(57)【要約】  １，４−ジオキサン分解菌を担持した分解菌固定担体と、この担体を用いた有機化合物の生分解処理方法、および生分解処理装置を提供することを課題とする。解決手段として、多孔質担体と、前記多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌と、を有する分解菌固定担体、ならびに、この担体を用いた有機化合物の生分解処理方法、および生分解処理装置を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
多孔質担体と、
前記多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌と、
を有することを特徴とする分解菌固定担体。
【請求項２】
前記多孔質担体が、比表面積３，０００ｍ２／ｍ３以上６０，０００ｍ２／ｍ３以下であることを特徴とする請求項１に記載の分解菌固定担体。
【請求項３】
前記多孔質担体が、疎水性であることを特徴とする請求項１または２に記載の分解菌固定担体。
【請求項４】
前記１，４−ジオキサン分解菌が、Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ（シュードノカルディア）属であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の分解菌固定担体。
【請求項５】
前記１，４−ジオキサン分解菌が、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２０３２として寄託されたＮ２３株であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の分解菌固定担体。
【請求項６】
１，４−ジオキサン分解菌を培養中の液体培地に多孔質担体を投入することを特徴とする、多孔質担体と該多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌とを有する分解菌固定担体の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれかに記載の分解菌固定担体により、有機化合物を生分解処理することを特徴とする生分解処理方法。
【請求項８】
前記有機化合物が、環状エーテルを含むことを特徴とする請求項７に記載の生分解処理方法。
【請求項９】
前記有機化合物が、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、２−メチル−１，３−ジオキソラン、テトラヒドロフランのいずれか１種以上を含むことを特徴とする請求項７または８に記載の生分解処理方法。
【請求項１０】
フェッドバッチプロセスであることを特徴とする請求項７〜９のいずれかに記載の生分解処理方法。
【請求項１１】
連続プロセスであることを特徴とする請求項７〜９のいずれかに記載の生分解処理方法。
【請求項１２】
請求項１〜５のいずれかに記載の分解菌固定担体により、有機化合物を生分解処理することを特徴とする生分解処理装置。
【請求項１３】
前記有機化合物が、環状エーテルを含むことを特徴とする請求項１２に記載の生分解処理装置。
【請求項１４】
前記有機化合物が、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、２−メチル−１，３−ジオキソラン、テトラヒドロフランのいずれか１種以上を含むことを特徴とする請求項１２または１３に記載の生分解処理装置。
【請求項１５】
フェッドバッチプロセスを行うことを特徴とする請求項１２〜１４のいずれかに記載の生分解処理装置。
【請求項１６】
連続プロセスを行うことを特徴とする請求項１２〜１４のいずれかに記載の生分解処理装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１，４−ジオキサン分解菌を固定した担体と、この担体を利用した汚染水の生分解処理方法、および生分解処理装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
１，４−ジオキサンは、下記式（１）で表される環状エーテルである。１，４−ジオキサンは、水や有機溶媒との相溶性に優れており、主に有機合成の反応溶剤として使用されている。【０００３】
【化１】
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【０００４】
２０１０年度の日本国における１，４−ジオキサンの製造・輸入量は、約４５００ｔ／年であり、約３００ｔ／年が環境中へ放出されたと推測される。１，４−ジオキサンは、水溶性であるため、水環境中へ放出されると広域に拡散してしまう。また、揮発性、固体への吸着性、光分解性、加水分解性、生分解性がいずれも低いため、水中からの除去が困難である。１，４−ジオキサンは急性毒性及び慢性毒性を有する上、発がん性も指摘されていることから、１，４−ジオキサンによる水環境の汚染は、人や動植物に悪影響を及ぼすことが懸念されている。そのため、日本国では、水道水質基準（０．０５ｍｇ／Ｌ以下）、環境基準（０．０５ｍｇ／Ｌ以下）及び排水基準（０．５ｍｇ／Ｌ以下）により、１，４−ジオキサンの規制がなされている。【０００５】
また、非特許文献１には、１，４−ジオキサンを含む産業廃水には、１，４−ジオキサンの他に１，３−ジオキソラン及び２−メチル−１，３−ジオキソランといった環状エーテルが含まれていることが報告されている。特に１，３−ジオキソランは、急性毒性等の毒性が確認されており、１，３−ジオキソランを含む汚染水等は適切に処理しなければならない。【０００６】
低コストかつ安定的に１，４−ジオキサン等の環状エーテルを含む水を処理する方法が求められており、特許文献１、非特許文献２では、１，４−ジオキサン分解菌による１，４−ジオキサン処理が提案されている。１，４−ジオキサン分解菌は、１，４−ジオキサンを単一炭素源として分解する菌（資化菌）と、テトラヒドロフラン等の特定の基質の存在下にて１，４−ジオキサンを分解できる菌（共代謝菌）の２種類に大別される。そのため、地下水や廃水等に含まれる１，４−ジオキサンを１，４−ジオキサン分解菌で処理する場合、特定の基質を添加する必要がない資化菌を活用する方が効率的である。【０００７】
資化菌は、さらに１，４−ジオキサン分解酵素の誘導の有無によって、誘導型と構成型に分けられる。非特許文献３に記載されているように、誘導型１，４−ジオキサン分解菌は、１，４−ジオキサンなどの誘導物質が存在することで分解酵素の生産・分泌がされるため、１，４−ジオキサン処理に用いる前に予め馴養する必要がある。一方、構成型１，４−ジオキサン分解菌は、常時、分解酵素を生産しているため、馴養することなく、直ちに１，４−ジオキサン処理に用いることができる。【０００８】
本発明者らは、特許文献２において、ジエチレングリコールを含む培地を用いて１，４−ジオキサン分解菌を増やす１，４−ジオキサン分解菌の培養方法を提案した。１，４−ジオキサン分解菌は、他の微生物と比較してジエチレングリコールを炭素源として利用する能力に優れているため、ジエチレングリコールを含有する培地を用いることにより、滅菌処理を行うことなく、他の微生物が生息している条件下でも優先的に増殖することができる。【０００９】
さらに、本発明者らは、特許文献３において、構成型１，４−ジオキサン分解菌であるＮ２３株を報告している。Ｎ２３株は、これまでに報告されている構成型１，４−ジオキサン分解菌の中で、最も高い１，４−ジオキサン最大比分解速度を示し、１，４−ジオキサンを始めとする環状エーテルの生分解に非常に有望である。
Ｎ２３株は、１，４−ジオキサン分解能を有さない微生物と比較して、１，４−ジオキサン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、１，４−ブタンジオールを炭素源として利用する能力に優れている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００８−３０６９３９号公報
【特許文献２】特許第５８７７９１８号公報
【特許文献３】特許第６１１７４５０号公報
【００１１】
【非特許文献１】CD. Adams, PA. Scanlan and ND. Secrist: Oxidation and biodegradability enhancement of 1,4-dioxane using hydrogen peroxide and ozone, Environ. Sci. Technol., 28(11), pp.1812-1818, 1994.
【非特許文献２】清和成、池道彦：１，４−ジオキサン分解菌を用いた汚染地下水の生物処理・浄化の可能性，用水と廃水，Vol.53, No.7, 2011
【非特許文献３】K. Sei, K. Miyagaki, T. Kakinoki, K. Fukugasako, D. Inoue and M. Ike: Isolation and characterization of bacterial strains that have high ability to degrade 1,4-dioxane as a sole carbon and energy source, Biodegradation, 24, 5, pp.665-674, 2012.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、１，４−ジオキサン分解菌（以下、分解菌ともいう）を担持した分解菌固定担体と、この担体を用いた有機化合物の生分解処理方法、および生分解処理装置を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
１．多孔質担体と、
前記多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌と、
を有することを特徴とする分解菌固定担体。
２．前記多孔質担体が、比表面積３，０００ｍ２／ｍ３以上６０，０００ｍ２／ｍ３以下であることを特徴とする１．に記載の分解菌固定担体。
３．前記多孔質担体が、疎水性であることを特徴とする１．または２．に記載の分解菌固定担体。
４．前記１，４−ジオキサン分解菌が、Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ（シュードノカルディア）属であることを特徴とする１．〜３．のいずれかに記載の分解菌固定担体。
５．前記１，４−ジオキサン分解菌が、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２０３２として寄託されたＮ２３株であることを特徴とする１．〜４．のいずれかに記載の分解菌固定担体。
６．１，４−ジオキサン分解菌を培養中の液体培地に多孔質担体を投入することを特徴とする、多孔質担体と該多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌とを有する分解菌固定担体の製造方法。
７．１．〜５．のいずれかに記載の分解菌固定担体により、有機化合物を生分解処理することを特徴とする生分解処理方法。
８．前記有機化合物が、環状エーテルを含むことを特徴とする７．に記載の生分解処理方法。
９．前記有機化合物が、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、２−メチル−１，３−ジオキソラン、テトラヒドロフランのいずれか１種以上を含むことを特徴とする７．または８．に記載の生分解処理方法。
１０．フェッドバッチプロセスであることを特徴とする７．〜９．のいずれかに記載の生分解処理方法。
１１．連続プロセスであることを特徴とする７．〜９．のいずれかに記載の生分解処理方法。
１２．１．〜５．のいずれかに記載の分解菌固定担体により、有機化合物を生分解処理することを特徴とする生分解処理装置。
１３．前記有機化合物が、環状エーテルを含むことを特徴とする１２．に記載の生分解処理装置。
１４．前記有機化合物が、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、２−メチル−１，３−ジオキソラン、テトラヒドロフランのいずれか１種以上を含むことを特徴とする１２．または１３．に記載の生分解処理装置。
１５．フェッドバッチプロセスを行うことを特徴とする１２．〜１４．のいずれかに記載の生分解処理装置。
１６．連続プロセスを行うことを特徴とする１２．〜１４．のいずれかに記載の生分解処理装置。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の分解菌固定担体を用いることにより、分解菌の流出を防ぐことができ、有機化合物の生分解処理時に高い処理活性を維持することができる。本発明の分解菌固定担体を用いることにより、連続プロセスにおいても分解菌の流出を防ぎ、高い菌体濃度を保つことができる。本発明の分解菌固定担体により、高密度の分解菌による生分解処理が可能となり、曝気槽の容量を小さくすることができる。
多孔質担体の比表面積が３，０００ｍ２／ｍ３以上６０，０００ｍ２／ｍ３以下である担体、多孔質担体が疎水性の材質からなる担体は、分解菌が付着しやすく、大量の菌体を担持することができる。
Ｎ２３株は、有機化合物の分解性に優れ、また、高濃度から低濃度の１，４−ジオキサンを分解することができるため、Ｎ２３株を固定した担体は、処理水の有機化合物濃度が変動しても、安定した処理能力を発揮することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実験２の連続プロセスにおける廃水中のジオキサン濃度の経時変化を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明の分解菌固定担体は、多孔質担体と、この多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌とを有する。
【００１７】
・多孔質担体
多孔質担体とは、担体の内部に複数の空孔を有する粒状かつ中実状の担体であり、一般的な繊維状担体とは異なる。多孔質担体の形状は、特に制限されず、例えば、立方体形状、直方体形状、六角柱等の多角柱形状、円柱形状、球形状等が挙げられる。立方体形状、または、直方体形状が、担体の製造が容易であるため好ましい。
【００１８】
多孔質担体の担体サイズは、特に制限はないが、１ｍｍ３以上１，０００ｍｍ３以下であることが好ましく、１００ｍｍ３以上１，０００ｍｍ３以下の範囲であることがより好ましい。多孔質担体の担体サイズが１ｍｍ３未満であると、担体を分離するスクリーンが閉塞する場合があり、１，０００ｍｍ３を超えると、比表面積が低下し十分に分解菌を保持できない場合がある。なお、多孔質担体の担体サイズは、ノギスまたはマイクロスコープ等を用いて少なくとも１０個の担体について測定した値から、その形状に応じて算出した体積の平均値を意味する。
【００１９】
多孔質担体の空孔の平均径は、特に制限はないが、例えば、２０μｍ以上２，０００μｍ以下の範囲のものを用いることができる。空孔の平均径が２０μｍ未満であると、担体の通気性が低下して流動性が低下する場合がある。空孔の平均径が２，０００μｍを超えると、分解菌の固定化が困難となる場合がある。なお、多孔質担体の空孔の平均径は、担体表面に現れる空孔開口部の口径を、ノギスまたはマイクロスコープ等を用いて少なくとも３０個測定した値の平均値を意味する。
【００２０】
多孔質担体の担体の単位体積あたりの比表面積は、３，０００ｍ２／ｍ３以上６０，０００ｍ２／ｍ３以下であることが好ましい。比表面積が３，０００ｍ２／ｍ３未満であると、分解菌を十分に保持できない場合がある。比表面積が６０，０００ｍ２／ｍ３より大きいと、担体が浮上して処理槽の外に流出しやすくなる。比表面積は、４，０００ｍ２／ｍ３以上５５，０００ｍ２／ｍ３以下であることがより好ましく、４，５００ｍ２／ｍ３以上５０，０００ｍ２／ｍ３以下であることがさらに好ましい。なお、多孔質担体の比表面積は、窒素ガスによる気体吸着法においてＢＥＴ法により算出することができる。
【００２１】
多孔質担体の空隙率は、５０％以上９９％以下であることが好ましい。多孔質担体の空隙率が５０％未満であると、分解菌の付着量が不足する場合がある。空隙率が９９％を超えると、担体の通気性が低下して流動性が低下する場合がある。
多孔質担体の空隙率は、対象担体の比重を測定し、下記の式から算出する。
空隙率（％）＝｛１−（比重／真比重）｝×１００
比重  ：対象担体の比重の測定値
真比重：対象担体材質の比重（文献値  例えばポリウレタンの場合
１．２０）
【００２２】
多孔質担体の材質は、特に制限することなく使用することができ、例えば、ポリウレタン系樹脂、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂、ポリエステル系樹脂、セルロース系樹脂、塩化ビニル等からなるスポンジ、ポリビニルアルコール、アルギン酸、ポリエチレングリコール等からなるゲル等を使用することができる。これらの中で、疎水性の材質からなる多孔質担体が、分解菌の付着性に優れるため好ましい。これは、分解菌が、組成は不明であるが、疎水性の粘性物質によるバイオフィルムを形成するためであると推測される。ここで、疎水性の担体とは、脱イオン水に投入して２４時間後に沈降していないもの、親水性の担体とは、脱イオン水に投入して２４時間後に沈降しているものを意味する。このような疎水性の材質としては、ポリウレタン系樹脂、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂、ポリエステル系樹脂、セルロース系樹脂が挙げられる。
【００２３】
・１，４−ジオキサン分解菌
本発明で使用する分解菌としては特に制限されず、マイコバクテリウム属（Mycobacterium sp.）、シュードノカルディア属（Pseudonocardia sp.）、アフピア属（Afipia sp.）、ロドコッカス属（Rhodococcus sp.）、フラボバクテリウム属（Flavobacterium sp.）、メチロサイナス属（Methylosinus sp.）、バークホルデリア属（Burkholderia sp.）、ラルストニア属（Ralstonia sp.）、コルディセプス属（Cordyceps sp.）、キサントバクター属（Xanthobacter sp.）、アシネトバクター属（Acinetobacter sp.）等に属するものを用いることができる。これらの中で、マイコバクテリウム属（Mycobacterium sp.）、または、シュードノカルディア属（Pseudonocardia sp.）が好ましい。また、構成型資化菌、誘導型資化菌、共代謝菌のいずれも使用することができるが、誘導物質が不要なため資化菌が好ましく、馴養が不要なため構成型資化菌がより好ましい。
【００２４】
具体的には、Pseudonocardia sp. N23、Mycobacterium sp. D11、Pseudonocardia sp. D17、Mycobacterium sp. D6、Pseudonocardia dioxanivorans CB1190、Afipia sp. D1、Mycobacterium sp. PH-06、Pseudonocardia benzenivorans B5、Flavobacterium sp.、Pseudonocardia sp. ENV478、Pseudonocardia tetrahydrofuranoxydans K1、Rhodococcus ruber T1、Rhodococcus ruber T5、Methylosinus trichosporium OB3b、Mycobacterium vaccae JOB5、Burkholderia cepacia G4、Pseudomonas mendocina KR1、Pseudonocardia tetrahydrofuranoxydans K1、Ralstonia pickettii PKO1、Rhodococcus sp. RR1、Acinetobacter Baumannii DD1、Rhodococcus sp. 219、Pseudonocardia antarctica DVS 5a1、Cordyceps sinensis A、Rhodococcus aetherivorans JCM14343等を挙げることができる。これらの中で、構成型資化菌であり、分解能に優れたPseudonocardia sp. N23が好ましい。
【００２５】
Pseudonocardia sp. N23（以下、Ｎ２３株という。）は、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２０３２として、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（郵便番号２９２−０８１８））に、２０１５年４月１０日付で国際寄託されている。
Ｎ２３株は、グラム染色性が陽性、カタラーゼ反応が陽性である。Ｎ２３株は、これまでに報告されている構成型１，４−ジオキサン分解菌の中で最も高い１，４−ジオキサン最大比分解速度を有し、その値は誘導型１，４−ジオキサン分解菌と同等以上である。また、Ｎ２３株は、１，４−ジオキサンを０．０１７ｍｇ／Ｌ以下の極低濃度まで分解することができ、約５，２００ｍｇ／Ｌという高濃度の１，４−ジオキサンを処理することができる。
【００２６】
・分解菌固定担体
多孔質担体に、１，４−ジオキサン分解菌を担持させて本発明の分解菌固定担体を製造する方法は特に制限されないが、１，４−ジオキサン分解菌を培養中の液体培地に多孔質担体を投入する方法が簡便である。
１，４−ジオキサン分解菌の培養方法は特に制限されないが、１，４−ジオキサン分解菌は、他の微生物（以下、雑菌という）と比べて増殖性に劣り、通常の培養方法では雑菌のコンタミネーションが起こりやすい。そのため、本発明者らが提案しているジエチレングリコールを含む培地を用いる培養方法（特許文献２）、また、分解菌がＮ２３株である場合は、１，４−ジオキサン、グリオキシル酸、グリコール酸、エチレングリコール、ジエチレングリコール、１，４−ブタンジオール、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、グルコース、酢酸の１種以上を含有する培地を用いる培養方法（特許文献３）が、好適である。
【００２７】
既に１，４−ジオキサン分解菌による有機化合物の生分解処理を行っている曝気槽に、多孔質担体を投入することにより、本発明の分解菌固定担体を得ることもできる。この場合、分解菌の流出を防ぐために、下記フェッドバッチプロセスにおける有機化合物処理の生分解処理工程時に多孔質担体を投入することが好ましい。
【００２８】
・生分解処理方法、および生分解処理装置
本発明の生分解処理方法、および生分解処理装置は、多孔質担体とこの多孔質担体に担持された１，４−ジオキサン分解菌とを有する分解菌固定担体により、有機化合物を生分解処理することを特徴とする。
生分解処理対象としては、有機化合物を含む地下水、工場排水等の汚染水、不法廃棄サイトの汚染土壌等が挙げられる。なお、汚染土壌を浄化する場合は、土壌を予め水で洗浄し、処理対象である有機化合物を水相に移行させて汚染水として処理する。
本発明の生分解処理方法、および生分解処理装置は、分解菌が担体に固定されているため、生分解処理後に廃水とともに流出するジオキサン分解菌が少なく、処理槽中の分解菌の濃度を高く保つことができる。そのため、生分解処理を行う処理槽の容量を小さくすることができる。
【００２９】
生分解処理する有機化合物としては、１，４−ジオキサン分解菌が分解できる、すなわち、炭素源として利用できる有機化合物であれば特に制限されない。例えば、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、２−メチル−１，３−ジオキソラン、テトラヒドロフラン等の環状エーテル、エチレングリコール、ジエチレングリコール、１，４−ブタンジオール等が挙げられる。
【００３０】
本発明の分解菌固定担体を用いた生分解処理方法は特に制限されないが、（１）汚染水中の有機化合物の生分解処理工程、（２）分解菌固定担体を沈殿させ、処理水の上澄みを排水する排水工程、（３）新たな汚染水を投入する汚染水投入工程を、（１）→（２）→（３）→（１）→・・・と、この順で繰り返す、いわゆるフェッドバッチプロセス、上流での汚染水の投入と下流での処理水の排水とを同量で連続的に行う連続プロセス等により行うことができる。フェッドバッチプロセスは、曝気槽での初期汚染物濃度が高いため、生分解処理速度を高く保つことができる。連続プロセスは、既設の廃水処理設備をそのまま用いることができる。
【００３１】
本発明の生分解処理方法、および生分解処理装置において、曝気槽容量に対する多孔質担体の量としては、見かけ体積で処理水に対して５％以上５０％以下の範囲が好ましく、１０％以上４０％以下であることがより好ましい。この多孔質担体の量が５％未満では、ジオキサン分解菌の菌体量が不足する場合があり、この多孔質担体の量が５０％より多いと、多孔質担体の流動性が低下する場合がある。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例および比較例を挙げ、本発明をより具体的に詳細に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。 【００３３】
「実験１：フェッドバッチプロセス」
井戸水に、１，４−ジオキサンを１，０００ｍｇ／Ｌ、硫酸アンモニウムを窒素濃度２０ｍｇ／Ｌ、リン酸二水素カリウムをリン濃度５ｍｇ／Ｌとなるように調製して試験水とした。【００３４】
多孔質担体は、以下の３種類を用いた。
担体Ａ：ポリウレタン系の多孔質担体。疎水性。立方体形状（７ｍｍ角）。
空孔の平均径：５２５μｍ（測定値：５００〜５５０μｍ）
比表面積    ：５，０００ｍ２/ｍ３
空隙率      :９５．０％
担体Ｂ：ポリウレタン系の多孔質担体。親水性。立方体形状（１０ｍｍ角）
。
空孔の平均径：１，５００μｍ（測定値１，０００〜２，０００μ
ｍ）
比表面積    ：１，０００ｍ２/ｍ３
空隙率      :９６．５％
担体Ｃ：ポリビニルアルコール系の多孔質担体。親水性。立方体形状（７ｍ
ｍ角）。
空孔の平均径：８０μｍ（測定値７０〜９０μｍ）
比表面積    ：４６，０００ｍ２/ｍ３
空隙率      :８９％
なお、担体の比表面積は、高精度全自動ガス吸着装置（装置名：ＢＥＬＳＯＲＰ３６、日本ベル株式会社製（現社名：マイクロトラック・ベル株式会社）による窒素ガスによる気体吸着法においてＢＥＴ法により算出した。【００３５】
１，４−ジオキサン分解菌は、Ｎ２３株を用いた。
Ｎ２３株は、ＭＧＹ培地（Ｍａｌｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ：１０ｇ／Ｌ、グルコース：４ｇ／Ｌ、Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ：４ｇ／Ｌ、ｐＨ７．３）を用いて２週間培養した。この培養液を、１０，０００×ｇ、４℃、３分間遠心分離して集菌し、無機塩培地（培地組成：Ｋ２ＨＰＯ４：１ｇ／Ｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４：１ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ：５０ｍｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：２００ｍｇ／Ｌ、ＦｅＣｌ３：１０ｍｇ／Ｌ、ＣａＣｌ２：５０ｍｇ／Ｌ、ｐＨ：７．３）を用いて二回洗浄した菌体を用いた。
【実施例１】
【００３６】
２．２Ｌ容の反応カラムに、試験水を容積の約１／３量まで加えた。反応カラムの容積に対して、見かけ体積が３０％となるように計量した担体Ａに対し、Ｎ２３株（０．８５％生理食塩水にて洗浄・調製した植菌液（菌体濃度２，０００ｍｇ／Ｌ）を０．１Ｌ添加し、軽く撹拌して馴染ませた後、全量を反応カラムに添加した。試験水で反応カラムを満水にした後、室温（２１〜２２℃）にて、反応カラムの下方から１．０Ｌ／ｍｉｎでエアレーションを４８時間行い、分解菌固定担体を得た。
次いで、１時間曝気を停止し、分解菌固定担体を沈降させた。上澄み水の半量を廃棄し、新たな試験水と置換した後、１．０Ｌ／ｍｉｎでエアレーションを２４時間行った。【００３７】
ここで、試験水は、井戸水に１，４−ジオキサン等を添加したものであり、試験水中に存在する全有機炭素（ＴＯＣ）はほぼ全量がジオキサン由来である。そこで、経時で処理水中のＴＯＣ濃度を全有機炭素分析装置（ＴＯＣ−ＬＣＰＮ型、株式会社島津製作所製）で測定し、次式により換算した値を用いてジオキサン濃度（換算）を評価し、初期ジオキサン濃度（換算）の値から、ジオキサン減少率を求めた。
換算式：ジオキサン濃度（換算）（ｍｇ／Ｌ）
＝ＴＯＣ濃度（ｍｇ／Ｌ）÷０．５４５
【実施例２】
【００３８】
担体Ｂを用いた以外は、実施例１と同様にした。
【実施例３】
【００３９】
担体Ｃを用いた以外は、実施例１と同様にした。
【比較例１】
【００４０】
コントロールとして、多孔質担体とＮ２３株を添加しなかった以外は実施例１と同様にして、エアレーションのみを行った。
【００４１】
・目視観察
親水性である担体Ｂ、Ｃを用いた実施例２、３は、曝気により撹拌され、エアレーション開始直後から、反応カラム内で流動した。ただし、多孔質担体の空孔内部まで菌体が浸透している様子は見られなかった。
一方、疎水性である担体Ａを用いた実施例１は、エアレーション開始直後は、担体は上下に流動することなく浮かんだままであった。
４８時間後には担体Ａ〜ＣのいずれもＮ２３株が付着していることが確認できた。また、実施例１においても、担体が水と馴染んで流動していることが確認できた。
【００４２】
・ジオキサン減少率
実施例１〜３、比較例１における、スタート時からのジオキサン減少率を表１に示す。
【表１】
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【００４３】
実施例１〜３は、比較例１と比べてジオキサンの減少率が大きく、Ｎ２３株によるジオキサンの分解が確認できた。特に、エアレーション開始時には試験水との馴染みが悪く流動しなかった疎水性の担体Ａを用いた実施例１が、ジオキサンの分解性に優れており、４８時間後のジオキサン減少率は最も大きかった。
実施例１〜３は、等量のＮ２３株が添加されているが、特に、実施例１と、実施例２、３との間で、ジオキサン分解活性に大きな差があることが確認できた。このことから、疎水性の多孔質担体に固定された分解菌は、親水性の多孔質担体に固定された分解菌より、高い分解活性を発揮することが示唆された。
【００４４】
「実験２：連続プロセス」
上記実験１で使用した装置をそのまま用いて、連続プロセスを行った。実施例１〜３、比較例１で使用した装置を用いた実験を、それぞれ実施例２−１〜３、比較例２−１とする。
【００４５】
井戸水に、１，４−ジオキサンを５００ｍｇ／Ｌ、硫酸アンモニウムを窒素濃度２０ｍｇ／Ｌ、リン酸二水素カリウムをリン濃度５ｍｇ／Ｌとなるように調製して模擬廃水とした。
この模擬廃水を、流量１．２ｍＬ／ｍｉｎ（１，４−ジオキサン負荷量０．３７〜０．４２ｋｇ／ｍ３／日）で上方から下方へ通水しながら、１．０Ｌ／ｍｉｎでエアレーションを行う連続プロセスを２５日間行った。
【００４６】
１日１回、反応カラム上部から処理水をシリンジで約１５ｍＬ採水し、ろ紙（ＮＯ．５Ｃ）でろ過後に、上記実験１と同様にして１，４−ジオキサン濃度を評価した。なお、２０日目以降の試料は、正確な値を知るためにヘッドスペースガスクロマトグラフ質量分析計（ＧＣ／ＭＳ−ＱＰ２０１０  ＰＬＵＳ、ＴＵＲＢＯＭＡＴＲＩＸ  ＨＳ４０、株式会社島津製作所製、以下、ＧＣ／ＭＳという。）を用いてジオキサン濃度を実測した。
【００４７】
ジオキサン濃度の経時変化を図１に示す。なお、図１中で白抜きとなっているプロットはＧＣ／ＭＳによりジオキサンを実測した値である。
【００４８】
実施例２−１が最も早く処理性能が安定し、処理水水質は１０日程度で安定した。次いで実施例２−３が、２週間程度で処理水水質が安定した。実施例２−１、２−３では、ＧＣ／ＭＳによるジオキサン濃度の実測値は０．５〜３ｍｇ／Ｌとなり、除去率は９５％以上であった。一方、実施例２−２は、ジオキサンの除去性能はほとんど向上せず、除去率は４０％前後のままであった。
【００４９】
実験終了後にＮ２３株の付着状況を目視で確認したところ、実施例２−１で使用した疎水性である担体Ａは表面の色が黄色から濃い橙色に、実施例２−３で使用した親水性である担体Ｃは白色から薄い茶色に変化しており、大量のＮ２３株が担体に付着していることが確認された。また、実施例２−３は、実施例２−１と比較して水質が安定するまで時間がかかった。これは、実施例２−３で使用した担体は親水性であるため、初期のＮ２３株の付着性、分解活性に劣っていたが、Ｎ２３株が生成する疎水性の粘性物質を足場にしてＮ２３株の付着量が増えたことにより、疎水性の担体を使用した実施例２−１と同等の性能を発揮できたと推察される。一方、実施例２−２で使用した担体Ｂは、Ｎ２３株は付着しているものの担体の色はほとんど変化しておらず、その付着量は少なかった。担体Ｂは、比表面積が１，０００ｍ２／ｍ３と小さく、その孔径が大きいため、ジオキサン分解菌の付着性が悪かったと推察される。
【図１】
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【国際調査報告】
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