(57)【要約】  (a)ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩、(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩及び(c)水を含有し、成分(a)の濃度が１．５質量％以上、成分(b)の濃度が０．５〜２質量％であり、回転粘度計を用いて、２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上である、密封容器または気密容器に充填された、すぐに使用可能（ready-to-use）な、保存安定性を有する、無菌のアルギン酸塩水溶液製剤及びその製造方法を提供する。このアルギン酸塩水溶液製剤は、すぐに使用可能（ready-to-use）な低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤である。
2018164128.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a)ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩、(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩及び(c)水を含有し、成分(a)の濃度が１．５質量％以上、成分(b)の濃度が０．５〜２質量％であり、回転粘度計を用いて、２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上である、密封容器または気密容器に充填された、すぐに使用可能（ready-to-use）な、保存安定性を有する、無菌のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項２】
成分(b)の１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩が塩化ナトリウムである請求項１記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項３】
密封容器または気密容器がバイアルである請求項１又は２記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項４】
成分(a)、(b)及び(c)からなる請求項１〜３のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項５】
前記保存安定性を有する製剤の３か月間の粘度低下率が、
１）２〜８℃で保存した場合に３％未満、
２）２５℃で保存した場合に７％未満、
３）４０℃で保存した場合に４７％未満、
のいずれかを満たす、請求項１〜４のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項６】
医薬品または医療機器として用いるための、請求項１〜５のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項７】
密封容器または気密容器の容量が２〜５０ｍｌである請求項１〜６のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項８】
密封容器または気密容器の空気が窒素ガス置換されている請求項１〜７のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤。
【請求項９】
１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有する、アルギン酸の１価金属塩水溶液を滅菌ないし無菌ろ過し、容器に充填した後、ろ液を濃縮すること、あるいは凍結乾燥した後に無菌的に復水し、密封することを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤の製造方法。
【請求項１０】
１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有する、アルギン酸の１価金属塩水溶液を滅菌ないし無菌ろ過し、ろ液を濃縮した後に、容器に無菌的に充填し、密封することを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項記載のアルギン酸塩水溶液製剤の製造方法。
【請求項１１】
１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を有効成分とするアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下抑制剤。
【請求項１２】
アルギン酸の１価金属塩水溶液に、１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有させることを特徴とするアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下を抑制する方法。
【請求項１３】
(a)ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩、(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩及び(c)水を含有し、成分(a)の濃度が１．５質量％以上、成分(b)の濃度が０．５〜２質量％であり、回転粘度計を用いて、２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上であるアルギン酸塩水溶液が充填された、すぐに使用可能（ready-to-use）な、保存安定性を有する、無菌のバイアル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品または医療機器として有用なアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、特にＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量が５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、回転粘度計を用いて２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上であるアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、経時的粘度低下を抑制したアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、アルギン酸の１価金属塩のバイアル入り水溶液製剤、すぐに使用可能（ready-to-use）なアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、保存安定性を有するアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、無菌のアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、密封容器または気密容器に充填されたアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤、アルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤を充填したプレフィルドシリンジ、それらの製造方法、アルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤の経時的粘度低下抑制剤、アルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤の経時的粘度低下を抑制する方法並びにアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルギン酸ナトリウム（以下、アルギン酸Ｎａとも記す）凍結乾燥製剤などのアルギン酸の１価金属塩凍結乾燥製剤を水に溶解してなる水溶液を、関節軟骨における軟骨欠損部に注入して、軟骨再生を行ったり、治療したりすることが知られている（特許文献１）。
一方、工業用アルギン酸ナトリウムには、不純物電解質として、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、水酸化ナトリウムや炭酸ナトリウムなどが含まれており、これらは約４０％以上のアルコールにより抽出される性質を利用して該不純物電解質を除去できること、及びアルギン酸ナトリウム水溶液に、塩化ナトリウムや硫酸ナトリウムなどを添加した場合の粘度、ｐＨ，構造粘度、流動曲線や毛管上昇性などの特性の変化が調べられている（非特許文献１及び２）。
又、粉末状と溶液状のアルギン酸ナトリウムの加熱による粘度低下を検討し、いずれも加熱により粘度は低下するが、溶液状の方が粘度低下率は大きいことが報告されている（非特許文献３及び４）。
又、アルギン酸ナトリウム溶液にクエン酸ナトリウムを添加することにより、アルギン酸ナトリウム溶液の経時的粘度低下が抑制されることが報告されている（非特許文献５）。【０００３】
アルギン酸ナトリウム水溶液については、アルギン酸ナトリウムの含有量が５質量％で、銅クロロフィリンナトリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラベン、サッカリンナトリウム、エタノール及び香料を含有する、消化性潰瘍用剤アルロイドＧ内服液５％が販売されている。また、特許文献２には、エンドトキシン２０ＥＵ／ｇ以下のアルギン酸塩溶液を取得する方法が開示されており、１．８％ＡＧ溶液の調製として、低粘性アルギン酸塩パウダー（アルギン酸（E400）のナトリウム塩）に生理溶液（０．９％ＮａＣｌ）を添加し、撹拌して１．８％ＡＧ溶液を調製したことが開示されている。同様に、特許文献３には、ポリサッカライド(例えば、アルギネート)を 生理溶液（水に0.15 MＮａＣｌ）に溶解し、ホモゲナイザーで激しく撹拌して、アルギネート２％(w/v)を含むアルギネートサンプルを調製したこと、およびこれを０．２μmナイロンメンブランでろ過して殺菌したことが開示されている。ここで使用されているアルギネートは、VLVG（非常に低粘度）及びLVG（低粘度）のものである。さらに、特許文献４には、周手術期間に使用される手術創傷或は吻合口の癒合を促進させる薬物の製造のための高張液組成物の使用が開示され、分子量が20,000〜26,000のアルギン酸ナトリウム3％〜18％（w/v）と、塩化ナトリウムが1.5％（w/v）以上で、且つナトリウムイオンの濃度が6.9％（w/v）で、残量の通常用注射液とからなる高張液組成物が開示されている。特許文献５には、アルギン酸塩を0.5-10wt%、及び、溶解したC2-7のモノ又はジカルボキシレートを含み、粘度が25℃で少なくとも300cp、pHが6.5-7.5の滅菌された水性組成物が開示されており、その実施例において、塩化ナトリウムが０.８質量％加えられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００８／１０２８５５号公報
【特許文献２】特許５６８４５７５号公報
【特許文献３】ＵＳ２０１５０３５２１４４Ａ号公報
【特許文献４】特表２０１０−５１４７０７号公報
【特許文献５】ＵＳ８９２７５２４Ｂ号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】化学工業雑誌61巻7号1958 p.871-874
【非特許文献２】化学工業雑誌61巻7号1958 p.874-877
【非特許文献３】室蘭工業大学研究報告 1957 Vol.2 No.3 p.609-616
【非特許文献４】室蘭工業大学研究報告 1960 Vol.3 p.443-449
【非特許文献５】Biomaterials 1985 Vol.6 p.68-69
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は、経時的粘度低下を抑制した低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。
本発明は、バイアル入り低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は、経時的粘度低下を抑制したバイアル入り低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。
本発明は、すぐに使用可能（ready-to-use）な低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は、経時的粘度低下を抑制したすぐに使用可能（ready-to-use）な低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。
本発明は、無菌の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は、経時的粘度低下を抑制した、無菌の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。
本発明は、密封容器または気密容器に充填された、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は、経時的粘度低下を抑制した、密封容器または気密容器に充填された、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供することを目的とする。
本発明は、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を充填したプレフィルドシリンジを提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は、経時的粘度低下を抑制した、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を充填したプレフィルドシリンジを提供することを目的とする。
本発明は、経時的粘度低下を抑制した低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の効率的な製造方法を提供することを目的とする。
本発明は、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下抑制剤を提供することを目的とする。
本発明は、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下を抑制する方法を提供することを目的とする。
本発明は、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の安定化方法を提供することを目的とする。
【０００７】
例えば軟骨再生剤のような、生体内に直接注入する医薬品、医療機器を、すぐに使用可能（ready-to-use）な製剤とするためには、当該製剤は無菌である必要がある。低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤を得るために、アルギン酸の１価金属塩の水溶液製剤を無菌化する際、加熱を伴う滅菌や電子線等による滅菌を行うと、アルギン酸の低分子化や粘度低下が生じるため好ましくない。一方で、例えば軟骨再生剤として用いるような高粘度のアルギン酸水溶液を無菌ろ過（0.22umフィルター）するためには、高い圧をかける必要があったり、ろ過に長時間を要したりして、工業生産上等の理由からいずれも好ましくない。また、例えば、凍結乾燥製剤のようなアルギン酸の１価金属塩の固形製剤を用時溶解して用いる場合、無菌性を維持するためにはクリーンベンチ等、相応の設備、施設が必要であり、また、アルギン酸の１価金属塩の均一な高濃度溶液とするためには溶解に時間を要する場合があり、より利便性の高い製剤が求められている。
そこで、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩のすぐに使用可能（ready-to-use）な水溶液製剤を得る方法について、鋭意検討した結果、驚くべきことに、先ず、低濃度のアルギン酸の１価金属塩の水溶液を調製し、これに所定量の１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を溶解し、得られた水溶液を無菌ろ過し、バイアルに充填して非酸化雰囲気下で常法による乾燥、例えば減圧乾燥等により、アルギン酸の１価金属塩濃度を濃縮すると、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩の水溶液であって、粘度低下が抑制された水溶液製剤が得られ、かつこの水溶液製剤は、経時的な粘度低下を効率的に抑制できるとの知見に基づいて本発明を完成した。
或いはまた、低濃度のアルギン酸の１価金属塩の水溶液を調製し、これに所定量の１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を溶解し、得られた水溶液を無菌ろ過し、バイアルやシリンジ等の容器に充填する前に、非酸化雰囲気下で常法による乾燥、例えば減圧乾燥等により、アルギン酸の１価金属塩水溶液を濃縮した後に、前記容器に充填し、密封することによっても、目的とする低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩の水溶液であって、粘度低下が抑制された水溶液製剤が得られ、かつこの水溶液製剤の経時的な粘度低下を効率的に抑制できることを確認した。
【０００８】
すなわち、本発明は、上記目的を達成する以下の態様を有する。
(1-1)(a)ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩、(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩及び(c)水を含有し、成分(a)の濃度が１．５質量％以上、成分(b)の濃度が０．５〜２質量％であり、回転粘度計を用いて、２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上である、密封容器または気密容器に充填された、すぐに使用可能（ready-to-use）な、保存安定性を有する、無菌のアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-2)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩が水溶性の無機塩である(1-1)のアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-3)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩が塩化ナトリウムである(1-1)または(1-2)のアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-4)密封容器または気密容器がバイアルである(1-1)〜(1-3)のアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-5)密封容器または気密容器がシリンジである(1-1)または(1-3)のアルギン酸塩水溶液製剤のプレフィルドシリンジ。
(1-6)成分(a)、(b)及び(c)からなる(1-1)〜(1-5)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-7)前記保存安定性を有する製剤の３か月間の粘度低下率が、
１）２〜８℃で保存した場合に３％未満、
２）２５℃で保存した場合に７％未満、
３）４０℃で保存した場合に４７％未満、
のいずれかを満たす、(1-1)〜(1-6)のアルギン酸塩水溶液製剤。
【０００９】
(1-8)医薬品または医療機器として用いるための、(1-1)〜(1-7)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-9)密封容器または気密容器の容量が２〜５０ｍｌである(1-1)〜(1-8)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-10)密封容器または気密容器へのアルギン酸塩水溶液の充填量が５〜２０ｍｌである(1-1)〜(1-9)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-11)密封容器または気密容器へのアルギン酸塩の充填量が乾燥アルギン酸ナトリウムとして５０〜５００ｍｇである(1-1)〜(1-10)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-12)密封容器または気密容器がバイアルである(1-9)〜(1-11)のアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-13)密封容器または気密容器がシリンジである(1-9)〜(1-11)のアルギン酸塩水溶液製剤のプレフィルドシリンジ。
(1-14)密封容器または気密容器の空気が窒素ガス置換されている(1-1)〜(1-13)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-15)密封容器または気密容器がバイアルである(1-14)のアルギン酸塩水溶液製剤。
(1-16)密封容器または気密容器がシリンジである(1-14)のアルギン酸塩水溶液製剤のプレフィルドシリンジ。
(2-1)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有する、アルギン酸の１価金属塩水溶液を滅菌ないし無菌ろ過し、容器に充填した後、ろ液を濃縮すること、あるいは凍結乾燥した後に無菌的に復水し、密封することを特徴とする、(1-1)〜(1-16)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤の製造方法。
(2-2)容器がバイアルである(2-1)のアルギン酸塩水溶液製剤の製造方法。
(2-3)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有する、アルギン酸の１価金属塩水溶液を滅菌ないし無菌ろ過し、ろ液を濃縮した後に、容器に無菌的に充填し、密封することを特徴とする、(1-1)〜(1-16)のいずれかのアルギン酸塩水溶液製剤の製造方法。
(2-4)密封容器または気密容器がバイアルである(2-3)のアルギン酸塩水溶液製剤の製造方法。
(2-5)容器がシリンジである(2-3)のアルギン酸塩水溶液製剤のプレフィルドシリンジの製造方法。
(3-1)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を有効成分とするアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下抑制剤。
(4-1)アルギン酸の１価金属塩水溶液に、１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有させることを特徴とするアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下を抑制する方法。
(5)(a)ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩、(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩及び(c)水を含有し、成分(a)の濃度が１．５質量％以上、成分(b)の濃度が０．５〜２質量％であり、回転粘度計を用いて、２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上であるアルギン酸塩水溶液が充填された、すぐに使用可能（ready-to-use）な、保存安定性を有する、無菌のバイアル。
(6) (a)ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万の低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩、(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩及び(c)水を含有し、成分(a)の濃度が１．５質量％以上、成分(b)の濃度が０．５〜２質量％であり、回転粘度計を用いて、２０℃で測定した粘度が２７００ｍＰａ・ｓ以上である、密封容器または気密容器に充填された、すぐに使用可能（ready-to-use）な、保存安定性を有する、無菌のアルギン酸塩水溶液である組成物。
【００１０】
本発明によれば、長期間保管や貯蔵しておいても、アルギン酸の１価金属塩水溶液製剤中のアルギン酸の１価金属塩の経時的粘度低下を効率的に抑制できるアルギン酸の１価金属塩水溶液製剤を提供できる。又、成分(a)と成分(b)を溶解してなる水溶液を、無菌ろ過し、非酸化雰囲気下で乾燥してアルギン酸の１価金属塩濃度を濃縮する工程を採用することにより、低エンドトキシンアルギン酸の１価金属塩の水溶液であって、粘度低下が抑制された水溶液製剤が得られ、かつこの水溶液製剤は、経時的な粘度低下を抑制できるという工業的生産上大きなメリットを享有できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明のアルギン酸ナトリウム濃度２質量％水溶液の25℃/60%RH（加速条件）及び40℃/75%RH（苛酷条件）での経時による粘度変化の評価結果を示す図である。
【図２】実施例２における各種分子量のアルギン酸ナトリウム水溶液製剤の４０℃/７５％ＲＨ保存時の塩化ナトリウムの粘度低下抑制効果を示す図である。
【図３】実施例３における４０℃/７５％ＲＨ保存時の塩化ナトリウムの粘度低下抑制効果を示す図である。
【図４】実施例３における２５℃/６０％ＲＨ保存時の塩化ナトリウムの粘度低下抑制効果を示す図である。
【図５】実施例３における２〜８℃保存時の塩化ナトリウムの粘度低下抑制効果を示す図である。
【図６】実施例４における本発明のアルギン酸ナトリウム水溶液製剤の２５℃/６０％ＲＨ保存時および２〜８℃保存時の長期保存時の経時による粘度変化を示す図である。
【図７】実施例５における本発明のアルギン酸ナトリウム水溶液製剤の４０℃/７５％ＲＨ保存時の長期保存時の経時による粘度変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明で使用するアルギン酸の１価金属塩(a)の構成成分であるアルギン酸は、海藻から抽出し、精製して製造される天然多糖類の一種である。又、D−マンヌロン酸(M)とL−グルロン酸(G)が重合したポリマーである。アルギン酸の工業的な製造方法には、酸法とカルシウム法などがあるが、本発明ではいずれの製法で製造されたものも使用することができるが、精製によりＨＰＬＣ法による定量値が９０〜１１０質量％の範囲に含まれるものが好ましい。市販品としては、例えば、キミカアルギンシリーズとして、(株)キミカより販売されているもの、好ましくは、高純度食品・医薬品用グレードのものを購入して使用することができる。市販品を、さらに適宜精製して使用することも可能である。
本発明で使用するアルギン酸の１価金属塩としては、アルギン酸のカルボキシル基の水素カチオンが、ナトリウムやカリウムなどの１価金属カチオン、特にアルカリ金属カチオンとイオン交換したものが好ましい。これらのうち、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム又はこれらの混合物などが好ましく、特に、アルギン酸ナトリウムが好ましい。
【００１３】
本発明で使用するアルギン酸の１価金属塩としては、ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による重量平均分子量５万〜４０万のものを用いる。このうち、１０万〜４０万のものが好ましい。ここで、重量平均分子量の上限が３０万であるのがさらに好ましい。
一般に天然物由来の高分子物質は、単一の分子量を持つのではなく、種々の分子量を持つ分子の集合体であるため、ある一定の幅を持った分子量分布として測定される。代表的な測定手法はゲルろ過クロマトグラフィーである。ゲルろ過クロマトグラフィーにより得られる分子量分布の代表的な情報としては、重量平均分子量（Mw）、数平均分子量（Mn）、分散比（Mw/ Mn）があげられる。
分子量の大きい高分子の平均分子量への寄与を重視したのが重量平均分子量であり、下記式で表される。
Mw = Σ(WiMi) / W =Σ(HiMi) /Σ(Hi)
数平均分子量は、高分子の総重量を高分子の総数で除して算出される。
Mn = W /ΣNi = Σ(MiNi) /ΣNi  =Σ(Hi) /Σ(Hi/Mi) 
ここで、W は高分子の総重量、Wiはi番目の高分子の重量、Miはi番目の溶出時間における分子量、Niは分子量Miの個数、Hiはi番目の溶出時間における高さである。
【００１４】
天然物由来の高分子物質の分子量測定では、測定方法により値に違いが生じうることが知られている（ヒアルロン酸の例：Chikako YOMOTA et.al. Bull.Natl.Health Sci., Vol.117, pp135-139(1999)、Chikako YOMOTA et.al. Bull.Natl.Inst. Health Sci., Vol.121, pp30-33(2003)）。アルギン酸塩の分子量測定については、固有粘度（Intrinsic viscosity）から算出する方法、SEC-MALLS(Size Exclusion Chromatography with Multiple Angle Laser Light Scattering Detection)により算出する方法が記載された文献がある（ASTM F2064-00 (2006), ASTM International発行）。なお、当該文献では、サイズ排除クロマトグラフィー（＝ゲルろ過クロマトグラフィー）により分子量を測定するにあたっては、プルランを標準物質として用いた較正曲線により算出するだけでは不十分とし、多角度光散乱検出器（MALLS）を併用すること（＝SEC-MALLSによる測定）を推奨している。従って、本発明においては、SEC-MALLSによるアルギン酸塩の重量平均分子量（Mw）を採用している（FMC Biopolymer社、PRONOVATM sodium alginates catalogue）。ここで、SEC-MALLSは、GPC(SEC)に多角度光散乱検出器(MALS)を接続することにより、ポリマーの絶対分子量を求める方法である。
【００１５】
よって、本明細書中においてアルギン酸塩の分子量を特定する場合は、特段のことわりがない限り、SEC-MALLS(GPC-MALS法)より算出される重量平均分子量である。SEC-MALLSの好適な測定条件としては、例えば、プルランを標準物質とした較正曲線を用いることが挙げられる。標準物質として用いるプルランの分子量としては、少なくとも１６０万、７８．８万、４０．４万、２１．２万および１１．２万のものを標準物質として用いることが好ましい。その他、溶離液（200mM硝酸ナトリウム溶液）、カラム条件などを特定できる。カラム条件としては、ポリメタクリレート樹脂系充填剤を用い、排除限界分子量１０００万以上のカラムを少なくとも１本用いることが好ましい。代表的なカラムは、TSKgel GMPWx1（直径7.8ｍｍ×300ｍｍ）（東ソー株式会社製）である。
【００１６】
また、本発明で使用するアルギン酸の１価金属塩としては、例えば、回転粘度計を用いて日局粘度測定法により測定した１％液の粘度（２０℃）が、５０〜２万mPa・sのものを用いるのが好ましく、より好ましくは５０〜１万mPa・s、より好ましくは１００〜５千mPa・s、より好ましくは３００〜８００mPa・s、さらに好ましくは３００〜６００mPa・sである。又、医薬品または医療機器としてすぐに使用可能（ready-to-use）な製剤としては、例えば、回転粘度計を用いて日局粘度測定法により測定した粘度（２０℃）が、２７００mPa・s以上のものが好ましく、３０００mPa・s以上のものがより好ましく、３３００mPa・s以上のものがさらに好ましい。
また、本発明で使用するアルギン酸の１価金属塩としては、その最終使用用途に応じて、適切なＭ／Ｇ比のものを用いるのがよい。Ｍ／Ｇ比が、０．４〜２．０のものを用いるのが好ましく、より好ましくは０．６〜１．８、さらに好ましくは０．８〜１．６である。これらのＭ／Ｇ比のアルギン酸の１価金属塩は、軟骨疾患治療に有用である。
また、本発明で使用するアルギン酸の１価金属塩としては、エンドトキシンレベルを低下させたものを使用する。日局エンドトキシン試験により測定したエンドトキシン値が、１００ＥＵ／ｇ未満のものを用いるのが好ましく、より好ましくは７５ＥＵ／ｇ未満、さらに好ましくは５０ＥＵ／ｇ未満である。このようなエンドトキシンレベルを低下させたものは、公知の方法またはそれに準じる方法によって行うことができる。例えば、ヒアルロン酸ナトリウムを精製する、菅らの方法（例えば、特開平９−３２４００１号公報など参照）、β１，３−グルカンを精製する、吉田らの方法（例えば、特開平８−２６９１０２号公報など参照）、アルギネート、ゲランガム等の生体高分子塩を精製する、ウィリアムらの方法（例えば、特表２００２−５３０４４０号公報など参照）、ポリサッカライドを精製する、ジェームスらの方法（例えば、国際公開第９３／１３１３６号パンフレットなど参照））、ルイスらの方法（例えば、米国特許第５５８９５９１号明細書など参照）、アルギネートを精製する、ハーマンフランクらの方法（例えば、Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ （１９９４）４０：６３８−６４３など参照）等またはこれらに準じる方法によって実施することができる。本発明の低エンドトキシン処理は、それらに限らず、洗浄、フィルター（エンドトキシン除去フィルターや帯電したフィルターなど）によるろ過、限外ろ過、カラム（エンドトキシン吸着アフィニティーカラム、ゲルろ過カラム、イオン交換樹脂によるカラムなど）を用いた精製、疎水性物質、樹脂または活性炭などへの吸着、有機溶媒処理（有機溶媒による抽出、有機溶剤添加による析出・沈降など）、界面活性剤処理（例えば、特開２００５−０３６０３６号公報など参照）など公知の方法によって、あるいはこれらを適宜組合せて実施することができる。これらの処理の工程に、遠心分離など公知の方法を適宜組み合わせてもよい。アルギン酸の種類などに合わせて適宜選択するのが望ましい。
【００１７】
本発明の成分(b)として用いる１価金属塩及びアンモニウム塩としては、水溶性の無機塩があげられる。このうち、１価金属塩としては、ナトリウムやカリウムなどの１価金属の塩、特にアルカリ金属の水溶性塩が好ましいものとしてあげられる。具体的には、無機塩として、アルカリ金属の塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩などがあげられる。これらのうち、塩酸塩が好ましく、特に塩化ナトリウムや塩化カリウムが好ましい。最も好ましくは塩化ナトリウムである。
又、アンモニウム塩としては、水溶性の塩化アンモニウムなどが好ましいものとしてあげられる。
本発明では、成分(a)/成分(b)の質量比が、１００/７０〜１００/１０であるのが好ましく、より好ましくは、１００/６０〜１００/２０であり、最も好ましくは１００／約４５である。成分(b)が塩化ナトリウムの場合、すぐに使用可能（ready-to-use）な製剤中の塩化ナトリウム濃度が生理食塩水相当の濃度となる様に、成分(a)に対して成分(b)を配合するのが最も好ましい。
【００１８】
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は、成分(a)の濃度が１.５質量％以上、成分(b)の濃度が０.５〜２質量％である。ここで、成分(a)の好ましい濃度は使用するアルギン酸の分子量に依存し、後述の実施例に記載のＡＬＧ−１（ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による平均分子量２５万）を使用する場合には１.５質量％〜３質量％であるのが好ましく、より好ましくは１.８質量％〜２.５質量％であり、最も好ましくは、２質量％である。後述の実施例に記載のＡＬＧ−２（ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による平均分子量１５万）を使用する場合には２質量％〜５質量％であるのが好ましく、より好ましくは２．５質量％〜４質量％であり、最も好ましくは、３．５質量％である。ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法による平均分子量７．２万のアルギン酸を使用する場合には、３質量％〜７質量％であるのが好ましく、より好ましくは４質量％〜６質量％であり、最も好ましくは４．５〜５質量％である。
又、成分(b)の濃度は、０．５〜２％であるのが好ましく、より好ましくは０．９％である。
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤には、その性能を損なわない範囲で、マンニトール、キシリトール、白糖などの糖を追加成分として含有させることができるが、成分(a)と成分(b)と水(c)のみから構成されるのが好ましい。一方、本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は、C2-7のモノ又はジカルボキシレートを含有しないのが好ましい。また、本発明のアルギン酸水溶液製剤は、クエン酸ナトリウムを含有しないのが好ましい。また、本発明のアルギン酸水溶液製剤は、カルシウム塩を含有しないのが好ましい。また、本発明のアルギン酸水溶液製剤は、アルギン酸が架橋されていないものが好ましい。
ここで用いる水としては、注射用水が好ましい。
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤の粘度は、通常、２７００mPa・s以上の値を示し、好ましくは３０００mPa・s以上の値を示し、より好ましくは３３００mPa・s以上の値を示す。
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤の粘度は、常法に従い測定することができる。例えば、回転粘度計法の、共軸二重円筒形回転粘度計、単一円筒形回転粘度計（ブルックフィールド型粘度計）、円すい−平板形回転粘度計（コーンプレート型粘度計）等を用いて測定することができる。好ましくは、日本薬局方（第１６版）の粘度測定法に従うことが望ましい。本発明において粘度測定は２０℃の条件で行うことが望ましい。例えば、コーンプレート型粘度計を用いて測定する場合、以下のような測定条件で測定することができる。試料溶液の調製は、MilliQ水を用いて行う。測定温度は２０℃とする。コーンプレート型粘度計の回転数は、アルギン酸１価金属塩の１％溶液測定時は１ｒｐｍ、２％溶液測定時は０．５ｒｐｍとし、これを目安にして決定する。読み取り時間は、アルギン酸１価金属塩の１％溶液測定の場合は２分間測定し、開始１分から２分までの平均値とする。２％溶液測定の場合は２．５分間測定し、開始０．５分から２．５分までの平均値とする。試験値は３回の測定の平均値とする。
本発明における粘度の測定は、後述の実施例に記載の通り、回転粘度計であるレオストレスRS600(Thermo Haake GmbH社製)で2軸円筒状の金属製カップを用いて、20℃における粘度を3分間測定しそのうち開始1分後から2分後までの平均を測定値とした。
【００１９】
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は、冷蔵、好ましくは２〜８℃で保存することが好ましい。冷蔵保存することにより、アルギン酸の１価金属塩の分解が抑制され、粘度低下が抑制される。本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は、２〜８℃で保存することによる有効期間または使用期限が２年または３年であることが好ましい。本発明のアルギン酸塩水溶液製剤を２〜８℃で２年間保存した後の粘度低下率は、通常４０％未満であり、好ましくは３０％未満であり、さらに好ましくは２０％未満である。粘度低下率は、加速試験結果、統計処理等により外挿することが可能である。
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は好ましくは保存安定性を有する。本発明において、保存安定性を有するとは、当該製剤を以下の各条件で３か月間保存した後の粘度低下率が、
１）２〜８℃で保存した場合に３％未満、
２）２５℃、湿度６０％で保存した場合に７％未満、
３）４０℃、湿度７５％で保存した場合に４７％未満、
のいずれかを満たすものをいう。
なお、２〜８℃で保存した場合の、３か月間保存した後の好ましい粘度低下率は２％未満であり、より好ましくは１．５％未満であり、２５℃、湿度６０％で保存した場合の、３か月間保存した後の好ましい粘度低下率は６％未満であり、より好ましくは５％未満であり、４０℃、湿度７５％で保存した場合の、３か月間保存した後の好ましい粘度低下率は４５％未満であり、より好ましくは４３％未満である。
【００２０】
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は、医薬品または医療機器として用いることができる。具体的には、軟骨再生剤、軟骨疾患治療剤、軟骨損傷補填剤、椎間板疾患治療剤および半月板疾患治療剤等に用いる医薬品または医療機器として使用することができる。本発明のアルギン酸塩水溶液製剤は、すぐに使用可能（ready-to-use）なように調製されたものであるが、注射用水、生理食塩水等の溶媒を加えて希釈して、目的とする用途に適した濃度、粘度の溶液として使用することもできる。当該溶液を、スポンジなどの担体に含浸させて使用することもできる。また、当該溶液に、塩化カルシウム溶液などの架橋剤を添加して、溶液をゲル化して使用することもできる。また、本発明のアルギン酸塩水溶液をバイアル等の容器から取り出し、そのまま、又は希釈して患部に塗布等の使用も可能である。
本発明のアルギン酸塩水溶液製剤の好ましい製造方法を次に説明する。
すなわち、(a)アルギン酸の１価金属塩及び(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を溶解してなる水溶液を、無菌ろ過し、バイアル等の容器に充填し、次いで、乾燥により所定の濃度まで濃縮する方法によって製造するのが好ましい。
また(a)アルギン酸の１価金属塩及び(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を溶解してなる水溶液を、無菌ろ過し、バイアル等の容器に充填し、次いで、凍結乾燥したものを無菌的に復水して製造することもできる。
また、(a)アルギン酸の１価金属塩及び(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を溶解してなる水溶液を、無菌ろ過し、乾燥により所定の濃度まで濃縮し、次いで、バイアル、シリンジ等の容器に充填する方法によって製造することもできる。
また、(a)アルギン酸の１価金属塩及び(b)１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を溶解してなる水溶液を、無菌ろ過した後、バイアル、シリンジ等の容器に充填する方法によって製造することもできる。
【００２１】
より具体的には、成分(a)と成分(b)を、注射用水に溶解して水溶液を調製する。この際、成分(a)であるアルギン酸の１価金属塩の濃度を０．１質量％以上１．４質量％以下、より好ましくは０．２質量％以上１．３質量％以下、さらに好ましくは、０.３質量％以上１．２質量％以下となるようにするのがよい。成分(b)である塩は、使用した成分(a)に対して、成分(a)/成分(b)の質量比が、１００/７０〜１００/１０となる量、より好ましくは１００/６０〜１００/２０となる量で用いるのがよい。しかしながら、乾燥による濃縮後に、成分(b)の濃度が０.５〜２質量％になるように調整しておくのが肝要である。水への成分(a)と成分(b)の添加順序は任意とすることができるが、成分(a)、成分(b)の順で加えるのが好ましい。通常、室温で溶解させるが、場合により、溶液を４０℃程度まで加温、加熱または冷却してもよい。溶解に際して、任意の攪拌機を用いてもよい。
本発明では、成分(a)と成分(b)を溶解した水溶液の粘度（２０℃）が、４０〜８００mPa・sとなるようにするのが好ましい。ここで、水溶液の粘度は、回転粘度計であるレオストレスRS600(Thermo Haake GmbH社製)で2軸円筒状の金属製カップを用いて、20℃で測定した値を用いることができる。
溶解後、本発明では、水溶液を濾過して、好ましくは無菌濾過を行って、エンドトキシンレベルを低下させる。この際、ろ過フィルター、例えば、0.22umフィルターを用いるのが好ましい。
なお、本発明の無菌の製剤とは、例えば、日本薬局方に規定される無菌試験法に適合する製剤を意味する。
【００２２】
本発明では、成分(a)と成分(b)を溶解した水溶液、あるいは成分(a)と成分(b)を溶解してなる水溶液をバイアル等の容器に充填した後、好ましくは、例えば窒素気流中のような非酸化雰囲気下において、常法により乾燥、例えば減圧乾燥や常圧乾燥により濃縮し、アルギン酸の１価金属塩の濃度を１．５％以上とすることができる。あるいは、本発明では、成分(a)と成分(b)を溶解した水溶液、あるいは成分(a)と成分(b)を溶解してなる水溶液を、好ましくは、例えば窒素気流中のような非酸化雰囲気下において、常法により乾燥、例えば減圧乾燥や常圧乾燥により濃縮し、アルギン酸の１価金属塩の濃度を１．５％以上とした後に、バイアル、シリンジ等の容器に充填することができる。本発明のアルギン酸の１価金属塩の水溶液を充填するバイアル、シリンジ等の容器は、容量が２〜５０ｍｌであるものが好ましい。また、本発明のアルギン酸の１価金属塩の水溶液の充填量は、バイアル、シリンジ等の容器の容量の１〜９０％程度とするのが好ましい。例えば、容器へのアルギン酸塩水溶液の充填量として、５〜２０ｍｌが挙げられる。また、容器へのアルギン酸塩の充填量として、乾燥アルギン酸ナトリウムとして５０〜５００ｍｇが挙げられ、好ましくは５０〜１５０ｍｇであり、９０〜１１０ｍｇであるものがより好ましい。
濃縮終了後、あるいは容器への充填後、バイアル等の容器中の空気を窒素ガス、好ましくは乾燥窒素ガスで置換し、次いで、キャップ、シール等により密封するのが好ましい。バイアル等に用いるキャップとしてはゴム製、特に、臭化ブチルゴム製のものが好ましい。尚、バイアルとしては、ガラス製バイアルなど市販の種々の材料でできたものを用いることができる。また、バイアルの内壁をシリコーン等でコーティングすることも可能である。本発明の水溶液製剤を充填する密封容器または気密容器として、バイアルが挙げられるが、バイアルに代えて、アンプル、シリンジ、ソフトバッグ等を用いることも可能であり、バイアルまたはシリンジが好ましい。シリンジを用いた場合には、プレフィルドシリンジとして、すぐに使用することが可能（ready-to-use）であり、より利便性が高い。
【００２３】
本発明は、さらに、１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有することを特徴とするアルギン酸の１価金属塩アルギン酸塩水溶液製剤の経時的粘度低下抑制剤を提供する。又、本発明は、アルギン酸の１価金属塩アルギン酸塩水溶液製剤に、１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩を含有させることを特徴とするアルギン酸の１価金属塩アルギン酸塩水溶液製剤の経時的粘度低下を抑制する方法を提供する。
これらの態様において、１価金属塩及びアンモニウム塩から選ばれる塩である成分(b)を、アルギン酸の１価金属塩である成分(a)に対して、成分(a)/成分(b)の質量比が、１００/７０〜１００/１０の範囲で用いるのが好ましく、より好ましくは、１００/６０〜１００/２０の範囲で用いることにより、アルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の経時的粘度低下を抑制することができる。
本発明は、また、成分(a)と成分(b)を溶解してなる水溶液を、無菌ろ過し、非酸化雰囲気下で乾燥してアルギン酸の１価金属塩濃度を濃縮する工程を含む、アルギン酸の１価金属塩水溶液製剤の安定化方法を提供する。
【実施例】
【００２４】
次に、実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
以下の方法により、アルギン酸ナトリウム水溶液製剤を調製した。
(1)アルギン酸ナトリウム水溶液の調製方法
精製アルギン酸ナトリウム（（株）キミカより購入：ＡＬＧ−１（平均分子量２５万：ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法により測定：純度（定量値）９８％：粘度（１質量％溶液、２０℃）５２５mPa・s：Ｍ／Ｇ比１．２）、塩化ナトリウム（メルク(株)社製）及び水（注射用水：大塚製薬(株)社製）を用いた。
滅菌済みの１〜２Ｌ容量の容器に、精製アルギン酸ナトリウムと塩化ナトリウムを、注射用水と共に入れ、室温で攪拌して溶解させ、アルギン酸ナトリウム濃度１％の水溶液を調製した。
次いで、この調製薬液を、クリーンベンチ内で０．２２μｍフィルター（ミリポア社製）を用いて無菌ろ過を行った。
(2)濃縮
上記の方法で調製した調製薬液を、バイアルあたり、乾燥アルギン酸ナトリウムとして１０２ｍｇとなるように、２０ml容量のガラスバイアルに充填し、凍結乾燥装置を用いて、常法にて濃縮した後、バイアル内の空気を乾燥窒素ガスで置換し、次いで、キャップして密封状態にし、アルギン酸ナトリウム２質量％、塩化ナトリウム０．９質量％の水溶液製剤を調製した。【００２５】
(3)アルギン酸Ｎａ水溶液製剤の経時安定性
上記(2)で得られたアルギン酸Ｎａ濃度２質量％水溶液の経時的な粘度の変化を評価するため、２５℃、６０％ＲＨ（加速条件）及び４０℃、７５％ＲＨ（苛酷条件）の恒温恒湿室に保存して、経時による粘度変化を評価した。
粘度の測定は、回転粘度計であるレオストレスRS600(Thermo Haake GmbH社製)で2軸円筒状の金属製カップを用いて、20℃における粘度を3分間測定しそのうち開始1分後から2分後までの平均を測定値とした。
(4)結果
得られた結果を図１に示す。
図１における結果から、２５℃（加速条件）では、粘度低下が緩やかであることから冷所保存で、２年間安定性を担保できる可能性があることがわかった。特に、２５℃、６０％ＲＨの加速条件において、３か月間の粘度低下率が１％未満であることがわかる。また、４０℃、７５％ＲＨの２か月間の結果から、３か月間の粘度低下率は約４０％と推定された。【００２６】
実施例２
実施例１の方法に準じて、分子量の異なるアルギン酸ナトリウムを用いて、アルギン酸ナトリウム水溶液製剤を調製した。
(1)アルギン酸ナトリウム水溶液の調製方法および濃縮
精製アルギン酸ナトリウムＡＬＧ−１（実施例１と同じ）およびＡＬＧ−２（（株）キミカより購入：平均分子量１５万：ＧＰＣ−ＭＡＬＳ法により測定）を用いて、アルギン酸ナトリウム２質量％（ＡＬＧ−１）および３．５質量％（ＡＬＧ−２）の水溶液製剤を調製した。塩化ナトリウム濃度はいずれも０．９質量％である。
(2)アルギン酸Ｎａ水溶液製剤の経時安定性
上記(1)で得られた各アルギン酸Ｎａ水溶液の経時的な粘度の変化を評価するため、４０℃、７５％ＲＨ（苛酷条件）の恒温恒湿室に保存して、実施例１の方法に準じて経時による粘度変化を評価した。
(3)結果
得られた結果を図2に示す。
図２における苛酷条件の結果から、冷所保存で、２年間安定性を担保できる可能性があることがわかった。また、ＡＬＧ−１およびＡＬＧ−２の、４０℃、７５％ＲＨの苛酷条件における３週間の結果から推定した３か月間の粘度低下率はそれぞれ、約３９％、約４５％であることがわかった。【００２７】
実施例３
以下の方法により、各種アルギン酸ナトリウム凍結乾燥製剤を調製した後、無菌的に復水しアルギン酸ナトリウム水溶液製剤としたものについて、実施例１の方法に準じて経時的な粘度を測定、評価した。
(1)アルギン酸ナトリウム水溶液の調製方法
実施例１で用いたのと同じ精製アルギン酸ナトリウム、塩化ナトリウム（メルク(株)社製）及び水（注射用水：大塚製薬(株)社製）を用いた。
滅菌済みの１〜２Ｌ容量の容器に、精製アルギン酸ナトリウム単独（アルギン酸ナトリウム  ５.１ｇ／Ｌ）、又は精製アルギン酸ナトリウムと塩化ナトリウム（アルギン酸ナトリウム  ５.１ｇ／Ｌ：ＮａＣｌ  ２．２５ｇ／Ｌ）を、注射用水と共に入れ、室温で攪拌して溶解させ、使用原薬液を調製した。
次いで、使用原薬液を、クリーンベンチ内で０．２２μｍフィルター（ミリポア社製）を用いて無菌ろ過を行い、２０ml容量のガラスバイアルにバイアルあたり、乾燥アルギン酸ナトリウムとして、１０２mgとなるように充填を行った。【００２８】
(2)凍結乾燥
アルギン酸ナトリウム水溶液を充填したガラスバイアルを、凍結乾燥装置を用いて、下記の条件で、凍結乾燥した。
凍結・乾燥条件：２７０分かけて−４０℃まで冷却し、この温度で、６００分保持して完全に凍結させた後、２４０分かけて温度を−１０℃に上昇させ、この温度で、凍結乾燥機の庫内が３Ｐａ以下となるまで減圧し、約１２０時間保持して、水分含量約２質量％まで乾燥した。
凍結乾燥後、バイアル中の空気を乾燥窒素ガスで置換し、次いで、キャップして密封状態にし、これを以下の試験に供した。
(3)アルギン酸ナトリウム２質量％溶液の経時安定性
上記(2)で得られたアルギン酸ナトリウム凍結乾燥品を、水（注射用水：大塚製薬(株)社製）に溶解して、下記のアルギン酸ナトリウム濃度２質量％水溶液１と２を調製した。又、精製アルギン酸ナトリウム単独の凍結乾燥品を、生理食塩水に溶解して、下記のアルギン酸ナトリウム濃度２質量％水溶液３を調製した。
水溶液１：凍結乾燥時にＮａＣｌあり：注射用水で調製（実施例３−１）
水溶液２：凍結乾燥時にＮａＣｌなし：注射用水で調製（参考例３−２）
水溶液３：凍結乾燥時にＮａＣｌなし：生理食塩水で調製（参考例３−３）【００２９】
これらのアルギン酸ナトリウム２質量％溶液の４０℃/７５％ＲＨ、２５℃/６０％ＲＨ及び２〜８℃における経時安定性を経時による粘度変化で評価した。粘度を実施例１と同様の方法で測定した。
得られた結果を図３〜図５に示す。
図３における結果から、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在すると、粘度低下が緩やかである（水溶液１：実施例３−１：粘度低下の傾き−５４８、３か月間の粘度低下率約３８％）ことから、経時による粘度低下を抑制できることがわかる。これに対して、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在しないと、経時による粘度低下が大きく（水溶液２：参考例３−２：粘度低下の傾き−６２３、３か月間の粘度低下率約４９％）、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在せず、その後添加しても経時による粘度低下を抑制できないことがわかる（水溶液３：参考例３−３：粘度低下の傾き−７０２、３か月間の粘度低下率約５４％）。なお、実施例３−１の製剤は、４０℃、７５％ＲＨの条件において、３か月間の粘度低下率が４７％未満であることがわかる。【００３０】
図４の結果からも、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在すると、経時による粘度低下を抑制できるが、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在しないと、経時による粘度低下が大きく、又、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在せず、その後添加しても経時による粘度低下を抑制できないことがわかる。なお、実施例３−１の製剤は、２５℃、６０％ＲＨの条件において、３か月間の粘度低下率が７％未満であることがわかる。
図５の結果からも、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在すると、経時による粘度低下を抑制できるが、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在しないと、経時による粘度低下が大きく、又、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在せず、その後添加しても経時による粘度低下を抑制できないことがわかる。なお、実施例３−１の製剤は、２〜８℃の保存条件において、３か月間の粘度低下率が３％未満であることがわかる。【００３１】
実施例４
実施例３−１で調製したアルギン酸ナトリウム２質量％溶液（水溶液１）の、２５℃/６０％ＲＨ及び２〜８℃における、１８か月までの経時安定性を経時による粘度変化で評価した。粘度を実施例１と同様の方法で測定した。
得られた結果を図６に示す。
図６における結果から、凍結乾燥時にＮａＣｌが存在すると、復水後の水溶液製剤が長期間安定であることが確認された。本試験の結果から、実施例３−１の製剤は、２５℃、６０％ＲＨの条件における３か月間の平均粘度低下率が約６％であり、７％未満であることがわかる。また、実施例３−１の製剤は、２〜８℃の保存条件において１８か月間実質的な粘度低下が認められず、３か月間の平均粘度低下率が約３％未満であることがわかる。【００３２】
実施例５
実施例１の（１）で調製し、無菌ろ過した調製薬液１．６ｋｇを、無菌的に容量５Ｌの輸液バッグに充填し、乾燥窒素ガスを輸液バック内に通気させて、クリーンベンチ内で適宜加温、攪拌しながら常圧にて濃縮し、アルギン酸ナトリウム２質量％、塩化ナトリウム０．９質量％の調製薬液を得た（lot 1）。加温条件を変更した以外は、前記同様にして、調剤薬液を得た（lot 2）。この薬液を、無菌的に２０ｍＬ容量のガラスバイアルに充填し、キャップして密封し、アルギン酸ナトリウム水溶液製剤を得た。別に、前記薬液を、無菌的に２０ｍＬ容量のシリンジに充填し、キャップして密封し、アルギン酸ナトリウム水溶液製剤を充填したプレフィルドシリンジを得た。ここで、無菌的に充填する操作は、クリーンベンチ内で行った。
バイアルに充填した前記のアルギン酸ナトリウム２質量％溶液（lot 1、lot 2）について、４０℃/７０％ＲＨにおける、２か月までの経時安定性を経時による粘度変化で評価した。粘度を実施例１と同様の方法で測定した。
得られた結果を図７に示す。
図７における本試験の結果から、４０℃、７５％ＲＨの２か月間の結果から推定される、実施例５の製剤（lot 1、lot 2）の３か月間の粘度低下率は、それぞれ約３５％および約３７％であり、凍結乾燥後に復水した水溶液製剤と同等の安定性であった。
【図１】
2018164128.tif 000003
【図２】
2018164128.tif 000004
【図３】
2018164128.tif 000005
【図４】
2018164128.tif 000006
【図５】
2018164128.tif 000007
【図６】
2018164128.tif 000008
【図７】
2018164128.tif 000009
【国際調査報告】
2018164128.tif 000010
2018164128.tif 000011
2018164128.tif 000012
2018164128.tif 000013