【手続補正書】
【提出日】平成23年3月7日(2011.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内でｓｉＲＮＡ分子を発現する方法であって、
該方法がｅｘ  ｖｉｖｏで標的細胞に組換えレトロウイルスを感染させることを含み、
前記組換えレトロウイルスが、第１のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域、第１のＲＮＡコード領域、及び第１の終結配列を含み、
前記ＲＮＡコード領域の発現によって、標的遺伝子又はゲノム転写物が低下するように調節され、
前記第１のＲＮＡコード領域は、配列番号１６を含むｓｉＲＮＡをコードすることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記ＲＮＡコード領域が配列番号１７から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＲＮＡコード領域がヘアピン領域を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記標的細胞内の前記ＲＮＡコード領域の発現が、少なくとも約１０日間、該標的細胞の増殖速度を変えない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記組換えレトロウイルスがさらに、レンチウイルス５’長末端反復（ＬＴＲ）及び自己不活性化レンチウイルス３’ＬＴＲ由来のＲ配列及びＵ５配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＲＮＡコード領域が、センス領域と、アンチセンス領域と、ループ領域とを有するＲＮＡ分子をコードし、該センス領域は該アンチセンス領域と実質的に相補的である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ループ領域は約２ヌクレオチド長〜約１５ヌクレオチド長である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＲＮＡコード領域が、標的領域と実質的に相補的であり、該標的領域が、１５ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＲＮＡコード領域が、標的領域と実質的に相補的であり、該標的領域が、１８ヌクレオチド長〜２３ヌクレオチド長である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記５’ＬＴＲ配列がＨＩＶに由来する、請求項５〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記自己不活性化レンチウイルス３’ＬＴＲが、エンハンサー配列が欠失したＵ３因子を含む、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記自己不活性化レンチウイルス３’ＬＴＲが修飾ＨＩＶ３’ＬＴＲである、請求項５〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記組換えレトロウイルスが偽型である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記組換えレトロウイルスが水泡性口内炎ウイルスエンベロープ糖タンパク質によって偽型となっている、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記５’ＬＴＲ配列がモロニーマウス白血病ウイルスに由来する、請求項５〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記５’ＬＴＲ配列がマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）に由来する、請求項５〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記標的細胞がヒト細胞である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記標的細胞が造血細胞である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記標的細胞がＣＤ３４陽性造血細胞である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記標的ＣＤ３４陽性造血細胞が患者から単離されたものであることを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
感染したＣＤ３４陽性造血細胞が前記患者へ再導入するためのものであることを特徴とする、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞が培養細胞である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞がヒト細胞である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
パッケージング細胞株にレトロウイルス構築物をトランスフェクトすること、及び
前記パッケージング細胞株から組換えレトロウイルスを回収すること、
をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記パッケージング細胞株がＨＥＫ２９３細胞株である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＨＩＶに感染した患者を治療するための細胞の製造方法であって、該方法が、
患者より単離されたＣＤ３４陽性標的細胞に、
レトロウイルス構築物をトランスフェクトしたパッケージング細胞株から回収された組換えレトロウイルスを感染させることを含み、
前記組換えレトロウイルス構築物が、第１のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域、配列番号１７をコードする第１のＲＮＡコード領域、及び第１の終結配列を含み、
前記ＲＮＡコード領域の発現によって、ＣＣＲ５が低下するように調節されることを特徴とする細胞の製造方法。
【請求項２７】
前記標的細胞内の前記ＲＮＡコード領域の発現が、少なくとも約１０日間、該標的細胞の増殖速度を変えない、請求項２６に記載の細胞の製造方法。
【請求項２８】
前記組換えレトロウイルス構築物がさらに、レンチウイルス５’長末端反復（ＬＴＲ）及び自己不活性化レンチウイルス３’ＬＴＲ由来のＲ配列及びＵ５配列を含む、請求項２６または２７に記載の細胞の製造方法。
【請求項２９】
第１のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域、該ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域と作動可能に連結された配列番号１７をコードする第１のＲＮＡコード領域、及び第１の終結配列を含む組換えレトロウイルスを標的細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで感染させることを含む細胞内でｓｉＲＮＡ分子を発現する方法であって、前記第１のＲＮＡコード領域の発現によって、前記標的細胞においてＣＣＲ５が低下するように調節されることを特徴とする方法。
【請求項３０】
配列番号１７を含む小ＲＮＡ分子。
【請求項３１】
ヒト末梢血単核細胞におけるｓｉＲＮＡの発現が、少なくとも約１０日間、該細胞の増殖速度を変えない、請求項３０に記載の小ＲＮＡ分子。
【請求項３２】
前記ｓｉＲＮＡがヘアピン領域を含む、請求項３０または３１に記載の小ＲＮＡ分子。
【請求項３３】
細胞に、第１のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域、第１のＲＮＡコード領域、及び第１の終結配列を含む組換えレンチウイルスをｉｎ  ｖｉｔｒｏでトランスフェクトすることを含む、細胞のＣＣＲ５が低下するように調節する方法であって、
前記ＲＮＡコード領域が配列番号１７をコードすることを特徴とする方法。
【請求項３４】
細胞内でｓｉＲＮＡ分子を発現させるための、レトロウイルス構築物であって、該レトロウイルス構築物が
レンチウイルス５’長末端反復（ＬＴＲ）由来のＲ配列及びＵ５配列を有する核酸；
自己不活性化レンチウイルス３’ＬＴＲ；
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター；および
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域と作動可能に連結された少なくとも１つのＲＮＡコード領域；を含み、
該ＲＮＡコード領域が配列番号１７をコードする、
レトロウイルス構築物。
【請求項３５】
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター及びＲＮＡコード領域が５’ＬＴＲと３’ＬＴＲ配列との間に位置する、請求項３４に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項３６】
少なくとも1つの終結配列をさらに含む、請求項３４及び３５に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項３７】
該ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターが誘導性である、請求項３４〜３６のいずれか
１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項３８】
該誘導性プロモーターがテトラサイクリンで活性化される、請求項３７に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項３９】
前記ＲＮＡコード領域が、センス領域と、アンチセンス領域と、ループ領域とを有する自己相補的なＲＮＡ分子をコードする、請求項３４〜３８のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４０】
前記ループ領域が約２ヌクレオチド長〜１５ヌクレオチド長である、請求項３９に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４１】
前記センス領域及びアンチセンス領域が約１５ヌクレオチド長〜約３０ヌクレオチド長の間である、請求項３９または４０に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４２】
前記、５’ＬＴＲ配列がＨＩＶ由来である、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４３】
前記レトロウイルス構造物が、ウッドチャック肝炎ウイルスエンハンサー因子配列を含む、請求項３４〜４２のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４４】
前記ウイルス構造物がｔＲＮＡアンバー抑制因子配列を含む、請求項３４〜４３のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４５】
前記自己不活性化３’ＬＴＲがエンハンサー配列が欠失したＵ３因子である、請求項３４〜４４のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４６】
自己不活性化３’ＬＴＲは修飾ＨＩＶ３’ＬＴＲである、請求項３３〜４５のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４７】
前記レトロウイルス構築物が偽型である、請求項３４〜４６のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４８】
前記レトロウイルス構築物が、水疱性口内炎ウイルスエンベロープ糖タンパク質によって偽型とされる、請求項４７に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項４９】
該ＲＮＡコード領域が配列番号１７をコードする、請求項３４〜４８のいずれか１項に記載のレトロウイルス構築物。
【請求項５０】
ＨＩＶに感染した患者を治療するための細胞の製造方法であって、
該方法が、患者から単離されたＣＤ３４−陽性標的細胞に、
レトロウイルス構築物をトランスフェクトしたパッケージング細胞株から回収された、組換えレトロウイルスを感染させる工程
を含み、
前記組換えレトロウイルス構築物は第一のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター領域を含み、
配列番号１６をコードする第一のＲＮＡコード領域、及び
第１の終結配列を含み、
前記ＲＮＡコード領域の発現によってＣＣＲ５が低下するように調節される、
細胞の製造方法。