【手続補正書】
【提出日】平成23年9月29日(2011.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中の対象物を選別および同定する方法であって、
ホログラフィック光トラッピング装置を提供すること；
分離されるべき対象物を含むサンプルを供給すること；
前記サンプル中の前記対象物を光学的に捕捉すること；
前記光トラッピングを用いて、前記対象物を所望の対象物と非所望の対象物とに選別すること；
前記サンプルから少なくとも１の所望の対象物を移動させること；および
前記所望の対象物についてＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施して、前記所望の対象物の識別を決定すること、
を含む方法。
【請求項２】
前記光トラッピングステップに先立って、前記方法が：
マイクロ流体チャンバーを有するマイクロ流体チップ内の流体の流れの中に前記サンプルを供給すること；および
前記マイクロ流体チップを通して前記サンプルを流動させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記所望の対象物のそれぞれが個別チャンバー内へ選別される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記選別ステップおよび前記実施ステップが単一のマイクロ流体チップ上で行なわれる、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記所望の対象物が細胞であり、前記非所望の対象物が混入物である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記所望の対象物が癌細胞であり、前記非所望の対象物が健常細胞であるか、またはその逆である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記実施ステップが単一細胞ＰＣＲに基づくＳＴＲ分析である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記マイクロ流体チャンバーが前記サンプルを含む入力チャンバーを含み、前記サンプルが前記入力チャンバーから少なくとも１の出力チャンバーへ流れ込む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記入力チャンバーの出口にフィルターを供給することをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
逆流を防ぐために前記マイクロ流体チャンバー内にバルブを供給することをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記の選別ステップおよびＰＣＲ実施ステップが自動化ならびに多重化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
サンプル中の対象物を選別および同定する方法であって、
入力チャンバーおよび少なくとも１の出力チャンバーを含むマイクロ流体チャンバーを有するマイクロ流体チップを提供すること；
選別されるべき対象物を含むサンプルを前記入力チャンバー内に供給すること；
前記対象物が所望の対象物と非所望の対象物とに選別されるように、前記対象物を前記入力チャンバー内で流体の流れを用いて選別すること；
前記所望の対象物を少なくとも１の前記出力チャンバー内へ移動させること；および
前記所望の対象物それぞれについてＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施して、前記所望の対象物の識別を決定すること、
を含む方法。
【請求項１３】
前記選別ステップおよび前記実施ステップが単一のマイクロ流体チップ上で行なわれる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記所望の対象物が細胞であり、前記非所望の対象物が混入物である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記実施ステップが単一細胞ＰＣＲに基づくＳＴＲ分析である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記所望の対象物が正常細胞であり、前記非所望の対象物が癌性細胞であるか、またはその逆である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記入力チャンバーの出口にフィルターを供給することをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
逆流を防ぐために前記マイクロ流体チャンバー内にバルブを供給することをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記の選別ステップおよびＰＣＲ実施ステップが自動化ならびに多重化されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
対象物を選別するための装置であって、
サンプルが配置される支持体を有するホログラフィック光トラッピング装置であって、該光トラッピング装置が、前記サンプル中の非所望の対象物から所望の対象物を光学的に捕捉し選別するホログラフィック光トラッピング装置；および
前記所望の対象物についてＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施するための装置、を含む装置。
【請求項２１】
前記所望の対象物が細胞であり、前記非所望の対象物が混入物である、請求項２０に記載の装置。
【請求項２２】
前記所望の対象物が正常細胞であり、前記非所望の対象物が癌性細胞であるか、またはその逆である、請求項２０に記載の装置。
【請求項２３】
前記ＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施するための装置が、単一細胞ＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を行う、請求項２０に記載の装置。
【請求項２４】
前記所望の対象物の光トラッピングの前に前記サンプルを流動させるためのマイクロ流体チップであって、入力チャンバー及び出力チャンバーを含むマイクロ流体チャンバーを有するマイクロ流体チップをさらに含む、請求項２０に記載の装置。
【請求項２５】
前記支持体および前記のＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施するための前記装置が単一チップである、請求項２０に記載の装置。
【請求項２６】
逆流を防ぐための、前記マイクロ流体チャンバー内に配置される複数のバルブをさらに含む、請求項２４に記載の装置。
【請求項２７】
前記入口チャンバーの出口に配置されるフィルターをさらに含む、請求項２４に記載の装置。
【請求項２８】
前記の選別ステップおよびＰＣＲ実施ステップが自動化ならびに多重化されている、請求項２０に記載の装置。
【請求項２９】
対象物を選別するための装置であって、
サンプルを含む入力チャンバーおよび少なくとも１の出力チャンバーを含むマイクロ流体チャンバーを有するマイクロ流体チップであって；
前記マイクロ流体チップが前記サンプルを流し、非所望の対象物から所望の対象物が、前記入力チャンバーから前記の少なくとも１の出力チャンバーへ選別されるマイクロ流体チップ；および
前記所望の対象物についてＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施するための装置、を含む装置。
【請求項３０】
前記非所望の対象物から前記所望の対象物を、前記入力チャンバーから前記の少なくとも１の出力チャンバーへ選別するためのホログラフィック光トラッピング装置をさらに含む、請求項２９に記載の装置。
【請求項３１】
前記マイクロ流体チップおよび前記ＰＣＲに基づくＳＴＲ分析を実施するための前記装置が単一チップである、請求項２９に記載の装置。
【請求項３２】
前記所望の対象物が細胞であり、前記非所望の対象物が混入物である、請求項２９に記載の装置。
【請求項３３】
前記所望の対象物が正常細胞であり、前記非所望の対象物が癌性細胞である、請求項２９に記載の装置。
【請求項３４】
逆流を防ぐための、前記マイクロ流体チャンバー内に配置される複数のバルブをさらに含む、請求項２９に記載の装置。
【請求項３５】
前記入口チャンバーの出口に配置されるフィルターをさらに含む、請求項２９に記載の装置。
【請求項３６】
前記の選別ステップおよびＰＣＲ実施ステップが自動化ならびに多重化されている、請求項２９に記載の装置。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
一例によれば、入力チャンバー３０４の寸法はサンプル３０２そのものの必要に基づいて選択されるが、精子の選別については、長さとしては５００μｍ、幅としては１００μｍ、および深さとしては使用するサンプル量に基づくものの約１〜５μｌ（または、オンチップＰＣＲがナノリットル量でもうまく実行できることから、ナノリットル範囲のように、より少ない量でもよい）と推定され得る。出力チャンバー３０５は入力チャンバー３０４よりも小型で、かつ該チャンバー３０５が単一チャネル３０６または複数チャネル３０６を介して入力チャンバー３０４と結合され、１以上のチャンバー３０５が入力チャンバー３０４に結合して無菌使い捨てチップを形成するのに適切なサイズであってよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
上記の第１の実施形態で述べたように、抽出されたＤＮＡを有するチップ３００を、ＳＴＲプライマーを用いた増幅のため、ＰＣＲ（サーモサイクラー）装置３０１に配置する。その後、ＰＣＲ増幅されたＤＮＡについてＳＴＲ分析を行う（すなわち、標準ＳＴＲマーカーに対するバンドを同定するためゲルを流す）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
本発明の第３の実施形態によれば、第２の実施形態によるマイクロ流体チップ４００は、入力チャンバー４０１（図５を参照）からの液体の流速、チャネル４０３の寸法（すなわち長さ、幅、深さ）、およびチップ４００自体の材料が調整されるように改変されており、かつ、サンプル４０２からの２個の細胞がチャネル４０３の内側、特には接合部４０４付近の同一位置を占めないように流れが調節されているため、単一細胞を、チャネル４０５を通してチャンバー４０６〜４０９などへ選別できる。１つのチャンバー（例えば４０６）は１個の細胞を含むことが理想的である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
サンプル５００からの混入物（すなわち上皮細胞）は入口チャンバー／リザーバー５０１の底面に沈殿し、精子細胞は、チャネル５０４を通した流量により移動させられて、出口チャンバーリザーバー５０３内に回収される。第２段階において、前述の方法に従い、チャネル５０９を介して選別された精子は個別回収リザーバー５０５〜５０８に回収される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
第３段階において、チャンバー５１０〜５１３内で個々の精子の溶解が行なわれ、前述の方法に従って、単一細胞ＰＣＲ（オンチップＰＣＲ）によりＤＮＡの抽出が達成される。