(57)【要約】  フィトケミカルの体内への取り込み、特に血中への移行の速度および／または移行の量を有意に高めることのできる難水溶性フィトケミカル吸収促進剤が開示されている。多糖体を含有する乳酸菌産生物はフィトケミカルの体内への取り込み、特に血中への移行の速度および／または移行の量を有意に高めることができ、従って、本発明によるフィトケミカル吸収促進剤はこれを有効成分とするものである。さらに、このフィトケミカル吸収促進剤は、食品添加剤として有用であり、またこれらが添加された飲食品または飲食品組成物は、フィトケミカル吸収促進の効果が付加される。
2018169027.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖体を含有する乳酸菌産生物を有効成分として含んでなる、難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項２】
前記乳酸菌産生物が、ラクトバチルス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）とストレプトコッカス・サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）との組合せによって生成されるものである、請求項１に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項３】
前記難水溶性フィトケミカルが、その溶解率が８８％以下のものである、請求項１または２に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項４】
前記難水溶性フィトケミカルが、その溶解率が５０％以下のものである、請求項１または２に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項５】
前記難水溶性フィトケミカルが、ポリフェノール、有機硫黄化合物、およびテルぺノイドからなる群から選択されるものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項６】
前記ポリフェノールが、フラボノイド類である、請求項５に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項７】
前記フラボノイド類が、フラボン、イソフラボン、フラボノール、フラバノン、フラバン−３−オール、およびアントシアニン並びにそれらの類縁体からなる群から選択されるものである、請求項６に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項８】
前記フラボノイド類が、フラボン、イソフラボン、フラボノール、フラバノン、フラバン−３−オールまたはそれらの類縁体である、請求項７に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項９】
前記テルぺノイドがテトラテルペンおよびその類縁体である、請求項５に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項１０】
前記難水溶性フィトケミカルが、ケルセチン、ゲニステイン、エピカテキン、ルテオリン、ナリンゲニン、βカロテンおよびリコペン並びにそれらの類縁体から選択されるものである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項１１】
前記乳酸菌産生物が発酵乳である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤を含んでなる、食品添加剤。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤を含んでなる、飲食品または飲食品組成物。
【請求項１４】
多糖体を含有する乳酸菌産生物をヒトまたは動物に投与するまたは摂取させることを含んでなる、当該ヒトまたは動物の体内への難水溶性フィトケミカルの取り込みを促進する方法。
【請求項１５】
前記多糖体を含有する乳酸菌産生物が、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤の形態である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ヒトまたは動物の体内への難水溶性フィトケミカルの取り込みを促進するための、多糖体を含有する乳酸菌産生物の使用。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の難水溶性フィトケミカル吸収促進剤の製造のための、多糖体を含有する乳酸菌産生物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は難水溶性のフィトケミカルの体内への吸収を促進する作用を有するフィトケミカル吸収促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
フィトケミカルは、一般的に、通常の身体機能維持には必要とされないが、健康によい影響を与える植物由来の化合物を意味する。例えば、ポリフェノールであるイソフラボンは大豆に多く含まれ、更年期障害改善・骨粗鬆症予防の機能を示し、ケルセチンはたまねぎに多く含まれ、血流改善や体脂肪軽減の機能を示す。また、テルペノイドであるβカロテンはにんじんやかぼちゃに多く含まれ、視機能や体内の粘膜や 皮膚、免疫機能を保つ働きを示し、リコペンはトマトに多く含まれ、血中コレステロールや血圧を低下させる機能を示す。【０００３】
多くのフィトケミカルは、加工・調理により分解され失われてしまい、さらに難水溶性の成分が多いため、生体内への移行性が低いことが知られている。難水溶性のフィトケミカルの吸収を促進する方法としては、乳化製剤化により溶解性や分散性を向上する方法、粒子径を小さくする方法、非晶化する方法が多く用いられている。【０００４】
さらに、難水溶性のフィトケミカルの吸収を促進する手法としては、例えば、特開２０１６−２１６４４０号公報（特許文献１）には、カテキン類の吸収促進剤として、レスベラトロール、ヘスペレチン、ラカンカ（Siraitia grosvenorii）抽出物、ナツメ（Zizyphus  jujuba var．inermis）抽出物、ライム（Citrus aurantiifolia）抽出物、レモン（Citrus  limon）抽出物、パイナップル（Ananas comosus）抽出物、アピゲニン、グルコース、ジフルクトースジアンヒドリドIII、スクラロース、アスパルテーム若しくはその塩、エリスリトール、イノシトール、クエン酸若しくはその塩、フィチン酸若しくはその塩、及び没食子酸若しくはその塩からなる群より選ばれる少なくとも１種が開示されている。【０００５】
また、特開２０１６−９３１４３号公報（特許文献２）には、生体利用性が低いカテキン等のポリフェノールを、特定の配合の脂肪及び炭水化物に添加することにより、カテキン等のポリフェノールの吸収および血漿への蓄積を向上することのできるとの開示がある。【０００６】
また、特表２０１６−５０６３８１号公報（特許文献３）には、シクロデキストリンを有効成分として含む、カテキン生体利用率増進剤が示されている。【０００７】
しかし、これら文献は、多糖体を有効成分とする乳酸菌の産生物が、フィトケミカルの吸収を促進する作用を有することを開示するものではない。【０００８】
一方、乳酸菌とフィトケミカルとの組み合わせは、例えば、特開平８−３２２４６４号公報（特許文献４）に開示がある。この公報には、乳酸菌と共にビフィドバクテリウム菌を含有するヨーグルトに、カテキン類やトコフェロール類をそれぞれ０．１〜２，０００ｐｐｍ程度含有させた発酵乳の開示があり、これによりビフィドバクテリウム菌の生残性が向上するとされている。また、特表２０１５−５２７０７６号公報（特許文献５）には、濃厚なテクスチャの乳製品ベース栄養組成物を製造する方法であって、フィトケミカルを含むことができるとの記載がある。しかしながら、これら特許文献のいずれも、乳酸菌の産生物が、フィトケミカルの吸収を促進する作用を有することを開示するものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２０１６−２１６４４０号公報
【特許文献２】特開２０１６−９３１４３号公報
【特許文献３】特表２０１６−５０６３８１号公報
【特許文献４】特開平８−３２２４６４号公報
【特許文献５】特表２０１５−５２７０７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者らは、今般、多糖体を含有する乳酸菌産生物が難水溶性のフィトケミカルの体内への取り込み、特に血中への移行の速度および／または移行の量を有意に高めることを見出した。本発明はかかる知見に基づくものである。【００１１】
従って、本発明は、難水溶性のフィトケミカルの体内への吸収を促進する作用を有するフィトケミカル吸収促進剤の提供をその目的としている。【００１２】
また本発明は、上記難水溶性のフィトケミカル吸収促進剤を含んでなる食品添加剤、さらにそれらが添加された飲食品または飲食品組成物の提供をその目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
そして、本発明による難水溶性のフィトケミカル吸収促進剤は、多糖体を含有する乳酸菌産生物を有効成分として含んでなるものである。【００１４】
また、本発明による食品添加剤、飲食品または飲食品組成物は、本発明による難水溶性のフィトケミカル吸収促進剤を含んでなるものである。【００１５】
また、本発明は、多糖体を含有する乳酸菌産生物をヒトまたは動物に投与するまたは摂取させることを含んでなる、当該ヒトまたは動物の体内への難水溶性フィトケミカルの取り込みを促進する方法に関する。【００１６】
また、本発明は、ヒトまたは動物の体内への難水溶性フィトケミカルの取り込みを促進するための、多糖体を含有する乳酸菌産生物の使用にも関する。【００１７】
また、本発明は、上記難水溶性フィトケミカル吸収促進剤の製造のための、多糖体を含有する乳酸菌産生物の使用にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ラットにケルセチンのみ、またはケルセチンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のケルセチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図２】ラットにケルセチンのみ、またはケルセチンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のイソラムネチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図３】ラットにケルセチンと脱脂粉乳のみ、またはケルセチンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のケルセチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図４】ラットにケルセチンと脱脂粉乳のみ、またはケルセチンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のイソラムネチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図５】ラットにケルセチンのみ、またはケルセチンと多糖体濃縮物を同時に投与した時の、血清中のケルセチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図６】ラットにケルセチンのみ、またはケルセチンと多糖体濃縮物を同時に投与した時の、血清中のイソラムネチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図７】ラットにゲニステインのみ、またはゲニステインとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のゲニステイン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図８】ラットにエピカテキンのみ、またはエピカテキンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のエピカテキン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図９】ラットにβカロテンのみ、またはβカロテンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のβカロテン濃度の変化を表すグラフである。
【図１０】ラットにβカロテンと脱脂粉乳のみ、またはβカロテンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のβカロテン濃度の変化を表すグラフである。
【図１１】ラットにβカロテンのみ、またはβカロテンと多糖体濃縮物を同時に投与した時の、血清中のβカロテン濃度の変化を表すグラフである。
【図１２】ラットにαグルコシルルチンのみ、またはαグルコシルルチンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のケルセチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図１３】ラットにαグルコシルルチンのみ、またはαグルコシルルチンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のイソラムネチン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図１４】ラットにルテオリンのみ、またはルテオリンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のルテオリン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図１５】ラットにナリンゲニンのみ、またはナリンゲニンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のナリンゲニン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【図１６】ラットにリコペンのみ、またはリコペンとヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のリコペン濃度の変化を表すグラフである。
【図１７】ラットにカカオ豆由来抽出物のみ、またはカカオ豆由来抽出物とヨーグルトを同時に投与した時の、血清中のエピカテキン抱合体濃度の変化を表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
フィトケミカル
本発明において、「フィトケミカル」とは、植物中に存在する天然の化学物質およびその修飾体並びにそれらを含む組成物であって、通常の身体機能維持には必須とはされないが、健康維持・改善によい影響を与えるものとして摂取されている、または今後摂取されるものとなる化合物または組成物を意味する。従って、本発明において、フィトケミカルとは、植物由来の純粋なまたはある程度の純度を有する化合物に加え、そのような化合物を主たる成分として含む植物由来の組成物の形態のもの、例えば画分をも意味するものとする。
【００２０】
本発明の好ましい態様によれば、フィトケミカルは、例えば、ポリフェノール、有機硫黄化合物、およびテルぺノイドなどを意味する。
【００２１】
本発明において、ポリフェノールの好ましい例としては、フラボノイド類、シゲトン類、テトラテルペンなどが挙げられ、さらにそれらの具体例とては、フラボノイド類として、フラボン（例えば、アピゲニン、ルテオリンなど）、イソフラボン（例えば、ゲニステイン、ダイゼインなど）、フラボノール（例えば、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロールなど）、フラバノン（例えば、ヘスペレチン、ナリンゲニンなど）、フラバン−３−オール（例えば、カテキン、エピカテキンなど）、アントシアニン（例えば、シアニジン、デルフィニジンなど）が挙げられる。また、シゲトン類としてはクルクミンが挙げられる。
【００２２】
また、有機硫黄化合物の好ましい例としては、イソシアネート類（例えば、スルフォラファンなど）、システインスルホキシド類（例えば、メチルシステインスルホキシドなど）、スルフィン類（例えば、アリシンなど）が挙げられる。
【００２３】
また、テルぺノイドとしては、テトラテルペンが挙げられ、その具体例としてはカロテノイド（例えば、βカロテン、リコペン、ルテイン、アスタキサンチンなど）が挙げられる。
【００２４】
さらに、本発明において、上記フィトケミカルには、それらの類縁体も包含され、その好ましい例としては、ゲニステインについて配糖体（ゲニスチン）および抱合体（グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体）が、ケルセチンについてメチル化体（イソラムネチン）、配糖体（ルチン、ケルセチングルコシド）、抱合体（グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体）が、ケンフェロールについて配糖体（ヘスペリジン）および抱合体（グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体）が挙げられる。さらに、エピカテキンやカテキンについて、異性体（カテキン）、重合体（プロシアニジンB1、プロシアニジンB2、プロシアニジンB5、プロシアニジンC1など）、抱合体（グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体）および没食子エステル（エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート）が挙げられる。ヘスペレチンについて配糖体（ヘスペリジン）および抱合体（グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体）が、ナリンゲニンについて配糖体（ナリンゲニン）および抱合体（グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体）が挙げられる。βカロテンについて異性体（αカロテン、γカロテン）および代謝物（パルミチン酸レチノール、アポ−10−カロテナール、レチノール）が、リコペンについて代謝物（アポ−10−リコペナール）が挙げられる。
【００２５】
さらに、本発明においてフィトケミカルには、植物由来の抽出物や濃縮物も含まれる。その好ましい例として、ゲニステインについては大豆、小豆、えんどう豆、空豆由来の抽出物や濃縮物、ケルセチンについてはたまねぎやりんごの由来の抽出物や濃縮物、ケンフェロールについては茶やブロッコリーの由来の抽出物や濃縮物、エピカテキンやカテキンについてはカカオ豆、茶由来の抽出物や濃縮物、ヘスペレチンについては温州みかん由来の抽出物や濃縮物、ナリンゲニンについてグレープフルーツやオレンジ由来の抽出物や濃縮物、ルテオリンについてエゴマ、シソ、春菊やピーマン由来の抽出物や濃縮物、βカロテンについては、人参やほうれんそうの抽出物や濃縮物、リコペンについてはトマト由来の抽出物や濃縮物、エピカテキンについてはカカオ豆由来の抽出物や濃縮物が挙げられる。
【００２６】
本発明において、フィトケミカルは難水溶性のものである。本発明の好ましい態様によれば、難水溶性のフィトケミカルとは、水への溶解率が８８％以下のものであり、さらに好ましくは５０％以下、より好ましくは２０％以下、最も好ましくは１％以下のフィトケミカルである。ここで、本発明における「溶解率」とは、化合物の水への溶解しやすさを表した指標であり、化合物を純水に振とうして溶解させた後、遠心分離した上清の濃度（ｗ／ｖ）を、振とう溶解前の濃度（ｗ／ｖ）で除した値を１００分率（％）で示したものである。濃度の測定は分光光度計を用いて行うことができる。本発明において好ましくは、フィトケミカル化合物３３．３ｍｇに純水１０ｍＬに加えて調製した溶液を、「溶解率」の測定のために用いる。より難水溶性のフィトケミカルの場合には、３．３ｍｇを純水１０ｍＬに加えて調製した溶液を用いて「溶解率」を測定してもよい。なお、「溶解率」測定の温度条件は２１±２℃とする。また、フィトケミカルの難水溶性は、上記「溶解率」の測定にあたり得られた「化合物を純水に振とうして溶解させた後、遠心分離した上清の濃度（ｗ／ｖ）」を指標に表してもよく、この場合、水への溶解率が８８％以下は、２９３ｍｇ／１００ｇ以下に対応する。なお、本発明において吸収促進の対象とされるフィトケミカルは、水に溶解している態様にあることは必須ではないと考えられる。すなわち、固形の状態または水に懸濁した状態で摂取されたフィトケミカルに対しても、本発明による吸収促進の効果は得られるものと考えられる。
【００２７】
吸収促進剤
本発明において、フィトケミカルの吸収促進とは、フィトケミカルを、多糖体を含有する乳酸菌産生物なしで摂取した対照と比較して、体内への取り込み、特に血中への移行の速度および／または移行の量を有意に高めることを意味する。具体的には、投与後、対照と比較して高い血中濃度を生じさせる、または対照と比較して大きな血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）を生じさせることのいずれかまたは両方を意味する。それにより、より少ない量または短い時間でフィトケミカル摂取の効果が得られ、併せて原料コストを低減できる。また、本発明によるフィトケミカル吸収促進剤を飲食品、飲食品組成物に添加することで、飲食品等の付加価値を高め商品価値を上げることができる。
【００２８】
多糖体を含有する乳酸菌産生物
本発明において、多糖体を含有する「乳酸菌産生物」とは、乳酸菌発酵物に加え、乳酸菌培養物、乳酸菌代謝物等、乳酸菌の発酵により多糖体を含むことになる組成物を広く意味する。
【００２９】
本明細書において「多糖体」とは、ガラクトース、グルコース、ラムノース、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミンなどの糖類から構成される糖鎖高分子である。この多糖体には、中性多糖体の他、リン酸基が結合した酸性多糖体が含まれてもよい。また、その分子量は、通常、５０００から５０万の範囲内である。
【００３０】
また、本明細書において「乳酸菌」とは、ブドウ糖を資化して対糖収率で５０％以上の乳酸を生産する微生物の総称であり、生理学的性質としてグラム陽性菌の球菌または桿菌で、運動性なし、胞子形成能なし、カタラーゼ陰性などの特徴を有しているものである。乳酸菌は古来、発酵乳等を介して世界各地で食されており、極めて安全性の高い微生物と言える。乳酸菌は現在までに、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ラクトバチルス（Lactobacillus）属、リューコノストック（Leuconostoc）属、ペディオコッカス（Pediococcus）属、ストレプトコッカス（Streptococcus）属、ワイセラ（Wissella）属、テトラジェノコッカス（Tetragenococcus）属、オエノコッカス（Oenococcus）属、エンテロコッカス（Enterococcus）属、バゴコッカス（Vagococcus）属、カルノバクテリウム（Carnobacterium）属の１１属に分類されている。本発明の実施の形態ではこれら全ての乳酸菌を用いることができる。
【００３１】
本発明の好ましい態様によれば、上記の中でも、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）とストレプトコッカス・サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）とを組み合わせて用いることが特に好ましい。
【００３２】
本発明のさらに好ましい態様によれば、
ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスとして、
ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌、または
ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスＯＬＬ１２２４菌を用い、
ストレプトコッカス・サーモフィラスとして、
ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌、または
ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３２９０菌を用いる。
【００３３】
ここで、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌は、２０１４年３月６日付（受託日）で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−０１８１４として、ブタペスト条約に基づき国際寄託されている。
【００３４】
さらに、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスＯＬＬ１２２４菌は、２００９年７月２日付（受託日）で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−７７８として独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに、ブタペスト条約に基づき国際寄託されている。
【００３５】
また、ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌は、２０１３年８月２３日付（受託日）で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−０１６９７として、ブタペスト条約に基づき国際寄託されている。
【００３６】
さらにストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３２９０菌は、２００４年１月１９日付（受託日）で、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１９６３８として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに、ブタペスト条約に基づき国際寄託されている。
【００３７】
本明細書において「乳酸菌発酵物」とは、乳酸菌による発酵によって得られた培養物およびそれを含んでなる組成物、およびそれを処理した後の組成物を意味する。従って、この乳酸菌発酵物には、乳酸菌の発酵物およびその処理物、例えば、培養物（乳酸菌発酵物）をろ過・遠心分離もしくは膜分離等で除菌して得られた培養濾液や培養上清液、培養濾液・培養上清液や乳酸菌発酵物等をエバポレーター等により濃縮した濃縮物、ペースト化物、希釈物、または乾燥物（例えば、凍結、加熱、減圧などによるもの）が含まれる。また、処理は、ろ過、遠心分離、膜分離等の除菌処理、沈殿、濃縮、ペースト化、希釈、乾燥などの上記処理工程の１つまたは複数を組み合わせて実施することができる。また、培養用の培地としては、例えば、酵母エキスを添加した脱脂粉乳培地、ＭＲＳ培地等が挙げられる。
【００３８】
本発明の好ましい態様によれば、乳酸菌産生物は、乳酸菌の乳発酵物、乳培養物、乳代謝物であるのが特に好ましい。乳発酵物、乳培養物、および乳代謝物としては、例えば、発酵乳（ヨーグルト）が挙げられる。本発明において発酵乳（ヨーグルト）は、好ましくはその上清とすることができる。この発酵乳には、脱脂粉乳や、ホエイ分解物等の培養液の他、ペクチン、グアーガム、キサンタンガム、カラギーナン、加工でんぷん等の増粘剤やゲル化剤が添加されていてもよい。
【００３９】
本発明において、乳としては、例えば、牛乳等の獣乳や、その加工品（例えば、脱脂乳、全脂粉乳、脱脂粉乳、れん乳、カゼイン、乳清、生クリーム、コンパウンドクリーム、バター、バターミルクパウダー、チーズ等）、大豆由来の豆乳等の植物性乳等が挙げられる。なお、乳は、殺菌処理されていてもよく、また殺菌処理されていなくてもよい。
【００４０】
本発明の一つの態様によれば、発酵乳（ヨーグルト）の原料として、発酵乳原料ミックスと呼ばれるものを用いることができる。発酵乳原料ミックスとは、原料乳および他の成分を含む混合物である。この発酵乳原料ミックスは、例えば、原料乳、水、他の任意成分（例えば、砂糖、糖類、甘味料、酸味料、ミネラル、ビタミン、香料等）等の発酵乳の製造に常用される原料を加温して溶解し、混合することによって得られる。原料乳には、水、生乳、殺菌乳、脱脂乳、全脂粉乳、脱脂粉乳、全脂濃縮乳、脱脂濃縮乳、バターミルク、バター、クリーム、チーズ等が含まれてもよい。また、原料乳には、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイタンパク質単離物（ＷＰＩ）、α−ラクトアルブミン（α−Ｌａ）、β−ラクトグロブリン（β−Ｌｇ）等が含まれてもよい。
【００４１】
本発明において、発酵乳（ヨーグルト）は、当業界において常法とされる方法により調製されてよい。すなわち、発酵乳（ヨーグルト）は、原料ミックスの調合工程、原料ミックスの（加熱）殺菌工程、原料ミックスの冷却工程、スターターの添加工程、発酵工程、発酵乳の冷却工程等の工程を経て製造されてよい。また、これら工程においては発酵乳（ヨーグルト）を製造する際に用いられる通常の条件を適宜採用してよい。また、原料ミックスの（加熱）殺菌工程、原料ミックスの冷却工程、スターターの添加工程、発酵工程および発酵乳の冷却工程は、この順番で実施されることが好ましい。
【００４２】
本発明において、乳酸菌を培養するための培地としては、乳酸菌を培養するため当業界において通常用いられる培地を使用することができる。すなわち、主炭素源のほか窒素源、無機物その他の栄養素を程良く含有する培地であれば、いずれの培地も使用することができる。炭素源としては、使用菌の資化性に応じて、ラクトース、グルコース、スクロース、フラクトース、澱粉加水分解物、廃糖蜜等を使用することができる。窒素源としては、カゼインの加水分解物、ホエイタンパク質加水分解物、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、グリコマクロペプチド、大豆タンパク質加水分解物等の有機窒素含有物を使用することができる。ほかに増殖促進剤としては、肉エキス、魚肉エキス、酵母エキス等を使用することができる。
【００４３】
本発明において、乳酸菌は、嫌気状態で培養されてもよく、また液体静置培養等で用いられる微好気状態で培養されてもよい。嫌気状態下での培養方法には、例えば、炭素ガス気相下で培養する方法などの公知の手法を採用することができるが、他の方法を採用してもよい。培養温度は一般に３０℃以上４７℃以下の範囲内であることが好ましく、３５℃以上４６℃以下の範囲内であることがより好ましく、３７℃以上４５℃以下の範囲内であることがさらに好ましい。乳酸菌培養中の培地のｐＨは、６以上７以下の範囲内に維持されることが好ましいが、菌が生育するｐＨであれば他のｐＨ範囲でもよい。乳酸菌等の培養時間としては、通常、１時間以上４８時間以下の範囲内が好ましく、１．５時間以上３６時間以下の範囲内であることがより好ましく、２時間以上２４時間以下の範囲内であることがさらに好ましい。
【００４４】
本発明の一つの態様によれば、発酵乳（ヨーグルト）は、典型的には、無脂乳固形分が８重量％以上であり、乳酸菌数又は酵母数が１０６個／ｍｌ以上１０１１個／ｍｌ以下の範囲内である。
【００４５】
フィトケミカル吸収促進剤の組成、形態、および任意成分
本発明において、「吸収促進剤」とは、「乳酸菌産生物」として乳酸菌発酵物、乳酸菌培養物、乳酸菌代謝物等の形態のまま用いられてもよいが、好ましくは製剤化して用いられる。従って、本発明において「吸収促進剤」とは、例えば、医薬品の他、そのまま摂取、好ましくは経口摂取される製剤の形態、いわゆるサプリメントの形態で提供されるものを包含し、また食品添加剤として、他の食品、飲食物に添加して、その食品、飲食物にフィトケミカル吸収促進作用を付加するために用いられるものも含まれる。
【００４６】
また、本発明によれば、本発明によるフィトケミカル吸収促進剤を含んでなる飲食品、および加工された飲食品、飲食品組成物もまた本発明に包含される。
【００４７】
本発明において、製剤とは、製剤化のために許容されうる添加剤を併用して、常法に従い、好ましくは経口製剤として調製したものである。この製剤は、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤などの固形製剤、溶液、懸濁液、乳濁液などの液状製剤の形態を採り得る。製剤化のために許容され得る添加剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、緩衝剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤などが挙げられる。なお、食品添加剤としては、具体的には加工調味料、風味調味料、調理ミックス等の調味料等が挙げられる。
【００４８】
また、本発明において、飲食品および飲食品組成物とは、ヒトや動物の飲食のために加工されたものであって、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物等の経口摂取可能な形態であればよく、特に限定されない。飲食品および飲食品組成物の例としては、具体的には、乳飲料（加工乳を含む）、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、発酵乳、アイスクリーム類、クリーム類、チーズ類などの乳製品；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、ゼリー飲料、栄養ドリンク、美容用の飲料、ココア、スムージーなどの粉末飲料やスポーツ粉末飲料、栄養強化の粉末飲料、美容用の粉末食品、粉末スープ、蒸しパンのもと、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉などの小麦粉製品；チョコレート、ガム、飴、クッキー、グミ、スナック、和菓子、ゼリー、プリンなどのデザート菓子などの菓子類；カレー、パスタソース、ポトフ、シチュー、和風食品のレトルト食品；加工油脂、バター、マーガリン、スプレッド、マヨネーズなどの油脂類；フリーズドライ食品などの即席食品類；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル、雑炊などの農産加工品；水産加工品；畜産加工品；ピッツア、ドリア、グラタン、惣菜、フライなど冷凍食品；流動食、半流動食、さらには動物の飼料、タブレット、口腔内に使用する化粧品などが挙げられる。
【００４９】
本発明において、飲食品および飲食品組成物には、機能性食品、健康栄養食品、健康食品、特定保健用食品、機能性表示食品、栄養機能食品、病者用食品、乳幼児用調製粉乳、妊産婦もしくは授乳婦用粉乳、または疾病リスク低減表示を付した飲食品のような分類のものも包含される。ここで、疾病リスク低減の表示とは、疾病リスクを低減する可能性のある飲食品の表示であって、ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会（コーデックス委員会）の定める規格に基づいて、またはその規格を参考にして、定められた表示または認められた表示である。
【００５０】
本発明において、飲食品および飲食品組成物には、必要に応じて、任意の成分を加えることができる。このような任意の成分としては、特段の制限はないが、通常、飲食品に配合される成分である甘味料、酸味料、野菜や果物や種実の汁やそのエキス、ビタミン、ミネラル、アミノ酸などの栄養素、乳酸菌（本発明の実施の形態に係る必須の乳酸菌を除く。）、ビフィズス菌、プロピオン酸菌などの有用な微生物やその発酵物、オリゴ糖などの機能性をもつ糖類、ローヤルゼリー、グルコサミン、アスタキサンチン、コラーゲン、ポリフェノールなどの既存の機能性素材、香料、ｐＨ調整剤、賦形剤、酸味料、着色料、乳化剤、保存料等が挙げられる。
【００５１】
また、以上から明らかなように、本発明の一つの態様によれば、上記した本発明による難水溶性フィトケミカル吸収促進剤の製造のための、多糖体を含有する乳酸菌産生物の使用が提供される。
【００５２】
フィトケミカル吸収促進剤の摂取方法
本発明において、フィトケミカル吸収促進剤の摂取量は、適宜決定されてよいが、本発明の一つの態様によれば、多糖体の摂取量が２００μｇ以上／日となる程度の量とされ、２００μｇ／日以上６００００μｇ／日以下の範囲内であることが好ましく、３００μｇ／日以上４５０００μｇ／日以下の範囲内であることがより好ましく、４００μｇ／日以上３００００μｇ／日以下の範囲内であることがさらに好ましく、５００μｇ／日以上１５０００μｇ／日以下の範囲内であることが特に好ましい（なお、「質量／日以上」の表記は「質量以上／日」の表記と同義であり、「質量／日以下」の表記は「質量以下／日」の表記と同義である。）。摂取の期間も特に限定されないが、例えば少なくとも１回以上、経口摂取することが好ましい。
【００５３】
本発明の別の態様によれば、必要用量は、動物実験（例えばマウス実験）における必要投与用量から食品安全委員会資料に基づく下式を用いて人体への必要投与用量に換算することもできる。
（人体への必要投与用量（換算値））＝（動物への必要投与用量）×（女性体重下限値：４０ｋｇ）÷（安全係数：１００）
【００５４】
以上から明らかなとおり、本発明の一つの態様によれば、多糖体を含有する乳酸菌産生物をヒトまたは動物に投与するまたは摂取させることを含んでなる、当該ヒトまたは動物の体内への難水溶性フィトケミカルの取り込みを促進する方法が提供される。また、本発明の別の態様によれば、ヒトまたは動物の体内への難水溶性フィトケミカルの取り込みを促進するための、多糖体を含有する乳酸菌産生物の使用が提供される。
【実施例】
【００５５】
以下の実施例において、以下の測定方法を共通して適用した。
ヨーグルト中の多糖体含有量の測定
ヨーグルト中の多糖体の含有量は、フェノール硫酸法（Ｈｏｄｇｅら，「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，第１巻，第３３８頁（１９６２年））に従って測定した。具体的には以下の通りである。【００５６】
先ず、１０ｇのヨーグルトに１ｇのトリクロロ酢酸を加えてよく撹拌した。次に、そのトリクロロ酢酸添加ヨーグルトを１００００ｒｐｍ、１０分、４℃の条件下で遠心分離処理した後、その上清を別のチューブに移した。次いで、その上清に２倍容量の９９．５％エタノールを加えてから、そのエタノール添加上清を冷凍庫で一晩放置したところ、チューブ中に沈殿物が生じていた。この沈殿物を１００００ｒｐｍ、１０分、４℃の条件下で遠心分離処理した後、得られた沈殿物に超純水を３ｍＬ加えて多糖体抽出液とした。そして、５００μＬの多糖体抽出液に５００μＬのフェノール試薬（５％（ｗ/ｖ））を加えてその混合液を撹拌した後に、さらにその混合液に２．５ｍＬの濃硫酸を加えてその混合液を直ぐに１０秒間撹拌した。その後、その混合液を室温で２０分以上放置してから、分光光度計でその混合液の４９０ｎｍの吸光度を測定した。対照液は次のとおり調製し、上述と同様にしてその４９０ｎｍの吸光度を測定した。５００μＬの標準グルコース溶液に５００μＬのフェノール試薬（５％（ｗ/ｖ））を加えてその混合液を撹拌した後に、さらにその混合液に２．５ｍＬの濃硫酸を加えてその混合液を直ぐに１０秒間撹拌した。その後、その混合液を室温で２０分以上放置した。【００５７】
実験例１：ケルセチンの吸収促進（その１）
（１）ヨーグルトの調製
１０質量％の脱脂粉乳を含む培地にラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＯＬＬ１２４７菌、およびストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＯＬＳ３０７８菌を接種した後、その培地を４３℃で３時間発酵させて加熱した。このようにして得られたヨーグルトには、多糖体が１１０μｇ／ｇ含まれていた。【００５８】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにケルセチン（和光純薬工業株式会社製）、ケルセチンとヨーグルトをそれぞれ投与した。ここで、ケルセチンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、ケルセチンを投与したラット群（コントロール）を「ケルセチン群」と呼び、ケルセチンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「ケルセチン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００５９】
（３）ケルセチン代謝物の測定
ケルセチン代謝物であるケルセチン抱合体と、イソラムネチン抱合体を以下のとおり測定した。血清５０μＬに、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させたグルクロニダーゼ溶液を４５μＬ（１００００Ｕ／ｍＬ、シグマアルドリッチ社製）、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させた０．１Ｍアスコルビン酸溶液を５μＬ加え、３７℃で２時間加温させた。メタノールを３００μＬ加え、酵素反応を停止させ、遠心分離（１２０００ｒｐｍ 、１０分、４℃）した。上清を別のチューブに移し、遠心濃縮により溶媒を除去した。３００μＬの０．１％ギ酸含有の５０％アセトニトリル溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【００６０】
（４）ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ＨＰＬＣは、Ｎｅｘｅｒａ ＸＲ（島津製作所製）、ＭＳ／ＭＳ検出器は４５００ＱＴＲＡＰ（サイエックス社製）を使用した。カラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相はＡ液として０．１％含有ギ酸溶液、 Ｂ液として０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液を調製した。Ｂ液３０％で１分間保持し、その後４．５分間でＢ液４５％までグラジエントをかけ、目的の物質を溶出させた。その後、Ｂ液９９％でカラムを２分間洗浄し、Ｂ液３０％で３分間保持した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定した。ＭＳ／ＭＳ分析はＥＳＩネガティブモードで分析した。ＭＳ／ＭＳの分析条件は、カーテンガス流量３０ｐｓｉ、コリジョンガス流量９ｐｓｉ、イオンスプレー電圧−４５００Ｖ、ターボガス温度６００℃、イオンソースガス７０ｐｓｉに設定した。【００６１】
（５）結果
結果は表１並びに図１および２に示される通りであった。図１はケルセチン抱合体の血清中濃度を、図２はイソラムネチン抱合体の血清中濃度をそれぞれ表すグラフである。いずれの時点においても、ケルセチン群に比べ、ケルセチン＋ヨーグルト群において、ケルセチン抱合体、イソラムネチン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ケルセチン群に比べ、ケルセチン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がケルセチンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でケルセチン群に対して有意差があることを示している。
【表１】
2018169027.tif 000003
【００６２】
実験例２：ケルセチンの吸収促進（その２）
（１）用いた脱脂粉乳およびヨーグルト
脱脂粉乳として実験例１（１）で用いた培地を、ヨーグルトとして実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【００６３】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにケルセチンと脱脂粉乳、ケルセチンとヨーグルトをそれぞれ投与した。ここで、ケルセチンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、脱脂粉乳とヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、ケルセチンと脱脂粉乳を投与したラット群（コントロール）を「ケルセチン＋脱脂粉乳群」と呼び、ケルセチンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「ケルセチン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００６４】
（３）ケルセチン代謝物の測定とＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ケルセチン代謝物であるケルセチン抱合体と、イソラムネチン抱合体を、実験例１に記載の方法および条件に従い行った。【００６５】
（４）結果
結果は表２並びに図３および４に示される通りであった。図３はケルセチン抱合体の血清中濃度を、図４はイソラムネチン抱合体の血清中濃度をそれぞれ表すグラフである。ケルセチン＋脱脂粉乳群に比べ、ケルセチン＋ヨーグルト群において、投与後６０分、１２０分のケルセチン代謝物、投与後６０分、１２０分、２４０分のイソラムネチン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、ケルセチン代謝物又はイソラムネチン抱合体の血清中濃度が上昇した。また、ケルセチン抱合体の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ケルセチン＋脱脂粉乳群に比べ、ケルセチン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、乳酸菌による発酵がケルセチンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でケルセチン＋脱脂粉乳群に対して有意差があることを示している。
【表２】
2018169027.tif 000004
【００６６】
実験例３：ケルセチンの吸収促進（その３）
（１）ヨーグルト由来の多糖体濃縮物の調製
ヨーグルトの一部を分取し、その上清に３倍量のエタノールを添加して冷凍保管した。その後、その上清を遠心分離処理したところ、沈殿物が得られた。そして、この沈殿物を凍結乾燥して多糖体濃縮物を得た。なお、１１．３ｇのヨーグルト中に７０ｍｇの多糖体濃縮物が含まれていた。【００６７】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにケルセチン、ケルセチンと多糖体濃縮物をそれぞれ投与した。ここで、ケルセチンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、多糖体濃縮物は７０ｍｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、ケルセチンを投与したラット群（コントロール）を「ケルセチン群」と呼び、ケルセチン多糖体濃縮物を投与したラット群（実施例）を「ケルセチン＋多糖体濃縮物群」と呼ぶこととする。【００６８】
（３）ケルセチン代謝物の測定とＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ケルセチン代謝物であるケルセチン抱合体と、イソラムネチン抱合体についての測定及び分析を、実験例１に記載の方法および条件に従い行った。【００６９】
（４）結果
結果は表３並びに図５および６に示される通りであった。図５はケルセチン抱合体の血清中濃度を、図６はイソラムネチン抱合体の血清中濃度をそれぞれ表すグラフである。ケルセチン群に比べ、ケルセチン＋多糖体濃縮物群において、投与後４８０分のケルセチン抱合体の血清中濃度が、投与後２４０分、４８０分のイソラムネチン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、ケルセチン代謝物又はイソラムネチン抱合体の血清中濃度が上昇した。また、イソラムネチン抱合体の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ケルセチン群に比べ、ケルセチン＋多糖体濃縮物群において有意に増加した。本結果は、多糖体を含有する乳酸菌産生物の摂取がケルセチンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でケルセチン群に対して有意差があることを示している。
【表３】
2018169027.tif 000005
【００７０】
実験例４：ゲニステインの吸収促進
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【００７１】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにゲニステイン（東京化成工業株式会社製）、ゲニステインとヨーグルトをそれぞれを投与した。なお、ゲニステインは５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、ゲニステインを投与したラット群（コントロール）を「ゲニステイン群」と呼び、ゲニステインとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「ゲニステイン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００７２】
（３）ゲニステイン代謝物の測定
ゲニステイン代謝物であるゲニステイン抱合体を、以下のとおり測定した。すなわち、血清５０μＬに、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させたグルクロニダーゼ溶液を４５μＬ（１００００Ｕ／ｍＬ、シグマアルドリッチ社製）、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させた０．１Ｍアスコルビン酸溶液を５μＬ加え、３７℃で２時間加温させた。メタノールを３００μＬ加え、酵素反応を停止させ、遠心分離（１２０００ｒｐｍ 、１０分、 ４℃）した。上清を別のチューブに移し、遠心濃縮により溶媒を除去した。３００μＬの０．１％ギ酸含有の５０％アセトニトリル溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【００７３】
（４）ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ＨＰＬＣは、Ｎｅｘｅｒａ ＸＲ（島津製作所製）、ＭＳ／ＭＳ検出器は４５００ＱＴＲＡＰ（サイエックス社製）を使用した。カラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１×５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相はＡ液として０．１％含有ギ酸溶液、 Ｂ液として０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液を調製した。Ｂ液３０％で１分間保持し、その後４．５分間でＢ液４５％までグラジエントをかけ、目的の物質を溶出させた。その後、Ｂ液９９％でカラムを２分間洗浄し、Ｂ液３０％で３分間保持した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定した。ＭＳ／ＭＳ分析はＥＳＩネガティブモードで分析した。ＭＳ／ＭＳの分析条件は、カーテンガス流量３０ｐｓｉ、コリジョンガス流量９ｐｓｉ、イオンスプレー電圧−４５００Ｖ、ターボガス温度６００℃、イオンソースガス７０ｐｓｉに設定した。【００７４】
（５）結果
結果は表４および図７に示される通りであった。投与後６０分、４８０分において、ゲニステイン群に比べ、ゲニステイン＋ヨーグルト群において、ゲニステイン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、ゲニステイン抱合体の血清中濃度が上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ゲニステイン群に比べ、ゲニステイン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がゲニステインの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でゲニステイン群に対して有意差があることを示している。
【表４】
2018169027.tif 000006
【００７５】
実験例５：エピカテキンの吸収促進（その１）
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【００７６】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにエピカテキン、エピカテキン（シグマアルドリッチ社製）とヨーグルトをそれぞれ投与した。なお、エピカテキンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、エピカテキンを投与したラット群（コントロール）を「エピカテキン群」と呼び、エピカテキンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「エピカテキン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００７７】
（３）エピカテキン代謝物の測定
エピカテキン代謝物であるエピカテキン抱合体を、以下のとおり測定した。すなわち、血清５０μＬに、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させたグルクロニダーゼ溶液を４５μＬ（１００００Ｕ／ｍＬ、シグマアルドリッチ社製）、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させた０．１Ｍアスコルビン酸溶液を５μＬ加え、３７℃で２時間加温させた。メタノールを３００μＬ加え、酵素反応を停止させ、遠心分離（１２０００ｒｐｍ 、１０分、 ４℃）した。上清を別のチューブに移し、遠心濃縮により溶媒を除去した。３００μＬの０．１％ギ酸含有の５０％メタノール溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【００７８】
（４）ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ＨＰＬＣは、Ｎｅｘｅｒａ ＸＲ（島津製作所製）、ＭＳ／ＭＳ検出器は４５００ＱＴＲＡＰ（サイエックス社製）を使用した。カラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相はＡ液として０．１％含有ギ酸溶液、 Ｂ液として０．１％ギ酸含有メタノール溶液を調製した。Ｂ液１０％で１分間保持し、その後９分間でＢ液４０％までグラジエントをかけ、目的の物質を溶出させた。その後、Ｂ液９９％でカラムを２分間洗浄し、Ｂ液１０％で３分間保持した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定した。ＭＳ／ＭＳ分析はＥＳＩネガティブモードで分析した。ＭＳ／ＭＳの分析条件は、カーテンガス流量３０ｐｓｉ、コリジョンガス流量９ｐｓｉ、イオンスプレー電圧−４５００Ｖ、ターボガス温度６００℃、イオンソースガス７０ｐｓｉに設定した。【００７９】
（５）結果
結果は表５および図８に示される通りであった。投与後６０分、１２０分、２４０分において、エピカテキン群に比べ、エピカテキン＋ヨーグルト群において、エピカテキン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、エピカテキン群に比べ、エピカテキン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がエピカテキンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でエピカテキン群に対して有意差があることを示している。
【表５】
2018169027.tif 000007
【００８０】
実験例６：βカロテンの吸収促進（その１）
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【００８１】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにβカロテン、βカロテン（三栄源エフ・エフ・アイ株式会社.製）とヨーグルトをそれぞれ投与した。なお、βカロテンは５ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、βカロテンを投与したラット群（コントロール）を「βカロテン群」と呼び、βカロテンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００８２】
（３）βカロテンの測定
血清５０μＬに、生理食塩水を９０μＬ加え、ジクロロメタンメタノール溶液（ジクロロメタン：メタノール＝１：２）を３００μＬ加えた。さらに、ヘキサンを１５０μＬ加えβカロテンを抽出した。上層を別のチューブに移し、窒素還流により溶媒を除去した。１５０μＬの０．１％酢酸アンモニウム含有３０％酢酸エチル７０％メタノール溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【００８３】
（４）ＨＰＬＣの分析条件
ＨＰＬＣは、１２００シリーズ（アジレントテクノロジーズ社製）を使用した。カラムは、ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ―８０ＴｓＱＡ(５．０×２５０ｍｍ)（東ソー株式会社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相は０．１％酢酸アンモニウム含有３０％酢酸エチル７０％メタノール溶液を調製した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定し、４５０ｎｍの吸光波長を測定した。【００８４】
（５）結果
結果は表６および図９に示される通りであった。いずれの時点においても、βカロテン群に比べ、βカロテン＋ヨーグルト群において、βカロテンの血清中濃度が有意に上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、βカロテン群に比べ、βカロテン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がβカロテンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でβカロテン群に対して有意差があることを示している。
【表６】
2018169027.tif 000008
【００８５】
実験例７：βカロテンの吸収促進（その２）
（１）用いた脱脂粉乳およびヨーグルト
脱脂粉乳として実験例１（１）で用いた培地を、ヨーグルトとして実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【００８６】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにβカロテンと脱脂粉乳、βカロテンとヨーグルトをそれぞれ投与した。なお、βカロテンは５ｍｇ／ｋｇ体重、脱脂粉乳とヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、βカロテンと脱脂粉乳を投与したラット群を（コントロール）を「βカロテン＋脱脂粉乳群」と呼び、βカロテンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００８７】
（３）βカロテンの測定とＨＰＬＣの分析条件
実験例６に記載の方法および条件に従い行った。【００８８】
（４）結果
結果は表７および図１０に示される通りであった。投与後６０分において、βカロテン＋脱脂粉乳群に比べ、βカロテン＋ヨーグルト群において、βカロテンの血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、βカロテンの血清中濃度が上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、βカロテン＋脱脂粉乳群に比べ、βカロテン＋ヨーグルト群において増加した。本結果は、乳酸菌による発酵がβカロテンの吸収速度を増大させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でβカロテン群に対して有意差があることを示している。
【表７】
2018169027.tif 000009
【００８９】
実験例８：βカロテンの吸収促進（その３）
（１）用いた多糖体濃縮物
実験例３で調製した多糖体濃縮物を用いた。【００９０】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにβカロテン、βカロテンと多糖体濃縮物をそれぞれ投与した。なお、βカロテンは５ｍｇ／ｋｇ体重、多糖体濃縮物は７０ｍｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、βカロテンを投与したラット群を（コントロール）を「βカロテン群」と呼び、βカロテンと多糖体濃縮物を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋多糖体濃縮物群」と呼ぶこととする。【００９１】
（３）βカロテンの測定とＨＰＬＣの分析条件
実験例６に記載の方法および条件に従い行った。【００９２】
（４）結果
結果は表８および図１１に示される通りであった。投与後６０分、１２０分において、βカロテン群に比べ、βカロテン＋多糖体濃縮物群において、βカロテンの血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、βカロテンの血清中濃度が上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、βカロテン群に比べ、βカロテン＋多糖体濃縮物群において有意に増加した。本結果は、多糖体を含有する乳酸菌産生物の摂取がβカロテンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でβカロテン群に対して有意差があることを示している。
【表８】
2018169027.tif 000010
【００９３】
実験例９：リコペンの吸収促進（その１）
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにリコペン（和光純薬工業株式会社製）、リコペンとヨーグルトをそれぞれ投与した。ここで、リコペンは５ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与後１２０分後に腹部大静脈より採血を行い、血清を得た。以下、リコペンを投与したラット群（コントロール）を「リコペン群」と呼び、リコペンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「リコペン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００９４】
（３）リコペンの測定
血清５００μＬに、エタノールを５００μＬ加えた。さらに、ヘキサンを２５００μＬ加えリコペンを抽出した。上層を別のチューブに移し、窒素還流により溶媒を除去した。２００μＬの０．１％酢酸アンモニウム含有３０％酢酸エチル７０％メタノール溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【００９５】
（４）ＨＰＬＣの分析条件
ＨＰＬＣは、１２００シリーズ（アジレントテクノロジーズ社製）を使用した。カラムは、ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ―８０ＴｓＱＡ(５．０×２５０ｍｍ)（東ソー株式会社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相は０．１％酢酸アンモニウム含有３０％酢酸エチル７０％メタノール溶液を調製した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定し、４７０ｎｍの吸光波長を測定した。【００９６】
（５）結果
結果は表９に示される通りであった。投与１２０分後のリコペンの血清中濃度は、リコペン群に比べて、リコペン＋ヨーグルト群で有意に上昇した。本結果は、ヨーグルトの摂取がリコペンの吸収を促進させることを意味する。
【表９】
2018169027.tif 000011
【００９７】
比較例：αグルコシルルチンの吸収促進
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにαグルコシルルチン（和光純薬工業株式会社製）、αグルコシルルチンとヨーグルトをそれぞれ投与した。ここで、αグルコシルルチンは２７ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、αグルコシルルチンを投与したラット群（コントロール）を「αＧルチン群」と呼び、αグルコシルルチンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「αＧルチン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【００９８】
（３）ケルセチン代謝物の測定とＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ケルセチンの代謝物であるケルセチン抱合体濃度と、イソラムネチン抱合体濃度の測定を、実験例１に記載の方法および条件に従い行った。【００９９】
（４）結果
結果は表１０並びに図１２および１３に示される通りであった。図１２はケルセチン抱合体の血清中濃度を、図１３はイソラムネチン抱合体の血清中濃度をそれぞれ表すグラフである。αＧルチン群とαＧルチン＋ヨーグルト群の間に、ケルセチン抱合体の血清中濃度、イソラムネチン抱合体の血清中濃度に違いはみられなかった。また、ケルセチン抱合体、イソラムネチン抱合体の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、αＧルチン群とαＧルチン＋ヨーグルト群の間に違いはみられなかった。
【表１０】
2018169027.tif 000012
【０１００】
実験例１０：フィトケミカルの溶解性
（１）実験方法
エピカテキン（シグマアルドリッチ社製）、カテキン（東京化成工業株式会社製）、ケルセチン（和光純薬工業株式会社製）、ゲニステイン（東京化成工業株式会社製）、ルチン（和光純薬工業株式会社製）、αグルコシルルチン（和光純薬工業株式会社製）、ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社製）、ナリンジン（シグマアルドリッチ社製）、ナリンゲニン（シグマアルドリッチ社製）、ケンフェロール（Ｅｘｔｒａ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ社製）、βカロテン（和光純薬工業株式会社製）、リコペン（和光純薬工業株式会社製）を用いた。実験例に用いた投与用量に従い、エピカテキン、カテキン、ケルセチン、ゲニステイン、ナリンゲニン、ケンフェロール、ルテオリンはそれぞれ３３．３ｍｇに１０ｍＬの超純水を加えた。配糖体のフィトケミカルはアグリコン（配糖体を加水分解すると得られる糖質以外の部分）量として３３．３ｍｇと等しくなるように、ルチンは６７．３ｍｇ（ケルセチンとして３３．３ｍｇ）、αグルコシルルチンは８９．６ｍｇ（ケルセチンとして３３．３ｍｇ）、ヘスペリジンは６７．３ｍｇ（ヘスペレチンとして３３．３ｍｇ）、ナリンジンは７１．０ｍｇ（ナリンゲニンとして３３．３ｍｇ）に１０ｍＬの超純水を加えた。実験例に用いた投与用量に従い、テルぺノイドは、βカロテン、リコペンをそれぞれ３．３ｍｇに１０ｍＬの超純水を加えた。調製した溶液を３時間振とうした後、２０００×ｇ、１０分間遠心分離した。遠心上清を０．４５μＬのフィルターを用い濾過した。遠心上清の吸光度（エピカテキン、カテキン、ヘスペリジン、ナリンジン、ナリンゲニンは２８０ｎｍ、ゲニステインは２６０ｎｍ、ケルセチン、ルチン、αグルコシルルチン、ケンフェロールは３６０ｎｍ、βカロテンは４５０ｎｍ、リコペンは４７０ｎｍ）を、分光光度計を用い測定した。それぞれの化合物を８０％メタノールまたはメタノールを用い溶解し、検量線を作成し、遠心上清の濃度を求めた。なお、以上の一連の操作は２１±２℃の温度条件下で行った。そして、以下の式に従い、溶解率を算出した。
溶解率（％）＝（（振とう溶解後の遠心上清液の濃度（ｗ／ｖ）÷（振とう溶解前の溶液の濃度（ｗ／ｖ））×  １００【０１０１】
（２）結果
結果は表１１および表１２に示される通りであった。カテキン、αグルコシルルチンは溶解率が８９％以上であり水溶性のフィトケミカルであった。一方、エピカテキン、ゲニステイン、ケルセチン、ルチン、ケンフェロール、ヘスペリジン、ナリンジン、ナリンゲニン、βカロテン、リコペン、ルテオリンは溶解率が８８％以下であり、難水溶性であった。これらの結果は、溶解率が８８％以下の難水溶性のフィトケミカルにおいて、多糖体を含有する乳酸菌産生物の摂取がフィトケミカルの吸収を促進させることを意味する。また、溶解率測定にあたり得られた「（振とう溶解後の遠心上清液の濃度（ｗ／ｖ））を「飽和溶解度」と呼び、表１１および表１２に併せて記載した。なお、配糖体のフィトケミカルは、アグリコン換算値として記した。
【表１１】
2018169027.tif 000013
【表１２】
2018169027.tif 000014
【０１０２】
実験例１１：ルテオリンの吸収促進
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【０１０３】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにルテオリン（東京化成工業株式会社製）、ルテオリンとヨーグルトをそれぞれ投与した。なお、ルテオリンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、ルテオリンを投与したラット群（コントロール）を「ルテオリン群」と呼び、ルテオリンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「ルテオリン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【０１０４】
（３）ルテオリン代謝物の測定
ルテオリン代謝物であるルテオリン抱合体を、以下のとおり測定した。すなわち、血清５０μＬに、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させたグルクロニダーゼ溶液を４５μＬ（１００００Ｕ／ｍＬ、シグマアルドリッチ社製）、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させた０．１Ｍアスコルビン酸溶液を５μＬ加え、３７℃で２時間加温させた。メタノールを３００μＬ加え、酵素反応を停止させ、遠心分離（１２０００ｒｐｍ 、１０分、 ４℃）した。上清を別のチューブに移し、遠心濃縮により溶媒を除去した。３００μＬの０．１％ギ酸含有の５０％アセトニトリル溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【０１０５】
（４）ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ＨＰＬＣは、Ｎｅｘｅｒａ ＸＲ（島津製作所製）、ＭＳ／ＭＳ検出器は４５００ＱＴＲＡＰ（サイエックス社製）を使用した。カラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１×５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相はＡ液として０．１％含有ギ酸溶液、 Ｂ液として０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液を調製した。Ｂ液３０％で１分間保持し、その後４．５分間でＢ液４５％までグラジエントをかけ、目的の物質を溶出させた。その後、Ｂ液９９％でカラムを２分間洗浄し、Ｂ液３０％で３分間保持した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定した。ＭＳ／ＭＳ分析はＥＳＩネガティブモードで分析した。ＭＳ／ＭＳの分析条件は、カーテンガス流量３０ｐｓｉ、コリジョンガス流量９ｐｓｉ、イオンスプレー電圧−４５００Ｖ、ターボガス温度６００℃、イオンソースガス７０ｐｓｉに設定した。【０１０６】
（５）結果
結果は表１３および図１４に示される通りであった。投与後６０分、１２０、２４０分において、ルテオリン群に比べ、ルテオリン＋ヨーグルト群において、ルテオリン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、ルテオリン抱合体の血清中濃度が上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ルテオリン群に比べ、ルテオリン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がルテオリンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でルテオリン群に対して有意差があることを示している。
【表１３】
2018169027.tif 000015
【０１０７】
実験例１２：ナリンゲニンの吸収促進
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【０１０８】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにナリンゲニン（東京化成工業株式会社製）、ナリンゲニンとヨーグルトをそれぞれ投与した。なお、ナリンゲニンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。以下、説明の便宜上、ナリンゲニンを投与したラット群（コントロール）を「ナリンゲニン群」と呼び、ナリンゲニンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「ナリンゲニン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【０１０９】
（３）ナリンゲニン代謝物の測定
ナリンゲニン代謝物であるナリンゲニン抱合体を、以下のとおり測定した。すなわち、血清５０μＬに、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させたグルクロニダーゼ溶液を４５μＬ（１００００Ｕ／ｍＬ、シグマアルドリッチ社製）、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させた０．１Ｍアスコルビン酸溶液を５μＬ加え、３７℃で２時間加温させた。メタノールを３００μＬ加え、酵素反応を停止させ、遠心分離（１２０００ｒｐｍ 、１０分、 ４℃）した。上清を別のチューブに移し、遠心濃縮により溶媒を除去した。３００μＬの０．１％ギ酸含有の５０％アセトニトリル溶液に溶解させ、ＨＰＬＣ用のサンプルを調製した。【０１１０】
（４）ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳの分析条件
ＨＰＬＣは、Ｎｅｘｅｒａ ＸＲ（株式会社島津製作所製）、ＭＳ／ＭＳ検出器は４５００ＱＴＲＡＰ（サイエックス社製）を使用した。カラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μｍ（２．１×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）を使用し、カラム温度は４０℃に設定した。移動相はＡ液として０．１％含有ギ酸溶液、 Ｂ液として０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液を調製した。Ｂ液３０％で１分間保持し、その後４．５分間でＢ液４５％までグラジエントをかけ、目的の物質を溶出させた。その後、Ｂ液９９％でカラムを２分間洗浄し、Ｂ液３０％で３分間保持した。なお、流速は、０．３ｍＬ／分に設定した。ＭＳ／ＭＳ分析はＥＳＩネガティブモードで分析した。ＭＳ／ＭＳの分析条件は、カーテンガス流量３０ｐｓｉ、コリジョンガス流量９ｐｓｉ、イオンスプレー電圧−４５００Ｖ、ターボガス温度６００℃、イオンソースガス７０ｐｓｉに設定した。【０１１１】
（５）結果
結果は表１４および図１５に示される通りであった。投与後６０分において、ナリンゲニン群に比べ、ナリンゲニン＋ヨーグルト群において、ナリンゲニン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。その他の全ての時点において、ナリンゲニン抱合体の血清中濃度が上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ナリンゲニン群に比べ、ナリンゲニン＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がナリンゲニンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でナリンゲニン群に対して有意差があることを示している。
【表１４】
2018169027.tif 000016
【０１１２】
実験例１３：リコペンの吸収促進（その２）
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【０１１３】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにリコペン（リコレッド社製）、リコペンとヨーグルトをそれぞれ投与した。ここで、リコペンは５ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。リコペンの血清中濃度の測定は実験例９に記載の方法および条件に従い行った。また、以下では、リコペンを投与したラット群（コントロール）を「リコペン群」と呼び、リコペンとヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「リコペン＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【０１１４】
（３）結果
結果は表１５および図１６に示される通りであった。投与後６０分、１２０分、２４０分において、リコペン群に比べ、リコペン＋ヨーグルト群において、リコペンの血清中濃度が有意に上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、リコペン群に比べ、リコペン＋ヨーグルト群において増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がリコペンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でリコペン群に対して有意差があることを示している。
【表１５】
2018169027.tif 000017
【０１１５】
実験例１４：βカロテンの吸収促進（その４）
（１）ヨーグルトの調製
１０質量％の脱脂粉乳および０．５ｍＭギ酸ナトリウムを含む培地にラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２２４菌、ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌をそれぞれ接種した後、その培地を４３℃でｐＨ４．６になるまで発酵させて加熱した。このようにして得られたヨーグルトには、多糖体がそれぞれ８８μｇ／ｇ、６８μｇ／ｇ含まれていた。【０１１６】
（２）実験方法
２４匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにβカロテン、βカロテンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２２４菌）、βカロテンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌）をそれぞれ投与した。ここで、βカロテンは５ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。βカロテンの血清中濃度の測定は実験例６に記載の方法および条件に従い行った。
以下、βカロテンを投与したラット群（コントロール）を「βカロテン群」と呼び、βカロテンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２２４菌）を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ＯＬＬ１２２４群」、βカロテンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌）を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ＯＬＬ１２４７群」と呼ぶこととする。【０１１７】
（３）結果
結果は表１６に示される通りであった。血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、βカロテン群に比べ、βカロテン＋ＯＬＬ１２２４群、βカロテン＋ＯＬＬ１２４７群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がβカロテンの吸収を促進させることを意味する。
【表１６】
2018169027.tif 000018
【０１１８】
実験例１５：βカロテンの吸収促進（その５）
（１）ヨーグルトの調製
１０質量％の脱脂粉乳および０．１重量％のカゼインペプチド（ＤＯＭＯ製）を含む培地にストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３２９０菌、ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌を接種した後、その培地を４３℃でｐＨ４．６になるまで発酵させて加熱した。このようにして得られたヨーグルトには、多糖体がそれぞれ７６．３μｇ／ｇ、４５．８μｇ／ｇ含まれていた。【０１１９】
（２）実験方法
２４匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにβカロテン、βカロテンとヨーグルト（ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３２９０菌）、βカロテンとヨーグルト（ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌）をそれぞれ投与した。ここで、βカロテンは５ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。βカロテンの血清中濃度の測定は実験例６に記載の方法および条件に従い行った。以下、βカロテンを投与したラット群（コントロール）を「βカロテン群」と呼び、βカロテンとヨーグルト（ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３２９０菌）を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ＯＬＳ３２９０群」、βカロテンとヨーグルト（ストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌）を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ＯＬＳ３０７８群」と呼ぶこととする。【０１２０】
（３）結果
結果は表１７に示される通りであった。血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、βカロテン群に比べ、βカロテン＋ＯＬＳ３２９０群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がβカロテンの吸収を促進させることを意味する。
【表１７】
2018169027.tif 000019
【０１２１】
実験例１６：βカロテンの吸収促進（その６）
（１）ヨーグルトの調製
１０質量％の脱脂粉乳を含む培地に、市販のスターター（カスピ海ヨーグルト、フジッコ株式会社製）、ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌およびストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌を接種した後、その培地を４３℃でｐＨ４．６に達するまで発酵させて加熱した。このようにして得られたヨーグルトには、多糖体が１５μｇ／ｇ、５４μｇ／ｇ含まれていた。【０１２２】
（２）実験方法
２４匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにβカロテン、βカロテンとヨーグルト（カスピ海ヨーグルト）、βカロテンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌およびストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌）をそれぞれ投与した。ここで、βカロテンは５ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。βカロテンの血清中濃度の測定は実験例６に記載の方法および条件に従い行った。以下、βカロテンを投与したラット群（コントロール）を「βカロテン群」と呼び、βカロテンとヨーグルト（カスピ海ヨーグルト）を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋カスピ海ＹＧ群」、βカロテンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌およびストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌）を投与したラット群（実施例）を「βカロテン＋ＯＬＬ１２４７×ＯＬＳ３０７８群」と呼ぶこととする。【０１２３】
（５）結果
結果は表１８に示される通りであった。血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、βカロテン群に比べ、βカロテン＋ＯＬＬ１２４７×ＯＬＳ３０７８群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がβカロテンの吸収を促進させることを意味する。
【表１８】
2018169027.tif 000020
【０１２４】
実験例１７：ケルセチンの吸収促進（その４）
（１）用いたヨーグルト
１０質量％の脱脂粉乳を含む培地に、市販のスターター（明治ブルガリアヨーグルト（株式会社明治製）より単離したラクトバチルス・ブルガリクス２０３８菌およびストレプトコッカス・サーモフィラス１１３１菌）、ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌およびストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌を接種した後、その培地を４３℃でｐＨ４．６に達するまで発酵させて加熱し、ヨーグルトを調製した。【０１２５】
（２）実験方法
２４匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにケルセチン、ケルセチンとヨーグルトをそれぞれ投与した。ここで、ケルセチンは５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。ケルセチン代謝物であるケルセチン抱合体と、イソラムネチン抱合体の血清中濃度の測定は、実験例１に記載の方法および条件に従い行った。以下、ケルセチンを投与したラット群（コントロール）を「ケルセチン群」と呼び、ケルセチンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクス２０３８菌およびストレプトコッカス・サーモフィラス１１３１菌）を投与したラット群（実施例）を「ケルセチン＋ＬＢ８１群」、ケルセチンとヨーグルト（ラクトバチルス・ブルガリクスＯＬＬ１２４７菌およびストレプトコッカス・サーモフィラスＯＬＳ３０７８菌）を投与したラット群（実施例）を「ケルセチン＋ＯＬＬ１２４７×ＯＬＬ３０７８群」と呼ぶこととする。【０１２６】
（３）結果
結果は表１９に示される通りであった。ケルセチン抱合体の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、ケルセチン群に比べ、ケルセチン＋ＬＢ８１群、ケルセチン＋ＯＬＬ１２４７×ＯＬＳ３０７８群において有意に増加した。本結果は、乳酸菌による発酵がケルセチンの吸収を促進させることを意味する。
【表１９】
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【０１２７】
実験例１８：エピカテキンの吸収促進（その２）
（１）用いたヨーグルト
実験例１で調製したヨーグルトを用いた。【０１２８】
（２）実験方法
１６匹のラット（ＳＤ、雄、８週齢、日本エスエルシー株式会社）を７日間馴化させた後、それらのラットを８匹ずつの群に分けた。１６時間の絶食後、各群のラットにカカオ豆抽出物、カカオ豆抽出物とヨーグルトをそれぞれ投与した。カカオ豆抽出物は、未発酵カカオ豆を脱脂して得たカカオ豆パウダーを、５０％エタノール（v/v）で抽出した後、抽出液を濃縮、凍結乾燥させて調製した。得られたカカオ豆抽出物中には、エピカテキンが１８８  ｍｇ／ｇ含まれていた。なお、カカオ豆抽出物はエピカテキンとして５０ｍｇ／ｋｇ体重、ヨーグルトは１１．３ｇ／ｋｇ体重で投与した。投与前、投与後６０分、１２０分、２４０分、４８０分に尾静脈より採血を行い、血清を得た。エピカテキン代謝物であるエピカテキン抱合体の血清中濃度の測定は、実験例５に記載の方法および条件に従い行った。以下、説明の便宜上、カカオ豆抽出物を投与したラット群（コントロール）を「カカオ豆抽出物群」と呼び、カカオ豆抽出物とヨーグルトを投与したラット群（実施例）を「カカオ豆抽出物＋ヨーグルト群」と呼ぶこととする。【０１２９】
（３）結果
結果は表２０および図１７に示される通りであった。投与後６０分、１２０分において、カカオ豆抽出物群に比べ、カカオ豆抽出物＋ヨーグルト群において、エピカテキン抱合体の血清中濃度が有意に上昇した。また、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、カカオ豆抽出物群に比べ、カカオ豆抽出物＋ヨーグルト群において有意に増加した。本結果は、ヨーグルトの摂取がカカオ豆抽出物中に含まれるエピカテキンの吸収を促進させることを意味する。なお、図中、「＊」の記号はＰ＜０．０５でカカオ豆抽出物群に対して有意差があることを示している。
【表２０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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