(57)【要約】【課題】  低温環境において結晶の析出が抑制され、かつ適切な粘度を維持できる糖液ならびにこれを用いる液体甘味料およびハナバチ用飼料を提供する。【解決手段】  スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、糖の総量に対するニストースの含有割合が０〜６質量％であり、かつ、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有する糖液。本発明によれば、低温環境において結晶の析出が抑制され、かつ適切な粘度を維持できる糖液を得ることができる。本発明に係る糖液は、低温環境においても優れた品質と操作性とを維持し、飲食品に優れた食味を付与する液体甘味料として、あるいは、優れた操作性、保存性およびハナバチの嗜好性を兼ね備えたハナバチ用飼料として、用いることができる。
2018117198.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、糖の総量に対するニストースの含有割合が０〜６質量％であり、かつ、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有する糖液。
【請求項２】
糖の総量に対する各糖の含有割合が下記のとおりである糖液：
スクロース：３０〜７０質量％、
１−ケストース：１０〜４０質量％、
グルコース：５〜３０質量％、
フルクトース：０〜１０質量％、
ニストース：０〜６質量％、
マルトース：０〜０．１質量％。
【請求項３】
糖用屈折計で測定したブリックス糖度が７０度以上である、請求項１または２に記載の糖液。
【請求項４】
前記糖液は、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７５度とした場合に、４℃で２１日間冷蔵保存しても糖の結晶が析出しない物性を有する、請求項１から請求項３のいずかに記載の糖液。
【請求項５】
前記糖液は、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７５度とした場合に、回転粘度計で２００回転／分で測定した５℃における粘度が１５０００ミリパスカル秒以下である物性を有する、請求項１から請求項４のいずれかに記載の糖液。
【請求項６】
請求項１から請求項５のいずれかに記載の糖液を用いてなる液体甘味料。
【請求項７】
請求項１から請求項５のいずれかに記載の糖液を用いてなるハナバチ用飼料。
【請求項８】
請求項６に記載の液体甘味料を飲食品に添加する工程を有する、甘味が付与された飲食品の製造方法。
【請求項９】
飲食品が、０℃以上１０℃以下で保存される飲食品である、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
請求項７に記載のハナバチ用飼料をハナバチに与える工程を有する、ハナバチの飼育方法。
【請求項１１】
１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含む糖液を飼料としてハナバチに与える工程を有する、ハナバチの飼育方法。
【請求項１２】
前記糖液が、１−ケストース以外のオリゴ糖としてスクロースを含み、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有する糖液である、請求項１１に記載の飼育方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖液に関し、特に、低温環境において結晶の析出が抑制され、かつ適切な粘度を維持することができる糖液ならびにこれを用いる液体甘味料およびハナバチ用飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
濃厚な糖液はシロップとも呼ばれ、その代表的な用途としては液体甘味料を挙げることができる。ハチミツやメープルシロップ、ガムシロップなどの糖液は、菓子、パン、ホットケーキ、ヨーグルト等の食品、紅茶、コーヒー等の飲料など、各種の飲食品に対して液体甘味料として幅広く使用されている。しかしながら、これらの糖液は、冬期における保管・流通環境や冷蔵・チルド食品の売り場といった低温環境に晒された場合、含有されている糖が結晶として析出して品質が低下するという問題があった。また、結晶が析出しない場合においても、粘度が顕著に上昇して、容器から出にくい、あるいは添加した飲食品と混ざり難い等、操作性が低下するという問題があった。【０００３】
また、糖液は、従来から、ミツバチやマルハナバチ等のハナバチ類の飼料として用いられている。ハナバチ類は、野菜や果物といった農作物の受粉に極めて重要な役割を果たしているほか、ミツバチについては、人間の生活に有用な蜂蜜や蜜ろう、プロポリスやローヤルゼリーを生産する。これらのことから、ハナバチ類はヒトによって飼育されており、農作物の受粉の媒介や、蜂蜜等の生産に用いられている。飼育されているハナバチ類は、開花時期の野外においては、野外の花から花蜜や花粉を採集して餌とするため、給餌は不要であるが、秋冬期や施設園芸における閉鎖空間（ビニルハウスやガラス室など）などで花蜜や花粉の量が不十分な時には、衰弱や餓死を防ぐために給餌が必要となる。そこで、従来より、簡便なハナバチ類の飼料として、砂糖（スクロース）を主成分とする糖液（砂糖水）が用いられている。この飼料用の砂糖水は、細菌やカビ・酵母の増殖を抑制するためには飽和に近い濃度とする必要があるが、砂糖の飽和水溶液は冬期の外気温といった低温環境に晒された場合に結晶が析出しやすく、取り扱いが困難であるという問題があった。【０００４】
係る結晶析出の問題に関しては、例えば、特許文献１の実施例１には、所定の割合でブドウ糖とショ糖とを含有し、１０℃で保管しても結晶が析出しないシロップの製造方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−１３１２２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１に記載の方法により製造されたシロップは、１０℃で結晶が析出しないことは確認されているものの、粘度は確認されておらず、低温環境において適切な粘度を維持できるか否かは不明である。すなわち、上記の従来技術を鑑みても、低温環境において結晶の析出が抑制され、かつ適切な粘度を維持することができる糖液は未だ十分に提供されておらず、そのような糖液の開発が求められていた。また、ハナバチ用飼料としても、優れた操作性とともに、十分な保存性と高い嗜好性とを兼ね備えたハナバチ用飼料は未だ十分に提供されていない。本発明は、このような課題を解決するためになされたものであって、低温環境において結晶の析出が抑制され、かつ適切な粘度を維持できる糖液および液体甘味料、ならびに、優れた操作性とともに十分な保存性と高い嗜好性とを兼ね備えたハナバチ用飼料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究の結果、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、フルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さく、かつスクロースと１−ケストースとを所定の割合で含有する糖液が、低温環境における糖の結晶析出を顕著に抑制でき、また、低温環境においても適切な粘度を維持できることを見出した。また、上記糖液が、低温環境において優れた品質と操作性とを有するとともに、飲食品に優れた食味を付与する液体甘味料として使用可能であることを見出した。さらに、上記糖液ないし１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含む糖液が、低温環境において優れた品質と操作性とを有するとともに、保存性が高く、かつ、ハナバチの嗜好性が高いハナバチ用飼料として使用可能であることを見出した。そこで、これらの知見に基づいて下記の各発明を完成した。【０００８】
（１）本発明に係る糖液の第１の態様は、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、糖の総量に対するニストースの含有割合が０〜６質量％であり、かつ、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有する糖液である。【０００９】
（２）本発明に係る糖液の第２の態様は、糖の総量に対する各糖の含有割合が下記のとおりである糖液である：スクロース：３０〜７０質量％、１−ケストース：１０〜４０質量％、グルコース：５〜３０質量％、フルクトース：０〜１０質量％、ニストース：０〜６質量％、マルトース：０〜０．１質量％。【００１０】
（３）本発明に係る糖液は、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７０度以上とすることができる。【００１１】
（４）本発明に係る糖液は、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７５度とした場合に、４℃で２１日間冷蔵保存しても糖の結晶が析出しない物性を有するものとすることができる。【００１２】
（５）本発明に係る糖液は、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７５度とした場合に、回転粘度計で２００回転／分で測定した５℃における粘度が１５０００ミリパスカル秒以下である物性を有するものとすることができる。【００１３】
（６）本発明に係る液体甘味料は、前記（１）〜（５）のいずれかに記載の糖液を用いてなる。【００１４】
（７）本発明に係るハナバチ用飼料は、前記（１）〜（５）のいずれかに記載の糖液を用いてなる。【００１５】
（８）本発明に係る甘味が付与された飲食品の製造方法は、前記（６）に記載の液体甘味料を飲食品に添加する工程を有する。【００１６】
（９）本発明に係る甘味が付与された飲食品の製造方法において、液体甘味料を添加する対象の飲食品は、０℃以上１０℃以下で保存される飲食品であってもよい。【００１７】
（１０）本発明に係るハナバチの飼育方法の第１の態様は、前記（７）に記載のハナバチ用飼料をハナバチに与える工程を有する。【００１８】
（１１）本発明に係るハナバチの飼育方法の第２の態様は、１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含む糖液を、飼料としてハナバチに与える工程を有する。【００１９】
（１２）本発明に係るハナバチの飼育方法の第２の態様において、前記糖液は、１−ケストース以外のオリゴ糖としてスクロースを含み、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有することが好ましい。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、低温環境において結晶の析出が抑制され、かつ適切な粘度を維持できる糖液を得ることができる。【００２１】
本発明に係る糖液は、冷蔵保存される飲食品に添加しても結晶が析出しにくく、容易に混合でき、さらに、当該飲食品に優れた食味を付与する。従って、本発明に係る糖液は、液体甘味料として用いることができる。液体甘味料として用いる場合、本発明に係る糖液は、低温環境においても優れた品質と操作性とを維持できるため、その添加対象として好適な冷蔵保存される飲食品と並んで、冷蔵・チルド食品売り場に陳列することができる。【００２２】
また、本発明に係る糖液は、冬期の戸外などの低温環境に晒されても結晶が析出したり極端に粘度を増すことがないため、取扱が容易で、さらに、酵母等の汚染微生物が増殖しにくく、ハナバチの嗜好性が高い。従って、本発明に係る糖液は、優れた操作性、保存性およびハナバチの嗜好性を兼ね備えたハナバチ用飼料として用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明に係る実施例１の糖液（糖液１）と比較例の糖液２〜５とを４℃で保存した場合の、結晶析出の有無を示す写真である。
【図２】７０％のグラニュー糖を含有する寒天菓子（試料１）と、グラニュー糖の０．１〜１５％を１−ケストースに置換した寒天菓子（試料２〜９）とを４℃で保存した場合の、結晶析出の有無を示す写真である。
【図３】糖液１〜５について、２０℃（常温）および５℃（低温）における粘度を示す棒グラフである。
【図４】滅菌水、市販のミツバチ用飼料Ａ〜Ｃ、または、本発明に係る実施例６の糖液（飼料Ｄ）を塗布した培地で、２日間培養した酵母の菌数を示すグラフである。
【図５】滅菌水、または、糖度を揃えた飼料Ａ〜Ｄを塗布した培地で、２日間培養した酵母の菌数を示すグラフである。
【図６】飼料Ｄと、１−ケストースのみを含む糖液（飼料Ｅ）とについて、誘引したミツバチの数を示す写真である。
【図７】飼料Ａ〜Ｄおよび市販のミツバチ用飼料Ｆについて、誘引したミツバチの数の平均値を示す棒グラフである。
【図８】飼料Ａ〜ＤおよびＦについて、試験開始から３０分後に誘引したミツバチの数を示す写真である。
【図９】飼料ＤおよびＦを、４℃で３６日間冷蔵保存した場合の、結晶析出の有無を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明に係る糖液ならびにこれを用いる液体甘味料およびハナバチ用飼料について、詳細に説明する。なお、以下の説明において、％は、別段の記載の無い限り質量％（（ｗ／ｗ）％）を意味する。
【００２５】
本発明に係る糖液は、１−ケストースを含有する糖液であり、「第１の態様」、「第２の態様」および「第３の態様」がある。これらのうち、第１および第２の態様に係る糖液は、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、フルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さく、かつスクロースと１−ケストースとを所定の割合で含有するものである。一方、第３の態様に係る糖液は、１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含むものである。
【００２６】
詳細には、本発明に係る糖液の第１の態様は、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、糖の総量に対するニストースの含有割合が０％以上６％以下であり、かつ、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有する糖液である。
【００２７】
また、本発明に係る糖液の第２の態様は、糖の総量に対する各糖の含有割合が下記のとおりである糖液である：
スクロース：３０％以上７０％以下、
１−ケストース：１０％以上４０％以下、
グルコース：５％以上３０％以下、
フルクトース：０％以上１０％以下、
ニストース：０％以上６％以下、
マルトース：０％以上０．１％以下。
【００２８】
本発明に係る糖液の第３の態様は、１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含有する糖液である。
【００２９】
ここで、「単糖」は、それ以上加水分解されない糖をいい、例えば、グルコースやフルクトース、ガラクトース、マンノースなどを挙げることができる。また、「オリゴ糖」は、単糖が２〜１０または数１０個結合してなる糖をいい、例えば、マルトース、スクロース、ラクトースなどの二糖類、１−ケストース、マルトトリオース、ラフィノース、メレジトース、マルトトリウロース、ニゲロトリオースなどの三糖類、ニストース、スタキオース、ニゲロテトラオースなどの四糖類などを挙げることができる。
【００３０】
第３の態様の糖液において、「１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖」は、上述のオリゴ糖や単糖のいずれも用いることができるが、スクロースを含むことが好ましい。第３の態様の糖液がスクロースを含有する場合、１−ケストースとの含有割合としては、後述する実施例３で示すように、糖の結晶析出抑制効果を大きくする観点から、スクロース９７重量部に対して１−ケストースが３重量部以上が好ましい。
【００３１】
本発明の糖液における、糖の総量に対するスクロースの含有割合の下限としては、例えば１０％以上、好ましくは、１５％以上、２０％以上、２５％以上、より好ましくは３０％以上、３５％以上または４０％以上を挙げることができる。また、前記スクロースの含有割合の上限としては、例えば９０％以下、好ましくは、８５％以下、８０％以下、７５％以下、より好ましくは７０％以下を挙げることができる。
【００３２】
本発明の糖液における、糖の総量に対する１−ケストースの含有割合の下限としては、例えば０．０１％以上、０．１％以上、１％以上、５％以上、好ましくは、６％以上、７％以上、８％以上、より好ましくは９％以上または１０％以上を挙げることができる。また、前記１−ケストースの含有割合の上限としては、例えば９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６０％以下、好ましくは、５５％以下、５０％以下、４５％以下、より好ましくは４０％以下を挙げることができる。
【００３３】
本発明の糖液における、糖の総量に対するグルコースの含有割合の下限としては、例えば１％以上、好ましくは、２％以上、３％以上、４％以上、より好ましくは５％以上を挙げることができる。また、前記グルコースの含有割合の上限としては、例えば５０％以下、好ましくは、４５％以下、４０％以下、３５％以下、より好ましくは３０％以下または２５％以下を挙げることができる。
【００３４】
本発明において「フルクトースを含有しないか、またはその含有割合が小さい」とは、糖液における糖の総量に対するフルクトースの含有割合が０％または相当に小さい値であることをいう。前記フルクトースの含有割合として、具体的には、０％以上３０％以下、０％以上２５％以下、０％以上２０％以下、０％以上１５％以下、０％以上１０％以下などを挙げることができる。
【００３５】
また、本発明において「ニストースを含有しないか、またはその含有割合が小さい」とは、糖液における糖の総量に対するニストースの含有割合が０％または相当に小さい値であることをいう。前記ニストースの含有割合として、具体的には、０％以上１．５％以下、０％以上２．０％以下、０％以上２．５％以下、０％以上３．０％以下、０％以上３．５％以下、０％以上４．０％以下、０％以上４．５％以下、０％以上５．０％以下、０％以上５．５％以下、０％以上６．０％以下、０％以上６．５％以下、０％以上７．０％以下、０％以上７．５％以下、０％以上８．０％以下、０％以上８．５％以下、０％以上９．０％以下、０％以上９．５％以下または０％以上１０．０％以下などを挙げることができる。
【００３６】
また、本発明において「マルトースを含有しないか、またはその含有割合が小さい」とは、糖液における糖の総量に対するマルトースの含有割合が０％または相当に小さい値であることをいう。前記マルトースの含有割合として、具体的には、０％以上０．３％以下、０％以上０．２５％以下、０％以上０．２％以下、０％以上０．１５％以下、０％以上０．１％以下などを挙げることができる。
【００３７】
本発明の糖液は、当業者に公知の方法によりつくることができる。係る方法の一例として、例えば、後述する実施例６に示すように、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを上記の含有割合となるよう、滅菌水などの溶媒に溶解する方法を挙げることができる。フルクトース、ニストースおよびマルトースは、糖の総量に対する含有割合が相当に小さい範囲である限り含有させてもよいが、含有させなくてもよい。スクロース、１−ケストース、グルコース、フルクトース、ニストースおよびマルトースは試薬や食品として市販されており、本発明においては、係る市販品を用いることができる。
【００３８】
また、本発明の糖液は、後述する実施例１に示すように、スクロースを基質としてフラクトシルトランスフェラーゼ（β−フルクトフラノシダーゼ）の酵素反応を行うことによりつくることもできる。この方法は、（ｉ）フラクトシルトランスフェラーゼを発現する微生物の培養、（ｉｉ）酵素反応、（ｉｉｉ）酵素の失活、および（ｉｖ）糖液の精製の（ｉ）〜（ｉｖ）の工程に分けることができる。
【００３９】
（ｉ）の工程について、フラクトシルトランスフェラーゼを発現する微生物としては、例えば、Beijerinckia indica subsp. indica ATCC9039やBurkholderia phymatum STM815などの細菌、アスペルギルス・カワチ４３０３、アスペルギルス・ニガーＡＣＥ−２−１株（FERM P-5886）、アスペルギルス・ニガーＡＰＣ−９３１９株（寄託番号：FERM BP-7680）、アスペルギルス・ニガー・バラエティ・アワモリＪＣＭ２２６１株（Aspergillus niger var. awamori JCM2261, FERM P-13866）、フザリウム・リニ（Fusarium lini IAM5008）、グレオスポリウム・カキ（Gloeosporium kaki IAM5011）、オーレオバシデウム・プルランス・バル・メラニゲナム（Aureobasidium pullulans var melanigenum A-8, ATCC20612, FERM-P5885）などのカビ、サッカロミセス・セレビシエなどの酵母を挙げることができる。
【００４０】
上記微生物の培養は、各微生物に応じて適当な培地および培養条件で行うことができる。例えば、オーレオバシデウム・プルランス・バル・メラニゲナム（Aureobasidium pullulans var melanigenum A-8, ATCC20612, FERM-P5885）であれば、スクロース１０％、ペプトン１％、肉エキス０．７％、塩化ナトリウム０．３％、塩化コバルト６水和物０．１％を含有するｐＨ６．５の培地を用いて、２５〜３０℃、２４０ｒｐｍ、５０ＶＶｍで通気攪拌しながら、２４〜９６時間培養する。これを遠心分離して沈殿物を回収することにより、粗酵素として、フラクトシルトランスフェラーゼを発現する菌体を得る。
【００４１】
次に、（ｉｉ）の酵素反応の工程では、粗酵素をスクロース水溶液に添加して酵素反応を行う。ここで、スクロース水溶液におけるスクロース濃度は５〜７０％、好ましくは３０〜６０％とする。また、反応ｐＨおよび反応温度は酵素の由来により異なるが、ｐＨ４．０〜７．０、温度２５〜６５℃、好ましくは５０〜６０℃とする。酵素濃度は、スクロース１ｇ当たり５〜２００単位、好ましくは２．０〜８０単位とする。なお、酵素の単位は、５％スクロース溶液１．０ｍＬにｐＨ５．０の緩衝液１．０ｍＬおよび酵素液０．５ｍＬを添加し、４０℃で６０分間反応させたときに、反応液（計２．５ｍＬ）中に１μモルのグルコースを生成する酵素量を１単位として定義している。
【００４２】
次に、（ｉｉｉ）の酵素の失活の工程では、反応液を１００℃で１０分間程度加熱して酵素を失活させる。これにより酵素反応を停止させる。最後に、（ｉｖ）の糖液の精製工程では、反応液をろ過して菌体成分を除去した後、活性炭で脱色し、さらにイオン交換樹脂で脱塩することにより精製して、糖液を得る。
【００４３】
酵素反応によりつくった糖液において、スクロース、１−ケストース、グルコース、フルクトース、ニストースおよびマルトースの含有割合が、本発明の糖液の範囲に無い場合は、当該糖液にスクロース、１−ケストースおよび／またはグルコースを添加する、あるいは、当該糖液からフルクトース、ニストースおよび／またはマルトースを除去することにより、当該範囲となるよう調整することができる。ここで、フルクトース、ニストースおよび／またはマルトースの除去は、当業者に公知の方法により行うことができる。そのような方法としては、例えば、特開２０００−２３２８７８号公報で開示されているようなクロマト分離法に当該糖液を供することによって、フルクトース含有画分、ニストース含有画分および／またはマルトース含有画分を分離する方法を挙げることができる。
【００４４】
なお、本発明において、糖液に含まれる糖の種類ならびにそれらの含有割合は、当業者に公知の方法により測定することができる。そのような方法としては、例えば、後述する実施例１に示すように、糖分析用カラム（配位子交換クロマトグラフィー用カラム）を装着した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に糖液を供して糖成分を分離し、示差屈折率検出器で検出してクロマトグラムを得る方法を挙げることができる。ＨＰＬＣ測定における標準試料は、市販の各種単糖やオリゴ糖の試薬を用いることができる。
【００４５】
本発明の糖液において、糖の濃度（糖度）は特に限定されず、糖液の用途などに応じて適宜設定することができるが、腐敗防止の観点からは、市販の糖用屈折計を用いて２０℃で測定したブリックス糖度が６０度以上が好ましく、６５度以上がより好ましく、７０度以上がさらに好ましい。
【００４６】
後述する実施例で示すように、本発明の糖液は、低温環境において結晶の析出が抑制されることが明らかになっている。すなわち、本発明の糖液は、実施例２で示すように、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７５度に設定した場合に、４℃で２１日間冷蔵保存しても、糖の結晶が析出しない物性を有するもの、または、実施例６（５）で示すように、ブリックス糖度を７０度に設定した場合に、４℃で３６日間冷蔵保存しても、糖の結晶が析出しない物性を有するものとすることができる。
【００４７】
また、後述する実施例で示すように、本発明の糖液は、低温環境において粘度が高くなり過ぎず、適切な粘度を維持できることが明らかになっている。すなわち、本発明の糖液は、実施例４で示すように、糖用屈折計で測定したブリックス糖度を７５度に設定した場合に、回転粘度計で２００回転／分で測定した５℃における粘度が１５０００ミリパスカル秒以下となる物性を有するものとすることができる。
【００４８】
本発明に係る糖液は、例えば、液体甘味料として用いることができる。すなわち、本発明は、本発明に係る糖液を用いてなる液体甘味料、および、これを用いる甘味が付与された飲食品の製造方法も提供する。本製造方法は、本発明に係る糖液を、液体甘味料として飲食品に添加して、当該飲食品に甘味を付与する工程（添加工程）を有する。
【００４９】
後述する実施例５で示すように、本発明の糖液を用いてなる液体甘味料は、低温の飲食品に添加した際に、結晶が析出したり、極端に粘度を増すことはなく、低温環境においても優れた品質と操作性とを維持できることが明らかになっている。従って、上記添加工程で液体甘味料を添加する対象の飲食品は、０℃以上１０℃以下で保存される飲食品であってもよい。０℃以上１０℃以下で保存される飲食品としては、一般に、冷蔵保存される飲食品を挙げることができ、具体的には、牛乳や加工乳、乳飲料、練乳、はっ酵乳（ヨーグルト）、乳酸菌飲料などの酪農製品、乳、清涼飲料水や茶、コーヒー、ココアなどの飲料、洋生菓子や半生菓子、和生菓子などの菓子類、食肉製品、スープ、総菜、野菜加工品、果実加工品、野菜、果実、肉類、魚類などを例示することができる。
【００５０】
また、本発明に係る糖液は、ハナバチ用飼料として用いることもできる。すなわち、本発明は、本発明に係る糖液を用いてなるハナバチ用飼料、および、これを用いるハナバチの飼育方法をも提供する。本飼育方法は、本発明に係る糖液を、ハナバチ用飼料としてハナバチに与える工程（給餌工程）を有する。
【００５１】
ここで、本発明において、「ハナバチ」とは、ハチ目（Hymen optera）ハナバチ上科（Apoidea）に属する昆虫のうち、花を訪れ花蜜や花粉を採取する習性を持つものをいう。ハナバチとして、具体的には、例えば、ミツバチ（ミツバチ属（Apis）に属するハチ）、マルハナバチ（マルハナバチ属（Bombus）に属するハチ）、クマバチ（クマバチ亜科（Xylocopinae）に属するハチ）、ハリナシバチ（ハリナシバチ族（Meliponini）に属するハチ）、マメコバチ（ツツハナバチ属（Osmia）に属するハチ）などを挙げることができる。
【００５２】
上記給餌工程において、本発明に係る糖液を用いてなるハナバチ用飼料は、従来のハチ用飼料と同様にハナバチに与えることができる。すなわち、給餌器等の適当な容器に糖液を入れ、巣箱の中または近傍に置いておけばよい。給餌器は、ハナバチが糖液中で溺れないように底の浅いものがよく、ガラス製や樹脂製など表面が平滑なものは避け、木製などがよい。また、容器の中に割り箸や小枝、ロープなど足場になるようなものを入れることが好ましい。
【００５３】
本発明に係る糖液には、本発明の特徴を損なわない限りにおいて、他の成分を添加して用いてもよい。糖液を液体甘味料として用いる場合の添加物としては、例えば、着色料、保存料、増粘剤、安定剤、ゲル化剤、糊料、酸化防止剤、酸味料、香料などを例示することができ、糖液をハナバチ用飼料として用いる場合の添加物としては、例えば、市販の代用花粉、花粉、大豆粉末やカゼイン、ビール酵母などの花粉代用物、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸、ハチの誘引剤（キンリョウヘンやその成分、ナサノフ腺フェロモン、蜂蜜など）を例示することができる。また、糖液をハナバチ用飼料として用いる場合、その形態も特に限定されず、例えば、粉末や塊などの固形状、ペースト状または液体状のいずれの形態であってもよい。
【００５４】
以下、本発明について、各実施例に基づいて説明する。本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって示される特徴に限定されない。なお、本実施例において、糖液の糖度は糖用屈折計で２０℃にて測定したものであり、単位を「度」とするブリックス糖度で表す。
【実施例】
【００５５】
＜実施例１＞糖液の製造および糖組成の確認
特公昭５９−５３８３４号公報（第２〜３頁）および特開２０１０−２７３５８０号公報（段落［００９６］）に記載の方法に準じて、スクロースを基質としてフラクトシルトランスフェラーゼの酵素反応を行い、オリゴ糖を含む糖液を製造し、糖液１とした。具体的には、まず、アスペルギルス・ニガーＡＣＥ−２−１株（寄託番号：ＦＥＲＭ Ｐ−５８８６）を酵素生産培地（５％スクロース、０．７％麦芽エキス、１％ポリペプトン、０．５％カルボキシメチルセルロース、０．３％ＮａＣｌ）に植菌し、２８℃で３日間培養した後、菌体を超音波で破砕して粗酵素液を調製した。４５％スクロース水溶液（ｐＨ７．５）に、粗酵素液をスクロース１ｇあたり２．５単位の割合で添加して、４０℃にて２４時間反応させて酵素反応液を得た。酵素反応液を１００℃で１０分間加熱して酵素反応を停止させた後、ろ過してろ液を回収した。ろ液を定法により活性炭で脱色し、さらにイオン交換樹脂で脱塩して、これを糖液１とした。【００５６】
また、グラニュー糖１００ｇを滅菌水１００ｇに溶解した後、加熱することによりブリックス糖度を７５度付近に調整してスクロースシロップを作製し、これを糖液２とした。また、市販の異性化液糖「ハイフラクトーカ（加藤化学）」、ならびに市販のハチミツ「サクラ印純粋ハチミツ（加藤美蜂園本舗）」および「セブンプレミアム純粋はちみつ（加藤美蜂園本舗）」）を用意し、糖液３〜５とした。【００５７】
糖液１〜５を下記の条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供して、糖組成（糖液に含まれる単糖・オリゴ糖の種類ならびにそれらの含有割合）を確認した。各糖の含有割合は、検出された全ピークの面積の総和に対する各ピークの面積の割合として、百分率で算出した。その結果を表１に示す。なお、表１において「−」は検出限界以下（０．１％以下）であることを示す。
《ＨＰＬＣの条件》
カラム：Shodex SUGAR KS-802 HQ（8.0mm ID x 300mm) ２本
溶離液：高純水
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：５０℃
注入量：２００μＬ
検出：示差屈折率検出器Shodex RI
【表１】
2018117198.tif 000003
【００５８】
表１に示すように、糖液１は、糖の総量に対する含有割合が最も大きい第１成分としてスクロースを３０〜７０％程度、含有割合が２番目に大きい第２成分として１−ケストースを１０〜４０％程度、含有割合が３番目に大きい第３成分としてグルコースを５〜３０％程度含み、かつ、フルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さい点で、糖液２〜５とは異なる特有の糖組成を有していた。よって、この結果から、糖液１は、スクロースシロップや市販の液体甘味料とは異なる、特有の糖組成を有することが明らかになった。【００５９】
＜実施例２＞結晶の析出抑制効果
実施例１の糖液１〜５について、ブリックス糖度を７５度付近に調整した後、１２ｇずつ量り取って試験管に入れた。これを４℃で２１日間冷蔵保存した後、結晶析出の有無を目視で確認した。その結果を図１に示す。【００６０】
図１に示すように、糖液２〜５は析出した結晶が確認されたのに対して、糖液１は結晶が確認されなかった。また、糖液１は、冷蔵保存期間が２１日間を経過した後においても、結晶が確認されなかった（結果は図示しない）。この結果から、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、かつフルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さい糖液は、低温環境における糖の結晶の析出が、顕著に抑制されることが明らかになった。【００６１】
＜実施例３＞スクロースと１−ケストースとの含有割合
実施例１の糖液１の第１成分であるスクロースと、第２成分であるケストースとの含有割合を、結晶析出抑制効果の観点から検討した。【００６２】
具体的には、仕上がり総重量に対して７０％のグラニュー糖を含有する寒天菓子を作成し、これを試料１とした。また、グラニュー糖の０．１〜１５％を１−ケストースに置換した配合にて、同様に寒天菓子を作成し、これを試料２〜９とした。試料１〜９の配合を表２に示す。なお、寒天菓子の作成方法は、まず、２．５ｇの粉末寒天を１００ｇの水に添加した後、加熱しながらグラニュー糖、または、グラニュー糖および１−ケストースを添加して、煮溶かした。その後、水分を蒸発させながら、仕上がり総重量が２２５．７ｇとなるまで煮詰めた。これを、温度が低下する前にシリコン型（縦２．５ｃｍ×横２．５ｃｍ×深さ０．８ｃｍ）に８ｇずつ流し込み、冷ますことにより作成した。
【表２】
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【００６３】
続いて、試料１〜９を４℃で２１日間冷蔵保存した。その後、寒天菓子表面における結晶析出の有無を、光学顕微鏡（キーエンス）を用いて確認した。その結果を図２に示す。【００６４】
冷蔵保存１日目では、試料１〜９のいずれにおいても結晶は確認されなかった（１日目の結果は図示しない）。一方、図２に示すように、冷蔵保存２１日目では、試料１〜５において、析出した大きな結晶が確認された。これに対して、試料６〜９では、冷蔵保存１日目と同様に２１日目においても、結晶は確認されなかった。すなわち、スクロースに対する１−ケストースの割合が、試料６（スクロース：１−ケストースが９７：３）よりも大きい場合は、糖の結晶の析出が抑制されることが明らかになった。この結果から、糖液において、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有させることにより、糖の結晶の析出を抑制できることが明らかになった。【００６５】
＜実施例４＞粘度
実施例１の糖液１〜５について、ブリックス糖度を７５度付近に調整した後、常温（２０℃）における粘度を測定した。また、各糖液を低温（５℃）で１時間冷蔵保存した後、５℃における粘度を測定した。粘度は、「ブルックフィールド回転粘度計ＤＶ２Ｔ  ＨＢ」の低粘度アダプターに各糖液２０ｍＬを入れ、スピンドルＵＬＡ（０）を取り付けて、回転数は２００回転／分（ｒｐｍ）、各温度（２０℃または５℃）の循環恒温槽にて測定した。粘度の測定値を表３に、当該測定値を棒グラフに表したものを図３に、それぞれ示す。
【表３】
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【００６６】
表３および図３に示すように、２０℃の粘度は、糖液１〜５のいずれも１２０００ミリパスカル秒（ｍＰａ・ｓ）未満であった。一方、５℃の粘度は、糖液４および糖液５ではそれぞれ９１７００ミリパスカル秒および１９００００ミリパスカル秒であり、顕著に大きかった。これに対して、糖液１〜３では、５℃の粘度は１３２００ミリパスカル秒以下であった。【００６７】
一般に、ヨーグルトの粘度が１０３〜１０４ミリパスカル秒程度であることを鑑みると、糖液４および糖液５における５℃の粘度は顕著に高いことがわかる。したがって、これらの糖液は、低温環境では容器から出しにくく、滴下することも困難であるため、操作性に欠けるといえる。また、糖液を添加する対象物が低温である場合には、糖液の粘度が急激に上昇して当該対象物と混ざり難いという点でも、操作性に欠けるといえる。【００６８】
これに対して、糖液１、糖液２および糖液３の低温環境における粘度はヨーグルトと同等以下である。したがって、これらの糖液は、低温環境においても容器から出しやすく、滴下することも容易であるため、優れた操作性を有するといえる。また、糖液を添加する対象が低温である場合でも、糖液の粘度が極端に上昇することも無いため当該対象物と容易に混ざるという点でも、優れた操作性を有するといえる。【００６９】
以上のとおり、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、かつフルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さい糖液は、低温環境においても適切な粘度を維持でき、低温環境における使用にあたり、優れた操作性を有することが明らかになった。【００７０】
＜実施例５＞糖液の用途の検討；液体甘味料
実施例１の糖液１を、液体甘味料としてヨーグルトに添加して官能試験をおこなった。具体的には、４℃で保存しておいたヨーグルト「ビヒダスプレーンヨーグルト（森永乳業）」７５ｇに対して糖液１を１０ｇの割合で添加して、スプーンを用いて混合することにより評価試料を作成した。また、糖液１を添加しないものを対照試料とした。分析型パネル８名において評価試料および対照試料を喫食し、「酸味の抑制の程度」、「渋みの抑制の程度」および「舌触りの滑らかさ」の３項目を評価した。各評価項目について、対照試料を比較対照（３点）として、「非常に強い（５点）、強い（４点）、同等（３点）、やや弱い（２点）、弱い（１点）」の５段階のいずれに該当するかを各パネルが判断して採点した。その後、全パネルにおける採点結果の平均値を求めた。その結果を表４に示す。
【表４】
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【００７１】
表４に示すように、酸味の抑制の程度は、対照試料の３点に対して、評価試料では４点であった。また、渋みの抑制の程度は、対照試料の３点に対して、評価試料では４．６点であった。また、舌触りの滑らかさは、対照試料の３点に対して、評価試料では４．８点であった。すなわち、糖液１を添加しないヨーグルトと比較して、糖液１を添加したヨーグルトでは、酸味および渋みが抑制され、かつ舌触りの滑らかさが増強していて、美味しかった。すなわち、この結果から、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、かつフルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さい糖液は、飲食品に優れた食味を付与する液体甘味料として使用可能であることが明らかになった。【００７２】
また、糖液１は、低温のヨーグルトに添加した際に、結晶が析出したり、極端に粘度を増すことはなく、容易にヨーグルトと混ざってなじんだ（結果は図示しない）。すなわち、この結果から、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、かつフルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さい糖液は、低温環境において優れた品質と操作性とを有する液体甘味料として使用可能であることが明らかになった。【００７３】
＜実施例６＞糖液の用途の検討；ハナバチ用飼料
（１）飼料の糖組成の確認
３種類の市販の液体状ミツバチ用飼料を用意し、飼料Ａ、飼料Ｂおよび飼料Ｃとした。また、スクロース、１−ケストース、グルコース、フルクトースおよびニストースを滅菌水に溶解することにより、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、ニストースの含有割合が小さく、かつ、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有する糖液（糖度：７０．８度）を作成し、これを飼料Ｄとした。飼料Ａ〜Ｄを実施例１に記載の条件でＨＰＬＣに供して、糖組成を確認した。その結果を表５に示す。
【表５】
2018117198.tif 000007
【００７４】
表５に示すように、飼料Ｄのみが、スクロース、１−ケストースおよびグルコースを含有し、スクロース９７重量部に対して１−ケストースを３重量部以上含有し、かつフルクトース、ニストースおよびマルトースを含有しないか、またはそれらの含有割合が小さいという、特有の糖組成を有することが明らかになった。特に、飼料Ａ、飼料Ｂおよび飼料Ｃは１−ケストースを含まず、飼料Ｄのみが１−ケストースを含む点で、特有の組成であることが明らかになった。【００７５】
（２）飼料の保存性の確認
飼料Ａ〜Ｄについて、食品中の衛生指標菌の一つである酵母（Yeast）の増殖性を調べることにより保存性を確認した。具体的には、まず、酵母を単離した。すなわち、市販のアメリカ産レーズンを滅菌水に入れて、２２℃にて３日間静置することにより培養液を得た。この培養液について、ＹＭ寒天培地（組成；グルコース（和光純薬社）１０ｇ、ペプトン（BD Biosciences社）５ｇ、酵母エキス（BD Biosciences社）３ｇ、麦芽エキス（BD Biosciences社）３ｇ、蒸留水１Ｌ、寒天（和光純薬社）２０ｇ、ｐＨ無調整）を用いてストリークカルチャー法を数回繰り返し、コロニーの外観が酵母様（小型コロニー、コロニーの縁が明確、クリーム色ないし黄褐色、コロニーが盛り上がっている、コロニーの中心に色の濃い点（芯）が見られない等）であり、かつ顕微鏡観察にて出芽が確認されたものを分離して、以下の試験に用いる酵母とした。酵母は、試験日の前日にＹＭ液体培地（組成；上記ＹＭ寒天培地の組成から寒天を除いたもの）に植菌し、２５℃にて一晩、６００ｎｍでのＯＤ（Optical Density）値が約４．０になるまで振とう培養し、酵母培養液を得た。酵母培養液を滅菌水を用いて２０，０００倍に希釈し、これを酵母液とした。【００７６】
［２−１］飼料Ａ〜Ｄ間での比較
飼料Ａ〜Ｄを、滅菌水を用いて５倍に希釈し、孔径０．２２μｍのフィルターでろ過してろ液を回収し、これを飼料検体とした。また、比較対照として滅菌水を用意した。直径１０ｃｍのシャーレに、１の飼料検体当たり３枚のＹＭ寒天培地を作製した。これに飼料検体または滅菌水を５００μＬずつ均一に塗布し、乾燥させた。続いて、酵母液を５０μＬずつ均一に塗布し、乾燥させた。その後、２５℃にて２日間培養し、出現したコロニーの数を計測して、飼料検体毎に３枚のシャーレの平均値および標準偏差を算出した。算出結果に基づき、飼料Ａ〜Ｄにおける菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）の平均値および標準偏差を算出してグラフに表した。その結果を図４に示す。【００７７】
図４に示すように、滅菌水および飼料Ａ〜Ｃと比較して、飼料Ｄの菌数が最も小さかったことから、飼料Ｄでは酵母が増殖しにくいことが明らかになった。この結果から、１−ケストースを含む糖液は、腐敗の進行が遅く、保存性が高いハナバチ用飼料として使用可能であることが明らかになった。【００７８】
［２−２］糖度を揃えた飼料Ａ〜Ｄ間での比較
保存性に対する糖度の影響を検証するため、糖度（Ｂｒｉｘ）を揃えた飼料Ａ〜Ｄ間で酵母の増殖度を調べた。具体的には、飼料Ａ〜Ｄを、いずれも３０度となるよう滅菌水を用いて希釈した。続いて、これらを滅菌水を用いて２倍に希釈した後、孔径０．２２μｍのフィルターでろ過してろ液を回収し、飼料検体とした。また、比較対照として滅菌水を用意した。続いて、本実施例６（２）［２−１］に記載の方法によりＹＭ寒天培地上でコロニーを培養し、その数を計測してグラフに表した。なお、酵母液に代えて、本実施例６（２）の酵母培養液を滅菌水を用いて１００，０００倍に希釈したものを用いた。その結果を図５に示す。【００７９】
図５に示すように、糖度を揃えたにもかかわらず、飼料Ａ〜Ｃと比較すると、飼料Ｄの菌数が最も小さかった。この結果から、飼料Ｄの「保存性が高い」という効果は糖度によるものではなく、特有の糖組成に起因すると考えられた。以上のことから、１−ケストースを含む糖液は、腐敗の進行が遅く、保存性が高いハナバチ用飼料として使用可能であることが明らかになった。【００８０】
（３）ハナバチの嗜好性の確認；１−ケストースのみを含む糖液との比較
本実施例６（１）において、飼料Ｄに特有であることが示された成分である「１−ケストース」のみを可溶性固形分として含む糖液について、ハナバチの嗜好性を確認した。具体的には、まず、１−ケストースを６０度となるよう滅菌水に溶解して、これを飼料Ｅとした。また、比較対照として飼料Ｄを用意した。これらを５５ｍｍ×７５ｍｍの長方形の容器に５ｍＬずつ入れて養蜂箱（約８０００匹／箱）の巣枠の上に設置し、１０分経過した後、写真を撮影した。撮影した写真画像に基づいて、各飼料の容器にいるミツバチの数を計測した。その結果を図６に示す。【００８１】
図６に示すように、１０分後のハチ数は、飼料Ｄで８匹、飼料Ｅで０匹であった。すなわち、１−ケストースのみを含む糖液はミツバチを誘引しなかったのに対して、１−ケストースの他に１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖を含む糖液はミツバチを誘引した。この結果から、可溶性固形分として、１−ケストースの他に１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖を含む糖液の方が、ハナバチが好んで摂取する（ハナバチの嗜好性が高い）ことが明らかになった。【００８２】
（４）ハナバチの嗜好性の確認；市販の飼料との比較
［４−１］ハチ数の計測
市販の液体状ミツバチ用飼料「日蜂協液糖」（一般社団法人日本養蜂協会）（糖組成はスクロース１００％）を用意し、飼料Ｆとした。また、飼料Ａ〜Ｄを用意した。これらの飼料を用いて、本実施例６（３）と同様の実験を行った。ただし、各飼料につき２皿ずつ飼料を入れた容器を設置した。また、ハチ数の計測は、１０分、２０分および３０分経過後に行った。同様の試験を３つの養蜂箱（約８０００匹／箱）に対して行い、それらの計測結果に基づいて、ハチ数の平均値を算出した。その結果を表６および図７に示す。また、３０分経過後の代表的な写真画像を図８に示す。
【表６】
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【００８３】
表６、図７および図８に示すように、３０分後の平均ハチ数は、飼料Ａで９．３匹、飼料Ｂで２．３匹、飼料Ｃで１５．３匹、飼料Ｄで２２匹、飼料Ｆで６．３匹であった。また、３０分後の最大ハチ数は、飼料Ｄにおける３６匹であった。すなわち、市販のミツバチ用飼料である飼料Ａ〜ＣおよびＦと比較して、本発明に係る実施例６の糖液である飼料Ｄが誘引したミツバチの数は顕著に大きかった。この結果から、１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含む糖液は、ハナバチの嗜好性が顕著に高いハナバチ用飼料として使用可能であることが明らかになった。【００８４】
［４−２］飼料残存量の計測
飼料Ａ〜ＤおよびＦを用意した。５００ｍＬの飼料を給餌器に入れたものを、各飼料につき２つずつ用意し、飼料Ａ−１、飼料Ａ−２（以下同様）とした。また、試験に使用するものと同じ型の給餌器に１００〜５００ｍＬの飼料を入れ、１００ｍＬ毎の水位を測り、当該水位の目盛りを木の板に書き込むことにより、検尺棒を作製した。１の巣箱につき１の給餌器の割合で、巣箱（約６２００〜６７００匹／１群）内に給餌器を設置し、４〜８時間経過後および２４時間経過後に、検尺棒を用いて各飼料の残存量を確認した。その結果を表７に示す。なお、表７において、「残有り」とは、残存量の計測は行わなかったものの、目視により飼料が残存していることを確認したことを示す。
【表７】
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【００８５】
表７に示すように、試験開始から飼料がミツバチに摂取されて無くなる（０になる）までの時間は、飼料Ａ−１では７時間後、飼料Ａ−２では６時間後、飼料Ｂ−１では８時間後、飼料Ｂ−２、飼料Ｃ−１、飼料Ｃ−２、飼料Ｆ−１および飼料Ｆ−２では８時間後以降であったのに対して、飼料Ｄ−１および飼料Ｄ−２では、４時間後には１００ｍＬ程度と顕著に減少し、５時間後には０となった。なお、２４時間後は全ての飼料が無くなっていた。【００８６】
すなわち、市販のミツバチ用飼料である飼料Ａ〜ＣおよびＦと比較して、本発明に係る実施例６の糖液である飼料Ｄは、飼料が無くなるまでの時間が最も短かった。この結果から、１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含む糖液は、ハナバチの嗜好性が顕著に高いハナバチ用飼料として使用可能であることが明らかになった。【００８７】
（５）飼料における結晶析出抑制効果の確認
飼料Ｄおよび飼料Ｆを用意した。滅菌水を用いて各飼料の糖度を７０度に調製した後、試験管に入れ、４℃で３６日間冷蔵保存した。その後、結晶析出の有無を目視で確認した。その結果を図９に示す。【００８８】
図９に示すように、飼料Ｆでは、冷蔵保存後に、液面および試験管下部において析出した大きな結晶が確認された。これに対して、飼料Ｄでは、冷蔵保存後も試験開始前と同様に結晶は析出していなかった。本実施例６（５）および実施例４の結果から、１−ケストースと１−ケストース以外のオリゴ糖および／または単糖とを含む糖液は、冬期の戸外などの低温環境においても、結晶が析出したり、極端に粘度を増すことはなく、優れた品質と操作性とを維持できるハナバチ用飼料として使用可能であることが明らかになった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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