【手続補正書】
【提出日】平成23年9月21日(2011.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的核酸の発現を調節する方法であって、前記核酸をｓｎｏＲＮＡまたは修飾ｓｎｏＲＮＡと、前記ｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡおよび／またはその断片が標的核酸の一部とハイブリダイズすることができる条件下で接触させるステップを含み、前記ｓｎｏＲＮＡまたはその断片の前記核酸の一部とのハイブリダイゼーションが前記標的核酸の発現および／または機能を調節する、方法。
【請求項２】
前記標的核酸配列がＲＮＡ配列である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｓｎｏＲＮＡ分子が、いわゆるボックスＣ／Ｄ−ｓｎｏＲＮＡまたはボックスＨ／ＡＣＡ−ｓｎｏＲＮＡを含む細胞ｓｎｏＲＮＡに基づく、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ボックスＣ／Ｄ  ｓｎｏＲＮＡが、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ｂ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  Ｂ３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ０４６５９８）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  Ｂ４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ０４６５９８）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  Ｂ５（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ０４６５９８）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ＴＳ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ＴＳ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ｇ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ｓｎｏＲＮＡ−２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ０５００９５）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ｓｎｏＲＮＡ  ９２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｚ５０１７１、Ｌ．ｔａｒｅｎｔｏｌａｅ  ｓｎｏＲＮＡ  ９２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ０１６３９９）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ＴＢＣ４  ｓｎｏＲＮＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ｓｎｏ  ２７０（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｚ５０１７１）およびヒトＵ１４  ｓｎｏＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＲ＿００００２２）を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ボックスＣ／Ｄ  ｓｎｏＲＮＡに一般的に見出される１つ以上のＤ／Ｄ’ボックス核酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つ以上のＤおよび／またはＤ’ボックスが、例えば、５’−ＣＵＧＡ−３’，５’−ＡＵＧＡ−３’，５’−ＣＣＧＡ−３’，５’−ＣＡＧＡ−３’，５’−ＣＵＵＡ−３’，５’−ＵＵＧＧ−３’および５’−ＣＡＧＣ−３’から選択される配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記修飾ｓｎｏＲＮＡ分子が、ボックスＣ配列および／または、任意に、２８Ｓ  ｒＲＮＡ若しくはｓｎｏＲＮＡ修飾の他の生理学的標的と相補的な更なる領域を更に含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ｓｎｏＲＮＡをコードする配列が、確立されたｓｎｏＲＮＡプロセシング経路に従ってイントロンからのプロセシングを供与するために必要な構造要素を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記ボックスＣ配列が５〜９ヌクレオチド長である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
標的ＲＮＡ配列の一部と実質的に相補的な前記配列が、イントロン若しくはエクソン配列、またはイントロン−エクソン結合配列、または前記標的核酸の５’若しくは３’非翻訳領域内の領域若しくはその接合部における領域と実質的に相補的である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記標的ＲＮＡ配列の一部と実質的に相補的な前記核酸配列が、通常、１５〜４５ヌクレオチド長である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記標的ＲＮＡ配列が、ｍＲＮＡ，ｔＲＮＡ，ｍｉＲＮＡまたはｒＲＮＡ配列またはＲＮＡウイルスゲノム配列またはこれらから生じる転写産物である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記修飾ｓｎｏＲＮＡ分子が、標的核酸分子とハイブリダイズするように設計された２つ以上の配列を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記標的核酸分子とハイブリダイズするように設計された２つ以上の配列が、同じ標的核酸分子の異なる部分または異なる標的核酸分子を標的とすることができる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
標的核酸の発現の調節に用いる修飾ｓｎｏＲＮＡ配列であって、前記標的核酸の一部とハイブリダイズし、且つ前記標的核酸の発現を調節するための、前記標的配列の一部と実質的に相補的な核酸配列を含む、修飾ｓｎｏＲＮＡ配列。
【請求項１６】
前記標的核酸配列がＲＮＡ配列である、請求項１５に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ配列。
【請求項１７】
前記ｓｎｏＲＮＡ分子が、いわゆるボックスＣ／Ｄ−ｓｎｏＲＮＡまたはボックスＨ／ＡＣＡ−ｓｎｏＲＮＡを含む細胞ｓｎｏＲＮＡに基づく、請求項１５または１６に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ配列。
【請求項１８】
前記ボックスＣ／Ｄ  ｓｎｏＲＮＡが、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ｂ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  Ｂ３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ０４６５９８）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  Ｂ４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ０４６５９８）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  Ｂ５（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ０４６５９８）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ＴＳ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ＴＳ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ｇ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３３１６５６）、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ  ｓｎｏＲＮＡ−２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ０５００９５）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ｓｎｏＲＮＡ  ９２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｚ５０１７１、Ｌ．ｔａｒｅｎｔｏｌａｅ  ｓｎｏＲＮＡ  ９２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ０１６３９９）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ＴＢＣ４  ｓｎｏＲＮＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ｓｎｏ  ２７０（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｚ５０１７１）およびヒトＵ１４  ｓｎｏＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＲ＿００００２２）を含む、請求項１７に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項１９】
ボックスＣ／Ｄ  ｓｎｏＲＮＡに一般的に見出される１つ以上のＤ／Ｄ’ボックス核酸配列を含む、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２０】
前記少なくとも１つ以上のＤおよび／またはＤ’ボックスが、例えば、５’−ＣＵＧＡ−３’，５’−ＡＵＧＡ−３’，５’−ＣＣＧＡ−３’，５’−ＣＡＧＡ−３’，５’−ＣＵＵＡ−３’，５’−ＵＵＧＧ−３’および５’−ＣＡＧＣ−３’から選択される配列を含む、請求項１９に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２１】
前記修飾ｓｎｏＲＮＡ分子が、ボックスＣ配列および／または、任意に、２８Ｓ  ｒＲＮＡ若しくはｓｎｏＲＮＡ修飾の他の生理学的標的と相補的な更なる領域を更に含む、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２２】
前記ｓｎｏＲＮＡをコードする配列が、確立されたｓｎｏＲＮＡプロセシング経路に従ってイントロンからのプロセシングを供与するために必要な構造要素を含む、請求項１７に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２３】
前記ボックスＣ配列が５〜９ヌクレオチド長である、請求項２１に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２４】
標的ＲＮＡ配列の一部と実質的に相補的な前記配列が、イントロン若しくはエクソン配列、またはイントロン−エクソン結合配列、または前記標的核酸の５’若しくは３’非翻訳領域内の領域若しくはその接合部における領域と実質的に相補的である、請求項１５〜２３のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２５】
前記標的ＲＮＡ配列の一部と実質的に相補的な前記核酸配列が、通常、１５〜４５ヌクレオチド長である、請求項１５〜２４のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２６】
前記標的ＲＮＡ配列が、ｍＲＮＡ，ｔＲＮＡ，ｍｉＲＮＡまたはｒＲＮＡ配列またはＲＮＡウイルスゲノム配列またはそれから生じる転写産物である、請求項１６に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２７】
前記修飾ｓｎｏＲＮＡ分子が、標的核酸分子とハイブリダイズするように設計された２つ以上の配列を含む、請求項１５〜２６のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２８】
前記標的核酸分子とハイブリダイズするように設計された２つ以上の配列が、同じ標的核酸分子の異なる部分または異なる標的核酸分子を標的とすることができる、請求項２７に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ。
【請求項２９】
請求項１５〜２８のいずれか１項に記載の少なくとも１つの修飾ｓｎｏＲＮＡ分子を発現することができる、プラスミドおよびウイルスベクターを含む核酸構築物。
【請求項３０】
修飾ｓｎｏＲＮＡをコードすることができるイントロンの核酸の領域に隣接するエクソンの核酸の少なくとも２つの領域を含む、請求項２９に記載の核酸構築物。
【請求項３１】
前記核酸構築物が、１つ以上のｓｎｏＲＮＡをコードすることができる配列を含む２つ以上のイントロン配列に隣接する多数のエクソン配列を含む、請求項２９または３０に記載の核酸構築物。
【請求項３２】
前記構築物が、単一の構築物として形成され、標的細胞内における転写と同時に、エクソン配列に対応するｍＲＮＡの生成およびイントロン配列のスプライシングアウトおよびその後の修飾ｓｎｏＲＮＡの生成をもたらす、請求項３１に記載の核酸構築物。
【請求項３３】
２つ以上のｓｎｏＲＮＡ配列を生成するために２つ以上のイントロン配列が用いられ、各ｓｎｏＲＮＡが同じまたは異なる標的ＲＮＡ分子を標的とするように設計された、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の核酸構築物。
【請求項３４】
前記核酸構築物が形質転換され、またはトランスフェクトされた細胞の同定を容易にするための選択マーカー遺伝子を更に含む、請求項２９〜３３のいずれか１項に記載の核酸構築物。
【請求項３５】
少なくとも１つのプロモーター、例えば、構成的または制御可能なプロモーターを含む、請求項２９〜３４のいずれか１項に記載の核酸構築物。
【請求項３６】
宿主細胞のゲノムへの部位特異的組込みを容易にするように設計された部位特異的組換え部位を更に含む、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載の核酸構築物。
【請求項３７】
請求項２９〜３６のいずれか１項に記載の核酸構築物で形質転換され、またはトランスフェクトされる宿主細胞。
【請求項３８】
前記細胞が、真核細胞、特に哺乳動物細胞（例えば、ＨｅＬａ細胞、Ｃｏｓ細胞）、酵母細胞（例えば、ＡＨ１０９，ＨＨＹ１０，ＫＤＹ８０）昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９）、トリパノソーマ細胞（例えば、Ｌ．ｃｏｌｌｏｓｏｍａ，Ｌ．ｍａｊｏｒ，Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ  ２９−１３）、細菌細胞（例えば、ＪＭ１０９，ＲＰ４３７，ＭＭ５０９，ＳＷ１０）または植物細胞から選択される、請求項３７に記載の宿主細胞。
【請求項３９】
修飾ｓｎｏＲＮＡ分子を生成するのに用いる核酸ベクター構築物であって、５’から３’方向に、
ｉ）転写を制御するためのプロモーター配列と、
ｉｉ）第一のエクソン配列と、
ｉｉｉ）第一のイントロンスプライシング配列と、
ｉｖ）請求項１５〜２８のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡをコードする核酸配列のクローニングを促進するためのクローニング部位または配列と、
ｖ）第二のイントロンスプライシング配列と、
ｖｉ）第二のエクソン配列と
を含む、核酸ベクター構築物。
【請求項４０】
５’から３’方向に、
ｖｉｉ）第三の、または更なるイントロンスプライシング配列と、
ｖｉｉｉ）請求項１５〜２８のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡをコードする核酸配列のクローニングを促進するための第二の、または更なるクローニング部位または配列と、
ｉｘ）第四の、または更なるイントロンスプライシング配列と、
ｘ）第三の、または更なるエクソン配列と
を更に含む、請求項３９に記載の核酸ベクター構築物。
【請求項４１】
標的ＲＮＡまたは前記１つ以上のｓｎｏＲＮＡによって調節されるタンパク質を機能的に置換するためにタンパク質、ＲＮＡ、標識タンパク質、変異タンパク質などをコードする発現可能なコード配列を更に含む、請求項３９または４０に記載の核酸ベクター構築物。
【請求項４２】
前記ｓｎｏＲＮＡ核酸および、標的ＲＮＡ若しくは前記１つ以上のｓｎｏＲＮＡによって調節されるタンパク質を機能的に置換するためにタンパク質、ＲＮＡ、標識タンパク質、変異タンパク質などをコードする発現可能なコード配列が、同じプロモーターの制御下にあり、単一の転写物として発現される、請求項４１に記載の核酸ベクター構築物。
【請求項４３】
標的核酸の発現を調節し、特に下方制御することが望ましい患者における疾患または病状を処置するのに用いる、ｓｎｏＲＮＡ、修飾ｓｎｏＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡをコードする核酸構築物、またはｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡを発現することができる細胞。
【請求項４４】
ｓｎｏＲＮＡ、修飾ｓｎｏＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡをコードする核酸構築物、またはｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡを発現することができる細胞、および医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項４５】
請求項１５〜４２のいずれか１項に記載の修飾ｓｎｏＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡをコードする核酸構築物、またはｓｎｏＲＮＡ若しくは修飾ｓｎｏＲＮＡを発現することができる細胞を含む、請求項４３または４４に記載の生成物または組成物。
【請求項４６】
変異表現型を評価し、または薬物スクリーニング戦略を支援し、または標的を検証し、既存の未標識細胞型からの競合なしに標識形態のタンパク質を分析するための、または他の適用若しくは研究用途のための、請求項４１または４２に記載のベクターの使用。