(57)【要約】  試料の前処理を行う前処理部１０１と、前処理部１０１において前処理された試料のＬＣ分離を行う分離部１１１と、分離部１１１でＬＣ分離された試料の分析を行う検出部１１２と、前処理部１０１、分離部１１１、検出部１１２を制御する制御部１１３と、を備え、制御部１１３は、試料の精製を行う際に用いる磁性ビーズ５０３の官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および溶出処理後に磁性ビーズ５０３の官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器１０６内で実行する制御を行う。これにより、測定対象物質の回収率の向上と、装置の運転効率の向上や装置の小型化とを両立することが可能となる。
2019130907.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料の前処理を行う前処理部と、
前記前処理部において前処理された試料のＬＣ分離を行う分離部と、
前記分離部でＬＣ分離された試料の分析を行う検出部と、
前記前処理部、前記分離部、前記検出部を制御する制御部と、を備えた自動分析装置において、
前記制御部は、前記試料の精製を行う際に用いる担体の官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および前記溶出処理後に前記担体の官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器内で実行する
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項２】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記担体の官能基が温度応答性高分子であり、
前記失活処理は、前記反応容器内の温度を前記溶出処理時より低温にする
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項３】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記担体の官能基が逆相モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より低ｐＨにする
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項４】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記担体の官能基が逆相モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より高ｐＨにする
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項５】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記担体の官能基が抗体であり、
前記失活処理は、前記反応容器内の温度を前記抗体のたんぱく質が変質する温度以上に昇温する
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項６】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記担体の官能基が順相モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より低ｐＨ、または高ｐＨにする
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項７】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記担体の官能基がイオン交換モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より低ｐＨ、または高ｐＨにする
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項８】
請求項１に記載の自動分析装置において、
前記検出部は、前記ＬＣ分離された試料の検出を行う質量分析計である
ことを特徴とする自動分析装置。
【請求項９】
試料の前処理を行う前処理工程と、
前記前処理工程において前処理された試料のＬＣ分離を行う分離工程と、
前記分離工程でＬＣ分離された試料の分析を行う検出工程と、を有する前記試料の分析方法において、
前記前処理工程では、前記試料の精製を行う際に用いる担体の官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および前記溶出処理後に前記担体の官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器内で実行する
ことを特徴とする分析方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の分析方法において、
前記担体の官能基が温度応答性高分子であり、
前記失活処理は、前記反応容器内の温度を前記溶出処理時より低温にする
ことを特徴とする分析方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の分析方法において、
前記担体の官能基が逆相モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より低ｐＨ、または高ｐＨにする
ことを特徴とする分析方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の分析方法において、
前記担体の官能基が抗体であり、
前記失活処理は、前記反応容器内の温度を前記抗体のたんぱく質が変質する温度以上に昇温する
ことを特徴とする分析方法。
【請求項１３】
請求項９に記載の分析方法において、
前記担体の官能基が順相モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より低ｐＨ、または高ｐＨにする
ことを特徴とする分析方法。
【請求項１４】
請求項９に記載の分析方法において、
前記担体の官能基がイオン交換モードであり、
前記失活処理は、前記反応容器内の液体のｐＨを前記溶出処理時より低ｐＨ、または高ｐＨにする
ことを特徴とする分析方法。
【請求項１５】
請求項９に記載の分析方法において、
前記検出工程は、前記ＬＣ分離された試料の検出を行う質量分析計により検出を行う
ことを特徴とする分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体試料を分析する自動分析装置および分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
分解能の向上した固相抽出装置を用いる液体クロマトグラフの一例として、特許文献１には、固相抽出カラムには、オートサンプラーから試料が導入され、試料中の目的成分が吸着され、固相抽出カラムに試料を導入する時の方向と逆方向から、固相抽出カラムに吸着された目的成分を溶解し得る分離溶離液若しくは試料溶解溶媒を流入させて溶解した後、溶解した目的成分を分離カラムに導入して分離分析を行うことが記載されている。【０００３】
また、特許文献２には、高濃度塩の溶液に含まれる有機成分を高感度に定量する方法の一例として、無機塩濃度が水１リットルに対して５０ｇ以上である高濃度塩溶液を活性炭に通液して高濃度塩溶液中の有機成分を活性炭に吸着させる工程と、吸着工程後の活性炭に溶剤を通液して、吸着された有機成分を溶出する工程と、有機成分の溶出された溶剤を濃縮乾燥する工程と、濃縮乾燥後の有機成分を試料に用いてクロマトグラフにより分析する工程とを実行することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１１−１２５６２４号公報
【０００５】
【特許文献２】特開２００３−２２２６１８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
自動分析装置は、試料検査の手順の一部を自動化することにより、迅速で効率的な臨床検査業務に貢献している。【０００７】
一般的な自動分析装置のひとつとして、磁性ビーズを担体とした免疫法を用いて試料の精製を行う免疫装置がある。一般的な免疫装置は、試料や試薬および磁性ビーズ等の溶液を所定量反応容器に分注するための分注機構、反応容器内の試料や試薬および磁性ビーズ等を撹拌する撹拌機構、磁性ビーズを移動させるための磁石が備わった機構、および光学測定機構を備えている。【０００８】
磁性ビーズの表面には抗体が結合されており、抗原−抗体反応がビーズ表面上で行われることで試料が精製される。【０００９】
具体的には、１）磁性ビーズ表面に測定対象物質を吸着する工程、２）洗浄溶液を反応容器に吐出し、洗浄を行う工程、３）溶出溶液を反応容器に吐出し、磁性ビーズ表面から測定対象物質を溶出する工程、４）光学測定機構を用いて測定する工程、を有している。【００１０】
このほかに、試料の前処理を行う前処理部と、ＬＣ（Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）分離を行う分離部と、ＬＣ分離された測定対象物質を検出する検出部および各機構を制御する制御部を備えている自動分析装置がある。【００１１】
この自動分析装置では、前処理部は、一般的な免疫装置と同様に磁性ビーズを用いて測定対象物質を精製する機構を有する。分離部は、測定対象物質を分離するＬＣカラム、ＬＣカラムに測定対象物質を送液するポンプおよび流路を変更するバルブを備えている。【００１２】
磁性ビーズの表面には、例えば、温度応答性高分子（ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミドに疎水性共重合体である例えばメタクリル酸ブチル）からなる官能基が結合している。温度応答性高分子は、磁性ビーズ上の高分子の相転移温度より低温側では伸展して水和するが、高温側では収縮して脱水するという、外部温度に応答して鋭敏で可逆的な反応を示す。つまり、反応容器内の温度を制御することにより、疎水性相互作用を制御可能であり、測定対象物質と磁性ビーズへの吸着／遊離が制御可能である。【００１３】
また、他のモードとして、逆相モードがあげられる。これは、測定対象物質の親水性／疎水性の物性を利用し、水濃度の高い溶液に溶解した測定対象物質を磁性ビーズに吸着させ、洗浄溶液を送液し洗浄した後に、有機溶媒濃度の高い溶液を送液し、測定対象物質を磁性ビーズから溶離することで、測定対象物質の精製を行う。【００１４】
さらに、他のモードとして、順相モードがあげられる。これは、測定対象物質の親水性／疎水性の物性を利用しているが、逆相モードの反対の吸着機構である。有機溶媒濃度の高い溶液に溶解した測定対象物質を磁性ビーズに吸着させ、洗浄溶液を送液して洗浄した後に、水濃度の高い溶液を送液し、測定対象物質を磁性ビーズから溶離することで、測定対象物質の精製を行う。【００１５】
さらに、他のモードとして、抗原−抗体反応があげられる。これは免疫装置と同様に、磁性ビーズ表面に抗体が結合されており、抗原−抗体反応がビーズ表面上で行われることで、試料が精製される。【００１６】
前処理部で精製した溶液を分離部へ導入する場合、ＬＣカラムに測定対象物質が効率的にＬＣカラムに吸着できるようにするため、精製した溶液組成を調製することが必要となる。一般的には、溶液組成はポンプに送液されるイニシャルの溶液組成に合わせることになる。【００１７】
イニシャルの溶液組成は、主にＬＣカラムの分離モードにより選択される。分離モードは前述の磁性ビーズと同様に、温度応答性高分子、逆相モード、順相モード、イオン交換モードおよびアフィニティークロマト（抗原−抗体）モードが考えられる。【００１８】
溶液組成を調製しない場合、前処理部で精製した溶液がＬＣカラムに導入されると、測定対象物質がカラムに充分量吸着できない可能性がある。つまり、後段の検出部に導入される測定対象物質の量が充分量確保できず、検出精度が劣化することになる。すなわち、ＬＣカラムに充分量吸着させるためには、前処理部で精製した溶液組成の調製が必要になる。【００１９】
特許文献１には、試料中の測定対象物質を吸着する固相抽出カラムと、固相抽出カラムに吸着された試料の測定対象物質が導入され、測定対象物質を分離する分離カラムと、分離カラムによって分離された測定対象物質を検出する発明が開示されている。特許文献２には、有機成分を活性炭に吸着させ、活性炭に用材を通液して吸着成分を溶出させ、溶出物を濃縮乾燥させた後に、有機成分を液体クロマトグラフィで分析する発明が開示されている。【００２０】
以下、一例として、磁性ビーズの表面上に温度応答性高分子を、ＬＣカラムに逆相モードを用いた場合について説明する。【００２１】
前処理部で用いる溶液は血清試料（水濃度が高い溶液）であり、反応容器内を相転移温度より高い（疎水性）状態で試料の吸着を行い、洗浄溶液（水濃度が高い溶液）により洗浄した後、溶出溶液（有機溶媒濃度の高い溶液）を導入し、ビーズ表面上の親水性／疎水性の変化を利用し、反応容器中への測定対象物質の溶離を実施する。この溶液（有機溶媒濃度の高い溶液）をＬＣカラムに導入すると、測定対象物質が素通りするため、回収率が著しく低下する。【００２２】
この課題を解決するため、反応容器内に溶出した溶出液に水濃度の高い溶媒を添加した場合、反応容器内の親水性／疎水性の変化により、磁性ビーズに再び測定対象物質が吸着することになる。そこで、前処理部で精製した溶液を一旦別の専用容器（添加容器）に分注した後、水濃度の高い溶液を添加する方法が考えられる。しかし、この場合は、添加容器の消耗品が増加するのに加えて、装置面積が増大するという課題が新たに発生する。【００２３】
このように、測定対象物質の回収率の向上と、装置の運転効率の向上や装置の小型化とを両立することが困難であった。【００２４】
本発明は、測定対象物質の回収率の向上と、装置の運転効率の向上や装置の小型化とを両立することが可能な自動分析装置および分析方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明は、上記課題を解決する手段を複数含んでいるが、その一例を挙げるならば、試料の前処理を行う前処理部と、前記前処理部において前処理された試料のＬＣ分離を行う分離部と、前記分離部でＬＣ分離された試料の分析を行う検出部と、前記前処理部、前記分離部、前記検出部を制御する制御部と、を備えた自動分析装置において、前記制御部は、前記試料の精製を行う際に用いる担体の官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および前記溶出処理後に前記担体の官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器内で実行することを特徴とする。【００２６】
また、他の一例をあげるならば、試料の前処理を行う前処理工程と、前記前処理工程において前処理された試料のＬＣ分離を行う分離工程と、前記分離工程でＬＣ分離された試料の分析を行う検出工程と、を有する前記試料の分析方法において、前記前処理工程では、前記試料の精製を行う際に用いる担体の官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および前記溶出処理後に前記担体の官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器内で実行することを特徴とする。
【発明の効果】
【００２７】
本発明によれば、測定対象物質の回収率の向上と、装置の運転効率の向上や装置の小型化とを両立することができる。上記した以外の課題、構成および効果は、以下の実施例の説明により明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明の実施例に係る自動分析装置の概略図である。
【図２】実施例に係る担体（磁性ビーズ）の概略図である。
【図３】実施例に係る担体（磁性ビーズ）の概略図である。
【図４】実施例に係る分離部の概略図である。
【図５】実施例に係る分離部の流路切換の概略図である。
【図６】実施例に係る分離部の流路切換の概略図である。
【図７】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図８】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図９】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図１０】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図１１】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図１２】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図１３】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【図１４】実施例に係る分析工程のうち、前処理工程の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明の自動分析装置および分析方法の実施例について図１乃至図１４を用いて説明する。なお、実施例は自動分析装置を主な対象としているが、本開示は分析装置全般に適用可能なものである。本開示は、例えば、遺伝子分析装置、質量分析装置、細菌検査装置にも適用できる。
【００３０】
最初に、本実施例にかかる自動分析装置の概略について図１乃至図６を用いて説明する。図１は、本実施例に係る自動分析装置の概略図である。図２および図３は、実施例に係る磁性ビーズの概略を示す図である。図４は分離部１１１に係る概略図である。図５および図６は分離部１１１のインジェクションバルブ２０３のポジションに係る概略図である。
【００３１】
図１において、自動分析装置１０は、前処理部１０１、分離部１１１、検出部１１２および制御部１１３から構成される。
【００３２】
前処理部１０１は、試料の前処理を行う機器から構成され、試薬容器１０３を保持する試薬槽１０２、試薬容器１０３から試薬を分注／吐出する分注ノズル１０４、反応容器１０６を保持する反応容器槽１０５、反応容器１０６内の溶液を撹拌する撹拌槽１０７、反応容器１０６内の磁性ビーズ（担体）の収集を行う磁石槽１０８、反応容器１０６を撹拌槽１０７または磁石槽１０８に移動するグリッパ１０９、および前処理部１０１で精製後の反応容器１０６を分離部１１１に移送する試料導入ノズル１１０から構成される。
【００３３】
試薬槽１０２は、５種類の試薬容器１０３を保持している。
【００３４】
試薬容器１０３には試料、試薬および磁性ビーズ溶液等が保持される。各溶液について下記に説明する。試料は、自動分析装置で検査される血清、血漿、血液、細胞、ＤＮＡ、ＲＮＡ、組織等を含む生体試料のことである。試薬は、試料を適用な濃度に希釈する希釈溶液、試料濃度の補正を行う内部標準物質溶液、反応容器１０６内で洗浄を行う洗浄溶液、反応容器１０６内で溶出を行う溶出溶液および溶出溶液の調製を行う添加溶液のことである。磁性ビーズ溶液は、磁性ビーズが溶液に懸濁されたスラリー状になっている溶液のことである。
【００３５】
次に、図２および図３を用いて本実施例において用いる磁性ビーズの概要について説明する。
【００３６】
図２に示すように、測定対象物質４０３をテストステロンとする場合、磁性ビーズ４０１の表面に結合している官能基は温度応答性高分子４０２とする。また後述するＬＣカラム２０８は逆相モードとする。相転移温度より低温側である場合、図２に示すように、磁性ビーズ４０１の表面に結合している温度応答性高分子４０２は親水性となり、テストステロンを吸着する。これに対し、相転移温度より高温側にすると、図３に示すように温度応答性高分子４０２は疎水性となり、吸着しているテストステロンが離れないように保持する。
【００３７】
なお、磁性ビーズ表面に結合している官能基は温度応答性高分子以外にもあり、本発明の自動分析装置１０では、温度応答性高分子に加えて、抗体、逆相モード、順相モード、イオン交換モード、およびＨＩＬＩＣ（親水クロマトグラフィ、Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）モードのいずれか一つ以上を用いることができる。
【００３８】
分注ノズル１０４は、試薬容器１０３から試薬を吸引し、反応容器１０６に分注する機能に加えて、反応容器１０６から溶液を分注し、廃棄する機構である。本実施例の自動分析装置１０では合計で８つ備わっており、各々独立してＸ，Ｚ方向に移動することが可能である。
【００３９】
反応容器槽１０５は、各々の反応容器１０６の温度を５℃から５０℃までの範囲で温調制御が可能に構成されている。
【００４０】
撹拌槽１０７は、反応容器１０６内の溶液を撹拌する機構である。
【００４１】
磁石槽１０８は、反応容器１０６内の磁性ビーズを反応容器１０６内側壁面に移動させるための機構である。
【００４２】
グリッパ１０９は合計で８つ備わっており、各々独立してＸ，Ｚ方向に移動することが可能である。グリッパ１０９は反応容器１０６を撹拌槽１０７または磁石槽１０８に移動する機構である。
【００４３】
試料導入ノズル１１０は、Ｘ，Ｙ，Ｚ方向に移動可能であり、前処理が終了した溶液を吸引し、分離部１１１まで移動後に吐出する機構である。
【００４４】
次に、分離部１１１について図４乃至図６を用いて説明する。
【００４５】
分離部１１１は、前処理部１０１において前処理された試料のＬＣ分離を行うユニットであり、図４に示すように、送液溶媒２０１と、送液溶媒２０１を送液する送液ポンプ２０２と、インジェクションバルブ２０３と、サンプルループ２０４と、インジェクションポート２０５と、洗浄ポンプ２０６、洗浄溶媒２０７、およびＬＣカラム２０８から構成される。
【００４６】
測定対象物質をテストステロンとする場合、送液溶媒２０１には、Ａ液として０．１％ギ酸水溶液、Ｂ液として０．１％ギ酸を含むアセトニトリル溶液が用いられ、送液ポンプ２０２は０．４５ｍＬ／ｍｉｎの流量で送液する。
【００４７】
サンプルループ２０４の内径は０．５μｍであり、容量は２０μＬである。
【００４８】
インジェクションバルブ２０３は６方バルブであり、流路を切替えることにより２パターンの流路を構成することができる。
【００４９】
図５に示すように、ポジション１では、ポート１とポート６、ポート２とポート３、ポート４とポート５の流路が繋がる。ポジションポ２では、図６に示すように、ポート１とポート２、ポート２とポート３、ポート４とポート５の流路が繋がる。
【００５０】
検出部１１２は、分離部１１１でＬＣ分離された試料の分析を行うユニットであり、本実施例においては、イオン源および質量分析計で構成される。イオン源でのイオン化方法は、本実施例であれば、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ；ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）が挙げられる。
【００５１】
他のイオン化法としては、大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ；Ａｔｏｍｏｓｐｈｅｒｉｃ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）等がある。
【００５２】
質量分析計は、本実施例であれば、三連四重極型質量分析計を用いて、ＳＲＭ（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）モードにより測定対象成分の解析を行う。測定対象物質であるテストステロンの質量数はＱ１／Ｑ３＝ｍ／ｚ：２８９．１／９７．１、内部標準物質の質量数はＱ１／Ｑ３＝ｍ／ｚ：２９２．１／９７．１に設定する。面積値の比率を取得し、濃度既知の試料から作成した検量線を用いて、試料濃度を算出する。
【００５３】
なお、質量分析計は、四重極型質量分析計、イオントラップ型質量分析計等、他の種類の質量分析計を用いることもできる。
【００５４】
また、検出部１１２は、質量分析計以外にも、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ，Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、ガスクロマトグラフィおよびＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）等を用いることができる。
【００５５】
図１に戻り、制御部１１３は、上述した前処理部１０１、分離部１１１、検出部１１２を構成する各種機器（例えばバルブ、ポンプ等）の動作を制御するとともに、検出部１１２での検出結果から試料中の所定成分の濃度を演算するためのコンピュータ等から構成される。
【００５６】
本実施例の制御部１１３は、特に、前処理部１０１内の機器に対して、試料の精製を行う際に用いる磁性ビーズの官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および溶出処理後に磁性ビーズの官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器１０６内で実行させる制御を行う。
【００５７】
次に、本実施例に係る試料の分析方法について、測定対象物質５０１がテストステロン、磁性ビーズ表面に結合している官能基が温度応答性高分子、ＬＣカラムが逆相モードのケースを例にして、図７乃至図１４を参照して説明する。
【００５８】
まず、分析工程のうち、前処理部１０１内での工程について図７乃至図１４を用いて説明する。図７乃至図１４は、分析工程のうち、前処理工程の概略を示す図である。
【００５９】
分析工程のうち、前処理部１０１では下記工程が実行される。
【００６０】
１）吸着工程：  
分注ノズル１０４を用いて、試薬槽１０２に保持した試料（１００μＬの血清）を反応容器１０６内に分注する。次に、分注ノズル１０４を用いて、試薬槽１０２に保持した内部標準物質溶液（１００μＬの１００ｐｇ／ｍＬのテストステロン−ｄ３）を反応容器１０６内に分注する。そして、分注ノズル１０４を用いて、試薬槽１０２に保持した磁性ビーズ５０３を含む溶液（１００μＬの磁性ビーズ溶液）を反応容器１０６内に分注する。このタイミングでの反応容器１０６内の様子が図７に示す状態である。
【００６１】
その後、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を撹拌槽１０７に移送し、反応容器１０６内の溶液を撹拌する。前処理部１０１の温度は、相転移温度より高い（疎水性）状態である４５℃に設定されている。これにより、図８に示すように、磁性ビーズ５０３に測定対象物質５０１が吸着することになる。
【００６２】
本実施例では、試料中の測定対象物質５０１の濃度がｐｇ／ｍＬレベルと低いため、試料の希釈は実施しないが、例えば抗てんかん剤のような測定対処物質の濃度がμｇ／ｍＬレベルと高い場合は、内部標準物質溶液を反応容器１０６に分注した後に、希釈溶液を分注することもある。希釈溶液の分注は希釈したい濃度により複数回行うこともある。
【００６３】
２）廃棄工程１：  
次いで、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を磁石槽１０８に移送する。これにより、図９に示すように、測定対象物質５０１および内部標準物質が吸着した磁性ビーズ５０３が反応容器１０６内側壁面に移動する。この位置で分注ノズル１０４により反応容器１０６内の溶液を吸引し、廃棄する。
【００６４】
３）洗浄工程：  
次いで、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を反応容器槽１０５に移送し、分注ノズル１０４を用いて、洗浄溶液（１００μＬの５％アセトニトリル水溶液）を反応容器１０６内に分注する。その後、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を撹拌槽１０７に移送し、反応容器１０６内の溶液を撹拌する。これにより、図１０に示すように、磁性ビーズ５０３に吸着されていた測定対象物質５０１や内部標準物質以外の夾雑物５０２が吸着から外され、洗浄されることになる。
【００６５】
４）廃棄工程２：  
次いで、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を磁石槽１０８に移送する。これにより、図１１に示すように、測定対象物質５０１および内部標準物質が吸着した磁性ビーズ５０３が反応容器１０６内側壁面に移動する。この位置で分注ノズル１０４により反応容器１０６内の溶液を吸引し、廃棄する。
【００６６】
５）  溶出工程：  
次いで、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を反応容器槽１０５に移送し、分注ノズル１０４を用いて、溶出溶液（１００μＬのアセトニトリル溶液）を反応容器１０６内に分注する。その後、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を撹拌槽１０７に移送し、反応容器１０６内の溶液を撹拌する。これにより、図１２に示すように、磁性ビーズ５０３の温度応答性高分子５０４に吸着した測定対象物質５０１および内部標準物質が溶出されることになる。
【００６７】
６）  失活工程：  
次いで、前処理部１０１の温度を調整して、反応容器１０６内の温度を、相転移温度より低い（親水性）状態である５℃に設定する。これにより、図１３に示すように、磁性ビーズ５０３表面上の温度応答性高分子５０４のコンフォメーションが変化し、磁性ビーズ５０３の官能基が失活する。
【００６８】
なお、磁性ビーズ５０３の官能基が温度応答性高分子５０４であるときについて説明したが、本失活工程は、磁性ビーズ５０３の官能基が逆相モード，ＨＩＬＩＣモードを含む順相モード，あるいはイオン交換モードのときは、官能基の耐性がない高い酸性溶液を添加して反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より高ｐＨにする、あるいは官能基の耐性がない高いアルカリ性溶液を添加して反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より低ｐＨにする工程とする。
【００６９】
また、磁性ビーズ５０３の官能基が抗体であるときは、反応容器１０６内の温度を抗体のたんぱく質が変質する温度以上に昇温する工程や、官能基の耐性がない高い酸性溶液を添加して反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より高ｐＨにする、あるいは官能基の耐性がない高いアルカリ性溶液を添加して反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より低ｐＨにする工程とする。
【００７０】
７）  添加工程：  
次いで、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を反応容器槽１０５に移送し、分注ノズル１０４を用いて、添加溶液（２００μＬの蒸留水）を反応容器１０６内に分注する。その後、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を撹拌槽１０７に移送し、反応容器１０６内の溶液を撹拌する。これにより、図１４に示すように、反応容器１０６内の溶液組成が６６．６％の水濃度が高い濃度に調製される。その後、グリッパ１０９を用いて反応容器１０６を磁石槽１０８に移送し、磁性ビーズ５０３が反応容器１０６内側壁面に移動する。
【００７１】
次に、試料導入ノズル１１０により溶出後の調製した溶液を８０μＬ吸引し、分離部１１１に移動後の溶液を吸引し、分離部１１１に移動後、全量の８０μＬを吐出する。同時に、使用済みの反応容器１０６はグリッパ１０９を用いて、廃棄場所（図示省略）に廃棄する。
【００７２】
本実施例で記載した試薬容器１０３に保持される試料、希釈溶液、内部標準物質溶液、洗浄溶液、溶出溶液および添加溶液は一例であり、測定対象物質５０１、磁性ビーズ５０３の官能基およびＬＣカラムの分離モードにより分析に適した溶液を選択することができる。
【００７３】
上記吸着工程、廃棄工程１、洗浄工程、廃棄工程２、溶出工程、失活工程、添加工程が試料の前処理を行う前処理工程に相当し、本発明では、これらの工程の全てを一つの試料に対して一つの反応容器１０６内で実行する。
【００７４】
次に、分離部１１１における分離工程と検出部１１２における検出工程について説明する。
【００７５】
８）  試料導入工程（分離工程）：  
最初に、インジェクションバルブ２０３はポジション１に設定されており、試料導入ノズル１１０の先端が、ポート６に接続し溶出後の調製した溶液が吐出される。ポジション１では、ポート６−ポート１−サンプルループ２０４−ポート４−ポート５が繋がっていることから、サンプルループ２０４に溶液が満たされる。
【００７６】
その後、インジェクションバルブ２０３をポジション２に切換えることによって、ポート２−ポート１−サンプルループ２０４−ポート４−ポート３が繋がる。そのことで送液ポンプ２０２からの送液される送液溶媒２０１にサンプルループ２０４に満たされた溶液が、後段のＬＣカラム２０８に導入される。
【００７７】
インジェクションバルブ２０３がポジション２に切り換わると送液ポンプ２０２のグラジエントが開始され、Ｂ液：０％（０−３０ｓ）−１００％（９０−１２０ｓ）−０％（１２０．１−１８０ｓ）の定圧グラジエント分析を実施することで、ＬＣカラムでの測定対象物質５０１および内部標準物質の分離が行われ、検出部１１２に導入される。
【００７８】
９）  検出工程：  
測定対象物質５０１が検出部１１２に導入された後、質量分析計により測定対象物質５０１の質量分析を行う。
【００７９】
次に、本実施例の効果について説明する。
【００８０】
上述した本実施例の自動分析装置１０は、試料の前処理を行う前処理部１０１と、前処理部１０１において前処理された試料のＬＣ分離を行う分離部１１１と、分離部１１１でＬＣ分離された試料の分析を行う検出部１１２と、前処理部１０１、分離部１１１、検出部１１２を制御する制御部１１３と、を備え、制御部１１３は、試料の精製を行う際に用いる磁性ビーズ５０３の官能基に付着させた試料の測定対象成分を溶媒で溶出する溶出処理、および溶出処理後に磁性ビーズ５０３の官能基を失活させる失活処理を一つの試料に対して一つの反応容器１０６内で実行する制御を行う。
【００８１】
このように、担体（磁性ビーズ）に吸着させた測定対象成分を溶媒で溶出した溶出溶液をＬＣカラムで吸着可能な組成になるように調製する前に、反応容器１０６内で担体（磁性ビーズ）表面に結合した官能基を失活させる処理を行うため、専用容器を用いずに反応容器１０６内で自動調製を行うことが可能となる。そのことにより、測定対象物質５０１の回収率の向上を達成した上で容器等の消耗品を削減することができ、装置面積の増大を防ぐとともに装置の運転効率の向上や装置の小型化を両立することができる。
【００８２】
また、磁性ビーズ５０３の官能基が温度応答性高分子であり、失活処理は反応容器１０６内の温度を溶出処理時より低温にする、または磁性ビーズ５０３の官能基が逆相モードであり、失活処理は反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より低ｐＨまたは高ｐＨにする、または磁性ビーズ５０３の官能基が抗体であり、失活処理は反応容器１０６内の温度を抗体のたんぱく質が変質する温度以上に昇温する、または磁性ビーズ５０３の官能基が順相モードであり、失活処理は反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より低ｐＨまたは高ｐＨにする、または磁性ビーズ５０３の官能基がイオン交換モードであり、失活処理は反応容器１０６内の液体のｐＨを溶出処理時より低ｐＨまたは高ｐＨにするため、官能基に応じた失活処理を実行することができ、測定対象物質５０１の回収率を高めることができる。
【００８３】
＜その他＞  
なお、本発明は上記の実施例に限られず、種々の変形、応用が可能なものである。上述した実施例は本発明を分かりやすく説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されない。
【００８４】
例えば、上記の制御部等は、それらの一部又は全部を、例えば集積回路で設計する等によりハードウェアで実現することができる。また、上記の各構成、機能等は、プロセッサがそれぞれの機能を実現するプログラムを解釈し、実行することによりソフトウェアで実現することができる。各機能を実現するプログラム、テーブル、ファイル等の情報は、メモリや、ハードディスク、ＳＳＤ（Ｓｏｌｉｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｄｒｉｖｅ）等の記憶装置、または、ＩＣカード、ＳＤカード、ＤＶＤ等の記憶媒体に置くことができる。
【００８５】
また、制御線等は説明上必要と考えられるものを示しており、製品上必ずしも全ての制御線や情報線を示しているとは限らない。実際には殆ど全ての構成が相互に接続されていると考えてもよい。
【符号の説明】
【００８６】
１０：自動分析装置
１０１：前処理部
１０２：試薬槽
１０３：試薬容器
１０４：分注ノズル
１０５：反応容器槽
１０６：反応容器
１０７：撹拌槽
１０８：磁石槽
１０９：グリッパ
１１０：試料導入ノズル
１１１：分離部
１１２：検出部
１１３：制御部
２０１：送液溶媒
２０２：送液ポンプ
２０３：インジェクションバルブ
２０４：サンプルループ
２０５：インジェクションポート
２０６：洗浄ポンプ
２０７：洗浄溶媒
２０８：ＬＣカラム
４０１：磁性ビーズ
４０２：温度応答性高分子
４０３：測定対象物質
５０１：測定対象物質
５０２：夾雑物
５０３：磁性ビーズ（担体）
５０４：温度応答性高分子
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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