(57)【要約】発明の課題は新規なワクチンアジュバントを提供することである。課題の解決手段は、デキストラン硫酸又はその誘導体を含むワクチンアジュバントである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
デキストラン硫酸又はその誘導体を含むワクチンアジュバント。
【請求項２】
請求項１に記載のワクチンアジュバントを含む溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項３】
更にワクチン抗原を含む請求項２に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項４】
先端部と底部を結ぶ方向に積層された複数の層を有する請求項２又は３に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項５】
先端部を有する層にワクチン抗原が含まれている請求項４に記載の溶解性マイクロニードル。
【請求項６】
底部を有する層にはワクチン抗原が含まれていない請求項４又は５に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項７】
ワクチン抗原が含まれている層とは別の層に請求項１に記載のワクチンアジュバントが含まれている請求項４〜６のいずれか一項に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項８】
ワクチン抗原が含まれている層よりも底部の方向に位置する層に請求項１に記載のワクチンアジュバントが含まれている請求項７に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項９】
基剤として曳糸性及び水溶性を有する高分子物質を含有する請求項２〜８のいずれか一項に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項１０】
表面に形成された請求項１に記載のワクチンアジュバントを含む被膜を有するマイクロニードル製剤。
【請求項１１】
請求項１に記載のワクチンアジュバントを含有する経皮吸収製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は経皮ワクチン及びワクチンアジュバントに関する。
【背景技術】
【０００２】
世界の主要なワクチン会社が、中空の金属製マイクロニードルを装填した皮内注射器を用いてインフルエンザワクチンの開発を進めている。しかし、例えば、注射時の背圧が高かったり、皮内へ注入できる薬液量に限界があるなど開発は決して順調に進んではいない。【０００３】
皮内注射器に代わる経皮ワクチンとしてマイクロニードル製剤がある。特許文献１には、ワクチン抗原表皮デリバリー用溶解性３層マイクロニードル製剤が記載されている。特許文献１の溶解性３層マイクロニードル製剤は、洩糸性及び水溶性を有する高分子物質を基剤に用いて、ワクチン抗原を基剤とともに練り込んで成形した、経皮ワクチンである。【０００４】
曳糸性とは、高分子物質を少量の水に溶解させた場合に糊状になり、長く糸状に伸びる性質をいう。高分子物質の曳糸性は、実際に高分子物質を少量の水と混合して濃厚液を作成し、これを引伸ばしてみることにより判別される。そのことにより、特許文献１のマイクロニードル製剤はポリマーが絡み合った内部構造を有し、溶解性でありながら強度が強く、皮膚への挿入製剤として使えることになる。【０００５】
溶解性マイクロニードル製剤は固形剤であるので、ワクチン抗原の長期安定性が良いため皮内注射液剤よりも優位性は高い。溶解性マイクロニードル製剤を使用した経皮ワクチンの性能に関し、免疫誘導性を強化することが望まれている。【０００６】
一般には、ワクチン抗原と組み合わせてワクチンアジュバントを使用することで、より強力に抗体価の誘導を行うことが可能である。しかしながら、従来から知られているワクチンアジュバントは不溶性、低溶解性、又は曳糸性が不十分である。【０００７】
ワクチンアジュバントとして水酸化アルミニウムなどの鉱酸塩、毒素、エマルジョン、サポニンなどの植物成分が知られているが、溶解性マイクロニードルに配合する場合には、溶解性マイクロニードル製剤の形状、強度及び溶解性に影響を及ぼしかねない。【０００８】
特許文献２には高分子多糖と脂肪酸のエステル等を含むワクチンアジュバントが記載されている。しかしながら、カルボン酸エステル以外の酸エステルのアジュバント効果に関し、特許文献２は何も記載していない。【０００９】
水不溶性、低溶解性、又は曳糸性が不十分な物質を溶解性マイクロニードルに含有させた場合、溶解性マイクロニードルの強度又は溶解性が悪影響を被る可能性がある。例えば、溶解性マイクロニードル製剤の強度が低下した場合は、皮膚への穿刺に耐えられなくなる可能性がある。また、溶解性マイクロニードル製剤の溶解性が低下した場合は、皮膚内に存在する少量の体液によりすみやかに溶解することができなくなる可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２０１２−９０７６７号公報
【特許文献２】特開２００１−３９８９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は上記従来の問題を解決するものであり、その目的とするところは、新規のワクチンアジュバントを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
デキストラン硫酸は上記の洩糸性及び水溶性という２種の物理化学的性質を満たす高分子物質である。すなわち、デキストラン硫酸を少量の水で練って粘調液（ヒドロゲル）とすると強い洩糸性を示す。デキストラン硫酸は、曳糸性及び水溶性に加えて高い免疫学的な活性を示すことが見い出された。【００１３】
本発明は、デキストラン硫酸又はその誘導体を含むワクチンアジュバントを提供する。【００１４】
また、本発明は、上記ワクチンアジュバントを含む溶解性マイクロニードル製剤を提供する。【００１５】
上記溶解性マイクロニードル製剤は、更にワクチン抗原を含む。【００１６】
上記いずれかの溶解性マイクロニードル製剤は、先端部と底部を結ぶ方向に積層された複数の層を有する。【００１７】
上記いずれかの溶解性マイクロニードル製剤は、先端部を有する層にワクチン抗原が含まれている。【００１８】
上記いずれかの溶解性マイクロニードル製剤は、底部を有する層にはワクチン抗原が含まれていない。【００１９】
上記いずれかの溶解性マイクロニードル製剤は、ワクチン抗原が含まれている層とは別の層に上記ワクチンアジュバントが含まれている。【００２０】
上記いずれかの溶解性マイクロニードル製剤は、ワクチン抗原が含まれている層よりも底部の方向に位置する層に上記ワクチンアジュバントが含まれている。【００２１】
上記いずれかの溶解性マイクロニードル製剤は、基剤として曳糸性及び水溶性を有する高分子物質を含有する。【００２２】
また、本発明は、表面に形成された上記ワクチンアジュバントを含む被膜を有するマイクロニードル製剤を提供する。【００２３】
また、本発明は、上記ワクチンアジュバントを含有する経皮吸収製剤を提供する。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、新規なワクチンアジュバントが提供される。本発明のワクチンアジュバントを使用することで、強度及び溶解性が高く、免疫誘導性も高い溶解性マイクロニードル製剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例４で作成した溶解性マイクロニードルの拡大写真である。
【図２】比較例２で作成した溶解性マイクロニードルの拡大写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
デキストラン硫酸とは、デキストランの硫酸エステルをいう。デキストラン硫酸は、硫酸部分が酸の構造を有していてよく、塩の構造を有していてもよい。デキストラン硫酸は、その誘導体であってもよい。デキストラン硫酸又は誘導体の具体例としては、デキストラン硫酸ナトリウム、デキストラン硫酸カリウム、デキストラン硫酸エステルナトリウム イオウ18（局方品）などが挙げられる。
【００２７】
デキストラン硫酸は市販されているものを使用することができる。ナカライテスク株式会社が試薬として販売している製品には、「デキストラン硫酸ナトリウム」（商品名）という商品がある。また、名糖産業株式会社が医薬品原薬、医療機器の原料や試薬用のデキストラン硫酸として販売している製品には、「デキストラン硫酸エステルナトリウム イオウ18」（商品名）、「デキストラン硫酸エステルナトリウム イオウ5」（商品名）、DSH（商品名）、DS 500（商品名）、及びDST-H（商品名）という商品がある。
【００２８】
デキストラン硫酸の分子量は特に限定されない。デキストラン硫酸がマイクロニードル製剤の基剤として使用される場合は、デキストラン硫酸の分子量は、マイクロニードル製剤に要求される強度及び溶解性を考慮して適宜決定される。その場合、デキストラン硫酸の分子量は、重量平均分子量（Ｍｗ）として、例えば約１０００〜１０万、好ましくは約２０００〜５万、より好ましくは約３０００〜１万である。
【００２９】
名糖株式会社が販売している上記デキストラン硫酸の分子量は、デキストラン分子量と硫酸基置換度による計算値として、約４０００〜７０００である。ナカライテスク株式会社が試薬として販売しているデキストラン硫酸ナトリウムの分子量は約５０００〜６０００や約５０万、約９５万〜２００万のものがある。
【００３０】
デキストラン硫酸は単独でワクチンアジュバントとして使用することができる。かかる場合、ワクチンアジュバントはデキストラン硫酸から成るものになる。デキストラン硫酸は、また、通常使用される添加剤及び溶媒等と組み合わせてワクチンアジュバントとして使用してもよい。
【００３１】
デキストラン硫酸と組み合わせて使用される上記添加剤には、例えば、オレイン酸、スクワラン、スクワレン、流動パラフィン、合成直鎖アルカン系オイル、アルコール脂肪酸エステル油等の油性成分やポリグリセリンエステル系などの界面活性剤、リン酸アルミニウムゲル、水酸化アルミニウムゲル等を挙げることができる。
【００３２】
デキストラン硫酸を含むワクチンアジュバントは、使用形態に応じて各種ワクチン製剤に、有効に機能する量で含有させる。ワクチン製剤の種類は特に限定されないが、例えば、皮内注射器用注射剤、及びマイクロニードル製剤、貼付剤及び塗布剤等の経皮吸収製剤が挙げられる。
【００３３】
本発明のワクチン製剤は、上記本発明のワクチンアジュバントと所望の抗原を含有する。水性ワクチン製剤は、上記のような本発明のワクチンアジュバントに所望の抗原液を添加混合し、必要により乳化／分散させるか、あるいは所望の抗原を含有する水性ワクチンまたは油性ワクチンに上記のような本発明のワクチンアジュバントを添加混合し、必要により乳化／分散させることで調製することができる。所望の抗原としては、いずれの抗原でも用いることができる。
【００３４】
水性ワクチン製剤中のデキストラン硫酸又はその誘導体の含有量は、剤形により異なるが、０．０５〜１．０ｗ／ｖ％が好ましく、より好ましくは、０．１〜０．５ｗ／ｖ％である。また、ワクチン中の所望の抗原の含有量は、０．０５〜５．０ｗ／ｖ％が好ましく、より好ましくは０．１〜１．０ｗ／ｖ％である。
【００３５】
＜溶解性マイクロニードル製剤＞
本発明の溶解性マイクロニードル製剤は、例えば、鋳型を用いてマイクロニードルを形成し、次いで、形成されたマイクロニードルを支持体に固定することにより製造される。鋳型としては、マイクロニードルの形状及び配置に対応する穴が設けられた板状材料を用いる。板状材料の材質には、フッ素樹脂、シリコン樹脂、ＡＢＳ樹脂等が用いられる。
【００３６】
まず、マイクロニードルの原料である基剤、目的物質及び水等を混合して、原料混合物を調製する。原料混合物には、デキストラン硫酸及び必要に応じて添加剤等も含有させる。尚、油性の添加剤は、デキストラン硫酸と混合した場合にマイクロニードルの強度が脆くなるので、使用しないことが好ましい。
【００３７】
本発明のある一形態においては、マイクロニードルの基剤としてデキストラン硫酸を使用する。マイクロニードルの強度、溶解性を調節する目的で、デキストラン硫酸と水溶性及び曳糸性の高分子物質とを混合して基剤に使用してもよい。
【００３８】
基剤としてデキストラン硫酸と水溶性及び曳糸性の高分子物質との混合物を使用する場合は、デキストラン硫酸は、好ましくは、基剤の５０重量％以上になる量で使用する。デキストラン硫酸の含有量が基剤の５０重量％未満になると、溶解性マイクロニードル製剤の免疫誘導性が低下する可能性が生ずる。基剤中のデキストラン硫酸の含有量は、より好ましくは６０〜９５重量％であり、更に好ましくは７０〜９０重量％である。
【００３９】
基剤として、デキストラン硫酸と共に使用する水溶性及び曳糸性の高分子物質としては、洩糸性を有する多糖類、タンパク質、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、及びポリアクリル酸ナトリウムからなる群より選ばれた少なくとも１つの物質が挙げられる。なお、これらの高分子物質については、１種類だけを用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。
【００４０】
好ましくは、前記洩糸性の多糖類は、コンドロイチン硫酸ナトリウム、デキストラン、ヒアルロン酸、シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、アガロース、プルラン、及びグリコーゲンおよびそれらの誘導体より選ばれた少なくとも１つの物質である。
【００４１】
好ましくは、前記洩糸性のタンパク質は、血清アルブミン、血清α酸性糖タンパク質、コラーゲン、低分子コラーゲン及びゼラチンおよびそれらの誘導体より選ばれた少なくとも１つの物質である。
【００４２】
特に好ましい水溶性かつ曳糸性の高分子物質としては、コンドロイチン硫酸ナトリウム、デキストラン及びヒアルロン酸等が挙げられる。
【００４３】
溶解性マイクロニードル製剤の目的物質としては、ワクチン抗原を使用する。ワクチン抗原の具体例としては、ジフテリアワクチン抗原、破傷風ワクチン抗原、百日咳ワクチン抗原、肝炎ワクチン抗原、肺炎球菌ワクチン抗原、インフルエンザワクチン抗原、子宮頸がんワクチン抗原などすでに販売されている抗原以外に、ＨＩＶワクチン抗原，結核ワクチン抗原、マラリアワクチン抗原、高血圧ワクチン抗原、糖尿病ワクチン抗原、アルツハイマー病ワクチン抗原、禁煙ワクチン抗原、肥満ワクチン抗原、避妊ワクチン抗原等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４４】
マイクロニードル製剤中の目的物質、即ち抗原の含有量は、抗原の種類により異なるが、単一の層を形成する原料組成物の固形分を基準にして、５０重量％以下、好ましくは０．１〜４０重量％、より好ましくは１〜３０重量％である。抗原の含有量が５０重量％を超えると、マイクロニードル製剤の強度が低下する可能性がある。
【００４５】
次いで、原料混合物を鋳型に載せ、要すれば、スキジー等の塗布用具又は塗布装置を用いて塗布圧をかけて、これを鋳型に形成された穴の中に充填する。充填を確実に行うために、遠心分離機等を用いて鋳型に遠心力を印加してもよい。
【００４６】
原料混合物が乾燥する前に、原料混合物に接触するように鋳型の上に支持体を重ねる。支持体は多孔性であり、原料混合物と接触してその成分がアンカー効果で支持体内部の細孔へ侵入することにより強固に接合するとともに原料混合物に含まれる水を吸収し、放出することができる。
【００４７】
支持体はマイクロニードルを強固に固定することが可能な材料で構成される。支持体は非水溶性である。支持体は硬質であり、室温環境下で実質的に変形しない。
【００４８】
好ましい支持体は、非水溶性の錠剤用賦形剤から成る成形体である。生産性に優れ、滅菌などの医薬品製造プロセスに適するからである。錠剤用賦形剤は複数の成分を含有する組成物であってもよい。好ましい錠剤用賦形剤としては、酢酸セルロース、結晶セルロース、セルロース誘導体、キチン及びキチン誘導体などが挙げられる。
【００４９】
錠剤用賦形剤から成る成形体は錠剤と同様にして製造すればよい。例えば、錠剤用賦形剤を打錠機の臼に入れ、杵を用いて適当な打錠圧で打錠する。支持体の寸法は、臼の直径、錠剤用賦形剤の充填量及び打錠圧を増減することにより、適宜調節される。
【００５０】
次いで、穴に充填された原料混合物を乾燥させる。乾燥は、目的物質の変質等を防止するために、５０℃以下、好ましくは室温以下の温度で行われる。その後、支持体を鋳型から剥がすことにより、支持体上に本発明の溶解性マイクロニードル製剤が多数植設された、マイクロニードル・アレイ・チップが得られる。
【００５１】
上記原料混合物として、成分が異なるものを複数種類準備し、鋳型に充填する際には、それらを順番に充填してもよい。そうすることで、先端部と底部を結ぶ方向に積層された、成分が異なる複数の層を有する溶解性マイクロニードル製剤が得られる。その場合は、積層された層の少なくとも一つの層に、基剤としてデキストラン硫酸が含まれていればよい。また、積層された層の少なくとも一つの層に、目的物質としてワクチン抗原が含まれていることが好ましい。
【００５２】
複数種類の原料混合物を鋳型に充填する場合、基剤としてデキストラン硫酸を含む原料混合物は、その前又は後に充填されるこれを含まない原料混合物と混ざりにくく、結果として、２つの層の間に明確な境界面を形成することが明らかになった。つまり、基剤として使用されるデキストラン硫酸は、その前又は後に充填されるこれを含まない層の成分と混合し難く、相互に分離されることになる。
【００５３】
複数の層を有する溶解性マイクロニードル製剤のある好ましい一形態においては、先端部を有する層にワクチン抗原を含有させる。そうすることで、真皮層に存在するＤｅｎｄｒｉｔｉｃ細胞にワクチン抗原が送達されやすくなる。ワクチンアジュバントは、先端部を有する層に含有させてよく、又は、先端部を有する層よりも底部の方向に位置する層に含有させてもよい。ワクチンアジュバントを、先端部を有する層よりも底部の方向に位置する層に含有させた場合、ワクチンアジュバントは、表皮層に存在するＬａｎｇｅｒｈａｎｓ細胞に送達されやすくなる。
【００５４】
溶解性マイクロニードル製剤は、３０〜１０００μｍ、好ましくは１５０〜５００μｍ、より好ましくは２００〜３５０μｍの底部直径、及び５０〜１５００μｍ、好ましくは１００〜７５０μｍ、より好ましくは２００〜６００μｍの挿入方向長さを有する。溶解性マイクロニードル製剤の寸法がこの範囲外であると、強度が不足したり、刺入性が低下したりする。より具体的には、溶解性マイクロニードル製剤は挿入方向長さ約５００μｍ、底部直径約３００μｍの円錐状であってよい。
【００５５】
得られた溶解性マイクロニードル製剤はヒト又は動物の体内にワクチン抗原及びワクチンアジュバントを投与するために使用される。投与方法は、まず、溶解性マイクロニードル製剤の先端部を皮膚に向け、その支持体を皮膚に対して指で押すことで、マイクロニードルを皮膚から体内へ刺入させる。指で押す代わりに、衝撃力を印加することで、より深く刺入することができる。
【００５６】
＜その他のワクチン製剤＞
本発明は、鋳型を用いた充填法により調製する溶解性マイクロニードルに限定されるものではない。マイクロニードルの表面をデキストラン硫酸及びワクチン抗原でコーティングすることによってもマイクロニードル製剤を調製することができる。例えば、金属製、生分解性ポリマー物質あるいはプラスチック製のマイクロニードルの皮膚へ穿刺可能な先端部をデキストラン硫酸及びワクチン抗原でコーティングすることによっても本発明の目的を達成することができる。
【００５７】
例えば、金属、プラスチックあるいは生分解性高分子物質を使用して円錐台形状を有するマイクロニードルの土台部を作製しておき、この土台部の上面に本発明のマイクロニードルを形成してもよい。そのような二層型溶解性マイクロニードル製剤は、例えば、マイクロニードルの土台部の上面に、抗原物質、デキストラン硫酸、及び要すれば水溶性の洩糸性高分子物質を含む水性粘調液を付着して曳き延ばし、乾燥させる等の方法で、その先端部を針状に整形することができる。
【００５８】
また、マイクロニードル表面全体をいったんデキストラン硫酸あるいはその誘導体でコーティングを行い、乾燥する。その後、ワクチン抗原を含む液で皮膚へ穿刺可能な先端部分の表面をコーティングすることによっても本発明の目的を達成することができる。
【００５９】
また、中空のマイクロニードルを用いる皮内注射器を使用して、デキストラン硫酸を添加したワクチン抗原液を皮膚の表皮層もしくは真皮層へ注入することによっても本発明の目的を達成することができる。
【００６０】
また、金属製あるいはプラスチック製マイクロニードルで皮膚の表皮から真皮層に達する穿孔を開け、その後、デキストラン硫酸を添加したワクチン抗原液を塗布することによっても目的を達成することができる。
【実施例】
【００６１】
以下に実施例をあげて具体的な実施形態を説明する。もちろん、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００６２】
（実施例１）
ヒアルロン酸（商品名「ヒアルロン酸  ＦＣＨ−ＳＵ」、キッコーマンバイオケミファ社製、平均分子量５〜１１万）の６ｍｇ、高分子デキストラン（商品名「デキストラン７０」、名糖産業株式会社製、平均分子量７万）の１２ｍｇ、卵白アルブミン（商品名「Ovalbumin」、Sigma-Aldrich社製,St. Louis, MO, USA）５ｍｇにｐＨ７．４のリン酸バッファーの１５０マイクロリットルを加えて攪拌することにより、第１の粘調液（ヒドロゲル）を調製した。１平方センチメートルあたりに深さ約５００ミクロン、開口部直径約３００ミクロンの逆円錐状の細孔を３００個有するメス型の上にこの粘調液を塗布し、加圧条件下でメス型に充填し、乾燥させた。【００６３】
コンドロイチン硫酸ナトリウム（商品名「コンドロイチン硫酸Cナトリウム」、ナカライテスク社製）の６００ｍｇ、デキストラン硫酸（商品名「デキストラン硫酸ナトリウム」、ナカライテスク社製、平均分子量５０００〜６０００）の２．４ｇにｐＨ７．４のリン酸バッファー２．１ｍＬを加えて攪拌することにより第２の粘調液を調製した。【００６４】
酢酸セルロースとヒドロキシプロピルセルロースの重量比１００：１０の混合物を打錠することにより、直径約１．５ｃｍ、厚さ約２ｍｍの円形の支持基盤を作製した。【００６５】
支持基盤の片面に第２の粘調液を塗り、メス型の上に被せ、加圧下で乾燥を行った。６時間後に支持基盤をメス型から引き離すことにより３００本のマイクロニードルをアレイ状に構築したマイクロニードル・アレイ・チップを得た。【００６６】
（比較例１）
デキストラン硫酸の代わりに高分子デキストランの２．４ｇを使用して第２の粘調液を調製すること以外は実施例１と同様にしてマイクロニードル・アレイ・チップを得た。【００６７】
（実施例２）
コンドロイチン硫酸ナトリウム（商品名「コンドロイチン硫酸Cナトリウム」、ナカライテスク社製）の６ｍｇ、デキストラン硫酸（商品名「デキストラン硫酸ナトリウム」、ナカライテスク社製、平均分子量５０００〜６０００）の２４ｍｇに卵白アルブミン（商品名「Ovalbumin」、Sigma-Aldrich社製,St. Louis, MO, USA）５ｍｇ、ｐＨ７．４のリン酸バッファーの２００マイクロリットルを加えて攪拌することにより、第１の粘調液を調製した。１平方センチメートルあたりに深さ約５００ミクロン、開口部直径約３００ミクロンの逆円錐状の細孔を３００個有するメス型の上にこの粘調液を塗布し、加圧条件下でメス型に充填し、乾燥させた。【００６８】
コンドロイチン硫酸ナトリウム（商品名「コンドロイチン硫酸Cナトリウム」、ナカライテスク社製）の６００ｍｇ、高分子デキストラン（商品名「デキストラン７０」、名糖産業株式会社製、平均分子量７万）の１．２ｇにｐＨ７．４のリン酸バッファー２．１ｍＬを加えて攪拌することにより第２の粘調液を調製した。【００６９】
酢酸セルロースとヒドロキシプロピルセルロースの重量比１００：１０の混合物を打錠することにより、直径約１．５ｃｍ、厚さ約２ｍｍの円形の支持基盤を作製した。【００７０】
支持基盤の片面に第２の粘調液を塗り、メス型の上に被せ、加圧下で乾燥を行った。６時間後に支持基盤をメス型から引き離すことにより３００本のマイクロニードルをアレイ状に構築したマイクロニードル・アレイ・チップを得た。【００７１】
（実施例３）
体重約２３０ｇのＷｉｓｔａｒ系雄性ラットを用いて経皮ワクチンの有効性の評価を行った。実施例１および比較例１の製剤を１チップずつ除毛したラットの皮膚へ穿刺により投与した。投与はＤａｙ０およびＤａｙ１４の２回、採血は、Ｄａｙ１４およびＤａｙ２８とした。得られた血液試料を用いて総抗体価Ｉｇ（Ｇ＋Ａ＋Ｍ）を測定した。【００７２】
製剤の初回投与から１４日後における総抗体価Ｉｇ（Ｇ＋Ａ＋Ｍ）は、実施例１の製剤では１５．１±２．６Ｘ１０４Ｕ／ｍＬ、比較例１の製剤では３．１±０．７Ｘ１０４Ｕ／ｍＬであった。【００７３】
製剤の初回投与から２８日後における総抗体価Ｉｇ（Ｇ＋Ａ＋Ｍ）は、実施例１の製剤では３１０．２±４７．３Ｘ１０４Ｕ／ｍＬ、比較例１の製剤では１４３．３±３５．７Ｘ１０４Ｕ／ｍＬであった。【００７４】
デキストラン硫酸を基剤として用いた実施例１の溶解性マイクロニードル製剤では、従来の水溶性及び曳糸性の高分子物質を基剤とする比較例１の溶解性マイクロニードル製剤に比べて高い抗体価が誘導された。【００７５】
（実施例４）
ヒアルロン酸（商品名「ヒアルロン酸  ＦＣＨ−ＳＵ」、キッコーマンバイオケミファ社製、平均分子量５〜１１万）の２０ｍｇ、高分子デキストラン（商品名「デキストラン７０」、名糖産業株式会社製、平均分子量７万）の４０ｍｇ、標識用色素である青色１号４．０ｍｇにｐＨ７．４のリン酸バッファーの５２０マイクロリットルを加えて攪拌することにより第１の粘調液を調製した。１平方センチメートルあたりに深さ約５００ミクロン、開口部直径約３００ミクロンの逆円錐状の細孔を３００個有するメス型の上にこの粘調液を塗布し、加圧条件下でメス型に充填し、乾燥させた。【００７６】
コンドロイチン硫酸ナトリウム（商品名「コンドロイチン硫酸Cナトリウム」、ナカライテスク社製）の６００ｍｇ、デキストラン硫酸（商品名「デキストラン硫酸ナトリウム」、ナカライテスク社製）の２．４ｇにｐＨ７．４のリン酸バッファー１．５ｍＬを加えて攪拌することにより第２の粘調液を調製した。【００７７】
酢酸セルロースとヒドロキシプロピルセルロースの重量比１００：１０の混合物を打錠することにより、直径約１．５ｃｍ、厚さ約２ｍｍの円形の支持基盤を作製した。【００７８】
支持基盤の片面に第２の粘調液を塗り、メス型の上に被せ、加圧下で乾燥を行った。６時間後に支持基盤をメス型から引き離すことにより３００本のマイクロニードルをアレイ状に構築したマイクロニードル・アレイ・チップを得た。【００７９】
（比較例２）
ヒアルロン酸（商品名「ヒアルロン酸  ＦＣＨ−ＳＵ」、キッコーマンバイオケミファ社製、平均分子量５〜１１万）の４４０ｍｇ、高分子デキストラン（商品名「デキストラン７０」、名糖産業株式会社製、平均分子量７万）の８８０ｍｇにｐＨ７．４のリン酸バッファー１．０ｍＬを加えて攪拌することにより粘調液を調製した。【００８０】
コンドロイチン硫酸ナトリウム及びデキストラン硫酸を含む第２の粘調液の代わりに上記粘調液を使用すること以外は実施例４と同様にして、マイクロニードル・アレイ・チップを得た。【００８１】
（実施例５）
実施例４及び比較例２で得られた溶解性マイクロニードルをキーエンス社製ビデオマイクロスコープを用いて観察を行い、その結果を図１および図２に示す。【００８２】
実施例４で得たマイクロニードルは先端部が青色１号の存在により青色に標識されており、かつ根元部との境界が明確に示されている。青色に標識された先端部の長さを測定したところ１４８μｍであった。一方、比較例２で得られたマイクロニードルの場合、先端部に充填したはずの青色１号が根元部に向かって拡散したために、先端部から根元部まで一様に青色に標識された。【００８３】
（実施例６）
デキストラン硫酸（商品名「デキストラン硫酸ナトリウム」、ナカライテスク社製、平均分子量５０００〜６０００）の２４ｍｇに卵白アルブミン（商品名「Ovalbumin」、Sigma-Aldrich社製,St. Louis, MO, USA）５ｍｇ、ｐＨ７．４のリン酸バッファーの６０マイクロリットルを加えて攪拌することにより、第１の粘調液を調製した。１平方センチメートルあたりに深さ約５００ミクロン、開口部直径約３００ミクロンの逆円錐状の細孔を３００個有するメス型の上にこの粘調液を塗布し、加圧条件下でメス型に充填し、乾燥させた。【００８４】
コンドロイチン硫酸ナトリウム（商品名「コンドロイチン硫酸Cナトリウム」、ナカライテスク社製）の６００ｍｇ、高分子デキストラン（商品名「デキストラン７０」、名糖産業株式会社製、平均分子量７万）の６００ｍｇにｐＨ７．４のリン酸バッファー１．０ｍＬを加えて攪拌することにより第２の粘調液を調製した。【００８５】
酢酸セルロースとヒドロキシプロピルセルロースの重量比１００：１０の混合物を打錠することにより、直径約１．５ｃｍ、厚さ約２ｍｍの円形の支持基盤を作製した。【００８６】
支持基盤の片面に第２の粘調液を塗り、メス型の上に被せ、加圧下で乾燥を行った。６時間後に支持基盤をメス型から引き離すことにより３００本のマイクロニードルをアレイ状に構築したマイクロニードル・アレイ・チップを得た。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明は、強度及び溶解性が高く、免疫学的活性も高い溶解性マイクロニードル製剤の製造を可能とするものであり、産業上有用である。
【図１】
2019021954.tif 000002
【図２】
2019021954.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月14日(2019.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基剤としてデキストラン硫酸又はその誘導体を含む溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項２】
更にワクチン抗原を含む請求項１に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項３】
先端部と底部を結ぶ方向に積層された複数の層を有する請求項１又は２に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項４】
先端部を有する層にワクチン抗原が含まれている請求項３に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項５】
底部を有する層にはワクチン抗原が含まれていない請求項３又は４に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項６】
ワクチン抗原が含まれている層とは別の層に基剤としてデキストラン硫酸又はその誘導体が含まれている請求項３〜５のいずれか一項に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項７】
ワクチン抗原が含まれている層よりも底部の方向に位置する層に基剤としてデキストラン硫酸又はその誘導体が含まれている請求項６に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項８】
基剤として曳糸性及び水溶性を有する高分子物質を含む請求項１〜７のいずれか一項に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項９】
前記デキストラン硫酸又はその誘導体はワクチンアジュバントとして使用される請求項１〜８のいずれか一項に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項１０】
基剤としてデキストラン硫酸と水溶性及び曳糸性の高分子物質との混合物が使用される場合は、デキストラン硫酸又はその誘導体は、基剤の５０重量％以上になる量で含まれている請求項１〜９のいずれか一項に記載の溶解性マイクロニードル製剤。
【請求項１１】
前記曳糸性及び水溶性を有する高分子物質がヒアルロン酸又はコンドロイチン硫酸ナトリウムである請求項８〜１０のいずれか一項に記載のマイクロニードル製剤。
【請求項１２】
支持体と、支持体の上に固定された請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマイクロニードル製剤とを、有するマイクロニードル製剤。
【請求項１３】
支持体と、支持体の上にアレイ状に構築された請求項１〜１２のいずれか一項に記載のマイクロニードル製剤とを、有する、マイクロニードル・アレイ・チップ。
【国際調査報告】
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2019021954.tif 000005
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