(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖の製造方法であって、該アルケン単位は、次に示す化学式Ａ’
【化１】
0005872576.tif 000024
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、水素原子である）に対応し、
該方法は、
ａ）次に示す化学式Ａ
【化２】
0005872576.tif 000025
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基である）の酸無水物を、
水と極性非プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒とからなる液体有機溶媒中で、少なくとも１つの多糖と反応させる工程と、
ｂ）グラフト化されたアルケン単位を含む該多糖を回収する工程と、を含んでなる、方法。
【請求項２】
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、ベンジル基である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程ａ）が、水／ＤＭＦ、水／ＤＭＳＯ、または水／イソプロパノール混合物中で行われることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
工程ａ）がｐＨ６〜１１で行われることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
工程ａ）において、前記モルグラフト率が、加える無水物の量によって調節される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記多糖が、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、中性多糖から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記多糖が、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチンおよびキトサンとその誘導体から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
多糖であって、
該多糖が、次に示す化学式Ｂに対応するヒアルロン酸であることを特徴とする、前記多糖。
【化３】
0005872576.tif 000026
（式中、
ｎ’は１０〜１０，０００、
Ｒ３はＨまたはＮａであり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄはそれぞれ、独立して、Ｈまたは次に示す式Ａ’の単位であり、
【化４】
0005872576.tif 000027
式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基である。）
【請求項９】
多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された多糖の製造方法であって、
該単位は、次に示す化学式Ｃ
【化５】
0005872576.tif 000028
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒおよび／またはＲ’は、水素原子であり、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である）に対応し、
該方法は、
ａ）請求項１〜５のいずれか一項に記載の製造方法の前記多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖を製造する工程と、
ｂ）ラジカル反応によって、前の工程で得られた前記多糖とチオール化合物Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨとを反応させる工程と、
ｃ）官能化された多糖を回収する工程と、を含んでなる、
前記方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、
工程ｂ）の前記ラジカル反応が、
光重合されるか、または、
ＵＶ光を使用せずに、水溶性開始剤によって開始されることを特徴とする、
前記方法。
【請求項１１】
工程ｂ）の前記ラジカル反応が、４‐（２‐ヒドロキシエトキシ）フェニル‐（２-ヒドロキシ‐２‐プロピル）ケトンによって光重合されることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
工程ｂ）の前記ラジカル反応が、アゾビス-（２‐メチルロピオンアミジン）ジヒドロクロリド、または２、２’‐アゾビス［２（２‐イミダゾリン‐２‐イル）プロパン］ジヒドロクロリドにより開始されることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
工程ｂ）が、水、または水／エタノール、水／イソプロパノール、水／ＤＭＦもしくは水／ＤＭＳＯ混合物から選択される溶媒中で行われることを特徴とする、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記多糖が、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および中性多糖から選択される、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記多糖が、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチンおよびキトサンとその誘導体から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
多糖であって、
該多糖が、次に示す化学式Ｄに対応するヒアルロン酸であることを特徴とする、前記多糖。
【化６】
0005872576.tif 000029
（式中、
ｎ’は１０〜１０，０００であり、
Ｒ３はＨまたはＮａであり、かつ、
Ｒａ’、Ｒｂ’、Ｒｃ’およびＲｄ’はそれぞれ、独立して、Ｈまたは次に示す式Ｃの単位であり、
【化７】
0005872576.tif 000030
式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を含む直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓであって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である。）
【請求項１７】
ヒアルロン酸の架橋方法であって、該方法は、
ａ）請求項１〜５のいずれか一項に記載の製造方法によるヒアルロン酸の少なくとも１つのヒドロキシル官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有したヒアルロン酸を製造する工程と、
ｂ）前の工程で得られたヒアルロン酸と、複数のチオール官能基を含む化合物とを反応させる工程と、
ｃ）架橋されたヒアルロン酸を回収する工程と、を含んでなる、
前記方法。
【請求項１８】
前記複数のチオール官能基を含む化合物が、ポリ（エチレングリコール）ジチオール、およびポリ（エチレン）テトラチオールから選択される、請求項１７に記載のヒアルロン酸の架橋方法。
【請求項１９】
工程ｂ）には、ＵＶ光による照射が含まれる、請求項１７または１８に記載のヒアルロン酸の架橋方法。
【請求項２０】
ヒアルロン酸を水和して、ヒドロゲルを形成することがさらに含まれる、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載のヒアルロン酸の架橋方法。
【請求項２１】
少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された架橋ヒアルロン酸の製造方法であって、該方法には、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の製造方法によって官能化されたヒアルロン酸の製造と、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載のヒアルロン酸の架橋と、が含まれることを特徴とする、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グラフト化され、任意により官能化された多糖、該多糖を得るための方法、および、かかる多糖を含む材料の分野に関する。本発明によって、ヒドロゲルなどの新しい種の材料を得ることができると共に、生物学、医学、製薬、および化粧料の分野における様々な適用が可能になり得る。
【背景技術】
【０００２】
生体材料工学は、過去１５年で顕著な進歩がみられ、ベクター化および組織修復の分野における新しい用途の発生に特に関係している。
【０００３】
たとえば、標的器官への薬剤の送達、または組織を修復することを意図した、これらの材料の効果は、これらの環境と連通するこれらの性能に特に基づく。
【０００４】
この効果は、生物系との類似性によって、材料の化学的性質および機械的性質、ならびに、外部刺激（ｐＨ、温度、生体分子の存在）に反応するこれらの性能を含む、複数のパラメーターに関係がある場合がある。
【０００５】
かかる系を生じるために使用されるポリマーの中で、天然由来の多糖（ＰＳ）は選択候補である。これらは、一般に、十分な生体適合性および生物分解性を有し、さらに生物活性を示し得る。
【０００６】
これらの化学的複雑性は、構造および／または特性の点から複数の選択肢を提供し、また、これらが天然由来ということから、環境的、毒性的、および／または商品的観点から極めて魅力的なものとなり得る。
【０００７】
したがって、特に、新しいまたは改良された特性を有する化合物（たとえば、増粘剤、ゲル化剤、もしくは分散剤）を得るために、改良された多糖などの天然由来の新しい改良されたポリマーを得ることが特に望ましい。
【０００８】
これらの改良ポリマーまたはこれらのポリマーの誘導体は、更に、化粧料、医薬または生物医学の分野において、多く使用することができる。
【０００９】
これらの理由のすべては、多くのグラフト化および／または官能化された多糖の合成が文献に記載されているということである。
【００１０】
たとえば、国際公開公報第２００９／０６３０８２号は、銅（Ｉ）触媒の存在下で、アルキン基によって官能化された多糖要素（グア）とアジド官能基(azide functional group)を有するポリエーテルの間の付加環化反応（いわゆるHuisgen反応)について記載する。この反応によって、位置選択的な方法で、本質的に１‐４‐二置換１，２，３‐トリアゾールを形成することが可能になる。
【００１１】
とりわけ、糖およびタンパク質の化学官能基を含む、他の化学官能基とのこの反応の実施容易性および適合性は、「クリック化学」と命名された(M. Meldal et al., Chem Rev. (2008), 108, 2952)。
【００１２】
また、この付加環化反応も、ヒアルロン酸系三次元網目構造を製造するために、国際公開公報第２００８／０３１５２５号にてCrescenziらによって用いられた。
【００１３】
特に、これは、１つまたは両方がヒアルロン酸である１組の多糖を使用する。多糖（ＰＳ）およびヒアルロン酸はそれぞれ、たとえば末端のアジドまたはアルキン基を有する反応性単位を伴い、１，３‐二極性付加環化機構により、三次元網目構造の形成をもたらす。
【００１４】
しかしながら、このクリック化学反応は、一態様において、特に、インビボで毒性のあるＣｕ（Ｉ）の除去により、たとえば、毒性および／または実施容易性の点から、不十分である場合がある。
【００１５】
欧州特許第１５６４２２０号は、ヒアルロン酸を化学架橋するための、および、ヒアルロン酸に関心対象の基をカップリングするための方法について記載する。ヒドラジル基またはアミノ基は、ヒアルロン酸のカルボキシル基を、アミド基またはＮ置換エステルに変換することによって、ヒアルロン酸重合体上に導入される。その後、このように得られたヒアルロン酸は、メルカプト基または不飽和結合を含む基によって誘導される。この反応は、水中で自発発生する場合があるが、該反応は比較的遅く（数時間）、定量することができない。該反応は、ラジカルの存在下で活性化され、収率を向上させることができるが、重合が生じ、架橋ゲルが得られる。この反応によっては、ポリマー（特に、線状ヒアルロン酸）を得ることはできず、グラフト率は制御されない。
【００１６】
このように、多くのグラフト化および／または官能化された多糖の合成が文献に記載されていても、これらは、得られたグラフト型および／または官能化、収率、実施容易性、特に、使用される溶媒および／または試薬の安全性、コスト、生態学、多価および／または効果の点から満足のゆくものではない。
【００１７】
さらに、記載された改良多糖は、機能性、コスト、純度、反応性、および／または使用の点から不十分であることを示し得る。
【００１８】
したがって、多糖において、活性のある分子をグラフト化するためおよび／または水性もしくは液体有機媒体中で該多糖を化学的に架橋するための、簡単で、効果的で、選択的な方法の必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明は、上述する問題のすべてもしくは一部を解決することを可能にする、特に活性のある分子によって、多糖を官能化するための方法、または、該多糖を架橋するための方法を特に提案する。
【００２０】
また、本発明は、産業規模で容易にかつ経済的に得ることができる、反応性単位を有した新しい多糖誘導体も提供する。
【００２１】
本発明の別の目的は、分子または巨大分子（特に、活性があり、改良された）によって、反応性単位を有する多糖を効果的にかつ選択的に官能化し、および／または、該多糖を化学架橋することである。
【００２２】
また、本発明は、緩やかな条件下、および／または、ほとんどグラフト化されないか、もしくはまったくグラフト化されないようにＰＳおよび分子のモル質量に影響を与える条件下でこれらの２つの反応工程を行うことも目的とする。
【００２３】
そして、本発明はまた、生物医学、医薬または化粧料の用途のための、グラフト化直鎖状ポリマーまたはヒドロゲルの形態の改良された多糖を含む生体材料を提供することも目的とする。
【００２４】
本発明の方法には、多糖および特にヒアルロン酸のヒドロキシルまたはアミン官能基において、非結合アルケンをグラフト化することが含まれる。この反応は、ラジカルの存在下を含む制御反応であり、該反応によって、非常に良好な収率を得ることが可能になる。さらに、グラフト率または置換度（ＤＳ）は、試薬の量を変化させることによって制御することができる。
【００２５】
多糖における非結合アルケンのグラフト化後、チオールクリック化学作用によるカップリングによって、チオール官能基を含む種々の基でこの多糖を官能化することができる。有利に、疎水基または他の関心対象の基で、多糖（特に、ヒアルロン酸）を特に官能化することができる。
【００２６】
複数のチオール官能基を含む化合物と、非結合アルケン（特に、ヒアルロン酸）を有する多糖とを反応させることによって、多糖の制御された架橋を得ることができる。これによって、特に、架橋されたヒアルロン酸ヒドロゲルを得ることが可能になる。
【００２７】
当然、本発明の方法によって、多糖の官能化と架橋化を組み合わせることができる。
【００２８】
特に、本発明は、チオールクリック化学作用によって種々の関心対象の基で官能化された、架橋されたヒアルロン酸ヒドロゲルに関する。
【００２９】
したがって、本発明は、上述する問題をすべてまたは一部において解決することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明は、前記多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖の製造方法に関し、該アルケン単位は、次に示す化学式Ａ’
【化１】
0005872576.tif 000002
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、水素原子である）に対応し、
該方法は、次に示す工程を含んでなる：
ａ）次に示す化学式Ａ
【化２】
0005872576.tif 000003
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基である）の酸無水物を、
水と極性非プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒とからなる液体有機溶媒中で、少なくとも１つの多糖と反応させる工程、
ｂ）グラフト化されたアルケン単位を含む多糖を回収する工程。
【００３１】
本発明の方法において、工程ａ）は、水および／または極性非プロトン性溶媒からなる溶媒であって、該極性非プロトン性溶媒が、ＤＭＦおよびＤＭＳＯから選択される溶媒中で行うことができる。
【００３２】
本発明の方法において、工程ａ）は、水／ＤＭＦ、水／ＤＭＳＯ、または水／イソプロパノール混合物中で行われることが好ましい。
【００３３】
本発明の方法において、工程ａ）は、水／ＤＭＦまたは水／ＤＭＳＯ混合物中で、とりわけ５／１から１／２、特に３／２から１／１の容積比で行われることが好ましい。
【００３４】
本発明の方法において、工程ａ）は、ｐＨ６〜１１、とりわけ７〜１０、特に８〜９で行われることが好ましい。
【００３５】
本発明の方法において、工程ａ）では、モルグラフト率は、加える無水物の量によって調節されることが好ましい。
【００３６】
該多糖は、ポリ（ガラクツロナート）(poly(galacturonate))、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択されることが好ましい。
【００３７】
また、本発明は、前記多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖にも関し、該単位は、次に示す化学式Ａ’
【化３】
0005872576.tif 000004
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒ、Ｒ’およびＲ”は、水素原子である）に対応する。
【００３８】
該多糖のモルグラフト率は、多糖反復単位当たり０．５〜（多糖反復単位当たりの遊離ヒドロキシル官能基の数）×１００％であることが好ましい。
【００３９】
該多糖は、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択されることが好ましい。
【００４０】
好ましい実施態様において、該多糖は、次に示す化学式Ｂ
【化４】
0005872576.tif 000005
（式中、
ｎ’は１０〜１０，０００（特に、１５〜７，０００）であり、
Ｒ３はＨまたはＮａであり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄはそれぞれ、独立して、Ｈまたは上に定義する式Ａ’の単位である）に対応するヒアルロン酸である。
【００４１】
また、本発明は、多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された多糖の製造方法にも関し、該単位は、次に示す化学式Ｃ
【化５】
0005872576.tif 000006
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒおよび／またはＲ’はそれぞれ、水素原子であり、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である）に対応し、
該方法は、次に示す工程を含んでなる：
ａ）上述の製造方法の前記多糖の少なくとも１つのヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖を製造する工程、
ｂ）ラジカル反応によって、前の工程で得られた多糖とチオール化合物Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨとを反応させる工程、
ｃ）官能化された多糖を回収する工程。
【００４２】
工程ｂ）のラジカル反応は、
特に、４‐（２‐ヒドロキシエトキシ）フェニル‐（２-ヒドロキシ‐２‐プロピル）ケトンによって光重合されるか、または、
ＵＶ光を使用せずに、アゾビス-（２‐メチルプロピオンアミジン）ジヒドロクロリド、もしくは２、２’‐アゾビス［２（２‐イミダゾリン‐２‐イル）プロパン］ジヒドロクロリドなどの水溶性開始剤によって開始されることが好ましい。
【００４３】
本発明の方法において、工程ｂ）は、水、または水／エタノール、水／イソプロパノール、水／ＤＭＦもしくは水／ＤＭＳＯ混合物から選択される溶媒中で行われることが好ましい。
【００４４】
本発明に使用される多糖は、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択されることが好ましい。
【００４５】
また、本発明は、前記多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された多糖にも関し、該単位は、次に示す化学式Ｃ
【化６】
0005872576.tif 000007
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を含む直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒおよび／またはＲ’は、水素原子であり、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である）に対応する。
【００４６】
本発明の多糖のグラフト率は、多糖反復単位当たり０．５〜（多糖反復単位当たりの遊離ヒドロキシル官能基の数）×１００％であることが好ましい。
【００４７】
Ｒｔｈｉｏ‐Ｓ‐は、次に示すものから選択される化合物からなる。
アルキルチオール、特に、直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル（たとえば、ペンタンチオールもしくはデカンチオール）、
たとえば窒素原子および／または硫黄原子を有する、アリールチオール（特に、ヘテロアリール）、
特に、少なくとも１つのチオール官能基を有するポリ（エチレングリコール）、少なくとも１つのチオール官能基を有するプルロニックスなどのポリエーテルのファミリー、少なくとも１つのチオール官能基を有するポリ（Ｎ‐アルキルアクリルアミド）（ポリ（Ｎ‐（イソプロピルアクリルアミド））のファミリーに属する、合成高分子、
たとえば、オリゴ糖鎖もしくは多糖鎖の還元末端で、または該鎖に沿って、少なくとも１つのチオール官能基を有する、単糖、オリゴ糖、もしくは多糖、
少なくとも１つのチオール官能基を有するペプチド、
少なくとも１つのチオール官能基を有するオリゴヌクレオチド、
少なくとも１つのチオール官能基を有する活性化合物（特に、医薬としての活性化合物）、
ステロイド、
シクロデキストリン、
少なくとも２つの（特に、２つ、３つ、４つ、５つもしくは６つの）チオール官能基を有する化合物、ならびに、
特に鎖末端で少なくとも１つのチオール官能基を有する、ポリ（エチレングリコール）。
【００４８】
該多糖は、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択されることが好ましい。
【００４９】
好ましい実施態様において、該多糖は、次に示す化学式Ｄ
【化７】
0005872576.tif 000008
（式中、
ｎ’は１０〜１０，０００（特に、１５〜７，０００）であり、
Ｒ３はＨまたはＮａであり、かつ、
Ｒａ’、Ｒｂ’、Ｒｃ’およびＲｄ’はそれぞれ、独立して、Ｈまたは上に定義する式Ｃの単位である）に対応するヒアルロン酸である。
【００５０】
また、本発明は、次に示す工程を含んでなるヒアルロン酸の架橋方法にも関する：
ａ）上述の製造方法の前記ヒアルロン酸の少なくとも１つのヒドロキシル官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有したヒアルロン酸を製造する工程、
ｂ）前の工程で得られたヒアルロン酸と、複数のチオール官能基を含む化合物とを反応させる工程、
ｃ）架橋された多糖を回収する工程。
【００５１】
該複数のチオール官能基を含む化合物は、ポリ（エチレングリコール）ジチオール、およびポリ（エチレン）テトラチオールから選択されることが好ましい。
【００５２】
工程ｂ）には、ＵＶ光による照射が含まれることが好ましい。
【００５３】
好ましい実施態様において、ＨＡ架橋方法には、ヒアルロン酸を水和して、ヒドロゲルを形成することがさらに含まれる。
【００５４】
また、本発明は、本発明の方法によって得ることができる架橋ヒアルロン酸、および、本発明の方法によって得ることができるヒアルロン酸ヒドロゲルにも関する。
【００５５】
さらに、本発明は、本発明の製造方法によって官能化されたヒアルロン酸の製造と、本発明のヒアルロン酸の架橋とを含んでなる、少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された架橋ヒアルロン酸の製造方法にも関する。
【００５６】
さらにまた、本発明は、本発明の方法によって得ることができる官能化架橋ヒアルロン酸、ならびに、かかる官能化架橋ヒアルロン酸、もしくは本発明の多糖、もしくは本発明のヒアルロン酸ヒドロゲルを含んでなる制御放出医薬または化粧料組成物にも関する。
【００５７】
第１の態様によれば、本発明は、炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖（特に、ヒアルロン酸）の製造方法に関する。
【００５８】
第２の態様によれば、本発明は、炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖（特に、ヒアルロン酸）に関する。
【００５９】
第３の態様によれば、本発明は、チオエーテル単位によって官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖（特に、ヒアルロン酸）の製造方法に関する。
【００６０】
第４の態様によれば、本発明は、チオエーテル単位によって官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖（特に、ヒアルロン酸）に関する。
【００６１】
第５の態様によれば、本発明は、炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖、および／または、チオエーテル単位により官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖を含んでなる、組成物に関する。
【００６２】
第６の態様によれば、本発明は、炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された少なくとも１つの多糖を含んでなる材料、チオエーテル単位により官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された少なくとも１つの多糖を含んでなる材料、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖、および／または、チオエーテル単位により官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖を含んだ少なくとも１つの組成物を含んでなる材料に関する。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
（発明の詳細な説明）
本明細書において、「炭素‐炭素二重結合を含む単位」という表現は、「アルケン単位」という表現と同等である。「炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された」という表現は、「グラフト化されたアルケン」という表現と同等である。「チオエーテル単位によって官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位」という表現は、「チオエーテルグラフト化アルケン単位」という表現と同等である。また、「チオエーテル単位により官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位によって官能化された」という表現は、「チオエーテル官能化グラフト化アルケン」または「チオエーテル単位によって官能化された」という表現と同等である。
【００６４】
本発明は、前記多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖の製造方法に関し、該アルケン単位は、次に示す化学式Ａ’
【００６５】
【化８】
0005872576.tif 000009
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、水素原子である）に対応し、
該方法は、次に示す工程を含んでなる：
ａ）次に示す化学式Ａ
【化９】
0005872576.tif 000010
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基である）の酸無水物を、
水と極性非プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒とからなる液体有機溶媒中で、少なくとも１つの多糖と反応させる工程、
ｂ）グラフト化されたアルケン単位を含む多糖を回収する工程。
【００６６】
第１の態様によれば、本発明は、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された多糖（ＰＳとも称する）の製造方法に関し、該方法は、少なくとも次に示すものからなる工程を含んでなる：
ａ）次に示す化学式Ａ
【化１０】
0005872576.tif 000011
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、任意により置換されたアリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、任意により置換されたアリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）である）の酸無水物を、
水および／または極性非プロトン性溶媒を含むか、または該水および／または極性非プロトン性溶媒からなる液体有機溶媒（特に、該極性非プロトン性溶媒が、ＤＭＦおよびＤＭＳＯから選択される）中で、少なくとも１つの多糖と反応させる工程、ならびに、
ｂ）少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された多糖を回収する工程。
【００６７】
本発明の方法において、該酸無水物は、酸塩化物または対応する混合無水物と代わることができる。
【００６８】
前述の酸塩化物は、次に示す化学式ａ
【化１１】
0005872576.tif 000012
（式中、Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、Ｘおよびｍは、式Ａの無水物において上に定義するとおりである）に対応し得る。
【００６９】
前述の混合無水物は、次に示す化学式ａ’
【化１２】
0005872576.tif 000013
（式中、
Ｒ”は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基であり、特に、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルから選択され、かつ、
Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、Ｘおよびｍは、式Ａの無水物において上に定義するとおりである）に対応し得る。
【００７０】
該酸無水物は、ｍが２〜６の整数（特に、４または５）である、式Ａに対応し得る。
【００７１】
該酸無水物は、ＸがＣＨ２である式Ａに対応し得る。
【００７２】
該酸無水物は、Ｒ、Ｒ’およびＲ”がそれぞれ水素原子である、式Ａに対応し得る。
【００７３】
特定の実施態様によれば、該酸無水物は、式Ａに対応し、
式中、
ｍは２〜６の整数（特に、４または５）であり、
ＸはＣＨ２であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ水素原子である。
【００７４】
該無水物は、特に、アルコール官能基（ヒドロキシル基）および／またはアミン官能基（好ましくは第一級アミン官能基）において、多糖と反応させることができる。したがって、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位（アルケン単位）は、エステルまたはアミド結合によって多糖に結合することができる。
【００７５】
本発明の方法において、工程ａ）は、水および／または極性非プロトン性溶媒からなる溶媒であって、該極性非プロトン性溶媒が、ＤＭＦおよびＤＭＳＯから選択される溶媒中で行うことができる。
【００７６】
本発明の方法において、工程ａ）は、水／ＤＭＦ、水／ＤＭＳＯ、または水／イソプロパノール混合物中で行われることが好ましい。
【００７７】
特に、工程ａ）は、水／イソプロパノール混合物中で、５／１から１／２、好ましくは３／２から１／１、より優先的には３／２の容積比で行われる。
【００７８】
特に、工程ａ）は、水／ＤＭＦまたは水／ＤＭＳＯ混合物中で、特に５／１から１／２、好ましくは３／２から１／１、より優先的には３／２の容積比で行われる。
【００７９】
工程ａ）の反応は、ｐＨ６〜１１、とりわけｐＨ７〜１０、特に８〜９で行うことができる。
【００８０】
工程ａ）の反応は、０〜５０℃、特に約４〜２０℃の温度で行うことができる。
【００８１】
モルグラフト率は、多糖反復単位当たり０．５〜（多糖反復単位当たりの遊離ヒドロキシル官能基の数）×１００％、特に０．５〜４００％、とりわけ２〜２５０％、特に５〜１００％、特に７〜７５％、さらに７〜５０％であり得る。
【００８２】
特に、最大モルグラフト率は、多糖反復単位当たりの遊離ヒドロキシル官能基の数の１００倍である。
【００８３】
モルグラフト率は、多糖反復単位のモル当たりのグラフト単位のモル数から導き出される。
【００８４】
本発明の方法において、工程ａ）では、モルグラフト率は、加える無水物の量によって調節されることが好ましい。
【００８５】
該多糖は、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択することができる。
【００８６】
本明細書において、「誘導体」とは、単純な添加または置換によって別のものが生じる化合物をいう。本事例において、多糖２から誘導された多糖１は、ヒドロキシル官能基または修飾されたヒドロキシル官能基を他の官能基に置換することができた。たとえば、ヒドロキシル官能基は、エステルもしくはアミド官能基に変換することができるか、または、ヒドロキシル官能基は、特に、Greenの「Protective Groups in Organic Synthesis（第４版）」に定義されるように、特に保護基によって、保護することができる。特に、誘導体には、修飾された官能基の数の２０％未満が含まれる。
【００８７】
該多糖の反復単位は、１０〜２５，０００、特に１５〜１５，０００であり得る。
【００８８】
該多糖は、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸誘導体であることが好ましい。
【００８９】
特定の実施態様によれば、該製造方法には、少なくとも次に示すものからなる工程が含まれる：
ａ’）次に示す化学式Ａ
【化１３】
0005872576.tif 000014
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキレン基、任意により置換されたアリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を含む直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、任意により置換されたアリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）である）の酸無水物を、
水および／または極性非プロトン性溶媒を含むか、または該水および／または極性非プロトン性溶媒からなる液体有機溶媒（特に、該極性非プロトン性溶媒が、ＤＭＦおよびＤＭＳＯから選択される）中で、ヒアルロン酸と反応させる工程、ならびに、
ｂ’）少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化されたヒアルロン酸を回収する工程。
【００９０】
反応条件は、上に定義するとおりであり得る。
【００９１】
ヒアルロン酸の反復単位の数は、特に７〜１５，０００（特に、１５〜７，０００）であり得る。
【００９２】
また、本発明は、本発明の方法により得ることができるアルケン単位によってグラフト化された多糖にも関する。
【００９３】
本発明は、特に、多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基（好ましくは第一級アミン）においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖に関し、該単位は、次に示す化学式Ａ’
【化１４】
0005872576.tif 000015
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ、水素原子である）に対応する。
【００９４】
少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位は、ｍが２〜６（特に、４または５）の整数である、式Ａ’に対応し得る。
【００９５】
少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位は、ＸがＣＨ２である式Ａ’に対応し得る。
【００９６】
少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位は、Ｒ、Ｒ’およびＲ”がそれぞれ水素原子である、式Ａ’に対応し得る。
【００９７】
特定の実施態様によれば、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位は、式Ａ’に対応し、
式中、
ｍは２〜６の整数（特に、４または５）であり、
ＸはＣＨ２であり、かつ、
Ｒ、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ水素原子である。
【００９８】
少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位は、多糖において、特に、アルコール官能基および／またはアミン官能基（特に、第一級アミン官能基）において存在しうる。したがって、該単位は、エステルまたはアミド結合によって多糖に結合することができる。
【００９９】
モルグラフト率は、多糖反復単位当たり０．５〜（多糖反復単位当たりの遊離ヒドロキシル官能基の数）×１００％、特に０．５〜４００％、とりわけ２〜２５０％、特に５〜１００％、特に７〜７５％、または７〜５０％であり得る。
【０１００】
モルグラフト率は、多糖反復単位のモル当たりの、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する置換基のモル数から導き出される。
【０１０１】
該多糖は、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択されることが好ましい。
【０１０２】
該多糖の反復単位の数は、１０〜２５，０００、特に１５〜１５，０００であり得る。
【０１０３】
好ましい実施態様によれば、該多糖は、デキストランまたはデキストラン誘導体である。
【０１０４】
好ましい実施態様によれば、該多糖は、特に７〜１５，０００、特に１５〜７，０００の反復単位の数を有するヒアルロン酸またはヒアルロン酸誘導体である。
【０１０５】
好ましい実施態様において、該多糖は、次に示す化学式Ｂ
【化１５】
0005872576.tif 000016
（式中、
ｎ’は１０〜１０，０００（特に、１５〜７，０００）であり、
Ｒ３はＨまたはＮａであり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄはそれぞれ、独立して、Ｈまたは上に定義する式Ａ’の単位である）に対応するヒアルロン酸である。
【０１０６】
また、本発明は、多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された多糖の製造方法にも関し、該単位は、次に示す化学式Ｃ
【化１６】
0005872576.tif 000017
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒおよび／またはＲ’は、水素原子であり、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である）に対応し、
該方法は、次に示す工程を含んでなる：
ａ）上述の製造方法の多糖の少なくとも１つのヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有する多糖を製造する工程、
ｂ）ラジカル反応によって、前の工程で得られた多糖とチオール化合物Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨとを反応させる工程、
ｃ）官能化された多糖を回収する工程。
【０１０７】
通常、工程ｂ）の反応はラジカル反応である。有利に、工程ｂ）のラジカル反応は、
特に、４‐（２‐ヒドロキシエトキシ）フェニル‐（２-ヒドロキシ‐２‐プロピル）ケトンによって光重合されるか、または、
ＵＶ光を使用せずに、アゾビス-（２‐メチルロピオンアミジン）ジヒドロクロリド、もしくは２、２’‐アゾビス［２（２‐イミダゾリン‐２‐イル）プロパン］ジヒドロクロリドなどの水溶性開始剤によって開始される。
【０１０８】
本発明の方法において、工程ｂ）は、水、または水／エタノール、水／イソプロパノール、水／ＤＭＦもしくは水／ＤＭＳＯ混合物から選択される溶媒中で行われることが好ましい。
【０１０９】
工程ｂ）は、精製後、特に、沈殿または限外ろ過によって、行うことができる。工程ｂ）には、特に３６５ｎｍの波長のＵＶ光による照射が含まれ得る。工程ｂ）のラジカル反応は、特に、Irgacure 2959という名称で販売されている、４‐（２‐ヒドロキシエトキシ）フェニル‐（２‐ヒドロキシ‐２‐プロピル）ケトンによって、光重合することができるか、または、ＵＶ光を使用せずに、たとえば、Ｖ‐５０（和光純薬工業株式会社製）という名称で販売されている、アゾビス-（２‐メチルロピオンアミジン）ジヒドロクロリド、もしくは、Ｖ‐０４４（和光純薬工業株式会社製）という名称で販売されている、２、２’‐アゾビス［２（２‐イミダゾリン‐２‐イル）プロパン］ジヒドロクロリドなどの水溶性開始剤によって開始することができる。
【０１１０】
この反応は、水、または水／エタノール、水／イソプロパノール、水／ＤＭＦ、もしくは水／ＤＭＳＯ混合物から選択される溶媒中で、特に４／１から１／１の容積比で行うことができる。
【０１１１】
光開始剤が使用される場合、工程ｂ）の反応は、１〜１２０分間、特に１〜６０分間、特に１〜２０分間、行うことができる。
【０１１２】
反応が水溶性アゾ開始剤で開始される場合、該反応は、４〜２４時間、行うことができる。
【０１１３】
少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位は、１以上のチオール化合物によって官能化することができる。複数のチオール化合物が使用される場合、これらは連続して加えることができるか、または、同時に加え反応させることができる。
【０１１４】
特に、２つまたは３つの「関心対象の」チオール化合物を使用することができる。特に、これらの関心対象のチオールは、特に、複数の成分による「複合の」官能化を得るために、グラフト化後、これら自身で相互作用することができる。
【０１１５】
特に、その反応性に応じて、該チオール化合物は、等モル量または過剰量（たとえば、炭素‐炭素二重結合に関して１〜３モルの等価物）で使用することができる。
【０１１６】
チオール化合物Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨは、いずれかの型のチオールであり得る。Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨは、少なくとも１個の炭素原子、特に、‐ＳＨ官能基に結合した少なくとも１個の炭素原子を有する基である。たとえば、Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨは、次に示すものから選択することができる。
アルキルチオール、特に、直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル（たとえば、ペンタンチオールもしくはデカンチオール）、
たとえば窒素原子および／または硫黄原子を有する、アリールチオール（特に、ヘテロアリール）、
特に、少なくとも１つのチオール官能基を有するポリ（エチレングリコール）、少なくとも１つのチオール官能基を有するプルロニックスなどのポリエーテルのファミリー、少なくとも１つのチオール官能基を有する（ポリ（Ｎ‐（イソプロピルアクリルアミド））などのポリ（Ｎ‐アルキルアクリルアミド）のファミリーに属する、合成高分子、
たとえば、オリゴ糖鎖もしくは多糖鎖の還元末端で、または該鎖に沿って、少なくとも１つのチオール官能基を有する、単糖、オリゴ糖、もしくは多糖、
少なくとも１つのチオール官能基を有するペプチド、
少なくとも１つのチオール官能基を有するオリゴヌクレオチド、
少なくとも２つの（特に、２つ、３つ、４つ、５つもしくは６つの）チオール官能基を有する化合物、ならびに、
少なくとも１つのチオール官能基を有する活性化合物（特に、医薬としての活性化合物）。
【０１１７】
たとえば、該チオール化合物は、ステロイド、特に、α‐チオコレステロール、特にセリンを含むオリゴペプチドまたはポリペプチドであり得る。
【０１１８】
また、チオールＲｔｈｉｏ‐ＳＨは、上に引用された化合物の誘導体だけでなく、たとえば、次に示すものの誘導体であり得る。
コレステロールなどのステロイド、
たとえば、アミノ酸配列、アルギニン‐グリシン‐アスパラギン酸（Ａｒｇ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ）（より一般にＲＧＤと称する）を含むペプチド、
６’‐アミノ‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオース(6'-amino-6'-deoxycyclomaltoheptaose)などのシクロデキストリン。
【０１１９】
特に、関心対象の分子であるチオール誘導体Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨは、チオール官能基のグラフト化によって得ることができ、該グラフト化は、たとえば、
特に、カルボン酸官能基を有する化合物によって、システアミンをグラフト化すること、または、
特に、アルコールもしくはアミン官能基を有する化合物によって、メルカプトプロピオン酸をグラフト化することによるものである。
【０１２０】
多糖におけるこれらの反応性単位の存在によって、分子の水性媒体における効果的で制御されたグラフト化、または、「チオールクリック」反応による活性のある巨大分子および／またはその化学架橋の変化が可能になる。
【０１２１】
この反応は、種々の官能基に対して直交し、これによって、たとえば、生体分子もしくは複合生体高分子（薬剤、ペプチド）を、または、多糖系生体材料の合成時において反応混合物に細胞を物理的に導入することができる。
【０１２２】
別の態様によれば、本発明は、チオエーテル単位によって官能化されたグラフト化多糖の製造方法に関し、該方法は、少なくとも次に示すものからなる工程を含んでなる：
ラジカル反応によって、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によりグラフト化された多糖（特に、上述するグラフト化されたヒアルロン酸）と、チオール化合物Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨとを反応させる工程、
特に式Ｃのチオエーテルによって官能化された多糖を回収する工程。
【０１２３】
特に、本方法は、上述する少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された多糖の製造方法に従って行われる。
【０１２４】
上述の方法に使用される多糖は、ポリ（ガラクツロナート）、ヘパリンとその誘導体、ヒアルロン酸とその誘導体、コンドロイチン硫酸、ペクチンとその誘導体、アルギン酸塩、および、セルロース、デキストラン、プルラン、澱粉、マルトデキストリンとその誘導体、キチン、キトサンとその誘導体などの中性多糖から選択されることが好ましい。該多糖の反復単位の数は、１０〜２５，０００（特に、１５〜１５，０００）であり得る。
【０１２５】
好ましい実施態様において、該多糖は、ヒアルロン酸とその誘導体、およびデキストランとその誘導体から選択される。
【０１２６】
特に、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によって官能化されたグラフト化ヒアルロン酸の製造方法に関し、該方法は、少なくとも次に示すものからなる工程を含んでなる：
ｃ）少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有した単位を含む単位によってグラフト化されたヒアルロン酸（特に、上述するグラフト化されたヒアルロン酸）と、特に少なくとも３個の炭素原子を有する、チオール化合物（特に、Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨ）とを反応させる工程、
ｄ）チオエーテル（特に、式Ｃのチオエーテル）によって官能化されたヒアルロン酸（特に、下の式Ｄのヒアルロン酸）を回収する工程。
【０１２７】
また、本発明は、多糖のヒドロキシルまたはアミン官能基においてグラフト化された少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された多糖の製造方法にも関し、該単位は、次に示す化学式Ｃ
【化１７】
0005872576.tif 000018
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキレン基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基、アリール基、またはアリールアルキル基であり、特に、Ｒおよび／またはＲ’は、水素原子であり、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である）に対応する。
【０１２８】
別のその態様によれば、本発明は、チオエーテル基によって官能化された多糖グラフト化アルケンに関し、該アルケンは、次に示す化学式Ｃ
【化１８】
0005872576.tif 000019
（式中、
ｍは１〜１０の整数であり、
ＸはＣＲ１Ｒ２単位であって、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキレン基、任意により置換されたアリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、
ＲおよびＲ’はそれぞれ、独立して、水素原子、ハロゲン原子、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル基、任意により置換されたアリール基、またはアリールアルキル基（特に、ベンジル）であり、特に、Ｒおよび／またはＲ’は、水素原子であり、かつ、
Ｒ５またはＲ６の一方は水素原子であり、他方はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であって、Ｒｔｈｉｏが、少なくとも１個の炭素原子を有した基である）に対応するチオエーテル基によって官能化される。
【０１２９】
Ｒｔｈｉｏ‐Ｓ‐基は、式Ｃのそれほど置換されていない炭素に存在することができ、特に、Ｒ６はＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐であり、Ｒ５はＨである。
【０１３０】
特に、前述のアルケンは、次に示す化学式Ｃ
【化１９】
0005872576.tif 000020
（式中、Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、Ｒｔｈｉｏ‐Ｓ‐、Ｘおよびｍは、式Ｃにおいて上に定義するとおりである）に対応するチオエーテル基によって官能化される。
【０１３１】
特に、Ｒおよび／またはＲ’はＨである。
【０１３２】
Ｒｔｈｉｏ‐Ｓ‐は、本明細書に定義するチオール化合物から誘導された基であるか、またはポリマーであり得る。
【０１３３】
グラフト化され官能化された多糖は、式Ｃの官能化された炭素‐炭素二重結合を含む単位において、多糖反復単位当たり０．５〜（多糖反復単位当たりの遊離ヒドロキシル官能基の数）×１００％、特に０．５〜４００％、とりわけ２〜２５０％、特に５〜１００％、特に７〜７５％、さらに７〜５０％のグラフト率を有し得る。
【０１３４】
特に、炭素‐炭素二重結合を含む単位はすべて官能化される。該官能化は、１以上の異なるチオールによって達成することができる。
【０１３５】
チオール化合物からなるＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐基は、いずれかの型のチオールからなり得る。このチオール化合物からなるＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐基は、上述する化合物、または次に示すものから選択される化合物からなり得る。
アルキルチオール、特に、直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル（たとえば、ペンタンチオールもしくはデカンチオール）、
たとえば窒素原子および／または硫黄原子を有する、アリールチオール（特に、ヘテロアリール）、
特に、少なくとも１つのチオール官能基を有するポリ（エチレングリコール）、少なくとも１つのチオール官能基を有するプルロニックスなどのポリエーテルのファミリー、少なくとも１つのチオール官能基を有する（ポリ（Ｎ‐アルキルアクリルアミド）（ポリ（Ｎ‐（イソプロピルアクリルアミド））のファミリーに属する、合成高分子、
たとえば、オリゴ糖鎖もしくは多糖鎖の還元末端で、または該鎖に沿って、少なくとも１つのチオール官能基を有する、単糖、オリゴ糖、もしくは多糖、
少なくとも１つのチオール官能基を有するペプチド、
少なくとも１つのチオール官能基を有するオリゴヌクレオチド、
少なくとも２つの（特に、２つ、３つ、４つ、５つもしくは６つの）チオール官能基を有する化合物、ならびに、
少なくとも１つのチオール官能基を有する活性化合物（特に、医薬としての活性化合物）。
【０１３６】
たとえば、チオール化合物からなるＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐基は、ステロイド、特に、α‐チオコレステロール、オリゴペプチドまたはポリペプチドであり得る。
【０１３７】
また、該チオールは、上に引用された化合物の誘導体だけでなく、たとえば、次に示すものの誘導体であり得る。
コレステロールなどのステロイド、
たとえば、アミノ酸配列、アルギニン‐グリシン‐アスパラギン酸（Ａｒｇ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ）（より一般にＲＧＤと称する）を含むペプチド、
６’‐アミノ‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオースなどのシクロデキストリン。
【０１３８】
特に、関心対象の分子であるチオール誘導体は、チオール官能基のグラフト化によって得ることができ、該グラフト化は、たとえば、
特に、カルボン酸官能基を有する化合物によって、システアミンをグラフト化すること、または、
特に、アルコールもしくはアミン官能基を有する化合物によって、メルカプトプロピオン酸をグラフト化することによるものである。
【０１３９】
一般に、チオール化合物から誘導されたＲｔｈｉｏ‐Ｓ‐基は、特に本明細書に説明する、いずれかの型のチオールからなり得る
【０１４０】
該多糖は、本発明に定義するとおりである。該多糖は、デキストランまたはデキストラン誘導体であることが好ましい。該多糖は、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸誘導体であることが好ましい。
【０１４１】
好ましい実施態様において、該多糖は、次に示す化学式Ｄ
【化２０】
0005872576.tif 000021
（式中、
ｎ’は１０〜１０，０００（特に、１５〜７，０００）であり、
Ｒ３はＨまたはＮａであり、かつ、
Ｒａ’、Ｒｂ’、Ｒｃ’およびＲｄ’はそれぞれ、独立して、Ｈまたは上に定義する式Ｃの単位である）に対応するヒアルロン酸である。
【０１４２】
特に、前述の式Ｃの単位は、ヒアルロン酸反復単位当たり０．５〜４００％、とりわけ２〜２５０％、特に５〜１００％、特に７〜７５％、さらに７〜５０％のモルグラフト率で存在する。
【０１４３】
該官能化は、１以上の異なるチオールによって達成することができる。
【０１４４】
本発明の方法が複数のチオール官能基を含むチオール化合物によって行われる場合、該方法は多糖の架橋をもたらす。
【０１４５】
別の特定の実施態様によれば、チオール化合物Ｒｔｈｉｏ‐ＳＨには、複数の（特に、１つ、２つ、３つたは４つの）チオール官能基が含まれる。これらは、たとえば、Shearwater社(http://www.creativepegworks.com)によって販売されている、ポリ（エチレングリコール）誘導体であり得る。該チオール化合物は、次に示すものであり得る。
ＣＺ４−ｒ（Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑＣＨ２ＣＨ２ＳＨ）ｒ化合物（式中、Ｚは、Ｈ、もしくは、特に１〜１８個の炭素原子を含むアルキル基であり、ｑは、２〜１５０（とりわけ４〜１００、特に５〜７５）の整数であり、かつ、ｒは１〜４の整数である）、または、
ＨＳＣＨ２ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ＳＣＨ２ＣＨ２ＳＨ化合物（式中、Ｓは１０〜５００、特に２０〜２５０、とりわけ２５〜１５０の整数である）。
【０１４６】
したがって、本発明はまた、次に示す工程を含んでなるヒアルロン酸の架橋方法にも関する：
ａ）上述の製造方法のヒアルロン酸の少なくとも１つのヒドロキシル官能基においてグラフト化された少なくとも１つのアルケン単位を有するヒアルロン酸を製造する工程、
ｂ）前の工程で得られたヒアルロン酸と、複数のチオール官能基を含む化合物とを反応させる工程、
ｃ）架橋されたヒアルロン酸を回収する工程。
【０１４７】
複数のチオール官能基を含む化合物は、ポリ（エチレングリコール）ジチオール、およびポリ（エチレン）テトラチオールから選択されることが好ましい。
【０１４８】
有利に、工程ｂ）は、ラジカル反応によって行われる。工程ｂ）には、ＵＶ光による照射が含まれることが好ましい。
【０１４９】
好ましい実施態様において、ＨＡ架橋方法には、ヒアルロン酸を水和して、ヒドロゲルを形成することがさらに含まれる。
【０１５０】
また、本発明は、本発明の方法によって得ることができる架橋ヒアルロン酸、および、本発明の方法によって得ることができるヒアルロン酸ヒドロゲルにも関する。
【０１５１】
さらに、本発明は、本発明の製造方法によって官能化されたヒアルロン酸の製造と、本発明のヒアルロン酸の架橋とを含んでなる、少なくとも１つのチオエーテル単位によって官能化された架橋ヒアルロン酸の製造方法にも関する。
【０１５２】
さらにまた、本発明は、本発明の方法によって得ることができる官能化架橋ヒアルロン酸、ならびに、かかる官能化架橋ヒアルロン酸、本発明の官能化多糖、もしくは本発明のヒアルロン酸ヒドロゲルを含んでなる制御放出医薬または化粧料組成物にも関する。
【０１５３】
また、本発明は、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された多糖、またはチオエーテル単位によって官能化された多糖を含んでなる組成物にも関する。この組成物には、保存剤も含まれ得る。したがって、本溶液には、酸化防止剤および／または抗菌剤（たとえば、マンニトール、ナトリウムのアジ化物）が含まれ得る。
【０１５４】
この組成物には、保存剤も含まれ得る。したがって、本溶液には、酸化防止剤および／または抗菌剤（たとえば、マンニトール、ナトリウムのアジ化物）が含まれ得る。
【０１５５】
また、本発明は、本発明の方法によって得ることができる多糖にも関する。
【０１５６】
別の態様によれば、本発明は、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された少なくとも１つの多糖、および／または、チオエーテル単位によって官能化された少なくとも１つのグラフト化多糖を含んでなるか、または該多糖からなる組成物に関する。
【０１５７】
別の態様によれば、本発明は、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された少なくとも１つの多糖、チオエーテル単位によって官能化された少なくとも１つのグラフト化多糖、少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する単位によってグラフト化された少なくとも１つの多糖を含んだ少なくとも１つの組成物、および／または、チオエーテル単位によって官能化された少なくとも１つのグラフト化多糖を含んでなる材料に関する。
【０１５８】
また、溶液中の化学ゲルも、特に１以上のチオール官能基を有する、官能化ポリマーと、炭素‐炭素二重結合を含んだ単位を有する多糖とを混合することによって得ることができる。この種のゲルは、任意により、特に生物医学の用途で、注入することができる。
【０１５９】
さらに、炭素‐炭素二重結合を含む単位によってグラフト化された多糖は、チオール官能基を有する活性化合物（特に、医薬としての活性化合物）もしくはこれらの化合物の誘導体、または生物活性高分子によって官能化することもできる。したがって、これらの材料によって、薬剤の細かいアドレシング(addressing)が可能になり得る。
【図面の簡単な説明】
【０１６０】
【図１】図１は、本発明の種々のＨＡ‐ペンテノアート／ＰＥＧ‐（ＳＨ）４、およびＨＡ‐ペンテノアート／ＰＥＧ‐（ＳＨ）２混合物の２５℃における時間の関数としての、保存係数（Ｇ’）の変化を表す。
【実施例】
【０１６１】
次に示す実施例において、合成および分析は、１８．２ ＭＱ・ｃｍの抵抗を有するElga Purelabシステムによって精製された水を使用して行った。
【０１６２】
改良多糖を、グラフト化および最終ポリマーの純度を確認するために、１Ｈ ＮＭＲによって分析した。改良多糖のモル質量および平均モル質量分布を、三重検出排除クロマトグラフィー（示差屈折率検出器、毛細管粘度計、および多重角光散乱装置を装備した）によって測定した。
【０１６３】
Bruker Daltonics Autoflex分光計を使用して、低分解能ＭＡＬＤＩ‐ＴＯＦ質量分析測定を行った。使用するマトリックスは、Ｈ２Ｏ中の５０ ｍｇ／ｍｌの濃度の２，５‐ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）である。
【０１６４】
光レオメトリー(Photorheometry)測定を、ＵＶ照射セルを装備したAR2000Exレオメーター（TA Instruments社製）を使用して行った。
【０１６５】
実施例１：２０％のグラフト率を有するＨＡ‐ペンテノアート誘導体の合成
質量ＭＷ＝２００，０００ ｇ／ｍｏｌのヒアルロン酸の初期バッチからのヒアルロン酸においてペンテノアート基をグラフト化するための手順。
２００，０００の重量平均モル質量（ＭＷ、ｇ／ｍｏｌ）（０．２００ｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）を有するヒアルロン酸を、撹拌下で、超純水（１０ ｍｌ）中に可溶化させる（２％ ｗ／ｖ ＨＡ溶液）。
この溶液に、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、６．７ ｍｌ）を、撹拌下で加える（水／ＤＭＦ混合物、３／２（ｖ／ｖ））。反応混合物のｐＨを、０．５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を加えることによって、８．３（８＜ｐＨ＜９）に調整し、次いで、これを４℃に冷却する。
その後、１ ｍｌのＤＭＦ中に予め可溶化させた４‐ペンテン酸無水物（０．０９１ｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）を、撹拌下で、該反応混合物に滴下する。
ｐＨを８．３で４時間維持した後、混合物を４℃で一晩冷蔵する。
４℃で、一晩撹拌下で、反応媒体を整置した後に、溶液を、透析ろ過工程（Amicon YM10膜、１０，０００ Ｄａ遮断）のために移す。透過液が超純水と同等の伝導率となるまで、これを、２０℃の水／エタノール混合物（３／２、ｖ／ｖ）により洗浄する。
その後、透過液を、エタノールの存在を除去するために、ロータリーエバポレータに移す。
最終ポリマーを、凍結乾燥後、９６％の収率で単離する。１Ｈ ＮＭＲによって決定した該最終ポリマーのグラフト率は、２０％である。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，８０℃，δ（ｐｐｍ））：１．９４（ＨＡアセチル基ＣＨ３），２．３２（ｍ，ＣＨ２‐ＣＨ＝ＣＨ２），２．４８（ｍ，ＣＨ２‐ＣＯ），３．１０‐４．００（ｍ，ＨＡ主鎖の糖のプロトンの質量），４．３８‐４．５５（ｍ，ＨＡのアノマープロトン），５．０１（ｍ，ＣＨ２＝），５．８３（ｍ，ＣＨ＝）。
ＳＥＣによって測定した重量平均モル質量：ＭＷ＝３７０，０００ ｇ／ｍｏｌ。
【０１６６】
実施例２：２０％のグラフト率を有するデキストラン‐ペンテノアート誘導体の合成
ＭＷ＝２００，０００ ｇ／ｍｏｌの質量のデキストランの初期バッチからのデキストランにおいてペンテノアート基をグラフト化するための手順。
２００，０００の重量平均モル質量（ＭＷ、ｇ／ｍｏｌ）（０．２００ｇ、１．２３ ｍｍｏｌ）を有するデキストランを、撹拌下で、超純水（１０ ｍｌ）中に可溶化させる（２％ ｗ／ｖ デキストラン溶液）。
この溶液に、ＤＭＦ（６．７ ｍｌ）を、撹拌下で加える（水／ＤＭＦ混合物、３／２（ｖ／ｖ））。反応混合物を４℃に冷却した後、このｐＨを、０．５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を加えることによって、８．３（８＜ｐＨ＜９）に調整する。
１ ｍｌのＤＭＦ中に予め可溶化させた４‐ペンテン酸無水物（０．０９１ｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）を、撹拌下で、該反応混合物に滴下する。
ｐＨを８．３で４時間維持した後、混合物を４℃で一晩冷蔵する。
４℃で、一晩撹拌下で、反応媒体を放置した後に、溶液を、透析ろ過工程（Amicon YM10膜、１０，０００ Ｄａ遮断）のために移す。透過液が超純水と同等の伝導率になるまで、これを、２０℃の水／エタノール混合物（３／２、ｖ／ｖ）により洗浄する。
その後、透過液を、エタノールの存在を除去するために、ロータリーエバポレータに移す。
最終ポリマーを、凍結乾燥後（２４時間）、８４％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲによって決定した該最終ポリマーのグラフト率は、２０％である。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，８０℃，δ（ｐｐｍ））：２．３４（ｍ，ＣＨ２‐ＣＨ＝ＣＨ２），２．５３（ｍ，ＣＨ２‐ＣＯ），３．３０‐４．１０（ｍ，デキストラン主鎖の糖のプロトンの質量），４．９１（ｍ，ＨＡのアノマープロトン），５．０７（ｍ，ＣＨ２＝），５．８２（ｍ，ＣＨ＝）。
【０１６７】
実施例３：１８％のβ‐シクロデキストリン（ＣＤ）グラフト率を有するＨＡ‐シクロデキストリン誘導体の合成
ａ．６’‐メルカプトプロピオニルアミド‐６’‐デオキシシクロマルヘプタオース(6'-mercaptopropionylamido-6'-deoxycyclomaltoheptaose)の合成。
撹拌および窒素雰囲気下で、ＤＭＦ（２０ ｍｌ）中６’‐アミノ‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオース（SIGMA社製）（０．２ｇ、０．１７ ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（１ ｍｌ）中Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、０．０２９ ｍｌ、０．１７ ｍｍｏｌ）の溶液、さらに、ＤＭＦ（１ ｍｌ）中１‐ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、０．０４６ｇ、０．３４ ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’‐ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（０．１０６ ｍｌ、０．６８ ｍｍｏｌ）の溶液を連続的に加える。次いで、メルカプトプロピオン酸（ＭＰＡ、０．０１９ ｍｌ、０．２２ ｍｍｏｌ）を反応媒体に加える。その後、反応混合物を、窒素雰囲気下、一晩撹拌下で整置する。ロータリーエバポレータでほとんどのＤＭＦが蒸発した後、生成物をアセトン（２００ ｍｌ）中に沈殿させる。次いで、その沈殿物を、１００ ｍｌのアセトンで５の孔隙率を有するフリット上で３回洗浄し、その後、室温で一晩乾燥させる。６’‐メルカプトプロピオニルアミド‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオースを、８８％の収率で、白色の粉末(０．１８１ｇ、０．１５ ｍｍｏｌ）の形態で得る。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，２５℃，δ（ｐｐｍ））：２．５３（ｍ，ＣＨ２‐ＳＨ，ＭＰＡ鎖），２．６７（ｍ，ＣＨ２‐ＣＯ，ＭＰＡ結合），３．１３（ｍ，１Ｈ，ＣＤ），３．５２‐３．８６（ｍ，Ｈ‐２，Ｈ‐３，Ｈ‐４，Ｈ‐５，Ｈ‐６，６’，ＣＤ），５．０（ｍ，アノマープロトン，ＣＤ）
ＭＳ‐ＭＡＬＤＩ‐ＴＯＦ：Ｃ４５Ｈ７４Ｏ３５ＮＳＮａの［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値：１２４４．１１；測定値：１２４４．４０
【０１６８】
ｂ．２０％のグラフト率を有するＨＡ‐ペンテノアート誘導体と６’‐メルカプトプロピオニルアミド‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオースのカップリング
撹拌下で、超純水（２ ｍｌ）中２０％のグラフト率を有する質量ＭＷ＝３７０，０００ ｇ／ｍｏｌのＨＡ‐ペンテノアート誘導体（実施例１によって合成）の溶液（１％ ｗ／ｖ ＨＡ‐ペンテノアート溶液）に、６’‐メルカプトプロピオニルアミド‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオース（０．０１２ｇ、０．００９６ ｍｍｏｌ）を加える。次いで、その混合物に、ＰＢＳ（０．１ ｍｌ、リン酸緩衝生理食塩水、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中１％（ｗ／ｖ）Irgacure 2959溶液を加える。その後、反応混合物を石英セルに移し、波長λ＝３６５ ｎｍで５分間照射する。
次いで、溶液を透析ろ過工程（Amicon YM10膜、１０，０００ Ｄａ遮断）のために移し、透過液が超純水と同等の伝導率になるまで、これを、２０℃の超純水により洗浄する。
最終ポリマーを、凍結乾燥後、８７％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲによって決定した該最終ポリマーのグラフト率は、１８％である。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，８０℃，δ（ｐｐｍ））：１．５９（ｍ，ＣＨ２，ＣＯ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐Ｓ），１．９１（ＨＡアセチルＣＨ３基），２．４１（ｍ，ＣＯ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐Ｓ，Ｓ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＯ‐ＮＨ），３．２０‐４．００（ｍ，ＨＡ主鎖およびＣＤの糖のプロトンの質量），４．３５‐４．５０（ｍ，ＨＡのアノマープロトン），４．９７（ｍ，ＣＤのアノマープロトン）。
【０１６９】
実施例４：２０％のＲＧＤペプチド単位グラフト率を有するＨＡ‐ＲＧＤ誘導体の合成
撹拌下で、超純水（１．８ ｍｌ）中２０％のグラフト率を有する質量ＭＷ＝３７０，０００ ｇ／ｍｏｌのＨＡ‐ペンテノアート（実施例１によって合成）の溶液（１％ ｗ／ｖ ＨＡ‐ペンテノアート溶液）に、ＲＧＤペプチド（Genecust社から入手したＭＰＡ‐ｇｌｙ‐ａｒｇ‐ｇｌｙ‐ａｓｐ‐ｓｅｒ、０．００５ｇ、０．００８６ ｍｍｏｌ）を加える。次いで、その混合物に、ＰＢＳ（０．１ ｍｌ、リン酸緩衝生理食塩水、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中１％（ｗ／ｖ）Irgacure 2959溶液を加える。その後、反応混合物を石英セルに移し、波長λ＝３６５ ｎｍで５分間照射する。
次いで、溶液を透析ろ過工程（Amicon YM10膜、１０，０００ Ｄａ遮断）のために移し、透過液が超純水と同等の伝導率になるまで、これを、２０℃の超純水により洗浄する。
最終ポリマーを、凍結乾燥後、７６％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲによって決定した該最終ポリマーのグラフト率は、２０％である。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，８０℃，δ（ｐｐｍ））：１．５４‐１．６７（ｍ，３ ＣＨ２アルギニン），２．５３（ｍ，ＣＨ２ＣＯ，メルカプトプロピオンアミド），２．７３（ｍ，ＣＨ２アスパラギン酸），３．１１（ｔ，ＣＨ２Ｓ），３．２０‐４．００（ｍ，ＨＡ主鎖，ＣＨ２グリシン，ＣＨ２セリンの糖のプロトンの質量），４．２４‐４．６６（ｍ，ＨＡ，ＣＨアルギニン，ＣＨアスパラギン酸，ＣＨセリンのアノマープロトン）。
【０１７０】
実施例５：２０％のペンタン鎖グラフト率を有するＨＡ‐ペンタン誘導体の合成。
撹拌下で、超純水／エタノール混合物（３／２、ｖ／ｖ、５ ｍｌ）中２０％のグラフト率を有するＨＡ‐ペンテノアート（実施例１によって合成）の溶液（１％ ｗ／ｖ ＨＡ‐ペンテノアート溶液）に、１‐ペンタンチオール（０．０１２ｇ、０．１１９ ｍｍｏｌ）を加える。次いで、その混合物に、水／エタノール混合物（３／２、ｖ／ｖ、０．１ ｍｌ)中１％（ｗ／ｖ）Irgacure 2959溶液を加える。その後、反応混合物を石英セルに移し、波長λ＝３６５ ｎｍで１０分間照射する。
次いで、溶液を透析ろ過工程（Amicon YM10膜、１０，０００ Ｄａ遮断）のために移し、透過液が超純水と同等の伝導率になるまで、これを、２０℃の超純水／エタノール混合物（３／２、ｖ／ｖ）により洗浄する。
最終ポリマーを、凍結乾燥後、７５％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲによって決定した該最終ポリマーのグラフト率は、２０％である。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，８０℃，δ（ｐｐｍ））：０．７７（ｔ，Ｓ‐（ＣＨ２）４‐ＣＨ３），１．２３（ｍ，Ｓ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ３），１．５０（ｍ，ＣＯ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐Ｓ，Ｓ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ３），１．９１（ＨＡアセチル基ＣＨ３），２．４８（ｍ，ＣＯ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐Ｓ，Ｓ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ３），３．１０‐４．００（ｍ，ＨＡ主鎖の糖のプロトンの質量），４．３４‐４．５５（ｍ，ＨＡのアノマープロトン）。
【０１７１】
実施例６：１０％のβ‐シクロデキストリン（ＣＤ）グラフト率を有するデキストラン‐シクロデキストリン誘導体の合成。
撹拌下で、超純水（２ ｍｌ）中２０％のグラフト率を有する質量ＭＷ＝２００，０００ ｇ／ｍｏｌのデキストラン‐ペンテノアート（実施例２によって合成）の溶液（１％ ｗ／ｖ デキストラン‐ペンテノアート溶液）に、６’‐メルカプトプロピオニルアミド‐６’‐デオキシシクロマルトヘプタオース（０．０２７ｇ、０．００２２４ ｍｍｏｌ）を加える。次いで、その混合物に、ＰＢＳ（０．１ ｍｌ、リン酸緩衝生理食塩水、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中１％（ｗ／ｖ）Irgacure 2959溶液を加える。その後、反応混合物を石英セルに移し、波長λ＝３６５ ｎｍで５分間照射する。
次いで、溶液を透析ろ過工程（Amicon YM10膜、１０，０００ Ｄａ遮断）のために移し、透過液が超純水と同等の伝導率になるまで、これを、２０℃の超純水により洗浄する。
最終ポリマーを、凍結乾燥後、１００％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲによって決定した該最終ポリマーのグラフト率は、１０％である。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ ＭＨｚ，８０℃，δ（ｐｐｍ））：１．６４（ｍ，ＣＯ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐Ｓ），２．４０‐２．５０（ｍ，ＣＯ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐Ｓ，Ｓ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＯ‐ＮＨ），２．７２（ｍ，Ｓ‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐ＣＯ‐ＮＨ），３．２０‐４．００（ｍ，デキストラン主鎖およびＣＤの糖のプロトンの質量），４．８８（ｍ，デキストランのアノマープロトン），４．９９（ｍ，β‐ＣＤのアノマープロトン）。
【０１７２】
実施例７：ヒアルロン酸を含む化学ヒドロゲルの合成。
ＨＡ‐ペンテノアート誘導体を、次に示す式の、複数のチオール官能基を有する化合物、ポリ（エチレングリコール）ジチオール（ＰＥＧ‐（ＳＨ）２、ＭＷ＝３．６００ ｇ／ｍｏｌ、Shearwater社製）
【化２１】
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または、次に示す式の、ポリ（エチレングリコール）テトラチオール（ＰＥＧ‐（ＳＨ）４、ＭＷ＝２，２００ ｇ／ｍｏｌ、Shearwater社製）と結合させる場合、
【化２２】
0005872576.tif 000023
ＵＶ照射による化学ヒドロゲルの形成がみられる。これは、図１に示す光レオロジー(photorheology)（AR2000Exレオメーター、TA Instruments社製）による結果となった。
図１は、８％のグラフト率を有するＨＡ‐ペンテノアート誘導体（ＨＡ‐ｐｅｎｔ（ＤＳ＝０．０８）という）、または２５％のグラフト率を有するＨＡ‐ペンテノアート誘導体（ＨＡ‐ｐｅｎｔ（ＤＳ＝０．２５）という）から製造された、種々のＨＡ‐ペンテノアート／ＰＥＧ‐（ＳＨ）４、およびＨＡ‐ペンテノアート／ＰＥＧ‐（ＳＨ）２混合物の２５℃における時間の関数としての、保存係数（Ｇ’）の変化を表す。ＰＥＧ‐（ＳＨ）４（ＭＷ=２，２００ ｇ／ｍｏｌ）およびＰＥＧ‐（ＳＨ）２（ＭＷ＝３，６００ ｇ／ｍｏｌ）誘導体は、Shearwater社から入手する。ＵＶ照射は、１ Ｈｚの周波数で行った保存係数Ｇ’の測定開始１分後に、活性化される。ＰＢＳ中ＨＡ‐ペンテノアート（ＭＷ＝２００，０００ ｇ／ｍｏｌ）の初期濃度は、１５ ｇ／ｌである。
この図１によれば、鎖間の化学架橋の確立を表す保存係数（弾性係数）Ｇ’は、ＵＶ照射（λ＝３６５ ｎｍ、力：１４４ ｍＷ／ｃｍ２）の活性化から急激になり、５分後に、一定値に達する。保存係数の値は、チオール／ペンテノアートモル比、ＨＡ‐ペンテノアートの置換度、チオール誘導体の性質、およびＨＡ‐ペンテノアート濃度の関数として調節することができる。
【図１】
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