【手続補正書】
【提出日】平成22年11月24日(2010.11.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
未修飾型ＥＰＯポリペプチド、その対立遺伝子型、種間変異体、または活性断片における修飾を含む修飾型エリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドまたはその活性断片であって、
前記修飾は、配列番号２または２３７に示されるアミノ酸配列を有する成熟型ＥＰＯポリペプチド、配列番号２または２３７に示される配列を有するポリペプチドと少なくとも、または、少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくはそれ以上の配列同一性を有するその対立遺伝子型、種間変異体、または他の変異体における、Ｋ２０Ｑのアミノ酸置換に対応し、
前記活性断片が前記修飾を含む、修飾型ＥＰＯポリペプチドまたはその活性断片。
【請求項２】
さらにＲ１３９Ｈのアミノ酸置換を含む、請求項1に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項３】
アミノ酸置換、欠失及び／または挿入からなる群より選択される１以上のアミノ酸位置において１以上のさらなる修飾を含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項４】
１以上のさらなる修飾が、２、３、４、５、７、８、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２１、２３、２９、３１、３５、３７、４２、４３、４５、４８、４９、５１、５２、５３、５４、６２、６４、６７、６９、７０、７２、７５、７６、８０、８１、８７、８８、８９、９０、９１、９３、９６、９７、１０２、１０３、１０５、１０８、１０９、１１０、１１２、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２９、１３０、１３１、１３６、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４５、１４８、１４９、１５０、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５９、１６２、１６５、及び１６６からなる群より選択されるアミノ酸位置にあり、前記アミノ酸位置は、配列番号２または２３７に示される配列を有する成熟型ヒトＥＰＯポリペプチドにおいて位置を参照したものである、請求項３に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項５】
１以上のさらなる修飾が、Ｐ２Ｓ、Ｐ２Ａ、Ｐ３Ｓ、Ｐ３Ａ、Ｒ４Ｈ、Ｒ４Ｑ、Ｌ５Ｉ、Ｌ５Ｖ、Ｃ７Ｓ、Ｃ７Ｖ、Ｃ７Ａ、Ｃ７Ｉ、Ｃ７Ｔ、Ｄ８Ｑ、Ｄ８Ｈ、Ｄ８Ｎ、Ｒ１０Ｈ、Ｒ１０Ｑ、Ｌ１２Ｖ、Ｌ１２Ｉ、Ｅ１３Ｑ、Ｅ１３Ｈ、Ｅ１３Ｎ、Ｒ１４Ｈ、Ｒ１４Ｑ、Ｙ１５Ｈ、Ｙ１５Ｉ、Ｌ１６Ｉ、Ｌ１６Ｖ、Ｌ１７Ｉ、Ｌ１７Ｖ、Ｅ１８Ｑ、Ｅ１８Ｈ、Ｅ１８Ｎ、Ｅ２１Ｑ、Ｅ２１Ｈ、Ｅ２１Ｎ、Ｅ２３Ｑ、Ｅ２３Ｈ、Ｅ２３Ｎ、Ｃ２９Ｓ、Ｃ２９Ｖ、Ｃ２９Ａ、Ｃ２９Ｉ、Ｃ２９Ｔ、Ｅ３１Ｑ、Ｅ３１Ｈ、Ｅ３１Ｎ、Ｌ３５Ｖ、Ｌ３５Ｉ、Ｅ３７Ｑ、Ｅ３７Ｈ、Ｅ３７Ｎ、Ｐ４２Ｓ、Ｐ４２Ａ、Ｄ４３Ｑ、Ｄ４３Ｈ、Ｄ４３Ｎ、Ｋ４５Ｑ、Ｋ４５Ｔ、Ｋ４５Ｎ、Ｆ４８Ｉ、Ｆ４８Ｖ、Ｙ４９Ｈ、Ｙ４９Ｉ、Ｗ５１Ｓ、Ｗ５１Ｈ、Ｋ５２Ｑ、Ｋ５２Ｔ、Ｋ５２Ｎ、Ｒ５３Ｈ、Ｒ５３Ｑ、Ｍ５４Ｖ、Ｍ５４Ｉ、Ｅ５５Ｑ、Ｅ５５Ｈ、Ｅ５５Ｎ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６２Ｈ、Ｅ６２Ｎ、Ｗ６４Ｓ、Ｗ６４Ｈ、Ｌ６７Ｉ、Ｌ６７Ｖ、Ｌ６９Ｖ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ７０Ｉ、Ｌ７０Ｖ、Ｅ７２Ｑ、Ｅ７２Ｈ、Ｅ７２Ｎ、Ｌ７５Ｖ、Ｌ７５Ｉ、Ｒ７６Ｈ、Ｒ７６Ｑ、Ｌ８０Ｖ、Ｌ８０Ｉ、Ｌ８１Ｉ、Ｌ８１Ｖ、Ｐ８７Ｓ、Ｐ８７Ａ、Ｗ８８Ｓ、Ｗ８８Ｈ、Ｅ８９Ｑ、Ｅ８９Ｈ、Ｅ８９Ｎ、Ｐ９０Ｓ、Ｐ９０Ａ、Ｌ９１Ｉ、Ｌ９１Ｖ、Ｌ９３Ｖ、Ｌ９３Ｉ、Ｄ９６Ｑ、Ｄ９６Ｈ、Ｄ９６Ｎ、Ｋ９７Ｑ、Ｋ９７Ｔ、Ｋ９７Ｎ、Ｌ１０２Ｖ、Ｌ１０２Ｉ、Ｒ１０３Ｈ、Ｒ１０３Ｑ、Ｌ１０５Ｉ、Ｌ１０５Ｖ、Ｌ１０８Ｉ、Ｌ１０８Ｖ、Ｌ１０９Ｉ、Ｌ１０９Ｖ、Ｒ１１０Ｈ、Ｒ１１０Ｑ、Ｌ１１２Ｖ、Ｌ１１２Ｉ、Ｋ１１６Ｑ、Ｋ１１６Ｔ、Ｋ１１６Ｎ、Ｅ１１７Ｑ、Ｅ１１７Ｈ、Ｅ１１７Ｎ、Ｐ１２１Ｓ、Ｐ１２１Ａ、Ｐ１２２Ｓ、Ｐ１２２Ａ、Ｄ１２３Ｑ、Ｄ１２３Ｈ、Ｄ１２３Ｎ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１２９Ａ、Ｌ１３０Ｖ、Ｌ１３０Ｉ、Ｒ１３１Ｈ、Ｒ１３１Ｑ、Ｄ１３６Ｑ、Ｄ１３６Ｈ、Ｄ１３６Ｎ、Ｆ１３８Ｉ、Ｆ１３８Ｖ、Ｒ１３９Ｈ、Ｒ１３９Ｑ、Ｋ１４０Ｎ、Ｋ１４０Ｑ、Ｌ１４１Ｉ、Ｌ１４１Ｖ、Ｆ１４２Ｉ、Ｆ１４２Ｖ、Ｒ１４３Ｈ、Ｒ１４３Ｑ、Ｙ１４５Ｈ、Ｙ１４５Ｉ、Ｆ１４８Ｉ、Ｆ１４８Ｖ、Ｌ１４９Ｉ、Ｌ１４９Ｖ、Ｒ１５０Ｈ、Ｒ１５０Ｑ、Ｋ１５２Ｑ、Ｋ１５２Ｔ、Ｋ１５２Ｎ、Ｌ１５３Ｉ、Ｌ１５３Ｖ、Ｋ１５４Ｑ、Ｋ１５４Ｔ、Ｋ１５４Ｎ、Ｌ１５５Ｖ、Ｌ１５５Ｉ、Ｙ１５６Ｈ、Ｙ１５６Ｉ、Ｅ１５９Ｑ、Ｅ１５９Ｈ、Ｅ１５９Ｎ、Ｒ１６２Ｈ、Ｒ１６２Ｑ、Ｄ１６５Ｑ、Ｄ１６５Ｈ、Ｄ１６５Ｎ、Ｒ１６６Ｈ、及びＲ１６６Ｑのいずれか１以上からなる群より選択される１以上のアミノ酸置換である、請求項４に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項６】
前記修飾型ＥＰＯにおけるアミノ酸置換が、Ｒ１３９Ｈ／Ｋ２０Ｑ、Ｋ２０Ｑ／Ｌ８０Ｉ／Ｒ１３９Ｈ、Ｋ２０Ｑ／Ｌ９３Ｉ／Ｒ１３９Ｈ、Ｋ２０Ｑ／Ｌ９３Ｖ／Ｒ１３９Ｈ、Ｒ４Ｈ／Ｋ２０Ｑ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉ、Ｅ１５９Ｎ／Ｋ２０Ｑ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ９３Ｉ、Ｋ２０Ｑ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ１５３Ｖ、Ｌ１５３Ｖ／Ｋ２０Ｑ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉ及びＥ１５９Ｎ／Ｋ２０Ｑ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉからなる群より選択される、請求項３に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項７】
前記修飾型ＥＰＯポリペプチドが、Ｎ３８Ｈのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項８】
前記修飾型ＥＰＯポリペプチドにおけるアミノ酸置換が、Ｎ３８Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｋ２０Ｑである、請求項７に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項９】
前記修飾型ＥＰＯポリペプチドが、Ｎ３８Ｈ及びＮ８３Ｈのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１０】
前記修飾型ＥＰＯポリペプチドにおけるアミノ酸置換が、Ｋ２０Ｑ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ、Ｋ２０Ｑ／Ｎ３８Ｈ／Ｌ８０Ｉ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ、Ｋ２０Ｑ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｌ９３Ｉ／Ｒ１３９Ｈ、及びＫ２０Ｑ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｌ９３Ｖ／Ｒ１３９Ｈからなる群より選択される、請求項９に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド
【請求項１１】
前記修飾型ＥＰＯポリペプチドが、Ｎ２４Ｈ、Ｎ３８Ｈ及びＮ８３Ｈのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１２】
修飾型ＥＰＯポリペプチドにおけるアミノ酸置換が、Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉ、Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ９３Ｉ、Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ９３Ｖ、Ｒ４Ｈ／Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉ、Ｅ１５９Ｎ／Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ９３Ｉ、Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ１５３Ｖ、Ｌ１５３Ｖ／Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉ及びＥ１５９Ｎ／Ｋ２０Ｑ／Ｎ２４Ｈ／Ｎ３８Ｈ／Ｎ８３Ｈ／Ｒ１３９Ｈ／Ｌ８０Ｉからなる群より選択される、請求項１１に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１３】
Ａ３０Ｎ、Ｈ３２Ｔ、Ｐ８７Ｖ、Ｗ８８Ｎ、及びＰ９０Ｔからなる群より選択される１以上の付加的なアミノ酸修飾を含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１４】
一つから全てまでのＯ糖化部位またはＮ糖化部位を除去する１以上の修飾を含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１５】
前記糖化部位がＳ１２６であるか、あるいはＮ２４、Ｎ３８及びＮ８３からなる群より選択される、請求項１４に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１６】
前記１以上の修飾が、
（ａ）Ｎ２４Ｈ、Ｎ３８Ｈ及びＮ８３Ｈからなる群より選択される、あるいは
（ｂ）Ｎ２４Ｋ、Ｎ３８Ｋ及びＮ８３Ｋからなる群より選択される
アミノ酸置換である、請求項１５に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１７】
前記未修飾型ＥＰＯポリペプチドが１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６個のアミノ酸長を有する、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号１９、２５０、２５５、２５９、２６０、２６１、及び２６５から２７２のいずれかに示されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号２に示される成熟型ＥＰＯポリペプチドの１６６位に対応するアミノ酸が修飾、置換、または欠失された、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項２０】
前記未修飾対立遺伝子型、種間変異体、または他の変異体が、配列番号２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、３０９、または３１０のいずれかに示されるアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項２１】
前記修飾型ＥＰＯポリペプチドが経口投与されたとき、または、消化管内に存在するときに、増強されたタンパク質分解酵素の抵抗性が現れる、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項２２】
ＥＰＯポリペプチドがさらに修飾され、且つ、その修飾が、カルボキシル化、水酸化、ハシル化、カルバミル化、硫化、リン酸化、アルブミン化、酸化、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基への接合のいずれか１種以上である、請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチドを暗号化するヌクレオチドの配列を含む核酸分子。
【請求項２４】
請求項２３に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２５】
請求項２３に記載の核酸分子または請求項２４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２６】
（ｉ）請求項２３に記載の核酸分子または請求項２４に記載のベクターを含む核酸を細胞に導入する工程と、
（ii）暗号化された修飾型ＥＰＯポリペプチドが発現される条件下において細胞を培養する工程と、
を含む、修飾型ＥＰＯポリペプチドの発現方法。
【請求項２７】
薬剤学的に許容可能なビヒクル内に請求項１または２に記載の修飾型ＥＰＯポリペプチドを含む薬剤組成物。
【請求項２８】
経口、鼻腔、経肺、口腔、粘膜、経皮、皮下、十二指腸内、直腸、非経口、静脈または筋肉内投与のために製剤化された、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項２９】
前記薬剤組成物が、液剤、丸剤、錠剤、トローチ剤及びカプセル剤からなる群より選択されるいずれか１種に経口投与のために製剤化された、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項３０】
修飾型治療用ポリペプチドの制御型放出のために製剤化された、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項３１】
請求項２３に記載の核酸分子または請求項２４に記載のベクターを含む薬剤組成物。