【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年8月3日(2011.8.3)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  標的遺伝子の一次翻訳産物のＣ末端又はＮ末端のいずれかであるタンパク質フラグメントであるタンパク質の産生方法であって、
前記フラグメントが生物活性をもち、
前記方法が、
（ｉ）（ａ）前記フラグメントをコードするＤＮＡの転写及び翻訳を開始するか又は終結させる能力をもつ調節ＤＮＡ；及び
（ｂ）前記フラグメントをコードする配列の５′側又は３′側に位置する前記標的遺伝子の１領域に相同な複数の配列を含むＤＮＡターゲティングセグメント；
を含むＤＮＡ構成体によるトランスフェクションを受けた宿主細胞を増殖させる段階であって、前記構成体は、前記フラグメントの発現が前記調節ＤＮＡの制御下にあるような形で前記ＤＮＡターゲティングセグメントにより決定された位置で、宿主細胞のゲノミックＤＮＡ内に組込まれる前記段階、そして任意には、
（ｉｉ）相同的に組換え型の細胞を培養する段階；そして任意には、
（ｉｉｉ）機能性タンパク質ドメインを収集する段階
を含んで成り、
前記フラグメントが、
（ｉ）膜レセプタの細胞外結合ドメイン；
（ｉｉ）脈管形成防止特性をもつ構造的細胞外基質タンパク質のタンパク質分解フラグメン；及び
（ｉｉｉ）不活性前駆体タンパク質からタンパク質分解によって放出されたタンパク質
からなる群より選択される前記方法。
【請求項２】  前記フラグメントが、エキソンによってコードされ、前記ＤＮＡターゲティングセグメントが、前記タンパク質をコードするエキソンの５′側又は３′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】  （ｉ）前記フラグメントが、標的遺伝子の一次翻訳産物のＣ末端に対応し、少なくともイントロン含有標的遺伝子の最３′エキソンによってコードされ、
（ｉｉ）前記ＤＮＡターゲティングセグメントが、前記フラグメントをコードするエキソンの５′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＤＮＡ構成体が、相同な組換えによる宿主細胞ゲノム内への組込みを経て前記エキソンに操作可能な形で連結され；
（ｉｖ）前記調節ＤＮＡが、
（ａ）前記フラグメントをコードするＤＮＡの転写を活性化する能力をもつＤＮＡ配列から成る転写モジュール；及び
（ｂ）前記一次転写産物から前記フラグメントへの翻訳を開始する能力をもつ翻訳制御要素を含むＤＮＡ配列から成る翻訳モジュール
を含み、
（ｖ）前記ＤＮＡ構成体は、前記フラグメントのＮ末端をコードする内因性エキソンの不対合３′スプライス受容部位を補完することにより、一次転写産物のスプライシングを可能にして、前記フラグメントをコードする配列に対する前記翻訳モジュールの「インフレーム」並置を結果としてもたらす、不対合５′スプライス供与部位を含むスプライシングモジュールを任意に含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】  前記翻訳モジュールが５′の未翻訳領域を含み、翻訳開始コドンが、前記フラグメントのＮ末端をコードするエキソンの中に含まれている、請求項３に記載の方法。
【請求項５】  前記翻訳モジュールが、５′の未翻訳領域及び翻訳開始コドンを含む１又は複数の外因性エキソンを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】  前記外因性エキソンが、前記スプライシングモジュールにより前記フラグメントをコードする配列と「インフレーム」に置かれ、前記フラグメントのＮ末端エキソンとなる、請求項５記載の方法。
【請求項７】  前記外因性エキソンが前記フラグメントのＮ末端をコードするエキソンと融合するように前記ターゲティングセグメントを選択することにより、前記外因性エキソンが前記フラグメントをコードする配列と「インフレーム」に配置される、請求項５記載の方法。
【請求項８】  前記外因性エキソンがシグナルペプチド又はそのＮ末端をコードする、請求項５〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】  （ｉ）前記フラグメントが、標的遺伝子の一次翻訳産物のＮ末端に対応し、少なくともイントロン含有標的遺伝子の最５′エキソンによってコードされ、
（ｉｉ）前記ＤＮＡターゲティングセグメントが、前記フラグメントをコードするエキソンの３′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＤＮＡ構成体が、相同な組換えによる宿主細胞ゲノム内への組込みを経て前記エキソンに操作可能な形で連結され；
（ｉｖ）前記調節ＤＮＡが、
（ａ）ゲノミックＤＮＡの転写を終結させる能力をもつＤＮＡ配列から成る転写モジュール；及び
（ｂ）前記一次転写産物から前記フラグメントへの翻訳を終結させる能力をもつ翻訳制御要素を含むＤＮＡ配列から成る翻訳モジュール
を含み、
（ｖ）前記ＤＮＡ構成体は、前記フラグメントのＣ末端をコードする内因性エキソンの不対合５′スプライス受容部位を補完することにより、一次転写産物のスプライシングを可能にして、前記フラグメントをコードする配列に対する前記翻訳モジュールの「インフレーム」並置を結果としてもたらす、不対合３′スプライス供与部位を含むスプライシングモジュールを任意に含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１０】  前記翻訳モジュールが翻訳終止コドン及び３′の未翻訳領域を含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】  翻訳モジュールが３′の未翻訳領域及び翻訳終止コドンを含む１又は複数の外因性エキソンを含み、前記翻訳終止コドンが、前記スプライシングモジュールにより前記フラグメントをコードする配列と「インフレーム」に置かれ、前記フラグメントの翻訳終止コドンとなる、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】  前記外因性エキソンが、前記フラグメントをコードする１又は複数のエキソンとインフレームに置かれた時点で、前記標的遺伝子によってコードされる一次翻訳産物内に含まれたタンパク質配列と非相同なタンパク質配列をコードする、請求項５、６、７，８又は１１に記載の方法。
【請求項１３】  前記外因性エキソンが、前記フラグメントをコードする１又は複数のエキソンとインフレームに置かれた時点で、前記標的遺伝子によりコードされる一次翻訳産物内に含まれたタンパク質配列と相同なタンパク質配列をコードする、請求項５、６、７、８又は１１に記載の方法。
【請求項１４】  前記外因性エキソンがさらに、タンパク質分解酵素の認識部位をコードする、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】  前記タンパク質分解酵素が宿主細胞により発現される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】  前記タンパク質分解酵素が市販のプロテアーゼである、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】  前記ターゲティングセグメントが２つのターゲティングセグメントで構成されている、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】  前記構成体がさらに１又は複数の選択可能な及び／又は増幅可能なマーカー遺伝子を含んで成る、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】  前記フラグメントをコードする１又は複数のエキソンを含有する標的遺伝子の一次翻訳産物がホルモン、サイトカイン、リンフォカイン、ケモカイン、膜結合タンパク質、トランスメンブランタンパク質、細胞外基質タンパク質、細胞内タンパク質、核タンパク質、細胞成長及び代謝調節因子、酵素、レセプタ、血液製剤又はモノクローナル抗体である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】  前記フラグメントが可溶性ＴＲＡＮＣＥ、エンドスタチン、Ｔｒｘ８０、チロシン−ｔＲＮＡシンセターゼ由来サイトカイン、又は免疫グロブリンの抗原結合部位から選択される、請求項１９に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
かくして、本発明の第１の態様に従うと、
１つの遺伝子の一次翻訳産物のＣ末端又はＮ末端のいずれかに対応する機能タンパク質ドメインであるタンパク質の産生方法において、該タンパク質が前記一次翻訳産物の生物活性と全く異なる生物活性をもち、
（ｉ）（ａ）該タンパク質をコードするＤＮＡ配列の転写及び翻訳を開始するか又は終結させる能力をもつ調節ＤＮＡ；及び
（ｂ）該タンパク質についてコードする配列の５′側又は３′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含むＤＮＡターゲティングセグメント；
を含むＤＮＡ構成体によるトランスフェクションを受けた宿主細胞を増殖させる段階であって、該構成体は、該タンパク質の発現が調節ＤＮＡの制御下にあるような形でＤＮＡターゲティングセグメントにより決定された位置で、宿主細胞のゲノミックＤＮＡ内に組込まれる段階；
（ｉｉ）相同的に組換え型の細胞を培養する段階； 
（ｉｉｉ）機能性タンパク質ドメインを収集する段階、
を含んで成る方法が提供されている。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
本発明は同様に、
遺伝子の一次翻訳産物のＣ末端又はＮ末端配列のいずれかに対応する配列をもつ機能タンパク質ドメインについてコードする１又は複数のエキソンを選択的に発現するための方法において、前記１又は複数のエキソンによりコードされるタンパク質が一次翻訳産物の生物活性と全く異なる生物活性をもち、
（ａ）機能タンパク質ドメインに対応するタンパク質をコードする１又は複数のエキソンの転写及び翻訳を開始するか又は終結させる能力をもつ調節ＤＮＡ配列；
（ｂ）該タンパク質についてコードする１又は複数のエキソンの５′側又は３′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含むＤＮＡターゲティング領域；
を含むＤＮＡ構成体によるトランスフェクションを受けた宿主細胞を増殖させる段階であって、該構成体は、１又は複数のエキソンの発現が調節ＤＮＡの制御下にあるような形でＤＮＡターゲティングセグメントにより決定された位置で、宿主細胞のゲノミックＤＮＡ内に組込まれている段階、
を含んで成る方法をも開示している。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
好ましい実施形態においては、機能タンパク質ドメインを形成するペプチド又はポリペプチドは、イントロン含有遺伝子の少なくとも最５′又は３′エキソンによってコードされる。かくして、第１の好ましい実施形態においては、
標的遺伝子の一次翻訳産物のＣ末端に対応し、少なくともイントロン含有標的遺伝子の最３′エキソンによってコードされる機能タンパク質ドメインであるタンパク質を産生する方法において：
（ｉ）相同な組換えによる宿主細胞ゲノム内の組込みの後前記エキソンに操作可能な形でリンクされるＤＮＡ構成体でトランスフェクションされた宿主細胞を増殖させる段階であって、前記構成体が、
（ａ）該タンパク質についてコードする１又は複数のエキソンの５′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含むＤＮＡターゲティング領域：
（ｂ）機能タンパク質ドメインをコードするＤＮＡの転写を活性化する能力をもつＤＮＡ配列から成る転写モジュール；
（ｃ）機能タンパク質ドメインの翻訳を開始する能力をもつＤＮＡ配列から成る翻訳モジュール； そして任意には、
（ｄ）機能タンパク質ドメインのＮ末端をコードする内因性エキソンの不対合３′スプライス受容部位を補完することにより、一次転写産物のスプライシングを可能にして、機能タンパク質ドメインについてコードする配列に対する翻訳モジュールの「インフレーム」並置を結果としてもたらす、不対合５′スプライス供与部位を含むスプライシングモジュール；
を含んで成る段階；
（ｉｉ）相同に組換え型である細胞を培養する段階； 
（ｉｉｉ）機能タンパク質ドメインを収集する段階、
を含んで成る方法が提供されている。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
不対合スプライシング供与部位を含むスプライシングモジュールは、機能タンパク質ドメインのＮ末端についてコードするエキソンに隣接する天然又は合成のエキソンに会合させられる。スプライシングモジュールは、スプライシングプロセスの後機能タンパク質ドメインの同じ読み枠内に置かれた時点でメチオニンコドンが機能タンパク質ドメインのＮ末端残基になることができるようにするはずである。この実施形態においては、一次翻訳産物についてコードする標的遺伝子は、充分なレベルですでに発現されていてもいなくてもよいが、外因性調節配列は、機能タンパク質ドメインについてコードする１又は複数のエキソンに対し５′のところに新しい転写及び翻訳開始部位が得られるようにするはずである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明の第２の好ましい実施形態においては、
標的遺伝子の一次翻訳産物のＮ末端に対応し、少なくともイントロン含有標的遺伝子の１又は複数の最５′エキソンによってコードされる機能タンパク質ドメインであるタンパク質を産生する方法において：
（ｉ）相同な組換えによる宿主細胞ゲノム内の組込みの後前記エキソンに操作可能な形で連結されるＤＮＡ構成体でのトランスフェクションを受けた宿主細胞を増殖させる段階であって、前記構成体が、
（ａ）該タンパク質についてコードする１又は複数のエキソンの５′側に位置するゲノミック領域に相同な複数の配列を含むＤＮＡターゲティング領域：
（ｂ）ゲノミックＤＮＡの転写を終結させる能力をもつＤＮＡ配列から成る転写モジュール；
（ｃ）機能タンパク質ドメインの翻訳を終結させるＤＮＡ配列から成る翻訳モジュール； そして任意には、
（ｄ）機能タンパク質ドメインのＣ末端をコードする内因性エキソンの不対合５′スプライス供与部位を補完することにより、一次転写産物の正しいスプライシングを可能にして、機能タンパク質ドメインについてコードする配列に対する翻訳モジュールの「インフレーム」並置を結果としてもたらす、不対合３′スプライス受容部位を含むスプライシングモジュール；
を含んで成る段階；
（ｉｉ）相同に組換え型である細胞を培養する段階； 
（ｉｉｉ）機能タンパク質ドメインを収集する段階、
を含んで成る方法が提供されている。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
不対合スプライシング受容部位を含むスプライシングモジュールは、機能タンパク質ドメインのＣ末端についてコードするエキソンの近位の天然又は合成のエキソンに会合させられる。スプライシングモジュールは、スプライシングプロセスの後機能タンパク質ドメインの同じ読み枠内に置かれた時点で、停止コドンが機能タンパク質ドメインの終止用コドンになることができるようにするはずである。この実施形態においては、一次翻訳産物についてコードする標的遺伝子は、充分なレベルですでに発現されていなければならず、外因性配列は、異なる位置で転写及び翻訳を停止させるためだけに必要である。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
しかしながら、本発明の背景参考及び例をその中から選択することのできる科学的文献は、当初これらのグループに属するものとして特徴づけされず（例えば膜結合タンパク質、トランスメンブランタンパク質、酵素、細胞外基質タンパク質、細胞内シグナリング及び構造タンパク質、核タンパク質）治療的に有利な機能タンパク質ドメインをも同様に内含するものと特徴づけされた一次翻訳産物へと治療的に有利なＦＤＤを同定できる、ということを示している。従って、これらの一次翻訳産物に対応する遺伝子も同様に、内因性エキソンを用いて機能タンパク質ドメインを生成するために本発明の方法により標的遺伝子として使用可能である。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
転写モジュール
外因性調節単位内に含まれた第１のＤＮＡ配列である転写モジュールは、標的遺伝子に属するエキソン全体のうち機能タンパク質ドメインについてコードするもののみを含む一次転写産物を得るべく、ターゲティングされた１又は複数のエキソンの片端で欠如している転写制御要素を提供する。転写モジュールは、（一次翻訳産物のＣ末端に対応する機能タンパク質ドメインの場合：図１Ａ−Ｆ）５′乃至より５′のエキソン内に、又（一次翻訳産物のＮ末端に対応する機能タンパク質ドメインの場合：図１Ｇ−Ｌ）機能タンパク質ドメインについてコードする３′乃至より３′のエキソン内に組込まれるはずである。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
機能タンパク質ドメインが一次翻訳産物のＮ末端にある場合、転写モジュールは、一次転写産物の分割及び連結型ポリアデニル化反応が関与する複雑なプロセスである、その３′末端におけるｍＲＮＡの適正な終結及び修飾を可能にする配列を含有しているはずである。大部分の哺乳動物のｍＲＮＡにはポリ（Ａ）路が存在しており、それはｍＲＮＡの安定性及び翻訳効率にとって不可欠である。ポリアデニル化のためのシグナルは、ポリアデニル化部位の上流側２０〜３０ヌクレオチドのところにあるＡＡＴＡ アミノ酸配列、及びポリアデニル化部位のすぐ下流側のＧＴ富有セグメントで構成されている。発現ベクター内ですでに使用され、真核生物（ウシ成長ホルモン、マウスベータグロビン）又はウイルス遺伝子（ＳＶ４０早期転写単位、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ）のいずれかの中で単離された調節単位の中で使用可能ないくつかの効率の良いポリ（Ａ）シグナルが存在する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
ポリ（Ａ）シグナルに会合した状態で、転写モジュール内には、転写が機能タンパク質ドメインに関連しない３′隣接ゲノミック配列内まで進行しないことを確実にするため、転写ターミネータと呼ばれる付加的な配列が存在する可能性がある。この事象は、所望の機能タンパク質ドメインの翻訳を削減又は改変しうる一次転写産物内の不要な配列の導入及び、宿主細胞の複製又は代謝にとって重要な遺伝子を制御しうる下流側プロモータの活性の阻害という、考えられる２つの結果を導く可能性がある。いくつかのｍＲＮＡの分析によって明確なコンセンサスが規定されなかったにせよ、これらの配列のうちのいくつかは、文献中で充分に特徴づけされてきた（Ｐｅｔｉｔｃｌｅｒｃ Ｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９５），４０（３）；１６９−７８）。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
翻訳モジュール
外因性調節単位内に含まれている第２のＤＮＡ配列である翻訳モジュールは、機能タンパク質ドメイン内への一次転写産物の適正かつ効率の良い翻訳を得るべく、適正な読み枠内でターゲティングされた１又は複数のエキソンの片端において欠如している翻訳制御要素を提供する。翻訳モジュールは、転写モジュールと（一次翻訳産物のＣ末端に対応する機能タンパク質ドメインの場合には）より５′のエキソン又は（一次翻訳産物のＮ末端に対応する機能タンパク質ドメインの場合には）機能タンパク質ドメインについてコードするより３′のエキソンの間に取込まれ、同じ方向に方向づけされているはずである。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８５】
５′未翻訳領域（５′ＵＴＲ）は、翻訳開始コドンに対し５′のところの一次転写産物に属する配列であることから、翻訳開始コドンに関係づけされる。物理的には、それは、転写開始部位（通常は、プロモータから下流側にあり、「キャッピング」酵素により修飾されるべきＧヌクレオチドで構成されている２０〜３０個のヌクレオチド）と翻訳開始コドンの間の配列である。相同的組換えによりターゲティングされたイントロンの配列及び機能タンパク質ドメインについてコードする隣接するエキソンの配列に応じて、この配列は、（ＡＴＧが同様に相同的組換えによって導入される場合には）完全に構成され得、そうでなければ、外因性配列により部分的にのみ構成され得る。文献中には、５′未翻訳領域についての特定的長さ又はコンセンサス配列は全く定義されていないが、機能タンパク質ドメインの適正かつ効率の高い翻訳に対する妨害を最小限にするため、それは、１００〜２００ヌクレオチドを超えてはならない。さらに、それは、対合して翻訳中のリボソームの進展を遅延又は停止させることのできる二次構造を作り出し得る付加的なＡＴＧ又はその他の配列（例えばＧＣ富有領域）を含有すべきではない。或る種の状況、例えば、５′ＵＴＲが特に長い場合などには、複数の哺乳動物細胞型において異なるｍＲＮＡについて示されてきたように、リボソームタンパク質と一次転写産物の相互作用を容易にし翻訳効率を増大させるべく５′ＵＴＲ内に内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）又は翻訳エンハンサ要素を取込むことができる（Ｌｉｕ Ｘ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ（２０００），２８０（Ｉ）：２０−８）。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
５′未翻訳領域について述べた通り、翻訳停止コドンとポリアデニル化部位の間の一次転写産物セグメントから成る３′未翻訳領域についても、文献中にはいかなる特定的長さ又はコンセンサス配列も記述されていない。しかしながら、転写効率を最大にするためには、それは、ＡＴ富有配列のような不安定化領域を含有すべきである。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９１】
しかしながら、前出の状況の場合と同様に、機能タンパク質に融合されるこのタンパク質配列は、機能タンパク質ドメインの活性を妨害してはならず、存在する場合、最終的には宿主細胞自体により生成される酵素活性によって容易に除去又は不活性化されるべきである。例えば、機能タンパク質ドメインが、一次翻訳産物のＣ末端フラグメンである場合、１又は複数のエキソンは、ひとたび翻訳開始部位と内因性エキソン配列の間の適正な読み枠内に置かれた時点で培地中での機能タンパク質ドメインの分泌を可能にするシグナルペプチド（又はシグナルペプチドのＮ末端）をコードすることができる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９３】
スプライシングモジュール
上述のように、標的遺伝子に属する内因性配列が、活用されるべき適切な位置（すなわち機能タンパク質ドメインについてコードし機能タンパク質ドメインと同じ読み枠をもつ１又は複数のエキソンに隣接するか又はその内部にある）に翻訳終結又は開始コドンを含有しない場合、相同的組換えのための構成体は、天然又は合成のいずれかの外因性エキソン内にそれらのうちの１つを収納することになる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
しかしながら、翻訳モジュールに属する１又は複数の外因性エキソンは、１又は複数の内因性エキソンとインフレームに位置づけされなくてはならない。この配置は、より近位のエキソンのスプライシング部位を補完するスプライシング部位を使用すること（図Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｊ）によってか又は、エキソンがより近位のエキソンに精確に融合されるような形でターゲティング配列を選択すること（図Ｂ、Ｅ、Ｈ、Ｋ）によって達成可能である。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９６】
従って、調節単位は、その組込みの後残留イントロン配列が、機能タンパク質ドメインについてコードする１又は複数のエキソンから翻訳モジュールを分離する場合にはつねに、機能タンパク質ドメインについてコードする転写産物の生成を可能にするスプライシングモジュールを含むことができる。外因性調節単位の制御下に置かれたものに対する機能タンパク質ドメインについてコードするもの以外の１又は複数のエキソンの融合を通常駆動する内因性スプライシング配列は、宿主細胞の中での標的遺伝子のスプライシング事象を再構築することができないはずである。これは、調節単位がそれらに置換しかつ／又は、過度に遠くその活性を効率よく発揮することができないような形で位置づけされ、不対合状態にとどまっているという事実に起因するものである。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９７】
５′／３′スプライス部位は、イントロン中断された遺伝子から生成された一次転写産物の適切なスプライシングを可能にすることから、遺伝子の発現のための基礎的な要素である。これらの配列は、数多くの脊椎動物遺伝子の中で特にイントロンの５′及び３′で充分に保存されている。高等真核生物内の５′スプライス供与部位の大部分は、ＡＧがエキソンの３′末端における保存されたジヌクレオチドモチーフであるコンセンサス配列ＡＧ］［ＧＴＲＡＧＴに適合する。なおここで ］［ はスプライス部位を、ＧＴはイントロンの５′末端にある保存度の高いジヌクレオチドモチーフであり、Ｒはプリンである。３′スプライス受容部位は、基本的に、コンセンサス配列、ＹＡＧ］［Ｇにより構成されており、ここで、ＡＧは（標準的にピリミジン（Ｙ）の伸長が先行している）イントロンの３′末端にある保存度の高いジヌクレオチドモチーフであり、］［はスプライス部位を表わし、Ｇは、エキソンの５′末端にある保存されたヌクレオチドである。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５１】
翻訳開始部位を含有する翻訳モジュールは、スプライス供与部位のためのコンセンサス配列を伴うスプライシングモジュールと組合わせられた。さらに、遺伝子の３′末端にある機能タンパク質ドメインの単離を容易にするために、機能タンパク質ドメインについてコードするエキソンとインフレームにあるシグナルペプチドについてコードする配列が、翻訳開始部位とスプライシングコンセンサス配列の間に内含された。シグナルペプチドとしては、マウスＩｇ シグナルペプチド（ｍＩｇＳＰ）配列（Ｇｅｎ Ｂａｎｋ受入れ番号Ｍ１３３２９）が選択され、一方、ヒト細胞内で機能的であることが近年示されたものの中からスプライシング適切コンセンサスが選択された。（Ｌｏｎｇ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ（１９９８），９５（１）：２１９−２２３；Ｂｌｅｎｃｏｗｅ ＢＪ， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．（２０００），２５（３）：１０６−１１０）。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５７】
ｍＩｇＳＰシグナルペプチドについてコードするエキソンに対し下流側にあるＮｈｅ Ｉ及びＮｏｔ Ｉ部位とそれに続くコンセンサススプライス供与部位を用いて、各構成体の３′ターゲティング領域をｐＢＳ−ＫＳＩＩベクターからＸｂａ Ｉ−Ｎｏｔ Ｉフラグメントとして切断し、プラスミドｐＢＳ−ＥＦ１アルファ−ｍＩｇＳＰ−ＳＤ内にクローニングした。結果として得られたプラスミドｐＢＳ−ＥＦ１アルファ−ｍＩｇＳＰ−ＳＤ−３′ＨＲ＃１及びｐＢＳ−ＥＦ１アルファ−ｍＩｇＳＰ−ＳＤ−３′ＨＲ＃２は、Ｃｌａ Ｉ及びＮｏｔ Ｉ部位間で３′ターゲティング領域に融合されたＥＦ１−ｍＩｇＳＰコーディング配列を含有している。かかるＣｌａ Ｉ−Ｎｏｔ Ｉフラグメントは最後に、正の選択カセットに対し下流側にあるｐＧＥＭ−３Ｚ−ＰＧＫ−ＴＫ−ＨＹＧ−５′ＨＲ＃１及びｐＧＥＭ−３Ｚ−ＰＧＫ−ＴＫ−ＨＹＧ−５′ＨＲ＃２のＣｌａ Ｉ及びＮｏｔ Ｉ部位の間に導入され、最終的ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１（図７）及びｐＥｎｄ及びＨＲ＃２ベクターを提供した。これらのプラスミドは、ヒトＣＯＬ１８Ａ１遺伝子内へと特異的場所へ外因性配列をターゲティングするため細胞内にトランスフェクションされる前に３′ターゲティング領域の３′末端にあるユニークＮｏｔ Ｉ部位で線形化され得る。ひとたび組込まれた時点で、調節単位は、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１のためのＣＯＬ１８Ａ１エキソン（配列番号１２；配列番号１３；図８）又はｐＥｎｄ−ＨＲ＃２のためのＣＯＬ１８Ａ１エキソン（配列番号１４，配列番号１５；図９）のいずれかに対しインフレームで融合されたｍＩｇＳＰについてコードするｍＲＮＡの転写を駆動するものと予想される。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５８】
ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１及びｐＥｎｄ−ＨＲ＃２の中に内含された外因性調節単位の活性は、エンドスタチンコーディング配列を含有するｐＥＡＫプラスミドを過渡的にトランスフェクションを行なうことによって予備的にテストされた（Ｅｄｇｅ ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）。調節領域は、ヒトＣＯＬ１８Ａ１遺伝子内の相同的組換えの後に転写されスプライシングされることになるイントロン配列、少量であってもタンパク質の同定を補助する非相同性エピトープとインフレームで融合されたヒトＣＯＬ１８Ａ１遺伝子の下流側エキソン内のコーディング配列、停止コドン及びベクター内に存在するポリアデニル化部位を含有するＤＮＡフラグメントに対して５′のところでクローニングされた（図１０Ａ）。２つの構成体（ｐＥＡＫ−ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１及びｐＥＡＫ−ｐＥｎｄ−ＨＲ＃２）は、ＣＯＬ１８Ａ１遺伝子を発現していない（後に相同的組換えのために使用される）ヒト２９３−ＥＢＮＡ細胞内にトランスフェクションされた（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ．（１９９９），１８（１６）：４４１４−４４２３）。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６４】
選択されたクローン内のヒトＣＯＬ１８Ａ１遺伝子及び転写産物の構造の分析は、当業者にとって既知の文献の中で記述された技術を用いて陽性の細胞プールから抽出したゲノミックＤＮＡ及びｍＲＮＡについて実施された。適正なターゲティング及びスプライシングの後、ゲノミックＤＮＡ及びｍＲＮＡ内に含まれることになる配列を同定するためには、より高速で必要な生体材料が比較的少ないことから、第１のアプローチとして、ＤＮＡプライマを用いたＤＮＡセグメントの選択的増幅（ＰＣＲ）が好まれた（図１１Ａ−Ｂ）。増幅されたコーディング配列の一部分は同じくクローニングされ、配列同一性のさらなる確認のためＤＮＡ配列決定に付された。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６６】
ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１又はｐＥｎｄ−ＨＲ＃２でのトランスフェクションを受けたクローンのプールをまず最初に、新しい転写産物の存在についてスクリーニングした。クローンから抽出したｍＲＮＡを、逆転写しその後ＰＣＲで増幅する（２段階アプローチ）か又は、直接逆転写し同じ試験管内で増幅した（１段階アプローチ）。プライマは、ｍＩｇＳＰエキソン内にハイブリッド形成する同じ順方向プライマを保ちかつ、ヒト内因性ＣＯＬ１８Ａ１エキソンとハイブリッド形成する異なる逆プライマを用いて、異なる外因性配列内で鋳型とハイブリッド形成するように設計された（図１１Ａ）。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６９】
マイナーバンドが代替スプライシングから結果としてもたらされる場合には、鋳型としてＦｒａｇＡ及びＦｒａｇＢを用いて得られた増幅されたフラグメントは、欠如するエキソンの長さに対応するコーディング配列だけ異なるはずである。ＦｒａｇＡとＦｒａｇＢの間で約２５０塩基対だけ異なるフラグメントを全てのプライマ対が増幅することから、もともとプール４内で同定されたマイナーバンドが実際には、全てのフラグメント内に含まれたエキソン３８（２４６塩基）が代替スプライシング事象に起因してスプライシングし尽された１つの転写産物に対応していた、という結論を下すことができる（図１３）。しかしながら、その後、クローニングされたフラグメントを配列決定することにより確認されたこの不規則なスプライシングは、エキソン３８及び３９が同じ読み枠をもつことから、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃２を細胞にトランスフェクションして得られたものと同一の転写産物を導く（図８）。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７１】
ｏ−１１６５（配列番号１６）及びｏ−１１６６（配列番号２２）の場合のようにエキソン配列か又はｏ−１１６８（配列番号２３）及びｏ−１１２１（配列番号７）の場合のようにイントロン配列のいずれかとハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドでのＰＣＲを用いてゲノミックレベルで、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１でのトランスフェクションを受け適正な転写産物を発現するクローンのプールについてのさらなる分析を行なった（図１１Ｂ）。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７９】
ヒトＴｒｘ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ記録Ｘ５４５３９及びＸ５４５４０）は、１０５の残基を含有するタンパク質についてコードするエキソンを５つ含有する（Ｋａｇｈａｄ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ（１９９４）１４０（２），２７３−８）。最初の４つのエキソンは、全てゼロ読み枠をもち、合計８５の残基についてコードし、基本的にＴｒｘ８０に対応する。イントロン４のレベルで、スプライシング受容部位と共に転写及び翻訳を終結させるための調節単位の組込みを可能にするターゲティングベクターを構築するために、イントロン４，エキソン４〜５及びイントロン３の一部を含有する１．３Ｋｂの配列を使用することができる（ＧｅｎＢａｎｋ記録Ｘ７０２８８）。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】図１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１１】
図１１。（Ａ）は、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１の組込みの後にヒト２９３−ＥＢＮＡ細胞によって発現された産物内に含有された１．０Ｋｂの長いコーディング領域の簡略化された地図を示す。転写産物を同定するために使用されるプライマの位置が示されている。（Ｂ）は、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１の組込みの後のヒト２９３−ＥＢＮＡ細胞内の２．４Ｋｂの長さのＣＯＬ１８Ａ１ゲノミック領域の簡略化された地図を示している。クローンを特定づけするために用いられるプライマ及び制限部位の位置が示されている。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】図１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１４】
図１４：（Ａ）は、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１でのトランスフェクションを受けた２９３−ＥＢＮＡ細胞の元のプール４から（１），このプールかさらに単離されたクローンのプールから（２−４）、又はトランスフェクションを受けていない２９３−ＥＢＮＡ細胞から（５）抽出されたいずれかのゲノミックＤＮＡを用いたｏ−１１６５及びｏ−１１６６エキソン特異的プライマを使用して増幅されたＤＮＡフラグメントを示す。（Ｂ）は、ｐＥｎｄ−ＨＲ＃１でのトランスフェクションを受けた２９３−ＥＢＮＡ細胞の元のプール４から，単離されたクローンの異なるプールから（２−４）又はトランスフェクションを受けていない２９３−ＥＢＮＡ細胞から（５）抽出されたいずれかのゲノミックＤＮＡを用いたｏ−１１２１及びｏ−１１６８イントロン特異的プライマを使用して増幅されたＤＮＡフラグメントを示す。レーン２−４内のクローンのプールはなおも、予想された転写産物を発現している。