【手続補正書】
【提出日】平成23年5月25日(2011.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、選択された抗原に結合する一価IgG4抗体：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有するが、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、ヒトCH領域：234位のThr（T）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；277位のArg（R）がAla（A）により置換されている、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
【請求項２】
以下を含む、選択された抗原に結合する一価IgG4抗体：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有する、ヒトCH領域、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
【請求項３】
225位のGlu（E）がAla（A）により置換されている、請求項2記載の一価抗体。
【請求項４】
234位のThr（T）がAla（A）により置換されている、請求項2から3のいずれか記載の一価抗体。
【請求項５】
236位のLeu（L）がAla（A）、Val（V）、Glu（E）、またはGly（G）により置換されている、請求項2から4のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項６】
238位のLys（K）がAla（A）により置換されている、請求項2から5のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項７】
267位のAsp（D）がAla（A）により置換されている、請求項2から6のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項８】
273位のPhe（F）がAla（A）またはLeu（L）により置換されている、請求項2から7のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項９】
273位のPhe（F）がAsp（D）により置換され、かつ／または275位のTyr（Y）がGlu（E）により置換されている、請求項2から7のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１０】
273位のPhe（F）がThr（T）により置換され、かつ／または275位のTyr（Y）がGlu（E）により置換されている、請求項2から7のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１１】
275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている、請求項2から8のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１２】
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、118位のThr（T）がGln（Q）により置換され、かつ／または296位のMet（M）がLeu（L）により置換されている、請求項2から11のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１３】
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、以下の置換のうち一つ、二つ、または三つ全てが行われている、請求項2から12のいずれか一項記載の一価抗体：120位のMet（M）がTyr（Y）により置換されている；122位のSer（S）がThr（T）により置換されている；および124位のThr（T）がGlu（E）により置換されている。
【請求項１４】
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、302位のAsn（N）がAla（A）により置換されている、請求項2から13のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１５】
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、302位のAsn（N）がAla（A）により置換され、かつ175位のThr（T）がAla（A）により置換され、かつ248位のGlu（E）がAla（A）により置換されている、請求項2から14のいずれか一項記載の一価抗体。
【請求項１６】
抗原刺激を受けると選択された抗原に結合する一価抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物であって、該一価抗体が以下を含む重鎖を含む、非ヒトトランスジェニック動物：
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域、および任意でCH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCH領域とのジスルフィド結合、または同一のCH領域との他の共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変されている、ヒトCH領域。
【請求項１７】
抗原刺激を受けると選択された抗原に結合する一価IgG4抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物であって、該一価抗体が以下を含む、非ヒトトランスジェニック動物：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変されている、ヒトCH領域、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
【請求項１８】
抗原刺激を受けると、選択された抗原に結合する、以下を含む一価IgG4抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有するが、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、ヒトCH領域：234位のThr（T）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；277位のArg（R）がAla（A）により置換されている、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
【請求項１９】
抗原刺激を受けると選択された抗原に結合する、以下を含む一価IgG1抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物：
以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域およびCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCH領域とのジスルフィド結合、または同一のCH領域との他の共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変されている、ヒトCH領域、
ならびに
以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCL領域とのジスルフィド結合または同一のCL領域との他の共有結合を形成する能力のあるアミノ酸を全く含まないように改変されている、ヒトCL領域。
【請求項２０】
以下の工程を含む、選択された抗原に結合する一価抗体の作製方法：
（i）選択された抗原、選択された抗原を発現する細胞、もしくは選択された抗原をコードする核酸構築物、またはその組み合せを用いて、前記請求項16〜19のいずれか一項記載の動物を免疫する工程、
（ii）トランスジェニック動物から、選択された抗原に結合する一価抗体を発現するB細胞を得る工程、
（iii）任意で、該B細胞からハイブリドーマを作製する工程
（iv）B細胞またはハイブリドーマにより産生される一価抗体の、選択された抗原に対する結合を試験する工程、および
（v）選択された抗原に対して結合する能力のある一つまたは複数の一価抗体を同定する工程。
【請求項２１】
請求項20記載の方法によって得ることのできる一価抗体。
【請求項２２】
以下を含む、請求項21記載の一価抗体：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有するが、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、ヒトCH領域：234位のThr（T）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；277位のArg（R）がAla（A）により置換されている、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
さらなる局面では、本発明は上記の方法によって得ることのできるまたは得られた非ヒトトランスジェニック動物に関する。
[請求項1001]
抗原刺激を受けると選択された抗原に結合する一価抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物であって、該一価抗体が以下を含む重鎖を含む、非ヒトトランスジェニック動物：
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域、および任意でCH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCH領域とのジスルフィド結合、または同一のCH領域との他の共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変されている、ヒトCH領域。
[請求項1002]
前記一価抗体が、以下を含む軽鎖をさらに含む、請求項1001記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCL領域とのジスルフィド結合または同一のCL領域との他の共有結合を形成する能力のあるアミノ酸を全く含まないように改変されていてもよい、ヒトCL領域。
[請求項1003]
トランスジーンが動物のリンパ球において生産的（productive）VDJ再構成およびアイソタイプスイッチを行う、機能的に連結された以下を含む重鎖トランスジーンをそのゲノムに含む、請求項1001または1002記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）複数のヒトV遺伝子、複数のヒトD遺伝子、複数のヒトJ遺伝子、および
（ii）ヒトμCH遺伝子および少なくとも一つの改変されたγCH遺伝子を含む、複数のヒトCH遺伝子および関連するアイソタイプスイッチ配列。
[請求項1004]
以下を含むκ軽鎖トランスジーンを含む、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）複数のヒトκV遺伝子、複数のヒトκJ遺伝子、および
（ii）請求項1002に定義されたCL領域の改変をコードしていてもよい、ヒトκCL遺伝子。
[請求項1005]
以下を含むλ軽鎖トランスジーンを含む、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）複数のヒトλV遺伝子、少なくとも一つのヒトλJ遺伝子、および
（ii）請求項1002に定義されたCL領域の改変をコードしていてもよい、少なくとも一つのヒトλCL遺伝子。
[請求項1006]
抗原刺激を受けると選択された抗原に結合する一価IgG4抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物であって、該一価抗体が以下を含む、非ヒトトランスジェニック動物：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変されている、ヒトCH領域、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
[請求項1007]
トランスジーンが動物のリンパ球において生産的V(D)J再構成およびアイソタイプスイッチを行う、そのゲノムに以下を含む、請求項1006記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）機能的に連結された、
- 複数のヒトV遺伝子、複数のヒトD遺伝子、複数のヒトJ遺伝子、および
- ヒトμCH遺伝子および少なくとも一つのヒンジ改変Cγ4遺伝子を含む、複数のヒトCH遺伝子および関連するアイソタイプスイッチ配列
を含む重鎖トランスジーン、ならびに
（iia）
- 複数のヒトκV遺伝子、複数のヒトκJ遺伝子、および
- ヒトκCL遺伝子、
を含むκ軽鎖トランスジーン、および／または
（iib）
- 複数のヒトλV遺伝子、少なくとも一つのヒトλJ遺伝子、および
- 少なくとも一つのヒトλCL遺伝子
を含むλ軽鎖トランスジーン。
[請求項1008]
抗原刺激を受けると、選択された抗原に結合する、以下を含む一価IgG4抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有するが、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、ヒトCH領域：234位のThr（T）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；277位のArg（R）がAla（A）により置換されている、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
[請求項1009]
トランスジーンが動物のリンパ球において生産的V(D)J再構成およびアイソタイプスイッチを行う、そのゲノム中に以下を含む、請求項1008記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）機能的に連結された
- 複数のヒトV遺伝子、複数のヒトD遺伝子、複数のヒトJ遺伝子、および
- ヒトμCH遺伝子および少なくとも一つの改変Cγ4遺伝子を含む、複数のヒトCH遺伝子および関連するアイソタイプスイッチ配列
を含む重鎖トランスジーン、
ならびに
（iia）
- 複数のヒトκV遺伝子、複数のヒトκJ遺伝子、および
- ヒトκCL遺伝子、
を含むκ軽鎖トランスジーン、および／または
（iib）
- 複数のヒトλV遺伝子、少なくとも一つのヒトλJ遺伝子、および
- 少なくとも一つのヒトλCL遺伝子
を含むλ軽鎖トランスジーン。
[請求項1010]
抗原刺激を受けると選択された抗原に結合する、以下を含む一価IgG1抗体を産生する能力のある非ヒトトランスジェニック動物：
以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域およびCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCH領域とのジスルフィド結合、または同一のCH領域との他の共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変されている、ヒトCH領域、
ならびに
以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCL領域とのジスルフィド結合または同一のCL領域との他の共有結合を形成する能力のあるアミノ酸を全く含まないように改変されている、ヒトCL領域。
[請求項1011]
トランスジーンが動物のリンパ球において生産的V(D)J再構成およびアイソタイプスイッチを行う、そのゲノム中に以下を含む、請求項1010記載の非ヒトトランスジェニック動物：
（i）機能的に連結された
- 複数のヒトV遺伝子、複数のヒトD遺伝子、複数のヒトJ遺伝子、および
- ヒトμCH遺伝子および少なくとも一つの改変Cγ1遺伝子を含む複数のヒトCH遺伝子および関連するアイソタイプスイッチ配列
を含む重鎖トランスジーン、
ならびに
（iia）
- 複数のヒトκV遺伝子、複数のヒトκJ遺伝子、および
- 改変ヒトκCL遺伝子、
を含むκ軽鎖トランスジーン、および／または
（iib）
- 複数のヒトλV遺伝子、少なくとも一つのヒトλJ遺伝子、および
- 少なくとも一つの改変ヒトλCL遺伝子
を含むλ軽鎖トランスジーン。
[請求項1012]
請求項1006〜1009のいずれか一項に定義されるIgG4一価抗体を産生する能力がさらにある、請求項1010または1011記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1013]
内因性動物免疫グロブリン重鎖遺伝子座が不活化されている、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1014]
内因性動物免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が不活化されている、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1015]
内因性動物免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座が不活化されている、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1016]
ヒトγCH遺伝子が、天然に存在するヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座よりもヒトμCH遺伝子の近くにある、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1017]
重鎖トランスジーンがSEQ ID NO: 19に示されるCH3領域を含むCH領域をコードするが、CH3領域は、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、請求項1011記載の非ヒトトランスジェニック動物：238位のArg（R）がGln（Q）により置換されている；239位のAsp（D）がGlu（E）により置換されている；249位のThr（T）がAla（A）により置換されている；251位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；251位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；288位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；288位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；290位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；292位のLys（K）がArg（R）により置換されている；292位のLys（K）がAla（A）により置換されている；302位のGln（Q）がGlu（E）により置換されている；および328位のPro（P）がLeu（L）により置換されている。
[請求項1018]
一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われている、請求項1017記載の非ヒトトランスジェニック動物：238位のArg（R）がGln（Q）により置換されている；239位のAsp（D）がGlu（E）により置換されている；292位のLys（K）がArg（R）により置換されている；302位のGln（Q）がGlu（E）により置換されている；および328位のPro（P）がLeu（L）により置換されている。
[請求項1019]
（i）238位のArg（R）がGln（Q）により置換されているか、
（ii）238位のArg（R）がGln（Q）により置換され、かつ328位のPro（P）がLeu（L）により置換されているか、または
（iii）9つのアミノ酸全てが置換されている、
請求項1017〜1018のいずれか記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1020]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 19に示されるCH1および／またはCH2領域をさらにコードする、前記請求項1017〜1019のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1021]
軽鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 18に示されるアミノ酸配列を有するカッパCL領域をコードするが、該配列は、106位の末端システイン残基が別のアミノ酸残基で置換されるか欠失するように改変されている、前記請求項1011または1017〜1020のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1022]
軽鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 17に示されるアミノ酸配列を有するラムダCL領域をコードするが、該配列は、104位のシステイン残基が別のアミノ酸残基で置換されるか欠失するように改変されている、前記請求項1011または1017〜1020のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1023]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 19に示されるCH1領域をさらにコードするが、CH1領域は、14位のSer（S）がシステイン残基により置換されるように改変されている、上記の請求項1011または1017〜1020のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1024]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 20に示されるCH3領域を含むCH領域をコードするが、CH3領域は、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、請求項1003記載の非ヒトトランスジェニック動物：234位のArg（R）がGln（Q）により置換されている；245位のThr（T）がAla（A）により置換されている；247位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；247位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；276位のMet（M）がVal（V）により置換されている；284位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；284位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；286位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；288位のLys（K）がArg（R）により置換されている；288位のLys（K）がAla（A）により置換されている；298位のGln（Q）がGlu（E）により置換されている；および324位のPro（P）がLeu（L）により置換されている。
[請求項1025]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 20に示されるCH1および／またはCH2領域をさらにコードする、請求項1024記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1026]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 21に示されるCH3領域を含むCH領域をコードするが、CH3領域は、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、請求項1003記載の非ヒトトランスジェニック動物：285位のArg（R）がGln（Q）により置換されている；296位のThr（T）がAla（A）により置換されている；298位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；298位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；314位のSer（S）がAsn（N）により置換されている；322位のAsn（N）がLys（K）により置換されている；327位のMet（M）がVal（V）により置換されている；335位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；335位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；337位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；339位のLys（K）がArg（R）により置換されている；339位のLys（K）がAla（A）により置換されている；349位のGln（Q）がGlu（E）により置換されている；352位のIle（I）がVal（V）により置換されている；365位のArg（R）がHis（H）により置換されている；366位のPhe（F）がTyr（Y）により置換されている；および375位のPro（P）がLeu（L）により置換されている。
[請求項1027]
重鎖トランスジーンがSEQ ID NO: 21に示されるCH1および／またはCH2領域をさらにコードする、請求項1026記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1028]
重鎖トランスジーンが、CH領域のヒンジ領域に対応する領域がシステイン残基を全く含まないように改変されているCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1029]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 14のCH配列のアミノ酸106および109に対応するアミノ酸が欠失するように改変されているCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1030]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 14のCH配列のアミノ酸106および109に対応するアミノ酸残基の一つがシステイン以外のアミノ酸残基で置換され、かつSEQ ID NO: 14の配列のアミノ酸残基106および109に対応する他方のアミノ酸残基が欠失するように改変されているCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1031]
重鎖トランスジーンが、アミノ酸残基106に対応するアミノ酸残基がシステイン以外のアミノ酸残基で置換され、かつアミノ酸残基109に対応するアミノ酸残基が欠失するように改変されているCH領域をコードする、請求項1030記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1032]
重鎖トランスジーンが、アミノ酸残基106に対応するアミノ酸残基が欠失し、かつアミノ酸残基109に対応するアミノ酸残基がシステイン以外のアミノ酸残基で置換されるように改変されているCH領域をコードする、請求項1030記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1033]
重鎖トランスジーンが、少なくともSEQ ID NO: 14のCH配列のアミノ酸残基106から109に対応するアミノ酸残基が欠失するように改変されているCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1034]
重鎖トランスジーンが、少なくともSEQ ID NO: 14の配列のアミノ酸残基99から110に対応するアミノ酸残基が欠失するように改変されているCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1035]
重鎖トランスジーンが、SEQ ID NO: 16に示されるCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1036]
重鎖トランスジーンが、ヒンジ領域全体が欠失するように改変されているCH領域をコードする、前記請求項1003〜1027のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1037]
動物が、10-7 Mまたはそれ以下、例えば10-8 M、10-9 M、10-10 M、または10-11 Mもしくはそれ以下の解離定数（kd）で、選択された抗原、例えばc-Metに結合する一価抗体を産生する能力がある、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1038]
ラクダ科の動物、例えばラマもしくはラクダ、または齧歯類の動物、例えばマウス、ウサギ、モルモット、もしくはラットのような、哺乳動物である、前記請求項のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1039]
C57BL/6J、CBA/J、DBA/2J、129/sv、またはSJL/J系統に由来するマウスのような、マウスである、請求項1038記載の非ヒトトランスジェニック動物。
[請求項1040]
以下を含む重鎖トランスジーン：
（i）複数のヒトV遺伝子、複数のヒトD遺伝子、複数のヒトJ遺伝子、および
（ii）ヒトγCH遺伝子が天然に存在するヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座よりもヒトμCH遺伝子の近くにある、ヒトμCH遺伝子および少なくとも一つの改変γCH遺伝子を含む、複数のヒトCH遺伝子および関連アイソタイプスイッチ配列。
[請求項1041]
以下の工程を含む、選択された抗原に結合する一価抗体の作製方法：
（i）選択された抗原、選択された抗原を発現する細胞、もしくは選択された抗原をコードする核酸構築物、またはその組み合せを用いて、前記請求項1001〜1039のいずれか一項記載の動物を免疫する工程、
（ii）トランスジェニック動物から、選択された抗原に結合する一価抗体を発現するB細胞を得る工程、
（iii）任意で、該B細胞からハイブリドーマを作製する工程
（iv）B細胞またはハイブリドーマにより産生される一価抗体の、選択された抗原に対する結合を試験する工程、および
（v）選択された抗原に対して結合する能力のある一つまたは複数の一価抗体を同定する工程。
[請求項1042]
さらに以下の工程を含む、請求項1041記載の方法：
（vi）一価抗体のコード配列を同定する工程、および
（vii）組み換え発現系において一価抗体を産生する工程。
[請求項1043]
工程（iii）およびさらに以下の工程を含む、請求項1041記載の方法：
（vi）ハイブリドーマから一価抗体を産生および精製する工程。
[請求項1044]
抗原が、VEGF、c-Met、CD20、CD38、IL-8、CD25、CD74、FcalphaRI、FcepsilonRI、アセチルコリン受容体、fas、fasL、TRAIL、肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルスのエンベロープE2、組織因子、組織因子と第VII因子の複合体、EGFr、CD4、およびCD28から選択される、請求項1041〜1043のいずれか一項記載の方法。
[請求項1045]
前記請求項1041〜1044のいずれか一項記載の方法によって得ることのできる一価抗体。
[請求項1046]
前記請求項1041〜1044のいずれか一項記載の方法によって得られた一価抗体。
[請求項1047]
以下を含む、請求項1045記載の一価抗体：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有するが、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、ヒトCH領域：234位のThr（T）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；277位のArg（R）がAla（A）により置換されている、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
[請求項1048]
以下を含む、選択された抗原に結合する一価IgG4抗体：
- 以下を含む重鎖
（i）ヒトVH領域、および
（ii）ヒンジ領域に対応する領域が、同一のCH領域とのジスルフィド結合を形成する能力のあるアミノ酸残基を全く含まないように改変され、かつCH3領域がSEQ ID NO: 16に示される配列を有するが、一つまたは複数の以下のアミノ酸置換が行われるように改変されている、ヒトCH領域：234位のThr（T）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている；236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている；273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている；273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている；275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている；277位のArg（R）がAla（A）により置換されている、
ならびに
- 以下を含む軽鎖
（i）ヒトVL領域、および
（ii）ヒトCL領域。
[請求項1049]
SEQ ID NO: 16に示されるCH3領域を含む、請求項1048記載の一価抗体。
[請求項1050]
225位のGlu（E）がAla（A）により置換されている、請求項1049記載の一価抗体。
[請求項1051]
234位のThr（T）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1050のいずれか記載の一価抗体。
[請求項1052]
236位のLeu（L）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1051のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1053]
236位のLeu（L）がVal（V）により置換されている、請求項1049から1051のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1054]
236位のLeu（L）がGlu（E）により置換されている、請求項1049から1051のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1055]
236位のLeu（L）がGly（G）により置換されている、請求項1049から1051のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1056]
238位のLys（K）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1055のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1057]
267位のAsp（D）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1056のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1058]
273位のPhe（F）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1057のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1059]
273位のPhe（F）がLeu（L）により置換されている、請求項1049から1057のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1060]
273位のPhe（F）がAsp（D）により置換され、かつ／または275位のTyr（Y）がGlu（E）により置換されている、請求項1049から1057のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1061]
273位のPhe（F）がThr（T）により置換され、かつ／または275位のTyr（Y）がGlu（E）により置換されている、請求項1049から1057のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1062]
275位のTyr（Y）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1059のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1063]
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、118位のThr（T）がGln（Q）により置換され、かつ／または296位のMet（M）がLeu（L）により置換されている、請求項1049から1062のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1064]
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、以下の置換のうち一つ、二つ、または三つ全てが行われている、請求項1049から1063のいずれか一項記載の一価抗体：120位のMet（M）がTyr（Y）により置換されている；122位のSer（S）がThr（T）により置換されている；および124位のThr（T）がGlu（E）により置換されている。
[請求項1065]
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、302位のAsn（N）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1064のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1066]
SEQ ID NO: 16に示されるCH2領域をさらに含むが、302位のAsn（N）がAla（A）により置換され、かつ175位のThr（T）がAla（A）により置換され、かつ248位のGlu（E）がAla（A）により置換されている、請求項1049から1065のいずれか一項記載の一価抗体。
[請求項1067]
一価抗体を作製するための、請求項1001〜1039のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物の使用。
[請求項1068]
以下の工程を含む、前記請求項1001〜1039のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物を作製する方法：
（i）非ヒト動物の胚幹細胞に、請求項1040記載の重鎖トランスジーン構築物、および任意で請求項1002に定義される軽鎖を産生する能力のある軽鎖トランスジーンを導入する工程、
（ii）トランスジーンを発現する胚幹細胞を選択する工程、
（iii）形質転換した胚幹細胞を胚盤胞の内細胞塊に注入する工程、
（iv）偽妊娠した非ヒトメス動物の子宮または卵管に胚盤胞を移植する工程、
（v）子孫をトランスジーンの存在について試験する工程、および
（vi）二つのヘテロ接合の子孫を交配して非ヒト動物のホモ接合トランスジェニック系統を作製する工程。
[請求項1069]
以下の工程を含む、前記請求項1001〜1039のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物を作製する方法：
（i）非ヒト動物の受精卵の前核に、請求項1040記載のトランスジーンを含むベクター構築物、および任意で請求項1002に定義される軽鎖を産生する能力のある軽鎖トランスジーンを注入する工程、
（ii）偽妊娠した非ヒトメス動物の子宮または卵管に受精卵を移植する工程、
（iii）子孫をトランスジーンの存在について試験する工程、および
（iv）二つのヘテロ接合の子孫を交配して非ヒト動物のホモ接合トランスジェニック系統を作製する工程。
[請求項1070]
以下の工程を含む、前記請求項1001〜1039のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物を作製する方法：
（i）既存のトランスジェニック配列を含んでいるためヒト抗体を産生できる非ヒトトランスジェニック動物の胚幹細胞に、請求項1001〜1036のいずれか一項に定義される改変を含むCH領域またはそのフラグメントをコードする配列を含むトランスジーン、および任意で、請求項1003〜1036のいずれか一項に定義される改変を含むCL領域またはそのフラグメントをコードする配列を含むトランスジーンを導入する工程であって、
ここで、該トランスジーンは、トランスジェニック動物ゲノムのゲノム組み込みならびに対応するヒトCH領域またはそのフラグメントの置換、および任意で、対応するヒトCL領域またはそのフラグメントの置換が起きると、残っている既存のトランスジェニック配列に機能的に連結するよう設計されており、それにより動物は請求項1001〜1036のいずれか一項に定義される一価抗体を産生できるようになる工程、
（ii）工程（i）で導入されたトランスジーンを発現する胚幹細胞を選択する工程、
（iii）形質転換した胚幹細胞を胚盤胞の内細胞塊に注入する工程、
（iv）偽妊娠した非ヒトメス動物の子宮または卵管に胚盤胞を移植する工程、
（v）子孫をトランスジーンの存在について試験する工程、および
（vi）二つのヘテロ接合の子孫を交配して非ヒト動物のホモ接合トランスジェニック系統を作製する工程。
[請求項1071]
以下の工程を含む、前記請求項1001〜1039のいずれか一項記載の非ヒトトランスジェニック動物を作製する方法：
（i）既存のトランスジェニック配列を含んでいるためヒト抗体を産生できる非ヒトトランスジェニック動物の受精卵の前核に、請求項1001〜1036のいずれか一項に定義される改変を含むCH領域またはそのフラグメントをコードする配列を含むトランスジーン、および任意で、請求項1003〜1036のいずれか一項に定義される改変を含むCL領域またはそのフラグメントをコードする配列を含むトランスジーンを注入する工程であって、
ここで、該トランスジーンは、トランスジェニック動物ゲノムのゲノム組み込みならびに対応するヒトCH領域またはそのフラグメントの置換、および任意で、対応するヒトCL領域またはそのフラグメントの置換が起きると、残っている既存のトランスジェニック配列に機能的に連結するよう設計されており、それにより動物は請求項1001〜1036のいずれか一項に定義される一価抗体を産生できるようになる工程、
（ii）偽妊娠した非ヒトメス動物の子宮または卵管に受精卵を移植する工程、
（iii）子孫を工程（i）で導入したトランスジーンの存在について試験する工程、および
（iv）二つのヘテロ接合の子孫を交配して非ヒト動物のホモ接合トランスジェニック系統を作製する工程。
[請求項1072]
工程（i）で提供される非ヒトトランスジェニック動物が、HuMab-Mouse（商標）、KM-Mouse（商標）、TC-Mouse（商標）、またはXenomouse（商標）のようなトランスジェニックマウスである、請求項1070または1071記載の方法。
[請求項1073]
請求項1068〜1072のいずれか一項記載の方法によって得ることのできる非ヒトトランスジェニック動物。