【手続補正書】
【提出日】平成23年5月2日(2011.5.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）１８〜２５個のヌクレオチドのヌクレオチド配列からなるガイド鎖核酸分子｛前記ガイド鎖ヌクレオチド配列は、シード領域ヌクレオチド配列及び非シード領域ヌクレオチド配列を含み、前記シード領域は、前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１から１２からなり、前記非シード領域は、前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端からなり、前記ガイド鎖の位置１は前記ガイド鎖の５’末端に相当し、前記シード領域は、天然のマイクロＲＮＡのシード領域配列と同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列をさらに含む｝、及び
（ｉｉ）１８〜２５個のヌクレオチドのヌクレオチド配列からなるパッセンジャー鎖核酸分子｛前記パッセンジャー鎖は、ガイド鎖と基本的に相補的であるヌクレオチド配列を含み、前記パッセンジャー鎖核酸分子は、ガイド鎖のシード領域の正確な逆相補体と比較して、１個のヌクレオチド配列の相違を有し、この１個のヌクレオチドの相違はパッセンジャー鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端内に位置する｝
を含む、単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項２】
ガイド鎖が、
（ａ）配列番号３、配列番号６、配列番号９、及び配列番号３１からなる群から選択されるヌクレオチド配列と配列が同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含むシード領域を含み、
（ｂ）ガイド鎖配列が、ｍｉＲ３４ａ（配列番号１）、ｍｉＲ３４ｂ（配列番号４）、ｍｉＲ３４ｃ（配列番号７）、及びｍｉＲ４４９（配列番号２９）からなる群から選択される、
ことを特徴とする、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項３】
パッセンジャー鎖におけるヌクレオチドの相違がその３’末端の６個のヌクレオチド内に位置する、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項４】
合成２本鎖が、少なくとも１つの３’突出部をさらに含み、前記３’突出部が１〜４個のヌクレオチドを含む、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項５】
２本鎖が、非ヌクレオチド部分をさらに含む、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項６】
ガイド鎖及びパッセンジャー鎖が核酸分解に対して安定化されている、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項７】
下記の少なくとも１つ：
（ａ）ガイド鎖の５’末端及び／又は３’末端において及びパッセンジャー鎖の３’末端において、少なくとも１個の化学修飾されたヌクレオチド又は非ヌクレオチド、又は
（ｂ）パッセンジャー鎖及びガイド鎖の３’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアート、又は
（ｃ）パッセンジャー鎖及びガイド鎖の３’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアート、又は
（ｄ）ガイド鎖及びパッセンジャー鎖の５’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアートを、及びガイド鎖及びパッセンジャー鎖の３’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアート
をさらに含む、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項８】
２’−修飾ヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項９】
２’−修飾ヌクレオチドが、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、及び２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される修飾を含む、請求項８に記載の単離合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物。
【請求項１０】
合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物を形成させるために単離パッセンジャー鎖核酸分子と単離ガイド鎖核酸分子をアニーリングさせることを含む、合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物を作製する方法であって、
（ｉ）単離ガイド鎖核酸分子は、１８〜２５個のヌクレオチドのヌクレオチド配列からなり、前記ガイド鎖ヌクレオチド配列は、シード領域ヌクレオチド配列及び非シード領域ヌクレオチド配列を含み、前記シード領域は、前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１から１２からなり、前記非シード領域は前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端からなり、前記ガイド鎖の位置１は、前記ガイド鎖の５’末端に相当し、前記シード領域は、天然のマイクロＲＮＡのシード領域配列と同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列をさらに含み；並びに
（ｉｉ）単離パッセンジャー鎖核酸分子は、１８〜２５個のヌクレオチドのヌクレオチド配列からなり、前記パッセンジャー鎖は、ガイド鎖と基本的に相補的であるヌクレオチド配列を含み、前記パッセンジャー鎖核酸分子は、ガイド鎖のシード領域の正確な逆相補配列と比較して、１個のヌクレオチド配列の相違を有し、この１個のヌクレオチドの相違は、パッセンジャー鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端内に位置する、
前記方法。
【請求項１１】
ガイド鎖が、
（ａ）配列番号３、配列番号６、配列番号９、及び配列番号３１からなる群から選択されるヌクレオチド配列と配列が同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含むシード領域を含み、
（ｂ）ガイド鎖配列が、ｍｉＲ３４ａ（配列番号１）、ｍｉＲ３４ｂ（配列番号４）、ｍｉＲ３４ｃ（配列番号７）、及びｍｉＲ４４９（配列番号２９）からなる群から選択される、
ことを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
パッセンジャー鎖におけるヌクレオチドの相違が、その３’末端の６個のヌクレオチド内に位置する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
２本鎖が少なくとも１つの３’突出部をさらに含み、前記３’突出部が１〜４個のヌクレオチドを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
１８〜２５個のヌクレオチドのガイド鎖ヌクレオチド配列を含み、前記ガイド鎖ヌクレオチド配列は、シード領域ヌクレオチド配列及び非シード領域ヌクレオチド配列を含み、前記シード領域は基本的に前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１から１２からなり、前記非シード領域は基本的に前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端からなり、前記ガイド鎖の位置１は前記ガイド鎖の５’末端に相当し、前記シード領域は配列番号３、配列番号６、配列番号９及び配列番号３１からなる群から選択されるヌクレオチド配列と配列が同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列をさらに含み；並びに
配列番号１、配列番号２及び配列番号３からなる群から選択されるヌクレオチド配列と比較して、少なくとも１個のヌクレオチド配列の相違を有する、単離核酸分子。
【請求項１５】
細胞株Ａ５４９の第一の試料への単離核酸分子の導入の結果、前記単離核酸分子に曝露されない細胞株Ａ５４９細胞の第二の試料中の少なくとも２つの遺伝子の測定レベルと比較して、前記少なくとも２つの遺伝子の測定レベルが検出可能に低下し、前記少なくとも２つの遺伝子は、配列番号１、配列番号４又は配列番号７を含むｓｉＮＡが前記Ａ５４９細胞に導入される場合にＡ５４９細胞において下方制御される一連の遺伝子から選択される、請求項１４に記載の単離核酸分子。
【請求項１６】
前記２以上の遺伝子が、表５から選択される、請求項１５に記載の単離核酸分子。
【請求項１７】
前記ガイド鎖配列が、ｍｉＲ３４ａ−ｍｍｌ８，１９（配列番号１５）、ｍｉＲ３４ｂ−ｍｍｌ８，１９（配列番号２０）、及びｍｉＲ３４ｃ−ｍｍｌ８，１９（配列番号２５）からなる群から選択される、請求項１４に記載の単離核酸分子。
【請求項１８】
前記ガイド鎖の相補体であるパッセンジャー鎖をさらに含む、請求項１４に記載の単離核酸分子。
【請求項１９】
非ヌクレオチド部分をさらに含む、請求項１４に記載の単離核酸分子。
【請求項２０】
ガイド鎖及びパッセンジャー鎖が核酸分解に対して安定化されている、請求項１８に記載の単離核酸分子。
【請求項２１】
下記の少なくとも１つ：
（ａ）ガイド鎖の５’末端及び／又は３’末端及びパッセンジャー鎖の３’末端において少なくとも１個の化学修飾されたヌクレオチド又は非ヌクレオチド、又は
（ｂ）少なくとも１つの３’−突出部、ここで前記３’−突出部は１〜４個のヌクレオチドを含む、又は
（ｃ）少なくとも１つの２ヌクレオチド３’−突出部、又は
（ｄ）パッセンジャー鎖及びガイド鎖の３’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアート、又は
（ｅ）ガイド鎖及びパッセンジャー鎖の５’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアートを、及び、ガイド鎖及びパッセンジャー鎖の３’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアート
をさらに含む、請求項１８に記載の単離核酸分子。
【請求項２２】
パッセンジャー鎖及びガイド鎖の５’末端の第一のヌクレオチド間結合においてホスホロチオアートをさらに含む、請求項１９に記載の単離核酸分子。
【請求項２３】
２’−修飾ヌクレオチドをさらに含む、請求項１８に記載の単離核酸分子。
【請求項２４】
２’−修飾ヌクレオチドが、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、及び２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される修飾を含む、請求項２３に記載の単離核酸分子。
【請求項２５】
少なくとも１つの合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物及び送達物質を含む組成物であって、
合成２本鎖マイクロＲＮＡ模倣物は、
（ｉ）１８〜２５個のヌクレオチドのヌクレオチド配列からなるガイド鎖核酸分子｛前記ガイド鎖ヌクレオチド配列は、シード領域ヌクレオチド配列及び非シード領域ヌクレオチド配列を含み、前記シード領域は、前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１から１２からなり、前記非シード領域は、前記ガイド鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端からなり、前記ガイド鎖の位置１は前記ガイド鎖の５’末端に相当し、前記シード領域は、天然のマイクロＲＮＡのシード領域と配列が同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列をさらに含む｝、及び
（ｉｉ）１８〜２５個のヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むパッセンジャー鎖核酸分子｛前記パッセンジャー鎖は、ガイド鎖と基本的に相補的であるヌクレオチド配列を含み、前記パッセンジャー鎖核酸分子は、ガイド鎖のシード領域の正確な逆相補体配列と比較して、１個のヌクレオチド配列の相違を有し、１個のヌクレオチドの相違は、前記パッセンジャー鎖のヌクレオチド位置１３から３’末端内に位置する｝
を含む、組成物。
【請求項２６】
ガイド鎖が、
（ａ）配列番号３、配列番号６、配列番号９及び配列番号３１からなる群から選択されるヌクレオチド配列と配列が同一である少なくとも６個のヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を含むシード領域を含み、
（ｂ）ガイド鎖配列が、ｍｉＲ３４ａ（配列番号１）、ｍｉＲ３４ｂ（配列番号４）、ｍｉＲ３４ｃ（配列番号７）及びｍｉＲ４４９（配列番号２９）からなる群から選択される、
ことを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
パッセンジャー鎖におけるヌクレオチドの相違が、その３’末端の６個のヌクレオチド内に位置する、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
送達物質が脂質ナノ粒子を含む、請求項２５に記載の組成物。