(57)【要約】  本開示は、担体材料の物理的強度が保持され、免疫抑制性タンパク質を効率的に吸着する吸着材料を提供することを目的としている。本開示は、所定式で表されるポリアミン及び所定式で表される脂肪族アミンから選択される１種以上の窒素含有化合物が結合した水不溶性担体を含み、該水不溶性担体上のアミノ基の総量は、１ｇ当たり０μｍｏｌ超２５００μｍｏｌ以下であり、かつ、該水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、１ｇ当たり４５０μｍｏｌ以下である、免疫抑制性タンパク質の吸着材料を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（１）で表されるポリアミン、以下の式（２）で表される第１級脂肪族アミン及び式（３）で表される第２級脂肪族アミンから選択される１種以上の窒素含有化合物が結合した水不溶性担体を含み、
前記水不溶性担体上のアミノ基の総量は、１ｇ当たり０μｍｏｌ超２５００μｍｏｌ以下であり、かつ、前記水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、１ｇ当たり４５０μｍｏｌ以下である、免疫抑制性タンパク質の吸着材料。
Ｒ１Ｒ２Ｎ−Ｘ−ＮＲ３Ｒ４    ・・・式（１）
［式（１）中、Ｘは、２〜２０個の炭素原子を有する飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は、３〜２０個の炭素原子を有する飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基において１〜５個の炭素原子を窒素原子で置き換えたヘテロ原子含有炭素鎖であり、該窒素原子に結合する水素原子は、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子又はアルキル基である。］
ＮＨ２Ｒ５  ・・・式（２）
［式（２）中、Ｒ５は、１〜１２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。］
ＮＨＲ６Ｒ７  ・・・式（３）
［式（３）中、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、１〜１２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。］
【請求項２】
前記窒素含有化合物は、前記式（１）で表されるポリアミンを含む、請求項１記載の吸着材料。
【請求項３】
前記窒素含有化合物は、リンカーを介して前記水不溶性担体に結合している、請求項１又は２記載の吸着材料。
【請求項４】
前記アミノ基の総量は、１ｇ当たり３０〜２４００μｍｏｌである、請求項１〜３のいずれか一項記載の吸着材料。
【請求項５】
前記アミノ基の総量に対する前記１級アミノ基の量の比率（１級アミノ基の量／アミノ基の総量）は、０．３０以下である、請求項４記載の吸着材料。
【請求項６】
前記水不溶性担体の形状は、繊維又は粒子であり、
前記繊維又は前記粒子の直径は、１５〜５０μｍであり、
前記水不溶性担体の表面の算術平均粗さは、０．１〜３．０μｍである、請求項１〜５のいずれか一項記載の吸着材料。
【請求項７】
前記免疫抑制性タンパク質は、ＴＧＦ−β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ−βである、請求項１〜６のいずれか一項記載の吸着材料。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項記載の吸着材料を備える、吸着カラム。
【請求項９】
血液浄化療法に用いるための、請求項８に記載の吸着カラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、免疫抑制性タンパク質の吸着材料及びそれを含む吸着カラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、免疫と密接に関係していることが明らかとなってきており、近年、多くの進行癌で免疫抑制性の血液成分の濃度が上昇していることが報告されてきている。【０００３】
免疫抑制性の血液成分の中でも代表的なものがＴＧＦ-β（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ-β）である。近年、癌の進展に関与する分子の一つであるＴＧＦ-βが関与する免疫抑制シグナルが亢進することで、癌細胞は免疫系からの攻撃を免れ、その結果、癌が進行することが明らかになっている。ＴＧＦ-βは単独では分子量２５０００程度のタンパク質であり、５つのアイソフォーム（ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ＴＧＦ-β３、ＴＧＦ-β４、ＴＧＦ-β５）が存在する。ＴＧＦ-βは、血液中では、分子量７５０００程度のＬａｔｅｎｃｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（以下、ＬＡＰと称す。）と呼ばれるタンパク質と結合して存在している（以下、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ-βと称す。）。【０００４】
癌を治療する方法としては、癌細胞から放出されるＴＧＦ-βが関与する免疫抑制シグナルをブロックする薬が開発されてきているが、未だ有効な治療法となるまでには至っていない。【０００５】
一方で、ＴＧＦ-βを除去すれば、癌細胞が免疫系から免れるシグナルが解除されて患者の免疫力が高まり、腫瘍の退縮や癌進行の抑制が期待できる。【０００６】
タンパク質を吸着する材料として、水不溶性担体に化合物を固定化した材料がいくつか開示されている。例えば、特許文献１には、クリングル配列を有するタンパク質又はペプチドを吸着する材料として、水不溶性担体にリジンを固定化した材料が開示されている。また、特許文献２には、ハイモビリティグループタンパク等の炎症性サイトカインを吸着する、アミノ基を有する官能基が導入された吸着担体が開示されている。また、特許文献３には、変性低密度リポ蛋白質及び／又は終末糖化産物を除去するための所定式で表されるポリアミン誘導体を有効成分として含む吸着剤が開示されている。また、特許文献４には、サイトカイン及び／又はスーパー抗原を吸着する材料として、ポリアミンを有する基材からなる吸着材料が開示されている。【０００７】
さらに、特許文献５及び６には、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ-βを吸着する材料として、水不溶性担体に親水性アミノ基（４級アンモニウム基）を固定した吸着材が開示されている。【０００８】
特許文献７には、白血球及びサイトカインを吸着又は除去するための、所定の孔径と孔容積率を有する、親水性アミン残基が結合している吸着器が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２０１２−０６２２５９号公報
【特許文献２】特開２０１２−００５８２７号公報
【特許文献３】特開２０１１−１３９８０６号公報
【特許文献４】特開２００６−２７２０７５号公報
【特許文献５】国際公開２００３／１０１５１１号
【特許文献６】特開２００３−３３９８５４号公報
【特許文献７】特開２００７−２０２６３４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、特許文献１〜４では、ＴＧＦ-β等の免疫抑制性タンパク質の吸着性を高めるための技術の開示はない。また、特許文献５〜７に開示される材料に固定される４級アンモニウム基や親水性アミン残基は親水性が高いために、担体材料の物理的強度を維持しつつ、吸着効率を高めることが困難である場合が考えられる。【００１１】
そのため、担体材料の物理的強度を維持しつつ、血液中のＴＧＦ-β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ-βを効率的に吸着することができる吸着材料の開発が求められている。【００１２】
そこで、本開示は、担体材料の物理的強度が保持され、免疫抑制性タンパク質を効率的に吸着する吸着材料を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、水不溶性担体にポリアミン残基又は脂肪族アミン残基を含有させることにより、免疫抑制性タンパク質が吸着することを見出した。さらに、水不溶性担体にポリアミン残基又は脂肪族アミン残基を含有させることに加え、水不溶性担体上のアミノ基の総量及び該水不溶性担体上の１級アミノ基の量を所定の範囲とした場合、担体材料の物理的強度が保持され、かつ免疫抑制性タンパク質（特にＴＧＦ-β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β）を効率的に吸着できることを見出し、本開示に至った。【００１４】
本実施形態の態様例を以下に記載する。
［１]  以下の式（１）で表されるポリアミン、以下の式（２）で表される第１級脂肪族アミン及び式（３）で表される第２級脂肪族アミンから選択される１種以上の窒素含有化合物が結合した水不溶性担体を含み、
上記水不溶性担体上のアミノ基の総量は、１ｇ当たり０μｍｏｌ超２５００μｍｏｌ以下であり、かつ、上記水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、１ｇ当たり４５０μｍｏｌ以下である、免疫抑制性タンパク質の吸着材料。
Ｒ１Ｒ２Ｎ−Ｘ−ＮＲ３Ｒ４    ・・・式（１）
［式（１）中、Ｘは、２〜２０個の炭素原子を有する飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は、３〜２０個の炭素原子を有する飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基において１〜５個の炭素原子を窒素原子で置き換えたヘテロ原子含有炭素鎖であり、該窒素原子に結合する水素原子は、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子又はアルキル基である。］
ＮＨ２Ｒ５  ・・・式（２）
［式（２）中、Ｒ５は、１〜１２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。］
ＮＨＲ６Ｒ７  ・・・式（３）
［式（３）中、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、１〜１２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。］
［２]  上記窒素含有化合物は、上記式（１）で表されるポリアミンを含む、［１]に記載の吸着材料。
［３]  上記窒素含有化合物は、リンカーを介して上記水不溶性担体に結合している、［１]又は［２]に記載の吸着材料。
［４]  上記アミノ基の総量は、１ｇ当たり３０〜２４００μｍｏｌである、［１]〜［３]のいずれかに記載の吸着材料。
［５]  上記アミノ基の総量に対する上記１級アミノ基の量の比率（１級アミノ基の量／アミノ基の総量）は、０．３０以下である、［４]に記載の吸着材料。
［６]  上記水不溶性担体の形状は、繊維又は粒子であり、
上記繊維又は上記粒子の直径は、１５〜５０μｍであり、
上記水不溶性担体の表面の算術平均粗さは、０．１〜３．０μｍである、［１]〜［５]のいずれかに記載の吸着材料。
［７]  上記免疫抑制性タンパク質は、ＴＧＦ−β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ−βである、［１]〜［６]のいずれかに記載の吸着材料。
［８]  ［１]〜［７]のいずれかに記載の吸着材料を備える、吸着カラム。
［９]  血液浄化療法に用いるための、［８］に記載の吸着カラム。
【発明の効果】
【００１５】
本開示により、担体材料の物理的強度が保持され、かつ免疫抑制性タンパク質（特にＴＧＦ-β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ-β）を効率的に吸着する吸着材料を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ジエチレントリアミンを水不溶性担体上に固定化した場合に得られる構造例を示す概念図である。
【図２】ラジアルフロー型の吸着カラムの一例の縦断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本実施形態について更に詳細に説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。したがって、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」等）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００１８】
本実施形態に係る吸着材料は、免疫抑制性タンパク質を吸着するための免疫抑制性タンパク質吸着材料に関する。また、本実施形態に係る吸着材料は、式（１）で表されるポリアミン、式（２）で表される第１級脂肪族アミン及び式（３）で表される第２級脂肪族アミンから選択される１種以上の窒素含有化合物が結合した水不溶性担体を含む。また、本実施形態に係る吸着材料において、水不溶性担体上のアミノ基の総量が吸着材料１ｇあたり０μｍｏｌ超２５００μｍｏｌ以下であり、かつ、水不溶性担体上の１級アミノ基の量が吸着材料１ｇあたり４５０μｍｏｌ以下である。
【００１９】
「水不溶性担体上のアミノ基」は、水不溶性担体上に存在する１級アミノ基（−ＮＨ２）、２級アミノ基、３級アミノ基、及び４級アミノ基（４級アンモニウム基）を意味する。窒素含有化合物が水不溶性担体に結合する際、窒素含有化合物中の結合位置に依存して、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基及び／又は４級アミノ基が結合後の窒素含有化合物中に存在する。例えば、式（１）で表されるポリアミンが水不溶性担体に結合する際、ポリアミン中の結合位置に依存して、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基及び／又は４級アミノ基が結合後のポリアミン中に存在することになる。また、窒素含有化合物は、該化合物中のアミノ基（又は窒素原子）を介して水不溶性担体に結合していることが好ましい。本明細書において、「水不溶性担体上のアミノ基」は、そのように生じた窒素含有化合物由来の１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基及び４級アミノ基を少なくとも含む概念である。窒素含有化合物がリンカーを介して結合している場合、「水不溶性担体上のアミノ基」は、リンカー由来の１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基及び４級アミノ基を含む。
【００２０】
また、「アミノ基の総量」とは、水不溶性担体上の１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基及び４級アミノ基の総量（μｍｏｌ）を意味する。また、「水不溶性担体上の１級アミノ基」とは、水不溶性担体上に存在する１級アミノ基を意味する。「水不溶性担体上の１級アミノ基」は、窒素含有化合物（例えばポリアミン）中の反応せずに残った１級アミノ基を少なくとも含む概念である。
【００２１】
「窒素含有化合物残基」とは、本明細書で使用される場合、窒素含有化合物を水不溶性担体に直接的又は間接的に結合させて得られる基を意味する。同様に、「ポリアミン残基」とは、式（１）で表されるポリアミンを水不溶性担体に直接的又は間接的に結合させて得られる基を意味し、「脂肪族アミン残基」とは、式（２）又は式（３）で表される脂肪族アミン（脂肪族アミンとも称す）を水不溶性担体に直接的又は間接的に結合させて得られる基を意味する。
【００２２】
窒素含有化合物は、式（１）で表されるポリアミン、式（２）で表される第１級脂肪族アミン及び式（３）で表される第２級脂肪族アミンから選択される。窒素含有化合物は、１種を単独で用いてもよく、複数種を組み合わせて用いてもよい。
【００２３】
一実施形態において、窒素含有化合物は、式（１）で表されるポリアミンである。
【００２４】
Ｒ１Ｒ２Ｎ−Ｘ−ＮＲ３Ｒ４    ・・・式（１）
［式（１）中、Ｘは、２〜２０個の炭素原子を有する飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は、３〜２０個の炭素原子を有する飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基において１〜５個の炭素原子を窒素原子で置き換えたヘテロ原子含有炭素鎖であり、該窒素原子に結合する水素原子は、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子又はアルキル基である。］。
【００２５】
式（１）において、Ｘは、例えば、２〜２０個（例えば、１６個以下、１４個以下、１２個以下、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下）の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。式（１）において、Ｘは、例えば、３〜２０個（例えば、１６個以下、１４個以下、１２個以下、１０個以下）の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基において１〜５個（例えば、１〜３個）の炭素原子を窒素原子で置き換えたヘテロ原子含有炭素鎖であり、該窒素原子に結合する水素原子は、アミノ基を有していてもよいアルキル基（例えば１〜６個（好ましくは１〜４個）の炭素原子を有する。）で置換されていてもよい。Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子又はアルキル基である。アルキル基は、例えば１〜６個（好ましくは１〜４個）の炭素原子を有する。脂肪族炭化水素基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。
【００２６】
式（１）で表されるポリアミンは、下記式（１−１）〜（１−６）のいずれかで表されるポリアミンであることが好ましい。
H2N-(CH2)p1-NH2  ・・・式（１−１）
［式（１−１）中、p1は、２〜１２（好ましくは２〜６、２〜５又は２〜４）の整数であり、両末端の１級アミノ基の水素原子のうち少なくとも１つはアルキル基で置換されていてもよい。］、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH2  ・・・式（１−２）
［式（１−２）中、p1及びp2は、それぞれ独立に、２〜５（好ましくは２〜４、２〜３、２）の整数であり、２級アミノ基の水素原子は、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、両末端の１級アミノ基の水素原子のうち少なくとも１つはアルキル基で置換されていてもよい。］、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH2  ・・・式（１−３）
［式（１−３）中、p1、p2及びp3は、それぞれ独立に、２〜５（好ましくは２〜４、２〜３、２）の整数であり、２級アミノ基の水素原子は、それぞれ独立に、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、両末端の１級アミノ基の水素原子のうち少なくとも１つはアルキル基で置換されていてもよい。］、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH-(CH2)p4-NH2  ・・・式（１−４）
［式（１−４）中、p1、p2、p3及びp4は、それぞれ独立に、２〜５（好ましくは２〜４、２〜３、２）の整数であり、p1、p2、p3及びp4の和は１７以下であり、２級アミノ基の水素原子は、それぞれ独立に、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、両末端の１級アミノ基の水素原子のうち少なくとも１つはアルキル基で置換されていてもよい。］、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH-(CH2)p4-NH-(CH2)p5-NH2  ・・・式（１−５）
［式（１−５）中、p1、p2、p3、p4及びp5は、それぞれ独立に、２〜５（好ましくは２〜４、２〜３、２）の整数であり、p1、p2、p3、p4及びp5の和は１６以下であり、２級アミノ基の水素原子は、それぞれ独立に、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、両末端の１級アミノ基の水素原子のうち少なくとも１つはアルキル基で置換されていてもよい。］、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH-(CH2)p4-NH-(CH2)p5-NH-(CH2)p6-NH2  ・・・式（１−６）
［式（１−６）中、p1、p2、p3、p4、p5及びp6は、それぞれ独立に、２〜５（好ましくは２〜４、２〜３、２）の整数であり、p1、p2、p3、p4、p5及びp6の和は１５以下であり、２級アミノ基の水素原子は、それぞれ独立に、アミノ基を有していてもよいアルキル基で置換されていてもよく、両末端の１級アミノ基の水素原子のうち少なくとも１つはアルキル基で置換されていてもよい。］。
【００２７】
式（１−２）〜（１−６）において、２級アミノ基の窒素原子に結合し得る「アミノ基を有していてもよいアルキル基」の炭素原子数は、例えば１〜６個であり、好ましくは１〜５個であり、好ましくは１〜４個であり、好ましくは１〜３個である。式（１−１）〜（１−６）において、両末端の１級アミノ基の窒素原子に結合し得る「アルキル基」の炭素原子数は、例えば１〜６個であり、好ましくは１〜５個であり、好ましくは１〜４個であり、好ましくは１〜３個である。これらの「アルキル基」は、直鎖状又は分岐鎖状であることが好ましい。
【００２８】
式（１）で表されるポリアミンとしては、例えば、エチレンジアミン、Ｎ−エチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、Ｎ−エチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミン、テトラエチレンペンタミンが挙げられる。また、その他にも、以下のポリアミンが挙げられる。3,3'-ジアミノジプロピルアミン；1,3−ジアミノプロパン；ノルスペルミジン；ホモスペルミジン；アミノプロピルカダベリン；アミノブチルカダベリン；ノルスペルミン；テルモスペルミン；アミノプロピルホモスペルミジン；カナバルミン；ホモスペルミン；アミノペンチルノルスペルミジン；N,N-ビス（アミノプロピル）カダベリン；カルドペンタミン；ホモカルドペンタミン；テルモペンタミン；カルドヘキサミン；ホモカルドヘキサミン；テルモヘキサミン；ホモテルモヘキサミン；N4-アミノプロピルノルスペルミジン；N4-アミノプロピルスペルミジン；N4-アミノプロピルノルスペルミン。
【００２９】
一実施形態において、窒素含有化合物は、式（２）で表される第１級脂肪族アミン又は式（３）で表される第２級脂肪族アミンである。
ＮＨ２Ｒ５  ・・・式（２）
［式（２）中、Ｒ５は、１〜１２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。］、
ＮＨＲ６Ｒ７  ・・・式（３）
［式（３）中、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、１〜１２個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基である。］。
【００３０】
式（２）又は（３）で表される脂肪族アミンにおいて、脂肪族炭化水素基は、直鎖状又は分岐鎖状の脂肪族炭化水素基であることが好ましく、直鎖状又は分岐鎖状の飽和脂肪族炭化水素基であることが好ましい。脂肪族炭化水素基の炭素数は、１〜８個であることが好ましく、１〜６個であることが好ましく、１〜４個であることが好ましい。
【００３１】
脂肪族アミンの具体例としては、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、ペンチルアミン、ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチルアミン、ノニルアミン、デシルアミン等のモノアルキルアミン；ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジブチルアミン、ジヘプチルアミン、ジオクチルアミン、ジシクロヘキシルアミン等のジアルキルアミンが挙げられる。
【００３２】
窒素含有化合物としては、例えば、エチルアミン、エチレンジアミン、ジエチルアミン、Ｎ−エチルエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、Ｎ−エチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミン又はテトラエチレンペンタミンが挙げられる。これらの中でも、好ましくは、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミン又はテトラエチレンペンタミンが挙げられる。窒素含有化合物は、市販されているか又は公知の方法若しくはそれに準じた方法により製造することができる。
【００３３】
窒素含有化合物が結合した水不溶性担体とは、上記窒素含有化合物が、直接的に共有結合している水不溶性担体、又はリンカーを介して間接的に結合している水不溶性担体の両方を包含する。また、窒素含有化合物が結合した水不溶性担体には、上記ポリアミン及び上記脂肪族アミンから選ばれる、それぞれ異なる２種以上の窒素含有化合物が結合しているものも包含する。
【００３４】
窒素含有化合物として式（１）で表されるポリアミンを用いる場合、複数のアミノ基が水不溶性担体に結合して、架橋構造を形成していてもよい。すなわち、窒素含有化合物として、式（１）で表されるポリアミンを水不溶性担体に結合させた場合、ポリアミン中のアミノ基の少なくとも２つが水不溶性担体に結合すると、架橋構造を形成することになる。例として、式（１）で表されるポリアミンの代表的な化合物であるジエチレントリアミン（以下、ＤＥＴＡとも称す。）を水不溶性担体上に固定化した場合に得られる構造例を図１に示す。図１の例では、Ｎ−メチロール−α−クロルアセトアミド（以下、ＮＭＣＡとも称す。）をリンカーとして用いている。図１に示すように、ジエチレントリアミンのアミノ基のうち、両末端１級アミノ基が反応した場合、片末端１級アミノ基及び２級アミノ基が反応した場合、全てのアミノ基（両末端１級アミノ基及び２級アミノ基）が反応した場合において、架橋構造が得られる。
【００３５】
「免疫抑制性タンパク質」とは、免疫系を抑制する働きを有するタンパク質を意味し、例えば、ＴＧＦ−β、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ-β、免疫抑制酸性蛋白、癌胎児性抗原、インドールアミン酸素添加酵素（Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ ２，３−Ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ: ＩＤＯ）、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ：ｉＮＯＳ）、アルギナーゼ（ａｒｇｉｎａｓｅ：ＡＲＧ）、インターロイキン４、インターロイキン６、インターロイキン１０、インターロイキン１３、腫瘍壊死因子等が挙げられる。これらの中でも、癌患者の腫瘍の退縮や癌進行の抑制を目的とした治療の効果を最大化するという点で、本実施形態に係る吸着材料はＴＧＦ−βとＬＡＰ結合型ＴＧＦ-βを血液中から選択的に吸着することが好ましい。なお、「選択的に吸着する」とは、吸着材料を充填したカラムに免疫抑制性タンパク質（例えば、ＴＧＦ−β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ-β）を含む液体（例えば血液又は血液細胞混合液）を通した時、通過した液体中の免疫抑制性タンパク質の濃度が通過前よりも減少し、吸着したタンパク質中の免疫抑制性タンパク質の存在比率が通過前より増加することを意味する。
【００３６】
「水不溶性担体」とは、常温（２５℃）の水に浸漬した場合に形状変化を起こさない担体を指し、具体的には、２５℃の水に１時間浸漬させた際の重量変化が５％以下である担体であることが好ましい。水不溶性担体の材料としては、特に制限されるものではないが、ポリスチレンに代表されるポリ芳香族ビニル化合物、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリアリールエーテルスルホン、ポリエーテルイミド、ポリイミド、ポリアミド、ポリフェニレンサルファイド等が好ましく挙げられる。水不溶性担体の材料は、市販されているか又は公知の方法若しくはそれに準じた方法により製造することができる。これらの材料は、血液と接触した際に補体を活性化しやすいと言われている水酸基を実質的に有しない材料である。これらの中でも単位重量あたりの芳香環の数が多く、アミノ基を固定化しやすいことから、ポリスチレンが好ましい。これらの高分子材料は、単独で用いてもよく、複数種を組み合わせて用いてもよい。また、水不溶性担体は、ポリ芳香族ビニル化合物（例えば、ポリスチレン）を含む高分子材料であることが好ましい。水不溶性担体としては、ポリスチレン部分にアミノ基を固定化するための活性ハロゲン基等のリンカーを導入し易い点、及びポリオレフィン部分による強度補強による扱い易さ及び耐薬品性の点から、ポリスチレンとポリオレフィンの共重合体（例えば、ポリスチレンとポリエチレンの共重合体又はポリスチレンとポリプロピレンの共重合体）が好ましい。また、高分子材料は、ブレンド又はアロイ化したものでもよく、特に、ポリスチレンとポリオレフィンのポリマーアロイ（例えば、ポリスチレンとポリエチレンのポリマーアロイ又はポリスチレンとポリプロピレンのポリマーアロイ）は、耐薬品性を有し、物理形状を保持し易い観点から、好ましい。その中でも、血液体外循環療法で使用実績のあるポリスチレンとポリプロピレンのポリマーアロイが好ましい。また、用いる水不溶性担体は、アミノ基を実質的に有さないことが好ましい。
【００３７】
窒素含有化合物は、水不溶性担体に直接的に結合してもよいし、リンカーを介して間接的に水不溶性担体に結合してもよい。窒素含有化合物を水不溶性担体に結合させる方法は、特に制限されるものではなく、例えば、化学的方法により水不溶性担体表面にリンカーを介して共有結合させる方法が挙げられる。リンカーとしては、例えば、反応性官能基を用いることができる。また、リンカーとしては、アミド結合、尿素結合、エーテル結合又はエステル結合等の電気的に中性の化学結合を有しているものが好ましく、アミド結合又は尿素結合を有しているものが好ましい。リンカーとしての反応性官能基としては、例えば、ハロメチル基、ハロアセチル基、ハロアセトアミドメチル基若しくはハロゲン化アルキル基等の活性ハロゲン基、エポキシ基、カルボキシル基、イソシアネート基、チオイソシアネート基、又は酸無水物基等を挙げることができる。これらの中でも、活性ハロゲン基（特にハロアセチル基）は、製造が容易であり、反応性が適度に高く、アミノ基の固定化反応が温和な条件で遂行でき、生じる共有結合が化学的に安定であるため、好ましい。反応性官能基を導入したポリマーの具体的な例としては、クロルアセトアミドメチル基を付加したポリスチレン、クロルアセトアミドメチル基を付加したポリスルホン、クロルアセトアミドメチル基を付加したポリエーテルイミド等が挙げられる。なお、これらのポリマーは有機溶媒に対し可溶であり、成型しやすい利点がある。窒素含有化合物の添加量の目安は、リンカーの構造にもよるが、例えば、水不溶性担体１ｇに対して、１０〜１００００μｍｏｌである。また、窒素含有化合物は過剰量で用いてもよい。
【００３８】
反応性官能基は、予め、水不溶性担体と反応させることで導入することができる。例えば、水不溶性担体がポリスチレンで、反応性官能基がクロルアセトアミドメチル基の場合は、ポリスチレンとＮ−メチロール−α−クロルアセトアミドを反応させることでクロルアセトアミドメチル基を付加したポリスチレンを得ることができる。
【００３９】
水不溶性担体上のアミノ基の総量は、吸着材料１ｇあたり０μｍｏｌ超２５００μｍｏｌ以下である。アミノ基の総量は、吸着材料１ｇあたり、例えば、１０μｍｏｌ以上、２０μｍｏｌ以上、３０μｍｏｌ以上、４０μｍｏｌ以上、５０μｍｏｌ以上、１００μｍｏｌ以上、２００μｍｏｌ以上、３００μｍｏｌ以上、４００μｍｏｌ以上、５００μｍｏｌ以上、又は６００μｍｏｌ以上である。また、アミノ基の総量は、吸着材料１ｇあたり、例えば、２４００μｍｏｌ以下、２３００μｍｏｌ以下、２２００μｍｏｌ以下、２１００μｍｏｌ以下、２０００μｍｏｌ以下、１７００μｍｏｌ以下、又は１５００μｍｏｌ以下である。例示したいずれの下限値も例示したいずれの上限値と組み合わせることができる。例えば、アミノ基の総量は、吸着材料１ｇあたり、例えば、０μｍｏｌ超２４００μｍｏｌ以下、１０μｍｏｌ以上２４００μｍｏｌ以下（１０〜２４００μｍｏｌ）、２０μｍｏｌ以上２４００μｍｏｌ以下（２０〜２４００μｍｏｌ）、３０μｍｏｌ以上２４００μｍｏｌ以下（３０〜２４００μｍｏｌ）である。水不溶性担体上の免疫抑制性タンパク質と効果的に相互作用できるアミノ基が全く存在しない場合、吸着性能が低くなる。また、アミノ基の総量が吸着材料１ｇあたり２５００μｍｏｌを超える場合でも、吸着性能が低くなる。これは以下の理由によるものと推測している。タンパク質の表面電荷分布は不均一であり、タンパク質は部分的に正電荷や負電荷を有している。そのため、液中で正に帯電したアミノ基の固定化密度が高いと、正に帯電したタンパク質表面と静電反発を起こし、結果的にタンパク質は表面に吸着され難くなる。なお、当該推測により本実施形態が制限されることはない。
【００４０】
水不溶性担体上のアミノ基の総量は、例えば、アミノ基を酸塩基逆滴定を利用して測定することにより、１級アミノ基の量、２級アミノ基の量、３級アミノ基の量、及び４級アミノ基（４級アンモニウム基）の量の和として求めることができる。すなわち、まず、ポリプロピレン製容器に、吸着材料及び過剰量の水酸化ナトリウム水溶液を添加して室温で十分撹拌し、吸着材料中の塩が付加されたアミノ基を脱塩する。次に、吸着材料をイオン交換水で溶液が中性になるまで十分に洗浄し、重量変化が１％以下になるまで乾燥する。次に、乾燥した吸着材料中のアミノ基を、過剰の酸を含む標準溶液の一定量と反応させる。次に、アミノ基と反応せずに残った酸の量を、塩基を含む標準溶液で滴定する。この方法により、アミノ基の総量（μｍｏｌ）を求めることができる。さらに具体的には、水不溶性担体上のアミノ基の総量は下記実施例において記載した方法により求めることができる。
【００４１】
また、水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、吸着材料１ｇあたり４５０μｍｏｌ以下であり、好ましくは４００μｍｏｌ以下であり、好ましくは３５０μｍｏｌ以下であり、好ましくは３００μｍｏｌ以下であり、好ましくは２５０μｍｏｌ以下であり、好ましくは２００μｍｏｌ以下である。１級アミノ基が吸着材料１ｇあたり４５０μｍｏｌより多いと、液中での担体の親水性が高くなり、担体の物理的強度が低下し、微粒子が発生しやすくなる。なお、上記の好ましい水不溶性担体上のアミノ基の総量と上記の好ましい水不溶性担体上の１級アミノ基の量は任意に組み合わせることができる。
【００４２】
１級アミノ基の量は、例えば、水不溶性担体への反応性官能基の結合量、窒素含有化合物の種類、窒素含有化合物の使用量を調整することで制御することができる。反応性官能基の結合量は、例えば、反応性官能基の種類又は溶媒の種類、浸漬温度若しくは浸漬時間等の反応条件で制御することができる。例えば、水不溶性担体がポリ芳香族ビニル化合物を含む場合は、架橋剤を用いて、反応性官能基の結合可能箇所を制御することもできる。また、窒素含有化合物の固定化量は、窒素含有化合物の種類や反応性官能基の結合量に加え、溶媒の種類、浸漬温度、浸漬時間等の反応条件で制御することができる。
【００４３】
水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、例えば、チオール化合物の存在下で１級アミノ基と特異的に反応して蛍光分子を生成するｏ-フタルアルデヒド（以下、ＯＰＡ）を用いて吸着材料中の１級アミノ基を逆滴定することにより測定することできる。すなわち、まず、ポリプロピレン製容器中に、乾燥させた吸着材料を配置する。また、８０体積％メタノール及び２０体積％炭酸塩ｐＨ標準液（ｐＨ １０．０１）中に、過剰のＯＰＡ及びチオール化合物のジチオトレイトール（以下、ＤＴＴ）を溶解させ、混合溶液を調製する。該混合溶液を、上記吸着材料が配置されたポリプロピレン製容器中に添加し、室温にて十分撹拌する。撹拌後、溶液を回収し、測定サンプルとする。また、検量線用サンプルとして、既知濃度となるように添加したＯＰＡ、ＤＴＴ、８０体積％メタノール及び２０体積％炭酸塩ｐＨ標準液(ｐＨ １０．０１)を含む混合溶液を準備する。測定サンプル及び検量線用サンプルを、n-プロピルアミン及びＤＴＴを含む炭酸塩ｐＨ標準液（ｐＨ １０．０１）と混合し、希釈後の測定サンプル及び希釈後の検量線用サンプルを得る。一定時間後、希釈後の測定サンプル及び希釈後の検量線用サンプルについて、３４０ｎｍにおける吸光度を分光光度計で測定し、両者を比較することにより水不溶性担体上の１級アミノ基の量（μｍｏｌ）を算出することができる。具体的には、水不溶性担体上の１級アミノ基の量は下記実施例において記載した方法により求めることができる。
【００４４】
吸着材料１ｇ当たりのアミノ基の総量に対する１級アミノ基の量の比率（１級アミノ基の量／アミノ基の総量）は、０．３０以下であることが好ましく、０．２５以下であることが好ましく、０．２０以下であることが好ましい。
【００４５】
「繊維の直径」は、以下の方法により求めることができる。まず、繊維のサンプル１００本をランダムに採取して、走査型電子顕微鏡を用いて１０００〜３０００の倍率で断面（繊維の伸長方向に垂直な断面）の写真をサンプル１本につきそれぞれ１枚撮影する。次に、それぞれの繊維断面の直径を測定する。そして、それらの値の平均値（計１００本の繊維断面の直径の平均値）を算出することにより、「繊維の直径」を求める。繊維断面が円でない場合は、その断面積と同じ面積を有する円の直径を繊維の直径とする。
【００４６】
「粒子の直径」は、以下の方法により求めることができる。まず、粒子のサンプル群１０個をランダムに採取して、走査型電子顕微鏡を用いて１０００〜３０００の倍率で写真をサンプル群１個につきそれぞれ１枚撮影する。次に、写真１枚当たり１０個の粒子の直径を測定する。そして、それらの値の平均値（計１００個の粒子の直径の平均値）を算出することにより、「粒子の直径」を求める。粒子の写真形状が円でない場合は、その粒子面積と同じ面積を有する円の直径を粒子の直径とする。
【００４７】
繊維又は粒子の直径を１５μｍ以上とすることにより、吸着材料のカラムへの充填密度を適度に低下させることができ、その結果、血小板や白血球等の各種細胞が繊維又は粒子に吸着され難くなる。また、白血球のなかでも顆粒球や単球は貪食能を有するため、繊維又は粒子の直径を１５μｍ以上とすることにより、繊維又は粒子が異物として認識され難くなり、その結果、白血球が繊維又は粒子に吸着され難くなる。繊維又は粒子の直径が５０μｍ以下である場合、吸着材料のカラムへの充填密度が適度に向上するため、吸着材料の単位体積あたりの血液接触面積が大きくなり、その結果、免疫抑制性タンパク質の吸着量を向上させることができる。以上の理由により、水不溶性担体を構成する繊維又は粒子の直径は、好ましくは１５μｍ以上５０μｍ以下（１５〜５０μｍ）であり、好ましくは１６μｍ以上４０μｍ以下（１６〜４０μｍ）であり、好ましくは１７μｍ以上３５μｍ以下（１７〜３５μｍ）である。いずれの好ましい下限値もいずれの好ましい上限値と組み合わせることができる。
【００４８】
「算術平均粗さ」とは、粗さ曲線から、その平均線の方向に基準長さＬだけ抜き取り、この抜き取り部分の平均線から測定曲線までの偏差の絶対値の平均値を意味し、ＪＩＳ Ｂ ０６０１−２００１の算術平均粗さ（Ｒａ）を意味する。算術平均粗さは、例えば、形状測定レーザーマイクロスコープで測定することができる。測定環境としては、水不溶性担体が水に濡れた状態で行うことが好ましい。また、繊維のように配向性のある場合は、長手方向の値を測定する。
【００４９】
水不溶性担体の表面の算術平均粗さが３．０μｍ以下である場合、貪食能を有する顆粒球や単球が水不溶性担体の凹凸を異物として認識し難くなるため、表面に吸着し難くなる。また、血小板の付着惹起も小さくなる。そのため、免疫抑制性タンパク質の吸着性能を向上することができる。一方で、水不溶性担体の表面の算術平均粗さが０．１μｍ以上である場合も、免疫抑制性タンパク質の吸着性能を向上することができる。この理由については、免疫抑制性タンパク質が材料表面と接触できる面積が大きくなるためと推測している。以上の理由から、水不溶性担体（又は吸着材料）の表面の算術平均粗さは、好ましくは０．１μｍ以上３．０μｍ以下（０．１〜３．０μｍ）であり、好ましくは０．５μｍ以上２．０μｍ以下（０．５〜２．０μｍ）である。いずれの好ましい下限値もいずれの好ましい上限値と組み合わせることができる。なお、上記繊維又は上記粒子の好ましい直径と上記水不溶性担体の表面の好ましい算術平均粗さは任意に組み合わせることができる。
【００５０】
水不溶性担体の表面の算術平均粗さは、例えば、水不溶性担体を有機溶媒に浸漬させることで制御することができる。水不溶性担体の表面の算術平均粗さを制御する方法としては、例えば、水不溶性担体としてポリ芳香族ビニル化合物とポリプロピレンを混練させて得たポリマーを、ポリ芳香族ビニル化合物を一部可溶させ、かつ、ポリプロピレンを溶かさない溶媒に浸漬する方法が挙げられる。水不溶性担体の表面の算術平均粗さは、ポリマーの種類、ポリマーの分子量、溶媒の種類、浸漬温度、浸漬時間等で制御することができる。さらには、ポリ芳香族ビニルについては、架橋剤を導入することにより、溶媒への可溶性を制御する等の方法も採用することができる。さらには、上記の反応は、窒素含有化合物の導入反応と同時に行うことも可能である。
【００５１】
水不溶性担体の形状は、例えば、繊維、粒子又はこれらの高次加工品が挙げられる。中でも、繊維は、高次加工により血液流路を確保しつつ、血液との接触面積を増大させることが可能である点で好ましい。中でも、海島型複合繊維が好ましく、材料としての強度を保つ観点から、島が補強材、海が水不溶性ポリマーと補強材のアロイである海島型複合繊維が好ましく、さらに島がポリプロピレンであり、海がポリスチレンとポリプロピレンのアロイである海島型複合繊維が好ましい。
【００５２】
補強材としては、特に限定されるものではないが、例えば、ポリアミド、ポリアクリロニトリル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ナイロン、ポリメチルメタクリレート、ポリテトラフルオロエチレン等が挙げられる。中でも、ポリプロピレンが好ましい。これらのポリマーは、単独で用いてもよく、複数種を組み合わせて用いてもよい。
【００５３】
また、水不溶性担体の形状が繊維の場合、水不溶性担体は、高次加工品である編み地であることが好ましい。編み地は、その編み目を制御することで血液流路を確保できるため、編み地を用いることにより血液が繊維を通過する際の圧力損失を低減させることができる。また、繊維を合糸させて編み地を形成させる場合、合糸本数は、好ましくは１０本以上１００本以下であり、好ましくは３０本以上８０本以下である。合糸本数を１００本以下とすることにより、血液が効率よく繊維束深部の繊維に接触し易いため、免疫抑制性タンパク質の吸着量が向上する。また、合糸本数を１０本以上とすることにより、編み地の保持性が向上する。いずれの好ましい下限値もいずれの好ましい上限値と任意に組み合わせることができる。
【００５４】
本実施形態の吸着材料は、免疫抑制性タンパク質（特にＴＧＦ−β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β）の吸着用担体に用いることができ、吸着カラムの充填剤として使用することができる。
【００５５】
また、本実施形態において、吸着材料１ｇあたりのＴＧＦ−β又はＬＡＰ結合型ＴＧＦ-βの吸着量は７．０ｎｇ以上であることが好ましく、１０．０ｎｇ以上であることが好ましく、１１．０ｎｇ以上であることが好ましい。吸着材料の吸着量の試験系としては、例えば、ＴＧＦ−β溶液を用いたバッチ式吸着試験が挙げられ、評価系としては、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ（以下、ＥＬＩＳＡ法）による分析が挙げられる。
【００５６】
さらに、体外循環への用途を考えたとき、吸着材料の一部が分離して発生する微粒子が少ないことが望ましい。したがって、吸着材料から発生する微粒子数は、可能な限り少ないことが好ましい。吸着材料の物理的強度が保持されると、吸着材料から発生する微粒子数が少なくなる。一方、吸着材料の物理的強度が低下すると、吸着材料から発生する微粒子数が多くなる。吸着材料からの微粒子発生を調査する試験系としては、例えば第十五改正日本薬局方収載(２００６年３月３１日厚生労働省告示第２８５号)の一般試験法６．０７注射剤の不溶性微粒子試験法が挙げられ、評価系としては、光遮へい型自動微粒子測定装置での微粒子発生数（個）を測定する方法が挙げられる。
【００５７】
また、体外循環への用途を考えたとき、吸着材料に吸着される血液抗凝固剤の量は少ないことが望ましい。一般に、体外循環を行う前には、体外循環時に血液中に溶解させた血液抗凝固剤が吸着材料に吸着されてカラム内で血液が凝固するのを防ぐために、血液抗凝固剤を溶解させた生理食塩水を吸着材料が充填された血液浄化カラムに通過させて、吸着材料に予め血液抗凝固剤を吸着させる。吸着材料に予め吸着させる血液抗凝固剤の量が少ない方が、血液抗凝固剤の使用量を低減できるとともに、一旦吸着材料に吸着させた血液抗凝固剤が、血液中に過剰に漏出する可能性を低下させることができる。血液抗凝固剤としては、特に限定されるのもではないが、ヘパリン、クエン酸ナトリウム、メシル酸、フッ化ナトリウム、ＥＤＴＡ−２Ｋ等が挙げられる。中でも、ヘパリンが好ましい。吸着材料による血液抗凝固剤の吸着率の評価方法としては、例えば、血液抗凝固剤を溶解させた生理食塩水を用いたバッチ式吸着試験が挙げられる。血液抗凝固剤がヘパリンである場合、分光光度計を用いた比色分析法による分析を好ましく用いることができる。すなわち、ポリプロピレン製容器に、吸着材料と、ヘパリンを溶解させた生理食塩水とを添加し、３７℃のインキュベータ内で２時間転倒混和する。混和後、溶液を回収し、測定サンプルとする。また、検量線用サンプルとして、既知濃度となるようにヘパリン生理食塩水を準備する。測定サンプル及び検量線用サンプルについて、２１０ｎｍにおける吸光度を分光光度計で測定し、両者を比較することにより測定サンプルにおけるヘパリン濃度を算出することができる。吸着材料によるヘパリンの吸着率は、インキュベート前のヘパリン濃度から、インキュベート後のヘパリン濃度を減じたものを、インキュベート前のヘパリン濃度で除した値の百分率として算出することができる。具体的には、吸着材料によるヘパリンの吸着率は下記実施例において記載した方法により求めることができる。
【００５８】
血液抗凝固剤の吸着率の観点から、水不溶性担体上のアミノ基の総量は、吸着材料１ｇあたり、好ましくは１８００μｍｏｌ以下であり、好ましくは１０００μｍｏｌ以下であり、好ましくは７００μｍｏｌ以下であり、好ましくは６００μｍｏｌ以下であり、好ましくは５００μｍｏｌ以下であり、好ましくは４００μｍｏｌ以下であり、好ましくは３００μｍｏｌ以下であり、好ましくは２５０μｍｏｌ以下であり、好ましくは１５０μｍｏｌ以下である。また、血液抗凝固剤の吸着率の観点から、水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、吸着材料１ｇあたり、好ましくは４００μｍｏｌ以下であり、好ましくは２００μｍｏｌ以下であり、好ましくは１００μｍｏｌ以下であり、好ましくは７５μｍｏｌ以下であり、好ましくは５０μｍｏｌ以下であり、好ましくは３０μｍｏｌ以下である。
【００５９】
本実施形態の吸着カラムは、本実施形態の吸着材料を含む。
【００６０】
「吸着カラム」とは、少なくとも血液入口部、ケース部、血液出口部を有しており、ケース部には吸着材料が充填されているものを意味する。吸着カラムとしては、例えば、ラジアルフロー型の吸着カラムが挙げられる。上述したように、吸着材料の形状としては、繊維が好ましく、編み地が好ましい。
【００６１】
吸着カラムの内部の構成の一例を、図２に沿って説明する。図２において、１は容器本体であり、その長手方向の前端と後端とに流入口２と流出口３とを有する。流入口２の内側には、フィルター４と円板状の仕切板５が設けられ、また、流出口３の内側には、フィルター６と円板状の仕切板７が設けられている。２枚の仕切板５、７のうち、前側（流入口側）の仕切板５には中心部に開口５ａが設けられ、また、後側の仕切板７の中心部には支持突起７ａが設けられている。また、仕切板７の外周には、多数の透孔７ｂが周方向に間欠的に設けられている。さらに仕切板５の開口５ａと仕切板７の支持突起７ａとの間に、１本のパイプ８が掛け渡されている。パイプ８は血液を誘導する流路９を内側に形成し、かつ周壁に多数の貫通孔１０を有する。また、パイプ８は、その前端で仕切板５の開口５ａに連通しており、また、その後端は仕切板７の支持突起７ａにより閉止されている。このパイプ８の外周に、吸着材料１１が何重にも複数層に巻き付けられている。この吸着カラムを循環法に使用するときは、流入口２と流出口３に、血液プールとの間に循環回路を形成したチューブを連結し、その血液プールから取り出される血液を流入口２に供給し、内部の吸着材料１１で対象吸着物質（免疫抑制性タンパク質）を除去して流出口３から流出し、再び血液プールに戻すように循環させる。カラム内では、流入口２からフィルター４を経て流路９に侵入した血液は、流路９を移動しながら貫通孔１０から順次吸着材料１１に浸入し、半径方向のいずれかへ移動しながら細胞等を吸着する。細胞等が除去された血液は、仕切板７の外周の多数の透孔７ｂから流出し、フィルター６を経て流出口３から流出する。上記の例では血液が開口５ａからパイプ８内の流路９を流動しながら貫通孔１０から流出するが、吸着カラムにおける血液の移動方向は、上記とは逆にして、流出口３から血液を供給し、流入口２から流出させるようにしてもよい。
【００６２】
免疫抑制性タンパク質の吸着効率を上げるためには、カラム内の血液線速度も重要である。すなわち、血液線速度が速い場合、免疫抑制性タンパク質が吸着材料と十分な相互作用が起き難くなる場合がある。一方、血液線速度が遅い場合、血小板や白血球等の他の血液成分が吸着材料に非特異的に付着し、吸着材料と免疫抑制性タンパク質との相互作用を阻害する場合がある。したがって、吸着カラム入口の流速が５０ｃｍ３／分のときの吸着材料内の血液線速度の最大値が５０ｃｍ／分以下であることが好ましく、２５ｃｍ／分以下であることが好ましい。また、吸着カラム入口の流速が５０ｃｍ３／分であるときの吸着材料内の血液線速度の最小値は、０．１ｃｍ／分以上であることが好ましく、０．３ｃｍ／分以上であることが好ましい。ここで、血液線速度は、計算によって求められるものであり、例えば、ラジアルフロー型の吸着カラムの場合、吸着材料内の血液線速度の最大値（Ｖｍａｘ）は、中空円柱形状の中心パイプの側面に開いた開口部の合計面積（Ｓｐ）と吸着カラム入口の流速（５０ｃｍ３／分）から、下記式１により算出される。
【００６３】
Ｖｍａｘ（ｃｍ／分）＝  ５０（ｃｍ３／分）／Ｓｐ（ｃｍ２）・・・式１
【００６４】
また、最小値（Ｖｍｉｎ）は中心パイプに巻き付けた吸着材料の最外周面の面積（Ｓｏ）と吸着カラム入口の流速（５０ｃｍ３／分）から、下記式２により算出される。
【００６５】
Ｖｍｉｎ（ｃｍ／分）＝  ５０（ｃｍ３／分）／Ｓｏ（ｃｍ２）・・・式２
【００６６】
一方、吸着カラムが、粒子や単に繊維を重ねただけの円柱形状の吸着カラムの場合、血液の流れに直交する吸着材料の断面積の最小値と最大値が同一になるため、上記最大値（Ｖｍａｘ）と上記最小値（Ｖｍｉｎ）は同じ値となる。
【００６７】
さらには、吸着カラムとしては、供給された血液を流出するために設けられた貫通孔を長手方向の側面に備える中心パイプと、上記中心パイプの周りに吸着材料が充填されており、流入する上記血液が、上記中心パイプの中を通るように上記中心パイプの上流端に連通され、上記血液が上記中心パイプを通過せずに吸着材料と接触するのを防ぐように配置されたプレートＡと、上記中心パイプの下流端を封鎖し、吸着材料を上記中心パイプの周りの空間に固定するように配置されたプレートＢと、を備えるラジアルフロー型の吸着カラムが好ましい。これは、血液が吸着材料を均一に流れるようにするためである。なお、上記中心パイプの貫通孔の開口率が低い場合、この部分で圧力損失が生じやすくなるために、顆粒球、単球及び血小板が活性化し、これらが吸着材料に付着しやすくなる。そのため、免疫抑制性タンパク質の吸着性能が低下する場合がある。また、開口率が高い場合は、パイプの強度が低下すること、血液入口部付近の貫通孔でショートパスを起こしやすくなる等の問題が出てくる可能性がある。したがって、貫通孔の開口率は２０〜８０％であることが好ましく、３０〜６０％であることが好ましい。
【００６８】
「ラジアルフロー型」とは、カラム内部の血液の流れ方を言う。カラムの入口と出口に血液を垂直方向に流した場合、カラム内部で、水平方向の血液流れが存在する場合に、ラジアルフロー型と呼ぶ。
【００６９】
「貫通孔の開口率」とは、下記式３で求められる値を意味する。
【００７０】
貫通孔の開口率（％）＝パイプの長手方向の側面に形成された貫通孔の面積の和／パイプの側面の面積×１００・・・式３
【００７１】
血小板の付着は、上述したとおり、免疫抑制性タンパク質の吸着量が低下する原因になるとともに、カラムの目詰まりも引き起こすため、血小板は吸着材料になるべく付着しないことが望ましい。したがって、吸着材料への血小板の付着率は、８０％以下であることが好ましく、７０％以下であることが好ましく、６５％以下であることが好ましい。血小板の付着率は、例えば、バッチ式試験で、血球計測器を用いて評価することができる。
【００７２】
本実施形態の吸着カラムは、血液浄化療法に用いることができる。本実施形態の吸着カラムを血液浄化用カラムとして使用することで、血液中から免疫抑制性タンパク質を効率良く除去することができる。例えば、血液を体外循環させて、本実施形態の吸着カラムに通すことにより、血液中から免疫抑制性タンパク質を効率良く除去することができる。すなわち、本実施形態の吸着カラムは、体外循環用カラムとして用いることができる。より具体的には、本実施形態の吸着カラムは、がん患者の血液中から免疫抑制性タンパク質を選択的に除去する治療に用いることができる。すなわち、本実施形態の吸着カラムは、がん治療用カラムとして用いることができる。
【００７３】
本実施形態の吸着カラムは、免疫抑制性タンパク質を吸着することができることから、癌治療に好適に用いられる。また、樹状細胞やナチュラルキラー細胞等を活性化させる細胞輸注治療と併用することも可能である。
【実施例】
【００７４】
以下、実施例を挙げて本実施形態を説明するが、本実施形態はこれらの例によって限定されるものではない。【００７５】
１．免疫抑制性タンパク質吸着材料の作製
水不溶性担体として、ポリプロピレン（株式会社プライムポリマー；Ｊ１０５ＷＴ）からなる島成分を１６島有し、海成分がポリスチレン（重量平均分子量：１８１，０００）９０重量％及びポリプロピレン（株式会社プライムポリマー；Ｊ１０５ＷＴ）１０重量％からなり、島と海の比率（重量比）が５０：５０である、海島型複合繊維（直径２０μｍ）を紡糸した。得られた繊維４２本を合糸して編み地を形成した（以下、原編み地１）。なお、繊維表面の粗さは、島数や海島比率、ポリスチレンやポリプロピレンの分子量等によって影響を受ける。【００７６】
ニトロベンゼン２０ｍＬと硫酸１３．３ｍＬの混合溶液にパラホルムアルデヒド（以下、ＰＦＡ）２ｇを１０℃で溶解させた（以下、ＰＦＡ溶液）。さらに、ニトロベンゼン２５９．３ｍＬと硫酸１６９．３ｍＬの混合溶液に４６．９ｇのＮ−メチロール−α−クロルアセトアミドを１０℃で溶解させた（以下、ＮＭＣＡ溶液）。１０ｇの原編み地１をＰＦＡ溶液に浸漬させた後、速やかにＮＭＣＡ溶液を添加し、撹拌した。撹拌下で２時間浸漬させた後、編み地を取りだし、過剰のニトロベンゼンで洗浄後、メタノールで置換・洗浄し、さらに水洗いし、α−クロルアセトアミドメチル化した編み地（以下、中間体１）を得た。ＰＦＡ溶液の作製からメタノールを用いた編み地の洗浄までの一連の操作は１５℃以下で実施した。【００７７】
（１）免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１の作製
ジエチレントリアミン（４６μＬ）とトリエチルアミン（２８．６ｍＬ）をジメチルスルホキシド（３９８ｍＬ）に溶かした溶液に、中間体１（１０ｇ）を浸し、４０℃にて３時間撹拌した。その後、ジエチレントリアミンで処理した中間体１を水洗いし、乾燥させ、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１を得た。【００７８】
（２）免疫抑制性タンパク質吸着材料１−２の作製
免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−２を得た。【００７９】
（３）免疫抑制性タンパク質吸着材料２−１の作製
ジエチレントリアミンの量を２３２μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料２−１を得た。【００８０】
（４）免疫抑制性タンパク質吸着材料２−２の作製
免疫抑制性タンパク質吸着材料２−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料２−２を得た。【００８１】
（５）免疫抑制性タンパク質吸着材料３の作製
ジエチレントリアミンの量を４６４μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料３を得た。【００８２】
（６）免疫抑制性タンパク質吸着材料４−１の作製
ジエチレントリアミンの量を９２９μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料４−１を得た。【００８３】
（７）免疫抑制性タンパク質吸着材料４−２の作製
免疫抑制性タンパク質吸着材料４−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料４−２を得た。【００８４】
（８）免疫抑制性タンパク質吸着材料５の作製
ジエチレントリアミン（４６μＬ）の代わりにエチレンジアミン（９２９μＬ）を用いたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料５を得た。【００８５】
（９）免疫抑制性タンパク質吸着材料６の作製
ジエチレントリアミン（４６μＬ）の代わりにテトラエチレンペンタアミン（１８６３μＬ）を用いたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料６を得た。【００８６】
（１０）免疫抑制性タンパク質吸着材料７−１の作製
ジエチレントリアミンの量を１８６３μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料７−１を得た。【００８７】
（１１）免疫抑制性タンパク質吸着材料７−２の作製
免疫抑制性タンパク質吸着材料７−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料７−２を得た。【００８８】
（１２）免疫抑制性タンパク質吸着材料８−１の作製
ジエチレントリアミンの量を４６８７μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料８−１を得た。【００８９】
（１３）免疫抑制性タンパク質吸着材料８−２の作製
免疫抑制性タンパク質吸着材料８−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料８−２を得た。【００９０】
（１４）免疫抑制性タンパク質吸着材料９の作製
ジエチレントリアミンの量を９４７９μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料９を得た。【００９１】
（１５）免疫抑制性タンパク質吸着材料１０の作製
ジエチレントリアミン（４６μＬ）の代わりにテトラエチレンペンタアミン（４６８７μＬ）を用いたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料１０を得た。【００９２】
（１６）免疫抑制性タンパク質吸着材料１１の作製
ジエチレントリアミンの量を１９３８８μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料１１を得た。【００９３】
（１７）免疫抑制性タンパク質吸着材料１２の作製
ジエチレントリアミンの量を３２９６４μＬとしたこと以外は、免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１と同様にして、免疫抑制性タンパク質吸着材料１２を得た。【００９４】
（１８）免疫抑制性タンパク質吸着材料１３の作製
数平均分子量が約６００のポリエチレンイミン（８１９５μＬ）とトリエチルアミン（２８．６ｍＬ）をジメチルスルホキシド（３９８ｍＬ）に溶かした溶液に１０ｇの中間体１を浸し、４０℃にて３時間撹拌した。その後、ポリエチレンイミンで処理した中間体１を水洗いし、乾燥し、免疫抑制性タンパク質吸着材料１３を得た。【００９５】
（１９）免疫抑制性タンパク質吸着材料１４の作製
数平均分子量が約７５００００のポリエチレンイミン５０重量％水溶液（１６３９０μＬ）とトリエチルアミン（２８．６ｍＬ）をジメチルスルホキシド（３９８ｍＬ）に溶かした溶液に、１０ｇの中間体１を浸し、４０℃にて３時間撹拌した。その後、ポリエチレンイミンで処理した中間体１を水洗いし、乾燥し、免疫抑制性タンパク質吸着材料１４を得た。【００９６】
（２０）免疫抑制性タンパク質吸着材料１５の作製
数平均分子量が約６５０００のポリアリルアミン２０重量％水溶液（２８７６μＬ）とトリエチルアミン（２８．６ｍＬ）をジメチルスルホキシド（３９８ｍＬ）に溶かした溶液に１０ｇの中間体１を浸し、４０℃にて３時間撹拌した。その後、ポリアリルアミンで処理した中間体１を水洗いし、乾燥し、免疫抑制性タンパク質吸着材料１５を得た。【００９７】
２．吸着材料が有するアミノ基の総量の測定
作製した吸着材料等について、水不溶性担体上のアミノ基の総量は、酸塩基逆滴定により測定した。ポリプロピレン製容器に、吸着材料（１．０ｇ）及び６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を添加し、室温で１時間撹拌した。次に、イオン交換水（５０ｍＬ）を含む別のポリプロピレン製容器に、上記吸着材料を添加し、室温で３０分間撹拌した（洗浄）。吸着材料を添加したイオン交換水のｐＨが７になるまで洗浄を繰り返すことで、脱塩処理された吸着材料を得た。脱塩後の吸着材料を２５℃の減圧下で４８時間静置して乾燥した。乾燥後の吸着材料の重量を測定し、新たなポリプロピレン製容器に該吸着材料と０．１Ｍの塩酸を４０ｍＬ加え、室温で３０分間撹拌した。撹拌後、溶液のみを５ｍＬ抜き取って新たなポリプロピレン製容器に移した。次に、得られた溶液に対して、０．１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を０．１ｍＬ滴下した。滴下後１０分間撹拌し、溶液のｐＨを測定した。水酸化ナトリウムの滴下、１０分間の撹拌及びｐＨ測定を同様に１００回繰り返した。溶液のｐＨが８．５を超えた際の水酸化ナトリウム水溶液の滴下量を滴定量とした。吸着材料１ｇあたりの適定量と以下の式４を用いて、吸着材料１ｇあたりのアミノ基の総量を算出した。【００９８】
吸着材料１ｇあたりのアミノ基の総量（μｍｏｌ）＝{添加した０．１Ｍ塩酸の液量（４０ｍＬ）／抜き取った塩酸の液量（５ｍＬ）}×滴定量（ｍＬ）÷乾燥後の吸着材料の重量（ｇ）×水酸化ナトリウム水溶液濃度（０．１Ｍ）・・・式４【００９９】
３．吸着材料が有する１級アミノ基の量の測定
水不溶性担体上の１級アミノ基の量は、１級アミノ基と特異的に反応して蛍光物質を生じるo-フタルアルデヒド（以下、ＯＰＡ）を利用して測定した。まず、吸着材料を直径６ｍｍの円形になるようにポンチで任意の枚数打ち抜き、２５℃の減圧下で４８時間静置して乾燥させた。次に、乾燥後の吸着材料の重量を測定し、ポリプロピレン製容器中に、該吸着材料を配置した。また、８０体積％メタノール及び２０体積％炭酸塩ｐＨ標準液（ｐＨ １０．０１）中に、ＯＰＡ及びＤＴＴをそれぞれ１．５ｍＭ及び５ｍＭの濃度となるように溶解させ、混合溶液を調製した。該混合溶液を、上記吸着材料が配置されたポリプロピレン製容器中に添加し、室温にて３時間撹拌した。撹拌後、１００μＬの溶液を回収し、測定サンプルとした。検量線用サンプルとして、ＯＰＡ（濃度がそれぞれ０ｍＭ、０．３７５ｍＭ、０．７５ｍＭ、１．５ｍＭとなるように調整した）、５ｍＭのＤＴＴ、８０体積％メタノール及び２０体積％炭酸塩ｐＨ標準液(ｐＨ １０．０１)を含む混合溶液を準備した。測定サンプル１００μＬ及び検量線用サンプル１００μＬを、それぞれ、６．１ｍＭのn-プロピルアミン及び５ｍＭのＤＴＴを含む炭酸塩ｐＨ標準液（ｐＨ １０．０１）１ｍＬと混合し、希釈後の測定サンプル及び希釈後の検量線用サンプルを得た。９０秒後、希釈後の測定サンプル及び希釈後の検量線用サンプルについて、３４０ｎｍにおける吸光度を分光光度計で測定した。希釈後の測定サンプルのＯＰＡ濃度を検量線から求め、希釈倍率を乗じて希釈前の測定サンプルのＯＰＡ濃度（以下、サンプルのＯＰＡ濃度）に換算した。【０１００】
以下の式５を用いて、吸着材料１ｇあたりの１級アミノ基の量を算出した。【０１０１】
吸着材料１ｇあたりの１級アミノ基の量（μｍｏｌ）＝{添加したＯＰＡ濃度（１．５ｍＭ）−サンプルのＯＰＡ濃度}×吸着材料と撹拌反応させる混合溶液の量（ｍＬ）／乾燥後の吸着材料の重量（ｇ）・・・式５【０１０２】
４．ＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着性能試験
免疫抑制性タンパク質吸着材料における吸着反応の前後の溶液中のＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１濃度をＥＬＩＳＡ法で定量し、以下の式６に従って材料１ｇあたりのＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着量を算出した。すなわち、直径６ｍｍの円板状に切り抜いた免疫抑制性タンパク質吸着材料４枚を、容量２ｍＬのポリプロピレン製の容器に入れた。この容器に、ウシ血清アルブミンを３．５重量％と、リコンビナントヒトＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１（Ｒ＆Ｄシステムズ社）の濃度が２５ｎｇ／ｍＬになるように調整したリン酸緩衝生理食塩水を１．１ｍＬ添加し、３７℃のインキュベータ内で２時間転倒混和した。吸着繊維担体を容器から取り除いた後、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｈｕｍａｎ ＬＡＰ(ＴＧＦ−β１) ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄシステムズ社）を用いて溶液中のＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１の残濃度を測定した。また、直径６ｍｍの円板状に切り抜いた免疫抑制性タンパク質吸着材料４枚を、２５℃の減圧下で４８時間静置して乾燥させた。乾燥後の水免疫抑制性タンパク質吸着材料４枚の重量を測定した。以下の式６にしたがってＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着量を算出した。【０１０３】
吸着材料１ｇあたりのＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着量＝｛（インキュベート前のＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１濃度）―（インキュベート後のＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１濃度）｝／（インキュベート前のＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１濃度）×リン酸緩衝生理食塩水量１．１ｍＬ÷（直径６ｍｍの円板状に切り抜いた吸着材料４枚の乾燥重量）・・・式６【０１０４】
５．タンパク質吸着材料を吸着担体として備えたカラムの作製
ポリプロピレン−ポリエチレン共重合体製ラジアルフロー型カラム（直径：２５ｍｍ×長さ：１３３ｍｍ、吸着繊維充填部体積：１４．７ｃｍ３）１本当たりに原編み地１又は免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１、２−１、３、４−１、５、６、７−１、８−１、９〜１５を各々４ｇ充填した。その後、カラム内を生理食塩液で満たした後、高圧蒸気滅菌を行い、それぞれ原編み地１を吸着担体として備えたカラム（以下、「原編み地１カラム」）、及び免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１、２−１、３、４−１、５、６、７−１、８−１、９〜１５を吸着担体として備えたカラム（以下、「カラム１〜１５」）を得た。【０１０５】
６．不溶性微粒子数測定
第十五改正日本薬局方収載(２００６年３月３１日厚生労働省告示第２８５号)の一般試験法６．０７注射剤の不溶性微粒子試験法（第１法：光遮蔽粒子計数法；ｐｐ．１−２）を参考にして実施した。包装貨物及び容器の振動試験方法（ＪＩＳ Ｚ ０２３２）を参考にし、カラムを水平および垂直方向に各１時間振動した。振動後のカラムを市販の人工腎臓用血液回路と接続し、生理食塩液２Ｌを用いて毎分１００ｍＬの流速にて洗浄した。なお、使用する生理食塩液はポアサイズ０．３μｍのフィルターで濾過し、１０μｍ以上の微粒子が０．５個／ｍＬ以下かつ２５μｍ以上の微粒子が０．２個／ｍＬ以下であることを確認した。濾過した生理食塩液をポンプを用いて毎分５０ｍＬの流速で１時間本品に送入し、その流出液を２０分毎に１Ｌずつ、計３回採取（計３Ｌ）した。得られた流出液を光遮へい型自動微粒子測定装置にてそれぞれ３００ｍＬずつ供給し、微粒子を測定し、１時間送液した時の微粒子数（個／ｍＬ）を算出した。【０１０６】
（実施例１〜１０）
免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１、２−１、３、４−１、５、６、７−１、８−１、９、１０について、アミノ基の総量の測定、１級アミノ基の量の測定、及びＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着性能試験を行った。また、カラム１〜１０を用いて、不溶性微粒子数を測定した。結果を表１に示す。【０１０７】
免疫抑制性タンパク質吸着材料１−１、２−１、３、４−１、５、６、７−１、８−１、９、１０は、不溶性微粒子の発生量が少なく、かつＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１を効率的に吸着できることが確認された。【０１０８】
（比較例１）
原編み地１カラム（原編み地１）について、アミノ基の総量の測定、１級アミノ基の量の測定、及びＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着性能試験を行った。また、原編み地１カラムを用いて、不溶性微粒子数を測定した。結果を表２に示す。【０１０９】
原編み地１カラム（原編み地１）では、不溶性微粒子の発生量は少なかったが、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１を効率的に吸着できなかった。【０１１０】
（比較例２〜６）
免疫抑制性タンパク質吸着材料１１〜１５について、アミノ基の総量の測定、１級アミノ基の量の測定及びＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１吸着性能試験を行った。また、カラム１１〜１５を用いて、不溶性微粒子数を測定した。結果を表２に示す。【０１１１】
免疫抑制性タンパク質吸着材料１１（比較例２）では、不溶性微粒子の発生量は少ないが、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１を効率的に吸着できなかった。【０１１２】
免疫抑制性タンパク質吸着材料１２（比較例３）では、不溶性微粒子が多く発生し、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１も効率的に吸着できなかった。【０１１３】
免疫抑制性タンパク質吸着材料１３〜１５（比較例４〜６）では、ＬＡＰ結合型ＴＧＦ−β１は効率的に吸着できたものの、不溶性微粒子が多く発生した。【０１１４】
後記表中以下の略号を用いる。
ＥＤＡ：エチレンジアミン
ＤＥＴＡ：ジエチレントリアミン
ＴＥＰＡ：テトラエチレンペンタアミン
ＰＥＩ６００：数平均分子量が約６００のポリエチレンイミン
ＰＥＩ７５０Ｋ：数平均分子量が約７５００００のポリエチレンイミン
ＰＡＡ：数平均分子量が約６５０００のポリアリルアミン【０１１５】
【表１】
2019049961.tif 000003
【０１１６】
【表２】
2019049961.tif 000004
【０１１７】
７．表面の算術平均粗さの測定
形状測定レーザー顕微鏡（キーエンス社製；カラー３Ｄレーザー顕微鏡 ＶＫ−９７００）を用いて、１００倍の倍率で、乾燥させないように水に濡れた状態で、吸着材料の表面を観察し、表面の算術平均粗さを測定した（ＪＩＳ Ｂ ０６０１−２００１準拠）。基準長さＬは５０μｍとし、位置が異なる１０箇所で測定した値の平均値を表面の算術平均粗さの値とした。【０１１８】
８．血小板の付着試験
ヒト血液を用いたバッチ式試験を行い、吸着材料への血小板の付着性を、血球計測機により分析・算出した。すなわち、直径１０ｍｍの円板状に切り抜いた吸着材料５枚を、ポリプロピレン製の容器に入れた。この容器に、ヒト健常者から採血した血液を３．０７ｍＬ添加し、３７℃のインキュベータ内で１時間転倒混和した。吸着材料を容器から取り除いた後、残りの血液中に含まれる血小板数を血球計測器により算出した（以下、免疫抑制性タンパク質吸着材料を添加した血液の血小板数）。吸着材料を添加していない血液で、同様の操作を行った（以下、免疫抑制性タンパク質吸着材料を添加していない血液の血小板数）。以上の値を用いて、血小板の付着率を下記式７により算出した。【０１１９】
血小板の付着率（％）＝（免疫抑制性タンパク質吸着材料を添加していない血液の血小板数−免疫抑制性タンパク質吸着材料を添加した血液の血小板数）／免疫抑制性タンパク質吸着材料を添加していない血液の血小板数×１００・・・式７【０１２０】
（実施例１１）
免疫抑制性タンパク質吸着材料４−１について、表面の算術平均粗さの測定及び血小板の付着試験を行った。結果を表３に示す。免疫抑制性タンパク質吸着材料４−１において、血小板の付着率は低かった。【０１２１】
【表３】
2019049961.tif 000005
【０１２２】
９．血液抗凝固剤吸着試験
免疫抑制性タンパク質吸着材料における吸着反応の前後の溶液中のヘパリン濃度を、分光光度計を用いた比色分析法で定量し、以下の式８に従って吸着材料によるヘパリン吸着率を算出した。すなわち、直径１０ｍｍの円板状に切り抜いた免疫抑制性タンパク質吸着材料４枚を、容量２ｍＬのポリプロピレン製の容器に入れた。また、免疫抑制性タンパク質吸着材料を入れていない容量２ｍＬのポリプロピレン製の容器を準備した。吸着材料を入れた容器と、吸着材料を入れていない容器のそれぞれに、ヘパリンナトリウム（エイワイファーマ社）の濃度が５０単位／ｍＬになるように調製した生理食塩水を１．４ｍＬ添加し、３７℃のインキュベータ内で２時間転倒混和した。転倒混和後、１ｍＬの溶液を回収し、測定サンプル（それぞれ、吸着材料を入れたサンプル、吸着材料を入れていないサンプル）とした。検量線用サンプルとして、濃度がそれぞれ０単位／ｍＬ、０．３１２５単位／ｍＬ、０．６２５単位／ｍＬ、１．２５単位／ｍＬ、２．５単位／ｍＬとなるように調製した生理食塩水を準備した。それぞれの測定サンプル５０μＬを、生理食塩水０．９５ｍＬと混合し、希釈後の測定サンプルをそれぞれ得た。希釈後のそれぞれの測定サンプル及び検量線用サンプルについて、２１０ｎｍにおける吸光度を分光光度計で測定した。希釈後の測定サンプルのヘパリン濃度を検量線から求め、希釈倍率を乗じて希釈前の測定サンプルのヘパリン濃度（以下、それぞれ、吸着材料を入れたサンプルのヘパリン濃度、吸着材料を入れていないサンプルのヘパリン濃度）に換算した。以下の式８に従ってヘパリン吸着率を算出した。【０１２３】
吸着材料によるヘパリン吸着率（％）＝｛（吸着材料を入れていないサンプルのヘパリン濃度）−（吸着材料を入れたサンプルのヘパリン濃度）｝／（吸着材料を入れていないサンプルのヘパリン濃度）×１００・・・式８【０１２４】
（実施例１２〜１６）
免疫抑制性タンパク質吸着材料１−２、２−２、４−２、７−２、８−２について、血液抗凝固剤吸着試験を行った。結果を表４に示す。【０１２５】
免疫抑制性タンパク質吸着材料１−２、２−２、４−２、７−２、８−２（実施例１２〜１６）では、アミノ基の総量が少ない方が、ヘパリンの吸着率は低かった。【０１２６】
【表４】
2019049961.tif 000006
【０１２７】
実施例１３、１５及び１６については、１級アミノ基の量は未測定であるが、これらの実施例で用いた吸着材料２−２、７−２及び８−２は、上記吸着材料２−１、７−１及び８−１と同じプロセスにより作製されているため、実施例１３、１５及び１６における１級アミノ基の量はいずれも４５０μｍｏｌ以下であることが推測される。
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
本実施形態の吸着材料及び吸着カラムは、免疫抑制性タンパク質を効率良く吸着することができる。そのため、癌治療への適用が期待される。また、本実施形態の吸着材料及び吸着カラムは、樹状細胞やナチュラルキラー細胞等を活性化させる細胞輸注治療と併用することも可能である。
【符号の説明】
【０１２９】
１    容器本体
２    流入口
３    流出口
４    フィルター
５    仕切板
５ａ  仕切板の開口
６    フィルター
７    仕切板
７ａ  仕切板の支持突起
７ｂ  仕切板の透孔
８    パイプ
９    流路
１０    貫通孔
１１    吸着材料
Ｑ    血液流れ
【図１】
2019049961.tif 000007
【図２】
2019049961.tif 000008
【国際調査報告】
2019049961.tif 000009
2019049961.tif 000010
2019049961.tif 000011