【手続補正書】
【提出日】平成23年9月22日(2011.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
グレリンがグルコース恒常性に役割を有し得て、ＧＨＳ−Ｒ１アンタゴニストの糖尿病の処置への有用性を立証できるはずであることを示唆する証拠が増加している。グレリンおよびＧＨＳ−Ｒ１は膵臓ランゲルハンス島で発現され、グレリンはインビトロおよびインビボの両方でインスリン分泌を変える。グレリンおよびＧＨＳＲ−／−マウスは、恐らくインスリンに対する感受性およびインスリン分泌両方の改善のために、糖耐性試験で改善された糖耐性を示す。グレリンのアブレーションもｏｂ／ｏｂマウスの糖尿病性表現型を改善する。ペプチドおよび小分子グレリンアンタゴニストは、齧歯類糖耐性試験におけるグルコース可動域を低下させることが報告されている。この領域は、最近Neuroendocrinology 2007, (Epub ahead of print) (DOI: 10.1159/000109094), 86, 215-228によりレビューされた。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
細胞懸濁液(１４μl)を化合物プレートに添加し、２時間、３７℃で５％ＣＯ２／９５％空気中インキュベートした。キットに供えられたＩＰ１−２(６μl)および抗ＩＰ１(６μl)crypateを使用して細胞を１時間、室温で溶解後、蛍光をEnvision(Perkin Elmer)で、ＨＴＲＦ設定(６６５nm／６２０nm)を使用して測定した。本化合物のアゴニスト効果を、ＧＨＲＰ−６(５μM：Bachem)の最大効果％として示した。シグモイド曲線を、Origin 7.5 Clientにより適合させ、ＥＣ５０値を決定した。実施例化合物をこのアッセイで試験して得られた結果を表１に示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６６】
実施例４１：２−クロロ−Ｎ−[[６−(２−ヒドロキシエチルスルホニル)ベンゾチアゾール−２−イル]カルバモイル]ベンズアミド
【化３８】
2011500546.tif 000001
ＴＨＦ(５mL)中の２−クロロ−Ｎ−[(６−エテニルスルホニルベンゾチアゾール−２−イル)カルバモイル]ベンズアミド(中間体１、０.１２ｇ、０.２８mmol)の溶液にTriton B(１mL)を添加し、溶液を一夜静置した。溶液を真空で濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を白色固体として得た(１１mg、９％)：1H NMR δ 3.49(2H, t), 3.71(2H, t), 7.50-7.69(4H, m), 7.94-7.96(2H, m), 8.64(1H, s); MS 440。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５５】
中間体１１３：メチル５−(３−アミノピリジン−２−イル)−２−クロロベンゾエート
酢酸エチル(４０mL)中のメチル２−クロロ−５−(３−ニトロピリジン−２−イル)ベンゾエート(０.９００ｇ、３.０８mmol)および１０％パラジウム炭(０.１ｇ、０.９４mmol)を、水素雰囲気下、大気圧および室温で５時間撹拌した。反応は不完全であり、さらに１０％パラジウム炭(０.１００ｇ、０.９４０mmol)を添加し、混合物を室温でさらに１時間撹拌した。反応混合物をセライトを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。溶媒を真空で除去して、メチル５−(３−アミノピリジン−２−イル)−２−クロロベンゾエート(０.６０ｇ、７４.３％)を明褐色油状物として得て、それは静置により固化し、それを精製せずに使用した。m/z(ESI+)(M+H)+=263.28; HPLC tR=0.83分. 1H NMR(400.13MHz, CDCl3) δ 3.80(2H, s), 3.93(3H, s), 7.06-7.12(2H, m), 7.56(1H, d), 7.78-7.80(1H, m), 8.14-8.15(1H, m), 8.20(1H, d)。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３８４】
中間体１５２：２,４−ジクロロ−５−モルホリノベンズアミド
アンモニア(水中２８％ｗ／ｗ)(２０mL、２.３８mmol)中のメチル２,４−ジクロロ−５−モルホリノベンゾエート(中間体１４６、６９１mg、２.３８mmol)の懸濁液を、アンモニア(ＭｅＯＨ中７Ｎ)(５.０mL、２.３８mmol)で処理した。得られた溶液を一夜環境温度で撹拌した。溶媒を真空で除去して、粗物質を得た。粗生成物を１０〜１００％ＥｔＯＡｃのイソヘキサン溶液の溶出勾配で、フラッシュシリカクロマトグラフィーで精製した。純粋フラクションを蒸発乾固して、２,４−ジクロロ−５−モルホリノベンズアミド(２８２mg、４３.０％)を白色固体として得た。m/z(ES+)(M+H)+=275; HPLC tR=1.55分. 1H NMR(400.13MHz, CDCl3) δ 3.06-3.08(4H, m), 3.85-3.90(4H, m), 5.90(1H, s), 6.49(1H, s), 7.45(1H, s), 7.55(1H, s)。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４０５】
中間体１７４ｂ：(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル３−((４−クロロ−３−(６−(メチルスルホニル)ベンゾ[ｄ]チアゾール−２−イルカルバモイルカルバモイル)フェノキシ)メチル)ピペリジン−１−カルボキシレート
３個のマイクロ波バイアルに各ＴＨＦ(１２mL)中(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル３−((３−カルバモイル−４−クロロフェノキシ)メチル)ピペリジン−１−カルボキシレート、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド(ＴＨＦ中１Ｍ)および４−フルオロフェニル６−(メチルスルホニル)ベンゾ[ｄ]チアゾール−２−イルカルバメートを等しく分け、マイクロ波チューブに密閉した。反応を１２０℃で１０分間、マイクロ波リアクターで加熱し、ＲＴに冷却した。反応物を合わせ、２Ｎ  ＨＣｌの添加により中和した。反応混合物をＥｔＯＡｃ(１００mL)で希釈し、水(２５mL)で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を０から１０％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液の勾配で溶出する、フラッシュシリカクロマトグラフィーで精製した。純粋フラクションを蒸発乾固して、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル３−((４−クロロ−３−(６−(メチルスルホニル)ベンゾ[ｄ]チアゾール−２−イルカルバモイルカルバモイル)フェノキシ)メチル)ピペリジン−１−カルボキシレートをクリーム色固体として得た。m/z(ES+)(M+H)+=623; HPLC tR=2.93分。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４１０】
中間体１７９：２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸
２−クロロ−４−フルオロ−５−ニトロ安息香酸(５５.０ｇ、０.２５０mol)を、水酸化ナトリウム(１.２５Ｌ、２.５０mol)に添加し、混合物を環境温度で２時間撹拌した。混合物を濃塩酸で酸性化し、沈殿した固体を濾取し、水で洗浄し、乾燥させて、２−クロロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸(５３.２ｇ、９８％)を得た。