(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の将来の急性腎不全（ＡＲＦ）の尤度を測定する方法であって、
腎臓損傷マーカーとしてミトコンドリア６０ｋＤａ熱ショックタンパク質及び７２ｋＤａＩＶ型コラゲナーゼを検出するように構成された複数のアッセイを被験者由来の体液検体を使って実行し、１つまたは複数のアッセイ結果を提供するステップ；ならびに
アッセイ結果を被験者の将来のＡＲＦと相互に関連付けするステップ、とを含む方法。
【請求項２】
前記相互に関連付けするステップが、
アッセイ結果を１つまたは複数の被験者の将来のＡＲＦのリスク層別化、ステージ分類、選別およびモニタリングと相互に関連付けるステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記将来のＡＲＦの尤度が、目的イベントが４８時間または２４時間以内におおよそ発生する可能性があることである、請求項１に記載の方法。  
【請求項４】
前記相互に関連付けするステップが、被験者が４８時間以内に、（ｉ）１．５倍以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度、（ｉｉ）６時間にわたり０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の尿量を有する尤度、または（ｉｉｉ）０．３ｍｇ／ｄＬ以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度の内の１つまたは複数を割り付けることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記相互に関連付けするステップが、被験者が２４時間以内に、（ｉ）１．５倍以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度、（ｉｉ）６時間にわたり０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の尿量を有する尤度、または（ｉｉｉ）０．３ｍｇ／ｄＬ以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度の内の１つまたは複数を割り付けることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記相互に関連付けするステップが、被験者が４８時間以内に、（ｉ）２倍以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度、（ｉｉ）６時間にわたり０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の尿量を有する尤度、または（ｉｉｉ）０．３ｍｇ／ｄＬ以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度の内の１つまたは複数を割り付けることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記相互に関連付けするステップが、被験者が２４時間以内に、（ｉ）２倍以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度、（ｉｉ）６時間にわたり０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の尿量を有する尤度の内の１つまたは複数を割り付けることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記相互に関連付けするステップが、被験者が４８時間以内に、（ｉ）３倍以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度、または（ｉｉ）２４時間にわたり０．３ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の尿量を有するか、もしくは１２時間にわたり無尿である尤度の内の１つまたは複数を割り付けることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記相互に関連付けするステップが、被験者が２４時間以内に、（ｉ）３倍以上の血清クレアチニン値の増加を経験する尤度、または（ｉｉ）２４時間にわたり０．３ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の尿量を有するか、もしくは１２時間にわたり無尿である尤度の内の１つまたは複数を割り付けることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記アッセイ結果が、メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、アディポネクチン、最終糖化産物特異的受容体、アグーチ関連タンパク質、アルカリフォスファターゼ、組織非特異的アイソザイム、アルファ−１−抗トリプシン、アルファ−１−抗トリプシン：好中球エラスターゼ複合体、アルファ−１−抗トリプシン：プラスミノーゲン複合体、アルファ−２マクログロブリン、アルファ−２−ＨＳ−糖タンパク質、アルファフェトプロテイン、アンフィレギュリン、アミロイドベータ４０、アミロイドベータ４２、アンジオジェニン、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン−１受容体、アンジオポエチン−２、アンジオポエチン関連タンパク質３、アンジオポエチン関連タンパク質４、アンジオポエチン関連タンパク質６、抗ロイコプロテイナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、アポリポタンパク質Ｂ−１００、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質（ａ）、食欲調節ホルモン、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ、細胞質、殺菌性透過性増強タンパク質、細胞死促進Ｂｃｌ２アンタゴニスト、ベータ−２−糖タンパク質１、ベータ−２−ミクログロブリン、ベータ神経増殖因子、ベータセルリン、骨形成タンパク質７、脳由来神経栄養因子、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１３、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１５、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１７、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１８、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１９、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２０、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２１、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２３、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２４、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２６、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２７、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン３、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン４、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン５、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン７、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン８、Ｃ−ペプチド、Ｃ反応性タンパク質、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１１、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１３、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン２、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン５、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン６、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン９、カドヘリン−１、カドヘリン−１６、カドヘリン−３、カドヘリン−５、カルビンジン、カルシトニン、カルシトニン（プロカルシトニン）、癌抗原１５−３、癌抗原１９−９、炭酸脱水酵素９、癌胎児抗原関連細胞接着分子１、癌胎児抗原関連細胞接着分子５、カスパーゼ−１、カスパーゼ−３、活性、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＳ、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４４抗原、細胞性腫瘍抗原ｐ５３、絨毛性ゴナドトロピンβサブユニット、毛様体神経栄養因子、クラスタリン、凝固因子ＶＩＩ、コラゲナーゼ３、補体Ｃ３、補体Ｃ４−Ｂ、補体Ｃ５、補体因子Ｈ、コルチコトロピン、コルチゾル、クレアチンキナーゼ−ＭＢ、クレアチニン、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子１、シスタチン−Ｃ、チトクロムｃ、ＤＤＲＧＫドメイン含有タンパク質１、ジペプチジルペプチダーゼ４、Ｅ−セレクチン、エンド���リン、エンドスタチン、内皮プロテインＣ受容体、エンドセリン−１、エオタキシン、上皮増殖因子受容体、エピレギュリン、上皮細胞接着分子、エリトロポイエチン、エリトロポイエチン受容体、脂肪酸結合タンパク質、心臓、脂肪酸結合タンパク質、腸の、脂肪酸結合タンパク質、肝臓、フェリチン、フィブリノーゲン、繊維芽細胞増殖因子１９、繊維芽細胞増殖因子２１、繊維芽細胞増殖因子２３、フィブロネクチン、フォリスタチン、フォリトロピン、フォリトロピンサブユニットベータ、フラクタルカイン、ガレクチン−３、胃抑制ポリペプチド、グリア細胞由来神経栄養因子、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１、グルタチオンＳ−転移酵素Ａ１、グルタチオンＳ−転移酵素Ｐ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、グランザイムＢ、グランザイムＭ、増殖調節アルファタンパク質、ハプトグロビン、熱ショック７０ｋＤａタンパク質１、熱ショックタンパク質ベータ−１、熱ショックタンパク質ベータ−１（ｐｈｏｓｐｈｏ  ＳＥＲ７８／ｐｈｏｓｐｈｏ  ＳＥＲ８２）、熱ショックタンパク質ＨＳＰ９０−アルファ、ヘムオキシゲナーゼ１、ヘパラン硫酸、ヘパリン結合ＥＧＦ様増殖因子、ヘパリン結合増殖因子１、ヘパリン結合増殖因子２、Ａ型肝炎ウイルス細胞性受容体１、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、ヒアルロン酸、低酸素誘導因子１アルファ、免疫グロブリンＡ、免疫グロブリンＥ、免疫グロブリンＭ、免疫グロブリンＧ１、免疫グロブリンＧ２、免疫グロブリンＧ３、免疫グロブリンＧ４、インスリン、インスリン受容体基質１、インスリン様増殖因子１受容体、インスリン様増殖因子ＩＡ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質５、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、インスリン様増殖因子結合タンパク質７、細胞間接着分子１、細胞間接着分子２、細胞間接着分子３、インターフェロンアルファ−２、インターフェロンガンマ、インターロイキン−１アルファ、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質、インターロイキン−１受容体Ｉ型、インターロイキン−１受容体ＩＩ型、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１２サブユニットベータ、インターロイキン−１３、インターロイキン−１５、インターロイキン−１７Ａ、インターロイキン−１８、インターロイキン−２、インターロイキン−２受容体アルファ鎖、インターロイキン−２０、インターロイキン−２１、インターロイキン−２３、インターロイキン−２８Ａ、インターロイキン−２９、インターロイキン−３、インターロイキン−３３、インターロイキン−４、インターロイキン−４受容体アルファ鎖、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−６受容体サブユニットアルファ、インターロイキン−６受容体サブユニットベータ、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、間質コラゲナーゼ、間質コラゲナーゼ：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、インボルクリン、膵島アミロイドポリペプチド、ケラチン、Ｉ型細胞骨格系１９（ａａ３１１−３６７）、ケラチン、ＩＩ型細胞骨格系１；１型細胞骨格系１０（ケラチン−１、−１０混合物）、ケラチン、ＩＩ型細胞骨格系６（６Ａ、−６Ｂ、−６Ｃ混合物）、キットリガンド、ラクトトランスフェリン、レプチン、白血病抑制因子、リポ多糖類（血清型−Ｋ、−Ｏ）、ルトロピン、ルトロピンサブユニットベータ、リンパ管内皮ヒアルロン酸受容体１、リンホタクチン、リンホトキシンアルファ、リゾチームＣ、マクロファージコロニー刺激因子１、マクロファージメタロエラスターゼ、マクロファージ遊走阻止因子、マロンジアルデヒド修飾低比重リポ蛋白、マトリライシン、マトリックスメタロプロテアーゼ−９、マトリックスメタロプロテアーゼ−９：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、メタロプロテイナーゼ阻害剤１、メタロプロテイナーゼ阻害剤２、メタロプロテイナーゼ阻害剤３、メタロプロテイナーゼ阻害剤４、ミッドカイン、増殖調節アルファ、ベータ、およびガンマタンパク質の混合物、単球分化抗原ＣＤ１４、ムチン−１６、ミエロイド分化１次応答蛋白質ＭｙＤ８８、ミエロペルオキシダーゼ、ミオグロビン、ネプリライシン、ネトリン−１、神経細胞接着分子１、ニューロン接着分子、好中球コラゲナーゼ、好中球エラスターゼ、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、ＮＦ−カッパ−Ｂ阻害剤アルファ、ナイドジェン−１、一酸化窒素合成酵素、誘導型、Ｎ末端プロＢＮＰ、オステオカルシン、オステオポンチン、酸化低密度リポタンパク質受容体１、Ｐ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、膵臓プロホルモン、パッパリシン−１、副甲状腺ホルモン、ペプチドＹＹ、色素上皮由来因子、胎盤増殖因子、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１、血小板塩基性たんぱく質、血小板内皮細胞接着分子、血小板因子４、血小板由来増殖因子Ａ、血小板由来増殖因子サブユニットＡ（ダイマー）、血小板由来増殖因子サブユニットＢ（ダイマー）、ポリ［ＡＤＰリボース］ポリメラーゼ１（切断型）、プロ上皮増殖因子、プロインターロイキン−１ベータ、プロインターロイキン−１６、プロラクチン、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、タンパク質ＮＯＶ同族体、タンパク質Ｓ１００−Ａ１２、タンパク質Ｓ１００−Ｂ、プロ形質転換成長因子アルファ、レニン、レジスチン、血清アルブミン、血清アミロイドＡタンパク質、血清アミロイドＰ成分、性ホルモン結合グロブリン、ＳＬサイトカイン、ソマトトロピン、ストロマ細胞由来因子１、ストロメライシン−１、ストロメライシン−１：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、ストロメライシン−２、テネイシン、トロンボモジュリン、トロンボポエチン、トロンボスポンジン−１、トロンボスポンジン−２、胸腺間質性リンパ球新生因子、チロトロピン、チロキシン結合グロブリン、組織因子、組織型プラスミノゲンアクチベーター、形質転換増殖因子ベータ−１、形質転換増殖因子ベータ−２、形質転換増殖因子ベータ−３、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、トランスサイレチン、トレフォイルファクター３、尿細管間質性腎炎抗原、腫瘍壊死因子、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１０、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１１、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー６、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｂ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ｂ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー６、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子、血管細胞接着タンパク質１、血管内皮細胞増殖因子Ａ、血管内皮細胞増殖因子Ｄ、血管内皮細胞増殖因子受容体１、血管内皮細胞増殖因子受容体２、血管内皮細胞増殖因子受容体３、バーシカンコアタンパク質、ビタミンＤ結合タンパク質、ビタミンＫ依存性タンパク質Ｃ、フォンウィルブランド因子、およびＷＡＰ型４ジスルフィドコアドメインタンパク質２、からなる群より選択される少なくとも１、２、または３の腎臓損傷マーカーの測定濃度をさらに含む請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記アッセイ結果を１つの複合結果に変換する関数を使って、前記アッセイ結果が組み合わされた請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
被験者が、腎前性、腎性、または腎後性ＡＲＦに対する１つまたは複数の既知のリスク因子の内の被験者に前から存在する因子に基づく将来のＡＲＦの尤度の測定のために選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
被験者が、１つまたは複数のうっ血性心不全、子癇前症、子癇、糖尿病、高血圧、冠状動脈疾患、蛋白尿、腎不全、正常な範囲未満の糸球体濾過値、肝硬変、正常な範囲を超える血清クレアチニン値、敗血症、腎機能損傷、腎機能低下、もしくはＡＲＦの既存診断に基づいて、または大血管手術、冠動脈バイパス術、もしくは他の心臓手術を受けている、もしくは受けたことがある状態に基づいて、またはＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、ホスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イホスファミド、重金属、メトトレザト、放射線造影剤、もしくはストレプトゾトシンへの暴露に基づいて、将来のＡＲＦの尤度の測定を目的として被験者が選択される請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法が、
前記被験者の急性腎不全の将来の発生または不発生のリスクを割り付ける方法である、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記将来のＡＲＦは、体液検体の採取時点から４８時間以内の将来のＡＲＦを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記将来のＡＲＦは、体液検体の採取時点から２４時間以内の将来のＡＲＦを含む請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
被験者がＲＩＦＬＥステージ０であり、前記相互関連付けステップが、被験者が４８時間以内、または２４時間以内にＲＩＦＬＥステージＲ、ＩまたはＦに到達する尤度を割り付けることを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
被験者がＲＩＦＬＥステージ０またはＲであり、前記相互関連付けステップが、被験者が４８時間以内、または２４時間以内にＲＩＦＬＥステージＩまたはＦに到達する尤度を割り付けることを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
被験者がＲＩＦＬＥステージＲであり、前記相互関連付けステップが、被験者が４８時間以内、または２４時間以内にＲＩＦＬＥステージＩまたはＦに到達する尤度を割り付けることを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
被験者がＲＩＦＬＥステージ０、Ｒ、またはＩであり、前記相互関連付けステップが、被験者が４８時間以内、または２４時間以内にＲＩＦＬＥステージＦに到達する尤度を割り付けることを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）被験者が、急性腎不全ではないか、
（ｂ）被験者が、体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値１．５倍以上の増加を経験したことがないか、
（ｃ）被験者が、体液検体採取の前の６時間にわたり、少なくとも０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒの尿量を有するか、
（ｄ）被験者が、体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値０．３ｍｇ／ｄＬ以上の増加を経験したことがないか、
（ｅ）被験者が（ｉ）体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値１．５倍以上の増加を経験したことがなく、（ｉｉ）体液検体採取の前の６時間にわたり、少なくとも０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒの尿量を有し、さらに（ｉｉｉ）体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値０．３ｍｇ／ｄＬ以上の増加を経験したことがないか、
（ｆ）被験者が、（ｉ）体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値１．５倍以上の増加を経験したことがなく、（ｉｉ）体液検体採取の前の１２時間にわたり、少なくとも０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒの尿量を有し、さらに（ｉｉｉ）体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値０．３ｍｇ／ｄＬ以上の増加を経験したことがないか、
（ｇ）被験者が、体液検体採取の前の２４時間にわたり、少なくとも０．３ｍｌ／ｋｇ／ｈｒの尿量を有する、または体液検体採取の前の１２時間にわたり無尿であるか、
（ｈ）被験者が（ｉ）体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値３倍以上の増加を経験したことがなく、（ｉｉ）体液検体採取の前の２４時間にわたり、少なくとも０．３ｍｌ／ｋｇ／ｈｒの尿量を有するか、または体液検体採取の前の１２時間にわたり無尿であり、さらに（ｉｉｉ）体液検体採取の前に測定した血清クレアチニン値の対ベースライン値０．３ｍｇ／ｄＬ以上の増加を経験したことがない請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記体液検体が尿検体である請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記方法が、１つまたは複数の図１〜４３に挙げた腎臓損傷マーカーパネルを測定すること、および腎臓損傷マーカーパネルの測定から得られたアッセイ結果を被験者の将来のＡＲＦと相互関連付けをすることを含む請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
ミトコンドリア６０ｋＤａ熱ショックタンパク質及び７２ｋＤａＩＶ型コラゲナーゼの組み合わせ、または前記ミトコンドリア６０ｋＤａ熱ショックタンパク質及び７２ｋＤａＩＶ型コラゲナーゼの組み合わせ並びに以下からなる群：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、アディポネクチン、最終糖化産物特異的受容体、アグーチ関連タンパク質、アルカリフォスファターゼ、組織非特異的アイソザイム、アルファ−１−抗トリプシン、アルファ−１−抗トリプシン：好中球エラスターゼ複合体、アルファ−１−抗トリプシン：プラスミノーゲン複合体、アルファ−２マクログロブリン、アルファ−２−ＨＳ−糖タンパク質、アルファフェトプロテイン、アンフィレギュリン、アミロイドベータ４０、アミロイドベータ４２、アンジオジェニン、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン−１受容体、アンジオポエチン−２、アンジオポエチン関連タンパク質３、アンジオポエチン関連タンパク質４、アンジオポエチン関連タンパク質６、抗ロイコプロテイナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、アポリポタンパク質Ａ−ＩＩ、アポリポタンパク質Ｂ−１００、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質（ａ）、食欲調節ホルモン、アスパルタートアミノトランスフェラーゼ、細胞質、殺菌性透過性増強タンパク質、細胞死促進Ｂｃｌ２アンタゴニスト、ベータ−２−糖タンパク質１、ベータ−２−ミクログロブリン、ベータ神経増殖因子、ベータセルリン、骨形成タンパク質７、脳由来神経栄養因子、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１３、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１５、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１７、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１８、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン１９、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２０、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２１、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２３、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２４、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２６、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２７、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン３、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン４、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン５、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン７、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン８、Ｃ−ペプチド、Ｃ反応性タンパク質、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１１、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１３、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１６、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン２、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン５、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン６、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン９、カドヘリン−１、カドヘリン−１６、カドヘリン−３、カドヘリン−５、カルビンジン、カルシトニン、カルシトニン（プロカルシトニン）、癌抗原１５−３、癌抗原１９−９、炭酸脱水酵素９、癌胎児抗原関連細胞接着分子１、癌胎児抗原関連細胞接着分子５、カスパーゼ−１、カスパーゼ−３、活性、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＳ、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４４抗原、細胞性腫瘍抗原ｐ５３、絨毛性ゴナドトロピンβサブユニット、毛様体神経栄養因子、クラスタリン、凝固因子ＶＩＩ、コラゲナーゼ３、補体Ｃ３、補体Ｃ４−Ｂ、補体Ｃ５、補体因子Ｈ、コルチコトロピン、コルチゾル、ク���アチンキナーゼ−ＭＢ、クレアチニン、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子１、シスタチン−Ｃ、チトクロムｃ、ＤＤＲＧＫドメイン含有タンパク質１、ジペプチジルペプチダーゼ４、Ｅ−セレクチン、エンドグリン、エンドスタチン、内皮プロテインＣ受容体、エンドセリン−１、エオタキシン、上皮増殖因子受容体、エピレギュリン、上皮細胞接着分子、エリトロポイエチン、エリトロポイエチン受容体、脂肪酸結合タンパク質、心臓、脂肪酸結合タンパク質、腸の、脂肪酸結合タンパク質、肝臓、フェリチン、フィブリノーゲン、繊維芽細胞増殖因子１９、繊維芽細胞増殖因子２１、繊維芽細胞増殖因子２３、フィブロネクチン、フォリスタチン、フォリトロピン、フォリトロピンサブユニットベータ、フラクタルカイン、ガレクチン−３、胃抑制ポリペプチド、グリア細胞由来神経栄養因子、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１、グルタチオンＳ−転移酵素Ａ１、グルタチオンＳ−転移酵素Ｐ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、グランザイムＢ、グランザイムＭ、増殖調節アルファタンパク質、ハプトグロビン、熱ショック７０ｋＤａタンパク質１、熱ショックタンパク質ベータ−１、熱ショックタンパク質ベータ−１（ｐｈｏｓｐｈｏ  ＳＥＲ７８／ｐｈｏｓｐｈｏ  ＳＥＲ８２）、熱ショックタンパク質ＨＳＰ９０−アルファ、ヘムオキシゲナーゼ１、ヘパラン硫酸、ヘパリン結合ＥＧＦ様増殖因子、ヘパリン結合増殖因子１、ヘパリン結合増殖因子２、Ａ型肝炎ウイルス細胞性受容体１、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、ヒアルロン酸、低酸素誘導因子１アルファ、免疫グロブリンＡ、免疫グロブリンＥ、免疫グロブリンＭ、免疫グロブリンＧ１、免疫グロブリンＧ２、免疫グロブリンＧ３、免疫グロブリンＧ４、インスリン、インスリン受容体基質１、インスリン様増殖因子１受容体、インスリン様増殖因子ＩＡ、インスリン様増殖因子結合タンパク質１、インスリン様増殖因子結合タンパク質２、インスリン様増殖因子結合タンパク質３、インスリン様増殖因子結合タンパク質４、インスリン様増殖因子結合タンパク質５、インスリン様増殖因子結合タンパク質６、インスリン様増殖因子結合タンパク質７、細胞間接着分子１、細胞間接着分子２、細胞間接着分子３、インターフェロンアルファ−２、インターフェロンガンマ、インターロイキン−１アルファ、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−１受容体アンタゴニストタンパク質、インターロイキン−１受容体Ｉ型、インターロイキン−１受容体ＩＩ型、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１２サブユニットベータ、インターロイキン−１３、インターロイキン−１５、インターロイキン−１７Ａ、インターロイキン−１８、インターロイキン−２、インターロイキン−２受容体アルファ鎖、インターロイキン−２０、インターロイキン−２１、インターロイキン−２３、インターロイキン−２８Ａ、インターロイキン−２９、インターロイキン−３、インターロイキン−３３、インターロイキン−４、インターロイキン−４受容体アルファ鎖、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−６受容体サブユニットアルファ、インターロイキン−６受容体サブユニットベータ、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、間質コラゲナーゼ、間質コラゲナーゼ：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、インボルクリン、膵島アミロイドポリペプチド、ケラチン、Ｉ型細胞骨格系１９（ａａ３１１−３６７）、ケラチン、ＩＩ型細胞骨格系１；１型細胞骨格系１０（ケラチン−１、−１０混合物）、ケラチン、ＩＩ型細胞骨格系６（６Ａ、−６Ｂ、−６Ｃ混合物）、キットリガンド、ラクトトランスフェリン、レプチン、白血病抑制因子、リポ多糖類（血清型−Ｋ、−Ｏ）、ルトロピン、ルトロピンサブユニットベータ、リンパ管内皮ヒアルロン酸受容体１、リンホタクチン、リンホトキシンアルファ、リゾチームＣ、マクロファージコロニー刺激因子１、マクロファージメタロエラスターゼ、マクロファージ遊走阻止因子、マロンジアルデヒド修飾低比重リポ蛋白、マトリライシン、マトリックスメタロプロテアーゼ−９、マトリックスメタロプロテアーゼ−９：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、メタロプロテイナーゼ阻害剤１、メタロプロテイナーゼ阻害剤２、メタロプロテイナーゼ阻害剤３、メタロプロテイナーゼ阻害剤４、ミッドカイン、増殖調節アルファ、ベータ、およびガンマタンパク質の混合物、単球分化抗原ＣＤ１４、ムチン−１６、ミエロイド分化１次応答蛋白質ＭｙＤ８８、ミエロペルオキシダーゼ、ミオグロビン、ネプリライシン、ネトリン−１、神経細胞接着分子１、ニューロン接着分子、好中球コラゲナーゼ、好中球エラスターゼ、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン、ＮＦ−カッパ−Ｂ阻害剤アルファ、ナイドジェン−１、一酸化窒素合成酵素、誘導型、Ｎ末端プロＢＮＰ、オステオカルシン、オステオポンチン、酸化低密度リポタンパク質受容体１、Ｐ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１、膵臓プロホルモン、パッパリシン−１、副甲状腺ホルモン、ペプチドＹＹ、色素上皮由来因子、胎盤増殖因子、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１、血小板塩基性たんぱく質、血小板内皮細胞接着分子、血小板因子４、血小板由来増殖因子Ａ、血小板由来増殖因子サブユニットＡ（ダイマー）、血小板由来増殖因子サブユニットＢ（ダイマー）、ポリ［ＡＤＰリボース］ポリメラーゼ１（切断型）、プロ上皮増殖因子、プロインターロイキン−１ベータ、プロインターロイキン−１６、プロラクチン、前立腺特異抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、タンパク質ＮＯＶ同族体、タンパク質Ｓ１００−Ａ１２、タンパク質Ｓ１００−Ｂ、プロ形質転換成長因子アルファ、レニン、レジスチン、血清アルブミン、血清アミロイドＡタンパク質、血清アミロイドＰ成分、性ホルモン結合グロブリン、ＳＬサイトカイン、ソマトトロピン、ストロマ細胞由来因子１、ストロメライシン−１、ストロメライシン−１：メタロプロテイナーゼ阻害剤２複合体、ストロメライシン−２、テネイシン、トロンボモジュリン、トロンボポエチン、トロンボスポンジン−１、トロンボスポンジン−２、胸腺間質性リンパ球新生因子、チロトロピン、チロキシン結合グロブリン、組織因子、組織型プラスミノゲンアクチベーター、形質転換増殖因子ベータ−１、形質転換増殖因子ベータ−２、形質転換増殖因子ベータ−３、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、トランスサイレチン、トレフォイルファクター３、尿細管間質性腎炎抗原、腫瘍壊死因子、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１０、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１１、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー６、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｂ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１１Ｂ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー６、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子、血管細胞接着タンパク質１、血管内皮細胞増殖因子Ａ、血管内皮細胞増殖因子Ｄ、血管内皮細胞増殖因子受容体１、血管内皮細胞増殖因子受容体２、血管内皮細胞増殖因子受容体３、バーシカンコアタンパク質、ビタミンＤ結合タンパク質、ビタミンＫ依存性タンパク質Ｃ、フォンウィルブランド因子、およびＷＡＰ型４ジスルフィドコアドメインタンパク質２より選択される腎臓損傷マーカーを検出するように構成された複数のアッセイを行うための試薬を含むキットであって、
前記複数のアッセイが、１つまたは複数の図１〜４３に挙げられた腎臓損傷マーカーのパネルを検出するアッセイを含むキット。
【請求項２５】
前記試薬が、複数の結合剤を含み、それぞれが、前記腎臓損傷マーカーの１つに特異的に結合し、
前記複数の結合剤が、単一のアッセイ装置中に含まれ、
少なくとも１つの前記複数のアッセイが、サンドイッチ結合アッセイとして構成され、
少なくとも１つの前記複数のアッセイが、競合結合アッセイとして構成されている請求項２４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１０年２月２６日出願の米国特許仮出願第６１／３０８、８６１号の優先権を主張する。本出願は、全ての表、図、請求項を含むその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景発明の背景に関する以下の考察は、単に読む人の本発明の理解を助けるために提供されており、本発明に対する先行技術を記載する、または構成する意図はない。  
【０００３】
腎臓は、身体から水および溶質を排出する役割を担っている。その機能には、酸−塩基バランスの維持、電解質濃度の調節、血液量の管理、および血圧の調節が含まれる。従って、損傷および／または疾患による腎臓機能の喪失は、多くの罹患および死亡につながる。腎損傷の詳細な考察は、ハリソン内科学（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、１７ｔｈ  Ｅｄ．、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  １７４１−１８３０、に記載されている。本文献は、参照によってその全体が組み込まれる。腎疾患および／または損傷は、急性の場合も、慢性の場合もある。急性および慢性腎疾患は、以下のように記述される（カレントメディカル診断と治療（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ＆  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）２００８、４７ｔｈ  Ｅｄ、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  ７８５−８１５、から引用。本文献は、参照によってその全体が組み込まれる。）：「急性腎不全は、数時間から数日の間に腎機能が悪化し、血液中の窒素性廃棄物（例えば、尿素窒素）およびクレアチニンの貯溜が生じる。これらの物質の貯溜は、高窒素血症と呼ばれる。慢性腎不全（慢性腎疾患）は、数ヶ月から数年の間の腎機能の異常な喪失から生じる」。  
【０００４】
急性腎不全（ＡＲＦ、急性腎損傷、またはＡＫＩとしても知られる）は、急速な（通常、約４８時間から１週間以内に検出される）糸球体濾過値の減少である。この濾過能力の低下により、通常、腎臓により排出される窒素性（尿素およびクレアチニン）および非窒素性廃棄物の貯溜、尿量の減少、またはこれらの両方が起こる。ＡＲＦは、入院の約５％、心肺バイパス手術の４〜１５％、さらに集中治療入院の３０％で併発すると報告されている。ＡＲＦは、原因によって腎前性、腎性、または腎後性に分類できる。腎性腎疾患は、さらに、糸球体、尿細管、間質性、および血管異常に分けられる。ＡＲＦの主要原因を、下表に記載するが、これは、メルクマニュアル第１７版２２２章（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、１７ｔｈ  ｅｄ．、Ｃｈａｐｔｅｒ  ２２２）、から引用したもので、参照によってその全体が組み込まれる。    
【表１】
0005998057.tif 000002
【０００５】
虚血性ＡＲＦの場合には、疾患の経過を４つの段階に分けることができる。数時間から数日続く初期の間、腎臓の灌流減少が損傷に進行する。糸球体限外濾過が減少し、尿細管内の壊死組織片に起因する濾液流量が減少して、損傷上皮を通して濾液のバックリークが起こる。この段階の間に、腎臓の再灌流により腎損傷が媒介される可能性がある。開始段階の後に進展期が続くが、これは、虚血損傷および炎症の継続を特徴とし、内皮の損傷および血管の鬱血を伴う可能性がある。１〜２週間続く乏尿期の間、腎細胞損傷が発生し、糸球体濾過値および尿量が最小になる。次に回復期に入り、腎上皮が修復され、ＧＦＲが徐々に回復する。これにも拘わらず、ＡＲＦ患者の生存率は約６０％と低い。  
【０００６】
放射線造影剤（ｒａｄｉｏｃｏｎｔｒａｓｔ  ａｇｅｎｔ）（造影剤（ｃｏｎｔｒａｓｔ  ｍｅｄｉａ）とも呼ばれる）ならびに他の腎毒性物質、例えば、シクロスポリン、アミノグリコシド等の抗生物質およびシスプラチン等の抗癌剤、により引き起こされた急性腎損傷は、数日から約１週間かけて顕在化する。造影剤腎症（ＣＩＮ、放射線造影剤が原因のＡＫＩ）は、腎臓内血管収縮（虚血損傷の原因となる）が原因で、腎尿細管上皮細胞に直接的に毒性のある活性酸素種の生成により引き起こされると考えられる。ＣＩＮは、古典的には、急性（２４〜４８時間以内に発症）かつ、可逆的（３〜５日間がピーク、１週間以内に回復）な血中尿素窒素および血清クレアチニン値の上昇として現れる。  
【０００７】
既報告のＡＫＩを定義し検出するための共通基準は、急激な（通常、約２〜７日以内、または入院期間内）血清クレアチニン値の上昇である。ＡＫＩを定義し検出するために血清クレアチニン値上昇を使用することは十分確立されているが、血清クレアチニン値上昇の大きさ、およびＡＫＩを判定するために測定される時間は、報告の間でかなり異なる。従来から、比較的大きな血清クレアチニン値の増加、例えば、１００％、２００％、少なくとも１００％〜２ｍｇ／ｄＬを超える値の増加および他の定義が、ＡＫＩの定義として用いられてきた。しかし、最近の傾向は、ＡＫＩの定義に対し、より小さい血清クレアチニン値上昇を使用する方に向かっている。血清クレアチニン値上昇、ＡＫＩおよび関連健康リスクの間の関係は、Ｐｒａｕｇｈｔ  ａｎｄ  Ｓｈｌｉｐａｋ、ＣｕｒｒＯｐ  ｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ  １４：２６５−２７０、２００５およびＣｈｅｒｔｏｗ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １６：３３６５−３３７０、２００５、で概説されている。これらの文献は、その中に引用されている文献と共に、参照によってその全体が組み込まれる。これらの文献に記載のように、急性悪化腎機能（ＡＫＩ）および死亡リスクの増加、ならびに他の有害な結果は、現在では、血清クレアチニン値の非常に小さい増加に関連していることが知られている。これらの増加は、相対的（パーセント）値または名目値として測定できる。損傷前に対し２０％程度の小さい血清クレアチニン値の相対増加でも急性腎機能悪化（ＡＫＩ）を示し、健康上のリスクを増加させると報告されているが、ＡＫＩを定義し、健康上のリスクを増やす値としてさらに多く見られる報告値は、少なくとも２５％の相対増加である。０．３ｍｇ／ｄＬ、０．２ｍｇ／ｄＬまたは０．１ｍｇ／ｄＬであっても、このような小さい名目上の増加が、腎機能悪化を示し、死亡のリスクを増加させると報告されている。ＡＫＩに対し種々の異なる期間を使って、血清クレアチニン値のこれらの閾値までの上昇が測定されている。例えば、例えば、２日、３日、７日、または患者が病院または集中治療室にいる時間として定義される可変期間の範囲が使われている。これらの調査は、腎機能悪化に対する特定の血清クレアチニン値上昇（または上昇期間）閾値は存在せず、むしろ、血清クレアチニン値上昇の大きさに付随する連続したリスク増加が存在することを示している。  
【０００８】
１つの調査（Ｌａｓｓｎｉｇｇ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １５：１５９７−１６０５、２００４、参照によってその全体が組み込まれる）で、血清クレアチニン値の増加と減少の両方が検討されている。心臓手術後の血清クレアチニン値の−０．１〜−０．３ｍｇ／ｄＬの緩やかな低下を示す患者は、死亡率が最も低い。より大きな血清クレアチニン値低下（−０．４ｍｇ／ｄＬ以上）または血清クレアチニン値の何らかの増加を示す患者は、より大きな死亡率を有する。これらの知見から著者等は、腎機能の非常にわずかな変化（手術後４８時間以内の小さなクレアチニン値の変化によって検出されるような）でさえも、患者の転帰に著しく影響を与えるという結論に至った。臨床試験および臨床診療においてＡＫＩを定義するための血清クレアチニン値の使用を目的とした統一された分類系に関する合意を得る努力の中で、Ｂｅｌｌｏｍｏ  ｅｔ  ａｌ．、（Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．８（４）：Ｒ２０４−１２、２００４．本文献は、参照によってその全体が組み込まれる）は、以下のＡＫＩ患者の層別化用分類を提案している：「リスク（Ｒｉｓｋ）」：血清クレアチニン値のベースラインから１．５倍の増加、または６時間の尿産生＜０．５ｍｌ／ｋｇ体重／ｈｒ；「損傷（Ｉｎｊｕｒｙ）」：血清クレアチニン値のベースラインから２．０倍の増加、または１２時間の尿産生＜０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ；「不全（Ｆａｉｌｕｒｅ）」：血清クレアチニン値のベースラインから３．０倍の増加、クレアチニン＞３５５μｍｏｌ／ｌ（上昇値＞４４）、または２４時間の尿量０．３ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満、または少なくとも１２時間の無尿；さらに２つの臨床的転帰を含む：「喪失（Ｌｏｓｓ）」：４週間を超える期間の間、腎置換療法の持続的必要性がある。「ＥＳＲＤ」：末期腎疾患−３ヶ月を超える期間、透析が必要。これらの基準は、ＲＩＦＬＥ分類と呼ばれ、腎臓状態を分類する有用な臨床的ツールを提供する。Ｋｅｌｌｕｍ、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．３６：Ｓ１４１−４５、２００８およびＲｉｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．７３、５３８−５４６、２００８（それぞれ、参照によってその全体が組み込まれる）、で考察されているように、ＲＩＦＬＥ分類は、ＡＫＩの統一的定義を提供し、これは、多くの調査により検証されている。  
【０００９】
さらに最近、Ｍｅｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  １１：Ｒ３１（ｄｏｉ：１０．１１８６．ｃｃ５７１３）、２００７（参照によってその全体が組み込まれる）は、下記の類似の層別化ＡＫＩ患者分類を提案しており、これはＲＩＦＬＥ分類を改良したものである：「第Ｉ期」：０．３ｍｇ／ｄＬ以上（≧２６．４μｍｏｌ／Ｌ）の血清クレアチニン値の増加、またはベースラインから１５０％（１．５倍）以上に増加、または６時間超の間で尿量の０．５ｍＬ／ｋｇ／ｈｒ未満；「第ＩＩ期」：血清クレアチニン値のベースラインから２００％超（＞２倍）の増加、または１２時間超の間で尿量の０．５ｍＬ／ｋｇ／ｈｒ未満；「第ＩＩＩ期」：血清クレアチニン値のベースラインから３００％超（＞３倍）の増加、または少なくとも４４μｍｏｌ／Ｌの急性の増加を伴う血清クレアチニン値≧３５４μｍｏｌ／Ｌ、または２４時間の間で尿量の０．３ｍＬ／ｋｇ／ｈｒ未満、または１２時間の無尿。  
【００１０】
ＣＩＮコンセンサスワーキングパネル（Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｐａｎｅｌ）（ＭｃＣｏｌｌｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ、Ｒｅｖ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．２００６；７（４）：１７７−１９７（参照によってその全体が組み込まれる））では、血清クレアチニン値の２５％の上昇を使って、造影剤腎症（これは、ＡＫＩの１つのタイプ）を定義している。色々なグループがＡＫＩを検出するための血清クレアチニン値を使用するための少しずつ異なる基準を提案しているが、コンセンサスは、ＡＫＩ（腎機能を悪化させる）を検出するには、血清クレアチニン値の小さい変化、例えば、０．３ｍｇ／ｄＬまたは２５％で充分であり、血清クレアチニン値の変化の大きさは、ＡＫＩの重症度および死亡リスクの指標であるということである。  
【００１１】
数日間にわたる血清ク
レアチニン値の一連の測定が、ＡＫＩの検出と診断方法として認められており、ＡＫＩ患者を評価する最も重要なツールの１つであるが、通常、血清クレアチニン値は、ＡＫＩ患者の診断、評価およびモニタリングを行う上でいくつかの制約があると見られている。ＡＫＩ診断のために考慮された値（例えば、０．３ｍｇ／ｄＬまたは２５％の上昇）まで血清クレアチニン値が上昇する時間は、使用される定義に応じて、４８時間でも、または、さらに長くてもよい。ＡＫＩでの細胞損傷は、数時間の間に起こりうると言う理由から、４８時間、またはそれ以上の時間で検出された血清クレアチニン値上昇は、後手の損傷指標である可能性があり、従って、血清クレアチニン値に依存することは、ＡＫＩ診断を遅らせる可能性がある。さらに、腎臓機能が急速に変化している場合には、血清クレアチニン値は、正確な腎臓状態およびＡＫＩの最急性期の間に必要な治療の良い指標ではない。一部のＡＫＩ患者は、完全に回復し、一部の患者は、透析（短期または長期）が必要になり、また一部は、死亡、主要有害心イベントおよび慢性腎疾患、等の他の有害な結果を有することになる。血清クレアチニン値は、ろ過率のマーカーであるために、これでは、ＡＫＩの原因（腎前性、腎性、腎後性閉塞、アテローム塞栓、等）または腎性腎疾患のカテゴリーもしくは損傷部位（例えば、起源が尿細管、糸球体または間質性）間の鑑別ができない。尿量も同様に制限があり、これらのことを知ることは、ＡＫＩ患者を管理し治療するのに極めて重要でありうる。  
【００１２】
これらの制約により、特に、早期の、無症候性段階で、さらに、腎臓の回復および修復が起こりうる後期段階でも同様に、ＡＫＩを検出し評価するより良い方法の必要性が明らかになる。さらに、ＡＫＩに罹患する危険性のある患者をより適切に特定する必要がある。
【発明の概要】
【００１３】
被験者の腎機能を評価する方法と組成物を提供することは、本発明の１つの目的である。本明細書記載のように、１つまたは複数のアッセイが、１つまたは複数のバイオマーカーを検出する様に構成されている複数のアッセイの測定を本明細書の表２に示す（本明細書では、ひとまとめに「腎臓損傷マーカー（複数）」、およびそれぞれを個別に「腎臓損傷マーカー」と呼ぶ）。複数のアッセイを組み合わせて、腎機能損傷、腎機能低下、および／または急性腎不全（急性腎損傷とも呼ばれる）に罹患している、またはその危険性のある被験者の、診断、予後、リスク層別化、ステージ分類、モニタリング、分類およびその後の診断と治療計画の決定のために使用可能な「バイオマーカーパネル手法」を提供する。好ましいバイオマーカーパネルは、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ超の本明細書の表２のバイオマーカーを検出する様に構成された２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ超のアッセイを含む。  
【００１４】
これらの腎臓損傷マーカーは、リスク層別化のために（すなわち、将来の腎機能損傷の危険性がある被験者、将来腎機能低下への進行の危険性がある被験者、将来ＡＲＦへの進行の危険性がある被験者、将来腎機能改善の可能性がある被験者、等を特定するために）；既存疾患診断のために（すなわち、腎機能に損傷を受けたことがある被験者、腎機能低下まで進行させたことがある被験者、ＡＲＦにまで進行させたことがある被験者、等を特定するために）；腎機能の悪化または改善をモニタリングするために；および将来の医学的転帰、例えば、腎機能改善または悪化、死亡リスクの減少または増加、被験者が腎置換療法（すなわち、血液透析、腹膜透析、血液濾過法、および／または腎臓移植）を必要とするリスクの減少または増加、被験者が腎機能損傷から回復する可能性の減少または増加、被験者がＡＲＦから回復する可能性の減少または増加、被験者が末期腎疾患に進行するリスクの減少または増加、被験者が慢性腎不全に進行するリスクの減少または増加、被験者が移植腎臓から拒絶を受けるリスクの減少または増加、等を予測するために、複数の腎臓損傷マーカーを含むパネルとして使用可能である。  
【００１５】
第１の態様では、本発明は、被験者の腎臓状態の評価方法に関する。これらの方法は、被験者由来の体液検体中で１つまたは複数の本発明の腎臓損傷マーカーを検出するように構成されたアッセイ法を行うことを含む。例えば、本明細書の表２に挙げられたマーカーからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーの測定濃度を含む、複数のアッセイ結果は、次に、被験者の腎臓状態と相互に関連付けられる。この腎臓状態に対する相関は、本明細書記載のように、アッセイ結果を１人または複数の被験者のリスク層別化、診断、予後、病期分類、類別およびモニタリングに相互関連付けすることを含んでもよい。従って、本発明は、腎損傷の評価のために、１つまたは複数の本発明の腎臓損傷マーカーを利用する。  
【００１６】
特定の実施形態では、本明細書記載の腎臓状態を評価する方法は、被験者のリスク層別化の方法；すなわち、被験者の腎臓状態の１つまたは複数の将来の変化の尤度を割り付ける方法である。これらの実施形態では、アッセイ結果は、１つまたは複数のこのような将来の変化に相関付けられる。以下は、好ましいリスク層別化実施形態である。  
【００１７】
好ましいリスク層別化実施形態では、これらの方法は、将来の腎機能損傷に対する被験者のリスクの判定を含み、アッセイ結果は、このような将来の腎機能損傷の尤度と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、それぞれ、閾値と比較できる。「ポジティブゴーイング（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｇｏｉｎｇ）」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて、測定濃度が閾値より高い場合に、将来の腎機能損傷を受ける尤度の増加が、被験者に対し割り付けられる。「ネガティブゴーイング（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｇｏｉｎｇ）」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて、測定濃度が閾値より低い場合に、将来の腎機能損傷を受ける尤度の増加が被験者に割り付けられる。  
【００１８】
別の好ましいリスク層別化実施形態では、これらの方法は、被験者の将来の腎機能低下リスクを判定することを含み、アッセイ結果は、このような腎機能低下の尤度と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、それぞれ、閾値と比較できる。「ポジティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に比べて、測定濃度が閾値より高い場合に、将来の腎機能低下を受ける尤度の増加が被験者に割り付けられる。「ネガティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて、測定濃度が閾値より低い場合に、将来の腎機能低下を受ける尤度の増加が被験者に割り付けられる。  
【００１９】
さらに他の好ましいリスク層別化実施形態では、これらの方法は、被験者の腎機能の改善の尤度を判定することを含み、アッセイ結果は、このような将来の腎機能改善の尤度と相関付けられる。例えば、測定濃度が、それぞれ、閾値と比較できる。「ポジティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に比べて、測定濃度が閾値より低い場合に、将来の腎機能改善の尤度の増加が被験者に割り付けられる。「ネガティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて、測定濃度が閾値より高い場合に、将来の腎機能改善の尤度の増加が被験者に割り付けられる。  
【００２０】
また他の好ましいリスク層別化実施形態では、これらの方法は、被験者のＡＲＦ進行リスクの判定を含み、結果は、このようなＡＲＦ進行の尤度と相関付けられる。例えば、測定濃度は、それぞれ、閾値と比較できる。「ポジティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に比べて、測定濃度が閾値より高い場合に、ＡＲＦ進行の尤度の増加が被験者に割り付けられる。「ネガティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて、測定濃度が閾値より低い場合に、ＡＲＦ進行の尤度の増加が被験者に割り付けられる。  
【００２１】
また別の好ましいリスク層別化実施形態では、これらの方法は、被験者の転帰リスクの判定を含み、アッセイ結果は、被験者が受ける腎損傷に関連する臨床的転帰の発生の尤度と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、それぞれ、閾値と比較できる。「ポジティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に比べて、測定濃度が閾値より高い場合に、１つまたは複数の：急性腎損傷、ＡＫＩの悪化ステージへの進行、死亡率、腎置換療法の要求、腎性毒素の中止要求、末期腎疾患、心不全、脳卒中、心筋梗塞、慢性腎疾患への進行、等の尤度の増加が被験者に割り付けられる。「ネガティブゴーイング」腎臓損傷マーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて、測定濃度が閾値より低い場合に、１つまたは複数の：急性腎損傷、ＡＫＩの悪化ステージへの進行、死亡率、腎置換療法の要求、腎性毒素の中止要求、末期腎疾患、心不全、脳卒中、心筋梗塞、慢性腎疾患への進行、等の尤度の増加が被験者に割り付けられる。  
【００２２】
このようなリスク層別化実施形態では、割り付けられる尤度またはリスクは、対象イベントが、被験者から体液検体入手後、おおよそ１８０日以内に発生する可能性のあるものであることが好ましい。特に好ましい実施形態では、割り付けられる尤度またはリスクは、より短い期間、例えば、１８ヶ月、１２０日、９０日、６０日、４５日、３０日、２１日、１４日、７日、５日、９６時間、７２時間、４８時間、３６時間、２４時間、１２時間、またはそれ未満の期間内に発生する対象イベントに関する。被験者から体液検体入手後０時間でのリスクは、現在の状態の診断と等価である。  
【００２３】
好ましいリスク層別化実施形態では、被験者は、腎前性、腎性、または腎後性ＡＲＦに対する１つまたは複数の既知因子を有する被験者の前から存在する因子（ｐｒｅ−ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ）に基づいてリスク層別化される。例えば、大血管手術、冠動脈バイパス術、もしくは他の心臓手術を受けている、もしくは受けたことがある被験者；既往うっ血性心不全、子癇前症、子癇、糖尿病、高血圧、冠状動脈疾患、蛋白尿、腎不全、正常範囲未満の糸球体濾過値、肝硬変、正常範囲を超える血清クレアチニン値、もしくは敗血症を有する被験者；またはＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、ホスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イホスファミド、重金属、メトトレザト、放射線造影剤、もしくはストレプトゾトシンに暴露された被験者は全て、本明細書記載の方法によるリスクモニタリングの好適対象である。このリストは、制限を意味するものではない。本明細書の文脈における「前から存在する因子（ｐｒｅ−ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ）」は、被験者から体液検体を入手した時点で存在するリスク因子を意味する。特に好ましい実施形態では、被験者は、腎機能損傷、腎機能低下、またはＡＲＦの既存診断に基づいてリスク層別化される。  
【００２４】
他の実施形態では、本明細書記載の腎臓状態を評価する方法は、被験者の腎損傷を診断する方法；すなわち、被験者が、腎機能損傷、腎機能低下、またはＡＲＦを患っているか否かを評価する方法である。これらの実施形態では、例えば、本明細書の表２に挙げたバイオマーカーからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーの測定濃度を含むアッセイ結果は、腎臓状態の変化の発生または不発生と相互に関連付けられる。以下は、好ましい診断の実施形態である。  
【００２５】
好ましい診断の実施形態では、これらの方法は、腎機能損傷の発生または不発生の診断を含み、アッセイ結果は、このような損傷の発生または不発生と相互に関連付けされる。例えば、それぞれの測定濃度は、閾値と比較できる。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて
）腎機能損傷発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能損傷不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能損傷発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能損傷不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。  
【００２６】
他の好ましい診断の実施形態では、これらの方法は、腎機能低下の発生または不発生の診断を含み、アッセイ結果は、腎機能低下を起こす損傷の発生または不発生に相互に関連付けされる。例えば、それぞれの測定濃度は、閾値と比較できる。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能低下を起こす損傷の発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能低下を起こす損傷の不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能低下を起こす損傷の発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎機能低下を起こす損傷の不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。  
【００２７】
さらに他の好ましい診断の実施形態では、これらの方法は、ＡＲＦの発生または不発生の診断を含み、アッセイ結果は、ＡＲＦを起こす損傷の発生または不発生と相互に関連付けされる。例えば、それぞれの測定濃度を、閾値と比較することができる。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）ＡＲＦ発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）ＡＲＦ不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）ＡＲＦ発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）ＡＲＦ不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。  
【００２８】
さらに他の好ましい診断の実施形態では、これらの方法は、腎置換療法を必要としている被験者の診断を含み、アッセイ結果は、腎置換療法の必要性と相互に関連付けされる。例えば、それぞれの測定濃度は、閾値と比較可能である。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎置換療法の必要性をもたらす損傷の発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎置換療法の必要性をもたらす損傷の不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎置換療法の必要性をもたらす損傷の発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎置換療法の必要性をもたらす損傷の不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。  
【００２９】
さらに他の好ましい診断の実施形態では、これらの方法は、腎移植を必要としている被験者の診断を含み、アッセイ結果は、腎移植の必要性と相互に関連付けされる。例えば、それぞれの測定濃度は、閾値と比較可能である。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎移植の必要性をもたらす損傷の発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎移植の必要性をもたらす損傷の不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、（測定濃度が閾値より高い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎移植の必要性をもたらす損傷の発生の尤度の増加が被験者に割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、（測定濃度が閾値より低い場合に割り付けられる尤度に比べて）腎移植の必要性をもたらす損傷の不発生の尤度の増加を被験者に割り付けることが可能である。  
【００３０】
さらなる他の実施形態では、本明細書記載の腎臓状態の評価方法は、被験者の腎損傷のモニタリング方法；すなわち、腎機能損傷、腎機能低下、またはＡＲＦを患っている被験者の腎機能が改善されているか、悪化しているかを評価する方法である。これらの実施形態では、例えば、本明細書の表２に挙げられたバイオマーカーからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーの測定濃度、等の腎臓状態のアッセイ結果が、変化の発生または不発生と相互に関連付けされる。以下は、好ましいモニタリング実施形態である。  
【００３１】
好ましいモニタリングの実施形態では、これらの方法は、腎機能損傷を患っている被験者の腎臓状態のモニタリングを含み、アッセイ結果は、被験者の腎臓状態の変化の発生または不発生と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、閾値と比較可能である。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付けることが可能である。  
【００３２】
他の好ましいモニタリングの実施形態では、これらの方法は、腎機能が低下している被験者の腎臓状態のモニタリングを含み、アッセイ結果は、被験者の腎臓状態の変化の発生または不発生と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、閾値と比較可能である。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付けることが可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付けることが可能である。  
【００３３】
また別の好ましいモニタリングの実施形態では、これらの方法は、急性腎不全を患っている被験者の腎臓状態のモニタリングを含み、アッセイ結果は、被験者の腎臓状態の変化の発生または不発生と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、閾値と比較可能である。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付け可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付け可能である。  
【００３４】
別のさらなる好ましいモニタリングの実施形態では、これらの方法は、腎前性、腎性、または腎後性ＡＲＦに対する１つまたは複数の前から存在する既知のリスク因子に起因する腎機能損傷の危険のある被験者の腎臓状態のモニタリングを含み、アッセイ結果は、被験者の腎臓状態の変化の発生または不発生と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、閾値と比較可能である。ポジティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付け可能である。ネガティブゴーイングマーカーに対しては、測定濃度が閾値より低い場合に、腎機能の悪化を被験者に割り付け可能である。あるいは、測定濃度が閾値より高い場合に、腎機能の改善を被験者に割り付け可能である。  
【００３５】
さらに他の実施形態では、本明細書記載の腎臓状態を評価する方法は、被験者の腎損傷を分類する方法；すなわち、被験者の腎損傷が、腎前性、腎性、または腎後性であるかどうかを判定する方法；および／またはこれらのクラスをサブクラス、例えば、急性尿細管損傷、急性糸球体腎炎、急性尿細管間質性腎炎、急性脈管腎症、または浸潤性疾患に細分割する方法；および／または被験者が、特定のＲＩＦＬＥステージに進行する尤度を割り付ける方法である。これらの実施形態では、アッセイ結果、例えば、本明細書の表２に挙げられたバイオマーカーからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーの測定濃度が特定のクラスおよび／またはサブクラスに相互に関連付けされる。以下は、好ましい分類の実施形態である。  
【００３６】
好ましい分類の実施形態では、これらの方法は、被験者の腎損傷が、腎前性、腎性、または腎後性であるかどうかを判定する方法；および／またはこれらのクラスをサブクラス、例えば、急性尿細管損傷、急性糸球体腎炎、急性尿細管間質性腎炎、急性脈管腎症、または浸潤性疾患にさらに細分割する方法；および／または被験者が、特定のＲＩＦＬＥステージに進行する尤度を割り付ける方法を含み、アッセイ結果は、被験者の損傷分類と相互に関連付けされる。例えば、測定濃度は、閾値と比較可能であり、測定濃度が閾値より高い場合は、特定の分類が割り付けられる。あるいは、測定濃度が閾値より低い場合には、異なる分類を被験者に割り付け可能である。  
【００３７】
当業者なら、これらの方法で使用される目的閾値に到達するために、種々の方法を使用可能である。例えば、閾値は、正常な被験者で測定した腎臓損傷マーカーの７５番目、８５番目、９０番目、９５番目、または９９番目のパーセンタイルを示す濃度を選択することにより、正常被験者集団から、決定することができる。あるいは、閾値は、「疾患」被験者集団、例えば、損傷を受けている人、または損傷に対する素因（例えば、ＡＲＦへの進行またはいくつかの他の臨床的転帰、例えば、死亡、透析、腎移植、等）を有する人で測定した腎臓損傷マーカーの７５番目、８５番目、９０番目、９５番目、または９９番目のパーセンタイルを示す濃度を選択することにより、前記被験者集団から決定することができる。別の代替法では、閾値は、同じ被験者の前回の腎臓損傷マーカー測定から決定可能である。すなわち、被験者の腎臓損傷マーカーレベルの時間的変化は、被験者にリスクを割り付けるのに使用可能である、  
【００３８】
しかし、前述の考察は、本発明の腎臓損傷マーカーが、対応する個別閾値と比較されねばならないことを意味するものではない。アッセイ結果を組み合わせる方法は、多変量ロジスティック回帰分析、対数線形モデル、ニューラルネットワーク解析、ｎ−ｏｆ−ｍ解析、決定木解析、マーカー比率の計算、等の使用を含んでもよい。このリストは、制限を意味するものではない。これらの方法では、個別マーカーの組み合わせにより決定される複合的結果は、それ自体がマーカーであるように取り扱
うことができる；すなわち、閾値は、個別マーカーに対して本明細書で記載のように、複合的結果に対して決定可能であり、また、この閾値と比較される個別患者のために、複合的結果に対して決定可能である。  
【００３９】
特定の試験、または試験の組み合わせが２つの集団を鑑別する能力は、ＲＯＣ分析を使って確立可能である。例えば、１つまたは複数の腎臓状態の将来の変化を受けやすい「第１の」亜集団、およびそれを受けやすくない「第２の」亜集団から確立されたＲＯＣ曲線は、ＲＯＣ曲線下面積を計算するのに使用可能であり、曲線下面積は、試験の良質性の尺度を提供する。好ましくは、本明細書記載の試験は、０．５超、好ましくは、少なくとも０．６、さらに好ましくは、０．７、またさらに好ましくは、少なくとも０．８、またさらに好ましくは、少なくとも０．９、および最も好ましくは、少なくとも０．９５のＲＯＣ曲線下面積を与える。  
【００４０】
特定の態様では、１つまたは複数の腎臓損傷マーカー、またはこのようなマーカーの複合体の測定濃度は、連続変数として扱うことができる。例えば、任意の特定の濃度は、被験者の将来の腎機能の減少、損傷の発生、選別、等の対応する確率に変換できる。また別の代替態様では、閾値は、被験者集団を、「第１の」亜集団（例えば、１つまたは複数の将来の腎臓状態の変化、損傷の発生、選別、等、が起こりやすい亜集団）およびそれが起こりやすくない「第２の」亜集団、等の「ビン」への分別に際し、受容可能なレベルの特異度および感度を与える。閾値は、１つまたは複数の下記の試験精度の測定により、この第１および第２の集団を分別するように選択される：１超、好ましくは、少なくとも約２以上または約０．５以下、より好ましくは、少なくとも約３以上または約０．３３以下、さらにより好ましくは、少なくとも約４以上または約０．２５以下、またさらに好ましくは、少なくとも約５以上または約０．２以下、および最も好ましくは、少なくとも約１０以上または約０．１以下のオッズ比；０．５超、好ましくは、少なくとも約０．６、より好ましくは、少なくとも約０．７、さらにより好ましくは、少なくとも約０．８、またさらに好ましくは、少なくとも約０．９および最も好ましくは、少なくとも約０．９５の特異度であって、０．２超、好ましくは、約０．３超、より好ましくは、約０．４超、さらにより好ましくは、少なくとも約０．５、またさらにより好ましくは、約０．６、またさらに好ましくは、約０．７超、またさらに好ましくは、約０．８超、より好ましくは、約０．９超、および最も好ましくは、約０．９５超の対応する感度を伴った特異度；０．５超、好ましくは、少なくとも約０．６、より好ましくは、少なくとも約０．７、さらにより好ましくは、少なくとも約０．８、またさらに好ましくは、少なくとも約０．９および最も好ましくは、少なくとも約０．９５の感度であって、０．２超、好ましくは、約０．３超、より好ましくは、約０．４超、さらにより好ましくは、少なくとも約０．５、またさらに好ましくは、約０．６、またさらに好ましくは、約０．７超、またさらに好ましくは、約０．８超、より好ましくは、約０．９超、および最も好ましくは、約０．９５超の対応する特異度を伴った感度；少なくとも約７５％の特異度と組み合わされた少なくとも約７５％の感度；１超、少なくとも約２、より好ましくは、少なくとも約３、さらにより好ましくは、少なくとも約５、および最も好ましくは、少なくとも約１０の陽性尤度比（感度／（１−特異度）：で計算される）；または１未満、約０．５以下、より好ましくは、約０．３以下、および最も好ましくは、約０．１以下の陰性尤度比（（１−感度）／特異度：で計算される）。いずれかの上記測定値の文脈下で、用語の「約」は、示された測定値の±５％を指す。  
【００４１】
多重閾値もまた、被験者の腎臓状態評価に使用可能である。例えば、１つまたは複数の将来の腎臓状態の変化、損傷の発生、選別、等を起こしやすい「第１の」亜集団、およびそれを起こしやすくない「第２の」亜集団を、単一の群に組み合わせることが可能である。この群は、次に、３つ以上の均等部分に細分される（細区画の数に応じて、三分位、四分位、五分位、等として知られる）。オッズ比が、それらが分類される細区画に基づいて被験者に割り付けられる。三分位数を検討する場合、最小または最大三分位数は、他の細区画の比較のための基準として使用可能である。この基準細区画は、オッズ比１に割り付けられる。第２三分位は、第１三分位に比例したオッズ比が割り付けられる。すなわち、第２三分位の人は、第１三分位の人に比べて、１つまたは複数の将来の腎臓状態の変化が３倍多く起こる可能性がある。第３三分位もまた、第１三分位に比例したオッズ比が割り付けられる。  
【００４２】
特定の実施形態では、アッセイ方法は、イムノアッセイである。このようなアッセイに使用する抗体は、目的の完全長腎臓損傷マーカーに対し特異的に結合し、また、それに「関連する」（この用語は後で定義する）１つまたは複数のポリペプチドにも結合可能である。多くのイムノアッセイ形式が当業者に既知である。体液検体は、尿、血液、血清、唾液、涙、および血漿からなる群より選択されることが好ましい。  
【００４３】
前に述べたように、好ましいバイオマーカーパネルは、本明細書の表２に挙げた２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ超のバイオマーカーを検出するように構成された、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ超のアッセイを含む。以上のように述べてきたが、本明細書記載の方法において、腎臓損傷マーカーアッセイ結果が単独で使われることを意味するものとして、前述の方法のステップを解釈すべきではない。むしろ、追加の変数または他の臨床的徴候が、本明細書記載の方法に含まれうる。例えば、リスク層別化、診断、選別、モニタリング、等、の方法では、アッセイ結果を次記からなる群より選択される被験者に対し測定される１つまたは複数の変数と組み合わせることができる：人口統計情報（例えば、重量、性別、年齢、人種）、病歴（例えば、家族歴、手術のタイプ、前から存在する疾患、例えば、動脈瘤、うっ血性心不全、子癇前症、子癇、糖尿病、高血圧、冠状動脈疾患、蛋白尿、腎不全、または敗血症、毒素暴露のタイプ、例えば、ＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、ホスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イホスファミド、重金属、メトトレザト、放射線造影剤、もしくはストレプトゾトシン）、臨床的変数（例えば、血圧、温度、呼吸数）、リスクスコア（ＡＰＡＣＨＥスコア、ＰＲＥＤＩＣＴ  Ｓｃｏｒｅ、ＵＡ／ＮＳＴＥＭＩ用のＴＩＭＩ  Ｒｉｓｋ  Ｓｃｏｒｅ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ  Ｒｉｓｋ  Ｓｃｏｒｅ、Ｔｈａｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１６：１６２−６８、２００５）、Ｍｅｈｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４４：１３９３−９９、２００４）、Ｗｉｊｅｙｓｕｎｄｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ＪＡＭＡ  ２９７：１８０１−９、２００７）、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｗｌａ（Ｃｌｉｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．５：９４３−４９、２０１０）、またはＣｈａｗｌａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．６８：２２７４−８０、２００５））、糸球体濾過値率、推定糸球体濾過値率、尿産生速度、血清または血漿中クレアチニン濃度、尿中クレアチニン濃度、ナトリウム排泄率、尿中ナトリウム濃度、血清または血漿中クレアチニンに対する尿中クレアチニン比率、尿比重、尿浸透圧、血漿中尿素窒素に対する尿中尿素窒素比率、クレアチニンに対する血漿ＢＵＮ比率、尿中ナトリウム／（尿中クレアチニン／血漿中クレアチニン）として計算される腎機能不全指数、血清または血漿好中球ゼラチナーゼ（ＮＧＡＬ）濃度、尿ＮＧＡＬ濃度、血清または血漿シスタチンＣ濃度、血清または血漿心筋トロポニン濃度、血清または血漿ＢＮＰ濃度、血清または血漿Ｎ末端プロＢＮＰ濃度、および血清または血漿プロＢＮＰ濃度。１つまたは複数の腎臓損傷マーカーアッセイ結果と組み合わせることができる他の腎機能の測定法は、本明細書の後部で、また、ハリソン内科学（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、１７ｔｈ  Ｅｄ．、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  １７４１−１８３０、および、カレントメディカル診断と治療（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ＆  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）２００８、４７ｔｈ  Ｅｄ、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  ７８５−８１５、中で記載されている。これらの文献は、参照によってその全体が組み込まれる。  
【００４４】
２つ以上のマーカーが測定される場合は、個別のマーカーは、同時に得られた検体で測定してもよく、または、異なる時点（例えば、前、または後で）に得た検体から測定してもよい。個別のマーカーはまた、同じ、または異なる体液検体で測定してもよい。例えば、１つの腎臓損傷マーカーは、血清または血漿検体で測定してもよく、別の腎臓損傷マーカーは、尿検体で測定してもよい。さらに、尤度の割り付けでは、個別の腎臓損傷マーカーアッセイ結果と、１つまたは複数の追加の変数における時間的変化とを組み合わせてもよい。  
【００４５】
種々の関連する態様では、本発明は、また、本明細書記載の方法を実行するためのデバイスとキットに関する。適切なキットは、少なくとも１つの記載された腎臓損傷マーカーに対するアッセイを行うのに充分な試薬、ならびに、記載された閾値比較を行うためのインストラクションを含む。  
【００４６】
特定の実施形態では、このようなアッセイを行う試薬は、アッセイデバイスに入れて提供され、このようなアッセイデバイスは、このようなキット中に含むことができる。好ましい試薬は、１つまたは複数の固相抗体を含み、この固相抗体は、固体支持体に結合した目的のバイオマーカー標的を検出する抗体を含んでもよい。サンドイッチイムノアッセイの場合は、このような試薬は、１つまたは複数の検出可能なように標識した抗体を含み、この検出可能なように標識した抗体は、検出可能標識を結合した目的バイオマーカー標的を検出できる抗体を含んでもよい。アッセイデバイスの一部として提供される追加の任意選択の要素は、本明細書で後程記載される。  
【００４７】
検出可能標識は、それ自体検出可能な分子（例えば、蛍光部分、電気化学標識、ｅｃｌ（電気化学発光）標識、金属キレート、コロイド状金属粒子、等）、ならびに、検出可能反応産物（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、等の酵素）の生成により、またはそれ自体検出可能である特異的結合分子（例えば、第２の抗体、ビオチン、ジゴキシゲニン、マルトース、オリゴヒスチジン、２、４−ジントロベンゼン、フェニルアルセナート、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、等に結合する標識抗体）の使用により、間接的に検出される分子を含んでもよい。  
【００４８】
シグナル発生要素からのシグナルの生成は、当技術分野でよく知られた様々な光学的、音響的、および電気化学的方法を使って行うことができる。検出法の例には、蛍光、放射化学検出、反射率、吸光度、電流滴定、コンダクタンス、インピーダンス、干渉法、偏光解析法、等が含まれる。これら内のある方法では、シグナルの生成のために、固相抗体がトランスデューサー（例えば、回折格子、電気化学センサー、等）に連結され、また、別の方法では、固相抗体から空間的に分離されたトランスデューサー（例えば、励起光源と光学的検出器を使った蛍光光度計）によってシグナルが生成される。このリストは、限定を意図するものではない。抗体ベースバイオセンサーもまた、標識分子の必要性を任意選択で除外してもよい分析物の存在または量を測定するために、採用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
図１〜４３は、ＩＣＵ患者集団におけるバイオマーカーパネルの急性腎損傷を評価する能力の詳細な一覧を示す。集団中の
患者は、腎臓状態のＲＩＦＬＥ分類に基づいて分類される。以下の分析が提供される：    
【図１】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。
【図２】ｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。
【図３】尿量により判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。
【図４】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より２４時間前に採取される。
【図５】ｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より２４時間前に採取される。
【図６】尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より２４時間前に採取される。
【図７】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。
【図８】尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。
【図９】尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。
【図１０】ｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。
【図１１】尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。
【図１２】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断時に採取される。
【図１３】ｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断時に採取される。
【図１４】尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断時に採取される。
【図１５】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。
【図１６】ｓＣｒより判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。
【図１７】尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。
【図１８】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。
【図１９】ｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。
【図２０】尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。
【図２１】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より４８時間前に採取される。
【図２２】ｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より４８時間前に採取される。
【図２３】尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より４８時間前に採取される。
【図２４】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。
【図２５】ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲからＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージへの進行。検体は、Ｒ診断時に採取される。
【図２６】ｓＣｒより判定されたＲからＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージへの進行。検体は、Ｒ診断時に採取される。
【図２７】尿量より判定されたＲからＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージへの進行。検体は、Ｒ診断時に採取される。
【図２８】登録後４８時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図２９】登録後４８時間以内にｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３０】登録後４８時間以内に尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３１】登録後４８時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３２】登録後４８時間以内にｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３３】登録後４８時間以内に尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３４】登録後４８時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３５】登録後４８時間以内に尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３６】登録後２４時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３７】登録後２４時間以内にｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３８】登録後２４時間以内に尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図３９】登録後２４時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図４０】登録後２４時間以内にｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図４１】登録後２４時間以内に尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図４２】登録後２４時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【図４３】登録後２４時間以内に尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
発明の詳細な説明本発明は、１つまたは複数の腎臓損傷マーカーの測定による、腎機能損傷、腎機能低下および／または急性腎不全に罹患している、または罹患の危険性のある被験者の診断、鑑別診断、リスク層別化、モニタリング、選別および治療計画の決定のための方法と組成物に関する。いくつかの実施形態では、本明細書の表２に列挙されたバイオマーカー、またはそれに関連する１つまたは複数のマーカーが、１つまたは複数の本明細書の表２に挙げられた追加のバイオマーカーおよび／または１つまたは複数の他のバイオマーカーまたは臨床的徴候と組み合わされ、その組み合わせたものが被験者の腎臓状態と相互に関連付けされる。  
【００５１】
本文書の目的のために、以下の定義が適用される：  
【００５２】
本明細書で使われる「腎機能損傷」は、腎機能の測定値の急速な（１４日以内、好ましくは、７日以内、より好ましくは、７２時間以内、およびさらにより好ましくは、４８時間以内の）計測可能な減少である。このような損傷は、例えば、糸球体濾過値率または推定ＧＦＲの減少、尿量の減少、血清クレアチニン値の増加、血清シスタチンＣの増加、腎置換療法に対する要求、等により特定可能である。「腎機能の改善」は、腎機能の測定値の急速な（１４日以内、好ましくは、７日以内、より好ましくは、７２時間以内、およびさらにより好ましくは、４８時間以内の）計測可能な増加である。ＧＦＲ測定および／または推定の好ましい方法は、以下に記載される。  
【００５３】
本明細書で使われる「腎機能低下」は、０．１ｍｇ／ｄＬ以上（≧８．８μｍｏｌ／Ｌ）の血清クレアチニン値の絶対増加、血清クレアチニン値の２０％（ベースラインから１．２倍）以上のパーセンテージ増加、または尿量の減少（０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の乏尿として実証されている）によって特定される腎臓機能の急速な（１４日以内、好ましくは、７日以内、より好ましくは、７２時間以内、およびさらにより好ましくは、４８時間以内の）低下である。  
【００５４】
本明細書で使われる「急性腎不全」または「ＡＲＦ」は、０．３ｍｇ／ｄｌ以上（≧２６．４μｍｏｌ／ｌ）の血清クレアチニン値の絶対増加、血清クレアチニン値の５０％（ベースラインから１．５倍）以上のパーセンテージ増加、または尿量の減少（少なくとも６時間の間、０．５ｍｌ／ｋｇ／ｈｒ未満の乏尿として実証されている）によって特定される腎臓機能の急速な（１４日以内、好ましくは、７日以内、より好ましくは、７２時間以内、およびさらにより好ましくは、４８時間以内の）低下である。この用語は、「急性腎損傷」または「ＡＫＩ」の同義語である。  
【００５５】
本明細書で使われるリペプチドバイオマーカーの場合には、「マーカー」または「バイオマーカー」は、特定の生合成前駆物質由来の生物試料中に存在するポリペプチドを指す。ポリペプチドではないバイオマーカー（例えば、ヒアルロン酸）の場合には、「マーカー」または「バイオマーカー」は、特定の列挙された分子実体を指す。  
【００５６】
以下の表２は、本発明で使用される好ましいバイオマーカーのリストを提供する。表中、「推奨名」は、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ「ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ」データベース由来のバイオマーカー前駆物質、およびほとんどのポリペプチドバイオマーカーに対しては、ヒト前駆物質のＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔエントリー番号である。アッセイにより複合体が検出されると、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔエントリーが複合体の各メンバーに対してリストアップされる。    
【表２】
0005998057.tif 000003
0005998057.tif 000004
0005998057.tif 000005
0005998057.tif 000006
0005998057.tif 000007
0005998057.tif 000008
【００５７】
このリストには、Ｉ型、ＩＩ型、またはＧＰＩアンカー型膜タンパク質のような、１つの型として存在する多くのタンパク質が含まれる。通常、このような膜タンパク質は、実質的に細胞外のドメインを含み、これらの一部または全部は、有効な膜貫通ドメインの欠失を引き起こす開裂産物またはスプライス変異体として、血液、血清、血漿、尿、等の水性検体中に存在する可溶形で検出できる。これらの膜タンパク質には、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔエントリー番号：Ｏ１４７８８、Ｏ１４９４４、Ｏ７５３０９、Ｐ００７９７、Ｐ０５１８６、Ｐ０８４７３、Ｐ１３６８８、Ｐ１５５１４、Ｐ２２２２３、Ｐ２７４８７、Ｐ３５０７０、Ｑ０３４０５、Ｑ１４９５６、Ｑ１６７９０、Ｑ９９０７５、Ｑ９Ｙ５Ｙ７Ｑ１５１０９、Ｑ０２７６３、Ｐ１７２１３、Ｐ１２８３０、Ｐ３３１５１、Ｐ０６７３１、Ｐ２９９６５、Ｐ１６０７０、Ｑ９Ｈ２Ａ７、Ｐ１７８１３、Ｑ９ＵＮＮ８、Ｐ００５３３、Ｐ１６４２２、Ｐ１９２３５、Ｐ１６５８１、Ｐ７８４２３、Ｏ４３６５６、Ｐ０８５８１、Ｐ０８０６９、Ｐ０５３６２、Ｐ１３５９８、Ｐ３２９４２、Ｐ１４７７８、Ｐ２７９３０、Ｐ０１５８９、Ｐ２４３９４、Ｐ０８８８７、Ｐ４０１８９、Ｐ２１５８３、Ｐ０９６０３、Ｐ０８５７１、Ｑ８ＷＸＩ７、Ｐ１３５９１、Ｑ９２８２３、Ｐ７８３８０、Ｐ１６２８４、Ｐ０１１３３、Ｐ１５３０９、Ｐ０１１３５、Ｐ１６１０９、Ｑ１４２４２、Ｐ４９７７１、Ｐ０７２０４、Ｐ１３７２６、Ｐ０１３７５、Ｐ５０５９１、Ｐ４８０２３、Ｏ１４７６３、Ｐ１９４３８、Ｐ２０３３３、Ｐ２５９４２、Ｐ２５４４５、Ｐ２８９０８、Ｐ１９３２０、Ｐ１７９４８、およびＰ３５９６８が含まれる。可溶形のこれらのバイオマーカーを検出するアッセイが好ましい。  
【００５８】
これに関しては、当業者なら、イムノアッセイから得られるシグナルは、１つまたは複数の抗体と抗体が結合すのに必要なエピトープを含む対応する標的生体分子（すなわち、被検体）の間で形成された複合体の直接の結果であることがわかるであろう。このようなアッセイは、完全長バイオマーカーを検出可能で、アッセイ結果を目的のバイオマーカーの濃度として表わすことができるが、アッセイからのシグナルは、事実上、検体中に存在する全てのこのような「免疫反応性」分子の結果である。バイオマーカーの発現は、また、タンパク質測定（例えば、ドットブロット、ウェスタンブロット、クロマトグラフ法、質量分析法、等）および核酸測定（ｍＲＮＡ定量化）等のイムノアッセイ以外の手段でも測定可能である。このリストは限定を意図するものではない。  
【００５９】
本明細書で使われる用語の、「シグナルを分析物の存在または量に対し関連付けること」は、この理解を反映するものである。アッセイシグナルは、通常、目的分析物の既知の濃度を使って計算した検量線を用いることにより、分析物の存在または量に関連付けられる。この用語を本明細書で使用する場合、アッセイが生理学的濃度の分析物の存在または量を示す検出可能シグナルを生成できる場合は、アッセイは、分析物を「検出するように構成される」。抗体エピトープは、８アミノ酸のオーダーであるから、目的マーカーを検出するように構成されたイムノアッセイは、また、これらのポリペプチドが、アッセイで使われる抗体または複数抗体に結合するのに必要なエピトープを含む限り、マーカー配列に関連するポリペプチドも検出することになる。本明細書記載の１つの腎臓損傷マーカー等のバイオマーカーに関連して本明細書で使われる用語の「関連マーカー」は、マーカーそれ自体の代用として、または非依存性バイオマーカーとして、検出可能な特定のマーカーまたはその生合成の親の１つまたは複数の断片、変異体、等を指す。この用語は、また、追加の種と複合化したバイオマーカー前駆物質、例えば、結合タンパク質、受容体、ヘパリン、脂質、糖、等由来の生物試料中に存在する１つまたは複数のポリペプチドを指す。  
【００６０】
本明細書で使われる場合、用語の「ポジティブゴーイング」マーカーは、疾患または状態を患っていない被験者に比べて、疾患または状態を患っている被験者中で上昇して測定されるマーカーを指す。本明細書で使われる場合、用語の「ネガティブゴーイング」マーカーは、疾患または状態を患っていない被験者に比べて、疾患または状態を患っている被験者で減少して測定されるマーカーを指す。  
【００６１】
本明細書で使われる用語の「被験者（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、ヒトまたは非ヒト生物を指す。従って、本明細書記載の方法および組成物は、ヒトおよび獣医学疾患の両方に適用可能である。さらに、被験者は、生物が好ましいが、本明細書記載の本発明は、死後分析にも同様に使用可能である。好ましい被験者は、ヒトで、最も好ましくは、「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」は、本明細書では、疾患または状態に対し医療を受けている、生きているヒトを指す。これは、病状の徴候に対して調査中の定まった疾病のない人を含む。  
【００６２】
好ましくは、分析物は、検体中で測定される。このような検体は、被験者から入手してもよく、または、被験者に提供される予定の生物学的物質から入手してもよい。例えば、検体は、被験者への想定される移植のため、および腎臓の既存損傷評価用分析物測定のために評価される腎臓から入手してもよい。好ましい検体は体液検体である。  
【００６３】
本明細書で使われる用語の「体液検体」は、目的被験者、例えば、患者または移植ドナーの診断、予後、選別または評価のために採取された身体の体液の検体を指す。特定の実施形態では、このような検体は、進行中の状態または状態に対する治療法の効果の結果を測定するために採取してもよい。好ましい体液検体には、血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、唾液、痰、および胸水が含まれる。さらに、当業者なら、特定の体液検体は、分画または精製手順、例えば、全血の血清または血漿成分への分離、の後にさらに容易に分析可能なことをわかるであろう。  
【００６４】
本明細書で使われる用語の「診断」は、患者が所与の疾患または状態を患うか否かの確率（「尤度」）を当業者が推定および／または測定することができる方法を指す。本発明の場合では、「診断」は、本発明の腎臓損傷マーカーに対するアッセイ、最も好ましくは、イムノアッセイの結果を使って、任意選択で、他の臨床的特性と併せて、検体を採取しアッセイした被験者に対する急性腎損傷またはＡＲＦの診断（すなわち、発生または不発生）に至ることを含む。このような診断が「決定される」ことは、診断が１００％正しいと示していることを意味しない。多くのバイオマーカーは、複数の状態を示す。熟練臨床医は、情報が欠如している状態（ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｖａｃｕｕｍ）では、バイオマーカーの結果を使用せずに、むしろ、試験結果を他の臨床的徴候と併せて使って、診断を行う。従って、所定の診断閾値の一方の側にある測定バイオマーカーレベルは、所定の診断閾値のもう一方の側にあるレベルに比べて、被験者における疾患の発生のより大きな尤度を示す。  
【００６５】
同様に、予後リスクは、所与の経過または転帰が発生する確率（「尤度」）を示唆する。予後指標のレベルまたはレベルの変化は、その結果として、罹患確率の増加（例えば、腎機能の悪化、将来のＡＲＦ、または死亡）に関連し、患者の有害転帰の「尤度の増加を示す」と表現される。  
【００６６】
本明細書で使われる「複数」は、少なくとも２つを指す。好ましくは、複数は、少なくとも３つ、より好ましくは、少なくとも４つ、さらにより好ましくは、少なくとも５つ、またさらにより好ましくは、少なくとも１０、および最も好ましくは、少なくとも２０を指す。  
【００６７】
マーカーアッセイ通常、イムノアッセイは、目的バイオマーカーを含む、または含むと疑われる検体を、バイオマーカーに特異的に結合する少なくとも１つの抗体と接触させることを含む。検体中のポリペプチドの抗体への結合により形成された複合体の存在または量を示すシグナルが生成される。シグナルは、次に、検体中のバイオマーカーの存在または量に関係付けられる。多くの方法とデバイスが、バイオマーカーの検出および分析用として、当業者によく知られている。例えば、米国特許第６、１４３、５７６号；同６、１１３、８５５号；同６、０１９、９４４号；５、９８５、５７９；同５、９４７、１２４号；同５、９３９、２７２号；同５、９２２、６１５号；同５、８８５、５２７号；同５、８５１、７７６号；同５、８２４、７９９号；同５、６７９、５２６号；同５、５２５、５２４号；および同５、４８０、７９２号、ならびに、Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｄａｖｉｄ  Ｗｉｌｄ、ｅｄ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９４、を参照のこと。これらのそれぞれは、参照によって全ての表、図および請求項を含め、その全体が組み込まれる。  
【００６８】
当技術分野で既知のアッセイデバイスおよび方法は、種々のサンドイッチ、競合または非競合アッセイ形式で標識分子を利用し、目的バイオマーカーの存在または量に関連したシグナルを生成可能である。また、適切なアッセイ形式には、クロマトグラフ、質量分析、およびタンパク質「ブロッティング」法が含まれる。さらに、特定の方法およびデバイス、例えば、バイオセンサーおよび光学的イムノアッセイ、を採用して、標識分子を必要とせずに、分析物の存在または量を測定可能である。例えば、米国特許第５、６３１、１７１号；および同５、９５５、３７７号、参照。これらのそれぞれは、参照によって全ての表、図および請求項を含め、その全体が組み込まれる。また、当業者は、これらに限定されないが、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＡＣＣＥＳＳ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＸＳＹＭ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ  ＥＬＥＣＳＹＳ（登録商標）、Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  ＳＴＲＡＴＵＳ（登録商標）システムを含むロボット計測装置が、イムノアッセイを実行できるイムノアッセイ分析機器であることをわかっている。しかし、いずれかの適切なイムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、競合結合アッセイ、等が利用可能である。  
【００６９】
抗体または他のポリペプチドは、アッセイで使用するために種々の固体支持体上に固定化できる。特異的結合メンバーを固定するのに使用される固相には、固相結合アッセイの固相として開発された、および／または使用されたものが含まれる。適切な固相の例には、膜フィルター、セルロースベース紙、ビーズ（高分子、ラテックスおよび常磁性粒子、等）、ガラス、シリコンウエハ、微粒子、ナノ粒子、ＴｅｎｔａＧｅｌ、ＡｇｒｏＧｅｌ、ＰＥＧＡゲル、ＳＰＯＣＣゲル、および多重ウエルプレートが含まれる。アッセイストリップは、固体支持体上のアレイに１つまたは複数の抗体をコーティングして調製することもできる。このストリップを、次に、試験検体中に浸漬し、洗浄および検出ステップで素早く処理して、測定可能シグナル、例えば、着色スポットを生成できる。抗体または他のポリペプチドは、アッセイ装置表面に直接結合させるか、または間接的に結合させることにより、アッセイデバイスの特異的ゾーン結合させることができる。ラ
テックスの場合の一例では、抗体または他のポリペプチドは、粒子または他の固体支持体上に固定し、その固体支持体をデバイス表面に固定できる。  
【００７０】
生物学的アッセイには、検出方法が必要であり、結果の定量化に最もよく使われる１つの方法は、調査される生物学的システム中の１つの成分に対する親和性を有するタンパク質または核酸に検出可能な標識を結合することである。検出可能な標識には、それ自体検出可能な分子（例えば、蛍光成分、電気化学標識、金属キレート、等）、ならびに検出可能反応産物（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、等の酵素）の産生により、またはそれ自体検出可能な特異的結合分子（例えば、ビオチン、ジゴキシゲニン、マルトース、オリゴヒスチジン、２、４−ジントロベンゼン、フェニルアルセナート、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、等）により間接的に検出される分子を含んでもよい。  
【００７１】
固相および検出可能な標識複合体の調製は、化学架橋剤の使用を含むことが多い。架橋剤は、少なくとも２つの反応性基を含み、通常、ホモ官能性架橋剤（同じ反応性基を含む）およびヘテロ官能性架橋剤（異なる反応性基を含む）に分けられる。アミン、スルフヒドリルを介して結合する、または非特異的に反応するホモ二官能性架橋剤は、多くの市販品メーカーから入手可能である。マレイミド、アルキルおよびアリールハロゲン化物、アルファハロアシルおよびピリジルジスルフィドは、チオール反応性基である。マレイミド、アルキルおよびアリールハロゲン化物、ならびにアルファハロアシルは、スルフヒドリルと反応し、チオールエーテル結合を形成し、一方、ピリジルジスルフィドは、スルフヒドリルと反応して混合ジスルフィドを生成する。ピリジルジスルフィド生成物は、切断可能である。イミドエステルは、また、タンパク質−タンパク質架橋に非常に有用である。複合化を成功させるために、それぞれ異なる性質のものを結合する種々のヘテロ二機能性架橋剤は、市販品として入手可能である。  
【００７２】
特定の態様では、本発明は、記載された腎臓損傷マーカーの分析のためのキットを提供する。キットは、腎臓損傷マーカーに結合する少なくとも１つの抗体を含む少なくとも１つの試験検体の分析用試薬を含む。キットには、また、１つまたは複数の本明細書記載の診断および／または予後に対する関連付けを行うためのデバイスおよびインストラクションを含めてもよい。好ましいキットは、分析物用のサンドイッチ法を行うための抗体ペア、または競合アッセイを行うための標識した種を含む。好ましくは、抗体ペアは、固相に結合した一次抗体および検出可能な標識に結合した二次抗体を含み、一次および二次抗体のそれぞれが腎臓損傷マーカーに結合する。それぞれの抗体がモノクローナル抗体であるのが、最も好ましい。キットおよび相互関連付け実施の説明書は、添付される任意の文書または記録物を指し示すラベル表示か、あるいは、その製造、輸送、販売または使用の間ずっとキットに付随するラベル表示の形でもよい。例えば、用語のラベル表示は、宣伝パンフレットおよび冊子、パッケージング材料、インストラクション、オーディオまたはビデオカセット、コンピュータディスク、ならびにキットに直接刷り込まれた記述を包含する。  
【００７３】
抗体本明細書で使われる用語の「抗体」は、抗原またはエピトープに特異的に結合可能な１つまたは複数の免疫グロブリン遺伝子、またはその断片由来の、それらを手本にした、またはそれらにより実質的にコードされたペプチドまたはポリペプチドを指す。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ、ｅｄ．、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９９３）；Ｗｉｌｓｏｎ（１９９４；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７５：２６７−２７３；Ｙａｒｍｕｓｈ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５：８５−９７、を参照のこと。用語の抗体は、抗原結合部分、すなわち、抗原に結合する能力を保持する「抗原結合部位」（例えば、断片、部分配列、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含み、これには、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを含む一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ部でジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）、が含まれる。また、用語の「抗体」の言及には、単鎖抗体も含まれる。  
【００７４】
本明細書記載のイムノアッセイで使われる抗体は、本発明の腎臓損傷マーカーに特異的に結合するのが好ましい。用語の「特異的に結合」は、抗体がその目的の標的に排他的に結合することを示す意図はない。理由は、上述のように、抗体は、抗体が結合するエピトープを提示している任意のポリペプチドに結合するためである。むしろ、適切なエピトープを提示していない非標的分子に対するその親和性に比べて、目的標的に対するその親和性が約５倍大きい場合に、抗体は、「特異的に結合」する。好ましくは、抗体の親和性は、非標的分子に対するその親和性よりも、標的分子に対して、少なくとも約５倍、好ましくは、１０倍、より好ましくは、２５倍、さらにより好ましくは、５０倍、および最も好ましくは、１００倍以上大きい。好ましい実施形態では、好ましい抗体は、少なくとも約１０７Ｍ−１、および好ましくは、約１０８Ｍ−１〜約１０９Ｍ−１、約１０９Ｍ−１〜約１０１０Ｍ−１、または約１０１０Ｍ−１〜約１０１２Ｍ−１の間の親和性で結合する。  
【００７５】
親和性は、Ｋｄ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される（ｋｏｆｆは解離速度定数、Ｋｏｎは会合速度定数、Ｋｄは平衡定数）。親和性は、種々の濃度（ｃ）で、平衡時の標識リガンドの結合割合（ｒ）を測定することにより、決定できる。データは、スキャッチャード式：ｒ／ｃ＝Ｋ（ｎ−ｒ）を使ってグラフに描画される：ここで、ｒ＝平衡時の結合リガンドのモル／受容体モル；ｃ＝平衡時の遊離リガンド濃度；Ｋ＝平衡結合定数；およびｎ＝受容体分子当たりのリガンド結合部位の数である。グラフ解析のために、ｒ／ｃをＹ−軸上に、ｒをＸ−軸上にプロットして、スキャッチャードプロットを作る。スキャッチャード解析による抗体親和性測定は、当技術分野でよく知られている。例えば、ｖａｎ  Ｅｒｐ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  １２：４２５−４３、１９９１；Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｇｒｉｓｗｏｌｄ、Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．２７：６５−８、１９８８、を参照。  
【００７６】
用語の「エピトープ」は、抗体に特異的結合可能な抗原決定基を指す。エピトープは、通常、化学的に活性な表面分子グループ、例えば、アミノ酸または糖側鎖、からなり、通常、特異的な３次元構造特性、ならびに特異的チャージ特性を有する。立体構造および非立体構造エピトープは、変性溶剤の存在下、前者に対する結合が失われ、後者に対しては結合が失われないことで区別される。  
【００７７】
多くの出版物で、ポリペプチドのライブラリーを生成し、選択分析物に対する結合に関して選別するためのファージディスプレイ技術の使用について考察されている。例えば、Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７、６３７８−８２、１９９０；Ｄｅｖｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９、４０４−６、１９９０、Ｓｃｏｔｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９、３８６−８８、１９９０；およびＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５、５７１、６９８号、を参照。ファージディスプレイ方法の基本的概念は、選別されるポリペプチドをコードするＤＮＡとポリペプチドの間の物理的結合を確立することである。この物理的結合は、ポリペプチドをコードするファージゲノムを内包するカプシッドの一部としてポリペプチドを提示するファージ粒子により提供される。ポリペプチドおよびそれらの遺伝物質の間の物理的結合の確立は、異なるポリペプチドを有する非常に多数のファージの同時に多量の選別を可能とする。標的に対する親和性を有するポリペプチドを提示しているファージは、標的に結合し、これらのファージは、標的に対する親和性選別により濃縮される。これらのファージから提示されたポリペプチドの同一性は、それらのそれぞれのゲノムから決定可能である。これらの方法を使って、目的標的に対する結合親和性を有すると特定されたポリペプチドは、従来の方法により大量に合成可能である。例えば、米国特許第６、０５７、０９８号を参照。本特許は、この参照により全ての表、図、および請求項を含むその全体が本明細書に組み込まれる。  
【００７８】
次に、これらの方法により生成される抗体は、目的精製ポリペプチドとの親和性および特異性に関して、必要に応じ、結合から除外されるのが望ましいポリペプチドと抗体の親和性および特異性の結果を比較して、一次選別により選択可能である。選別手順には、マイクロタイタープレートの別々のウエルに精製ポリペプチドを固定することを含めてもよい。その後、可能性のある抗体または抗体のグループを含む溶液を、それぞれのマイクロタイターウエル入れ、約３０分〜２時間インキュベートする。次に、マイクロタイターウエルを洗浄し、ウエルに標識二次抗体（例えば、集めた抗体がマウス抗体の場合は、アルカリフォスファターゼに結合した抗マウス抗体）を添加して、３０分間インキュベート後、洗浄する。基質をウエルに添加すると、固定化ポリペプチドに対する抗体が存在する場合は、呈色反応が現れる。  
【００７９】
このようにして特定された抗体は、次に、選択されたアッセイデザインでの親和性および特異性をさらに解析してもよい。標的タンパク質のためのイムノアッセイの開発では、精製標的タンパク質は、選択された抗体を使ってイムノアッセイ感度と特異度を判定する標準として使用可能である。種々の抗体の結合親和性は異なり、特定の抗体ペア（例えば、サンドイッチ法）が、相互に、例えば、立体的に干渉する可能性があるので、抗体のアッセイパフォーマンスは、抗体の絶対的親和性および特異性よりもより重要性の高い尺度でありうる。  
【００８０】
本出願は、抗体ベースの結合アッセイを詳細に記載するが、アッセイにおける抗体とは別の結合種が、当技術分野でよく知られている。これらには特定の標的に対する受容体、アプタマー、等が含まれる。アプタマーは、特異的標的分子に結合するオリゴ核酸またはペプチド分子である。アプタマーは、通常、大きなランダム配列プールからそれらを選択することにより生成されるが、天然のアプタマーも存在する。修飾ヌクレオチドを含む高親和性アプタマーは、リガンドに、改善されたインビボ安定性または改善された送達特性、等の改善された特性を与える。このような修飾の例には、リボースおよび／またはリン酸塩および／または塩基位置での化学置換が含まれ、アミノ酸側鎖官能性を含んでもよい。  
【００８１】
アッセイの相関性バイオマーカーの使用に関連して本明細書で使われる用語の「相互関連付け（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｎｇ）」は、患者中のバイオマーカーの存在または量を、所与の状態を患っているとわかっている、またはその危険があるとわかっている人におけるその存在または量；または所与の状態が無いとわかっている人におけるその存在または量に比較することを指す。これは、バイオマーカー濃度の形のアッセイ結果を、疾患の発生または不発生、またはいくつかの将来の転帰の尤度を示すように選択された所定の閾値と比較する形を取ることが多い。  
【００８２】
診断閾値の選択は、特に、疾患の
確率、異なる試験の閾値での真と偽診断の分布、および診断に基づいた治療の結果（または治療の失敗）の推定の考察を伴う。例えば、非常に有効で、低いリスクレベルの特異療法を行うことを考慮する場合、臨床医は、実質的な診断の不確定性を受け入れることができるため、わずかな試験で充分である。他方、治療オプションの有効性が少なく、危険である場合は、臨床医は、より高度な診断の確実性を必要とすることが多い。従って、コスト／利益分析は、診断の閾値の選択に関連する。  
【００８３】
適切な閾値は、種々の方法で決定可能である。例えば、心筋トロポニンを使った１つの推奨できる急性心筋梗塞の診断用の診断閾値は、正常な集団で認められる第９７．５パーセンタイルの濃度である。別の方法は、同じ患者由来の連続的検体に着目することであろう。この場合、前の「ベースライン」結果は、バイオマーカーレベルの時間的変化をモニターするのに使用される。  
【００８４】
また、集団調査も、識別閾値の選択に使用可能である。受信者動作特性（「ＲＯＣ」）は、第二次大戦中にレーダー画像分析用に開発されたシグナ検出理論の分野から発生し、ＲＯＣ分析は、「疾病」亜集団を「非疾病」亜集団から最良に鑑別することができる閾値を選択するために使用されることが多い。このケースでは、検査で陽性と出るが、その人が実際は疾患を有さない場合に、偽陽性が発生する。他方、検査で陰性と出て、健康であることを示唆するが、その人は、実際には疾患を有する場合に偽陰性が発生する。ＲＯＣ曲線を描くために、識別閾値は、連続的に変化するので、真陽性の割合（ＴＰＲ）および偽陽性の割合（ＦＰＲ）が決定される。ＴＰＲは、感度と等しく、ＦＰＲは、１−特異度と等しいために、ＲＯＣフラグは、感度ｖｓ（１−特異度）プロットと呼ばれることもある。理想的な試験は、１．０のＲＯＣ曲線下面積を有する；ランダム試験は、０．５の同面積を有することになる。閾値は、受容可能なレベルの特異度および感度を与える様に選定される。  
【００８５】
この文脈では、「疾病」は、１つの特徴（疾患または状態の存在または一部の転帰の発生）を指し、「非疾患」は、その特徴のない集団を指す。単一の識別閾値は、このような方法の最も単純な適用であるが、複数の識別閾値も使用可能である。例えば、第１の閾値未満で、疾患の非存在を比較的高い信頼性をもって割り付け可能であり、また、第２の閾値超で疾患の存在を比較的高い信頼性をもって割り付け可能である。２つの閾値の間では、不確定と考えることができる。ここで述べたことは、基本的に単なる例を意図しているに過ぎない。  
【００８６】
閾値の比較に加えて、アッセイ結果を患者分類（疾患の発生または非発生、転帰の尤度、等）に相互関連付けする他の方法には、決定木、ルールセット、ベイジアン法、およびニューラルネットワーク法が含まれる。これらの方法は、被験者が複数の分類から１つの分類に属する度合いを表す確率値を生成することができる。  
【００８７】
試験精度の測定値は、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２９：１０４３−５１、２００３、に記載のようにして得ることができ、所与のバイオマーカーの有効性を決定するために使用できる。これらの測定値には、感度および特異度、適中度、尤度比、診断オッズ比、およびＲＯＣ曲線下面積が含まれる。ＲＯＣプロットの曲線下面積（「ＡＵＣ」）は、分類器が、無秩序に選択された陽性の事例を、無秩序に選択された陰性の事例より高くランク付けする確率に等しい。ＲＯＣ曲線下面積は、マンホイットニーのＵ検定（これは、２つのグループで得られたスコア間の中央値の差を、グループが連続データからなるとして検定する）、またはランクのウイルコクソン検定に等価であると考えることができる。  
【００８８】
上記で考察したように、適切な試験では、これらの種々の測定値に対する１つまたは複数の以下の結果を示すことができる。：０．５超、好ましくは少なくとも０．６、より好ましくは少なくとも０．７、さらに好ましくは少なくとも０．８、またさらに好ましくは少なくとも０．９および最も好ましくは少なくとも０．９５の特異度であって、０．２超、好ましくは０．３超、より好ましくは０．４超、さらに好ましくは少なくとも０．５、またさらに好ましくは０．６、さらにより好ましくは０．７超、またさらに好ましくは０．８超、より好ましくは０．９超、および最も好ましくは０．９５超の対応する感度を伴った特異度；０．５超、好ましくは少なくとも０．６、より好ましくは少なくとも０．７、さらに好ましくは少なくとも０．８、またより好ましくは少なくとも０．９および最も好ましくは少なくとも０．９５の感度であって、０．２超、好ましくは０．３超、より好ましくは０．４超、さらにより好ましくは少なくとも０．５、またさらに好ましくは０．６、またより好ましくは０．７超、またさらに好ましくは０．８超、より好ましくは０．９超、および最も好ましくは０．９５超の対応する特異度を伴った感度；少なくとも７５％の特異性と組み合わされた少なくとも７５％の感度；０．５超、好ましくは少なくとも０．６、より好ましくは０．７、さらにより好ましくは少なくとも０．８、またさらに好ましくは少なくとも０．９、および最も好ましくは少なくとも０．９５のＲＯＣ曲線下面積；１とは異なる、好ましくは少なくとも約２以上または約０．５以下、より好ましくは少なくとも約３以上または約０．３３以下、さらにより好ましくは少なくとも約４以上または約０．２５以下、またさらに好ましくは少なくとも約５以上または約０．２以下、および最も好ましくは少なくとも約１０以上または約０．１以下のオッズ比；１超、少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、さらにまた好ましくは少なくとも５、および最も好ましくは少なくとも１０の陽性尤度比（感度／（１−特異度）として計算）；および／または１未満、０．５以下、より好ましくは０．３以下、および最も好ましくは０．１以下の陰性尤度比（（１−感度）／特異度として計算）。  
【００８９】
追加の臨床的徴候を本発明の腎臓損傷マーカーアッセイ結果と組み合わせ可能である。これらは、他の腎臓状態関連するバイオマーカーを含む。以下に、例として、一般的バイオマーカー名、続いてそのバイオマーカーまたはその親のＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔエントリー番号を列挙する：アクチン（Ｐ６８１３３）；アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＤＰＰ４、Ｐ２７４８７）；アルファ−１−酸糖タンパク質１（Ｐ０２７６３）；アルファ−１−ミクログロブリン（Ｐ０２７６０）；アルブミン（Ｐ０２７６８）；アンジオテンシノゲナーゼ（レニン、Ｐ００７９７）；アネキシンＡ２（Ｐ０７３５５）；ベータグルクロニダーゼ（Ｐ０８２３６）；Ｂ−２−ミクログロブリン（Ｐ６１６７９）；ベータガラクトシダーゼ（Ｐ１６２７８）；ＢＭＰ−７（Ｐ１８０７５）；脳ナトリウム利尿ペプチド（プロＢＮＰ、ＢＮＰ−３２、Ｎ末端プロＢＮＰ；Ｐ１６８６０）；カルシウム−結合タンパク質ベータ（Ｓ１００−ベータ、Ｐ０４２７１）；炭酸脱水酵素（Ｑ１６７９０）；カゼインキナーゼ２（Ｐ６８４００）；カテプシンＢ（Ｐ０７８５８）；セルロプラスミン（Ｐ００４５０）；クラスタリン（Ｐ１０９０９）；補体Ｃ３（Ｐ０１０２４）；システインリッチタンパク質（ＣＹＲ６１、Ｏ００６２２）；チトクロムＣ（Ｐ９９９９９）；上皮増殖因子（ＥＧＦ、Ｐ０１１３３）；エンドセリン−１（Ｐ０５３０５）；エキソソームフェチュイン−Ａ（Ｐ０２７６５）；脂肪酸結合タンパク質、心臓（ＦＡＢＰ３、Ｐ０５４１３）；脂肪酸結合タンパク質、肝臓（Ｐ０７１４８）；フェリチン（軽鎖、Ｐ０２７９３；重鎖Ｐ０２７９４）；フルクトース−１、６−ビホスファターゼ（Ｐ０９４６７）；ＧＲＯアルファ（ＣＸＣＬ１、（Ｐ０９３４１）；成長ホルモン（Ｐ０１２４１）；肝細胞増殖因子（Ｐ１４２１０）；インスリン様増殖因子Ｉ（Ｐ０１３４３）；免疫グロブリンＧ；免疫グロブリン軽鎖ｓ（カッパおよびラムダ）；インターフェロンガンマ（Ｐ０１３０８）；リゾチーム（Ｐ６１６２６）；インターロイキン−１アルファ（Ｐ０１５８３）；インターロイキン−２（Ｐ６０５６８）；インターロイキン−４（Ｐ６０５６８）；インターロイキン−９（Ｐ１５２４８）；インターロイキン−１２ｐ４０（Ｐ２９４６０）；インターロイキン−１３（Ｐ３５２２５）；インターロイキン−１６（Ｑ１４００５）；Ｌ１細胞接着分子（Ｐ３２００４）；乳酸塩脱水素酵素（Ｐ００３３８）；ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｐ２８８３８）；メプリンＡ−アルファサブユニット（Ｑ１６８１９）；メプリンＡ−ベータサブユニット（Ｑ１６８２０）；ミッドカイン（Ｐ２１７４１）；ＭＩＰ２−アルファ（ＣＸＣＬ２、Ｐ１９８７５）；ＭＭＰ−２（Ｐ０８２５３）；ＭＭＰ−９（Ｐ１４７８０）；ネトリン−１（Ｏ９５６３１）；中性エンドペプチダーゼ（Ｐ０８４７３）；オステオポンチン（Ｐ１０４５１）；腎乳頭抗原１（ＲＰＡ１）；腎乳頭抗原２（ＲＰＡ２）；レチノール結合タンパク質（Ｐ０９４５５）；リボヌクレアーゼ；Ｓ１００カルシウム結合タンパク質Ａ６（Ｐ０６７０３）；血清アミロイドＰ成分（Ｐ０２７４３）；ナトリウム／水素交換輸送体アイソフォーム（ＮＨＥ３、Ｐ４８７６４）；スペルミジン／スペルミンＮ１−アセチルトランスフェラーゼ（Ｐ２１６７３）；ＴＧＦベータ１（Ｐ０１１３７）；トランスフェリン（Ｐ０２７８７）；トレフォイルファクター３（ＴＦＦ３、Ｑ０７６５４）；Ｔｏｌｌ様タンパク質４（Ｏ００２０６）；総タンパク質量；尿細管間質性腎炎抗原（Ｑ９ＵＪＷ２）；ウロモジュリン（タム・ホースフォールタンパク質、Ｐ０７９１１）。  
【００９０】
リスク層別化のために、以下を本発明の腎臓損傷マーカーアッセイ結果と組み合わせることができる：アディポネクチン（Ｑ１５８４８）；アルカリフォスファターゼ（Ｐ０５１８６）；アミノペプチダーゼＮ（Ｐ１５１４４）；カルビンジンＤ２８ｋ（Ｐ０５９３７）；シスタチンＣ（Ｐ０１０３４）；Ｆ１ＦＯ  ＡＴＰアーゼの８サブユニット（Ｐ０３９２８）；ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（Ｐ１９４４０）；ＧＳＴａ（アルファグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、Ｐ０８２６３）；ＧＳＴｐｉ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼＰ；ＧＳＴクラス−ｐｉ；Ｐ０９２１１）；ＩＧＦＢＰ−１（Ｐ０８８３３）；ＩＧＦＢＰ−２（Ｐ１８０６５）；ＩＧＦＢＰ−６（Ｐ２４５９２）；膜内在性タンパク質１（Ｉｔｍ１、Ｐ４６９７７）；インターロイキン−６（Ｐ０５２３１）；インターロイキン−８（Ｐ１０１４５）；インターロイキン−１８（Ｑ１４１１６）；ＩＰ−１０（１０ｋＤａインターフェロンガンマ誘導タンパク質、Ｐ０２７７８）；ＩＲＰＲ（ＩＦＲＤ１、Ｏ００４５８）；イソバレリル−ＣｏＡ脱水素酵素（ＩＶＤ、Ｐ２６４４０）；Ｉ−ＴＡＣ／ＣＸＣＬ１１（Ｏ１４６２５）；ケラチン１９（Ｐ０８７２７）；Ｋｉｍ−１（Ａ型肝炎ウイルス細胞性受容体１、Ｏ４３６５６）；Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ（Ｐ５０４４０）；レプチン（Ｐ４１１５９）；リポカリン２（ＮＧＡＬ、Ｐ８０１８８）；ＭＣＰ−１（Ｐ１３５００）；ＭＩＧ（ガンマインターフェロン誘導モノカインＱ０７３２５）；ＭＩＰ−１ａ（Ｐ１０１４７）；ＭＩＰ−３ａ（Ｐ７８５５６）；ＭＩＰ−１ベータ（Ｐ１３２３６）；ＭＩＰ−１ｄ（Ｑ１６６６３）；ＮＡＧ（Ｎ−アセチルベータＤ−グルコサミニダーゼ、Ｐ５４８０２）；有機イオン輸送体（ＯＣＴ２、Ｏ１５２４４）；破骨細胞分化抑制因子（Ｏ１４７８８）；Ｐ８タンパク質（Ｏ６０３５６）；プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１（ＰＡＩ−１、Ｐ０５１２１）；ＰｒｏＡＮＰ（１−９８）（Ｐ０１１６０）；タンパク質ホスファターゼ１ベータ（ＰＰＩ−ベータ、Ｐ６２１４０）；ＲａｂＧＤＩベータ（Ｐ５０３９５）；腎カリクレイン（Ｑ８６Ｕ６１）；膜内在性タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（アルファ）鎖（Ｑ５Ｙ７Ａ８）；可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ（ｓＴ
ＮＦＲ−Ｉ、Ｐ１９４３８）；可溶性腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ（ｓＴＮＦＲ−ＩＩ、Ｐ２０３３３）；メタロプロテアーゼ３の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−３、Ｐ３５６２５）；ｕＰＡＲ（Ｑ０３４０５）。  
【００９１】
本発明の腎臓損傷マーカーアッセイ結果と組み合わせ可能な他の臨床的徴候には、以下が含まれる：人口統計情報（例えば、重量、性別、年齢、人種）、病歴（例えば、家族歴、手術のタイプ、前から存在する疾患、例えば、動脈瘤、うっ血性心不全、子癇前症、子癇、糖尿病、高血圧、冠状動脈疾患、蛋白尿、腎不全、または敗血症、毒素暴露タイプ、例えば、ＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、タクロリムス、アミノグリコシド、ホスカルネット、エチレングリコール、ヘモグロビン、ミオグロビン、イホスファミド、重金属、メトトレザト、放射線造影剤、またはストレプトゾトシン）、臨床的変数（例えば、血圧、温度、呼吸数）、リスクスコア（ＡＰＡＣＨＥスコア、ＰＲＥＤＩＣＴスコア、ＵＡ／ＮＳＴＥＭＩ用ＴＩＭＩリスクスコア、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍリスクスコア）、尿総タンパク質量測定値、糸球体濾過値率、推定糸球体濾過値率、尿産生速度、血清または血漿中クレアチニン濃度、腎乳頭抗原１（ＲＰＡ１）測定値；腎乳頭抗原２（ＲＰＡ２）測定値；尿中クレアチニン濃度、ナトリウム排泄率、尿ナトリウム濃度、血清または血漿中クレアチニン対尿クレアチニン比率、尿比重、尿浸透圧、血漿尿素窒素対尿中尿素窒素比率、クレアチニン対血漿ＢＵＮ比率、および／または尿ナトリウム／（尿中クレアチニン／血漿中クレアチニンとして計算された腎機能不全指数）。腎臓損傷マーカーアッセイ結果と組み合わせ可能な他の腎機能測定値は、以降で記載され、また、ハリソン内科学、（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）１７ｔｈＥｄ．、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  １７４１−１８３０、およびカレントメディカル診断と治療（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ＆  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）２００８、４７ｔｈ  Ｅｄ、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  ７８５−８１５、に記載されている。これらのそれぞれは、参照によってその全体が組み込まれる。  
【００９２】
このようなアッセイ結果／臨床的徴候の組み合わせ方法には、多変量ロジスティック回帰分析、対数線形モデル、ニューラルネットワーク解析、ｎ−ｏｆ−ｍ分析、決定木解析、等の使用を含んでもよい。このリストは、限定を意図するものではない。  
【００９３】
急性腎不全の診断上述のように、本明細書で使われる用語の「急性腎（ｒｅｎａｌ）（または腎臓（ｋｉｄｎｅｙ））損傷」および「急性の腎（または腎臓）不全」は、血清クレアチニン値のベースライン値からの変化によって定義される場合もある。大抵のＡＲＦの定義は、血清クレアチニン値および、時には、尿量、等の共通要素を有する。入手可能なこの比較に用いる腎機能のベースライン測定値が無く、患者が、腎機能障害を呈することがある。このよう場ケースでは、患者は、最初は正常なＧＦＲであると仮定して、ベースライン血清クレアチニン値を推定することができる。糸球体濾過値率（ＧＦＲ）は、単位時間当たりの腎（腎臓）糸球体毛細管からボーマン嚢へ濾過される体液の容量である。糸球体濾過値率（ＧＦＲ）は、血液中に一定のレベル存在し、束縛無く濾過されるが、腎臓により再吸収も分泌もされない任意の化学物質の測定により計算できる。ＧＦＲは、通常、ｍｌ／ｍｉｎの単位で表される：    
【数１】
0005998057.tif 000009
【００９４】
ＧＦＲを体表面積で正規化することにより、１．７３ｍ２の表面積当たり約７５〜１００ｍｌ／ｍｉｎのＧＦＲが想定できる。従って、測定された割合は、計算血液容量に基づく尿中の物質の量である。  
【００９５】
糸球体濾過値率（ＧＦＲまたはｅＧＦＲ）を計算または推定するのに使用されるいくつかの異なる技術が存在する。しかし、診療では、クレアチニンクリアランスがＧＦＲ測定に使われる。クレアチニンは、身体で自然に生成される（クレアチニンは筋肉中に認められるクレアチンの代謝物である）。それは糸球体で自由に濾過されるが、腎尿細管によっても活発に極少量分泌されるために、クレアチニンクリアランスは、実際のＧＦＲより１０〜２０％過大評価になる。この誤差範囲は、クレアチニンクリアランスの測定の容易さを考慮すれば、受け入れられるものである。  
【００９６】
クレアチニンの尿中濃度（ＵＣｒ）、尿流量（Ｖ）、およびクレアチニンの血漿中濃度（ＰＣｒ）の値が既知であれば、クレアチニンクリアランス（ＣＣｒ）は計算できる。尿中濃度と尿流量の積は、クレアチニンの排出速度であるから、クレアチニンクリアランスは、排出速度（ＵＣｒ×Ｖ）を血漿中濃度で割ったものとも言える。これは、通常、数学的には、    
【数２】
0005998057.tif 000010
として表される。  
【００９７】
通常、ある朝の空の膀胱から次の朝の膀胱の含有物まで２４時間尿採取が行われ、その後、比較血液試験が行われる：    
【数３】
0005998057.tif 000011
【００９８】
異なる大きさの人の間での結果の比較を可能とするために、ＣＣｒは、体表面積（ＢＳＡ）で補正して、平均の大きさの人に比較して、ｍｌ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２として表されることが多い。大抵の成人は、１．７（１．６〜１．９）近傍のＢＳＡであるが、極端に肥満、または細い患者は、ＣＣｒを実際のＢＳＡで補正すべきである：    
【数４】
0005998057.tif 000012
【００９９】
クレアチニンクリアランス測定の正確さは、（採取が完璧であっても）限られている。理由は、糸球体濾過値率（ＧＦＲ）が低下するにつれ、クレアチニン分泌が増え、従って、血清クレアチニン値の上昇が少なくなる、ためである。このように、クレアチニン排出は、濾過された量よりもずっと大きく、潜在的に大きなＧＦＲ過大評価を生ずる（２倍もの差異）。しかし、臨床目的としては、腎機能が安定か、または悪くなっているか、または良くなっているかを判断することが重要である。これは、血清クレアチニン値のみのモニタリングによって判断されることが多い。クレアチニンクリアランスのように、血清クレアチニン値は、ＡＲＦの非定常状態の条件下では、ＧＦＲの正確な反映ではないと思われる。にもかかわらず、血清クレアチニン値がベースラインから変化する程度は、ＧＦＲの変化を反映していると思われる。血清クレアチニン値は、すぐに、かつ容易に測定でき、腎機能に特異的である。  
【０１００】
ｍＬ／ｋｇ／ｈｒベースで尿量を測定するためには、時間毎の尿採取および測定が適切である。例えば、累積２４時間生成物のみが入手可能で、患者の体重が提供されない場合、ＲＩＦＬＥ尿量基準を少し修正することに関し報告がある。例えば、Ｂａｇｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２３：１２０３−１２１０、２００８、は、平均患者重量を７０ｋｇと仮定し、下記に基づいて患者をＲＩＦＬＥ分類に割り付けている：＜３５ｍＬ／ｈ（リスク）、＜２１ｍＬ／ｈ（損傷）または＜４ｍＬ／ｈ（不全）。  
【０１０１】
治療計画の選定 診断が得られるとすぐ、臨床医は、容易に診断に適合した治療計画、例えば、腎置換療法の開始、腎臓に損傷を与えることがわかっている化合物の送達中止、腎臓移植、腎臓に損傷を与えることがわかっている処置の延期または回避、利尿薬投与の変更、目標指向型治療の開始、等を選定できる。当業者なら、本明細書記載の診断方法に関連して考察した多くの疾患の適切な治療法をわかっている。例えば、診断と治療のメルクマニュアル（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、１７ｔｈＥｄ．Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ、ＮＪ、１９９９、を参照のこと。さらに、本明細書記載の方法と組成物は、予後情報を提供するため、本発明のマーカーは、治療の過程をモニターするのに使用可能である。例えば、改善された、または悪化した予後状態は、特定の治療が有効、または有効でないことを示している可能性がある。  
【０１０２】
当業者なら、本発明は目的を実行し、記載された目的と利点、ならびにその中の固有のものが得られるように適合化されていることを容易に理解する。本明細書で提供される例は、好ましい実施形態の代表的な例であり、本発明の範囲を限定する意図はない。  
【０１０３】
実施例１：造影剤腎症検体採取この検体採取試験の目的は、血管内造影剤を受ける前後の患者から血漿および尿検体ならびに臨床データを集めることである。ヨウ素標識造影剤の血管内投与を伴うＸ線検査／血管造影術を受けている約２５０成人が登録される。この試験に登録するには、各患者は、以下の選択基準の全てに適合すること、および以下の除外基準のいずれにも適合しないことが必要である：選択基準１８才以上の男女；造影剤の血管内投与を伴うＸ線検査／血管造影治療（例えば、ＣＴスキャンまたは冠動脈インターベンション）を受けている患者；造影剤投与後少なくとも４８時間入院することが予期される患者；自らの意思で試験参加に対し文書でインフォームドコンセントを提出し、全ての試験手順に従うことができる患者。除外基準腎性移植レシピエント；造影剤手続き前に急性腎機能悪化がある患者；登録時点で既に透析を受けている（急性または慢性）または切迫した透析が必要な患者；造影剤投与後４８時間以内に、大手術（例えば、心肺バイパスを伴う）またはさらなる腎性侵襲の大きなリスクを伴う造影剤を使った追加の画像処理手続きが予期される患者；３０日前以内に実験的治療を伴った介入性臨床試験に参加した患者；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または肝炎ウイルスへの感染がわかっている患者。  
【０１０４】
最初の造影剤投与の直前（および任意の処理前水分補給後）に、ＥＤＴＡ抗凝固処理血液検体（１０ｍＬ）および尿検体（１０ｍＬ）を各患者から集める。血液と尿検体は、造影剤の最終投与後、屈折コントラスト処理の間に４（±０．５）、８（±１）、２４（±２）４８（±２）、および７２（±２）時間目に採取する。直接静脈穿刺または他の利用可能な静脈へのアクセス手段、例えば、既存大腿鞘、中央静脈ライン、末梢静脈ラインまたはヘパロックを使って血液を採取する。これらの試験血液検体は、臨床現場で血漿に加工され、凍結して、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ．に送付される。試験尿検体は、凍結され、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃ．に送られる。  
【０１０５】
血清クレアチニン値を、最初の造影剤投与直後（および任意の処理前水分補給後）の直前ならびに造影剤の最終投与後４（±０．５）、８（±１）、２４（±２）、４８（±２））、および７２（±２）時間後に、（理想的には、試験検体が得られると同時に）その現場で評価する。さらに、追
加の血清および尿クレアチニン測定値、透析の必要性、入院状態、および有害臨床転帰（死亡率を含む）に関しては、３０日目まで各患者の状態を評価する。  
【０１０６】
造影剤投与の前に、各患者は、下記の評価に基づいてリスクを割り付けられる：収縮期血圧＜８０ｍｍＨｇ＝５ポイント；動脈内バルーンポンプ＝５ポイント；うっ血性心不全（クラスＩＩＩ〜ＩＶまたは肺水腫の病歴）＝５ポイント；年齢＞７５才＝４ポイント；ヘマトクリット値＜３９％（男性）、＜３５％（女性）＝３ポイント；糖尿病＝３ポイント；造影剤容量＝１００ｍＬ毎に１ポイント；血清クレアチニン値レベル＞１．５ｇ／ｄＬ＝４ポイントまたは推定ＧＦＲ４０〜６０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２＝２ポイント、２０〜４０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２＝４ポイント、＜２０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２＝６ポイント。リスク割り付けは以下の通り：ＣＩＮおよび透析に対するリスク：５以下の全体ポイント＝ＣＩＮリスク−７．５％、透析リスク−０．０４％；６〜１０全体ポイント＝ＣＩＮリスク−１４％、透析リスク−０．１２％；１１〜１６全体ポイント＝ＣＩＮリスク−２６．１％、透析リスク−１．０９％；＞１６全体ポイント＝ＣＩＮリスク−５７．３％、透析リスク−１２．８％。  
【０１０７】
実施例２：心臓手術検体採取この検体採取の試験の目的は、血漿および尿の検体ならびに腎臓機能に損傷を与えるとわかっている治療である心臓血管の手術を受ける前後の患者から臨床データを採取することである。このような手術を受けている約９００人の成人が登録される。この試験に登録されるには、各患者は、以下の選択基準の全てに適合すること、および以下の除外基準のいずれにも適合しないことが必要である：選択基準１８才以上の男女；心臓血管手術を受けている患者；少なくとも２の腎性置換リスクスコアに対するトロント／オタワ予測的リスク指数（Ｗｉｊｅｙｓｕｎｄｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．、ＪＡＭＡ  ２９７：１８０１−９、２００７）の患者；および自らの意思で試験参加に対し文書でインフォームドコンセントを提出し、全ての試験手順に従うことができる患者。除外基準妊娠が既知の患者；以前に腎移植のある患者；登録の前に腎機能が急悪化した患者（例えば、ＲＩＦＬＥ分類中のいずれかのカテゴリー）；登録時点で既に透析を受けている（急性または慢性）または切迫した透析が必要な患者；最近ＡＫＩに対する薬剤注入または治療的介入を伴う心臓手術の別の臨床試験に登録したまたは７日以内に別の臨床試験に登録の見込みである患者；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または肝炎ウイルスへの感染がわかっている患者。  
【０１０８】
最初の切開の３時間前以内に（および任意の処理前水分補給後）、ＥＤＴＡ抗凝固処理血液検体（１０ｍＬ）、全血（３ｍＬ）、および尿検体（３５ｍＬ）を各患者から採取する。次に、施術後３（±０．５）、６（±０．５）、１２（±１）、２４（±２）および４８（±２）時間目に、その後、被験者が病院に残っている場合は、３〜７日目に毎日、血液および尿検体を採取する。直接静脈穿刺または他の利用可能な静脈へのアクセス手段、例えば、既存大腿鞘、中央静脈ライン、末梢静脈ラインまたはヘパロックを使って血液を採取する。これらの試験血液検体は、凍結され、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ．に送付される。試験尿検体は、凍結され、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃ．に送られる。  
【０１０９】
実施例３：急性疾患被験者の検体採取この試験の目的は、急性疾患患者から検体を採取することである。少なくとも４８時間の間ＩＣＵにいることが予期される約９００人の成人が登録される予定である。この試験に登録するには、各患者は、以下の選択基準の全てに適合すること、および以下の除外基準のいずれにも適合しないことが必要である：選択基準１８才以上の男女；試験集団１：以下の内の少なくとも１つを有する約３００人の患者：ショック（ＳＢＰ＜９０ｍｍＨｇおよび／またはＭＡＰ＞６０ｍｍＨｇを維持するために昇圧支援が必要および／またはＳＢＰの少なくとも４０ｍｍＨｇの実証されている低下）；および敗血症。試験集団２：以下の内の少なくとも１つを有する約３００人の患者：登録の２４時間以内に医師による電子オーダーエントリー（ＣＰＯＥ）で指示された抗生物質の静脈内投与；登録の２４時間以内に造影剤暴露；急性非代償性心不全に伴う腹圧増加；および登録後４８時間の間、重篤な外傷を主な理由としてＩＣＵ入院および同様のＩＣＵに入院する可能性。試験集団３：以下を有する約３００人の患者：急性腎損傷（例えば、敗血症、低血圧／ショック（ショック＝収縮期ＢＰ＜９０ｍｍＨｇおよび／またはＭＡＰ＞６０ｍｍＨｇを維持するために昇圧支援が必要および／またはＳＢＰ＞４０ｍｍＨｇの実証されている低下）、大外傷、出血、または大手術）の既知のリスク因子を伴う急性医療環境（ＩＣＵまたはＥＤ）経由入院の可能性；および／または登録後少なくとも２４時間の間ＩＣＵに入院の可能性。除外基準妊娠が既知の患者；入院した個人；以前に腎移植のある患者；登録の前に腎機能が急悪化したことが既知の患者（例えば、ＲＩＦＬＥ分類中のいずれかのカテゴリー）；登録の前５日以内に透析（急性または慢性）を受けている、または登録の時点で切迫した透析が必要な患者；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または肝炎ウイルスへの感染がわかっている患者；上記のＳＢＰ＜９０ｍｍＨｇ選択基準のみを満たし、主治医または試験責任医師の見解では、ショックを有さない患者。  
【０１１０】
インフォームドコンセントを作成後、ＥＤＴＡ抗凝固処理血液検体（１０ｍＬ）および尿検体（２５〜３０ｍＬ）を各患者から採取する。次に、造影剤投与（適用可能な場合）後４（±０．５）および８（±１）時間目；登録後１２（±１）、２４（±２）、および４８（±２）時間目、およびその後毎日７〜１４日目まで被験者が入院している間、血液と尿検体を採取する。直接静脈穿刺または他の利用可能な静脈へのアクセス手段、例えば、既存大腿鞘、中央静脈ライン、末梢静脈ラインまたはヘパロックを使って血液を採取する。これらの試験血液検体は、臨床現場で血漿に加工され、凍結されて、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ．に送付される。試験尿検体は、凍結され、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃ．に送られる。  
【０１１１】
実施例４．イムノアッセイフォーマット分析物は、標準的サンドイッチ酵素イムノアッセイ技術を使って測定される。分析物に結合する一次抗体は、９６ウエルポリスチレンマイクロプレートのウエルに固定化される。分析物標準および試験検体を、適切なウエルにピペットで採取し、存在する任意の分析物を固定化抗体と結合させる。全ての非結合物質を洗い流した後、分析物に結合するセイヨウワサビペルオキシダーゼ結合二次抗体を、ウエルに添加し、それにより、分析物（もしあれば）と一次抗体を含むサンドイッチ複合体を形成させる。洗浄して全ての非結合抗体酵素試薬を除去後、テトラメチルベンジジンおよび水素過酸化物を含む基質溶液をウエルに添加する。検体中に存在する分析物の量に比例して発色が起こる。発色を停止させ、色の強度を５４０ｎｍまたは５７０ｎｍで測定する。分析物標準から決定した検量線との比較により、分析物濃度を試験検体に割り付ける。  
【０１１２】
実施例５．外見上健康なドナーおよび慢性疾患患者の検体既知の慢性または急性疾患のないドナー（「外見上健康なドナー」）由来のヒト尿検体を２つのベンダー（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｗｅｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．、２７６２５Ｃｏｍｍｅｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｄｒ．、Ｔｅｍｅｃｕｌａ、ＣＡ  ９２５９０およびＶｉｒｇｉｎｉａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ．、９１５  Ｆｉｒｓｔ  Ｃｏｌｏｎｉａｌ  Ｒｄ．、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｂｅａｃｈ、ＶＡ  ２３４５４）から購入した。尿検体を受け取り、−２０℃未満で凍結貯蔵した。ベンダーから、性別、人種（黒人／白人）、喫煙状態および年齢、等の個別のドナーの人口統計情報が提供された。  
【０１１３】
うっ血性心不全、冠状動脈疾患、慢性腎疾患、慢性閉塞性肺疾患、糖尿病および高血圧を含む種々の慢性疾患のドナー（「慢性疾患患者」）由来のヒト尿検体を、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ．、９１５  Ｆｉｒｓｔ  Ｃｏｌｏｎｉａｌ  Ｒｄ．、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  Ｂｅａｃｈ、ＶＡ  ２３４５４、から購入した。尿検体を受け取り、−２０℃未満で冷凍貯蔵した。年齢、性別、人種（黒人／白人）、喫煙状態および、アルコール摂取、身長、体重、慢性疾患診断、現在の薬物投与および既往手術の情報を含む各個別ドナーの症例報告書の提供をベンダーから受けた。  
【０１１４】
実施例６．バイオマーカーパネル以下の典型的な方法を使って患者集団を２つの群に分け、便宜的に、「非疾患」（ＮｏｎＤｉｓ）および「疾患」（Ｄｉｓ）と呼ぶことにする。ＮｏｎＤｉｓ／Ｄｉｓ集団を組み合わせて、データセットを形成し、以下の分析を行った。データセット中の被験者に対し、複数の分析物を血液もしくは尿または両方から測定した。血液および尿測定値を別々のバイオマーカーとして取り扱って、パネル結果を計算した。２つ以上の分析物を次の２つの方法の内の１つの方法でアルゴリズムに従い組み合わせてパネルを形成した：（ｉ）非常に単純な生成物および分析物値の分配；ならびに（ｉｉ）ロジスティック回帰分析。  
【０１１５】
ロジスティック回帰分析は、二値、例えば、本明細書で示される「疾患。「非疾患」二分法、の結果を有するモデルに対し、広く使われている方法である。この方法を、以下に簡単に説明するが、完全な取扱は文献で見付けることができる。使用するモデルは：    
【数５】
0005998057.tif 000013
である。  
【０１１６】
このモデルでは、ｘおよびβはベクトルで、ｘは異なる観測量または分析物値を表し、ｙｉ＝１は疾病状態を示し、さらにＩＩｉは、ｉ番目のケースの所与のｘｉに対するこの状態のモデルの確率である。各検体に対するパネル値はＩＩｉである。ｌｏｇオッズまたはロジットは：    
【数６】
0005998057.tif 000014
となる。  
【０１１７】
ｐｉを真の転帰が観察される確率として定義すると：    
【数７】
0005998057.tif 000015
で表される。  
【０１１８】
尤度関数は真の転帰が観察される確率の積であるので、ｌｏｇ尤度（ＬＬ）は：    
【数８】
0005998057.tif 000016
となる。  
【０１１９】
モデルに最も適合するパラメータのαとβを求めるために、負のｌｏｇ尤度（−ＬＬ）を最小化する。この最小化をＬｅｖｅｎｂｅｒｇ−Ｍａｒｑｕａｒｄｔ法を使って行った（Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｒｅｃｉｐｅｓ  Ｔｈｅ  Ａｒｔ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ、Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００７）。
パラメータの最初の点は０である。  
【０１２０】
２つのネストされたモデルの適合性を比較するためによく使われる統計量は、尤度比検定である。２つのモデルに対するこの統計量、または偏差値は、負のｌｏｇ尤度の２倍（−２ＬＬ）の差分であり、モデル間の自由度の数（分析物の数）の変化に等しいＤＦを有する漸近χ２である。ｐ値は、この統計量から計算される。帰無仮説は、ロジスティックモデルは、定数モデル（βを０に設定）と違いが無く、尤度比検定を使って各モデルを検定できるということである。「モデルｐ値」は、帰無仮説が真実である確率として定義される。定数モデルでは、αおよび−２ＬＬに対する閉形式解が見付けられる。それは、データセット中の疾病の数（＃Ｄ）および非疾病検体の数（＃ＮＤ）の関数である。    
【数９】
0005998057.tif 000017
【数１０】
0005998057.tif 000018
【数１１】
0005998057.tif 000019
【０１２１】
各分析物は、βをゼロにして、分析物不含モデルと完全モデルを比較して、有意性を検定できる。尤度比検定は、１自由度で使用される。「分析物ｐ値」は、モデルが分析物を除いた場合と異ならない確率として定義される。  
【０１２２】
パネルで使われる分析物濃度は、対数変換されても、または非変換でもよい。パネル中の各分析物に対し、対数変換／対数非変換分析物全ての組み合わせが計算される。最小のモデルｐ値を有する組み合わせがそのパネルに使用される。２つのマーカーパネルに対し、４つの組み合わせがあり、６つのマーカーパネルに対しては、８つの組み合わせがある。  
【０１２３】
表３は、尿（「Ｕ」）およびＥＤＴＡ血漿（「Ｅ」）検体で測定したアッセイのリストである。また、本ドキュメント全体で使われることになる、以下の慣習に従ったこれらのアッセイを指す２つの文字コードをリストしている：コードの最初の文字が大文字の場合、アッセイが尿で測定されたことを意味する。二番目のコードの文字が大文字の場合、アッセイがＥＤＴＡ血漿で測定されたことを意味する。療法のコードの文字が大文字の場合は、アッセイは、尿とＥＤＴＡ血漿の両方で測定された。表中、一部のアッセイでは、一文字の大文字コードになっているが、これは、尿と血漿の両方に対し同じアッセイフォーマット（例えば、マイクロタイターディッシュ、自動解析器、等）が使用されたことを示す。他のアッセイでは、別々のＵとＥのコードになっている。これは、尿とＥＤＴＡ血漿に対し異なるアッセイが使用されたことを示す。「＊＊」のコードは、そのアッセイが不十分な標本数で測定されており、これは、以降のパネル結果では記載しないことを示す。  
【０１２４】
【表３】
0005998057.tif 000020
0005998057.tif 000021
0005998057.tif 000022
0005998057.tif 000023
0005998057.tif 000024
0005998057.tif 000025
0005998057.tif 000026
【０１２５】
以下の実施例で記載した各分析の結果を、図１〜４３に示す。  
【０１２６】
各図には、同図中のその次のバイオマーカーパネルに記載の分析物の単変量統計を示す最初の表が含まれる。データセットは、図の見出しに示されるように、非疾病（ＮｏｎＤｉｓ）と疾病（Ｄｉｓ）患者の２つの群に分けられる。分析物コードと測定単位に続いて、群に対して計算された中央値、平均値、標準偏差、分析物の最大値と最小値を示す。また、各群を構成する標本数、および検体を採取した患者数も示す。特定のアッセイ検出限界未満の値は、値１ｘ１０−９（「１．０Ｅ−９）と記載）で示す。各分析物の単変量ＡＵＣも示す。標準誤差は、Ｈａｎｌｅｙ、Ｊ．Ａ．、ａｎｄ  ＭｃＮｅｉｌ、Ｂ．Ｊ．、「Ｔｈｅ  ｍｅａｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ａ  ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ（ＲＯＣ）ｃｕｒｖｅ」、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ（１９８２）１４３：２９−３６、に記載のように計算した；ｐ値は、両側Ｚ−検定で計算した。測定単位を指定する列で、特定の分析物は、「２．６ｎｇ／ｍｌ」、「２．５ｎｇ／ｍｌ」、および「２．３ｍＵ／ｍｌ」のように記載されている。これらのマーカーに対しては、表中の値は、それぞれ２．６、２．５、および２．３倍する必要がある。例として述べるが、「中央値」列の１の値は、それぞれ、２．６ｎｇ／ｍｌ、２．５ｎｇ／ｍｌ、または２．３ｍＵ／ｍｌの値に変換される。データにこのような拡大縮小因子を適用することが、マーカーのＡＵＣまたはそれが一部となっているパネルのＡＵＣに影響をしないことに留意されたい。  
【０１２７】
単変量統計に続く各図は、特定の図中で指定された範囲のモデルｐ値を有するバイオマーカーパネルを記載するパネル表を提供する。このセットから複数の分析物を組み合わせて形成される場合は、使用した標本数を、特定のパネルの全分析物により測定された検体の論理積とした。非疾病または疾病群中の７検体未満の論理積を有するパネルは、分析では考慮しなかった。簡潔なパネルとするために、次のようにコードする：ａＢＣｄＥＥは２つのパネルａＢＣｄＥｅおよびａＢＣｄｅＥを示し、この場合、バイオマーカー「ａｂ」は血漿で測定、バイオマーカー「ｃｄ」は尿で測定、およびバイオマーカーｅｅは最初のパネルに対し尿で測定、ｅｅは、二番目のパネルに対し血漿で測定したることを示す。（）または｛｝中のおよびスペースで区切られたコードは、括弧の外側の分析物と連結して共通の分析物を含むパネルを形成する分析物のリストを示す。例えば、Ａｂ｛ｃＤ（ｅＦ  ｇＨ）  Ｋｍ（Ｅｆ  ＱＲ）｝は、全て、共通のバイオマーカーＡｂを有する５つのパネルを示す。それらは、ＡｂｃＤｅＦ、ＡｂｃＤｇＨ、ＡｂＫｍＥｆ、ＡｂＫｍＱｒ、およびＡｂＫｍｑＲである。  
【０１２８】
「非拘束性パネル」と標識した結果は、各分析物を０．０５以下の単変量ｐ値を有するようにする必要が無いパネルを指す。「拘束性パネル」と標識した結果は、各分析物が、そのパネル中で０．０５以下の単変量ｐ値を有するように使用することが必要である。  
【０１２９】
実施例７．バイオマーカーパネルの使用集中治療室（ＩＣＵ）からの患者は、ＲＩＦＬＥ分類により決定される最大到達ＲＩＦＬＥステージに従って、腎臓状態により非損傷（０）、損傷のリスク（Ｒ）、損傷（Ｉ）、および不全（Ｆ）に分類される。２つのコホートを、特定のＲＩＦＬＥステージを超えて進行しない（コホート１−「非疾病」）患者、および１０日以内に後ろのＲＩＦＬＥステージに到達した（コホート２−「疾病」）患者として定義した。被験者から採取した検体で、「疾病」ステージに到達前の０、２４時間、および４８時間目にマーカー濃度を測定した。  
【０１３０】
各バイオマーカーを市販品として入手可能なアッセイ試薬を使い、標準的イムノアッセイ法を使って測定した。膜結合性バイオマーカーの場合には、可溶形を認識するアッセイを使用した。上述のように、膜結合性バイオマーカーには、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔエントリー番号でＯ１４７８８、Ｏ１４９４４、Ｏ７５３０９、Ｐ００７９７、Ｐ０５１８６、Ｐ０８４７３、Ｐ１３６８８、Ｐ１５５１４、Ｐ２２２２３、Ｐ２７４８７、Ｐ３５０７０、Ｑ０３４０５、Ｑ１４９５６、Ｑ１６７９０、Ｑ９９０７５、Ｑ９Ｙ５Ｙ７Ｑ１５１０９、Ｑ０２７６３、Ｐ１７２１３、Ｐ１２８３０、Ｐ３３１５１、Ｐ０６７３１、Ｐ２９９６５、Ｐ１６０７０、Ｑ９Ｈ２Ａ７、Ｐ１７８１３、Ｑ９ＵＮＮ８、Ｐ００５３３、Ｐ１６４２２、Ｐ１９２３５、Ｐ１６５８１、Ｐ７８４２３、Ｏ４３６５６、Ｐ０８５８１、Ｐ０８０６９、Ｐ０５３６２、Ｐ１３５９８、Ｐ３２９４２、Ｐ１４７７８、Ｐ２７９３０、Ｐ０１５８９、Ｐ２４３９４、Ｐ０８８８７、Ｐ４０１８９、Ｐ２１５８３、Ｐ０９６０３、Ｐ０８５７１、Ｑ８ＷＸＩ７、Ｐ１３５９１、Ｑ９２８２３、Ｐ７８３８０、Ｐ１６２８４、Ｐ０１１３３、Ｐ１５３０９、Ｐ０１１３５、Ｐ１６１０９、Ｑ１４２４２、Ｐ４９７７１、Ｐ０７２０４、Ｐ１３７２６、Ｐ０１３７５、Ｐ５０５９１、Ｐ４８０２３、Ｏ１４７６３、Ｐ１９４３８、Ｐ２０３３３、Ｐ２５９４２、Ｐ２５４４５、Ｐ２８９０８、Ｐ１９３２０、Ｐ１７９４８、およびＰ３５９６８、が含まれる。  
【０１３１】
「非疾病」から「疾病」を鑑別するバイオマーカーパネルの能力を、上述の実施例６の場合のように測定した。また、コホート２の患者も、血清クレアチニン測定値（ｓＣｒ）、尿量（ＵＯ）に基づいて、または血清クレアチニン測定値または尿量のいずれかに基づいて、「疾病」ステージであるとの判定に従い分別した。一例であるが、血清クレアチニン測定値のみに基づきステージＦと判定された患者に対しては、ステージ０コホートは、尿量に基づきステージＦと判定された患者を含んでいる可能性がある；尿量のみでステージＦと判定された患者に対しては、ステージ０コホートは、血清クレアチニン測定値に基づきステージＦと判定された患者を含んでいる可能性がある；および血清クレアチニン測定値または尿量に基づきステージＦと判定された患者に対しては、ステージ０コホートは、血清クレアチニン測定値および尿量の両方に対するステージ０の患者のみ含む。また、血清クレアチニン測定値または尿量に基づきステージＦと判定された患者に対しては、最も重篤なＲＩＦＬＥステージが得られる判定方法を使用した。  
【０１３２】
下記のデータが図で示される：図１．ｓＣｒおよび尿量により判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏま
たはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断の２４時間前に採取される。図２．ｓＣｒにより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断の２４時間前に採取される。図３．尿量により判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。図４．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より２４時間前に採取される。図５．ｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より２４時間前に採取される。図６．尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より２４時間前に採取される。図７．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。図８．尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より２４時間前に採取される。図９．尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。図１０．ｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。図１１．尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。図１２．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断時に採取される。図１３．ｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断時に採取される。図１４．尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断時に採取される。図１５．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。図１６．ｓＣｒより判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。図１７．尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断時に採取される。図１８．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。図１９．ｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。図２０．尿量より��定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。図２１．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より４８時間前に採取される。図２２．ｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より４８時間前に採取される。図２３．尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｒ診断より４８時間前に採取される。図２４．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。疾病群検体は、ＲＩＦＬＥ  Ｉ診断より４８時間前に採取される。図２５．ｓＣｒおよび尿量より判定されたＲからＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージへの進行。検体は、Ｒ診断時に採取される。図２６．ｓＣｒより判定されたＲからＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージへの進行。検体は、Ｒ診断時に採取される。図２７．尿量より判定されたＲからＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージへの進行。検体は、Ｒ診断時に採取される。図２８．登録後４８時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図２９．登録後４８時間以内にｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３０．登録後４８時間以内に尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３１．登録後４８時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３２．登録後４８時間以内にｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３３．登録後４８時間以内に尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３４．登録後４８時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３５．登録後４８時間以内に尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３６．登録後２４時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３７．登録後２４時間以内にｓＣｒより判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３８．登録後２４時間以内に尿量より判定されたＩまたはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対ＮｏまたはＲ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図３９．登録後２４時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥス��ージ。検体は、登録時採取される。図４０．登録後２４時間以内にｓＣｒより判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図４１．登録後２４時間以内に尿量より判定されたＲ、Ｉ、またはＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図４２．登録後２４時間以内にｓＣｒおよび尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。図４３．登録後２４時間以内に尿量より判定されたＦ  ＲＩＦＬＥステージ対Ｎｏ、Ｒ、またはＩ  ＲＩＦＬＥステージ。検体は、登録時採取される。  
【０１３３】
実施例８．バイオマーカーパネルの使用前述の例は、バイオマーカーパネルの識別および使用をロジスティック回帰分析に依存している。述べてきたように、これは、このようなマーカーパネル生成に使用できる１つの分析のタイプに過ぎない。以下を含む（これらに限定されない）どの分類法も使用可能である：ベイズ識別器、判別分析、決定木、ニューラルネットワーク、サポートベクターマシン、ノンパラメトリックカーネル密度推定法、最近傍則、マーカー濃度の合計、差、積および比率。  
【０１３４】
一例として、以下の代表的２、３、４および５マーカーのバイオマーカーパネルが、マーカー濃度の積（表中「＊」で表示）および比率（表中「／」で表示）を使って生成される。測定患者集団に対する単変量性能により決定される腎臓損傷により増加したマーカーおよび減少したマーカーからなるパネルでない限り、マーカー濃度の積が使用された。このケースでは、比率は、増加したマーカーを減少したマーカーで除算して作られた。  
【０１３５】
この例では、コホート１は、ＲＩＦＬＥステージＲを超えて進行しなかった患者からなり、コホート２は、１０日以内にステージＩまたはＦに到達した患者からなる。コホート１の患者由来の検体およびコホート２でステージＩ（またはステージＩの検体が無い場合はＦ）の前２４（＋／−１２）時間に採取した検体に対して、パネル値を測定した。患者は、血清クレアチニン値または尿量のいずれかに基づいて、ＲＩＦＬＥステージＲ、Ｉ、またはＦと判定され、いずれの方法でも最も重篤なＲＩＦＬＥステージを与えた。各パネルに対し受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線を作成し、各ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ）を測定した。標準誤差をＨａｎｌｅｙ、Ｊ．Ａ．、ａｎｄ  ＭｃＮｅｉｌ、Ｂ．Ｊ．、Ｔｈｅ  ｍｅａｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ａ  ｒｅｃｅｉｖｅｒ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ（ＲＯＣ）ｃｕｒｖｅ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ（１９８２）１４３：２９−３６、に記載のように計算した。ｐ値を、両側Ｚ−検定により計算した。  
【０１３６】
２、３、４、および５マーカーパネルの例を、下表に示す。４および５マーカーパネルの結果は、より大きなパネルが表２の腎臓損傷マーカーにより形成可能であり、これらのパネルは、２および３マーカーパネルに比べて、改善されたｐ値を有することが可能であることを示している。    
【表４】
0005998057.tif 000027
0005998057.tif 000028
0005998057.tif 000029
0005998057.tif 000030
0005998057.tif 000031
【０１３７】
当業者が本発明の対象物を作り、使用できるように充分詳細に記載し、例示してきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく種々の代替、修飾および改善を行えることは、明らかである。本明細書で提供されている例は、代表的な好ましい実施形態であり、本発明の範囲を限定する意図はない。当業者なら、それの修正および他の用途を思いつくであろう。これらの修正は、本発明の趣旨の範囲に含まれ、請求項の範囲により定められる。  
【０１３８】
本明細書で開示の発明に対し、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の置換および修正をなし得ることは当業者には容易に明らかになることであろう。  
【０１３９】
本明細書で参照した全特許および出版物は、本発明の属する分野の当業者のレベルを示している。全特許および出版物は、あたかもそれぞれ個別の出版物が具体的かつ個々に参照によって組み込まれると表示されているように、参照によ
って本明細書に組み込まれる。  
【０１４０】
実例となるように本明細書で記載されている本発明は、具体的に本明細書で開示されていないいずれかのまたは複数の要素や制限のない場合には、適切に実施可能である。従って、例えば、本明細書のそれぞれの例において、用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「基本的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」および「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」のいずれかは、他の２つの用語のいずれかと置換可能である。採用されている用語および表現は、制限の用語ではなく、説明の用語として使用され、このような用語および表現の使用により、示され、記載された特徴のどのような等価物またはその部分も排除する意図はないが、請求された本発明の範囲内で様々な修正が可能であることは、認識されたい。従って、本発明は、好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されてきたが、本明細書で開示の概念の修正および変更が、当業者によりおこなわれ得ること、およびこのような修正および変更が添付の請求項により定まる本発明の範囲内に入ると見なされることは、理解されたい。  
【０１４１】
他の実施形態は、下記の請求項の範囲内で記述される。
【図１−１】
0005998057.tif 000032
【図１−２】
0005998057.tif 000033
【図１−３】
0005998057.tif 000034
【図１−４】
0005998057.tif 000035
【図１−５】
0005998057.tif 000036
【図１−６】
0005998057.tif 000037
【図１−７】
0005998057.tif 000038
【図１−８】
0005998057.tif 000039
【図１−９】
0005998057.tif 000040
【図１−１０】
0005998057.tif 000041
【図１−１１】
0005998057.tif 000042
【図１−１２】
0005998057.tif 000043
【図１−１３】
0005998057.tif 000044
【図１−１４】
0005998057.tif 000045
【図１−１５】
0005998057.tif 000046
【図１−１６】
0005998057.tif 000047
【図１−１７】
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【図４３−１８】
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【図４３−５９】
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【図４３−６０】
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