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　特願２００２−５５３５２５「オリゴヌクレオチドトランスフェクションスクリーニング方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１４年　７月　４日国際公開、ＷＯ０２／５２０４６、平成１７年　１月２７日国内公表、特表２００５−５０２３０９〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯
　本願は，平成１３年１２月１８日（パリ条約による優先権主張２０００年１２月２３日，　２００１年１０月１１日，米国）を国際出願日とする特許出願であって，平成１９年９月２８日に特許請求の範囲について手続補正がなされ，同年１０月３０日付で拒絶査定がなされ，平成２０年１月２９日に拒絶査定不服審判が請求され，平成２２年１１月２５日付で当審による拒絶理由が通知されたものである。
　
２．本願発明
　本願の請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，平成１９年９月２８日付手続補正書によって補正された特許請求の範囲に記載された以下のとおりのものと認める。
「【請求項１】　オリゴヌクレオチドを用いて細胞をトランスフェクトする際の有効性についてペプトイドをスクリーニングするための方法であって，該方法は，
　別個の区画において複数の異なる配列のペプトイドを提供する工程；
　該区画のうちの少なくとも１つにおいてペプトイド−オリゴヌクレオチド混合物を形成する工程；
　該混合物を細胞と接触させる工程；
　該オリゴヌクレオチドによる該細胞のトランスフェクションの程度を決定する工程；
を包含し，
　該ペプトイドが固体粒子上に支持され，該ペプトイド−オリゴヌクレオチド混合物を形成する前に，該区画にある該粒子から該ペプトイドを遊離させる，方法。」
　
３．引用例
（１）引用例５
　当審による拒絶の理由で引用例５として引用された本願優先日前に頒布された刊行物である，Chemistry  Biology, 1998，Vol.5，No.6，p.345-354（以下，「引用例５」という。）には，以下の事項が記載されている。 
 　 
ア．「リピトイド−インビトロのプラスミドＤＮＡの細胞への送達のための新規なカチオン性脂質」（第３４５頁，標題） 
 　 
イ．「背景：合成の非ウイルス性ベクターがプラスミドＤＮＡの送達のために期待されているが，それらの遺伝子伝達効率はウイルスの効率と一致するにはほど遠い。カチオン性脂質の構造−活性の関係を体系的に研究するために，カチオン性脂質−ペプトイド複合体（リピトイド）の小ライブラリーを合成した。化合物はプラスミドＤＮＡとの複合体を形成する能力及びインビトロでＤＮＡ伝達を媒介する能力について評価した。 
 結果：脂質−ペプトイド複合体は固相合成を用いて簡便に高い生産量で準備された。いくつかのリピトイドがプラスミドＤＮＡと凝集し，１００ｎｍの球状粒子となり，ＤＮａｓｅ分解からＤＮＡを保護した。反復する（アミノエチル，中性，中性）側鎖トリマーモチーフを有し，ジミリストイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＭＰＥ）と結合したリピトイドのサブセットは，高い効率でＤＮＡ伝達を媒介した。 
 結論：カチオン性脂質の自動化した固相合成は多種多様なトランスフェクション試薬の迅速な合成を可能にした。最も活性な化合物であるＤＭＰＥ−（Nae−Nmpe−Nmpe）３（Nae，Ｎ−アミノエチルグリシン；Nmpe，Ｎ−ｐ−メトキシフェネチル−グリシン）はリポフェクチン又はＤＭＲＩＥ−Ｃ（２つの市販されるカチオン性脂質トランスフェクション試薬）より効率が高く，血清の存在下及び非存在下で活性であった。血清の存在下での活性はインビボでの応用の可能性を示唆する。」（第３４５頁，要約） 
　
ウ．「表１ 
  
」（第３４７頁） 
 　 
エ．「トランスフェクション効率 
 　インビトロでリピトイドのＤＮＡ伝達を媒介する能力を評価するために，培養液中に１０％ウシ胎仔血清が存在する条件で，ルシフェラーゼリポータープラスミドとＨＴ１０８０細胞系を用いてトランスフェクション実験を行った。ＤＮＡ−リピトイド複合体は，脂質の正電荷とＤＮＡの負電荷の間の電荷比（＋／−）として表現された化学量論で，リピトイドとＤＮＡとを混合することにより形成された。異なるリピトイドのトランスフェクション活性の比較は２／１電荷比で行った。複合体は同量のＤＮＡ溶液とリピトイド溶液を混合することにより準備され，通常検出可能な沈殿のない清んだ溶液が得られた。トランスフェクションの結果は図３に示す。 
 正に荷電した側鎖のみを有するリピトイド（表１ａ，１−１０）は，側鎖長（２−アミノエチル対３−アミノプロピル）や脂質部分（ＤＭＰＥ対ジパルミトイルホスホチジルエタノールアミン［ＤＰＰＥ］）に関係なく，著しいＤＮＡ伝達を媒介しなかった。対象的に，（２−アミノエチル，中性，中性）トリマーモチーフを有するリピトイド（表１ｂ，１１−２２）は，血清の存在下で，様々な程度でＤＮＡ伝達を媒介し，その効率は一般的にリポフェクチンより高かった。実際，リピトイド２１は，ＨＴ１０８０細胞において，リポフェクチンより１０から２０倍高い効率を示し，ＤＭＲＩＥ−Ｃより３倍高い効率を示した。・・・リピトイド　ＤＭＰＥ−（Nae−Nmpe−Nmpe）n（リピトイド１３，１４，１５，１６及び１７に対して，それぞれn=２，３，４，８，１２）の中でのペプトイド部分の長さの効果については，９−マー（リピトイド１４，n=3）が最も活性が高いことが判った。最後に，これらのリピトイドの中で脂質部分としてＤＭＰＥはジオレオイルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）よりも一貫してより効果的であった。」（第３４７頁左欄第１行〜第３４８頁左欄第２６行） 
 　 
 オ．「図３． 
合成カチオン性脂質とリピトイドにより媒介されるＤＮＡトランスフェクションの比較。トランスフェクションは，１０％胎仔ウシ血清存在下で，ＨＴ１０８０細胞に，リピトイド，ＤＭＲＩＥ−Ｃ及びリポフェクチンによって媒介された。２／１の＋／−電荷比が全ての複合体の形成に使用された。ルシフェラーゼは材料と方法のセクションに述べたように定量された。」（第３４８頁左欄）
　
カ．「トランスフェクション条件の最適化 
 ＤＮＡトランスフェクション条件を最適化するための試みとして，リピトイド１４とＤＮＡが８／１から０．５／１までの範囲の異なる＋／−電荷比で複合体化され，血清の存在下及び非存在下でのトランスフェクション能力を評価した。２／１の＋／−比が細胞にトランスフェクトするのに最も効率的であることが判った。血清は試験された比率では効率に重大な影響はなかった（図４）。」（第３４８頁左欄下から３行〜右欄第５行） 
 　 
キ．「図４ 
ＨＴ１０８０細胞にトランスフェクションする効率におけるリピトイド１４−ＤＮＡの変化する＋／−電荷比の効果。黒棒はＤＭＥＭ中の１０％血清を含む；白棒はＯｐｔｉＭＥＭ中で血清なし。２０μｌ細胞溶解物中のルシフェラーゼが材料と方法のセクションで述べたように定量された。」（第３４８頁右欄） 
 　 
ク．「トランスフェクションと毒性の細胞依存性 
 トランスフェクションを媒介する化合物の効率と細胞毒性は，使用した細胞系に依存することが判った。例えば，我々はリピトイド１４及び２１を，２／１の最適なリピトイド／ＤＮＡ比で使用して，ＣＯＳ６Ｍ，ＮＩＨ３Ｔ３及びＨＴ１０８０細胞系のトランスフェクション効率を調べた。リピトイド２１はＨＴ１０８０細胞では非常に効率的で（図３），ほとんど毒性もないが，ＮＩＨ３Ｔ３細胞には非常に効率的ではない。対象的に，リピトイド１４はＮＩＨ３Ｔ３細胞に対して，非常に高い活性を示し，基本的に無毒であった。」（第３４８頁右欄第６行〜１５行） 
 　 
ケ．「図５ 
異なる細胞系でのトランスフェクション効率の比較 
 トランスフェクションはリピトイド１４，２１，ＤＭＲＩＥ−Ｃ，又はリポフェクチンによって，（ａ）ＮＩＨ３Ｔ３細胞及び（ｂ）ＣＯＳ６Ｍ細胞において媒介された。黒棒はＤＭＥＭ中の１０％血清を含む；白棒はＯｐｔｉＭＥＭ中で血清なし。２／１の＋／−電荷比は全ての複合体の形成に使用された。細胞溶解物中のルシフェラーゼとタンパク質全量が材料と方法のセクションで述べたように定量され，数値は，タンパク質全量ｍｇあたりのルシフェラーゼｎｇで示した。」（第３４９頁左欄） 
 　 
コ．「重要性 
 遺伝子治療は多くの病気の予防及び治療を期待させる。ウイルスは遺伝子療法のための最も効率的なＤＮＡデリバリー手段であるが，臨床応用における使用には，安全性についての不確実性のような，多くの難点がある。結果として，合成の非ウイルス性ベクターも開発され続けている。細胞に対する効率的な毒性のないＤＮＡ伝達のためのカチオン性脂質の構造的な要件を体系的に研究するために，リピトイド（ペプトイド−脂質複合体）の小ライブラリーが製造された。・・・これらのリピトイドは血清の非存在下のみならず存在下においてもＤＮＡトランスフェクションを媒介し，それらのトランスフェクション効率は一般に，リポフェクチン又はＤＭＲＩＥ−Ｃよりも高い。血清存在下における活性は，インビボにおけるＤＮＡ−デリバリーの応用での使用の可能性を示す。さらに，リピトイドは最適化条件では細胞に対して実質的に無毒である。リピトイド−ＤＮＡ複合体の構造的研究は比較的均一な球体粒子の形成を明らかにし，この粒子はＤＮａｓｅ分解から核酸を保護する。この粒子は，モジュラーアプローチを用いて人工ウイルスを構築するために，標的リガンド及び／又はコロイド安定化剤のような付加的な構成要素を接合するコア構造として役立つことが期待される。適切な標的リガンドと複合した他の脂質を有する製剤によって，この粒子を特異的な組織に対して標的にすることも可能であろう。標的化リガンドの設計及び合成，リピトイドのための共役化学の開発と同時に，インビボトランスフェクションアッセイは現在進行中である。」（第３５２頁右欄第１〜４３行） 
 　 
サ．「リピトイドの化学合成 
 Ｎ−（２−アミノエチル）−グリシン及びＮ−（３−アミノプロピル）グリシンを構築するために，モノ−ｔ−ＢＯＣエチレンジアミン及び１，３−ジアミノプロパンがそれぞれのサブモノマーとして使用され，そのＢＯＣ保護基は水中９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡによる開裂ステップで最終的に除去された。ペプトイドはＲｉｎｋアミド樹脂の１００ｍｇ（５０μｍｏｌ）上に合成され，自動ロボット合成機［２４−２６］を用いて２番目から最後の位置まで普通のサブモノマー条件下で産生された。脂質はその後以下のようにしてアミノ末端に導入された。アミノ末端のアミノ基はＤＭＦ中の１．２Ｍブロモ酢酸０．８５ｍｌ及びＤＩＣ０．２ｍｌで３５℃で４５分間アセチル化された。樹脂は完全にＤＭＦ（３×２ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＰＥ（２５４ｍｇ）はクロロベンゼン中の１５％（ｖ／ｖ）メタノール２ｍｌに懸濁し，１２．８Ｎ水性ＫＯＨの０．９５当量（３０μｌ）で処理された。結果として生じたＤＭＰＥの０．２Ｍ溶液は樹脂上のブロモアセチル化されたペプトイドに加えられ，３５℃で１４時間ゆっくりと攪拌された。樹脂は完全にクロロベンゼン中の１５％（ｖ／ｖ）メタノール（６×２ｍｌ）で完全に洗浄され未反応のＤＭＰＥを除去し，続いてＤＣＭ（２×２ｍｌ）で洗浄した。リピトイドは水中の９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを用いて，樹脂から切断及び脱保護され，凍結乾燥して粗生成物を得た。」（第３５３頁左欄第１９〜３９行） 
 　 
シ．「図１ 
 
 サブモノマー法を用いた固相上でのペプトイド（ポリＮ−置換グリシン）合成のスキーム。それぞれのペプトイドモノマーは，樹脂上の二級アミンに対してブロモ酢酸をカップリングすることによりポリマービーズ上で構築され，続いて所望のアミンによって，臭化物のＳＮ２置換が起こる。ＤＩＣ，ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＭＦ，ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ，ジメチルスルホキシド。」（第３４６頁左欄） 
 　　 
　引用例１の記載事項ア〜シによれば，引用例１には，アミド樹脂からなる固体粒子上でリピトイドの合成反応を行い，合成した化合物を樹脂から切断してリピトイドを得る方法，及び合成した様々なリピトイドとポリヌクレオチドとを混合して複合体を形成し，各複合体を細胞に接触させて，ポリヌクレオチドの細胞への取り込みを誘発させ，ポリヌクレオチドの取り込みをアッセイして，トランスフェクション効率を評価する方法が記載されている。 
　
（２）引用例２
　当審による拒絶の理由で引用された，本願優先日前に頒布された刊行物である国際公開第９９／５８４７６号（以下，「引用例２」という。）には，以下の事項が記載されている。 
 ア．「固相方法により合成されるポリペプチド，ペプトイドおよび他の分子の合成のような固相化学合成での使用のための方法が提供される。この方法は，選択された標的に対する活性を有する化合物を同定するために使用され，ここで，これらの化合物は，コンビナトリアルライブラリーから得られた混合物中に存在する。ビーズ分配器プローブもまた提供される。このプローブは，ビーズをビーズの集団から抽出するために使用され，次いで，ビーズを選択された位置に送達する。キャピラリービーズインサート，ならびにビーズ分配器プローブおよびキャピラリービーズインサートの両方を備えるビーズ分配システムも提供される。」（要約） 
 　 
イ．「【請求項１】選択された標的に対する活性を有する化合物を同定する方法であって，該方法は，以下： 
 （ａ）コンビナトリアルライブラリーから化合物の混合物を提供する工程であって，ここで，（ｉ）該混合物は，それに結合した化合物を有する複数の樹脂支持体ビーズを含有し，および（ｉｉ）該ビーズは，それぞれ，それらに結合したただ１つの異なる化合物を有する，工程； 
 （ｂ）工程（ａ）で提供された該混合物由来のビーズを，複数の反応容器に，個々に分配して各容器がただ１つのビーズを含有するようにする工程； 
 （ｃ）該化合物を該ビーズから切断し，そして該ビーズを該切断した化合物から分離し，これによって個々の化合物の個別のサンプルを提供する工程； 
 （ｄ）切断した化合物の各々の一部を選択された標的に対する活性についてスクリーニングして，活性な化合物を同定する工程；ならびに 
 （ｅ）該活性な化合物の残りの一部に対して化学分析を行って該化合物を化学的に同定する工程，を包含する，方法。 
 【請求項２】 前記ビーズが，個々のビーズをビーズの混合物から選択するためのバキュームを使用し，次いで，該選択されたビーズを反応容器に送達するためにガス放電を使用するビーズ分配器プローブを使用して，個々に分配される，請求項１に記載の方法。 
 【請求項３】 工程（ｂ）が個別のビーズを反応容器のアレイに分配することを必要とする，請求項１に記載の方法。 
 【請求項４】 前記混合物がコンビナトリアルライブラリーのサブライブラリーであり，そして該サブラリブラリーが約２０〜１００個の個別の化合物を含有する，請求項１に記載の方法。 
 【請求項５】 工程（ａ）において提供される前記ビーズの混合物が，保管部とスクリーニング部に分割され，そして，工程（ｂ）〜（ｅ）を該保管部から得たサンプルに対して行う前に，該混合物が１つ以上の活性な化合物を含有するかどうかを決定するための予備スクリーニング工程が，該スクリーニング部を評価するために使用される，請求項１に記載の方法。 
 【請求項６】 前記予備スクリーング工程が，前記ビーズから前記化合物を切断する工程，および該切断した化合物を選択した標的と接触させて，該混合物が該標的に対して活性である１つ以上の化合物を含有するかどうかを決定する工程を包含する，請求項５に記載の方法。」（特許請求の範囲） 
　
（３）引用例６ 
　当審による拒絶の理由で引用された，本願の優先日前である２０００年１０月１２日に頒布された刊行物である国際公開第００／６００８３号（以下，「引用例６」という。）には，以下の事項が記載されている。
 　 
ア．「ストレス−リン酸化小胞体タンパク質，ＮｏｇｏＢが提供される。このタンパク質は細胞がストレスに曝された結果として高リン酸化される。二種のＮｏｇｏＢの転写物がヒト組織中に同定され，長い転写物はヒト脳腫瘍サンプルにおいて優性である。」（要約）　
イ．「本発明はさらにアンチセンスポリヌクレオチド及びリボザイムを用いてＮｏｇｏタンパク質を抑制する方法に関連し，細胞の代謝回転を刺激する方法に関連する。」（第２頁第２２〜２４行）
 　 
ウ．「実施例７ 
　ＮｏｇｏＢは細胞の成長及び生存に重要である。 
　ＮｏｇｏＢタンパク質の精製中，ＮＰ−４０可溶化タンパク質の約１／２０００であるため，それは豊富なタンパク質として同定された。ＮｏｇｏＢが正常な細胞の成長において役割を果たすかどうかを確定するために，特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用してＮｏｇｏＢのレベルを減少させた。４種の一律にホスホロチオエートに修飾したオリゴヌクレオチドであって，それらの配列はＮｏｇｏＢ遺伝子のｍＲＮＡ配列の様々な領域に相補的であるオリゴヌクレオチドを合成し，ＩＭＲ９０細胞に合成リピトイドを用いてトランスフェクトした。対照のＦＩＴＣ−標識化オリゴヌクレオチドが，約１００％のトランスフェクション効率の指標として各実験で使用された。トランスフェクションの１６時間後，アンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした細胞に対して，わずかな細胞毒性が観察された。さらに２４時間後，細胞毒性がより明確になった（図９Ａ）。アンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞は，トランスフェクトされていない細胞かＦＩＴＣ標識化した対照のオリゴヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞のシャーレより，シャーレに付着する細胞の数が少なかった（図９Ａ）。生き残った細胞が成長に戻り始めて，アンチセンスオリゴヌクレオチドが分解されたか，もはや機能しなくなったことを示すまでに，細胞毒性はさらに１−２日間残存した。 
　アンチセンスオリゴヌクレオチドのトランスフェクションが実際にＮｏｇｏＢのレベルを減少させたか否かを判定するために，トランスフェクション完了後２４時間に付着して残っている細胞からタンパク質溶解物が調製された。図９Ｂに示されるように，アンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした細胞におけるＮｏｇｏＢのレベルは，トランスフェクトされていないか，対照のオリゴヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞よりもかなり低かった。」（第３９頁第１〜２３行） 
　
（４）周知例７
　当審による拒絶の理由で技術常識を示す文献として例示された，本願優先日前に頒布された刊行物である，Pharmacology  Therapeutics, 2000.Oct, Vol.87, p.255-277（以下，「周知例７」という。）には，以下の事項が記載されている。
　
ア．「アンチセンスオリゴヌクレオチドのための送達システム」（第２５５頁標題）　
　
イ．「タンパク質合成はＤＮＡからｍＲＮＡへの転写とそのタンパク質への翻訳を必要とする。第一段階を阻止すること，すなわちＤＮＡの読み出しを妨害することによって，その選択的阻害を考えることができる（いわゆる三重鎖戦略）。翻訳，第二段階の阻止は「アンチセンス戦略」である。選択的阻害は適当な一本鎖オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）の結合によって達成することができる。現在，第二のアプローチはより有利であると考えられている。多数のインビトロ及びインビボの研究はアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性を示している。癌，ウイルス性疾患及び炎症性疾患において役割を果たす様々な標的に向けられた，いくつかの治験が進行中である（Agrawal  Iyer, 1997）。
　アンチセンスアプローチに関して，２つの主要な問題に遭遇している。：骨格の不安定性に起因する急速なＯＤＮ分解及び細胞に対するＯＤＮの非効率的な送達である。ある種の化学的修飾は標的に対する親和性を大きく変えることなく分解を効率的に減らした。この目的のために，ホスホジエステルＯＤＮ（ＰＳ−ＯＤＮ）の代わりに，ホスホロチオエート化ＯＤＮ（ＰＳ−ＯＤＮ）が最近使用されている。いくつかの他の修飾が研究されているが（Uhlmannら，１９９７），我々はこれら２つのＯＤＮで得られた結果に大部分は限定するだろう。第２の問題，ＯＤＮの非効率的な送達は，ＯＤＮのインターナリゼーションを促進する基をＯＤＮに共役することによって，または，新規な送達システムを開発する試みによって取り組まれた。」（第２５６頁左欄２〜２７行）
　
ウ．「いくつかの優れたレビューは，送達システムを伴う又は伴わないＯＤＮインターナリゼーションの特徴付けと，ＯＤＮの天然及びモデル膜を横切る輸送（Vlassovら，１９９４）・・・を含むアンチセンス活性の開発におけるこれらのシステムの役割を記述している。ベクター化のためのポリ（Ｌ−リジン）（ｐＬＫ）の使用はClarencら（１９９３）によって記述された。より最近の細胞表面のＯＤＮ−結合タンパク質についての論文は，Hanssら（１９９８ｂ）によって概説され，インビトロ及びインビボのカチオン性脂質の有効性についてはBennett（１９９８）により，ＯＤＮ−カチオン性脂質の物理−化学的相互作用についてはMonkkonen及びUrrti（１９９８）によって概説されている。」（第２５６頁左欄下から３行〜右欄１１行）
　
（５）周知例８
　当審による拒絶の理由で技術常識を示す文献として例示された，本願優先日前の１９９８年に頒布された刊行物である米国特許第５７０５６９３号明細書（以下，「周知例８」という。）には，以下の事項が記載されている。
　
ア．「本発明は，核酸又はペプチドを原核又は真核細胞にトランスフェクトするのに役立つ，新規なカチオン性脂質とその合成における中間体に向けられる。この脂質は，親油性成分に連結された，１又は２の置換アルギニン，リジン又はオルニチン残基，若しくはそれらの誘導体からなる。この脂質は核酸やペプチドのようなポリアニオンと混合すると複合体を形成する。この複合体は，通常，有意な細胞毒性なしに，細胞に対するポリアニオンの効率的輸送を可能にする。」（要約）
　
イ．「ここで使用されるポリヌクレオチドは，一本鎖又は二本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡを意味し，例えばオリゴヌクレオチド（ここに定義されるように，ＤＮＡ，ＲＮＡ及びオリゴヌクレオチドアナログを含む）及びプラスミドを含む。一般的にプラスミド又はｍＲＮＡのような比較的大きい核酸は，トランスフェクトされた細胞で発現される１以上の遺伝子を保有する一方で，例えば，オリゴヌクレオチドのような比較的小さい核酸は，（１）細胞に存在するＤＮＡ又はＲＮＡ配列に対して，（ワトソン　クリック　又はフッグスティーン結合を介した）相補的な塩基配列，又は（２）オリゴヌクレオチドをペプチド，タンパク質又は糖タンパク質のような細胞内部の分子に結合することを可能にする塩基配列を包含するであろう。例えばＲＮＡは，リボザイム及び細胞中の標的ＲＮＡ配列に相補的なアンチセンスＲＮＡ配列を含む。」（１６欄２２〜３６行）
　
（６）周知例９
　当審による拒絶の理由で技術常識を示す文献として提示された，本願優先日前の１９９７年に頒布された刊行物である米国特許第５６１４５０３号明細書（以下，「周知例９」という。）には，以下の事項が記載されている。
　
ア．「細胞に核酸を送達するための核酸輸送体は，核酸に結合するためのカチオン性頭部基を持つカチオン性化合物と膜に会合するための脂質尾部を包含する。このカチオン性化合物は通常ポリアミン又は短い塩基性ペプチドである。この脂質尾部は通常，植物ステロイド，動物ステロイド，イソプレノイド化合物，脂肪族の脂質，ポア形成タンパク質，ポア形成ペプチド及び膜融合性ペプチドからなる群から選択される。カチオン性頭部及び脂質尾部はカルバメート結合で連結される。ポリアミンが使用された場合，スペルミジン又はスペルミンが好ましく，核酸はいかなる種でもよく，三重鎖を形成するオリゴヌクレオチド，アンチセンスオリゴヌクレオチド，アプタマー，リボザイム，プラスミド及び遺伝子治療のためのＤＮＡを含む。治療用核酸に連結された輸送体を用いてヒトを治療する方法も記述される。」（要約）
　
イ．「ある種のカチオン性脂質，例えばＤＯＴＭＡ（Felgner, Adv.Drug Delivery Rev. 5:163, 1990)が，あるタイプの動物細胞における核酸の動力学的取り込みを改善できることが知られている。残念ながら，商業的に入手できるカチオン性脂質製剤はしばしば細胞の取り込みを達成するために必要な濃度において細胞障害性である。加えて，これらの化合物は異なるタイプの細胞集団に材料を送達するために必ずしも有効ではない。・・・
　核酸治療の分野において，様々な細胞のタイプにおいて毒性がなく有効な非ウイルス性取り込み増強剤を開発することが真に求められている。多数の商業的製剤は，核酸送達のほとんどの局面で無効であるか限定された有用性であることが広く認識されている。本発明は，核酸の細胞及び核への送達を向上する単純で，比較的毒性のないカチオン性化合物の合成によって，この課題に取り組む。」（第１欄１６行〜末行）
　
４．対比・判断
（１）対比
　本願明細書には，本願発明の「ペプトイド」はリピトイドを含むことが記載され（段落【００３１】），また，引用例５の記載事項ウに記載された化合物１４は，本願明細書の実施例に記載されたリピトイド１（図１Ｃ）と同一の化合物であるから，引用例５に記載された「リピトイド」は，本願発明における「ペプトイド」に相当する。 
　また，引用例５に記載された発明では，合成された化合物ライブラリーの中で，トランスフェクション効率を比較し（記載事項エ及びオ），効率のよいものを選択して後の実験に使用しているので（記載事項カ〜ケ），細胞をトランスフェクトする際の有効性についてペプトイドをスクリーニングしている。 
　よって，本願発明と引用例５に記載された発明とを対比すると，両発明は，「ＤＮＡを用いて細胞をトランスフェクトする際の有効性についてペプトイドをスクリーニングするための方法であって，該方法は， 
 複数の異なる配列のペプトイドを提供する工程； 
 ペプトイド−ＤＮＡ混合物を形成する工程； 
 該混合物を細胞と接触させる工程； 
 該ＤＮＡによる該細胞のトランスフェクションの程度を決定する工程；を包含し， 
 該ペプトイドが固体粒子上に支持され，該ペプトイド−ＤＮＡ混合物を形成する前に，該粒子から該ペプトイドを遊離させる，方法。」である点で一致し，以下の二点で相違する。 
相違点１：本願発明が，複数の異なる配列のペプトイドを固体粒子上に支持されたまま別個の区画に配置し，ペプトイド−ＤＮＡ混合物を形成する前に，該区画にある粒子からペプトイドを遊離させて提供するのに対し，引用例５に記載された発明では，そのようにしてペプトイドを提供していない点。 
相違点２：本願発明におけるＤＮＡがオリゴヌクレオチドであるのに対し，引用例５に記載された発明ではプラスミドＤＮＡである点。 
　
（２）判断
　上記相違点について検討する。 
　まず，相違点１については，引用例２には，コンビナトリアルライブラリーから選択された標的に対する活性を有する化合物を同定するために，ペプトイドなどの固相合成した化合物の混合物を反応容器に提供する方法として，異なる化合物を支持するビーズを，複数の反応容器に個々に分配し，反応容器内でビーズから化合物を切断して遊離の化合物を提供する方法が記載されている。
　そして，引用例５に記載された発明においても，固相合成したペプトイドのライブラリーの中から有効なペプトイドをスクリーニングするためには，異なる化合物をそれぞれ個別の反応容器に提供する必要があることは明らかであるから，引用例２に記載された方法により個別の反応容器にペプトイドを提供し，その後，各ペプトイドのトランスフェクション効率についてのアッセイを行うことは，当業者が容易になし得たものである。 
　
　次に，相違点２については，引用例６の実施例７には，「ＮｏｇｏＢ遺伝子のｍＲＮＡ配列の様々な領域に相補的であるオリゴヌクレオチドを合成し，ＩＭＲ９０細胞に合成リピトイドを用いてトランスフェクトした。」と記載され，合成リピトイドをアンチセンスオリゴヌクレオチドのトランスフェクションに使用したことが記載されている（記載事項ウ）。
 ここで，周知例７に記載されるように，アンチセンスオリゴヌクレオチドは，引用例５に記載されるプラスミド（引用例５の記載事項コ）と同様に遺伝子治療に使用されるＤＮＡであり（周知例７の記載事項イ），また，周知例７及び９に記載されるように，アンチセンスオリゴヌクレオチドを効率的に細胞内へ送達するためのＤＮＡ−送達システムの開発が望まれていたこと（周知例７の記載事項イ，周知例９の記載事項イ），さらに，引用例５に記載された合成リピトイドのような「カチオン性脂質」を，プラスミドＤＮＡだけではなくアンチセンスオリゴヌクレオチドの送達システムとしても利用することが検討されていること（周知例７の記載事項ウ，周知例８の記載事項ア及びイ，周知例９の記載事項ア及びイ）は，本願優先日当時において技術常識であった。
　このような本願優先日当時における技術常識に照らし，引用例５及び６の記載に接した当業者であれば，引用例５に記載された新規なカチオン性脂質である「合成リピトイド」が，引用例６に記載された「アンチセンスヌクレオチド」の送達においても，プラスミドＤＮＡを用いた場合と同様に有効であろうと予想して，引用例５に記載された発明において，トランスフェクトに用いるＤＮＡの種類を，プラスミドＤＮＡに換えてアンチセンスオリゴヌクレオチドとし，細胞をトランスフェクトする際の有効なペプトイド（合成リピトイド）のスクリーニングを行うことは，当業者が容易に想到し得たものである。
　
　そして，本願発明の奏する効果は，引用例５，２及び６の記載に基づき予測し得るものである。
　
（３）請求人の主張について
　請求人は平成２３年２月２８日付意見書において，引用例６にも追加の周知文献とされる文献にも，「引用例５に記載された発明において，トランスフェクトするＤＮＡの種類を，プラスミドＤＮＡに換えて，アンチセンスオリゴヌクレオチドとして，トランスフェクション効率の高いペプトイドのスクリーニングを行うこと」について示唆等に該当する記載がどこにあるのか，そもそも審判長は示しておらず，立証責任を果たしていない旨を述べ，本願発明の進歩性を主張している。
　
　しかしながら，上記（２）においても指摘したとおり，引用例６の実施例７には，「ＮｏｇｏＢ遺伝子のｍＲＮＡ配列の様々領域に相補的であるオリゴヌクレオチドを合成し，ＩＭＲ９０細胞に合成リピトイドを用いてトランスフェクトした。」と記載され，合成リピトイドをアンチセンスオリゴヌクレオチドのトランスフェクションに使用したことが記載されており（記載事項イ），この記載は，引用例５に記載された「合成リピトイド」を用いたトランスフェクトに用いるＤＮＡの種類を，プラスミドではなく，アンチセンスオリゴヌクレオチドに換えることを示唆するものといえる。
　また，アンチセンスオリゴヌクレオチドが，引用例５に記載されたプラスミドＤＮＡと同じ遺伝子治療という同一の技術分野において使用される物であるというだけでなく，周知例７〜９に記載されるように，アンチセンスオリゴヌクレオチドの効率的なＤＮＡ−送達システムの開発が望まれていたことや，カチオン性脂質を，プラスミドＤＮＡだけではなくアンチセンスオリゴヌクレオチドの送達システムとしても利用することが検討されていたといった本願優先日当時の技術常識からも，引用例５に記載されたスクリーニング方法を，アンチセンスオリゴヌクレオチドで細胞をトランスフェクトする際に有効な合成リピトイドのスクリーニングのために使用する動機付を与えるものといえる。
　したがって，請求人の主張を採用することはできない。
　
５．むすび
　したがって，本願の請求項１に係る発明は，引用例５，２及び６に基づき当業者が容易に発明をすることができたものであり，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから，本願は拒絶すべきものである。
　よって，結論のとおり審決する。