(57)【要約】  検査キットにおいて、ウイルスを含有する検査試料を展開する展開層１２と、展開層１２の途中に設けられた認識部１７と、展開層１２の縁部に接触するように配置された試薬部１３とを有し、認識部１７は、ウイルスが有する第１および第２の抗原決定部位を、特異的に認識する、マウス由来の第１および第２の特異抗体が固定化され、試薬部１３は、ウイルスが有する第１および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識し、かつ標識物質で標識化されている、マウス由来の第１および第２の標識化抗体を含み、第１および第２の標識化抗体は、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変していることにより、ウイルスによる感染の有無の検査を、早期に、かつ、優れた検出感度で実施することができる。
2019187271.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスによる感染の有無を検査するのに用いられる検査キットであって、
前記ウイルスを含有する検査試料を展開する展開層と、該展開層の途中に設けられた認識部と、前記検査試料が前記展開層を展開する展開方向を基準としたとき、前記展開層の上流側の縁部に接触するように配置された試薬部とを有し、
前記認識部は、前記ウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する、マウス由来の第１の特異抗体および第２の特異抗体が固定化され、
前記試薬部は、前記ウイルスが有する前記第１の抗原決定部位および前記第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている、マウス由来の第１の標識化抗体および第２の標識化抗体を含み、
前記第１の標識化抗体および前記第２の標識化抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変していることを特徴とする検査キット。
【請求項２】
さらに、前記第１の特異抗体および前記第２の特異抗体は、それぞれ、前記ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、前記糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変している請求項１に記載の検査キット。
【請求項３】
前記ウイルスは、デングウイルスである請求項１または２に記載の検査キット。
【請求項４】
前記第１の特異抗体および前記第１の標識化抗体は、それぞれ、前記デングウイルスが有する内部抗原の一部を特異的に認識するものである請求項３に記載の検査キット。
【請求項５】
前記内部抗原は、エンベロープが備えるＥタンパクである請求項４に記載の検査キット。
【請求項６】
前記第２の特異抗体および前記第２の標識化抗体は、それぞれ、前記デングウイルスが有する外部抗原の一部を特異的に認識するものである請求項３ないし５のいずれか１項に記載の検査キット。
【請求項７】
前記外部抗原は、前記デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１である請求項６に記載の検査キット。
【請求項８】
前記試薬部の上流側の縁部に接触するように配置された試薬供給部と、該試薬供給部上に積層するように配置された血球ろ過部とを有し、前記検査試料が全血であり、
前記血球ろ過部を介して前記試薬供給部に前記検査試料を供給することにより、前記検査試料に含まれる血球成分が除去されるよう構成されている請求項１ないし７のいずれか１項に記載の検査キット。
【請求項９】
請求項１ないし８のいずれか１項に記載の検査キットを用いて、ウイルスによる感染の有無を検査する検査方法であって、
前記検査試料を前記展開層に供給する第１の工程と、
前記検査試料が前記展開層を展開する際に、前記展開層の途中に設けられた前記認識部に、前記ウイルスが捕捉されているか否かを確認する第２の工程とを有することを特徴とする検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルスによる感染の有無を検査することができる検査キットおよび検査方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ウイルスによる感染症の１種である、デングウイルスによるデングウイルス感染症は、デング熱（ＤＦ）・デング出血熱およびデングショック症候群（ＤＨＦ／ＤＳＳ）に分類され、地球の温暖化やヒト、物資の移動範囲拡大、時間短縮等により、その患者数、発症地域が近年増加の一途を辿っている。【０００３】
このデングウイルスは、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス等と同様にフラビウイルス科フラビウイルス属に属しており、ヤブ蚊属のネッタイシマカやヒトスジシマカを媒介とし、ヒト(感染者)、蚊、ヒトにより感染が拡大することが知られている。【０００４】
また、ＷＨＯ（世界保健機構）の推定に拠れば、熱帯・亜熱帯に居住する約２５億人のうち、毎年５０００万人の人々がデングウイルスに感染し、５０万人のＤＨＦ／ＤＳＳ患者を含め８００万人程度が入院をし、小児を主として毎年３万人前後の人々が死亡している。本邦においても、海外旅行者の増加に伴い輸入感染症として年々増加している。しかしながら、このデングウイルス感染症に対する、治療薬およびワクチンは、未だ開発されていないのが実情である。【０００５】
ＷＨＯは、この世界的な感染者数、および感染地域の拡大に留意して、デングウイルス感染症を、Neglected Tropical Diseases(顧みられない熱帯性疾患)の１つに取り上げ、治療薬、ワクチンの開発とともに、その感染拡大の予防、防止に努め、発症患者動向、ウイルスの種別（血清型）等の情報報告を各国に求めている。【０００６】
したがって、発症患者動向を早期に知り得ること、さらには、治療方針を早期に決定し得ることを目的に、デングウイルスの感染の有無を早期に知り得ることができる検査方法の開発が求められている。【０００７】
ここで、近年、ウイルスによる感染症に対する感染の有無を、簡便、迅速でかつ安価に検査することができる方法として、抗原−抗体反応を利用した免疫クロマト方式を用いた検査方法が広く用いられている（例えば、特許文献１参照。）。【０００８】
デングウイルスの感染の有無についても、この免疫クロマト方式を用いた検査方法が適用されているが、この場合、デングウイルスの感染の有無を早期に、かつ、優れた検出感度で、デングウイルスの感染の有無を検出することができているとは言えないのが実情である。【０００９】
また、このような問題は、デングウイルスが属するフラビウイルス科のウイルス以外のウイルスについても同様に生じている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特表２００３−５１１６９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、ウイルスによる感染の有無の検査を、早期に、かつ、優れた検出感度で実施することができる検査キットおよび検査方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
このような目的は、下記（１）〜（９）の本発明により達成される。
（１）  ウイルスによる感染の有無を検査するのに用いられる検査キットであって、
前記ウイルスを含有する検査試料を展開する展開層と、該展開層の途中に設けられた認識部と、前記検査試料が前記展開層を展開する展開方向を基準としたとき、前記展開層の上流側の縁部に接触するように配置された試薬部とを有し、
前記認識部は、前記ウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する、マウス由来の第１の特異抗体および第２の特異抗体が固定化され、
前記試薬部は、前記ウイルスが有する前記第１の抗原決定部位および前記第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている、マウス由来の第１の標識化抗体および第２の標識化抗体を含み、
前記第１の標識化抗体および前記第２の標識化抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変していることを特徴とする検査キット。【００１３】
（２）  さらに、前記第１の特異抗体および前記第２の特異抗体は、それぞれ、前記ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、前記糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変している上記（１）に記載の検査キット。【００１４】
（３）  前記ウイルスは、デングウイルスである上記（１）または（２）に記載の検査キット。【００１５】
（４）  前記第１の特異抗体および前記第１の標識化抗体は、それぞれ、前記デングウイルスが有する内部抗原の一部を特異的に認識するものである上記（３）に記載の検査キット。【００１６】
（５）  前記内部抗原は、エンベロープが備えるＥタンパクである上記（４）に記載の検査キット。【００１７】
（６）  前記第２の特異抗体および前記第２の標識化抗体は、それぞれ、前記デングウイルスが有する外部抗原の一部を特異的に認識するものである上記（３）ないし（５）のいずれかに記載の検査キット。【００１８】
（７）  前記外部抗原は、前記デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１である上記（６）に記載の検査キット。【００１９】
（８）  前記試薬部の上流側の縁部に接触するように配置された試薬供給部と、該試薬供給部上に積層するように配置された血球ろ過部とを有し、前記検査試料が全血であり、
前記血球ろ過部を介して前記試薬供給部に前記検査試料を供給することにより、前記検査試料に含まれる血球成分が除去されるよう構成されている上記（１）ないし（７）のいずれかに記載の検査キット。【００２０】
（９）  上記（１）ないし（８）のいずれかに記載の検査キットを用いて、ウイルスによる感染の有無を検査する検査方法であって、
前記検査試料を前記展開層に供給する第１の工程と、
前記検査試料が前記展開層を展開する際に、前記展開層の途中に設けられた前記認識部に、前記ウイルスが捕捉されているか否かを確認する第２の工程とを有することを特徴とする検査方法。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、ウイルスによる感染の有無を、早期に、かつ、優れた検出感度で検査することができる。【００２２】
このように、ウイルス感染の早期診断を優れた精度で行うことができ、早期に治療方針を立てることができる。そのため、このウイルス感染の有無の検査を、デングウイルスの感染の有無に適用した場合には、デング出血熱／デングショック症候群（ＤＨＦ／ＤＳＳ）の発症、さらにはＤＨＦ／ＤＳＳ発症に起因する致死率を低減させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、本発明の検査キットの実施形態を示す図（図１（ａ）は平面図、図１（ｂ）は縦断面図）である。
【図２】図２は、本発明の検査キットが備える免疫クロマト試験片の実施形態を示す図（図２（ａ）は斜視図、図２（ｂ）は分解斜視図）である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明の検査キットおよび検査方法を、添付図面に示す好適実施形態に基づいて詳細に説明する。
【００２５】
図１は、本発明の検査キットの実施形態を示す図（図１（ａ）は平面図、図１（ｂ）は縦断面図）、図２は、本発明の検査キットが備える免疫クロマト試験片の実施形態を示す図（図２（ａ）は斜視図、図２（ｂ）は分解斜視図）である。なお、説明の都合上、以下の説明では、図１（ａ）、図２中の上側を「上」、下側を「下」と言う。
【００２６】
まず、本発明の検査キットについて説明する。
本発明の検査キットは、免疫（イムノ）クロマト方式を用いて、ウイルスの感染の有無を検査するために用いられるものである。
【００２７】
ここで、免疫クロマト方式とは、一般的に、以下のような工程を経て、検査試料（検体）中における被測定物としてのウイルスの有無を判別する方法である。すなわち、１：まず、被測定物としてのウイルスを特異的に認識する標識化抗体に、検査試料（検体）を接触させ、２：次いで、この検査試料を展開層において毛細管現象により展開し、この展開の際に、展開層の途中に固定化した被測定物を特異的に認識する特異抗体で、被測定物と前記標識化抗体との複合体を捕捉し、３：この捕捉された複合体が有する標識化抗体を観察することにより被測定物の有無を判別する方法である。
【００２８】
かかる方法によれば、血液（全血）や尿のような検査試料を、展開層を備える試験片に滴下する等の簡単な操作で、検査試料中に含まれる被測定物を検出（分析）することができる。したがって、免疫クロマト方式は、近年、検査試料に含まれる被測定物を、簡便かつ迅速に検出するのに非常に有用な手法として用いられている。
【００２９】
以下、この免疫クロマト方式を用いて、ウイルスの感染の有無について検査することができる本発明の検査キットについて説明する。
【００３０】
なお、以下では、本発明の検査キットを用いて、ウイルスの１種であるフラビウイルス科に属するデングウイルスを検出する場合を一例に説明する。
【００３１】
図１に示す検査キット１は、デングウイルスの感染の有無を判別する免疫クロマト試験片１０と、この免疫クロマト試験片１０を収納するハウジングケース（ケーシング）２０とを有している。
【００３２】
免疫クロマト試験片１０（以下、単に「試験片」と言う。）は、図２に示すように、支持基板１１と、この支持基板１１上にそれぞれ配置された、検査試料中の血球成分をろ過する血球ろ過部１５と、血球成分がろ過された検査試料が供給される試料供給部１４と、検査試料中に含まれるデングウイルスを特異的に認識する標識化抗体を含有する試薬部１３と、検査試料を展開する展開層１２と、この展開層１２の途中に設けられ、検査試料中に含まれるデングウイルスを特異的に認識する特異抗体が固定化された認識部１７と、展開層１２の途中に前記認識部１７の試薬部１３に対する反対側に設けられ、標識化抗体を認識する抗抗体（抗標識化抗体抗体）が固定化されたコントロール部１８と、展開層１２を展開した検査試料を吸水する吸収部１６とを有している。
【００３３】
なお、試験片１０では、検査試料が展開層１２を展開する展開方向を基準としたとき、展開層１２の上流側に、試薬部１３を介して試料供給部１４が配置され、展開層１２の下流側に、吸収部１６が配置されている。換言すれば、支持基板１１上において、前記展開方向の上流側から下流側に向かって、互いの縁部同士が接触するように、試料供給部１４、試薬部１３、展開層１２および吸収部１６が、この順で配置されている。
【００３４】
支持基板１１は、短冊（平板）状をなしており、試験片１０を構成する各種部材、すなわち、血球ろ過部１５、試料供給部１４、試薬部１３、展開層１２および吸収部１６を支持するためのものである。
【００３５】
この支持基板１１の構成材料としては、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエステル、酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレートのような樹脂材料等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３６】
支持基板１１の厚さは、特に限定されず、例えば、０．０５〜０．６ｍｍ程度であることが好ましく、０．１〜０．５ｍｍ程度であることがより好ましい。
【００３７】
血球ろ過部１５は、その全体形状が短冊状をなし、試料供給部１４上に積層するように配置されており、血球成分をろ過（分離）して、血球成分がろ過された検査試料、すなわち血漿成分を試料供給部１４に供給するためのものである。
【００３８】
このように試験片１０を、血球ろ過部１５を備える構成とすることにより、デングウイルスの存在の有無を確認する検査試料として、赤血球、白血球、血小板のような血球成分を含有するもの、すなわち全血等を用いることができる。そのため、全血等から血漿成分を、遠心分離等を用いて分離する際の手間の低減および時間の短縮を図ることができる。
【００３９】
この血球ろ過部１５は、通常、ガラスフィルター等のろ過膜で構成され、その細孔径は、好ましくは１００〜１５００ｎｍ程度に設定され、より好ましくは２００〜１０００ｎｍ程度に設定される。これは、デングウイルスの大きさが約４０〜７０ｎｍ程度であり、血球成分の大きさが約２０００μｍ以上であることから、ろ過膜の細孔径をかかる範囲内に設定することで、血球成分をろ過しつつ、デングウイルスを血漿成分側に移行させることができる。したがって、血球ろ過部１５に捕捉されるデングウイルスの捕捉率を低減させて、展開層１２で展開されるデングウイルスの展開率を向上させることができるため、試験片１０を用いてデングウイルスの感染の有無を検出する際の検出感度が向上する。
【００４０】
なお、検査試料として全血を用いず、予め血球成分が除去された血漿成分および血清成分等を用いる場合には、この血球ろ過部１５の試料供給部１４上への載置を省略することができる。
【００４１】
試料供給部１４は、その全体形状が短冊状をなし、その長手方向の下流側の縁部が試薬部１３に接触する（重なる）ように配置されており、血球ろ過部１５を介して添加された検査試料を、試薬部１３に供給するためのものである。
【００４２】
この試料供給部１４は、液体透過性を備えるものであれば特に限定されず、例えば、多孔質材料および繊維質材料を用いて形成される。なお、試料供給部１４を、多孔質材料または繊維質材料を用いて形成した場合、試料供給部１４の多孔性は、試料供給部１４の長手方向に対して、気孔の連通方向または繊維の延伸方向が平行をなしている一方向性を備えるものであっても良いし、気孔の連通方向または繊維の延伸方向がランダムとなっている多方向性を備えるものであっても良い。
【００４３】
このような多孔質材料および繊維質材料の構成材料としては、例えば、紙やニトロセルロールのようなセルロース材料の他、ガラスウール、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリフッ化ビニリデン、エチレン酢酸ビニル、アクリロニトリル、ポリテトラフルオロエチレンのような樹脂材料が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４４】
試薬部１３は、その全体形状が短冊状をなし、その長手方向の上流側の縁部が試料供給部１４に接触し（重なり）、下流側の縁部が展開層１２に接触するように配置されており、試料供給部１４を介して供給された検査試料を展開層１２に供給する。
【００４５】
さらに、この試薬部１３は、試薬として、デングウイルスを特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている標識化抗体を有し、試薬部１３では、この標識化抗体が、液体の通過（透過）により遊離可能な状態で、多孔質担体に担持（保持）されている。すなわち、試薬部１３は、試薬として、デングウイルスを特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている標識化抗体を含むものである。
【００４６】
そのため、検査試料が試薬部１３を透過（通過）して展開層１２に供給された際には、検査試料中には、標識化抗体（試薬）が添加された状態となっている。
【００４７】
また、検査試料中にデングウイルスが含まれる場合、すなわち被検者がデングウイルスに感染している場合（陽性の場合）には、標識化抗体がデングウイルスを特異的に認識するため、標識化抗体とデングウイルスとで構成される複合体が形成され、この複合体を形成した状態で、検査試料は展開層１２に供給される。
【００４８】
この試薬部１３が備える多孔質担体は、液体透過性のものであれば特に限定されず、例えば、前記試料供給部１４と同様に、多孔質材料および繊維質材料を用いて形成される。
【００４９】
また、標識化抗体は、デングウイルスを特異的に認識する抗体（２次抗体）を、標識物質で標識化したものであるが、この抗体（２次抗体）としては、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤのいずれであってもよいが、取り扱いの容易さからＩｇＧが好ましく用いられる。
【００５０】
さらに、この抗体（２次抗体）は、本発明では、マウス由来の抗体（マウス抗体）が用いられ、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれでもよいが、モノクローナル抗体であることが好ましい。
【００５１】
また、上記のような抗体（２次抗体）は、デングウイルスを特異的に認識するものが用いられ、本実施形態では、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１、ＮＳ２ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５のような外部抗原（非構造タンパク質）の一部を抗原決定部位（第１の抗原決定部位；エピトープ）として特異的に認識する第１の抗体（第１の２次抗体）と、エンベロープが備えるＥタンパク、Ｍタンパク、Ｃタンパクのような内部抗原（構造タンパク質）の一部を抗原決定部位（第２の抗原決定部位）として特異的に認識する第２の抗体（第２の２次抗体）とを含んでいる。
【００５２】
ここで、例えば、外部抗原の１種であるＮＳ１は、デングウイルスによる感染発症の後、２、３日後から１０日程度の期間（検査時期）に血液中に含まれるタンパク質であり、さらに、内部抗原の１種であるＥタンパクは、デングウイルスによる感染発症の後に、０日後から５〜７日程度の期間に血液中に含まれるタンパク質であり、ＮＳ１とＥタンパクとでは、血液中に含まれる期間が異なっている。
【００５３】
そのため、第１の抗体（第１の２次抗体）として、外部抗原の１種であるＮＳ１の一部を抗原決定部位として認識するものを選択し、さらに、第２の抗体（第２の２次抗体）として、内部抗原の１種であるＥタンパクの一部を抗原決定部位として認識するものを選択することで、これら第１の２次抗体と第２の２次抗体との双方を２次抗体として備える標識化抗体は、０日後から１０日程度の期間をウインドウサイズ（至適検査可能期間）として、検査試料中に含まれる抗原が備える抗原決定部位に結合することで、デングウイルスに由来する抗原を認識する。このように、標識化抗体が備える２次抗体として、ウインドウサイズが異なる第１の２次抗体と第２の２次抗体との２種を用いること、すなわち、標識化抗体として、デングウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている第１の標識化抗体および第２の標識化抗体との２種を用いることで、いずれか一方を２次抗体として用いた場合と比較して、ウインドウサイズの期間拡大を図ることができるため、デングウイルスによる感染の早期から長期に亘って、検査キット１によるデングウイルスの検出を高感度に実施することができる。
【００５４】
さらに、前述の通り、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）として、マウス抗体が用いられている。この場合、東洋人のうち日本人には１０〜１５％程度、タイ人には２０〜２５％程度に、血液中に異好抗体の１種であるヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ；human anti mouse antibody）が含まれＨＡＭＡ活性を有していると言われている。そのため、検査試料（血液）中に、ヒト抗マウス抗体が含まれていると、２次抗体をヒト抗マウス抗体が認識して、２次抗体を備える標識化抗体とヒト抗マウス抗体との間で凝集が生じ、その結果、デングウイルスによる感染が認められないにも関わらず、陽性と判定される偽陽性により誤診断が生じるおそれがある。
【００５５】
また、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）として、マウス抗体を用いると、マウス抗体の定常部位には、不可避的に糖鎖が連結していることとなる。そのため、検査試料（血液）中に、この糖鎖を認識するヒト抗体が含まれていると、２次抗体をこのヒト抗体が認識して、２次抗体を備える標識化抗体とヒト抗体との間で凝集が生じ、その結果、このヒト抗体が含まれる場合においても、デングウイルスによる感染が認められないにも関わらず、陽性と判定される偽陽性により誤診断が生じるおそれがある。
【００５６】
これに対して、本発明では、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）として、この抗体（２次抗体）の定常部位に含まれる、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方を、欠損または改変しているものが用いられている。すなわち、標識物質で標識化されている第１の標識化抗体および第２の標識化抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方を、欠損または改変している。
【００５７】
そのため、標識物質で標識化されている第１の標識化抗体および第２の標識化抗体が、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を、欠損している場合には、検査試料（血液）中に、たとえヒト抗マウス抗体が含まれていたとしても、２次抗体を備える標識化抗体とヒト抗マウス抗体との間で凝集が生じるのが的確に防止される。その結果、デングウイルスによる感染が認められない際に、陽性と判定される偽陽性が生じるのが確実に防止される。
【００５８】
また、標識物質で標識化されている第１の標識化抗体および第２の標識化抗体が、それぞれ、前記糖鎖が結合する部位を欠損または改変している場合には、検査試料（血液）中に、たとえ、糖鎖を認識するヒト抗体が含まれていたとしても、２次抗体を備える標識化抗体と、糖鎖を認識するヒト抗体との間で凝集が生じるのが的確に防止される。その結果、デングウイルスによる感染が認められない際に、陽性と判定される偽陽性が生じるのが確実に防止される。
【００５９】
以上のように、本発明では、標識物質で標識化されている第１の標識化抗体および第２の標識化抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変している。これにより、デングウイルスによる感染が認められない際に、陽性と判定される偽陽性が生じるのが確実に防止されるため、結果として、検査キット１の検出感度の向上が図られる。
【００６０】
なお、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）は、この抗体（２次抗体）の定常部位に含まれる、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方を、欠損または改変しているものであればよいが、双方を欠損または改変しているものであることが好ましい。これにより、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損している場合に得られる効果と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位を欠損している場合に得られる効果との双方を得ることができる。
また、本実施形態では、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）の定常部位（より詳しくはＣＨ２領域）において、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方が、欠損または改変している。これらのうち、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損または改変している領域は、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）の定常部位（Ｃ領域）の他、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）の可変部位（Ｖ領域）において存在していてもよいが、本実施形態のように、定常部位（Ｃ領域）に存在していることが好ましい。これにより、第１の抗体（第１の２次抗体）による、外部抗原の１種であるＮＳ１の一部を抗原決定部位として認識する認識能、さらには、第２の抗体（第２の２次抗体）による、内部抗原の１種であるＥタンパクの一部を抗原決定部位として認識する認識能が低下するのを的確に抑制または防止することができる。
さらに、標識化抗体が備える抗体（２次抗体）の定常部位において、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位との双方が、欠損または改変している場合、これらが欠損または改変している領域は、隣接もしくはそれらの一部が重なっていることが好ましい。これにより、第１の抗体（第１の２次抗体）および第２の抗体（第２の２次抗体）を、マウス由来の抗体（マウス抗体）として得る際の工程の簡略化を図ることができる。さらに、第１の抗体（第１の２次抗体）による、外部抗原の１種であるＮＳ１の一部を抗原決定部位として認識する認識能、さらには、第２の抗体（第２の２次抗体）による、内部抗原の１種であるＥタンパクの一部を抗原決定部位として認識する認識能が低下するのを的確に抑制または防止することができる。
【００６１】
抗体を標識化する方法としては、特に制限されず、例えば、金コロイド標識、着色ラテックス粒子標識、放射性標識、蛍光色素標識、酵素標識等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができるが、金コロイド標識であるのが好ましい。金コロイド標識であれば、標識化抗体とデングウイルスとで構成される複合体を優れた感度で視認することができるようになる。
【００６２】
なお、抗体を標識化する方法として金コロイド標識を用いる場合、金コロイドによる抗体の標識化は、例えば、抗体と金コロイドとを緩衝液中で混合することにより行われる。かかる方法によれば、抗体が金コロイドに物理的に吸着することで、抗体が標識化される。
【００６３】
試薬部１３に含まれる標識化抗体は、第１の標識化抗体と第２の標識化抗体との混合比（モル比）が、１：０．１〜１：２０程度であることが好ましく、１：０．５〜１：１０程度であることがより好ましい。これにより、第１の標識化抗体および第２の標識化抗体が、それぞれ、デングウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識して、第１の標識化抗体とデングウイルスとの複合体、および、第２の標識化抗体とデングウイルスとの複合体を確実に形成することができる。
【００６４】
さらに、多孔質担体に標識化抗体（試薬）を担持させる方法、すなわち試薬部１３の形成方法としては、例えば、標識化抗体を含有する水溶液を調製した後、この水溶液を、多孔質担体に含浸させ、その後、乾燥する方法が挙げられる。かかる方法によれば、標識化抗体を多孔質担体に対して均一に担持させることができる。
【００６５】
展開層１２は、その全体形状が短冊状をなし、その長手方向の上流側の縁部が試薬部１３に接触し（重なり）、下流側の縁部が吸収部１６に接触するように配置されており、試薬部１３から供給された、標識化抗体（試薬）を含有する検査試料を、毛細管現象により、その上流側の縁部から下流側の縁部まで展開するためのものである。
【００６６】
この展開層１２は、毛細管現象により検査試料を展開し得るように、通常、多孔質担体で構成され、具体的には、例えば、セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロースのようなセルロース誘導体で構成される膜、ガラスフィルター、ろ紙等で構成されるが、中でもニトロセルロース膜で構成されているのが好ましい。展開層１２をニトロセルロース膜で構成される多孔質担体とすることで、後述する認識部１７における特異抗体の固定化、およびコントロール部１８における抗抗体の固定化を容易に行うことができる。
【００６７】
また、展開層１２の気孔径は、１μｍ以上であるのが好ましく、５μｍ以上であるのがより好ましく、８μｍ以上、１２μｍ以下であるのがさらに好ましい。これにより、検査試料に含まれる液状成分ばかりでなく、デングウイルスや、標識化抗体、さらにはこれらの複合体を、気孔内を確実に透過させることができるようになる。そのため、デングウイルスの感染の有無をより高感度に検出することが可能となる。
【００６８】
また、上述したような構成の展開層１２には、その途中に、認識部１７と、この認識部１７よりも下流側に配置されたコントロール部１８とが設けられている。
【００６９】
認識部１７は、展開層１２における、コントロール部１８の上流側の途中に、デングウイルスを特異的に認識する特異抗体（１次抗体）が固定化されたものである。
【００７０】
この認識部１７は、本実施形態では、展開層１２のコントロール部１８よりも上流側において、図２に示すように、展開層１２の長手方向に直交するように、帯状に形成されている。
【００７１】
かかる構成の認識部１７が設けられた展開層１２に、デングウイルスを含む検査試料、すなわちデングウイルスに感染している被検者に由来する検査試料（陽性の検査試料）が試薬部１３から供給されると、以下のようにして認識部１７においてデングウイルスの有無が確認される。
【００７２】
すなわち、検査試料にデングウイルスが含まれていると、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）がデングウイルスを認識する。そのため、認識部１７にデングウイルスが捕捉される。
【００７３】
さらに、前記試薬部１３の説明で述べたように、試薬部１３を透過して展開層１２に供給された検査試料では、デングウイルスと標識化抗体とで構成される複合体が形成されているため、認識部１７においてデングウイルスが認識（捕捉）された際には、デングウイルスとともに複合体を形成した状態で、標識化抗体も捕捉される。
【００７４】
したがって、認識部１７において、標識化抗体の捕捉の有無を確認することにより、固定化されている特異抗体と複合体との反応が確認されることとなる。
【００７５】
そのため、認識部１７において、標識化抗体の捕捉が確認されることで、検査試料中にデングウイルスが含まれている（被検者がデングウイルスに感染している）と言うことができる。
以上のようにして、デングウイルスによる感染の有無を検査することができる。
【００７６】
認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）としても、標識化抗体が備える２次抗体と同様に、認識部１７において、デングウイルスを特異的に認識するものであれば、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤのいずれであってもよいが、取り扱いの容易さからＩｇＧが好ましく用いられる。
【００７７】
さらに、この特異抗体（１次抗体）は、本発明では、マウス由来の抗体（マウス抗体）が用いられ、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれでもよいが、モノクローナル抗体であることが好ましい。
【００７８】
また、このような特異抗体（１次抗体）は、前記２次抗体と同様に、デングウイルスを特異的に認識するものが用いられ、本実施形態では、ＮＳ１、ＮＳ２ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５のような外部抗原（非構造タンパク質）の一部を抗原決定部位（第１の抗原決定部位）として認識する第１の特異抗体（第１の１次抗体）と、エンベロープが備えるＥタンパク、Ｍタンパク、Ｃタンパクのような内部抗原（構造タンパク質）の一部を抗原決定部位（第２の抗原決定部位）として認識する第２の特異抗体（第２の１次抗体）とを含んでいる。
【００７９】
ここで、前述の通り、例えば、外部抗原の１種であるＮＳ１は、デングウイルスによる感染発症の後に、２、３日後から１０日程度の期間に血液中に含まれるタンパク質であり、さらに、内部抗原の１種であるＥタンパクは、デングウイルスによる感染発症の後に、０日後から５〜７日程度の期間に血液中に含まれるタンパク質であり、ＮＳ１とＥタンパクとでは、血液中に含まれる期間が異なっている。
【００８０】
そのため、第１の特異抗体（第１の１次抗体）として、外部抗原の１種であるＮＳ１の一部を抗原決定部位として認識するものを選択し、さらに、第２の特異抗体（第２の１次抗体）として、内部抗原の１種であるＥタンパクの一部を抗原決定部位として認識するものを選択することで、これら第１の特異抗体と第２の特異抗体との双方を含む特異抗体は、０日後から１０日程度の期間をウインドウサイズ（至適検査可能期間）として、検査試料中に含まれる抗原が備える抗原決定部位に結合することで、デングウイルスに由来する抗原を認識する。このように、認識部１７で固定化されている特異抗体として、ウインドウサイズが異なる第１の特異抗体と第２の特異抗体との２種を用いること、すなわち、特異抗体として、デングウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有する第１の標識化抗体および第２の標識化抗体との２種を用いることで、いずれか一方を特異抗体として用いた場合と比較して、ウインドウサイズの期間拡大を図ることができるため、デングウイルスによる感染の早期から長期に亘って、検査キット１によるデングウイルスの検出を高感度に実施することができる。
【００８１】
さらに、前述の通り、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）として、マウス抗体が用いられている。そのため、検査試料（血液）中に、ヒト抗マウス抗体が含まれていると、特異抗体をヒト抗マウス抗体が認識し、特異抗体とヒト抗マウス抗体との間で凝集が生じ、その結果、デングウイルスによる感染が認められないにも関わらず、陽性と判定される偽陽性により誤診断が生じるおそれがある。
【００８２】
また、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）として、マウス抗体を用いると、以下の点も前述の通り、マウス抗体の定常部位には、糖鎖が連結していることとなる。そのため、検査試料（血液）中に、この糖鎖を認識するヒト抗体が含まれていると、特異抗体をこのヒト抗体が認識して、特異抗体とヒト抗体との間で凝集が生じ、その結果、このヒト抗体が含まれる場合においても、デングウイルスによる感染が認められないにも関わらず、陽性と判定される偽陽性により誤診断が生じるおそれがある。
【００８３】
これに対して、本発明では、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）として、この特異抗体の定常部位に含まれる、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方を、欠損または改変しているものが用いられていることが好ましい。すなわち、認識部１７で固定化されている第１の特異抗体および第２の特異抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方を、欠損または改変していることが好ましい。
【００８４】
そのため、認識部１７で固定化されている第１の特異抗体および第２の特異抗体が、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を、欠損している場合には、検査試料（血液）中に、たとえヒト抗マウス抗体が含まれていたとしても、認識部１７で固定化されている特異抗体とヒト抗マウス抗体との間で凝集が生じるのが的確に防止される。その結果、デングウイルスによる感染が認められない際に、陽性と判定される偽陽性が生じるのが確実に防止される。
【００８５】
また、認識部１７で固定化されている第１の特異抗体および第２の特異抗体が、それぞれ、前記糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位を欠損または改変している場合には、検査試料（血液）中に、たとえ糖鎖を認識するヒト抗体が含まれていたとしても、特異抗体と、糖鎖を認識するヒト抗体との間で凝集が生じるのが的確に防止される。その結果、デングウイルスによる感染が認められない際に、陽性と判定される偽陽性が生じるのが確実に防止される。
【００８６】
以上のように、認識部１７で固定化されている第１の特異抗体および第２の特異抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖が結合する部位との少なくとも一方を欠損または改変していることが好ましい。これにより、デングウイルスによる感染が認められない際に、陽性と判定される偽陽性が生じるのが確実に防止されるため、結果として、検査キット１の検出感度の向上が図られる。
【００８７】
なお、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）は、この特異抗体（１次抗体）の定常部位に含まれる、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方を、欠損または改変しているものであればよいが、双方を欠損または改変しているものであることが好ましい。これにより、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損している場合に得られる効果と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位を欠損している場合に得られる効果との双方を得ることができる。
また、本実施形態では、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）の定常部位（より詳しくはＣＨ２領域）において、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位とのうち少なくとも一方が欠損または改変している。これらのうち、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損または改変している領域は、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）の定常部位（Ｃ領域）の他、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）の可変部位（Ｖ領域）において存在していてもよいが、本実施形態のように、定常部位（Ｃ領域）に存在していることが好ましい。これにより、第１の特異抗体（第１の１次抗体）による、外部抗原の１種であるＮＳ１の一部を抗原決定部位として認識する認識能、さらには、第２の特異抗体（第２の１次抗体）による、内部抗原の１種であるＥタンパクの一部を抗原決定部位として認識する認識能が低下するのを的確に抑制または防止することができる。
さらに、認識部１７で固定化されている特異抗体（１次抗体）の定常部位において、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、ヒト抗体が認識する糖鎖の結合部位との双方が、欠損または改変している場合、これらが欠損または改変している領域は、隣接もしくはそれらの一部が重なっていることが好ましい。これにより、第１の特異抗体（第１の１次抗体）および第２の特異抗体（第２の１次抗体）を、マウス由来の抗体（マウス抗体）として得る際の工程の簡略化を図ることができる。さらに、第１の特異抗体（第１の１次抗体）による、外部抗原の１種であるＮＳ１の一部を抗原決定部位として認識する認識能、さらには、第２の特異抗体（第２の１次抗体）による、内部抗原の１種であるＥタンパクの一部を抗原決定部位として認識する認識能が低下するのを的確に抑制または防止することができる。
【００８８】
認識部１７で固定化されている特異抗体は、第１の特異抗体と第２の特異抗体との混合比（モル比）が、１：０．１〜１：２０程度であることが好ましく、１：０．５〜１：１０程度であることがより好ましい。これにより、第１の特異抗体および第２の特異抗体が、それぞれ、デングウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識して、認識部１７において、第１の特異抗体とデングウイルスとの複合体、および、第２の特異抗体とデングウイルスとの複合体を確実に形成することができる。
【００８９】
また、認識部１７における、特異抗体の固定化は、上述したように展開層１２をニトロセルロース膜で構成される多孔質担体とした場合、特異抗体を含有する水溶液を、認識部１７を形成すべき領域に滴下した後、乾燥および洗浄することにより行うことができる。このように展開層１２をニトロセルロースで構成することで、展開層１２または特異抗体に対して化学的な処理を予め施すことなく、展開層１２と特異抗体との間で化学的な結合が形成される。そのため、特異抗体を含有する水溶液を展開層１２に接触させるという単純な工程で、展開層１２に特異抗体を確実に固定化して、認識部１７を形成することができる。
【００９０】
なお、前記水溶液を乾燥させる際の温度は、特に限定されないが、例えば、４０〜７０℃程度であるのが好ましく、５０〜６５℃程度であるのがより好ましい。これにより、特異抗体が備える抗原認識能の失活を抑制または防止しつつ、特異抗体を展開層１２に確実に固定化することができる。
【００９１】
また、展開層１２をろ紙で構成される多孔質担体とした場合、前記固定化は、展開層１２と特異抗体との間に、ＣＮＢｒ、カルボニルジイミダゾール、塩化トレシル等を用いた化学結合を形成することにより行なうことができる。
【００９２】
以上のようにして、検査キット１を用いて、デングウイルスによる感染の有無を検査することができる。
【００９３】
よって、検査キット１により得られた検査結果に基づいて、デングウイルス感染の早期診断を優れた精度で行うことができ、早期に治療方針を立てることができる。そのため、デング出血熱／デングショック症候群（ＤＨＦ／ＤＳＳ）の発症、さらにはＤＨＦ／ＤＳＳ発症に起因する致死率を低減させることができる。
【００９４】
コントロール部１８は、展開層１２の途中の認識部１７よりも下流側に、標識化抗体を認識する抗抗体（抗標識化抗体抗体）が固定化されたものである。
【００９５】
このコントロール部１８は、本実施形態では、展開層１２の長手方向に直交するように、帯状に形成されている。
【００９６】
かかる構成のコントロール部１８において、固定化された抗抗体と標識化抗体との反応が確認されることにより、展開層１２に供給された検査試料に含まれる標識化抗体が、展開層１２の上流側から、下流側に位置するコントロール部１８にまで展開されたことを示す証拠となる。そのため、コントロール部１８でかかる反応が確認されることで、認識部１７で確認された検出結果（判定結果）が正確であることが判る。
【００９７】
また、抗抗体としては、標識化抗体を認識し得る抗体、すなわち、コントロール部１８よりも上流側の展開層１２を展開（透過）してきた標識化抗体を捕捉し得る機能を有するものであれば、特に限定されず、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤのいずれであってもよいが、取り扱いの容易さからＩｇＧが好ましく用いられる。
【００９８】
なお、このような抗抗体としては、通常、標識化抗体が備える抗体（マウス抗体）の定常部位を認識するものが用いられる。
【００９９】
また、標識化抗体とヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）との間で凝集が生じるのを防止することを目的に、一般的に、検査試料（血液）中に、予めマウス抗体を添加し、ヒト抗マウス抗体にマウス抗体を認識、吸着させる方法が知られている。しかしながら、前記抗抗体として、標識化抗体が備える抗体（マウス抗体）の定常部位を認識するものを用いた場合、この添加されたマウス抗体をコントロール部１８において固定化された抗抗体が不本意に認識し、その結果、標識化抗体を十分に前記固定化された抗抗体で認識させることができず、コントロール部１８において、固定化された抗抗体と標識化抗体との反応を確認（視認）することができなくなると言う問題があり、マウス抗体の添加量には限度がある。
【０１００】
これに対して、検査試料中にマウス抗体を添加することなく、標識物質で標識化されている標識化抗体（第１の標識化抗体および第２の標識化抗体）として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損または改変しているものを用いた場合には、標識化抗体とヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）との間で凝集が生じるのを防止しているため、前記問題が生じるのを確実に防止することができる。
【０１０１】
また、コントロール部１８における抗抗体の固定化は、認識部１７における特異抗体の固定化で説明したのと同様の方法を用いて行うことができる。
【０１０２】
吸収部１６は、その全体形状が短冊状をなし、その長手方向の上流側の縁部が展開層１２に接触する（重なる）ように配置されており、展開層１２を展開してきた検査試料を展開層１２の下流側の端部から吸収（吸水）する。
【０１０３】
これにより、吸収部１６が展開層１２における毛細管現象を補助する機能を発揮するため、展開層１２における上流側から下流側に向かった検査試料の展開をより円滑に行うことができるようになる。
【０１０４】
この吸収部１６は、液体透過性のものであれば特に限定されず、前記試料供給部１４と同様に、多孔質材料および繊維質材料を用いて形成することができる。
【０１０５】
ハウジングケース２０は、防水性を備え、試験片１０の形状に対応した中空部２１を有しており、この中空部２１に試験片１０を収納することで、試験片１０（検査キット１）の取り扱い性を容易にするためのものである。
【０１０６】
このハウジングケース２０は、検査試料供給窓２２と、検査結果観察窓２３とを有し、中空部２１に試験片１０を収納した状態で、検査試料供給窓２２から血球ろ過部１５の一部（上面）が露出し、検査結果観察窓２３から展開層１２の一部（認識部１７およびコントロール部１８が形成されている領域）が露出するように構成されている。
【０１０７】
これにより、検査試料供給窓２２から露出する血球ろ過部１５に検査試料を滴下することで、血球ろ過部１５を介して試料供給部１４に検査試料を供給することができる。そして、検査結果観察窓２３から露出する展開層１２に設けられた認識部１７およびコントロール部１８における、標識化抗体の捕捉の有無を観察することにより、デングウイルスの感染の有無を検出することができる。
【０１０８】
このハウジングケース２０の構成材料としては、防水性と適度な強度とを備えるものであれば特に限定されないが、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレートのような樹脂材料等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【０１０９】
次に、上述した検査キット１の使用方法、すなわち、被検者がデングウイルスに感染しているか否かを判定する検査方法（本発明の検査方法）について説明する。
【０１１０】
［１］  まず、被検者から採取した検査試料（検体）である全血を、検査試料供給窓２２から露出する血球ろ過部１５に滴下する。
【０１１１】
これにより、血球ろ過部１５を介して試料供給部１４に、血球成分が除去された検査試料すなわち血漿成分が供給され、さらに、この検査試料が試料供給部１４から試薬部１３に移行する。
【０１１２】
この際、試薬部１３に含まれる標識化抗体（試薬）と、検査試料に含まれるデングウイルスとが接触し、この接触により、標識化抗体とデングウイルスとで構成される複合体が形成される。
【０１１３】
［２］  次に、試薬部１３を透過した検査試料が、展開層１２に供給される（第１の工程）。
【０１１４】
そして、この供給の後、展開層１２中を展開する（第２の工程）。
このとき、展開層１２中を前記複合体も展開し、この複合体中にはデングウイルスが含まれるため、展開層１２の途中に形成された、認識部１７に固定化された、デングウイルスを特異的に認識する特異抗体により、デングウイルスを含む複合体が捕捉される。
【０１１５】
そして、複合体には標識化抗体が含まれているため、認識部１７における複合体の捕捉を確認（視認）することにより、被検者がデングウイルスに感染していることを知ることができる。
【０１１６】
［３］  次に、認識部１７を透過した検査試料が、さらに展開層１２の認識部１７よりも下流側に位置するコントロール部１８にまで到達する。
【０１１７】
このとき、コントロール部１８に到達した検査試料中には、複合体の形成に関与しなかった標識化抗体が含まれるため、この標識化抗体が、コントロール部１８に固定化された標識化抗体を認識する抗抗体により捕捉される。
【０１１８】
そのため、このコントロール部１８における標識化抗体の捕捉を確認することにより、認識部１７で確認された被検者がデングウイルスに感染しているという検出結果（判定結果）が正確であることを知ることができる。
【０１１９】
なお、コントロール部１８を透過した検査試料は、さらに展開層１２のコントロール部１８よりも下流側を展開して端部にまで到達し、最終的には吸収部１６へと吸水されていく。
【０１２０】
以上のような検査キット１を用いた工程を経ることで、被検者のデングウイルスの感染の有無を知ることができる。
【０１２１】
なお、本実施形態では、検査試料中への標識化抗体の添加は、試験片１０を、試薬部１３を備える構成とし、この試薬部１３を検査試料が透過する際に行われる構成としたが、かかる構成に限定されず、例えば、血球ろ過部１５への検査試料の供給（滴下）に先立って、予め検査試料に直接添加するようにしてもよい。なお、かかる構成とする場合、試験片１０を、試薬部１３を有しない構成のものとすることができる。
【０１２２】
なお、本実施形態では、フラビウイルス科に属するデングウイルスを検出する場合について説明したが、これに限定されず、各ウイルスに適した特異抗体（第１の特異抗体および第２の特異抗体）と、標識化抗体（第１の標識化抗体および第２の標識化抗体）とを適宜選択することで、例えば、日本脳炎ウイルスのようなデングウイルス以外のフラビウイルス科、インフルエンザウイルスのようなオルトミクソウイルス科、麻疹ウイルスのようなパラミクソウイルス科、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のようなレトロウイルス科、パピロマーウイルスのようなパピロマーウイルス科、レオウイルス、ロタウイルスのようなレオウイルス科等に属する他のウイルスの検出にも、本発明の検出キットを適用することができる。
【０１２３】
以上、本発明の検査キットおよび検査方法を好適実施形態に基づいて説明したが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０１２４】
例えば、本発明の検査キットでは、各構成を、同様の機能を発揮し得る任意のものと置換することができ、あるいは、任意の構成のものを付加することができる。
さらに、検査方法では、任意の目的で、１以上の工程を追加することができる。
【実施例】
【０１２５】
次に、本発明の具体的実施例について説明する。
１．ウインドウサイズ（至適検査可能期間）の検討【０１２６】
（実施例１Ａ）
１−１．特異抗体および標識化抗体の準備
（ａ）第１の特異抗体
マウス由来の第１の特異抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との双方を欠損し、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識するものを用意した。【０１２７】
（ｂ）第２の特異抗体
マウス由来の第２の特異抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との双方を欠損し、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識するものを用意した。【０１２８】
（ｃ）第１の標識化抗体
マウス由来の第１の標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との双方を欠損し、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１２９】
（ｄ）第２の標識化抗体
マウス由来の第２の標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との双方を欠損し、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１３０】
１−２．検査キットの製造
１−２−１．展開層への認識部およびコントロール部の形成【０１３１】
（ａ）認識部の形成
短冊状をなす０．５ｃｍ×３．０ｃｍのニトロセルロース（ミリポア社製）を展開層として用意し、この展開層の上流側の端部から１．５ｃｍの位置に、第１の特異抗体および第２の特異抗体をそれぞれ５ｍｇ／ｍＬを含有するリン酸緩衝液１．０μＬを、展開層の長手方向対して直交する方向に幅約０．１ｃｍのライン状に滴下した。その後、リン酸緩衝液を６０℃×４時間の条件で乾燥させることにより、展開層の途中に、第１の特異抗体と第２の特異抗体とが固定化された認識部を形成した。【０１３２】
（ｂ）コントロール部の形成
第１の特異抗体および第２の特異抗体に代えて、後述する標識化抗体を認識する抗抗体を含有するリン酸緩衝液を調製し、このリン酸緩衝液を、展開層の上流側の端部から２．０ｃｍの位置に滴下したこと以外は前記認識部の形成と同様にして、コントロール部を、展開層の途中の前記認識部よりも下流側の位置に形成した。【０１３３】
１−２−２．試薬部の作製
短冊状をなす０．５ｃｍ×１．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体を用意し、第１の標識化抗体および第２の標識化抗体を含有するリン酸緩衝液に、多孔質担体を含浸した後、かかる多孔質担体を凍結乾燥することにより、第１の標識化抗体と第２の標識化抗体とが多孔質担体に担持された試薬部を得た。【０１３４】
１−２−３．検査キットの組立
まず、中空部を備える２．７ｃｍ×８．５ｃｍのポリカーボネートで構成されるハウジングケースと、短冊状をなす０．５ｃｍ×７．５ｃｍの白色ポリスチレン、白色ビニール、白色ポリエステル、クリアポリエステルで構成される支持基板と、短冊状をなす１．２ｃｍ×１．９ｃｍのガラスフィルター（ミリポア社製）で構成される試料供給部と、短冊状をなす０．５ｃｍ×１．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体からなる血球ろ過部と、短冊状をなす０．５ｃｍ×３．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体からなる濾紙で構成される多孔質担体からなる吸収部と、前記工程１−２−１で作製した認識部およびコントロール部が形成された展開層と、前記工程１−２−２で作製した試薬部とをそれぞれ用意した。【０１３５】
次に、支持基板上に、互いの縁部同士が接触するように、上流側から下流側に向かって、試料供給部と、試薬部と、展開層と、吸収部とを、この順で配置した後、試料供給部上に血球ろ過部を配置することにより、図２に示すような免疫クロマト試験片を得た。【０１３６】
次に、得られた免疫クロマト試験片をハウジングケースが有する中空部に収納することで、図１に示すような検査キットを組み立てた。【０１３７】
１−３．デングウイルスの感染の有無の検査
１−３−１．  対象症例
デングウイルスの感染が疑われた被検者を対象とした。【０１３８】
１−３−２．  ＲＴ−ＰＣＲ法
デングウイルスの感染が疑われた被検者について、検体として血液を採取し、この検体中からＲＴ−ＰＣＲ法を用いてデングウイルス遺伝子が検出された延べ１７０例をデングウイルス感染群（陽性群）とした。【０１３９】
なお、発症後８日以降の検体については５日以前にRT-PCRにて陽性と判定された患者から採血された検体を使用した。【０１４０】
１−３−３．  免疫クロマト法（実施例１Ａ）
デングウイルスの感染が疑われた被検者について、その当日（０日後）に、検体として血液（全血）を採取し、実施例１Ａの検査キットのハウジングケースが備える検査試料供給窓から露出する血球ろ過部に検体を滴下した後、検査結果観察窓から露出する展開層に設けられた認識部およびコントロール部における、標識化抗体の捕捉の有無を観察した。【０１４１】
その結果、前記１−３−２で陽性群とされた１０例のうち、９例（９０％）について、認識部における標識化抗体の捕捉が確認された。【０１４２】
その後、これら被検者における、実施例１Ａの検査キットを用いた、認識部における標識化抗体の捕捉の観察を、１日後、２日後、３日後、５日後、８日後、１０日後および１２日後についても、０日後と同様にして行った。【０１４３】
その結果、１日後については、２０例のうち、１９例（９５％）、２日後は２０例のうち１９例（９５％）、３日後は４０例のうち３８例（９５％）、５日後は４０例のうち３８例（９５％）、８日後は２０例のうち１８例（９０％）、１０日後は１０例のうち９例（９０％）および１２日後は１０例のうち８例（８０％）について、認識部における標識化抗体の捕捉が確認された。【０１４４】
（比較例１Ａ）
前記１−２−１．（ａ）における、認識部の形成の際に、リン酸緩衝液に対する第２の特異抗体の添加を省略して、展開層の途中に、第１の特異抗体が固定化された認識部を形成し、さらに、前記１−２−２における、試薬部の作製の際に、リン酸緩衝液に対する第２の標識化抗体の添加を省略して、第１の標識化抗体が多孔質担体に担持された試薬部を作製したこと以外は、前記実施例１Ａと同様にして、比較例１Ａの検査キットを製造し、その後、この検査キットを用いて、デングウイルスの感染の有無の検査を実施した。【０１４５】
（比較例２Ａ）
前記１−２−１．（ａ）における、認識部の形成の際に、リン酸緩衝液に対する第１の特異抗体の添加を省略して、展開層の途中に、第２の特異抗体が固定化された認識部を形成し、さらに、前記１−２−２における、試薬部の作製の際に、リン酸緩衝液に対する第１の標識化抗体の添加を省略して、第２の標識化抗体が多孔質担体に担持された試薬部を作製したこと以外は、前記実施例１Ａと同様にして、比較例２Ａの検査キットを製造し、その後、この検査キットを用いて、デングウイルスの感染の有無の検査を実施した。
以上の結果を、表１に示す。【０１４６】
【表１】
2019187271.tif 000003
【０１４７】
表１から明らかなように、実施例１Ａの検査キットを用いることにより、被検者のデングウイルスによる感染の有無を、優れた検出感度で、０〜１０日後のように早期かつ長期にわたったウインドウサイズで、検査できることが判った。【０１４８】
これに対して、比較例１Ａの検査キットでは、０〜５日後のように早期において、被検者のデングウイルスによる感染の有無を検査できるものの、５日後よりも後の期間において、優れた検出感度でデングウイルスによる感染の有無を検査することができなかった。また、比較例２Ａの検査キットでは、３〜１０日後のような期間において、被検者のデングウイルスによる感染の有無を検査できるものの、０〜２日後のような早期において、優れた検出感度でデングウイルスによる感染の有無を検査することができなかった。【０１４９】
２．ヒト抗マウス抗体が認識する抗原決定部位の有無の検討
（実施例１Ｂ）【０１５０】
２−１．特異抗体および標識化抗体の準備
（ａ）第１の特異抗体
マウス由来の第１の特異抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損し、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識するものを用意した。【０１５１】
（ｂ）第２の特異抗体
マウス由来の第２の特異抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損し、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識するものを用意した。【０１５２】
（ｃ）第１の標識化抗体
マウス由来の第１の標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損し、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１５３】
（ｄ）第２の標識化抗体
マウス由来の第２の標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位を欠損し、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１５４】
２−２．検査キットの製造
２−２−１．展開層への認識部およびコントロール部の形成【０１５５】
（ａ）認識部の形成
短冊状をなす０．５ｃｍ×３．０ｃｍのニトロセルロース（ミリポア社製）を展開層として用意し、この展開層の上流側の端部から１．５ｃｍの位置に、第１の特異抗体および第２の特異抗体をそれぞれ５ｍｇ／ｍＬを含有するリン酸緩衝液１．０μＬを、展開層の長手方向対して直交する方向に幅約０．１ｃｍのライン状に滴下した。その後、リン酸緩衝液を６０℃×４時間の条件で乾燥させることにより、展開層の途中に、第１の特異抗体と第２の特異抗体とが固定化された認識部を形成した。【０１５６】
（ｂ）コントロール部の形成
第１の特異抗体および第２の特異抗体に代えて、後述する標識化抗体を認識する抗抗体を含有するリン酸緩衝液を調製し、このリン酸緩衝液を、展開層の上流側の端部から２．０ｃｍの位置に滴下したこと以外は前記認識部の形成と同様にして、コントロール部を、展開層の途中の前記認識部よりも下流側の位置に形成した。【０１５７】
２−２−２．試薬部の作製
短冊状をなす０．５ｃｍ×１．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体を用意し、第１の標識化抗体および第２の標識化抗体を含有するリン酸緩衝液に、多孔質担体を含浸した後、かかる多孔質担体を凍結乾燥することにより、第１の標識化抗体と第２の標識化抗体とが多孔質担体に担持された試薬部を得た。【０１５８】
２−２−３．検査キットの組立
まず、中空部を備える２．７ｃｍ×８．５ｃｍのポリカーボネートで構成されるハウジングケースと、短冊状をなす０．５ｃｍ×７．５ｃｍの白色ポリスチレン、白色ビニール、白色ポリエステル、クリアポリエステルで構成される支持基板と、短冊状をなす１．２ｃｍ×１．９ｃｍのガラスフィルター（ミリポア社製）で構成される試料供給部と、短冊状をなす０．５ｃｍ×１．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体からなる血球ろ過部と、短冊状をなす０．５ｃｍ×３．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体からなる濾紙で構成される多孔質担体からなる吸収部と、前記工程１−２−１で作製した認識部およびコントロール部が形成された展開層と、前記工程１−２−２で作製した試薬部とをそれぞれ用意した。【０１５９】
次に、支持基板上に、互いの縁部同士が接触するように、上流側から下流側に向かって、試料供給部と、試薬部と、展開層と、吸収部とを、この順で配置した後、試料供給部上に血球ろ過部を配置することにより、図２に示すような免疫クロマト試験片を得た。【０１６０】
次に、得られた免疫クロマト試験片をハウジングケースが有する中空部に収納することで、図１に示すような検査キットを組み立てた。【０１６１】
２−３．偽陽性と判定されるか否かの検査
２−３−１．  ＲＴ−ＰＣＲ法
デングウイルスの感染が疑われた被検者について、検体として血液を採取し、この検体中からＲＴ−ＰＣＲ法を用いてデングウイルス遺伝子が検出されず、野生型のマウスIgGを用いた免疫クロマト法で偽陽性を示した検体から３０例から、更にマウスIgG  ELISAにて高い陽性を示した２０例をＨＡＭＡ陽性群とした。【０１６２】
２−３−２．  免疫クロマト法（実施例１Ｂ）
ＨＡＭＡ活性を有していることで偽陽性と判定された検体（ＨＡＭＡ陽性群）について、実施例１Ｂの検査キットのハウジングケースが備える検査試料供給窓から露出する血球ろ過部に検体を滴下した後、検査結果観察窓から露出する展開層に設けられた認識部およびコントロール部における、標識化抗体の捕捉の有無を観察した。【０１６３】
その結果、前記２−３−１で偽陽性と判定（ＨＡＭＡ陽性群）された２０例のうち、３例（１５％）について、認識部における標識化抗体の捕捉が確認された。【０１６４】
（比較例１Ｂ）
前記２−１において準備した特異抗体および標識化抗体に代えて、以下に示す特異抗体および標識化抗体を用いたこと以外は、前記実施例１Ｂと同様にして、比較例１Ｂの検査キットを製造し、その後、この検査キットを用いて、ＨＡＭＡ活性を有していることで偽陽性と判定された検体（ＨＡＭＡ陽性群）について検査を実施した。【０１６５】
（ａ）第１の特異抗体
マウス由来の第１の特異抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識するものを用意した。【０１６６】
（ｂ）第２の特異抗体
マウス由来の第２の特異抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識するものを用意した。【０１６７】
（ｃ）第１の標識化抗体
マウス由来の第１の標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１６８】
（ｄ）第２の標識化抗体
マウス由来の第２の標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。
以上の結果を、表２に示す。【０１６９】
【表２】
2019187271.tif 000004
【０１７０】
表２から明らかなように、実施例１Ｂの検査キットを用いることにより、ＨＡＭＡ活性を有していることで偽陽性と判定された被検者について、優れた精度で、偽陽性と判定することなく検査を実施することができた。【０１７１】
これに対して、比較例１Ｂの検査キットでは、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位が欠損することなく正常である特異抗体および標識化抗体を用いたことに起因して、ＨＡＭＡ活性を有していることで偽陽性と判定された被検者について、全て、偽陽性と判定される結果を示した。【０１７２】
３．糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位の有無の検討
（実施例１Ｃ）【０１７３】
３−１．特異抗体および標識化抗体の準備
（ａ）第１の特異抗体
マウス由来の第１の特異抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位を欠損し、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識するものを用意した。【０１７４】
（ｂ）第２の特異抗体
マウス由来の第２の特異抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位を欠損し、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識するものを用意した。【０１７５】
（ｃ）第１の標識化抗体
マウス由来の第１の標識化抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位を欠損し、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１７６】
（ｄ）第２の標識化抗体
マウス由来の第２の標識化抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位を欠損し、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１７７】
３−２．検査キットの製造
３−２−１．展開層への認識部およびコントロール部の形成【０１７８】
（ａ）認識部の形成
短冊状をなす０．５ｃｍ×３．０ｃｍのニトロセルロース（ミリポア社製）を展開層として用意し、この展開層の上流側の端部から１．５ｃｍの位置に、第１の特異抗体および第２の特異抗体をそれぞれ５ｍｇ／ｍＬを含有するリン酸緩衝液１．０μＬを、展開層の長手方向対して直交する方向に幅約０．１ｃｍのライン状に滴下した。その後、リン酸緩衝液を６０℃×４時間の条件で乾燥させることにより、展開層の途中に、第１の特異抗体と第２の特異抗体とが固定化された認識部を形成した。【０１７９】
（ｂ）コントロール部の形成
第１の特異抗体および第２の特異抗体に代えて、後述する標識化抗体を認識する抗抗体を含有するリン酸緩衝液を調製し、このリン酸緩衝液を、展開層の上流側の端部から２．０ｃｍの位置に滴下したこと以外は前記認識部の形成と同様にして、コントロール部を、展開層の途中の前記認識部よりも下流側の位置に形成した。【０１８０】
３−２−２．試薬部の作製
短冊状をなす０．５ｃｍ×１．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体を用意し、第１の標識化抗体および第２の標識化抗体を含有するリン酸緩衝液に、多孔質担体を含浸した後、かかる多孔質担体を凍結乾燥することにより、第１の標識化抗体と第２の標識化抗体とが多孔質担体に担持された試薬部を得た。【０１８１】
３−２−３．検査キットの組立
まず、中空部を備える２．７ｃｍ×８．５ｃｍのポリカーボネートで構成されるハウジングケースと、短冊状をなす０．５ｃｍ×７．５ｃｍの白色ポリスチレン、白色ビニール、白色ポリエステル、クリアポリエステルで構成される支持基板と、短冊状をなす１．２ｃｍ×１．９ｃｍのガラスフィルター（ミリポア社製）で構成される試料供給部と、短冊状をなす０．５ｃｍ×１．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体からなる血球ろ過部と、短冊状をなす０．５ｃｍ×３．０ｃｍのガラスウールで構成される多孔質担体からなる濾紙で構成される多孔質担体からなる吸収部と、前記工程１−２−１で作製した認識部およびコントロール部が形成された展開層と、前記工程１−２−２で作製した試薬部とをそれぞれ用意した。【０１８２】
次に、支持基板上に、互いの縁部同士が接触するように、上流側から下流側に向かって、試料供給部と、試薬部と、展開層と、吸収部とを、この順で配置した後、試料供給部上に血球ろ過部を配置することにより、図２に示すような免疫クロマト試験片を得た。【０１８３】
次に、得られた免疫クロマト試験片をハウジングケースが有する中空部に収納することで、図１に示すような検査キットを組み立てた。【０１８４】
３−３．偽陽性と判定されるか否かの検査
３−３−１．  ＲＴ−ＰＣＲ法
デングウイルスの感染が疑われた被検者について、検体として血液を採取し、この検体中からＲＴ−ＰＣＲ法を用いてデングウイルス遺伝子が検出されなかった３０例をデングウイルス陰性群とした。さらに大腸菌により産生された組換えEタンパクに対しELISA陰性を示した２０例を糖鎖結合検体とした。【０１８５】
３−３−２．  免疫クロマト法（実施例１Ｃ）
糖鎖を認識する糖鎖結合部位を備える抗体を有していることで偽陽性と判定された検体（糖鎖結合検体）を用いて、実施例１Ｃの検査キットのハウジングケースが備える検査試料供給窓から露出する血球ろ過部に検体を滴下した後、検査結果観察窓から露出する展開層に設けられた認識部およびコントロール部における、標識化抗体の捕捉の有無を観察した。【０１８６】
その結果、前記３−３−１で偽陽性と判定された２０例（糖鎖結合検体）のうち、２例（１０％）について、認識部における標識化抗体の捕捉が確認された。【０１８７】
（比較例１Ｃ）
前記３−１において準備した特異抗体および標識化抗体に代えて、以下に示す特異抗体および標識化抗体を用いたこと以外は、前記実施例１Ｃと同様にして、比較例１Ｃの検査キットを製造し、その後、この検査キットを用いて、糖鎖を認識する糖鎖結合部位を備える抗体を有していることで偽陽性と判定された検体（糖鎖結合検体）について検査を実施した。【０１８８】
（ａ）第１の特異抗体
マウス由来の第１の特異抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識するものを用意した。【０１８９】
（ｂ）第２の特異抗体
マウス由来の第２の特異抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識するものを用意した。【０１９０】
（ｃ）第１の標識化抗体
マウス由来の第１の標識化抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスが有するエンベロープが備えるＥタンパクを特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。【０１９１】
（ｄ）第２の標識化抗体
マウス由来の第２の標識化抗体として、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位が欠損することなく正常であり、かつ、デングウイルスがウイルスの外部に産出するＮＳ１を特異的に認識する特異抗体が、金コロイドで標識化されているものを用意した。
以上の結果を、表３に示す。【０１９２】
【表３】
2019187271.tif 000005
【０１９３】
表３から明らかなように、実施例１Ｃの検査キットを用いることにより、糖鎖を認識する糖鎖結合部位を備える抗体を有していることで偽陽性と判定された被検者について、優れた精度で、偽陽性と判定することなく検査を実施することができた。【０１９４】
これに対して、比較例１Ｃの検査キットでは、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位が欠損することなく正常である特異抗体および標識化抗体を用いたことに起因して、糖鎖を認識する糖鎖結合部位を備える抗体を有していることで偽陽性と判定された被検者について、全て、偽陽性と判定される結果を示した。【０１９５】
なお、上記の各実施例では、特異抗体および標識化抗体として、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位とのうち少なくとも一方を欠損している場合について検討を行ったが、前記抗原部位と前記糖鎖結合部位とのとのうち少なくとも一方を改変している場合についても検討を行ったが、この場合についても、欠損している場合と同様の結果が得られた。
【産業上の利用可能性】
【０１９６】
本発明の検査キットは、ウイルスによる感染の有無を検査するのに用いられるものであり、前記ウイルスを含有する検査試料を展開する展開層と、該展開層の途中に設けられた認識部と、前記検査試料が前記展開層を展開する展開方向を基準としたとき、前記展開層の上流側の縁部に接触するように配置された試薬部とを有し、前記認識部は、前記ウイルスが有する第１の抗原決定部位および第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する、マウス由来の第１の特異抗体および第２の特異抗体が固定化され、前記試薬部は、前記ウイルスが有する前記第１の抗原決定部位および前記第２の抗原決定部位を、それぞれ、特異的に認識する機能を有し、かつ標識物質で標識化されている、マウス由来の第１の標識化抗体および第２の標識化抗体を含み、前記第１の標識化抗体および前記第２の標識化抗体は、それぞれ、ヒト抗マウス抗体が認識する抗原部位と、糖鎖を認識する抗体の糖鎖結合部位との少なくとも一方を欠損または改変している。そのため、ウイルスによる感染の有無を、早期に、かつ、優れた検出感度で検査することができる。このように、ウイルス感染の早期診断を優れた精度で行うことができ、早期に治療方針を立てることができる。そのため、このウイルス感染の有無の検査を、デングウイルスの感染の有無に適用した場合には、デング出血熱／デングショック症候群（ＤＨＦ／ＤＳＳ）の発症、さらにはＤＨＦ／ＤＳＳ発症に起因する致死率を低減させることができる。従って、本発明の検査キットおよび検査方法は、産業上の利用可能性を有する。
【符号の説明】
【０１９７】
１            検査キット
１０          免疫クロマト試験片（試験片）
１１          支持基板
１２          展開層
１３          試薬部
１４          試料供給部
１５          血球ろ過部
１６          吸収部
１７          認識部
１８          コントロール部
２０          ハウジングケース
２１          中空部
２２          検査試料供給窓
２３          検査結果観察窓
【図１】
2019187271.tif 000006
【図２】
2019187271.tif 000007
【国際調査報告】
2019187271.tif 000008
2019187271.tif 000009
2019187271.tif 000010
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