【手続補正書】
【提出日】平成22年9月6日(2010.9.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、図面および特許請求の範囲から明らかである。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングまたはトランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナリングを阻害する化合物を同定する方法であって、この方法は、非ヒト胚と候補化合物とを接触させる工程およびこの胚の表現型を観察する工程を包含し、ここで：
未処理のコントロールと比較した場合のこの胚の背側化の検出が、ＢＭＰシグナリングを阻害する化合物の同定を示し；そして
未処理のコントロールと比較した場合のこの胚の腹側化の検出が、ＢＭＰシグナリングを増強または開始する化合物の同定を示し；そして
未処理のコントロールと比較した場合の単眼症または頭のサイズの減少の検出が、ＴＧＦ−βシグナリングを阻害する化合物の同定を示す；
方法。
（項目２）
上記非ヒト胚は、ゼブラフィッシュ胚、アフリカツメガエル胚、メダカ胚、およびキイロショウジョウバエ胚からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングまたはトランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナリングをモジュレートする化合物を同定する方法であって、この方法は、
細胞と候補化合物とを接触させる工程；
メタノール処理によってこの細胞の原形質膜および核膜を透過性にし、そしてこの細胞中のタンパク質を沈殿させる工程；
グルタルアルデヒドによって沈殿したタンパク質を架橋する工程；
二官能性アミンによってこの細胞由来のこのグルタルアルデヒドをクエンチする工程；ならびに
未処理の細胞と比較した場合の化合物処理した細胞におけるＳＭＡＤ２またはＳＭＡＤ１／５／８のリン酸化に対するこの候補化合物の効果を決定する工程であって、ＳＭＡＤ１／５／８の増大したリン酸化の検出が、ＢＭＰシグナリングを活性化する化合物の同定を示し、ＳＭＡＤ１／５／８の減少したリン酸化の検出が、ＢＭＰシグナリングを阻害する化合物の同定を示し、ＳＭＡＤ２の増大したリン酸化の検出が、ＴＧＦ−βシグナリングを活性化する化合物の同定を示し、そしてＳＭＡＤ２の減少したリン酸化の検出が、ＴＧＦ−βシグナリングを阻害する化合物の同定を示す、工程；
を包含する、方法。
（項目４）
上記メタノールは、氷冷であり、そして上記メタノール処理は、１０分間〜１５分間にわたって行われる、項目３に記載の方法。
（項目５）
グルタルアルデヒド溶液は、０．２５％〜２％のグルタルアルデヒドの濃度を含み、そしてグルタルアルデヒド処理は、１０分間〜１５分間にわたって行われる、項目３に記載の方法。
（項目６）
上記二官能性アミンは、２５〜２００ｍＭの濃度および８〜１０のｐＨにおいて使用されるリジン、エチレンジアミン、およびフェニレンジアミンからなる群より選択される、項目３に記載の方法。
（項目７）
ＳＭＡＤ１／５／８またはＳＭＡＤ２のリン酸化の検出は、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）の使用によって行われる、項目３に記載の方法。
（項目８）
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングの阻害によって利益を得る被験体における疾患または状態を処置または予防する方法であって、この方法は、トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナリングと比較してＢＭＰシグナリングを選択的に阻害する化合物をこの被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目９）
上記化合物は、６−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）］−３−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［１，５−ａ］−ピリミジン（化合物Ｃ／ドルソモルフィン）である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
上記化合物は、図１７に示される化合物から選択される、項目８に記載の方法。
（項目１１）
上記疾患または状態は、家族性または散発性の原発性肺高血圧症、遺伝性出血性毛細管拡張症候群、心臓弁奇形、癌（一次治療として原発性腫瘍の増殖または転移をモジュレートすること、あるいは伝統的な癌治療に補助療法を提供することにおけるもの））、貧血、血管の石灰化、アテローム性動脈硬化症、弁の石灰化、腎性骨形成異常症、炎症性障害、ウイルスによる感染、細菌による感染、真菌による感染、結核菌による感染、寄生生物による感染、および進行性骨化性線維形成異常症からなる群より選択される、項目８に記載の方法。
（項目１２）
上記癌は、乳癌、前立腺癌、腎細胞癌、骨転移、骨肉腫、および多発性骨髄腫からなる群より選択される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
上記炎症性障害は、強直性脊椎炎である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナリングの阻害によって利益を得る被験体における疾患または状態を処置または予防する方法であって、この方法は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングと比較してＴＧＦ−βシグナリングを選択的に阻害する化合物をこの被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目１５）
上記疾患または状態は、線維性疾患あるいはマルファン症候群の弁または大動脈の異常である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
上記線維性疾患は、肝臓、腎臓、または肺の線維性疾患である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）インヒビターを含む薬学的組成物。
（項目１８）
上記骨形成タンパク質（ＢＭＰ）インヒビターは、６−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）］−３−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［１，５−ａ］−ピリミジン（化合物Ｃ／ドルソモルフィン）である、項目１７に記載の薬学的組成物。
（項目１９）
細胞の表現型を改変する方法であって、この方法は、この細胞と骨形成タンパク質（ＢＭＰ）インヒビターとを接触させる工程を包含する、方法。
（項目２０）
上記細胞は、胚性幹細胞または成体幹細胞である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
上記骨形成タンパク質（ＢＭＰ）インヒビターは、治療目的または診断目的のためにエキソビボまたはインビボで上記幹細胞の増殖または分化を可能にする、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
上記ＢＭＰインヒビターは、６−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）］−３−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［１，５−ａ］−ピリミジン（化合物Ｃ／ドルソモルフィン）である、項目１９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングの阻害によって利益を得る被験体における疾患または状態を処置または予防するのに使用するための、トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナリングと比較してＢＭＰシグナリングを選択的に阻害する低分子を含む組成物。
【請求項２】
前記疾患または状態は、家族性または散発性の原発性肺高血圧症、遺伝性出血性毛細管拡張症候群、心臓弁奇形、癌（一次治療として原発性腫瘍の増殖または転移をモジュレートすること、あるいは伝統的な癌治療に補助療法を提供することにおけるもの））、貧血、血管の石灰化、アテローム性動脈硬化症、弁の石灰化、腎性骨形成異常症、炎症性障害、ウイルスによる感染、細菌による感染、真菌による感染、結核菌による感染、寄生生物による感染、および進行性骨化性線維形成異常症からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記癌は、乳癌、前立腺癌、腎細胞癌、骨転移、骨肉腫、および多発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記炎症性障害は、強直性脊椎炎である、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記低分子は、６−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）］−３−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［１，５−ａ］−ピリミジン（化合物Ｃ／ドルソモルフィン）である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記低分子は、図１７に示されるものから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
低分子である骨形成タンパク質（ＢＭＰ）インヒビターを含む薬学的組成物。
【請求項８】
前記低分子は、６−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）］−３−ピリジン−４−イル−ピラゾロ［１，５−ａ］−ピリミジン（化合物Ｃ／ドルソモルフィン）である、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記低分子は、図１７に示されるものから選択される、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
経口投与のためのものである、請求項７〜９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。