【手続補正書】
【提出日】平成22年10月29日(2010.10.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）不飽和である結合表面を有する固相支持体；および
ｂ）少なくとも１つのリガンドであって、最大未満の該リガンドが該固相支持体に連結される、リガンド、
ｃ）タンパク質またはポリマーを含み、該固相支持体上に共有結合的にかまたは非共有結合的に固定される少なくとも１つの支持体連結器であって、飽和量未満の該支持体連結器が該固相支持体に固定され、該リガンドは、該支持体連結器に共有結合的にかまたは非共有結合的に連結される、支持体連結器、および
ｄ）少なくとも２つの親水性テール基が隣接している疎水性頭部基を含むブロックコポリマーであって、該疎水性の頭部基が前記アッセイ支持体と接触する、ブロックコポリマー
を含む、親和性結合支持体。
【請求項２】
前記支持体がマイクロ粒子の形態であり、前記不飽和である結合表面が、前記アッセイ支持体１ミリグラムあたり０．５×１０−４から１０×１０−４マイクロモルのリガンド、または該アッセイ支持体１平方メートルあたり０．５×１０−２から２．０×１０−１マイクロモルのリガンドを有し、好ましくは、該アッセイ支持体１ミリグラムあたり１．０×１０−４から５．５×１０−４マイクロモルのリガンド、または該アッセイ支持体１平方メートルあたり１．０×１０−２から２．０×１０−１マイクロモルのリガンドを有している、請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項３】
前記リガンドと結合した少なくとも１つのリガンド結合基がさらに含まれている、請求項１または２に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項４】
前記リガンド結合基が少なくとも２価であり、該２価のリガンド結合基に、ストレプトアビジン、アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジンの断片、アビジンの断片、ニュートラアビジンの断片、またはそれらの組み合わせが含まれている、請求項３に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項５】
前記リガンド結合基と結合した捕捉部分がさらに含まれている、請求項４に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項６】
前記捕捉部分が、前記アッセイ支持体１平方メートルあたり１．０×１０−４マイクロモルから１平方メートルあたり２．０×１０−２マイクロモルまでの密度で該アッセイ支持体上に存在する、請求項５に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項７】
前記捕捉部分が前記アッセイ支持体に対して空間的配向性を持つか、または該アッセイ支持体に対して空間的配向性および物理的配向性を持つ、請求項６に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項８】
前記支持体連結器が、ウシ血清アルブミン、ウシ血清アルブミンの断片、オボアルブミン、オボアルブミンの断片、またはそれらの混合物のうちの少なくとも１つから選択されるタンパク質または融合タンパク質を含む、請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項９】
前記リガンドにビオチンが含まれている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１０】
前記支持体連結器が、５：１未満または５：１に等しい、好ましくは、３：１未満または３：１に等しい、ビオチン対支持体連結器のモル取り込み比が得られるようにビオチン化されている、請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１１】
前記リガンドがビオチンであり、前記リガンド結合基が少なくとも２価であり、該少なくとも２価のリガンド結合基に、ストレプトアビジン、アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジンの断片、アビジンの断片、ニュートラアビジンの断片、またはそれらの組み合わせが含まれ、前記捕捉部分がビオチン化され、かつ少なくとも１つの抗体、抗体の結合断片、受容体、受容体のリガンド、ホルモン、ホルモンの受容体、酵素、酵素の基質、１本鎖のオリゴヌクレオチド、２本鎖のオリゴヌクレオチド、１本鎖のポリヌクレオチド、２本鎖のポリヌクレオチド、抗原、ペプチド、およびタンパク質からなる群より選択される、請求項５に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１２】
前記ビオチン化された捕捉部分にスペーサーが含まれている、請求項１１に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１３】
前記固相支持体に、マイクロ粒子、ビーズ、マイクロタイタープレート、コーティングされたチューブ、マイラーが裏打ちされたニトロセルロース支持体、ナイロン支持体、微小管、ナノ粒子、ナノチューブ、または常磁性もしくは超常磁性物質が含まれる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１４】
前記リガンド結合基と結合した少なくとも１つの第２の捕捉部分がさらに含まれている、請求項４に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１５】
前記リガンド結合基が、前記アッセイ支持体１平方メートルあたり１．０×１０−２〜５．０×１０−２マイクロモルの密度で該アッセイ支持体上に存在する、請求項３に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの支持体連結器が、前記アッセイ支持体１平方メートルあたり１．２×１０−２マイクロモルから１平方メートルあたり７．５×１０−２マイクロモルの密度で該アッセイ支持体上に存在する、請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１７】
前記リガンドがビオチンまたはその誘導体であり、該ビオチンまたはその誘導体が、前記アッセイ支持体１平方メートルあたり１．６×１０−２から２．０×１０−１マイクロモルの密度で存在する、請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体。
【請求項１８】
前記支持体連結器が、前記支持体と共有結合したビオチン化タンパク質またはビオチン化融合タンパク質であって、ここで、タンパク質または融合タンパク質１モルあたり５モル未満のビオチンが結合し、さらに：
ａ）該ビオチンと結合したビオチン結合部分であって、該ビオチン結合部分は少なくとも２価である、ビオチン結合部分；
ｂ）該ビオチン結合部分と結合したビオチン化された捕捉部分；および
ｃ）該支持体と接触するブロックコポリマーであって、該ブロックコポリマーには、少なくとも２つのポリエチレンオキサイドテール基が隣接しているポリプロピレンオキサイド頭部基が含まれており、該ポリプロピレンオキサイド頭部基は該支持体と接触する、ブロックコポリマー
が含まれている、請求項２に記載の不飽和であり配向性を持つ親和性結合支持体。
【請求項１９】
前記ブロックコポリマー中の２つ以上の親水性テールの長さが、それぞれ独立して、前記疎水性頭部基の長さの約２倍から約２．５倍であり得、好ましくは、式Ｉ：
ＨＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｘ（Ｃ３Ｈ６Ｏ）ｙ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｚＨ      （Ｉ）、
の構造が含まれ、式中、ｘは約１００から約１３５であり、ｙは約４０から約７５であり、そしてｚは約１００から約１３５であり、該ブロックコポリマーが約９，０００ダルトンから約１８，０００ダルトンの平均分子量を有している、請求項８に記載の親和性結合支持体。
【請求項２０】
請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体を調製する方法であって、該方法は、
ａ）支持体連結器とリガンドを、リガンド：：支持体連結器複合体の混合物が得られるように選択されたリガンド対支持体連結器の比で共有結合的にかもしくは非共有結合的に連結する工程；および
ｂ）リガンド：：支持体連結器複合体の不飽和である密度が生じるように、該リガンド：：支持体連結器複合体を該固相支持体に共有結合させる工程
を包含する、方法。
【請求項２１】
前記リガンド：：支持体連結器複合体を前記アッセイ支持体と共有結合させた後に、該アッセイ支持体に、アッセイ支持体１平方メートルあたり約１．０×１０−２マイクロモルのリガンドからアッセイ支持体１平方メートル当たり約２．０×１０−１マイクロモルのリガンドが含まれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記支持体連結器が、ウシ血清アルブミン、ウシ血清アルブミンの断片、オボアルブミン、オボアルブミンの断片、またはそれらの混合物であり、そして前記リガンドがビオチンであり、そして該ウシ血清アルブミン、ウシ血清アルブミンの断片、オボアルブミン、オボアルブミンの断片、またはそれらの混合物が、５：１未満または５：１に等しいビオチン：：支持体連結器のモル取り込み比が得られるようにビオチン化される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ａ）前記固相支持体を複数のブロックコポリマー分子と接触させる工程であって、該ブロックコポリマー分子には、少なくとも２つの親水性テール基が隣接している疎水性頭部基が含まれる、工程、ならびに
ｂ）該親和性結合支持体をリガンド結合基で、該親和性結合支持体を前記リガンド：：支持体連結器複合体の該リガンドと結合するリガンド結合基に曝露させることによってコーティングする工程
による、不飽和であり配向性を持つ親和性結合支持体を調製する工程をさらに包含する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記親和性結合支持体が、コーティングされ、分散したマイクロ粒子の集団を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の不飽和である親和性結合支持体を調製する方法であって、該方法は、
ａ）リガンド：：支持体連結器複合体、およびリガンドを欠く支持体連結器を含む空間充填部分を含む、分析物に結合する部分の混合物を調製する工程であって、該分析物に結合する部分は、目的の分析物と直接または間接的のいずれかで結合し、該空間充填部分は、目的の分析物とは直接または間接的のいずれでも結合しない、工程；ならびに
ｂ）該分析物に結合する部分と該空間充填部分がアッセイ支持体と結合して、該アッセイ支持体と結合した分析物に結合する部分の量と比較して飽和していない、不飽和であるアッセイ結合表面を形成するように、該混合物を該アッセイ支持体に曝露させる工程、を包含する、方法。
【請求項２６】
前記不飽和であるアッセイ結合表面にブロックコポリマーがさらに含まれており、該ブロックコポリマーには、少なくとも２つの親水性テール基が隣接している疎水性の頭部基が含まれている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
分析物の親和性アッセイにおける請求項５に記載の不飽和であるアッセイ結合支持体の使用であって、該親和性アッセイは、
該不飽和である親和性結合支持体を該分析物と接触させる工程であって、捕捉部分が特異的に該分析物に結合する、工程、ならびに、
該分析物の不飽和であるアッセイ結合表面との結合を検出する工程、
を包含する、使用。
【請求項２８】
分析物特異的な前記捕捉部分がビオチン化される、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記親和性アッセイが免疫測定法である、請求項２８に記載の使用。