(57)【要約】  子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤を提供すること。  ＩＬ−３３が子宮内膜症又は子宮腺筋症の悪化因子であることを特定し、ＩＬ−３３の作用を阻害することができるＩＬ−３３アンタゴニストが、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、予防、又は軽減に有用であることを見出した。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分とする子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤。
【請求項２】
子宮内膜症又は子宮腺筋症の痛みを緩和する、請求項１に記載の治療剤。
【請求項３】
子宮内膜症又は子宮腺筋症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長を抑制する、請求項１又は２に記載の治療剤。
【請求項４】
子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生を抑制する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項５】
異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での線維化又は細胞増殖を抑制する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤。
【請求項６】
子宮内膜症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の諸臓器との癒着を抑制する、請求項１〜５に記載の治療剤。
【請求項７】
ＩＬ−３３アンタゴニストが、抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体又は可溶性ＩＬ−３３受容体である請求項１〜６のいずれか一項に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤。
【請求項８】
抗ＩＬ−３３抗体が、Ａ１０−１Ｃ０４、Ａ２３−１Ａ０５、Ａ２５−２Ｃ０２、Ａ２５−３Ｈ０４、又はＡ２６−１Ｆ０２である、請求項７に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症治療剤。
【請求項９】
可溶性ＩＬ−３３受容体が、ｓＳＴ２−Ｆｃである請求項７に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）アンタゴニストを有効成分として含有する子宮内膜症治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
子宮内膜症は子宮腔から離れた部位で（異所性に）子宮内膜組織が増殖する良性（非癌性）の疾患であり、生殖可能年齢にある全女性の約１０％が罹患している。不妊症の女性の２５〜５０％は子宮内膜症を患っている。【０００３】
子宮内膜症の発症原因には諸説あるが、子宮内膜細胞が月経血にのって他組織にたどり着き、子宮内膜組織が異所性に発生及び増殖することが一因と考えられている。【０００４】
子宮腺筋症は、子宮筋層に子宮内膜に類似した病変が認められる疾患である。子宮内膜症と組織学的類似性を有する疾患であるが、子宮内膜症とは発生機序や臨床像が異なるため、別疾患として取り扱われている。４０歳代に発症年齢のピークがあり、月経困難症、下腹部痛、腰痛、不妊、過多月経などが認められる。典型的な臨床症状は月経時の疼痛であり、日常生活を障害するほど強い疼痛を訴える患者も多い。子宮腺筋症患者は、子宮内膜症や子宮筋腫を合併することもある。【０００５】
子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療方法には手術療法と薬物療法があるが、これらはいずれも対症療法であり、根本的な治療方法は存在しない。手術療法を選択した場合でも、妊孕性温存のために根治を果たせず、再発防止のために術後の薬物療法を併用することが多い。薬物療法としては、低用量ピル、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニスト（リュープリンなど）、男性ホルモン類（ダナゾールなど）及び黄体ホルモン類(ジェノゲストなど)が挙げられる。しかしながら、いずれもホルモンバランスに影響を及ぼすが故の副作用がある。すなわち、ジェノゲストは妊娠ラットへの投与により胚死亡率を増加させることが知られている。このため、いずれの薬剤も、妊婦の使用が禁忌となっている。また、多くの薬物において擬閉経や擬妊娠の症状を伴うことから、不妊やホットフラッシュ、骨粗鬆症などの更年期障害様の副作用がある。したがって、安全性が高く、妊娠に影響しないような子宮内膜症又は子宮腺筋症の予防剤、又は治療剤の登場が期待されている。【０００６】
インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）は、炎症性状態において役割を果たすと考えられているインターロイキン−１ファミリーに属するサイトカインである。ＩＬ−３３は、上皮細胞や血管内皮細胞の核内で恒常的に発現しており、感染や物理的・化学的ストレスによる組織傷害によって細胞破壊と共に放出され、アラーミンとして機能する。また、ＩＬ−３３の発現はリポ多糖等の刺激によって上昇し、分泌される機構もあると考えられている。細胞外に放出されたＩＬ−３３は、細胞上に発現するＩＬ−３３受容体に結合することによって、細胞内シグナルを活性化することができる。ＩＬ−３３受容体は、様々な免疫系細胞や上皮細胞などで発現しており、これらの細胞において、ＩＬ−３３誘導性の細胞内シグナル伝達が生じる。【０００７】
ＩＬ−３３は、ＩＬ−３３受容体を発現する免疫系細胞の内、Ｔｈ２細胞、マスト細胞、好酸球、好塩基球、ＮＫ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ）Ｔ細胞やグループ２自然リンパ球からのＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３等）の産生を誘導することによって、アレルギー性炎症（喘息、アトピー性皮膚炎、花粉症、アナフィラキシーショックなど）を誘導すると考えられている（非特許文献１：Tatsukuni Ohno et al., Allergy, 2012, Vol. 67, p1203）。近年、ＩＬ−３３アンタゴニストである抗ＩＬ−３３抗体や抗ＩＬ−３３受容体抗体が喘息やアトピー性皮膚炎、ピーナッツアレルギーを適応症として臨床試験がすすめられている。【０００８】
子宮内膜症患者の血清や腹水を解析することにより、ＩＬ−３３が子宮内膜症の腹水などで病態(ステージ)の進行とともに増加し、サロゲートマーカーとして使用できることがMbarikらにより報告されている(非特許文献２：Maroua Mbarik et al., Immunolo.Lett. 2015, Vol.166, p1)。Ｍｂａｒｉｋらの報告によると、ＩＬ−３３のアンタゴニストとして機能する可溶性ＩＬ−３３受容体（ｓＳＴ２）の腹水中の濃度がＩＬ−３３の約１００倍の濃度であり、ＩＬ−３３と同様に子宮内膜症の進行とともに増加している。従って、子宮内膜症において発現が増加したＩＬ−３３が疾患の原因であるのか、又は結果であるのか、及びどのように病態に対して機能しているのかは依然として不明であった。【０００９】
ＩＬ−３３アンタゴニストを、局所線維症の治療に用いることが報告されている（特許文献１：国際公開第２０１６／１４０９２１号）。特許文献１は、局所線維症の一症例として、子宮内膜症について言及するものの、その実施例において、子宮内膜症の治療効果は調べられていない。特許文献１は、単に線維症の一態様として列挙されているに過ぎず、子宮内膜症等におけるＩＬ−３３の役割については見いだされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１６／１４０９２１号
【特許文献２】国際公開第２０１４／１６４９５９号
【特許文献３】国際公開第２０１５／０９９１７５号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Tatsukuni Ohno et al., Allergy, 2012, Vol. 67, p1203
【非特許文献２】Maroua Mbarik et al., Immunolo.Lett. 2015, Vol.166, p1
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
子宮内膜症又は子宮腺筋症を治療するための安全性が高く、妊娠に影響しないような薬剤が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意検討した結果、ＩＬ−３３が子宮内膜症又は子宮腺筋症の悪化因子であることを特定した。また、本発明者らは、ＩＬ−３３の作用を阻害することができるＩＬ−３３アンタゴニストが、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、予防、又は軽減に有用であることを見出し、本発明に至った。【００１４】
そこで、本発明は、以下のものに関する：【００１５】
[１]  ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分とする子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤。
[２]  子宮内膜症又は子宮腺筋症の痛みを緩和する、項目１に記載の治療剤。
[３]  子宮内膜症又は子宮腺筋症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長を抑制する、項目１又は２に記載の治療剤。
[４]  子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生を抑制する、項目１〜３のいずれか一項に記載の治療剤。
[５]  異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での線維化又は増殖を抑制する、項目１〜４のいずれか一項に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤。
[６]  子宮内膜症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の諸臓器との癒着を抑制する、項目１〜５に記載の治療剤。
[７]  ＩＬ−３３アンタゴニストが、抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体又は可溶性ＩＬ−３３受容体である項目１〜６のいずれか一項に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤。
[８]  抗ＩＬ−３３抗体が、Ａ１０−１Ｃ０４、Ａ２３−１Ａ０５、Ａ２５−２Ｃ０２、Ａ２５−３Ｈ０４、又はＡ２６−１Ｆ０２である、項目７に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症治療剤。
[９]  可溶性ＩＬ−３３受容体が、ｓＳＴ２−Ｆｃである項目７に記載の子宮内膜症又は子宮腺筋症治療剤。
[１０]  ＩＬ−３３アンタゴニストを投与することを含む、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療方法。
[１１]  子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤の製造において使用するための、ＩＬ−３３アンタゴニストの使用。
[１２]  子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療において使用する、ＩＬ−３３アンタゴニスト。
[１３]  子宮内膜症又は子宮腺筋症の痛みを緩和する、項目１０〜１２のいずれか一項に記載の治療方法、使用、又はＩＬ−３３アンタゴニスト。
[１４]  子宮内膜症又は子宮腺筋症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長を抑制する、項目１０〜１２のいずれか一項に記載の治療方法、使用、又はＩＬ−３３アンタゴニスト。
[１５]  子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生を抑制する、項目１０〜１２のいずれか一項に記載の治療方法、使用、又はＩＬ−３３アンタゴニスト。
[１６]  異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での線維化又は増殖を抑制する、項目１０〜１２のいずれか一項に記載の治療方法、使用、又はＩＬ−３３アンタゴニスト。
[１７]  ＩＬ−３３アンタゴニストが、抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体又は可溶性ＩＬ−３３受容体である、項目１０〜１６のいずれか一項に記載の治療方法、使用、又はＩＬ−３３アンタゴニスト。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤は、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療効果を有する。また、本発明の子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤は、子宮内膜症又は子宮腺筋症に伴う、痛みの緩和、異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長の抑制、異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生の抑制、及び異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での線維化又は増殖の抑制からなる群から選ばれる少なくとも１の作用を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は子宮内膜症モデルにおけるＩＬ−３３遺伝子ノックアウトマウス（ＩＬ−３３ＫＯ）は、ワイルドタイプの対照マウス（control）に比較して異所性の子宮内膜組織である嚢胞病変の成長が抑制されることを示すグラフである。
【図２】図２は、子宮内膜症モデルにおけるＩＬ−３３投与マウス(IL-33 ip)は、対照マウス(control)に比較して異所性の子宮内膜組織である嚢胞病変の成長を促進することを示すグラフである。
【図３】図３は、子宮内膜症モデルにおけるＩＬ−３３アンタゴニスト投与マウス(sST2-Fc)は、対照マウス(cont Fc)に比較して異所性の子宮内膜組織である嚢胞病変の成長が抑制されていることを示すグラフである。
【図４】図４は、子宮内膜症モデルにおけるＩＬ−３３アンタゴニスト投与マウス(sST2-Fc)は、対照マウス(cont Fc)に比較して異所性の子宮内膜組織である嚢胞病変の線維化が抑制されていることを示すアザン染色像である。
【図５】図５は、ＩＬ−３３投与子宮内膜症モデルにおいて抗IL-３３抗体(Anti-IL-33)投与により、対照抗体(Control Ab)と比較して嚢胞病変の成長が抑制されていることを示すグラフである。
【図６】図６は、ＩＬ−３３投与子宮内膜症モデルにおいて抗IL-３３抗体(Anti-IL-33 Ab)投与により、対照抗体(Control Ab)と比較して嚢胞病変での細胞増殖（Ｋｉ-６７陽性細胞の割合）が抑制されていることを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の理解を容易にするため、以下に本発明に用いられる用語を説明する。
【００１９】
［ＩＬ−３３］
ＩＬ−３３はＩＬ−１ファミリーに属するサイトカインであり、ヒトＩＬ−３３は配列表の配列番号１に示すように２７０アミノ酸からなり、そのｍＲＮＡの配列を配列番号２に示す。ＩＬ−３３は、Ｎ末端側にクロマチン結合ドメインを有し、Ｃ末端側に１２個のβストランドを持つ分子量１８ｋＤａのＩＬ−１様サイトカインドメインを有しており、さらに９５位及び１０９位にカテプシンＧ切断部位、９９位にエラスタラーゼ切断部位及び１７８位にカスパーゼ切断部位を有している。ＩＬ−３３は、細胞がネクローシスを起こす過程で、リソゾーム等に由来するエラスタラーゼ、カテプシンＧ、又はプロテイナーゼ３などの酵素により切断されて成熟型ＩＬ−３３、例えばＩＬ−３３（残基９５から残基２７０）（配列表の配列番号１のＮ末から９５位から２７０位のアミノ酸配列で表されるＩＬ−３３を「ＩＬ−３３（残基９５から残基２７０）」と表記する。以下同様に表記する）、ＩＬ−３３（残基９９から２７０）、ＩＬ−３３（残基１０９から残基２７０）、ＩＬ−３３（残基１１２から残基２７０位）などを含むさまざまな断片となり、サイトカインとして機能すると考えられている。一方で、細胞死がアポトーシスである場合、アポトーシスの過程で活性化されるカスパーゼにより、ＩＬ−３３は、１７８位で切断されて、不活性型ＩＬ−３３、例えばＩＬ−３３（残基１７９から残基２７０）になると考えられている。
【００２０】
ＩＬ−３３は、サイトカインとして細胞外に放出されると、ＩＬ−３３受容体と結合し、当該ＩＬ−３３受容体を発現する細胞において、細胞内シグナル伝達を開始させるという機能を有する。ＩＬ−３３により誘導されるシグナル伝達には、非限定的に、ＮＦ−κＢ経路と、ＭＡＰＫＫｓ経路とがあり、最終的に各種のサイトカインやケモカイン、炎症性メディエータの産生を惹起する。ＩＬ−３３により誘導されるサイトカインの例として、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３などが挙げられる。ＩＬ−３３により誘導されるケモカインの例としてＣＸＣＬ２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２４などが挙げられる。ＩＬ−３３により誘導される炎症性メディエータの例としてＰＧＤ２、ＬＴＢ４などが挙げられる。ＩＬ−３３により誘導されるサイトカインやケモカイン、炎症性メディエータは、免疫系細胞の遊走、サイトカイン産生、脱顆粒に関与し炎症を惹起する。本発明では、ＩＬ−３３は、後述するＩＬ−３３受容体に結合して作用するものであれば、全長ＩＬ−３３又はその活性型断片のいずれかを指してもよいし、それらの誘導体又は変異体であってもよい。また、本発明のＩＬ−３３は、ヒトＩＬ−３３でも他の生物由来のＩＬ−３３でもよい。本発明のＩＬ−３３は、中でも配列表の配列番号１のアミノ酸配列で表されるヒトＩＬ−３３が好ましい。
【００２１】
ＩＬ−３３が結合するＩＬ−３３受容体は、ＳＴ２とＩＬ−１ＲＡｃＰ（ＩＬ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｃｅｓｓｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）とのヘテロ二量体から構成される。ＩＬ−３３受容体において、ＩＬ−３３を特異的に認識して結合する部位は、ＳＴ２の細胞外領域に存在する。ＩＬ−３３の受容体は、様々な免疫系細胞（Ｔｈ２細胞、マスト細胞、好酸球、好塩基球、マクロファージ、樹状細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、グループ２自然リンパ球（ナチュラルヘルパー細胞）、ｎｕｏｃｙｔｅ、Ｉｈ２（ｉｎｎａｔｅ  ｈｅｌｐｅｒ  ｔｙｐｅ  ２）細胞など）や上皮細胞などで発現しているが、これらの細胞に限定されない。
【００２２】
［ＩＬ−３３アンタゴニスト］
本願において「アンタゴニスト」とは目的の標的又はそのリガンドもしくはその受容体又はそれらの遺伝子（ｍＲＮＡを含む）に対し直接的に作用し、その機能の中和作用を有する物質の総称を意味する。したがって、アンタゴニストには、単に標的の機能を直接中和する作用を有する物質の他に、標的のタンパク質と相互作用する物質の機能の中和や、標的のタンパク質の遺伝子発現を抑制することで、間接的に標的の機能を中和する作用を有する物質も含まれるものとする。すなわち、「ＩＬ−３３アンタゴニスト」は、ＩＬ−３３に結合して、ＩＬ−３３のいずれかの機能を阻害することができる物質であってもよいし、ＩＬ−３３受容体に結合し、ＩＬ−３３の機能を阻害することが出来る物質であってもよい。さらに、ＩＬ−３３やＩＬ−３３受容体の遺伝子発現を抑制するアンチセンス及びｓｉＲＮＡもＩＬ−３３アンタゴニストに含まれる。ＩＬ−３３アンタゴニストとして、例えば抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体、可溶性ＩＬ−３３受容体、及びＩＬ−３３やＩＬ−３３受容体に対するアプタマーなどが挙げられるが、これらのものに限定されることを意図するものではない。抗ＩＬ−３３抗体及び抗ＩＬ−３３受容体抗体、ならびにＩＬ−３３及びＩＬ−３３受容体に結合するアプタマーは、それぞれ標的分子であるＩＬ−３３及びＩＬ−３３受容体に結合することで、ＩＬ−３３と、ＩＬ−３３受容体との間の会合を妨げることができる。一方、可溶性ＩＬ−３３受容体は、遊離しているＩＬ−３３と結合することで、ＩＬ−３３と、細胞表面上のＩＬ−３３受容体との会合を妨げることができる。
【００２３】
［ＩＬ−３３受容体］
ＩＬ−３３の受容体のサブユニットをコードするＳＴ２遺伝子は、膜貫通型（ＳＴ２Ｌ）タンパク質をコードするが、選択的スプライシングにより膜貫通領域及び細胞内領域を欠く分泌型タンパク質もコードする。ヒトＳＴ２Ｌの全長アミノ酸配列は、配列表の配列番号３で表される。このうち、ＳＴ２Ｌと、他のＩＬ−３３受容体サブユニット、例えばＩＬ−１ＲＡｃＰとが会合することで形成されるＩＬ−３３受容体（ヘテロダイマー）に、ＩＬ−３３が結合することで細胞内シグナル伝達系が活性化される。ＩＬ−３３はＳＴ２Ｌの細胞外領域に結合する。したがって、ＳＴ２Ｌを、単にＩＬ−３３受容体ということもある。
【００２４】
［可溶性ＩＬ−３３受容体］
本発明において可溶性ＩＬ−３３受容体は、ＳＴ２Ｌタンパク質の細胞外領域（配列表の配列番号３の残基１９から残基３２８）の一部又は全部を含むタンパク質であり、かつＩＬ−３３と結合することによりＩＬ−３３アンタゴニストとして機能するものであればよい。可溶性ＩＬ−３３受容体は、任意に修飾されていてもよく、例えばポリエチレングリコールや抗体の定常領域が結合したものでもよい。特に、免疫グロブリンの定常領域が結合した可溶性ＩＬ−３３受容体をｓＳＴ２−Ｆｃと呼ぶものとする。好ましいｓＳＴ２−Ｆｃとしては、ヒトＳＴ２Ｌタンパク質の細胞外領域及びヒトＩｇＧ抗体の定常領域の融合タンパク質である、配列表の配列番号５で表される融合タンパク質があげられる。
【００２５】
［抗体］
本発明において「抗体」という語は、最も広い意味で使用するものとし、所望の特異的結合性が示される限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体が含まれるものとする。本発明における抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ラクダ抗体など、任意の動物由来の抗体であってもよい。
【００２６】
［モノクローナル抗体］
本発明の抗体のうちモノクローナル抗体は、設計上のアミノ酸配列において単一クローン(単一分子種)のみからなる抗体集団の抗体のことをいう。モノクローナル抗体には、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、マルチスペシフィック抗体、及び人工抗体、並びにそれらの機能改変抗体、並びにそれらのコンジュゲート抗体、並びにそれらのフラグメントが含まれるものとする。本発明のモノクローナル抗体はハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法、及び遺伝子工学的手法など、任意の公知の手法を用いて生成することができる。
【００２７】
［キメラ抗体］
キメラ抗体とは、軽鎖、重鎖、又はその両方が、非ヒト由来の免疫グロブリンの可変領域と、ヒト由来の免疫グロブリンの定常領域から構成される抗体をいう。
【００２８】
［ヒト化抗体］
ヒト化抗体は、非ヒト由来免疫グロブリンの相補性決定領域と、ヒト免疫グロブリン由来のフレームワーク領域とからなる可変領域並びにヒト免疫グロブリン由来の定常領域からなる抗体をいう。
【００２９】
［ヒト抗体］
ヒト抗体とは、軽鎖、重鎖ともにヒト免疫グロブリン由来の抗体をいう。ヒト抗体は、重鎖の定常領域の違いにより、γ鎖の重鎖を有するＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む）、μ鎖の重鎖を有するＩｇＭ、α鎖の重鎖を有するＩｇＡ（ＩｇＡ１、ＩｇＡ２を含む）、δ鎖の重鎖を有するＩｇＤ、又はε鎖の重鎖を有するＩｇＥを含む。また原則として軽鎖は、κ鎖とλ鎖のどちらか一方を含む。
【００３０】
［マルチスペシフィック抗体］
マルチスペシフィック抗体とは、２つ以上の異なる抗原特異性を有する２つ以上の独立した抗原認識部位を持ち合わせた非対称となりうる抗体であり、２つの抗原特異性を有するバイスペシフィック抗体、３つの抗原特異性を有するトリスペシフィック抗体などが挙げられる。本発明のマルチスペシフィック抗体が認識する１つ以上の抗原はＩＬ−３３分子又はＩＬ−３３受容体分子である。
【００３１】
［人工抗体］
人工抗体とは、例えばタンパク質スキャフォールドであり、免疫グロブリンの構造を有しないものの、免疫グロブリンと同様の機能を有する人工抗体である。タンパク質スキャフォールドとしてはヒトのセリンプロテアーゼ阻害剤のKunitzドメインやヒトのファイブロネクチンの細胞外ドメイン、アンキリン、リポカリンなどが利用され、スキャフォールド上の標的結合部位の配列を改変すれば本発明のエピトープに結合するタンパク質スキャフォールドを生成することができる（Clifford Mintz et.al BioProcess International, 2013, Vol.11(2), pp40-48）。
【００３２】
［機能改変抗体］
本願において機能改変抗体とは、免疫グロブリンの主に定常領域のアミノ酸や糖鎖を改変することにより、抗体の有する抗原結合機能以外の細胞殺傷機能、補体活性化機能や血中半減期等を調節した抗体をいう。
【００３３】
［コンジュゲート抗体］
本願においてコンジュゲート抗体とは、抗体にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非ペプチド性ポリマー、放射性物質、毒素、低分子化合物、サイトカイン、アルブミン、酵素などの抗体以外の機能分子を化学的又は遺伝子工学的に結合した抗体をいう。
【００３４】
［フラグメント］
本願において抗体のフラグメントとは、抗体の一部分を含むタンパク質であり、抗原に結合できるものをいう。抗体のフラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、又はｓｃＦｖが挙げられる。
さらにこれらの抗体のフラグメントは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非ペプチド性ポリマー、放射性物質、毒素、低分子化合物、サイトカイン、アルブミン、酵素などの抗体以外の機能分子を化学的又は遺伝子工学的に結合していてもよい。
【００３５】
［ヒトモノクローナル抗体］
ヒトモノクローナル抗体は、ヒトの生殖系列の免疫グロブリンの配列に由来する可変領域及び定常領域を有するモノクローナル抗体をいう。ヒト抗体遺伝子を導入したトランスジェニックマウス由来のモノクローナル抗体や、ヒト抗体遺伝子ライブラリーに由来する抗体も含まれる。
【００３６】
［中和］
本願において「中和」とは、その標的のいずれかの機能を阻害することができる作用のことをいう。ＩＬ−３３の機能（生物学的活性）の阻害としては、ＩＬ−６などのＩＬ−３３誘導性サイトカインの産生の阻害を含むが、これに限定されない。ＩＬ−３３の生物学的活性の指標は、当分野において知られたいくつかのｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ分析の１つ又はそれ以上によって評価することができる。
【００３７】
［相補性決定領域］
相補性決定領域とは免疫グロブリン分子の可変領域のうち、抗原結合部位を形成する領域をいい、超可変領域とも呼ばれ、免疫グロブリン分子ごとに特にアミノ酸配列の変化が大きい部分をいう。相補性決定領域には軽鎖、重鎖それぞれに３つの相補性決定領域（相補性決定領域１、相補性決定領域２及び相補性決定領域３）がある。本願では、免疫グロブリン分子の相補性決定領域はカバット（Kabat）の番号付けシステム（Kabatら, 1987, Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA）に従って決定される。
【００３８】
[アプタマー]
アプタマーとは、特定の物質と特異的に結合する核酸分子のことであり、本願においてアプタマーとは、ＩＬ−３３やＩＬ−３３受容体に結合してアンタゴニストとして機能する分子を意味する。本願におけるアプタマーは天然の核酸分子以外に人工的な核酸分子を含んでもよい。
【００３９】
[アンチセンス]
アンチセンスとは、標的遺伝子ＲＮＡにハイブリダイズすることのできるアンチセンス核酸（ＲＮＡもしくはＤＮＡ）であり、遺伝子機能発現を抑制する機能を有するものである。本願においてアンチセンスとは、ＩＬ−３３やＩＬ−３３受容体のｍＲＮＡに結合して遺伝子の発現を抑制するアンタゴニストとして機能する分子を意味する。本願におけるアンチセンスは天然の核酸分子以外に人工的な核酸分子を含んでもよい。
【００４０】
［ｓｉＲＮＡ］
ｓｉＲＮＡ（small interfering RNA）とは１５−３０塩基対から成る低分子二本鎖ＲＮＡである。  ｓｉＲＮＡはＲＮＡ干渉と呼ばれる現象に関与しており、標的遺伝子のｍＲＮＡの破壊によって配列特異的に遺伝子の発現を抑制する。本願においてｓｉＲＮＡとは、ＩＬ−３３やＩＬ−３３受容体のｍＲＮＡを破壊して遺伝子の発現を抑制するアンタゴニストとして機能する分子を意味する。本願におけるｓｉＲＮＡは天然の核酸分子以外に人工的な核酸分子を含んでもよい。
【００４１】
[子宮内膜症］
子宮内膜症は子宮腔から離れた部位で（異所性に）子宮内膜組織が増殖する良性（非癌性）の疾患であり、離れた部位としては卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁、へそなどがある。異所性の子宮内膜組織は諸臓器と癒着が起こることがある。卵巣にできた子宮内膜組織の血腫はチョコレート嚢胞と呼ばれることがある。子宮内膜症の確定診断としては腹腔鏡検査があり、直接異所性の子宮内膜組織を観察する。子宮内膜症の臨床進行期の分類としてはＲｅ−ＡＳＲＭ分類があり、病巣部位、表在性か深在性か、あるいは諸臓器との癒着度合によりスコア化され第１期から第４期までとされる。子宮内膜症の経過観察としてＢｅｅｃｈａｍ分類があり、病態の進行に応じて第１期から第４期までとされる。
【００４２】
［子宮腺筋症］
子宮腺筋症は子宮内膜組織が子宮の筋層内に認められる疾患であり、ＭＲＩの診断により子宮の一部に限定される部分性子宮腺筋症、子宮全体にひろがる全周性子宮腺筋症に分類される。
【００４３】
以下、本発明の実施の形態について説明する。なお、以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明はその実施の形態のみに限定されない。
【００４４】
本発明は、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分とする子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療剤に関する。治療剤は、子宮内膜症又は子宮腺筋症を患う患者に対し投与されることで、根治、症状を軽減、又は悪化を予防しうる。ＩＬ−３３アンタゴニストとしては、抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体、IL−３３受容体結合アプタマー又は可溶性ＩＬ−３３受容体を挙げることができる。
【００４５】
別の態様では、本発明はＩＬ−３３アンタゴニストを含有する、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療用、予防用、又は軽減用の医薬組成物に関する。また、さらに別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３アンタゴニストを投与することを含む、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、予防又は軽減方法に関する。また、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、予防又は軽減用医薬の製造のための本発明のＩＬ−３３アンタゴニストの使用に関する。また、子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、予防又は軽減において使用するためのＩＬ−３３アンタゴニストにも関する。
【００４６】
子宮内膜症は、子宮内膜組織が、子宮内膜以外の場所で生育してしまう疾患である。子宮の筋層内に子宮内膜組織が存在するものを子宮腺筋症という。これら異所性の子宮内膜組織は、子宮の内膜と同様に、月経周期に併せて発育と出血を繰り返すが、経血のように出口がないことから血腫を形成することもある。こうして形成された血腫をチョコレート嚢胞という。嚢胞が形成した結果、組織が線維化して癒着や硬結を形成しうる。異所性の子宮内膜組織が諸臓器（腹膜、腸、卵巣など）に癒着してしまうと、痛みの原因となる。また、卵管が癒着してしまうと不妊の原因となる。子宮内膜症に対して、通常ホルモン療法や外科的手術による切除が行われる。子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、軽減、予防により、子宮内膜症又は子宮腺筋症に伴う痛みの緩和、異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長の抑制、異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生の抑制、異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の諸臓器との癒着の抑制及び異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の線維化又は細胞増殖の抑制からなる群から選ばれる少なくとも１の作用を発揮する。
【００４７】
子宮内膜症及び子宮腺筋症を患う患者は、月経周期の変動に伴い、経血量の増加、月経痛が強くなるなどの症状を有する。したがって月経周期の変動に伴う症状変化を有する対象や、月経周期の変動に伴う愁訴を訴える対象に対し、ＩＬ−３３アンタゴニストを含む治療剤、又は治療、予防、又は軽減用の医薬組成物が投与されうる。このような対象は、単に局所線維症を有する対象と区別しうる。
【００４８】
本発明の別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する子宮内膜症又は子宮腺筋症に伴う痛みの緩和剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する子宮内膜症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の諸臓器との癒着の抑制剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する子宮内膜症又は子宮腺筋症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長の抑制剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）における血管新生抑制剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）における子宮内膜ストローマ細胞の線維化抑制剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）における細胞増殖抑制剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する表在性子宮内膜症治療剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する深在性子宮内膜症治療剤、ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する部分性子宮腺筋症治療剤、又はＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分して含有する全周性子宮腺筋症治療剤にも関する。
【００４９】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症又は子宮腺筋症患者の月経時の腰痛、下腹部痛もしくは排便痛または月経時以外の腰痛、下腹部痛もしくは排便痛を緩和することが好ましく、当該痛みをなくすことがより好ましい。
【００５０】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症患者の骨盤、卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁及び／又はへそにおける痛みを緩和することが好ましく、当該痛みをなくすことがより好ましい。
【００５１】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストの痛みを緩和することは、例えば痛みにともなうＱＯＬをスコア化したＢｉｂｅｒｏｇｌｕとＢｅｈｒｍａｎスケール（Biberoglu KO, Behrman SJ, Am J Obstet Gynecol.,139:645（1981））で評価することができる。このスケールでは月経時以外の骨盤痛、月経困難性疼痛、及び性交痛などが自覚症状として評価される。
【００５２】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストの痛みを緩和することは、鎮痛剤の服用の回数や量が減ることで評価することができる。鎮痛剤としては、非ステロイド系の消炎鎮痛剤が好ましく、例えばロキソプロフェンナトリウム水和物やジクロフェナクナトリウム、アスピリンがあげられる。
【００５３】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症患者の骨盤、卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁及び／又はへそにおける異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の癒着を抑制することが好ましく、当該癒着をなくすことがより好ましい。本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは子宮の癒着を抑制し、子宮可動性の制限が緩和させられることが好ましい。
【００５４】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症患者の骨盤、卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁及び／又はへそにおける異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長を抑制することが好ましく、当該異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）を縮小させることがより好ましい。
【００５５】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症患者の骨盤、卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁及び／又はへそにおける異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生を抑制することが好ましい。
【００５６】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症患者の骨盤、卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁及び／又はへそにおける異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での線維化又は細胞増殖を抑制することが好ましい。
【００５７】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、子宮内膜症患者の骨盤、卵巣、腹腔、腹膜、ダクラス窩、Ｓ状結腸、直腸、仙骨子宮靱帯、腟、外陰部、膀胱、腹壁及び／又はへそにおける異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）でのサイトカイン及び／又はメディエータ―の産生を抑制を抑制することが好ましく、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８及び／又はプロスタグランジンの産生を抑制することがより好ましい。
【００５８】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストはＢｅｅｃｈａｍ分類での診察により、第１期、第２期、第３期及び／又は第４期の子宮内膜症の患者を治療することが好ましく、Ｒｅ−ＡＳＲＭ分類でのスコアの評価により、第１期、第２期、第３期及び／又は第４期の子宮内膜症の患者を治療することが好ましい。
【００５９】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは子宮内膜症にともなうＱＯＬの改善できることが好ましい。ＱＯＬの改善は例えば、Endometriosis Health Profile-30（ＥＨＰ−３０） （Jones Gら、Obstet Gynecol;98:258(2001)）、ＥＱ−５Ｄ（Brooks, Rら、Health Policy,37:53(1997)）またはEndometriosis Treatment Satisfaction Questionnaire(ETSQ)（Deal LSら、 Qual Life Res.;19(6):899(20101)）での問診により評価することができる。ＱＯＬの改善としては、例えば直立困難、着座困難、歩行困難、食欲、睡眠困難、フラストレーション、憂鬱、涙もろさ、悲哀感、躁鬱、短気、乱暴、孤独感、自信喪失、性交困難を改善することがあげられる。
【００６０】
ＩＬ−３３アンタゴニストを用いた子宮内膜症や子宮腺筋症の治療剤は一般的に使用されるホルモン調節剤の薬物療法と異なり、不妊や更年期障害様の副作用が緩和されている。従って、本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、妊娠可能な状態を維持し、妊娠時の胎児毒性がない子宮内膜症又は子宮腺筋症治療剤であることが好ましく、更年期障害様の副作用をともなわない子宮内膜症又は子宮腺筋症治療剤であることが好ましい。更年期障害様の副作用としては、例えば不妊やホットフラッシュ、骨粗鬆症、うつ状態などがあげられるが、これらに限定されるものではない。
【００６１】
抗ＩＬ−３３抗体及び抗ＩＬ−３３受容体抗体には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体が含まれるものとする。本発明における抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ラクダ抗体など、任意の動物由来の抗体であってもよい。好ましくは、本発明の抗ＩＬ−３３抗体及び抗ＩＬ−３３受容体抗体は、モノクローナル抗体であり、より好ましくは、本発明の抗ＩＬ−３３抗体及び抗ＩＬ−３３受容体抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体であるモノクローナル抗体である。
【００６２】
本発明の抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体は、本技術分野に既知の任意の方法により取得することができる。モノクローナル抗体に関する場合、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法、及び遺伝子工学的手法などのうち、任意の手法を用いて取得することができる。
【００６３】
ハイブリドーマ法では、免疫原を用いて免疫した動物、特にラット又はマウスの脾臓又はリンパ節から採取したＢ細胞と、不死化細胞、例えばミエローマ細胞とを融合させてハイブリドーマを作成し、所望の結合性を有する抗体を生成するハイブリドーマをスクリーニングし、スクリーニングされたハイブリドーマを用いて生成することができる。また、ヒトの抗体遺伝子を導入したマウスを使用することによりヒト抗体を取得することができる。ハイブリドーマからモノクローナル抗体を取得するには、当該ハイブリドーマを通常の方法にしたがい培養し、その培養上清として得る方法、あるいはハイブリドーマをこれと適合性がある哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水として得る方法などが採用される。前者の方法は、高純度の抗体を得るのに適しており、一方、後者の方法は、抗体の大量生産に適している。モノクローナル抗体を作製する技術は、公知の技術を用いればよく、例えばCurrent Protocols in Immunology, Wiley and Sons Inc.のChapter 2の記載に従うことで生成することができる。
【００６４】
ファージディスプレイ法では、任意のファージ抗体ライブラリより選別したファージを、目的の抗原（本願ではＩＬ−３３又はＩＬ−３３受容体）を用いてスクリーニングを行い、抗原に対する所望の結合性を有するファージを選択する。次に、ファージ内に含まれる抗体対応配列を単離又は配列決定し、単離された配列又は決定された配列情報に基づき、モノクローナル抗体をコードする核酸分子を含む発現ベクターを構築する。そしてかかる発現ベクターをトランスフェクションされた細胞株を培養することにより、モノクローナル抗体を産生させることができる。ファージ抗体ライブラリとして、ヒト抗体ライブラリを用いることにより、所望の結合性を有するヒト抗体を生成することができる。
【００６５】
遺伝子工学的手法では、抗体をコードする遺伝子配列において、相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応する配列、又はその他の配列に変異を導入して、かかる配列を発現ベクターに組み込み、これを宿主細胞に形質転換し、抗原との親和性を高めた、及び/又は機能を改変した抗体を作製することができる（例えば、Borrebaeck C. A. K. and Larrick J. W. THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in theUnited Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990参照）。
【００６６】
本発明では、ヒトに対する異種抗原性を低下させたり、別の機能を付加すること等を目的として、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、マルチスペシフィック抗体、人工抗体も使用することができるし、これらの抗体は、遺伝子工学的手法などの既知の方法を用いて製造することができる。
【００６７】
キメラ抗体は、非ヒト免疫グロブリンの可変領域をコードするＤＮＡを、ヒト免疫グロブリンの定常領域をコードするＤＮＡと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる（ＥＰ  １２５０２３、国際公開第９２／１９７５９号参照）。この既知の方法を用いて、本発明に有用なキメラ抗体を得ることができる。
【００６８】
ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、その他の部分のヒト免疫グロブリンの領域をコードするＤＮＡを連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる。
【００６９】
ヒト抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載の手順を使用して調製される。またヒト抗体は、トリオーマ技術、ヒトＢ-細胞ハイブリドーマ技術(Kozborら, 1983 Immunol Today 4: p72)及びヒトモノクローナル抗体を生成するためのＥＢＶハイブリドーマ技術(Coleら, 1985, MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., p. 77)等を使用し、調製することもできる。さらに、ヒト抗体遺伝子を導入したトランスジェニックマウスに抗原タンパク質（本願ではＩＬ−３３又はＩＬ−３３受容体）を免疫し、ハイブリドーマを作製することにより、ヒト抗体を生成することもできる。トランスジェニックマウスとしては、ＨｕＭａｂ（登録商標）マウス(Medarex)、ＫＭＴＭマウス (Kirin Pharma)、ＫＭ(ＦＣγＲＩＩｂ-ＫＯ)マウス、ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅマウス（Regeneron）等が挙げられる。
【００７０】
マルチスペシフィック抗体は、２種類以上のモノクローナル抗体の抗原結合領域を利用して、遺伝子工学的な手法により作製することができる。該遺伝子工学的な手法はこの分野において既に確立されている。例えば、２種類のモノクローナル抗体の抗原結合領域を直列に連結したＤＶＤ−Ｉｇ（Wuら、Nature Biotechnology 25(11), 1290(2007)）の技術や、免疫グロブリンの定常領域を改変することにより、異なった抗原に結合する２種類の抗体の重鎖が組み合わされるＡＲＴ−Ｉｇの技術(Kitazawaら、Nature Medicine 18(10), 1570(2012))を利用すれば所望のバイスペシフィック抗体が取得できる。
【００７１】
人工抗体としては、例えばヒトファイブロネクチンタイプＩＩＩドメインの１０番目のユニット（ＦＮｆｎ１０）が利用でき、該ユニットのＢＣ、ＤＥ、及び／又はＦＧループに変異をいれることにより所望の標的に結合する人工抗体が取得できる。人工抗体としては、ファイブロネクチンの細胞外ドメイン以外に、セリンプロテアーゼ阻害剤のＫｕｎｉｔｚドメインやアンキリン、リポカリンなどのペプチドが利用できる。これらの人工抗体は該ペプチドをコードする核酸分子を含むベクターを大腸菌や酵母又は動物細胞等に導入し、該宿主細胞を培養した培養上清から精製することにより、遺伝子工学的に製造することができる（特許文献4、Clifford Mintz et.al BioProcess International, 2013, Vol.11(2), pp40-48）。
【００７２】
人工抗体としては、上記のような特定のタンパク質、又はその一部のアミノ酸配列を利用するのではなく、アミノ酸をランダムに組み合わせたランダム配列ライブラリから、抗体のように本発明のエピトープに特異的に結合する低分子ペプチド分子として探索することもできる（例えば、Hipolito et al., Current Opinion in Chemical Biology, 2012 Vol 16: 196, Yamagishi et al., Chemistry & Biology, 2011 Vol 18: 1562）。このようなペプチドは、遺伝子工学的な方法以外に、フルオレニルメチルオキシ力ルボニル法、tーブチルオキシ力ルボニル法などの化学合成法によって製造することもできる。
【００７３】
本発明に使用するモノクローナル抗体は、例えば、ポリエチレングリコール（PEG）等の非ペプチド性ポリマー、放射性物質、トキシン等の各種分子と結合したコンジュゲート抗体でもよい。このようなコンジュゲート抗体は、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。なお、化学的修飾方法はこの分野においてすでに確立されている。本発明におけるモノクローナル抗体にはこれらのコンジュゲート抗体も包含される(D.J.King., Applications and Engineering of Monoclonal antibodies., 1998 T.J. International Ltd, Monoclonal Antibody-Based Therapy of Cancer., 1998 Marcel Dekker Inc; Chari et al., Cancer Res., 1992 Vol152:127; Liu et al., Proc Natl Acad Sci USA., 1996 Vol 93:8681, )。
【００７４】
本発明では、上記のような全抗体とは別に、抗原結合性を有し、アンタゴニスト活性を発揮する限り、モノクローナル抗体のフラグメントやその修飾物であってよい。例えば、抗体のフラグメントとしては、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、又はＨ鎖とＬ鎖のＦｖを適当なリンカーで連結させたシングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）が挙げられる。さらにこれらの抗体のフラグメントは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非ペプチド性ポリマー、放射性物質、毒素、低分子化合物、サイトカイン、アルブミン、酵素などの抗体以外の機能分子を化学的又は遺伝子工学的に結合していてもよい。
【００７５】
モノクローナル抗体製造のための産生系は、本技術分野に周知であり、目的製剤の品質に応じて適宜選択することができる。一例として、in vitro又はin vivoの産生系のいずれかを利用することができる。in vitroの産生系としては、真核細胞、例えば動物細胞、植物細胞、又は真菌細胞を使用する産生系や原核細胞、例えば大腸菌、枯草菌などの細菌細胞を使用する産生系が挙げられる。使用される動物細胞としては、哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ミエローマ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、Ｖｅｒｏといった一般に使用される細胞、昆虫細胞、植物細胞などが用いられてもよい。in vivoの産生系としては、動物を使用する産生系や植物を使用する産生系が挙げられる。動物を使用する場合、例えば哺乳類動物、昆虫を用いる産生系などがある。哺乳類動物としては、例えばヤギ、ブタ、ヒツジ、マウス、ウシなどを用いることができる（Vicki Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993 ）。また、昆虫としては、例えばカイコを用いることができる。植物を使用する場合、例えばタバコを用いることができる。
【００７６】
上述のようにin vitro又はin vivoの産生系にてモノクローナル抗体を産生する場合、免疫グロブリンの重鎖（Ｈ鎖）又は軽鎖（Ｌ鎖）をコードするＤＮＡを別々に発現ベクターに組み込んで宿主を同時形質転換させてもよいし、あるいはＨ鎖及びＬ鎖をコードするＤＮＡを単一の発現ベクターに組み込んで、宿主を形質転換させてもよい（国際公開第９４/１１５２３号参照）。
【００７７】
得られたモノクローナル抗体は、均一になるまで精製することができる。モノクローナル抗体の分離、精製は通常のタンパク質で使用されている分離、精製方法を使用すればよい。例えばアフィニティークロマトグラフィー等のクロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、透析、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動等を適宜選択、組み合わせれば、モノクローナル抗体を分離、精製することができる（Antibodies: A Laboratory Manual. Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988）が、これらに限定されるものではない。アフィニティークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムが挙げられる。例えばプロテインＡカラムを用いたカラムとして、Hyper D, POROS, Sepharose F. F.（Amersham Biosciences）等が挙げられる。
【００７８】
本発明のアプタマー、アンチセンス又はｓｉＲＮＡである核酸分子はモノマーの核酸分子を材料として、例えばホスホラミダイト法により合成することができる。ホスホラミダイト法としては、例えば国際公開第２０１４／０４６２１２号に記載の方法に準じる方法に従って行うことができる。本発明のアプタマーはヒトＩＬ−３３タンパク質（配列表の配列番号１）、又はヒトＩＬ−３３受容体タンパク質（配列表の配列番号３）に結合することが好ましく、アンチセンス又はｓｉＲＮＡはヒトＩＬ−３３ｍＲＮＡ（配列表の配列番号２）又はヒトＩＬ−３３受容体ｍＲＮＡ（配列表の配列番号４）に結合することが好ましい。本発明のアプタマー、アンチセンス又はsｉＲＮＡである核酸分子は人工核酸を含んでもよく、人工核酸としてはホスホロチオエート（Phosphorothioate：Ｓ−ＰＯ3）型オリゴヌクレオチド（Ｓ−オリゴ）、２’，４’−ブリッジド（架橋）核酸（bridged nucleic acid）（ＢＮＡ）／２’，４’−ロックト核酸（locked nucleic acid）（ＬＮＡ）（国際公開第９８／３９３５２号、国際公開第２００５／０２１５７０号、国際公開第２００３／０６８７９５号、国際公開第２０１１／０５２４３６号）などがある。
【００７９】
本発明の好ましいＩＬ−３３アンタゴニスト態様としては、例えば、ヒトＩＬ−３３受容体に結合して、ＩＬ−３３の作用を中和しうるアプタマーであればよく、例えば、ＲＢＭ−００９があげられる。
【００８０】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストを含む治療剤又は医薬組成物は、有効成分であるヒトＩＬ−３３アンタゴニストに関する抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体、又は可溶性ＩＬ−３３受容体など、或いはその塩の他に、薬理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤を含んでいてもよい。さらに本発明のＩＬ−３３アンタゴニスト以外の他の活性成分、例えば抗炎症性薬剤や免疫抑制剤等を含んでもよい。このような組成物は、非経口投与又は経口に適する剤形として提供されるが、非経口投与が好ましい。非経口投与としては、例えば、静脈内、動脈内、皮下、局所、腹腔内、筋肉内、経鼻、点眼、経皮、経粘膜、髄膜内、経直腸、筋肉内、膣内投与等が挙げられるがこれらに限られるものではない。
【００８１】
本発明の治療剤又は医薬組成物は、その投与経路に応じて適宜剤形を選択することができ、例えば注射剤、粉末剤、輸液製剤等いかなるものでもよいが、非経口投与する観点では、注射剤、輸液製剤、用時溶解性の粉末剤等が好ましい。また、これらの製剤は医薬用に用いられる種々の補助剤、即ち、担体やその他の助剤、例えば、安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤等の添加剤を含有していてもよい。
【００８２】
本発明のＩＬ−３３アンタゴニストは、例えば、１日、１週間、１月間に１回もしくは１年間に１から７回の間隔での持続注入によってか、又はボーラス投与によって提供され得る。投薬は、静脈内、腹腔内、皮下、局所、経口、経鼻、経直腸、筋肉内、膣内によって提供され得る。好ましい用量プロトコルは、重大な望まれない副作用を避ける最大用量又は投薬頻度を含むものである。１回の投与量は、一般的に少なくとも約０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般的には少なくとも約０．２μｇ／ｋｇ、最も一般的には少なくとも約０．５μｇ／ｋｇ、代表的には少なくとも約１μｇ／ｋｇ、より代表的には少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、最も代表的には少なくとも約１００μｇ／ｋｇ、好ましくは少なくとも約０．２ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは少なくとも約１．０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは少なくとも約２．０ｍｇ／ｋｇ、より適切には少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、さらにより適切には少なくとも約２５ｍｇ／ｋｇ、そして最適には少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇである。
【００８３】
本発明の好ましいＩＬ−３３アンタゴニストの態様としては、ヒト抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体である、Ａ１０−１Ｃ０４、Ａ２３−１Ａ０５、Ａ２５−２Ｃ０２、Ａ２５−３Ｈ０４及びＡ２６−１Ｆ０２があげられる。これらのモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列はそれぞれ、配列表の配列番号７及び配列番号８（Ａ１０−１Ｃ０４）、配列番号９及び配列番号１０（Ａ２３−１Ａ０５）、配列番号１１及び配列番号１２（Ａ２５−２Ｃ０２）、配列番号１３及び配列番号１４（Ａ２５−３Ｈ０４）、配列番号１５及び配列番号１６（Ａ２６−１Ｆ０２）である。これらの抗体の定常領域はヒト抗体の定常領域であることが好ましく、ヒトＩｇＧ１の定常領域であることが、より好ましい。
【００８４】
本発明の別のＩＬ−３３アンタゴニスト態様としては、例えば、ヒトＩＬ−３３に結合して、ＩＬ−３３の作用を中和しうる抗体であればよく、例えば、ｅｔｏｋｉｍａｂ（ＡＮＢ−０２０ともいう）、ＲＥＧＮ−３５００（ＳＡＲ−４４０３４０ともいう）、ＭＥＤＩ-３５０６、ＰＦ−０６８１７０２４及びＣＢＰ−２３３があげられる。
【００８５】
本発明の別のＩＬ−３３アンタゴニスト態様としては、例えば、ヒトＩＬ−３３受容体に結合して、ＩＬ−３３の作用を中和しうる抗体であればよく、例えば、ＲＧ−６１４９（ＡＭＧ−２８２、ＭＳＴＴ１０４１ＡまたはＲＯ−７１８７８０７ともいう）、ＧＳＫ−３７７２８４７（ＣＮＴＯ−７１６０ともいう）及びＬＹ−３３７５８８０があげられる。
【００８６】
可溶性ＩＬ−３３受容体は、配列表の配列番号３のＳＴ２Ｌの細胞外領域（残基１９から残基３２８）の１部又は全部のアミノ酸配列を有するタンパク質であるが、ＩＬ−３３アンタゴニスト作用を発揮する限りにおいて、アミノ酸の置換、欠失又は挿入がされてもよい。ＩＬ−３３アンタゴニスト作用を損なわない観点から、置換、欠失又は挿入されるアミノ酸の数は、１又は数個であることが好ましく、１〜９の任意の数のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されうる。別の態様では、可溶性ＩＬ−３３受容体は、ＩＬ−３３アンタゴニスト作用を発揮する限りにおいて、配列表の配列番号３のＳＴ２Ｌの細胞外領域（残基１９から残基３２８）のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、より一層好ましくは少なくとも９８％の同一性を有していてもよい。また、薬物動態を改善するする観点から、可溶性ＩＬ−３３受容体に対し、免疫グロブリンの定常領域、ポリエチレングリコール等を融合させてもよい。抗体の定常領域が融合された可溶性ＩＬ−３３受容体はｓＳＴ２−Ｆｃと呼ぶことができる。結合しうる免疫グロブリンの定常領域は、任意の種由来の定常領域であってよいが、低い抗原性を担保する観点から、ヒト定常領域が好ましい。好ましいヒトｓＳＴ２−Ｆｃとしては、配列表の配列番号５で表される融合タンパク質があげられる。
【００８７】
ｓＳＴ２−Ｆｃは、免疫グロブリンと同様に二量体を形成しうる。ｓＳＴ２−Ｆｃは、元のアミノ酸配列、例えば配列番号５又は６のアミノ酸配列に対し、ＩＬ−３３アンタゴニスト作用を発揮する限りにおいて、アミノ酸の置換、欠失又は挿入がされていてもよい。ＩＬ−３３アンタゴニスト作用を損なわない観点から、置換、欠失又は挿入されるアミノ酸の数は１又は数個であることが好ましく、１〜９の任意の数のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されうる。別の態様では、ｓＳＴ２−Ｆｃは、ＩＬ−３３アンタゴニスト作用を発揮する限りにおいて、配列表の配列番号５又は６のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、より一層好ましくは少なくとも９８％の同一性を有していてもよい。これらのｓＳＴ２−Ｆｃは、さらに二量体形成能を維持することが好ましい。
【００８８】
ｓＳＴ２−Ｆｃなどの可溶性ＩＬ−３３受容体は、可溶性ＩＬ−３３受容体タンパク質をコードする核酸を含むベクターを用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏの産生系を利用して製造することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏの産生系としては、真核細胞、例えば動物細胞、植物細胞又は真菌細胞を使用する産生系や原核細胞、例えば大腸菌、枯草菌などの細菌細胞を使用する産生系等が挙げられる。使用される動物細胞としては、哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ミエローマ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、Ｖｅｒｏ、２９３、ＮＳ０、Ｎａｍａｌｗａ、ＹＢ２／０といった一般に使用される細胞、昆虫細胞、植物細胞などが用いられてもよい。このようにして産生されたタンパク質をさらに精製することで、可溶性ＩＬ−３３受容体を単離することができる。
【００８９】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、特に言及しない限り、本発明は以下に限定されるものではない。本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【００９０】
実施例１：子宮内膜症モデルにおけるＩＬ−３３遺伝子欠損の影響
子宮内膜症の動物モデルとして、エストロゲンを投与する子宮移植マウスを使用した（Ricci et al.,Reprod.Sci.2011, vol.18,p614）。ワイルドタイプである６週齢雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス（日本チャールズ・リバー）又はＢａｌｂ／ｃ―バックグラウンドＩＬ−３３ノックアウトマウス（Yasuda et al., PNAS, 2012, Vol. 109, p3451、Haenuki et al., J.Allergy Clin. Immunol., 2012, Vol. 130, p184）（以下、「ＩＬ−３３ＫＯマウス」と表記する）にイソフルラン（イソフルラン濃度：３．０％、ａｉｒ流量：３００〜４００周囲で維持麻酔）で吸入麻酔導入後、マウス下腹部正中やや左側に小切開を加え、開腹孔から左右の子宮を順番に引き出し、子宮先端に付着している卵巣を摘出した。これらのマウスにＣｏｒｎ  ｏｉｌ（Ｗａｋｏ純薬工業）で５μｇ／ｍＬに溶解したエストラジオール吉草酸エステル注射液（富士製薬）（エストロゲン）を０．５μg／１００μＬ／ｂｏｄｙでマウス後頸部皮下に２２Ｇ注射針を用いて皮下注射を２週間（1 回／週）行い、ドナーマウスとレシピエントマウスを作製した。２週間後ドナーマウスを頸椎脱臼させ、開腹し子宮を摘出した。シャーレ上で摘出子宮の重量を４０ｍｇに統一して切断した。その後、摘出子宮を２５ｍＬ広口丸底スピッツに、抗生剤アンピシリン（１ｍｇ／ｍＬ）を溶解したＰＢＳ４００μＬと共に入れ、クーパーで２ｍｍ角のシート状に細かく細砕した。細砕した子宮片を２．５ｍＬのシリンジで吸引した。卵巣摘出術時と同様に吸入麻酔したレシピエントマウスの腹部正中を小切開し、シリンジ内の子宮組織を腹腔内に散布し、切開部を３−０モノクリルで縫合した。子宮片を移植後、レシピエントマウスにエストロゲンをさらに２週間（１回／週）皮下注射にて投与した。移植２週間後にマウスを安楽死させ、開腹した。腹腔内に形成された異所性の子宮内膜組織（嚢胞）病変を可能な限り傷つけないように摘出し，各々の重量と体積を測定した。嚢胞病変の体積は、Ｖ＝(４／３)πｂ２Ａ（ｂ：小径、Ａ:大径）にて算出した。
【００９１】
図１に示すように、ドナー、レシピエント共にＩＬ−３３ＫＯマウスを使用した場合、嚢胞病変の体積はワイルドタイプを使用した場合と比較し、有意に減少した。また、ＩＬ−３３ＫＯマウスの嚢胞病変は対照マウスの嚢胞病変と比較して、摘出する際に腹膜等への癒着が抑制されていた。さらに、ＩＬ−３３ＫＯマウスの嚢胞病変は対象マウスの嚢胞病変と比較して、外観上の血管の数が減少していた。この結果は、ＩＬ−３３が子宮内膜症モデルにおいて嚢胞病変の成長や諸臓器への癒着（諸臓器への癒着は痛みの原因となる）、及び血管新生に関与していること、並びにＩＬ−３３を阻害することにより嚢胞病変の成長や諸臓器への癒着（痛み）、及び血管新生を抑制できること示す。
【００９２】
実施例２：ＩＬ−３３投与の子宮内膜症モデルに対する影響
ワイルドタイプ６週齢雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを用い、実施例１に記載した方法で子宮内膜症モデルを作製した。ＩＬ−３３投与群には子宮片の移植時からＰＢＳで溶解したリコンビナント  ヒトＩＬ−３３タンパク質（残基１１２−残基２７０）（Kondo et al.,Int.Immunol.2008, vol. 20, p791）を１回１００ｎｇ／２００μＬ／ｂｏｄｙで３回／週、２週間、計６回腹腔内に投与した。移植２週間後にマウスを安楽死させ、開腹し、腹腔内に形成された嚢胞病変を摘出し、各々の体積を測定した。図２に示すように、ヒトＩＬ−３３投与群は媒体投与群に比べ、嚢胞病変の体積が有意に増大した。この結果はＩＬ−３３が嚢胞病変の成長に関与していることを示す。また、ＩＬ−３３の濃度が子宮内膜症患者の腹水や血清で上昇している（非特許文献２）ため、ヒトＩＬ−３３投与子宮内膜症モデルは子宮内膜症の病態を反映した、有用な疾患モデルであると考えられる。
【００９３】
実施例３：ＩＬ−３３アンタゴニスト
５種類のヒト抗ＩＬ−３３抗体（Ａ１０−１Ｃ０４、Ａ２３−１Ａ０５、Ａ２５−２Ｃ０２、Ａ２５−３Ｈ０４、Ａ２６−１Ｆ０２）、及びマウスＳＴ２とヒトＩｇＧ１定常領域の融合蛋白であるマウスｓＳＴ２−Ｆｃを組み換えＣＨＯ細胞にて作製した（国際公開第２０１５／０９９１７５号）。これらのアミノ酸配列は下表のとおりであり、５種類のヒト抗ＩＬ−３３抗体のヒトＩＬ−３３タンパク質（残基１１２−残基２７０）（ATGen, ILC0701）に対する親和性をＫｉｎＥｘＡで測定したところ、Ａ１０−１Ｃ０４でＫｄ＝１００．３ｐＭ、Ａ２３−１Ａ０５でＫｄ＝１９５．３ｐＭ、Ａ２５−２Ｃ０２でＫｄ＝７００ｆＭ、Ａ２５−３Ｈ０４でＫｄ＝７．７ｐＭ、Ａ２６−１Ｆ０２でＫｄ＝５．３ｐＭであった。
【表１】
2019045075.tif 000003
【００９４】
実施例４：ＩＬ−３３アンタゴニストｓＳＴ２-Ｆｃの異所性子宮内膜組織の成長に対する効果
子宮内膜症モデルにおいてＩＬ−３３が嚢胞病変の増殖に関与しており、ＩＬ−３３を阻害することにより、子宮内膜症を治療できることが示された。そこで、ＩＬ−３３のアンタゴニストを投与して子宮内膜症を治療した。ＩＬ−３３のアンタゴニストとしては実施例３で調製したマウスｓＳＴ２-Ｆｃを用いた。実施例１で示した方法により作製した各群６匹の子宮内膜症モデルマウスを用い、子宮片の移植後にマウスｓＳＴ２-Ｆｃを２０ｍｇ/ｋｇで３日毎に２週間にわたって静脈内投与した。対照群のマウスにはコントロールＦｃ（InVivoMAb recombinant Human Fc-G1 (Bio X Cell 社 Cat# BE0096)をマウスｓＳＴ２-Ｆｃの代わりに投与した。マウスｓＳＴ２-Ｆｃを用いた治療後にマウスを安楽死させ、開腹し、腹腔内に形成された嚢胞病変を摘出し、摘出時の嚢胞病変の癒着の程度、嚢胞病変の体積、嚢胞病変の血管について解析した。図３に示すようにコントロールＦｃ投与群と比較し、マウスｓＳＴ２-Ｆｃ投与群において嚢胞病変の体積が有意に減少した。また、嚢胞病変の体積が減少するのにともない、マウスｓＳＴ２-Ｆｃ投与マウスの嚢胞病変は対照マウスの嚢胞病変と比較して、摘出する際に腹膜等への癒着が抑制されていた。さらに、マウスｓＳＴ２-Ｆｃ投与マウスの嚢胞病変は対照マウスの嚢胞病変と比較して、外観上の血管の数が減少していた。
以上の結果から、マウスｓＳＴ２-Ｆｃの投与によって子宮内膜症を治療することができ、子宮内膜症の異所性子宮内膜組織の成長、癒着（諸臓器への癒着は痛みの原因となる）、血管新生を抑制することができる。
【００９５】
実施例５：ＩＬ−３３アンタゴニストｓＳＴ２-Ｆｃの異所性子宮内膜組織の線維化に対する効果
実施例４で摘出した嚢胞病変をパラフォルムアルデヒドで固定後、パラフィンに包埋して８μm厚のパラフィン切片を作製した。マロリー・アニリン青オレンジG液（武藤化学）の染色液を用いて、武藤化学の推奨するプロトコールに従って線維化された組織を青色に染色した。線維化の程度はアザン染色の青色の濃さを、１（薄い）から３（濃い）点のスコアで評価した。表２に示すようにコントロールＦｃ投与群と比較し、マウスｓＳＴ２-Ｆｃ投与群において嚢胞病変の線維化が抑制された。図４にそれぞれの群における平均的な染色像（コントロールＦｃ投与群個体番号ＤとマウスｓＳＴ２−Ｆｃ投与群個体番号Ｃ）を示した。
【表２】
2019045075.tif 000004
以上の結果から、マウスｓＳＴ２-Ｆｃの投与によって子宮内膜症を治療することができ、子宮内膜症の異所性子宮内膜組織の線維化を抑制することができる。
【００９６】
実施例６：抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体の異所性子宮内膜組織の成長に対する効果
ＩＬ−３３ＫＯマウスで作製した子宮内膜症モデルにおいて、リコンビナント  ヒトＩＬ−３３投与により嚢胞病変が増大することを示した（実施例２）。このモデルを用いて、実施例３で調製したヒト抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（Ａ１０−１Ｃ０４、Ａ２３−１Ａ０５、Ａ２５−２Ｃ０２、Ａ２５−３Ｈ０４、Ａ２６−１Ｆ０２）の効果を調べた。実施例２で示した方法により作製したＩＬ−３３投与子宮内膜症モデルを用い、子宮片の移植後にヒト抗ＩＬ−３３抗体を１週間毎に静脈内に１０ｍｇ/ｋｇで投与した。対照群のマウスには対照抗体（Fully human IgG1 isotype control PC grade (EUREKA社 Cat#ET901 )）をヒト抗ＩＬ−３３抗体の代わりに投与した。ヒト抗ＩＬ−３３抗体を用いた治療後にマウスを安楽死させ、開腹し、腹腔内に形成された嚢胞病変を摘出し、摘出時の嚢胞病変の癒着の程度、嚢胞病変の体積、嚢胞病変の血管について解析した。図５（Ａ１０−１Ｃ０４の結果を示す）に示すようにＰＢＳ投与群と比較し、ヒトＩＬ−３３投与群において嚢胞病変の体積が増加し、対照抗体を投与しても嚢胞病変の体積は有意に増加していた。嚢胞病変の体積増加は抗ＩＬ−３３抗体投与によって有意に阻害された。また、嚢胞病変の体積が減少するのにともない、抗ＩＬ−３３抗体投与マウスの嚢胞病変は対照抗体投与マウスの嚢胞病変と比較して、摘出する際に腹膜等への癒着が抑制されていた。さらに、抗ＩＬ−３３抗体投与マウスの嚢胞病変は対照マウスの嚢胞病変と比較して、外観上の血管の数が減少していた。
以上の結果から、抗ＩＬ−３３抗体の投与によって子宮内膜症を治療することができ、子宮内膜症の異所性子宮内膜組織の成長、癒着（諸臓器への癒着は痛みの原因となる）、血管新生を抑制することができる。
【００９７】
実施例７：抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体の異所性子宮内膜組織の細胞増殖に対する効果
実施例６で摘出した嚢胞病変をパラフォルムアルデヒドで固定後、パラフィンに包埋して８μm厚のパラフィン切片を作製した。嚢胞病変の増殖を調べるために細胞増殖マーカーであるＫｉ−６７抗原の免疫組織染色を抗Ｋｉ−６７抗体〔ＳＰ６〕（Ａｂｃａｍ社、ａｂ１６６６７）とＤａｋｏ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＋  Ｄｕａｌ  ｌｉｎｋ  （Ａｇｉｌｅｎｔ社、Ｋ４０６３）を用い、Ａｂｃａｍ社の推奨するプロトコールに従って行った。切片の顕微鏡１視野当りの細胞核のＫｉ−６７陽性率を算出した。１スライド当り３か所のＫｉ−６７陽性率を算出し、平均値をとった。図６（Ａ１０−１Ｃ０４の結果を示す）に示すように、ＰＢＳ投与群と比較して、ヒトＩＬ−３３投与は子宮内膜症嚢胞病変の細胞において細胞増殖マーカーであるＫｉ−６７陽性細胞数の割合を増大させ、対照抗体を投与してもＫｉ−６７陽性細胞数の割合は増大していたが、抗ＩＬ−３３抗体投与によって増大が抑制された。
以上の結果から、抗ＩＬ−３３抗体の投与によって子宮内膜症を治療することができ、子宮内膜症の異所性子宮内膜組織の細胞増殖を抑制することができる。
【００９８】
実施例８  抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体の子宮内膜症の疼痛に対する効果
子宮内膜症や子宮腺筋症患者に抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体を投与することにより、子宮内膜症や子宮腺筋症の治療することができる。子宮内膜症や子宮腺筋症患者にともなう骨盤痛、月経困難性疼痛、性交痛などの疼痛を緩和することができる。また、子宮内膜症や子宮腺筋症にともなう歩行困難や性交困難などに関するＱＯＬを改善することができる。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明におけるＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分とする治療剤は、子宮内膜症又は子宮腺筋症の診断、治療、予防又は軽減用の医薬組成物として用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年6月25日(2019.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年6月17日(2020.6.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−３３アンタゴニストを有効成分とする子宮内膜症又は子宮腺筋症の治療、予防又は軽減剤。
【請求項２】
子宮内膜症又は子宮腺筋症の痛みを緩和する、請求項１に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項３】
子宮内膜症又は子宮腺筋症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の成長を抑制する、請求項１又は２に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項４】
子宮内膜症又は子宮腺筋症の異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での血管新生を抑制する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項５】
異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）での線維化又は細胞増殖を抑制する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項６】
子宮内膜症における異所性の子宮内膜組織（嚢胞を含む）の諸臓器との癒着を抑制する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項７】
ＩＬ−３３アンタゴニストが、抗ＩＬ−３３抗体、抗ＩＬ−３３受容体抗体又は可溶性ＩＬ−３３受容体である請求項１〜６のいずれか一項に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項８】
前記抗ＩＬ−３３抗体又は抗ＩＬ−３３受容体抗体がモノクローナル抗体である、請求項７に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項９】
前記ＩＬ−３３抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項８に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項１０】
前記ＩＬ−３３抗体の軽鎖アミノ酸配列及び重鎖アミノ酸配列が、以下の：配列番号７及び配列番号８、配列番号９及び配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４、並びに配列番号１５及び配列番号１６からなる群から選ばれる請求項７に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項１１】
抗ＩＬ−３３抗体が、Ａ１０−１Ｃ０４、Ａ２３−１Ａ０５、Ａ２５−２Ｃ０２、Ａ２５−３Ｈ０４、又はＡ２６−１Ｆ０２である、請求項７に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項１２】
前記可溶性ＩＬ−３３受容体が、ＳＴ２Ｌタンパク質の細胞外領域の全部又は一部を含む、請求項７に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項１３】
前記ＳＴ２Ｌタンパク質の細胞外領域が、配列番号３の残基１９〜３２８残基を含む、請求項１２に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項１４】
前記可溶性ＩＬ−３３受容体が、免疫グロブリンの定常領域を有する、請求項７、１２、及び１３のいずれか一項に記載の治療、予防又は軽減剤。
【請求項１５】
可溶性ＩＬ−３３受容体が、ｓＳＴ２−Ｆｃである請求項７、１２〜１４のいずれか一項に記載の治療、予防又は軽減剤。
【国際調査報告】
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