(57)【要約】  本実施形態に係る細胞培養容器１は、側面に開口部を有する第１の容器１０及び第２の容器２０と、第１の容器の開口部を覆うフィルター３０とを有し、フィルター３０は、端部に粘着層を有し、各容器の開口部は、フィルター３０を介して、対向させて連結される。フィルター３０の粘着層３２により、ピンセットが粘着層３２に接着し、フィルター３０を簡易に操作可能である。また、フィルター３０の孔径は、細胞は通さないが培養液は通すサイズであるため、各容器間で培養液の移動が可能である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
側面に開口部を有する第１の容器及び第２の容器と、
前記第１の容器の開口部を覆うフィルターと、
を有し、
前記フィルターは、端部に粘着層を有し、
前記各開口部は、前記フィルターを介して、対向させて連結される
細胞培養容器。
【請求項２】
シート状のフィルター本体と、
前記フィルター本体の外縁部に設けられた粘着層と
を有する
フィルター。
【請求項３】
前記フィルター本体は、直径が１ｍｍ以上１３ｍｍ以下である
請求項２に記載のフィルター。
【請求項４】
前記粘着層は、前記フィルター本体の両面に形成される
請求項２に記載のフィルター。
【請求項５】
前記粘着層は、前記フィルターの片面に対して５％以上２０％以下の面積割合である
請求項２に記載のフィルター。
【請求項６】
前記粘着層は、着色されている
請求項２に記載のフィルター。
【請求項７】
切り出されるフィルター領域とそれ以外の領域とに跨って粘着シートを有する
フィルター切抜き用シート。
【請求項８】
フィルター切抜き用シートにおいて、フィルター領域とそれ以外の領域とに跨って粘着シートを貼るステップと、
前記フィルター切抜き用シートからフィルター領域を切り出すステップと、
前記切り出すステップにおいて、切り出されたフィルターを前記粘着シートから剥がすステップと、
前記剥がすステップにおいて、剥がされたフィルターの端部に粘着層を形成するステップと
を有するフィルターの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞培養容器、フィルター、フィルター切抜き用シート、及びフィルターの製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
例えば、特許文献１には、対象物に貼着して通過する気体をろ過するためのフィルターであって、シート状の不織布と、前記不織布の一方面の少なくとも一部に粘着剤が塗布されてなる粘着層とを備え、前記粘着剤は、主剤と硬化剤とを含む２液混合型ポリウレタン系粘着剤であり、前記主剤は、分子量が１５０００〜２５０００のポリウレタンポリオールを含み、前記硬化剤は、前記主剤１００重量部に対して２．５〜４．５重量部含まれており、前記粘着層は、前記粘着剤塗布前の前記不織布の表面レベルから２０〜４０μｍ突出する、フィルターが開示されている。【０００３】
また、特許文献２には、透明な熱可塑性プラスチック材料によって成形する第１、第２の容器を備えてなり、前記第１、第２の容器は、それぞれ横向きの開口を有する上部開放の有底容器であって、前記第１、第２の容器に形成する連結機構を介して前記各開口を対向させるようにして連結すると、前記各開口が水密に連通することを特徴とする培養容器が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−１２４５９７号公報
【特許文献２】特開２０１５−５０９９８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
例えば、細胞培養等に使用するフィルターは小さく、ピンセットにより傷つけることでフィルター機能の低下を招いたり、また、クリーンベンチ内で取り扱う際に、風に飛ばされたりする。そして、その薄さから強度が低く、折れ曲がることがあり、操作性が悪かった。本発明は、このような課題を解決するために、より操作性の高いフィルターを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明に係る細胞培養容器は、側面に開口部を有する第１の容器及び第２の容器と、前記第１の容器の開口部を覆うフィルターと、を有し、前記フィルターは、端部に粘着層を有し、前記各開口部は、前記フィルターを介して、対向させて連結される。【０００７】
本発明に係るフィルターは、シート状のフィルター本体と、前記フィルター本体の外縁部に設けられた粘着層とを有する。【０００８】
好適には、前記フィルター本体は、直径が１ｍｍ以上１３ｍｍ以下である。【０００９】
好適には、前記粘着層は、前記フィルター本体の両面に形成される。【００１０】
好適には、前記粘着層は、前記フィルターの片面に対して５％以上２０％以下の面積割合である。【００１１】
好適には、前記粘着層は、着色されている。【００１２】
本発明に係るフィルター切抜き用シートは、切り出されるフィルター領域とそれ以外の領域とに跨って粘着シートを有する。【００１３】
本発明に係るフィルターの製造方法は、フィルター切抜き用シートにおいて、フィルター領域とそれ以外の領域とに跨って粘着シートを貼るステップと、前記フィルター切抜き用シートからフィルター領域を切り出すステップと前記切り出すステップにおいて、切り出されたフィルターを前記粘着シートから剥がすステップと、前記剥がすステップにおいて、剥がされたフィルターの端部に粘着層を形成するステップとを有する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、フィルター本体の外縁部に設けられた粘着層により、粘着層を対象物に粘着させておくことにより、クリーンベンチ内でフィルターが飛ばされることを防ぎ、さらに、ピンセットで操作する際は、粘着層とピンセットを接触させるだけでフィルターを持ち上げることができるため、フィルターをピンセットで挟むことで傷つける虞がない。さらに、粘着層によりフィルター本体の外縁部が補強されることでフィルターが折れ曲がることを防ぐことができる。つまり、本発明によれば、より操作性の高いフィルターを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】細胞培養容器１の構成を説明する図である。
【図２】（ａ）は、細胞培養容器１のＡ−Ａ‘断面を例示する図であり、（ｂ）は、フィルター３０の装着例を説明する図である。
【図３】（ａ）は、フィルター３０を例示するであり、（ｂ）は、フィルター３０のＢ−Ｂ‘断面を説明する図である。
【図４】（ａ）は、粘着シート５０が貼られていないフィルター切抜き用シートを例示する図であり、（ｂ）は、粘着シート５０が貼られているフィルター切抜き用シート３を例示する図である。
【図５】フィルター３０の製造方法を説明するフローチャートである。
【図６】細胞培養容器１の使用方法を説明するフローチャートである。
【図７】（a）は、変形例におけるフィルター３０を有する器具を例示する図であり、（ｂ）は、従来のマルチウェルプレートを例示する図である。
【図８】（ａ）は、細胞培養容器１へのインサート７の装着例を表す図であり、（ｂ）は、インサート７の平面図及び正面図であり、（ｃ）は、インサート７へのフィルター３０の装着例を表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明に係る実施形態の構成を、図面を参照して説明する。ただし、本発明の範囲は、図示例に限定されるものではない。
図１は、本実施例における細胞培養容器１の構成を説明する図である。
図１に例示するように、細胞培養容器１は、第１の容器１０、第２の容器２０、フィルター３０、及びＯリング４０により構成されている。
第１の容器１０は、側面に開口部１２を有する。具体的には、開口部１２は、第１の容器１０の側面の開口と、開口の周りに形成された、第２の容器２０に連結する連結部１２０を有する。また、開口部１２の開口は、フィルター３０により覆われている。
第２の容器２０も第１の容器１０と同様に、側面に開口部２２を有する。具体的には、開口部２２は、第２の容器２０の側面の開口と、開口の周りに形成された、第１の容器１０に連結する連結部２２０を有する。各開口部は、フィルター３０を介して、対向させて連結される。具体的には、連結部１２０は、連結部２２０に適合する形状であり、連結部１２０に連結部２２０が勘合し、第１の容器１０と第２の容器２０とは連結される。より具体的には、連結部１２０と連結部２２０とは、フィルター３０とＯリング４０とを挟持して連結する。
【００１７】
図２（ａ）は、細胞培養容器１のＡ−Ａ‘断面を例示する図であり、（ｂ）は、フィルター３０の装着例を説明する図である。
第１の容器１０及び第２の容器２０は、細胞を培養する容器であり、細胞及び培養液を収容する。具体的には、図２（ａ）に例示するように、第１の容器１０には細胞Ａ及びその培養液Ａが収容され、第２の容器２０には、細胞Ａとは異なる細胞Ｂ及びその培養液Ｂが収容される。細胞を個別に培養する際は、各開口部には専用の蓋がされ、単独で各容器を使用できる。第１の容器１０及び第２の容器２０を接続すると、各細胞Ａ及び細胞Ｂの分泌物質を含む各培養液は、フィルター３０を介して第１の容器１０と第２の容器２０との間を移動する。これにより、各細胞からの分泌物質の相互作用の観察が可能である。
【００１８】
(フィルター)
図３は、（ａ）は、フィルター３０を例示する図であり、（ｂ）は、フィルター３０のＢ−Ｂ‘断面を説明する図である。
図３（ａ）に例示するように、フィルター３０は、直径１ｍｍ以上５０ｍｍ以下の円形であり、孔径が０．０１μｍ以上１ｍｍ以下である。より好ましくは、フィルター３０の直径は、１３ｍｍ以下である。フィルター３０の孔径は、一般的な細胞よりも小さいため、フィルター３０は、培養細胞を通過させない。一方、細胞から分泌されるエクソソームの大きさは３０〜１５０ｎｍであり、孔径よりも小さいため、フィルター３０を介して第１の容器１０と第２の容器２０とを移動可能である。フィルター３０は、薄いポリマーフィルムに細孔が分散したトラックエッチドメンブレンであり、素材は、ポリカーボネート製、厚み６〜５０μmである。なお、トラックエッチドメンブレンとは、ポリマー素材への強力な重イオンの照射することで形成された直線のトラックに、ケミカルエッチングにより細孔があけられたメンブレンをいう。
【００１９】
（粘着層）
フィルター３０は、図３（ｂ）に例示するように、シート状のフィルター本体３４と、フィルター本体３４の両面において、外縁部に設けられた粘着層３２とを有する。粘着層３２は、フィルター３０の片面に対して５％以上２０％以下の面積割合で設けられている。具体的には、粘着層３２は、第１の容器１０と第２の容器２０との間を移動する培養液に影響を及ぼさないよう、また、フィルターの機能を阻害しないよう、フィルター本体のうち、培養液が通過する部分を避けて、円周端部に設けられている。
【００２０】
図２（ｂ）に例示するように、第１の容器１０と第２の容器２０とフィルター３０とＯリング４０とを結合させた場合、第１の容器１０と第２の容器２０とがＯリング４０を押さえつけ、Ｏリング４０が第１の容器１０と第２の容器２０とフィルター３０とに４方向に密着することで培養液の液漏れを防止している。つまり、フィルター３０は、第１の容器１０と、Ｏリング４０を介した第２の容器２０とに挟まれることで、開口部１２の開口を覆うように配置される。すなわち、培養液に影響を及ぼさないようにするためにも、粘着層３２は、連結部１２０とフィルター３０との接着範囲を超えないことが望ましい。
【００２１】
フィルター３０の粘着層３２は、粘着剤により構成され、粘着剤の種類は、例えば、アクリル系粘着剤、シリコーン系粘着剤、またはゴム系粘着剤である。粘着層３２は、両面粘着テープを貼ることにより形成されてもよいし、粘着剤を塗布することにより形成されてもよい。
【００２２】
フィルター３０が粘着層３２を有することにより、操作性の悪い小さなフィルターでも、ピンセット等を粘着層３２に接触させるだけで、粘着層３２とピンセットとが接着し、ピンセットでフィルター３０を簡単に持ち上げることができる。つまり、培養液を通すフィルター領域をピンセットが触れることがないため、フィルター領域が傷つかず、また、フィルター領域を通過する培養液にも影響を及ぼすことがない。
【００２３】
また、クリーンベンチ内では、空気が循環しているため、フィルター本体３４だけでは、飛ばされる虞があるが、粘着層３２をクリーンベンチ内の特定の場所に粘着させておくことでこれを防ぐことができる。
【００２４】
そして、フィルター本体３４は、その薄さのため、フィルター本体３４の周縁部が反りやすいが、粘着層３２が周縁部を補強することで、フィルター本体３４の強度が増し、周縁部の反りを防ぐことも可能である。
【００２５】
フィルター３０を細胞培養容器１に装着後は、ピンセットと粘着層３２との分離が必要であるため、分離容易な程度の粘着力で十分であるが、粘着層３２は、細胞培養容器１に装着時、つまり、Ｏリング４０と、第１の容器１０とにより挟まれ、粘着層３２に圧力がかけられた場合は、圧力がかけられた部分の粘着力が増す。
さらに、粘着層３２は、着色されていてもよい。粘着層３２が着色されていることにより、粘着部分が判別できるため、ピンセットを接触させるべき位置が操作者にとって把握し易く、より操作性が増す。
また、粘着層３２は、フィルター３０の外周を一周するように設けられているが、これに限らず、ピンセットにより持ち上げられる程度の粘着範囲であれば、フィルター３０の外周において、点在してもよいし、フィルター３０の外周の一部分にのみ設けられていてもよい。
【００２６】
図４は、フィルター切抜き用シート３からフィルター３０を切り出す場面を例示する図である。
フィルター３０は、フィルター切抜き用シートから作られているが、図４（ａ）に例示するように、フィルター切抜き用シートからフィルター３０をレーザーカッター等で切り出す際、フィルター３０が切り出され、脱落する虞がある。そこで、フィルター切抜き用シートに粘着シート５０を設け、切り出されたフィルター３０の脱落を防止する。具体的には、図４（ｂ）に例示するように、粘着シート５０は、フィルター切抜き用シートのうち、フィルター３０となる領域と、それ以外の領域とに跨るように貼り付けられている。粘着シート５０が貼られたフィルター切抜き用シート３からフィルター３０を切り出す際、粘着シート５０が貼られているため、フィルター３０の形にカットしても、フィルター３０がフィルター切抜き用シート３から脱落することはない。そして、使用の際には、フィルター３０を粘着シート５０から引剥がすことでフィルター切抜き用シート３から分離できる。粘着シート５０の粘着剤は、引き剥がしの際フィルター３０に残らないため、細胞培養容器１に装着してもコンタミネーションを起こさない。
【００２７】
図５は、フィルター３０の製造方法を説明するフローチャートである。
図５に例示するように、ステップ１００（Ｓ１００）において、フィルター切抜き用シート３のうち、フィルター領域とフィルター領域以外の領域とに跨って粘着テープ５０を貼る。
ステップ１０５（Ｓ１０５）において、フィルター切抜き用シート３からフィルター領域の型を抜く。
ステップ１１０（Ｓ１１０）において、フィルター本体３４を粘着テープ５０から引き剥がす。
ステップ１１５（Ｓ１１５）において、フィルター本体３４の両面に粘着剤を塗布し、粘着層３２を形成する。
【００２８】
図６は、細胞培養容器１の使用方法を説明するフローチャートである。
図６に例示するように、ステップ２００（Ｓ２００）において、第１の容器１０と第２の容器２０との開口をそれぞれ専用蓋で閉じ、各容器にて異なる細胞を独立して培養する。
ステップ２０５（Ｓ２０５）において、第１の容器１０と第２の容器２０とをＯリング４０とフィルター３０とを介して接続する。接続の際、フィルター３０の粘着層３２は、第１の容器１０、第２の容器２０、及びＯリング４０により圧着され、圧着された粘着層３２部分は、粘着力を増す。これにより、フィルター３０は、細胞培養容器１に固定される。
ステップ２１０（Ｓ２１０）において、細胞培養容器１を専用アダプタへ装着し、顕微鏡にセットする。細胞培養容器１の底板は、透明であるため顕微鏡観察が可能である。
ステップ２１５（Ｓ２１５）において、各容器について再度単体で使用したい場合は細胞培養容器１の使用方法（Ｓ２０）は、Ｓ２２０へ移行し（Ｓ２１５：Ｙｅｓ）、それ以外の場合は（Ｓ２１５：Ｎｏ）、終了する。
ステップ２２０（Ｓ２２０）において、第１の容器１０と第２の容器２０とを分離し、フィルター３０とＯリング４０とを外し、各開口に蓋をすることで再度単体使用可能である。
【００２９】
以上説明したように、直径１３ｍｍの小さなフィルター３０でも、フィルター本体３４の周縁部に粘着層３２の枠が設けられているため、ピンセットと粘着層３２とが粘着することで、フィルター３０を簡易に操作することが可能になる。また、フィルター３０は、細胞培養容器１に装着されるが、フィルター３０の両面の粘着層３２が第１の容器１０と第２の容器２０とに粘着することで装着後のずれを防ぐことができる。
【００３０】
なお、上記実施形態では、粘着層３２は、フィルター３０の両面に形成されているが、一方の面にのみ形成されていてもよい。
また、上記実施形態のフィルター３０の製造方法において、フィルター本体３４をフィルター切抜き用シート３から分離した後に、粘着層３２を形成しているが、これに限定されるものではなく、例えば、フィルター切抜き用シート３のフィルター領域の端部に予め粘着剤を塗布し、粘着層３２を形成した後に、フィルター３０をフィルター切抜き用シート３から切り出してもよい。
【変形例】
【００３１】
上記実施形態では、細胞培養容器１にフィルター３０を装着しているが、これに限らず、例えば、図７（ａ）に例示するように、フィルターチップ、フィルターチューブにフィルター３０を装着してもよい。具体的には、フィルター３０の粘着層３２をフィルターチップ、又はフィルターチューブの内部の縁に粘着させて装着してもよい。従来では、フィルターが装着された状態でこれらの器具は提供されているが、フィルター３０を用いれば、自身で装着可能であるため、フィルターの交換が簡易にでき、また、フィルターが装着されて提供されていないような、少量多品種の器具にも対応可能である。
【００３２】
また、図７（ｂ）は、既存のフィルターが埋め込まれたマルチウェルプレートの平面図とＣ−Ｃ‘断面図を例示する図であるが、これは、フィルターを埋め込んだ状態で容器の成型が行われるため、成型時にフィルターが撓んだり、しわが寄ったりする。しかし、成型された容器に後付けでフィルター３０を装着できるようにすれば、撓んだり、しわが寄ったフィルター３０のみを交換可能であり、さらに、粘着層３２により固定されるため、装着されたフィルター３０にしわが寄ったりすることもない。
【００３３】
さらに、上記実施形態では、第１の容器１０と第２の容器２０とはフィルター３０とＯリング４０とを挟持して連結していたが、これに限定されず、第１の容器１０と第２の容器２０とはフィルター３０のみを挟持して連結してもよい。この場合、粘着層３２がＯリング４０の代わりに培養液の液漏れを防止する。Ｏリング４０の代替としてフィルター３０を使用する場合において、フィルター３０の粘着層３２は、円周端部を一周するように粘着層３２が形成されていることが好ましい。
【００３４】
図８（ａ）は、細胞培養容器１へのインサート７の装着例を表す図であり、（ｂ）は、インサート７の平面図及び正面図であり、（ｃ）は、インサート７へのフィルター３０の装着例を表す図である。
インサート７は、図８（ａ）に例示されるように、細胞培養容器１に装着される容器である。具体的には、インサート７は、第１の容器１０または第２の容器２０内に挿入されて第１の容器１０または第２の容器２０と一体となる。本例においては、第２の容器２０にインサート７が装着される場合について説明する。インサート７の深さは、第１の容器１０及び第２の容器２０の深さよりも浅く、インサート７を装着した際、第１の容器１０または第２の容器２０とインサート７との間には隙間が存在する。また、図８（ｂ）に例示するように、インサート７の底面は、開口７０と、開口の枠７２を有する。図８（ｃ）に例示するように、フィルター３０は、インサート７の開口７０を覆うように装着される。具体的には、フィルター３０の粘着層３２は、インサート７の開口の枠７２に粘着する。フィルター３０の粘着層３２の範囲は、インサート７の開口の枠７２の範囲内である。
インサート７にフィルター３０を装着することにより、インサート７内で培養される細胞と、インサート７の外、且つ第２の容器２０内で培養される細胞とにより分泌される物質の相互作用を観察できる。
【００３５】
以上、本発明に係る実施形態について説明したが、これらに限定されるものではなく、発明の趣旨を逸脱しない範囲内において、種々の変更、追加等が可能である。
【符号の説明】
【００３６】
１        細胞培養容器
３        フィルター切抜き用シート
７        インサート
１０      第１の容器
１２      開口部
２０      第２の容器
２２      開口部
３０      フィルター
３２      粘着層
３４      フィルター本体
４０      Ｏリング
５０      粘着シート
７０      開口
７２      枠
１２０、２２０    連結部
【図１】
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【図２】
2019026284.tif 000004
【図３】
2019026284.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
2019026284.tif 000008
【図７】
2019026284.tif 000009
【図８】
2019026284.tif 000010
【国際調査報告】
2019026284.tif 000011
2019026284.tif 000012
2019026284.tif 000013
2019026284.tif 000014
2019026284.tif 000015
2019026284.tif 000016
2019026284.tif 000017
2019026284.tif 000018