(57)【要約】  本発明は、腸内のビフィズス菌の増殖を促進して、腸内環境を改善する食品の提供を課題とする。  （１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品。
【請求項２】
難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物が、オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物である、請求項１記載の食品。
【請求項３】
アミノ酸が、アラニン、グルタミン、グルタミン酸、イソロイシン、ヒスチジン、リジン、プロリン、およびバリンから選択される１種または２種以上の組み合わせである、請求項１または２に記載の食品。
【請求項４】
アミノ酸が、グルタミン酸、リジン、またはグルタミン酸およびリジンの組み合わせである、請求項１または２に記載の食品。
【請求項５】
腸溶性組成物が、顆粒剤、造粒物、錠剤、ハードカプセル、またはソフトカプセルである、請求項１〜４の何れか１項に記載の食品。
【請求項６】
腸内環境改善に使用するための（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、食品。
【請求項７】
（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる食品を、ヒトに有効量摂取させることを特徴とする、ヒトにおける腸内環境改善方法。
【請求項８】
腸内環境改善用食品を製造するための、（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内のビフィズス菌の増殖を促進して、腸内環境を改善する食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸内のビフィズス菌などの善玉菌の増殖を促進して、腸内環境を改善すること（腸内細菌叢の正常化）は、各種疾病の予防や健康維持増進のために重要である。
特許文献１は、プレバイオティクスを含む甘味料組成物を開示し、プレバイオティクスには、ムコ多糖、オリゴ糖、多糖、アミノ酸、ビタミン、栄養素前駆物質、タンパク質、およびこれらの組み合わせが含まれることが記載されている。しかし、該文献には上記プレバイオティクスが胃腸管内のビフィズス菌を増殖させることを実証する試験例は示されていない。
非特許文献１には、ビフィズス菌のアミノ酸要求性についての報告がされている。しかし、この報告は腸内よりも栄養豊富な培地を用いた純粋培養菌株の実験結果であり、下部消化管のような貧栄養で且つ腸内細菌叢のような複合系においては検討されていない。
オリゴ糖や水溶性食物繊維（例えば、イヌリン）のような多糖類は、胃や小腸で消化・吸収されにくく、大腸まで届いてビフィズス菌などの善玉菌の餌になることが知られている。（例えば、非特許文献２、非特許文献３参照）
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２００９−５１７０３２号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】「ビフィズス菌の研究」光岡知足、学会誌刊行センター、１９９８年、Ｐ７０
【非特許文献２】GIBSON et al., GASTROENTEROLOGY, Vol. 108, No. 4, pages 975-982, 1995
【非特許文献３】Kolida et al., Br J Nutr. 2002 May; 87 Suppl 2: S193-197
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、腸内のビフィズス菌の増殖を促進して、腸内環境を改善する食品の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を行ったところ、後述の試験例１−１、１−２および２（ヒト糞便懸濁液での培養試験）の結果、さらに試験例３（ブタへの投与試験）の結果から、有効成分としてオリゴ糖（難消化性多糖類）およびアミノ酸を組み合わせて供給することによって、それぞれ単独で用いた場合に比べて、顕著に優れたビフィズス菌の増殖促進効果が得られることを見出した。
また本発明者らは、通常アミノ酸は空腸〜回腸上部で吸収され、そのままではビフィズス菌の生息する下部消化管に届きにくいと考えられたが、アミノ酸を腸溶性組成物にすることで、下部消化管でオリゴ糖（難消化性多糖類）とアミノ酸を同時に存在させることができることを見出した。
本発明者らは、上記知見に基づき、さらに検討を行って本発明を完成させた。【０００７】
すなわち、本発明は、下記を提供する。
［１］（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品。
［２］難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物が、オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物である、上記［１］記載の食品。
［３］アミノ酸が、アラニン、グルタミン、グルタミン酸、イソロイシン、ヒスチジン、リジン、プロリン、およびバリンから選択される１種または２種以上の組み合わせである、上記［１］または［２］に記載の食品。
［３−１］アミノ酸が、アラニン、グルタミン、グルタミン酸、イソロイシン、リジン、およびバリンから選択される１種または２種以上の組み合わせである、上記［１］または［２］に記載の食品。
［４］アミノ酸が、グルタミン酸、リジン、またはグルタミン酸およびリジンの組み合わせである、上記［１］または［２］に記載の食品。
［５］腸溶性組成物が、顆粒剤、造粒物、錠剤、ハードカプセル、またはソフトカプセルである、上記［１］〜［４］の何れかに記載の食品。
［６］オリゴ糖を含有する組成物が、オリゴ糖を含有する飲料である、上記［２］〜［５］の何れかに記載の食品。
［７］（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる食品、並びに、腸内環境改善への使用に関する説明を記載した記載物を含む商業パッケージ。
［８］（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善に用いられる旨の表示が付された食品。
［９］（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善作用の増強用食品。
［１０］アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物である、難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物の腸内環境改善作用の増強用食品。
［１１］腸内環境改善に使用するための（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、食品。
［１２］（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる食品を、ヒトに有効量摂取させることを特徴とする、ヒトにおける腸内環境改善方法。
［１３］腸内環境改善用食品を製造するための、（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物の使用。【０００８】
本発明は、また以下を提供する。
［１４］（１）アミノ酸を含有する腸溶性組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善用食品。
［１５］アミノ酸が、アラニン、グルタミン、グルタミン酸、イソロイシン、リジン、およびバリンから選択される１種または２種以上の組み合わせである、上記［１４］記載の食品。
［１６］アミノ酸が、グルタミン酸、リジン、またはグルタミン酸およびリジンの組み合わせである、上記［１４］記載の食品。
［１７］腸溶性組成物が、顆粒剤、錠剤、ハードカプセル、またはソフトカプセルである、上記［１４］〜［１６］の何れかに記載の食品。
［１８］オリゴ糖を含有する組成物が、オリゴ糖を含有する飲料である、上記［１４］〜［１７］の何れかに記載の食品。
［１９］（１）アミノ酸を含有する腸溶性組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる食品、並びに、腸内環境改善への使用に関する説明を記載した記載物を含む商業パッケージ。
［２０］（１）アミノ酸を含有する腸溶性組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善に用いられる旨の表示が付された食品。
［２１］（１）アミノ酸を含有する腸溶性組成物、および（２）オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善作用の増強用食品。
［２２］アミノ酸を含有する腸溶性組成物である、オリゴ糖またはオリゴ糖を含有する組成物の腸内環境改善作用の増強用食品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）およびアミノ酸またはその塩を組み合わせて供給することによって、それぞれ単独で用いた場合に比べて、顕著に優れたビフィズス菌の増殖促進効果を有し、腸内環境を改善する機能を有する食品を提供することができる。
本発明によれば、アミノ酸またはその塩を腸溶性組成物として難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）と組み合わせて供給することで、ビフィズス菌が生息する下部消化管で難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）とアミノ酸またはその塩を同時に存在させることができ、腸内のビフィズス菌の増殖を促進することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１−１】図１−１は試験例１−１の結果を示す。
【図１−２】図１−２は試験例１−２の結果を示す。
【図２】図２は試験例２の結果を示す。
【図３】図３は試験例３の盲腸内ビフィズス菌相対量の結果を示す。
【図４】図４は試験例３の盲腸内リジン濃度の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明の腸内環境改善用食品は、（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる。
本発明の食品は、（１）および（２）を組み合わせて用いる、（１）および（２）の併用食品である。
本発明の食品において、（１）および（２）は、同時に製剤化し、同一の製剤（食品）中に含有してもよく、（１）および（２）を別々に製剤化し、同時にあるいは時間差をおいて別々に、同一経路あるいは別経路にて、摂取されてもよい。すなわち、本発明の食品には、（１）および（２）を一つの製剤中に含有する食品、（１）および（２）を別々に製剤化して組み合わせて用いる食品が含まれる。
【００１２】
本明細書において、食品とは、経口摂取し得るもの（医薬品を除く）を広く包含する概念であり、いわゆる「食べ物」のみならず飲料、健康補助食品、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、機能性表示食品）、サプリメントなどを含む。
【００１３】
本明細書において、「腸内環境改善」とは、下部消化管に存在するビフィズス菌を相対的に増加させることをいう。相対的に増加させるとは、腸内細菌叢におけるビフィズス菌の優占化を促進することを意味する。腸内細菌叢におけるビフィズス菌の優占化は、糞便中のビフィズス菌量を、定量ＰＣＲなどを用いて測定する事により確認できる。
本明細書において、「下部消化管」とは、回腸、盲腸、結腸、直腸を意味する。
【００１４】
（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物
本発明において、アミノ酸としては、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、バリンが挙げられ、アラニン、グルタミン、グルタミン酸、イソロイシン、ヒスチジン、リジン、プロリン、バリンが好ましい。これらのアミノ酸はＬ体が好ましい。アミノ酸は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
本発明において、アミノ酸としては、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−リジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリン、これらの組み合わせ（例えば、Ｌ−グルタミン酸およびＬ−リジンの組み合わせ）が好ましく、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン酸およびＬ−リジンの組み合わせがより好ましい。
本発明におけるアミノ酸は、塩の形態であってもよい。医薬又は食品として許容される塩が挙げられ、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；エチレンジアミン、プロピレンジアミン、エタノールアミン、モノアルキルエタノールアミン、ジアルキルエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機塩基との塩；塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等の無機酸との塩；ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩が挙げられ、ナトリウム塩、カリウム塩、塩酸塩が好ましい。
【００１５】
本発明において、腸溶性組成物は、ｐＨが低い胃や小腸上部では崩壊せず、ｐＨが高い小腸下部または大腸で崩壊して、アミノ酸またはその塩を放出する組成物である。
本発明における腸溶性組成物は、好ましくはｐＨ４以上（より好ましくはｐＨ４〜ｐＨ９、さらに好ましくはｐＨ５〜ｐＨ９）で崩壊する。
崩壊性は、例えば第１７改正日本薬局方の崩壊試験法の腸溶性製剤の規定に準じて測定できる。
【００１６】
本発明における腸溶性組成物としては、例えば、顆粒剤（細粒剤を含む）、造粒物、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセルが挙げられる。
本発明における腸溶性組成物は、食品製剤または医薬製剤の分野で公知の方法で製造することができる。
例えば、アミノ酸またはその塩を担体（例、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、保護剤）と共に、混合、造粒および／または打錠して、顆粒剤または錠剤を得、これに腸溶性コーティングを施して、腸溶性顆粒剤または腸溶性錠剤を得る方法；アミノ酸またはその塩を含有する顆粒剤または錠剤を、腸溶性コーティングを施したハードカプセルに充填して腸溶性カプセルを得る方法；アミノ酸またはその塩の担体（例、油成分）懸濁液を腸溶性基材からなるソフトカプセルに封入して、腸溶性カプセルを得る方法が挙げられる。また、上記腸溶性顆粒剤をカプセル（例、セルロースカプセル）に封入して、カプセル剤としてもよい。また、油や脂肪（保護剤）とアミノ酸またはその塩の溶融混合物を、冷却固化して、腸溶性造粒物を得てもよい。
また、市販品を用いることもできる。
【００１７】
腸溶性コーティング基剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース等のセルロース系高分子；メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマーＬＤ、メタクリル酸コポリマーＳ等のアクリル酸系高分子；シェラック等の天然物が挙げられる。また、コーティングの際に、コーティング添加剤（例、可塑剤）を用いてもよい。
担体、コーティング基剤、コーティング添加剤は、製剤技術分野において慣用の量が用いられる。
【００１８】
（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物
本明細書において、難消化性多糖類とは、胃や小腸で消化・吸収されにくく、大腸まで届いてビフィズス菌の餌になる多糖類である。 
本発明において、難消化性多糖類の重合度は、２以上または３以上である。本発明において、難消化性多糖類の重合度の上限は特に限定されないが、例えば、１００以下、好ましくは６０以下、より好ましくは１０以下、さらに好ましくは６以下、よりさらに好ましくは５以下である。
本発明において、難消化性多糖類の重合度は、好ましくは２〜１００、より好ましくは２〜６０、さらに好ましくは２〜１０、よりさらに好ましくは２〜６である。
本発明において、難消化性多糖類としては、例えば、オリゴ糖、水溶性食物繊維などが挙げられる。
本発明において、（２）としては、難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）をそのまま用いること、または難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）を含有する組成物として用いることができる。
本明細書において、オリゴ糖は、単糖が２〜１０個結合したものを言う。
本発明において、オリゴ糖としては、例えば、コーヒー豆マンノオリゴ糖、乳果オリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖が挙げられ、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖が好ましい。オリゴ糖は１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
オリゴ糖は、公知の方法で製造することができ、また市販品を用いることもできる。
フラクトオリゴ糖としては、例えば、スクロースにフルクトースが１〜３個結合した、重合度が３〜５のフラクトオリゴ糖が挙げられる。具体的には例えば、ＦＯＳ：和光純薬工業、＃０６４−０２３８５が挙げられる。
ガラクトオリゴ糖としては、例えば、ラクトースにガラクトースが結合した、重合度が２〜６のガラクトオリゴ糖が挙げられる。具体的には例えば、ＧＯＳ：和光純薬工業、＃０７６−０５９４５が挙げられる。
【００１９】
本発明において、水溶性食物繊維とは、胃や小腸で消化・吸収されず、到達した大腸で腸内細菌によって分解をうけ、ビフィズス菌の餌になる食物繊維である。
本発明において、水溶性食物繊維としては、例えば、イヌリンが挙げられる。
水溶性食物繊維（例、イヌリン）は、公知の方法で製造することができ、また市販品を用いることもできる。
イヌリンは、一般に、フルクトースがβ（２−１）結合で２〜６０分子重合し、末端にグルコース分子が結合した構造である。
イヌリンは、大腸で腸内細菌により分解（部分加水分解）をうけフラクトオリゴ糖になるため、消化管内において、後述の試験例１−１、１−２で確認されたフラクトオリゴ糖の効果と同様の効果が期待できる。
【００２０】
本発明における難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）を含有する組成物は、形態は特に問わず、例えば、散剤、顆粒剤（細粒剤を含む）、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、液剤（例、溶液、懸濁液、乳液）、飲料、ゼリー、プリン、ヨーグルト、キャンディー、チューイングガムなどが挙げられる。これらは公知の方法で製造することができる。例えば、難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）を担体（例、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶剤）と混合し、食品製剤または医薬製剤の分野で公知の方法で散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤等を製造することができる。また、難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）を、食品、飲料（例、水、ソフトドリンク）に添加、混合して製造することもできる。また、市販品（例、明治フードマテリア社製フラクトオリゴ糖「メイオリゴＰ顆粒」）を用いることもできる。
【００２１】
上述の通り、本発明の食品には、上記（１）および（２）を一つの製剤中に含有する食品、および、上記（１）および（２）を別々に製剤化して組み合わせて用いる食品が含まれる。
（１）および（２）を別々に製剤化して組み合わせて用いる食品として、例えば、（１）がアミノ酸またはその塩を含有する、腸溶性顆粒剤、腸溶性造粒物、腸溶性錠剤、腸溶性ハードカプセル、または腸溶性ソフトカプセルの形態であり、（２）が難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）を含有する飲料の形態であり、これらを組み合わせて用いる食品が挙げられる。
本発明において、（１）および（２）は、同時にあるいは時間差をおいて別々に、同一経路あるいは別経路にて、摂取されてもよい。具体的には例えば、アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性カプセル（例、ハードカプセル、ソフトカプセル）、腸溶性顆粒剤、腸溶性造粒物などを、難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）含有飲料と共に摂取されてもよい。
【００２２】
本発明の腸内環境改善用食品におけるアミノ酸またはその塩の摂取量は、アミノ酸として、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり、通常０．１〜５０ｇ、好ましくは０．２〜２０ｇ、より好ましくは０．５〜１０ｇである。
本発明の腸内環境改善用食品における難消化性多糖類（例、オリゴ糖、水溶性食物繊維）の摂取量は、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり、通常０．１〜５０ｇ、好ましくは０．２〜２０ｇ、より好ましくは０．５〜１０ｇである。
【００２３】
本発明の食品は、ヒト、ヒト以外の動物（例えば、家畜、家禽、実験動物などの、哺乳動物、鳥類）が安全に摂取することができる。ヒト以外の動物に摂取させる形態としては、飼料中への添加であってもよい。
【００２４】
本発明の別の態様としては、「（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる食品、並びに、腸内環境改善への使用に関する説明を記載した記載物を含む商業パッケージ。」、「（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善に用いられる旨の表示が付された食品。」、「（１）アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物、および（２）難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物を組み合わせてなる、腸内環境改善作用の増強用食品。」および「アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物である、難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物の腸内環境改善作用の増強用食品。」が挙げられる。「アミノ酸またはその塩を含有する腸溶性組成物」、「難消化性多糖類または難消化性多糖類を含有する組成物」、「腸内環境改善」、「アミノ酸またはその塩の摂取量」、「難消化性多糖類の摂取量」は、上記腸内環境改善用食品について説明した例示、定義と同じである。
【実施例】
【００２５】
以下、試験例、実施例、比較例、参考例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
略語は、以下を示す。
Ａｌａ：Ｌ−アラニン
Ａｒｇ：Ｌ−アルギニン
Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギン
Ｃｙｓ：Ｌ−システイン
Ｇｌｎ：Ｌ−グルタミン
Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸
Ｇｌｙ：グリシン
Ｈｉｓ：Ｌ−ヒスチジン
Ｉｌｅ：Ｌ−イソロイシン
Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン
Ｌｙｓ：Ｌ−リジン
Ｍｅｔ：Ｌ−メチオニン
Ｐｈｅ：Ｌ−フェニルアラニン
Ｐｒｏ：Ｌ−プロリン
Ｓｅｒ：Ｌ−セリン
Ｔｈｒ：Ｌ−トレオニン
Ｖａｌ：Ｌ−バリン
ＦＯＳ：フラクトオリゴ糖
ＧＯＳ：ガラクトオリゴ糖
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水【００２６】
［試験例１−１］ヒト糞便懸濁液へのアミノ酸およびフラクトオリゴ糖添加試験
表１−１に示す実施例および比較例のＰＢＳ溶液を調製し、糞便培養用の培地とした。ＰＢＳのみの場合をコントロールとした。フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）は和光純薬工業製（＃０６４−０２３８５）を使用した。
その後、ガラス製バイアル瓶にそれぞれ１０ｍｌずつ分注しオートクレーブ滅菌および嫌気化し、ブチルゴム栓で密閉した。糞便懸濁液は、２０〜４０代の健常人３人（男１人、女２人）から糞便約１０ｇを採取し、８０ｍｌの嫌気化されたＰＢＳに懸濁することによって調製した。この糞便懸濁液をそれぞれのバイアル瓶に０．５ｍｌずつ添加し、３７℃のインキュベータ内に入れ１日１回転倒混和しながら４日間嫌気培養した。培養終了後、培養液の全量から遠心分離（８，０００×ｇ、５分）により腸内細菌ペレットを得た。このペレットからＩＳＯＦＥＣＡＬ  ｆｏｒ  ＢｅａｄｓＢｅａｔ（ニッポンジーン社製）を用いてＤＮＡ抽出を行い、ＧｅｎｅＡｃｅ  ＳＹＢＲ  ｑＰＣＲ  Ｍｉｘ  α（ニッポンジーン社製）を用いて定量ＰＣＲを行った。定量ＰＣＲは、９５℃１０分の後、９５℃３０秒と６０℃６０秒を４５サイクル実施する条件で行った。ビフィズス菌の検出に用いた定量ＰＣＲ用プライマーは、下記の通りである。
ｇ−Ｂｉｆｉｄ−Ｆ：５’−ＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＣＧＧＧＴＧＧ−３’（配列番号：１）
ｇ−Ｂｉｆｉｄ−Ｒ：５’−ＧＧＴＧＴＴＣＴＴＣＣＣＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡ−３’（配列番号：２）【００２７】
【表１−１】
2018181619.tif 000003
【００２８】
定量ＰＣＲによって得られた結果は、コントロールを１とした場合の相対量を算出し、その結果をｚ−ｓｃｏｒｅで標準化した。
結果を図１−１に示す。データはｚ−ｓｃｏｒｅの平均値±標準誤差で示した（ｎ＝３）。
その結果、いずれのアミノ酸も単独の添加では、ビフィズス菌の増殖は認められなかったが、０．５％ＦＯＳと共にＡｌａ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌをそれぞれ添加すると、ＦＯＳ単独よりも顕著なビフィズス菌の増殖が認められた。また、０．５％ＦＯＳと共にＧｌｕとＬｙｓを混合して添加しても同様にＦＯＳ単独よりも顕著なビフィズス菌の増殖が認められた。
このように、本発明においては、アミノ酸とオリゴ糖の組み合わせで、ビフィズス菌の増殖について、相加効果を超える相乗効果が認められた。【００２９】
［試験例１−２］ヒト糞便懸濁液へのアミノ酸およびフラクトオリゴ糖添加試験
表１−２に示す実施例および比較例のＰＢＳ溶液を調製し、糞便培養用の培地とした。ＰＢＳのみの場合をコントロールとした。糞便培養およびビフィズス菌の検出は、試験例１−１と同様の方法で行った。【００３０】
【表１−２】
2018181619.tif 000004
【００３１】
定量ＰＣＲによって得られた結果は、コントロールを１とした場合の相対量を算出し、その結果をｚ−ｓｃｏｒｅで標準化した。
結果を図１−２に示す。データはｚ−ｓｃｏｒｅの平均値±標準誤差で示した（ｎ＝３）。
その結果、いずれのアミノ酸も単独の添加では、ビフィズス菌の増殖は認められなかったが、０．５％ＦＯＳと共にＨｉｓ、Ｐｒｏをそれぞれ添加すると、ＦＯＳ単独よりも顕著なビフィズス菌の増殖が認められた。
このように、本発明においては、アミノ酸とオリゴ糖の組み合わせで、ビフィズス菌の増殖について、相加効果を超える相乗効果が認められた。【００３２】
［試験例２］ヒト糞便懸濁液へのアミノ酸およびガラクトオリゴ糖添加試験
表２に示す実施例および比較例のＰＢＳ溶液を調製し、糞便培養用の培地とした。糞便培養およびビフィズス菌の検出は、試験例１−１と同様の方法で行った。ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）は和光純薬工業製（＃０７６−０５９４５）を使用した。【００３３】
【表２】
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【００３４】
定量ＰＣＲによって得られた結果は、コントロールを１とした場合の相対量を算出し、その結果をｚ−ｓｃｏｒｅで標準化した。
結果を図２に示す。データはｚ−ｓｃｏｒｅの平均値±標準誤差で示した（ｎ＝３）。
その結果、いずれの濃度においてもアミノ酸単独の添加では、ビフィズス菌の増殖は認められなかったが、０．５％ＧＯＳと共にＧｌｕ、Ｌｙｓをそれぞれ添加すると、ＧＯＳ単独よりも顕著なビフィズス菌の増殖が認められた。また、０．５％ＧＯＳと共にＧｌｕとＬｙｓを混合して添加しても同様にＧＯＳ単独よりも顕著なビフィズス菌の増殖が認められた。
このように、本発明においては、オリゴ糖の種類によらずアミノ酸との組み合わせで、ビフィズス菌の増殖について、相加効果を超える相乗効果が認められた。【００３５】
［試験例３］ブタへの腸溶性ＬｙｓおよびＦＯＳ投与試験
全国農業協同組合連合会より２〜３ヶ月齢の雄性ブタ（ハイコープＳＰＦ豚ＬＷＤ）６頭を購入し、平均体重が均一になる様に３頭ずつ２つの試験区に分け、３頭／ペンで４週間飼育した。それぞれの試験区には、１日２回、４００ｇ／頭のピグみらいＣＥＸ（全国農業協同組合連合会）を制限給餌した。それぞれの試験区には、表３に示す用量・方法で被験物質の投与を行った。腸溶性Ｌｙｓは味の素社製乳牛用リジン製剤「ＡｊｉＰｒｏ−Ｌ」（リジン塩酸塩含有量は４０％以上）、ＦＯＳは、明治フードマテリア社製フラクトオリゴ糖「メイオリゴＰ顆粒」（ＦＯＳ含有量は９５％以上）を用いた。投与開始から４週間経過後、盲腸を採材し、試験例１−１、１−２および２と同様の方法で、盲腸内容物中のビフィズス菌を定量ＰＣＲで調べた。盲腸内容物中のＬｙｓ濃度は、Ａｇｉｌｅｎｔ社製６４７０  Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムおよびＩｍｔａｋｔ社製Ｉｎｔｒａｄａ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄカラムを用いて測定した。【００３６】
【表３】
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【００３７】
定量ＰＣＲによって得られた結果は、比較例２４（プラセボ）を１とした場合の相対量で示した。盲腸内ビフィズス菌相対量の結果を図３に示す（平均値±標準偏差、ｎ＝３）。その結果、腸溶性ＬｙｓとＦＯＳの組み合わせによって、ＦＯＳ単独の摂取よりもブタ腸内のビフィズス菌を平均値で約３倍の増殖効果が確認できた。
また、この時の盲腸内Ｌｙｓ濃度の結果を図４に示す（平均値±標準偏差、ｎ＝３）。その結果、腸溶性Ｌｙｓ摂取区では、盲腸内のＬｙｓ濃度が上昇していることが確認できた。
このように、腸溶性を施したＬｙｓの摂取による下部消化管のＬｙｓ濃度を上昇させることによって、フラクトオリゴ糖との相乗効果が認められた。【００３８】
本出願は、日本で出願された特願２０１７−０６３１４５を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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