(57)【要約】本発明は、従来よりも効果的な骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症治療剤又は予防剤を提供することを目的とする。式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩と活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグを併用することによって、単独の投与に比較して、優れた骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症治療効果又は予防効果が得られる。
2010087517.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の（ａ）及び（ｂ）を有効成分として含有する骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤：
（ａ）下記式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩；および
（ｂ）活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグ：
2010087517.tif 000019
［前記式（Ｉ）中、
Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ１２アリール；Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール；又はＮＲ５Ｒ６であり；
Ｒ２は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；アミノ；Ｃ１〜３ジアルキルアミノ；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，もしくはＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；ＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；又はＮ−メチルカルバモイルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ；無置換もしくはハロゲンで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルアミノ；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ１〜６アルカノイルオキシ；Ｃ２〜６アルケニルオキシ；フェニル−Ｃ１〜６アルコキシ；フェノキシ；Ｃ２〜６アルケノイルオキシ；フェニル−Ｃ１〜６アルカノイルオキシ；カルボキシ，エステル化されたカルボキシ，又はアミド化されたカルボキシで置換されたＣ３〜６シクロアルキルオキシ；あるいはアミノオキシであり；
Ｒ５は、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；あるいはヒドロキシ，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキルであり；
Ｒ７は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ８は、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ１〜３アルコキシで置換されたＣ１〜３アルキル；又は４−ピリジノイルであり；
Ｘ１は、−Ｏ−；−Ｓ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−であり；
Ｘ２は、Ｃ３〜７アルキレン；Ｃ３〜７アルキレンカルボニル；又はＣ１〜３アルキレン−フェニレン−Ｃ１〜３アルキレンであり；
Ｘ３は、−Ｏ−；−Ｓ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−；を表す。］
【請求項２】
１）Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるとき、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；アミノ；Ｃ１〜３ジアルキルアミノ；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；あるいはＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；
２）Ｒ１が、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルであるとき、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；又はＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；
３）Ｒ１が、Ｃ６〜Ｃ１２アリール又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリールであるとき、
Ｒ２は、ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜Ｃ３アルキル；
４）Ｒ１が、ＮＲ５Ｒ６であるとき、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜Ｃ３アルキル；あるいはＮ−メチルカルバモイルである、請求項１に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
１）Ｒ５が、水素であるとき、
Ｒ６は、水素；又はＣ１〜Ｃ６アルキル；
２）Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるとき、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；ヒドロキシ，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，及びＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルから選択される基で置換されたＣ１〜３アルキル；である、請求項１又は２に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項４】
１）Ｒ７が、水素であるとき、
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル；あるいはＣ１〜３アルコキシ又はＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；
２）Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるとき、
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル；
３）Ｒ７が、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルであるとき、
Ｒ８は、４−ピリジノイル；である、請求項１〜３のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項５】
Ｒ１が、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；シクロヘキシル；フェニル；３−ピリジニル；又はＮＲ５Ｒ６；である、請求項１〜４のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項６】
Ｒ２が、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；ブチル；ビニル；シクロペンチル；アミノ；ジメチルアミノ；塩素，ペンチル，フェニル，１−イミダゾリル，４−チオモルホリニル，４−モルホリニル，又はＮＲ７Ｒ８で置換されたメチル又はエチル；あるいはＮ−メチルカルバモイルで置換されたメチル又はエチル；である、請求項１〜５のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項７】
Ｒ３が、水素；である、請求項１〜６のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項８】
Ｒ４が、水素；又はフッ素；である、請求項１〜７のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項９】
Ｒ５が、水素；メチル；エチル；プロピル；又はイソプロピル；である、請求項１〜８のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１０】
Ｒ６が、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；あるいはヒドロキシ，フェニル，３−ピリジニル又は４−モルホリニルで置換されたメチル又はエチル；である、請求項１〜９のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１１】
Ｒ７が、水素；メチル；エチル；又はシクロプロピル；である、請求項１〜１０のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１２】
Ｒ８が、水素；メチル；エチル；イソプロピル；３−イソプロピルオキシプロピル；又は４−ピリジノイル；である、請求項１〜１１のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１３】
Ｘ１が、Ｏ；
Ｘ２が、ブチレン；ペンチレン；
2010087517.tif 000020
Ｘ３が、−Ｏ−；−ＮＨ−；又はＮ（ＣＨ３）−；
である、請求項１〜１２のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１４】
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３が、
2010087517.tif 000021
である、請求項１〜１３のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１５】
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体が、以下の化合物のいずれかである、請求項１に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤：
１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ベンジル−２−（ピリジン−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−クロロエチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチルメチル−２−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ビニル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
６）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチルメチル−２−メチルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
７）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−（２−ヒドロキシエチル）メチルアミノ−５−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
８）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ベンジルメチルアミノ−５−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
９）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−メチル−２−（メチル（ピリジン−３−イルメチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１０）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ベンジルメチルアミノ−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ジプロピルアミノ−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−（メチル（ピリジン−３−イル−メチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ブチル−２−（メチル（２−（４−モルホリノ）エチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチルメチル−２−ジプロピルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチル−２−（メチル（２−（４−モルホリノ）エチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１６）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−ジプロピルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１７）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−ジメチルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１８）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペンタノイルアミノ｝ベンズアミジン
１９）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペンチルメチルアミノ｝ベンズアミジン
２０）Ｎ−ヒドロキシ−２−フルオロ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛４−［４−（２−シクロヘキシル−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ブトキシ｝ベンズアミジン
２２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛３−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシメチル］ベンジルオキシ｝ベンズアミジン
２３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（イミダゾール−１−イル）エチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（イソプロピルアミノ）エチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（３−（イソプロポキシ）プロピルアミノ）エチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２６）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−ジエチルアミノエチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２７）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−イソプロピル−５−（２−（チオモルホリン−４−イル）エチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２８）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−シクロヘキシル−５−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２９）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ジメチルアミノ−５−（２−（モルホリン−４−イル）エチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３０）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（シクロプロピル（ピリジン−４−カルボニル）アミノ）エチル）−２−イソプロピル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−アミノ−５−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−エチルメチルアミノ−５−（モルホリン−４−イルメチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−｛４−（２−（メチル（２−（モルホリン−４−イル）エチル）アミノ）−５−（チオモルホリン−４−イル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ジメチルアミノ−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン。
【請求項１６】
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体が、Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジンである、請求項１に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１７】
骨代謝異常に起因する疾患が骨吸収異常に起因する疾患である、請求項１〜１６のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１８】
骨代謝異常に起因する疾患が骨形成異常に起因する疾患である、請求項１〜１６のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項１９】
骨代謝異常に起因する疾患が骨粗鬆症である、請求項１〜１６のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２０】
（ｂ）が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３、１α，２４Ｒ−ジヒドロキシビタミンＤ３もしくは１α−ヒドロキシビタミンＤ３である、請求項１〜１９のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２１】
（ｂ）が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３もしくは１α−ヒドロキシビタミンＤ３である、請求項１〜１９のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２２】
（ａ）及び（ｂ）が合剤を構成する請求項１〜２１のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２３】
（ａ）及び（ｂ）がそれぞれ独立した単剤である請求項１〜２１のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２４】
（ａ）及び（ｂ）を含むキットである請求項１〜２１のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤に関し、特に骨粗鬆症の予防剤又は治療剤に関し、具体的には、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩、及び活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグを有効成分として含有する骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤又は予防剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩は、骨吸収抑制効果及び骨形成促進効果を有し、骨粗鬆症の治療剤又は予防剤として期待されるものである。式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩は、特許文献１、２、３又は４に開示されている。
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体の１つである、式（ＩＩ）で表されるＮ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン又はその塩は、骨吸収抑制効果及び骨形成促進効果を有し、骨粗鬆症の治療剤又は予防剤として期待されるものである。
2010087517.tif 000003
Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン又はその塩は、特許文献４及び非特許文献１に開示されている。
活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグは、骨活性化薬として骨代謝を調節し、骨粗鬆症をはじめカルシウム代謝異常に基づく疾患の治療薬として用いられている（非特許文献２）。
現在、使用できる骨粗鬆症治療薬は多数存在する。しかしながら、これらの併用による治療効果は一様ではない。例えば、ＰＴＨ（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅ；副甲状腺ホルモン）とある種のビスホスホン酸との組合せでは、治療効果が相殺されることが知られている。両者は代表的な骨粗鬆症治療薬であるが、併用投与した場合、それぞれ単独で投与された場合よりも治療効果が減弱するという前臨床試験及び臨床試験結果が報告されている（非特許文献３、４）。また、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグに関しても、骨へのカルシウムの定着作用を有するビタミンＫとの組み合わせにおいて、前述のＰＴＨとビスホスホン酸と同様に、併用投与した場合それぞれ単独で投与された場合よりも治療効果が減弱するという臨床試験結果が報告されている（非特許文献５）
以上の例からも考えられるように、既存若しくは新規の骨粗鬆症治療薬による、より効果の高い治療方法若しくは予防方法を見出すことは容易に想定できるものではない。
【特許文献１】特表２００８−５０９１３４号公報
【特許文献２】特表２００９−５２５３２１号公報
【特許文献３】ＷＯ２００９／０１７３４６パンフレット
【特許文献４】特表２００４−５３７５４９号公報
【非特許文献１】李ソンウン，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｎｅｗ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＬＴＢ４  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，釜山大学校大学院理学博士学位論文，１９９９．８
【非特許文献２】中村利孝、松本俊夫、加藤茂明監修，「骨代謝と活性型ビタミンＤ  −過去と現在、そして未来−」，ライフサイエンス出版，２００６年９月２５日発行
【非特許文献３】Ｒ  Ｓａｍａｄｆａｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，第１４８巻６号，２００７
【非特許文献４】ＤＭ  Ｂｌａｃｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第３４９巻１３号，２００３
【非特許文献５】小林千益、白木正孝、高岡邦夫，「骨粗鬆症治療におけるビタミンＫ併用療法の現状」，ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＣＡＬＣＩＵＭ，第１７巻  １１号，２００７年
【発明の開示】
【０００３】
本発明の目的は、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症に関し、既存薬に比べてより効果の高い治療剤若しくは予防剤を提供することである。さらに本発明の目的は、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症に関し、既存の治療方法若しくは予防方法に比べて、より効果の高い治療方法若しくは予防方法を提供することである。
本発明者らは、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤又は予防剤として有効な成分について鋭意研究を行ったところ、単独で用いうる特定の薬剤を併用することによって、それぞれ単独で用いるよりも格段に優れた薬効が得られることを見出した。
すなわち、本発明は、下記である。
（１）下記の（ａ）及び（ｂ）を有効成分として含有する骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（ａ）下記式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩。
（ｂ）活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグ。
2010087517.tif 000004
［前記式（Ｉ）中、
Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ１２アリール；Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール；又はＮＲ５Ｒ６であり；
Ｒ２は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；アミノ；Ｃ１〜３ジアルキルアミノ；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；ＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；又はＮ−メチルカルバモイルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ；無置換もしくはハロゲンで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルアミノ；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ１〜６アルカノイルオキシ；Ｃ２〜６アルケニルオキシ；フェニル−Ｃ１〜６アルコキシ；フェノキシ；Ｃ２〜６アルケノイルオキシ；フェニル−Ｃ１〜６アルカノイルオキシ；カルボキシ，エステル化されたカルボキシ，又はアミド化されたカルボキシで置換されたＣ３〜６シクロアルキルオキシ；又はアミノオキシであり；
Ｒ５は、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；ヒドロキシ，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール、又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキルであり；
Ｒ７は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ８は、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ１〜３アルコキシで置換されたＣ１〜３アルキル；又は４−ピリジノイルであり；
Ｘ１は、−Ｏ−；−Ｓ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−であり；
Ｘ２は、Ｃ３〜７アルキレン；Ｃ３〜７アルキレンカルボニル；又はＣ１〜３アルキレン−フェニレン−Ｃ１〜３アルキレンであり；
Ｘ３は、−Ｏ−；−Ｓ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−；を表す。］
（２）１）Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるとき、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；アミノ；Ｃ１〜３ジアルキルアミノ；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール、又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；又はＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；
２）Ｒ１が、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルであるとき、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；又はＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；
３）Ｒ１が、Ｃ６〜Ｃ１２アリール又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリールであるとき、
Ｒ２は、ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール、又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜Ｃ３アルキル；
４）Ｒ１が、ＮＲ５Ｒ６であるとき、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール、又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜Ｃ３アルキル；又はＮ−メチルカルバモイルである、（１）に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（３）１）Ｒ５が、水素であるとき、
Ｒ６は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；
２）Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるとき、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル；ヒドロキシ，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，及びＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルから選択される基で置換されたＣ１〜３アルキル；である、（１）又は（２）に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（４）１）Ｒ７が、水素であるとき、
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ１〜３アルコキシ又はＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；
２）Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるとき、
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル；
３）Ｒ７が、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルであるとき、
Ｒ８は、４−ピリジノイル；である、（１）〜（３）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（５）Ｒ１が、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；シクロヘキシル；フェニル；３−ピリジニル；又はＮＲ５Ｒ６；である、（１）〜（４）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（６）Ｒ２が、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；ブチル；ビニル；シクロペンチル；アミノ；ジメチルアミノ；塩素，ペンチル，フェニル，１−イミダゾリル，４−チオモルホリニル，４−モルホリニル，ＮＲ７Ｒ８で置換されたメチル又はエチル；あるいはＮ−メチルカルバモイルで置換されたメチル又はエチル；である、（１）〜（５）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（７）Ｒ３が、水素；である、（１）〜（６）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（８）Ｒ４が、水素；又はフッ素；である、（１）〜（７）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（９）Ｒ５が、水素；メチル；エチル；プロピル；又はイソプロピル；である、（１）〜（８）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１０）Ｒ６が、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；あるいはヒドロキシ，フェニル，３−ピリジニル又は４−モルホリニルで置換されたメチル又はエチル；である、（１）〜（９）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１１）Ｒ７が、水素；メチル；エチル；又はシクロプロピル；である、（１）〜（１０）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１２）Ｒ８が、水素；メチル；エチル；イソプロピル；３−イソプロピルオキシプロピル；又は４−ピリジノイル；である、（１）〜（１１）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１３）Ｘ１が、−Ｏ−；
Ｘ２が、ブチレン；ペンチレン；
2010087517.tif 000005
Ｘ３が、−Ｏ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（ＣＨ３）−；である、（１）〜（１２）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１４）
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３が、
2010087517.tif 000006
である、（１）〜（１３）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１５）式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体が、以下の化合物のいずれかである、（１）に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ベンジル−２−（ピリジン−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−クロロエチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチルメチル−２−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ビニル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
６）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチルメチル−２−メチルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
７）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−（２−ヒドロキシエチル）メチルアミノ−５−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
８）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ベンジルメチルアミノ−５−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
９）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−メチル−２−（メチル（ピリジン−３−イルメチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１０）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ベンジルメチルアミノ−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ジプロピルアミノ−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−（メチル（ピリジン−３−イル−メチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ブチル−２−（メチル（２−（４−モルホリノ）エチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチルメチル−２−ジプロピルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−シクロペンチル−２−（メチル（２−（４−モルホリノ）エチル）アミノ）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１６）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−ジプロピルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１７）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−ジメチルアミノ−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
１８）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペンタノイルアミノ｝ベンズアミジン
１９）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペンチルメチルアミノ｝ベンズアミジン
２０）Ｎ−ヒドロキシ−２−フルオロ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛４−［４−（２−シクロヘキシル−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ブトキシ｝ベンズアミジン
２２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛３−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシメチル］ベンジルオキシ｝ベンズアミジン
２３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（イミダゾール−１−イル）エチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（イソプロピルアミノ）エチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（３−（イソプロポキシ）プロピルアミノ）エチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２６）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−ジエチルアミノエチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２７）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−イソプロピル−５−（２−（チオモルホリン−４−イル）エチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２８）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−シクロヘキシル−５−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
２９）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−ジメチルアミノ−５−（２−（モルホリン−４−イル）エチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３０）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（２−（シクロプロピル（ピリジン−４−カルボニル）アミノ）エチル）−２−イソプロピル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３１）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−アミノ−５−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３２）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３３）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（２−エチルメチルアミノ−５−（モルホリン−４−イルメチル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３４）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−｛４−（２−（メチル（２−（モルホリン−４−イル）エチル）アミノ）−５−（チオモルホリン−４−イル）−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
３５）Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−ジメチルアミノ−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジン
（１６）式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体が、Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝ベンズアミジンである、（１）に記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１７）骨代謝異常に起因する疾患が骨吸収異常に起因する疾患である、（１）〜（１６）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１８）骨代謝異常に起因する疾患が骨形成異常に起因する疾患である、（１）〜（１６）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（１９）骨代謝異常に起因する疾患が骨粗鬆症である、（１）〜（１６）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（２０）（ｂ）が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３、１α，２４Ｒ−ジヒドロキシビタミンＤ３もしくは１α−ヒドロキシビタミンＤ３である、（１）〜（１９）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（２１）（ｂ）が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３もしくは１α−ヒドロキシビタミンＤ３である、（１）〜（１９）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（２２）（ａ）及び（ｂ）が合剤を構成する（１）〜（２１）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（２３）（ａ）及び（ｂ）がそれぞれ独立した単剤である（１）〜（２１）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
（２４）（ａ）及び（ｂ）を含むキットである（１）〜（２１）のいずれかに記載の骨代謝異常に起因する疾患の治療剤又は予防剤。
また、本発明は、上記（ａ）及び（ｂ）を有効成分として含有する剤を投与することを特徴とする骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療方法又は予防方法である。
発明の効果
本発明は、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩と、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグの両者を有効成分として含有する、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤若しくは予防剤である。また、本発明は、これら剤を投与することを特徴とする骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療方法若しくは予防方法であり、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩と、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグの、いずれか単独で使用するよりも、両有効成分を併用して投与することで格段に強い治療効果又は予防効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン（以下、化合物１という）溶液、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液、ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯという）（化合物１溶液の調製溶媒）、エタノール（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液の調製溶媒）のうち、それぞれ二つで併用刺激したラット骨肉腫細胞株（ＲＯＳ１７／２．８細胞）の細胞増殖促進効果を示したグラフである。
【図２】Ｎ−ヒドロキシ−４−５−［４−（２−ジプロピルアミノ−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ−ベンズアミジン（以下、化合物１１という）溶液、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液、ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯという）（化合物１１溶液の調製溶媒）、エタノール（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液の調製溶媒）のうち、それぞれ二つで併用刺激したラット骨肉腫細胞株（ＲＯＳ１７／２．８細胞）の細胞増殖促進効果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本発明で用いられる式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩は、優れた骨吸収抑制効果及び骨形成促進効果を有し、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤又は予防剤として期待されるものである。
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体は、特許文献１、２又は３及び非特許文献１に記載があり、これらの特許文献の記載などにより製造可能である。
本発明における式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体は、下記の化合物である。
2010087517.tif 000007
［前記式（Ｉ）中、
Ｒ１は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；Ｃ６〜Ｃ１２アリール；Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール；又はＮＲ５Ｒ６であり；
Ｒ２は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；Ｃ２〜Ｃ６アルケニル；Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；アミノ；Ｃ１〜３ジアルキルアミノ；ハロゲン，Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキル；ＮＲ７Ｒ８で置換されたＣ１〜３アルキル；又はＮ−メチルカルバモイルであり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ；無置換もしくはハロゲンで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルアミノ；Ｃ１〜６アルコキシ；Ｃ１〜６アルカノイルオキシ；Ｃ２〜６アルケニルオキシ；フェニル−Ｃ１〜６アルコキシ；フェノキシ；Ｃ２〜６アルケノイルオキシ；フェニル−Ｃ１〜６アルカノイルオキシ；カルボキシ，エステル化されたカルボキシ，又はアミド化されたカルボキシで置換されたＣ３〜６シクロアルキルオキシ；又はアミノオキシであり；
Ｒ５は、水素又はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；ヒドロキシ，Ｃ６〜Ｃ１２アリール，Ｎ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜１２員環ヘテロアリール、又はＮ，Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含有するＣ３〜６ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキルであり；
Ｒ７は、水素；Ｃ１〜Ｃ６アルキル；又はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ８は、水素；Ｃ１〜Ｃ４アルキル；Ｃ１〜３アルコキシで置換されたＣ１〜３アルキル；又は４−ピリジノイルであり；
Ｘ１は、−Ｏ−；−Ｓ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−であり；
Ｘ２は、Ｃ３〜７アルキレン；Ｃ３〜７アルキレンカルボニル；又はＣ１〜３アルキレン−フェニレン−Ｃ１〜３アルキレンであり；
Ｘ３は、−Ｏ−；−Ｓ−；−ＮＨ−；又は−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）−；を表す。］
また、Ｒ１は、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；シクロヘキシル；フェニル；３−ピリジニル；又はＮＲ５Ｒ６が好ましく、さらに、メチル；エチル；イソプロピル；シクロヘキシル；３−ピリジニル；又はＮＲ５Ｒ６がより好ましい。
Ｒ２は、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；ブチル；ビニル；シクロペンチル；アミノ；ジメチルアミノ；塩素，ペンチル，フェニル，１−イミダゾリル，４−チオモルホリニル，４−モルホリニル，又はＮＲ７Ｒ８で置換されたメチル又はエチル；あるいはＮ−メチルカルバモイルで置換されたメチル又はエチルが好ましく、さらに、メチル；エチル；イソプロピル；ブチル；ビニル；シクロペンチル；ジメチルアミノ；塩素，ペンチル，フェニル，１−イミダゾリル，４−チオモルホリニル，４−モルホリニル，又はＮＲ７Ｒ８で置換されたメチル又はエチル；あるいはＮ−メチルカルバモイルで置換されたメチル又はエチルがより好ましい。
Ｒ３は、水素が好ましい。
Ｒ４は、水素；又はフッ素が好ましい。
Ｒ５は、水素；メチル；エチル；プロピル；又はイソプロピルが好ましく、さらに、水素；メチル；エチル；プロピルがより好ましい。
Ｒ６は、水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；あるいはヒドロキシ，フェニル，３−ピリジニル又は４−モルホリニルで置換されたメチル又はエチルが好ましく、さらに、水素；メチル；エチル；プロピル；あるいはヒドロキシ，フェニル，３−ピリジニル又は４−モルホリニルで置換されたメチル又はエチルがより好ましい。
Ｒ７は、水素；メチル；エチル；又はシクロプロピルが好ましい。
Ｒ８は、水素；メチル；エチル；イソプロピル；３−イソプロピルオキシプロピル；又は４−ピリジノイルが好ましい。
Ｘ１は、−Ｏ−；
Ｘ２は、ブチレン；ペンチレン；
2010087517.tif 000008
Ｘ３は、−Ｏ−；−ＮＨ−；又はＮ（ＣＨ３）−；が好ましい。
さらに、Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３は、
2010087517.tif 000009
が好ましい。
特に、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体として、表１に記載の誘導体又はその塩が好ましい。なかでも、化合物番号１のＮ−ヒドロキシ−４−５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ−ベンズアミジンが特に好ましい。
これらは、優れた骨吸収抑制効果及び骨形成促進効果を有し、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤又は予防剤として期待されるものであり、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグとの併用が可能であり、両者を有効成分として含有する剤は骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤若しくは予防剤として有用である。
【表１】
2010087517.tif 000010
2010087517.tif 000011
2010087517.tif 000012
2010087517.tif 000013
2010087517.tif 000014
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩の脱ヒドロキシ体である、ベンズアミジン誘導体又はその塩も、優れた骨吸収抑制効果及び骨形成促進効果を有し、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤又は予防剤として期待されるものであり、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグとの併用が可能で、両者を有効成分として含有する剤は骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤若しくは予防剤として有用である。
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体の塩としては、無機酸（塩酸、臭素酸、硫酸及びリン酸）や有機酸（クエン酸、酢酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、ギ酸、プロピオン酸、シュウ酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、安息香酸、マレイン酸、グルコン酸、グリコール酸、コハク酸、４−トルエンスルホン酸、ガラクトロン酸、エンボン酸、グルタミン酸又はアスパラギン酸）を用いた、薬剤学的に許容されるものが挙げられる。本発明においては、無機酸としては塩酸が、また有機酸としてはメタンスルホン酸又はエタンスルホン酸が好ましく用いられる。
式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩の投与量としては、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の予防又は治療に有効な量であり、かつ、患者の年齢、体重、併用療法の種類、治療の頻度、望まれる効果の種類、あるいは投与法等によるため一概には決められないが一般に治療剤又は予防剤として用いる場合には、通常投与される量で可能である。
本発明で用いられる活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグは、ビタミンＤ受容体と親和性を有し、それに基づく生理作用を発現する化合物であれば特に限定されない。一例として、活性型ビタミンＤとしては、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオール）、１α，２４Ｒ−ジヒドロキシビタミンＤ３（タカルシトール）、２β−（３−ヒドロキシプロポキシ）−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（エルデカルシトール、ＥＤ−７１）、１α，２５−ジヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ３（２ＭＤ）、１α，２５−ジヒドロキシ−２２−オキサビタミンＤ３（マキサカルシトール、ＯＣＴ）、１α，２４Ｓ−ジヒドロキシ−２２，２３：２６，２７−テトラデヒドロ−ビタミンＤ３（カルシポトリオール、ＭＣ９０３）、１α，２５−ジヒドロキシ−２６，２６，２６，２７，２７，２７−ヘキサフルオロビタミンＤ３（ファレカルシトリオール）、（２３Ｅ）−１α−フルオロ−２５−ヒドロキシ−１６，１７，２３，２４−テトラヒドロ−２６，２７−ビスホモ−２０−エピビタミンＤ３（エロカルシトール、ＢＸＬ−６２８）、１９−ノル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２（パリカルシトール）などが挙げられ、活性型ビタミンＤのプロドラッグとしては１α−ヒドロキシビタミンＤ３（アルファカルシドール）、１α−ヒドロキシビタミンＤ２（ドキサカルシフェロール）などが挙げられる。
本発明における活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグとしてはアルファカルシドールが好ましい。
本発明において式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩と、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグを併用するにあたって、それぞれ一種であっても、互いに二種以上を任意の割合で混合して用いてもよい。好ましくは、これらから選ばれる一つの化合物を併用することである。
本明細書において用いられる「プロドラッグ」とは、生体内において加水分解、代謝、誘導体化などを受けて所望の活性を有する活性化合物を生じる任意の化合物のことを言う。また、これらのプロドラッグは、生理的条件で活性化合物に変化するものであってもよい。更に、ビタミンＤでは、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ３（アルファカルシドール）に見られるように、生体内、主として肝臓において２５位が水酸化を受け、活性化合物である１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３に変換され、活性型ビタミンＤとして骨代謝に対する作用を発現することが知られている。このような水酸化を受ける前の１α−ヒドロキシビタミンＤ３のような化合物もプロドラッグに含まれる（１９９０年刊「医薬品の開発」第７巻「分子設計」、ｐ１８５−１８６、広川書店、１９９０年）。
ある種の活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグは、塩を形成しうる。本発明で用いられる、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグの塩としては、無機酸（塩酸、臭素酸、硫酸及びリン酸）や有機酸（クエン酸、酢酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、ギ酸、プロピオン酸、シュウ酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、安息香酸、マレイン酸、グルコン酸、グリコール酸、コハク酸、４−トルエンスルホン酸、ガラクトロン酸、エンボン酸、グルタミン酸又はアスパラギン酸）、あるいは、無機塩基（ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の金属塩等）又は有機塩基（アンモニア、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、プロパンジアミン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ピリジン、リジン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、Ｎ，Ｎ‐ジメチルエタノールアミン、４‐ヒドロキシピペリジン、グルコサミン、Ｎ‐メチルグルカミン等）を用いた、薬剤学的に許容されるものが挙げられる。
本発明の骨粗鬆症治療剤又は予防剤は、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグと、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩という２種類を有効成分として併用することにより、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症治療剤以上の骨密度及び／又は骨強度の向上効果を有する薬剤の提供を可能にするものである。また、本発明の薬剤は、毒性が低く、安定性にも優れたものである。併用とすることにより、各有効成分の投与量を単一で投与するときより減らすことも可能である。
活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグの投与量としては、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療又は予防に有効な量であり、かつ、患者の年齢、体重、併用療法の種類、治療の頻度、望まれる効果の種類、あるいは投与法等によるため、一概には決められないが、一般に治療剤又は予防剤として用いる場合には、通常の量を投与することが可能である。
本発明の骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤若しくは予防剤又は治療方法若しくは予防方法は、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩、及び活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグを有効成分として含有するものであればよい。両有効成分は混合して同時に投与することもできるが、それぞれを別々に同時又は連鎖的に、あるいは時間をおいて別々に投与することもできる。投与時が同時でない場合は、例えば、両有効成分を互いに交互に投与してもよいし、一方の有効成分を続けて投与した後に、他方の有効成分を投与してもよい。
本発明における薬剤は、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩、及び活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグを有効成分として含有していればよく、どのような形態の薬剤であっても構わない。例えば、両有効成分を含む合剤を構成しても良いし、それぞれ単剤として構成しても良い。ここで合剤とは一つの製剤に２つ以上の有効成分を配合したものを指し、単剤とは一つの製剤に一つの有効成分を含むものを指す。なお、単剤の態様の場合、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグから複数の化合物が使われる場合は、それぞれを単剤として使用しても良いし、合剤として使用しても良いが、それぞれ単剤として使用する態様が好ましい。
本発明における両有効成分が単剤である場合の治療剤若しくは予防剤又は治療方法若しくは予防方法とは、それぞれ単一に利用できる単剤を、組み合わせて利用する薬剤又は方法を意味する。したがって、両有効成分を含む薬剤がそれぞれ異なる剤型であっても構わない。例えば、それぞれの剤の形態は、固体又は液体同士でもよいし、固体と液体でも良いし、特に限定されない。両有効成分が単剤の場合は、両剤を一式として揃えた状態である、キットの形態にしてもよい。代表的なキットの形態としては、一連の投与スケジュールに従って特定の期間（例えば１週間あるいはそれ以上の期間）に相当する両剤を１つのシートにまとめて包装したブリスターパッケージなどが挙げられる。他にも、剤の製造終了段階でＰＴＰ等で同一のパッケージがされたり、病院や薬局等で処方されるときに同一の袋に入れられたりしてもよく、特に限定されない。
合剤としては、例えば、両有効成分のそれぞれの効果が発揮できる適当量を合わせて、錠剤、カプセル剤、液剤などの剤形を製造することが挙げられる。このとき両有効成分を合わせて配合剤とするタイミングは、合剤として剤型の製造段階で行ってもよいし、投与する直前に配合するものであってもよい。製造段階で行う場合には、例えば各有効成分を適当量混合して、成型したり、詰め合わせたりすればよい。成型する方法としては、例えば、それぞれの剤を混合してもよいし、層状に積み重ねてもよく、特に限定されない。投与する直前に配合剤とする場合は、例えば投与直前までは、各有効成分はそれぞれ独立の状態で保存され、投与する時に、液体状の剤を混合したり、液体状の剤に錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、又はカプセル剤等の固体の剤を溶かしたり、顆粒剤又は散剤等の固体の剤同士を混合したりする方法がある。直前に混合するための方法としては、手作業で行ってもよいし、切断したり、引いたり、裂いたり、引き抜く等して、簡単に両剤が混ざるようなパッケージのものを使用してもよい。配合剤の形態としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、又はカプセル剤等の剤型がある。
また、本発明の骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症治療剤又は予防剤は、連日投与、又は間歇的に投与しても良く、一日当たりの投与回数は、１回又は２〜３回に分けて行うことができる。両有効成分がそれぞれ単剤である場合の投与回数は、同じ回数としても良いし、異なった回数とすることもできる。また、両剤が単剤であるときに、それぞれが通常投与される回数を組み合わせることでもよい。このように両剤が異なった投与回数を選択した場合においてもブリスターパッケージ等のキットの形態をとれば、利便性の向上が期待される。
本発明の式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩、及び活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグは、それらの有効成分のみ、あるいは以下に説明するような適当な添加剤とともに公知の方法で製剤化することができる。このような剤型の具体例としては、軟カプセル剤、硬カプセル剤、錠剤、シロップ剤等の経口剤、注射剤、あるいは外用剤を挙げることができる。
本発明の有効成分を含有する製剤は、通常製剤化に用いられる添加剤を用いて調製される。それら添加剤としては、固形製剤の場合、乳糖、白糖、ブドウ糖、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、及びリン酸水素カルシウム等の賦形剤；結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びポリビニルピロリドン等の結合剤；デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、及びカルボキシメチルスターチナトリム等の崩壊剤；タルク、及びステアリン酸類等の滑沢剤；ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、及びエチルセルロース等のコーティング剤；着色剤；半固形製剤の場合、白色ワセリン等の基剤、液状製剤の場合、エタノール等の溶剤、エタノール等の溶解補助剤、パラオキシ安息香酸エステル類等の保存剤、ブドウ糖等の等張化剤、クエン酸類等の緩衝剤、Ｌ−アスコルビン酸等の抗酸化剤、ＥＤＴＡ等のキレート剤、及びポリソルベート８０等の懸濁化剤・乳化剤、等を挙げることができる。
また、本発明における骨代謝の異常に起因する疾患は、骨粗鬆症に限らず、骨吸収異常に起因する疾患や、骨代謝のうち骨形成の低下に起因する疾患も該当する。骨形成の低下に起因する疾患としては、骨形成不全症、くる病、骨軟化症、続発性骨粗鬆症に区分される糖尿病性骨粗鬆症及びグルココルチコイド誘導骨粗鬆症等が挙げられる。また、さらに骨形成の促進により著しい治療効果若しくは予防効果が期待される疾患としては、遷延治癒骨折（難治性骨折及び偽関節）を含む骨折などが挙げられる。骨吸収異常に起因する疾患としては、関節リウマチ、骨パジェット病、高カルシウム血症、歯周骨喪失、腎性骨異栄養症、骨溶解性腫瘍及び骨転移性腫瘍などが挙げられる。本発明における、骨代謝異常に起因する疾患としては、骨粗鬆症が特に適している。
【実施例】
【０００６】
実施例１
Ｎ−ヒドロキシ−４−｛５−［４−（５−イソプロピル−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ｝−ベンズアミジン（化合物１）と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖に対する影響の検討（図１、表２）
ＲＯＳ１７／２．８細胞は、９６−ウェルプレートに２×１０４個／ウェルの密度で播き込んだ。培地には、１０％ウシ胎児血清を添加したアルファＭＥＭ培地（以下、１０％ＦＣＳ−αＭＥＭという）を用いた。一晩培養後、各ウェルから培地を除去し、０．５％ウシ胎児血清を添加したアルファＭＥＭ培地（以下、０．５％ＦＣＳ−αＭＥＭという）を添加した。約６時間の培養後、各ウェルから培地を除去し、ＤＭＳＯ及びエタノール（以下、溶液１という）、化合物１溶液及びエタノール（以下、溶液２という）、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液及びＤＭＳＯ（以下、溶液３という）、もしくは化合物１溶液及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液（以下、溶液４という）を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭを添加した。溶液１を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、ＤＭＳＯ及びエタノールを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行った。溶液２を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、１０−５Ｍの濃度の化合物１溶液及びエタノールを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行った。溶液３を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、１０−４Ｍの濃度の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液及びＤＭＳＯを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行った。溶液４を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、１０−５Ｍの濃度の化合物１溶液及び１０−４Ｍの濃度の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液を１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行った。約２４時間の培養後、ＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖に対する化合物１と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の影響をＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｔｒａｋ  ＥＬＩＳＡ  Ｓｙｓｔｅｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ  ２（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社製，コード番号ＲＰＮ２５０）を用いて評価した。すなわち、増殖している細胞に５−ｂｒｏｍｏ−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（ＢｒｄＵ）を取り込ませ、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識した抗ＢｒｄＵ抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により検出した。細胞に取り込まれたＢｒｄＵの定量はマイクロプレートリーダーで吸光度（４５０ｎｍ）を測定することにより行った。
結果を図１に示した。各溶液添加群におけるＢｒｄＵ取り込み量は、溶液１添加群において取り込まれたＢｒｄＵ量の４ウェルの平均値に対する百分率で求めた。グラフは、各溶液添加群の４ウェルの平均値±標準誤差で表示した。溶液２を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖は、溶液１を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意な差はなかった（ｎ．ｓ．，Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。また、溶液３を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖も、溶液１を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意な差はなかった（ｎ．ｓ．，Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。一方、溶液４を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖は、溶液１を含む１０％ＦＣＳ‐αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意に増加した（＊＊：ｐ＜０．０１、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。すなわち、化合物１及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の併用刺激でのみ、ＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖が亢進することが明らかとなった。
化合物１及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞増殖に対する相乗的作用をバルジの方法（高木敬次郎・小沢光  編著，「薬物学」、ｐ１８−１９，南山堂，１９８７年）にて検討した結果を表２に示した。バルジの方法では、それぞれ処置した群の値を基準群の値で除し相対指数を算出する。求めた各単独処置した群の相対指数の積と実際に併用処置した群の相対指数を比較し、併用処置群の値が優れている場合、相乗的な作用ありと判断し、同等であれば相加的な作用と判断する。逆に併用処置群の値が劣っていた場合、拮抗的な作用と判断する。
【表２】
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溶液１を添加した際のＢｒｄＵ取り込み量を１．０００として各溶液添加群のＢｒｄＵ取り込み量の相対指数を算出した。化合物１及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を併用添加した群の相対指数（１．５９６）は、各単独添加群の相対指数の積（１．２３３）よりも大きく、併用による相乗効果が認められた。
実施例２
Ｎ−ヒドロキシ−４−５−［４−（２−ジプロピルアミノ−５−エチル−１，３−チアゾール−４−イル）フェノキシ］ペントキシ−ベンズアミジン（化合物１１）と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖に対する影響の検討（図２、表３）
ＲＯＳ１７／２．８細胞は、９６−ウェルプレートに５×１０３個／ウェルの密度で播き込んだ。培地には、１０％ＦＣＳ−αＭＥＭを用いた。一晩培養後、各ウェルから培地を除去し、０．５％ＦＣＳ−αＭＥＭを添加した。約６時間の培養後、各ウェルから培地を除去し、ＤＭＳＯ及びエタノール（以下、溶液１という）、化合物１１溶液及びエタノール（以下、溶液５という）、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液及びＤＭＳＯ（以下、溶液３という）、もしくは化合物１１溶液及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液（以下、溶液６という）を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭを添加した。溶液１を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、ＤＭＳＯ及びエタノールを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行なった。溶液５を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、１０−５Ｍの濃度の化合物１１溶液及びエタノールを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行なった。溶液３を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、１０−４Ｍの濃度の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液及びＤＭＳＯを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行なった。溶液６を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、１０−５Ｍの濃度の化合物１１溶液及び１０−４Ｍの濃度の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液を１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行なった。約２４時間の培養後、ＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖に対する化合物１１と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の影響をＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｔｒａｋ  ＥＬＩＳＡ  Ｓｙｓｔｅｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ  ２（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社製，コード番号ＲＰＮ２５０）を用いて評価した。すなわち、増殖している細胞に５−ｂｒｏｍｏ−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（ＢｒｄＵ）を取り込ませ、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識した抗ＢｒｄＵ抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により検出した。細胞に取り込まれたＢｒｄＵの定量はマイクロプレートリーダーで吸光度（４５０ｎｍ）を測定することにより行なった。
結果を図２に示した。各溶液添加群におけるＢｒｄＵ取り込み量は、溶液１添加群において取り込まれたＢｒｄＵ量の４ウェルの平均値に対する百分率で求めた。グラフは、各溶液添加群の４ウェルの平均値±標準誤差で表示した。溶液５を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖は、溶液１を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意な差はなかった（ｎ．ｓ．，Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。また、溶液３を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖も、溶液１を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意な差はなかった（ｎ．ｓ．，Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。一方、溶液６を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖は、溶液１を含む１０％ＦＣＳ‐αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意な差はなかったが、明らかな細胞増殖傾向が認められた（ｐ＝０．０６６、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）。
化合物１１及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞増殖に対する相乗的作用をバルジの方法にて検討した結果を表３に示した。溶液１を添加した際のＢｒｄＵ取り込み量を１．０００として各溶液添加群のＢｒｄＵ取り込み量の相対指数を算出した。化合物１１及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を併用添加した群の相対指数（１．４４４）は、各単独添加群の相対指数の積（１．２２３）よりも大きく、併用による相乗効果が認められた。
【表３】
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実施例３
表１に示すＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体（以下、被試験化合物という）と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖に対する影響の検討（表４、表５）
ＤＭＳＯ及びエタノール（以下、溶液７という）、被試験化合物溶液及びエタノール（以下、溶液８という）、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液及びＤＭＳＯ（以下、溶液９という）、もしくは被試験化合物溶液及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液（以下、溶液１０という）を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭをそれぞれ１００μＬずつ分注した。これにＲＯＳ１７／２．８細胞を５×１０３個／１００μＬ／ウェルの密度で播き込んだ。約４８時間培養した後の被試験化合物と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖に対する影響をＭＴＴ法を用いて評価した。すなわち、約４４時間細胞培養した後にＭＴＴ液（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム・ブロミド２ｍｇ／ｍＬ）を２５μＬ／ウェルずつ添加し、さらに４時間培養する。培地を取り除いた後に、ＤＭＳＯ  １００μＬ／ウェルを添加し、生成されたホルマザンを溶解する。生成されたホルマザンの定量はマイクロプレートリーダーで吸光度（５６０ｎｍ）を測定することにより行なった。
また、溶液７を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、ＤＭＳＯを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈すること、及びエタノールを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１００００倍希釈することにより行なった。溶液８を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、２ｘ１０−５Ｍの濃度の被試験化合物溶液を１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈すること、及びエタノールを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１００００倍希釈することにより行なった。溶液９を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、２ｘ１０−３Ｍの濃度の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液を１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１００００倍希釈すること、及びＤＭＳＯを１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈することにより行なった。溶液１０を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの調製は、２ｘ１０−５Ｍの濃度の被試験化合物溶液を１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１０００倍希釈すること、及び２ｘ１０−３Ｍの濃度の１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３溶液を１０％ＦＣＳ−αＭＥＭで１００００倍希釈することにより行なった。
結果を表４に示した。各溶液添加群におけるホルマザン生成量は、溶液７添加群において生成されたホルマザン量の４ウェルの平均値に対する百分率で求めた。全ての定量値は、各溶液添加群の４ウェルの平均値±標準偏差で表示した。全ての溶液１０を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖は、それぞれ溶液８及び溶液９を含む１０％ＦＣＳ−αＭＥＭの存在下で培養したＲＯＳ１７／２．８細胞の細胞増殖と比べ、有意な差を認めた（＊；ｐ＜０．０５，＊＊；ｐ＜０．０１  ｖｓ．被試験化合物単独添加群，Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、＃；ｐ＜０．０５，＃＃；ｐ＜０．０１  ｖｓ．１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３単独添加群，Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定）。
【表４】
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被試験化合物及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のＲＯＳ１７／２．８細胞増殖に対する相乗的作用をバルジの方法にて検討した結果を表５に示した。溶液７を添加した際のホルマザン生成量を１．００として各溶液添加群のホルマザン生成量の相対指数を算出した。被試験化合物及び１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を併用添加した群の相対指数は、各単独添加群の相対指数の積よりも大きく、全ての被試験化合物と１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の併用において相乗効果が認められた。
【表５】
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骨は、骨形成を担う骨芽細胞と骨破壊を担う破骨細胞によって、常に新しい骨に置換され、質的及び量的に正常に維持されている。骨量の増加は、骨芽細胞と破骨細胞の量的もしくは機能的なバランスが相対的に骨形成に傾いた際に生じることは周知の事実である（須田立雄・小澤英浩・高橋榮明・田中栄・中村浩彰・森論史  編著，「新骨の科学」，医歯薬出版株式会社，２００７年）。特に骨芽細胞の量的及び機能的な増加は、骨形成促進に直接結びつくものと考えられ、本明細書実施例に用いたＲＯＳ１７／２．８細胞は骨肉腫由来の骨芽細胞様細胞であり、この細胞の増殖は骨形成作用促進を促すといえる。従って、これらの結果から、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩と活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグの併用は、それぞれの単独での使用と比較して、強い骨形成促進作用を示すことが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【０００７】
本発明は、式（Ｉ）で表されるＮ−ヒドロキシベンズアミジン誘導体又はその塩と、活性型ビタミンＤ又はそのプロドラッグとの併用は、骨代謝異常に起因する疾患、特に骨粗鬆症の治療剤若しくは予防剤又は治療方法若しくは予防方法として使用できる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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