【事件の表示】
　特許第６０８５８０６号発明「ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物の、急性脳血管疾患の治療用医薬の製造における使用」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。
【結　論】
　特許第６０８５８０６号の請求項１〜２に係る特許を維持する。
【理　由】
［１］手続の経緯
　特許第６０８５８０６号の請求項１〜２に係る特許についての出願は、平成２１年１０月２３日（パリ条約による優先権主張外国庁受理　２００８年１１月１１日　中国）を国際出願日とする出願であって、平成２９年２月１０日にその特許権の設定登録がなされ、同年３月１日に特許掲載公報が発行され、その後、同年８月３１日にその特許について、特許異議申立人　日本臓器製薬株式会社（以下、単に「申立人」ということがある）より特許異議の申立てがなされ、同年１０月２３日付で取消理由が通知され、その指定期間内に平成３０年１月２５日付の意見書の提出があったものである。
　
［２］本件の特許発明
　特許第６０８５８０６号の請求項１〜２の特許に係る発明は、その特許請求の範囲の請求項１〜２に記載された事項により特定される、次のとおりのものである（以下、順に「特許発明１」〜「特許発明２」ということがあり、また、これらをまとめて単に「特許発明」ということがある）。
　
『　【請求項１】
　哺乳動物において、急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するための医薬の製造における、ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物の使用であって、
　前記ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物が、アナルジェシンであり、且つ
　前記医薬は、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いられる、前記使用。
【請求項２】
　前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の使用。　』
　
［３］取消理由の概要
　
［３−１］　特許発明１〜２に対し、平成２９年１０月２３日付の取消理由通知書で特許権者に通知した取消理由は、次のとおりである。
『　
（１）　下記の請求項に係る本件特許は、発明の詳細な説明の記載が下記の点で、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていないから、特許法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである。
　
（２）　下記の請求項に係る本件特許は、特許請求の範囲の記載が下記の点で、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていないから、特許法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである。
　
　　　　　　［　記　　（引用文献等については引用文献等一覧参照）　］
　
・理由：（１）、（２）について
・請求項：１，２
・引用文献等：１
　取消理由の詳細については、本件特許異議申立人日本臓器製薬株式会社が提出した特許異議申立書を参照のこと。引用文献１は、同申立書中の甲第１号証として提出されたものである。
　
　なお、これらの取消理由への対応に際し、例えば以下のａ、ｂ：
ａ．本件特許明細書の実施例１のＭＣＡＯラットのような、本件特許の請求項１、２の「急性脳虚血」系に伴う神経細胞の損傷において、Ｈ２Ｏ２がその「発症に関与する」（本件特許明細書【０００９】第３段落）こと；
ｂ．同実施例２のような、ＰＣ１２細胞を神経細胞モデルとしその保護効果をみる試験系において、ＰＣ１２をＮＧＦで分化させる前処理は必ずしも要しないこと；
がいずれも、本件特許出願時当業者にとり技術常識又は周知技術であった、ということを根拠に反論を行うのであれば、当該ａ，ｂの各技術常識又は周知技術の存在を示す適切な公知文献を乙号証として提示した上で、上記実施例１及び２の試験結果を含む本件特許明細書の記載、ならびに当該技術常識又は周知技術を踏まえれば本件特許の請求項１，２に係る発明について申立理由に係る記載不備はない、ということを意見書にて説明されたい。
　
＜引用文献等一覧＞
１　神経細胞培養ハンドブック、ＤＳファーマバイオメディカル株式会社、http://www.dspbio.co.jp/pdf/square2/neuron.pdf　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　』
　そして、上記取消理由において参照される特許異議申立書に記載の理由は概要次の（ｉ）〜（ｉｉｉ）のとおりである。
（ｉ）　本件特許明細書の実施例中、Ｈ２Ｏ２誘発性損傷に対する細胞保護効果を調べているのは、実施例２のみであるところ、甲第１号証に示されるとおり、ＰＣ１２細胞は、副腎髄質由来の細胞であり、それ自身が神経細胞ではないことは明らかであり、また、ＰＣ１２細胞は、神経成長因子（ＮＧＦ）の添加により交感神経細胞様に分化する細胞であるが、実施例２においては、「神経成長因子」なる用語や「ＮＧＦ」なる用語はどこにも記載されていない。そうしてみると、実施例２で使用されている細胞は、ＰＣ１２細胞をＮＧＦによって分化させて得られた神経細胞ではなく、ＰＣ１２細胞そのもの、すなわち副腎髄質細胞に他ならないといえる。よって、実施例２では、Ｈ２Ｏ２誘発性損傷に対するＰＣ１２細胞（副腎髄質細胞）保護効果が調べられているに留まり、神経細胞を保護できた実験結果はどこにも記載されていない。［特許異議申立書第５頁下から第２行〜第９頁第１６行］
（ｉｉ）　また、本件特許の請求項１の「前記医薬は、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いられる」に関し、本件特許明細書においてアナルジェシンを「発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与」している実施例１においては、脳梗塞が体積等調べられた旨が記載されているものの、「急性脳虚血に伴う
Ｈ
２
Ｏ
２
誘発性損傷
　よって、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、アナルジェシンを「急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用い」ることによって、「急性脳虚血に伴う
Ｈ
２
Ｏ
２
誘発性損傷
（ｉｉｉ）　そうすると、
・本件特許明細書の発明の詳細な説明には、アナルジェシンが、
Ｈ
２
Ｏ
２
誘発性損傷
ＰＣ１２細胞（副腎髄質細胞）
急性脳虚血に伴うＨ
２
Ｏ
２
誘発性損傷
神経細胞
・また、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、アナルジェシンを「急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用い」ることによって、「急性脳虚血に伴う
Ｈ
２
Ｏ
２
誘発性損傷
のだから、発明の詳細な説明は、当業者が請求項１−２に係る発明を実施できる程度に明確且つ十分に記載されたものではなく、また、特許発明１−２に係る発明の範囲まで発明の詳細な説明を拡張ないし一般化することはできない。［特許異議申立書第１０頁第６行〜第１１頁第５行］
　
［３−２］　上の取消理由に対し、特許権者は、平成３０年１月２５日付の意見書中で、以下の乙第１〜５号証の写しを添付し引用すると共に、取消理由（１）及び（２）はいずれも理由がなく、特許発明１〜２はいずれも特許維持されるべきものであることを主張する。
・乙第１号証：Journal of Neuroscience research, (2002) 68 p.463-469
・乙第２号証：Proc.Natl.Acad.Sci.USA, (1976) 73(7) p.2424-2428
・乙第３号証：Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol., (2004) 287 p.H29-H39
・乙第４号証：Ann.N.Y.Acad.Sci., (2002) 965 p.487-496
・乙第５号証：Exp.Brain Res., (2008)(Published online：24 Aug.2007) 184 p.307-312
　
［４］合議体の判断
　
［４−１］取消理由（１）について(実施可能要件）
　
（１）特許発明１について
（ｉ）　特許発明１は、請求項１の規定からみて、「急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するための」、「急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いられる」医薬の製造にお」いて、「ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物」である「アナルジェシン」を使用する方法の発明と解されるものである。
　そうすると、特許発明１について、発明の詳細な説明が「その発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者がその実施をすることができる程度に明確かつ十分に」記載したものであること（実施可能要件）、とは、発明の詳細な説明が、特許発明１の「ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物」である「アナルジェシン」を、「急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用い」ることによって「急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護する」という薬理作用をもたらす医薬を製造するために使用できる、ということを当業者が理解できるように記載されていること、である。
　そして、発明の詳細な説明が、特許発明１の「ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物」である「アナルジェシン」を、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いることによって、哺乳動物の急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという薬理作用をもたらす医薬を製造するために使用できること、を当業者が理解できるように記載されている、といえるためには、発明の詳細な説明中で、特許発明１の医薬中の成分であるアナルジェシンが、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いることによって、哺乳動物の急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという薬理作用をもたらす、ということが、当業者に理解できるように記載されていることが必要である。
　
　そこで、以下、特許明細書の発明の詳細な説明の記載から、特許発明１の医薬に含まれるアナルジェシンが、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いることによって、哺乳動物の急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという薬理作用をもたらす、ということが理解できるか否か、という点について検討する。 
　
（ｉｉ）　哺乳動物における急性脳虚血等の虚血性脳血管疾患に伴う神経細胞の損傷及びそれに関連する症状、ならびに、それら損傷や関連症状に対しアナルジェシンが及ぼす神経細胞に対する保護作用に関し、特許明細書中には以下の記載がある［下線は合議体による］。
　
（ｉｉ−１）特許明細書の記載事項
　
ａ．『　【技術分野】
【０００１】
　本発明は、
急性脳血管疾患の治療
ワクシニアウイルスによって炎症を起こしたウサギ皮膚由来の抽出物の、急性脳血管疾患の治療用医薬の製造における使用
【背景技術】
【０００２】
　急性脳血管疾患の一つである発作は、世界的な住人における第三の主要な死因であり、また様々な疾患の中でも最高の能力障害率を生じる。・・・
　該脳血管疾患は、主として2つの型、即ち出血性および虚血性脳血管疾患に分類され、後者が60-70％を占めており、これが最も一般的な型の脳血管疾患である。虚血性脳血管疾患の病態生理学的メカニズムを研究し、またニューロン保護剤として機能する薬物を探索することが重要である。』
　
ｂ．『　【０００７】
　虚血性脳血管疾患は、塞栓症による、動脈血供給の幾つかの領域における、血流の一過性のまたは永続的な減少によって引起され、またその病理的な過程は、複雑な一時的および空間的なカスケード反応と関連している。・・・、
発作の最初の発症に係る臨床例において、該中大脳動脈閉塞の割合は高く、従って中大脳動脈閉塞(MCAO)の動物モデルによりシミュレートされたその病理過程は、臨床的な発作のそれと著しい類似性を有している。
　
ベダーソン(Bederson)の評価およびスロープテスト
神経学的徴候学的損傷の徴候、例えば反対側の手足の虚弱化および麻痺が、ラットにおける脳組織の虚血後に引起される
アナルジェシンが、動物のこれら神経学的な症状を顕著に改善し得ることを見出した
アナルジェシンを、脳血管疾患の治療のために使用して、神経機能を改善することができる
　
ｃ．『　【０００８】
　
脳梗塞病巣の領域
中間的用量のアナルジェシン投与群における脳梗塞の体積は、損傷を受けた群の該体積と比較して、有意に減少した
アナルジェシンを、脳血管疾患の治療のために使用して、脳梗塞領域を低減させる
  ・・・。ニューロンは、大脳皮質または脳全体において酸素を消費する主要な部分を構成し、また虚血および低酸素症傷害に対して極めて敏感である。新鮮な酸素源が存在しない場合、該組織は、その高エネルギーリン酸塩化合物の蓄積分のみを使用することができ、更に代謝により、蓄積されているグルコースおよびグリコーゲンをMDAとすることによって、エネルギーを得ることができる。該脳組織の虚血および/または低酸素症は、エネルギーの枯渇に導き、エネルギーポンプ機能障害、神経細胞におけるカルシウムイオンの過負荷、有害な酸素ラジカルの増大、細胞の酸中毒を含む一連の連鎖反応を結果し、また細胞膜の構造およびその保全性が損傷を受け、その結果、該膜の透過性が増大し、細胞毒性浮腫の程度が拡大され、また幾分かの細胞内酵素が、血液中に大量に放出される。これら結果は、
虚血後に、脳組織中の乳酸およびMDAの濃度が著しく高められ、
脳組織中の乳酸の濃度は、アナルジェシンの介入により大幅に減じられることを示した
アナルジェシンを、脳血管疾患の治療のために使用して、脳組織中の乳酸の濃度を低下させる
　
ｄ．『　【０００９】
  SODは重要な酸化防止性酵素であり、該酵素は、遊離基反応を効果的に阻害し、また高いSOD活性は強力な酸化防止能力を表す。
ラットにおける脳組織の該SOD活性は、大幅に低下し、従って遊離基排除能力は、脳虚血傷害後に減少した。
該SOD活性を、アナルジェシンの介入によって増強することができることを示した
アナルジェシンを、脳血管疾患の治療において使用して、該SOD活性を高める
　もう一つの局面において、本発明者は、アナルジェシンが、神経細胞の損傷に対して保護作用を持つことができることを見出した。
　
Ｈ
２
Ｏ
２
脳虚血
神経系の諸疾患の発症に関与する、重要な反応性酸素成分
膜脂質を過剰酸化し、細胞膜の流動性を低下し、細胞内タンパク質の成分および活性を変更し、クロマチンを濃厚化し、かつDNAを破壊し、しかも最終的に細胞死をもたらす
アナルジェシンを使用して、PC12細胞のＨ
２
Ｏ
２
誘発性傷害を改善する
　
ｅ．『　【００１０】
　・・・
。グルタミン酸
神経細胞系および一次神経細胞を損傷する可能性がある
細胞内で減少したグルタチオン(GSH)の喪失、高い酸素ラジカル濃度および神経細胞の死滅を誘発する
アナルジェシンは、PC12細胞のグルタミン酸-誘発性損傷を改善・・・するために有用である
　・・・　』
　
ｆ．『　【００１４】
　・・・
実施例1：ラットにおける急性脳虚血(MCAO)に及ぼす、アナルジェシンの保護効果
実験材料：
1. 薬物および試薬：
  10U/mL
アナルジェシン
2. テスト動物およびグループ分け：
  体重280-300gの、雄ウィスタ(Wistar)ラットは、・・・
【００１５】
　これらラットを、ランダムに6つのグループに分けた：即ち、擬似薬投与群、傷害モデル群(ビヒクルコントロール)、
アナルジェシン
外科手術後2時間から開始して、該動物に5回に渡り(2時間、6時間、20時間、24時間および47時間)投与した
実験方法：
1: 
中大脳動脈閉塞のラットモデル
　・・・
1.2: 外科手術前の麻酔：
　ラットを、400mg/kgにて、10％抱水クロラール溶液で腹腔内注射した。
【００１６】
1.3: 外科手術工程：
　・・・
　ラットをその背面位置に固定し、その首部の丁度真ん中の皮膚の切開を行った。該動物の左総頸動脈(CCA)を、組織の層を大まかに切開した後に露出させた。
　・・・
　内頸動脈(ICA)を、外頸動脈から二股に分かれる点の最終部分まで、迷走神経および気管の損傷を回避するように、注意して分離し、また糸を後の使用のために配置した。同側の外頸動脈を分離し、ECAの分岐の開始点から約0.8cmの位置において結サツを行った。
(3) 中脳動脈の結サツ：
  CCAの近位端部において把持するために、ブルドッグクランプを使用し、ECAの結サツ部と二股に分かれる点との間で、径約2mmの「V」字型切開を行った。該ブルドッグクランプを外す前に、上記ナイロン糸を、該切開部からCCA内に徐々に挿入し、また次いで内頸動脈と外頸動脈との間の該二股に分かれる点を介して、該内頸動脈に通した。該ナイロン糸を、幾分かの抵抗力が現れるまで、約18.5±0.5mmなる深さで、頭蓋内方向にICA部分に向けて徐々に押込み、次いで該ナイロン糸の他端部を、より細い前大脳動脈に達するように、外MCAの始点に通した。
左中大脳動脈における血流の遮断
　・・・
【００２３】
アッセイの結果
1. ラットにおける急性脳虚血の神経学的徴候学に及ぼすアナルジェシンの効果
　・・・。モデル群における動物は、脳虚血後に、神経機能に関する評点の有意な増加(P0.01)を伴って、神経損傷の明確な症状を示したが、
40U/kgのアナルジェシンは、該神経機能の症状を有意に(P0.05)改善し、
　・・・
　・・・
【００２５】
2. ラットにおける急性脳虚血に起因する脳梗塞の体積に及ぼすアナルジェシンの効果
　・・・。エダラボン投与群および
中-用量のアナルジェシン投与群における脳梗塞領域は、有意に減少した
3. ラットの急性虚血脳組織における乳酸の濃度に及ぼす、アナルジェシンの効果
  ラット脳組織中の乳酸の濃度は、擬似薬投与群に比して、有意な差(P0.01)を持って、虚血傷害後に、0.98±0.09mM/gタンパクまで増大した。
40U/kgアナルジェシン投与群における乳酸の濃度は、モデル群と比較して、統計的有意性(P0.05)を持って、0.70±0.07mM/gタンパクまで有意に増大した。
　・・・
　・・・
【００２７】
4. ラット脳組織におけるスーパーオキシドジスムターゼ活性に及ぼすアナルジェシンの効果
　ラット脳組織におけるSODの濃度は、虚血傷害を被った後、擬似薬投与群と比較して有意な差(P0.01)を持って、165.84±13.14nM/gタンパクまで低下した。
20u/kgおよび40u/kgのアナルジェシン投与群においては、モデル群と比較して、該濃度は有意に増大した(P0.05)。
　・・・
　・・・　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　』
［※　合議体注：
　摘記ｆ中の【００２５】に
『40U/kgアナルジェシン投与群における乳酸の濃度は、モデル群と比較して、統計的有意性(P0.05)を持って、0.70±0.07mM/gタンパクまで有意に
増大した
増大した
との記載がみられるが、
・当該記載の直後の表２によれば、「モデル群」の乳酸濃度は「０．９８±０．０９」であって、当該記載箇所の各数はこれより低い（即ち
「増大」ではなく「減少又は「低下」している
・摘記ｃ中に．『　・・・、虚血後に、脳組織中の乳酸およびMDAの濃度が著しく高められ、一方で脳組織中の乳酸の濃度は、アナルジェシンの介入により大幅に
減じられる
低下させる
と整合しないことから、
上記【００２５】の各「増大した」はいずれも例えば「減少した」の誤記と解される。
　
ｇ．『　【００２９】
実施例2：Ｈ２Ｏ２−誘発性PC12細胞障害に及ぼすアナルジェシンの効果
実験材料：
1. 薬物および試薬：
  
PC12細胞
　・・・
【００３０】
実験法
1. PC12細胞の培養：
　・・・PC12細胞を、恒温インキュベータ内で、37℃、5％CO2なる条件下で、完全1640培地(10％のウマ血清、5％牛胎児血清、10U/mLのペニシリン、100μg/mLのストレプトマイシンを含む)中で培養し、該培地を2-3日毎に交換した[6]。
2. 細胞の処理：
  正常なコントロール群：PC12細胞を、血清含有DMEM培地で正規に培養した。Ｈ２Ｏ２モデル群：PC12細胞の培養物が単層まで密集成長した後に、該元の培地を除去し、200μM/Lなる最終的濃度にてＨ２Ｏ２を含む、血清を含まない培地を添加し、該培養物を、37℃、5％CO2なる条件下で、24時間に渡り恒温インキュベータ内でインキュベートした。サンプル処理群：該PC12細胞培養物が、単層まで密集成長した後に、該元の培地を除去し、サンプルを添加して、1時間に渡り予備処理し、引続き200μM/Lなる最終的濃度にてＨ２Ｏ２で処理し、次いで該培養物を、血清を含まない条件下で24時間に渡りインキュベートした。
【００３１】
3. 細胞の生存能力に関するアッセイ
  各ウエルに、最終濃度0.5mg/mLとなるように、100μLのMTT溶液を添加し、この培養物を、更に37℃、5％CO2なる条件下で、4時間に渡りインキュベートし、次いでその上澄を捨てた。100μLのDMSOを各ウエルに添加し、振とうし、次いで吸光度のOD値を540nmにて測定した。細胞の生存能力= Aテストウエル/A正常なコントロールウエル*100%。
アッセイの結果
  PC12細胞の生存能力は、71.94±3.54%に低下したが、これは、過酸化水素による傷害を受けた後の、正常なコントロール群と比較して、有意な差を示した(P0.01)。また、
0.25、0.5、1U/mLなるアナルジェシン投与群における該生存能力は、モデル群と比較して、有意に増大した(P0.05)
　・・・　
　・・・　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　  』
　
ｈ．『　【００３３】
実施例3：グルタミン酸による傷害を受けた神経細胞に及ぼす、アナルジェシンの保護効果
実験物質：
1. 薬物および試薬：
　
PC12細胞
　・・・
【００３４】
実験法
1. PC12細胞の培養：
  PC12細胞を、恒温インキュベータ内で、37℃、5％CO2なる条件下で、完全1640培地(10％のウマ血清、5％牛胎児血清、10U/mLのペニシリン、100μg/mLのストレプトマイシンを含む)中で培養し、・・・
2. 細胞の処理：
  PC12細胞の培養物が単層まで密集成長した後に、該元の培地を除去し、1mMのL-グルタミン酸を含む、Mg2+を含まない-イーグルズ(Earle's)溶液(142.6mM/LのNaCl、5.4mM/LのKCl、1.8mM/LのCaCl2、1.0mM/LのNaH2PO4、2.38mM/LのHEPERS、5.6mM/Lのグルコース、pH 7.4、0.5μMのL-gly)を添加した。15分後に、該溶液を、血清を含まない1640培地で置換えた。測定は24時間後に行った。投与群における該溶液を、薬物を含有し、血清を含まない1640培地で置換え、該細胞を24時間に渡り培養した後に、測定を行った。
【００３５】
3. 細胞生存能力のアッセイ
  各ウエルに、最終濃度0.5mg/mLとなるように、100μLのMTT溶液を添加し、この培養物を、更に37℃、5％CO2なる条件下で、4時間に渡りインキュベートした。次いで、その上澄を捨てた。100μLのDMSOを、各ウエルに添加し、振とうし、次いで吸光度のOD値を540nmにて測定した。細胞生存能力=Aテストウエル/A正常なコントロールウエル*100%。
アッセイの結果
　以下の表5は、グルタミン酸により傷害を受けたPC12細胞に及ぼすアナルジェシンの保護効果に関する結果を示す。
  PC12細胞の生存能力は、グルタミン酸により傷害を受けた後、74.76±4.86%に低下したが、これは、正常なコントロール群と比較して、有意な差を示した(P0.01)。また、
0.25、0.5、1U/mLなるアナルジェシン投与群における該生存能力は、モデル群と比較して、有意に増大した(P0.01)
　・・・
　・・・　』
　
　また、特許権者が提出した上記乙第１〜５号証には、次のような記載がある［乙第１〜５号証はいずれも英語で記されているため、特許権者が提出した訳文を参考に合議体で作成した日本語文にて記す。下線は合議体による］。
　
（ｉｉ−２）乙号証の記載事項
　
＜１＞乙第１号証：Journal of Neuroscience research, (2002) 68 p.463-469
ア　標題
『　
虚血
褐色細胞腫ＰＣ１２細胞
イ　要約
『　
虚血性傷害に対する神経保護
ＰＣ１２細胞
　
ウ　第４６３頁左欄下から第１２〜８行
『　
虚血性損傷（酸素及びグルコースの欠乏化、ＯＧＤ）
神経細胞死
　
エ　第４６３頁右欄第１４〜２９行
『　
未分化ＰＣ１２細胞
該細胞は培養液中で生存し増殖する
未分化のＰＣ１２細胞
酸素及びグルコースの欠乏の組合せによる虚血のインビトロモデル
　
オ　第４６４頁左欄第３１〜３５行
『・・・。我々は、カルノシンやホモカルノシンといったＣＲＣの潜在的神経保護の役割を理解すべく、
ＰＣ１２細胞における虚血性（ＯＧＤ）細胞死に対する神経保護を
  　
カ　第４６４頁左欄第４５行〜右欄第５行
『　ＰＣ１２細胞培養
　ＰＣ１２細胞は、７％ＦＣＳ、７％ウマ血清、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、及び１００Ｕ／ｍｌペニシリン・・・を追加されたダルベコ変法イーグル（ＤＭＥＭ）培地中で生育された。・・・培地は週２回交換され、培養物は週に１回１：６の割合で分割された（Ａｂｕ−Ｒａｙａ他、１９９３）。・・・
　
虚血装置
　虚血性損傷（ＯＧＤ）を誘導するため、ＰＣ１２細胞はペトリ皿上で培養され、以前に我々により示され（Ａｂｕ−Ｒａｙａ他、１９９３）今回改変されアップグレードされた虚血装置へと導入された（図１）。・・・』
　
キ　第４６８頁左欄第１〜４行
『　
ＮＧＦで分化させていないＰＣ１２細胞
　
＜２＞乙第２号証：Proc.Natl.Acad.Sci.USA, (1976) 73(7) p.2424-2428
　
ア　標題
『　神経成長因子に応答するラット副腎褐色細胞腫細胞ノルアドレナリン作用性クローン株の確立　』
　
イ　要約
『　
可逆的に神経成長因子（ＮＧＦ）に反応する単一細胞クローン株
ＰＣ１２
１週間のＮＧＦへの曝露により、ＰＣ１２細胞は増殖を止め、一次細胞培養における交感神経細胞により産生されるのと類似する分枝した結節状のプロセスの拡大を開始する。
ＮＧＦの除去に次いで、２４時間以内のプロセスの縮退及び７２時間以内の細胞増殖の再開が生じる。ＮＧＦの
非存在下で成長したＰＣ１２細胞
ＰＣ１２細胞株は神経生物学的及び神経化学的研究のための有用なモデル系であろう。
　
ウ　第２４２５頁　図１説明文
『　図１．　（Ａ−Ｄ）　
ＮＧＦ非存在下
ＮＧＦ非存在下
　
エ　第２４２６頁左欄第４０〜４９行
『　カテコールアミン代謝。　・・・
ＰＣ１２細胞（ＮＧＦ−処理及び
未処理
　
オ　第２４２７頁　表１［※罫線略］
『　　表１：ＰＣ１２細胞のノルアドレナリン作動特性　　　　　
　　　　　　　
ＰＣ１２細
ＮＧＦ処理
　　　　　　　　
胞
したＰ
　　　　　　　　　　　　　　　　　
Ｃ１２
　　　　　　　　　　　　　　　　　
細胞
　・・・　　　　・・・　　　　　・・・　　　　　・・・　　・・・
　ドーパミン　　　16.6±1.7　　　　4.4±0.4　　　・・・　　・・・
　　　　　　　　　(2.9±0.5)　　　(3.3±0.5)
ノルエピネフリン　6.1±6　　　　　1.5±0.2　　　・・・　　・・・
　　　ン　　　　　(1.0±0.2)　　　(1.2±0.2)　　
　エピネフリン　　　＜0.15　　　　　＜0.15　　　・・・　　・・・
　
　ＰＣ１２細胞はコラーゲン被覆された３５ｍｍ組織培養皿上で２週間
ＮＧＦの
非存在下で
　
カ　第２４２７頁右欄第２０〜２４行
『　本データから、
ＰＣ１２細胞
ＰＣ１２細胞
　
＜３＞乙第３号証：Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol., (2004) 287 p.H29-H39
　
ア　標題
『　細胞外ノルエピネフリンは
ＰＣ１２細胞
酸化ストレス
　
イ　要約
『　心臓のノルエピネフリン（ＮＥ）取り込み活性はうっ血性心不全において減少する。インタクトな動物における我々の研究は、心臓の交感神経末端へのこの作用が酸化ストレス及び／又はＮＥ由来のＮＥ毒性代謝産物を原因とするものであることを示唆している。本研究で、我々は、神経細胞のＮＥ取込み活性及びＮＥ輸送体へのＮＥの直接的な作用を、
未分化のＰＣ１２細胞
　
ウ　第Ｈ２９頁右欄第１６〜２３行
『　本研究の目的は、シナプス接合を欠いている
未分化のラット褐色細胞腫ＰＣ１２細胞
　
エ　第Ｈ３０頁左欄第４〜１１行
『　ＰＣ１２細胞培養
　ＰＣ１２細胞は、American Type Culture Collection (Manassas, VA)から入手し、９５％の空気及び５％の二酸化炭素を含む加湿インキュベーター内で、３７℃で、１０％の熱不活性化ウマ血清及び２．５％のウシ胎仔血清を含むHEPES-modified RPMI 1640培地の７５ｃｍ２フラスコ中で培養した。培地は、１週間に３回交換した。細胞は、４〜５日後に継代培養した。全ての実験は、６〜１５回継代したＰＣ１２細胞を用いて行った。』
　
オ　第Ｈ３５頁右欄第７〜２１行
『　これまでＰＣ１２細胞株は交感神経の機能及びモノアミン神経伝達因子の研究のために広範囲で用いられて来た。当該細胞はドーパミンやＮＥを合成する酵素を含むのみならず、・・・（２０）。ＰＣ１２からクローン化されたＮＥＴのｃＤＮＡは６１７アミノ酸の膜タンパク質をコードしている（９）。それは脳におけるヒトＮＥＴと高レベルのホモロジーを示す。しかしながら、インタクトな動物又は単離された器官における交感神経末端とは異なり、
未分化のＰＣ１２細胞
　
＜４＞乙第４号証：Ann.N.Y.Acad.Sci., (2002) 965 p.487-496
　
ア　標題
『　
未分化のＰＣ１２細胞
イ　要約
『　これまでに細胞死及び反応性酸素種の産生が薬物濫用誘導性の神経変性に関与していることが示唆されてきた。この研究において、
未分化ＰＣ１２細胞
神経モデル
　
ウ　第４８８頁第１２〜２２行
『　方法
　
未分化ＰＣ１２細胞
　ＰＣ１２細胞１０は、１０％（ｖ／ｖ）のウマ血清、５％（ｖ／ｖ）のウシ血清、５０Ｕ／ｍＬのペニシリン及び５０ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補ったＲＰＭＩ１６４０培地中の７５ｃｍ２フラスコ中で培養された。培養物は、９５％空気と５％二酸化炭素を含む加湿インキュベーター内で３７℃に保たれ、１週間に２回継代された。当該細胞は、ポリ−Ｌ−リシンでコーティングされたマルチウェル上に、ＭＴＴ研究用には５００００細胞／ｃｍ２の密度で、他の研究用には１６００００細胞／ｃｍ２の密度で撒かれた。クロマチン凝縮の分析のために、当該細胞は、１８００００細胞／ｍＬで懸濁液中で培養された。当該細胞は、乱用薬モルヒネ、ヘロイン、コカイン及びアンフェタミンを用いて２４時間、４８時間又は９６時間更に培養された。』
　
＜５＞乙第５号証：Exp.Brain Res., (2008)(Published online：24 Aug.2007) 184 p.307-312
　
ア　標題
『　ＰＣ１２細胞におけるＺ−リグスチリドの過酸化水素誘導性損傷に対する保護作用　』
　
イ　要約
『　Ｚ−リグスチリド（Ｚ−ＬＩＧ）は、中国の薬剤Danggui（Radix Angelica sinensis）の主要な親油性化合物である。これまでの研究から、Ｚ−ＬＩＧは、
一過性的な脳虚血及び永続的な脳虚血
ＰＣ１２細胞
過酸化水素（Ｈ
２
Ｏ
２
）誘導性障害
細胞のＨ
２
Ｏ
２
（５００μＭ）への曝露
細胞のＺ−ＬＩＧによる前処理（０．１，１．０，２．５，又は５．０μｇ／ｍｌ）はＨ
２
Ｏ
２
誘導性細胞死を有意に減弱させ、
細胞の抗酸化性防御の改善及びミトコンドリアのアポトーシス経路の阻害を通して、誘導性細胞毒性に対する顕著な保護作用
、酸化ストレス及びアポトーシスが主に関連する神経変性障害
　
ウ　第３０７頁右欄第１行〜下から第５行
『　序
　神経変性障害は、認知機能の進行性喪失により特徴付けられる通常疾患の大きな部分を占める。・・・、これまでに多くの研究が、酸化ストレス及びアポトーシスが神経変性疾患の病態形成において重要な役割を演じていることを示唆して来た（Ｂｕｔｔｋｅ及びＳａｎｄｓｔｒｏｍ　１９９４；Ｇｏｔｓ他　１９９４；Ｓｅｌｋｏｅ　１９９４）。
過酸化水素（Ｈ
２
Ｏ
２
細胞の酸化ストレスのバックグラウンドレベルに寄与するヒドロキシルフリーラジカルの内在性の供給源
Ｈ
２
Ｏ
２
は、
酸化ストレスを上昇させ、ミトコンドリアの機能不全を惹起することでアポトーシス性の細胞死を誘導し得る
Ｈ
２
Ｏ
２
は、神経保護の可能性と、新たな薬物療法の作用機序を探索するための神経損傷の誘導物質として広く使用されている
　
エ　第３０８頁左欄下から第３行〜右欄第１３行
『　細胞培養及び薬剤処理
　American Type Culture Collection（Rockville, MD, USA）からの未分化のＰＣ１２細胞は、５％ＦＢＳ、１０％ウマ血清、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補った高グルコースＤＭＥＭ中に９５％の空気及び５％の二酸化炭素環境下３７℃で保持された。ＰＣ１２細胞は、２．５×１０５細胞／ｍｌの密度でプレート上に生育された。ＰＣ１２細胞に対するＺ−ＬＩＧで２４時間前培養し、過酸化水素（５００）μＭ）を種々の期間培地に添加した。最終培養培地中のＤＭＳＯの濃度は、０．１％であり、細胞の生存能力には影響を及ぼさない量であった。指し示された時間のＨ２Ｏ２処理で、細胞の生存能力、反応性酸素種（ＲＯＳ）、ＴＡＣ及びミトコンドリア経路のアポトーシスタンパクのためのアッセイをそれぞれ行った。』
　
オ　第３０９頁右欄第９〜１７行
『　結果　
　Ｚ−ＬＩＧは、Ｈ２Ｏ２誘導性の細胞毒性からＰＣ１２細胞を保護した
　Ｈ２Ｏ２−誘導性の細胞毒性に対するＺ−ＬＩＧの作用を測定するため、ＰＣ１２細胞が様々な濃度のＺ−ＬＩＧで２４時間前処理された。５００μＭのＨ２Ｏ２がさらなる２４時間インキュベーションで添加された。細胞生存率がＭＴＴミトコンドリア機能アッセイを用いて試験された。図１に示されるように、・・・』
　
カ　第３１１頁右欄第２２〜２６行
『　・・・。故に、神経細胞を模倣するより正確なモデルである
分化ＰＣ１２細胞
虚血性脳卒中
より
　
（ｉｉｉ）　そして、これら（ｉ）の発明の詳細な説明の記載、及び、（ｉｉ）の乙第１〜５号証の記載を併せみた当業者は、概要以下のＡ〜Ｃの事項を把握し得るものである。
　
Ａ　特許明細書の実施例１によれば、ヒトの急性脳虚血を模した中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットモデルを作成することで、当該モデルにおいて、神経学的徴候、脳梗塞、脳組織における乳酸濃度、ＳＯＤ活性の低下といった、神経細胞の損傷又はそれに関連する諸症状が誘発されること、ならびに、かかる損傷及び諸症状を呈するモデル動物に対し、アナルジェシンをＭＣＡＯ手術後２、６、２０、２４及び４７時間後に投与することで、それら損傷又は諸症状に対し神経細胞を保護する作用が現実にもたらされること、を把握することができる。
　
Ｂ　ここで、同実施例１では、急性脳虚血モデルにおける神経細胞の損傷及び関連諸症状のいずれかが
特にＨ
２
Ｏ
２
誘発性のものである
　しかしながら、
　１）　特許権者の提出した乙第５号証の記載によれば、虚血性脳卒中等の一過性的又は永続的な脳虚血を含む神経変性障害において、Ｈ２Ｏ２による酸化ストレス及びアポトーシスレベルの上昇がその病理形成に寄与することは、同乙第５号証以前にも多くの研究により示唆されており、よって、当業者が広く認識し得ていたことであるといえる。
　そうすると、かかる乙第５号証の記載からみて、取消理由通知書で審尋された事項ａ：
　ａ：　特許明細書の実施例１のＭＣＡＯラットのような、本件特許の請求項１、２の「急性脳虚血」系に伴う神経細胞の損傷において、Ｈ２Ｏ２がその「発症に関与する」（本件特許明細書【０００９】第３段落）こと；
は、本件特許出願時、当業者にとり広く認識されていた技術常識であったものということができる。
　２）　さらに、乙第５号証には、当該Ｈ２Ｏ２による酸化ストレス及びアポトーシスのモデル系として、未分化のＰＣ１２細胞に対しＨ２Ｏ２処理したものを採用することも記載されている。
　また、それ以外にも、神経細胞モデルとして未分化の又はＮＧＦにより分化されてなるＰＣ１２細胞を採用すること自体、乙第１〜４号証の記載にもみられるとおり、これまた本件特許出願時当業者にとり広く知られていたことであったといえる。そして、中でも乙第１，３，４号証では、虚血（乙第１号証）、酸化ストレス（乙第３号証）、オピオイド又は覚醒剤による中毒作用（乙第４号証）による各神経細胞損傷又はその関連症状のモデルの作成に際し、特に未分化の（ＮＧＦによる分化誘導を施していない）ＰＣ１２細胞が用いられることが実際に記載されている。
　即ち、これら乙第１〜５号証の記載からみて、神経細胞モデルとしてＰＣ１２細胞を用いること、及びその際、ＰＣ１２細胞をＮＧＦにより分化させてなるものを用いるか、もしくは未分化のまま用いるかは、試験の目的（例えば、神経細胞モデルとしてのＰＣ１２細胞について、の生存／死や増殖性の変化をみるのか、あるいはそれ以外の変化をみるのか）等によって、適宜選択し得る事項であり、少なくとも、分化ＰＣ１２細胞を用いることのみならず、未分化のままのＰＣ１２細胞もまた神経細胞モデルとして用いること、いいかえれば、取消理由通知書で審尋された事項ｂ：
　ｂ：　特許明細書の実施例２のような、ＰＣ１２細胞を神経細胞モデルとしその保護効果をみる試験系において、ＰＣ１２をＮＧＦで分化させる前処理は必ずしも要しないこと；
もまた、本件特許出願時、当業者にとり広く認識されていた技術常識であったものということができる。
［　なお、この点に関し、乙第５号証には、同号証の試験において、
分化
より正確な
　そして、特許明細書の実施例２では、そのような未分化の（前以てＮＧＦで分化誘導処理されているとは認められない）ＰＣ１２細胞に対し、事前にアナルジェシンを添加投与することで、その後のＨ２Ｏ２処理により誘発される損傷から当該ＰＣ１２細胞を保護する作用がもたらされたことが、具体的な薬理試験データと共に示されているのである。
　
Ｃ　そうすると、上述のＡに対し、これらＢ１）〜２）の事項をさらに併せ考慮すれば、特許明細書の実施例１の試験においては、採用されている急性脳虚血モデル（ＭＣＡＯ）動物に伴う神経細胞の損傷がＨ２Ｏ２誘発性のものであることこそ現実の試験結果を以て確認されてはいないものの、
・ＭＣＡＯモデルラットにおいて誘発され、、ＭＣＡＯ状態の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されたアナルジェシンにより薬理作用がもたらされている、様々な観点からみた神経細胞における損傷及び関連症状のいずれかについて、Ｈ２Ｏ２がその誘発に寄与するものであること；
・そのような、Ｈ２Ｏ２がその誘発に寄与する神経細胞における損傷及び関連症状のいずれかに対し、実施例１で用いられたのと同じ薬効成分であるアナルジェシンの添加により、保護作用がもたされることは、実施例２の未分化ＰＣ１２細胞をモデルとした薬理試験の結果を以て裏付けられていること；
は、いずれも当業者にとり十分に理解し得た、ということができる。
　
（ｉｖ）　してみれば、上述の実施例１及び２の薬理試験結果を含む特許明細書の発明の詳細な説明の記載、及び、乙第１〜５号証に例示される本件特許出願時の技術常識を踏まえれば、特許発明１の医薬に含まれるアナルジェシンが、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いることによって、哺乳動物の急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという薬理作用をもたらす、ということは、当業者にとり十分に理解できることである。
　
　したがって、特許明細書の発明の詳細な説明は、特許発明１について、当業者がその実施をすることができる程度の明確かつ十分な記載がなされているといえる。
　
（２）特許発明２について
　特許発明２は、特許発明１の哺乳動物がヒトに限定されたものであるところ、特許発明１の哺乳動物が主にヒトを意図するものであることは、例えば「【０００２】　急性脳血管疾患の一つである発作は、世界的な住人における第三の主要な死因であり、・・・」（（１）の摘記（ｉｉ−１）ａ）といった記載を含む特許明細書全体の記載から明らかであり、また、特に、特許明細書の実施例１で急性脳虚血のモデルとして採用されている中大脳動脈閉塞(MCAO)ラットは、（ヒトの）虚血性脳疾患における発作の最初の発症に係る臨床例と著しい類似性を示すモデルである（（１）の摘記（ｉｉ−１）ｂ）。
　（１）での検討結果と併せこれらの事項を踏まえれば、哺乳動物が特にヒトである場合にも、アナルジェシンが、当該ヒトの急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いることによって、当該ヒトの急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという、薬理作用をもたらし得ることは、当業者にとり特段の不合理性なく理解し得たことといえる。
　したがって、特許明細書の発明の詳細な説明には、特許発明２についても、当業者がその実施をすることができる程度の明確かつ十分な記載がなされているといえる。
［４−２］取消理由（２）について（サポート要件）
　
　特許請求の範囲の記載が、明細書のサポート要件に適合するか否かは、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載とを対比し、特許請求の範囲に記載された発明が、発明の詳細な説明に記載された発明で、発明の詳細な説明の記載により当業者が当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるか否か、また、その記載や示唆がなくとも当業者が出願時の技術常識に照らし当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるか否かを検討して判断すべきものである。
 
　ここで、特許発明１が解決すべき課題は、その規定からみて、
　「急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いられる」医薬であって「哺乳動物において、急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護する」医薬の製造において、アナルジェシンを使用することができること；
であると解されるが、これは即ち、
　アナルジェシンを、急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いる医薬成分とすることにより、哺乳動物において急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護する、という薬理作用をもたらすこと；
に他ならない。
　
　そして、乙第１〜５号証に例示される本件特許出願時の技術常識を併せ踏まえると、特許明細書の発明の詳細な説明には、アナルジェシンを急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されるように用いることにより、哺乳動物において、急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという薬理作用をもたらしめることについて、当業者が理解かつ実施することができるといえる程度の明確かつ十分な記載がなされている、といえることは、［４−１］で詳述したとおりである。
　そうすると、このような発明の詳細な説明の記載、及び本件特許出願時の技術常識を併せ踏まえることにより、アナルジェシンが急性脳虚血の発症から２、６、２０、２４及び４７時間後に投与されることで、哺乳動物における急性脳虚血に伴うＨ２Ｏ２誘発性損傷から神経細胞を保護するという薬理作用がもたらされることは、当業者が十分に認識できることといえるものである。
　
　したがって、特許発明１は、発明の詳細な説明に記載された発明であって、発明の詳細な説明の記載により当業者が当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものである、といえるから、いわゆるサポート要件を満たすものである。
　特許発明２についても同様である。
　
［４−３］申立人の主張について
　
　上の［３］のとおり、申立人が主張する申立理由は、上記した取消理由（１）（２）と同旨であるから、［４−１］〜［４−２］で詳述したように、いずれも理由のないものである。
　
［４−４］むすび
　
　以上のとおりであるから、上記取消理由（申立理由）によっては、本件請求項１〜２に係る特許を取り消すことはできない。
　また、他に本件請求項１〜２に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成３０年３月６日（２０１８．３．６）