【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年1月5日(2011.1.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
エピトープとは、抗体が結合する抗原表面の局在領域であり、エピトープは糖、脂質またはアミノ酸で構成されている。抗体に認識されるエピトープの大部分が抗原分子の三次元表面構図である。例外は直鎖状エピトープであり、これはタンパク質の立体的な三次元構造ではなく、アミノ酸配列（即ち、一次構造）によって決定されるものである。タンパク質データバンクから現在入手可能な８２種の異なる抗原−抗体免疫複合体のほぼ全てがＩｇＧ−抗原複合体である。ＩｇＧエピトープの構造要素（α−へリックス、β−鎖とループ）およびエピトープの形状（凸状、平面状、凹状）の解析によると、エピトープの半分はループのみで構成されており、残りの半分はループと二次構造要素の両方を含んでいる（図１を参照）。ＩｇＧエピトープの大部分（６８％）が抗原の凸状領域または露出したループ領域に位置する。従って、タンパク質構造のクレフト（clefts）および／または窪み（depressions）、ならびに平面状表面はＩｇＧエピトープ構造としては好ましくない。近年、ヒトコブラクダおよびサメから同定された抗体クラス、即ち、単一ドメイン抗体と呼ばれる突出したＨＣＤＲ３ループのあるＶＨ領域のみを有する抗体は、酵素基質部位などのクレフト領域を認識し結合することが確認された（De Genst et al. 2006）。しかし、これら抗体はヒト由来ではないため、治療用途には好ましくない。免疫原性の低い構造、クレフトおよび平面状表面を認識しうるヒト抗体は、ヒトの治療と診断のための新規な結合性物質を開発するための貴重な材料を提供するであろう。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
発明の概要
本発明は、タンパク質表面には露出していない構造、例えば、窪み、クレフトまたはチャネル（例えば、耐性トランスポーターの薬剤チャネル、酵素の基質結合部位、および受容体のリガンド結合部位）、あるいはタンパク質−タンパク質相互作用を仲介する平坦な表面、に結合するヒトＩｇＥ抗体およびその誘導体の製造方法に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
本発明の他の好ましい態様においては、１種または数種のリガンドを有する第１の受容体タンパク質に結合するが、１種または数種のリガンドを有する第２の受容体タンパク質には結合しないＩｇＥモノクローナル抗体を選択する。第２の受容体タンパク質とは、第１の受容体タンパク質と関連し、１種または数種のリガンドを有するものである。例えば、標的タンパク質が複数のリガンドを有する薬剤耐性ポンプである多剤耐性関連タンパク質２（ＭＲＰ２）である場合、ＭＲＰ２に対する１種または数種のリガンドの結合を防止するが、ＡＴＰ結合カセットトランスポーター（即ち、ＡＢＣ−トランスポーター）などの、関連受容体タンパク質への１種または数種のリガンドの結合を防止しないＩｇＥ モノクローナル抗体を選択し単離することが好ましい。このような状況において「関連受容体タンパク質」とは、構造の相同性、重複するリガンドまたは基質特異性、および／または細胞または組織において類似した機能を有する一群の受容体タンパク質を意味する。ＭＲＰ２の他の関連受容体タンパク質としては、例えば、多剤耐性関連タンパク質１（ＭＲＰ１）が挙げられる。ＭＲＰ１とＭＲＰ２の基質／リガンド特異性の大部分が重複するが、組織における局在性は異なる。ＭＲＰ２に対する公知のリガンドとしては、グルタチオン抱合体、グルクロニド抱合体（例えば、エストラジオール−１７−ｂ−Ｄ−グルクロニド）、ロイコトリン、メトトリキセート、オクラトキシンＡおよびｐ−アミノ馬尿酸（ＰＡＨ）などの、抱合型または非抱合型の有機アニオンが挙げられる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
本発明の他の好ましい態様の一例においては、多剤耐性関連タンパク質２（ＭＲＰ２）に対する１種または数種のリガンドの結合を防止しうるＩｇＥモノクローナル抗体を次の方法で調製する。ヒトＩｇＥ ＶＨ／κＶＬまたはλＶＬのｓｃＦｖファージライブラリーを、初めにアレルギー患者のリンパ球から単離したｍＲＮＡから構築する。軽鎖および重鎖の可変領域ｃＤＮＡを、Ｆｄ ｃＤＮＡ用のヒトＩｇＥに特異的なプライマーを用いて合成し、ヒト軽鎖のカッパ（κ）鎖およびラムダ（λ）鎖をヒトκ鎖およびλ鎖に特異的なプライマーを用いて合成した。軽鎖および重鎖の可変領域は、Ｖκ ｃＤＮＡ用のヒトκ鎖特異的プライマーとＶλ ｃＤＮＡ用のヒトλ鎖特異的プライマーおよびＶH ｃＤＮＡ用のヒトＩｇＥ特異的プライマーをそれぞれ用いてＰＣＲによって増幅した。これらのＰＣＲプライマーに導入しておいた制限部位を利用して、ｓｃＦｖファージディスプレイベクターに可変領域のｃＤＮＡをクローニングし、ヒトＩｇＥ／ＩｇＧ ｓｃＦｖライブラリーを構築した。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
本願明細書に記載したように、ファージディスプレイ法は、本発明の選択工程のためのヒトＩｇＥ ＶＨ／κＶＬまたはＶＨ／λＶＬ組み換え抗ＭＲＰ２抗体を開発するための有効かつ簡便な方法である。単離した抗ＭＲＰ２抗体は、ＭＲＰ２に対して高い親和性と特異性を示すことから、リガンド活性の測定によるＭＲＰ２の機能の特徴付けや、免疫化学染色法による細胞サンプルおよび組織サンプルにおけるＭＲＰ２分布の特定に有用である。さらに、単離した抗ＭＲＰ２抗体は、ＭＲＰ２の機能の詳細な調節、例えば、このトランスポーターに対する種々のリガンドの流出を不活性化または活性化すること、を行うための手段を提供する。単離したＩｇＥ抗体を、標的受容体、トランスポーターまたは酵素とそれに特異的なリガンドを用いた選択的な不活性化／活性化アッセイにも応用することで、細胞、組織または器官に存在する非常に関連性の高い相当物に対して影響を与えないクローンを発見することができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
種々の抗体断片の最終ＰＣＲ産物をプールし、適切な制限酵素で消化した。消化したＤＮＡ断片であり、ＩｇＥ Ｆｄ領域やκ軽鎖やλ軽鎖をコードするＤＮＡ断片をファージミドベクターに連結し、そのファージミドベクターでE. coli XL-1 Blue細胞を形質転換して１０6個の独立したクローンからなるＦａｂ−κライブラリーおよびＦａｂ−λライブラリーを得た。ファージ粒子上のＦａｂフラグメントの発現に関わる問題を防止するために、ｓｃＦｖ形式の抗体ライブラリーを構築した。種々のライブラリーからファージミドＤＮＡを単離し、ヒトＩｇＥ重鎖およびヒトＩｇＥ軽鎖の可変領域を増幅するための鋳型ＤＮＡとして用いることで、ヒトＩｇＥ ｓｃＦｖ−κライブラリーおよびｓｃＦｖ−λライブラリーを構築した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
重鎖可変領域のＰＣＲ増幅は、ヒトＶH特異的プライマー（ＶＨ１−ＶＨ４とＶＨ１Ａ）を用いて行った。軽鎖可変領域の増幅は以下のプライマーペアを用いて行った：ヒト カッパ鎖の増幅にはＶκ１−Ｖκ７，Ｖκ２−Ｖκ８，Ｖκ３−Ｖκ９，Ｖκ４−Ｖκ１０，Ｖκ５−Ｖκ１１およびＶκ６−Ｖκ１１を用い、ヒト ラムダ鎖の増幅にはＶλ１−Ｖλ８，Ｖλ２−Ｖλ９，Ｖλ３−Ｖλ９，Ｖλ４−Ｖλ９，Ｖλ５−Ｖλ１０，Ｖλ６−Ｖλ１０およびＶλ７−Ｖλ１０を用いた（表３および表４参照）。ｓｃＦｖファージディスプレイベクターに連結するために、増幅したＤＮＡフラグメントを精製し消化した（図３）。連結用混合物でE. coli XL-1 Blue細胞を形質転換し、約１０5個の独立したクローンからなるヒトＩｇＥ ｓｃＦｖ−κライブラリーおよびｓｃＦｖ−λライブラリーを得た。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2010516747.tif 000001