【手続補正書】
【提出日】平成23年1月31日(2011.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(I)の修飾されたポリペプチド、またはその薬学的に許容される塩：
2010518017.tif 000001
式中、
各R1およびR2は独立して、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり；
各R3は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル；[R4-K-R4']nであり；その各々は0〜6個のR5で置換され；
R4およびR4'は独立して、アルキレン、アルケニレン、またはアルキニレンであり；
各R5は独立して、ハロ、アルキル、OR6、N(R6)2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり；
各Kは独立して、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、または
2010518017.tif 000002
であり；
各R6は独立して、H、アルキル、または治療剤であり；
nは、1〜4の整数であり；
xは、2、3、4、または6であり；
yおよびwは独立して、0〜100の整数であり；
zは、1〜10の整数であり；かつ
各Xaaは独立して、アミノ酸であり；
該修飾されたポリペプチドはヒトp53と少なくとも６０％同一のアミノ酸配列を含み、
(a)該修飾されたペプチドの8個の連続したアミノ酸配列内に、3、4、または6アミノ酸で隔てられた少なくとも1対のアミノ酸の側鎖が、式Iに示すアミノ酸対のα炭素に接続している連結基R3で置き換えられていること；および
(b)アミノ酸対の第一のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR1で置換されており、かつアミノ酸対の第二のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR2で置換されていることを除いて、ヒトp53もしくはこのバリアント、またはヒトp53もしくはこのバリアントのホモログの少なくとも8個の連続したアミノ酸を含み；
さらに、該修飾されたペプチドは、無傷細胞を透過することができる。
【請求項２】
ヒトp53ポリペプチドが、SEQ ID NO:1を含む、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項３】
ヒトp53の少なくとも8個の連続したアミノ酸が、
(a) Xaa1、Xaa4、Xaa7、Xaa8、Xaa11、Xaa14、Xaa15のそれぞれが任意のアミノ酸である、
2010518017.tif 000003
、または
(b) Phe6、Trp10、および、Leu1３以外の０または最大６アミノ酸は、独立して他の任意のアミノ酸により置換されている
2010518017.tif 000004
の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項４】
修飾されたポリペプチドがHDM2に結合する、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項５】
xが2である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項６】
xが3である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項７】
xが6である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項８】
xが2、3、または6であり、R3が単一の二重結合を含むアルケニルであり、かつR1およびR2が両方ともHである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項９】
各yが独立して、3〜15の間の整数である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１０】
ヒトp53の少なくとも8個の連続したアミノ酸が、Leu1とLys11の両方がが独立して、他の任意のアミノ酸と置換されている、
2010518017.tif 000005
の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項3記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１１】
Glu4がAsp以外の任意のアミノ酸と置換されている、請求項10記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１２】
Asp8がGlu以外の任意のアミノ酸と置換されている、請求項10記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１３】
ポリペプチドがpH 7で正味の負電荷を有しない、請求項10記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１４】
ポリペプチドが、pH 7で正電荷を有する少なくとも1個のアミノ酸を含み、(a)アミノ末端がLeu1であるか、もしくはLeu1と置換されたアミノ酸、または(b)カルボキシ末端がAsn16であるか、もしくはAsn16と置換されたアミノ酸のいずれかである、請求項13記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１５】
R1およびR2が各々独立して、HまたはC1-C6アルキルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１６】
R3がC8アルキルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１７】
xが6である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１８】
R3がC11アルキルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項１９】
R3がアルケニルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２０】
xが3である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２１】
R3がC8アルケニルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２２】
xが6である、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２３】
R3がC11アルケニルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２４】
R3が直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２５】
乳酸とグリコール酸のコポリマーをさらに含む、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２６】
アミノ末端の脂肪酸をさらに含む、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２７】
ビオチン部分をさらに含む、請求項1記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項２８】
下記式を有する化合物：
2010518017.tif 000006
式中、
R1は、Gln以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R2は、-CH2OH[S]であり；
R3は、-CH2CH2C(O)NH2[Q]であり；
R4は、GluまたはAsp以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R5は、-C(OH)CH3[T]であり；
R6は、ベンジル[F]であり；
R7およびR14は合わせてRxであり；
R8は、GluまたはAsp以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R9は、-CH2CH(CH3)2[L]であり；
R10は、
2010518017.tif 000007
であり；
R11は、Lys以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R12およびR13は、-CH2CH(CH3)2[L]であり；
R15は、-CH2CH2C(O)NH2[Q]であり；かつ
R16は、-CH2C(O)NH2[N]であり；
Rxは、アルキル、アルケニル、アルキニル；または[Rx1-K-Rx1']nであり；その各々は、0〜6個のRx2で置換され；
Rx1およびRx1'は独立して、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；
Rx2は、ハロ、アルキル、ORx3、N(Rx3)2、SR6、SORx3、SO2Rx3、CO2Rx3、Rx3、蛍光部分、または放射性同位元素であり；
Kは、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONRx3、または
2010518017.tif 000008
であり；
Rx3は、H、アルキル、または治療剤であり；かつ
RzおよびRwは独立して、H、ヒドロキシル、アミド(NH2)、アミノ酸、ペプチド結合によって連結された2〜10アミノ酸；tat；またはPEGである。
【請求項２９】
細胞膜を通って輸送される、請求項1記載のポリペプチド。
【請求項３０】
下記式(II)の修飾されたポリペプチド、またはその薬学的に許容される塩：
2010518017.tif 000009
式中、
各R1およびR2は独立して、HまたはC1〜C10アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり；
R3は、アルキレン、アルケニレン、もしくはアルキニレン、または[R4'-K-R4]nであり；その各々は0〜6個のR5で置換され；
R4およびR4'は独立して、アルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン(例えば各々独立して、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、またはC10のアルキレン、アルケニレン、もしくはアルキニレン)であり；
R5は、ハロ、アルキル、OR6、N(R6)2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり；
Kは、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、または
2010518017.tif 000010
、アジリジン、エピスルフィド、ジオール、アミノアルコールであり；
R6は、H、アルキル、または治療剤であり；
nは、2、3、4、または6であり；
xは、2〜10の整数であり；
wおよびyは独立して、0〜100の整数であり；
zは、1〜10の整数(例えば1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)であり；かつ
各Xaaは独立して、アミノ酸(例えば、20種の天然のアミノ酸の1つ、または任意の天然の、非天然のアミノ酸)であり；
R7は、例えばチオカルバミン酸塩またはカルバミン酸結合を介して連結された、PEG、tatタンパク質、アフィニティー標識、標的化部分、脂肪酸由来のアシル基、ビオチン部分、または蛍光プローブ(例えばフルオレセインもしくはローダミン)であり；
R8は、H、OH、NH2、NHR8a、またはNR8aR8bであり；
該ポリペプチドは、ヒトp53と少なくとも６０％同一のアミノ酸配列を含み、(a)該修飾されたペプチドの8個の連続したアミノ酸配列内に、3、4、または6アミノ酸で隔てられた少なくとも1対のアミノ酸の側鎖が、式Iに示すアミノ酸対のα炭素に接続している連結基R3で置き換えられていること；および(b)アミノ酸対の第一のα炭素が、式IIに示すR1で置換されており、かつアミノ酸対の第二のα炭素が式IIに示すR2で置換されている。
【請求項３１】
ポリペプチドが、ヒトp53と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項1または３０に記載の修飾されたポリペプチド。
【請求項３２】
ポリペプチドが、ヒトp53と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項1または３０記載の修飾されたポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
本発明の1種または複数の態様の詳細は、添付図面および以下の説明に記されている。本発明の他の特徴、目的、および利点は、説明および図面、ならびに「特許請求の範囲」から明らかであると思われる。
[請求項1001]
下記式(I)の修飾されたポリペプチド、またはその薬学的に許容される塩：
2010518017.tif 000011
式中、
各R1およびR2は独立して、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり；
各R3は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル；[R4-K-R4']nであり；その各々は0〜6個のR5で置換され；
R4およびR4'は独立して、アルキレン、アルケニレン、またはアルキニレンであり；
各R5は独立して、ハロ、アルキル、OR6、N(R6)2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり；
各Kは独立して、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、または
2010518017.tif 000012
であり；
各R6は独立して、H、アルキル、または治療剤であり；
nは、1〜4の整数であり；
xは、2、3、4、または6であり；
yおよびwは独立して、0〜100の整数であり；
zは、1〜10の整数であり；かつ
各Xaaは独立して、アミノ酸であり；
該修飾されたポリペプチドは、
(a)8個の連続したアミノ酸内に、3、4、または6アミノ酸で隔てられた少なくとも1対のアミノ酸の側鎖が、式Iに示すアミノ酸対のα炭素に接続している連結基R3で置き換えられていること；および
(b)アミノ酸対の第一のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR1で置換されており、かつアミノ酸対の第二のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR2で置換されていること
を除いて、ヒトp53もしくはこのバリアント、またはヒトp53もしくはこのバリアントのホモログの少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む。
[請求項1002]
ヒトp53ポリペプチドが、SEQ ID NO:1を含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1003]
ヒトp53の少なくとも8個の連続したアミノ酸が、SEQ ID NO:2の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1004]
ヒトp53の少なくとも8個の連続したアミノ酸が、Xaa1、Xaa4、Xaa7、Xaa8、Xaa11、Xaa14、Xaa15のそれぞれがSEQ ID NO:3の任意のアミノ酸である、
2010518017.tif 000013
の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1005]
修飾されたポリペプチドがHDM2に結合する、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1006]
xが2である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1007]
xが3である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1008]
xが6である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1009]
xが2、3、または6であり、R3が単一の二重結合を含むアルケニルであり、かつR1およびR2が両方ともHである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1010]
各yが独立して、3〜15の間の整数である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1011]
ポリペプチドが、SEQ ID NO:2の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1012]
Ser7およびPro14の側鎖が、アミノ酸対のα炭素に連結している式Iに示す連結基R3と置換されており、かつアミノ酸対の第一のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR1で置換されており、かつアミノ酸対の第二のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR2で置換されており、かつPhe6、Trp10、およびLeu13以外の0個または最大6個のアミノ酸が独立して、他の任意のアミノ酸と置換されている、
2010518017.tif 000014
の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1013]
Ser7およびPro14の側鎖が、アミノ酸対のα炭素に接続している式Iに示す連結基R3と置換されており、かつアミノ酸対の第一のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR1で置換されており、かつアミノ酸対の第二のアミノ酸のα炭素が式Iに示すR2で置換されており、かつPhe6、Trp10、およびLeu13以外の0個または最大6個のアミノ酸が独立して、他の任意のアミノ酸と置換されている、
2010518017.tif 000015
の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1014]
Leu1およびLys11がいずれも独立して、他の任意のアミノ酸と置換されている、請求項1013記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1015]
Glu4がAsp以外の任意のアミノ酸と置換されている、請求項1013記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1016]
Asp8がGlu以外の任意のアミノ酸と置換されている、請求項1013記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1017]
ポリペプチドがpH 7で正味の負電荷を有しない、請求項1013記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1018]
ポリペプチドが、pH 7で正電荷を有する少なくとも1個のアミノ酸を含み、(a)アミノ末端がLeu1であるか、もしくはLeu1と置換されたアミノ酸、または(b)カルボキシ末端がAsn16であるか、もしくはAsn16と置換されたアミノ酸のいずれかである、請求項1017記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1019]
ポリペプチドがPEGと共有結合されている、請求項1017b記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1020]
R1およびR2が各々独立して、HまたはC1-C6アルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1021]
R1およびR2が各々独立して、C1-C3アルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1022]
R1およびR2がメチルである、請求項1012記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1023]
R3がアルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1024]
xが3である、請求項1022記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1025]
R3がC8アルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1026]
xが6である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1027]
R3がC11アルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1028]
R3がアルケニルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1029]
xが3である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1030]
R3がC8アルケニルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1031]
xが6である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1032]
R3がC11アルケニルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1033]
R3が直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1034]
R3が[R4-K-R4]であり；かつR4が直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1035]
R1またはR2の少なくとも一方がアルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1036]
R1およびR2が各々独立して、HまたはC1-C3アルキルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1037]
R1およびR2がメチルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1038]
xが3または6であり、かつzが1である、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1039]
R3が、C8またはC11のアルキルもしくはアルケニルである、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1040]
乳酸とグリコール酸のコポリマーをさらに含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1041]
アミノ末端の脂肪酸をさらに含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1042]
HDM2を発現する細胞にペプチドを標的輸送する抗体をさらに含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1043]
ビオチン部分をさらに含む、請求項1001記載の修飾されたポリペプチド。
[請求項1044]
下記式を有する化合物：
2010518017.tif 000016
式中、
R1は、Gln以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R2は、-CH2OH[S]であり；
R3は、-CH2CH2C(O)NH2[Q]であり；
R4は、GluまたはAsp以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R5は、-C(OH)CH3[T]であり；
R6は、ベンジル[F]であり；
R7およびR14は合わせてRxであり；
R8は、R4は、GluまたはAsp以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R9は、-CH2CH(CH3)2[L]であり；
R10は、
2010518017.tif 000017
であり；
R11は、Lys以外の任意のアミノ酸の側鎖であり；
R12およびR13は、-CH2CH(CH3)2[L]であり；
R15は、-CH2CH2C(O)NH2[Q]であり；かつ
R16は、-CH2C(O)NH2[N]であり；
Rxは、アルキル、アルケニル、アルキニル；[Rx1-K-Rx1]nであり；その各々は、0〜6個のRx2で置換され；
Rx1およびRx1'は独立して、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；
Rx2は、ハロ、アルキル、ORx3、N(Rx3)2、SRx3、SORx3、SO2Rx3、CO2Rx3、Rx3、蛍光部分、または放射性同位元素であり；
Kは、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONRx3、または
2010518017.tif 000018
であり；
Rx3は、H、アルキル、または治療剤であり；かつ
RzおよびRwは独立して、H、ヒドロキシル、アミド(NH2)、アミノ酸、ペプチド結合によって連結された2〜10アミノ酸；tat；およびPEGである。
[請求項1045]
各yが独立して、3〜15の間の整数である、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1046]
R1およびR2が各々独立して、HまたはC1-C6アルキルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1047]
R1およびR2が各々独立して、C1-C3アルキルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1048]
R1およびR2の少なくとも一方がメチルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1049]
R1およびR2がメチルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1050]
R3がアルキルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1051]
R3がC8アルキルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1052]
R3がC11アルキルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1053]
R3がアルケニルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1054]
R3がC8アルケニルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1055]
R3がC11アルケニルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1056]
R3が、直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1057]
R3が[R4-K-R4]であり、かつR4が直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1058]
xが3であり、かつzが1である、請求項1044記載のポリペプチド。
[請求項1059]
細胞膜を通って輸送される、請求項1047記載のポリペプチド。
[請求項1060]
下記式(II)の修飾されたポリペプチド、またはその薬学的に許容される塩：
2010518017.tif 000019
式中、
各R1およびR2は独立して、HまたはC1〜C10アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり；
R3は、アルキレン、アルケニレン、もしくはアルキニレン、または[R4'-K-R4]nであり；その各々は0〜6個のR5で置換され；
R4およびR4'は独立して、アルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン(例えば各々独立して、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、またはC10のアルキレン、アルケニレン、もしくはアルキニレン)であり；
R5は、ハロ、アルキル、OR6、N(R6)2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり；
Kは、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、または
2010518017.tif 000020
、アジリジン、エピスルフィド、ジオール、アミノアルコールであり；
R6は、H、アルキル、または治療剤であり；
nは、2、3、4、または6であり；
xは、2〜10の整数であり；
wおよびyは独立して、0〜100の整数であり；
zは、1〜10の整数(例えば1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)であり；かつ
各Xaaは独立して、アミノ酸(例えば、20種の天然のアミノ酸の1つ、または任意の天然の、非天然のアミノ酸)であり；
R7は、例えばチオカルバミン酸塩またはカルバミン酸結合を介して連結された、PEG、tatタンパク質、アフィニティー標識、標的化部分、脂肪酸由来のアシル基、ビオチン部分、蛍光プローブ(例えばフルオレセインもしくはローダミン)であり；
R8は、H、OH、NH2、NHR8a、NR8aR8bであり；
該ポリペプチドは、(a)SEQ ID NO:1の8個の連続したアミノ酸内に、3、4、または6アミノ酸で隔てられた少なくとも1対のアミノ酸の側鎖が、式Iに示すアミノ酸対のα炭素に接続している連結基R3で置き換えられていること；および(b)アミノ酸対の第一のα炭素が、式IIに示すR1で置換されており、かつアミノ酸対の第二のα炭素が式IIに示すR2で置換されていること
を除いて、SEQ ID NO:1(ヒトp53)もしくはこのバリアント、SEQ ID NO:2もしくはこのバリアント、または本明細書に記載された別のポリペプチド配列の少なくとも8個の連続したアミノ酸を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１Ａ】
2010518017.tif 000021
【図１Ｂ】
2010518017.tif 000022
【図１Ｃ】
2010518017.tif 000023
【図１Ｄ】
2010518017.tif 000024
【図１Ｅ】
2010518017.tif 000025
【図１Ｆ】
2010518017.tif 000026
【図２】
2010518017.tif 000027
【図３Ａ】
2010518017.tif 000028
【図３Ｂ】
2010518017.tif 000029
【図４Ａ】
2010518017.tif 000030
【図４Ｂ】
2010518017.tif 000031
【図５】
2010518017.tif 000032
【図６】
2010518017.tif 000033
【図７Ａ】
2010518017.tif 000034
【図７Ｂ】
2010518017.tif 000035
【図７Ｃ】
2010518017.tif 000036
【図７Ｄ−１】
2010518017.tif 000037
【図７Ｄ−２】
2010518017.tif 000038
【図７Ｄ−３】
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【図８】
2010518017.tif 000040
【図９】
2010518017.tif 000041
【図１０】
2010518017.tif 000042
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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