(57)【要約】式（Ｉ）で表される化合物またはその薬剤学的に許容される塩は、本態性振戦、小径線維ニューロパチー、ジストニア、アルツハイマー病に伴うてんかん、脳腫瘍に伴うてんかんまたは脳腫瘍治療剤としての利用可能性を有している。    【化１】2018207729.tif 000068
2018207729.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１】
2018207729.tif 000056
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦または小径線維ニューロパチー治療剤。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２】
2018207729.tif 000057
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、本態性振戦または小径線維ニューロパチーの治療方法。
【請求項３】
本態性振戦または小径線維ニューロパチーの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３】
2018207729.tif 000058
またはその薬剤学的に許容される塩。
【請求項４】
本態性振戦または小径線維ニューロパチー治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４】
2018207729.tif 000059
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
【請求項５】
式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化５】
2018207729.tif 000060
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦治療剤。
【請求項６】
式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化６】
2018207729.tif 000061
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、本態性振戦の治療方法。
【請求項７】
本態性振戦の治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化７】
2018207729.tif 000062
またはその薬剤学的に許容される塩。
【請求項８】
本態性振戦治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化８】
2018207729.tif 000063
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化９】
2018207729.tif 000064
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する小径線維ニューロパチー治療剤。
【請求項１０】
式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１０】
2018207729.tif 000065
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、小径線維ニューロパチーの治療方法。
【請求項１１】
小径線維ニューロパチーの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１１】
2018207729.tif 000066
またはその薬剤学的に許容される塩。
【請求項１２】
小径線維ニューロパチー治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１２】
2018207729.tif 000067
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）受容体阻害作用を有するピラノジピリジン化合物またはその薬剤学的に許容される塩を有効成分とする本態性振戦、小径線維ニューロパチー、ジストニア、アルツハイマー病に伴うてんかん、脳腫瘍に伴うてんかんまたは脳腫瘍の治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
本態性振戦は、基礎疾患や器質的な異常、外傷、服薬歴など原因となる因子が存在せず、主に姿勢時と動作時に振戦のみを示す病態である。本態性振戦は４０歳以後に発現する例が多く、加齢によって増悪し一生持続する。また、発症頻度は年齢とともに増加する。本態性振戦の発症に関し、家族性が認められる場合は常染色体優性遺伝を取ることが多く家族性振戦と呼ばれ、老人に発現した場合は、老人性振戦と呼ばれる。【０００３】
本態性振戦は薬物療法が主に行われるが、有効性に関するエビデンスがあり、かつ本態性振戦への保険適応を持っているのはプロプラノロールのみであり、第一選択薬として治療ガイドラインで推奨されている（非特許文献１参照）。しかし、プロプラノロールは喘息、徐脈、糖尿病、心不全あるいは褐色性細胞腫等の合併症患者に投与禁忌である。ガイドラインでは抗てんかん薬であるプリミドンも第一選択薬として推奨しているが、眠気や鎮静等の副作用がある。効果または副作用の問題から５６．３％の患者が第一選択薬の服薬を中断しており、クロナゼパム、トピラメート、ガバペンチン、プレガバリン等の抗てんかん薬等を補助薬として使用する（非特許文献２参照）。しかし、これらの薬剤には、必ずしも有効性が証明されておらず、多剤併用する必要や薬剤を変更する必要が生じることがあるだけでなく、徐脈、低血圧、めまい、鎮静、体重増加、疲労、眠気、運動失調、悪心等の副作用発現の問題があり、十分満足する治療剤が存在しないのが現状である（非特許文献３参照）。アルコールが本態性振戦の症状を軽減させることが知られているが、長期的に使用するとアルコール依存症になる危険性が大きい（非特許文献４参照）。【０００４】
このように多くの既存薬が存在しているが、日常生活が困難な患者やＱＯＬの大幅な低下が知られており（非特許文献５参照）、本態性振戦に有効な薬剤の開発が待望されている。【０００５】
本態性振戦の病態機序は未だ不明であるが、中枢性の振戦の１つであると考えられている。本態性振戦の動物モデルとしてハルマリンを投与した動物が使われている。ハルマリンにより、４〜１２Ｈｚの動作時の振戦が誘発され、本態性振戦の治療に用いられる薬剤で減弱する。ハルマリンは、下オリーブ核のニューロン活動の同期発火を引き起こす作用があり、これが振戦の発生原因であると推測されている（非特許文献６参照）。【０００６】
これまでに、ＡＭＰＡ受容体及びカイニン酸受容体アンタゴニスト２，３−Ｄｉｏｘｏ−６−ｎｉｔｒｏ−１，２，３，４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏ［ｆ］ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ−７−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ（ＮＢＱＸ）がハルマリン動物モデルで振戦を抑制するとの報告（非特許文献７参照）があるが、振戦を抑制する作用を有するピラノジピリジン化合物は知られていない。【０００７】
小径線維ニューロパチー（ＳＦＮ）は、末梢神経障害のなかでも主に小径線維が障害された一群を称した新たな疾患概念である。【０００８】
末梢神経は運動神経・知覚神経からなる体性神経と体内の臓器を不随意的に機能調節する自律神経系があり、この神経に障害がある状態を末梢神経障害と呼ぶ。一般人口の２．４％、５５歳以上の８％が罹患すると報告されており極めて多くの患者が存在する（非特許文献８、９）。知覚神経・自律神経は髄鞘の有無、線維の太さ、伝導速度の違いから大きくＡβ、Ａδ、Ｃ線維と分類される（非特許文献１０）。Ａβ線維は髄鞘をもち直径が大きな線維で、早い神経伝導を担い、主に触覚、圧覚を伝える。Ａδは髄鞘を持ち、Ａβ線維に比して小さな直径を持ち、比較的早い温度感覚や痛覚を伝達する。Ｃ線維は髄鞘を持たず直径も小さい線維で、知覚神経において持続性で線維遅い内臓痛や温度を伝達、自律神経節後線維では自律神経の調節を行う。【０００９】
末梢神経障害の検査では主に伝導速度を測定するが、この手法では主に大径Ａβ線維の機能しか見ることができない。しかし、近年は診断技術の進歩により小径線維線維（ＡδやＣ線維）の障害を皮膚生検で検出する方法が普及しつつある。これにより、末梢神経障害のなかでも主に小径線維が障害された疾患概念として、ＳＦＮが提唱され普及してきている。【００１０】
ＳＦＮは糖尿病を始めとする代謝性疾患、ＨＩＶ等の感染、アミロイドーシス、薬物・毒物誘発、特発性等様々な背景疾患によって引き起こされる（非特許文献１１）。ＳＦＮ患者では痛み、灼熱感、ヒリヒリ感、無感覚などの感覚系の異常が認められる（非特許文献１１）。自律神経における小径線維が障害を受けた場合はドライアイや口渇、起立性のふらつき、発汗異常等が認められる（非特許文献１２）。これらの症状から患者のＱＯＬは精神的、身体的に大きく低下しているが、特に痛みはＱＯＬに強く影響することから（非特許文献１３）、痛みの除去は重要な治療のゴールになる。【００１１】
これまでにＳＦＮを対象として実施した臨床試験はほとんどなく鎮痛効果に対する強いエビデンスを持つ薬剤、ＳＦＮへの保険適応をもった鎮痛薬は存在しない。ＳＦＮの治療には保険適応外であるが神経痛治療で用いられる三環系抗うつ薬、セロトニンーノルエピネフリン取り込み阻害剤や抗痙攣薬、オピオイド系鎮痛薬等を用いて痛みをコントロールする。しかし、一般的に鎮痛薬は２０−３０％の痛み減少にとどまり、５０％痛みが取れる患者は２０−３５％しかいないと報告されており、ＳＦＮにおける鎮痛剤の効果が切望されている（非特許文献１４）。【００１２】
ＳＦＮの動物モデルとしてはストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発モデルが知られている（非特許文献１５）。これまでにＳＴＺモデルにおいてＡＭＰＡ／カイニン酸受容体阻害剤である６−シアノ−７−ニトロキノキサリン−２，３−ジオン（ＣＮＱＸ）を前脳にある前帯状皮質に直接投与することで、熱および機械刺激痛覚過敏が抑制されることが報告されていたが（非特許文献１６）、鎮痛作用を有するピラノジピリジン化合物は知られていない。【００１３】
ジストニアは「反復性・捻転性の持続する一定のパターンを持った筋収縮により特定の姿勢や動作が傷害される病態」と定義される。【００１４】
ジストニアは病態によって大きく二つに分類される（非特許文献１７）。一次性（原発性）ジストニアは、ジストニアを唯一または必須の中核症状とし、既知の独立した疾患単位を原因病態として特定しえない場合を言う。二次性ジストニアは既知の独立した疾患の一症候として、または外因によって生じたジストニアをいう。外因としては薬物、毒物、外傷などがある。薬剤性には薬物の副作用として出現する急性ジストニア、遅発性ジストニアがある。パーキンソン症候群やウィルソン病など神経疾患によって引き起こされる二次性ジストニアがある。【００１５】
部位による分類では局所性ジストニア（眼瞼痙攣、痙性斜頸、書痙、咽頭ジストニア等）、多巣性ジストニア（隣接しない複数部位のジストニアを呈するジストニア）、全身性ジストニア（脚部の分節性ジストニアおよび他部位のジストニアを併発）、分節性ジストニア（隣り合う複数部位のジストニアのうち全身性ジストニアの定義に合致しない場合）がある。【００１６】
ジストニアは全身性の命に関わるもの、姿勢や頻用動作の日常生活の動作への支障、職業への影響、悪化した姿勢を気にした外出低下等様々なＱＯＬの低下を伴うことから種々の治療が行われる（非特許文献１８）。【００１７】
局所性ジストニアの治療にはボツリヌス治療が第一選択として使用される（非特許文献１９）。全身性のジストニアにおいても特定部位の筋弛緩がＱＯＬの改善につながると判断される場合、合併症の進行予防に有効と判断される場合はボツリヌス治療が選択される。全身性ジストニアでは淡蒼球内節当への深部脳刺激療法（Ｄｅｅｐ  ｂｒａｉｎ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ：ＤＢＳ）が行われる（非特許文献２０）。ボツリヌス療法やＤＢＳを行っている場合にも補助療法として抗コリン薬、クロナゼパム、ジアゼパム、バクロフェン等の内服薬が用いられる（非特許文献２０）。【００１８】
上記の通り、種々の治療法が試され、症状がコントロールされてきているものの効果が不十分な症例がいまだ多い。またボツリヌス治療は病院での注射処置が必要となり、利便性に欠けるだけでなく保険適応で認められた筋肉・投与量しか用いることができない（非特許文献２０）。ＤＢＳにおいても一次性全身性ジストニア等推奨されるジストニアも存在するが、脳に刺激電極を留置する手術が必要となり、簡便な代替療法のニーズが強く存在する。【００１９】
ジストニアの病態機序は不明な点が多いが、運動機能制御に関わる大脳基底核の異常な活動が原因と考えられている。ジストニアモデルとして、ジストニア様症状を自然発症するハムスターｄｔｓｚが知られている（非特許文献２１）。これまでにｄｔｓｚモデルにおいてＡＭＰＡ受容体阻害剤である２，３−Ｄｉｏｘｏ−６−ｎｉｔｒｏ−１，２，３，４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏ［ｆ］ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ−７−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ（ＮＢＱＸ）が抗ジストニア作用を有すると報告されているが（非特許文献２１）、抗ジストニア作用を有するピラノジピリジン化合物は知られていない。【００２０】
アルツハイマー病（ＡＤ）におけるてんかん発症率は非認知症の場合の約７倍高いことが報告されている（非特許文献２２）。また、ＡＤの４２％でｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｐｉｌｅｐｔｉｆｏｒｍ  ａｃｔｉｖｉｔｙと呼ばれる痙攣を呈さない脳波異常が、疾患のより早期段階から確認されている（非特許文献２３）。さらに、早期発症家族性ＡＤでは平均４８％、ある特定の遺伝子型（ＡＰＰ  ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を有する場合は約８１％と高いてんかん発症率を示す（非特許文献２４）。以上のことから、ＡＤはてんかんのリスク因子であることが示唆される。【００２１】
一方で、てんかんがＡＤのリスク因子であることを示唆する報告も複数ある。以下の２つの報告がその代表例である。（１）ｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｐｉｌｅｐｔｉｆｏｒｍ  ａｃｔｉｖｉｔｙを有するＡＤ患者は有していない患者に比べ認知機能の低下が速い（非特許文献２３）。（２）てんかんを小児期に発症した成人では、脳内のアミロイド蓄積が増加する（非特許文献２５）。このように、ＡＤとてんかんは相互に関わり合っている。【００２２】
ヒトＡＤ脳ではＧＬＵＲ１やＧＬＵＲ２（Ｑ）といった、カルシウム透過性ＡＭＰＡ受容体を構成するサブユニットの発現が亢進している（非特許文献２６，２７）。また、ＡＤの病態進行に深く関与していると考えられているアミロイドベータ（Ａβ）はラットの海馬において細胞表面のＧｌｕＲ１の発現を上昇させ、ＡＭＰＡ受容体を介する興奮性シナプス後電流を増大させる（非特許文献２８）。一方で、ＡＭＰＡ受容体阻害剤を処置しておくとＡβによる興奮性シナプス後電流の増大は起こらない（非特許文献２８）。以上のことから、ＡＭＰＡ受容体の発現及び機能亢進はＡＤにおけるてんかん発症の一因であることが示唆される。【００２３】
ＡＤ関連てんかんモデルとして、Ｔｇ２５７６マウスや５ＸＦＡＤマウスなどのＡＤモデルマウスが知られており、それぞれにおいて自発的な異常興奮脳波を示すことが報告されている（非特許文献２９，３０）。これまでにこれらのモデルにおいてＡＭＰＡ受容体阻害剤が抗痙攣作用を示すことは報告されていない。【００２４】
脳腫瘍は脳から発生する原発性脳腫瘍と、脳以外の組織・臓器で発生した癌が転移する転移性脳腫瘍の二つに大別される。脳腫瘍には他の癌のようにＴＮＭ分類やステージ分類は無く、１から４の悪性度（グレード）で分類される。良性脳腫瘍の多くはグレード１であり、髄膜腫、下垂体腺腫、神経鞘腫などが代表例として挙げられる。悪性脳腫瘍の代表例としては神経膠腫（グリオーマ）が挙げられる。【００２５】
神経細胞は神経膠細胞により支持されている。神経膠細胞から発生する腫瘍の総称がグリオーマであり、脳から発生する腫瘍の約２５％を占めている。グリオーマはさらに複数種に分類される。星細胞腫、乏突起膠腫（いずれもグレード２）、退形成性星細胞腫、退形成性乏突起膠腫、退形成性乏突起星細胞腫（いずれもグレード３）、膠芽腫（グレード４）が代表的なものである。【００２６】
初発グリオーマの標準治療では、可能な限り腫瘍を摘出し、残った腫瘍に対して放射線治療とテモゾロミドによる化学療法を同時に行う。しかしながら、グリオーマは脳組織に浸潤して増殖するため、手術で完全に摘出するのは困難であり、しばしば再発する。５年生存率はグレード２で５０〜７０％、グレード３で２０〜３３％、グレード４で８％以下と予後が悪い疾患である。また、高い確率でてんかんを発症するためＱＯＬの低下を招く。特にグレード１・２の低グレードのグリオーマでは約７０％でてんかんを発症する（非特許文献３１）。発作の種類としては、強直間代発作や複雑部分発作、二次性全般化発作など重篤な発作が主に認められ、抗てんかん薬３剤以上を併用しても６６％で痙攣が消失せず、アンメットニーズが高い疾患である（非特許文献３２）。【００２７】
グリオーマ関連てんかんモデルとして、患者由来グリオーマ細胞やヒトグリオーマ細胞株をヌードマウスの頭蓋内に移植したモデルが知られている（非特許文献３３）。これまでに本モデルにおいて抗痙攣作用を示すＡＭＰＡ受容体阻害剤は知られていない。また、ヒトグリオーマ細胞株をヌードマウスの皮下に移植したモデルにおいては、ＡＭＰＡ受容体阻害剤であるＹＭ８７２が抗腫瘍効果を有すると報告されているが（非特許文献３４）、本モデルにおいて抗腫瘍効果を示すピラノジピリジン化合物は知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２８】
【非特許文献１】Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，６４，ｐ２００８−２０２０（２００５）
【非特許文献２】Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，１６，ｐ６０４−６０７（２０１０）
【非特許文献３】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｄｉｓｅａｓｅ，５，ｐ４３−５５（２０１３）
【非特許文献４】Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１１５，ｐ１３４−１４２（２００３）
【非特許文献５】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，３４９，ｐ１６８−１７３（２０１５）
【非特許文献６】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，３７６，ｐ１６３−１８２（１９８６）
【非特許文献７】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，６１６，ｐ７３−８０（２００９）
【非特許文献８】Ｍａｒｔｙｎ  ＣＮ  ｅｔ  ａｌ，（１９９７）Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ
【非特許文献９】Ｈｕｇｈｅｓ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｒ  Ｍｅｄ  Ｊ  ３２４：４６６−４６９  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ
【非特許文献１０】Ｂａｓｂａｕｍ  ＡＩ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｐａｉｎ．Ｃｅｌｌ．（２００９）１３９（２）：２６７−８４
【非特許文献１１】Ｃｈａｎ  ＡＣ  ａｎｄ  Ｗｉｌｄｅｒ−Ｓｍｉｔｈ  ＥＰ．Ｓｍａｌｌ  ｆｉｂｅｒ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：Ｇｅｔｔｉｎｇ  ｂｉｇｇｅｒ！  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ（２０１６）５３（５）：６７１−８２．
【非特許文献１２】Ｔａｖｅｅ  Ｊ  ａｎｄ  Ｚｈｏｕ  Ｌ．（２００９）Ｃｌｅｖｅ  Ｃｌｉｎ  Ｊ  Ｍｅｄ．７６（５）：２９７−３０５．
【非特許文献１３】Ｂａｋｋｅｒｓ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｍａｌｌ  ｆｉｂｅｒｓ，ｌａｒｇｅ  ｉｍｐａｃｔ：ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  ｉｎ  ｓｍａｌｌ−ｆｉｂｅｒ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ．（２０１４）４９（３）：３２９−３６
【非特許文献１４】Ｎａｎｎａ  Ｂｒｉｘ  Ｆｉｎｎｅｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｐｔｅｒ  １７−Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｉｎｆｕｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ．  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（２０１３）１１５，  ２７９−２９０
【非特許文献１５】Ｖｉｋｔｏｒ  Ｒ  Ｄｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ  ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｃａｔａｌｙｓｔ  Ｆｅ（ＩＩＩ）ｔｅｔｒａｍｅｓｉｔｙｌｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  ｏｃｔａｓｕｌｆｏｎａｔｅ  ｏｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ．（２００７）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０（６）：７８３−７９２
【非特許文献１６】Ｔｏｍｉｙａｍａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍＲＮＡｓ  ｃｏｄｉｎｇ  ｆｏｒ  ＡＭＰＡ  ａｎｄ  ＮＭＤＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｕｎｉｔｓ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｏｒｓａｌ  ｈｏｒｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｍｏｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ（２００５）２０；１３６（１−２）：２７５−２８１
【非特許文献１７】Ｂｒｅｓｓｍａｎ  ＳＢ：Ｄｙｓｔｏｎｉａ  ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ，ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ，ａｎｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ａｄｖ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２００４（９４）１０１−１０７
【非特許文献１８】Ｐａｇｅ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ：Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  ｉｎ  ｆｏｃａｌ，ｓｅｇｍｅｎｔａｌ，ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｄｙｓｔｏｎｉａ，  Ｍｏｖ  Ｄｉｓｏｒｄ  ２００７，２２（３），３４１−３４７
【非特許文献１９】Ｅ．Ｚｏｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ：Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ｔｏｘｉｎ  ａｓ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｆｏｃａｌ  ｄｙｓｔｏｎｉａ：  ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏ−ｅｃｏｎｏｍｉｃ  ｖａｌｕｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２０１２，２５９（１２），２５１９−２５２６
【非特許文献２０】Ｔｅｒｍｓａｒａｓａｂ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ：Ｍｅｄｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｙｓｔｏｎｉａ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｏｖｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ２０１６，３（１９）
【非特許文献２１】ＲｉｃｈｔｅｒＡ  ｅｔ  ａｌ：Ｔｈｅ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ＮＢＱＸ  ｅｘｅｒｔｓ  ａｎｔｉｄｙｓｔｏｎｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｄｙｓｔｏｎｉａ  １９９３，２３１，２８７−２９１
【非特許文献２２】Ｈｏｒｖ&aacute;ｔｈ  Ａ  ｅｔ  ａｌ：Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ  ｓｅｉｚｕｒｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ．  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｉｓ．  Ａｓｓｏｃ．  Ｄｉｓｏｒｄ．  ２０１６，  ３０（２），１８６−１９２
【非特許文献２３】Ｖｏｓｓｅｌ  ＫＡ  ｅｔ  ａｌ：Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｐｉｌｅｐｔｉｆｏｒｍ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２０１６，８０（６），８５８−８７０
【非特許文献２４】Ｚａｒｅａ  Ａ  ｅｔ  ａｌ：Ｓｅｉｚｕｒｅｓ  ｉｎ  ｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ  ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０１６，８７（９），９１２−９１９
【非特許文献２５】Ｊｏｕｔｓａ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ−ｏｎｓｅｔ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ  ａｎｄ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｕｒｄｅｎ  ５  ｄｅｃａｄｅｓ  ｌａｔｅｒ．  ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２０１７，７４（５），５８３−５９０
【非特許文献２６】Ｍａｒｃｅｌｌｏ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ：ＳＡＰ９７−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｌｏｃａｌ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｉｓ  ａｌｔｅｒｅｄ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ’  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  Ａｇｉｎｇ，２０１２，３３（２），４２２．ｅ１−１０
【非特許文献２７】Ｇａｉｓｌｅｒ−Ｓａｌｏｍｏｎ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ：Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ＲＮＡ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｏｆ  ＧｌｕＡ２  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  Ａｇｉｎｇ，  ２０１４，３５（８），１７８５−１７９１
【非特許文献２８】Ｗｈｉｔｃｏｍｂ  ＤＪ  ｅｔ  ａｌ：Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｒａｐｉｄｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＧｌｕＡ１  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｐ．  ２０１５，５，１０９３４
【非特許文献２９】Ｂｅｚｚｉｎａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ：Ｅａｒｌｙ  ｏｎｓｅｔ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｓｅｉｚｕｒｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｇ２５７６  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１５，１０（３），ｅ０１１９９１０
【非特許文献３０】Ｓｉｗｅｋ  ＭＥ  ｅｔ  ａｌ：Ａｌｔｅｒｅｄ  ｔｈｅｔａ  ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ａｂｅｒｒａｎｔ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ５ＸＦＡＤ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎｅｕｒａｌ  Ｐｌａｓｔ．  ２０１５，２０１５，７８１７３１
【非特許文献３１】Ｌｉ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ：ＩＤＨ１  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｈｉｇｈｅｒ  ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｓｅｉｚｕｒｅ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｉｎ  ｌｏｗ−ｇｒａｄｅ  ｇｌｉｏｍａ：  Ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．  Ｓｅｉｚｕｒｅ  ２０１８，５５，７６−８２
【非特許文献３２】Ｎｅａｌ  Ａ  ｅｔ  ａｌ：Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｓｅｉｚｕｒｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ．  Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２０１６，５７（１１），１７７９−１７８８
【非特許文献３３】Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ  ＳＣ  ｅｔ  ａｌ：Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｙ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｒａｉｎ  ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ２０１１，１７（１０），１２６９−１２７４
【非特許文献３４】Ｉｓｈｉｕｃｈｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ：Ｂｌｏｃｋａｇｅ  ｏｆ  Ｃａ２＋−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ＡＭＰＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ２００２，８（９），９７１−９７８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
本発明の課題は、動物モデルでの抗振戦作用を示し、本態性振戦の治療剤としての利用可能性を有する、動物モデルでの抗ＳＦＮ作用を示し、ＳＦＮの治療剤としての利用可能性を有する、動物モデルでの抗ジストニア作用を示し、ジストニアの治療剤としての利用可能性を有する、動物モデルでのアルツハイマー病に伴うてんかんに対する抗痙攣作用を示し、アルツハイマー病に伴うてんかんの治療剤としての利用可能性を有する、動物モデルでの脳腫瘍に伴うてんかんに対する抗痙攣作用を示し、脳腫瘍に伴うてんかんの治療剤としての利用可能性を有する、または動物モデルでの脳腫瘍に対する抗腫瘍作用を示し、脳腫瘍の治療剤としての利用可能性を有する、化合物もしくはその薬剤学的に許容される塩を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、精力的に研究を重ねた結果、ピラノジピリジン化合物またはその薬剤学的に許容される塩が、ラットハルマリンモデルにおいてハルマリンにより誘発される振戦を抑制する効果を有していること、ラットＳＴＺモデルにおいてＳＴＺにより誘発される痛みを抑制する効果を有していること、ｄｔｓｚハムスターモデルにおいてジストニアを抑制する効果を確認できること、Ｔｇ２５７６マウスや５ＸＦＡＤマウスなどのＡＤモデルマウスにおいて痙攣を抑制する効果を確認できること、マウス頭蓋内ヒトグリオーマ細胞移植モデルにおいて痙攣を抑制する効果を確認できること、またはヒトグリオーマ細胞皮下移植マウスモデルにおいて抗腫瘍効果を確認できること、を見出し、本発明を完成した。【００３１】
すなわち、本発明は以下＜１＞から＜５３＞に関する。
＜１＞以下の群から選ばれる化合物：
２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル、
【化１】
2018207729.tif 000003
２−フルオロ−６−（８−オキソ−７−（ピリミジン−５−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２】
2018207729.tif 000004
および
２−フルオロ−６−（７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３】
2018207729.tif 000005
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦、小径線維ニューロパチー、ジストニア、アルツハイマー病に伴うてんかん、脳腫瘍に伴うてんかんまたは脳腫瘍治療剤。
＜２＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４】
2018207729.tif 000006
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦、小径線維ニューロパチー、ジストニア、アルツハイマー病に伴うてんかんまたは脳腫瘍に伴うてんかん治療剤。
＜３＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化５】
2018207729.tif 000007
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦または小径線維ニューロパチー治療剤。
＜４＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化６】
2018207729.tif 000008
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、本態性振戦または小径線維ニューロパチーの治療方法。
＜５＞本態性振戦または小径線維ニューロパチーの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化７】
2018207729.tif 000009
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜６＞本態性振戦または小径線維ニューロパチー治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化８】
2018207729.tif 000010
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜７＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化９】
2018207729.tif 000011
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦または小径線維ニューロパチー用組成物。
＜８＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１０】
2018207729.tif 000012
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦または小径線維ニューロパチー治療用の医薬組成物。
＜９＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜８＞に記載の医薬組成物。
＜１０＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１１】
2018207729.tif 000013
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦治療剤。
＜１１＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１２】
2018207729.tif 000014
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、本態性振戦の治療方法。
＜１２＞本態性振戦の治療に使用される、式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１３】
2018207729.tif 000015
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜１３＞本態性振戦治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１４】
2018207729.tif 000016
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜１４＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１５】
2018207729.tif 000017
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦用組成物。
＜１５＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１６】
2018207729.tif 000018
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する本態性振戦治療用の医薬組成物。
＜１６＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜１５＞に記載の医薬組成物。
＜１７＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル、
【化１７】
2018207729.tif 000019
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する小径線維ニューロパチー治療剤。
＜１８＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１８】
2018207729.tif 000020
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、小径線維ニューロパチーの治療方法。
＜１９＞小径線維ニューロパチーの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化１９】
2018207729.tif 000021
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜２０＞小径線維ニューロパチーの治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２０】
2018207729.tif 000022
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜２１＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２１】
2018207729.tif 000023
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する小径線維ニューロパチー用組成物
＜２２＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２２】
2018207729.tif 000024
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する小径線維ニューロパチー治療用の医薬組成物
＜２３＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜２２＞に記載の医薬組成物。
＜２４＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル、
【化２３】
2018207729.tif 000025
またはその薬剤学的に許容される塩を含有するジストニア治療剤。
＜２５＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２４】
2018207729.tif 000026
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、ジストニアの治療方法。
＜２６＞ジストニアの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２５】
2018207729.tif 000027
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜２７＞ジストニアの治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２６】
2018207729.tif 000028
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜２８＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２７】
2018207729.tif 000029
またはその薬剤学的に許容される塩を含有するジストニア治療用の医薬組成物
＜２９＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化２８】
2018207729.tif 000030
またはその薬剤学的に許容される塩を含有するジストニア治療用の医薬組成物
＜３０＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜２９＞に記載の医薬組成物。
＜３１＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル、
【化２９】
2018207729.tif 000031
またはその薬剤学的に許容される塩を含有するアルツハイマー病に伴うてんかん治療剤。
＜３２＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３０】
2018207729.tif 000032
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、アルツハイマー病に伴うてんかんの治療方法。
＜３３＞アルツハイマー病に伴うてんかんの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３１】
2018207729.tif 000033
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜３４＞アルツハイマー病に伴うてんかんの治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３２】
2018207729.tif 000034
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜３５＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３３】
2018207729.tif 000035
またはその薬剤学的に許容される塩を含有するアルツハイマー病に伴うてんかん用組成物
＜３６＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３４】
2018207729.tif 000036
またはその薬剤学的に許容される塩を含有するアルツハイマー病に伴うてんかん治療用の医薬組成物
＜３７＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜３６＞に記載の医薬組成物。
＜３８＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル、
【化３５】
2018207729.tif 000037
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する脳腫瘍に伴うてんかん治療剤。
＜３９＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３６】
2018207729.tif 000038
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、脳腫瘍に伴うてんかんの治療方法。
＜４０＞脳腫瘍に伴うてんかんの治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３７】
2018207729.tif 000039
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜４１＞脳腫瘍に伴うてんかんの治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３８】
2018207729.tif 000040
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜４２＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化３９】
2018207729.tif 000041
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する脳腫瘍に伴うてんかん用組成物
＜４３＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４０】
2018207729.tif 000042
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する脳腫瘍に伴うてんかん治療用の医薬組成物
＜４４＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜４３＞に記載の医薬組成物。
＜４５＞脳腫瘍がグリオーマである、上記治療剤、治療方法、化合物、使用、組成物または医薬組成物。
＜４６＞式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４１】
2018207729.tif 000043
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する脳腫瘍治療剤。
＜４７＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４２】
2018207729.tif 000044
またはその薬剤学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与する、脳腫瘍の治療方法。
＜４８＞脳腫瘍の治療に使用される、式（Ｉ）で表される２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４３】
2018207729.tif 000045
またはその薬剤学的に許容される塩。
＜４９＞脳腫瘍の治療剤の製造のための式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４４】
2018207729.tif 000046
またはその薬剤学的に許容される塩の使用。
＜５０＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４５】
2018207729.tif 000047
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する脳腫瘍用組成物
＜５１＞式（Ｉ）で表される、２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリル
【化４６】
2018207729.tif 000048
またはその薬剤学的に許容される塩を含有する脳腫瘍治療用の医薬組成物
＜５２＞さらに薬剤学的に許容される賦形剤を含有する、＜５１＞に記載の医薬組成物。
＜５３＞脳腫瘍がグリオーマである、上記治療剤、治療方法、化合物、使用、組成物または医薬組成物。
【発明の効果】
【００３２】
本発明のピラノジピリジン化合物またはその薬剤学的に許容される塩は、本態性振戦の動物モデルであるラットハルマリンモデルにおいてハルマリンによって誘発される振戦を抑制する効果、小径線維ニューロパチーの動物モデルであるラットＳＴＺモデルにおいてＳＴＺによって誘発される痛みを抑制する効果、ジストニアの動物モデルであるｄｔｓｚハムスターモデルにおいてジストニアを抑制する効果、アルツハイマー病の動物モデルであるＴｇ２５７６マウスおよび５ＸＦＡＤマウスにおいて痙攣を抑制する効果、脳腫瘍の動物モデルであるマウス頭蓋内ヒトグリオーマ細胞移植モデルにおいて痙攣を抑制する効果、または脳腫瘍の動物モデルであるヒトグリオーマ細胞皮下移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。したがって本発明にかかる化合物またはその薬剤学的に許容される塩は、本態性振戦、小径線維ニューロパチージストニア、アルツハイマー病に伴うてんかん、脳腫瘍に伴うてんかんまたは脳腫瘍の治療剤としての利用可能性を有している。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、本発明の内容について詳細に説明する。
【００３４】
本明細書中における化合物は、その構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、便宜上の式の記載に限定されるものではなく、化合物の構造上生ずるすべての幾何異性体、光学異性体、回転異性体、立体異性体、互変異性体等の異性体および異性体混合物を含み、いずれか一方の異性体でも、各異性体を任意の比率で含む混合物でもよい。したがって例えば、本明細書中の化合物には、光学異性体およびラセミ体が存在することがありえるが、本明細書においてはいずれにも限定されず、ラセミ体であっても、各光学活性体のいずれかであっても、各光学活性体を任意の比率で含む混合物でもよい。
【００３５】
また、結晶多形が存在することもあるが同様にいずれにも限定されず、いずれかの結晶形の単一物であっても混合物であってもよく、また、本発明には非晶質体も含まれ、そして、本発明に係る化合物には、無水物と溶媒和物（特に水和物）とが包含される。
【００３６】
本明細書における「薬剤学的に許容される塩」とは、本発明に係る化合物と塩を形成されるものであれば特に限定されず、具体的には例えば、無機酸塩、有機酸塩または酸性アミノ酸塩等の酸付加塩が挙げられる。
【００３７】
本明細書における「薬剤学的に許容される塩」とは、特に限定する記載がない限り、適宜な比で塩を形成しさえすれば、形成された塩において、当該化合物１分子に対する酸の分子数は特に限定されないが、一態様としては該化合物１分子に対して酸は、約０．１〜約５分子であり、別の態様としては該化合物１分子に対して酸は約０．５〜約２分子であり、さらに別の態様としては、当該化合物１分子に対して酸は、約０．５、約１、または約２分子である。
【００３８】
無機酸塩の具体的な一態様としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等が挙げられ、有機酸塩の具体的な一態様としては、例えば酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩等が挙げられる。
【００３９】
酸性アミノ酸塩の具体的な一態様としては、例えばアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などが挙げられる。
【００４０】
本発明に係るピラノジピリジン化合物がフリー体として得られる場合、前記の化合物が形成していてもよい塩またはそれらの水和物の状態に常法に従って変換することができる。
【００４１】
本発明に係るピラノジピリジン化合物が化合物の塩または化合物の水和物として得られる場合、前記の化合物のフリー体に常法に従って変換することができる。
【００４２】
また、本明細書中の化合物について得られる種々の異性体（例えば幾何異性体、光学異性体、回転異性体、立体異性体、互変異性体等）は、通常の分離手段、例えば、再結晶、ジアステレオマー塩法、酵素分割法、種々のクロマトグラフィー（例えば薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー等）を用いることにより精製し、単離することができる。
【００４３】
［製剤］
本発明に係る医薬組成物は、薬剤学的に許容される賦形剤をピラノジピリジン化合物またはその薬剤学的に許容される塩と混和することにより製造することができる。本発明に係る医薬組成物は例えば第十七改正日本薬局方の製剤総則、米国薬局方または欧州薬局方に記載の方法など既知の方法に従って製造することができる。
本発明に係る医薬組成物は、その剤形に応じて適切に患者に投与することができる。
【００４４】
本発明に係るピラノジピリジン化合物またはその薬剤学的に許容される塩の投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態・塩の種類、疾患の具体的な種類等に応じて異なるが、通常、成人の場合は１日あたり経口投与で約３０μｇ〜１０ｇ、一態様としては１００μｇ〜５ｇ、別の態様としては１００μｇ〜１ｇを、注射投与で約３０μｇ〜１ｇ、一態様としては１００μｇ〜５００ｍｇ、別の態様としては１００μｇ〜３００ｍｇをそれぞれ１回または数回に分けて投与する。
【００４５】
［併用］
本発明に係るピラノジピリジン化合物またはその薬剤学的に許容される塩は、本態性振戦の治療剤としては、例えばプリミドン、プロプラノロール、アルプラゾラム、ガバペンチン、ソタロール、トピラマート、クロナゼパム、クロザピンもしくはナドロール等と同時、別々に、連続してまたは間隔を空けて患者に投与することができる。また、小径線維ニューロパチー治療剤としては、例えば三環系抗うつ薬（ノルトリプチリン、アミトリプチリン、イミプラミン等）、Ｃａチャンネルα２δリガンド（プレガバリン、ガバペンチン等）、ノイロトロピン、セロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（デュロキセチン等）、抗不整脈薬（メキシレチン等）、アルドース還元酵素阻害薬（エパルレスタット等）、オキシコドン、カルバマゼピン、ラモトリギン、バクロフェン、トラマドール、コデイン、フェンタニル、モルヒネ、ブプレノルフィンもしくはペンタゾシン等と同時、別々に、連続してまたは間隔を空けて患者に投与することができる。さらにジストニア治療剤としては、例えばボツリヌス毒素、抗コリン薬（トリヘキシルフェニディル等）、抗てんかん薬（クロナゼパム、レベチラセタム等）、Ｌ−ｄｏｐａ製剤、非定型向精神薬（リスペリドン、クロザピン等）もしくは筋弛緩薬（バクロフェン等）等と同時、別々に、連続してまたは間隔を空けて患者に投与することができる。
【実施例】
【００４６】
本発明のピラノジピリジン化合物は、例えば、以下の製造例および参考例に記載した方法により製造することができ、また、当該化合物の効果は、以下の試験例に記載した方法により確認することができる。ただし、これらは例示的なものであって、本発明は、如何なる場合も以下の具体例に制限されるものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。【００４７】
文献名等が記載されている化合物は、その文献等に従って製造したことを示す。【００４８】
また、本明細書に使用される略号は当業者に周知の慣用的な略号である。本明細書においては下記の略号を使用する。
（Ａｔａｐｈｏｓ）２ＰｄＣｌ２：ビス（ジ−ｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＥＡＤ：ジ−２−メトキシエチル  アゾジカルボキシラート
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＭＴＢＥ：２−メトキシ−２−メチルプロパン
ｎ−：ノルマル
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ｔ−：ターシャリー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
１Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴スペクトルメトリー
ＭＳ：マススペクトルメトリー【００４９】
以下の製造例および参考例中の「室温」は通常約１０℃から約３５℃を示す。％は特記しない限り重量パーセントを示す。【００５０】
プロトン核磁気共鳴スペクトルの化学シフトは、テトラメチルシランに対するδ単位（ｐｐｍ）で記録され、カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で記録されている。分裂パターンの略号は以下の通りである。
ｓ：シングレット、ｄ：ダブレット、ｔ：トリプレット、ｑ：カルテット、ｍ：マルチプレット、ｂｒ．ｓ：ブロードシングレット。【００５１】
製造例および参考例においてマイクロウェーブ反応装置を用いた反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ社製ｉｎｉｔｉａｔｏｒＴＭまたはｉｎｉｔｉａｔｏｒ＋ＴＭを用いた。【００５２】
クロマトグラフィーに関して、シリカゲルは、Ｍｅｒｃｋ社製Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ６０（７０−２３０ｍｅｓｈ  ＡＳＴＭ）または富士シリシア化学社製ＰＳＱ６０Ｂを用いるか、プレパックカラム｛カラム：ＹＡＭＡＺＥＮ社製  Ｈｉ−ＦｌａｓｈＴＭ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ）、サイズ；Ｓ（１６×６０ｍｍ）、Ｍ（２０×７５ｍｍ）、Ｌ（２６×１００ｍｍ）、２Ｌ（２６×１５０ｍｍ）、３Ｌ（４６×１３０ｍｍ）のいずれか、またはＢｉｏｔａｇｅ社製ＢｉｏｔａｇｅＴＭＳＮＡＰ  Ｕｌｔｒａ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ、サイズ：１０ｇ、２５ｇ、５０ｇのいずれか｝を用いた。
ＮＨシリカゲルは、富士シリシア化学（株）製ＣＨＲＯＭＡＴＯＲＥＸ  ＮＨ−ＤＭ２０３５を用いるか、プレパックカラム｛カラム：ＹＡＭＡＺＥＮ社製  Ｈｉ−ＦｌａｓｈＴＭ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｉｎｏ）、サイズ；Ｓ（１６×６０ｍｍ）、Ｍ（２０×７５ｍｍ）、Ｌ（２６×１００ｍｍ）、２Ｌ（２６×１５０ｍｍ）、３Ｌ（４６×１３０ｍｍ）のいずれか、もしくは和光純薬工業社製  プレセップＴＭ（ルアーロック）ＮＨ２（ＨＣ）、サイズ：タイプＭ（１４ｇ／２５ｍＬ）、タイプL（３４ｇ／７０ｍＬ）、タイプ２L（５０ｇ／１００ｍＬ）、タイプ３L（１１０ｇ／２００ｍＬ）のいずれか｝を用いた。
中性アルミナはＡｌｕｍｉｎｉｕｍ  ｏｘｉｄｅ  ９０  ａｃｔｉｖｅ  ｎｅｕｔｒａｌ，７０−２３０ｍｅｓｈ，Ｍｅｒｃｋ，Ｅ６ＮＸＸを用いた。【００５３】
以下に示す化合物の命名は、一般的に用いられる試薬を除き、「Ｅ−ノートブック」バージョン１２（パーキンエルマー社）で表示されたものを用いた。【００５４】
製造例１
ベンジル  （３−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−４−メトキシ−２−オキソブト−３−エン−１−イル）カルボナート（Ｅ／Ｚ  ｍｉｘｔｕｒｅ）の合成
【化４７】
2018207729.tif 000049
（１）２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−１−モルホリノエタノンの合成
２，３，４，６，７，８−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピリミド［１，２−ａ］ピリミジン（１．９１ｇ，１３．７ｍｍｏｌ，０．３当量）、エチル  ２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）アセタート（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２０１１，１３３（３５），１４０８２−１４０８９のＳｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐ．２７）（ＣＡＳ  Ｎｏ．６７２２６−７８−２）（１０ｇ，４５．８ｍｍｏｌ，１当量）、モルホリン（４．４１ｍＬ，５０．４ｍｍｏｌ，１．１当量）および２−メチルテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）の混合物を６０℃にて終夜攪拌した。反応液を室温に戻した後、５％塩化アンモニウム水溶液、水で順次洗浄した。その溶液を減圧下濃縮し、標記化合物（１０．４ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．１１（ｓ，６Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），３．５４−３．７４（ｍ，８Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６０【００５５】
（２）１−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−３−ヒドロキシプロパン−２−オンの合成
３−（ベンジロキシ）−２−メチルピリジン（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，５１（１５），４７０８−４７１４のＳｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐ．２２）（ＣＡＳ  Ｎｏ．１７７５５９−０１−２）（４．４ｇ，２２．１ｍｍｏｌ，１当量）の２−メチルテトラヒドロフラン（４４ｍＬ）溶液に、−７８℃にてｎ−ブチルリチウム（２．６５Ｍ  ｎ−ヘキサン溶液，１０．０ｍＬ，２６．５ｍｍｏｌ，１．２当量）を加えた。反応液を−７８℃にて１時間攪拌した。その反応液を、２−（（ｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−１−モルホリノエタノン（６．８７ｇ，２６．５ｍｍｏｌ，１．２当量）の２−メチルテトラヒドロフラン（１３．２ｍＬ）溶液に−７８℃にて滴下した。反応液を−７８℃にて３０分攪拌した。反応液に５％塩化アンモニウム水溶液を加え、室温まで昇温させた。有機層を分離した。得られた有機層を５％塩化アンモニウム水溶液で洗浄した。得られた有機層に２Ｎ  塩酸（２６．４ｍＬ，５２．８ｍｍｏｌ，２．３９当量）を加え、室温で２時間攪拌した。水層を分離した。得られた水層を２Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液にて中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後、得られた溶液を使用した３−（ベンジロキシ）−２−メチルピリジンの約５倍量になるまで６０℃にて減圧下濃縮した。残った溶液を室温まで冷却した。この混合液にｎ−ヘプタン（５０ｍＬ）を加えた。沈殿をろ取した。得られた固体をＭＴＢＥで洗浄し、標記化合物（３．５３ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：３．４８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），４．０３（ｓ，２Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），７．１２−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．５５（ｍ，５Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５８【００５６】
（３）ベンジル （３−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−２−オキソプロピル）カルボナートの合成
１−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−３−ヒドロキシプロパン−２−オン（２１ｇ，８１．６ｍｍｏｌ，１当量）のＴＨＦ（２１０ｍＬ）溶液に、０℃でピリジン（８．５８ｍＬ，１０６ｍｍｏｌ，１．３当量）と１−カルボベンゾキシ−３−メチルイミダゾリウム  トリフラート（ＣＡＳ  Ｎｏ．１６３０８０−９９−７）（３５．９ｇ，９７．９ｍｍｏｌ，１．２当量）を加えた。反応液を室温で１６時間撹拌した後、ＭＴＢＥ、酢酸（８．５ｍＬ）および水を加え、有機層を分離した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮して標記化合物（３３ｇ）を粗生成物として得た。この粗生成物をさらに精製することなく次の反応に用いた。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９２【００５７】
（４）ベンジル  （３−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−４−メトキシ−２−オキソブト−３−エン−１−イル）カルボナート（Ｅ／Ｚ  ｍｉｘｔｕｒｅ）の合成
ベンジル  （３−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−２−オキソプロピル）カルボナート（３３ｇ）とオルトぎ酸トリメチル（ＣＡＳ  Ｎｏ．１４９−７３−５）（６６ｍＬ，６０３ｍｍｏｌ）の混合物に、室温で無水酢酸（１３２ｍＬ，１．４０ｍｏｌ）と酢酸（６６ｍＬ，１．１５ｍｏｌ）を加えた。反応液を７０℃で３時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１５％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（２９．２ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：３．８４（ｓ，０．８５ｘ３Ｈ），３．９４（ｓ，０．１５ｘ３Ｈ），４．７４（ｓ，０．８５ｘ２Ｈ），５．０４（ｓ，０．１５ｘ２Ｈ），５．１０（ｓ，０．８５ｘ２Ｈ），５．１１（ｓ，０．１５ｘ２Ｈ），５．１７（ｓ，０．８５ｘ２Ｈ），５．１９（ｓ，０．１５ｘ２Ｈ），７．１０−７．４３（ｍ，０．８５ｘ１２Ｈ  ａｎｄ  ０．１５ｘ１３Ｈ），７．６４（ｓ，０．８５ｘ１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝４．０，２．２Ｈｚ，０．１５ｘ１Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．５Ｈｚ，０．８５ｘ１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３４【００５８】
参考例１
２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリルの合成
【化４８】
2018207729.tif 000050
（１）３−ブロモ−６−メトキシ−２−（（メトキシメトキシ）メチル）ピリジンの合成
（３−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）メタノール（ＣＡＳ  Ｎｏ．６２３９４２−８４−７）（２．１５ｇ，９．８６ｍｍｏｌ，１当量）、クロロメチル  メチル  エーテル（２．２５ｍＬ，２９．６ｍｍｏｌ，３当量）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．６１ｍＬ，４９．３ｍｍｏｌ，５当量）の混合物をＤＣＭ（４５ｍＬ）溶液中、室温にて１５時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨシリカゲル、０％−５％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（２．２２ｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６２【００５９】
（２）（６−メトキシ−２−（（メトキシメトキシ）メチル）ピリジン−３−イル）ボロン酸の合成
３−ブロモ−６−メトキシ−２−（（メトキシメトキシ）メチル）ピリジン（１．０９ｇ，４．１６ｍｍｏｌ，１当量）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を−７８℃に冷却し、ｎ−ブチルリチウム（２．６９Ｍ  ｎ−ヘキサン溶液，１．７０ｍＬ，４．５８ｍｍｏｌ，１．１当量）を加えた。反応液を同温度で１時間攪拌した後、ホウ酸トリメチル（０．６９６ｍＬ，６．２４ｍｍｏｌ，１．５当量）を加えた。反応液を室温まで昇温させながら１２時間攪拌した後、減圧下濃縮した。残渣に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ＤＣＭで抽出した。有機層を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（５７０ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：３．４２（ｓ，３Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．７５（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｓ，２Ｈ），６．３２（ｓ，２Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２２８【００６０】
（３）３，５−ジフルオロ−６’−メトキシ−２’−（（メトキシメトキシ）メチル）−２，３’−ビピリジンの合成
（６−メトキシ−２−（（メトキシメトキシ）メチル）ピリジン−３−イル）ボロン酸（５７０ｍｇ，２．５１ｍｍｏｌ，１当量）、２−ブロモ−３，５−ジフルオロピリジン（ＣＡＳ  Ｎｏ．６６０４２５−１６−１）（５６０ｍｇ，２．８９ｍｍｏｌ，１．１５当量）、フッ化カリウム（４３８ｍｇ，７．５３ｍｍｏｌ，３当量）、（Ａｔａｐｈｏｓ）２ＰｄＣｌ２（８９ｍｇ，０．１２６ｍｍｏｌ，０．０５当量）、１，４−ジオキサン（１２ｍＬ）および水（３ｍＬ）の混合物を、マイクロウェーブ反応装置中１３０℃にて４時間反応させた。反応液を室温まで冷却した後、そのままシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨシリカゲルの上にシリカゲル、５％−３５％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（６４８ｍｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９７【００６１】
（４）３，５−ジフルオロ−２’−（ヒドロキシメチル）−［２，３’−ビピリジン］−６’−オールの合成
３，５−ジフルオロ−６’−メトキシ−２’−（（メトキシメトキシ）メチル）−２，３’−ビピリジン（６４８ｍｇ，２．１９ｍｍｏｌ，１当量）および４８％臭化水素酸水溶液（１．９８ｍＬ，１７．５ｍｍｏｌ，８当量）の混合物をＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液中、５５℃にて８時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、減圧下濃縮した。残渣に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびＤＣＭを加えた。その混合物を室温にて１時間攪拌した後、生じた沈殿をろ取した。得られた固体を水で洗浄し、標記化合物（３４９ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：４．３３（ｓ，２Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝９．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１，８．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３９【００６２】
（５）３−フルオロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オンの合成
３，５−ジフルオロ−２’−（ヒドロキシメチル）−［２，３’−ビピリジン］−６’−オール（３２９ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ，１当量）および炭酸カリウム（５７３ｍｇ，４．１４ｍｍｏｌ，３当量）の混合物をＤＭＦ（７ｍＬ）溶液中、１００℃にて５時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、塩化アンモニウム水溶液を加えた。その混合物を室温にて３０分攪拌した後、生じた沈殿をろ取した。得られた固体を水およびｎ−ヘプタンで洗浄し、標記化合物（２５１ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：５．２０（ｓ，２Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝９．７，２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１９【００６３】
（６）３−フルオロ−７−（ピリジン−３−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オンの合成
３−フルオロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オン（２５０ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ，１当量）、炭酸銀（４７４ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ，１．５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（１３１ｍｇ，０．６８７ｍｍｏｌ，０．６当量）およびピリジン（０．９２７ｍＬ，１１．５ｍｍｏｌ，１０当量）の混合物をＤＭＦ（７ｍＬ）およびＤＭＳＯ（９ｍＬ）の混合溶媒中、８０℃にて２０分攪拌した。反応液にピリジン−３−ボロン酸１，３−プロパンジオールサイクリックエステル（ＣＡＳ  Ｎｏ．１３１５３４−６５−１）（３７３ｍｇ，２．２９ｍｍｏｌ，２当量）のＤＭＦ（４ｍＬ）およびＤＭＳＯ（１ｍＬ）の混合溶液をゆっくり加えた。反応液を８０℃にて２０時間攪拌した後、シリカゲルパッド（ＮＨシリカゲルとシリカゲル）に供し、酢酸エチルで溶出した。得られた溶液を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲルの上にＮＨシリカゲル、１０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン、１０％メタノール／酢酸エチル）で精製して標記化合物（４３．５ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．６４−４．７３（ｍ，１Ｈ），４．７７−４．８６（ｍ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．５８（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．７２（ｍ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９６【００６４】
（７）９−ブロモ−３−フルオロ−７−（ピリジン−３−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オンの合成
３−フルオロ−７−（ピリジン−３−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オン（４３．５ｍｇ，０．１４７ｍｍｏｌ，１当量）およびＮＢＳ（３１．５ｍｇ，０．１７７ｍｍｏｌ，１．２当量）の混合物をアセトニトリル（３ｍＬ）溶液中、室温にて１５時間攪拌した。反応液をそのままシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲルの上にＮＨシリカゲル、１０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（３３ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．６０−４．７０（ｍ，１Ｈ），４．７４−４．８３（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．１，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６５−７．７２（ｍ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｎａ］＋＝３９６【００６５】
（８）２−フルオロ−６−（３−フルオロ−８−オキソ−７−（ピリジン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリルの合成
９−ブロモ−３−フルオロ−７−（ピリジン−３−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オン（１６．５ｍｇ，０．０４４ｍｍｏｌ，１当量）、２−シアノ−３−フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（ＣＡＳ  Ｎｏ．７６５９１６−９１−４）（１４．２ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ，１．３当量）、（Ａｔａｐｈｏｓ）２ＰｄＣｌ２（１．５６ｍｇ，２．２１μｍｏｌ，０．０５当量）、トリエチルアミン（０．０２５ｍＬ，０．１７６ｍｍｏｌ，４当量）、１，４−ジオキサン（０．５ｍＬ）および水（０．１５ｍＬ）の混合物を、マイクロウェーブ反応装置中１３０℃にて２．５時間反応させた。反応液をそのままシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲルの上にＮＨシリカゲル、５％−９０％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（１１．０ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．７１−４．８０（ｍ，１Ｈ），４．８６−４．９５（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．２８（ｍ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｔｄ，Ｊ＝８．２，５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，２．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｓ，１Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．６Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１５【００６６】
参考例２
２−フルオロ−６−（８−オキソ−７−（ピリミジン−５−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリルの合成
【化４９】
2018207729.tif 000051
（１）ｔ−ブチル  ３−オキソ−３−（ピリミジン−５−イルアミノ）プロパノアートの合成
５−アミノピリミジン（ＣＡＳ  Ｎｏ．５９１−５５−９）（２．００ｇ，２１．０ｍｍｏｌ，１当量）、トリエチルアミン（１４．７ｍＬ，１０５ｍｍｏｌ，５当量）、ＥＤＣ（７．２６ｇ，３７．９ｍｍｏｌ，１．８当量）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（０．２５７ｇ，２．１０ｍｍｏｌ，０．１当量）、およびＤＣＭ（６０．０ｍＬ）の混合物に、３−（ｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピオン酸（ＣＡＳ  Ｎｏ．４００５２−１３−９）（４．８６ｍＬ，３１．５ｍｍｏｌ，１．５当量）を滴下し、室温で３日間攪拌した。反応液に水と酢酸エチルを加えた。有機層を、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％−７１％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製し、標記化合物（４．７３ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５２（ｓ，９Ｈ），３．４４（ｓ，２Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），９．０３（ｓ，２Ｈ），９．７７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．【００６７】
（２）ｔ−ブチル  ３−（ベンジロキシ）−２’−（（（（ベンジロキシ）カルボニル）オキシ）メチル）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−カルボキシラートの合成
製造例１で得たベンジル  （３−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−４−メトキシ−２−オキソブト−３−エン−１−イル）カルボナート（Ｅ／Ｚ  ｍｉｘｔｕｒｅ）（３．０５ｇ，７．０３ｍｍｏｌ，１当量）のプロピオニトリル（５０．０ｍＬ）溶液にｔ−ブチル  ３−オキソ−３−（ピリミジン−５−イルアミノ）プロパノアート（２．００ｇ，８．４３ｍｍｏｌ，１．２当量）、臭化リチウム（１．２２ｇ，１４．１ｍｍｏｌ，２当量）、トリエチルアミン（３．４３ｍＬ，２４．６ｍｍｏｌ，３．５当量）を０℃で順次加えた。同温で５分間攪拌後、反応液を室温まで昇温し、１２時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。併せた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨシリカゲル、２０％−７５％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製した。得られた粗生成物をＭＴＢＥ／ｎ−ヘプタンの混合溶液でトリチュレーションし、標記化合物（２．３０ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５５（ｓ，９Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），７．２４−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．４２（ｍ，１１Ｈ），８．２６（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，２Ｈ），９．２１（ｓ，１Ｈ）．【００６８】
（３）ベンジル  （（３−（ベンジロキシ）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−２’−イル）メチル）カルボナートの合成
ｔ−ブチル  ３−（ベンジロキシ）−２’−（（（（ベンジロキシ）カルボニル）オキシ）メチル）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−カルボキシラート（１．５６ｇ，２．５１ｍｍｏｌ，１当量）に塩化水素（４Ｍ  酢酸エチル溶液）（６．２８ｍＬ，２５．１ｍｍｏｌ，１０当量）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣にＤＭＳＯ（４６．８ｍＬ）、および酢酸リチウム二水和物（２．５６ｇ，２５．１ｍｍｏｌ，１０当量）を加え、反応液を１２０℃にて４時間攪拌した。反応液を室温に冷却後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。併せた有機層を、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０％−８３酢酸エチル／ｎ−ヘプタン、５％メタノール／酢酸エチル）で精製し標記化合物（５８８ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．６９（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２７−７．４２（ｍ，１２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｓ，２Ｈ），９．２３（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５２１【００６９】
（４）ベンジル  （（３−（ベンジロキシ）−５’−ブロモ−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−２’−イル）メチル）カルボナートの合成
ベンジル  （（３−（ベンジロキシ）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−２’−イル）メチル）カルボナート（５６０ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ，１当量）のＤＭＦ（５．００ｍＬ）溶液にＮＢＳ（２８７ｍｇ，１．６１ｍｍｏｌ，１．５当量）を室温にて加え、室温で１８時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。併せた有機層を、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０％−７７％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製し標記化合物（５９５ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．６６（ｓ，２Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），７．２６−７．４２（ｍ，１２Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝４．５，１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｓ，２Ｈ），９．２３（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９９，６０１【００７０】
（５）ベンジル  （（３−（ベンジロキシ）−５’−（２−シアノ−３−フルオロフェニル）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−２’−イル）メチル）カルボナートの合成
ベンジル  （（３−（ベンジロキシ）−５’−ブロモ−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−２’−イル）メチル）カルボナート（５９０ｍｇ，０．９８４ｍｍｏｌ，１当量）、２−シアノ−３−フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（ＣＡＳ  Ｎｏ．７６５９１６−９１−４）（３６５ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ，１．５当量）、（Ａｔａｐｈｏｓ）２ＰｄＣｌ２（３４．８ｍｇ，０．０４９ｍｍｏｌ，０．０５当量）、フッ化カリウム（１７２ｍｇ，２．９５ｍｍｏｌ，３当量）、１，４−ジオキサン（１５．０ｍＬ）および水（３．０ｍＬ）の混合物を、マイクロウェーブ反応装置中１２０℃にて３０分間反応させた。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。併せた有機層を、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０％−８３％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製し標記化合物（５１１ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．７６（ｓ，２Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２７−７．３７（ｍ，１３Ｈ），７．５７（ｔｄ，Ｊ＝８．２，５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｓ，２Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝６４０【００７１】
（６）２−フルオロ−６−（３−ヒドロキシ−２’−（ヒドロキシメチル）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−イル）ベンゾニトリルの合成
ベンジル  （（３−（ベンジロキシ）−５’−（２−シアノ−３−フルオロフェニル）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−２’−イル）メチル）カルボナート（５０５ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ，１当量）、５％パラジウム炭素（８４．０ｍｇ，０．０３９ｍｍｏｌ，０．０５当量）、およびエタノール（２０．０ｍＬ）の混合物を水素雰囲気下、室温にて６時間激しく攪拌した。反応液を窒素置換後、ろ過した。得られたろ液を減圧下濃縮し標記化合物（３１１ｍｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１６【００７２】
（７）２−フルオロ−６−（８−オキソ−７−（ピリミジン−５−イル）−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリルの合成
２−フルオロ−６−（３−ヒドロキシ−２’−（ヒドロキシメチル）−６’−オキソ−１’−（ピリミジン−５−イル）−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−イル）ベンゾニトリル（３１１ｍｇ，０．７４９ｍｍｏｌ，１当量）、トリフェニルホスフィン（２９５ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ，１．５当量）、およびＴＨＦ（１０．０ｍＬ）の混合物に、ＤＭＥＡＤ（２６３ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ，１．５当量）を室温にてゆっくり加え、１０分間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。併せた有機層を、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％−６３％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製し標記化合物（１１０ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：４．８２（ｓ，２Ｈ），７．１２−７．１７（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．２３（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｔｄ，Ｊ＝８．１，５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝４．５，１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｓ，２Ｈ），９．３９（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９８【００７３】
参考例３
２−フルオロ−６−（７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリルの合成
【化５０】
2018207729.tif 000052
（１）ｔ−ブチル  ３−（（２−メチルピリミジン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロパノアートの合成
３−（ｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピオン酸（ＣＡＳ  Ｎｏ．４００５２−１３−９）（１．６１ｇ，１０．１ｍｍｏｌ，１．１当量）、２−メチル−５−ピリミジンアミン（ＣＡＳ  Ｎｏ．３９８８９−９４−６）（１．００ｇ，９．１６ｍｍｏｌ，１．０当量）、トリエチルアミン（１．５３ｍＬ，１１．０ｍｍｏｌ，１．２当量）、ＥＤＣ（２．１１ｇ，１１．０ｍｍｏｌ，１．２当量）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）の混合物を、１時間加熱還流させた。反応液を室温まで冷却した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ＤＣＭで抽出した。有機層を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（２．２１ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．５３（ｓ，９Ｈ），２．７２（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），８．９１（ｓ，２Ｈ），９．６４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．【００７４】
（２）ｔ−ブチル  ３−（ベンジロキシ）−２’−（（（（ベンジロキシ）カルボニル）オキシ）メチル）−１’−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６’−オキソ−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−カルボキシラートの合成
ｔ−ブチル  ３−（（２−メチルピリミジン−５−イル）アミノ）−３−オキソプロパノアート（３１３ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ，１．２当量）、臭化リチウム（１８０ｍｇ，２．０８ｍｍｏｌ，２．０当量）、製造例１で得たベンジル  （３−（３−（ベンジロキシ）ピリジン−２−イル）−４−メトキシ−２−オキソブト−３−エン−１−イル）カルボナート（Ｅ／Ｚ  ｍｉｘｔｕｒｅ）（４５０ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ，１．０当量）、トリエチルアミン（０．５０６ｍＬ，３．６３ｍｍｏｌ，３．５当量）、およびプロピオニトリル（５．００ｍＬ）の混合物を室温にて１０分間攪拌した。反応液をそのままシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、４０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製して標記化合物（４８０ｍｇ）を得た。
ＭＳｍ／ｚ＝６３６【００７５】
（３）ｔ−ブチル  ３−ヒドロキシ−２’−（ヒドロキシメチル）−１’−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６’−オキソ−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−カルボキシラートの合成
ｔ−ブチル  ３−（ベンジロキシ）−２’−（（（（ベンジロキシ）カルボニル）オキシ）メチル）−１’−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６’−オキソ−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−カルボキシラート（４８０ｍｇ，０．７５６ｍｍｏｌ，１．０当量）、１０％パラジウム炭素（５３．９％含水品）（８０．０ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ，０．０４６当量）、およびメタノール（３．００ｍＬ）の混合物を水素雰囲気下、室温にて４０分間攪拌した。反応液をセライトＴＭろ過し、残渣を酢酸エチルで洗浄した。得られたろ液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０％−２０％メタノール／酢酸エチル）で精製し標記化合物（２５０ｍｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１１【００７６】
（４）ｔ−ブチル  ７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−カルボキシラートの合成
ｔ−ブチル  ３−ヒドロキシ−２’−（ヒドロキシメチル）−１’−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６’−オキソ−１’，６’−ジヒドロ−［２，３’−ビピリジン］−５’−カルボキシラート（２５０ｍｇ，０．６０９ｍｍｏｌ，１．０当量）、トリフェニルホスフィン（２２４ｍｇ，０．８５３ｍｍｏｌ，１．４当量）、およびＴＨＦ（３．００ｍＬ）の混合物に、ＤＭＥＡＤ（２００ｍｇ，０．８５３ｍｍｏｌ，１．４当量）のＴＨＦ（１．００ｍＬ）溶液を０℃にて加えた。反応の進行を確認した後、反応液を約半分の溶液量になるまで減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、４０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製し標記化合物（２３９ｍｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９３【００７７】
（５）７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オンの合成
ｔ−ブチル  ７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−カルボキシラート（２３９ｍｇ，０．６０９ｍｍｏｌ，１．０当量）にＴＦＡ（３．００ｍＬ）を加え、反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣にＤＭＳＯ（３．００ｍＬ）、および酢酸リチウム二水和物（３１１ｍｇ，３．０５ｍｍｏｌ，５．０当量）を加え、反応液を１２０℃にて３０分間攪拌した。反応液に１０％塩化ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過後減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨシリカゲル、６０％−８０％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０％−１５％メタノール／酢酸エチル）で再度精製し標記化合物（３４．０ｍｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９３【００７８】
（６）９−ブロモ−７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オンの合成
７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オン（３４．０ｍｇ，０．１１６ｍｍｏｌ，１．０当量）、ＮＢＳ（３１．１ｍｇ，０．１７４ｍｍｏｌ，１．５当量）、およびＤＭＦ（３．００ｍＬ）の混合物を５０℃にて３０分間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０％−２５％メタノール／酢酸エチル）で精製して標記化合物（２２．０ｍｇ）を得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７１【００７９】
（７）２−フルオロ−６−（７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−９−イル）ベンゾニトリルの合成
９−ブロモ−７−（２−メチルピリミジン−５−イル）−６Ｈ−ピラノ［３，２−ｂ：５，４−ｂ’］ジピリジン−８（７Ｈ）−オン（２２．０ｍｇ，０．０５９ｍｍｏｌ，１．０当量）、２−シアノ−３−フルオロフェニルボロン酸ピナコールエステル（ＣＡＳ  Ｎｏ．７６５９１６−９１−４）（２２．０ｍｇ，０．０８９ｍｍｏｌ，１．５当量）、（Ａｔａｐｈｏｓ）２ＰｄＣｌ２（４．２０ｍｇ，５．９３μｍｏｌ，０．１当量）、フッ化カリウム（１０．３ｍｇ，０．１７８ｍｍｏｌ，３．０当量）、１，４−ジオキサン（０．８ｍＬ）および水（０．４ｍＬ）の混合物を、マイクロウェーブ反応装置中１４０℃にて１０分間反応させた。反応液をそのままシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、８０％−１００％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で精製した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＮＨシリカゲル、５０％−８０％酢酸エチル／ｎ−ヘプタン）で再度精製して標記化合物（１１．５ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：２．８８ (ｓ，３Ｈ) ， ４．８４ (ｓ，２Ｈ) ，７．０８−７．３２ (ｍ，３Ｈ) ，７．４４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｔｄ，Ｊ＝８．１，５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，２Ｈ）．
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２【００８０】
（薬理試験例）
本発明者らは、ＡＭＰＡ受容体阻害作用、振戦に対する抑制効果、ＳＦＮに対する抑制効果、抗ジストニア効果、ＡＤ関連てんかんに対する抗痙攣効果、グリオーマ関連てんかんに対する抗痙攣効果およびグリオーマに対する抗腫瘍効果を確認するために以下の試験を行った、または行うことができる。【００８１】
［試験例１］ＡＭＰＡ誘発神経細胞内カルシウム流入抑制作用
化合物のＡＭＰＡ受容体阻害作用はＡＭＰＡ誘発による神経細胞へのカルシウム流入抑制作用をラット胎児大脳皮質神経細胞初代培養系により検討した。
＜培養条件＞イソフルラン麻酔した胎生１８日のウィスター系ラット（日本チャールス・リバー）の子宮より全胎仔を摘出した。全胎仔の全脳を摘出し，Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ  Ｌ−１５培地または２０％ウシ胎児血清入りハンクス平衡塩溶液中で大脳皮質を分離した。トリプシン／ＤＮａｓｅ溶液で３７℃、４５〜６０分間処理した。トリプシン反応停止のため血清を加えた後、１２００〜１５００ｒｐｍ、３〜５分間遠心した。上清を除去後、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（２％Ｂ−２７  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ等を含む。以下Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地）を添加し、静かにピペッティングを行い、細胞が単一になるように分散させた。細胞懸濁液を軽く撹拌後ナイロンメッシュフィルターでろ過した。生存細胞を血算盤を用いて計数し、８〜１０ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるようにＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地で希釈した。９６ウェルプレートに１００μＬずつ細胞を播種しＣＯ２インキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）で培養した。２４時間後培地交換を行い、７日から２１日培養した神経細胞を使用した。
アッセイ当日、培地を除き５〜１０μｍｏｌ／Ｌ  Ｆｕｒａ２−ＡＭを含むカルシウム測定溶液（１４０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム，５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム，２ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、３ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウム，２４ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｄ（＋）−グルコース，１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ，１μｍｏｌ／Ｌ  ＭＫ−８０１，ｐＨ７．４）に置き換え、ＣＯ２  インキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）で１〜２時間処置した。その後、Ｆｕｒａ−２ＡＭ溶液を含むカルシウム測定溶液を除き、各ウェルの神経細胞をカルシウム測定溶液で各ウェルを２回洗浄後、５０μＬカルシウム測定溶液を各ウェルに添加した。その後、終濃度の３倍濃い濃度で調製した試験化合物または媒体を５０μＬ添加し、約１５分前処置した。その後プレートをＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｄｒｕｇ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ  ６０００（浜松ホトニクス社製）にセットした。刺激はカルシウム測定用溶液で３．３μｍｏｌ／Ｌに調製したＡＭＰＡ刺激溶液を５０μＬで各ウェルに添加することにより行った。カルシウム濃度変化は励起波長３４０ｎｍおよび３８０ｎｍ（測定波長５４０ｎｍ）での蛍光強度の変化として測定した。細胞内カルシウム濃度変化率は以下の式で算出した。
細胞内カルシウム濃度上昇率（％コントロール）＝（Ｔｐｏｓｔ−Ｔｐｒｅ）／（Ｃｐｏｓｔ−Ｃｐｒｅ）×１００
Ｔｐｏｓｔ：検体ウェルの刺激後蛍光割合、Ｔｐｒｅ：検体ウェルの刺激前蛍光割合、Ｃｐｏｓｔ：コントロールウェルの刺激後蛍光割合、Ｃｐｒｅ：コントロールウェルの刺激前蛍光割合
また、試験化合物のＡＭＰＡ阻害に対するＩＣ５０値は、種々の濃度における細胞内カルシウム濃度上昇率より求めた。
結果を表１に示す。この結果から、化合物（Ｉ）〜（ＩＩＩ）は充分なＡＭＰＡ受容体阻害作用を有することが明らかとなった。【００８２】
【表１】
2018207729.tif 000053
【００８３】
［試験例２］ラットハルマリンモデル
振戦に対する抑制効果を確認するため、ラットを使用したハルマリンモデル試験を実施した。このモデルでは、ハルマリンを投与した後に観察される平衡感覚障害が評価指標となる（Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒ，５９０，ｐ８４−９０（２０１５））。
＜方法＞
４週齢の雄性ＳＤラット（チャールズリバー）を試験に供した（各処置でｎ＝５を計２回実施）。ハルマリンによって誘発される平衡感覚障害（振戦症状の１つ）を評価の指標とした（上記文献）。
経口投与用に化合物は０．４％メチルセルロース／５％クレモフォア／５％  １Ｎ塩酸／１０％ジメチルスルホキシド溶液に５ｍｌ／ｋｇの投与容量になるように調製し、経口投与した。ネガティブコントロールとして、化合物を含まない上記混合溶媒（Ｖｅｈｉｃｌｅ）のみを使用した。４ｍｇ／ｍｌハルマリン溶液は、ハルマリン（シグマ）を生理食塩水（大塚製薬）に希釈して調製した。化合物投与２０分後に４ｍｇ／ｍｌハルマリン溶液を腹腔内投与した（投与用量：２０ｍｇ／ｋｇ）。ハルマリン投与５分後から１５分後の１０分間において、平衡感覚障害を観察し、０，１，２，３の４段階でスコア化した。
結果は、平均値±標準偏差で表した。統計解析にはＤｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定を用い、ｐ＜０．０５を統計学的有意差として判断した。
＜結果＞
ハルマリンモデルの結果を表２に示す。化合物（Ｉ）の前投与によって、振戦スコアが統計学的有意に減少した。この結果は、本願薬剤の本態性振戦の動物モデルに対する有効性を示すものである。【００８４】
【表２】
2018207729.tif 000054
【００８５】
［試験例３］ラットＳＴＺモデル
ＳＦＮモデルにおける鎮痛効果を確認するために、ラットを使用したＳＴＺモデル試験を実施した。ＳＴＺ投与２週間後に惹起される痛みに対する化合物の効果を検討した。
＜方法＞
試験には７週齢の雄性ＳＤラット（チャールズリバー）を用いた。予め遮光瓶に分注しておいたＳＴＺを６５  ｍｇ／ｍＬとなるよう、氷冷した生理食塩液（株式会社大塚製薬工場）を加え、氷冷しながら静かに転倒混和して溶解させた。溶解後は氷冷下で保存し、調製開始から２０分以内に使用した。動物を約２０時間の絶食後にイソフルランにて麻酔し、１  ｍＬシリンジ及び２６Ｇ注射針を用いてＳＴＺ  ６５  ｍｇ／ｍＬ溶液を尾静脈より１  ｍＬ／ｋｇの容量で約１５秒かけて投与した。ＳＴＺ投与１４日後に体重及び薬剤投与前疼痛反応の測定を行い（下記疼痛反応の項目参照）ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｔｅｓｔで機械刺激に対する５０％反応閾値が６  ｇ以下を示す動物を選択し、５０％反応閾値及び体重が群間で差がないように群分けした。
経口投与用に化合物はＤＭＳＯ：１ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ：Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ：０．５％  Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ＝１０：５：５：８０に１０ｍＬ／ｋｇの投与容量になるように調製し、経口投与した。ネガティブコントロールとして、化合物を含まない上記混合溶媒（Ｖｅｈｉｃｌｅ）のみを使用した。
疼痛反応の評価はｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｔｅｓｔによりブラインド下で実施し、疼痛反応測定者は群分け及び投与には関わらなかった。ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｔｅｓｔによる５０％反応閾値の測定は、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｆｉｌａｍｅｎｔｓを用いＣｈａｐｌａｎらの方法（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９９４；５３：５５−６３）に従って行った。動物を床が金網製の測定用ケージに測定予定時刻の約３０分前に入れ、静置して環境の変化に慣らし、落ち着いたことを確認後、測定を開始した。左後肢の足裏真中へｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｆｉｌａｍｅｎｔｓ（ｂｅｎｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ：０．４、０．６、１、２、４、６、８、１５ｇ；２ｇから開始）を、ｆｉｌａｍｅｎｔが曲がるまで垂直に約６秒間押し当て、回避反応（足を引っ込める等）を観察した。Ｄｉｘｏｎのｕｐ−ｄｏｗｎ法（Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  １９８０；２０：４４１−４６２）に従って５０％反応閾値を算出した。測定はＤａｙ  １４の薬剤投与前、投与３０、９０及び１８０分後の４時点で実施した。
結果は、平均値±標準偏差で表した。統計解析にはＤｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定を用い、有意水準はいずれも両側５％とした。
＜結果＞
ＳＴＺモデルの結果を表３に示す。化合物（Ｉ）前投与によって有意な鎮痛効果が認められた。この結果は、本願薬剤のＳＦＮの動物モデルに対する有効性を示すものである。【００８６】
【表３】
2018207729.tif 000055
【００８７】
［試験例４］ｄｔｓｚ  ハムスターモデル
ジストニアモデルにおける抗ジストニア効果を確認するために、ｄｔｓｚハムスターを用いた試験を実施する。
＜方法＞
試験には自発ジストニアを発症する雄性ｄｔｓｚ  ハムスター（３０日から４０日齢）を用いる。経口投与用に化合物はＤＭＳＯ：１ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ：Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ：０．５％  Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ＝１０：５：５：８０に１０ｍＬ／ｋｇの投与容量になるように調製し、経口投与する。ネガティブコントロールとして、化合物を含まない上記混合溶媒（Ｖｅｈｉｃｌｅ）のみを使用する。ジストニアの評価はブラインド下で実施する。化合物評価の２日前にハムスターを新しいプラスチックケージに入れて３時間観察し、発症するジストニアをＥｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９９３，２３１，２８７−２９１に従って０−６の７段階でスコア化する（Ｐｒｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ）。化合物試験の日に、化合物（Ｉ）を０．６，２，６  ｍｇ／ｋｇで経口投与し、新しいプラスチックケージに入れ３時間観察し、発症するジストニアをスコア化する。その２日後、無処置のハムスターを新しいプラスチックケージにおいて発症するジストニアをスコア化し（Ｐｏｓｔ−ｃｏｎｔｒｏｌ）、Ｐｒｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ値とＰｏｓｔ−ｃｏｎｔｒｏｌ値のスコアの差が２以上ある個体はばらつきが大きいと判断し除外する。Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群に対する化合物投与による抗ジストニア作用をＷｉｌｃｏｘｏｎの符号順位検定により有意性を検討する。【００８８】
［試験例５］ＡＤ関連てんかんモデル
ＡＤ関連てんかんモデルにおける抗痙攣効果を確認するために、Ｔｇ２５７６マウス及び５ＸＦＡＤマウスを用いた試験を実施する。
＜方法＞
試験にはＴｇ２５７６マウス及び５ＸＦＡＤマウスを用いる。化合物は１０ｍＬ／ｋｇの投与容量になるようにｖｅｈｉｃｌｅ（１０％ＤＭＳＯ，０．０５ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ，５％  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ，および０．４％  Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）を用いて調製し、経口投与する。化合物を含まないｖｅｈｉｃｌｅのみをネガティブコントロールとして使用する。抗痙攣効果の評価は痙攣閾値の測定あるいは脳波測定により行う。
痙攣閾値に対する効果を評価する試験においては、化合物あるいはｖｅｈｉｃｌｅを投与後角膜電気刺激により痙攣を誘発する。刺激電流の強さを変化させた時の痙攣の有無を目視で判定し、ｕｐ―ｄｏｗｎ法（Ｋｉｍｂａｌｌ  ＡＷ  ｅｔ  ａｌ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｉｏｎｉｚｉｎｇ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ．  Ｉ．  Ｓａｍｐｌｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｉｎ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｍｉｃｅ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｒｅｓ．  １９５７，７（１），１−１２）により痙攣閾値を算出する。
自発痙攣波に対する効果を評価する試験においては、痙攣波が生じた動物を選別し、これらの動物に対して化合物あるいはｖｅｈｉｃｌｅを投与する。投与前後の自発痙攣の有無を目視で判定するとともに、脳波を定量解析し、痙攣波に対する化合物の効果を評価する。【００８９】
［試験例６］グリオーマ関連てんかんのモデル
グリオーマ関連てんかんモデルにおける抗痙攣効果を確認するために、頭蓋内移植モデルを用いた試験を実施する。
＜方法＞
試験にはヒトグリオーマ細胞を頭蓋内に移植したヌードマウスを用いる。化合物は１０ｍＬ／ｋｇの投与容量になるようにｖｅｈｉｃｌｅ（１０％ＤＭＳＯ，０．０５ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ，５％  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ，および０．４％  Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）を用いて調製し、経口投与する。化合物を含まないｖｅｈｉｃｌｅのみをネガティブコントロールとして使用する。脳波測定により痙攣波の有無を判断する。痙攣波が生じた動物を選別し、これらの動物に対して化合物あるいはｖｅｈｉｃｌｅを投与する。投与前後の自発痙攣の有無を目視で判定するとともに、脳波を定量解析し、痙攣波に対する化合物の効果を評価する。【００９０】
［試験例７］グリオーマモデル
グリオーマモデルにおける抗腫瘍効果を確認するために、皮下移植モデルを用いた試験を実施する。
＜方法＞
試験にはヒトグリオーマ細胞を皮下に移植したヌードマウスを用いる。化合物は１０ｍＬ／ｋｇの投与容量になるようにｖｅｈｉｃｌｅ（１０％ＤＭＳＯ，０．０５ｍｏｌ／Ｌ  ＨＣｌ，５％  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ，および０．４％  Ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）を用いて調製し、経口あるいは腹腔内投与する。化合物を含まないｖｅｈｉｃｌｅのみをネガティブコントロールとして使用する。抗腫瘍効果は腫瘍容積を定量解析することにより評価する。
【国際調査報告】
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