【手続補正書】
【提出日】平成23年11月1日(2011.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
強心配糖体又は強心配糖体を含む組成物を用いる治療に対する、過剰な細胞増殖に関連した病因を有する疾病又は疾患のインビボの治療応答性を予測するために有用なインビトロの予後方法であって、
該方法が：
過剰な細胞増殖に関連した病因を有する疾病又は疾患を持つ対象物の疾病にかかったインビボの細胞組織から直接的に又は間接的に得られる疾患細胞組織のサンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα−サブユニットのα１アイソフォームに対するα３アイソフォームの発現比を求めること、ここでサンプルはＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのαサブユニットの一つ又はそれ以上のアイソフォームを含む；及び
対象物が強心配糖体の治療上適切な用量を用いて治療されるとして、対象物における治療応答の確率を求めること；
を含み、
ここで疾病又は疾患が、癌、腫瘍、抗原誘発性の関節炎、アレルギー性脳脊髄炎、関節リュウマチ、全身発症型若年性慢性関節炎、骨粗鬆症、乾癬、線維嚢胞性疾患、良性前立腺肥大症、糖尿病性網膜症、アテローム性動脈硬化症又は冠動脈狭窄である、
インビトロの予後方法。
【請求項２】
もし、その比が少なくとも１以上であれば、細胞組織が強心配糖体を用いた治療に対して治療的に応答性であろうと予測すること、又はもし、その比が０.５から１.０の範囲内であれば、細胞組織が強心配糖体を用いた治療に対して少なくとも部分的に治療的に応答性であろうと予測すること、又はもし、その比が０.３未満であれば、細胞組織が強心配糖体を用いた治療に対して実質的に治療的に非応答性であろうと予測すること、又は１から１００の範囲内のα−サブユニットアイソフォーム比を有する疾病にかかった組織が、１未満のα−サブユニットアイソフォーム比を有するものよりも治療的により応答性であろうと予測すること、又は検出できるα３アイソフォームのみを有し、そして検出できるα１アイソフォームを有しないそれらの組織が、強心配糖体に最も治療的に応答性であろうと予測すること、を更に含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
もし、その比が２以上であれば、細胞組織が、強心配糖体を用いた治療に対して少なく
とも部分的に治療的に応答性であろうと予測すること、又はもし、その比が１０以上であれば、細胞組織が、強心配糖体を用いた治療に対して治療的に少なくとも部分的に応答性であろうと予測すること、又はもし、その比が２５以上であれば、細胞組織が、強心配糖体を用いた治療に対して治療的に少なくとも部分的に応答性であろうと予測すること、又はもし、その比が７５以上であれば、細胞組織が、強心配糖体を用いた治療に対して治療的に少なくとも部分的に応答性であろうと予測すること、を更に含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも部分的な治療応答があるであろう確率が下表に記載のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１アイソフォームに対するα３アイソフォームの比に関係している、請求項１に記載の方法。
【表１】
2011508184.tif 000001
【請求項５】
比を求める工程が、インビトロのサンプル又は生検標本中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォーム及びＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォーム各々の発現レベルを定量すること、並びにその比を計算することを含む、又は比を求める工程が、インビトロのサンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームの量に対する、Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼの各α３サブユニットアイソフォームの量を求めること、並びにその比を計算することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
サンプルが細胞組織、細胞の塊、細胞溶解物、これらから調製された膜標本、又はそれらの固定された組織病理学スライドである、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
サンプルが、少なくともＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのαサブユニットの二つのアイソフォームを含む、又はサンプルが、少なくともＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのαサブユニットのα１及びα３アイソフォームを含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
細胞、組織又は生検標本を溶解又は破壊すること；又はサンプルを形成するために、疾病にかかったインビボの細胞組織から組織病理学的検査のために組織切片を固定すること、又は
サンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームに対する、Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームの量及び相対的発現を求めるために、サンプルについてウエスタンブロット法及び／又は免疫組織化学染色法を実施すること；及びその比を計算すること；を含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
サンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームの含量に対する、Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームの含量を求めるために、ゲルの放射分析又は濃度分析を行うことを含む、又はサンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームの及び、Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームの存在を検出しそして含量を定量するために、ゲルの放射分析又は濃度
分析を行うことを含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ポジティブコントロールサンプル及び／又はネガティブコントロールサンプル中の、Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームの及び／又はＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームの含有量に対する、サンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームの及びＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームの含有量を比較すること、又はコントロールとして、α３サブユニット及びα１サブユニットのただ一つの発現が生じることが知られている組織サンプル中の、Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームの及びＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームの含有量を比較すること、を更に含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１１】
疾病にかかった細胞組織が、哺乳動物のような対象物から得られる、又は疾病にかかった細胞組織が、商業的価値の有無に拘わらず、ヒト、牛、犬、猫、馬、豚又は他の家畜から得られる、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
過剰な細胞増殖に関連した病因を有する疾病又は疾患が、結腸直腸癌、頭頚部癌、副腎皮質癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、骨肉腫、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、非ホジキンリンパ腫、直腸癌、食道癌、目の癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎癌、喉頭癌及び下咽頭癌、肝癌、肺癌（非小細胞癌及び小細胞癌の両方）、肺カルチノイド腫瘍、悪性中皮腫、転移性癌、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔癌及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、中枢神経系の新生物、口腔癌及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺腫瘍、尿管癌；子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ウィルムス腫瘍、イヌ骨肉腫（及び推測によってヒト骨肉腫）、ヒト脳腫瘍 （多形神経膠芽腫）及びヒト結腸癌から成るグループから選ばれる癌又は腫瘍である、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１３】
過剰な細胞増殖に関連した病因を有する疾病又は疾患を持つ対象物を同定することを更に含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１４】
対象物から疾病にかかった細胞のサンプルを得ることを更に含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα−サブユニットのα１アイソフォーム及びα３アイソフォームに対する分析を如何に実行するかを特定する情報を更に含む、及び／又は予後データを如何に解釈するかを詳細に示す情報を更に含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１６】
過剰な細胞増殖に関連した病因を有する疾病又は疾患が、１）抗原誘発性の関節炎及びアレルギー性脳脊髄炎などの自己免疫疾患； ２）関節リュウマチ、全身発症型若年性慢
性関節炎、骨粗鬆症及び乾癬などの慢性炎症性増殖性疾患； ３）線維嚢胞性疾患を含む
乳房の増殖性疾患； ４）良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）を含む前立腺の増殖性疾患；５）
増殖性糖尿病性網膜症を含む目の増殖性疾患；及び６）アテローム性動脈硬化症及び冠動脈狭窄を含む血管増殖性疾患から成るグループから選ばれる、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１７】
強心配糖体が、オレアンドリン、ウアバイン、ブファリン、ジギトキシン、ジゴキシン、シノブファタリン、シノブファギン及びレジブフォゲニンから成るグループから選ばれる、請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
キットが：
ａ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームに対する結合親和性を有する第一の一次抗体；及び
ｂ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームに対する結合親和性を有する第二の一次抗体；
ｃ）キットの使用、及び強心配糖体又は強心配糖体を含む組成物を用いる治療に対する、過剰な細胞増殖に関連した病因を有する疾病又は疾患のインビボの治療応答性を予測するための予後アッセイの性能、に関する指示；及び
ｄ）予後アッセイの実行から得られる予後データを如何に解釈するかを詳細に示す情報；
を含む、予後アッセイを実行する際に使用するのに適しているキット。
【請求項１９】
請求項１８に記載のキットであって：
ａ）溶解組成物；
ｂ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームを含むポジティブコントロールサンプル；
ｃ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォーム及びＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームを含むポジティブコントロールサンプル；
ｄ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームを含み、そしてＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームを含まないネガティブコントロールサンプル；
ｅ）第二抗体、ヤギの抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（これは、例えば、関心ある蛋白質の可視化のために使用され得る）；
ｆ）ゲル電気泳動分析に適しているゲル形成材料；
ｇ）放射線標識マーカー；
ｈ）濃度計及び線量計；
ｉ）水系液体培地；
ｊ）ゲル／膜製造キット；
ｋ）ブロッキング溶液；
ｌ）洗浄緩衝液；
ｍ）ウェスタンブロット解析キットを含む材料；又は
ｎ）それらの組み合わせ；
を更に含むキット。
【請求項２０】
第一の一次抗体がＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームに対して特異的結合親和性を有する、請求項１８又は１９に記載のキット。
【請求項２１】
第二の一次抗体がＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームに対して特異的結合親和性を有する、請求項１８〜２０の何れか１項に記載のキット。
【請求項２２】
第二抗体がヤギαマウスＩｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼであり、又は西洋ワサビペルオキシダーゼのような適切なマーカーを付けられたマウスＩｇＧに抗して産生されたマウス以外の種からの他の第二抗体を含む、請求項１８〜２１の何れか１項に記載のキット。
【請求項２３】
一次抗体がモノクロナール抗体である、請求項１８〜２２の何れか１項に記載のキット。
【請求項２４】
ポジティブコントロールサンプルが、生検又は他の外科的切除手段を通して得ることが
できる組織、細胞の塊、細胞溶解物、及びこれらから調製された膜標本から成るグループから選ばれる、請求項１９〜２３の何れか１項に記載のキット。
【請求項２５】
ネガティブコントロールサンプルが、組織、細胞の塊、細胞溶解物、及びＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα−サブユニットのα３アイソフォームを含まない、これらから調製された膜標本から成るグループから選ばれる、請求項１９〜２４の何れか１項に記載のキット。
【請求項２６】
ネガティブコントロールが、齧歯動物（マウス若しくはラット）の腫瘍組織の細胞塊又はインビトロで成長させたマウス又はラットの細胞を含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
相対的なＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα−サブユニット組成及びアイソフォーム比を決定する代替手段を含み、ここで代替手段が：ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着法）における抗体又は蛋白質組織又は細胞溶解物配列の使用；異なるＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼサブユニットアイソフォームに対するｍＲＮＡの測定のためのノーザンブロット分析及び関連技法（例えば、ｒｔＰＣＲ）の使用；又は免疫組織化学染色法の使用；を含む、請求項１９に記載のキット。
【請求項２８】
ウエスタンブロット法が：
ａ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォームに対する結合親和性を有する第一の一次抗体；及び
ｂ）Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォームに対する結合親和性を有する第二の一次抗体；
を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項２９】
請求項８に記載の方法であって、ここで免疫組織化学染色法が：
ａ）抗原アンマスキング溶液；
ｂ）緩衝液；
ｃ）内因性ペルオキシド活性のクエンチング物質；
ｄ）抗Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３サブユニットアイソフォーム抗体、及び抗Ｎａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１サブユニットアイソフォーム抗体；
ｅ）非免疫性マウスＩｇＧＩ抗体；
ｆ）抗ウサギＩｇＧ及び抗マウスＩｇＧの試薬の混合物を含むユニバーサル抗体試薬；
ｇ）一次化学的染色剤；
ｈ）一般的な対化学的でない染色剤；
ｉ）特定細胞小器官染色剤；又は
ｊ）それらの二つ又はそれ以上の組み合わせ；
を含む方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法であって：
ａ）哺乳動物の組織のサンプルを供すること；
ｂ）サンプル中に存在するＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα−サブユニットのα３アイソフォーム及びα１アイソフォームを免疫化学的に染色すること；
ｃ）サンプル中のＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα３アイソフォームの含有量及びＮａ、Ｋ−ＡＴＰアーゼのα１アイソフォームの含有量を求めること；及び
ｄ）サンプル中に存在するα１アイソフォームに対するα３アイソフォームの比を求めること；
を含む方法。