【手続補正書】
【提出日】平成22年9月30日(2010.9.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
（発明の要旨）
本開示は、透明な生体適合性フィルム上で培養した、増殖性メラニン細胞を含む移植片に関連する。その細胞が創面切除部位と向かい合わせになるようにフィルムを反転することによって、細胞を色素脱失部位に直接送達する。１つの実施態様において、本発明の移植片は、メラニン細胞の生存度を、移植前に輸送条件下で最低９６時間維持する。本発明は、白斑（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、白斑（ｌｅｕｃｏｄｅｒｍａ）のような色素沈着低下異常、およびまた母斑のような色素沈着過剰状態の治療に有用である。色素沈着過剰領域を、色素沈着低下部位と同様に創面切除し得る。これは、非常に濃い色素沈着の原因である、活動亢進メラニン細胞の除去を引き起こす。この部位における正常メラニン細胞の移植は、正常色素沈着を助ける。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
自己表皮由来のメラニン細胞および生体高分子膜を含む、皮膚における色素沈着を誘発し得る移植片組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、移植片組成物。
（項目２）
少なくとも８０％の前記細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも９６時間、前記組成物中で生存可能である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記組成物が、ケラチノサイト細胞をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記メラニン細胞組成物と前記ケラチノサイト細胞とが、前記生体高分子膜中で０．８：２から１：１の比で存在する、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記細胞が、前記生体高分子膜上で単層として存在する、項目１に記載の組成物。
（項目６）
前記単層が、サブコンフルエントな単層である、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記メラニン細胞が、さらに増殖し得る、項目１に記載の組成物。
（項目８）
少なくとも９０％の前記細胞が、活発に増殖しているメラニン細胞である、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記生体高分子膜が、少なくとも５０，０００Ｄａの分子量を有する、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、およびポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ）からなる群から選択される、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記生体高分子膜が、ポリ乳酸（ＰＬＡ）である、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
前記メラニン細胞が、結果として生じた組成物が皮膚の色素沈着低下異常に対して治療効果を有するように、十分な量で存在する、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
項目１に記載の組成物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
ａ）自己表皮からメラニン細胞を単離する工程；
ｂ）単離されたメラニン細胞を含む細胞懸濁液を調製する工程；
ｃ）該メラニン細胞を増殖させる工程；
ｄ）任意で、該メラニン細胞を凍結保存する工程；
ｅ）任意で、該メラニン細胞を解凍する工程；
ｆ）該メラニン細胞を生体高分子膜に播種する工程；
ｇ）該細胞を生体高分子膜上でサブコンフルエントな単層中で増殖させる工程；および
ｈ）輸送培地を含む輸送装置を用いて、該生体高分子膜を輸送する工程；
を含み、ここで少なくとも７５％の該細胞が、輸送条件下で少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能なままである、プロセス。
（項目１３）
前記生体高分子膜が、ポリ乳酸（ＰＬＡ）を含み、前記メラニン細胞が、１×１０４から１×１０５細胞／ｃｍ２の細胞密度で、該生体高分子膜に播種される、項目１２に記載のプロセス。
（項目１４）
前記輸送装置が、ポリカーボネートを含む、項目１２に記載のプロセス。
（項目１５）
前記輸送培地が、二酸化炭素富化培地を含む、項目１２に記載のプロセス。
（項目１６）
前記輸送培地が、ＫＳＦＮ培地である、項目１２に記載のプロセス。
（項目１７）
皮膚の色素沈着を必要とする個体を治療するための方法であって、該方法は、該個体に項目１に記載の組成物を適用する工程を含み、該組成物は、該個体の皮膚における表皮再生の速度を増強する、方法。
（項目１８）
前記個体がヒトである、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記皮膚の色素沈着を必要とする個体が、白斑に罹患している、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
メラニン細胞のサブコンフルエントな単層および生体高分子膜を含む組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、組成物。
（項目２１）
ケラチノサイトと同時培養されたメラニン細胞のサブコンフルエントな単層および生体高分子膜を含む組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、組成物。
（項目２２）
前記メラニン細胞が、ケラチノサイトと１：１の比で同時培養される、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）
（１）未分化細胞を含むケラチノサイト細胞のサブコンフルエントな単層、および（２）生体高分子膜を含む組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、組成物。
（項目２４）
被験体における色素脱失を治療するための方法であって、送達システムとして生体高分子膜を使用する工程、および皮膚にサブコンフルエントなメラニン細胞の単層を送達する工程を含む、方法。
（項目２５）
被験体における色素過剰を治療するための方法であって、送達システムとして生体高分子膜を使用する工程、および皮膚にサブコンフルエントなメラニン細胞の単層を送達する工程を含む、方法。
（項目２６）
白斑を治療するためのキットであって、該キットは（１）（ａ）メラニン細胞のサブコンフルエントな単層および（ｂ）生体高分子膜を含む組成物であって、ここで該単層は該生体高分子膜上にある、組成物；ならびに（２）輸送装置を含み、ここで少なくとも７５％の該メラニン細胞が、５−３７℃の輸送条件下で少なくとも７２時間、組成物中で生存可能なままである、キット。
（項目２７）
前記項目に記載され、本明細書の実施例および図で実質的に例示し、本明細書において実質的に記載された、自己表皮由来のメラニン細胞および生体高分子膜を含む、皮膚における色素沈着を誘発し得る移植片組成物、その方法およびキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己表皮由来のメラニン細胞および生体高分子膜を含む、皮膚における色素沈着を誘発し得る移植片組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、移植片組成物。
【請求項２】
少なくとも８０％の前記細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも９６時間、前記組成物中で生存可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、ケラチノサイト細胞をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記メラニン細胞組成物と前記ケラチノサイト細胞とが、前記生体高分子膜中で０．８：２から１：１の比で存在する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記細胞が、前記生体高分子膜上で単層として存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記単層が、サブコンフルエントな単層である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記メラニン細胞が、さらに増殖し得る、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも９０％の前記細胞が、活発に増殖しているメラニン細胞である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記生体高分子膜が、少なくとも５０，０００Ｄａの分子量を有する、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、およびポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ）からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記生体高分子膜が、ポリ乳酸（ＰＬＡ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記メラニン細胞が、結果として生じた組成物が皮膚の色素沈着低下異常に対して治療効果を有するように、十分な量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物を調製するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：
ａ）自己表皮からメラニン細胞を単離する工程；
ｂ）単離されたメラニン細胞を含む細胞懸濁液を調製する工程；
ｃ）該メラニン細胞を増殖させる工程；
ｄ）任意で、該メラニン細胞を凍結保存する工程；
ｅ）任意で、該メラニン細胞を解凍する工程；
ｆ）該メラニン細胞を生体高分子膜に播種する工程；
ｇ）該細胞を生体高分子膜上でサブコンフルエントな単層中で増殖させる工程；および
ｈ）輸送培地を含む輸送装置を用いて、該生体高分子膜を輸送する工程；
を含み、ここで少なくとも７５％の該細胞が、輸送条件下で少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能なままである、プロセス。
【請求項１３】
前記生体高分子膜が、ポリ乳酸（ＰＬＡ）を含み、前記メラニン細胞が、１×１０４から１×１０５細胞／ｃｍ２の細胞密度で、該生体高分子膜に播種される、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
前記輸送装置が、ポリカーボネートを含む、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１５】
前記輸送培地が、二酸化炭素富化培地を含む、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１６】
前記輸送培地が、ＫＳＦＮ培地である、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１７】
皮膚の色素沈着を必要とする個体を治療するための組成物であって、請求項１に記載の組成物を含み、該組成物は、該個体の皮膚における表皮再生の速度を増強する、組成物。
【請求項１８】
前記個体がヒトである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記皮膚の色素沈着を必要とする個体が、白斑に罹患している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
メラニン細胞のサブコンフルエントな単層および生体高分子膜を含む組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、組成物。
【請求項２１】
ケラチノサイトと同時培養されたメラニン細胞のサブコンフルエントな単層および生体高分子膜を含む組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、組成物。
【請求項２２】
前記メラニン細胞が、ケラチノサイトと１：１の比で同時培養される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
（１）未分化細胞を含むケラチノサイト細胞のサブコンフルエントな単層、および（２）生体高分子膜を含む組成物であって、ここで少なくとも７５％の該細胞が、５−３７℃の輸送条件下で、少なくとも７２時間、該組成物中で生存可能である、組成物。
【請求項２４】
被験体における色素脱失を治療するための組成物であって、サブコンフルエントなメラニン細胞の単層を含み、該組成物は生体高分子膜を用いて皮膚に送達されることを特徴とする、組成物。
【請求項２５】
被験体における色素過剰を治療するための組成物であって、サブコンフルエントなメラニン細胞の単層を含み、該組成物は生体高分子膜を用いて皮膚に送達されることを特徴とする、組成物。
【請求項２６】
白斑を治療するためのキットであって、該キットは（１）（ａ）メラニン細胞のサブコンフルエントな単層および（ｂ）生体高分子膜を含む組成物であって、ここで該単層は該生体高分子膜上にある、組成物；ならびに（２）輸送装置を含み、ここで少なくとも７５％の該メラニン細胞が、５−３７℃の輸送条件下で少なくとも７２時間、組成物中で生存可能なままである、キット。
【請求項２７】
前記請求項に記載され、本明細書の実施例および図で実質的に例示し、本明細書において実質的に記載された、自己表皮由来のメラニン細胞および生体高分子膜を含む、皮膚における色素沈着を誘発し得る移植片組成物、その方法およびキット。