【手続補正書】
【提出日】平成23年5月23日(2011.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含有するヒト化抗体又は抗体断片であって、ここで軽鎖ポリペプチドは、少なくとも以下：（ｉ）ＦＲ１からＦＲ３に至る中で選択されるアミノ酸残基の、所望の抗原への特異性を有するヒト化される親ウサギ抗体の軽鎖の対応するアミノ酸残基に対する（ヒト生殖細胞系配列のライブラリー中の他のヒト生殖細胞系配列に比べた）そのより大きな相同性（配列同一性パーセント）に基づいて該ライブラリーより選択されるヒト軽鎖生殖細胞系配列のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域が含まれる、ＦＲ１の第一残基からＦＲ３の末端に至るアミノ酸残基；及び（ｉｉ）さらにここで、同じ親ウサギ抗体の軽鎖中の「選択性決定残基」に対応するＣＤＲ１及びＣＤＲ２中のＣＤＲ残基は、対応するウサギ選択性決定残基で置き換えられている；（ｉｉｉ）同じ親ウサギ抗体の全ＣＤＲ３領域が含まれるアミノ酸残基；（ｉｖ）同じ親ウサギ抗体の軽鎖に含まれる対応するＦＲ４領域に対するそのより大きな相同性（配列同一性）に基づいてヒト生殖細胞系配列のライブラリーから導かれる抗体軽鎖の全ＦＲ４領域が含まれるアミノ酸残基；及び（ｖ）ここで、選択される相同的なヒトＦＲ領域中のヒトＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４領域のＦＲ残基の中で、対応するウサギＦＲ残基で置換されているものは、ほとんど又はまったくないこと；を含有するヒト化軽鎖ポリペプチドである、前記ヒト化抗体又は抗体断片。
【請求項２】
少なくとも１つの重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含有するヒト化抗体又は抗体断片であって、ここで重鎖は、少なくとも以下：（ｉ）ＦＲ１からＦＲ３に至る中で選択されるアミノ酸残基の、所望の抗原への特異性を有するヒト化される親ウサギ抗体の重鎖の対応するアミノ酸残基に対する（ヒト生殖細胞系配列のライブラリー中の他のヒト生殖細胞系配列に比べた）そのより大きな相同性（配列同一性パーセント）に基づいて該ライブラリーより選択されるヒト生殖細胞系配列によりコードされるＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域が含まれる、ＦＲ１の第一残基からＦＲ３の末端に至るアミノ酸残基；及び（ｉｉ）さらにここで、同じ親ウサギ抗体の重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域中の「選択性決定残基」に対応するヒト重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２中のＣＤＲ残基は、ウサギ重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域に含まれる対応する重鎖選択性決定残基で置き換えられている；（ｉｉｉ）同じ親ウサギ抗体の全ＣＤＲ３領域が含まれるアミノ酸残基；（ｉｖ）同じ親ウサギ抗体の重鎖に含まれる対応するＦＲ４領域に対するそのより大きな相同性（配列同一性）に基づいてヒト生殖細胞系配列のライブラリーから導かれるＦＲ４領域；及び（ｖ）ここでヒト重鎖ＦＲ１領域の最終の１〜３のアミノ酸は、対応するウサギ重鎖ＦＲ１残基の末端の１〜３のアミノ酸で置き換えられていてもよい；及び／又は、ヒト重鎖フレームワーク２領域の末端アミノ酸は、ウサギ重鎖フレームワーク２の対応する末端アミノ酸残基で置き換えられていてもよい；及び／又は、ウサギ重鎖ＣＤＲ２の末端から４番目のアミノ酸（典型的には、トリプトファン）は、対応するヒトＣＤＲ２残基（典型的には、セリン）で置き換えられていてもよい；及び（ｖｉ）ここで、選択される相同的なヒトＦＲ領域の残るＦＲ残基の中で、対応するウサギＦＲ残基で置換されているものは、ほとんど又はまったくないこと；を含有するヒト化重鎖ポリペプチドである、前記ヒト化抗体又は抗体断片。
【請求項３】
親ウサギ抗体が、ヒト、ウイルス、又は細菌の抗原に特異的であって、該抗体はＩＬ−６、ヘプシジン、肝細胞増殖因子、又はＴＮＦポリペプチドに特異的であり、ここでヒト抗原は、サイトカイン、増殖因子、ホルモン、又は癌抗原である、請求項１のヒト化抗体。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか１項に引用されるヒト化抗体に含まれるヒト化抗体軽鎖をコードする核酸配列。
【請求項５】
請求項４に記載の核酸配列を含有するベクター。
【請求項６】
請求項５に記載のベクターを含有する細胞。
【請求項７】
酵母、細菌、及び哺乳動物の細胞より選択される、請求項６の細胞。
【請求項８】
二倍体の酵母細胞である、請求項７の細胞。
【請求項９】
ピキア属（Pichia）又は他のメタノール資化性二倍体酵母である、請求項８の細胞。
【請求項１０】
少なくとも１つのヒト化軽鎖ポリペプチドを含有し、そしてさらに少なくとも１つの重鎖ポリペプチドを含んでなる請求項１のヒト化抗体であって、ここで少なくとも１つの重鎖は、少なくとも以下：（ｉ）ＦＲ１からＦＲ３に至る中で選択されるアミノ酸残基の、所望の抗原への特異性を有するヒト化される親ウサギ抗体の重鎖の対応するアミノ酸残基に対する（ヒト生殖細胞系配列のライブラリー中の他のヒト生殖細胞系配列に比べた）そのより大きな相同性（配列同一性パーセント）に基づいて該ライブラリーより選択されるヒト生殖細胞系配列によりコードされるＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域が含まれる、ＦＲ１の第一残基からＦＲ３の末端に至るアミノ酸残基；及び（ｉｉ）さらにここで、同じ親ウサギ抗体の重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域中の「選択性決定残基」に対応するヒト重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２中のＣＤＲ残基は、ウサギ重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域に含まれる対応する重鎖選択性決定残基で置き換えられている；（ｉｉｉ）同じ親ウサギ抗体の全ＣＤＲ３領域が含まれるアミノ酸残基；（ｉｖ）同じ親ウサギ抗体の重鎖に含まれる対応するＦＲ４領域に対するそのより大きな相同性（配列同一性）に基づいてヒト生殖細胞系配列のライブラリーから導かれるＦＲ４領域；及び（ｖ）ここでヒト重鎖ＦＲ１領域の最終の１〜３のアミノ酸は、対応するウサギ重鎖ＦＲ１残基の末端の１〜３のアミノ酸で置き換えられていてもよい；及び／又は、ヒト重鎖フレームワーク２領域の末端アミノ酸は、ウサギ重鎖フレームワーク２の対応する末端アミノ酸残基で置き換えられていてもよい；及び／又は、ウサギ重鎖ＣＤＲ２の末端から４番目のアミノ酸（典型的には、トリプトファン）は、対応するヒトＣＤＲ２残基（典型的には、セリン）で置き換えられていてもよい；及び（ｖｉ）ここで、選択される相同的なヒトＦＲ領域の残るＦＲ残基の中で、対応するウサギＦＲ残基で置換されているものは、ほとんど又はまったくないこと；を含有するヒト化重鎖ポリペプチドである、前記ヒト化抗体。
【請求項１１】
ＩＬ−６、ヘプシジン、肝細胞増殖因子、又はＴＮＦポリペプチドに特異的である、請求項１０のヒト化抗体。
【請求項１２】
以下の工程：
（ｉ）所望の抗原へ特異的に結合するウサギ抗体からのウサギ軽鎖抗体配列をコードするＤＮＡを入手して、フレームワーク１（ＦＲ１）の始まりからフレームワーク３（ＦＲ３）の終わりを含む範囲のアミノ酸残基を同定する工程；
（ｉｉ）ＦＲ１の始まりからＦＲ３配列の終わりに至る前記ウサギ軽鎖抗体アミノ酸配列を用いて、ヒト軽鎖抗体配列を含有するライブラリーに対する相同性検索を実行して、他のヒト生殖細胞系抗体軽鎖配列に比べてそれに対する実質的な配列相同性を示すヒト軽鎖抗体配列を同定する工程；
（ｉｉｉ）ウサギとヒトの両方の軽鎖配列において、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２の領域に対応する配置とその特異的残基（specific residues）を同定して、ウサギのこれらの離散領域と選択されるヒト抗体軽鎖を並置する工程；
（ｉｖ）選択される相同的なヒト軽鎖配列のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域が、ウサギ軽鎖配列のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域に含まれる対応する選択性決定残基によって置換されているＤＮＡ又はアミノ酸配列を構築する工程；
（ｖ）工程（ｉｖ）によって得られるＤＮＡ又はアミノ酸配列へ、ウサギＣＤＲ３軽鎖抗体配列の対応するアミノ酸残基をコードするＤＮＡ配列又はそれを含有するポリペプチドをさらに付ける工程；
（ｖｉ）ウサギ軽鎖に含まれるＦＲ４に相同的であり、好ましくは、多くても２〜４のアミノ酸残基だけそれから異なるヒト軽鎖フレームワーク４領域（ＦＲ４）をさらに選択して、前記ヒトＦＲ４をコードするＤＮＡ配列又は前記ヒトＦＲ４の対応するアミノ酸残基を、工程（ｖ）の後で得られるＤＮＡ又はアミノ酸配列の上へ付ける工程；並びに
（ｖｉｉ）工程（ｉ）〜（ｖｉ）より得られるヒト化ウサギ軽鎖配列をコードするか又は含有するＤＮＡ又はアミノ酸配列を合成する工程を含んでなる、ヒト化軽鎖抗体配列を産生するための方法。
【請求項１３】
ａ）ＦＲ１を始めるアミノ酸がウサギ軽鎖シグナル配列の後で最初のアミノ酸である、
ｂ）シグナル配列が約２０〜２２のアミノ酸残基を含む、
ｃ）ヒト軽鎖配列がヒト生殖細胞系可変軽鎖配列を含有するライブラリーより同定される、
ｄ）ウサギ配列中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ１、及びＣＤＲ２領域が、ウサギＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ１、及びＣＤＲ２領域を対応するヒト軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ１、及びＣＤＲ２領域と並置することによって同定される、
ｅ）ウサギＣＤＲ３領域が９〜１５のアミノ酸残基を含む、
ｆ）ウサギ軽鎖ＦＲ４領域が１１のアミノ酸残基を含む、
ｇ）ＦＲ３がＹＹＣで終わる、
ｈ）ウサギ軽鎖中のＦＲ４がＦＧＧＧＧで始まる（配列番号１０６８）、
ｉ）前記ウサギＦＲ４領域がＶＶＫＲアミノ酸配列で始まる、
ｊ）選択されるヒトＦＲ４軽鎖配列がＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲを含む（配列番号１０７０）、または
ｋ）得られるヒト化ウサギ軽鎖を所望の抗原へ結合するヒト化抗体又はヒト化抗体断片の製造に使用する、
請求項１２の方法。
【請求項１４】
請求項１２または請求項１３の方法に従って産生される、ヒト化ウサギ軽鎖可変アミノ酸配列又はそれをコードするＤＮＡ。
【請求項１５】
微生物抗原、ヒト抗原、ウイルス抗原、及びアレルゲンより選択される抗原に特異的である、請求項１４のヒト化ウサギ軽鎖可変アミノ酸配列又はＤＮＡ配列。
【請求項１６】
ヒト抗原が、ヒトの自己抗原、サイトカイン、受容体タンパク質、酵素、ホルモン、受容体リガンド、ステロイド、増殖因子、及び癌遺伝子より選択される、請求項１５のヒト化ウサギ軽鎖可変アミノ酸又はＤＮＡ配列。
【請求項１７】
請求項１２または請求項１３の方法に従って産生されるヒト化ウサギ軽鎖を含有する抗体又は抗体断片。
【請求項１８】
請求項１２または請求項１３の方法に従って産生される、エフェクター部分へ付くヒト化ウサギ軽鎖又はそれを含有する抗体。
【請求項１９】
エフェクター部分が、薬物、毒素、酵素、放射性核種、フルオロフォア、サイトカイン、アフィニティー標識、及び転座型ポリペプチドより選択される、請求項１８のヒト化ウサギ軽鎖ポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１２または請求項１３の方法に従って産生される、サイトカイン、増殖因子、又は腫瘍特異的ポリペプチドへ特異的に結合するウサギ抗体から導かれる、ヒト化ウサギ軽鎖ポリペプチド又はそれを含有する抗体又はそれらをコードするＤＮＡ。
【請求項２１】
ＩＬ−６、ＴＮＦ、ＶＥＧＦ、ＩＬ−１２、ヘプシジン、又は肝細胞増殖因子へ特異的に結合するウサギ抗体から導かれる、請求項２０のヒト化ウサギ軽鎖ポリペプチド又は含有する抗体。
【請求項２２】
以下の工程：
（ｉ）所望の抗原へ特異的に結合するウサギ抗体からウサギ重鎖抗体配列を入手して、フレームワーク１（ＦＲ１）の始まりからフレームワーク３（ＦＲ３）の終わりを含む範囲のアミノ酸残基を同定する工程；
（ｉｉ）ＦＲ１の始まりからＦＲ３配列の終わりに至る前記ウサギ重鎖抗体アミノ酸配列を使用する相同性検索を（例えば、ヒト生殖細胞系抗体配列含有ライブラリーのＢＬＡＳＴ検索によって）実行して、それに対して相同的である、即ち、好ましくは、それに対してアミノ酸レベルで少なくとも８０％〜９０％の同一性を保有するヒト重鎖抗体配列を同定する工程；
（ｉｉｉ）ウサギとヒトの両方の重鎖配列において、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２の領域に対応する配置とその特異的残基を同定して、ウサギのこれらの離散領域を選択される相同的なヒト抗体重鎖の対応領域に対して並置する工程；
（ｉｖ）選択される相同的なヒト重鎖配列のＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域中の残基が、ウサギ重鎖配列の対応するＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域に含まれる選択性決定残基によって置換されているＤＮＡ又はアミノ酸配列を構築して、ヒト重鎖ＦＲ１領域の末端の１〜３のアミノ酸をウサギ重鎖ＦＲ１の対応する末端の１〜３のアミノ酸で置き換えてもよい；及び／又は、ヒト重鎖フレームワーク２領域の末端アミノ酸をウサギ重鎖フレームワーク２の対応する末端アミノ酸残基で置き換えてもよい；及び／又は、ウサギ重鎖ＣＤＲ２の末端から４番目のアミノ酸（典型的には、トリプトファン）を対応するヒトＣＤＲ２残基（典型的には、セリン）で置き換えてもよい工程；
（ｖ）工程（ｉｖ）によって得られるＤＮＡ又はアミノ酸配列へ、同じウサギ重鎖抗体配列に含まれるウサギ重鎖ＣＤＲ３の対応するアミノ酸残基をコードするＤＮＡ配列又はそれを有するポリペプチドをさらに付ける工程；
（ｖｉ）それに相同的である（好ましくは、ヒト化ウサギ抗体重鎖配列に含まれるＦＲ４より、多くても４つのアミノ酸残基だけ異なる）ヒト重鎖フレームワーク４領域（ＦＲ４）をさらに選択して、前記選択された相同的なヒトＦＲ４をコードするＤＮＡ配列又は前記ヒトＦＲ４の対応するアミノ酸残基を、工程（ｖ）の後で得られるＤＮＡ又はアミノ酸配列の上へ付ける工程；並びに
（ｖｉｉ）工程（ｉ）〜（ｖｉ）より得られるヒト化ウサギ重鎖配列をコードするか又は含有するＤＮＡ又はアミノ酸配列を合成する工程を含んでなる、ヒト化重鎖抗体配列をウサギ重鎖抗体配列より産生するための方法。
【請求項２３】
ａ）ＦＲ１を始めるアミノ酸がウサギ重鎖シグナル配列の後で最初のアミノ酸である、
ｂ）ＦＲ３の終わりがＦＲ１の第一残基の後の約９５〜１００番目のアミノ酸残基である、
ｃ）シグナル配列が１９以下のアミノ酸残基を含む、
ｄ）相同的なヒト重鎖配列が抗体成熟化に先立って得られるヒト生殖細胞系配列のＢＬＡＳＴ検索によって同定される、
ｅ）選択される相同的なヒト重鎖がウサギ重鎖の対応領域に対して少なくとも９０〜９５％の配列同一性を保有する、
ｆ）ウサギ重鎖配列中のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ１、及びＣＤＲ２領域がウサギＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ１、及びＣＤＲ２領域を対応するヒト重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ１、及びＣＤＲ２領域と並置することによって同定される、
ｇ）ヒトＦＲ１の最終の３つのアミノ酸残基を、ｓｅｒ−ｇｌｙが先行するウサギＦＲ１の対応する３つの残基で置き換える、
ｈ）ヒトＦＲ２の末端アミノ酸残基を、イソロイシン残基に先行される場合もあるグリシンを含むウサギＦＲ２の対応する末端アミノ酸残基で置き換える工程をさらに含む、
ｉ）ウサギＣＤＲ２の終わりより約４残基に位置するトリプトファン残基をセリン残基に変える工程をさらに含む、
ｊ）ウサギＣＤＲ３が５〜１９のアミノ酸残基を含む、
ｋ）ウサギＣＤＲ３に残基ＷＧ「Ｘ」Ｇ（配列番号１０７１）が続き、ここで「Ｘ」は、好ましくはＱ（配列番号１０７２）又はＰ（配列番号１０７３）である、
ｌ）ウサギＦＲ４が１１のアミノ酸残基を含む、または
ｍ）ウサギＦＲ４がＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む（配列番号１０７４）、
請求項２２の方法。
【請求項２４】
請求項２２または請求項２３の方法により産生される、微生物抗原、ヒト抗原、ウイルス抗原、及びアレルゲンより選択される抗原に特異的なウサギ抗体から導かれるヒト化ウサギ重鎖可変アミノ酸配列又はＤＮＡ配列。
【請求項２５】
ヒト抗原に特異的である、請求項２４のヒト化ウサギ重鎖可変アミノ酸配列又はＤＮＡ配列。
【請求項２６】
ヒト抗原が、ヒトの自己抗原、サイトカイン、受容体タンパク質、酵素、ホルモン、受容体リガンド、ステロイド、増殖因子、及び癌遺伝子より選択される、請求項２５のヒト化ウサギ重鎖可変アミノ酸配列又はＤＮＡ配列。
【請求項２７】
請求項２２または請求項２３の方法に従って産生されるヒト化ウサギ重鎖可変配列を含有する抗体又は抗体断片。
【請求項２８】
請求項２２または請求項２３の方法に従って産生される、エフェクター部分へ付くヒト化ウサギ重鎖。
【請求項２９】
エフェクター部分が、薬物、毒素、酵素、放射性核種、フルオロフォア、サイトカイン、アフィニティー標識、及び転座型ポリペプチドより選択される、請求項２８のヒト化ウサギ重鎖ポリペプチド。
【請求項３０】
請求項２２または請求項２３の方法に従って産生される、サイトカイン、増殖因子、又は腫瘍特異的ポリペプチドへ特異的に結合するウサギ抗体から導かれるヒト化ウサギ重鎖ポリペプチド又はそれをコードするＤＮＡ。
【請求項３１】
ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ−α、ＩＬ−１２、ヘプシジン、又は肝細胞増殖因子へ特異的に結合するウサギ抗体から導かれる、請求項３０のヒト化ウサギ重鎖ポリペプチド。
【請求項３２】
非グリコシル化（aglycosylated）されている、請求項２９のヒト化ウサギ重鎖ポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１２または請求項１３の方法に従って産生される少なくとも１つのヒト化ウサギ軽鎖と請求項２２または請求項２３の方法に従って産生される少なくとも１つのヒト化ウサギ重鎖を含んでなるヒト化ウサギ抗体。
【請求項３４】
ヒトの定常ドメインを含む、請求項３３のヒト化ウサギ抗体。
【請求項３５】
ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４より選択される、請求項３３のヒト化ウサギ抗体。
【請求項３６】
ヒト抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、病原体、寄生虫、酵母抗原、及び真菌抗原より選択される抗原へ結合する、請求項３３のヒト化ウサギ抗体。
【請求項３７】
請求項１から３および請求項１０から請求項１１のいずれか１項記載のヒト化抗体または抗体断片を含む、改善された免疫療法又は免疫診断のための医薬組成物。
【請求項３８】
ＩＬ−６又はＴＮＦに関連した疾患又は障害の症状を改善又は抑制するための請求項３７の医薬組成物。
【請求項３９】
ＩＬ−６又はＴＮＦ−αに関連した前記疾患又は障害が癌又は炎症性状態である、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４０】
抗体が抗ＩＬ−６抗体であり、ＩＬ−６関連の疲労、悪液質、又は関節炎を治療するか又はその予後を診断するために使用される、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４１】
ＩＬ−６に関連した前記疾患又は障害が、全身疲労、運動誘発性疲労、癌関連疲労、炎症性疾患関連疲労、慢性疲労症候群、癌関連悪液質、心臓関連悪液質、呼吸関連悪液質、腎臓関連悪液質、加齢関連悪液質、慢性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、全身型若年性特発性関節炎、乾癬、乾癬性関節症、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、リウマチ性多発性筋痛、巨細胞性動脈炎、自己免疫性脈管炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、シェーグレン症候群、成人発症型スティル病、慢性関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、骨関節炎、骨粗鬆症、骨ページェット病、骨関節炎、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前立腺癌、白血病、腎細胞癌、多中心型キャッスルマン病、卵巣癌、癌化学療法時の薬剤耐性、癌化学療法の毒性、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、肥満、糖尿病、喘息、多発性硬化症、アルツハイマー病、及び脳血管系疾患より選択され、かつ、ＴＮＦに関連した前記疾患又は障害が、全身疲労、運動誘発性疲労、癌関連疲労、炎症性疾患関連疲労、慢性疲労症候群、癌関連悪液質、心臓関連悪液質、呼吸関連悪液質、腎臓関連悪液質、加齢関連悪液質、慢性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、全身型若年性特発性関節炎、乾癬、乾癬性関節症、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、リウマチ性多発性筋痛、巨細胞性動脈炎、自己免疫性脈管炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、シェーグレン症候群、成人発症型スティル病、慢性関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、骨関節炎、骨粗鬆症、骨ページェット病、骨関節炎、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前立腺癌、白血病、腎細胞癌、多中心型キャッスルマン病、卵巣癌、癌化学療法時の薬剤耐性、癌化学療法の毒性、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、肥満、糖尿病、喘息、多発性硬化症、アルツハイマー病、及び脳血管系疾患より選択される、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４２】
ヒト化抗体又は抗体断片が、少なくとも１０〜２５ｍｇ／リットルの前記抗体を安定的に発現して培養基へ分泌する倍数体酵母培養物において発現される、請求項１から請求項３、請求項１０から請求項１１、請求項１７から請求項１８、請求項２０から請求項２１、請求項２７、および請求項３３から請求項３６のいずれか１項記載のヒト化抗体または抗体断片の作製方法であって：
（ｉ）プロモーター及びシグナル配列へ機能可能的に連結した前記ヒト化抗体又は断片をコードする１以上の異種ポリヌクレオチドを含有する少なくとも１つの発現ベクターを一倍体酵母細胞へ導入する工程；
（ｉｉ）前記第一及び／又は第二の一倍体酵母細胞より、接合又はスフェロプラスト融合によって、倍数体酵母を産生する工程；
（ｉｉｉ）前記ヒト化抗体又は断片を安定的に発現する倍数体酵母細胞を選択する工程；及び
（ｉｖ）少なくとも１０〜２５ｍｇ／リットルの前記ヒト化抗体又は断片を培養基へ安定的に発現する前記倍数体酵母細胞より、安定した倍数体酵母培養物を産生する工程を含んでなる、前記方法。
【請求項４３】
前記酵母が以下の属：アルキシオザイマ（Arxiozyma）；アスコボトリオザイマ（Ascobotryozyma）；シテロマイセス（Citeromyces）；デバリオマイセス（Debaryomyces）；デッケラ（Dekkera）；エレモセシウム（Eremothecium）；イサットヘンキア（Issatchenkia）；カザクスタニア（Kazachstania）；クルイベロマイセス（Kluyveromyces）；コダマエア（Kodamaea）；ロデロマイセス（Lodderomyces）；パチソレン（Pachysolen）；ピキア（Pichia）；サッカロマイセス（Saccharomyces）；サツニスポラ（Saturnispora）；テトラピシスポラ（Tetrapisispora）；トルラスポラ（Torulaspora）；ウィリオプシス（Williopsis）；及びザイゴサッカロマイセス（Zygosaccharomyces）より選択される、請求項４２の方法。
【請求項４４】
前記酵母属がピキアである、請求項４３の方法。
【請求項４５】
ピキアの種が、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、ピキア・メタノリカ（Pichia metanolica）、及びハンセヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）（ピキア・アングスタ（Pichia angusta））より選択される、請求項４４の方法。
【請求項４６】
請求項１２〜１３および請求項２２〜２３のいずれか１項記載の方法によって産生されるヒト化抗体ポリペプチドを含有するヒト化抗体又は抗体断片であって、５ｘ１０−７Ｍ−１、１０−７Ｍ−１、５ｘ１０−８Ｍ−１、１０−８Ｍ−１、５ｘ１０−９Ｍ−１、１０−９Ｍ−１、５ｘ１０−１０Ｍ−１、１０−１０Ｍ−１、５ｘ１０−１１Ｍ−１、１０−１１Ｍ−１、５ｘ１０−１２Ｍ−１、１０−１２Ｍ−１、５ｘ１０−１３Ｍ−１、１０−１３Ｍ−１、又は５ｘ１０−１４Ｍ−１以下の解離定数（ＫＤ）で抗原へ結合する、前記ヒト化抗体又は断片。
【請求項４７】
ａ）５ｘ１０−１０Ｍ−１以下の解離定数（ＫＤ）で抗原へ結合する、
ｂ）１０−４Ｓ−１、５ｘ１０−５Ｓ−１、１０−５Ｓ−１、５ｘ１０−６Ｓ−１、１０−６Ｓ−１、５ｘ１０−７Ｓ−１、又は１０−７Ｓ−１以下の解離速度（Ｋｏｆｆ）で抗原へ結合する、
ｃ）親ウサギ抗体が１以上のウサギＢ細胞集団に由来する、または
ｄ）ＩＬ−６のＩＬ−６Ｒとの会合、又はＴＮＦとその受容体との会合を阻害する、
請求項４６のヒト化抗体。
【請求項４８】
ＩＬ−６Ｒが可溶性Ｌ−６Ｒ（ｓＩＬ−６Ｒ）であるか、またはＴＮＦ受容体（ＴＮＦＲ）が可溶性である、請求項４７のヒト化抗体。
【請求項４９】
請求項１から３、または１０〜１１、および請求項４６から４８のいずれか１項に記載のヒト化ウサギ抗体を発現するベクター。
【請求項５０】
９０
請求項４９のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項５１】
ピキア属に属する酵母細胞である、請求項５０の宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
[00082]  本明細書での「インターロイキン−６」又は（ＩＬ−６）という表現には、ＧｅｎＢａｎｋタンパク質受入番号：ＮＰ＿０００５９１として利用可能な以下の２１２のアミノ酸配列：ＭＮＳＦＳＴＳＡＦＧＰＶＡＦＳＬＧＬＬＬＶＬＰＡＡＦＰＡＰＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＬＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号１０７５）だけでなく、このＩＬ−６アミノ酸配列のあらゆるプレプロ、プロ、及び成熟形態、並びにこの配列の突然変異体と対立遺伝子変異体が含まれる変異体が含まれる。