【手続補正書】
【提出日】平成23年7月5日(2011.7.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原に対する免疫応答を誘導するために有用な免疫原性組成物であって、
（ａ）免疫応答が所望される抗原；および
（ｂ）改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチド源
を含み、ここで該改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドは、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して１個または複数個のアミノ酸の置換、欠失または挿入を含み、かつ野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して、ＰＤ−１に対する改変された親和性を有する、組成物。
【請求項２】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチド源が、改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチド、改変体Ｂ７−ＤＣ融合タンパク質、改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドもしくは改変体Ｂ７−ＤＣ融合タンパク質をコードする核酸、または改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドもしくは改変体Ｂ７−ＤＣ融合タンパク質を発現するベクターを含有する宿主細胞からなる群より選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
単離された改変体マウスまたはヒトＢ７−ＤＣポリペプチドまたはその断片を含む、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
前記単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドまたはその断片が、マウスまたはヒトのＢ7-ＤＣの細胞外ドメインまたはその断片を含む、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドまたはその断片は、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して、ＰＤ−１に対する増加した結合親和性を有する、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記抗原は、ウイルス、細菌、寄生生物、植物、原虫、真菌、組織、形質転換細胞、アレルゲン、環境抗原または腫瘍抗原に由来する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記抗原は、α−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、β−カテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−１、２および３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースホスフェートイソメラーゼ（ｉｓｏｍｅｒａｓ）、Ｂａｇｅ−１、Ｇａｇｅ３、４、５、６、７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、Ｌａｇｅ−１、Ｍａｇｅ−Ａ１、２、３、４、６、１０、１２、Ｍａｇｅ−Ｃ２、ＮＡ−８８、ＮＹ−Ｅｓｏ−１／Ｌａｇｅ−２、ＳＰ１７、ＳＳＸ−２、およびＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５（５８）、ＣＥＡ、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ（ＬＡＧＥ）、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｈ−Ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、β−カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ付随タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰおよびＴＰＳからなる群より選択される腫瘍抗原である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドのＡ’，Ｂ、Ｃ、Ｃ’、Ｃ”、Ｄ、Ｅ、ＦまたはＧ  βストランドにアミノ酸置換を含み、かつ該野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して、ＰＤ−１に対する改変された親和性を有する、Ｂ７−ＤＣのＩｇＶドメインを含む単離された哺乳動物改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換は、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして１１１位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
前記アミノ酸置換がセリン残基での置換である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換が、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして１１３位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記置換がセリン残基での置換である、請求項１１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換が、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして５６位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記置換がセリン残基での置換である、請求項１３に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換が、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして６７位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記置換がチロシンでの置換である、請求項１５に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換が、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして７１位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記置換がセリン残基での置換である、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換が、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして１０１位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記置換がセリン残基での置換である、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドにおける置換が、野生型マウスＢ７−ＤＣ（配列番号２）またはヒトＢ７−ＤＣ（配列番号１）の開始メチオニンから番号付けして１０５位のアミノ酸に対応するアミノ酸残基を置換することを含む、請求項８に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記置換がアラニンでの置換である、請求項２１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドは、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して、ＰＤ−１に対する低下した結合親和性を有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記抗原が、腫瘍細胞由来の抗原である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記抗原が、可溶性抗原である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記抗原が、ペプチド、タンパク質、多糖、糖、脂質またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記抗原が、核酸によってコードされるポリペプチドのエピトープである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
改変体Ｂ７−ＤＣ融合タンパク質を含む請求項２に記載の免疫原性組成物であって、該改変体Ｂ７−ＤＣ融合タンパク質は、
ａ）第１の融合相手として、請求項３〜５または８〜２３のいずれかに記載の改変体ポリペプチドを含み、そして
ｂ）第２の融合相手として、Ｉｇ重鎖定常領域の１または複数のドメインを含む、免疫原性組成物。
【請求項２９】
前記改変体Ｂ７−ＤＣ融合タンパク質の前記第２の融合相手が、ヒト免疫グロブリン鎖のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
前記第１の融合相手が、改変体Ｂ７−ＤＣの細胞外ドメインまたはその断片を含み、そして前記第２の融合相手が、ヒト免疫グロブリン鎖のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
哺乳動物被験体における抗原またはワクチンに対する免疫応答を増強するための、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の１つまたは複数の実施形態に関する詳細は、付属の図面および下記の説明において提示される。本発明の他の特徴、目的および利点は、この記載および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかとなる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドの改変体であり、
該改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して、ＰＤ−１に対する減少した結合親和性を有しており、
該改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、Ｔ細胞の抗原特異的増殖を高め、Ｔ細胞によるサイトカイン産生を増強し、Ｔ細胞の分化およびエフェクター機能を刺激し、またはＴ細胞の生存を促進する能力を保持する
単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドまたはその共刺激性断片。
（項目２）
前記ポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸の置換、欠失または挿入を含む、項目１に記載の単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチド。
（項目３）
前記Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、ヒトＢ７−ＤＣである、項目１に記載の単離されたポリペプチド。
（項目４）
前記１個または複数のアミノ酸の置換、欠失または挿入が、Ａ’、Ｂ、Ｃ、Ｃ’、Ｃ”、Ｄ、Ｅ、ＦもしくはＧストランド、またはそれらの任意の組合せ中にある、項目３に記載の単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチド。
（項目５）
前記置換が、野生型のマウスＢ７−ＤＣまたはヒトＢ７−ＤＣの１１１位にあるアミノ酸をセリン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目６）
前記置換が、野生型ヒトＢ７−ＤＣの１１３位にあるアミノ酸をセリン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目７）
前記置換が、野生型ヒトＢ７−ＤＣの５６位にあるアミノ酸をセリン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目８）
前記置換が、野生型ヒトＢ７−ＤＣの６７位にあるアミノ酸をチロシン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目９）
前記置換が、野生型ヒトＢ７−ＤＣの７１位にあるアミノ酸をセリン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目１０）
前記置換が、野生型ヒトＢ７−ＤＣの１０１位にあるアミノ酸をセリン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目１１）
前記置換が、野生型のマウスＢ７−ＤＣまたはヒトＢ７−ＤＣの１０５位にあるアミノ酸をアラニン残基で置き換えることを含む、項目４に記載の単離されたポリペプチド。
（項目１２）
ａ）第１の融合相手として項目１に記載のポリペプチド、および
ｂ）第２の融合相手として第２のポリペプチド
を含み、該第１の融合相手が、該第２の融合相手に直接融合しており、または場合により、該第２の融合相手に融合しているリンカー配列に、融合している
単離された融合ポリペプチド。
（項目１３）
前記第２のポリペプチドが、Ｉｇ重鎖定常領域の１つまたは複数のドメインを含む、
項目１２に記載の融合ポリペプチド。
（項目１４）
前記第２のポリペプチドが、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む、
項目１３に記載の融合ポリペプチド。
（項目１５）
前記第１のポリペプチドが、前記Ｂ７−ＤＣの細胞外ドメインまたはその共刺激性断片を含み、
前記第２のポリペプチドが、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む、
項目１４に記載の融合ポリペプチド。
（項目１６）
Ｔ細胞の抗原特異的増殖を高め、Ｔ細胞によるサイトカイン産生を増強し、Ｔ細胞の分化およびエフェクター機能を刺激し、またはＴ細胞の生存を促進する方法であって、
ａ）第１の融合相手として、単離された改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドまたはその共刺激性断片
を含み、該改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドの改変体であり、
該改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、野生型Ｂ７−ＤＣポリペプチドと比較して、ＰＤ−１に対する減少した結合親和性を有しており、
該改変体Ｂ７−ＤＣポリペプチドが、Ｔ細胞の抗原特異的増殖を高め、Ｔ細胞によるサイトカイン産生を増強し、Ｔ細胞の分化およびエフェクター機能を刺激し、またはＴ細胞の生存を促進する能力を保持しており、
ｂ）第２の融合相手として、第２のポリペプチド
を含み、
該第１の融合相手が、該第２の融合相手に直接融合しており、または場合により、該第２の融合相手に融合しているリンカー配列に、融合している、
単離された融合ポリペプチドと、Ｔ細胞を接触させる工程を含む方法。
（項目１７）
前記第２のポリペプチドが、Ｉｇ重鎖定常領域の１つまたは複数のドメインを含む、
項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記第２のポリペプチドが、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む、
項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記第１のポリペプチドが、Ｂ７−ＤＣの細胞外ドメインまたはその共刺激性断片を含み、
前記第２のポリペプチドが、ヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を含む、
項目１８に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】マウスおよびヒトＢ７分子の構造志向的な配列整列（ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａ
ｌｉｇｎｍｅｎｔ）を示す図である。この整列には、ヒトＣＤ８６（ｈＣＤ８６）（配列番号５）、ヒトＣＤ８０（ｈＣＤ８０）（配列番号６）、ヒトＢ７−Ｈ１（ｈＢ７−Ｈ１）（配列番号７）、マウスＢ７−Ｈ１（ｍＢ７−Ｈ１）（配列番号８）、ヒトＢ７−Ｈ２（ｈＢ７−Ｈ２）（配列番号９）、ヒトＢ７−Ｈ３（ｈＢ７−Ｈ３）（配列番号１０）、ヒトＢ７−ＤＣ（ｈＰＤ−Ｌ２）（配列番号１１）およびマウスＢ７−ＤＣ（ｍＰＤ−Ｌ２）（配列番号１２）のＮ末端ＩｇＶドメイン由来の配列を包含する。ＣＤＳ０およびＣＤ８６のＸ線構造中に観察したβストランドは、（Ａ’〜Ｇ）と標識されており、Ｂ７ファミリー共通に最もよく保存されている残基位置（例えば、大型疎水性、荷電／極性、またはシステインの残基）には、太字にしていない。潜在的なＮ連結グリコシル化部位は、箱囲いしてある。下線を引いたＣＤ８６残基は、ホモ二量体結晶界面の形成に関与し、ＣＤ８０内に保存されており、太字で下線を引いたフォントで示した残基は、複合体構造中のＣＴＬＡ−４結合に関与する。変異原性試験に基づいてＰＤ−１結合に最も重要である、ｍＢ７−Ｈ１およびｍＢ７−ＤＣ内の残基位置は、太字で示してある。変異誘発した際にＰＤ−１に対するアビディティの増加を示した、ｍＢ７−Ｈ１内の残基は、丸囲いしてある。残基番号は、ｍＢ７−Ｈ１（上側の番号）およびｍＢ７−ＤＣ（下側の番号）内の位置を示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図８】野生型および改変体Ｂ７−ＤＣ分子のＴ細胞共刺激に対する効果を示すグラ
フである。図８Ａのデータは、９６ウェルプレートのウェル底部上に表示濃度で被覆した抗ＣＤ３  ｍＡｂの存在下、示した野生型（−◇−）または改変体（−■−Ｄ１１１；−×−Ｋ１１３）Ｂ７−ＤＣ  Ｉｇ融合タンパク質で刺激した後のＴ細胞増殖を表す。Ｔ細胞増殖は、抗ＣＤ３  ｍＡｂ濃度（μｇ／ｍｌ）の関数としての３Ｈ−チミジン（３Ｈ−ＴｄＲ）（×１０３ｃｐｍ）の取込みとして測定した。ヒトＩｇ（ｈＩｇ）（−○−）およびＰＢＳ単独（−▲−）を、共刺激性分子に対する陰性対照として用いた。データは、３実験の代表的な１実験を表す。図８Ｂのデータは、示したＩｇ融合タンパク質および抗ＣＤ３の存在下、４８または７２時間培養したＴ細胞によるＩＦＮ−γ分泌（ｎｇ／ｍｌ）を表す。ヒトＩｇおよびＰＢＳを、陰性対照として用いた。データは、３実験の代表的な１実験を表す。