【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年4月5日(2011.4.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質のフォールディング及び／または溶解性を評価するための方法であって、
ａ）（ｉ）融合タンパク質をコードしている遺伝子であって、前記融合タンパク質がマーカー・タンパク質の第１の断片に融合している目的のタンパク質を含み、前記第１の断片が目的のタンパク質のフォールディングまたは溶解性に影響を与えない遺伝子と、（ｉｉ）前記宿主細胞中で活性があり、前記遺伝子に動作可能に結合しているプロモーターとを含む発現構築物を提供すること、
ｂ）前記マーカー・タンパク質の第２の断片も発現する宿主細胞中で前記融合タンパク質を発現させることであって、前記第２の断片が前記第１の断片と構造的に相補性であることができること、及び
ｃ）構造的な相補性を判定することを含み、
適切なネガティブ・コントロールで観察した構造的な相補性と比べて構造的な相補性がより高いと、前記タンパク質のフォールディング及び／または溶解性が適切であることが示される方法。
【請求項２】
前記目的のタンパク質への前記融合がＣ末端である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記目的のタンパク質への前記融合がＮ末端である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記マーカー・タンパク質が標的結合タンパク質、酵素、タンパク質阻害物質、蛍光団及び発色団からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記マーカー・タンパク質が標的結合タンパク質である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記標的結合タンパク質がユビキチンである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記マーカー・タンパク質が発色団である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記発色団が緑色蛍光性タンパク質、青色蛍光性タンパク質、黄色蛍光性タンパク質、ルシフェラーゼまたはアクオリンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記マーカー・タンパク質が酵素である、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
前記酵素がβ−ガラクトシダーゼ、チトクロームｃ、キモトリプシン阻害物質、ＲＮアーゼ、ホスホグリセリン酸キナーゼ、インベルターゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、チオレドキシンＣ、ラクトースパーミアーゼ、アミノアシルｔＲＮＡシンターゼ、及びジヒドロ葉酸リダクターゼである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記酵素がβ−ガラクトシダーゼである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
第１の断片がβ−ガラクトシダーゼのα−ペプチドであり、前記第２の断片がβ−ガラクトシダーゼのω−ペプチドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記目的のタンパク質がアルツハイマーのアミロイドペプチド（Ａβ）、ＳＯＤ１、プレセニリン１及び２、α−シヌクレイン、アミロイドＡ、アミロイドＰ、ＣＦＴＲ、トランスチレチン、アミリン、リソザイム、ゲルソリン、ｐ５３、ロドプシン、インシュリン、インシュリンレセプター、フィブリリン、α−ケト酸デヒドロゲナーゼ、コラーゲン、ケラチン、ＰＲＮＰ、免疫グロブリン軽鎖、心房性ナトリウム利尿性ペプチド、精嚢外分泌タンパク質、β２−ミクログロブリン、ＰｒＰ、プレカルシトニン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン６、アタキシン７、ハンチグチン、アンドロゲンレセプター、ＣＲＥＢ結合タンパク質、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症関連のタンパク質、マルトース結合タンパク質、ＡＢＣトランスポーター、グルタチオンＳトランスフェラーゼ、及びチオレドキシンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の断片をコードしている遺伝子が前記宿主細胞の染色体上に保有されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２の断片をコードしている遺伝子が前記宿主細胞中でエピソームによって保有されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記宿主細胞が細菌細胞、昆虫細胞、酵母菌細胞、線虫細胞、及びホ乳動物細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記宿主細胞が細菌細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌細胞が大腸菌である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記プロモーターがＴａｑプロモーター、Ｔ７プロモーター、またはＰlacプロモーターである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記宿主細胞が線虫細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記線虫細胞がＣ．ｅｌｅｇａｎｓ細胞である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記宿主細胞が昆虫細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記宿主細胞がＳ．ｆｕｇｅｒｉａ細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記宿主細胞が酵母菌細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
前記プロモーターがＣｕｐＡＤＨまたはＧａｌである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
前記宿主細胞がホ乳動物細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
前記プロモーターがＰｅｐＣｋまたはｔｋである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ネガティブ・コントロールが前記マーカー・タンパク質の第２の断片が欠けている宿主細胞を使用する、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記ネガティブ・コントロールが不適切に折りたたまれており、かつ／または不溶性である融合タンパク質を使用する、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
タンパク質のフォールディング及び／または溶解性の突然変異体をスクリーニングするための方法であって、
ａ）（ｉ）目的のタンパク質と、（ｉｉ）マーカー・タンパク質の第１の断片であって、前記目的のタンパク質のフォールディングまたは溶解性に影響を与えない第１の断片とを含む融合タンパク質（ここで、前記融合タンパク質は、前記宿主細胞中で発現されるとき、適切に折りたたまれておらず、かつ／または可溶性ではない）をコードしている遺伝子を提供すること、
ｂ）前記目的のタンパク質をコードしている遺伝子の部分に突然変異を引き起こさせること、
ｃ）前記マーカー・タンパク質の第２の断片を発現する宿主細胞中で前記融合タンパク質を発現させることであって、前記第２の断片が前記第１の断片と構造的に相補性であることができること、及び
ｄ）構造的な相補性を判定することを含み、
突然変異していない融合タンパク質で観察した構造的な相補性と比べて構造的な相補性が相対的に増大していると、前記タンパク質の適切なフォールディング及び／または溶解性が増大していることが示される方法。
【請求項３１】
前記目的のタンパク質への前記融合がＣ末端である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記目的のタンパク質への前記融合がＮ末端である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記マーカー・タンパク質が標的結合タンパク質、酵素、タンパク質阻害物質、発色団からなる群から選択される、請求項３０に記載の方
法。
【請求項３４】
前記宿主細胞が細菌細胞、昆虫細胞、酵母菌細胞、線虫細胞、ホ乳動物細胞からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
タンパク質のフォールディング及び／または溶解性を調節する候補となる調節物質をスクリーニングするための方法であって、
ａ）（ｉ）融合タンパク質をコードしている遺伝子であって、前記融合タンパク質がマーカー・タンパク質の第１の断片に融合している目的のタンパク質を含み、前記第１の断片が目的のタンパク質のフォールディングまたは溶解性に影響を与えない遺伝子と、（ｉｉ）前記宿主細胞中で活性があり、前記遺伝子に動作可能に結合しているプロモーターとを含む発現構築物を提供すること、
ｂ）前記マーカー・タンパク質の第２の断片を発現する宿主細胞中で前記融合タンパク質を発現させることであって、前記第２の断片が前記第１の断片と構造的に相補性であることができること、
ｃ）宿主細胞を前記候補となる調節物質と接触させること、及び
ｄ）構造的な相補性を判定することを含み、
前記候補となる調節物質の不在下で観察した構造的な相補性と比べて構造的な相補性が相対的に変化していると、前記候補となる調節物質がタンパク質のフォールディング及び／または溶解性のモジュレーターであることが示される方法。
【請求項３６】
前記目的のタンパク質への前記融合がＣ末端である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記目的のタンパク質への前記融合がＮ末端である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記マーカー・タンパク質が標的結合タンパク質、酵素、タンパク質阻害物質、発色団からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記宿主細胞が細菌細胞、昆虫細胞、酵母菌細胞、線虫細胞、ホ乳動物細胞からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記候補となる調節物質がタンパク質、核酸または小分子からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
他の実施形態では、タンパク質のフォールディング及び／または溶解性の突然変異体をスクリーニングするための方法であって、（ａ）（ｉ）目的のタンパク質と、（ｉｉ）マーカー・タンパク質の第１の断片であって、前記目的のタンパク質のフォールディングまたは溶解性に影響を与えない第１の断片とを含む融合タンパク質（ここで、前記融合タンパク質は、前記宿主細胞中で発現されるとき、適切に折りたたまれておらず、かつ／または可溶性ではない）、および（ｉｉ）前記宿主細胞中で活性があり、前記遺伝子に動作可能に結合しているプロモーター（ここで、前記融合タンパク質が、前記宿主細胞中で発現されるとき、適切に折りたたまれておらず、かつ／または可溶性ではない）をコードしている遺伝子を提供すること、（ｂ）前記目的のタンパク質をコードしている遺伝子の部分に突然変異を引き起こさせること、（ｃ）前記マーカー・タンパク質の第２の断片も発現する宿主細胞中で前記融合タンパク質を発現させることであって、前記第２の断片が前記第１の断片と構造相補的であることができること、及び（ｄ）構造的な相補性を判定することを含み、突然変異していない融合タンパク質で観察した構造的な相補性に比べて構造的な相補性が相対的に増大すると、前記タンパク質の適切なフォールディング及び／または溶解性が増大することが示される方法が提供される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
他の実施形態では、突然変異体のフォールディング及び／または溶解性に関するスクリーニングの方法を提供し、この方法は以下のステップを含む。
ａ）（ｉ）目的のタンパク質、及び（ｉｉ）マーカー・タンパク質の第１の断片であって、前記第１の断片は目的のタンパク質のフォールディングまたは溶解性に影響を与えないか、あるいは系統的（すなわち、予測可能かつ繰り返し可能）な方法でのみ影響を与える第１の断片を含む融合タンパク質（ここで、前記融合タンパク質は、前記宿主細胞中で発現されるとき、適切に折りたたまれていないか、かつ／または可溶性ではない）をコードしている遺伝子を提供するステップ、
ｂ）前記目的のタンパク質をコードしている遺伝子のその部分に突然変異を引き起こさせるステップ、
ｃ）前記マーカー・タンパク質の第２の断片も発現する宿主細胞中で前記融合タンパク質を発現させるステップであって、前記第２の断片が前記第１の断片と構造的に相補性であることができるステップ、及び
ｄ）構造的な相補性を判定するステップ。