(57)【要約】  リアノジン阻害活性、特にＲｙＲ１阻害活性を有する化合物を有効成分として含有する医薬を提供すること。  一般式（Ｉ）2019082940.tif 000054（式中、すべての記号は明細書中に記載の意味と同じ意味を示す。）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするリアノジン受容体関連疾患の治療又は予防薬。
2019082940.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2019082940.tif 000052
［式中、Ｒ１は、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基を示し、該アルキル基、アルケニル基及びアルキニル基はＣ３〜１２炭素環、又は４〜１２員複素環が置換していてもよく、
ＸはＣＲ４又はＮを示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基、Ｃ２〜６アルケニル基、Ｃ２〜６アルキニル基、Ｃ１〜３フッ化アルキル基、Ｃ１〜６アルコキシ基、ＯＲ１０（式中、Ｒ１０は水素原子又はフェニル基を示す。）、ＮＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）、ＣＯＲ１３（式中、Ｒ１３は水酸基、ＯＲ２０（式中、Ｒ２０は水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）又はＮＲ２１Ｒ２２（式中、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）を示す。）、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、Ｃ１〜３フッ化アルコキシ基、Ｃ１〜６アルキルチオ基、Ｃ１〜６アルキルチオ基、Ｃ３〜１２炭素環又は４〜１２員複素環を示し、Ｒ２とＲ３は一緒になってＣ３〜５アルキレン基又はＣ１〜３アルキレンジオキシ基を示してもよく、
ＹはＣＯＲ３０（Ｒ３０は水酸基、ＯＲ４０（式中、Ｒ４０はＣ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）又はＮＲ４１Ｒ４２（式中、Ｒ４１およびＲ４２はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）を示す。）を示す。］
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするリアノジン受容体関連疾患の治療又は予防薬。
【請求項２】
一般式（Ｉ）で表される化合物において、ＸがＣＨであり、Ｒ１がＣ４〜１０アルキル基であり、Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３がＣ１〜４アルキル基である、請求項１記載の治療又は予防薬。
【請求項３】
リアノジン受容体が、ＲｙＲ１である請求項１又は２記載の治療又は予防薬。
【請求項４】
リアノジン受容体関連疾患が、悪性高熱症及びセントラルコア病からなる群より選択される疾患である、請求項１〜３のいずれか１項記載の治療又は予防薬。
【請求項５】
請求項１記載の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするリアノジン受容体阻害薬。
【請求項６】
リアノジン受容体がＲｙＲ１である請求項５記載の阻害薬。
【請求項７】
一般式（ＩＡ）
【化２】
2019082940.tif 000053
［式中、Ｒ１ＡはＣ１〜１２アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキル基又はフェニル−Ｃ１〜４アルキル基を示し、
ＸＡはＣＲ４Ａ又はＮを示し、Ｒ４Ａは水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜４アルコキシ基を示し、
Ｒ２ＡとＲ３Ａは一方が水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜４アルコキシ基であり、他方が水素原子、Ｃ１〜４アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、シアノ基、ハロゲン原子、トリハロメチル基、トリハロメチルオキシ基もしくはメチルチオ基を示すか、又はＲ２ＡとＲ３Ａが一緒になってＣ３〜５アルキレン基又は−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示す
（ただし、（ｉ）Ｒ２ＡとＲ３Ａがともに水素原子のときＲ１Ａはシクロへキシルメチル基を示し、
（ｉｉ）Ｒ１Ａがｎ−プロピル基のときＲ２Ａはメチル基又はメトキシ基ではなく、
（ｉｉｉ）Ｒ２ＡとＲ３Ａが一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示すときＲ１Ａはオクチル基ではない）］で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項７記載の一般式（ＩＡ）で表される化合物において、
Ｒ２ＡとＲ３Ａは一方が水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜４アルコキシ基であり、他方がＣ１〜４アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子、シアノ基もしくはトリハロメチル基を示すか、又はＲ２とＲ３が一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示す
（ただし、（ｉ）Ｒ１Ａがｎ−プロピル基のときＲ２Ａはメチル基又はメトキシ基ではなく、
（ｉｉ）Ｒ２ＡとＲ３Ａが一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示すときＲ１Ａはオクチル基ではない）］
請求項７記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
（１）１−シクロへキシルメチル−１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（２）１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（３）１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（４）１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（５）１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（６）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−４−オキソ−１−プロピルキノリン−３−カルボン酸、
（７）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（８）１，４−ジヒドロ−１−プロピル−４−オキソ−７−トリフルオロメチルキノリン−３−カルボン酸、
（９）１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソ−７−トリフルオロメチルキノリン−３−カルボン酸、
（１０）５−デシル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸、
（１１）７−メトキシ−１−プロピル−１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸、
（１２）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸、
（１３）１−デシル−１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸、
（１４）１，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（１５）１−デシル−１，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（１６）１−プロピル−４−オキソ−シクロペンタ［ｇ］キノリン−３−カルボン酸、
（１７）１−オクチル−４−オキソ−シクロペンタ［ｇ］キノリン−３−カルボン酸、
（１８）１−プロピル−１，４−ジヒドロ−７−トリフルオロメチルオキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（１９）１−プロピル−１，４−ジヒドロ−７−トリフルオロメチルオキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（２０）１，４−ジヒドロ−８−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（２１）７，８−ジメトキシ−１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、及び
（２２）１，４−ジヒドロ−７−メチルチオ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸
からなる群より選択される、請求項７記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リアノジン受容体阻害薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
リアノジン受容体（ＲｙＲ）は、筋収縮にとって不可欠なステップである、筋小胞体（ＳＲ）からのカルシウムイオン（Ｃａ２＋）の遊離を担うＣａ２＋遊離チャネルである。ＲｙＲは、細胞質基質側のＣａ２＋に刺激されて、Ｃａ２＋を細胞質基質中に遊離する（Ｃａ２＋誘発性Ｃａ２＋遊離、ＣＩＣＲ）。そのためポジティブフィードバック機構として働き、チャネル付近の細胞質基質中にある少量のＣａ２＋が、ＳＲからより多くのＣａ２＋遊離を引き起こす。【０００３】
ＲｙＲには主に骨格筋に発現するＲｙＲ１、主に心筋に発現するＲｙＲ２、及び広範囲に発現するが脳に多く発現するＲｙＲ３のサブタイプが知られている。ＲｙＲ遺伝子変異は、ＣＩＣＲ活性の異常亢進を引き起こし、種々の疾患の原因とされている。例えば、ＲｙＲ１関連疾患としては、悪性高熱症（ＭＨ）（例えば、手術時の吸入麻酔薬による体温上昇、骨格筋拘縮等）、セントラルコア病（ＣＣＤ）（難病に指定されている四肢の筋力低下等）が挙げられる（非特許文献１）。また、ＲｙＲ２関連疾患としては、カテコラミン誘発性多形性心室頻拍（ＣＰＶＴ）（運動性不整脈）、不整脈性原性右室心筋症（ＡＲＶＣ）（右室形成異常、不整脈誘発）、特発性心室細動（ＩＶＦ）（安静時に心室細動誘発）等が挙げられる（非特許文献２）。さらに、ＲｙＲ以外の主要因により、二次的にＲｙＲの制御異常が起こることの結果生じる疾患として、悪性症候群（統合失調症治療薬の副作用）、筋ジストロフィー症、アルツハイマー型認知症、ハンチントン症、外傷性脳損傷等が挙げられる（非特許文献３〜８）。【０００４】
これらのＲｙＲ関連疾患の原因は、ＲｙＲ遺伝子変異によるＣＩＣＲ活性の異常亢進にあると考えられているが、現時点で有効な治療薬は存在しない。例えば、悪性高熱症にはダントロレンが唯一の治療薬とされている（非特許文献９）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特公昭５１−１８４４０号公報
【特許文献２】国際公開第２０１０／０６４７０１号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Orphanet J Rare Dis. 10:93 (2015)
【非特許文献２】J. Electrocardiol. 48 (5), 874-878 (2015)
【非特許文献３】Neuropsychiatr Dis Treat. 13: 161-175 (2017)
【非特許文献４】FASEB J. 32: 1025-1043 (2018)
【非特許文献５】J. Neurosci. 35: 6893-6902 (2015)
【非特許文献６】J. Alzheimers Dis. 45: 561-580 (2015)
【非特許文献７】Molecular Neurodegeneration 2011, 6:81, 1-12
【非特許文献８】Eur Spine J (2009) 18: 1442-1451 外傷性脳損傷
【非特許文献９】悪性高熱症患者の管理に関するガイドライン2016−安全な麻酔管理のために− 2016年8月  日本麻酔科学会 安全委員会  悪性高熱症WG作成
【非特許文献１０】Hum Mutat., 37, 1231-1241, 2016
【非特許文献１１】J. Med. Chem. 1980, 23, 1358-1363
【非特許文献１２】Chem. Pharm. Bull. 41 (1) 126-131 (1993)
【非特許文献１３】Nat. Commun., 2014, 5: 4153
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、ダントロレンは副作用が強いことから長期投与には不向きであることと、水溶性が低いことから投与方法に制限がある。また、ダントロレンにはＣＣＤ治療薬としての適用がない。したがって、本発明の課題は、リアノジン受容体阻害活性、特にＲｙＲ１に対して阻害活性を有し、リアノジン受容体関連疾患に有効な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで、本発明者らは、リアノジン受容体と筋収縮にとって不可欠なステップであるＣＩＣＲとの関係に鑑みて種々検討した結果、蛍光小胞体Ｃａ２＋インジケーターと疾患変異型ＲｙＲとを発現する培養細胞、及び蛍光小胞体Ｃａ２＋インジケーターと野生型ＲｙＲとを発現する培養細胞とをそれぞれ培養し、被検物質の存在下で小胞体内Ｃａ２＋濃度を測定し、前記両培養細胞の小胞体内Ｃａ２＋濃度を対比することにより、ＣＩＣＲ活性抑制剤、すなわちリアノジン受容体関連疾患治療薬のスクリーニングができることを見出し、先に特許出願を行った（特願２０１６−１１３１４７号、また非特許文献１０）。そして、このスクリーニング方法を用いて、種々の化合物をスクリーニングした結果、下記一般式（Ｉ）で表される化合物が優れたリアノジン受容体阻害活性を有し、リアノジン受容体関連疾患の予防又は治療薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。【０００９】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［９］を提供するものである。
［１］一般式（Ｉ）【００１０】
【化１】
2019082940.tif 000003
【００１１】
［式中、Ｒ１は、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基を示し、該アルキル基、アルケニル基及びアルキニル基はＣ３〜１２炭素環、又は４〜１２員複素環が置換していてもよく、
ＸはＣＲ４又はＮを示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基、Ｃ２〜６アルケニル基、Ｃ２〜６アルキニル基、Ｃ１〜３フッ化アルキル基、Ｃ１〜６アルコキシ基、ＯＲ１０（式中、Ｒ１０は水素原子又はフェニル基を示す。）、ＮＲ１１Ｒ１２（式中、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）、ＣＯＲ１３（式中、Ｒ１３は水酸基、ＯＲ２０（式中、Ｒ２０は水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）又はＮＲ２１Ｒ２２（式中、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）を示す。）、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、Ｃ１〜３フッ化アルコキシ基、Ｃ１〜６アルキルチオ基、Ｃ３〜１２炭素環又は４〜１２員複素環を示し、Ｒ２とＲ３は一緒になってＣ３〜５アルキレン基又はＣ１〜３アルキレンジオキシ基を示してもよく、
ＹはＣＯＲ３０（Ｒ３０は水酸基、ＯＲ４０（式中、Ｒ４０はＣ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）又はＮＲ４１Ｒ４２（式中、Ｒ４１およびＲ４２はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基又はフェニル基を示す。）を示す。）を示す。］
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするリアノジン受容体関連疾患の治療又は予防薬。【００１２】
［２］  前項［１］記載の一般式（Ｉ）で表される化合物において、ＸがＣＨであり、Ｒ１がＣ６〜１０アルキル基であり、Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３がＣ１〜４アルキル基である、前項［１］記載の治療又は予防薬。【００１３】
［３］  リアノジン受容体が、ＲｙＲ１である前項［１］又は［２］記載の治療及び／又は予防薬。【００１４】
［４］  リアノジン受容体関連疾患が、悪性高熱症及びセントラルコア病からなる群より選択される疾患である、前項［１］〜［３］のいずれか１項記載の治療又は予防薬。【００１５】
［５］  前項［１］記載の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするリアノジン受容体の阻害薬。【００１６】
［６］  リアノジン受容体がＲｙＲ１である前項［５］記載の阻害薬。【００１７】
［７］  一般式（ＩＡ）
【化２】
2019082940.tif 000004
【００１８】
［式中、Ｒ１ＡはＣ１〜１２アルキル基、Ｃ３〜６シクロアルキル−Ｃ１〜４アルキル基又はフェニル−Ｃ１〜４アルキル基を示し、
ＸＡはＣＲ４Ａ又はＮを示し、Ｒ４Ａは水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜４アルコキシ基を示し、
Ｒ２ＡとＲ３Ａは一方が水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜４アルコキシ基であり、他方が水素原子、Ｃ１〜４アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、シアノ基、ハロゲン原子、トリハロメチル基、トリハロメチルオキシ基もしくはメチルチオ基を示すか、又はＲ２ＡとＲ３Ａが一緒になってＣ３〜５アルキレン基又は−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示す
（ただし、（ｉ）Ｒ２ＡとＲ３Ａがともに水素原子のときＲ１Ａはシクロへキシルメチル基を示し、
（ｉｉ）Ｒ１Ａがｎ−プロピル基のときＲ２Ａはメチル基又はメトキシ基ではなく、
（ｉｉｉ）Ｒ２ＡとＲ３Ａが一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示すときＲ１Ａはオクチル基ではない）］で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。【００１９】
［８］  前項［７］記載の一般式（ＩＡ）で表される化合物において、
Ｒ２ＡとＲ３Ａは一方が水素原子であり、他方がＣ１〜４アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子、シアノ基もしくはトリハロメチル基を示すか、又はＲ２とＲ３が一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示す
（ただし、（ｉ）Ｒ１Ａがｎ−プロピル基のときＲ２Ａはメチル基又はメトキシ基ではなく、
（ｉｉ）Ｒ２ＡとＲ３Ａが一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−基を示すときＲ１Ａはオクチル基ではない）］
請求項７記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。【００２０】
［９］（１）１−シクロへキシルメチル−１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（２）１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（３）１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（４）１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（５）１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（６）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−４−オキソ−１−プロピルキノリン−３−カルボン酸、
（７）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（８）１，４−ジヒドロ−１−プロピル−４−オキソ−７−トリフルオロメチルキノリン−３−カルボン酸、
（９）１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソ−７−トリフルオロメチルキノリン−３−カルボン酸、
（１０）５−デシル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸、
（１１）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−プロピル−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸、
（１２）１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸、
（１３）１−デシル−１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸、
（１４）１，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（１５）１−デシル−１，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（１６）１−プロピル−４−オキソ−シクロペンタ［ｇ］キノリン−３−カルボン酸、
（１７）１−オクチル−４−オキソ−シクロペンタ［ｇ］キノリン−３−カルボン酸、
（１８）１−プロピル−１，４−ジヒドロ−７−トリフルオロメチルオキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（１９）１−プロピル−１，４−ジヒドロ−７−トリフルオロメチルオキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（２０）１，４−ジヒドロ−８−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
（２１）７，８−ジメトキシ−１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、及び
（２２）１，４−ジヒドロ−７−メチルチオ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸
からなる群より選択される、前項［７］記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【発明の効果】
【００２１】
一般式（Ｉ）で表される本発明化合物又はその薬学的に許容される塩は、リアノジン受容体、特にＲｙＲ１受容体の阻害活性を示すため、骨格筋疾患の予防又は治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】オキソリン酸及び１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン３−カルボン酸（ＤＯＣＡ）のＲｙＲ１阻害活性を示す。
【図２】本発明で用いる化合物のＲｙＲ１阻害活性を示す。
【図３】本発明で用いる化合物のＲｙＲ１阻害活性を示す。
【図４】本発明で用いる化合物のＲｙＲ１阻害活性を示す。
【図５】本発明で用いる化合物のＲｙＲ１結合活性を示す。
【図６】ＲｙＲ１悪性高熱症変異導入マウスに対する治療効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明のリアノジン受容体関連疾患の治療又は予防薬における有効成分は、一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である。当該一般式（Ｉ）で表される化合物には、オキソリン酸及びキノリン−３−カルボン酸誘導体化合物が含まれる。オキソリン酸は１９７０年代に開発されたキノロン系抗菌剤である（特許文献１）。オキソリン酸は細菌ＤＮＡのジャイレースを阻害し、現在では主に動物用の抗菌剤として使用されている。また、オキソリン酸に構造が類似した化合物として、１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（ＤＯＣＡ）誘導体の抗菌活性に関する構造活性相関の研究が行われている（例えば、非特許文献１１、１２）。これらの化合物は抗菌作用を有することは知られているが、リアノジン受容体阻害活性を有することは何ら知られていない。また、一般式（ＩＡ）で示される化合物はこれまで知られていない新規な化合物である。
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
本明細書中、「Ｃ１〜１２アルキル基」とは、炭素数１〜１２の直鎖状のアルキル基又は炭素数３〜１２の分岐鎖状のアルキル基を示す。Ｃ１〜１２アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−へキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基の直鎖状のアルキル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｓ−ブチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、３−メチルブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、イソへキシル基、３−エチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、イソヘプテニル基、イソオクチル基、イソノニル基、イソデシル、イソウンデシル基、イソドデシル基等の分岐鎖状のアルキル基が挙げられる。
【００２５】
本明細書中、「Ｃ２〜１２アルケニル基」とは、炭素数２〜１２の直鎖状のアルケニル基又は炭素数３〜１２の分岐鎖状のアルケニル基を示す。Ｃ２〜１２アルケニル基の例としては、エテニル基、ｎ−プロペニル基、ｎ−ブテニル基、ｎ−ペンテニル基、ｎ−へキセニル基、ｎ−ヘプタニル基、ｎ−オクタニル基、ｎ−ノネニル基、ｎ−デセニル基、ｎ−ウンデセニル基、ｎ−ドデセニル基の直鎖状のアルケニル基、イソプロペニル基、イソブテニル基、ｓ−ブテニル基、イソペンテニル基、１−エチルプロペニル基、３−メチルブテニル基、２，２−ジメチルプロペニル基、イソへキセニル基、３−エチルブテニル基、３，３−ジメチルブテニル基、イソヘプテニル基、イソオクテニル基、イソノネニル基、イソデセニル、イソウンデセニル基、イソドデセニル基等の分岐鎖状のアルケニル基が挙げられる。
【００２６】
本明細書中、「Ｃ２〜１２アルキニル基」とは、炭素数２〜１２の直鎖状のアルキニル基又は炭素数３〜１２の分岐鎖状のアルキニル基を示す。Ｃ２〜１２アルキニル基の例としては、エチニル基、ｎ−プロピニル基、ｎ−ブチニル基、ｎ−ペンチニル基、ｎ−へキシニル基、ｎ−ヘプチニル基、ｎ−オクチニル基、ｎ−ノニニル基、ｎ−デシニル基、ｎ−ウンデシニル基、ｎ−ドデシニル基の直鎖状のアルキニル基、イソブチニル基、ｓ−ブチニル基、イソペンチニル基、１−エチルプロピニル基、３−メチルブチニル基、２，２−ジメチルプロピニル基、イソへキシニル基、３−エチルブチニル基、３，３−ジメチルブチニル基、イソヘプチニル基、イソオクチニル基、イソノニニル基、イソデシニル、イソウンデシニル基、イソドデシニル基等の分岐鎖状のアルキニル基が挙げられる。
【００２７】
本明細書中、「Ｃ３〜１２炭素環」は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタン、シクロノナン、シクロデカン等の飽和炭化水素（シクロアルカン）、ビシクロヘプタン、ビシクロオクタン、ビシクロノナン等のビシクロ環、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテン、シクロノネン、シクロデセン等のシクロアルケン、ベンゼン、ナフタレン、インダン、インデン等の芳香環等を含む完全不飽和又は不完全不飽和の炭素環が挙げられる。
【００２８】
本明細書中、「４〜１２員複素環」には「４〜１２員飽和複素環」及び「４〜１２員不飽和複素環」が含まれる。
「４〜１２員飽和複素環」とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択されるヘテロ原子を有する飽和の単環式又は二環式以上の複素環であり、例えば、モルホリン、１−ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオフェン、チアゾリジン、オキサゾリジン等が挙げられる。
【００２９】
本明細書中、「４〜１２員不飽和複素環」とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択されるヘテロ原子を有する、完全不飽和又は部分不飽和の単環式又は二環式以上の複素環であり、例えば、イミダゾリン、チオフェン、フラン、ピロール、オキサゾール、イソキサゾール基、チアゾール、イソチアゾール基、チアジアゾール基、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドール、イソインドール、インダゾール基、トリアゾロピリジン、ベンゾイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール基、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、プリン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、メチレンジオキシベンゼン、エチレンジオキシベンゼン、ジヒドロベンゾフラン等が挙げられる。
【００３０】
本明細書中、「Ｃ１〜６アルキル基」とは、炭素数１〜６の直鎖状のアルキル基又は炭素数３〜６の分岐鎖状のアルキル基を示す。Ｃ１〜６アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−へキシル基の直鎖状のアルキル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｓ−ブチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、３−メチルブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、イソへキシル基、３−エチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基等の分岐鎖状のアルキル基が挙げられる。
【００３１】
本明細書中、「Ｃ１〜４アルキル基」とは、炭素数１〜４の直鎖状のアルキル基又は炭素数３〜４の分岐鎖状のアルキル基を示す。Ｃ１〜４アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基の直鎖状のアルキル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｓ−ブチル基等の分岐鎖状のアルキル基が挙げられる。
【００３２】
本明細書中、「Ｃ２〜６アルケニル基」とは、炭素数２〜６の直鎖状のアルケニル基又は炭素数３〜６の分岐鎖状のアルケニル基を示す。Ｃ２〜６アルケニル基の例としては、エテニル基、ｎ−プロペニル基、ｎ−ブテニル基、ｎ−ペンテニル基、ｎ−へキセニル基の直鎖状のアルケニル基、イソプロペニル基、イソブテニル基、ｓ−ブテニル基、イソペンテニル基、１−エチルプロペニル基、３−メチルブテニル基、２，２−ジメチルプロペニル基等の分岐鎖状のアルケニル基が挙げられる。
【００３３】
本明細書中、「Ｃ２〜６アルキニル基」とは、炭素数２〜６の直鎖状のアルキニル基又は炭素数３〜６の分岐鎖状のアルキニル基を示す。Ｃ２〜６アルキニル基の例としては、エチニル基、ｎ−プロピニル基、ｎ−ブチニル基、ｎ−ペンチニル基、ｎ−へキシニル基の直鎖状のアルキニル基、イソブチニル基、ｓ−ブチニル基、イソペンチニル基、１−エチルプロピニル基、３−メチルブチニル基、２，２−ジメチルプロピニル基、イソへキシニル基等の分岐鎖状のアルキニル基が挙げられる。
【００３４】
本明細書中、「Ｃ１〜３フッ化アルキル基」としては、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、フルオロプロピル、ジフルオロプロピル、トリフルオロプロピル、ヘキサフルオロプロピル基等が挙げられる。
【００３５】
本明細書中、「Ｃ１〜６アルコキシ基」とは、炭素数１〜６の直鎖状のアルキルオキシ基又は炭素数３〜６の分岐鎖状のアルキルオキシ基を示す。Ｃ１〜６アルコキシ基の例としては、メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【００３６】
本明細書中、「Ｃ１〜４アルコキシ基」としては、メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ基等が挙げられる。
【００３７】
本明細書中、「Ｃ１〜６アルキルチオ基」は、炭素数１〜６の直鎖状のアルキルチオ基又は炭素数３〜６の分岐鎖状のアルキルチオ基を示す。Ｃ１〜６アルキルチオ基の例としては、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオ基等が挙げられる。
【００３８】
本明細書中、ハロゲン原子とは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を示す。
【００３９】
本明細書中、「Ｃ１〜３フッ化アルコキシ基」としては、フルオロメチルオキシ、ジフルオロメチルオキシ、トリフルオロメチルオキシ、フルオロエチルオキシ、ジフルオロエチルオキシ、トリフルオロエチルオキシ、フルオロプロピルオキシ、ジフルオロプロピルオキシ、トリフルオロプロピルオキシ、ヘキサフルオロプロピルオキシ基等が挙げられる。
【００４０】
本明細書中、「Ｃ１〜３アルキレンジオキシ基」とは、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ又はプロピレンジオキシ基を示す。
【００４１】
本明細書中、「Ｃ３〜５アルキレン基」とは、トリメチレン、テトラメチレン又はペンタメチレン基を示す。
【００４２】
本明細書中、「治療又は予防薬」とは、「治療薬」及び「予防薬」の少なくとも一つを意味し、治療薬かつ予防薬である薬剤も含む。
【００４３】
以下、一般式（Ｉ）で表される化合物の好ましい態様を示す。
【００４４】
Ｘとしては、ＣＨ又はＮが好ましく、ＣＨがより好ましい。
【００４５】
Ｙとしては、カルボキシル基又はＣＯＲ４０が好ましく、カルボキシル基がより好ましい。
【００４６】
Ｒ１としては、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基が好ましく、Ｃ１〜１２アルキル基がより好ましく、Ｃ２〜１２アルキル基がさらに好ましく、Ｃ４〜１０アルキル基がいっそう好ましく、Ｃ６〜１０アルキル基が特に好ましい。
【００４７】
Ｒ２としては水素原子、Ｃ１〜６アルキル基及びＣ１〜６アルコキシ基が好ましく、水素原子がより好ましい。
【００４８】
Ｒ３としては水素原子、Ｃ１〜６アルキル基及びＣ１〜６アルコキシ基が好ましく、Ｃ１〜４アルキル基及びＣ１〜４アルコキシ基がより好ましい。
【００４９】
また、Ｒ２とＲ３が一緒になってＣ１〜３アルキレンジオキシ基を形成していてもよい。
【００５０】
一般式（Ｉ）で表される化合物において、ＸがＣＨであり、Ｒ１がＣ４〜１０アルキル基であり、Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３がＣ１〜４アルキル基又はＣ１〜４アルコキシ基である化合物が好ましい。
【００５１】
一般式（ＩＡ）で表される化合物の好ましい態様を示す。
【００５２】
ＸＡとしては、ＣＨ又はＮが好ましく、ＣＨがより好ましい。
【００５３】
Ｒ１Ａとしては、Ｃ１〜１２アルキル基が好ましく、Ｃ６〜１０アルキル基がより好ましい。
【００５４】
Ｒ２Ａ及びＲ３Ａとしては、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基及びＣ１〜６アルコキシ基が好ましく、Ｃ１〜４アルキル基及びＣ１〜４アルコキシ基がより好ましい。
【００５５】
また、Ｒ２ＡとＲ３Ａが一緒になってＣ３〜５アルキレン基又はＣ１〜３アルキレンジオキシ基を形成していてもよい。
【００５６】
本発明で使用される一般式（Ｉ）で表される化合物において、具体的には、
化合物１：１，４−ジヒドロ−１−メチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物２：１，４−ジヒドロ−１−エチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物３：１，４−ジヒドロ−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物４：１，４−ジヒドロ−１−ブチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物５：１，４−ジヒドロ−１−ペンチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物６：１，４−ジヒドロ−１−ヘキシル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物７：１，４−ジヒドロ−１−ヘプチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物８：１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物９：１，４−ジヒドロ−１−シクロプロピルメチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１０：１，４−ジヒドロ−１−シクロヘキシルメチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１１：１，４−ジヒドロ−１−ベンジル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１２：１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１３：１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１４：１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１５：１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１６：１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１７：１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１８：１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１９：１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物２０：５−エチル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸（オキソリン酸）、及び
化合物２９：５−デシル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸が好ましく、
化合物２：１，４−ジヒドロ−１−エチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物４：１，４−ジヒドロ−１−ブチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物８：１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１３：１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１５：１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１７：１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１９：１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物２０：５−エチル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸（オキソリン酸）、及び
化合物２９：５−デシル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸がより好ましく、
化合物１３：１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１５：１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１７：１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１９：１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物２０：５−エチル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸（オキソリン酸）及び
化合物２９：５−デシル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸がさらに好ましい。
【００５７】
一般式（Ｉ）及び（ＩＡ）で表される化合物には、その薬学的に許容される塩が含まれる。具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、アルミニウム塩等の無機塩基や、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リシン、オルニチン等の有機塩基との塩基付加塩等が挙げられる。
【００５８】
一般式（Ｉ）及び（ＩＡ）で表される化合物並びにその薬学的に許容される塩には、溶媒和物（水和物を含む）及び結晶多形が存在することもあるが、単独の結晶形であっても、複数の結晶形の混合物であってもよく、いずれもが包含される。また、非晶質形であってもよい。
【００５９】
一般式（Ｉ）及び（ＩＡ）で表される化合物又はそれらの薬学的に許容される塩は、それ自身公知であるか、その基本骨格又はその置換基の種類に基づく特徴を利用し、置換基導入や官能基変換に関する種々の公知の合成法を適用して製造することができる。例えば、１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（ＤＯＣＡ、CAS番号：13721-01-2）を出発原料として、公知の方法で置換基導入反応を行うか、又は特許文献２、非特許文献１１、１２に記載の方法に準じて製造することができる。例えば、オキソリン酸はCAS番号：14698-29-4が付された公知化合物である。
【００６０】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、以下の反応工程式１または以下の実施例に従って製造することができるが、これらに限定されない。また、一般式（ＩＡ）で表される化合物も、同様の方法によって製造することができる。
【００６１】
【化３】
2019082940.tif 000005
【００６２】
（式中、Ｙ１はＹのうちＣＯＯＨ以外の基を示し、Ｈａｌはハロゲン原子（ヨウ素、塩素、臭素）を示し、Ｒ３０−１は、前記Ｒ３０のうち水酸基以外のものを示し、その他の記号は前記と同じ意味を表す。）
【００６３】
ステップ（１）
一般式（Ｉ）で示される化合物のうち、ＹがＣＯＯＨ基以外の基である化合物、すなわち一般式（Ｉ−１）で示される化合物は、一般式（ＩＩ）で表される化合物を一般式（ＩＩＩ）で表される化合物との反応であるＮ−アルキル化反応によって製造することができる。この反応は、アルカリ剤または強塩基存在下で、溶媒の存在下または非存在下で行うことができる。
式（ＩＩＩ）で表される化合物はハロゲン化炭化水素であり、塩化メタン、臭化メタン、ヨウ化メタン、臭化エタン、塩化ｎ−プロパン、臭化ｎ−プロパン、臭化イソプロパン、臭化ｎ−ブタン、臭化ｔ−ブタン、塩化ｎ−ヘキサン、臭化ｎ−ヘキサン、ヨウ化ｎ−ヘキサン、臭化シクロヘキサン、臭化ｎ−オクタン、臭化ｎ−ドデカン、ヨウ化ｎ−ドデカン、臭化シクロへキシル、臭化ベンジル、臭化アリル等の公知化合物を用いることができる。
アルカリ剤としては、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機アルカリ化合物等が挙げられる。
強塩基としては、水素化ナトリウム、水素化カリウム等が挙げられる。
溶媒としては、用いるアルキルハライドやアルカリ化剤によって異なるが、一般に有機合成に用いられる溶剤、例えば、メタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族系溶媒、クロロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、Ｎ−メチルピロリドンなど、水、又はこれらの混合物を使用することができる。
なお、一般式（ＩＩ）で示される化合物のＹ１基をＣＯＯＨ基に置き換えた化合物を原料としても、ステップ（１）の反応によりＮ−アルキル化とエステル化が同時に進行して、一般式（Ｉ−１）で示される化合物を製造することができる。
【００６４】
ステップ（２）
一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、Ｙがカルボキシル基である化合物（一般式（Ｉ−２）で表される化合物）は、ステップ（１）によって得られた一般式（Ｉ−１）で表される化合物をエステル基の脱保護反応に付すことによって得ることができる。脱保護反応は、Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora W Green(John Wiley & Sons) 等に記載の方法に従って行うことができる。たとえば、保護基に応じて酸（例えば、塩酸、トリフルオロ酢酸）または塩基（例えば、水酸化ナトリウム等）の存在下に加水分解するか、または接触還元（例えば、１０％パラジウム−炭素触媒存在下）することによって実施することができる。この反応は、室温〜還流温度で１〜２４時間行うことができる。
溶媒としては、一般に有機合成に用いられる溶剤、例えば、メタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族系溶媒、クロロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、N−メチルピロリドンなど、水、又はこれらの混合物を使用することができる。
【００６５】
ステップ（３）
一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、ＹがＣＯＯＲ４０（Ｒ４０は前記と同じ意味を示す。）、ＣＯＮＲ４１Ｒ４２（Ｒ４１およびＲ４２は前記と同じ意味を示す。）である化合物、すなわち一般式（Ｉ−３）で表される化合物は、上記ステップ（２）によって製造した一般式（Ｉ−２）で表される化合物をエステル化またはアミド化反応に付すことによって製造することができる。
エステル化反応およびアミド化反応は、例えば、
（Ａ）酸ハライドを用いる方法、
（Ｂ）混合酸無水物を用いる方法、
（Ｃ）縮合剤を用いる方法などによって行うことができる。
【００６６】
これらの方法を具体的に説明すると、
（Ａ）酸ハライドを用いる方法は、例えば、カルボン酸を有機溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等）中または無溶媒で、酸ハライド化剤（オキザリルクロリド、チオニルクロリド等）と約−２０℃〜還流温度で反応させ、得られた酸ハライドを塩基（ピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアニリン、ジメチルアミノピリジン、ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、アルコールと有機溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等）中、約０〜４０℃の温度で反応させることにより行なわれる。また、有機溶媒（ジオキサン、テトラヒドロフラン等）中、アルカリ水溶液（重曹水または水酸化ナトリウム溶液等）を用いて、酸ハライドと約０〜４０℃で反応させることにより行なうこともできる。
（Ｂ）混合酸無水物を用いる方法は、例えば、カルボン酸を有機溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等）中または無溶媒で、塩基（ピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアニリン、ジメチルアミノピリジン、ジイソプロピルエチルアミン等）の存在下、酸ハライド（ピバロイルクロリド、トシルクロリド、メシルクロリド等）、または酸誘導体（クロロギ酸エチル、クロロギ酸イソブチル等）と、約０〜４０℃で反応させ、得られた混合酸無水物を有機溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等）中、アルコールと約０〜４０℃で反応させることにより行なわれる。
（Ｃ）縮合剤を用いる方法は、例えば、カルボン酸とアルコールを、有機溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等）中、または無溶媒で、塩基（ピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアニリン、ジメチルアミノピリジン等）の存在下または非存在下、縮合剤［１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド（ＥＤＣ）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨウ素、１−プロピルホスホン酸環状無水物（ＰＰＡ）等］を用い、１−ヒドロキシベンズトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いるか用いないで、約０〜４０℃で反応させることにより行なわれる。
これら（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の反応は、いずれも不活性ガス（例えば、アルゴン、窒素等）雰囲気下、無水条件で行なうことが望ましい。
【００６７】
出発原料として用いる一般式（ＩＩ）で表される化合物は公知であるか、公知の方法、例えば、「Comprehensive Organic Transformations:A Guide to Functional Group Preparations 2nd Edition (Richard C. Larock, John Wiley & Sons Inc, 1999)」に記載された方法により容易に製造することができる。例えば、以下の反応工程式２で示される方法によって製造することができる。
【００６８】
【化４】
2019082940.tif 000006
【００６９】
（式中、Ｒｐはエステル保護基（アルキル基又はベンジル基）を表し、その他の記号は前記と同じ意味を表す。）
【００７０】
ステップ（４）
一般式（ＩＩＩ）で表される化合物と一般式（ＩＶ）で表される化合物（メチレンマロネートエステル）との反応は、無溶媒または溶媒存在下で行うことができる。溶媒としては、水または有機溶媒（例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル系溶媒；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒；メタノール、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール系溶媒；ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ヘキサメチルリン酸トリアミド、アセトニトリル等の極性溶媒を１種単独又は２種以上の混合物）が使用される。上記反応は、通常室温〜２００℃、好ましくは室温〜１５０℃の温度条件下で、１〜３０時間の任意の時間行うことができる。
【００７１】
ステップ（５）
一般式（Ｖ）で表される化合物を出発化合物とする環化反応は、特許文献１に記載されるように、例えばジフェニルエーテルのような溶媒中で加熱することにより実施できる。また、溶媒の不存在下でも一般式（Ｖ）で表される化合物を加熱することによって実施することもできる。かかる反応は、１５０〜３００℃で５分間〜２時間行われる。
【００７２】
一般式（ＩＩＩ）および一般式（ＩＶ）で表される化合物は公知であるか、公知の化合物を原料として公知の方法によって製造することができる。
【００７３】
一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩は、リアノジン受容体、特にリアノジン１受容体（ＲｙＲ１）阻害作用を有し、動物、例えば哺乳動物、特にヒトにおける骨格筋疾患の治療に適用することができる。一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩は、特に悪性高熱症やＣＣＤの治療に有用である。
【００７４】
一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を医薬として用いる場合、経口又は非経口的に投与することができる。一般式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される担体と組み合わせることによって薬学組成物とすることができる。薬学的に許容される担体として、賦形剤、結合剤、緩衝剤、増粘剤、安定化剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等の公知のものを使用することができ、通常の方法により製剤化することができる。
【００７５】
経口投与用製剤としては、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げられる。
【００７６】
この経口投与用製剤は製剤分野において通常用いられる添加剤を配合し、公知の方法に従って製造することができる。このような添加剤としては、例えば乳糖、マンニトール、無水リン酸水素カルシウム等の賦形剤；ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤；でんぷん、カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤等が挙げられる。非経口的には、注射剤、直腸投与製剤、局所投与剤等として投与することができ、なかでも注射剤が好ましい。
【００７７】
注射剤としては、例えば無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。これらの注射剤は、例えば本発明化合物又はその薬学的に許容しうる塩を日局注射用水に溶解又は懸濁することにより製造される。必要により塩化ナトリウム等の等張化剤；リン酸二水素ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム等の緩衝剤；溶解補助剤等を配合してもよい。また、用時溶解型（粉末充填、凍結乾燥）の注射剤とすることができ、この場合、マンニトール、乳糖等の賦形剤を添加して、通常の方法で製造することができる。
【００７８】
直腸投与製剤としては坐剤等が挙げられる。坐剤は例えば本発明化合物又はその薬学的に許容しうる塩をカカオ脂、マクロゴール等の基剤に溶解又は懸濁した後、鋳型に注いで成形して製造される。また、液又はクリームを注入用の容器に入れ、直腸投与製剤とすることもできる。
【００７９】
局所投与製剤は液剤、点眼剤、クリーム、軟膏、ゲル製剤、スプレー剤、粉剤等が挙げられる。液剤は、本発明化合物又はその薬学的に許容しうる塩を水に加え、安定化剤、溶解剤、増粘剤、分散剤、懸濁化剤等を必要に応じて加えて製造することができる。この増粘剤としては、ゼラチン、ヒアルロン酸ナトリウム、高分子デキストラン、アルギン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム等を用いることができる。点眼剤は、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤のほかに防腐剤を加えて製造することができる。クリーム及び軟膏は、水性又は油性の基剤、例えば水、流動パラフィン、植物油（ピーナッツ油、ひまし油等）、マクロゴール等を用いて製造することができる。ゲル製剤は、公知の方法により、ゼラチン、ペクチン、カラゲナン、寒天、トラガント、アルギン酸塩、セルロースエーテル（メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース等）、ペクチン誘導体、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリビニルアルコール及びポリビニルピロリドン等を用いて製造することができる。スプレー剤は本発明化合物又はその薬学的に許容しうる塩を水等に溶解又は懸濁した後、スプレー容器に入れて製造することができる。粉剤とする場合は、本発明化合物又はその薬学的に許容しうる塩をそのまま使用することもできるが、適当な賦形剤と混合して製造することができる。
【００８０】
本発明化合物の投与量は対象とする疾患や症状、投与対象の年齢、体重、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。通常、経口投与の場合、成人（体重約６０ｋｇ）１日当たりの本発明化合物の投与量は、０．０１〜１００ｍｇ、好ましくは０．０１〜３０ｍｇ、さらに好ましくは０．１〜１０ｍｇであり、これを１回で、あるいは２〜４回に分けて投与する。また、静脈内投与される場合は、通常、成人１日の投与量は体重１ｋｇあたり０．０３〜３０００μｇ、好ましくは０．０３〜３００μｇ、より好ましくは０．０３〜３０μｇであり、１日１回〜複数回に分けて投与する。
【００８１】
［実施例］
以下、本発明について実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００８２】
［試験化合物の合成］
参考例１
１，４−ジヒドロ−１−メチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸メチル
【００８３】
【化５】
2019082940.tif 000007
【００８４】
３０ｍＬナス型フラスコ中で、１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（２００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ)およびヨウ化メチル（４５０ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ)を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解させ、さらに炭酸セシウム（１．０３ｇ）を加えて、混合物を５０℃で攪拌した。６時間後、反応液にクロロホルムおよび水を加えて分液した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、標題化合物を無色液体として得た（定量的）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 8.56 (dd, J = 1.5, 8.1 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.73 (ddd, J = 8.5, 7.0, 1.6 Hz, 1 H), 7.49 (ddd, J = 7.2, 8.0, 0.9 Hz, 1 H), 7.45 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.91 (s, 3 H).
【００８５】
合成例１
１，４−ジヒドロ−１−メチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１）
【００８６】
【化６】
2019082940.tif 000008
【００８７】
３０ｍＬナス型フラスコ中で、参考例１で製造した化合物（０．３７ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍＬ）に溶解させた。そこに１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を滴下し、混合物を室温下で攪拌した。３時間後、反応液に1Ｍ塩酸を加え、析出した白色固体を吸引ろ過によって回収した。得られた固体をｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒から再結晶し、標題化合物を無色針状晶として得た（収率：９６％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ8.56 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.73 (ddd, J = 8.5, 7.0, 1.5 Hz, 1 H), 7.49 (ddd, J = 8.0, 7.2, 0.9 Hz, 1 H), 7.45 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.91 (s, 3 H).
【００８８】
合成例１（１）〜合成例１（１１）
ヨウ化メチルの代わりに相当するヨウ化アルキル化合物を用いて、参考例１→合成例１で示される方法と同様の方法で、以下の化合物を製造した。
【００８９】
合成例１（１）
１，４−ジヒドロ−１−エチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物２）
【００９０】
【化７】
2019082940.tif 000009
【００９１】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3):δ 15.0 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.54 (dd, J= 8.2, 1.5 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.8, 7.2, 1.6 Hz, 1 H), 7.60 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.62 (ddd, J = 8.1, 7.2, 0.9 Hz, 1 H), 4.41 (q, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.58 (t, J = 7.5 Hz, 3 H).
合成例１（２）
１，４−ジヒドロ−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３）
【００９２】
【化８】
2019082940.tif 000010
【００９３】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ15.0 (s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 8.58 (dd, J= 8.2, 1.5 Hz, 1 H), 7.86 (ddd, J = 8.7, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.60 (ddd, J = 8.1, 7.2, 0.9 Hz, 1 H), 4.31 (t, J = 7.4 Hz, 2 H), 2.00 (sex, J = 7.4 Hz, 2 H), 1.07 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例１（３）
１，４−ジヒドロ−１−ブチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物４）
【００９４】
【化９】
2019082940.tif 000011
【００９５】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ14.96 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.56 (dd, J= 8.1, 1.5 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.7, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.59 (ddd, J = 8.1, 7.3, 0.2 Hz, 1 H), 4.33 (m, 2 H), 1.92 (t, J= 7.6 Hz, 2 H), 1.46 (sex, J = 7.56 Hz, 2 H), 1.01 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例１（４）
１，４−ジヒドロ−１−ペンチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物５）
【００９６】
【化１０】
2019082940.tif 000012
【００９７】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 14.97 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.57 (dd, J = 8.1, 1.5, Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.7, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.60 (ddd, J = 8.1, 7.2, 0.7 Hz, 2 H), 4.31 (t, J = 7.6 Hz, 2 H), 1.94 (quin, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.40 (m, 4 H), 0.93 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
合成例１（５）
１，４−ジヒドロ−１−ヘキシル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物６）
【００９８】
【化１１】
2019082940.tif 000013
【００９９】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ14.95 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.58 (dd, J = 8.1, 1.4 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J= 8.7, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62 (d, J= 8.7 Hz, 2 H), 7.60 (td, J = 7.8, 0.6, Hz, 2 H), 4.31 (t, J = 7.6 Hz, 2 H), 1.94 (quin, J= 7.5 Hz, 2 H), 1.43 (m, 2 H), 1.34 (m, 4 H), 0.90 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
合成例１（６）
１，４−ジヒドロ−１−ヘプチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物７）
【０１００】
【化１２】
2019082940.tif 000014
【０１０１】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ14.96 (s, 1 H) 8.76 (s, 1 H), 8.57 (dd, J= 8.1, 1.4 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.7, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.60 (ddd, J = 7.9, 7.2, 0.7 Hz, 2 H), 4.31 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.94 (quin, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.39 (m, 2 H), 1.29 (m, 6 H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 3 H).
合成例１（７）
１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物８）
【０１０２】
【化１３】
2019082940.tif 000015
【０１０３】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 14.97 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.58 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.7, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.60 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 4.31 (t, J = 7.6 Hz, 2 H), 1.94 (quin, J = 7.6 Hz, 2 H), 1.23-1.45 (m, 10 H), 0.88 (t, J = 7.5 Hz, 3 H).
合成例１（８）
１，４−ジヒドロ−１−シクロプロピルメチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物９）
【０１０４】
【化１４】
2019082940.tif 000016
【０１０５】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ14.99 (s, 1 H), 8.85 (s, 1 H), 8.58 (dd, J= 8.1, 1.5 Hz, 1 H), 7.86 (ddd, J = 8.6, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.74 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.61 (ddd, J = 8.0, 7.2, 0.8 Hz, 1 H), 4.18 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.41 (m, 1 H), 0.81 (m, 2 H), 0.52 (m, 2 H).
合成例１（９）
１，４−ジヒドロ−１−シクロヘキシルメチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１０）
【０１０６】
【化１５】
2019082940.tif 000017
【０１０７】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 14.96 (s, 1 H), 8.68 (s, 1 H), 8.58 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.6, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62-7.59 (m, 2 H), 4.13 (d, J =7.4 Hz, 2 H), 1.94 (m, 1 H), 1.80-1.60 (m, 5 H),・1.25-1.06 (m, 5 H).
合成例１（１０）
１，４−ジヒドロ−１−ベンジル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１１）
【０１０８】
【化１６】
2019082940.tif 000018
【０１０９】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ14.89 (s, 1 H), 8.91 (s, 1 H), 8.57 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1 H), 7.72 (ddd, J = 8.6, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.55 (1 H, ddd, J = 8.3, 7.4, 0. 7 Hz), 7.53 (d, J = 8.61 Hz, 1 H), 7.40-7.35 (m, 5 H), 7.17 (m, 2 H), 5.53 (s, 2 H).
合成例１（１１）
１−シクロへキシルメチル−１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３５）
【０１１０】
【化１７】
2019082940.tif 000019
【０１１１】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 14.96 (s, 1 H), 8.68 (s, 1 H), 8.58 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1 H), 7.85 (ddd, J = 8.6, 7.1, 1.6 Hz, 1 H), 7.62-7.59 (m, 2 H), 4.13 (d, J =7.4 Hz, 2 H), 1.94 (m, 1 H), 1.80-1.60 (m, 5 H), 1.25-1.06 (m, 5 H).
参考例２
ｐ−トルイジノメチレンマロン酸ジエチル
【０１１２】
【化１８】
2019082940.tif 000020
【０１１３】
３０ｍＬナス型フラスコ中で、ｐ−トルイジン（１．７４ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解させた。混合物を攪拌しながらエトキシメチレンマロン酸ジエチル（４．０ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温下で１８時間攪拌した。エタノールを留去後、残渣を酢酸エチルと水で分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、標題化合物を無色液体として得た（収率：９０％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 10.98 (d, J = 13.4 Hz, 1 H), 8.50 (d, J = 13.8 Hz, 1 H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 4.30 (q, J = 7.4 Hz, 2 H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.37 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 1.32 (t, J = 7.12 Hz, 3 H).
参考例３
１，４−ジヒドロ−６−メチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸エチル
【０１１４】
【化１９】
2019082940.tif 000021
【０１１５】
２００ｍＬ二口フラスコ中で、ジフェニルエーテル（５０ｍＬ）を２２０℃に加温後、参考例２で製造した化合物（６．４ｍｍｏｌ）のジフェニルエーテル（１０ｍｌ）溶液を３０分間かけて滴下し、２２０℃で１０時間攪拌した。反応液を室温に戻した後、ジエチルエーテルおよびｎ−ヘキサンを加えて固体を析出させた。析出した固体を吸引ろ過によって回収し、ジエチルエーテルで洗浄し、化合物（Ｃ）を乳白色固体として得た（収率：４０％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 12.24 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.52 (s, 2 H), 4.21 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.42 (s, 3 H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
参考例４
１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸エチル
【０１１６】
【化２０】
2019082940.tif 000022
【０１１７】
３０ｍＬ二口フラスコ中で、ｎ−ヘキサンで洗浄した水素化ナトリウム（０．８６ｍｍｏｌ）に乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬを加えた。氷冷下、参考例３で製造した化合物（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）溶液を滴下し、さらにヨウ化プロピル（０．８６ｍｍｏｌ)を滴下した。５５℃で９時間攪拌後、室温に戻し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止させた。酢酸エチルおよび水を加えて分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をオープンカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、標題化合物を無色液体として得た（収率：７２％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ8.45 (s, 1 H), 8.36 (d, J = 1.0 Hz, 1 H), 7.50 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1 H), 7.35 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 4.30 (t, J = 6.8 Hz, 2 H), 4.14 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 2.48 (s, 3 H), 1.94 (sex, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.83 (sex, J = 7.2 Hz, 3 H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3 H), 1.03 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例２
１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１２）
【０１１８】
【化２１】
2019082940.tif 000023
【０１１９】
３０ｍＬナス型フラスコ中で、化合物参考例４で製造した化合物（０．３２ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍＬ）に溶解させた。そこに１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を滴下し、室温下で攪拌した。３時間後、反応液に１Ｍ塩酸水を加え、析出した白色固体を吸引ろ過によって回収した。得られた固体をｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒から再結晶し、標題化合物を無色針状晶として得た（収率：７４％）。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ15.09 (s, 1 H) 8.73 (s, 1 H), 8.37 (d, J= 0.9 Hz, 1 H), 7.66 (dd, J = 8.8, 2.1 Hz, 1 H), 7.53 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 7.4 Hz, 2 H), 2.55 (s, 3 H), 1.99 (sex, J = 7.4 Hz, 2 H), 1.05 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
【０１２０】
合成例２（１）〜合成例２（２８）
参考例２（必要に応じてｐ−トルイジンの代わりに相当する化合物を使用した）→参考例３→参考例４（必要に応じてヨウ化エチルの代わりに相当するヨウ化アルキルを使用した）→合成例２で示される方法と同様の方法で、以下の化合物を製造した。
【０１２１】
合成例２（１）
１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１３）
【０１２２】
【化２２】
2019082940.tif 000024
【０１２３】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ15.10 (s, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 8.37 (d, J= 0.9 Hz, 1 H), 7.67 (q, J = 3.6 Hz, 1 H), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 4.30 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2.55 (s, 3 H), 1.93 (quin, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.44-1.26 (m, 10 H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
合成例２（２）
１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１４）
【０１２４】
【化２３】
2019082940.tif 000025
【０１２５】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 15.08 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.45 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.42 (br d, J= 8.3 Hz, 1 H), 7.37 (br s, 1 H), 4.27 (t, J= 7.4 Hz, 2 H), 2.61 (s, 3 H), 1.99 (sex, J= 7.4 Hz, 2 H), 1.07 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例２（３）
１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１５）
【０１２６】
【化２４】
2019082940.tif 000026
【０１２７】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ15.09 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.45 (d, J= 8.3 Hz, 1 H), 7.42 (br d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.37 (br s, 1 H), 4.29 (t, J= 7.5 Hz, 2 H), 2.61 (s, 3 H), 1.93 (quin,J = 7.5 Hz, 2 H), 1.45-1.23 (m, 10 H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3 H).
合成例２（４）
１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１６）
【０１２８】
【化２５】
2019082940.tif 000027
【０１２９】
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)：δ 15.42 (s, 1 H), 8.98 (s, 1 H), 8.03 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.75 (d, J = 3.0 Hz, 1 H), 7.57 (dd, J = 9.4, 3.0 Hz, 1 H), 4.53 (t, J=7.30 Hz, 2 H), 3.92 (s, 3 H), 1.81 (sex, J = 7.4 Hz, 2 H),・・ 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例２（５）
１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１７）
【０１３０】
【化２６】
2019082940.tif 000028
【０１３１】
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)：δ 15.42 (s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 8.02 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 7.75 (d, J = 3.0 Hz, 1 H), 7.58 (dd, J = 3.1, 9.4 Hz, 1 H), 4.56 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 3.92 (s, 3 H), 1.77 (quin, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.34-1.18 (m, 10 H), 0.83 (t, J = 6.90 Hz, 3 H).
合成例２（６）
１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１８）
【０１３２】
【化２７】
2019082940.tif 000029
【０１３３】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ15.15 (s, 1 H), 8.70 (s, 1 H), 8.50 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 7.18 (dd, J = 9.1, 2.0 Hz, 1 H ), 6.93 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 4.22 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 3.99 (s, 3 H), 1.99 (sex, J = 7.3 Hz, 2 H), 1.06 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例２（７）
１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物１９）
【０１３４】
【化２８】
2019082940.tif 000030
【０１３５】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)：δ 15.16 (s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.50 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 7.18 (dd, J = 9.1, 2.1 Hz, 1 H), 6.93 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 4.24 (t, J = 7.48 Hz, 2 H), 3.99 (s, 3 H), 1.93 (quin, J = 7.4 Hz, 2 H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
合成例２（８）
１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物２１）
【０１３６】
【化２９】
2019082940.tif 000031
【０１３７】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.10 (s, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 8.37 (d, J = 0.9 Hz, 1 H), 7.67 (q, J = 3.6 Hz, 1 H), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 4.30 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2.55 (s, 3 H), 1.93 (quin, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.44-1.26 (m, 10 H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
合成例２（９）
１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−プロピル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物２２）
【０１３８】
【化３０】
2019082940.tif 000032
【０１３９】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.08 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.45 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.42 (br d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.37 (br s, 1 H), 4.27 (t, J = 7.4 Hz, 2 H), 2.61 (s, 3 H), 1.99 (sex, J = 7.4 Hz, 2 H), 1.07 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例２（１０）
１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物２３）
【０１４０】
【化３１】
2019082940.tif 000033
【０１４１】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.09 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.45 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.42 (br d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.37 (br s, 1 H), 4.29 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2.61 (s, 3 H), 1.93 (quin, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.45-1.23 (m, 10 H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3 H).
合成例２（１１）
１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物２４）
【０１４２】
【化３２】
2019082940.tif 000034
【０１４３】
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 15.42 (s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 8.02 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 7.75 (d, J = 3.0 Hz, 1 H), 7.58 (dd, J = 3.1, 9.4 Hz, 1 H), 4.56 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 3.92 (s, 3 H), 1.77 (quin, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.34-1.18 (m, 10 H), 0.83 (t, J = 6.90 Hz, 3 H).
合成例２（１２）
１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−４−オキソ−１−プロピルキノリン−３−カルボン酸（化合物２５）
【０１４４】
【化３３】
2019082940.tif 000035
【０１４５】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.15 (s, 1 H), 8.70 (s, 1 H), 8.50 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 7.18 (dd, J = 9.1, 2.0 Hz, 1 H ), 6.93 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 4.22 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 3.99 (s, 3 H), 1.99 (sext, J = 7.3 Hz, 2 H), 1.06 (t, J = 7.4 Hz, 3 H)
合成例２（１３）
１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物２６）
【０１４６】
【化３４】
2019082940.tif 000036
【０１４７】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.16 (s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.50 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 7.18 (dd, J = 9.1, 2.1 Hz, 1 H), 6.93 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 4.24 (t, J = 7.48 Hz, 2 H), 3.99 (s, 3 H), 1.93 (quin, J = 7.4 Hz, 2 H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
合成例２（１４）
１，４−ジヒドロ−１−プロピル−４−オキソ−７−トリフルオロメチルキノリン−３−カルボン酸（化合物２７）
【０１４８】
【化３５】
2019082940.tif 000037
【０１４９】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 14.5 (s, 1H), 8.83 (s, 1 H), 8.71 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 4.34 (t, J = 7.4 Hz, 2 H), 2.01 (sext, J = 7.4 Hz, 2 H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3 H).
合成例２（１５）
１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソ−７−トリフルオロメチルキノリン−３−カルボン酸（化合物２８）
【０１５０】
【化３６】
2019082940.tif 000038
【０１５１】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 14.5 (s, 1H), 8.82 (s, 1 H), 8.71 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.80 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 4.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.95 (quin, J = 7.3 Hz, 2 H), 1.28-1.46 (m, 10 H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3 H).
合成例２（１６）
５−デシル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸（化合物２９）
【０１５２】
【化３７】
2019082940.tif 000039
【０１５３】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) 9.21 (s, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.49 (s, 1 H), 6.18 (s, 2 H), 4.42 (t, J = 6.5 Hz, 2 H), 1.91 (quin, J= 6.5 Hz, 2 H), 1.48 (q, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.37-1.25 (m, 12 H), 0.87 (t, J= 5.2 Hz, 3 H).
合成例２（１７）
７−メトキシ−１−プロピル−１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸（化合物３０）
【０１５４】
【化３８】
2019082940.tif 000040
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 15.17 (s, 1 H), 9.09 (s, 1 H), 8.50 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.11 (d, J = 8.8, 1 H ), 4.53 (t, J = 6.8 Hz, 2 H), 4.05 (s, 3 H), 1.88 (sext, J = 7.2 Hz, 2 H), 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).
合成例２（１８）
７−メトキシ−１−オクチル−１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸（化合物３１）
【０１５５】
【化３９】
2019082940.tif 000041
【０１５６】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 15.17 (s, 1 H), 9.08 (s, 1 H), 8.55 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.11 (d, J = 8.8, 1 H ), 4.55 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 4.05 (s, 3 H), 1.84 (quin, J = 6.4 Hz, 2 H), 1.39-1.18 (m, 10 H), 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).
合成例２（１９）
１−デシル−７−メトキシ−１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸（化合物３２）
【０１５７】
【化４０】
2019082940.tif 000042
【０１５８】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.17 (s, 1 H), 9.08 (s, 1 H), 8.55 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.11 (d, J = 8.5, 1 H ), 4.55 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 4.05 (s, 3 H), 1.84 (quin, J = 7.0 Hz, 2 H), 1.38-1.15 (m, 14 H), 0.83 (t, J = 6.5 Hz, 3 H).
合成例２（２０）
１，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３３）
【０１５９】
【化４１】
2019082940.tif 000043
【０１６０】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 9.23 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 4.60 (t, J = 6.4 Hz, 2 H), 4.10 (s, 3 H), 4.02 (s, 3H), 1.89 (quin, J = 6.4 Hz, 2 H), 1.49 (quin, J= 6.8 Hz, 2 H), 1.35-1.20 (m, 8 H), 0.84 (t, J = 6.8 Hz, 3 H).
合成例２（２１）
１−デシル−１，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３４）
【０１６１】
【化４２】
2019082940.tif 000044
【０１６２】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 8.66 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 6.88 (s, 1 H), 4.27 (t, J = 14.8 Hz, 2 H), 4.05 (s, 3 H), 4.04 (s, 3H), 1.94 (quin, J = 7.4 Hz, 2 H), 1.43-1.22 (m, 14 H), 0.87 (t, J = 13.6 Hz, 3 H).
【０１６３】
合成例２（２２）
４−オキソ−１−プロピル−シクロペンタ［ｇ］キノリン−３−カルボン酸（化合物３５）
【０１６４】
【化４３】
2019082940.tif 000045
【０１６５】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.28 (br s, 1H), 8.68 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 4.26 (t, J = 7.0 Hz, 2 H), 3.12 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 3.06 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2.21 (quin, J = 7.0 Hz, 2 H), 1.92 (sext, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.04 (t, J = 7.5 Hz, 3 H).
合成例２（２３）
１−オクチル−４−オキソ−シクロペンタ［ｇ］キノリン−３−カルボン酸（化合物３６）
【０１６６】
【化４４】
2019082940.tif 000046
【０１６７】
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 15.3 (s, 1H), 8.68 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 7.42 (s, 1 H), 4.27 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 3.12 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.08 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.21 (quin, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.92 (quin, J = 7.4 Hz, 2 H), 1.25-1.41 (m, 10 H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3 H).
合成例２（２４）
１，４−ジヒドロ−１−プロピル−７−トリフルオロメチルオキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３７）
【０１６８】
【化４５】
2019082940.tif 000047
【０１６９】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 14.59 (s, 1H), 8.78 (s, 1 H), 8.62 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.44 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 4.26 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.99 (sext, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).
合成例２（２５）
１，４−ジヒドロ−１−プロピル−７−トリフルオロメチルオキシ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３８）
【０１７０】
【化４６】
2019082940.tif 000048
【０１７１】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 14.6 (s, 1H), 8.76 (s, 1 H), 8.62 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 7.43 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 4.26 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.92 (quin, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.28-1.44 (m, 10 H), 0.88 (t, J = 7.9 Hz, 3 H).
合成例２（２６）
１，４−ジヒドロ−８−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物３９）
【０１７２】
【化４７】
2019082940.tif 000049
【０１７３】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 8.62 (s, 1 H), 8.18 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1 H), 7.50 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.30 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1 H), 4.60 (t, J = 7.6 Hz, 2 H), 4.02 (s, 3 H), 1.84 (quin, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.32-1.26 (m, 10 H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3 H).合成例２（２７）
７，８−ジメトキシ−１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物４０）
【０１７４】
【化４８】
2019082940.tif 000050
【０１７５】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 8.61 (s, 1 H), 8.34 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.24 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 4.49 (t, J = 7.6 Hz, 2 H), 4.06 (s, 3 H), 3.93 (s, 3 H), 1.83 (quin, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.30-1.25 (m, 10 H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
合成例２（２８）
１，４−ジヒドロ−７−メチルチオ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物４１）
【０１７６】
【化４９】
2019082940.tif 000051
【０１７７】
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 8.68 (s, 1 H), 8.42 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.39 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1 H), 7.28 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 4.26 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 2.62 (s, 3 H), 1.92 (quin, J = 7.6 Hz, 2 H), 1.45-1.22 (m, 10 H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3 H).
【０１７８】
薬理試験１  ＲｙＲ１に対する阻害活性試験
本発明化合物について、以下の方法によりＲｙＲ１に対する阻害活性を試験した。試験方法は、非特許文献１０を参照して、疾患変異型（悪性高熱症、セントラルコア病）を発現させたＨＥＫ２９３細胞の小胞体内のＣａ２＋濃度（［Ｃａ２＋］ＥＲ）で行い、試験化合物による小胞体内Ｃａ２＋濃度の上昇度を測定した。
【０１７９】
（１）発現プラスミドの構築
ＲｙＲ１及びＲｙＲ２のｃＤＮＡはウサギ骨格筋及びマウス心筋からＰＣＲ法でクローニングして、Ｆｌｐ−Ｉｎ  Ｔ−ＲＥＸ用のハイグロマイシン耐性を有する発現ベクター（ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ）に組み込んだ。このベクターはテトラサイクリン誘導発現型（Ｔｅｔ-Ｏｎ）でドキシサイクリン存在下でＲｙＲを誘導発現する。Ｒ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒはネオマイシン耐性を有する発現ベクターであるｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ＥＲに組み込んだ。このベクターはＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒを恒常発現する。
【０１８０】
（２）ＨＥＫ２９３細胞
ＨＥＫ２９３細胞はＴｅｔ−Ｏｎ誘導型のシステムに対応したＦｌｐ−Ｉｎ  Ｔ−ＲＥＸ  ２９３細胞を用いた。細胞は３７℃でＣＯ2インキュベータ中で培養した。
【０１８１】
（３）ＨＥＫ２９３細胞へのＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒ（非特許文献１３記載）及び疾患変異型ＲｙＲ遺伝子の導入疾患変異型ＲｙＲ遺伝子はリポフェクション法によりＦｌｐ−Ｉｎ  Ｔ−ＲＥＸ  ２９３細胞に導入して、ハイグロマイシンを添加した培地で１０〜１４日間培養することで安定発現株を樹立した。この疾患変異型ＲｙＲ安定発現株にＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒ発現ベクターをリポフェクション法により導入して、Ｇ４１８を添加した培地で培養することで疾患変異型ＲｙＲ遺伝子とＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒを二重発現する安定発現株を樹立した。
【０１８２】
（４）ＨＥＫ２９３細胞へのＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒ及び野生型ＲｙＲ遺伝子の導入
野生型ＲｙＲ遺伝子はリポフェクション法によりＦｌｐ−Ｉｎ  Ｔ−ＲＥＸ  ２９３細胞に導入して、ハイグロマイシンを添加した培地で１０〜１４日間培養することで安定発現株を樹立した。この疾患変異型ＲｙＲ安定発現株にＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒ発現ベクターをリポフェクション法により導入して、Ｇ４１８を添加した培地で培養することで野生型ＲｙＲ遺伝子とＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒを二重発現する安定発現株を樹立した。
【０１８３】
（５）蛍光小胞体内Ｃａ２＋濃度の測定
疾患変異型ＲｙＲとＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒを発現する培養細胞、及び野生型ＲｙＲとＲ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒを発現する培養細胞をそれぞれ９６ウェルプレートに播種して、３７℃で２４時間培養した。ドキシサイクリンを添加した培地に交換してさらに２４時間培養してＲｙＲの発現を誘導した。測定前に培地をＫｒｅｂｓ溶液に交換した。蛍光測定はＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎで行った。Ｒ−ＣＥＰＩＡ１ｅｒは５６０ｎｍで励起して、６１０ｎｍの蛍光を取得した。蛍光は１０秒おきに３００秒間取得し、以下の試験化合物又は対照化合物を各種濃度で開始６０秒後に添加し、蛍光小胞体内Ｃａ２＋濃度の測定を行った。
【０１８４】
（６）被検化合物
試験に供した化合物は以下の通りである。
・本発明にかかる化合物
化合物２：１，４−ジヒドロ−１−エチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物４：１，４−ジヒドロ−１−ブチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物８：１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１３：１，４−ジヒドロ−６−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１５：１，４−ジヒドロ−７−メチル−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１７：１，４−ジヒドロ−６−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物１９：１，４−ジヒドロ−７−メトキシ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸、
化合物２０：５−エチル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸（オキソリン酸）、及び
化合物２９：５−オクチル−８−オキソ−［１，３］ジオキソロ［４，５−ｇ］キノリン−７−カルボン酸
【０１８５】
・対照化合物：１，４−ジヒドロ−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（ＤＯＣＡ）
【０１８６】
なお、図１〜６における（２）、（４）、（８）、（１３）、（１５）、（１７）、（１９）、（２０）及び（２９）は、上記化合物番号を示す。
【０１８７】
（７）結果
結果を図１〜４に示す。
図１はオキソリン酸（化合物２０）と、対照化合物であるＤＯＣＡのＲｙＲ１阻害活性の比較である。ＤＯＣＡに比べて、オキソリン酸はＲｙＲ１阻害活性が向上した。
図２は、ＤＯＣＡを対照化合物として、その窒素原子にアルキル基を置換することで、ＲｙＲ１阻害作用が向上したことを示す。
図３は、１，４−ジヒドロ−１−オクチル−４−オキソキノリン−３−カルボン酸（化合物８，Ｎ−Ｃ８）を対照化合物として、６位又は７位に置換基を有する化合物の活性を測定したところ、特に７位に置換基を有する化合物においてＲｙＲ１阻害活性が向上したことを示す。
図４は、悪性高熱症の治療薬として知られるダンドロレンに対して、化合物２９が優れたＲｙＲ１阻害活性を有することを示す。
【０１８８】
薬理試験２  リアノジン結合試験
本発明化合物について、リアノジン結合法により悪性高熱症変異ＲｙＲ１に対する阻害活性を試験した。試験方法は、非特許文献１０を参照して行い、対照群に対する化合物２９を添加した群のリアノジン結合の低下度を測定した。
【０１８９】
（１）ミクロゾームの調製
疾患変異型ＲｙＲ１を発現するＨＥＫ細胞を窒素ガス細胞破砕器で破砕した。低速遠心で核画分を除去した後、超遠心した。沈殿をバッファーで懸濁して超遠心後、再懸濁してミクロゾーム画分を得た。
【０１９０】
（２）リアノジン結合
ミクロゾームを種々のＣａ２＋濃度の反応液中でトリチウムラベルしたリアノジンと３７℃で２時間反応に付した。化合物２９は最終濃度１０μＭで添加した。反応液をポリエチレンイミン処理したガラスフィルターで濾過して、ＲｙＲ１と結合したリアノジンを分離した。
【０１９１】
（３）結果
結果を図５に示す。化合物２９は疾患変異型ＲｙＲ１のリアノジン結合を、特に低Ｃａ２＋濃度領域で低下させた。このことは、化合物２９がＲｙＲ１を抑制することを示す。
【０１９２】
薬理試験３  動物試験
本発明化合物について、以下の方法によりＲｙＲ１悪性高熱症変異導入マウスに対する治療効果を試験した。試験方法は、イソフルラン麻酔により生じるマウスの体温上昇の測定により行った。
【０１９３】
（１）ＲｙＲ１悪性高熱症変異導入マウスの作出
悪性高熱症患者で同定されたＲｙＲ１アミノ酸変異（Ａｒｇ２５０８Ｃｙｓ）をマウスに導入したノックインマウスを作製した。マウスＲｙＲ１の２５０９番目のアルギニン（Ａｒｇ）をシステイン（Ｃｙｓ）に置換するためのターゲッティングベクターをデザインし、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によりマウス受精卵にゲノム編集を行った。生まれたマウスをスクリーニングして目的変異が導入されたファウンダーマウスを取得し、これを野生型マウスと交配してＦ１ヘテロマウスを得た。
【０１９４】
（２）化合物２９の溶液の作製
化合物２９を０．１５Ｍ塩化ナトリウム水溶液、３ｍＭ水酸化ナトリウム水溶液で溶解して１ｍｇ／ｍＬ溶液を作製した。
【０１９５】
（３）イソフルラン麻酔試験
野生型または変異型のマウスを２％イソフルランで麻酔導入し、その後、１％イソフルランで維持した。マウス直腸温をデジタル温度計（立山科学工業、サーミスタ高精度温度データ収録装置Ｋ７３０）で連続的に測定し、５分ごとに記録した。化合物２９の溶液は試験１０分前に１０ｍｇ／ｋｇになるように腹腔内に投与した。
【０１９６】
（４）結果および考察
結果を図６に示す。野生型マウス（○）はイソフルラン麻酔後３０分間にわたって直腸温が徐々に上昇したが、死亡することはなかった。変異型マウス（●）は麻酔後１５分過ぎから直腸温が急上昇し、２６分から３３分の間に全身の筋拘縮を起こしてすべて死亡した（図中の＋印）。一方、化合物２９を前投与した変異型マウス（▽）は体温上昇が抑えられ、死亡することはなかった。この結果は、悪性高熱症モデルマウスに対する化合物（Ｘ）の著明な予防効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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