【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年6月10日(2011.6.10)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
ADの症状は緩やかに発現し、また初期の症状は、軽度の健忘症に留まる可能性がある。この段階では患者は、最近の出来事、行動、家族や物の名前を忘れる場合があり、また算数の簡単な問題を解けなくなることがある。疾患の進行に伴い、症状は容易に目に付くようになり、AD患者または患者の家族が医療の助けを求めるほど重度となる。ADの中期の症状には、身繕いなどの簡単な課題の方法を忘れることなどが含まれ、また発話、理解、読字、または書字に問題が生じる。後期のAD患者は、不安を覚えるようになったり攻撃的になったりする場合があり、家を出て徘徊する恐れがあり、最終的には全面看護が必要となる可能性がある。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
ADの管理には、薬物を使用する治療、および薬物を使用しない治療がある。同疾患の基礎過程を変化させること（進行の逆転または遅延）を目的とした治療は、これまでほとんど成功していない。コリンエステラーゼ阻害剤（ChEI）などの神経細胞の化学メッセンジャー（神経伝達物質）の欠損（欠陥）、または機能不全を回復させる薬剤は症状を改善することがわかっている。薬物は、ADの精神症状に対処するためにも利用される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
新薬を開発する際に考慮すべき別の要素が、対象患者にとっての使用の容易さである。経口的な薬剤輸送（特に錠剤、カプセル剤、および軟ゲル）は患者の利便性に叶うことから、使用されている全投与形態の70%を占める。薬剤開発者の間では、患者が、注射や他の侵襲性の高い薬剤投与様式より経口輸送を好むということで意見が一致している。投与間隔の短い（すなわち1日1回、または持続的放出による投与を行う）製剤も好ましい。経口用剤型による抗生物質の投与が容易であることは、治療期間中における患者の服薬順守率を高めることになる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
求められるのは、特異性が高くて有効性が高い抗体を生じる有効な方法および組成物である。このような抗体は、アミロイドタンパク質、プリオンタンパク質、またはP170糖タンパク質などの、種々の抗原上に存在する特異的エピトープを認識することが好ましい。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
本発明のさらに別の目的は、筋肉内に、静脈内に、経皮的に、経口的に、または皮下に投与可能な免疫原性組成物を提供することである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
典型的には、ペプチドを構成するアミノ酸は順番に番号がつけられる（アミノ末端から始めて、ペプチドのカルボキシ末端方向へ向かって数値が増えてゆく）。したがって、1つのアミノ酸が、別のアミノ酸に「続く」と表現される場合、そのアミノ酸は、先行するアミノ酸よりも、対象ペプチドのカルボキシ末端に近い側に位置する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
または、本明細書に記載された免疫原性ペプチドは組換え核酸法で合成される。一般に、この方法は、対象ペプチドをコードする核酸配列を作製する段階、同核酸を発現カセット中で特定のプロモーターの制御下に配置する段階、ペプチドを宿主で発現させる段階、発現されたペプチドまたはポリペプチドを単離する段階を含み、また必要ならばペプチドを再生させる段階を含む。このような手順について、当業者を十分導くことができる手法は、文献に記載されている。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
「抗原」という表現は、哺乳類で免疫反応を引き起こすことが可能な分子の全体または断片を意味する。この表現は、免疫原、および抗原性に関与する領域または抗原決定基を含む。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
本発明はさらに、担体の疎水性の脂質二重層への挿入を容易にする、パルミチン酸などの疎水性部分で修飾された抗原ペプチドを含む。本発明の疎水性部分は、脂肪酸の場合があるほか、脂肪酸の炭素骨格が少なくとも10個の炭素原子を含むトリグリセリドおよびリン脂質の場合がある。最も好ましいのは、少なくとも約14個、最大約24個、の炭素原子を含む炭素骨格を含む脂肪酸を有する親油性部分である。最も好ましい疎水性部分は、少なくとも14個の炭素原子の炭素骨格を有する。疎水性部分の例には、パルミチン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸、ラウリル酸、オレイン酸、リノール酸、およびリノレン酸などがあるが、これらに限定されない。最も好ましい疎水性部分はパルミチン酸である。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８５】
製剤
免疫原性を有するタンパク質もしくはペプチドの全体もしくは活性部分を含む、天然もしくは合成のタンパク質、ペプチド、またはタンパク質断片は、薬学的に許容可能な担体中などの生理学的に許容される製剤中に、既知の手法で調製できる。例えば、タンパク質、ペプチド、またはタンパク質断片と薬学的に許容可能な賦形剤とを混合することで、治療用組成物が得られる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８９】
本明細書で用いる徐放性基剤は、酵素もしくは酸/塩基による加水分解によって、または溶解によって分解する材料（通常はポリマー）から作られる基剤である。このような基剤は、身体内に挿入されると、酵素および体液の働きによって作用する。徐放性基剤は望ましくは、リポソーム、ポリラクチド（ポリ乳酸）、ポリグリコリド（グリコール酸のポリマー）、ポリラクチドコ-グリコリド（乳酸とグリコール酸の共重合体）、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリペプチド、ヒアルロン酸、コラーゲン、硫酸コンドロイチン、カルボン酸、脂肪酸、リン脂質、ポリサッカライド、核酸、ポリアミノ酸、アミノ酸（フェニルアラニン、チロシン、イソロイシンなど）、ポリヌクレオチド、ポリビニルプロピレン、ポリビニルピロリドン、およびシリコーンなどの、生体適合性を有する材料から選択される。好ましい生分解性基剤は、ポリラクチド、ポリグリコリド、またはポリラクチドコ-グリコリド（乳酸とグリコール酸の共重合体）のいずれか1種類の基剤である。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
組成物の用量は、治療される病気、使用する組成物の種類、および患者の体重や状態などの他の臨床的要素、ならびに投与経路によって決定される。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０１】
本発明の1つの態様では、アミロイドタンパク質のFRHDSGY（SEQ ID NO: 1）配列を使用するが、他の任意のアミロイドタンパク質の配列を代用することができる。ポリクローナル抗体に関する上記のインビトロ特性に加えて、上述のコンストラクトで免疫化されたマウスから得られたモノクローナル抗体は、ヒトのアルツハイマー病のモデルであるAPP[V717I] FVBトランスジェニックマウスにおいて生物学的活性を示す。これらのマウスには、有意なレベルの記憶回復および好奇心の喚起が観察される。このmAbは、免疫化されたトランスジェニックマウスで脳内出血を引き起こさない。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０２】
以下の理論に拘泥するわけではないが、抗アミロイドmAb（本発明の方法で作製された1-16配列に対する抗体）の相互作用（主に繊維の可溶化およびCDスペクトル）を調べるインビトロ試験に基づいて、抗体は、αらせん構造中のβアミロイドに優先的に結合すると考えられる。このため、アミロイド繊維の可溶化作用を熱力学的用語で説明できると考えられる。抗体は、αらせんに優先的に結合することによって、αらせんアミロイドを以下の平衡式から解離させる：
Aβ（αらせん）←→Aβ（βシート）
この結果、より多くのβシート構造中にあるβアミロイドが、平衡を再び確立するために、可溶性のαらせん型に構造転移する。化学量論的な観察の結果は、mAbが構造の平衡に直接影響を及ぼすという仮説を支持している。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
Aβ1-42およびAβ1-40の疎水性配列は、疎水性配列の強いオリゴマー形成を誘導することがわかっているモチーフGXXXGXXXGGを含む（Eilers et al., 2002; Leeds et al., 2001; Lemmon et al., 1994; Russ and Engelmann, 1999; Russ and Engelmann, 2000; Smith and Bormann, 1995）。このモチーフは、治療法の第1の標的と見なされている。なぜなら、Aβ1-42およびAβ1-40の形成、オリゴマー形成、ならびに蓄積に至るあらゆる病原過程に重要な役割を担っているに違いないからである。APPの完全な配列に関しては、SREBPの切断（Ye et al., 2000）から明らかにされているように、同モチーフが、γ-セクレターゼによる処理を受けるために解きほぐされる必要がある下流配列を覆う可能性が高い。この配列がアミロイドのオリゴマー形成に重要な役割を果たすことは、これまで指摘されていない。本明細書に記載されたように、本発明の修飾型の超分子（好ましくはPEG化型）抗原の抗原性は高く、またこれによって誘導された抗体の親和性は高い。Aβ1-16に加えて、本発明の超分子コンストラクトは、ワクチンとして使用される際に、Aβ4-11（SEQ ID NO: 2）、Aβ22-35（SEQ ID NO: 3）、Aβ29-40（SEQ ID NO: 4）で表されるペプチドも含む。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１２】
したがって要約すると、本発明は、種々のアミロイド配列を露出した超分子抗原に対する新しいモノクローナル抗体を提供する。特に、2つのポリエチレングリコール（n=70）鎖を選択されたアミロイド配列に共有結合で結合させるための、独自の合成経路を考案した。PEG鎖の自由端には、ホスファチジルエタノールアミンを共有結合で結合させた。以下の理論に拘泥するわけではないが、その機能は、PEG化されたアミロイド配列をリポソームの二重層中に係留することであると考えられる。PEG化は本発明で、パルミトイル化と比較して抗原の免疫原性を高めることが明らかにされている。これらのモノクローナル抗体による、親和性テスト、エピトープの決定、構造転移の誘導については、発明者らの研究室で実施中である。本発明の固有の修飾法は、種々のペプチドに応用可能であり、また究極的には、アルツハイマー病、癌、および感染症を含むが、これらに限定されない疾患や障害に対する治療用製剤およびワクチンに使用することができる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１４】
癌細胞におけるMultidrug resistance 1（MDR 1）
癌細胞における多剤耐性1は、癌細胞から、種々の互いに無関係の化学療法剤を排出する膜ポンプであるP糖タンパク質（P170）の過剰発現によって生じる。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３５】
以上の観察、また発明者らが開発した手法を元に、神経毒性PrP 106-126に対する強い液性および細胞性の免疫反応をマウスで引き起こすことで、疾患に対する「ワクチン」を開発し、続いて、免疫化したマウスをスクレイピーマウスの脳抽出物でチャレンジした。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３９】
実施例1
発明者らは、ラット海馬一次培養物を、ヒトのPrPc cDNAから推定されるアミノ酸配列の残基106〜126位に対応するマイクロモル濃度のペプチドに長期曝露することで、ニューロン死が濃度依存的に生じることを明らかにした。得られたデータを表1に示す。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４０】
（表1）海馬ニューロンの9日間の長期間処置
2007527870.tif 000001
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
PrP 106-126によって誘導されるニューロン死が、アポトーシスによって用量依存的に生じることが示された。スクレイピーなどの亜急性脳症の末期では、PrPScはPrPcと比べ10〜20倍高い全脳濃度に達し、これは、PrP 106-126の2つの濃度に関する表1のデータと極めて似ている。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４５】
内部にLys残基またはHis残基を含む、ペプチド配列（4-11、1-16、22-35）については、直交的に保護されたLys（ivDde）を各末端に追加した。合成を促進するために、追加のGlyをC末端に加えた。Fmoc基をDMF中の20%ピペリジンで除去し、無水酢酸でN-アセチル化した。ivDde基の選択的な切断は、DMF中の3%ヒドラジン水和物を使用して1時間かけて行った。2-クロロトリチル樹脂は、ヒドラジン分解に対する耐性がより強いことが証明されているため、より広く使用されているWang樹脂より好ましい。さらに2-クロロトリチル樹脂は極めて酸感受性が高いので、Wang樹脂とは異なり、保護ペプチドの単離を可能とする。実際には、樹脂に結合したペプチドの、活性化済みのPEG化脂質試薬DSPE-PEG-SPAへのカップリングでは、いかなるカップリング産物も生じなかったため、カップリング反応は液相中で行う必要があった。したがって、穏和な条件（酢酸/トリフルオロエタノール/ジクロロメタン、1:1:8、1時間、室温）における、樹脂からの選択的な切断によって、内部が保護されたペプチドが得られた（図5）。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４７】
実施例3
PEG化抗原とパルミトイル化抗原の免疫原性の比較、ELISAおよび脱凝集アッセイ法
リポソーム抗原は上述の手順で作製した。配列PEG-Aβ1-16、PEG-Aβ4-11、およびPEG-Aβ22-35を、モノホスホリル脂質A（40 mg/mMリン脂質）を含む、ジミリストイルホスファチジルコリン（DMPC）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（DMPEA）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（DMPG）、およびコレステロール（モル比0.9:0.1:0.1:0.7）から作製されたリポソームを含むコンストラクト中に再構成した。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５０】
脱凝集アッセイ法
リポソーム-PEG-Aβ4-11で免疫化された動物から採取した9種類の血清（希釈率1:100）を、事前に形成されたAβ1-42繊維と抗血清とをインキュベートしたアッセイ法に使用した。このアッセイ法は、文献記載の手順で実施した（Nicolau et al., 2002）。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５２】
実施例4
可溶化アッセイ法
パルミトイル化Aβ1-16/リポソーム/脂質Aで免疫化された2匹の動物から、Aβ1-42特異的抗体に特異性を示すことがわかっている、最近作製されたハイブリドーマクローンについて25個の上清を得た。これらを可溶化アッセイ法で、PNAS 2002, 99, 2332-2337に記載された方法および手順に従って検討した。得られた結果を図9にまとめる。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５４】
実施例5
固体NMR分光法によるAβ1-42-ペプチドのβシートからαらせんへの転移の調査
13C-標識アミノ酸の喪失を避けるために、Fmocペプチド合成によるAβ1-42の合成の検証を、試験合成によって、標識アミノ酸を使用せずに行った。Aβ1-42ペプチドが得られたか否かは、MALDI質量分析で検証可能であり、また逆相カラムおよびアンモニア緩衝アセトニトリル水勾配を用いるHPLCを用いた精製手順を確立することができた。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５５】
アミロイドβペプチドの合成および精製に関する手順の成功裡の設定に続いて、12位（12val）に13C標識バリンを、かつ10位（10tyr）に13C標識チロシンを含む標識ペプチドが合成された。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５７】
実施例6
超分子抗原性コンストラクトによって誘導される抗体
mAbの作製
リポソーム抗原を文献記載の手順で作製した（Nicolau et al., 2002, PNAS, 99, 2332-37）。配列、PEG-Aβ1-15、PEG-Aβ1-16、PEG-Aβ4-11、PEG-Aβ22-35、およびPEG-Aβ29-40を、モノホスホリル脂質A（40 mg/mMリン脂質）を含む、ジミリストイルホスファチジルコリン（DMPC）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（DMPEA）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（DMPG）、およびコレステロール（モル比0.9:0.1:0.1:0.7）から作製したリポソームを含むコンストラクトにおいて再構成した。これらの抗原、およびパルミトイル化Aβ1-16をC57BL/6マウスの免疫化に2週間間隔で使用した。10〜12匹の動物を各抗原で免疫化した。3〜6回のブースティング後に、治療的力価（1:5,000の希釈率の血清がELISAで陽性であった）を示したマウスを融合用に選択した。このマウスの脾臓由来のBリンパ球と骨髄腫細胞系列SP2-0の融合を実施した。IgG産生ハイブリドーマクローンを選択し、Aβ1-42ペプチドに対する特異的な結合に関してELISAによる検討を行った。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６４】
実施例8
抗体の有効性を評価する行動テスト
本明細書に記載された方法で誘導された抗体、すなわち修飾型アミロイドペプチド（PEG化アミロイドペプチドなど）を含む超分子抗原性コンストラクトによって誘導された抗体の有効性を評価するために、マウスを処理し、以下に概説する行動テストで評価する。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
モリス水迷路（Morris Water Maze）
プール（白色、円形容器、直径1 m）に20℃の水を張り、併せて二酸化チタンを無臭の非毒性の添加物として、退避プラットフォーム（escape platform）（水面の1 cm下）を見えなくするために使用する。個々のマウスの泳ぐ様子を、ビデオカメラで撮影して解析する（Ethovision, Noldus information Technology, Wageningen, the Netherlands）。トレーニングに先立ち、各マウスをプラットフォーム上に15秒間置く。プレースナビゲーション（place navigation）テストのために、3日間連続で、3回の試行の5つのブロックにおいて、隠れたプラットフォームの位置を見つけるようにマウスをトレーニングする。各試行は、最大120秒間の強制的な水泳試験とそれに続く60秒間の休憩で構成される。個々のマウスがプラットフォームの位置に到達するまでに要した時間を測定する。連続5回の試行の結果から学習曲線を得る。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６６】
最終トレーニングの24時間後に、各動物を対象に、プラットフォームを除いた状態で、プローブ試行を行う。マウスに60秒間探索させ、当初のプラットフォーム位置の四分円（quadrant）探索時間、および交差（crossing）を測定する。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６８】
オープンフィールド
黒色の垂直壁と半透明の床を擁するPlexiglasのオープンフィールドボックス（52×52×40 cm）をテストに使用し、ボックスの下からランプによって弱い光をあてる。コンピューターシステム（Ethovision, Noldus information Technology, Wageningen, the Netherlands）に、以下の異なる区画を割り当てる：コーナー（9×9 cm）、ボックスの4側部（壁から9 cm）、およびオープンフィールドボックスの中央部（43×43 cm）。各マウスをビデオカメラで撮影し、移動した距離（cm）、マウスの移動速度（cm/秒）、境界部（コーナー＋側部）と比較した時の、中央部で要した期間/時間（秒）、および両区画をまたぐ回数（N）を測定することで活動を解析する（Ethovision）。各マウスをボックスの中央に配置し、自由に探索させる（10分間）。テスト間にオープンフィールドボックスを清掃し、乾燥させてから、新しいマウスをボックスに入れる。