【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年10月19日(2011.10.19)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
1細胞当たりの子宮頸部細胞におけるHPV E6, E7 mRNAの発現をin vitroのアッセイで定量する工程；
各細胞に対して、所定のカットオフポイントより大きいHPV E6, E7 mRNAコピーの発現を有する子宮頸部細胞を同定する工程
を含む方法。
【請求項２】
各細胞に対するHPV E6, E7 mRNAコピーの発現が所定のカットオフポイントより大きい場合、前記子宮頸部細胞が前悪性であること、または悪性形質転換したことを決定する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
所定のカットオフポイントが、200コピーのHPV E6, E7 mRNAである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
各細胞に対して200コピー未満のHPV E6, E7 mRNAの発現により、前記子宮頸部細胞が良性であることを決定する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
各細胞に対して所定のカットオフポイントより大きいHPV E6, E7 mRNAコピーの発現を有する子宮頸部細胞の割合を決定する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
各細胞に対して200コピー以上のHPV E6, E7 mRNAの発現を有する子宮頸部細胞の割合を決定する工程を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記子宮頸部細胞が、正常細胞、意義不明な異常扁平上皮細胞(ASCUS)、低悪性度の扁平上皮内病変(LGSIL)を有する細胞、及び高悪性度の扁平上皮内病変(HGSIL)を有する細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
HPV E6, E7 mRNAに特異的なオリゴヌクレオチドを使用するin situハイブリダイゼーションにより、HPV E6, E7 mRNAを同定する工程を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
フローサイトメトリーにより、各細胞に対してHPV E6, E7 mRNAの発現を定量する工程を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
液状細胞診(LBC)検体として前記子宮頸部細胞を調製する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
HPV E6, E7 mRNAに特異的なオリゴヌクレオチドを使用して、前記LBC検体をハイブリダイズさせる工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
CD16とCAM5.2の組み合わせで子宮頸部細胞を染色する工程をさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法であって、好中球がCD16+染色によって同定され、円柱子宮頚管内膜細胞がCD16-, CAM 5.2+染色によって同定され、及び扁平子宮膣部細胞がCD16-, CAM5.2-染色によって同定される方法。
【請求項１３】
悪性形質転換した円柱子宮頚管内膜細胞を同定することにより、腺癌の状態を決定する工程を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
悪性形質転換した扁平子宮膣部細胞を同定することにより、扁平細胞癌の状態を決定する工程を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
細胞診の診断に、HPV E6, E7 mRNAを発現する細胞の割合を関連付ける工程をさらに含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法であって、前記細胞診の診断が、HPV E6, E7 mRNAを発現する細胞の割合がWNL(p<0.001)、ASCUS(p<0.001)、及びLGSIL(p<0.001)におけるHPV E6, E7 mRNAを発現する細胞の割合よりも有意に大きい場合にHGSILである、あるいは前記細胞診の診断が、HPV E6, E7 mRNAを発現する細胞の割合がWNL(p<0.01)におけるHPV E6, E7 mRNAを発現する細胞の割合よりも有意に大きい場合にLGSILである、方法。
【請求項１６】
第一のプレハイブリダイゼーション洗浄液；
第二のプレハイブリダイゼーション洗浄液；
ハイブリダイゼーション混合物；
HPV E6, E7 mRNA特異的オリゴヌクレオチド；
第一のポストハイブリダイゼーション洗浄液；
第二のポストハイブリダイゼーション洗浄液；及び
透過化試薬
からなる試薬のセットであって、第一および第二の抗体と、リン酸緩衝生理食塩水と、2%ウシ胎仔血清と、ならびに細胞あたり200コピー以上のHPV E6, E7 mRNAを有する子宮頸部細胞を含む液状子宮頸部細胞診検体とを組み合わせる場合、前記試薬のセットによって、細胞あたり200コピーより大きいHPV E6, E7 mRNAを有する液状子宮頸部細胞診検体における子宮頸部細胞が、悪性であること、または悪性の可能性があることを決定する、試薬のセット。
【請求項１７】
前記HPV E6, E7 mRNA特異的オリゴヌクレオチドが蛍光標識されている、請求項１６に記載の試薬のセット。
【請求項１８】
前記HPV E6, E7 mRNA特異的オリゴヌクレオチドが、フルオロセインで3’および5’標識されている、請求項１７に記載の試薬のセット。
【請求項１９】
前記透過化試薬が固定化試薬である、請求項１６に記載の試薬のセット。
【請求項２０】
前記第一の抗体および第二の抗体が、抗CD16および抗CAM5.2である、請求項１６に記載の試薬のセット。
【請求項２１】
前記固定化／透過化試薬がPermiFlowである、請求項１６に記載の試薬のセット。
【請求項２２】
前記ハイブリダイゼーション混合物が、5×SSC、30%ホルムアミド、及び100μg/mL剪断サケ精子DNAからなる、請求項１６に記載の試薬のセット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
HPVのライフサイクルは、高リスクのHPVを有する女性が低悪性度のSIL(「LGSIL」、すなわち、早期の前悪性病変に由来するSIL)又は高悪性度のSIL(「HGSIL」、すなわち、進行した前悪性病変に由来するSIL)のいずれかを発症して癌に進行し、一方で低リスクのHPVを有する女性はその様にならないことを示すであろうが、実際には、高リスクのHPVに感染してLGSIL又はHGSILを示す少数の女性のみが、癌に進行するであろう。下表は、ASCUS(意義不明な異常扁平上皮細胞)、LGSIL、及びHGSILを使用するPap塗抹試験又はLBCによって診断された女性の退行及び進行の割合を示す(Melnikow et al., Natural History of Cervical Squamous Intraepithelial Lesions: A Meta-Analysis, J. OBSTET. GYNECOL. 92:727-735 (1998); Woodman et al., Natural History of Cervical Human Papillomavirus Infection in Young Women: A Longitudinal Cohort Study, LANCET 357: 1831 -1836 (2001))。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
上記アッセイ及び方法の双方において使用されて良い子宮頸部細胞は、正常な細胞、意義不明な異常扁平上皮細胞(ASCUS)、低悪性度の扁平上皮内病変(LGSIL)を有する細胞、並びに高悪性度の上皮内病変(HGSIL)を有する細胞からなる群から選択されて良い。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明の第3の態様では、子宮頸部細胞におけるHPV E6, E7 mRNAの発現を定量する工程を含む、前悪性子宮頸部細胞についての異常な子宮頸部細胞を有する患者のスクリーニング方法であって、1細胞当たり200コピー以上のHPV E6, E7 mRNAを発現する細胞が悪性の可能性がある細胞を示し、200コピー未満のHPV E6, E7 mRNAを発現する細胞が良性の細胞を示す方法を提供する。異常な子宮頸部細胞は、意義不明な異常扁平上皮細胞(ASCUS)、低悪性度の扁平上皮内病変(LGSIL)、並びに高悪性度の上皮内病変(HGSIL)を有する細胞を有する細胞からなる群から選択される。好ましい実施態様では、HPV E6, E7 mRNAは、HPV E6, E7 mRNAに特異的なオリゴヌクレオチドを使用するin situハイブリダイゼーションを使用して同定され、フローサイトメトリーを使用して定量される。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本発明の第1及び第2の実施態様のアッセイ及び方法の双方において、子宮頸部細胞は、正常細胞、意義不明な異常扁平上皮細胞(ASCUS)、低悪性度の扁平上皮内病変(LGSIL)を有する細胞、及び高悪性度の上皮内病変(HGSIL)を有する細胞からなる群から選択される。上述のように、子宮頸部細胞診の他の利用可能な方法を超える、細胞内HPVアッセイの非常に有利な点は、HPV E6, E7 mRNA発現の検出を介する細胞内HPVアッセイは、外見上正常な細胞における早期の悪性形質転換を同定し得る点である。子宮頸部細胞のスクリーニングの現在利用可能な方法には、その様な感度及び特異性が可能なものは存在しない。正常な細胞診の細胞におけるHPV E6, E7 mRNAを検出する細胞内HPVアッセイの能力は、実施例６及び７に記載している。実施例６では、正常な子宮頸部細胞診を有する高リスクの女性41人のうち3人が、細胞内HPVアッセイを使用するとHPV E6, E7 mRNAに関して陽性反応を示し、実施例７では、低リスクの女性109人のうち10人がHPV E6, E7 mRNAに関して陽性反応を示した。かくして、これらの女性の「正常」細胞における悪性形質転換を示した。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
本発明の第3の実施態様では、子宮頸部細胞におけるHPV E6, E7 mRNAの発現を定量する工程を含む、前悪性子宮頸部細胞について異常な子宮頸部細胞を有する患者をスクリーニングする方法であって、1細胞当たり200コピー以上のHPV E6, E7 mRNAを発現する細胞が悪性の細胞を示し、200コピー未満のHPV E6, E7 mRNAを発現する細胞が良性の細胞を示す方法を提供する。この第3の実施態様において試験され得る異常な細胞は、意義不明な異常扁平上皮細胞(ASCUS)、低悪性度の扁平上皮内病変(LGSIL)を有する細胞、及び高悪性度の上皮内病変(HGSIL)を有する細胞からなる群から選択されて良い。上述の実施態様と同様に、HPV E6, E7 mRNAは、in situハイブリダイゼーションによって同定され、フローサイトメトリーによって定量される。