【手続補正書】
【提出日】平成23年4月12日(2011.4.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリカン調製物を提供するステップと、
該グリカン調製物の第１の試料に第１のエキソグリコシダーゼ処置をほどこすステップと、
該グリカン調製物の第２の試料に、該第１のエキソグリコシダーゼ処置とは異なる第２のエキソグリコシダーゼ処置をほどこすステップと、
該第１および第２のエキソグリコシダーゼ処置での切断産物を特性決定するステップと、
該グリカン調製物のグリコシル化の特徴を少なくとも１つ判断できるように、該第１のエキソグリコシダーゼ処置の該切断産物の特性決定と第２のエキソグリコシダーゼ処置の該切断産物の特性決定とを比較するステップと、
を含み、
該第１のエキソグリコシダーゼ処置または第２のエキソグリコシダーゼ処置の一方は、該グリカン調製物が１種類ずつの該エキソグリコシダーゼに曝露される、少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼでの該グリカン調製物試料の逐次処理を含み、
該第１のエキソグリコシダーゼ処置または第２のエキソグリコシダーゼ処置の他方は、少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼでの該グリカン調製物試料の同時処理を含む、方法。
【請求項２】
前記比較するステップが、前記第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置の切断産物の特性決定と参照試料の切断産物とを比較することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、
（ａ）前記グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１種類のエキソグリコシダーゼで処理すること；
（ｂ）前記グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼで処理すること
のうちの少なくとも一方を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも１つの切断産物が、硫酸化グリカン、リン酸化グリカン、Ｎ−アセチルグルコサミンに結合したシアル酸、アセチル化グリカン、分岐フコシル化、ラクトサミン伸長、または３つのマンノースと２つのＮ−アセチルグルコサミン残基とを含む五糖コアを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記グリカン調製物を提供するステップが、
ａ）複数の糖タンパク質に結合されたＮ−グリカンを各々が少なくとも１つ含む複数の糖タンパク質を提供するステップと、
ｂ）少なくとも１つのＮ−グリカンを少なくとも１つの糖タンパク質から除去するステップと、
ｃ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップとを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記特性決定のステップが、クロマトグラフによる方法、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィ（ＵＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、アミドカラムクロマトグラフィ、質量分析（ＭＳ）、タンデムＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）、イオン移動度質量分析（ＩＭＳ−ＭＳ）、電子移動解離（ＥＴＤ−ＭＳ）、電気泳動法、細管式電気泳動（ＣＥ）、ＣＥ−ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に続いて特定のグリカン構造を認識する抗体を用いるウェスタンブロッティング、核磁気共鳴（ＮＭＲ）一次元ＮＭＲ（１Ｄ−ＮＭＲ）、二次元ＮＭＲ（２Ｄ−ＮＭＲ）、相関分光磁気角スピニングＮＭＲ（ＣＯＳＹ−ＮＭＲ）、全相関分光ＮＭＲ（ＴＯＣＳＹ−ＮＭＲ）、異種核一量子コヒーレンスＮＭＲ（ＨＳＱＣ−ＮＭＲ）、異種核多重量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ−ＮＭＲ）、回転系での核オーバーハウザー効果分光ＮＭＲ（ＲＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される手法を前記切断産物に適用することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
リン酸化、硫酸化、アセチル化、ラクトサミン伸長および分岐フコシル化からなる群から選択される、前記Ｎ−グリカン調製物における修飾の存在を評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
複数のタンパク質結合型Ｎ−グリカンを特性決定する方法であって、
ａ）複数の糖タンパク質に結合されたＮ−グリカンを各々が少なくとも１つ含む複数の糖タンパク質を提供するステップと、
ｂ）少なくとも２つのＮ−グリカンを少なくとも１つの糖タンパク質から除去するステップと、
ｃ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップと、
ｄ）該少なくとも１つの除去後のＮ−グリカンを少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼ酵素での逐次処理に供することで少なくとも１つの末端グリコシド結合を該少なくとも１つの除去後のＮ−グリカンの非還元末端から切断し、複数の切断産物を生成するステップ、および、該少なくとも１つの他の除去後のＮ−グリカンを少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼ酵素での同時処理に供することで少なくとも１つの末端グリコシド結合を該少なくとも１つの他の除去後のＮ−グリカンの非還元末端から切断し、複数の切断産物を生成するステップと、
ｅ）これらの切断産物を特性決定するステップと、
ｆ）任意に、該切断産物の特性決定を参照試料と比較するステップ
を含み、
該複数のうちの少なくとも１つのメンバーのグリコシル化パターンが、該複数のうちの少なくとも１つの他のメンバーのグリコシル化パターンとは異なる、方法。
【請求項９】
糖タンパク質のバッチ同士を比較する方法であって、
該糖タンパク質の第１のバッチから第１のグリカン調製物を提供するステップと、
該糖タンパク質の第２のバッチから第２のグリカン調製物を提供するステップと、
第１および第２のグリカン調製物の各々に、第１のエキソグリコシダーゼ処置と、該第１のエキソグリコシダーゼ処置とは異なる第２のエキソグリコシダーゼ処置とをほどこして、該グリカン調製物におけるＮ−結合型グリカンの非還元末端から単糖を特異的に切断するステップと、
２つの該バッチの一貫性を評価できるように、該第１のグリカン調製物から得られた切断産物と該第２の調製物から得られた切断産物とを比較するステップと、
を含み、
該第１のエキソグリコシダーゼ処置または第２のエキソグリコシダーゼ処置の一方は、該グリカン調製物が１種類ずつの該エキソグリコシダーゼに曝露される、少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼでの該グリカン調製物試料の逐次処理を含み、
該第１のエキソグリコシダーゼ処置または第２のエキソグリコシダーゼ処置の他方は、少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼでの該グリカン調製物試料の同時処理を含む、
方法。
【請求項１０】
前記エキソグリコシダーゼ処置が、前記第１および第２のグリカン調製物を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つの切断産物が、
３つのマンノースと２つのＮ−アセチルグルコサミン残基とを含む五糖コアと、
分岐フコシル化と、
ラクトサミン伸長と、
硫酸化グリカンと、
リン酸化グリカンと、
Ｎ−アセチルグルコサミンに結合したシアル酸と、
アセチル化グリカンと、
からなる群から選択される糖型を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記グリカン調製物を提供するステップが、
ａ）少なくとも１つのＮ−グリカンを前記第１または第２のバッチの少なくとも１つの糖タンパク質から除去するステップと、
ｂ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップとを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
糖タンパク質の産生を監視するための方法であって、
糖タンパク質の産生時、少なくとも第１および第２のグリカン含有試料を産生系から除去するステップと、
該第１および第２のグリカン含有試料の各々に、第１のエキソグリコシダーゼ処置と、該第１のエキソグリコシダーゼ処置とは異なる第２のエキソグリコシダーゼ処置とをほどこし、該グリカン含有試料におけるＮ−結合型グリカンの非還元末端から単糖を特異的に切断するステップと、
差を判断して糖タンパク質産生の進行を監視できるように、該第１のグリカン含有試料から得られた切断産物と該第２のグリカン含有試料から得られた切断産物とを比較するステップと、を含み、
該第１のエキソグリコシダーゼ処置または第２のエキソグリコシダーゼ処置の一方は、該グリカン調製物が１種類ずつの該エキソグリコシダーゼに曝露される、少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼでの該グリカン調製物試料の逐次処理を含み、
該第１のエキソグリコシダーゼ処置または第２のエキソグリコシダーゼ処置の他方は、少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼでの該グリカン調製物試料の同時処理を含む、方法。
【請求項１４】
前記エキソグリコシダーゼ処置が約１０％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記エキソグリコシダーゼ処置がほぼ１００％完了する前に少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記グリカンが１００％切断される前に少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、請求項１３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
特定の実施形態では、目的の治療用糖タンパク質が、市販の糖タンパク質（疾患、症状または機能障害の治療に用いられる、抗体、ポリペプチド、インターロイキン、受容体類似体、受容体アンタゴニストなどおよび／またはその特徴的な部分など）である。本開示による方法を使用して、このような市販の糖タンパク質のグリコシル化パターンを判断することが可能である。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
グリカン調製物を提供するステップと、
グリカン調製物の第１の試料に第１のエキソグリコシダーゼ処置をほどこすステップと、
グリカン調製物の第２の試料に、第１のエキソグリコシダーゼ処置とは異なる第２のエキソグリコシダーゼ処置をほどこすステップと、
第１および第２のエキソグリコシダーゼ処置での切断産物を特性決定するステップと、
グリカン調製物のグリコシル化の特徴を少なくとも１つ判断できるように、第１のエキソグリコシダーゼ処置の切断産物の特性決定と第２のエキソグリコシダーゼ処置の特性決定切断産物とを比較するステップと、を含み、
第１および第２のエキソグリコシダーゼ処置が、
処理なし；
逐次処理；および
同時処理
からなる群から選択される、方法。
（項目２）
比較するステップが、第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置の切断産物の特性決定と参照試料の切断産物とを比較することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量で提供される、項目４に記載の方法。
（項目６）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量では提供されない、項目４に記載の方法。
（項目７）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される２種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される３種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される４種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される５種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される６種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも７種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで逐次処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料を少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで同時処理することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
第１または第２のエキソグリコシダーゼ処置が、グリカン調製物試料をエキソグリコシダーゼで処理しないことを含む、項目１に記載の方法。
（項目１６）
少なくとも１つの切断産物が３つのマンノースと２つのＮ−アセチルグルコサミン残基とを含む五糖コアを含む、項目１に記載の方法。
（項目１７）
少なくとも１つの切断産物が分岐フコシル化を含む、項目１に記載の方法。
（項目１８）
少なくとも１つの切断産物がラクトサミン伸長を含む、項目１に記載の方法。
（項目１９）
少なくとも１つの切断産物が、硫酸化グリカン、リン酸化グリカン、Ｎ−アセチルグルコサミンに結合したシアル酸またはアセチル化グリカンを含む、項目１に記載の方法。
（項目２０）
グリカン調製物を提供するステップが、
ａ）複数の糖タンパク質に結合されたＮ−グリカンを各々が少なくとも１つ含む複数の糖タンパク質を提供するステップと、
ｂ）少なくとも１つのＮ−グリカンを少なくとも１つの糖タンパク質から除去するステップと、
ｃ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップとを含む、項目１に記載の方法。
（項目２１）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質をグリカナーゼに曝露することを含む、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
グリカナーゼがＮ−グリカナーゼＦを含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質を化学的に切断することを含む、項目２０に記載の方法。
（項目２４）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質をヒドラジンに曝露することを含む、項目２０に記載の方法。
（項目２５）
単離するステップの前に、除去後のＮ−グリカンを蛍光標識で標識するステップをさらに含む、項目２０に記載の方法。
（項目２６）
単離するステップの後に、除去後のＮ−グリカンを蛍光標識で標識するステップをさらに含む、項目２０に記載の方法。
（項目２７）
蛍光標識が、２−アミノベンズアミド、２−アミノプリンまたはアニリンを含む、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
単離するステップの前に、除去後のＮ−グリカンを放射性標識および同位体標識作用剤のうちの一方または両方で標識するステップをさらに含む、項目２０に記載の方法。
（項目２９）
単離するステップの後に、除去後のＮ−グリカンを放射性標識で標識するステップをさらに含む、項目２０に記載の方法。
（項目３０）
特性決定のステップが、クロマトグラフによる方法、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィ（ＵＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、アミドカラムクロマトグラフィ、質量分析（ＭＳ）、タンデムＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）、イオン移動度質量分析（ＩＭＳ−ＭＳ）、電子移動解離（ＥＴＤ−ＭＳ）、電気泳動法、細管式電気泳動（ＣＥ）、ＣＥ−ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に続いて特定のグリカン構造を認識する抗体を用いるウェスタンブロッティング、核磁気共鳴（ＮＭＲ）一次元ＮＭＲ（１Ｄ−ＮＭＲ）、二次元ＮＭＲ（２Ｄ−ＮＭＲ）、相関分光磁気角スピニングＮＭＲ（ＣＯＳＹ−ＮＭＲ）、全相関分光ＮＭＲ（ＴＯＣＳＹ−ＮＭＲ）、異種核一量子コヒーレンスＮＭＲ（ＨＳＱＣ−ＮＭＲ）、異種核多重量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ−ＮＭＲ）、回転系での核オーバーハウザー効果分光ＮＭＲ（ＲＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される手法を切断産物に適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３１）
特性決定するステップが、切断産物に質量分析（ＭＳ）を適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３２）
特性決定するステップが、切断産物にタンデムＭＳを適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３３）
特性決定するステップが、切断産物にＭＡＬＤＩ−ＭＳを適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３４）
特性決定するステップが、切断産物に核磁気共鳴（ＮＭＲ）を適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３５）
特性決定するステップが、切断産物にクロマトグラフによる方法を適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３６）
特性決定するステップが、切断産物に細管式電気泳動（ＣＥ）を適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３７）
特性決定するステップが、切断産物にＣＥ−ＭＳを適用することを含む、項目１に記載の方法。
（項目３８）
Ｎ−グリカン調製物における異常な修飾の存在を評価することをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３９）
異常な修飾が、リン酸化、硫酸化、アセチル化、ラクトサミン伸長および分岐フコシル化からなる群から選択される、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
複数のタンパク質結合型Ｎ−グリカンを特性決定する方法であって、
ａ）複数の糖タンパク質に結合されたＮ−グリカンを各々が少なくとも１つ含む複数の糖タンパク質を提供するステップと、
ｂ）少なくとも１つのＮ−グリカンを少なくとも１つの糖タンパク質から除去するステップと、
ｃ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップと、
ｄ）少なくとも１つの除去後のＮ−グリカンを少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼ酵素に曝露することで少なくとも１つの末端グリコシド結合を少なくとも１つの除去後のＮ−グリカンの非還元末端から切断し、複数の切断産物を生成するステップと、
ｅ）これらの切断産物を特性決定するステップとを含み、
複数の少なくとも１つのメンバーのグリコシル化パターンが、複数の少なくとも１つの他のメンバーのグリコシル化パターンとは異なる、方法。
（項目４１）
切断産物の特性決定を参照試料と比較するステップをさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼ酵素が、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
切断するステップが、単離されたＮ−グリカンを、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼ酵素に曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目４４）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量で提供される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量では提供されない、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
切断するステップが、単離されたＮ−グリカンを、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される２種類のエキソグリコシダーゼに曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目４７）
切断するステップが、単離されたＮ−グリカンを、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される３種類のエキソグリコシダーゼに曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目４８）
切断するステップが、単離されたＮ−グリカンを、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される４種類のエキソグリコシダーゼに曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目４９）
切断するステップが、単離されたＮ−グリカンを、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される５種類のエキソグリコシダーゼに曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５０）
切断するステップが、少なくとも１つの除去後のＮ−グリカンを、少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼに逐次的に曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５１）
切断するステップが、少なくとも１つの除去後のＮ−グリカンを、少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼに同時に曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５２）
少なくとも１つの切断産物が３つのマンノースと２つのＮ−アセチルグルコサミン残基とを含む五糖コアを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５３）
少なくとも１つの切断産物が分岐フコシル化を含む、項目４０に記載の方法。
（項目５４）
少なくとも１つの切断産物がラクトサミン伸長を含む、項目４０に記載の方法。
（項目５５）
少なくとも１つの切断産物が、硫酸化グリカン、リン酸化グリカン、Ｎ−アセチルグルコサミンに結合したシアル酸またはアセチル化グリカンを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５６）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質をグリカナーゼに曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５７）
グリカナーゼがＮ−グリカナーゼＦを含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質を化学的に切断することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目５９）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質をヒドラジンに曝露することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目６０）
単離するステップの前に、除去後のＮ−グリカンを蛍光標識で標識するステップをさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目６１）
単離するステップの後に、除去後のＮ−グリカンを蛍光標識で標識するステップをさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目６２）
蛍光標識が２−アミノベンズアミドを含む、項目６０または６１に記載の方法。
（項目６３）
単離するステップの前に、除去後のＮ−グリカンを放射性標識で標識するステップをさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目６４）
単離するステップの後に、除去後のＮ−グリカンを放射性標識で標識するステップをさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目６５）
特性決定するステップが、クロマトグラフによる方法、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィ（ＵＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、アミドカラムクロマトグラフィ、質量分析（ＭＳ）、タンデムＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）、イオン移動度質量分析（ＩＭＳ−ＭＳ）、電子移動解離（ＥＴＤ−ＭＳ）、電気泳動法、細管式電気泳動（ＣＥ）、ＣＥ−ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に続いて特定のグリカン構造を認識する抗体を用いるウェスタンブロッティング、核磁気共鳴（ＮＭＲ）一次元ＮＭＲ（１Ｄ−ＮＭＲ）、二次元ＮＭＲ（２Ｄ−ＮＭＲ）、相関分光磁気角スピニングＮＭＲ（ＣＯＳＹ−ＮＭＲ）、全相関分光ＮＭＲ（ＴＯＣＳＹ−ＮＭＲ）、異種核一量子コヒーレンスＮＭＲ（ＨＳＱＣ−ＮＭＲ）、異種核多重量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ−ＮＭＲ）、回転系での核オーバーハウザー効果分光ＮＭＲ（ＲＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される手法を切断産物に適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目６６）
特性決定するステップが、切断産物に質量分析（ＭＳ）を適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目６７）
特性決定するステップが、切断産物にタンデムＭＳを適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目６８）
特性決定するステップが、切断産物にＭＡＬＤＩ−ＭＳを適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目６９）
特性決定するステップが、切断産物に核磁気共鳴（ＮＭＲ）を適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目７０）
特性決定するステップが、切断産物にクロマトグラフによる方法を適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目７１）
特性決定するステップが、切断産物に細管式電気泳動（ＣＥ）を適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目７２）
特性決定するステップが、切断産物にＣＥ−ＭＳを適用することを含む、項目４０に記載の方法。
（項目７３）
複数のエキソグリコシダーゼの逐次投与を含み、グリカン調製物のグリカンを切断するエキソグリコシダーゼ処置を、グリカン調製物にほどこすステップと、
エキソグリコシダーゼ処置の際に、グリカン調製物から少なくとも第１の試料を取得するステップと、
少なくとも１つの取得した試料における切断されたグリカンを分析するステップと、を含む、方法。
（項目７４）
取得するステップが、時間的に間隔をあけて、グリカン調製物から複数の試料を除去することを含み、
分析するステップが、除去された試料のうちの１つ以上において切断されたグリカンを特性決定することを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
分析するステップが、少なくとも１つの除去された試料における切断されたグリカンと少なくとも１つの他の除去された試料における切断されたグリカンとを比較することを含む、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
分析するステップが、少なくとも１つの除去された試料における切断されたグリカンと参照試料における切断されたグリカンとを比較することを含む、項目７４に記載の方法。
（項目７７）
試料を一定間隔で除去する、項目７４に記載の方法。
（項目７８）
試料を不規則な間隔で除去する、項目７４に記載の方法。
（項目７９）
エキソグリコシダーゼ処置が約１０％完了したら試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８０）
エキソグリコシダーゼ処置が約２５％完了したら試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８１）
エキソグリコシダーゼ処置が約５０％完了したら試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８２）
エキソグリコシダーゼ処置が約７５％完了したら試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８３）
エキソグリコシダーゼ処置が約９０％完了したら試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８４）
エキソグリコシダーゼ処置がほぼ１００％完了したら試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８５）
エキソグリコシダーゼ処置が１００％完了する前に試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８６）
グリカンが１００％切断される前に試料を除去する、項目７４に記載の方法。
（項目８７）
エキソグリコシダーゼ処理が、少なくとも第１および第２のエキソグリコシダーゼの逐次投与を含み、
取得するステップが、
第１のエキソグリコシダーゼの投与後であるが第２のエキソグリコシダーゼの投与前に、少なくとも第１の試料を除去するステップと、
第２のエキソグリコシダーゼの投与後に少なくとも第２の試料を除去するステップとを含む、項目７３に記載の方法。
（項目８８）
糖タンパク質のバッチ同士を比較する方法であって、
糖タンパク質の第１のバッチから第１のグリカン調製物を提供するステップと、
糖タンパク質の第２のバッチから第２のグリカン調製物を提供するステップと、
第１および第２のグリカン調製物に、それぞれエキソグリコシダーゼ処置をほどこして、グリカン調製物におけるＮ−結合型グリカンの非還元末端から単糖を特異的に切断するステップと、
２つのバッチの一貫性を評価できるように、第１のグリカン調製物から得られた切断産物と第２の調製物から得られた切断産物とを比較するステップと、を含む、方法。
（項目８９）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９１）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量で提供される、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量では提供されない、項目９０に記載の方法。
（項目９３）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される２種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９４）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される３種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９５）
エキソグリコシダーゼ処置が、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される４種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９６）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される５種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９７）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで逐次処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９８）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン調製物を少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで同時処理することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目９９）
少なくとも１つの切断産物が、
３つのマンノースと２つのＮ−アセチルグルコサミン残基とを含む五糖コアと、
分岐フコシル化と、
ラクトサミン伸長と、
硫酸化グリカンと、
リン酸化グリカンと、
Ｎ−アセチルグルコサミンに結合したシアル酸と、
アセチル化グリカンと、
からなる群から選択される糖型を含む、項目８８に記載の方法。
（項目１００）
グリカン調製物を提供するステップが、
ａ）少なくとも１つのＮ−グリカンを第１または第２のバッチの少なくとも１つの糖タンパク質から除去するステップと、
ｂ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップとを含む、項目８８に記載の方法。
（項目１０１）
除去するステップが、糖タンパク質のバッチをグリカナーゼに曝露するか、あるいは化学的に切断することを含む、項目１００に記載の方法。
（項目１０２）
単離するステップの前または後に、除去後のＮ−グリカンを蛍光標識で標識するステップをさらに含む、項目１００に記載の方法。
（項目１０３）
単離するステップの前または後に、除去後のＮ−グリカンを放射性標識で標識するステップをさらに含む、項目１００に記載の方法。
（項目１０４）
特性決定のステップが、クロマトグラフによる方法、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィ（ＵＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、アミドカラムクロマトグラフィ、質量分析（ＭＳ）、タンデムＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）、イオン移動度質量分析（ＩＭＳ−ＭＳ）、電子移動解離（ＥＴＤ−ＭＳ）、電気泳動法、細管式電気泳動（ＣＥ）、ＣＥ−ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に続いて特定のグリカン構造を認識する抗体を用いるウェスタンブロッティング、核磁気共鳴（ＮＭＲ）一次元ＮＭＲ（１Ｄ−ＮＭＲ）、二次元ＮＭＲ（２Ｄ−ＮＭＲ）、相関分光磁気角スピニングＮＭＲ（ＣＯＳＹ−ＮＭＲ）、全相関分光ＮＭＲ（ＴＯＣＳＹ−ＮＭＲ）、異種核一量子コヒーレンスＮＭＲ（ＨＳＱＣ−ＮＭＲ）、異種核多重量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ−ＮＭＲ）、回転系での核オーバーハウザー効果分光ＮＭＲ（ＲＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される手法を切断産物に適用することを含む、項目８８に記載の方法。
（項目１０５）
糖タンパク質の産生を監視するための方法であって、
糖タンパク質の産生時、少なくとも第１および第２のグリカン含有試料を産生系から除去するステップと、
第１および第２のグリカン含有試料の各々にエキソグリコシダーゼ処置をほどこし、グリカン含有試料におけるＮ−結合型グリカンの非還元末端から単糖を特異的に切断するステップと、
差を判断して糖タンパク質産生の進行を監視できるように、第１のグリカン含有試料から得られた切断産物と第２のグリカン含有試料から得られた切断産物とを比較するステップと、を含む、方法。
（項目１０６）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれら
の組み合わせからなる群から選択される１種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１０７）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１０８）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量で提供される、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
少なくとも２種類のエキソグリコシダーゼが、互いに実質的に等しい量では提供されない、項目１０７に記載の方法。
（項目１１０）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される２種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１１）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される３種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１２）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される４種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１３）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、シアリダーゼ、ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、フコシダーゼ、マンノシダーゼ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される５種類のエキソグリコシダーゼで処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１４）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで逐次処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１５）
エキソグリコシダーゼ処置が、第１および第２のグリカン含有試料を、少なくとも１種類のエキソグリコシダーゼで同時処理することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１６）
少なくとも１つの切断産物が、
３つのマンノースと２つのＮ−アセチルグルコサミン残基とを含む五糖コアと、
分岐フコシル化と、
ラクトサミン伸長と、
硫酸化グリカンと、
リン酸化グリカンと、
Ｎ−アセチルグルコサミンに結合したシアル酸と、
アセチル化グリカンと、
からなる群から選択される糖型を含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１７）
グリカン含有試料を除去するステップが、グリカン含有試料から少なくとも１つのグリカン調製物を取得することをさらに含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１１８）
少なくとも１つのグリカン調製物を取得することが、
ａ）少なくとも１つのＮ−グリカンを、グリカン含有試料に含まれる少なくとも１つの複合糖質から除去するステップと、
ｂ）任意に、除去後のＮ−グリカンを単離するステップとを含む、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
除去するステップが、１つまたは複数の糖タンパク質をグリカナーゼに曝露するか、あるいは化学的に切断することを含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２０）
単離するステップの前または後に、除去後のＮ−グリカンを蛍光標識で標識するステップをさらに含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２１）
単離するステップの前または後に、除去後のＮ−グリカンを放射性標識で標識するステップをさらに含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２２）
特性決定のステップが、クロマトグラフによる方法、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィ（ＵＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、アミドカラムクロマトグラフィ、質量分析（ＭＳ）、タンデムＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）、イオン移動度質量分析（ＩＭＳ−ＭＳ）、電子移動解離（ＥＴＤ−ＭＳ）、電気泳動法、細管式電気泳動（ＣＥ）、ＣＥ−ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に続いて特定のグリカン構造を認識する抗体を用いるウェスタンブロッティング、核磁気共鳴（ＮＭＲ）一次元ＮＭＲ（１Ｄ−ＮＭＲ）、二次元ＮＭＲ（２Ｄ−ＮＭＲ）、相関分光磁気角スピニングＮＭＲ（ＣＯＳＹ−ＮＭＲ）、全相関分光ＮＭＲ（ＴＯＣＳＹ−ＮＭＲ）、異種核一量子コヒーレンスＮＭＲ（ＨＳＱＣ−ＮＭＲ）、異種核多重量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ−ＮＭＲ）、回転系での核オーバーハウザー効果分光ＮＭＲ（ＲＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、核オーバーハウザー効果分光法（ＮＯＥＳＹ−ＮＭＲ）、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される手法を切断産物に適用することを含む、項目１０５に記載の方法。
（項目１２３）
グリカン含有試料を一定間隔で除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１２４）
グリカン含有試料を不規則な間隔で除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１２５）
エキソグリコシダーゼ処置が約１０％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１２６）
エキソグリコシダーゼ処置が約２５％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１２７）
エキソグリコシダーゼ処置が約５０％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１２８）
エキソグリコシダーゼ処置が約７５％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１２９）
エキソグリコシダーゼ処置が約９０％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１３０）
エキソグリコシダーゼ処置がほぼ１００％完了したら少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１３１）
エキソグリコシダーゼ処置が１００％完了する前に少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。
（項目１３２）
グリカンが１００％切断される前に少なくとも１つのグリカン含有試料を除去する、項目１０５に記載の方法。