(57)【要約】  有効成分に核酸を用いた場合においても、経皮吸収性に優れる、コアシェル構造体を提供する。  核酸を含有する、コア部と、親水基を有する界面活性剤を含有する、シェル部と、を備え、コア部が固体であり、界面活性剤の親水基が、アルカノールアミンにより構成されている、コアシェル構造体。
2019155992.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸を含有する、コア部と、
親水基を有する界面活性剤を含有する、シェル部と、
を備え、
前記コア部が固体であり、
前記界面活性剤の前記親水基が、アルカノールアミンにより構成されている、コアシェル構造体。
【請求項２】
前記界面活性剤が、脂肪酸アルカノールアミドである、請求項１に記載のコアシェル構造体。
【請求項３】
核酸を含有する、コア部と、
親水基を有する界面活性剤を含有する、シェル部と、
を備え、
前記コア部が固体であり、
前記界面活性剤が、脂肪酸アルカノールアミドである、コアシェル構造体。
【請求項４】
前記核酸の分子量が、３０００ｇ／ｍｏｌ以上、１３０００ｇ／ｍｏｌ以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコアシェル構造体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のコアシェル構造体を含む、製剤。
【請求項６】
前記製剤中における前記コアシェル構造体の含有量が、１重量％以上、４０重量％以下である、請求項５に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コアシェル構造体及び該コアシェル構造体を用いた製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
外用剤や化粧品等の製剤分野においては、薬物等の有効成分を経皮吸収させるための技術が開発されている。有効成分の経皮吸収過程では、皮膚バリア機能や代謝等の影響を受けることがあり、これらの影響は薬物によって異なることが知られている。【０００３】
有効成分の経皮吸収性を向上させるべく、各種技術が提案されている。例えば、特許文献１では、薬剤含有複合体が油相に溶解または分散しているＳ／Ｏ（Ｓｏｌｉｄ−ｉｎ−Ｏｉｌ）型の製剤が開示されている。上記薬剤含有複合体は、親水性薬剤が界面活性剤により被覆されている固体状のものであることが記載されている。特許文献１では、このようなＳ／Ｏ型の製剤が経皮吸収性に優れていることが記載されている。また、特許文献１や特許文献２では、製剤に用い得るさまざまな界面活性剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第４８４３４９４号公報
【特許文献２】特許第５５３１２３０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献１や特許文献２の製剤は、有効成分の種類によっては、経皮吸収性がなお十分でなかった。特に、有効成分に分子量の大きい核酸を用いた場合、その傾向が顕著であった。【０００６】
本発明の目的は、有効成分に核酸を用いた場合においても、経皮吸収性に優れる、コアシェル構造体及び該コアシェル構造体を用いた製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、核酸を含有する、コア部と、親水基を有する界面活性剤を含有する、シェル部とを備えるコアシェル構造体において、親水基がアルカノールアミンにより構成されている界面活性剤を用いることで上記課題を解決できることを見出し、本発明を成すに至った。【０００８】
本発明に係るコアシェル構造体の広い局面では、核酸を含有する、コア部と、親水基を有する界面活性剤を含有する、シェル部と、を備え、コア部が固体であり、界面活性剤の親水基が、アルカノールアミンにより構成されている。【０００９】
本発明に係るコアシェル構造体のある特定の局面では、前記界面活性剤が、脂肪酸アルカノールアミドである。【００１０】
本発明に係るコアシェル構造体の他の広い局面では、核酸を含有する、コア部と、親水基を有する界面活性剤を含有する、シェル部と、を備え、前記コア部が固体であり、前記界面活性剤が、脂肪酸アルカノールアミドである。【００１１】
本発明に係るコアシェル構造体のさらに他の特定の局面では、前記核酸の分子量が、３０００ｇ／ｍｏｌ以上、１３０００ｇ／ｍｏｌ以下である。【００１２】
本発明に係る製剤は、本発明に従って構成されているコアシェル構造体を含む。製剤中におけるコアシェル構造体の含有量は、１重量％以上、４０重量％以下であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、有効成分に核酸を用いた場合においても、経皮吸収性を高めることができる、コアシェル構造体及び該コアシェル構造体を用いた製剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の一実施形態に係るコアシェル構造体を示す模式的断面図である。
【図２】図２は、試験例１で使用した薬物皮膚透過試験セルの簡略図である。
【図３】図３は、試験例１で使用した薬物皮膚透過試験セルの模式的断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の詳細を説明する。
【００１６】
［コアシェル構造体］
本発明に係るコアシェル構造体は、核酸を含有するコア部と、界面活性剤を含有するシェル部とを備える。上記界面活性剤は、親水基を有する。また、上記界面活性剤の親水基は、アルカノールアミンにより構成されている。
【００１７】
本発明においては、コアシェル構造体のシェル部に含有される界面活性剤が、アルカノールアミンにより構成されている親水基を有しているので、有効成分として分子量が高くかつ親水性の高い薬剤、特に核酸を用いた場合においても経皮吸収性を効果的に高めることができる。
【００１８】
本発明においては、コア部とシェル部とが分子間力などにより結び付きあって集合体を形成していてもよい。もっとも、核酸の経皮吸収性をより一層高める観点から、コア部の表面の少なくとも一部がシェル部によって被覆されていることが好ましい。
【００１９】
より具体的には、コア部の表面の３０％以上が、シェル部によって被覆されていることが好ましい。より好ましくは５０％以上、さらに好ましくは７０％以上、さらに好ましくは８５％以上、特に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上である。もっとも、コア部の表面がシェル部によって完全に被覆されていてもよい。コアシェル構造体は、上記のような構成を有しているので、例えば、皮膚に適用した場合、コア部に含有される核酸を体内に放出することができる。
【００２０】
本発明においては、コア部が、固体である。コア部が固体であるので、後述する基剤中での安定性をより一層高めることができる。また、この場合、コアシェル構造体を油相である基剤相中に分散させることで、Ｓ／Ｏ（Ｓｏｌｉｄ  ｉｎ  Ｏｉｌ）型の構造を有する製剤を形成することができる。
【００２１】
なお、後述する製造方法の欄で説明するように、本発明のコアシェル構造体は、Ｗ／Ｏエマルションを乾燥させ、溶媒（水性溶媒及び油性溶媒）を除去することにより得られるので、コア部が固体（上記Ｓ／Ｏ（Ｓｏｌｉｄ  ｉｎ  Ｏｉｌ）型のＳ）を構成している。
【００２２】
本発明のコアシェル構造体は、有効成分に核酸を用いた場合においても、経皮吸収性に優れるので、製剤に好適に用いることができる。なかでも、外用薬、化粧品又は注射剤などの分野に好適に用いることができる。
【００２３】
以下、本発明のコアシェル構造体の一例について図面を参照して説明する。
図１は、本発明の一実施形態に係るコアシェル構造体を示す模式的断面図である。
【００２４】
図１に示すように、コアシェル構造体１０は、コア部１１及びシェル部１２を備える。コア部１１の表面は、シェル部１２により被覆されている。
【００２５】
なお、本発明のコアシェル構造体の形状は、特に限定されない。コアシェル構造体は、例えば、球状、ロッド状、キュービック状、レンズ状又はウニ状の形状を有する粒子である。
【００２６】
また、本発明のコアシェル構造体のサイズは、特に限定されない。核酸の経皮吸収性をより一層高める観点から、コアシェル構造体の平均サイズは、例えば、１ｎｍ〜１００μｍとすることができる。
【００２７】
なお、本発明において、コアシェル構造体の平均サイズとは、溶媒（例えば、スクワラン等）分散時の動的光散乱法により、数平均径を算出したものとする。
【００２８】
以下、コア部及びシェル部の詳細について説明する。
【００２９】
（コア部）
コア部は、有効成分として核酸を含有する。
【００３０】
核酸としては、特に限定されないが、例えば、ｓｉＲＮＡ、ＣｐＧオリゴ、ｍｉＲＮＡ、アプタマー、デコイ、リボザイム等を用いることができる。
【００３１】
具体的には、Ｍｉｒａｖｉｒｓｅｎ（配列名称：ａｎｔｉｍｉｒ  １２２、ジーンデザイン社製、分子量：４９６７ｇ／ｍｏｌ）、Ｋ３  Ｅｔ−Ｆｒｅｅ（Ｂ−クラス  ＴＬＲ９  リガンド、ジーンデザイン社製、分子量：６３４９ｇ／ｍｏｌ）、Ｖｉｔｒａｖｅｎｅ（一般名：ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ、分子量：７１２２ｇ／ｍｏｌ）、Ｋｙｎａｍｒｏ（一般名：ｍｉｐｏｍｅｒｓｅｎ、分子量：７５９５ｇ／ｍｏｌ）、Ｅｘｏｎｄｙｓ（一般名：ｅｔｅｐｌｉｒｓｅｎ、分子量：１０３０６ｇ／ｍｏｌ）、Ｓｐｉｎｒａｚａ（一般名：ｎｕｓｉｎｅｒｓｅｎ、分子量：７５０１ｇ／ｍｏｌ）などを用いることができる。
【００３２】
核酸のオクタノール水分配係数は、特に限定されないが、−２０〜−２であることが好ましい。この場合、核酸の経皮吸収性をより一層高めることができる。核酸の経皮吸収性をさらに一層向上させる観点から、オクタノール水分配係数は、好ましくは−１８以上、より好ましくは−１５以上、好ましくは−５以下、より好ましくは−８以下である。
【００３３】
なお、本発明において、オクタノール水分配係数は、オクタノールとｐＨ７の水系緩衝液を入れたフラスコ中に核酸を添加後、振とうし、それぞれの相の核酸濃度から求められる。具体的には、式：オクタノール水分配係数＝Ｌｏｇ１０（オクタノール相中濃度／水相中濃度）により算出して求めることができる。
【００３４】
核酸の分子量は、特に限定されない。核酸の分子量は、好ましくは３０００ｇ／ｍｏｌ以上、より好ましくは４０００ｇ／ｍｏｌ以上、好ましくは１５０００ｇ／ｍｏｌ以下、より好ましくは１３０００ｇ／ｍｏｌ以下である。本発明においては、分子量が上記のように大きい核酸を用いた場合においても、経皮吸収性を高めることができる。
【００３５】
コアシェル構造体１００重量％中における核酸の含有量は、好ましくは１重量％以上、より好ましくは５重量％以上、好ましくは４０重量％以下、より好ましくは３０重量％以下である。
【００３６】
なお、コア部は、必要に応じて、２種以上の核酸を含んでいてもよい。
【００３７】
（シェル部）
シェル部は、親水基を有する界面活性剤を含む。上記親水基は、アルカノールアミンにより構成されている。より具体的には、上記親水基は、アルカノールアミンに由来する親水性基である。
【００３８】
このような界面活性剤としては、例えば、脂肪酸アルカノールアミドが挙げられる。
【００３９】
脂肪酸アルカノールアミドは、アミド結合のＮを中心として、1つの脂肪酸と1つ又は２つのアルコールが結合したものである。
【００４０】
具体的に脂肪酸アルカノールアミドとしては、オレイン酸ジエタノールアミド、ラウリン酸ジエタノールアミド、ラウリン酸モノイソプロパノールアミド、ステアリン酸ジエタノールアミド、ステアリン酸モノエタノールアミド、ステアリン酸モノイソプロパノールアミド、ラウリン酸ミリスチン酸ジエタノールアミド、パルミチン酸モノエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸モノイソプロパノールアミド、ヤシ油脂肪酸Ｎ−メチルエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド、又はパーム核油脂肪酸ジエタノールアミド等が挙げられる。これらは、単独で用いてもよく、複数を併用してもよい。
【００４１】
核酸の経皮吸収性をより一層高める観点から、脂肪酸アルカノールアミドは、オレイン酸ジエタノールアミド、ラウリン酸ジエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミドなどのジエタノールアミドであることが好ましい。
【００４２】
界面活性剤は、ＨＬＢ値、又は複数の界面活性剤を含む場合はＨＬＢ値の加重平均値が、好ましくは４以上、より好ましくは５以上、好ましくは１４以下、より好ましくは１２以下である。
【００４３】
本発明におけるＨＬＢ（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ  Ｌｙｐｏｐｈｉｌｅ  Ｂａｌａｎｃｅの略）値は、乳化剤が親水性か親油性かを知る指標となるもので、０〜２０の値をとる。ＨＬＢ値が小さい程、親油性が強いことを示す。
【００４４】
本発明において、ＨＬＢ値は、下記Ｇｒｉｆｆｉｎ式より算出される。
【００４５】
ＨＬＢ値＝２０×｛（親水部分の分子量）／（全分子量）｝
【００４６】
ＨＬＢ値の加重平均値は、例えば以下の算出式を用いて算出することができる。
【００４７】
ＨＬＢ値Ａ、Ｂ、Ｃの界面活性剤原料があり、それぞれのコアシェル構造体の重量がｘ、ｙ、ｚであったときの加重平均値の算出式は、（ｘＡ＋ｙＢ＋ｚＣ）÷（ｘ＋ｙ＋ｚ）である。
【００４８】
界面活性剤の親水部分における分子量は、好ましくは１００ｇ／ｍｏｌ以上、好ましくは３５０ｇ／ｍｏｌ以下、より好ましくは３００ｇ／ｍｏｌ以下、さらに好ましくは２００ｇ／ｍｏｌ以下である。界面活性剤の親水部分における分子量が、上記下限以上である場合、シェル部によるコア部の被覆性がより一層向上し、核酸の経皮吸収性をより一層高めることができる。界面活性剤の親水部分における分子量が、上記上限以下である場合、体内における粒子からの核酸の放出性がより一層向上し、核酸の経皮吸収性をより一層高めることができる。
【００４９】
なお、界面活性剤の親水部分とは、界面活性剤分子全体から、構成脂肪酸の炭化水素鎖を除いた部分をいう。
【００５０】
また、アルカノールアミンの分子量は、好ましくは７０ｇ／ｍｏｌ以上、より好ましくは８０ｇ／ｍｏｌ以上、好ましくは３３０ｇ／ｍｏｌ以下、より好ましくは３００ｇ／ｍｏｌ以下、さらに好ましくは２５０ｇ／ｍｏｌ以下、特に好ましくは２００ｇ／ｍｏｌ以下である。
【００５１】
アルカノールアミンの分子量が上記下限以上である場合、シェル部によるコア部の被覆性がより一層向上し、経皮吸収性をより一層高めることができる。また、アルカノールアミンの分子量が、上記上限以下である場合、体内における粒子からの核酸の放出性がより一層向上し、経皮吸収性をより一層高めることができる。
【００５２】
なお、脂肪酸アルカノールアミドは、アルカノールアミンと脂肪酸とがアミド結合されてなり、アルカノールアミンの分子量は、アミド結合前のアルカノールアミンの分子量をいうものとする。
【００５３】
本発明の界面活性剤は、脂肪酸アルカノールアミド以外の界面活性剤をさらに含んでいてもよく、これらは用途に応じて適宜選択できる。例えば、医薬品や化粧品として使用可能なもののなかから幅広く選択することができる。また、複数種の界面活性剤を併用してもよい。
【００５４】
脂肪酸アルカノールアミド以外の界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤のいずれであってもよい。
【００５５】
非イオン性界面活性剤としては、特に限定されないが、脂肪酸エステル、脂肪アルコールエトキシレート、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、アルキルグリコシド、ポリオキシエチレンヒマシ油、又は硬化ヒマシ油等が挙げられる。
【００５６】
脂肪酸エステルとしては、特に限定されないが、グリセリン、ポリグリセリン、ポリオキシエチレングリセリン、ポリオキシエチレン、ソルビタン、プロピレングリコール及びポリオキシエチレンソルビット等のうち少なくとも１種と、脂肪酸とのエステル等が挙げられる。脂肪酸としては、例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、ウンデシレン酸、リシノレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、リシノレン酸、エルカ酸、牛脂、豚脂、ヤシ油、パーム油、パーム核油、オリーブ油、菜種油、米ぬか油、大豆油、ヒマシ油等の脂肪酸とのエステル等が挙げられる。
【００５７】
陰イオン性界面活性剤としては、アルキル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、脂肪酸塩、又はリン酸エステル塩等が挙げられる。
【００５８】
陽イオン性界面活性剤としては、アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、又はアミン塩類等が挙げられる。
【００５９】
両性界面活性剤としては、アルキルアミノ脂肪酸塩、アルキルベタイン、又はアルキルアミンオキシド等が挙げられる。
【００６０】
脂肪酸アルカノールアミド以外の界面活性剤としては、特に、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、又は硬化ヒマシ油が好ましい。
【００６１】
界面活性剤の含有量は、本発明の効果が奏される範囲内において適宜設定することができる。核酸と界面活性剤との質量比（核酸：界面活性剤）は、好ましくは１：０．５〜１：３０、より好ましくは１：１〜１：２０、さらに好ましくは１：１〜１：１０である。
【００６２】
（その他の添加成分）
コアシェル構造体は、核酸及び界面活性剤に加えて、さらに少なくとも１種の他の成分を含有していてもよい。他の成分としては、特に限定されないが、例えば、安定化剤、経皮吸収促進剤、皮膚刺激低減剤、防腐剤、又は鎮痛剤等が挙げられる。
【００６３】
安定化剤は、粒子構造を安定化させる作用を有する。また、安定化剤は、粒子構造の意図せぬ早期の崩壊を防止し、核酸の徐放効果をより一層高める役割を有する。
【００６４】
安定化剤としては、特に限定されないが、例えば、多糖類、タンパク質、又は親水性高分子材料等が挙げられる。安定化剤は、１種又は２種以上を含有してもよい。安定化剤の含有量は、その種類にもより、適宜設定できる。例えば、核酸と安定化剤の重量比（核酸：安定化剤）が、１：０．１〜１：１０となるように配合することができる。
【００６５】
経皮吸収促進剤としては、特に限定されないが、例えば、高級アルコール、Ｎ−アシルサルコシン若しくはその塩、高級モノカルボン酸、高級モノカルボン酸エステル、芳香族モノテルペン脂肪酸エステル、炭素数２〜１０の２価カルボン酸若しくはその塩が挙げられる。また、経皮吸収促進剤として、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸エステル若しくはその塩、乳酸、乳酸エステル、又はクエン酸等を用いてもよい。
【００６６】
経皮吸収促進剤は、１種又は２種以上を含有してもよい。経皮吸収促進剤の含有量は、その種類にもより、適宜設定できる。例えば、核酸と経皮吸収促進剤の重量比（核酸：経皮吸収促進剤）が、１：０．０１〜１：５０となるように配合することができる。
【００６７】
皮膚刺激低減剤としては、特に限定されないが、例えば、ハイドロキノン配糖体、パンテチン、トラネキサム酸、レシチン、酸化チタン、水酸化アルミニウム、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸水素ナトリウム、大豆レシチン、メチオニン、グリチルレチン酸、ＢＨＴ、ＢＨＡが挙げられる。また、皮膚刺激低減剤として、ビタミンＥ若しくはその誘導体、ビタミンＣ若しくはその誘導体、ベンゾトリアゾール、没食子酸プロピル、又はメルカプトベンズイミダゾール等を用いてもよい。
【００６８】
皮膚刺激低減剤は、１種又は２種以上を含有してもよい。皮膚刺激低減剤の含有割合は、その種類にもより、適宜設定できる。皮膚刺激低減剤は、例えば、コアシェル構造体全体に対して０．１重量％〜５０重量％となるように配合することができる。
【００６９】
防腐剤としては、特に限定されないが、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、フェノキシエタノール、又はチモール等が挙げられる。防腐剤は、１種又は２種以上を含有してもよい。防腐剤の含有割合は、その種類にもより、適宜設定できる。防腐剤は、例えば、コアシェル構造体全体に対して０．０１重量％〜１０重量％となるように配合することもできる。
【００７０】
鎮痛剤としては、特に限定されないが、例えば、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、ジブカイン若しくはプリロカイン等の局所麻酔薬又はその塩等が挙げられる。鎮痛剤は、１種又は２種以上を含有してもよい。鎮痛剤の含有割合は、その種類にもより、適宜設定できる。鎮痛剤は、例えば、コアシェル構造体全体に対して０．１重量％〜３０重量％となるように配合することができる。
【００７１】
［製剤］
本発明の製剤は、少なくとも上記コアシェル構造体を含む。本発明の製剤は、少なくとも上記コアシェル構造体を含むので、有効成分に核酸を用いた場合においても、経皮吸収性を効果的に高めることができる。
【００７２】
製剤全体１００重量％に対するコアシェル構造体の含有量は、特に制限されないが、好ましくは１質量％以上、より好ましくは５質量％以上、好ましくは４０質量％以下、より好ましくは３０質量％以下である。コアシェル構造体の含有量が上記下限以上である場合、核酸の経皮吸収性をより一層高めることができる。コアシェル構造体の含有量が上記上限以下である場合、皮膚刺激性をより一層低減することができる。
【００７３】
製剤における核酸と界面活性剤との質量比（核酸：界面活性剤）は、本発明の効果が奏される範囲内において適宜設定することができる。核酸と界面活性剤との質量比（核酸：界面活性剤）は、好ましくは１：０．５〜１：３０、より好ましくは１：１〜１：２０、さらに好ましくは１：１〜１：１０である。
【００７４】
本発明の製剤は、例えば、皮膚外用薬、点眼薬、点鼻薬、座薬又は口腔薬などの外用薬や、化粧品または注射剤など、経皮吸収や経粘膜吸収を意図した幅広い用途に用いることができる。
【００７５】
本発明の製剤は、特に限定されないが、通常、１日〜１週間持続性であり、好ましい態様では１日〜１週間あたり１回適用されるように用いられる。
【００７６】
本発明の製剤が外用剤である場合、対象疾患は、核酸の種類によって異なる。
【００７７】
本発明の製剤は、特に限定されず、プラスター剤若しくは硬膏剤等のテープ剤（リザーバー型、マトリックス型等）、パップ剤、パッチ剤、又はマイクロニードル等の貼付剤、軟膏剤、リニメント剤若しくはローション剤等の外用液剤、外用エアゾール剤若しくはポンプスプレー剤等のスプレー剤、クリーム剤、ゲル剤、点眼剤、眼軟膏剤、点鼻剤、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、経口剤又は注射剤等として使用できる。
【００７８】
本発明の製剤は、好ましくは、水分含有率が２０質量％以下であり、より好ましくは実質的に水を含有しない。これにより、コアシェル構造体の形状保持性をより一層高めることができる。また、コアシェル構造体が本来有する形状保持性と相まって、コアシェル構造体からの核酸の漏出をより一層抑制することができ、結果としてより一層高い経皮吸収性を発揮することが可能である。この観点から、本発明の製剤は、水分含有率が２０質量％以下に調整される剤として使用されることが好ましい。より好ましくは実質的に水を含有しない剤として使用されることがより好ましい。本発明の製剤は、例えば、プラスター剤、パッチ剤、軟膏剤又はゲル剤等として使用されることが好ましい。
【００７９】
（基剤相）
本発明の製剤は、基剤相を含有し、該基剤相がコアシェル構造体を含有するものであってもよい。このとき、コアシェル構造体は、基剤相中に分散又は溶解されていることが好ましい。
【００８０】
基剤は、特に限定されず、特に外用薬などの医薬品や化粧品として使用可能なもののなかから幅広く選択することができる。
【００８１】
上述したように、本発明のコアシェル構造体は、コア部が固体である。そのため、基剤相が油相である場合、コアシェル構造体を油相である基剤相中に分散させることで、Ｓ／Ｏ（Ｓｏｌｉｄ  ｉｎ  Ｏｉｌ）型の製剤を形成することができる。Ｓ／Ｏ型の製剤は、例えば、後述する製造方法により得られた粒子（コアシェル構造体）を、油相中に分散させることにより得ることができる。
【００８２】
基剤は、コアシェル構造体を分散又は溶解させるのに適切なものの中から使用目的等に応じて適宜選択することができ、特に限定されない。
【００８３】
また、複数種の基剤を併用してもよい。
【００８４】
基剤としては、特に限定されず、油性基剤や、水性基剤等が挙げられる。なかでも、油性基剤であることが好ましい。基剤が油性基剤である場合、油性基剤中にコアシェル構造体を分散させることで、Ｓ／Ｏ（Ｓｏｌｉｄ  ｉｎ  Ｏｉｌ）型構造を有する製剤を形成することができる。Ｓ／Ｏ（Ｓｏｌｉｄ  ｉｎ  Ｏｉｌ）型構造を有する製剤は、後述するように例えば水相に核酸を含有するＷ／Ｏエマルションを乾燥する工程を備える方法によって、製造することができる。
【００８５】
油性基剤としては、例えば、植物油、動物油、中性脂質、合成油脂、ステロール誘導体、ワックス類、炭化水素類、モノアルコールカルボン酸エステル類、オキシ酸エステル類、多価アルコール脂肪酸エステル類、シリコーン類、高級アルコール類、高級脂肪酸類又はフッ素系油剤類等が挙げられる。水性基剤としては、水や、（多価）アルコール等が挙げられる。
【００８６】
植物油としては、特に限定されないが、例えば、大豆油、ゴマ油、オリーブ油、やし油、パーム油、こめ油、綿実油、ひまわり油、コメヌカ油、カカオ脂、コーン油、べに花油、ヒマシ油、又はなたね油等が挙げられる。
【００８７】
動物油としては、特に限定されないが、例えば、ミンク油、タートル油、魚油、牛油、馬油、豚油、又は鮫スクワラン等が挙げられる。
【００８８】
中性脂質としては、特に限定されないが、例えば、トリオレイン、トリリノレイン、トリミリスチン、トリステアリン、又はトリアラキドニン等が挙げられる。
【００８９】
合成油脂としては、特に限定されないが、例えば、リン脂質又はアゾン等が挙げられる。
【００９０】
ステロール誘導体としては、特に限定されないが、例えば、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、ジヒドロラノステロール、フィトステロール、コール酸又はコレステリルリノレート等が挙げられる。
【００９１】
ワックス類としては、キャンデリラワックス、カルナウバワックス、ライスワックス、木ろう、みつろう、モンタンワックス、オゾケライト、セレシン、パラフィンワックス、マイクロクリスタリンワックス、ペトロラタム、フィッシャートロプシュワックス、ポリエチレンワックス、又はエチレン・プロピレンコポリマー等が挙げられる。
【００９２】
炭化水素類としては、流動パラフィン（ミネラルオイル）、重質流動イソパラフィン、軽質流動イソパラフィン、α−オレフィンオリゴマー、ポリイソブテン、水添ポリイソブテン、ポリブテン、スクワラン、オリーブ由来スクワラン、スクワレン、ワセリン、又は固形パラフィン等が挙げられる。
【００９３】
モノアルコールカルボン酸エステル類としては、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸ヘキシルデシル、イソステアリン酸オクチルドデシル、パリミチン酸セチル、パルミチン酸オクチルドデシル、オクタン酸セチル、オクタン酸ヘキシルデシル、イソノナン酸イソトリデシル、イソノナン酸イソノニル、イソノナン酸オクチル、イソノナン酸イソトリデシル、ネオペンタン酸イソデシル、ネオペンタン酸イソトリデシル、ネオペンタン酸イソステアリル、ネオデカン酸オクチルドデシル、オレイン酸オレイル、オレイン酸オクチルドデシル、リシノレイン酸オクチルドデシル、ラノリン脂肪酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、エルカ酸オクチルドデシル、イソステアリン酸硬化ヒマシ油、オレイン酸エチル、アボカド油脂肪酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸オクチル、イソステアリン酸イソプロピル、ラノリン脂肪酸イソプロピル、セバチン酸ジエチル、セバチン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジオクチル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジブチルオクチル、アジピン酸ジイソブチル、コハク酸ジオクチル、又はクエン酸トリエチル等が挙げられる。
【００９４】
オキシ酸エステル類としては、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、又はモノイソステアリン酸水添ヒマシ油等が挙げられる。
【００９５】
多価アルコール脂肪酸エステル類としては、トリオクタン酸グリセリル、トリオレイン酸グリセリル、トリイソステアリン酸グリセリル、ジイソステアリン酸グリセリル、トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル、トリ（カプリル酸／カプリン酸／ミリスチン酸／ステアリン酸）グリセリル、水添ロジントリグリセリド（水素添加エステルガム）、ロジントリグリセリド（エステルガム）、ベヘン酸エイコサン二酸グリセリル、トリオクタン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジオクタン酸２−ブチル−２−エチル−１，３−プロパンジオール、ジオレイン酸プロピレングリコール、テトラオクタン酸ペンタエリスリチル、水素添加ロジンペンタエリスリチル、トリエチルヘキサン酸ジトリメチロールプロパン、（イソステアリン酸／セバシン酸）ジトリメチロールプロパン、トリエチルヘキサン酸ペンタエリスリチル、（ヒドロキシステアリン酸／ステアリン酸／ロジン酸）ジペンタエリスリチル、ジイソステアリン酸ジグリセリル、テトライソステアリン酸ポリグリセリル、ノナイソステアリン酸ポリグリセリル−１０、デカ（エルカ酸／イソステアリン酸／リシノレイン酸）ポリグリセリル−８、（ヘキシルデカン酸／セバシン酸）ジグリセリルオリゴエステル、ジステアリン酸グリコール（ジステアリン酸エチレングリコール）、ジネオペンタン酸３−メチル−１，５−ペンタンジオール、又はジネオペンタン酸２，４−ジエチル−１，５−ペンタンジオール等が挙げられる。
【００９６】
シリコーン類としては、ジメチコン（ジメチルポリシロキサン）、高重合ジメチコン（高重合ジメチルポリシロキサン）、シクロメチコン（環状ジメチルシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン）、フェニルトリメチコン、ジフェニルジメチコン、フェニルジメチコン、ステアロキシプロピルジメチルアミン、（アミノエチルアミノプロピルメチコン／ジメチコン）コポリマー、ジメチコノール、ジメチコノールクロスポリマー、シリコーン樹脂、シリコーンゴム、アミノプロピルジメチコン若しくはアモジメチコン等のアミノ変性シリコーン、カチオン変性シリコーン、ジメチコンコポリオール等のポリエーテル変性シリコーン、ポリグリセリン変性シリコーン、糖変性シリコーン、カルボン酸変性シリコーン、リン酸変性シリコーン、硫酸変性シリコーン、アルキル変性シリコーン、脂肪酸変性シリコーン、アルキルエーテル変性シリコーン、アミノ酸変性シリコーン、ペプチド変性シリコーン、フッ素変性シリコーン、カチオン変性若しくはポリエーテル変性シリコーン、アミノ変性若しくはポリエーテル変性シリコーン、アルキル変性若しくはポリエーテル変性シリコーン、又はポリシロキサン・オキシアルキレン共重合体等が挙げられる。
【００９７】
高級アルコール類としては、セタノール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、ラウリルアルコール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、アラキルアルコール、ベヘニルアルコール、ホホバアルコール、キミルアルコール、セラキルアルコール、バチルアルコール、ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、又はダイマージオール等が挙げられる。
【００９８】
高級脂肪酸類としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレイン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、イソヘキサデカン酸、アンテイソヘンイコサン酸、長鎖分岐脂肪酸、ダイマー酸、又は水素添加ダイマー酸等が挙げられる。
【００９９】
フッ素系油剤類としては、パーフルオロデカン、パーフルオロオクタン、又はパーフルオロポリエーテル等が挙げられる。
【０１００】
（多価）アルコールとしては、エタノール、イソプロパノール、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、又はポリエチレングリコール等が挙げられる。
【０１０１】
また、その他の基剤としては、特に限定されないが、プラスター剤若しくは硬膏剤等のテープ剤（リザーバー型、マトリックス型等）、パップ剤、パッチ剤、マイクロニードル等の貼付剤、軟膏剤、外用液剤（リニメント剤、ローション剤等）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤等）、クリーム剤、ゲル剤、点眼剤、眼軟膏剤、点鼻剤、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、経口剤、又は注射剤等に使用される基剤等が挙げられる。
【０１０２】
［製造方法］
本発明のコアシェル構造体は、特に限定されないが、例えば、水相に核酸を含有するＷ／Ｏエマルションを乾燥する工程を備える方法によって、製造することができる。
【０１０３】
Ｗ／Ｏエマルションは、いわゆる油中水滴エマルション、具体的には水性溶媒の液滴が油性溶媒中に分散した状態のエマルションである限り、特に制限されない。
【０１０４】
水相に核酸を含有するＷ／Ｏエマルションは、例えば、核酸を含有する水や緩衝水溶液等の水性溶媒と、界面活性剤を含有するシクロヘキサン、ヘキサン、又はトルエン等の油性溶媒とを混合することによって得ることができる。核酸を含有する水性溶媒は、核酸の他に、必要に応じて安定化剤、吸収促進剤又は刺激低減剤等の添加成分を含有していてもよい。また、界面活性剤を含有する油性溶媒は、界面活性剤の他に、必要に応じて、刺激低減剤、鎮痛剤、吸収促進剤又は安定化剤等の添加成分を含有していてもよい。混合の方法としては、Ｗ／Ｏエマルションを形成できる方法である限り特に限定されず、例えばホモジナイザー等による撹拌が挙げられる。
【０１０５】
ホモジナイザー撹拌時の条件は、例えば、５０００ｒｐｍ〜５００００ｒｐｍ程度、好ましくは、１００００ｒｐｍ〜３００００ｒｐｍ程度である。
【０１０６】
Ｗ／Ｏエマルションにおける核酸と界面活性剤との質量比（核酸：界面活性剤）は、好ましくは１：０．５〜１：３０、より好ましくは１：１〜１：２０、さらに好ましくは１：１〜１：１０である。
【０１０７】
水相に核酸を含有するＷ／Ｏエマルションの乾燥の方法としては、該Ｗ／Ｏエマルション中の溶媒（水性溶媒及び油性溶媒）を除去できる方法である限り特に限定されない。Ｗ／Ｏエマルションの乾燥の方法としては、例えば凍結乾燥又は減圧乾燥等が挙げられ、好ましくは凍結乾燥が挙げられる。
【０１０８】
また、得られるコアシェル構造体の個数平均粒子径をより一層小さくする観点から、Ｗ／Ｏエマルション又は該Ｗ／Ｏエマルションの乾燥物を加熱処理する工程をさらに備えることが好ましい。加熱処理温度は、例えば３０℃〜６０℃、好ましくは３５℃〜５０℃、より好ましくは３５℃〜４５℃である。
【０１０９】
加熱処理時間は、加熱処理温度に応じて適宜調整されるものであるが、例えば１日間〜３０日間、好ましくは２日間〜１５日間、より好ましくは３〜７日間である。
【０１１０】
また、得られるコアシェル構造体の個数平均粒子径をより一層小さくする別の方法としては、Ｗ／Ｏエマルション又は該Ｗ／Ｏエマルションの乾燥物を必要に応じて溶媒等に分散後、フィルタ等で濾過する方法や、遠心処理分離を行う方法が挙げられる。フィルタ濾過の場合のフィルタ孔径は、例えば１μｍ以下、好ましくは０．２μｍ以下、より好ましくは０．１μｍ以下である。
【０１１１】
本発明のコアシェル構造体は、そのまま用いてもよいが、上記基剤等に分散して用いてもよい。
【０１１２】
また、本発明のコアシェル構造体を用いて、例えば、溶液塗工法により製剤を製造できる。溶液塗工法では、本発明のコアシェル構造体及び基剤に加えてさらに所望の添加成分を所定の割合になるように溶剤に添加する。その後、攪拌して均一な溶液を調製する。上記添加成分としては、吸収促進剤、増粘剤又はゲル化剤等が挙げられる。上記溶剤としては、ヘキサン、トルエン又は酢酸エチル等が挙げられる。溶液中の固形分濃度は、好ましくは１０質量％〜８０質量％、より好ましくは２０質量％〜６０質量％である。
【０１１３】
次に、各成分を含有する上記溶液を、例えばナイフコーター、コンマコーター又はリバースコーターなどの塗工機を用いて、シリコーン処理したポリエステルフィルム等の剥離ライナー上に均一に塗布する。塗布後、乾燥して薬剤含有層を完成させ、該薬剤含有層の上に支持体をラミネートすることにより、製剤を得ることができる。支持体の種類によっては、支持体に薬剤含有層を形成した後、薬剤含有層の表面に剥離ライナーをラミネートしてもよい。
【０１１４】
また、別の方法としては、例えば、まず、本発明のコアシェル構造体に必要に応じて基剤や吸収促進剤、安定剤、増粘剤又はゲル化剤等の添加成分を加えて混合する。混合後、用途に応じて、ガーゼ若しくは脱脂綿等の天然織物部材、ポリエステル若しくはポリエチレン等の合成繊維織物部材、又はこれらを適宜組み合わせて織布若しくは不織布等に加工したもの、又は透過性膜等に、積層や含浸等して保持させた状態とする。さらに粘着カバー材等で覆って使用することもできる。
【０１１５】
このようにして得られた製剤は、使用用途に応じて、楕円形、円形、正方形又は長方形などの形状に適宜裁断する。また、必要に応じて周辺に粘着剤層等を設けてもよい。
【０１１６】
次に、本発明の具体的な実施例及び比較例を挙げることにより本発明を明らかにする。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【０１１７】
（実施例１）
Ｍｉｒａｖｉｒｓｅｎ（配列名称：ａｎｔｉｍｉｒ  １２２、ジーンデザイン社製、分子量：４９６７ｇ／ｍｏｌ、オクタノール水分配係数：−１２．２）０．１ｇを４０ｇの純水に溶解し、これに、ラウリン酸ジエタノールアミド（日油社製、製品名「スタホームＤＬ」、ＨＬＢ値：９．２、飽和炭化水素鎖の炭素数：１１）０．６ｇをシクロヘキサン８０ｇに溶解した溶液を加え、ホモジナイザーにて撹拌（２５０００ｒｐｍ、２分間）した。この後に２日間凍結乾燥し、コアシェル構造体を得た。なお、コアシェル比は、１：６とした。得られたコアシェル構造体に流動パラフィン（和光純薬工業社製、密度（２０℃）：０．８００〜０．８３５ｇ／ｍｌ）を加え、混合、分散して製剤を製造した。なお、流動パラフィンは、コアシェル構造体が、製剤の全体重量に対して２０重量％となるように加えた。
【０１１８】
（実施例２）
実施例１で用いたラウリン酸ジエタノールアミドの代わりに、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド（日油社製、製品名「スタホームＤＦＣ」、ＨＬＢ値：９．２、飽和炭化水素鎖の炭素数：１１）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、コアシェル構造体及び製剤を調製した。
【０１１９】
（実施例３）
Ｋ３  Ｅｔ−Ｆｒｅｅ（Ｂ−クラス  ＴＬＲ９  リガンド、ジーンデザイン社製、分子量：６３４９ｇ／ｍｏｌ、オクタノール水分配係数：−１２以下）０．１ｇを４０ｇの純水に溶解し、これに、ラウリン酸ジエタノールアミド（日油社製、製品名「スタホームＤＬ」、ＨＬＢ値：９．２、飽和炭化水素鎖の炭素数：１１）０．６ｇをシクロヘキサン８０ｇに溶解した溶液を加え、ホモジナイザーにて撹拌（２５０００ｒｐｍ、２分間）した。この後に２日間凍結乾燥し、コアシェル構造体を得た。なお、コアシェル比は、１：６とした。得られたコアシェル構造体に流動パラフィン（和光純薬工業社製、密度（２０℃）：０．８００〜０．８３５ｇ／ｍｌ）を加え、混合、分散して製剤を製造した。なお、流動パラフィンは、コアシェル構造体が、製剤の全体重量に対して２０重量％となるように加えた。
【０１２０】
（実施例４）
実施例３で用いたラウリン酸ジエタノールアミドの代わりに、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド（日油社製、製品名「スタホームＤＦＣ」、ＨＬＢ値：９．２、飽和炭化水素鎖の炭素数：１１）を用いたこと以外は、実施例３と同様にして、コアシェル構造体及び製剤を調製した。
【０１２１】
（実施例５）
実施例１で得られたコアシェル構造体に流動パラフィン（和光純薬工業社製、密度（２０℃）：０．８００〜０．８３５ｇ／ｍｌ）を加え、混合、分散して製剤を製造した。なお、流動パラフィンは、コアシェル構造体が、製剤の全体重量に対して３５重量％となるように加えた。
【０１２２】
（実施例６）
実施例２で得られたコアシェル構造体に流動パラフィン（和光純薬工業社製、密度（２０℃）：０．８００〜０．８３５ｇ／ｍｌ）を加え、混合、分散して製剤を製造した。なお、流動パラフィンは、コアシェル構造体が、製剤の全体重量に対して３５重量％となるように加えた。
【０１２３】
（比較例１）
実施例１で用いたラウリン酸ジエタノールアミドの代わりに、ショ糖エルカ酸エステル（三菱化学フーズ社製、製品名「ＥＲ−２９０」、ＨＬＢ値：２．０、不飽和炭化水素鎖の炭素数：２１）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、コアシェル構造体及び製剤を調製した。
【０１２４】
（比較例２）
実施例３で用いたラウリン酸ジエタノールアミドの代わりに、ショ糖エルカ酸エステル（三菱化学フーズ社製、製品名「ＥＲ−２９０」、ＨＬＢ値：２．０、不飽和炭化水素鎖の炭素数：２１）を用いたこと以外は、実施例３と同様にして、コアシェル構造体及び製剤を調製した。
【０１２５】
（評価）
実施例１〜６及び比較例１〜２で得られた製剤について、以下の試験により、ヘアレスマウス皮膚透過性及びウサギ皮膚一次刺激性を評価した。結果を下記の表１に示す。
【０１２６】
ヘアレスマウス皮膚透過性試験；
薬物皮膚透過試験セル（図２及び図３参照）にヘアレスマウス皮膚（日本エスエルシー社製、Ｈｏｓ：ＨＲ−１  ７週齢より摘出）をセットした。この装置の上部に、上記の方法で製造した製剤を１．０ｇ（７．０７ｃｍ２）適用した。下部のレセプター層においては、蒸留水中にＮａＨ２ＰＯ４を５×１０−４Ｍ、Ｎａ２ＨＰＯ４を２×１０−４Ｍ、ＮａＣｌを１．５×１０−４Ｍ、硫酸ゲンタマイシン（和光純薬工業社製、Ｇ１６５８）を１０ｐｐｍ含有させた液をＮａＯＨでｐＨ７．２に調整した緩衝液を入れた。また、試験開始後より３２℃に保たれた恒温槽中に装置を設置した。試験開始後、所定時間後に下部のレセプター層より槽中の液のうち１ｍｌを採取した直後に、同じ組成の液を１ｍｌ補充した。回収した各々のレセプター液試料にメタノールを添加して溶出脂質等を抽出し遠心分離した。遠心分離後、上清中の核酸濃度を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により定量した。定量した核酸量に基づき、上記と同様の方法で２４時間累積皮膚透過量を算出した。
【０１２７】
ウサギ皮膚一次刺激性試験；
電気バリカンでウサギの背部皮膚を剪毛した（必要に応じて電気シェーバーで剃毛した）。背部皮膚の正中線を中心とした背部の片側２ヵ所、計４ヵ所の健常皮膚を投与部位とした。ヘアレスラット皮膚透過性試験と同様の方法で製造した製剤をスパーテルで取り出し、２ｃｍ×２ｃｍ大のリント布に均一に広げ、それを投与部位に貼付した。その上に不織布粘着包帯（ニチバン社製、メッシュポア、Ｎｏ．５０）で固定した。その後、ガーゼで投与部位全体を巻き、粘着性布伸縮包帯（ニチバン社製、エラストポア、Ｎｏ．１００）で覆って閉塞した。投与開始後２４時間で、閉塞を解除し、投与検体を除去した。
【０１２８】
投与後２４時間（閉塞解除し、投与検体除去後３０分）における皮膚反応を肉眼で観察した。その後、さらに同様にして投与後４８時間及び７２時間（閉塞解除し、投与検体除去後３０分）における皮膚反応を肉眼で観察した。なお、皮膚反応の評価は、下記の表２に示すＤｒａｉｚｅの基準に従って行った。
【０１２９】
具体的には、観察時毎に各投与検体について、各ウサギの投与部位の皮膚反応の個別評点（紅斑・痂皮形成と浮腫形成の合計）を算出した。その後、投与後２４時間及び７２時間の個別評点（投与後４８時間の評点は加算しない）から一次刺激インデックス（ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ；Ｐ．Ｉ．Ｉ．）を算出した。具体的には、下記の式（１）及び式（２）を用いて算出した。
【０１３０】
各投与部位の平均評点＝（投与後２４時間及び７２時間の個別評点の合計）／２…式（１）
【０１３１】
一次刺激インデックス（Ｐ．Ｉ．Ｉ．）＝（各投与部位の平均評点の合計）／（３（匹））…式（２）
【０１３２】
【表１】
2019155992.tif 000003
【０１３３】
【表２】
2019155992.tif 000004
【０１３４】
表１より、本発明のコアシェル構造体を用いた実施例１〜６では、比較例１，２と比較して、経皮吸収性が高められていることがわかる。また、製剤中におけるコアシェル構造体の含有量が１重量％以上、３０重量％以下である実施例１〜４では、経皮吸収性に加え、さらに皮膚刺激性にも優れていることがわかる。
【符号の説明】
【０１３５】
１…パラフィルム
２…皮膚
３…製剤
４…レセプター液（ｐＨ＝７．２リン酸緩衝液）
５…撹拌子
１０…コアシェル構造体
１１…コア部
１２…シェル部
【図１】
2019155992.tif 000005
【図２】
2019155992.tif 000006
【図３】
2019155992.tif 000007
【国際調査報告】
2019155992.tif 000008
2019155992.tif 000009
2019155992.tif 000010
2019155992.tif 000011