【事件の表示】
　平成１０年特許願第　１５０６４号「糖化タンパク質の測定方法及び測定装置」拒絶査定不服審判事件〔平成１１年　７月２７日出願公開、特開平１１−１９６８９７〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯
　本願は，平成１０年１月９日を出願日とする特許出願であって，平成１９年１２月２８日に特許請求の範囲について手続補正がされ，平成２０年１月２２日付で拒絶査定がなされ，同年２月２８日に拒絶査定不服審判が請求されるとともに特許請求の範囲について手続補正がなされたものである。
　
２．平成２０年２月２８日付の手続補正についての補正却下の決定
［補正却下の決定の結論］
　平成２０年２月２８日付の手続補正（以下，「本件補正」という。）を却下する。
［理由］
（１）補正の内容
　本件補正は，補正前の特許請求の範囲の請求項１〜４の，
「【請求項１】プロテアーゼ及びフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを固定化担体に固定化することによりプロテアーゼ固定化担体およびフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を作製し，前記プロテアーゼ固定化担体を充填したプロテアーゼ固定化カラムおよび前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を充填したフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムを測定試料がこの順に流れるように予め用意し，測定試料中の糖化タンパク質を前記プロテアーゼ固定化カラムにより断片化処理した後，続いて断片化した糖化タンパク質を前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムに流すことにより過酸化水素を生成させ，前記過酸化水素を検出することによって，糖化率または糖化タンパク質量を求める糖化タンパク質の測定方法。
【請求項２】前記過酸化水素の検出に，ペルオキシダーゼ固定化担体を充填したペルオキシダーゼ固定化カラムを用い，前記ペルオキシダーゼ固定化カラムは，前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムの次に連結されている請求項１に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項３】測定時に測定試料を流すために前記各カラムを通る溶液を使用し，前記溶液は前記過酸化水素を検出するための色原体を含有する請求項１又は請求項２のいずれかに記載する糖化タンパク質の測定方法。
【請求項４】前記ペルオキシダーゼ固定化カラムにおいて生じた発色を吸光度計を用いて測定する請求項２又は請求項３のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。」の記載を，補正後の
「【請求項１】プロテアーゼ及びフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを固定化担体に固定化することによりプロテアーゼ固定化担体およびフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を作製し，前記プロテアーゼ固定化担体を充填したプロテアーゼ固定化カラムおよび前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を充填したフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムを測定試料がこの順に流れるように予め用意し，前記測定試料中の糖化タンパク質を前記プロテアーゼ固定化カラムにより断片化処理した後，続いて断片化した糖化タンパク質を前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムに流すことにより過酸化水素を生成させ，前記過酸化水素を検出することによって，糖化率または糖化タンパク質量を求める糖化タンパク質の測定方法であって，
前記過酸化水素の検出にペルオキシダーゼ固定化担体を充填したペルオキシダーゼ固定化カラムを用い，前記ペルオキシダーゼ固定化カラムは前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムの次に連結されており，
測定時に前記測定試料を流すために前記各カラムを順に通る溶液を使用し，前記溶液は前記過酸化水素を検出するための色原体を含有し，
前記ペルオキシダーゼ固定化カラムにおいて生じた前記溶液の発色を前記ペルオキシダーゼ固定化カラムの次に連結された吸光度計を用いて測定することによって，
糖化率または糖化タンパク質量を求める糖化タンパク質の測定方法。」に変更する補正を含むものである。
　
（２）補正の目的
　本件補正は，補正前の請求項１を削除するとともに，補正前の請求項２に対し，補正前の請求項３及び４の特定事項を付加し，さらに，補正前の請求項４の特定事項に含まれていた「発色」及び「吸光度計」について，それぞれ「前記溶液の」及び「前記ペルオキシダーゼ固定化カラムの次に連結された」という特定事項を付加して補正後の請求項１としたものであるから，特許請求の範囲の限定的減縮を目的とするものである。
　
（３）独立特許要件
　そこで，補正後の請求項１に係る発明（以下，「本件補正発明」という。）の独立特許要件について検討する。
　
ア．引用例
　原査定の拒絶の理由で引用された，本願出願日前に頒布された刊行物である国際公開第９７／１３８７２号(以下，「引用例１」という。）には，以下の事項が記載されている。
　
（ア）「１４．試料をエンド型プロテアーゼで処理したのち，あるいは処理しながら，フルクトシルアミノ酸オキシダーゼを作用させて，酸素の消費量又は反応生成物の量を測定することを特徴とする，該試料中のペプチト鎖内部に糖化部位を有するアマドリ化合物の分析方法。
１５．アマドリ化合物が糖化アルブミンである請求項１４記載の方法。
１６．試料中にヘモグロビンを含有する場合には，アマドリ化合物を６００〜８００ｎｍにおける吸光度によって測定することを特徴とする，請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
１７．反応混合物に，ペルオキシダーゼと酸化されて色素を生成する試薬を作用し，反応混合物中の過酸化水素の発生量を測定することを特徴とする，請求項１６記載の方法。
１８．試薬が，Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４,４−ビス（ジメチルアミノ）ビフェニルアミン（ＤＡ６４），１０−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３,７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン（ＤＡ６７），４−アミノアンチピリン（４ＡＡ）／Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン（ＭＡＯＳ），４−アミノアンチピリン（４ＡＡ）／Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３,５−ジメチルアニリン（ＭＡＰＳ）からなる群から選択されるものである請求項１７記載の方法。」（特許請求の範囲）
　
（イ）「アマドリ化合物は，タンパク質，ペプチド及びアミノ酸のようなアミノ基を有する物質と，アルドースのような還元性の糖が共存する場合，アミノ基とアルデヒド基が非酵素的かつ非可逆的に結合し，アマドリ転移することにより生成される。アマドリ化合物の生成速度は反応性物質の濃度，接触時間，温度などの関数で表される。従って，その生成量から，それら反応性物質を含有する物質に関する様々な情報を得ることができると考えられている。アマドリ化合物を含有する物質としては，醤油等の食品，及び血液等の体液がある。
  生体では，グルコースとアミノ酸が結合したアマドリ化合物であるフルクトシルアミン誘導体が生成している。例えば，血液中のヘモグロビンが糖化されたフルクトシルアミン誘導体はグリコヘモグロビン，アルブミンが糖化された誘導体はグリコアルブミン，血液中のタンパクが糖化された誘導体の還元能はフルクトサミンと呼ばれる。これらの血中濃度は，過去の一定期間の平均血糖値を反映しており，その測定値は，糖尿病の症状の診断及び症状の菅理の重要な指標となり得るために，測定手段の確立は臨床上，極めて有用である。また，食品中のアマドリ化合物を測定することにより，その食品の製造後の保存状況や期間を知ることができ，品質管理に役立つと考えられる。このように，アマドリ化合物の分析は医学及び食品を含む広範な分野で有用である。」（再公表公報第５頁８〜２５行）
　
（ウ）「基質の糖化部位に作用する酵素として，フルクトシルアミノ酸オキシダーゼを挙げることができる。フルクトシルアミノ酸オキシダーゼを用いる場合，アマドリ化合物の測定は，反応混合物における酸素の消費量又は生成物の量を測定することにより行う。生成物としては，過酸化水素及びグルコソンがある。過酸化水素の定量は，通常，過酸化水素のペルオキシダーゼ又はペルオキシダーゼ様活性を有する触媒による分解に伴って色素を生成する色原体を用いて測定するか，電気化学的手法によって測定することができる。または，カタラーゼとアルコールの存在下で生成されたアルデヒドの量を測定することによっても過酸化水素の発生量を定量することができる。
　本発明方法には，真菌類をフルクトシルリジン及び／又はフルクトシルＮα−Ｚ−リジン含有培地で培養することによって生成される酵素を用いることができる。なお，本明細書中では，本発明方法に用いるフルクトシルアミノ酸オキシダーゼをＦＡＯＤと称する。」（同第１１頁１３〜２５行）
　
（エ）「本発明の分析法では，下記のいずれかのアマドリ化合物の測定法を用いる。
（１）反応生成物の量に基づく方法
  ＦＡＯＤの作用により，過酸化水素及びグルコソンが生成される。過酸化水素の測定には，当該技術分野で既知の方法，例えば，発色法，過酸化水素電極を用いる方法等で測定し，過酸化水素及びアマドリ化合物の量に関して作成した標準曲線と比較することにより，試料中のアマドリ化合物を測定する。具体的には，上記３の力価の測定に準じる。ただし，ＦＡＯＤ量は１ユニット／ｍｌとし，適当に希釈した試料を添加し，生成する過酸化水素量を測定する。過酸化水素の比色法における発色系としては，ペルオキシダーゼの存在下で４−アミノアンチピリン（４ＡＡ），３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(ＭＢＴＨ)等のカップラーとフェノール等の色原体との酸化縮合により色素を生成する系を用いることができる。
  色原体として，フェノール誘導体，アニリン誘導体，トルイジン誘導体等があり，例えば，Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン，Ｎ,Ｎ−ジメチルアニリン，Ｎ,Ｎ−ジエチルアニリン，２,４−ジクロロフェノール，Ｎ−エチル-Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロビル）−３,５−ジメトキシアニリン，Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３,５−ジメチルアニリン（ＭＡＰＳ），Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３,５−ジメチルアニリン（ＭＡＯＳ）等が挙げられる。」（同第２１頁２６行〜第２２頁１５行）
　
（オ）「本発明方法は試料溶液をそのまま用いて行うこともできるが，対象となるアマドリ化合物によっては，試料をＦＡＯＤが反応しやすい状態に処理しながら，又は処理してから行うことが好ましい。
  そのような目的には，プロテアーゼを用いる場合（酵素法）と，トリクロロ酢酸等の化学物質を用いる場合（化学法），熱等の物理的手法を用いる場合（物理法）がある。酵素法には，当業者に既知である，エンド型及びエキソ型のプロテアーゼを単独であるいは組み合わせて用いることができる。」（同第２３頁２３行〜２４頁２行）
　
（カ）「さらに，本発明方法に用いられるＦＡＯＤ，ペルオキシダーゼ，カタラーゼ，プロテアーゼ等の酵素は，溶液状態で用いてもよいが，適当な固体支持体に固定化してもよい。例えば，ビーズに固定化した酵素をカラムに充填し，自動化装置に組み込むことにより，臨床検査など，多数の検体の日常的な分析を効率的に行うことができる。しかも，固定化酵素は再使用が可能であることから，経済効率の点でも好ましい。・・・　
　酵素の固定化は当該技術分野で既知の方法により行うことができる。例えば，担体結合法，架橋化法，包括法，複合法等によって行う。担体としては，高分子ゲル，マイクロカプセル，アガロース，アルギン酸，カラギーナン，などがある。結合は共有結合，イオン結合，物理吸着法，生化学的親和力を利用し，当業者既知の方法で行う。
固定化酵素を用いる場合，分析はフロー又はバッチ方式のいずれでもよい。上記のごとく，固定化酵素は，血液試料中の糖化タンパクの日常的な分析（臨床検査）に特に有用である。
  臨床検査が糖尿病診断を目的とする場合，診断の基準としては，結果を糖化タンパク濃度として表すか，試料中の全タンパク質濃度に対する糖化タンパク質の濃度の比率（糖化率）又はフルクトシルアミン量で表す。」（同第２８頁３行〜２２行）
　
（キ）「実施例１
  本実施例では製造例１で得たキベレラ属由来のＦＡＯＤを用いた。
  ０.１％のフルクトシルポリリジン溶液をＢＭＹ・ＮＢＴ検定法を用いて検定したところ，７５０μmol／ｌのフルクトサミン値を示すことが分かった。
  この溶液を蒸留水で希釈することにより，０〜７５０μmol／ｌの範囲で変化する一連の試料を作成した。ＦＡＯＤ反応液は，以下のように調製した。
  ４５mＭ  ４−アミノアンチピリン溶液                      ５０μl
  ６０mＭ  フェノール溶液                                  ５０μl
  ６０ユニット／ml  ペルオキシダーゼ溶液                   ５０μl
  ０.１Ｍ  トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０）               ５００μl
  ７.６ユニット／ml  ＦＡＯＤ溶液                          ３０μl
  ０.０５％  トリプシン(エンド型プロテアーゼ)溶液        １００μl
蒸留水で全量を１４００μlとした。
  ７.６ユニット／mlＦＡＯＤ溶液は，製造例１で得たギベレラ・フジクロイ（IFO NO.6356）（Gibberella fujikuroi）由来のＦＡＯＤを７.６ユニット／mlになるよう，０.１Ｍ  トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０）で希釈して調製した。
  この反応液を３０℃でインキュベートし，作成したフルクトシルポリリジン溶液各１００μlを加え，３０分後の５０５nmにおける吸光度を測定した。この方法で得られるフルクトサミン値と吸光度との関係を第１図に示す。図中，縦軸は５０５nmの吸光度（過酸化水素の量に対応），横軸はフルクトサミン値を表す。図は，フルクトサミン値と過酸化水素発生量が相関関係にあることを示している。」（同第３４頁１０行〜第３５頁４行）
　
（ク）「　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　」（第１図）
（ケ）「実施例２  糖化ヒト血清アルブミン濃度の測定
  本実施例では製造例２で得たフサリウム属由来のＦＡＯＤを用いた。糖化ヒト血清アルブミン（シグマ社）を０.９％塩化ナトリウム水溶液で溶解させ，０〜１０％の範囲で濃度の異なる糖化ヒト血清アルブミン溶液を調製した。
  これらの溶液を用いて以下の操作を行った。
１）試料の処理
  糖化アルブミン溶液                                       ６０μl
  １２.５mg/ml  プロテアーゼXIV（シグマ社）
                （エンド型プロテアーゼ）溶液               ６０μl
  この混合液を３７℃で３０分間インキュベートし，その後，約９０℃で５分間，加熱して熱変性させた。
２）活性測定
  ＦＡＯＤ反応液は以下のようにして調製した。
  ４５mＭ  ４−アミノアンチピリン溶液                      ３０μl
  ６０mＭ  Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−
  ３−スルホプロピル）−m−トルイジン溶液                  ３０μl
  ６０ユニット／ml  ペルオキシダーゼ溶液                   ３０μl
  ０.１Ｍ  トリス−塩酸緩衝液（pＨ８.０）                ３００μl
  １０.３ユニット/ml  ＦＡＯＤ溶液                         ２０μl
蒸留水で全量を１mlとした。
  １０.３ユニット／ml  ＦＡＯＤ溶液は，製造例２で得たフサリウム・オキシスポルムＳ−１Ｆ４（FERM BP-5010）（Fusarium oxysporum Ｓ−１Ｆ４）白来のＦＡＯＤを１０.３ユニット／mlになるよう，０.１Ｍトリス−塩酸緩衝液（pＨ８.０）で希釈して調製した。
  ＦＡＯＤ反応液を３０℃で２分間インキュベートした後，上記の各処理溶液を１００μl加え，３０分後の５５５nmにおける吸光度を測定した。この方法で得られる糖化アルブミンの濃度と吸光度との関係を第２図に示す。図中の縦軸は５５５nmの吸光度（過酸化水素の量に対応），横軸は糖化アルブミンの濃度を表す。図は，糖化アルブミンの濃度と過酸化水素発生量が相関関係にあることを示している。」（同第３５頁５行〜第３６頁７行）
　
（コ）「　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　」（第２図）
　
（サ）「実施例１７  ＦＡＯＤ固定化酵素を用いたフルクトシルリジンの測定
  １０.３ユニット／mlＦＡＯＤ溶液１０mlに３％アルギン酸ナトリウム水溶液２０mlを加えた。この混合液を注射器に入れ，３７℃に保った０.０５Ｍ塩化カルシウム溶液（ｐＨ６〜８）中に一定速度で滴下するとビーズが得られた。このビーズを硬化させ固定化酵素を得た。１０.３ユニット／mlＦＡＯＤ溶液は，製造例２で得たフサリウム・オキシスポルムＳ−１Ｆ４由来のＦＡＯＤを１０.３ユニット／mlになるよう，０.１Ｍトリス−塩酸緩衝液（pＨ８.０）で希釈して調製した。
  この固定化酵素を用い，以下の方法でフルクトシルリジン濃度を測定した。
反応液
  ０.１Ｍ  トリス−塩酸緩衝液（pＨ８.０）                ３００μl
  ４５mＭ  ４−アミノアンチピリン溶液                      ３０μl
  ６０mＭ  Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−
  ３−スルホプロピル）−m−トルイジン溶液                  ３０μl
  ６０ユニット／ml  ペルオキシダーゼ溶液                   ３０μl
  ＦＡＯＤ固定化酵素                                       ４０mg
蒸留水で全量を１mlとした。
  この反応液にフルクトシルリジンを添加し，３０℃，３分後の５５５nmにおける吸光度を測定した。この方法で得られるフルクトシルリジン濃度と吸光度との関係を第１７図に示す。図中の縦軸は５５５nmの吸光度（過酸化水素の量に対応），横軸はフルクトシルリジンの濃度を表す。図は，フルクトシルリジンの濃度と過酸化水素発生量が相関関係にあることを示している。」（同第４５頁１６行〜第４６頁９行）
　
　上記記載事項（ア）〜（サ）によれば，引用例１には，試料溶液をエンド型プロテアーゼで処理したのち，フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ（ＦＡＯＤ）を作用させて過酸化水素を生成し，この反応混合物にペルオキシダーゼと色原体とを作用させて発色させ，吸光度を測定することにより，反応混合物中の過酸化水素の発生量を測定する方法が記載され，ＦＡＯＤ，ペルオキシダーゼ，プロテアーゼ等の酵素をビーズに固定化して充填したカラムを組み込んだ自動化装置を使用すること，分析はフロー又はバッチ方式のいずれでもよいこと，及び測定結果を糖化タンパク質濃度として表すか，糖化率又はフルクトシルアミン量で表すことが記載されている。　
　
イ．対比
　引用例１に記載された発明において，エンド型プロテアーゼは，タンパク質を消化により断片化する酵素であることは技術常識であるから，引用例１に記載された「エンド型プロテアーゼによる処理」は，本件補正発明における「断片化処理」に相当する。
　また，各酵素を固定したビーズを充填したカラムを組み込んだ自動化装置を用いてフロー方式で分析する際には，反応が行われるカラムに測定試料を供給するために，溶液として流す必要があること，色原体についても，カップラーと縮合して色素に変化する物質であり（記載事項（エ）），反応を触媒するだけの酵素のように何度も使用できるものではないから，縮合反応が行われるカラムに供給するためには，測定試料とともに溶液として供給しなければならないものであることは，技術常識から自明である。
　
　よって，本件補正発明と引用例１に記載された発明とは，「プロテアーゼ及びフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを固定化担体に固定化することによりプロテアーゼ固定化担体およびフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を作製し，これらの固定化担体を充填したカラムを予め用意し，前記測定試料中の糖化タンパク質をプロテアーゼにより断片化処理した後，続いて断片化した糖化タンパク質をフルクトシルアミノ酸オキシダーゼにより過酸化水素を生成させ，前記過酸化水素を検出することによって，糖化率または糖化タンパク質量を求める糖化タンパク質の測定方法であって，前記過酸化水素の検出にペルオキシダーゼ固定化担体を充填したカラムを用い，測定時に測定試料を流すためにカラムを通る溶液を使用し，溶液は前記過酸化水素を検出するための色原体を含有し，ペルオキシダーゼによって生じた溶液の発色を吸光度計を用いて測定することによって，糖化率または糖化タンパク質量を求める糖化タンパク質の測定方法。」である点で一致し，以下の点で相違する。
相違点１：本件補正発明は，プロテアーゼ固定化担体，ＦＡＯＤ固定化担体及びペルオキシダーゼ固定化担体を充填したカラムをそれぞれ別々のカラムに充填し，試料がプロテアーゼ固定化カラム，ＦＡＯＤ固定化カラム，ペルオキシダーゼ固定化カラム，吸光度計の順に通るように連結されているのに対し，引用例１には，各酵素の固定化担体を充填するカラムの配置については具体的に記載されていない点。
相違点２：本件補正発明では，各カラムを順に通る測定試料を流すための溶液が色原体を含有する，すなわち，プロテアーゼ固定化カラムを通す前の時点で，該溶液に色原体を含ませるのに対し，引用例１には，どの時点で溶液に色原体を含ませるのか，具体的に記載されていない点。
　
ウ．判断
　上記相違点について検討する。
（ア）相違点１について
　引用例１には，試料を，プロテアーゼで処理した後に，ＦＡＯＤ及びペルオキシダーゼと反応させ，その後吸光度を測定することが記載されている（記載事項（ア），（オ），（ケ）及び（コ））。
　そして，フロー方式の装置において上記の順に従って各酵素の反応を行うためには，プロテアーゼ固定化担体を上流に設置して，試料をプロテアーゼ固定化担体に接触させた後に，ＦＡＯＤ及びペルオキシダーゼと接触させる必要があることは明らかである。
　次に，ＦＡＯＤとペルオキシダーゼについては，ＦＡＯＤの作用によって発生した過酸化水素を，ペルオキシダーゼの存在下でのカップラーと色原体の酸化縮合反応により測定するものであるから（記載事項（エ）），ペルオキシダーゼよりも先にＦＡＯＤを作用させる必要があり，フロー方式の装置の場合には，ＦＡＯＤ固定化担体をペルオキシダーゼ固定化担体の上流に設置して，測定試料をＦＡＯＤ固定化担体に接触させた後に，ペルオキシダーゼ固定化担体に接触させる必要があることも明らかである。
　さらに，ペルオキシダーゼ処理による生ずる発色の吸光度は，測定試料がペルオキシダーゼ固定化担体に接触した後でなければ測定できないものであるから，フロー方式の装置の場合には，ペルオキシダーゼ固定化担体の下流に吸光度計をを設置する必要があることも自明である。
　そうすると，引用例１には，フロー方式の装置における各酵素固定化カラム及び吸光度計の具体的な配置については記載はないものの，引用例１に記載された各酵素反応を順に実施しようとすれば，測定試料がプロテアーゼ固定化担体に接触した後に，ＦＡＯＤ固定化担体に接触し，次にペルオキシダーゼ固定化担体に接触し，最後に吸光度計の測定が行われるように，各酵素固定化担体及び吸光度計をこの順に配置することは，当業者が当然行うことである。
　そして，各酵素固定化担体を順に配置するためには，それぞれの酵素固定化担体を別々のカラムに充填して各カラムを順に接続するか，１つのカラムに複数種の酵素固定化担体を順に重層して充填するかしかなく，この何れを採用するかは，カラムの大きさや各酵素の反応に要する時間等を考慮して当業者が適宜選択し得る設計事項に過ぎない。また，複数種の酵素固定化カラムを順に接続することは周知技術でもある（必要であれば，Anal.Chem., 1988, Vol.60, p.147-151,  Anal.Biochem., 1991, Vol.194, p.16-24, Biosensors  Bioelectronics, 1994, Vol.9, p.429-437等を参照。）。
　よって，引用例１に記載された発明において，プロテアーゼ固定化カラム，ＦＡＯＤ固定化カラム，ペルオキシダーゼ固定化カラム，吸光度計の順に連結し，試料がこの順に流れるように通すことは，当業者が容易になし得たものである。
　
（イ）相違点２について
　色原体はペルオキシダーゼの存在下でカップラーと酸化縮合させて色素を生成させるために使用するものであるから（引用例１の記載事項（エ）），フロー方式の装置に流す測定試料溶液に色原体を含ませるためには，遅くとも測定試料溶液がペルオキシダーゼ固定化担体と接触する前に，該溶液と色原体とを混合しておく必要がある。
　さらに，引用例１の実施例１では，プロテアーゼ，ＦＡＯＤ，ペルオキシダーゼ及び色原体の全てを初めから含む反応液で，測定試料溶液中の糖化タンパク質量を測定できたことが記載され（記載事項（キ）及び（ク）），色原体はプロテアーゼ及びＦＡＯＤで処理される溶液中に存在しても測定できることが確認されているから，色原体を測定試料溶液と混合する時点は，ペルオキシダーゼ固定化担体と接触する前であれば，どの時点であってもよく，当業者が適宜選択し得るものに過ぎない。
　しかも，故障を少なくしたり，コスト削減のために，装置の構成を単純にすることは，どのような装置であっても，その設計の際に考慮される一般的な技術課題であり，引用例1に記載されたフロー方式の装置において，色原体を流路の途中で混合しようとすると，色原体供給用の流路を別途設ける必要があり，装置が複雑化することは明らかである。
　よって，引用例1に記載された発明において，測定試料溶液に色原体を混合する最も単純な方法として，予め色原体を測定試料溶液に混合してから，フロー方式の装置に供給することは，当業者が容易に想到し得たものである。
　そして，本件補正発明の奏する効果は，引用例１から予測し得るものである。
　
エ．請求人の主張について
　請求人は審判請求書において以下の主張をしている。
（ア）引用例１の実施例１７には，カラムに充填しないＦＡＯＤ固定化酵素と色原体を単純に混合する測定方法が記載されているだけであり，一度使用したＦＡＯＤを回収できるというメリットがあるに留まる。このような方法では，使用者にとって測定及び固定化ＦＡＯＤの再生に大変手間がかかるのは明らかである。本願発明は，このような技術的課題を解決すべく採用されたものであり，当業者といえども到底想到し得るものではない。
　
（イ）色原体は測定に必須の成分であるが，フロー方式にした場合に，液の流れのどの時点で色原体を添加するかによって，糖化タンパク質測定システムの構成が単純になったり，複雑になったりする。本願発明の方法では，流路の最初に色原体をすでに含む溶液により試料を流すのであるから，測定開始から反応液を廃棄するまで，外部から色原体を注入したり，色原体を有する反応容器を準備するような操作は不要であるので，測定システムを単純化でき，高い測定精度も確保できるという格別な作用効果を有している。
　
（ウ）上記主張を検討する。
　主張（ア）について
　請求人が指摘する実施例１７（記載事項（サ））は，引用例１の記載事項（キ）で言及される「バッチ方式」の実施例である。
　そして，本件補正発明は，バッチ方式における「使用者にとって測定および固定化ＦＡＯＤの再生に大変手間がかかる」という技術的課題を解決したものであることは，本願明細書の記載からは明らかではない。
　しかし仮に，本件補正発明が，バッチ方式ではなくフロー方式を採用することにより，上記技術的課題を解決したものであるとするならば，引用例1に記載された「フロー方式」の装置においても，当然そのような技術的課題は解決されているはずのものである。
　したがって，「当業者といえども到底想到し得るものではない」という主張は採用することができない。
　
　主張（イ）について
　前記ウ．（イ）に記載したように，装置の構成を単純化することは，一般的な技術課題であって，引用例1に記載された発明において，色原体を試料溶液と混合する最も単純な方法として，予め混合してからフロー式の装置に供給することは当業者が容易に想到し得たものである。
　そして，予め色原体と試料溶液とを混合してから装置に供給すれば，色原体の注入や反応容器が不要となることは自明であり，それらの設置に伴って生ずる装置の複雑化や測定精度の低下といった問題が解消されることも当業者が予測し得るものに過ぎない。
　
　よって，請求人の主張は何れも採用することができず，本件補正発明は引用例1に記載された発明に基づき，当業者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により，特許出願の際独立して特許を受けることができない。
　
（４）小括
　したがって，本件補正は，平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するので，同法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下すべきものである。
　
３．本願発明
　平成２０年２月２８日付の手続補正は上記のとおり却下されたので，本願の請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，平成１９年１２月２８日付手続補正書によって補正された特許請求の範囲に記載された以下のとおりのものである。
「【請求項１】プロテアーゼ及びフルクトシルアミノ酸オキシダーゼを固定化担体に固定化することによりプロテアーゼ固定化担体およびフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を作製し，前記プロテアーゼ固定化担体を充填したプロテアーゼ固定化カラムおよび前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化担体を充填したフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムを測定試料がこの順に流れるように予め用意し，測定試料中の糖化タンパク質を前記プロテアーゼ固定化カラムにより断片化処理した後，続いて断片化した糖化タンパク質を前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムに流すことにより過酸化水素を生成させ，前記過酸化水素を検出することによって，糖化率または糖化タンパク質量を求める糖化タンパク質の測定方法。」
　
４．当審の判断
　本願発明は，本件補正発明における「前記過酸化水素の検出にペルオキシダーゼ固定化担体を充填したペルオキシダーゼ固定化カラムを用い，前記ペルオキシダーゼ固定化カラムは前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ固定化カラムの次に連結されており，測定時に前記測定試料を流すために前記各カラムを順に通る溶液を使用し，前記溶液は前記過酸化水素を検出するための色原体を含有し，前記ペルオキシダーゼ固定化カラムにおいて生じた前記溶液の発色を前記ペルオキシダーゼ固定化カラムの次に連結された吸光度計を用いて測定することによって」という特定事項を削除したものであり，本件補正発明を包含する発明である。
　ゆえに，２．（３）において検討した本件補正発明と同じく，本願発明は引用例１に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
５．むすび
　したがって，本願の請求項１に係る発明は，特許法第２９条第２項の規定により，特許を受けることができない。
　よって，結論のとおり審決する。