【手続補正書】
【提出日】平成23年3月22日(2011.3.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要なペプチド合成酵素遺伝子で形質転換し、
(b) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養し、
(c) 該細菌から二次代謝物を精製する
ことを含む二次代謝物の製造方法。
【請求項２】
Synechocystis sp.菌が外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ (PPT)を発現する請求項1記載の方法。
【請求項３】
(a) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要なポリケチドシンターゼ遺伝子または脂肪酸シンターゼ遺伝子の1またはそれ以上で形質転換し、
(b) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養し、
(c) 該細菌から二次代謝物を精製する
ことを含む二次代謝物の製造方法であって、
該Synechocystis sp.菌が外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ(PPT)を発現する製造方法。
【請求項４】
工程(c)の前に、二次代謝物を生成するためにSynechocystis sp.菌をスクリーニングする工程をさらに含む請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
スクリーニング工程が高速液体クロマトグラフィー、質量分析、またはそれらの組み合わせを含む請求項4記載の方法。
【請求項６】
二次代謝物が、ペプチド、ポリケチド、脂肪酸、もしくはハイブリッド、またはその誘導体である請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ペプチド、ポリケチド、脂肪酸、またはその誘導体が生理活性化合物である請求項6記載の方法。
【請求項８】
生理活性化合物が、抗微生物剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗癌剤、免疫抑制剤、麻酔薬、鎮痛薬、抗腫瘍生成物、抗生物質、抗コレステロール剤、抗寄生虫剤、獣医用治療薬、農薬、および化粧品からなる群から選ばれる請求項7記載の方法。
【請求項９】
該遺伝子がSynechocystis sp.中で活性なプロモーターと作動可能に連結している請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
該プロモーターが誘導可能である請求項9記載の方法。
【請求項１１】
該プロモーターが、該細菌が培養中に曝露される光の強度を変化させることにより誘導可能である請求項10記載の方法。
【請求項１２】
該遺伝子がプラスミド、ホスミド、またはコスミドである請求項1〜11のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
該遺伝子の形質転換がトランスポゾン介在性である請求項1〜12のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
該細菌が、生合成遺伝子クラスターを形成する複数の遺伝子により形質転換される請求項1〜13のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
該外因性PPTが、Synechocystis sp. ゲノム内に安定に統合される請求項2〜14のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
該外因性PPTがCyanobacteria PPTである請求項2〜15のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
該PPTがNodularia spumigena由来である請求項2〜16のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
該PPTがNodularia spumigena NSOR10由来である請求項2〜17のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
該PPTが、配列番号1に記載のアミノ酸配列、またはその変異体もしくは断片を含む請求項18記載の方法。
【請求項２０】
Synechocytis sp.がSynechocystis sp. PCC6803である請求項1〜19のいずれかに記載の使用。
【請求項２１】
請求項1〜20のいずれかに記載の方法に従って製造される二次代謝物。
【請求項２２】
Synechocystis sp.が、二次代謝物の生成に必要なペプチド合成酵素遺伝子で形質転換され、Synechocystis sp.菌が、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養される、二次代謝物を製造するためのSynechocystis sp.菌の使用。
【請求項２３】
Synechocystis sp.が外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ(PPT)を発現する請求項22記載の使用。
【請求項２４】
Synechocystis sp.が、二次代謝物の生成に必要なポリケチドシンターゼ遺伝子または脂肪酸シンターゼ遺伝子の1またはそれ以上で形質転換され、Synechocystis sp.菌が、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養される、二次代謝物を製造するためのSynechocystis sp.菌の使用であって、
該Synechocystis sp.菌が外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ(PPT)を発現する使用。
【請求項２５】
該外因性PPTがSynechocystis sp. ゲノム内に安定して統合されている請求項23または24記載の使用。
【請求項２６】
該外因性PPTがCyanobacteria PPTである請求項23〜25のいずれかに記載の使用。
【請求項２７】
該PPTがNodularia spumigena由来である請求項23〜26のいずれかに記載の使用。
【請求項２８】
該PPTがNodularia spumigena NSOR10由来である請求項23〜27のいずれかに記載の使用。
【請求項２９】
該PPTが配列番号1に記載のアミノ酸配列、またはその変異体もしくは断片を含む請求項23〜28のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】
Synechocytis sp.がSynechocystis sp. PCC6803である請求項22〜29のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】
配列番号2に記載のアミノ酸配列、またはその変異体もしくは断片を含むホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ。
【請求項３２】
請求項31に記載のホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ、を含むベクター。
【請求項３３】
請求項31に記載のホスホパンテテイニルトランスフェラーゼポリヌクレオチドまたは請求項32に記載のベクター、を含む宿主細胞。
【請求項３４】
Synechocystis sp.である請求項33記載の宿主細胞。
【請求項３５】
Synechocystis sp. PCC6803である請求項34記載の宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
別の局面において、配列番号1で示すアミノ酸配列によりコードされるホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ、またはその変異体もしくは断片を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
別の局面において、配列番号2で示すアミノ酸配列によりコードされるホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ、またはその変異体もしくは断片を提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
ある態様において、ベクター中の配列番号1または配列番号2に示すアミノ酸によりコードされるホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ、またはその断片の機能的変異体を提供する。該ベクターは宿主細胞中に提供することができよう。該宿主細胞は、Synechocystis sp.宿主細胞、例えばSynechocystis sp. PCC6803であってよい。
別の局面において、(a) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要なペプチド合成酵素遺伝子で形質転換し、
(b) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養し、
(c) 該細菌から二次代謝物を精製する
ことを含む二次代謝物の製造方法を提供する。
Synechocystis sp.菌は外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ (PPT)を発現することがある。
別の局面において、(a) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要なポリケチドシンターゼ遺伝子または脂肪酸シンターゼ遺伝子の1またはそれ以上で形質転換し、
(b) Synechocystis sp.菌を、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養し、
(c) 該細菌から二次代謝物を精製する
ことを含む二次代謝物の製造方法であって、
該Synechocystis sp.菌が外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ(PPT)を発現する製造方法を提供する。
別の局面において、
Synechocystis sp.が、二次代謝物の生成に必要なペプチド合成酵素遺伝子で形質転換され、Synechocystis sp.菌が、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養される、二次代謝物を製造するためのSynechocystis sp.菌の使用を提供する。
Synechocystis sp.は外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ(PPT)を発現することがある。
別の局面において、Synechocystis sp.が、二次代謝物の生成に必要なポリケチドシンターゼ遺伝子または脂肪酸シンターゼ遺伝子の1またはそれ以上で形質転換され、Synechocystis sp.菌が、二次代謝物の生成に必要な1またはそれ以上の遺伝子の発現に適した条件下で培養される、二次代謝物を製造するためのSynechocystis sp.菌の使用であって、
該Synechocystis sp.菌が外因性ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ(PPT)を発現する使用を提供する。