(57)【要約】本発明は、角膜内皮細胞におけるＴＧＦ−βシグナルに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防するための組成物を提供する。本発明は、化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、組成物を提供する。
2018230713.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、組成物。
【請求項２】
前記化合物は、抗炎症薬、ビタミンＢ１２群、ビタミンＤ群、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）、選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
抗炎症薬を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗炎症薬は、ステロイド性抗炎症薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）あるいはこれらの組み合わせである、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗炎症薬はステロイド性抗炎症薬であり、該ステロイド性抗炎症薬は、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、エタボン酸ロテプレドノール（Loteprednol  Etabonate）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、アムシノニド（Amcinonide）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、プレドニゾロン（Prednisolone）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、デソニド（Desonide）、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、ブデソニド（Budesonide）、フルドロコルチゾン酢酸エステル（Fludrocortisone  Acetate）、フルオシノニド（Fluocinonide）、メチルプレドニゾロン（Methylprednisolone）、ベタメタゾン（Betamethasone）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、ハルシノニド（Halcinonide）、フルオロメトロン（Fluorometholone）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Beclomethasone  Dipropionate）、およびデュタステリド（Dutasteride）からなる群から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項６】
前記抗炎症薬は非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であり、該非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、アンレキサノクス（Amlexanox）、レフルノミド（Leflunomide）、オルサラジンナトリウム（Olsalazine・Na）、オルフェナドリンクエン酸塩（Orphenadrine  Citrate）、フルルビプロフェン（Flurbiprofen）、およびフェノキシベンザミン塩酸塩（Phenoxybenzamine・HCl）からなる群から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項７】
前記化合物は、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記化合物は、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項９】
前記化合物は、選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項１０】
前記化合物は、下記一般式（１）または一般式（２）で表される化合物又はその塩であって、
【化１】
2018230713.tif 000057
式中、環Ｘはベンゼン環又はピリジン環を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシ基、アリールアルキルオキシアルキルオキシ基、置換基を有してもよい複素環基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基のエステル、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基、置換基を有してもよい複素環オキシ基、メルカプト基、メルカプト基のエステル、置換基を有してもよい低級アルキルチオ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルチオ基、置換基を有してもよいアリールチオ基、置換基を有してもよい複素環チオ基、置換基を有してもよい低級アルキルアミノ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノ基、置換基を有してもよいアリールアミノ基、置換基を有してもよい複素環アミノ基、アミノ基のアミド、置換基を有してもよい低級アルキルアミノ基のアミド、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノ基のアミド、置換基を有してもよいアリールアミノ基のアミド、置換基を有してもよい複素環アミノ基のアミド、ホルミル基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、置換基を有してもよい低級アルキルスルホニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルスルホニル基、置換基を有してもよいアリールスルホニル基、置換基を有してもよい複素環スルホニル基、スルホン酸基、スルホン酸基のエステル、スルホン酸基のアミド、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシ基、置換基を有してもよいシリル基、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１８、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１８、−Ｗ１−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ１９、−Ｗ１−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ２０、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２、−ＯＣＨ２ＣＨ（Ｒ２３）−ＯＲ２４、置換基を有してもよいアミノ基、ニトロ基又はシアノ基を示し；
Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２はそれぞれ独立して、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、置換基を有してもよいアラルキル基、置換基を有してもよい複素環アルキル基、置換基を有してもよいアミノ低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシ基、置換基を有してもよい低級アルキニルオキシ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基又は置換基を有してもよい複素環オキシ基を示し；
ｐは０〜５の整数を示し；
ｐが２〜５の場合、各Ｒ１は同一であっても異なってもよく；
Ｗ１は、酸素原子、硫黄原子又は−Ｎ（Ｒ２５）−を示し；
Ｚ１は、酸素原子、硫黄原子又は＝Ｎ−Ｒ２５を示し；
Ｒ２３は、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミドまたはシアノ基を示し；
Ｒ２４は、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、リン酸基またはリン酸基のエステルを示し；
Ｒ２５は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシアルキル基、置換基を有してもよい複素環アルキル基、置換基を有してもよいシリル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基又は置換基を有してもよいアリールカルボニル基を示し；
Ｒ２はハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９、−ＳＲ８、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ８を示し；
ｑは０〜３の整数を示し；
ｑが２または３の場合、各Ｒ２は同一又は異なってもよく；
Ｒ３は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシアルキル基、置換基を有してもよいシリル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基又は置換基を有してもよいアリールカルボニル基を示し；
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、または置換基を有してもよい複素環基を示し、または、Ｒ４とＲ５は一緒になって、置換基を有してもよい３〜８員の低級シクロアルカン環を形成してもよく；
Ｒ６は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基又は置換基を有してもよい複素環基を示し；
Ａは単結合または置換基を有してもよい低級アルキレン基を示し；
Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立して、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、ホルミル基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基、置換基を有してもよい低級アルコキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルオキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシカルボニル基、置換基を有してもよいアリールオキシカルボニル基、置換基を有してもよい複素環オキシカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニルオキシ基、置換基を有してもよい複素環カルボニルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基、置換基を有してもよい複素環オキシ基、置換基を有してもよいアリールチオ基、置換基を有してもよい低級アルキルスルホニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルスルホニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルスルホニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルスルホニル基、置換基を有してもよいアリールスルホニル基、置換基を有してもよい複素環スルホニル基、置換基を有してもよいアリールアミノ基、アミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアミノカルボニル基又は置換基を有してもよい複素環アミノカルボニル基を示し；
また、Ｒ２がＮＲ８Ｒ９の場合、Ｒ８とＲ９が一緒になって、置換基を有してもよい３〜８員の含窒素複素環を形成してもよい、
化合物またはその塩を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記化合物は、下記一般式（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０−ａ）、（１０−ｂ）、（１２）、（１３−ａ）、（１３−ｂ）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）、または（２０）で表される化合物またはその塩であって、
【化２】
2018230713.tif 000058
【化３】
2018230713.tif 000059
【化４】
2018230713.tif 000060
上記式中、
【化５】
2018230713.tif 000061
は、単結合または二重結合を表し、
ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＡ３、ＲＡ４、ＲＡ５、ＲＡ６、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＢ３、ＲＣ１、ＲＣ２、ＲＣ３、ＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３、ＲＥ１、ＲＥ２、ＲＥ３、ＲＦ１、ＲＦ２、ＲＧ１、ＲＧ２、ＲＧ３、ＲＧ４、ＲＧ５、ＲＨ１、ＲＨ２、ＲＨ３、ＲＨ４、ＲＨ５、ＲＨ６、ＲＨ７、ＲＨ８、ＲＨ９、ＲＪ１、ＲＪ２、ＲＪ３、ＲＪ４、ＲＭ１、ＲＭ２、ＲＭ３、ＲＭ４、ＲＭ５、ＲＭ６、ＲＭ７、ＲＭ８、ＲＭ９、ＲＭ１０、ＲＭ１１、ＲＮ１、ＲＮ２、ＲＰ１、ＲＰ２、ＲＰ３、ＲＰ４、ＲＰ５、ＲＰ６、ＲＰ７、ＲＰ８、ＲＰ９、ＲＰ１０、ＲＱ１、ＲＱ２、ＲＳ１、ＲＳ２、ＲＳ３、ＲＳ４、ＲＳ５、ＲＴ１、ＲＴ２、ＲＴ３、ＲＴ４は各々独立して、置換基群Ａから選択され、
環Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、およびＸ９は各々独立して、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよい低級シクロアルケニル基、置換基を有してもよいアリール基、または置換基を有してもよい複素環基であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、およびＬ７は各々独立して、単結合、置換基を有してもよい低級アルキレン基、置換基を有してもよいアリーレン基、置換基を有してもよいヘテロアリーレン基、置換基を有してもよいヘテロシクリレン基、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、
各ｍ、各ｋ１、各ｋ２、各ｋ３、各ｋ４、および各ｋ５は独立して、０、１、２、３、４、または５であり、
波線の結合は、（Ｅ）または（Ｚ）の立体異性を表す単結合である、
化合物またはその塩を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記化合物は、以下、
（Ｒ）−トランス−Ｎ−（ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）シクロヘキサンカルボキサミド：
【化６】
2018230713.tif 000062
（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミド：
【化７】
2018230713.tif 000063
１−（５−イソキノリンスルホニル）ホモピペラジン：
【化８】
2018230713.tif 000064
１−（５−イソキノリンスルホニル）−２−メチルピペラジン：
【化９】
2018230713.tif 000065
からなる群から選択される化合物、またはその塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記化合物は、フルチカゾン、フルメタゾン、およびＲＵ−２４８５８からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化合物は、フルチカゾンプロピオン酸エステルまたはフルチカゾンフランカルボン酸エステルである、請求項１に記載の記載の組成物。
【請求項１５】
前記化合物は、マプラコラット（Ｍａｐｒａｃｏｒａｔ）、ＺＫ２１６３４８、ＺＫ２０９６１４、ダグロコラット（Ｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、フォスダグロコラット（Ｆｏｓｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ａ、ＡＬ−４３８、ＬＧＤ−５５５２、Ｃ１０８２９７、ＭＫ−５９３２、Ｏｒｇ  ２１４００７−０、ＰＦ−８０２、ＤＥ−１１０およびＣｏｍｐｏｕｎｄ  １０からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記化合物はビタミンＢ１２群であり、該ビタミンＢ１２群はヒドロキソコバラミン塩酸塩（Hydroxocobalamin・HCl）、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１７】
前記化合物はビタミンＤ群であり、該ビタミンＤ群はカルシポトリエン（Calcipotriene）、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１８】
前記化合物は、表Ａ：
【表Ａ−１】
2018230713.tif 000066
【表Ａ−２】
2018230713.tif 000067
に示す少なくとも１つの化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つの化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物。
【請求項２０】
前記症状、障害または疾患は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）に起因する角膜内皮の症状、障害または疾患である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィ、角膜移植後障害、角膜内皮炎、外傷、眼科手術、眼科レーザー手術後の障害、加齢、後部多形性角膜ジストロフィ（ＰＰＤ）、先天性遺伝性角膜内皮ジストロフィ（ＣＨＥＤ）、特発性角膜内皮障害、およびサイトメガロウイルス角膜内皮炎からなる群より選択される、請求項１〜２０のいずれか一項の組成物。
【請求項２２】
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィを含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記化合物は、さらに、不死化ヒト角膜内皮細胞と接触した場合、以下：
（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および
（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、細胞生存率（％）に対する、ＭＧ−１３２存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記化合物は、アンレキサノクス（Amlexanox）、オルサラジンナトリウム（Olsalazine・Na）、ヒドロキソコバラミン塩酸塩（Hydroxocobalamin・HCl）、レフルノミド（Leflunomide）、フェブキソスタット（Febuxostat）、フルルビプロフェン（Flurbiprofen）、テラゾシン塩酸塩（Terazosin・HCl）、およびフルオロウラシル（５−フルオロウラシル）（Fluorouracil(5-Fluorouracil)）からなる群から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記症状、障害または疾患は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）および小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患である、請求項２３または２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記小胞体（ＥＲ）関連ストレスは、タンパク質のフォールディングの異常に起因する、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィにおける角膜内皮細胞の障害、角膜内皮障害、角膜内皮密度低下、グッテーの形成、デスメ膜の肥厚、角膜厚の肥厚、混濁、角膜上皮障害、角膜実質混濁、羞明、霧視、視力障害、眼痛、流涙、充血、疼痛、水疱性角膜症、眼の不快感、コントラスト低下、グレア、角膜実質の浮腫、角膜上皮びらん、および血管新生のうち小胞体（ＥＲ）ストレスに関連する症状、障害または疾患から選択される、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィを含む、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
表Ｂ：
【表Ｂ−１】
2018230713.tif 000068
【表Ｂ−２】
2018230713.tif 000069
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、カスパーゼ阻害剤。
【請求項３０】
カスパーゼ３／７活性を阻害する、請求項２９に記載のカスパーゼ阻害剤。
【請求項３１】
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000070
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物。
【請求項３２】
表Ｄ：
【表Ｄ】
2018230713.tif 000071
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、カスパーゼ阻害剤。
【請求項３３】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法であって、該方法は、化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含み、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、方法。
【請求項３４】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法であって、該方法は、化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含み、該化合物が選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つを含む、方法。
【請求項３５】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法であって、該方法は、化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含み、該化合物は、
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000072
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、方法。
【請求項３６】
請求項１〜３２のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、使用。
【請求項３８】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物が、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つを含む、使用。
【請求項３９】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物が、
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000073
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、使用。
【請求項４０】
請求項１〜３２のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための化合物であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、化合物。
【請求項４２】
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つの化合物。
【請求項４３】
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000074
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、化合物。
【請求項４４】
請求項１〜３２のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、角膜内皮細胞におけるトランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナルに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防するための技術、方法、ならびにそのための薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
視覚情報は、眼球の最前面の透明な組織である角膜から取り入れられた光が、網膜に達して網膜の神経細胞を興奮させ、発生した電気信号が視神経を経由して大脳の視覚野に伝達することで認識される。良好な視力を得るためには、角膜が透明であることが必要である。角膜の透明性は、角膜内皮細胞のポンプ機能とバリア機能により、含水率が一定に保たれることにより保持される。【０００３】
ヒトの角膜内皮細胞は、出生時には１平方ミリメートル当たり約３０００個の密度で存在しているが、一度障害を受けると再生する能力は極めて限定的である。フックス角膜内皮ジストロフィは、角膜の内側の内皮細胞が異常を来して角膜の浮腫を生じたりする疾患であり、その原因は不明である。フックス角膜内皮ジストロフィでは、コラーゲン等の細胞外マトリクスが角膜の後部にあるデスメ膜の後面の一部分に沈着しグッテー（Corneal  guttae）およびデスメ膜の肥厚を生じる。グッテー（Corneal  guttae）およびデスメ膜の肥厚はフックス角膜内皮ジストロフィ患者における羞明、霧視の原因であり患者のQOLを著しく損なう。フックス角膜内皮ジストロフィは角膜移植以外に有効な治療法はないとされるが、日本での角膜提供は不足しており、角膜移植の待機患者約２６００人に対し、年間に国内で行われている角膜移植件数は１７００件程度である。【０００４】
フックス角膜内皮ジストロフィについては、フックス角膜患者由来の角膜内皮細胞の培養(非特許文献１および３)や不死化の報告(非特許文献２)があるが、細胞外マトリックスの過剰産生を伴うなどの疾患の特徴を維持した、治療薬、進行予防薬のスクリーニングに適切な細胞の報告はないため、その治療薬の開発には限界があり、現在のところ臨床で使用されている治療薬は存在せず角膜移植に頼らざるを得ない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Zaniolo  K,  et  al.  Exp  Eye  Res.;94(1)：22-31.  2012
【非特許文献２】Azizi  B,  et  al.  Invest  Ophthalmol  Vis  Sci.  2；52(13)：9291-9297.  2011
【非特許文献３】Kelliher  C.  et  al.  Exp  Eye  Res  Vol.93(6),  880-888,  2011
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、驚くべきことに、これまで角膜内皮において障害抑制やカスパーゼ活性の抑制を行うことが知られていなかった特定の化合物が、カスパーゼ活性の抑制または阻害の活性を有すること、およびＴＧＦ−β存在下でフックス角膜内皮ジストロフィの角膜内皮障害モデルの細胞においてカスパーゼ３／７活性を抑制することができることを見出した。【０００７】
加えて、本発明者らは、ＴＧＦ−β存在下でカスパーゼ３／７活性を抑制することができた一部の化合物が、ＭＧ−１３２に対する阻害活性も有していることが明らかになり、このような化合物は、折り畳まれなかったタンパク質によりもたらされる小胞体（ＥＲ）関連ストレスを抑制することも見出した。【０００８】
本発明で使用される化合物はまた、細胞（ｉＦＣＥＤまたはｉＨＣＥＣ）に対して毒性が低く、安全性が高いことを確認しているため、この点においても、本発明で使用される化合物は、角膜内皮の症状、障害または疾患を予防する医薬として非常に有用であるといえる。【０００９】
したがって、本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および
（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、組成物。
（項目２）
前記培養時間が２８時間である、前記項目に記載の組成物。
（項目３）
前記培養時間が２４時間である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４）
前記化合物は、抗炎症薬、ビタミンＢ１２群、ビタミンＤ群、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）、選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
抗炎症薬を含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記抗炎症薬は、ステロイド性抗炎症薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）あるいはこれらの組み合わせである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
前記抗炎症薬はステロイド性抗炎症薬であり、該ステロイド性抗炎症薬は、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、エタボン酸ロテプレドノール（Loteprednol  Etabonate）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、アムシノニド（Amcinonide）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、プレドニゾロン（Prednisolone）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、デソニド（Desonide）、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、ブデソニド（Budesonide）、フルドロコルチゾン酢酸エステル（Fludrocortisone  Acetate）、フルオシノニド（Fluocinonide）、メチルプレドニゾロン（Methylprednisolone）、ベタメタゾン（Betamethasone）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、ハルシノニド（Halcinonide）、フルオロメトロン（Fluorometholone）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Beclomethasone  Dipropionate）、およびデュタステリド（Dutasteride）からなる群から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
前記抗炎症薬は非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であり、該非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、アンレキサノクス（Amlexanox）、レフルノミド（Leflunomide）、オルサラジンナトリウム（Olsalazine・Na）、オルフェナドリンクエン酸塩（Orphenadrine  Citrate）、フルルビプロフェン（Flurbiprofen）、およびフェノキシベンザミン塩酸塩（Phenoxybenzamine・HCl）からなる群から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
前記化合物はビタミンＢ１２群であるかまたはビタミンＢ１２群を含み、該ビタミンＢ１２群はヒドロキソコバラミン（Hydroxocobalamin）、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩（例えば、ヒドロキソコバラミン塩酸塩（Hydroxocobalamin・HCl）など）、あるいはその溶媒和物である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記化合物はビタミンＤ群であるかまたはビタミンＤ群を含み、該ビタミンＤ群はカルシポトリエン（Calcipotriene）、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記化合物は、表Ａ：
【表Ａ−１】
2018230713.tif 000003
【表Ａ−２】
2018230713.tif 000004
に示す少なくとも１つの化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
前記症状、障害または疾患は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）に起因する角膜内皮の症状、障害または疾患である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィ、角膜移植後障害、角膜内皮炎、外傷、眼科手術、眼科レーザー手術後の障害、加齢、後部多形性角膜ジストロフィ（ＰＰＤ）、先天性遺伝性角膜内皮ジストロフィ（ＣＨＥＤ）、特発性角膜内皮障害、およびサイトメガロウイルス角膜内皮炎からなる群より選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィを含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５）
前記化合物は、さらに、不死化ヒト角膜内皮細胞と接触した場合、以下：
（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および
（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、細胞生存率（％）に対する、ＭＧ−１３２存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６）
前記化合物は、アンレキサノクス（Amlexanox）、オルサラジンナトリウム（Olsalazine・Na）、ヒドロキソコバラミン塩酸塩（Hydroxocobalamin・HCl）、レフルノミド（Leflunomide）、フェブキソスタット（Febuxostat）、フルルビプロフェン（Flurbiprofen）、テラゾシン塩酸塩（Terazosin・HCl）、およびフルオロウラシル（５−フルオロウラシル）（Fluorouracil(5-Fluorouracil)）からなる群から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１７）
前記症状、障害または疾患は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）および小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
前記小胞体（ＥＲ）関連ストレスは、タンパク質のフォールディングの異常および／または異常タンパク質の蓄積に起因する、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１９）
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィにおける角膜内皮細胞の障害、角膜内皮障害、角膜内皮密度低下、グッテーの形成、デスメ膜の肥厚、角膜厚の肥厚、混濁、角膜上皮障害、角膜実質混濁、羞明、霧視、視力障害、眼痛、流涙、充血、疼痛、水疱性角膜症、眼の不快感、コントラスト低下、グレア、角膜実質の浮腫、角膜上皮びらん、および血管新生のうち小胞体（ＥＲ）ストレスに関連する症状、障害または疾患から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィを含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
表Ｂ：
【表Ｂ−１】
2018230713.tif 000005
【表Ｂ−２】
2018230713.tif 000006
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、カスパーゼ阻害剤。
（項目２２）
カスパーゼ３／７活性を阻害する、前記項目のいずれか一項に記載のカスパーゼ阻害剤。
（項目２３）
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000007
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物。
（項目２４）
表Ｄ：
【表Ｄ】
2018230713.tif 000008
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、カスパーゼ阻害剤。
（項目２５）
表Ｅ：
【表Ｅ−１】
2018230713.tif 000009
【表Ｅ−２】
2018230713.tif 000010
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物、あるいはカスパーゼ阻害剤。
（項目２６）
前記化合物は、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つを含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目２７）
選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つの化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物。
（項目２８）
前記化合物は、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）を含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目２９）
前記化合物は、選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）を含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３０）
前記化合物または前記選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）は、下記一般式（１）または一般式（２）で表される化合物又はその塩であって、
【化１】
2018230713.tif 000011
式中、環Ｘはベンゼン環又はピリジン環を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシ基、アリールアルキルオキシアルキルオキシ基、置換基を有してもよい複素環基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基のエステル、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基、置換基を有してもよい複素環オキシ基、メルカプト基、メルカプト基のエステル、置換基を有してもよい低級アルキルチオ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルチオ基、置換基を有してもよいアリールチオ基、置換基を有してもよい複素環チオ基、置換基を有してもよい低級アルキルアミノ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノ基、置換基を有してもよいアリールアミノ基、置換基を有してもよい複素環アミノ基、アミノ基のアミド、置換基を有してもよい低級アルキルアミノ基のアミド、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノ基のアミド、置換基を有してもよいアリールアミノ基のアミド、置換基を有してもよい複素環アミノ基のアミド、ホルミル基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、置換基を有してもよい低級アルキルスルホニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルスルホニル基、置換基を有してもよいアリールスルホニル基、置換基を有してもよい複素環スルホニル基、スルホン酸基、スルホン酸基のエステル、スルホン酸基のアミド、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシ基、置換基を有してもよいシリル基、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１８、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１８、−Ｗ１−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ１９、−Ｗ１−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ２０、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２、−ＯＣＨ２ＣＨ（Ｒ２３）−ＯＲ２４、置換基を有してもよいアミノ基、ニトロ基又はシアノ基を示し；
Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２はそれぞれ独立して、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、置換基を有してもよいアラルキル基、置換基を有してもよい複素環アルキル基、置換基を有してもよいアミノ低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシ基、置換基を有してもよい低級アルキニルオキシ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基又は置換基を有してもよい複素環オキシ基を示し；
ｐは０〜５の整数を示し；
ｐが２〜５の場合、各Ｒ１は同一であっても異なってもよく；
Ｗ１は、酸素原子、硫黄原子又は−Ｎ（Ｒ２５）−を示し；
Ｚ１は、酸素原子、硫黄原子又は＝Ｎ−Ｒ２５を示し；
Ｒ２３は、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミドまたはシアノ基を示し；
Ｒ２４は、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、リン酸基またはリン酸基のエステルを示し；
Ｒ２５は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシアルキル基、置換基を有してもよい複素環アルキル基、置換基を有してもよいシリル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基又は置換基を有してもよいアリールカルボニル基を示し；
Ｒ２はハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９、−ＳＲ８、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ８を示し；
ｑは０〜３の整数を示し；
ｑが２または３の場合、各Ｒ２は同一又は異なってもよく；
Ｒ３は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシアルキル基、置換基を有してもよいシリル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基又は置換基を有してもよいアリールカルボニル基を示し；
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、または置換基を有してもよい複素環基を示し、または、Ｒ４とＲ５は一緒になって、置換基を有してもよい３〜８員の低級シクロアルカン環を形成してもよく；
Ｒ６は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基又は置換基を有してもよい複素環基を示し；
Ａは単結合または置換基を有してもよい低級アルキレン基を示し；
Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立して、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、ホルミル基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基、置換基を有してもよい低級アルコキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルオキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシカルボニル基、置換基を有してもよいアリールオキシカルボニル基、置換基を有してもよい複素環オキシカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニルオキシ基、置換基を有してもよい複素環カルボニルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基、置換基を有してもよい複素環オキシ基、置換基を有してもよいアリールチオ基、置換基を有してもよい低級アルキルスルホニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルスルホニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルスルホニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルスルホニル基、置換基を有してもよいアリールスルホニル基、置換基を有してもよい複素環スルホニル基、置換基を有してもよいアリールアミノ基、アミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアミノカルボニル基又は置換基を有してもよい複素環アミノカルボニル基を示し；
また、Ｒ２がＮＲ８Ｒ９の場合、Ｒ８とＲ９が一緒になって、置換基を有してもよい３〜８員の含窒素複素環を形成してもよい、
化合物またはその塩である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３１）
前記化合物または前記選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）は、下記一般式（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０−ａ）、（１０−ｂ）、（１２）、（１３−ａ）、（１３−ｂ）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）、または（２０）で表される化合物またはその塩であって、
【化２】
2018230713.tif 000012
【化３】
2018230713.tif 000013
【化４】
2018230713.tif 000014
上記式中、
【化５】
2018230713.tif 000015
は、単結合または二重結合を表し、
ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＡ３、ＲＡ４、ＲＡ５、ＲＡ６、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＢ３、ＲＣ１、ＲＣ２、ＲＣ３、ＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３、ＲＥ１、ＲＥ２、ＲＥ３、ＲＦ１、ＲＦ２、ＲＧ１、ＲＧ２、ＲＧ３、ＲＧ４、ＲＧ５、ＲＨ１、ＲＨ２、ＲＨ３、ＲＨ４、ＲＨ５、ＲＨ６、ＲＨ７、ＲＨ８、ＲＨ９、ＲＪ１、ＲＪ２、ＲＪ３、ＲＪ４、ＲＭ１、ＲＭ２、ＲＭ３、ＲＭ４、ＲＭ５、ＲＭ６、ＲＭ７、ＲＭ８、ＲＭ９、ＲＭ１０、ＲＭ１１、ＲＮ１、ＲＮ２、ＲＰ１、ＲＰ２、ＲＰ３、ＲＰ４、ＲＰ５、ＲＰ６、ＲＰ７、ＲＰ８、ＲＰ９、ＲＰ１０、ＲＱ１、ＲＱ２、ＲＳ１、ＲＳ２、ＲＳ３、ＲＳ４、ＲＳ５、ＲＴ１、ＲＴ２、ＲＴ３、ＲＴ４は各々独立して、置換基群Ａから選択され、
環Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、およびＸ９は各々独立して、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよい低級シクロアルケニル基、置換基を有してもよいアリール基、または置換基を有してもよい複素環基であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、およびＬ７は各々独立して、単結合、置換基を有してもよい低級アルキレン基、置換基を有してもよいアリーレン基、置換基を有してもよいヘテロアリーレン基、置換基を有してもよいヘテロシクリレン基、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、
各ｍ、各ｋ１、各ｋ２、各ｋ３、各ｋ４、および各ｋ５は独立して、０、１、２、３、４、または５であり、
波線の結合は、（Ｅ）または（Ｚ）の立体異性を表す単結合である、
化合物またはその塩である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３２）
前記選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）は、以下、
（Ｒ）−トランス−Ｎ−（ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）シクロヘキサンカルボキサミド：
【化６】
2018230713.tif 000016
（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミド：
【化７】
2018230713.tif 000017
１−（５−イソキノリンスルホニル）ホモピペラジン：
【化８】
2018230713.tif 000018
１−（５−イソキノリンスルホニル）−２−メチルピペラジン：
【化９】
2018230713.tif 000019
からなる群から選択される化合物、またはその塩である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３３）
前記化合物または前記選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）は、フルチカゾン、フルメタゾン、およびＲＵ−２４８５８からなる群から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３４）
前記化合物または前記選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）は、フルチカゾンプロピオン酸エステルまたはフルチカゾンフランカルボン酸エステルである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３５）
前記化合物または前記選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）は、マプラコラット（Ｍａｐｒａｃｏｒａｔ）、ＺＫ２１６３４８、ＺＫ２０９６１４、ダグロコラット（Ｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、フォスダグロコラット（Ｆｏｓｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ａ、ＡＬ−４３８、ＬＧＤ−５５５２、Ｃ１０８２９７、ＭＫ−５９３２、Ｏｒｇ  ２１４００７−０、ＰＦ−８０２、ＤＥ−１１０およびＣｏｍｐｏｕｎｄ  １０からなる群から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３６）
前記症状、障害または疾患は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）および小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３７）
前記小胞体（ＥＲ）関連ストレスは、タンパク質のフォールディングの異常および／または異常タンパク質の蓄積に起因する、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３８）
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィにおける角膜内皮細胞の障害、角膜内皮障害、角膜内皮密度低下、グッテーの形成、デスメ膜の肥厚、角膜厚の肥厚、混濁、角膜上皮障害、角膜実質混濁、羞明、霧視、視力障害、眼痛、流涙、充血、疼痛、水疱性角膜症、眼の不快感、コントラスト低下、グレア、角膜実質の浮腫、角膜上皮びらん、および血管新生のうち小胞体（ＥＲ）ストレスに関連する症状、障害または疾患から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目３９）
前記症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィを含む、前記項目のいずれか一項に記載の組成物またはカスパーゼ阻害剤。
（項目４０）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法であって、該方法は、化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含み、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、方法。
（項目４１）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法であって、該方法は、化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含み、該化合物が選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つを含む、方法。
（項目４２）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法であって、該方法は、化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含み、該化合物は、
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000020
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、方法。
（項目４３）
前記項目のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、項目４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、使用。
（項目４５）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物が、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つを含む、使用。
（項目４６）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物が、
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000021
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、使用。
（項目４７）
前記項目のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、項目４４〜４６のいずれか一項に記載の使用。
（項目４８）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための化合物であって、該化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、以下：（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、該細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す、化合物。
（項目４９）
角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）からなる群より選択される少なくとも１つの化合物。
（項目５０）
表Ｃ：
【表Ｃ】
2018230713.tif 000022
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、化合物。
（項目５１）
前記項目のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、項目４８〜５０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項目５２）
カスパーゼ活性を阻害する方法であって、化合物の有効量をそれを必要な対象に接触させる工程を含み、該化合物は、
表Ｂ：
【表Ｂ−１】
2018230713.tif 000023
【表Ｂ−２】
2018230713.tif 000024
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、方法。
（項目５３）
カスパーゼ活性を阻害する方法であって、化合物の有効量をそれを必要な対象に接触させる工程を含み、該化合物は、
表Ｄ：
【表Ｄ】
2018230713.tif 000025
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、方法。
（項目５４）
前記項目のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、項目５２または５３に記載の方法。
（項目５５）
カスパーゼ活性を阻害するための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物は、
本明細書に記載の表Ｂ：
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、使用。
（項目５６）
カスパーゼ活性を阻害するための医薬の製造のための化合物の使用であって、該化合物は、
本明細書に記載の表Ｄ：
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、使用。
（項目５７）
前記項目のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、項目５５または５６に記載の使用。
（項目５８）
カスパーゼ活性を阻害するための化合物であって、該化合物は、
本明細書に記載の表Ｂ：
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、化合物。
（項目５９）
カスパーゼ活性を阻害するための化合物であって、該化合物は、
本明細書に記載の表Ｄ：
に示す少なくとも１つの化合物から選択される化合物、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物である、化合物。
（項目６０）
前記項目のいずれか１つ又は複数の特徴を含む、項目５８または５９に記載の化合物。【００１０】
本発明において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供されうることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナルに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を処置または予防しうる新規医薬を提供する。さらに、本発明は、ＴＧＦ−βシグナルおよび小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を処置または予防しうる新規医薬を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１−１】図１−１および図１−２は、ＳＣＲＥＥＮ−ＷＥＬＬ（登録商標）  ＦＤＡ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｖ２，  Ｊａｐａｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ各薬剤の薬剤名、ＴＧＦ−β２刺激におけるカスパーゼ３／７活性（ｎ＝５）の結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。図１−１および図１−２は、（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％）の値が１〜２５位にランク付けられた薬剤を示している。
【図１−２】図１−１および図１−２は、ＳＣＲＥＥＮ−ＷＥＬＬ（登録商標）  ＦＤＡ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｖ２，  Ｊａｐａｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ各薬剤の薬剤名、ＴＧＦ−β２刺激におけるカスパーゼ３／７活性（ｎ＝５）の結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。図１−１および図１−２は、（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％）の値が１〜２５位にランク付けられた薬剤を示している。
【図２−１】図２−１および図２−２は、ＳＣＲＥＥＮ−ＷＥＬＬ（登録商標）  ＦＤＡ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｖ２，  Ｊａｐａｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ各薬剤の薬剤名、ＴＧＦ−β２刺激におけるカスパーゼ３／７活性（ｎ＝５）の結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。図２−１および図２−２は、（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％）の値が２６〜４７位にランク付けられた薬剤を示している。
【図２−２】図２−１および図２−２は、ＳＣＲＥＥＮ−ＷＥＬＬ（登録商標）  ＦＤＡ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｖ２，  Ｊａｐａｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ各薬剤の薬剤名、ＴＧＦ−β２刺激におけるカスパーゼ３／７活性（ｎ＝５）の結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。図２−１および図２−２は、（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％）の値が２６〜４７位にランク付けられた薬剤を示している。
【図３】図３は、各薬剤名、ＭＧ−１３２（０．１μＭ）刺激におけるカスパーゼ３／７活性の結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。
【図４Ａ−１】図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３は、ＴＧＦ−β２刺激における種々の濃度の各薬剤のカスパーゼ３／７活性を示す。「ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ」は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたカスパーゼ３／７活性を示す。「位相差顕微鏡」は、位相差顕微鏡による観察において、コントロールの浮遊細胞を「１」とした場合、◎が浮遊細胞比１以上かつ１．２未満を示し、〇が浮遊細胞比１．２以上かつ１．４未満、△が、浮遊細胞比１．４以上かつ１．５未満を示す。
【図４Ａ−２】図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３は、ＴＧＦ−β２刺激における種々の濃度の各薬剤のカスパーゼ３／７活性を示す。「ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ」は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたカスパーゼ３／７活性を示す。「位相差顕微鏡」は、位相差顕微鏡による観察において、コントロールの浮遊細胞を「１」とした場合、◎が浮遊細胞比１以上かつ１．２未満を示し、〇が浮遊細胞比１．２以上かつ１．４未満、△が、浮遊細胞比１．４以上かつ１．５未満を示す。
【図４Ａ−３】図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３は、ＴＧＦ−β２刺激における種々の濃度の各薬剤のカスパーゼ３／７活性を示す。「ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ」は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたカスパーゼ３／７活性を示す。「位相差顕微鏡」は、位相差顕微鏡による観察において、コントロールの浮遊細胞を「１」とした場合、◎が浮遊細胞比１以上かつ１．２未満を示し、〇が浮遊細胞比１．２以上かつ１．４未満、△が、浮遊細胞比１．４以上かつ１．５未満を示す。
【図４Ｂ−１】図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３は、ＴＧＦ−β２刺激における種々の濃度の各薬剤のカスパーゼ３／７活性を示す。「ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ」は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたカスパーゼ３／７活性を示す。「位相差顕微鏡」は、位相差顕微鏡による観察において、コントロールの浮遊細胞を「１」とした場合、◎が浮遊細胞比１以上かつ１．２未満を示し、〇が浮遊細胞比１．２以上かつ１．４未満、△が、浮遊細胞比１．４以上かつ１．５未満を示す。
【図４Ｂ−２】図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３は、ＴＧＦ−β２刺激における種々の濃度の各薬剤のカスパーゼ３／７活性を示す。「ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ」は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたカスパーゼ３／７活性を示す。「位相差顕微鏡」は、位相差顕微鏡による観察において、コントロールの浮遊細胞を「１」とした場合、◎が浮遊細胞比１以上かつ１．２未満を示し、〇が浮遊細胞比１．２以上かつ１．４未満、△が、浮遊細胞比１．４以上かつ１．５未満を示す。
【図４Ｂ−３】図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３は、ＴＧＦ−β２刺激における種々の濃度の各薬剤のカスパーゼ３／７活性を示す。「ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ」は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたカスパーゼ３／７活性を示す。「位相差顕微鏡」は、位相差顕微鏡による観察において、コントロールの浮遊細胞を「１」とした場合、◎が浮遊細胞比１以上かつ１．２未満を示し、〇が浮遊細胞比１．２以上かつ１．４未満、△が、浮遊細胞比１．４以上かつ１．５未満を示す。
【図５】図５は、フルチカゾンフランカルボン酸エステルでプレトリートメントしたフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞をＴＧＦ−β２で刺激した不死化ヒト角膜内皮細胞の位相差顕微鏡写真を示す。
【図６】図６は、フルチカゾンフランカルボン酸エステル存在下でのフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞におけるカスパーゼ３／７活性のグラフを示す。
【図７】図７は、フルチカゾンフランカルボン酸エステル存在下でのフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞における細胞生存率のグラフを示す。
【図８】図８は、フルチカゾンプロピオン酸エステルでプレトリートメントしたフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞をＴＧＦ−β２で刺激した不死化ヒト角膜内皮細胞の位相差顕微鏡写真を示す。
【図９】図９は、フルチカゾンプロピオン酸エステル存在下でのフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞におけるカスパーゼ３／７活性のグラフを示す。
【図１０】図１０は、フルチカゾンプロピオン酸エステル存在下でのフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞における細胞生存率のグラフを示す。
【図１１】図１１は、ＺＫ２１６３４８でプレトリートメントしたフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞をＴＧＦ−β２で刺激した不死化ヒト角膜内皮細胞の位相差顕微鏡写真を示す。
【図１２】図１２は、フルチカゾンフランカルボン酸エステルおよびフルチカゾンプロピオン酸エステルを使用した場合の（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）の比を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００１４】
（定義）
本明細書において、数値の前の「約」とは、後に続く数値の±１０％を意味する。
【００１５】
本明細書において、「細胞生存率（％）」とは、本発明で使用される化合物の非存在下でｉＦＣＥＤまたはｉＨＣＥＣを培養した場合の細胞数に対する、当該化合物の存在下でｉＦＣＥＤまたはｉＨＣＥＣを培養した場合の細胞数の割合をいう。本明細書で使用される細胞生存率は、別段指示しない限り、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙによって測定されたものである。
【００１６】
本明細書において、「カスパーゼ３／７活性（％）」とは、ＴＧＦ−β（例えば、ＴＧＦ−β２）添加群（化合物なし）またはＭＧ−１３２添加群（化合物なし）におけるカスパーゼ３／７活性に対する、ＴＧＦ−β（例えば、ＴＧＦ−β２）またはＭＧ−１３２存在下で、本発明で使用される化合物とｉＦＣＥＤまたはｉＨＣＥＣとを接触させた場合のカスパーゼ３／７活性の割合をいう。本明細書で使用されるカスパーゼ３／７活性は、別段指示しない限り、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙによって測定されたものである。
【００１７】
本明細書において、「化合物」は、角膜内皮における症状、障害または疾患の予防または治療を達成し得るあらゆる物質を包含し、例えば、小分子化合物、ペプチド、タンパク質、核酸、細胞などが挙げられる。
【００１８】
本明細書において「誘導体」または「類似体」とは、そのコア構造が親化合物のそれと同じかまたはよく似ているが、異なる官能基または付加的な官能基などの化学的または物理的修飾を有するような化合物を指す。誘導体または類似体は、親化合物と同一または類似の生物学的活性を有する。
【００１９】
本明細書において、「薬学的に許容され得る塩」とは、比較的非毒性の、本発明の化合物の塩（例えば、酸性塩、塩基性塩など）をいう。これらの塩は、化合物の最終的な単離および精製の間に一時的に、またはその遊離酸または遊離塩基型で精製された化合物を適切な有機もしくは無機の塩基または酸と別々に反応させること、およびそのように形成された塩を単離することによって調製することができる。
【００２０】
本発明の化合物の薬学的に許容され得る塩基性塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、プロカイン塩、メグルミン塩、ジエタノールアミン塩またはエチレンジアミン塩等の脂肪族アミン塩；Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ベネタミン塩等のアラルキルアミン塩；ピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソキノリン塩等のヘテロ環芳香族アミン塩；テトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアモニウム塩、ベンジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルアンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メチルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩等の第４級アンモニウム塩；アルギニン塩、リジン塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。
【００２１】
本発明の化合物の薬学的に許容され得る酸性塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、過塩素酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩等の有機酸塩；メタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩；アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等の酸性アミノ酸等が挙げられる。
【００２２】
本明細書において、「溶媒和物」とは、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の溶媒和物を意味し、例えば有機溶媒との溶媒和物（例えば、アルコール（エタノールなど）和物）、水和物等を包含する。水和物を形成する時は、任意の数の水分子と配位していてもよい。水和物としては、１水和物、２水和物等を挙げることができる。
【００２３】
本明細書において、「ＴＧＦβに対する阻害活性」または「小胞体関連ストレス誘導物質に対する阻害活性」とは、ＴＧＦβ／小胞体関連ストレス誘導物質に起因する細胞のアポトーシスを阻害する活性を指す。「ＴＧＦβに対する阻害活性を有する」または「小胞体関連ストレス誘導物質に対する阻害活性を有する」とは、細胞（ｉＦＣＥＤまたはｉＨＣＥＣ等）と候補化合物とを接触させていない群（候補化合物非接触群）に対して実質的に低下したカスパーゼ活性を有することを指す。
【００２４】
本明細書において、「毒性が低い」とは、ＴＧＦ−βおよび小胞体関連ストレス誘導物質の非存在下で細胞の生存率が実質的に減少していないことを指し、「実質的に減少していない細胞生存率」とは、細胞（ｉＦＣＥＤまたはｉＨＣＥＣ等）と候補化合物とを接触させていない群（候補化合物非接触群）比較して、細胞生存率が有意に減少していないことを指す。例えば、目安となる数値として、１０％以下の減少、５％以下の減少などを挙げることができる。
【００２５】
本明細書において、「抗炎症薬」とは、炎症を抑制する性質を有する作用物質をいう。抗炎症薬としてはステロイド性抗炎症薬が知られており、ステロイド系抗炎症薬は一般に「ステロイド」とも呼ばれる。本明細書において、「ステロイド」および「ステロイド性抗炎症薬」は交換可能に使用される。ステロイド性抗炎症薬は、シクロペンタヒドロフェナントレンと呼ばれるステロイド核を基本骨格としており、抗炎症作用を有する化合物である。ステロイド性抗炎症薬の他に非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が抗炎症薬として挙げられる。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、ステロイドのような骨格を有していない種々の構造を有する抗炎症作用を有する化合物である。
【００２６】
本明細書において、「選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｇｏｎｉｓｔ：ＳＥＧＲＡ）」とは、グルココルチコイド受容体に選択的に結合し、その受容体のリガンドの生理作用と同様の作用を示す化合物をいう。本明細書では、ＳＥＧＲＡは、基本骨格がステロイドであるもののみをさす。従って、本明細書における「ＳＥＧＲＡ」は「ステロイド性ＳＥＧＲＡ」とも称されるが、両者は同義である。本明細書において使用され得るＳＥＧＲＡとしては、例えば、フルチカゾン（例えば、フルチカゾンプロピオン酸エステルまたはフルチカゾンフランカルボン酸エステル）、フルメタゾン、ＲＵ−２４８５８等を挙げることができる。
【００２７】
本明細書において、「選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ：ＳＥＧＲＭ）」とは、グルココルチコイド受容体に選択的に結合し、その受容体のリガンドの生理作用と同様の作用を示す化合物のうち、非ステロイド性のものをいう。本明細書では、ＳＥＧＲＭは、基本骨格が非ステロイドであるもののみをさす。従って、本明細書における「ＳＥＧＲＭ」は「非ステロイド性ＳＥＧＲＭ」とも称されるが、両者は同義である。本明細書において使用され得るＳＥＧＲＭとしては、例えば、マプラコラット（Ｍａｐｒａｃｏｒａｔ、ＺＫ２４５１８６）、ＺＫ２１６３４８、ＺＫ２０９６１４、ダグロコラット（Ｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、フォスダグロコラット（Ｆｏｓｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ａ、ＡＬ−４３８、ＬＧＤ−５５５２、Ｃ１０８２９７、ＭＫ−５９３２、Ｏｒｇ  ２１４００７−０、ＰＦ−８０２、ＤＥ−１１０、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ
１０等を挙げることができる。
【００２８】
ＳＥＧＲＡは、歴史的には、ステロイド骨格から誘導された化合物として命名されたものである。その後、ステロイド骨格を持たないＳＥＧＲＡと同様の活性を有する化合物が見出され、このような非ステロイド性の化合物を、もともとステロイド骨格を持つ選択的グルココルチコイド受容体アゴニストに対して命名されたＳＥＧＲＡと区別するために、「選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ：ＳＥＧＲＭ）」と命名した（Sundahl  et  al.,  Pharmacol  Ther.  2015  Aug;152:28-41）。本明細書では、上記の定義に従って、「非ステロイド性ＳＥＧＲＡ」と称することはせず、非ステロイド性のものはすべて「ＳＥＧＲＭ」といい、逆に、「ステロイド性ＳＥＧＲＭ」と称することもせず、ステロイド性のものはすべて「ＳＥＧＲＡ」と称する。
【００２９】
本明細書において、「ステロイド性」化合物とは、シクロペンタヒドロフェナントレンと呼ばれるステロイド核を基本骨格とする化合物をいう。このような化合物は、ステロイド核に対して官能基などの任意の基が結合されていてもよく、当業者であれば、化合物の構造に基づき、ステロイド性化合物であるか、非ステロイド性化合物であるか容易に判断することができる。
【００３０】
本明細書において、「ビタミンＢ１２群」は、ヒドロキソコバラミン、シアノコバラミン、それらの誘導体（メコバラミン、デオキシアデノシルコバラミンなど）およびそれらの薬学的に許容され得る塩を包含する。
【００３１】
本明細書において、「ビタミンＤ群」は、ビタミンＤおよびビタミンＤと類似の活性を有する誘導体または類似体を包含する。ビタミンＤの誘導体または類似体は、参照によって本明細書に組み込まれる特表２０１３−５１８８１２、特表２０１３−５１５０１８等に詳細に記載される。
【００３２】
本発明で使用される化合物は水溶性のものが好ましい。水溶性でなければ、溶媒として身体に適合しにくいものを使用することが必要となりうるからである。水溶性かどうかについては薬局方の溶解度の定義に基づき分類されうる。すなわち、溶質1gまたは1mLを溶かすのに要する溶媒量として、極めて溶けやすい：1mL未満；溶けやすい：1mL以上10mL未満；やや溶けやすい：10mL以上30mL未満；やや溶けにくい：30mL以上100mL未満；溶けにくい：100mL以上1000mL未満；極めて溶けにくい：1000mL以上10000mL未満；ほとんど溶けない：10000mL以上と定義されており、本明細書においても同様に評価する。水溶性とは、水を溶媒としたときに、これらのうち有効量を溶解させるものであれば、任意の溶解性のものを利用することができることが理解される。
【００３３】
本明細書において「ｉＦＥＣＤ」（ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ  Ｆｕｃｈｓ’  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）は、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞の略称である。ｉＦＥＣＤの製造法については、例えば、ＷＯ２０１５／０１５６５５に記載されている。
【００３４】
本明細書において「ＨＣＥＣ」（ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ）とは、ヒト角膜内皮細胞の略称である。「ｉＨＣＥＣ」は、不死化（ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ）ヒト角膜内皮細胞の略称である。
【００３５】
本明細書において、「プログラム細胞死」とは、あらかじめプログラムされているかのように決まった時期や環境で自発的に細胞が死ぬ現象を指す。プログラム細胞死は、例えば「アポトーシス」を含む意味で使用される。
【００３６】
本明細書において「トランスフォーミング増殖因子−β（トランスフォーミング成長因子−β；略称ＴＧＦ−βとも表示される）」とは、当該分野で用いられるものと同様の意味で用いられ、様々な硬化性疾患や、関節リウマチ、増殖性硝子体網膜症の病態形成を担い、脱毛に深く関与し、免疫担当細胞の働きを抑制する一方、プロテアーゼの過剰産生を抑制することによって肺組織が分解され肺気腫に陥るのを防ぎ、癌細胞の増殖を抑制するなど、多彩な生物活性を示す分子量２５ｋＤのホモダイマー多機能性サイトカインである。「ＴＧＦ−βシグナル」とは、ＴＧＦ−βによって媒介されるシグナルであって、ＴＧＦ−βによって惹起されるものをいう。ＴＧＦ−βシグナル例えば、ＴＧＦ−β２によって媒介されるシグナルが含まれ、このほか、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β３等によって媒介されるシグナルも例示される。ＴＧＦ−βについて、ヒトでは、ＴＧＦ−β１〜β３までの相同性約７０％の３つのアイソフォームが存在し、その作用は類似している。ＴＧＦ−βはレセプターに結合できない分子量約３００ｋＤの不活性な潜在型として産生され、標的細胞表面やその周囲において活性化されてレセプターに結合できる活性型となり、その作用を発揮する。理論に束縛されることを望まないが、標的細胞におけるＴＧＦ−βの作用はＳｍａｄという情報伝達を担う一連のタンパク質のリン酸化経路によって伝達されるとされている。まず、活性型ＴＧＦ−βが標的細胞表面に存在するＩＩ型ＴＧＦ−βレセプターに結合すると、ＩＩ型レセプター２分子とＩ型ＴＧＦ−βレセプター２分子からなるレセプター複合体が形成され、ＩＩ型レセプターがＩ型レセプターをリン酸化する。次に、リン酸化Ｉ型レセプターは、Ｓｍａｄ２またはＳｍａｄ３をリン酸化すると、リン酸化されたＳｍａｄ２およびＳｍａｄ３はＳｍａｄ４と複合体を形成して核に移行し、標的遺伝子プロモーター領域に存在するＣＡＧＡ  ｂｏｘと呼ばれる標的配列に結合し、コアクチベーターとともに標的遺伝子の転写発現を誘導するとされている。
【００３７】
トランスフォーミング（形質転換）増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナル伝達経路は、その標的遺伝子の調節によって、細胞増殖および分化、増殖停止、プログラム細胞死（アポトーシス）、ならびに上皮間充織分化転換（ＥＭＴ；上皮間葉転換ともいう）といったような、多くの細胞活性を調節することができる。ＴＧＦ−β自体（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３）、アクチビンおよび骨形成タンパク質（ＢＭＰ）が含まれる、ＴＧＦ−βファミリーのメンバーは、細胞増殖、分化、移動およびプログラム細胞死（アポトーシス）等の強力な調節剤である。
【００３８】
ＴＧＦ−βは、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球および活性化マクロファージを含め、多くの細胞により、および多くの他の細胞型により産生される、約２４Ｋｄのタンパク質である。免疫系に対するＴＧＦ−βの効果の中には、ＩＬ−２レセプター誘導、ＩＬ−１誘発性胸腺細胞増殖の阻害、およびＩＦＮ−γ誘発性マクロファージ活性化の遮断がある。ＴＧＦ−βは、様々な病的状態に関与すると考えられており（Ｂｏｒｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：１）、そして腫瘍抑制物質または腫瘍プロモーターのいずれかとして機能することが十分裏付けられている。
【００３９】
ＴＧＦ−βは、２つのセリン／スレオニンキナーゼ細胞表面レセプターであるＴＧＦ−βＲＩＩおよびＡＬＫ５によって、そのシグナル伝達を媒介する。ＴＧＦ−βシグナル伝達は、ＴＧＦ−βＲＩＩがＡＬＫ５レセプターをリン酸化するのを可能とする、リガンド誘発性レセプター二量体化で開始される。そのリン酸化は、ＡＬＫ５キナーゼ活性を活性化して、活性化ＡＬＫ５は次に、下流エフェクターＳｍａｄタンパク質（ＭＡＤの脊椎動物相同体、または「Ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＤＰＰ（デカペンタプレジック）」タンパク質）、Ｓｍａｄ２または３をリン酸化する。Ｓｍａｄ４とのｐ−Ｓｍａｄ２／３複合体は、核に入って、標的遺伝子の転写を活性化する。
【００４０】
Ｓｍａｄ３は、ＳｍａｄのＲ−Ｓｍａｄ（レセプター−活性化Ｓｍａｄ）サブグループのメンバーであって、ＴＧＦ−βレセプターによる転写活性化の直接メディエーターである。ＴＧＦ−β刺激は、Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３のリン酸化および活性化をもたらし、これらは、Ｓｍａｄ４（脊椎動物における「共通（ｃｏｍｍｏｎ）Ｓｍａｄ」または「ｃｏ−Ｓｍａｄ」）と複合体を形成し、これが核と共に蓄積して、標的遺伝子の転写を調節する。Ｒ−Ｓｍａｄは、細胞質に局在し、そしてＴＧＦ−βレセプターによるリガンド誘発性リン酸化で、ｃｏ−Ｓｍａｄと複合体を形成して、核へと移動し、ここで、それらは、クロマチンおよび協同転写因子と関連のある遺伝子発現を調節する。Ｓｍａｄ６およびＳｍａｄ７は阻害性Ｓｍａｄ（「Ｉ−Ｓｍａｄ」）であり、すなわち、ＴＧＦ−βにより転写的に誘発されて、ＴＧＦ−βシグナル伝達の阻害剤として機能する（Ｆｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２１：６５９）。Ｓｍａｄ６／７は、Ｒ−Ｓｍａｄのレセプター媒介活性化を妨げることにより、それらの阻害効果を発揮する；それらは、Ｒ−Ｓｍａｄの動員およびリン酸化を競合的に妨げる、Ｉ型レセプターと関連する。Ｓｍａｄ６およびＳｍａｄ７は、Ｓｍａｄ６／７相互作用タンパク質のユビキチン化および分解をもたらす、Ｅ３ユビキチンリガーゼを補充することが知られている。
【００４１】
ＴＧＦ−βシグナル伝達経路は、このほか、ＢＭＰ−７などによって伝達される経路も存在し、これは、ＡＬＫ−１／２／３／６を経由し、Ｓｍａｄ１／５／８を介して機能が発現されるとされている。ＴＧＦ−βシグナル伝達経路については、J.  Massagu’e,  Annu.  Rev.  Biochem.  1998.  67:  753-91;Vilar  JMG,  Jansen  R,  Sander  C  (2006)  PLoS  Comput  Biol  2(1):e3;  Leask,  A.,  Abraham,  D.  J.  FASEB  J.18,  816-827  (2004);  Coert  Margadant  &  Arnoud  Sonnenberg  EMBO  reports  (2010)11,  97-105;  Joel  Rosenbloom  et  al.,  Ann  Intern  Med.  2010;  152:  159-166等を参照のこと。
【００４２】
本明細書において「トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）に起因する角膜内皮の症状、障害または疾患」とは、角膜内皮細胞におけるＴＧＦ−βに誘導される任意の角膜内皮の症状、障害または疾患を指す。本発明では、角膜内皮細胞、例えば、フックス角膜内皮ジストロフィのモデル細胞（例えば、ｉＦＥＣＤ）を、ＴＧＦ−β２に曝露したところ、驚くべきことに種々の障害（例えば、プログラム細胞死）が生じた。このような現象は従来よく解明されていなかった現象である。本発明者らは、カスパーゼ３／７活性を角膜内皮における障害の指標とし、ＴＧＦ−β存在下でフックス角膜内皮ジストロフィの角膜内皮障害モデルの細胞におけるカスパーゼ３／７活性を抑制することができる化合物を見出した。驚くべきことに、見出された化合物は、これまで角膜内皮のける障害を抑制することも、カスパーゼ活性を抑制することも知られていなかったものであった。
【００４３】
本明細書において「小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患」とは、小胞体（ＥＲ）ストレスに関連するものを指し、例えば、フックス角膜内皮ジストロフィにおける角膜内皮細胞の障害、角膜内皮障害、角膜内皮密度低下、グッテーの形成、デスメ膜の肥厚、角膜厚の肥厚、混濁、角膜上皮障害、角膜実質混濁、羞明、霧視、視力障害、眼痛、流涙、充血、疼痛、水疱性角膜症、眼の不快感、コントラスト低下、グレア、および角膜実質の浮腫、角膜上皮びらん、血管新生等のうち小胞体（ＥＲ）ストレスに関連するものを挙げることができるがこれらに限定されない。
【００４４】
本明細書中で使用される文言（原子、基等）の定義について以下に詳しく説明する。
【００４５】
本明細書において「ハロゲン原子」とは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素原子を示す。
【００４６】
本明細書において「低級アルキル基」とは、炭素原子数が１〜８個の直鎖又は分枝のアルキル基を示す。具体例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル基等が挙げられる。
【００４７】
本明細書において「低級アルケニル基」とは、炭素原子数が２〜８個の直鎖又は分枝のアルケニル基を示す。具体例として、ビニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、イソプロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチル−２−ブテニル基等が挙げられる。
【００４８】
本明細書において「低級アルキニル基」とは、炭素原子数が２〜８個の直鎖又は分枝のアルキニル基を示す。具体例として、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、イソブチニル、イソペンチニル基等が挙げられる。
【００４９】
「低級シクロアルキル基」とは、炭素原子数が３〜８個のシクロアルキル基を示す。具体例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチル基が挙げられる。
【００５０】
本明細書において「低級シクロアルカン環」とは、炭素原子数が３〜８個のシクロアルカン環を示す。具体例として、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン又はシクロオクタン環が挙げられる。
【００５１】
本明細書において「アリール基」とは、炭素原子数が６〜１４個の単環式芳香族炭化水素基又は２環式若しくは３環式の縮合多環式芳香族炭化水素から水素１原子を除いた残基を示す。具体例として、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等が挙げられる。
【００５２】
本明細書において「複素環基」とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される１又は複数個のヘテロ原子を環内に有する飽和或いは不飽和単環式複素環又は２環式若しくは３環式の縮合多環式複素環から水素１原子を除いた残基を示す。
【００５３】
飽和の単環式複素環の具体例として、窒素原子を環内に有するピロリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、トリアゾリジン、ピペリジン、ヘキサヒドロピリダジン、ヘキサヒドロピリミジン、ピペラジン、ホモピペリジン、ホモピペラジン環等が、酸素原子を環内に有するテトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン環等が、硫黄原子を環内に有するテトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピラン環等が、窒素原子と酸素原子を環内に有するオキサゾリジン、イソオキサゾリジン、モルホリン環等が、窒素原子と硫黄原子を環内に有するチアゾリジン、イソチアゾリジン、チオモルホリン環等が挙げられる。
【００５４】
また、飽和の単環式複素環はベンゼン環等と縮合してジヒドロインドール、ジヒドロインダゾール、ジヒドロベンゾイミダゾール、テトラヒドロキノリン、テトラヒドロイソキノリン、テトラヒドロシンノリン、テトラヒドロフタラジン、テトラヒドロキナゾリン、テトラヒドロキノキサリン、ジヒドロベンゾフラン、ジヒドロイソベンゾフラン、クロマン、イソクロマン、ジヒドロベンゾチオフェン、ジヒドロイソベンゾチオフェン、チオクロマン、イソチオクロマン、ジヒドロベンゾオキサゾール、ジヒドロベンゾイソオキサゾール、ジヒドロベンゾオキサジン、ジヒドロベンゾチアゾール、ジヒドロベンゾイソチアゾール、ジヒドロベンゾチアジン、キサンテン、４ａ−カルバゾール、ペリミジン環等の２環式又は３環式の縮合多環式複素環を形成してもよい。
【００５５】
不飽和の単環式複素環の具体例として、窒素原子を環内に有するジヒドロピロール、ピロール、ジヒドロピラゾール、ピラゾール、ジヒドロイミダゾール、イミダゾール、ジヒドロトリアゾール、トリアゾール、テトラヒドロピリジン、ジヒドロピリジン、ピリジン、テトラヒドロピリダジン、ジヒドロピリダジン、ピリダジン、テトラヒドロピリミジン、ジヒドロピリミジン、ピリミジン、テトラヒドロピラジン、ジヒドロピラジン、ピラジン環等が、酸素原子を環内に有するジヒドロフラン、フラン、ジヒドロピラン、ピラン環等が、硫黄原子を環内に有するジヒドロチオフェン、チオフェン、ジヒドロチオピラン、チオピラン環等が、窒素原子と酸素原子を環内に有するジヒドロオキサゾール、オキサゾール、ジヒドロイソオキサゾール、イソオキサゾール、ジヒドロオキサジン、オキサジン環等が、窒素原子と硫黄原子を環内に有するジヒドロチアゾール、チアゾール、ジヒドロイソチアゾール、イソチアゾール、ジヒドロチアジン、チアジン環等が挙げられる。
【００５６】
また、不飽和の単環式複素環はベンゼン環等と縮合してインドール、インダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ジヒドロキノリン、キノリン、ジヒドロイソキノリン、イソキノリン、フェナントリジン、ジヒドロシンノリン、シンノリン、ジヒドロフタラジン、フタラジン、ジヒドロキナゾリン、キナゾリン、ジヒドロキノキサリン、キノキサリン、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、クロメン、イソクロメン、ベンゾチオフェン、イソベンゾチオフェン、チオクロメン、イソチオクロメン、ベンゾオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、ベンゾオキサジン、ベンゾチアゾール、ベンゾイソチアゾール、ベンゾチアジン、フェノキサンチン、カルバゾール、β−カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、フェナジン、フェノチアジン、フェノキサジン環等の２環式又は３環式の縮合多環式複素環を形成してもよい。
【００５７】
本明細書において「低級アルコキシ基」とは、ヒドロキシ基の水素原子が低級アルキル基で置換された基を示す。具体例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、ｎ−ヘプチルオキシ、ｎ−オクチルオキシ、イソプロポキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソペントキシ基等が挙げられる。
【００５８】
本明細書において「低級アルケニルオキシ基」とは、ヒドロキシ基の水素原子が低級アルケニル基で置換された基を示す。具体例として、ビニルオキシ、プロペニルオキシ、ブテニルオキシ、ペンテニルオキシ、ヘキセニルオキシ、ヘプテニルオキシ、オクテニルオキシ、イソプロペニルオキシ、２−メチル−１−プロペニルオキシ、２−メチル−２−ブテニルオキシ基等が挙げられる。
【００５９】
本明細書において「低級アルキニルオキシ基」とは、ヒドロキシ基の水素原子が低級アルキニル基で置換された基を示す。具体例として、エチニルオキシ、プロピニルオキシ、ブチニルオキシ、ペンチニルオキシ、ヘキシニルオキシ、ヘプチニルオキシ、オクチニルオキシ、イソブチニルオキシ、イソペンチニルオキシ基等が挙げられる。
【００６０】
本明細書において「低級シクロアルキルオキシ基」とは、ヒドロキシ基の水素原子が低級シクロアルキル基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロヘプチルオキシ、シクロオクチルオキシ基等が挙げられる。
【００６１】
本明細書において「アリールオキシ基」とは、ヒドロキシ基の水素原子がアリール基で置換された基を示す。具体例として、フェノキシ、ナフトキシ、アントリルオキシ、フェナントリルオキシ基等が挙げられる。
【００６２】
「複素環オキシ基」とは、ヒドロキシ基の水素原子が複素環基で置換された基を示す。
【００６３】
「低級アルキルチオ基」とは、メルカプト基の水素原子が低級アルキル基で置換された基を示す。具体例として、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｎ−ペンチルチオ、ｎ−ヘキシルチオ、ｎ−ヘプチルチオ、ｎ−オクチルチオ、イソプロピルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、イソペンチルチオ基等が挙げられる。
【００６４】
本明細書において「低級シクロアルキルチオ基」とは、メルカプト基の水素原子が低級シクロアルキル基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルチオ、シクロブチルチオ、シクロペンチルチオ、シクロヘキシルチオ、シクロヘプチルチオ又はシクロオクチルチオ基が挙げられる。
【００６５】
本明細書において「アリールチオ基」とは、メルカプト基の水素原子がアリール基で置換された基を示す。具体例として、フェニルチオ、ナフチルチオ、アントリルチオ、フェナントリルチオ基等が挙げられる。
【００６６】
本明細書において「複素環チオ基」とは、メルカプト基の水素原子が複素環基で置換された基を示す。
【００６７】
本明細書において「低級アルキルアミノ基」とは、アミノ基の一方又は両方の水素原子が低級アルキル基で置換された基を示す。具体例として、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、エチル（メチル）アミノ基等が挙げられる。
【００６８】
本明細書において「低級シクロアルキルアミノ基」、アミノ基の一方若しくは両方の水素原子が低級シクロアルキル基で置換された基、又はアミノ基の一方の水素原子が低級シクロアルキル基で、他方の水素原子が低級アルキル基、低級アルケニル基、若しくは低級アルキニル基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロペンチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、シクロヘプチルアミノ、シクロオクチルアミノ、ジシクロヘキシル、シクロヘキシル（メチル）アミノ、シクロヘキシル（ビニル）アミノ、シクロヘキシル（エチニル）アミノ基等が挙げられる。
【００６９】
「アリールアミノ基」とは、アミノ基の一方若しくは両方の水素原子がアリール基で置換された基、又はアミノ基の一方の水素原子がアリール基で、他方の水素原子が低級アルキル基、低級アルケニル基、低級アルキニル基、若しくは低級シクロアルキル基で置換された基を示す。具体例として、フェニルアミノ、ナフチルアミノ、アントリルアミノ、フェナントリルアミノ、ジフェニルアミノ、メチル（フェニル）アミノ、エチル（フェニル）アミノ、フェニル（ビニル〕アミノ、エチニル（フェニル）アミノ、シクロヘキシル（フェニル）アミノ基等が挙げられる。
【００７０】
本明細書において「複素環アミノ基」とは、アミノ基の一方若しくは両方の水素原子が複素環基で置換された基、アミノ基の一方の水素原子が複素環基で、他方の水素原子が低級アルキル基、又は低級アルケニル基、低級アルキニル基、低級シクロアルキル基、若しくはアリール基で置換された基を示す。
【００７１】
本明細書において「低級アルキルカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルキル基で置換された基を示す。具体例としてメチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニル、ｎ−ペンチルカルボニル、ｎ−ヘキシルカルボニル、ｎ−ヘプチルカルボニル、ｎ−オクチルカルボニル、イソプロピルカルボニル、イソブチルカルボニル、ｓｅｃ−ブチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル、イソペンチルカルボニル基等が挙げられる。
【００７２】
本明細書において「低級アルケニルカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルケニル基で置換された基を示す。具体例として、ビニルカルボニル、プロペニルカルボニル、ブテニルカルボニル、ペンテニルカルボニル、ヘキセニルカルボニル、ヘプテニルカルボニル、オクテニルカルボニル、イソプロペニルカルボニル、２−メチル−１−プロペニルカルボニル、２−メチル−２−ブテニルカルボニル基等が挙げられる。
【００７３】
本明細書において「低級アルキニルカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルキニル基で置換された基を示す。具体例として、エチニルカルボニル、プロピニルカルボニル、ブチニルカルボニル、ペンチニルカルボニル、ヘキシニルカルボニル、ヘプチニルカルボニル、オクチニルカルボニル、イソブチニルカルボニル、イソペンチニルカルボニル基等が挙げられる。
【００７４】
「低級シクロアルキルカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級シクロアルキル基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルカルボニル、シクロブチルカルボニル、シクロペンチルカルボニル、シクロヘキシルカルボニル、シクロヘプチルカルボニル又はシクロオクチルカルボニル基が挙げられる。
【００７５】
本明細書において「アリールカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子がアリール基で置換された基を示す。具体例として、フェニルカルボニル、ナフチルカルボニル、アントリルカルボニル、フェナントリルカルボニル基等が挙げられる。
【００７６】
本明細書において「複素環カルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が複素環基で置換された基を示す。
【００７７】
本明細書において「低級アルコキシカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルコキシ基で置換された基を示す。具体例として、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、ｎ−ペントキシカルボニル、ｎ−ヘキシルオキシカルボニル、ｎ−ヘプチルオキシカルボニル、ｎ−オクチルオキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソペントキシカルボニル基等が挙げられる。
【００７８】
本明細書において「低級アルケニルオキシカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルケニルオキシ基で置換された基を示す。具体例として、ビニルオキシカルボニル、プロペニルオキシカルボニル、ブテニルオキシカルボニル、ペンテニルオキシカルボニル、ヘキセニルオキシカルボニル、ヘプテニルオキシカルボニル、オクテニルオキシカルボニル、イソプロペニルオキシカルボニル、２−メチル−１−プロペニルオキシカルボニル、２−メチル−２−ブテニルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００７９】
本明細書において「低級アルキニルオキシカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルキニルオキシ基で置換された基を示す。具体例として、エチニルオキシカルボニル、プロピニルオキシカルボニル、ブチニルオキシカルボニル、ペンチニルオキシカルボニル、ヘキシニルオキシカルボニル、ヘプチニルオキシカルボニル、オクチニルオキシカルボニル、イソブチニルオキシカルボニル、イソペンチニルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００８０】
本明細書において「低級シクロアルキルオキシカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級シクロアルキルオキシ基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルオキシカルボニル、シクロブチルオキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、シクロヘプチルオキシカルボニル、シクロオクチルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００８１】
本明細書において「アリールオキシカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子がアリールオキシ基で置換された基を示す。具体例として、フェノキシカルボニル、ナフトキシカルボニル、アントリルオキシカルボニル、フェナントリルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００８２】
「複素環オキシカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が複素環オキシ基で置換された基を示す。
【００８３】
本明細書において「低級アルキルアミノカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルキルアミノ基で置換された基を示す。具体例として、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、プロピルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、エチルメチルアミノカルボニル基等が挙げられる。
【００８４】
本明細書において「低級アルケニルアミノカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルケニルアミノ基で置換された基を示す。具体例として、ビニルアミノカルボニル、プロペニルアミノカルボニル、ブテニルアミノカルボニル、ペンテニルアミノカルボニル、ヘキセニルアミノカルボニル、ヘプテニルアミノカルボニル、オクテニルアミノカルボニル、イソプロペニルアミノカルボニル、２−メチル−１−プロペニルアミノカルボニル、２−メチル−２−ブテニルアミノカルボニル、ジビニルアミノカルボニル、メチル（ビニル）アミノカルボニル基等が挙げられる。
【００８５】
本明細書において「低級アルキニルアミノカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級アルキニルアミノ基で置換された基を示す。具体例として、エチニルアミノカルボニル、プロピニルアミノカルボニル、ブチニルアミノカルボニル、ペンチニルアミノカルボニル、ヘキシニルアミノカルボニル、ヘプチニルアミノカルボニル、オクチニルアミノカルボニル、イソブチニルアミノカルボニル、イソペンチニルアミノカルボニル、ジエチニルアミノカルボニル、エチニル（メチル）アミノカルボニル、エチニル（ビニル）アミノカルボニル基等が挙げられる。
【００８６】
本明細書において「低級シクロアルキルアミノカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が低級シクロアルアミノ基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルアミノカルボニル、シクロブチルアミノカルボニル、シクロペンチルアミノカルボニル、シクロヘキシルアミノカルボニル、シクロヘプチルアミノカルボニル、シクロオクチルアミノカルボニル、ジシクロヘキシルアミノカルボニル、シクロヘキシル（メチル）アミノカルボニル、シクロヘキシル（ビニル）アミノカルボニル、シクロヘキシル（エチニル）アミノカルボニル基等が挙げられる。
【００８７】
本明細書において「アリールアミノカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子がアリールアミノ基で置換された基を示す。具体例として、フェニルアミノカルボニル、ナフチルアミノカルボニル、アントリルアミノカルボニル、フェナントリルアミノカルボニル、ジフェニルアミノカルボニル、メチルフェニルアミノカルボニル、エチルフェニルアミノカルボニル、フェニル（ビニル）アミノカルボニル、エチニル（フェニル）アミノカルボニル、シクロヘキシル（フェニル）アミノカルボニル基等が挙げられる。
【００８８】
本明細書において「複素環アミノカルボニル基」とは、ホルミル基の水素原子が複素環アミノ基で置換された基を示す。
【００８９】
本明細書において「低級アルキルスルフィニル基」とは、スルフィン酸基のヒドロキシが低級アルキル基で置換された基を示す。具体例として、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、ｎ−プロピルスルフィニル、ｎ−ブチルスルフィニル、ｎ−ペンチルスルフィニル、ｎ−ヘキシルスルフィニル、ｎ−ヘプチルスルフィニル、ｎ−オクチルスルフィニル、イソプロピルスルフィニル、イソブチルスルフィニル、ｓｅｃ−ブチルスルフィニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル、イソペンチルスルフィニル基等が挙げられる。
【００９０】
本明細書において「アリールスルフィニル基」とは、スルフィン酸基のヒドロキシがアリール基で置換された基を示す。具体例として、フェニルスルフィニル、ナフチルスルフィニル、アントリルスルフィニル、フェナントリルスルフィニル基等が挙げられる。
【００９１】
「低級アルキルスルホニル基」とは、スルホン酸基のヒドロキシが低級アルキル基で置換された基を示す。具体例として、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、ｎ−ブチルスルホニル、ｎ−ペンチルスルホニル、ｎ−ヘキシルスルホニル、ｎ−ヘプチルスルホニル、ｎ−オクチルスルホニル、イソプロピルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｓｅｃ−ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル、イソペンチルスルホニル基等が挙げられる。
【００９２】
本明細書において「低級アルケニルスルホニル基」とは、スルホン酸基のヒドロキシが低級アルケニル基で置換された基を示す。具体例として、ビニルスルホニル、プロペニルスルホニル、ブテニルスルホニル、ペンテニルスルホニル、ヘキセニルスルホニル、ヘプテニルスルホニル、オクテニルスルホニル、イソプロペニルスルホニル、２−メチル−１−プロペニルスルホニル、２−メチル−２−ブテニルスルホニル基等が挙げられる。
【００９３】
本明細書において「低級アルキニルスルホニル基」とは、スルホン酸基のヒドロキシが低級アルキニル基で置換された基を示す。具体例として、エチニルスルホニル、プロピニルスルホニル、ブチニルスルホニル、ペンチニルスルホニル、ヘキシニルスルホニル、ヘプチニルスルホニル、オクチニルスルホニル、イソブチニルスルホニル、イソペンチニルスルホニル基等が挙げられる。
【００９４】
「低級シクロアルキルスルホニル基」とは、スルホン酸基のヒドロキシが低級シクロアルキル基で置換された基を示す。具体例として、シクロプロピルスルホニル、シクロブチルスルホニル、シクロペンチルスルホニル、シクロヘキシルスルホニル、シクロヘプチルスルホニル、シクロオクチルスルホニル基等が挙げられる。
【００９５】
本明細書において「複素環スルホニル基」とは、スルホン酸基のヒドロキシが複素環基で置換された基を示す。
【００９６】
本明細書において「アリールスルホニル基」とは、スルホン酸基のヒドロキシがアリール基で置換された基を示す。具体例として、フェニルスルホニル、ナフチルスルホニル、アントリルスルホニル、フェナントリルスルホニル基等が挙げられる。
【００９７】
本明細書において「低級アルキルアミノカルボニルオキシ基」とは、ホルミルオキシ基の水素原子が低級アルキルアミノ基で置換された基を示す。具体例として、メチルアミノカルボニルオキシ、エチルアミノカルボニルオキシ、プロピルアミノカルボニルオキシ、ジメチルアミノカルボニルオキシ、ジエチルアミノカルボニルオキシ、エチル（メチル）アミノカルボニルオキシ基等が挙げられる。
【００９８】
本明細書において「アリールアミノカルボニルオキシ基」とは、ホルミルオキシ基の水素原子がアリールアミノ基で置換された基を示す。具体例として、フェニルアミノカルボニルオキシ、ナフチルアミノカルボニルオキシ、アントリルアミノカルボニルオキシ、フェナントリルアミノカルボニルオキシ、ジフェニルアミノカルボニルオキシ、メチル（フェニル）アミノカルボニルオキシ、エチル（フェニル）アミノカルボニルオキシ、フェニル（ビニル）アミノカルボニルオキシ、エチニル（フェニル）アミノカルボニルオキシ、シクロヘキシル（フェニル）アミノカルボニルオキシ基等が挙げられる。
【００９９】
本明細書において「３〜８員の含窒素複素環」とは、環内に１又は２個の窒素原子を含む飽和単環式複素環を示す。具体例として、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピペラジン、モルホリン環等が挙げられる。
【０１００】
本明細書において「アルキレン基」とは、炭素原子数が１〜８個の直鎖又は分枝のアルキレン基を示す。具体例として、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、ヘプタメチレン、オクタメチレン、メチルメチレン、エチルメチレン基等が挙げられる。
【０１０１】
本明細書において「ヒドロキシ基のエステル」とは、ヒドロキシ基とカルボン酸類とから形成されるエステルを示す。
【０１０２】
本明細書において「メルカプト基のエステル」とは、メルカプト基とカルボン酸類とから形成されるチオエステルを示す。
【０１０３】
本明細書において「アミノ基のアミド」とは、アミノ基とカルボン酸類とから形成されるアミドを示す。
【０１０４】
本明細書において「低級アルキルアミノ基のアミド」とは低級アルキルアミノ基とカルボン酸類とから形成されるアミドを示す。
【０１０５】
「アリールアミノ基のアミド」とは、アリールアミノ基とカルボン酸類とから形成されるアミドを示す。
【０１０６】
本明細書において「複素環アミノ基のアミド」とは、複素環アミノ基とカルボン酸類とから形成されるアミドを示す。
【０１０７】
本明細書において「カルボン酸類」とは、ＲａＣＯＯＨ（Ｒａは水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、置換基を有しても低級アルコキシ基等を示す）で示される飽和脂肪族モノカルボン酸、飽和脂肪族ジカルボン酸、不飽和脂肪族カルボン酸、炭素環系カルボン酸、複素環系カルボン酸等を示す。具体例として、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸等の飽和脂肪族モノカルボン酸；シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸等の飽和脂肪族ジカルボン酸；アクリル酸、プロピオル酸、クロトン酸、ケイ皮酸等の不飽和脂肪族カルボン酸；安息香酸、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、ナフトエ酸、トルイル酸、シクロヘキサンカルボン酸、シクロヘキサンジカルボン酸等の炭素環系カルボン酸；フランカルボン酸、チオフェンカルボン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸等の複素環系カルボン酸等が挙げられる。また、これらのカルボン酸の酸無水物［（ＲａＣＯ）２Ｏ］、酸ハロゲン化物（ＲａＣＯＸ、Ｘはハロゲン原子を示す）も「カルボン酸類」に含まれる。
【０１０８】
本明細書において「カルボキシ基のエステル」とは、カルボキシ基とアルコール類又はフェノール類とから形成されるエステルを示す。
【０１０９】
本明細書において「スルフィン酸基のエステル」とは、スルフィン酸基とアルコール類又はフェノール類とから形成されるエステルを示す。
【０１１０】
本明細書において「スルホン酸基のエステル」とは、スルホン酸基とアルコール類又はフェノール類とから形成されるエステルを示す。
【０１１１】
本明細書において「アルコール類」とは、ＲｂＯＨ（Ｒｂは置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよいアルケニル基等を示す）で示される飽和脂肪族系ヒドロキシ化合物、不飽和脂肪族系ヒドロキシ化合物等を示す。具体例として、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、イソプロパノール等の飽和脂肪族系ヒドロキシ化合物；ビニルアルコール等の不飽和脂肪族系ヒドロキシ化合物；ベンジルアルコール、フェネチルアルコール等のアリール基で置換された飽和脂肪族系ヒドロキシ化合物等を示す。
【０１１２】
本明細書において「フェノール類」とは、ＲｃＯＨ（Ｒｃは置換基を有してもよいアリール基等を示す）で示される炭素環系ヒドロキシ化合物等を示す。具体例として、フェノール、ナフトール、アントロール、フェナントロール等が挙げられる。
【０１１３】
本明細書において「カルボキシ基のアミド」とは、カルボキシ基とアミン類とから形成される酸アミドを示す。
【０１１４】
本明細書において「スルフィン酸基のアミド」とは、スルフィン酸基とアミン類とから形成される酸アミドを示す。
【０１１５】
本明細書において「スルホン酸基のアミド」とは、スルホン酸基とアミン類から形成される酸アミドを示す。
【０１１６】
本明細書において「アミン類」とは、ＨＮＲｄＲｅ［ＲｄとＲｅは同一又は異なって、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよいアリール基、複素環基等を示し、また、ＲｃとＲｄとが一緒になって飽和環状アミンを形成してもよい］で示されるアンモニア、飽和脂肪族系アミン化合物、炭素環系アミン化合物、複素環系アミン化合物、飽和環状アミン化合物等を示す。具体例として、アンモニア；メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、ペンチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エチルメチルアミン等の飽和脂肪族系アミン化合物；ベンジルアミン等の置換基を有する飽和脂肪族系アミン化合物；フェニルアミン、ナフチルアミン、アントリルアミン、フェナントリルアミン、ジフェニルアミン、メチルフェニルアミン、エチルフェニルアミン、シクロヘキシルアミン等の炭素環系アミン化合物；フリルアミン、チエニルアミン、ピロリジルアミン、ピリジルアミン、キノリルアミン、メチルピリジルアミン等の複素環系アミン化合物；アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、４−メチルピペリジン等の飽和環状アミン化合物等を示す。
【０１１７】
本明細書において「置換基を有してもよい低級アルキル基」、「置換基を有してもよい低級アルケニル基」「置換基を有してもよい低級アルキニル基」、「置換基を有してもよい低級アルコキシ基」、「置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基」、「置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基」、「置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基」、「置換基を有してもよい低級アルコキシカルボニル基」、「置換基を有してもよい低級アルケニルオキシルボニル基」、「置換基を有してもよい低級アルキニルオキシカルボニル基」、「置換基を有してもよい低級アルキルアミノカルボニル基」、及び／又は「置換基を有してもよい低級アルキルスルホニルオキシ基」とは、下記、α１群から選択される１又は複数個の置換基を有してもよい「低級アルキル基」、「低級アルケニル基」「低級アルキニル基」、「低級アルコキシ基」、「低級アルキルカルボニル基」、「低級アルケニルカルボニル基」、「低級アルキニルカルボニル基」、「低級アルコキシカルボニル基」、「低級アルケニルオキシルボニル基」、「低級アルキニルオキシカルボニル基」、「低級アルキルアミノカルボニル基」、又は「低級アルキルスルホニルオキシ基」を示す。
【０１１８】
［α１群］
ハロゲン原子、低級シクロアルキル基、アリール基、ハロゲン原子で置換されたアリール基、低級アルキル基で置換されたアリール基、ヒドロキシ基で置換されたアリール基、低級アルコキシ基で置換されたアリール基、複素環基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基のエステル、低級アルコキシ基、ハロゲン原子で置換された低級アルコキシ基、低級アルケニルオキシ基、低級アルキニルオキシ基、低級シクロアルキルオキシ基、アリールオキシ基、複素環オキシ基、メルカプト基、メルカプト基のエステル、低級アルキルチオ基、低級アルケニルチオ基、低級アルキニルチオ基、低級シクロアルキルチオ基、アリールチオ基、複素環チオ基、アミノ基、アミノ基のアミド、低級アルキルアミノ基、低級アルキルアミノ基のアミド、アリールアミノ基、アリールアミノ基のアミド、複素環アミノ基、複素環アミノ基のアミド、ホルミル基、低級アルキルカルボニル基、低級アルケニルカルボニル基、低級アルキニルカルボニル基、低級シクロアルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、複素環カルボニル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、低級アルコキシカルボニル基、低級アルケニルオキシカルボニル基、低級アルキニルオキシカルボニル基、低級シクロアルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、複素環オキシカルボニル基、低級アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、低級アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、スルフィン酸基、スルフィン酸基のエステル、スルフィン酸基のアミド、スルホン酸基、スルホン酸基のエステル、スルホン酸基のアミド、ニトロ基、及びシアノ基。
【０１１９】
本明細書において「置換基を有してもよい低級シクロアルキル基」、「置換基を有してもよいアリール基」、「置換基を有してもよい複素環基」、「置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基」、「置換基を有してもよいアリールカルボニル基」、「置換基を有してもよい複素環カルボニル基」、「置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシカルボニル基」、「置換基を有してもよいアリールオキシカルボニル基」、「置換基を有してもよい複素環オキシカルボニル基」、「置換基を有してもよいアリールアミノカルボニル基」、及び／又は「置換基を有してもよい複素環アミノカルボニル基」とは、下記、β１群から選択される１又は複数個の置換基を有してもよい「低級シクロアルキル基」「アリール基」、「複素環基」、「低級シクロアルキルカルボニル基」、「アリールカルボニル基」、「複素環カルボニル基」、「低級シクロアルキルオキシカルボニル基」、「アリールオキシカルボニル基」、「複素環オキシカルボニル基」、「アリールアミノカルボニル基」、又は「複素環アミノカルボニル基」を示す。
【０１２０】
［β１群］
ハロゲン原子、低級アルキル基、ハロゲン原子で置換された低級アルキル基、ヒドロキシ基で置換された低級アルキル基、低級アルコキシ基で置換された低級アルキル基、アミノ基で置換された低級アルキル基、低級アルキルアミノ基で置換された低級アルキル基、カルボキシ基で置換された低級アルキル基、低級アルコキシカルボニル基で置換された低級アルキル基、低級アルケニル基、低級アルキニル基、低級シクロアルキル基、アリール基、複素環基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基のエステル、低級アルコキシ基、ハロゲン原子で置換された低級アルコキシ基、低級アルケニルオキシ基、低級アルキニルオキシ基、低級シクロアルキルオキシ基、アリールオキシ基、複素環オキシ基、メルカプト基、メルカプト基のエステル、低級アルキルチオ基、低級アルケニルチオ基、低級アルキニルチオ基、低級シクロアルキルチオ基、アリールチオ基、複素環チオ基、アミノ基、アミノ基のアミド、低級アルキルアミノ基、低級アルキルアミノ基のアミド、アリールアミノ基、アリールアミノ基のアミド、複素環アミノ基、複素環アミノ基のアミド、ホルミル基、低級アルキルカルボニル基、低級アルケニルカルボニル基、低級アルキニルカルボニル基、低級シクロアルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、複素環カルボニル基、カルボキシ基、カルボキシ基のアミド、低級アルコキシカルボニル基、低級アルケニルオキシカルボニル基、低級アルキニルオキシカルボニル基、低級シクロアルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、複素環オキシカルボニル基、低級アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、低級アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、スルフィン酸基、スルフィン酸基のエステル、スルフィン酸基のアミド、スルホン酸基、スルホン酸基のエステル、スルホン酸基のアミド、ニトロ基、シアノ基、アミノカルボニルオキシ基、低級アルキルアミノカルボニルオキシ基、及びアリールアミノカルボニルオキシ基。
【０１２１】
好ましい実施形態では、本発明が対象とする症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィに関する障害である。フックス角膜内皮ジストロフィに関しては、角膜内皮細胞におけるＴＧＦ−β誘導が関与していることが示されており、ＦＥＣＤにおける細胞喪失に関与し得ることも示されている。
【０１２２】
本発明の医薬は、フックス角膜内皮ジストロフィの中でもひとつの重要な異常または障害の原因となるＴＧＦ−β２に誘導される細胞障害等を処置しうることから、フックス角膜内皮ジストロフィの治療または予防に有用であることが理解される。特に、本発明では実施例において、フックス角膜内皮ジストロフィモデルにおいてＴＧＦ−β２に誘導される細胞障害あるいはプログラム細胞死を抑制することができたことから本発明は、フックス角膜内皮ジストロフィモデルにおけるＴＧＦ−β２に関連する重症患者の治療に使用することができると考えられる。本発明は、フックス角膜内皮ジストロフィにおける角膜内皮細胞の障害や、角膜内皮密度低下、guttaeの形成、デスメ膜の肥厚、角膜厚の肥厚、角膜上皮障害、角膜実質混濁、羞明、霧視、視力障害、眼痛、流涙、充血、疼痛、水疱性角膜症、眼の不快感、コントラスト低下、グレアおよび角膜実質の浮腫などを処置しまたは予防し得る。
【０１２３】
（一般技術）
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook  J.et  al.(1989).Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  Cold  Spring  Harborおよびその3rd  Ed.(2001);  Ausubel,  F.M.(1987).Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Pub.  Associates  and  Wiley-Interscience;  Ausubel,  F.M.(1989).Short  Protocols  in  Molecular  Biology:  A  Compendium  of  Methods  from  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Pub.  Associates  and  Wiley-Interscience;  Innis,  M.  A.(1990).PCR  Protocols:  A  Guide  to  Methods  and  Applications,  Academic  Press;  Ausubel,  F.M.(1992).Short  Protocols  in  Molecular  Biology:  A  Compendium  of  Methods  from  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Pub.  Associates;  Ausubel,  F.M.(1995).Short  Protocols  in  Molecular  Biology:  A  Compendium  of  Methods  from  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Pub.  Associates;  Innis  ,M.A.  et  al.(1995).PCR  Strategies,  Academic  Press;  Ausubel,  F.M.(1999).Short  Protocols  in  Molecular  Biology:  A  Compendium  of  Methods  from  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Wiley,  and  annual  updates;  Sninsky,  J.J.et  al.(1999).PCR  Applications:  Protocols  for  Functional  Genomics,  Academic  Press、Gait,  M.J.(1985).Oligonucleotide  Synthesis:  A  Practical  Approach,  IRL  Press;  Gait,  M.J.(1990).Oligonucleotide  Synthesis:  A  Practical  Approach,  IRL  Press;  Eckstein,  F.(1991).Oligonucleotides  and  Analogues:  A  Practical  Approach,  IRL
Press;  Adams,  R.L.  et  al.(1992).The  Biochemistry  of  the  Nucleic  Acids,  Chapman  &  Hall;  Shabarova,  Z.  et  al.(1994).Advanced  Organic  Chemistry  of  Nucleic  Acids,  Weinheim;  Blackburn,  G.M.  et  al.(1996).Nucleic  Acids  in  Chemistry  and  Biology,  Oxford  University  Press;  Hermanson,  G.T.(I996).Bioconjugate  Techniques,  Academic  Press、別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７などに記載されている。角膜内皮細胞については、Nancy  Joyceらの報告｛Joyce,  2004  #161}  {Joyce,  2003  #7｝がよく知られているが、前述のごとく長期培養、継代培養により線維芽細胞様の形質転換を生じ、効率的な培養法の研究が現在も行われている。これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
【０１２４】
（好ましい実施形態の説明）
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。これらの実施形態について、当業者は適宜、任意の実施形態を組み合わせ得る。
【０１２５】
＜医薬＞
１つの局面において、本発明は、従来角膜内皮細胞においてカスパーゼ活性の阻害活性を有することが知られていなかった化合物がカスパーゼ活性を有することを見出し、その化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための医薬を提供する。具体的には、本発明は、化合物を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物であって、該化合物は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間培養後、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、（ｉ）該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること（すなわち、毒性が低いまたはないこと）、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間（例えば、２４時間、２８時間）培養後、細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ活性（好ましくは、カスパーゼ３／７活性）（％）の比が１．０未満、０．９５以下、０．９以下、０．８５以下、または０．８以下であること（カスパーゼ阻害活性）を示す、組成物を提供する。したがって、本発明の医薬は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）に起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得る。培養時間は好ましくは２４時間である。
【０１２６】
本発明の医薬において使用され得る化合物としては、例えば、表１に列挙される化合物が挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物は、これまで、カスパーゼ阻害活性を有することが知られておらず、特に角膜内皮の条件下でカスパーゼ阻害活性を有することが知られていなかった化合物群であり、それ故、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得ることが知られていなかったため、驚くべく事象であり、予想外であった。カスパーゼ活性が比較的強い有利な化合物を表２に列挙している。
【０１２７】
以下の表１および表２に示される化合物は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中２４〜２８時間（例えば、２４時間、２８時間）培養後、フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞と接触した場合、（ｉ）該細胞の細胞生存率が約９０％以上であること、および（ｉｉ）細胞生存率（％）に対する、ＴＧＦ−β存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が１．０未満（表１）または０．８以下（表２）であること例示的な化合物である。培養時間は好ましくは２４時間である。
【０１２８】
【表１−１】
2018230713.tif 000026
【０１２９】
【表１−２】
2018230713.tif 000027
【０１３０】
【表１−３】
2018230713.tif 000028
【０１３１】
【表１−４】
2018230713.tif 000029
【０１３２】
【表２−１】
2018230713.tif 000030
【０１３３】
【表２−２】
2018230713.tif 000031
特に、表２には、例えば、抗炎症薬（ステロイド性抗炎症薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）など）として知られている薬剤が多く含まれているが、抗炎症薬が、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得ることが知られていなかった。また、表２には、ビタミン（ビタミンＢ１２群、ビタミンＤ群等）が含まれているが、ビタミン（ビタミンＢ１２群、ビタミンＤ群等）も同様に、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得ることは知られていなかった。また、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）および選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）もまた、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得ることが見いだされたが、これらの化合物が、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得ることは知られていなかった。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本発明の医薬に使用される化合物は、抗炎症薬である。抗炎症薬は、ステロイド性抗炎症薬であってもよく、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であってもよい。ステロイド性抗炎症薬としては、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、エタボン酸ロテプレドノール（Loteprednol  Etabonate）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、アムシノニド（Amcinonide）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、プレドニゾロン（Prednisolone）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、デソニド（Desonide）、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、ブデソニド（Budesonide）、フルドロコルチゾン酢酸エステル（Fludrocortisone  Acetate）、フルオシノニド（Fluocinonide）、メチルプレドニゾロン（Methylprednisolone）、ベタメタゾン（Betamethasone）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、ハルシノニド（Halcinonide）、フルオロメトロン（Fluorometholone）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Beclomethasone  Dipropionate）、およびデュタステリド（Dutasteride）が挙げられるが、これらに限定されない。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）としては、アンレキサノクス（Amlexanox）、レフルノミド（Leflunomide）、オルサラジンナトリウム（Olsalazine・Na）、オルフェナドリンクエン酸塩（Orphenadrine  Citrate）、フルルビプロフェン（Flurbiprofen）、およびフェノキシベンザミン塩酸塩（Phenoxybenzamine・HCl）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本発明の医薬に使用される化合物は、ビタミンＢ１６およびビタミンＤなどのビタミンである。ビタミンＢ１６およびビタミンＤは、その誘導体または類似体であってもよい。ビタミンＢ１６としては、例えば、ヒドロキソコバラミン、シアノコバラミン、メコバラミン、デオキシアデノシルコバラミンが挙げられるがこれに限定されない。好ましい実施形態では、ビタミンＢ１６は、ヒドロキソコバラミン塩酸塩（Hydroxocobalamin・HCl）であり得る。ビタミンＤは、ビタミンＤおよびビタミンＤと類似の活性を有する誘導体または類似体を含む。ビタミンＤの誘導体または類似体は、参照によって本明細書に組み込まれる特表２０１３−５１８８１２、特表２０１３−５１５０１８等に詳細に記載される。好ましい実施形態では、ビタミンＤは、カルシポトリエン（Calcipotriene）であり得る。
【０１３６】
１つの実施形態では、本発明の医薬は、角膜内皮細胞におけるトランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）に起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得る。特定の実施形態では、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィ、角膜移植後障害、角膜内皮炎、外傷、眼科手術、眼科レーザー手術後の障害、加齢、後部多形性角膜ジストロフィ（ＰＰＤ）、先天性遺伝性角膜内皮ジストロフィ（ＣＨＥＤ）、特発性角膜内皮障害、およびサイトメガロウイルス角膜内皮炎からなる群より選択される。好ましい実施形態では、ＴＧＦ−βに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィである。
【０１３７】
別の実施形態において、本発明で使用される上記化合物は、さらに不死化ヒト角膜内皮細胞と接触した場合、（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、細胞生存率（％）に対する、ＭＧ−１３２存在下でのカスパーゼ活性（例えば、カスパーゼ３／７活性）（％）の比が１．０未満、０．９５以下、０．９以下、０．８５以下、または０．８以下であること（カスパーゼ阻害活性）を示す化合物である。このような化合物は、さらにＭＧ−１３２に対する阻害活性を有しており、小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患を治療または予防し得る。ＭＧ−１３２は、小胞体関連ストレスの原因の１つであるタンパク質のフォールディングの異常（変性タンパク質の蓄積）を誘導し得る物質として知られている。ある実施形態では、小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患は、フックス角膜内皮ジストロフィにおける角膜内皮細胞の障害、角膜内皮障害、角膜内皮密度低下、グッテーの形成、デスメ膜の肥厚、角膜厚の肥厚、混濁、角膜上皮障害、角膜実質混濁、羞明、霧視、視力障害、眼痛、流涙、充血、疼痛、水疱性角膜症、眼の不快感、コントラスト低下、グレア、角膜実質の浮腫、角膜上皮びらん、および血管新生のうち小胞体（ＥＲ）ストレスに関連する症状、障害または疾患から選択される。
【０１３８】
以下の表３に示される化合物は、表２に列挙される化合物のうち、不死化ヒト角膜内皮細胞と接触した場合、（ｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、該細胞の細胞生存率（％）が約９０％以上であること、および（ｉｉ）ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋２％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）中１８時間培養後、細胞生存率（％）に対する、ＭＧ−１３２存在下でのカスパーゼ３／７活性（％）の比が０．８以下であることを示す例示的な化合物である。
【０１３９】
【表３】
2018230713.tif 000032
ある実施形態では、本発明の医薬は、ＴＧＦ−βおよび小胞体（ＥＲ）関連ストレスの両方に起因する疾患を治療または予防することができる化合物を含む。このような化合物としては、アンレキサノクス（Amlexanox）、オルサラジンナトリウム（Olsalazine・Na）、ヒドロキソコバラミン塩酸塩（Hydroxocobalamin  HCl）、レフルノミド（Leflunomide）、フェブキソスタット（Febuxostat）、フルルビプロフェン（Flurbiprofen）、テラゾシン塩酸塩（Terazosin・HCl）、およびフルオロウラシル（５−フルオロウラシル）（Fluorouracil(5-Fluorouracil)）が挙げられるがこれらに限定されない。フックス角膜内皮ジストロフィは、ＥＲストレスと関連していることが知られており（Engler,  C.  et  al.  Am  J  Ophthalmol  149,  194-202  (2010)）、そのためＴＧＦ−βに加えてＥＲストレスを抑制することは、フックス角膜内皮ジストロフィの治療および予防における著明な改善が可能であり、場合によっては完全な治癒が可能であることを意味している。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、上記化合物は、その誘導体もしくは類似体、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはその溶媒和物の形態であってもよい。誘導体もしくは類似体は、親化合物の本来有する活性と同一または類似の活性を有し得る。あるいは、誘導体もしくは類似体は、親化合物と同一または類似のＴＧＦ−βに対する阻害活性および／またはＭＧ−１３２に対する阻害活性を有し得る。
【０１４１】
１つの実施形態では、角膜内皮細胞における小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮の症状、障害または疾患は、タンパク質のフォールディングの異常に起因するものであり得る。哺乳動物細胞において、フォールディングしなかったり（ｕｎｆｏｌｄｅｄ）、ミスフォールディングやタンパク質分解の異常などにより凝集したタンパク質（折りたたみ不全タンパク質、変性タンパク質（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）ともいう。）はユビキチン化され、微小管上を移動するダイニンモーターにより中心体付近に蓄積し、アグリソームという封入体を形成することが知られる。一般的にアグリソームは熱ショックやウイルス感染、酸化ストレスなどによって形成される。ヒトでは、パーキンソン病の神経細胞に見られるＬｅｗｙ小体や、アルコール性肝臓疾患の肝臓細胞で見られるＭａｌｌｏｒｙ小体、筋萎縮性側索硬化症の星状細胞で見られる硝子様小体など、細胞内の封入体が関与する疾患がいくつか知られている。
【０１４２】
表Ｅに示される化合物は、実施例３において、種々の濃度の化合物を使用して、ＴＧＦ−β阻害活性を確認した結果、いずれかの濃度でカスパーゼ活性が８０％を下回った化合物を列挙している。表Ｃに列挙されている化合物は、カスパーゼ阻害剤、ならびに／あるいは、角膜内皮の症状、障害または疾患（例えば、フックス角膜内皮ジストロフィ）の治療または予防のための組成物として有用であり得る。
【表Ｅ−１】
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【表Ｅ−２】
2018230713.tif 000034
【０１４３】
上記列挙した化合物のうち、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）は、１ｐＭの濃度で８０％以下のカスパーゼ活性を示し、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）およびフルオシノニド（Fluocinonide）は、それぞれ１０ｐＭおよび１００ｐＭの濃度で８０％以下のカスパーゼ活性を示した（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３）。これらの化合物は、１ｎＭ未満という極めて低い濃度ででも８０％以下のカスパーゼ活性を示した。驚くべきことに、これらの化合物は、いずれもステロイド性抗炎症薬であり、ステロイド性抗炎症薬は、例えば角膜内皮細胞におけるＴＧＦ−β刺激に対するカスパーゼの活性化に対して、強いカスパーゼ阻害活性を有することが示唆される。したがって、好ましい実施形態では、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）およびフルオシノニド（Fluocinonide）からなる群より選択される化合物、より好ましくは、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）およびフルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）からなる群より選択される化合物、さらに好ましくはクロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）が本発明において企図されるが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０１４４】
１ｎＭの濃度では、ステロイド性抗炎症薬であるジフルプレドナート（Difluprednate）およびブデソニド（Budesonide）、ならびに抗コリン剤である酒石酸トルテロジン（Tolterodine  Tartrate）も８０％以下のカスパーゼ活性を示した（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３）。したがって、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、フルオシノニド（Fluocinonide）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、ブデソニド（Budesonide）、および抗コリン剤である酒石酸トルテロジン（Tolterodine  Tartrate）からなる群より選択される化合物が、１つの好ましい実施形態であり得る。
【０１４５】
１つの好ましい実施形態では、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、ミコフェノール酸モフェチル（Mycophenolate  Mofetil）、ミコフェノール酸（Mycophenolic  Acid）、フルベストラント（Fulvestrant）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、アムシノニド（Amcinonide）、ブデソニド（Budesonide）、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、酒石酸トルテロジン（Tolterodine  Tartrate）、フルオシノニド（Fluocinonide）、エベロリムス（Everolimus）、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、ハルシノニド（Halcinonide）、およびピメクロリムス（Pimecrolimus）からなる群より選択される化合物が選択される。これらの化合物は、１０ｎＭの濃度で８０％以下のカスパーゼ活性を示した（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３）。
【０１４６】
１つの好ましい実施形態では、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、ミコフェノール酸モフェチル（Mycophenolate  Mofetil）、ミコフェノール酸（Mycophenolic  Acid）、フルベストラント（Fulvestrant）、メチルプレドニゾロン（Methylprednisolone）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、ベタメタゾン（Betamethasone）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、プレドニゾロン（Prednisolone）、フルドロコルチゾン酢酸エステル（Fludrocortisone  Acetate）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、アムシノニド（Amcinonide）、ブデソニド（Budesonide）、クロベタゾールプロ
ピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Beclomethasone  Dipropionate）、デソニド（Desonide）、フルオシノニド（Fluocinonide）、エベロリムス（Everolimus）、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、フルオロメトロン（Fluorometholone）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、およびハルシノニド（Halcinonide）からなる群より選択される化合物が選択される。これらの化合物は、１００ｎＭの濃度で８０％以下のカスパーゼ活性を示した（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３）。
【０１４７】
１つの好ましい実施形態では、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、ミコフェノール酸モフェチル（Mycophenolate  Mofetil）、ミコフェノール酸（Mycophenolic  Acid）、フルベストラント（Fulvestrant）、メチルプレドニゾロン（Methylprednisolone）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、ベタメタゾン（Betamethasone）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、プレドニゾロン（Prednisolone）、フルドロコルチゾン酢酸エステル（Fludrocortisone  Acetate）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、アムシノニド（Amcinonide）、ブデソニド（Budesonide）、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、酒石酸トルテロジン（Tolterodine  Tartrate）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Beclomethasone  Dipropionate）、デソニド（Desonide）、フルオシノニド（Fluocinonide）、エベロリムス（Everolimus）、リファペンチン(Rifapentine)、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、フルオロメトロン（Fluorometholone）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、ハルシノニド（Halcinonide）、およびピメクロリムス（Pimecrolimus）からなる群より選択される化合物が選択される。これらの化合物は、１μＭの濃度で８０％以下のカスパーゼ活性を示した（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３）。
【０１４８】
１０μＭでは、上記表Ｅに列挙されるほとんどの化合物（リファペンチン(Rifapentine)およびテルビナフィン塩酸塩（Terbinafine・HCl）以外の化合物）が、８０％以下のカスパーゼ活性を示した（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３）。したがって、別の実施形態では、テラゾシン塩酸塩（Terazosin・HCl）、ケトコナゾール（Ketoconazole）、トレミフェンベース（Toremifene  Base）、ニタゾキサニド（Nitazoxanide）、フランカルボン酸モメタゾン（Mometasone  Furoate）、ミコフェノール酸モフェチル（Mycophenolate  Mofetil）、ミコフェノール酸（Mycophenolic  Acid）、デフェラシロクス（Deferasirox）、カルベジロール（Carvedilol）、フルオキセチン塩酸塩（Fluoxetine・HCl）、フルベストラント（Fulvestrant）、メチルプレドニゾロン（Methylprednisolone）、デキサメタゾン（Dexamethasone）、ベタメタゾン（Betamethasone）、ジフルプレドナート（Difluprednate）、プレドニゾロン（Prednisolone）、フルドロコルチゾン酢酸エステル（Fludrocortisone  Acetate）、フルランドレノリド（Flurandrenolide）、アムシノニド（Amcinonide）、ブデソニド（Budesonide）、クロベタゾールプロピオン酸エステル（Clobetasol  Propionate）、フルオシノロンアセトニド（Fluocinolone  Acetonide）、酒石酸トルテロジン（Tolterodine  Tartrate）、イミプラミン塩酸塩（Imipramine・HCl）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Beclomethasone  Dipropionate）、ピリメタミン(Pyrimethamine)、デソニド（Desonide）、オキサリプラチン（Oxaliplatin）、フルオシノニド（Fluocinonide）、エベロリムス（Everolimus）、ブロモクリプチンメシル酸塩（Bromocriptine  Mesylate）、ニソルジピン（Nisoldipine）、トリアムシノロンアセトニド（Triamcinolone  Acetonide）、フルオロメトロン（Fluorometholone）、デソキシメタゾン（Desoximetasone）、オキシコナゾール硝酸塩(Oxiconazole  Nitrate)、ハルシノニド（Halcinonide）、ピメクロリムス（Pimecrolimus）、カルシトリオール（Calcitriol）、ジヒドロエルゴタミンメシル酸塩（Dihydroergotamine  Mesylate）、アリピプラゾール(Aripiprazole)、およびアセナピンマレイン酸塩（Asenapine  Maleate）からなる群より選択される化合物が選択される。
【０１４９】
別の実施形態において、本発明は、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）または選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物を提供する。ＳＥＧＲＡおよびＳＥＧＲＭ（これらの総称としてＳＥＧＲＡＭ）は、ステロイドの副作用を低減させるために、典型的には、副作用の原因であるトランス活性化（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）活性を有さない、またはあったとしても部分的であり、かつ、トランス抑制（ｔｒａｎｓｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）活性を有するように開発された化合物である。ＳＥＧＲＡＭは、グルココルチコイド受容体にのみ作用する化合物群であるが、グルココルチコイド受容体に対する作用が、ＴＧＦ−βシグナル伝達に影響を及ぼすことはこれまで知られていなかったため、ＳＥＧＲＡＭがＴＧＦ−βシグナルに起因する角膜内皮細胞における障害を抑制することができることは予想外であった。さらに、ＳＥＧＲＡＭの存在下では、細胞に対して毒性が低い、すなわち細胞生存率が高いことが明らかになった。したがって、本発明の組成物において使用されるＳＥＧＲＡＭは、トランス活性化活性を有してもよく、有さなくてもよいが、トランス活性化活性を有さないか、あったとしても部分的に有するのが好ましい。
【０１５０】
１つの実施形態において、選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）は、ステロイドの基本骨格を有さない、選択的グルココルチコイド受容体アゴニストであり、例えば、下記一般式（１）または一般式（２）で表される化合物又はその塩であって、
【化１０】
2018230713.tif 000035
式中、環Ｘはベンゼン環又はピリジン環を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシ基、アリールアルキルオキシアルキルオキシ基、置換基を有してもよい複素環基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基のエステル、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基、置換基を有してもよい複素環オキシ基、メルカプト基、メルカプト基のエステル、置換基を有してもよい低級アルキルチオ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルチオ基、置換基を有してもよいアリールチオ基、置換基を有してもよい複素環チオ基、置換基を有してもよい低級アルキルアミノ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノ基、置換基を有してもよいアリールアミノ基、置換基を有してもよい複素環アミノ基、アミノ基のアミド、置換基を有してもよい低級アルキルアミノ基のアミド、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノ基のアミド、置換基を有してもよいアリールアミノ基のアミド、置換基を有してもよい複素環アミノ基のアミド、ホルミル基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、置換基を有してもよい低級アルキルスルホニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルスルホニル基、置換基を有してもよいアリールスルホニル基、置換基を有してもよい複素環スルホニル基、スルホン酸基、スルホン酸基のエステル、スルホン酸基のアミド、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシ基、置換基を有してもよいシリル基、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１８、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ１８、−Ｗ１−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ１９、−Ｗ１−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ２０、−Ｗ１−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２、−ＯＣＨ２ＣＨ（Ｒ２３）−ＯＲ２４、置換基を有してもよいアミノ基、ニトロ基又はシアノ基を示し；
Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２はそれぞれ独立して、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、置換基を有してもよいアラルキル基、置換基を有してもよい複素環アルキル基、置換基を有してもよいアミノ低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシ基、置換基を有してもよい低級アルキニルオキシ基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基又は置換基を有してもよい複素環オキシ基を示し；
ｐは０〜５の整数を示し；
ｐが２〜５の場合、各Ｒ１は同一であっても異なってもよく；
Ｗ１は、酸素原子、硫黄原子又は−Ｎ（Ｒ２５）−を示し；
Ｚ１は、酸素原子、硫黄原子又は＝Ｎ−Ｒ２５を示し；
Ｒ２３は、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、カルボキシ基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミドまたはシアノ基を示し；
Ｒ２４は、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基のエステル、カルボキシ基のアミド、リン酸基またはリン酸基のエステルを示し；
Ｒ２５は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシアルキル基、置換基を有してもよい複素環アルキル基、置換基を有してもよいシリル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基又は置換基を有してもよいアリールカルボニル基を示し；
Ｒ２はハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、−ＯＲ８、−ＮＲ８Ｒ９、−ＳＲ８、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８又は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ８を示し；
ｑは０〜３の整数を示し；
ｑが２または３の場合、各Ｒ２は同一又は異なってもよく；
Ｒ３は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアルキル基、置換基を有してもよいアリールアルキルオキシアルキル基、置換基を有してもよいシリル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基又は置換基を有してもよいアリールカルボニル基を示し；
Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、または置換基を有してもよい複素環基を示し、または、Ｒ４とＲ５は一緒になって、置換基を有してもよい３〜８員の低級シクロアルカン環を形成してもよく；
Ｒ６は水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基又は置換基を有してもよい複素環基を示し；
Ａは単結合または置換基を有してもよい低級アルキレン基を示し；
Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立して、水素原子、置換基を有してもよい低級アルキル基、置換基を有してもよい低級アルケニル基、置換基を有してもよい低級アルキニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよい複素環基、ホルミル基、置換基を有してもよい低級アルキルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニル基、置換基を有してもよい複素環カルボニル基、カルボキシ基、置換基を有してもよい低級アルコキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルオキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルオキシカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルオキシカルボニル基、置換基を有してもよいアリールオキシカルボニル基、置換基を有してもよい複素環オキシカルボニル基、置換基を有してもよいアリールカルボニルオキシ基、置換基を有してもよい複素環カルボニルオキシ基、置換基を有してもよいアリールオキシ基、置換基を有してもよい複素環オキシ基、置換基を有してもよいアリールチオ基、置換基を有してもよい低級アルキルスルホニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルスルホニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルスルホニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルスルホニル基、置換基を有してもよいアリールスルホニル基、置換基を有してもよい複素環スルホニル基、置換基を有してもよいアリールアミノ基、アミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルケニルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級アルキニルアミノカルボニル基、置換基を有してもよい低級シクロアルキルアミノカルボニル基、置換基を有してもよいアリールアミノカルボニル基又は置換基を有してもよい複素環アミノカルボニル基を示し；
また、Ｒ２がＮＲ８Ｒ９の場合、Ｒ８とＲ９が一緒になって、置換基を有してもよい３〜８員の含窒素複素環を形成してもよい、
化合物またはその塩であり得る。これらの化合物またはその塩は、本発明の組成物の成分として含まれ得る。
【０１５１】
上記一般式（１）および（２）に示される化合物は、例えば、特開2017-43614号、特許第4817020号、特許第4825636号、特許第5054996号、および特許第5635743号に開示されている（これらは、参照によって、本明細書に組み込まれる）。
【０１５２】
別の実施形態では、ＳＥＧＲＭとして、以下の化合物も使用され得る：
下記一般式（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０−ａ）、（１０−ｂ）、（１２）、（１３−ａ）、（１３−ｂ）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（１９）、または（２０）で表される化合物またはその塩であって、
【化１１】
2018230713.tif 000036
【化１２】
2018230713.tif 000037
【化１３】
2018230713.tif 000038
上記式中、
【化１４】
2018230713.tif 000039
は、単結合または二重結合を表し、
ＲＡ１、ＲＡ２、ＲＡ３、ＲＡ４、ＲＡ５、ＲＡ６、ＲＢ１、ＲＢ２、ＲＢ３、ＲＣ１、ＲＣ２、ＲＣ３、ＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３、ＲＥ１、ＲＥ２、ＲＥ３、ＲＦ１、ＲＦ２、ＲＧ１、ＲＧ２、ＲＧ３、ＲＧ４、ＲＧ５、ＲＨ１、ＲＨ２、ＲＨ３、ＲＨ４、ＲＨ５、ＲＨ６、ＲＨ７、ＲＨ８、ＲＨ９、ＲＪ１、ＲＪ２、ＲＪ３、ＲＪ４、ＲＭ１、ＲＭ２、ＲＭ３、ＲＭ４、ＲＭ５、ＲＭ６、ＲＭ７、ＲＭ８、ＲＭ９、ＲＭ１０、ＲＭ１１、ＲＮ１、ＲＮ２、ＲＰ１、ＲＰ２、ＲＰ３、ＲＰ４、ＲＰ５、ＲＰ６、ＲＰ７、ＲＰ８、ＲＰ９、ＲＰ１０、ＲＱ１、ＲＱ２、ＲＳ１、ＲＳ２、ＲＳ３、ＲＳ４、ＲＳ５、ＲＴ１、ＲＴ２、ＲＴ３、ＲＴ４は各々独立して、置換基群Ａから選択され、
環Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、およびＸ９は各々独立して、置換基を有してもよい低級シクロアルキル基、置換基を有してもよい低級シクロアルケニル基、置換基を有してもよいアリール基、または置換基を有してもよい複素環基であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５、Ｌ６、およびＬ７は各々独立して、単結合、置換基を有してもよい低級アルキレン基、置換基を有してもよいアリーレン基、置換基を有してもよいヘテロアリーレン基、置換基を有してもよいヘテロシクリレン基、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、
各ｍ、各ｋ１、各ｋ２、各ｋ３、各ｋ４、および各ｋ５は独立して、０、１、２、３、４、または５であり、
波線の結合は、（Ｅ）または（Ｚ）の立体異性を表す単結合である、
化合物またはその塩。これらの化合物またはその塩は、本発明の組成物の成分として含まれ得る。
【０１５３】
１つの実施形態では、ＳＥＧＲＭとして、以下の化合物も使用され得る：
（Ｒ）−トランス−Ｎ−（ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）シクロヘキサンカルボキサミド：
【化１５】
2018230713.tif 000040
（Ｒ）−（＋）−Ｎ−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル）−４−（１−アミノエチル）ベンズアミド：
【化１６】
2018230713.tif 000041
１−（５−イソキノリンスルホニル）ホモピペラジン：
【化１７】
2018230713.tif 000042
１−（５−イソキノリンスルホニル）−２−メチルピペラジン：
【化１８】
2018230713.tif 000043
からなる群から選択される化合物、またはその塩。これらの化合物またはその塩は、本発明の組成物の成分として含まれ得る。
【０１５４】
「置換基を有してもよい」基は、
ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素原子など）、
低級アルキル基（例えば、Ｃ１−８アルキル基など）、
ハロゲン原子で置換された低級アルキル基、
ヒドロキシ基で置換された低級アルキル基、
低級アルケニル基（例えば、Ｃ２−８アルケニル基など）、
低級アルキニル基（例えば、Ｃ２−８アルキニル基など）、
低級シクロアルキル基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル基など）、
アリール基（例えば、Ｃ６−１４の単環式または縮合多環式アリール基など）、
複素環基（例えば、非芳香族であっても芳香族であってもよい、３〜１４員の、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される１又は複数個のヘテロ原子を環内に有する飽和或いは不飽和単環式複素環又は二環式若しくは三環式の縮合多環式複素環から水素１原子を除いた残基）、
ヒドロキシ基、
ヒドロキシ基のエステル、
低級アルコキシ基（例えば、Ｃ１−８アルキル−Ｏ−基など）、
ハロゲン原子で置換された低級アルコキシ基、
低級アルケニルオキシ基（例えば、Ｃ２−８アルケニル−Ｏ−基など）、
低級アルキニルオキシ基（例えば、Ｃ２−８アルキニル−Ｏ−基など）、
低級シクロアルキルオキシ基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｏ−基など）、
アリールオキシ基（例えば、Ｃ６−１４またはＣ６−１０アリール−Ｏ−基など）、
複素環オキシ基（例えば、３〜１４員または３〜１０員複素環−Ｏ−基など）、
メルカプト基、
メルカプト基のエステル、
低級アルキルチオ基（例えば、Ｃ１−８アルキル−Ｓ−基など）、
低級アルケニルチオ基（例えば、Ｃ２−８アルケニル−Ｓ−基など）、
低級アルキニルチオ基（例えば、Ｃ２−８アルキニル−Ｓ−基など）、
低級シクロアルキルチオ基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｓ−基など）、
アリールチオ基（例えば、Ｃ６−１４アリール−Ｓ−基など）、
複素環チオ基（例えば、３員〜１４員または３員〜１０員複素環−Ｓ−基など）、
低級アルキルアミノ基（例えば、Ｃ１−８アルキル−ＮＲ１０ａ−基など）、
低級シクロアルキルアミノ基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル−ＮＲ１０ａ−基など）、
アリールアミノ基（例えば、Ｃ６−１４またはＣ６−１０アリール−ＮＲ１０ａ−基など）、
複素環アミノ基（例えば、３〜１４員または３〜１０員複素環−ＮＲ１０ａ−基など）、
アミノ基のアミド、
低級アルキルアミノ基のアミド、
低級シクロアルキルアミノ基のアミド、
アリールアミノ基のアミド、
複素環アミノ基のアミド、
ホルミル基、
低級アルキルカルボニル基（例えば、Ｃ１−８アルキル−Ｃ（＝Ｏ）−基など）、
低級アルケニルカルボニル基（例えば、Ｃ２−８アルケニル−Ｃ（＝Ｏ）−基など）、
低級アルキニルカルボニル基（例えば、Ｃ２−８アルキニル−Ｃ（＝Ｏ）−基など）、
低級シクロアルキルカルボニル基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｃ（＝Ｏ）−基など）、
アリールカルボニル基（例えば、Ｃ６−１４またはＣ６−１０アリール−Ｃ（＝Ｏ）−基など）、
複素環カルボニル基（例えば、３〜１４員または３〜１０員複素環−Ｃ（＝Ｏ）−基など）、
カルボキシ基、
カルボキシ基のエステル、
カルボキシ基のアミド、
低級アルキルスルフィニル基（例えば、Ｃ１−８アルキル−Ｓ（＝Ｏ）−基など）、
低級シクロアルキルスルフィニル基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｓ（＝Ｏ）−基など）、
アリールスルフィニル基（例えば、Ｃ６−１４またはＣ６−１０アリール−Ｓ（＝Ｏ）−基など）、
低級アルキルスルホニル基（例えば、Ｃ１−８アルキル−Ｓ（＝Ｏ）２−基など）、
低級シクロアルキルスルホニル基（例えば、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｓ（＝Ｏ）２−基など）、
アリールスルホニル基（例えば、Ｃ６−１４またはＣ６−１０アリール−Ｓ（＝Ｏ）２−基など）、
複素環スルホニル基（例えば、３〜１４員または３〜１０員複素環−Ｓ（＝Ｏ）２−基など）、
アラルキル基（アリールアルキル基とも呼ばれる）（例えば、Ｃ６−１４アリール−Ｃ１−８アルキル基、およびＣ６−１０アリール−Ｃ１−８アルキル基など）、
複素環アルキル基（例えば、３〜１４員複素環−Ｃ１−８アルキル基、および３〜１０員複素環−Ｃ１−８アルキル基など）、
スルフィン酸基、
スルフィン酸基のエステル、
スルフィン酸基のアミド、
スルホン酸基、
スルホン酸基のエステル、
スルホン酸基のアミド、
ニトロ基、
シアノ基、
低級アルキルアミノカルボニルオキシ基（例えば、Ｃ１−８アルキル−ＮＲ１０ａ−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−基など）、
アリールアミノカルボニルオキシ基（例えば、Ｃ６−１４またはＣ６−１０アリール−ＮＲ１０ａ−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−基など）、
−ＮＲ１０ａＲ１１ａ、
−ＳＯ２−ＮＲ１０ｂＲ１１ｂ、
−ＮＲ１０ｃ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１ｃ、
−ＮＲ１０ｄ−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１１ｄ、
−ＮＲ１２ａ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１０ｅＲ１１ｅ、
−ＮＲ１０ｆ−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ１１ｆ、
−ＮＲ１０ｇ−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ１１ｇ、
−ＮＲ１２ｂ−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１０ｈＲ１１ｈ、
−ＮＲ１０ｉ−ＳＯ２−Ｒ１１ｉ、
−ＮＲ１２ｃ−ＳＯ２−ＮＲ１０ｊＲ１１ｊ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１０ｋ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１０ｌＲ１１ｋ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１０ｍＯＲ１１ｌ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１２ｄ−ＮＲ１０ｎＲ１１ｍ、
−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ１０ｏ、
−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１０ｐＲ１１ｎ、
−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１０ｑＯＲ１１ｏ、
−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１２ｅ−ＮＲ１０ｒＲ１１ｐ、
−Ｃ（＝ＮＲ１３ａ）Ｒ１０ｓ、
−Ｃ（＝ＮＲ１３ｂ）ＣＨＯ、
−Ｃ（＝ＮＲ１３ｃ）ＮＲ１０ｔＲ１１ｑ、
−Ｃ（＝ＮＲ１３ｄ）ＮＲ１２ｆ−ＮＲ１０ｕＲ１１ｒ、
−ＮＲ１７ｃ−Ｃ（＝ＮＲ１３ｋ）Ｒ１７ｄ、
−ＮＲ１２ｇ−Ｃ（＝ＮＲ１３ｅ）−ＮＲ１０ｖＲ１１ｓ、
−ＮＲ１４−Ｃ（＝ＮＲ１３ｆ）−ＮＲ１２ｈ−ＮＲ１０ｗＲ１１ｔ、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１０ｘ、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ１０ｙ、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１０ｚ１Ｒ１１ｕ、
−ＮＲ１２ｉ−ＮＲ１０ｚ２Ｒ１１ｖ、
−ＮＲ１０ｚ３ＯＲ１１ｗ、
−Ｃ（＝Ｎ−ＯＲ１３ａ）Ｒ１０ｓ、
−Ｃ（＝Ｎ−ＯＲ１３ｂ）ＣＨＯ、
−Ｃ（＝Ｎ−ＯＲ１３ｃ）ＮＲ１０ｔＲ１１ｑ、及び
−Ｃ（＝Ｎ−ＯＲ１３ｄ）ＮＲ１２ｆ−ＮＲ１０ｕＲ１１ｒ
からなる群（本明細書中、置換基群Ａと呼ばれる場合がある）より選択される１又は複数個の置換基を有してもよい。前記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、シクロアルキル基、アリール基、複素環基、ヒドロキシ基、メルカプト基、およびカルボキシ基（一つの基そのものまたはある基の一部として）は、
ハロゲン原子、
ヒドロキシ基、
カルボキシ基、
シアノ基、
低級シクロアルキル基、
低級アルコキシ基、
低級シクロアルキルオキシ基、
低級アルキルチオ基、
５員または６員のヘテロアリールチオ基、
Ｃ６−１０アリール、
５員または６員の芳香族複素環、
４〜１０員の非芳香族複素環、
低級アルキルカルボニル基、
低級シクロアルキルカルボニル基、
アリールカルボニル基、
５員または６員の芳香族複素環カルボニル基、
４〜１０員の非芳香族複素環カルボニル基、
−ＮＲ１５ａＲ１６ａ、
−ＳＯ２−ＮＲ１５ｂＲ１６ｂ、
−ＮＲ１５ｃ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１６ｃ
−ＮＲ１７ａ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１５ｄＲ１６ｄ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１５ｅＲ１６ｅ、
−Ｃ（＝ＮＲ１３ｇ）Ｒ１５ｆ、
−Ｃ（＝ＮＲ１３ｈ）ＮＲ１５ｇＲ１６ｆ
−ＮＲ１６ｇ−Ｃ（＝ＮＲ１３ｉ）Ｒ１５ｈ
−ＮＲ１７ｂ−Ｃ（＝ＮＲ１３ｊ）−ＮＲ１５ｉＲ１６ｈ
−Ｃ（＝Ｎ−ＯＲ１３ｇ）Ｒ１５ｆ、および
−Ｃ（＝Ｎ−ＯＲ１３ｈ）ＮＲ１５ｇＲ１６ｆ
からなる群（本明細書中、置換基群Ｂと呼ばれる場合がある）より選択される１又は複数個の置換基で置換されていてもよい。上記式中のＲ１３ａ、Ｒ１３ｂ、Ｒ１３ｃ、Ｒ１３ｄ、Ｒ１３ｅ、Ｒ１３ｆ、Ｒ１３ｇ、Ｒ１３ｈ、Ｒ１３ｉ、Ｒ１３ｊ、Ｒ１３ｋは、各々独立して、同一または異なって、水素原子、ヒドロキシ基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基であり、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１０ｄ、Ｒ１０ｅ、Ｒ１０ｆ、Ｒ１０ｇ、Ｒ１０ｈ、Ｒ１０ｉ、Ｒ１０ｊ、Ｒ１０ｋ、Ｒ１０ｌ、Ｒ１０ｍ、Ｒ１０ｎ、Ｒ１０ｏ、Ｒ１０ｐ、Ｒ１０ｑ、Ｒ１０ｒ、Ｒ１０ｓ、Ｒ１０ｔ、Ｒ１０ｕ、Ｒ１０ｖ、Ｒ１０ｗ、Ｒ１０ｘ、Ｒ１０ｙ、Ｒ１０ｚ１、Ｒ１０ｚ２、Ｒ１０ｚ３、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１１ｃ、Ｒ１１ｄ、Ｒ１１ｅ、Ｒ１１ｆ、Ｒ１１ｇ、Ｒ１１ｈ、Ｒ１１ｉ、Ｒ１１ｊ、Ｒ１１ｋ、Ｒ１１ｌ、Ｒ１１ｍ、Ｒ１１ｎ、Ｒ１１ｏ、Ｒ１１ｐ、Ｒ１１ｑ、Ｒ１１ｒ、１１ｓ、Ｒ１１ｔ、Ｒ１１ｕ、Ｒ１１ｖ、Ｒ１１ｗ、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｂ、Ｒ１２ｃ、Ｒ１２ｄ、Ｒ１２ｅ、Ｒ１２ｆ、Ｒ１２ｇ、Ｒ１２ｈ、Ｒ１２ｉ、Ｒ１４、Ｒ１５ａ、Ｒ１５ｂ、Ｒ１５ｃ、Ｒ１５ｄ、Ｒ１５ｅ、Ｒ１５ｆ、Ｒ１５ｇ、Ｒ１５ｈ、Ｒ１５ｉ、Ｒ１６ａ、Ｒ１６ｂ、Ｒ１６ｃ、Ｒ１６ｄ、Ｒ１６ｅ、Ｒ１６ｆ、Ｒ１６ｇ、Ｒ１６ｈ、Ｒ１７ａ、Ｒ１７ｂ、Ｒ１７ｃ、Ｒ１７ｄは、各々独立して、同一または異なって、水素原子またはＣ１−６アルキル基（該基は、ヒドロキシ基、シアノ基、Ｃ１−６アルコキシ基、−ＮＲ１８ａＲ１８ｂより選ばれる同一または異なる、１〜３個の置換基によって置換されていてもよい）であり、Ｒ１８ａ、Ｒ１８ｂは、各々独立して、同一または異なって、水素原子またはＣ１−６アルキル基である。これらの化合物またはその塩は、本発明の組成物の成分として含まれ得る。
【０１５５】
ＳＥＧＲＭとして使用される可能性がある上記化合物は、特開2017-186375号公報、特開2017-31177号公報、特開2017-14269号公報、特開2017-43614号公報、特開2017-14209号公報、国際公開第2015/105144号、特開2016-27060号公報、特開2015-147763号公報、特開2015-147762号公報、特開2015-7122号公報、特開2015-57381号公報、特開2014-208611号公報、特開2014-139161号公報、特開2014-31369号公報、特開2013-166752号公報、特開2014-19650号公報、特開2012-180345号公報、特表2009-538879号公報、特開2010-90117号公報、特開2010-77119号公報、特開2009-298775号公報、特開2009-143940号公報、国際公開第2007/142323号、特開2009-29828号公報、特開2009-84274号公報、特開2009-84273号公報、特開2009-7344号公報、特開2008-266323号公報、特開2008-255112号公報、特開2008-266295号公報、特開2008-143913号公報、特開2008-143891号公報、特開2008-143890号公報、特開2008-143889号公報、特開2008-74829号公報、特開2007-230993号公報、特開2006-257080号公報、国際公開第2005/035506号、特開2006-117654号公報、特開2006-117653号公報、特開2007-77049号公報、特開2005-336174号公報、特開2005-336173号公報、特開2007-297283号公報、特開2005-47909号公報、特開2005-41866号公報、特開2004-256524号公報、国際公開第2003/011276号、特開2007-15928号公報、特開2007-8816号公報、特開2004-137267号公報、特開2004-107335号公報、特開2004-2352号公報、特開2004-331501号公報、特開平4-134093号公報、国際公開第2017/034006号、国際公開第2017/002941号、国際公開第2015/105135号、国際公開第2015/105134号、国際公開第2015/020204号、国際公開第2014/148574号、国際公開第2014/098046号、国際公開第2014/010654号、国際公開第2012/108455号、国際公開第2010/029986号、国際公開第2009/139361号、国際公開第2009/035068号、国際公開第2009/035067号、国際公開第2008/146871号、国際公開第2008/111632号、国際公開第2008/093674号、国際公開第2008/059867号、国際公開第2008/059866号、国際公開第2008/059865号、国際公開第2007/105766号、国際公開第2007/032556号、国際公開第2005/102331号、国際公開第2005/007161号、および国際公開第2004/069822号に開示される（これらは参照によって本明細書に組み込まれる）。
【０１５６】
１つの実施形態において、選択的グルココルチコイド受容体アゴニスト（ＳＥＧＲＡ）は、ステロイドを基本骨格として有しており、例えば、フルチカゾン（例えば、フルチカゾンプロピオン酸エステルまたはフルチカゾンフランカルボン酸エステル）、フルメタゾン、９−フルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３，２０−ジオキソプレグナ−１，４−ジエン−２１−カルボニトリル（ＲＵ−２４８５８）からなる群から選択され得る。
【０１５７】
ＳＥＧＲＡとして使用される可能性がある化合物は、米国特許第８，６６３，６３９号明細書に開示される（参照によって、本明細書に組み込まれる）。
【０１５８】
１つの実施形態において、選択的グルココルチコイド受容体モジュレーター（ＳＥＧＲＭ）は、以下：マプラコラット（Ｍａｐｒａｃｏｒａｔ）、（＋）−４−（２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラン−７−イル）−２−ヒドロキシ−４−メチル−Ｎ−（４−メチル−１−オキソ−２，３−ベンゾオキサジン−６−イル）−２−（トリフルオロメチル）ペンタンアミド（ＺＫ２１６３４８）、（±）−４−（２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラン−７−イル）−２−ヒドロキシ−４−メチル−Ｎ−（４−メチル−１−オキソ−２，３−ベンゾオキサジン−６−イル）−２−（トリフルオロメチル）ペンタンアミド（ＺＫ２０９６１４）、ダグロコラット（Ｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、フォスダグロコラット（Ｆｏｓｄａｇｒｏｃｏｒａｔ）、２−（（４−アセトキシフェニル）−２−クロロ−Ｎ−メチル）エチルアンモニウムクロリド（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ａ）、１０−メトキシ−２，２，４−トリメチル−５−プロパ−２−エニル−１，５−ジヒドロクロメノ［３，４−ｆ］キノリン（ＡＬ−４３８）、５−［（Ｚ）−２−フルオロ−３−メチルベンジリデン］−２，５−ジヒドロ−１０−メトキシ−２，２，４−トリメチル−１Ｈ−６−オキサ−１−アザクリセン−９−オール（ＬＧＤ−５５５２）、（４ａＲ）−６−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）スルホニル−１−（４−フルオロフェニル）−４ａ−（２−メトキシエトキシメチル）−４，５，７，８−テトラヒドロピラゾロ［３，４−ｇ］イソキノリン（Ｃ１０８２９７）、［（−）−Ｎ−（２Ｓ，１０Ｓ，１４ｂＳ）］−Ｎ−（８−シアノ−１，２，３，４，１０，１４ｂ−ヘキサヒドロ−１０−メチルジベンゾ［ｃ，ｆ］ピリド［１，２−ａ］アゼピン−２−イル）−４−メチル−１，２，３−チアジアゾール−５−カルボキサミド（Ｏｒｇ  ２１４００７−０）、および（４ｂＳ，７Ｒ，８ａＲ）−４ｂ−ベンジル−７−ヒドロキシ−Ｎ−（２−メチルピリジン−３−イル）−７−（トリフルオロメチル）−４ｂ，５，６，７，８，８ａ，９，１０−オクタヒドロフェナントレン−２−カルボキサミド（ＰＦ−８０２）からなる群から選択され得るが、これらに限定されるものではない。
【０１５９】
ＳＥＧＲＭは、以下の構造：
【化１９】
2018230713.tif 000044
（ＭＫ−５９３２）
を有する化合物、または以下の構造：
【化２０】
2018230713.tif 000045
（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  １０）
を有する化合物を使用してもよい。
【０１６０】
上述のとおり、ＳＥＧＲＡはステロイド骨格を有しており、他方、ＳＥＧＲＭはステロイド骨格を有していないが、いずれもＴＧＦ−βに対する阻害活性を示した。理論に束縛されることは望まないが、ステロイド骨格を有しているかにかかわらず、グルココルチコイド受容体に対するアゴニスト活性を有してさえいればＴＧＦ−βに対する阻害活性を示すことが示唆される。そして、これらの化合物またはその塩は、どのような形態や構造であっても、上記活性を示すものであれば、本発明の組成物の成分として含まれ得る。
【０１６１】
１つの実施形態において、本発明の利用法としては、例えば点眼薬が挙げられるが、これに限定されず、前房内への注射、徐放剤への含浸、結膜下注射、全身投与（内服、静脈注射）などの投与方法も挙げることができる。
【０１６２】
本発明の医薬において、上記化合物は、単独で使用されてもよく、組み合わせて使用されてもよい。本発明で使用される化合物の濃度は、約０．００１ｎＭ（ｎｍｏｌ／ｌ）〜１００μＭ（μｍｏｌ／ｌ）、０．０１ｎＭ〜１００μＭ、または約０．１ｎＭ〜１００μＭ、通常約１ｎＭ〜１００μＭ、約１０ｎＭ〜１００μＭ、好ましくは約０．１〜３０μＭ、より好ましくは約１〜１０μＭであり、これらの上限下限は適宜組み合わせて設定されることができ、２種以上の化合物を組み合わせて使用する場合は適宜変更することができ、他の濃度範囲としては、例えば、通常、約０．１ｎＭ〜１００μＭ、あるいは約０．００１〜１００μＭ、好ましくは、約０．０１〜７５μＭ、約０．０５〜５０μＭ、約１〜５０μＭ、約０．０１〜１０μＭ、約０．０５〜１０μＭ、約０．０７５〜１０μＭ、約０．１〜１０μＭ、約０．５〜１０μＭ、約０．７５〜１０μＭ、約１．０〜１０μＭ、約１．２５〜１０μＭ、約１．５〜１０μＭ、約１．７５〜１０μＭ、約２．０〜１０μＭ、約２．５〜１０μＭ、約３．０〜１０μＭ、約４．０〜１０μＭ、約５．０〜１０μＭ、約６．０〜１０μＭ、約７．０〜１０μＭ、約８．０〜１０μＭ、約９．０〜１０μＭ、約０．０１〜５．０μＭ、約０．０５〜５．０μＭ、約０．０７５〜５．０μＭ、約０．１〜５．０μＭ、約０．５〜５．０μＭ、約０．７５〜５．０μＭ、約１．０〜５．０μＭ、約１．２５〜５．０μＭ、約１．５〜５．０μＭ、約１．７５〜５．０μＭ、約２．０〜５．０μＭ、約２．５〜５．０μＭ、約３．０〜５．０μＭ、約４．０〜５．０μＭ、約０．０１〜３．０μＭ、約０．０５〜３．０μＭ、約０．０７５〜３．０μＭ、約０．１〜３．０μＭ、約０．５〜３．０μＭ、約０．７５〜３．０μＭ、約１．０〜３．０μＭ、約１．２５〜３．０μＭ、約１．５〜３．０μＭ、約１．７５〜３．０μＭ、約２．０〜３．０μＭ、約０．０１〜１．０μＭ、約０．０５〜１．０μＭ、約０．０７５〜１．０μＭ、約０．１〜１．０μＭ、約０．５〜１．０μＭ、約０．７５〜１．０μＭ、約０．０９〜３．５μＭ、約０．０９〜３．２μＭであり、より好ましくは、約０．０５〜１．０μＭ、約０．０７５〜１．０μＭ、約０．１〜１．０μＭ、約０．５〜１．０μＭ、約０．７５〜１．０μＭを挙げることができるがこれらに限定されない。
【０１６３】
点眼剤として用いられる場合は、涙液などでの希釈も考慮し、毒性にも気を付けながら、上記有効濃度の約１〜１００００倍、好ましくは約１００〜１００００倍、例えば、約１０００倍を基準として製剤濃度を決定することができ、これらを上回る濃度を設定することも可能である。例えば、約０．０１μＭ（μｍｏｌ／ｌ）〜１０００ｍＭ（ｍｍｏｌ／ｌ）、約０．１μＭ〜１００ｍＭ、約１μＭ〜１００ｍＭ、約１０μＭ〜１００ｍＭ、あるいは約０．１μＭ〜３０ｍＭ、約１μＭ〜３０ｍＭ、より好ましくは約１μＭ〜１０ｍＭ、約１０μＭ〜１０ｍＭ、約１００μＭ〜１０ｍＭ、約１０μＭ〜１００ｍＭ、約１００μＭ〜１００ｍＭであり、約１ｍＭ〜１０ｍＭ、約１ｍＭ〜１００ｍＭであり得、これらの上限下限は適宜組み合わせて設定されることができ、２種以上の化合物を組み合わせて使用する場合は適宜変更することができる。
【０１６４】
１つの実施形態では、本発明の治療または予防するための医薬は、角膜内皮を有する任意の動物、例えば哺乳動物を対象とすることができ、好ましくは霊長類の角膜内皮の治療または予防を目的とする。好ましくは、この治療または予防の対象は、ヒトの角膜内皮である。
【０１６５】
別の局面では、本発明は、本発明の化合物の有効量をそれを必要な被験体に投与する工程を含む、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための方法を提供する。
【０１６６】
本明細書において「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、本発明の治療および予防するための医薬または方法の投与(移植)対象を指し、被験体としては、哺乳動物(例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、サル等)があげられるが、霊長類が好ましく、特にヒトが好ましい。本明細書において「対象（ｏｂｊｅｃｔ）」とは、本発明の化合物または該化合物を含む組成物もしくはカスパーゼ阻害剤を投与する、または接触させる対象（例えば、ヒト等の生物（例えば、上記被験体）または該生物から取り出した器官もしくは細胞等）をいう。
【０１６７】
特定の疾患、障害または状態の治療に有効な本発明の医薬の有効量は、障害または状態の性質によって変動しうるが、当業者は本明細書の記載に基づき標準的臨床技術によって決定可能である。さらに、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、最適投薬量範囲を同定するのを補助することも可能である。配合物に使用しようとする正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重大性によっても変動しうるため、担当医の判断および各患者の状況に従って、決定すべきである。しかし、投与量は特に限定されないが、例えば、１回あたり０．００１、１、５、１０、１５、１００、または１０００ｍｇ／ｋｇ体重であってもよく、それらいずれか２つの値の範囲内であってもよい。投与間隔は特に限定されないが、例えば、１、７、１４、２１、または２８日あたりに１または２回投与してもよく、それらいずれか２つの値の範囲あたりに１または２回投与してもよい。投与量、投与回数、投与間隔、投与方法は、患者の年齢や体重、症状、投与形態、対象臓器等により、適宜選択してもよい。例えば、本発明は点眼剤として使用され得る。また、本発明の医薬を前房内に注入することもできる。また治療薬は、治療有効量、または所望の作用を発揮する有効量の有効成分を含むことが好ましい。治療マーカーが、投与後に有意に減少した場合に、治療効果があったと判断してもよい。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から得られる用量−反応曲線から推定可能である。
【０１６８】
＜カスパーゼ阻害剤＞
本発明で使用される化合物は、カスパーゼ阻害剤としても有用であり得る。本発明でカスパーゼ阻害剤として使用される化合物は、＜医薬＞の節として前段落までに記載された任意の化合物またはその組み合わせを含み得、＜医薬＞に記載される任意の実施形態がカスパーゼ阻害剤として利用可能であることが理解される。上述のとおり、ＴＧＦ−βは、細胞死（アポトーシス）を誘導する因子であることが知られているが、本発明で使用される化合物は、ＴＧＦ−βの存在下でカスパーゼ活性（例えば、カスパーゼ３／７活性）を抑制することができるため、カスパーゼ阻害剤（例えば、試薬、または医薬品の成分）として有用であることが理解される。また、ＴＧＦ−βの存在下でカスパーゼ活性を抑制することができる化合物の一部は、ＭＧ−１３２の存在下でのカスパーゼ活性も抑制することが可能である。そのような化合物は、あらゆる因子に誘発されるカスパーゼ活性を抑制することが可能であるため、非常に強力なカスパーゼ活性であることが理解される。
【０１６９】
＜保存用組成物＞
別の局面において、本発明は、上記化合物を含む、角膜内皮細胞の保存のための組成物を提供する。本発明で角膜内皮細胞の保存のための組成物の成分として使用される化合物は、＜医薬＞の節に記載された任意の化合物またはその組み合わせを含み得、＜医薬＞に記載される任意の実施形態が角膜内皮細胞の保存のための組成物として利用可能であることが理解される。好ましい実施形態では、保存は凍結保存である。本発明において用いられる化合物は、本明細書において説明される任意の形態、例えば、医薬として説明されている実施形態のうち、保存用組成物として適切なものを用いることができると理解される。本明細書において「保存用組成物」とは、ドナーから摘出した角膜片を、レシピエントに移植するまでの期間において保存するため、あるいは増殖前または増殖した角膜内皮細胞を保存するための組成物である。
【０１７０】
１つの実施形態では、本発明の保存用組成物は、従来使用される保存剤または保存液に本発明の化合物を添加して調製され得る。そのような角膜保存液としては、角膜移植時に通常用いられる保存液（強角膜片保存液（Ｏｐｔｉｓｏｌ  ＧＳ：登録商標）、角膜移植用眼球保存液（ＥＰＩＩ：登録商標））、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などが挙げられる。
【０１７１】
本発明の保存用組成物は、臓器移植などに用いられる角膜の保存用に用いられる。また、本発明の保存用組成物は、角膜内皮細胞を凍結保存するための保存液またはその成分としても用いられる。
【０１７２】
凍結保存のために使用される本発明の保存用組成物の別の実施形態では、既存の凍結保存液に本発明のカスパーゼ阻害剤を含む保存用組成物を添加して使用することもできる。凍結保存液としては、例えば、タカラバイオにより提供されるＣＥＬＬＢＡＮＫＥＲ（登録商標）シリーズ（ＣＥＬＬ  ＢＡＮＫＥＲ  ＰＬＵＳ（カタログ番号：ＣＢ０２１）、ＣＥＬＬ  ＢＡＮＫＥＲ  ２（カタログ番号：ＣＢ０３１）、ＳＴＥＭ−ＣＥＬＬＢＡＮＫＥＲ（カタログ番号：ＣＢ０４３）など）、ＫＭ  ＢＡＮＫＥＲ（コージンバイオ  カタログ番号：ＫＯＪ−１６０９２００５）、およびＦｒｅｅｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ，  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｆｒｅｅ，  ＣＲＹＯ  Ｄｅｆｉｎｅｄ（Ｃｎｔ−ＣＲＹＯとも記載される）（ＣＥＬＬＮＴＥＣ  カタログ番号：ＣｎＴ−ＣＲＹＯ−５０）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに別の実施形態では、使用される凍結保存液はＫＭ  ＢＡＮＫＥＲであってもよい。また、当業者であれば、上記凍結保存液の構成成分を適宜変更またはさらなる構成成分を添加し、改変された適切な凍結保存液を使用することができることが理解される。凍結保存のためには、本発明の保存液にグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール、アセトアミド等をさらに添加してもよい。
【０１７３】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
【０１７４】
以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【０１７５】
以下に、本発明の例を記載する。該当する場合生物試料等の取り扱いは、厚生労働省、文部科学省等において規定される基準を遵守し、該当する場合はヘルシンキ宣言またはその宣言に基づき作成された倫理規定に基づいて行った。研究のための眼の寄贈については、全ての故人ドナーの近親者から同意書を得た。本研究は、エルランゲン大学（ドイツ）、ＳｉｇｈｔＬｉｆｅＴＭ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）アイバンクの倫理委員会またはそれに準ずるものの承認を受けた。【０１７６】
（調製例：フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞株（ｉＦＥＣＤ）および正常角膜内皮細胞の不死化細胞（ｉＨＣＥＣ）の作製）
本実施例では、フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来および健常者由来の角膜内皮細胞から不死化角膜内皮細胞株（ｉＦＥＣＤおよびｉＨＣＥＣ）を作製した。【０１７７】
（培養方法）
シアトルアイバンクから購入した研究用角膜より角膜内皮細胞を基底膜とともに機械的に剥離し、コラゲナーゼを用いて基底膜よりはがして回収後、初代培養を行った。培地はＯｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ，    Ｌｉｑｕｉｄ（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ  カタログ番号：３１９８５−０７０）に、８％ＦＢＳ（ＢＩＯＷＥＳＴ、カタログ番号：Ｓ１８２０−５００）、２００ｍｇ／ｍｌ  ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（ＳＩＧＭＡ  カタログ番号：Ｃ７９０２−５００Ｇ）、０．０８％  コンドロイチン硫酸（ＳＩＧＭＡ  カタログ番号：Ｃ９８１９−５Ｇ）、２０μｇ／ｍｌアスコルビン酸（ＳＩＧＭＡ  カタログ番号：Ａ４５４４−２５Ｇ）、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシン（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ  カタログ番号：１５７１０−０６４）および５ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦ（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ  カタログ番号：ＰＨＧ０３１１）を加えた３Ｔ３フィーダー細胞用の馴化させたものを基本培地として用いた。また、基本培地にＳＢ４３１５４２（１μｍｏｌ／ｌ）およびＳＢ２０３５８０（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルホニルフェニル）−５（４−ピリジル）イミダゾール＜４−［４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］ピリジン）（１μｍｏｌ／ｌ）を添加したもの（「ＳＢ２０３５８０＋ＳＢ４３１５４２＋３Ｔ３馴化培地」という）で培養した。【０１７８】
（取得方法）
フックス角膜内皮ジストロフィの臨床診断により水疱性角膜症に至り、角膜内皮移植（デスメ膜内皮角膜移植＝ＤＭＥＫ）を実施されたヒト患者３名より文書による同意および倫理員会の承認のもと角膜内皮細胞を得た。ＤＭＥＫの際に機械的に病的な角膜内細胞と基底膜であるデスメ膜とともに剥離し、角膜保存液であるＯｐｔｉｓｏｌ−ＧＳ（ボシュロム社）に浸漬した。その後、コラゲナーゼ処理を行い酵素的に角膜内皮細胞を回収して、ＳＢ２０３５８０＋ＳＢ４３１５４２＋３Ｔ３順か培地により培養した。培養したフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の角膜内皮細胞はＳＶ４０ラージＴ抗原およびｈＴＥＲＴ遺伝子をＰＣＲにより増幅して、レンチウイルスベクター（ｐＬｅｎｔｉ６．３＿Ｖ５−ＴＯＰＯ；  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ）に導入した。その後、レンチウイルスベクターを３種類のヘルパープラスミド（ｐＬＰ１、ｐＬＰ２、ｐＬＰ／ＶＳＶＧ；  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）とともにトランスフェクション試薬（Ｆｕｇｅｎｅ  ＨＤ；  Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＷＩ）を用いて２９３Ｔ  細胞  （ＲＣＢ２２０２；  Ｒｉｋｅｎ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｉｂａｒａｋｉ，  Ｊａｐａｎ）  に感染させた。４８時間の感染後にウイルスを含む培養上清を回収して、５  μｇ／ｍｌ  のポリブレンを用いて、培養したフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の角膜内皮細胞の培養液に添加して、ＳＶ４０ラージＴ抗原およびｈＴＥＲＴ遺伝子を導入した。フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化角膜内皮細胞株（ｉＦＥＣＤ）の位相差顕微鏡像を確認した。シアトルアイバンクから輸入した研究用角膜より培養した角膜内皮細胞を同様の方法で不死化し、正常角膜内皮細胞の不死化細胞株を作製した（ｉＨＣＥＣ）。健常ドナー由来の不死化角膜内皮細胞株（ｉＨＣＥＣ）および不死化角膜内皮細胞株（ｉＦＥＣＤ）の位相差顕微鏡像をみると、ｉＨＣＥＣおよびｉＦＥＣＤはいずれも正常の角膜内皮細胞同様に一層の多角形の形態を有する。ｉＨＣＥＣおよびｉＦＥＣＤはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋１０％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）により維持培養を行った。【０１７９】
（実施例１：フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞を用いたＴＧＦ−βに対する阻害活性の確認）
本実施例では、上記調製例で作製したフックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞を用いて、薬剤のＴＧＦ−βに対する阻害活性の確認を行った。本実施例では、角膜内皮細胞の細胞障害を誘導する物質としてＴＧＦ−β２を使用した。【０１８０】
（材料および方法）
フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞を９６ウェルプレートに７×１０３個播種し、３７℃で５％ＣＯ２の条件下にて２４時間培養した。培地はダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ，２６２５２−９４）＋１０％  ＦＢＳ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ／０４−００１−１Ａ）＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ、２６２５２−９４）＜ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ＞を使用した。【０１８１】
次に、ＴＧＦ−β２（製造元：Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．、販売元：和光純薬工業株式会社／製造元コード３０２−Ｂ２−００２，３０２−Ｂ２−０１０、販売元コード：５５３−６２８８１，５５９−６２８８３）（５ｎｇ／ｍＬ）のみまたはＴＧＦ−β２（５ｎｇ／ｍＬ）とＳＣＲＥＥＮ−ＷＥＬＬ（登録商標）  ＦＤＡ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｖ２，  Ｊａｐａｎ  ｖｅｒｓｉｏｎの各薬剤（１０μM）両方を添加し、３７℃で５％ＣＯ２の条件下にて２４〜２８時間後に位相差顕微鏡を用いて細胞形態を観察した。その後Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ  ３／７  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，＃Ｇ８０９１）を用いてカスパーゼ３／７活性の測定を行った。培地は、ＤＭＥＭ＋２％  ＦＢＳ＋１％  Ｐ／Ｓを使用した。本実施例におけるカスパーゼ３／７活性および細胞生存率の測定は、Ｖｅｒｉｔａｓ（商標）  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒを使用した。このような装置であれば、多数の試料について同時に測定することが可能である。【０１８２】
コントロール群には各試薬の溶媒であるＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  Ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、Ｓｔｅｒｉｌｅ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ、１３４０８−６４）を添加した。また、陽性対照としてカスパーゼ阻害剤であるＺ−ＶＤ−ＦＭＫ（異性体混合物）（和光純薬工業株式会社／２６２−０２０６１）（１０μＭ）を使用した。【０１８３】
（結果）
ＴＧＦ−β２（５ｎｇ／ｍＬ）添加群を１００％としてカスパーゼ３／７活性を評価した（ｎ＝２）。コントロール群、ＴＧＦ−β２（５ｎｇ／ｍＬ）添加群、ＴＧＦ−β２（５ｎｇ／ｍＬ）＋Ｚ−ＶＤ−ＦＭＫ添加群（１０μＭ）、ＴＧＦ−β２（５ｎｇ／ｍＬ）＋ＳＣＲＥＥＮ−ＷＥＬＬ（登録商標）  ＦＤＡ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｖ２，  Ｊａｐａｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ各薬剤添加群（１０μＭ）についてそれぞれｎ＝２でカスパーゼ３／７活性を測定した。カスパーゼ３／７活性が１００％未満（すなわち、カスパーゼ阻害活性が少しでも見いだされたもの）は、表４に示されている。これらの化合物は、従来カスパーゼ阻害活性が見いだされていなかった化合物であり、これらは、いずれもカスパーゼ阻害試薬として有用であり得、そして、角膜内皮の症状、障害または疾患（例えば、フックス角膜内皮ジストロフィ）の治療または予防のための組成物として有用であり得る。【０１８４】
【表４−１】
2018230713.tif 000046
【０１８５】
【表４−２】
2018230713.tif 000047
【０１８６】
【表４−３】
2018230713.tif 000048
【０１８７】
【表４−４】
2018230713.tif 000049
【０１８８】
【表４−５】
2018230713.tif 000050
【０１８９】
【表４−６】
2018230713.tif 000051
【０１９０】
【表４−７】
2018230713.tif 000052
【０１９１】
【表４−８】
2018230713.tif 000053
【０１９２】
【表４−９】
2018230713.tif 000054
【０１９３】
【表４−１０】
2018230713.tif 000055
【０１９４】
【表４−１１】
2018230713.tif 000056
次に、上記アッセイでカスパーゼ３／７活性が７５％以下の薬剤を次の実験に使用して更なる解析を行った。【０１９５】
カスパーゼ３／７活性が７５％以下の薬剤について、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ  カタログ番号：Ｇ７５７０）で、ｎ＝２で毒性の指標として細胞生存率を算出した。細胞生存率の測定はＴＧＦβ非存在下で行った。【０１９６】
カスパーゼ３／７活性が７５％以下の薬剤について、さらにＣａｓｐａｓｅ３／７活性の評価をｎ＝５で行った。【０１９７】
図１−１および図１−２ならびに図２−１および図２−２は、活性を示した各薬剤の薬剤名、ＴＧＦ−β２刺激におけるカスパーゼ３／７活性（ｎ＝５）の結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％）が低いほど有用な薬剤であることを示している。図１−１および図１−２ならびに図２−１および図２−２に示される薬剤は、カスパーゼ３／７活性／細胞生存率（％）が８０％以下を示しており、ＴＧＦ−β２に対する阻害活性を有し、かつ、毒性が低く、角膜内皮における疾患等に有効である。図１−１および図１−２は、カスパーゼ３／７活性／細胞生存率（％）の値が１〜２５位にランク付けられた薬剤を示しており、図２−１および図２−２は、カスパーゼ３／７活性／細胞生存率（％）の値が２６〜４７位にランク付けられた薬剤を示している。細胞生存率が９０％を切った場合、ランキングから除外した。図１−１および図１−２と図２−１および図２−２をまとめたものは、本明細書中で表２としてまとめている。また、４８位以下の薬剤であって、カスパーゼ３／７活性が１００％未満の薬剤は本明細書中で表１としてまとめている。これらの表１および表２に示される各化合物は、好ましいカスパーゼ試薬として有用であり得、そして、角膜内皮の症状、障害または疾患（例えば、フックス角膜内皮ジストロフィ）の治療または予防のための好ましい組成物として有用であり得る。【０１９８】
（実施例２：不死化ヒト角膜内皮細胞を用いたＭＧ−１３２に対する阻害活性の確認）
本実施例では、上記調製例において作製した不死化ヒト角膜内皮細胞を用いて、薬剤のＭＧ−１３２に対する阻害活性の確認を行った。本実施例では、細胞障害を誘導する物質として小胞体（ＥＲ）関連ストレスを誘導する物質として知られるＭＧ−１３２を使用した。【０１９９】
（材料および方法）
不死化ヒト角膜内皮細胞（ｉＨＣＥＣ）を９６ウェルプレートに７×１０３個播種し、３７℃で５％ＣＯ２の条件下にて２４時間培養した。培地はダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ，２６２５２−９４）＋１０％  ＦＢＳ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ／０４−００１−１Ａ）＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ、２６２５２−９４）を使用した。次に、ＭＧ−１３２（ＳＩＧＭＡ、Ｍ７４４９）（０．１μＭ）のみまたはＭＧ−１３２（０．１μＭ）と実施例１において（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％）の値が８０％以下を示した上位４０種類の各薬剤（１０μM）両方を添加し、３７℃で５％ＣＯ２の条件下にて18時間後に位相差顕微鏡を用いて細胞形態を観察した。その後Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）  ３／７  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，＃Ｇ８０９１）を用いてカスパーゼ３／７活性の測定を行った。ＭＧ−１３２は、フックス角膜内皮ジストロフィ患者で認められるのと同様に、折りたたまれなかったタンパク質（ｕｎｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の細胞内への蓄積を増加させる作用を有しており、小胞体ストレスを介した細胞死を誘導する。培地は、ＤＭＥＭ＋２％  ＦＢＳ＋１％  Ｐ／Ｓを使用した。なお、コントロール群には各試薬の溶媒であるＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  Ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、Ｓｔｅｒｉｌｅ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ、１３４０８−６４）を添加した。また、陽性対照としてカスパーゼ阻害剤であるＺ−ＶＤ−ＦＭＫ（異性体混合物）（和光純薬工業株式会社／２６２−０２０６１）（１０μＭ）を使用した。実施例２と同様の手順で、カスパーゼ３／７活性および細胞生存率の測定を行った（それぞれｎ＝２）。【０２００】
（結果）
図３は、各薬剤名、ＭＧ−１３２（０．１μＭ）刺激におけるカスパーゼ３／７活性のスクリーニングの結果、細胞の生存率の結果、及びカスパーゼ３／７活性の値を細胞生存率の値で割った値（（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）（％））を示す。図３に示される薬剤は、カスパーゼ３／７活性／細胞生存率（％）が８０％以下を示しており、ＭＧ−１３２に対する阻害活性を有し、かつ、毒性が低く、小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮における疾患等に有効である。これらの化合物は、表３としてもまとめられている。これらの化合物は、さらに好ましいカスパーゼ試薬として有用であり得、そして、角膜内皮の症状、障害または疾患（例えば、フックス角膜内皮ジストロフィ）の治療または予防のためのさらに好ましい組成物として有用であり得る。【０２０１】
本実施例で同定された化合物は、ＴＧＦ−βシグナルに起因する角膜内皮における疾患等だけではなく、小胞体（ＥＲ）関連ストレスに起因する角膜内皮における疾患に対しても有効であり有利である。特に、フックス角膜内皮ジストロフィのような角膜内皮障害は、ＴＧＦ−βシグナルおよび小胞体（ＥＲ）関連ストレスが原因であることが知られており、その両方を抑制することができる化合物は、フックス角膜内皮ジストロフィのような角膜内皮障害に特に有効である。さらに、実施例１および２では、化合物のｉＦＥＣＤおよびｉＨＣＥＣに対して毒性が低いことが確認されており、本実施例において同定された化合物は、ｉＦＥＣＤおよびｉＨＣＥＣの両方に対して低い毒性を示すため、非常に高い安全性で使用され得ることが予想される。【０２０２】
（実施例３：濃度依存的なＴＧＦ−β阻害活性）
実施例１では、薬剤の濃度として１０μＭを使用して試験してきた。本実施例では、表４に示されるいくつかの薬剤について、種々の濃度でのＴＧＦ−β阻害活性を確認した。【０２０３】
（材料および方法）
フックス角膜内皮ジストロフィの不死化細胞を９６ウェルプレートに７×１０３個播種し、３７℃で５％ＣＯ２の条件下にて２４時間培養した。培地はダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ，０８４５６−３６）＋１０％  ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ、１３Ｈ４６７）＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン（ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ、２６２５２−９４）＜ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ＞を使用した。【０２０４】
次に、ＴＧＦ−β２（製造元：ＷＡＫＯ、販売元：和光純薬工業株式会社／製造元コード２００−１９９１１）（１０ｎｇ／ｍＬ）のみまたはＴＧＦ−β２（１０ｎｇ／ｍＬ）と各薬剤（図４に示される）（１００μＭ、１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭ、１ｐＭ）の両方を添加し、３７℃で５％ＣＯ２の条件下にて２８時間後に位相差顕微鏡を用いて細胞形態を観察した。その後Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ  ３／７  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，＃Ｇ８０９１）を用いてカスパーゼ３／７活性の測定を行った。培地は、ＤＭＥＭ＋２％  ＦＢＳ＋１％  Ｐ／Ｓを使用した。本実施例におけるカスパーゼ３／７活性および細胞生存率の測定は、ＧｌｏＭａｘ−Ｍｕｌｔｉ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｅ７０５１）を使用した。【０２０５】
（結果）
結果を図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３に示す。角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防に使用され得るかどうか、またはカスパーゼ阻害剤として使用され得るかどうかの指標を、８０％を下回るカスパーゼ活性３／７とした（図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３の下線部）。いずれかの薬剤濃度においてカスパーゼ活性３／７が８０％を下回っている場合、カスパーゼ阻害剤として使用され得、そして、角膜内皮の症状、障害または疾患（例えば、フックス角膜内皮ジストロフィ）の治療または予防のための組成物として有用であり得る。当業者は、図４Ａ−１、図４Ａ−２、および図４Ａ−３ならびに図４Ｂ−１、図４Ｂ−２、および図４Ｂ−３以外の薬剤についても、表４に列挙されている薬剤を適宜選択して、同様の試験をすることで、カスパーゼ阻害剤や、角膜内皮の症状、障害または疾患の治療または予防のための組成物として有用かどうかを種々の濃度で試験することが可能である。【０２０６】
（実施例４：フルチカゾンフランカルボン酸エステルによるＴＧＦ−βに対する阻害活性の確認）
本実施例では、ＳＥＧＲＡの１つであるフルチカゾンフランカルボン酸エステルによるＴＧＦ−β阻害活性を試験した。【０２０７】
（材料および方法）
（位相差顕微鏡観察）
フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞を培養中の培養皿から培地を除去し、事前に３７℃に温めておいた１×ＰＢＳ（−）を添加し、洗浄を行った。この作業を２回繰り返した。再び１×ＰＢＳ（−）を添加し、３７℃（５％  ＣＯ２）で５分インキュベートした。ＰＢＳ（−）除去後、０．０５％  Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（ナカライテスク、３２７７８−３４）を添加し、３７℃（５％  ＣＯ２）で５分インキュベートした。その後、培地で懸濁し、１５００ｒｐｍで３分間遠心することで細胞を回収した。培地は、ＤＭＥＭ（ナカライテスク、０８４５６−３６）＋１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ、１３Ｈ４６７）＋１％Ｐ／Ｓ（ナカライテスク、２６２５２−９４）を使用した。【０２０８】
１２ウェルプレートにフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞（ロット：ｉＦＥＣＤ３−５）を１ウェル当たり５．０×１０４個の割合で播種し、３７℃（５％  ＣＯ２）で２４時間培養した。培地は、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓを使用した。【０２０９】
２４時間後、培地を除去し、フルチカゾンフランカルボン酸エステル（ＡＸＯＮ  ＭＥＤＣＨＥＭ、１１７２）をそれぞれ終濃度０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭとなるように添加し、２４時間培養した。培地は、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓを使用した。【０２１０】
２４時間後、培地を除去し、１０ｎｇ／ｍｌのＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−β２  Ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ（ＷＡＫＯ、２００−１９９１１）と共にフルチカゾンフランカルボン酸エステルを終濃度０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭとなるように添加し、２４時間培養した。培地：ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ【０２１１】
２４時間後、位相差顕微鏡下で細胞形態及びアポトーシスを観察した。【０２１２】
（カスパーゼ活性および細胞生存率の測定）【０２１３】
フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞を培養中の培養皿から培地を除去し、事前に３７℃に温めておいた１×ＰＢＳ（−）を添加し、洗浄を行った。この作業を２回繰り返した。再び１×ＰＢＳ（−）を添加し、３７℃（５％  ＣＯ２）で５分インキュベートした。ＰＢＳ（−）除去後、０．０５％  Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（ナカライテスク、３２７７８−３４）を添加し、３７℃（５％  ＣＯ２）で５分インキュベートした。その後、培地で懸濁し、１５００ｒｐｍで３分間遠心することで細胞を回収した。培地は、ＤＭＥＭ（ナカライテスク、０８４５６−３６）＋１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ、１３Ｈ４６７）＋１％Ｐ／Ｓ（ナカライテスク、２６２５２−９４）を使用した。【０２１４】
９６ウェルプレートにフックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞（ロット：ｉＦＥＣＤ３−５）を１ウェル当たり７×１０３個の割合で播種し、３７℃（５％  ＣＯ２）でコンフルエントになるまで培養した。培地は、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓを使用した。【０２１５】
２４時間後、培地を除去し、フルチカゾンフランカルボン酸エステル（ＡＸＯＮ  ＭＥＤＣＨＥＭ、１１７２）をそれぞれ終濃度０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭとなるように添加し、２４時間培養した。培地は、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓを使用した。【０２１６】
２４時間後、培地を除去し、１０ｎｇ／ｍｌのＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ−β２ Ｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ（ＷＡＫＯ、２００−１９９１１）およびフルチカゾンフランカルボン酸エステルをそれぞれ終濃度０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭとなるように添加し、２４時間培養した。培地は、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓを使用した。【０２１７】
２４時間後、位相差顕微鏡下で細胞形態を観察した。【０２１８】
観察後、以下の手順で、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ  ３/７  ＡｓｓａｙによるＣａｓｐａｓｅ  ３／７活性の測定を行った。【０２１９】
１ウェル当り５０μｌになるように培地を捨て、ＣａｓｐａｓｅＧｌｏ  ３／７  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ  ３／７  Ａｓｓａｙ  ＢｕｆｆｅｒとＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ  ３／７  Ａｓｓａｙ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅの混合液）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ８０９１）溶液を培地と１：１になるように５０μｌ／ｗｅｌｌ加えた。ここからの作業は遮光で行った。シェイカーを用いて１２０ｒ／ｍｉｎ程度で２分間よく混ぜ、室温で４０分間静置させた。静置後、Ａｓｓａｙ  ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３９１２、Ａｓｓａｙ  ｐｌａｔｅ  ９６ｗｅｌｌ、ｗｈｉｔｅ  ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ）に８０μｌを移し、ＧｌｏＭａｘ-Ｍｕｌｔｉ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｅ７０５１）を用いて吸光度を測定した。なお、陽性対照としてカスパーゼ阻害剤である１０μＭＺ−ＶＤ−ＦＭＫ（ＷＡＫＯ、２６２−０２０６Ｉ）を使用した。【０２２０】
生存細胞率については、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙをしようして、以下の手順で解析を行った。【０２２１】
１ウェル当り５０μｌになるように培地を捨て、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７２）を培地と１：１になるように５０μｌ／ｗｅｌｌ加えた。ここからの作業は遮光で行った。シェイカーを用いて１２０ｒ／ｍｉｎ程度で２分間よく混ぜ、１０分間静置させた。静置後、Ａｓｓａｙ  ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３９１２、Ａｓｓａｙ
ｐｌａｔｅ  ９６ｗｅｌｌ、ｗｈｉｔｅ  ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ）に８０μｌを移し、ＧｌｏＭａｘ-Ｍｕｌｔｉ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｅ７０５１）を用いて吸光度を測定した。【０２２２】
（結果）
（位相差顕微鏡観察）
フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞をＴＧＦ―βにより刺激した場合、顕著に細胞が障害された。フルチカゾンフランカルボン酸エステルによりプレトリートメントした場合は特に０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭにおいて効果的に角膜内皮細胞の障害が抑制されていることが観察された。また、０．０００１、０．０００３μＭにおいても角膜内皮細胞障害抑制効果が確認された。【０２２３】
（カスパーゼ活性）
Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ ３/７ Ａｓｓａｙは、アポトーシス誘導に伴うＣａｓｐａｓｅ  ３／７の活性を測定することができる。つまり、Ｃａｓｐａｓｅ  ３／７の活性が高いほど、細胞障害が誘導されていることを表す。ＴＧＦ―βで刺激した場合、刺激していない場合と比べて有意にＣａｓｐａｓｅ  ３／７が活性したことが認められた。一方でフルチカゾンフランカルボン酸エステルを添加すると、０．０００１、０．０００３、０．００１の順にＣａｓｐａｓｅ  ３／７の活性が低下しており、特に０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭではＴＧＦ―βで刺激していないＣｏｎｔｒｏｌ群と同程度の値となった。よってフルチカゾンフランカルボン酸エステルは濃度依存的にＣａｓｐａｓｅ  ３／７の活性を阻害しており、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭで最も効果的にその効果を示すことが示された。【０２２４】
（細胞生存率）
Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙにより、生存細胞率を測定した結果、フルチカゾンフランカルボン酸エステルを添加した場合、０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭの全ての濃度においてＣｏｎｔｒｏｌ群と比較して生存細胞率に有意な差は認められなかった。これらのことから０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭの濃度においては、フルチカゾンフランカルボン酸エステルの添加は細胞に障害をきたさないことが示唆された。【０２２５】
図１２は、フルチカゾンフランカルボン酸エステルを用いた場合の（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）の比を示す。薬剤濃度は、実施例１で採用されている１０μＭよりも低い濃度（０．０００１〜３μＭ）であったにもかかわらず、０．８を大きく下回る比が得られた。このことから、フルチカゾンフランカルボン酸エステルは、非常に強くＴＧＦ−βを阻害することが可能であることが示された。また、フルチカゾンフランカルボン酸エステルは、カスパーゼ阻害剤としても有用であることが示された。【０２２６】
（実施例５：フルチカゾンプロピオン酸エステルによるＴＧＦ−βに対する阻害活性の確認）
本実施例では、ＳＥＧＲＡの１つであるフルチカゾンプロピオン酸エステル（ＡＸＯＮ  ＭＥＤＣＨＥＭ、１４０４）によるＴＧＦ−β阻害活性を試験した。試験は実施例４と同様の手順で行った。【０２２７】
（結果）
フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞をＴＧＦ―βにより刺激した場合、顕著に細胞が障害された。フルチカゾンプロピオン酸エステルによりプレトリートメントした場合は特に、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１μＭにおいて効果的に角膜内皮細胞の障害が抑制されていることが観察された。また、０．０００１、０．０００３、１、３μＭにおいても角膜内皮細胞障害抑制効果が確認された。【０２２８】
図１２は、フルチカゾンプロピオン酸エステルを用いた場合の（カスパーゼ３／７活性）／（細胞生存率）の比を示す。薬剤濃度は、実施例１で採用されている１０μＭよりも低い濃度（０．０００１〜３μＭ）であったにもかかわらず、０．８を大きく下回る比が得られた。このことから、フルチカゾンフランカルボン酸エステルは、非常に強くＴＧＦ−βを阻害することが可能であることが示された。また、フルチカゾンフランカルボン酸エステルは、カスパーゼ阻害剤としても有用であることが示された。【０２２９】
（結果）
ＴＧＦ―βで刺激した場合、刺激していない場合と比べて有意にＣａｓｐａｓｅ  ３／７が活性したことが認められた。一方でフルチカゾンプロピオン酸エステルを添加すると、０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３の順にＣａｓｐａｓｅ  ３／７の活性が低下しており、特に０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭではＴＧＦ―βで刺激していないＣｏｎｔｒｏｌ群と同程度の値となった。よってフルチカゾンプロピオン酸エステルは濃度依存的にＣａｓｐａｓｅ  ３／７の活性を阻害しており、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭで最も効果的にその効果を示すことが示された。【０２３０】
（結果）
Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙにより、生存細胞率を測定した結果、フルチカゾンプロピオン酸エステルを添加した場合、０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭの全ての濃度においてＣｏｎｔｒｏｌ群と比較して生存細胞率に有意な差は認められなかった。これらのことから０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３μＭの濃度においては、フルチカゾンプロピオン酸エステルの添加は細胞に障害をきたさないことが示唆された。【０２３１】
（実施例６：ＺＫ２１６３４８によるＴＧＦ−βに対する阻害活性の確認）
本実施例では、ＳＥＧＲＭの１つであるＺＫ２１６３４８（ＡＸＯＮ  ＭＥＤＣＨＥＭ、ＡＸＯＮ２２３９）によるＴＧＦ−β阻害活性を試験した。位相差顕微鏡による操作は、実施例４と同様に行った。なお、終濃度として１０μＭのＺＫ２１６３４８を使用した。【０２３２】
２４時間後、培地を除去し、１０ｎｇ／ｍｌのＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−β２  Ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ（ＷＡＫＯ、２００−１９９１１）と共にＺＫ２１６３４８を終濃度１０Ｍとなるように添加し、２４時間培養した。培地は、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓを使用した。【０２３３】
２４時間後、位相差顕微鏡下で細胞形態及びアポトーシスを観察した。【０２３４】
（結果）
フックス角膜内皮ジストロフィ患者由来の不死化ヒト角膜内皮細胞をＴＧＦ―βにより刺激した場合、顕著に細胞が障害された。ＺＫ２１６３４８によりプレトリートメントすると浮遊細胞が減少し、角膜内皮細胞の障害が抑制されていることが観察された。ZK216348はステロイド性の骨格を有しない非ステロイド性SEGRAに分類される薬剤であり、本結果はステロイド骨格の有無に関わらずSEGRA全般に角膜内皮障害に対する抑制作用を有することを示す。【０２３５】
（実施例７：診断および治療例）
フックス角膜内皮ジストロフィおよび類縁の角膜内皮疾患と診断された際に（具体例としては、1）細隙灯顕微鏡検査によるグッテー形成、デスメ膜肥厚、角膜上皮浮腫、角膜実質浮腫の観察、2）スペキュラマイクロスコープによるグッテー像、角膜内皮障害像の観察、3)ペンタカム、OCT、超音波角膜厚測定装置などによる角膜浮腫の観察、4）遺伝子診断により高リスクと判断された場合）使用する。本発明の組成物を、点眼薬、前房内注射、徐放剤を用いた投与、硝子体内注射、結膜下注射として用いて治療することができる。【０２３６】
有効成分以外の各成分としては、例えば、日本薬局方またはその等価物に適合した、市販のものを利用することができる。【０２３７】
（実施例８：製剤例：角膜保存液）
本実施例では、製剤例として、カスパーゼ阻害剤を含有する角膜保存液を以下のように製造する。【０２３８】
常法により下に示す保存液を調製する。
表４に示される任意の化合物                    有効量
Ｏｐｔｉｓｏｌ−ＧＳ（Ｂａｕｓｃｈ−Ｌｏｍｂ）適量
全量１００ｍＬ
表４に示される任意の化合物は各種提供会社(例えば、アンレキサノクスであれば武田薬品等から入手可能）を用いることができる。【０２３９】
（実施例９：マウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ評価）
フックス角膜内皮ジストロフィのモデルマウスであるＡｌｐｈａ２  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  ＶＩＩＩ  （Ｃｏｌ８ａ２）  Ｑ４５５Ｋ  ノックインマウス（Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．  ２０１２  Ｊａｎ  １５；２１（２）：３８４−９３．）を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏでの評価が行える。モデルマウスはヒトにおけるフックス角膜内皮ジストロフィと同様にｇｕｔｔａｅと呼ばれる細胞外マトリックスの角膜内皮基底膜（デスメ膜）への沈着および角膜内皮障害による細胞密度減少を認める。このようなマウスに対して、本発明の化合物を点眼投与、前房内投与、硝子体内投与、結膜下投与、全身投与を行うことによって、フックス角膜内皮ジストロフィの治療または発症を予防もしくは病態の進行を遅らせることが可能となる。【０２４０】
（実施例１０：点眼剤の調製例）
本実施例では、製剤例として、カスパーゼ阻害剤を含有する点眼剤を以下のように製造する。【０２４１】
各濃度の被験物質の組成を以下に示す。
表４に示される任意の化合物          有効量
塩化ナトリウム                    ０．８５ｇ
リン酸二水素ナトリウム二水和物    ０．１ｇ
（任意に）ベンザルコニウム塩化物  ０．００５ｇ
水酸化ナトリウム                  適量
精製水                            適量
全量１００ｍＬ（ｐＨ７．０）
濃度は、以下からなる基剤を用いて希釈してもよい。
塩化ナトリウム                    ０．８５ｇ
リン酸二水素ナトリウム二水和物    ０．１ｇ
（任意に）ベンザルコニウム塩化物  ０．００５ｇ
水酸化ナトリウム                  適量
精製水                            適量
全量１００ｍＬ（ｐＨ７．０）
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本願は日本国特許出願特願２０１７−１１８６１７（２０１７年６月１６日出願）、特願２０１８−１０８２５（２０１８年１月２５日）および特願２０１８−５３２３５（２０１８年３月２０日出願）に対して優先権主張を行うものであり、それらの内容全体が本明細書において参照として援用される。
【産業上の利用可能性】
【０２４２】
トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）シグナルに起因する角膜内皮障害の治療または予防のための医薬が提供され、特に、フックス角膜内皮ジストロフィの角膜内皮障害を治療または予防するための医薬が提供された。このような技術に基づく製剤等に関連する技術に関与する産業（製薬等）において利用可能な技術が提供される。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４Ａ−１】
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【図４Ａ−２】
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【図４Ａ−３】
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【図４Ｂ−１】
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【図４Ｂ−２】
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【図４Ｂ−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2018230713.tif 000091
【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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