フィルター、または熱交換器をさらに含む、請求項９から２４のいずれかに記載の装置。
【請求項２６】
化学的処置の溶媒を添加するための場所をさらに含む、請求項９から２５のいずれかに記載の装置。
【請求項２７】
連続的な浸透圧ショックを発酵培地中に含まれる宿主細胞に加える手段をさらに含む、請求項９から２６のいずれかに記載の装置。
【請求項２８】
浸透圧によって細胞にショックを与える方法であって、前記方法が、
細胞を含む第１の溶液を準備することと；
第２の溶液を準備することとを含み；
前記第１の溶液のモル浸透圧濃度は前記第２の溶液のモル浸透圧濃度よりも高く；
前記第１の溶液を含む第１の流体流を生成することと；
前記第２の溶液を含む第２の流体流を生成することと；
前記第１および第２の流体流を連続的に混合して第３の流体流とすることと
を含む、方法。
【請求項２９】
前記細胞が、微生物細胞、植物細胞、真菌細胞、細菌細胞、哺乳類細胞、および酵母細胞からなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞が、シュードモナス属の種(Pseudomonas sp.)、大腸菌(E. coli)、クレブシエラ属の種(Klebsialla sp.)、サッカロマイセス属の種(Saccharomyces sp):、ピキア属の種(Pichia sp.)、およびハンゼヌラ属の種(Hansenuela sp.)からなる群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞が、細胞膜周辺腔を有し、前記細胞が、関心対象のタンパク質を産生する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１の溶液が、前記第１の溶液中に０．５Ｍ〜１０Ｍのモル濃度で存在する第１の溶質セットを含み、前記第１の溶質セットが少なくとも１種類の溶質を含む、請求項２８から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の溶液が、前記第２の溶液中に０Ｍ〜１Ｍのモル濃度で存在する第２の溶質セットを含み、前記第２の溶質セットが少なくとも１種類の溶質を含む、請求項２８から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記第１の溶質セットまたは前記第２の溶質セットが、糖または塩を含む、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記糖または前記塩が、グルコース、スクロース、グリセロール、ナトリウムクロライド、ナトリウムスルフェート、ナトリウムホスフェート、ナトリウムニトラート、カリウムクロライド、カリウムスルフェート、カリウムホスフェート、カリウムニトラート、マグネシウムクロライド、マグネシウムスルフェート、マグネシウムホスフェート、マグネシウムニトラート、カルシウムクロライド、カルシウムスルフェート、カルシウムホスフェート、カルシウムニトラートアンモウニウムスルフェート、およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記第１および第２の流体流を前記第３の流体流に混合することが、
前記第１の流体流の流路に沿って第１の流路を規定することと；
前記第１の流路と交差し、これまでの前記第１の流路に進まない、前記第１の流路に対してほぼ直角に第２の流路を規定して、前記第１および第２の流路の交点を形成することと；
前記第１および第２の流路の前記交点に接続された第３の流路を規定することであって、前記第３の流路と前記第１の流路が実質的に一直線の流路を形成する、ことと；
前記第１の溶液を前記第２の流路にもたらすことと；
前記第２の溶液を前記第１の流路にもたらすことと；
前記第１および第２の流路の前記交点で、前記第３の流体流が前記第３の流路から出るように、前記第１および第２の溶液を混合することと
を含む、請求項２８から３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記第２の溶液が、前記第１の溶液が前記第１および第２の流路の前記交点にもたらされるよりもより速い速度で、前記第１および第２の流路の前記交点にもたらされる、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
スタティックミキサーで前記第３の流体流を混合することをさらに含む、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記細胞が、関心対象のポリペプチドを産生し、前記細胞の細胞膜周辺腔の中に前記関心対象のポリペプチドを分泌する、請求項２８から３８のいずれかに記載の方法。