【手続補正書】
【提出日】平成22年3月5日(2010.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲＳＶサブタイプＡおよびＢを中和することができる抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体であって、前記ポリクローナル抗体が、少なくとも１種のＲＳＶ外被タンパク質における少なくとも３種の異なるエピトープに一緒に特異的に結合する別個の抗体メンバーを含む、抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項２】
前記ポリクローナル抗体が、少なくとも２種のＲＳＶ外被タンパク質に対する特異的な反応性を一緒に提供する別個の抗体メンバーを含む、請求項１記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項３】
ＲＳＶ外被タンパク質が、ＲＳＶ  Ｇタンパク質、ＲＳＶ  Ｆタンパク質およびＲＳＶ  ＳＨタンパク質から選択される、請求項１または２記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項４】
抗−外被タンパク質の反応性が抗−Ｇおよび抗−Ｆ反応性であり、前記反応性が少なくとも２種の別個の抗−Ｇ抗体および少なくとも１種の別個の抗−Ｆ抗体により提供される、請求項１から３のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項５】
第１の抗−Ｇ抗体が、Ｇ−タンパク質における保存されたエピトープに特異的に結合でき、第２の抗−Ｇ抗体が、Ｇ−タンパク質システインリッチドメイン（ＧＣＲＲ）に特異的に結合でき、ならびにＦ−反応性が、抗原部位Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、Ｃ、またはＦ１のうちの少なくとも１つに対して指向性である、請求項４記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項６】
少なくとも抗−Ｇ反応性の一部がＣＸ３Ｃモチーフに対して指向性である、請求項４または５記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項７】
抗−Ｇ反応性が、さらに少なくとも１種の株特異的なエピトープに対して指向性である、請求項４から６のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項８】
抗−Ｆ反応性が、少なくとも抗原部位ＩＩおよび抗原部位ＩＶに対して指向性である、請求項４から７のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項９】
抗−外被タンパク質の反応性が、請求項４から８に対して、または関して指向性であって、さらにＳＨタンパク質に対して指向性である、請求項１から８のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項１０】
別個の抗体メンバーの組成物が、ドナーにおけるＲＳＶ外被抗原に対する多様性、親和性および特異性に関する液性免疫応答を反映する、請求項１から９のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項１から１０のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体であって、別個の抗体が、ＲＳＶに対する液性免疫応答を上げた一人またはそれ以上のヒトドナーから得られた核酸配列によりコードされ、前記ポリクローナル抗体が、十分にヒト抗体であるポリクローナル抗体。
【請求項１２】
別個の抗体メンバーが、ドナーに元々存在するＶＨおよびＶＬのペアーから構成される、請求項１０または１１記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項１３】
別個のメンバーが各々、表５に示されるＶＨおよびＶＬのペアーの群から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域を含む、請求項１から１２のうちのいずれか記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体。
【請求項１４】
請求項１から１３のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体および医薬上許容される賦形剤を活性成分として含む、医薬組成物。
【請求項１５】
哺乳動物においてＲＳＶ感染に関連する１つまたはそれ以上の症状を予防、治療または改善するための医薬組成物であって、請求項１から１３のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体の有効量を含む組成物。
【請求項１６】
有効量が、体重ｋｇあたり抗体１００ｍｇまたはそれ以下であり、例えば、体重ｋｇあたり抗体９０ｍｇまたはそれ以下、８０ｍｇまたはそれ以下、７０ｍｇまたはそれ以下、６０ｍｇまたはそれ以下、５０ｍｇまたはそれ以下、４０ｍｇまたはそれ以下、３０ｍｇまたはそれ以下、２０ｍｇまたはそれ以下、１０ｍｇまたはそれ以下、９ｍｇまたはそれ以下、８ｍｇまたはそれ以下、７ｍｇまたはそれ以下、６ｍｇまたはそれ以下、５ｍｇまたはそれ以下、４ｍｇまたはそれ以下、３ｍｇまたはそれ以下、２ｍｇまたはそれ以下、１ｍｇまたはそれ以下、０．９ｍｇまたはそれ以下、０．８ｍｇまたはそれ以下、０．７ｍｇまたはそれ以下、０．６ｍｇまたはそれ以下、０．５ｍｇまたはそれ以下、０．４ｍｇまたはそれ以下、０．３ｍｇまたはそれ以下、０．２ｍｇまたはそれ以下および０．１ｍｇまたはそれ以下である、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
有効量が、少なくとも体重ｋｇあたり抗体０．０１ｍｇであり、例えば、少なくとも０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８ｍｇである、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１８】
有効量が、体重ｋｇあたり抗体０．１〜２０ｍｇの間である、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１９】
年間あたり少なくとも１回投与され、例えば、年間あたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９回で投与される、請求項１５〜１８のうちのいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＲＳＶ感染を誘引するリスクの高い年の間に一定間隔で投与される、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
一定間隔が、１週間、２週間、１ヶ月間、または２ヶ月間である、請求項２０記載の医薬組成物。
【請求項２２】
哺乳動物におけるＲＳＶ感染に関連した１つまたはそれ以上の症状の治療、改善または予防のための組成物の調製のための請求項１から１３のうちのいずれか１項記載の抗−ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体または請求項１４記載の医薬組成物の使用。
【請求項２３】
ＶＨおよびＶＬをコードするペアー（ｐａｉｒｓ）のレパートリーを作成する方法であって、メンバーが、ＲＳＶ感染から生じる液性免疫応答に関連する遺伝子のペアーを反映するものであって、
ａ．ＲＳＶに感染したドナーまたはＲＳＶ感染から回復したドナーからリンパ球を含む細胞画分を提供し；
ｂ．任意選択的に、前記細胞画分からＢ細胞または血漿細胞を濃縮し；
ｃ．前記細胞画分由来の細胞を複数の容器に個々に分配することを含む、単離された単一細胞の集団を得て；次いで
ｄ．前記単離された単一細胞に由来する鋳型を用いて、重複伸長（ｏｖｅｒｌａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）ＲＴ−ＰＣＲ法において、増幅させ、ＶＨおよびＶＬをコードするペアーの連結を生じさせ；
ｅ．任意選択的に、連結したＶＨおよびＶＬをコードするペアーのネスティド（ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲを実施すること：
を含む方法。
【請求項２４】
請求項１から１３のうちのいずれか１項記載の組み換えポリクローナル抗−ＲＳＶ抗体を発現することができる、ポリクローナル細胞株。
【請求項２５】
個々の細胞が各々、単一のＶＨおよびＶＬをコードするペアーを発現することができ、全体としてポリクローナル細胞株がＶＨおよびＶＬをコードするペアーのコレクションを発現することができ、各ＶＨおよびＶＬをコードするペアーが、抗−ＲＳＶ抗体をコードする、ポリクローナル細胞株。
【請求項２６】
前記ＶＨおよびＶＬをコードするペアーのコレクションが、請求項２３の方法により作成される、請求項２５記載のポリクローナル細胞株。
【請求項２７】
本明細書の表５に記載される抗体分子、あるいは前記抗体分子の特異的に結合するフラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログから選択される単離ヒト抗ＲＳＶ−抗体分子であって、前記結合するフラグメントまたはアナログが、少なくとも前記単離抗体分子の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む単離ヒト抗ＲＳＶ−抗体分子。
【請求項２８】
表８に記載された抗体に由来するか、あるいは配列番号：１〜４４のうちの１つに含まれる重鎖ＣＤＲアミノ酸配列および配列番号：１〜４４から選択されるアミノ酸配列より８８高い配列番号を有する付随の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項２７記載の抗体分子、フラグメントまたはアナログ。
【請求項２９】
本明細書の表６または７に記載される抗体に由来する、請求項２７記載の抗体分子、フラグメントまたはアナログ。
【請求項３０】
本明細書の表６または７に記載される抗体である、請求項２７記載の抗体分子、フラグメントまたはアナログ。
【請求項３１】
ヒト抗体由来のＦａｂにおけるＣＤＲと同一であるＣＤＲを含み、前記Ｆａｂは、物質輸送時の制限を避けるために非常に低い密度でセンサー表面上に固定された組み換えＲＳＶ  Ｇタンパク質を用いて、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００において表面プラズモン共鳴分析を実施して測定する場合、５００ｎＭまたはそれ以下のＲＳＶ  Ｇタンパク質に対する解離定数ＫＤを示す、単離された抗体分子、抗体フラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログ。
【請求項３２】
ＫＤが、４００ｎＭまたはそれ以下であり、例えば、３００ｎＭまたはそれ以下、２００ｎＭまたはそれ以下、１００ｎＭまたはそれ以下、１ｎＭまたはそれ以下であり、９００ｐＭまたはそれ以下、８００ｐＭまたはそれ以下、７００ｐＭまたはそれ以下、６００ｐＭまたはそれ以下、５００ｐＭまたはそれ以下、４００ｐＭまたはそれ以下、３００ｐＭまたはそれ以下、２００ｐＭまたはそれ以下、１００ｐＭまたはそれ以下、９０ｐＭまたはそれ以下、および８０ｐＭまたはそれ以下である、請求項３１記載の単離された抗体分子、抗体フラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログ。
【請求項３３】
ヒト抗体由来のＦａｂにおける抗原結合部位に同一である抗原結合部位を含み、前記Ｆａｂは、物質輸送時の制限を避けるために非常に低い密度でセンサー表面上に固定された組み換えＲＳＶ  Ｇタンパク質を用いて、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００において表面プラズモン共鳴分析を実施して測定する場合、５００ｎＭまたはそれ以下のＲＳＶ  Ｆタンパク質に対する解離定数ＫＤを示す、単離された抗体分子、抗体フラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログ。
【請求項３４】
ＫＤが、４００ｎＭまたはそれ以下であり、例えば、３００ｎＭまたはそれ以下、２００ｎＭまたはそれ以下、１００ｎＭまたはそれ以下、１ｎＭまたはそれ以下であり、９００ｐＭまたはそれ以下、８００ｐＭまたはそれ以下、７００ｐＭまたはそれ以下、６００ｐＭまたはそれ以下、５００ｐＭまたはそれ以下、４００ｐＭまたはそれ以下、３００ｐＭまたはそれ以下、２００ｐＭまたはそれ以下、１００ｐＭまたはそれ以下、９０ｐＭまたはそれ以下、８０ｐＭまたはそれ以下、７０ｐＭまたはそれ以下、６０ｐＭまたはそれ以下、５０ｐＭまたはそれ以下、４０ｐＭまたはそれ以下、３０ｐＭまたはそれ以下、２５ｐＭまたはそれ以下、２０ｐＭまたはそれ以下、１５ｐＭまたはそれ以下、１０ｐＭまたはそれ以下、９ｐＭまたはそれ以下、８ｐＭまたはそれ以下、７ｐＭまたはそれ以下、６ｐＭまたはそれ以下、および５ｐＭまたはそれ以下である、請求項３３記載の単離された抗体分子、抗体フラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログ。
【請求項３５】
クローン番号８１０、８１８、８１９、８２４、８２５、８２７、８５８または８９４で産生されるヒト抗体のＣＤＲを含む、請求項２７〜３４のうちのいずれか１項記載の抗体分子あるいは特異的に結合するフラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログ。
【請求項３６】
医薬上許容される担体、賦形剤、ビヒクルまたは希釈液との混合において、請求項２７〜３５のうちのいずれか１項記載の抗体分子あるいは特異的に結合するフラグメントまたは合成もしくは半合成抗体アナログを含む抗体組成物。
【請求項３７】
請求項２７〜３５のうちのいずれか１項記載の２種の別個の抗体分子および／または特異的に結合するフラグメントおよび／または合成もしくは半合成抗体アナログを含む、請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】
請求項２７〜３５のうちのいずれか１項記載の少なくとも３種の別個の抗体分子および／または特異的に結合するフラグメントおよび／または合成もしくは半合成抗体アナログを含み、かかる組成物が、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０種の別個の抗体分子および／またはフラグメントおよび／または合成もしくは半合成抗体アナログを含む、請求項３６記載の組成物。
【請求項３９】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質に結合する少なくとも１種の抗体分子、フラグメントまたはアナログを含み、ＲＳＶ  Ｇタンパク質に結合する少なくとも１種の抗体分子、フラグメントまたはアナログを含む、請求項３６〜３８のうちのいずれか１項記載の組成物。
【請求項４０】
請求項２７〜３５のうちのいずれか１項で定義される少なくとも１種のＣＤＲのアミノ酸配列をコードする、単離核酸フラグメント。
【請求項４１】
少なくとも表５に記載されたクローンのうちの１つにより産生される抗体のＣＤＲをコードする、請求項４０記載の単離核酸フラグメント。
【請求項４２】
配列番号：１〜４４のうちのいずれか１つに記載される重鎖アミノ酸配列のＣＤＲ配列をコードする、単離核酸フラグメント。
【請求項４３】
配列番号：８９〜１３２のうちのいずれか１つに記載される軽鎖アミノ酸配列のＣＤＲ配列をコードする、単離核酸フラグメント。
【請求項４４】
配列番号：１〜４４のうちのいずれか１つに記載される重鎖アミノ酸配列のＣＤＲ配列および配列番号：１〜４４から選択されるアミノ酸配列より８８高い配列番号を有する付随の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列をコードする、単離核酸フラグメント。
【請求項４５】
配列番号：４５〜８８および／または１３３〜１７６に含まれるコーディング配列を含む、請求項４０〜４４のうちのいずれか１項記載の核酸フラグメント。
【請求項４６】
請求項４０〜４５のうちのいずれか１項に記載の核酸フラグメントを含む、ベクター。
【請求項４７】
自律的に複製することができる、請求項４６記載のベクター。
【請求項４８】
プラスミド、ファージ、コスミド、ミニ染色体、およびウイルスからなる群から選択される、請求項４６または４７記載のベクター。
【請求項４９】
５’→３’方向および作動可能な連結において、請求項４０〜４５のうちのいずれか１項に記載の第１の核酸フラグメントの発現を促進するための少なくとも１つのプロモーターであって、必須なフレームワーク領域、任意選択でリーダーペプチドをコードする核酸配列、前記第１の核酸フラグメント、任意選択で定常領域をコードする核酸配列、および任意選択で第１の転写終結領域をコードする核酸配列と一緒に少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲをコードし、ならびに／あるいは
５’→３’方向および作動可能な連結において、請求項４０〜４５のうちのいずれか１項に記載の第２の核酸フラグメントの発現を促進するための少なくとも１つのプロモーターであって、必須なフレームワーク領域、任意選択でリーダーペプチドをコードする核酸配列、前記第２の核酸フラグメント、任意選択で定常領域をコードする核酸配列、および任意選択で第２の転写終結領域をコードする核酸配列と一緒に少なくとも１つの重鎖ＣＤＲをコードするもの
を含む、請求項４６〜４８のうちのいずれか１項記載のベクター。
【請求項５０】
宿主細胞に導入される時に宿主細胞のゲノムに組み込まれる、請求項４６〜４９のうちのいずれか１項記載のベクター。
【請求項５１】
請求項４６〜５０のうちのいずれか１項のベクターを有する、形質転換細胞。
【請求項５２】
請求項４６〜５０のうちのいずれか１項記載のベクターを有し、請求項４０〜４５のうちのいずれか１項記載の核酸フラグメントを発現し、ならびに任意選択的にその表面上でその組み換え発現産物を分泌または保有する安定な細胞株。
【請求項５３】
組み換え産生された多様性抗体分子の組成物を製造する方法であって、前記方法が、前記多様性抗体分子を、前記抗体分子のコーディング配列を含む発現ベクターでトランスフェクトされた細胞または細胞株から発現させることを含み、個々のメンバーが、少なくとも１種の外被タンパク質における少なくとも３種の異なるエピトープと一緒に結合することができ、ポリクローナル組成物が、ＲＳＶサブタイプＡおよびＢを中和することができる、方法。
【請求項５４】
前記多様性抗体分子が、請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗ＲＳＶ組み換えポリクローナル抗体を構成するものである、請求項５３記載の方法。