【手続補正書】
【提出日】平成23年8月2日(2011.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト生殖細胞のための実質的に無タンパク質の細胞培養培地であって、体外受精および他の生殖補助医療で使用されるヒト生殖細胞のインビトロの処置の全過程での使用に適しており、無機塩、アミノ酸、抗酸化物質、ビタミン、栄養素、抗生物質、Ｄ−マンニトールおよび分子量１４，０００ダルトンのメチルセルロースを含む、前記培地。
【請求項２】
メチルセルロースが、その２％溶液が２５℃で１５センチポアズの粘度を有することを特徴とする、請求項１に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３】
請求項１に記載の実質的に無タンパク質の培地であって、メチルセルロースが、
式Ｉ：
【化１】
2011507530.tif 000001
式中、
それぞれのＲは独立してＨまたはＣＨ３であり、
ｎは約３４から約４３の値を有する整数であり、
ここでメトキシ置換が２７．５重量％から３１．５重量％までである、
で表される、前記培地。
【請求項４】
式Ｉの化合物のそれぞれの糖部分に付属するＣＨ３置換基の平均数が、１．５から１．９である、請求項３に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項５】
メチルセルロースが、０．０１ｇ／Ｌ（０．７１μＭ）から０．５ｇ／Ｌ（０．０３６ｍＭ）の濃度で溶液中に存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項６】
メチルセルロースが、０．０１ｇ／Ｌ（０．７１μＭ）から０．１５ｇ／Ｌ（０．０００１１ｍＭ）の濃度で溶液中に存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項７】
メチルセルロースが、約０．１ｇ／Ｌ（０．００７１ｍＭ）の濃度で溶液中に存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項８】
アミノ酸が、Ｌ−アルギニン、Ｌ−シスチン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、Ｌ−バリン、Ｌ−アラニン、Ｌ−タウリン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−グルタミンまたはグリシン、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項９】
請求項８に記載の実質的に無タンパク質の培地であって、アミノ酸が、Ｌ−アルギニン・ＨＣｌについては約０．０１８ｍＭ〜約０．１８ｍＭ；Ｌ−シスチン・２ＨＣｌについては約０．００２５ｍＭ〜約０．０２５ｍＭ；Ｌ−ヒスチジン・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏについては約０．００５ｍＭ〜約０．０５ｍＭ；Ｌ−イソロイシンについては約０．０１ｍＭ〜約０．１ｍＭ；Ｌ−ロイシンについては約０．０１ｍＭ〜約０．１ｍＭ；Ｌ−リジン・ＨＣｌについては約０．０１２５ｍＭ〜約０．１２５ｍＭ；Ｌ−メチオニンについては約０．００２５ｍＭ〜約０．０２５ｍＭ；Ｌ−フェニルアラニンについては約０．００５ｍＭ〜約０．０５ｍＭ；Ｌ−スレオニンについては約０．０１ｍＭ〜約０．１ｍＭ；Ｌ−トリプトファンについては約０．００１２５ｍＭ〜約０．０１２５ｍＭ；Ｌ−チロシン・２Ｎａ・２Ｈ２Ｏについては約０．００５ｍＭ〜約０．０５ｍＭ；Ｌ−バリンについては約０．０１ｍＭ〜約０．１ｍＭ；Ｌ−アラニンについては約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭ；Ｌ−タウリンについては約１．０ｍＭ〜約３０ｍＭ；グルタミン酸については約０．０１ｍＭ〜約１．０ｍＭ；Ｌ−グルタミンについては約１．０ｍＭ〜約５０ｍＭ；Ｌ−グリシンについては約０．１〜約１．０ｍＭの間の濃度で存在する、前記培地。
【請求項１０】
請求項９に記載の実質的に無タンパク質の培地であって、アミノ酸が、０．５ｍＭ  Ｌ−アルギニン；０．０１ｍＭ  Ｌ−シスチン・２ＨＣｌ；０．０２ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン；０．０４ｍＭ  Ｌ−イソロイシン；０．０４ｍＭ  Ｌ−ロイシン；０．０５ｍＭ  Ｌ−リジン・ＨＣｌ；０．０１ｍＭ  Ｌ−メチオニン；０．０２ｍＭ  Ｌ−フェニルアラニン；０．０４ｍＭ  Ｌ−スレオニン；０．００５ｍＭ  Ｌ−トリプトファン；０．０２ｍＭ  Ｌ−チロシン・２Ｎａ・２Ｈ２Ｏ；０．０４ｍＭ  Ｌ−バリン；０．５ｍＭ  Ｌ−アラニン；２０ｍＭ  Ｌ−タウリン；０．５ｍＭ  グルタミン酸；および２０ｍＭ  Ｌ−グルタミンまたは０．２５ｍＭ  Ｌ−グリシンの濃度で存在する、前記培地。
【請求項１１】
培地に含まれる無機塩が、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項１２】
請求項１１に記載の実質的に無タンパク質の培地であって、培地に含まれる無機塩が、塩化カルシウムについては約３．０ｍＭ（０．２３ｇ／Ｌ）〜３．６ｍＭ（０．２７ｇ／Ｌ）；硫酸マグネシウムについては約０．７ｍＭ（０．０８６ｇ／Ｌ）〜約０．８１ｍＭ（０．０９８ｇ／Ｌ）；塩化カリウムについては約４．７ｍＭ（０．３５ｇ／Ｌ）〜約５．４ｍＭ（０．４ｇ／Ｌ）；塩化ナトリウムについては約０．１Ｍ（６．１２ｇ／Ｌ）〜約０．１２Ｍ（６．９５ｇ／Ｌ）；およびリン酸二水素ナトリウムについては約０．８９ｍＭ（０．１０７ｇ／Ｌ）〜約１．０ｍＭ（０．１２２ｇ／Ｌ）の間の濃度で存在する、前記培地。
【請求項１３】
請求項１２に記載の実質的に無タンパク質の培地であって、培地に含まれる無機塩が塩化カルシウムについては３．１ｍＭ（０．２３５ｇ／Ｌ）；硫酸マグネシウムについては０．７２ｍＭ（０．０８７ｇ／Ｌ）；塩化カリウムについては４．８ｍＭ（０．３５５ｇ／Ｌ）；塩化ナトリウムについては０．１１Ｍ（６．１７１ｇ／Ｌ）；およびリン酸二水素ナトリウムについては０．８８ｍＭ（０．１０８ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、前記培地。
【請求項１４】
培地に含まれるビタミンが、塩化コリン、ミオイノシトール、ナイアシンアミド、Ｄ−パントテン酸、ピリドキシン・ＨＣｌ、リボフラビン、チアミン・ＨＣｌ、葉酸、ビタミンＢ１２、ビタミンＥ、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項１５】
請求項１４に記載の実質的無タンパク質培地であって、培地に含まれるビタミンが、塩化コリンについては約０．００４ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）〜０．００５ｍＭ（０．０００７ｇ／Ｌ）；Ｄ−ビオチンについては約０．００２４ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）〜０．００２８ｍＭ（０．０００７ｇ／Ｌ）；ミオイノシトールについては約０．００６７ｍＭ（０．００１２ｇ／Ｌ）〜０．００７８ｍＭ（０．００１４ｇ／Ｌ）；ナイアシンアミドについては約０．００５ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）〜０．００５７ｍＭ（０．０００７ｇ／Ｌ）；Ｄ−パントテン酸については約０．００２５ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）〜０．００３ｍＭ（０．０００７ｇ／Ｌ）；ピリドキシン・ＨＣｌについては約０．００３ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）〜０．００３４ｍＭ（０．０００７ｇ／Ｌ）；リボフラビンについては約０．０００１６ｍＭ（０．００００６ｇ／Ｌ）〜０．０００１９ｍＭ（０．００００７ｇ／Ｌ）；チアミン・ＨＣｌについては約０．００１８ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）〜０．００２１ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）；葉酸については約０．００１４ｍＭ（０．００６ｇ／Ｌ）〜０．００１６ｍＭ（０．０００７ｇ／Ｌ）；ビタミンＢ１２については約４４３ｐＭ（６００ｎｇ／Ｌ）〜８８５ｐＭ（１．２ｍｇ／Ｌ）；およびビタミンＥについては０．００８ｍＭ（０．００３ｇ／Ｌ）〜０．０１２ｍＭ（０．００５ｇ／Ｌ）の間の濃度で存在する、前記培地。
【請求項１６】
請求項１５に記載の実質的無タンパク質培地であって、培地を構成するビタミンが、塩化コリンについては０．００４ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）；Ｄ−ビオチンについては０．００２４ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）；ミオイノシトールについては０．００６７ｍＭ（０．００１２ｇ／Ｌ）；ナイアシンアミドについては０．００５ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）；Ｄ−パントテン酸については０．００２５ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）；ピリドキシン・ＨＣｌについては０．００３ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）；リボフラビンについては０．０００１６ｍＭ（０．００００６ｇ／Ｌ）；チアミン・ＨＣｌについては０．００１８ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）；葉酸については０．００１４ｍＭ（０．００６ｇ／Ｌ）；ビタミンＢ１２については６１６ｐＭ（８００ｎｇ／Ｌ）；およびビタミンＥについては０．０１０ｍＭ（０．００４ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、前記培地。
【請求項１７】
培地に含まれる栄養素が、Ｄ−グルコース、ピルビン酸、フルクトース、乳酸、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項１８】
請求項１７に記載の実質的に無タンパク質の培地であって、溶液に含まれる栄養素が、Ｄ−グルコースについては４．３ｍＭ（０．７８ｇ／Ｌ）；ピルビン酸ナトリウムについては０．３ｍＭ（０．０２９７５ｇ／Ｌ）；フルクトースについては５．１ｍＭ（０．９２ｇ／Ｌ）；および乳酸ナトリウムについては１０ｍＭ（１．１３ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、前記培地。
【請求項１９】
Ｄ−グルコースが、４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）〜５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、請求項１８に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２０】
フルクトースが、１ｍＭ（０．１８ｇ／Ｌ）〜５．６ｍＭ（１．０１ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、請求項１９に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２１】
溶液中の抗酸化物質が、グルタチオンである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２２】
グルタチオン濃度が、約０．２５ｍＭ（０．０７７ｇ／Ｌ）〜０．３５ｍＭ（０．１１ｇ／Ｌ）の間である、請求項２１に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２３】
グルタチオン濃度が、０．３ｍＭ（０．０９２ｇ／Ｌ）である、請求項２２に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２４】
ＥＤＴＡをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２５】
ＥＤＴＡ濃度が、約０．１ｍＭ（０．０４１６ｇ／Ｌ）〜０．１０３ｍＭ（０．０４３ｇ／Ｌ）の間である、請求項２４に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２６】
ＥＤＴＡ濃度が、０．１ｍＭ（０．０４１８ｇ／Ｌ）である、請求項２５に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２７】
ＨＥＰＥＳをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２８】
ＨＥＰＥＳ濃度が、１５ｍＭ（３．５７４５ｇ／Ｌ）または２５ｍＭ（５．９５７５ｇ／Ｌ）であり、Ｄ−グルコース濃度が、約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）〜約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間である、請求項２７に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項２９】
フェノールレッドまたは他のｐＨ指示薬をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３０】
フェノールレッド濃度が、０．０３１ｍＭ（０．０１１ｇ／Ｌ）である、請求項２９に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３１】
ゲンタマイシン硫酸塩が、約１．５ｍｇ／Ｌ〜約４ｍｇ／Ｌの濃度で溶液中に存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３２】
ペニシリンＧが、７５ｍｇ／Ｌの濃度で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３３】
Ｄ−マンニトールが、約０．０５６μＭから約６．９μＭの濃度で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３４】
Ｄ−マンニトールが、２．８μＭの濃度で存在する、請求項３３に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３５】
炭酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３６】
炭酸水素ナトリウムが、２６．２ｍＭ（２．２ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、請求項３５に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３７】
炭酸水素ナトリウムが、４．０ｍＭ（０．３３６ｇ／Ｌ）〜２６．２ｍＭ（２．２ｇ／Ｌ）の濃度で存在する、請求項３５に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３８】
生殖補助医療におけるヒト生殖細胞の処置に有用である、請求項３６に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項３９】
ヒト生殖細胞が、未受精の卵細胞である、請求項３８に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項４０】
ヒト生殖細胞が、多数の精子である、請求項３８に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項４１】
ヒト生殖細胞が、受精卵である、請求項３８に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項４２】
培地が、子宮間授精に特異的である、請求項３８に記載の実質的に無タンパク質の培地。
【請求項４３】
請求項１に記載のヒト生殖細胞のための実質的に無タンパク質の細胞培養培地であって、無機塩、アミノ酸、抗酸化物質、ビタミン、栄養素、抗生物質、Ｄ−マンニトールおよび分子量１４，０００ダルトンを有するメチルセルロースのストック溶液の少なくとも１または多数から調製され、ここで該ストック溶液が水で希釈されて、実質的に無タンパク質の細胞培養培地が作られる、前記培地。
【請求項４４】
ヒト生殖細胞のための実質的に無タンパク質の細胞培養培地であって、体外受精および他の生殖補助医療で使用されるヒト生殖細胞のインビトロの治療の全過程での使用に適しており、０．１ｇ／Ｌ（０．００７１ｍＭ）分子量１４，０００ダルトンを有するメチルセルロース；０．５ｍＭ  Ｌ−アルギニン；０．０１ｍＭ  Ｌ−シスチン・２ＨＣｌ；０．０２ｍＭ（Ｌ−ヒスチジン；０．０４ｍＭ  Ｌ−イソロイシン；０．０４ｍＭ  Ｌ−ロイシン；０．０５ｍＭ  Ｌ−リジン・ＨＣｌ；０．０１ｍＭ  Ｌ−メチオニン；０．０２ｍＭ  Ｌ−フェニルアラニン；０．０４ｍＭ  Ｌ−スレオニン；０．００５ｍＭ  Ｌ−トリプトファン；０．０２ｍＭ  Ｌ−チロシン・２Ｎａ・２Ｈ２Ｏ；０．０４ｍＭ  Ｌ−バリン；０．５ｍＭ  Ｌ−アラニン；２０ｍＭ  Ｌ−タウリン；０．５ｍＭ  グルタミン酸（０．３９ｍＭ）；２０ｍＭ  Ｌ−グルタミンまたは０．２５ｍＭ  Ｌ−グリシン；３．１ｍＭ（０．２３５ｇ／Ｌ）塩化カルシウム；０．７２ｍＭ（０．０８７ｇ／Ｌ）硫酸マグネシウム；４．８ｍＭ（０．３５５ｇ／Ｌ）塩化カリウム；０．１１Ｍ（６．１７１ｇ／Ｌ）塩化ナトリウム；０．８８ｍＭ（０．１０８ｇ／Ｌ）リン酸二水素ナトリウム；０．００４ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）塩化コリン；０．００２４ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）Ｄ−ビオチン；０．００６７ｍＭ（０．００１２ｇ／Ｌ）ミオイノシトール；０．００５ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）ナイアシンアミド；０．００２５ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）Ｄ−パントテン酸；０．００３ｍＭ（０．０００６ｇ／Ｌ）ピリドキシン・ＨＣｌ；０．０００１６ｍＭ（０．００００６ｇ／Ｌ）リボフラビン；０．００１８ｍＭ（０．０００５ｇ／Ｌ）チアミン・ＨＣｌ；０．００１４ｍＭ（０．００６ｇ／Ｌ）葉酸；６１６ｐＭ（８００ｎｇ／Ｌ）ビタミンＢ１２；０．０１０ｍＭ（０．００４ｇ／Ｌ）ビタミンＥ；約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）のＤ−グルコース；０．３ｍＭ（０．０２９７５ｇ／Ｌ）ピルビン酸ナトリウム；５．１ｍＭ（０．９２ｇ／Ｌ）フルクトース；１０ｍＭ（１．１３ｇ／Ｌ）乳酸ナトリウム；０．３ｍＭ（０．０９２ｇ／Ｌ）グルタチオン；０．１ｍＭ（０．０４１８ｇ／Ｌ）ＥＤＴＡ；０．０３１ｍＭ（０．０１１ｇ／Ｌ）フェノールレッド；２．８μＭ  Ｄ−マンニトール；２６．２ｍＭ（２．２ｇ／Ｌ）炭酸水素ナトリウム；および７５ｍｇ／Ｌ  ペニシリンＧ；または約１．５ｍｇ／Ｌから約４ｍｇ／Ｌ  ゲンタマイシン硫酸塩を含む、前記培地。
【請求項４５】
ゲンタマイシン硫酸塩濃度が４ｍｇ／Ｌである、請求項４４に記載の実質的無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項４６】
Ｄ−グルコース濃度が約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間であり、さらに１５ｍＭ（３．５７４５ｇ／Ｌ）ＨＥＰＥＳを含む、請求項４４に記載の実質的に無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項４７】
Ｄ−グルコース濃度が約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間であり、さらに２５ｍＭ（５．９５７５ｇ／Ｌ）ＨＥＰＥＳを含む、請求項４４に記載の実質的に無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項４８】
Ｄ−グルコース濃度が約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間であり、さらに１５ｍＭ（３．５７４５ｇ／Ｌ）ＨＥＰＥＳを含む、請求項４５に記載の実質的に無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項４９】
Ｄ−グルコース濃度が約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間であり、さらに２５ｍＭ（５．９５７５ｇ／Ｌ）ＨＥＰＥＳを含む、請求項４５に記載の実質的に無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項５０】
ゲンタマイシン硫酸塩濃度が１．５ｍｇ／Ｌである、請求項４４に記載の実質的無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項５１】
Ｄ−グルコース濃度が約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間であり、さらに１５ｍＭ（３．５７４５ｇ／Ｌ）ＨＥＰＥＳを含む、請求項５０に記載の実質的に無タンパク質の細胞培養培地。
【請求項５２】
Ｄ−グルコース濃度が約４．２ｍＭ（０．７５ｇ／Ｌ）から約５．６ｍＭ（１．０ｇ／Ｌ）の間であり、さらに２５ｍＭ（５．９５７５ｇ／Ｌ）ＨＥＰＥＳを含む、請求項５０に記載の実質的に無タンパク質の細胞培養培地。