【事件の表示】
　特願２００２−　１９７１７「ニトリルヒドラターゼの保存方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１５年　８月　５日出願公開、特開２００３−２１９８７０〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯
　本願は平成１４年１月２９日を出願日とする特許出願であって，平成１９年１２月２１日付で拒絶査定がなされ，平成２０年２月７日に拒絶査定不服審判が請求され，平成２２年１２月２７日付で当審による拒絶理由が通知され，平成２３年３月７日に特許請求の範囲について手続補正がなされたものである。
　
２．本願発明
　本願の請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，平成２３年３月７日付手続補正書によって補正された特許請求の範囲に記載された以下のとおりのものと認める。
「【請求項１】ニトリルヒドラターゼを保存する際に，その保存温度を−５℃未満，−４０℃以上の凍結した状態で安定剤を添加することなく保存するニトリルヒドラターゼの保存方法であって，ニトリルヒドラターゼの状態が，酵素を含む遺伝子組換え大腸菌菌体，酵素を含む遺伝子組換え大腸菌の固定化物，酵素を含む遺伝子組換え大腸菌を含む培養液のいずれかであることを特徴とするニトリルヒドラターゼの保存方法。」
　
３．引用例
（１）引用例１
　当審による拒絶の理由で引用例された，本願出願日前に頒布された刊行物である，FEMS, Microbiology Letters, 1995, Vol.129, p.57-61には，以下の事項が記載されている。
　
ア．「Rhodococcus AJ270由来のニトリルヒドラターゼによる位置−及び立体−特異的ニトリル加水分解」（第５７頁標題）
　
イ．「アセトニトリルを利用する細菌AJ270が土壌から単離され，Rhodococcus菌種として同定され，その属の全ての認識された種と異なるものであることが示された。それは試験された３６の脂肪族，芳香族及び複素環芳香族のニトリルのうち３２のニトリルでよく成長し，高濃度（0.25−0.38Ｍ）のアセトニトリル，ベンゾニトリル及び３−シアノピリジンで急成長することができる。Rhodococcus AJ270のニトリルヒドラターゼは−２０℃で１８ヶ月間の貯蔵において安定であり，非常に広範な範囲のニトリル及びジニトリルに対して活性を持ち，位置特異的及び立体特異的なニトリル生体内分解を触媒することができる。AJ270の頑強な多用途の生体触媒としての適合性が議論される。」（第５７頁要約）
　
ウ．「ニトリルヒドラターゼ解析のための細菌は，３０℃で０．２５Ｍアセトニトリルを補充された５００ｍｌのミネラル培地を含む２リットル振盪フラスコで生育された。培養物は対数期後期（約２０時間後）に遠心分離により回収され，０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液，ｐＨ７．２（緩衝液Ａ）で２度洗浄し，同じ緩衝液に再懸濁された。」（第５８頁左欄第１８〜２４行）
エ．「ｐＨ７での割合の＞６５％はｐＨ５〜９の範囲にわたって観察されたが，最も高い割合のアセトニトリル加水分解は，３０℃，ｐＨ７．０で観察された。−２０℃で貯蔵された細胞ペレットは，１８ヶ月後に最初の活性の８０％を保持していた。」（第６０頁左欄第９〜１３行）
　
　上記記載事項ア〜エによれば，引用例１には，ニトリルヒドラターゼを含むRhodococcus AJ270菌体のペレットを−２０℃で保存することが記載されている。
　
（２）引用例２
　当審による拒絶の理由で引用された，本願出願日前に頒布された刊行物である，特開平９−２７５９７８号公報には，以下の事項が記載されている。
　
ア．「本発明は，シュードノカルディア・サーモフィラ（
Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ
　
イ．「ニトリルヒドラターゼを用いてニトリル化合物よりアミド化合物を工業的に製造するためには，アミド化合物の製造コストに占める該酵素の製造コストを下げることが重要であり，より具体的には単位微生物重量・単位時間あたりのアミド化合物の生成速度（以下，菌体活性と呼ぶ）を高くする必要がある。そこで，該酵素の遺伝子を用いて遺伝子工学の手法により該酵素を大量に発現させることを目的として，該酵素の遺伝子をクローニングする試みが検討されている。例えば，コリネバクテリウム属（特開平２−１１９７７８），シュードモナス属（特開平３−２５１１８４），ロドコッカス属ロドクロウス種（特開平４−２１１３７９），リゾビウム属（特開平６−２５２９６），クレビシエラ属（特開平６−３０３９７１）を挙げることができる。」（段落【０００３】）
　
ウ．「［実施例３］形質転換菌株の造成
　ｐＰＴ−Ｂ１上のｌａｃプロモーターの転写方向とＯＲＦ１及びＯＲＦ２の転写方向は完全に一致していた。そこで，ｐＰＴ−Ｂ１上のニトリルヒドラターゼ遺伝子の５’末端側上流に位置し，かつ，ｐＰＴ−Ｂ１上の唯一の制限酵素サイトであるＸｂａＩおよびＮｓｐＶによりｐＰＴ−Ｂ１を切断し，アガロースゲル電気泳動（シグマ社製タイプＶＩＩ低融点アガロース使用；アガロース濃度０．７％）を行い，アガロースゲルから約４．６ＫｂｐのＤＮＡ断片のみを切り出した。切りだしたアガロース片（約０．１ｇ）を細かく粉砕し１ｍｌのＴＥ溶液に懸濁後，５５℃で１時間保温してアガロースを完全に融解させ，この融解液に対して実施例２と同様のフェノール／クロロホルム抽出とエタノール沈澱を行ってＤＮＡ断片を精製した。ＤＮＡブランティングキット（宝酒造社製）により平滑末端化処理を行った後，ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造社製）により自己連結させてプラスミドｐＰＴ−ＤＢ１［図−２（図２）］を構築した。東洋紡績社製の大腸菌ＨＢ１０１のコンピテントセルを用いてｐＰＴ−ＤＢ１をＨＢ１０１株に導入し，形質転換菌株ＭＴ−１０８２２株を得た。これにより，本菌株においてニトリルヒドラターゼ遺伝子がｐＵＣ１８上のｌａｃプロモーターにより転写・翻訳されるようになった。ＭＴ−１０８２２株は受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−５７８５として茨城県つくば市東１丁目１番３号にある工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている。」（段落【００３５】）
　
４．対比・判断
　引用例１の記載事項ウによれば，解析のための細菌は振盪フラスコで培養された後，遠心分離によって回収されたものであるから，引用例1に記載された発明において貯蔵された細胞ペレットは，安定剤を添加することなく−２０℃の凍結した状態で保存されたものと認められる。
　よって，本願発明と引用例1に記載された発明とは，「ニトリルヒドラターゼを保存する際に，その保存温度を−５℃未満，−４０℃以上の凍結した状態で安定剤を添加することなく保存するニトリルヒドラターゼの保存方法であって，ニトリルヒドラターゼの状態が，酵素を含む菌体であることを特徴とするニトリルヒドラターゼの保存方法。」の点で一致し，以下の点で相違する。
相違点：本願発明は菌体が遺伝子組換え大腸菌であるのに対し，引用例1に記載された発明では，Rhodococcus AJ270である点。
　
　上記相違点について検討する。
　引用例２には，アミド化合物の工業的製造に使用するために，遺伝子組換えによりニトリルヒドラターゼを大量生産することが従来から検討されてきたこと（記載事項イ），及び，ニトリルヒドラターゼを産生する遺伝子組換え大腸菌（記載事項ウ）が記載されており，このような遺伝子組換え大腸菌によって大量生産された酵素についても，アミド化合物の製造に使用するまでの間，その活性を低下せさずに保存する必要があるのは自明である。
　そして，引用例１に記載されたRhodococcus属菌と引用例２に記載された大腸菌とは，微生物の種類は異なるものではあるが，菌体内で生産される酵素は，同じニトリルヒドラターゼであり，上述のとおり，いずれも工業的に使用するまで安定に保存する必要性があるものであるから，引用例１に記載されたニトリルヒドラターゼと同じ条件で，引用例２に記載されたニトリルヒドラターゼの保存を試みることは，当業者が容易に想到し得たものである。
　よって，引用例1に記載されたRhodococcus AJ270を−２０℃で凍結保存する方法を，引用例2に記載された遺伝子組換え大腸菌に適用し，本願発明の構成とすることは，当業者が容易に想到し得たものである。
　そして，本願発明の奏する効果は，引用例１及び２の記載から予測し得るものである。
　
　請求人は平成２３年３月７日付の意見書において，引用例１及び２を組み合わせて参酌し，本願発明を想到するためには，当業者であってもさらに過度の試行錯誤を要すると述べ，本願発明の進歩性を主張している。
　しかしながら，引用例１に記載された−２０℃という保存温度は，本願発明において特定する保存温度の範囲に含まれるものであり，それをそのまま採用して引用例１に記載された保存方法と引用例２に記載された遺伝子組換え大腸菌とを組み合わせれば，本願発明の構成となるのであるから，さらに過度の試行錯誤を要するという請求人の主張を採用することはできない。
　
５．むすび
　したがって，本願の請求項１に係る発明は，引用例１及び２に基づき当業者が容易に発明をすることができたものであり，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから，本願は拒絶すべきものである。
　よって，結論のとおり審決する。