(57)【要約】  プラセンタ抽出物からエクソソームを抽出し、エクソソーム含量の高い豚プラセンタ抽出物の製造方法を確立した。このエクソソーム内には抗老化作用を有する複数のｍｉＲＮＡが見出され、これらのｍｉＲＮＡを含むエクソソームは、抗老化効果を有する錠剤、サプリメントおよび飲料などの経口組成物、乳液、化粧用オイルおよび洗顔クリームなどの化粧料、ならびに線維芽細胞増殖促進剤として利用することができる。
2018199231.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）配列番号１〜１６２のいずれかで示される塩基配列の核酸分子、
（ｉｉ）（ｉ）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する核酸分子、または
（ｉｉｉ）（ｉ）の塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有する塩基配列の核酸分子、
からなる群より選択される少なくとも１種の核酸分子を含有し、哺乳類のプラセンタからの抽出物であることを特徴とするエクソソーム。ただし、前記核酸分子がＲＮＡの場合は、前記各塩基配列で示されるＴがＵである。
【請求項２】
前記少なくとも１種の核酸分子が、配列番号３、８、１０、１８、２２、２９、３３、３４、３７、３９、４１、５１、６０、６１、６６、７１、７２、７５、７６、７７、１０５、１０８、１０９、１３８、１４８、１５７および１５９で示される塩基配列の核酸分子を含有する請求項１に記載のエクソソーム。ただし、各核酸分子の塩基配列は、当該塩基配列と９０％以上の同一性を有するか、または当該塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有してもよい。
【請求項３】
前記少なくとも１種の核酸分子が、配列番号１６、７４および８７で示される塩基配列の核酸分子、を含有する請求項１に記載のエクソソーム。ただし、各核酸分子の塩基配列は、当該塩基配列と９０％以上の同一性を有するか、または当該塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有してもよい。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のエクソソーム、またはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを有効成分として含有する経口組成物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のエクソソーム、またはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを、有効成分として含有する化粧料組成物。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のエクソソーム、またはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０のｍｉＲＮＡを有効成分として含有する線維芽細胞増殖促進剤。
【請求項７】
哺乳類のプラセンタを熱水で抽出し、プロテアーゼによる酵素分解を行い、球状構造をしたエクソソームを含有するプラセンタ抽出物を回収することを特徴とするプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項８】
前記プラセンタ抽出物をさらに滅菌水で抽出する工程を含む請求項７に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項９】
前記哺乳類のプラセンタが、豚プラセンタである請求項７または８に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のエクソソーム、またはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを、哺乳動物細胞に投与することを特徴とする細胞の老化を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【クロスリファレンス】
【０００１】
本出願は、２０１７年４月２８日に日本国において出願された特願２０１７−０８９０２４号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、プラセンタに由来するエクソソームを含有する各種組成物（経口組成物、化粧料組成物、線維芽細胞増殖促進剤）の提供、およびエクソソームを含有するプラセンタ抽出物、エクソソームの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
プラセンタ（胎盤）抽出物は美容効果や健康効果をねらい、化粧品やサプリメントに配合されている（特許文献１）。プラセンタ抽出物中には、アミノ酸、ペプチド、核酸などが含まれ、それらが相乗的に生理作用に寄与していると考えられてきたが、機能性関与成分の特定や生体内への吸収など解明されていない点も多いのが現状である。そういった背景から、プラセンタ抽出物内の機能性成分の特定が食品、医薬品市場で望まれていた。【０００４】
近年、エクソソーム（細胞外小胞体）として知られる細胞分泌物が注目されている。生体内において、エクソソームは様々な臓器に由来する細胞から分泌される。これらのエクソソームには、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）やアミノ酸、ペプチドなどの生理活性物質が含まれ、輸送体として働き、ホルモン様に臓器間のクロストークに役立つことが知られている（非特許文献１）。妊娠時の胎盤からもエクソソームが放出され、胎児と母体のクロストークに働いていることも報告されている（非特許文献２）。【０００５】
また、ヒトの血清中に食物のエクソソームに由来するｍｉＲＮＡが検出されることから、エクソソームは消化管から吸収される可能性があることも知られている（非特許文献３）。これらの食物由来エクソソームは、吸収され、免疫調整などの生体の機能に有用な役割を果たすことも報告されているが、メカニズムについては不明な点も多く、特に、細胞レベルでの解明は十分ではなかった（非特許文献４）。【０００６】
ｍｉＲＮＡとは、２０〜２５塩基からなる微小ＲＮＡである。ヒト等の生体においては数千種類のｍｉＲＮＡが存在することが知られている。ｍｉＲＮＡはタンパク質へ翻訳されないＲＮＡであるが、メッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)配列に部分相補的に結合することで、直接的に、ほかの遺伝子の発現を調節する事ができる。1種類のｍｉＲＮＡが、複数の遺伝子の発現制御に関わっていること、もしくは、複数のｍｉＲＮＡの組み合わせによって機能が発揮されることもある。つまり、ｍｉＲＮＡは単一でも機能できるときもあるが、ほかの種類のｍｉＲＮＡと協力することで、複数のｍＲＮＡの遺伝子発現を抑制している。【０００７】
一方、プラセンタ抽出物による美容効果や健康効果の多くには抗老化効果が期待されるものが多いのも現状であるが、細胞レベルでの解明は十分ではなかった。プラセンタ抽出物はこのような背景から、細胞レベルでの解明も望まれていた。【０００８】
細胞レベルでの老化は、in vitroにおいて、細胞の増殖力や細胞の大きさを指標に調べることができる。例えば、動物の支持組織に存在する繊維芽細胞では、生体の老化と同様に培養継代数が増えるごとに増殖能力が低下することが知られている。また、動物種ごとに、増殖能力が低下する継代数は異なるが、ヒトの線維芽細胞では約８０継代で増殖しなくなる（非特許文献５）。また、増殖能力の低下と同時に細胞の大きさが大きくなることも知られている。この現象は、老化に伴う細胞内のタンパク質の分子構造の変化や細胞の代謝能力の低下によるものである。（非特許論文６）【０００９】
生体の老化も、細胞レベルの老化を反映したものであると考えられており、皮膚、肝臓、骨などの増殖が盛んな臓器においても、老化に伴い、増殖能力や代謝スピードが低下することが知られていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２０１３−３４４２３号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】臨床血液５７巻（２０１６）１０号 ｐ. １８７４−１８８０
【非特許文献２】Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｃｌｏｎｉｎｇ. ２０１５ Ｊｕｌ ７；８：１０３−７.
【非特許文献３】Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ. ２０１４ Ａｐｒ；３６(４)：３９４−４０６.
【非特許文献４】ＲＮＡ Ｂｉｏｌ. ２０１３ Ｊｕｌ；１０(７)：１０８０−６.
【非特許文献５】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９６５  Ｍａｒｃｈ；３７（３）：６１４-６３６.
【非特許文献６】Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａ. ２，００７ Ｏｃｔ；１１６（５）：４３１−４０.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の課題は、有効成分が不明であったプラセンタ抽出物中の有効成分、およびこの有効成分を含むプラセンタ抽出物の製法を見出し、より活性の高い分画成分を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは前記課題を解決するため、プラセンタ抽出物中のエクソソームを抽出し、エクソソームおよびエクソソーム含量の高い豚プラセンタ抽出物の製造方法を確立した。さらに、エクソソーム内には表１〜表３に記載した１６２種のｍｉＲＮＡが含まれており、これらはヒト由来のエクソソームに含まれるｍｉＲＮＡの塩基配列と同一であり、その内の２７種（配列番号３、８、１０、１８、２２、２９、３３、３４、３７、３９、４１、５１、６０、６１、６６、７１、７２、７５、７６、７７、１０５、１０８、１０９、１３８、１４８、１５７、１５９）については老化細胞で減少していることを確認した。
また、プラセンタ由来のエクソソーム、及び該エクソソームに含まれているｍｉＲＮＡと同様の塩基配列をもつ合成ｍｉＲＮＡをヒト線維芽細胞に添加したところ、細胞増殖が促進されたこと、細胞面積が減少したことを確認した。【００１４】
【表１】
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【００１５】
【表２】
2018199231.tif 000004
【００１６】
【表３】
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【００１７】
すなわち、本発明の一実施形態に係るエクソソームは、（ｉ）配列番号１〜１６２のいずれかで示される塩基配列の核酸分子、（ｉｉ）（ｉ）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する核酸分子、または（ｉｉｉ）（ｉ）の塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有する塩基配列の核酸分子、からなる群より選択される少なくとも１種の核酸分子を含有し、哺乳類のプラセンタからの抽出物であることを特徴とするエクソソーム。ただし、前記核酸分子がＲＮＡの場合は、前記各塩基配列で示されるＴがＵである。【００１８】
上記エクソソームの好ましい態様では、少なくとも１種の核酸分子が、配列番号３、８、１０、１８、２２、２９、３３、３４、３７、３９、４１、５１、６０、６１、６６、７１、７２、７５、７６、７７、１０５、１０８、１０９、１３８、１４８、１５７および１５９で示される塩基配列の核酸分子を含有する。ただし、各核酸分子の塩基配列は、当該塩基配列と９０％以上の同一性を有するか、または当該塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有してもよい。【００１９】
上記エクソソームの他の好ましい実施形態において、少なくとも１種の核酸分子が、配列番号１６、７４および８７で示される塩基配列の核酸分子、を含有する。ただし、各核酸分子の塩基配列は、当該塩基配列と９０％以上の同一性を有するか、または当該塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有してもよい。【００２０】
また、本発明の他の実施形態では、上記エクソソームまたはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを有効成分として含有する経口組成物を提供する。【００２１】
さらに他の実施形態では、上記エクソソームまたはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを有効成分として含有する化粧料組成物を提供する。【００２２】
さらになお別の実施形態は、上記エクソソームまたはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを有効成分として含有する線維芽細胞増殖促進剤である。【００２３】
本発明の他の視点において、哺乳類のプラセンタを熱水で抽出し、プロテアーゼによる酵素分解を行い、球状構造をしたエクソソームを含有するプラセンタ抽出物を回収することを特徴とするプラセンタ抽出物の製造方法が提供される。【００２４】
さらに別の視点において、上記エクソソーム、またはｍｉｒ−１２５ａ、ｍｉｒ−２６ａおよび／またはｍｉｒ−３０ｃのｍｉＲＮＡを、哺乳動物細胞に投与することを特徴とする細胞の老化を抑制する方法を提供する。
【発明の効果】
【００２５】
本発明によれば、プラセンタ由来エクソソーム、エクソソームに含まれるｍｉＲＮＡを提供することが可能である。また、エクソソームをヒト線維芽細胞に添加後、線維芽細胞が増殖したことも確認した。以上より、プラセンタ由来のエクソソームを含む組成物を経口投与、または経皮投与することで、真皮の構造を強化し、肌のはり、しわ、たるみ等を改善する美容、抗老化用途として提供することが可能となった。また、エクソソームに含まれるｍｉＲＮＡと同じ塩基配列を有する合成ｍｉＲＮＡを添加した場合も同様な効果がみられ、同様な効果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】豚プラセンタ抽出物中に含まれていたエクソソームの電子顕微鏡写真である。
【図２】豚プラセンタ抽出物中に含まれていたエクソソームの粒度解析を示す図である。
【図３】エクソソーム添加、非添加時のヒト線維芽細胞（６６ＰＤＬ）を免疫染色した写真である。
【図４】エクソソーム添加、非添加時のヒト線維芽細胞（６６ＰＤＬ）の細胞数を示す図である。
【図５】エクソソーム添加、非添加時のヒト線維芽細胞（６６ＰＤＬ）の細胞サイズを示す図である。
【図６】エクソソーム添加、非添加時のヒト線維芽細胞（８３ＰＤＬ）を免疫染色した写真である。
【図７】エクソソーム添加、非添加時のヒト線維芽細胞（８３ＰＤＬ）の細胞数を示す図である。
【図８】エクソソーム添加、非添加時のヒト線維芽細胞（８３ＰＤＬ）の細胞サイズを示す図である。
【図９】トランスウェル移行アッセイによる、本発明のエクソソームのマクロファージ遊走能を評価した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
尚、本発明で使用する豚プラセンタとは、特定疾患原因のないブタ（ＳＰＦブタ）の正常分娩により娩出される胎盤を用いる。また、本発明におけるエクソソームとは、ペプチド、たんぱく質、核酸等を内包し、脂質表面からなる球状の組成物である。
【００２８】
本発明で使用する豚プラセンタ抽出物の抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、１，５−ペンタンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，３−ペンタンジオール、１，４−ペンタンジオール、１，３，５−ペンタントリオール、グリセリンや、適宜規定度を調製した酸（塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸等）やアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等）の中から選ばれる１種もしくは２種以上の混液が挙げられ、特に水を選択することが好ましい。但し、用途により溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用するか、或いは抽出後に溶媒を除去しやすい、揮発性の高い溶媒を用いて抽出を行い、溶媒除去後水等に溶解させるといった方法も可能である。さらにプロテアーゼを加えることが好ましい。用いるプロテアーゼとしては天野エンザイム社製の食品加工用プロテアーゼであるプロテアーゼＡ「アマノ」ＳＤ、プロテアーゼＭ「アマノ」ＳＤまたはプロテアーゼＰ「アマノ」３ＳＤ等が好ましいがこれらに限定されない。
【００２９】
抽出方法については、原料に対する溶媒の重量比率、又は抽出時間について任意に設定することができる。原料に対する溶媒の重量比率は、例えば原料：溶媒が、４：１〜１：１００の範囲内で任意に設定することができ、特に１：１〜１：２０の重量比率が好ましい。
【００３０】
本発明で使用する豚プラセンタ抽出物は、溶媒抽出後、更に適宜精製操作を施すことも可能であり、精製操作としては、クロマトグラフィーを用いた分画、濾紙やメンブランフィルター、限外濾過膜等を用いた濾過、乾燥、ｐＨ調整、脱臭、脱色、長時間の静置保管等が例示でき、これらを任意に選択し、組合わせた処理を行うことが可能である。
【００３１】
また、本発明で使用するエクソソームとは、豚プラセンタ抽出物粉体を水で溶解したもの、または豚プラセンタ抽出液から、超遠心法によって遠心分離することにより、高濃度で得ることができ、その遠心分離の前後に、ろ過等の精製操作を行うことが可能である。
【００３２】
このようにして得られたエクソソームから核酸分子を抽出し、次世代シーケンサを用いて塩基配列を解析し、ヒトマイクロＲＮＡのデータベースを検索した結果、上記表１〜３に示した塩基配列を有することが分かった。すなわち、少なくとも豚プラセンタ中にはこれらのヒトマイクロＲＮＡと同じ配列を有する核酸分子が存在する。なお、好ましい核酸分子はマイクロＲＮＡであり、その場合は、配列中のＴ（チミン）はＵ（ウラシル）である。本明細書において、プラセンタとは、出産後の母体から得ることができる胎盤組織を意味し、妊娠した動物の子宮内に形成され、母体と胎児を連絡する器官である。哺乳類のプラセンタ（胎盤）は構造的、機能的に類似していることから、豚以外のプラセンタ、例えば、羊プラセンタ、馬プラセンタ、牛プラセンタおよびヒトプラセンタを用いることもできる。これらの中でも、入手の容易性および安全性の観点から豚プラセンタが好ましい。
【００３３】
本明細書において、マイクロＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ；ｍｉＲＮＡ）とは、典型的には、成熟ｍｉＲＮＡと呼ばれているものを意味する。成熟ｍｉＲＮＡは、ゲノム上にコードされた内在性の２０〜２５塩基程度の非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡは、ゲノムＤＮＡ上のｍｉＲＮＡ遺伝子から、まず数百〜数千塩基程度の長さの一次転写物として転写され、次にプロセッシングを受けて約６０〜７０塩基程度のヘアピン構造を有する前駆体ｍｉＲＮＡとなる。その後、核から細胞質内へ移動し、さらにプロセッシングを受けて２０〜２５塩基程度の二本鎖成熟ｍｉＲＮＡとなる。二本鎖成熟ｍｉＲＮＡは、そのうちの一本鎖がＲＩＳＣと呼ばれるタンパク質と複合体を形成し、標的遺伝子のｍＲＮＡに作用することで、標的遺伝子の翻訳を阻害する働きをすることが知られている。したがって、本明細書において、「ｍｉＲＮＡ」は、内在性の一本鎖及び二本鎖ｍｉＲＮＡのみならず、これらのｍｉＲＮＡと同一の塩基配列からなる合成核酸も包含する。また、ｍｉＲＮＡは、その前駆体も包含する。
【００３４】
例えば、「ｍｉＲ−１２５ａ」は、上記マイクロＲＮＡの前駆体も成熟型もどちらも含むが、好ましくは成熟型であり、成熟型としては、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ（配列番号１６３）やｍｉＲ−１２５ａ−３ｐ（配列番号１６６）が例示される。また、「ｍｉＲ−３０ｃ」は、成熟型として、ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（配列番号１６４）やｍｉＲ−３０ｃ−３ｐ（配列番号１６７）を含む。同様に、「ｍｉＲ−２６ａ」は、成熟型として、ｍｉＲ−２６ａ−５ｐ（配列番号１６５）やｍｉＲ−２６ａ−３ｐ（配列番号１６８）を含む。これらのｍｉＲＮＡは、例えばサンガー研究所が作成しているｍｉＲＢａｓｅデータベース：http://microrna.sanger.ac.uk/等に、その塩基配列が開示されている。
【００３５】
本発明では表１〜３に示したｍｉＲＮＡに関連して、以下のいずれかの核酸を意味する。
（ｉ）配列番号１〜１６２のいずれかで示される塩基配列を有するＲＮＡ、
（ｉｉ）配列番号１〜１６２のいずれかで示される塩基配列と９０％以上、好ましくは９５％以上の同一性を有するＲＮＡ、または
（ｉｉｉ）配列番号１〜１６２のいずれかで示される塩基配列において、１個または２個の塩基の欠失、付加および／または置換を有する塩基配列を有するＲＮＡ。ただし、表１〜３の各配列で示されるＴ（チミン）はＵ（ウラシル）である。なお、一般的に、成熟ｍｉＲＮＡの５’末端から２〜７番目の塩基から始まる7塩基は、シード配列と呼ばれている。この配列は、ターゲットとなるｍＲＮＡの配列と完全に相補的でなければならないが、その他の塩基は必ずしも完全一致しなくともよいことが知られている。したがって、本発明のｍｉＲＮＡにおいて、配列番号１〜１６２に示す各配列のコアとなる配列が完全に一致すればよく、その５’側または３’側の配列が１または数個の塩基の欠失、付加および／または置換を有してもよい。数個とは、１〜１０個が含まれ、好ましくは５個以下であり、より好ましくは１〜３個である。コアとなる配列（シード配列）はターゲットとなるｍＲＮＡを解析することにより特定することができる。
【００３６】
「同一性」とは、当該技術分野において公知の数学的アルゴリズムを用いて２つのヌクレオチド配列をアラインさせた場合の、最適なアラインメント（好ましくは、該アルゴリズムは最適なアラインメントのために配列の一方もしくは両方へのギャップの導入を考慮し得るものである）における、オーバーラップする全ヌクレオチド残基に対する、同一ヌクレオチド残基の割合（％）を意味する。
例えば、ヌクレオチド配列における同一性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）のＢＬＡＳＴ−２を用い、以下の条件（ギャップオープン＝５ペナルティ；ギャップエクステンション＝２ペナルティ；ｘ＿ドロップオフ＝５０；期待値＝１０；フィルタリング＝ＯＮ）にて２つのヌクレオチド配列をアラインすることにより、計算することができる。
【００３７】
また、本発明で使用するｍｉＲＮＡは、本発明で行った試験のように合成して得ることの他、同様な塩基配列を有するｍｉＲＮＡを抽出、精製することによって得ることも可能である。例えば、上記（ｉ）〜（ｉｉｉ）に示したｍｉＲＮＡの塩基配列において一部の塩基がデオキシリボヌクレオチドに置き換えられたキメラ核酸であってもよい。
【００３８】
本発明を実施する上で用いるエクソソーム、ｍｉＲＮＡ、豚プラセンタ抽出物、およびそれらを含む経口組成物としては、液状、固形状、粉末状、ペースト状等いずれの形状でも良く、最適な形状を任意に選択することができる。
【００３９】
上記抽出物、エクソソーム、およびｍｉＲＮＡの含有量としては、本発明の効果を有することが確認できる範囲であれば特に制限はないが、一般的には０．０００１ｍｇ／ｇ〜１０ｍｇ／ｇ（分母は製剤の重量を示す）の範囲に設定される。好ましくは０．００１ｍｇ／ｇ〜１０ｍｇ／ｇの範囲であって、最も好ましくは０．００１ｍｇ／ｇ〜１ｍｇ／ｇである。
【００４０】
本発明におけるエクソソーム、ｍｉＲＮＡ、線維芽細胞増殖促進剤は医薬品に配合する用途が好ましい。医薬品としては、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。又、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、張化剤等の慣用の添加剤を適宜添加して、使用することができる。
【００４１】
また、エクソソーム、ｍｉＲＮＡを経口組成物、化粧料、線維芽細胞増殖促進剤に配合する場合は、本発明の効果を損なわない範囲内で、下記に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用して各種製剤を製造することができ、製剤中における含有量は、特に限定されないが、通常０．０００１〜５０％の濃度範囲が好ましい。
【００４２】
例えば、エクソソーム、ｍｉＲＮＡを配合する経口組成物としては、そのまま又は種々の栄養補給、滋養強壮、疲労回復、体質改善等を加えて、飲食品中に含有せしめて、栄養補助食品、健康補助食品、栄養調整食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、サプリメント、食品素材として食される。例えば、上述した適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペースト等に成形して食用に供しても良く、又、種々の食品、例えば、かまぼこ、ちくわ等の加工水産ねり製品、ソーセージ、ハム等の畜産製品、洋菓子類、和菓子類、生めん、中華めん、ゆでめん、ソバ等のめん類、ソース、醤油、タレ、砂糖、ハチミツ、粉末あめ、水あめ等の調味料、カレー粉、からし粉、コショウ粉等の香辛料、ジャム、マーマレード、チョコレートスプレッド、漬物、そう菜、ふりかけ、又は各種野菜・果実の缶詰・瓶詰等の加工野菜・果実類、チーズ、バター、ヨーグルト等の乳製品、みそ汁、スープ、果実ジュース、野菜ジュース、乳清飲料、清涼飲料、酒類等の飲料、流動食等の一般嗜好性飲食品に添加して使用することができ、又、ペットフード、動植物用飼料等にも使用することができる。又、飲食品組成物においては、栄養補給、疲労回復、強壮、細胞賦活（細胞老化防止）等の健身等の効果をはじめ、味覚の改善、色調や芳香、光沢の付与、安定化、増粘等の目的で使用することができる。さらに、この他にも、これまでに知られている各原料素材の様々な薬剤的効果を期待し、これらを組み合わせることによって、本発明の目的とする効果の増進を図ったり、多機能的な効果を期待したりする製品とすることも可能である。
【００４３】
例えば、エクソソーム、ｍｉＲＮＡを配合する化粧料としては、各種の皮膚外用剤類（動物用に使用する製剤も含む）全般において利用でき、具体的には、アンプル、カプセル、丸剤、錠剤、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の1)医薬品類、2)医薬部外品類、3)局所用又は全身用の皮膚用化粧品類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、美容液、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、まつ毛用塗布剤、まつ毛用美容液、まつ毛用トリートメント、まつ毛用パーマ剤、まつ毛用育毛剤等のまつ毛用化粧品、洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレショーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、4)頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、5)浴湯に投じて使用する浴用剤、6)その他、腋臭防止剤や消臭剤、防臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ、歯磨き類、口中清涼剤、含嗽剤等が挙げられる。
【００４４】
尚、本発明のエクソソーム、ｍｉＲＮＡ、およびエクソソームまたはｍｉＲＮＡを含む経口組成物、化粧料、線維芽細胞増殖促進剤には、前記の必須成分に加え必要に応じ、本発明の効果を損なわない範囲内で、下記に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用して各種製剤を製造することができ、製剤中における含有量は、特に限定されないが、通常０．０００１〜５０％の濃度範囲が好ましい。
【００４５】
高分子・増粘剤・ゲル化剤としては、グアーガム、ローカストビーンガム、クィーンスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、タラガム、タマリンド、ファーセレラン、カラヤガム、トロロアオイ、キャラガム、トラガントガム、アルギン酸及びナトリウム塩等の塩、マンナン；コメ、トウモロコシ、バレイショ、コムギ等のデンプン；キサンタンガム、デキストラン、サクシノグルカン、カードラン、ヒアルロン酸及びその塩、ザンサンガム、プルラン、ジェランガム、キチン、キトサン、寒天、カッソウエキス、コンドロイチン硫酸塩、カゼイン、コラーゲン、ゼラチン、アルブミン；メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びそのナトリウム等の塩、メチルヒドロキシプロピルセルロース、セルロース硫酸ナトリウム、ジアルキルジメチルアンモニウム硫酸セルロース、結晶セルロース、セルロース末等のセルロース及びその誘導体；可溶性デンプン、カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシプロピルデンプン、メチルデンプン等のデンプン系高分子、塩化ヒドロキシプロピルトリモニウムデンプン、オクテニルコハク酸トウモロコシデンプンアルミニウム等のデンプン誘導体；アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等アルギン酸誘導体；ポリビニルピドリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピドリドン・ビニルアルコール共重合体、ポリビニルメチルエーテル；ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン共重合体；（メタクリロイルオキシエチルカルボキシベタイン／メタクリル酸アルキル）コポリマー、（アクリレーツ／アクリル酸ステアリル／メタクリル酸エチルアミンオキシド）コポリマー等の両性メタクリル酸エステル共重合体；（ジメチコン／ビニルジメチコン）クロスポリマー、（アクリル酸アルキル／ジアセトンアクリルアミド）コポリマー、（アクリル酸アルキル／ジアセトンアクリルアミド）コポリマーＡＭＰ；ポリ酢酸ビニル部分けん化物、マレイン酸共重合体；ビニルピロリドン・メタクリル酸ジアルキルアミノアルキル共重合体；アクリル樹脂アルカノールアミン；ポリエステル、水分散性ポリエステル；ポリアクリルアミド；ポリアクリル酸エチル等のポリアクリル酸エステル共重合体、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸及びそのナトリウム塩等の塩、アクリル酸・メタアクリル酸エステル共重合体；アクリル酸・メタアクリル酸アルキル共重合体；ポリクオタニウム−１０等のカチオン化セルロース、ポリクオタニウム−７等のジアリルジメチルアンモニウムクロリド・アクリルアミド共重合体、ポリクオタニウム−２２等のアクリル酸・ジアリルジメチルアンモニウムクロリド共重合体、ポリクオタニウム−３９等のアクリル酸・ジアリルジメチルアンモニウムクロリド・アクリルアミド共重合体、アクリル酸・カチオン化メタアクリル酸エステル共重合体、アクリル酸・カチオン化メタアクリル酸アミド共重合体、ポリクオタニウム−４７等のアクリル酸・アクリル酸メチル・塩化メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウム共重合体、塩化メタクリル酸コリンエステル重合体；カチオン化オリゴ糖、カチオン化デキストラン、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド等のカチオン化多糖類；ポリエチレンイミン；カチオンポリマー；ポリクオタニウム−５１等の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンの重合体及びメタクリル酸ブチル共重合体等との共重合体；アクリル樹脂エマルジョン、ポリアクリル酸エチルエマルジョン、ポリアクリルアルキルエステルエマルジョン、ポリ酢酸ビニル樹脂エマルジョン、天然ゴムラテックス、合成ラテックス等の高分子エマルジョン；ニトロセルロース；ポリウレタン類及び各種共重合体；各種シリコーン類；アクリル−シリコーングラフト共重合体等のシリコーン系各種共重合体；各種フッ素系高分子；１２−ヒドロキシステアリン酸及びその塩；パルミチン酸デキストリン、ミリスチン酸デキストリン等のデキストリン脂肪酸エステル；無水ケイ酸、煙霧状シリカ（超微粒子無水ケイ酸）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸ナトリウムマグネシウム、金属石鹸、ジアルキルリン酸金属塩、ベントナイト、ヘクトライト、有機変性粘土鉱物、ショ糖脂肪酸エステル、フラクトオリゴ糖脂肪酸エステルが好ましいものとして挙げられる。
【００４６】
酸化防止剤としては、α−リポ酸、α−リポ酸の塩、及びα−リポ酸の誘導体；トコフェロール（ビタミンＥ）、トコトリエノール、酢酸トコフェロール等のトコフェロール誘導体；ＢＨＴ、ＢＨＡ；没食子酸プロピル等の没食子酸誘導体；ビタミンＣ（アスコルビン酸）および／またはその誘導体；エリソルビン酸及びその誘導体；亜硫酸ナトリウム等の亜硫酸塩；亜硫酸水素ナトリウム等の亜硫酸水素塩；チオ硫酸ナトリウム等のチオ硫酸塩；メタ亜硫酸水素塩；チオタウリン、ヒポタウリン；チオグリセロール、チオ尿素、チオグリコール酸、システイン塩酸塩が好ましいものとして挙げられる。還元剤としては、チオグリコール酸、システイン、システアミン等が好ましいものとして挙げられる。酸化剤としては、過酸化水素水、過硫酸アンモニウム、臭素酸ナトリウム、過炭酸等が好ましいものとして挙げられる。
【００４７】
防腐剤・抗菌剤としては、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン等のヒドロキシ安息香酸及びその塩若しくはそのエステル；サリチル酸；安息香酸ナトリウム；フェノキシエタノール；１，２−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール等の１，２−ジオール；メチルクロロイソチアゾリノン、メチルイソチアゾリノン等のイソチアゾリンオン誘導体；イミダゾリニウムウレア；デヒドロ酢酸及びその塩；フェノール類；トリクロサン等のハロゲン化ビスフェノール類、酸アミド類、四級アンモニウム塩類；トリクロロカルバニド、ジンクピリチオン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ソルビン酸、クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、ハロカルバン、ヘキサクロロフェン、ヒノキチオール；フェノール、イソプロピルフェノール、クレゾール、チモール、パラクロロフェノール、フェニルフェノール、フェニルフェノールナトリウム等のその他フェノール類；フェニルエチルアルコール、感光素類、抗菌性ゼオライト、銀イオンが好ましいものとして挙げられる。
【００４８】
キレート剤としては、ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ２Ｎａ、ＥＤＴＡ３Ｎａ、ＥＤＴＡ４Ｎａ等のエデト酸塩（エチレンジアミン四酢酸塩）；ＨＥＤＴＡ３Ｎａ等のヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸塩；ペンテト酸塩（ジエチレントリアミン五酢酸塩）；フィチン酸；エチドロン酸等のホスホン酸及びそのナトリウム塩等の塩類；シュウ酸ナトリウム；ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸等のポリアミノ酸類；ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、リン酸；クエン酸ナトリウム、クエン酸、アラニン、ジヒドロキシエチルグリシン、グルコン酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸が好ましいものとして挙げられる。
【００４９】
ｐＨ調整剤・酸・アルカリとしては、クエン酸、クエン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、グリコール酸、コハク酸、酢酸、酢酸ナトリウム、リンゴ酸、酒石酸、フマル酸、リン酸、塩酸、硫酸、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、イソプロパノールアミン、トリイソプロパノールアミン、２−アミノ−２−メチル−１，３ープロパンジオール、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３ープロパンジオール、アルギニン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア水、炭酸グアニジン、炭酸アンモニウムが好ましいものとして挙げられる。
【００５０】
粉体類としては、マイカ、タルク、カオリン、セリサイト、モンモリロナイト、カオリナイト、雲母、白雲母、金雲母、合成雲母、紅雲母、黒雲母、パーミキュライト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸バリウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、ケイ酸ストロンチウム、タングステン酸金属塩、マグネシウム、ゼオライト、硫酸バリウム、焼成硫酸カルシウム、リン酸カルシウム、弗素アパタイト、ヒドロキシアパタイト、セラミックパウダー、ベントナイト、スメクタイト、粘土、泥、金属石鹸(例えば、ミリスチン酸亜鉛、パルミチン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム)、炭酸カルシウム、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、群青、紺青、カーボンブラック、酸化チタン、微粒子及び超微粒子酸化チタン、酸化亜鉛、微粒子及び超微粒子酸化亜鉛、アルミナ、シリカ、煙霧状シリカ（超微粒子無水ケイ酸）、雲母チタン、魚鱗箔、窒化ホウ素、ホトクロミック顔料、合成フッ素金雲母、微粒子複合粉体、金、アルミニウム等の各種の大きさ・形状の無機粉体、及び、これらをハイドロジェンシリコーン、環状ハイドロジェンシリコーン等のシリコーン若しくはその他のシラン若しくはチタンカップリング剤等の各種表面処理剤で処理を行って疎水化若しくは親水化した粉体等の無機粉体；デンプン、セルロース、ナイロンパウダー、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル末、ポリスチレン末、スチレンとアクリル酸の共重合体樹脂粉末、ポリエステル末、ベンゾグアナミン樹脂粉末、ポリエチレンテレフタレート・ポリメチルメタクリレート積層末、ポリエチレンテレフタレート・アルミニウム・エポキシ積層末等、ウレタン粉末、シリコーン粉末、テフロン（登録商標）粉末等の各種の大きさ・形状の有機系粉体及び表面処理粉体、有機無機複合粉体が好ましいものとして挙げられる。無機塩類としては、食塩、並塩、岩塩、海塩、天然塩等の塩化ナトリウム含有塩類；塩化カリウム、塩化アルミニウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、にがり、塩化亜鉛、塩化アンモニウム；硫酸ナトリウム、硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウム・カリウム（ミョウバン）、硫酸アルミニウム・アンモニウム、硫酸バリウム、硫酸カルシウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、硫酸鉄、硫酸銅；リン酸１Ｎａ・２Ｎａ・３Ｎａ等のリン酸ナトリウム類、リン酸カリウム類、リン酸カルシウム類、リン酸マグネシウム類が好ましいものとして挙げられる。
【００５１】
ビタミン類及びその誘導体類としては、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンＡ類；チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩、リボフラビン、酢酸リボフラビン、塩酸ピリドキシン、ピリドキシンジオクタノエート、ピリドキシンジパルミテート、フラビンアデニンジヌクレオチド、シアノコバラミン、葉酸類、ニコチン酸アミド・ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸類、コリン類等のビタミンＢ群類；アスコルビン酸及びそのナトリウム等の塩等のビタミンＣ類；ビタミンＤ；α、β、γ、δ−トコフェロール等のビタミンＥ類；パントテン酸、ビオチン等のその他ビタミン類；アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩及びアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩等のアスコルビン酸リン酸エステル塩、アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル・ステアリン酸アスコルビル・パルミチン酸アスコルビル・ジパルミチン酸アスコルビル等のアスコルビン酸脂肪酸エステル、アスコルビン酸エチルエーテル等のアスコルビン酸アルキルエーテル、アスコルビン酸−２−グルコシド等のアスコルビン酸グルコシド及びその脂肪酸エステル、リン酸トコフェリルアスコルビル等のアスコルビン酸誘導体；ニコチン酸トコフェロール、酢酸トコフェロール、リノール酸トコフェロール、フェルラ酸トコフェロール、トコフェロールリン酸エステル等のトコフェロール誘導体等のビタミン誘導体、トコトリエノール、その他各種ビタミン誘導体類が好ましいものとして挙げられる。
【００５２】
消炎剤・抗炎症剤としては、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸誘導体、サリチル酸誘導体、ヒノキチオール、グアイアズレン、アラントイン、インドメタシン、酸化亜鉛、酢酸ヒドロコーチゾン、プレドニゾン、塩酸ジフェドラミン、マレイン酸クロルフェニラミン；桃葉エキス、蓬葉エキス等の植物エキスが好ましいものとして挙げられる。
【００５３】
ホルモン類としては、エストラジオール、エストロン、エチニルエストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン等が好ましいものとして挙げられる。
【００５４】
植物・動物・微生物エキス類としては、アイリスエキス、アシタバエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルテアエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アンズエキス、アンズ核エキス、イチョウエキス、インチコウエキス、ウイキョウエキス、ウコンエキス、ウーロン茶エキス、ウワウルシエキス、エイジツエキス、エチナシ葉エキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オオムギエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オノニスエキス、オランダカラシエキス、オレンジエキス、海水乾燥物、海藻エキス、カキ葉エキス、カキョクエキス、加水分解エラスチン、加水分解コムギ末、加水分解シルク、カッコンエキス、カモミラエキス、油溶性カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カラスムギエキス、カルカデエキス、カンゾウエキス、油溶性カンゾウエキス、キウイエキス、キオウエキス、キクラゲエキス、キナエキス、キューカンバーエキス、キリ葉エキス、グアノシン、グアバエキス、クジンエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、クリエキス、グレープフルーツエキス、クレマティスエキス、黒米エキス、黒砂糖抽出物、黒酢、クロレラエキス、クワエキス、ゲンチアナエキス、ゲンノショウコエキス、紅茶エキス、酵母エキス、コウボクエキス、コーヒーエキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コンフリーエキス、コラーゲン、コケモモエキス、サイシンエキス、サイコエキス、サイタイ抽出液、サフランエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、ジャトバエキス、シャクヤクエキス、ショウキュウエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、白キクラゲエキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、西河柳エキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、地衣類エキス、茶エキス、チョウジエキス、チガヤエキス、チンピエキス、ティートリー油、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、蜂蜜、ハマメリスエキス、パリエタリアエキス、ヒキオコシエキス、ビサボロール、ヒノキエキス、ビフィズス菌エキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、プロポリス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マイカイカエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、卵殻膜エキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
【００５５】
色素・着色剤・染料・顔料としては、褐色２０１号、黒色４０１号、紫色２０１号、紫色４０１号、青色１号、青色２号、青色２０１号、青色２０２号、青色２０３号、青色２０４号、青色２０５号、青色４０３号、青色４０４号、緑色２０１号、緑色２０２号、緑色２０４号、緑色２０５号、緑色３号、緑色４０１号、緑色４０２号、赤色１０２号、赤色１０４−１号、赤色１０５−１号、赤色１０６号、赤色２号、赤色２０１号、赤色２０２号、赤色２０３号、赤色２０４号、赤色２０５号、赤色２０６号、赤色２０７号、赤色２０８号、赤色２１３号、赤色２１４号、赤色２１５号、赤色２１８号、赤色２１９号、赤色２２０号、赤色２２１号、赤色２２３号、赤色２２５号、赤色２２６号、赤色２２７号、赤色２２８号、赤色２３０−１号、赤色２３０−２号、赤色２３１号、赤色２３２号、赤色３号、赤色４０１号、赤色４０４号、赤色４０５号、赤色５０１号、赤色５０２号、赤色５０３号、赤色５０４号、赤色５０５号、赤色５０６号、橙色２０１号、橙色２０３号、橙色２０４号、橙色２０５号、橙色２０６号、橙色２０７号、橙色４０１号、橙色４０２号、橙色４０３号、黄色２０１号、黄色２０２−１号、黄色２０２−２号、黄色２０３号、黄色２０４号、黄色２０５号、黄色４号、黄色４０１号、黄色４０２号、黄色４０３−１号、黄色４０４号、黄色４０５号、黄色４０６号、黄色４０７号、黄色５号等の法定色素；Ａｃｉｄ Ｒｅｄ １４等のその他酸性染料；Ａｒｉａｎｏｒ Ｓｉｅｎｎａ Ｂｒｏｗｎ、Ａｒｉａｎｏｒ Ｍａｄｄｅｒ Ｒｅｄ、ＡｒｉａｎｏｒＳｔｅｅｌ Ｂｌｕｅ、Ａｒｉａｎｏｒ Ｓｔｒａｗ Ｙｅｌｌｏｗ等の塩基染料；ＨＣ Ｙｅｌｌｏｗ ２、ＨＣ Ｙｅｌｌｏｗ ５、ＨＣ Ｒｅｄ ３、４−ｈｙｄｏｘｙｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ−３−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ、Ｎ,Ｎ‘−ｂｉｓ(２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ)−２−ｎｉｔｒｏ−ｐ−ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ、ＨＣ Ｂｌｕｅ ２、Ｂａｓｉｃ Ｂｌｕｅ ２６等のニトロ染料；分散染料；二酸化チタン、酸化亜鉛等の無機白色顔料；酸化鉄(ベンガラ)、チタン酸鉄等の無機赤色系顔料；γ−酸化鉄等の無機褐色系顔料；黄酸化鉄、黄土等の無機黄色系顔料；黒酸化鉄、低次酸化チタン等の無機黒色系顔料；マンゴバイオレット、コバルトバイオレット等の無機紫色系顔料；酸化クロム、水酸化クロム、チタン酸コバルト等の無機緑色系顔料；群青、紺青等の無機青色系顔料；酸化チタンコーテッドマイカ、酸化チタンコーテッドオキシ塩化ビスマス、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイカ、オキシ塩化ビスマス、魚鱗箔等のパール顔料；アルミニウムパウダー、カッパーパウダー、金等の金属粉末顔料；表面処理無機及び金属粉末顔料；赤色２０１号、赤色２０２号、赤色２０４号、赤色２０５号、赤色２２０号、赤色２２６号、赤色２２８号、赤色４０５号、橙色２０３号、橙色２０４号、黄色２０５号、黄色４０１号、青色４０４号、赤色３号、赤色１０４号、赤色１０６号、赤色２２７号、赤色２３０号、赤色４０１号、赤色５０５号、橙色２０５号、黄色４号、黄色５号、黄色２０２号、黄色２０３号、緑色３号、青色１号等のジルコニウム、バリウム又はアルミニウムレーキ等の有機顔料；表面���理有機顔料；アスタキサンチン、アリザリン等のアントラキノン類、アントシアニジン、β−カロチン、カテナール、カプサンチン、カルコン、カルサミン、クエルセチン、クロシン、クロロフィル、クルクミン、コチニール、シコニン等のナフトキノン類、ビキシン、フラボン類、ベタシアニジン、ヘナ、ヘモグロビン、リコピン、リボフラビン、ルチン等の天然色素・染料；ｐ−フェニレンジアミン、トルエン−２，５−ジアミン、ｏ−，ｍ−，若しくはｐ−アミノフェノール、ｍ−フェニレンジアミン、５−アミノ−２−メチルフェノール、レゾルシン、１−ナフトール、２，６−ジアミノピリジン等及びその塩等の酸化染料中間体及びカップラー；インドリン等の自動酸化型染料；ジヒドロキシアセトンが好ましいものとして挙げられる。
【００５６】
これらの他、日本薬局方、医薬品添加物規格、食品添加物公定書等に記載されている成分、及び、国際特許分類ＩＰＣがＡ６１Ｋ７及びＡ６１Ｋ８の分類に属する日本国及び諸外国特許公報及び特許公開公報（公表公報・再公表を含む）に記載されている成分等、公知の医薬品成分、食品成分等を、公知の組み合わせ及び配合比・配合量で含有させることが可能である。
【００５７】
本明細書において、「投与する」とは、処置に有効な用量の上記組成物の投与を意味する。「処置に有効な量」とは、細胞の老化を抑制する効果を生み出す用量を意味し、哺乳動物細胞の活度を高め、美容上または健康上の改善効果が得られる量であることが好ましい。正確な用量は処理の目的に応じて変化するものであり、当業者が公知の技法を用いて確認することができる。当技術分野で公知であり、全身対局所デリバリー、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、および症状の重症度に関する調整が必要であり、当業者であれば、ルーチンな実験により確かめることができる。
【００５８】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制約されるものではない。
【実施例】
【００５９】
本発明で用いるエクソソーム、ｍｉＲＮＡ、および豚プラセンタ抽出物の製造例を以下に詳述するが、本発明のエクソソームおよび豚プラセンタ抽出物は以下の製造例に限定されない。【００６０】
（製造例１）豚プラセンタ抽出物
冷凍豚胎盤１ｋｇを、５０℃の水８ｋｇを加え、さらにプロテアーゼＭ（天野エンザイム社製）を加え２時間攪拌を行った後、９０℃で１時間加熱してプロテアーゼを失活させた。３０℃まで冷却後、ろ過し、豚プラセンタ抽出物を２ｋｇ得た。【００６１】
（製造例２）エクソソーム
製造例１で得た豚プラセンタ抽出物２ｋｇを乾燥し、パウダー状の豚プラセンタ抽出物を４００ｇ得た。その内、１ｇの抽出物を６４ｍＬの水で溶解し、０．２２μｍのフィルターで濾過した。濾過液を、２０００×ｇで２０分間遠心後、上清を回収した。この上清を、さらに、１１０，０００×ｇで７０分間遠心し、４６μｇのエクソソームを回収した。さらにエクソソーム１０μｇをリン酸緩衝液で１００倍希釈しナノ粒子/マイクロ粒子マルチアナライザー（ｑＮａｎｏ、メイワフォーシス社製）を用い、エクソソーム数の確認を行ったところ１．０７×１０１２個／ｍＬであった。【００６２】
（試験１）エクソソームの確認
プラセンタ抽出物１ｇを水１ｍＬで溶解後、０．２２μｍのフィルターで濾過し、試験サンプルとした。室温にて、カーボン指示膜付銅グリッドメッシュ上に１０倍希釈した試料サンプルを滴下し、１０秒静置することで、試料を分散した。蒸留水液滴上にカーボン指示膜付銅グリッドメッシュを移動し、更に、室温で３０秒静置し、洗浄処理を行った。２％酢酸ウラニル水溶液液滴上にカーボン指示膜付銅グリッドメッシュを移動し、室温で１０秒静置することでネガティブ染色を行った。グリッドを乾燥後、透過型電子顕微鏡ＨＩＴＡＣＨＩ Ｈ-７６００にて加速電圧１００ｋＶにて撮影した。【００６３】
（試験結果）
図１に示した通り、約４０ｎｍと約３００ｎｍ粒径の球状組成物が観察された。【００６４】
（試験２）エクソソームの粒度の確認
プラセンタ抽出物１０ｍｇを水１ｍＬで溶解後、０．２２μｍのフィルターで濾過し、試験サンプルとした。この試験サンプルを更に１００倍希釈し、動的光散乱光度計（ＺＥＴＡＳＩＺＥＲ ＮＡＮＯ-ＺＳ, Ｍａｌｖｅｒｎ者製)で、粒子の大きさを測定した。【００６５】
（試験結果）
図２に示した通り、粒径が４１．１４ｎｍと２６８．２ｎｍのものが多いことを確認した。【００６６】
（試験３）エクソソーム内のｍｉＲＮＡの確認
製造例２のエクソソームを用い、内包されるｍｉＲＮＡをｅｘｏＲＮｅａｓｙ(Ｑｉａｇｅｎ社製)で抽出した。そのｍｉＲＮＡの配列を次世代シークエンサー（Ｉｏｎ ＰＧＭシーケンサ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）で解析した。【００６７】
（試験結果）
得られたシークエンスデータをヒトｍｉＲＮＡデータベースと照合した結果、表１〜３に示したｍｉＲＮＡが含まれていることを確認した。【００６８】
（試験４）細胞老化で減少するｍｉＲＮＡ
細胞はＴＩＧ-３（ヒト由来繊維芽細胞）（老人研バンクから購入）を用いた。若い細胞として３９継代目（以下３９ＰＤＬと記載）のＴＩＧ-３と老化細胞として８０継代（以下８０ＰＤＬと記載）のＴＩＧ−３よりｍｉＲＮｅａｓｙ(Ｑｉａｇｅｎ社製)を用い、ｍｉＲＮＡを抽出した。それぞれのｍｉＲＮＡを３Ｄ−Ｇｅｎｅ(ＴＯＲＡＹ社製)のＤＮＡマイクロアレイ（ｈｕｍａｎ ｍｉＲＮＡ ｖｅｒ１２．１）を用いて比較解析を行った。【００６９】
（試験結果）
表１〜３に示したエクソソームに含まれているｍｉＲＮＡの内、若い細胞と比較して、老化細胞において減少しているｍｉＲＮＡを老化細胞で減少＊として示した。８０ＰＤＬの老化細胞において、２７種類のｍｉＲＮＡの減少が確認できた。細胞が老化すると、これらの２７種類（配列番号３、８、１０、１８、２２、２９、３３、３４、３７、３９、４１、５１、６０、６１、６６、７１、７２、７５、７６、７７、１０５、１０８、１０９、１３８、１４８、１５７、１５９）を含むｍｉＲＮＡ群が減少し、若い細胞の機能に関わる遺伝子の発現制御の能力が低下すると考えられる。【００７０】
（試験５）ｍｉＲＮＡの線維芽細胞への添加時の評価
細胞は７４継代のＴＩＧ−３を用いた。プラセンタ抽出物由来ｍｉＲＮＡの内の、表４に示す量が含まれる３つのｍｉＲＮＡに対応する以下の合成ｍｉＲＮＡ（いづれもＱＩＡＧＥＮ社製）を、それぞれ１０ｎＭに希釈し、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ ＲＮＡｍａｘを用い、細胞にトランスフェクションした。
hsa-miR-125a-5p：5'-UCCCUGAGACCCUUUAACCUGUGA-3'（配列番号１６３）
hsa-miR-30c-5p：5'-UGUAAACAUCCUACACUCUCAGC-3'（配列番号１６４）
hsa-miR-26a-5p：5'-UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU-3'（配列番号１６５）【００７１】
トランスフェクションは２４時間毎に２回行い、添加して４８時間後に細胞を固定、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ（サーモフィッシャー社製）を用いてアクチン・細胞核を蛍光染色し、染色した細胞の細胞核数と細胞サイズを解析した。核数、細胞サイズともに、コントロールの合成Ｈｓａ−ｍｉＲＮＡ（ＱＩＡＧＥＮ社製）をトランスフェクションした細胞との比較値で示した。【００７２】
（試験結果）
細胞数、細胞サイズの比較を表４に示した。ｈｓａ−ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−２６ａ−５ｐの添加による細胞数の増加、細胞サイズの低下が確認できた。細胞が老化すると細胞増殖が停止し、細胞の形が扁平肥大化することが知られていることから、これらのｍｉＲＮＡは抗老化活性を有するものと考えられる。【００７３】
【表４】
2018199231.tif 000006
【００７４】
（試験６）エクソソームの線維芽細胞への添加時の評価
細胞はＴＩＧ３（ヒト由来繊維芽細胞）（老人研バンクから購入）を用いた。ＴＩＧ３を９６穴プレートに播種しＤＭＥＭ培地で培養し、６６継代（以下６６ＰＤＬと記載）、８３継代（以下８３ＰＤＬと記載）し、６６ＰＤＬ、８３ＰＤＬの細胞に対し、製造例２で得たエクソソームをＰＢＳで５．１５×１０３ ｐｅｒｔｉｃｌｅ/ｍＬ濃度に希釈したエクソソーム溶液を６６ＰＤＬ線維芽細胞に、５．１５×１０４ ｐｅｒｔｉｃｌｅ/ｍＬ濃度に希釈したエクソソーム溶液を８３ＰＤＬ線維芽細胞にそれぞれ添加した。
添加は２４時間毎に２回行い、添加して４８時間後に細胞を固定、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８ Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ（サーモフィッシャー社製）を用いてアクチン・細胞核を蛍光染色し、染色した細胞の細胞核数と細胞サイズを解析した。【００７５】
（試験結果）
６６ＰＤＬの蛍光染色後の写真を図３、細胞数を図４、細胞サイズを図５に示し、８３ＰＤＬの蛍光染色後の写真を図６、細胞数を図７、細胞サイズを図８に示した。図３〜図８より、６６ＰＤＬ、８３ＰＤＬ共にエクソソーム添加による細胞数の増加、細胞サイズの低下が確認できた。細胞が老化すると細胞増殖が停止し、細胞の形が扁平肥大化することが知られていることから、エクソソームは抗老化活性を有するものと考えられる。【００７６】
（処方例）
以下に本発明によって得られたエクソソームおよび豚プラセンタ抽出物の処方例を示すが、本発明はこれらに限定されるわけではない。【００７７】
（処方例１）錠剤                                            質量％
１．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        ３．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００３）
２．乳糖                                                 ３０．０
３．コーンスターチ                                      ５８．０
４．結晶セルロース                                        ７．０
５．ポリビニールピロリドン                                ３．０【００７８】
（処方例２）サプリメント                                    質量％
１．製造例１で得たプラセンタ抽出物                      １０．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                      ０．０１）
２．ヘスペリジン                                        ８０．０
３．澱粉                                                １０．０
４．香料                                                    適量【００７９】
（処方例３）グミ                                            質量％
１．還元水飴                                            ４０．０
２．グラニュー糖                                        ２０．０
３．ブドウ糖                                            １８．０
４．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        ２．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００２）
５．水                                                  １０．０
６．ゼラチン                                              ９．０
７．クエン酸                                              ０．９
８．色素                                                  ０．１
９．香料                                                    適量【００８０】
（処方例４）チューインガム                                  質量％
１．ガムベース                                          ２０．０
２．砂糖                                                １５．０
３．イソマルトース                                      ２０．０
４．パラチノース                                        １０．０
５．キシリトール                                        １０．０
６．コーンシロップ                                      １３．０
７．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        ２．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００２）
８．水飴                                                １０．０
９．香料                                                    適量【００８１】
（処方例５）飲料                                            質量％
１．果糖ブドウ糖液糖                                    ４０．０
２．グレープフルーツ果汁                                ４０．０
３．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        ２．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００２）
４．イヨカン果汁                                          ２．０
５．アスコルビン酸ナトリウム                              １．０
６．香料                                                    適量
７．精製水                                        １００とする残余【００８２】
（処方例６）野菜ジュース飲料                                質量％
１．市販の野菜ジュース                                  ９９．０
２．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）【００８３】
（処方例７）錠剤                                             質量％
１．コーンスターチ                                      ３０．０
２．カルボキシメチルセルロースカルシウム                ２０．０
３．微結晶セルロース                                    ３８．０
４．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        ２．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００２）
５．ポリビニルピロリドン                                  ６．０
６．タルク                                                ３．０
７．アスコルビン酸ナトリウム                              １．０
８．香料                                                     適量【００８４】
（処方例８）菓子                                            質量％
１．粉糖                                                ８８．０
２．乳糖                                                  ２．０
３．クエン酸                                              ２．０
４．ゼラチン１％水溶液                                    ４．０
５．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
６．アスコルビン酸ナトリウム                              ２．０
７．ショ糖脂肪酸エステル                                  １．０
８．香料                                                    適量【００８５】
（処方例９）乳液                                            質量％
１．スクワラン                                            ５．０
２．オリーブ油                                            ５．０
３．ホホバ油                                              ５．０
４．セチルアルコール                                      １．５
５．グリセリンモノステアレート                            ２．０
６．ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル              ３．０
７．ポリオキシエチレン（２０）ソオルビタンモノオレート    ２．０
８．１，３−ブチレングリコール                            １．０
９．グリセリン                                            ２．０
１０．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
１１.防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）                     適量
１２.香料                                                      適量
１３.精製水                                        １００とする残余【００８６】
（処方例１０）化粧用オイル                                  質量％
１．流動パラフィン                                      ３０．０
２．スクワラン                                          ２０．０
３．オリーブ油                                          ２０．０
４．パルミチン酸イソプロピル                            １０．０
５．ハマスゲ全草熱水抽出液                                ３．０
６．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
７．丁字蕾熱水抽出液                                      １．０
８．グレープフルーツ果実又は葉熱水抽出液                  ３．０
９．杜仲葉熱水抽出液                                       ３．０
１０．オリーブ油                                            １．０
１１．シア脂                                                １．０
１２．ブチルヒドロキシアニソール                            ０．１
１３．ビタミンＥ誘導体                                      ０．１
１４．防腐剤（塩化ベンザルコニウム）                          適量
１５．香料（バラ水）                                          適量
１６．精製水                                      １００とする残余【００８７】
（処方例１１）柔軟性化粧水                                  質量％
１．グリセリン                                            ５．０
２．１，３−ブチレングリコール                            ５．０
３．モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）１．０
４．エタノール                                          １５．０
５．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                      ０．００１）
６．ボダイジュ花又は果実５０％１，３−ブチレングリコール抽出液  ５．０
７．ユズ果実３０％エタノール抽出液                        １．０
８．ハコベ全草３０％エタノール抽出液                      １．０
９．葡萄茎又は葉３０％エタノール抽出液                    １．０
１０．キウイ果実５０％エタノール抽出液                      １．０
１１．白樺樹液                                              １．０
１２．抗菌（ラクトフェリン溶液）                              適量
１３．防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）                    適量
１４．香料（西洋薄荷水）                                      適量
１５．精製水                                      １００とする残余【００８８】
（処方例１２）パック                                        質量％
１．ポリビニルアルコール                                １５．０
２．カルボキシメチルセルロースナトリウム                  ５．０
３．プロピレングリコール                                  ３．０
４．エタノール                                          １０．０
５．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
６．キイチゴ果実５０％ジグリセリン抽出液                  １．０
７．丁字蕾５０％ジグリセリン抽出液                        １．０
８．温州蜜柑果皮５０％１，３−ブチレングリコール抽出液    １．０
９．緑茶葉熱水抽出液                                      １．０
１０．桃葉熱水抽出液                                        ２．０
１１．豚プラセンタ熱水抽出エキス                            １．０
１２．防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）                    適量
１３．香料（バラ水）                                          適量
１４．精製水                                      １００とする残余【００８９】
（処方例１３）美容液                                        質量％
１．ポリビニルアルコール                                １５．０
２．キサンタンガム                                        ０．４
３．ヒドロキシエチルセルロース                            ０．２
４．カルポキシビニルポリマー                              ０．２
５．水酸化カリウム                                    ０．０２５
６．１，３−ブチレングリコール                            ５．０
７．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
８．ボタン根茎又は根皮６０％エタノール抽出液              １．０
９．グリチルリチン酸ジカリウム                            ０．２
１０．防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）                      適量
１１．香料（バラ水）                                          適量
１２．精製水                                      １００とする残余【００９０】
（処方例１４）洗顔クリーム                                  質量％
１．ミリスチン酸                                        ２５．０
２．ステアリン酸                                          ５．０
３．牛脂脂肪酸                                            ５．０
４．プロピレングリコール                                １０．０
５．水酸化カリウム                                        ６．０
６．ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                        ６．０
７．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
８．林檎果実２０％１，３−ブチレングリコール抽出液        ２．０
９．カワラヨモギ葉２０％１，３−ブチレングリコール抽出液  ２．０
１０．ローズヒップ果実３０％エタノール抽出液                １．０
１１．葛根熱水抽出液                                        ２．０
１２．グリチルリチン酸                                      １．０
１３．杏子核粒                                              ０．１
１４．防腐剤（サルチル酸）                                  ０．１
１５．香料（当帰水）                                          適量
１６．精製水                                      １００とする残余【００９１】
（処方例１５）ボディーソープ                                質量％
１．ラウリン酸カリウム                                  １５．０
２．ミリスチン酸カリウム                                  ５．０
３．プロピレングリコール                                  ５．０
４．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
５．烏龍茶葉７０％１，３−ブチレングリコール抽出液        １．０
６．当帰根茎７０％２，３−ブチレングリコール抽出液        ０．５
７．ワカメ７０％１，３−ブチレングリコール抽出液          ０．５
８．メリロート花又は葉７０％１，３−ブチレングリコール抽出液０．５
９．アロエ果肉７０％エタノール抽出液                      ２．０
１０．グリチルリチン酸モノアンモニウム                      ０．１
１１．防腐剤（ウンデシレン酸、フェノール）                    適量
１２．香料（ラベンダー水）                                    適量
１３．精製水                                      １００とする残余【００９２】
（処方例１６）サンスクリーン化粧品（Ｏ／Ｗ型）              質量％
１．オキシベンゾン                                        ２．０
２．パラメトキシケイ皮酸オクチル                          ５．０
３．ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン                    ０．２
４．スクワラン                                          １０．０
５．ワセリン                                              ５．０
６．ステアリルアルコール                                  ３．０
７．ステアリン酸                                          ３．０
８．グリセリルモノステアレート                            ２．０
９．ポリアクリル酸エチル                                  １．０
１０．１，３−ブチレングリコール                            ６．０
１１．エデト酸二ナトリウム                                  ０．１
１２．トリエタノールアミン                                  １．０
１３．二酸化チタン                                          ５．０
１４．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
１５．白樺樹皮７０％ジプロピレングリコール抽出液            ０．５
１６．ヤグルマギク葉５０％プロピレングリコール抽出液        ０．５
１７．葛根５０％プロピレングリコール抽出液                  ０．５
１８．柚子果実５０％ジプロピレングリコール抽出液            ０．５
１９．防腐剤（パラオキシ安息香酸ベンジル）                    適量
２０．香料（ジャスミン水）                                    適量
２１．精製水                                      １００とする残余【００９３】
（処方例１７）サンスクリーン化粧品（オイルタイプ）          質量％
１．流動パラフィン                                      ７０．０
２．テトラヒドロキシベンゾフェノン                        １．０
３．セチルオクタノエート                                ２３．８
４．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
５．ローマカミツレ花１０％１，３−ブチレングリコール抽出液  １．０
６．ゴボウ根熱水抽出液                                    ０．５
７．セイヨウトチノキ全草３０％１，３−ブチレングリコール抽出液０．５
８．ゼニアオイ花又は葉５０％プロピルアルコール抽出液      ０．５
９．ハトムギ全草５０％１，３−ブチレングリコール抽出液    ０．５
１０．茴香果実３０％ブタノール抽出液                        ０．５
１１．芍薬根又は葉熱水抽出液                                ０．５
１２．パラアミノ安息香酸エチル                              ０．２
１３．酸化防止剤（ブチルヒドロキシトルエン）                  適量
１４．香料（ヤグルマギク水）                                  適量【００９４】
（処方例１８）ヘアーリキッド                                質量％
１．エタノール                                          ２９．０
２．ポリオキシプロピレンブチルエーテルリン酸            １０．０
３．ポリオキシプロピレンモノブチルエーテル                ５．０
４．トリエタノールアミン                                  １．０
５．トリメチレングリコール                                ５．０
６．製造例１で得たプラセンタ抽出物                        １．０
（又は製造例２で得たエクソソーム                    ０．００１）
７．センブリ葉又は茎５０％１，２−ブチレングリコール抽出液１．０
８．オタネニンジン根熱水抽出液                            １．０
９．レモン果実５０％１，３−ブチレングリコール抽出液      ０．５
１０．リンゴ果実３０％エタノール抽出液                      １．０
１１．白樺樹液                                              １．０
１２．アズレン                                              １．０
１３．抗菌・防腐剤（パラベン、塩化ベンザルコニウム）          適量
１４．香料（オレンジ水）                                      適量
１５．精製水                                      １００とする残余【００９５】
（試験７）トランスウェル移行アッセイによるマクロファージ遊走能の評価
ＲＡＷ２６４．７マウスマクロファージ様細胞を用いたトランスウェル移行アッセイにより製造例２で調製したエクソソームの作用を調べた。２４ウェルプレートの各ウェルに７５０μＬずつ血清含有培地を添加し、インサートを置いた。ＲＡＷ２６４．７細胞を２×１０６個／ｍｌとなるように無血清培地に懸濁し、これを１００μＬずつ、上記各ウェルのインサートに播種した。この細胞に各サンプルを添加し、３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養した。２４時間後に各サンプルを再度添加し、さらに３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養した。最初のサンプルを添加してから４８時間経過後に、細胞をギムザ染色し、インサートの下に遊走した細胞数を測定・解析した。細胞数の解析は、１枚のインサートにつき５視野の写真を撮影し、その合計数を遊走細胞数とした。サンプルは二重測定（ｎ＝２）した。【００９６】
その結果を図９に示す。図９の縦軸は、遊走した細胞数を示し、横軸には、用いた各サンプルを示す。「未処理」とは、サンプルとしてリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を用いたものである。「試薬のみ」とは、エクソソームの精製に用いたインビトロジェン社のＴｏｔａｌ  ｅｘｏｓｏｍｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｋｉｔの試薬を意味する。「処理なし」とは、製造例２で得たエクソソーム溶液をそのまま用いたことを示す。「フィルター処理」とは、製造例２で得たエクソソーム溶液を０．２２μｍのフィルターで処理したものである。「エクソソーム除去」とは、キット精製時の上清を意味し、エクソソームを含まない画分のことである。そして、「エクソソーム」とは、エクソソームが含まれるキット精製時の沈殿画分を意味する。【００９７】
図９に示したように、「未処理」や「試薬のみ」および「エクソソーム除去」などの対照サンプルに対し、エクソソームを含むサンプルを用いた場合には、有意に高い細胞遊走数が検出され、本発明のエクソソームがマクロファージなどの免疫細胞に対する活性化作用を有することが分かった。【００９８】
（試験８）創傷治癒アッセイ（ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ａｓｓａｙ）
創傷治癒アッセイにより製造例２で調製したエクソソームのマクロファージの遊走能を調べた。６ウェルプレートの各ウェルに、翌日にはコンフルエントになるようにＲＡＷ２６４．７マウスマクロファージ様細胞を播種した。３７℃、５％ＣＯ２存在下で２４時間培養した後、１００％コンフルエントになった細胞表面にイエローチップを用いてスクラッチ（引っ掻き傷）を引き、ＰＢＳで洗浄後、各サンプルを含む新しい培養液に交換した。３７℃、５％ＣＯ２環境下で培養し、０および２４時間後の写真を撮影してスクラッチ部分の幅を測定・解析した。撮影した写真からスクラッチした傷の幅を測定し、２４時間でどの程度修復されたかの割合を算出した。以下の式に基づき、４回の実験における平均値と標準偏差を算出した。修復割合（％）＝１００−［（２４時間後の傷の幅；μｍ）／（０時間の傷の幅；μｍ）×１００］【００９９】
その結果、サンプルとして、エクソソームを含まない画分に比べて、エクソソームを含む精製画分を用いた場合の修復割合は有意に高く、本発明のエクソソームがマクロファージの遊走を活性化して創傷部位の回復を促進することが示唆された。以上の結果より、本発明にかかるエクソソームは、マクロファージの遊走促進剤、免疫細胞活性化剤または創傷治癒促進剤として利用も期待される。
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明によれば、生理活性の高い豚プラセンタ由来エクソソーム、ｍｉＲＮＡ、およびエクソソーム含量の高い豚プラセンタ抽出物の提供が可能となった。  
【図１】
2018199231.tif 000007
【図２】
2018199231.tif 000008
【図３】
2018199231.tif 000009
【図４】
2018199231.tif 000010
【図５】
2018199231.tif 000011
【図６】
2018199231.tif 000012
【図７】
2018199231.tif 000013
【図８】
2018199231.tif 000014
【図９】
2018199231.tif 000015
【配列表】
2018199231000001.app
【国際調査報告】
2018199231.tif 000016
2018199231.tif 000017
2018199231.tif 000018
2018199231.tif 000019
2018199231.tif 000020
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2018199231.tif 000022