【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年9月22日(2011.9.22)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１０８】
2008501029.tif 000001
を有する抗体−薬物結合体化合物の混合物を含む、組成物であって、ここで、
Ａｂはトラスツズマブであり；
ｐは、１〜８から選択される整数であり；
平均薬物負荷は、２〜５である、
組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物、または薬学的に受容可能なその塩と
薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤と
を含む、薬学的組成物。
【請求項３】
エルロチニブ、ボルテゾミブ、フルベストラント、スーテント、レトロゾール、メシル酸イマチニブ、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４、オキサリプラチン、５−ＦＵ、ロイコボリン、ラパマイシン、ラパチニブ、ロナファーニブ、ソラフェニブおよびゲフィチニブから選択される化学療法剤の治療上有効な量をさらに含む、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
乳癌を処置する方法で使用するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
治療上有効な量のベバシツマブ、モノクローナル抗体２Ｃ４またはヒト化２Ｃ４と併用して投与されることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
（ａ）Ａｂと７．５〜１０モル当量のリンカー試薬であるスクシンイミジル  ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）とを反応させて、抗体−リンカー中間体Ａｂ−Ｌを形成し、次に、Ａｂ−Ｌと薬物部分ＤＭ１とを反応させて、抗体−薬物結合体化合物の混合物を形成する工程；および
（ｂ）吸光度または質量分析法によって、平均薬物負荷を測定する工程
を含むプロセスによって生成される、請求項１に記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】抗体−薬物結合体および方法
【技術分野】
【０００１】
米国特許法施行規則§１．５３（ｂ）に基づいて出願されたこの非仮特許出願は、米国仮特許出願番号第６０／５７６，５１７号（２００４年６月１日出願）および米国仮特許出願番号第６０／６１６，０９８号（２００４年１０月５日出願）（これらの各々は、その全体が参考として援用される）の米国特許法§１１９（ｅ）に基づく利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、概して、抗癌活性を有する化合物に関し、より詳細には、化学療法的メイタンシノイド薬物または毒素に結合される抗体に関する。本発明はまた、哺乳類細胞または関連する病的状態のインビトロ、インサイチュ、およびインビボ診断または処置のために抗体−薬物結合体化合物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
抗体治療は、癌、免疫学的障害および脈管形成障害を有する患者を標的とした処置に対して確立されている。細胞毒性因子または細胞増殖抑制性因子（すなわち、癌の処置において腫瘍細胞を死滅させるかまたは阻害するための薬物）の局所送達のための、抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）（すなわち、免疫結合体）の使用（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；特許文献１）は、理論的には、腫瘍に対する薬物部分の標的送達およびその中での細胞内蓄積を可能にする。ここで、これらの非結合型薬物因子の全身投与は、正常な細胞ならびに除去すべきとされる腫瘍細胞に対する許容し得ないレベルの毒性を生じ得る（非特許文献５；非特許文献６）。したがって、最小の毒性での最大効能が求められる。ＡＤＣを設計し、洗練するための努力は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の選択性ならびに薬物結合特性および薬物放出特性に集中しているポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方が、これらのストラテジーにおいて有用であると報告されている（非特許文献７）。これらの方法で使用される薬物としては、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトロレキサート、マイトマイシン、ネオカルチノスタチン（非特許文献８）およびビンデシン（非特許文献７）が挙げられる。抗体−毒素結合体で使用される毒素としては、細菌毒素（例えば、ジフテリア毒素）、植物毒素（例えば、リシン（特許文献２；特許文献３；特許文献４；特許文献５））、低分子毒素（例えば、ゲルダナマイシン（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１）、メイタンシノイド（特許文献６；非特許文献１２）、およびカリケアマイシン（非特許文献１３；非特許文献１４））が挙げられる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはトポイソメラーゼ阻害を含む機構によってその細胞毒性効果および細胞増殖抑制効果に影響を及ぼし得る。いくつかの細胞毒性薬物は、大きな抗体またはタンパク質結合リガンドに結合された場合に不活性であるかまたは活性が低い傾向がある。
【０００４】
抗体−放射性核種結合体が認可されており、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン、Ｂｉｏｇｅｎ／Ｉｄｅｃ）は、ＣＤ２０抗原に対して向けられるマウスＩｇＧ１κモノクローナル抗体と、チオウレアリンカー−キレーターによって連結される１１１Ｉｎまたは９０Ｙ放射性核種からなる（非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８）。カリケアマイシンに結合されたｈｕ  ＣＤ３３抗体からなるＭＹＬＯＴＡＲＧＴＭ（ゲムツズマブオゾガマイシン、Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、注射による急性骨髄性白血病の処置のために、２０００年に認可された（非特許文献１９；特許文献７；特許文献８；特許文献９；特許文献１０；特許文献１１；特許文献１２；特許文献１３；特許文献１４）。ジスルフィドリンカーＳＰＰを介してメイタンシノイド薬物部分（ＤＭ１）に連結されたｈｕＣ２４２抗体からなる抗体−薬物結合体であるカンツズマブメルタンシン（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．）（非特許文献２０；非特許文献２１；特許文献１５）は、ＣａｎＡｇを発現する癌（例えば、結腸癌、膵臓癌、胃癌および他の癌）の処置のために、フェーズＩ試験が行われた。ＭＬＮ−２７０４（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．，ＢＺＬ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．）は、前立腺腫瘍の潜在的処置の開発下で、メイタンシノイド薬物部分（ＤＭ１）に連結された抗前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）モノクローナル抗体からなる抗体−薬物結合体である。同じメイタンシノイド薬物部分（ＤＭ１）が、非ジスルフィドリンカー（ＳＭＣＣ）を介してマウスのマウスモノクローナル抗体（ＴＡ．１）に連結された（非特許文献２２）。この結合体は、対応するジスルフィドリンカー結合体よりも２００倍効力が低いと報告された。そのＳＭＣＣリンカーは、その文献の中で「切断不可能」であると考えられた（また、特許文献１６も参照のこと）。ＳＭＣＣによってＤＭ１に連結されたＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）が報告されている（特許文献１７）。
【０００５】
癌の診断および治療のための有効な細胞標的を発見するための試みにおいて、研究者は、１以上の正常な非癌性細胞と比べて１以上の特定の型の癌細胞の表面に特異的に発現される膜貫通ポリペプチドまたはその他の腫瘍関連ポリペプチドを同定しようと努めてきた。多くの場合、そのような腫瘍関連ポリペプチドは、非癌性細胞の表面上と比べて、癌細胞の表面上により大量に発現される。そのような腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチド（すなわち、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ））の同定は、抗体ベースの治療を介して破壊のために癌細胞を特異的に標的する能力を生じさせてきた。
【０００６】
モノクローナル抗体治療は、癌、免疫学的障害および脈管形成障害を有する患者の標的処置のために確立されてきた。成功した抗体治療の例は、ヒト表皮成長因子レセプター２タンパク質であるＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の細胞外ドメインに対して、細胞ベースアッセイにおいて高い親和性で選択的に結合する（Ｋｄ＝５ｎＭ）組換えＤＮＡ由来のヒト化モノクローナル抗体である、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）である（特許文献１８；特許文献１９；特許文献２０；特許文献２１；非特許文献２３；非特許文献２４）。トラスツズマブは、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域を含むＩｇＧ１κ抗体である。トラスツズマブは、ＨＥＲ２抗原に結合し、それゆえ、癌性細胞の成長を阻害する。トラスツズマブはヒト化抗体であるので、患者における任意のＨＡＭＡ応答を最小化する。ＨＥＲ２に対するヒト化抗体は、哺乳類細胞（チャイニーズハムスター卵巣、ＣＨＯ）懸濁培養物によって産生される。ＨＥＲ２（またはｃ−ｅｒｂＢ２）プロトオンコジーンは、１８５ｋＤａの膜貫通レセプタータンパク質コードし、これは、表皮成長因子レセプターに構造的に関連する。ＨＥＲ２タンパク質過剰発現は、２５％〜３０％の原発性乳癌において観察され、固定された腫瘍ブロックの免疫組織化学ベース評価を用いて決定され得る（非特許文献２５）。トラスツズマブは、インビトロアッセイおよび動物の両方において、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されている（非特許文献２６；非特許文献２７；非特許文献２８）。トラスツズマブは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、ＡＤＣＣのメディエータである（非特許文献２９；非特許文献３０；非特許文献３１；非特許文献３２）。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、広範な事前抗癌治療を受けたＥｒｂＢ２を過剰発現する転移性乳癌を有する患者において、臨床的に活性である（非特許文献３３）。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮは、広範な事前抗癌治療を受けたＥｒｂＢ２を過剰発現する転移性乳癌を有する患者を処置することにおいて新たな発見であるが、この集団中の多数の患者がＨＥＲＣＥＰＴＩＮ処置に対して応答しないかまたはほとんど応答しない。したがって、ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍を有するかあるいはＨＥＲＣＥＰＴＩＮ処置に対して応答しないかまたはほとんど応答しないＨＥＲ２発現に関連する他の疾患を有する患者に対するさらなるＨＥＲ２指向性癌治療を開発することに対して、重大な臨床的必要性が存在する。ＨＥＲ２に加えて、標的治療で他の腫瘍関連抗原を活用する機会が存在する。
【特許文献１】米国特許第４９７５２７８号明細書
【特許文献２】米国特許第４７５３８９４号明細書
【特許文献３】米国特許第５６２９１９７号明細書
【特許文献４】米国特許第４９５８００９号明細書
【特許文献５】米国特許第４９５６４５３号明細書
【特許文献６】欧州特許第１３９１２１３号明細書
【特許文献７】米国特許第４９７０１９８号明細書
【特許文献８】米国特許第５０７９２３３号明細書
【特許文献９】米国特許第５５８５０８９号明細書
【特許文献１０】米国特許第５６０６０４０号明細書
【特許文献１１】米国特許第５６９３７６２号明細書
【特許文献１２】米国特許第５７３９１１６号明細書
【特許文献１３】米国特許第５７６７２８５号明細書
【特許文献１４】米国特許第５７７３００１号明細書
【特許文献１５】米国特許第５２０８０２０号明細書
【特許文献１６】米国特許第４９８１９７９号明細書
【特許文献１７】国際公開第２００５／０３７９９２号パンフレット
【特許文献１８】米国特許第５８２１３３７号明細書
【特許文献１９】米国特許第６０５４２９７号明細書
【特許文献２０】米国特許第６４０７２１３号明細書
【特許文献２１】米国特許第６６３９０５５号明細書
【非特許文献１】Ｐａｙｎｅ，Ｇ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２００３）３：２０７−２１２
【非特許文献２】Ｔｒａｉｌら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２００３）５２：３２８−３３７
【非特許文献３】ＳｙｒｉｇｏｓおよびＥｐｅｎｅｔｏｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）１９：６０５−６１４
【非特許文献４】Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−ＤｕｖａｚおよびＳｐｒｉｎｇｅｒ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．（１９９７）２６：１５１−１７２
【非特許文献５】Ｂａｌｄｗｉｎら、Ｌａｎｃｅｔ  ｐｐ．（Ｍａｒ．１５，１９８６）：６０３−０５
【非特許文献６】Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編），（１９８５）ｐｐ．４７５−５０６
【非特許文献７】Ｒｏｗｌａｎｄら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（１９８６）２１：１８３−８７
【非特許文献８】Ｔａｋａｈａｓｈｉら，Ｃａｎｃｅｒ（１９８８）６１：８８１−８８８
【非特許文献９】Ｍａｎｄｌｅｒら，Ｊ．  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．（２０００）９２（１９）：１５７３−１５８１
【非特許文献１０】Ｍａｎｄｌｅｒら，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００）１０：１０２５−１０２８
【非特許文献１１】Ｍａｎｄｌｅｒら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．（２００２）１３：７８６−７９１
【非特許文献１２】Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ（１９９６）９３：８６１８−８６２３
【非特許文献１３】Ｌｏｄｅら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９８）５８：２９２８
【非特許文献１４】Ｈｉｎｍａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９３）５３：３３３６−３３４２
【非特許文献１５】Ｗｉｓｅｍａｎら，Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．（２０００）２７（７）：７６６−７７
【非特許文献１６】Ｗｉｓｅｍａｎら，Ｂｌｏｏｄ（２００２）９９（１２）：４３３６−４２
【非特許文献１７】Ｗｉｔｚｉｇら，Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．（２００２）２０（１０）：２４５３−６３
【非特許文献１８】Ｗｉｔｚｉｇら，Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．（２００２）２０（１５）：３２６２−６９
【非特許文献１９】Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ（２０００）２５（７）：６８６
【非特許文献２０】Ｘｉｅら，Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍ．  ａｎｄ  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．（２００４）３０８（３）：１０７３−１０８２
【非特許文献２１】Ｔｏｌｃｈｅｒら，Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００３）２１（２）：２１１−２２２
【非特許文献２２】Ｃｈａｒｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９２）５２：１２７−１３１
【非特許文献２３】Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０：１１３２−９
【非特許文献２４】Ｓｌａｍｏｎ  ＤＪら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８９）２４４：７０７−１２
【非特許文献２５】Ｐｒｅｓｓ  ＭＦら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（１９９３）５３：４９６０−７０
【非特許文献２６】Ｈｕｄｚｉａｋ  ＲＭら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（１９８９）９：１１６５−７２
【非特許文献２７】Ｌｅｗｉｓ  ＧＤら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ；（１９９３）３７：２５５−６３
【非特許文献２８】Ｂａｓｅｌｇａ  Ｊら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９８）５８：２８２５−２８３１
【非特許文献２９】Ｈｏｔａｌｉｎｇ  ＴＥら，［ａｂｓｔｒａｃｔ］．  Ｐｒｏｃ．  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；（１９９６）３７：４７１
【非特許文献３０】Ｐｅｇｒａｍ  ＭＤら，［ａｂｓｔｒａｃｔ］．  Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；（１９９７）３８：６０２
【非特許文献３１】Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（１９９９）２６（４），補遺１２：６０−７０
【非特許文献３２】Ｙａｒｄｅｎ  Ｙ．およびＳｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｍａｇａｚｉｎｅｓ，  Ｌｔｄ．，（２００１）Ｖｏｌ．２：１２７−１３７
【非特許文献３３】Ｂａｓｅｌｇａら，Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．（１９９６）１４：７３７−７４４
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本発明は、癌細胞に対する生物学的活性を有する新規化合物を提供する。その化合物は、哺乳動物において腫瘍増殖を阻害し得、そしてヒト癌患者を処置するのに有用であり得る。
【０００８】
本発明は、細胞内で治療的抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）化合物の送達、輸送、蓄積または保持に関する。本発明は、より詳細には、癌細胞において活性な代謝産物分子の高い濃度を達成することに関する。細胞内ターゲッティングは、細胞内で生物学的に活性な因子の蓄積または保持を可能にする方法および化合物によって達成され得る。そのような有効なターゲッティングは、種々の治療的処方物および手順に利用可能であり得る。
【０００９】
メイタンシノイド薬物部分を抗体に結合させる安定な非ジスルフィドリンカー基を有する抗体−薬物結合体がインビトロ効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）およびインビボ効能（ｅｆｆｉｃａｃｙ）の増加を生じるという驚くべき発見がなされた。さらに、その抗体−薬物結合体は、特定のジスルフィドリンカー結合体に対してインビボでより安全である予期せぬ結果を示す。
【００１０】
抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）化合物は、１以上のメイタンシノイド薬物部分にリンカーによって共有結合される抗体を含む。ＡＤＣは、式Ｉ：
【００１１】
【化１８】
2008501029.tif 000002
によって表され得、ここで、
１以上のメイタンシノイド薬物部分（Ｄ）は、Ｌによって抗体（Ａｂ）に共有結合される。Ａｂは、ＥｒｂＢレセプターに結合するかあるいは１以上の腫瘍関連抗原または細胞表面レセプターに結合する抗体である。リンカーＬは、細胞の外側（すなわち、細胞外）で安定であり得る。リンカーＬも、メイタンシノイド薬物部分Ｄも、一緒になったリンカーとメイタンシノイド薬物部分（Ｌ−Ｄ）も、ジスルフィド基を含まない。
【００１２】
一実施形態において、上記薬物部分の相当量は、上記抗体−薬物結合体がその抗体−薬物結合体の抗体に特異的な細胞表面レセプターを有する細胞に入るまで、抗体から切断されず、その薬物部分は、抗体−薬物結合体が細胞に入るときに抗体から切断される。
【００１３】
別の実施形態において、上記ＡＤＣは、ＥｒｂＢ遺伝子によってコードされるレセプター（例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４）に特異的に結合する。ＡＤＣは、ＨＥＲ２レセプターの細胞外ドメインに特異的に結合し得る。ＡＤＣは、ＨＥＲ２レセプターを過剰発現する腫瘍細胞の増殖を阻害し得る。
【００１４】
別の実施形態において、上記式Ｉの抗体（Ａｂ）は、ヒト化抗体（例えば、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７またはｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（トラスツズマブ））である。
【００１５】
本発明の別の局面は、式Ｉの化合物あるいはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物と、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物である。
【００１６】
別の局面は、式Ｉの化合物と抗癌特性または他の治療効果を有する第二化合物とを含む薬学的組み合わせを提供する。
【００１７】
別の局面は、本明細書に開示される化合物および組成物についての診断的用途および治療的用途を包含する。
【００１８】
別の局面は、腫瘍細胞もしくは癌細胞を殺傷するかまたは腫瘍細胞もしくは癌細胞の増殖を阻害するための方法であって、この方法は、その細胞を、腫瘍細胞もしくは癌細胞を殺傷するかまたは腫瘍細胞もしくは癌細胞の増殖を阻害するのに有効である一定量の抗体−薬物結合体あるいはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物で処理する工程を包含する。
【００１９】
別の局面は、式Ｉの化合物の処方物を患者に投与する工程を包含する、癌を処置する方法である。１つの方法は、哺乳動物における癌を処置するためであり、ここで、その癌は、ＥｒｂＢレセプターの過剰発現によって特徴付けられる。その哺乳動物は、必要に応じて、非結合型抗ＥｒｂＢ抗体での処置に対して応答しないか、またはほとんど応答しない。この方法は、治療有効量の抗体−薬物結合体化合物をその哺乳動物に投与する工程を包含する。
【００２０】
別の局面は、ＨＥＲ２レセプターおよびＥＧＦレセプターからなる群より選択される成長因子レセプターを過剰発現する腫瘍細胞の成長を阻害する方法であり、この方法は、上記成長因子レセプターに特異的に結合する抗体−薬物結合体化合物と化学療法剤とを患者に投与する工程を包含し、この抗体−薬物結合体化合物およびこの化学療法剤は各々、その患者における腫瘍細胞の成長を阻害するために有効な量で投与される。
【００２１】
別の局面は、ＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現によって特徴付けられる障害の影響を受けやすいかまたはＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現によって特徴付けられる障害と診断されたヒト患者の処置のための方法であって、この方法は、式Ｉの抗体−薬物結合体化合物と化学療法剤との組み合わせを投与する工程を包含する。
【００２２】
別の局面は、癌細胞を検出するためのアッセイ方法であって、該方法は、細胞を抗体−薬物結合体化合物に曝露する工程、およびその細胞に対する抗体−薬物結合体化合物の結合の程度を決定する工程を包含する。
【００２３】
別の局面は、疾患または障害の処置のためにＡＤＣ薬物候補物をスクリーニングするための方法に関し、ここで、その疾患または障害は、ＨＥＲ２の過剰発現によって特徴付けられる。
【００２４】
別の局面は、製造物品（すなわち、キット）を包含し、この製造物品は、抗体−薬物結合体、容器、および処置を示すパッケージ挿入物またはラベルを備える。
【００２５】
別の局面は、患者においてＨＥＲ２の過剰発現によって特徴付けられる疾患または障害を、上記抗体−薬物結合体化合物を用いて処置する方法を包含する。
【００２６】
別の局面は、上記抗体−薬物結合体化合物ならびにその抗体−薬物結合体化合物の調製、合成および結合のための中間体を作製する方法、それらを調製する方法、それらを合成する方法、それらを結合する方法、ならびにそれらを精製する方法を包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
（例示的実施形態の詳細な説明）
本発明の特定の実施形態に関する言及が、ここで詳細になされる。その実施形態の例は、添付の構造および式において示される。本発明は、多数の実施形態と組み合わせて記載されるが、本発明をそれらの実施形態に限定することは意図されないことが、理解される。対照的に、本発明は、すべての代替形、改変形、等価物を網羅することが意図され、これらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に包含され得る。
【００２８】
当業者は、本明細書虫に記載される方法および物質と類似するかもしくは等価である多くの方法および物質を認識する。本発明は、記載される方法および物質に決して限定はされない。
【００２９】
そうではないと規定されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有し、それらは、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；およびＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ．と一致する。
（定義）
そうではないと記載されない限り、以下の用語および句は、本明細書中で使用される場合、以下の意味を有することが意図される：
商標名が本明細書において使用される場合、本出願人は、その商標名の製品処方物、遺伝子薬物、およびその商標名の製品の活性薬剤成分を独立して包含することを意図する。
【００３０】
用語「抗体」とは、本明細書において、その最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ダイマー、マルチマー、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントを、それらが望ましい生物学的活性を示す限り、網羅する（Ｍｉｌｌｅｒら（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または他の種由来であり得る。抗体は、特定の抗原を認識および結合することが可能な、免疫系によって生成されるタンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般的には、複数の抗体上にあるＣＤＲによって認識される多数の結合部位（エピトープとも呼ばれる）を有する。異なるエピトープ特異的に結合する抗体は、異なる構造を有する。従って、ある１つの抗原は、１つよりも多くの対応する抗体を有し得る。抗体は、全長免疫グロブリン分子、または全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、対象とする抗原もしくはその部分に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）を包含する。そのような標的としては、癌細胞、または自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を生成する細胞が挙げられるが、これらに限定はされない。本明細書において開示される免疫グロブリンは、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）またはサブクラスの免疫グロブリン分子であり得る。上記免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。しかし、一局面において、上記免疫グロブリンは、ヒト起源、マウス起源、またはウサギ起源である。
【００３１】
「抗体フラグメント」とは、全長抗体の部分（一般的には、その抗原結合領域もしくは可変領域）を包含する。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント；Ｆａｂ’フラグメント；Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；およびＦｖフラグメント；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体；Ｆａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメント；抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体；ＣＤＲ（相補性決定領域）；および癌細胞抗原、ウイルス抗原、もしくは微生物抗原に免疫特異的に結合する上記のうちのいずれかのエピトープ結合フラグメント；単鎖抗体分子、および複数の抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００３２】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書中で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団（すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得るあり得る天然に存在する変異以外は同じである）を指す。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、１つの抗原性エピトープに対する。さらに、種々の決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を包含するポリクローナル抗体とは対照的に、各モノクローナル抗体は、１つの抗原上の１つの抗原決定基に対する。その特異性に加えて、上記モノクローナル抗体は、他の抗体が混入していない状態で合成され得るという点で、有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的な均一な抗体集団から得られている抗体の特徴を示し、これは、特定の何らかの方法によるその抗体の生成を必要とするとは解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって生成され得るか、または組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって生成され得る。上記「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７に記載された技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【００３３】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくは抗体サブクラスに属する抗体中の対応配列と同一であるかまたはそれに相同であるが、その鎖の残りは、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくは抗体サブクラスに属する抗体中の対応配列と同一であるかまたはそれに相同である、「キメラ」抗体；ならびにそのような抗体のフラグメント；を、それらが望ましい生物学的活性を示す限りは、包含する。（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５。本明細書における対象となるキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界サルもしくは類人猿）に由来する可変ドメイン抗原結合配列と、ヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）」抗体を包含する。
【００３４】
「インタクトな抗体」とは、本明細書において、ＶＬドメインおよびＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む、抗体である。上記定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）であっても、そのアミノ酸配列改変体であってもよい。上記インタクトな抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有し得る。この「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列改変体Ｆｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；および細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプターおよびＢＣＲ）のダウンレギュラーションが挙げられる。
【００３５】
その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、インタクトな抗体は、種々の「クラス」に割り当てられ得る。インタクトな抗体の５つの主要なクラスが存在し、それは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭである。これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２）へとさらに分割され得る。種々のクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元構造は、周知である。
【００３６】
「ＥｒｂＢレセプター」とは、細胞の増殖、分化、および生存のために重要な媒介因子である、ＥｒｂＢレセプターファミリーに属するレセプタータンパク質チロシンキナーゼである。そのＥｒｂＢレセプターファミリーは、４つの別個のメンバー（上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、ＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２もしくはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４もしくはｔｙｒｏ２）を含む）を包含する。一群の抗ＥｒｂＢ２抗体が、ヒト乳癌細胞株ＳＫＢＲ３を使用して特徴付けられている（Ｈｕｄｚｉａｋら（１９８９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９（３）：１１６５−１１７２）。最大の阻害が、４Ｄ５と呼ばれる抗体を用いて得られた。この抗体は、細胞増殖を５６％阻害した。上記の群における他の抗体は、このアッセイにおいて、より弱い程度まで細胞増殖を低減させた。この抗体  ４Ｄ５は、ＴＮＦ−αの細胞傷害効果に対して、ＥｒｂＢ２過剰発現乳癌細胞株を感受性にすることがさらに見出された（米国特許第５６７７１７１号）。Ｈｕｄｚｉａｋらにおいて考察された抗ＥｒｂＢ２抗体は、Ｆｅｎｄｌｙら（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８；Ｋｏｔｔｓら（１９９０）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ２６（３）：５９Ａ；Ｓａｒｕｐら（１９９１）Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  １：７２−８２；  ＳｈｅｐａｒｄらＪ．（１９９１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１（３）：１１７−１２７；Ｋｕｍａｒら（１９９１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１（２）：９７９−９８６；Ｌｅｗｉｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３７：２５５−２６３；Ｐｉｅｔｒａｓら（１９９４）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ９：１８２９−１８３８；Ｖｉｔｅｔｔａら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５４：５３０１−５３０９；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２０）：１４６６１−１４６６５；Ｓｃｏｔｔら（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４３００−５；Ｄ’ｓｏｕｚａらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４）９１：７２０２−７２０６；Ｌｅｗｉｓら（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５６：１４５７−１４６５；およびＳｃｈａｅｆｅｒら（１９９７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５−１３９４においてさらに特徴付けられている。
【００３７】
種々の特性を有する他の抗ＥｒｂＢ２抗体が、Ｆｒａｎｋｌｉｎら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７−３２８；Ｔａｇｌｉａｂｕｅら（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：９３３−９３７；ＭｃＫｅｎｚｉｅら（１９８９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４：５４３−５４８；Ｍａｉｅｒら（１９９１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：５３６１−５３６９；Ｂａｃｕｓら（１９９０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３：３５０−３６２；Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら（１９９１）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１−８６９５；Ｂａｃｕｓら（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２５８０−２５８９；Ｘｕら（１９９３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５３：４０１−４０８；ＷＯ９４／００１３６；Ｋａｓｐｒｚｙｋら（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２７７１−２７７６；Ｈａｎｃｏｃｋら（１９９１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：４５７５−４５８０；Ｓｈａｗｖｅｒら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：１３６７−１３７３；Ａｒｔｅａｇａら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：３７５８−３７６５；Ｈａｒｗｅｒｔｈら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１５１６０−１５１６７；米国特許第５７８３１８６号；およびＫｌａｐｐｅｒら（１９９７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４：２０９９−２１０９において記載されている。
【００３８】
配列同一性スクリーニングが、他の２つのＥｒｂＢレセプターファミリーのメンバーであるＥｒｂＢ３（米国特許第５，１８３，８８４；米国特許第５，４８０，９６８；Ｋｒａｕｓら（１９８９）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８６：９１９３−９１９７）；ならびにＥｒｂＢ４（ＥＰ  ５９９２７４；Ｐｌｏｗｍａｎら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１７４６−１７５０；およびＰｌｏｗｍａｎら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６６：４７３−４７５）の同定をもたらした。これらのレセプターは両方とも、少なくともいくつかの乳癌細胞株における発現の増加を示す。
【００３９】
上記ＥｒｂＢレセプターは、一般的には、細胞外ドメイン（これは、ＥｒｂＢ  リガンドに結合し得る）；親油性膜貫通ドメイン；保存的細胞内チロシンキナーゼドメイン；およびカルボキシル末端シグナル伝達ドメイン（リン酸化され得るいくつかのチロシン残基を保有する）を含む。上記ＥｒｂＢレセプターは、「ネイティブ配列」ＥｒｂＢレセプターであっても、その「アミノ酸配列改変体」であってもよい。上記ＥｒｂＢレセプターは、ネイティブ配列ヒトＥｒｂＢレセプターであり得る。従って、「ＥｒｂＢレセプターファミリーのメンバー」とは、現在公知であるかまたは将来同定され得る、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４または他の任意のＥｒｂＢレセプターである。
【００４０】
用語「ＥｒｂＢ１」、「上皮増殖因子レセプター」、「ＥＧＦＲ」および「ＨＥＲ１」は、本明細書において互換可能に使用され、これらは、例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（１９８７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：８８１−９１４において開示されるようなＥＧＦＲ（天然に存在するその変異体形態（例えば、Ｈｕｍｐｈｒｅｙら（１９９０）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），８７：４２０７−４２１１におけるような欠失変異体ＥＧＦＲ）を含む）を指す。用語ｅｒｂＢ１とは、ＥＧＦＲタンパク質生成物をコードする遺伝子を指す。ＨＥＲ１に対する抗体は、例えば、Ｍｕｒｔｈｙら（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、２５２：５４９−５６０およびＷＯ  ９５／２５１６７において記載されている。
【００４１】
用語「ＥＲＲＰ」、「ＥＧＦレセプター関連タンパク質」、「ＥＧＦＲ関連タンパク質」および「上皮増殖因子レセプター関連タンパク質」は、本明細書において互換可能に使用され、これらの用語は、例えば、米国特許第６３９９７４３号および米国特許第２００３／００９６３７３号に開示されるようなＥＲＲＰを指す。
【００４２】
表現「ＥｒｂＢ２」および「ＨＥＲ２」は、本明細書において互換可能に使用され、これらの表現は、例えば、Ｓｅｍｂａら（１９８５）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），８２：６４９７−６５０１およびＹａｍａｍｏｔｏら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ，３１９：２３０−２３４（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｘ０３３６３）に記載されるようなヒトＨＥＲ２タンパク質を指す。用語「ｅｒｂＢ２」とは、ヒトＥｒｂＢ２をコードする遺伝子を指し、「ｎｅｕ」とは、ラットｐ１８５ｎｅｕをコードする遺伝子を指す。
【００４３】
「ＥｒｂＢ３」および「ＨＥＲ３」とは、例えば、米国特許第５１８３８８４号；米国特許第５４８０９６８号；Ｋｒａｕｓら（１９８９）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８６：９１９３−９１９７に開示されるようなレセプターポリペプチドを指す。ＥｒｂＢ３に対する抗体は、当該分野で公知である（米国特許第５１８３８８４号；米国特許第５４８０９６８号；ＷＯ  ９７／３５８８５）。
【００４４】
用語「ＥｒｂＢ４」および「ＨＥＲ４」とは、本明細書において、例えば、欧州特許出願第５９９，２７４号；Ｐｌｏｗｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１７４６−１７５０（１９９３）；およびＰｌｏｗｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３６６：４７３−４７５（１９９３）に開示されるようなレセプターポリペプチド（例えば、ＷＯ  ９９／１９４８８に開示されるような、そのアイソフォームを含む）を指す。ＨＥＲ４に対する抗体が、例えば、ＷＯ  ０２／１８４４４に記載されている。
【００４５】
ＥｒｂＢレセプターに対する抗体は、多数の供給源（例えば、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡが挙げられる）から市販されている。
【００４６】
「ＥｒｂＢリガンド」によって、ＥｒｂＢレセプターに結合および／またはそれを活性化する、ポリペプチドが意味される。上記ＥｒｂＢリガンドは、ネイティブ配列ヒトＥｒｂＢリガンド（例えば、上皮増殖因子（ＥＧＦ）（Ｓａｖａｇｅら（１９７２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４７：７６１２−７６２１）；トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）（Ｍａｒｑｕａｒｄｔら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２３：１０７９−１０８２）；アンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）（神経鞘腫オートクライン増殖因子またはケラチノサイトオートクライン増殖因子としても公知である）（Ｓｈｏｙａｂら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１０７４−１０７６；Ｋｉｍｕｒａら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：２５７−２６０；およびＣｏｏｋら（１９９１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１：２５４７−２５５７）；ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）（Ｓｈｉｎｇら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６０４−１６０７；およびＳａｓａｄａら（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９０：１１７３）；ヘパリン結合上皮増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）（Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：９３６−９３９）；エピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）（Ｔｏｙｏｄａら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７４９５−７５００；およびＫｏｍｕｒａｓａｋｉら（１９９７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：２８４１−２８４８）；ヘレグリン（下記参照）；ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ）−２（ＮＲＧ−２）（Ｃａｒｒａｗａｙら、Ｎａｔｕｒｅ，３８７：５１２−５１６（１９９７））；ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ）−３（ＮＲＧ−３）（Ｚｈａｎｇら（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９４：９５６２−９５６７）；ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ）−４（ＮＲＧ−４）（Ｈａｒａｒｉら（１９９９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１８：２６８１−８９）またはクリプト（ｃｒｉｐｔｏ）（ＣＲ−１）（Ｋａｎｎａｎら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（６）：３３３０−３３３５）が挙げられる）であり得る。ＥＧＦＲに結合するＥｒｂＢリガンドとしては、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、アンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）、ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）、ＨＢ−ＥＧＦおよびエピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）が挙げられる。ＥｒｂＢ３に結合するＥｒｂＢリガンドとしては、ヘレグリン類が挙げられる。ＥｒｂＢ４に結合可能なＥｒｂＢリガンドとしては、ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）、エピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）、ＨＢ−ＥＧＦ、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４およびヘレグリン類が挙げられる。上記ＥｒｂＢリガンドはまた、合成ＥｒｂＢリガンドであり得る。上記合成リガンドは、特定のＥｒｂＢレセプターに特異的であり得るか、または特定のＥｒｂＢレセプター複合体を認識し得る。合成リガンドの例は、合成ヘレグリン／ＥＧＦキメラヘレグリンである（例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９９９）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４４７：２２７−２３１（これは、参考と���て援用される）を参照のこと）。
【００４７】
「ヘレグリン（Ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ）」（ＨＲＧ）とは、米国特許第５６４１８６９号またはＭａｒｃｈｉｏｎｎｉら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：３１２−３１８において開示されるようなヘレグリン遺伝子生成物によってコードされるポリペプチドを指す。ヘレグリンの例としては、ヘレグリン−α、ヘレグリン−β１、ヘレグリン−β２およびヘレグリン−β３（Ｈｏｌｍｅｓら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２０５−１２１０；および米国特許第５６４１８６９号）；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）（Ｐｅｌｅｓら（１９９２）Ｃｅｌｌ  ６９：２０５−２１６）；アセチルコリンレセプター誘導活性（ＡＲＩＡ）（Ｆａｌｌｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ  ７２：８０１−８１５）；グリア増殖因子（ＧＧＦ）（Ｍａｒｃｈｉｏｎｎｉら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ、３６２：３１２−３１８）；感覚・運動ニューロン由来因子（ＳＭＤＦ）（Ｈｏら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１４５２３−１４５３２）；γ−ヘレグリン（Ｓｃｈａｅｆｅｒら（１９９７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１５：１３８５−１３９４）が挙げられる。上記用語は、ネイティブ配列ＨＲＧポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントおよび／またはアミノ酸配列改変体（例えば、そのＥＧＦ様ドメインフラグメント（例えば、ＨＲＧβ１１７７−２４４））を包含する。
【００４８】
「ＥｒｂＢヘテロオリゴマー」とは、少なくとも２つの異なるＥｒｂＢレセプターを含む、非共有結合したオリゴマーである。「ＥｒｂＢ  ダイマー」とは、２つの異なるＥｒｂＢレセプターを含む、非共有結合したオリゴマーである。そのような複合体は、２つ以上のＥｒｂＢレセプターを発現する細胞がＥｒｂＢリガンドに対して曝露された場合に、形成し得る。ＥｒｂＢオリゴマー（例えば、ＥｒｂＢ  ダイマー）は、例えば、Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９（２０）：１４６６１−１４６６５に記載されるように、免疫沈降によって単離され得、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析され得る。そのようなＥｒｂＢヘテロオリゴマーの例としては、ＥＧＦＲ−ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ１／ＨＥＲ２とも呼ばれる）、ＥｒｂＢ２−ＥｒｂＢ３（ＨＥＲ２／ＨＥＲ３）およびＥｒｂＢ３−ＥｒｂＢ４（ＨＥＲ３／ＨＥＲ４）複合体が挙げられる。さらに、上記ＥｒｂＢヘテロオリゴマーは、２つ以上のＥｒｂＢ２レセプターを異なるＥｒｂＢレセプター（例えば、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４もしくはＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１））と組み合わせて含み得る。他のタンパク質（例えば、サイトカインレセプターサブユニット（例えば、ｇｐ１３０））が、上記ヘテロオリゴマー中に含まれ得る。
【００４９】
「ＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化」によって、対象とするＥｒｂＢレセプターを含むＥｒｂＢヘテロオリゴマーへのＥｒｂＢリガンド結合によって媒介される、シグナル伝達（例えば、ＥｒｂＢレセプターまたは基質ポリペプチドにおけるチロシン残基をリン酸化する、ＥｒｂＢレセプターの細胞内キナーゼドメインによって引き起こされる）が意味される。一般的に、これは、ＥｒｂＢヘテロオリゴマーに対するＥｒｂＢリガンドの結合を含み、これが、そのヘテロオリゴマー中にあるＥｒｂＢレセプターのうちの１つ以上のキナーゼドメインを活性化し、それによって、そのＥｒｂＢレセプターのうちの１つ以上におけるチロシン残基のリン酸化、および／またはさらなる基質ポリペプチドにおけるチロシン残基のリン酸化を生じる。ＥｒｂＢレセプター活性化は、種々のチロシンリン酸化アッセイを使用して定量され得る。
【００５０】
「ネイティブ配列」ポリペプチドとは、自然に由来するポリペプチド（例えば、ＥｒｂＢレセプターまたはＥｒｂＢリガンド）と同じアミノ酸配列を有する、ポリペプチドである。そのようなネイティブ配列ポリペプチドは、自然から単離され得るか、または組換え手段もしくは合成手段によって生成され得る。従って、ネイティブ配列ポリペプチドは、天然に存在するヒトポリペプチド、マウスポリペプチド、または他の任意の哺乳動物種由来のポリペプチドの、アミノ酸配列を有し得る。
【００５１】
用語「アミノ酸配列改変体」とは、ネイティブ配列ポリペプチドとはある程度異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。通常、アミノ酸配列改変体は、ネイティブＥｒｂＢリガンドの少なくとも１つのレセプター結合ドメインと、またはネイティブＥｒｂＢレセプターの少なくとも１つのリガンド結合ドメインと、少なくとも約７０％の配列同一性を有するか、あるいはそのようなレセプター結合ドメインもしくはリガンド結合ドメインと少なくとも約８０％もしくは少なくとも約９０％相同である。上記アミノ酸配列改変体は、上記ネイティブアミノ酸配列のアミノ酸配列における特定の位置において、置換、欠失、および／または挿入を保有する。
【００５２】
「配列同一性」は、配列を整列して（必要な場合には）ギャップを導入して配列同一性最大パーセントに達した後に同じである、上記アミノ酸配列改変体中の残基の割合として定義される。上記整列のための方法およびコンピュータープログラムは、当該分野において周知である。そのようなコンピュータープログラムのうちの１つは、「Ａｌｉｇｎ  ２」であり、これは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、１９９１年１２月１０日に、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ  ２０５５９）に提出された。
【００５３】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合した抗体を認識した後、その標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応である。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現が、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，９：４５７−９２の第４６４頁表３にまとめられている。対象とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＣアッセイが、実施され得る（米国特許第５５００３６２ｌ号；米国特許第５８２１３３７号）。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで（例えば、動物モデル（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら（１９９８）ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６に開示される）において）評価され得る。
【００５４】
「メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）薬物部分」とは、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）化合物の構造を有する抗体−薬物結合体の部分構造を意味する。メイタンシンは、東アフリカの低木であるＭａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａから最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。驚くべきことに、特定の微生物もまた、メイタンシノイド類（例えば、メイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステル）を生成することが、発見された（米国特許第４１５１０４２号）。合成メイタンシノールおよびメイタンシノールアナログが、報告されている。米国特許第４１３７２３０号；同第４２４８８７０号；同第４２５６７４６号；同第４２６０６０８号；同第４２６５８１４号；同第４２９４７５７号；同第４３０７０１６号；同第４３０８２６８号；同第４３０８２６９号；同第４３０９４２８号；同第４３１３９４６号；同第４３１５９２９号；同第４３１７８２１号；同第４３２２３４８号；同第４３３１５９８号；同第４３６１６５０号；同第４３６４８６６号；同第４４２４２１９号；同第４４５０２５４号；同第４３６２６６３号；および同第４３７１５３３号、ならびにＫａｗａｉら（１９８４）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３４４１−３４５１）（これらの各々は、明示的に参考として援用される）を参照のこと。
【００５５】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」とは、抗体のＦｃ領域（例えば、ネイティブ配列ヒトＦｃＲ）に結合するレセプターを記載するために使用される。ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合し得（γレセプター）、これは、ＦｃγＲＩサブクラスのレセプター、ＦｃγＲＩＩサブクラスのレセプター、およびＦｃγ  ＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子改変体および選択的スプライス形態）を包含する。ＦｃγＲＩＩレセプターとしては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられ、これらは、その細胞質ドメインが主に異なる、類似するアミノ酸配列を有する。活性化レセプターであるＦｃγＲＩＩＡは、免疫レセプターのチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を、その細胞質ドメイン中に含む。阻害レセプターであるＦｃγＲＩＩＢは、免疫レセプターのチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を、その細胞質ドメイン中に含む（概説Ｍ．ｉｎ  Ｄａeｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４；およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１において概説されている。他のＦｃＲ（将来同定されるものを包含する）も、本明細書において用語「ＦｃＲ」によって包含される。上記用語はまた、新生児レセプターであるＦｃＲｎを包含し、これは、胎児への母系ＩｇＧの転移を担う（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，ａｎｄ  Ｋｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９）。
【００５６】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で分子が標的を溶解する能力を指す。補体活性化経路は、同族抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）に対して、補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３に記載される）が、実施され得る。
【００５７】
「ネイティブ抗体」は、通常は、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であり、２つの同じ軽（Ｌ）鎖および２つの同じ重（Ｈ）鎖から構成される。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に結合されるが、ジスルフィド結合の数は、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。各重鎖および軽鎖はまた、規則的に間隔を空けた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一方の末端に、１つの可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に、多数の定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の末端に、１つの可変ドメイン（ＶＬ）を有し、もう一方の末端に、定常ドメインを有する。その軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一の定常ドメインと整列され、その軽鎖の可変ドメインが、重鎖の可変ドメインと整列される。特定のアミノ酸残基が、この軽鎖および重鎖の可変ドメインの間で境界面を形成すると考えられる。
【００５８】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定部分が抗体間で広範に異なり、かつその特定の抗原に対する特定の抗体各々の結合および特異性において使用されるという事実を指す。しかし、その可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均一に分布しているわけではない。その可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方における、超可変領域と呼ばれる３つのセグメントにおいて集中している。可変ドメインの非常に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブの重鎖および軽鎖の可変ドメイン各々は、４つのＦＲ（これは、βシート構造を主に呈する）を含み、これらは、３つの超可変領域によって結合されており、これは、そのβシート構造に接続し、場合によってはそのβシート構造の一部を形成する、ループを形成する。各鎖における超可変領域は上記のＦＲによって近接した状態で一緒に保持され、他の鎖に由来する超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）を参照のこと。上記の定常ドメインは、抗原に抗体を結合することには直接には関与しないが、種々のエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与）を示す。
【００５９】
用語「超可変領域」とは、本明細書において使用される場合、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をさす。上記超可変領域は、一般的には、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに軽鎖可変ドメインにおける残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら（前出））ならびに／または「超可変ループ」中の残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基とは、本明細書中において定義されるような超可変領域残基以外の、可変ドメイン残基である。
【００６０】
抗体のパパイン消化は、２つの同じ抗原結合フラグメント（「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれ、これらは各々、１つの抗原結合部位を含む）と、残りの「Ｆｃ」フラグメント（この名前は、容易に結晶化する能力を反映する）とを生じる。パパイン消化は、２つの抗原結合部位を有し、かつ抗原を依然として架橋可能である、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。
【００６１】
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む、最小限の抗体フラグメントである。この領域は、緊密に非共有結合している１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインからなる。各可変ドメインの３つの超可変領域が、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面上に抗原結合部位を規定するように相互作用するのは、この構成にある場合である。まとめると、６つの超可変領域が、上記抗体に対して抗原結合特異性を付与する。しかし、１つの可変ドメイン（または１つの抗原に対して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分部分）でさえ、抗原を認識して結合する能力を有するが、結合部位全体よりは低い親和性である。
【００６２】
上記Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における少数の残基（抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステイン）の添加によって、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１つの遊離チオール基を保有するＦａｂ’についての、本明細書における表示である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、もともと、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメント対として、生成された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングもまた、公知である。
【００６３】
任意の脊椎動物種に由来する抗体の「軽鎖」が、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に別個である型（カッパ（κ）およびラムダ（λ））と呼ばれる）のうちの１つに割り当てられる。
【００６４】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」とは、抗体ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む、単鎖可変領域抗体フラグメントを意味し、これらのドメインは、１つのポリペプチド鎖中に存在する。上記Ｆｖポリペプチドは、抗原結合のために望ましい構造をｓｃＦｖが形成するのを可能にするポリペプチドリンカーを、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含み得る（Ｐｌuｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）。抗ＥｒｂＢ２抗体ｓｃＦｖフラグメントは、ＷＯ  ９３／１６１８５；米国特許第５５７１８９４号；米国特許第５５８７４５８号に記載されている。
【００６５】
用語「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」とは、２つの抗原結合部位を含む小さい抗体フラグメントを指し、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合体化している重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間での対合を可能にするには短か過ぎるリンカーを使用することによって、それらのドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対合させられ、２つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ  ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８において、より完全に記載される。
【００６６】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、この抗体において、このレシピエントの超可変領域に由来する残基が、望ましい特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギ、および非ヒト霊長類）の超可変領域に由来する残基によって置換されている。いくつかの場合においては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに精緻化するためになされる。一般的には、上記ヒト化抗体は、少なくとも１つ（代表的には２つ）の可変ドメインのうちの実質的にすべてを含み、その超可変ループのうちのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、そのＦＲのうちのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。上記ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）のうちの少なくとも部分（代表的にはヒト免疫グロブリンのうちの少なくとも部分）を含む。さらなる詳細について、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３−５９６を参照のこと。
【００６７】
ヒト化抗ＥｒｂＢ２抗体としては、米国特許第５８２１３３７号（本明細書において明示的に参考として援用される）の表３において記載されるようなｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ハーセプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）（登録商標）、トラスツズマブ）；ヒト化５２０Ｃ９（ＷＯ  ９３／２１３１９）およびヒト化２Ｃ４抗体が挙げられる。
【００６８】
「単離された」抗体とは、その天然環境から同定されそして分離および／または回収されている、抗体である。その天然環境の混入成分は、その抗体についての診断的用途または治療的用途を妨害する物質であり、それには、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性溶質もしくは非タンパク質性溶質が挙げられ得る。上記抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定した場合に９５重量％よりも多い抗体になるまで、または９９重量％よりも多い抗体になるまで精製され得るか、（２）タンパク質配列決定機の使用によってＮ末端アミノ酸配列もしくは内部アミノ酸配列のうちの少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで精製され得るか、あるいは、（３）クマシーブルー染色もしくは銀染色を使用する還元条件もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで精製され得る。単離された抗体とは、その抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないので組換え細胞中でインサイチュで存在する抗体を包含する。しかし、通常は、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【００６９】
対象とする抗原（例えば、ＥｒｂＢ２抗原）に「結合する」抗体とは、その抗原に十分な親和性で結合可能であり、その結果、その抗体がその抗原を発現する細胞を標的化する際に有用である、抗体である。上記抗体がＥｒｂＢ２に結合する場合、その抗体は、通常は、他のＥｒｂＢレセプターに対してよりも優先的にＥｒｂＢ２に結合し、この抗体は、他のタンパク質（例えば、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３またはＥｒｂＢ４）と有意には交差反応しない抗体であり得る。そのような  実施形態において、上記抗体がこれらの非ＥｒｂＢ２タンパク質に結合する程度（例えば、内因性レセプターに対する細胞表面結合）は、蛍光細胞分析分離（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降法（ＲＩＡ）によって決定した場合、１０％未満である。ときには、上記抗ＥｒｂＢ２抗体は、例えば、Ｓｃｈｅｃｔｅｒら（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：５１３、およびＤｒｅｂｉｎら（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ，３１２：５４５−５４８に記載されるように、ラットｎｅｕタンパク質と有意には交差反応しない。
【００７０】
ＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化を「ブロックする」抗体は、そのような活性化を低減もしくは防止し、その抗体は、ＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化を、モノクローナル抗体４Ｄ５よりも実質的に有効に、例えば、モノクローナル抗体７Ｆ３もしくは２Ｃ４またはそれらのＦａｂフラグメントとほぼ同定度有効に、ブロックすることが可能である。例えば、ＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化をブロックする抗体は、ＥｒｂＢヘテロオリゴマーの形成をブロックする場合に、４Ｄ５よりも約５０％〜約１００％有効な抗体であり得る。ＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化のブロックは、任意の手段によって、例えば、ＥｒｂＢレセプターに対するリガンドの結合、ＥｒｂＢ複合体形成、ＥｒｂＢ複合体におけるＥｒｂＢレセプターのチロシンキナーゼ活性および／またはＥｒｂＢレセプター中もしくはＥｒｂＢレセプターによるチロシンキナーゼ残基のリン酸化によって、生じ得る。
【００７１】
指定された抗体（例えば、２Ｃ４と称するモノクローナル抗体（Ｏｍｎｉｔａｒｇ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．））の「生物学的特徴」を有する抗体は、同じ抗原（例えば、ＥｒｂＢ２）に結合する他の抗体と区別する上記抗体の生物学的特徴のうちの１つ以上を保有する、抗体である。例えば、２Ｃ４の生物学的特徴を有する抗体は、ＥｒｂＢヘテロオリゴマー（ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ１またはＥｒｂＢ４を含む）のＨＲＧ活性化をブロックし得；ＥｒｂＢレセプター（ＥＧＦＲおよびＥｒｂＢ２を含む）のＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、エピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）および／またはアンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）活性化をブロックし得；ＭＡＰＫのＥＧＦ、ＴＧＦ−αおよび／またはＨＲＧによって媒介される活性化をブロックし得；かつ／あるいは２Ｃ４により結合されるエピトープと同じ、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメイン中のエピトープに結合し得る（例えば、これは、ＥｒｂＢ２に対するモノクローナル抗体２Ｃ４の結合をブロックする）。
【００７２】
そうではないと示されない限り、表現「モノクローナル抗体２Ｃ４」とは、下記の実施例のマウス２Ｃ４抗体の抗原結合残基もしくはマウス２Ｃ４抗体に由来する抗原結合残基を有する、抗体を指す。例えば、上記モノクローナル抗体２Ｃ４は、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４  またはその改変体（例えば、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４の抗原結合アミノ酸残基を有するヒト化抗体２Ｃ４（ＷＯ  ０１／００２４５））であり得る。そうではないと示されない限り、表現「ｒｈｕＭＡｂ  ２Ｃ４」とは、本明細書中で使用される場合、それぞれ配列番号３および４の可変軽鎖（ＶＬ）配列および可変重鎖（ＶＨ）配列を、ヒト軽鎖および重鎖のＩｇＧ１（非Ａアロタイプ）定常領域配列を融合して含み、必要に応じてチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞によって発現される、抗体（ＷＯ  ０１／００２４５）を指す。
【００７３】
そうではないと示されない限り、用語「モノクローナル抗体４Ｄ５」とは、マウス４Ｄ５抗体（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０４６３）の抗原結合残基またはマウス４Ｄ５抗体に由来する抗原結合残基を有する、抗体を指す。例えば、上記モノクローナル抗体４Ｄ５は、マウスモノクローナル抗体４Ｄ５またはその改変体（例えば、マウスモノクローナル抗体４Ｄ５の抗原結合残基を保有するヒト化４Ｄ５）であり得る。例示的ヒト化４Ｄ５抗体としては、米国特許第５８２１３３７号におけるような、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ハーセプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）（登録商標））が挙げられる。
【００７４】
「増殖阻害因子」とは、細胞（例えば、ＥｒｂＢ発現癌細胞）の増殖を、インビトロまたはインビボのうちのいずれかで阻害する、化合物または組成物を指す。従って、上記増殖阻害因子は、Ｓ期にあるＥｒｂＢ発現細胞の割合を有意に減少させる因子であり得る。増殖阻害因子の例としては、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）ブロックする因子（例えば、Ｇ１停止Ｍ期停止を誘導する因子）（Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編，Ｃｈａｐｔｅｒ  １，表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」Ｍｕｒａｋａｍｉら（ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５），特に  ｐ．１３）が挙げられる。「増殖阻害」抗体の例は、ＥｒｂＢ２に結合しかつＥｒｂＢ２を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する抗体である。増殖阻害抗ＥｒｂＢ２抗体は、細胞培養におけるＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞の増殖を約０．５μｇ／ｍｌ〜約３０μｇ／ｍｌの抗体濃度にて、２０％よりも高くかまたは５０％よりも高く（例えば、約５０％〜約１００％）阻害し得、この増殖阻害は、上記抗体にＳＫ−ＢＲ−３細胞を曝露した６日間後に決定される（米国特許第５６７７１７１号）。
【００７５】
「細胞死を誘導する」抗体とは、生細胞が生存不能になるのを引き起こす抗体である。上記細胞は、一般的には、ＥｒｂＢ２レセプターを発現する細胞であり、特に、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する場合である。上記細胞は、癌細胞（例えば、乳細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、唾液腺細胞、肺細胞、腎臓細胞、結腸細胞、甲状腺細胞、膵臓細胞、または膀胱細胞）であり得る。インビトロにおいて、上記細胞は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞、ＢＴ４７４細胞、Ｃａｌｕ  ３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１細胞、またはＳＫＯＶ３細胞であり得る。インビトロでの細胞死は、補体および免疫エフェクター細胞の非存在化で決定されて、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によって誘導された細胞死と区別される。従って、細胞死についてのアッセイは、熱非働体化血清を使用して（すなわち、補体の非存在下で）、免疫エフェクター細胞の非存在下で、実施され得る。上記抗体が細胞死を誘導可能であるか否かを決定するために、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー（Ｍｏｏｒｅら（１９９５）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１７：１−１１を参照のこと）または７ＡＡＤの取り込みによって評価される膜完全性の喪失が、未処理細胞と比較して評価され得る。細胞死誘導性抗体は、ＢＴ４７４細胞におけるＰＩ取り込みアッセイ（下記を参照のこと）において、ＰＩ取り込みを誘導する抗体である。
【００７６】
「アポトーシスを誘導する」抗体とは、アネキシン（ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス体と呼ばれる）の形成によって決定される、プログラムされた細胞死を誘導する抗体である。上記細胞は、通常は、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞（腫瘍細胞（例えば、乳房細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、唾液腺細胞、肺細胞、腎臓細胞、結腸細胞、甲状腺細胞、膵臓細胞、または膀胱細胞）を含む）である。インビトロにおいて、上記細胞は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞、ＢＴ４７４細胞、Ｃａｌｕ  ３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１細胞、またはＳＫＯＶ３細胞であり得る。
【００７７】
用語「処置する」または「処置」とは、治療的処置および防御的手段もしくは予防的手段の両方を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化または障害（例えば、癌の発症もしくは伝播）を防止または鈍化（減弱化）することである。本発明の目的のためには、有益な臨床結果または望ましい臨床結果としては、症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の安定化した（すなわち、悪化しない）状態、疾患進行の遅延もしくは軽減、ならびに寛解（部分的であろうと、全体的であろうと）（検出可能であろうと、検出不能であろうと）が挙げられるが、これらに限定はされない。「処置」はまた、処置を受けない場合に予期される生存と比較して生存を延長させることも意味し得る。処置が必要な被験体としては、その状態もしくは障害を既に有する被験体、ならびにその状態もしくは障害を有する傾向がある被験体、またはその状態もしくは障害が予防されるべき被験体が挙げられる。
【００７８】
「障害」とは、本発明の処置から恩恵を受ける任意の状態である。これは、慢性および急性の障害もしくは疾患（問題となる障害に哺乳動物がなりやすくする病理的状態を含む）を包含する。本明細書において処置されるべき障害の非限定的例としては、良性腫瘍および悪性腫瘍；白血病およびリンパ系悪性腫瘍（特に、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、または膀胱癌）；神経障害、グリア障害、神経膠星状細胞障害、視床下部障害、および他の腺障害、マクロファージ障害、上皮障害、間質障害、および胞胚腔障害；ならびに炎症障害、脈管形成障害、および免疫障害が挙げられる。本発明に従って処置されるべき例示的障害は、固形悪性腫瘍である。
【００７９】
用語「治療有効量」とは、哺乳動物において疾患または障害を処置するために有効な薬物の量を指す。癌の場合、上記薬物の治療有効量は、（ｉ）癌細胞の数を低減し得；（ｉｉ）腫瘍の大きさを低減し得；（ｉｉｉ）末梢器官への癌細胞の浸潤をある程度阻害し、遅滞させ、遅延させ、好ましくは停止させ得；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させ）得；（ｖ）腫瘍の増殖を阻害し得、かつ／または（ｖｉ）上記癌に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。上記薬物が、存在する癌細胞の増殖を防止し得かつ／またはそれを死滅させ得る程度まで、その薬物は、細胞増殖抑制性および／または細胞毒性であり得る。動物モデルにおいて、効力は、ＡＤＣの投与後の経過の間に腫瘍の物理的測定によって、そして腫瘍の部分的後退および完全な後退を決定することによって、評価され得る。癌治療について、効力は、例えば、疾患進行時間（ＴＴＰ）を評価すること、および／または応答速度（ＲＲ）を決定することによって、測定され得る。
【００８０】
用語「バイオアベイラビリティ」とは、患者に対して投与される所定量の薬物の全身利用性（すなわち、血液レベル／血漿レベル）を指す。バイオアベイラビリティは、投与される投与形態から全身循環に達する薬物の時間（速度）および総量（程度）の両方の尺度を示す絶対的用語である。
【００８１】
用語「癌」および「癌性」とは、調節されていない細胞増殖によって代表的には特徴付けられる、哺乳動物における生理状態を指すかまたは記載する。「腫瘍」は、１つ以上の癌性細胞を含む。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病、またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定はされない。そのような癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺腺癌、および肺扁平上皮細胞癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒまたはｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌を含む）、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、多形グリア芽細胞腫、子宮頚部癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒまたはｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌、ならびに頭部頚部癌が挙げられる。
【００８２】
「ＥｒｂＢ発現癌」とは、その細胞表面に存在するＥｒｂＢタンパク質を有する細胞を含む癌である。「ＥｒｂＢ２発現癌」とは、その細胞表面に十分なレベルのＥｒｂＢ２を精製し、その結果、抗ＥｒｂＢ２抗体がその癌に結合し得、かつその癌に対して治療効果を有し得る、癌である。
【００８３】
レセプター（例えば、ＥｒｂＢレセプター）を「過剰発現する」癌とは、同じ組織型の非癌性細胞と比較して、その細胞表面に有意に高いレベルの上記レセプター（例えば、ＥｒｂＢ２）を有する癌である。そのような過剰発現は、遺伝子増幅によってか、または転写の増加もしくは翻訳の増加によって、引き起こされ得る。ＥｒｂＢレセプター過剰発現は、細胞表面上に存在するＥｒｂＢタンパク質のレベル増加を（例えば、免疫組織化学アッセイ；ＩＨＣ）を介して）評価することによって、診断アッセイまたは予後判定アッセイにおいて決定され得る。あるいは、またはさらに、上記細胞におけるＥｒｂＢコード核酸のレベルを、例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ；ＷＯ  ９８／４５４７９を参照のこと）、サザンブロッティング、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術（例えば、リアルタイム定量ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ））を介して、測定し得る。ＥｒｂＢリガンドの過剰発現は、患者における上記リガンド（またはそれをコードする核酸）のレベルを、例えば、腫瘍生検においてかまたは種々の診断アッセイ（例えば、上記のＩＨＣ、ＦＩＳＨ、サザンブロッティング、ＰＣＲ、またはインビボアッセイ）によって評価することによって、診断的に決定され得る。また、生物学的流体（例えば、血清）中の落ちた（ｓｈｅｄ）抗原（例えば、ＥｒｂＢ細胞外ドメイン）を測定することによって（例えば、米国特許第４９３３２９４号；ＷＯ  ９１／０５２６４；米国特許第５４０１６３８号；およびＳｉａｓら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １３２：７３−８０）を参照のこと）、ＥｒｂＢレセプターの過剰発現を研究し得る。上記のアッセイに加えて、他の種々のインビボアッセイが、当業者にとって利用可能である。例えば、患者の身体中にある細胞を、検出可能な標識（例えば、放射性同位体）で必要に応じて標識した抗体に曝露させ得、その患者における細胞に対する上記抗体の結合が、例えば、放射能活性の外部スキャンによってか、または上記抗体に対して以前に曝露された患者から得た政権を分析することによって、評価され得る。
【００８４】
ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍が、細胞１つ当たりで発現されるＨＥＲ２のコピー数に対応する免疫組織学的スコアによって評点付けされ、それは、生化学的に決定され得る：０＝０コピー／細胞〜１０，０００コピー／細胞、１＋＝少なくとも約２００，０００コピー／細胞、２＋＝少なくとも約５００，０００コピー／細胞、３＋＝約１×１０６〜約２×１０６コピー／細胞。３＋レベルのＨＥＲ２過剰発現（これは、チロシンキナーゼのリガンド非依存性活性化をもたらす（Ｈｕｄｚｉａｋら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：７１５９−７１６３）））が、乳癌のうちの約３０％において生じ、これらの患者において、再発しない生存および全体的生存は、減少する（Ｓｌａｍｏｎら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：７０７−７１２；Ｓｌａｍｏｎら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７−１８２）。逆に、「ＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現によって特徴付けられない」癌は、診断アッセイにおいて、同じ組織型の非癌性細胞と比較して、正常レベルよりも高いレベルのＥｒｂＢ２レセプターを発現しない癌である。上記マウスモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体は、２＋および３＋（１つの細胞につき１×１０６〜−２×１０６のＨＥＲ２レセプター）レベルでＨＥＲ２を過剰発現する乳癌細胞の増殖を阻害するが、それよりも低いＨＥＲ２レベルを有する細胞に対しては、何の活性も有さない（Ｌｅｗｉｓら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３７：２５５−２６３）。この知見に基づいて、抗体４Ｄ５が、ヒト化され（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、米国特許第５８２１３３７号；Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−４２８９）、そして腫瘍がＨＥＲ２を過剰発現するが従来の化学療法の後に進行した乳癌患者において試験された（Ｃｏｂｌｅｉｇｈら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２６３９−２６４８）。この試験におけるほとんどの患者腫瘍は、３＋レベルでＨＥＲ２を発現したが、一部は、２＋であった。
【００８５】
「ホルモン非依存性」癌とは、その増殖が、その癌における細胞により発現されるレセプターに結合するホルモンの存在下で依存性ではない、癌である。癌は、その腫瘍中またはその腫瘍付近でのホルモン濃度を低減する薬理学的ストラテジーもしくは外科手術的ストラテジーの投与の際に、臨床的退縮をしない。ホルモン非依存性癌の例としては、アンドロゲン非依存性前立腺癌、エストロゲン非依存性乳癌、子宮内膜癌、および卵巣癌が挙げられる。そのような癌は、ホルモン依存性腫瘍として始まり得、抗ホルモン療法の後にホルモン感受性段階からホルモン難治性腫瘍へと進行する。
【００８６】
用語「細胞毒性因子」とは、本明細書中で使用される場合、細胞の機能を阻害もしくは防止し、かつ／または細胞の破壊を引き起こす、因子を指す。上記用語は、放射性同位体（例えば、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、６０Ｃ、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、および毒素（例えば、細菌起源、真菌起源、植物起源、もしくは動物起源の、低分子毒素もしくは酵素的に活性な毒素（その合成アナログおよび誘導体を含む））を包含することが意図される。
【００８７】
「化学療法剤」とは、癌の処置において有用な化合物である。化学療法剤の例としては、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、Ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）、Ｓｕｔｅｎｔ（ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシレート（Ｉｍａｔｉｎｉｂ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ（Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ（ＧＳＫ５７２０１６、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、Ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ（ＳＣＨ  ６６３３６）、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ（ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ．）、およびＧｅｆｉｔｉｎｉｂ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、アルキル化剤（例えば、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、シクロホスファミド）；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メチュレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）、トリエチレンホスホロアミド、トリエチレンチオホスホロアミド、およびトリメチロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；アセトゲニン（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎ）（特に、ブラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）およびブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（その合成アナログであるトポテカンを含む）；ブリオスタチン（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ）；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゾレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）合成アナログ、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）合成アナログおよびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成アナログを含む）；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）類（特に、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）１およびクリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（その合成アナログであるＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード（例���ば、クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、塩酸メクロメタミンオキシド（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード）；ニトロソ尿素類（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ））；抗生物質（例えば、エネジイン（ｅｎｅｄｉｙｎｅ）抗生物質（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）（特に、カリケアマイシンγＩＩ（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ  ｇａｍｍａ１Ｉ）およびカリケアマイシンωＩＩ（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ  ｏｍｅｇａＩ１）（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６））；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）（ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含む）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ））；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；ならびにネオカルジノスタチン発色団（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ  ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）および関連する色素タンパク質エネジイン（ｅｎｅｄｉｙｎｅ）抗生物質発色団）、アラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、オートラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトロルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ）（登録商標）、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、キュエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ユベニメックス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔ��ｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール（ｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｏｌ）、メピチオスタン、テストラクトン；アンチアドレナール（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）（例えば、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトーテン、トリロスタン）；葉酸補充剤（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）（例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；窒化ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）；ロニダニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（例えば、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトザントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチイン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｉｒａｎ）；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テヌアゾニン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；トリアジキオン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（ｔａｘｏｉｄ）（例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ（パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒフリーでアルブミンを操作したナノ粒子処方物（Ａｍｅｒｉｃａｎ    Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈoｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲンシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキサート；白金アナログ（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ミトザントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；エダトレキサート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；および上記のうちのいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。
【００８８】
また、この「化学療法剤」の定義に包含されるのは、（ｉ）腫瘍に対するホルモンの作用を調節もしくは阻害するように作用する抗ホルモン剤（例えば、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ・トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）が挙げられる）；（ｉｉ）酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター（これは、副腎におけるエストロゲン生成を調節する）（例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フォルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ））；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ロイプロリド、およびゴセレリン）；ならびにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（ｉｖ）アロマターゼインヒビター；（ｖ）プロテインキナーゼインヒビター；（ｖｉ）脂質キナーゼインヒビター；（ｖｉｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド（特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路（ＰＫＣ−α、ＲａｌｆおよびＨ−Ｒａｓ）中の遺伝子の発現を阻害するもの）；（ｖｉｉｉ）リボザイム（例えば、ＶＥＧＦ発現インヒビター（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現インヒビター）；（ｉｘ）ワクチン（例えば、遺伝子治療ワクチン（例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１インヒビター；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｘ）抗脈管形成因子（例えば、ベバシツマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；および（ｘｉ）上記のうちのいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。
【００８９】
プロテインキナーゼインヒビターとしては、チロシンキナーゼ（例えば、ＥｒｂＢレセプター）のチロシンキナーゼ活性をある程度まで阻害するチロシンキナーゼインヒビターが挙げられる。チロシンキナーゼインヒビターの例としては、ＥＧＦＲ標的化薬物（例えば、（ｉ）ＥＧＦＲに結合する抗体（ＭＡｂ  ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ  ８５０６）、ＭＡｂ  ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ  ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０８）、ＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎらを参照のこと）、およびそれらの改変体（例えば、キメラ化（ｃｈｉｍｅｒｉｚｅｄ）２２５（Ｃ２２５またはＣｅｔｕｘｉｍａｂ；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）および再成形（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ  ９６／４０２１０、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．））；ＩＩ型変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５２１２２９０号）；ＥＧＦＲ（米国特許第５８９１９９６号）；およびＥＧＦＲに結合する抗体（例えば、ＡＢＸ−ＥＧＦ（ＷＯ  ９８／５０４３３））；（ｉｉ）細胞毒性因子に結合体化した抗ＥＧＦＲ抗体（ＥＰ  ６５９４３９Ａ２）；およびＥＧＦＲに結合する低分子（ＺＤ１８３９またはＧｅｆｉｔｉｎｉｂを含む）（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）；Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ  ＨＣｌ（ＣＰ−３５８７７４，ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ）およびＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、キナゾリン（例えば、ＰＤ  １５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリン）、ピリドピリミジン、ピリミドピリミジン、ピロロピリミジン（例えば、ＣＧＰ  ５９３２６、ＣＧＰ  ６０２６１およびＣＧＰ  ６２７０６）、ならびにピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタリミド）、ニトロチオフェン部分を含むチロホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｅ）；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）；アンチセンス分子（例えば、ＥｒｂＢコード核酸に結合するもの）；キノキサリン（ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ）（米国特許第５８０４３９６号）；トリホスチン（ｔｒｙｐｈｏｓｔｉｎ）（米国特許第５８０４３９６号）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；汎ＥｒｂＢインヒビター（例えば、ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ  ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；イマチニブメシレート（Ｉｍａｔｉｎｉｂ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）（Ｇｌｅｅｖａｃ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＫＩ  １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；  Ｓｅｍａｘａｎｉｂ（Ｓｕｇｅｎ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；または米国特許第５８０４３９６号；ＷＯ  ９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ  ９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ  ９７／３８９８３（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ  ９９／０６３７８（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ  ９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ  ９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ）；ＷＯ  ９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）；ＷＯ  ９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）；およびＷＯ  ９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）に記載されるもの）が挙げられる。
【００９０】
「抗脈管形成因子」とは、血管の発達をある程度までブロックまたは妨害する化合物を指す。上記抗脈管形成因子は、例えば、脈管形成を促進することに関与する増殖因子または増殖因子レセプターに結合する、低分子もしくは抗体であり得る。例示的な抗脈管形成因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体（例えば、ババシツマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。
【００９１】
用語「サイトカイン」とは、細胞間メディエーターとして別の細胞に対して作用する、ある細胞集団によって放出されるタンパク質に関する一般用語である。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および伝統的ポリペプチドホルモンである。上記サイトカイン中に包含されるのは、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン）；サイロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体化ホルモン（ＬＨ）；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミュラー管阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子；（例えば、ＮＧＦ−β）；血小板増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）；インスリン様増殖因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子（ｏｓｔｅｏｉｎｄｕｃｔｉｖｅ  ｆａｃｔｏｒ）；インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−β、およびインターフェロン−γ）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ））；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２）；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；および他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）が挙げられる）が挙げられる。本明細書で使用される場合、用語サイトカインとは、天然供給源由来のタンパク質、または組換え細胞培養由来のタンパク質、およびネイティブ配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を包含する。
【００９２】
用語「プロドラッグ」とは、本出願において使用される場合、親薬物と比較して腫瘍細胞に対して細胞傷害性が低く、かつ酵素的に活性化され得るかまたはより活性な親形態へと変換され得る、薬学的に活性な物質の前駆体もしくは誘導体を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）、ならびにＳｔｅｌｌａら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，」  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（ｅｄ．），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照のこと。本発明のプロドラッグとしては、より活性な細胞傷害性遊離薬物へと変換され得る、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸改変型プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、必要に応じて置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、または必要に応じて置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるが、これらに限定はされない。本発明における使用のためのプロドラッグ形態へと誘導体化され得る細胞傷害性薬物の例としては、上記の化学療法剤が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００９３】
「リポソーム」とは、薬物（例えば、本明細書中に開示される抗ＥｒｂＢ２抗体、および必要に応じて、化学療法剤）を哺乳動物に送達するために有用な、種々の型の脂質、リン脂質、および／または界面活性剤から構成される、小胞である。上記リポソームの成分は、生物膜の脂質配置と類似している二重層形態で一般的に配置される。
【００９４】
用語「パッケージ挿入物」とは、治療製品の商業的パッケージ中に通例含まれ、そのような治療製品の仕様に関する指示、使用法、投与量、投与、禁忌、および／または警告に関する情報を含む、指示書を指すために使用される。
【００９５】
「心臓保護剤」とは、薬物（例えば、アントラサイクリン抗生物質および／もしくは抗ＥｒｂＢ２抗体）の患者への投与に関連する心筋機能不全（すなわち、心筋症および／または鬱血性心不全）を予防または低減する化合物もしくは組成物である。上記心臓保護剤は、例えば、フリーラジカル媒介性の心臓毒性効果をブロックもしくは低減し得、かつ／または酸化的ストレス傷害を予防もしくは低減し得る。本発明によって包含される心臓保護剤としては、鉄キレート剤であるデキスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）（ＩＣＲＦ−１８７）（Ｓｅｉｆｅｒｔら、Ｔｈｅ  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，２８：１０６３−１０７２（１９９４））；脂質低減剤および／または抗酸化剤（例えば、プロブコール（Ｓｉｎｇａｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．，２７：１０５５−１０６３（１９９５）））；アミフォスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）（アミノチオール２−［（３−アミノプロリル）アミノ］エタンチオール−リン酸二水素エステル（ＷＲ−２７２１とも呼ばれる）、その脱リン酸化細胞取込み形態（ＷＲ−１０６５と呼ばれる））、およびＳ−３−（３−メチルアミノプロピルアミノ）プロピルホスホロチオン酸（ｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＷＲ−１５１３２７）（Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：７３８−７４１を参照のこと）；ジゴキシン（Ｂｒｉｓｔｏｗ，Ｍ．Ｒ．ｅｄ．（１９８０）Ｄｒｕｇ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  １９１−２１５）；β遮断剤（例えば、メトプロロール（Ｈｊａｌｍａｒｓｏｎら（１９９４）Ｄｒｕｇｓ  ４７：Ｓｕｐｐｌ  ４：３１−９；およびＳｈａｄｄｙら（１９９５）Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．，１２９：１９７−９））；ビタミンＥ；アスコルビン酸（ビタミンＣ）；フリーラジカルスカベンジャー（例えば、オレアノール酸、ウルソル酸、およびＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）；スピン捕捉化合物（例えば、α−フェニル−ｔｅｒｔ−ブチル二トロン（ＰＢＮ）；（Ｐａｒａｃｃｈｉｎｉら（１９９３）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１３：１６０７−１６１２））；セレン有機化合物（例えば、Ｐ２５１（Ｅｌｂｅｓｅｎ））などが挙げられる。
【００９６】
「単離された」核酸分子とは、その分子が通常は抗体核酸の天然供給源中で会合している少なくとも１つの混入核酸から同定および分離されている、核酸分子である。単離された核酸分子は、その分子が天然で見出される形態または状態以外の形態または状態である。従って、単離された核酸分子は、天然細胞中に存在するその核酸分子とは区別される。しかし、単離された核酸分子は、その抗体を通常は発現する細胞中に含まれる核酸分子であり、例えば、その核酸分子は、天然細胞の染色体位置とは異なる染色体位置にある。
【００９７】
「アルキル」とは、直鎖炭素原子、二級炭素原子、三級炭素原子、または環状炭素原子を含む、Ｃ１〜Ｃ１８炭化水素である。アルキルラジカルの例としては、Ｃ１〜Ｃ８炭化水素部分（例えば、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピルｌ（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３であるが、これらに限定はされない）が挙げられる。
【００９８】
「アルケニル」とは、少なくとも１つの不飽和部位（すなわち、炭素間ｓｐ２二重結合）を有する、直鎖状炭素原子、二級炭素原子、三級炭素原子、または環状炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ１８炭化水素である。アルケニルラジカルの例としては、Ｃ２〜Ｃ８炭化水素部分が挙げられ、これは、例えば、エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、および５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）であるが、これらに限定はされない。
【００９９】
「アルキニル」とは、少なくとも１つの不飽和部位（すなわち、炭素間ｓｐ三重結合）を有する、直鎖状炭素原子、二級炭素原子、三級炭素原子、または環状炭素原子を含む、Ｃ２〜Ｃ１８炭化水素である。アルキニルラジカルの例としては、Ｃ２〜Ｃ８炭化水素部分が挙げられ、これは、例えば、アセチレン性（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）であるが、これらに限定はされない。
【０１００】
「アルキレン」とは、１〜１８個の炭素原子からなる飽和した、分枝もしくは直鎖もしくは環状の炭化水素ラジカルであり、かつ親アルカンの同じ炭素原子もしくは異なる２つの炭素原子から２つの水素原子が除去されることによって誘導される２つの一価ラジカル中心を有する。代表的なアルキレンラジカルとしては、Ｃ１〜Ｃ８炭化水素部分が挙げられ、例えば、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）であるが、これらに限定はされない。
【０１０１】
「アルケニレン」とは、２〜１８個の炭素原子の不飽和の、分枝もしくは直鎖の、または、環式の炭化水素ラジカルであって、親アルケンの同じかまたは２つの異なる炭素原子から、２つの水素原子を除去することによって誘導された２個の一価ラジカル中心を有する、炭化水素ラジカルをいう。代表的なアルケニレンラジカルとしては、Ｃ２〜Ｃ８炭化水素部分（例えば、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）であるがこれらに限定されない）が挙げられる。
【０１０２】
「アルキニレン」とは、２〜１８個の炭素原子の、不飽和の、分枝もしくは直鎖の、または、環式の炭化水素ラジカルであって、親アルキンの同じかまたは２つの異なる炭素原子から、２つの水素原子を除去することによって誘導された２個の一価ラジカル中心を有する、炭化水素ラジカルをいう。代表的なアルキニレンラジカルとしては、Ｃ２〜Ｃ８炭化水素部分（例えば、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）であるがこれらに限定されない）が挙げられる。
【０１０３】
「アリール」は、単独で、もしくは、組み合せて、親の芳香族環系の単一の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導された、６〜２０個の炭素原子の、一価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。アリールラジカルは、１、２または３個の環を含み得、このような環は、吊り下がった様式で互いに結合していても（例えば、ビフェニル）、縮合していても（例えば、ナフタレンまたはアントラセン）よい。いくつかのアリール基は、「Ａｒ」として例示的な構造において表される。代表的なアリール基としては、Ｃ６〜Ｃ１２の炭化水素部分（例えば、ベンゼンから誘導されたラジカル、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどであるがこれらに限定されない）が挙げられる。
【０１０４】
「アリールアルキル」とは、炭素原子（代表的には、末端もしくはｓｐ３の炭素原子）に結合した水素原子の１つが、アリールラジカルによって置き換えられている、非環式のアルキルラジカルをいう。代表的なアリールアルキル基としては、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられるが、これらに限定はされない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分（アルカニル基、アルケニル基もしくはアルキニル基を含む）は、１〜６個の炭素原子であり、そして、アリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
【０１０５】
「ヘテロアリールアルキル」とは、炭素原子（代表的には、末端もしくはｓｐ３の炭素原子）に結合した水素原子の１つが、ヘテロアリールラジカルによって置き換えられている、非環式のアルキルラジカルをいう。代表的なヘテロアリールアルキル基としては、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチルなどが挙げられるがこれらに限定はされない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分（アルカニル基、アルケニル基もしくはアルキニル基を含む）は、１〜６個の炭素原子であり、そして、ヘテロアリール部分は、５〜１４個の炭素原子、および、Ｎ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個の複素原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環員を有する単環（環員のうち２〜６個は炭素原子である）、または、７〜１０個の環員を有する二環式（環員のうち４〜９個は炭素原子であり、１〜３個は、Ｎ、Ｏ、ＰおよびＳから選択されるの複素原子である）（例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］の系）であり得る。
【０１０６】
アルキル基、アルキレン基、アリール基、アリールアルキル基およびヘテロアリールアルキル基は、置換され得、これらの基において、１つ以上の水素原子が、各々、置換基によって置換される。代表的な置換基としては、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２（ここで、各Ｘは、独立してハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）であり；そして、各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１８アルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護基もしくはプロドラッグ部分である）が挙げられるが、これらに限定はされない。上述のアルキレン基、アルケニレン基およびアルキニレン基もまた同様に置換され得る。
【０１０７】
「ヘテロアリール」は、複素環もしくはヘテロシクリルとしても公知であり、環系ラジカルであって、１個以上の環原子がヘテロ原子（例えば、窒素、酸素および硫黄）であるものをいう。このヘテロアリールラジカルは、５〜１４個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリールは、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する単環であってもよいし、または７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子およびＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環（例えば、ビシクロ［４，５］系、ビシクロ［５，５］系、ビシクロ［５，６］系、またはビシクロ［６，６］系）であってもよい。ヘテロアリール化合物は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．；「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８），特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章および第９章；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０から現在）、特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、および第２８巻；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６において記載されている。
【０１０８】
「リンカー」または「連結」とは、抗体を薬物部分に共有結合する共有結合または原子の鎖を含む化学部分を意味する。種々の実施形態において、リンカーは、Ｌとして特定される。リンカーとしては、二価ラジカル（例えば、アルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン）、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−のような部分、アルコキシの反復単位（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）およびアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、ＪｅｆｆａｍｉｎｅＴＭ）；ならびに二酸エステルおよびアミド（スクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネート、およびカプロアミドが挙げられる）が挙げられる。
【０１０９】
用語「キラル」とは、鏡像パートナーの重ね合わせできない特性を有する分子をいう一方で、用語「アキラル」とは、それらの鏡像パートナーが重ね合わせできる分子をいう。
【０１１０】
用語「立体異性体」とは、同一の化学組成を有するが、空間における原子または基の配置が異なる化合物をいう。
【０１１１】
「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル中心を有しかつその分子が互いに鏡像でない立体異性体をいう。ジアステレオマーは、異なる物理的特性（例えば、融点、沸点、スペクトル特性、および反応性）を有する。ジアステレオマーの混合物は、高分離能分析手順（例えば、電気泳動およびクロマトグラフィー）の下で分離し得る。
【０１１２】
「エナンチオマー」とは、互いに鏡像を重ね合わせられない化合物の立体異性体をいう。
【０１１３】
本明細書で使用される立体化学の定義および規約は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびにＥｌｉｅｌ，Ｅ．およびＷｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （１９９４）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学的に活性な形態で存在する（すなわち、それらは、平面偏光の面を回転する能力を有する）。光学的に活性な化合物を記載するにあたって、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳは、そのキラル中心について分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）は、その化合物による平面偏光の回転のしるしを示すように示される。（−）またはｌは、その化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞が付いた化合物は、右旋性である。所定の化学構造に関して、これらの立体異性体は、それらが互いに鏡像であることを除いて、同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーをいい、このような異性体の混合物はしばしば、鏡像体混合物といわれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体といわれ、これは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択性または立体特異性がない場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」および「ラセミ体」とは、光学活性を除いて、２つのエナンチオマー種の当モル混合物をいう。
【０１１４】
語句「薬学的に受容可能な塩」とは、本明細書で使用される場合、ＡＤＣの薬学的に受容可能な有機塩または無機塩をいう。例示的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩酸塩、臭素酸塩、ヨウ化物塩、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシネート（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸））塩が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に受容可能な塩は、別の分子（例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオン）の包含を伴い得る。この対イオンは、親化合物の電荷を安定させる任意の有機部分または無機部分であり得る。さらに、薬学的に受容可能な塩は、その構造において１つより多くの荷電した原子を有し得る。複数の荷電した原子が、薬学的に受容可能な塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。従って、薬学的に受容可能な塩は、１個以上の荷電した原子および／または１個以上の対イオンを有し得る。
【０１１５】
「薬学的に受容可能な溶媒和物」とは、１個以上の溶媒分子と１個のＡＤＣの会合をいう。薬学的に受容可能な溶媒和物を形成する溶媒の例としては、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、およびエタノールアミンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
（抗体−薬物結合体）
本発明の化合物は、抗癌活性に関する有用性を有するものを包含する。特に、この化合物は、結合体化した、すなわち、リンカーによって、薬物部分に共有結合した抗体を包含し、ここでこの薬物は、抗体に結合体化していない場合、細胞毒性効果または細胞増殖抑制性効果を有する。従って、薬物部分の生物学的活性は、抗体への結合体化によって調節される。本発明の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、腫瘍組織への有効用量の細胞毒性薬剤を選択的に送達し得、それによって、より大きな選択性、すなわち、より低い効果的用量が達成され得る。
【０１１７】
一実施形態において、ＡＤＣ、またはこのＡＤＣの細胞内代謝産物のバイオアベイラビリティーは、対応するメイタンシノイド化合物単独と比較した場合、哺乳動物において改善される。また、このＡＤＣのバイオアベイラビリティー、またはこのＡＤＣの細胞内代謝産物は、その対応する抗体単独（薬物部分もリンカーもなしの、このＡＤＣの抗体）と比較した場合、哺乳動物において改善される。
【０１１８】
一実施形態において、上記ＡＤＣのメイタンシノイド薬物部分は、抗体−薬物結合体が、細胞表面レセプターに結合するかまたは抗体−薬物結合体の抗体に対して特異的な細胞表面レセプターを有する細胞に入るまで、抗体から切断されない。この薬物部分は、抗体−薬物結合体が細胞に入った後に抗体から切断され得る。このメイタンシノイド薬物部分は、この化合物の抗体またはこの化合物の細胞内代謝産物から、酵素作用、加水分解、酸化、または他の機構によって、哺乳動物の内部で細胞内で切断され得る。例であって、特定作用機構に本発明を限定するとは決して意味せず、上記ＡＤＣのメイタンシノイド薬物部分の硫黄原子は、スルホン基またはスルホキシド基に酸化され得る。スルホンおよびスルホキシドに結合した炭素上のプロトンは、細胞内での一般的なまたは酵素的な触媒の条件下で除去され得、ＡＤＣの抗体から薬物部分を切断かつ分離するβ脱離断片化（ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を生じ得る。あるいは、他の電子吸引基（例えば、リンカー、抗体または薬物部分におけるアミド）が、細胞内で類似の断片化／切断機構をもたらし得る。
【０１１９】
抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、以下の式Ｉによって表され得るか：
【０１２０】
【化１９】
2008501029.tif 000003
またはその薬学的に受容可能な塩もしくは溶媒和物であり、ここで：
Ａｂは、ＥｒｂＢレセプターに結合するかまたは以下の（１）〜（３６）から選択される１種以上の腫瘍関連抗原もしくは細胞表面レセプターに結合する抗体である：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質レセプターＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１２０３）；
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００３４８６）；
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１２４４９）；
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）；
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）；
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質キャリアファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存型リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００６４２４）；
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマホリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、ｓｅｍａドメイン、トロンボスポンジン７回繰り返し（１型および１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン、（セマホリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型レセプター、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７７６３）；
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）；
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性レセプター潜在的カチオンチャネル（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃａｔｉｏｎ  ｃｈａｎｎｅｌ）、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７６３６）；
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）；
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン  バーウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）；
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連β）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００６２６）；
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０３０７６４）；
（１７）ＨＥＲ２（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）；
（１８）ＮＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
（１９）ＭＤＰ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）；
（２０）ＩＬ２０Ｒα（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）；
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００４４４２）；
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）；
（２４）ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）；
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３；
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子レセプター、ＢＬｙＳレセプター３、ＢＲ３、ＮＰ＿４４３１７７．１）；
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞レセプターＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＮＰ−００１７６２．１）；
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α；免疫グロブリン関連α；Ｉｇβと共有性相互作用し（ＣＤ７９Ｂ）、ＩｇＭ分子と表面で複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを変換する、Ｂ細胞特異的タンパク質；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７４．１）；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１；ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および体液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染においてそしておそらくＡＩＤＳ、リンパ腫、黒色腫および白血病の発症において役割を果たすＧタンパク共役レセプター；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７０７．１）；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合しＣＤ４＋  Ｔリンパ球にそのペプチドを提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２１１１．１）；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンドゲート制御イオンチャネル５；細胞外ＡＴＰによってゲートされ、シナプス伝達および神経発生に関与し得るイオンチャネル；欠乏症が特発性不安定膀胱の病態生理に寄与し得る；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２５５２．２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７３．１）；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質、Ｂ細胞活性化およびアポトーシスを調節する、機能の欠損が全身性エリテマトーデスを有する患者の疾患活性の増加に関与する、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５７３．１）；
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃレセプター様タンパク質１；Ｃ２型Ｉｇ様ドメインおよびＩＴＡＭドメインを含み、Ｂリンパ球分化において役割を果たし得る免疫グロブリンＦｃドメインに対する推定レセプター；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿４４３１７０．１）；
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプター転座関連２、Ｂ細胞発生およびリンパ腫形成において役割を果たし得る推定免疫レセプター；転座によるこの遺伝子の脱調節がいくつかのＢ細胞性悪性腫瘍において生じる、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿１１２５７１．１）；ならびに
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン、ＥＧＦ／ヘレグリンファミリーの成長因子およびホリスタチンに関連する、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１７９２７４）
ただし抗体は、ＴＡ．１ではない。
【０１２１】
Ｌは、非ジスルフィドリンカーである。Ｌとしては、以下の構造が挙げられるが、これらに限定されない：
【０１２２】
【化２０】
2008501029.tif 000004
ここで波線は、ＡｂおよびＤへの共有結合を示し；
Ｘは、以下であり：
【０１２３】
【化２１】
2008501029.tif 000005
Ｙは以下であり：
【０１２４】
【化２２】
2008501029.tif 000006
Ｒは、独立して、ＨもしくはＣ１-Ｃ６アルキルであり；そしてｎは１〜１２であり；
Ｄは、メイタンシノイド薬物部分である。メイタンシノイドとしては、以下の構造が挙げられるが、これらに限定されない：
【０１２５】
【化２３】
2008501029.tif 000007
ここで波線は、Ｌへの共有結合を示し；
Ｒは、独立して、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；そして
ｍは、１、２、または３である。
【０１２６】
この薬物：抗体の比または薬物負荷（ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ）は、式Ｉの化合物についてのｐによって表される。この薬物負荷値ｐは、１〜８である。式Ｉの化合物としては、種々に負荷されかつ１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個および８個の薬物部分がこの抗体に共有結合されている結合した抗体−薬物結合体の全ての混合物が挙げられる。
【０１２７】
別の実施形態において、Ａｂは、１個以上の腫瘍関連抗原または（１）〜（１６）および（１８）〜（３６）から選択される細胞表面レセプターに結合する（すなわち、ＥｒｂＢレセプターに結合しない）（ＨＥＲ２が挙げられる）抗体である。
【０１２８】
（抗体）
式Ｉの抗体単位（Ａｂ−）は、その範囲内に、レセプター、抗原または所定の標的細胞集団と会合する他の受容部分（ｒｅｃｅｐｔｉｖｅ  ｍｏｉｅｔｙ）と結合するか、または反応的に会合するかまたは複合体形成する抗体の任意の単位を含む。抗体は、任意のタンパク質またはタンパク質様分子であって、治療的にまたは他の方法で生物学的に改変されていると考えられる細胞集団の部分に結合するかまたはこの部分と複合体形成するかまたはこの部分と反応するものであり得る。一局面において、この抗体単位は、メイタンシノイド薬物部分を、この抗体単位が反応する特定の標的細胞集団に送達するように作用する。このような抗体としては、高分子量タンパク質（例えば、全長抗体および抗体フラグメント）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
本発明の抗体−薬物結合体を含む抗体は、好ましくは、それらのネイティブの野生型対応物の抗原結合能力を維持する。従って、本発明の抗体は、好ましくは、特異的に抗原に結合し得る。このような抗原としては、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面レセプタータンパク質および他の細胞表面分子、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織発生もしくは組織分化と関連する（例えば、組織発生もしくは組織分化に機能的に寄与することが公知であるかまたは疑われている）分子、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期調節に関与している分子、脈管形成（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）に関与する分子および新脈管形成（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）と関連する（例えば、新脈管形成に機能的に寄与することが公知であるかまたは疑われている）分子が挙げられる。この腫瘍関連抗原は、クラスター分化因子（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）（すなわち、ＣＤタンパク質）であり得る。本発明の抗体が結合することができる抗原は、上記分類のうちの１つの多くのサブセットであり得る。ここで上記分類の他のサブセットは、別個の特徴（目的の抗原に関して）を有する他の分子／抗原を含む。
【０１３０】
一実施形態において、上記抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の抗体は、ＥｒｂＢ遺伝子によってコードされるレセプターに特異的に結合する。この抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４から選択されるＥｒｂＢレセプターに特異的に結合し得る。このＡＤＣは、ＨＥＲ２レセプターの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合し得、ＨＥＲ２レセプターを過剰発現する腫瘍細胞の増殖を阻害する。上記ＡＤＣの抗体は、モノクローナル抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）、キメラ抗体、またはヒト化抗体であり得る。ヒト化抗体は、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７またはｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（トラスツズマブ）であり得る。上記抗体は、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）であり得る。
【０１３１】
式Ｉの抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）中の、癌の処置において有用であり得る抗体としては、細胞表面レセプターおよび腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。このような腫瘍関連抗原は、当該分野で公知でありかつ当該分野で周知の方法および情報を用いて抗体を生成することにおいて調製され得る。ガン診断および癌治療のための有効な細胞標的を発見しようとする試みにおいて、研究者らは、膜貫通ポリペプチドまたはそうでなければ、１個以上の正常非癌細胞と比較して、癌細胞の１つ以上の特定の癌細胞の表面に特異的に発現される腫瘍関連ポリペプチドを同定しようとしていた。しばしば、このような腫瘍関連ポリペプチドは、非癌細胞の表面と比較して、癌細胞の表面により豊富に発現される。このような腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体ベースの治療を介する破壊のために、癌細胞を特異的に標的とする能力を起こした。
【０１３２】
ＴＡＡの例としては、以下に列挙された腫瘍関連抗原（１）〜（３６）が挙げられるが、これらに限定されない。便宜上、これらの抗原に関する情報（これらの全ては、当該分野で公知である）は、以下に列挙され、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の核酸配列およびタンパク質配列の同定の慣例に従って、名称、別名、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号および主な参考文献を含む。ＴＡＡ（１）〜（３６）に対応する核酸配列およびタンパク質配列は、公のデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）において利用可能である。抗体による標的となる腫瘍関連抗原は、引用された参考文献において同定されている配列に対して、すくなくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の配列同一性を有するか、または引用された参考文献において見いだされる配列を有するＴＡＡと同じ生物学的特性もしくは特徴を実質的に示す全てのアミノ酸配列改変体およびアイソフォームを含む。例えば、改変配列を有するＴＡＡは、一般に、列挙される対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合し得る。この配列および本明細書中で具体的に記載される参考文献中の開示は、明確に参考として援用される。
【０１３３】
腫瘍関連抗原（１）〜（３６）：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質レセプターＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１２０３）
ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））；ＷＯ２００４０６３３６２（請求項２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＵＳ２００３１３４７９０−Ａ１（Ｐａｇｅ  ３８〜３９）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；Ｐａｇｅ  ２９６）；ＷＯ２００３０５５４４３（Ｐａｇｅ  ９１〜９２）；ＷＯ２００２９９１２２（実施例２；Ｐａｇｅ  ５２８〜５３０）；ＷＯ２００３０２９４２１（請求項６）；ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図１１２）；ＷＯ２００２９８３５８（請求項１；Ｐａｇｅ  １８３）；ＷＯ２００２５４９４０（Ｐａｇｅ  １００−１０１）；ＷＯ２００２５９３７７（Ｐａｇｅ  ３４９−３５０）；ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７；Ｐａｇｅ  ３７６）；ＷＯ２００１４８２０４（実施例；図４）ＮＰ＿００１１９４  骨形態形成タンパク質レセプター，ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−
相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８；ＮＰ＿００１１９４．１；ＡＹ０６５９９４
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００３４８６）
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ  ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８），Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．ら，（１９９２）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＷＯ２００２９９０７４（請求項１９；Ｐａｇｅ  １２７〜１２９）；ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７；Ｐａｇｅｓ  ２２２，３９３）；ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０；Ｐａｇｅ  ２９３）；ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３；Ｐａｇｅ  ９３〜９５）；ＷＯ２０００１４２２８（請求項５；Ｐａｇｅ  １３３〜１３６）；ＵＳ２００３２２４４５４（図３）；ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２；Ｐａｇｅ  １５０）；ＵＳ  ２００５０１０７５９５；ＵＳ  ２００５０１０６６４４；ＮＰ＿００３４７７    溶質キャリアファミリー７（陽イオン性アミノ酸トランスポーター，ｙ＋系），膜５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３  −Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  
相互参照：ＭＩＭ：６００１８２；  ＮＰ＿００３４７７．３；  ＮＭ＿０１５９２３；
ＮＭ＿００３４８６＿１
（３）ＳＴＥＡＰ１（６回膜貫通前立上皮抗原，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１２４４９）
Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１），Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．ら，（１９９９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）；ＷＯ２００４０６５５７７（請求項６）；ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｌ）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＵＳ２００３１５７０８９（実施例５）；ＵＳ２００３１８５８３０（実施例５）；ＵＳ２００３０６４３９７（図２）；ＷＯ２００２８９７４７（実施例５；Ｐａｇｅ  ６１８−６１９）；ＷＯ２００３０２２９９５（実施例９；図１３Ａ，実施例５３；Ｐａｇｅ  １７３，実施例２；図２Ａ）；
ＮＰ＿０３６５８１    ６回膜貫通前立腺上皮抗原
相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５；ＮＰ＿０３６５８１．１；ＮＭ＿０１２４４９＿１
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５，ＭＵＣ１６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））；ＷＯ２００４０４５５５３（請求項１４）；ＷＯ２００２９２８３６（請求項６；図１２）；ＷＯ２００２８３８６６（請求項１５；Ｐａｇｅ  １１６−１２１）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例１６）；ＵＳ２００３０９１５８０（請求項６）；ＷＯ２００２０６３１７（請求項６；Ｐａｇｅ  ４００−４０８）；
相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７；ＡＡＫ７４１２０．３；ＡＦ３６１４８６＿１
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ，ＭＳＬＮ，ＳＭＲ，巨核球増強因子，メソセリン，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）
Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．ら，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））；ＷＯ２００３１０１２８３（請求項１４）；（ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；Ｐａｇｅ  ２８７−２８８）；ＷＯ２００２１０１０７５（請求項４；Ｐａｇｅ  ３０８−３０９）；ＷＯ２００２７１９２８（Ｐａｇｅ  ３２０−３２１）；ＷＯ９４１０３１２（Ｐａｇｅ  ５２−５７）；
相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１；ＮＰ＿００５８１４．２；ＮＭ＿００５８２３＿１
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ，ＮＰＴＩＩｂ，ＳＬＣ３４Ａ２，溶質キャリアファミリー３４（リン酸ナトリウム），メンバー２，ＩＩ型ナトリウム依存性ホスフェートトランスポーター３ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００６４２４）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２），Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６２（２）：２８１−２８４（１９９９），  Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．ら，（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）；ＷＯ２００４０２２７７８（請求項２）；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；Ｐａｇｅ  ３２６）；ＥＰ８７５５６９（請求項１；Ｐａｇｅ  １７−１９）；ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０；Ｐａｇｅ  ３２９）；ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）；ＷＯ２００１７５１７７（請求項２４；Ｐａｇｅ  １３９−１４０）；
相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７；ＮＰ＿００６４１５．１；ＮＭ＿００６４２４＿１
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２，ＫＩＡＡ１４４５，Ｍｍ．４２０１５，ＳＥＭＡ５Ｂ，ＳＥＭＡＧ，セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ，ｓｅｍａドメイン，７回トロンボスポンジン反復（１型および１型様），膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン，（セマフォリン）５Ｂ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）
Ｎａｇａｓｅ  Ｔ．ら，（２０００）ＤＮＡ  Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）；ＷＯ２００４０００９９７（請求項１）；ＷＯ２００３００３９８４（請求項１）；ＷＯ２００２０６３３９（請求項１；Ｐａｇｅ  ５０）；ＷＯ２００１８８１３３（請求項１；Ｐａｇｅ  ４１−４３，４８−５８）；ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）；ＷＯ２００３１０１４００（請求項１１）；
アクセッション：Ｑ９Ｐ２８３；ＥＭＢＬ；ＡＢ０４０８７８；ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ；ＨＧＮＣ：１０７３７；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ，Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２，ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）；Ｒｏｓｓら，（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３；ＵＳ２００３１２９１９２（請求項２）；ＵＳ２００４０４４１８０（請求項１２）；ＵＳ２００４０４４１７９（請求項１１）；ＵＳ２００３０９６９６１（請求項１１）；ＵＳ２００３２３２０５６（実施例５）；ＷＯ２００３１０５７５８（請求項１２）；ＵＳ２００３２０６９１８（実施例５）；ＥＰ１３４７０４６（請求項１）；ＷＯ２００３０２５１４８（請求項２０）；
相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８；ＡＡＱ８８９９１．１；ＡＹ３５８６２８＿１
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型レセプター，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）；
Ｎａｋａｍｕｔａ  Ｍ．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１；Ｏｇａｗａ  Ｙ．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１；Ａｒａｉ  Ｈ．ら，Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２；Ａｒａｉ  Ｈ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３；Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ  Ｍ．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１；Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ．Ａ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３；Ｈａｅｎｄｌｅｒ  Ｂ．ら，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２；Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  Ｍ．ら，Ｇｅｎｅ  ２２８，４３−４９，１９９９；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  Ｃ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７；Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｙ．ら，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７；Ｖｅｒｈｅｉｊ  Ｊ．Ｂ．ら，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７；Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｅ．Ｇ．ら，Ｃｅｌｌ  ７９，１２５７−１２６６，１９９４；Ａｔｔｉｅ  Ｔ．ら，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５；Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ  Ａ．ら，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６；Ａｍｉｅｌ  Ｊ．ら，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．ら，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６；Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．ら，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８；Ｆｕｃｈｓ  Ｓ．ら，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１；Ｐｉｎｇａｕｌｔ  Ｖ．ら，（２００２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１１，１９８−２０６；ＷＯ２００４０４５５１６（請求項１）；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０４００００（請求項１５１）；ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２６１０８７（図１）；ＷＯ２００３０１６４９４（図６）；ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２；Ｐａｇｅ  １４４）；ＷＯ２００１９８３５１（請求項１；Ｐａｇｅ  １２４−１２５）；ＥＰ５２２８６８（請求項８；図２）；ＷＯ２００１７７１７２（請求項１；Ｐａｇｅ  ２９７−２９９）；ＵＳ２００３１０９６７６；ＵＳ６５１８４０４（図３）；ＵＳ５７７３２２３（請求項１ａ；Ｃｏｌ  ３１−３４）；ＷＯ２００４００１００４；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４，仮想タンパク質  ＦＬＪ２０３１５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７７６３）；
ＷＯ２００３１０４２７５（請求項１）；ＷＯ２００４０４６３４２（実施例２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００３０８３０７４（請求項１４；Ｐａｇｅ  ６１）；ＷＯ２００３０１８６２１（請求項１）；ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図９３）；ＷＯ２００１６６６８９（実施例６）；
相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４；ＮＰ＿０６０２３３．２；ＮＭ＿０１７７６３＿１
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９，ＩＰＣＡ−１，ＰＣＡＮＡＰ１，ＳＴＡＭＰ１，ＳＴＥＡＰ２，ＳＴＭＰ，前立腺癌関連遺伝子１，前立腺癌関連タンパク質１，６回膜貫通前立腺上皮抗原２，６回膜貫通前立腺タンパク質，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）
Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））；ＷＯ２００３０８７３０６；ＵＳ２００３０６４３９７（請求項１；図１）；ＷＯ２００２７２５９６（請求項１３；Ｐａｇｅ  ５４−５５）；ＷＯ２００１７２９６２（請求項１；図４Ｂ）；ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１１）；ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１６）；ＵＳ２００４００５５９８（請求項２２）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＵＳ２００３０６０６１２（請求項１２；図１０）；ＷＯ２００２２６８２２（請求項２３；図２）；ＷＯ２００２１６４２９（請求項１２；図１０）；
相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８；ＡＡＮ０４０８０．１；ＡＦ４５５１３８＿１
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０，ＦＬＪ２００４１，ＴＲＰＭ４，ＴＲＰＭ４Ｂ，一過性レセプター電位陽イオン性チャネル，サブファミリーＭ，メンバー４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７６３６）
Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１），Ｃｅｌｌ  １０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））；ＵＳ２００３１４３５５７（請求項４）；ＷＯ２０００４０６１４（請求項１４；Ｐａｇｅ  １００−１０３）；ＷＯ２００２１０３８２（請求項１；図９Ａ）；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７；Ｐａｇｅ  ３９１）；ＵＳ２００３２１９８０６（請求項４）；ＷＯ２００１６２７９４（請求項１４；図１Ａ−Ｄ）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６；ＮＰ＿０６０１０６．２；ＮＭ＿０１７６３６＿１
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ，ＣＲ１，ＣＲＧＦ，ＣＲＩＰＴＯ，ＴＤＧＦ１，奇形癌由来増殖因子，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）
Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））；ＵＳ２００３２２４４１１（請求項１）；ＷＯ２００３０８３０４１（実施例１）；ＷＯ２００３０３４９８４（請求項１２）；ＷＯ２００２８８１７０（請求項２；Ｐａｇｅ  ５２−５３）；ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図５８）；ＷＯ２００２１６４１３（請求項１；Ｐａｇｅ  ９４−９５，１０５）；ＷＯ２００２２２８０８（請求項２；図１）；ＵＳ５８５４３９９（実施例２；Ｃｏｌ  １７−１８）；ＵＳ５７９２６１６（図２）；
相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５；ＮＰ＿００３２０３．１；ＮＭ＿００３２１２＿１
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体レセプター２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルスレセプター）またはＨｓ．７３７９２Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）
Ｆｕｊｉｓａｋｕら，（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８；Ｍｏｏｒｅ  Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７；Ｂａｒｅｌ  Ｍ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６；Ｓｉｎｈａ  Ｓ．Ｋ．ら，（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０；ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）；ＵＳ２００４００５５３８（実施例１）；ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）；ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）；ＷＯ９１０２５３６（図９．１−９．９）；ＷＯ２００４０２０５９５（請求項１）；
アクセッション：Ｐ２００２３；Ｑ１３８６６；Ｑ１４２１２；ＥＭＢＬ；Ｍ２６００４；ＡＡＡ３５７８６．１．
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ，ＣＤ７９β，ＩＧｂ（免疫グロブリン関連β），Ｂ
２９，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）１００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（９）：３０６８−３０７６，Ｍｕｌｌｅｒら，（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）；ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２，図１４０）；ＷＯ２００３０８７７６８，ＵＳ２００４１０１８７４（請求項１，ｐａｇｅ  １０２）；ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＵＳ２００２１５０５７３（請求項５，ｐａｇｅ  １５）；ＵＳ５６４４０３３；ＷＯ２００３０４８２０２（請求項１，ｐａｇｅｓ  ３０６および３０９）；ＷＯ９９／５５８６５８，ＵＳ６５３４４８２（請求項１３，図１７Ａ／Ｂ）；ＷＯ２０００５５３５１（請求項１１，ｐａｇｅｓ  １１４５−１１４６）；
相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５；ＮＰ＿０００６１７．１；ＮＭ＿０００６２６＿１
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４，ＩＲＴＡ４，ＳＰＡＰ１Ａ（ホスファターゼアンカータンパク質１ａを含むＳＨ２ドメイン），ＳＰＡＰ１Ｂ，ＳＰＡＰ１Ｃ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０３０７６４，ＡＹ３５８１３０）
Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３），Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５４（２）：８７−９５（２００２），Ｂｌｏｏｄ  ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１），Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．ら，（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５；ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）；ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（請求項５；図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２）；ＷＯ２００３０９７８０３（請求項１２）；ＷＯ２００３０８９６２４（請求項２５）；
相互参照：  ＭＩＭ：６０６５０９；  ＮＰ＿１１０３９１．２；  ＮＭ＿０３０７６４＿１
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）
Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）；Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ３１９，２３０−２３４，１９８６；Ｓｅｍｂａ  Ｋ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５；ＳｗｉｅｒｃｚＪ．Ｍ．ら，Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４；Ｋｕｈｎｓ  Ｊ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９；Ｃｈｏ  Ｈ．−Ｓ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ４２１，７５６−７６０，２００３；Ｅｈｓａｎｉ  Ａ．ら，（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １５，４２６−４２９；ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）；ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｉ）；ＷＯ２００４００９６２２；ＷＯ２００３０８１２１０；ＷＯ２００３０８９９０４（請求項９）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＵＳ２００３１１８５９２；ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）；ＷＯ２００３０５５４３９（請求項２９；図１Ａ−Ｂ）；ＷＯ２００３０２５２２８（請求項３７；図５Ｃ）；ＷＯ２００２２２６３６（実施例１３；Ｐａｇｅ  ９５−１０７）；ＷＯ２００２１２３４１（請求項６８；図７）；ＷＯ２００２１３８４７（Ｐａｇｅ  ７１−７４）；ＷＯ２００２１４５０３（Ｐａｇｅ  １１４−１１７）；ＷＯ２００１５３４６３（請求項２；  Ｐａｇｅ  ４１−４６）；ＷＯ２００１４１７８７（Ｐａｇｅ  １５）；ＷＯ２０００４４８９９（請求項５２；図７）；ＷＯ２０００２０５７９（請求項３；図２）；ＵＳ５８６９４４５（請求項３；Ｃｏｌ  ３１−３８）；ＷＯ９６３０５１４（請求項２；Ｐａｇｅ  ５６−６１）；ＥＰ１４３９３９３（請求項７）；ＷＯ２００４０４３３６１（請求項７）；ＷＯ２００４０２２７０９；ＷＯ２００１００２４４（実施例３；図４）；
アクセッション：Ｐ０４６２６；ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６７；ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６１；ＡＡＡ３５８０８．１．
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）；
Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｔ．ら，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３，５９−６６，１９８８；Ｔａｗａｒａｇｉ  Ｙ．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２；ＷＯ２００４０６３７０９；ＥＰ１４３９３９３（請求項７）；ＷＯ２００４０４４１７８（実施例４）；ＷＯ２００４０３１２３８；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７；Ｐａｇｅ  ４２７）；ＷＯ２００２６０３１７（請求項２）；
アクセッション：Ｐ４０１９９；Ｑ１４９２０；ＥＭＢＬ；Ｍ２９５４１；ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１８７２８；
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３；Ｐａｇｅ  ８５−８７）；ＪＰ０５００３７９０（図６−８）；ＷＯ９９４６２８４（図９）；
相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０；ＡＡＨ１７０２３．１；ＢＣ０１７０２３＿１
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ，ＺＣＹＴＯＲ７，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）；
Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．ら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｍｕｎｇａｌｌ  Ａ．Ｊ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ４２５，８０５−８１１，２００３；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  Ｈ．ら，Ｃｅｌｌ  １０４，９−１９，２００１；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１；Ｐａｒｒｉｓｈ−ＮｏｖａｋＪ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２；Ｐｌｅｔｎｅｖ  Ｓ．ら，（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２：１２６１７−１２６２４；Ｓｈｅｉｋｈ  Ｆ．ら，（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＵＳ２００４００５３２０（実施例５）；ＷＯ２００３０２９２６２（Ｐａｇｅ  ７４−７５）；ＷＯ２００３００２７１７（請求項２；Ｐａｇｅ  ６３）；ＷＯ２００２２２１５３（Ｐａｇｅ  ４５−４７）；ＵＳ２００２０４２３６６（Ｐａｇｅ  ２０−２１）；ＷＯ２００１４６２６１（Ｐａｇｅ  ５７−５９）；ＷＯ２００１４６２３２（Ｐａｇｅ  ６３−６５）；ＷＯ９８３７１９３（請求項１；Ｐａｇｅ  ５５−５９）；
アクセッション：Ｑ９ＵＨＦ４；Ｑ６ＵＷＡ９；Ｑ９６ＳＨ８；ＥＭＢＬ；ＡＦ１８４９７１；ＡＡＦ０１３２０．１．
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ，ＢＥＨＡＢ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）
Ｇａｒｙ  Ｓ．Ｃ．ら，Ｇｅｎｅ  ２５６，１３９−１４７，２０００；Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．ら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２；ＵＳ２００３１８６３７２（請求項１１）；ＵＳ２００３１８６３７３（請求項１１）；ＵＳ２００３１１９１３１（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２２（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２６（請求項１）；ＵＳ２００３１１９１２１（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２９（請求項１）；ＵＳ２００３１１９１３０（請求項１）；ＵＳ２００３１１９１２８（請求項１；図５２）；ＵＳ２００３１１９１２５（請求項１）；ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）；ＷＯ２００２０２６３４（請求項１）；
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ，ＥＲＫ，Ｈｅｋ５，ＥＰＨＴ３，Ｔｙｒｏ５，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００４４４２）
Ｃｈａｎ，Ｊ．およびＷａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））；ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）；ＷＯ２０００５３２１６（請求項１；Ｐａｇｅ  ４１）；ＷＯ２００４０６５５７６（請求項１）；ＷＯ２００４０２０５８３（請求項９）；ＷＯ２００３００４５２９（Ｐａｇｅ  １２８−１３２）；ＷＯ２０００５３２１６（請求項１；Ｐａｇｅ  ４２）；
相互参照：ＭＩＭ：６００９９７；ＮＰ＿００４４３３．２；ＮＭ＿００４４４２＿１
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）
ＵＳ２００４０１０１８９９（請求項２）；ＷＯ２００３１０４３９９（請求項１１）；ＷＯ２００４０００２２１（図３）；ＵＳ２００３１６５５０４（請求項１）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例２）；ＵＳ２００３０６５１４３（図６０）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；Ｐａｇｅ  ２９９）；ＵＳ２００３０９１５８０（実施例２）；ＷＯ２００２１０１８７（請求項６；図１０）；ＷＯ２００１９４６４１（請求項１２；図７ｂ）；ＷＯ２００２０２６２４（請求項１３；図１Ａ−１Ｂ）；ＵＳ２００２０３４７４９（請求項５４；Ｐａｇｅ  ４５−４６）；ＷＯ２００２０６３１７（実施例２；Ｐａｇｅ  ３２０−３２１，請求項３４；Ｐａｇｅ  ３２１−３２２）；ＷＯ２００２７１９２８（Ｐａｇｅ  ４６８−４６９）；ＷＯ２００２０２５８７（実施例１；図１）；ＷＯ２００１４０２６９（実施例３；Ｐａｇｅｓ  １９０−１９２）；ＷＯ２０００３６１０７（実施例２；Ｐａｇｅ  ２０５−２０７）；ＷＯ２００４０５３０７９（請求項１２）；ＷＯ２００３００４９８９（請求項１）；ＷＯ２００２７１９２８（Ｐａｇｅ  ２３３−２３４，４５２−４５３）；ＷＯ０１１６３１８；
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）
Ｒｅｉｔｅｒ  Ｒ．Ｅ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８；Ｇｕ  Ｚ．ら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，１２８８−１２９６，２０００；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）２７５（３）：７８３−７８８；ＷＯ２００４０２２７０９；ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）；ＵＳ２００４０１８５５３（請求項１７）；ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）；ＷＯ２００２８１６４６（請求項１；Ｐａｇｅ  １６４）；ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０；Ｐａｇｅ  ２８８）；ＷＯ２００１４０３０９（実施例１；図１７）；ＵＳ２００１０５５７５１（実施例１；図１ｂ）；ＷＯ２０００３２７５２（請求項１８；図１）；ＷＯ９８５１８０５（請求項１７；Ｐａｇｅ  ９７）；ＷＯ９８５１８２４（請求項１０；Ｐａｇｅ  ９４）；ＷＯ９８４０４０３（請求項２；図１Ｂ）；アクセッション：Ｏ４３６５３；ＥＭＢＬ；ＡＦ０４３４９８；ＡＡＣ３９６０７．１．
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）；
ＡＡＰ１４９５４    脂肪腫  ＨＭＧＩＣ  融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ
種：Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）；ＷＯ２００３０００８４２（請求項１）；ＷＯ２００３０２３０１３（実施例３，請求項２０）；ＵＳ２００３１９４７０４（請求項４５）；
相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９；ＡＡＰ１４９５４．１；ＡＹ２６０７６３＿１
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子レセプター，ＢＬｙＳ  レセプター３，ＢＲ３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１１６４５６）；ＢＡＦＦレセプター／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）；ＷＯ２００４０５８３０９；ＷＯ２００４０１１６１１；ＷＯ２００３０４５４２２（実施例；Ｐａｇｅ  ３２−３３）；ＷＯ２００３０１４２９４（請求項３５；図６Ｂ）；ＷＯ２００３０３５８４６（請求項７０；Ｐａｇｅ  ６１５−６１６）；ＷＯ２００２９４８５２（Ｃｏｌ  １３６−１３７）；ＷＯ２００２３８７６６（請求項３；Ｐａｇｅ  １３３）；ＷＯ２００２２４９０９（実施例３；図３）；
相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９；ＮＰ＿４４３１７７．１；ＮＭ＿０５２９４５＿１；ＡＦ１３２６００
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞レセプターＣＤ２２−Ｂアイソフォーム，ＢＬ−ＣＡＭ，Ｌｙｂ−８，Ｌｙｂ８，ＳＩＧＬＥＣ−２，ＦＬＪ２２８１４，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＫ０２６４６７）；
Ｗｉｌｓｏｎら，（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６；ＷＯ２００３０７２０３６（請求項１；図１）；
相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６；ＮＰ＿００１７６２．１；ＮＭ＿００１７７１＿１
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ，ＣＤ７９α，免疫グロブリン関連α，Ｉｇβと共有結合的に相互作用し、Ｉｇ  Ｍ分子と細胞表面上で複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質（ＣＤ７９Ｂ））  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｐｇｇｐｇｖ．．．ｄｖｑｌｅｋｐ（１．．２２６；２２６  ａａ），ｐＩ：４．８４，ＭＷ：２５０２８    ＴＭ：２［Ｐ］Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１９ｑ１３．２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７４．１０）
ＷＯ２００３０８８８０８，ＵＳ２００３０２２８３１９；ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）；ＵＳ２００２１５０５７３（請求項４，ｐａｇｅｓ  １３−１４）；ＷＯ９９５８６５８（請求項１３，図１６）；ＷＯ９２０７５７４（図１）；ＵＳ５６４４０３３；Ｈａら，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１；Ｍｕｅｌｌｅｒら，（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら，（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４０（４）：２８７−２９５；Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅら，（１９９２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６；Ｙｕら，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７；Ｓａｋａｇｕｃｈｉら，（１９８８）ＥＭＢＯ  Ｊ．７（１１）：３４５７−３４６４；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫レセプター１，ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および体液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染、およびおそらく、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、および白血病の発生においてにおいて役割を果たすＧタンパク質共役レセプター）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｎｙｐｌｔｌ．．．ａｔｓｌｔｔｆ（１．．３７２；３７２  ａａ），ｐＩ：８．５４  ＭＷ：４１９５９    ＴＭ：７［Ｐ］Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１１ｑ２３．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７０７．１）
ＷＯ２００４０４００００；ＷＯ２００４０１５４２６；ＵＳ２００３１０５２９２（実施例２）；ＵＳ６５５５３３９（実施例２）；ＷＯ２００２６１０８７（図１）；ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０，ｐａｇｅ  ２６９）；ＷＯ２００１７２８３０（ｐａｇｅｓ  １２−１３）；ＷＯ２０００２２１２９（実施例１，ｐａｇｅｓ  １５２−１５３，実施例２，ｐａｇｅｓ  ２５４−２５６）；ＷＯ９９２８４６８（請求項１，ｐａｇｅ  ３８）；ＵＳ５４４００２１（実施例２，ｃｏｌ  ４９−５２）；ＷＯ９４２８９３１（ｐａｇｅｓ  ５６−５８）；ＷＯ９２１７４９７（請求項７，図５）；Ｄｏｂｎｅｒら，（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９；Ｂａｒｅｌｌａら，（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合しかつＣＤ４＋  Ｔ  リンパ球にこのペプチドを提示するＭＨＣクラスＩＩ分子のβサブユニット（Ｉａ抗原））ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｇｓｇｗｖｐ．．．ｖｌｌｐｑｓｃ  （１．．２７３；２７３  ａａ，ｐＩ：６．５６  ＭＷ：３０８２０    ＴＭ：１［Ｐ］  Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：６ｐ２１．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２１１１．１）
Ｔｏｎｎｅｌｌｅら，（１９８５）ＥＭＢＯ  Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７；Ｊｏｎｓｓｏｎら，（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２９（６）：４１１−４１３；Ｂｅｃｋら，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇら，（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３；Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓら，（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６；Ｂｅｃｋら，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３；Ｎａｒｕｓｅら，（２００２）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ５９：５１２−５１９；ＷＯ９９５８６５８（請求項１３，図１５）；ＵＳ６１５３４０８（Ｃｏｌ  ３５−３８）；ＵＳ５９７６５５１（ｃｏｌ  １６８−１７０）；ＵＳ６０１１１４６（ｃｏｌ  １４５−１４６）；Ｋａｓａｈａｒａら，（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３０（１）：６６−６８；Ｌａｒｈａｍｍａｒら，（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性レセプターＰ２Ｘリガンドゲート制御イオンチャネル５，細胞外ＡＴＰによってゲート制御されたイオンチャネルは、シナプス伝達および神経発生に関与し得る。欠損は、突発性排尿筋不安定の病態生理に寄与し得る）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｇｑａｇｃｋ．．．ｌｅｐｈｒｓｔ  （１．．４２２；４２２  ａａ），ｐＩ：７．６３，  ＭＷ：４７２０６    ＴＭ：１［Ｐ］  Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：  １７ｐ１３．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２５５２．２）
Ｌｅら，（１９９７）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９；ＷＯ２００４０４７７４９；ＷＯ２００３０７２０３５（請求項１０）；Ｔｏｕｃｈｍａｎら，（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３；ＷＯ２００２２２６６０（請求項２０）；ＷＯ２００３０９３４４４（請求項１）；ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）；ＷＯ２００３０２９２７７（ｐａｇｅ  ８２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２，Ｌｙｂ−２）ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９  ａａ），ｐＩ：８．６６，  ＭＷ：４０２２５    ＴＭ：１［Ｐ］  Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：  ９ｐ１３．３，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７３．１）
ＷＯ２００４０４２３４６（請求項６５）；ＷＯ２００３０２６４９３（ｐａｇｅｓ  ５１−５２，５７−５８）；ＷＯ２０００７５６５５（ｐａｇｅｓ  １０５−１０６）；Ｖｏｎ  Ｈｏｅｇｅｎら，（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇら，（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３；
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５），Ｂ細胞活性化およびアポトーシスを調節するロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質，機能の喪失は、全身性エリテマトーデスを有する患者において増大した疾患活性と関連する）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍａｆｄｖｓｃ．．．ｒｗｋｙｑｈｉ  （１．．６６１；６６１  ａａ），ｐＩ：６．２０，  ＭＷ：７４１４７    ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：５ｑ１２，  Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５７３．１）
ＵＳ２００２１９３５６７；ＷＯ９７０７１９８（請求項１１，ｐａｇｅｓ  ３９−４２）；Ｍｉｕｒａら，（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３８（３）：２９９−３０４；Ｍｉｕｒａら，（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９２：２８１５−２８２２；ＷＯ２００３０８３０４７；ＷＯ９７４４４５２（請求項８，ｐａｇｅｓ  ５７−６１）；ＷＯ２０００１２１３０（ｐａｇｅｓ  ２４−２６）；
（３４）ＦｃＲＨ１  （Ｆｃレセプター様タンパク質１，Ｃ２型Ｉｇ様ドメインおよびＩＴＡＭドメインを含む免疫グロブリンＦｃドメインの推定レセプターは、Ｂリンパ球分化において役割を有し得る）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｌｐｒｌｌｌ．．．ｖｄｙｅｄａｍ（１．．４２９；４２９  ａａ），ｐＩ：  ５．２８，ＭＷ：４６９２５    ＴＭ：１［Ｐ］Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１ｑ２１−１ｑ２２，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿４４３１７０．１）ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（請求項６，図１８Ｅ−１−１８−Ｅ−２）；Ｄａｖｉｓら，（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ
９８（１７）：９７７２−９７７７；ＷＯ２００３０８９６２４（請求項８）；ＥＰ１３４７０４６（請求項１）；ＷＯ２００３０８９６２４（請求項７）；
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連２，Ｂ細胞発生およびリンパ腫発生において考えられる役割を有する推定イムノレセプター；トランスロケーションによる遺伝子の制御解除は、いくつかのＢ細胞悪性疾患において生じる）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｌｌｗｖｉｌ．．．ａｓｓａｐｈｒ  （１．．９７７；  ９７７  ａａ），ｐＩ：６．８８    ＭＷ：１０６４６８  ＴＭ：１  ［Ｐ］Ｇｅｎｅ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ：１ｑ２１，Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ヒト：ＡＦ３４３６６２，ＡＦ３４３６６３，ＡＦ３４３６６４，ＡＦ３４３６６５，ＡＦ３６９７９４，ＡＦ３９７４５３，ＡＫ０９０４２３，ＡＫ０９０４７５，ＡＬ８３４１８７，ＡＹ３５８０８５；マウス：ＡＫ０８９７５６，ＡＹ１５８０９０，ＡＹ５０６５５８；ＮＰ＿１１２５７１．１
ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２，図９７）；Ｎａｋａｙａｍａら，（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７；ＷＯ２００３０７７８３６；ＷＯ２００１３８４９０（請求項３，図１８Ｂ−１−１８Ｂ−２）；
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２，ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ，ＴＰＥＦ，ＨＰＰ１，ＴＲ，推定膜貫通プロテオグリカン，増殖因子およびフォリスタチンのＥＧＦ／ヘレグリンファミリーに関連）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍｖｌｗｅｓｐ．．．ｒａｓｔｒｌｉ  （１．．３７４；３７４  ａａ，ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＤ５５７７６，ＡＡＦ９１３９７，ＡＡＧ４９４５１，ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ：ＮＰ＿０５７２７６；ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ：２３６７１；ＯＭＩＭ：６０５７３４；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｑ９ＵＩＫ５；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１７９２７４；ＡＹ３５８９０７，ＣＡＦ８５７２３，ＣＱ７８２４３６
ＷＯ２００４０７４３２０（配列番号８１０）；ＪＰ２００４１１３１５１（配列番号２，４，８）；ＷＯ２００３０４２６６１（配列番号５８０）；ＷＯ２００３００９８１４（配列番号４１１）；ＥＰ１２９５９４４（ｐａｇｅｓ  ６９−７０）；ＷＯ２００２３０２６８（ｐａｇｅ  ３２９）；ＷＯ２００１９０３０４（配列番号２７０６）；ＵＳ２００４２４９１３０；ＵＳ２００４０２２７２７；ＷＯ２００４０６３３５５；ＵＳ２００４１９７３２５；ＵＳ２００３２３２３５０；ＵＳ２００４００５５６３；ＵＳ２００３１２４５７９；ＵＳ  ６４１０５０６；ＵＳ  ６６４２００６ｌ；Ｈｏｒｉｅら，（２０００）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６７：１４６−１５２；Ｕｃｈｉｄａら，（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２；Ｌｉａｎｇら，（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２；Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓら，（２００１）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ  １５；９４（２）：１７８−８４。
【０１３４】
（抗体の生成）
種々の方法が、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）を生成するために使用されてきた。ハイブリドーマ技術（これは、単一の型の抗体を生成するクローン化細胞株に言及する）は、種々の種（マウス（ｍｏｕｓｅ）（マウス（ｍｕｒｉｎｅ））、ハムスター、ラットおよびヒトが挙げられる）の細胞を利用する。ＭＡｂ（キメラ抗体およびヒト化抗体を含む）を調製する他の方法は、遺伝子操作、すなわち、組換えＤＮＡ技術を利用する。
【０１３５】
ポリクローナル抗体は、関連する抗原およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物において惹起され得る。モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体集団から得られる。すなわち、その集団を構成する個々の抗体が、少量で存在し得る天然に存在する考えられる変異を除いて、同一である。
【０１３６】
ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロミエローマ（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の生成について記載されてきた（Ｋｏｚｂｏｒ，（１９８４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１，およびＢｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、その抗原に対して指向するモノクローナル抗体の生成についてアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって生成されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫ソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって決定され得る。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら，（１９８０）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０のスキャッチャード分析によって決定され得る。
【０１３７】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定される。このハイブリドーマ細胞は、ＤＮＡの供給源として働く。一旦単離されると、このＤＮＡは、発現ベクターの中に配置され得、次いでその発現ベクターは、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を獲得するために、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または別の状況では抗体タンパク質を産生しないミエローマ細胞）にトランスフェクトされる（ＵＳ  ２００５／００４８５７２；ＵＳ  ２００４／０２２９３１０）。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａら，（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６−２６２およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９２）  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−１８８が挙げられる。
【０１３８】
さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントは、それぞれ、ファージライブラリーを使用するマウスおよびヒトの抗体の単離を記載する、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；およびＭａｒｋｓら，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載される技術を使用して生成される抗体ファージライブラリーから単離され得る。その後の刊行物は、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら、（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）ならびに非常に大規模なファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしての組み合わせ感染およびインビボ組換えによる高い親和性の（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生を記載している（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替技術である。
【０１３９】
ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインをコードする配列に置換することによってか（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｓ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１、または免疫グロブリンコード配列を、非免疫グロブリンポリペプチドをコードする配列の全てまたは一部に共有結合させることによって改変され得る。
【０１４０】
代表的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗原に対する特異性を有する一つの抗原結合部位および異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製するために、抗体の定常ドメインに対して置換されるか、またはそれらは、抗体の一つの抗原結合部位の可変ドメインに対して置換される。
【０１４１】
本発明の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）において使用される上記抗体（Ａｂ）の生成についての例示的技術に関する説明が続けられる。抗体の生成は、抗ＥｒｂＢ２抗体に関して例示されるが、ＥｒｂＢレセプターファミリーの他のメンバーに対する抗体、ならびに任意の他のレセプターまたは腫瘍関連抗原または標的が、類似の様式において生成および改変され得ることは当業者にとって明らかである。
【０１４２】
抗体の生成のために使用されるべきＥｒｂＢ２抗原は、例えば、所望のエピトープを含む、ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインの可溶性形態またはその一部であり得る。あるいは、ＥｒｂＢ２をそれらの細胞表面に発現する細胞（例えば、ＥｒｂＢ２を過剰発現するように形質転換されたＮＩＨ−３Ｔ３細胞）；または癌細胞株（例えば、ＳＫ−ＢＲ−３細胞（Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら，（１９９１）  ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１−８６９５））は、抗体を生成するために使用され得る。抗体を生成するために有用な他の形態のＥｒｂＢ２は、当業者に明らかである。
【０１４３】
実施例１は、例示的なヒト化抗ＥｒｂＢ２抗体の生成を記載する。このヒト化抗体は、例えば、ヒト可変重鎖ドメインに組み込まれる非ヒト超可変領域残基を含み得、そしてＫａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載される可変ドメイン番号付けシステムを利用して、６９Ｈ、７１Ｈおよび７３Ｈからなる群より選択される位置で、フレームワーク領域（ＦＲ）置換をさらに含み得る。一実施形態において、このヒト化抗体は、６９Ｈ、７１Ｈおよび７３Ｈの位置の２つまたは３つの位置においてＦＲ置換を含む。
【０１４４】
ヒト化の代替法として、ヒト抗体が生成され得る。例えば、免疫に際して、内因性免疫グロブリン生成の非存在かでヒト抗体の完全レパートリーを生成することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生成することが今や可能である（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら，（１９９３）Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３；およびＵＳ  ５５９１６６９；ＵＳ  ５５８９３６９；ＵＳ  ５５４５８０７）。
【０１４５】
あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，（１９９０）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３）は、免疫していないドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体または抗体フラグメントを生成するために使用され得る（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１）。免疫していないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーが構築され得、そして多岐のアレイの抗原（自己抗原を含む）に対する抗体は、以下に記載される技術に本質的に従って単離され得る（Ｍａｒｋｓら，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；Ｇｒｉｆｆｉｔｈら，（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４；ＵＳ  ５５６５３３２；ＵＳ  ５５７３９０５）。ヒト抗体はまた、インビトロで活性化したＢ細胞により生成され得る（ＵＳ  ５５６７６１０；ＵＳ  ５２２９２７５）。ヒト抗ＥｒｂＢ２抗体が記載されている（ＵＳ  ５７７２９９７およびＷＯ  ９７／００２７１）。
【０１４６】
種々の技術が抗体フラグメントの産生のために開発されてきた。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、以下を参照のこと：Ｍｏｒｉｍｏｔｏら，（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７；およびＢｒｅｎｎａｎら，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１）。フラグメントは、組換え宿主細胞によっておよび上記で議論された抗体ファージライブラリーから直接産生され得る。Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、化学的に結合されて、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成し得る（Ｃａｒｔｅｒら，（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントの産生のための他の技術は、当業者に明白である。他の実施形態において、えり抜きの抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。以下を参照のこと：ＷＯ  ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号。この抗体フラグメントはまた、「線状抗体」（ｌｉｎｅａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）であり得る（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるとおり）。そのような線状抗体フラグメントは、単一特異性または二重特異性であり得る。
【０１４７】
少なくとも２つの異なるエピトープについての結合特異性を有する二重特異性抗体（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら，（１９８３），Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９）は、ＥｒｂＢ２タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＥｒｂＢ２結合部位と、ＥＧＦＲ、Ｅｒｂ３および／またはＥｒｂＢ４についての結合部位とを兼ね備え得る。あるいは、抗ＥｒｂＢ２アームは、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）のような白血球上のトリガー分子に結合するアームと組み合わされて、またはＩｇＧについてのＦｃレセプター（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）））、細胞防御機構をＥｒｂＢ２発現細胞へと集中させ得る。二重特異性抗体はまた、ＥｒｂＢ２を発現する細胞に対して細胞毒性因子を局在化させるために使用され得る（ＷＯ  ９６／１６６７３；ＵＳ  ５８３７２３４；ＷＯ９８／０２４６３；ＵＳ  ５８２１３３７）。二重特異的抗体のための精製法が、開示された（ＷＯ  ９３／０８８２９；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，（１９９１）  ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９；ＷＯ  ９４／０４６９０；Ｓｕｒｅｓｈら，（１９８６）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０；ＵＳ  ５７３１１６８）。二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを用いて（Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，（１９９２）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３）、および単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を用いて（Ｇｒｕｂｅｒら，（１９９４）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８）生成され得る。
【０１４８】
例えば、インタクトな抗体がＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成するためにタンパク質分解により切断される化学的結合を用いて、抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成するための技術もまた、文献に記載されている。調製され得る（Ｂｒｅｎｎａｎら，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１）。Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから回収され得、そして二重特異的抗体を形成するために化学的に結合され得る（Ｓｈａｌａｂｙら，（１９９２）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５）。「ダイアボディー」技術は、二重特異的抗体フラグメントを作成するための代替法を提供する（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，（１９９３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８）。
【０１４９】
二価より多い価数を有する抗体が企図される。３つ以上の抗原結合部位を有し、２つ以上の可変ドメインを有する多価の「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）」抗体は、上記抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に生成され得る（ＵＳ  ２００２／０００４５８６；ＷＯ  ０１／７７３４２）。例えば、三重特異的抗体（ｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）が、調製され得る（Ｔｕｔｔら，（１９９１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０）。
【０１５０】
抗体のアミノ酸配列改変が企図される。例えば、腫瘍関連抗原に結合する抗体の変異体および種々のアイソフォームは、その抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが企図される。抗体のアミノ酸配列改変体は、適切なヌクレオチド変化を、その抗体をコードする核酸に導入するか、またはペプチド合成によって調製される。このような改変としては、例えば、その抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失および／またはその配列への残基の挿入および／またはその配列内の残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせが、最終構築物が、望ましい特性を有することを条件として、最終的構築物に達するために行われる。アミノ酸変化はまた、その抗体の翻訳後プロセスを変化させ得る（例えば、グリコシル化部位の数または位置の変化）。
【０１５１】
変異誘発のための好ましい位置である抗体の特定の残基または領域を同定するために有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５）であり、この方法において、アミノ酸残基、または、標的残基の群が同定され（例えば、荷電した残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ）が、アミノ酸と抗原との相互作用を最適にするために、中性アミノ酸または負に荷電した残基（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置換される。アミノ酸配列挿入は、１残基〜１００個以上の残基を含むポリペプチドの長さの範囲に及ぶアミノ末端融合物および／またはカルボキシル末端融合物、ならびに単一アミノ酸残基または複数アミノ酸残基の内部配列挿入物を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗ＥｒｂＢ２抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合された抗体が挙げられる。抗ＥｒｂＢ２抗体分子の他の挿入改変体としては、酵素への（例えば、ＡＤＥＰＴに関して：Ｔｉｅｔｚｅら，（２００３）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓｉｇｎ  ９：２１５５−２１７５）、または抗体の血清半減期を増大させるポリペプチド（例えば、アルブミン結合ペプチド）への抗ＥｒｂＢ２抗体のＮ末端またはＣ末端の融合物が挙げられる。
【０１５２】
血漿−タンパク質結合は、短命の分子の薬物動態特性を改善する有効な手段であり得る。アルブミンは、結晶中で最も豊富なタンパク質である。血清アルブミン結合ペプチド（ＡＢＰ）は、融合した活性ドメインタンパク質の薬物動態（組織取り込み、浸透、および拡散を含む）を変化させ得る。これらの薬物動態パラメーターは、適切な血清アルブミン結合ペプチド配列の具体的な選択によって調節され得る（ＵＳ  ２００４０００１８２７）。一連のアルブミン結合ペプチドは、ファージディスプレイスクリーニングによって同定された（Ｄｅｎｎｉｓら，（２００２）「Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｓ  Ａ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  Ｆｏｒ  Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７７：３５０３５−３５０４３；ＷＯ  ０１／４５７４６）。本発明の化合物は、以下によって教示されるＡＢＰ配列を含む：（ｉ）Ｄｅｎｎｉｓら，（２００２）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７７：３５０３５−３５０４３（表ＩＩＩおよび表ＩＶ、３５０３８頁）；（ｉｉ）ＵＳ  ２００４０００１８２７（［００７６］  配列番号９〜２２）；および（ｉｉｉ）ＷＯ  ０１／４５７４６（１２〜１３頁、配列番号ｚ１−ｚ１４）（これらは全て、本明細書に参考として援用される）。
【０１５３】
上記のアミノ酸配列は、通常、基礎となる核酸配列を変更することによって変化させられる。上記抗体のアミノ酸配列改変体をコードする核酸分子は、当該分野で公知の種々の方法によって調整される。これらの方法としては、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列改変体の場合）またはオリゴヌクレオチド指向性（または部位指向性）変異誘発による調製、ＰＣＲ変異誘発、および先に調製した改変体または抗体の非改変バージョンのカセット変異誘発が挙げられるが、これらに限定されない。実質的な変異誘発のための最も重要な部位としては、超可変領域が挙げられる、ＦＲ改変もまた、企図される。
【０１５４】
上記抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）置換の領域におけるポリペプチド骨格の（例えば、シートコンホメーションまたはらせんコンホメーションとしての）維持、（ｂ）標的部位における分子の荷電もしくは疎水性の維持、または（ｃ）側鎖のかさ高さの維持、に対するそれらの影響が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖の特性に基づいて以下のような群に分類される：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖方向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
（６）芳香族性：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０１５５】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを他のクラスのものに交換することを包含する。
【０１５６】
上記抗体の適切なコンホメーションの維持に関与しない任意のシステイン残基はまた、一般にセリンに置換されて、その分子の酸化に対する安定性を改善し得、そして異常な架橋を妨害し得る。逆に、システイン結合は、その抗体に付加されて、その安定性（特に、その抗体がＦｖフラグメントのような抗体フラグメントである場合）を改善し得る。
【０１５７】
上記抗体の血清半減期を増大させるために、例えば、ＵＳ  ５７３９２７７に記載のように、サルベージレセプター結合エピトープ（ｓａｌｖａｇｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｅｐｉｔｏｐｅ）が上記抗体（特に抗体フラグメント）に組み込まれ得る。本明細書で使用される場合、用語「サルベージレセプター結合エピトープ」とは、ＩｇＧ分子のインビボでの血清半減期の増大を担う、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープをいう（ＵＳ  ２００３／０１９０３１１、ＵＳ６８２１５０５；ＵＳ  ６１６５７４５；ＵＳ  ５６２４８２１；ＵＳ  ５６４８２６０；ＵＳ  ６１６５７４５；ＵＳ  ５８３４５９７）。
【０１５８】
抗体のグリコシル化改変体は、抗体のグリコシル化パターンが変化した改変体である。変化するとは、抗体において見出される１つ以上の炭水化物部分の欠失、抗体への１つ以上の炭水化物部分の付加、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）、またはグリコシル化の程度の変化を意味する。
【０１５９】
抗体は、それらの定常領域における保存された位置でグリコシル化され得る（Ｎ結合型またはＯ結合型）（Ｈｓｅら，（１９９７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０；ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ，（１９９７）  Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ，（１９９７）  ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能に（Ｂｏｙｄら，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８；ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ，（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０）、ならびに糖タンパク質のコンホメーションに影響を与え得る糖タンパク質の部分と糖タンパク質の提示された三次元表面との間の分子内相互作用に（ＨｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ，前出；ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ（１９９６）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６）影響を及ぼす。オリゴ糖はまた、特定の認識構造に基づいて、特定の分子へ、所定の糖タンパク質を標的化するように作用し得る（Ｍａｌｈｏｔｒａら，（１９９５）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１：２３７−２４３；Ｕｍａｎａら，（１９９９）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。オリゴ糖の除去は、抗体の抗原結合および他の特性を最適化し得る（Ｂｏｙｄら，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８）。
【０１６０】
抗体の組換え生成の間のグリコシル化に影響を及ぼす要因としては、増殖様式、培地処方、培養密度、酸素付加、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる（ＵＳ  ５０４７３３５；ＵＳ  ５５１０２６１；ＵＳ  ５２７８２９９）。グリコシル化、またはグリコシル化の特定の型は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）を用いて、糖タンパク質から酵素的に除去され得る。さらに、組換え宿主細胞は、遺伝子的に操作され得、例えば、特定の型の多糖をプロセシングすることにおいて欠損性にし得る。これらおよび類似の技術が、当該分野で周知である。
【０１６１】
抗体のグリコシル化構造は、炭水化物分析（レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析法、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖組成分析、逐次的酵素消化、およびＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ（これは、電荷に基づいてオリゴ糖を分離するために、高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィーを利用する）が挙げられる）の従来からの技術によって、容易に分析され得る。分析目的でオリゴ糖を遊離させるための方法もまた公知であり、これらの方法としては、酵素処理（一般には、ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ／エンド−β−ガラクトシダーゼを用いて行われる）、主にＯ結合型構造を遊離させるために、過酷なアルカリ性環境を使用する脱離、ならびにＮ結合型オリゴ糖およびＯ結合型オリゴ糖の両方を遊離させるために無水ヒドラジンを使用する化学的方法が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６２】
（メイタンシノイド薬物部分）
メイタンシン化合物は、マイクロチューブリンタンパク質、チューブリンの重合の阻害を介して、有糸分裂の間に微小管の形成を阻害することによって、細胞増殖を阻害する（Ｒｅｍｉｌｌａｒｄら，（１９７５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １８９：１００２−１００５；ＵＳ  ５２０８０２０）。メイタンシンおよびメイタンシノイドは、高度に細胞毒性であるが、それらの癌治療における臨床使用は、主にそれらの腫瘍に対する選択性が乏しいことに起因したそれらの重篤な全身的な副作用によって、非常に制限されてきた。メイタンシンの臨床試験は、中枢神経系および胃腸系に対する重篤な副作用に起因して中断された（Ｉｓｓｅｌら，（１９７８）  Ｃａｎ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｒｅｖ．５：１９９−２０７）。
【０１６３】
メイタンシノイド薬物部分は、抗体−薬物結合体における魅力的な薬物部分である。なぜなら、それらは、（ｉ）比較的、醗酵または化学的修飾、醗酵生成物の誘導体化による調製のために接近しやすい、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーを介して抗体に結合体化するために適切な官能基で誘導体化しやすい、（ｉｉｉ）結晶中で安定である、そして（ｉｖ）種々の腫瘍細胞株に対して有効である、からである。
【０１６４】
メイタンシノイド薬物部分としての使用に適したメイタンシン化合物は、当該分野で周知であり、そして公知の方法に従って、天然の供給源から単離され得るか、遺伝子操作技術を使用して生成され得る（Ｙｕら，（２００２）  ＰＮＡＳ  ９９：７９６８−７９７３を参照のこと）か、またはメイタンシノール（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ）およびメイタンシノールアナログは、公知の方法に従って合成により調製され得る。
【０１６５】
例示的なメイタンシノイド薬物部分としては、改変された芳香族環を有するもの（例えば、Ｃ−１９−デクロロ（ＵＳ  ４２５６７４６）（アンサマイトシンＰ２の水酸化リチウムアルミニウム還元により調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号および同第４３０７０１６号）（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓまたはＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓを使用する脱メチル化あるいはＬＡＨを使用する脱塩素によって調製される）；およびＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（ＵＳ  ４２９４７５７）（アシルクロリドを使用するアシル化によって調製される）、ならびに他の位置で改変を有するものが挙げられる。
【０１６６】
例示的なメイタンシノイド薬物部分はまた、改変を有するもの（例えば、Ｃ−９−ＳＨ（メイタンシノールと、Ｈ２ＳもしくはＰ２Ｓ５との反応によって調製される（ＵＳ  ４４２４２１９）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（ＵＳ  ４３３１５９８）；Ｎｏｃａｒｄｉａから調製されるＣ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨもしくはＣＨ２ＯＡｃ）（ＵＳ  ４４５０２５４）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによるメイタンシノールの変換によって調製される）（ＵＳ  ４３６４８６６）；Ｃ−１５−メトキシ（Ｔｒｅｗｉａ
ｎｕｄｌｆｌｏｒａから単離される）（ＵＳ  ４３１３９４６およびＵＳ  ４３１５９２９）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによりメイタンシノールの脱メチル化によって調製される）（ＵＳ  ４３６２６６３およびＵＳ  ４３２２３４８）；ならびに４，５−デオキシ（メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製される）（ＵＳ  ４３７１５３３））が挙げられる。
【０１６７】
メイタンシン化合物上の多くの位置が、結合の型に依存して、結合位置として有用であることが公知である。例えば、エステル結合の形成に関しては、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで改変されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で改変されたＣ−１５位、およびヒドロキシル基で改変されたＣ−２０位は、全て適している。
【０１６８】
メイタンシノイド薬物部分（Ｄ）としては、以下の構造を有するものが挙げられる：
【０１６９】
【化２４】
2008501029.tif 000008
ここで波線は、抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）のリンカー（Ｌ）への、Ｄの硫黄原子の共有結合を示す。Ｒは、独立して、ＨもしくはＣ１-Ｃ６アルキルであり得る。この硫黄原子へアミド基を結合するアルキレン鎖は、メタニル（ｍｅｔｈａｎｙｌ）、エタニル（ｅｔｈａｎｙｌ）、またはプロピルであり得る（すなわち、ｍは、１、２、もしくは３である）（ＵＳ  ６３３４１０、５２０８０２０、Ｃｈａｒｉら，（１９９２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１；Ｌｉｕら，（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ９３：８６１８−８６２３）。
【０１７０】
メイタンシノイド薬物部分の全ての立体異性体は、本発明の化合物について企図される（すなわち、Ｄのキラル炭素におけるＲ配置とＳ配置との任意の組み合わせ）。一実施形態において、上記メイタンシノイド薬物部分（Ｄ）は、以下の立体配置を有する：
【０１７１】
【化２５】
2008501029.tif 000009
Ｄの実施形態としては、以下が挙げられる：
ＤＭ１（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン）
ここで（ＣＲ２）ｍ＝ＣＨ２ＣＨ２；
【０１７２】
【化２６】
2008501029.tif 000010
ＤＭ３（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ−２’（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン）
ここで（ＣＲ２）ｍ＝ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）；
【０１７３】
【化２７】
2008501029.tif 000011
ＤＭ４（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン）  ここで（ＣＲ２）ｍ＝ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２：
【０１７４】
【化２８】
2008501029.tif 000012
アルキル基（例えば、ＤＭ３およびＤＭ４の硫黄原子に隣り合う炭素上のメチル基）により与えられる立体障害は、ＡＤＣの細胞内切断の速度に影響を及ぼし得る（ＵＳ  ２００４／０２３５８４０  Ａ１）。変数アルキル単位（ＣＲ２）ｍは、従って、インビトロおよびインビボでの効力、有効性、および安全性／毒性に影響を及ぼし得る。
【０１７５】
（リンカー）
上記リンカー（すなわち、Ｌ）は、共有結合を介して（ジスルフィド基を含まない）、薬物部分へ抗体を結合する。このリンカーは、式Ｉの抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）を形成するために、１以上の薬物部分（Ｄ）および抗体単位（Ａｂ）を連結するために使用され得る二官能性または多官能性部分である。抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、薬物へおよび抗体へ結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して、従来通り調製され得る。システインチオール、またはアミン（例えば、抗体（Ａｂ）のＮ末端もしくはリジンのようなアミノ酸側鎖）は、リンカー試薬、薬物部分または薬物−リンカー試薬の官能基との結合を形成する。
【０１７６】
上記リンカーは、好ましくは、細胞外で安定である。細胞への輸送または送達の前に、上記抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、好ましくは、安定でありかつインタクトなままである（すなわち、抗体は、薬物部分に結合されたままである）。このリンカーは、標的細胞の外で安定であり、細胞内である効率的速度で切断され得る。有効なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的結合特性を維持する；（ｉｉ）上記結合体または薬物部分の細胞内送達を可能にする；（ｉｉｉ）その標的とされた部位に送達または輸送されるまで、安定でありかつインタクトなままである（すなわち、切断されない）；そして（ｉｖ）メイタンシノイド薬物部分の細胞毒性、細胞殺傷効果または細胞増殖抑制性効果を維持する。上記ＡＤＣの安定性は、標準的な分析技術（例えば、質量分析法、ＨＰＬＣ、および分離／分析技術  ＬＣ／ＭＳ）により測定され得る。
【０１７７】
上記抗体および薬物部分の共有結合は、リンカーが２つの反応性官能基（すなわち、反応の意味において二価）を有することを要する。２つ以上の官能部分または生物学的に活性な部分（例えば、ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、およびレセプター基）を結合するために有用である二価リンカー試薬は公知であり、方法は、それらの得られた結合体を記載した（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐ２３４−２４２）。
【０１７８】
リンカーは、以下から選択される構造を有し得る：
【０１７９】
【化２９】
2008501029.tif 000013
ここで波線は、何れの方向でのＡｂおよびＤへの共有結合を示す。Ｘは、何れの方向においても上記の構造を有し得る：
【０１８０】
【化３０】
2008501029.tif 000014
ここでＲは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；そしてｎは１〜１２である。Ｙは、何れの方向においても、以下の構造を有し得る：
【０１８１】
【化３１】
2008501029.tif 000015
ここでＲは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；そしてｎは１〜１２である。
【０１８２】
例えば、このリンカーは、ＳＭＣＣと称される以下の構造を有し得る：
【０１８３】
【化３２】
2008501029.tif 000016
。
【０１８４】
別の実施形態において、リンカー（Ｌ）は、以下の構造を有する：
【０１８５】
【化３３】
2008501029.tif 000017
。
ここで波線は、何れの方向においても、ＡｂおよびＤへの共有結合を示す。
【０１８６】
例えば、上記リンカーは、ＳＩＡＢと称される以下の構造を有し得る：
【０１８７】
【化３４】
2008501029.tif 000018
。
【０１８８】
別の実施形態において、リンカー（Ｌ）は、以下の構造を有する：
【０１８９】
【化３５】
2008501029.tif 000019
。
【０１９０】
別の実施形態において、上記リンカーは、可溶性または反応性を調節した基で置換され得る。例えば、スルホネート置換基は、試薬の水溶性を増大し得、そしてＡＤＣを調製するために使用される合成経路に依存して、リンカー試薬と上記抗体または薬物部分との結合反応を促進し得るかまたはＡｂ−ＬとＤ、またはＤ−ＬとＡｂとの結合反応を促進し得る。
【０１９１】
別の実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する求電子性基に反応性である求核性基を有する反応性官能基を有する。抗体上の有用な求電子性基としては、アルデヒド基およびケトンカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。リンカーの求電子性基のヘテロ原子は、抗体上の求電子性基と反応し得、かつ抗体単位への共有結合を形成し得る。リンカー上の有用な求核性基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない、抗体上の求電子性基は、リンカーへの結合に都合のよい部位を提供する。
【０１９２】
リンカーは、１個以上のアミノ酸単位を含む、ペプチド単位であり得る。ペプチドリンカー試薬は、自動化合成機（例えば、Ｒａｉｎｉｎ  Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）またはＭｏｄｅｌ  ４３３（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ））でのペプチド化学の分野において周知の固相合成法または液相合成法（ｔ−ＢＯＣ化学（Ｇｅｉｓｅｒら，「Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８８，ｐｐ．１９９−２１８）およびＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ化学（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．およびＮｏｂｌｅ，Ｒ．（１９９０）「Ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ９−ｆｌｕｏｒｏｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ」，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３５：１６１−２１４）を含む）によって調製され得る（Ｅ．ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｂｋｅ，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６（１９６５）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。
【０１９３】
この化合物は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｃｕｓｔｏｍｅｒ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １１７，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ  ６１１０５  Ｕ．Ｓ．Ａ，  Ｕ．Ｓ．Ａ  １−８００−８７４−３７２３，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＋８１５−９６８−０７４７から市販されている架橋リンカー試薬：ＢＭＰＥＯ、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣおよびスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）（ビス−マレイミド試薬：ＤＴＭＥ、ＢＭＢ、ＢＭＤＢ、ＢＭＨ、ＢＭＯＥ、ＢＭ（ＰＥＯ）３、およびＢＭ（ＰＥＯ）４が挙げられる）で調製されたＡＤＣが明らかに企図されるが、これらに限定されない。４６７〜４９８頁、２００３−２００４  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｏｇを参照のこと。ビス−マレイミド試薬は、逐次的または同時の様式で、チオール含有薬物部分、標識、またはリンカー中間体への、抗体のシステイン残基の遊離チオール基の結合を可能にする。抗体、メイタンシノイド薬物部分、またはリンカー中間体のチオール基と反応する、マレイミド以外の官能基としては、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、およびイソチオシアネートが挙げられる。
【０１９４】
【化３６】
2008501029.tif 000020
。
【０１９５】
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介してトラスツズマブのチオール基に連結される例示的な抗体−薬物結合体は、以下の構造を有する：
【０１９６】
【化３７】
2008501029.tif 000021
ここでＴｒは、トラスツズマブであり；ｎは、０、１、または２であり；そしてｐは、１、２、３、または４である。
【０１９７】
有用なリンカー試薬はまた、他の商業的供給源（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ））を介して得られ得るかまたはＴｏｋｉら，（２００２）  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２；ＦｉｒｅｓｔｏｎｅらのＵＳ  ６２１４３４５；ＷＯ  ０２／０８８１７２；ＵＳ  ２００３１３０１８９；ＵＳ２００３０９６７４３；ＷＯ  ０３／０２６５７７；ＷＯ  ０３／０４３５８３；およびＷＯ  ０４／０３２８２８に記載される手順に従って合成され得る。
【０１９８】
上記リンカーは、分枝状多官能性リンカー部分を介して抗体へ１つより多い薬物部分を共有結合するための樹枝状リンカーであり得る（Ｓｕｎら，（２００２）  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎら，（２００３）  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８；Ｋｉｎｇら，（２００２）  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４３：１９８７−１９９０）。樹枝状リンカーは、上記ＡＤＣの効力に関連する薬物：抗体のモル比（すなわち、負荷）を増大し得る。従って、抗体が唯一の反応性システインチオール基を有する場合、複数の薬物部分が、樹枝状リンカーを介して結合され得る。
【０１９９】
樹枝状リンカー試薬の以下の例示的実施形態は、９つまでの求核性薬物部分試薬が、クロロエチルナイトロジェンマスタードの官能基との反応によって結合体化することを可能にする：
【０２００】
【化３８】
2008501029.tif 000022
。
【０２０１】
（薬物負荷）
薬物負荷は、式Ｉの分子におけるｐ（１抗体あたりのメイタンシノイド薬物の平均数）によって表される。薬物負荷は、１抗体（Ａｂ）あたり１〜８個の薬物（Ｄ）の範囲であり得る。すなわち、ここで１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、および８個の薬物部分が、上記抗体に共有結合される。式ＩのＡＤＣの組成物は、  １個〜８個の範囲の薬物と結合体化した抗体の集まりを包含する。結合体化反応からのＡＤＣの調製における１抗体あたりの平均薬物数は、従来の手段（例えば、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動、およびＨＰＬＣ）によって特徴づけられ得る。ｐに関するＡＤＣの定量的分布はまた、決定され得る。ＥＬＩＳＡによって、ＡＤＣの特定の調製物中のｐの平均値が、決定され得る（Ｈａｍｂｌｅｔｔら，（２００４）  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎら，（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２）。しかし、ｐ（薬物）値の分布は、抗体−抗原結合およびＥＬＩＳＡの検出限界によって見分けられない。また、抗体−薬物結合体の検出のためのＥＬＩＳＡアッセイは、上記薬物部分が、上記抗体（例えば、重鎖フラグメントもしくは軽鎖フラグメント、または特定のアミノ酸残基）に結合したか否かを決定しない。いくらかの場合において、均質なＡＤＣ（ここでｐは、他の薬物負荷を有するＡＤＣからの特定の値である）の分離、精製、および特徴付けは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段によって達成され得る。
【０２０２】
いくらかの抗体−薬物結合体に関して、ｐは、上記抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、結合がシステインチオールの場合、上記の例示的実施形態と同様に、抗体は、唯一のまたは数個のシステインチオール基を有し得るか、または唯一のまたは数個の十分に反応性の、リンカーが結合され得るチオール基を有し得る。より多くの薬物負荷（例えば、ｐ＞５）が、特定の抗体−薬物結合体の凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。
【０２０３】
代表的には、理論的最大値未満の薬物部分が、結合体化反応の間に、抗体に結合される。抗体は、例えば、薬物−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）またはリンカー試薬と反応しない多くのリジン残基を含み得る。最も反応性のリジン基のみが、アミン反応性リンカー試薬と反応し得る。また、最も反応性のシステインチオール基のみが、チオール反応性リンカー試薬と反応し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結され得る多くの（存在する場合）遊離および反応性システインチオール基を含まない。化合物の抗体中の大部分のシステインチオール残基は、ジスルフィド結合として存在し、部分的または完全な還元条件下で、還元剤（例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはＴＣＥＰ）で還元されなければならない。さらに、上記抗体は、反応性の求核性基（例えば、リジンまたはシステイン）を曝すために、変性条件に曝されなければならない。ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、いくつかの異なる様式において集められ得る。この様式としては、以下が挙げられる：（ｉ）抗体に対してモル過剰の薬物−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）またはリンカー試薬を制限すること、（ｉｉ）結合体化反応の時間または温度を制限すること、そして（ｉｉｉ）システインチオール改変のための部分的または限定的な還元条件。
【０２０４】
上記抗体の１個より多い求核性基または求電子性基が、薬物−リンカー中間体と反応するか、またはリンカー試薬、続いて薬物部分試薬と反応する場合、得られた生成物は、抗体へ結合した薬物部分のある分布（例えば、１、２、または３など）を有するＡＤＣ化合物の混合物である。液体クロマトグラフィー法（例えば、ポリマー逆相（ＰＬＲＰ）および疎水性相互作用（ＨＩＣ））は、薬物負荷値によって、混合物中の化合物を分離し得る。単一の薬物負荷値（ｐ）を有するＡＤＣの調製物が、単離され得る（「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」，Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．ら，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４；「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」，Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．  ６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４）。しかし、これらの単一の負荷値のＡＤＣは、なお不均質な混合物であり得る。なぜなら、この薬物部分は、上記抗体の異なる部位で、リンカーを介して結合され得るからである。
【０２０５】
（抗体−薬物結合体の調製）
式ＩのＡＤＣは、以下を含む当業者に公知の有機化学反応、条件および試薬を使用する幾つかの経路によって調製され得る：（１）共有結合を介して抗体−リンカー中間体Ａｂ−Ｌを形成する抗体の求核基もしくは求電子基と二価リンカー試薬との反応、およびそれに続く活性化薬物部分Ｄとの反応；ならびに（２）共有結合を介して薬物−リンカー中間体Ｄ−Ｌを形成する薬物部分の求核基もしくは求電子基とリンカー試薬との反応、およびそれに続く抗体の求核基もしくは求電子基との反応。結合体化方法（１）および（２）は、種々の抗体、薬物部分、およびリンカーと共に使用されて、式Ｉの抗体−薬物結合体を調製する。
【０２０６】
抗体上の求核基としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基（例えば、リジン）、（ｉｉｉ）側鎖チオール基（例えば、システイン）、および（ｉｖ）糖ヒドロキシル基もしくは糖アミノ基であって、ここで、抗体は、グリコシル化されている。アミン基、チオール基、ヒドロキシル基は、求核基であり、そして以下を含むリンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能である：（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物のような活性エステル；（ｉｉ）ハロアセトアミドのようなハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル；（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基およびマレイミド基。特定の抗体は、還元性鎖内ジスルフィド（すなわち、システイン架橋）を有する。抗体は、例えば、ＤＴＴ（Ｃｌｅｌａｎｄ試薬、ジチオスレイトール）もしくはＴＣＥＰ（ｔｒｉｓ（２−カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリド；Ｇｅｔｚら（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ  ２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）のような還元性試薬による処理によって、リンカー試薬との結合体化について反応性にされ得る。理論上、このようにして、各システインジスルフィド架橋は、２つの反応性チオール求核剤を形成する。さらなる求核基は、リジンの２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）との反応（アミンのチオールへの変換をもたらす）を通して抗体内に導入され得る。
【０２０７】
抗体−薬物結合体はまた、求電子部分を導入する抗体の改変によって産生され得、この求電子部分は、リンカー試薬もしくは薬物上の求核置換基と反応し得る。グリコシル化抗体の糖は、例えば、過ヨウ素酸酸化によって酸化されて、アルデヒド基もしくはケトン基を形成し得、これらのアルデヒド基もしくはケトン基は、リンカー試薬もしくは薬物部分のアミン基と反応し得る。得られたイミンシッフ塩基の基は、安定的な連結を形成し得るか、または、例えばホウ化水素試薬によって還元されて、安定的なアミン連結を形成し得る。一実施形態において、グリコシル化抗体の炭水化物部分とガラクトース酸化酵素もしくはメタ−過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応は、タンパク質中のカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基を生じ得、これらは、薬物における適切な基と反応し得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐ２３４−２４２）。別の実施形態において、Ｎ末端セリン残基もしくはＮ末端トレオニン残基を含むタンパク質は、メタ−過ヨウ素酸ナトリウムと反応し得、第１アミノ酸の代わりにアルデヒドの産生をもたらす（ＧｅｏｇｈｅｇａｎおよびＳｔｒｏｈ，（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６；ＵＳ  ５３６２８５２）。このようなアルデヒドは、薬物部分もしくはリンカー求核剤と反応され得る。
【０２０８】
同様に、薬物部分上の求核基としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アミン基、チオール基、ヒドラジン基、オキシム基、ヒドラジン基、チオセミカルバゾン基、ヒドラジンカルボキシレート基、およびアリールヒドラジン基。これらは、以下を含むリンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と反応して共有結合を形成し得る：（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物のような活性エステル；（ｉｉ）ハロアセトアミドのようなハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル；（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基およびマレイミド基。
【０２０９】
メイタンシンは、例えば、Ｍａｙ−ＳＳＣＨ３に変換され得、Ｍａｙ−ＳＳＣＨ３は、遊離のチオールであるＭａｙ−ＳＨに還元され得、そして改変抗体と反応されて（Ｃｈａｒｉら（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１）、ジスルフィドリンカーによって、メイタンシノイド−抗体免疫結合体を産生し得る。ジスルフィドリンカーを有する抗体−メイタンシノイド結合体は、報告されている（ＷＯ  ０４／０１６８０１；ＵＳ  ６８８４８７４；ＵＳ  ２００４／０３９１７６  Ａ１；ＷＯ  ０３／０６８１４４；ＵＳ  ２００４／００１８３８  Ａ１；ＵＳ  ６４４１１６３；ＵＳ  ５２０８０２０；ＵＳ  ５４１６０６４；ＷＯ  ０１／０２４７６３）。ジスルフィドリンカーＳＰＰは、リンカー試薬であるＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエートによって構築される。抗体−ＳＰＰ−ＤＭ１結合体は、構造によって表される：
ジスルフィド（Ｓ−Ｓ）リンカー抗体−薬物結合体は、本発明の非ジスルフィドリンカーＡＤＣとの比較の目的のために試験された。トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）−ＳＰＰ−ＤＭ１は、実施例３に従って調製された（Ｒａｎｓｏｎ，Ｍ．およびＳｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  Ｍ．（２００２）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ６３（補遺１）：１７−２４）。また、ジスルフィド抗体−薬物結合体：トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ３およびトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４が、試験された。そしてこれらは以下の構造を有する：
【０２１０】
【化３９】
2008501029.tif 000023
。
【０２１１】
本発明のＡＤＣは、ＳＭＣＣリンカーおよびＤＭ１メイタンシノイド薬物部分を含み、Ａｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１と表される：
【０２１２】
【化４０】
2008501029.tif 000024
。
【０２１３】
Ａｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の一実施形態は、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１であり、ここで、ｐは、１、２、３、または４である（Ａｂ＝トラスツズマブ、Ｔｒ、ＷＯ  ２００５／０３７９９２）。ＡＤＣの別の実施形態は、トラスツズマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１（トラスツズマブ＝Ｔｒ）であって、以下の構造を有する：
【０２１４】
【化４１】
2008501029.tif 000025
。
【０２１５】
（腫瘍関連抗原および細胞表面レセプターに対して指向される抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）についてのスクリーニング）
トランスジェニック動物および細胞株は、腫瘍関連抗原および細胞表面レセプター（例えば、ＨＥＲ２（ＵＳ  ６６３２９７９））の過剰発現に関する疾患もしくは障害の予防的処置または治療的処置としての可能性を有する抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）のスクリーニングにおいて、特に有用である。有用なＡＤＣについてのスクリーニングは、一定の用量範囲にわたる候補ＡＤＣをトランスジェニック動物に投与する工程、および評価されるべき疾患もしくは障害に対するＡＤＣの効果を種々の時点でアッセイする工程を、包含する。あるいは、またはさらに、適切な場合、この薬物は、疾患の誘導剤への曝露より前に投与され得るか、もしくは、疾患の誘導剤への曝露と同時に投与され得る。候補ＡＤＣは、連続的にかつ個別にスクリーニングされてもよく、または培地の下でもしくは高処理スクリーニングフォーマットの下で平行してスクリーニングされてもよい。疾患もしくは障害の予防的処置または治療的処置のための有用性についてＡＤＣがスクリーニングされ得る速度は、合成の速度およびスクリーニング方法論によってのみ制限され、このスクリーニング方法論は、データの検出／測定／分析を含む。
【０２１６】
一実施形態は、（ａ）安定した乳癌細胞株から非ヒト動物へ細胞を移植する工程、（ｂ）ＡＤＣ薬物候補をこの非ヒト動物に投与する工程、および（ｃ）この移植された細胞株からの腫瘍の形成を阻害するこの候補の能力を決定する工程を包含する、スクリーニング方法である。本発明はまた、レセプタータンパク質の過剰発現によって特徴付けられる疾患または障害の処置のためのＡＤＣ候補をスクリーニングする方法にも関し、この方法は、（ａ）安定した乳癌細胞株由来の細胞を薬物候補に接触させる工程、および（ｂ）この安定した細胞株の増殖を阻害するこのＡＤＣ候補の能力を評価する工程を包含する。
【０２１７】
一実施形態は、（ａ）安定した乳癌細胞株由来の細胞をＡＤＣ薬物候補に接触させる工程、および（ｂ）ＨＥＲ２のリガンド活性化を遮断するこのＡＤＣ候補の能力を評価する工程を包含する、スクリーニング方法である。別の実施形態において、ヘレグリン結合を遮断するＡＤＣ候補の能力が、評価される。別の実施形態において、リガンドによって刺激されるチロシンリン酸化を遮断するＡＤＣ候補の能力が、評価される。
【０２１８】
別の実施形態は、（ａ）安定した乳癌細胞株からの細胞をＡＤＣ薬物候補に接触させる工程、および（ｂ）細胞死を誘導するＡＤＣ候補の能力を評価する工程を包含する、スクリーニング方法である。一実施形態において、アポトーシスを誘導するＡＤＣ候補の能力が、評価される。
【０２１９】
別の実施形態は、（ａ）例えばその乳腺細胞において、天然ヒトタンパク質（例えばＨＥＲ２）もしくはそのフラグメントを過剰発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、ここで、このようなトランスジェニック哺乳動物は、この天然ヒトタンパク質もしくはこの天然ヒトタンパク質の生物学的活性を有するそのフラグメントをコードする核酸配列をそのゲノム内に安定的に組み込んでおり、この核酸配列は、この核酸配列の発現を指向する転写調節配列に作動可能に連結されている、トランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、そして抗体（例えば抗ＨＥＲ２）処置に反応しないかもしくはわずかに反応する腫瘍（例えば乳房腫瘍）を発達させる、トランスジェニック非ヒト哺乳動物、またはこのトランスジェニック非ヒト哺乳動物から移植された腫瘍を保有する非ヒト哺乳動物に、ＡＤＣ薬物候補を投与する工程、および（ｂ）標的疾患もしくは障害に対するＡＤＣ候補の効果を評価する工程を包含する、スクリーニング方法である。限定されないが、この疾患もしくは障害は、ＨＥＲ２を過剰発現する癌（例えば、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、甲状腺癌、膵臓癌および膀胱癌）である。この癌は、ＨＥＲ２を１細胞あたり少なくとも約５００，０００コピー発現する乳癌、または１細胞あたり少なくとも約２００，０００コピー発現する乳癌であり得る。ＡＤＣ薬物候補は、例えば、細胞死および／またはアポトーシスを誘導するその能力について、当該分野で周知であるアッセイ方法および本明細書中で後述されるアッセイ方法を用いて評価され得る。
【０２２０】
一実施形態において、候補ＡＤＣは、一定の用量範囲にわたってトランスジェニック動物に投与され、そしてこの動物のこの化合物に対する生理学的応答を時間をかけて評価することによってスクリーニングされる。投与は、評価される化合物の化学的性質に依存して、経口であっても、または適切な注射によってもよい。いくつかの場合、この化合物を、この化合物の効力を増強する補因子と組み合わせて投与することが、適切であり得る。被験トランスジェニック動物由来の細胞株が、特定の腫瘍関連抗原タンパク質もしくは細胞表面レセプターの過剰発現（例えばＨＥＲ２過剰発現）に関連する種々の疾患の処置において有用である化合物についてのスクリーニングに使用される場合、この試験化合物は、適切な時に細胞培養培地に添加され、そしてこの化合物に対する細胞性応答は、適切な生化学アッセイおよび／または組織学的アッセイを用いて、時間をかけて評価される。幾つかの場合、目的の化合物を、この化合物の効力を増強する補因子と組み合わせて培養培地に加えることが適切であり得る。
【０２２１】
従って、本発明は、過剰発現されたＨＥＲ２タンパク質を特異的に標的化しそして結合するＡＤＣを同定するためのアッセイを提供する。過剰発現されたＨＥＲ２タンパク質の存在は、異常な細胞機能に関連し、そして乳房腫瘍の発達の原因として関連する乳腺の細胞性増殖および／または分化の病因に関連する。
【０２２２】
ＥｒｂＢ（例えば、ＥｒｂＢ２）レセプターのリガンド活性化を遮断するＡＤＣを同定するために、ＥｒｂＢ（ＥｒｂＢ２）レセプターを（例えば、目的のＥｒｂＢレセプターと共にＥｒｂＢヘテロオリゴマーを形成する別のＥｒｂＢレセプターと組み合わせて）発現する細胞へのＥｒｂＢリガンド結合を遮断するこの化合物の能力が、決定され得る。例えば、ＨＥＲ２を過剰発現するトランスジェニック動物から単離され、そして（ＨＥＲ２が共にヘテロオリゴマーを形成する）別のＥｒｂＢレセプターを発現するようにトランスフェクトされた細胞は、ＡＤＣと共にインキュベート（すなわち、培養）され得、次いで、標識されたＥｒｂＢリガンドに曝露され得る。次いで、ＥｒｂＢヘテロオリゴマーにおいて、ＥｒｂＢレセプターに対するリガンドを遮断するこの化合物の能力が、評価され得る。
【０２２３】
例えば、ＨＥＲ２を過剰発現する、本明細書中でトランスジェニック非ヒト哺乳動物（例えば、マウス）から樹立された乳房腫瘍細胞株への、候補ＡＤＣによるヘレグリン（ＨＲＧ）結合の阻害は、単層培養物を用いて、２４ウェルプレートフォーマットにおいて氷上で実施され得る。抗ＥｒｂＢ２モノクローナル抗体は、各ウェルに添加されて、３０分間にわたってインキュベートされ得る。次いで、１２５Ｉ標識化ｒＨＲＧβ１１７７−２２４（２５，０００ｃｐｍ）が添加され、そしてインキュベーションが、４時間〜１６時間にわたって続けられ得る。用量応答曲線が作成され得、そして目的の化合物についてのＩＣ５０値が、計算され得る。
【０２２４】
あるいは、またはさらに、ＥｒｂＢヘテロオリゴマーにおいて存在する、ＥｒｂＢリガンドによって刺激されるＥｒｂＢレセプターのチロシンリン酸化を遮断する、ＡＤＣの能力が、評価され得る。例えば、本明細書中でトランスジェニック動物から樹立された細胞株は、試験ＡＤＣと共にインキュベートされ得、次いで、抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（これは、必要に応じて検出可能な標識と結合体化される）を用いて、ＥｒｂＢリガンド依存性チロシンリン酸化活性についてアッセイされ得る。ＵＳ  ５７６６８６３に記載されるキナーゼレセプター活性化アッセイもまた、ＥｒｂＢレセプター活性化およびこの活性化の上記化合物による遮断を決定するために利用可能である。
【０２２５】
一実施形態において、ＭＣＦ７細胞におけるｐ１８０チロシンリン酸化のＨＲＧ刺激を阻害するＡＤＣについて、本質的に以下に記載されるようにスクリーニングし得る。例えば、ＨＥＲ２トランスジェニック動物から樹立された細胞株は、２４ウェルプレート中に平板培養され得、そして上記化合物は、各ウェルに添加され得、そして室温で３０分間インキュベートされ得る。次いで、ｒＨＲＧβ１１７７−２４４が、０．２ｎＭの終濃度まで各ウェルに添加され得、そしてインキュベーションは、約８分間にわたって続けられ得る。培地は、各ウェルからアスピレーションされ得、そして反応は、１００μｌのＳＤＳ緩衝液（５％  ＳＤＳ、２５ｍＭ  ＤＴＴ、および２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８）の添加によって停止され得る。各サンプル（２５μｌ）は、４〜１２％勾配ゲル（Ｎｏｖｅｘ）上で電気泳動され得、次いで、ポリビニリデンジフルオリド膜に電気泳動的に移動され得る。抗ホスホチロシン（１μｇ／ｍｌにおいて）免疫ブロットが展開され得、そしてＭｒ−１８０，０００における主な反応性バンドの強度が、反射率デンシトメトリーによって定量され得る。レセプターリン酸化の阻害を評価する代替の方法は、ＫＩＲＡ（キナーゼレセプター活性化）アッセイ（Ｓａｄｉｃｋら（１９９８）Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍ．ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．１−９）である。ｐ１８０チロシンリン酸化のＨＲＧ刺激を阻害することが公知であるよく確立されたＨＥＲ２に対するモノクローナル抗体の幾つかは、このアッセイにおいて、ポジティブコントロールとして使用され得る。反射率デンシトメトリーによって決定されるｐ１８０チロシンリン酸化のＨＲＧ刺激の阻害についての用量−応答曲線が、作成され得、そして目的の化合物についてのＩＣ５０が、計算され得る。
【０２２６】
ＨＥＲ２トランスジェニック動物由来の細胞株における試験ＡＤＣの増殖阻害効果を、評価し得る（Ｓｃｈａｅｆｅｒら（１９９７）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５−１３９４）。このアッセイに従い、細胞は、種々の濃度の試験化合物で４日間にわたって処理され得、そしてクリスタルバイオレットもしくは酸化還元色素であるＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅによって染色される。この化合物と一緒のインキュベーションは、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞においてモノクローナル抗体２Ｃ４によって示される増殖阻害効果と類似の増殖阻害効果を、この細胞株において示し得る（Ｓｃｈａｅｆｅｒら、前出）。さらなる実施形態において、外因性ＨＲＧは、この阻害を有意に逆転しない。
【０２２７】
ＨＥＲ２を特異的に標的化する増殖阻害性ＡＤＣ化合物を同定するために、トランスジェニックマウスに由来するＨＥＲ２過剰発現癌細胞（ＵＳ  ５６７７１７１）の増殖を阻害するＡＤＣについてスクリーニングし得る。このアッセイに従い、ＨＥＲ２過剰発現細胞は、１０％ウシ胎仔血清、グルタミンおよびペニシリンストレプトマイシンで補充された、Ｆ１２とＤＭＥＭ培地との１：１混合物において増殖される。細胞は、３５ｍｍ細胞培養皿中２０，０００細胞（２ｍｌ／３５ｍｍ皿）で平板培養され、そして試験化合物は、種々の濃度で添加され得る。６日後、未処理細胞と比較した細胞の数は、電子ＣＯＵＬＴＥＲＴＭ細胞カウンターを用いて計数される。約２０〜１００％の量もしくは約５０〜１００％の量で細胞増殖を阻害するＡＤＣが、増殖阻害性化合物として選択され得る。
【０２２８】
細胞死を誘導するＡＤＣについて選択するために、例えば、ＰＩ、トリパンブルーもしくは７ＡＡＤの取り込みによって示される膜強度の減少が、コントロールと比較して評価され得る。ＰＩ取り込みアッセイは、トランスジェニック動物の乳房腫瘍組織から単離された細胞を使用する。このアッセイに従い、細胞は、１０％熱不活性化ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンで補充された、Ｄｕｌｂｅｃｃｏの改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）：Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２（５０：５０）中で培養される。従って、このアッセイは、補体および免疫エフェクター細胞の非存在下で実施される。細胞は、１００×２０ｍｍの皿１枚あたり３×１０６個の細胞の濃度で播種され、そして一晩接着させられる。次いで、培地は除去され、そして新鮮な培地のみもしくは種々の濃度の上記化合物を含む培地と置き換えられる。細胞は、３日間の期間の間、インキュベートされる。各処理の後、単層は、ＰＢＳで洗浄され、そしてトリプシン処理によって剥離される。次いで、細胞は、４℃で１２００ｒｐｍで５分間遠心分離され、ペレットは、３ｍｌの冷Ｃａ２＋結合緩衝液（１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２）中に再度懸濁され、そして細胞凝集塊の除去のために、３５ｍｍのストレーナーでキャップされた１２×７５ｍｍチューブに等分される（チューブ１本あたり１ｍｌ、処理群あたりチューブ３本）。次いで、このチューブは、ＰＩ（１０μｇ／ｍｌ）を与えられる。サンプルを、ＦＡＣＳＣＡＮＴＭフローサイトメーターおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴＴＭＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析し得る。ＰＩ取り込みによって決定される、実質的に有意なレベルの細胞死を誘導する化合物が、細胞死誘導性化合物として選択され得る。
【０２２９】
アポトーシスを誘導する化合物について選択するために、トランスジェニック動物の乳房腫瘍組織から樹立された細胞を用いるアネキシン結合アッセイが、実施される。細胞は、上記段落において考察されたように、皿の中に培養されそして播種される。次いで、培地は除去され、そして新鮮な培地のみもしくは１０μｇ／ｍｌの抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）を含む培地によって置き換えられる。３日間のインキュベーション期間後、単層はＰＢＳで洗浄され、そしてトリプシン処理によって剥離される。次いで、細胞は遠心分離され、Ｃａ２＋結合緩衝液中に再度懸濁され、そして上で考察されたように、細胞死アッセイのためにチューブ中に等分される。次いで、チューブは、標識化アネキシン（例えば、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ）（１μｇ/ｍｌ）を与えられる。サンプルは、ＦＡＣＳＣＡＮＴＭフローサイトメーターおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴＴＭ  ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析され得る。コントロールと比較して実質的に有意なレベルのアネキシン結合を誘導する化合物は、アポトーシス誘導性化合物として選択される。
【０２３０】
（インビトロ細胞増殖アッセイ）
一般に、抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の細胞毒性活性または細胞分裂抑制活性は、以下の方法により測定される：腫瘍関連抗原または腫瘍関連レセプタータンパク質を有する哺乳動物細胞を、細胞培養培地中のＡＤＣの抗体に曝露し；細胞を、約６時間〜約５日の期間にわたり培養し；そして、細胞の生存率を測定する。細胞ベースのインビトロアッセイを用いて、ＡＤＣの、生存率、すなわち、増殖率（ＩＣ５０）、細胞毒性（ＥＣ５０）、および、アポトーシス（カスパーゼ活性化）誘導を測定した。
【０２３１】
抗体−薬物結合体のインビトロにおける効力を、細胞増殖アッセイ（図１〜４）により測定した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙが市販されており（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、これは、Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａルシフェラーゼの組換え発現に基づいた、均質なアッセイ法である（米国特許第５，５８３，０２４号；米国特許第５，６７４，７１３号；米国特許第５，７００，６７０号）。この細胞増殖アッセイは、ＡＴＰの存在量に基づいて、培養中の生存細胞の数を決定し、この数は、代謝的に活性な細胞の指標である（Ｃｒｏｕｃｈら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８；米国特許第６，６０２，６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを、９６ウェル形式で行い、これを、自動化されたハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に従うようにした（Ｃｒｅｅら（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４）。均質なアッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を、血清を補充した培地中で培養した細胞に直接加える工程を包含する。細胞を洗浄する工程、培地を除去する工程、および、複数回ピペッティングする工程は、必要とされない。このシステムは、試薬を加え、混合してから１０分間で、３８４ウェルの形式で、わずか１５細胞／ウェルを検出する。
【０２３２】
均質な「添加−混合−測定」形式は、細胞の溶解と、ＡＴＰの存在量に比例する発光信号の発生とを生じる。ＡＴＰの量は、培養物中に存在する細胞数に直接比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、ルシフェラーゼ反応により生成される、「グロー型（ｇｌｏｗ−ｔｙｐｅ）」の発光信号を生成し、これは、使用される細胞の型および培地に依存して、一般に５時間より長い半減期を有する。生存細胞は、相対発光単位（ＲＬＵ）で示される。基質である、Ｂｅｅｔｌｅルシフェリンは、ＡＴＰのＡＭＰへの変換と、光子の生成と同時に、組換えホタルルシフェラーゼにより、酸化的に脱炭酸される。長時間の半減期が、試薬注入器を使用する必要性を排除し、そして、複数のプレートの、連続的もしくはバッチモードによる処理に対する柔軟性を提供する。この細胞増殖アッセイは、マルチウェルの形式（例えば、９６ウェル形式または３８４ウェル形式）で使用され得る。データは、ルミノメーター、または、ＣＣＤカメラ画像化デバイスにより記録され得る。発光の出力は、経時的に測定される、相対光単位（ＲＬＵ）として表される。
【０２３３】
【化４２】
2008501029.tif 000026
。
【０２３４】
３つの抗体−薬物結合体の抗増殖性効果を、４つの異なる乳癌細胞株に対する、上述の細胞増殖、インビトロ細胞殺傷アッセイにより測定した（図１〜４）。図１は、ＳＫ−ＢＲ−３（ＨＥＲ２  ３＋）乳癌細胞に対する３日の処置の後の、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の濃度を増加させたときの、効力の測定を示す。図２は、ＢＴ−４７４（ＨＥＲ２  ３＋）乳癌細胞に対する３日の処置の後の、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の濃度を増加させたときの、効力の測定を示す。図３は、ＭＣＦ７（ＨＥＲ２  低）乳癌細胞に対する３日の処置の後の、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の濃度を増加させたときの、効力の測定を示す。図４は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（ＨＥＲ２  陰性）乳癌細胞に対する３日の処置の後の、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の濃度を増加させたときの、効力の測定を示す。
【０２３５】
ＩＣ５０値を、ＨＥＲ２レセプタータンパク質を過剰発現することが知られるＳＫ−ＢＲ−３およびＢＴ−４７４について確立した。１トラスツズマブあたり２．８のＤＭ１（薬物／Ａｂ）を有する、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の結合体のロットは、ＳＫ−ＢＲ−３細胞に対する６回の実験について、９．１μｇ／ｍｌ〜２２．３μｇ／ｍｌの範囲で、１４．４μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０を、そして、ＢＴ−４７４細胞に対する４回の実験について、２８．７μｇ／ｍｌ〜６３．１μｇ／ｍｌの範囲で、５１．７μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０を生じた。１トラスツズマブあたり２．７のＤＭ１（薬物／Ａｂ）を有する、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の結合体のロットは、ＳＫ−ＢＲ−３細胞に対する４回の実験について、１２．６μｇ／ｍｌ〜１８．８μｇ／ｍｌの範囲で、１５．２μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０を、そして、ＢＴ−４７４細胞に対する２回の実験について、７５．２μｇ／ｍｌ〜１１４．６μｇ／ｍｌの範囲で、９４．９μｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０を生じた。これらの結合体は、ＨＥＲ２を過剰発現しないＭＣＦ７細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に対して不活性であった。
【０２３６】
抗ＣＤ１９−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、Ｒａｊｉ細胞において、インビトロでの強力な細胞殺傷を示した（ＩＣ５０＝０．２５μ／ｍｌ未満）。Ｒａｊｉ細胞において、裸の抗体、およびコントロールのＡＤＣ、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、効果を示さなかった。抗ＣＤ７９ａ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１および抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、Ｒａｍｏｓ細胞において、インビトロでの強力な細胞殺傷を示した（ＩＣ５０＝＜０．２５μ／ｍｌ未満）。Ｒａｍｏｓ細胞において、裸の抗体、およびコントロールのＡＤＣ、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、効果を示さなかった。
【０２３７】
図１７は、抗ＥｐｈＢ２Ｒ  ２Ｈ９抗体−薬物結合体：２Ｈ９−ＳＰＰ−ＤＭ１（ＩＣ５０  ８０ｎｇ／ｍｌ）および２Ｈ９−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（ＩＣ５０  ５０ｎｇ／ｍｌ）で処理した、ＨＴ１０８０ＥｐｈＢ２（Ｃ８）細胞を用いた、インビトロ細胞増殖アッセイ（実施例５）を示す。
【０２３８】
（マウスにおけるインビボでの血清クリアランスおよび安定性）
ＡＤＣの血清クリアランスおよび安定性を、ネイティブな（外来性の移植片により受け入れた腫瘍を有さない）ヌードマウスにおいて調べた。図５は、７日間にわたる６回の時点において、結合体の血清濃度と総抗体血清濃度を測定した、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１  対  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の腫瘍を有さないベージュヌードマウスにおける血清クリアランスを示す。総抗体およびＡＤＣの量の差は、リンカーの切断およびそのＤＭ１部分からの抗体の分離を示す。７日目におけるより高い結合体化した抗体の血清濃度により示されるように、ＳＭＣＣで連結したＡＤＣは、ＳＰＰで連結した結合体よりも長く、インビボにおいてインタクトなままであった。
【０２３９】
図６は、７日間にわたる６回の時点において、血清濃度を測定した、結合体：トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ３、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の腫瘍を有さないヌードマウスにおける経時的な安定性を示す。ＳＭＣＣリンカーを有するＡＤＣは、ＳＰＰまたはＳＰＤＰにより連結された結合体よりもインビボにおいてより安定であったが、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、最もかさ高いジスルフィド結合体であるトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４とほぼ同じ安定性を有した。
【０２４０】
図５および図６に示される実験を、腫瘍を有さないヌードマウスにおいて行なった。しかし、ＳＭＣＣで連結した結合体は、腫瘍を有するヌードマウスにおけるＳＰＰで連結した結合体と比較して、同じ、安定性の増加を示した。図７に示されるように、最初のトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の約７２％が、処置後７日目に結合体として残っており、一方で、最初のトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の約１０％が、処置後７日目に結合体として残っており、これは、腫瘍を有するヌードマウスにおける、非酵素的に切断可能なトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体の安定性の向上を示した。
【０２４１】
（ラットにおけるインビボでの血清クリアランスおよび安定性）
図８および図９は、ジスルフィドリンカーＡＤＣ（トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１）、および非ジスルフィドリンカーＡＤＣ（トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）の、ラットにおける匹敵する安定性およびクリアランスのプロフィールを示す。研究のパラメータは、以下を含む：
【０２４２】
【化４３】
2008501029.tif 000027
非ジスルフィドリンカーＡＤＣであるトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（図９）は、ジスルフィドリンカーＡＤＣであるトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（図８）よりも良いラットの血清における安定性を示した。
【０２４３】
（インビボ効能）
本発明の抗体−薬物結合体の効能は、げっ歯類に、癌細胞の同種移植片または異種移植片を移植し、そして、ＡＤＣを用いてこれらの腫瘍を処置することによって、インビボにおいて測定し得る。細胞株、癌細胞上に存在するレセプターに対するＡＤＣの抗体結合の特異性、投薬レジメン、および他の要因に依存して、変動性の結果が予測される。抗ＨＥＲ２  ＡＤＣのインビボ効果を、ＨＥＲ２を高く発現するトランスジェニック外植マウスモデルにより測定した。同種移植片を、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ療法に対して応答しないか、または、ほとんど応答しない、Ｆｏ５  ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから増殖させた。被験体を、ＡＤＣを用いて１回処置し、そして、３〜６週間にわたってモニターし、腫瘍倍化時間、細胞殺傷対数期（ｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ）および腫瘍の減少を測定した。追跡の投薬応答および複数回の投薬による実験を行なった。
【０２４４】
腫瘍は、ｎｅｕ（ＨＥＲ２のラットホモログ）の変異により活性化された形態を発現するトランスジェニックマウスにおいて容易に生じるが、乳癌において過剰発現されるＨＥＲ２は、変異しておらず、そして、腫瘍の形成は、変異していないＨＥＲ２を過剰発現するトランスジェニックマウスにおいては、ましてや強力ではない（Ｗｅｂｓｔｅｒら（１９９４）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．５：６９−７６）。
【０２４５】
変異していないＨＥＲ２を有する腫瘍の形成を促進させるために、ＨＥＲ２  ｃＤＮＡプラスミド（上流のＡＴＧコドンにおける翻訳の開始を防止するために、上流のＡＴＧを欠失させたか、または、ＨＥＲ２の下流にある本来の開始コドンからの翻訳開始の頻度を他の方法で減少させた）を用いて、トランスジェニックマウスを作製した（例えば、Ｃｈｉｌｄら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２４３３５−２４３４１を参照のこと）。さらに、５’末端にキメライントロンを追加し、これもまた、以前に報告されたものよりも、発現レベルを高めるはずである（ＮｅｕｂｅｒｇｅｒおよびＷｉｌｌｉａｍｓ（１９８８）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：６７１３；ＢｕｃｈｍａｎおよびＢｅｒｇ（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４３９５；Ｂｒｉｎｓｔｅｒら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８３６）。このキメライントロンは、Ｐｒｏｍｅｇａ製のベクター、ｐＣＩ−ｎｅｏ哺乳動物発現ベクター（８９０ｂｐ〜１０２２ｂｐ）に由来した。ｃＤＮＡの３’末端に、ヒト成長ホルモンのエキソン４および５、ならびに、ポリアデニル化配列を隣接させた。さらに、ＦＶＢマウスを用いた。なぜならば、この系統は、腫瘍の発生に対してより感受性であるからである。ＭＭＴＶ−ＬＴＲからのプロモーターを用いて、乳腺における組織特異的なＨＥＲ２の発現を確実なものとした。腫瘍形成に対する感受性を高めるため、動物には、ＡＩＮ  ７６Ａ食餌を与えた（Ｒａｏら（１９９７）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４５：１４９−１５８）。
【０２４６】
図１０〜１３は、ＡＤＣが、元々は、ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２トランスジェニックマウスにおいて生じたＨＥＲ２陽性腫瘍（Ｆｏ５）において、強力な抗腫瘍活性を有することを示す。抗体単独（例えば、トラスツズマブ）では、このモデルにおいて、有意な抗腫瘍活性は有さない（Ｅｒｉｃｋｓｏｎら、米国特許第６，６３２，９７９号）。図１０および図１１に示すように、腫瘍の増殖は、コントロール（ビヒクル）の増殖レベルと比較して、ＡＤＣを用いる処置により遅延した。腫瘍の増殖は、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体およびトラスツズマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１結合体を用いる処置によって、最も遅くなった。図１０、図１２および図１３に示されるように、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体は、ヌードマウスにおける腫瘍の倍化時間として測定したとしても、または、示される倍化時間に対応する細胞殺傷対数期として測定したとしても、ＳＰＰリンカーを有する結合体よりも腫瘍の増殖を遅くし、すなわち、より強力であった（図１３）。
【０２４７】
抗ＣＤ２２  ＡＤＣのインビボ効果を、マウスの腫瘍異種移植片モデルを用いて測定した。１匹あたり２，０００万個のＢｊａｂ−ｌｕｃ（ルシフェラーゼを発現するＢｊａｂ細胞）異種移植片腫瘍細胞を有する８匹のＳＣＩＤマウスの群に、抗ＣＤ２２抗体−薬物結合体または裸の抗体を、１日目に１回（記されている場合を除く）投薬した（実施例８）。
【０２４８】
【化４４】
2008501029.tif 000028
腫瘍サイズが倍化する時間を測定した（ＭＴＤ，平均腫瘍倍化時間）。３つの裸の抗ＣＤ２２抗体は、非特異的に結合するＡＤＣ（トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）と比較して、本質的に効果を示さなかった。対応する結合体は全て、有意な腫瘍増殖の遅延効果を示した。複数回の投薬による効果は、ＲＦＢ４−ＳＭＣＣ−ＤＭ１により確立され、ここでは、単回投薬したマウスについてのＭＴＤが１８日であったのに対し、３回投薬（１日目、７日目、および１７日目）したマウスについてのＭＴＤは、５５日であった。８匹全てのマウスにおいて、腫瘍の完全な寛解は、３回投薬した群において生じた。他の抗ＣＤ２２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体は、抗体１２Ｆ７、９Ａ８、８Ｃ９、８Ｇ１０、３Ｆ１１、１０Ｄ２、６Ｃ９、１４Ｄ１および１１Ｈ１０と共に、１匹あたり２，０００万個のＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片腫瘍細胞を有するＳＣＩＤマウスにおいて、単回投薬（４００μｇ  ＤＭ１／ｍ２）から７日後に、最初の腫瘍容積の縮小、または、コントロール（トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）に対する、腫瘍増殖の遅延を示した。抗ＣＤ２２結合体である、ＲＦＢ４−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、５Ｅ８−ＳＭＣＣ−ＤＭ１および７Ａ２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１もまた、１匹あたり５００万個のＲａｍｏｓ  ＲＡ１異種移植片腫瘍細胞を有するＳＣＩＤマウスにおいて、単回投薬（２００μｇ  ＤＭ１／ｍ２）から１１日後に、コントロール（トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）に対する、腫瘍増殖の遅延において有効であった。
【０２４９】
結合体ＲＦＢ４−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を、Ｂｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片を有する１０匹のＳＣＩＤマウスの群に対する３つの異なる薬物負荷（ｌｏａｄｉｎｇ）で研究した（実施例８）。低い（１．９５）および中程度（３．７）の薬物負荷の結合体は、各々、有意な腫瘍増殖遅延効果を示し、ＭＴＤは約１５日であった。高負荷（６．７５）の結合体は、コントロール結合体であるＧＰ１２０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１または裸の抗体ＲＦＢ４と有意に異なる効果を示さなかった。
【０２５０】
【化４５】
2008501029.tif 000029
抗ＣＤ１９−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体および抗ＣＤ２２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体は、Ｒａｊｉ細胞マウス腫瘍異種移植片モデルにおいて、インビボ活性を示さなかった。他の抗ＣＤ１９結合体および抗ＣＤ２２結合体は、他の癌細胞腫瘍モデルに対してインビボ活性を有し得る。
【０２５１】
抗ＣＤ７９ａ（α）ＡＤＣおよび抗ＣＤ７９ｂ（β）ＡＤＣのインビボ効果を、マウス腫瘍異種移植片モデルを用いて測定した。マウス１匹あたり２，０００万個のＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片腫瘍細胞を有する８匹のＳＣＩＤマウスの群に、以下の表および以下の実施例８におけるサンプルを、１日目に投薬した。
【０２５２】
【化４６】
2008501029.tif 000030
結合体ＳＮ８抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、１７Ａ７抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１および８Ｈ９抗ＣＤ７９ａ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、全て、７日後に、最初の腫瘍容積（平均１６０ｍｍ３）の縮少を示した。８匹のマウスの群において、結合体ＳＮ８抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、４匹の動物において部分的な寛解（ＰＲ）を、そして、２匹の動物において完全な寛解（ＣＲ）をもたらした。結合体１７Ａ７抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、１匹の動物においてＣＲをもたらした。結合体８Ｈ９抗ＣＤ７９ａ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、２匹の動物においてＰＲを、そして、１匹の動物においてＣＲをもたらした。他の抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体は、抗体２Ｆ２、５Ｃ３、７Ｈ７、８Ｄ１１、１５Ｅ４および１６Ｃ１１と共に、マウス１匹あたり２，０００万個のＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片腫瘍細胞を有するＣＢ１７  ＩＣＲ  ＳＣＩＤマウスにおいて、単回投薬（１９２μｇ  ＤＭ１／ｍ２）から８日後に、コントロール（トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）に対して、腫瘍増殖の遅延、または、最初の腫瘍容積の縮小を示した。
【０２５３】
抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を投与したマウスにおける用量応答効果を測定した。マウス１匹あたり２，０００万個のＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片腫瘍細胞を有する８匹のＳＣＩＤマウスの群に、以下の表におけるサンプルを１日目に投薬した（実施例８）。抗ＣＤ７９ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を、マウス１ｋｇあたり０．５ｍｇのＡｂ、２．０ｍｇのＡｂ、および３．６４ｍｇのＡｂのレベルで投薬した。
【０２５４】
【化４７】
2008501029.tif 000031
抗ＴＥＮＢ２  ＡＤＣのインビボ効果を、マウス腫瘍異種移植片モデルを用いて測定した。ＴＥＮＢ２は、ヒト前立腺においてほぼ排他的に発現しており、そして、ヒト前立腺腫瘍において過剰発現していることが示されている、腫瘍抗原である（Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓら（２００１）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ  １５；９４（２）：１７８−８４）。ＰＣ３−ＴＶＡ−９１９ｃｖ１：５は、高レベルのＴＥＮＢ２を発現するヒト前立腺癌細胞株である。
【０２５５】
胸腺欠損したヌードマウスに、マウス１匹あたり０．２ｍｌの用量で、５００万個のＰＣ３−ＴＶＡ−９１９を高く発現するか、もしくは中程度に発現する細胞を皮下注射した。細胞を、ＨＢＳＳ中に懸濁した。平均腫瘍サイズが１００〜２００ｍｍ３に達したとき、マウスを、無作為に、各群８〜１０匹の８つの群に群分けし、そして、以下のサンプルの単回のＩＶ処置を与えた（実施例８）。
【０２５６】
【化４８】
2008501029.tif 000032
マウス抗−ＴＥＮＢ２−ＤＭ１結合体は、ネガティブコントロールおよびビヒクルコントロールに対して、ＰＣ３−ＴＥＮＢ２腫瘍に対する抗腫瘍効果を示した。マウス１０Ｈ１抗ＮａＰｉ３ｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体は、ネガティブコントロールおよびビヒクルコントロールに対して、ＰＣ３−ＮａＰｉ３ｂ腫瘍に対する抗腫瘍効果を示さなかった。抗ＮａＰｉ３ｂ結合体の他の抗体改変体は、ＰＣ３−ＮａＰｉ３ｂ腫瘍または他の癌細胞株に対してインビボ活性を有し得る。
【０２５７】
（げっ歯類の毒性）
抗体−薬物結合体およびＡＤＣなしのコントロールである「ビヒクル」を、急性毒性のラットモデルにおいて評価した。ＡＤＣの毒性を、ＡＤＣを用いた雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの処置、ならびに、その後の、種々の器官に対する効果の検査および分析によって調べた。巨視的な観察（体重）、臨床的な病理学的パラメータ（血清化学および血液学）ならびに組織病理学に基づいて、ＡＤＣの毒性を観察、特徴付け、および測定し得る。等価な用量レベルにおいては、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１よりも低い急性毒性を伴ったことが分かった。
【０２５８】
青年期の雌性ラット（１００〜１２５グラム）における５日の急性毒性研究を、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（２つの用量：１８６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２および３２６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）、比較例のジスルフィドＡＤＣ、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（２つの用量：１８６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２および３２６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）、遊離のＤＭ１メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）（チオール）およびコントロールビヒクルの単回注射（０日目）により行なった。体重を毎日測定した。臨床化学、血清酵素および血液学の分析を、３日目および５日目に行った；組織病理学的な評価により、完全な検死を結論付けた。毒性のシグナルには、体重減少の臨床的な観察も含めた。
【０２５９】
ＡＤＣを投薬した後の動物における、ビヒクルのみを投薬した動物に対する体重の減少または体重の変化は、全身性または局所的な毒性の、巨視的および一般的な指標であると考えられる。図１４は、５日間にわたる、体重（グラム）の変化を示す。ジスルフィドＡＤＣ、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１を受けたラットは、より高い用量における致死性、および、より低い用量における体重の減少により示されるように、顕著な用量依存性の毒性を示した。対照的に、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を受けたラットは、プラシーボのビヒクル投薬したラットと比較して、体重が増加し、そして、より低い用量で投薬したラットは、体重増加速度の低下を示さなかった。より高いレベルのトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を投薬したラットもまた、遊離のＤＭ１細胞毒と比較して、体重が増加した。
【０２６０】
肝臓毒性を、肝臓酵素の増加、有糸分裂像およびアポトーシス像の数の増加、ならびに、肝細胞の壊死によって測定した。血液リンパ系の毒性（ｈｅｍａｔｏｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ）を、白血球（主に、顆粒球（好中球）および／または血小板）の欠乏、および、リンパ系器官の関与（すなわち、萎縮活性またはアポトーシス活性）により観察した。毒性をまた、有糸分裂像およびアポトーシス像の数の増加、ならびに、変性全腸炎のような、消化管の病変により記述した。
【０２６１】
研究した肝臓損傷の酵素的指標には、以下が含まれる：
ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）
−局在：細胞質；肝臓、心臓、骨格筋、腎臓
−肝臓：血漿の比＝７０００：１
−Ｔ１／２：１７時間
ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）
−局在：細胞質；肝臓、腎臓、心臓、骨格筋
−肝臓：血漿の比３０００：１
−Ｔ１／２：４２時間；日変化
ＧＧＴ（ｇ−グルタミルトランスフェラーゼ）
−局在：高分泌能または高吸収能を有する細胞の原形質膜；肝臓、腎臓、腸
−肝臓損傷の弱い指標；胆管障害において共通して上昇している。
【０２６２】
上記の測定した３つの酵素のいずれもが、肝臓特異的ではない。本発明のＡＤＣが、一過性の網状赤血球減少症を伴って、肝臓酵素ＡＬＴおよびＡＳＴの一過性の穏やかな上昇をもたらしたことが分かった（図１５）。末梢血顆粒球または血小板に対しては、有意な効果が観察されなかった（図１６）。
【０２６３】
図１５および図１６は、２２．３ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１に曝露したラット（群２）が、この５日間の急性毒性研究において、最も重篤な臨床毒性を示したことを示す。これらの動物は、最も顕著な体重の減少、肝機能試験の上昇、白血球減少症および血小板減少症、ならびに、血液リンパ系の組織に対する毒性の形態学的な徴候を示した。毒性の程度は、２５ｍｇ／ｋｇの用量を用いた以前の研究において見られたものと比較して同様であった。対照的に、それぞれ、１０ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を与えた群３および群４の動物は、臨床病理学および体重のデータに基づいて、ビヒクル処置した動物とは区別できなかった。形態学的に、これらの動物は、肝臓における有糸分裂像の数の穏やかな上昇を示したが、末梢のリンパ系および造血組織は、正常な限界の範囲内であった。
【０２６４】
群５の動物（５０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）は、毒性の徴候を示した。しかし、１つの肝機能試験（ＡＬＴ）を除いて、毒性の重篤度は、同じ薬物用量の５０％のトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１を受けた動物（群２）未満であった。これとほぼ同じ用量において、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（群４、２２．３ｍｇ／ｋｇ）は、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（群２、２５ｍｇ／ｋｇ）の約２５％のＡＳＴレベルを示した。この研究の５日目までに、群５の動物は、体重の増加（と、その後、３日目および４日目の間に、一時的な減少）と、血清中ビリルビンの減少と、血小板数の上昇を示した（図１５）。
【０２６５】
遊離なメイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）ＤＭ１に曝露した群（群６）は、トラスツズマブ結合体で処置した動物と同じ毒性のパターンを示す。遊離ＤＭ１のこの用量は、以前の研究において１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の用量として与えた薬物の量に相当する。群６の動物における毒性の重篤度は、群２の動物において見られるものより低かったが、１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１で処置した動物において以前に見られたものより高かった。回復は、かなり速いようであった：脾臓の切片は、遊離メイタンシンで処置した動物における、不成熟な造血分子の数の増加を示した；また、ＬＦＴおよび臨床的な血液学的パラメータは、５日目までに、群６の動物において、正規化に向かう明確な傾向を示した。
【０２６６】
（カニクイザルの毒性／安全性）
カニクイザルに投与したＡＤＣの毒性および安全性を評価し得る。抗体−薬物結合体であるトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の毒性／安全性研究を、カニクザルにおいて行なった。３群のサルを、段階的に上昇する用量で静脈内注射により投与したトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の毒性を、コントロール（ビヒクル）に対して評価するために研究した。群１（４匹の被験体）は、ビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ６．５、すなわち、ＡＤＣのない処方物）のみを１日目および２２日目に受け、その後、３６日目に検死した。群２（４匹の被験体）は、１日目および２２日目に４９００μｇ／ｍ２のトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を受けた。群３（４匹の被験体）は、２２日目に、７２００μｇ／ｍ２のトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を受けた。
【０２６７】
肝臓毒性を、げっ歯類の毒性研究からの上昇した肝臓酵素の測定により推測した。カニクイザルに、ビヒクル（群１）およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（群２：４９００μｇ／ｍ２；群３：７２００μｇ／ｍ２）を投薬した。肝臓酵素ＡＳＴ、血小板数、白血球、絶対的な好中球、赤血球、網状赤血球、および２回のＩＶ投薬レジメンの比較を、カニクイザルにおけるトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１について測定した（実施例１０）。
【０２６８】
（抗体−薬物結合体の薬学的処方物の投与）
治療用の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、処置される状態に対して適切なあらゆる経路により投与され得る。ＡＤＣは、代表的には、非経口、すなわち、注入、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔内、ボーラス、腫瘍内の注射、または、硬膜外で投与される（Ｓｈｉｒｅら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９３（６）：１３９０−１４０２）。治療用の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の薬学的処方物は、代表的には、薬学的に受容可能な非経口投与用ビヒクルと共に非経口投与するために調製され、そして、単一投薬形態の注射可能な形状である。所望の程度の純度を有する抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、必要に応じて、凍結乾燥形態または水溶液の形態で、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、賦形剤または安定化剤と混合される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編）。
【０２６９】
受容可能な非経口用のビヒクル、希釈剤、キャリア、賦形剤および安定化剤は、使用される投薬量および濃度において、レシピエントに対して非毒性であり、そして、以下のようなものが挙げられる：緩衝剤（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸およびメチオニン）；保存料（例えば、オクタデシルジメチルベン汁アンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または、免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；単糖、二糖、および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖類（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／または、非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。例えば、凍結乾燥抗ＥｒｂＢ２抗体処方物は、ＷＯ  ９７／０４８０１（特別に、本明細書中に参考として援用される）に記載されている。トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１のようなＡＤＣの例示的な処方物は、約１００ｍｇ／ｍｌのトレハロース（２−（ヒドロキシメチル）−６−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラン−２−イル］オキシ−テトラヒドロピラン−３，４，５−トリオール；Ｃ１２Ｈ２２Ｏ１１；ＣＡＳ番号９９−２０−７）、および約０．１％のＴＷＥＥＮＴＭ２０（ポリソルベート２０；ドデカン酸２−［２−［３，４−ビス（２−ヒドロキシエトキシ）テトラヒドロフラン−２−イル］−２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エチルエステル；Ｃ２６Ｈ５０Ｏ１０；ＣＡＳ番号９００５−６４−５）（ｐＨ約６）を含有する。
【０２７０】
治療用抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）の薬学的処方物は、ＡＤＣを作製するプロセスにおける、過剰の試薬、不純物および副産物の不完全な精製および分離の結果として；または、大量のＡＤＣ、もしくは、処方したＡＤＣ組成物の保存時の、時間／温度による加水分解もしくは分解の結果として、未反応の薬物部分（Ｄ）、抗体−リンカー中間体（Ａｂ−Ｌ）、および／または、薬物／リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）の特定の量を含有し得る。例えば、ＡＤＣの処方物である、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、遊離薬物ＤＭ１の検出可能な量を含有し得る。あるいは、もしくはこれに加えて、この処方物は、薬物−リンカー中間体ＤＭ１−ＳＭＣＣの検出可能な量を含有し得る。あるいは、そしくはこれに加えて、この処方物は、抗体、トラスツズマブの検出可能な量を含有し得る。トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の例示的な処方物は、１０％モル等量までのＤＭ１−ＳＭＣＣを含有し得る。予想外なことに、ＤＭ１−ＳＭＣＣ（ＩＣ５０  ０．０５μＭ）は、ＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞およびＢＴ−４７４乳癌細胞に対して、遊離薬物ＤＭ１（ＩＣ５０  ０．００４５μＭ）よりも約２０倍細胞殺傷能力が劣ることがインビトロ細胞増殖アッセイ（実施例５）により決定された。
【０２７１】
活性な薬学的成分もまた、例えば、コアセルベーション技術により調製されたマイクロカプセル（ヒドロキシメチルセルロース）中に、または、界面重縮合により調製されたマイクロカプセル（ゼラチン−マイクロカプセル、およびポリ−(メチルメタクリレート）マイクロカプセル）中に、または、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中に、または、マクロエマルジョン（ｍａｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ）中に取り込まれ得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編に開示されている。
【０２７２】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の適切な例としては、ＡＤＣを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、このマトリクスは、成形された物品（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）の形状である。徐放性マトリクスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される、注射可能なマイクロスフェア）およびポリ−（Ｄ）−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０２７３】
インビボ投与のために使用される処方物は、無菌でなければならず、これは、滅菌ろ過膜を通すろ過によって、容易に達成される。
【０２７４】
処方物は、上述の投与経路に適したものを含む。処方物は、単位投薬形態で簡便に提示され得、そして、薬学の分野で周知の任意の方法によって調製され得る。技術および処方物は、一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に見られる。このような方法は、活性成分を１種以上の補助成分を構成するキャリアと会合させる工程を包含する。一般に、処方物は、活性成分を、液体キャリア、もしくは、細かく砕いた固体キャリア、または、この両方と、均一かつ緊密に会合させ、次いで、必要に応じて、生成物を成形することによって調製される。
【０２７５】
水性懸濁物は、水性懸濁物の製造に適した賦形剤と混合した活性物質（ＡＤＣ）を含有する。このような賦形剤としては、懸濁剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロース、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアゴム）、および分散剤もしくは湿潤剤（例えば、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカアセチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート））が挙げられる。水性懸濁物はまた、１種以上の保存料（例えば、エチルｐ−ヒドロキシ−ベンゾエートまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ−ベンゾエート）、１種以上の着色剤、１種以上の矯味矯臭剤、および、１種以上の甘味料（例えば、スクロースまたはサッカリン）も含有し得る。
【０２７６】
ＡＤＣの薬学的組成物は、滅菌の注射可能な調製物（例えば、滅菌の注射可能な水性懸濁物または油性懸濁物）の形態であり得る。この懸濁物は、上述されたこれらの適切な分散剤もしくは湿潤剤、および懸濁剤を用いて、公知技術に従って処方され得る。滅菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤もしくは溶剤中の、滅菌の注射可能な溶液もしくは懸濁液（例えば、１，３−ブタン−ジオール中の溶液）であり得るか、または、凍結乾燥粉末として調製され得る。使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶剤の中でも、好ましいのは、水、リンガー溶液および等張性の塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌の不揮発性油が、溶剤もしくは懸濁媒体として簡便に使用され得る。この目的のために、あらゆる無刺激性の不揮発性油（例えば、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリド）が使用され得る。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）も同様に、注射剤（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ）の調製において使用され得る。
【０２７７】
単一の投薬形態を生成するためにキャリア材料と合わされ得る活性成分の量は、処置される宿主、および、特定の投与様式に依存して変動する。例えば、静脈内注入のために意図される水溶液は、約３０ｍＬ／時間の速度での適切な用量の注入が生じ得るように、溶液１ｍｌあたり約３〜５００μｇの活性成分を含有し得る。皮下（大量）投与は、約１．５ｍｌ以下の総容量、および１ｍｌあたり約１００ｍｇのＡＤＣの濃度で達成され得る。頻繁かつ慢性的な投与を要するＡＤＣについては、予め充填したシリンジ、または、自動注入デバイス技術などによって皮下経路が使用され得る。
【０２７８】
一般的な提案として、１回の投薬あたりに投与されるＡＤＣの初期の薬学的に有効な量は、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、すなわち、１日あたり、患者の体重１ｋｇあたり、約０．１〜２０ｍｇの範囲内であり、使用され得る化合物の代表的な初期の範囲は、０．３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日である。例えば、ヒト患者は、患者の体重１ｋｇあたり、約１．５ｍｇのＡＤＣで最初に投薬され得る。投薬は、最大耐用量（ＭＴＤ）まで段階的に増やされ得る。投薬計画は、約３週おきであり得るが、診断される状態または応答によっては、この計画は、より頻繁であっても、より頻繁でなくてもよい。投薬は、さらに、処置の過程の間に、ＭＴＤ以下まで調節され得、複数回にわたって（例えば、約４回以上）安全に投与され得る。
【０２７９】
非経口投与に適切な処方物としては、抗酸化物質、緩衝剤、静菌剤、および、処方物を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る、水性および非水性の滅菌注射溶液；ならびに、懸濁剤および増粘剤を含有し得る、水性および非水性の滅菌懸濁剤が挙げられる。
【０２８０】
タンパク質治療剤の経口投与は、一般に、消化管におけるその制限された吸収、加水分解もしくは変性に起因するその乏しいバイオアベイラビリティに起因して好まれないが、経口投与に適したＡＤＣの処方物は、各々が、ＡＤＣの所定の量を含有するカプセル、カシェ剤、または錠剤のような別個の単位として調製され得る。
【０２８１】
処方物は、単一投薬または複数回投薬の容器（例えば、密封されたアンプルおよびバイアル）中にパッケージ化され得、そして、使用の直前に、注射のために、滅菌液体キャリア（例えば、水）を加えることのみを必要とする、フリーズドライ（凍結乾燥）の状態で保存され得る。即座の注射用溶液および懸濁物は、滅菌の粉末、顆粒、および、これまでに記載されている種類の錠剤から調製される。例示的な単位投薬処方物は、活性成分の毎日用量（ｄａｉｌｙ  ｄｏｓｅ）、または、単位毎日分割用量（ｕｎｉｔ  ｄａｉｌｙ  ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）、または、その適切な画分を含有する。
【０２８２】
本発明は、さらに、獣医学的なキャリアと共に、上に定義された少なくとも１つの活性成分を含有する、獣医学用組成物を提供する。獣医学的なキャリアは、組成物を投与する目的のために有用な物質であり、そして、獣医学において不活性であるか、もしくは受容可能であり、そして、活性成分と適合性である、固体物質、液体物質もしくは気体物質であり得る。これらの獣医学用組成物は、非経口、経口、または、任意の他の所望される経路によって投与され得る。
【０２８３】
（抗体−薬物結合体による処置）
本発明の抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、種々の疾患もしくは障害（例えば、癌および自己免疫状態）を処置するために使用され得ることが企図される。例示的な状態もしくは障害としては、良性もしくは悪性の腫瘍；白血病およびリンパ球性悪性腫瘍（ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）；他の障害（例えば、神経障害、グリア細胞障害、星状細胞障害、視床下部障害、腺障害、マクロファージ障害、上皮障害、間質障害、胞胚腔障害、炎症障害、血管形成障害および免疫学的障害）が挙げられる。ＡＤＣ処置に感受性の癌としては、特定の腫瘍関連抗原または細胞表面レセプター（例えば、ＨＥＲ２）の過剰発現により特徴付けられる癌が挙げられる。
【０２８４】
動物モデルおよび細胞ベースのアッセイにおいて同定されたＡＤＣ化合物は、さらに、腫瘍を有するより高等な霊長類およびヒトの臨床治験において試験され得る。ヒト臨床治験は、Ｂａｓｅｌｇａら（１９９６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：７３７−７４４により報告されたような、以前に長期にわたり抗癌治療を受けた、ＨＥＲ２を過剰発現する転移性乳癌を有する患者における抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であるＨＥＲＣＥＰＴＩＮの効力を試験する臨床治験と同様に設計され得る。臨床治験は、放射線療法、ならびに／または、公知の化学療法剤および／もしくは細胞傷害剤を含む化学療法のような、公知の治療レジメンと組み合せて、ＡＤＣの効力を評価するように設計され得る（Ｐｅｇｒａｍら（１９９９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２２４１−２２５１）。
【０２８５】
一般に、処置される疾患または障害は癌である。本明細書において処置される癌の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：癌種、リンパ種、芽腫、肉腫および白血病、または、リンパ球性悪性腫瘍。このような癌のより具体的な例としては、以下が挙げられる：扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平上皮細胞癌）、肺癌（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮細胞癌）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｏｒ  ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（例えば、消化管癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、膵臓癌、神経膠芽腫、頸部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌もしくは子宮癌、唾液線癌腫、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝細胞癌腫、肛門癌、陰茎癌、ならびに、頭頸部癌。
【０２８６】
本明細書において処置される癌は、ＥｒｂＢレセプター（例えば、ＨＥＲ２）の過度の活性化により特徴付けられる癌であり得る。このような過度の活性化は、ＥｒｂＢレセプターまたはＥｒｂＢリガンドの過剰発現もしくは生成の増加に寄与し得る。一実施形態において、診断アッセイもしくは予後のアッセイが、患者の癌が、ＥｒｂＢレセプターの過度の活性化により特徴付けられるかどうかを決定するために行なわれる。例えば、癌における、ＥｒｂＢレセプターにおけるＥｒｂＢ遺伝子の増幅および／または過剰発現が決定され得る。このような増幅／過剰発現を決定するための種々のアッセイが、当該分野において利用可能であり、そして、このようなアッセイとしては、上記のような、ＩＨＣ、ＦＩＳＨ、およびシェッド抗原アッセイ（ｓｈｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｓｓａｙ）が挙げられる。あるいは、もしくは、さらに、腫瘍内もしくは腫瘍に関連する、ＥｒｂＢリガンド（例えば、ＴＧＦ−α）のレベルが、公知の手順に従って決定され得る。このようなアッセイは、試験されるサンプル中で、タンパク質、および／または、これをコードする核酸を検出し得る。一実施形態において、腫瘍内のＥｒｂＢリガンドのレベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて決定され得る；例えば、Ｓｃｈｅｒら（１９９５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １：５４５−５５０を参照のこと。あるいは、もしくは、さらに、例えば、ＦＩＳＨ、サザンブロッティング、またはＰＣＲ技術によって、試験されるサンプル中のＥｒｂＢリガンドをコードする核酸のレベルを評価し得る。一実施形態において、ＥｒｂＢ２の過剰発現は、ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（Ｄａｋｏ）を用いて、ＩＨＣによって分析され得る。腫瘍生検からのパラフィン包埋組織切片を、ＩＨＣアッセイに供し、そして、以下のような、ＥｒｂＢ２タンパク質の染色強度の指標を与え得る：スコア０、染色が観察されないか、または、膜の染色が、腫瘍細胞の１０％より多くにおいて観察される；スコア１＋、かすかな／弱く認知できる膜の染色が、主要紙ア棒の１０％より多く検出される、細胞は、その膜の一部分においてのみ染色されている；スコア２＋、弱い〜中程度の膜全体の染色が、腫瘍細胞の１０％より多くで観察される；スコア３＋、中程度〜強い膜全体の染色が、腫瘍細胞の１０％より多くで観察される。ＥｒｂＢ２過剰発現評価について、０または１＋のスコアを有する腫瘍細胞は、ＥｒｂＢ２を過剰発現していないものと特徴づけられ得るが、２＋または３＋のスコアを有する腫瘍細胞は、ＥｒｂＢ２を過剰発現するものとして特徴付けられ得る。
【０２８７】
あるいは、もしくはさらに、ＦＩＳＨ分析（例えば、ＩＮＦＯＲＭＴＭ（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｃｏ．，Ａｒｉｚ．）またはＰＡＴＨＶＩＳＩＯＮＴＭ（Ｖｙｓｉｓ，Ｉｌｌ．））が、腫瘍中のＥｒｂＢ２の過剰発現の程度（もしあれば）を決定するために、ホルマリン固定した、パラフィン包埋腫瘍組織において行なわれ得る。
【０２８８】
さらに、ＥｒｂＢレセプターまたはＥｒｂＢリガンドの過剰発現または増幅は、インビボ診断アッセイ（例えば、検出される分子に結合し、そして、検出可能な標識（例えば、放射性同位元素）とタグ化された分子（例えば、抗体）を投与し、標識の位置について患者を外部からスキャンすることによる）を用いて評価され得る。
【０２８９】
疾患の予防もしくは処置について、ＡＤＣの適切な投薬量は、上で規定されるような、処置される疾患の型、疾患の重篤度および経過、分子が、予防目的で投与されるのか、治療目的で投与されるか、以前の治療、患者の臨床的な病歴および抗体に対する応答性、ならびに、主治医の裁量に依存する。分子は、一度に、または、一連の処置にわたって、患者に適切に投与される。疾患の型および重篤度に依存して、例えば、１回以上の別々の投与によるものであっても、連続注入によるものであっても、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の分子が、患者に対する投与の最初の候補投薬量である。代表的な毎日の投薬量は、上記の要因に依存して、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。患者に投与されるＡＤＣの例示的な投薬量は、患者の体重１ｋｇあたり、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲である。
【０２９０】
数日以上にわたる反復投与については、状態に依存して、所望の疾患症状の抑制が生じるまで、処置が持続される。例示的な投薬レジメンは、約４ｍｇ／ｋｇの抗ＥｒｂＢ２抗体の初期の負荷投薬、その後の、約２ｍｇ／ｋｇの抗ＥｒｂＢ２抗体の毎週の持続投薬の投与を包含する。他の投薬レジメンが有用であり得る。この治療の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易にモニターされる。
【０２９１】
（組み合わせ治療）
抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）は、薬学的な組み合わせ処方物中で、または、組み合わせ治療のような投薬レジメンにおいて、抗癌特性を有する第２の化合物と組み合され得る。薬学的な組み合わせ処方物または投薬レジメンの第２の化合物は、好ましくは、互いに有害な影響を与えないように、組み合わせのＡＤＣに対して補完的な活性を有する。
【０２９２】
第２の化合物は、化学療法剤、細胞傷害剤、サイトカイン、増殖阻害剤、抗ホルモン剤、アロマターゼインヒビター、プロテインキナーゼインヒビター、脂質キナーゼインヒビター、抗アンドロゲン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、遺伝子治療用ワクチン、抗血管新生剤および／または心臓保護物質であり得る。このような分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせ中に適切に存在する。ＡＤＣを含有する薬学的組成物はまた、チューブリン形成インヒビター、トポイソメラーゼインヒビター、またはＤＮＡ結合剤のような、化学療法剤の治療有効量も有し得る。
【０２９３】
あるいは、もしくはさらに、第２の化合物は、ＥｒｂＢ２に結合し、ＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化をブロックする抗体であり得る。この第２の抗体は、モノクローナル抗体２Ｃ４またはヒト化２Ｃ４「Ｏｍｎｉｔａｒｇ」（（ＷＯ  ０１／００２４５）であり得る。第２の抗体は、細胞傷害剤もしくは化学療法剤（たとえば、メイタンシノイド、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ））、または、１，８ビス−ナフタルイミド部分と結合体化され得る。例えば、１つの処方物または投薬レジメンにおいて、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、または血管内皮因子（ＶＥＧＦ）と結合する抗体をさらに提供ことが望ましくあり得る。
【０２９４】
他の治療レジメンが、本発明に従う抗癌剤の投与と組み合され得る。組み合わせ治療は、同時もしくは連続したレジメンとして投与され得る。連続的に投与される場合、組み合わせは、２回以上の投与で投与され得る。組み合わせられた投与としては、別個の処方物または単一の薬学的処方物を用いる同時投与（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、および、いずれかの順序による連続投与（ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）が挙げられ、これらの投与において、両方（または全て）の活性成分が同時にその生物学的活性を発揮する時間が存在する。
【０２９５】
一実施形態において、本発明のＡＤＣを用いる処置は、本明細書中で同定される抗癌剤、および、１種以上の化学療法剤または増殖阻害剤の組み合せた投与を包含し、これには、異なる化学療法剤のカクテルの、必要に応じて、抗ＥｒｂＢ２抗体（例えば、トラスツズマブ）を用いる処置と同時の、同時投与が含まれる。化学療法剤としては、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ  ＨＣｌ（ＣＰ−３５８７７４、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ）、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）および／またはアントラサイクリン抗生物質が挙げられる。このような化学療法剤についての調製および投薬計画は、製造業者の説明書に従って、または、当業者により経験的に決定されたように、使用され得る。このような化学療法剤の調製および投薬計画はまた、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｅｄ．，Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９９２）に記載される。
【０２９６】
抗癌剤は、抗ホルモン化合物（例えば、抗エストロゲン化合物（例えば、タモキシフェン）；抗プロゲステロン（例えば、オナプリストン（ＥＰ  ６１６８１２）；または抗アンドロゲン（例えば、フルタミド））と、このような分子について公知の投薬量において組み合され得る。処置される癌が、ホルモン非依存性の癌である場合、患者は、以前に抗ホルモン治療に供され、癌がホルモン非依存性になった後に、抗ＥｒｂＢ２抗体（および、必要に応じて、本明細書中に記載される他の因子）が患者に投与され得る。（治療に伴う心筋の機能不全を防止もしくは減らすために）心臓保護物質、または、１種以上のサイトカインを患者に同時投与することもまた有益であり得る。上記の治療レジメンに加えて、患者は、癌細胞の外科的な除去および／または放射線治療に供され得る。
【０２９７】
上記の同時投与される因子のいずれかのついての適切な投薬量は、現在使用されているものであり、そして、新たに同定された因子および他の化学療法剤もしくは治療の組み合せた作用（相乗作用）に起因して低下され得る。
【０２９８】
組み合わせ治療は、「相乗作用」を提供し得、そして、「相乗作用的」であると判明し得る。すなわち、活性成分を一緒に使用した場合に達成される効果は、これらの化合物を別個の使用した場合に得られる効果の合計よりも大きい。相乗作用は、活性成分が、（１）組み合わせられた単位投薬処方物において、同時に処方されて投与されるか、または、連続的に送達されるか；（２）別個の処方物として交互にもしくは平行して送達されるか；あるいは、（３）いくつかの他のレジメンによって投与される場合に達成され得る。交互の治療において送達される場合、相乗作用は、例えば、別個のシリンジ内の異なる注射剤によって、連続的に投与もしくは送達される場合に達成され得る。一般に、交互療法の間に、各活性成分の有効投薬量は、連続して（すなわち、段階的に）投与されるが、組み合わせ療法においては、２以上の活性成分の有効投薬量が、一緒に投与される。
【０２９９】
（抗体−薬物結合体の代謝産物）
また、本明細書中に記載されるＡＤＣ化合物のインビボ代謝産物も、このような産物が、先行技術を上回って新規かつ進歩性を有する範囲まで、本発明の範囲内に入る。このような産物は、投与される化合物の、例えば、酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化、酵素的切断などから生じ得る。従って、本発明は、本発明の化合物をこの化合物の代謝産物を得るために十分な時間にわたり哺乳動物に接触させる工程を包含するプロセスによって生成される、新規かつ進歩性を有する化合物を包含する。
【０３００】
代謝産物は、放射標識（例えば、１４Ｃまたは３Ｈ）したＡＤＣを調製し、これを検出可能な用量で（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇより多い用量）、ラット、マウス、モルモット、サルのような動物またはヒトに対して非経口的に投与し、代謝が生じるのに十分な時間（代表的には、約３０秒〜３０時間）を経過させ、そして、尿、血液もしくは他の生物学的サンプルから変換された生成物を単離することによって同定され得る。これらの生成物は、容易に単離される。なぜならば、これらは、標識されているからである（代謝産物中に残るエピトープに結合し得る抗体を用いることによって単離されるものもある）。代謝産物の構造は、従来の様式で（例えば、ＭＳ、ＬＣ／ＭＳまたはＮＭＲ分析によって）決定される。一般に、代謝産物の分析は、当業者に周知の従来の薬物代謝研究と同じ方法で行われる。変換された生成物は、変換されない場合にはインビボにおいて見られない限り、ＡＤＣ化合物の治療用投薬についての診断アッセイにおいて有用である。
【０３０１】
代謝産物としては、ＡＤＣのインビボ切断による生成物が挙げられ、このインビボ切断においては、薬物部分を抗体に連結するあらゆる結合の切断が生じる。代謝的切断は、こうして、裸の抗体、または、抗体フラグメントをもたらし得る。抗体の代謝産物は、リンカーの一部または全体に連結され得る。代謝的切断はまた、生成物中に、薬物部分またはその一部を生じ得る。薬物部分の代謝産物は、リンカーの一部もしくは全体に連結され得る。
【０３０２】
（製造物品）
別の実施形態において、ＡＤＣおよび上記の障害の処置に有用な物質を含有する製造物品または「キット」が提供される。製造物品は、容器と、容器上のラベルもしくはパッケージ挿入物または容器に付随したラベルもしくはパッケージ挿入物を含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジまたはブリスターパックが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。この容器は、状態の処置に有効な抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）組成物を保持し、そして滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通され得るストッパーを有するバイアルであり得る）。この組成物中の少なくとも１つの活性因子は、ＡＤＣである。このラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が目的の状態（例えば、癌）を処置するために使用されることを示す。一実施形態において、ラベルまたはパッケージ挿入物は、ＥｒｂＢ２と結合する抗体を含む組成物が、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４からなる群より選択されるＥｒｂＢレセプターを発現する癌を処置するのに使用され得ることを示す。さらに、ラベルまたはパッケージ挿入物は、処置される患者が、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３またはＥｒｂＢ４から選択されるＥｒｂＢレセプターの過度の活性化により特徴付けられる癌を有する患者であることを示し得る。例えば、癌は、これらのレセプターのうちの１つを過剰発現するか、そして／または、ＥｒｂＢリガンド（例えば、ＴＧＦ−α）を過剰発現する癌であり得る。ラベルまたはパッケージ挿入物はまた、この組成物が、ＥｒｂＢ２レセプターの過剰発現により特徴付けられない癌を処置するために使用され得ることも示し得る。他の実施形態において、パッケージ挿入物は、ＡＤＣ組成物が、ホルモン非依存性の癌、前立腺癌、結腸癌、または結腸直腸癌を処置するためにも使用され得ることを示し得る。
【０３０３】
製造物品は、（ａ）製造物品に含まれる化合物を有する第１の容器（ここで、その化合物は、本発明のADCを含み、このADCの抗体は、ＥｒｂＢ２に結合し、そしてＥｒｂＢ２を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する第１の抗体である）；および（ｂ）製造物品に含まれる化合物を有する第２の容器（ここで、その化合物は、ＥｒｂＢ２に結合し、そしてＥｒｂＢレセプターのリガンド活性化をブロックする第２の抗体、または、この第２の抗体とメイタンシノイドとの結合体を含む）を含み得る。この実施形態における製造物品は、第１および第２の化合物が、癌を処置するために使用され得ることを示すパッケージ挿入物をさらに含み得る。あるいは、もしくはさらに、この製造物品は、薬学的に受容可能な緩衝液（注射のための静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液など）を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。それは、商業的観点および利用者の観点から所望される他の物質をさらに含み得、これらの物質としては、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、およびシリンジが挙げられる。
【実施例】
【０３０４】
（実施例１−抗ＥｒｂＢ２モノクーナル抗体４Ｄ５の産生、特徴付けおよびヒト化）
ＥｒｂＢ２の細胞外ドメインに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体４Ｄ５を、Ｆｅｎｄｌｙら（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８に記載されるように産生した。簡単に述べると、Ｈｕｄｚｉａｋら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８４：７１５８−７１６３に記載されるように産生したＮＩＨ  ３Ｔ３／ＨＥＲ２−３４００細胞（１細胞あたりおよそ１×１０５  ＥｒｂＢ２分子を発現する）を、２５ｍＭ  ＥＤＴＡを含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）用いて収集し、ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫するために使用した。そのマウスに、０週目、２週目、５週目および７週目に、０．５ｍｌ  ＰＢＳ中１０７細胞の腹腔内注射を与えた。３２Ｐ標識したＥｒｂＢ２を免疫沈降した抗血清を有するマウスに、９週目および１３週目に、コムギ胚芽凝集素−セファロース（ＷＧＡ）精製したＥｒｂＢ２膜抽出物の腹腔内注射を与えた。その後、０．１ｍｌのＥｒｂＢ２調製物の静脈内注射を行い、脾細胞をマウス黒色腫株Ｘ６３−Ａｇ８．６５３と融合したハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡおよび放射性免疫沈降法によってＥｒｂＢ２結合についてスクリーニングした。
【０３０５】
マウスモノクローナル抗体４Ｄ５を、米国特許第５８２１３３７号（その全開示は、明確に参考として本明細書に援用される）に記載されるように、「遺伝子変換変異誘発」ストラテジーを用いてヒト化した。以下の実験で使用されるヒト化モノクローナル抗体４Ｄ５は、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８と称される。この抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【０３０６】
（実施例２−トラスツズマブの精製）
４４０ｍｇのＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、米国特許第５８２１３３７号）抗体）を含む１つのバイアルを、５０ｍＬ  ＭＥＳ緩衝液（２５ｍＭ  ＭＥＳ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ５．６）に溶解させ、同じ緩衝液で平衡化したカチオン交換カラム（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｓ、１５ｃｍ×１．７ｃｍ）にロードした。次いで、このカラムを同じ緩衝液（５カラム体積）で洗浄した。トラスツズマブを、緩衝液のＮａＣｌ濃度を２００ｍＭまで上昇させることによって溶出させた。抗体を含む画分をプールし。１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、そして５０ｍｍ  リン酸カリウム、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡを含む緩衝液（ｐＨ６．５）に透析した。
【０３０７】
（実施例３−抗体−薬物結合体：トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の調製）
【０３０８】
【化４９】
2008501029.tif 000033
精製したトラスツズマブを、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸で誘導体化して、ジチオピリジル基を導入した。ＮａＣｌ（５０ｍＭ）およびＥＤＴＡ（１ｍＭ）を含む４４．７ｍＬの５０ｍＭリン酸カルシウム緩衝液（ｐＨ６．５）中のトラスツズマブ（３７６．０ｍｇ、８ｍｇ／ｍＬ）を、ＳＰＰ（２．３ｍＬ  エタノール中５．３モル当量）で処理した。周囲温度でアルゴン雰囲気下での９０分間のインキュベーションの後、この反応混合物を、３５ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１５４ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡで平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５カラムでゲル濾過した。抗体を含む画分をプールし、アッセイした。抗体の改変の程度を、上記のように決定した。改変型抗体（トラスツズマブ−ＳＰＰ−Ｐｙ）の回収は、３３７ｍｇ（８９．７％）であり、１抗体あたりに連結された４．５個の放出可能な２−チオピリジン基を含む（ｐ’）。
【０３０９】
トラスツズマブ−ＳＰＰ−Ｐｙ  （３３７．０  ｍｇ、９．５  μｍｏｌの放出可能な２−チオピリジン基）を、上記の３５ｍＭ  クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）で２．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度に希釈した。次いで、３．０ｍＭ  ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ、最終反応混合物中３％  ｖ／ｖ）中のＤＭ１（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン）（その構造は、図１に示されている）（１．７当量、１６．１μｍｏｌ）を、抗体溶液に添加した。この反応をアルゴン雰囲気下で２０分間進めた。
【０３１０】
その反応物を、３５ｍＭ  クエン酸ナトリウム，１５４ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ６．５）で平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ３００ゲル濾過カラム（５．０ｃｍ×９０．０ｃｍ、１．７７Ｌ）にロードした。流速は、５．０ｍＬ／分であり、６５個の画分（各々２０．０ｍＬ）を回収した。主要なピークは、画分番号４７付近に集中した（図３）。主要なピークは、モノマーのトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１を含む。画分４４〜５１をプールし、アッセイした。１抗体分子あたりに連結されたＤＭ１薬物分子の数（ｐ’）を、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定し、１抗体分子あたり３．７個の薬物分子であることを見出した。
【０３１１】
（実施例４−抗体−薬物結合体：  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の調製）
【０３１２】
【化５０】
2008501029.tif 000034
精製したトラスツズマブを、（スクシンイミジル  ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート，ＳＭＣＣ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）で誘導体化して、ＳＭＣＣリンカーを導入した。トラスツズマブを、実施例２のようにＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）から精製し、７．５〜１０モル当量のＳＭＣＣ（ＤＭＳＯまたはＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）中２０ｍＭ、６．７ｍｇ／ｍＬ）を含む５０ｍＭ  リン酸カリウム／５０ｍＭ  塩化ナトリウム／２ｍＭ  ＥＤＴＡ，（ｐＨ６．５）中、２０ｍｇ／ｍＬで緩衝液交換処理した。アルゴン雰囲気下、周囲温度で２〜４時間攪拌後、その反応混合物を、５０ｍＭ  リン酸カリウム／５０ｍＭ  塩化ナトリウム／２ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ６．５）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５カラムで濾過した。あるいは、その反応混合物をｐＨ６で３０ｍＭ  クエン酸および１５０ｍＭ  塩化ナトリウムでゲル濾過した。抗体を含む画分をプールし、アッセイした。トラスツズマブ−ＳＭＣＣの回収は、８８％であった。
【０３１３】
薬物−リンカー中間体である上記からのトラスツズマブ−ＳＭＣＣを、５０ｍＭ  リン酸カリウム／５０ｍＭ  塩化ナトリウム／２  ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ６．５）で希釈して、１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度にし、ジメチルアセトアミド中ＤＭ１の１０ｍＭ溶液（１つのトラスツズマブあたり５つのＳＭＣＣと仮定して１．７当量、７．３７  ｍｇ／ｍｌ）と反応させた。この反応物をアルゴン雰囲気下、周囲温度で４〜１６時間攪拌した。この結合体化反応混合物を、ｐＨ６．５で、１×ＰＢＳを使用してＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５ゲル濾過カラム（１．５×４．９ｃｍ）で濾過した。あるいは、その反応混合物を、ｐＨ５で、１０ｍＭ  スクシナートおよび１５０ｍＭ  塩化ナトリウムでゲル濾過した。ＤＭ１／トラスツズマブ比（ｐ）は、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍでの吸光度から測定すると３．１であった。薬物  対  抗体の比（ｐ）はまた、質量分析法によって測定され得る。結合体化はまた、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によってモニタリングされ得る。凝集はレーザー光散乱分析によって評価され得る。
【０３１４】
（抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１結合体：）
このプロトコルの後、ＳＭＣＣリンカーおよびＤＭ１薬物部分を含む他の抗体−薬物結合体を調製した。これらとしては、以下が挙げられる：
【０３１５】
【化５１】
2008501029.tif 000035
【０３１６】
【化５２】
2008501029.tif 000036
【０３１７】
【化５３】
2008501029.tif 000037
。
【０３１８】
（抗体−ＢＭＰＥＯ−ＤＭ１結合体：）
システイン結合体化について、抗体を、ＥＤＴＡの存在下、還元剤（例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはＴＣＥＰ）を用いて還元し得る。３７℃で１時間インキュベートした後、ｐＨを、１００ｍＭ  リン酸カリウムを用いて約７に調整する。還元された抗体を、ビスマレイミド試薬ＢＭ（ＰＥＯ）４  （Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）によって改変し、抗体の表面上の未反応のマレイミド基を離す。これは、５０％  エタノール／水混合物中のＢＭ（ＰＥＯ）４を１０ｍＭの濃度に溶解させ、１０倍のモル過剰量をおよそ１．６  ｍｇ／ｍｌ（１０μＭ）の濃度でリン酸緩衝化生理食塩水中の抗体を含む溶液に添加し、１時間反応させてＡｂ−ＢＭＰＥＯを形成することによって達成され得る。過剰なＢＭ（ＰＥＯ）４を、３０ｍＭ  シトラート、ｐＨ６で１５０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液を用いてゲル濾過（ＨｉＴｒａｐカラム、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）によって除去する。およそ１０倍のモル過剰のＤＭ１を、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解させ、Ａｂ−ＢＭＰＥＯ中間体を添加する。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）もまた、薬物部分試薬を溶解させるために使用され得る。その反応混合物を一晩反応させ、その後、ゲル濾過またはＰＢＳに透析して、未反応のＤＭ１を除去する。ＰＢＳ中のＳ２００カラムでのゲル濾過を使用して、高分子量集合体を除去し、精製されたＡｂ−ＢＭＰＥＯ−ＤＭ１を提供する。
【０３１９】
このプロトコルの後、ＢＭＰＥＯリンカーおよびＤＭ１薬物部分を含む他の抗体−薬物結合体を調製した。それらとしては、以下が挙げられる：
【０３２０】
【化５４】
2008501029.tif 000038
。
【０３２１】
（実施例５−インビトロ細胞増殖アッセイ）
ＡＤＣの効能を、以下のプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８；Ｍｅｎｄｏｚａら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２：５４８５−５４８８）を使用する細胞増殖アッセイによって測定した：
１  培地中の約１０４細胞（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を含む１００μｌの細胞培養物のアリコートを、９６ウェルの不透明な壁を備えるプレートの各ウェルに堆積させた。
２  培地を含むが細胞を含まないコントロールウェルを準備した。
３  ＡＤＣを実験用ウェルに添加し、３〜５日間インキュベートした。
４  プレートをおよそ３０分間室温で平衡化した。
５  各ウェルに存在する細胞培養培地の体積に等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔを添加した。
６  内容物を軌道振盪機で２分間混合して、細胞溶解を誘導した。
７  プレートを室温で１０分間インキュベートし、発光シグナルを安定化した。
８  発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位としてグラフで報告した。
【０３２２】
（実施例６−マウスにおける血清クリアランスおよび安定性）
４匹の動物の群６つにおいて、ｂｅｉｇｅ変異の、未処置（腫瘍無し）ヌードマウスを、研究した。０日目に、キャリアのみを与えたビヒクル群を除いて、各マウスに、２００μｌの水性キャリア中、１回の２ｍｇ／ｋｇ用量のＡＤＣを与えた。血液を、投与後の各時点（５分後、１時間後、６時間後、２４時間後、７２時間後、および１６８時間後）で、麻酔下で心臓穿刺によって回収した。その血清を単離し、抗体およびＡＤＣを測定した。
群１：ビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ６．５、ＡＤＣなし）
群２：トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１
群３：トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１
群４：トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１
群５：トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ３
群５：トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４。
【０３２３】
（実施例７−ラットにおける血清安定性）  １用量群あたり６匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（各１００〜１２５グラム）の６つの用量群を研究した。０日目に、動物に、外側尾静脈を介して１用量体積１０ｍｌ／ｋｇで、ビヒクルのＩＶ用量、１０ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、または１０ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を１回投与した。約３００μｌの全血を、投与後の各時点：０分後（投与前）、１０分後、および３０分後；１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、２４時間後、および３６時間後；ならびに２日後、３日後、４日後、７日後、１４日後、２１日後、２８日後）で回収した。
【０３２４】
（実施例８−腫瘍体積のインビボ効力）
高発現ＨＥＲ２トランスジェニック外植片マウス：
トランスジェニック実験に適した動物は、標準的な商業的供給源（例えば、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｎ．Ｙ．））から得られ得る。多くの系統が適切であるが、ＦＶＢ雌性マウスは、彼らが非常に腫瘍形成しやすいので、好ましい。ＦＶＢ雄性を、交配のために使用し、精管切除したＣＤ．１雄性（ｓｔｕｄ）を、偽妊娠を刺激するために使用した。精管切除したマウスは、任意の業者から得ることができる。創始動物を、ＦＶＢマウスまたは１２９／ＢＬ６×ＦＶＢ  ｐ５３ヘテロ接合性マウスのいずれかと交配した。ｐ５３対立遺伝子においてヘテロ接合性を有するマウスを、腫瘍形成を潜在的に増大させるために使用した。しかし、これは、不要であることが判明した。従って、いくらかのＦ１腫瘍は、混合系統のものである。創始動物の腫瘍は、ＦＶＢのみである。いくらかの発生しつつある腫瘍を有するが、同腹仔を有さない６匹の創始動物を得た。
【０３２５】
腫瘍（Ｆｏ５  ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから増殖させた同種移植片）を有する動物を、トラスツズマブ−ＤＭ１マイタンシノイド結合体（１０ｍｇ／ｋｇ用量）の１回の注射で処置し、腫瘍体積を、注射後２０日間にわたって評価した。
【０３２６】
（Ｂｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片ＳＣＩＤマウス：）
マウス１匹あたり２０００万個のＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植片腫瘍細胞を有する８〜１０匹のＳＣＩＤマウスの群に、１日目に抗体−薬物結合体、または裸の抗体を投与した。８匹のマウスの群を、抗ＣＤ２２  ＡＤＣ、裸の抗ＣＤ２２抗体、およびコントロールで各々試験した。コントロールＡＤＣ（トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１；負荷：ＤＭ１／トラスツズマブ＝３．２）は、特異的結合物（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｅｒ）ではなく、２００μｇのＤＭ１／ｍ２，４．２  トラスツズマブ／ｋｇマウスで投与し、約３日の平均腫瘍倍加時間を生じた。抗ＣＤ２２結合体７Ａ２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（負荷：ＤＭ１／Ａｂ＝３．６）、５Ｅ８−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（負荷：ＤＭ１／Ａｂ＝３．６）、およびＲＦＢ４−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（負荷：ＤＭ１／Ａｂ＝４．３）、裸の抗体７Ａ２、５Ｅ８およびＲＦＢ４を、４ｍｇ／ｋｇマウスで投与した。
【０３２７】
（実施例９−ラットの毒性）
トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（ジスルフィドリンカー）の急性毒性プロフィールを、遊離ＤＭ１およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（非ジスルフィドリンカー）のプロフィールと比較し、評価した。動物に、１日目に注射し、完全な化学的プロフィールおよび血液プロフィールをベースライン、３日目および５日目において得、そして完全な剖検を、５日に行った。慣用的な組織学を、以下の組織に関して、各群につき３匹の無作為の動物に対して行った：胸骨、肝臓、腎臓、胸腺、脾臓、大腸および小腸。実験群は、以下のとおりであった：
群１：ビヒクル（１０ｍＭ  コハク酸ナトリウム、１００ｍｇ／ｍＬ  スクロース、０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０、ｐＨ５．０）
群２：トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、２２．３ｍｇ／ｋｇ
群３：トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、１０ｍｇ／ｋｇ
群４：トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、２５ｍｇ／ｋｇ
群５：トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、５０ｍｇ／ｋｇ
群６：遊離ＤＭ１、１６０μｇ／ｋｇ。
【０３２８】
（実施例１０−カニクイザルの毒性／安全性）
４頭（２頭のオス、２頭のメス）の未処置Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）の３つの群を、研究した。
群１：（４頭の動物）に、１日目および２２日目に、ビヒクル（ＰＢＳ、ｐＨ６．５（すなわち、ＡＤＣなし処方物）のみを与え、続いて、３６日目に剖検した。
群２：（４頭の動物）に、１日目および２２日目に、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１  ４９００μｇ／ｍ２を与えた。
群３：（４頭の動物）に、２２日目に、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１  ７２００μｇ／ｍ２を与えた。
【０３２９】
投与を、他の種に関連させるために、動物の表面積で表す（すなわち、種に関係なくμｇ／ｍ２での投与量、よって種間で比較可能）。群２および群３の研究のためのトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の処方物は、ＰＢＳ、５．４ｍＭ  リン酸ナトリウム、４．２ｍＭ  リン酸カリウム、１４０ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ６．５を含んでいた。
【０３３０】
血液分析のために、最初に投与する前（馴化期間）、ならびに最初に投与して３日後、７日後、１１日後、および１４日後に（群１および群２）、ならびに２回目に投与して３日後、７日後、１１日後、１４日後、および２１日後（群１、群２および群３）に、血液を採取した。赤血球（ＲＢＣ）数および血小板（ＰＬＴ）数を、光散乱法によって測定した。白血球（ＷＢＣ）数を、ペルオキシダーゼ／好塩基球法により測定した。網状赤血球数を、カチオン性色素を用いた光散乱法により測定した。細胞数を、Ａｄｖｉａ  １２０装置で測定した。ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）を、ＵＶ／ＮＡＤＨによるＵ／Ｌにおいて；Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００装置のＩＦＣＣ方法、およびＴｏｔａｌ  Ａｂ  ＥＬＩＳＡ−ＥＣＤ／ＧｘｈｕＦｃ−ＨＲＰ．Ｃｏｎｊ．Ａｂ  ＥＬＩＳＡ−ｘＤＭ１／ＥＣＤ−Ｂｉｏ／ＳＡ−ＨＲＰ試験を用いて測定した。
【０３３１】
本明細書全体にわたって引用されている全ての特許、特許出願、および参考文献は、明らかに本明細書に参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０３３２】
【図１】図１は、抗体−薬物結合体で処理したＳＫ−ＢＲ−３細胞を用いるインビトロでの細胞増殖アッセイを示す。−（白四角）−  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、−（白三角）−  トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、−（白丸）−  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１。
【図２】図２は、抗体−薬物結合体で処理したＢＴ−４７４細胞を用いるインビトロでの細胞増殖アッセイを示す。−（白四角）−  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、−（白三角）−  トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、−（白丸）−  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１。
【図３】図３は、抗体−薬物結合体で処理したＭＣＦ７細胞を用いるインビトロでの細胞増殖アッセイを示す。−（白四角）−  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、−（白三角）−  トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、−（白丸）−  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１。
【図４】図４は、抗体−薬物結合体で処理したＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞を用いるインビトロでの細胞増殖アッセイを示す。−（白四角）−  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、−（白三角）−  トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、−（白丸）−  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１。
【図５】図５は、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１  対  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の、腫瘍を有さないベージュヌードマウスにおける血清クリアランスを示す。７日間にわたって６つの時点（投与５分後、１時間後、６時間後、２４時間後、７２時間後、１６８時間後）で結合および総抗体血清濃度を測定する。
【図６】図６は、以下の結合体：トラスツズマブ−ＳＰＤＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ３、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の、腫瘍を有さないヌードマウスにおける経時的安定性を示す。７日間にわたって６つの時点（投与５分後、１時間後、６時間後、２４時間後、７２時間後、１６８時間後）で血清濃度を測定する。
【図７】図７は、処置７日後の腫瘍を有するマウスおよび腫瘍を有さないマウスにおける、トラスツズマブ／トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１およびトラスツズマブ／トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の総血清濃度の測定を示す。
【図８】図８は、４匹の被験体ラットに対する１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１投与後の、血漿濃度クリアランス研究を示す。抗体およびトラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１の総濃度を測定した（ｔｒ＝トラスツズマブ）。
【図９】図９は、４匹の被験体ラットに対する１０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１投与後の血漿濃度クリアランス研究を示す。抗体およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の総濃度を測定した。
【図１０】図１０は、以下：ビヒクル（ＰＢＳ  ｐＨ６．５）、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（３７０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）、およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（３３０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）を投与したマウスにおける、経時的な平均腫瘍容積変化を示す。ここで、用量は投与したＤＭ１の用量を参照する。
【図１１】図１１は、０日目に以下：ビヒクル（ＰＢＳ  ｐＨ６．５）、１０ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１（３．４  ＤＭ１／Ａｂ；１６８μｇ  ＤＭ１／ｋｇ）、および１０ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（３．２  ＤＭ１／Ａｂ；１５８μｇ  ＤＭ１／ｋｇ）を投与した、Ｆｏ５腫瘍同種移植片を有する胸腺欠損ヌードマウスにおける、経時的な平均腫瘍容積変化を示す。ここで、用量は投与した抗体−薬物結合体の用量を参照する。
【図１２】図１２は、ビヒクル（ＰＢＳ  ｐＨ６．５）、１０  ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、１０ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４、１０  ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ３および１０ｍｇ／ｋｇ  トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を含む単回注射による、ＭＭＴＶ−Ｈｅｒ２  Ｆｏ  ５ベージュヌードマウス（各群７匹、すべて腫瘍を有する、Ｔｉ＝７）における、経時的な平均腫瘍容積変化を示す。
【図１３】図１３は、ＨＥＲ２−Ｆｏ５腫瘍における、ビヒクル（ＰＢＳ  ｐＨ６．５）、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ４、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ３およびトラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１についての、２倍腫瘍体積までの時間およびｌｏｇ細胞死滅分析を示す。
【図１４】図１４は、以下：ビヒクル（１０ｍＭ  コハク酸ナトリウム、１００ｍｇ／ｍＬ  スクロース、０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．０）、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（１８６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（１８６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（３２６０μｇ  ＤＭ１／ｍ２）および遊離のＤＭ１（６５０μｇ／ｍ２）を投与したラットの、経時的な体重の変化を示す。
【図１５】図１５は、以下：ビヒクル（１０ｍＭ  コハク酸ナトリウム、１００ｍｇ／ｍＬ  スクロース、０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．０）、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（２２．３ｍｇ／ｋｇ）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（１０ｍｇ／ｋｇ）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（２５ｍｇ／ｋｇ）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（５０ｍｇ／ｋｇ）および遊離のＤＭ１を投与したラットモデルにおける、経時的な１リットルあたりのＡＳＴ単位で測定した肝機能試験を示す。
【図１６】図１６は、以下：ビヒクル（１０ｍＭ  コハク酸ナトリウム、１００ｍｇ／ｍＬ  スクロース、０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．０）、トラスツズマブ−ＳＰＰ−ＤＭ１（２２．３ｍｇ／ｋｇ）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（１０ｍｇ／ｋｇ）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（２５ｍｇ／ｋｇ）、トラスツズマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（５０ｍｇ／ｋｇ）および遊離のＤＭ１を投与したラットモデルにおける、経時的な１リットルあたりの細胞のＰＬＴ単位で測定した安全性プロフィールを示す。
【図１７】図１７は、抗体−薬物結合体で処理したＨＴ１０８０ＥｐｈＢ２（Ｃ８）細胞を用いるインビトロでの細胞増殖アッセイを示す：−（上向きの黒三角）−  抗ＥｐｈＢ２Ｒ  ２Ｈ９−ＳＰＰ−ＤＭ１、−（下向きの黒三角）−  抗ＥｐｈＢ２Ｒ  ２Ｈ９−ＳＭＣＣ−ＤＭ１。