【手続補正書】
【提出日】平成22年4月16日(2010.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号：１、２、および３に記載されている配列から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドにより哺乳動物を免疫化する段階であって、該ポリペプチドが全長Ｓｔｘ１を含まない、段階；および
（ｂ）該哺乳動物の組織、または該組織を使用して作製したハイブリドーマ細胞から、Ｓｔｘ１タンパク質の１３Ｃ４エピトープに特異的に結合する抗Ｓｔｘ１抗体を精製する段階
を含む、志賀毒素１型（Ｓｔｘ１）タンパク質の１３Ｃ４エピトープに特異的に結合する抗Ｓｔｘ１抗体を産生する方法。
【請求項２】
Ｓｔｘ１タンパク質の１３Ｃ４エピトープに特異的に結合する抗Ｓｔｘ１抗体が、Ｓｔｘ２に結合しない、請求項１記載の方法。
【請求項３】
（ｃ）インビトロ中和アッセイにおいて、Ｓｔｘ１およびＳｔｘ２に対する抗体をスクリーニングする段階であって、Ｓｔｘ１の細胞毒性の少なくとも５０％を中和する抗体が、Ｓｔｘ１タンパク質の１３Ｃ４エピトープに特異的に結合する抗Ｓｔｘ１抗体である、段階
をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ポリペプチドが、配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列のうちの少なくとも２つを含む、請求項１記載の方法。
【請求項５】
ポリペプチドが、配列番号：４に記載されているアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ポリペプチドが配列番号：４のアミノ酸配列からなる、請求項５記載の方法。
【請求項７】
段階（ａ）が、アジュバントを使用することをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項８】
抗体がポリクローナル抗体またはその断片である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
抗体がモノクローナル抗体またはその断片である、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
抗体が修飾抗体である、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つのポリペプチドを薬学的に許容される担体とともに含む、Ｓｔｘ１に対する免疫反応を刺激するための組成物であって、該ポリペプチドが、配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列のうちの少なくとも１つを含み、該ポリペプチドがＳｔｘ１の抗原性を有し、該ポリペプチドが全長Ｓｔｘ１を含まない、組成物。
【請求項１３】
ポリペプチドがキメラタンパク質である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
キメラタンパク質が、配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列、ならびにＳｔｘ１ではないタンパク質を含む、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
Ｓｔｘ１ではないタンパク質が足場（scaffold）タンパク質であり、配列番号：１、２、または３に記載されているアミノ酸配列が該足場タンパク質に挿入されている、請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
Ｓｔｘ１ではないタンパク質が、ＳｔｘＢ２タンパク質またはその断片を含む、請求項１４記載の組成物。
【請求項１７】
Ｓｔｘ２に対する免疫反応を刺激しない、請求項１２記載の組成物。
【請求項１８】
キメラタンパク質が、配列番号：４に記載されているアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１４記載の組成物。
【請求項１９】
キメラタンパク質が、配列番号：４に記載されているアミノ酸配列を含む、請求項１８記載の組成物。
【請求項２０】
アジュバントをさらに含む、請求項１２記載の組成物。
【請求項２１】
対象においてＳｔｘ１に対する免疫反応を誘導する方法における使用のための請求項１２または１８記載の組成物。
【請求項２２】
対象において志賀毒素関連疾病を治療または予防する方法における使用のための請求項１２または１８記載の組成物。
【請求項２３】
志賀毒素関連疾病が溶血性尿毒症症候群である、請求項２２記載の使用のための組成物。
【請求項２４】
志賀毒素関連疾病が大腸菌または志賀赤痢菌の感染に関連する、請求項２２記載の使用のための組成物。
【請求項２５】
配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列のうちの少なくとも１つを含む志賀毒素１型（Ｓｔｘ１）タンパク質の１３Ｃ４エピトープに特異的に結合する、抗Ｓｔｘ１抗体、またはその断片であって、該抗体またはその断片が、１３Ｃ４抗体（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１７９４）、キメラ１３Ｃ４抗体、またはヒト化１３Ｃ４抗体の該Ｓｔｘ１タンパク質への結合を抑制する、抗Ｓｔｘ１抗体、またはその断片。
【請求項２６】
配列番号：１、２、および３に記載されている配列を含むポリペプチドのエピトープに特異的に結合する、請求項２５記載の抗体。
【請求項２７】
エピトープが配列番号：１、２、および３に記載されている配列を含む、請求項２６記載の抗体。
【請求項２８】
エピトープが立体配座エピトープである、請求項２６記載の抗体。
【請求項２９】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項２５記載の抗体またはその断片。
【請求項３０】
抗体がヒト化されている、請求項２５記載の抗体またはその断片。
【請求項３１】
抗体がポリクローナル抗体である、請求項２５記載の抗体またはその断片。
【請求項３２】
Ｓｔｘ１と１３Ｃ４抗体との間の結合を抑制する抗体またはその断片であって、該１３Ｃ４抗体が０．５０ｎＭ以下のＫｄを有する、請求項２５記載の抗体またはその断片。
【請求項３３】
１３Ｃ４抗体が、マウス、ヒト化、またはキメラ１３Ｃ４抗体である、請求項３２記載の抗体またはその断片。
【請求項３４】
ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＡである、請求項２５記載の抗体またはその断片。
【請求項３５】
ＦａｂまたはＦｖ断片である、請求項２５記載の抗体またはその断片。
【請求項３６】
請求項２５記載の抗体またはその断片、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項３７】
請求項２５記載の抗体を産生する、ハイブリドーマ細胞株。
【請求項３８】
真核生物受容体であるグロボトリアオシルセラミドに対するＳｔｘ１の結合を抑制する、請求項２５記載の抗体。
【請求項３９】
（ａ）抗体とＳｔｘ１との間の複合体形成を可能とする条件下で、生体試料を請求項２５記載の抗体またはその断片と接触させる段階；および
（ｂ）該生体試料において該複合体を検出する段階
を含む、生体試料においてＳｔｘ１を検出する方法。
【請求項４０】
生体試料が、組織、細胞、細胞抽出物、体液、または生検標本に由来する、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
ＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、ウエスタンブロット法、免疫沈降法、またはフローサイトメトリー法を使用して複合体を検出する、請求項３９記載の方法。
【請求項４２】
対象において志賀毒素関連疾病を診断する方法における使用のための、請求項２５記載の抗体およびその断片を含む組成物であって、ここで、該方法が、
（ａ）対象から生体試料を採取する段階；
（ｂ）抗体とＳｔｘ１との間の複合体形成を可能とする条件下で、該生体試料を請求項２５記載の抗体またはその断片と接触させる段階；および
（ｃ）該生体試料において該複合体を検出する段階
を含み、
ここで、該方法が、該試料におけるＳｔｘ１の存在により、志賀毒素関連疾病を罹患する対象を診断する、
組成物。
【請求項４３】
志賀毒素関連疾病が溶血性尿毒症症候群である、請求項４２記載の使用のための組成物。
【請求項４４】
志賀毒素関連疾病が大腸菌または志賀赤痢菌の感染である、請求項４２記載の使用のための組成物。
【請求項４５】
請求項２５記載の抗体または抗原結合部分、および、該抗体を検出するための手段を含む、志賀毒素関連疾病を検出するための免疫検査キット。
【請求項４６】
対象において志賀毒素関連疾病を治療または予防する方法における使用のための、請求項２５〜３６のいずれか一項記載の抗体またはその断片の薬学的有効量を含む、組成物。
【請求項４７】
志賀毒素関連疾病が溶血性尿毒症症候群である、請求項４６記載の使用のための組成物。
【請求項４８】
志賀毒素関連疾病が大腸菌または志賀赤痢菌の感染に関連する、請求項４６記載の使用のための組成物。
【請求項４９】
配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列の少なくとも１つを含むポリペプチドであって、全長Ｓｔｘ１を含まない、ポリペプチド。
【請求項５０】
配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列を含む、請求項４９記載のポリペプチド。
【請求項５１】
Ｓｔｘ１ではないポリペプチドをさらに含むキメラタンパク質である、請求項４９または５０記載のポリペプチド。
【請求項５２】
Ｓｔｘ１ではないタンパク質が、ＳｔｘＢ２タンパク質またはその断片を含む、請求項５１記載のポリペプチド。
【請求項５３】
Ｓｔｘ１ではないタンパク質が足場タンパク質であり、配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列が該足場タンパク質に挿入されている、請求項５１記載のポリペプチド。
【請求項５４】
配列番号：４に記載されているアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項５５】
配列番号：４に記載されているアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項５６】
配列番号：４に記載されているアミノ酸からなる、請求項５５記載のポリペプチド。
【請求項５７】
請求項４９、５４、または５５のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
【請求項５８】
発現制御配列に動作可能に結合されている、請求項５７記載の単離された核酸分子。
【請求項５９】
請求項５８記載の単離された核酸分子を含む、ポリペプチドを発現することが可能なベクター。
【請求項６０】
請求項５９記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項６１】
（ａ）請求項５２記載の核酸を宿主細胞に導入する段階、
（ｂ）宿主細胞からポリペプチドを精製する段階
を含む、配列番号：１、２、および３に記載されているアミノ酸配列を含むポリペプチドを調製する方法であって、該ポリペプチドが全長Ｓｔｘ１を含まない、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
「志賀毒素関連疾病」とは、志賀毒素を発現する病原体から生じるいかなる疾病をも意味する。「志賀毒素関連疾病」という用語は、溶血性尿毒症症候群、細胞性赤痢、志賀毒素産生大腸菌または志賀赤痢菌感染から生じる疾病を含むことを意味する。
[請求項101]
(a)配列番号:1、2、および3に記載されている配列から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含むポリペプチドにより哺乳動物を免疫化する段階であって、該ポリペプチドが全長Stx1を含まない、段階;および
(b)該哺乳動物の組織、または該組織を使用して作製したハイブリドーマ細胞から、Stx1タンパク質の13C4エピトープに特異的に結合する抗Stx1抗体を精製する段階
を含む、志賀毒素1型(Stx1)タンパク質の13C4エピトープに特異的に結合する抗Stx1抗体を産生する方法。
[請求項102]
Stx1タンパク質の13C4エピトープに特異的に結合する抗Stx1抗体が、Stx2に結合しない、請求項101記載の方法。
[請求項103]
(c)インビトロ中和アッセイにおいて、Stx1およびStx2に対する抗体をスクリーニングする段階であって、Stx1の細胞毒性の少なくとも50%を中和する抗体が、Stx1タンパク質の13C4エピトープに特異的に結合する抗Stx1抗体である、段階
をさらに含む、請求項101記載の方法。
[請求項104]
ポリペプチドが、配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸のうちの少なくとも2つを含む、請求項101記載の方法。
[請求項105]
ポリペプチドが、配列番号:4に記載されているアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む、請求項101記載の方法。
[請求項106]
ポリペプチドが配列番号:4のアミノ酸配列からなる、請求項105記載の方法。
[請求項107]
段階(a)が、アジュバントを使用することをさらに含む、請求項101記載の方法。
[請求項108]
抗体がポリクローナル抗体またはその断片である、請求項101記載の方法。
[請求項109]
抗体がモノクローナル抗体またはその断片である、請求項101記載の方法。
[請求項110]
抗体が修飾抗体である、請求項101記載の方法。
[請求項111]
抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項110記載の方法。
[請求項112]
少なくとも1つのポリペプチドを薬学的に許容される担体とともに含む、Stx1に対する免疫反応を刺激するための組成物であって、該ポリペプチドが、配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列のうちの少なくとも1つを含み、該ポリペプチドがStx1の抗原性を有し、該ポリペプチドが全長Stx1を含まない、組成物。
[請求項113]
ポリペプチドがキメラタンパク質である、請求項112記載の組成物。
[請求項114]
キメラタンパク質が、配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列、ならびにStx1ではないタンパク質を含む、請求項113記載の組成物。
[請求項115]
Stx1ではないタンパク質が足場(scaffold)タンパク質であり、配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列が該足場タンパク質に挿入されている、請求項114記載の組成物。
[請求項116]
Stx1ではないタンパク質が、StxB2タンパク質またはその断片を含む、請求項114記載の組成物。
[請求項117]
Stx2に対する免疫反応を刺激しない、請求項112記載の組成物。
[請求項118]
キメラタンパク質が、配列番号:4に記載されているアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む、請求項114記載の組成物。
[請求項119]
キメラタンパク質が、配列番号:4に記載されているアミノ酸配列を含む、請求項118記載の組成物。
[請求項120]
アジュバントをさらに含む、請求項112記載の組成物。
[請求項121]
請求項112または118記載の組成物を対象に投与する段階を含む、対象においてStx1に対する免疫反応を誘導する方法。
[請求項122]
請求項112または118記載の組成物を対象に投与する段階を含む、対象において志賀毒素関連疾病を治療または予防する方法。
[請求項123]
志賀毒素関連疾病が溶血性尿毒症症候群である、請求項122記載の方法。
[請求項124]
志賀毒素関連疾病が大腸菌または志賀赤痢菌の感染に関連する、請求項122記載の方法。
[請求項125]
配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列のうちの少なくとも1つを含む志賀毒素1型(Stx1)タンパク質の13C4エピトープに特異的に結合する、抗Stx1抗体、またはその断片であって、13C4抗体(ATCC CRL-1794)、キメラ13C4抗体、またはヒト化13C4抗体の該Stx1タンパク質への結合を抑制する、抗Stx1抗体、またはその断片。
[請求項126]
配列番号:1、2、および3に記載されている配列を含むポリペプチドのエピトープに特異的に結合する、請求項125記載の抗体。
[請求項127]
エピトープが配列番号:1、2、および3に記載されている配列を含む、請求項126記載の抗体。
[請求項128]
エピトープが立体配座エピトープである、請求項126記載の抗体。
[請求項129]
抗体がモノクローナル抗体である、請求項125記載の抗体またはその断片。
[請求項130]
抗体がヒト化されている、請求項125記載の抗体またはその断片。
[請求項131]
抗体がポリクローナル抗体である、請求項125記載の抗体またはその断片。
[請求項132]
Stx1と13C4抗体との間の結合を抑制し、該13C4抗体が0.50nM以下のKdを有する、請求項125記載の抗体またはその断片。
[請求項133]
13C4抗体が、マウス、ヒト化、またはキメラ13C4抗体である、請求項132記載の抗体またはその断片。
[請求項134]
IgG、IgM、IgE、IgD、またはIgAである、請求項125記載の抗体またはその断片。
[請求項135]
FabまたはFv断片である、請求項125記載の抗体またはその断片。
[請求項136]
請求項125記載の抗体またはその断片、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。
[請求項137]
請求項125記載の抗体を産生する、ハイブリドーマ細胞株。
[請求項138]
真核生物受容体であるグロボトリアオシルセラミドに対するStx1の結合を抑制する、請求項125記載の抗体。
[請求項139]
(a)抗体とStx1との間の複合体形成を可能とする条件下で、生体試料を請求項125記載の抗体またはその断片と接触させる段階;および
(b)該生体試料において該複合体を検出する段階
を含む、生体試料においてStx1を検出する方法。
[請求項140]
生体試料が、組織、細胞、細胞抽出物、体液、または生検標本に由来する、請求項139記載の方法。
[請求項141]
ELISA法、RIA法、ウエスタンブロット法、免疫沈降法、またはフローサイトメトリー法を使用して複合体を検出する、請求項139記載の方法。
[請求項142]
(a)対象から生体試料を採取する段階;
(b)抗体とStx1との間の複合体形成を可能とする条件下で、該生体試料を請求項125記載の抗体またはその断片と接触させる段階;および
(c)該生体試料において該複合体を検出する段階
を含む、対象において志賀毒素関連疾病を診断する方法であって、
該試料におけるStx1の存在により、志賀毒素関連疾病を罹患する対象を診断する、方法。
[請求項143]
志賀毒素関連疾病が溶血性尿毒症症候群である、請求項142記載の方法。
[請求項144]
志賀毒素関連疾病が大腸菌または志賀赤痢菌の感染である、請求項142記載の方法。
[請求項145]
請求項125記載の抗体または抗原結合部分、および、該抗体を検出するための手段を含む、志賀毒素関連疾病を検出するための免疫検査キット。
[請求項146]
請求項125〜136のいずれか一項記載の抗体またはその断片の薬学的有効量を対象に投与する段階を含む、対象において志賀毒素関連疾病を治療または予防する方法。
[請求項147]
志賀毒素関連疾病が溶血性尿毒症症候群である、請求項146記載の方法。
[請求項148]
志賀毒素関連疾病が大腸菌または志賀赤痢菌の感染に関連する、請求項146記載の方法。
[請求項149]
配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列の少なくとも1つを含むポリペプチドであって、全長Stx1を含まない、ポリペプチド。
[請求項150]
配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列を含む、請求項149記載のポリペプチド。
[請求項151]
Stx1ではないポリペプチドをさらに含むキメラタンパク質である、請求項149または150記載のポリペプチド。
[請求項152]
Stx1ではないタンパク質が、StxB2タンパク質またはその断片を含む、請求項151記載のポリペプチド。
[請求項153]
Stx1ではないタンパク質が足場タンパク質であり、配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列が該足場タンパク質に挿入されている、請求項151記載のポリペプチド。
[請求項154]
配列番号:4に記載されているアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
[請求項155]
配列番号:4に記載されているアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
[請求項156]
配列番号:4に記載されているアミノ酸からなる、請求項155記載のポリペプチド。
[請求項157]
請求項149、154、または155のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
[請求項158]
発現制御配列に動作可能に結合されている、請求項157記載の単離された核酸分子。
[請求項159]
請求項158記載の単離された核酸分子を含む、ポリペプチドを発現することが可能なベクター。
[請求項160]
請求項159記載のベクターを含む、宿主細胞。
[請求項161]
(a)請求項152記載の核酸を宿主細胞に導入する段階、
(b)宿主細胞からポリペプチドを精製する段階
を含む、配列番号:1、2、および3に記載されているアミノ酸配列を含むポリペプチドを調製する方法であって、該ポリペプチドが全長Stx1を含まない、方法。