(57)【要約】  本発明は、エビに対するアレルギーの新規抗原、エビに対するアレルギーの診断方法および診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、当該抗原が除去されたエビまたはエビ加工品、ならびに対象物におけるエビ抗原の有無を判定するためのテスター組成物を提供する。本発明はまた、抗原のエピトープを含むポリペプチド、当該ポリペプチドを含むアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、ならびに、当該ポリペプチドを含む抗原が除去若しくは低減された原料又は加工品に関する。本発明はさらに、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のポリペプチドの少なくとも一つを含む、アレルギーの診断キット。
（Ｅ１）（ｉ）配列番号５５８−５６５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
(ｉｉ)配列番号５５８−５６５において、配列番号５５８の４、５、７、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２）（ｉ）配列番号５６６−５８１、９４９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５６６−５８１、９４９において、配列番号５６６の１、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３）（ｉ）配列番号５８２−５８５、９５０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５８２−５８５、９５０において、配列番号５８２の９、１０、１１、１２、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４）（ｉ）配列番号５８６−５９３、９５１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５８６−５９３、９５１において、配列番号５８６の２、４、５、６、７、１０、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ５）（ｉ）配列番号５９４−５９８、９５２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５９４−５９８、９５２において、配列番号５９４の９、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ６）（ｉ）、配列番号５９９−６１３、９５３、９５４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５９９−６１３、９５３、９５４において、配列番号５９９の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ７）（ｉ）配列番号６１４−６２３、９５５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）、配列番号６１４−６２３、９５５において、配列番号６１４の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ８）（ｉ）配列番号６２４−６３３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６２４−６３３において、配列番号６２４の３、５、６、７、８、１０、１１、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ９）（ｉ）配列番号６３４−６３９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６３４−６３９において、配列番号６３４の４、６、８、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１０）（ｉ）配列番号６４０−６５３、９５６、９５７のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６４０−６５３、９５６、９５７において、配列番号６４０の４、６、８、９、１１、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１１）（ｉ）配列番号６５４−６７０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６５４−６７０において、配列番号６５４の２、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１２）配列番号６７１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１３）（ｉ）配列番号６７２−６７７、９５８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６７２−６７７、９５８において、配列番号６７２の６、７、８、９、１０、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基に相当する任意のアミノ酸残基に置換されていてもよい。
（Ｅ１４）配列番号６７８−６８０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１５）（ｉ）配列番号６８１−６８５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６８１−６８５において、配列番号６８１の１０番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１６）（ｉ）配列番号６８６−６９０、９５９，９６０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６８６−６９０、９５９，９６０において、配列番号６８６の４、５、６、７、９、１０、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１７）（ｉ）配列番号６９１−６９６、９６１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６９１−６９６、９６１において、配列番号６９１の７、１０、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１８）（ｉ）配列番号６９７−７０３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６９７−７０３において、配列番号６９７の１、３、５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１９）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２０）配列番号７０５−７０７のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２１）（ｉ）配列番号７０８−７１６、９６２、９６３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７０８−７１６、９６２、９６３において、配列番号７０８の１、２、４、５、７、８、９、１０、１２、１３、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２２）（ｉ）配列番号７１７−７２４、９６４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７１７−７２４、９６４において、配列番号７１７の２、４、５、６、８、９、１０、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２３）配列番号７２５−７２８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２４）（ｉ）配列番号７２９−７４０、９６５、９６６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７２９−７４０、９６５、９６６において、配列番号７２９の４、５、６、７、８、９、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２５）（ｉ）配列番号７４１−７４９、９６７、９６８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７４１−７４９、９６７、９６８において、配列番号７４１の３、５、６、８、９、１０、１１、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２６）配列番号７５０−７５１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２７）（ｉ）配列番号７５２−７６４、９６９、９７０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７５２−７６４、９６９、９７０において、配列番号７５２の３、４、５、７、８、９、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２８）（ｉ）配列番号７６５−７６９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７６５−７６９において、配列番号７６５の３、５、６番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２９）（ｉ）配列番号７７０−７７７、９７１、９７２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７７０−７７７、９７１、９７２において、配列番号７７０の１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３０）（ｉ）配列番号７７８−７８７、９７３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７７８−７８７、９７３において、配列番号７７８の２、３、４、６、７、８、９、１０、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３１）（ｉ）配列番号７８８−７９２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７８８−７９２において、配列番号７８８の４、７、８、９、１０、１１、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３２）（ｉ）配列番号７９３−８０９、９７４、９７５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７９３−８０９、９７４、９７５において、配列番号７９３の３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３３）（ｉ）配列番号８１０−８１６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８１０−８１６において、配列番号８１０の２、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３４）（ｉ）配列番号８１７−８２５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８１７−８２５において、配列番号８１７の２、４、５、７、８、９、１１、１２、１３，１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３５）（ｉ）配列番号８２６−８３２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８２６−８３２おいて、配列番号８２６の２、３、５、８、９、１０、１１、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３６）（ｉ）配列番号８３３−８４６、９７６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８３３−８４６、９７６において、配列番号８３３の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３７）（ｉ）配列番号８４７−８５７、９７７のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８４７−８５７、９７７において、配列番号８４７の５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３８）（ｉ）配列番号８５８−８６４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８５８−８６４において、配列番号８５８の６、７、８、９、１３、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３９）（ｉ）配列番号８６５−８７８、９８４、９７８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８６５−８７８、９８４、９７８において、配列番号８６５の１、２、４、５、６、８、９、１０、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４０）配列番号８７９−８８０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；；
（Ｅ４１）（ｉ）配列番号８８１−８９１、９７９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８８１−８９１、９７９において、配列番号８８１の２、３、４、６，９、１０、１１、１２、１３、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４２）（ｉ）配列番号８９２−９０７、９８０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８９２−９０７、９８０において、配列番号８９２の１、２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４３）（ｉ）配列番号９０８−９１１、９８１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９０８−９１１、９８１において、配列番号９０８の７番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４４）配列番号９１２−９１４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；；
（Ｅ４５）配列番号９１５−９１６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４６）（ｉ）配列番号９１７−９２７、９８２、９８３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９１７−９２７、９８２、９８３において、配列番号９１７の４、７、８、９、１０、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４７）（ｉ）配列番号９２８−９３４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９２８−９３４において、配列番号９２８の６、７、８、１０、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４８）（ｉ）配列番号９３５−９３８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９３５−９３８において、配列番号９３５の５、６番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４９）（ｉ）配列番号９３９−９４２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９３９−９４２において、配列番号９３９の３、６、７、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ５０）（ｉ）配列番号９４３−９４８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９４３−９４８において、配列番号９４３の１、２、３，４，５、８、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド。 
【請求項２】
アレルギーの診断用組成物であって、請求項１に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む、前記診断用組成物。
【請求項３】
アレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合するポリペプチドであって、請求項１に記載のポリペプチドのいずれか一つである、前記ポリペプチド。
【請求項４】
対象のアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、請求項３に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記方法。
【請求項５】
請求項３に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む医薬組成物。
【請求項６】
アレルギーを治療するための、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
請求項３に記載のポリペプチドの少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター組成物。
【請求項８】
以下のいずれかのプライマー：
（ａ）請求項３に記載のポリペプチドをコードする核酸の塩基配列の一部及び／またはその相補鎖の一部を含むプライマー；または
（ｂ）配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つの一部であるプライマーおよび／または配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つと相補的な配列の一部であるプライマー；
を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター組成物。
【請求項９】
請求項３に記載のポリペプチドの原料・加工品中の有無を判定する方法であって、前記原料・加工品中に請求項３に記載のポリペプチドを検出する、ことを含む、前記方法。
【請求項１０】
抗原が除去若しくは低減されていることを特徴とする原料又は加工品であって、当該抗原は請求項３に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記原料又は加工品。
【請求項１１】
抗原が除去若しくは低減されている加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去若しくは低減されていることを確認するステップを有し、ここで当該抗原は請求項３に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エビに対するアレルギーの新規抗原に関する。本発明はまた、エビに対するアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法に関する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、及び当該抗原が除去又は低減されたエビまたはエビ加工品に関する。本発明はさらに、対象物におけるエビ抗原の有無を判定するためのテスター組成物に関する。【０００２】
本発明はまた、抗原のエピトープを含むポリペプチドに関する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含むアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法に関する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、及び当該ポリペプチドが除去若しくは低減された原料又は加工品に関する。本発明はさらに、当該ポリペプチドが除去若しくは低減された加工品の製造方法に関する。本発明はさらにまた、対象物における当該ポリペプチドを含む抗原の有無を判定するためのテスター組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
アレルギー患者の血清及び組織中では、特定の抗原（以下、アレルゲンともいう）に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。このＩｇＥ抗体と特定の抗原の相互作用により生じた生理学的結果によりアレルギー反応が惹起される。抗原とは、広義にはアレルギー症状を引き起こす食品・食材等を示し、狭義には特異的なＩｇＥ抗体が結合する、食品・食材等に含まれるタンパク質（以下、アレルゲンコンポーネントともいう）をいう。【０００４】
従来のアレルギー検査薬においては、単にアレルゲン候補の食品・食材等をすりつぶして抗原試薬を作成していることが多い（特許文献１）。このため、従来の抗原試薬中に含まれる多数のアレルゲンコンポーネントの中で、ＩｇＥ抗体との結合について陽性反応が判定可能な閾値を超える含有量であった場合にのみ、アレルギー検査における陽性反応を検出することが可能であり、診断効率は十分に高いとはいえない状態であった。【０００５】
アレルゲン候補の食品・食材において、いくつかのアレルゲンコンポーネントが示唆され、検査キットとして商品化もされている。アレルギー検査の信頼度を高めるためには、アレルゲンコンポーネントを網羅的に特定する必要があるところ、上記アレルゲンコンポーネントの測定による患者検出率はまだまだ不十分である。エビの新規アレルゲンを同定することは、診断薬の精度を高めるだけでなく、低アレルゲン食品、低アレルゲン食材や治療薬のターゲットとしても非常に重要である。【０００６】
一方、タンパク質の分離・精製に関しては、近年、少量のサンプルから多様なタンパク質を分離精製する方法として、１次元目に等電点電気泳動を行い、２次元目にＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム―ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を行う２次元電気泳動法が用いられている。出願人らはこれまでに、分離能が高い２次元電気泳動法を開発してきた（特許文献２〜５）。【０００７】
アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体はアレルゲンコンポーネント中の特定のアミノ酸配列であるエピトープを認識して結合する。しかしながら、アレルゲンコンポーネントについてエピトープまで解析されている例は若干数あるものの（非特許文献１）、極めて少ないのが現状である。また、エピトープを含むポリペプチドを利用したアレルギーの診断キットも現時点では市場に存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００２−２８６７１６
【特許文献２】特開２０１１−３３５４４
【特許文献３】特開２０１１−３３５４６
【特許文献４】特開２０１１−３３５４７
【特許文献５】特開２０１１−３３５４８
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Matsuo, H., et al., J. Biol. Chem., (2004), Vol.279, No.13, pp.12135-12140
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、エビに対するアレルギーの新規抗原を提供する。本発明はまた、エビに対するアレルギーの診断方法及び診断キットを提供する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、及び当該抗原が除去又は低減されたエビまたはエビ加工品を提供する。本発明はさらに、対象物におけるエビ抗原の有無を判定するためのテスター組成物を提供する。【００１１】
本発明はまた、抗原のエピトープを含むポリペプチドを提供する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含むアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法を提供する。本発明はまた、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、及び当該ポリペプチドを含む抗原が除去若しくは低減された原料又は加工品を提供する。本発明はさらに、当該抗原が除去若しくは低減された加工品の製造方法に関する。本発明はさらにまた、対象物における当該ポリペプチドを含む抗原の有無を判定するためのテスター組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決するためにエビに対するアレルギーの原因抗原特定について鋭意研究を行った。その結果、エビアレルギーを有する患者の血清中のＩｇＥ抗体が特異的に結合する新規な抗原を特定することに成功した。当該知見に基づいて、本発明は完成された。【００１３】
すなわち、一態様において、本発明は以下のとおりであってよい。【００１４】
［１］  エビアレルギーの診断キットであって、以下の（１）〜（１１）のタンパク質の少なくとも一つ：
（１）（１Ａ）ミオシン ヘビー チェイン タイプ １（myosin heavy chain type 1）のＣ末端部分またはミオシン ヘビー チェイン タイプ ａ（myosin heavy chain type a）のＣ末端部分を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（１Ａ−ａ）〜（１Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１Ａ−ａ）配列番号２、４５または８７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ−ｂ）配列番号２、４５または８７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ−ｃ）配列番号１、４４または８６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ−ｄ）配列番号１、４４または８６で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１Ａ−ｅ）配列番号１、４４または８６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１Ｂ）配列番号２〜４３からなる群、配列番号４５〜８５からなる群、または配列番号８７〜１１５からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２）（２Ａ）ミオシン ヘビーチェイン タイプ １のＮ末端部分またはミオシン ヘビー チェイン タイプ ａのＮ末端部分を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（２Ａ−ａ）〜（２Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２Ａ−ａ）配列番号１１７、１４１または１４６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ−ｂ）配列番号１１７、１４１または１４６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ−ｃ）配列番号１１６、１４０または１４５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ−ｄ）配列番号１１６、１４０または１４５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２Ａ−ｅ）配列番号１１６、１４０または１４５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２Ｂ）配列番号１１７〜１３９からなる群、配列番号１４１〜１４４からなる群、または配列番号１４６〜１５９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３）（３Ａ）ミオシン ヘビー チェイン タイプ ２（myosin heavy chain type 2）のＣ末端部分またはミオシン ヘビーチェイン タイプ ｂ（myosin heavy chain type b）のＣ末端部分を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（３Ａ−ａ）〜（３Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３Ａ−ａ）配列番号１６１、１７９または２３０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ−ｂ）配列番号１６１、１７９または２３０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ−ｃ）配列番号１６０、１７８または２２９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ−ｄ）配列番号１６０、１７８または２２９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３Ａ−ｅ）配列番号１６０、１７８または２２９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３Ｂ）配列番号１６１〜１７７からなる群、配列番号１７９〜２２８からなる群、または配列番号２３０〜２７４からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４）（４Ａ）ミオシン ヘビーチェイン タイプ ２のＮ末端部分またはミオシン ヘビー チェイン タイプ ｂのＮ末端部分を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（４Ａ−ａ）〜（４Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４Ａ−ａ）配列番号２７６、３００または３０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ−ｂ）配列番号２７６、３００または３０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ−ｃ）配列番号２７５、２９９または３０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ−ｄ）配列番号２７５、２９９または３０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４Ａ−ｅ）配列番号２７５、２９９または３０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４Ｂ）配列番号２７６〜２９８からなる群、配列番号３００〜３０４からなる群、または配列番号３０６〜３２０からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５）（５Ａ）グリコーゲン ホスホリラーゼ（glycogen phosphorylase）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（５Ａ−ａ）〜（５Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５Ａ−ａ）配列番号３６２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５Ａ−ｂ）配列番号３６２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５Ａ−ｃ）配列番号３６１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５Ａ−ｄ）配列番号３６１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５Ａ−ｅ）配列番号３６１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５Ｂ）配列番号３２１〜３３６からなる群、配列番号３３７〜３６０からなる群、または配列番号３６２〜３７９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（６）（６Ａ）ヘモシアニン サブユニット Ｌ１（hemocyanin subunit L1）の一部、ヘモシアニン（hemocyanin）またはヘモシアニン サブユニット Ｌ（hemocyanin subunit L）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（６Ａ−ａ）〜（６Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（６Ａ−ａ）配列番号３８１、３９９または４１４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６Ａ−ｂ）配列番号３８１、３９９または４１４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６Ａ−ｃ）配列番号３８０、３９８または４１３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６Ａ−ｄ）配列番号３８０、３９８または４１３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（６Ａ−ｅ）配列番号３８０、３９８または４１３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（６Ｂ）配列番号３８１〜３９７からなる群、配列番号３９９〜４１２からなる群、または配列番号４１４〜４１９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（７）（７Ａ）ピルベート キナーゼ ３（pyruvate kinase 3）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（７Ａ−ａ）〜（７Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（７Ａ−ａ）配列番号４２１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７Ａ−ｂ）配列番号４２１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７Ａ−ｃ）配列番号４２０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７Ａ−ｄ）配列番号４２０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（７Ａ−ｅ）配列番号４２０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（７Ｂ）配列番号４２１〜４３５からなる群、または配列番号４３６〜４４１からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（８）（８Ａ）ホスホピルベート ヒドラターゼ（phosphopyruvate hydratase）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（８Ａ−ａ）〜（８Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（８Ａ−ａ）配列番号４５５または４８１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８Ａ−ｂ）配列番号４５５または４８１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８Ａ−ｃ）配列番号４５４または４８０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８Ａ−ｄ）配列番号４５４または４８０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（８Ａ−ｅ）配列番号４５４または４８０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（８Ｂ）配列番号４４２〜４５３からなる群、配列番号４５５〜４７９からなる群、または配列番号４８１〜４８４からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（９）（９Ａ）ミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファ プレカーサー（mitochondrial ATP synthase subunit alpha precursor）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（９Ａ−ａ）〜（９Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（９Ａ−ａ）配列番号４８６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（９Ａ−ｂ）配列番号４８６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（９Ａ−ｃ）配列番号４８５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（９Ａ−ｄ）配列番号４８５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（９Ａ−ｅ）配列番号４８５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（９Ｂ）配列番号４８６〜４９０からなる群、配列番号４９１〜４９７からなる群、または配列番号４９８〜５１８からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１０）（１０Ａ）トロポニン Ｉ（troponin I）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１０Ａ−ａ）配列番号５２０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０Ａ−ｂ）配列番号５２０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０Ａ−ｃ）配列番号５１９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０Ａ−ｄ）配列番号５１９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１０Ａ−ｅ）配列番号５１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１０Ｂ）配列番号５２０〜５２７からなる群、配列番号５２８〜５３２からなる群、または配列番号５３３〜５３９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１１）（１１Ａ）シクロフィリン Ａ（cyclophilin A）を含むタンパク質またはその変異体であって、エビに対するアレルギーの抗原である、以下の（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１１Ａ−ａ）配列番号５４１または５４９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１Ａ−ｂ）配列番号５４１または５４９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１Ａ−ｃ）配列番号５４０または５４８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１Ａ−ｄ）配列番号５４０または５４８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１１Ａ−ｅ）配列番号５４０または５４８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１１Ｂ）配列番号５４１〜５４７からなる群、配列番号５４９〜５５３からなる群、または配列番号５５４〜５５７からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
を抗原として含む、前記診断キット。【００１５】
［２］  エビアレルギーの診断用組成物であって、上記［１］において（１）〜（１１）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを抗原として含む、前記診断用組成物。【００１６】
［３］  対象のエビアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がエビアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、上記［１］において（１）〜（１１）として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法。【００１７】
［４］  上記［１］において（１）〜（１１）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを含む医薬組成物。【００１８】
［５］  エビアレルギーを治療するための、上記［４］に記載の医薬組成物。【００１９】
［６］  抗原が除去又は低減されていることを特徴とするエビまたはエビ加工品であって、当該抗原は上記［１］において（１）〜（１１）として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記エビまたはエビ加工品。【００２０】
［７］  上記［１］において（１）〜（１１）として特定されるタンパク質の少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物におけるエビ抗原の有無を判定するためのテスター組成物。【００２１】
［８］  配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０、および５４８からなる群より選択される少なくとも一つの塩基配列の一部と相補的な塩基配列を有するプライマーを含むことを特徴とする、対象物におけるエビに対するアレルギーの原因となる抗原の有無を判定するためのテスター組成物。【００２２】
本発明者らはまた、上記抗原を含むエビ由来の抗原についてのエピトープを見出すことにも成功した。【００２３】
エピトープは比較的短いアミノ酸配列を有するものであるため、異なるアレルゲンコンポーネントにも同一のアミノ酸配列が存在すれば、当該ＩｇＥ抗体は、複数のアレルゲンコンポーネントに結合可能である。異なるアレルゲンコンポーネントに共通するエピトープが存在する結果、両者にアレルギー患者のＩｇＥ抗体が結合するため、その抗原は交差性を有する。したがって、本願により特定されたエピトープは、交差性を含めたアレルギーの診断や治療、および当該エピトープを含む複数のアレルゲンコンポーネントの検出等を可能にするものである。【００２４】
当該知見に基づいて、本発明は完成された。すなわち、別の態様において、本発明は以下のとおりであってよい。【００２５】
［態様１］
以下のポリペプチドの少なくとも一つを含む、アレルギーの診断キット。
（Ｅ１）（ｉ）配列番号５５８−５６５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
(ｉｉ)配列番号５５８−５６５において、配列番号５５８の４、５、７、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２）（ｉ）配列番号５６６−５８１、９４９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５６６−５８１、９４９において、配列番号５６６の１、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３）（ｉ）配列番号５８２−５８５、９５０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５８２−５８５、９５０において、配列番号５８２の９、１０、１１、１２、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４）（ｉ）配列番号５８６−５９３、９５１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５８６−５９３、９５１において、配列番号５８６の２、４、５、６、７、１０、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ５）（ｉ）配列番号５９４−５９８、９５２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５９４−５９８、９５２において、配列番号５９４の９、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ６）（ｉ）、配列番号５９９−６１３、９５３、９５４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号５９９−６１３、９５３、９５４において、配列番号５９９の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ７）（ｉ）配列番号６１４−６２３、９５５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）、配列番号６１４−６２３、９５５において、配列番号６１４の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ８）（ｉ）配列番号６２４−６３３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６２４−６３３において、配列番号６２４の３、５、６、７、８、１０、１１、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ９）（ｉ）配列番号６３４−６３９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６３４−６３９において、配列番号６３４の４、６、８、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１０）（ｉ）配列番号６４０−６５３、９５６、９５７のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６４０−６５３、９５６、９５７において、配列番号６４０の４、６、８、９、１１、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１１）（ｉ）配列番号６５４−６７０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６５４−６７０において、配列番号６５４の２、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１２）配列番号６７１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１３）（ｉ）配列番号６７２−６７７、９５８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６７２−６７７、９５８において、配列番号６７２の６、７、８、９、１０、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基に相当する任意のアミノ酸残基に置換されていてもよい。【００２６】
（Ｅ１４）配列番号６７８−６８０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１５）（ｉ）配列番号６８１−６８５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６８１−６８５において、配列番号６８１の１０番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１６）（ｉ）配列番号６８６−６９０、９５９，９６０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６８６−６９０、９５９，９６０において、配列番号６８６の４、５、６、７、９、１０、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１７）（ｉ）配列番号６９１−６９６、９６１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６９１−６９６、９６１において、配列番号６９１の７、１０、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１８）（ｉ）配列番号６９７−７０３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号６９７−７０３において、配列番号６９７の１、３、５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ１９）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２０）配列番号７０５−７０７のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２１）（ｉ）配列番号７０８−７１６、９６２、９６３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７０８−７１６、９６２、９６３において、配列番号７０８の１、２、４、５、７、８、９、１０、１２、１３、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２２）（ｉ）配列番号７１７−７２４、９６４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７１７−７２４、９６４において、配列番号７１７の２、４、５、６、８、９、１０、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２３）配列番号７２５−７２８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２４）（ｉ）配列番号７２９−７４０、９６５、９６６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７２９−７４０、９６５、９６６において、配列番号７２９の４、５、６、７、８、９、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２５）（ｉ）配列番号７４１−７４９、９６７、９６８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７４１−７４９、９６７、９６８において、配列番号７４１の３、５、６、８、９、１０、１１、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２６）配列番号７５０−７５１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２７）（ｉ）配列番号７５２−７６４、９６９、９７０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７５２−７６４、９６９、９７０において、配列番号７５２の３、４、５、７、８、９、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２８）（ｉ）配列番号７６５−７６９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７６５−７６９において、配列番号７６５の３、５、６番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ２９）（ｉ）配列番号７７０−７７７、９７１、９７２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７７０−７７７、９７１、９７２において、配列番号７７０の１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３０）（ｉ）配列番号７７８−７８７、９７３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７７８−７８７、９７３において、配列番号７７８の２、３、４、６、７、８、９、１０、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３１）（ｉ）配列番号７８８−７９２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７８８−７９２において、配列番号７８８の４、７、８、９、１０、１１、１３番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３２）（ｉ）配列番号７９３−８０９、９７４、９７５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号７９３−８０９、９７４、９７５において、配列番号７９３の３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３３）（ｉ）配列番号８１０−８１６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８１０−８１６において、配列番号８１０の２、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３４）（ｉ）配列番号８１７−８２５のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８１７−８２５において、配列番号８１７の２、４、５、７、８、９、１１、１２、１３，１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３５）（ｉ）配列番号８２６−８３２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８２６−８３２おいて、配列番号８２６の２、３、５、８、９、１０、１１、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３６）（ｉ）配列番号８３３−８４６、９７６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８３３−８４６、９７６において、配列番号８３３の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３７）（ｉ）配列番号８４７−８５７、９７７のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８４７−８５７、９７７において、配列番号８４７の５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３８）（ｉ）配列番号８５８−８６４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８５８−８６４において、配列番号８５８の６、７、８、９、１３、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ３９）（ｉ）配列番号８６５−８７８、９８４、９７８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８６５−８７８、９８４、９７８において、配列番号８６５の１、２、４、５、６、８、９、１０、１１、１２番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４０）配列番号８７９−８８０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；；
（Ｅ４１）（ｉ）配列番号８８１−８９１、９７９のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８８１−８９１、９７９において、配列番号８８１の２、３、４、６，９、１０、１１、１２、１３、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４２）（ｉ）配列番号８９２−９０７、９８０のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号８９２−９０７、９８０において、配列番号８９２の１、２、３、４、５、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４３）（ｉ）配列番号９０８−９１１、９８１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９０８−９１１、９８１において、配列番号９０８の７番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４４）配列番号９１２−９１４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；；
（Ｅ４５）配列番号９１５−９１６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４６）（ｉ）配列番号９１７−９２７、９８２、９８３のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９１７−９２７、９８２、９８３において、配列番号９１７の４、７、８、９、１０、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４７）（ｉ）配列番号９２８−９３４のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９２８−９３４において、配列番号９２８の６、７、８、１０、１２、１４番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４８）（ｉ）配列番号９３５−９３８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９３５−９３８において、配列番号９３５の５、６番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ４９）（ｉ）配列番号９３９−９４２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９３９−９４２において、配列番号９３９の３、６、７、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド；
（Ｅ５０）（ｉ）配列番号９４３−９４８のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号９４３−９４８において、配列番号９４３の１、２、３，４，５、８、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されている、アミノ酸配列を含むポリペプチド。 【００２７】
［態様２］
アレルギーの診断用組成物であって、態様１に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む、前記診断用組成物。【００２８】
［態様３］
アレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合するポリペプチドであって、態様１に記載のポリペプチドのいずれか一つである、前記ポリペプチド。【００２９】
［態様４］
対象のアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、態様３に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記方法。【００３０】
［態様５］
態様３に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含む医薬組成物。【００３１】
［態様６］
アレルギーを治療するための、態様５に記載の医薬組成物。【００３２】
［態様７］
態様３に記載のポリペプチドの少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター組成物。【００３３】
［態様８］
以下のいずれかのプライマー：
（ａ）態様３に記載のポリペプチドをコードする核酸の塩基配列の一部及び／またはその相補鎖の一部を含むプライマー；または
（ｂ）配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つの一部であるプライマーおよび／または配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つと相補的な配列の一部であるプライマー；
を含むことを特徴とする、対象物における抗原の有無を判定するためのテスター組成物。【００３４】
［態様９］
態様３に記載のポリペプチドの原料・加工品中の有無を判定する方法であって、前記原料・加工品中に態様３に記載のポリペプチドを検出する、ことを含む、前記方法。【００３５】
［態様１０］
抗原が除去若しくは低減されていることを特徴とする原料又は加工品であって、当該抗原は態様３に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記原料又は加工品。【００３６】
［態様１１］
抗原が除去若しくは低減されている加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去若しくは低減されていることを確認するステップを有し、ここで当該抗原は態様３に記載のポリペプチドの少なくとも一つである、前記製造方法。
【発明の効果】
【００３７】
本発明により、エビに対するアレルギーの新規抗原を提供することができる。本発明においてエビアレルギーを引き起こす新規なアレルゲンコンポーネントが同定されたことから、エビに対するアレルギーの高感度な診断方法及び診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、当該抗原が除去又は低減されたエビまたはエビ加工品、および対象物におけるエビ抗原の有無を判定するためのテスター組成物を提供することができる。【００３８】
また、本発明により、抗原のエピトープを含む新規ポリペプチドを提供することができる。本発明のポリペプチドを利用することにより、アレルギーの高感度な診断キット、診断用組成物、及び診断方法、当該ポリペプチドを含む医薬組成物、対象物における当該ポリペプチドを含む抗原の有無を判定するためのテスター組成物、並びに当該ポリペプチドが除去若しくは低減された原料又は加工品、及びその加工品の製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、バナメイエビに含まれるタンパク質について、２次元電気泳動によるタンパク質の泳動パターンを示すゲルの写真である。写真の左側のバンドは分子量マーカーのバンドであり、写真の左側の数値は各分子量マーカーの分子量（ＫＤａ）である。写真上部の数値は、等電点を表す。
【図２】図２は、バナメイエビに含まれるタンパク質の二次元電気泳動パターンに対して、エビアレルギー患者の血清を用いたイムノブロットの写真である。エビアレルギー患者の血清中のＩｇＥ抗体が特異的に反応したスポット１〜１１を、それぞれ白枠で囲って示した。
【図３】図３は、ブラックタイガーに含まれるタンパク質について、２次元電気泳動によるタンパク質の泳動パターンを示すゲルの写真である。写真の左側のバンドは分子量マーカーのバンドであり、写真の左側の数値は各分子量マーカーの分子量（ＫＤａ）である。写真上部の数値は、等電点を表す。
【図４】図４は、ブラックタイガーに含まれるタンパク質の二次元電気泳動パターンに対して、エビアレルギー患者の血清を用いたイムノブロットの写真である。エビアレルギー患者の血清中のＩｇＥ抗体が特異的に反応したスポット１〜１１を、それぞれ白枠で囲って示した。
【図５】図５は、クルマエビに含まれるタンパク質について、２次元電気泳動によるタンパク質の泳動パターンを示すゲルの写真である。写真の左側のバンドは分子量マーカーのバンドであり、写真の左側の数値は各分子量マーカーの分子量（ＫＤａ）である。写真上部の数値は、等電点を表す。
【図６】図６は、クルマエビに含まれるタンパク質の二次元電気泳動パターンに対して、エビアレルギー患者の血清を用いたイムノブロットの写真である。エビアレルギー患者の血清中のＩｇＥ抗体が特異的に反応したスポット１〜６および８〜１１を、それぞれ白枠で囲って示した。
【図７】図７は、各エピトープのアミノ酸配列を有するペプチドに対して、エビと小麦若しくはカニに対するアレルギーを併発している患者の血清を用いて、ＥＬＩＳＡにより交差反応性を調べた結果である。
【図８】図８は、各エピトープのアミノ酸配列を有するペプチドに対して、エビと小麦若しくはカニに対するアレルギーを併発している患者の血清を用いて、ＥＬＩＳＡにより交差反応性を調べた結果である。
【図９】図９は、各エピトープのアミノ酸配列を有するペプチドに対して、エビと小麦若しくはカニに対するアレルギーを併発している患者の血清を用いて、ＥＬＩＳＡにより交差反応性を調べた結果である。
【図１０】図１０は、各エピトープのアミノ酸配列を有するペプチドに対して、エビと小麦若しくはカニに対するアレルギーを併発している患者の血清を用いて、ＥＬＩＳＡにより交差反応性を調べた結果である。
【図１１】図１１は、各エピトープのアミノ酸配列を有するペプチドに対して、エビと小麦若しくはカニに対するアレルギーを併発している患者の血清を用いて、ＥＬＩＳＡにより交差反応性を調べた結果である。
【図１２】図１２は、各エピトープのアミノ酸配列を有するペプチドに対して、エビと小麦若しくはカニに対するアレルギーを併発している患者の血清を用いて、ＥＬＩＳＡにより交差反応性を調べた結果である。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
以下に本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４１】
本明細書で特段に定義されない限り、本発明に関連して用いられる科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。
【００４２】
本明細書においてアレルギーとは、ある抗原に感作されている生体に、再びその抗原が入った場合に起こる、生体に不都合な過敏反応を示す状態をいう。抗原と接触した場合、あるいは当該抗原を摂取した場合に、アレルギー反応を生じ得る。ここで接触は物体に触れることをいい、特に人体に対しては皮膚、粘膜（眼、口唇等）等に付着することをいう。また、摂取は体内に取り込むことをいい、吸入、経口等の手段で取り込むことをいう。一般的に食物を摂取した場合に生じるアレルギー反応を特に食物アレルギーという。好ましい態様においてアレルギーは食物アレルギーであってもよい。食物におけるアレルギー疾患の多くにおいて、血液および組織で抗原に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。ＩｇＥ抗体は、肥満細胞または好塩基球と結合する。当該ＩｇＥ抗体に特異的な抗原が再びアレルギー疾患患者の体内に入ると、当該抗原は肥満細胞または好塩基球と結合したＩｇＥ抗体と組み合わさり、ＩｇＥ抗体−抗原相互作用の生理学的効果を生ずる。これらの生理学的効果として、ヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、好酸球遊走因子または各種ロイコトリエン等の放出が挙げられる。これらの放出物質は、ＩｇＥ抗体と特定の抗原の組み合わせにより起こるアレルギー反応を惹起する。詳しくはＩｇＥ抗体は、特定の抗原中の特定のアミノ酸配列であるエピトープを認識して結合し、当該抗原によるアレルギー反応は、上記の経路を通じて現れる。
【００４３】
本発明が対象とするアレルギーは、使用するエピトープを含むアレルゲンに対するアレルギーである限り、特に限定されない。一態様として、アレルゲンは、生体（特にヒト）が摂取する、魚介類、フルーツ、野菜、ナッツ類（種実類）、食用草、穀物、畜肉、乳汁、乳製品など、あるいは、生体（特にヒト）に寄生する寄生虫等などが含まれる。
【００４４】
非限定的に、魚介類としては、十脚目（エビ目）に属するエビ、カニ等が含まれる。一般に「甲殻類」として認識されているものは、ほとんど十脚目（エビ目）に含まれる。十脚目（エビ目）には、十脚目短尾下目（別名：カニ下目）、十脚目異尾下目（ヤドカリ下目）が含まれる。十脚目（エビ目）のうち、十脚目短尾下目（別名：カニ下目）、十脚目異尾下目（ヤドカリ下目）以外の全ての総称が「エビ」である。エビについては後述する。非限定的に、十脚目短尾下目（別名：カニ下目）は、クリガニ科（例えば、ケガニ（Erimacrus isenbeckii））、ケセンガニ科（例えば、ズワイガニ（Chionoecetes opilio））、ワタリガニ科（ワタリガニ（Portunus trituberculatus））を含む。非限定的に、十脚目異尾下目（ヤドカリ下目）は、タラバガニ科（例えば、タラバガニ（Paralithodes camtschaticus））を含む。
【００４５】
非限定的に、魚介類はまた、ツツイカ目、タコ目に属するイカ。タコを含む。魚介類はさらに、サバ科、タラ科、に属する魚を含む。魚介類はさらにまた、マルスダレガイ科の貝類を含む。非限定的に、ツツイカ目のイカはスルメイカ（Todarodes pacificus）を含む。スルメイカは「真イカ」とも呼称する。タコ目のタコは、マダコ（Octopus vulgaris）を含む。サバ科の魚は、マグロ（Thunnus orientalis）、マサバ（Scomber japonicas）を含む。タラ科の魚は、マダラ（Gadus macrocephalus）を含む。 マルスダレガイ科の貝は、アサリ、ハマグリ、シジミ等を含む。一態様において、アサリ（Ruditapes philippinarum）を含む。
【００４６】
非限定的に、フルーツとしては、例えば、マタタビ科、パイナップル科、ウルシ科、ウリ科、バショウ科、ミカン科、バラ科に属するフルーツを含む。野菜としては、例えば、ナス科、ウリ科、クスノキ科に属するフルーツを含む。ナッツ類（種実類）としては、例えば、ウルシ科、バラ科、クルミ科に属するナッツ類（種実類）を含む。食用草としては、例えば、キク科に属する食用草を含む。穀物としては、例えば、イネ科、タデ科の属する穀物を含む。
【００４７】
非限定的に、マタタビ科のフルーツはキウイ（Actinidia deliciosa）を含む。パイナップル科のフルーツは、パイナップル（Ananas comosus）を含む。ウルシ科は、マンゴー（Mangifera indica）等のフルーツの他、カシューナッツ（Anacardium occidentale）等のナッツ類（種実類）を含む。ウリ科は、メロン（Cucumis melo）等のフルーツの他に、きゅうり（Cucumis sativus）等の野菜を含む。バショウ科のフルーツは、バナナ（Musa acuminate）を含む。ミカン科のフルーツは、オレンジ（Citrus sinensis）を含む。バラ科は、モモ、イチゴ、リンゴ、ナシ、ビワ等のフルーツの他、アーモンド等のナッツ類（種実類）を含む。一態様において、バラ科は、リンゴ（Malus domestica）、アーモンド（Prunus dulcis）を含む。
【００４８】
非限定的に、ナス科の野菜は、なす（Solanum melongena）、トマト（Solanum lycopersicum）を含む。クスノキ科の野菜は、アボカド（Persea americana）を含む。非限定的に、ナッツ類（種実類）は、ウルシ科のカシューナッツ（Anacardium occidentale）、バラ科のアーモンド（Prunus dulcis）を含む。クルミ科のナッツ類（種実類）は、シナノグルミ（Juglans regia）を含む。
【００４９】
非限定的に、キク科の食用草は、ヨモギ（Artemisia indica var. maximowiczii又はArtemisia indica）を含む。イネ科の穀物は、パンコムギ（Triticum aestivum）を含む。タデ科の穀物は、例えば、タデ科ソバ属のソバ（Fagopyrum esculentum）を含む。
【００５０】
畜肉の種類は特に限定されない。一態様において、鳥類（鶏肉、鴨肉、等）の肉、豚肉、牛肉、羊肉等を含む。一態様において、鳥類の肉である。一態様においてニワトリ（Gallus gallus）の肉である。
【００５１】
乳汁（ミルク）の由来は特に限定されない。一態様においてウシ、ヤギ、ヒツジ等由来の乳汁を含む。一態様において、牛乳（Bos Taurus）である。乳製品は、乳汁の加工品である。非限定的に、バター、生クリーム、チーズ、ヨーグルト、アイスクリームを含む。
【００５２】
寄生虫は、非限定的に、例えば、アニサキス科の寄生虫である。アニサキス科の寄生虫は、アニサキス（Anisakis simplex）を含む。
【００５３】
一態様において、アレルゲンは以下のいずれかである。エビ、ケガニ（Erimacrus isenbeckii）、ズワイガニ（Chionoecetes opilio）、ワタリガニ（Portunus trituberculatus）、タラバガニ（Paralithodes camtschaticus）、スルメイカ（Todarodes pacificus）、マダコ（Octopus vulgaris）、マグロ（Thunnus orientalis）、マサバ（Scomber japonicas）、マダラ（Gadus macrocephalus ）、アサリ（Ruditapes philippinarum）、キウイ（Actinidia deliciosa）、パイナップル（Ananas comosus）、マンゴー（Mangifera indica）、カシューナッツ（Anacardium occidentale）、メロン（Cucumis melo）、バナナ（Musa acuminate）、オレンジ（Citrus sinensis）、リンゴ（Malus domestica）、アーモンド（Prunus dulcis）、なす（Solanum melongena）、トマト（Solanum lycopersicum）、きゅうり（Cucumis sativus）、アボカド（Persea americana）、シナノグルミ（Juglans regia）、ヨモギ（Artemisia indica var. maximowiczii又はArtemisia indica）、パンコムギ（Triticum aestivum）、ソバ（Fagopyrum esculentum）、ニワトリ（Gallus gallus）の肉、牛乳（Bos Taurus）、アニサキス（Anisakis simplex）。
【００５４】
本明細書においてエビとは、エビ上目（Eucarida）に属するエビをいう。十脚目（エビ目）のうち、十脚目短尾下目（別名：カニ下目）、十脚目異尾下目（ヤドカリ下目）以外の全ての種がこれに該当する。エビ上目に属するエビは、例えば、クルマエビ科、イセエビ科、アカザエビ科、サクラエビ科、オキエビ科、タラバエビ科、オキアミ科に属するエビであってもよい。クルマエビ科に属するエビは、例えばバナメイエビ、ブラックタイガー、クルマエビであってもよく、イセエビ科に属するエビは、例えばイセエビ、ウチワエビであってもよく、アカザエビ科に属するエビは、例えばオマールエビ（ロブスター）であってもよい。サクラエビ科に属するエビは、例えばサクラエビであってもよく、オキエビ科に属するエビは、例えば白エビであってもよく、タラバエビ科に属するエビは、例えば甘エビ、ボタンエビ、シマエビであってもよく、オキアミ科に属するエビは、例えばオキアミであってもよい。本発明が対象とするエビは、上記のエビのいずれかであればよい。好ましくは、本発明が対象とするエビはクルマエビ科（family Panaeidae）に属するエビである。
【００５５】
本明細書においてエビに対するアレルギーとは、エビに含まれるタンパク質等を抗原として生じるアレルギー反応を有する状態をいう。エビに対するアレルギーは、エビに含まれる抗原と接触した場合、あるいは当該抗原を摂取した場合に、アレルギー反応を生じ得る。一般的に食物を摂取した場合に生じるアレルギー反応を特に食物アレルギーという。エビに対するアレルギーは食物アレルギーであってもよい。
【００５６】
本明細書において抗原とは、アレルギー反応を惹起させる物質である。食材等の原材料中に含まれるタンパク質である場合は、アレルゲンコンポーネントとも称される。抗原は好ましくはタンパク質である。
【００５７】
本明細書において、タンパク質は、天然のアミノ酸がペプチド結合により連結された構造を有する分子である。タンパク質に含まれるアミノ酸の数は特に限定されない。本明細書において「ポリペプチド」の用語もまた、天然のアミノ酸がペプチド結合により連結された構造を有する分子を意味する。ポリペプチドに含まれるアミノ酸の数は特に限定されない。「ポリペプチド」は、「タンパク質」を含む概念である。また、２〜５０個程度のアミノ酸がペプチド結合により連結されたポリペプチドを、特にペプチドと呼ぶことがある。
【００５８】
アミノ酸に関して光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示す。本明細書で用いるタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのアミノ酸配列の表記法は、標準的用法及び当業界で慣用されている表記法に基づき、アミノ酸の一文字表記で表され、左方向はアミノ末端方向であり、そして右方向はカルボキシ末端方向である。なお、アミノ酸の一文字表記においてＸは、両端のアミノ酸と結合できるアミノ基およびカルボキシル基を有する物質であればいずれでもよく、特に２０種類の天然のアミノ酸のいずれかであってもよいことを表す。
【００５９】
アラニンスキャン法（又は「アラニングリシンスキャン」法）は、タンパク質中の残基を１つ１つアラニン（元のアミノ酸がアラニンの場合はグリシン）に変異させた変異体を作製し、タンパク質の構造や機能にとって重要な残基を部位特異的に同定する方法である。アラニン（元のアミノ酸がアラニンの場合はグリシン）に変異しても患者のＩｇＥ抗体との結合性が残存する場合には、その残基がＩｇＥ抗体との結合性に重要でなく、他のアミノ酸に変更しても結合性は残存する。ＩｇＥ抗体の結合性とは、対象のエピトープとＩｇＥ抗体が結合及び反応が検出されることをいう。本願の配列表において、Ｘで表される残基は、実施例４に示すアラニングリシンスキャンにより、アラニン（元のアミノ酸がアラニンの場合はグリシン）に置換してもアレルギー患者のＩｇＥ抗体への結合性が残存する部位のアミノ酸残基である。このような部位については、他のいずれかのアミノ酸に置換した場合も当該ＩｇＥ抗体への結合性が残存する蓋然性が高いことは、当業者に周知である。即ち、アラニン、グリシンのみでなく、アラニン以外の任意のアミノ酸残基に置換可能である残基である。
【００６０】
ＩｇＥと抗原（エピトープ）の結合・維持がその後のアレルギー反応に重要であるが、この結合・維持は、エピトープの電荷、疎水結合、水素結合、芳香族性相互作用が担っている。アラニン、グリシンに変えることでこれらを失っても結合・維持できるということは、そのアミノ酸は重要ではないことを意味する。
【００６１】
抗原の特定
エビに含まれるタンパク質を下記の条件で２次元電気泳動に供し、エビに対するアレルギーの抗原の特定を行った。
【００６２】
１次元目の電気泳動は、等電点電気泳動用ゲルとして、ゲル長が５〜１０ｃｍの範囲内であって、ゲルのｐＨ範囲が３〜１０であり、泳動方向に対するゲルのｐＨ勾配が、ゲルの全長を１とし、ｐＨ５までのゲル長をａ、ｐＨ５〜７のゲル長をｂ、ｐＨ７以上のゲル長をｃとした場合において、ａが０．１５〜０．３の範囲内、ｂが０．４〜０．７の範囲内、ｃが０．１５〜０．３の範囲内であるゲルを用いて、具体的には、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社（以下、ＧＥ社と省略する）製のＩＰＧゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL)を用いて等電点泳動を行った。電気泳動機器は、ＧＥ社製のIPGphorを用いた。電気泳動機器の電流値の上限をゲル１本当たり７５μＡに設定し、電圧プログラムを、（１）３００Ｖ定電圧で７５０Ｖｈｒまで定電圧工程を行い（当該工程終了前の泳動３０分間の電流変化幅が５μＡであった）、（２）３００Ｖｈｒかけて１０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（３）更に４５００Ｖｈｒかけて５０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（４）その後５０００Ｖ定電圧で総Ｖｈｒが１２０００になるまで、１次元目の等電点電気泳動を行った。
【００６３】
２次元目の電気泳動は、泳動方向基端部のゲル濃度が３〜６％に設定され、泳動方向先端側の部分のゲル濃度が泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定されたポリアクリルアミドゲルを用いて、具体的にはlife technologies社製のNuPAGE 4-12% Bris-Tris Gels IPG well mini 1mmを用いてSDS-PAGEを行った。電気泳動機器は、life technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを用いた。泳動緩衝液として５０ｍＭ  ＭＯＰＳ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、１ｍＭ  ＥＤＴＡを用い、２００Ｖ定電圧で約４５分間泳動を行った。
【００６４】
その結果、エビ（バナメイエビ（リトペナエウス・バナメイ（Litopenaeus vannamei））、ブラックタイガー（ペナエウス・モノドン（Penaeus monodon））およびクルマエビ（マルスペナエウス・ジャポニカス（Marsupenaeus japonicas）））のタンパク質について上記の条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、以下のスポット１〜１１の抗原が、エビに対するアレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合することを明らかにした（図２、４、６）。
【００６５】
抗原
（１）スポット１の抗原
スポット１について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号３〜４３、ブラックタイガーについて配列番号４６〜８５、クルマエビについて配列番号８８〜１１５、のアミノ酸配列が検出された。
【００６６】
また、スポット１について、質量分析装置から得られた質量データを米国バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号３〜４３についてバナメイエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ １のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号２、それをコードする塩基配列：配列番号１）であることが同定され、配列番号４６〜８５についてブラックタイガー由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ １のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号４５、それをコードする塩基配列：配列番号４４）であることが同定され、そして、配列番号８８〜１１５のアミノ酸配列についてクルマエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ａのＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号８７、それをコードする塩基配列：配列番号８６）であることが同定された。
【００６７】
したがって、本願においてスポット１の抗原は、以下（１Ａ−ａ）〜（１Ａ−ｅ）および（１Ｂ）のいずれかであってよい。
（１Ａ−ａ）配列番号２、４５または８７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ−ｂ）配列番号２、４５または８７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ−ｃ）配列番号１、４４または８６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ−ｄ）配列番号１、４４または８６で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ−ｅ）配列番号１、４４または８６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ｂ）配列番号２〜４３からなる群、配列番号４５〜８５からなる群、または配列番号８７〜１１５からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４５、５０種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号２〜５、７〜１３、１６〜２４および２６〜４３からなる群、配列番号４５、４６、４８、４９、５１〜５５、５８〜６６および６８〜８５からなる群、または、配列番号８７〜９０および９２〜１１５からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２〜４３、配列番号４５〜８５および配列番号８７〜１１５のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００６８】
上記（１Ａ−ａ）〜（１Ａ−ｅ）および（１Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量８０〜２６０ｋＤａ、好ましくは分子量９０〜２３０ｋＤａ付近、さらに好ましくは１００〜２００ｋＤａ、および、等電点３．０〜７．０、好ましくは４．０〜６．５、さらに好ましくは５．０〜６．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００６９】
（２）スポット２の抗原
スポット２について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号１１８〜１３９、ブラックタイガーについて配列番号１４２〜１４４、クルマエビについて配列番号１４７〜１５９、のアミノ酸配列が検出された。
【００７０】
また、スポット２について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号１１８〜１３９についてバナメイエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ １のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１１７、それをコードする塩基配列：配列番号１１６）であることが同定され、配列番号１４２〜１４４についてブラックタイガー由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ １のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１４１、それをコードする塩基配列：配列番号１４０）であることが同定され、そして、配列番号１４７〜１５９のアミノ酸配列についてクルマエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ａのＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１４６、それをコードする塩基配列：配列番号１４５）であることが同定された。
【００７１】
したがって、本願においてスポット２の抗原は、以下（２Ａ−ａ）〜（２Ａ−ｅ）および（２Ｂ）のいずれかであってよい。
（２Ａ−ａ）配列番号１１７、１４１または１４６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ−ｂ）配列番号１１７、１４１または１４６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ−ｃ）配列番号１１６、１４０または１４５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ−ｄ）配列番号１１６、１４０または１４５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ−ｅ）配列番号１１６、１４０または１４５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ｂ）配列番号１１７〜１３９からなる群、配列番号１４１〜１４４からなる群、または配列番号１４６〜１５９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号１１７〜１２６、１２８〜１３２、１３６、１３８および１３９からなる群、配列番号１４１〜１４４からなる群、または配列番号１４６〜１５９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１１７〜１３９、配列番号１４１〜１４４および配列番号１４６〜１５９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００７２】
上記（２Ａ−ａ）〜（２Ａ−ｅ）および（２Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０〜１６０ｋＤａ、好ましくは分子量５５〜１５０ｋＤａ付近、さらに好ましくは６０〜１３０ｋＤａ、および、等電点４．５〜１０．０、好ましくは５．０〜９．５、さらに好ましくは５．５〜９．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００７３】
（３）スポット３の抗原
スポット３について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号１６２〜１７７、ブラックタイガーについて配列番号１８０〜２２８、クルマエビについて配列番号２３１〜２７４、のアミノ酸配列が検出された。
【００７４】
また、スポット３について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号１６２〜１７７についてバナメイエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ２のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１６１、それをコードする塩基配列：配列番号１６０）であることが同定され、配列番号１８０〜２２８についてブラックタイガー由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ２のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１７９、それをコードする塩基配列：配列番号１７８）であることが同定され、そして、配列番号２３１〜２７４のアミノ酸配列についてクルマエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ｂのＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号２３０、それをコードする塩基配列：配列番号２２９）であることが同定された。
【００７５】
したがって、本願においてスポット３の抗原は、以下（３Ａ−ａ）〜（３Ａ−ｅ）および（３Ｂ）のいずれかであってよい。
（３Ａ−ａ）配列番号１６１、１７９または２３０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ−ｂ）配列番号１６１、１７９または２３０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ−ｃ）配列番号１６０、１７８または２２９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ−ｄ）配列番号１６０、１７８または２２９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ−ｅ）配列番号１６０、１７８または２２９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ｂ）配列番号１６１〜１７７からなる群、配列番号１７９〜２２８からなる群、または配列番号２３０〜２７４からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号１６１、１６２および１６４〜１７７からなる群、配列番号１７９〜１８１、１８３〜１８６、１８８〜１９０、１９２〜２１２、２１４〜２１６および２１８〜２２８からなる群、配列番号２３０〜２３３、２３５〜２４０、２４２、２４４〜２５８、２６０〜２６２および２６４〜２７４からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１６１〜１７７、配列番号１７９〜２２８および配列番号２３０〜２７４のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００７６】
上記（３Ａ−ａ）〜（３Ａ−ｅ）および（３Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量８０〜２６０ｋＤａ、好ましくは分子量９０〜２３０ｋＤａ付近、さらに好ましくは１００〜２００ｋＤａ、および、等電点３．０〜７．０、好ましくは４．０〜６．５、さらに好ましくは５．０〜６．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００７７】
（４）スポット４の抗原
スポット４について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号２７７〜２９８、ブラックタイガーについて配列番号３０１〜３０４、クルマエビについて配列番号３０７〜３２０、のアミノ酸配列が検出された。
【００７８】
また、スポット４について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号２７７〜２９８についてバナメイエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ２のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号２７６、それをコードする塩基配列：配列番号２７５）であることが同定され、配列番号３０１〜３０４についてブラックタイガー由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ２のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号３００、それをコードする塩基配列：配列番号２９９）であることが同定され、そして、配列番号３０７〜３２０のアミノ酸配列についてクルマエビ由来のミオシン ヘビー チェイン タイプ ｂのＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号３０６、それをコードする塩基配列：配列番号３０５）であることが同定された。
【００７９】
したがって、本願においてスポット４の抗原は、以下（４Ａ−ａ）〜（４Ａ−ｅ）および（４Ｂ）のいずれかであってよい。
（４Ａ−ａ）配列番号２７６、３００または３０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ−ｂ）配列番号２７６、３００または３０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ−ｃ）配列番号２７５、２９９または３０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ−ｄ）配列番号２７５、２９９または３０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ−ｅ）配列番号２７５、２９９または３０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ｂ）配列番号２７６〜２９８からなる群、配列番号３００〜３０４からなる群、または配列番号３０６〜３２０からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号２７６〜２９３および２９５〜２９８かからなる群、配列番号３００〜３０４からなる群、または配列番号３０６、３０７、および３０９〜３１９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２７６〜２９８、配列番号３００〜３０４および配列番号３０６〜３２０のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００８０】
上記（４Ａ−ａ）〜（４Ａ−ｅ）および（４Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０〜１６０ｋＤａ、好ましくは分子量５５〜１５０ｋＤａ付近、さらに好ましくは６０〜１３０ｋＤａ、および、等電点４．５〜１０．０、好ましくは５．０〜９．５、さらに好ましくは５．５〜９．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００８１】
（５）スポット５の抗原
スポット５について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号３２１〜３３６、ブラックタイガーについて配列番号３３７〜３６０、クルマエビについて配列番号３６３〜３７９、のアミノ酸配列が検出された。
【００８２】
また、スポット５について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号３６３〜３７９についてクルマエビ由来のグリコーゲン ホスホリラーゼ（アミノ酸配列：配列番号３６２、それをコードする塩基配列：配列番号３６１）であることが同定された。また、配列番号３２１〜３３６、および配列番号３３７〜３６０についても、クルマエビ由来のグリコーゲン ホスホリラーゼがヒットした。すなわち、バナメイエビおよびブラックタイガーにおいてホモロジーの高いタンパク質が検出されたため、グリコーゲン ホスホリラーゼやそのホモログがエビの抗原であると判断された。
【００８３】
したがって、本願においてスポット５の抗原は、以下（５Ａ−ａ）〜（５Ａ−ｅ）および（５Ｂ）のいずれかであってよい。
（５Ａ−ａ）配列番号３６２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ−ｂ）配列番号３６２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ−ｃ）配列番号３６１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ−ｄ）配列番号３６１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ−ｅ）配列番号３６１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ｂ）配列番号３２１〜３３６からなる群、配列番号３３７〜３６０からなる群、または配列番号３６２〜３７９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号３２２〜３２６、３２９〜３３０および３３２〜３３６からなる群、配列番号３３８〜３４３、３４５、３４７〜３４９および３５２〜３６０からなる群、配列番号３６２〜３６７、３６９、３７１および３７３〜３７９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３２１〜３３６、配列番号３３７〜３６０および配列番号３６２〜３７９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００８４】
上記（５Ａ−ａ）〜（５Ａ−ｅ）および（５Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７０〜１６０ｋＤａ、好ましくは分子量７５〜１４０ｋＤａ付近、さらに好ましくは８０〜１３０ｋＤａ、および、等電点５．０〜９．０、好ましくは５．５〜８．５、さらに好ましくは６．０〜８．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００８５】
（６）スポット６の抗原
スポット６について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号３８２〜３９７、ブラックタイガーについて配列番号４００〜４１２、クルマエビについて配列番号４１５〜４１９、のアミノ酸配列が検出された。
【００８６】
また、スポット６について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号３８２〜３９７についてバナメイエビ由来のヘモシアニン サブユニット Ｌ１の一部（アミノ酸配列：配列番号３８１、それをコードする塩基配列：配列番号３８０）であることが同定され、配列番号４００〜４１２についてブラックタイガー由来のヘモシアニン（アミノ酸配列：配列番号３９９、それをコードする塩基配列：配列番号３９８）であることが同定され、そして、配列番号４１５〜４１９のアミノ酸配列についてクルマエビ由来のヘモシアニン サブユニット Ｌ（アミノ酸配列：配列番号４１４、それをコードする塩基配列：配列番号４１３）であることが同定された。
【００８７】
したがって、本願においてスポット６の抗原は、以下（６Ａ−ａ）〜（６Ａ−ｅ）および（６Ｂ）のいずれかであってよい。
（６Ａ−ａ）配列番号３８１、３９９または４１４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ−ｂ）配列番号３８１、３９９または４１４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ−ｃ）配列番号３８０、３９８または４１３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ−ｄ）配列番号３８０、３９８または４１３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ−ｅ）配列番号３８０、３９８または４１３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ｂ）配列番号３８１〜３９７からなる群、配列番号３９９〜４１２からなる群、または配列番号４１４〜４１９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号３８１〜３８４および３８６〜３９７からなる群、配列番号３９９〜４０２、４０４および４０７〜４１２からなる群、または配列番号４１４〜４１６、４１８および４１９から成る群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３８１〜３９７、配列番号３９９〜４１２および配列番号４１４〜４１９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００８８】
上記（６Ａ−ａ）〜（６Ａ−ｅ）および（６Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０〜１１０ｋＤａ、好ましくは分子量５５〜１００ｋＤａ付近、さらに好ましくは６０〜９０ｋＤａ、および、等電点４．０〜７．０、好ましくは４．５〜６．５、さらに好ましくは５．０〜６．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００８９】
（７）スポット７の抗原
スポット７について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号４２２〜４３５、ブラックタイガーについて配列番号４３６〜４４１、のアミノ酸配列が検出された。
【００９０】
また、スポット７について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号４２２〜４３５についてバナメイエビ由来のピルベート キナーゼ ３（アミノ酸配列：配列番号４２１、それをコードする塩基配列：配列番号４２０）であることが同定された。また、配列番号４３６〜４４１についても、バナメイエビ由来のピルベート キナーゼ ３がヒットした。すなわち、ブラックタイガーにおいてホモロジーの高いタンパク質が検出されたため、ピルベート キナーゼ ３やそのホモログがエビの抗原であると判断された。
【００９１】
したがって、本願においてスポット７の抗原は、以下（７Ａ−ａ）〜（７Ａ−ｅ）および（７Ｂ）のいずれかであってよい。
（７Ａ−ａ）配列番号４２１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ−ｂ）配列番号４２１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ−ｃ）配列番号４２０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ−ｄ）配列番号４２０で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ−ｅ）配列番号４２０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ｂ）配列番号４２１〜４３５からなる群、または配列番号４３６〜４４１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４２１〜４３５および配列番号４３６〜４４１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００９２】
上記（７Ａ−ａ）〜（７Ａ−ｅ）および（７Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量４５〜８０ｋＤａ、好ましくは分子量５０〜７５ｋＤａ付近、さらに好ましくは５５〜７０ｋＤａ、および、等電点４．５〜９．０、好ましくは５．０〜８．５、さらに好ましくは５．５〜８．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００９３】
（８）スポット８の抗原
スポット８について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号４４２〜４５３、ブラックタイガーについて配列番号４５６〜４７９、クルマエビについて配列番号４８２〜４８４、のアミノ酸配列が検出された。
【００９４】
また、スポット８について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号４５６〜４７９についてブラックタイガー由来のホスホピルベート ヒドラターゼ（アミノ酸配列：配列番号４５５、それをコードする塩基配列：配列番号４５４）であることが同定された。また、配列番号４４２〜４５３についても、ブラックタイガー由来のホスホピルベート ヒドラターゼがヒットした。すなわち、バナメイエビにおいてホモロジーの高いタンパク質が検出されたため、ホスホピルベート ヒドラターゼやそのホモログがエビの抗原であると判断された。また、配列番号４８２〜４８４については、クルマエビ由来のホスホピルベート ヒドラターゼ（アミノ酸配列：配列番号４８１、それをコードする塩基配列：配列番号４８０）であることが同定された。
【００９５】
したがって、本願においてスポット８の抗原は、以下（８Ａ−ａ）〜（８Ａ−ｅ）および（８Ｂ）のいずれかであってよい。
（８Ａ−ａ）配列番号４５５または４８１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ−ｂ）配列番号４５５または４８１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ−ｃ）配列番号４５４または４８０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ−ｄ）配列番号４５４または４８０で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ−ｅ）配列番号４５４または４８０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ｂ）配列番号４４２〜４５３からなる群、配列番号４５５〜４７９からなる群、または配列番号４８１〜４８４からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号４４２〜４５０、４５２および４５３からなる群、配列番号４５５〜４５９、４６３〜４６９、４７１〜４７３および４７６〜４７９からなる群、または配列番号４８１〜４８４からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４４２〜４５３、配列番号４５５〜４７９および配列番号４８１〜４８４のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【００９６】
上記（８Ａ−ａ）〜（８Ａ−ｅ）および（８Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３５〜８０ｋＤａ、好ましくは分子量４０〜７５ｋＤａ付近、さらに好ましくは４５〜７０ｋＤａ、および、等電点４．０〜８．０、好ましくは４．５〜７．５、さらに好ましくは５．０〜７．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【００９７】
（９）スポット９の抗原
スポット９について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号４８７〜４９０、ブラックタイガーについて配列番号４９１〜４９７、クルマエビについて配列番号４９８〜５１８、のアミノ酸配列が検出された。
【００９８】
また、スポット９について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号４８７〜４９０についてバナメイエビ由来のミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファ プレカーサー（アミノ酸配列：配列番号４８６、それをコードする塩基配列：配列番号４８５）であることが同定された。また、配列番号４９１〜４９７、配列番号４９８〜５１８についても、バナメイエビ由来のミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファ プレカーサーがヒットした。すなわち、ブラックタイガーおよびクルマエビにおいてホモロジーの高いタンパク質が検出されたため、ミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファ プレカーサーやそのホモログがエビの抗原であると判断された。
【００９９】
したがって、本願においてスポット９の抗原は、以下（９Ａ−ａ）〜（９Ａ−ｅ）および（９Ｂ）のいずれかであってよい。
（９Ａ−ａ）配列番号４８６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９Ａ−ｂ）配列番号４８６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９Ａ−ｃ）配列番号４８５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９Ａ−ｄ）配列番号４８５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９Ａ−ｅ）配列番号４８５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９Ｂ）配列番号４８６〜４９０からなる群、配列番号４９１〜４９７からなる群、または配列番号４９８〜５１８からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号４８６〜４９０からなる群、配列番号４９１〜４９７からなる群、または配列番号４９８〜５０１、５０３〜５０７、５０９および５１２〜５１８からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４８６〜４９０、配列番号４９１〜４９７および配列番号４９８〜５１８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【０１００】
上記（９Ａ−ａ）〜（９Ａ−ｅ）および（９Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量４０〜７０ｋＤａ、好ましくは分子量４５〜６５ｋＤａ付近、さらに好ましくは５０〜６０ｋＤａ、および、等電点５．０〜１０．０、好ましくは５．５〜９．５、さらに好ましくは６．０〜９．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【０１０１】
（１０）スポット１０の抗原
スポット１０について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号５２１〜５２７、ブラックタイガーについて配列番号５２８〜５３２、クルマエビについて配列番号５３３〜５３９、のアミノ酸配列が検出された。
【０１０２】
また、スポット１０について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号５２１〜５２７についてバナメイエビ由来のトロポニン Ｉ（アミノ酸配列：配列番号５２０、それをコードする塩基配列：配列番号５１９）であることが同定された。また、配列番号５２８〜５３２、および配列番号５３３〜５３９についても、バナメイエビ由来のトロポニン Ｉがヒットした。すなわち、ブラックタイガーおよびクルマエビにおいてホモロジーの高いタンパク質が検出されたため、トロポニン Ｉやそのホモログがエビの抗原であると判断された。
【０１０３】
したがって、本願においてスポット１０の抗原は、以下（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）および（１０Ｂ）のいずれかであってよい。
（１０Ａ−ａ）配列番号５２０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｂ）配列番号５２０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｃ）配列番号５１９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｄ）配列番号５１９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ａ−ｅ）配列番号５１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０Ｂ）配列番号５２０〜５２７からなる群、配列番号５２８〜５３２からなる群、または配列番号５３３〜５３９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号５２０〜５２５および５２７からなる群、配列番号５２８〜５３０および５３２からなる群、または配列番号５３３〜５３７および５３９からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５２０〜５２７、配列番号５２８〜５３２および配列番号５３３〜５３９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【０１０４】
上記（１０Ａ−ａ）〜（１０Ａ−ｅ）および（１０Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１０〜５０ｋＤａ、好ましくは分子量１５〜４０ｋＤａ付近、さらに好ましくは２０〜４０ｋＤａ、および、等電点７．０〜１１．０、好ましくは７．５〜１０．５、さらに好ましくは８．０〜１０．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【０１０５】
（１１）スポット１１の抗原
スポット１１について質量分析による配列同定を行った結果、バナメイエビについて配列番号５４２〜５４７、ブラックタイガーについて配列番号５５０〜５５３、クルマエビについて配列番号５５４〜５５７、のアミノ酸配列が検出された。
【０１０６】
また、スポット１１について、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析した。その結果、配列番号５４２〜５４７についてバナメイエビ由来のシクロフィリンＡ（アミノ酸配列：配列番号５４１、それをコードする塩基配列：配列番号５４０）であることが同定された。また、配列番号５５４〜５５７についても、バナメイエビ由来のシクロフィリン Ａがヒットした。すなわち、クルマエビにおいてホモロジーの高いタンパク質が検出されたため、シクロフィリン Ａやそのホモログがエビの抗原であると判断された。また、配列番号５５０〜５５３については、ブラックタイガー由来のシクロフィリン Ａ（アミノ酸配列：配列番号５４９、それをコードする塩基配列：配列番号５４８）であることが同定された。
【０１０７】
したがって、本願においてスポット１１の抗原は、以下（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）および（１１Ｂ）のいずれかであってよい。
（１１Ａ−ａ）配列番号５４１または５４９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｂ）配列番号５４１または５４９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｃ）配列番号５４０または５４８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｄ）配列番号５４０または５４８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ａ−ｅ）配列番号５４０または５４８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１Ｂ）配列番号５４１〜５４７からなる群、配列番号５４９〜５５３からなる群、または配列番号５５４〜５５７からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号５４１〜５４３、５４５および５４６からなる群、配列番号５４９〜５５３からなる群、または配列番号５５４〜５５６からなる群、より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５４１〜５４７、配列番号５４９〜５５３および配列番号５５４〜５５７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
【０１０８】
上記（１１Ａ−ａ）〜（１１Ａ−ｅ）および（１１Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１０〜３０ｋＤａ、好ましくは分子量１３〜２５ｋＤａ付近、さらに好ましくは１５〜２０ｋＤａ、および、等電点７．０〜１１．０、好ましくは７．５〜１０．５、さらに好ましくは８．０〜１０．０、のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。
【０１０９】
上記（１）〜（１１）の抗原であるタンパク質及び後述する（Ｅ１）−（Ｅ５０）のポリペプチドには、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより、当該タンパク質またはポリペプチドのアミノ酸残基が修飾を受けている態様もまた含まれる。
【０１１０】
好ましくは、上記（１）〜（１１）の抗原であるタンパク質及び後述する（Ｅ１）−（Ｅ５０）のポリペプチドは、アレルギーの抗原である。
【０１１１】
本明細書において、アミノ酸配列について「１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加された」という場合は、対象となるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が欠失しているか、他のアミノ酸に置換されているか、他のアミノ酸が挿入されているか、および／または他のアミノ酸が付加されているアミノ酸配列をいう。「数個のアミノ酸」とは、非限定的に、２００個以内、１００個以内、５０個以内、３０個以内、２０個以内、１５個以内、１２個以内、１０個以内、８個以内、６個以内、４個以内、３個以内のアミノ酸を意味する。あるいは、数個のアミノ酸とは、アミノ酸配列の全長に対して３０％、好ましくは２５％、２０％、１５％、１０％、５％、３％、２％または１％のアミノ酸を意味する。
【０１１２】
上記のうち、置換は、好ましくは保存的置換である。保存的置換とは、特定のアミノ酸残基を類似の物理化学的特徴を有する残基で置き換えることであるが、もとの配列の構造に関する特徴を実質的に変化させなければいかなる置換であってもよく、例えば、置換アミノ酸が、もとの配列に存在するらせんを破壊したり、もとの配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊したりしなければいかなる置換であってもよい。以下に、アミノ酸残基の保存的置換について置換可能な残基ごとに分類して例示するが、置換可能なアミノ酸残基は以下に記載されているものに限定されるものではない。
Ａ群：ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン
Ｂ群：アスパラギン酸、グルタミン酸
Ｃ群：アスパラギン、グルタミン
Ｄ群：リジン、アルギニン、
Ｅ群：セリン、スレオニン
Ｆ群：フェニルアラニン、チロシン
【０１１３】
非保存的置換の場合は、上記種類のうち、ある１つのメンバーと他の種類のメンバーとを交換することができる。例えば、不用意な糖鎖修飾を排除するために上記のＢ、Ｄ、Ｅ群のアミノ酸をそれ以外の群のアミノ酸に置換してもよい。または、３次構造でタンパク質中に折りたたまれることを防ぐためにシステインを欠失させるか、他のアミノ酸に置換してもよい。あるいは、親水性／疎水性のバランスが保たれるように、または合成を容易にするために親水度を上げるように、アミノ酸に関する疎水性／親水性の指標であるアミノ酸のハイドロパシー指数（J. Kyte 及びR. Doolittle, J. Mol. Biol., Vol.157, p.105-132, 1982）を考慮して、アミノ酸を置換してもよい。
【０１１４】
別の態様として、元のアミノ酸よりも立体障害の少ないアミノ酸への置換、例えばＦ群からＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ群への置換；電荷を持つアミノ酸から電荷を持たないアミノ酸への置換、例えばＢ群からＣ群への置換、をしてもよい。そうすることで、ＩｇＥ抗体との結合性が向上することがある。
【０１１５】
本明細書において、２つのアミノ酸配列の同一性％は、視覚的検査及び数学的計算によって決定することができる。また、コンピュータープログラムを用いて同一性％を決定することもできる。そのようなコンピュータープログラムとしては、例えば、ＢＬＡＳＴ及びＣｌｕｓｔａｌＷ等があげられる。特に、ＢＬＡＳＴプログラムによる同一性検索の各種条件（パラメーター）は、Altschulら(Nucl. Acids. Res., 25, p.3389-3402, 1997)に記載されたもので、ＮＣＢＩやDNA Data Bank of Japan（ＤＤＢＪ）のウェブサイトから公的に入手することができる（ＢＬＡＳＴマニュアル、Altschulら NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894；Altschulら）。また、遺伝情報処理ソフトウエアGENETYX Ver.7（ゼネティックス）、DNASIS Pro（日立ソフト）、Vector NTI（Infomax）等のプログラムを用いて決定することもできる。
【０１１６】
本明細書において、塩基配列について「１もしくは数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加された」という場合は、対象となる塩基配列において、１個もしくは数個のヌクレオチドが欠失しているか、他のヌクレオチドに置換されているか、他のヌクレオチドが挿入されているか、および／または他のヌクレオチドが付加されている塩基配列をいう。「数個のヌクレオチド」とは、非限定的に、６００個以内、３００個以内、１５０個以内、１００個以内、５０個以内、３０個以内、２０個以内、１５個以内、１２個以内、１０個以内、８個以内、６個以内、４個以内、３個以内のヌクレオチド酸を意味する。あるいは、数個のヌクレオチドとは、塩基配列の全長に対して３０％、好ましくは２５％、２０％、１５％、１０％、５％、３％、２％または１％のヌクレオチドを意味する。上記ヌクレオチドの欠失、置換、挿入もしくは付加により、アミノ酸をコードする配列にフレームシフトを生じないことが好ましい。
【０１１７】
本明細書において、２つの塩基配列の同一性％は、視覚的検査及び数学的計算によって決定することができる。また、コンピュータープログラムを用いて同一性％を決定することもできる。そのような配列比較コンピュータープログラムとしては、例えば、米国国立医学ライブラリーのウェブサイト：https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgiから利用できるBLASTNプログラム(Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10)：バージョン2.2.7、又はWU-BLAST2.0アルゴリズム等があげられる。WU-BLAST2.0についての標準的なデフォルトパラメーターの設定は、以下のインターネットサイト：http://blast.wustl.eduに記載されているものを用いることができる。
【０１１８】
本明細書における「ストリンジェントな条件下」とは、中程度又は高度にストリンジェントな条件においてハイブリダイズすることを意味する。具体的には、中程度にストリンジェントな条件としては、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、一般の技術を有する当業者によって、容易に決定することが可能である。基本的な条件は、Sambrookら，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第３版，第６−７章，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001に示されている。好ましくは、中程度にストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーション条件として、１×ＳＳＣ〜６×ＳＳＣ、４２℃〜５５℃の条件、より好ましくは、１×ＳＳＣ〜３×ＳＳＣ、４５℃〜５０℃の条件、最も好ましくは、２×ＳＳＣ、５０℃の条件があげられる。ハイブリダイゼーション溶液中に、例えば、約５０％のホルムアミドを含む場合には、上記温度よりも５ないし１５℃低い温度を採用する。洗浄条件としては、０．５×ＳＳＣ〜６×ＳＳＣ、４０℃〜６０℃があげられる。ハイブリダイゼーション及び洗浄時には、一般に、０．０５％〜０．２％、好ましくは約０．１％ＳＤＳを加えてもよい。高度にストリンジェントな条件もまた、例えばＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することが可能である。一般に、高度にストリンジェント（ハイストリンジェント）な条件としては、中程度にストリンジェントな条件よりも高い温度及び／又は低い塩濃度でのハイブリダイゼーション及び／又は洗浄を含む。例えば、ハイブリダイゼーション条件として、０．１×ＳＳＣ〜２×ＳＳＣ、５５℃〜６５℃の条件、より好ましくは、０．１×ＳＳＣ〜１×ＳＳＣ、６０℃〜６５℃の条件、最も好ましくは、０．２×ＳＳＣ、６３℃の条件があげられる。洗浄条件として、０．２×ＳＳＣ〜２×ＳＳＣ、５０℃〜６８℃、より好ましくは、０．２×ＳＳＣ、６０〜６５℃が挙げられる。
【０１１９】
抗原は、エビから当業者に周知のタンパク質精製方法を組み合わせて分離・精製することによって得てもよい。または、抗原は、当業者に周知の遺伝子組換え技術により抗原を組換えタンパク質として発現させ、そして当業者に周知のタンパク質精製方法により分離・精製することによって得てもよい。
【０１２０】
タンパク質の精製方法としては、例えば、塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、SDS-PAGEなど分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーやヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーなどの荷電を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。
【０１２１】
遺伝子組換え技術によるタンパク質の調製は、抗原をコードする核酸を含む発現ベクターを調製し、当該発現ベクターを適切な宿主細胞中に遺伝子導入または形質転換により導入し、当該宿主細胞を組換えタンパク質の発現に適する条件下で培養し、そして当該宿主細胞中で発現された組換えタンパク質を回収することにより行う。
【０１２２】
「ベクター」は、それに連結させた核酸を宿主細胞内に導入するために用いることが可能な核酸であり、「発現ベクター」はベクターにより導入された核酸がコードするタンパク質の発現を導くことが可能なベクターである。ベクターには、プラスミドベクター、ウイルスベクター等が含まれる。当業者は、使用する宿主細胞の種類に応じて、組換えタンパク質の発現に適切な発現ベクターを選択することができる。
【０１２３】
「宿主細胞」は、ベクターにより遺伝子導入または形質転換を受ける細胞である。宿主細胞は、使用するベクターに応じて当業者が適切に選択することができる。宿主細胞は、例えば、大腸菌（E. coli）などの原核生物由来であることが可能である。大腸菌のような原核細胞を宿主として使用する場合、本発明の抗原は、原核細胞内での組換えタンパク質の発現を容易にするためにＮ末端メチオニン残基を含むようにしてもよい。このＮ末端メチオニンは、発現後に組換えタンパク質から切り離すこともできる。あるいは、酵母などの単細胞真核生物、植物細胞、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞）などの、真核生物由来の細胞やカイコであることが可能である。
【０１２４】
発現ベクターの宿主細胞への遺伝子導入または形質転換は、当業者に公知の手法により適宜行うことができる。また、当業者は、宿主細胞の種類に応じて組換えタンパク質の発現に適する条件を適宜選択し、宿主細胞を培養することにより組換えタンパク質を発現させることができる。そして、組換えタンパク質を発現した宿主細胞をホモジナイズし、得られたホモジネートから上述したタンパク質の精製方法を適宜組み合わせて行うことにより、組換えタンパク質として発現された抗原を分離・精製することができる。上記発現ベクター若しくは合成した二本鎖ＤＮＡ、またはそれらから転写したmRNAを無細胞タンパク質合成系に導入して発現し、発現されたタンパク質を分離・精製することによっても抗原を調製することができる。
【０１２５】
診断キット・診断方法（１）
本発明は、対象のエビアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がエビアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は上記（１）〜（１１）の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。
【０１２６】
本明細書において「診断」とは、一般的に医師による（確定的な）診断以外に、可能性を含めた単なる「検出」も含む。
【０１２７】
対象から得られた試料とは、対象から採取されたＩｇＥ抗体、が含まれる溶液である。そのような溶液には、例えば、血液、唾液、痰、鼻水、尿、汗、涙が含まれる。対象から得られた試料は、抗原に接触させる前に、試料中のＩｇＥ抗体濃度を高めるための前処理が施されていてもよい。試料の前処理としては、例えば血液から血清、血しょうを得ることが含まれてもよい。またさらに、抗原との結合部分であるＦａｂ部分を精製してもよい。特に好ましい態様において、上記工程（ｉ）は、対象から得られた血清中のＩｇＥ抗体と抗原を接触させることにより行われる。
【０１２８】
ＩｇＥ抗体は、ＩｇＥ抗体そのものであってもよく、ＩｇＥ抗体が結合した肥満細胞等であってもよい。
【０１２９】
対象から得られた試料と抗原との接触およびその結合の検出は、既知の方法により行うことが可能である。そのような方法には、例えば、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorvent Assay）、サンドイッチ免疫測定法、イムノブロット法、免疫沈降法、イムノクロマト法による検出を用いることができる。これらはいずれも、抗原に対象のＩｇＥ抗体を接触させて結合させ、抗原に特異的に結合したＩｇＥ抗体に対して酵素標識した二次抗体を作用させ、酵素の基質（通常は、発色あるいは発光試薬）を加えて酵素反応の生成物を検出することにより、抗原と対象のＩｇＥ抗体の結合を検出する手法である。もしくは、蛍光標識した二次抗体を検出する方法である。あるいは、表面プラズモン共鳴（SPR）等の、抗原とＩｇＥ抗体の結合を評価可能な測定方法による検出を用いることもできる。複数種の抗原特異的ＩｇＥ抗体が混合されていてもよい。
【０１３０】
抗原は、単離された抗原が担体に固定されている状態であってもよい。この場合は上記工程（ｉ）および（ｉｉ）においてＥＬＩＳＡ、サンドイッチ免疫測定法、イムノクロマト法、表面プラズモン共鳴等が利用でき、また、上記工程（ｉ）では、対象から得られた試料を、抗原を固定した面に接触させることにより行う。単離された抗原は、エビから当業者に周知のタンパク質精製方法を組み合わせて分離・精製することによって、または遺伝子組換え技術により調製することによって得てもよい。また、抗体が貼り付けられたものであってもよい。
【０１３１】
抗原は担体に固定されていない状態であってもよい。この場合は、上記工程（ｉ）および（ｉｉ）において、フローサイトメトリー等が利用でき、レーザー光により抗体が結合した抗原の存在を確認できる。例えば、好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）等が挙げられる。また、抗原を試料中の血球にさらに接触させることにより、ヒスタミンを遊離するかどうかを調べるヒスタミン遊離試験（ＨＲＴ）も挙げられる。
【０１３２】
また、抗原は２次元電気泳動により分離した状態から転写してイムノブロット法による検出を行ってもよい。２次元電気泳動は、１次元目に等電点電気泳動、２次元目にＳＤＳ−ＰＡＧＥを行うことで、タンパク質試料を分離する手法である。この場合、２次元電気泳動の条件は、本願発明の抗原が分離できる条件であれば特に限定されない。例えば、上記「抗原の特定」の項目において記載した２次元電気泳動の条件を利用できる。あるいは、上述の特許文献１〜４の記載を参考にして電気泳動の条件を定めることもでき、例えば、以下：
（Ａ）１次元目の等電点電気泳動ゲルとして、ゲル長が５〜１０ｃｍの範囲内であって、ゲルのｐＨ範囲が３〜１０であり、泳動方向に対するゲルのｐＨ勾配が、ｐＨ５までのゲル長をａ、ｐＨ５〜７のゲル長をｂ、ｐＨ７以上のゲル長をｃとした場合において、「ａ＜ｂ］及び「ｂ＞ｃ」の関係を満たす；
（Ｂ）（Ａ）の場合であって、ゲルの全長を１とした場合、ａが０．１５〜０．３の範囲内、ｂが０．４〜０．７の範囲内、ｃが０．１５〜０．３の範囲内である；
（Ｃ）１次元目の等電点電気泳動において、検体を含むゲル１本につき１００Ｖ〜６００Ｖの範囲内の値の定電圧の印加による定電圧工程を行い、泳動３０分あたりの泳動変化幅が５μＡの範囲内となった後に前記定電圧から電圧を上昇させる電圧上昇行程を始める；
（Ｄ）（Ｃ）の場合に、電圧上昇工程の最終電圧を３０００Ｖ〜６０００Ｖの範囲内とする；
（Ｅ）１次元目の等電点電気泳動ゲルの長手方向のゲル長が５〜１０ｃｍであって、２次元目電気泳動ゲルの泳動方向基端部のゲル濃度を３〜６％とする；および
（Ｆ）（Ｅ）の場合に、２次元目電気泳動ゲルの泳動方向先端側の部分のゲル濃度が、泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定する；
からなる群より選択される少なくとも一つを満たす条件で２次元電気泳動を行うことができる。
【０１３３】
上記（１）〜（１１）の抗原は、エビに対するアレルギーの患者のＩｇＥ抗体と特異的に結合する抗原である。したがって、対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がエビに対するアレルギーであることの指標が提供される。
【０１３４】
本発明はまた、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを含むエビに対するアレルギーの診断キットを提供する。本発明の診断キットは、上記のエビに対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法、または下記の診断方法に用いてもよい。本発明の診断キットは、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを含むほか、酵素標識された抗ＩｇＥ抗体および当該酵素の基質となる発色基質または発光基質を含んでいてもよい。また、蛍光標識された抗ＩｇＥ抗体を用いてもよい。本発明の診断キットにおいて、抗原は担体に固定化された状態で提供されてもよい。本発明の診断キットはまた、診断のための手順についての説明書や当該説明を含むパッケージと共に提供されてもよい。
【０１３５】
別の態様において、上記の診断キットは、エビに対するアレルギーについてのコンパニオン診断薬を含む。コンパニオン診断薬とは、医薬品の効果が期待される患者の特定または医薬品の重篤な副作用リスクを有する患者の特定、あるいは医薬品を用いた治療の最適化のために当該医薬品の反応性を検討するために用いるものである。ここで治療の最適化とは、例えば、用法容量の決定や投与中止の判断、どのアレルゲンコンポーネントを使って免疫寛容するかの確認等が含まれる。
【０１３６】
本発明はまた、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを含むエビに対するアレルギーの診断用組成物を提供する。本発明の診断用組成物は、下記の診断方法に用いることができる。本発明の診断用組成物は、必要に応じて本発明の抗原とともに一般的に用いられる、薬学的に許容される担体や添加剤を含んでいてもよい。
【０１３７】
一態様において、本発明は、対象のエビに対するアレルギーを診断する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がエビに対するアレルギーであると判断する；
ことを含み、ここで当該抗原は上記（１）〜（１１）の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。ここにおいて（ｉ）および（ｉｉ）の各工程は、エビに対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法の各工程について説明したとおりに行われる。
【０１３８】
別の態様において、本発明は、対象のエビに対するアレルギーを診断する方法であって、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを対象に投与することを含む、前記方法を提供する。当該方法は、皮膚に抗原を適用することを特徴とする皮膚テストの形式で行ってもよい。皮膚テストには、皮膚上に診断用組成物を適用した後に、出血しない程度に微少な傷をつけることで皮膚に抗原を浸透させて皮膚反応を観察するプリックテスト、診断用組成物を適用した上に皮膚を少し引っ掻いて反応を観察するスクラッチテスト、クリームや軟膏などの形態の診断用組成物を皮膚に適用して反応を観察するパッチテスト、抗原を皮内に投与して反応を観察する皮内テスト、などの形態が含まれる。抗原を適用した部分の皮膚に腫れなどの皮膚反応が生じた場合、その対象はエビに対するアレルギーを有すると診断する。ここで、皮膚に適用する抗原の量は、例えば、１回あたり１００μｇ以下の用量であってよい。
【０１３９】
アレルギーの診断においては、抗原の特定を目的とした負荷試験がしばしば行われている。上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つは、エビに対するアレルギーであることを診断するための負荷試験の有効成分として用いることができる。ここで、負荷試験に用いる抗原タンパク質としては、発現精製したタンパク質であってもよく、例えば、イネにスギ花粉抗原の遺伝子を形質転換し、その抗原タンパク質を米内に発現させた花粉米のように、原料・加工品において発現させたものであってもよい。
【０１４０】
一態様において、上記の診断用組成物、診断キットは、プリックテスト、スクラッチテスト、パッチテスト、皮内テスト等のために使用することが可能である。
【０１４１】
また別の態様において、本発明はエビに対するアレルギーの診断に使用するための上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを提供する。ここで、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを、既知の抗原と混合して提供することも含む。
【０１４２】
さらなる別の態様において、本発明はエビに対するアレルギーの診断用組成物の製造においての上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つの使用を提供する。
【０１４３】
医薬組成物・治療方法（１）
本発明は、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。
【０１４４】
一態様において、上記の医薬組成物は、エビに対するアレルギーを治療するために用いられる。本明細書において、「アレルギーの治療」とは、体内に取り込んでも発症しない抗原の限界量を増やすことであり、最終的には通常の抗原の摂取量では発症しない状態（寛解）を目指すものである。
【０１４５】
本発明はまた、エビに対するアレルギーの治療を必要とする患者に対して、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを投与することを含む、エビに対するアレルギーを治療する方法を提供する。
【０１４６】
別の態様において、本発明はエビに対するアレルギーの治療に使用するための上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つを提供する。さらに別の態様において本発明は、エビに対するアレルギーの治療薬の製造のための上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つの使用を提供する。
【０１４７】
アレルギーの治療においては、患者に抗原を投与することで免疫寛容へと誘導することを目標とした、減感作療法がしばしば行われている。上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つは、エビに対するアレルギーに対する減感作療法のための有効成分として用いることができる。ここで、減感作療法に用いる抗原タンパク質としては、発現精製したタンパク質であってもよく、例えば、イネにスギ花粉抗原の遺伝子を形質転換し、その抗原タンパク質を米内に発現させた花粉米のように、原料・加工品において発現させたものであってもよい。
【０１４８】
本発明の医薬組成物は、通常の投与経路により投与することができる。通常の投与経路には例えば、経口、舌下、経皮、皮内、皮下、血液内、鼻腔内、筋肉内、腹腔内、直腸内の投与が含まれる。
【０１４９】
本発明の医薬組成物は、必要に応じて本発明の抗原と共に、一般的に用いられる薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤、または各種の添加剤（例えば安定剤、溶解補助剤、乳濁化剤、緩衝剤、保存剤、着色剤等）を常法により添加した医薬組成物として用いることができる。医薬組成物の剤型は、投与経路に応じて当業者が適宜選択することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ、舌下錠、注射剤、鼻腔内噴霧剤、パップ剤、液剤、クリーム剤、ローション剤、坐剤等の形態であってよい。本発明の医薬組成物の投与量、投与回数および／または投与期間は、投与経路、症状、年齢や体重などの患者の特性等に応じて医師が適宜選択することができる。例えば、成人の場合、１回あたり１００μｇ以下の用量で投与してもよい。投与間隔は、例えば、毎日、毎週１回、月に２回、又は３ヶ月に１回程度であってよい。投与期間は例えば、数週間から数年であってよい。投与期間内において、投与量を段階的に増加させる投与方法であってもよい。
【０１５０】
テスター組成物（１）
本発明は、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つに対する抗体を含むテスター組成物を提供する。
【０１５１】
当該抗体は、常法により作製することができる。例えば、ウサギなどの哺乳動物を上記（１）〜（１１）の抗原で免疫することにより作製してもよい。当該抗体は、Ｉｇ抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’）であってもよい。
【０１５２】
また、上記のテスター組成物において、当該抗体は担体に結合した形で提供されていてもよい。担体は、抗体と抗原の結合の検出に利用可能な担体であれば特に限定されない。当業者に公知の任意の担体が利用できる。
【０１５３】
抗原含有の有無を調べる方法としては、例えば、以下の方法が挙げられる。
・作製したＩｇ抗体を含むテスター組成物を原料・加工品等から得られた試料に接触させて、例えばＥＬＩＳＡ等を用いて当該Ｉｇ抗体と試料中の抗原との結合を検出し、当該Ｉｇ抗体と抗原との結合が検出された場合に、対象原料・加工品等に当該抗原が含まれると判断する方法。
・ろ紙などに原料・加工品をしみこませ、そこに含まれる抗原を検出するように、抗体溶液を反応させる方法。
【０１５４】
本発明の別の態様において、配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つの一部と相補的な塩基配列を有するプライマーを含むことを特徴とする、対象物におけるエビに対するアレルギーの抗原の有無を判定するためのテスター組成物を含む。非限定的に、上記プライマーは例えば、配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つの配列の一部の３’末端の部分または中央部分の配列の、好ましくは、１２残基、１５塩基、２０塩基、２５塩基と相補的な塩基配列を有する。特にｍＲＮＡを対象とする場合は、ポリＡテールの相補プライマーを有する。好ましい態様において、上記のプライマーを含むテスター組成物は、さらに配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つの配列の５’末端の部分の塩基配列、好ましくは１２塩基、１５塩基、２０塩基、２５塩基からなる塩基配列を含むプライマーを含んでもよい。
【０１５５】
例えば、エビから得られたＤＮＡまたはｍＲＮＡを鋳型として、前記相補的なプライマーを用い、ＲＴ−ＰＣＲ（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）を含むＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）でｃＤＮＡを増幅し、増幅されたｃＤＮＡの配列を配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８と比較することで、抗原の有無を判断する。ＰＣＲで増幅する方法は、ＲＡＣＥ(Rapid Amplification of cDNA End)法等が例示できる。この時、増幅されたｃＤＮＡと配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８との比較において、同じアミノ酸をコードする点変異が存在する場合、または、増幅されたｃＤＮＡの塩基配列において、配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８の塩基配列に対する塩基の挿入、欠失、置換もしくは付加が存在しても、当該ｃＤＮＡコードするアミノ酸配列が配列番号２、４５、８７、１１７、１４１、１４６、１６１、１７９、２３０、２７６、３００、３０６、３６２、３８１、３９９、４１４、４２１、４５５、４８１、４８６、５２０、５４１または５４９のアミノ酸配列に対して同一性が７０％以上、好ましくは８０、９０、９５、９８、９９％以上となる場合は、抗原が存在すると判断する。
【０１５６】
一態様において、上記のテスター組成物は、例えば、食材（エビ）または食品製造ライン中などの対象物中の抗原含有の有無を調べるために用いられる。上記テスター組成物は、製造業者による製造ラインおよび出荷前製品の品質検査用として用いてもよく、喫食者自身による対象原料・加工品の抗原含有の有無のチェック用として用いてもよい。
【０１５７】
抗原の有無の判定方法（１）
本発明は、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つに対する抗体を、原料・加工品（液体を含む）とを接触させることを含む、上記（１）〜（１１）の抗原の対象物質中の有無を判定する方法を含む。
【０１５８】
原料は食材であってもよく、化粧品原料、医薬品原料等であってもよい。加工品は食用加工品であってもよく、化粧品、医薬品等であってもよい。
【０１５９】
当該抗体、抗体の作製方法、抗体と原料・加工品とを接触させる方法、抗体と抗原との結合等については、「テスター組成物（１）」で上述した通りである。
【０１６０】
アレルゲン除去食品等（１）
本発明は、上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つが除去又は低減されていることを特徴とするエビまたはエビ加工品を提供する。
【０１６１】
エビまたはエビ加工品において、本発明の抗原を除去又は低減する方法は限定されない。抗原の除去又は低減は、本発明の抗原が除去又は低減される限り、いかなる方法によって行われてもよい。
【０１６２】
例えば、本発明の抗原が除去又は低減されたエビは、遺伝子改変技術を用いて、本発明の抗原の発現が改変されたエビを調製してもよい。
【０１６３】
遺伝子改変技術は、当業者に公知の手法のいずれかを用いることができる。例えば、 Oishi, et al.（Scientific Reports, Vol.6, Article number: 23980, 2016, doi:10.1038/srep23980）は、ゲノム編集技術であるCRISPER/Cas9をニワトリの始原生殖細胞に適用して、オボムコイド遺伝子欠失個体を得ることを記載している。同様の手法を利用して、本発明の抗原が除去されたエビを得てもよい。
【０１６４】
また、抗原を含有しないまたは含有量の少ないエビとの人工授精による交配により、本発明の抗原が低減されたエビを得てもよい。エビの人工交配は国立研究開発法人水産研究・教育機構 水産工学研究所（「クルマエビ類の成熟・産卵と採卵技術」（奥村卓二・水藤勝喜編）愛知県水産業振興基金、2014）の方法等、常法により行うことができる。
【０１６５】
本発明の抗原が除去又は低減されたエビ加工品は、本発明の抗原が除去又は低減されたエビを原料とした加工品であってもよい。通常のエビを原料とする場合は、エビ加工品の調製前または調製後に本発明の抗原を除去又は低減する処理を行う。通常のエビを原料としたエビ加工品において本発明の抗原を除去又は低減する方法として、高圧処理および中性塩溶液による溶出や、高温スチーム等の、原料・加工品中のタンパク質成分を除去する方法や、熱処理および酸処理による加水分解・変性・アミノ酸変化（側鎖の化学修飾・脱離等）する方法が挙げられる。
【０１６６】
アレルゲン除去加工品の製造方法（１）
本発明は、抗原が除去または低減されているエビまたはエビ加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップを有する、ここで当該抗原は上記（１）〜（１１）の抗原の少なくとも一つである、前記製造方法を提供する。
【０１６７】
抗原が除去または低減されているエビまたはエビ加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップは、上記「テスター（１）」の項目において記載した方法により抗原の含有の有無を確認することにより行ってもよい。
【０１６８】
また、抗原が除去または低減されているエビまたはエビ加工品の製造は、上記「アレルゲン除去食品等」の項目において記載した方法により行ってもよい。
【０１６９】
抗原のエピトープ
実施例１−３に示すとおり特定した抗原ならびにアルギニンキナーゼ（arginine kinase）ついて、実施例４に示すとおり、エピトープおよびそのエピトープ内でアレルギー患者のＩｇＥ抗体との結合性に重要なアミノ酸を特定した。
【０１７０】
本発明は、アレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合するアミノ酸配列を含むポリペプチドとして後述の表３に記載の配列番号５５８−９８４の各アミノ酸配列を含む、または各アミノ酸配列からなる、（Ｅ１）〜（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。（Ｅ１）〜（Ｅ５０）は、各々表３の「由来」に記載したタンパク質に由来するＩｇＥ抗体と結合するアミノ酸配列である（以下、「エピトープ」と呼称する場合がある）。
【０１７１】
ミオシン ヘビー チェイン タイプ １由来：（Ｅ１）−（Ｅ４）、（Ｅ２６）−（Ｅ４３）
ミオシン ヘビー チェイン タイプ ２由来：（Ｅ５）−（Ｅ１１）
グリコーゲン ホスホリラーゼ由来：（Ｅ１２）、（Ｅ１３）
ヘモシアニン サブユニット Ｌ１由来：（Ｅ１４）、（Ｅ１５）、（Ｅ４４）
ピルベート キナーゼ ３由来：（Ｅ１６）、（Ｅ１７）、（Ｅ４５）
ホスホピルベート ヒドラターゼ由来：（Ｅ１８）、（Ｅ４６）、（Ｅ４７）
ミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファ プレカーサー由来：（Ｅ１９）、（Ｅ２０）
トロポニン Ｉ由来：（Ｅ２１）、（Ｅ４８）、（Ｅ４９）
シクロフィリンＡ由来：（Ｅ２２）、（Ｅ２３）、（Ｅ５０）
アルギニンキナーゼ由来：（Ｅ２４）、（Ｅ２５）
【０１７２】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、ペプチドの固相合成など化学合成の手法により調製してもよい。または、エピトープを含むポリペプチドは、当業者に周知の遺伝子組換え技術により組換えポリペプチドとして発現させ、そして当業者に周知のタンパク質生成方法により分離・生成することによって得てもよい。ポリペプチドは、２種以上を組み合わせて連結してもよく、１種のエピトープを繰り返し連結させたものであってもよい。その場合一般に、Ｉｇ抗体との結合性が向上する。
【０１７３】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの長さは特に限定されない。好ましい態様において、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの長さは、５００アミノ酸以下、３００アミノ酸以下、２００アミノ酸以下、１００アミノ酸以下、５０アミノ酸以下、３０アミノ酸以下、２０アミノ酸以下、１５アミノ酸以下、１０アミノ酸以下、または５アミノ酸以下であってもよい。ポリペプチドが１種以上の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を１回または２回以上繰り返し連結させたものである場合、好ましい態様において当該アミノ酸配列部分の長さは、１０００アミノ酸以下、７５０アミノ酸以下、５００アミノ酸以下、２５０アミノ酸以下、１００アミノ酸以下、７５アミノ酸以下、５０アミノ酸以下、３０アミノ酸以下、１５アミノ酸以下、１０アミノ酸以下、または５アミノ酸以下であってもよい。上記ポリペプチドの長さとして好ましい態様に記載のアミノ酸残基の数は、スペーサーの前後の（スペーサを含まない）配列の長さの合計である。
【０１７４】
表３に記載の配列番号５５８−９８４のうち、表３の「共通１５残基配列」に記載の、配列番号５５８，５６６、５８２、５８６、５９４、５９９、６１４、６２４、６３４、６４０、６５４、６７１、６７２、６７８、６８１、６８６、６９１、６９７、７０４、７０５、７０８、７１７、７２５、７２９、７４１、７５０、７５２、７６５、７７０、７７８、７８８、７９３、８１０、８１７、８２６、８３３、８４７、８５８、８６５、８７９、８８１、８９２、９０８、９１２、９１５、９１７、９２８、９３５、９３９及び９４３の５０種類の各配列は、オーバーラッピングに基づくエピトープマッピングにより、（Ｅ１）−（Ｅ５０）の各エピトープにおいてＩｇＥ抗体と結合するエピトープとして同定された共通１５アミノ酸残基配列である。本発明は一態様において、これらのアミノ酸配列を含む、あるいはこれらのアミノ酸配列からなるポリペプチドである。本発明のポリペプチド中に含まれるエピトープ配列は、この共通エピトープ１５アミノ酸残基全体、またはその一部でありうる。エピトープ配列は、４アミノ酸残基以上、５アミノ酸残基以上、６アミノ酸残基以上、７アミノ酸残基以上、８アミノ酸残基以上、９アミノ酸残基以上、１０アミノ酸残基以上、１１アミノ酸残基以上、１２アミノ酸残基以上、１３アミノ酸残基以上、１４アミノ酸残基以上である。
【０１７５】
本明細書の実施例において、例えば、４アミノ酸残基からなるポリペプチド（例えば、配列番号５８７、５９３、５９５、６３６、６５５、６６２、６６３，６７９、７０７、７２６，７２７，７９４、８８０等）が多数において、エピトープの交差反応性が確認された。さらに、５アミノ酸残基、それ以上の場合も多数、エピトープの交差反応性が確認された。よって、少なくとも４アミノ酸残基存在すれば、各種抗原との交差反応性を検出するためのエピトープ配列として有用である。
【０１７６】
よって、配列番号５５８−９８４のうち「共通１５残基配列」、即ち、配列番号５５８，５６６、５８２、５８６、５９４、５９９、６１４、６２４、６３４、６４０、６５４、６７１、６７２、６７８、６８１、６８６、６９１、６９７、７０４、７０５、７０８、７１７、７２５、７２９、７４１、７５０、７５２、７６５、７７０、７７８、７８８、７９３、８１０、８１７、８２６、８３３、８４７、８５８、８６５、８７９、８８１、８９２、９０８、９１２、９１５、９１７、９２８、９３５、９３９及び９４３以外の各アミノ酸配列を含む、あるいはこれらのアミノ酸配列からなるポリペプチドも本発明に含まれる。
【０１７７】
表３において、「好ましい」配列は、「共通１５残基配列」のうちエピトープとして機能し得るより短い部分配列である。「鍵」配列は、「共通１５残基配列」または「鍵」配列のうち、特に重要と思われる配列を示す。「鍵」の配列のうち、「Ｘ」で示されたアミノ酸配列はアラニングリシンスキャンにより任意のアラニン（元のアミノ酸残基がアラニンの場合にはグリシン）に変更してもＩｇＥ抗体への結合性が残存することが確認されたアミノ酸残基である。よって、Ｘは、任意のアミノ酸残基であり、好ましくはアラニン（又はグリシン）である。なお、「鍵」の配列において「Ｘ」で示された配列が含まれないものは、アラニングリシンスキャンでＩｇＥ抗体への結合性が残存することが確認されたアミノ酸残基が見出されなかった場合である。
【０１７８】
（Ｅ１）のエピトープに関し、配列番号５６０、５６２、５６４、５６５において、Ｘと示されているアミノ酸残基は、変化させてもＩｇＥ抗体への結合性が残存することが確認されたアミノ酸残基である。よって、配列番号５５８−５６５において、配列番号５５８の４、５、７、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当する１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されていてもよい。本発明は好ましくは、各「好ましい配列」に対応する「鍵配列」においてＸと示されているアミノ酸残基の１つないし複数のアミノ酸残基が任意のアミノ酸残基に置換されていてもよい。例えば、一態様において、好ましい配列である配列番号５５９において対応する鍵配列は配列番号５６０である。好ましくは、配列番号５５９において、配列番号５６０でＸとなっている２、６、７、８、９番目のアミノ酸残基（配列番号５５８の８、１２、１３、１４、１５番目のアミノ酸残基に相当）が、任意の置換されうるアミノ酸残基である。あるいは、別の一態様において、好ましい配列である配列番号５６３において対応する鍵配列は配列番号５６４である。好ましくは、配列番号５６３において、配列番号５６４でＸとなっている１，２，４，５，７，８番目のアミノ酸残基（配列番号５５８の４、５、７、８、１０、１１番目のアミノ酸残基に相当）が、任意の置換されうるアミノ酸残基である。以下、（Ｅ１）のその他の「好ましい配列、「鍵配列」、（Ｅ２）−（Ｅ５０）において同様である。
【０１７９】
置換されていても良いアミノ酸残基の数は限定されない、好ましくは、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、１個以下である。以下、（Ｅ２）−（Ｅ５０）において同様である。
【０１８０】
（Ｅ１）−（Ｅ５０）のエピトープに関する情報をまとめて表１に示す。
【０１８１】
【表１】
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【０１８２】
表３のグラフＮｏ．１−１１４の右の「合成配列」及び／又は「配列番号」の欄に記載の各配列は、実施例５においてエピトープ交差反応が確認された配列である。「エピトープ交差反応性が確認された」とは、各アレルギー患者の血清のＩｇＥ抗体が、非アレルギー被験者の血清中のＩｇＥ抗体よりもより高い結合性を示した（具体的には、図７−１２において「１」より大きい）ことを意味する。よって、一態様において、本発明のポリペプチドは、これらのアミノ酸配列を含む、または、これらのアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。一態様において、本発明のポリペプチドに対し、各アレルギー患者の血清のＩｇＥ抗体は、、非アレルギー被験者の血清中のＩｇＥ抗体よりも、１．０５倍以上、１．１０倍以上、１．１５倍以上、１．２０倍以上、１．２５倍以上高い結合性を示す。
【０１８３】
本明細書において、「（Ｅ１）〜（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド」は、配列番号５５８−９８４の各アミノ酸配列を含む、または各アミノ酸配列からなるポリペプチド、並びに、上述したようにアミノ酸残基が置換されている態様のいずれをも含む。「配列番号５５８−９８４の各アミノ酸配列を含む」とは、配列番号５５８−９８４の各アミノ酸配列（これらの上記置換された態様も含む）とＩｇＥ抗体との結合（即ち、これらのエピトープとしての機能）に影響を与えない範囲において、その他の任意のアミノ酸配列を含んで良いことを意味する。
【０１８４】
診断キット・診断方法（２）
本発明は、対象のアレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇＥ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つであるポリペプチド、または２以上の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドがスペーサーを介してもしくは介さずに連結されたポリペプチドである、前記方法を提供する。
【０１８５】
以下、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つであるポリペプチド、または２以上の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドがスペーサーを介してもしくは介さずに連結されたポリペプチドを、本明細書において「上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）を含む抗原」と記載する場合がある。スペーサーの種類は特に限定されず、複数のペプチドを連結するのに当業者が通常使用するものを利用できる。スペーサーは例えば、Ａｃｐ（６）-ＯＨなどの炭化水素鎖、アミノ酸鎖等のポリペプチドであってもよい。
【０１８６】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドがスペーサーを介してもしくは介さずに連結される場合、連結されるポリペプチドの数は特に限定されない。一態様において、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、８個以上、１０個以上、１５個以上である。一態様において、３０個以下、２０個以下。１５個以下。１０個以下、８個以下、６個以下、５個以下、３個以下、２個以下である。
【０１８７】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドのうち、同じものが繰り返されるものであっても、別のものが複数連結されたものでもよい。このように複数の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが連結された場合でも、本願発明のポリペプチドとして、本発明の方法、キット、組成物に適用しうる。
【０１８８】
対象から得られた試料は、上記「診断キット・診断方法（１）」の項目において記載したとおりである。
【０１８９】
対象から得られた試料と当該ポリペプチドとの接触およびその結合の検出は、上記「診断キット・診断方法（１）」の項目において記載した既知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorvent Assay）、サンドイッチ免疫測定法、イムノブロット、免疫沈降法、イムノクロマト法等により行うことが可能である。
【０１９０】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、担体に固定されている状態であってもよい。この場合は上記工程（ｉ）および（ｉｉ）においてＥＬＩＳＡ、サンドイッチ免疫測定法、イムノクロマト法、表面プラズモン共鳴等が利用でき、上記工程（ｉ）は、対象から得られた試料を、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを固定した面に接触させることにより行う。また、対象のＩｇＥ抗体が担体に固定されている状態のものを利用し、上記の手法により上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドとの結合を検出してもよい。担体への結合のため若しくは担体とスペースを設けるため、またはポリペプチドに抗体が接触しやすくするため、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端にはスペーサーやビオチン等のタグを付してもよい。ビオチンとの結合の場合、担体にはアビシンを有することが好ましい。
【０１９１】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドは担体に固定されていない状態であってもよい。この場合は、上記工程（ｉ）および（ｉｉ）において、フローサイトメトリー等が利用でき、レーザー光によりＩｇＥ抗体が結合した上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの存在を確認できる。この方法は例えば、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの接触により好塩基球が活性化したときに現れる表面抗原ＣＤ２０３ｃを検出する方法である、好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）が挙げられる。また、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを試料中の血球にさらに接触させることにより、ヒスタミンを遊離するかどうかを調べるヒスタミン遊離試験（ＨＲＴ）も挙げられる。
【０１９２】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、アレルギー患者のＩｇＥ抗体と特異的に結合する抗原である。したがって、対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、交差性まで含めて、対象がアレルギーであることの指標が提供される。上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの合成においては、例えば大腸菌を用いた合成を容易にするため、エピトープの前後に配列を付加し、配列長を長くすることがある。そのような場合も、対象のＩｇＥ抗体と上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列との結合が検出されれば、交差性まで含めて、対象がアレルギーであることの指標が提供される。従って、エピトープである上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列の前後に如何なるものが付加されていてもよい。
【０１９３】
本発明はまた、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを含むアレルギーの診断キットを提供する。本発明の診断キットは、上記のアレルギーを診断するための指標を提供する方法、または下記の診断方法に用いてもよい。本発明の診断キットは、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを含むほか、酵素標識された抗ＩｇＥ抗体および当該酵素の基質となる発色基質または発光基質を含んでいてもよい。また、蛍光標識された抗ＩｇＥ抗体を用いてもよい。本発明の診断キットにおいて、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドは担体に固定化された状態で提供されてもよい。本発明の診断キットはまた、診断のための手順についての説明書や当該説明を含むパッケージと共に提供されてもよい。
【０１９４】
別の態様において、上記の診断キットは、アレルギーについてのコンパニオン診断薬を含む。コンパニオン診断薬とは、医薬品の効果が期待される患者の特定または医薬品の重篤な副作用リスクを有する患者の特定、あるいは医薬品を用いた治療の最適化のために当該医薬品の反応性を検討するために用いるものである。ここで治療の最適化とは、例えば、用法容量の決定や投与中止の判断、どのアレルゲンコンポーネントを使って免疫寛容するかの確認等が含まれる。
【０１９５】
本発明はまた、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを含むアレルギーの診断用組成物を提供する。本発明の診断用組成物は、下記の診断方法に用いることができる。本発明の診断用組成物は、必要に応じて本発明のポリペプチドとともに一般的に用いられる、薬学的に許容される担体や添加剤を含んでいてもよい。
【０１９６】
一態様において、本発明は、対象のアレルギーを診断する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象がアレルギーであると判断する；
ことを含み、ここで当該抗原は上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドして特定されるポリペプチドの少なくとも一つである、前記方法を提供する。ここにおいて（ｉ）および（ｉｉ）の各工程は、アレルギーを診断するための指標を提供する方法の各工程について説明したとおりに行われる。
【０１９７】
別の態様において、本発明は、対象のアレルギーを診断する方法であって、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを対象に投与することを含む、前記方法を提供する。当該方法は、皮膚に上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを適用することを特徴とする皮膚テストの形式で行ってもよい。皮膚テストには、皮膚上に診断用組成物を適用した後に、出血しない程度に微少な傷をつけることで皮膚に上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを浸透させて皮膚反応を観察するプリックテスト、診断用組成物を適用した上に皮膚を少し引っ掻いて反応を観察するスクラッチテスト、クリームや軟膏などの形態の診断用組成物を皮膚に適用して反応を観察するパッチテスト、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを皮内に投与して反応を観察する皮内テスト、などの形態が含まれる。上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを適用した部分の皮膚に腫れなどの皮膚反応が生じた場合、その対象はアレルギーを有すると診断する。ここで、皮膚に適用する上記ポリペプチドの量は、例えば、１回あたり１００μｇ以下の用量であってよい。
【０１９８】
アレルギーの診断においては、抗原の特定と抗原摂取と症状の程度の検証を目的とした経口負荷試験がしばしば行われている。上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つは、アレルギーであることを診断するための経口負荷試験の有効成分として用いることができる。ここで、経口負荷試験に用いるポリペプチドとしては、発現精製したポリペプチドであってもよく、例えば、イネにスギ花粉抗原の遺伝子を形質転換し、そのポリペプチドを米内に発現させた花粉米のように、原料・加工品において発現させたものであってもよい。
【０１９９】
一態様において、上記の診断用組成物、診断キットは、プリックテスト、スクラッチテスト、パッチテスト、皮内テスト等のために使用することが可能である。
【０２００】
また別の態様において、本発明はアレルギーの診断に使用するための上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを提供する。
【０２０１】
さらなる別の態様において、本発明はアレルギーの診断薬の製造においての上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つの使用を提供する。
【０２０２】
本項目において、診断対象となるアレルギーは、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対するアレルギーであってよい。すなわち、アレルギーの検出および診断指標の提供を含むアレルギーの診断は、単一の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対するアレルギーのみならず、交差性を含めたアレルギーを診断するものであり得る。
【０２０３】
医薬組成物・治療方法（２）
本発明は、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。一態様において、上記の医薬組成物は、アレルギーを治療するために用いられる。アレルギーの治療とは、体内に取り込んでも発症しないポリペプチドの限界量を増やすことであり、最終的には通常のポリペプチドの摂取量では発症しない状態（寛解）を目指すものである。
【０２０４】
本発明はまた、アレルギーの治療を必要とする患者に対して、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを投与することを含む、アレルギーを治療する方法を提供する。
【０２０５】
別の態様において、本発明はアレルギーの治療に使用するための上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを提供する。さらに別の態様において本発明は、アレルギーの治療薬の製造のための上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つの使用を提供する。
【０２０６】
アレルギーの治療においては、患者に抗原を投与することで免疫寛容へと誘導することを目標とした、減感作療法がしばしば行われている。上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つは、アレルギーに対する減感作療法のための有効成分として用いることができる。ここで、減感作療法に用いる抗原としては、発現精製したポリペプチドであってもよく、例えば花粉米のように、原料・加工品において発現させたものであってもよい。
【０２０７】
本発明の医薬組成物の投与経路、投与量、投与回数および／または投与期間、医薬組成物に含まれる他の成分、ならびに剤型については、上記「医薬組成物・治療方法（１）」の項目において記載したものとすることができる。上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを用いる場合の用量は、例えば、成人の場合、１回あたり１００μｇ以下の用量であってもよい。
【０２０８】
本項目において、治療対象となるアレルギーは、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対するアレルギーであってよい。すなわち、アレルギーの治療は、単一の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対するアレルギーのみならず、交差性を含めたアレルギーを治療するものであり得る。
【０２０９】
テスター組成物（２）
本発明は、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つに対する抗体を含むテスター組成物を提供する。
【０２１０】
当該抗体は、常法により作製することができる。例えば、ウサギなどの哺乳動物を、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドで免疫することにより作製してもよい。当該抗体は、Ｉｇ抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’）であってもよい。
【０２１１】
また、上記のテスター組成物において、当該抗体は担体に結合した形で提供されていてもよい。担体は、抗体と上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの結合の検出に利用可能な担体であれば特に限定されない。当業者に公知の任意の担体が利用できる。また、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対する抗体が、上記「抗原のエピトープ」の項目に記載されたエピトープおよび重要なアミノ酸が同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対する抗体であることが好ましい。それにより、交差性を含めて検出できるテスター組成物とすることができる。
【０２１２】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド含有の有無を調べる方法としては、例えば、以下の方法が挙げられる。
【０２１３】
・作製した抗体を含むテスター組成物を原料・加工品等から得られた試料に接触させて、例えばＥＬＩＳＡ等を用いて当該抗体と試料中の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）を含むのアミノ酸配列を含むポリペプチドとの結合を検出し、当該抗体と上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドとの結合が検出された場合に、対象原料・加工品等に当該のアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれると判断する方法。（「ポリペプチド含有の有無を調べる方法」には、当該抗体と上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドとの結合が低下した場合に、ポリペプチドが除去又は低減されている、と判断することを含む。）
・ろ紙などに原料・加工品等をしみこませ、そこに含まれる上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを検出するように、抗体溶液を反応させる方法。
【０２１４】
本発明の別の態様において、エピトープおよび重要なアミノ酸が同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対応するプライマーを含むことを特徴とする、対象物におけるアレルギーの上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの有無を判定するためのテスター組成物を含む。非限定的に、上記プライマーは例えば、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）で特定したアミノ酸配列をコードする核酸の塩基配列の一部またはその相補鎖を含むように設計されたものであってもよい。あるいは、上記プライマーは、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）で特定したアミノ酸配列であるエピトープおよび重要なアミノ酸が同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むタンパク質をコードする核酸において、当該エピトープおよび重要なアミノ酸が同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする部分の上流側の領域の塩基配列またはそのエピトープおよび重要なアミノ酸が同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする部分の下流側の領域の相補鎖の塩基配列となるように設計されたものであってもよい。そのようなプライマーとして、例えば配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つの一部であるプライマーおよび／または配列番号１、４４、８６、１１６、１４０、１４５、１６０、１７８、２２９、２７５、２９９、３０５、３６１、３８０、３９８、４１３、４２０、４５４、４８０、４８５、５１９、５４０または５４８で示される塩基配列の少なくとも１つと相補的な配列の一部であるプライマーが挙げられる。ここで、抗原の全長配列におけるエピトープの位置は、下記実施例４の表３において特定した通りである。また、特にｍＲＮＡを対象とする場合は、ポリＡテールの相補プライマーを有していてもよい。
【０２１５】
例えば、試料から得られたＤＮＡまたはｍＲＮＡを鋳型として、前記プライマーを用い、ＲＴ−ＰＣＲを含むＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）でＤＮＡを増幅し、増幅されたＤＮＡの配列において、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）で特定したアミノ酸配列をコードする核酸を含むか否かを判定することで、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）を含む抗原の有無を判断する。ｍＲＮＡを対象にＰＣＲで増幅する方法は、ＲＡＣＥ法等が例示できる。増幅されたＤＮＡにおいて可能な３通りのオープンリーディングフレームがコードするアミノ酸配列の一つが、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）で特定したアミノ酸配列を含む場合、抗原を有すると判断する。ＤＮＡが増幅されない場合は、抗原を有しないと判断する。
【０２１６】
一態様において、上記のテスター組成物は、原料または加工品製造ライン中などの対象物中の上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド含有の有無を調べるために用いられる。原料は食材であってもよく、化粧品原料、医薬品原料等であってもよい。加工品は食用加工品であってもよく、化粧品、医薬品等であってもよい。上記テスター組成物は、原料として含まれる生物種の探索用として用いてもよく、製造業者による製造ラインおよび出荷前製品の品質検査用として用いてもよく、喫食者または使用者自身による対象原料・加工品の抗原含有の有無のチェック用として用いてもよい。
【０２１７】
ポリペプチドの有無の判定方法（２）
本発明は、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの原料・加工品中の有無を判定する方法を含む。当該方法は、原料・加工品中に上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドのアミノ酸配列の全体又は部分を有するポリペプチドを検出することを含む。
【０２１８】
一態様において、本発明の方法は、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つに対する抗体を、原料・加工品（液体を含む）とを接触させることを含む、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの対象物質中の有無を判定する、工程を含む。
【０２１９】
当該抗体、原料・加工品の定義抗体の作製方法、抗体と原料・加工品とを接触させる方法、抗体と抗原との結合等については、「テスター組成物（２）」で上述した通りである。
【０２２０】
あるいは、上記抗原の有無を判定する方法は、抗原に含まれる上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドのエピトープの部分を検出する態様も含む。「エプトープの部分」とは、好ましくは、４アミノ酸残基以上、６アミノ酸残基以上、８アミノ酸残基以上である。エピートープの部分の検出は、ポリペプチドの一部分の特定のアミノ酸配列を検出するための公知の方法で行うことが可能である。例えば、対象原料・加工品等（例えば、食材）のタンパク質を抗原除去処理のための消化酵素で切断し、ＨＰＬＣ等で分離し、任意のエピトープペプチドのピークが、抗原除去処理により低下したかどうかを測定する方法等、などが考えられる。あるいは、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの部分を認識する抗体を用いて、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む抗原の対象物質中の有無を判定してもよい。
【０２２１】
アレルゲン除去原料等（２）
本発明は、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つが除去又は低減されていることを特徴とする原料または加工品を提供する。
【０２２２】
原料または加工品において本発明の抗原を除去又は低減する方法は限定されない。抗原の除去又は低減は、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが除去又は低減される限り、いかなる方法によって行われてもよく、例えば上記「アレルゲン除去食品等」の項目に記載した手法を用いてもよい。
【０２２３】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つが除去又は低減されているとは、アミノ酸配列全体が除去または低減されていることにより達成されてもよく、あるいは抗原タンパク質から、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列部分が切断または取り除かれることにより達成されてもよい。「取り除かれる」には、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）で特定する配列部分のすべてまたは一部の欠失および改変を含む。
【０２２４】
例えば、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが除去又は低減された原料は、遺伝子改変技術を用いて、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの発現がしなくなった原料を調製してもよい。遺伝子改変ノックアウト技術は、当業者に公知の手法のいずれかを用いることができる。
【０２２５】
上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが除去又は低減された加工品は、タンパク質消化物を原料として用いた粉ミルクのように、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが除去又は低減された原料を用いた加工品であってもよい。通常の原料を用いる場合は、加工品の調製前、調製中または調製後に上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを除去又は低減する処理を行う。「加工品の調製」とは、例えば食品原料（例：エビ）から食品加工品（例：エビ加工品、例えばエビフライ）を調製することを意味する。
【０２２６】
通常の原料を用いた加工品において上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチド原を除去又は低減する方法として、上記「アレルゲン除去食品等」の項目に記載した手法を用いてもよい。上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを切断する方法としては、特定の消化酵素で切断する処理をする方法が挙げられる。
【０２２７】
アレルゲン除去加工品の製造方法（２）
本発明は、（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つがが除去又は低減されている加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップを有する、前記製造方法を提供する。
【０２２８】
当該製造方法において、（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドが除去又は低減されているとは、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つが除去又は低減されているか、前記抗原から、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）で特定する配列部分が切断または取り除かれていることを意味する。
【０２２９】
加工品の製造過程でポリペプチドが除去又は低減されていることを確認する手法は、特に限定されず、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つを検出可能ないかなる手法を用いてもよい。例えば、当該加工品の製造過程で生じる材料を含む試料と、上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つに対する抗体との結合性により、当該加工品中の当該ポリペプチドの存在の有無を確認してもよい。そのような方法の詳細は、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目において記載した通りである。すなわち、上記製造方法においては、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目における「対象のＩｇＥ抗体」を「上記（Ｅ１）−（Ｅ５０）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの少なくとも一つに対する抗体」と置き換え、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目における「抗原」「ポリペプチド」を「加工品の製造過程で生じる材料を含む試料」と置き換えて、上記「診断キット・診断方法（２）」の項目において記載した手法を加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するために用いることができる。また、上記「テスター組成物（２）」の項目で記載したテスター組成物を使用することもできる。
【実施例】
【０２３０】
以下に本発明の実施例を説明する。本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって限定されない。【０２３１】
実施例１：タンパク質パターンの確認
下記の二次元電気泳動方法を使用して、エビ（バナメイエビ、ブラックタイガーおよびクルマエビ）に含まれるタンパク質を調べた。【０２３２】
タンパク質の抽出
エビに含まれるタンパク質の抽出及び精製は次のように行った。エビの身に、尿素バッファーを加えてタンパク質を抽出した。尿素バッファーの組成は以下の通りである。
３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ
２Ｍ  チオ尿素
７Ｍ  尿素
４％(ｗ／ｖ)   ＣＨＡＰＳ：
３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホナート
適量の希塩酸
蒸留水を加えて全体を１００ｍＬに調整した。ｐＨは８．５であった。【０２３３】
その後、2D-CleanUPキット（ＧＥ社製）を使用して２回の沈殿操作を行った。第１回目の沈殿操作は、回収した上記蛋白質抽出液にＴＣＡ（トリクロロ酢酸）を加えて沈殿を行い、当該操作で生じた沈殿（ＴＣＡ沈殿）を回収した。第２回目の沈殿操作は、回収した前記ＴＣＡ沈殿にアセトンを加えて沈殿を行い、当該操作で得られた沈殿（検体）を回収した。【０２３４】
検体溶液の調製
得られた検体の一部（タンパク質重量として５０μｇ）を、１次元目等電点電気泳動用ゲルの膨潤用緩衝液であるDeStreak Rehydration Solution（ＧＥ社製）１５０μｌに溶解し、１次元目等電点電気泳動用の検体溶液（膨潤用検体溶液）とした。DeStreak Rehyd
ration Solutionの組成は以下の通りである。
７Ｍ  チオ尿素
２Ｍ  尿素
４％（ｗ／ｖ）  ＣＨＡＰＳ
０．５％（ｖ／ｖ）  ＩＰＧバッファー；ＧＥ社製
適量のＢＰＢ（ブロモフェノールブルー）【０２３５】
１次元目等電点電気泳動用ゲルへの検体の浸透
１次元目等電点電気泳動用ゲル（ＧＥ社製：ＩＰＧゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL)）を前記した１次元目等電点電気泳動用の検体溶液（膨張用検体溶液）１４０μｌに浸漬し、一晩室温にて浸透させた。【０２３６】
本実施例においては、電気泳動機器としてＧＥ社製のIPGphorを使用した。【０２３７】
泳動トレーにシリコンオイルを満たした。検体を浸透させたゲルの両端に水で湿らせた濾紙を設け、ゲルをシリコンオイルに覆われるよう、泳動トレーにセットし、ゲルとの間に当該濾紙を挟んだ状態で電極をセットした。【０２３８】
等電点電気泳動機器の電流値の上限をゲル１本当たり７５μＡに設定し、電圧プログラムを、（１）３００Ｖ定電圧で７５０Ｖｈｒまで定電圧工程を行い（当該工程終了前の泳動３０分間の電流変化幅が５μＡであった）、（２）３００Ｖｈｒかけて１０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（３）更に４５００Ｖｈｒかけて５０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（４）その後５０００Ｖ定電圧で総Ｖｈｒが１２０００になるまで、１次元目の等電点電気泳動を行った。【０２３９】
等電点電気泳動ゲルのＳＤＳ平衡化
上記の１次元目の等電点電気泳動を行った後、等電点電気泳動機器からゲルを取り外し、還元剤を含む平衡化緩衝液に当該ゲルを浸漬して、１５分・室温にて振とうした。上記還元剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）
６Ｍ  尿素
３０％（ｖ／ｖ）  グリセロール
２％（ｗ／ｖ）  ＳＤＳ
１％（ｗ／ｖ）  ＤＴＴ【０２４０】
次に、上記還元剤を含む平衡化緩衝液を除き、ゲルをアルキル化剤を含む平衡化緩衝液に浸漬して、１５分・室温にて振とうし、ＳＤＳ平衡化したゲルを得た。上記アルキル化剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）
６Ｍ  尿素
３０％（ｖ／ｖ）  グリセロール
２％（ｗ／ｖ）  ＳＤＳ
２．５％（ｗ／ｖ）  ヨードアセトアミド【０２４１】
２次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
本実施例においては、電気泳動機器としてlife technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを使用した。２次元目泳動用ゲルはlife technologies社製NuPAGE 4-12% Bis-Tris Gelsを使用した。また、以下の組成の泳動用緩衝液を調製し、使用した。
５０ｍＭ  ＭＯＰＳ
５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基
０．１％（ｗ／ｖ）  ＳＤＳ
１ｍＭ  ＥＤＴＡ【０２４２】
また、本実施例においては泳動用緩衝液に０．５％（ｗ／ｖ）のアガロースＳ（ニッポンジーン社製）と適量のＢＰＢ（ブロモフェノールブルー）を溶解させた接着用アガロース溶液を使用した。【０２４３】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥのウェル中を十分に上記泳動用緩衝液で洗浄した後、当該洗浄に用いた緩衝液を取り除いた。次に、ウェルの中に充分に溶解させた接着用アガロース溶液を添加した。次に、ＳＤＳ平衡化したゲルをアガロース中に浸漬させ、ピンセットでＳＤＳ平衡化したゲルと２次元目泳動用ゲルを密着させた。当該両ゲルが密着した状態でアガロースが充分に固まったのを確認し、２００Ｖ定電圧で約４５分間泳動を行った。【０２４４】
ゲルの蛍光染色
SYPRO Ruby（life technologies社製）を用いてゲルの蛍光染色を行った。【０２４５】
まず、使用する密閉容器を事前に９８％（ｖ／ｖ）のエタノールで十分に洗浄した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ機器から泳動後の２次元目泳動用ゲルを取り外して、洗浄した密閉容器におき、５０％（ｖ／ｖ）メタノール及び７％（ｖ／ｖ）酢酸含有水溶液に３０分間浸漬する処理を２回行った。その後、当該水溶液を水に置換し、１０分間浸漬した。次に、２次元目泳動用ゲルを４０ｍｌのSYPRO Rubyに浸漬し、室温で一晩振とうした。次に、SYPRO Rubyを除き、２次元目泳動用ゲルを水で洗浄した後、１０％（ｖ／ｖ）メタノール及び７％（ｖ／ｖ）酢酸含有水溶液で３０分間振とうした。更に当該水溶液を水に置換し、３０分以上振とうした。【０２４６】
解析
上記一連の処理を施した２次元目泳動用ゲルをTyphoon9500（ＧＥ社製）を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。エビの身に含まれるタンパク質について、２次元電気泳動の結果を図１（バナメイエビ）、図３（ブラックタイガー）および図５（クルマエビ）に示す。各図のゲルの写真の左側には、分子量マーカーのバンドが見られ、バンドの位置が特定の分子量（ＫＤａ）を示す。【０２４７】
実施例２：イムノブロットでの抗原確認
イムノブロットでの抗原確認は、バナメイエビ、ブラックタイガーおよびクルマエビについて、それぞれ実施例１に記載した手順を「２次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥ」まで行った後、以下の「メンブレンへの転写」「イムノブロット」「解析」の操作を行うことにより行った。【０２４８】
メンブレンへの転写
メンブレンへの転写は、以下の転写装置及び転写用緩衝液を用いて行った。
転写装置：XCell SureLock Mini-Cell およびXCell IIブロットモジュール（life technologies社製）
転写用緩衝液：NuPAGEトランスファーバッファー（×２０）（life technologies社製）をmilliQ水で20倍希釈して使用した。【０２４９】
具体的には以下の手順に従って二次元電気泳動ゲル中のタンパク質をメンブレン（ＰＶＤＦ膜）へ転写した。【０２５０】
（１）ＰＶＤＦ膜を、１００％メタノールに浸漬し、次にmilliQ水に浸漬し、その後、転写用緩衝液に移して、ＰＶＤＦ膜の親水化処理を行った。【０２５１】
（２）スポンジ、ろ紙、２次元目のＳＤＳ−ＰＡＧＥが終わったゲル、親水化処理済みＰＶＤＦ膜、ろ紙、スポンジの順でセットし、転写装置中、３０Ｖ定電圧で１時間通電した。【０２５２】
イムノブロット
メンブレンのイムノブロットを、１次抗体としてエビに対するアレルギーを有する患者の血清または非エビアレルギー被験者の血清を用いて行った。【０２５３】
メンブレンのイムノブロットは、以下の手順に従って行った。
（１）転写したメンブレンを５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液（非イオン界面活性剤Tween 20を０．１％含むＰＢＳバッファー）中、室温で１時間振とうした。
（２）１次抗体として、５％血清／５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液中、室温で１時間静置した。
（３）ＰＢＳＴ溶液で洗浄した（５分×３回）。
（４）２次抗体として抗ヒトＩｇＥ−ＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）を５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液で５０００倍に希釈した溶液中、室温で１時間静置した。
（５）ＰＢＳＴ溶液で洗浄した（５分×３回）。
（６）Pierce Western Blotting Substrate Plus（Thermo社製）で、５分間静置した。【０２５４】
解析
上記一連の処理を施したメンブレンをTyphoon9500（ＧＥ社製）を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。【０２５５】
エビアレルギー患者の血清を用いたイムノブロットを、対照である非エビアレルギー被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。エビに含まれるタンパク質についてエビアレルギー患者の血清を用いたイムノブロット（バナメイエビについて図２、ブラックタイガーについて図４、およびクルマエビについて図６）において、非エビアレルギー被験者の血清を用いた場合とは異なり、かつ公知のエビアレルゲンタンパク質とは異なる１１のスポットが検出された。【０２５６】
上記１１のスポットの分子量および等電点はそれぞれ以下の通りである（図２、４、および６）。
スポット１：分子量１００〜２００ｋＤａ、ｐＩ５．０〜６．０
スポット２：分子量６０〜１３０ｋＤａ、ｐＩ５．５〜９．０
スポット３：分子量１００〜２００ｋＤａ、ｐＩ５．０〜６．０
スポット４：分子量６０〜１３０ｋＤａ、ｐＩ５．５〜９．０
スポット５：分子量８０〜１３０ｋＤａ、ｐＩ６．０〜８．０
スポット６：分子量６０〜９０ｋＤａ、ｐＩ５．０〜６．０
スポット７：分子量５５〜７０ｋＤａ、ｐＩ５．５〜８．０
スポット８：分子量４５〜７０ｋＤａ、ｐＩ５．０〜７．０
スポット９：分子量５０〜６０ｋＤａ、ｐＩ６．０〜９．０
スポット１０：分子量２０〜４０ｋＤａ、ｐＩ８．０〜１０．０
スポット１１：分子量１５〜２０ｋＤａ、ｐＩ８．０〜１０．０【０２５７】
実施例３：質量分析および抗原の同定
上記の３つのスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。【０２５８】
具体的には、以下の手順でタンパク質の抽出および質量分析を行った。
（１）エビ（バナメイエビ、ブラックタイガーおよびクルマエビ）について、実施例１及び２の手順に従ってタンパク質抽出、２次元電気泳動及びメンブレン転写を行い、０．００８％Direct blue／４０％エタノール・１０％酢酸で振とうにより染色した。
（２）その後、４０％エタノール・１０％酢酸で５分間の処理を３回行って脱色し、水で５分間洗浄後、風乾した。
（３）目的のスポットをきれいなカッター刃で切り取り、遠心チューブに入れた。５０μＬのメタノールでメンブレン親水処理後、１００μＬの水で２回洗浄後遠心除去し、２０μＬの２０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３・５０％アセトニトリルを加えた。
（４）１ｐｍｏｌ／μＬリシルエンドペプチダーゼ（ＷＡＫＯ）１μＬを加え、３７℃で６０分間静置した後、溶液を新しい遠心チューブに回収した。２０μＬの２０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３・７０％アセトニトリルをメンブレンに加え、室温にて１０分間浸し、さらに回収した。０．１％ギ酸、４％アセトニトリル１０μＬで溶解し、チューブに移した。
（５）回収した溶液を減圧乾燥した後、Ａ液（０．１％ギ酸、４％アセトニトリル溶液）１５μｌで溶解し、質量分析（ESI-TOF6600, AB Sciex社製）を行った。
（６）質量分析計から得られた質量データに基づくタンパク質の同定は、ＮＣＢＩをサーチすることで行った。【０２５９】
結果
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。【０２６０】
【表２】
2018199341.tif 000003
【０２６１】
さらに、各スポットについて、質量分析計から得られた質量データをＮＣＢＩで解析したところ、それぞれのスポットは以下のタンパク質であることが同定された。【０２６２】
スポット１：
・バナメイエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ １（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65721.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758443.1）のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号２、それをコードする塩基配列：配列番号１）
・ブラックタイガーについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ １（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65719.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758441.1）のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号４５、それをコードする塩基配列：配列番号４４）
・クルマエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ａ（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAK61429.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB613205.1）のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号８７、それをコードする塩基配列：配列番号８６）
スポット２：
・バナメイエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ １（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65721.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758443.1）のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１１７、それをコードする塩基配列：配列番号１１６）
・ブラックタイガーについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ １（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65719.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758441.1）のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１４１、それをコードする塩基配列：配列番号１４０）
・クルマエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ａ（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAK61429.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB613205.1）のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１４６、それをコードする塩基配列：配列番号１４５）
スポット３：
・バナメイエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ２（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65722.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758444.1）のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１６１、それをコードする塩基配列：配列番号１６０）
・ブラックタイガーについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ２（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65720.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758442.1）のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号１７９、それをコードする塩基配列：配列番号１７８）
・クルマエビについてミオシン ヘビー チェイン タイプ ｂ（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAK61430.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB613206.1）のＣ末端部分（アミノ酸配列：配列番号２３０、それをコードする塩基配列：配列番号２２９）
スポット４：
・バナメイエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ２（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65722.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758444.1）のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号２７６、それをコードする塩基配列：配列番号２７５）
・ブラックタイガーについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ２（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAM65720.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB758442.1）のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号３００、それをコードする塩基配列：配列番号２９９）
・クルマエビについて、ミオシン ヘビー チェイン タイプ ｂ（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAK61430.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB613206.1）のＮ末端部分（アミノ酸配列：配列番号３０６、それをコードする塩基配列：配列番号３０５）
スポット５：
・クルマエビについて、グリコーゲン ホスホリラーゼ（NCBIのタンパク質アクセッション番号BAJ23879.1、GenBank のDNAアクセッション番号AB596876.1）（アミノ酸配列：配列番号３６２、それをコードする塩基配列：配列番号３６１）
バナメイエビおよびブラックタイガーについては、NCBIのタンパク質アクセッション番号BAJ23879.1がヒットした。このことから、バナメイエビおよびブラックタイガーにグリコーゲン ホスホリラーゼのホモログが存在し、それがエビアレルギーの抗原となることが示された。
スポット６：
・バナメイエビについて、ヘモシアニン サブユニット Ｌ１の一部（NCBIのタンパク質アクセッション番号AHY86471.1、GenBank のDNAアクセッション番号KF193058.1）（アミノ酸配列：配列番号３８１、それをコードする塩基配列：配列番号３８０）
・ブラックタイガーについて、ヘモシアニン（NCBIのタンパク質アクセッション番号AEB77775.1、GenBank のDNAアクセッション番号JF357966.1）（アミノ酸配列：配列番号３９９、それをコードする塩基配列：配列番号３９８）
・クルマエビについて、ヘモシアニン サブユニット Ｌ（NCBIのタンパク質アクセッション番号ABR14693.1、GenBank のDNAアクセッション番号EF375711.1）（アミノ酸配列：配列番号４１４、それをコードする塩基配列：配列番号４１３）
スポット７：
・バナメイエビについて、ピルベート キナーゼ ３（NCBIのタンパク質アクセッション番号ABY66598.1、GenBank のDNAアクセッション番号EU216039.1）（アミノ酸配列：配列番号４２１、それをコードする塩基配列：配列番号４２０）
ブラックタイガーについては、NCBIのタンパク質アクセッション番号ABY66598.1がヒットした。このことから、ブラックタイガーにピルベート キナーゼ ３のホモログが存在し、それがエビアレルギーの抗原となることが示された。
スポット８：
・ブラックタイガーについて、ホスホピルベート ヒドラターゼ（NCBIのタンパク質アクセッション番号AAC78141.1、GenBank のDNAアクセッション番号AF100985.1）（アミノ酸配列：配列番号４５５、それをコードする塩基配列：配列番号４５４）
・クルマエビについてホスホピルベート ヒドラターゼ（NCBIのタンパク質アクセッション番号ALL27930.1、GenBank のDNAアクセッション番号KR184189.1）（アミノ酸配列：配列番号４８１、それをコードする塩基配列：配列番号４８０）
バナメイエビについては、NCBIのタンパク質アクセッション番号AAC78141.1がヒットした。このことから、バナメイエビにホスホピルベート ヒドラターゼのホモログが存在し、それがエビアレルギーの抗原となることが示された。
スポット９：
・バナメイエビについて、ミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファプレカーサー（NCBIのタンパク質アクセッション番号ADC55251.1、GenBank のDNAアクセッション番号GQ848643.3）（アミノ酸配列：配列番号４８６、それをコードする塩基配列：配列番号４８５）
ブラックタイガーおよびクルマエビについては、NCBIのタンパク質アクセッション番号ADC55251.1がヒットした。このことから、ブラックタイガーおよびクルマエビにミトコンドリアル ＡＴＰ シンターゼ サブユニット アルファ プレカーサーのホモログが存在し、それがエビアレルギーの抗原となることが示された。
スポット１０：
・バナメイエビについて、トロポニン Ｉ（NCBIのタンパク質アクセッション番号AFW99839.1、GenBank のDNAアクセッション番号JX683730.1）（アミノ酸配列：配列番号５２０、それをコードする塩基配列：配列番号５１９）
ブラックタイガーおよびクルマエビについては、NCBIのタンパク質アクセッション番号AFW99839.1がヒットした。このことから、ブラックタイガーおよびクルマエビにトロポニン Ｉのホモログが存在し、それがエビアレルギーの抗原となることが示された。
スポット１１：
・バナメイエビについて、シクロフィリン Ａ（NCBIのタンパク質アクセッションAEP83534.1、GenBank のDNAアクセッション番号JN546074.1）（アミノ酸配列：配列番号５４１、それをコードする塩基配列：配列番号５４０）
・ブラックタイガーについて、ブラックタイガー由来のシクロフィリン Ａ（NCBIのタンパク質アクセッションAGS46493.1、GenBank のDNAアクセッション番号KF214635.1）（アミノ酸配列：配列番号５４９、それをコードする塩基配列：配列番号５４８）
・クルマエビについては、NCBIのタンパク質アクセッションAEP83534.1がヒットした。このことから、クルマエビにシクロフィリン Ａのホモログが存在し、それがエビアレルギーの抗原となることが示された。【０２６３】
実施例４：エピトープの同定
エビのアレルゲンコンポーネントのエピトープ
エビのアレルゲンコンポーネントについて、以下の手順によりエピトープの同定を行った。【０２６４】
（Ａ）エピトープマッピング（１）
エビのアレルギーコンポーネントとして特定したアミノ酸配列ならびにアルギニンキナーゼ（arginine kinase）のアミノ酸配列に対応するオーバーラップペプチド（長さ：１５アミノ酸）のライブラリーによって、エピトープマッピングを行った。具体的には、配列番号１１７、１４１、１４６、２、４５、８７、２７６、１６１、２３０、１７９、３６２、３８１、３９９、４２１、４５５、４８１、４８６、５２０、５４１、３００、３０６およびアルギニンキナーゼのアミノ酸配列に基づいてオーバーラップペプチドのライブラリーを調製した。【０２６５】
合成する各ペプチドは、１０アミノ酸ずつシフトさせた。すなわち各ペプチドは、前のペプチドおよび後のペプチドと、それぞれ５アミノ酸の重複を有する。【０２６６】
ペプチドアレイの調製のため、Intavis CelluSpots（商標）技術を使用した。すなわち次の手順、（１）アミノ修飾セルロースディスク上に自動化合成装置（Intavis MultiPep RS）を用いて目的のペプチドを合成し、（２）前記アミノ修飾セルロースディスクを溶解させてセルロース結合ペプチド溶液を得て、（３）コーティングを施したスライドガラス上に前記セルロース結合ペプチドをスポットすることにより、ペプチドアレイを調製した。各手順の詳細は以下のとおりである。【０２６７】
（１）ペプチドの合成
３８４ウェル合成プレート中のアミノ修飾セルロースディスク上で、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学反応を利用して、ペプチド合成を段階的に行った。すなわち、Ｆｍｏｃ基がアミノ基に結合したアミノ酸をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の溶液で活性化し、前記セルロースディスクに滴下してセルロースディスク上のアミノ基へ前記Ｆｍｏｃ基結合アミノ酸を結合させ（カップリング）、未反応のアミノ基を無水酢酸によりキャッピングしてＤＭＦにより洗浄し、さらにピペリジンで処理してＤＭＦにより洗浄して、セルロースディスク上のアミノ基に結合したアミノ酸のアミノ基からＦｍｏｃ基を除去した。前記セルロースディスク上のアミノ基に結合したアミノ酸に対して、上記カップリング、キャッピング、およびＦｍｏｃ基の除去を反復して行うことにより、アミノ末端を伸長させてペプチド合成を行った。【０２６８】
（２）アミノ修飾セルロースディスクの溶解
上記「（１）ペプチドの合成」で得られた目的のペプチドが結合したセルロースディスクを９６ウェルプレートに移し、アミノ酸の側鎖の脱保護のため、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジクロロメタン、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）、および水の側鎖脱保護混合液で処理した。その後、脱保護されたセルロース結合ペプチドを、ＴＦＡ、トリフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）、ＴＩＰＳ、および水の混合液で溶解し、テトラブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）で沈殿させ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に再懸濁し、ＮａＣｌ、クエン酸Ｎａ、および水の混合液と混合し、スライドスポット用ペプチド溶液を得た。【０２６９】
（３）セルロース結合ペプチド溶液のスポット
上記「（２）アミノ修飾セルロースディスクの溶解」で得られたスライドスポット用ペプチド溶液を、Intavisスライドスポッティングロボットを用いて、Intavis CelluSpots（商標）スライド上にスポットし、これを乾燥させてペプチドアレイを調製した。【０２７０】
前記ペプチドアレイを用いて、抗原抗体反応によりエビアレルギー患者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを各ペプチド断片について測定した。測定は以下の手順に従って行った。【０２７１】
（１）ペプチドを、Pierce Protein-Free(PBS)Blocking Buffer(Thermo社製)中で、室温で１時間振盪した。【０２７２】
（２）２％血清／Pierce Protein-Free(PBS)Blocking Buffer(Thermo社製)中で、４℃で一晩振盪した。【０２７３】
（３）ＰＢＳＴ（非イオン界面活性剤Tween 20を３％含むＰＢＳバッファー）で５分洗浄した（×３回）。【０２７４】
（４）抗ヒトＩｇＥ抗体−ＨＲＰ（１：２０，０００、Pierce Protein-Free(PBS)Blocking Buffer(Thermo社製)）を添加し、室温で１時間振盪した。【０２７５】
（５）ＰＢＳＴで５分洗浄した（×３回）。【０２７６】
（６）Pierce ECL Plus Western Blotting Substrate（Thermo社製）を添加し、室温で５分間振盪した。【０２７７】
（７）Amersham Imager 600を使用して、上記（１）〜（６）の処理を施したペプチドの化学発光を測定した。【０２７８】
上記（７）において測定して得られた画像に対して、ImageQuant TL(GEヘルスケア社)を用いて化学発光量を数値化した。５名の非エビアレルギー被験者の血清を使用した結果から得られた画像からそれぞれ数値化された値の中で２番目に高い値をN2nd値とし、３７名の患者の血清を使用した結果から得られた画像から数値化された値からそれぞれペプチドのN2nd値の差をとった値において３５,０００以上の値を有するペプチドを患者特異的にＩｇＥ抗体と結合したペプチドと判断した。【０２７９】
（Ｂ）エピトープマッピング（２）：オーバーラッピング
上記（Ａ）により患者特異的に血清中ＩｇＥ抗体が結合したペプチドの配列（配列番号５５８、５６６、５８２、５８６、５９４、５９９、６１４、６２４、６３４、６４０、６５４、６７１、６７２、６７８、６８１、６８６、６９１、６９７、７０４、７０５、７０８、７１７、７２５、７２９、７４１、７５０、７５２、７６５、７７０、７７８、７８８、７９３、８１０、８１７、８２６、８３３、８４７、８５８、８６５、８７９、８８１、８９２、９０８、９１２、９１５、９１７、９２８、９３５、９３９および９４３）を基に、当該ペプチドの配列および当該ペプチドの配列を含むアレルゲンコンポーネントのアミノ酸配列における当該ペプチドの前後の配列を付加した配列において、オーバーラップペプチド断片（長さ：１０アミノ酸）のライブラリーを作製し、エピトープマッピングを行った。【０２８０】
合成する各ペプチドは、１アミノ酸ずつシフトさせた。すなわち各ペプチドは、前のペプチドおよび後のペプチドと、それぞれ９アミノ酸の重複を有する。【０２８１】
ライブラリーは上記（Ａ）と同様の手順で調製し、上記と同様の手法で患者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを各ペプチド断片について測定した。前記（３）セルロース結合ペプチド溶液のスポットの欄に記載の（１）、（４）〜（６）のみを行った際の結果から得られた画像からそれぞれ数値化された値をコントロール値とし、患者の血清を使用した結果から得られた画像から数値化された値からそれぞれペプチドのコントロール値の差をとった値においてオーバーラッピングの基礎としたペプチドから得られた値と比較し、１アミノ酸ずつシフトさせたペプチドにより患者のＩｇＥ抗体への結合性が喪失あるいは著しく減少したペプチドは、ＩｇＥ抗体の結合性がないペプチドと判断した。【０２８２】
上記（Ａ）と同様に、測定して得られた画像に対して化学発光量を数値化した。前記（３）セルロース結合ペプチド溶液のスポットの欄に記載の（１）、（４）〜（６）のみを行った際の結果（２次抗体測定値）から得られた画像から数値化された値をコントロール値とし、患者の血清を使用した結果から得られた画像から数値化された値からそれぞれペプチドのコントロール値の差をとった値において、オーバーラッピングの基礎とした配列（配列番号５５８、５６６、５８２、５８６、５９４、５９９、６１４、６２４、６３４、６４０、６５４、６７１、６７２、６７８、６８１、６８６、６９１、６９７、７０４、７０５、７０８、７１７、７２５、７２９、７４１、７５０、７５２、７６５、７７０、７７８、７８８、７９３、８１０、８１７、８２６、８３３、８４７、８５８、８６５、８７９、８８１、８９２、９０８、９１２、９１５、９１７、９２８、９３５、９３９および９４３）により得られた値を１００％としたとき、３０％未満はＩｇＥ抗体との結合性なし、３０％以上５０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性はあり、５０％以上７０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は多少劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性あり、７０％以上はＩｇＥ抗体との結合性に差がないまたはＩｇＥ抗体との結合性がよいとして、ＩｇＥ抗体との結合性が残存したペプチドであると判断した。【０２８３】
この解析により、オーバーラッピングの基礎とした配列において、患者のＩｇＥ抗体との結合に重要な領域を見出した。【０２８４】
（Ｃ）エピトープマッピング（３）：アラニングリシンスキャン
上記（Ａ）で同定したアミノ酸配列について、アラニングリシンスキャンと呼ばれる手法（非特許文献５）により、アミノ末端側から１アミノ酸ずつアラニン（元のアミノ酸がアラニンの場合はグリシン）に置換したペプチド断片のライブラリーを、上記と同様の手法で調製し、上記と同様の手法で患者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを各ペプチド断片について測定した。アラニングリシン置換により患者のＩｇＥ抗体への結合性が喪失あるいは著しく減少した位置のアミノ酸は、本来の抗原性の発現のために重要なアミノ酸、または本来の抗原性の発現に影響するアミノ酸と判断し、患者のＩｇＥ抗体への結合性が喪失あるいは著しく減少しなかったアミノ酸は、本来の抗原性の発現のためには重要ではなく、置換が可能なアミノ酸と判断した。【０２８５】
上記（Ａ）と同様に、測定して得られた画像に対して、化学発光量を数値化した。２次抗体測定値から得られた画像から数値化された値をコントロール値とし、３７名の患者の血清を使用した結果から得られた画像から数値化された値からそれぞれペプチドのコントロール値の差をとった値において、アラニングリシンススキャンの基礎とした配列（配列番号５５８、５６６、５８２、５８６、５９４、５９９、６１４、６２４、６３４、６４０、６５４、６７１、６７２、６７８、６８１、６８６、６９１、６９７、７０４、７０５、７０８、７１７、７２５、７２９、７４１、７５０、７５２、７６５、７７０、７７８、７８８、７９３、８１０、８１７、８２６、８３３、８４７、８５８、８６５、８７９、８８１、８９２、９０８、９１２、９１５、９１７、９２８、９３５、９３９および９４３）により得られた値を１００％としたとき、３０％未満はＩｇＥ抗体との結合性なし、３０％以上５０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性はあり、５０％以上７０％未満はＩｇＥ抗体との結合性は多少劣るが、ＩｇＥ抗体との結合性あり、７０％以上はＩｇＥ抗体との結合性に差がないまたはＩｇＥ抗体との結合性がよいとして、ＩｇＥ抗体との結合性が残存したペプチドであると判断した。【０２８６】
（Ａ）〜（Ｃ）の結果を解析したところ、アラニングリシンスキャンの基礎とした配列における患者のＩｇＥ抗体との結合に重要な領域において、本来の抗原性の発現のために重要な共通配列を見出した。５０種類全てのエピトープについて配列を特定し、結果を以下の表３にまとめた。【０２８７】
【表３−１】
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【０２８８】
【表３−２】
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【０２８９】
【表３−３】
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【０２９０】
【表３−４】
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【０２９１】
【表３−５】
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【０２９２】
【表３−６】
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【０２９３】
【表３−７】
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【０２９４】
【表３−８】
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【０２９５】
【表３−９】
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【０２９６】
【表３−１０】
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【０２９７】
【表３−１１】
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【０２９８】
【表３−１２】
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【０２９９】
【表３−１３】
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【０３００】
【表３−１４】
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【０３０１】
【表３−１５】
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【０３０２】
【表３−１６】
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【０３０３】
【表３−１７】
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【０３０４】
【表３−１８】
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【０３０５】
【表３−１９】
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【０３０６】
【表３−２０】
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【０３０７】
【表３−２１】
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【０３０８】
【表３−２２】
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【０３０９】
【表３−２３】
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【０３１０】
【表３−２４】
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【０３１１】
【表３−２５】
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【０３１２】
【表３−２６】
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【０３１３】
【表３−２７】
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【０３１４】
【表３−２８】
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【０３１５】
【表３−２９】
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【０３１６】
【表３−３０】
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【０３１７】
【表３−３１】
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【０３１８】
【表３−３２】
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【０３１９】
【表３−３３】
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【０３２０】
【表３−３４】
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【０３２１】
【表３−３５】
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【０３２２】
【表３−３６】
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【０３２３】
【表３−３７】
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【０３２４】
【表３−３８】
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【０３２５】
【表３−３９】
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【０３２６】
【表３−４０】
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【０３２７】
【表３−４１】
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【０３２８】
【表３−４２】
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【０３２９】
【表３−４３】
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【０３３０】
【表３−４４】
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【０３３１】
【表３−４５】
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【０３３２】
【表３−４６】
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【０３３３】
【表３−４７】
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【０３３４】
【表３−４８】
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【０３３５】
【表３−４９】
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【０３３６】
【表３−５０】
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【０３３７】
なお、各患者は以下の表４に示す食物等に対し、アレルギーを示すとの問診情報を得ている。【０３３８】
【表４】
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【０３３９】
また、（Ｅ１）−（Ｅ５０）の共通１５残基配列に対し、表３に示した患者も含め、下記の表５に示す患者のＩｇＥ抗体が結合性を示した。【０３４０】
【表５】
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【０３４１】
実施例５：エピトープの交差性の確認
上記表３の、エビの各タンパク質について見出された各エピトープ配列（配列番号５５９、５６１、５６３、５６７、５６９、５７１、５７３、５７６、５７８、５８０、５８３、５８５、５８７、５８８、５９１、５９３、５９５、５９６、５９７、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１１、６１２、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２６、６３０、６３２、６３５、６３６、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４６、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５６、６５８、６６０、６６２、６６３、６６４、６６６、６６８、６６９、６７３、６７６、６７９、６８０、６８２、６８３、６８４、６８７、６８９、６９２、６９４、６９５、６９８、７００、７０２、７０３、７０６、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１９、７２１、７２３、７２４、７２６、７２７、７２８、７３０、７３２、７３４、７３６、７３８、７４２、７４４、７４６、７４８、７５１、７５３、７５５、７５７、７５９、７６１、７６３、７６４、７６６、７６７、７６８、７７１、７７２、７７４、７７６、７７９、７８１、７８３、７８５、７８７、７８９、７９１、７９４、７９５、７９７、７９９、８０１、８０３、８０５、８０８、８１１、８１３、８１５、８１８、８２０、８２２、８２４、８２７、８２９、８３１、８３４、８３６、８３８、８４０、８４２、８４５、８４８、８５０、８５１、８５２、８５４、８５６、８５９、８６１、８６３、８６６、８６８、８７０、８７２、８７５、８７７、８８０、８８２、８８４、８８５、８８７、８８９、８９３、８９５、８９７、８９９、９００、９０２、９０４、９０６、９０９、９１０、９１３、９１４、９１６、９１８、９２０、９２１、９２３、９２６、９２９、９３１、９３３、９３６、９３７、９４０、９４２、９４４、９４６および９４７）中におけるＩｇＥ抗体との結合維持に重要なアミノ酸以外のアミノ酸を、任意のアミノ酸（Ｘ）とした鍵配列（配列番号５６０、５６２、５６４、５６５、５６８、５７０、５７２、５７４、５７５、５７７、５７９、５８１、５８４、５８９、５９０、５９２、５９８、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１０、６１３、６１６、６１８、６２０、６２２、６２７、６２９、６３１、６３３、６３６、６３８、６４２、６４４、６４８、６５０、６５２、６５７、６５９、６６１、６６５、６６７、６７０、６７４、６７５、６７７、６８５、６８８、６９０、６９３、６９６、７０１、７１０、７１２、７１４、７１６、７２０、７２２、７３１、７３３、７３５、７３７、７３９、７４０、７４３、７４５、７４７、７４９、７５４、７５６、７５８、７６０、７６２、７６９、７７３、７７５、７７７、７８０、７８２、７８４、７８６、７９０、７９２、７９６、７９８、８００、８０２、８０４、８０６、８０７、８０９、８１２、８１４、８１６、８１９、８２１、８２３、８２５、８２８、８３０、８３２、８３５、８３７、８３９、８４１、８４３、８４４、８４６、８４９、８５３、８５５、８５７、８６０、８６２、８６４、８６７、８６９、８７１、８７３、８７４、８７６、８７８、９８４、８８３、８８６、８８８、８９０、８９１、８９４、８９６、８９８、９０１、９０３、９０５、９０７、９１１、９１９、９２２、９２４、９２５、９２７、９３０、９３２、９３４、９３８、９４１、９４５および９４８）について、各患者が同時に有するアレルゲン食材に対して同配列を有するタンパク質をＮＣＢＩで検索した結果、一例として表３−１〜表３−５０の「交差性確認食物」の列に記載の各食物の配列に含まれるアミノ酸配列がヒットした。【０３４２】
表３の「合成配列」、再右列の「配列番号」の列に記載ののアミノ酸配列を含むペプチドについて、表３−１〜表３−５０の「交差性確認食物」の列に記載の各食物に対してアレルギーを有する患者のＩｇＥ抗体との結合性をＥＬＩＳＡにより確認した。ペプチドは、Ｆｍｏｃ法によりＮ末端側でビオチン化されるように合成した。【０３４３】
ＥＬＩＳＡは、具体的には以下の手順に従って行った。【０３４４】
（１）ビオチン化ペプチドの濃度が１０μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で調製した。【０３４５】
（２）各ペプチド溶液をストレプトアビジン被覆した３８４ウェルプレートの各ウェルに２０μＬ添加して、室温で１時間振盪した。溶液を回収後、ＰＢＳで５回洗浄した。【０３４６】
（３）４０μＬのPierce Protein-Free(PBS)Blocking Buffer(Thermo社製)を添加して、室温で１時間振盪した。溶液を除去後、ＰＢＳＴで５回洗浄した。【０３４７】
（４）２０μＬの２％血清／Canget SignalSolution I (TOYOBO社製)を添加し、室温で１時間振盪した。溶液を除去後、ＰＢＳＴで５回洗浄した。【０３４８】
（５）２０μＬの二次抗体希釈液（１：１００００、Canget SignalSolution II (TOYOBO社製)）を添加し、室温で１時間振盪した。溶液を除去後、ＰＢＳＴで５回洗浄した。【０３４９】
（６）２０μＬの1-Step Ultra TMB-ELISA（Thermo社製）を添加し、室温で１５分間振盪した。【０３５０】
（７）２０μＬの２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加した。４５０ｎｍの吸光度を測定した。【０３５１】
これらのアミノ酸配列を有するペプチドを、実施例４の（Ａ）と同様の手順で調製し、アレルギー患者の血清および非アレルギー被験者の血清中のＩｇＥ抗体が結合するか否かを測定した。非アレルギー被験者の血清は２名分を測定してその平均値で割った値を表記した。【０３５２】
結果を図７−１２に示す。各図の縦軸は、「アレルギー患者の吸光度／非アレルギー患者（健常者）の吸光度」である。同じ配列に対する棒グラフが２本ある場合、グラフの濃淡が異なることは患者が別個であることを意味する。例えば、図７のグラフＮｏ．８とＮｏ．１０は同一配列のペプチドに対する異なる患者の結果である。各グラフに記載の食材名は、使用した各合成配列の基礎となるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む食材名である。【０３５３】
図７−１２から明らかであるように、グラフＮｏ，１−１１４に記載のアミノ酸配列を有する全てのポリペプチドにおいて、非アレルギー被験者の血清中のＩｇＥ抗体よりも各アレルギー患者のＩｇＥ抗体に対しより高い結合性（「１」より大きい）が示され、これらのポリペプチドの交差性が確認された。このことは、これらのエピトープがエビ以外の抗原との交差性を検出するのに利用できることを示している。さらに、「Ｘ」部分が任意のアミノ酸残基をとりうることを裏付ける。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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