(57)【要約】  細胞の判別方法は、対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測工程と、計測された信号に基づいて、対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否か判別する判別工程と、を備える。
2018159833.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測工程と、
計測された前記信号に基づいて、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否か判別する判別工程と、
を備える細胞の判別方法。
【請求項２】
請求項１に記載の細胞の判別方法において、
前記対象細胞は、生体の血液に含まれる細胞である、細胞の判別方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の細胞の判別方法において、
前記判別工程は、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か、上皮系のがん細胞または非がん化細胞かの判別を行う細胞の判別方法。
【請求項４】
請求項１から３までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法において、
前記所定のアミノ酸は、芳香族アミノ酸である細胞の判別方法。
【請求項５】
請求項４に記載の細胞の判別方法において、
前記芳香族アミノ酸は、トリプトファンまたはフェニルアラニンである細胞の判別方法。
【請求項６】
請求項１から５までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法において、
前記所定の核酸塩基は、シトシンである細胞の判別方法。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法において
前記所定の原子間結合は、前記対象細胞の一部又は全部における有機化合物の量の指標となる原子間結合である細胞の判別方法。
【請求項８】
請求項７に記載の細胞の判別方法において、
前記所定の原子間結合は、炭素原子間の二重結合、アミド結合、飽和炭化水素におけるＣ−Ｈ結合、及びシトクロムｃのポルフィリン環に存在する炭素原子間の二重結合からなる群より選択される少なくとも一以上の原子間結合である細胞の判別方法。
【請求項９】
請求項１から３までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法において、
前記計測工程は、ラマン散乱光のストークス散乱域の強度において、半値幅の範囲に７４９／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に７８２／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１５８３／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１６５９／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１００３／ｃｍを含むピーク、または半値幅の範囲に１４５０／ｃｍを含むピークのデータから算出された統計値に基づいて前記物質または結合の量を算出する細胞の判別方法。
【請求項１０】
請求項１から９までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法において、
前記計測工程は、前記対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも二以上の物質または結合の量に対応する信号を計測し、
前記判別工程は、一つの前記物質または結合の量と、他の前記物質または結合の量との比を算出し、一以上の前記比に基づいて、前記対象細胞の前記判別を行う細胞の判別方法。
【請求項１１】
請求項１から９までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法において、
前記計測工程は、
トリプトファンに対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値に対する、シトシンに対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値の比率、
飽和炭化水素のＣ−Ｈ結合に対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値に対する、フェニルアラニンに対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値の比率、及び
シトクロムｃのポルフィリン環に存在する炭素原子間の二重結合に対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値に対する、炭素原子間の二重結合又はアミド結合に対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値の比率、
からなる群より選択される少なくとも一つの比率に基づいて、前記対象細胞の前記判別を行う細胞の判別方法。
【請求項１２】
請求項１から１１までのいずれか一項に記載の細胞の判別方法により、検査対象から取得した細胞の判別を行うことと、
前記判別の結果に基づいて、前記検査対象のがんの有無、程度または転移可能性についての情報を提供することと、を含むがんの検査方法。
【請求項１３】
対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測部と、
測定された前記信号に基づいて、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否かの判別を行った判別結果を出力する情報出力部と、
を備える計測装置。
【請求項１４】
請求項１３に記載の計測装置において、
細胞が移動する流路と、
前記流路と接続され、一部の前記細胞を保持する保持部と、
前記保持部に光を照射する照射部と、
を備え、
前記計測部は、前記保持部にある前記細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測装置。
【請求項１５】
請求項１４に記載の計測装置において、
複数の前記保持部と、
複数の前記照射部とを備える計測装置。
【請求項１６】
請求項１３から１５までのいずれか一項に記載の計測装置において、
前記判別結果に基づいて前記細胞を分離する操作を制御する分離制御部を備える計測装置。
【請求項１７】
請求項１３から１６までのいずれか一項に記載の計測装置を備え、
前記情報出力部は、前記細胞が取得された検査対象のがんの有無、程度または転移可能性についての情報を出力するがんの検査装置。
【請求項１８】
対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号に基づいて、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否かの判別を行う判別処理と、
前記判別処理の結果についての情報、または前記対象細胞が取得された検査対象のがんの有無、程度または転移可能性についての情報を出力する出力処理を処理装置に行わせる検査プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞の判別方法、がんの検査方法、計測装置、がんの検査装置および検査プログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
生体組織等からの光を解析することにより、当該生体組織等にがん化した部位があるか否かを調べる検査方法が提案されている（特許文献１参照）。精密ながん検査のために、組織や細胞からの光をより適切なパラメータに基づいて解析することが望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】日本国特表第２００９−５３８１５６号
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第１の態様によると、対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測工程と、計測された前記信号に基づいて、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否か判別する判別工程と、を備える。
本発明の第２の態様によると、計測装置は、対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測部と、測定された前記信号に基づいて、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否かの判別を行った判別結果を出力する情報出力部と、を備える。
本発明の第３の態様によると、検査プログラムは、対象細胞の一部または全部における、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号に基づいて、前記対象細胞が、非上皮系のがん細胞か否かの判別を行う判別処理と、前記判別処理の結果についての情報、または前記対象細胞が取得された検査対象のがんの有無、程度または転移可能性についての情報を出力する出力処理を処理装置に行わせる。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】図１は、循環がん細胞と上皮間葉転換について説明するための概念図である。
【図２】図２は、一実施形態の細胞の判別方法に関するがんの検査装置の構成を説明するための概念図である。
【図３】図３は、一実施形態の細胞の判別方法に関する情報処理装置の構成を示す概念図である。
【図４】図４は、判別パラメータに基づいて細胞の判別を行う方法を説明するための図である。
【図５】図５は、流路構造体の構造を示す図である。
【図６】図６は、がんの検査方法におけるラマン測定の流れを示す図であり、（ａ）は、保持部に細部が保持されていない場合を示す概念図であり、（ｂ）は、保持部に細胞を保持している場合の概念図である。
【図７】図７は、がんの検査方法におけるラマン測定の流れを示す図であり、（ａ）は、保持部に細胞が保持されていない場合を示す概念図であり、（ｂ）は、保持部に上皮間葉転換された細胞を保持している場合の概念図である。
【図８】図８は、がんの検査方法におけるラマン測定の流れを示す図であり、（ａ）は、全ての保持部が上皮間葉転換された細胞で満たされている場合を示す概念図であり、（ｂ）は、保持部から上皮間葉転換された細胞を解放した場合の概念図である。
【図９】図９は、がんの検査方法の流れを示すフローチャートである。
【図１０】図１０は、がんの検査方法に関するプログラムを説明するための図である。
【図１１】図１１は、卵巣がん細胞についての、ラマン散乱光の測定結果を示す図である。
【図１２】図１２は、卵巣がん細胞についての、ラマン散乱光の測定結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
以下では、適宜図面を参照しながら、一実施形態の細胞の判別方法、がんの検査方法、計測装置、がんの検査装置および検査プログラム等について説明する。本実施形態の細胞の判別方法では、細胞からの光を測定し、測定結果に基づいて、当該細胞が非上皮系のがん細胞か、それとも、上皮系のがん細胞または非がん化細胞かの判別（以下、「細胞判別」と呼ぶ）を行う。
なお、本実施形態において、「がん」とは、癌（癌腫）、肉腫、血液腫瘍およびその他の悪性腫瘍を含む。
【０００７】
図１は、循環がん細胞（ＣＴＣ：Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ）および上皮間葉転換（ＥＭＴ：Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）を説明するための概念図である。上皮細胞は、個体や個体の臓器等の表面を覆う上皮を構成し、通常、極性が有り、細胞間結合により隣り合う細胞と接しながら配列している。上皮細胞を含む組織ががん化すると、通常、高分化型の上皮様の性質を有する悪性腫瘍となる（矢印Ａ１）。
【０００８】
悪性腫瘍が大きくなると、例えば浸潤により血管壁を損傷し、血液に接したがん細胞が、悪性腫瘍から分離して血液中を循環することがある。この血液中を循環するがん細胞は循環がん細胞（ＣＴＣ）と呼ばれ、血液中の単位体積当たりの数等の検査により、当該腫瘍の進行度、悪性度、予後および／または転移可能性についての情報を得ることができる。
【０００９】
循環がん細胞は、上皮様の性質を有したまま血液中を循環する上皮系のがん細胞に加え非上皮系のがん細胞を含む。非上皮系のがん細胞には、上皮系のがん細胞から上皮間葉転換（矢印Ａ２）により低分化型の非上皮様の性質を有するようになった細胞が含まれ、血流から離脱し血管内に微小転移巣を形成した後、間葉上皮転換を起こして高分化型となることにより、悪性腫瘍の転移において大きな役割を果たす。
【００１０】
従って、血液中の循環がん細胞の検査の際、上皮系のがん細胞に加え、生化学的マーカーの異なる非上皮系のがん細胞をもより確実に検出することが悪性腫瘍の程度と転移可能性等の予後とについての情報を得るために重要である。本実施形態の細胞の判別方法は非上皮系のがん細胞を判別するものであり、上記のような血液に含まれる細胞の判別に加え、非上皮系のがん細胞の検出を目的とした様々な用途に用いられ得るものである。
【００１１】
図２は、本実施形態の細胞の判別方法に用いられる計測装置１００の構成を示す図である。本実施形態において、計測装置１００は、ラマン散乱光の分光スペクトルを測定する。計測装置１００は、測定部２と、情報処理装置４０とを備える。測定部２は、照射光学系１０と、対物光学系２０と、検出光学系３０と、細胞送出系８０を備える。照射光学系１０は、光源装置１１と、ガルバノスキャナ１２と、リレーレンズ１３ａ、１３ｂと、光学ミラー１４とを備える。対物光学系２０は、光学ミラー２１と、対物レンズ２２と、ステージ２３とを備える。細胞送出系８０は、細胞調整液Ｓを入れる容器８１と、ポンプ８２と、流路構造体９０と、細胞Ｒを回収する回収容器８３とを備える。流路構造体９０は、ステージ２３に載置されている。検出光学系３０は、ダイクロイックミラー３１と、リレーレンズ３２ａ、３２ｂと、分光器３３とを備える。図１では、照射光および検出光を１点鎖線を用いて模式的に示した。情報処理装置４０によるポンプ８２の制御を破線矢印Ａ３で模式的に示した。
なお、図１では後方散乱された光を解析する構成になっているが、前方散乱された光を解析する構成にしてもよい。流路構造体９０からの光から解析可能な分光スペクトルが得られれば、計測装置１００の構成は特に限定されない。細胞送出系８０は、計測装置１００とは別個の、独立に制御される系として構成してもよい。
【００１２】
光源装置１１は、半導体レーザ等のレーザ発振装置等を含んで構成される。光源装置１１が発振する光の波長は、散乱光の分光スペクトルが測定可能なら特に限定されないが、測定感度等の観点から適宜５３２ｎｍ、７８５ｎｍ等の波長を用いることができる。光源装置１１から出射された光は、ガルバノスキャナ１２に入射する。
【００１３】
ガルバノスキャナ１２は、不図示の可動ミラー等を含んで構成され、レーザ光の出射方向を変化させ走査させる。ガルバノスキャナ１２を出射した光は、リレーレンズ１３ａおよび１３ｂに入射する。リレーレンズ１３ａ、１３ｂを通過した光は光学ミラー１４、ダイクロイックミラー３１で反射された後、対物光学系２０に入射する。
【００１４】
対物光学系２０に入射した光は、光学ミラー２１で反射され、対物レンズ２２で屈折され、後に詳述するように、流路構造体９０における流路に形成された保持部に保持された細胞に入射する。
【００１５】
ラマン測定の対象となる細胞（以下、対象細胞Ｃと呼ぶ）の種類や状態等は、特に限定されない。本実施形態では、対象細胞Ｃは、生体、特に人間の血液に含まれる細胞とし、対象細胞Ｃを灌流しながら流路の途中で保持してラマン測定を行い、その結果から、対象細胞Ｃが、循環がん細胞か、上皮系のがん細胞または血液中の非がん化細胞かの判別を行う。
なお、対象細胞Ｃをホルマリン等で固定してラマン測定を行ってもよい。
【００１６】
流路構造体９０にある対象細胞Ｃで散乱された光は、対物レンズ２２を透過して光学ミラー２１で反射され、検出光学系３０に入射する。
【００１７】
検出光学系３０に入射した光は、ダイクロイックミラー３１を透過してリレーレンズ３２ａ、３２ｂを透過し、分光器３３に入射する。分光器３３は、グレーティングやＣＣＤ等の検出器等を含んで構成され、入射した光を分光して波長ごとの強度を取得する。分光器３３で波長ごとの強度が取得されたら、当該強度等のデータは情報処理装置４０に出力（図２の実線矢印Ａ４で情報の流れを示した）され、後述の記憶部４４に記憶される。
【００１８】
細胞送出系８０は、流路構造体９０を流れる対象細胞Ｃの移動、保持を制御しながら、容器８１に投入された、対象細胞Ｃと緩衝液とを含む細胞懸濁液Ｓを管に沿って送出する。容器８１では、対象細胞Ｃには、非上皮系のがん細胞Ｃｎと非上皮系のがん細胞以外の細胞Ｃｅが含まれている可能性が有る。対象細胞Ｃはラマン測定を受けた後、非上皮系のがん細胞Ｃｎであることが検出されたら回収容器８３に回収される。
なお、ラマン測定の結果を受けて、どの細胞を回収するかについては、適宜設定することができる。
【００１９】
図３は、情報処理装置４０の構成を示した図である。情報処理装置４０は、入力部４１と、表示部４２と、通信部４３と、記憶部４４と、制御部５０とを備える。制御部５０は、パラメータ算出部５１と、判別部５２と、流速制御部５３と、情報出力部５４とを備える。
【００２０】
入力部４１は、キーボードやタッチパネル等の入力装置により構成され、後述する判別パラメータを用いて対象細胞Ｃの判別を行う際の基準となる数値等を含む入力データを受け付ける。入力部４１は、受け付けた入力データを、後述の記憶部４４に記憶させる。
なお、入力データは、後述の通信部４３を介して取得してもよい。
【００２１】
表示部４２は、液晶モニタ等の表示装置により構成され、上皮系および／または非上皮系のがん細胞の数等の細胞判別の結果や、細胞判別に基づいて、腫瘍の進行度、悪性度、予後および／または転移可能性について分析（以下、がん分析と呼ぶ）を行った情報（以下、がん分析情報と呼ぶ）を表示する。また、表示部４２は、分光スペクトルや当該分光スペクトルから得た統計値等を適宜表示する。
なお、表示部４２は、感熱紙等の紙媒体に判定結果等を印字して出力する構成にしてもよい。
【００２２】
通信部４３は、インターネット等の通信網を利用して通信を行う通信装置により構成され、細胞判別の判定結果やがん分析情報を送信したり、適宜必要なデータを送受信する。記憶部４４は、不揮発性メモリ等により構成され、制御部５０に処理を行わせるプログラム、分光器３３から出力された測定データ、ならびに、判別パラメータを用いて細胞の判別やがん分析を行う際の基準となる数値等を記憶する。
【００２３】
制御部５０は、ＣＰＵ等の処理装置により構成され、計測装置１００を制御する動作の主体として機能し、記憶部４４または不図示の記憶媒体に搭載されているプログラムを実行することにより、細胞判別における計算処理、出力処理等の各種処理を行う。
【００２４】
制御部５０のパラメータ算出部５１は、記憶部４４に記憶されている測定データの分光スペクトルから、細胞判別に用いる判別パラメータを算出する。本実施形態の判別パラメータは、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合の量に対応する信号を定量化した数値、または２以上の当該信号から算出される数値である。複数の判別パラメータを用いて細胞判別を行うこともできる。
【００２５】
判別パラメータは、対象となる細胞の種類や測定条件等により選択される。所定のアミノ酸としては、芳香族アミノ酸、特にトリプトファンおよび／またはフェニルアラニンを選択することができる。所定の核酸塩基としては、特にシトシンを選択することができる。所定の原子間結合としては、対象細胞Ｃの一部または全部における有機化合物の量の指標となる原子間結合を選択することができる。有機化合物の量の指標となる原子間結合としては、特に炭素原子を含む複数の原子間の結合、すなわち炭素原子間の二重結合およびアミド結合、飽和炭化水素におけるＣ−Ｈ結合等を選択することができる。さらに、所定の原子間結合として、シトクロムｃのポルフィリン環に存在する炭素原子間の二重結合を選択することができる。
【００２６】
所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合に対応する信号の定量化の方法は、特に限定されず、様々な統計値を用いることができる。パラメータ算出部５１は、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基、または所定の原子間結合に対応する、ラマン散乱光のストークス領域の波数の強度を用いて上記信号を定量化することができる。パラメータ算出部５１は、トリプトファンに対応する７４９／ｃｍの強度、フェニルアラニンに対応する波数１００３／ｃｍの強度、シトシンに対応する７８２／ｃｍの強度、炭素原子間の二重結合若しくはアミド結合に対応する波数１６５９／ｃｍの強度、シトクロムｃのポルフィリン環に存在する炭素原子間の二重結合に対応する１５８３／ｃｍの強度、または、飽和炭化水素のＣ−Ｈ結合１４５０／ｃｍの強度の値を算出して判別パラメータとしたり、これらの強度の値を用いて判別パラメータを算出することができる。
なお、パラメータ算出部５１は、上記に挙げた波数の強度のみではなく、判別パラメータの算出に関係する所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合の種類に合わせて適切な波数の強度を算出することができる。
【００２７】
パラメータ算出部５１は、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合に対応するピークの最大強度、面積等を用いて上記信号を定量化することができる。パラメータ算出部５１は、ストークス散乱域において、半値幅の範囲に７４９／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１００３／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に７８２／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１６５９／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１５８３／ｃｍを含むピーク、または半値幅の範囲に１４５０／ｃｍを含むピークの最大強度、面積等の値を算出して判別パラメータとしたり、これらの強度の値を用いて判別パラメータを算出することができる。パラメータ算出部５１は、ピークの強度、面積等を算出する場合は、ノイズや自家蛍光等のバックグラウンドを適宜差し引いて求める。
【００２８】
本実施形態のパラメータ算出部５１は、一つの上記所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合の量またはこれらの量に基づくパラメータを算出し判別パラメータとする。例えば、一つの上記所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合の量と、他の上記所定のアミノ酸、所定の核酸塩基または所定の原子間結合の量との比率を算出し判別パラメータとすることができる。
なお、判別パラメータの算出方法は特に限定されない。
【００２９】
本実施形態のパラメータ算出部５１は、トリプトファンに対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値に対する、シトシンに対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値の比率を判別パラメータ１−１（図中、「７４９ｃｍ−１／７８２ｃｍ−１」と表す）とする。本実施形態のパラメータ算出部５１は、飽和炭化水素のＣ−Ｈ結合に対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値に対する、フェニルアラニンに対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値の比率を判別パラメータ１−２（図中、「１００３ｃｍ−１／１４５０ｃｍ−１」と表す）とする。以下では、判別パラメータ１−１と判別パラメータ１−２を総称して判別パラメータ１とする。
【００３０】
本実施形態のパラメータ算出部５１は、シトクロムｃのポルフィリン環に存在する炭素原子間の二重結合に対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値に対する、炭素原子間の二重結合若しくはアミド結合に対応するラマンスペクトルのピークの大きさを定量化した数値の比率を判別パラメータ２（図中、「１５８３ｃｍ−１／１６５９ｃｍ−１」と表す）とする。
【００３１】
制御部５０の判別部５２は、パラメータ算出部５１で算出された判定パラメータと、記憶部４４に記憶されており細胞判別の基準となる値（以下、判別基準値と呼ぶ）とを比較することにより、対象細胞Ｃが非上皮系のがん細胞か、上皮系のがん細胞か、非がん化細胞かを判別する。本実施形態の判別部は、判別基準値に基づいて二次元上にマッピングされた細胞プロフィール領域に、判別パラメータ１および判別パラメータ２の組合せに対応する点が含まれるか否かにより細胞判別を行う。
【００３２】
判別基準値および細胞プロフィール領域は、過去のデータに基づき、非上皮系のがん細胞、上皮系のがん細胞、および非がん化細胞がとり得る当該判別パラメータの基準値および範囲をそれぞれ示す。判別基準値および細胞プロフィール領域は、非上皮系のがん細胞、上皮系のがん細胞、および非がん化細胞に対してラマン測定を行って得た判別パラメータの値を、多変量解析等を用いて分析することで設定することができる。ラマン測定で得た統計値により、これらの細胞がとり得る判別パラメータの値の範囲が設定され、例えば、この範囲を近似した関数の形で表す場合のパラメータを判別基準値として用いることができる。
【００３３】
図４は、判別パラメータと細胞プロフィール領域７０とに基づいて、対象細胞Ｃを判別する方法を説明するための概念図である。図４には、判別パラメータ１を横軸に、判別パラメータ２を縦軸にとったグラフ（以下、判別グラフ７と呼ぶ）が示されている。判別グラフ７に示された細胞プロフィール領域７０は、非上皮系のがん細胞に対応する細胞プロフィール領域７０ａ、上皮系のがん細胞に対応する細胞プロフィール領域７０ｂ、および所定の非がん化細胞に対応する細胞プロフィール領域７０ｃを備える。所定の非がん化細胞としては、細胞懸濁液Ｓに多い割合で含まれる非がん化細胞を選択することが好ましく、例えば細胞懸濁液Ｓが循環がん細胞の判別のため末梢血を遠心分離した分画から得られた場合、上記所定の非がん化細胞の細胞プロフィール領域７０ｃとしては、末梢血単核細胞の細胞プロフィール領域を設定することが好ましい。
なお、細胞プロフィール領域７０は、様々な細胞に対応させて４つ以上設定してもよく、また、上皮系のがん細胞および／または所定の非がん化細胞の細胞プロフィール領域７０ｂ、７０ｃを省略してもよい。
【００３４】
対象細胞Ｃを測定して得た判別パラメータ１および判別パラメータ２が判別グラフ７中の点Ｐ１に対応する場合、点Ｐ１は非上皮系のがん細胞に対応するため、対象細胞Ｃは非上皮系のがん細胞に分類される。特に血液等から対象細胞Ｃを採取した場合、点Ｐ１は上皮間葉転換したがん細胞に該当する。
【００３５】
対象細胞Ｃを測定して得た判別パラメータ１および判別パラメータ２が判別グラフ７中の点Ｐ２に対応する場合、点Ｐ２は上皮系のがん細胞に対応するため、対象細胞Ｃは非上皮系のがん細胞に分類される。
【００３６】
対象細胞Ｃを測定して得た判別パラメータ１および判別パラメータ２が判別グラフ７中の点Ｐ３に対応する場合、点Ｐ３は所定の非がん化細胞に対応するため、対象細胞Ｃは所定の非がん化細胞に分類される。
【００３７】
対象細胞Ｃを測定して得た判別パラメータ１および判別パラメータ２が判別グラフ７中の点Ｐ４に対応する場合、点Ｐ４は上皮系のがん細胞、非上皮系のがん細胞、上記所定の非がん化細胞のいずれにも対応しないため、対象細胞Ｃはこれらの細胞ではないものとして分類される。
なお、上述の判別グラフ７は、二次元のものとしたが、任意の数の判別パラメータを用いて任意の次元の下で解析することができる。
【００３８】
判別基準値および細胞プロフィール領域７０は、がんの種類や、部位、関与する遺伝子等に基づいてそれぞれ設定されることが精密な判定のために好ましい。がんの種類または部位としては、癌（癌腫）、また、体内の器官のがん、例えば、卵巣がんとすることができる。例えば、検査対象を卵巣がんの患者とした場合、卵巣がんが上皮間葉転換されたがん細胞を検出するように細胞プロフィール領域７０を設定することが好ましい。
【００３９】
本実施形態における「上皮系のがん細胞」はサイトケラチン、ＥｐＣＡＭ、Ｅ−カドヘリンからなる群から選択される一以上のタンパク質を発現する細胞であり、「上皮間葉転換したがん細胞」はビメンチンおよび／またはＮ−カドヘリンを発現する細胞である。
【００４０】
制御部５０の流速制御部５３（図３）は、細胞懸濁液Ｓおよびリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと呼ぶ）の流速を制御することにより、対象細胞Ｃの流路での移動を制御し、さらに細胞判別の結果に基づいて対象細胞を分離する操作を制御する。
【００４１】
図５は、流路構造体９０の構造を示す概念図である。流路構造体９０は、細胞流路９１と、補助流路９２ａ、９２ｂと、保持部９３ａ、９３ｂと、バイパス流路９４ａ、９４ｂと、連結部９５とを備える。細胞流路９１は、保持部９３ａおよびバイパス流路９４ａとを介して補助流路９２ａと連結され、保持部９３ｂおよびバイパス流路９４ｂとを介して補助流路９２ｂと連結されている。連結部９５は、流路構造体９０の内部の流路と外部の流路とを連結している。
【００４２】
保持部９３の数は、適宜設定することができる。例えば、検査対象となる人間から２０ｍｌの血液を採取し、循環がん細胞の数を調べる検査を行う場合、検出された循環がん細胞の数が０個から数個までと増加するに従い、段階的に推定されるがんの進行度、悪性度、予後および／または転移可能性が変わる。流路構造体９０は、保持部９３を１個のみ備えてもよいが、複数の保持部９３を備えることが好ましい。流路構造体９０は、流路が複雑になりすぎないように、細胞流路９１を複数設けたり、２個以上１０個以下の保持部９３を備えることが好ましい。これにより、効率的に細胞判別を行うことができる。
【００４３】
細胞流路９１には、対象細胞Ｃを含む細胞懸濁液Ｓが流れている。補助流路９２ａ、９２ｂには、ＰＢＳが流れている。細胞流路９１および補助流路９２ａ、９２ｂの内部を液体が流れる方向を実線矢印Ａ５ならびにＡ６およびＡ７で模式的に示した。細胞流路９１と、補助流路９２ａ、９２ｂのそれぞれを流れる液体の流速は、独立して流速制御部５３により制御される。
なお、補助流路９２ａ、９２ｂを流れる液体は、ＰＢＳに限定されないが、ラマン測定に影響を与えない程度に、温度、浸透圧等が細胞流路９１の緩衝液と近いものが好ましい。
【００４４】
保持部９３ａ、９３ｂは、細胞流路９１側に開いた反楕円体上の形状をしているが、対象細胞Ｃに細胞流路９１の流れが直接当たらないようにするものであれば特に限定されない。保持部９３ａ、９３ｂの細胞流路９１と接する開口部の幅Ｗおよび奥行Ｌは、対象細胞Ｃの全体が収まり保持されるように、１０μｍ以上２００μｍ以下であることが好ましく、２０μｍ以上１００μｍ以下であることがより好ましい。バイパス回路９４ａおよび９４ｂの管径は、対象細胞Ｃを通過させないよう、対象細胞Ｃの平均的な幅よりも小さく設定され、０．１μｍ以上２０μｍ以下であることが好ましい。
【００４５】
（対象細胞Ｃの移動制御の方法）
以下、図６〜８を参照しながら、流速制御部５３により対象細胞Ｃの移動が制御され、非上皮系のがん細胞Ｃｎを、対象細胞Ｃの細胞群から分離して回収する方法について説明する。
【００４６】
図６（ａ）は、細胞流路９１と補助流路９２ａ、９２ｂが略等しい速度で流れるように設定されている場合の対象細胞Ｃの移動状態を示す図である。細胞流路９１には、対象細胞Ｃとして、非上皮系のがん細胞Ｃｎおよび非上皮系のがん細胞以外の細胞Ｃｅが流れている。細胞流路９１を流れる対象細胞Ｃは、細胞流路９１と補助流路９２とにおける流速が略等しいため、保持部９３ａ、９３ｂに引き寄せられることなく、細胞流路９１に沿って進んでいる。
【００４７】
図６（ｂ）は、図６（ａ）の状態の後に、補助流路９２ａにおける流速を上げた場合の対象細胞Ｃの移動状態を示す図である。ベルヌーイの定理により流速の大きい液体の方が圧力が低いため、対象細胞Ｃ１は保持部９３ａに引き寄せられ、保持部９３ａの側面と接して保持される。こうして対象細胞Ｃ１が保持された状態でレーザ光が照射され、ラマン測定および細胞判別が行われる。
【００４８】
図７（ａ）は、図６（ｂ）の状態の後に、補助流路９２ａにおける流速を下げた場合の対象細胞Ｃの移動状態を示す図である。図６（ｂ）で対象細胞Ｃ１に対して行ったラマン測定および細胞判別の結果、対象細胞Ｃ１が非上皮系のがん細胞ではないと判別された場合に相当する。このとき、補助流路９２ａにおける流速は下げられ、細胞流路９１および補助流路９２ａ、９２ｂにおいては略等しい流速になっている。細胞流路９１と補助流路９２とにおける流速差により保持部９３ａに保持されていた対象細胞Ｃ１は保持部９３ａから離れ、細胞流路９１に沿って進む。
【００４９】
図７（ｂ）は、図７（ａ）の状態の後に、補助流路９２ａにおける流速を上げた場合の対象細胞Ｃの移動状態を示す図である。ベルヌーイの定理により流速の大きい液体の方が圧力が低いため、対象細胞Ｃｎは保持部９３ａに引き寄せられ、保持部９３ａの側面と接して保持される。こうして対象細胞Ｃｎが保持された状態でレーザ光が照射され、ラマン測定および細胞判別が行われる。ラマン測定および細胞判別により対象細胞Ｃｎが非上皮系のがん細胞であるという結果が出た場合、細胞懸濁液Ｓを全て流し終わるまで対象細胞Ｃｎは保持部９３ａに保持される。保持部９３ａに非上皮系のがん細胞Ｃｎが保持されたら、ラマン測定のための光の照射位置を保持部９３ａから保持部９３ｂに移し、保持部９３で上記と同様にラマン測定および細胞判別を行う。
なお、計測装置１００は、保持部９３ａと保持部９３ｂ等、複数の保持部９３のそれぞれに対して独立に光を照射する複数の照射部を備えてもよい。これにより、より効率的に細胞の判別を行うことができる。ここで、複数の照射部は、複数の照射口を有すれば、計測装置１００の照射光学系１０または対物光学系２０の一部を共有していてもよい。
【００５０】
図８（ａ）は、保持部９３ａ、９３ｂの両方が非上皮系のがん細胞Ｃｎを保持しつつ、全ての細胞懸濁液Ｓが流し終わり、細胞流路９１にＰＢＳが流されている状態を示している。補助流路９２ａ、９２ｂは上皮系のがん細胞Ｃｎを保持するため、細胞流路９１よりも大きな流速でＰＢＳが流れている。
【００５１】
図８（ｂ）は、図８（ａ）の後に、補助流路９２ａ、９２ｂにおける流速を下げた場合の上皮系のがん細胞Ｃｎの移動状態を示す図である。このとき、補助流路９２ａ、９２ｂにおける流速は下げられ、細胞流路９１および補助流路９２ａ、９２ｂにおいては略等しい流速になっている。細胞流路９１と補助流路９２とにおける流速差により保持部９３ａ、９３ｂに保持されていた対象細胞Ｃ１は保持部９３ａから離れ、細胞流路９１に沿って進む。非上皮系のがん細胞Ｃｎは、流路構造体９０を出ると回収容器８３に回収される。こうして非上皮系のがん細胞Ｃｎは、細胞懸濁液Ｓに含まれる他の細胞群から分離されて回収される。
なお、対象細胞Ｃを保持し、分離して回収するアルゴリズムは、本実施形態の方法に限定されず、必要とされる保持部９３の数等に合わせ、適宜設計され得る。
【００５２】
制御部５０の情報出力部５４は、各対象細胞Ｃの細胞判別の結果となる情報、上皮系のがん細胞Ｃｎと判別された個数、非上皮系のがん細胞と判別された個数およびこの２つの個数を合わせた循環がん細胞の個数を含む、表示用画像を作成し、表示部４２に出力する。さらに、情報出力部５４は、腫瘍の進行度、悪性度、予後および／または転移可能性を示すがん分析情報を含む、表示用画像を作成し、表示部４２に出力する。このように、計測装置１００は、がんの検査装置ともなり得る。
【００５３】
（がんの検査方法の流れ）
図９は、本実施形態の細胞の判別方法を含むがんの検査方法の流れを示すフローチャートである。
【００５４】
ステップＳ１００１において、医療従事者等により、検査対象の個体から血液が採取される。ステップＳ１００１が終了したら、ステップＳ１００３に進む。ステップＳ１００３において、ステップＳ１００１で採取された血液から遠心分離等を用いて、循環がん細胞が含まれると推定される一部の細胞を含む細胞懸濁液Ｓを調整する。ステップＳ１００３が終了したら、ステップＳ１００５に進む。
【００５５】
ステップＳ１００５において、ステップＳ１００３で調製された細胞懸濁液Ｓが流路に流され、流速制御部５３により、細胞流路９１の空いている保持部９３に対象細胞を一時的に保持し、保持した対象細胞Ｃのラマンスペクトルを取得する。ステップＳ１００５が終了したら、ステップＳ１００７に進む。ステップＳ１００７において、パラメータ算出部５１は、ステップＳ１００５で取得したラマンスペクトルにおける、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対する信号から、判別パラメータを算出する。ステップＳ１００７が終了したら、ステップＳ１００９に進む。
【００５６】
ステップＳ１００９において、判別部５２は、判別パラメータに基づいて、一時的に保持した対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞Ｃｎか、上皮系のがん細胞または非がん化細胞かの判別を行う。ステップＳ１００９が終了したら、ステップＳ１０１１に進む。ステップＳ１０１１において、制御部５０は、ステップＳ１００９で対象細胞Ｃが非上皮系のがん細胞と判別されたか否かを判定する。非上皮系のがん細胞と判別された場合、ステップＳ１０１１を否定判定してステップＳ１０１９に進む。非上皮系のがん細胞と判別された場合、ステップＳ１０１１を肯定判定されステップＳ１０１３に進む。
【００５７】
ステップＳ１０１９において、流速制御部５３は、細胞流路９１と補助流路９２とにおける流速差を調整し、一時的に保持している、非上皮系のがん細胞ではないと判別された対象細胞Ｃを保持部９３から解放する。ステップＳ１０１９が終了したら、ステップＳ１０１３に進む。ステップＳ１０１３において、制御部５０は、細胞懸濁液Ｓを全て流し終わったか否かを判定する。細胞懸濁液Ｓを流し終わっていない場合、ステップＳ１０１３を否定判定してステップＳ１００５に戻る。細胞懸濁液Ｓを流し終わった場合、ステップＳ１０１３を肯定判定してステップＳ１０１５に進む。
【００５８】
ステップＳ１０１５において、制御部５０は、保持部９３に保持している上皮系のがん細胞Ｃｎを細胞流路９１に開放し、細胞懸濁液Ｓ中の他の細胞群から分離して回収する。ステップＳ１０１５が終了したら、ステップＳ１０１７に進む。ステップＳ１０１７において、情報出力部５４は、対象細胞Ｃを採取した検査対象の腫瘍の進行度、悪性度、予後および／または転移可能性についての情報を表示部４２に表示する。
【００５９】
上述の実施の形態によれば、次の作用効果が得られる。
（１）本実施形態の細胞の判別方法は、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号を計測する計測工程と、計測された信号に基づいて、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞Ｃｎか否かの判別を行う判別工程と、を備える。これにより、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６０】
（２）本実施形態の細胞の判別方法において、対象細胞Ｃは、生体の血液に含まれる細胞であり、上記判別工程は、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞Ｃｎを含む循環がん細胞か、血液中の非がん化細胞かの判別を行う。これにより、正確に循環がん細胞の数を算出することができる。
【００６１】
（３）本実施形態の細胞の判別方法において、上記判別工程は、対象細胞Ｃが、上皮系のがん細胞か、当該上皮系のがん細胞が上皮間葉転換した細胞Ｃｎかの判別を行う。これにより、転移可能性等の腫瘍の予後を示す非上皮系細胞Ｃｎが存在するか否かについての情報を正確に得ることができる。
【００６２】
（４）本実施形態の細胞の判別方法において、対象細胞Ｃは、卵巣がんの患者から採取した細胞であり、上記上皮系のがん細胞は、卵巣がんの細胞である。これにより、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６３】
（５）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、芳香族アミノ酸の量に対応する信号を計測する。これにより、対象細胞Ｃが、芳香族アミノ酸の量と関連づけられている非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６４】
（６）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、トリプトファンおよび／またはフェニルアラニンの量に対応する信号を計測する。これにより、対象細胞Ｃが、トリプトファンおよび／またはフェニルアラニンの量と関連づけられている非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６５】
（７）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、シトシンの量に対応する信号を計測する。これにより、対象細胞Ｃが、シトシンの量と関連づけられている非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６６】
（８）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、炭素原子を含む複数の原子間の結合の量に対応する信号を計測する。これにより、対象細胞Ｃが、炭素原子を含む複数の原子間の結合の量と関連づけられている非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６７】
（９）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、シトクロムｃのポルフィリン環にある炭素原子間の二重結合の量に対応する信号を計測する。これにより、炭素原子を含む複数の原子間の結合の量と関連づけられている非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００６８】
（１０）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、対象細胞Ｃの一部または全部における有機化合物の量に対応する信号を計測する。これにより、有機化合物の量により判別パラメータを規格化したり等でき、非上皮系のがん細胞か否かの判別をより正確に行うことができる。
【００６９】
（１１）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、ラマン散乱光のストークス散乱域の強度において、半値幅の範囲に７４９／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に７８２／ｃｍを含むピーク、半値幅の範囲に１５８３／ｃｍを含むピーク、または半値幅の範囲に１６５９／ｃｍを含むピークのデータから算出された統計値に基づいてそれぞれ対応する物質または結合の量を算出する。これにより、生化学的なマーカーを用いずとも、対象細胞Ｃが非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００７０】
（１２）本実施形態の細胞の判別方法において、計測工程では、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも二以上の物質または結合の量に対応する信号を計測し、判別工程では、一つの上記物質または結合の量と、他の上記物質または結合の量との比を算出し、一以上の上記比に基づいて、対象細胞Ｃの判別を行う。これにより、判別パラメータを適宜組み合わせて、より正確に非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００７１】
（１３）本実施形態のがんの検査装置またはがんの検査方法は、本実施形態の細胞の判別方法により、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞Ｃｎか否かの判別を行い、この判別の結果に基づいて、検査対象のがんの有無、程度、または転移可能性についての情報を提供する。これにより、非上皮系のがん細胞も正確に判別し、がんの現在、予後についての正確な情報を提供することができる。
【００７２】
（１４）本実施形態の計測装置は、上記計測工程により測定された信号に基づいて、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞か否かの判別を行った判別結果を出力する情報出力部を備える。これにより、非上皮系のがん細胞を正確に判別した結果を提供することができる。
【００７３】
（１５）本実施形態の計測装置は、対象細胞Ｃが移動する細胞流路９１と、細胞流路９１と接続され、一部の対象細胞を保持する保持部９３と、保持部９３に光を照射する対物光学系２０と、を備える。これにより、細胞懸濁液Ｓに含まれる細胞に対し、順次、非上皮系のがん細胞か否かを正確に判別することができる。
【００７４】
（１６）本実施形態の計測装置は、細胞判別の判別結果に基づいて対象細胞Ｃを分離する操作を制御する流速制御部を備える。これにより、正確に選別し、取り出した細胞を、より詳細に解析等することができる。
【００７５】
なお、上述の実施形態に係る細胞の判別方法、がんの検査装置またはがんの検査方法、及び計測装置では、対象細胞が、非上皮系のがん細胞か、上皮系のがん細胞または非がん化細胞かの判別が行われるが、非上皮系のがん細胞か否かのみを判別する細胞の判別方法、がんの検査装置またはがんの検査方法、及び計測装置も本発明に包含される。
【００７６】
次のような変形も本発明の範囲内であり、上述の実施形態と組み合わせることが可能である。
（変形例１）
本実施形態の情報処理装置４０の情報処理機能を実現するためのプログラムをコンピュータにより読み取り可能な記録媒体に記録して、この記録媒体に記録された、上述した判別パラメータの算出処理および判別処理等に関するプログラムをコンピュータシステムに読み込ませ、実行させてもよい。なお、ここでいう「コンピュータシステム」とは、ＯＳ（Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ）や周辺機器のハードウェアを含むものとする。また、「コンピュータ読み取り可能な記録媒体」とは、フレキシブルディスク、光磁気ディスク、光ディスク、メモリカード等の可搬型記録媒体、コンピュータシステムに内蔵されるハードディスク等の記憶装置のことをいう。さらに「コンピュータ読み取り可能な記録媒体」とは、インターネット等のネットワークや電話回線等の通信回線を介してプログラムを送信する場合の通信線のように、短時間の間、動的にプログラムを保持するもの、その場合のサーバやクライアントとなるコンピュータシステム内部の揮発性メモリのように、一定時間プログラムを保持するものを含んでもよい。また上記のプログラムは、前述した機能の一部を実現するためのものであってもよく、さらに前述した機能をコンピュータシステムにすでに記録されているプログラムとの組み合わせにより実現するものであってもよい。
【００７７】
また、パーソナルコンピュータ（以下、ＰＣと呼ぶ）等に適用する場合、上述した制御に関するプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭなどの記録媒体やインターネット等のデータ信号を通じて提供することができる。図１０はその様子を示す図である。ＰＣ９５０は、ＣＤ−ＲＯＭ９５３を介してプログラムの提供を受ける。また、ＰＣ９５０は通信回線９５１との接続機能を有する。コンピュータ９５２は上記プログラムを提供するサーバーコンピュータであり、ハードディスク等の記録媒体にプログラムを格納する。通信回線９５１は、インターネット、ＰＣ通信などの通信回線、あるいは専用通信回線などである。コンピュータ９５２はハードディスクを使用してプログラムを読み出し、通信回線９５１を介してプログラムをＰＣ９５０に送信する。すなわち、プログラムをデータ信号として搬送波により搬送して、通信回線９５１を介して送信する。このように、プログラムは、記録媒体や搬送波などの種々の形態のコンピュータ読み込み可能なコンピュータプログラム製品として供給できる。
【００７８】
本変形例の検査プログラムは、所定のアミノ酸、所定の核酸塩基および所定の原子間結合からなる群から選択される少なくとも一以上の物質または結合の量に対応する信号に基づいて、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞Ｃｎか、上皮系のがん細胞または非がん化細胞かの判別を行う判別処理と、判別処理の結果についての情報、または対象細胞Ｃが取得された検査対象のがんの有無、程度または転移可能性についての情報を出力する出力処理を処理装置に行わせる。これにより、対象細胞Ｃが、非上皮系のがん細胞か否かの判別を正確に行うことができる。
【００７９】
（実施例）
培養卵巣がん細胞と、この培養卵巣がん細胞に上皮間葉転換誘導試薬を加え上皮間葉転換を誘導した細胞と、末梢血単核細胞とについて、ラマン測定を行い、判別パラメータの分布を各細胞毎にプロットした。
【００８０】
（培養卵巣がん細胞の上皮間葉転換の誘導）
Ｅ−カドヘリンの発現が確認されている培養卵巣がん細胞ＯＶＣＡＲ−３（ＡＴＣＣ社）に上皮間葉転換誘導試薬ＳｔｅｍＸＶｉｖｏ  ＥＭＴＩｎｄｕｃｉｎｇ  Ｍｅｄｉａ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を加えたところ、当該試薬を加えた後５〜１０日、間葉系マーカーのビメンチンの発現を一部の細胞について確認することができた。この細胞を、以下では、上皮間葉転換が誘導された細胞とする。浮遊培養についても間葉状態が維持されることが確認された。
【００８１】
（実施例１）
上述のように取得した上皮間葉転換が誘導された細胞と、培養卵巣がん細胞（ＯＶＣＡＲ−３）と、末梢血単核細胞（Ｌｏｎｚａ社）とを、それぞれパラフィンを用いて固定し、標本を作成した後、公知の脱パラフィン処理を行った。脱パラフィン処理がされた試料に対し、光照射を行うおおまかな領域を設定し、当該領域をいくつかの単位領域に分割し、それぞれの単位領域に対し１μｍ程度のビーム径を有する波長５３２ｎｍのレーザ光を照射してラマン散乱光を測定した。
【００８２】
各単位領域について取得したスペクトルを平均し、ガラスに対応するピークと自家蛍光とを公知のアルゴリズムにより除去した。本実施形態の細胞の判別方法により、ストークス散乱域において、トリプトファンに対応する７４９／ｃｍの強度の、シトシンに対応する７８２／ｃｍの強度に対する比率（図中「７４９ｃｍ−１／７８２ｃｍ−１」：判別パラメータ１−１）を算出した。また、同じ標本において、シトクロムｃのポルフィリン環にある炭素原子間の二重結合に対応する１５８３／ｃｍの強度の、炭素原子間の二重結合およびアミド結合に対応する１６５９／ｃｍの強度に対する比率（図中、「１５８３ｃｍ−１／１６５９ｃｍ−１」：判別パラメータ２）を算出した。
【００８３】
図１１は、各細胞の判別パラメータ１−１を横軸に、判別パラメータ２を縦軸にとったグラフを示した図である。培養卵巣がん細胞（ＯＶＣＡＲ−３）と、上皮間葉転換（ＥＭＴ）誘導された培養卵巣がん細胞と、末梢血単核細胞とのそれぞれのデータは、分かれてクラスターを形成している。
図１１のように与えられた測定値から、多変量解析の方法による各細胞に対応するデータ分布の重心や各点の当該重心からの距離等に基づいて、判定基準値および細胞プロフィール領域を様々な方法で設定することができる。
【００８４】
（実施例２）
実施例１で得られたラマンスペクトルをさらに解析し、本実施形態の細胞の判別方法により、ストークス散乱域において、フェニルアラニンに対応する１００３／ｃｍの強度の、飽和炭化水素のＣ−Ｈ結合に対応する１４５０／ｃｍの強度に対する比率（図中「１００３ｃｍ−１／１４５０ｃｍ−１」：判別パラメータ１−２）を算出した。
【００８５】
図１２は、各細胞の判別パラメータ１−２を横軸に、判別パラメータ２を縦軸にとったグラフを示した図である。上皮間葉転換（ＥＭＴ）誘導された培養卵巣がん細胞と、培養卵巣がん細胞（ＯＶＣＡＲ−３）および末梢血単核細胞の２つを１まとまりとしたデータとは、分かれてクラスターを形成している。しかしながら、図中の点Ｄは、培養卵巣がん細胞についての点であるが、培養卵巣がん細胞のクラスターより末梢血単核細胞のクラスターに近い位置に位置している。従って、判別パラメータ１−１と判別パラメータ２とを用いて細胞判別を行う場合、対象細胞Ｃが非上皮系のがん細胞か否かを判別する方が、培養卵巣がん細胞か末梢血単核細胞かを判別するよりも精度が高いと考えられる。
【００８６】
本発明は上記実施形態の内容に限定されるものではない。本発明の技術的思想の範囲内で考えられるその他の態様も本発明の範囲内に含まれる。
【００８７】
次の優先権基礎出願の開示内容は引用文としてここに組み込まれる。
日本国特許出願２０１７年第０３９７２７号（２０１７年３月２日出願）
【符号の説明】
【００８８】
４０…情報処理装置、５０…制御部、５１…パラメータ算出部、５２…判別部、５３…流速制御部、５４…情報出力部、７０，７０ａ，７０ｂ，７０ｃ…細胞プロフィール領域、９０…流路構造体、９１…細胞流路、９２ａ，９２ｂ…補助流路、９３ａ，９３ｂ…保持部、９４ａ，９４ｂ…バイパス流路、１００…計測装置、Ｃｎ…非上皮系のがん細胞。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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