【手続補正書】
【提出日】平成23年4月25日(2011.4.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のコンセンサス配列に相当する超好熱性ホスホトリエステラーゼ(PTE)に由来し、かつ以下の４つの変異：
- 配列番号１の98位のチロシンＹの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の100位のチロシンＹの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の224位のアルギニンＲの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の259位のシステインＣの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換
の少なくとも１つを含む、ラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ(PTE)であって、それが由来する非変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ(PTE)のものよりも大きい活性を有するラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性PTE。
【請求項２】
配列番号３の配列に相当するスルフォロバス・ソルファタリカスの超好熱性PTE、又は配列番号５の配列に相当するスルフォロバス・アシドカルダリウスの超好熱性PTEに由来する、請求項１に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項３】
以下の４つの変異：
- 配列番号１の98位のチロシンＹの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の100位のチロシンＹの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の224位のアルギニンＲの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の259位のシステインＣの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換
を少なくとも含む、請求項１又は２に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項４】
以下の変異：
- 配列番号１の28位のバリンＶの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の68位のプロリンＰの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の69位のスレオニンＴの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の73位のロイシンＬの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の142位のアスパラギン酸Ｄの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の226位のグリシンＧの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の227位のロイシンＬの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の230位のフェニルアラニンＦの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の264位のトリプトファンＷの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の279位のトリプトファンＷの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換
の少なくとも１つもまた含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項５】
以下の５つの変異：
- 配列番号１の28位のバリンＶの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の73位のロイシンＬの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の142位のアスパラギン酸Ｄの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の226位のグリシンＧの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の227位のロイシンＬの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換
を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項６】
以下の５つの変異：
- 配列番号１の68位のプロリンＰの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の69位のスレオニンＴの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の230位のフェニルアラニンＦの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の264位のトリプトファンＷの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換、
- 配列番号１の279位のトリプトファンＷの任意の他の天然又は非天然アミノ酸による置換
を含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項７】
以下の４つの変異：
- 98位のチロシンＹのトリプトファンＷによる置換、
- 100位のチロシンＹのフェニルアラニンＦによる置換、
- 224位のアルギニンＲのヒスチジンＨによる置換、
- 259位のシステインＣのロイシンＬによる置換
の少なくとも１つと、もし適切であれば、以下の変異：
- 28位のバリンＶのアラニンＡによる置換、
- 68位のプロリンＰのバリンＶによる置換、
- 69位のスレオニンＴのセリンＳによる置換、
- 73位のロイシンＬのイソロイシンＩによる置換、
- 142位のアスパラギン酸ＤのスレオニンＴによる置換、
- 226位のグリシンＧのプロリンＰによる置換、
- 227位のロイシンＬのヒスチジンＨによる置換、
- 230位のフェニルアラニンＦのセリンＳによる置換、
- 264位のトリプトファンＷのアラニンＡによる置換、
- 279位のトリプトファンＷのイソロイシンＩによる置換
の少なくとも１つとを含むことを特徴とする、配列番号１のコンセンサス配列に相当する超好熱性PTEに由来する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項８】
以下の配列：配列番号７、配列番号９、配列番号11、配列番号13、配列番号15及び配列番号17に相当することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項９】
配列番号３中の以下のアミノ酸対：
2R/314S、14K/12E、26R/75D、26R/42E、33R/42E、33R/45E、55R/52E、55R/285E、74R/121D、81K/42E、81K/43D、84K/80E、109R/113E、123K/162E、147K/148D、151K/148D、154R/150E、154R/187E、154R/188E、161K/188E、183R/150E、183R/187E、183R/180E、210K/245D、215K/214D、223R/256D、223R/202D、234K/204D、235R/202D、241R/245D、245D/244K、250K/249D、277R/286D、292K/298E、310K/307E
のアミノ酸の少なくとも一方の、他の天然又は非天然アミノ酸による置換に相当する少なくとも１つの変異を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項１０】
ラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼの活性化温度が、塩橋に含まれるアミノ酸が改変されていないラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼの活性化温度と比較して低減されるように、塩橋に含まれるアミノ酸の少なくとも１つが置換又は欠失により改変されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼをコードするヌクレオチド配列。
【請求項１２】
請求項１１に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼをコードするヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項１３】
請求項１２に記載のベクターを用いて形質転換された宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼと結合したか、又は請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼが表面にグラフトされている宿主細胞。
【請求項１５】
病原体に対して耐性がある、請求項１２で定義されるベクターを用いて形質転換されたトランスジェニック非ヒト生物。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ、又は請求項１３若しくは１４に記載の宿主細胞の、有機リン化合物若しくは細菌で汚染された物体、皮膚又は粘膜の表面の除染に関連するか、或いは
外部の汚染又は有機リン化合物の摂取若しくは吸入による内部の中毒の予防又は治療に関連して用いることができる医薬品の製造に関連するか、或いは
細菌感染の予防若しくは治療に関連して用いることができる医薬品の製造に関連するか、或いは
有機リン化合物で汚染された水の汚染管理に関連するか、或いは
神経毒性剤のストックの分解に関連するバイオスカベンジャーとしての使用。
【請求項１７】
液体又は固体の形態の、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼを含浸させた物体。
【請求項１８】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼ、又は請求項１６に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼを含浸させた物体を含むことを特徴とする、有機リン化合物で汚染された物体、皮膚又は粘膜の表面を除染するため、又は有機リン化合物で汚染された水の汚染管理のためのキット。
【請求項１９】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼを含む有機リン化合物のスカベンジャー。
【請求項２０】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼが内部にグラフトされた、外部除染用のカートリッジ。
【請求項２１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のラクトナーゼ活性を有する変異超好熱性ホスホトリエステラーゼを、医薬的に許容されるビヒクルと組み合わせて含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２２】
注入可能な経路により投与できるか、又は局所経路により投与できる形態にあることを特徴とする、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１７に記載の含浸させた物体、請求項２０に記載の外部の除染のためのカートリッジの、表面細菌感染の除染のための消毒剤としての使用。
【請求項２４】
細菌感染の治療用の請求項２１又は２２に記載の医薬組成物。