【手続補正書】
【提出日】平成23年10月27日(2011.10.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１８】
好ましい本開示の核酸分子は、5B1、5B1a、7D4、7E4、13B8、または3C4モノクローナル抗体のVHおよびVL配列をコードする核酸分子である。5B1、5B1a、7D4、7E4、13B8、および18D5のVH配列をコードするDNA配列をそれぞれ、配列番号：49、50、51、52、53および54に示す。5B1、5B1a、7D4、7E4、13B8、および3C4のVL配列をコードするDNA配列をそれぞれ、配列番号：55、56、57、58、59および60に示す。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４７】
3C4の重鎖可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を、図6Aならびに配列番号：54および63にそれぞれ示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４８】
3C4の軽鎖可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を、図6Bならびに配列番号：60および64にそれぞれ示す。 
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４９】
18D5重鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン重鎖配列との比較により、18D5重鎖が、ヒト生殖細胞系列VH 3-48由来のVHセグメント、ヒト生殖細胞系列1-1由来のDセグメント、およびヒト生殖細胞系列JH 6b由来のJHセグメントを利用していることが実証された。18D5 VH配列の生殖細胞系列VH 3-48配列に対するアラインメントを図7に示す。カバットシステムを用いて18D5 VH配列をさらに分析することによってCDR領域を決定し、図7、ならびに配列番号：18、24および30それぞれに、重鎖CDR1、CDR2、およびCD3領域を図示した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５０】
18D5軽鎖免疫グロブリン配列の、公知のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン重鎖配列との比較により、18D5軽鎖がヒト生殖細胞系列VK L15由来のVLセグメントおよびヒト生殖細胞系列JK 4由来のJKセグメントを利用していることが実証された。18D5 VL配列の生殖細胞系列VK L15配列に対するアラインメントを図8に示す。カバットシステムを用いて18D5 VL配列をさらに分析することによってCDR領域を決定し、図8、ならびに配列番号：36、42および48それぞれに、軽鎖CDR1、CDR2、およびCD3領域を図示した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７１】
配列リスト
2009518050.tif 000001
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７２】
【図１Ａ】5B1ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域の、ヌクレオチド配列(配列番号：49)およびアミノ酸配列(配列番号：1)を示す。CDR1 (配列番号：13)、CDR2 (配列番号：19)およびCDR3 (配列番号：25)領域に線を引き、またV、D、およびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図１Ｂ】5B1ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：55)およびアミノ酸配列(配列番号：7)を示す。CDR1 (配列番号：31)、CDR2 (配列番号：37)およびCDR3 (配列番号：43)領域に線を引き、またVおよびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図２Ａ】5B1aヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：50)およびアミノ酸配列(配列番号：2)を示す。CDR1 (配列番号：14)、CDR2 (配列番号：20)およびCDR3 (配列番号：26)領域に線を引き、またV、D、およびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図２Ｂ】5B1aヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：56)およびアミノ酸配列(配列番号：8)を示す。CDR1 (配列番号：32)、CDR2 (配列番号：38)およびCDR3(配列番号：44)領域に線を引き、またVおよびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図３Ａ】7D4ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：51)およびアミノ酸配列(配列番号：3)を示す。CDR1 (配列番号：15)、CDR2 (配列番号：21)およびCDR3 (配列番号：27)領域に線を引き、またV、D、およびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図３Ｂ】7D4ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：57)およびアミノ酸配列(配列番号：9)を示す。CDR1 (配列番号：33)、CDR2 (配列番号：39)およびCDR3 (配列番号：45)領域に線を引き、またVおよびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図４Ａ】7E4ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：52)およびアミノ酸配列(配列番号：4)を示す。CDR1 (配列番号：16)、CDR2 (配列番号：22)およびCDR3 (配列番号：28)領域に線を引き、またV、D、およびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図４Ｂ】7E4ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：58)およびアミノ酸配列(配列番号：10)を示す。CDR1 (配列番号：34)、CDR2 (配列番号：40)およびCDR3 (配列番号：46)領域に線を引き、またVおよびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図５Ａ】13B8ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：53)およびアミノ酸配列(配列番号：5)を示す。CDR1 (配列番号：17)、CDR2 (配列番号：23)およびCDR3 (配列番号：29)領域に線を引き、またV、D、およびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図５Ｂ】13B8ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：59)およびアミノ酸配列(配列番号：11)を示す。CDR1 (配列番号：35)、CDR2 (配列番号：41)およびCDR3 (配列番号：47)領域に線を引き、またVおよびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図６Ａ】3C4ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：54)およびアミノ酸配列(配列番号：63)を示す。CDR1 (配列番号：65)、CDR2 (配列番号：66)およびCDR3 (配列番号：67)領域に線を引き、またV、D、およびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図６Ｂ】3C4ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のヌクレオチド配列(配列番号：60)およびアミノ酸配列(配列番号：64)を示す。CDR1 (配列番号：68)、CDR2 (配列番号：69)およびCDR3 (配列番号：70)領域に線を引き、またVおよびJ生殖細胞系列由来領域を示す。
【図７】5B1、5B1a、7D4、7E4、13B8、および18D5の重鎖可変領域のアミノ酸配列の、ヒト生殖細胞系列VH3-48アミノ酸配列(配列番号：61)とのアラインメントを示す。
【図８】5B1、5B1a、7D4、7E4、13B8、および18D5の軽鎖可変領域のアミノ酸配列の、ヒトの生殖細胞系列VK L15のアミノ酸配列(配列番号：62)とのアラインメントを示す。
【図９】図9A〜Cは、フコシルGM1に対するヒトモノクローナル抗体が、フコシルGM1に特異的に結合することを実証するELISA実験の結果を示す。
【図１０】図10A〜Cは、フコシルGM1に対するヒトモノクローナル抗体が、フコシルGM1を発現する細胞へ特異的に結合することを実証する全細胞ELISA実験の結果を示す。
【図１１】図11A〜Cは、フローサイトメトリー実験の結果を示し、(AおよびB)は、フコシルGM1に対するヒトモノクローナル抗体が、フコシルGM1を発現している細胞株DMS79およびH-4-II-Eの細胞表面に結合すること、および(C)は、DMS79細胞が、インビボで(すなわちマウス中への移植後に)フコシルGM1を発現し続けると判明したことを示す。
【図１２】図12AおよびBは、フコシルGM1に対するヒトモノクローナル抗体が、フコシルGM1+ 細胞中に内在化することができることを示すHum-Zap内在化実験の結果を示す。
【図１３】図13AおよびBは、ヒトモロクローナル抗フコシルGM1抗体が、フコシルGM1を発現する細胞株(A) DMS79および(B) H-4-II-Eを死滅させることを実証する、補体依存性細胞障害性(CDC)細胞増殖分析の結果を示す。
【図１４】図14AおよびBは、ヒトモロクローナル抗フコシルGM1抗体が、CD16ブロックの非存在下で、フコシルGM1を発現している細胞株を死滅させることを実証する、抗体依存性細胞障害(ADCC)細胞増殖分析の結果を示す。
【図１５】図15A〜Cは、DMS79小細胞肺癌腫瘍細胞(フコシルGM1+)を移植された個々のSCIDマウス中の腫瘍容積を経時的に示す。腫瘍が定着した後に、マウスを次の療法の1つで5回処理した：(A) PBS(媒体対照)；(B) マウス当たり30mg/kgでのヒトIgG1 (アイソタイプ対照)；(C) マウス当たり10mg/kgでの抗フコシルGM1モノクローナル抗体5B1；(D) マウス当たり30mg/kgでの抗フコシルGM1モノクローナル抗体5B1；(E) マウス当たり10mg/kgでの抗フコシルGM1モノクローナル抗体7E4；または(F) マウス当たり30mg/kgでの抗フコシルGM1モノクローナル抗体7E4。処置初日の腫瘍容積は、約200mm3であった。
【図１６】図16AおよびBは、図15に示したマウスの腫瘍容積の平均値および中央値をそれぞれ示す。
【図１７】図15に示したマウスの群平均体重を示す。
【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１Ａ】
2009518050.tif 000002
【図１Ｂ】
2009518050.tif 000003
【図２Ａ】
2009518050.tif 000004
【図２Ｂ】
2009518050.tif 000005
【図３Ａ】
2009518050.tif 000006
【図３Ｂ】
2009518050.tif 000007
【図４Ａ】
2009518050.tif 000008
【図４Ｂ】
2009518050.tif 000009
【図５Ａ】
2009518050.tif 000010
【図５Ｂ】
2009518050.tif 000011
【図６Ａ】
2009518050.tif 000012
【図６Ｂ】
2009518050.tif 000013
【図７】
2009518050.tif 000014
【図８】
2009518050.tif 000015
【図９Ａ】
2009518050.tif 000016
【図９Ｂ】
2009518050.tif 000017
【図９Ｃ】
2009518050.tif 000018
【図１０Ａ】
2009518050.tif 000019
【図１０Ｂ】
2009518050.tif 000020
【図１０Ｃ】
2009518050.tif 000021
【図１１Ａ】
2009518050.tif 000022
【図１１Ｂ】
2009518050.tif 000023
【図１１Ｃ】
2009518050.tif 000024
【図１２】
2009518050.tif 000025
【図１３】
2009518050.tif 000026
【図１４】
2009518050.tif 000027
【図１５Ａ】
2009518050.tif 000028
【図１５Ｂ】
2009518050.tif 000029
【図１５Ｃ】
2009518050.tif 000030
【図１６】
2009518050.tif 000031
【図１７】
2009518050.tif 000032
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2009518050000001.app