(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における前立腺癌細胞の増殖を処置もしくは阻害するのに使用するための、テストステロンの産生を低減させるアンドロゲン除去療法と式（Ｉ）：
【化１】
0005998137.tif 000015
［式中：
Ｒ１は、メチル；
Ｒ２は、水素；
Ｒ３は、−ＯＨ；
Ｒ４は、水素；
Ｒ５は、水素；
Ｒ６は、水素；
である］
の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩とを含む、製品の組合せ。
【請求項２】
前記アンドロゲン除去療法が、アビラテロン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、アバレリクスおよびデガレリクスから成る群より選択される１以上を含む、請求項１に記載の製品の組合せ。
【請求項３】
前記アンドロゲン除去療法がアビラテロンを含む、請求項２に記載の製品の組合せ。
【請求項４】
前記アンドロゲン除去療法がロイプロリドを含む、請求項２に記載の製品の組合せ。
【請求項５】
前記アンドロゲン除去療法がデガレリクスを含む、請求項２に記載の製品の組合せ。
【請求項６】
前記アンドロゲン除去療法が、前記対象の血清テストステロンレベルを低下させる薬剤である、請求項１に記載の製品の組合せ。
【請求項７】
前記アンドロゲン除去療法が、前記対象の血清テストステロンレベルを健常男性対象のレベルの５〜２０％、１０〜３０％、２０〜４０％、３０〜５０％、４０〜６０％または５０〜７０％に低下させる、請求項６に記載の製品の組合せ。
【請求項８】
アンドロゲン依存性癌細胞を式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩と接触させることにより、アンドロゲン依存性癌細胞の有糸分裂およびアポトーシスを誘導する式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩を選択すること、およびテストステロンの産生を低減させるアンドロゲン除去療法を選択することを含む、請求項１に記載の製品の組合せを作る方法。
【請求項９】
有糸分裂の誘導によりアポトーシスが誘導される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アンドロゲン依存性癌細胞のアポトーシスまたは有糸分裂を測定することをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
アポトーシスを核濃縮により測定する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記アンドロゲン除去療法が化学的去勢剤である、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記化学的去勢剤がアビラテロンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記化学的去勢剤がロイプロリドである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記化学的去勢剤がデガレリクスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記テストステロンの産生を低減させるアンドロゲン除去療法が外科的精巣摘除術である請求項１に記載の製品の組合せ。
【請求項１７】
前記テストステロンの産生を低減させるアンドロゲン除去療法が外科的精巣摘除術である、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年８月４日に出願された米国特許仮出願第６１／３７０，５３４号に対する優先権の利益を主張するもので、これをそのまま出典明示により援用する。
【０００２】
本出願の態様は、化学、生化学および医学の分野に関する。より詳細には、プルンバギンなどのナフトキノン類似体、プルンバギンなどのナフトキノン類似体を含む医薬組成物、ならびにプルンバギンなどのナフトキノン類似体で疾患および／または状態を処置する方法を本明細書で開示する。また、プルンバギンなどのナフトキノン類似体とホルモン除去化合物などのホルモン療法剤を、前立腺癌などの癌を有する対象に提供する併用療法も含まれる。
【背景技術】
【０００３】
前立腺癌は前立腺において発現し、典型的には緩やかに増殖する：しかし、一部の前立腺癌は侵攻性である。前立腺癌細胞は、典型的にはアンドロゲン／テストステロン／ＤＨＴ依存性であり、前立腺から身体の他の部分、特に骨およびリンパ節に転移し得る。前立腺内にとどまる前立腺癌の処置の選択肢には、注意深い経過観察／積極的な監視、体外照射療法、小線源療法、凍結療法、ＨＩＦＵおよび手術が含まれる。ホルモン療法および化学療法は、前立腺を越えて侵攻した疾患のための選択肢とされることが多い。しかし、一部の進行した腫瘍にも放射線療法が用いられることがあり、またホルモン療法が一部の早期腫瘍に使用され得るという例外もある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
１〜３年のホルモン療法の後に、アンドロゲン／テストステロン／ＤＨＴを遮断したにもかかわらず前立腺癌細胞が再び増殖し始めることは一般的である。以前は「ホルモン不応性前立腺癌」または「アンドロゲン非依存性前立腺癌」と称されていたが、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）という用語が現在では一般的に使用される。化学療法剤および免疫療法はＣＲＰＣ後の生存期間を延長させることが示されているが、延命効果は限られている。これまでの多くの人々の努力にもかかわらず、今もなお、さらなる癌の処置法、特に前立腺癌の処置法が必要とされていることは明らかである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書で開示する一部の実施形態は、前立腺癌を有する対象におけるアンドロゲンの量を低減しつつ、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩の治療有効量を前記対象に提供することによって前立腺癌の増殖を阻害するまたは遅延させる方法に関する。一部の実施形態では、抗アンドロゲン化合物、エストロゲン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストまたはＬＨＲＨアンタゴニストを対象に提供することによってアンドロゲンの量を低減することができる。一部の実施形態では、ステロイド性抗アンドロゲン剤または非ステロイド性抗アンドロゲン剤を対象に提供することによってアンドロゲンの量を低減することができる。一部の実施形態では、酢酸シプロテロン、アビラテロン、フィナステリド、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスおよび／またはデガレリクスを対象に提供することによってアンドロゲンの量を低減することができる。一部の実施形態では、前立腺癌の増殖を阻害するまたは遅延させる本発明の方法により、対象の血清テストステロンレベルを約２０〜５０ｎｇ／ｄＬに低下させることができる。一部の実施形態では、前立腺癌の増殖を阻害するまたは遅延させる本発明の方法により、対象の血清テストステロンレベルを約５０ｎｇ／ｄＬ未満に低下させることができる。一部の実施形態では、前立腺癌の増殖を阻害するまたは遅延させる本発明の方法により、対象の血清テストステロンレベルを約２０ｎｇ／ｄＬ未満に低下させることができる。
【０００６】
本明細書で開示する一部の実施形態は、前立腺癌を有する偽同所性チャンバーマウスモデルを提供すること；前記マウスモデルにおいてアンドロゲンのレベルを低下させること；式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩もしくはプロドラッグを前記マウスモデルに提供すること；および前記化合物が前立腺癌細胞の増殖を阻害するのに有効であるかどうかを評価することにより、前立腺癌細胞の増殖を阻害するまたは遅延させる化合物を同定するための方法に関する。
【０００７】
本明細書で開示する一部の実施形態は、対象を、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）を発症する危険性がある集団の成員として分類すること；前記対象におけるアンドロゲンの量を低減しつつ、治療有効量の式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩を前記対象に提供すること；および前立腺癌細胞の増殖もしくはそのマーカーまたはＣＲＰＣの発症の阻害または遅延を評価することにより、ＣＲＰＣの発症を阻害するまたは遅延させる方法に関する。
【０００８】
本明細書で開示する一部の実施形態は、アンドロゲンの非存在下で前立腺癌細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させること；前立腺癌細胞の増殖の阻害または遅延の有無を判定すること；および前記化合物を、アンドロゲンの非存在下で前立腺癌細胞の増殖を阻害するもしくは遅延させる集団、または前立腺癌細胞の増殖を阻害しないもしくは遅延させない集団に分類することにより、前立腺癌細胞の増殖を阻害するまたは遅延させる化合物を同定する方法に関する。
【０００９】
本明細書で開示する一部の実施形態は、アンドロゲンの非存在下で前立腺癌細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させること；前立腺癌細胞の増殖の阻害または遅延の有無を判定すること；アンドロゲンの非存在下で前立腺癌細胞の増殖を阻害する式（Ｉ）の化合物を選択すること；および前立腺癌に罹患している対象への投与を目的として、アンドロゲンの非存在下で前立腺癌細胞の増殖を阻害するまたは遅延させる前記化合物を製剤化することにより、前立腺癌治療薬を創製する方法に関する。
【００１０】
本明細書で開示する一部の実施形態は、前立腺癌細胞の増殖または去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）の発症を阻害するまたは遅延させるための、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩とホルモン療法剤との併用に関する。一部の実施形態では、ホルモン療法剤は、酢酸シプロテロン、アビラテロン、フィナステリド、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスもしくはデガレリクスまたはそれらの１以上の任意の組合せであり得る。
【００１１】
本明細書で開示する一部の実施形態は、前立腺腫瘍の大きさを縮小させるのに使用するための、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容される式（Ｉ）の塩とホルモン療法剤との併用に関する。一部の実施形態では、ホルモン療法剤は、酢酸シプロテロン、アビラテロン、フィナステリド、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスもしくはデガレリクスまたはそれらの１以上の任意の組合せであり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ細胞の増殖に対するナフトキノン類似体の作用を示す。
【図２】図２は、ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ細胞の増殖に対するナフトキノン類似体の作用を示す。
【図３】図３は、ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ細胞におけるプルンバギンの用量反応を示す。
【図４】図４は、無処置、去勢単独、プルンバギン単独、および去勢とプルンバギンの併用による腫瘍の増殖を比較した図である。
【図５】図５は、去勢と組み合わせて投与した、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇのプルンバギンの作用を示す。
【図６】図６は、外科的去勢後におけるプルンバギン追加の作用を示した図である。
【図７】図７は、プルンバギンの毎日の腹腔内投与（２ｍｇ／ｋｇ）後におけるアポトーシス（ＡＰ）および有糸分裂（ＭＩ）の増大を示した図である。
【図８】図８は、ジヒドロテストステロンの非存在下でのヒトＬＮＣａＰ細胞におけるプルンバギンの作用を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
Ｉ．定義
特に規定されない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および学術用語は、当業者が一般的に理解しているのと同じ意味を有する。本明細書で引用されるすべての特許、特許出願、公開済み出願およびその他の刊行物は、他に指示がない限りそのまま出典明示により本明細書に援用される。本明細書中の用語に関して複数の定義が存在する場合は、特に明記されない限り本章における定義が優先する。
【００１４】
以下に限定されるわけではないが、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４などの、本明細書で使用する任意の「Ｒ」基は、指示された原子に結合され得る置換基を示す。Ｒ基は置換されていてもよくまたは置換されていなくてもよい。
【００１５】
本明細書で使用する、「Ｃａ〜Ｃｂ」［式中、「ａ」および「ｂ」は整数である］は、アルキル基、アルケニル基もしくはアルキニル基における炭素原子の数、またはシクロアルキル基、シクロアルケニル基、シクロアルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基もしくはヘテロアリシクリル基の環における炭素原子の数を指す。すなわち、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルの環、シクロアルケニルの環、シクロアルキニルの環、アリールの環、ヘテロアリールの環またはヘテロアリシクリルの環は、ａ、ｂも含めた「ａ」から「ｂ」までの炭素原子を含むことができる。したがって、例えば、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基は、１〜４個の炭素を有するすべてのアルキル基、すなわち、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−および（ＣＨ３）３Ｃ−を指す。アルキル基またはアルケニル基に関して「ａ」および「ｂ」が指定されない場合は、これらの定義において記述される最も広い範囲が想定されるべきである。
【００１６】
本明細書で使用する、「アルキル」は、完全に飽和した（二重結合または三重結合がない）炭化水素基を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖を指す。アルキル基は１〜２０個の炭素原子を有してよい（本明細書中では常に、「１〜２０」などの数値範囲は、所与の範囲内の各整数を指す；例えば、「１〜２０個の炭素原子」は、アルキル基が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等、最大２０個までの炭素原子から成ってよいことを意味するが、本定義はまた、数値範囲が指定されない「アルキル」という用語の存在も包含する）。アルキル基はまた、１〜１０個の炭素原子を有する中間サイズのアルキルであってもよい。アルキル基はまた、１〜６個の炭素原子を有する低級アルキルであり得る。化合物のアルキル基は、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」または同様の表記で表示され得る。ほんの一例ではあるが、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、アルキル鎖中に１〜４個の炭素原子が存在する、すなわち、アルキル鎖がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔ−ブチルから選択されることを示す。典型的なアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ペンチルおよびヘキシルが含まれるが、決してこれらに限定されない。アルキル基は置換されていてもよくまたは置換されていなくてもよい。
【００１７】
本明細書で使用する、「アルケニル」は、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖中に１以上の二重結合を含むアルキル基を指す。アルケニル基は置換されていなくてもよくまたは置換されていてもよい。
【００１８】
本明細書で使用する「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素などの、元素周期表の第７カラムの放射安定性原子の任意の１つを意味する。
【００１９】
ある基が「所望により置換されていてもよい」と表される場合は常に、その基は、置換されていなくてもよくまたは指示された置換基の１以上で置換されていてもよい。同様に、ある基が「置換されていないかまたは置換された」と表されるとき、置換されている場合には、その置換基は１以上の指示された置換基から選択されてよい。置換基が指示されていない場合は、指示された「所望により置換されていてもよい」または「置換された」基が、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、ヘテロアラルキル、（ヘテロアリシクリル）アルキル、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロゲン、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、保護されたＣ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、シリル、スルフェニル、スルフィニル、スルホニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンスルホンアミド、アミノ、一置換アミノ基および二置換アミノ基、ならびにそれらの保護された誘導体からそれぞれ独立して選択される１以上の基で置換されていてもよいことを意味する。
【００２０】
「ナフトキノン類似体」という用語は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が本明細書で定義されるとおりである、式（Ｉ）の化合物を指す。
【００２１】
「医薬的に許容される塩」という用語は、それが投与される生物に対して顕著な刺激を引き起こさず、かつ化合物の生物学的活性および特性を打ち消さない、化合物の塩を指す。一部の実施形態では、塩は化合物の酸付加塩である。医薬塩は、化合物を、例えばハロゲン化水素酸（例えば塩酸または臭化水素酸）、硫酸、硝酸およびリン酸などの無機酸と反応させることによって得ることができる。医薬塩はまた、化合物を、例えばギ酸、酢酸、コハク酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸およびナフタレンスルホン酸を含む脂肪族または芳香族のカルボン酸またはスルホン酸などの有機酸と反応させることによって得ることもできる。医薬塩はまた、化合物を塩基と反応させることにより、アンモニウム塩などの塩、ナトリウム塩またはカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩またはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｃ１〜Ｃ７アルキルアミン、シクロヘキシルアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミンなどの有機塩基との塩、ならびにアルギニンおよびリシンなどのアミノ酸との塩を形成させて得ることもできる。
【００２２】
１以上のキラル中心を有する、本明細書で述べる任意の化合物において、絶対立体化学が明確に指示されない場合、各々の中心は独立してＲ立体配置もしくはＳ立体配置またはその混合物であってよいことは言うまでもない。したがって、本明細書で提供される化合物は、ジアステレオマー的に純粋であってよく、ジアステレオマー的に濃縮されていてもよく、または立体異性体混合物であってもよい。加えて、ＥまたはＺと定義され得る幾何異性体を生じる１以上の二重結合を有する、本明細書で述べる任意の化合物において、各二重結合は独立してＥもしくはＺまたはその混合物であってよいことは言うまでもない。同様に、記述される任意の化合物において、すべての互変異性体も含まれることが意図されていることは言うまでもない。
【００２３】
「医薬組成物」という用語は、本明細書で開示する化合物と、希釈剤または担体などの他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物は、生物への化合物の投与を容易にする。医薬組成物はまた、化合物を、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびサリチル酸などの無機酸または有機酸と反応させることによって得ることができる。医薬組成物は、一般に意図される特定の投与経路に合わせて調製される。
【００２４】
「生理学的に許容される」という用語は、化合物の生物学的活性および特性を打ち消さない担体、希釈剤または賦形剤を定義する。
【００２５】
本明細書で使用する、「担体」は、細胞または組織への化合物の取込みを促進する化合物を指す。例えば、以下に限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、対象の細胞または組織への多くの有機化合物の取込みを促進する、一般的に使用される担体である。
【００２６】
本明細書で使用する、「希釈剤」は、薬理学的活性はないが、医薬的に必要または望ましいと考えられる、医薬組成物中の成分を指す。例えば、強力な薬剤の質量が製造および／または投与には小さすぎる場合、そのかさを増やすために希釈剤を使用することができる。希釈剤はまた、注射、経口摂取または吸入によって投与される薬剤の溶解のための液体であってもよい。当分野における希釈剤の一般的な形態は、緩衝水溶液、例えば、以下に限定はされないが、ヒト血液の組成を模倣したリン酸緩衝食塩水である。
【００２７】
本明細書で使用する、「賦形剤」は、以下に限定はされないが、かさ、粘稠度、安定性、結合能、潤滑性、崩壊能等を組成物に提供するために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。「希釈剤」は賦形剤の一種である。
【００２８】
本明細書で使用する、「対象」は、処置、観察または実験の対象となる動物を指す。「動物」には、冷血および温血脊椎動物ならびに無脊椎動物、例えば魚類、甲殻類、爬虫類が含まれ、特に、哺乳動物が含まれる。「哺乳動物」には、以下に限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、霊長動物、例えばサル、チンパンジーおよび類人猿が含まれ、特に、ヒトが含まれる。一部の実施形態では、対象はヒトである。
【００２９】
本明細書で使用する、「処置すること」、「処置」、「治療的」または「治療（法）」という用語は、必ずしも疾患または状態の完全な治癒または排除を意味するものではない。疾患または状態の何らかの望ましくない徴候または症状が緩和されていれば、程度を問わず処置および／または治療とみなすことができる。さらに、処置は、健康または外観についての患者の全体的な感覚を悪化させ得る行為を含み得る。
【００３０】
「治療有効量」という用語は、指定した生物学的または医学的応答を誘発する、活性化合物または薬剤の量を示すために使用される。例えば、化合物の治療有効量は、疾患の症状を予防する、緩和するもしくは改善する、または処置されている対象の生存期間を延長させるのに必要な量であり得る。この応答は、組織、系、動物またはヒトにおいて起こり得、処置されている疾患の徴候または症状の緩和を含む。治療有効量の決定は、本明細書で提供する開示内容を考慮すれば、十分に当業者の能力の範囲内で行うことができる。投与量として必要な本明細書で開示する化合物の治療有効量は、投与経路、処置されている動物（ヒトを含む）の種類、および考慮される特定の動物の身体的特徴に左右される。投与量は、所望の効果を達成するように調整され得るが、体重、食事、併用薬剤などの因子および医学分野の専門家が認識する他の因子に左右される。
【００３１】
本明細書で使用する、「ホルモン療法剤」という用語は、抗アンドロゲン剤（ステロイド性抗アンドロゲン剤および非ステロイド性抗アンドロゲン剤を含む）、エストロゲン剤、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストおよびＬＨＲＨアンタゴニスト、ならびにホルモン除去治療薬を指す。ホルモン療法剤には、例えば酢酸シプロテロン、アビラテロン、フィナステリド、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスおよびデガレリクスが含まれるが、これらに限定されない。
【００３２】
特許請求項の移行句であっても本文であっても、本明細書において使用する、「含む」および「含むこと」という用語は、限度を設定しない意味を有するものとして解釈されるべきである。すなわち、これらの用語は、「少なくとも有する」または「少なくとも含む」という語句と同義的に解釈されるべきである。ある方法に関連して使用する場合、「含むこと」という用語は、その方法が少なくとも列挙されている工程を含むが、付加的な工程を含んでもよいことを意味する。化合物、組成物または装置に関連して使用する場合、「含むこと」という用語は、その化合物、組成物または装置が少なくとも列挙されている特徴または成分を含むが、付加的な特徴または成分も含んでもよいことを意味する。以下の章では、単独でまたは１以上のアンドロゲン除去療法（例えば去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法）と組み合わせて、癌を処置するため、または癌細胞、特に前立腺癌細胞の増殖を阻害するもしくは遅延させるために使用することができる化合物について説明する。
【００３３】
ＩＩ．式（Ｉ）の化合物
本明細書で開示する一部の実施形態は、式（Ｉ）の化合物；医薬的に許容されるその塩；および処置等を必要とする対象において前立腺癌細胞の増殖または前立腺癌を阻害する、遅延させる、処置するまたは予防するために、これらの化合物を、本明細書で述べるように、ホルモン療法剤と共におよびホルモン療法剤なしで使用する方法に関する。式（Ｉ）：
【化１】
0005998137.tif 000002
［式中：Ｒ１は、水素、ハロゲン、所望により置換されていてもよいＣ１−１８アルキル、所望により置換されていてもよいＣ２−１８アルケニル、−ＯＲ７および−ＳＲ８から選択され得；Ｒ２は、水素、ハロゲン、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキル、所望により置換されていてもよいＣ２−６アルケニル、−ＯＲ９および−ＳＲ１０から選択され得；Ｒ３は、水素、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルおよび−ＯＲ１１から選択され得；Ｒ４は、水素、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルおよび−ＯＲ１２から選択され得；Ｒ５は、水素、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルおよび−ＯＲ１３から選択され得；Ｒ６は、水素、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルおよび−ＯＲ１４から選択され得；かつＲ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、水素および所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルからそれぞれ独立して選択され得る］。
【００３４】
一部の実施形態では、Ｒ１は水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はハロゲンであり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はクロロであり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は、所望により置換されていてもよいＣ１−１８アルキルであり得る。所望により置換されていてもよいＣ１−１８アルキルの例には、所望により置換されていてもよい以下の基が含まれるが、これらに限定されない：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノナニル、デカニル、ウンデカニル、ドデカニル、トリデカニル、テトラデカニル、ペンタデカニル、ヘキサデカニル、ヘプタデカニル、オクタデカニルおよびフィタニル。所望により置換されていてもよいＣ１−１８アルキルは分枝鎖または直鎖であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はメチルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はｔ−ブチルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は、所望により置換されていてもよいＣ２−１８アルケニルであり得る。所望により置換されていてもよいＣ２−１８アルケニルの例には、所望により置換されていてもよい以下の基が含まれるが、これらに限定されない：エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、トリデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、ヘプタデセニル、オクタデセニルおよびフィテニル。所望により置換されていてもよいＣ２−１８アルケニルは、分枝鎖または直鎖であり得、１以上の二重結合を含み得る。一部の実施形態では、Ｒ１は、所望により置換されていてもよいＣ２−６アルケニルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＲ７であり得、式中、Ｒ７は水素である。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＲ７であり得、式中、Ｒ７は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＲ７であり得、式中、Ｒ７はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＲ８であり得、式中、Ｒ８は水素である。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＲ８であり得、式中、Ｒ８は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＲ８であり得、式中、Ｒ８は、ヒドロキシで所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＳＲ８であり得、式中、Ｒ８は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。
【００３５】
一部の実施形態では、Ｒ２は水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ２はハロゲンであり得る。一部の実施形態では、Ｒ２はクロロであり得る。一部の実施形態では、Ｒ２は、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり得る。所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルの例には、所望により置換されていてもよい以下の基が含まれる：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル（分枝鎖および直鎖）およびヘキシル（分枝鎖および直鎖）。一部の実施形態では、Ｒ２はメチルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ２は、所望により置換されていてもよいＣ２−６アルケニルであり得る。所望により置換されていてもよいＣ２−６アルケニルの例には、所望により置換されていてもよい以下の基が含まれる：エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル（分枝鎖および直鎖）ならびにヘキセニル（分枝鎖および直鎖）。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であり得る。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲ９であり得、式中、Ｒ９は水素である。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲ９であり得、式中、Ｒ９は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＯＲ９であり得、式中、Ｒ９はメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＳＲ１０であり得、式中、Ｒ１０は水素である。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＳＲ１０であり得、式中、Ｒ１０は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＳＲ１０であり得、式中、Ｒ１０は、ヒドロキシで所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２は−ＳＲ１０であり得、式中、Ｒ１０は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。
【００３６】
一部の実施形態では、Ｒ３は水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ３は、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲ１１であり得、式中、Ｒ１１は水素である。一部の実施形態では、Ｒ３は−ＯＲ１１であり得、式中、Ｒ１１は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。
【００３７】
一部の実施形態では、Ｒ４は水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ４は、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ４はｔ−ブチルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ４は−ＯＲ１２であり得、式中、Ｒ１２は水素である。一部の実施形態では、Ｒ４は−ＯＲ１２であり得、式中、Ｒ１２は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。
【００３８】
一部の実施形態では、Ｒ５は水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ５は、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ５は−ＯＲ１３であり得、式中、Ｒ１３は水素である。一部の実施形態では、Ｒ５は−ＯＲ１３であり得、式中、Ｒ１３は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。
【００３９】
一部の実施形態では、Ｒ６は水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ６は、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｒ６は−ＯＲ１４であり得、式中、Ｒ１４は水素である。一部の実施形態では、Ｒ６は−ＯＲ１４であり得、式中、Ｒ１３は所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルである。
【００４０】
一部の実施形態では、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、水素からそれぞれ独立して選択され得る。一部の実施形態では、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、Ｃ１−６アルキルからそれぞれ独立して選択され得る。一部の実施形態では、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、Ｃ１−６アルキルからそれぞれ独立して選択され得、その場合Ｃ１−６アルキルは、ハロゲン、ヒドロキシおよびＣ１−４アルキルから選択される基で所望により置換されていてもよい。
【００４１】
一部の実施形態では、Ｒ１は、水素、ハロゲン、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキル、−ＯＲ７および−ＳＲ８から選択され得；Ｒ２は、水素、ハロゲン、所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキル、−ＯＲ９および−ＳＲ１０から選択され得；Ｒ３は、水素および−ＯＲ１１から選択され得；Ｒ４は、水素および所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルから選択され得；Ｒ５は水素であり得；Ｒ６は、水素および−ＯＲ１４から選択され得；かつＲ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、水素および所望により置換されていてもよいＣ１−６アルキルからそれぞれ独立して選択され得る。
【００４２】
一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はメチルであり得；Ｒ３は−ＯＨであり得；かつＲ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ３およびＲ６は各々−ＯＨであり得；かつＲ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ３は−ＯＨであり得；かつＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は各々−ＳＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり得；かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は各々−ＯＣＨ３であり得；かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＣＨ３であり得；かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はメチルであり得；かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は各々クロロであり得；かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＨであり得；かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１はフィテニルであり得；Ｒ２はメチルであり得；かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ４は各々ｔ−ブチルであり得；かつＲ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒ１は−ＯＨであり得；Ｒ２は−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であり得；かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素であり得る。
【００４３】
一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つは水素ではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ１がメチルであり、かつＲ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ３は−ＯＨではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が各々水素である場合、Ｒ３およびＲ６の少なくとも１つは−ＯＨではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ３は−ＯＨではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは−ＳＣＨ２ＣＨ２ＯＨではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは−ＯＣＨ３ではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１は−ＯＣＨ３ではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１はメチルではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つはクロロではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１は−ＯＨではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ２がメチルであり、かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１はフィテニルではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１およびＲ４の少なくとも１つはｔ−ブチルではあり得ない。一部の実施形態では、Ｒ２が−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であり、かつＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が各々水素である場合、Ｒ１は−ＯＨではあり得ない。
【００４４】
式（Ｉ）の化合物の例には以下が含まれるが、これらに限定されない。
【化２】
0005998137.tif 000003
【００４５】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の１つが式（Ｉ）の構造を有する、二量体であり得る。例えば、一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はローソン二量体であり得る。
【化３】
0005998137.tif 000004
【００４６】
以下の章では、前立腺癌細胞の増殖を阻害するもしくは遅延させるため、および／または前立腺癌を処置もしくは予防するために使用できる従来の療法について説明する。本明細書で述べる本発明の療法は、以下の章で述べる療法の任意の１以上を含む前立腺癌のための従来の療法のいずれかと共におよび従来の療法なしで実施できることは言うまでもない。
【００４７】
ＩＩＩ．前立腺癌
２００９年に米国で新たに診断された前立腺癌の症例数は１９２，２８０例と推定され、死亡は２７，３６０例と推定されている。疾患が進行した患者の約９０％は、激しい痛み、運動性の喪失および脊髄圧迫を伴う骨転移を発症する。他の罹患臓器には肝臓、肺および脳が含まれ得る。進行した前立腺癌は、ホルモン療法、放射線および従来の化学療法に対して耐性を示す。５年生存率は、局所疾患では１００％に近いが、進行癌では３０％に低下する。
【００４８】
最近、新しい外科的方法および放射線療法の改良を含む、前立腺癌の処置にいくつかの進歩があった。例えば：
１）１９８６年に、神経損傷を最小限に抑えつつ前立腺を切除することで有害な副作用を低減できる技術（ダヴィンチ前立腺癌切除術を用いる）が外科医によって開発された。
２）加えて、長い歴史を持つ放射線療法技術の１つである、少量の放射性物質（シード）を前立腺に埋め込む小線源療法が臨床研究者によって改良された。この放射線療法は早期前立腺癌のための有効な処置である。
３）精巣を刺激してテストステロンを生成する下垂体の能力を阻害する、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニストの開発を含む、前立腺癌のためのホルモン療法にも進歩があった。
４）前立腺癌のための化学療法においても進歩がなされた。２００４年に、ＮＣＩが資金援助した２つの大きな臨床試験の結果は、薬剤ドセタキセルの使用が、ホルモン療法に応答しなくなった進行前立腺癌を有する男性の生存期間を延長し得ることを示した。
【００４９】
残念ながら、従来の療法と共にまたはダヴィンチ前立腺癌切除術を用いる進んだ療法と共に根治的前立腺摘除術が実施された後も、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）レベルが依然としてゼロを超えている場合は、前立腺癌が被膜の外側に広がっていること、すなわち播種性疾患が示唆され、現在に至るまで、これについての治癒可能な処置はない。
【００５０】
したがって、そのような播種性のアンドロゲン依存性前立腺癌のための現在のすべてのホルモン療法ならびに化学療法の処置レジメンは対症療法である。前立腺癌の処置は進歩しているものの、播種性疾患の処置のための新しい戦略を見出すことは依然として極めて重要な課題である。以下の章では、癌細胞、特に前立腺癌細胞の増殖を阻害するまたは遅延させるための式（Ｉ）の化合物の使用に関してさらに詳細な説明を提供する。
【００５１】
ＩＶ．抗癌剤としての式（Ｉ）の化合物
式（Ｉ）の化合物は顕著な抗癌特性を有する。例えば、プルンバギン（５−ヒドロキシ−２−メチルナフタレン−１，４−ジオン）は、プルンバゴ・ゼイラニカ（Ｐｌｕｍｂａｇｏ  ｚｅｙｌａｎｉｃａ）、スターチス・リモニウム（Ｓｔａｔｉｃｅ  ｌｉｍｏｎｉｕｍ）およびリモニウム・カロリニアヌム（Ｌｉｍｏｎｉｕｍ  ｃａｒｏｌｉｎｉａｎｕｍ）を含む、様々な薬草種において見出すことができる天然のナフトキノンである。プルンバギンは、線維肉腫（ＥＤ５０  ０．７５ｍｇ／ｋｇ体重）およびＰ３８８リンパ性白血病（ＥＤ５０  ４ｍｇ／ｋｇ体重）に対する抗癌作用を示し、肝癌の退縮を誘導し、ホルモン不応性前立腺癌の増殖と浸潤を阻害した（Ａｚｉｚら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００８，６８（２１）：９０２４−３２２）。さらに、プルンバギンは、腸腫瘍に対する有望な化学予防剤／抗癌剤であることを示した。
【００５２】
理論に拘束されることを望むものではないが、プルンバギンおよび他のキノイド化合物の細胞傷害作用の主要メカニズムは、酸化還元循環および求電子アリール化によるものであると考えられる。プルンバギンは電子移動によってフラボタンパク質からセミキノンラジカルに還元され、セミキノンラジカルは、次に、酸素をスーパーオキシドに還元することができる。生じたスーパーオキシドは、結果的に過酸化水素、ヒドロキシルラジカルおよび／またはペルオキシ亜硝酸へと変換され得るため、これらすべてが強力な細胞傷害作用および殺腫瘍作用を有する高度活性酸素種（ＲＯＳ）である。
【００５３】
やはり理論に拘束されることを望むものではないが、プルンバギンおよび関連キノン類の副次的な抗腫瘍メカニズムは、細胞内チオールが直接アリール化されることによるグルタチオン（ＧＳＨ）の枯渇を含み得る。ＧＳＨの枯渇は、最終的に細胞高分子のアルキル化およびそれらの不活性化をもたらし得る。さらに、低用量濃度のプルンバギン（５μｍｏｌ／Ｌ）は、前立腺癌細胞におけるプロテインキナーゼＣｑ（ＰＫＣｑ）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＡＫＴを含む多数の分子標的の発現、転写因子アクチベータタンパク質−１（ＡＰ−１）、核内因子κＢ（ＮＦ−κＢ）およびシグナル伝達性転写因子３（Ｓｔａｔ３）の活性化を阻害できることが示されている。このような活性がプルンバギンの殺腫瘍作用に寄与している可能性がある。
【００５４】
前臨床モデルにおけるプルンバギンを用いた試験は、プルンバギンによる処置がアンドロゲン非依存性前立腺癌のより緩やかな増殖をもたらし得ること、およびより緩やかな増殖の背後にあるメカニズムは前立腺腫瘍細胞のアポトーシスに起因すると考えられることを明らかにした。
【００５５】
式（Ｉ）のいくつかの化合物は抗癌活性を有しており、テストステロン／アンドロゲン／ＤＨＴの遮断（例えば去勢、ホルモン除去などのホルモン処置療法）と併用して提供された場合、その抗癌活性、特に前立腺癌に関する抗癌活性が顕著に増強され得る（例えば相乗作用を得ることができる）と考えられる。例えば、メナジオン（ビタミンＫ３）のそれを必要とする対象への投与は、前立腺癌細胞の増殖を有効に阻害し、それにより致死的前立腺癌の発生率を低下させると考えられる。メナジオンと抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、αリポ酸、ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、リコペン、トコフェロール、トコトリエノール等との併用も有益であり得る。メナジオンとマイトマイシンＣの併用も、進行した固形腫瘍、進行した肺癌および進行した消化器癌を有する対象を処置するのに有益であり得る。メナジオンとビタミンＣなどの１以上の抗酸化剤とを組み合わせて、前立腺癌を有する対象に投与することにより、腫瘍細胞数およびＰＳＡ（前立腺癌特異抗原）の低減が達成されると考えられる。
【００５６】
第Ｉ／第ＩＩａ相試験において、以前に標準治療レジメン（すなわち根治的前立腺摘除術、放射線療法および／またはホルモン除去）が奏効しなかった前立腺癌患者にメナジオンとビタミンＣの組み合わせが与えられた。試験に参加した患者のうち１０名は試験の前にホルモン除去療法を受けたことがあったが、これらの患者は、ビタミンＣとメナジオンの組み合わせを摂取する時点ではホルモン除去療法を受けていなかった（Ｔａｒｅｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ，２００８，５：６２参照）。この試験では、末期疾患（侵攻性、再発性）を有する患者において処置が行われた。以前にホルモン療法を受けたことがある患者は、試験の時点でホルモン抵抗性になっていた（おそらくこのことがこれらの患者で疾患が進行していた原因である）可能性が高い。
【００５７】
患者が抗酸化剤（例えばアスコルビン酸）とメナジオンなどの式（Ｉ）の化合物との組み合わせを摂取している期間中に去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法を行った場合、前立腺癌細胞増殖の阻害が顕著に増強され得ることが本明細書では考えられる。根治的前立腺摘除術後にゼロを超えるＰＳＡ値を有する対象に対して、すなわち対象がアンドロゲン依存性播種性疾患を有する場合に、前立腺癌に罹患している対象を式（Ｉ）の化合物およびアンドロゲン除去療法で処置するための改善された方法が本明細書で提供される。現在、このための治療法は存在せず、患者は、目下のところ、ホルモン療法単独を含む対症療法のみを受けている。本明細書で提供されるデータは、ホルモン療法時のプルンバギンの併用がホルモン療法単独よりも良好であることを示している。
【００５８】
２，３−ビス［（２−ヒドロキシエチル）チオ］−１，４−ナフトキノン（ＮＳＣ  ９５３９７）は、細胞周期調節に関与する二重特異性ホスファターゼＣｄｃ２５の強力な阻害剤であり得る。ＮＳＣ  ９５３９７は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼホスファターゼＭＫＰ−１およびＭＫＰ−３の活性を阻害することができる。この化合物は、化学療法剤、例えばドキソルビシン、エトポシド、オキサリプラチンおよびドセタキセルとの併用で検討されてきた。ＮＳＣ  ９５３９７は、神経内分泌性腫瘍細胞、ヒト膵癌細胞および気管支癌細胞において検討されてきた。さらに、この化合物は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）経路の調節におけるＣｄｃ２５ホスファターゼの役割を検討するために前立腺癌細胞において使用されてきた（Ｎｅｍｏｔｏら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２００４，５８：９５参照）。しかし、前立腺癌細胞の増殖または生存に対するＮＳＣ  ９５３９７の作用に関してのＮｅｍｏｔｏによる報告はない。ＮＳＣ  ９５３９７は前立腺癌細胞の増殖を阻害するために使用することができ、患者がＮＳＣ  ９５３９７を摂取する時点より前、摂取している間および／または摂取後に去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法が行われた場合、前立腺癌細胞増殖の阻害が顕著に増強され得ると考えられる。
【００５９】
ジュグロンは、ペプチジル−プロリルシス／トランスイソメラーゼ（ＰＩＮ−１）阻害剤であると考えられる。ジュグロンはヒト癌細胞においてエトポシドとの併用で検討されており、β−ラパコンは喉頭扁平上皮癌細胞における放射線の作用を増強することができる。式（Ｉ）の化合物は酸化度が高く、細胞において酸化ストレスを誘導すると考えられる。したがって、ジュグロンは前立腺癌細胞の増殖を阻害するために使用することができ、患者がジュグロンを摂取する時点より前、摂取している間および／または摂取後に去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法が行われた場合、前立腺癌細胞増殖の阻害が顕著に増強され得ると考えられる。
【００６０】
ナフタザリンは微小管脱重合剤であると考えられ、２，３−ジメトキシ−１，４−ナフトキノン（ＤＭＮＱ）はＤＮＡトポイソメラーゼＩを阻害し得る。ナフタザリンおよび／または２，３−ジメトキシ−１，４−ナフトキノン（ＤＭＮＱ）は前立腺癌細胞の増殖を阻害するために使用することができ、患者がナフタザリンおよび／または２，３−ジメトキシ−１，４−ナフトキノン（ＤＭＮＱ）を摂取する時点より前、摂取している間および／または摂取後に去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法が行われた場合、前立腺癌細胞増殖の阻害が顕著に増強され得ると考えられる。
【００６１】
上述したように、癌（例えば前立腺癌）を有する対象を１以上の式（Ｉ）の化合物単独でまたは式（Ｉ）の化合物の組み合わせで処置しても、癌性細胞の増殖を阻害することはできるが、患者のアンドロゲンレベルを低下させる療法（例えば去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法）と併用して、１以上の式（Ｉ）の化合物を別々にまたは混合物もしくは組合せとして提供することにより、癌細胞増殖（例えば前立腺癌細胞増殖）の阻害を顕著に増強することができる。すなわち、一部の実施形態は、癌細胞増殖（例えば前立腺癌細胞増殖）を阻害する、または癌（例えば前立腺癌）を処置もしくは予防する方法を含み、前記方法では、癌（例えば前立腺癌）を有する対象におけるアンドロゲンの量を低減させつつ（例えば去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法を行いつつ）、１以上の式（Ｉ）の化合物（例えばプルンバギン）を提供する。所望により、治療後に（例えばプルンバギンとホルモン療法の併用を行った後に）癌（例えば前立腺癌）またはそのマーカー（例えばＰＳＡ）の阻害を評価してもよい。言い換えると、本発明の一部の実施形態は、前立腺癌細胞の増殖を阻害するもしくは遅延させる、または前立腺癌を処置もしくは予防するのに使用される、別々にまたは一緒に投与するために製剤化された１以上の式（Ｉ）の化合物と、アンドロゲン除去療法（例えば去勢、ホルモン去勢、ホルモン除去またはホルモン療法）との併用を含む。以下の章では、上述した処置および処置プロトコールを提供するために対象においてアンドロゲンのレベルを枯渇させるのに使用することができる方法について説明する。
【００６２】
Ｖ．ホルモン療法
前立腺癌を処置するため、または前立腺癌細胞の増殖を阻害するもしくは遅延させるためのホルモン療法は、アンドロゲン除去（ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ）療法（ＡＤＴ）、化学的去勢またはアンドロゲン除去（ａｂｌａｔｉｏｎ）療法とも呼ばれ得る。アンドロゲンは、正常前立腺細胞および癌性前立腺細胞の両方を含む、前立腺細胞の増殖を刺激することができる。一部の実施形態では、前立腺癌に罹患している対象に、対象のアンドロゲンレベルを低下させるホルモン療法剤を提供する。一部の実施形態では、対象において低減されるアンドロゲンは、テストステロン、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、アンドロステロン、アンドロステンジオール、アンドロステンジオン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）および硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ−Ｓ）である。一部の実施形態では、対象の血清テストステロンレベルを１以上の抗アンドロゲン剤またはアンドロゲン除去剤で低下させる。好ましくは、１以上の式（Ｉ）の化合物が提供される期間中にアンドロゲン除去療法を提供する。
【００６３】
一部の実施形態では、前立腺癌に罹患している対象を、前立腺癌のための療法を必要とする対象として分類し、前記対象は、プルンバギンや表１に提示される化合物などの１以上の式（Ｉ）の化合物を摂取しつつ、対象のアンドロゲンレベルを低下させるホルモン療法剤を提供される。所望により、前立腺癌細胞の増殖の阻害または前立腺癌の進行の阻害を評価してもよい。所望により、前立腺癌細胞の増殖の遅延または前立腺癌の進行の遅延を評価してもよい。生検、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、指診、グリソンスコアまたはＰＳＡレベルを含む従来からある臨床病理学的手法により、対象を、前立腺癌治療を必要とする対象として同定することができる。今日の患者はＰＥＴスキャン検査も受けるが、これは腫瘍細胞の活性（グルコース代謝）を評価できるので非常に重要である。同様に、処置を受けた後の前記対象における癌細胞増殖の阻害または遅延を、生検、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、指診、グリソンスコアまたはＰＳＡレベルを含む従来からある臨床病理学的手法により評価することができる。
【００６４】
一部の実施形態では、本明細書で述べる方法または処置の任意の１以上と共に使用することができるホルモン療法剤は、抗アンドロゲン剤（ステロイド性抗アンドロゲン剤および非ステロイド性抗アンドロゲン剤を含む）、エストロゲン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストならびにＬＨＲＨアンタゴニストから成る群より選択される。ステロイド性抗アンドロゲン剤には、酢酸シプロテロンおよびフィナステリドが含まれるが、これらに限定されない。非ステロイド性抗アンドロゲン剤には、フルタミド、ニルタミドおよびビカルタミドが含まれるが、これらに限定されない。エストロゲン剤には、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロールおよびリン酸エスタムスチンが含まれるが、これらに限定されない。ＬＨＲＨアゴニスト剤には、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリンおよびブセレリンが含まれるが、これらに限定されない。ＬＨＲＨアンタゴニスト剤には、アバレリクスおよびデガレリクスが含まれるが、これらに限定されない。望ましくは、酢酸シプロテロン、フィナステリド、フルタミド、アビラテロン、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスおよびデガレリクスから成る群より選択される化合物の１以上を本明細書で述べる方法および処置（組成物）において使用し、前記酢酸シプロテロン、フィナステリド、フルタミド、アビラテロン、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスまたはデガレリクスを提供する前、提供している間および／または提供した後に、式（Ｉ）の化合物の１以上（例えば表１の化合物）を提供する。
【００６５】
上述したように、前立腺癌はホルモン療法剤によって処置することができるが、ホルモン療法剤単独では去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）の進行をもたらすことがある。例えば、ホルモン療法は、最初は前立腺癌に罹患している対象において応答をもたらすことができるが、ホルモン不応性腫瘍が再発すると患者の長期生存は必ず妨げられる。進行した前立腺癌患者のために平均余命を延長させ、生活の質を改善するには、より有効な戦略が必要である。したがって、本発明の一部の態様は、酢酸シプロテロン、フィナステリド、アビラテロン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスまたはデガレリクスを提供する前、提供している間および／または提供した後に、式（Ｉ）の化合物の１以上（例えば表１の化合物）を提供することによる、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）の発症を緩和する、阻害する、低減する、または遅延させるための方法または処置（例えばＣＲＰＣの発症を緩和する、阻害する、低減する、または遅延させる目的で使用される組成物）に関係する。所望により、前立腺癌細胞の増殖の阻害、前立腺癌の進行の阻害またはＣＲＰＣの発症の遅延を評価してもよい。所望により、前立腺癌患者を、本明細書で述べる併用療法の１以上を受ける前に、ＣＲＰＣの発症を緩和する、低減する、遅延させるまたは阻害する薬剤を必要とする対象として分類する。生検、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、指診、グリソンスコアまたはＰＳＡレベルを含む従来からある臨床病理学的手法により、対象を、前立腺癌の治療を必要とする対象として同定することができる。
【００６６】
今日の患者はＰＥＴスキャン検査も受けており、これは腫瘍細胞の活性（グルコース代謝）を評価できるので非常に重要である。
【００６７】
同様に、処置を受けた後の前記対象における癌細胞増殖の阻害または遅延を、生検、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、指診、グリソンスコアまたはＰＳＡレベルを含む従来からある臨床病理学的手法により評価することができる。以下の章では併用療法についてさらに詳細に説明する。
【００６８】
ＶＩ．併用療法
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物（例えば表１の化合物）もしくは医薬的に許容されるその塩などの本明細書で開示する化合物、または本明細書で述べる化合物を含む医薬組成物は、１以上の付加的な薬剤と併用することができる。本明細書で開示する一部の実施形態は、腫瘍性疾患に罹患している対象に、本明細書で述べる１以上の化合物（例えば式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩）の治療有効量を１以上のホルモン療法剤と併用して投与すること（「併用療法」と称する）を含み得る、腫瘍性疾患を緩和するまたは処置する方法に関する。式（Ｉ）の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、または式（Ｉ）の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を含む医薬組成物と併用できる付加的な薬剤の例には、対象の血清アンドロゲンレベルを低下させ得る薬剤（例えば酢酸シプロテロン、アビラテロン、フィナステリド、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスまたはデガレリクス）が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
１つの実施形態では、腫瘍性疾患は癌であり得る。一部の実施形態では、腫瘍性疾患は、固形腫瘍などの腫瘍であり得る。１つの実施形態では、腫瘍性疾患は前立腺癌であり得、一部の実施形態では、前立腺癌はＣＲＰＣであり得る。それゆえ、一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、または式（Ｉ）の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を含む医薬組成物を、前立腺癌を有する対象を処置する目的で、前立腺癌細胞の増殖を阻害するため、前立腺癌を遅延させるため、前立腺腫瘍の大きさを縮小させるため、またはＣＲＰＣの発症もしくは進行を阻害するために１以上のホルモン療法剤と併用する。
【００７０】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、または式（Ｉ）の化合物（例えば表１の化合物の１以上）もしくは医薬的に許容されるその塩を含む医薬組成物を、「併用療法」が提供されるように、外科的精巣摘除術および／またはホルモン療法剤である酢酸シプロテロン、フィナステリド、アビラテロン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、エチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、酢酸メゲストロール、ホスフェストロール、リン酸エスタムスチン、ロイプロリド、トリプトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ブセレリン、アバレリクスもしくはデガレリクスの１以上と併用する。
【００７１】
正常な血清テストステロンは１０００〜３００ｎｇ／ｄＬの範囲である。一部の実施形態では、対象に本明細書で述べる併用療法を提供し、それにより、処置された対象の血清テストステロンレベルを少なくとも約８０ｎｇ／ｄＬ以下、７０ｎｇ／ｄＬ以下、６０ｎｇ／ｄＬ以下、５０ｎｇ／ｄＬ以下、４０ｎｇ／ｄＬ以下、３０ｎｇ／ｄＬ以下、２０ｎｇ／ｄＬ以下または１０ｎｇ／ｄＬ以下に低下させることができる。一部の実施形態では、対象に、対象の血清テストステロンレベルを少なくとも約５０ｎｇ／ｄＬ以下に低下させる併用療法を提供する。一部の実施形態では、対象を、対象の血清テストステロンレベルを少なくとも約２０ｎｇ／ｄＬ以下に低下させる併用療法で処置する。一部の実施形態では、対象を、対象の血清テストステロンレベルを少なくとも約１２０〜７０、１００〜６０、８０〜４０、７０〜３０、５０〜２０、４０〜１０、３０〜１０もしくは２０〜１０ｎｇ／ｄＬの範囲にまたはその間の任意の数に低下させる、本明細書で述べる併用療法で処置する。一部の実施形態では、対象を、対象の血清テストステロンレベルを健常男性のレベルの約９５％以下、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下または５０％以下に低下させる併用療法で処置する。一部の実施形態では、対象を、対象の血清テストステロンレベルを健常男性の少なくとも約５〜２０％、１０〜３０％、２０〜４０％、３０〜５０％、４０〜６０％もしくは５０〜７０％の範囲またはその間の任意の数に低下させる併用療法で処置する。
【００７２】
間欠的ホルモン療法（ＩＨＴ）は、ホルモン不応性疾患（すなわちＣＲＰＣ）の進行を遅延させ得る、持続的ホルモン療法の代替手段である。例えば、間欠的療法では、６か月間治療を行い、次いで６か月間これを休止することができる。一部の実施形態では、１か月間の治療、次いで１か月間の休止という形で療法を行う。一部の実施形態では、３か月間の治療、次いで３か月間の休止という形で療法を行う。したがって、式（Ｉ）の化合物の１以上、例えば表１の化合物を、ＣＲＰＣの発症を低減もしくは阻害する、または遅延させるために、上述したようにＩＨＴの前、ＩＨＴの間および／またはＩＨＴの後に提供することができる。
【００７３】
式（Ｉ）の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、または本明細書で述べる化合物を含む医薬組成物と、１以上の付加的な治療剤（複数可）との例示的な併用の非限定的なリストを表１および２に提供する。表１は、式（Ｉ）の各化合物についての略称および各療法についての略称を提供する。表２における各々の番号を付したＸ化合物は、表１で提供される各番号に対応する化合物構造を有する。同様に、表２における各々の番号を付したＹ療法は、表１で提供される各番号に対応する療法を意味する。それゆえ、表２における各々の「Ｘ：Ｙ」の項目は、前立腺癌に罹患している対象の処置に使用できる式（Ｉ）の化合物と療法との組合せの例を示す。例えば、表２の「Ｆ０２：ＡＴ０４」で表される組合せは、前立腺癌に罹患している対象の処置に使用できる、
【化４】
0005998137.tif 000005
とフルタミドの組合せを提供する。表２で提供される組合せの各々は、本明細書で述べる１、２、３またはそれ以上の付加的な薬剤と共に使用することができる。
【００７４】
【表１】
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【００７５】
【表２】
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【００７６】
式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩と、１以上の付加的なホルモン療法剤の投与の順序は様々であり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を、すべての付加的なホルモン療法剤の前に投与することができる。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を、少なくとも１つの付加的なホルモン療法剤の前に投与することができる。さらに別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を、１以上の付加的なホルモン療法剤（複数可）と同時に投与することができる。さらなる別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を、少なくとも１つの付加的なホルモン療法剤の投与の後に投与することができる。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を、すべての付加的なホルモン療法剤の投与の後に投与することができる。
【００７７】
一部の実施形態では、前立腺癌に罹患している対象を外科的精巣摘除術（すなわち精巣の切除）によって処置する。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を外科的精巣摘除術の後に投与することができる。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を外科的精巣摘除術の前後に投与することができる。
【００７８】
ＶＩＩ．抗癌活性の測定および評価
動物モデル
動物モデルは、癌の（進行性）増殖メカニズムに関する我々の理解をさらに深めるために極めて重要である。トランスジェニック腫瘍モデルを含む、現在使用されているげっ歯動物腫瘍モデル（遺伝的に改変された癌易発症性マウスを用いる）、および免疫不全マウスの皮膚下へのヒト腫瘍の移植は、特に転移および薬剤感受性に関して、臨床的な癌を十分に反映しているとは言えない。潜在的な新規処置戦略を評価するために用いられる前臨床腫瘍モデル系は、臨床における転移の過程およびパターンをできるだけ厳密に反映させることを目指すべきである。
【００７９】
同系偽同所性インビボモデルは、前立腺癌の早期段階を検討するために開発された。チャンバーを雄性マウスの背側皮下に外科的に挿置する。簡単に述べると、雄性マウス（体重２５〜３０ｇ）を麻酔し、加熱パッド上に置く。２つの対称なチタンフレームを背側皮下に移植する。皮膚層の一つから円形層を摘出する。下にある筋肉および皮下組織を、フレームの１つに組み込まれたカバーガラスで覆う。２〜３日の回復期間後、間質組織と腫瘍細胞を注意深くチャンバーに入れる。
【００８０】
腫瘍由来細胞株は、伝統的な皮下モデルに対応するチャンバー内で直ちに増殖することができる。しかし、チャンバーに移植した様々な細断組織は生存し続けて血管再生すること、および腫瘍由来細胞株は同時移植後これらの様々な間質に適応することから、この方法は同所性モデルならびに転移の初期段階についてのモデルであることがわかる。
【００８１】
例えば、マウス前立腺組織をチャンバーに移植することができる。この移植片はそれ自体の血管系を発達させ、腫瘍のための同所性間質としての役割を果たす。この前立腺間質の上に少数の前立腺癌細胞（例えばＴＲＡＭＰマウス由来のＴＲＡＭＰ−Ｃ２細胞）を移植することができる。腫瘍の微小環境は様々な種類の癌の進行にとって重要であり、癌細胞の同所性移植は皮下移植よりもはるかに厳密にヒト疾患を再現することができる。癌細胞を適切な臓器に移植した場合、腫瘍はより速く増殖し、より良好に血管系を発達させることができる。マウス前立腺癌細胞を前立腺間質と同時移植することにより、単なる皮下モデルと比べて臨床疾患をより良好に反映する環境を腫瘍細胞に提供することができる。この方法を用いると、血管再生された間質組織および移植された腫瘍は長期間にわたって、例えば９０日間まで生存可能なままであり得る。
【００８２】
ホスファターゼ・テンシン・ホモログ（ＰＴＥＮ）欠損モデル
前立腺癌のＰＴＥＮ（第１０番染色体で欠失しているホスファターゼ・テンシン・ホモログ）欠損モデル由来のマウス細胞を使用して前立腺癌を検討することができる。腫瘍抑制因子ＰＴＥＮは、ヒト前立腺癌において最も高い頻度で突然変異する遺伝子の１つである。ＰＴＥＮの欠失により、ＰＩ３−キナーゼ活性およびＡｋｔ活性が構成的に高くなり、遊走、浸潤性、細胞増殖および生存率の増大へとつながる。ＰＴＥＮの欠失はヒト前立腺癌の病因において主要な役割を果たし得る。少なくとも１つのＰＴＥＮ対立遺伝子の変化が原発腫瘍の約６０％で認められる。ＰＴＥＮの欠失は、より高いグリソンスコアおよび予後不良、ホルモン非依存性への癌の進行、化学療法または放射線療法に対する抵抗性、ならびに骨転移に結びつき得る。ＰＴＥＮ欠損マウスは、ヒトではカウデン症候群（ＰＴＥＮ遺伝子の生殖細胞突然変異によって引き起こされる）として知られる癌を遺伝的に発症しやすいのと同じように、癌の発生率が高い。これらの点に関して、ＰＴＥＮ欠損モデルはヒトでの発症を極めて厳密に再現していると思われる。したがって、ＰＴＥＮ遺伝子のヘテロ接合破壊は、いくつかの組織における腫瘍の自然発生および前立腺における前立腺上皮内腫瘍（ＰＩＮ）病変をもたらし得る。ＰＴＥＮの前立腺特異的ホモ接合欠失は前立腺腫瘍を誘導するのに十分であり、前立腺腫瘍は転移性疾患へと進行し得る。一方、ＰＴＥＮのヘテロ接合欠失は、遅発型潜伏期間を有するＰＩＮを引き起こし得る。
【００８３】
ＰＴＥＮの生殖細胞ホモ接合欠失は、ＰＴＥＮ除去に起因する胚致死性を生じさせ得る。これは、Ｃｒｅ−ＬｏｘＰ系を用いた遺伝子の条件的不活性化を介して克服することができる。前立腺特異的プロバシンプロモーターの使用を介して、前立腺の上皮細胞においてＣｒｅリコンビナーゼの発現を特異的に示すトランスジェニックマウスを作製することができる（ＰＢ−Ｃｒｅ４マウス）。これらの動物をフロックス（ｆｌｏｘｅｄ）ＰＴＥＮ対立遺伝子を有するマウスと交配することにより、ＰＴＥＮが前立腺上皮において特異的に欠失しているヘテロ接合マウスおよびホモ接合マウスの両方を作製することが可能になり得る。このモデルにおける前立腺癌の進行は、ヒトで認められる前立腺癌の進行と非常に類似する。例えば、このモデルでは上皮過形成が観察され、次いで上皮形成異常、ＰＩＮ、浸潤腺癌、そして最終的にリンパ節および肺への転移が認められる。ヒト癌と同様に、このＰＴＥＮヌルマウスにおいても、アンドロゲン除去後最初は退縮が見られ、その後アンドロゲン非依存性になる。
【００８４】
ホモ接合ＰＴＥＮＬ／Ｌ／ＰＢＣｒｅ＋マウスから切除した前立腺腫瘍から上皮細胞株を得ることができる。少なくとも２つのクローン細胞株（ＰＴＥＮ−Ｐ２およびＰＴＥＮ−Ｐ８）はヘテロ接合ＰＴＥＮＬ／＋である。残りの対立遺伝子は、インビトロでのＣｒｅリコンビナーゼの強制発現によって抑制され得る（ＰＴＥＮ−ＣａＰ２およびＰＴＥＮ−ＣａＰ８細胞）。第二対立遺伝子の欠失は、足場非依存性増殖を促進し、インビボでの腫瘍形成をもたらし得る。ＰＴＥＮ−ＣａＰ２細胞およびＰＴＥＮ−ＣａＰ８細胞がアンドロゲン受容体を発現していても、インビボで自発的アンドロゲン非依存性が起こり得る。
【００８５】
本明細書で開示する動物モデルにおけるＰＴＥＮ前立腺細胞の導入は、ヒト前立腺癌との関連性が極めて高く、種々の処置レジメンに対する前立腺腫瘍の増殖および／または退縮の詳細な観察を可能にし得る。同系マウスにおける移植は、多くの点で通常の腫瘍増殖を反映している。例えば、２対のマウス前立腺癌細胞（ＰＴＥＮ−Ｐ２／８およびＰＴＥＮ−ＣａＰ２／８）は、ヒト癌に関連する前立腺癌のマウスモデルにおける転移の検討を容易にし得る。
【００８６】
生体顕微鏡検査（ＩＶＭ）
生体顕微鏡検査（ＩＶＭ）を使用することにより、動物における腫瘍を視覚化し、腫瘍血管新生、細胞遊走および転移など癌生理学を様々な面から分析することができる。ＩＶＭの利点には、単一細胞分解能による動的過程のリアルタイム分析が含まれる。生体顕微鏡検査は、非侵襲的、非破壊的に腫瘍増殖を追跡することができる。ＩＶＭの適用は、視覚的にアクセス可能な腫瘍を保持する動物モデルに限定され得る。それゆえ、上述した背側皮下チャンバーモデルはＩＶＭに適合し得る。ＩＶＭの使用により、生存動物において多様なパラメータを時間の関数として測定することが可能となり、例えば腫瘍増殖、血管新生、免疫細胞による浸潤、腫瘍細胞の遊走、有糸分裂（細胞分裂）およびアポトーシス（プログラムされた細胞死）などすべてを宿主においてリアルタイムで測定できる。
【００８７】
ＶＩＩＩ．医薬組成物
本明細書で述べる一部の実施形態は、治療有効量の本明細書で述べる１以上の化合物（例えば式（Ｉ）の化合物（例えば表１の化合物）もしくは医薬的に許容されるその塩および／またはホルモン療法剤）および医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはそれらの組合せを含み得る医薬組成物に関する。一部の実施形態では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の単一ジアステレオマーを含み得る（例えば、単一ジアステレオマーはその他のジアステレオマーの総濃度に対して９９％を超える濃度で医薬組成物中に存在する）。別の実施形態では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩のジアステレオマーの混合物を含み得る。例えば、医薬組成物は、その他のジアステレオマーの総濃度に対して、約５０％超、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上または９８％以上の濃度で１つのジアステレオマーを含み得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩のジアステレオマーのラセミ混合物を含む。
【００８８】
本明細書で述べる一部の実施形態は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、付加的なホルモン療法剤および医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはそれらの組合せを含み得る医薬組成物に関する。本明細書で述べる一部の実施形態は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物および医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはそれらの組合せを含み得る医薬組成物に関する。一部の実施形態は、治療有効量のホルモン療法剤および医薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはそれらの組合せを含み得る医薬組成物に関する。
【００８９】
本明細書で述べる医薬組成物は、それ自体でヒト患者に投与することができるが、併用療法におけるように他の有効成分、または担体、希釈剤、賦形剤もしくはそれらの組合せと混合された医薬組成物として、ヒト患者に投与することもできる。適切な製剤は、選択される投与経路により異なる。本明細書で述べる化合物の製剤および投与のための技術は当業者に公知である。
【００９０】
本明細書で開示する医薬組成物は、それ自体公知の方法で、例えば従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠生成、湿式粉砕（ｌｅｖｉｇａｔｉｎｇ）、乳化、カプセル化、封入または錠剤化工程によって製造され得る。加えて、有効成分を、その意図される目的を達成するのに有効な量で含める。本明細書で開示する医薬組成物において使用される化合物の多くは、医薬的に適合性のある対イオンとの塩として提供され得る。
【００９１】
化合物および／または薬剤を投与する多くの技術が当分野に存在し、例えば経口、経直腸、局所、エアロゾル、注射ならびに非経口送達、例えば筋肉内、皮下、静脈内、骨髄内注射、髄腔内、直接心室内、腹腔内、鼻内および眼内注射が含まれるが、これらに限定されない。
【００９２】
また、化合物および／または薬剤を全身ではなく局所的に投与してもよく、例えば、感染部位に化合物を直接注射することも可能であり、このとき多くの場合デポー剤または持続放出製剤が用いられる。さらに、化合物および／または薬剤を、標的型薬剤送達システム、例えば組織特異的抗体で被覆されたリポソームに封入して投与してもよい。このようなリポソームは臓器を標的とし、臓器によって選択的に取り込まれる。
【００９３】
組成物は、所望する場合、有効成分を含有する１以上の単位用量形態を含み得るパックまたはディスペンサー装置で提供され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属ホイルまたはプラスチックホイルを含み得る。パックまたはディスペンサー装置には投与のための指示書が添付され得る。パックまたはディスペンサー装置には、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局によって規定される形態で容器に付随する注意書も添付され得、注意書は、人体または動物への投与用の薬剤の形態についての当局による認可を反映する。そのような注意書は、例えば、処方薬についての米国食品医薬品局によって認可されたラベルまたは認可された製品説明書であり得る。適合する医薬担体を用いて製剤化された本明細書で述べる化合物および／または薬剤を含み得る組成物も、調製され、適切な容器に納められて、適応症の処置に関するラベルを貼付され得る。
【００９４】
ＩＸ．投与
当業者には容易に理解できるように、投与されるべき有用なインビボ用量および特定の投与方法は、年齢、体重、疾病の重症度、治療される哺乳動物種、使用される特定の化合物、およびこれらの化合物が使用される特定の用途により異なる。有効用量レベル、すなわち所望の結果を達成するのに必要な用量レベルの決定は、常用方法、例えばヒトでの臨床試験およびインビトロ試験を用いて当業者によって達成され得る。
【００９５】
用量は、所望の効果および治療適応症に応じて広い範囲にわたり得る。あるいは、用量は、当業者に理解されるように、患者の体表面積に基づいて計算され得る。正確な用量は薬剤ごとに決定されるが、ほとんどの場合、用量に関してある程度の一般化が為され得る。成人患者についての１日用量レジメンは、例えば、各々の有効成分０．０１ｍｇ〜３０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜７００ｍｇ、例えば５〜２００ｍｇの経口用量であり得る。用量は、対象の必要に応じて、単回用量または１日以上の期間内で２回以上に分割して連続で与えられる用量であり得る。一部の実施形態では、持続的療法の期間、例えば１週間もしくはそれ以上、または数か月間もしくは数年間にわたって有効成分を投与する。一部の実施形態では、有効成分を１日１回投与することができる。
【００９６】
有効成分を複数回用量で対象に投与することができる。例えば、有効成分を月に１回、月に２回、月に３回、１週間おき（ｑｏｗ）、週に１回（ｑｗ）、週に２回（ｂｉｗ）、週に３回（ｔｉｗ）、週に４回、週に５回、週に６回、１日おき（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）または１日３回（ｔｉｄ）の頻度で、約１日〜約１週間、約２週間〜約４週間、約１か月間〜約２か月間、約２か月間〜約４か月間、約４か月間〜約６か月間、約６か月間〜約８か月間、約８か月間〜約１年間、約１年間〜約２年間、約２年間〜約４年間またはそれ以上に及ぶ期間にわたって投与することができる。
【００９７】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩およびホルモン療法剤を周期的に患者に投与することができる。サイクリング療法は、第一有効成分を一定期間投与し、次いで第二有効成分を一定期間投与し、この連続的な投与を反復することを含む。サイクリング療法は、１以上の療法に対する抵抗性の発現を低減し、１以上の療法の副作用を回避もしくは低減し、かつ／または処置の効力を向上させることができる。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩およびホルモン療法剤を、約３週間未満の周期で、２週間に約１回、１０日ごとに約１回、または１週間に約１回投与する。周期の回数は、約１〜約１２周期、約２〜約１０周期、または約２〜約８周期であり得る。
【００９８】
一部の実施形態では、有効成分は式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩であり得る。一部の実施形態では、有効成分はホルモン療法剤であり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の有効成分およびホルモン療法剤の有効成分の両方を対象に投与する。
【００９９】
成人患者についての１日用量レジメンは、併用して提供される２つの有効成分について同じあってもよくまたは異なっていてもよい。例えば、式（Ｉ）の化合物を０．０１ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で提供し、一方ホルモン療法剤を１ｍｇ〜７００ｍｇの用量で提供することができる。各々の有効成分の用量は、独立して、対象の必要に応じて単回用量または１日以上の期間内で２回以上に分割して連続で与えられる用量であり得る。一部の実施形態では、持続的療法のある一定期間、例えば１週間もしくはそれ以上、または数か月間もしくは数年間にわたって有効成分を投与する。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または医薬的に許容されるその塩を１日１回投与することができる。一部の実施形態では、ホルモン療法剤を週に１回投与することができる。
【０１００】
有効成分についてのヒト用量が少なくとも何らかの条件に関して確立されている場合は、それと同じ用量を使用してもよく、または確立されているヒト用量の約０．１％〜５００％、より好ましくは約２５％〜２５０％である用量を使用してもよい。新たに発見された医薬組成物の場合のように、ヒト用量が確立されていない場合は、ＥＤ５０値もしくはＩＤ５０値から、または動物における毒性試験および効力試験によって適正と認められた、インビトロ試験またはインビボ試験から導かれた他の適切な数値から、適切なヒト用量を推測することができる。
【０１０１】
医薬的に許容される塩の投与の場合は、用量を遊離塩基として計算し得る。当業者に理解されるように、ある種の状況では、特に侵攻性疾患または感染を有効かつ積極的に処置するために、本明細書で開示する有効成分を上述した好ましい用量範囲を超える、さらにははるかに超える量で投与する必要があり得る。
【０１０２】
投与の量および間隔は、調節作用を維持するのに十分な活性部分の血漿中レベル、すなわち最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するように個別に調整され得る。ＭＥＣは各有効成分について異なるが、インビトロデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するのに必要な用量は、個々の特徴および投与経路により異なる。しかし、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用して血漿中濃度を測定することができる。投与の間隔も、ＭＥＣ値を用いて決定することができる。１０〜９０％の時間、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％の時間にわたってＭＥＣを超える血漿中レベルを維持するレジメンを用いて組成物を投与すべきである。局所投与または選択的取込みの場合には、薬剤の有効局所濃度は血漿中濃度に関連しないことがあり得る。
【０１０３】
毒性または臓器の機能不全が生じた際には投与を打ち切る、中断するまたは調整する方法および時期を主治医が理解していることに留意すべきである。逆に、臨床応答が十分でない場合は処置をより高いレベルに調整する（毒性を回避しつつ）ことも主治医は理解しているだろう。対象とする障害の管理において投与される用量の大きさは、治療される状態の重症度および投与経路によって異なる。状態の重症度は、例えば、一部には、標準的な予後評価方法によって評価され得る。さらに、用量、およびおそらく投与頻度も、個々の患者の年齢、体重および応答に応じて異なる。上記で論じたのに匹敵するプログラムを獣医学において使用し得る。
【０１０４】
本明細書で開示する有効成分は、公知の方法を用いて効力および毒性に関して評価することができる。例えば、特定の有効成分、またはある種の化学的部分を共有する有効成分群の毒性学的特性は、哺乳動物細胞株、好ましくはヒト細胞株などの細胞株に対するインビトロ毒性を測定することによって決定され得る。そのような試験の結果は、哺乳動物、特にヒトなどの動物における毒性を予測するものであることが多い。あるいは、マウス、ラット、ウサギまたはサルなどの動物モデルにおける特定の化合物の毒性を、公知の方法を用いて測定してもよい。特定の有効成分の効力は、インビトロ法、動物モデルまたはヒト臨床試験などのいくつかの広く認められた方法を用いて決定され得る。効力を測定するためのモデルを選択する場合、当業者は、適切なモデル、用量、投与経路および／またはレジメンを選択する現時点での最高の技術水準を指針とすることができる。
【実施例】
【０１０５】
さらなる実施形態を以下の実施例においてさらに詳細に開示するが、これらはいかなる意味においても特許請求の範囲を限定することを意図しない。
【実施例１】
【０１０６】
式（Ｉ）の化合物は、当分野で公知の方法によって調製することができる。加えて、式（Ｉ）の多くの化合物は、植物から単離することができる天然の有機化合物である。さらに、式（Ｉ）の多くの化合物は市販されている。
【０１０７】
プルンバギンは、アルコール、アセトン、クロロホルム、ベンゼンおよび酢酸に対して可溶性である。プルンバギンは、エタノール（インビトロ）を用いた調製物およびＤＭＳＯ（インビトロ）またはＤＭＳＯとＰＥＧ３０％（インビボ）を用いた調製物として使用した。
【実施例２】
【０１０８】
細胞培養：ヒストンＨ２Ｂ−ＧＦＰ融合タンパク質を安定して発現するＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ細胞。Ｋａｎｄａら（Ｋａｎｄａ  Ｔ，Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ＫＦ，Ｗａｈｌ  ＧＭ．  Ｈｉｓｔｏｎｅ−ＧＦＰ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎａｂｌｅｓ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｉｎ  ｌｉｖｉｎｇ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  １９９８年３月２６日；８（７）：３７７−８５）は、生細胞における染色体動態を観察するための高感度な方法を開発した。彼らは、ＧＦＰをコードする遺伝子にヒトヒストンＨ２Ｂ遺伝子を融合し、それをヒトＨｅＬａ細胞にトランスフェクトして、Ｈ２Ｂ−ＧＦＰを構成的に発現する安定な株を作製した。このＨ２Ｂ−ＧＦＰ融合タンパク質は、クロマチンに組み込まれるが、細胞周期進行には影響を及ぼさなかった。ＬＸＲＮレトロウイルスカセット内の５’ＬＴＲ下にヒストンＨ２Ｂ−ＧＦＰ融合タンパク質をコードするｃＤＮＡを挿入し、それをレトロウイルス形質導入によってヒト癌細胞株ならびにマウス癌細胞株に導入した。
【０１０９】
１０％ＦＢＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン／１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、インスリン−セレン−トランスフェリン（５μｇ／ｍｌインスリン）およびＤＨＴ  １０−８Ｍ（最終濃度）を含むＤＭＥＭ培地で細胞を増殖させる。ＤＨＴ以外は通常培地と同じ添加物を含む、１０％活性炭処理ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ＤＭＥＭ培地に細胞を維持することによってアンドロゲン除去を達成する。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で加湿インキュベータ内に維持する。Ｈ２Ｂ−ＧＦＰの安定な発現を維持するためにＧ４１８（１００μｇ／ｍｌ）を添加する。
【０１１０】
細胞数測定：１２ウェルプレート中の細胞をＰＢＳで１回洗浄し、トリプシンを用いて分離して、懸濁液バイアルに移し、ＰＢＳで最終容積を１０ｍｌとする。適切な細胞サイズにゲートをかけ、微粒子片について補正したＣＯＵＬＴＥＲ（商標）Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩ装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｎｃ．，ハイアレア、フロリダ）を用いて細胞を計数する。
【０１１１】
動物モデルおよび外科技術：動物実験は必要に応じて承認を受けた。手術に関わるすべての操作は滅菌層流フード内で実施する。背側皮下チャンバーおよび手術装置を使用前に加圧滅菌する。手術の準備中に組織を湿潤に保つために使用する食塩水をゲンタマイシン（５０μｌ／ｍｌ）と混合する。
【０１１２】
雄性ヌードマウス（体重２５〜３５ｇ）を麻酔し（塩酸ケタミン７．３ｍｇおよびキシラジン２．３ｍｇ／１００ｇ体重、腹腔内注射）、加熱パッド上に置く。伸ばした皮膚の二重層を挟むように、２つの対称なチタンフレームを背側皮下に移植する。全厚１５ｍｍの円形層を切除する。その下にある筋肉（大皮筋（Ｍ．ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｍａｘ．））および皮下組織を、フレームの１つに組み込まれたカバーガラスで覆う。２〜３日の回復期間後、前立腺組織および癌細胞スフェロイド（球状凝集塊）を注意深くチャンバーに入れる。手術後、引っかきを防ぐために小さな円形のバンドエイドをチャンバーの背面に適用する。手術の前に、ブプレノルフィン（０．１ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与する。手術後、メロキシカムを飲料水に添加して４日間与える。メロキシカム（５．０ｍｇ／ｍｌ）を、水１００ｍｌにつき３５μｌ添加する。
【０１１３】
間質の調製：雄性ドナーマウスを安楽死させ、前部前立腺組織を切除して、抗生物質（ゲンタマイシン５０μｌ／ｍｌ）と共にペトリ皿に入れ、移植用に微細鋏で小片（＜１ｍｍ２）に切り刻む。
【０１１４】
腫瘍スフェロイドの調製：１％アガロースを溶解したＤＭＥＭを丸底９６ウェルプレートに添加して（５０μｌ／ウェル）、液体重層プレートを作製する。プレコンフルエントになるまで増殖した単層を形成する癌細胞をトリプシン処理し、希釈して最終容積を２５０，０００腫瘍細胞／ｍｌとする。トリパンブルーを用いて生存率を測定する。細胞をアガロースコーティングプレートに１００μｌ／ウェルで播種する。４８時間後、スフェロイドを形成した細胞を採取し、無血清培地で洗浄してマウスチャンバーへ移植する。トリパンブルーを用いて生存率を測定する。移植したスフェロイドの大きさを正確に測定することにより、動物間の偏差が最小限に抑えられる。
【０１１５】
外科的去勢：マウスを塩酸ケタミン７．３ｍｇおよびキシラジン２．３ｍｇ／１００ｇ体重の腹腔内注射により麻酔する。陰嚢を横切る側方切開を行い、精巣を個別に結紮して、切除する。創傷を焼灼した。次に切開を縫合し、アクリル系Ｎｅｘａｂａｎｄ（登録商標）で閉じた。
【０１１６】
生体顕微鏡検査：落射照明器およびキセノンアーク灯によるビデオ誘発ストロボスコープ照明を備えたＭｉｋｒｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（ＭＶ−７６００、ＥＧ＆Ｇ）を用いて蛍光顕微鏡検査を実施する。この顕微鏡には、シリコン増強ターゲットカメラ（ＳＩＴ６８、Ｄａｇｅ−ＭＴＩ）が取り付けてある。ファームウェアバージョン２．５０と浜松画像処理装置（Ａｒｇｕｓ  ２０）（Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍ）を画像補正およびコンピュータへの画像の取込みのために使用する。Ｚｅｉｓｓ  Ｐｌａｎ  Ｎｅｏｆｌｏｕｒ  １．２５Ｘ／０．０３５対物レンズを使用してチャンバーの全体像を取得し、腫瘍の大きさを測定する。Ｚｅｉｓｓ  Ａ−Ｐｌａｎ  １０Ｘ／０．２５対物レンズを使用して血管パラメータの計算のための画像を取得する。Ｚｅｉｓｓ  Ａｃｈｒｏｐｌａｎ  ２０Ｘ／０．５Ｗ対物レンズを使用して、有糸分裂指数およびアポトーシス指数の計算のための画像を取得する。我々のシステムは以下のパラメータの評価を可能にする。
【０１１７】
腫瘍面積（ＡＴ） は、７５を超える濃度値（２５６階調の輝度レベル）を有するピクセル数、すなわち、ＡＴ＝ΣＡｋ（ただし、７５＜ｋ＜２５５）と定義される。
【０１１８】
腫瘍細胞の数：腫瘍が不均質である場合、ＡＴの変化は腫瘍増殖を直接反映しない。腫瘍細胞数の推定値（ＮＴＣ）は、強度指数の二次関数、例えばＮＴＣ＝−３．２９６×１０−１２＋１９０．６×ＩＴ＋７．７３１０−２×（ＩＴ）２［式中、強度指数は、ＩＴ  ＝ΣＡｋ＊ｋ（ただし、７５＜ｋ＜２５５）によって定義される］に当てはめることによって得ることができる。
【０１１９】
有糸分裂指数およびアポトーシス指数：各々の時点で、腫瘍における周辺視野および中心視野（２０倍の拡大視野）をそれぞれ２つずつＦＩＴＣフィルターおよび内蔵されたフレーム取込み器で取得する。核膜の歪みの潜在的な人為的影響を排除するため、中期−終期の有糸分裂（ＭＩ）像だけを有糸分裂指数に含める。アポトーシス／濃縮核は、断面積が３０μｍ２未満のＨ２Ｂ−ＧＦＰで標識される核と定義される。小胞性核凝縮およびＨ２ＢＧＦＰの明るさによって容易に識別できる核崩壊（ＮＫ）は、このアポトーシス指数に含まれる。
【０１２０】
血管パラメータの画像解析：各々のスフェロイドについて、ビデオ記録を使用して、移植した腫瘍スフェロイドによって誘導されている新生血管系の長さ、面積および血管密度を計算する。Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓを用いてビデオ記録から血管パラメータを解析する。１０倍対物レンズで得られた顕微鏡写真を、バックグラウンドピクセルの強度偏差を小さくするために「平らにならす（ｆｌａｔｔｅｎｅｄ）」。変形した領域を排除するために関心領域（ＡＯＩ）を選択し、閾値化により画像を対象とバックグラウンドに分割する。このパネルを使用して血管面積（ＡＶ）を計算する。画像をスケルトン化して血管の長さ（ＬＶ）を計算する。平均腫瘍血管径ＤＶをＡＶ／ＬＶとして計算し、血管密度（ΔＶ）を腫瘍面積当たりのＬＶとして計算する。最後に、腫瘍血管系の総面積の増大速度を計算する。
【実施例３】
【０１２１】
ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ細胞の増殖に対するナフトキノン類似体の作用
ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ前立腺癌細胞を、９６ウェルプレートにおいて（３ウェルを１組とする）１０％胎仔ウシ血清およびＤＨＴを含む増殖培地に８０００細胞／ウェルの密度で播種した。その翌日、漸増濃度のナフトキノン類似体（１０ｍＭ  ＤＭＳＯ保存溶液から希釈した）を添加して、２４時間インキュベートした。ホルマザンを利用した細胞傷害性アッセイ「ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６Ａｑｕａｅｏｕｓ非放射性増殖アッセイ」（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって細胞生存率を判定した。結果を表３および４ならびに図１および２に示す。
【０１２２】
【表３】
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【０１２３】
【表４】
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【実施例４】
【０１２４】
ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ細胞におけるプルンバギンの用量応答
ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰマウス癌細胞を、最終濃度１０−８ＭのＤＨＴ（ジヒドロテストステロン）の存在下または非存在下でアンドロゲン除去培地中に加えた。プルンバギンを指示濃度で添加して、２４時間静置した。ＤＨＴが存在しない状態は、外科的または化学的去勢をシミュレーションするものである。細胞をトリプシン処理し、細片を排除するＣｅｌｌ  Ｃｏｕｌｔｅｒ計数器Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩを用いて計数した。結果は、対照に対するパーセント値として細胞数を表したものである（薬剤の非存在下での細胞数を１００％とする）。図３は、各々二重測定で実施した、２つの別々の実験の平均値を示すグラフである。結果を表５および図３に示す。結果は、インビトロで、模擬的な外科的または化学的去勢とプルンバギンの併用処置がプルンバギン単独での処置よりも有効であったことを示す。
【０１２５】
アンドロゲン除去培地：以下の添加物を含む、高グルコース・フェノールレッド不含ＤＭＥＭ：１０％活性炭処理胎仔ウシ血清、２５μｇ／ｍｌウシ下垂体抽出物、５μｇ／ｍｌインスリン、６ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦ組換え体。
【０１２６】
【表５】
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【実施例５】
【０１２７】
前立腺癌についての偽同所性チャンバーモデルにおける去勢と併用したプルンバギンのインビボ作用
白金チャンバーを手術によってヌードマウスの背側皮下に挿置した。２日後、ＢａｌｂＣマウス（同系）からの細かく刻んだ前立腺組織をチャンバーに移植し、７〜１０日間血管新生させた。次に、小さな腫瘍細胞スフェロイドを各々のチャンバーに移植した。Ｈ２Ｂ−ＧＦＰ融合タンパク質が安定してトランスフェクトされた腫瘍細胞ＰＴＥＮ−Ｐ２（ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ）をこれらの実験において使用した。腫瘍血管新生が十分に誘導されたところで（約５〜７日目）、アンドロゲン産生を阻害するために動物を外科的に去勢した。外科的去勢はアンドロゲン枯渇を誘導し、臨床でのホルモン療法を有効に再現できることが当分野において公知である。去勢の直後からマウスをプルンバギンで処置した。プルンバギンは、腹腔内注射により用量１ｍｇ／ｋｇ（ＤＭＳＯおよびＰＥＧ３０％）を１日１回のスケジュールで投与した。結果は、意外にも、去勢とプルンバギンの併用処置がいずれの処置単独よりもインビボでより有効であったことを示す。それゆえ、この実験は、プルンバギンと併用した去勢（外科的または化学的に拘わらず）により、当分野で従来公知である療法に対して顕著な改善がもたらされ得るという重要な指摘を提供する。
【０１２８】
さらに、上記の結果は、去勢だけによる処置またはプルンバギンだけによる処置では腫瘍サイズの著しい縮小に至らなかったことを示している。しかし、プルンバギンと去勢の併用処置は、意外にも腫瘍サイズの顕著な縮小をもたらした。このように、本明細書で述べる併用療法は、当分野で従来公知である療法に対して前立腺癌を処置するうえで顕著な改善を提供する。
【０１２９】
図４は、無処置、去勢単独、プルンバギン単独、および去勢とプルンバギンの併用による腫瘍の増殖を比較した図である。
【０１３０】
図５は、去勢と組み合わせて投与した、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇのプルンバギンの作用を示す。図４および５において、０日目はプルンバギン処置の１日目である。
【実施例６】
【０１３１】
前立腺癌についての偽同所性チャンバーモデルにおける去勢と併用したプルンバギンのインビボ作用
白金チャンバーを手術によってヌードマウスの背側皮下に挿置した。２日後、ＢａｌｂＣマウス（同系）からの細かく刻んだ前立腺組織をチャンバーに移植し、７〜１０日間血管新生させた。次に、小さな腫瘍細胞スフェロイドを各々のチャンバーに移植した。Ｈ２Ｂ−ＧＦＰ融合タンパク質が安定してトランスフェクトされた腫瘍細胞ＰＴＥＮ−Ｐ２（ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ）をこれらの実験において使用した。アンドロゲン産生を阻害するために移植の約３週間後に動物を外科的に去勢した。外科的去勢はアンドロゲン枯渇を誘導し、臨床でのホルモン療法を有効に再現できることが当分野において公知である。去勢の２週間後から、マウスを２ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のプルンバギンで毎日処置した。
【０１３２】
図６は、外科的去勢後におけるプルンバギンの追加の作用を示した図である。
【０１３３】
図７は、プルンバギン（２ｍｇ／ｋｇ）の毎日の腹腔内投与後におけるアポトーシス（ＡＰ）および有糸分裂（ＭＩ）の増大を示した図である。この図は、急速な腫瘍退縮には、アポトーシスの増加だけでなく、細胞周期停止の指標となる有糸分裂の増加も関与していることを示している。
【０１３４】
上記の結果は、意外にも、去勢とプルンバギンの併用処置が去勢単独よりもインビボでより有効であったことを示す。それゆえ、この実験は、プルンバギンと併用した去勢（外科的または化学的に拘わらず）により、当分野で従来公知である療法に対して顕著な改善がもたらされ得るという重要な指摘を提供する。
【０１３５】
さらに、上記の結果は、去勢だけによる処置では腫瘍サイズの著しい縮小に至らなかったことを示している。しかし、プルンバギンと去勢の併用処置は、意外にも腫瘍サイズの顕著な縮小をもたらした。このように、本明細書で述べる併用療法は、当分野で従来公知である療法に対して前立腺癌を処置するうえで顕著な改善をもたらす。
【０１３６】
理論に拘束されることを望むものではないが、上記の所見は、腫瘍の退縮が、おそらく、腫瘍細胞の増殖停止またはアポトーシス（主としてプルンバギン処置によるものである）と、アンドロゲン除去による血管新生の抑制の組合せによって引き起こされることを示している。各処置が異なる生物学的区画（血管系間質の、おそらく炎症細胞）で別々の作用を示すという現象は細胞株の培養物では見られないことから、この併用により、インビトロで得られるよりもはるかに良好な結果がインビボで得られたと考えられる。
【実施例７】
【０１３７】
ヒトＬＮＣａＰ細胞におけるプルンバギンの用量応答
ＬＮＣａＰホルモン感受性ヒト前立腺癌細胞をＤＨＴ（ジヒドロテストステロン）の非存在下でアンドロゲン除去培地中に加えた。ＤＨＴが存在しない状態は、外科的または化学的去勢をシミュレーションするものである。アンドロゲン除去培地は、１０％活性炭処理胎仔ウシ血清を含むフェノールレッド不含ＤＭＥＭ高グルコース培地であった。
【０１３８】
プルンバギンを表６に示す濃度で添加して、２４時間静置した。細胞をトリプシン処理し、細片を排除するＣｅｌｌ  Ｃｏｕｌｔｅｒ計数器Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩを用いて計数した。表６の結果は、対照に対するパーセント値として細胞数を表したものである（薬剤の非存在下での細胞数を１００％とする）。図８は、ヒトＬＮＣａＰ細胞におけるプルンバギンの作用を示した図である。結果は、インビトロで、模擬的な外科的または化学的去勢とプルンバギンの併用処置が去勢単独処置よりも有効であることを示す。
【０１３９】
【表６】
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【実施例８】
【０１４０】
化学的去勢と併用したプルンバギンのインビボ作用
白金チャンバーを手術によってヌードマウスの背側皮下に挿置する。２日後、ＢａｌｂＣマウス（同系）からの細かく刻んだ前立腺組織をチャンバーに移植し、７〜１０日間血管新生させる。次に、小さな腫瘍細胞スフェロイドを各々のチャンバーに移植する。Ｈ２Ｂ−ＧＦＰ融合タンパク質が安定してトランスフェクトされた腫瘍細胞ＰＴＥＮ−Ｐ２（ＰＴＥＮ−Ｐ２／ＧＦＰ）をこれらの実験において使用する。腫瘍血管新生が十分に誘導されたところで（約５〜７日目）、アンドロゲン枯渇を誘導するために動物を抗アンドロゲン化合物（例えば酢酸シプロテロン）で処置する。次にマウスをプルンバギンまたはその類似体（例えば表１の化合物）で処置する。プルンバギンまたはその類似体は、腹腔内注射により用量１ｍｇ／ｋｇ（ＤＭＳＯおよびＰＥＧ３０％）を１日１回のスケジュールに従って投与する。酢酸シプロテロンで処置していない対照マウスを並行して分析する。また、酢酸シプロテロンで処置するがプルンバギンでは処置しないマウスも並行して分析する。結果は、抗アンドロゲン化合物（例えば酢酸シプロテロン）とプルンバギン（またはその類似体）の併用がプルンバギン（もしくはその類似体）単独または抗アンドロゲン化合物（例えば酢酸シプロテロン）単独での処置よりも効率的に前立腺癌細胞増殖を阻害することを示す。
【０１４１】
本開示の精神から逸脱することなく数多くの様々な変更を行い得ることは当業者に理解される。それゆえ、本明細書で開示する形態は単なる例示であり、本開示の範囲を限定することを意図しないことは言うまでもない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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