(57)【要約】本発明は、アクアポリン３の発現を促進する特定の組成物、及び、その使用を提供することを目的とする。本発明は、有効成分として、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むアクアポリン３発現促進用組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むアクアポリン３発現促進用組成物。
【請求項２】
前記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又は前記ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、ブドウ由来原料に含まれるものである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ブドウ由来原料は、ブドウの果皮、果実及び種子からなる群から選択される少なくとも１種の生原料、前記生原料の発酵物、これらの抽出物及びこれらの加工物からなる群から選択される少なくとも１種を含むものである請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマーは、下記式（１）で示される化合物及び／又は下記式（２）で示される化合物である請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【化１】
2019066031.tif 000015
【化２】
2019066031.tif 000016
【請求項５】
前記ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、下記式（３）で示される化合物及び／又は下記式（４）で示される化合物である請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【化３】
2019066031.tif 000017
【化４】
2019066031.tif 000018
【請求項６】
飲食品、化粧料、医薬品又は医薬部外品である請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
肌の潤いの改善、肌の水分補給、肌の水分保持、肌の保湿、肌の乾燥緩和、肌状態改善、肌のバリア機能を高める、肌荒れ予防、肌荒れ改善、肌機能保持、肌機能改善及び傷口の治癒促進からなる群より選択される１又は２以上の用途に用いられる請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の、アクアポリン３発現促進のための使用。
【請求項９】
ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の、アクアポリン３発現促進による肌の潤いを向上させるための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アクアポリン３発現促進用組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
女性の肌の悩み、美容に関する要望では、肌の保湿や潤いに関するものが多く、肌の潤いを向上させるための技術の研究が盛んにおこなわれている。【０００３】
このような肌の潤いを向上させ得るタンパク質としてアクアポリン（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ、ＡＱＰ）が知られている。
ＡＱＰは水を速く大量に通すチャネルとして１９９２年に発見されたタンパク質であり、ヒトでは１３種類（ＡＱＰ０−ＡＱＰ１２）の存在が確認されている。これらのＡＱＰは細胞や組織の種類に応じて特異的に分布する。ＡＱＰはヒトのほぼ全ての臓器に分布し、腎臓などの水輸送が盛んな臓器には特に多く、それぞれが協調して働き、尿の産生、消化液の分泌、乾燥からの保護、さらには細胞同士の結合を含む多彩な機能を担っている（非特許文献１）。【０００４】
皮膚は、表面から表皮、真皮及び皮下組織の３層構造をとっている。表皮は角層、顆粒層、有棘層、基底層に分かれており、角層は大気中への水分蒸散を防ぐ機能があり、また、外気や肌内部の水をとり込む能力とその水分を保持する能力がある。角層には水の供給源である血管が存在しないが、アクアポリン３（ＡＱＰ３）が細胞膜に発現して細胞間隙の水分子を取り込むことで水の通り道となって角質に水をあまねく行き渡らせることができる。実際、ＡＱＰ３を欠損させたマウスの皮膚では、野生型マウスの皮膚に比べ、角層水分量と皮膚の弾力性が顕著に低下することからも、肌の潤い維持にＡＱＰ３が重要な役割を果たしていると考えられている（非特許文献２）。また、肌荒れ等の創傷を負った場合の回復能にも大きな影響を及ぼしていることからもＡＱＰ３産生を増強することで、様々な皮膚トラブルを改善できると考えられてきた（非特許文献２）。【０００５】
皮膚上皮細胞においてはＡＱＰ３が発現しており、ＡＱＰ３の発現量が増加すると、皮膚組織の含水量が増加し、皮膚が若返って見える、皮膚弾力性が増し、創傷治癒能力が高まることが知られている（非特許文献３）。一方で、ＡＱＰ３の発現が欠損すると、皮膚組織の弾力性低下及び乾燥を招き、さらに傷の治癒が遅くなることが報告されている（非特許文献４）。
また、ＡＱＰ３は、グリセロールの輸送体としての機能も有し、角層のグリセロールを増やすことができると考えられている（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１３−８７０５８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】水とアクアポリンの生物学  ２００８年、佐々木誠  編集、中山書店
【非特許文献２】Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  Ａｑｕａｐｏｒｉｎ−３  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ．  Ｈａｒａ−Ｃｈｉｋｕｍａ  Ｍ．  ａｎｄ    Ｖｅｒｋｍａｎ  ＡＳ，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００８）  １２８：２１４５−２１５１
【非特許文献３】Ｈｙｄｒａｔｉｎｇ  ｓｋｉｎ  ｂｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｑｕａｐｏｒｉｎｓ．Ｄｕｍａｓ  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２００７）６：ｓ２０−４
【非特許文献４】Ａｑｕａｐｏｒｉｎ−３  ｆａｃｉｌｉｔｅｓ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ．Ｈａｒａ−Ｃｈｉｋｕｍａ  Ｍ．  ａｎｄ  Ｖｅｒｋｍａｎ  ＡＳ．，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．（２００８）８６：２２１−２３１
【非特許文献５】Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｑｕａｐｏｒｉｎｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ：  Ｉｓ  ａｑｕａｐｏｒｉｎ−３  ｊｕｓｔａ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ？  Ｂｏｕｒｙ−Ｊａｍｏｔ  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．（２００６）１７５８：１０３４−１０４２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
例えば、特許文献１には、アクアポリンの産生増強製剤が示されており、ブドウ葉等の植物の抽出物を有効成分として含有することが開示されている。しかし、アクアポリンの産生を増強する有効成分は具体的に特定されておらず、単に植物抽出物を有効成分とすることが開示されているのみである。
ここで、植物の抽出物には、様々な成分が含まれており、飲食品、化粧料、医薬品又は医薬部外品等に含有させるには、ターゲットとするアクアポリンの産生を増強する成分を特定することが望まれていた。【０００９】
本発明は、上記問題を解決するためになされたものであり、本発明の目的は、アクアポリン３の発現を促進する特定の組成物、及び、その使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは鋭意研究を遂行した結果、後述する特定のブドウ由来原料が、肌の潤いを向上させることができることを見出した。さらに、後述する特定のブドウ由来原料が、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させることができることを見出し、ブドウ由来原料に含まれる成分のなかでも、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及びガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体（オリゴメリックプロアントシアニジン（ＯＰＣ））が、特にアクアポリン３の発現量を増加させることができることを見出し、本発明を完成させた。【００１１】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（９）に関する。
（１）有効成分として、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むアクアポリン３発現促進用組成物。
（２）上記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又は上記ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、ブドウ由来原料に含まれるものである上記（１）に記載の組成物。
（３）上記ブドウ由来原料は、ブドウの果皮、果実及び種子からなる群から選択される少なくとも１種の生原料、上記生原料の発酵物、これらの抽出物及びこれらの加工物からなる群から選択される少なくとも１種を含む上記（２）に記載の組成物。
（４）上記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマーは、下記式（１）で示される化合物及び／又は下記式（２）で示される化合物である上記（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。【００１２】
【化１】
2019066031.tif 000002
【００１３】
【化２】
2019066031.tif 000003
【００１４】
（５）上記ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、下記式（３）で示される化合物及び／又は下記式（４）で示される化合物である上記（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物。【００１５】
【化３】
2019066031.tif 000004
【００１６】
【化４】
2019066031.tif 000005
【００１７】
（６）飲食品、化粧料、医薬品又は医薬部外品である上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物。
（７）肌の潤いの改善、肌の水分補給、肌の水分保持、肌の保湿、肌の乾燥緩和、肌状態改善、肌のバリア機能を高める、肌荒れ予防、肌荒れ改善、肌機能保持、肌機能改善及び傷口の治癒促進からなる群より選択される１又は２以上の用途に用いられる上記（１）〜（６）のいずれかに記載の組成物。
（８）ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の、アクアポリン３発現促進のための使用。
（９）ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の、アクアポリン３の発現促進による肌の潤いを向上させるための使用。
【発明の効果】
【００１８】
ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、アクアポリン３の発現を促進することができる。従って、有効成分としてガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む本発明の組成物は、アクアポリン３の発現量を増加させることができる。さらに、有効成分としてガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む本発明の組成物は、アクアポリン３の発現を促進することで、肌の潤いを向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１（ａ）は、肌の潤い評価試験における被験者の角層の含水量を示すグラフである。図１（ｂ）は、肌の潤い評価試験における被験者の角層の含水量の変化量を示すグラフである。
【図２】図２は、本発明の実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例２−６に係る組成物の画分を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
【図４】図４は、本発明の実施例３−１〜実施例３−４に係る組成物を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明の実施例４−１〜実施例４−４に係る組成物を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
【図６】図６は、本発明の実施例５−１〜実施例５−２に係る組成物を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。
【００２１】
本発明の組成物は、有効成分として、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含み、「アクアポリン３発現促進のため」又は「アクアポリン３発現促進による肌の潤い向上のため」に使用される。
肌の潤い向上用組成物は、本発明の第１実施形態に係る組成物である。また、アクアポリン３発現促進用組成物は、本発明の第２実施形態に係る組成物である。
以下、本発明の第１実施形態に係る組成物及び第２実施形態に係る組成物に共通する構成等を説明する。
なお、以下の説明において、本発明の第１実施形態に係る組成物及び第２実施形態に係る組成物を合わせて「本発明に係る組成物」とも記載する。
【００２２】
上記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマーとは、カテキンやエピカテキン等に代表されるフラバン−３−オールにガロイル基が結合したものであるが、その結合位置は特に限定されず、例えば、フラバン骨格に結合していてもよい。一態様において、本発明におけるガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマーは、フラバン骨格の３位の水酸基にガロイル基が結合したもの、すなわち、フラバン骨格の３位の水酸基が没食子酸とエステル結合した化合物であってよい。
【００２３】
上記フラバン−３−オールの３位の水酸基にガロイル基が結合した化合物としては、例えば、上記式（１）で示される化合物及び上記式（２）で示される化合物等が挙げられる。
すなわち、カテキンガレート、エピカテキンガレートや、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート等が挙げられる。なかでもエピカテキンガレートが好ましい。
【００２４】
上記フラバン−３−オール重合体は、フラバン−３−オールを構成単位とし、フラバン−３−オールが４−６位又は４−８位で結合した２量体以上の重合体である。フラバン−３−オール重合体は、ポリフェノールの一種であり、縮合型タンニンとも称されている化合物である。
ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、ガロイル基で修飾されたフラバン−３−オールを少なくとも１つの構成単位として含むフラバン−３−オール重合体である。構成単位のフラバン−３−オールにおけるガロイル基の結合位置は特に限定されないが、例えば、本発明におけるガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、フラバン骨格の３位の水酸基にガロイル基が結合したフラバン−３−オール（フラバン骨格の３位の水酸基が没食子酸とエステル結合したフラバン−３−オール）を構成単位に有するフラバン−３−オール重合体であることが好ましい。
ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、重合度等が異なる２種以上の重合体の混合物であってよい。
【００２５】
なお、上記フラバン−３−オール重合体は、構成単位であるフラバン−３−オールが４−８位で結合した２量体以上の重合体であることが好ましい。例えば、４−６位で結合したフラバン−３−オール２量体と、４−８位で結合したフラバン−３−オール２量体とでは、４−８位で結合したフラバン−３−オール２量体の方がブドウ等の天然物における含有量が多く、アクアポリン３の発現を促進するための充分な量を確保することができるためである。
【００２６】
フラバン骨格の３位の水酸基にガロイル基が結合したフラバン−３−オールを構成単位に有するフラバン−３−オール重合体としては、例えば、上記式（３）で示される化合物及び上記式（４）で示される化合物が挙げられる。
【００２７】
本発明で用いられるガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、飲食品、化粧料、医薬品又は医薬部外品に適用される組成物である観点から、１量体から３量体であることが好ましい。さらに、２量体及び／又は３量体であることがより好ましく、２量体であることが更に好ましい。経口摂取される場合、フラバン−３−オールモノマー及び２量体のフラバン−３−オール重合体は、体内への吸収が可能であるためである。また、外用剤として用いられる場合、アクアポリン３の発現するケラチノサイトへの吸収浸透を考慮するとフラバン−３−オールモノマー、２及び／又は３量体のフラバン−３−オール重合体が好ましい。
【００２８】
カテキン、エピカテキン等のフラバン−３−オールモノマー、２量体及び／又は３量体のフラバン−３−オール重合体は、「アクアポリン３発現促進」又は「アクアポリン３発現促進による肌の潤い向上」作用が低いが、ガロイル基を有すると、その作用が向上する。特に２量体及び／又は３量体のフラバン−３−オール重合体では、ガロイル基を有することで、上記作用が顕著に向上する。従って、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー、２量体及び３量体のガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体からなる群から選択される少なくとも一種は、血中を循環し、ケラチノサイトに吸収されることが可能であり、上記作用が高い組成物となり得る。さらに、アクアポリン３発現促進作用の観点から、本発明に係る組成物は、ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を有効成分として含むことが好ましい。
【００２９】
本発明に係る組成物に用いられるガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、特に限定されないが、例えば、（＋）−ｃａｔｅｃｈｉｎ−（−）−ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ−３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ（以下、Ｃ−ＥＣＧとも記載する。）、（−）−ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ−（−）−ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ−３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ（以下、ＥＣ−ＥＣＧとも記載する。）等のガロイル基を有するフラバン−３−オール２量体、（＋）−ｃａｔｅｃｈｉｎ−  （＋）−ｃａｔｅｃｈｉｎ−（−）−ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ−３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ（以下、Ｃ−Ｃ−ＥＣＧとも記載する）等のガロイル基を有するフラバン−３−オール３量体等が好ましい。
【００３０】
ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、その由来や製造方法によって特に限定されるものではない。例えば、植物から抽出した植物由来のものを用いてもよく、合成法によって得られたものを用いてもよい。ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマーは、例えば、ブドウ、チャノキ等の植物から得ることができる。また、ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、例えば、ブドウ、セイヨウナシ、ライチ等の植物から得ることができる。例えば、ブドウ種子には、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及びガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体が含まれている（参照文献１：“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｆｌａｖａｎ−３−ｏｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｅｄｓ  ｆｒｏｍ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｇｒａｐｅ  ｖａｒｉｅｔｉｅｓ”  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５３  （１９９５）  １９７−２０１、参照文献２：“ＰＲＯＣＹＡＮＩＤＩＮ  ＤＩＭＥＲＳ  ＡＮＤ  ＴＲＩＭＥＲＳ  ＦＲＯＭ  ＧＲＡＰＥ  ＳＥＥＤＳ”  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．  ３０．  Ｎｏ．  ４，  ｐｐ  １２５９−１２６４  １９９１、参照文献３：“「ブドウ種子ポリフェノール」機能性の応用”ＮＥＷ  ＦＯＯＤ  ＩＮＤＵＳＴＲＹ  Ｖｏｌ．  ４３  Ｎｏ．  １１  （２００１）  別冊）。
肌の潤い向上用及びアクアポリン３の発現量増加の観点から、上記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、ブドウ由来原料に含まれるものであることがより好ましい。ブドウ由来原料に含まれるガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及びガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、安全性の観点から好適である。
【００３１】
ブドウ由来原料は、ブドウの果皮、果実及び種子からなる群から選択される少なくとも１種の生原料、上記生原料の発酵物、これらの抽出物及びこれらの加工物からなる群から選択される少なくとも１種を含む。ブドウ由来原料は、ブドウの果皮及び／又は種子、ブドウの果皮及び／又は種子の発酵物、これらの抽出物並びにこれらの加工物からなる群から選択される少なくとも１種を含むことが好ましい。より好ましくは、ブドウ由来原料は、ブドウの生原料として、ブドウの果皮及び／又は種子を含む。
本発明に係る組成物は、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む上記のブドウ由来原料を含有することが好ましい。
【００３２】
また、本明細書において「生原料の抽出物」とは、生原料から得られる一部の成分を意味する。
生原料の抽出物としては、例えば、果汁（ストレート果汁及び濃縮果汁）等が挙げられる。
生原料の発酵物としては、例えば、ワイン等が挙げられる。
生原料の発酵物の抽出物としては、例えば、ワイン醗酵残渣の水又はエタノールなどの溶媒で抽出した物が挙げられる。
生原料の発酵物の加工物としては、例えば、ワインの濃縮物、希釈物や、特定の成分を濃縮又は除去したものが挙げられ、ワインからアルコール分を留去したもの等が好ましい。
【００３３】
上記生原料の抽出物は、植物成分の抽出に用いられる通常の抽出方法により得ることができる。抽出方法は適宜設定することができ、抽出条件も特に限定されない。例えば、上記ブドウの果皮、果実及び種子からなる群から選択される少なくとも１種の生原料を常温、加温又は低温下にて溶媒で抽出してもよい。
なお、抽出を行う場合、生原料を粉砕してもよい。
粉砕の方法としては、特許第４８９２３４８号公報に記載のように生原料を液体窒素中で粉砕する方法が挙げられる。
【００３４】
上記生原料の抽出物を抽出液の形態で得る場合には、例えば、溶媒中に生原料を加えて、適宜加熱、攪拌等をして成分を抽出することにより、生原料の抽出物を得てもよい。
【００３５】
抽出に用いる溶媒（抽出溶媒）としては、水、有機溶媒又はこれらの混合溶媒を使用することが望ましい。有機溶媒としては、例えば、エタノール、１，３−ブチレングリコール（表示名称：ＢＧ）、１，２−ペンタンジール（表示名称：ペンタンジオール）、プロパン−１，２−ジオール（表示名称：プロピレングリコール）、１，３−プロパンジオール（表示名称：ペンタンジオール）、スクワラン等が挙げられる。有機溶媒は単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせてもよい。
【００３６】
抽出に際して酸又はアルカリを添加し、抽出溶媒のｐＨを調整してもよい。
【００３７】
抽出の際には適宜加圧してもよい。抽出温度は特に限定されないが、例えば、０〜１３０℃が望ましく、２０〜１００℃がより望ましく、５０〜１００℃がさらに望ましく、７０〜９５℃がよりさらに望ましい。また、抽出温度は、溶媒の沸点以下とすることが好ましい。
抽出時間は、抽出温度等の抽出条件に応じて適宜設定することができる。
【００３８】
抽出後は、得られた抽出物から抽出残渣を除去することが望ましい。除去方法は特に限定されず、濾過、遠心分離等の公知の方法を採用することができる。
【００３９】
本発明においては、抽出により得られた抽出液をブドウ由来原料として用いてもよい。また、抽出液を適宜な溶媒で希釈してブドウ由来原料としてもよく、該抽出液に濃縮又は乾燥工程を行って、濃縮物や乾燥物としてもよい。濃縮方法、乾燥方法も特に限定されず、凍結乾燥、噴霧乾燥等の公知の方法を使用できる。
抽出物の形態も特に限定されず、液状、粉末状、ペースト状として用いることができる。また、本発明の効果を損なわない限り、抽出物を、さらに適当な精製方法又は分離方法（例えば、液液抽出（液液分配）、クロマトグラフィー）により、活性の高い画分を精製又は分画して用いることもできる。
本発明におけるブドウ由来原料は、上記のような抽出方法で得られた各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮物、その乾燥物、これらの精製画分を含む。
【００４０】
上記生原料の発酵物は、特に限定されず、例えば、酵母による発酵物を用いることができる。また、酵母としては、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを用いることができる。
発酵の条件としては、酵母の種類に応じ適宜決定することが望ましい。
【００４１】
本発明に係る組成物において、ブドウ由来原料の由来となるブドウの品種は、特に限定されないが、ワインの原料となる品種であることが望ましい。ワインの原料となる品種としては、赤ワインの原料となる品種、白ワインの原料となる品種が挙げられる。
また、赤ワインの原料となる品種としては、メルロー（Ｍｅｒｌｏｔ）、ガルナチャ・ティントレラ（Ｇａｒｎａｃｈａ  Ｔｉｎｔｏｒｅｒａ）、アンチェロッタ（Ａｎｃｅｌｌｏｔｔａ）、モナストレル（Ｍｏｎａｓｔｒｅｌｌ）、テンプラニーリョ（Ｔｅｍｐｒａｎｉｌｌｏ）、カベルネ・ソーヴィニヨン（Ｃａｂｅｒｎｅｔ  Ｓａｕｖｉｇｎｏｎ）、ピノ・ノワール（Ｐｉｎｏｔ  Ｎｏｉｒ）、マスカットベーリーＡ（Ｍｕｓｃａｔ  Ｂａｉｌｅｙ  Ａ）及びコンコード（Ｃｏｎｃｏｒｄ）からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
また、白ワインの原料となるシャルドネ（Ｃｈａｒｄｏｎｎａｙ）、シャブリ（Ｃｈａｂｌｉｓ）、甲州（Ｋｏｓｈｕ）を用いることもできるが、これに限定されるものではない。
これらの品種からのブドウ由来原料は、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及びガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むため、優れた肌の潤い向上効果を示し、優れたアクアポリン３の発現量の増加効果を示す。
【００４２】
本発明に係る組成物の有効成分であるガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、上記ブドウ由来原料から得られるものであることが好ましい。ブドウ由来原料からガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を得る方法としては、分画方法等が挙げられ、本発明の属する技術分野において通常用いられる方法を使用することができる。
【００４３】
例えば、ブドウ種子からガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を抽出及び精製する場合は、ブドウ種子を含水アルコールで抽出したのち、得られる抽出液を濾過、濃縮してアルコールを除去したのち、カラム精製等の精製を行うことで、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むブドウ種子抽出物を得ることができる。得られたブドウ種子抽出物を、さらに精製してガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の純度を高めることもできる。
なお、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマーは、ブドウの他にチャノキ由来原料から得られ、例えば、緑茶葉から抽出し、精製を行うことにより得ることができる。
【００４４】
フラバン−３−オールのモノマー及び重合体が、ガロイル基を有することは、例えば、該フラバン−３−オールのモノマー及び重合体をタンナーゼ処理又は酸加水分解処理した場合に、没食子酸が生成することにより確認することができる。上記処理により没食子酸を生成するフラバン−３−オールのモノマー及び重合体は、ガロイル基を有する。
没食子酸が生成したことの確認は、フラバン−３−オールのモノマー及び重合体について、タンナーゼ処理又は酸加水分解処理の処理前と後の没食子酸量を測定することにより行うことができる。上記処理後のフラバン−３−オールのモノマー及び重合体における没食子酸量が、処理前のフラバン−３−オールのモノマー及び重合体における没食子酸量と比較して多い場合は、上記処理により没食子酸が生成したといえる。
【００４５】
本発明に係る組成物は、飲食品、化粧料、医薬品又は医薬部外品であることが望ましい。このような飲食品、化粧料、医薬品、又は、医薬部外品の製造方法は特に限定されず、これらに本発明における有効成分又はこれを含む上記ブドウ由来原料を配合すれば良い。なお、本発明に係る組成物は、これら飲食品、化粧料、医薬品又は医薬部外品などの原料として用いられる原料用組成物であってもよい。
また、本発明に係る組成物は、肌の潤い改善、肌の水分保持、肌の水分補給、肌の保湿、肌の乾燥緩和、肌のバリア機能を高める、肌状態改善、肌荒れ予防、肌荒れ改善、肌機能保持、肌機能改善及び傷口の治癒促進からなる群より選択される１又は２以上の用途に用いられてもよい。
【００４６】
本明細書において、「飲食品」は固体、流動体及び液体、並びに、それらの混合物であって、経口摂食可能なものの総称である。
飲食品の例としては、特定保健用食品、栄養補助食品、健康食品、機能性表示食品、幼児用食品、乳児用調製乳、未熟児用調製乳、老人用食品等が挙げられる。
【００４７】
特定保健用食品とは、健康増進法第２６条第１項の許可又は同法第２９条第１項の承認を受けて、食生活において特定の保健の目的で摂取をする者に対し、その摂取により当該保健の目的が期待できる旨の表示をする食品を意味する。
栄養補助食品とは、特定の栄養成分が強化されている食品をいう。健康食品とは、健康的な又は健康によいとされる食品をいい、栄養補助食品、自然食品、ダイエット食品等を含む。
機能性表示食品とは、科学的根拠を基に機能性を表示するものとして、消費者庁に届け出られた食品をいう。
幼児用食品とは、約６歳までの子供に与えるための食品をいう。
乳児用調製乳とは、約１歳までの子供に与えるための調製乳をいう。
未熟児用調製乳とは、未熟児が生後約６ヶ月になるまで与えるための調製乳をいう。
老人用食品とは、無処理の食品と比較して消化及び吸収が容易であるように処理された食品をいう。
【００４８】
また、飲食品の形態は特に限定されず、種々の形態とすることができる。このような形態の例としては、例えば、飲料、菓子類、サプリメント等が挙げられる。
【００４９】
飲料は、アルコール飲料及びノンアルコール飲料のいずれであってもよい。
【００５０】
ノンアルコール飲料としては、例えば、茶系飲料、コーヒー飲料、炭酸飲料、機能性飲料、果実・野菜系飲料、乳性飲料、豆乳飲料、フレーバーウォーター等が挙げられるがこれに限定されるものではない。
さらに、ノンアルコール飲料には、アルコール１％未満の飲料も含まれ、例えば、ノンアルコールビール、ノンアルコールワイン、ノンアルコールカクテル等も含まれる。
【００５１】
茶系飲料としては、紅茶飲料、無糖茶飲料等が挙げられる。
また、無糖茶飲料としては、緑茶飲料、ウーロン茶飲料、麦茶飲料、玄米茶飲料、ハト麦茶飲料、無糖の紅茶飲料等が挙げられる。
【００５２】
コーヒー飲料としては、容器詰コーヒー又はリキッドコーヒーのいずれであってもよい。
【００５３】
炭酸飲料としては、コーラフレーバー飲料、透明炭酸飲料、ジンジャーエール、果汁系炭酸飲料、乳類入炭酸飲料、無糖炭酸飲料等が挙げられる。
【００５４】
機能性飲料としては、美容ドリンク、スポーツドリンク、エナジードリンク、健康サポート飲料、パウチゼリー飲料等が挙げられる。
【００５５】
果実・野菜系飲料としては、果実飲料、果実入飲料、低果汁入清涼飲料、果粒含有果実飲料、果肉飲料等が挙げられる。
【００５６】
乳性飲料としては、牛乳、ドリンクヨーグルト、乳酸菌飲料、乳類入清涼飲料等が挙げられる。
【００５７】
豆乳飲料としては、豆乳、大豆飲料等が含まれる。
【００５８】
飲料が収容される形態は特に限定されないが、容器詰飲料とすることができる。容器詰飲料の容器は特に限定されず、いずれの形態及び材質の容器を用いてもよく、例えば、アルミ缶、スチール缶等の金属製容器；ペットボトル等の樹脂製容器；紙パック等の紙容器；ガラス瓶等のガラス製容器；樽等の木製容器等の通常用いられる容器のいずれも用いることができる。このような容器に飲料を充填及び密閉することにより、容器詰飲料が得られる。
また、本発明の容器詰飲料は容器から直接飲用するものだけではなく、たとえばバックインボックスなどのバルク容器、あるいはポーション容器などに充填したものを飲用時に別容器に注ぐことによって飲用に供することもできる。また、濃縮液を飲用に供する際に希釈することもできる。
【００５９】
アルコール飲料としては、ビール、ビール系飲料、ワイン、焼酎、チューハイ、リキュール、カクテル、スピリッツ、ウイスキー、ブランデー等が挙げられる。
ビール系飲料には発泡酒又は第三のビール、果実や果汁入りビールが含まれる。
【００６０】
本発明に係る組成物を飲食品として使用する場合、当該飲食品には、ステビア抽出物、アセスルファムカリウムやスクラロール等の甘味料、ショ糖等の糖質、リンゴ酸や無水クエン酸等の有機酸、難消化性デキストリン等の食物繊維、香料、着色料が含まれていてもよい。
【００６１】
また、本発明に係る組成物が飲食品である場合、皮膚を健やかに保ち肌質自体を整えることを目的とするスキンケア用の飲食品であってもよい。このような飲食品の形態としては、例えば、飲料、サプリメント等が挙げられる。
【００６２】
本発明に係る組成物を化粧料として使用する場合、皮膚外用組成物として好ましく使用される。
皮膚外用組成物として使用する場合、本発明に係る組成物は、テープ剤、軟膏剤、洗顔料（洗顔用化粧料）、化粧水、パック、マッサージクリーム、ミルキーローション、乳液、クリーム、エッセンス（美容液）等のスキンケア化粧料、石鹸、液体洗浄料、入浴剤、日焼け止めクリーム、サンオイル、デオドラントスプレー、ボディローション、ボディクリーム、ハンドクリーム等のボディケア化粧料として調製することができる。
また、化粧料は、さらに化粧料に使用可能な担体や賦形剤を含んでいてもよい。
【００６３】
本発明に係る組成物を医薬品又は医薬部外品として使用する場合、医薬品又は医薬部外品の投与経路としては経口又は非経口投与のいずれでもよい。
非経口投与の例としては経皮、局所、経鼻、舌下、経肺、経腸、経粘膜、注射等による投与が挙げられる。
経口投与のための製剤の剤型としては、液剤、錠剤、散剤、丸剤、細粒剤、顆粒剤、糖衣錠、カプセル剤、懸濁液、乳剤、シロップ剤、エキス剤、エマルジョン、マイクロカプセル剤、トローチ剤、飴剤、バッカル剤、チュアブル剤等が挙げられる。
非経口投与のための製剤の剤型としては、エアロゾール剤、注射剤、点滴、吸入剤、輸液剤、坐薬、経皮吸収剤、点鼻剤、点眼剤、バップ剤、湿布、クリーム、ゲル、ローション等が挙げられる。
【００６４】
本発明に係る組成物を医薬品又は医薬部外品として使用する場合、本発明に係る組成物を単独で使用してもよく、他の医薬品又は医薬部外品と併用してもよい。
さらに、本発明に係る組成物を医薬品又は医薬部外品として使用する場合、当該医薬品又は医薬部外品は、医薬的に許容可能な担体、賦形剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、抗酸化剤、着色剤から成る群より選択されるいずれか一つ以上の添加剤を含んでいてもよい。
【００６５】
また、本発明に係る組成物は、一例として、剤の形態で使用してもよいが、本形態に限定されるものではない。当該剤をそのまま組成物として使用してもよく、当該剤を含む組成物として使用してもよい。
【００６６】
本発明に係る組成物では、上述の通り、有効成分としてガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む。また、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体は、ブドウ由来原料に含まれるものであることが望ましい。一態様において、本発明に係る組成物は、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むブドウ由来原料を含むことがより望ましい。
さらに、本発明に係る組成物におけるブドウ由来原料の含有量（乾燥物換算）は、１〜３０重量％であることが望ましい。
【００６７】
また、本発明に係る組成物では、有効成分としてブドウ由来原料に含まれるガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含むことがより好ましい。
以下、ブドウ由来原料に含まれるフラバン−３−オール重合体を「ブドウ由来ＯＰＣ」、ブドウ由来原料に含まれるガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を「ガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣ」と略記する。
【００６８】
本発明に係る組成物が、飲食品、化粧料、医薬品、医薬部外品等の原料として用いられる原料用組成物である場合、上記原料用組成物に含まれるブドウ由来ＯＰＣの濃度は、１００ｐｐｍ以上、２００ｐｐｍ以上、５００ｐｐｍ以上、１，０００ｐｐｍ以上、又は、２，０００ｐｐｍ以上とすることができる。また、上記原料用組成物に含まれるブドウ由来ＯＰＣの濃度は、５０，０００ｐｐｍ以下が望ましく、２５，０００ｐｐｍ以下がより望ましく、２０，０００以下がさらに望ましい。上記原料用組成物に含まれるブドウ由来ＯＰＣの濃度は、例えば、１００〜５０，０００ｐｐｍであることが望ましく、２００〜２５，０００ｐｐｍであることがより望ましく、５００〜２０，０００ｐｐｍであることがさらに望ましい。別の態様において、５００〜５０，０００ｐｐｍであることが望ましく、１，０００〜２５，０００ｐｐｍであることがより望ましく、２，０００〜２０，０００ｐｐｍであることがさらに望ましい。上記原料用組成物に含まれるガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの濃度は、１．０ｐｐｍ以上、２．０ｐｐｍ以上、５．０ｐｐｍ以上、１０．０ｐｐｍ以上、又は、２０．０ｐｐｍ以上とすることができる。また、上記原料用組成物に含まれるガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの濃度は、５，０００ｐｐｍ以下が望ましく、２，５００ｐｐｍ以下がより望ましく、２，０００以下がさらに望ましい。上記原料用組成物に含まれるガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの濃度は、例えば、１．０〜５，０００ｐｐｍであることが望ましく、２．０〜２，５００ｐｐｍであることがより望ましく、５．０〜２，０００ｐｐｍであることがさらに望ましい。別の態様において、５．０〜５，０００ｐｐｍであることが望ましく、１０．０〜２，５００ｐｐｍであることがより望ましく、２０．０〜２，０００ｐｐｍであることがさらに望ましい。
また、本発明の組成物が、飲食品、化粧料、医薬品、又は、医薬部外品である場合には、本発明に係る組成物に含まれるブドウ由来ＯＰＣの濃度は、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上が望ましく、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上がより望ましく、０．１ｍｇ／ｍＬ以上がさらに望ましい。また、本発明に係る組成物に含まれるブドウ由来ＯＰＣの濃度は、１００．０ｍｇ／ｍＬ以下が望ましく、１０．０ｍｇ／ｍＬ以下がより望ましい。本発明に係る組成物に含まれるブドウ由来ＯＰＣの濃度は、組成物中に０．００１〜１００．０ｍｇ／ｍＬであることが望ましく、０．０１〜１０．０ｍｇ／ｍＬであることがより望ましい。別の態様において、０．０１〜１００．０ｍｇ／ｍＬであることが望ましく、０．１〜１０．０ｍｇ／ｍＬであることがより望ましい。なお、本発明に係る組成物に含まれるガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの濃度は、０．００００１ｍｇ／ｍＬ以上が望ましく、０．０００１ｍｇ／ｍＬ以上がより望ましく、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上がさらに望ましい。また、本発明に係る組成物に含まれるガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの濃度は、１０．０ｍｇ／ｍＬ以下が望ましく、１．０ｍｇ／ｍＬ以下がより望ましい。本発明に係る組成物に含まれるガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの濃度は、組成物中に０．００００１〜１０．０ｍｇ／ｍＬであることが望ましく、０．０００１〜１．０ｍｇ／ｍＬであることがより望ましい。別の態様において、０．０００１〜１０．０ｍｇ／ｍＬであることが望ましく、０．００１〜１．０ｍｇ／ｍＬであることがより望ましい。なお、ブドウ由来ＯＰＣの濃度は、特許第４６５９４０７号公報に記載の方法で測定することができる。また、この量を１回で使用してもよく、数回に分けて使用してもよい。また、ガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの含量は、公知の方法に従って測定することができ、例えば、ＬＣ−ＭＳ法等を用いることができる。
【００６９】
また、本発明に係る組成物を経口で摂取する場合、１日当たりのブドウ由来ＯＰＣの摂取量は、１０〜２０００ｍｇであることが望ましく、１００〜４００ｍｇであることがより望ましい。なお、この場合、１日当たりのガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの摂取量は、０．１〜２００ｍｇであることが望ましく、１．０〜４０．０ｍｇであることがより望ましい。
また、本発明に係る組成物を、皮膚外用組成物等の外用剤として使用する場合、１日当たりのブドウ由来ＯＰＣの使用量（乾燥物換算）は、０．０１〜１００．０ｍｇであることが望ましく、０．１〜１０．０ｍｇであることがより望ましい。なお、この場合、１日当たりのガロイル基を有するブドウ由来ＯＰＣの使用量（乾燥物換算）は、０．０００１〜１０．０ｍｇであることが望ましく、０．００１〜１．０ｍｇであることがより望ましい。
また、上記量を１回で使用してもよく、数回に分けて使用してもよい。
【００７０】
本発明に係る組成物は、ヒトに好適に使用される。一態様において、アクアポリン３の発現の増加を希望する又は必要とする対象や、肌の潤いの向上を希望する又は必要とする対象に好適に使用される。
【００７１】
本発明に係る組成物には、ブドウ由来のアントシアニンを含んでいてもよい。
【００７２】
本発明に係る組成物には、ブドウ由来の総ポリフェノールは、組成物中に５００〜５００００ｍｇ／ｍＬ含まれていることが望ましく、１０００〜２００００ｍｇ／ｍＬ含まれることがより望ましい。
ブドウ由来の総ポリフェノールは、フォーリンチオカルト法により測定することができる。
【００７３】
本発明に係るガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む組成物は、例えば、以下の（１）〜（３）の方法により製造することができる。
（１）ポリフェノールを多く含むワインを適当な濃度に調整してアルコールを含むワイン様飲料とし、これをガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む組成物とする方法。
（２）ポリフェノールを多く含むワインを減圧濃縮して、エタノールを留去させることによりノンアルコールの加工物を製造し、これを適当な濃度に調整してノンアルコール飲料とし、これをガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む組成物とする方法。
（３）ブドウの生原料を粉砕（例えば、液体窒素中で粉砕）し、粉砕物を、エタノールを０〜１００％含む水溶液で抽出した抽出物を用い、これを適当な濃度に調整して飲料とし、これをガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む組成物とする方法。
【００７４】
なお、上記方法により製造された組成物は、有効成分であるガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の他にも様々な成分を含むため、得られた組成物を更に分画等することにより、ブドウ由来の、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を高含有する組成物を製造することができる。
【００７５】
（第１実施形態）
次に、本発明の第１実施形態に係る組成物、すなわち、有効成分として、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む組成物であって、上記組成物は、アクアポリン３の発現を増加させることにより肌の潤いを向上させるものである肌の潤い向上用組成物について説明する。
【００７６】
本発明の第１実施形態に係る組成物の使用方法としては、特に限定されず、経口摂取により体内に取り込んでもよく、塗布等により皮膚に適用してもよい。
これらの中では、経口摂取により体内に取り込む方法が望ましい。
【００７７】
なお、本明細書において、「肌の潤い」とは、角層の水分が保持されている状態をいう。
また、本明細書において、「肌の潤いを向上させる」とは、角層の水分の含水量を増加させること、皮膚の水分の蒸散を防ぐこと、及び／又は、角層への水分取り込みを増加させることによって、角層の水分量の低下を防ぎ、角層の水分が適度に保持されている状態を維持し、又は、角層の含水量を増加させることを意味する。
【００７８】
本発明の第１実施形態に係る組成物はアクアポリン３の発現を増加させることにより、角層の含水量を増加させるためや、皮膚の水分の蒸散を防ぐためや、角層への水分取り込みを増加させるために使用することが望ましい。
本発明の第１実施形態に係る組成物を使用することにより、摂取者の肌の潤いを向上させることができる。
【００７９】
ここで、角層の含水量の測定方法の一例について説明する。以下の例では、顔の一部の含水量を測定する方法を示すが、角層の含水量を測定する方法は以下の例に限られず、例えば、腕の角層における含水量を測定してもよい。
【００８０】
（角層の含水量の測定方法）
化粧料のクレンジング及び洗顔を終えた被験者を、恒温恒湿室（温度：２１±１℃、湿度：５０±５％）に移し、安静な状態で２０分馴化させる。
次に、目尻及び小鼻の交点となる部位を測定部位として定め、毎回同じ位置を測定する。測定は、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて上記測定部位（同一箇所）の角層の含水量を５回測定する。
得られた数値の最上値及び最下値を削除し、残りの３回の測定値の平均を「角層の含水量」とする。
【００８１】
また、本発明の第１実施形態に係る組成物は、肌の潤い改善、肌の保湿、肌の乾燥緩和、肌のバリア機能を高める、肌状態の改善、肌荒れ防止、肌荒れ改善、肌機能保持、肌機能改善及び傷口の治癒促進からなる群から選択される１又は２以上の用途に用いてもよい。
これらは、角層の含水量が増加することに伴い、結果として生じる効果である。
角層の含水量が増加する効果の一因は、本発明の組成物に含まれるガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体が、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させることによるものであると考えられる。
アクアポリン３は水の輸送体であり、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させることで、角層への水の取込が増加し、角層の含水量が増加することが報告されている（非特許文献２）。
また、アクアポリン３は、グリセロールの輸送体としての機能も有し、角層のグリセロールを増やすことができると考えられている（非特許文献５）。角層のグリセロールが増加すると、水分が角層から蒸散することを防ぐ効果が期待できる。
【００８２】
肌の潤い改善、肌の保湿及び肌の乾燥緩和は、いずれも角層の含水量が増加することで達成されるので、これらの効果は上で述べた角層の含水量の測定方法で確認することができる。あるいは、上記効果は、本発明の第１実施形態に係る組成物の使用者が実感すること、又は、皮膚科医等の皮膚組織の専門家の判断によって確認することができる。
【００８３】
肌状態改善、肌荒れ予防、肌荒れ改善、肌機能保持及び肌機能改善はいずれも肌荒れの症状が改善されるか、あるいは肌荒れの症状を予防する効果を意味する。
肌荒れの症状は、肌の赤み、痒み、乾燥、吹き出物、皮脂の過剰分泌及び皮脂分泌の低下からなる群より選択されるいずれか一つ以上を指す。
肌荒れ症状は、肌の保湿力（バリア機能）を高めることや、肌の潤いを保つことにより改善することができる。
肌状態改善、肌荒れ予防、肌荒れ改善、肌機能保持及び肌機能改善は、本発明の第１実施形態に係る組成物の使用者が実感すること、又は、皮膚科医等の皮膚組織の専門家の判断によって確認することができる。
【００８４】
傷口の治癒促進は、傷口付近の角層の皮膚上皮組織の弾性が向上することで達成されるが、皮膚上皮組織の弾性は皮膚上皮組織の含水量が増加することで向上する。当該効果は傷口の治癒プロセスが速く進むことを観察することにより確認することができる。傷口の治癒プロセスは、肉芽組織が瘢痕組織へ変化するプロセスを指す。傷口の治癒プロセスが速く進むことは、本発明の第１実施形態に係る組成物の使用者が実感すること、又は、皮膚科医等の皮膚組織の専門家の判断によって確認することができる。
【００８５】
（第２実施形態）
次に、本発明の第２実施形態に係る組成物、すなわち、有効成分として、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む組成物であって、アクアポリン３発現促進用組成物について説明する。
【００８６】
ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体には、アクアポリン３の発現量、例えば、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量、を増加させる効果がある。そのため、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体を含む本発明の第２実施形態に係る組成物を使用することにより、アクアポリン３の発現を促進することができる。
本発明の第２実施形態に係る組成物は、好ましくは、皮膚上皮細胞におけるアクアポリン３の発現促進のために使用される。
【００８７】
本明細書において、「アクアポリン３の発現量」とは、タンパク質としてのアクアポリン３の発現量及びアクアポリン３をコードする遺伝子の発現量の両方を意味する。従って、アクアポリン３の発現量はタンパク質レベル及び遺伝子レベル（例えばｍＲＮＡレベル）のいずれかで測定することができる。
【００８８】
アクアポリン３は水の輸送体であり、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させることで、角層への水の取込が増加し、角層の含水量が増加することが報告されている（非特許文献２）。
また、アクアポリン３は、グリセロールの輸送体としての機能も有し、角層のグリセロールを増やすことができると考えられている（非特許文献５）。角層のグリセロールが増加すると、水分が角層から蒸散することを防ぐ効果が期待できる。
【００８９】
ヒトのアクアポリン３の塩基配列やアミノ酸配列（ＯＲＦ）は公知であり、その「Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．」は、以下の通りである。
ｍＲＮＡ配列：ＮＭ＿００４９２５
【００９０】
タンパク質としてのアクアポリン３は、質量分析、各種クロマトグラフィー又は各種免疫化学アッセイ等により測定することが可能である。これらの中では、抗アクアポリン３抗体を用いた免疫化学アッセイにより検出することが望ましい。
免疫化学アッセイの具体例としては、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ  （ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロッティング、プロテインチップアッセイ、フローサイトメトリー等が挙げられる。
【００９１】
アクアポリン３をコードする遺伝子は、ノーザンブロッティング、ＰＣＲ、マイクロアレイ、蛍光プローブを用いたライブイメージング等により測定することが可能である。
ＰＣＲによりアクアポリン３をコードする遺伝子を測定する場合、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）により測定することがより望ましい。
【００９２】
本発明の第２実施形態に係る組成物の使用方法としては、特に限定されず、経口摂取により体内に取り込んでもよく、塗布等により皮膚に適用してもよい。
【００９３】
（その他の実施形態）
本発明は、以下の態様も包含する。
皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現を促進するための上記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の使用は、本発明の一態様である。
また、肌の潤い改善、肌の水分補給、肌の保湿、肌の乾燥緩和、肌状態改善、肌のバリア機能を高める、肌荒れ予防、肌荒れ改善、肌機能保持、肌機能改善及び傷口の治癒促進からなる群より選択される１又は２以上の用途に用いる、本発明に係る組成物も、本発明の一態様である。
また、上記ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体の、アクアポリン３発現促進による肌の潤いを向上させるための使用も、本発明の一態様である。上記使用は、治療的使用であってもよく、非治療的使用であってもよい。上記使用は、ヒトにおける使用であることが好ましい。
なお、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及び／又はガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体及びその望ましい態様は、上述した通りである。
【００９４】
（実施例）
以下、実施例を示し、本発明に係る組成物をより具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例によって限定されるものではない。
【００９５】
（実施例１）
（ブドウ抽出物（ブドウ由来原料）の製造方法）
赤ワインを減圧濃縮し、エタノールを留去した物をブドウ抽出物とする。このブドウ抽出物のＯＰＣ濃度は１５，０００ｐｐｍであった。
ここで、ワイン等のブドウ種子を含むブドウ由来原料の抽出物には、ガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体（プロシアニジンＢ２−３´−Ｏ−ガレート（以下、ＥＣ−ＥＣＧ）、プロシアニジンＢ４−３´−Ｏ−ガレート（以下、Ｃ−ＥＣＧ）等）、及び、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー（エピカテキンガレート（以下、ＥＣＧ）等）が含まれる（参照文献１：“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｆｌａｖａｎ−３−ｏｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｅｄｓ  ｆｒｏｍ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｇｒａｐｅ  ｖａｒｉｅｔｉｅｓ”  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５３  （１９９５）  １９７−２０１、参照文献２：“ＰＲＯＣＹＡＮＩＤＩＮ  ＤＩＭＥＲＳ  ＡＮＤ  ＴＲＩＭＥＲＳ  ＦＲＯＭ  ＧＲＡＰＥ  ＳＥＥＤＳ”  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．  ３０．  Ｎｏ．  ４，  ｐｐ  １２５９−１２６４  １９９１、参照文献３：“「ブドウ種子ポリフェノール」機能性の応用”ＮＥＷ  ＦＯＯＤ  ＩＮＤＵＳＴＲＹ  Ｖｏｌ．  ４３  Ｎｏ．  １１  （２００１）  別冊））。
【００９６】
（試験飲料の製造方法）
表１に示す配合で、上記ブドウ抽出物及びその他の物質を水に加え混合し、実施例１に係る組成物（試験食品）を製造した。
【００９７】
【表１】
2019066031.tif 000006
【００９８】
（比較例１）
表１に示す配合で、各物質を混合し、比較例１に係る組成物（対照食品）を製造した。
【００９９】
（肌の潤い評価）
以下の方法によりヒト試験を行い、実施例１及び比較例１に係る組成物の肌の潤いに関する効果を評価した。また、本試験は、ヘルシンキ宣言の精神に則り十分な配慮の下に実施した。
【０１００】
（試験デザイン）
本試験は、単施設、プラセボ対照ランダム化二重盲検並行群間比較試験により行った。
（ＵＭＩＮ試験ＩＤ：ＵＭＩＮ００００２４４７８）
【０１０１】
（被験者）
３０歳以上、６０歳未満の健常女性であり、日光性のシミでかつ判定可能な頬のシミがあると責任医師又は分担医師により診断された者１００名を被験者とした。
被験者を無作為に２群に分け、一方を試験食品摂取群（５０名）とし、もう一方を対照食品摂取群（５０名）とした。
本試験の解析を行うにあたって、棄却基準に該当する被験者が３例認められたため、この３例は除外し、９７例（試験食品摂取群５０例、対照食品摂取群４７例）を解析対象とした。
【０１０２】
（試験食品の摂取方法）
試験食品摂取群の被験者は、１日１回、任意の時期に試験食品（実施例１に係る組成物）を摂取することを１２週間繰り返した。
なお、試験食品を飲み始めてから飲み終わるまでの摂取時間は１時間以内とした。
対照食品摂取群の被験者は、１日１回、任意の時期に対照食品（比較例１に係る組成物）を摂取することを１２週間繰り返した。
なお、対照食品を飲み始めてから飲み終わるまでの摂取時間は１時間以内とした。
【０１０３】
（角層の含水量の測定）
０週、４週、８週及び１２週に、以下の方法で被験者の角層の含水量（ＡＵ：ａｒｂｉｔｒａｒｙ  ｕｎｉｔ）を測定した。
化粧料のクレンジング及び洗顔を終えた被験者を、恒温恒湿室（温度：２１±１℃、湿度：５０±５％）に移し、安静な状態で２０分馴化させた。
次に、目尻及び小鼻の交点となる部位を測定部位として定め、毎回同じ位置を測定した。
次に、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社製）を用いて上記測定部位（同一箇所）の角層の含水量を５回測定した。
得られた数値の最上値及び最下値を削除し、残り３回の測定値の平均を「角層の含水量」とした。
結果を図１（ａ）及び（ｂ）、並びに、表２に示す。
図１（ａ）は、肌の潤い評価試験における被験者の角層の含水量を示すグラフである。図１（ｂ）は、肌の潤い評価試験における被験者の角層の含水量の変化量を示すグラフである。
なお、本試験では、ＩＢＭ  ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ２４を用いて統計解析を行い、統計学的有意差検定にｔ検定を用いて、有意水準は５％（両側）とした。
また、図１（ａ）及び（ｂ）中のエラーバーは、標準誤差（ＳＥ）を示し、符号「＊」は、ｐ値が０．０５未満であること（ｐ＜０．０５）を示している。
【０１０４】
【表２】
2019066031.tif 000007
【０１０５】
摂取後１２週で試験食品摂取群は対照食品摂取群にくらべ有意に角層の含水量が多く、変化量での解析において摂取後４週、８週、１２週で試験食品摂取群は対照食品摂取群にくらべ有意に角層の含水量が多かった。
また、４週、８週、１２週の試験食品摂取群の角層の含水量は、０週の試験食品摂取群の角層の含水量より有意に多かった。
【０１０６】
（実施例２−１〜実施例２−８）
表３に示す、品種、生産地のワインを実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物とした。
【０１０７】
【表３】
2019066031.tif 000008
【０１０８】
（トータルポリフェノール及びＯＰＣの測定）
実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物のトータルポリフェノールの量を、フォーリンチオカルト法で測定し、ＯＰＣの量を特許第４６５９４０７号公報に記載の方法で測定した。
結果を表３に示す。
なお、上述したように、ワインにはガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体（ＥＣ−ＥＣＧ、Ｃ−ＥＣＧ等）及びガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー（ＥＣＧ）が含まれる。
【０１０９】
実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物を以下の方法により皮膚上皮細胞に作用させ、アクアポリン３の発現量を測定した。
【０１１０】
（アクアポリン３の発現量評価方法）
（１）試験用サンプルの調整
実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物を凍結乾燥し、その後、５０％エタノールで溶解し試験用サンプルを準備した。
また、コントロールとして、５０％エタノールを準備した。
また、ポジティブコントロールとして、レチノイン酸を準備した。レチノイン酸は、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させる物質として公知である。
【０１１１】
（２）皮膚上皮細胞の培養
正常ヒト表皮角化細胞（Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；  ＮＨＥＫ（ＡＤ））を２１ｃｍ２ディッシュにおいて正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清液体培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２；Ｋｕｒａｂｏ社製）で３７℃、５％ＣＯ２条件下で前培養し、サブコンフルエントになるまで培養した。
次に、各試験用サンプルを培養液に添加した。ワインは、培養液中での濃度が元の各組成物（ワイン）の１／４００相当量となるように、各試験用サンプルを培養液に添加した。
各試験用サンプルを添加後、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。
【０１１２】
また、コントロールとして、各試験用サンプルの代わりに、５０％エタノールを培養液５ｍＬに対し０．０１２５ｍＬ添加した。
また、ポジティブコントロールとして、各試験用サンプルの代わりに、培養液中での濃度が、２μＭとなるようにレチノイン酸を培養液に添加した。
各コントロールとなる組成物を添加した後、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。
【０１１３】
（３）アクアポリン３の発現量の測定
上記「（２）皮膚上皮細胞の培養」における皮膚上皮細胞の培養後、ＩＳＯＧＥＮ（株式会社ニッポンジーン製）を用いて各培養細胞からＲＮＡを抽出した。
得られたＲＮＡ  １μｇからＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いてｃＤＮＡ合成をした。
その後、表４に示すプライマー（配列番号１及び配列番号２の塩基配列を有するプライマー）を用いて、リアルタイムＰＣＲを行いアクアポリン３（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００４９２５）の発現を検出した。
ＰＣＲにはＫＯＤ  ＳＹＢＲ  ｑＰＣＲ  Ｍｉｘ（ＴＯＹＯＢＯ社製）を用い、反応条件は、熱変性は９８℃で１０秒、アニーリングは６０℃で１０秒、伸長反応は６８℃で３０秒とした。
増幅過程の蛍光強度を定量ＰＣＲ装置ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）により一定の蛍光強度が得られるまでのサイクル数をモニタリングし、アクアポリン３のサイクル数からスタンダード法を用いて発現量を算出した。
また、リアルタイムＰＣＲによりアクアポリン３の発現量を検出すると同時に、表４に示すプライマー（配列番号３及び配列番号４の塩基配列を有するプライマー）を用いて、ハウスキーピングジーンであるｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ）（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００２０４６）の発現量も測定した。
【０１１４】
【表４】
2019066031.tif 000009
【０１１５】
各培養細胞のアクアポリン３の発現量を、ＧＡＰＤＨの発現量で補正した後、コントロールにおけるアクアポリン３の発現量を１．０として、相対的な発現量を算出した。
なお、本試験では、最低標本数を３とした。
結果を図２及び表５に示す。
図２は、本発明の実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
なお、本試験では、Ｅｘｃｅｌを用いて統計解析を行い、統計学的有意差検定にｔ検定を用いて、有意水準は５％（両側）とした。
また、図２中のエラーバーは、標準誤差（ＳＥ）を示し、符号「＊」は、ｐ値が０．０５未満であること（ｐ＜０．０５）を示し、符号「＊＊」は、ｐ値が０．０１未満（ｐ＜０．０１）を示している。
【０１１６】
【表５】
2019066031.tif 000010
【０１１７】
図２及び表５に示すように、実施例２−１〜実施例２−８に係る組成物を使用することにより、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量が増加した。
【０１１８】
（実施例に係る組成物の分画）
アクアポリン３の発現量を増加させる化合物を検索するため、上記実施例２−６に係る組成物を以下の方法により分画した。
まず、１２Ｌの実施例２−６に係る組成物を減圧濃縮によりエタノールを溜去した。
その後、エタノール溜去した組成物を、水で平衡化した１０ＬのＨＰ−２ＭＧ（Ｓｕｐｅｌｃｏ社製，ＵＳＡ）カラムに負荷し、２０Ｌの蒸留水で洗浄後、３０Ｌの７０％エタノールで溶出した。
７０％エタノール溶出画分を減圧濃縮、凍結乾燥を行った。
この乾燥物５００ｍｇをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（１Ｌ，  ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムに負荷し、各々４Ｌの１％ギ酸を含む１０％、２０％、３０％、４０％、５０％及び６０％メタノール／水で溶出し、６つの画分に分画した。５０％メタノール画分にはガロイル基を含むフラバン−３−オール２量体（ダイマー）が、６０％メタノール画分にはガロイル基を含むフラバン−３−オール３量体（トリマー）が存在していた。
各試験用サンプルの代わりに、各分画を培養液５ｍＬに対し０．０１２５ｍＬ添加した以外は、上記「アクアポリン３の発現量評価方法」と同じ方法で、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を測定した。
なお、本試験では、標本数を３とした。
結果を図３及び表６に示す。
図３は、実施例２−６に係る組成物の画分を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
なお、本試験では、Ｅｘｃｅｌを用いて統計解析を行い、統計学的有意差検定にｔ検定を用いて、有意水準は５％（両側）とした。
また、図３中のエラーバーは、標準誤差（ＳＥ）を示し、符号「＊」は、ｐ値が０．０５未満であること（ｐ＜０．０５）を示し、符号「＊＊」は、ｐ値が０．０１未満（ｐ＜０．０１）を示している。
【０１１９】
【表６】
2019066031.tif 000011
【０１２０】
図３及び表６に示すように、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させる作用を有する化合物は、２０％メタノール／水の画分及び６０％メタノール／水の画分に多く含まれることが示唆された。
【０１２１】
＜製造例１＞
下記方法により、実施例及び比較例で用いるフラバン−３−オールモノマー及び／又は重合体を準備した。
ＥＣ−ＥＣＧ、ＥＣ−ＣＧの合成は論文（Ｆｏｏｄ  ｃｈｅｍ．，  ２０１８，  Ｔａｋａｈｉｒｏ  Ｆｕｊｉｍａｋｉ  ｅｔ．  ａｌ  ２４８，  Ｐ６１−６９）に従い得られた物を用いた。
プロシアニジンＢ３（以下、Ｃ−Ｃ）、プロシアニジンＢ４（以下、Ｃ−ＥＣ）、Ｃ−ＥＣＧ及びＣ−Ｃ−ＥＣＧの合成は論文（Ｆｏｏｄ  ｃｈｅｍ．，  ２０１８，  Ｔａｋａｈｉｒｏ  Ｆｕｊｉｍａｋｉ  ｅｔ．  ａｌ  ２４８，  Ｐ６１−６９）に準じ、以下のように行った。
Ｃ−Ｃ  ；（＋）−ｔａｘｉｆｏｌｉｎ（Ｅｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ社製）５００ｍｇをエタノール５０ｍｌに溶解し、ＮａＢＨ４を２００ｍｇ加えて４５分間室温で撹拌した。この溶液に（＋）−ｃａｔｅｃｈｉｎ（Ｃ）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、１ｇを加え溶解後、ＨＣｌ（０．１Ｎ）を６０ｍｌ加え１時間撹拌した。反応物を逆相のＨＰＬＣで精製し、Ｃ−Ｃを２００ｍｇと、Ｃ−Ｃ−Ｃトリマーを１ｍｇ得た。
Ｃ−ＥＣ；（＋）−ｔａｘｉｆｏｌｉｎ５００ｍｇを、エタノール５０ｍｌに溶解し、ＮａＢＨ４を２００ｍｇ加えて４５分間室温で撹拌した。この溶液に（−）−ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ（ＥＣ）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社製）１ｇを加え溶解後、ＨＣｌ（０．１Ｎ）を６０ｍｌ加え１時間撹拌した。反応物を逆相のＨＰＬＣで精製し、Ｃ−ＥＣ  ２００ｍｇを得た。
Ｃ−ＥＣＧ及びＣ−Ｃ−ＥＣＧ；（＋）−ｔａｘｉｆｏｌｉｎ、３５０ｍｇ（１．１５ｍｍｏｌ）をエタノール２０ｍｌに溶解し、ＮａＢＨ４を７０ｍｇ加えて４５分間室温で撹拌した。この溶液に（−）−ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ−３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ（ＥＣＧ）、４２０ｍｇ（０．９５ｍｍｏｌ，富士フイルム和光純薬株式会社製）を加え溶解後、ＨＣｌ（０．１Ｎ）を４０ｍｌ加え１時間撹拌した。反応物を逆相のＨＰＬＣで精製し、Ｃ−ＥＣＧを９６ｍｇ、Ｃ−Ｃ−ＥＣＧを３４ｍｇ得た。
Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ  Ｂ１（以下、ＥＣ−Ｃ）はＥｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ社製、Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ  Ｂ２（以下、ＥＣ−ＥＣ）は  Ｔｒｏｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．社製、ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎ  Ｃ１（ＰＣ１）は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社製を用いた。
【０１２２】
（参考例１及び２、実施例３−１〜３−４、比較例２−１〜２−４  ）
表７に示すカテキン（Ｃ）（比較例２−１、２−２）、エピカテキン（ＥＣ）（比較例２−３、２−４）、エピカテキンガレート（ＥＣＧ）（実施例３−１、３−２）、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）（実施例３−３、３−４）について、アクアポリン３発現促進活性を測定した。
ＥＧＣＧは、富士フイルム和光純薬株式会社製を用いた。
参考例１として細胞培養液をコントロールとし、参考例２（ポジティブコントロール）としてレチノイン酸（ＲＡ）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を用いた。
【０１２３】
（アクアポリン３の発現量評価方法）
各化合物を正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清液体培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２；Ｋｕｒａｂｏ社製）で溶解し試験用サンプルを準備した。上記以外は、上述の実施例２−１〜２−２と同様にして、参考例１及び２、実施例３−１〜３−４及び比較例２−１〜２−４に係るアクアポリン３の発現量を評価した。なお、実施例３−１〜３−４及び比較例２−１〜２−４では、化合物の培養液中の濃度が、３０μＭ又は５０μＭになるように各試験用サンプルを培養液に添加した。コントロールは、培養液とした。
結果を表７及び図４に示す。
図４は、参考例１及び２、実施例３−１〜３−４及び比較例２−１〜２−４に係る化合物を用いたアクアポリン３の発現量の測定結果を示すグラフである。
なお、本試験では、Ｅｘｃｅｌを用いて統計解析を行い、統計学的有意差検定にｔ検定を用いて、有意水準は５％（両側）とした。
また、図４中のエラーバーは、標準誤差（ＳＥ）を示し、符号「＊」は、ｐ値が０．０５未満であること（ｐ＜０．０５）を示し、符号「＊＊」は、ｐ値が０．０１未満（ｐ＜０．０１）を示している。
【０１２４】
【表７】
2019066031.tif 000012
【０１２５】
（参考例３及び４、実施例４−１〜４−４及び比較例３−１〜３−８）
カテキンなどのフラバン−３−オールモノマーの代わりに、表８に示すＥＣ−Ｃ（比較例３−１及び３−２）、ＥＣ−ＥＣ（比較例３−３、３−４）、Ｃ−Ｃ（比較例３−５及び３−６）及びＣ−ＥＣ（比較例３−７及び３−８）を使用した以外は、上記比較例２−１〜２−４と同様にしてアクアポリン３発現促進活性を測定した。
また、ガロイル基を有するフラバン−３−オール２量体として、表８に示すＣ−ＥＣＧ（ＰＢ４−ＧＡ）（実施例４−１及び４−２）、ＥＣ−ＣＧ（実施例４−３及び４−４）を用いた以外は、実施例３−１〜３−４と同様にしてアクアポリン３発現促進活性を測定した。
また、参考例３として細胞培養液をコントロールとし、参考例４（ポジティブコントロール）としてレチノイン酸（ＲＡ）を用いた。測定結果を表８及び図５に示す。
【０１２６】
【表８】
2019066031.tif 000013
【０１２７】
（参考例５及び６、実施例５−１〜５−２及び比較例４−１〜４−４）
カテキンなどのフラバン−３−オールモノマーの代わりに、表９に示すように、フラバン−３−オール３量体（ＥＣ−ＥＣ−ＥＣ（ＰＣ１）（比較例４−１、４−２）、Ｃ−Ｃ−Ｃ（比較例４−３、４−４））を比較例として使用した以外は、上記比較例２−１〜２−４と同様にしてアクアポリン３発現促進活性を測定した。
また、ガロイル基を有するフラバン−３−オール３量体として、表９に示す、Ｃ−Ｃ−ＥＣＧ（実施例５−１、５−２）を用いた以外は、実施例３−１〜３−４と同様にしてアクアポリン３発現促進活性を測定した。
また、参考例５として細胞培養液をコントロールとし、参考例６（ポジティブコントロール）としてレチノイン酸（ＲＡ）を用いた。測定結果を表９及び図６に示す。
【０１２８】
【表９】
2019066031.tif 000014
【０１２９】
上記表６〜９及び図４〜６の結果から、フラバン−３−オールモノマー、及び、２量体以上のフラバン−３−オール重合体で、ガロイル基を有する化合物（すなわち、ガロイル基を有するフラバン−３−オールモノマー及びガロイル基を有するフラバン−３−オール重合体）は、アクアポリン３の発現を増加させる効果を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１３０】
本発明の組成物は、肌の潤いを向上させるため、及び、皮膚上皮細胞のアクアポリン３の発現量を増加させるために使用することができる。
【図１】
2019066031.tif 000019
【図２】
2019066031.tif 000020
【図３】
2019066031.tif 000021
【図４】
2019066031.tif 000022
【図５】
2019066031.tif 000023
【図６】
2019066031.tif 000024
【配列表】
2019066031000001.app
【国際調査報告】
2019066031.tif 000025
2019066031.tif 000026
2019066031.tif 000027
2019066031.tif 000028