【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年2月24日(2011.2.24)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内に運搬しようとする目的ヌクレオチド配列及びリラクシン(relaxin)−エンコーディングヌクレオチド配列を含むウイルスベクターを有効成分として含む、前記目的ヌクレオチド配列の細胞内運搬効率を増加させる用途の組成物。
【請求項２】
前記細胞は、細胞外基質により連結された細胞からなる組織内の細胞であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組織は、腫瘍組織であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ウイルスベクターは、組み換えアデノウイルス、アデノ−関連ウイルス(Adeno-associated viruses: AAV)、レトロウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、またはワクシニアウイルスであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ウイルスベクターは、組み換えアデノウイルスであることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記組み換えアデノウイルスは、Ｅ３領域が欠失されたものであって、前記リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、Ｅ３領域の位置に挿入されたことを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
アデノウイルスのＩＴＲ(inverted terminal repeat)ヌクレオチド配列及びリラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列を含み、前記リラクシンは、アデノウイルスの腫瘍組織浸透能及び腫瘍細胞アポトーシスを誘導させるための組み換えアデノウイルス。
【請求項８】
前記組み換えアデノウイルスは、Ｅ３遺伝子領域が欠失されたものであって、前記リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、前記Ｅ３遺伝子領域の位置に挿入されたことを特徴とする請求項７に記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項９】
前記組み換えアデノウイルスは、非活性化されたＥ１Ｂ １９遺伝子、Ｅ１Ｂ  ５５遺伝子、またはＥ１Ｂ １９/Ｅ１Ｂ ５５遺伝子を有することを特徴とする請求項７に記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１０】
前記組み換えアデノウイルスは、活性のＥ１Ａ遺伝子を含むことを特徴とする請求項７に記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１１】
(a)組み換えアデノウイルスの治療学的有効量、及び(b)薬剤学的に許容される担体を含む薬剤学的抗腫瘍組成物であって、
前記組み換えアデノウイルスは、アデノウイルスのＩＴＲ(inverted terminal repeat)ヌクレオチド配列及びリラクシン(relaxin)−エンコーディングヌクレオチド配列を含み、前記リラクシンは、アデノウイルスの腫瘍組織浸透能及び腫瘍細胞アポトーシスを誘導させるための抗腫瘍組成物。
【請求項１２】
前記組み換えアデノウイルスは、Ｅ３遺伝子領域が欠失されたものであって、前記リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、前記Ｅ３遺伝子領域の位置に挿入されたことを特徴とする請求項１１に記載の抗腫瘍組成物。
【請求項１３】
前記組み換えアデノウイルスは、非活性化されたＥ１Ｂ １９遺伝子、Ｅ１Ｂ  ５５遺伝子、またはＥ１Ｂ １９/Ｅ１Ｂ ５５遺伝子を有することを特徴とする請求項１１に記載の抗腫瘍組成物。
【請求項１４】
前記組み換えアデノウイルスは、活性のＥ１Ａ遺伝子を含むことを特徴とする請求項１１に記載の抗腫瘍組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
したがって、本発明の目的は、リラクシン(relaxin)−エンコーディングヌクレオチド配列を含む新規遺伝子伝達システムを提供することにある。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
本発明の一様態によると、本発明は、細胞内に運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を含む遺伝子伝達システムにおいて、前記遺伝子伝達システムは、リラクシン(relaxin)−エンコーディングヌクレオチド配列を追加的に含み、前記リラクシンは、前記目的ヌクレオチド配列の細胞内運搬効率を増加させる作用をすることを特徴とする遺伝子伝達システムを提供する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
本発明の遺伝子伝達システムを製造するために、リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、適合した発現コンストラクト(Expression construct)内に存在することが好ましい。前記発現コンストラクトにおいて、リラクシン遺伝子は、プロモーターに作動的に連結されることが好ましい。本明細書において、用語“作動的に結合された”は、核酸発現調節配列(例えば、プロモーター、シグナル配列、または転写調節因子結合位置のアレイ)と他の核酸配列との間の機能的な結合を意味し、これにより、前記調節配列は、前記他の核酸配列の転写及び/または解読を調節するようになる。本発明において、リラクシン遺伝子に結合されたプロモーターは、好ましくは、動物細胞、より好ましくは、哺乳動物細胞で作動し、リラクシン遺伝子の転写を調節することができるものであって、哺乳動物ウイルス由来のプロモーター及び哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーターを含み、例えば、ＣＭＶ(Cytomegalo virus)プロモーター、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Kプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＨＳＶのｔｋプロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＥＦ１アルファプロモーター、メタロチオネインプロモーター、ベータ−アクチンプロモーター、ヒトＩＬ−２遺伝子のプロモーター、ヒトＩＦＮ遺伝子のプロモーター、ヒトＩＬ−４遺伝子のプロモーター、ヒトリンホトキシン遺伝子のプロモーター、及びヒトＧＭ−ＣＳＦ遺伝子のプロモーターを含むが、これに限定されるものではない。最も好ましくは、ＣＭＶプロモーターである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
好ましくは、本発明に利用される発現コンストラクトは、ポリアデニル化配列を含む(例えば、牛成長ホルモンターミネーター及びＳＶ４０由来ポリアデニル化配列)。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明の好ましい具現例によると、本発明に利用されるリラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、“プロモーター−リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列−ポリアデニル化配列”の構造を有する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
本発明の遺伝子伝達システムにおいて、細胞内に運搬しようとする目的のヌクレオチド配列も、上述のリラクシン遺伝子の発現コンストラクトと同一な方法により発現コンストラクトに構築することができる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
本発明で細胞内に運搬しようとする目的ヌクレオチド配列は、いかなるヌクレオチド配列でも可能であって、例えば、癌細胞の死滅を誘導して、究極的に腫瘍を退化させる癌治療遺伝子として、腫瘍抑制遺伝子、免疫調節遺伝子[例えば、サイトカイン遺伝子、ケモカイン遺伝子、及び共刺激因子(Costimulatory factor:B7.1とB7.2のようなT細胞活性に必要な補助分子)]、抗原性遺伝子、自殺遺伝子、細胞毒性遺伝子、細胞増殖抑制遺伝子、親−細胞死滅遺伝子、及び抗−新生血管生成遺伝子が含まれるが、これに限定されるものではない。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
自殺遺伝子は、細胞が外部因子により殺傷され易くなるように誘導する物質を発現するか、細胞に毒性条件を誘発する核酸配列である。このような自殺遺伝子としてよく知られているものは、チミジンキナーゼ(TK)遺伝子である(米国特許第5,631,236号及び第5,601,818号)。ＴＫ遺伝子産物を発現する細胞は、ガンシクロビル(gancyclovir)の投与により選択的な死滅に敏感である。腫瘍抑制遺伝子は、腫瘍の形成を抑制するポリペプチドを暗号化する遺伝子を意味する。腫瘍抑制遺伝子は、哺乳動物において自然発生遺伝子であり、この遺伝子の欠失または不活性化は、腫瘍発生に必須前提とされている。腫瘍抑制遺伝子の例としては、ＡＰＣ、ＤＰＣ４、ＮＦ−１、ＮＦ−２、ＭＴＳ１、ＷＴ１、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＶＨＬ、ｐ５３、Ｒｂ、ＭＭＡＣ−１、ＭＭＳＣ−２、網膜芽細胞腫遺伝子(Lee et al. Nature, 329:642(1987))、大腸腺腫症遺伝子蛋白質(adenomatous polyposis coli protein;米国特許第5,783,666号)、染色体３ｐ２１．３に位置した鼻咽喉腫瘍抑制因子遺伝子(Cheng et al. Proc. Nat .Acad. Sci., 95:3042-3047(1998))、欠損された血漿腫瘍(DCC)遺伝子、ＭＴＳ１、ＣＤＫ４、ＶＨＬ、ｐ１１０Ｒｂ、ｐ１６、及びｐ２１を含む腫瘍抑制遺伝子のＩＮＫ４系列の一員及びこれの治療学的に有効な断片(例えば、p56Rb、p94Rbなど)が含まれる。当業者なら、前記例示した遺伝子に限定されず、その他に知られたあらゆる抗腫瘍遺伝子が本発明に使用できるということが分かるだろう。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本明細書において、用語“抗原性遺伝子(antigenic gene)”は、ターゲット細胞内で発現されて、免疫システムで認識できる細胞表面抗原性蛋白質を生産するヌクレオチド配列を意味する。このような抗原性遺伝子の例には、癌胎児性抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)及びＰＳＡ(prostate specific antigen)、ＡＦＰ(α-feto protein)、ｐ５３(WO 94/02167)が含まれる。免疫システムが容易に認識するようにするために、前記抗原性遺伝子をＭＨＣ第Ｉ型抗原に結合させることができる。  
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
本明細書において、用語“細胞毒性遺伝子(Cytotoxic gene)”は、細胞内で発現されて毒性効果を示すヌクレオチド配列を意味する。このような細胞毒性遺伝子の例には、シュードモナス外毒素(exotoxin)、リシン毒素、ジフテリア毒素などをコーディングするヌクレオチド配列が含まれる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
本明細書において、用語“細胞増殖抑制遺伝子(cytostatic gene)”は、細胞内で発現されて、細胞周期途中に細胞周期を停止させるヌクレオチド配列を意味する。このような細胞増殖抑制遺伝子の例には、ｐ２１、網膜芽細胞腫遺伝子、Ｅ２Ｆ−Ｒｂ融合蛋白質遺伝子、シクリン−従属性キナーゼ抑制因子をコーディングする遺伝子(例えば、p16、p15、p18及びp19)、成長中止特異性ホメオボックス(growth arrest specific homeobox, GAX)遺伝子(WO 97/16459及びWO 96/30385)などがあるが、これに限定されるものではない。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
本明細書において、用語“親−細胞死滅遺伝子(Pro-apoptotic gene)”は、発現されて、プログラムされた細胞消滅を誘導するヌクレオチド配列を意味する。このような親−細胞死滅遺伝子の例には、ｐ５３、アデノウイルスＥ３−１１．６Ｋ(Ａｄ２及びＡｄ５由来)またはアデノウイルスＥ３−１０．５Ｋ(Ａｄ由来)、アデノウイルスＥ４遺伝子、Ｆａｓリガンド、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＩＬ、ｐ５３経路遺伝子及びカスパーゼをコーディングする遺伝子が含まれる。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
本発明の明細書において、用語“抗−新生血管生成遺伝子(anti-angiogenic gene)”は、発現されて、抗−新生血管生成因子を細胞外に放出するヌクレオチド配列を意味する。抗−新生血管生成因子には、アンジオスタチン、Ｔｉｅ ２(PNAS, 1998, 95,8795-800)のような血管内皮成長因子(VEGF)の抑制因子、エンドスタチンなどが含まれる。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
上述の目的のヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋまたはＥＭＢＬのようなＤＮＡ配列データバンクから入手できる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、通常的な遺伝子治療に利用される全ての遺伝子伝達システムに適用できて、好ましくは、プラスミド、アデノウイルス(Lockett LJ, et al., Clin. Cancer Res. 3:2075-2080(1997))、アデノ−関連ウイルス(Adeno-associated viruses: AAV, Lashford LS., et al., Gene Therapy Technologies, Applications and Regulations Ed. A. Meager, 1999)、レトロウイルス(Gunzburg WH, et al., Retroviral vectors. Gene Therapy Technologies, Applications and Regulations Ed. A. Meager, 1999)、レンチウイルス(Wang G. et al., J. Clin. Invest. 104(11):R55-62(1999))、単純ヘルペスウイルス(Chamber R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 92:1411-1415(1995))、ワクシニアウイルス(Puhlmann M. et al., Human Gene Therapy 10:649-657(1999))、リポソーム(Methods in Molecular Biology, Vol 199, S.C. Basu and M. Basu (Eds.), Human Press 2002)、またはネオソームに適用できる。最も好ましくは、本発明の遺伝子伝達システムは、リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列をアデノウイルスに適用して製造される。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
現在開発されたアデノウイルスベクターの中で、Ｅ１領域の欠如された複製不能アデノウイルスがよく利用されている。一方、Ｅ３領域は、通常的なアデノウイルスベクターから除去され、外来遺伝子が挿入される座を提供する(Thimmappaya, B. et al., Cell, 31:543-551(1982); Riordan, J. R. et al., Science, 245:1066-1073(1989))。したがって、本発明のリラクシン遺伝子は、欠失されたＥ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)、またはＥ３領域に挿入されることが好ましく、より好ましくは、欠失されたＥ３領域に挿入される。一方、細胞内に運搬しようとする目的ヌクレオチド配列は、欠失されたＥ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)、またはＥ３領域に挿入されることが好ましく、より好ましくは、欠失されたＥ１領域に挿入される。また、前記挿入配列は、欠失されたＥ４領域にも挿入できる。本明細書において、ウイルスゲノム配列と関連して使用される用語、“欠失”は、該当配列が完全に欠失されたものだけではなく、部分的に欠失されたものも含む意味を有する。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
本発明の最も好ましい具現例によると、本発明のアデノウイルス遺伝子伝達システムは、“プロモーター−目的ヌクレオチド配列−ポリＡ配列”と“プロモーター−リラクシン遺伝子−ポリＡ配列”とが連結された構造を有して、前記“プロモーター−目的ヌクレオチド配列−ポリＡ配列”は、欠失されたＥ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)、またはＥ３領域、好ましくは、欠失されたＥ１領域に挿入されたものであり、前記“プロモーター−リラクシン遺伝子−ポリＡ配列”は、欠失されたＥ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)、またはＥ３領域、好ましくは、欠失されたＥ３領域に挿入されたものである。また、“プロモーター−目的ヌクレオチド配列−ポリＡ配列−ＩＲＥＳ−リラクシン遺伝子−ポリＡ配列”のように、目的ヌクレオチドとリラクシン遺伝子がＩＲＥＳ(internal ribosome entry site)により連結されたバイシストロン(bicistronic)発現システムによっても発現可能である。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
また、アデノウイルスは、野生型ゲノムの約１０５％までパッケージングすることができるため、約２ｋｂを追加的にパッケージングすることができる(Ghosh-Choudhury et al., EMBO J., 6:1733-1739(1987))。したがって、アデノウイルスに挿入される上述の外来配列は、アデノウイルスのゲノムに追加的に結合させることもできる。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
レトロウイルスベクターを構築するために、リラクシン遺伝子及び運搬しようする目的ヌクレオチド配列は、レトロウイルスの配列の代わりにレトロウイルスゲノムに挿入されて、複製不能のウイルスを生産する。ビリオンを生産するために、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子を含むが、ＬＴＲ(long terminal repeat)とЖ配列は含まないパッケージング細胞株を構築する(Mann et al., Cell, 33:153-159(1983))。リラクシン遺伝子、運搬しようとする目的ヌクレオチド配列、ＬＴＲ及びЖ配列を含む組み換えプラスミドを前記細胞株に移入すると、Ж配列は、組み換えプラスミドのＲＮＡ転写体の生産を可能にして、この転写体は、ウイルスにパッケージングされて、ウイルスは、培地に排出される(Nicolas and Rubinstein "Retroviral vectors," In: Vectors: A survey of molecular cloning vectors and their uses, Rodriguez and Denhardt (eds.), Stoneham: Butterworth, 494-513(1988))。組み換えレトロウイルスを含有する培地を収集して濃縮し、遺伝子伝達システムに利用する。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
２世帯レトロウイルスベクターを利用した遺伝子伝達が発表された。Kasaharaら(Science, 266:1373-1376(1994))は、モロニーマウス白血病ウイルス(moloney-murine leukemia virus)の変異体を製造して、ここで、ＥＰＯ(erythropoietin)配列をエンベロープ部位に挿入して、新しい結合特性を有するキメリック蛋白質(Chimeric proteins)を生産した。本発明の遺伝子伝達システムも、このような２世帯レトロウイルスベクターの構築戦略により製造することができる。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
典型的に、ＡＡＶウイルスは、二つのＡＡＶ末端リピートが両側に位置されている目的の遺伝子配列(リラクシン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列)を含むプラスミド(McLaughlin et al., J. Virol., 62:1963-1973(1988);及びSamulski et al., J. Virol., 63:3822-3828(1989))及び末端リピートのない野生型ＡＡＶコーディング配列を含む発現プラスミド(McCarty et al., J. Virol., 65:2936-2945( 1991))を同時形質転換させて製造される。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
iv．他のウイルスベクター
他のウイルスベクターも、本発明の遺伝子伝達システムとして利用することができる。ワクシニアウイルス(Puhlmann M. et al., Human Gene Therapy 10:649-657(1999); Ridgeway, "Mammalian expression vectors," In: Vectors: A survey of molecular cloning vectors and their uses. Rodriguez and Denhardt, eds. Stoneham: Butterworth, 467-492(1988); Baichwal and Sugden, "Vectors for gene transfer derived from animal DNA viruses: Transient and stable expression of transferred genes," In: Kucherlapati R, ed. Gene transfer. New York: Plenum Press, 117-148( 1986)及びCoupar et al., Gene, 68:1-10(1988))、レンチウイルス(Wang G. et al., J. Clin. Invest. 104(11):R55-62(1999))、または単純ヘルペスウイルス(Chamber R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 92:1411-1415(1995))由来のベクターも、リラクシン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を細胞内に運搬することができる運搬システムとして利用することができる。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
v．リポソーム
リポソームは、水上に分散された燐脂質により自然に形成される。外来ＤＮＡ分子をリポソームにより成功的に細胞内に運搬した例は、Nicolau及びSene, Biochim. Biophys. Acta, 721:185-190(1982)、及びNicolau et al., Methods Enzymol., 149:157-176(1987)に開示されている。一方、リポソームを利用した動物細胞の形質転換に最もよく利用される試薬としては、Lipofectamine(Gibco BRL)がある。リラクシン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を内包したリポソームは、エンドサイトーシス、細胞表面への吸着またはプラズマ細胞膜との融合などのメカニズムを通じて細胞と相互作用し、細胞内にリラクシン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を運搬する。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
本発明のまた他の様態によると、本発明は、アデノウイルスのＩＴＲ(inverted terminal repeat)ヌクレオチド配列及びリラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列を含み、前記リラクシンは、アデノウイルスの腫瘍組織浸透能及び腫瘍細胞アポトーシス能を増大させる作用をすることを特徴とする組み換えアデノウイルスを提供する。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
本発明の組み換えアデノウイルスは、従来の組み換えアデノウイルスにリラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列を追加的に結合させ、アデノウイルスの腫瘍組織浸透能及び腫瘍細胞アポトーシス能を増大させて、アデノウイルスによる癌治療効能を大きく増加させる。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
アデノウイルスゲノムの小さい部分だけがｃｉｓで必要であると知られているため(Tooza, J. Molecular biology of DNA Tumor viruses, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.(1981))、アデノウイルスは、大量の外来ＤＮＡ分子を運搬できる能力があり、これは特に、２９３のような特定細胞株を利用する場合にそうである。このような側面で、本発明の組み換えアデノウイルスにおいて、リラクシン遺伝子以外の他のアデノウイルスの配列は、少なくともＩＴＲ配列を含む。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
リラクシン遺伝子は、Ｅ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)、またはＥ３領域に挿入されることが好ましく、より好ましくは、Ｅ３領域に挿入される。一方、他の外来ヌクレオチド配列(例えば、サイトカイン、免疫−共刺激因子、自殺遺伝子、及び腫瘍抑制遺伝子)も追加的にアデノウイルスに含めることができて、これは、Ｅ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)またはＥ３領域に挿入されることが好ましく、より好ましくは、Ｅ１領域(E1A領域及び/またはE1B領域、好ましくは、E1B領域)に挿入される。また、前記挿入配列は、Ｅ４領域にも挿入できる。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
また、アデノウイルスは、野生型ゲノムの約１０５％までパッケージングすることができるため、約２ｋｂを追加的にパッケージングすることができる。したがって、アデノウイルスに挿入される上述の外来配列は、アデノウイルスのゲノムに追加的に結合させることもできる。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
本発明の好ましい具現例によると、本発明の組み換えアデノウイルスは、活性のＥ１Ａ遺伝子を含む。Ｅ１Ａ遺伝子を含む組み換えアデノウイルスは、複製可能な特性を有するようになる。本発明のより好ましい具現例によると、本発明の組み換えアデノウイルスは、非活性化されたＥ１Ｂ １９/Ｅ１Ｂ ５５遺伝子及び活性のＥ１Ａ遺伝子を含む。本発明の最も好ましい具現例によると、本発明の組み換えアデノウイルスは、非活性化されたＥ１Ｂ １９/Ｅ１Ｂ ５５遺伝子及び活性のＥ１Ａ遺伝子を含み、リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列は、欠失されたＥ３領域に挿入される。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
本発明の最も好ましい具現例によると、本発明の組み換えアデノウイルスは、“ＩＴＲ−Ｅ１Ａ−ΔＥ１Ｂ−プロモーター−リラクシン遺伝子−ポリＡ配列”構造を有して、前記“プロモーター−リラクシン遺伝子−ポリＡ配列”は、欠失されたＥ３領域に挿入される。本発明の組み換えアデノウイルスの好ましい一実施例は、図１において、Ａｄ−ΔＥ１Ｂ−ＲＬＸで表された遺伝子地図を有する。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
本発明の他の様態によると、本発明は、(a)リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列を含む遺伝子伝達システムまたはリラクシンタンパク質の治療学的有効量；及び(b)薬剤学的に許容される担体を含む細胞外基質の過度なる蓄積(accumulation)に係る疾患または状態の治療用薬剤学的組成物を提供する。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９１】
本発明の薬剤学的組成物において、リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列を含む遺伝子伝達システムは、上述した本発明の遺伝子伝達システムにより説明される。一方、本発明の薬剤学的組成物で利用されるリラクシンタンパク質は、天然ソース(natural source)から分離されたリラクシンタンパク質及び組み替え技術により得られたリラクシンタンパク質を含み、細胞外基質分解活性を有する範囲内で、前記タンパク質の断片も含まれる。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
本発明は、リラクシン−エンコーディングヌクレオチド配列を含む新規な遺伝子伝達システム、組み替えアデノウイルス、前記遺伝子伝達システムを利用した遺伝子伝達方法、前記組み換えアデノウイルスを含む薬剤学的抗腫瘍組成物、改善された組織浸透性を有する薬剤学的組成物、及び細胞外基質の過度なる蓄積に係る疾病または疾患の治療用薬剤学的組成物を提供する。本発明によると、リラクシンが遺伝子伝達効率を改善させるだけではなく、腫瘍細胞で細胞アポトーシスを増加させて、優れた腫瘍細胞殺傷能を奏する。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９７】
リラクシン遺伝子を発現するアデノウイルスを製作するために、ｐＤＮＲ−ＬＩＢ−ＲＬＸ(ATCC, # MGC-14599)をＳａｌＩとＨｉｎｄIII制限酵素で処理して得られた１ｋｂ ＤＮＡ切片を、ｐＣＡ１４ベクター(Microbix, Ontario, Canada)に挿入させて、ｐＣＡ１４−ＲＬＸベクターを製作した。本実験で利用されるリラクシン遺伝子の配列は、 Genbank accession No. BC005956に開示されている。製作されたｐＣＡ１４−ＲＬＸをＢｇｌII制限酵素で処理しＣＭＶ−ＲＬＸ−ｐｏｌ Ａ発現カセットを切り出して、これをアデノウイルスＥ３シャトルベクターであるｐＳＰ７２ΔＥ３(Promega, Madison, WI, USA)に挿入して、ｐＳＰ７２ΔＥ３−ｃＲＬＸ Ｅ３シャトルベクターを製作した。製作されたｐＳＰ７２ΔＥ３−ｃＲＬＸ Ｅ３シャトルベクターをＸｍｎＩ制限酵素で処理して単一筋とした後、トータルベクターである前記ｐｄｌ−ＬａｃＺと共に大腸菌ＢＪ５１８３(Dr. Verca, University of Fribourg,スイス)で 同時形質転換させて、遺伝子相同組み換え(homologous recombination)を誘導し、ｄｌ−ＬａｃＺ−ＲＬＸ(またはｄｌ−Ｚ−ＲＬＸ)アデノウイルスベクターを製作した(図１)。前記ｄｌ−Ｚ−ＲＬＸアデノウイルスは、寄託機関韓国微生物保存センターに２００４年３月１９日付にて寄託して、寄託番号ＫＣＣＭ−１０５６７を付与された。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９９】
図１において、Ψは、ＩＴＲ(inverted terminal repeat)及びパッケージシグナルを含む配列を示し、記号Ａｄは、アデノウイルスを示して、ＣＭＶは、ＣＭＶプロモーターを示し、Ｐｏｌ Ａは、ポリＡ配列であり、ＩＸは、タンパク質ＩＸ遺伝子を示す。