【手続補正書】
【提出日】平成23年5月19日(2011.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２個からｎ個までの別個のメンバーを含む組み換えポリクローナルタンパク質を発現することができるポリクローナル細胞株の作成のための方法であって、前記方法が：
ａ）発現ベクターの１セットであって、前記ベクターの各々が前記ポリクローナルタンパク質の別個のメンバーをコードする別個の核酸の少なくとも１コピーを含むものを提供し；
ｂ）発現ベクターの細胞ゲノムへの部位特異的な組み込みを回避する条件下で、前記発現ベクターの各々で宿主細胞を別々にトランスフェクトし、それにより２からｎ個の細胞の組成物であって、各々の組成物がポリクローナルタンパク質の１つの別個のメンバーを発現するものを得て；そして
ｃ）前記２からｎ個の細胞の組成物を混合してポリクローナル細胞株を得ること
を含む、方法。
【請求項２】
発現ベクターが、宿主細胞の１つまたはそれ以上の染色体に安定的かつ無作為に組み込まれる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程ｂ）で得られたトランスフェクトされた細胞がクローン化される、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
細胞が、ＦＡＣＳクローニングを用いてクローン化される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
クローンが、増殖率、倍加時間、発現レベル、産生レベル、長期間にわたる産生の安定性、生存率、耐性、構造安定性、形態、およびコピー数からなる群から選択される少なくとも１つの判断基準について選択される、請求項３または４記載の方法。
【請求項６】
クローンが、少なくとも１つの判断基準に関する均一性について選択される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
倍加時間および発現レベルに関する均一性について選択することを含む、請求項６記載の方法。
【請求項８】
１個のクローンが、各々別個のポリクローナルタンパク質のメンバーについて選択される、請求項３〜７のいずれか記載の方法。
【請求項９】
１個より多くのクローンが、各々別個のポリクローナルタンパク質のメンバーについて選択される、請求項３〜７のいずれか記載の方法。
【請求項１０】
発現ベクターが、ポリクローナルタンパク質をコードする配列における変動を除いて同一である、請求項１〜９のいずれか記載の方法。
【請求項１１】
宿主細胞が、トランスフェクション前の１つのクローンに由来するものである、請求項１〜１０のいずれか記載の方法。
【請求項１２】
ポリクローナルタンパク質が多量体タンパク質である、請求項１〜１１のいずれか記載の方法。
【請求項１３】
１つの発現ベクターが、１つの別個のポリクローナルタンパク質のメンバーの全てのサブユニットをコードする、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程ａ）における発現ベクターのセットが発現ベクターの２つまたはそれ以上のサブセットを含み、第１のサブセットが、タンパク質の１つのサブユニットをコードする変異核酸配列を含み、第２のサブセットが、タンパク質の別のサブユニットをコードする変異核酸配列を含むものであって、各トランスフェクションが、発現ベクターの第１のサブセットのメンバーおよび第２のサブセットのメンバーを用いて実施されるものである、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
発現ベクターまたはさらなる発現ベクターが選択可能なマーカーをコードする、請求項１〜１４のいずれか記載の方法。
【請求項１６】
選択可能なマーカーが、ポリペプチドメンバーまたは前記ポリペプチドメンバーのサブユニットをコードする転写物によりコードされるものである、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ポリクローナルタンパク質が、ポリクローナル抗体またはポリクローナル抗体フラグメントである、請求項１〜１６のいずれか記載の方法。
【請求項１８】
工程ａ）における発現ベクターのセットが発現ベクターの２つのサブセットを含み、第１のサブセットが、抗体重鎖をコードする変異核酸配列を含み、第２のサブセットが、抗体軽鎖をコードする変異核酸配列を含むものであって、各トランスフェクションが、発現ベクターの第１のサブセットのメンバーおよび第２のサブセットのメンバーを用いて実施されるものである、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
ポリクローナル抗体が、重鎖および／または軽鎖の同一の定常領域を有する、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
宿主細胞が真核細胞である、請求項１〜１９のいずれか記載の方法。
【請求項２１】
真核細胞が、チャイニーズハムスター卵母（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＨＫ細胞、骨髄腫細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、線維芽細胞、ならびにＨｅｌａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、およびＰＥＲ．Ｃ６細胞を含む不死化ヒト細胞からなる群から選択される哺乳動物細胞である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
宿主細胞が、ポリクローナルタンパク質の発現のためにコードするプロモーターをトランス活性化することができる組み換えトランスアクチベーターを発現する、請求項２０または２１記載の方法。
【請求項２３】
組み換えポリクローナルタンパク質の製造のための方法であって、前記方法が：
ａ）請求項１〜２２のいずれかの方法を用いて得られるポリクローナル細胞株を提供し；
ｂ）ポリクローナルタンパク質の発現を可能にする条件下で、ポリクローナル細胞株を培養し；次いで
ｃ）細胞または培地からポリクローナルタンパク質を回収し、任意選択的に精製すること
を含む、方法。
【請求項２４】
回収され、任意選択的に精製されるポリクローナルタンパク質における別個のメンバーの各々の存在を確認する工程をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
２からｎ個の細胞集団を含むポリクローナル細胞株であって、各集団が組み換えポリクローナルタンパク質の別個のメンバーを発現するものであって、組み換えポリクローナルタンパク質が、異なるが、相同なタンパク質分子を含み、組み込み部位がポリクローナル細胞株のメンバー間で変化するように、細胞がゲノムに無作為に組み込まれる少なくとも１つの発現構築物を含むものである、細胞株。
【請求項２６】
少なくとも１つの発現構築物が、１つまたはそれ以上の染色体に組み込まれる、請求項２５のポリクローナル細胞株。
【請求項２７】
ｎが３０より小さい、請求項２５または２６記載のポリクローナル細胞株。
【請求項２８】
組み換えポリクローナルタンパク質の１つの別個のメンバーを発現する細胞が、１個のクローン化された細胞に由来する、請求項２５〜２７のいずれか記載のポリクローナル細胞株。
【請求項２９】
組み換えポリクローナルタンパク質の１つの別個のメンバーを発現する細胞が、２個またはそれ以上のクローン化された細胞に由来し、クローン化された細胞の数が５０より小さい、請求項２５〜２７のいずれか記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３０】
ポリクローナルタンパク質が多量体タンパク質である、請求項２５〜２９のいずれか記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３１】
各発現構築物が多量体タンパク質のサブユニットをコードする、請求項３０記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３２】
サブユニットの発現が、同一または同質のプロモーターの制御下にある、請求項３０または３１記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３３】
発現構築物が選択可能なマーカーをコードする、請求項２５〜３２のいずれか記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３４】
選択可能なマーカーが、ポリペプチドメンバーまたは前記ポリペプチドメンバーのサブユニットをコードする転写物によりコードされる、請求項３３記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３５】
ポリクローナルタンパク質が、ポリクローナル抗体またはポリクローナル抗体フラグメントである、請求項２５〜３４のいずれか記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３６】
ポリクローナル抗体の全てのメンバーが同一のアイソタイプのものである、請求項３５記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３７】
宿主細胞が真核細胞である、請求項２５〜３６のいずれか記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３８】
真核細胞が、チャイニーズハムスター卵母（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＨＫ細胞、骨髄腫細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、線維芽細胞、ならびにＨｅｌａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、およびＰＥＲ．Ｃ６細胞を含む不死化ヒト細胞からなる群から選択される哺乳動物細胞である、請求項３７記載のポリクローナル細胞株。
【請求項３９】
細胞が、ポリクローナルタンパク質のメンバーのためにコードするプロモーターをトランス活性化することができるトランスアクチベーターをコードする安定的に組み込まれた発現構築物を含む、請求項２５〜３８のいずれか記載のポリクローナル細胞株。