【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年10月25日(2011.10.25)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンドソームから標的細胞の細胞質ゾルへのキメラタンパク質またはそのフラグメントの移行を可能にするポリペプチドにより結合された、細胞特異的標的因子のアミノ酸配列およびエルシニア外側タンパク質Ｐ（ＹｏｐＰ）のアミノ酸配列を含むキメラタンパク質であって、細胞特異的標的因子がＴＮＦ／ＮＧＦ受容体の細胞外部分であるＴＮＦ結合タンパク質１（ＴＢＰ−１）であるキメラタンパク質。
【請求項２】
ＹｏｐＰが、減少したアポトーシス活性を有するか、またはアポトーシス活性を有さず、かつアルギニン−１４３残基で突然変異したＹｏｐＰ血清群Ｏ：３、Ｏ：９およびＯ：８から選択される請求項１記載のキメラタンパク質。
【請求項３】
移行を可能にするポリペプチドが、シュードモナス外毒素移行ドメインまたはそのフラグメントを含む請求項１または２記載のキメラタンパク質。
【請求項４】
シュードモナス外毒素移行ドメインのフラグメントが、最後のα−ヘリックスドメイン（Ｆ）が欠失している請求項３記載のキメラタンパク質。
【請求項５】
本明細書においてＰＥＩＩｔｒと称されるシュードモナス外毒素移行ドメインのフラグメントが、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）外毒素のアミノ酸配列（配列番号：３）に相当する請求項３記載のキメラタンパク質。
【請求項６】
１つまたは２つのフリン切断部位を含む請求項１〜５のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項７】
１つのフリン切断部位が、移行を可能にするポリペプチドのＮ末端に位置し、１つのフリン切断部位が、ＹｏｐＰタンパク質のＮ末端に位置する請求項６記載のキメラタンパク質。
【請求項８】
１つのフリン切断部位が、ジフテリア毒素のフリン切断部位である請求項６または７記載のキメラタンパク質。
【請求項９】
フリン切断部位が、本明細書においてＤＴと称されるアミノ酸配列ＲＶＲＲを有する請求項８記載のキメラタンパク質。
【請求項１０】
キメラタンパク質が、本明細書においてＴＢＰ−ＹｏｐＰと称される、ＴＢＰ−１、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）外毒素の移行ドメインフラグメントＰＥＩＩｔｒ、フリン切断部位ＤＴおよびＹｏｐＰから構成されるか、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能性誘導体、フラグメントもしくは塩から構成される請求項９記載のキメラタンパク質。
【請求項１１】
標的細胞が、リンパ球様細胞である請求項１〜１０のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項１２】
標的細胞が、マクロファージである請求項１１記載のキメラタンパク質。
【請求項１３】
標的細胞が、単球細胞である請求項１１記載のキメラタンパク質。
【請求項１４】
標的細胞が、上皮細胞である請求項１〜１０のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質をコードするＤＮＡ配列からなる核酸。
【請求項１６】
真核細胞における分泌のためのシグナルペプチドをさらにコードする請求項１５記載のＤＮＡ配列からなる核酸。
【請求項１７】
請求項１５または１６記載のＤＮＡ配列からなる核酸を包含する発現ベクター。
【請求項１８】
ＤＮＡが、ＮＦ−κＢから独立している、活性を有するプロモーターに官能基で連結される請求項１７記載の発現ベクター。
【請求項１９】
プロモーターが、ＥＦ−１αである請求項１８記載の発現ベクター。
【請求項２０】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２１】
細胞が、ＨｅＬａ、ＣＨＯ、２９３、酵母および昆虫細胞から選択される真核細胞である請求項２０記載の宿主細胞。
【請求項２２】
細胞が、原核細胞である請求項２０記載の宿主細胞。
【請求項２３】
請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の宿主細胞を培養し、製造されたキメラタンパク質を単離することを含む請求項１〜１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質を製造する方法。
【請求項２４】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質もしくはフラグメントである請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質、および薬学的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
【請求項２６】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能的誘導体、フラグメントもしくは塩である請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
マラリア、敗血症、リューマチ性関節炎、乾癬、炎症性大腸疾患および癌からなる群より選択される疾患の治療のための医薬品の製造における請求項１〜１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質の使用。
【請求項２８】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能性誘導体、フラグメントもしくは塩である請求項２７記載の使用。
【請求項２９】
敗血症性ショック、強直性脊椎炎、筋萎縮性側索硬化症、インシュリン依存性糖尿病、移植片対宿主疾患および鎌形赤血球貧血からなる群より選択される疾患の治療のための医薬品の製造における請求項１〜１３のいずれか１項に記載のキメラタンパク質の使用。
【請求項３０】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能性誘導体、フラグメントもしくは塩である請求項２９記載の使用。
【請求項３１】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質の治療上有効量を含む、マラリア、敗血症、リューマチ性関節炎、乾癬、炎症性大腸疾患および癌からなる群より選択される疾患の治療用医薬組成物。
【請求項３２】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能性誘導体、フラグメントもしくは塩である請求項３１記載の医薬組成物。
【請求項３３】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の治療上有効量のキメラタンパク質を含む、敗血症性ショック、強直性脊椎炎、筋萎縮性側索硬化症、インシュリン依存性糖尿病、移植片対宿主疾患および鎌形赤血球貧血からなる群より選択される疾患の治療用医薬組成物。
【請求項３４】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能性誘導体、フラグメントもしくは塩である請求項３３記載の医薬組成物。
【請求項３５】
標的細胞における細胞表面上のリガンドの異常な発現を減少させるインビトロ方法であって、細胞をキメラタンパク質に暴露することを含み、該キメラタンパク質が、エンドソームから標的細胞の細胞質ゾルへの該キメラタンパク質またはそのフラグメントの移行を可能にするポリペプチドによって結合される、細胞特異的標的因子およびＹｏｐＰを含み、該細胞特異的標的因子がＴＮＦ／ＮＧＦ受容体の細胞外部分であるＴＮＦ結合タンパク質１（ＴＢＰ−１）である方法。
【請求項３６】
リガンドがＴＮＦである請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
移行を可能にするポリペプチドが、ＰＥＩＩｔｒである請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
細胞が、マクロファージまたは単球細胞である請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
キメラタンパク質が、ＴＢＰ−ＹｏｐＰ、またはそのムテイン、変異体、融合タンパク質、機能性誘導体、フラグメントもしくは塩である請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
ＴＮＦ−αは、活性化単球細胞、マクロファージおよびＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現される。これらの細胞は、それらの細胞分解経路における主要成分として、膜固定ＴＮＦ−αを示す。以下の疾患において、活性化マクロファージが、それらの病理学に関与することが推測されている：敗血性ショック、リューマチ性関節炎、強直性脊椎炎および乾癬性関節炎（SinghおよびSuruchi、２００４）、乾癬（Asadullahら、２００２）、筋萎縮性側索硬化症（Ghezziら、１９９８）、インシュリン依存性糖尿病（Kagiら、１９９９）、移植片対宿主疾患（Hongoら、２００４）および鎌状赤血球貧血（Belcherら、２０００年）。以下の疾患において、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞が、それらの病理学に関与することが推測されている：全身性紅斑性狼瘡(Pachecoら、2002)、反応性関節炎および他の自己免疫疾患(Mittler、２００４）。しばしば、活性化ＣＤ８＋Ｔは、特定の臓器に対して有害である。たとえば、肝臓炎症中に起こる集約的肝細胞アポトーシスは、肝臓への活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の浸透に続いて誘発される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
本発明は、エンドソームから標的細胞の細胞質ゾルへのキメラタンパク質またはそのフラグメントの移行を可能にするポリペプチドによって結合された、細胞特異的標的因子のアミノ酸配列およびエルシニア外側タンパク質（Ｙｏｐ）のアミノ酸配列を含むキメラタンパク質に関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
本発明の１つの態様において、本発明のキメラタンパク質の細胞標的は、マクロファージまたは単球細胞のようなリンパ球様細胞である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
１つの実施態様において、本発明は、活性化マクロファージまたは単球細胞が、発症または経過に関与する疾患の治療のための医薬品の製造における前記キメラタンパク質の使用に関する。該疾患の例として、敗血症性ショック、リューマチ性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、筋萎縮性側索硬化症、インシュリン依存性糖尿病、移植片対宿主疾患、および鎌型赤血球貧血があげられる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
１つの実施態様において、本発明は、活性化マクロファージまたは単球細胞が、発症または経過に関与している疾患の治療方法であって、治療上有効量の前記キメラタンパク質を、必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
さらに別の実施態様において、本発明は、単球細胞やマクロファージ細胞などの標的細胞における細胞表面上のＴＮＦなどのリガンドの異常な発現を減少させる方法であって、該標的細胞をキメラタンパク質に暴露することを含み、該キメラタンパク質が、標的細胞の細胞質ゾルにエンドソームから、該キメラタンパク質またはそのフラグメントの移行を可能にするポリペプチド（ＰＥＩＩｔｒなど）によって結合される、標的細胞の表面上に発現されるリガンドの受容体の細胞外部分およびＹｏｐを含む方法を提供する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
本発明は、細胞特異的標的因子のアミノ酸配列、およびエンドソームから標的細胞の細胞質ゾルへのキメラタンパク質またはそのフラグメントの移行を可能にするポリペプチドに結合されたエルシニア外側タンパク質（Ｙｏｐ）のアミノ酸配列を含むキメラタンパク質に関する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
本発明によるキメラタンパク質は、マクロファージおよび単球細胞などのリンパ球様細胞において、および上皮細胞において結合、貫通および作用することが分かった。ＴＢＰ−ＹｏｐＰは、単球細胞の特徴を示す活性化細胞株（ＴＨＰＩ）において、結合し、細胞毒性を誘発することが分かった。ＴＢＰ−ＹｏｐＰの細胞毒性活性は、ＴＨＰＩ細胞の表面ＴＮＦを通して特異的に誘発されることが分かった。対照的に、シュードモナス外毒素の移行および触媒ドメイン（ＰＥ３８）に融合したＴＢＰより構成される別のキメラタンパク質であるＴＢＰ−ＰＥ３８（２００４年６月２８日に出願された米国仮出願番号第６０／５８２８２７号で開示された）は、活性化ＴＨＰＩ細胞の細胞毒性を引き起さなかった。ＴＢＰ−ＰＥ３８は、表面ＴＮＦを過剰発現するように遺伝子操作された上皮細胞株であるＨｅＬａＭ９細胞に対して細胞毒性がある一方で、ＴＢＰ−ＹｏｐＰは、これらの細胞に対して細胞毒性がないことが分かった。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５３】
実施例７．  その表面にＴＮＦを発現する細胞
２つの細胞株を、ＴＢＰ−ＹｏｐＰの効果を調査するために使用した。（ａ）ヒト急性単球性白血病ＴＨＰＩ細胞（ドイツ国コレクション・オブ・マイクロオーガニズムス・アンド・セル・カルチャーから入手）。これらの細胞の単球細胞分化は、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）で誘発しうる。これらの細胞を、１０％Ｆｃｓ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭ  ピルビン酸Ｎａ、１％  非必須アミノ酸、９ｍｇ／ｍｌインシュリン、１００ｍｇ／ｍｌペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ  １６４０培地中で、０．３〜１×１０6／ｍｌの細胞密度範囲で培養する。細胞表面ＴＮＦ発現を増強するために、ＰＭＡで活性化された（１６〜２０時間、１００ｎｇ／ｍｌ）これらの細胞を、試験の前に２時間、ＬＰＳ（１．５時間、１ｍｋｇ／ｍｌ）で、１０ｍｃｇ／ｍｌメタロプロテアーゼ阻害剤ＧＭ６００１（カルバイオケム）で処理した。