(57)【要約】  ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を含む脂質代謝改善用組成物に関する。係る脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む脂質代謝改善用食品、医薬品、及び飼料を摂取することにより、脂質代謝が改善され結果的に体重が減少する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を含む脂質代謝改善用組成物。
【請求項２】
前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）、ＳＢＴ１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）のいずれかである請求項１に記載の脂質代謝改善用組成物。
【請求項３】
前記脂質代謝が肝臓における脂質代謝である請求項１又は請求項２に記載の脂質代謝改善用組成物。
【請求項４】
請求項３に記載の脂質代謝改善用組成物を含む脂質代謝改善用食品。
【請求項５】
請求項１から請求項３に記載の脂質代謝改善用組成物を含む脂質代謝改善用医薬品。
【請求項６】
請求項３に記載の脂質代謝改善用組成物を含む脂質代謝改善用飼料。
【請求項７】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する新規乳酸菌であるストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ−１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）。
【請求項８】
脂質代謝改善用組成物であって、
ストレプトコッカス・サーモフィルスにする乳酸菌の培養物及び/又は菌体を含み、
白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進する脂質代謝改善用組成物。
【請求項９】
前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）である請求項８に記載の脂質代謝改善用組成物。
【請求項１０】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を含む褐色脂肪細胞の活性化用組成物。
【請求項１１】
前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）である請求項１０に記載の褐色脂肪細胞の活性化用組成物。
【請求項１２】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を含むメタボリックシンドローム改善用組成物。
【請求項１３】
前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）である請求項１２に記載のメタボリックシンドローム改善用組成物。
【請求項１４】
請求項８又は９に記載の脂質代謝改善用組成物を含む白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進用食品、医薬品又は飼料。
【請求項１５】
請求項１０又は１１に記載の褐色脂肪細胞の活性化用組成物を含む褐色脂肪細胞の活性化用食品、医薬品又は飼料。
【請求項１６】
請求項１２又は１３に記載のメタボリックシンドローム改善用組成物を含むメタボリックシンドローム改善用食品、医薬品又は飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料に関する。また、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含むメタボリックシンドロームを改善する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪肝は、肝臓に中性脂肪が過剰に沈着し、肝障害をきたす疾患の総称であり、アルコールの過剰摂取、肥満、糖尿病、薬物など様々な要因により発症することが知られている。また、近年、肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病などによる非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が急増しており、成人の３０％が罹患しているといわれている（非特許文献１）。
肝臓に脂肪が蓄積する原因は、脂肪組織に蓄積した脂肪の肝臓への流入が主であるとされる。しかし、ＮＡＦＬＤ患者では、肝臓における脂肪合成の亢進も大きな原因であり、肝臓に蓄積した脂肪の２５％に達する。
この脂肪合成の亢進には、アセチルーＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）、ステアリル−ＣｏＡ不飽和化酵素１（ＳＣＤ１）等の脂肪酸合成関連遺伝子や、これら脂肪酸合成関連遺伝子の発現を制御している転写因子であるＳＲＥＢＰ−１ｃが関与している。肥満やメタボリックシンドロームによりインスリン抵抗性が惹起されると、ＳＲＥＢＰ−１ｃが誘導され、脂肪酸合成関連遺伝子の発現が亢進するために、肝臓での脂肪蓄積をきたす。【０００３】
特許文献１は、ラクトバチルス・ラムノーサスＧＧ株（ＡＴＣＣ５３１０３）により少なくとも乳清蛋白質と脱脂乳とを含有する培養基を培養した培養物（ａ）、ラクトバチルス・カゼイＴＭＣ０４０９株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７０４７）により前記の培養基を培養した培養物（ｂ）、ストレプトコッカス・サーモフィラスＴＭＣ１５４３株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７０４６）により前記の培養基を培養した培養物（ｃ）とカルシウム製剤とを含む混合物から成り、乳固形分中のカルシウムの割合が１．５重量％以上であることを特徴とする、体脂肪蓄積抑制及び抗肥満効果を有する機能性飲食品を開示している。
特許文献２は、肝組織に肝細胞の風船様腫大を伴う脂肪性肝炎を認め、肝硬変や肝がんになるリスクが高い症例であるＮｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ（ＮＡＳＨ）に対する予防治療剤として、乳酸菌を１×１０10／ｇ含有する高脂肪食をマウスに１２週間、１日当たりの摂取量が３ｇとなるように摂取させ、前記乳酸菌含有高脂肪食の投与開始から数えて９週目〜１２週目に四塩化炭素（初回：０．０５ｍｌ／ｋｇＢＷ（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）、２回目以降：０．１ｍｌ／ｋｇＢＷ）を週２回、合計８回皮下投与して肝障害を誘導した際に、乳酸菌非投与のマウスに比べて血清中ＡＬＴの値が６５％以上低下する乳酸菌を有効成分とするＮＡＳＨ予防治療剤を開示している。【０００４】
ところで、近年の食習慣や生活習慣の変化に伴い、先進諸国を中心として、肥満、特に、内臓脂肪型肥満に、高血糖、高血圧、脂質異常症のうち２つ以上の症状が一個人に集積した状態であるメタボリックシンドロームの患者数が増加しており、大きな社会問題となっている。
肥満は脂肪細胞が肥大化することが主な原因とされているが、脂肪細胞には異なる役割を有する白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞の２種類の細胞があることが知られている（非特許文献２）。
白色脂肪細胞は、細胞内にトリグリセリドの形で脂肪を蓄積し、エネルギーを貯蔵する。したがって、白色脂肪細胞に過剰に脂肪が蓄積し、肥大化すると肥満となる。肥大化した白色脂肪細胞は、ＭＣＰ１（Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）などの炎症性サイトカインを分泌して、慢性的な炎症状態からインスリン抵抗性を惹起させ、糖尿病を含む生活習慣病が発症する原因になると考えられている。
一方、褐色脂肪細胞は、白色脂肪細胞と同様に細胞内に脂肪を蓄積するものの、そのミトコンドリア膜上に存在するＵＣＰ１（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）の働きにより、脂肪を燃焼して熱を産生することでエネルギーを消費する。
つまり、生体内では、白色脂肪細胞によるエネルギーの貯蔵と褐色脂肪細胞の熱産生によるエネルギーの消費により、全身のエネルギーや体脂肪のバランスが調整されている。
また、最近の研究で、様々な環境要因等により白色脂肪組織中の白色脂肪前駆細胞から分化誘導される「誘導型」の褐色脂肪細胞が存在することが分かってきた（非特許文献２）。【０００５】
特許文献３は、肥満やメタボリックシンドロームを改善及び予防することのできる幹細胞から褐色脂肪細胞への分化促進剤を提供することを課題とし、カテキン類を有効成分として含有する幹細胞から褐色脂肪細胞への分化促進剤、該分化促進剤を含有する医薬品、医薬部外品、化粧品及び飲食品を解決手段として開示している。
特許文献４は、筋肉を増強もしくは増加させ、またはメタボリックシンドロームを改善させ、ＱＯＬを改善するための組成物を提供することを目的とし、トリテルペンとポリフェノール類、好ましくはオレアノール酸とオレウロペインを含む組成物、該組成物を含む医薬組成物および食品等を解決手段として開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１０−５７４６５号公報
【特許文献２】特開２０１４−２４７７６号公報
【特許文献３】特開２０１４−６５６７２号公報
【特許文献４】特開２０１６−１９９５３６号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｅｇｕｃｈｉ  Ｙ．ｅｔ．ａｌ．,Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔeｒｏｌ、２０１２、４７：５８６−５９５
【非特許文献２】Ｋａｊｉｍｕｒａ  Ｓ．  ｅｔ．  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．，  ２０１０、１１：２５７−２６２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、特許文献１の乳酸菌培養物は、前記（ａ）〜（ｃ）の３種類の乳酸菌の培養物の混合物であり、いずれの乳酸菌に体脂肪蓄積抑制および抗肥満効果があるのかは不明であった。また、特許文献２は、試験対象の乳酸菌としてストレプトコッカス・サーモフィルスを挙げているが、四塩化炭素で誘導した肝障害に対する効果を検証したものであり、脂質代謝改善効果については何ら記載されていなかった。即ち、乳酸菌を用いた、脂質代謝を改善する手段は、特許文献１にも特許文献２にも報告されていなかった。
そのため、乳酸菌を用いた、脂質代謝を改善する手段が求められていた。
本発明の第一の課題は、脂質代謝を改善する新たな解決手段として、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を有効成分とする脂質代謝改善用組成物、及び該組成物を含む脂質代謝改善用食品、医薬品、及び飼料を提供することにある。【０００９】
一方、非特許文献２には、白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞について開示されているが、乳酸菌を用いた、脂肪細胞の代謝を改善する方法は報告されていなかった。また特許文献３、４には、メタボリックシンドロームを改善及び予防する方法が開示されているが、乳酸菌を用いた方法は報告されていなかった。
そのため、乳酸菌を用いた、脂肪細胞の代謝を改善する方法やメタボリックシンドロームを改善及び予防が求められていた。
本発明の第二の課題は、新たな脂肪細胞の代謝を改善する組成物及び係る組成物を含む脂肪細胞の代謝を改善する食品、医薬品、及び飼料を提供することにある。また、本発明の第二の課題は、新たなメタボリックシンドロームを改善する組成物、及び係る組成物を含むメタボリックシンドロームを改善する食品、医薬品、及び飼料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記第一の課題を解決するため、本発明者らは、生体における脂質代謝を改善する組成物について鋭意検討を行った結果、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌にこれらの改善作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、第一の発明は以下の内容に関する。
（Ａ１）ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とする脂質代謝改善用組成物。
（Ａ２）前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ１
２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）、ＳＢＴ１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）のいずれかである（Ａ１）に記載の脂質代謝改善用組成物。
（Ａ３）前記脂質代謝が肝臓における脂質代謝である（Ａ１）又は（Ａ２）に記載の脂質代謝改善用組成物。
（Ａ４）（Ａ１）から（Ａ３）のいずれかに記載の脂質代謝改善用組成物を含む脂質代謝改善用食品。
（Ａ５）（Ａ１）から（Ａ３）のいずれかに記載の脂質代謝改善用組成物を含む脂質代謝改善用医薬品。
（Ａ６）（Ａ１）から（Ａ３）のいずれかに記載の脂質代謝改善用組成物を含む脂質代謝改善用飼料。
（Ａ７）ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する新規乳酸菌であるストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ−１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）。【００１１】
上記第二の課題を解決するため、本発明者らは、生体における過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制する組成物、メタボリックシンドロームを改善する組成物について鋭意検討を行った結果、ストレプトコッカス・サーモフィルスにこれらの改善作用があることを見出し本発明を完成するに至った。すなわち、第二の発明は以下の内容に関する。
（Ｂ１）ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とする白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進用組成物。
（Ｂ２）前記ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）である（Ｂ１）に記載の組成物。
（Ｂ３）ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とする褐色脂肪細胞の活性化用組成物。
（Ｂ４）前記ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）である（Ｂ３）に記載の組成物。
（Ｂ５）ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とするメタボリックシンドローム改善用組成物。
（Ｂ６）前記ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）である（Ｂ５）に記載のメタボリックシンドローム改善用組成物。
（Ｂ７）（Ｂ１）又は（Ｂ２）に記載の組成物を含む白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進用食品。
（Ｂ８）（Ｂ１）又は（Ｂ２）に記載の組成物を含む白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進用医薬品。
（Ｂ９）（Ｂ１）又は（Ｂ２）に記載の組成物を含む白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進用飼料。
（Ｂ１０）（Ｂ３）又は（Ｂ４）に記載の組成物を含む褐色脂肪細胞の活性化用食品。
（Ｂ１１）（Ｂ３）又は（Ｂ４）に記載の組成物を含む褐色脂肪細胞の活性化用医薬品。
（Ｂ１２）（Ｂ３）又は（Ｂ４）に記載の組成物を含む褐色脂肪細胞の活性化用飼料。
（Ｂ１３）（Ｂ５）又は（Ｂ６）に記載の組成物を含むメタボリックシンドローム改善用食品。
（Ｂ１４）（Ｂ５）又は（Ｂ６）に記載の組成物を含むメタボリックシンドローム改善用医薬品。
（Ｂ１５）（Ｂ５）又は（Ｂ６）に記載の組成物を含むメタボリックシンドローム改善用飼料。
さらに、第二の課題には、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）に属する乳酸菌を有効成分とする脂肪酸合成抑制剤、コレステロール合成抑制剤、糖新生抑制剤又は脂肪組織炎症抑制剤の構成も含まれる。
【発明の効果】
【００１２】
第一の発明は、脂質代謝を改善する新たな解決手段として、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む脂質代謝改善用食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。
したがって、本発明の上記組成物、食品、医薬品、飼料の摂取により手軽にかつ安全な方法で脂質代謝の改善が期待できる。【００１３】
第二の発明は、生体における過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制する新たな解決手段として、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む脂質代謝改善用組成物であって、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進、褐色脂肪細胞の活性化などの脂肪細胞の代謝を改善する脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。
また、第二の発明は、メタボリックシンドロームを改善する新たな解決手段として、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含むメタボリックシンドロームを改善する組成物及び係る組成物を含むメタボリックシンドロームを改善する食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。
したがって、第二の発明の上記組成物、食品、医薬品、飼料の摂取により手軽にかつ安全な方法で脂肪細胞の代謝の改善及びメタボリックシンドロームの改善が期待できる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
［Ａ：第一の発明］
本発明者等は、脂肪組織への脂肪の蓄積を抑制する以外に、肝臓における脂肪の合成を抑制することによっても、肝臓への脂肪の蓄積を防ぐことが可能であると着想した。そして、鋭意研究を続けた結果、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、肝臓への脂肪の蓄積を防ぐことを知見した。第一の発明は、上記知見に基づくものである。
（有効成分）
本発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む脂質代謝改善用組成物及びそれを含む食品、医薬品、及び飼料に関するものであるが、本発明に用いるストレプトコッカス・サーモフィルスは１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子配列解析等の一般的な分類方法によりＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ種に分類される乳酸菌であればどのようなものでも用いることができる。
本発明では、特に、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）、ＳＢＴ１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）、ＳＢＴ１０２１Ａ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１０６５８）、ＳＢＴ１０１３７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５３１）、ＳＢＴ０１０４（ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４２）、ＳＢＴ０１１３（ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４３）、ＳＢＴ０１４４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６６３８）、ＳＢＴ１０３５（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６９４５）、ＡＴＣＣ１９２５８を用いることが好ましく、このうちＳＢＴ１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）、ＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）が特に好ましい。
括弧内にＦＥＲＭまたはＮＩＴＥで始まる番号が記載されている菌株は、それぞれ後述する寄託機関より入手することができ、ＡＴＣＣ１９２５８はアメリカの微生物分譲機関であるアメリカンタイプカルチャーコレクションより購入できる。
本発明に用いるストレプトコッカス・サーモフィルスは生菌体、死菌体、菌体培養物、これらの菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分のいずれでもよく、これらのうちの１種類以上を用いることができる。
【００１５】
（ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物の調製）
本発明の有効成分であるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む組成物は、乳酸菌の培養物を調製するための常法に従って得ることができる。培養には、乳培地又は乳成分を含む培地、これを含まない半合成培地など種々の培地を用いることができる。
乳酸菌の培養物は、滅菌処理した上記培地にストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を接種し、２０℃〜４５℃程度で５時間〜数日間培養することにより得られる。培養の温度や期間は用いるストレプトコッカス・サーモフィルスの菌株や所望の菌数に応じて適宜調整すればよい。
培養により得られたストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む培養物は、そのまま本発明の有効成分であるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む組成物として用いることができる。また、前記培養物を遠心分離、膜濃縮、乾燥、凍結乾燥などの処理に供して得られる組成物を用いることもできる。
ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物の調製法の一態様として、０．５％酵母エキス（アサヒビール社製）添加の１１．５５％脱脂乳培地を、１１５℃、２０分間の条件で滅菌処理し室温まで冷却した後ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）を接種し、３７℃で１６時間培養し、得られた培養物を凍結乾燥、乳鉢で粉砕する工程を含む調製法が例示できる。
【００１６】
（有効成分の摂取量）
本発明の有効成分であるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の摂取量（１日あたりの菌数）は、ストレプトコッカス・サーモフィルスが生菌の場合は、５×１０8以上であればよく、１×１０10以上がさらに好ましく、１×１０11以上が最も好ましい。
ストレプトコッカス・サーモフィルスが死菌の場合は、上記の生菌と同等の菌数に相当する量であればよい。生菌と死菌の両方を含む場合は、生菌と死菌の合計が、上記の生菌と同等の菌数に相当する量であればよい。
菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分の場合は、成人1日あたりの摂取量が、０．１ｍｇ以上５０００ｍｇ以下であればよく、１００ｍｇ以上２５００ｍｇ以下が好ましく、５００ｍｇ以上１０００ｍｇ以下が最も好ましい。
【００１７】
（有効性）
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料は、上記の摂取量を摂取することにより、肝臓における脂肪酸合成関連遺伝子の発現を減少させ、肝臓におけるトリグリセリド及び総脂質の蓄積や、血漿トリグリセリド濃度を減少させ、さらに体重を減少させることができる。
上述の脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を摂取することにより、血液中のコレステロールやトリグリセライド（中性脂肪）のバランスが崩れることで起こるとされる脂質異常症の予防や改善が期待される。さらには、脂質異常症が原因で生じる疾患（例えば、インスリン抵抗性、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、肝癌）や動脈硬化性疾患（例えば、高血圧、狭心症、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、大動脈瘤、腎梗塞、閉塞性動脈硬化症）の予防や改善が期待される。
【００１８】
（有効性の評価）
本発明の、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料の脂質代謝に対する効果は、実施例Ａに記載したｉｎ  ｖｉｔｒｏ、又はｉｎ  ｖｉｖｏの試験により評価することができる。
【００１９】
（ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物を添加した食品、医薬品、飼料）
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物はあらゆる食品に配合することができ、上記の有効成分の摂取量を考慮のうえ該組成物の配合量を調整し、それ以外は各食品の定法によって製造すればよい。
食品の例としては、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、乳酸菌飲料、バター、マーガリンなどの乳製品、乳飲料、果汁飲料、清涼飲料などの飲料、ゼリー、キャンディー、プリン、マヨネーズなどの卵加工品、バターケーキなどの菓子・パン類、さらには、各種粉乳の他、乳幼児食品、栄養組成物などを例示することができる。
【００２０】
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物はあらゆる医薬品に配合することができ、上記の有効成分の摂取量を考慮のうえ該組成物の配合量を調整し、それ以外は所望の医薬品の定法によって製造すればよい。
【００２１】
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物はあらゆる飼料に配合することができ、上記の有効成分の摂取量を考慮のうえ該組成物の配合量を調整し、それ以外は所望の飼料の定法によって製造すればよい。
【００２２】
［実施例Ａ］
以下に実施例Ａ、試験例Ａを示し、本発明について詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
〔実施例Ａ１〕ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物の調製
ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）を１１５℃、２０分間の滅菌処理をした、０．５％酵母エキス（アサヒビール社製）添加の１１．５５％脱脂乳培地にて３７℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地に３％接種し、３７℃で１６時間培養した。得られた培養物を凍結乾燥後、乳鉢で粉砕し、粉末状のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物を得た。
上記の組成物中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は３．６×１０9ｃｆｕ／ｇであった。
【００２３】
〔試験例Ａ１〕肝細胞における脂肪酸合成関連遺伝子発現に対する各種乳酸菌の影響肝細胞における脂肪酸合成関連遺伝子発現に対する各種乳酸菌の影響を調べた。
１．試験方法
１−１．細胞の培養方法
株化肝癌細胞であるＨｅｐＧ２細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地でコンフルーエントになるまで培養した。ＦＢＳ非含有ＤＭＥＭ培地でさらに１晩培養した後に、脱脂乳培地（終濃度５ｍｇ／ｍＬ）、又は下記（１）〜（５）の乳酸菌の脱脂乳培養物（いずれも終濃度５ｍｇ／ｍＬ）を、それぞれ添加したＦＢＳ非含有ＤＭＥＭ培地に交換して２日間培養した。ここでＪＣＭで始まる番号の菌株は理化学研究所バイオリソースセンター微生物材料開発室より購入することができる。また、ＡＴＣＣで始まる番号の菌株はアメリカの微生物分譲機関であるアメリカンタイプカルチャーコレクションより購入することができる。
＜乳酸菌＞
（１）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）（ＪＣＭ１１３１）
（２）ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）（ＪＣＭ１２１７）
（３）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）（ＪＣＭ１１２０）
（４）ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ１１８４２）
（５）ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（ＡＴＣＣ１９２５８）
【００２４】
１−２．遺伝子発現の解析
その後、培養後の細胞からセパゾール ＲＮＡ Ｉ ＳｕｐｅｒＧ 試薬（ナカライテスク社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。逆転写反応はＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ  ｑＰＣＲ
ＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（東洋紡社製）を用いた。得られたｃＤＮＡを使用して、ＴＨＵＮＤＥＲＢＩＲＤ  ｑＰＣＲ  Ｍｉｘ（東洋紡社製）でリアルタイムＰＣＲを行い、脂肪酸合成関連遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１ｃ、ＦＡＳ、ＳＣＤ１）の発現量を定量した。
なお、遺伝子発現量を評価するための内部標準として、Ｃｙｐｌｏｐｈｉｌｉｎ遺伝子の発現量を使用し、解析には以下のプライマーを用いた。
ＳＲＥＢＰ１ｃ−Ｆ；ＴＣＧＣＧＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴ(配列表配列番号１）
ＳＲＥＢＰ１ｃ−Ｒ；ＧＣＣＡＧＧＧＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＴＧ(配列表配列番号２）
ＦＡＳ−Ｆ；ＧＣＡＡＡＴＴＣＧＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＡＡＣ(配列表配列番号３）
ＦＡＳ−Ｒ；ＧＧＡＣＣＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＴＣＡ(配列表配列番号４）
ＳＣＤ１−Ｆ；ＴＧＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＧＣＴＣＴＴＡＣ(配列表配列番号５）
ＳＣＤ１−Ｒ；ＡＣＧＡＧＣＣＣＡＴＴＣＡＴＡＧＡＣＡＴＣＡ(配列表配列番号６）
Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−Ｆ；ＧＣＧＴＣＴＣＣＴＴＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴＧ(配列表配列番号７）
Ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ−Ｒ；ＡＴＣＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＡＧＴＧＣＴＣＡＧＡ(配列表配列番号８）
【００２５】
２．試験結果
結果を表Ａ１に示す。ストレプトコッカス・サーモフィルスの脱脂乳培養物は、肝細胞における脂肪酸合成関連遺伝子の発現を有意に減少させた。一方、ラクトバチルス・ガセリ、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ブルガリクスの脱脂乳培養物は、脂肪酸合成関連遺伝子の発現をほとんど変化させなかった。
【００２６】
【表Ａ１】
2018174125.tif 000002
【００２７】
〔試験例Ａ２〕肝細胞における脂肪酸合成関連遺伝子の発現に対するストレプトコッカス・サーモフィルスの影響
肝細胞における脂肪酸合成関連遺伝子の発現に対するストレプトコッカス・サーモフィルスの影響を調べた。
１．試験方法
試験例Ａ１と同様にＨｅｐＧ２細胞を１２ウェルプレートに播種して培養後、脱脂乳培地
（終濃度１ｍｇ／ｍＬ）、又はストレプトコッカス・サーモフィルスＡＴＣＣ  １９２５８、又はＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）、又はＳＢＴ１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）の脱脂乳培養物（いずれも終濃度０．１、０．５、１ｍｇ／ｍＬ）を添加したＦＢＳ非含有ＤＭＥＭ培地に交換して２日間培養した。その後、試験例Ａ１と同様にＲＮＡを精製し、脂肪酸合成関連遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１ｃ、ＦＡＳ）の発現量を定量した。
【００２８】
２．試験結果
結果を表Ａ２に示す。ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７及びＳＢＴ１０６３は、ストレプトコッカス・サーモフィルスＡＴＣＣ  １９２５８では差のみられない１ｍｇ／ｍＬ以下の濃度においても、肝細胞における脂肪酸合成関連遺伝子の発現を減少させた。
【００２９】
【表Ａ２】
2018174125.tif 000003
【００３０】
〔試験例Ａ３〕肝細胞におけるトリグリセリドの蓄積に対するストレプトコッカス・サーモフィルスの影響
肝細胞におけるトリグリセリドの蓄積に対するストレプトコッカス・サーモフィルスの影響を調べた。
１．試験方法
試験例Ａ１と同様にＨｅｐＧ２細胞を１２ウェルプレートに播種して培養後、脱脂乳培地（終濃度０．２ｍｇ／ｍＬ）、又はストレプトコッカス・サーモフィルスＡＴＣＣ１９２５８、又はＳＢＴ１２７７、又はＳＢＴ１０６３の脱脂乳培養物（いずれも終濃度０．５ｍｇ／ｍＬ）を添加したＦＢＳ非含有ＤＭＥＭ培地に交換して２日間培養した。細胞を抽出バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５，０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）中で破砕後、遠心分離し、上清のトリグリセリド濃度をトリグリセライド Ｅ  テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて測定した。また、タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用いて測定した。
【００３１】
２．試験結果
結果を表Ａ３に示す。いずれのストレプトコッカス・サーモフィルスもコントロールに比べて有意に細胞へのトリグリセリドの蓄積を減少させたが、その効果は、ストレプトコッカス・サーモフィルスＡＴＣＣ  １９２５８と比べて、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７とＳＢＴ１０６３の方が高く、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７が最も効果が高かった。
【００３２】
【表Ａ３】
2018174125.tif 000004
【００３３】
〔試験例Ａ４〕ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）の脂質代謝改善効果
マウスを用いて、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）の脂質代謝改善効果を調べた。
１．試験方法
１−１．飼育方法
５週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ６／ＪＪｃｌマウスを１週間馴化した後、平均体重に差がないように２０匹ずつ、２つの群に分けて下記条件で８週間飼育した。
（１）コントロール群
ＡＩＮ７６飼料をベースに、２０％の脱脂乳培地及び２０％の脂肪を含むように調製した高脂肪食を摂取させた。
（２）サーモフィルス群
コントロール群飼料の脱脂乳培地の代わりに、実施例Ａ１で作製したストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７脱脂乳培養物を２０％含むように調製した高脂肪食を摂取させた。
【００３４】
１−２．測定方法
（１）体重、血漿トリグリセリド濃度
体重を測定後、血液を採取し、肝臓を摘出した。血液から調製した血漿を用いてトリグリセリド濃度を測定した。なお、測定には、トリグリセライド  Ｅ−テストワコーを使用した。
（２）遺伝子発現の解析
肝臓からＲＮＡを抽出し、試験例Ａ２と同様の方法で脂肪酸合成関連遺伝子の発現量を解析した。
（３）肝臓脂質濃度
肝臓からクロロホルム／メタノールで脂質を抽出し、総脂質濃度及びトリグリセリド濃度を測定した。なお、総脂質濃度は、抽出後の脂質重量を秤量することにより測定し、トリグリセリド濃度は、抽出した脂質をイソプロパノールに溶解後、トリグリセライド  Ｅ−テストワコーを使用して測定した。また、それぞれの測定値を、抽出に用いた肝臓の重量で除することにより肝臓１ｇあたりの濃度を算出した。
【００３５】
２．試験結果
（１）体重、肝臓重量、血漿トリグリセリド濃度
結果を表Ａ４に示す。サーモフィルス群は、コントロール群と比べて体重が有意に減少した。また、血漿トリグリセリド濃度も有意に減少した。
【００３６】
【表Ａ４】
2018174125.tif 000005
【００３７】
（２）脂肪酸合成関連遺伝子の発現
結果を表Ａ５に示す。サーモフィルス群は、コントロール群と比べて肝臓における脂肪酸合成関連遺伝子の発現量が有意に減少した。
【００３８】
【表Ａ５】
2018174125.tif 000006
【００３９】
（３）肝臓脂質濃度
結果を表Ａ６に示す。サーモフィルス群は、コントロール群と比べて、肝臓の総脂質やトリグリセリド濃度が減少傾向を示した。
【００４０】
【表Ａ６】
2018174125.tif 000007
【００４１】
これらの結果から、ストレプトコッカス・サーモフィルスは、血中の中性脂肪を低下させ、肝臓への脂肪の蓄積を抑制することにより代謝を改善し、さらに体重を減少させることが分かった。
【００４２】
〔実施例Ａ２〕脂質代謝改善用組成物の製造
ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７のＭ１７培地（ＯＸＯＩＤ社製）培養物を、４℃、７０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、滅菌水による洗浄と遠心分離を３回繰り返して行い、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末とした。これはそのまま脂質代謝改善用組成物として用いることができる。
なお、上記の組成物中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は１．６×１０11ｃｆｕ／ｇであった。
【００４３】
〔実施例Ａ３〕脂質代謝改善用医薬品の製造
実施例Ａ２で調製した菌体粉末１部に脱脂粉乳４部を混合し、この混合粉末を打錠機により１ｇずつ常法により打錠して、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の菌体２００ｍｇを含む錠剤を調製した。
【００４４】
〔実施例Ａ４〕脂質代謝改善用発酵乳の製造
１０％還元脱脂乳培地を１１５℃で１５分間滅菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を接種し、３７℃で１６時間培養し、脱脂乳培養物を調製した。１００℃にて１０分間殺菌した発酵ミックス（１６％脱脂粉乳＋３％グルコース）に接種し、３９℃で１０時間発酵させて脂質代謝改善用発酵乳を得た。
上記の発酵乳中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は１．８×１０9ｃｆｕ／ｇであった。
【００４５】
〔実施例Ａ５〕脂質代謝改善用乳酸菌飲料の製造
１０％還元脱脂乳培地で培養したストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を９５℃で９０分殺菌した発酵ミックス（１６％脱脂粉乳＋３％グルコース）１０ｇに３％となるように添加し、３５℃で２０時間培養した。この培養物１０ｇを異性化糖４０ｇと混合し（ＢＲＩＸ １５％）、脂質代謝改善用乳酸菌飲料を得た。
上記した乳酸菌飲料中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は４×１０8ｃｆｕ／ｇであった。
【００４６】
〔実施例Ａ６〕脂質代謝改善用組成物の製造
還元脱脂乳培地（１３重量％脱脂粉乳、０．５％酵母エキス）を９５℃で３０分間殺菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を接種し、３７℃で１６時間培養し、得られた培養物を５０００ｒｐｍで２０分間遠心して、沈殿物を除いた培養上清を得た。これはそのまま脂質代謝改善用組成物として用いることができる。
【００４７】
〔実施例Ａ７〕脂質代謝改善用健康食品の製造
実施例Ａ１で得られたストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の培養物粉末５０ｇに、ビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇを加えて混合した。混合物をスティック状袋に詰め、脂質代謝改善用健康食品を得た。
【００４８】
〔実施例Ａ８〕脂質代謝改善用飼料の製造
大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、実施例Ａ１で得られたストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の培養物粉末１０ｋｇを配合して、脂質代謝改善用飼料を製造した。
【００４９】
〔実施例Ａ９〕脂質代謝改善用チーズの製造
原料乳を加熱殺菌（７５℃、１５秒間）した後、３０℃まで冷却し、０．０１％塩化カルシウムを添加した。さらに、市販乳酸菌スターター（ＬＤスターター、クリスチャン・ハンセン社）０．７％及びストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７培養物を１％添加し、さらにレンネット０．００３％を添加して、乳を凝固させた。このようにして得られた凝乳をカッティングし、ｐＨが６．２〜６．１となるまで撹拌してホエーを排出して、カード粒を得た。そして、このカード粒を型詰めして圧搾し、さらに加塩して、１０℃で熟成させ、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を含むゴーダチーズタイプの脂質代謝改善用硬質ナチュラルチーズを製造した。
［Ｂ：第二の発明］
本発明者等は、脂肪細胞における代謝を改善し、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化したりすることで、熱産生によるエネルギー消費を亢進して、生体における過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制し、メタボリックシンドローム等を予防または改善することを着想した。そして、鋭意研究を続けた結果、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することを知見した。第二の発明は、上記知見に基づくものである。
（有効成分）
本発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進する脂質代謝改善用組成物、褐色脂肪細胞の活性化用組成物、メタボリックシンドローム代謝改善用組成物、及びそれらを含む食品、医薬品、及び飼料に関するものである。
本発明に用いるストレプトコッカス・サーモフィルスは１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子配列解析等の一般的な分類方法によりＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ種に分類される乳酸菌であればどのようなものでも用いることができる。
本発明では、特に、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）、ＳＢＴ１０６３（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８）、ＳＢＴ１０２１Ａ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１０６５８）、ＳＢＴ１０１３７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５３１）、ＳＢＴ０１０４（ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４２）、ＳＢＴ０１１３（ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４３）、ＳＢＴ０１４４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６６３８）、ＳＢＴ１０３５（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６９４５）、ＡＴＣＣ  １９２５８を用いることが好ましく、このうちＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４）が特に好ましい。
括弧内にＦＥＲＭまたはＮＩＴＥで始まる番号が記載されている菌株は、それぞれ後述する寄託機関より入手することができ、ＡＴＣＣ１９２５８はアメリカの微生物分譲機関であるアメリカンタイプカルチャーコレクションより購入できる。
本発明に用いるストレプトコッカス・サーモフィルスは生菌体、死菌体、菌体培養物、これらの菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分のいずれでもよく、これらのうちの１種類以上を用いることができる。
【００５０】
（ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物の調製）
本発明の有効成分であるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む組成物は、乳酸菌の培養物を調製するための常法に従って得ることができる。
培養には、乳培地又は乳成分を含む培地、これを含まない半合成培地など種々の培地を用いることができる。
乳酸菌の培養物は、滅菌処理した上記培地にストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を接種し、２０℃〜４５℃程度で５時間〜数日間培養することにより得ることができる。培養の温度や期間は用いるストレプトコッカス・サーモフィルスの菌株や所望の菌数に応じて適宜調整すればよい。
培養により得られたストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む培養物は、そのまま本発明の有効成分であるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む組成物として用いることができる。また、前記培養物を遠心分離、膜濃縮、乾燥、凍結乾燥などの処理に供して得られる組成物を用いることもできる。
ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物の調製法の一態様として、０．５％酵母エキス（アサヒビール社製）添加の１１．５５％脱脂乳培地を、１１５℃、２０分間の条件で滅菌処理し室温まで冷却した後、ストレプトコッカス・サーモフィルスを接種し、３７℃で１６時間培養し、得られた培養物を凍結乾燥し、乳鉢で粉砕する工程を含む調製法が例示できる。
【００５１】
（有効成分の摂取量）
本発明の有効成分であるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の摂取量（１日あたりの菌数）は、ストレプトコッカス・サーモフィルスが生菌の場合は、５×１０8以上であればよく、１×１０10以上がさらに好ましく、１×１０11以上が最も好ましい。
ストレプトコッカス・サーモフィルスが死菌の場合は、上記の生菌と同等の菌数に相当する量であればよい。生菌と死菌の両方を含む場合は、生菌と死菌の合計が、上記の生菌と同等の菌数に相当する量であればよい。
菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分の場合は、成人1日あたりの摂取量が、０．１ｍｇ以上５０００ｍｇ以下であればよく、１００ｍｇ以上２５００ｍｇ以下が好ましく、５００ｍｇ以上１０００ｍｇ以下が最も好ましい。
【００５２】
（有効性）
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を含む組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料は、上記の摂取量で摂取することにより、白色脂肪前駆細胞が褐色脂肪細胞へと分化し、褐色脂肪細胞が活性化し、さらに皮下脂肪及び内臓脂肪が減少し、体重が減少する。
さらに、本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を有効成分とする組成物、及び該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料は、上記の摂取量で摂取することにより、脂肪酸合成関連遺伝子の発現が抑制され、コレステロール合成関連遺伝子の発現が抑制され、糖新生関連遺伝子の発現が抑制されることによってメタボリックシンドロームが改善する。
上述の脂質代謝改善用組成物及び係る組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を摂取することにより、血液中のコレステロールやトリグリセライド（中性脂肪）のバランスが崩れることで起こるとされる脂質異常症の予防や改善が期待される。さらには、脂質異常症が原因で生じる疾患（例えば、インスリン抵抗性、糖尿病、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、肝癌）や動脈硬化性疾患（例えば、狭心症、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、大動脈瘤、腎梗塞、閉塞性動脈硬化症）の予防や改善が期待される。
【００５３】
（有効性の評価）
本発明の、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を有効成分とする組成物、及び該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料の脂肪細胞の代謝に対する改善効果は、実施例Ｂに記載したｉｎ  ｖｉｖｏの試験により評価することができる。
【００５４】
（ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物を添加した食品、医薬品、飼料）
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物はあらゆる食品に配合することができ、上記の有効成分の摂取量を考慮して該組成物の配合量を調整し、それ以外は各食品の定法によって製造すればよい。
食品の例として、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、乳酸菌飲料、バター、マーガリンなどの乳製品、乳飲料、果汁飲料、清涼飲料などの飲料、ゼリー、キャンディー、プリン、マヨネーズなどの卵加工品、バターケーキなどの菓子・パン類、さらには、各種粉乳の他、乳幼児食品、栄養組成物などを例示することができる。
【００５５】
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物はあらゆる医薬品に配合することができ、上記の有効成分の摂取量を考慮して該組成物の配合量を調整し、それ以外は所望の医薬品の定法にしたがって製造すればよい。
【００５６】
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物はあらゆる飼料に配合することができ、上記の有効成分の摂取量を考慮して該組成物の配合量を調整し、それ以外は所望の飼料の定法にしたがって製造すればよい。
【００５７】
［実施例Ｂ］
以下に実施例Ｂ、試験例Ｂを示し、本発明について詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００５８】
（実施例Ｂ１：ストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物の調製）
ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０３２３４）を１１５℃、２０分間の滅菌処理をした、０．５％酵母エキス（アサヒビール社製）添加の１１．５５％脱脂乳培地にて３７℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地に３％接種し、３７℃で１６時間培養した。得られた培養物を凍結乾燥後、乳鉢で粉砕し、粉末状のストレプトコッカス・サーモフィルスを含む組成物を得た。
上記の組成物中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は３．６×１０9ｃｆｕ／ｇであった。
【００５９】
〔試験例Ｂ１〕
マウスを用いて、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の代謝改善効果を調べた。
１．試験方法
１−１．飼育方法
５週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ６／ＪＪｃｌマウスを１週間馴化した後、平均体重に差がないように２０匹ずつ、２つの群に分けて下記条件で８週間飼育した。
（１）コントロール群
ＡＩＮ７６飼料に２０％の脱脂乳培地及び、２０％の脂肪を含むように調製した高脂肪食を摂取させた。
（２）サーモフィルス群
コントロール群飼料の脱脂乳培地の代わりに、実施例Ｂ１で作製したストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を含む組成物（脱脂乳培養物）を２０％含むように調製した高脂肪食を摂取させた
【００６０】
１−２．測定方法
（１）体重、各組織の重量、血漿パラメーター
体重を測定後、血液や、肝臓、鼠径部脂肪組織、精巣周囲脂肪組織、腸間膜脂肪組織、肩甲骨間褐色脂肪組織を採取した。
血液から調製した血漿を用いてトリグリセリド濃度およびインスリン濃度を測定した。尚、トリグリセリド濃度の測定には、トリグリセライド  Ｅ−テストワコーを使用し、インスリンの測定には、超高感度マウスインスリン測定キット（森永生科学研究所製）を使用した。
（２）肝臓総脂質、肝臓トリグリセリド濃度
肝臓からクロロホルム／メタノールで脂質を抽出し、総脂質濃度及びトリグリセリド濃度を測定した。なお、総脂質濃度は、抽出後の脂質重量を秤量することにより測定し、トリグリセリド濃度は、抽出した脂質をイソプロパノールに溶解後、トリグリセライド  Ｅ−テストワコーを使用して測定した。また、それぞれの測定値を、抽出に用いた肝臓の重量で除することにより肝臓１ｇあたりの濃度を算出した。
【００６１】
（３）遺伝子発現の解析
各組織からセパゾール ＲＮＡ Ｉ ＳｕｐｅｒＧ 試薬（ナカライテスク社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。逆転写反応にはＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ  ｑＰＣＲ  ＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（東洋紡社製）を用いた。得られたｃＤＮＡを使用して、ＴＨＵＮＤＥＲＢＩＲＤ  ｑＰＣＲ  Ｍｉｘ（東洋紡社製）でリアルタイムＰＣＲを行い、遺伝子の発現量を解析した。
肝臓では、脂肪酸合成関連遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１ｃ、ＦＡＳ，ＳＣＤ１）、及びコレステロール合成関連遺伝子（ＳＲＥＢＰ−２）、及び糖新生関連遺伝子（Ｇ６Ｐａｓｅ）の発現を、鼠径部脂肪組織と肩甲骨間褐色脂肪組織では、褐色脂肪細胞活性化のマーカーであるＵＣＰ１遺伝子の発現を解析した。
また、すべての脂肪組織（鼠径部脂肪組織、精巣周囲脂肪組織、腸間膜脂肪組織、肩甲骨間褐色脂肪組織）において、炎症のマーカーであるＭＣＰ１遺伝子の発現量を解析した。
内部標準として３６Ｂ４遺伝子を用い、各遺伝子発現量の解析には以下のプライマーを用いた。
【００６２】
ＳＲＥＢＰ１ｃ−Ｆ；ＴＣＧＣＧＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴ  (配列表配列番号１）
ＳＲＥＢＰ１ｃ−Ｒ；ＧＣＣＡＧＧＧＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＴＧ  （(配列表配列番号２）
ＦＡＳ−Ｆ；ＧＣＡＡＡＴＴＣＧＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＧＡＡＣ(配列表配列番号３）
ＦＡＳ−Ｒ；ＧＧＡＣＣＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＴＣＡ(配列表配列番号４）
ＳＣＤ１−Ｆ；ＴＧＴＧＧＡＧＣＣＡＣＣＧＣＴＣＴＴＡＣ(配列表配列番号５）
ＳＣＤ１−Ｒ；ＡＣＧＡＧＣＣＣＡＴＴＣＡＴＡＧＡＣＡＴＣＡ(配列表配列番号６）
Ｇ６Ｐａｓｅ−Ｆ：ＴＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＴＴＣＡＡＣＣＴＣ(配列表配列番号７）
Ｇ６Ｐａｓｅ−Ｒ：ＴＣＡＣＡＧＧＴＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＴＧ(配列表配列番号８）
ＳＲＥＢＰ２−Ｆ：ＡＡＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＴＣＣＣＴＴＧ(配列表配列番号９）
ＳＲＥＢＰ２−Ｒ：ＡＣＧＴＴＧＡＧＡＣＴＧＣＴＣＣＡＣＡＧ(配列表配列番号１０）
ＵＣＰ１−Ｆ：ＣＣＡＡＡＧＴＣＣＧＣＣＴＴＣＡＧＡ(配列表配列番号１１）
ＵＣＰ１−Ｒ：ＧＧＣＡＡＴＣＣＴＴＣＴＧＴＴＴＴＴＧＣ(配列表配列番号１２）
ＭＣＰ１−Ｆ：ＣＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＣＴＡＣＴＣＡＴ(配列表配列番号１３）
ＭＣＰ１−Ｒ：ＴＧＧＴＧＡＴＣＣＴＣＴＴＧＴＡＧＣＴＣＴＣＣ(配列表配列番号１４）
３６Ｂ４−Ｆ：ＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＴＣＴＣＧＣＴＴＴＣ(配列表配列番号１５）
３６Ｂ４−Ｒ：ＴＧＣＣＡＧＧＡＣＧＣＧＣＴＴＧＴ(配列表配列番号１６）
【００６３】
２．試験結果
（１）体重、各組織の重量、血漿パラメーター
結果を表Ｂ１に示す。サーモフィルス群では、コントロール群と比べて体重が有意に低下した。
また、肝臓と肩甲骨間褐色脂肪組織の重量も有意に減少し、皮下脂肪に相当する鼠径部脂肪組織及び、内臓脂肪に相当する精巣周囲脂肪組織や腸間膜脂肪組織の重量が減少傾向を示した。更に、血漿トリグリセリド濃度も有意に減少した。
【００６４】
【表Ｂ１】
2018174125.tif 000008
【００６５】
（２）肝臓脂質
結果を表Ｂ２に示す。サーモフィルス群では、コントロール群に比べて肝臓の総脂質やトリグリセリド濃度が減少傾向を示した。
【００６６】
【表Ｂ２】
2018174125.tif 000009
これらの結果から、ストレプトコッカス・サーモフィルスは、皮下脂肪や内臓脂肪の蓄積を抑制して肥満を防止するとともに、血中の中性脂肪を低下させ、肝臓への脂肪の蓄積を抑制することにより代謝を改善することが分かった。
【００６７】
（３）代謝改善メカニズム
(i）肝臓における脂肪酸合成関連遺伝子及び、コレステロール合成関連遺伝子及び、糖新生関連遺伝子の発現
結果を表Ｂ３に示す。サーモフィルス群では、コントロール群に比べて肝臓における脂肪酸合成関連遺伝子及び、コレステロール合成関連遺伝子及び、糖新生関連遺伝子何れの発現も有意に減少した。
【００６８】
【表Ｂ３】
2018174125.tif 000010
【００６９】
(ii）ＵＣＰ１遺伝子の発現
結果を表Ｂ４に示す。サーモフィルス群ではコントロール群に比べ、肩甲骨間褐色脂肪組織において、褐色脂肪細胞活性化のマーカーであるＵＣＰ１遺伝子の発現が有意に増加した。したがって、サーモフィルス群では肩甲骨間褐色脂肪組織の細胞当たりのＵＣＰ１遺伝子の発現が増加し、脂肪の燃焼が促進されたため、表Ｂ１に示したように、肩甲骨間褐色脂肪組の重量がコントロール群と比べて減少したと考えられた。また、白色脂肪組織である鼠径部脂肪組織において、褐色脂肪細胞活性化のマーカーであるＵＣＰ１遺伝子の発現が顕著に増加したことから、白色脂肪前駆細胞の一部が褐色脂肪細胞へと分化していることが示された。
【００７０】
【表Ｂ４】
2018174125.tif 000011
【００７１】
(iii）ＭＣＰ１遺伝子の発現
結果を表Ｂ５に示す。サーモフィルス群はコントロール群に比べて脂肪組織における炎症のマーカーであるＭＣＰ１遺伝子の発現が有意に減少した。
【００７２】
【表Ｂ５】
2018174125.tif 000012
【００７３】
これらのことから、ストレプトコッカス・サーモフィルスは、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進するとともに、褐色脂肪組織の活性化も促進する。また肝臓における脂肪酸合成関連遺伝子や、コレステロール合成関連遺伝子、糖新生関連遺伝子の発現を抑制し、さらに脂肪組織の炎症を抑制することによってメタボリックシンドロームを改善することが分かった。
【００７４】
〔実施例Ｂ２〕脂肪細胞の代謝改善用組成物の製造
ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７のＭ１７培地（ＯＸＯＩＤ社製）培養物を、４℃、７０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後、滅菌水による洗浄と遠心分離を３回繰り返して行い、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末とした。これはそのまま脂肪細胞の代謝改善用組成物として用いることができる。
なお、上記の組成物中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は１．６×１０11ｃｆｕ／ｇであった。
【００７５】
〔実施例Ｂ３〕脂肪細胞の代謝改善用医薬品の製造
実施例Ｂ２で調製した菌体粉末１部に脱脂粉乳４部を混合し、この混合粉末を打錠機により１ｇずつ常法により打錠して、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の菌体２００ｍｇを含む錠剤を調製した。
【００７６】
〔実施例Ｂ４〕脂肪細胞の代謝改善用発酵乳の製造
１０％還元脱脂乳培地を１１５℃で１５分間滅菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を接種し、３７℃で１６時間培養し、脱脂乳培養物を調製した。その脱脂乳培養物を１００℃にて１０分間殺菌した発酵ミックス（１６％脱脂粉乳＋３％グルコース）に接種し、３９℃で１０時間発酵させて脂肪細胞の代謝改善用発酵乳を得た。
なお、上記の発酵乳中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は１．８×１０9ｃｆｕ／ｇであった。
【００７７】
〔実施例Ｂ５〕脂肪細胞の代謝改善用乳酸菌飲料の製造
１０％還元脱脂乳培地で培養したストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を９５℃で９０分殺菌した発酵ミックス（１６％脱脂粉乳＋３％グルコース）１０ｇに３％となるように添加し、３５℃で２０時間培養した。この培養物１０ｇを異性化糖４０ｇと混合し（ＢＲＩＸ １５％）、脂肪細胞の代謝改善用乳酸菌飲料を得た。
なお、上記した乳酸菌飲料中のストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の生菌数は４×１０8ｃｆｕ／ｇであった。
【００７８】
〔実施例Ｂ６〕脂肪細胞の代謝改善用組成物の製造
還元脱脂乳培地（１３重量％脱脂粉乳、０．５％酵母エキス）を９５℃で３０分間殺菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を接種し、３７℃で１６時間培養し、得られた培養物を５０００ｒｐｍで２０分間遠心して、沈殿物を除いた培養上清を得た。これはそのまま脂肪細胞の代謝改善用組成物として用いることができる。
【００７９】
〔実施例Ｂ７〕脂肪細胞の代謝改善用健康食品の製造
実施例Ｂ１で得られたストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の培養物粉末５０ｇに、ビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇを加えて混合した。混合物をスティック状袋に詰め、脂肪細胞の代謝改善用健康食品を得た。
【００８０】
〔実施例Ｂ８〕脂肪細胞の代謝改善用飼料の製造
大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、  実施例Ｂ１で得られたストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７の培養物粉末１０ｋｇを配合して、脂肪細胞の代謝改善用飼料を製造した。
【００８１】
〔実施例Ｂ９〕脂肪細胞の代謝改善用硬質ナチュラルチーズの製造
原料乳を加熱殺菌（７５℃、１５秒間）した後、３０℃まで冷却し、０．０１％の塩化カルシウムを添加した。さらに、市販乳酸菌スターター（ＬＤスターター、クリスチャン・ハンセン社）を０．７％及びストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を１％添加し、さらにレンネット０．００３％を添加して、乳を凝固させた。このようにして得られた凝乳をカッティングし、ｐＨが６．２〜６．１となるまで撹拌してホエーを排出して、カード粒を得た。そして、このカード粒を型詰めして圧搾し、さらに加塩して、１０℃で熟成させ、ストレプトコッカス・サーモフィルスＳＢＴ１２７７を含むゴーダチーズタイプの脂肪細胞の代謝改善用硬質ナチュラルチーズを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
第一の発明は、脂質代謝を改善する新たな解決手段として、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を有効成分とする脂質代謝改善用組成物、及び該組成物を含む脂質代謝改善用食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。
したがって、本発明の上記組成物、食品、医薬品、飼料の摂取により手軽にかつ安全な方法で脂質代謝の改善が期待できる。【００８３】
第二の発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を有効成分とする、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化促進、褐色脂肪細胞の活性化などの脂肪細胞の代謝改善用組成物、及び該組成物を含む脂肪細胞の代謝改善用食品、医薬品、及び飼料、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を有効成分とするメタボリックシンドローム改善用組成物、及び該組成物を含むメタボリックシンドローム改善用食品、医薬品、及び飼料を提供するものである。
本発明によれば上記組成物、食品、医薬品、飼料の摂取により手軽にかつ安全な方法で脂肪細胞の代謝の改善及びメタボリックシンドロームの改善が期待できる。【００８４】
（受託番号）
ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４
ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４２
ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４３
ＦＥＲＭ  Ｐ−１０６５８
ＦＥＲＭ  Ｐ−１６６３８
ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５３１
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８【００８５】
[寄託生物材料への言及]
（１）ＳＢＴ１２７７
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１年１２月１１日（原寄託日）
平成３年１月２２日（原寄託によりブタペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  ＢＰ−３２３４
（２）ＳＢＴ０１０４
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
昭和６２年６月３０日（原寄託日）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４２
（３）ＳＢＴ０１１３
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
昭和６２年６月３０日（原寄託日）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  Ｐ−９４４３
（４）ＳＢＴ１０２１Ａ
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１年４月１３日（原寄託日）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  Ｐ−１０６５８
（５）ＳＢＴ０１４４
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１０年２月１７日（原寄託日）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  Ｐ−１６６３８
（６）ＳＢＴ１０１３７
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１５年９月２５日（原寄託日）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５３１
（７）ＳＢＴ１０６３
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成２８年１２月２７日（原寄託日）
（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブタペスト条約に基づく寄託への移管申請をし、生存確認試験の完了後に、受領・受託番号を通知する書面を受領した。受領・受託番号は、ＡＢＰ−０２３９８である。）
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２３９８
【配列表】
2018174125000001.app
【国際調査報告】
2018174125.tif 000013
2018174125.tif 000014
2018174125.tif 000015
2018174125.tif 000016
2018174125.tif 000017