【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年9月6日(2011.9.6)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１型糖尿病を有する哺乳類における１型糖尿病の進行を阻害するか、１型糖尿病のリスクがある哺乳類における１型糖尿病の発症を阻害するための医薬を製造するための、マクロファージ遊走阻止因子に特異的に結合する抗体の結合部位を含む物質の使用。
【請求項２】
前記物質が抗体である、請求項１の使用。
【請求項３】
前記物質が、Ｆａｂ断片もしくはＦ（ａｂ）2断片である、請求項１の使用。
【請求項４】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記抗体がヒト抗体である、請求項２に記載の使用。
【請求項７】
前記哺乳類が、耐糖能障害、ストレス高血糖、メタボリック・シンドローム、および／またはインシュリン耐性を有するか、もしくはそのリスクがある、請求項１の使用。
【請求項８】
前記医薬は、１型糖尿病を有する哺乳類における１型糖尿病の進行を阻害するための医薬である、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬は、１型糖尿病のリスクがある哺乳類における１型糖尿病の発症を阻害するための医薬、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記哺乳類はヒトである、請求項１に記載の使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】マクロファージ遊走阻止因子阻害剤を用いる、１型糖尿病処置
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
（１）本発明分野
本発明は一般的に、糖尿病処置に関する。より具体的には、本発明は、マクロファージ遊走阻止因子阻害剤の、１型糖尿病処置もしくは予防のための使用に関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
１型糖尿病（１型ＤＭ）は、多数の要因による症候であり、内因性インシュリンの欠乏により引き起こされ、自己反応性Ｔ細胞およびマクロファージにより媒介される、膵臓β細胞に対する免疫攻撃によるものと考えられる。この疾患は、およそ４，０００，０００人の北米の人々を患わせ、疫学データが、該疾患の発生率およびこれゆえ罹患率が、世界中で上昇していることで一致している（１）。更なる研究努力が大きく、疾患の病理の理解を拡大しており、幾つかの炎症促進性メディエーターに関する決定的な役割を解明してきている。しかしながら、有効な抗炎症治療薬は、１型ＤＭの臨床管理に関しては承認されていない。該疾患の幾つかの動物モデルが、糖尿病の病理に横たわる分子（レベルでの）現象の理解を促進してきた。罹患系統マウスに対する、多数回低用量ストレプトゾトシンが例えば、ヒト１型ＤＭの印の多くを有する糖尿病態を誘発させる。臨床および組織免疫学的な類似性は、膵島の、Ｔリンパ球およびマクロファージによる浸潤に関連した高血糖の発症も包含する（インシュリン炎（insultis）、２、３）。炎症促進性サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）−１β、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、およびＩＬ−１８を包含して、ストレプトゾトシン誘発糖尿病の発症において、重要な役割を演じる（４〜７）。しかしながら、組み換えＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、もしくはＴＮＦ−α、または、これらの活性の特異的阻害剤の投与が、疾患の発症および／または経過への複雑でしばしば矛盾する効果を持ち、これは使用される動物モデルおよび投与のタイミングに依っている（８〜１１）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
１型ＤＭの病因において免疫系により演じられる、鍵を握る病原的な役割が最近、多くの注意の焦点を、糖尿病前段階の個体において、もしくは、新たに診断された疾患を患っている患者において、β細胞崩壊を留めもしくは遅らせることを可能にするかも知れない免疫治療アプローチを同定することに当てている（１２）。マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、局所および全身での炎症における決定的なサイトカインであるが、糖尿病におけるその役割は、完全には探索されていない。ＭＩＦは多面的なサイトカインであり、免疫応答の間に、活性化Ｔ細胞、マクロファージ、および種々の非免疫細胞により産生される（１３、１４）。これは、宿主の防衛の決定的なメディエーターとして振る舞い、敗血症ショックならびに慢性炎症および自己免疫疾患における治療ターゲット（標的）として探索され続けている（１５〜１７）。上昇したＭＩＦ遺伝子発現が、自然に肥満しない糖尿病（ＮＯＤ）マウスにおいて検出されているが、１型ＤＭの病因におけるその重要性は不明である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
こうして、本発明者らは、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害剤が、１型糖尿病を軽減させることを発見した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
これゆえ、ある幾つかの実施形態において、本発明は、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類を処置する方法に関する。本方法は、該哺乳類に、該哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質を含む医薬組成物を投与することを含む。これらの実施形態において、該物質は、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
本発明は、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類を処置する他の方法にも関する。これらの方法も、該哺乳類に、該哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質を含む医薬組成物を投与することを含む。これらの実施形態において、該物質は、以降の構造ＩもしくはＩＩを含んでいる有機分子である。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明は加えて、化合物が、１型糖尿病を予防するかもしくは処置するのに有用であるかどうか評価する方法に関する。本方法は、（ａ）該化合物がマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を哺乳類において阻害するかどうか決定し、次いで、もし該化合物がＭＩＦを阻害すれば、（ｂ）該化合物が１型糖尿病の発症を阻害するかどうか決定することを含む。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
更なる実施形態において、本発明は、（ａ）マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を該哺乳類において阻害する、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである物質を含む医薬組成物、ならびに、（ｂ）該組成物を、該哺乳類に投与するための説明書を含むキットに関する。これらの実施形態において、該哺乳類が１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
更なる実施形態において、本発明は、（ａ）マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を該哺乳類において阻害する、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである物質を含む医薬組成物、ならびに、（ｂ）該組成物を、該哺乳類に投与するための説明書を含む他のキットに関する。これらの実施形態において、該哺乳類が１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある。これらの実施形態の医薬組成物は、以降の構造ＩもしくはＩＩを含んでいる有機分子である。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
本発明は、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類の処置用医薬品の製造のための、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を該哺乳類において阻害する物質の使用にも関し、ここで該物質が、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
加えて、本発明は、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類の処置用医薬品の製造のための、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を該哺乳類において阻害する物質の使用に関する。これらの実施形態において、該物質は、以降の構造ＩもしくはＩＩを含んでいる有機分子である。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
略号
ＭＩＦ：マクロファージ遊走阻止因子
ＩＳＯ−１：（Ｓ，Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸メチルエステル
ｉＮＯＳ：誘発型酸化窒素（ＮＯ）合成酵素
ＳＴＺ：ストレプトゾトシン
ＭＬＤ−ＳＴＺ：多数回低用量ストレプトゾトシン
ＳＭＮＣ：脾臓単核細胞
ＰＣ：腹腔細胞
ＩＦＮ−γ：γ−インターフェロン
ＴＮＦ−α：腫瘍壊死因子−α
ＩＬ−１β：インターロイキン１β
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
本発明は、ＭＩＦが、１型糖尿病の病因における決定的な因子であるとの発見に基づいている。これゆえ、ＭＩＦ阻害は、１型糖尿病の発症を防ぐかもしくは軽減させる。実施例参照。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
これゆえ、ある幾つかの実施形態において、本発明は、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類を処置する方法に関する。本方法は、該哺乳類に、該哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質を含む医薬組成物を投与することを含む。これらの実施形態において、該物質は、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
好ましい実施形態においては、前記哺乳類が、糖尿病、耐糖能障害、ストレス性高血糖、代謝症候群（メタボリック・シンドローム）、および／またはインシュリン耐性を有するかもしくはリスクがある。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
本発明は、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類を処置する方法にも関する。これらの方法は、該哺乳類に、該哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質を含む医薬組成物を投与することを含む。これらの実施形態においては、該物質が、以降の構造ＩもしくはＩＩを含む有機分子である。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
本発明の好ましい実施形態では、該哺乳類が、糖尿病、あるいは、糖尿病もしくは糖尿病リスクと関連した病状、例えば、耐糖能障害、ストレス高血糖、メタボリック・シンドローム、および／またはインシュリン耐性を有するかもしくはそのリスクがある。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
ＭＩＦ活性もしくは発現を阻害する化合物が、１型糖尿病処置に有用であるとの発見は、ＭＩＦ阻害活性を目指す化合物スクリーニングが、１型糖尿病を予防するかもしくは処置する能力を求めて化合物を同定するのに使用され得ることを指し示す。これゆえ、ある幾つかの実施形態では、本発明は、化合物が１型糖尿病を予防するかもしくは処置するのに有用であるかどうか評価していく方法に関する。本方法は、以降の２ステップ：
（ａ）化合物が、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を、哺乳類において阻害するかどうか決定し、次いでもし該化合物がＭＩＦを阻害すれば
（ｂ）該化合物が、１型糖尿病の発症を阻害するかどうか決定するステップ
を含む。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
これらの方法では、試験化合物のＭＩＦ活性を阻害する能力が、如何なる既知の手順によってでも求められ得る。非限定例は、米国特許出願公開２００３／０００８９０８および２００３／０１９５１９４において記載される方法も包含する。同様に、如何なる既知の手順も、１型糖尿病への化合物の効果を評価するために、利用され得る。好ましい実施形態では、１型糖尿病への化合物の効果は、多数回低用量ストレプトゾトシン投与を利用しての動物モデルにおける、もしくは、ＮＯＤマウスのような１型糖尿病の発症に遺伝子的に感受性の動物モデルにおける糖尿病の発症への該化合物の効果を評価して、求められる。このようなモデルにおける糖尿病の発症への試験化合物もしくは製剤の効果は、種々の便利な方法により、例えば、該哺乳類における循環グルコースもしくは脾臓リンパ球増殖をモニターしていくことにより、査定されることがある（実施例も参照）。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
更なる実施形態では、本発明はキットに関し、（ａ）前記哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質を含む医薬組成物、ならびに、（ｂ）該組成物を該哺乳類に投与するための説明書を含んでおり、ここで該物質が、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである。これらの実施形態では、該哺乳類が、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
更なる実施形態では、本発明は他のキットに関し、（ａ）前記哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質を含む医薬組成物、ならびに、（ｂ）該組成物を該哺乳類に投与するための説明書を含む。これらの実施形態では、該哺乳類が、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある。これらの実施形態の本医薬組成物は、以降の構造ＩもしくはＩＩを含んでいる有機分子である。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
本発明は、前記哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質の、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類の処置用の医薬品の製造のための使用にも関し、ここで該物質が、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチドである。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
加えて、本発明は、前記哺乳類においてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を阻害する物質の、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類の処置用の医薬品の製造のための使用に関する。これらの実施形態では、該物質が、以降の構造ＩもしくはＩＩを含んでいる有機分子である。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
実施例１．マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）活性の中和が、実験自己免疫糖尿病を減弱させる
実施例の要約
炎症促進性サイトカイン、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、重要な役割を、幾つかの炎症および自己免疫疾患において演じる。ＭＩＦｍＲＮＡ発現は、非肥満糖尿病マウスにおいてアップレギュレーションされるが、尚僅かしか、１型糖尿病レギュレーターとしての潜在的なポテンシャルについて知られていない。ここで、我々は、ＭＩＦ蛋白が、多数回低用量ストレプトゾトシンによりマウスにおいて誘発された実験糖尿病の発症の間に、膵島細胞において顕著に上昇されることを示す。ＭＩＦに対する中和抗体、もしくは、薬理的ＭＩＦ阻害剤（Ｓ，Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸メチルエステル（ＩＳＯ−１）のような例示的なＭＩＦ阻害剤を用いたＭＩＦ活性の減衰は顕著に、膵島における組織病理学的変化（病変）を抑え、高血糖の発症を抑え、１型糖尿病を有するかもしくは１型糖尿病のリスクがある哺乳類を処置する本方法の一般的な有用性を示している。観察された有益な効果は、自己反応性リンパ球の増殖および接着の抑制、ｉＮＯＳ発現のダウンレギュレーション、ならびに、膵島および腹腔マクロファージによるＮＯおよびＴＮＦ−αの分泌に帰属され得るが、これらの機序の繋がりの知識は、本発明の教示には必須ではない。本研究は、１型糖尿病の病理におけるＭＩＦに関する決定的な役割を定義し、新たな治療戦略を同定し、自己免疫プロセスを多段階において減衰させる。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８１】
はじめに
ＭＩＦが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、および酸化窒素（ＮＯ）（１９）のような、１型糖尿病（ＤＭ）の病理に含まれている他の炎症性サイトカインおよび可溶性メディエーターの合成をも刺激するとの観察は、ＭＩＦ活性の阻害が、疾患の発症を調節するかも知れないとの可能性を喚起した。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
はじめに
マクロファージおよびＴ細胞両方により仲介される免疫応答におけるＭＩＦの中心的な制御の役割が与えられれば、我々は、多数回低用量ストレプトゾトシン（ＭＬＤ−ＳＴＺ）処置されたマウスにおける糖尿病の発症の間のＭＩＦ発現、ならびに、ＭＩＦ活性の中和のこの疾患の発症への影響を研究してきた。これらは、ヒトでのよく認められた１型糖尿病モデルである。この目的では、抗ＭＩＦポリクローナル抗体が、（Ｓ，Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸メチルエステル（ＩＳＯ−１）、ＭＩＦの薬理的阻害剤（２０）同様、ＳＴＺを用いた挑戦前に、予防処置としてマウスに与えられた。ＤＭの病理に関する種々の免疫学的パラメーターが求められ、自己反応性細胞増殖および接着ならびに炎症促進メディエーター産生も包含していた。我々の知る限り、これが最初の試みであり、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＭＩＦの中和により、自己免疫糖尿病において干渉させる。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８６】
細胞のインキュベートおよび炎症促進メディエーターの決定
定住個体の腹腔細胞（ＰＣ）、脾臓単球細胞（ＳＭＮＣ）、および膵島が、個々の、抗ＭＩＦＩｇＧ処置、ＩＳＯ−１処置、もしくはコントロールマウスから、ＳＴＺの最初の注射後１５日に、同様に、正常非処置動物から単離された。ＳＭＮＣ（５×１０6／ウェル）はＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離により調製され、定住個体のＰＣ（２．５×１０6／ウェル）は冷ＰＢＳでの腹腔洗浄により収集され、もしくは、膵島（１５０〜２００膵島／ウェル）は記載されるとおり（２２）コラゲナーゼによる消化および密度勾配精製により調製され、２４ウェルＬｉｍｂｒｏ培養プレート中においてインキュベートされ、１ｍＬのＲＰＭＩ−１６４０培養培地中においてであり、５％の牛胎児血清（ＦＢＳ）を含有しており、細胞の上清が、４８時間後に収集された。培養上清における生物活性なＴＮＦ−αの濃度が求められ（以前に記載されたとおり、２２）、アクチノマイシンＤ処理フィブロサルコーマ細胞株Ｌ９２９を用いた細胞溶解バイオアッセイを使用した。ＮＯ産生の指標たる亜硝酸（塩）の蓄積が、細胞培養上清中において、Ｇｒｉｅｓｓ反応を使用して求められた。細胞内ＭＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＭＨＣ（クラス）ＩＩ、もしくはｉＮＯＳの発現が、細胞主体の僅かに修飾されたＥＬＩＳＡプロトコール（２３）により求められた。脾臓ＭＮＣ（５×１０5／ウェル）もしくはＰＣ（２．５×１０5／ウェル）が、ポリ−Ｌ−リジンにより予備コーティングされた９６ウェルマイクロプレートに接着するようにされた。４％パラホルムアルデヒドでの固定化およびＰＢＳ中０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（Ｔ／ＰＢＳ）での洗浄後、内因性過酸化酵素が、Ｔ／ＰＢＳ中１％Ｈ2Ｏ2を用いてクウェンチされ、反応が１時間、３７℃において、Ｔ／ＰＢＳ中１０％ＦＢＳを用いてブロックされた。引き続き、細胞が１時間、３７℃において、ウサギ抗マウスＭＩＦＩｇＧ、ラット抗マウスＩＦＮ−γ（Ｈｏｌｌａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｌｅｉｄｅｎ、オランダ）、マウス抗マウス／ラットＭＨＣ（クラス）ＩＩ（ＭＣＡ４６Ｒ、Ｓｅｒｏｔｅｃ）、もしくは、ウサギ抗マウスｉＮＯＳ（シグマ）を用いて、１％ＢＳＡ含有Ｔ／ＰＢＳ中においてインキュベートされた。洗浄後、これら細胞が１時間、対応している２次抗体（ヤギ抗ウサギＩｇ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰ、ヤギ抗ラットＩｇ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰ、もしくはヤギ抗マウスＩｇ（Ｆ（ａｂ’）2−特異的）−ＨＲＰ）と共にインキュベートされ、再び洗浄され、１５分間暗所室温において、０．４ｍｇ／ｍＬのＯＰＤ（シグマ）、１１．８ｍｇ／ｍＬのＮａ2ＨＰＯ4．２Ｈ2Ｏ、７．３ｍｇ／ｍＬのクエン酸、および０．０１５％Ｈ2Ｏ2含有溶液５０μＬと共にインキュベートされた。該反応は、３ＮのＨＣｌを用いて停止され、その吸光度が、Ｔｉｔｅｒｔｅｋマイクロプレート読み取り機（Ｆｌｏｗ）において、４９２ｎｍにおいて測定された。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９２】
抗ＭＩＦ予防薬は、ＭＬＤ−ＳＴＺ誘発糖尿病の、臨床的および組織学的パラメーターを抑える。
ＭＩＦ活性阻害が、ＭＬＤ−ＳＴＺに晒されたマウスにおける糖尿病を調節するかどうか決定するために、我々は第１に、ＭＩＦに対する中和ポリクローナル抗体の効果を、２つのＤＭ感受性同系交配系統マウスにおいて研究した。Ｃ５７Ｂ１／６およびＣＢＡ／Ｈコントロールマウス両方が、ＰＢＳもしくは非免疫ＩｇＧを用いて処置され、ＭＬＤ−ＳＴＺ注射後の２週間に亘り、持続した高血糖を発症させた。ＭＬＤ−ＳＴＺは、異なる程度の高血糖を、２系統のマウスにおいて誘発させたが、−３〜＋５日の抗ＭＩＦＡｂでのＣ５７Ｂ１／６マウス（図２Ａ）もしくはＣＢＡ／Ｈマウス（図２Ｂ）の処置は顕著に、ＭＬＤ−ＳＴＺ誘発高血糖を阻害した。加えて、膵臓の見本の組織学的検査が、この疾患の１５日後に実施され、膵島の浸潤の程度が顕著に、非罹患性ＩｇＧを用いて処置された糖尿病コントロールマウスと比べて、抗ＭＩＦ抗体を用いて処置されたマウスにおけるよりも低かったことを指し示した（図２ＣおよびＤ）。我々は、ＭＬＤ−ＳＴＺ誘発ＤＭにおけるＭＩＦアンタゴニストＩＳＯ−１（２０）の薬理効果も検査した。従って、我々は、マウスを予防的に１４日の期間に亘り、ＩＳＯ−１を用いて処置し、５回のＳＴＺ注射のうちの最初の３日前に開始した。これらのマウスは、８週の実験期間を通して、正常血糖のままであった（図２Ｂ）。ＭＩＦの免疫的もしくは薬理的中和の抗糖尿病原性効果は長く継続し、５８日のフォローアップ期間全体を通して、変動は限られていた（図２ＡおよびＢ）。ＩＳＯ−１によるＭＩＦのブロックが、膵島の炎症を減弱させた（図２Ｄ）。これらのデータは、免疫炎症ＤＭの誘発および進行におけるＭＩＦの決定的な役割、ならびに、リスク集団における１型糖尿病の発症を防ぐＭＩＦ阻害剤での処置の有用性に関する証拠を与える。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９６】
炎症促進メディエーター産生
炎症促進メディエーターは、齧歯類における１型ＤＭにおいて、重大な役割を演じるので（４〜７、２１、２２）、我々は、局所および末梢免疫細胞両方からのＳＴＺ関連サイトカイン放出へのＭＩＦ阻害効果を、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて求めた。抗ＭＩＦＩｇＧでの内因性ＭＩＦ蛋白の免疫的中和（図４Ａ）もしくはＩＳＯ−１でのＭＩＦの薬理的阻害（図４Ｂ）が、脾臓ＭＮＣ、腹腔マクロファージ、および膵島細胞によるＴＮＦ−α産生をダウンレギュレーションし、これを、健康な非処置マウスレベルまで低下させた。我々は、細胞内でのｉＮＯＳの発現が顕著に、抗ＭＩＦもしくはＩＳＯ−１で処置された動物から単離されたマクロファージにおいて、相対的に高発現のｉＮＯＳの糖尿病の動物に比べて抑えられたことをも見出した（図５Ａ）。従って、ＭＩＦのブロックが、マクロファージならびに膵島における引き続いてのＮＯ産生を廃止させた（図５Ｂ）。ＭＩＦ阻害剤の効果が、ＴＮＦ−α、ｉＮＯＳ、およびＮＯに特異的であったが、これは、脾臓細胞における細胞内ＩＦＮ−γ発現が、ＭＨＣクラスＩＩ分子発現同様、コントロールの糖尿病マウスに比べて変わらないままであったからである（図６ＡおよびＢ）。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９７】
議論
ＭＩＦは顕著に、過剰炎症および自己免疫と関連した免疫病理に寄与し、内因性ＭＩＦを、中和抗ＭＩＦ抗体、もしくは、ＭＩＦ遺伝子の標的とされた破壊で中和しており、数種類の炎症疾患の齧歯類モデルの発症を阻害し、免疫誘発腎疾患（２７）、リーシュマニア（２８）、グラム陰性およびグラム陽性敗血症（１５、２９、３０）、抗原誘発関節炎（３１）、結腸炎（１６）、ならびに実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ、１７）も包含している。最近、自己免疫の仲介によるＤＭの発症および病理におけるＭＩＦに関する潜在的な役割が、元より糖尿病のＮＯＤマウスにおいて示唆されてきており、これは、ＭＩＦｍＲＮＡ発現が顕著に、疾患の発症の間に増加されるからであり、外因性ＭＩＦ投与が、これらの動物における疾患の発症を増加させる（１８）。ＭＩＦは構成的に発現され、膵臓β細胞から、インシュリンと一緒に分泌され、オートクリンの因子として振る舞い、インシュリン放出を刺激する（３２）。インシュリン分泌の誘発が、β細胞上での発現および免疫細胞に対する抗原提示をしやすくすることにより、機能活性が増強される場合アップレギュレーションされる免疫炎症糖尿病原性経路に寄与すると考えられるので（１２）、このホルモン特性が、内因性ＭＩＦを、β細胞不全および破壊初期の現象に伴う更なる重要な因子を代表し得ると考えられる。内因性ＭＩＦを標的とするとこれゆえ、１型糖尿病の病理におけるこのサイトカインの役割を解明するのに、ならびに、この病状の治療および／または予防処置に、適切なアプローチであるかも知れない。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９８】
本研究において、我々は初めて、内因性ＭＩＦが、マウス自己免疫糖尿病の発症において鍵となる役割を演じることを示す。ＭＬＤ−ＳＴＺ誘発糖尿病の進行が、アップレギュレーションされたＭＩＦ蛋白発現を、膵島および末梢細胞両方において伴った。抗ＭＩＦＩｇＧによるＭＩＦの免疫の中和化、または、ＭＩＦ活性のＩＳＯ−１による薬理的阻害は顕著に、この疾患の臨床的および組織学的発症を減弱させた。炎症応答ならびに脾臓細胞増殖および接着を、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて阻害した。両薬剤の抗糖尿病原性効果は長く継続し、これはマウスが、８週のフォローアップ期間、正常血糖のままであったからである。自己反応性Ｔ細胞増殖、白血球接着、および、標的組織中への遊走の阻害、ならびに、これら抗ＭＩＦ戦略によるマクロファージの活性化は、ＭＩＦ活性の免疫的もしくは薬理的中和が、病原性自己免疫応答を、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて減弱させることがあることを示唆する。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１００】
自己反応性細胞のクローンの拡大に加えて、該疾患の発症は、自己免疫応答の誘発および遠心相両方における接着受容体およびリガンドにより仲介される細胞−細胞相互作用により決定される。この文脈においては、我々は、ＭＬＤ−ＳＴＺ誘発糖尿病マウスからの単核細胞が高度に、培養血管内皮細胞（２１）もしくは線維芽細胞（図３Ｂ）に、疾患活動ピーク時において接着性であることを示している。これらの接着特性は、標的組織の炎症浸潤に重要なメカニズムかも知れない（２１）。幾つかの系列の証拠が、ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）への細胞接着を仲介する（３４）ＣＤ１１ｂのアップレギュレーションが、１型ＤＭの免疫学的進展に参画している細胞間の相互作用に、機能的な結果を持つかも知れないことを実証する（２１、２５）。ＭＩＦのブロックが顕著に、糖尿病マウスの単核細胞上でのＣＤ１１ｂ発現を阻害し、顕著に白血球の接着特性をダウンレギュレーションしたが、このことは、抗ＭＩＦ戦略が、これらの細胞の膵島への帰還を妨げるかも知れず、これゆえ、ＭＩＦのブロックの治療の有益性に寄与していることを示唆している。この仮定を裏付けるように、組織学的分析が、抗ＭＩＦマウスにおけるインシュリン炎の抑制を示した。ＭＩＦ活性阻害も、ＥＡＥにおける接着分子依存性の標的組織の病理をダウンレギュレーションすると示されている（１７）。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０１】
この研究のもう１つ別の重要な知見は、抗ＭＩＦ処置が、炎症促進性および細胞毒性メディエーターの産生に影響を及ぼすことである。ＴＮＦ−αおよびＮＯのより低い局所的な産生が結果的に、膵臓中への炎症細胞流入の抑制から得られることがある。我々のｅｘ ｖｉｖｏでの知見に基づけば、しかしながら、腹腔および／または脾臓細胞による、ＴＮＦ−α、ｉＮＯＳ、およびＮＯのダウンレギュレーションにより示唆されるように、ＭＩＦのブロックも直接、マクロファージおよびＴ細胞のエフェクターとしての機能に影響するかも知れないように思われる。このことは、これらのメディエーター産生に干渉するｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗ＭＩＦ抗体の能力（２８）と一致している。ＭＩＦは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴＮＦ−αならびに反応性酸素種および窒素代謝物の産生をアップレギュレーションする（３５）。これゆえ、ＭＩＦの仲介によるｉＮＯＳ発現およびＴＮＦ−α合成の直接のブロックが、組織損傷炎症促進メディエーターの１型ＤＭにおけるダウンレギュレーションに寄与するかも知れないことに思い至る。これゆえ、我々は、ＭＬＤ−ＳＴＺによるＤＭ処置におけるＭＩＦのブロック効率が、Ｔ細胞およびマクロファージならびに膵島細胞の自己免疫および／または炎症応答への阻害効果によるものと仮定する。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０５】
図７および８において示されるように、糖尿病誘発後のＭＩＦ阻害は、有意な有益性をストレプトゾトシン処置マウスに、糖尿病の進行を阻害することにより与えた。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
実施例３．無ＭＩＦマウスは、ストレプトゾトシンによる１型糖尿病誘発に対して耐性である
更に１型糖尿病におけるＭＩＦの重要性を樹立させるために、ＭＩＦ−／−Ｃ５７Ｂ１／６マウス（４０）がストレプトゾトシン処理され、糖尿病の進行中のＭＩＦ+/+マウスと比較された。ストレプトゾトシン処理された場合、ＭＩＦ−／−マウスは糖尿病を発症せず、一方、ＭＩＦ+/+マウスは糖尿病を発症した（図９）。これは更に、例えば、リボザイム、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ等を用いてＭＩＦ発現を阻害することに関する方法が、１型糖尿病処置に有用であると期待されることをも、樹立させる。