(57)【要約】  マツノマダラカミキリなどの生物的防除法として有用なムキヒゲホソカタムシ科昆虫の大量増殖を可能にする手段として、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫に、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与える工程を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法であって、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、発育ゼロ点以下の温度下において低温処理された蛹であることを特徴とするムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫に、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与える工程を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法であって、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、発育ゼロ点以下の温度下において低温処理された蛹であることを特徴とするムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項２】
ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、蛹化後48時間以内に低温処理された蛹であることを特徴とする請求項１に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項３】
ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする請求項１又は２に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項４】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫が、サビマダラオオホソカタムシ、又はクロサワオオホソカタムシであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項５】
発育ゼロ点以下の温度下において低温処理されたことを特徴とするゴミムシダマシ科昆虫の蛹。
【請求項６】
蛹化後48時間以内に低温処理されたことを特徴とする請求項５に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹。
【請求項７】
ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする請求項５又は６に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹。
【請求項８】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫の餌として用いられることを特徴とする請求項５乃至７のいずれか一項に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹。
【請求項９】
以下の（１）及び（２）の工程を含むことを特徴とする低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法、
（１）ゴミムシダマシ科昆虫の幼虫を飼育し、蛹を形成させる工程、
（２）発育ゼロ点以下の温度下において蛹を低温処理する工程。
【請求項１０】
蛹化後48時間以内に蛹を低温処理することを特徴とする請求項９に記載の低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法。
【請求項１１】
ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする請求項９又は１０に記載の低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法、低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹、及び低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
マツ材線虫病（pine wilt disease）によるマツの枯損は、わが国における最大の林業被害である。北米原産の侵入病害であり、1905年に長崎県で初めて確認された後にも被害地域の拡大が続き、2010年には青森県で初確認された。2016年の被害量（材積量）は44万m3であり、ピークとなった1979年の243 m3と比較して5分の1程度に減少したものの、被害量が増えている地域もあることから、対策と警戒は今後も継続する必要がある。また、1980年代には韓国、中国、台湾でも被害が確認され、さらには1999年にポルトガルで被害が確認されるなど、問題は徐々に世界規模化している。【０００３】
マツ材線虫病は、病原体であるマツノザイセンチュウ（Bursaphelenchus xylophilus）が感染することで引き起こされる。樹体内にセンチュウが侵入したマツでは、センチュウの増殖にともなって仮導管の空洞化が起こり、通水が阻害されることで最終的には枯死へと至る。在来のアカマツやクロマツ、リュウキュウマツは特に感受性が高く、感染すると70〜90％が枯死するとされる。感染したマツの治療は難しいため、感染の拡大を防ぐ対策が極めて重要となる。【０００４】
マツノザイセンチュウ自身の移動性は低いものの、マツノザイセンチュウはカミキリムシ類に便乗することで広範囲に分散する。感染の拡大を防ぐ対策としては、主たる媒介昆虫であるマツノマダラカミキリ（Monochamus alternates）の防除が最も有効であり、現在の防除方法は、成虫の発生時期に合わせた殺虫剤の広域散布である。しかし、ヘリコプター等を用いて有機リン系殺虫剤の航空散布する方法は環境負荷が大きく、周辺住人の健康被害も懸念されるため、代替防除法の確立が強く望まれている。【０００５】
サビマダラオオホソカタムシ（Dastarcus longulus Fairmaire又はD.longulus Sharp）はカミキリムシ類に捕食寄生する天敵昆虫であり、野外で捕獲されたマツノマダラカミキリの幼虫や蛹が高確率で寄生されていた事例もあることで注目された。サビマダラオオホソカタムシは成虫になって2〜3年で1,000個以上の卵を産み、人工飼料を用いた飼育も可能であるなど、天敵資材（生物農薬）としての適性が認められる。実際に、中国ではポプラ並木で問題となるツヤハダゴマダラカミキリ（Anoplophora glabripennis）の防除に利用されており、沖縄県でも近縁であるクロサワオオホソカタムシのマツノマダラカミキリの防除への利用が進められている。【０００６】
生物農薬を開発する場面では大量増殖法の確立が必須となる。特に、効率的かつ経済的な飼料の確保は重要であるが、サビマダラオオホソカタムシが利用するカミキリムシ類は、幼虫が生木の樹幹に穿孔するため大量飼育が難しい。クワ科を利用するキボシカミキリ（Psacothea hilaris hilaris）についてはカイコの人工飼料を用いた飼育が可能であるが、その労力やコストを軽視することが出来ない。前述の通り、本種は人工飼料による飼育も可能であるが（非特許文献１、非特許文献２）、現行の方法では孵化幼虫を一時的にハチノスツヅリガ（Galleria mellonella）へ寄生される必要があり、発育にともなう栄養不足に備えて人工飼料を追加するという煩雑な作業が必要である。こうした背景から、サビマダラオオホソカタムシの大量増殖へ向けては代替餌の検討が最も重要な課題となっていた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ogura et al., BioControl 44: 291-299, 1999
【非特許文献２】サビマダラオオホソカタムシの人工飼料による飼育法の改良, 小倉信夫 - 第 111 回日林学術講, 2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
サビマダラオオホソカタムシの代替餌には、１）サビマダラオオホソカタムシが餌として利用できること、２）容易にかつ低コストで大量飼育できるか、あるいは安価に継続的に入手できること、３）孵化幼虫から成虫まで餌交換の必要がないこと、といった条件が求められる。【０００９】
しかし、本願出願時において、このような条件を満たす代替餌は知られていなかった。本発明は、このような背景の下、サビマダラオオホソカタムシの大量増殖を可能にする手段を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、発育ゼロ点以下の温度下において低温処理されたツヤケシオオゴミムシダマシの蛹、特に凍結処理され、その後解凍されたツヤケシオオゴミムシダマシの蛹が、上記したサビマダラオオホソカタムシの代替餌としての条件を満たすことを見出した。【００１１】
サビマダラオオホソカタムシの幼虫は、複数種のカミキリムシ類の幼虫又は蛹に外部寄生することが知られており、専ら生きた幼虫や蛹にのみ寄生すると考えられていた。従って、サビマダラオオホソカタムシの幼虫が、凍結処理され、既に死んでいる蛹を餌として利用することは全く予想外のことであった。なお、ツヤケシオオゴミムシダマシの幼虫を撒餌又は爬虫類の飼育用餌として凍結した商品は従来より存在しているものの、ツヤケシオオゴミムシダマシ蛹については特段の用途が発見されておらず、また、幼虫を蛹にするためには個体飼育が必要となることから、蛹の状態で発育ゼロ点以下の温度下において低温処理する検討は、これまで行われていない。【００１２】
また、本発明者は、ツヤケシオオゴミムシダマシの蛹の低温処理を蛹化後48時間以内に行うことにより、サビマダラオオホソカタムシの寄生率を著しく向上できることも見出した。
本発明は、以上の知見に基づき、完成されたものである。【００１３】
即ち、本発明は、以下の〔１〕〜〔１１〕を提供する。
〔１〕  ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫に、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与える工程を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法であって、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、発育ゼロ点以下の温度下において低温処理された蛹であることを特徴とするムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。【００１４】
〔２〕ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、蛹化後48時間以内に低温処理された蛹であることを特徴とする〔１〕に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。【００１５】
〔３〕ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする〔１〕又は〔２〕に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。【００１６】
〔４〕ムキヒゲホソカタムシ科昆虫が、サビマダラオオホソカタムシ、又はクロサワオオホソカタムシであることを特徴とする〔１〕乃至〔３〕のいずれかに記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。【００１７】
〔５〕発育ゼロ点以下の温度下において低温処理されたことを特徴とするゴミムシダマシ科昆虫の蛹。【００１８】
〔６〕蛹化後48時間以内に低温処理されたことを特徴とする〔５〕に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹。【００１９】
〔７〕ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする〔５〕又は〔６〕に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹。【００２０】
〔８〕ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫の餌として用いられることを特徴とする〔５〕乃至〔７〕のいずれかに記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹。【００２１】
〔９〕以下の（１）及び（２）の工程を含むことを特徴とする低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法、
（１）ゴミムシダマシ科昆虫の幼虫を飼育し、蛹を形成させる工程、
（２）発育ゼロ点以下の温度下において蛹を低温処理する工程。【００２２】
〔１０〕蛹化後48時間以内に蛹を低温処理することを特徴とする〔９〕に記載の低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法。【００２３】
〔１１〕ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする〔９〕又は〔１０〕に記載の低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法。【００２４】
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2018-063535の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【発明の効果】
【００２５】
本発明は、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の新規な増殖方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明を詳細に説明する。
（Ａ）ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法
本発明のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法は、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫に、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与える工程を含むものであって、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、発育ゼロ点以下の温度下において低温処理された蛹であることを特徴とするものである。
【００２７】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫としては、オオホソカタムシ（Dastarcus）属に属する昆虫を挙げることができる。好ましいムキヒゲホソカタムシ科昆虫としては、サビマダラオオホソカタムシ（Dastarcus longulus Fairmaire又はD.longulus Sharp）、クロサワオオホソカタムシ（Dastarcus kurosawai Sasaji）を挙げることができる。
【００２８】
ゴミムシダマシ科昆虫としては、ゾフォバス（Zophobas）属、又はテネブリオ（Tenebrio）属に属する昆虫を挙げることができる。好ましいゴミムシダマシ科昆虫としては、ツヤケシオオゴミムシダマシ（Zophobas atratus Fabricius、ジャイアントミルワーム）、コメノゴミムシダマシ（Tenebrio obscurus Fabricius）、チャイロコメノゴミムシダマシ（Tenebrio molitor Linnaeus）を挙げることができる。これらの中でも、ツヤケシオオゴミムシダマシが特に好ましい。
【００２９】
本発明では、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として使用するが、蛹は発育ゼロ点以下の温度下で低温処理されたものを使用する。低温処理は、発育ゼロ点以下の温度下での処理であれば特に限定されず、例えば、蛹を5℃以下、好ましくは-20℃以下において1〜5時間静置するといった処理を挙げることができる。低温処理により、蛹を凍結させてもよく、この場合は解凍処理されたものを使用する。解凍処理も特に限定されず、タンパク質が変性しない程度に熱を加えて解凍してもよく、常温に放置して解凍してもよい。
【００３０】
低温処理は、蛹化から一定時間内に行うことが好ましい。これにより、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫のゴミムシダマシ科昆虫の蛹への寄生率を向上させることができるからである。具体的には、低温処理は、蛹化から48時間以内に行うことが好ましく、蛹化から24時間以内に行うことがより好ましく、蛹化から6時間以内に行うことが更に好ましい。また、蛹化から5時間、4時間、3時間、2時間、1時間以内に低温処理を行うことも可能である。
【００３１】
低温処理により、蛹への寄生率を向上させ得る理由は、完全には明らかになっていないが、以下に述べる理由がその一つであると推測される。ゴミムシダマシ科昆虫の蛹は、捕食されるのを防ぐため蛹の間も体を動かすが、この運動が寄生率を下げる原因となっていると考えられる。低温処理は、この運動を抑制することができ、それにより寄生率が向上すると考えられる。従って、このような蛹の運動を抑制できれば、低温処理以外の方法によっても、寄生率の向上を図ることができると考えられる。実際に、蛹を糸などで縛り、動けなくする方法により、寄生率の向上が確認されている。
【００３２】
ゴミムシダマシ科昆虫の蛹は、幼虫を飼育し、蛹化させることによって得ることができる。蛹化は、常法に従って行うことができる。例えば、ツヤケシオオゴミムシダマシの幼虫を密集状態で飼育すると蛹にならならいが、1頭ずつ隔離して飼育すると蛹になるので、そのような飼育方法により蛹化させることができる。ゴミムシダマシ科昆虫の幼虫は、市販されているので（例えば、ツヤケシオオゴミムシダマシ、コメノゴミムシダマシ、チャイロコメノゴミムシダマシなどの幼虫が販売されている。）、それを使用することができる。
【００３３】
ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与える方法は、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫がゴミムシダマシ科昆虫の蛹に寄生できるような方法であれば特に限定されず、例えば、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫とゴミムシダマシ科昆虫の蛹を同じ容器内に収容するという方法を挙げることができる。このように同じ容器内に収容することにより、通常、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫はゴミムシダマシ科昆虫の蛹に寄生するようになる。この際、容器内に収容するムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫とゴミムシダマシ科昆虫の蛹の頭数比は特に限定されないが、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹1頭に対し、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫を4〜8頭とするのが好ましい。また、収容する容器が広すぎたり、狭すぎたりする場合には、寄生率が低下する可能性があるので、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を1頭収容するのであれば、収容する容器の広さ（容器の底面積）は、7〜28mm2とするのが好ましい。
【００３４】
本発明のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法は、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与えること以外は、従来のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法と同様に行うことができる。ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の中でも、サビマダラオオホソカタムシの増殖や飼育方法はよく知られており、文献にも記載されているので（例えば、非特許文献２）、そのような文献に基づいて増殖を行うことができる。具体的には、温度を25〜28℃とし、湿度を40〜60％とし、日長条件を臨界日長よりも長い長日条件で増殖を行うことができる。
【００３５】
増殖させたムキヒゲホソカタムシ科昆虫の用途は限定されるものではないが、主たる用途は、カミキリムシ類に対する生物的防除である。例えば、サビマダラオオホソカタムシは、マツノマダラカミキリ、ツヤハダゴマダラカミキリ、キボシカミキリに対する生物的防除に利用できる可能性があり、クロサワオオホソカタムシは、マツノマダラカミキリに対する生物的防除に利用できる可能性がある。
【００３６】
本発明のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法の利点としては、以下の点を挙げることができる。
１）ツヤケシオオゴミムシダマシのような入手が容易で安価な生物を餌として使用して、増殖が可能である。
２）孵化幼虫から成虫まで餌の交換が必要なく、増殖に要する労力を軽減できる。
３）低温処理により凍結した蛹は長期保存が可能であり、餌が必要な時に適宜解凍して使用することができる。
【００３７】
（Ｂ）ゴミムシダマシ科昆虫の蛹
本発明のゴミムシダマシ科昆虫の蛹は、発育ゼロ点以下の温度下において低温処理されたことを特徴とするものである。
【００３８】
ゴミムシダマシ科昆虫の種類は、上記の「ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法」と同様のものでよく、また、低温処理方法、及び蛹の作製方法も、上記の「ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法」と同様に行うことができる。
【００３９】
本発明のゴミムシダマシ科昆虫の蛹の用途は限定されるものではないが、主たる用途は、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫の餌である。
【００４０】
本発明のゴミムシダマシ科昆虫の蛹は、低温処理により凍結する場合があるが、凍結状態の蛹及び凍結後解凍された蛹のいずれも、本発明のゴミムシダマシ科昆虫の蛹に含まれる。
【００４１】
なお、上述のように、本明細書においては、「ゴミムシダマシ科昆虫の蛹」という「物」を構造や特性ではなく、「発育ゼロ点以下の温度下において低温処理された」という製造方法によって特定しているが、これは、「ゴミムシダマシ科昆虫の蛹」は生物であることから、その構造や特性は極めて複雑であり、それらを特定する作業を行うことは、著しく過大な経済的支出や時間を必要とするからである。
【００４２】
（Ｃ）ゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法
本発明のゴミムシダマシ科昆虫の蛹の作製方法は、（１）ゴミムシダマシ科昆虫の幼虫を飼育し、蛹を形成させる工程、及び（２）発育ゼロ点以下の温度下において蛹を低温処理する工程を含むことを特徴とするものである。
【００４３】
ゴミムシダマシ科昆虫の種類は、上記の「ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法」と同様のものでよく、また、幼虫を飼育し、蛹を形成させる方法、蛹を低温処理する方法も、上記の「ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法」と同様に行うことができる。
【００４４】
作製されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹の用途は限定されるものではないが、主たる用途は、ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫の餌である。また、作製されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹は、低温処理により凍結する場合があるが、凍結状態のまま使用してもよく、解凍処理を行った後使用してもよい。
【実施例】
【００４５】
次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。【００４６】
（Ａ）材料と方法
（１）供試昆虫
a) サビマダラオオホソカタムシ
飼育用のスチロール製容器（W 90mm×D 178mm×H 45mm）は底面にJKワイパー（150-S，日本製紙クレシア(株)）を敷き、この上に産卵基質として八つ折りにしたティッシュペーパー、木製のシェルター（W 60mm×D 60mm×H 15mm）、人工飼料（非特許文献２）を置いた。1つの飼育容器には30〜70頭の成虫を収容し、気温28℃、日長16L:8D、湿度65±10％に設定した恒温槽（MIR-154S-PJ，パナソニックヘルスケア(株)）内で管理した。成虫は1週間に1度ずつ、蒸留水を含ませたワイピングクロス（同上）を敷いたガラス製シャーレ（φ 90mm×H 20mm）に8時間ほど収容して給水を行った。また、給水の際にはティッシュペーパーを交換し、産み付けられた卵塊を切り取ったティッシュペーパーの小片とともに回収した。回収した卵塊は小型のスチロール製容器（W 70mm×D 90mm×H 23mm）に収容し、恒温槽（同上）内で管理して孵化を待った。【００４７】
代替寄主としての有効性が示されているハチノスツヅリガ（Galleria mellonella）（サビマダラオオホソカタムシの人工飼料による飼育法, 小倉信夫 - 第 109 回日林講要, 1998）の終齢幼虫を、ガラス製バイアル瓶（φ 27mm×H 55mm）に1頭ずつ収容し、これに孵化5日以内の幼虫を5頭ずつ、絵筆を用いて封入して一次的な寄生を促した。およそ1週間後、底面にアルミホイルを敷いたガラス製シャーレ（同上）に人工飼料（非特許文献１、非特許文献２）を取り、この上に体長5〜10mmに達した幼虫を、概ね食べ尽くされたハチノスツヅリガとともに静置した。さらに1週間が経過すると、幼虫は15〜18mmに成長して吐糸して営繭し、営繭から3週間程経つと羽化した新成虫が出現した。【００４８】
b) ツヤケシオオゴミムシダマシ
株式会社さがら屋本舗（熊本県球磨郡）から購入した幼虫を供試した。入手した幼虫は、床材としてふすまを入れた大型プラスチック製容器（W 310mm×D434mm×H 246mm）に収容し、餌としてドッグフードおよびニンジン片を与えて維持した。実験に際しては体重1.0〜1.2gの幼虫を選別し、底面にバーミキュライトを5mm敷いたガラス製バイアル瓶（φ 27mm×H 55mm）に1頭ずつ収容して蛹化を促した。蛹化は24時間毎あるいは6時間毎に確認した。【００４９】
c) キボシカミキリは、2009年6月に鹿児島県内のクワ畑において採集した成虫から飼育個体群を確立し、これを累代飼育して供試した。雌雄の成虫をペアにして円筒型プラスチック製容器（φ 127mm×H 130mm）に収容し、餌と産卵基質を兼ねたヤマグワやイチジクなど数種クワ科植物の枝を与えた。クワ科植物の枝から割り出した幼虫は、底面にろ紙（No.1，φ 55mm，アドバンテック東洋(株)）を敷いたガラス製シャーレ（φ 64mm×H 19mm）に収容し、餌としてシルクメイト2S（日本農産工業(株)）を与えた。成熟した幼虫の蛹化は24時間毎に確認した。【００５０】
（２）寄生実験
a) 寄生の可否
累代飼育から得られたツヤケシオオゴミムシダマシおよびキボシカミキリの蛹を、蛹化後24時間以内に回収し、ろ紙（No.1，φ 55mm，アドバンテック東洋(株)）を敷いたガラス製シャーレ（φ 64mm×H 19mm）に収容した。孵化5日以内のサビマダラオオホソカタムシの孵化幼虫を、絵筆を用いて上記のシャーレに8頭ずつ放飼し、蓋を閉じてパラフィルム（登録商標）で密封した。寄生の成否は営繭で判断し、繭数を計数して寄生率を算出した。両種について10反復を行った。【００５１】
b) 冷凍処理の効果
ツヤケシオオゴミムシダマシの蛹を蛹化後24時間以内に回収し、チャック付きのビニール袋（94mm×72mm）に1頭ずつ封入し、-30℃の冷凍庫（MDF-U538D-PJ，パナソニックヘルスケア(株)）内に1〜5日間静置することで冷凍処理を行った。冷凍した蛹は常温で解凍してから実験に供試した。対照には蛹化後24時間以内に回収した蛹を、冷凍処理を行わずに用いた。両条件の蛹を、ガラス製バイアル瓶（φ 27mm×H 55mm）に1頭ずつ収容し、孵化5日以内のサビマダラオオホソカタムシの孵化幼虫を、絵筆を用いて5頭ずつ放飼し、パラフィルム（登録商標）で密封した。寄生の成否は営繭で判断し、繭数を計数して寄生率を算出した。冷凍処理は19反復、対照は20反復を行った。【００５２】
サビマダラオオホソカタムシは蛹の尾端の形状からのみ雌雄を判別できるため、営繭に向けた吐糸を開始して10日後に繭を解剖し、蛹を採取した。雌雄の判別後には生体重を測定し（AUW220D，島津製作所）、その後はキムワイプ（S-200，日本製紙クレシア(株)）の小片とともにゼラチン製カプセル（#4，(株)松屋）に封入して羽化を待った。羽化に成功した成虫はゼラチン製カプセルから取り出し、実体顕微鏡を用いて背面から撮影した。同倍率で撮影した定規を基準とし、フリー画像解析ソフト（Image-J）を用いて前翅長および前胸背板幅を測定した。【００５３】
c) 蛹化後時間の影響
ツヤケシオオゴミムシダマシは蛹化を6時間毎に確認し、蛹化時間を記録して0時間後（蛹化6時間以内）、18時間後（蛹化24時間後）、1日後（蛹化1〜2日後）、2日後（蛹化2〜3日後）、3〜4日後（蛹化3〜5日後）に回収した。それぞれの蛹はチャック付きのビニール袋（同上）に1頭ずつ封入し、-30℃の冷凍庫（同上）内に1〜5日間静置することで冷凍処理を行った。冷凍した蛹は常温で解凍した後に、ガラス製バイアル瓶（同上）に1頭ずつ収容し、孵化5日以内のサビマダラオオホソカタムシの孵化幼虫を、絵筆を用いて5頭ずつ放飼し、パラフィルム（登録商標）で密封した。寄生の成否は営繭で判断し、繭数を計数して寄生率を算出した。各条件について、それぞれ21、23、23、26、19反復を行った。【００５４】
蛹は上記と同様に雌雄を判別し、生体重を測定した後にゼラチン製カプセルに封入した。また、羽化に成功した成虫についても、上記と同様の方法で前翅長および前胸背板幅を測定した。【００５５】
（Ｂ）結果
（１）寄生の可否【００５６】
ツヤケシオオゴミムシダマシ及びキボシカミキリの蛹に対するサビマダラオオホソカタムシの幼虫の寄生率を下表に示す。【００５７】
【表１】
2019189357.tif 000002
【００５８】
表に示すように、キボシカミキリの蛹と比較し、ツヤケシオオゴミムシダマシの蛹に対する寄生率は著しく低かった。このため、寄生率を向上させるための何らかの処理が必要であると考えられた。【００５９】
また、寄生率の低さは、実験方法に原因がある可能性も考えられたので、この実験では、サビマダラオオホソカタムシの幼虫をシャーレ内で飼育したが、以後の実験ではバイアル瓶内で飼育することとした。【００６０】
（２）冷凍処理の効果
寄生率を向上させるため、ツヤケシオオゴミムシダマシの蛹を冷凍処理し、この蛹に対するサビマダラオオホソカタムシの幼虫の寄生率を調べた。結果を下表に示す。【００６１】
【表２】
2019189357.tif 000003
【００６２】
表に示すように、冷凍処理をすることにより、寄生率が大きく向上した。この結果から、蛹への冷凍処理は、寄生率を向上させるための手段として非常に有効なものであると考えられる。【００６３】
（３）蛹化後時間の影響
蛹化後時間の影響を調べるため、蛹化から冷凍処理までの時間を変えて寄生率を調べた。結果を下表に示す。【００６４】
【表３】
2019189357.tif 000004
【００６５】
表に示すように、蛹化から時間が経過するに従い、寄生率は低下していった。表２のコントロールと比較から48時間以内の凍結処理で寄生率は向上することが分かる。蛹化後24時間以内、特に6時間以内に冷凍処理を行うと、寄生率は高かった。【００６６】
（４）クロサワオオホソカタムシの寄生率
サビマダラオオホソカタムシの近縁種であるクロサワオオホソカタムシについても、冷凍処理したツヤケシオオゴミムシダマシの蛹に対する幼虫の寄生率を調べた。結果を下表に示す。【００６７】
【表４】
2019189357.tif 000005
【００６８】
表に示すように、クロサワオオホソカタムシの幼虫も、サビマダラオオホソカタムシの幼虫と同様に、冷凍処理したツヤケシオオゴミムシダマシの蛹に寄生可能であった。このことから、冷凍処理したツヤケシオオゴミムシダマシの蛹は、クロサワオオホソカタムシの増殖にも利用できると考えられる。【００６９】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫は、マツノマダラカミキリなどの害虫に対する生物的防除法として有用なので、本発明は、生物的防除に関連する産業に利用可能である。
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月4日(2019.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫に、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹を餌として与える工程を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法であって、ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、５℃以下の温度下において低温処理された蛹であることを特徴とするムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項２】
ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、蛹化後４８時間以内に低温処理された蛹であることを特徴とする請求項１に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項３】
ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする請求項１又は２に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項４】
ムキヒゲホソカタムシ科昆虫が、サビマダラオオホソカタムシ、又はクロサワオオホソカタムシであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の増殖方法。
【請求項５】
５℃以下の温度下において低温処理されたゴミムシダマシ科昆虫の蛹を含むことを特徴とするムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫用餌。
【請求項６】
ゴミムシダマシ科昆虫の蛹が、蛹化後４８時間以内に低温処理された蛹であることを特徴とする請求項５に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫用餌。
【請求項７】
ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする請求項５又は６に記載のムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫用餌。
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
以下の（１）及び（２）の工程を含むことを特徴とするゴミムシダマシ科昆虫の蛹を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫用餌の作製方法、
（１）ゴミムシダマシ科昆虫の幼虫を飼育し、蛹を形成させる工程、
（２）５℃以下の温度下において蛹を低温処理する工程。
【請求項１０】
蛹化後４８時間以内に蛹を低温処理することを特徴とする請求項９に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫用餌の作製方法。
【請求項１１】
ゴミムシダマシ科昆虫が、ツヤケシオオゴミムシダマシであることを特徴とする請求項９又は１０に記載のゴミムシダマシ科昆虫の蛹を含むムキヒゲホソカタムシ科昆虫の幼虫用餌の作製方法。
【国際調査報告】
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