【手続補正書】
【提出日】平成23年4月22日(2011.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
Ｂ−ＣＬＬ細胞は、正常なＢ細胞プールを犠牲にして蓄積する。他方で、総Ｔ細胞は、通常、増加される。骨髄Ｔリンパ球は、サルコイドーシス及び関節リウマチなどの自己免疫疾患において見られるように、主にＣＤ４＋細胞である。末梢血中には、しばしばＴｈ２優位サイトカイン表現型が存在する。ＴＣＲレパートリーの異常もまた報告された。報告は、Ｔリンパ球及び間質細胞が、Ｂ−ＣＬＬ細胞の寿命を永続させることができる環境を支えることにおいて重要な役割を有し得ることを示している。悪性細胞及びそれらのＴ細胞環境は両方とも、種々の表面分子及びそれらの受容体：ＣＤ５並びにそのリガンドＣＤ７２、ＣＤ２７及びＣＤ７０を発現する。これらの知見は、直接的に又は間接的に（サイトカイン）細胞自己保存を生じさせ得る相互作用の種々の可能性を開く。このような長い生存は、次に、遺伝子突然変異及び遺伝子的不安定性の蓄積についての機会を増加させ、このことは、細胞周期チェックポイントの調節不全、及び細胞毒性治療に対する耐性による、疾患の進行に好都合である（非特許文献１０）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
Ｂ−ＣＬＬ細胞とそれらの環境との共生的相互作用は、ほぼ確実に、サイトカインの分泌によって仲介され、接着分子によって調節される。Ｂ−ＣＬＬにおけるサイトカイン関与の研究によって、この白血病における増殖及び長寿命のメディエーターとしての種々のサイトカインを支持又は反証するデータの実体が作製された。サイトカイン産生研究によって、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ７、ＴＮＦ−β、及びＴＮＦ−αについての逆転写ポリメラーゼ連鎖反応シグナルが実証された（非特許文献１１）。これらの知見は、ＩＬ４、ＩＬ３及びＩＬ６についての陰性結果を示した他の研究によって否定された（非特許文献１２）。対照的に、ＴＧＦ−β、及びＩＬ１０分泌が正常なＢリンパ球中において示された。これらの細胞について構成的であると報告された他のサイトカイン産生はない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【図１】誘発皮下ＲＭＡリンパ腫を有するマウスについて、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、配列番号６の物質１５０μｇの皮下投与後の時間に対する腫瘍体積（ｍｍ3）として測定した腫瘍増殖を示すグラフである。
【図２】図１と同様のグラフであり、ここで、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、皮下的に（５０μｇボーラス）及び鼻腔内（５０μｇ）に与えられた、配列番号６の物質との比較を示す。
【図３】誘発皮下ＲＭＡリンパ腫を有するマウスについて、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、配列番号７の物質５０μｇの皮下投与後の時間に対する腫瘍体積（ｍｍ3）として測定した腫瘍増殖を示すグラフである。
【図４】誘発皮下ＲＭＡリンパ腫を有するマウスについて、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、配列番号１の物質５０μｇの皮下投与後の時間に対する腫瘍体積（ｍｍ3）として測定した腫瘍増殖を示すグラフである。
【図５】誘発皮下ＲＭＡリンパ腫を有するマウスについて、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、配列番号２の物質５０μｇの皮下投与後の時間に対する腫瘍体積（ｍｍ3）として測定した腫瘍増殖を示すグラフである。
【図６】誘発皮下ＲＭＡリンパ腫を有するマウスについて、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、配列番号３の物質５０μｇの皮下投与後の時間に対する腫瘍体積（ｍｍ3）として測定した腫瘍増殖を示すグラフである。
【図７】誘発皮下ＲＭＡリンパ腫を有するマウスについて、コントロール（ＰＢＳ）と比較しての、配列番号４の物質５０μｇの皮下投与後の時間に対する腫瘍体積（ｍｍ3）として測定した腫瘍増殖を示すグラフである。
【図８】配列番号１〜７の化合物を投与後の、インビトロでのヒト結腸がん細胞株ＨＣＴ１１６に対する増殖減少効果を示す棒グラフであり、ここで、「＋」及び「−」は、それぞれ、ポジティブ及びネガティブコントロールを意味する。
【図９】配列番号１〜７の化合物を投与後の、インビトロでのヒト結腸がん細胞株ＨＣＴ１１６におけるアポトーシス誘導を示す棒グラフであり、ここで、「＋」及び「−」は、それぞれ、ポジティブ及びネガティブコントロールを意味する。
【図１０ａ】配列番号１〜７に従う化合物の投与後の、インビトロでのヒトＢ細胞リンパ腫モデルにおけるＢ細胞増殖マーカーであるＣＤ２０の発現に対する効果を示す棒グラフからなる。
【図１０ｂ】配列番号１〜７に従う化合物の投与後の、インビトロでのヒトＢ細胞リンパ腫モデルにおけるＢ細胞増殖マーカーであるＣＤ４０の発現に対する効果を示す棒グラフからなる。
【図１０ｃ】配列番号１〜７に従う化合物の投与後の、インビトロでのヒトＢ細胞リンパ腫モデルにおけるＢ細胞増殖マーカーであるＣＤ５４の発現に対する効果を示す棒グラフからなる。
【図１１ａ】配列番号１〜７に従う化合物の投与後の、インビトロでのヒトＢ細胞リンパ腫モデルにおけるＢ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９、及びＣＤ８０の発現に対する効果を示す棒グラフからなる。
【図１１ｂ】配列番号１〜７に従う化合物の投与後の、インビトロでのヒトＢ細胞リンパ腫モデルにおけるＢ細胞活性化マーカーであるＤ６９、及びＣＤ８６の発現に対する効果を示す棒グラフからなる。
【図１２】配列番号１〜７に従う化合物の投与後の、インビトロでのヒトＢ細胞リンパ腫モデルにおけるアポトーシスマーカーであるＣＤ９５の発現に対する効果を示す棒グラフである。
【図１３】実験化合物がＣＬＬ患者由来のＢ細胞上のＣＤ２０のアップレギュレーションをどの程度誘導するかを示すグラフである。試験濃度の１０μＭで、化合物ＩＤＸｓ００２２、００３８及び００７１は全て、有意な効果を示す。これらの化合物は、表１の配列番号３、８、及び９に対応する。
【図１４】同様に、ＣＬＬ患者由来のＢ細胞上のＣＤ８０のアップレギュレーションを示す。ここでまた、表１の配列番号３、８、及び９によって示される化合物は、未処置コントロールと比較した効果を示す。
【図１５】実験化合物がＣＬＬ患者由来のＰＢＭＣ中においてＮＫ細胞の活性化をどの程度誘導するかを示す。また、表１の配列番号３、８、及び９によって示される化合物は、未処理コントロールと比較した効果を示す。
【図１６】実験化合物がＣＬＬ患者由来のＰＢＭＣにおいてＴ細胞のアポトーシスを誘導することを示す。試験した化合物は効果を示し、配列番号３に対応する化合物ＩＤＸｓ００２２は、試験濃度の１０μＭで最も強力である。
【図１７】実験化合物がＣＬＬ患者由来のＰＢＭＣ中においてＢ細胞のアポトーシスも誘導することを示す。試験した化合物は全て効果を示し、配列番号３に対応する化合物ＩＤＸｓ００２２はまた、試験濃度の１０μＭで最も強力である。
【図１８】未処置と比較しての、配列番号３について２５μＭの濃度で３０分、２時間及び６時間曝露後の、健常なコントロール由来のＰＢＭＣにおけるサイトカインＩＬ−６のアップレギュレーションを示す。
【図１９】未処置と比較しての、配列番号３について２５μＭの濃度で３０分、２時間及び６時間曝露後の、健常なコントロール由来のＰＢＭＣにおけるサイトカインＩＬ−１０のアップレギュレーションを示す。
【図２０】未処置と比較しての、配列番号３について２５μＭの濃度で３０分、２時間及び６時間曝露後の、健常なコントロール由来のＰＢＭＣにおけるサイトカインＩＰ−１０のアップレギュレーションを示す。
【図２１】未処置及び７２時間曝露と比較しての、配列番号３について濃度０．１、１、１０及び２５μＭで３０分、２時間及び６時間曝露後の、健常なコントロール由来のＰＢＭＣにおけるＣＤ２０発現のアップレギュレーションを示す。
【図２２】未処置及び７２時間曝露と比較しての、配列番号３を使用して、種々の濃度で３０分、２時間及び６時間曝露後の、健常なコントロール由来のＰＢＭＣにおけるＮＫ細胞の活性化を示す。
【図２３】１０μＭで配列番号３を投与することによって達成された、３人の健常なコントロール由来のＰＢＭＣにおいて測定されたＣＤ２０の発現を示す。
【図２４】未処置及びポジティブコントロール、配列番号６と比較しての、１０μＭでの配列番号３によって達成された、ＮＫ細胞活性化（ＣＤ６９）の誘導を示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３、１、４、５、８及び９のいずれか１つに従う単離されたオリゴヌクレオチド配列。
【請求項２】
少なくとも１つのヌクレオチドがリン酸骨格修飾を有する、請求項１に記載の単離されたオリゴヌクレオチド配列。
【請求項３】
がんの治療用の薬剤を製造するための、配列番号３、１、４、５、６、８及び９のいずれか１つに従う単離されたオリゴヌクレオチド配列の使用。
【請求項４】
がんの治療において、アポトーシスを誘導するのに有効な用量で、粘膜へ局所的に又は皮下的に投与される薬剤を製造するための、配列番号６に従う単離されたオリゴヌクレオチド配列の使用。
【請求項５】
薬剤が、細胞表面マーカーであるＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ６９、ＣＤ８０、及びＣＤ８６の少なくとも１つの発現をアップレギュレートするのに有効な用量で、粘膜へ局所的に又は皮下的に投与される、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
薬剤が、アポトーシスを誘導するに有効な用量で、粘膜へ局所的に又は皮下的に投与される、請求項３に記載の使用。
【請求項７】
薬剤が、ＮＫ細胞を活性化するのに有効な用量で、粘膜へ局所的に又は皮下的に投与される、請求項３に記載の使用。
【請求項８】
用量が、がんの治療について体重１ｋｇ当たり約０.０１〜約１００μｇの範囲内にある、請求項３に記載の使用。
【請求項９】
抗がん治療が、オリゴヌクレオチドの投与の前、後、又は本質的に同時に行なわれる、請求項３に記載の使用。
【請求項１０】
抗がん治療が、放射線治療、ホルモン治療、外科的介入、化学療法、免疫学的療法、光線力学療法、レーザー療法、温熱療法、寒冷療法、血管新生阻害、又はそれらのいずれかの組み合わせの中から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
抗がん治療が、免疫学的療法であり、そして患者への抗体の投与を含む、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
配列が、配列番号３、１及び４から選択され、そしてがんの治療が、患者への抗体の投与の前に、細胞表面マーカーであるＣＤ２０及びＣＤ２３の少なくとも１つの発現をアップレギュレートすることを包含する、請求項３に記載の使用。
【請求項１３】
配列が、配列番号３、１及び４から選択され、そしてがんの治療が、ＮＫ細胞の活性化を包含する、請求項３に記載の使用。
【請求項１４】
配列が、配列番号３、１及び４から選択され、そしてがんの治療が、アポトーシスの誘導を包含する、請求項３に記載の使用。
【請求項１５】
配列が、配列番号６であり、そしてがんの治療が、アポトーシスの誘導及び患者への抗体の投与を包含する、請求項６に記載の使用。