(57)【要約】  本発明は、魚に対するアレルギーの新規抗原、魚に対するアレルギーの診断方法および診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、当該抗原が除去された魚、魚卵、当該魚もしくは当該魚卵加工品、または当該魚卵を産むもしくは当該魚卵から生まれた魚、ならびに対象物における魚抗原の有無を判定するためのテスターを提供する。  本発明はまた、抗原のエピトープを含むポリペプチド、当該ポリペプチドを含むアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、ならびに、当該ポリペプチドを含む抗原が除去若しくは低減された原料又は加工品に関する。本発明はさらに、対象物における抗原の有無を判定するためのテスターに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合するポリペプチドであって、以下：
（１α）配列番号１５０〜１５４、２０５〜２２７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（２α）配列番号１５５、２２８〜２３０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（３α）配列番号１５６、１５７、２３１〜２３７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（４α）配列番号１５８、１５９、２３８〜２４７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（５α）配列番号１６０〜１６２、２４８〜２６１からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（６α）配列番号１６３〜１６７、２６２〜２７９からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（７α）配列番号１６８〜１７１、２８０〜３００からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（８α）配列番号１７２〜１７４、３０１〜３１０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（９α）配列番号１７５〜１７８、３１１〜３２６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１０α）配列番号１７９〜１８５、３２７〜３６５からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１１α）配列番号１８６、３６６〜３７０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１２α）配列番号１８７〜１９６、３７１〜４１３からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１３α）配列番号１９７、４１４〜４１７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１４α）配列番号１９８、４１８〜４２０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１５α）配列番号１９９、４２１〜４２５からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１６α）配列番号２００〜２０２、４２６〜４３６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１７α）配列番号２０３、２０４、４３７〜４４４からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
のいずれか一つである、前記ポリペプチド。
【請求項２】
アミノ酸残基数が５００以下である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む、アレルギーの診断キット。
【請求項４】
アレルギーの診断用組成物であって、請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つ、を抗原として含む、前記診断用組成物。
【請求項５】
対象のアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記方法。
【請求項６】
請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む医薬組成物。
【請求項７】
アレルギーを治療するための、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター。
【請求項９】
以下のいずれかのプライマー：
（ａ）請求項１又は２に記載のポリペプチドをコードする核酸の塩基配列の一部及び／またはその相補鎖の一部を含むプライマー；または
（ｂ）配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つの一部であるプライマーおよび／または配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つと相補的な配列の一部であるプライマー；
を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター。
【請求項１０】
抗原が除去若しくは低減されていることを特徴とする原料又は加工品であって、当該抗原は請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記原料又は加工品。
【請求項１１】
抗原が除去若しくは低減されている加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去若しくは低減されていることを確認するステップを有し、ここで当該抗原は請求項１又は２に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚に対するアレルギーの新規抗原に関する。本発明はまた、魚に対するアレルギーの診断キット、診断用組成物、および診断方法に関する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、および当該抗原が除去または低減された魚、魚卵、当該魚もしくは当該魚卵加工品、または当該魚卵を産むもしくは当該魚卵から生まれた魚に関する。本発明はさらに、対象物における魚抗原の有無を判定するためのテスターに関する。【０００２】
本発明はまた、抗原のエピトープを含むポリペプチドに関する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含むアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法に関する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、及び当該ポリペプチドが除去若しくは低減された原料又は加工品に関する。本発明はさらに、当該ポリペプチドが除去若しくは低減された加工品の製造方法に関する。本発明はさらにまた、対象物における当該ポリペプチドを含む抗原の有無を判定するためのテスターに関する。
【背景技術】
【０００３】
アレルギー患者の血液および組織中では、特定の抗原に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。このＩｇＥ抗体と特定の抗原の相互作用により生じた生理学的結果によりアレルギー反応が惹起される。【０００４】
従来のアレルギー検査薬においては、単にアレルゲン候補の食品・食材等をすりつぶして抗原試薬を作成していることが多い（特許文献１）。このため、試薬中には無数のタンパク質が含まれており、個々のタンパク質の含有量は非常に少ないものであった。このため、従来の抗原試薬中に含まれる多数のタンパク質の中で、ＩｇＥ抗体との結合について陽性反応が判定可能な閾値を超える含有量のタンパク質が当該アレルギー反応を引き起こす特定の抗原タンパク質（アレルゲンコンポーネント）であった場合にのみ、アレルギー検査における陽性反応を検出することが可能であった。逆に、食品・食材等のアレルゲン中の含有量が少ないアレルゲンコンポーネントにＩｇＥ抗体が結びつく患者については、従来のアレルギー検査薬を用いても陽性反応が判定できず、診断効率は十分に高いとはいえない状態であった。【０００５】
また、アレルギー反応の症状や重篤度は、アレルゲンコンポーネントの含有量とは必ずしも相関しない。アレルゲン候補の食品・食材中に微量に含まれるアレルゲンコンポーネントに患者のＩｇＥ抗体が反応する場合であってもアレルギー症状が現れたり、重篤度に関与したりする場合がある。【０００６】
食品・食材を構成する一つ一つのタンパク質に対するＩｇＥ抗体を調べることにより、診断に直結する感作と汎アレルゲン等による交差抗原性に基づく感作を区別して診断効率を上げる試みも進められている。魚アレルゲンに関しては、現在、以下の表に示すものなどが知られている（非特許文献１〜４）。【０００７】
【表１】
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しかしながら、アレルギー検査の信頼度を高めるためには、アレルゲン候補の食品・食材において、アレルゲンコンポーネントを網羅的に特定する必要があるところ、上記アレルゲンコンポーネントの測定による患者検出率はまだまだ不十分である。魚の新規アレルゲンを同定することは、診断薬の精度を高めるだけでなく、低アレルゲン食品、低アレルゲン食材や治療薬のターゲットとしても非常に重要である。【０００８】
一方、タンパク質の分離・精製に関しては、従来、細胞抽出物などからタンパク質や核酸を分離・精製する方法が種々に検討されてきている。塩濃度を利用した透析、遠心分離などはその一例であるといえる。【０００９】
また、タンパク質や核酸の残基が有する電荷や、分子量の違いを利用した精製方法も多数検討されている。電荷を利用した精製方法としては、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーや等電点電気泳動を例示できる。分子量の違いを利用した精製方法としては遠心分離、分子量ふるいによるカラムクロマトグラフィーやＳＤＳ−ＰＡＧＥ(ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を例示できる。【００１０】
近年、少量のサンプルから多様なタンパク質を分離精製する方法として、１次元目に等電点電気泳動を行い、２次元目にＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う２次元電気泳動法が用いられている。出願人らはこれまでに、分離能が高い２次元電気泳動法を開発してきた（特許文献２〜５）。【００１１】
アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体はアレルゲンコンポーネント中の特定のアミノ酸配列であるエピトープを認識して結合する。しかしながら、アレルゲンコンポーネントについてエピトープまで解析されている例は若干数あるものの（非特許文献５）、極めて少ないのが現状である。また、エピトープを含むポリペプチドを利用したアレルギーの診断キットも現時点では市場に存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００２−２８６７１６
【特許文献２】特開２０１１−３３５４４
【特許文献３】特開２０１１−３３５４６
【特許文献４】特開２０１１−３３５４７
【特許文献５】特開２０１１−３３５４８
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Allergen Nomenclature, WHO/IUIS Allergen Nomenclature Sub-Committee, [平成２８年６月９日検索］，インターネット＜URL: http://www.allergen.org/search.php?allergenname=&allergensource=&TaxSource=Animalia+Chordata&TaxOrder=&foodallerg=1&bioname= ＞
【非特許文献２】Kuehn, A., et al., Clin. Exp. Allergy, (2013), Vol.43, No.7, pp.811-22
【非特許文献３】Gonzalez-Mancebo, E., et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., (2014), Vol.113, No.1, pp.114-115
【非特許文献４】van der Ventel, M. L., et al., Mol. Immunol., (2011), Vol.48, No.4, pp.637-646
【非特許文献５】Matsuo, H., et al., J. Biol. Chem., (2004), Vol.279, No.13, pp.12135-12140
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、魚に対するアレルギーの新規抗原を提供する。本発明はまた、魚に対するアレルギーの診断方法および診断キットを提供する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、および当該抗原が除去または低減された魚、魚卵、当該魚もしくは当該魚卵加工品、または当該魚卵を産むもしくは当該魚卵から生まれた魚を提供する。本発明はさらに、対象物における魚抗原の有無を判定するためのテスターを提供する。【００１５】
本発明はまた、抗原のエピトープを含むポリペプチドを提供する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含むアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法を提供する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、及び当該ポリペプチドを含む抗原が除去若しくは低減された原料又は加工品を提供する。本発明はさらに、当該抗原が除去若しくは低減された加工品の製造方法に関する。本発明はさらにまた、対象物における当該ポリペプチドを含む抗原の有無を判定するためのテスターを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、上記課題を解決するために魚に対するアレルギーの原因抗原特定について鋭意研究を行った。その結果、魚アレルギーを有する患者の血清中のＩｇＥ抗体が特異的に結合する新規な抗原を特定することに成功した。当該知見に基づいて、本発明は完成された。【００１７】
すなわち、一態様において、本発明は以下のとおりであってよい。【００１８】
［１］魚アレルギーの診断キットであって、以下（１０）〜（１４）のタンパク質の少なくとも一つ：
（１０）（１０Ａ）ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライク（myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like）またはその変異体であって、魚に対するアレルギーの抗原である、以下の（１０Ａ-ａ）〜（１０Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１０Ａ-ａ）配列番号７０において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０Ａ-ｂ）配列番号７０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０Ａ-ｃ）配列番号６９において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０Ａ-ｄ）配列番号６９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１０Ａ-ｅ）配列番号６９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；または
（１０Ｂ）配列番号７０〜１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１１）（１１Ａ）グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライク（glycogen phosphorylase, muscle form-like）またはその変異体であって、魚に対するアレルギーの抗原である、以下の（１１Ａ-ａ）〜（１１Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１１Ａ-ａ）配列番号１１０において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１Ａ-ｂ）配列番号１１０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１Ａ-ｃ）配列番号１０９において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１Ａ-ｄ）配列番号１０９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１１Ａ-ｅ）配列番号１０９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；または
（１１Ｂ）配列番号１１０〜１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１２）（１２Ａ）ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライク（myosin-binding protein C, fast-type-like）またはその変異体であって、魚に対するアレルギーの抗原である、以下の（１２Ａ-ａ）〜（１２Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１２Ａ-ａ）配列番号１２１において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１２Ａ-ｂ）配列番号１２１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１２Ａ-ｃ）配列番号１２０において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１２Ａ-ｄ）配列番号１２０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１２Ａ-ｅ）配列番号１２０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；または
（１２Ｂ）配列番号１２１〜１３６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１３）（１３Ａ）ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアル（ATP synthase subunit beta, mitochondrial）またはその変異体であって、魚に対するアレルギーの抗原である、以下の（１３Ａ-ａ）〜（１３Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１３Ａ-ａ）配列番号１３８において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３Ａ-ｂ）配列番号１３８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３Ａ-ｃ）配列番号１３７において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３Ａ-ｄ）配列番号１３７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１３Ａ-ｅ）配列番号１３７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；または
（１３Ｂ）配列番号１３８〜１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１４）（１４Ａ）Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライク（L-lactate dehydrogenase A chain-like）またはその変異体であって、魚に対するアレルギーの抗原である、以下の（１４Ａ-ａ）〜（１４Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１４Ａ-ａ）配列番号１４４において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４Ａ-ｂ）配列番号１４４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４Ａ-ｃ）配列番号１４３において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４Ａ-ｄ）配列番号１４３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１４Ａ-ｅ）配列番号１４３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；または
（１４Ｂ）配列番号１４４〜１４９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
を抗原として含む、前記診断キット。【００１９】
［２］魚アレルギーの診断用組成物であって、上記［１］において（１０）〜（１４）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを抗原として含む、前記診断用組成物。【００２０】
［３］対象の魚アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が魚アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、上記［１］において（１０）〜（１４）として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法。【００２１】
［４］上記［１］において（１０）〜（１４）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを含む医薬組成物。【００２２】
［５］魚アレルギーを治療するための、上記［４］に記載の医薬組成物。【００２３】
［６］抗原が除去または低減されていることを特徴とする魚または魚加工品であって、当該抗原は上記［１］において（１０）〜（１４）として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記魚または魚加工品。【００２４】
［７］上記［１］において（１０）〜（１４）として特定されるタンパク質の少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における魚抗原の有無を判定するためのテスター。【００２５】
［８］配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つの一部と相補的な塩基配列を有するプライマーを含むことを特徴とする、対象物における魚に対するアレルギーの原因となる抗原の有無を判定するためのテスター。【００２６】
［９］魚由来の抗原であって、上記［１］において（１０）〜（１４）として特定されるタンパク質の少なくとも１つであり、そして魚に対するアレルギーの原因となる、前記抗原。【００２７】
本発明者らはまた、上記抗原を含む魚由来の抗原についてのエピトープを見出すことにも成功した。【００２８】
エピトープは比較的短いアミノ酸配列を有するものであるため、異なるアレルゲンコンポーネントにも同一のアミノ酸配列が存在すれば、当該ＩｇＥ抗体は、複数のアレルゲンコンポーネントに結合可能である。異なるアレルゲンコンポーネントに共通するエピトープが存在する結果、両者にアレルギー患者のＩｇＥ抗体が結合するため、その抗原は交差性を有する。したがって、本願により特定されたエピトープは、交差性を含めたアレルギーの診断や治療、および当該エピトープを含む複数のアレルゲンコンポーネントの検出等を可能にするものである。【００２９】
当該知見に基づいて、本発明は完成された。すなわち、別の態様において、本発明は以下のとおりであってよい。【００３０】
［１０］アレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合するポリペプチドであって、以下：
（１α）配列番号１５０〜１５４、２０５〜２２７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（２α）配列番号１５５、２２８〜２３０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（３α）配列番号１５６、１５７、２３１〜２３７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（４α）配列番号１５８、１５９、２３８〜２４７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（５α）配列番号１６０〜１６２、２４８〜２６１からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（６α）配列番号１６３〜１６７、２６２〜２７９からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（７α）配列番号１６８〜１７１、２８０〜３００からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（８α）配列番号１７２〜１７４、３０１〜３１０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（９α）配列番号１７５〜１７８、３１１〜３２６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１０α）配列番号１７９〜１８５、３２７〜３６５からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１１α）配列番号１８６、３６６〜３７０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１２α）配列番号１８７〜１９６、３７１〜４１３からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１３α）配列番号１９７、４１４〜４１７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１４α）配列番号１９８、４１８〜４２０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１５α）配列番号１９９、４２１〜４２５からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１６α）配列番号２００〜２０２、４２６〜４３６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（１７α）配列番号２０３、２０４、４３７〜４４４からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド；
のいずれか一つである、前記ポリペプチド。【００３１】
［１１］アミノ酸残基数が５００以下である、上記［１０］に記載のポリペプチド。【００３２】
［１２］上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む、アレルギーの診断キット。【００３３】
［１３］アレルギーの診断用組成物であって、上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つ、を抗原として含む、前記診断用組成物。【００３４】
［１４］対象のアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記方法。【００３５】
［１５］上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む医薬組成物。【００３６】
［１６］アレルギーを治療するための、上記［１５］に記載の医薬組成物。【００３７】
［１７］上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター。【００３８】
［１８］以下のいずれかのプライマー：
（ａ）上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドをコードする核酸の塩基配列の一部及び／またはその相補鎖の一部を含むプライマー；または
（ｂ）配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つの一部であるプライマーおよび／または配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つと相補的な配列の一部であるプライマー；
を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター。【００３９】
［１９］抗原が除去若しくは低減されていることを特徴とする原料又は加工品であって、当該抗原は上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記原料又は加工品。【００４０】
［２０］抗原が除去若しくは低減されている加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去若しくは低減されていることを確認するステップを有し、ここで当該抗原は上記［１０］又は［１１］に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記製造方法。
【発明の効果】
【００４１】
本発明により、魚に対するアレルギーの新規抗原を提供することができる。本発明において魚アレルギーを引き起こす新規な抗原（アレルゲンコンポーネント）が同定されたことから、魚に対するアレルギーの高感度な診断方法および診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、当該抗原が除去または低減された魚、魚卵、当該魚もしくは当該魚卵加工品、または当該魚卵を産むもしくは当該魚卵から生まれた魚、ならびに対象物における魚抗原の有無を判定するためのテスターを提供することができる。【００４２】
また、本発明により、抗原のエピトープを含む新規ポリペプチドを提供することができる。本発明のポリペプチドを利用することにより、アレルギーの高感度な診断キット、診断用組成物、及び診断方法、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、対象物における当該ポリペプチドを含む抗原の有無を判定するためのテスター、並びに当該ポリペプチドが除去若しくは低減された原料又は加工品、及びその加工品の製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１Ａ】図１Ａは、サケの身の抽出物に含まれるタンパク質について、二次元電気泳動によるタンパク質の泳動パターンを示すゲルの写真（左図）および二次元電気泳動パターンに対して、魚アレルギー患者１の血清を用いたイムノブロットの写真（右図）である。ゲルの写真の左側のバンドは分子量マーカーのバンドであり、ゲルの写真の左側の数値は各分子量マーカーの分子量（ＫＤａ）である。写真上部の数値は、等電点を表す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、サケの身の抽出物に含まれるタンパク質についての二次元電気泳動パターンに対して、魚アレルギー患者２の血清を用いたイムノブロットの写真（左図）および魚アレルギー患者３の血清を用いたイムノブロットの写真（右図）である。各写真上部の数値は、等電点を表す。
【図２】図２は、１０種類の魚の身の抽出物に含まれるタンパク質の二次元電気泳動パターンに対して、魚アレルギー患者１の血清を用いたイムノブロットの写真である。
【図３】図３は、１０種類の魚の身の抽出物に含まれるタンパク質の二次元電気泳動パターンに対して、魚アレルギー症状を有さない被験者（非魚アレルギー被験者）の血清を用いたイムノブロットの写真である。
【図４】図４は、６種類の魚の身の抽出物に含まれるタンパク質の二次元電気泳動パターンに対して、魚アレルギー患者４の血清を用いたイムノブロットの写真である。
【図５】図５は、サケのヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテイン由来のアミノ酸配列「SMVLVKMKEIAEAYL」を有するエピトープＮｏ．１１（配列番号１６０）のペプチドと、ヒラメのヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテイン由来のアミノ酸配列「AMVLVKMKETAEAYL」を有するペプチドに対して、それぞれ魚アレルギー患者および非魚アレルギー被験者の血清を用いた化学発光の測定結果を示す図である。縦軸の数値は、波長４５０ｎｍ光に対する吸光度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
以下に本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４５】
本明細書で特段に定義されない限り、本発明に関連して用いられる科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。
【００４６】
本明細書においてアレルギーとは、ある抗原に感作されている生体に、再びその抗原が入った場合に起こる、生体に不都合な過敏反応を示す状態をいう。抗原と接触した場合、あるいは当該抗原を摂取した場合に、アレルギー反応を生じ得る。ここで接触は物体に触れることをいい、特に人体に対しては皮膚、粘膜（眼、口唇等）等に付着することをいう。また、摂取は体内に取り込むことをいい、吸入、経口等の手段で取り込むことをいう。一般的に食物を摂取した場合に生じるアレルギー反応を特に食物アレルギーという。好ましい態様においてアレルギーは食物アレルギーであってもよい。食物におけるアレルギー疾患の多くにおいて、血液および組織で抗原に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。ＩｇＥ抗体は、肥満細胞または好塩基球と結合する。当該ＩｇＥ抗体に特異的な抗原が再びアレルギー疾患患者の体内に入ると、当該抗原は肥満細胞または好塩基球と結合したＩｇＥ抗体と組み合わさり、そして当該ＩｇＥ抗体が細胞表面で架橋し、ＩｇＥ抗体−抗原相互作用の生理学的効果を生ずる。これらの生理学的効果として、ヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、好酸球遊走因子または各種ロイコトリエン等の放出が挙げられる。これらの放出物質は、ＩｇＥ抗体と特定の抗原の組み合わせにより起こるアレルギー反応を惹起する。詳しくはＩｇＥ抗体は、特定の抗原中の特定のアミノ酸配列であるエピトープを認識して結合し、当該抗原によるアレルギー反応は、上記の経路を通じて現れる。
【００４７】
本発明が対象とするアレルギーは、使用するエピトープを含むアレルゲンに対するアレルギーである限り、特に限定されない。そのようなアレルギーは、モクセイ科、キク科、イネ科、パイナップル科、クルミ科、ウリ科、マメ科などの植物に対するアレルギー、キジ科、ウシ科などの動物に対するアレルギー、アジ科、タイ科、サケ科、クルマエビ科、タラバガニ科、マダコ科、マルスダレガイ科などの魚介類に対するアレルギー、アニサキス科などの寄生虫に対するアレルギーを含んでいてもよい。モクセイ科の植物としてはオリーブ（学名olea europaea）等が挙げられ、キク科の植物としてはチョウセンアザミ（学名Cynara scolymus）等が挙げられ、イネ科の植物としてはパンコムギ（学名Triticum aestivum）、タルホコムギ（学名Aegilops tauschii）等が挙げられ、パイナップル科の植物としてはパイナップル（学名Ananas comosus）等が挙げられ、クルミ科の植物としてはクルミ（学名Juglans regia）等が挙げられ、ウリ科の植物としてはカボチャ（学名Cucurbita moschata）等が挙げられ、マメ科の植物としてはダイズ（学名Glycine max）等が挙げられる。キジ科の動物としてはウズラ（学名Conturnix japonica）、シチメンチョウ（学名Meleagris gallopavo）等が挙げられ、ウシ科の動物としてはウシ（学名Bos taurus）等が挙げらる。アジ科の魚介類としてはカンパチ（学名Seriola dumerili）等が挙げられ、タイ科の魚介類としてはマダイ（学名Pagrus major）等が挙げられ、、サケ科の魚介類としてはニジマス（学名Oncorhynchus mykiss）等が挙げられる。クルマエビ科の魚介類としてはバナメイエビ（学名Litopenaeus vannamei）等が挙げられ、タラバガニ科の魚介類としてはタラバガニ（学名Paralithodes camtschaticus）等が挙げられ、マダコ科の魚介類としてはミズダコ（学名Enteroctopus dofleini）等が挙げられ、マルスダレガイ科の魚介類としてはアサリ（学名Ruditapes philippinarum）等が挙げられる。アニサキス科の寄生虫としてはアニサキス（学名Anisakis simplex）等が挙げられる。
【００４８】
本明細書において魚とは、魚類のうち硬骨魚類、軟骨魚類、好ましくは硬骨魚類、より好ましくはサケ目、スズキ目、ウナギ目、タラ目、カレイ目に属するもの、さらに好ましくはサケ科、アジ科、アナゴ科、タイ科、サバ科、タラ科、ウナギ科、ヒラメ科に属するもの、さらにより好ましくはサケ、アジ、アナゴ、クロダイ、サバ、タイ、タラ、ハマチ、ウナギ、ヒラメを意味する。魚は食用のものであってもよい。
【００４９】
本明細書において「魚卵」とは、魚の卵を意味し、主に鳥類の卵を意図する「卵」と区別して表示する。魚卵は食用のものであってもよい。
【００５０】
本明細書において魚に対するアレルギーとは、魚に含まれるタンパク質等を抗原として生じるアレルギー反応を有する状態をいう。魚に対するアレルギーは、魚に含まれる抗原と接触した場合、あるいは当該抗原を摂取した場合に、アレルギー反応を生じ得る。一般的に食物を摂取した場合に生じるアレルギー反応を特に食物アレルギーという。魚に対するアレルギーは食物アレルギーであってもよい。
【００５１】
本明細書において抗原とは、アレルギー反応を惹起させる物質であり、アレルゲンコンポーネントとも称される。抗原は好ましくはタンパク質である。
【００５２】
本明細書においてタンパク質とは、天然のアミノ酸がペプチド結合により連結された構造を有する分子である。タンパク質に含まれるアミノ酸の数は特に限定されない。本明細書において「ポリペプチド」の用語もまた、天然のアミノ酸がペプチド結合により連結された構造を有する分子を意味する。ポリペプチドに含まれるアミノ酸の数は特に限定されない。「ポリペプチド」は、「タンパク質」を含む概念である。また、２〜５０個程度のアミノ酸がペプチド結合により連結されたポリペプチドを、特にペプチドと呼ぶことがある。また、アミノ酸に関して光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示す。本明細書で用いるタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのアミノ酸配列の表記法は、標準的用法及び当業界で慣用されている表記法に基づき、アミノ酸の一文字表記で表され、左方向はアミノ末端方向であり、そして右方向はカルボキシ末端方向である。なお、アミノ酸の一文字表記においてＸは、両端のアミノ酸と結合できるアミノ基およびカルボキシル基を有する物質であればいずれでもよく、特に２０種類の天然のアミノ酸のいずれかであってもよいことを表す。Ｘで表される残基は、実施例１０に示すアラニンスキャンにより、アラニンに置換してもアレルギー患者のＩｇＥ抗体への結合性が維持された部位のアミノ酸残基である。このような部位については、他のいずれかのアミノ酸に置換した場合も当該ＩｇＥ抗体への結合性を維持する蓋然性が高いことは、当業者に周知である。
【００５３】
抗原の特定
魚に含まれるタンパク質について、上記の手法を利用して魚に対するアレルギーの抗原の特定を行った。具体的には、魚の身からタンパク質を抽出し、下記の条件で２次元電気泳動に供した。
【００５４】
１次元目の電気泳動は、等電点電気泳動用ゲルとして、ゲル長が５〜１０ｃｍの範囲内であって、ゲルのｐＨ範囲が３〜１０であり、泳動方向に対するゲルのｐＨ勾配が、ゲルの全長を１とし、ｐＨ５までのゲル長をａ、ｐＨ５〜７のゲル長をｂ、ｐＨ７以上のゲル長をｃとした場合において、ａが０．１５〜０．３の範囲内、ｂが０．４〜０．７の範囲内、ｃが０．１５〜０．３の範囲内であるゲルを用いて、具体的には、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社（以下、ＧＥ社と省略する）製のＩＰＧゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL)を用いて等電点泳動を行った。電気泳動機器は、ＧＥ社製のIPGphorを用いた。電気泳動機器の電流値の上限をゲル１本当たり７５μＡに設定し、電圧プログラムを、（１）３００Ｖ定電圧で７５０Ｖｈｒまで定電圧工程を行い（当該工程終了前の泳動３０分間の電流変化幅が５μＡであった）、（２）３００Ｖｈｒかけて１０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（３）更に４５００Ｖｈｒかけて５０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（４）その後５０００Ｖ定電圧で総Ｖｈｒが１２０００になるまで、１次元目の等電点電気泳動を行った。
【００５５】
２次元目の電気泳動は、泳動方向基端部のゲル濃度が３〜６％に設定され、泳動方向先端側の部分のゲル濃度が泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定されたポリアクリルアミドゲルを用いて、具体的にはlife technologies社製のNuPAGE 4-12% Bris-Tris Gels IPG well mini 1mmを用いてSDS-PAGEを行った。電気泳動機器は、life technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを用いた。泳動緩衝液として５０ｍＭ  ＭＯＰＳ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡを用い、２００Ｖ定電圧で約４５分間泳動を行った。
【００５６】
その結果、魚のタンパク質について上記の条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、以下のスポットが、魚に対するアレルギー患者であって即時型アレルギーと診断された患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合することを明らかにした。
スポット１：分子量８０〜１６０ｋＤａ、ｐＩ３．０〜７．０
スポット２：分子量１１０〜２６０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜８．０
スポット３：分子量８０〜１６０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜１０．０
スポット４：分子量８０〜１６０ｋＤａ、ｐＩ５．０〜１１．０
スポット５：分子量５０〜１１０ｋＤａ、ｐＩ３．０〜７．０
スポット６：分子量６０〜１１０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜８．０
スポット７：分子量４０〜８０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜８．０
スポット８：分子量４０〜８０ｋＤａ、ｐＩ３．０〜７．０
スポット９：分子量２０〜５０ｋＤａ、ｐＩ３．０〜７．０
スポット１０：分子量１６０〜３００、ｐＩ３．０〜７．０
スポット１１：分子量８０〜１６０、ｐＩ４．０〜８．０
スポット１２：分子量１００〜１６０、ｐＩ４．０〜７．０
スポット１３：分子量３０〜７０、ｐＩ３．０〜７．０
スポット１４：分子量２０〜５０、ｐＩ５．０〜９．０
抗原
（１０）スポット１０の抗原
スポット１０について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号７１〜１０８のアミノ酸配列が検出された。
【００５７】
また、スポット１０について、質量分析装置から得られた質量データ（配列番号７１〜１０８）をＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライク（myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like）（アミノ酸配列：配列番号７０、それをコードする塩基配列：配列番号６９）であることが同定された。配列番号７１は配列番号７０のアミノ酸１３〜１９、配列番号７２は配列番号７０のアミノ酸２６２〜２７１、配列番号７３は配列番号７０のアミノ酸９９６〜１０１４、配列番号７４は配列番号７０のアミノ酸９５１〜９６１、配列番号７５は配列番号７０のアミノ酸１２９３〜１３０３、配列番号７６は配列番号７０のアミノ酸１０８２〜１０９１、配列番号７７は配列番号７０のアミノ酸１８４７〜１８５６、配列番号７８は配列番号７０のアミノ酸１７２〜１８６、配列番号７９は配列番号７０のアミノ酸９１９〜９３７、配列番号８０は配列番号７０のアミノ酸２４９〜２５８、配列番号８１は配列番号７０のアミノ酸７０６〜７１７、配列番号８２は配列番号７０のアミノ酸５０〜５９、配列番号８３は配列番号７０のアミノ酸４１５〜４３０、配列番号８４は配列番号７０のアミノ酸８３４〜８４５、配列番号８５は配列番号７０のアミノ酸６１７〜６３０、配列番号８６は配列番号７０のアミノ酸１５５６〜１５６７、配列番号８７は配列番号７０のアミノ酸１３９１〜１４０８、配列番号８８は配列番号７０のアミノ酸１０２５〜１０４０、配列番号８９は配列番号７０のアミノ酸１８１３〜１８３６、配列番号９０は配列番号７０のアミノ酸７４３〜７５５、配列番号９１は配列番号７０のアミノ酸１１７２〜１１９２、配列番号９２は配列番号７０のアミノ酸３５３〜３６４、配列番号９３は配列番号７０のアミノ酸１２６１〜１２９２、配列番号９４は配列番号７０のアミノ酸１７８３〜１７８９、配列番号９５は配列番号７０のアミノ酸１５０２〜１５１９、配列番号９６は配列番号７０のアミノ酸１４８４〜１４９７、配列番号９７は配列番号７０のアミノ酸１１９４〜１２１２、配列番号９８は配列番号７０のアミノ酸１３０４〜１３１４、配列番号９９は配列番号７０のアミノ酸３６９〜３８４、配列番号１００は配列番号７０のアミノ酸１３１５〜１３２２、配列番号１０１は配列番号７０のアミノ酸１５３６〜１５５５、配列番号１０２は配列番号７０のアミノ酸２３７〜２４８、配列番号１０３は配列番号７０のアミノ酸１６９９〜１７２５、配列番号１０４は配列番号７０のアミノ酸１０９２〜１１０４、配列番号１０５は配列番号７０のアミノ酸４０７〜４１４、配列番号１０６は配列番号７０のアミノ酸１８９７〜１９１７、配列番号１０７は配列番号７０のアミノ酸１４５８〜１４７０、配列番号１０８は配列番号７０のアミノ酸１３７３〜１３８８、にそれぞれ相当する。
【００５８】
したがって、本願においてスポット１０の抗原は、以下（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）および（１０Ｂ）のいずれかであってよい。
（１０Ａ−ａ）配列番号７０において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｂ）配列番号７０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｃ）配列番号６９において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｄ）配列番号６９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｅ）配列番号６９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ｂ）配列番号７０〜１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号７０〜１０８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００５９】
上記（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）および（１０Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。
【００６０】
上記（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）および（１０Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１６０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、好ましくは分子量１６０ｋＤａ〜２６０ｋＤａ、さらに好ましくは分子量２００ｋＤａ〜２３０ｋＤａ付近、および等電点３．０〜７．０、好ましくは等電点４．０〜６．０、さらに好ましくは等電点４．５〜５．５のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００６１】
好ましくは、スポット１０の抗原であるタンパク質は、魚に対するアレルギーの抗原である。
【００６２】
また、上記（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）および（１０Ｂ）の抗原のエピトープは、配列番号７０のアミノ酸６１〜７５（配列番号１７９）、アミノ酸４７１〜４８５（配列番号１８０）、アミノ酸６２１〜６３５（配列番号１８１）、アミノ酸９８１〜９９５（配列番号１８２）、アミノ酸１０１１〜１０２５（配列番号１８３）、アミノ酸１０４１〜１０５５（配列番号１８４）、及びアミノ酸１７４１〜１７５５（配列番号１８５）に存在する。スポット１０の抗原が、配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、少なくとも一つの当該エピトープに対応するアミノ酸については、配列番号７０における配列を保持していてもよい。
【００６３】
また、アミノ酸配列が変異しても感度（患者を陽性と判断できる度合い）や特異度（健常を陽性と判断しない度合い）等のＩｇＥ抗体との結合性が残存する観点から、スポット１０の抗原は、以下の変異体であってもよい。
【００６４】
配列番号１７９の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１７９の１〜１１番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３２７若しくは３２８又は１〜９番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３３０若しくは３３１においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸６１〜７５の１〜１１番目のアミノ酸が、配列番号３２７若しくは３２８又は１〜９番目のアミノ酸が、配列番号３３０若しくは３３１のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００６５】
配列番号１８０の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８０の７〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３３３又は３３４においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸４７１〜４８５の７〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３３３又は３３４のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００６６】
配列番号１８１の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８１の１〜１０番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３３６又は３３７においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸６２１〜６３５の１〜１０番目のアミノ酸が、配列番号３３６又は３３７のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００６７】
配列番号１８２の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８２の２〜９番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３３９若しくは３４０、２〜１１番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３４２若しくは３４３、７〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３４５若しくは３４６又は９〜１４番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３４８若しくは３４９においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸９８１〜９９５の２〜９番目のアミノ酸が、配列番号３３９若しくは３４０、２〜１１番目のアミノ酸が、配列番号３４２若しくは３４３、７〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３４５若しくは３４６又は９〜１４番目のアミノ酸が、配列番号３４８若しくは３４９のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００６８】
配列番号１８３の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８３の５〜１４番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３５１又は３５２においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸１０１１〜１０２５の５〜１４番目のアミノ酸が、配列番号３５１又は３５２のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００６９】
配列番号１８４の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８４の５〜１２番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３５４若しくは３５５又は９〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３５７若しくは３５８においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸１０４１〜１０５５の５〜１２番目のアミノ酸が、配列番号３５４若しくは３５５又は９〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３５７若しくは３５８のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００７０】
配列番号１８５の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８５の５〜１２番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３６０若しくは３６１又は７〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３６３若しくは３６４においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１０の抗原が配列番号７０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号７０におけるアミノ酸１７４１〜１７５５の５〜１２番目のアミノ酸が、配列番号３６０若しくは３６１又は７〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３６３若しくは３６４のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００７１】
（１１）スポット１１の抗原
スポット１１について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号１１１〜１１９のアミノ酸配列が検出された。
【００７２】
また、スポット１１について、質量分析装置から得られた質量データ（配列番号１１１〜１１９）をＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライク（glycogen phosphorylase, muscle form-like）（アミノ酸配列：配列番号１１０、それをコードする塩基配列：配列番号１０９）であることが同定された。配列番号１１１は配列番号１１０のアミノ酸４７１〜４７９、配列番号１１２は配列番号１１０のアミノ酸５４７〜５５５、配列番号１１３は配列番号１１０のアミノ酸２０３〜２１５、配列番号１１４は配列番号１１０のアミノ酸７２７〜７４１、配列番号１１５は配列番号１１０のアミノ酸５０８〜５２０、配列番号１１６は配列番号１１０のアミノ酸７４２〜７５５、配列番号１１７は配列番号１１０のアミノ酸１３〜２９、配列番号１１８は配列番号１１０のアミノ酸７７５〜７８４、配列番号１１９は配列番号１１０のアミノ酸６４３〜６５６、にそれぞれ相当する。
【００７３】
したがって、本願においてスポット１１の抗原は、以下（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）および（１１Ｂ）のいずれかであってよい。
（１１Ａ−ａ）配列番号１１０において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｂ）配列番号１１０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｃ）配列番号１０９において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｄ）配列番号１０９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｅ）配列番号１０９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ｂ）配列番号１１０〜１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１１０〜１１９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００７４】
上記（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）および（１１Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。
【００７５】
上記（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）および（１１Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量８０ｋＤａ〜１６０ｋＤａ、好ましくは分子量８０ｋＤａ〜１１０ｋＤａ、さらに好ましくは分子量９０ｋＤａ〜１１０ｋＤａ付近、および等電点４．０〜８．０、好ましくは等電点５．０〜７．５、さらに好ましくは等電点６．５〜７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００７６】
好ましくは、スポット１１の抗原であるタンパク質は、魚に対するアレルギーの抗原である。
【００７７】
また、上記（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）および（１１Ｂ）の抗原のエピトープは、配列番号１１０のアミノ酸２６１〜２７５（配列番号１８６）に存在する。スポット１１の抗原が、配列番号１１０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該エピトープに対応するアミノ酸については、配列番号１１０における配列を保持していてもよい。
【００７８】
また、アミノ酸配列が変異しても感度や特異度等のＩｇＥ抗体との結合性が残存する観点から、スポット１１の抗原は、以下の変異体であってもよい。
【００７９】
配列番号１８６の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８６の１〜１０番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３６６又は１１〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３６８若しくは３６９においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１１の抗原が配列番号１１０のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１１０におけるアミノ酸２６１〜２７５の１〜１０番目のアミノ酸が、配列番号３６６又は１１〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３６８若しくは３６９のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００８０】
（１２）スポット１２の抗原
スポット１２について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号１２２〜１３６のアミノ酸配列が検出された。
【００８１】
また、スポット１２について、質量分析装置から得られた質量データ（配列番号１２２〜１３６）をＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライク（myosin-binding protein C, fast-type-like）（アミノ酸配列：配列番号１２１、それをコードする塩基配列：配列番号１２０）であることが同定された。配列番号１２２は配列番号１２１のアミノ酸１９７〜２０４、配列番号１２３は配列番号１２１のアミノ酸４２１〜４３４、配列番号１２４は配列番号１２１のアミノ酸３２９〜３３６、配列番号１２５は配列番号１２１のアミノ酸４１３〜４２０、配列番号１２６は配列番号１２１のアミノ酸２４０〜２４６、配列番号１２７は配列番号１２１のアミノ酸２１４〜２２８、配列番号１２８は配列番号１２１のアミノ酸１０１４〜１０２４、配列番号１２９は配列番号１２１のアミノ酸８４２〜８５５、配列番号１３０は配列番号１２１のアミノ酸２６０〜２７４、配列番号１３１は配列番号１２１のアミノ酸６７２〜６８５、配列番号１３２は配列番号１２１のアミノ酸５０６〜５１２、配列番号１３３は配列番号１２１のアミノ酸２０５〜２１３、配列番号１３４は配列番号１２１のアミノ酸１６５〜１８２、配列番号１３５は配列番号１２１のアミノ酸３２１〜３２８、配列番号１３６は配列番号１２１のアミノ酸７０〜８２、にそれぞれ相当する。
【００８２】
したがって、本願においてスポット１２の抗原は、以下（１２Ａ−ａ）〜（１２Ａ−ｅ）および（１２Ｂ）のいずれかであってよい。
（１２Ａ−ａ）配列番号１２１において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２Ａ−ｂ）配列番号１２１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２Ａ−ｃ）配列番号１１９において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２Ａ−ｄ）配列番号１１９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２Ａ−ｅ）配列番号１１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２Ｂ）配列番号１２１〜１３６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１２１〜１３６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００８３】
上記（１２Ａ−ａ）〜（１２Ａ−ｅ）および（１２Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。
【００８４】
上記（１２Ａ−ａ）〜（１２Ａ−ｅ）および（１２Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１００ｋＤａ〜１６０ｋＤａ、好ましくは分子量１１０ｋＤａ〜１５０ｋＤａ、さらに好ましくは分子量１２０ｋＤａ〜１４０ｋＤａ付近、および等電点４．０〜７．０、好ましくは等電点４．０〜６．０、さらに好ましくは等電点５．０〜６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００８５】
好ましくは、スポット１２の抗原であるタンパク質は、魚に対するアレルギーの抗原である。
【００８６】
また、上記（１２Ａ−ａ）〜（１２Ａ−ｅ）および（１２Ｂ）の抗原のエピトープは、配列番号１２１のアミノ酸１８１〜１９５（配列番号１８７）、アミノ酸２１１〜２２５（配列番号１８８）、アミノ酸２２１〜２３５（配列番号１８９）、アミノ酸２３１〜２４５（配列番号１９０）、アミノ酸２５１〜２６５（配列番号１９１）、アミノ酸３７１〜３８５（配列番号１９２）、アミノ酸４９１〜５０５（配列番号１９３）、アミノ酸６５１〜６６５（配列番号１９４）、アミノ酸８３１〜８４５（配列番号１９５）、及びアミノ酸９５１〜９６５（配列番号１９６）に存在する。スポット１２の抗原が、配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、少なくとも一つの当該エピトープに対応するアミノ酸については、配列番号１２１における配列を保持していてもよい。
【００８７】
また、アミノ酸配列が変異しても感度や特異度等のＩｇＥ抗体との結合性が残存する観点から、スポット１２の抗原は、以下の変異体であってもよい。
【００８８】
配列番号１８７の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８７の２〜１１番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３７１若しくは３７２又は７〜１４番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３７４若しくは３７５においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸１８１〜１９５の２〜１１番目のアミノ酸が、配列番号３７１若しくは３７２又は７〜１４番目のアミノ酸が、配列番号３７４若しくは３７５のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００８９】
配列番号１８８の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８８の１〜１０番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３７７若しくは３７８又は８〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３８０若しくは３８１においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸２１１〜２２５の１〜１０番目のアミノ酸が、配列番号３７７若しくは３７８又は８〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３８０若しくは３８１のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９０】
配列番号１８９の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１８９の２〜８番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３８３においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸２２１〜２３５の２〜８番目のアミノ酸が、配列番号３８３のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９１】
配列番号１９０の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９０の２〜９番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３８５、１〜１０番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３８７又は９〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３８９においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸２３１〜２４５の２〜９番目のアミノ酸が、配列番号３８５、１〜１０番目のアミノ酸が、配列番号３８７又は９〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３８９のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９２】
配列番号１９１の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９１の６〜１１番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３９１又は６〜１２番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３９３若しくは３９４においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸２５１〜２６５の６〜１１番目のアミノ酸が、配列番号３９１又は６〜１２番目のアミノ酸が、配列番号３９３若しくは３９４のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９３】
配列番号１９２の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９２の５〜８番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３９６又は７〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号３９８若しくは３９９においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸３７１〜３８５の５〜８番目のアミノ酸が、配列番号３９６又は７〜１５番目のアミノ酸が、配列番号３９８若しくは３９９のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９４】
配列番号１９３の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９３の１〜７番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４０１又は６〜１５番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４０３若しくは４０４においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸４９１〜５０５の１〜７番目のアミノ酸が、配列番号４０１又は６〜１５番目のアミノ酸が、配列番号４０３若しくは４０４のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９５】
配列番号１９４の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９４の３〜７番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４０６においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸６５１〜６６５の３〜７番目のアミノ酸が、配列番号４０６のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９６】
配列番号１９５の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９５の２〜１３番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４０８においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸８３１〜８４５の２〜１３番目のアミノ酸が、配列番号４０８のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９７】
配列番号１９６の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９６の１〜１０番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４１０又は１〜８番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４１２においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１２の抗原が配列番号１２１のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１２１におけるアミノ酸９５１〜９６５の１〜１０番目のアミノ酸が、配列番号４１０又は１〜８番目のアミノ酸が、配列番号４１２のアミノ酸配列であるものであってよい。
【００９８】
（１３）スポット１３の抗原
スポット１３について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号１３９〜１４２のアミノ酸配列が検出された。
【００９９】
また、スポット１３について、質量分析装置から得られた質量データ（配列番号１３９〜１４２）をＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアル（ATP synthase subunit beta, mitochondrial）（アミノ酸配列：配列番号１３８、それをコードする塩基配列：配列番号１３７）であることが同定された。配列番号１３９は配列番号１３８のアミノ酸１９１〜２０１、配列番号１４０は配列番号１３８のアミノ酸４４９〜４６９、配列番号１４１は配列番号１３８のアミノ酸２０２〜２１４、配列番号１４２は配列番号１３８のアミノ酸１７８〜１８７、にそれぞれ相当する。
【０１００】
したがって、本願においてスポット１３の抗原は、以下（１３Ａ−ａ）〜（１３Ａ−ｅ）および（１３Ｂ）のいずれかであってよい。
（１３Ａ−ａ）配列番号１３８において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３Ａ−ｂ）配列番号１３８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３Ａ−ｃ）配列番号１３７において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３Ａ−ｄ）配列番号１３７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３Ａ−ｅ）配列番号１３７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３Ｂ）配列番号１３８〜１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１３８〜１４２のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【０１０１】
上記（１３Ａ−ａ）〜（１３Ａ−ｅ）および（１３Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。
【０１０２】
上記（１３Ａ−ａ）〜（１３Ａ−ｅ）および（１３Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０ｋＤａ〜７０ｋＤａ、好ましくは分子量４０ｋＤａ〜６０ｋＤａ、さらに好ましくは分子量４５ｋＤａ〜５５ｋＤａ付近、および等電点３．０〜７．０、好ましくは等電点３．０〜６．０、さらに好ましくは等電点４．０〜５．５のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【０１０３】
好ましくは、スポット１３の抗原であるタンパク質は、魚に対するアレルギーの抗原である。
【０１０４】
また、上記（１３Ａ−ａ）〜（１３Ａ−ｅ）および（１３Ｂ）の抗原のエピトープは、配列番号１３８のアミノ酸２１１〜２２５（配列番号１９７）に存在する。スポット１３の抗原が、配列番号１３８のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該エピトープに対応するアミノ酸については、配列番号１３８における配列を保持していてもよい。
【０１０５】
また、アミノ酸配列が変異しても感度や特異度等のＩｇＥ抗体との結合性が残存する観点から、スポット１３の抗原は、以下の変異体であってもよい。
【０１０６】
配列番号１９７の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９７の７〜１０番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４１４又は９〜１４番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４１６においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１３の抗原が配列番号１３８のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１３８におけるアミノ酸２１１〜２２５の７〜１０番目のアミノ酸が、配列番号４１４又は９〜１４番目のアミノ酸が、配列番号４１６のアミノ酸配列であるものであってよい。
【０１０７】
（１４）スポット１４の抗原
スポット１４について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号１４５〜１４９のアミノ酸配列が検出された。
【０１０８】
また、スポット１４について、質量分析装置から得られた質量データ（配列番号１４５〜１４９）をＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライク（L-lactate dehydrogenase A chain-like）（アミノ酸配列：配列番号１４４、それをコードする塩基配列：配列番号１４３）であることが同定された。配列番号１４５は配列番号１４４のアミノ酸１１９〜１２６、配列番号１４６は配列番号１４４のアミノ酸７〜２２、配列番号１４７は配列番号１４４のアミノ酸９〜２２、配列番号１４８は配列番号１４４のアミノ酸２７０〜２７８、配列番号１４９は配列番号１４４のアミノ酸９１〜１１８、にそれぞれ相当する。
【０１０９】
したがって、本願においてスポット１４の抗原は、以下（１４Ａ−ａ）〜（１４Ａ−ｅ）および（１４Ｂ）のいずれかであってよい。
（１４Ａ−ａ）配列番号１４４において１または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入または付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４Ａ−ｂ）配列番号１４４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４Ａ−ｃ）配列番号１４３において１または数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入または付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４Ａ−ｄ）配列番号１４３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４Ａ−ｅ）配列番号１４３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４Ｂ）配列番号１４４〜１４９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１４４〜１４９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【０１１０】
上記（１４Ａ−ａ）〜（１４Ａ−ｅ）および（１４Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。
【０１１１】
上記（１４Ａ−ａ）〜（１４Ａ−ｅ）および（１４Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０ｋＤａ〜５０ｋＤａ、好ましくは分子量３０ｋＤａ〜５０ｋＤａ、さらに好ましくは分子量３０ｋＤａ〜４０ｋＤａ付近、および等電点５．０〜９．０、好ましくは等電点６．０〜８．０、さらに好ましくは等電点６．５〜７．５のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【０１１２】
好ましくは、スポット１４の抗原であるタンパク質は、魚に対するアレルギーの抗原である。
【０１１３】
また、上記（１４Ａ−ａ）〜（１４Ａ−ｅ）および（１４Ｂ）の抗原のエピトープは、配列番号１４４のアミノ酸１１〜２５（配列番号１９８）に存在する。スポット１４の抗原が、配列番号１４４のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該エピトープに対応するアミノ酸については、配列番号１４４における配列を保持していてもよい。
【０１１４】
また、アミノ酸配列が変異しても感度や特異度等のＩｇＥ抗体との結合性が残存する観点から、スポット１４の抗原は、以下の変異体であってもよい。
【０１１５】
配列番号１９８の配列を有するエピトープのうち、アレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なのは、配列番号１９８の５〜１３番目のアミノ酸の位置に相当する配列番号４１８又４１９においてＸ以外のアミノ酸で示される部位である。したがって、別の好ましい態様において、スポット１４の抗原が配列番号１４４のアミノ酸配列に対して変異を含むものである場合、当該抗原は、配列番号１４４におけるアミノ酸１１〜２５の５〜１３番目のアミノ酸が、配列番号４１８又４１９のアミノ酸配列であるものであってよい。
【０１１６】
本明細書において、アミノ酸配列について「１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加された」という場合は、対象となるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸（例えば、アミノ酸配列の全長に対して３０％、好ましくは２５％、２０％、１５％、１０％、５％、３％、２％または１％のアミノ酸）が欠失しているか、他のアミノ酸に置換されているか、他のアミノ酸が挿入されているか、および／または他のアミノ酸が付加されているアミノ酸配列をいう。
【０１１７】
上記のうち、置換は、好ましくは保存的置換である。保存的置換とは、特定のアミノ酸残基を類似の物理化学的特徴を有する残基で置き換えることであるが、もとの配列の構造に関する特徴を実質的に変化させなければいかなる置換であってもよく、例えば、置換アミノ酸が、もとの配列に存在するらせんを破壊したり、もとの配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊したりしなければいかなる置換であってもよい。以下に、アミノ酸残基の保存的置換について置換可能な残基ごとに分類して例示するが、置換可能なアミノ酸残基は以下に記載されているものに限定されるものではない。
Ａ群：ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン
Ｂ群：アスパラギン酸、グルタミン酸
Ｃ群：アスパラギン、グルタミン
Ｄ群：リジン、アルギニン、
Ｅ群：セリン、スレオニン
Ｆ群：フェニルアラニン、チロシン
非保存的置換の場合は、上記種類のうち、ある１つのメンバーと他の種類のメンバーとを交換することができる。例えば、不用意な糖鎖修飾を排除するために上記のＢ、Ｄ、Ｅ群のアミノ酸をそれ以外の群のアミノ酸に置換してもよい。または、３次構造でタンパク質中に折りたたまれることを防ぐためにシステインを欠失させるか、他のアミノ酸に置換してもよい。あるいは、親水性／疎水性のバランスが保たれるように、または合成を容易にするために親水度を上げるように、アミノ酸に関する疎水性／親水性の指標であるアミノ酸のハイドロパシー指数（J. Kyte およびR. Doolittle, J. Mol. Biol., Vol.157, p.105-132, 1982）を考慮して、アミノ酸を置換してもよい。
【０１１８】
別の態様として、元のアミノ酸よりも立体障害の少ないアミノ酸への置換、例えばＦ群からＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ群への置換；電荷を持つアミノ酸から電荷を持たないアミノ酸への置換、例えばＢ群からＣ群への置換、をしてもよい。そうすることで、ＩｇＥ抗体との結合性が向上することがある。
【０１１９】
本明細書において、２つのアミノ酸配列の同一性％は、視覚的検査および数学的計算によって決定することができる。また、コンピュータープログラムを用いて同一性％を決定することもできる。そのようなコンピュータープログラムとしては、例えば、ＢＬＡＳＴおよびＣｌｕｓｔａｌＷ等があげられる。特に、ＢＬＡＳＴプログラムによる同一性検索の各種条件（パラメーター）は、Altschulら(Nucl. Acids. Res., 25, p.3389-3402, 1997)に記載されたもので、米国バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）やDNA Data Bank of Japan（ＤＤＢＪ）のウェブサイトから公的に入手することができる（ＢＬＡＳＴマニュアル、Altschulら NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894；Altschulら）。また、遺伝情報処理ソフトウエアGENETYX Ver.7（ゼネティックス）、DINASIS Pro（日立ソフト）、Vector NTI（Infomax）等のプログラムを用いて決定することもできる。
【０１２０】
本明細書において、塩基配列について「１もしくは数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加された」という場合は、対象となる塩基配列において、１個もしくは数個のヌクレオチド（例えば、塩基配列の全長に対して３０％、好ましくは２５％、２０％、１５％、１０％、５％、３％、２％または１％のアミノ酸）が欠失しているか、他のヌクレオチドに置換されているか、他のヌクレオチドが挿入されているか、および／または他のヌクレオチドが付加されている塩基配列をいう。上記ヌクレオチドの欠失、置換、挿入もしくは付加により、アミノ酸をコードする配列にフレームシフトを生じないことが好ましい。
【０１２１】
本明細書において、２つの塩基配列の同一性％は、視覚的検査および数学的計算によって決定することができる。また、コンピュータープログラムを用いて同一性％を決定することもできる。そのような配列比較コンピュータープログラムとしては、例えば、米国国立医学ライブラリーのウェブサイト：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bls.htmlから利用できるBLASTNプログラム(Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10)：バージョン2.2.7、またはWU-BLAST2.0アルゴリズム等があげられる。WU-BLAST2.0についての標準的なデフォルトパラメーターの設定は、以下のインターネットサイト：http://blast.wustl.eduに記載されているものを用いることができる。
【０１２２】
本明細書における「ストリンジェントな条件下」とは、中程度または高度にストリンジェントな条件においてハイブリダイズすることを意味する。具体的には、中程度にストリンジェントな条件としては、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、一般の技術を有する当業者によって、容易に決定することが可能である。基本的な条件は、Sambrookら，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第３版，第６−７章，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001に示されている。好ましくは、中程度にストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーション条件として、１×ＳＳＣ〜６×ＳＳＣ、４２℃〜５５℃の条件、より好ましくは、１×ＳＳＣ〜３×ＳＳＣ、４５℃〜５０℃の条件、最も好ましくは、２×ＳＳＣ、５０℃の条件があげられる。ハイブリダイゼーション溶液中に、例えば、約５０％のホルムアミドを含む場合には、上記温度よりも５ないし１５℃低い温度を採用する。洗浄条件としては、０．５×ＳＳＣ〜６×ＳＳＣ、４０℃〜６０℃があげられる。ハイブリダイゼーションおよび洗浄時には、一般に、０．０５％〜０．２％、好ましくは約０．１％ＳＤＳを加えてもよい。高度にストリンジェントな条件もまた、例えばＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することが可能である。一般に、高度にストリンジェント（ハイストリンジェント）な条件としては、中程度にストリンジェントな条件よりも高い温度および／または低い塩濃度でのハイブリダイゼーションおよび／または洗浄を含む。例えば、ハイブリダイゼーション条件として、０．１×ＳＳＣ〜２×ＳＳＣ、５５℃〜６５℃の条件、より好ましくは、０．１×ＳＳＣ〜１×ＳＳＣ、６０℃〜６５℃の条件、最も好ましくは、０．２×ＳＳＣ、６３℃の条件があげられる。洗浄条件として、０．２×ＳＳＣ〜２×ＳＳＣ、５０℃〜６８℃、より好ましくは、０．２×ＳＳＣ、６０〜６５℃が挙げられる。
【０１２３】
抗原は、魚から当業者に周知のタンパク質精製方法を組み合わせて分離・精製することによって得てもよい。または、抗原は、当業者に周知の遺伝子組換え技術により抗原を組換えタンパク質として発現させ、そして当業者に周知のタンパク質精製方法により分離・精製することによって得てもよい。
【０１２４】
タンパク質の精製方法としては、例えば、塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、SDS-PAGEなど分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーやヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーなどの荷電を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。
【０１２５】
遺伝子組換え技術によるタンパク質の調製は、抗原をコードする核酸を含む発現ベクターを調製し、当該発現ベクターを適切な宿主細胞中に遺伝子導入または形質転換により導入し、当該宿主細胞を組換えタンパク質の発現に適する条件下で培養し、そして当該宿主細胞中で発現された組換えタンパク質を回収することにより行う。
【０１２６】
「ベクター」は、それに連結させた核酸を宿主細胞内に導入するために用いることが可能な核酸であり、「発現ベクター」はベクターにより導入された核酸がコードするタンパク質の発現を導くことが可能なベクターである。ベクターには、プラスミドベクター、ウイルスベクター等が含まれる。当業者は、使用する宿主細胞の種類に応じて、組換えタンパク質の発現に適切な発現ベクターを選択することができる。精製を容易にするために、Ｈｉｓ×６残基等のアフィニティータグを含むようにしてもよい。また、シグナル配列を含んで細胞外に排出されるように合成してもよい。
【０１２７】
「宿主細胞」は、ベクターにより遺伝子導入または形質転換を受ける細胞である。宿主細胞は、使用するベクターに応じて当業者が適切に選択することができる。宿主細胞は、例えば、大腸菌（E. coli）などの原核生物由来であることが可能である。大腸菌のような原核細胞を宿主として使用する場合、本発明の抗原は、原核細胞内での組換えタンパク質の発現を容易にするためにＮ末端メチオニン残基を含むようにしてもよい。このＮ末端メチオニンは、発現後に組換えタンパク質から切り離すこともできる。あるいは、酵母などの単細胞真核生物、植物細胞、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞）などの、真核生物由来の細胞やカイコであることが可能である。
【０１２８】
発現ベクターの宿主細胞への遺伝子導入または形質転換は、当業者に公知の手法により適宜行うことができる。また、当業者は、宿主細胞の種類に応じて組換えタンパク質の発現に適する条件を適宜選択し、宿主細胞を培養することにより組換えタンパク質を発現させることができる。そして、組換えタンパク質を発現した宿主細胞をホモジナイズし、得られたホモジネートから上述したタンパク質の精製方法を適宜組み合わせて行うことにより、組換えタンパク質として発現された抗原を分離・精製することができる。
【０１２９】
診断キット・診断方法（１）
本発明は、対象の魚アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が魚アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は上記（１０）〜（１４）の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。
【０１３０】
対象から得られた試料とは、対象から採取されたＩｇＥ抗体、が含まれる溶液である。そのような溶液には、例えば、血液、唾液、痰、鼻水、尿、汗、涙が含まれる。対象から得られた試料は、抗原に接触させる前に、試料中のＩｇＥ抗体濃度を高めるための前処理が施されていてもよい。試料の前処理としては、例えば血液から血清、血しょうを得ることが含まれてもよい。またさらに、抗原との結合部分であるＦａｂ部分を精製してもよい。特に好ましい態様において、上記工程（ｉ）は、対象から得られた血清中のＩｇＥ抗体と抗原を接触させることにより行われる。
【０１３１】
ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥ抗体そのものであってもよく、ＩｇＥ抗体が結合した肥満細胞等であってもよい。
【０１３２】
対象から得られた試料と抗原との接触およびその結合の検出は、既知の方法により行うことが可能である。そのような方法には、例えば、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorvent Assay）、サンドイッチ免疫測定法、イムノブロット法、免疫沈降法、イムノクロマト法による検出を用いることができる。これらはいずれも、抗原に対象のＩｇＥ抗体を接触させて結合させ、抗原に特異的に結合したＩｇＥ抗体を検出する手法である。例えば、酵素標識した二次抗体を作用させ、酵素の基質（通常は発色あるいは発光試薬）を加えて酵素反応の生成物を検出する方法、ビオチン標識した二次抗体を作用させ、アビジン結合色素を加えて色素を検出する方法、蛍光標識した二次抗体を検出する方法等が挙げられる。あるいは、表面プラズモン共鳴（SPR）等の、抗原とＩｇＥ抗体の結合を評価可能な測定方法による検出を用いることもできる。複数種の抗原特異的ＩｇＥ抗体が混合されていてもよい。
【０１３３】
抗原は、単離された抗原が担体に固定されている状態であってもよい。この場合は上記工程（ｉ）および（ｉｉ）においてＥＬＩＳＡ、サンドイッチ免疫測定法、イムノクロマト法、表面プラズモン共鳴等が利用でき、また、上記工程（ｉ）では、対象から得られた試料を抗原を固定した面に接触させることにより行う。単離された抗原は、魚から当業者に周知のタンパク質精製方法を組み合わせて分離・精製することによって、または遺伝子組換え技術により調製することによって得てもよい。また、抗原を結合する抗体が固定されている状態であってもよい。
【０１３４】
抗原は担体に固定されていない状態であってもよい。この場合は、上記工程（ｉ）および（ｉｉ）において、フローサイトメトリー等が利用でき、レーザー光により抗体が結合した抗原の存在を確認できる。例えば、抗原が抗体と結合し、試料中の好塩基球を活性化すると発現される表面抗原ＣＤ２０３ｃの量を測定する好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）等が挙げられる。また、抗原を試料中の抗体との結合を介して血球に接触させることにより、ヒスタミンを遊離するかどうかを調べるヒスタミン遊離試験（ＨＲＴ）も挙げられる。
【０１３５】
また、抗原は２次元電気泳動により分離した状態から転写してイムノブロット法による検出を行ってもよい。２次元電気泳動は、１次元目に等電点電気泳動、２次元目にＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を行うことで、タンパク質試料を分離する手法である。この場合、２次元電気泳動の条件は、本願発明の抗原が分離できる条件であれば特に限定されない。例えば、上記「抗原の特定」の項目において記載した２次元電気泳動の条件を利用できる。あるいは、上述の特許文献１〜４の記載を参考にして電気泳動の条件を定めることもでき、例えば、以下：
（Ａ）１次元目の等電点電気泳動ゲルとして、ゲル長が５〜１０ｃｍの範囲内であって、ゲルのｐＨ範囲が３〜１０であり、泳動方向に対するゲルのｐＨ勾配が、ｐＨ５までのゲル長をａ、ｐＨ５〜７のゲル長をｂ、ｐＨ７以上のゲル長をｃとした場合において、「ａ＜ｂ］および「ｂ＞ｃ」の関係を満たす；
（Ｂ）（Ａ）の場合であって、ゲルの全長を１とした場合、ａが０．１５〜０．３の範囲内、ｂが０．４〜０．７の範囲内、ｃが０．１５〜０．３の範囲内である；
（Ｃ）１次元目の等電点電気泳動において、検体を含むゲル１本につき１００Ｖ〜６００Ｖの範囲内の値の定電圧の印加による定電圧工程を行い、泳動３０分あたりの泳動変化幅が５μＡの範囲内となった後に前記定電圧から電圧を上昇させる電圧上昇行程を始める；
（Ｄ）（Ｃ）の場合に、電圧上昇工程の最終電圧を３０００Ｖ〜６０００Ｖの範囲内とする；
（Ｅ）１次元目の等電点電気泳動ゲルの長手方向のゲル長が５〜１０ｃｍであって、２次元目電気泳動ゲルの泳動方向基端部のゲル濃度を３〜６％とする；および
（Ｆ）（Ｅ）の場合に、２次元目電気泳動ゲルの泳動方向先端側の部分のゲル濃度が、泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定する；
からなる群より選択される少なくとも一つを満たす条件で２次元電気泳動を行うことができる。
【０１３６】
上記（１０）〜（１４）の抗原は、魚に対するアレルギーの患者のＩｇＥ抗体と特異的に結合する抗原である。したがって、対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が魚に対するアレルギーであることの指標が提供される。
【０１３７】
本発明はまた、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを含む魚に対するアレルギーの診断キットを提供する。本発明の診断キットは、上記の魚に対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法、または下記の診断方法に用いてもよい。本発明の診断キットは、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを含むほか、酵素標識された抗ＩｇＥ抗体および当該酵素の基質となる発色基質もしくは発光基質、またはビオチン標識された抗ＩｇＥ抗体および当該ビオチンと結合するアビジン結合色素を含んでいてもよい。また、蛍光標識された抗ＩｇＥ抗体を用いてもよい。本発明の診断キットにおいて、抗原は担体に固定化された状態で提供されてもよい。本発明の診断キットはまた、診断のための手順についての説明書や当該説明を含むパッケージと共に提供されてもよい。
【０１３８】
別の態様において、上記の診断キットは、魚に対するアレルギーについてのコンパニオン診断薬を含む。コンパニオン診断薬とは、医薬品の効果が期待される患者の特定または医薬品の重篤な副作用リスクを有する患者の特定、あるいは医薬品を用いた治療の最適化のために当該医薬品の反応性を検討するために用いるものである。ここで治療の最適化とは、例えば、用法容量の決定や投与中止の判断、どのアレルゲンコンポーネントを使って免疫寛容するかの確認等が含まれる。
【０１３９】
本発明はまた、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを含む魚に対するアレルギーの診断用組成物を提供する。本発明の診断用組成物は、下記の診断方法に用いることができる。本発明の診断用組成物は、必要に応じて本発明の抗原とともに一般的に用いられる、薬学的に許容される担体や添加剤を含んでいてもよい。
【０１４０】
一態様において、本発明は、対象の魚に対するアレルギーを診断する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が魚に対するアレルギーであると判断する；
ことを含み、ここで当該抗原は上記（１０）〜（１４）の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、である、前記方法を提供する。ここにおいて（ｉ）および（ｉｉ）の各工程は、魚に対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法の各工程について説明したとおりに行われる。
【０１４１】
別の態様において、本発明は、対象の魚に対するアレルギーを診断する方法であって、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを対象に投与することを含む、前記方法を提供する。当該方法は、皮膚に抗原を適用することを特徴とする皮膚テストの形式で行ってもよい。皮膚テストには、皮膚上に診断用組成物を適用した後に、出血しない程度に微少な傷をつけることで皮膚に抗原を浸透させて皮膚反応を観察するプリックテスト、診断用組成物を適用した上に皮膚を少し引っ掻いて反応を観察するスクラッチテスト、クリームや軟膏などの形態の診断用組成物を皮膚に適用して反応を観察するパッチテスト、抗原を皮内に投与して反応を観察する皮内テスト、などの形態が含まれる。プリックテストやスクラッチテストにおいて皮膚に診断用組成物を浸透する方法としては、ランセットの先端を診断用組成物に接触し、その接触部位を皮膚にさすことで傷をつけて浸透させる方法であってもよい。抗原を適用した部分の皮膚に腫れなどの皮膚反応が生じた場合、その対象は魚に対するアレルギーを有すると診断する。ここで、皮膚に適用する抗原の量は、例えば、１回あたり１００μｇ以下の用量であってよい。
【０１４２】
アレルギーの診断においては、抗原の特定を目的とした負荷試験がしばしば行われている。上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つは、魚に対するアレルギーであることを診断するための負荷試験の有効成分として用いることができる。ここで、負荷試験に用いる抗原タンパク質としては、発現精製したタンパク質であってもよく、例えば、イネにスギ花粉抗原の遺伝子を形質転換し、その抗原タンパク質を米内に発現させた花粉米のように、食品・食材において発現させたものであってもよい。
【０１４３】
また別の態様において、本発明は魚に対するアレルギーの診断に使用するための上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを提供する。ここで、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを、既知の抗原と混合して提供することも含む。
【０１４４】
さらなる別の態様において、本発明は魚に対するアレルギーの診断薬の製造のための上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つの使用を提供する。
【０１４５】
医薬組成物・治療方法（１）
本発明は、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。
【０１４６】
一態様において、上記の医薬組成物は、魚に対するアレルギーを治療するために用いられる。アレルギーの治療とは、体内に取り込んでも発症しない抗原の限界量を増やすことであり、最終的には通常の抗原の摂取量では発症しない状態（寛解）を目指すものである。
【０１４７】
本発明はまた、魚に対するアレルギーの治療を必要とする患者に対して、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを投与することを含む、魚に対するアレルギーを治療する方法を提供する。
【０１４８】
別の態様において、本発明は魚に対するアレルギーの治療に使用するための上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つを提供する。さらに別の態様において本発明は、魚に対するアレルギーの治療薬の製造のための上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つの使用を提供する。
【０１４９】
アレルギーの治療においては、患者に抗原を投与することで免疫寛容へと誘導することを目標とした、減感作療法がしばしば行われている。上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つは、魚に対するアレルギーに対する減感作療法のための有効成分として用いることができる。ここで、減感作療法に用いる抗原タンパク質としては、発現精製したタンパク質であってもよく、例えば、イネにスギ花粉抗原の遺伝子を形質転換し、その抗原タンパク質を米内に発現させた花粉米のように、食品・食材において発現させたものであってもよい。
【０１５０】
本発明の医薬組成物は、通常の投与経路により投与することができる。通常の投与経路には例えば、経口、舌下、経皮、皮内、皮下、血液内、鼻腔内、筋肉内、腹腔内、直腸内の投与が含まれる。
【０１５１】
本発明の医薬組成物は、必要に応じて本発明の抗原と共に、一般的に用いられる薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤、または各種の添加剤（例えば安定剤、溶解補助剤、乳濁化剤、緩衝剤、保存剤、着色剤等）を常法により添加した医薬組成物として用いることができる。医薬組成物の剤型は、投与経路に応じて当業者が適宜選択することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ、舌下錠、注射剤、鼻腔内噴霧剤、パップ剤、液剤、クリーム剤、ローション剤、坐剤等の形態であってよい。本発明の医薬組成物の投与量、投与回数および／または投与期間は、投与経路、症状、年齢や体重などの患者の特性等に応じて医師が適宜選択することができる。例えば、成人の場合、１回あたり１００μｇ以下の用量で投与してもよい。投与間隔は、例えば、毎日、毎週１回、月に２回、または３ヶ月に１回程度であってよい。投与期間は例えば、数週間から数年であってよい。投与期間内において、投与量を段階的に増加させる投与方法であってもよい。
【０１５２】
テスター（１）
本発明は、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つに対する抗体を含むテスターを提供する。
【０１５３】
当該抗体は、常法により作製することができる。例えば、ウサギなどの哺乳動物を上記（１０）〜（１４）の抗原で免疫することにより作製してもよい。当該抗体は、ＩｇＥ抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’）であってもよい。
【０１５４】
また、上記のテスターにおいて、当該抗体は担体に結合した形で提供されていてもよい。担体は、抗体と抗原の結合の検出に利用可能な担体であれば特に限定されない。当業者に公知の任意の担体が利用できる。
【０１５５】
抗原含有の有無を調べる方法としては、例えば、以下の方法が挙げられる。
・作製したＩｇＥ抗体を含むテスターを食品・食材等から得られた試料に接触させて、例えばＥＬＩＳＡ法等を用いて当該ＩｇＥ抗体と試料中の抗原との結合を検出し、当該ＩｇＥ抗体と抗原との結合が検出された場合に、対象食品・食材等に当該抗原が残留していると判断する方法。
・食品・食材等からタンパク質を抽出し、電気泳動して抗原のスポットバンドがあるかどうかを抗体により検出する方法。
・ろ紙などに食品・食材等をしみこませ、そこに含まれる抗原を検出するように、抗体溶液を反応させる方法。
【０１５６】
本発明の別の態様において、配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つの一部と相補的な塩基配列を有するプライマーを含むことを特徴とする、対象物における魚に対するアレルギーの抗原の有無を判定するためのテスターを含む。非限定的に、上記プライマーは例えば、配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つの配列の３’末端の部分または中央部分の配列の、好ましくは、１２残基、１５塩基、２０塩基、２５塩基と相補的な塩基配列を有する。特にｍＲＮＡを対象とする場合は、ポリＡテールの相補プライマーを有する。好ましい態様において、上記のプライマーを含むテスターは、さらに配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３で示される塩基配列の少なくとも１つの配列の５’末端の部分の塩基配列、好ましくは１２塩基、１５塩基、２０塩基、２５塩基からなる塩基配列を含むプライマーを含んでもよい。
【０１５７】
例えば、魚から得られたＤＮＡまたはｍＲＮＡを鋳型として、前記プライマーを用い、ＲＴ−ＰＣＲを含むＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）でＤＮＡまたはｃＤＮＡを増幅し、増幅されたＤＮＡまたはｃＤＮＡの配列を配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３と比較することで、抗原の有無を判断する。ｍＲＮＡをＰＣＲで増幅する方法は、ＲＡＣＥ法等が例示できる。この時、増幅されたＤＮＡまたはｃＤＮＡと配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３との比較において、同じアミノ酸をコードする点変異が存在する場合、または、増幅されたＤＮＡまたはｃＤＮＡの塩基配列において、配列番号６９、１０９、１２０、１３７または１４３の塩基配列に対する塩基の挿入、欠失、置換もしくは付加が存在しても、当該ＤＮＡまたはｃＤＮＡがコードするアミノ酸配列が配列番号７０、１１０、１２１、１３８または１４４のアミノ酸配列に対して同一性が７０％以上、好ましくは８０、９０、９５、９８、９９％以上となる場合は、抗原が存在すると判断する。
【０１５８】
一態様において、上記のテスターは、食材（魚もしくは魚卵）または食品製造ライン中などの対象物中の抗原含有の有無を調べるために用いられる。上記テスターは、製造業者による製造ラインおよび出荷前製品の品質検査用として用いてもよく、喫食者自身による対象食品・食材の抗原含有の有無のチェック用として用いてもよい。
【０１５９】
アレルゲン除去食品等
本発明は、上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つが除去または低減されていることを特徴とする魚、魚卵、当該魚もしくは当該魚卵加工品、または当該魚卵を産むもしくは当該魚卵から生まれた魚を提供する。
【０１６０】
魚、魚卵、当該魚もしくは当該魚卵加工品、または当該魚卵を産むもしくは当該魚卵から生まれた魚において、本発明の抗原を除去または低減する方法は限定されない。抗原の除去または低減は、本発明の抗原が除去または低減される限り、いかなる方法によって行われてもよい。
【０１６１】
例えば、本発明の抗原が除去または低減された魚または魚卵は、遺伝子ノックアウト技術を用いて、本発明の抗原の発現がノックアウトされた魚または魚卵を調製してもよい。
【０１６２】
遺伝子ノックアウト技術は、当業者に公知の手法のいずれかを用いることができる。例えば、Oishi, et al.（Scientific Reports, Vol.6, Article number: 23980, 2016, doi:10.1038/srep23980）は、ゲノム編集技術であるCRISPER/Cas9を始原生殖細胞に適用して、アレルゲンタンパク質遺伝子欠失個体を得ることを記載している。同様の手法を利用して、本発明の抗原が除去された魚または魚卵を得てもよい。また、抗原を含有しないまたは含有量の少ない魚または魚卵との人工授精による交配により、本発明の抗原が除去・低減された魚または魚卵を得てもよい。魚または魚卵の人工交配は、常法により行うことができる。
【０１６３】
本発明の抗原が除去または低減された魚加工品または魚卵加工品は、本発明の抗原が除去または低減された魚を原料とした加工品であってもよい。通常の魚または魚卵を原料とする場合は、魚加工品または魚卵加工品の調製前または調製後に本発明の抗原を除去または低減する処理を行う。通常の魚または魚卵を原料とした魚加工品または魚卵加工品において本発明の抗原を除去または低減する方法として、高圧処理および中性塩溶液による溶出や、高温スチーム等の、食品・食材中のタンパク質成分を除去する方法や、熱処理および酸処理による加水分解・変性・アミノ酸変化（側鎖の化学修飾・脱離等）する方法が挙げられる。  本発明の抗原が除去または低減された魚は、上記本発明の抗原が除去または低減された魚卵を孵化し、成長させた魚であってもよい。また、本発明の抗原が除去または低減された魚卵は、上記本発明の抗原が除去または低減された魚から得られたものであってもよい。
【０１６４】
アレルゲン除去加工品の製造方法（１）
本発明は、抗原が除去または低減されている魚加工品または魚卵加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップを有する、ここで当該抗原は上記（１０）〜（１４）の抗原の少なくとも一つである、前記製造方法を提供する。
【０１６５】
抗原が除去または低減されている魚加工品または魚卵加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップは、上記「テスター（１）」の項目において記載した方法により抗原の含有の有無を確認することにより行ってもよい。
【０１６６】
また、抗原が除去または低減されている魚加工品または魚卵加工品の製造は、上記「アレルゲン除去食品等」の項目において記載した方法により行ってもよい。
【０１６７】
抗原のエピトープ
実施例２、３、５〜８に示すとおり特定した抗原ならびに公知のサケ等のアレルギー抗原であるアルドラーゼ（aldolase）、ベータ−エノラーゼ（β-enolase）、および公知のイワシ等のアレルギーの抗原であるグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）について、実施例１０に示すとおり、エピトープおよびそのエピトープ内でアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合性に重要なアミノ酸を特定した。
【０１６８】
本発明は、アレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合するアミノ酸配列を含むポリペプチドとして以下（１α）〜（１７α）のポリペプチドを提供する。
【０１６９】
（１α）α−アクチニン−３のエピトープ
本発明において、（１α）のポリペプチドは以下（１α−１）〜（１α−６）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０１７０】
（１α−１）配列番号１５０〜１５４、２０７、２１０、２１３、２１８、２２４、及び２２７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７１】
（１α−２）XXXXXXKPDX（配列番号２０５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SXXXXXKPDK（配列番号２０６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２０７の１〜６、１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２０７の２〜６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７２】
別の態様において、DKXXXR（配列番号２０８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２１０の３〜５番目のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７３】
（１α−３）XXXXXXXDPM（配列番号２１１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXXXXKDDPM（配列番号２１２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２１３の１〜７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２１３の２〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７４】
別の態様において、XXXXXXDXPM（配列番号２１４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YSXXXXDXPM（配列番号２１５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２１３の１〜６、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２１３の３〜６、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７５】
また別の態様において、PXGXLXX（配列番号２１６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、PXGNLNT（配列番号２１７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２１８の２、４、６、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２１８の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７６】
（１α−４）SXFYHAFAGAEQAET（配列番号２１９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号１５２の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７７】
（１α−５）TXLXXXNXPXXXXSE（配列番号２２０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、TXLRLXNRPXXXXSE（配列番号２２１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号１５３の２、４〜６、８、１０〜１３番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７、８又は９個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号１５３の２、６、１０〜１３番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７８】
（１α−６）SXKTXXXXXEXR（配列番号２２２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SDKTXXXXXELR（配列番号２２３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２２４の２、５〜９、１１番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２２４の５〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１７９】
別の態様において、XXRE（配列番号２２５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、LXRE（配列番号２２６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２２７の１、２番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２２７の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１８０】
一態様において、（１α）のポリペプチドは、α−アクチニン−３の全長アミノ酸配列（配列番号２）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０１８１】
（２α）ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライクのエピトープ
本発明において、（２α）のポリペプチドは以下（２α−１）及び（２α−２）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０１８２】
（２α−１）配列番号１５５及び２３０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１８３】
（２α−２）XXNRXYYXXXE（配列番号２２８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、LDNRLYYXVAE（配列番号２２９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２３０の１、２、５、８〜１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２３０の８番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１８４】
一態様において、（２α）のポリペプチドは、ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライクの全長アミノ酸配列（配列番号５）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０１８５】
（３α）α−１，４−グルカンホスホリラーゼのエピトープ
本発明において、（３α）のポリペプチドは以下（３α−１）〜（３α−３）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０１８６】
（３α−１）配列番号１５６、１５７、２３２、２３５、及び２３７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１８７】
（３α−２）YXXXXXXR（配列番号２３１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２３２の２〜７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１８８】
別の態様において、GGYXQXXLXR（配列番号２３３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、GGYIQXXLDR（配列番号２３４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２３５の４、６、７、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２３５の６、７番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１８９】
（３α−３）RXKXXXDY（配列番号２３６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２３７の２、４〜６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１９０】
一態様において、（３α）のポリペプチドは、α−１，４−グルカンホスホリラーゼの全長アミノ酸配列（配列番号１０）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０１９１】
（４α）エロンゲーションファクター２のエピトープ
本発明において、（４α）のポリペプチドは以下（４α−１）〜（４α−３）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０１９２】
（４α−１）配列番号１５８、１５９、２３９、２４２、２４５、及び２４７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１９３】
（４α−２）KKXXXR（配列番号２３８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２３９の３〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１９４】
別の態様において、KKXXXRN（配列番号２４０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KKSNXRN（配列番号２４１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２４２の３〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２４２の５番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１９５】
（４α−３）LXXXLXXKXXI（配列番号２４３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、LXDXLXXKXXI（配列番号２４４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２４５の２〜４、６、７、９、１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２４５の２、４、６、７、９、１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１９６】
別の態様において、GKXXXXXXXXS（配列番号２４６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２４７の３〜１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０１９７】
一態様において、（４α）のポリペプチドは、エロンゲーションファクター２の全長アミノ酸配列（配列番号１９）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０１９８】
（５α）ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインのエピトープ
本発明において、（５α）のポリペプチドは以下（５α−１）〜（５α−４）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０１９９】
（５α−１）配列番号１６０〜１６２、２５０、２５２（アミノ酸配列：QYK）、２５５、２５８、及び２６１からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２００】
（５α−２）EXXXXYL（配列番号２４８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、EIXXAYL（配列番号２４９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２５０の２〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２５０の３、４番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０１】
（５α−３）QXK（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２５２の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０２】
別の態様において、XDXXXDK（配列番号２５３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、DDVXXDK（配列番号２５４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２５５の１、３〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２５５の４、５番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０３】
（５α−４）KXSXEXK（配列番号２５６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KLSXEDK（配列番号２５７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２５８の２、４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２５８の４番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０４】
別の態様において、QXXXDKC（配列番号２５９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、QKIXDKC（配列番号２６０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２６１の２〜４番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２６１の４番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０５】
一態様において、（５α）のポリペプチドは、ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインの全長アミノ酸配列（配列番号２６）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０２０６】
（６α）セロトランスフェリンのエピトープ
本発明において、（６α）のポリペプチドは以下（６α−１）〜（６α−５）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２０７】
（６α−１）配列番号１６３〜１６７、２６３、２６６、２６９、２７１、２７３、２７６、及び２７９からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０８】
（６α−２）XXCYY（配列番号２６２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２６３の１、２番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２０９】
別の態様において、VXVXKKXXX（配列番号２６４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、VAVAKKGXE（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２６６の２、４、７〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２６６の８番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１０】
（６α−３）XKXXXXEX（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、XKXGXGEX（配列番号２６８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２６９の１、３〜６、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２６９の１、３、５、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１１】
（６α−４）XXKXM（配列番号２７０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２７１の１、２、４番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１２】
別の態様において、VTNFXXXS（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２７３の５〜７番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１３】
（６α−５）YXYXXXXXC（配列番号２７４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXYNXXFXC（配列番号２７５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２７６の２、４〜８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２７６の２、５、６、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１４】
別の態様において、XXCLV（配列番号２７７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、FXCLV（配列番号２７８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２７９の１、２番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２７９の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１５】
一態様において、（６α）のポリペプチドは、セロトランスフェリンの全長アミノ酸配列（配列番号３３）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０２１６】
（７α）ミオシンバインディングプロテインＨ−ライクのエピトープ
本発明において、（７α）のポリペプチドは以下（７α−１）〜（７α−５）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２１７】
（７α−１）配列番号１６８〜１７１、２８２、２８４、２８７、２９０、２９２、２９５、２９７及び３００からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１８】
（７α−２）YVKXXXXKI（配列番号２８０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YVKXVXEKI（配列番号２８１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２８２の４〜７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２８２の４、６番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２１９】
別の態様において、NIXIP（配列番号２８３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２８４の３番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２０】
（７α−３）SXEXXXKXXXF（配列番号２８５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SXEXCXKXXXF（配列番号２８６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２８７の２、４〜６、８〜１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２８７の２、４、６、８〜１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２１】
別の態様において、KXDXFXXK（配列番号２８８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KXDXFXDK（配列番号２８９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２９０の２、４、６、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２９０の２、４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２２】
（７α−４）EXXXYXXXXXXXXD（配列番号２９１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２９２の２〜４、６〜１３番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２３】
（７α−５）XNXXYXXIXX（配列番号２９３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、DNXXYXXIXT（配列番号２９４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２９５の１、３、４、６、７、９、１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２９５の３、４、６、７、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２４】
別の態様において、YXXIXT（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号２９７の２、３、５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２５】
別の態様において、XXXISXGG（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXMISXGG（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３００の１〜３、６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３００の２、６番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２６】
一態様において、（７α）のポリペプチドは、ミオシンバインディングプロテインＨ−ライクの全長アミノ酸配列（配列番号４３）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０２２７】
（８α）デスミン（フラグメント）のエピトープ
本発明において、（８α）のポリペプチドは以下（８α−１）〜（８α−４）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２２８】
（８α−１）配列番号１７２、１７３、１７４、３０３、３０６、３０８、及び３１０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２２９】
（８α−２）KXXXSX（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KXXXSD（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３０３の２〜４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３０３の２〜４番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３０】
別の態様において、XKXKXXXXN（配列番号３０４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YKSKXSDLN（配列番号３０５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３０６の１、３、５〜８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３０６の５番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３１】
また別の態様において、VXKN（配列番号３０７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３０８の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３２】
（８α−４）DXGRXXE（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３１０の２、５、６番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３３】
一態様において、（８α）のポリペプチドは、デスミン（フラグメント）のアミノ酸配列（配列番号５６）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０２３４】
（９α）キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータのエピトープ
本発明において、（９α）のポリペプチドは以下（９α−１）〜（９α−５）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２３５】
（９α−１）配列番号１７５〜１７８、３１２、３１４、３１７、３２０、３２３、及び３２６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３６】
（９α−２）KKXXXG（配列番号３１１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３１２の３〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３７】
別の態様において、SKXXK（配列番号３１３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３１４の３、４番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３８】
（９α−３）XXXXXQXKXXG（配列番号３１５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、HXXXXQXKSSG（配列番号３１６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３１７の１〜５、７、９、１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３１７の２〜５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２３９】
（９α−４）XYXGKXXXX（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、IYXGKTXDI（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３２０の１、３、６〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３２０の３、７番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４０】
別の態様において、XDXXNXXRS（配列番号３２１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KDXXNXLRS（配列番号３２２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３２３の１、３、４、６、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３２３の３、４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４１】
（９α−５）QKYRQXXKXXXX（配列番号３２４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、QKYRQXXKXLXQ（配列番号３２５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３２６の６、７、９〜１２番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３２６の６、７、９、１１番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４２】
一態様において、（９α）のポリペプチドは、キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータの全長アミノ酸配列（配列番号６１）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０２４３】
（１０α）ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライクのエピトープ
本発明において、（１０α）のポリペプチドは以下（１０α−１）〜（１０α−８）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２４４】
（１０α−１）配列番号１７９〜１８５、３２９、３３２、３３５、３３８、３４１、３４４、３４７、３５０、３５３、３５６、３５９、３６２、及び３６５からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４５】
（１０α−２）TXXXXDXXEGK（配列番号３２７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、TXXXLDFREGK（配列番号３２８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３２９の２〜５、７、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３２９の２〜４番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４６】
別の態様において、XXEXXEXXD（配列番号３３０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、FREXXEXXD（配列番号３３１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３３２の１、２、４、５、７、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３３２の４、５、７、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４７】
（１０α−３）LXXNFTXXK（配列番号３３３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、LXINFTNEK（配列番号３３４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３３５の２、３、７、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３３５の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４８】
（１０α−４）XYXPPPXXXK（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、LYXPPPXXXK（配列番号３３７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３３８の１、３、７〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３３８の３、７〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２４９】
（１０α−５）XXDEXVXK（配列番号３３９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SXDEXVXK（配列番号３４０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３４１の１、２、５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３４１の２、５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５０】
別の態様において、XXDXXXAKXT（配列番号３４２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SXDEXVAKXT（配列番号３４３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３４４の１、２、４〜６、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３４４の２、５、９番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５１】
また別の態様において、VXXXXKXKK（配列番号３４５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、VAXXXKXKK（配列番号３４６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３４７の２〜５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３４７の３〜５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５２】
また別の態様において、KXXKXK（配列番号３４８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KXXKEK（配列番号３４９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３５０の２、３、５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３５０の２、３番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５３】
（１０α−６）XNXXXKXKXK（配列番号３５１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、XNXXXKXKTK（配列番号３５２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３５３の１、３〜５、７、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３５３の１、３〜５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５４】
（１０α−７）DXXXSXXK（配列番号３５４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、DXXXSXRK（配列番号３５５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３５６の２〜４、６、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３５６の２〜４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５５】
別の態様において、SXXKXEX（配列番号３５７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SXRKXEG（配列番号３５８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３５９の２、３、５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３５９の２、５番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５６】
（１０α−８）XXRXXEXK（配列番号３６０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、EXRXXEEK（配列番号３６１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３６２の１、２、４、５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３６２の２、４、５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５７】
別の態様において、XXXEXKXKK（配列番号３６３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、RXXEEKXKK（配列番号３６４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３６５の１〜３、５、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３６５の２、３、７番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２５８】
（１１α）グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライクのエピトープ
本発明において、（１１α）のポリペプチドは以下（１１α−１）及び（１１α−２）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２５９】
（１１α−１）配列番号１８６、３６７、及び３７０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６０】
（１１α−２）GXYXXXXXXR（配列番号３６６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３６７の２、４〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６１】
別の態様において、NLXXN（配列番号３６８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、NLXEN（配列番号３６９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３７０の３、４番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３７０の３番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６２】
（１２α）ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライクのエピトープ
本発明において、（１２α）のポリペプチドは以下（１２α−１）〜（１２α−１１）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２６３】
（１２α−１）配列番号１８７〜１９６、３７３、３７６、３７９、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９５、３９７、４００、４０２、４０５、４０７、４０９、４１１、及び４１３からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６４】
（１２α−２）KXTXXKKKXX（配列番号３７１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KXTXXKKKPV（配列番号３７２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３７３の２、４、５、９、１０番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３７３の２、４、５番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６５】
別の態様において、KXKPVVXX（配列番号３７４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KXKPVVDE（配列番号３７５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３７６の２、７、８番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３７６の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６６】
（１２α−３）YXXXXFXXXI（配列番号３７７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXXIXFEYXI（配列番号３７８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３７９の２〜５、７〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６又は７個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３７９の２、３、５、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６７】
別の態様において、XXIXDXRG（配列番号３８０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXIXDXRG（配列番号３８１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３８２の１、２、４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３８２の２、４、６番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６８】
（１２α−４）DXRGXXK（配列番号３８３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３８４の２、５、６番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２６９】
（１２α−５）KMXXXXPK（配列番号３８５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３８６の３〜６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７０】
別の態様において、KXXKXXXPKH（配列番号３８７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３８８の２、３、５〜７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７１】
また別の態様において、KXXXXFL（配列番号３８９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３９０の２〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７２】
（１２α−６）KGKKXX（配列番号３９１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３９２の５、６番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７３】
別の態様において、KXKXXXLXXE（配列番号３９３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KXKXXXLQXE（配列番号３９４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号３９５の２、４〜６、８、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号３９５の２、４〜６、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７４】
（１２α−７）TXKX（配列番号３９６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号３９７の２、４番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７５】
別の態様において、KYXXKKXXX（配列番号３９８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、KYXXKKDGL（配列番号３９９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４００の３、４、７〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４００の３、４番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７６】
（１２α−８）YXXXPDG（配列番号４０１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４０２の２〜４番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７７】
別の態様において、DGYXXSXSXK（配列番号４０３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、DGYXLSLSXK（配列番号４０４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４０５の４、５、７、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４０５の４、９番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７８】
（１２α−９）PVTXX（配列番号４０６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４０７の４、５番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２７９】
（１２α−１０）QXXXXXXXDKXN（配列番号４０８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４０９の２〜８、１１番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８０】
（１２α−１１）YXXXXXDXKT（配列番号４１０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４１１の２〜６、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８１】
別の態様において、YXXQXXXK（配列番号４１２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４１３の２、３、５〜７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８２】
（１３α）ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアルのエピトープ
本発明において、（１３α）のポリペプチドは以下（１３α−１）及び（１３α−２）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２８３】
（１３α−１）配列番号１９７、４１５、及び４１７からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８４】
（１３α−２）GXYS（配列番号４１４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４１５の２番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８５】
別の態様において、YXXXXG（配列番号４１６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４１７の２〜５番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８６】
（１４α）Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライクのエピトープ
本発明において、（１４α）のポリペプチドは以下（１４α−１）及び（１４α−２）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２８７】
（１４α−１）配列番号１９８及び４２０からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８８】
（１４α−２）XPVGSXSKX（配列番号４１８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、EPVGSXSKV（配列番号４１９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４２０の１、６、９番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４２０の６番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２８９】
（１５α）アルドラーゼのエピトープ
本発明において、（１５α）のポリペプチドは以下（１５α−１）及び（１５α−２）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２９０】
（１５α−１）配列番号１９９、４２３、及び４２５からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９１】
（１５α−２）XYXRXXXXXXXK（配列番号４２１）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、SYXRXLXXXAXK（配列番号４２２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４２３の１、３、５〜１１番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７、８又は９個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４２３の３、５、７〜９、１１番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９２】
別の態様において、SXXKXXG（配列番号４２４）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４２５の２、３、５、６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９３】
一態様において、（１５α）のポリペプチドは、アルドラーゼの全長アミノ酸配列（NCBIのタンパク質アクセッション番号NP_001133180.1、配列番号４４５）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０２９４】
（１６α）ベータ−エノラーゼのエピトープ
本発明において、（１６α）のポリペプチドは以下（１６α−１）〜（１６α−４）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０２９５】
（１６α−１）配列番号２００〜２０２、４２８、４３１、４３４、及び４３６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９６】
（１６α−２）RYLGKXXX（配列番号４２６）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、RYLGKGXV（配列番号４２７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４２８の６〜８番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４２８の７番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９７】
（１６α−３）YXXIXDXXXH（配列番号４２９）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXXIXDLXGH（配列番号４３０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４３１の２、３、５、７〜９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４３１の２、３、５、８番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９８】
別の態様において、DXXXHXDVXL（配列番号４３２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、DXXXHKDVIL（配列番号４３３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４３４の２〜４、６、９番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４又は５個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４３４の２〜４番目のアミノ酸のいずれか１、２又は３個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０２９９】
（１６α−４）IKXXXXKDAT（配列番号４３５）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４３６の３〜６番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０３００】
一態様において、（１６α）のポリペプチドは、ベータ−エノラーゼの全長アミノ酸配列（NCBIのタンパク質アクセッション番号NP_001133193.1、配列番号４４６）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０３０１】
（１７α）グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼのエピトープ
本発明において、（１７α）のポリペプチドは以下（１７α−１）〜（１７α−３）からなる群より選択されるポリペプチドのいずれかであってよい。
【０３０２】
（１７α−１）配列番号２０３、２０４、４４１、及び４４４からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０３０３】
（１７α−２）YXXXXXXXDXXXGRF（配列番号４３７）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、YXXXXXXXDSTXGRF（配列番号４３８）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号２０３の２〜８、１０〜１２番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号２０３の２〜８、１２番目のアミノ酸のいずれか１、２、３、４、５、６、７又は８個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０３０４】
（１７α−３）SYXXIXXV（配列番号４４０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、配列番号４４１の３、４、６、７番目のアミノ酸のいずれか１、２、３又は４個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０３０５】
別の態様において、IKKXXK（配列番号４４２）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。好ましくは、IKKVXK（配列番号４４３）のアミノ酸配列を含むポリペプチド。より好ましくは、配列番号４４４の４、５番目のアミノ酸のいずれか１又は２個のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。さらに好ましくは、配列番号４４４の５番目のアミノ酸が別のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【０３０６】
一態様において、（１７α）のポリペプチドは、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼの全長アミノ酸配列（NCBIのタンパク質アクセッション番号NP_001117033.1、配列番号４４７）に対して同一または９０％以上、８０％以上もしくは７０％以上の同一性を有する変異体またはホモログを含まないものであってもよい。
【０３０７】
上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドの長さは特に限定されない。好ましい態様において、上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドの長さは、５００アミノ酸以下、３００アミノ酸以下、２００アミノ酸以下、１００アミノ酸以下、５０アミノ酸以下、３０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１５アミノ酸以下、１０アミノ酸以下、または５アミノ酸以下であってもよい。
【０３０８】
上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドは、ペプチドの固相合成など化学合成の手法により調製してもよい。または、エピトープを含むポリペプチドは、当業者に周知の遺伝子組換え技術により組換えタンパク質として発現させ、そして当業者に周知のタンパク質生成方法により分離・生成することによって得てもよい。
【０３０９】
診断キット・診断方法（２）
本発明は、対象のアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドの少なくとも一つであるポリペプチド、または２以上の上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドがスペーサーを介してもしくは介さずに連結されたポリペプチドである、前記方法を提供する。
【０３１０】
以下、上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドの少なくとも一つであるポリペプチド、または２以上の上記（１α）〜（１７α）のポリペプチドがスペーサーを介してもしくは介さずに連結されたポリペプチドを、本明細書において「上記（１α）〜（１７α）を含む抗原」と記載する。スペーサーの種類は特に限定されず、複数のペプチドを連結するのに当業者が通常使用するものを利用できる。スペーサーは例えば、Ａｃｐ（６）-ＯＨなどの炭化水素鎖であってもよい。
【０３１１】
対象から得られた試料は、上記「診断キット・診断方法（１）」の項目において記載したとおりである。
【０３１２】
対照から得られた試料と当該抗原との接触およびその結合の検出は、上記「診断キット・診断方法（１）」の項目において記載した既知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorvent Assay）、サンドイッチ免疫測定法、イムノブロット、免疫沈降法、イムノクロマト法等により行うことが可能である。
【０３１３】
上記（１α）〜（１７α）を含む抗原は、担体に固定されている状態であってもよい。この場合は上記工程（ｉ）および（ｉｉ）においてＥＬＩＳＡ、サンドイッチ免疫測定法、イムノクロマト法、表面プラズモン共鳴等が利用でき、上記工程（ｉ）は、対象から得られた試料を、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を固定した面に接触させることにより行う。また、対象のＩｇＥ抗体が担体に固定されている状態のものを利用し、上記の手法により上記（１α）〜（１７α）を含む抗原との結合を検出してもよい。
【０３１４】
上記（１α）〜（１７α）を含む抗原は担体に固定されていない状態であってもよい。この場合は、上記工程（ｉ）および（ｉｉ）において、フローサイトメトリー等が利用でき、レーザー光によりＩｇＥ抗体が結合した上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の存在を確認できる。この方法は例えば、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の接触により好塩基球が活性化したときに現れる表面抗原ＣＤ２０３ｃを検出する方法である、好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）が挙げられる。また、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を試料中の血球にさらに接触させることにより、ヒスタミンを遊離するかどうかを調べるヒスタミン遊離試験（ＨＲＴ）も挙げられる。
【０３１５】
上記（１α）〜（１７α）を含む抗原は、アレルギー患者のＩｇＥ抗体と特異的に結合する抗原である。したがって、対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される。
【０３１６】
本発明はまた、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを含むアレルギーの診断キットを提供する。本発明の診断キットは、上記のアレルギーを診断するための指標を提供する方法、または下記の診断方法に用いてもよい。本発明の診断キットは、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを含むほか、酵素標識された抗ＩｇＥ抗体および当該酵素の基質となる発色基質または発光基質を含んでいてもよい。また、蛍光標識された抗ＩｇＥ抗体を用いてもよい。本発明の診断キットにおいて、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原は担体に固定化された状態で提供されてもよい。本発明の診断キットはまた、診断のための手順についての説明書や当該説明を含むパッケージと共に提供されてもよい。
【０３１７】
別の態様において、上記の診断キットは、アレルギーについてのコンパニオン診断薬を含む。コンパニオン診断薬とは、医薬品の効果が期待される患者の特定または医薬品の重篤な副作用リスクを有する患者の特定、あるいは医薬品を用いた治療の最適化のために当該医薬品の反応性を検討するために用いるものである。ここで治療の最適化とは、例えば、用法容量の決定や投与中止の判断、どのアレルゲンコンポーネントを使って免疫寛容するかの確認等が含まれる。
【０３１８】
本発明はまた、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを含むアレルギーの診断用組成物を提供する。本発明の診断用組成物は、下記の診断方法に用いることができる。本発明の診断用組成物は、必要に応じて本発明の抗原とともに一般的に用いられる、薬学的に許容される担体や添加剤を含んでいてもよい。
【０３１９】
一態様において、本発明は、対象のアレルギーを診断する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであると判断する；
ことを含み、ここで当該抗原は上記（１α）〜（１７α）を含む抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。ここにおいて（ｉ）および（ｉｉ）の各工程は、アレルギーを診断するための指標を提供する方法の各工程について説明したとおりに行われる。
【０３２０】
別の態様において、本発明は、対象のアレルギーを診断する方法であって、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを対象に投与することを含む、前記方法を提供する。当該方法は、皮膚に上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を適用することを特徴とする皮膚テストの形式で行ってもよい。皮膚テストには、皮膚上に診断用組成物を適用した後に、出血しない程度に微少な傷をつけることで皮膚に上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を浸透させて皮膚反応を観察するプリックテスト、診断用組成物を適用した上に皮膚を少し引っ掻いて反応を観察するスクラッチテスト、クリームや軟膏などの形態の診断用組成物を皮膚に適用して反応を観察するパッチテスト、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を皮内に投与して反応を観察する皮内テスト、などの形態が含まれる。上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を適用した部分の皮膚に腫れなどの皮膚反応が生じた場合、その対象はアレルギーを有すると診断する。ここで、皮膚に適用する上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の量は、例えば、１回あたり１００μｇ以下の用量であってよい。
【０３２１】
アレルギーの診断においては、抗原の特定を目的とした負荷試験がしばしば行われている。上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つは、アレルギーであることを診断するための負荷試験の有効成分として用いることができる。ここで、負荷試験に用いるアレルゲンコンポーネントとしては、発現精製したポリペプチドであってもよく、例えば、イネにスギ花粉抗原の遺伝子を形質転換し、その抗原タンパク質を米内に発現させた花粉米のように、食品・食材において発現させたものであってもよい。
【０３２２】
また別の態様において、本発明はアレルギーの診断に使用するための上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを提供する。
【０３２３】
さらなる別の態様において、本発明はアレルギーの診断薬の製造のための上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つの使用を提供する。
【０３２４】
本項目において、診断または検出対象となるアレルギーは、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原に対するアレルギーであってよい。すなわち、アレルギーの検出は、単一の上記（１α）〜（１７α）を含む抗原に対するアレルギーのみならず、交差性を含めたアレルギーを検出するものであり得る。
【０３２５】
医薬組成物・治療方法（２）
本発明は、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。一態様において、上記の医薬組成物は、アレルギーを治療するために用いられる。アレルギーの治療とは、体内に取り込んでも発症しない抗原の限界量を増やすことであり、最終的には通常の抗原の摂取量では発症しない状態（寛解）を目指すものである。
【０３２６】
本発明はまた、アレルギーの治療を必要とする患者に対して、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを投与することを含む、アレルギーを治療する方法を提供する。
【０３２７】
別の態様において、本発明はアレルギーの治療に使用するための上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを提供する。さらに別の態様において本発明は、アレルギーの治療薬の製造のための上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つの使用を提供する。
【０３２８】
アレルギーの治療においては、患者に抗原を投与することで免疫寛容へと誘導することを目標とした、減感作療法がしばしば行われている。上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つは、アレルギーに対する減感作療法のための有効成分として用いることができる。ここで、減感作療法に用いるアレルゲンコンポーネントとしては、発現精製したポリペプチドであってもよく、例えば花粉米のように、食品・食材において発現させたものであってもよい。
【０３２９】
本発明の医薬組成物の投与経路、投与量、投与回数および／または投与期間、医薬組成物に含まれる他の成分、ならびに剤型については、上記「医薬組成物・治療方法（１）」の項目において記載したものとすることができる。上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を用いる場合の用量は、例えば、成人の場合、１回あたり１００μｇ以下の用量であってもよい。
【０３３０】
本項目において、治療対象となるアレルギーは、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原に対するアレルギーであってよい。すなわち、アレルギーの治療は、単一の上記（１α）〜（１７α）を含む抗原に対するアレルギーのみならず、交差性を含めたアレルギーを治療するものであり得る。
【０３３１】
テスター（２）
本発明は、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つに対する抗体を含むテスターを提供する。
【０３３２】
当該抗体は、常法により作製することができる。例えば、ウサギなどの哺乳動物を、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原で免疫することにより作製してもよい。当該抗体は、Ｉｇ抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’）であってもよい。
【０３３３】
また、上記のテスターにおいて、当該抗体は担体に結合した形で提供されていてもよい。担体は、抗体と上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の結合の検出に利用可能な担体であれば特に限定されない。当業者に公知の任意の担体が利用できる。また、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原に対する抗体が、上記「抗原のエピトープ」の項目に記載されたエピトープに対する抗体であることが好ましい。それにより、交差性を含めて検出できるテスターとすることができる。
【０３３４】
上記（１α）〜（１７α）を含む抗原含有の有無を調べる方法としては、例えば、以下の方法が挙げられる。
・作製した抗体を含むテスターを原料・加工品等から得られた試料に接触させて、例えばＥＬＩＳＡ法等を用いて当該抗体と試料中の上記（１α）〜（１７α）を含む抗原との結合を検出し、当該抗体と上記（１α）〜（１７α）を含む抗原との結合が検出された場合に、対象原料・加工品等に当該抗原が残留していると判断する方法。
・ろ紙などに原料・加工品等をしみこませ、そこに含まれる上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を検出するように、抗体溶液を反応させる方法。
【０３３５】
本発明の別の態様において、エピトープに対応するプライマーを含むことを特徴とする、対象物におけるアレルギーの上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の有無を判定するためのテスターを含む。非限定的に、上記プライマーは例えば、上記（１α）〜（１７α）で特定したアミノ酸配列をコードする核酸の塩基配列の一部またはその相補鎖を含むように設計されたものであってもよい。あるいは、上記プライマーは、上記（１α）〜（１７α）で特定したアミノ酸配列であるエピトープを含むタンパク質をコードする核酸において、当該エピトープをコードする部分の上流側の領域の塩基配列またはそのエピトープをコードする部分の下流側の領域の相補鎖の塩基配列となるように設計されたものであってもよい。そのようなプライマーとして、例えば配列番号１、４、９、１８、２５、３２、４２、５５、６０、６９、１０９、１２０、１３７、１４３、４４８、４４９または４５０で示される塩基配列の少なくとも１つの一部であるプライマーおよび／または配列番号１、４、９、１８、２５、３２、４２、５５、６０、６９、１０９、１２０、１３７、１４３、４４８、４４９または４５０で示される塩基配列の少なくとも１つと相補的な配列の一部であるプライマーが挙げられる。ここで、抗原の全長配列におけるエピトープの位置は、下記実施例１０の表２において特定した通りである。また、特にｍＲＮＡを対象とする場合は、ポリＡテールの相補プライマーを有していてもよい。
【０３３６】
例えば、試料から得られたＤＮＡまたはｍＲＮＡを鋳型として、前記プライマーを用い、ＲＴ−ＰＣＲを含むＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）でＤＮＡを増幅し、増幅されたＤＮＡの配列において、上記（１α）〜（１７α）で特定したアミノ酸配列をコードする核酸を含むか否かを判定することで、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の有無を判断する。ｍＲＮＡを対象にＰＣＲで増幅する方法は、ＲＡＣＥ法等が例示できる。増幅されたＤＮＡにおいて可能な３通りのオープンリーディングフレームがコードするアミノ酸配列の一つが、上記（１α）〜（１７α）で特定したアミノ酸配列を含む場合、抗原を有すると判断する。ＤＮＡが増幅されない場合は、抗原を有しないと判断する。
【０３３７】
一態様において、上記のテスターは、原料または加工品製造ライン中などの対象物中の上記（１α）〜（１７α）を含む抗原含有の有無を調べるために用いられる。原料は食材であってもよく、化粧品原料、医薬品原料等であってもよい。加工品は食用加工品であってもよく、化粧品、医薬品等であってもよい。上記テスターは、原料として含まれる生物種の探索用として用いてもよく、製造業者による製造ラインおよび出荷前製品の品質検査用として用いてもよく、喫食者または使用者自身による対象原料・加工品の抗原含有の有無のチェック用として用いてもよい。
【０３３８】
アレルゲン除去原料等
本発明は、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つが除去又は低減されていることを特徴とする原料または加工品を提供する。
【０３３９】
原料または加工品において本発明の抗原を除去又は低減する方法は限定されない。抗原の除去又は低減は、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原が除去又は低減される限り、いかなる方法によって行われてもよく、例えば上記「アレルゲン除去食品等」の項目に記載した手法を用いてもよい。
【０３４０】
上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つが除去又は低減されているとは、抗原全体が除去または低減されていることにより達成されてもよく、あるいは抗原タンパク質から、上記（１α）〜（１７α）で特定する配列部分が切断または取り除かれることにより達成されてもよい。「取り除かれる」には、上記（１α）〜（１７α）で特定する配列部分のすべてまたは一部の欠失および改変を含む。
【０３４１】
例えば、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原が除去又は低減された原料は、遺伝子ノックアウト技術を用いて、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の発現がノックアウトされた原料を調製してもよい。遺伝子ノックアウト技術は、遺伝子改変等の当業者に公知の手法のいずれかを用いることができる。
【０３４２】
上記（１α）〜（１７α）を含む抗原が除去又は低減された加工品は、精製ペプチドを原料として用いた粉ミルクのように、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原が除去又は低減された原料を用いた加工品であってもよい。通常の原料を用いる場合は、加工品の調製前または調製後に上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を除去又は低減する処理を行う。通常の原料を用いた加工品において上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を除去又は低減する方法として、上記「アレルゲン除去食品等」の項目に記載した手法を用いてもよい。上記（１α）〜（１７α）を含む抗原を切断する方法としては、特定の消化酵素で切断する処理をする方法が挙げられる。
【０３４３】
アレルゲン除去加工品の製造方法（２）
本発明は、抗原が除去又は低減されている加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップを有し、ここで当該抗原は上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つである、前記製造方法を提供する。
【０３４４】
当該製造方法において、抗原が除去又は低減されているとは、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つが除去又は低減されているか、前記抗原から、上記（１α）〜（１７α）で特定する配列部分が切断または取り除かれていることを意味する。
【０３４５】
加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認する手法は、特に限定されず、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つを検出可能ないかなる手法を用いてもよい。例えば、当該加工品の製造過程で生じる材料を含む試料と、上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つに対する抗体との結合性により、当該加工品中の当該ポリペプチドまたは抗原の存在の有無を確認してもよい。そのような方法の詳細は、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目において記載した通りである。すなわち、上記製造方法においては、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目における「対象のＩｇＥ抗体」を「上記（１α）〜（１７α）を含む抗原の少なくとも一つに対する抗体」と置き換え、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目における「抗原」を「加工品の製造過程で生じる材料を含む試料」と置き換えて、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目において記載した手法を加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するために用いることができる。また、上記「テスター（２）」の項目で記載したテスターを使用することもできる。
【実施例】
【０３４６】
以下に本発明の実施例を説明する。本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって限定されない。【０３４７】
実施例１：タンパク質パターンの確認
下記の二次元電気泳動方法を使用して、サケに含まれるタンパク質を調べた。【０３４８】
タンパク質の抽出
サケに含まれるタンパク質の抽出及び精製は次のように行った。サケの身に、可溶化剤（Mammalian Lysis Buffer (MCLI), SIGMA社）を加えてタンパク質を抽出した後、尿素バッファーを添加してタンパク質抽出液を得た。尿素バッファーの組成は以下の通りである。
３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ
２Ｍ  チオ尿素
７Ｍ  尿素
４％(ｗ／ｖ)   ＣＨＡＰＳ：
３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホナート
適量の希塩酸
蒸留水を加えて全体を１００ｍＬに調整した。ｐＨは８．５であった。
その後、タンパク質重量として２５μｇずつを混合して抽出液を得た。【０３４９】
その後、2D-CleanUPキット（ＧＥ社製）を使用して２回の沈殿操作を行った。第１回目の沈殿操作は、回収した上記蛋白質抽出液にＴＣＡ（トリクロロ酢酸）を加えて沈殿を行い、当該操作で生じた沈殿（ＴＣＡ沈殿）を回収した。第２回目の沈殿操作は、回収した前記ＴＣＡ沈殿にアセトンを加えて沈殿を行い、当該操作で得られた沈殿（検体）を回収した。【０３５０】
検体溶液の調製
得られた検体の一部（タンパク質重量として４０μｇ）を、１次元目等電点電気泳動用ゲルの膨潤用緩衝液であるDeStreak Rehydration Solution（ＧＥ社製）１５０μｌに溶解し、１次元目等電点電気泳動用の検体溶液（膨潤用検体溶液）とした。DeStreak Rehydration Solutionの組成は以下の通りである。
７Ｍ  チオ尿素
２Ｍ  尿素
４％（ｗ／ｖ）  ＣＨＡＰＳ
０．５％（ｖ／ｖ）  ＩＰＧバッファー；ＧＥ社製
適量のＢＰＢ（ブロモフェノールブルー）
１次元目等電点電気泳動用ゲルへの検体の浸透
１次元目等電点電気泳動用ゲル（ＧＥ社製：ＩＰＧゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL)）を前記した１次元目等電点電気泳動用の検体溶液（膨張用検体溶液）１４０μｌに浸漬し、一晩室温にて浸透させた。【０３５１】
本実施例においては、電気泳動機器としてＧＥ社製のIPGphorを使用した。【０３５２】
泳動トレーにシリコンオイルを満たした。検体を浸透させたゲルの両端に水で湿らせた濾紙を設け、ゲルをシリコンオイルに覆われるよう、泳動トレーにセットし、ゲルとの間に当該濾紙を挟んだ状態で電極をセットした。【０３５３】
等電点電気泳動機器の電流値の上限をゲル１本当たり７５μＡに設定し、電圧プログラムを、（１）３００Ｖ定電圧で７５０Ｖｈｒまで定電圧工程を行い（当該工程終了前の泳動３０分間の電流変化幅が５μＡであった）、（２）３００Ｖｈｒかけて１０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（３）更に４５００Ｖｈｒかけて５０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（４）その後５０００Ｖ定電圧で総Ｖｈｒが１２０００になるまで、１次元目の等電点電気泳動を行った。【０３５４】
等電点電気泳動ゲルのＳＤＳ平衡化
上記の１次元目の等電点電気泳動を行った後、等電点電気泳動機器からゲルを取り外し、還元剤を含む平衡化緩衝液に当該ゲルを浸漬して、１５分・室温にて振とうした。上記還元剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）
６Ｍ  尿素
３０％（ｖ／ｖ）  グリセロール
２％（ｗ／ｖ）  ＳＤＳ
１％（ｗ／ｖ）  ＤＴＴ
次に、上記還元剤を含む平衡化緩衝液を除き、ゲルをアルキル化剤を含む平衡化緩衝液に浸漬して、１５分・室温にて振とうし、ＳＤＳ平衡化したゲルを得た。上記アルキル化剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）
６Ｍ  尿素
３０％（ｖ／ｖ）  グリセロール
２％（ｗ／ｖ）  ＳＤＳ
２．５％（ｗ／ｖ）  ヨードアセトアミド
２次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
本実施例においては、電気泳動機器としてlife technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを使用した。２次元目泳動用ゲルはlife technologies社製NuPAGE 4-12% Bis-Tris Gelsを使用した。また、以下の組成の泳動用緩衝液を調製し、使用した。
５０ｍＭ  ＭＯＰＳ
５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基
０．１％（ｗ／ｖ）  ＳＤＳ
１ｍＭ  ＥＤＴＡ
また、本実施例においては泳動用緩衝液に０．５％（ｗ／ｖ）のアガロースＳ（ニッポンジーン社製）と適量のＢＰＢ（ブロモフェノールブルー）を溶解させた接着用アガロース溶液を使用した。【０３５５】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥのウェル中を十分に上記泳動用緩衝液で洗浄した後、当該洗浄に用いた緩衝液を取り除いた。次に、ウェルの中に充分に溶解させた接着用アガロース溶液を添加した。次に、ＳＤＳ平衡化したゲルをアガロース中に浸漬させ、ピンセットでＳＤＳ平衡化したゲルと２次元目泳動用ゲルを密着させた。当該両ゲルが密着した状態でアガロースが充分に固まったのを確認し、２００Ｖ定電圧で約４５分間泳動を行った。【０３５６】
ゲルの蛍光染色
SYPRO Ruby（life technologies社製）を用いてゲルの蛍光染色を行った。【０３５７】
まず、使用する密閉容器を事前に９８％（ｖ／ｖ）のエタノールで十分に洗浄した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ機器から泳動後の２次元目泳動用ゲルを取り外して、洗浄した密閉容器におき、５０％（ｖ／ｖ）メタノール及び７％（ｖ／ｖ）酢酸含有水溶液に３０分間浸漬する処理を２回行った。その後、当該水溶液を水に置換し、１０分間浸漬した。次に、２次元目泳動用ゲルを４０ｍｌのSYPRO Rubyに浸漬し、室温で一晩振とうした。次に、SYPRO Rubyを除き、２次元目泳動用ゲルを水で洗浄した後、１０％（ｖ／ｖ）メタノール及び７％（ｖ／ｖ）酢酸含有水溶液で３０分間振とうした。更に当該水溶液を水に置換し、３０分以上振とうした。【０３５８】
解析
上記一連の処理を施した２次元目泳動用ゲルをTyphoon9500（ＧＥ社製）を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。サケの身に含まれるタンパク質について、２次元電気泳動の結果を図１Ａ左図に示す。ゲルの写真の左側には、分子量マーカーのバンドが見られ、バンドの位置が特定の分子量（ＫＤａ）を示す。【０３５９】
実施例２：イムノブロットでの抗原確認（１）
イムノブロットでの抗原確認は、実施例１に記載した手順を「２次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥ」まで行った後、以下の「メンブレンへの転写」「イムノブロット」「解析」の操作を行うことにより行った。【０３６０】
メンブレンへの転写
メンブレンへの転写は、以下の転写装置及び転写用緩衝液を用いて行った。
転写装置：XCell SureLock Mini-Cell およびXCell IIブロットモジュール（life technologies社製）
転写用緩衝液：NuPAGEトランスファーバッファー（×２０）（life technologies社製）をmilliQ水で２０倍希釈して使用した。【０３６１】
具体的には以下の手順に従って２次元目泳動用ゲル中のタンパク質をメンブレン（ＰＶＤＦ膜）へ転写した。【０３６２】
（１）ＰＶＤＦ膜を、１００％メタノールに浸漬し、次にmilliQ水に浸漬し、その後、転写用緩衝液に移して、ＰＶＤＦ膜の親水化処理を行った。【０３６３】
（２）スポンジ、ろ紙、２次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥが終わった２次元目泳動用ゲル、親水化処理済みＰＶＤＦ膜、ろ紙、スポンジの順でセットし、転写装置中、３０Ｖ定電圧で１時間通電した。【０３６４】
イムノブロット
メンブレンのイムノブロットを、１次抗体として魚に対するアレルギーを有する患者１の血清または非魚アレルギー被験者の血清を用いて行った。この魚アレルギーの患者１は、魚による即時型アレルギーと診断された患者である。なお、この患者は、サケ、アジ、アナゴ、クロダイ、サバ、タイ、タラ、ハマチに対してアレルギー症状を発症し、プリックテストで陽性を示した。【０３６５】
メンブレンのイムノブロットは、以下の手順に従って行った。
（１）転写したメンブレンを５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液（非イオン界面活性剤Tween 20を０．１％含むＰＢＳバッファー）中、室温で１時間振とうした。
（２）１次抗体として、５％血清／５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液中、室温で１時間静置した。
（３）ＰＢＳＴ溶液で洗浄した（５分×３回）。
（４）２次抗体として抗ヒトＩｇＥ−ＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）を５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液で５０００倍に希釈した溶液中、室温で１時間静置した。
（５）ＰＢＳＴ溶液で洗浄した（５分×３回）。
（６）Pierce Western Blotting Substrate Plus（Thermo社製）で、５分間静置した。【０３６６】
解析
上記一連の処理を施したメンブレンをTyphoon9500（ＧＥ社製）を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。【０３６７】
魚アレルギー患者１の血清を用いたイムノブロットを、対照である非魚アレルギー被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。サケの身に含まれるタンパク質について魚アレルギー患者１の血清を用いて行ったイムノブロット（図１Ａ右図）において、非魚アレルギー被験者の血清を用いた場合（図３）とは異なり、かつ公知のサケアレルゲンタンパク質とは異なる９つのスポットが検出された。検出されたスポットをイムノブロット上に示す（図１Ａ右図）。【０３６８】
上記９つのスポットの分子量および等電点はそれぞれ以下の通りである。
スポット１：分子量９０〜１２０ｋＤａ、ｐＩ３．０〜６．０
スポット２：分子量１２０〜１６０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜７．０
スポット３：分子量９０〜１２０ｋＤａ、ｐＩ５．０〜８．０
スポット４：分子量９０〜１２０ｋＤａ、ｐＩ６．０〜８．０
スポット５：分子量６０〜９０ｋＤａ、ｐＩ３．０〜６．０
スポット６：分子量７０〜１００ｋＤａ、ｐＩ５．０〜７．０
スポット７：分子量４０〜７０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜７．０
スポット８：分子量４０〜７０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜７．０
スポット９：分子量２０〜５０ｋＤａ、ｐＩ４．０〜７．０
実施例３：質量分析および抗原の同定（１）
上記の９つのスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。【０３６９】
具体的には、以下の手順でタンパク質の抽出および質量分析を行った。
（１）サケの身について、実施例１及び２の手順に従ってタンパク質抽出、２次元電気泳動及びメンブレン転写を行い、０．００８％Direct blue／４０％エタノール・１０％酢酸で振とうにより染色した。
（２）その後、４０％エタノール・１０％酢酸で５分間の処理を３回行って脱色し、水で５分間洗浄後、風乾した。
（３）目的のスポットをきれいなカッター刃で切り取り、遠心チューブに入れた。５０μＬのメタノールでメンブレン親水処理後、１００μＬの水で２回洗浄後遠心除去し、２０μＬの２０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３・５０％アセトニトリルを加えた。
（４）１ｐｍｏｌ／μＬリシルエンドペプチダーゼ（ＷＡＫＯ）１μＬを加え、３７℃で６０分間静置した後、溶液を新しい遠心チューブに回収した。２０μＬの２０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３・７０％アセトニトリルをメンブレンに加え、室温にて１０分間浸し、さらに回収した。０．１％ギ酸、４％アセトニトリル１０μＬで溶解し、チューブに移した。
（５）回収した溶液を減圧乾燥した後、Ａ液（０．１％ギ酸、４％アセトニトリル溶液）１５μｌで溶解し、質量分析（ESI-TOF6600, AB Sciex社製）を行った。
（６）質量分析計から得られた質量データに基づくタンパク質の同定は、ＮＣＢＩまたはＵｎｉＰｒｏｔをサーチすることで行った。【０３７０】
結果
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。
スポット１：配列番号３で示されるアミノ酸配列
スポット２：配列番号６〜８で示されるアミノ酸配列
スポット３：配列番号１１〜１７で示されるアミノ酸配列
スポット４：配列番号２０〜２４で示されるアミノ酸配列
スポット５：配列番号２７〜３１で示されるアミノ酸配列
スポット６：配列番号３４〜４１で示されるアミノ酸配列
スポット７：配列番号４４〜５４で示されるアミノ酸配列
スポット８：配列番号５７〜５９で示されるアミノ酸配列
スポット９：配列番号６２〜６８で示されるアミノ酸配列
さらに、各スポットについて、質量分析計から得られた質量データをスポット１についてはＮＣＢＩで、スポット２〜９についてはＵｎｉＰｒｏｔで解析したところ、それぞれのスポットは以下のタンパク質であることが同定された。
スポット１：α−アクチニン−３（Alpha-actinin-3）（NCBIのタンパク質アクセッション番号XP_014051545.1、DNAアクセッション番号XM_014196070.1）（アミノ酸配列：配列番号２、それをコードする塩基配列：配列番号１）
スポット２：ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライク（EEF1A2 binding protein-like）（UniProtのタンパク質アクセッション番号B5RI29、DNAアクセッション番号ACH85270.1）（アミノ酸配列：配列番号５、それをコードする塩基配列：配列番号４）
スポット３：α−１，４−グルカンホスホリラーゼ（Alpha-1,4-glucan phosphorylase）（UniProtのタンパク質アクセッション番号B5DG55、DNAアクセッション番号ACH70729.1）（アミノ酸配列：配列番号１０、それをコードする塩基配列：配列番号９）
スポット４：エロンゲーションファクター２（Elongation factor 2）（UniProtのタンパク質アクセッション番号C0H9N2、DNAアクセッション番号ACN10751.1）（アミノ酸配列：配列番号１９、それをコードする塩基配列：配列番号１８）
スポット５：ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテイン（Heat shock cognate 70 kDa protein）（UniProtのタンパク質アクセッション番号B5X3U6、DNAアクセッション番号ACI33977.1）（アミノ酸配列：配列番号２６、それをコードする塩基配列：配列番号２５）
スポット６：セロトランスフェリン（Serotransferrin）（UniProtのタンパク質アクセッション番号P79815、DNAアクセッション番号BAA13759.1）（アミノ酸配列：配列番号３３、それをコードする塩基配列：配列番号３２）
スポット７：ミオシンバインディングプロテインＨ−ライク（Myosin binding protein H-like）（UniProtのタンパク質アクセッション番号B5DG45、DNAアクセッション番号ACH70719.1）（アミノ酸配列：配列番号４３、それをコードする塩基配列：配列番号４２）
スポット８：デスミン（フラグメント）（Desmin (Fragment)）（UniProtのタンパク質アクセッション番号Q8UWF1、DNAアクセッション番号CAC83053.1）（アミノ酸配列：配列番号５６、それをコードする塩基配列：配列番号５５）
スポット９：キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータ（Capping protein (Actin filament) muscle Z-line beta）（UniProtのタンパク質アクセッション番号B5DFX6、DNAアクセッション番号ACH70650.1）（アミノ酸配列：配列番号６１、それをコードする塩基配列：配列番号６０）
実施例４：他の魚種での抗原確認（１）
サケ以外のアジ、アナゴ、クロダイ、サバ、タイ、タラ、ハマチ、ウナギ、およびヒラメの９種の魚の身を用い、実施例１および実施例２に記載した手順と同様の手順により、抗原の確認を行った。【０３７１】
魚アレルギー患者１の血清を用いたイムノブロットを、対照である非魚アレルギー被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。９種の魚の身それぞれに含まれるタンパク質について魚アレルギー患者１の血清を用いて行ったイムノブロット（図２）において、非魚アレルギー被験者の血清を用いた場合（図３）とは異なり、サケにおいて得られた９つのスポットの一部に相当するスポットが検出された。【０３７２】
それぞれの魚種で検出されたスポットは以下のとおりである。
アジ：スポット１、３〜５、８、および９
アナゴ：スポット１、３、５、および９
クロダイ：スポット１〜６、８、および９
サバ：スポット１、３、５、８、および９
タイ：スポット１、３〜６、８、および９
タラ：スポット１、３、５、７〜９
ハマチ：スポット１、３〜５、８、９
ウナギ：スポット１、３、４、６、９
ヒラメ：スポット１、４、６
実施例５：イムノブロットでの抗原確認（２）
実施例２と同様に、魚アレルギー患者の血清を用いたイムノブロットを、対照である非魚アレルギー被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。サケの身に含まれるタンパク質について魚アレルギー患者２の血清を用いて行ったイムノブロット（図１Ｂ左図）において、実施例２で検出された９つのスポットのうちの７つ（スポット１〜６、９）のほか、非魚アレルギー被験者の血清を用いた場合（図３）とは異なり、かつ公知のサケアレルゲンタンパク質とは異なる３つのスポット（スポット１１、１２、１４）が新たに検出された。検出された合計１０のスポットをイムノブロット上に示す（図１Ｂ左図）。【０３７３】
新たに検出された上記３つのスポットの分子量および等電点はそれぞれ以下の通りである。
スポット１１：分子量９０〜１１０、ｐＩ６．５〜７．０
スポット１２：分子量１２０〜１４０、ｐＩ５．０〜６．０
スポット１４：分子量３０〜４０、ｐＩ６．５〜７．５
実施例６：質量分析および抗原の同定（２）
実施例３と同様に、新たに検出された上記の３つのスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。【０３７４】
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。
スポット１１：配列番号１１１〜１１９で示されるアミノ酸配列
スポット１２：配列番号１２２〜１３６で示されるアミノ酸配列
スポット１４：配列番号１４５〜１４９で示されるアミノ酸配列
さらに、各スポットについて、質量分析計から得られた質量データをＮＣＢＩで解析したところ、それぞれのスポットは以下のタンパク質であることが同定された。
スポット１１：グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライク（glycogen phosphorylase, muscle form-like）（NCBIのタンパク質アクセッション番号XP_013984904.1、DNAアクセッション番号XM_014129429.1）（アミノ酸配列：配列番号１１０、それをコードする塩基配列：配列番号１０９）
スポット１２：ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライク（myosin-binding protein C, fast-type-like）（NCBIのタンパク質アクセッション番号XP_014014310.1、DNAアクセッション番号XM_014158835.1）（アミノ酸配列：配列番号１２１、それをコードする塩基配列：配列番号１２０）
スポット１４：Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライク（L-lactate dehydrogenase A chain-like）（NCBIのタンパク質アクセッション番号XP_014003141.1、DNAアクセッション番号XM_014147666.1）（アミノ酸配列：配列番号１４４、それをコードする塩基配列：配列番号１４３）
実施例７：イムノブロットでの抗原確認（３）
実施例２と同様に、魚アレルギー患者の血清を用いたイムノブロットを、対照である非魚アレルギー被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。サケの身に含まれるタンパク質について魚アレルギー患者３の血清を用いて行ったイムノブロット（図１Ｂ右図）において、実施例２で検出された９つのスポットのうちの２つ（スポット７、８）のほか、非魚アレルギー被験者の血清を用いた場合（図３）とは異なり、かつ公知のサケアレルゲンタンパク質とは異なる２つのスポット（スポット１０、１３）が新たに検出された。検出された合計４つのスポットをイムノブロット上に示す（図１Ｂ右図）。【０３７５】
新たに検出された上記２つのスポットの分子量および等電点はそれぞれ以下の通りである。
スポット１０：分子量２００〜２３０、ｐＩ４．５〜５．５
スポット１３：分子量４５〜５５、ｐＩ４．０〜５．５
実施例８：質量分析および抗原の同定（３）
実施例３と同様に、新たに検出された上記の２つのスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。【０３７６】
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。
スポット１０：配列番号７１〜１０８で示されるアミノ酸配列
スポット１３：配列番号１３９〜１４２で示されるアミノ酸配列
さらに、各スポットについて、質量分析計から得られた質量データをＮＣＢＩで解析したところ、それぞれのスポットは以下のタンパク質であることが同定された。
スポット１０：ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライク（myosin heavy chain, fast skeletal muscle-like）（NCBIのタンパク質アクセッション番号XP_014039990.1、DNAアクセッション番号XM_014184515.1）（アミノ酸配列：配列番号７０、それをコードする塩基配列：配列番号６９）
スポット１３：ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアル（ATP synthase subunit beta, mitochondrial）（NCBIのタンパク質アクセッション番号XP_014007238.1、DNAアクセッション番号XM_014151763.1）（アミノ酸配列：配列番号１３８、それをコードする塩基配列：配列番号１３７）
実施例９：他の魚種での抗原確認（２）
アジ、アナゴ、サケ、サバ、タイ、およびタラの６種の魚の身を用いて、実施例４と同様に、抗原の確認を行った。魚アレルギー患者４の血清を用いたイムノブロットを、対照である非魚アレルギー被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。６種の魚の身それぞれに含まれるタンパク質について魚アレルギー患者４の血清を用いて行ったイムノブロット（図４）において、非魚アレルギー被験者の血清を用いた場合（図３）とは異なり、サケにおいて魚アレルギー患者１〜３の血清で得られた合計１４のスポットの一部に相当するスポットが検出された。【０３７７】
それぞれの魚種で検出されたスポットは以下のとおりである。
アジ：スポット１、３、４、８、１０、１１、および１４
アナゴ：スポット１、４、１０、および１１
サケ：スポット２、８、および１０〜１４
サバ：スポット４、８、１０、１１、１３、および１４
タイ：スポット１、４、６、８、１０、および１３
タラ：スポット１、５、８、１０、１１、および１３
実施例１０：エピトープの同定
魚のアレルゲンコンポーネントのエピトープ
魚のアレルゲンコンポーネントについて、以下の手順によりエピトープの同定を行った。【０３７８】
（Ａ）エピトープマッピング（１）
魚のアレルギーコンポーネントとして特定したアミノ酸配列ならびに公知の魚アレルギー抗原であるアルドラーゼ、ベータ−エノラーゼ、およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（非特許文献２〜４）のアミノ酸配列に対応するオーバーラップペプチド（長さ：１５アミノ酸）のライブラリーによって、エピトープマッピングを行った。具体的には、α−アクチニン−３について配列番号２、ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライクについて配列番号５、α−１，４−グルカンホスホリラーゼについて配列番号１０、エロンゲーションファクター２について配列番号１９、ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインについて配列番号２６、セロトランスフェリンについて配列番号３３、ミオシンバインディングプロテインＨ−ライクについて配列番号４３、デスミン（フラグメント）について配列番号５６、キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータについて配列番号６１、ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライクについて配列番号７０、グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライクについて配列番号１１０、ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライクについて配列番号１２１、ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアルについて配列番号１３８、Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライクについて配列番号１４４、アルドラーゼについて配列番号４４５、ベータ−エノラーゼについて配列番号４４６、およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼについて配列番号４４７のアミノ酸配列、に基づいてオーバーラップペプチドのライブラリーを調製した。【０３７９】
合成する各ペプチドは、１０アミノ酸ずつシフトさせた。すなわち各ペプチドは、前のペプチドおよび後のペプチドと、それぞれ５アミノ酸の重複を有する。【０３８０】
ペプチドアレイの調製のため、Intavis CelluSpots（商標）技術を使用した。すなわち次の手順、（１）アミノ修飾セルロースディスク上に自動化合成装置（Intavis MultiPep RS）を用いて目的のペプチドを合成し、（２）前記アミノ修飾セルロースディスクを溶解させてセルロース結合ペプチド溶液を得て、（３）コーティングを施したスライドガラス上に前記セルロース結合ペプチドをスポットすることにより、ペプチドアレイを調製した。各手順の詳細は以下のとおりである。
（１）ペプチドの合成
３８４ウェル合成プレート中のアミノ修飾セルロースディスク上で、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学反応を利用して、ペプチド合成を段階的に行った。すなわち、Ｆｍｏｃ基がアミノ基に結合したアミノ酸をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の溶液で活性化し、前記セルロースディスクに滴下してセルロースディスク上のアミノ基へ前記Ｆｍｏｃ基結合アミノ酸を結合させ（カップリング）、未反応のアミノ基を無水酢酸によりキャッピングしてＤＭＦにより洗浄し、さらにピペリジンで処理してＤＭＦにより洗浄して、セルロースディスク上のアミノ基に結合したアミノ酸のアミノ基からＦｍｏｃ基を除去した。前記セルロースディスク上のアミノ基に結合したアミノ酸に対して、上記カップリング、キャッピング、およびＦｍｏｃ基の除去を反復して行うことにより、アミノ末端を伸長させてペプチド合成を行った。
（２）アミノ修飾セルロースディスクの溶解
上記「（１）ペプチドの合成」で得られた目的のペプチドが結合したセルロースディスクを９６ウェルプレートに移し、アミノ酸の側鎖の脱保護のため、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジクロロメタン、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）、および水の側鎖脱保護混合液で処理した。その後、脱保護されたセルロース結合ペプチドを、ＴＦＡ、ペルフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）、ＴＩＰＳ、および水の混合液で溶解し、テトラブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）で沈殿させ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に再懸濁し、ＮａＣｌ、クエン酸Ｎａ、および水の混合液と混合し、スライドスポット用ペプチド溶液を得た。
（３）セルロース結合ペプチド溶液のスポット
上記「（２）アミノ修飾セルロースディスクの溶解」で得られたスライドスポット用ペプチド溶液を、Intavisスライドスポッティングロボットを用いて、Intavis CelluSpots（商標）スライド上にスポットし、これを乾燥させてペプチドアレイを調製した。【０３８１】
前記ペプチドアレイを用いて、抗原抗体反応により魚アレルギー患者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを各ペプチド断片について測定した。測定は以下の手順に従って行った。
（１）ペプチドを、ＰＢＳＴ中で、室温で１時間振盪した。
（２）５％血清／ＰＢＳＴ中で、室温で一晩振盪した。
（３）ＰＢＳＴ溶液（非イオン界面活性剤Tween 20を０．１％含むＰＢＳバッファー）で５分洗浄した（×３回）。
（４）抗ヒトＩｇＥ抗体−ＨＲＰ（１：５，０００、ＰＢＳＴ）を添加し、室温で１時間振盪した。
（５）ＰＢＳＴ溶液で５分洗浄した（×３回）。
（６）Pierce ECL Plus Western Blotting Substrate（Thermo社製）を添加し、室温で５分間静置した。
（７）Amersham Imager 600を使用して、上記（１）〜（６）の処理を施したペプチドの化学発光を測定した。【０３８２】
上記（７）において測定して得られた画像に対して、ImageQuant TL(GEヘルスケア社)を用いて化学発光量を数値化した。4名の非魚アレルギー被験者の血清を使用した結果から得られた画像からそれぞれ数値化されたその平均値で、5名の患者の血清を使用した結果から得られた画像から数値化されたその平均値を除した値（患者群の平均値/非魚アレルギー被験者群の平均値）が１．５以上で、かつマン・ホイットニーのＵ検定により有意差が０．０５以下のペプチドを患者特異的にＩｇＥ抗体と結合したペプチドと判断した。【０３８３】
（Ｂ）エピトープマッピング（２）：オーバーラッピング
上記（Ａ）により患者特異的に血清中ＩｇＥ抗体が結合したペプチドの配列（α−アクチニン−３について配列番号１５０〜１５４、ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライクについて配列番号１５５、α−１，４−グルカンホスホリラーゼについて配列番号１５６および１５７、エロンゲーションファクター２について配列番号１５８および１５９、ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインについて配列番号１６０〜１６２、セロトランスフェリンについて配列番号１６３〜１６７、ミオシンバインディングプロテインＨ−ライクについて配列番号１６８〜１７１、デスミン（フラグメント）について配列番号１７２〜１７４、キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータについて配列番号１７５〜１７８、ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライクについて配列番号１７９〜１８５、グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライクについて配列番号１８６、ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライクについて配列番号１８７〜１９６、ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアルについて配列番号１９７、Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライクについて配列番号１９８、アルドラーゼについて配列番号１９９、ベータ−エノラーゼについて配列番号２００〜２０２、およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼについて配列番号２０３および２０４）を基に、当該ペプチドの配列および当該ペプチドの配列を含むアレルゲンコンポーネントのアミノ酸配列（α−アクチニン−３について配列番号２、ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライクについて配列番号５、α−１，４−グルカンホスホリラーゼについて配列番号１０、エロンゲーションファクター２について配列番号１９、ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインについて配列番号２６、セロトランスフェリンについて配列番号３３、ミオシンバインディングプロテインＨ−ライクについて配列番号４３、デスミン（フラグメント）について配列番号５６、キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータについて配列番号６１、ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライクについて配列番号７０、グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライクについて配列番号１１０、ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライクについて配列番号１２１、ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアルについて配列番号１３８、Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライクについて配列番号１４４、アルドラーゼについて配列番号４４５、ベータ−エノラーゼについて配列番号４４６、およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼについて配列番号４４７）における当該ペプチドの前後の配列を付加した配列において、オーバーラップペプチド断片（長さ：１０アミノ酸）のライブラリーを作製し、エピトープマッピングを行った。【０３８４】
合成する各ペプチドは、１アミノ酸ずつシフトさせた。すなわち各ペプチドは、前のペプチドおよび後のペプチドと、それぞれ９アミノ酸の重複を有する。【０３８５】
ライブラリーは上記（Ａ）と同様の手順で調製し、上記と同様の手法で患者および非魚アレルギー被験者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを各ペプチド断片について測定した。１アミノ酸ずつシフトさせたペプチドにより患者のＩｇＥ抗体への結合性が喪失あるいは減少し、非魚アレルギー被験者のＩｇＥ抗体への結合性が発生した位置のアミノ酸は、ＩｇＥ抗体の結合の特異性に悪影響を及ぼすアミノ酸であると判断した。【０３８６】
上記（Ａ）と同様に、測定して得られた画像に対して、ImageQuant TL（GEヘルスケア社）を用いて化学発光量を数値化した。５名の患者の血清を使用した結果から得られた画像から患者特異的にＩｇＥ抗体と結合したと判断したペプチドであって、オーバーラッピングの基礎とした配列（配列番号１５０〜２０４）により得られた値を１００％としたとき、２０％未満はＩｇＥ抗体との結合性なし、２０％以上５０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性はあり、５０％以上７０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は多少劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性あり、７０％以上９０％未満は、ＩｇＥ抗体との結合性に差がほとんどない、９０％以上はＩｇＥ抗体との結合性に差がないまたはＩｇＥ抗体との結合性がよいとして、ＩｇＥ抗体との結合性が残存したペプチドであると判断した。【０３８７】
この解析により、オーバーラッピングの基礎とした配列において、患者のＩｇＥ抗体との結合に重要な領域を見出した。【０３８８】
（Ｃ）エピトープマッピング（３）：アラニンスキャン
上記（Ａ）で同定したアミノ酸配列について、アラニンスキャンと呼ばれる手法（非特許文献５）により、アミノ末端側から１アミノ酸ずつアラニンに置換したペプチド断片のライブラリーを、上記と同様の手法で調製し、上記と同様の手法で患者および非魚アレルギー被験者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを各ペプチド断片について測定した。アラニン置換により患者のＩｇＥ抗体への結合性が喪失あるいは減少し、非魚アレルギー被験者のＩｇＥ抗体への結合性が発生した位置のアミノ酸は、本来の抗原性の発現のために重要なアミノ酸、または本来の抗原性の発現に影響するアミノ酸と判断した。また、アラニン置換によっても患者のＩｇＥ抗体への結合性が維持され、非魚アレルギー被験者のＩｇＥ抗体への結合性も発生しなかった位置のアミノ酸は、本来の抗原性の発現のためには重要ではなく、置換が可能なアミノ酸と判断した。【０３８９】
上記（Ａ）と同様に、測定して得られた画像に対して、ImageQuant TL（GEヘルスケア社）を用いて化学発光量を数値化した。５名の患者の血清を使用した結果から得られた画像から患者特異的にＩｇＥ抗体と結合したと判断したペプチドであって、オーバーラッピングの基礎とした配列（配列番号１５０〜２０４）により得られた値を１００％としたとき、２０％未満はＩｇＥ抗体との結合性なし、２０％以上５０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性はあり、５０％以上７０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は多少劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性あり、７０％以上９０％未満は、ＩｇＥ抗体との結合性に差がほとんどない、９０％以上はＩｇＥ抗体との結合性に差がないまたはＩｇＥ抗体との結合性がよいとして、ＩｇＥ抗体との結合性が残存したペプチドであると判断した。 【０３９０】
この解析により、オーバーラッピングの基礎とした配列における患者のＩｇＥ抗体との結合に重要な領域において、本来の抗原性の発現のために重要な共通配列を見出した。【０３９１】
（Ｄ）結果 
上記（Ａ）のエピトープマッピングの結果、α−アクチニン−３についてエピトープＮｏ．１〜５（それぞれ、配列番号１５０〜１５４のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ＥＥＦ１Ａ２バインディングプロテイン−ライクについてエピトープＮｏ．６（配列番号１５５のアミノ酸配列を有するペプチド）に、α−１，４−グルカンホスホリラーゼについてエピトープＮｏ．７および８（それぞれ、配列番号１５６および１５７のアミノ酸配列を有するペプチド）に、エロンゲーションファクター２についてエピトープＮｏ．９および１０（それぞれ、配列番号１５８および１５９のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインについてエピトープＮｏ．１１〜１３（それぞれ、配列番号１６０〜１６２のアミノ酸配列を有するペプチド）に、セロトランスフェリンについてエピトープＮｏ．１４〜１８（それぞれ、配列番号１６３〜１６７のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ミオシンバインディングプロテインＨ−ライクについてエピトープＮｏ．１９〜２２（それぞれ、配列番号１６８〜１７１のアミノ酸配列を有するペプチド）に、デスミン（フラグメント）についてエピトープＮｏ．２３〜２５（それぞれ、配列番号１７２〜１７４のアミノ酸配列を有するペプチド）に、キャッピングプロテイン（アクチンフィラメント）マッスルＺ−ラインベータについてエピトープＮｏ．２６〜２９（それぞれ、配列番号１７５〜１７８のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ミオシンヘビーチェイン，ファストスケレタルマッスル−ライクについてエピトープＮｏ．３０〜３６（それぞれ、配列番号１７９〜１８５のアミノ酸配列を有するペプチド）に、グリコーゲンホスホリラーゼ，マッスルフォーム−ライクについてエピトープＮｏ．３７（配列番号１８６のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ミオシン−バインディングプロテインＣ，ファスト−タイプ−ライクについてエピトープＮｏ．３８〜４７（それぞれ、配列番号１８７〜１９６のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ＡＴＰシンターゼサブユニットβ，ミトコンドリアルについてエピトープＮｏ．４８（配列番号１９７のアミノ酸配列を有するペプチド）に、Ｌ−ラクテートデヒドロゲナーゼＡチェイン−ライクについてエピトープＮｏ．４９（配列番号１９８のアミノ酸配列を有するペプチド）に、アルドラーゼについてエピトープＮｏ．５０（配列番号１９９のアミノ酸配列を有するペプチド）に、ベータ−エノラーゼについてエピトープＮｏ．５１〜５３（配列番号２００〜２０２のアミノ酸配列を有するペプチド）に、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼについてエピトープＮｏ．５４および５５（配列番号２０３および２０４のアミノ酸配列を有するペプチド）に、それぞれ患者特異的にＩｇＥ抗体が結合したことが確認された。これらエピトープのペプチド配列が、それぞれ実施例２、３、５〜８において同定されたアレルゲンコンポーネントならびに公知のアレルゲンコンポーネントであるアルドラーゼ、ベータ−エノラーゼ、およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼの配列中のどの部分に相当するかについて、表２に示す。【０３９２】
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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各エピトープについて、上記（Ｂ）および上記（Ｃ）の結果、以下の通りエピトープ配列とアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に重要なアミノ酸が同定された。【０３９３】
（１）エピトープ１
エピトープ１（配列番号１５０）中で患者のＩｇＥ抗体との結合に重要な領域として、１〜１０番目のアミノ酸に相当する配列番号２０７及び９〜１４番目のアミノ酸に相当する配列番号２１０が同定された。【０３９４】
結合に重要な領域である配列番号２０７の、７〜９番目のアミノ酸がアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に特に重要なアミノ酸であり、１及び１０番目のアミノ酸がアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に影響するアミノ酸であることが特定された。配列番号２０７の２〜６番目のアミノ酸はアラニンに置換してもアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合性に影響しなかった。【０３９５】
また、結合に重要な領域である配列番号２１０の、１、２及び６番目のアミノ酸がアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合に特に重要なアミノ酸であることが特定された。配列番号２１０の３〜５番目のアミノ酸はアラニンに置換してもアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合性に影響しなかった。【０３９６】
以下、エピトープ２〜５５についても同様に特定し、結果を以下の表３にまとめた。【０３９７】
【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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実施例１１：エピトープの交差性の確認
上記表３の、サケのヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインについて見出された「SMVLVKMKEIAEAYL」のアミノ酸配列（配列番号１６０）を有するエピトープＮｏ．１１中の、結合に重要な領域（配列番号２５０）中における特に重要なアミノ酸以外のアミノ酸を、任意のアミノ酸（Ｘ）としたアミノ酸配列「EXXXXYL」（配列番号２４８）について、同配列を有するタンパク質をＮＣＢＩで検索した結果、ヒラメのヒートショック７０ｋＤａプロテイン（アクセッション番号XP_019944736.1）の「AMVLVKMKETAEAYL」（配列番号４５１）のアミノ酸配列がヒットした。【０３９８】
配列番号１６０および４５１のアミノ酸配列を含むペプチドについて、サケおよびヒラメに対してアレルギーを有する患者（１名）のＩｇＥ抗体との結合性をＥＬＩＳＡ法により確認した。ペプチドは、Ｆｍｏｃ法によりＮ末端側でビオチン化されるように合成した。【０３９９】
ＥＬＩＳＡ法は、具体的には以下の手順に従って行った。
（１）ビオチン化ペプチドの濃度が１μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳＴで調製した。
（２）各ペプチド溶液をストレプトアビジン被覆した３８４ウェルプレートの各ウェルに４０μＬ添加して、室温で１時間振盪した。溶液を回収後、ＰＢＳで５回洗浄した。
（３）４０μＬの５倍希釈Bloking one（MQで希釈）を添加して、室温で１５分間振盪した。溶液を除去後、ＰＢＳで５回洗浄した。
（４）４０μＬの血清希釈液（１：１０、希釈液：ナカライテスク社製ブロッキングワン）を添加し、室温で１時間振盪した。溶液を除去後、ＰＢＳで５回洗浄した。
（５）４０μＬの二次抗体希釈液（１：５０００、希釈液：ナカライテスク社製ブロッキングワン）を添加し、室温で１時間振盪した。溶液を除去後、ＰＢＳで５回洗浄した。
（６）４０μＬの1-Step Ultra TMB-ELISA（サーモフィッシャーサイエンティフィックス）を添加し、室温で１５分間振盪した。
（７）４０μＬの２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加した。４５０ｎｍの吸光度を測定した。【０４００】
このヒラメのヒートショック７０ｋＤａプロテインの「AMVLVKMKETAEAYL」のアミノ酸配列を有するペプチドおよびサケのヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテインの「SMVLVKMKEIAEAYL」のアミノ酸配列を有するペプチドを、実施例１０の（Ａ）と同様の手順でそれぞれ調製し、同様の手法でサケとヒラメにアレルギー症状を有する魚アレルギー患者の血清および非魚アレルギー被験者の血清（４名分を混合）中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを測定した。結果を図５に示す。【０４０１】
図５から明らかであるように、ヒラメのヒートショック７０ｋＤａプロテイン由来のアミノ酸配列を有するペプチドにも、サケのヒートショックコグネート７０ｋＤａプロテイン由来のアミノ酸配列を有するペプチドと同様に、患者特異的にＩｇＥ抗体が結合した。したがって、エピトープＮｏ．１１は、サケとヒラメの魚種間での交差性を示すエピトープであることが確認された。また、エピトープＮｏ．１１以外にも、実施例１０で同定したエピトープＮｏ．１〜Ｎｏ．５５（配列番号１５０〜２０４）において交差性が確認された。【０４０２】
なお、これらのエピトープは、ヒラメ以外にもアジ、アナゴ、クロダイ、サバ、タイ、タラ、ハマチ、ウナギなどにおいても交差性を有しており、このことは、これらのエピトープが魚種を越えた抗原の交差性を検出するのに利用できることを示している。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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