(57)【要約】  本発明は、高分子電解質の厚みを低減しつつ、治療効果を発揮するのに十分な量の抗血栓性化合物を担持した、ニッケルチタン合金を用いた医療材料を提供することを目的としている。本発明は、ニッケルチタン合金の表面を多孔化し、孔内部に高分子電解質を浸潤させることで、ニッケルチタン合金の表面に露出した高分子電解質の厚みを低減しつつ、浸潤した高分子電解質の寄与によって十分量の抗血栓性化合物を担持した医療材料を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニッケルチタン合金の表面に高分子電解質が結合し、
前記高分子電解質に該高分子電解質と対の電荷を有する抗血栓性化合物が結合し、
Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）を用いて測定すると以下の式１を満たし、
オージェ電子分光法（ＡＥＳ）を用いて測定すると以下の式２を満たす、抗血栓性医療材料。
Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳ  ＞  ２  ・・・式１
［式１中、Ｔｉｒａｉｔｉｏ，  ＸＰＳは、ＸＰＳで測定した場合における、医療材料の表面の全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率（原子数％）を表す。］
Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳ  ≧  ７  ・・・式２
［式２中、Ｃｒａｔｉｏ，ＡＥＳは、ＳｉＯ２換算で２０ｎｍアルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する炭素元素の存在比率（原子数％）を表す。］
【請求項２】
前記高分子電解質は、アルキレンイミン、ビニルアミン、アリルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロタミン、グルコサミン及びジアリルジメチルアンモニウムクロライドからなる群から選択されるモノマーを含むカチオン性ポリマーである、請求項１記載の抗血栓性医療材料。
【請求項３】
前記高分子電解質は、アクリル酸、α―ヒドロキシアクリル酸、ビニル酢酸、ビニルスルホン酸、アリルスルホン酸、ビニルホスホン酸、アリルホスホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸からなる群から選択されるモノマーを含むアニオン性ポリマーである、請求項１記載の抗血栓性医療材料。
【請求項４】
前記抗血栓性化合物は、ヘパリン、ヘパリン誘導体、デキストラン硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、アルガトロバン、ベラプロストナトリウム、オザクレル及びカングレロールからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項記載の抗血栓性医療材料。
【請求項５】
オージェ電子分光法（ＡＥＳ）を用いて測定すると以下の式３を満たし、
アルゴンイオンエッチング深さがＳｉＯ２換算で２０ｎｍ以上である、請求項１〜４のいずれか一項記載の抗血栓性医療材料。
Ｏｒａｔｉｏ／Ｍａｘ（Ｏｒａｔｉｏ）  ＝  ０．５  ・・・式３
［式３中、Ｏｒａｔｉｏは、アルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する酸素元素の存在比率（原子数％）を表し、Ｍａｘ（Ｏｒａｔｉｏ）は、Ｏｒａｔｉｏの最大値を表す。］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニッケルチタン合金を用いた抗血栓性医療材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
金属は高い強度と成型性を兼ね備えるため、生理的環境下での防食性が高い、ステンレス鋼、コバルト合金、チタン合金等は、医療器材（医療機器及び医療器具）の材料として活用されている。この中でも、ニッケルチタン合金は、超弾性という特有の性質を示すため、他の材料へ代替することができない。【０００３】
超弾性とは、形状回復温度以上の温度域において、負荷を加えて変形させても、加えた負荷を除去すると元の形状に回復する性質である。ニッケルチタン合金は組成や加工時の熱履歴を制御することで、形状回復温度を体温以下に設計することが可能であるため、体内で超弾性を発揮することができる。【０００４】
しかしながら、ニッケルチタン合金を血液と接触する医療器材（より具体的には、人工腎臓、人工肺、人工血管、人工弁、ステント、ステントグラフト、カテーテル、遊離血栓捕獲器具、血管内視鏡、縫合糸、血液回路、チューブ類、カニューレ、血液バッグ及び注射器等）の材料として用いる場合、ニッケルチタン合金の表面で異物反応が生じ、血栓が形成されることが避けられない。既存の医療器材では、抗血栓薬（抗凝固薬や抗血小板薬）を服用することで血栓形成を抑制しているが、副作用である出血リスク、服薬の中断による血栓形成リスク、医療経済への負担などの観点から、抗血栓薬の服薬量を低減する、または必要としない、抗血栓処理が付与された医療器材に対するニーズが高まっている。【０００５】
一般的な金属材料に抗血栓性を付与するために、抗凝固剤であるヘパリン又はヘパリン誘導体を金属材料の表面にコーティング又は化学結合させる手法が報告されている。ヘパリン又はヘパリン誘導体を金属材料の表面にコーティング又は化学結合させる手法としては、主に、１）有機カチオン混合物とヘパリン若しくはヘパリン誘導体との間でイオン複合体を形成させ、有機溶媒に溶かして金属材料の表面にコーティングする方法、２）金属材料の表面に導入された官能基と、ヘパリン又はヘパリン誘導体を共有結合あるいはイオン結合で固定化する方法、３）金属材料の表面に固定化したポリマーを介して、ヘパリン又はヘパリン誘導体を共有結合あるいはイオン結合で固定化する方法が知られている。【０００６】
上記１）の方法としては、第４級アンモニウム塩等の有機カチオン混合物とヘパリン又はヘパリン誘導体との間でイオン複合体を形成させ、有機溶媒に溶かして金属材料の表面にコーティングする方法が報告されている（特許文献１）。【０００７】
上記２）の方法としては、金属材料の表面に配位結合した低分子量のキレート分子を介してヘパリン等の薬剤を固定化する方法（特許文献２）等が報告されている。【０００８】
上記３）の方法としては、ホスホン酸誘導体又はカテコール誘導体を介して金属材料の表面にカチオン性ポリマーを固定化した後、固定化したカチオン性ポリマーにヘパリン又はヘパリン誘導体をイオン結合で固定化する方法（特許文献３）等が報告されている。【０００９】
一方で、金属自体へ薬剤を担持させる方法として、金属材料の表面に多孔層を形成して薬剤を担持させる方法（特許文献４）が報告されている。【００１０】
また、金属材料の表面を多孔化する方法としては、チタン又はチタン合金をアルカリ溶液中に浸漬することで、アルカリチタン酸塩からなる多孔層を形成する方法（特許文献５）、酸化皮膜を物理研磨で除去したニッケルチタン合金を１０規定の水酸化ナトリウム水溶液に浸漬して、金属材料の表面にチタン酸ナトリウム（Ｎａ２ＴｉＯ３）の層を形成する方法（非特許文献１）が報告されている。【００１１】
一方で、臨床で広く用いられている血管ステントとして、金属のみからなるステント（Ｂａｒｅ  Ｍｅｔａｌ  Ｓｔｅｎｔ、以下「ＢＭＳ」）と平滑筋細胞の過増殖抑制を目的にＢＭＳの表面に分厚いポリマー層と細胞増殖抑制薬を担持した薬物溶出ステント（Ｄｒｕｇ  Ｅｌｕｔｉｎｇ  Ｓｔｅｎｔ、以下「ＤＥＳ」）が挙げられるが、近年、ＢＭＳとＤＥＳの長期的な予後を比較した結果が報告されている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特許第４２７３９６５号公報
【特許文献２】特開２０１１−２００７００号
【特許文献３】国際公開２０１６／１５９２４３号
【特許文献４】特開平１０−２９５８２３号
【特許文献５】特開２００２−３５１０９号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｃ．Ｌ．Ｃｈｕら、Ｓｃｒｉｐｔａ  Ｍａｔｅｒｉａｌｉａ、２００５年、第５２巻、ｐ．１１１７−１１２１
【非特許文献２】Ｈ．Ｋｏｍｉｙａｍａら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ、２０１５年、第７巻、ｐ．７７６−７８３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
特許文献１で開示された方法は、第４級アンモニウム塩等の有機カチオン混合物とヘパリン又はヘパリン誘導体との間でイオン複合体を形成させ、有機溶媒に溶かして金属材料の表面にコーティングしている。ここで、イオン複合体は血液等の体液に接触すると容易に溶出し、ヘパリン又はヘパリン誘導体が抗血栓性を発揮するが、同時に放出される第４級アンモニウム塩等の有機カチオン混合物は溶血毒性を示してしまう恐れがある。【００１５】
特許文献２で開示された方法では、金属と配位結合可能な官能基と薬剤と結合可能な官能基を有するキレート分子を金属材料の表面へ配位結合で固定化し、キレート分子中の薬剤と結合可能な官能基を介してヘパリン等の薬剤を固定化しているが、キレート分子が低分子の場合、被覆するカチオン性化合物の量が少なく、ヘパリン又はヘパリン誘導体を十分量担持できないため、必要な抗血栓性を得ることができない。また、ニッケルチタン合金の表面は不活性であることから、アミノ基やカルボキシル基を有するキレート分子をニッケルチタン合金の表面に安定して固定化することは困難であることが一般的に知られていた。【００１６】
特許文献３で開示された方法では、ホスホン酸誘導体あるいはカテコール誘導体を金属材料の表面に強固に結合させるためには１００℃以上の高温で加熱する必要があるが、金属材料としてニッケルチタン合金を用いる場合、加熱工程中に塑性変形したり、超弾性特性（具体的には、形状回復力や形状回復温度）が変化したりする恐れがある。【００１７】
特許文献４で開示された方法では、金属材料の表面を多孔化することで、ポリマーを介さずに薬剤を担持させているが、水溶性の薬剤を用いる場合、薬剤の溶出挙動を制御することが困難である。薬剤担持後の金属材料の表面を、ポリマーで更に被覆することで、薬剤の溶出挙動を制御する手法については記載があるが、この手法では、薬剤が抗血栓性化合物である場合、金属を体内に留置した直後には十分な性能が得られないことが懸念される。【００１８】
特許文献５で開示された方法は、チタンの表面に形成されたアルカリチタン酸塩の多孔層が凝固系タンパク質であるフィブロネクチン及び血小板の吸着を抑制している。一方で、凝固系自体を制御しているわけでは無いため、血栓形成を抑制することができない。また、改質後のチタンの表面を化学的に修飾する手法については全く検討されていなかった。【００１９】
非特許文献１で開示された方法では、水酸化ナトリウム水溶液を用いてニッケルチタン合金の表面を改質しているが、疑似体液中でアパタイト層の生成を促進することを目的としており、改質後のニッケルチタン合金の表面を化学的に修飾する手法については全く検討されていなかった。【００２０】
非特許文献２によると、血管閉塞部位にＢＭＳ又はＤＥＳを留置する事で、血管内治療直後の再狭窄率は著しく改善される。しかしながら、慢性期において、ＢＭＳ又はＤＥＳの表面が血管内で新生した内膜により被覆され、さらに内膜上で新生内膜動脈硬化（Ｎｅｏａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，以下「ＮＡ」）が生じ、新たな病巣として閉塞に関与することが明らかとなっている。ここで、ＢＭＳと比較するとＤＥＳはＮＡ発症までの期間が有意に短いことから、金属材料の表面に露出したポリマー及び薬剤がＮＡを促進していると考えられる。特許文献３で開示された手法や、特許文献４で外層にポリマー層を形成する手法等は、金属材料の表面がポリマーで厚く被覆されるため、ＤＥＳ同様にＮＡ発症が促進されることが懸念される。【００２１】
そこで本発明はかかる従来の技術の欠点を改良するため、ニッケルチタン合金の表面を多孔化し、孔の内部に高分子電解質を浸潤させることで、高分子電解質の露出量を低減させつつ、十分量の抗血栓性化合物で被覆された抗血栓性医療材料を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明者らは、上記課題を克服するために鋭意検討を重ねた結果、以下の（１）〜（６）の発明を見出すに至った。
（１）  ニッケルチタン合金の表面に高分子電解質が結合し、上記高分子電解質に該高分子電解質と対の電荷を有する抗血栓性化合物が結合し、Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）を用いて測定すると以下の式１を満たし、オージェ電子分光法（ＡＥＳ）を用いて測定すると以下の式２を満たす、抗血栓性医療材料。
Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳ  ＞  ２  ・・・式１
［式１中、Ｔｉｒａｉｔｉｏ，  ＸＰＳは、ＸＰＳで測定した場合における、医療材料の表面の全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率（原子数％）を表す。］
Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳ  ≧  ７  ・・・式２
［式２中、Ｃｒａｔｉｏ，ＡＥＳは、ＳｉＯ２換算で２０ｎｍアルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する炭素元素の存在比率（原子数％）を表す。］
（２）  上記高分子電解質は、アルキレンイミン、ビニルアミン、アリルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロタミン、グルコサミン及びジアリルジメチルアンモニウムクロライドからなる群から選択されるモノマーを含むカチオン性ポリマーである、（１）記載の抗血栓性医療材料。
（３）  上記高分子電解質は、アクリル酸、α―ヒドロキシアクリル酸、ビニル酢酸、ビニルスルホン酸、アリルスルホン酸、ビニルホスホン酸、アリルホスホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸からなる群から選択されるモノマーを含むアニオン性ポリマーである、（１）記載の抗血栓性医療材料。
（４）  上記抗血栓性化合物は、ヘパリン、ヘパリン誘導体、デキストラン硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、アルガトロバン、ベラプロストナトリウム、オザクレル及びカングレロールからなる群から選択される、（１）〜（３）のいずれか記載の抗血栓性医療材料。
（５）  オージェ電子分光法（ＡＥＳ）を用いて測定すると以下の式３を満たし、アルゴンイオンエッチング深さがＳｉＯ２換算で２０ｎｍ以上である、（１）〜（４）のいずれか記載の抗血栓性医療材料。
Ｏｒａｔｉｏ／Ｍａｘ（Ｏｒａｔｉｏ）  ＝  ０．５  ・・・式３
［式３中、Ｏｒａｔｉｏは、アルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する酸素元素の存在比率（原子数％）を表し、Ｍａｘ（Ｏｒａｔｉｏ）は、Ｏｒａｔｉｏの最大値を表す。］
【発明の効果】
【００２３】
本発明の抗血栓性医療材料は、アルカリ溶液に浸漬してニッケルチタン合金の表面を改質することで、従来よりも高密度に高分子電解質を固定化することができる。この際、高分子電解質はニッケルチタン合金の表面より内側（深部）へ浸潤するため、総固定化量に対してニッケルチタン合金の表面に露出する量を低減でき、十分量の抗血栓性化合物を担持しつつも新生内膜動脈硬化のリスクを低減させることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】実施例１の抗血栓性医療材料において、オージェ電子分光法（ＡＥＳ）を用いて測定したデプスプロファイル。
【図２】実施例３の抗血栓性医療材料において、ＡＥＳを用いて測定したデプスプロファイル。
【図３】実施例４の抗血栓性医療材料において、ＡＥＳを用いて測定したデプスプロファイル。
【図４】比較例２の抗血栓性医療材料において、ＡＥＳを用いて測定したデプスプロファイル。
【図５】実施例１の抗血栓性医療材料の表面における、５００００倍の透過型電子顕微鏡（ＳＥＭ）画像。
【図６】実施例３の抗血栓性医療材料の表面における、２５０００倍のＳＥＭ画像。
【図７】実施例４の抗血栓性医療材料の表面における、５００００倍のＳＥＭ画像。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明の抗血栓性医療材料は、ニッケルチタン合金の表面に高分子電解質が結合し、
上記高分子電解質に該高分子電解質と対の電荷を有する抗血栓性化合物が結合し、
Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）を用いて測定すると以下の式１を満たし、
オージェ電子分光法（ＡＥＳ）を用いて測定すると以下の式２を満たすことを特徴とする。
Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳ  ＞  ２  ・・・式１
［式１中、Ｔｉｒａｉｔｉｏ，  ＸＰＳは、ＸＰＳで測定した場合における、医療材料の表面の全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率（原子数％）を表す。］
Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳ  ≧  ７  ・・・式２
［式２中、Ｃｒａｔｉｏ，ＡＥＳは、ＳｉＯ２換算で２０ｎｍアルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する炭素元素の存在比率（原子数％）を表す。］
【００２６】
本明細書中において使用する用語は、特に断りがない限り、下記に示す定義を用いる。
【００２７】
本明細書において、抗血栓性医療材料とは、ニッケルチタン合金の表面に結合した高分子電解質を介して抗血栓性化合物が結合したものである。そのため、抗血栓性医療材料の表面は高分子電解質及び抗血栓性化合物が存在しているが、ニッケルチタン合金の表面の全てに高分子電解質及び抗血栓性化合物が存在しなくてもよい。しかしながら、抗血栓性の付与の観点から、ニッケルチタン合金の血液接触面の全てに高分子電解質及び抗血栓性化合物が存在することが好ましく、ステントの様にニッケルチタン合金の全ての表面が血液と接触する場合、抗血栓性医療材料の表面の全てに高分子電解質及び抗血栓性化合物が存在することが好ましい。
【００２８】
抗血栓性化合物とは、血液凝固を抑制する化合物であり、例えば、血小板の凝集を抑制する抗血小板薬や、トロンビンに代表される血液凝固因子の活性化等で進行する血液凝固を阻害する抗凝固薬を指す。ニッケルチタン合金の表面に抗血栓性化合物を担持させることで抗血栓性を付与することができる。高分子電解質と効果的に相互作用できるため、抗血栓性化合物は水溶性の抗血栓性化合物であることが好ましい。
【００２９】
上記のニッケルチタン合金とは、主要構成元素としてニッケル及びチタンを含む合金である。全体の重量に対して５０重量％〜６０重量％のニッケル元素及び全体の重量に対して４０重量％〜５０重量％のチタン元素を含むことが好ましく、インプラント用途で用いる場合、国際規格である、ＡＳＴＭ  Ｆ２０６３で要求されている以上のグレードであることがより好ましい。ニッケルチタン合金は形状記憶性及び超弾性を示すため、ステントの様に閉塞した管腔を内側から拡張する用途に好適に用いることが可能である。
【００３０】
なお、上記のニッケルチタン合金の形状は特に限定されるものではないが、例えば、板、シート、棒、ワイヤー、微粒子を含む粉体、高分子又はセラミックスの表面に蒸着された薄膜が含まれる。また、下記の高分子電荷質を浸潤させるために、上記のニッケルチタン合金は表面に多孔層を有することが好ましい。
【００３１】
高分子電解質とは、繰り返し単位中に電離可能な官能基を有するポリマーのことである。電離可能な官能基の種類や組み合わせによって、アニオン性高分子電解質、中性高分子電解質、カチオン性高分子電解質に分類される。
【００３２】
ここで、電離可能な官能基とは、水中で電離してカチオン性を示す官能基及びアニオン性を示す官能基のことである。電離可能な官能基は、特に限定されるものではないが、例えば、カルボキシ基（−ＣＯＯＨ）、ホスホン酸基（−ＰＯ３Ｈ）、スルホン酸基（−ＳＯ３Ｈ）、ヒドロキシ基（−ＯＨ）、チオール基（−ＳＨ）、シラノール基（―ＳｉＯＨ）、アミノ基（−ＮＨ２）、グアニジノ基（―ＮＨ―（Ｃ＝Ｎ）ＮＨ２）、イミダゾイル基（−Ｃ３Ｎ３Ｈ２）等が挙げられる。
【００３３】
上記の高分子電解質は、イオン結合、水素結合、配位結合又は物理吸着を介してニッケルチタン合金の表面に結合することが可能である。
【００３４】
上記高分子電解質を構成するモノマーは、特に限定されるものではなく、例えば、アルキレンイミン、ビニルアミン、アリルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロタミン、グルコサミン、ジアリルジメチルアンモニウムクロライド、アクリル酸、α―ヒドロキシアクリル酸、ビニル酢酸、ビニルスルホン酸、アリルスルホン酸、ビニルホスホン酸、アリルホスホン酸、アスパラギン酸又はグルタミン酸が挙げられる。ヘパリンのようなアニオン性の抗血栓性化合物を、ニッケルチタン合金の表面にイオン結合で固定する場合、高分子電解質はカチオン性官能基を有することが好ましいことから、アルキレンイミン、ビニルアミン、アリルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロタミン、グルコサミン又はジアリルジメチルアンモニウムクロライドをモノマーとして含むことが好ましい。また、アルガトロバンのようなカチオン性の抗血栓性化合物を、ニッケルチタン合金の表面にイオン結合で固定する場合、高分子電解質はアニオン性官能基を有することが好ましいことから、アクリル酸、α―ヒドロキシアクリル酸、ビニル酢酸、ビニルスルホン酸、アリルスルホン酸、ビニルホスホン酸、アリルホスホン酸、アスパラギン酸又はグルタミン酸をモノマーとして含むことが好ましい。
【００３５】
上記高分子電解質を構成するモノマーは、電離可能な官能基が含まれないモノマーが含まれていてもよい。電離可能な官能基が含まれないモノマーは、特に限定されるものでは無いが、一例として、アクリレート、メタクリレート、アクリルアミド、メタクリドアミド、エチレングリコール、プロピレングリコール、ビニルピロリドン、ビニルアルコール、ビニルカプロラクタム、酢酸ビニル又はスチレンが挙げられる。
【００３６】
上記高分子電解質は、天然高分子であってもよく、合成高分子であってもよい。また、単独重合体であってもよく、共重合体であってもよい。高分子電解質が共重合体である場合には、ランダム共重合体、ブロック共重合体、グラフト共重合体又は交互共重合体のいずれであってもよい。カチオン性又はアニオン性の抗血栓性化合物を、ニッケルチタン合金の表面にイオン結合で固定する場合、高分子電解質中の荷電を有する官能基を有するモノマーが連続するブロックの部分と抗血栓性化合物の荷電が相互作用する方が、ニッケルチタン合金の表面に対してより強固にイオン結合するため、ブロック共重合体がより好ましい。
【００３７】
ここで、単独重合体とは、１種類のモノマーを重合して得られる高分子化合物をいい、共重合体とは、２種類以上のモノマーを共重合して得られる高分子化合物をいう。中でもブロック共重合体とは、繰り返し単位の異なる少なくとも２種類以上のポリマーが共有結合でつながり、長い連鎖になったような分子構造の共重合体をいい、ブロックとは、ブロック共重合体を構成する「繰り返し単位の異なる少なくとも２種類以上のポリマー」のそれぞれを指す。
【００３８】
上記高分子電解質は、直鎖状ポリマーでもよいし、分岐状ポリマーでもよい。しかしながら、抗血栓性化合物と多点でより安定なイオン結合を形成することができるため、分岐状ポリマーの方がより好ましい。
【００３９】
上記アニオン性の抗血栓性化合物に対しイオン相互作用に基づく吸着量が多いことから、高分子電解質としてポリアルキレンイミンを用いることが好ましい。ポリアルキレンイミンとしては、ポリエチレンイミン（以下、「ＰＥＩ」）、ポリプロピレンイミン、ポリブチレンイミン又はアルコキシル化されたポリアルキレンイミン等が挙げられ、荷電密度が高いことからＰＥＩがより好ましい。
【００４０】
ＰＥＩの具体例としては、“ＬＵＰＡＳＯＬ（登録商標）”（ＢＡＳＦ社製）や“ＥＰＯＭＩＮ（登録商標）”（株式会社日本触媒社製）等が挙げられるが、他のモノマーとの共重合体であってもよく、変性体であってもよい。ここでいう変性体とは、ポリマーを構成するモノマーの繰り返し単位は同じであるが、例えば、放射線の照射により、その一部がラジカル分解や再結合等を起こしているものを指す。
【００４１】
また、上記カチオン性の抗血栓性化合物とイオン相互作用に基づく吸着量が多いことから、高分子電解質としてポリアクリル酸（以下、「ＰＡＡ」）やポリビニル酢酸を用いることが好ましく、荷電密度が高いことからＰＡＡを用いることがより好ましい。
【００４２】
上記高分子電解質の重量平均分子量が小さすぎると、抗血栓性化合物が結合可能な吸着サイトが少なくなるため、必要な薬効が得られにくくなる。一方で、高分子電解質の重量平均分子量が大きすぎると、抗血栓性化合物が高分子電解質によって内包されてしまい、薬効を発揮することが難しくなる。このため、上記高分子電解質の重量平均分子量は、６００〜２００００００が好ましく、１０００〜１５０００００がより好ましく、１００００〜１００００００がさらにより好ましい。上記高分子電解質の重量平均分子量は、例えば、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法や、光散乱法等により測定することができる。
【００４３】
抗血栓性化合物の抗血栓性は、抗凝固作用又は抗血小板作用として発揮されるものであり、抗血栓性化合物の例としては、ヘパリン、ヘパリン誘導体、デキストラン硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、アルガトロバン、ベラプロストナトリウム、オザクレル及びカングレロールからなる群から選択される。
【００４４】
このうち、抗凝固作用を有する抗血栓性化合物の例として、ヘパリン、ヘパリン誘導体、デキストラン硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸及びアルガトロバン等が挙げられ、ヘパリン又はヘパリン誘導体がより好ましい。また、ヘパリン又はヘパリン誘導体は、血液凝固反応を阻害できるものであれば特に限定されず、ヘパリンであれば、臨床で一般的に広く使われている未分画ヘパリン等が挙げられ、ヘパリン誘導体であれば、同様に臨床で一般的に広く使われている低分子量ヘパリン又はアンチトロンビンＩＩＩに高親和性のヘパリン等が挙げられる。
【００４５】
上記の低分子量ヘパリンとは、未分画ヘパリンを酵素又は化学処理した後、ゲルろ過して得られる重量平均分子量が１０００〜１００００の分画である。臨床で使用されていることから、低分子量ヘパリンとして、レビパリン、エノキサパリン、パルナパリン、セルトパリン、ダルテパリン及びチンザパリン並びにその薬理学的に許容される塩を好ましく用いることができる。
【００４６】
また、抗血小板作用を示す抗血栓性化合物の例として、ベラプロストナトリウム、オザクレル又はカングレロールが挙げられる。
【００４７】
上記の抗血栓性化合物は、水溶性の抗血栓性化合物の場合、２５℃の水１００ｇ中に１ｇ以上溶解する化合物であり、生体内において抗血栓性を示す化合物である。
【００４８】
上記抗血栓性医療材料は、医療器材、例えば医療機器及び医療器具に好適に用いることができるが、特にステント及びステントグラフトの材料として用いることが好ましい。
【００４９】
以下、上記抗血栓性医療材料の製造方法を記載する。高分子電解質と抗血栓性化合物の組み合わせは特に限定されるものではないが、一例として、高分子電解質としてＰＥＩを用いるとともに、抗血栓性化合物としてヘパリンを用いた、抗血栓性医療材料の製造方法を記載する。
【００５０】
抗血栓性医療材料の製造方法は、特に限定されるものではないが、ニッケルチタン合金の表面で十分な効能を発揮させるためには、（１）ニッケルチタン合金の表面を改質する工程、（２）高分子電解質をニッケルチタン合金の表面に対して固定化する工程、（３）高分子電解質と対の電荷を有する抗血栓性化合物を高分子電解質に対して固定化する工程、を含むことが好ましい。
【００５１】
ニッケルチタン合金の表面の汚染を除去するために、上記の（１）ニッケルチタン合金の表面を改質する工程の前に、ニッケルチタン合金の洗浄工程を追加することが好ましい。ここで、ニッケルチタン合金の洗浄工程としては、有機溶媒中での超音波洗浄、Ａｒイオンエッチング、酸処理、塩基処理又は紫外線照射等の洗浄方法が挙げられるが、ニッケルチタン合金の表面の吸着物を除去できる方法であれば特に限定されるものではない。また、上記の洗浄方法を複数組み合わせて洗浄工程としてもよい。さらに、上記洗浄工程は、ピラニア溶液を用いてニッケルチタン合金の表面を洗浄する方法であることがより好ましい。ピラニア溶液は過酸化水素水と硫酸の混合溶液であり、極めて強い酸化力を持つ。そのため、ピラニア溶液を用いてニッケルチタン合金の表面を洗浄する洗浄工程を行うことで、ニッケルチタン合金の表面の有機物を十分に除去できる。
【００５２】
上記の（１）ニッケルチタン合金の表面を改質する工程は、細胞接着性や変異原性に影響するマクロなニッケルチタン合金の表面形状を変化させること無く、高分子電解質の浸潤を可能にする工程であり、特に限定されるものではないが、例えば、水酸化ナトリウム水溶液へ浸漬して表面に多孔層を形成する工程が挙げられる。
【００５３】
ニッケルチタン合金の表面の改質に水酸化ナトリウム水溶液を用いる場合、ニッケルチタン合金の表面が十分に改質される範囲内であれば特に限定されるものではないが、水酸化ナトリウム水溶液の濃度は、０．５ｍｏｌ／Ｌ〜１８ｍｏｌ／Ｌであることが好ましく、取り扱いや反応時間の観点から、１ｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌであることがより好ましい。また、ニッケルチタン合金の表面が十分に改質される範囲内であれば特に限定されるものではないが、ニッケルチタン合金を浸漬する時間及び浸漬時の温度は、２０℃〜１５０℃において数分間〜数日間であることが好ましく、８ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム溶液を用いる場合、２５℃〜８０℃において３０分〜２４時間であることがより好ましい。なお、表面に多孔層を形成した後のニッケルチタン合金は、イオン交換水等で十分に洗浄することで、ニッケルチタン合金の表面に付着した水酸化ナトリウムを除去することができる。
【００５４】
特に限定されるものではないが、水酸化ナトリウム水溶液に浸漬することで、ニッケルチタン合金の表面へ高分子電解質が浸潤可能となるメカニズムを以下に説明する。
【００５５】
水酸化ナトリウム水溶液へ浸漬する前のニッケルチタン合金の表面は、主に酸化チタン（ＴｉＯ２）からなる、厚さ数ｎｍの不動態被膜で被覆されているが、水酸化ナトリウム水溶液に浸漬することで不動態被膜が溶解し、バルクのニッケルチタン合金が水酸化ナトリウム水溶液中に露出する。ニッケルとチタンの水酸化ナトリウム水溶液に対する耐食性を比較すると、ニッケルの方が優れた耐食性を示し、チタンはイオンとして溶出しやすい一方で、ニッケルはアルカリ水溶液に難溶な水酸化ニッケル（Ｎｉ（ＯＨ）２）等の形でニッケルチタン合金の表面へ残留しやすく、チタンイオンが溶出した部分が空隙となる。水酸化ニッケルは洗浄工程で除去できるため、最終的に孔内部の表面が酸化チタンの酸化皮膜で被覆された多孔層が形成され、高分子電解質や抗血栓性化合物の浸潤が可能となる。
【００５６】
上記の（２）高分子電解質を固定化する工程としては、特に限定されるものではないが、一例として、上記高分子電解質の水溶液へ、表面に多孔層を形成したニッケルチタン合金を浸漬する方法が挙げられる。ここで、上記高分子電解質の水溶液は、濃度が０．１重量％〜２０重量％であることが好ましく、１重量％〜１０重量％であることがより好ましい。
【００５７】
上記の高分子電解質が第１級〜第３級のアミノ基を含んでいる場合、ｐＨに依存せずに高いカチオン性を発揮させるために、上記高分子電解質中のアミノ基を第４級アンモニウム化する第４級アンモニウム化工程を追加してもよい。
【００５８】
上記の第４級アンモニウム化工程を追加する場合、その工程は、上記の（２）高分子電解質を、改質されたニッケルチタン合金の表面に固定化する工程の前後どちらに実施してもよい。具体的には、高分子電解質をニッケルチタン合金の表面に固定化した後に、塩化メチル及び臭化エチル等のハロゲン化アルキル化合物又はグリシジル基含有４級アンモニウム塩を含む溶液中に浸漬することで第４級アンモニウム化しても良いし、あらかじめアミノ基を第４級アンモニウム化した高分子電解質を、上記の（２）の工程に用いても良い。
【００５９】
上記の高分子電解質がカチオン性の官能基を含んでいない場合、上記の高分子電解質に対しカチオン性ポリマーを共有結合により固定化することで、上記カチオン性ポリマーを介してアニオン性の抗血栓性化合物をイオン結合で結合させることができる。
【００６０】
特に限定されるものではないが、一例として、高分子電解質としてＰＡＡを用いる場合、ＰＡＡのカルボキシル基とＰＥＩのアミノ基を脱水縮合剤で縮合することで、共有結合を形成することができる。
【００６１】
上記の脱水縮合剤の種類は、特に限定されるものではないが、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、１−エーテル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エーテル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（以下、「ＥＤＣ」）、１，３−ビス（２，２−ジメチルー１，３−ジオキソランー４−イルメチル）カルボジイミド、Ｎ−｛３−（ジメチルアミノ）プロピル−｝−Ｎ’−エチルカルボジイミド、Ｎ−｛３−（ジメチルアミノ）プロピル−｝−Ｎ’−エチルカルボジイミドメチオダイド、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ’−エチルカルボジイミド、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−（２−モルフォィノエチル）カルボジイミド  メソ−ｐ−トルエンスルフォネート、Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルカルボジイミド又はＮ，Ｎ’−ジ−ｐ−トリカルボジイミド等のカルボジイミド系化合物や、４（−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルフォリニウムクロリドｎ水和物（以下、「ＤＭＴ−ＭＭ」）等のトリアジン系化合物が挙げられる。
【００６２】
上記の（３）高分子電解質と対の電荷を有する抗血栓性化合物を固定化する工程としては、例えば、脱水縮合剤を用いて、高分子電解質が有する官能基と抗血栓性化合物が有する官能基を縮合反応させることで共有結合を形成させて固定化する方法や、上記高分子電解質がカチオン性官能基を有する場合、上記高分子電解質が有するカチオン性官能基と抗血栓性化合物が有するアニオン性官能基の間でイオン結合を形成させて固定化する方法が挙げられる。ここで、上記抗血栓性化合物の抗凝固作用や抗血小板作用は共有結合を形成することにより低下するため、イオン結合を形成させて固定化する方法が好ましい。具体的には、上記抗血栓性化合物を含む水溶液に対し、上記高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金を接触させる方法が挙げられるが、特に限定されるものではない。
【００６３】
具体的に、抗血栓性医療材料の表面における、組成物の存在は、飛行時間型２次イオン質量分析法（以下、「ＧＣＩＢ−ＴＯＦ−ＳＩＭＳ」）によって求めることができる。
［測定条件］
装置                      ：ＴＯＦ．ＳＩＭＳ５（ＩＯＮ−ＴＯＦ社製）
１次イオン種              ：Ｂｉ３＋＋
２次イオン極性            ：正又は負
エッチングイオン          ：Ａｒガスクラスターイオン（Ａｒ−ＧＣＩＢ）
質量範囲（ｍ／ｚ）        ：０〜１５００
ラスターサイズ            ：３００μｍ四方
ピクセル数（１辺）        ：１２８ピクセル
後段加速                  ：１０ｋＶ
測定真空度（試料導入前）  ：４×１０−７Ｐａ以下
１次イオン加速電圧        ：３０ｋＶ
パルス幅                  ：５．１ｎｓ
バンチング                ：あり（高質量分解能測定）
帯電中和                  ：なし
【００６４】
超高真空中に配置した抗血栓性医療材料の表面に、パルス化された１次イオンが照射され、抗血栓性医療材料の表面から放出された２次イオンが一定の運動エネルギーを得て飛行時間型の質量分析計へ導かれる。２次イオンの質量に応じて質量スペクトルが得られるため、抗血栓性医療材料の表面に存在する有機物や無機物の同定、そのピーク強度から存在量に関する情報が得られる。また、Ａｒガスクラスターイオンビーム（以下、「ＧＣＩＢ」）を併用することで、深さ方向分析も可能である。
【００６５】
例えば、抗血栓性化合物がヘパリンである場合には、抗血栓性医療材料の表面におけるヘパリンの存在は、負２次イオンの８０ＳＯ３−ピーク、９７ＳＯ４Ｈ−ピーク、７１Ｃ３Ｈ３Ｏ２−ピーク及び８７Ｃ３Ｈ３Ｏ３−ピークからなる群から選択される少なくとも一種類のピークの検出から確認できる。
【００６６】
例えば、高分子電解質にＰＥＩが含まれる場合には、抗血栓性医療材料の表面におけるＰＥＩの存在は、ＧＣＩＢ−ＴＯＦ−ＳＩＭＳにより観測される正２次イオンの１８ＮＨ４＋ピーク、２８ＣＨ２Ｎ＋ピーク、４３ＣＨ３Ｎ２＋ピーク、７０Ｃ４Ｈ８Ｎ＋ピーク、負２次イオンの２６ＣＮ−ピーク及び４２ＣＮＯ−ピークからなる群から選択される少なくとも一種類のピークの検出から確認できる。
【００６７】
例えば、高分子電解質にＰＡＡが含まれる場合には、抗血栓性医療材料の表面におけるＰＡＡの存在は、ＧＣＩＢ−ＴＯＦ−ＳＩＭＳにより観測される負２次イオンの７１Ｃ３Ｈ３Ｏ２−ピークの検出から確認できる。
【００６８】
上記抗血栓性医療材料において、ニッケルチタン合金の表面に多孔層が存在し、孔の内部に高分子電解質が浸潤していることは、オージェ電子分光法（以下、「ＡＥＳ」）を用いた深さ方向分析によって確認することが可能である。ＡＥＳは測定対象の表面における、特定元素の存在比率を「原子数％」で測定できる手法である。
［ＡＥＳ測定条件］
装置            ：ＳＡＭ−６７０型走査型オージェ電子分光装置（アルバック・ファイ株式会社製）
加速電圧        ：１０ｋＶ
試料電流        ：２０ｎＡ
試料傾斜角      ：３０°（試料面法線に対する検出器の傾き）
測定真空度      ：１×１０−５Ｐａ
【００６９】
ＡＥＳでは、上記の抗血栓性医療材料の表面にＸ線を照射し、生じるオージェ電子のエネルギーを測定することで得られる、物質中の束縛電子の結合エネルギー値から、測定対象の表面における、元素の存在比率を得られる。
【００７０】
上記のＡＥＳを用いた深さ方向分析とは、測定対象の表面において、イオンエッチングとＡＥＳ測定を繰り返し実施することで、測定対象の表面を原子レベルで削りながら組成分析を行う手法である。
【００７１】
イオンエッチングに用いるイオン種は特に限定されるものではなく、ＡｒイオンエッチングやＧＣＩＢエッチングが挙げられるが、金属元素をエッチングする際には高いエネルギーが必要であるため、Ａｒイオンエッチングを用いることが好ましい。
［イオンエッチング条件］
イオン種        ：Ａｒ＋
加速電圧        ：２ｋＶ
試料傾斜角      ：３０°（試料面法線に対する検出器の傾き）
エッチングレート：４．４ｎｍ／ｍｉｎ（ＳｉＯ２換算）
【００７２】
測定対象の表面において、上記のＡＥＳを用いた深さ方向分析を行うことで、エッチング深さと特定元素の存在比率の関係をプロットしたデプスプロファイルを作成することが可能である。上記のエッチング深さとは、エッチングレートとエッチング時間の積で算出することが可能であり、例えば４．４ｎｍ／ｍｉｎ（ＳｉＯ２換算）のエッチグレートで５分エッチングした際のエッチング深さは２２ｎｍ（ＳｉＯ２換算）となる。
【００７３】
上記多孔層への高分子電解質の浸潤は、抗血栓性医療材料の表面を深さ方向分析した際の、チタン元素のデプスプロファイルと炭素元素のデプスプロファイルを比較することで確認することが可能である。即ち、チタン元素（主に酸化皮膜中のＴｉＯ２由来）が１０原子数％以上検出されるエッチング深さにおいて炭素元素（主に高分子電解質由来）が７原子数％以上検出されれば、上記エッチング深さまで高分子電解質が浸潤していることが確認できる。上記抗血栓性医療材料は、ＳｉＯ２換算で２０ｎｍエッチング後の表面に７原子数％以上の炭素元素が検出され、以下の式２を満たすことが、実施例で示された。
Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳ  ≧  ７  ・・・式２
［式２中、Ｃｒａｔｉｏ，ＡＥＳは、ＳｉＯ２換算で２０ｎｍアルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する炭素元素の存在比率（原子数％）を表す。］
【００７４】
また、バルクのニッケルチタン合金は酸素元素を含まず、多孔層は孔内の表面を占める酸化皮膜（主にＴｉＯ２）に由来する酸素元素を豊富に含むため、多孔層の厚さは、抗血栓性医療材料の表面を深さ方向分析した際の、酸素元素のデプスプロファイルから見積もることが可能である。即ち、全元素の存在量に対する酸素元素の存在比率（原子数％）が最大値の半分となるエッチング深さから見積もることが可能である。上記抗血栓性医療材料は、アルゴンイオンエッチング深さがＳｉＯ２換算で２０ｎｍ以上の多孔層を有し、以下の式３を満たすことが、実施例で示された。
Ｏｒａｔｉｏ／Ｍａｘ（Ｏｒａｔｉｏ）  ＝  ０．５  ・・・式３
［式３中、Ｏｒａｔｉｏは、アルゴンイオンエッチングした医療材料の表面における、全元素の存在量に対する酸素元素の存在比率（原子数％）を表し、Ｍａｘ（Ｏｒａｔｉｏ）は、Ｏｒａｔｉｏの最大値を表す。］
【００７５】
また、多孔層は酸化皮膜由来のＴｉＯ２を多く含むため、多孔層の厚さは、抗血栓性医療材料の表面を深さ方向分析した際の、ニッケル元素のデプスプロファイルとチタン元素のデプスプロファイルからも見積もることが可能である。即ち、エッチング深さに対するニッケル元素とチタン元素の存在比率（原子数％）の比から見積もることができ、上記比が１以上となるエッチング深さから見積もることが可能である。この測定により、抗血栓性医療材料が、ニッケルチタン合金の表面にＳｉＯ２換算で２０ｎｍ以上の多孔層を有することを示す。
【００７６】
なお、ＡＥＳの測定結果は測定対象の表面の汚染の影響を受けやすいため、測定前の測定対象は有機溶媒や水で十分に洗浄、乾燥させる必要がある。
【００７７】
また、上記抗血栓性医療材料を構成するニッケルチタン合金の表面の多孔層は走査型電子顕微鏡によって直接観察することが可能である。
［測定条件］
装置            ：Ｓ―５５００（株式会社日立ハイテクノロジーズ社製）
加速電圧        ：５．０ｋＶ
観察倍率        ：１００００倍〜１０００００倍
【００７８】
多孔層の表層の孔径は、大きすぎると内部に浸潤した血液が淀んで血栓形成の起点になり、小さすぎると高分子電解質及び抗血栓性化合物をニッケルチタン合金の表面より内側（深部）に浸潤させることが難しくなるため、１ｎｍ〜１μｍであることが好ましく、１０ｎｍ〜２００ｎｍであることがより好ましい。
【００７９】
また、上記抗血栓性医療材料の表面における元素組成は、Ｘ線電子分光法（以下、「ＸＰＳ」）でも検出可能である。ＸＰＳは測定対象の表面における、特定元素の存在比率を「原子数％」で測定できる。原子数％とは、検出される全元素の存在量を１００とした際の、特定元素の存在量を原子数換算で示したものである。
［測定条件］
装置            ：ＰＨＩ５０００  ＶｅｒｓａＰｒｏｂｅ２（Ｕｌｖａｃ−Ｐｈｉ社製）
励起Ｘ線        ：ｍｏｎｏｃｈｒｏｍａｔｉｃＡｌＫα１，２線
（１４８６．６ｅＶ）
Ｘ線径          ：１０μｍ
Ｘ電子脱出角度  ：９０°（抗血栓性医療材料の表面に対する検出器の傾き）
【００８０】
ここでいう抗血栓性医療材料の表面とは、ＸＰＳの測定条件におけるＸ電子脱出角度、すなわち抗血栓性医療材料の表面に対する検出器の傾きを９０°として測定した場合に検出される、測定表面からの深さ約１０ｎｍまでのことを指す。
【００８１】
ＸＰＳでは、上記抗血栓性医療材料の表面にＸ線を照射し、生じる光電子のエネルギーを測定することで得られる、物質中の束縛電子の結合エネルギー値から、抗血栓性医療材料の表面の元素情報が得られ、また各結合エネルギー値のピークのエネルギーシフトから価数や結合状態に関する情報が得られる。さらに、各ピークの面積比を用いて定量、すなわち各元素や価数、結合状態の存在比率を算出することができる。
【００８２】
具体的には、検出される全元素のピーク面積の比をとり、相対感度係数（ＲＳＦ）で補正することで、検出領域に含まれる元素の存在比率を原子数％で得ることができる。例えば、ニッケル元素の存在を示すＮｉ２ｐ３／２ピークは結合エネルギーのピークトップ値が８５３ｅＶ〜８５７ｅＶ付近に、チタン元素の存在を示すＴｉ２ｐピークは結合エネルギーのピークトップ値が４５３ｅＶ〜４６０ｅＶ付近に見られる。
【００８３】
血管内皮細胞の表面は、グリコカリックスと呼ばれる、グリコサミノグリカン及びシアロ糖タンパク質を主成分とする、アニオン性の被膜で保護されていることが知られている。グリコカサリックスの厚さは健常人で１００ｎｍ〜１０００ｎｍ、Ｉ型糖尿病患者で５０ｎｍ〜５００ｎｍであるため、内皮細胞の表面のグリコカサリックスに影響を与えないためには、上記抗血栓性医療材料の表面に露出した高分子電解質は１０ｎｍ未満であることが好ましく、特に高分子電解質がカチオン性ポリマーである場合、グリコカサリックスとの相互作用が強くなるため、５ｎｍ未満であることがより好ましい。
【００８４】
上記抗血栓性医療材料は、多孔層を有するニッケルチタン合金の多孔層に対し、高分子電解質を浸潤させることで抗血栓性医療材料の表面に露出する高分子電解質の量を抑制しているため、光電子の検出角度を４５°に設定してＸＰＳ測定した際に、以下の式１を満たし、抗血栓性医療材料の表面に露出した高分子電解質及び抗血栓性化合物層の厚さが５ｎｍ以下であることが実施例で示された。
Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳ  ＞  ２  ・・・式１
［式１中、Ｔｉｒａｉｔｉｏ，  ＸＰＳは、ＸＰＳで測定した場合における、医療材料の表面の全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率（原子数％）を表す。］
【００８５】
なお、ＸＰＳの測定結果は測定対象の表面の汚染の影響を受けやすいため、測定前の測定対象は有機溶媒や水で十分に洗浄、乾燥させる必要がある。
【００８６】
また、上記の高分子電解質がアニオン性官能基を有する場合、ニッケルチタン合金の表面に固定化された高分子電解質に含まれるアニオン性官能基の量は、カチオン性官能基を有する色素を用いた染色法により定量可能である。
【００８７】
用いられるカチオン性官能基を有する色素の種類は、特に限定されるものではないが、水溶性であることが好ましく、トルイジンブルーｏ、マラカイトグリーン、メチレンブルー、クリスタルバイオレット及びメチルバイオレット等が挙げられる。
【００８８】
カチオン性官能基を有する色素としてトルイジンブルーｏを用いた染色方法を以下に記す。
【００８９】
高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金の表面積１ｃｍ２に対し、１ｍＬのトルイジンブルーｏ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ１０．０の水酸化ナトリウム溶液へトルイジンブルーｏを溶解させて調製）に浸漬し、３７℃で１時間染色する。高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金を染色液から取出し、ｐＨ１０．０の水酸化ナトリウム溶液で３回洗浄後、５０％（ｖ／ｖ）酢酸水溶液で３７℃、３０分処理して、高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金の表面に存在するアニオン性官能基に対し、イオン結合したトルイジンブルーｏを抽出する。抽出液において、６３０ｎｍと７５０ｎｍ（リファレンス）の吸光度を紫外・可視分光光度計（Ｕ−３９００；株式会社日立ハイテクサイエンス製）にて測定し、差分を真の吸光度とする。別に作製した検量線を用い、真の吸光度から高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金へ静電的に吸着していたトルイジンブルーｏ量を定量することが可能である。
【００９０】
また、上記の高分子電解質がカチオン性官能基を有する場合、ニッケルチタン合金の表面に固定化された高分子電解質に含まれるカチオン性官能基の量は、アニオン性官能基を有する色素を用いた染色法により定量可能である。
【００９１】
用いられるアニオン性官能基を有する色素の種類は、特に限定されるものではないが、水溶性であることが好ましく、オレンジＩＩ、メチルオレンジ、メチルレッド、チモールブルー、ダイサルフィンブルー、ルモガリオン、ヒドロキシナフトールブルー及びクマシーブリリアントブルー等が挙げられる。
【００９２】
アニオン性官能基を有する色素としてオレンジＩＩを用いた染色方法を以下に記す。
【００９３】
高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金の表面積１ｃｍ２に対し、１ｍＬのオレンジＩＩ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ４．０の酢酸緩衝液にオレンジＩＩを溶解して調製）に浸漬し、３７℃で１時間染色する。高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金を染色液から取出し、ｐＨ４．０の酢酸緩衝液で１回、蒸留水で２回洗浄後、１ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液で３７℃、３０分処理して、高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金の表面のカチオン性官能基にイオン結合したオレンジＩＩを抽出する。抽出液において、４８２ｎｍと５５０ｎｍ（リファレンス）の吸光度を紫外・可視分光光度計（Ｕ−３９００；株式会社日立ハイテクサイエンス製）にて測定し、差分を真の吸光度とする。別に作製した検量線を用い、真の吸光度から高分子電解質を固定化したニッケルチタン合金へ静電的に吸着していたオレンジＩＩ量を定量することが可能である。
【００９４】
また、上記抗血栓性医療材料の抗血栓性を評価する方法は、具体的な方法の例としては、抗血栓性医療材料の表面の抗ファクターＸａ活性測定が挙げられる。
【００９５】
ここで、抗ファクターＸａ活性とは、プロトロンビンからトロンビンへの変換を促進する第Ｘａ因子の活性をどの程度阻害するかを表す指標であり、例えば、抗血栓性化合物としてヘパリン又はヘパリン誘導体を用いる場合に、抗血栓性の指標として用いることができる。特に限定されるものではないが、抗トロンビンＸａ活性測定には、“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”（積水メディカル株式会社製）を用いることが可能である。
【００９６】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用いた、抗ファクターＸａ活性の具体的な測定方法を次に記す。
【００９７】
上記抗血栓性医療材料（一例として０．５ｃｍ×１．０ｃｍの金属片）を準備し、生理食塩水を用いて３７℃で３０分間洗浄する。洗浄後の金属片を“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”（積水メディカル株式会社製）の操作手順に従って反応させ、４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダ（ＭＴＰ−３００；コロナ電気株式会社製）で測定して、操作手順に従って抗ファクターＸａ活性による表面量を算出した。抗ファクターＸａ活性が低すぎると、上記抗血栓性医療材料におけるヘパリン又はヘパリン誘導体の表面量が少なく、目的の抗血栓性は得られにくくなる。すなわち、抗ファクターＸａ活性は５０ｍＩＵ／ｃｍ２以上であることがより好ましく、７５ｍＩＵ／ｃｍ２以上であることがさらにより好ましい。
【００９８】
上記抗血栓性医療材料の滅菌にエチレンオキシドガス（以下、「ＥＯＧ」）を用いる場合、ＥＯＧ滅菌は抗血栓性医療材料の表面におけるヘパリン活性を低下させるため、ＥＯＧ滅菌前の抗ファクターＸａ活性は１００ｍＩＵ／ｃｍ２以上であることが好ましい。
【実施例】
【００９９】
以下、参考例、実施例及び比較例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【０１００】
（参考例１）
ニッケルチタン合金のワイヤー（φ１ｍｍ）を用いた。ニッケルチタン合金の洗浄工程として、超音波洗浄とピラニア溶液による洗浄を施した。まず、ニッケルチタン合金のワイヤーをヘキサン、アセトン、メタノール、蒸留水（２回）の順で超音波洗浄し、真空乾燥した。続いて、ピラニア溶液に１時間浸漬し、蒸留水で５回超音波洗浄後、真空乾燥した。続いて、８ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液へ浸漬し、６０℃で１時間反応させた。反応後の水溶液を除去し、イオン交換水で洗浄した。このニッケルチタン合金の改質処理により、参考例１である表面に多孔層を有するニッケルチタン合金のワイヤーを得た。【０１０１】
（参考例２）
参考例１のワイヤーを、５．０重量％ＰＥＩ（重量平均分子量７５万、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）の水溶液に浸漬し、３０℃で２時間反応させて参考例１のワイヤーの表面にＰＥＩを吸着させた。反応後の水溶液を除去し、未吸着のＰＥＩを除去する工程として、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（以下、「ＤＰＢＳ」）や蒸留水で洗浄した。このポリマーの固定処理により、参考例２であるニッケルチタン合金に対しＰＥＩを固定したワイヤーを得た。【０１０２】
オレンジＩＩを用い、参考例２のワイヤーの表面に対しカチオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。結果を表１に示す。参考例２のワイヤーへのオレンジＩＩの吸着量は、２３．７ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１０３】
（実施例１）
参考例２のワイヤーについて、以下の抗血栓処理を施して実施例１の抗血栓性医療材料を製造した。【０１０４】
まず、ＰＥＩ中のアミノ基を第４級アンモニウム化する第４級アンモニウム化工程として、参考例２のワイヤーを、臭化エチル（和光純薬工業株式会社製）の１重量％メタノール水溶液に浸漬し、３５℃で１時間反応させた後、５０℃に加温して４時間反応させ、ＰＥＩを第４級アンモニウム化した。反応後の水溶液を除去し、メタノールや蒸留水で複合材料を洗浄した。【０１０５】
続いて、ＰＥＩに対して抗血栓性化合物を固定化する抗血栓性化合物固定化工程として、アミノ基を第４級アンモニウム化した、参考例２のワイヤーを、０．７５重量％ヘパリンナトリウム（Ｏｒｇａｎｏｎ  ＡＰＩ社製）、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムの水溶液（ｐＨ＝４）に浸漬し、７０℃で６時間反応させて、ＰＥＩとヘパリンをイオン結合させた。反応後の水溶液を除去し、蒸留水で洗浄して、実施例１である抗血栓性医療材料を製造した。【０１０６】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、実施例１の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。実施例１の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後のヘパリン担持量は、２４６ｍＩＵ／ｃｍ２であり、抗血栓性を発揮するのに十分なヘパリンを担持していることを確認した。【０１０７】
Ａｒイオンビームでエッチングしながらオージェ電子分光法（ＡＥＳ）測定することで、実施例１の抗血栓性医療材料の深さ方向元素組成を評価した。結果を図１に示す。ＳｉＯ２換算で２０ｎｍエッチング後に検出される炭素元素は２１．７原子数％、酸素元素のデプスプロファイルにおいて半値を示すエッチング深さは、ＳｉＯ２換算で８４ｎｍであった。この場合、上記式２において、Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳは２１．７であり、７を越えた結果となった。また、上記式３を満たすエッチング深さはＳｉＯ２換算で８４ｎｍであり、２０ｎｍ以上となった。【０１０８】
光電子の検出角度を４５°に設定してＸ線光電子分光法（ＸＰＳ）で測定することで、実施例１の抗血栓性医療材料の表面の元素組成を評価した。結果を表３に示す。光電子の検出角度が４５°の場合、抗血栓性医療材料の表面から５ｎｍ程度の元素が検出されるが、実施例１の抗血栓性医療材料において、抗血栓性医療材料の表面から検出される全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率は、３．５原子数％であった。この場合、上記式１において、Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳは３．５であり、２を超えた結果となった。【０１０９】
ヘパリン加ヒト全血中に３７℃で２時間浸漬させて、凝固試験を行った。実施例１の抗血栓性医療材料の表面で血栓形成は全く観察されなかった。【０１１０】
倍率５００００倍で抗血栓性医療材料の表面に対しＳＥＭ観察を行った。結果を図５に示す。実施例１の抗血栓性医療材料の表面は、全体に孔径１００ｎｍ以下の孔、すなわち多孔層が形成されていることが確認された。【０１１１】
（参考例３）
８ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液への浸漬時間を６時間に変えた点を除き、参考例１と同様のニッケルチタン合金の改質処理を行い、参考例３である表面に多孔層を有するニッケルチタン合金のワイヤーを得た。【０１１２】
（参考例４）
参考例１のワイヤーに変えて、参考例３のワイヤーを用いた点を除き、参考例２と同様のポリマーの固定処理を行い、参考例４であるニッケルチタン合金に対しＰＥＩを固定したワイヤーを得た。【０１１３】
オレンジＩＩを用い、参考例４のワイヤーの表面に対しカチオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。結果を表１に示す。参考例４のワイヤーへのオレンジＩＩの吸着量は、１７．５ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１１４】
（実施例２）
参考例２のワイヤーに変えて、参考例４のワイヤーを用いた点を除き、実施例１と同様の抗血栓処理を行い、実施例２である抗血栓性医療材料を得た。【０１１５】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、実施例２の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。実施例２の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後のヘパリン担持量は、１６６ｍＩＵ／ｃｍ２であり、抗血栓性を発揮するのに十分なヘパリンを担持していることを確認した。【０１１６】
ヘパリン加ヒト全血中に３７℃で２時間浸漬させて、凝固試験を行った。実施例２の抗血栓性医療材料の表面で血栓形成は全く観察されなかった。【０１１７】
（参考例５）
８ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液への浸漬時間を２４時間に変えた点を除き、参考例１と同様のニッケルチタン合金の改質処理を行い、参考例５である表面に多孔層を有するニッケルチタン合金のワイヤーを得た。【０１１８】
（参考例６）
参考例１のワイヤーに変えて、参考例５のワイヤーを用いた点を除き、参考例２と同様のポリマーの固定処理を行い、参考例６であるニッケルチタン合金に対しＰＥＩを固定したワイヤーを得た。【０１１９】
オレンジＩＩを用い、参考例６のワイヤーに対しカチオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。結果を表１に示す。参考例６のワイヤーへのオレンジＩＩの吸着量は、１８．８ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１２０】
（実施例３）
参考例２のワイヤーに変えて、参考例６のワイヤーを用いた点を除き、実施例１と同様の抗血栓処理を行い、実施例３である抗血栓性医療材料を得た。【０１２１】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、実施例３の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。実施例３の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後の表面へのヘパリン担持量は、１４１ｍＩＵ／ｃｍ２であり、抗血栓性を発揮するのに十分なヘパリンを担持していることを確認した。【０１２２】
ＡｒイオンビームでエッチングしながらＡＥＳ測定することで、実施例３の抗血栓性医療材料の深さ方向元素組成を評価した。結果を図２に示す。ＳｉＯ２換算で２０ｎｍエッチング後に検出される炭素元素は１７．９原子数％、酸素元素のデプスプロファイルにおいて半値を示すエッチング深さは、ＳｉＯ２換算で１０７ｎｍであった。この場合、上記式２において、Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳは１７．９であり、７を越えた結果となった。また、上記式３を満たすエッチング深さはＳｉＯ２換算で１０７ｎｍであり、２０ｎｍ以上となった。【０１２３】
光電子の検出角度を４５°に設定してＸＰＳで測定することで、実施例３の抗血栓性医療材料の表面の元素組成を評価した。結果を表３に示す。光電子の検出角度が４５°の場合、抗血栓性医療材料の表面から深さ方向に５ｎｍ程度までの元素が検出されるが、実施例３の抗血栓性医療材料において、抗血栓性医療材料の表面から検出される全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率は、２．７原子数％であった。この場合、上記式１において、Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳは２．７であり、２を超えた結果となった。【０１２４】
倍率２５０００倍で抗血栓性医療材料の表面に対しＳＥＭ観察を行った。結果を図６に示す。実施例３の抗血栓性医療材料の表面には、孔径２００ｎｍ前後の孔を有する多孔層が観察された。【０１２５】
（参考例７）
８ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液への浸漬時間を０．５時間に変えた点を除き、参考例１と同様のニッケルチタン合金の改質処理を行い、参考例７である表面に多孔層を有するニッケルチタン合金のワイヤーを得た。【０１２６】
（参考例８）
参考例１のワイヤーに変えて、参考例７のワイヤーを用いた点を除き、参考例２と同様のポリマーの固定処理を行い、参考例８であるニッケルチタン合金に対しＰＥＩを固定したワイヤーを得た。【０１２７】
オレンジＩＩを用い、参考例８のワイヤーに対しカチオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。結果を表１に示す。参考例８のワイヤーへのオレンジＩＩの吸着量は、１２．３ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１２８】
（実施例４）
参考例２のワイヤーに変えて、参考例８のワイヤーを用いた点を除き、実施例３と同様の処理を行い、実施例４である抗血栓性医療材料を得た。【０１２９】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、実施例４の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。実施例４の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後の表面へのヘパリン担持量は、１３７ｍＩＵ／ｃｍ２であり、抗血栓性を発揮するのに十分なヘパリンを担持していることを確認した。【０１３０】
ＡｒイオンビームでエッチングしながらＡＥＳ測定することで、実施例４の抗血栓性医療材料ワイヤーの深さ方向元素組成を評価した。結果を図３に示す。ＳｉＯ２換算で２０ｎｍエッチング後に検出される炭素元素は９．６６原子数％、酸素元素のデプスプロファイルにおいて半値を示すエッチング深さは、ＳｉＯ２換算で７０ｎｍであった。この場合、上記式２において、Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳは９．６６であり、７を越えた結果となった。また、上記式３を満たすエッチング深さはＳｉＯ２換算で７０ｎｍであり、２０ｎｍ以上となった。【０１３１】
光電子の検出角度を４５°に設定してＸＰＳで測定することで、実施例４の抗血栓性医療材料の表面の元素組成を評価した。結果を表３に示す。光電子の検出角度が４５°の場合、表面から深さ方向に５ｎｍ程度までの元素が検出されるが、実施例４の抗血栓性医療材料において、抗血栓性医療材料の表面から検出される全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率は、４．９原子数％であった。この場合、上記式１において、Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳは４．９であり、２を超えた結果となった。【０１３２】
倍率５００００倍で抗血栓性医療材料の表面についてＳＥＭ観察を行った。結果を図７に示す。実施例４の抗血栓性医療材料の表面は全体に孔径が１００ｎｍ以下の孔を有する多孔層が形成されていることが確認された。【０１３３】
（実施例５）
参考例８のワイヤーについて、以下の抗血栓処理を施して実施例５の抗血栓性医療材料を製造した。【０１３４】
まず、ＰＥＩ中のアミノ基を第４級アンモニウム化する第４級アンモニウム化工程として、参考例８のワイヤーを、臭化エチル（和光純薬工業株式会社製）の１重量％メタノール水溶液に浸漬し、３５℃で１時間反応させた後、５０℃に加温して４時間反応させ、ＰＥＩを第４級アンモニウム化した。反応後の水溶液を除去し、メタノールや蒸留水で複合材料を洗浄した。【０１３５】
続いて、ＰＥＩに対して抗血栓性化合物を固定化する抗血栓性化合物固定化工程として、アミノ基を第４級アンモニウム化した、参考例８のワイヤーを、５４国際単位／ｍＬダルテパリンナトリウム（ダルテパリンＮａ静注５０００単位／５ｍＬ「サワイ」、沢井製薬株式会社製）、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムの水溶液（ｐＨ＝４）に浸漬し、７０℃で６時間反応させて、ＰＥＩとヘパリンをイオン結合させた。反応後の水溶液を除去し、蒸留水で洗浄して、実施例５である抗血栓性医療材料を製造した。【０１３６】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、実施例５の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。実施例５の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後の表面へのヘパリン担持量は、１１１ｍＩＵ／ｃｍ２であり、抗血栓性を発揮するのに十分なヘパリンを担持していることを確認した。【０１３７】
（参考例９）
参考例１のワイヤーを、１．０重量％ＰＡＡ（重量平均分子量１万、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）の水溶液に浸漬し、３０℃で２時間反応させ、参考例１のワイヤーの表面にＰＡＡを吸着させた。反応後の水溶液を除去し、未吸着のＰＡＡを除去する工程として、ＤＰＢＳや蒸留水で洗浄した。このポリマーの固定処理により、参考例９であるニッケルチタン合金に対しＰＡＡが固定されたワイヤーを得た。【０１３８】
トルイジンブルーを用い、参考例９のワイヤーの表面に対しアニオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。参考例９のワイヤーに対するトルイジンブルー吸着量は、１３．９ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。ＰＡＡの負電荷を介して、正電荷を有する抗血栓性化合物を担持させることが可能である。また、ＰＡＡに対しヘパリンを共有結合で固定化する、あるいはＰＡＡの末端カルボキシル基をカチオン性官能基へ変換してＰＡＡに対しヘパリンをイオン結合することで高い抗血栓性を付与することもできる。【０１３９】
参考例１、３及び５のワイヤーをヘパリン加ヒト全血中に３７℃で２時間浸漬させて、凝固試験を行った。凝固試験の結果、参考例１、３及び５のワイヤーの全てにおいて、ワイヤーの表面全面に非常に強固な赤色血栓の形成が確認された。【０１４０】
（参考例１０）
ニッケルチタン合金のワイヤー（φ１ｍｍ）を用い、８ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液へ全く浸漬せず、ニッケルチタン合金の改質処理を行わなかった点を除き、参考例１と同様の処理を行い、参考例１０であるニッケルチタン合金のワイヤーを得た。【０１４１】
（比較例１）
参考例１０のニッケルチタン合金のワイヤーに対し、参考例２と同様のポリマーの固定処理を行い、比較例１であるニッケルチタン合金に対しＰＥＩを固定したワイヤーを得た。【０１４２】
オレンジＩＩを用い、比較例１のワイヤーの表面へのカチオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。結果を表１に示す。比較例１のワイヤーへのオレンジＩＩの吸着量は、２．４ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１４３】
（比較例２）
比較例１のワイヤーに対し、実施例１と同様の抗血栓処理を行い、比較例２である抗血栓性医療材料を得た。【０１４４】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、比較例２の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。比較例２の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後のヘパリン担持量は、１２ｍＩＵ／ｃｍ２であり、抗血栓性を発揮するのに十分なヘパリンを担持していないことを確認した。【０１４５】
ＡｒイオンビームでエッチングしながらＡＥＳ測定することで、比較例２の抗血栓性医療材料の深さ方向元素組成を評価した。結果を図４に示す。ＳｉＯ２換算で２０ｎｍエッチング後に検出される炭素元素は４．３原子数％、酸素元素のデプスプロファイルにおいて半値を示すエッチング深さは、ＳｉＯ２換算で５ｎｍであった。この場合、上記式２において、Ｃｒａｔｉｏ，  ＡＥＳは４．３であり、７に満たない結果となった。また、上記式３を満たすエッチング深さはＳｉＯ２換算で５ｎｍであり、２０ｎｍ未満となった。【０１４６】
光電子の検出角度を４５°に設定してＸＰＳで測定することで、比較例２の抗血栓性医療材料の表面の元素組成を評価した。結果を表３に示す。光電子の検出角度が４５°の場合、抗血栓性医療材料の表面から深さ方向に５ｎｍ程度までの元素が検出されるが、比較例２の抗血栓性医療材料において、抗血栓性医療材料の表面から検出される全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率は、３．８原子数％であった。この場合、上記式１において、Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳは３．５であり、２を超えた結果となった。【０１４７】
従って、（１）ニッケルチタン合金の表面を改質する工程を経ずに、高分子電解質をニッケルチタン合金の表面に直接結合させる方法では、十分な抗血栓性を発揮する抗血栓性医療材料を製造することができない。【０１４８】
（比較例３）
ニッケルチタン合金のワイヤー（φ１ｍｍ）を用いた。ニッケルチタン合金の洗浄工程として、超音波洗浄とピラニア溶液による洗浄を施した。まず、ニッケルチタン合金のワイヤーをヘキサン、アセトン、メタノール、蒸留水（２回）の順で超音波洗浄し、真空乾燥した。続いて、ピラニア溶液に１時間浸漬し、蒸留水で５回超音波洗浄後、真空乾燥した。以下の一般式（Ｉ）で示されるスクシニルドーパミン（以下、「ＳＵＤ」）をトリス塩緩衝液へ溶解することで、１ｍＭのＳＵＤ溶液を調製した。浸漬工程として、洗浄後のニッケルチタン合金のワイヤーをＳＵＤ溶液に３７℃で浸漬してニッケルチタン合金の表面に自己組織化単分子膜を形成させ、一晩浸漬後に取出した。その後、水で洗浄後、真空乾燥した。
【化１】
2019065947.tif 000002
【０１４９】
続いて、ＳＵＤに対してカチオン性ポリマーであるＰＥＩを固定化する工程として、ＳＵＤを固定化したニッケルチタン合金のワイヤーを０．５重量％ＤＭＴ−ＭＭ（和光純薬工業株式会社製）、５．０重量％ＰＥＩ（重量平均分子量７５万、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）の水溶液に浸漬し、３０℃で２時間反応させてＳＵＤにＰＥＩを縮合反応により共有結合させた。反応後の水溶液を除去し、未反応のＰＥＩを除去する工程として、ＤＰＢＳや蒸留水で洗浄することで、比較例３であるＰＥＩ固定ニッケルチタン合金のワイヤーを得た。【０１５０】
オレンジＩＩを用い、比較例３のＰＥＩ固定ニッケルチタン合金のワイヤーの表面へのアニオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。結果を表１に示す。比較例３のＰＥＩ固定ニッケルチタン合金のワイヤーのオレンジＩＩの吸着量は、７．６ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１５１】
（比較例４）
比較例３のワイヤーに対し、実施例１と同様の抗血栓処理を行い、国際公開２０１６／１５９２４３号の実施例４に記載のサンプル１７と同様の方法による、比較例４である抗血栓性医療材料を製造した。【０１５２】
“テストチーム（登録商標）  ヘパリンＳ”を用い、抗ファクターＸａ活性を定量することで、比較例４の抗血栓性医療材料のヘパリン担持量を評価した。結果を表２に示す。比較例４の抗血栓性医療材料を生理食塩水に３０分浸漬した後のヘパリン担持量は、７０ｍＩＵ／ｃｍ２であった。【０１５３】
光電子の検出角度を９０°に設定してＸ線光電子分光法（ＸＰＳ）で測定することで、比較例４の抗血栓性医療材料の表面の元素組成を評価した。結果を表３に示す。光電子の検出角度が９０°の場合、抗血栓性医療材料の表面から深さ方向に１０ｎｍ程度までの元素が検出されるが、比較例４の抗血栓性医療材料において、抗血栓性医療材料の表面から検出される全元素の存在量に対するチタン元素の存在比率は、ＸＰＳ検出下限以下であった。この場合、上記式１において、Ｔｉｒａｔｉｏ，  ＸＰＳは検出限界以下であり、２に満たない結果となった。【０１５４】
従って、（１）ニッケルチタン合金の表面を改質する工程を経る代わりに、ニッケルチタン合金の表面に固定したカテコール誘導体を介して高分子電解質を固定させる方法では、ニッケルチタン合金の表面を高分子電解質で完全に被覆しても、必ずしも十分な抗血栓性を発揮する抗血栓性医療材料を製造することができない。また、抗血栓性医療材料の表面に露出する高分子電解質の層が１０ｎｍ以上となるため、内皮細胞上のグリコカリックスに影響を及ぼす。【０１５５】
（比較例５）
参考例１０のワイヤーを、１．０重量％ＰＡＡ（重量平均分子量１万、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）の水溶液に浸漬し、３０℃で２時間反応させ、参考例１０のワイヤーの表面にＰＡＡを吸着させた。反応後の水溶液を除去し、未吸着のＰＡＡを除去する工程として、ＤＰＢＳや蒸留水で洗浄した。このポリマーの固定処理により、比較例５であるニッケルチタン合金に対しＰＡＡが固定されたワイヤーを得た。【０１５６】
トルイジンブルーを用い、比較例５のワイヤーの表面に対しアニオン性官能基を有する色素の吸着量の定量を行った。比較例５のワイヤーへのトルイジンブルー吸着量は、１．０ｎｍｏｌ／ｃｍ２であった。【０１５７】
【表１】
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【０１５８】
【表２】
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【０１５９】
【表３】
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【産業上の利用可能性】
【０１６０】
本発明の抗血栓性医療材料は、ニッケルチタン合金の表面における高分子電解質の露出量を低減させつつ、十分量の抗血栓性化合物で被覆できるため、医療分野において、長期間体内に留置される医療器材（医療機器及び医療器具）に用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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