(57)【要約】  医療現場において、凍結乾燥製剤より、煩雑な溶解工程が不要で希釈してすぐ投与できる等で利便性が高い溶液形態のＲＴＵ（Ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）製剤が求められている。本発明の課題は、保存期間中で、類縁物質の生成を抑制すると共に溶液着色が抑制されたペメトレキセドを含む注射用溶液製剤を提供することにある。本発明によれば、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤の製造方法であって、（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および（２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有する、製造方法が提供される。
2019244965.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤の製造方法であって、
（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および
（２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、
前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、
前記ＨＰＬＣ分析の条件が、以下に示す分析条件である、
製造方法。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
【請求項２】
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ純度が９８．５０％以上である請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
６０℃の温度条件下で２週間の保存期間中に容器内へ透過する酸素量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いて密栓する、請求項１〜３の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
製剤用容器の容積から、前記注射用溶液の体積を除いた容器の空隙部分の容積が、容器の容積に対して６０％以下である、請求項１〜４の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１〜５の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、式（ＩＸ）で表される化合物又はその塩を０．０５％以下で含有する、請求項１〜６の何れか一項に記載の製造方法。
【化１】
2019244965.tif 000020
【請求項８】
ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分が０．０５％以下で含有する、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤であって、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
【請求項９】
式（ＩＸ）で表される化合物を０．０５％以下で含有する、請求項８に記載の注射用溶液製剤。
【化２】
2019244965.tif 000021
【請求項１０】
医薬品の注射用溶液製剤の製造に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料であって、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
【請求項１１】
ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１０に記載の注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、保存下において着色を抑制したペメトレキセドナトリウムを含有する注射用溶液製剤及びその製造方法、並びに注射用溶液製剤を調製するためのペメトレキセド２ナトリウム含有原料に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペメトレキセドナトリウム（化学名：Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］Ｌ−グルタミン酸  ２ナトリウム）は、悪性胸膜中皮腫及び切除不能な進行・再発の非小細胞肺癌の治療剤であり、アリムタ（ＡＬＩＭＴＡ  登録商標）という商品名で凍結乾燥製剤として市販されている。該製剤は、投与時に生理食塩液を加えて溶解し、必要量の溶液を抜き取り、適宜、生理食塩液にて希釈して静脈内投与して用いられている。【０００３】
一般的に凍結乾燥製剤は保存安定性に優れるものの、用時に煩雑な溶解工程が必要である。このため医療現場においては、煩雑な溶解工程が不要で、希釈してすぐ投与できる溶液製剤が求められている。したがって、ペメトレキセドナトリウム製剤も、利便性が高い注射用溶液製剤に対する要望がある。
しかしながら、ペメトレキセドナトリウムは溶液安定性が低く、水溶液において酸化分解を受けること、また、保存中に徐々に溶液の着色が見られることが知られている。安定性を確保したペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するために、これまでに、バイアル内の酸素濃度及び溶存酸素を厳密に制御すること、また、抗酸化剤を添加した組成物とする方法が報告されている。【０００４】
例えば特許文献１は、酸素分圧が０．２％以下のペメトレキセドナトリウム溶液製剤を開示しており、減圧脱気、蒸留脱気、窒素バブリング、膜脱気や触媒樹脂脱気方法が用いられることを記載している。
また、抗酸化剤を用いる処方も知られており、特許文献２は抗酸化剤としてモノチオグリセロール、システイン又はチオグリコール酸を用いたペメトレキセド水溶液製剤を記載している。特許文献３はリポ酸、ジヒドロリポ酸、メチオニン又はこれらの混合物から選択される抗酸化剤、及びラクトビオン酸、三塩基性クエン酸ナトリウム又はこれらの混合物から選択されるキレート剤を含有するペメトレキセド溶液製剤が記載している。特許文献４は、クエン酸及びシステインから選択される抗酸化剤を含むペメトレキセド溶液製剤を記載している。特許文献５は、システイン、アルギニン及びプロピレングリコールを含有するペメトレキセド溶液製剤を記載している。特許文献６は、システイン及びチオグリセリンを含有するペメトレキセド溶液製剤を記載している。特許文献７はアセチルシステイン及びクエン酸ナトリウムを含有するペメトレキセド溶液製剤を記載している。
これらのペメトレキセドナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤は、保存下において、類縁物質の生成を抑制できることを主眼とし、併せて溶液の着色を抑制できることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開２０１２／１２１５２３号
【特許文献２】特表２００３−５２１５１８号公報
【特許文献３】特表２０１３−５４０１０４号公報
【特許文献４】特開２０１４−２３７６０７号公報
【特許文献５】国際公開２０１５／１９３５１７号
【特許文献６】国際公開２０１５／１４５９１１号
【特許文献７】特表２０１６−５１８４０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存下において、徐々に類縁物質の増加が認められること、また溶液の着色が認められてくることが知られている。特に、溶液の着色は目視で認識でき、着色した製剤は医療現場において不良品と見なされることがある。これまでに、保存安定性を確保したペメトレキセドナトリウム溶液製剤として、溶存酸素を含めた溶液製剤中の酸素濃度を厳密に管理すること、及び／又は抗酸化剤等の添加剤を用いることが検討されてきた。これらはペメトレキセドナトリウムの分解を抑制し、類縁物質の生成を抑制することを主眼と方法である。しかしながら、類縁物質の量と着色との関係について相関を示すデータはなく、類縁物質を低減しても着色を抑制することはできず、類縁物質の量と着色の関係については不明であった。
本発明の課題は、保存下において着色を抑制した、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ペメトレキセドナトリウム注射用溶液製剤を調製するためのペメトレキセド２ナトリウム含有原料に含まれる類縁物質の構成及び含有量が、当該溶液製剤の保存下における溶液の着色に影響を与えることを見出したことに基づくものである。すなわち、特定の類縁物質の含有量を制御したペメトレキセド２ナトリウムを製剤調製用原薬に使用することにより、着色を抑制し、保存安定性に優れたペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を提供するものである。【０００８】
本願発明は以下の［１］〜［７］に記載のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤の製造方法を第１の発明とする。
［１］  ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤の製造方法であって、
（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および
（２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、
前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、
前記ＨＰＬＣ分析の条件が、以下に示す分析条件である、
製造方法。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間【０００９】
すなわち、ペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するに当たり、ＲＲＴが０．４１±０．０３に検出される類縁物質が０．１０％以下に制御されたペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いることにより、着色が抑制された注射用溶液製剤を製造できるものである。【００１０】
［２］  ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、［１］に記載の製造方法。
更に、ＲＲＴが０．３４±０．０３で検出される類縁物質にも着目し、この成分が０．０５％以下に制御したペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いることが好ましい。【００１１】
［３］  ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ純度が９８．５０％以上である［１］又は［２］に記載の製造方法。
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料は、他の類縁物質の含有量が少なく、極力高純度であることが好ましい。【００１２】
ペメトレキセドナトリウムは酸素の存在に鋭敏に反応して溶液の着色をもたらす。特に、ペメトレキセドの溶液製剤を調製するに当たり、注射用製剤のバイアル瓶の封止材料であるゴム栓にも酸素透過性があり、その透過酸素が溶液中のペメトレキセドナトリウムの着色や類縁物質生成に悪影響を及ぼすことを見出した。すなわち、ペメトレキセドナトリウム溶液製剤の調製において、封止材料であるゴム栓の選択が重要であり、酸素透過性について温度依存性が低いゴム栓を採用することで溶液着色及び／又は、類縁物質生成を抑制することができる。【００１３】
［４］  ６０℃の温度条件下で２週間の保存期間中に容器内へ透過する酸素量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いて密栓する、［１］〜［３］の何れか一に記載の製造方法。
［５］  製剤用容器の容積から、前記注射用溶液の体積を除いた容器の空隙部分の容積が、容器の容積に対して６０％以下である、［１］〜［４］の何れか一に記載の製造方法。【００１４】
特定の封止材料を用いることで、５℃〜室温以上の広範な温度範囲における保存条件において、着色が抑制され、且つ類縁物質の生成が抑制されたペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を提供することができる。また、空隙部分が少なくすることにより、製剤内の酸素量を減じることができ好ましい。【００１５】
本発明で製造されるペメトレキセドナトリウム溶液製剤は、保存下においても類縁物質含有量が少なく、溶液着色が抑制されていることを特徴とする。すなわち、以下の［６］及び［７］の類縁物質プロファイルを特徴とする。【００１６】
［６］  ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、［１］〜［５］の何れか一に記載の製造方法。
［７］  ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、式（ＩＸ）で表される化合物又はその塩を０．０５％以下で含有する、［１］〜［６］の何れか一に記載の製造方法。【００１７】
なお、式（ＩＸ）で表される化合物は、ペメトレキセド類縁物の１つとして知られている化合物（Keto-Amine体とも称する。）であり、ＨＰＬＣ分析でＲＲＴ０．９４±０．０３に検出される成分である。
【化１】
2019244965.tif 000003
【００１８】
本発明は保存下において着色が抑制されたペメトレキセドナトリウム溶液製剤をも包含する。すなわち、以下の［８］及び［９］に記載の類縁物質プロファイルを備える溶液製剤である。【００１９】
［８］  ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分が０．０５％以下で含有する、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤であって、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間【００２０】
［９］  式（ＩＸ）で表される化合物を０．０５％以下で含有する、［８］に記載の注射用溶液製剤。式（ＩＸ）で表される化合物は、ＨＰＬＣ分析でＲＲＴ０．９４±０．０３に検出される成分である。
【化２】
2019244965.tif 000004
【００２１】
本発明は、保存下において着色が抑制されたペメトレキセドナトリウム溶液製剤を製造するための原料である、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料も包含する。すなわち、以下の［１０］及び［１１］に記載の類縁物質プロファイルを備えるペメトレキセド２ナトリウム含有原料である。【００２２】
［１０］  医薬品の注射用溶液製剤の製造に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料であって、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間【００２３】
前記発明［１０］は、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤の製造における特定類縁物質を包含するペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用であって、前記特定類縁物質は、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下である、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用、という発明でもある。【００２４】
［１１］  ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、［１０］に記載の注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。【００２５】
前記発明［１１］は、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤の製造における特定類縁物質を包含するペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用であって、前記特定類縁物質は、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下であり、ＲＲＴが０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下である、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用、という発明でもある。
【発明の効果】
【００２６】
本発明は、ペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するためのペメトレキセド２ナトリウム含有原料に含まれる類縁物質の構成及びその含有量に着目することにより、当該溶液製剤の保存下において溶液の着色を抑制できる方法を提供することができる。特に、５℃〜室温以上の広範な温度範囲における保存条件において、溶液の着色が抑制されたペメトレキセドを含む注射用溶液製剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】実施例１に係る注射用溶液製剤に用いるペメトレキセド２ナトリウム原薬のＨＰＬＣチャートである。
【図２】実施例４に係る注射用溶液製剤のＨＰＬＣチャートである（Ａ；試験開始時、Ｂ；６０℃、２週間後の分析）。
【図３】比較例２に係る注射用溶液製剤のＨＰＬＣチャートである（Ａ；試験開始時、Ｂ；６０℃、２週間後の分析）。
【図４】ＨＰＬＣ分析の相対保持時間（ＲＲＴ）０．３４の成分のＬＣ−ＭＳスペクトルである（上図：ポジティブモード、下図：ネガティブモード）。
【図５】ＨＰＬＣ分析の相対保持時間（ＲＲＴ）０．４１の成分のＬＣ−ＭＳスペクトル）である（上図：ポジティブモード、下図：ネガティブモード）。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、特定の類縁物質の含有量を制御したペメトレキセド２ナトリウム含有原料を溶液製剤調製用の原薬として適用することにより、着色を抑制し、保存安定性に優れたペメトレキセドナトリウムを含む注射用溶液製剤を提供するものである。以下にその詳細を説明する。
【００２９】
［注射用溶液製剤に用いるペメトレキセド２ナトリウム含有原料］
本発明におけるペメトレキセド２ナトリウムは、化学名でＮ−［４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］Ｌ−グルタミン酸  ２ナトリウムであり、代謝拮抗性抗腫瘍剤の有効成分として知られており、医薬品用原薬として適当な品質の物であれば特に問題なく用いることができる。当該ペメトレキセド２ナトリウムは無水物であっても良く、水和物や任意の溶媒和物であっても良い。水和物としては２．５水和物や７水和物が知られており、特に限定なく用いることができる。
【００３０】
ペメトレキセド２ナトリウムの製造方法は多くの先行技術文献が存在しており、例えば特表２００３‐５３０３２１号公報にペメトレキセド２ナトリウム７水和物の調製方法が記載されている。本発明のペメトレキセド２ナトリウムの製造方法は特に限定されるものではなく、公知の方法に従い、これに適宜、精製工程を適用することにより、類縁物質組成及びその含量を制御したペメトレキセド２ナトリウムを製造することができる。好ましくは以下の第１〜４工程による方法に従い得ることができる。
【００３１】
［第１工程］アミド化反応
式（ＩＩ）で表される化合物と、グルタミン酸ジエチルを縮合反応に付して、式（ＩＩＩ）で表されるペメトレキセドのジエチルエステルを合成する工程。
【化３】
2019244965.tif 000005
【００３２】
［第２工程］加水分解反応
ペメトレキセドのジエチルエステル（ＩＩＩ）を加水分解して、ペメトレキセド２酸（ＩＶ）とする工程。
【化４】
2019244965.tif 000006
【００３３】
［第３工程］精製工程
ペメトレキセド２酸（ＩＶ）をジメチルスルホキシド及びエタノールから再結晶してペメトレキセド２酸（ＩＶ）のＤＭＳＯ和物を取得する工程。
【化５】
2019244965.tif 000007
【００３４】
［第４工程］ナトリウム塩調製工程
ペメトレキセド２酸（ＩＶ）のＤＭＳＯ和物を水酸化ナトリウム溶液に溶解し、ペメトレキセド２ナトリウム（Ｉ）を取得する工程、により得られる。
【化６】
2019244965.tif 000008
【００３５】
本製造工程では、特定の類縁物質の含有量を抑制したペメトレキセド２ナトリウムを取得するための好ましい条件として、製造工程の全ての操作を窒素気流下にて行い、酸素含量を制御して実施すること、及び／又は塩基性条件下の処理を行う際には、低温条件を維持することが好ましい。すなわち、製造工程中に亘り、好ましくは酸素雰囲気を５ｖ／ｖ％以下、より好ましくは２ｖ／ｖ％で行うことが好ましい。また各工程において塩基性条件下で処理を行う際には、１５℃以下に制御して行うことが好ましく、１０℃以下に制御して行うことがより好ましい。
【００３６】
ペメトレキセド２ナトリウムは安定性がやや乏しい物性であることが知られており、特に水溶液等の溶液状態において主として酸化反応を経由する類縁物質を生成することが知られている。ペメトレキセド２ナトリウム含有原料（ペメトレキセド２ナトリウム原薬ともいう）を製造する過程においても、これらの類縁物質の生成は不可避であり、精製工程を経ても複数種類の類縁物質が高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により検出される。
【００３７】
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料に含有している主な類縁物質としては、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分、０．４１±０．０３の成分、０．５５±０．０３の成分（式Ｖ、α-Hydroxy Lactone体とも称する。）、０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexdとも称する。）、０．８３±０．０３の成分（式ＶＩＩ、N-Me体とも称する。）、０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimerとも称する。）、０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体とも称する。）、１．０７±０．０３の成分、１．１２±０．０３の成分、１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体とも称する。）、１．１７±０．０３の成分、等が挙げられる。主たる類縁物質とそのＨＰＬＣ分析でのＲＲＴ値について表１にまとめた。医薬品の製造グレードであるペメトレキセド２ナトリウム含有原料には、これらの類縁物質の１種類以上が共存している。
【００３８】
【表１】
2019244965.tif 000009
【００３９】
【化７】
2019244965.tif 000010
【００４０】
本発明における、ペメトレキセド２ナトリウムの純度及び類縁物質分析のためのＨＰＬＣ分析条件は、以下のものである。
［ＨＰＬＣ分析条件］
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２２８ｎｍ）
カラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム温度：３０℃付近の一定温度
移動相Ａ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を表２のように変えて濃度勾配制御する。
流量：１．０ｍＬ／分 
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
類縁物質測定法：溶出時間０〜３２分までのブランクピークを除いたクロマトグラムピーク面積百分率
【００４１】
【表２】
2019244965.tif 000011
【００４２】
本発明の溶液着色が抑制されたペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するためには、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料において、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）０．４１±０．０３の成分に着目し、その含有量が０．１％以下のペメトレキセド２ナトリウムを用いることである。すなわち当該注射用溶液製剤の溶液着色は、前記ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分の含有に起因するものであり、該成分の含有量を制御することにより、保存下における溶液着色を抑制することができる。ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分は０．０７５％以下の含有量であることが好ましく、さらに好ましくは０．０５％以下である。
【００４３】
本発明のより好ましい態様は、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料において、相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分が０．１０％以下の含有量であり、且つＲＲＴが０．３４±０．０３の成分が０．０５％以下の含有量である、ペメトレキセド２ナトリウムを用いることである。ＲＲＴ０．３４±０．０３の成分は０．０３％以下の含有量であることが好ましく、さらに好ましくは０．０２％以下である。
なお、前記ＲＲＴが０．４１±０．０３の成分、並びに０．３４±０．０３の成分の構造は未同定である。これらの成分は当該注射用溶液製剤の保存下において、徐々に消失する物性であることから、着色性成分の前駆体と想定される。
【００４４】
ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分は、高速液体クロマトグラム−質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）による分析で、ｍ／ｚ＝４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）が検出される成分である。また、ＲＲＴ０．３４±０．０３の成分も、同様のＬＣ−ＭＳ分析でｍ／ｚ＝４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）が検出される成分である。
ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分、及び０．３４±０．０３の成分を検出するためのＬＣ−ＭＳ測定条件は、例えば以下の分析条件で行われる。
［ＬＣ−ＭＳ分析］
移動相流量: ０．２  ｍＬ/ｍｉｎ
移動相Ａ：０．１％ギ酸溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を表３に記載のように変えて濃度勾配制御する。
【００４５】
【表３】
2019244965.tif 000012
【００４６】
カラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５ μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
イオン化モード：ＥＳＩ（＋／−）
スキャン範囲：ｍ／ｚ  ３５０−９００
【００４７】
本発明において、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料のＲＲＴが０．４１±０．０３の成分、ＲＲＴ０．３４±０．０３の成分の含有量を制御することが肝要であるが、その他の類縁物質の含有量が少ないものを用いることがより好ましい。すなわち、前記ＨＰＬＣ分析における面積百分率に基づく含有量として、ペメトレキセドとして９８．５０％以上のペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いることが好ましい。より好ましくはペメトレキセドが９９．００％以上の純度であり、９９．５０％以上の純度であることが殊更好ましい。すなわち、総類縁物質含量が１．５０％より少ないペメトレキセド２ナトリウム含有原料であることが好ましく、１．００％より少ないことがより好ましく、０．５０％より少ないことが殊更好ましい。
【００４８】
本発明に係るペメトレキセド２ナトリウム含有原料は、更に、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）が０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体）、及び／又は１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体）の成分が含まれることがあり、その含有量と併せて特徴付けることもできる。好ましくは、ＲＲＴが０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体）が０．１０％以下、及び／又は、ＲＲＴが１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体）が０．１０％以下である。より好ましくは、ＲＲＴが０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体）が０．０５％以下、及び／又は、ＲＲＴが１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体）が０．０５％以下である。
【００４９】
また、更なる他の類縁物質としては、ＲＲＴが０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexd）、並びに／若しくは０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimer）が含まれることがある。好ましくは、０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexd）が０．１０％以下、並びに／若しくは０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimer）が０．１０％以下である。より好ましくは、０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexd）が０．０１％以上で０．０７５％以下、並びに／若しくは０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimer）が０．０１％以上で０．０７５％以下である。
【００５０】
その他の類縁物質としては、ＲＲＴが０．５５±０．０３の成分（式Ｖ、α-Hydroxy Lactone体）、及び０．８３±０．０３の成分（式ＶＩＩ、N-Me体）が含まれることもある。０．５５±０．０３の成分（式Ｖ、α-Hydroxy Lactone体）は０．１０％以下の含有量であり、より好ましくは０．０５％以下の含有量である。０．８３±０．０３の成分（式ＶＩＩ、N-Me体）は０．１０％以下の含有量であり、より好ましくは０．０５％以下の含有量である。
【００５１】
［ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤］
本発明のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、前記の類縁物質プロファイルを充たすペメトレキセド２ナトリウム含有原料を原薬として用い、このペメトレキセド２ナトリウム含有原料の溶液を調製することが第１の工程とする。
当該溶液調製のための溶媒としては、非経口投与用溶媒として許容されるものであれば特に限定されずに用いることができる。例えば、水、エタノール、ポリソルベート８０、マクロゴール類、グリセリン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられ、これらの単独使用、若しくは２種以上の混合溶媒であっても良い。溶媒としては、非経口投与可能な品質であることが好ましい。特に好ましい溶媒としては、水を主成分とする含水溶媒である。溶媒として水のみを用いる態様であっても良い。
【００５２】
本発明の注射用溶液製剤におけるペメトレキセドの濃度は５ｍｇ／ｍＬ以上で５０ｍｇ／ｍＬ以下に設定することが好ましい。より好ましくは、ペメトレキセド濃度として１０ｍｇ／ｍＬ以上で４０ｍｇ／ｍＬ以下である。
【００５３】
また、溶液調製温度は特に限定されるものではないが、ペメトレキセドの安定性を考慮して６０℃以下で調製することが好ましい。
【００５４】
本発明の溶液製剤は、医薬品として認容される添加剤を含んでいても良い。添加剤としては非経口投与が可能なものであれば、特に限定されず用いることが出来る。添加剤の種類としては、抗酸化剤、緩衝剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、キレート剤、安定化剤を含んでいても良い。
【００５５】
抗酸化剤とは、有効成分の酸化による分解を抑制するために用いられる添加剤である。例えば、アスコルビン酸、システイン、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、アルファチオグリセリン、クエン酸、チオグリコール酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、メチオニン、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエンなどがあげられる。
緩衝剤とは、ｐＨを一定に保つために使用される添加剤である。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩などが用いられる。
【００５６】
ｐＨ調節剤とは、設定したｐＨの範囲内にするために、使用される添加剤である。例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、酢酸やその塩、リン酸やその塩、クエン酸やその塩、酒石酸やその塩などが用いられる。
等張化剤とは、血清の浸透圧に近づけるために使用される添加剤である。例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、グリセリン、果糖、キシリトール、ソルビトール、トレハロース、ニコチンアミド、ブドウ糖、精製白糖、マンニトール、マクロゴールなどがあげられる。
キレート剤とは、金属イオンと錯体を形成することで、金属イオンの存在による分解を間接的に抑制する添加剤である。例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、クエン酸やその塩、酒石酸やその塩、グルコン酸やその塩などがあげられる。
【００５７】
安定化剤は、有効成分の分解抑制、粒子の安定化等種々の目的に応じて使用される。例えば、アセチルトリプトファン、アラニン、アルギニンやその塩、アルブミン、安息香酸やその塩、イノシトール、エタノール、ヒスチジンやその塩、果糖、カルジアミドナトリウム、カルバゾクロムスルホン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、キシリトール、グリシン、グルタミン酸やその塩、クレアチニン、リン酸二水素ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ジエタノールアミン、ジエチレントリアミン五酢酸、シスチン、ジブチルヒドロキシトルエン、臭化カルシウム、精製ゼラチン、精製大豆レシチン、ゼラチン、ソルビタン酸脂肪酸エステル、ソルビタンセスキオレイン酸エステル、ソルビトール、炭酸水素ナトリウム、チオシアン酸カリウム、デキストラン、糖酸カルシウム、トリエタノールアミン、トロメタモール、ナトリウムホルムアルデヒドスルホシレート、ニコチン酸アミド、乳酸、乳糖、尿素、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、氷酢酸、ブチルヒドロキシアニソール、プロピレングリコール、ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、ベンゼトニウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、マクロゴール類、マルトース、ピロリン酸ナトリウム、マレイン酸、リン酸やその塩、メグルミン、メタスルホ安息香酸ナトリウム、モノエタノールアミン、リジン塩酸塩、硫酸マグネシウムなどがあげられる。
本発明に係る溶液製剤は、酸化を受けやすい有効成分を用いた溶液製剤であることから、抗酸化剤を含有することが好ましい。
【００５８】
本発明の注射用溶液製剤は、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料の溶液を調製した後、前記溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含む。本発明は注射用溶液製剤であることから、製剤用容器に無菌的に充填され、酸素濃度が１体積％以下の雰囲気に制御して、気密性の高いゴム栓で封止することにより密封充填製剤として調製される。
【００５９】
使用される容器としては、ゴム栓等で密封可能であれば、バイアル状、シリンジ状等の形状は特に限定されないが、バイアル状の形状が好ましい。容器の材質としては、例えばソーダライムガラス製、ホウケイ酸ガラス製、環状ポリオレフィンポリマー製、環状ポリオレフィンコポリマー製があげられる。
【００６０】
ペメトレキセドは、二価金属イオンと錯体を形成し、不溶性微粒子を形成することから、ガラス成分の溶出が抑制されたバイアルを使用する方が好ましい。特に水を充填し、封をしたバイアルに対して、１２１℃で高圧蒸気滅菌処理を１時間行った後に水へ溶出するケイ素が１ｐｐｍ以下であるバイアルが好ましい。このようなケイ素の溶出が抑制されたガラスバイアルとしては、ガラス成分の溶出抑制等の目的に応じて表面処理された容器を用いることが好ましい。
【００６１】
ガラス成分の溶出が抑制されるバイアルとしてＶＩＳＴバイアル（大和特殊硝子（株）製）、ＶＩＡＬＥＸ（ニプロ（株）製）、ｔｙｐｅ１  ｐｌｕｓ（ＳＣＨＯＴＴ（株）製）などが挙げられる。特に、シリカで内面処理したホウケイ酸ガラスバイアルを用いることが好ましい。シリカで内面処理されたバイアルの例として、シリコートバイアル（不二硝子（株）製）が挙げられる。
【００６２】
これらの容器を用いて、本発明の方法で脱酸素処理を行い、気密性のゴム栓で封止することにより、高度に脱酸素された注射用溶液製剤を調製することができる。ゴム栓の材質としては、ブチルゴム製のもの、さらにフッ素樹脂によりラミネートされたブチルゴム製のゴム栓を使用するのが好ましい。
これらの封止可能な容器は、容器及びゴム栓共に適当な方法により滅菌処理を施した包材であることが好ましい。
【００６３】
ペメトレキセドは、主に酸化によって類縁物質を生成することが知られている。従って、本発明の注射用溶液製剤は、溶液中の溶存酸素の濃度を制御する必要がある。該製剤の容器の空隙の酸素濃度が１％以下である。好ましくは、容器の空隙の酸素濃度が０．５％以下の注射用溶液製剤であり、より好ましくは０．３体積％以下の酸素濃度である。
【００６４】
容器の空隙中の酸素濃度は、酸素センサーを用いた酸素濃度測定器により測定することができる。例えば、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用い、当該注射用溶液製剤の溶液に酸素濃度計の酸素センサーを接液させることで、本発明に係る密封状態のバイアル製剤中の酸素濃度を測定することができる。
【００６５】
なお、本発明の注射用製剤のバイアル中の空隙部分（ヘッドスペース）は、窒素やアルゴン等の不活性ガスが充填されていることが好ましい。ヘッドスペース内の酸素分圧は、製剤溶液中の溶存酸素濃度と相関する。したがって、ヘッドスペース内の酸素を除去することにより、ペメトレキセド溶液の溶存酸素濃度を減少させることができ、保存安定性の確保に有効である。
【００６６】
本発明の注射用溶液製剤における空隙部分の酸素濃度を制御する方法として、溶液が充填された容器内に、窒素やアルゴン等の不活性ガスを直接注入し、一定量の不活性ガスを注入した後に、容器をゴム栓等で密封する方法が挙げられる。この方法を用いることで、容器内の空隙酸素濃度を１．０体積％以下に制御することが可能となる。
【００６７】
また、本発明に係る注射用溶液を充填した容器を密閉空間に設置し、空間内を薬液の任意の温度における蒸気圧を下回らない程度まで減圧し、その後、窒素やアルゴン等の不活性ガスを大気圧になるまで注入し、数時間静置した後、ゴム栓等で密栓する方法を用いても良い。この方法を用いることで、容器内の空隙酸素濃度を１．０体積％以下に制御することが可能となる。
【００６８】
容器中の充填された溶液以外の空間（ヘッドスペース）の体積もペメトレキセドの安定性に影響を及ぼす。充填された体積に対するヘッドスペース部分の体積の割合が大きくなるほど、容器内の酸素量が増加し、ペメトレキセドの酸化分解が進行しやすくなる。従って、容器中のヘッドスペースの体積が少ない方が好ましい。具体的には、ヘッドスペースの体積の割合が容器の容積に対して７０％以下が好ましく、より好ましくは６０％以下である。
【００６９】
ペメトレキセドは微量な酸素流入によっても鋭敏に反応して溶液の着色をもたらす。本発明者らは、ペメトレキセドの溶液製剤を調製するに当たり、注射用製剤のバイアル瓶の封止材料であるゴム栓にも酸素透過性があり、その透過酸素が溶液中のペメトレキセドナトリウムの着色や類縁物質生成に悪影響を及ぼすことを見出した。すなわち、ペメトレキセドナトリウム溶液製剤の調製において、封止材料であるゴム栓の選択が重要であり、酸素透過性について温度依存性が低いゴム栓を採用することで溶液着色及び／又は、類縁物質生成を抑制することができる。このため、該注射用溶液製剤に用いるゴム栓は、酸素の透過が高度に抑えられたものである必要がある。特に、酸素の透過性が温度によって変化しないものが好ましい。具体的には、６０℃で２週間の保存中にゴム栓を通して容器の空隙内へ透過する酸素の量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いる必要がある。より好ましくは同条件において、酸素透過量が０．００１０ｍｍｏｌ以下のゴム栓であり、さらに好ましくは０．０００８ｍｍｏｌ以下のゴム栓である。
【００７０】
本明細書において、ゴム栓の酸素の透過量は、以下の方法に従い算出する。酸素透過量（ｍｍｏｌ）＝酸素増加量（体積％）÷１００×容器内空隙容積（ｍＬ）÷（０．０８２×（２７３＋温度（℃）））
酸素増加量（体積％）＝６０℃で２週間保存後の空隙酸素濃度（体積％）−製造直後の空隙酸素濃度（体積％）
【００７１】
前記ゴム栓の材質としては、上記の酸素透過量以下であればどの材質を選択しても良いが、ブチルゴム製のもの、さらにフッ素樹脂によりラミネートされたブチルゴム製のゴム栓を使用するのが好ましい。さらに具体的にあげると、大協精工（株）製のＤ７１３及びＤ７７７のフッ素樹脂によりラミネートされた材質のゴム栓が好ましい。
ゴム栓の厚さとしては、一般的に同じ材質であれば、厚みがある方が酸素透過量は低下する。好ましいゴム栓の厚さとしては、接液する部分の最小の厚さが１．５ｍｍ以上であり、より好ましくは２ｍｍ以上である。
【００７２】
また、ゴム栓の接液部分の面積が小さい方が、酸素透過量は低下する。ゴム栓の接液部分の面積は、容器の口内径に依存するため、容器の口内径が小さいほどゴム栓の接液部分の面積が小さくなり、酸素透過量は低下する。従って、容器の口内径は２０ｍｍ以下が好ましく、より好ましくは１５ｍｍ以下である。
これらの封止可能な容器は、容器及びゴム栓共に適当な方法により滅菌処理を施した包材であることが好ましい。
【００７３】
本発明において、ゴム栓には極めて僅かではあるが酸素透過性があることが明らかとなった。したがって、当該注射用溶液製剤は、容器の周辺の酸素濃度を低くすることで、製剤容器内に透過する酸素を抑制することができ、安定性を確保させることができる。特に当該注射用溶液製剤は、酸素濃度が１体積％以下の雰囲気に配置することで、確実に保存安定性を確保することができる。
注射用溶液製剤は、酸素濃度が１体積％以下の雰囲気に配置する具体的な方法としては、容器を酸素遮断性の袋に入れ、袋の内部を窒素やアルゴンなどの不活性ガスで満たして封を行うこと等が挙げられる。この時の袋の内部の酸素濃度は、１体積％以下が好ましく、より好ましくは０．５体積％以下である。また、注射用溶液製剤の容器と酸素遮断性の袋の間の空間に脱酸素剤を挿入し、封をすることで、袋の内部の酸素が吸収され、さらに安定性を向上させることができる。なお、酸素遮断性の袋の内部の酸素濃度は、該袋内容積に相当する酸素含量に対して、酸素吸着能に応じた脱酸素剤を適用することで袋の内部の酸素濃度を１体積％以下、好ましくは０．５体積％以下に調整することができる。
【００７４】
酸素遮断性の袋の酸素透過度は、１ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下であることが好ましく、より好ましくは０．５ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下であり、さらに好ましくは０．２ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下である。酸素遮断性の袋に使用される酸素遮断性のフィルムの材質としては、アルミ箔、ナイロン、ポリ塩化ビニリデン、エチレン・ビニルアルコール共重合体、無機蒸着フィルム（例として、アルミナ蒸着ポリエチレンテレフタレート、シリカ蒸着ポリエチレンテレフタレート等）が用いられる。
【００７５】
脱酸素剤としては、鉄系自力反応型の脱酸素剤である、三菱ガス化学（株）製のエージレスＳ，ＳＰ、ＺＰ、Ｚ−ＰＫＣ、ＺＪ−ＰＴ、日本化薬フードテクノ（株）製のモデュランＳなどが挙げられる。
【００７６】
本発明の保存下における溶液着色を抑制できるペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存期間中において、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分の生成を抑制できる。また、ＲＲＴが０．９４±０．０３である式（ＩＸ）で表される化合物（keto-amine体）の生成を抑制することができる。これらの類縁物質はペメトレキセド溶液製剤の保存中に増加してくる成分である。これらの成分と溶液着色との相関は明らかではないが、本発明による溶液製剤は、保存下におけるこれらの成分の含有量が少ないことが特徴である。
【００７７】
具体的には、当該溶液製剤を６０℃で２週間保存した場合において、ＲＲＴが１．０７±０．０３の成分は０．０５％以下（面積百分率）である。好ましくは０．０３％以下であり、より好ましくは０．０１％未満である。また同じ保存条件下で、式（ＩＸ）で表される化合物（ＲＲＴ；０．９４±０．０３、keto-amine体）は０．０５％以下（面積百分率）であり、より好ましくは０．０３％以下である。
また、本発明のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存期間中において、総類縁物質の生成を抑制できる。具体的には、当該溶液製剤を６０℃で２週間保存した場合において、総類縁物質含有量が０．７０％以下（面積百分率）であり、より好ましくは０．５０％以下である。
【００７８】
本発明のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存期間中において溶液の着色を抑制できる。ペメトレキセドナトリウムの溶液製剤は、通常、保存中において徐々に黄色を呈し、時間の経過により明らかな黄色澄明溶液に変化するものであるが、当該溶液製剤は目視において無色〜極めて僅かな黄色の着色範囲の澄明溶液状態を維持することができる。溶液製剤の着色の評価として色彩色差計によるｂ＊値を指標とすると、本発明の溶液製剤はｂ＊値が±３０以下である。ｂ＊値は色度を表しており、数値がプラスであれば黄色方向、マイナスであれば青色方向を示し、数値がゼロに近い程無色溶液であることを示す。本発明の溶液製剤は、好ましくはｂ＊値±２０以下であり、より好ましくは±１５以下である。すなわち、本発明に係る溶液製剤は、６０℃で２週間保存した場合において、色彩色差計によるｂ＊値が±３０以下であり、好ましくは±２０以下であり、より好ましくは±１５以下である。
【００７９】
本発明のペメトレキセドの注射用溶液製剤は以下の工程に示すように、注射用溶液製剤の製造における一般的な工程により製造することができる。ただし、本発明が以下の製造方法に限定されるものではない。
工程（ａ）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料、並びに必要に応じて製薬上許容可能な添加剤を秤量し、適当な溶媒に溶解させる。
工程（ｂ）必要に応じて、前記溶液に製薬上許容可能なｐＨ調節剤を添加する。
工程（ｃ）必要に応じて工程（ｂ）の溶液に製薬上許容可能な溶媒を補って最終容積を満たす。
工程（ｄ）工程（ｃ）の溶液をろ過滅菌する。
工程（ｅ）工程（ｄ）により得られた溶液を、製薬上許容可能な容器に充填する。
工程（ｆ）必要に応じて製薬上許容可能な不活性ガスにより容器内をパージする。
工程（ｇ）ゴム栓で容器に栓を行い、必要に応じてアルミキャップにより密封する。
工程（ｈ）必要に応じて製薬上許容可能な最終滅菌を行う。
【００８０】
必要に応じて、工程（ａ）から工程（ｃ）の工程時に混合物に不活性ガスを吹き込むことができる。以上の工程により、本発明に係る注射用溶液製剤を製造することができる。なお、更に、該注射用溶液製剤は、任意の脱酸素剤と共に、酸素遮断性の袋に収納して密封することで、酸素による悪影響をより抑制できる態様とすることができる。この酸素遮断性袋内は不活性ガスを吹き込んだ後、密封してもよい。
【実施例】
【００８１】
以下に、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
ペメトレキセド２ナトリウム塩、注射用溶液製剤の分析は以下のＨＰＬＣ分析の条件で行った。
［ＨＰＬＣ分析］
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２２８ｎｍ）
カラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５ μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム温度：３０℃付近の一定温度
移動相Ａ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を表４に記載のように変えて濃度勾配制御する。【００８２】
【表４】
2019244965.tif 000013
【００８３】
このＨＰＬＣ分析条件で、ペメトレキセドが溶出する保持時間（ＲＴ）は２０．２分であった。各類縁物質は、これを指標に各溶出成分の相対保持時間（ＲＲＴ）により特定した。【００８４】
ＨＰＬＣ分析により、ＲＲＴ０．４１成分及び０．３４成分のＬＣ−ＭＳ分析を以下の条件にて行った。
［ＬＣ−ＭＳ分析］
移動相流量: ０．２  ｍＬ/ｍｉｎ
移動相Ａ：０．１％ギ酸溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を以下のように変えて濃度勾配制御する。【００８５】
【表５】
2019244965.tif 000014
【００８６】
カラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５ μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
イオン化モード：ＥＳＩ（＋／−）
スキャン範囲：ｍ／ｚ  ３５０−９００【００８７】
［薬液の着色評価］
薬液の着色について、色彩色差計ＣＲ−５（コニカミノルタ（株）製）にて測定し、ｂ＊値を算出した。ｂ＊値は、色度を表しており、数値がプラスであれば黄色方向、マイナスであれば青色方向を示す。数値が±１５の範囲であれば、目視評価上は着色なしと判断した。【００８８】
［実施例１］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の製造
（１）  ４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル)エチル]安息香酸（４．０  ｋｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１８．９ ｋｇ）及びＮ−メチルモルホリン（３．０ｋｇ）を仕込み、窒素雰囲気下、１０℃まで冷却した後、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（２．６  ｋｇ）を仕込み、撹拌した。Ｌ−グルタミン酸ジエチル塩酸塩（３．５  ｋｇ）を加え、２５℃で反応を行った。
反応液を１５％食塩水（４０．０  ｋｇ）と酢酸エチル（３６．０  ｋｇ）の混合液に投入して撹拌後、分液した。分液後の水層を酢酸エチル（１８．０  ｋｇ）で抽出し、抽出液を分液した酢酸エチル層と混合した。混合した酢酸エチル層を５０℃に加温し、ｐ−トルエンスルホン酸・一水和物（３．０  ｋｇ）のエタノール（３１．６  ｋｇ）溶液を滴下し、結晶を析出させた。２５℃まで冷却した後、析出した結晶をろ過し、エタノールで洗浄した。得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸ジエチル  ｐ−トルエンスルホン酸塩を得た（収量７．７  ｋｇ）。【００８９】
（２）  ２ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（２５．７  ｋｇ）を仕込み、５℃まで冷却後、Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル]ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸ジエチル  ｐ−トルエンスルホン酸塩の結晶（７．７  ｋｇ）及び精製水（３．１  ｋｇ）を仕込み、窒素雰囲気下、反応を行った。
希釈した塩酸を滴下し、５０℃にてｐＨを３．０に調整し、結晶を析出させた。この懸濁液を７０℃まで加温し撹拌後、２５℃に冷却して析出した結晶をろ過し、精製水及びエタノールで洗浄した。得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸を得た（収量４．９  ｋｇ）。【００９０】
（３）  Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル)エチル]ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸の結晶（４．９  ｋｇ）及びジメチルスルホキシド（２３．２  ｋｇ）を仕込み、窒素雰囲気下、結晶を溶解した。エタノール（３３．３  ｋｇ）を滴下し結晶を析出させた後、４５℃で撹拌した。５℃まで冷却した後、析出した結晶をろ過し、エタノールで洗浄してＮ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸  ジメチルスルホキシド溶媒和物の粗結晶を得た。同様の再結晶操作を繰り返し実施後、得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル)エチル]ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸  ジメチルスルホキシド溶媒和物の精製結晶を得た（収量 ６．３  ｋｇ）。【００９１】
（４）  窒素雰囲気下、０．５ ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（４０．０  ｋｇ）を仕込んだ後、Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸  ジメチルスルホキシド溶媒和物の精製結晶（５．２  ｋｇ）を仕込み、精製水（６．３  ｋｇ）で洗い込んだ。水酸化ナトリウム溶液でｐＨを８．０に調整し、結晶を溶解した後、活性炭を精製水に懸濁して加え、撹拌した。
活性炭をろ過し、精製水で活性炭を洗浄した。ろ液を５０℃まで加温した後、エタノール（１１４．４ｋｇ）を滴下し、結晶を析出させた。５℃まで冷却した後、析出した結晶をろ過し、エタノールと精製水の混合液で洗浄した。得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ−｛４−［２−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル｝−Ｌ−グルタミン酸二ナトリウム  ２．５水和物（ペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物）を得た（収量４．９kg）。
実施例１として得られたペメトレキセド２ナトリウム塩  ２．５水和物は、ＨＰＬＣ分析で純度９９．８０％（面積百分率）であった。
またＲＲＴ０．３４の成分は０．０２％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．０５％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。また、そのクロマトチャートを図１に示した。【００９２】
［実施例２］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の製造
実施例１と同様の製造方法で、ペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物を得た。得られたペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物は、ＨＰＬＣ分析で純度９９．８３％（面積百分率）であった。
またＲＲＴ０．３４の成分は０．００％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．０１％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。【００９３】
［実施例３］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の製造
実施例１と同様の製造方法でペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物を得た。得られたペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物はＨＰＬＣ分析で純度９９．９０％（面積百分率）であった。
またＲＲＴ０．３４の成分は０．０１％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．０１％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。【００９４】
［比較例１］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の調製
実施例１と同様の製造方法によりペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物を得た。それを大気雰囲気下で、温度４０℃、１箇月半保管したものを比較例１のペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物とした。
比較例１のペメトレキセド２ナトリウム  ２．５水和物は、ＨＰＬＣ純度９９．６５％であった。またＲＲＴ０．３４の成分は０．０５％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．１３％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。【００９５】
比較例１のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物含有原料について、ＨＰＬＣ分析におけるＲＲＴ０．３４の成分及びＲＲＴ０．４１の成分を、ＬＣ−ＭＳ分析により質量分析を行ったところ、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１は、双方ともポジティブモードでｍ／ｚ＝４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）が検出された。それぞれの成分のＭＳスペクトルデータを図４及び図５に示した。【００９６】
【表６】
2019244965.tif 000015
【００９７】
構造既知の類縁物質（式（Ｖ）〜（Ｘ））は以下の通りである。
【化８】
2019244965.tif 000016
【００９８】
［実施例４］注射用溶液製剤の製造
実施例１のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物（ＲＲＴ０．３４の成分；０．０２％、ＲＲＴ０．４１の成分；０．０５％）２７１９ｍｇ（ペメトレキセドとして２２５０ｍｇ）を、８７．２８ｍＬの注射用水に溶解した（全量９０ｍＬ  ペメトレキセドとして２５ｍｇ／ｍＬ）。
この溶液を、孔径０．２２μｍのメンブランフィルターを用いて無菌ろ過を行い、容量１０ｍＬ、口内径１２．５ｍｍのホウケイ酸ガラス製のバイアル（不二硝子（株）製）にろ過した液を４ｍＬ充填し、バイアルの空隙部分の酸素濃度が０．５体積％以下になるよう窒素を注入し、大協精工（株）製のフッ素樹脂によりラミネートされたＤ７１３ブチルゴム栓（厚さ２ｍｍ）で打栓し、アルミキャップにて巻締めを行った。その後、巻締めされたバイアルを、脱酸素剤（日本化薬フードテクノ（株）製、モデュランＳ−５００）と共に、無機蒸着フィルム製の袋（酸素透過度０．２ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下）に入れて、ヒートシーラーにてシールして二次包装を行い、実施例４のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製した。【００９９】
［実施例５］注射用溶液製剤の製造
実施例２のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物（ＲＲＴ０．３４の成分；０．００％、ＲＲＴ０．４１の成分；０．０１％）を使用し、実施例４と同様の操作により実施例５の注射用溶液製剤を調製した。【０１００】
［比較例２］注射用溶液製剤の製造
医薬品原薬として流通しているペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物を購入した。ＨＰＬＣ分析により、ペメトレキセド純度は９９．２５％（面積百分率）、並びにＲＲＴ０．３４の成分が０．０８％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分が０．２２％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表７にまとめた。【０１０１】
このペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物  ９５２ｍｇ（ペメトレキセドとして７８８ｍｇ）を、３０．５５ｍＬの注射用水に溶解し（全量３１．５ｍＬ）、実施例４と同様の操作を行い、比較例２の注射用溶液製剤を調製した。【０１０２】
【表７】
2019244965.tif 000017
【０１０３】
［試験例１］注射用溶液製剤の６０℃保存安定性試験
実施例４及び５、並びに比較例２の注射用溶液製剤を、６０℃の条件下にて２週間保存した。各製剤について、着色（ｂ＊値、目視評価）、並びにペメトレキセド由来の類縁物質を評価した。各製剤の、着色並びにペメトレキセド由来の類縁物質の評価結果を表８に示す。また、実施例４及び比較例２における試験開始時（Ａ）及び６０℃２週間後（Ｂ）のＨＰＬＣチャートを、図２及び図３に示した。【０１０４】
【表８】
2019244965.tif 000018
【０１０５】
比較例２は、実施例４及び５と比較して、化合物（ＩＸ）が高含量で存在し、着色が著しく増加していた。これは、比較例２使用したペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１の類縁物質の含有量が多く、この成分によってペメトレキセドを含む注射用溶液製剤の着色が保存期間中に増加したものと考えられる。【０１０６】
実施例４及び５のように、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１の類縁物質の含有量を低減したペメトレキセド２ナトリウム含有原料を注射用溶液製剤の原薬として使用することで、保存下における着色を大きく抑制できることが明らかとなった。また、総類縁物質量も少なく、化学的安定性に優れた注射用溶液製剤を提供できることが明らかとなった。【０１０７】
［実施例６］注射用溶液製剤の製造
ペメトレキセド純度９８．５５％（面積百分率）、ＲＲＴ０．３４の成分；０．０１％、ＲＲＴ０．４１の成分；０．０１％のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物  １９６０ｍｇ（ペメトレキセドとして１６２５ｍｇ）を６３．０４ｍＬの注射用水に溶解した（全量６５ｍＬ）。
この溶液を、孔径０．２２μｍのメンブランフィルターを用いて無菌ろ過を行い、容量１０ｍＬ、口内径１２．５ｍｍのホウケイ酸ガラス製のバイアル（不二硝子（株）製）にろ過した液を４ｍＬ充填し、バイアルの空隙部分の酸素濃度が０．５体積％以下になるよう窒素を注入し、大協精工（株）製のフッ素樹脂によりラミネートされたＤ７１３ブチルゴム栓（厚さ２ｍｍ）で打栓し、アルミキャップにて巻締めを行った。その後、巻締めされたバイアルを脱酸素剤（日本化薬フードテクノ（株）製、モデュランＳ−５００）と共に無機蒸着フィルム製の袋（酸素透過度０．２ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下）に入れて、ヒートシーラーにてシールして二次包装を行い、実施例６の注射用溶液製剤を調製した。【０１０８】
［比較例３］注射用溶液製剤の製造
実施例６で使用したペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物を、大気雰囲気下で温度４０℃で１箇月半保管した後のものをペメトレキセド２ナトリウム含有原料に使用した以外は、実施例６と同様の操作を行い、比較例３の注射用溶液製剤を調製した。
なお、比較例３で用いたペメトレキセド２ナトリウム含有原料（大気雰囲気下で温度４０℃で１箇月半保管した後のペメトレキセド２ナトリウム塩２．５水和物）は、ＲＲＴ０．３４の成分は０．０５％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．１３％（面積百分率）であった。【０１０９】
［試験例２］注射用溶液製剤の６０℃保存安定性試験
実施例６及び比較例３の注射用溶液製剤を、６０℃の条件下にて２週間保存した。各製剤について、着色（ｂ＊値、目視評価）、ペメトレキセド由来の類縁物質を評価した。各製剤の、着色、ペメトレキセド由来の類縁物質の評価結果を表９に示す。【０１１０】
【表９】
2019244965.tif 000019
【０１１１】
比較例３については、実施例６と比較して、化合物（ＩＸ）が高含量で存在し、着色が大きく増加した。これは、比較例３で使用したペメトレキセド２ナトリウムは温度４０℃で１箇月半保管したことにより、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１の類縁物質量が増加し、この成分によってペメトレキセドを含む注射用溶液製剤の着色が保存期間中に増加したためと考えられる。
以上の検証結果から、ＲＲＴ０．３４±０．０３及びＲＲＴ０．４１±０．０３の類縁物質が抑制されたペメトレキセド２ナトリウム塩含有原料を使用することで、ペメトレキセドを含む注射用溶液製剤の保存期間中の着色を大きく抑制できることが明らかとなった。
【図１】
2019244965.tif 000022
【図２】
2019244965.tif 000023
【図３】
2019244965.tif 000024
【図４】
2019244965.tif 000025
【図５】
2019244965.tif 000026
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月13日(2019.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する着色が抑制された注射用溶液製剤の製造方法であって、
（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および
（２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、
前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、
前記ＨＰＬＣ分析の条件が、以下に示す分析条件である、
製造方法。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
【請求項２】
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ純度が９８．５０％以上である請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
６０℃の温度条件下で２週間の保存期間中に容器内へ透過する酸素量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いて密栓する、請求項１〜３の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
製剤用容器の容積から、前記注射用溶液の体積を除いた容器の空隙部分の容積が、容器の容積に対して６０％以下である、請求項１〜４の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１〜５の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、式（ＩＸ）で表される化合物又はその塩を０．０５％以下で含有する、請求項１〜６の何れか一項に記載の製造方法。
【化１】
2019244965.tif 000027
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月3日(2020.3.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する着色が抑制された注射用溶液製剤の製造方法であって、
（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および
（２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、
前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が、
０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有し、
０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、
０．５５±０．０３の成分である式（Ｖ）で表される化合物を０．１０％以下で含有し、
０．６９±０．０３の成分及び０．７０±０．０３の成分である式（ＶＩ）で表される化合物を０．１０％以下で含有し、
０．８３±０．０３の成分である式（ＶＩＩ）で表される化合物を０．１０％以下で含有し、
０．９１±０．０３の成分である式（ＶＩＩＩ）で表される化合物を０．１０％以下で含有し、
０．９４±０．０３の成分である式（ＩＸ）で表される化合物を０．１０％以下で含有し、
１．１４±０．０３の成分である式（Ｘ）で表される化合物を０．１０％以下で含有し、
【化１】
2019244965.tif 000028
前記ＨＰＬＣ分析の条件が、以下に示す分析条件であり、
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０−２０分）、７５→０（２０−３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
前記ゴム栓が、６０℃の温度条件下で２週間の保存期間中に容器内へ透過する酸素量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓である、
製造方法。
【請求項２】
ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ純度が９８．５０％以上である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
製剤用容器の容積から、前記注射用溶液の体積を除いた容器の空隙部分の容積が、容器の容積に対して６０％以下である、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１〜３の何れか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、式（ＩＸ）で表される化合物又はその塩を０．０５％以下で含有する、請求項１〜４の何れか一項に記載の製造方法。
【化２】
2019244965.tif 000029
【国際調査報告】
2019244965.tif 000030
2019244965.tif 000031
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