【手続補正書】
【提出日】平成23年10月17日(2011.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥおよび２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３ともいう）は、フラノシル環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は修飾糖である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
「二環式糖」とは、２つの非ジェミナル環原子の架橋によって修飾されたフラノシル環を意味する。二環式糖は修飾糖である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１１】
他の修飾核酸塩基には、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシルおよびシトシン、ならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、ならびに３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンなどがある。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７２】
表９のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥ、および２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。表９に挙げた最初のギャップマーは、残りのギャップマーをマイクロウォークによって設計する際の出発点とした元のギャップマー（表７参照）であり、これをアステリスク（＊）で示す。５−１０−５ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオチドで構成され、その両側（５’方向および３’方向）に、それぞれ５個のヌクレオチドを含むウイングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１４個の２’−デオキシヌクレオチドで構成され、その両側（５’方向および３’方向）に、それぞれ３個のヌクレオチドを含むウイングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１３個の２’−デオキシヌクレオチドで構成される。中央のギャップは、５’端には２個のヌクレオチドを含むウイングが隣接し、３’端には５個のヌクレオチドを含むウイングが隣接する。これらのモチーフ（５−１０−５、３−１４−３、および２−１３−５）のそれぞれについて、５’ウイングセグメント中の各ヌクレオチドおよび３’ウイングセグメント中の各ヌクレオチドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー中のシチジン残基はすべて５−メチルシチジンである。「標的開始部位」は、ギャップマーが標的とする最も５’側のヌクレオチドを示す。「標的終止部位」は、ギャップマーが標的とする最も３’側のヌクレオチドを示す。表９に列挙する各ギャップマーは配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿０２７１４０．６のヌクレオチド１２５５０００〜１２７３０００）を標的とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９４】
表１２のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥ、および２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。表１２に挙げた最初のギャップマーは、残りのギャップマーをマイクロウォークによって設計する際の出発点とした元のギャップマー（表７参照）であり、これをアステリスク（＊）で示す。５−１０−５ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオチドで構成され、その両側（５’方向および３’方向）に、それぞれ５個のヌクレオチドを含むウイングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１４個の２’−デオキシヌクレオチドで構成され、その両側（５’方向および３’方向）に、それぞれ３個のヌクレオチドを含むウイングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１３個の２’−デオキシヌクレオチドで構成される。中央のギャップは、５’端には２個のヌクレオチドを含むウイングが隣接し、３’端には５個のヌクレオチドを含むウイングが隣接する。これらのモチーフ（５−１０−５、３−１４−３、および２−１３−５）のそれぞれについて、５’ウイングセグメント中の各ヌクレオチドおよび３’ウイングセグメント中の各ヌクレオチドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー中のシチジン残基はすべて５−メチルシチジンである。「標的開始部位」は、ギャップマーが標的とする最も５’側のヌクレオチドを示す。「標的終止部位」は、ギャップマーが標的とする最も３’側のヌクレオチドを示す。表１２に列挙する各ギャップマーは、配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿０２７１４０．６のヌクレオチド１２５５０００〜１２７３０００）を標的とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０１】
表１３のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥ、および２−１３−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。表１３に挙げた最初のギャップマーは、残りのギャップマーをマイクロウォークによって設計する際の出発点とした元のギャップマー（表７参照）であり、これをアステリスク（＊）で示す。５−１０−５ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオチドで構成され、その両側（５’方向および３’方向）に、それぞれ５個のヌクレオチドを含むウイングが隣接している。３−１４−３ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１４個の２’−デオキシヌクレオチドで構成され、その両側（５’方向および３’方向）に、それぞれ３個のヌクレオチドを含むウイングが隣接している。２−１３−５ギャップマーは２０ヌクレオチド長であり、中央のギャップセグメントは１３個の２’−デオキシヌクレオチドで構成される。中央のギャップは、５’端には２個のヌクレオチドを含むウイングが隣接し、３’端には５個のヌクレオチドを含むウイングが隣接する。これらのモチーフ（５−１０−５、３−１４−３、および２−１３−５）のそれぞれについて、５’ウイングセグメント中の各ヌクレオチドおよび３’ウイングセグメント中の各ヌクレオチドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー中のシチジン残基はすべて５−メチルシチジンである。「標的開始部位」は、ギャップマーが標的とする最も５’側のヌクレオチドを示す。「標的終止部位」は、ギャップマーが標的とする最も３’側のヌクレオチドを示す。表１３に記載の各ギャップマーは配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿０２７１４０．６のヌクレオチド１２５５０００〜１２７３０００）を標的とする。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１２】
ショートマーを、ＨｅｐＢ３細胞におけるヒト第７因子ｍＲＮＡを減少させるその能力について評価し、表１６に記載する５−１０−５キメラオリゴヌクレオチドの１つ、ＩＳＩＳ４０７９３９と比較した。９６穴プレート中、１ウェルあたり２０，０００細胞の密度のＨｅｐＢ３細胞を、エレクトロポレーションにより、１，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、ＲＮＡを細胞から単離し、第７因子ｍＲＮＡレベルを、本明細書で述べるように、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲで測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に応じて、第７因子ｍＲＮＡレベルを調節した。結果を、無処理対照細胞と比較した第７因子ｍＲＮＡの阻害百分率として、表１７に記載する。ＩＳＩＳ４０７９３９は、ショートマーの比較対象とした表１７中の最初のオリゴヌクレオチドであり、これにはアステリスク（＊）を付す。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３０】
ＩＳＩＳ４０３１０２の単回投与で処置されたマウスでは、３日目に、ＩＳＩＳ４０３１０２の単回投与で処置されたマウスの１日目と比較して、ａＰＴＴが、わずかに増加した。３日目に、ＩＳＩＳ４０３１０２の２回投与で処置されたマウスでは、ＩＳＩＳ４０３１０２の単回投与で処置されたマウスと比較して、ａＰＴＴが増加した。３日目に、ＩＳＩＳ４０３１０２の４回投与で処置されたマウスでは、ＩＳＩＳ４０３１０２の２回投与で処置されたマウスと比較して、ａＰＴＴが増加した。ＩＳＩＳ４０３１０２の６回投与を受けたマウスでは、ａＰＴＴが７日目から５６日目まで減少した。
【表２４】
複数回投与薬物動態試験におけるＢＡＬＢ／ｃマウスでのＰＴおよびａＰＴＴ分析
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