(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶。
【請求項２】
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩の結晶。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）７．２°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項１記載の結晶。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１４．４°および１５．７°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項３記載の結晶。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１０．３°および２３．５°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項４記載の結晶。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１２．９°、１４．９°、１７．２°、２０．１°および２４．７°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項５記載の結晶。
【請求項７】
１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（ｐｐｍ）１４．１、５２．９、７５．２、１４４．７および１７４．０にピークを有することを特徴とする、請求項１記載の結晶。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）６．９°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項２記載の結晶（Ａ）。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１５．７°および１７．１°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項８記載の結晶（Ａ）。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）６．８°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項２記載の結晶（Ｂ）。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１３．７°および１６．８°に回折ピークを有することを特徴とする、請求項１０記載の結晶（Ｂ）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１経路において阻害作用を有するピロリジン−３−イル酢酸誘導体の塩およびその結晶に関する。
【背景技術】
【０００２】
ケモカインは、生体内での主たる細胞遊走因子であり、細胞運動の亢進や細胞接着分子の活性化を介して、リンパ球の組織浸潤を制御している。ケモカインは、その最初の２つのシステイン残基の配列により、ＣＣ、ＣＸＣ、Ｃ、ＣＸ３Ｃの４つのサブファミリーに分類される。【０００３】
フラクタルカインは、ＣＸ３Ｃケモカインの唯一のメンバーであり、その構造と機能において、他のケモカインには見られない際だった特徴を有している。フラクタルカインは、受容体であるＣＸ３ＣＲ１と結合することで、生理的血流速存在下において、セレクチンやインテグリンの介在なしに、単独で強固な接着を媒介することが可能である。すなわち、セレクチンやインテグリンを介する多段階の細胞浸潤機構と同様な機能を、フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１細胞浸潤系は一段階の反応で媒介する。【０００４】
フラクタルカインは、血管内皮細胞を炎症性サイトカインのＴＮＦやＩＬ−１で処理すると発現が誘導される。一方、ＣＸ３ＣＲ１は、単球や、ＮＫ細胞のほとんどにおいて、Ｔ細胞の一部において発現しているものの、好中球には発現していない。したがって、フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１細胞浸潤系は、損傷を受けた組織の内皮細胞上または組織内に、ある種の免疫細胞を動員するための、きわめて効率の良い機構であると考えられる。【０００５】
フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１系と病態との関係については、関節リウマチ、炎症性腸疾患、ループス腎炎、多発性硬化症などの自己免疫疾患において、その発症や病態にフラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１系が関与していることが示唆されている（非特許文献１）。特に炎症性腸疾患に関しては、患者の大腸組織の炎症部位においてフラクタルカインの発現が増強していること、免疫細胞の腸組織への浸潤にＣＸ３ＣＲ１が重要な働きを担っていることが報告されている（非特許文献２）。【０００６】
これまでにフラクタルカイン阻害剤として、特許文献１記載の抗体や特許文献２ないし６に記載の低分子化合物が知られている。【０００７】
さらに、特許文献７に記載の化合物は、ケモカインＣＣＲ２レセプターのアンタゴニストとして有用である旨、記載されているが、対象とするケモカインのファミリーが異なる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００２−３４５４５４号公報
【特許文献２】国際公開第２００６／１０７２５７号
【特許文献３】国際公開第２００６／１０７２５８号
【特許文献４】国際公開第２００８／０３９１３８号
【特許文献５】国際公開第２００８／０３９１３９号
【特許文献６】国際公開第２００９／１２０１４０号
【特許文献７】米国特許出願公開２０１０／０２１０６３３号明細書
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｕｍｅｈａｒａら，“Ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅ  ｉｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，２４巻，３４−４０頁，２００４年
【非特許文献２】Ｋｏｂａｙａｓｈｉら，“Ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｏｆ  ＣＸ３ＣＲ１＋ＣＤ２８−ＣＤ４＋  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ａｓ  Ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ”，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ．Ｄｉｓ．，１３巻，８３７−８４６頁，２００７年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１経路において阻害作用を有する化合物を見出すことにある。
また、医薬品として用いられる化合物およびその塩ならびにそれらの結晶およびそれらの非晶質体の物性は、薬物のバイオアベラビリティー、原薬の純度、製剤の処方などに大きな影響を与えるため、医薬品開発においては、当該化合物に関し、塩、結晶、非晶質体のいずれが医薬品として最も優れているかを、研究する必要がある。すなわち、本発明のさらなる課題は、原薬としての利用可能性を有する化合物の塩、それらの結晶およびそれらの非晶質体を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、下記式で表される化合物（１）、すなわち、２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸がフラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１経路において阻害作用を有することを見出した。本発明者らは、さらに、化合物（１）の各種の有機カルボン酸塩、それらの結晶およびそれらの非晶質体を単離し、その物性や形態を把握し、種々検討を行い、原薬としての利用可能性を有する有機カルボン酸塩、その結晶およびその非晶質体を見出し、本発明を完成した。
【化１】
0005872105.tif 000002
【００１２】
すなわち、本発明は、
１）２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸の有機カルボン酸塩；
２）有機カルボン酸が、Ｌ−マンデル酸であることを特徴とする、１）記載の塩；
３）有機カルボン酸が、Ｌ−乳酸であることを特徴とする、１）記載の塩；
４）２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸の有機カルボン酸塩の結晶；
５）有機カルボン酸が、Ｌ−マンデル酸であることを特徴とする、４）記載の結晶；
６）有機カルボン酸が、Ｌ−乳酸であることを特徴とする、４）記載の結晶；
７）粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）７．２°に回折ピークを有することを特徴とする、５）記載の結晶；
８）粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１４．４°および１５．７°に回折ピークを有することを特徴とする、７）記載の結晶；
９）粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１０．３°および２３．５°に回折ピークを有することを特徴とする、８）記載の結晶；
１０）粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１２．９°、１４．９°、１７．２°、２０．１°および２４．７°に回折ピークを有することを特徴とする、９）記載の結晶；
１１）１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（ｐｐｍ）１４．１、５２．９、７５．２、１４４．７および１７４．０にピークを有することを特徴とする、５）記載の結晶；
１２）粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）６．９°に回折ピークを有することを特徴とする、６）記載の結晶（Ａ）；
１３）粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１５．７°および１７．１°に回折ピークを有することを特徴とする、１２）記載の結晶（Ａ）；
１４）粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）６．８°に回折ピークを有することを特徴とする、６）記載の結晶（Ｂ）；および
１５）粉末Ｘ線回折において、さらに、回折角度（２θ±０．２°）１３．７°および１６．８°に回折ピークを有することを特徴とする、１４）記載の結晶（Ｂ）
に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、原薬としての利用可能性を有する２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸の有機カルボン酸塩およびその結晶を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２】２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。横軸は回折角２θ、縦軸はピーク強度を示す。
【図３】２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の非晶質体の粉末Ｘ線回折パターンである。横軸は回折角２θ、縦軸はピーク強度を示す。
【図４】２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物の結晶（Ａ）の粉末Ｘ線回折パターンである。横軸は回折角２θ、縦軸はピーク強度を示す。
【図５】２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物の結晶（Ｂ）の粉末Ｘ線回折パターンである。横軸は回折角２θ、縦軸はピーク強度を示す。
【図６】２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸のＴ細胞移入大腸炎モデルにおける体重量減少抑制効果を示すグラフである。横軸は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓から分取したＣＤ４陽性ＣＤ４５ＲＢ高陽性細胞（５×１０５個／ｍｏｕｓｅ）をＳＣＩＤマウスに静脈内投与した日を０日とした場合の経過日数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の化合物（１）の有機カルボン酸塩、その結晶およびその非晶質体ならびにそれらの製造方法について詳細に説明する。
【００１６】
化合物（１）、すなわち、２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸は、後述の製造例１の記載に基づいて製造することができる。
【００１７】
本明細書において、化合物（１）の有機カルボン酸塩とは、薬剤学的に許容される塩を示し、酢酸、コハク酸、グルタル酸、安息香酸、ケイ皮酸、リンゴ酸、シュウ酸、グリコール酸、マレイン酸、酒石酸、ジアセチル酒石酸、フマル酸、クエン酸、マロン酸、Ｌ−乳酸およびＬ−マンデル酸などからなる群より選択される一の有機カルボン酸および化合物（１）を含む塩である。ここで「塩」とは、化合物（１）と化学的に可能な当量数の有機カルボン酸との反応によって生じる化合物で、化合物（１）の分子内の塩基の陽性部分と有機カルボン酸の陰性成分とからなるものをいう。
【００１８】
有機カルボン酸塩としては、例えば、酢酸塩、コハク酸塩、グルタル酸塩、安息香酸塩、ケイ皮酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、グリコール酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、ジアセチル酒石酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、Ｌ−乳酸塩、Ｌ−マンデル酸塩などが挙げられる。有機カルボン酸塩の例としては、好ましくは、シュウ酸塩、グリコール酸塩、Ｌ−乳酸塩、Ｌ−マンデル酸塩などが挙げられ、より好ましくは、Ｌ−乳酸塩、Ｌ−マンデル酸塩などが挙げられる。
【００１９】
化合物（１）の有機カルボン酸塩は、溶媒和物でもよい。本明細書において、化合物（１）の有機カルボン酸塩の溶媒和物とは、化合物（１）の有機カルボン酸塩と溶媒分子とが一緒になって形成する固体をいう。溶媒和物としては、例えば、化合物（１）の有機カルボン酸塩と、アセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノンなどのケトン系溶媒とから形成される溶媒和物；化合物（１）の有機カルボン酸塩と、酢酸エチル、酢酸メチル等のエステル系溶媒とから形成される溶媒和物；化合物（１）の有機カルボン酸塩と、１，２−ジメトキシエタン、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルのようなエーテル系溶媒とから形成される溶媒和物；化合物（１）の有機カルボン酸塩と、メタノール、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノールなどのアルコール系溶媒とから形成される溶媒和物；化合物（１）の有機カルボン酸塩と、１−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの極性溶媒とから形成される溶媒和物；化合物（１）の有機カルボン酸塩と水とから形成される水和物などが挙げられる。
【００２０】
化合物（１）の有機カルボン酸塩またはその溶媒和物は、結晶であっても非晶質体であってもよい。化合物（１）の有機カルボン酸塩またはその溶媒和物の好ましい具体例としては、例えば、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩、化合物（１）・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物などが挙げられる。
【００２１】
化合物（１）の有機カルボン酸塩またはその溶媒和物の好ましい形態をさらに具体的に挙げれば、以下の結晶が挙げられる。
【００２２】
（ａ）粉末Ｘ線回折［回折角度（２θ±０．２°）］において、例えば、
（１）７．２°
（２）１０．３°
（３）１２．９°
（４）１４．４°
（５）１４．９°
（６）１５．７°
（７）１７．２°
（８）２０．１°
（９）２３．５°
（１０）２４．７°
に回折ピークを有していることを特徴とする、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶（ここにおいて、７．２°、１０．３°、１４．４°、１５．７°および２３．５°の回折ピーク、中でも、７．２°、１４．４°および１５．７°の回折ピーク、特に、７．２°の回折ピークは、本結晶において特徴的なピークである）、または
１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（ｐｐｍ）１４．１、５２．９、７５．２、１４４．７および１７４．０にピークを有することを特徴とする、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶、
（ｂ）粉末Ｘ線回折［回折角度（２θ±０．２°）］において、例えば、
（１）６．９°
（２）９．２°
（３）１０．０°
（４）１０．８°
（５）１３．８°
（６）１４．８°
（７）１５．７°
（８）１７．１°
（９）２０．５°
（１０）２３．８°
に回折ピークを有していることを特徴とする、化合物（１）・Ｌ−乳酸・溶媒和物の結晶（Ａ）（ここにおいて、６．９°、１４．８°、１５．７°、１７．１°および２３．８°の回折ピーク、中でも、６．９°、１５．７°および１７．１°の回折ピーク、特に、６．９°の回折ピークは、本結晶において特徴的なピークである）および
（ｃ）粉末Ｘ線回折［回折角度（２θ±０．２°）］において、例えば、
（１）  ６．８°
（２）１０．８°
（３）１３．７°
（４）１５．１°
（５）１６．８°
（６）１８．１°
（７）１８．９°
（８）２３．５°
（９）２４．７°
（１０）２５．６°
に回折ピークを有していることを特徴とする、化合物（１）・Ｌ−乳酸・溶媒和物の結晶（Ｂ）（ここにおいて、６．８°、１３．７°、１６．８°、１８．１°および１８．９°の回折ピーク、中でも、６．８°、１３．７°および１６．８°の回折ピーク、特に、６．８°の回折ピークは、本結晶において特徴的なピークである）などが好ましい具体例として挙げられる。
【００２３】
上記記載の粉末Ｘ線回折における特徴的ピークは、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶、化合物（１）・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物（Ａ）の結晶および化合物（１）・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物（Ｂ）の結晶にそれぞれ特有なものである。
【００２４】
一般に、粉末Ｘ線回折における回折角度（２θ）は、±０．２°の範囲内で誤差が生じ得るから、上記の回折角度の値は、±０．２°程度の範囲内の数値も含むものとして理解される必要がある。したがって、粉末Ｘ線回折におけるピークの回折角度が完全に一致する結晶だけでなく、ピークの回折角度が±０．２°程度の誤差で一致する結晶も本発明に含まれる。それ故に、本明細書において、例えば、「回折角度（２θ±０．２°）７．２°に回折ピークを有する」とは、「回折角度（２θ）７．０°〜７．４°に回折ピークを有する」ことを意味し、その他の粉末Ｘ線回折における回折角度（２θ）の場合も同様である。
【００２５】
上記記載の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける特徴的ピークは、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルおいて特有のものである。
【００２６】
本明細書において、「化学シフト（ｐｐｍ）１４．１、５２．９、７５．２、１４４．７および１７４．０にピークを有する」とは、「通常の測定条件または本明細書と実質的に同一の条件にて１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトル測定を行い、それぞれ、化学シフト（ｐｐｍ）１４．１、５２．９、７５．２、１４４．７および１７４．０と実質的に同等なピークを有すること」を意味する。
【００２７】
「実質的に同等なピークを有する」か否かの判断に際して、一般に、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフト（ｐｐｍ）は、±０．５ｐｐｍの範囲内で誤差が生じ得るから、上記の化学シフトの値は、±０．５ｐｐｍ程度の範囲内の数値も含むものとして理解される必要がある。したがって、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトが完全に一致する結晶だけでなく、化学シフトが±０．５ｐｐｍ程度の誤差で一致する結晶も本発明に含まれる。それ故に、本明細書において、例えば、「化学シフト（ｐｐｍ）１４．１にピークを有する」とは、「化学シフト（ｐｐｍ）１３．６〜１４．６にピークを有する」ことを意味し、その他の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトの場合も同様である。
【００２８】
次に、化合物（１）のＬ−マンデル酸塩、その結晶およびその非晶質体ならびにその溶媒和物の製造方法について詳細に説明する。なお、その他の化合物（１）・有機カルボン酸塩、それらの結晶およびそれらの非晶質体、または、それらの溶媒和物についても以下に詳細に説明する方法またはこの方法に準じて製造することが可能である。特に、化合物（１）・有機カルボン酸塩・溶媒和物の製造の際には、所望の溶媒和物の溶媒を加えることを要する。
【００２９】
［化合物（１）のＬ−マンデル酸塩の製造方法］
化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩は、通常の有機カルボン酸塩を製造する方法により得ることができる。具体的には、例えば、化合物（１）に直接、予め溶媒に溶解させたＬ−マンデル酸を加えることにより、または化合物（１）を溶媒に、必要に応じて加温下に溶解させ、次いで、得られる溶液に、予め溶媒に溶解させたＬ−マンデル酸を加え、室温下もしくは冷却バスで冷却しながら数分から５０〜６０時間程度撹拌することにより、または室温下あるいは冷却バスで冷却しながら数分から５０〜６０時間程度放置することにより、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩を製造することができる。また、化合物（１）およびＬ−マンデル酸に直接溶媒を加え溶解させても、製造することができる。これらの製造方法により、化合物（１）のＬ−マンデル酸塩を、結晶あるいは非晶質体として得ることができる。
【００３０】
ここで使用する溶媒としては、例えば、アセトンまたはメチルエチルケトンなどのアルキルケトン系溶媒；酢酸エチル；ヘキサン；アセトニトリル；例えば、エーテル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルまたは１，２−ジメトキシエタンなどのエーテル系溶媒：例えば、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノールまたはｔ−ブチルアルコールなどのアルコール系溶媒および水からなる群より選ばれる１種の溶媒または２種以上の溶媒の混合溶媒を挙げることができる。より好ましくは、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、エタノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１２）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１．５：８〜１．５：１３．５）などの溶媒が挙げられる。
【００３１】
また、溶媒の使用量は、化合物（１）とＬ−マンデル酸とが加熱により溶解する量を下限とし、塩の収量が著しく低下しない量を上限として適宜選択することができる。好ましくは、化合物（１）の重量に対する容量比は、例えば、５〜１００倍量（ｖ／ｗ）であり、より好ましくは、例えば、溶媒としてアセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、エタノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１２）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１．５：８〜１．５：１３．５）などの溶媒を使用する場合、化合物（１）の重量に対する容量比は、例えば、５〜２０倍量（ｖ／ｗ）である。
【００３２】
化合物（１）とＬ−マンデル酸とを溶解する温度は、使用する溶媒に応じて適宜選択すればよい。好ましくは、例えば、使用する溶媒の還流温度から１５℃であり、より好ましくは、例えば、１５〜１００℃である。
【００３３】
晶析時の冷却速度を変えると、態様の異なる結晶（多形）を与えうるので、結晶の品質や粒度などへの影響を考慮して適宜冷却速度を調整して実施することが望ましく、好ましくは、例えば、５〜４０℃／時間の速度での冷却、より好ましくは、例えば、１５〜２５℃／時間の速度での冷却することができる。また、最終的な晶析温度は、結晶の収量と品質などから適宜選択することができるが、好ましくは、例えば、−２５〜３０℃である。
【００３４】
結晶晶析において、種結晶（化合物（１）・Ｌ−マンデル酸の結晶）を加えても、加えなくてもよい。種結晶を加える温度は、特に限定されないが、好ましくは、例えば、０〜６０℃である。
【００３５】
晶析した結晶を通常の濾過操作で分離し、必要に応じて濾別した結晶を溶媒で洗浄し、さらにこれを乾燥して、目的の結晶を得ることができる。結晶の洗浄に使用する溶媒は、好ましくは、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、アセトン／酢酸イソプロピル（容量比１：９）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１０）などの溶媒であり、より好ましくは、例えば、酢酸エチル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１０）、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、アセトン／酢酸イソプロピル（容量比１：９）などである。
【００３６】
次に、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶を製造する方法およびその結晶を乾燥する方法についてさらに詳細に説明する。なお、その他の化合物（１）・有機カルボン酸塩の結晶、またはそれらの溶媒和物の結晶についても以下に詳細に説明する方法またはこの方法に準じて製造し、乾燥することができる。
【００３７】
［化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の晶析方法］
化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶は、製造例１に従い化合物（１）を製造し、前述した［化合物（１）のＬ−マンデル酸塩の製造方法］に従い、化合物（１）に直接、予め溶媒に溶解させたＬ−マンデル酸を加えることにより、または化合物（１）を溶媒に、必要に応じて加温下に、溶解させ、次いで、得られる溶液に、予め溶媒に溶解させたＬ−マンデル酸を加え、室温下もしくは冷却バスで冷却しながら数分から５０〜６０時間程度撹拌することにより、または室温下もしくは冷却バスで冷却しながら数分から５０〜６０時間程度放置することにより、晶析させることができる。また、化合物（１）およびＬ−マンデル酸に直接溶媒を加え溶解させても、製造することができる。また、一旦化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩を得た後、これを溶媒に溶解させ、結晶を晶析させることもできる。
【００３８】
以下に化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩を再結晶する方法について詳細に説明する。
晶析に使用する化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩は、非晶質体でも結晶（複数の結晶多形からなるものを含む）でもよく、これらの混合物であってもよい。
【００３９】
晶析に使用する溶媒は、好ましくは、例えば、アセトン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、ヘキサン、ヘプタン、アセトニトリル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、テトラヒドロフラン、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノール、ジメチルスルホキシドおよび水からなる群より選ばれる１種の溶媒または２種以上の溶媒の混合溶媒を挙げることができ、より好ましくは、例えば、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド／酢酸イソプロピル／ヘプタン（容量比３：２：１０）、ジメチルスルホキシド／酢酸イソプロピル（容量比１：８〜１：１６）、ジメチルスルホキシド／イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比３：３：２０〜３：２：２５）、ジメチルスルホキシド／アセトン／酢酸イソプロピル（容量比１．７０：３：２５）、ジメチルスルホキシド／アセトン／ヘプタン（容量比１．６５：３：２５）、ジメチルスルホキシド／酢酸エチル／ヘプタン（容量比２．０：１０：１０）などが挙げられる。
【００４０】
また、溶媒の使用量は、化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩が加熱により溶解する量を下限とし、結晶の収量が著しく低下しない量を上限として適宜選択することができる。
好ましくは化合物（１）の重量に対する容量比は、例えば、５〜１００倍量（ｖ／ｗ）であり、より好ましくは、例えば、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド／酢酸イソプロピル／ヘプタン（容量比３：２：１０）、ジメチルスルホキシド／酢酸イソプロピル（容量比１：８〜１：１６）、ジメチルスルホキシド／イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比３：３：２０〜３：２：２５）、ジメチルスルホキシド／アセトン／酢酸イソプロピル（容量比１．７０：３：２５）、ジメチルスルホキシド／アセトン／ヘプタン（容量比１．６５：３：２５）、ジメチルスルホキシド／酢酸エチル／ヘプタン（容量比２．０：１０：１０）などを使用する場合、化合物（１）の重量に対するに対する容量比は、例えば、１５〜４０倍量（ｖ／ｗ）である。
【００４１】
化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩を加熱して溶解する温度は、溶媒に応じて化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩が溶解する温度を適宜選択すればよい。好ましくは、例えば、１５℃から再結晶溶媒の還流温度であり、より好ましくは、例えば、４０〜１００℃である。晶析時の冷却速度を変えると、態様の異なる結晶（多形）を与えうるので、結晶の品質や粒度などへの影響を考慮して適宜冷却速度を調整して実施することが望ましく、好ましくは、例えば、５〜４０℃／時間の速度での冷却、より好ましくは、例えば、１５〜２５℃／時間の速度で冷却することが好ましい。また、最終的な晶析温度は、結晶の収量と品質などから適宜選択することができ、好ましくは、例えば、−２５〜３０℃である。
【００４２】
結晶晶析において、種結晶（化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶）を加えても、加えなくてもよい。種結晶を加える温度は特に限定されないが、好ましくは、例えば、６０℃以下であり、より好ましくは、例えば、０℃〜６０℃、さらに好ましくは、例えば、１５〜６０℃である。
【００４３】
晶析した結晶は、通常の濾過操作で分離し、必要に応じて濾別した結晶を溶媒で洗浄し、さらにこれを乾燥して、目的の結晶を得ることができる。結晶の洗浄に使用する溶媒は、好ましくは、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１０）、アセトン／酢酸イソプロピル（容量比１：４〜１：９）などの溶媒であり、より好ましくは、例えば、酢酸エチル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１０）、アセトン／酢酸イソプロピル（容量比１：９）などである。
【００４４】
［化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の乾燥方法］
上記したように濾過操作で分離した結晶は、適宜、大気下に放置することにより、または加熱することにより、乾燥することができる。乾燥時間は、残留溶媒が所定の量を下回るまでの時間を製造量、乾燥装置、乾燥温度などに応じて適宜選択すればよい。また、乾燥は通風下でも減圧下でも行うことができる。減圧度は、製造量、乾燥装置、乾燥温度などに応じて適宜選択すればよい。得られた結晶は、乾燥後、必要に応じて大気中に放置することもできる。
【００４５】
次に、化合物（１）のＬ−マンデル酸塩の非晶質体の製造方法および乾燥方法について詳細に説明する。なお、その他の化合物（１）・有機カルボン酸塩またはそれらの溶媒和物の非晶質体についても以下に詳細に説明する方法またはこの方法に準じて製造し、乾燥することができる。
【００４６】
［化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の非晶質体の製造方法］
化合物（１）と、Ｌ−マンデル酸との塩の非晶質体は、通常の非晶質体を製造する方法により得ることができる。具体的には、製造例１によって製造された化合物（１）を、溶媒に、必要に応じて加温下に、溶解させた後、Ｌ−マンデル酸を加え、数分から５０〜６０時間程度撹拌し、または放置し、その後、溶媒を減圧下留去することにより製造することができる。または、化合物（１）とＬ−マンデル酸に直接溶媒を加え溶解させ、その後、溶媒を減圧下留去することにより製造することができる。あるいは、このようにして得られた化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩を凍結乾燥することによっても、非晶質体を得ることができる。
ここで使用する溶媒としては、例えば、アセトンまたはメチルエチルケトンなどのアルキルケトン系溶媒；酢酸エチル；ヘキサン；アセトニトリル；例えば、エーテル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルまたは１，２−ジメトシエタンなどのエーテル系溶媒：例えば、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノールまたはｔ−ブチルアルコールなどのアルコール系溶媒および水からなる群より選ばれる１種の溶媒または２種以上の溶媒の混合溶媒を挙げることができる。より好ましくは、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、エタノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１２）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１．５：８〜１．５：１３．５）などの溶媒が挙げられる。
【００４７】
また、溶媒の使用量は、化合物（１）とＬ−マンデル酸とが加熱により溶解する量を下限とし、塩の収量が著しく低下しない量を上限として適宜選択することができる。好ましくは化合物（１）の重量に対する容量比は、例えば、５〜１００倍量（ｖ／ｗ）であり、より好ましくは、溶媒として、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）、エタノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１２）、イソプロパノール／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１．５：８〜１．５：１３．５）などの溶媒を使用する場合、化合物（１）の重量に対する容量比は、例えば、５〜２０倍量（ｖ／ｗ）である。
【００４８】
化合物（１）とＬ−マンデル酸とを溶解する温度は、使用する溶媒に応じて化合物（１）と有機カルボン酸とを溶解する温度を適宜選択すればよい。好ましくは、例えば、１５℃から使用する溶媒の還流温度であり、より好ましくは、例えば、１５〜１００℃である。
【００４９】
この様にして得られた溶液の溶媒を減圧下留去することにより、化合物（１）のＬ−マンデル酸塩の非晶質体を得ることができる。また、得られた化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩を、例えば、エタノール、１−プロパノールまたはイソプロパノール、ｔ−ブチルアルコールなどのアルコール系溶媒、ジオキサンなどのエーテル系溶媒、ジメチルスルホキシドなどの極性溶媒および水からなる群から選択される１種または、２種以上の溶媒の混合溶媒、好ましくは、例えば、水、ｔ−ブチルアルコール、ジオキサン、ジメチルスルホキシドなどを用いて、凍結乾燥することにより、溶解性に優れた、化合物（１）のＬ−マンデル酸塩の非晶質体を得ることができる。
【００５０】
［化合物（１）・Ｌ−マンデル酸塩の非晶質体の乾燥方法］
上記のようにして得られた非晶質体は、適宜、大気下に放置することにより、または加熱することにより、乾燥することができる。乾燥時間は、残留溶媒が所定の量を下回るまでの時間を製造量、乾燥装置、乾燥温度などに応じて適宜選択すればよい。また、乾燥は通風下でも減圧下でも行うことができる。減圧度は、製造量、乾燥装置、乾燥温度などに応じて適宜選択すればよい。得られた非晶質体は、乾燥後、必要に応じて大気中に放置することもできる。
【００５１】
化合物（１）の有機カルボン酸塩は、フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１経路において阻害作用を有し、潰瘍性大腸炎またはクローン病などの炎症性腸疾患治療剤の有効成分としての利用可能性を有している。
【００５２】
化合物（１）の有機カルボン酸塩は、医薬として使用する場合は、経口もしくは非経口的に、例えば、フラクタルカイン−ＣＸ３ＣＲ１が原因となる、潰瘍性大腸炎またはクローン病などの炎症性腸疾患治療剤として投与することができる。本発明にかかる医薬の投与量は、通常、症状、年齢、性別、体重等に応じて異なるが、所望の効果を奏するのに十分な量であればよい。例えば、成人の場合、１日あたり約０．１〜５０００ｍｇ（好ましくは０．５〜１０００ｍｇ、より好ましくは１〜６００ｍｇ）が、１日または複数日の間に１回または１日に２〜６回に分けて使用される。
【００５３】
化合物（１）の有機カルボン酸塩は、通常の方法により製剤化が可能であり、剤形としては、例えば、経口剤（錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤等）、注射剤（静脈内投与用、筋肉内投与用、皮下投与用、腹腔内投与用等）、外用剤（経皮吸収製剤（軟膏剤、貼付剤等）、点眼剤、点鼻剤、坐剤等）とすることができる。
【００５４】
経口用固形製剤を製造する場合には、化合物（１）の有機カルボン酸塩に、必要に応じて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤等を添加し、常法により錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤を製造することができる。また、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等は、必要に応じて、皮膜コーティングを施してもよい。
【００５５】
賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、結晶セルロース等を、結合剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等を、崩壊剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム等を、滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等を、着色剤としては、例えば、酸化チタン等を、皮膜コーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース等を挙げることができるが、もちろんこれらに限定される訳ではない。
【００５６】
これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形製剤は、通常、０．００１〜９９．５重量％、好ましくは０．００１〜９０重量％等の化合物（１）の有機カルボン酸塩を含むことができる。
【００５７】
注射剤（静脈内投与用、筋肉内投与用、皮下投与用、腹腔内投与用等）を製造する場合には、化合物（１）の有機カルボン酸塩に、必要に応じて、ｐＨ調整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、抗酸化剤、保存剤（防腐剤）、等張化剤等を添加し、常法により注射剤を製造することができる。また、凍結乾燥して、用時溶解型の凍結乾燥製剤としてもよい。
【００５８】
ｐＨ調整剤や緩衝剤としては、例えば、有機酸または無機酸および／またはその塩等を、懸濁化剤としては、例えば、メチルセルロース、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロースナトリウム等を、溶解補助剤としては、例えば、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート等を、抗酸化剤としては、例えば、α−トコフェロール等を、保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル等を、等張化剤としては、例えば、ブドウ糖、塩化ナトリウム、マンニトール等を挙げることができるが、もちろんこれらに限定される訳ではない。
【００５９】
これらの注射剤は、通常、０．０００００１〜９９．５重量％、好ましくは０．００００１〜９０重量％等の化合物（１）の有機カルボン酸塩を含むことができる。
【００６０】
外用剤を製造する場合には、化合物（１）の有機カルボン酸塩に、基剤原料を添加し、必要に応じて、例えば、上記の保存剤、安定剤、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、着色剤等を加えて、常法により、例えば、経皮吸収製剤（軟膏剤、貼付剤等）、点眼剤、点鼻剤、坐剤等を製造することができる。
【００６１】
使用する基剤原料としては、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される各種原料を用いることが可能である。具体的には、例えば、動植物油、鉱物油、エステル油、ワックス類、乳化剤、高級アルコール類、脂肪酸類、シリコン油、界面活性剤、リン脂質類、アルコール類、多価アルコール類、水溶性高分子類、粘土鉱物類、精製水等の原料を挙げることができる。
【００６２】
これらの外用剤は、通常０．０００００１〜９９．５重量％、好ましくは０．００００１〜９０重量％等の化合物（１）の有機カルボン酸塩を含むことができる。
【実施例】
【００６３】
以下に、製造例および実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００６４】
製造例１
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸の調製【００６５】
製造例１ａ
ベンジル  （２Ｅ）−ブト−２−エノエート
クロトン酸（７０ｇ，８１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４６７ｍＬ）に溶解し、窒素下氷浴で冷却し、炭酸カリウム（６１．６ｇ，４４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物に、ベンジルブロミド（９１．７ｍＬ，７７２ｍｍｏｌ）を２０分かけて滴下した。反応混合物を室温にて１８時間攪拌した。反応混合物に酢酸エチルを加え、セライトでろ過した。ろ液を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムにて乾燥し、乾燥剤を濾過後、減圧下濃縮し、標題化合物（１４２ｇ，収率：９９．４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．８７−１．９０（３Ｈ，ｍ），５．１７（２Ｈ，ｓ），５．８７−５．９２（１Ｈ，ｍ），６．９８−７．０７（１Ｈ，ｍ），７．２６−７．３９（５Ｈ，ｍ）．【００６６】
製造例１ｂ
ベンジル  （３ＲＳ，４ＳＲ）−１−ベンジル−４−メチルピロリジン−３−カルボキシレート
製造例１ａで得たベンジル  （２Ｅ）−ブト−２−エノエート（２０．５ｇ，１１６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、混合物を攪拌しながら氷浴にて冷却した。トリフルオロ酢酸（２５７μＬ，３．４７ｍｍｏｌ）を加え、Ｎ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）ベンジルアミン（３３．１ｇ，１３９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５ｍＬ）にて洗い込みながら内温が６２℃を超えないよう、１５分かけて反応液に滴下した。反応液を室温になるまで放置し、１５時間攪拌した。反応液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル／ヘプタン）により精製し、標題化合物（３８ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．１４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ），２．１８−２．２２（１Ｈ，ｍ），２．４８−２．６５（２Ｈ，ｍ），２．７５−２．８５（２Ｈ，ｍ），２．９０−２．９４（１Ｈ，ｍ），３．５４−３．６６（２Ｈ，ｍ），５．１３（２Ｈ，ｓ），７．２０−７．４０（１０Ｈ，ｍ）．【００６７】
製造例１ｃ
ベンジル  （３ＲＳ，４ＳＲ）−１−ベンジル−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−カルボキシレート
製造例１ｂで得たベンジル  （３ＲＳ，４ＳＲ）−１−ベンジル−４−メチルピロリジン−３−カルボキシレート（３０ｇ，９７．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）に溶解させ、窒素下攪拌しながら−７０℃まで冷却した。１．１１Ｍ  リチウム  ジイソプロピルアミド／ｎ−ヘキサン−テトラヒドロフラン溶液（１０５ｍＬ，１１６ｍｍｏｌ）を滴下し、内温が−６４．３℃を超えないよう２０分かけて滴下した。混合物を−７０℃にて１時間攪拌した後、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）とｔｅｒｔ−ブチル  ブロモアセテート（２６．６ｇ，１３６ｍｍｏｌ）を内温が−６０℃を超えないよう１０分かけて滴下した。反応混合物を−７０℃にてさらに１時間攪拌した後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。反応混合物をその後すぐに水で希釈し、酢酸エチルを加えた。有機層を飽和食塩水、５Ｎ塩酸水溶液にて洗浄後、硫酸マグネシウムにて乾燥し、乾燥剤を濾過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル／ヘプタン）により精製した。さらに残渣を、ＮＨシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン／酢酸エチル＝９８／２）により精製し、標題化合物（６ｇ，収率：１４．５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．８６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ），１．３４（９Ｈ，ｓ），２．０５−２．１５（２Ｈ，ｍ），２．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），２．９１−３．００（３Ｈ，ｍ），３．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．５９−３．７２（２Ｈ，ｍ），５．０８−５．１６（２Ｈ，ｍ），７．１９−７．３９（１０Ｈ，ｍ）．
同様の方法で標題化合物１８．１ｇを得た。【００６８】
製造例１ｄ
１，３−ジベンジル  （３ＲＳ，４ＳＲ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−１、３−ジカルボキシレート
製造例１ｃと同様にして得たベンジル  （３ＲＳ，４ＳＲ）−１−ベンジル−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−カルボキシレート（１１．７ｇ，２７．６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１１７ｍＬ）に溶解させ、ベンジル  クロロホルメート（２３．７ｍＬ，１６６ｍｍｏｌ）を、内温が２２℃を超えないよう、２０分かけて反応液に滴下した。混合物を室温にて１２時間攪拌した後、減圧下、溶媒を留去した。残渣をＮＨシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：酢酸エチル／ヘプタン）により精製し、標題化合物（９．１ｇ，収率：７０．５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．８４−０．９０（３Ｈ，ｍ），１．３２−１．４６（９Ｈ，ｍ），２．０９−２．１６（１Ｈ，ｍ），２．２１−２．２７（１Ｈ，ｍ），３．０４−３．１４（２Ｈ，ｍ），３．３３−３．３８（１Ｈ，ｍ），３．６０−３．６８（１Ｈ，ｍ），４．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ），５．０７−５．２０（４Ｈ，ｍ），７．２６−７．３６（１０Ｈ，ｍ）．
ＨＰＬＣによる分析；
（分析条件１）カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（ダイセル化学工業社製）（０．４６ｃｍφ×１５ｃｍ）、溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ．、検出：ＵＶ（２１０ｎｍ）
（分析結果）得られた標題化合物を上記分析条件１で分析したところ、保持時間８．５６分のピークと１０．８５分のピークが認められた。
また、別途得た標題化合物を上記と別のキラルカラムにて分析した。
（分析条件２）カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＡ（ダイセル化学工業社製）（０．４６ｃｍφ×１５ｃｍ）、溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ．、検出：ＵＶ（２１０ｎｍ）
（分析結果）得られた標題化合物を上記分析条件２で分析したところ、保持時間６．７８分のピークと８．２０分のピークが認められた。【００６９】
製造例１ｅ
（３Ｓ，４Ｒ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−カルボン酸
製造例１ｄで得た１，３−ジベンジル  （３ＲＳ，４ＳＲ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−１、３−ジカルボキシレート（９．１ｇ）を以下の２つの分取条件ＡまたはＢで繰り返し光学分割を行った。
ＨＰＬＣによる光学分割；
（分取条件Ａ）カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（ダイセル化学工業社製）（２ｃｍφ×２５ｃｍ）、溶離液：ヘキサン／エタノール＝８５／１５（ｖ／ｖ）、流速：８−１０ｍＬ／ｍｉｎ．
（分取条件Ｂ）カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＡ（ダイセル化学工業社製）（３ｃｍφ×２５ｃｍ）、溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、流速：２２ｍＬ／ｍｉｎ．
保持時間の短いピークを分取後、減圧下濃縮し、光学活性体を得た。この操作を３回繰り返した（３ロット）。３ロットを以下の分析条件にて分析した。
ＨＰＬＣによる分析；
（分析条件）カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ（ダイセル化学工業社製）（０．４６ｃｍφ×１５ｃｍ）、溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ．、検出：ＵＶ（２１０ｎｍ）
（分析結果）保持時間は９．０分−９．３分であり、すべてのロットで鏡像体過剰率は＞９９％ｅｅであった。
３ロットをまとめて、得られた光学活性体（４．０４ｇ）をメタノール（１２１ｍＬ）に溶解させ、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．７７ｇ）を加えて、水素ガスで置換した。混合物を室温にて１３時間攪拌した後、温水（３０−４０℃、１２２ｍＬ）を加えて攪拌し、析出している固体を溶解させた。Ｐｄ／Ｃをろ過後、溶媒を濃縮、乾燥し、標題化合物（２．１ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．９７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．４２（９Ｈ，ｓ），２．１５−２．２２（１Ｈ，ｍ），２．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），２．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），３．０４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ），３．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），３．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，１２Ｈｚ），４．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ）．
各化学シフトは、重水中のｓｏｌｖｅｎｔ  ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｐｅａｋの化学シフトを４．７９として補正した値を示す。【００７０】
製造例１ｆ
（３Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−カルボン酸
製造例１ｅで得た（３Ｓ，４Ｒ）−３−［２−（ｔｅｒｔ―ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−カルボン酸（１．８ｇ、７．４ｍｍｏｌ）、ベンズアルデヒド（１．５１ｍＬ、１４．８ｍｍｏｌ）、酢酸（０．６３５ｍＬ、１１．１ｍｍｏｌ）、ナトリウム  トリアセトキシボロヒドリド（３．１４ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）およびメタノール（３５ｍＬ）の混合物を４０℃で３８時間３０分加熱した。反応混合物を濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＯＤＳシリカゲル，溶出溶媒：水／メタノール）にて精製し、標題化合物をロットＡ（５８４ｍｇ），ロットＢ（７０８ｍｇ）として得た。
ロットＡの１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．３８（９Ｈ，ｓ），２．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），２．１５−２．２８（１Ｈ，ｂｒｓ），２．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），３．１０−３．４２（３Ｈ，ｍ），４．００−４．１０（１Ｈ，ｍ），４．３０−４．４０（１Ｈ，ｂｒｓ），４．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ），７．４５−７．５３（５Ｈ，ｍ）．
ロットＢの１Ｈ−ＮＭＲ：ロットＡの１Ｈ−ＮＭＲと一致した。【００７１】
製造例１ｇ
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−アミド］ピペリジン−１−カルボキシレート
製造例１ｆと同様の方法で得た（３Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−カルボン酸（９４２ｍｇ，２．８３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）溶液にｔｅｒｔ−ブチル  ４−アミノピペリジン−１−カルボキシレート（８４９ｍｇ，４．２４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．１８ｍＬ，８．４８ｍｍｏｌ）とベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ；２．２１ｇ，４．２４ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜攪拌した。反応液に酢酸エチルを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾過後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標題化合物（１．３３ｇ，収率：９１．１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．２０−１．４０（２Ｈ，ｍ），１．４０（９Ｈ，ｓ），１．４８（９Ｈ，ｓ），１．７８−１．８８（１Ｈ，ｍ），１．９２−１．９８（１Ｈ，ｍ），１．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），２．０３−２．０９（１Ｈ，ｍ），２．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），２．５８−２．６８（２Ｈ，ｍ），２．８９−２．９５（２Ｈ，ｍ），３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．６６（２Ｈ，ｓ），３．８３−４．００（３Ｈ，ｍ），７．２３−７．３５（５Ｈ，ｍ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５３８．２（Ｍ＋Ｎａ）＋．【００７２】
製造例１ｈ
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−アミド］ピペリジン−１−カルボキシレート
製造例１ｇで得たｔｅｒｔ−ブチル  ４−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−アミド］ピペリジン−１−カルボキシレート（１．３３ｇ，２．５８ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）溶液に２０％水酸化パラジウム（７２４ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、終夜攪拌した。反応液をろ過後、濾液を減圧下濃縮し、標題化合物（１．０４ｇ，収率：９４．７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．２０−１．５２（２Ｈ，ｍ），１．４１（９Ｈ，ｓ），１．４３（９Ｈ，ｓ），１．８０−２．１０（５Ｈ，ｍ），２．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），２．５５−２．６１（１Ｈ，ｍ），２．８０−３．０６（２Ｈ，ｍ），２．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ），３．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．８０−４．００（３Ｈ，ｍ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２６．１（Ｍ＋Ｈ）＋【００７３】
製造例１ｉ
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−４−メチルピロリジン−３−アミド］ピペリジン−１−カルボキシレート
製造例１ｈで得たｔｅｒｔ−ブチル  ４−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−４−メチルピロリジン−３−アミド］ピペリジン−１−カルボキシレート（３４５ｍｇ，０．８１１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（脱水）（１０ｍＬ）の溶液に２−（ブロモメチル）−１−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン（４４３ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（２４４ｍｇ）を加え、４５℃にて６時間、４０℃にて２日間攪拌した。反応液に酢酸エチルを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾過後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標題化合物（３２０ｍｇ，収率：６３．８％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．１３−１．１８（２Ｈ，ｍ），１．３９（９Ｈ，ｓ），１．４９（９Ｈ，ｓ），１．５３−１．６５（１Ｈ，ｍ），１．７６−１．８６（１Ｈ，ｍ），１．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），２．０２−２．１０（１Ｈ，ｍ），２．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），２．６０−２．８０（３Ｈ，ｍ），２．８８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ），３．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），４．０９−４．２５（５Ｈ，ｍ），７．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６４０．２（Ｍ＋Ｎａ）＋．【００７４】
製造例１ｊ
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−４−メチル−３−［（ピペリジン−４−イル）カルバモイル］ピロリジン−３−イル］酢酸
製造例１ｉで得たｔｅｒｔ−ブチル  ４−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−２−オキソエチル］−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−４−メチルピロリジン−３−アミド］ピペリジン−１−カルボキシレート（３２０ｍｇ，０．５１８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（脱水）（８ｍＬ）溶液に氷冷下トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）を加え、室温で２．５時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、残渣をＯＤＳカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：水／メタノール）にて精製し、標題化合物を含む混合物（３４４ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ），１．４３−１．６３（２Ｈ，ｍ），１．７６−１．８９（１Ｈ，ｍ），１．９２−２．００（１Ｈ，ｍ），２．０３−２．１９（２Ｈ，ｍ），２．５５−２．６８（２Ｈ，ｍ），２．９１−３．１０（４Ｈ，ｍ），３．２５−３．３６（２Ｈ，ｍ），３．４５−３．５９（１Ｈ，ｍ），３．７５−４．１８（３Ｈ，ｍ），７．４１−７．７６（３Ｈ，ｍ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４６２．３（Ｍ＋Ｈ）＋【００７５】
製造例１ｋ
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸
製造例１ｊの方法により得た２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−４−メチル−３−［（ピペリジン−４−イル）カルバモイル］ピロリジン−３−イル］酢酸の混合物（３４４ｍｇ，０．７４５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（脱水）（１０ｍＬ）の溶液にシクロヘキス−１−エン−１−カルバルデヒド（４２３μＬ，３．７３ｍｍｏｌ）、酢酸（３００μＬ）とナトリウム  トリアセトキシボロヒドリド（７８９ｍｇ，３．７３ｍｍｏｌ）を加え、終夜攪拌した。反応液に水とメタノールを加え、減圧濃縮し、残渣をＯＤＳカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：水／メタノール）にて精製した。精製した物をジクロロメタンに溶解し、ヘキサンを加え懸濁させ、濃縮することで標題化合物（１８０ｍｇ，収率：４３．４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．８９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．２３−１．３８（２Ｈ，ｍ），１．４４−１．８２（６Ｈ，ｍ），１．８２−１．９６（１Ｈ，ｍ），１．９６−２．２５（５Ｈ，ｍ），２．３０−２．４５（２Ｈ，ｍ），２．５５−２．６８（２Ｈ，ｍ），２．９２−３．２０（５Ｈ，ｍ），３．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．６４−３．７８（１Ｈ，ｍ），３．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），５．７６（１Ｈ，ｓ），７．４７−７．５２（１Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）．
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５７８．３（Ｍ＋Ｎａ）＋【００７６】
実施例１
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩結晶の調製
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸（１０２．８ｍｇ）にＬ−マンデル酸の酢酸エチル溶液（２０ｍｇ／ｍＬ）を１４０７μＬ（１当量）添加し、得られた混合溶液を超音波処理後、室温にてマグネティックスターラーにより攪拌した。一晩混合溶液を攪拌後、溶液中に固体を認めたため、固体を濾取し、これを酢酸エチルで洗浄後、乾燥し、標題の結晶を得た（４９．３ｍｇ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．５８−１．６４（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．７６（４Ｈ，ｍ），１．８２−１．８９（１Ｈ，ｍ），１．９７−２．０７（３Ｈ，ｍ），２．０８−２．１４（２Ｈ，ｍ），２．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），２．１５−２．２３（１Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），２．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，７Ｈｚ），２．７２−２．８４（２Ｈ，ｍ），３．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，１０Ｈｚ），３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），３．２５−３．３２（２Ｈ，ｍ），３．４３（２Ｈ，ｓ），３．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．７７−３．８５（１Ｈ，ｍ），３．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ），４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ），４．９１（１Ｈ，ｓ），５．９１（１Ｈ，ｂｒｄｓ），７．２３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．２９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７，７Ｈｚ），７．４６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，８Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）．【００７７】
上記方法により得られた２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを以下の条件で測定した。
［測定条件］
使用装置：ＡＶＡＮＣＥ４００（ＢＲＵＫＥＲ社製）
測定温度：室温（２２℃）
基準物質：グリシン（外部基準：１７６．０３ｐｐｍ）
測定核：１３Ｃ（１００．６２４８４２５ＭＨｚ）
パルス繰り返し時間：６秒
パルスモード：ＴＯＳＳ測定
１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを図１に、化学シフトを以下に示す。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ｓｏｌｉｄ  ｓｔａｔｅ）δ（ｐｐｍ）：１３．８，１４．１，２１．０，２２．８，２４．３，２６．８，２７．８，３０．５，４０．５，４１．６，４２．４，４６．０，５０．９，５１．４，５２．９，５３．３，５４．７，５５．７，５９．５，６０．３，６３．６，６４．４，７５．２，１２４．０，１２４．４，１２６．２，１２７．２，１２８．１，１３３．３，１３３．９，１３５．５，１３７．８，１４４．７，１７１．５，１７４．０，１７５．５，１７５．８．【００７８】
上記方法により得られた２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶を、粉末Ｘ線回折装置の試料台に載せ、以下の測定条件で分析した。得られた粉末Ｘ線回折パターンを図２に示す。【００７９】
【表１】
0005872105.tif 000003
【００８０】
実施例２
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩非晶質体の調製
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩（５３．６１ｍｇ）を秤取し、２００ｍＬ容量のビーカーに入れ、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ｔＢＡ）（２０ｍＬ）および水（４ｍＬ）を添加した。１００ｍＬ容量のナス型フラスコ（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｆｌａｓｋ）を、ドライアイスで冷却したエタノールに浸漬させた状態で回転させた。そのフラスコの内部に試料溶液を滴下して、凍結させた。試料溶液全量を凍結させた後、フラスコの開口部をワイピングクロスで覆い、凍結乾燥させた。４８．６０ｍｇの標題の非晶質体を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．５８−１．６４（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．７６（４Ｈ，ｍ），１．８２−１．９０（１Ｈ，ｍ），１．９８−２．０７（３Ｈ，ｍ），２．０８−２．１５（２Ｈ，ｍ），２．１５−２．２３（１Ｈ，ｍ），２．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），２．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），２．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，７Ｈｚ），２．７４−２．８５（２Ｈ，ｍ），３．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０，１０Ｈｚ），３．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７Ｈｚ），３．２５−３．３３（２Ｈ，ｍ），３．４４（２Ｈ，ｓ），３．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．７８−３．８５（１Ｈ，ｍ），３．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ），４．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ），４．９１（１Ｈ，ｓ），５．９１（１Ｈ，ｂｒｄｓ），７．２３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．２９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７，７Ｈｚ），７．４６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，８Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）．
上記方法により非晶質体を、粉末Ｘ線回折装置の試料台に載せ、実施例１記載の測定条件で分析した。得られた粉末Ｘ線回折パターンを図３に示す。【００８１】
実施例３
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物（Ａ）の結晶の調製
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸（８１．３８ｍｇ）にＬ−乳酸の酢酸エチル溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を１２９６μＬ（１当量）添加し、得られた溶液を超音波処理後、室温にてマグネティックスターラーにより攪拌した。溶液中に固体を認めたため、固体を濾取し、これを酢酸エチルで洗浄後、乾燥し、標題の結晶を得た（７８．９３ｍｇ）。
上記方法により得られた２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物の結晶を、粉末Ｘ線回折装置の試料台に載せ、実施例１記載の測定条件で分析した。得られた粉末Ｘ線回折パターンを図４に示す。【００８２】
実施例４
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物（Ｂ）の結晶の調製
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸（７９．９９ｍｇ）にＬ−乳酸のメチルエチルケトン溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を１３１８μＬ（１当量）添加し、得られた溶液を超音波処理後、室温にてマグネティックスターラーにより攪拌した。溶液中に固体を認めたため、固体を濾取し、これをメチルエチルケトンで洗浄後、乾燥し、標題の結晶を得た（６７．５６ｍｇ）。
上記方法により得られた２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−乳酸塩・溶媒和物の結晶を、粉末Ｘ線回折装置の試料台に載せ、実施例１記載の測定条件で分析した。得られた粉末Ｘ線回折パターンを図５に示す。【００８３】
実施例５
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶の調製
アセトン（０．７５ｍＬ）およびメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（０．７５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させた２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸（２３０ｍｇ、含量２００ｍｇ）に、アセトン（０．５ｍＬ）およびメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（０．５ｍＬ）の混合溶媒に溶解させたＬ−マンデル酸（６０．２ｍｇ）を滴下し、さらにアセトン（０．２５ｍＬ）およびメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（０．２５ｍＬ）の混合溶媒にて洗いこんだ。室温にて二晩攪拌した。得られた結晶を濾過し、アセトン／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（容量比１：１）（０．４ｍＬ×３）およびメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（０．４ｍＬ×３）で洗浄し、標題の結晶２２３．０ｍｇ（収率：８８％）を白色結晶として得た。【００８４】
実施例６
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の再結晶
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩の結晶（１．００ｇ）に、ジメチルスルホキシド（１．６５ｍＬ）およびアセトン（２．０ｍＬ）を加え、６０℃にて加温し溶解させた。さらに、ジメチルスルホキシド（０．０５ｍＬ）とアセトン（１．０ｍＬ）をこの溶液に加えた。得られた溶液に、酢酸イソプロピル（１０ｍＬ）を加え、添加後に４５℃で加温した。さらに４５℃にて酢酸イソプロピル（１５ｍＬ）を加えた。この溶液を、−２０℃に冷却後、生成した結晶を濾過し、アセトン／酢酸イソプロピルの混合溶媒（容量比１：９，５ｍＬ）で洗浄した後、常温にて乾燥し、標題の結晶９０７．１ｍｇ（収率：９０．７％）を白色結晶として得た。【００８５】
実施例７
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩のＸ線結晶構造解析
２−［（３Ｓ，４Ｒ）−１−｛［２−クロロ−６−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−３−｛［１−（シクロヘキス−１−エン−１−イルメチル）ピペリジン−４−イル］カルバモイル｝−４−メチルピロリジン−３−イル］酢酸・Ｌ−マンデル酸塩（５．２８ｍｇ）をガラスバイアルに秤取し、メタノール（１．０ｍＬ）を加えて溶かした。このガラスバイアルを、適量の酢酸エチルで満たした、より大きいガラスバイアルの内側に置き、外側のガラスバイアルをキャップで密閉した（蒸気拡散法）。３週間後、内側のガラスバイアル中に結晶が析出しているのを認めた。得られた単結晶（０．５０×０．２０×０．１０ｍｍ）を用いてＲ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ  ＩＩ（株式会社リガク）にてＸ線回折実験を行った。結晶学的データおよび構造解析結果を表２に、原子座標データを表３にしめす。かかる結果より、標題化合物の絶対立体配置を特定した。【００８６】
【表２】
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【００８７】
【表３−１】
0005872105.tif 000005
【００８８】
【表３−２】
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【００８９】
【表３−３】
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【００９０】
【表３−４】
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【００９１】
【表３−５】
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【００９２】
以下の試験例を行い、化合物（１）の薬理効果を調べた。【００９３】
（試験例１）フラクタルカイン誘導の細胞遊走モデルにおける細胞遊走阻害効果
（１）方法
ＣＸ３ＣＲ１を強制発現させたＢ３００細胞を用いて、フラクタルカイン誘導の細胞遊走に対する実施化合物の阻害効果を検討した。
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（２４ｗｅｌｌ  ｃｌａｓｔｅｒｓ，ｐｏｒｅ  ｓｉｚｅ：５μｍ，Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）を平衡化した後にフラクタルカイン溶液（０．３ｎＭ，Ｒ  ａｎｄ  Ｄ社製）を下層に添加した。続けて被験化合物（０．００１，０．００３，０．０１，または０．０３μＭ）と３０分間プレインキュベートしたＣＸ３ＣＲ１発現Ｂ３００細胞をＴｒａｎｓｗｅｌｌの上層に加え、５％ＣＯ２，３７℃の条件で３．５時間インキュベートした。下層に遊走した細胞数の評価は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて行った。
フラクタルカイン誘導の細胞遊走に対する被験化合物の阻害率の算出は、フラクタルカイン・被験化合物共存下での細胞遊走量を［Ａ］，フラクタルカイン存在下・被験化合物非存在下での細胞遊走量を［Ｂ］，フラクタルカイン・被験化合物双方とも非存在下での細胞遊走量を［Ｃ］として以下の式によって求め、これをもとに５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算出した。
阻害率（％）＝［１−｛（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）｝］×１００【００９４】
（２）結果
本試験例の結果、化合物（１）のＩＣ５０は、４ｎＭであった。【００９５】
（試験例２）Ｔ細胞移入大腸炎モデルにおける体重量減少抑制効果
（１）方法
ＢＡＬＢ／ｃマウスから採取したＣＤ４陽性ＣＤ４５ＲＢ高陽性細胞をＳＣＩＤマウスに移入することで誘導する大腸炎モデルを用い、化合物（１）の体重量減少抑制効果を検討した。実験は、３１日間にわたって実施した。第１日目はＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓から分取したＣＤ４陽性ＣＤ４５ＲＢ高陽性細胞（５×１０５個／ｍｏｕｓｅ）をＳＣＩＤマウスに静脈内投与した。第１６日目から第３１日目まで、化合物（１）を１日１回ＳＣＩＤマウスに経口投与すると共に、第１９、２２、２４、２６、２９、３１日目に体重量測定を行った。
体重量減少抑制効果は、第１９、２２、２４、２６、２９、３１日目の体重量変化率（％）で評価した。第１６日目の体重量を［Ａ］、各体重量測定日（第１９、２２、２４、２６、２９、３１日目）の体重量を［Ｂ］とし、以下に示す式より体重量変化率（％）を求めた。
体重量変化率（％）＝Ｂ／Ａ×１００【００９６】
（２）結果
結果を図６に示す。なお、図中の横軸は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓から分取したＣＤ４陽性ＣＤ４５ＲＢ高陽性細胞（５×１０５個／ｍｏｕｓｅ）をＳＣＩＤマウスに静脈内投与した日を０日とした場合の経過日数を示す。
【図６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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