(57)【要約】  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＶＥＧＦＲ）−１発現細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドからなる、脳神経疾患に対するペプチドワクチン。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＶＥＧＦＲ）−１発現細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドからなる、脳神経疾患に対するペプチドワクチン。
【請求項２】
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性である、請求項１に記載のペプチドワクチン。
【請求項３】
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号１に記載のアミノ酸配列、又は配列番号１に記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、請求項２に記載のペプチドワクチン。
【請求項４】
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性である、請求項１に記載のペプチドワクチン。
【請求項５】
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号２〜４のいずれかに記載のアミノ酸配列、又は配列番号２〜４のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、請求項４に記載のペプチドワクチン。
【請求項６】
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６結合性又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０７結合性である、請求項１に記載のペプチドワクチン。
【請求項７】
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性である、請求項１に記載のペプチドワクチン。
【請求項８】
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列、又は配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、請求項７に記載のペプチドワクチン。
【請求項９】
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性である、請求項１に記載のペプチドワクチン。
【請求項１０】
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列、又は配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、請求項９に記載のペプチドワクチン。
【請求項１１】
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６結合性又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０７結合性である、請求項１に記載のペプチドワクチン。
【請求項１２】
前記脳神経疾患が神経線維腫症ＩＩ型である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のペプチドワクチン。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のペプチドワクチンと、薬学的に許容される担体とを含有する、脳神経疾患に対するペプチドワクチン組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳神経疾患に対するペプチドワクチン及びペプチドワクチン組成物に関する。本願は、２０１７年５月１９日に、日本に出願された特願２０１７−１００３６１号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
脳神経疾患には、神経線維腫症ＩＩ型（ＮＦ２）、脳腫瘍、脳血管疾患、自己免疫疾患、眼科疾患等が存在する。例えば、ＮＦ２は、第２２番染色体長腕２２ｑ１２に存在する腫瘍抑制因子ｍｅｒｌｉｎの遺伝子異常により発症する常染色体優性の遺伝性疾患である。ＮＦ２は、左右両側に聴神経腫瘍（正確には前庭神経鞘腫）が発生することを指標として診断が確定される。ＮＦ２では多数の腫瘍が発生する。具体的には、脳神経、脊髄神経、末梢神経に神経鞘腫が発生し、更に、頭蓋内や脊髄に髄膜腫、上衣腫、神経膠腫等が発生する。ＮＦ２の発症は、１０〜２０歳代で多く、進行が速く、難聴、半身麻痺等をきたし、頭蓋内腫瘍の成長を制御できない場合には生命の危険性も高い。【０００３】
現在、ＮＦ２の治療は、手術による腫瘍摘出と定位放射線治療により行われている。しかしながら、ＮＦ２患者の神経鞘腫は出血性腫瘍であるため、手術では周囲神経が損傷される可能性が高く、特に多発腫瘍に対しては積極的に手術を行うことができない。また小さい腫瘍に対しては放射線治療も有効であるが、長期制御は困難なことが多く、悪性転化のリスクもある。【０００４】
ところで、Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＶＥＧＦＲ）は、受容体型チロシンキナーゼの一種であり、リガンドであるＶＥＧＦの作用発現に関与することが知られている。【０００５】
ＶＥＧＦＲには、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３の３種類に加えて、可溶性ＶＥＧＦＲ（ｓｏｌｕｂｌｅ  ＶＥＧＦＲ）として、ｓＶＥＧＦＲ−１、ｓＶＥＧＦＲ−２、ｓＶＥＧＦＲ−３が知られている。これらのうち、ＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２は、血管内皮細胞に発現し、血管新生において中心的な役割を担っていることが知られている。【０００６】
これまでに、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導するペプチドや、ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドが開発されてきた（例えば、特許文献１、２を参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第４９３１１５４号
【特許文献２】特許第３９７１７６９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１、２等に記載されたＶＥＧＦＲの部分ペプチドを、ペプチドワクチンとして癌の治療に応用する研究が行われている。しかしながら、例えば、ＶＥＧＦＲ−２の部分ペプチドの、再発の膵臓癌を対象とした第ＩＩＩ相臨床試験では、その有効性が確認されなかった。癌は成長速度が速く、ほとんどの場合、抗癌剤投与により免疫が抑制されているなど、ペプチドワクチンを癌治療に応用することは容易ではない。【０００９】
このような状況のもと、本発明は、脳神経疾患を効果的に治療することができるペプチドワクチン及びペプチドワクチン組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は以下の態様を含む。
［１］ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドからなる、脳神経疾患に対するペプチドワクチン。
［２］ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性である、［１］に記載のペプチドワクチン。
［３］ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号１に記載のアミノ酸配列、又は配列番号１に記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、［２］に記載のペプチドワクチン。
［４］ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性である、［１］に記載のペプチドワクチン。
［５］ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号２〜４のいずれかに記載のアミノ酸配列、又は配列番号２〜４のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、［４］に記載のペプチドワクチン。
［６］ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６結合性又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０７結合性である、［１］に記載のペプチドワクチン。
［７］ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性である、［１］に記載のペプチドワクチン。
［８］ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列、又は配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、［７］に記載のペプチドワクチン。
［９］ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性である、［１］に記載のペプチドワクチン。
［１０］ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列、又は配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなる、［９］に記載のペプチドワクチン。
［１１］ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導する前記ペプチドが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６結合性又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０７結合性である、［１］に記載のペプチドワクチン。
［１２］前記脳神経疾患が神経線維腫症ＩＩ型である、［１］〜［１１］のいずれかに記載のペプチドワクチン。
［１３］［１］〜［１２］のいずれかに記載のペプチドワクチンと、薬学的に許容される担体とを含有する、ＮＦ２患者に発生する腫瘍に対するペプチドワクチン組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、脳神経疾患を効果的に治療することができるペプチドワクチン及びペプチドワクチン組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】（ａ）〜（ｅ）は、実験例２において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例１の患者の髄膜腫を撮影した結果を示す写真である。
【図２】実験例２において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図３】（ａ）〜（ｅ）は、実験例２において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例１の患者の右側及び左側の前庭神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。
【図４】（ａ）は、実験例２において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例２において、頭部造影ＭＲＩ検査結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図５】（ａ）〜（ｆ）は、実験例３において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例２の患者の三叉神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。
【図６】実験例３において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における三叉神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図７】（ａ）〜（ｆ）は、実験例３において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例２の患者の右側及び左側の前庭神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。
【図８】（ａ）は、実験例３において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例３において、頭部造影ＭＲＩ検査結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図９】実験例２において、髄膜腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図１０】（ａ）は、実験例２において、右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例２において、左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図１１】実験例３において、三叉神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図１２】（ａ）は、実験例３において、右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例３において、左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図１３】（ａ）及び（ｂ）は、実験例３において、症例２の患者に行った語音明瞭度試験の結果を示すグラフである。
【図１４】（ａ）〜（ｆ）は、実験例４において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例５の患者の左側前庭神経鞘腫及び髄膜腫を撮影した結果を示す写真である。
【図１５】（ａ）は、実験例４において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例４において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図１６】（ａ）は、実験例４において、右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例４において、左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図１７】（ａ）〜（ｄ）は、実験例５において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例６の患者の両側前庭神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。
【図１８】（ａ）は、実験例５において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例５において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図１９】（ａ）は、実験例６において、右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。（ｂ）は、実験例６において、左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図２０】（ａ）〜（ｄ）は、実験例６において、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例６の患者の髄膜腫を撮影した結果を示す写真である。
【図２１】実験例６において、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の体積を測定した結果を示すグラフである。
【図２２】実験例６において、髄膜腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。
【図２３】実験例７における定量的ＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。
【図２４】（ａ）は、実験例７におけるペプチドワクチン組成物の投与前の免疫染色の結果を示す顕微鏡写真である。（ｂ）は、実験例７におけるペプチドワクチン組成物の投与後の免疫染色の結果を示す顕微鏡写真である。
【図２５】（ａ）は、実験例７におけるペプチドワクチン組成物の投与前の免疫染色の結果を示す顕微鏡写真である。（ｂ）は、実験例７におけるペプチドワクチン組成物の投与後の免疫染色の結果を示す顕微鏡写真である。
【図２６】実験例７における免疫染色の結果を示す蛍光顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
［ペプチドワクチン］
１実施形態において、本発明は、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドからなる、脳神経疾患に対するペプチドワクチンを提供する。
【００１４】
本明細書において、脳神経疾患としては、血管新生に関与する脳神経疾患が挙げられ、より具体的には、神経線維腫症ＩＩ型（ＮＦ２）患者に発生する腫瘍、脳腫瘍、脳血管疾患、自己免疫疾患、眼科疾患等が挙げられる。
【００１５】
ＮＦ２患者に発生する腫瘍としては、神経鞘腫、髄膜腫、上衣腫、神経膠腫等が挙げられる。神経鞘腫としては、脳神経、脊髄神経、末梢神経に発生する神経鞘腫が挙げられ、より具体的には、前庭神経鞘腫、三叉神経鞘腫等が挙げられる。また、髄膜腫、上衣腫、神経膠腫としては、頭蓋内に生じる腫瘍や脊髄に生じる腫瘍が挙げられる。
【００１６】
また、脳腫瘍としては、神経膠腫、髄膜腫、神経鞘腫、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、脊索腫、上衣腫、血管芽腫、血管周皮腫、転移性脳腫瘍、髄芽腫、悪性リンパ腫等が挙げられる。また、脳血管疾患としては、脳血管奇形、遺伝性毛細血管拡張症等が挙げられる。また、自己免疫疾患としては、視神経脊髄炎、巨細胞性動脈炎等が挙げられる。また、眼科疾患としては、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症等が挙げられる。
【００１７】
例えば、神経鞘腫や髄膜腫が頭蓋内に発生した場合、患者の生命にかかわる。しかしながら、従来、このような腫瘍の有効な治療法は存在しなかった。
【００１８】
これに対し、実施例において後述するように、発明者らは、脳神経疾患患者に本実施形態のペプチドワクチンを投与することにより、脳神経疾患を効果的に治療することができることを明らかにした。
【００１９】
ヒトＶＥＧＦＲ−１は、１３３８アミノ酸からなる細胞膜タンパク質である。ヒトＶＥＧＦＲ−１は、新生血管の増殖に不可欠な血管内皮細胞増殖因子受容体であり、固形腫瘍の腫瘍新生血管内皮細胞で高発現している。また、ヒトＶＥＧＦＲ−２は、１３５６アミノ酸からなる細胞膜タンパクである。ヒトＶＥＧＦＲ−２は、固形腫瘍の腫瘍新生血管内皮細胞で高発現しており、血管内皮細胞の増殖と遊走に関与している。
【００２０】
本実施形態のペプチドワクチンは、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる。本実施形態のペプチドワクチンの投与により患者の体内で誘導されたＣＴＬは、脳神経疾患において発生する腫瘍の血管を特異的に破壊して腫瘍増殖抑制をもたらすと考えられる。さらに、ＣＴＬの一部はメモリーＴ細胞となって持続するため、ペプチドワクチンの投与完了後においても長期の治療効果が奏されるものと考えられる。
【００２１】
本明細書において、腫瘍を効果的に治療するとは、例えば、腫瘍体積の増大を抑制することであってもよく、腫瘍体積を減少させることであってもよい。
【００２２】
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドとしては、既知のものを用いることができる。既知のペプチドには、臨床試験によりヒトに投与した場合の安全性が確認されたものが存在する。このようなペプチドは、臨床試験を一部省略することが可能であるため臨床応用しやすい。
【００２３】
本実施形態のペプチドワクチンにおいて、ペプチドの長さは、約４０アミノ酸未満であってもよく、約２０アミノ酸未満であってもよく、約１５アミノ酸未満であってもよい。例えば、ペプチドの長さは８〜１１アミノ酸であってもよく、９アミノ酸であってもよく、１０アミノ酸であってもよい。
【００２４】
本実施形態のペプチドワクチンにおいて、ペプチドは既知の方法により調製することができる。例えば、ペプチドは、組換えＤＮＡ技術により調製してもよいし、化学合成により調製してもよい。
【００２５】
また、ペプチドは、ＣＴＬを誘導する活性を有している限り、各種の修飾を有していてもよい。具体的には、例えば、ペプチドに、糖鎖、脂肪酸、ポリアルキレングリコール鎖等が結合されていてもよい。あるいは、ペプチドにＤ体のアミノ酸が含まれていてもよい。あるいは、ペプチドの側鎖が、酸化、リン酸化等の修飾を受けていてもよい。あるいは、ペプチドが、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、塩酸塩等の塩を形成していてもよい。
【００２６】
ところで、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）は組織適合性抗原とも呼ばれる膜タンパク質であり、免疫機構において重要な役割を担っている。ＨＬＡには多数の型が存在することが知られている。ペプチドワクチンが効果的に機能するためには、ペプチドが患者のＨＬＡ型と同じ型のＨＬＡに結合性を有する必要がある。
【００２７】
中でも、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７等のＨＬＡ型を有するヒトは特に日本人において比較的頻度が高い。本実施形態のペプチドワクチンは、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性（拘束性）又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性であり、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７への結合性も予想されることから、多くの日本人患者において効果的に機能することができる。
【００２８】
したがって、本実施形態のペプチドワクチンにおいて、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性であってもよいし、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性であってもよいし、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６結合性であってもよいし、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７結合性であってもよい。また、ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性であってもよいし、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性であってもよいし、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６結合性であってもよいし、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７結合性であってもよい。以下、本実施形態のペプチドワクチンに用いることができるより具体的なペプチドについて説明する。
【００２９】
（ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性のペプチド）
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性のペプチドはすでに知られている。このようなペプチドとしては、例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられる。
【００３０】
ここで、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる限り変異を有していてもよい。ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドは、例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。
【００３１】
ここで、１又は複数個とは、１個、２個又は３個であることが好ましい。アミノ酸の置換として、Ｎ末端から２番目のアミノ酸のフェニルアラニン、チロシン、メチオニン又はトリプトファンへの置換、Ｃ末端のアミノ酸のフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、トリプトファン又はメチオニンへの置換が挙げられる。また、アミノ酸の付加として、Ｎ末端又はＣ末端への１〜２個のアミノ酸の付加が挙げられる。
【００３２】
（ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性のペプチド）
ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性のペプチドはすでに知られている。このようなペプチドとしては、例えば、配列番号２〜４に記載のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられる。
【００３３】
ここで、配列番号２〜４のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる限り変異を有していてもよい。ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドは、例えば、配列番号２〜４のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。
【００３４】
ここで、１又は複数個とは、１個、２個又は３個であることが好ましい。アミノ酸の置換として、Ｎ末端から２番目のアミノ酸のロイシン又はメチオニンへの置換、Ｃ末端のアミノ酸のバリン又はロイシンへの置換が挙げられる。また、アミノ酸の付加として、Ｎ末端又はＣ末端への１〜２個のアミノ酸の付加が挙げられる。
【００３５】
（ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性のペプチド）
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２結合性のペプチドはすでに知られている。このようなペプチドとしては、例えば、配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられる。
【００３６】
ここで、配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる限り変異を有していてもよい。ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドは、例えば、配列番号５〜１０のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。
【００３７】
ここで、１又は複数個とは、１個、２個又は３個であることが好ましい。アミノ酸の置換として、Ｎ末端から２番目のアミノ酸のフェニルアラニン、チロシン、メチオニン又はトリプトファンへの置換、Ｃ末端のアミノ酸のフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、トリプトファン又はメチオニンへの置換が挙げられる。また、アミノ酸の付加として、Ｎ末端又はＣ末端への１〜２個のアミノ酸の付加が挙げられる。
【００３８】
（ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性のペプチド）
ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性のペプチドはすでに知られている。このようなペプチドとしては、例えば、配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられる。
【００３９】
ここで、配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導することができる限り変異を有していてもよい。ＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドは、例えば、配列番号１１〜１６のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。
【００４０】
ここで、１又は複数個とは、１個、２個又は３個であることが好ましい。アミノ酸の置換として、Ｎ末端から２番目のアミノ酸のロイシン又はメチオニンへの置換、Ｃ末端のアミノ酸のバリン又はロイシンへの置換が挙げられる。また、アミノ酸の付加として、Ｎ末端又はＣ末端への１〜２個のアミノ酸の付加が挙げられる。
【００４１】
例えば、配列番号１２に記載のアミノ酸配列において、Ｎ末端から２番目のアミノ酸をロイシンに置換したアミノ酸配列（配列番号１６）からなるペプチドは好適な例である。例えば、配列番号１６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドによる刺激に誘導されるＣＴＬは、変異前のペプチド（配列番号１２）を認識し、傷害することができることが確認されている。
【００４２】
［ペプチドワクチン組成物］
１実施形態において、本発明は、上述したペプチドワクチンと、薬学的に許容される担体とを含有する、脳神経疾患に対するペプチドワクチン組成物を提供する。
【００４３】
上述したペプチドワクチンは、直接患者に投与してもよいし、本実施形態のペプチドワクチン組成物の形態で患者に投与してもよい。実施例において後述するように、発明者らは、脳神経疾患患者に本実施形態のペプチドワクチン組成物を投与することにより、脳神経疾患を効果的に治療することができることを明らかにした。
【００４４】
本実施形態のペプチドワクチン組成物は、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、及びＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドの、一方のみを含有していてもよいし、双方を含有していてもよい。
【００４５】
本実施形態のペプチドワクチン組成物は、薬学的に許容される担体と混合して、一般的な製薬手法により製剤化することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤等の形態に製剤化して経口的に投与してもよく、注射剤、坐剤、皮膚外用剤等の形態に製剤化して非経口的に投与してもよい。皮膚外用剤としては、軟膏剤、貼付剤等の剤型が挙げられる。
【００４６】
薬学的に許容される担体としては、アジュバント、注射用溶剤、賦形剤、粘着剤等が挙げられる。アジュバントとしては、ワクチン製剤のアジュバントとして一般的に使用されるものを特に限定なく使用することができ、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化アルミニウム、リン酸カルシウム、リン酸アルミニウム、ミョウバン、ペペス、カルボキシビニルポリマー等の沈降性アジュバント、流動パラフィン、ラノリン、不完全型フロイントアジュバント、完全型フロイントアジュバント等の油性アジュバント等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４７】
注射用溶剤としては、注射剤に一般的に使用されるものを特に限定なく使用することができ、例えば、生理食塩水、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等の補助薬を含む等張液等が挙げられるがこれらに限定されない。注射用溶剤は、エタノール等のアルコール；プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のポリアルコール；ポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ−５０等の非イオン性界面活性剤等を含有していてもよい。
【００４８】
賦形剤としては、一般的な製剤に使用されるものを特に限定なく使用することができ、例えば、デンプン、結晶性セルロース等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４９】
粘着剤としては、一般的な貼付剤等に使用されるものを特に限定なく使用することができ、例えば、ゴム系粘着剤、シリコーン系粘着剤等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００５０】
本実施形態のペプチドワクチン組成物は、他の抗癌剤等の有効成分と共に投与されてもよいし、他の抗癌剤等の有効成分を含有していてもよい。
【００５１】
上述したペプチドワクチン又は本実施形態のペプチドワクチン組成物の患者への投与は、例えば、経口投与、皮内投与、皮下投与、静脈注射等により行うことができ、全身投与であってもよく、目的となる腫瘍の近傍に局所投与してもよい。
【００５２】
また、投与量は、患者の年齢、体重、症状、投与方法等により適宜調整することができ、通常成人（体重６０ｋｇ）においては、１回あたり、例えば０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば０．１ｍｇ〜１０ｍｇの有効成分（ペプチド）を投与する量が挙げられる。
【００５３】
ペプチドワクチン又はペプチドワクチン組成物の患者への投与回数は、１回であってもよいが、効率的にＣＴＬを誘導するためには複数回投与することが好ましい。複数回投与する場合の投与間隔は、例えば数日から数か月であってもよい。
【００５４】
［その他の実施形態］
１実施形態において、本発明は、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドの有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、脳神経疾患の治療方法を提供する。
【００５５】
１実施形態において、本発明は、脳神経疾患の治療のための、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドを提供する。
【００５６】
１実施形態において、本発明は、脳神経疾患の治療薬を製造するための、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、又はＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドの使用を提供する。
【００５７】
これらの各実施形態において、ＶＥＧＦＲ−１発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチド、及びＶＥＧＦＲ−２発現細胞に対するＣＴＬを誘導するペプチドとしては、上述したものが挙げられる。また、上記のペプチドは、薬学的に許容される担体を含む組成物の形態であってもよい。薬学的に許容される担体としては、上述したものが挙げられる。
【実施例】
【００５８】
次に実験例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実験例に限定されるものではない。【００５９】
［実験例１］
（ペプチドワクチン組成物の調製）
配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド２ｍｇと、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるペプチド２ｍｇと、不完全フロイントアジュバント（型式「ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ５１」、ＳＥＰＰＩＣ社）１ｍＬとを混合してエマルジョン化し、ペプチドワクチン組成物２ｍＬを調製した。【００６０】
［実験例２］
（症例１の患者へのペプチドワクチン組成物の投与）
症例１の患者は、３０歳の男性であった。症例１の患者のＨＬＡ型はＨＬＡ−Ａ＊２４：０２であった。頭蓋内に両側前庭神経鞘腫、三叉神経鞘腫及び髄膜腫を生じており、脊髄や皮膚にも無数に神経鞘腫が生じていた。両側の聴力は既に全くなく、寝たきりの状態であった。頭蓋内や脊髄を含めて、計４回の腫瘍摘出術及び３回のγナイフ照射を行ったが、腫瘍の増大を制御することは困難であり、腫瘍は年々増大していた。症例１の患者に、実験例１と同様にして調製したペプチドワクチン組成物の投与を行った。【００６１】
（投与スケジュール）
患者の両側腋窩又は鼠径リンパ節周囲に、１回あたりペプチドワクチン組成物１ｍＬを皮下投与した。初期投与として、投与開始から１ヶ月の間に、１週間に１回、４回投与した。その後、ブースト投与として、１ヶ月に１回、４回投与した。以上の投与スケジュールにより、投与開始から５か月間で、ペプチドワクチン組成物を合計８回投与した。【００６２】
（画像解析）
頭部造影ＭＲＩ検査により、ペプチドワクチン組成物の投与が患者の腫瘍に与える影響を検討した。図１（ａ）〜（ｅ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例１の患者の髄膜腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。図１（ａ）及び（ｂ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図１（ｃ）はペプチドワクチン組成物の投与開始時の結果であり、図１（ｄ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図１（ｅ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。図１（ａ）〜（ｅ）中、矢印は髄膜腫を示す。【００６３】
また、図２は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図２中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。【００６４】
その結果、ペプチドワクチン組成物を８回投与後には、それまで増大傾向であった頭蓋内の多数の腫瘍の成長が止まったことが明らかとなった。また、ペプチドワクチン組成物を８回投与後の髄膜腫の体積は、ペプチドワクチン組成物の投与開始時と比較して約１０％減少したことが明らかとなった。【００６５】
また、図９は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図９中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、腫瘍内血液量が減少したことが明らかとなった。【００６６】
また、図３（ａ）〜（ｅ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例１の患者の右側及び左側の前庭神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。図３（ａ）及び（ｂ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図３（ｃ）はペプチドワクチン組成物の投与開始時の結果であり、図３（ｄ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図３（ｅ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。図３（ａ）〜（ｅ）中、矢印は前庭神経鞘腫を示す。【００６７】
また、図４（ａ）は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフであり、図４（ｂ）は、頭部造影ＭＲＩ検査結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図４（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。【００６８】
その結果、ペプチドワクチン組成物の投与開始後は、それまで増大傾向であった右側及び左側の前庭神経鞘腫の増大がいずれも抑制されたことが明らかとなった。また、ペプチドワクチン組成物を８回投与後の右側及び左側の前庭神経鞘腫の体積は、ペプチドワクチン組成物の投与開始時と比較していずれも約１０％減少したことが明らかとなった。【００６９】
また、図１０（ａ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフであり、図１０（ｂ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図１０（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、腫瘍内血液量が減少したことが明らかとなった。【００７０】
［実験例３］
（症例２の患者へのペプチドワクチン組成物の投与）
症例２の患者は、２２歳の女性であった。症例２の患者のＨＬＡ型はＨＬＡ−Ａ＊２４：０２であった。聴力障害をきっかけにＮＦ２と診断された。両側前庭神経鞘腫、三叉神経鞘腫が生じており、脊髄や皮膚にも多数の神経鞘腫が生じていた。右の聴力は既に無く、左は補聴器をつけて何とか会話ができるレベルであったが、徐々に聴力が低下していた。過去に３回の腫瘍摘出術と、１回のγナイフ照射を行ったが、腫瘍の増大を制御することは困難であり、腫瘍は徐々に増大していた。【００７１】
症例２の患者に、実験例１と同様にして調製したペプチドワクチン組成物の投与を行った。投与スケジュール及び画像解析は実験例２と同様にして行った。【００７２】
（画像解析）
頭部造影ＭＲＩ検査により、ペプチドワクチン組成物の投与が患者の腫瘍に与える影響を検討した。図５（ａ）〜（ｆ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例２のＮＦ２患者の三叉神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。図５（ａ）〜（ｃ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図５（ｄ）はペプチドワクチン組成物の投与開始時の結果であり、図５（ｅ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図５（ｆ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。図５（ａ）〜（ｆ）中、矢印は三叉神経鞘腫を示す。【００７３】
また、図６は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における三叉神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図６中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。【００７４】
その結果、ペプチドワクチン組成物の投与開始後は、それまで増大傾向であった三叉神経鞘腫の成長が止まったことが明らかとなった。また、ペプチドワクチン組成物を８回投与後の三叉神経鞘腫の体積は、ペプチドワクチン組成物の投与開始時と比較して約１４％減少したことが明らかとなった。【００７５】
また、図１１は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における三叉神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図１１中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、腫瘍内血液量が減少したことが明らかとなった。【００７６】
また、図７（ａ）〜（ｆ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例２の患者の右側及び左側の前庭神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。図７（ａ）〜（ｃ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図７（ｄ）はペプチドワクチン組成物の投与開始時の結果であり、図７（ｅ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図７（ｆ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。図７（ａ）〜（ｆ）中、矢印は前庭神経鞘腫を示す。【００７７】
また、図８（ａ）は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフであり、図８（ｂ）は、頭部造影ＭＲＩ検査結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図８（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。【００７８】
その結果、ペプチドワクチン組成物の投与開始後は、それまで増大傾向であった右側の前庭神経鞘腫の体積は、ペプチドワクチン組成物の投与開始時と比較して約７％減少し、左側の前庭神経鞘腫の成長は止まったことが明らかとなった。【００７９】
また、図１２（ａ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフであり、図１２（ｂ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図１２（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、腫瘍内血液量が減少したことが明らかとなった。【００８０】
また、図１３（ａ）及び（ｂ）は、症例２の患者に行った語音明瞭度試験の結果を示すグラフである。語音明瞭度試験とは、被験者に音声を聞かせて、どのくらい言葉が理解できるのか、また、どのくらい音量を上げたら音声を理解しやすくなるのかを測定する試験である。図１３（ａ）はペプチドワクチン組成物の投与開始前の試験結果であり、図１３（ｂ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の試験結果である。【００８１】
語音明瞭度試験の結果は、ペプチドワクチン組成物の投与開始前は７０ｄＢで６０％であったが、ペプチドワクチン組成物を４回投与後には７０ｄＢで７０％程度判別できるようになり、聴力の改善が認められた。【００８２】
更に、血液中のＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２特異的な細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の反応をＥＬＩＳＰＯＴ法により解析した結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、ＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２に対するＣＴＬが誘導されたことが確認された。【００８３】
［実験例４］
（症例５の患者へのペプチドワクチン組成物の投与）
症例５の患者は、４１歳の女性であった。症例５の患者のＨＬＡ型はＨＬＡ−Ａ＊２４：０２であった。２３歳で両側聴神経鞘腫を発症し、ＮＦ２と診断された。右側聴神経鞘腫は２３歳時に手術した。更に２６歳時にも再手術した。右の聴力は術後低下し、左の聴力も低下傾向となった。２０１５年３月のＭＲＩで両側聴神経鞘腫、左錐体骨後面の髄膜腫は増大傾向を示した。実験例１と同様にして調製したペプチドワクチン組成物の投与を開始した。投与スケジュール及び画像解析は実験例２と同様にして行った。【００８４】
（画像解析）
頭部造影ＭＲＩ検査により、ペプチドワクチン組成物の投与が患者の腫瘍に与える影響を検討した。図１４（ａ）〜（ｆ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例５の患者の左側前庭神経鞘腫及び髄膜腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。【００８５】
図１４（ａ）〜（ｄ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図１４（ｅ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図１４（ｆ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。【００８６】
また、図１５（ａ）は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフであり、図１５（ｂ）は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図１５（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。【００８７】
その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、それまで増大傾向であった左側前庭神経鞘腫の体積は３４％減少した。また、それまで増大傾向であった髄膜腫の体積は１０％減少し、その後も増大抑制傾向を示した。【００８８】
また、図１６（ａ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフであり、図１６（ｂ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図１６（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、腫瘍内血液量が低下傾向を示したことが明らかとなった。【００８９】
また、症例５の患者に純音聴力試験を行った。純音聴力試験は、１２５Ｈｚ〜８，０００Ｈｚまでの７種類の高さの異なる音に対する聴力を測定し、聞こえる最も小さな音の大きさを調べる試験である。その結果、ペプチドワクチン組成物を８回投与後に、左聴力の改善傾向が認められた。【００９０】
更に、血液中のＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２特異的な細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の反応をＥＬＩＳＰＯＴ法により解析した結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、ＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２に対するＣＴＬが誘導されたことが確認された。【００９１】
［実験例５］
（ペプチドワクチン組成物の調製）
配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド２ｍｇと、配列番号１６に記載のアミノ酸配列からなるペプチド２ｍｇと、不完全フロイントアジュバント（型式「ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ５１」、ＳＥＰＰＩＣ社）１ｍＬとを混合してエマルジョン化し、ペプチドワクチン組成物２ｍＬを調製した。【００９２】
［実験例６］
（症例６の患者へのペプチドワクチン組成物の投与）
症例６の患者は、２３歳の男性であった。症例６の患者のＨＬＡ型はＨＬＡ−Ａ＊０２：０７であった。２００８年より左耳鳴りを感じていた。また同時に皮膚にも腫瘍が生じたため切除し、ＮＦ２と診断された。２０１１年に両側前庭神経鞘腫が発見された。その後両側聴力は徐々に低下しており、軽度呂律困難も生じ始めている。また前頭蓋底に髄膜腫を認め、その後も急速に増大傾向を示していた。実験例５と同様にして調製したペプチドワクチン組成物の投与を開始した。投与スケジュール及び画像解析は実験例２と同様にして行った。【００９３】
（画像解析）
頭部造影ＭＲＩ検査により、ペプチドワクチン組成物の投与が患者の腫瘍に与える影響を検討した。図１７（ａ）〜（ｄ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例６の患者の両側前庭神経鞘腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。【００９４】
図１７（ａ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図１７（ｂ）はペプチドワクチン組成物の投与開始前の結果であり、図１７（ｃ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図１７（ｄ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。【００９５】
また、図１８（ａ）は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフであり、図１８（ｂ）は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図１８（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。【００９６】
その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、それまで増大傾向であった右側前庭神経鞘腫の体積は５％減少した。また、それまで増大傾向であった左側前庭神経鞘腫の体積は１３％減少した。【００９７】
また、図１９（ａ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフであり、図１９（ｂ）は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における左側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図１９（ａ）及び（ｂ）中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、右側前庭神経鞘腫の腫瘍内血液量が低下傾向を示したことが明らかとなった。【００９８】
また、図２０（ａ）〜（ｄ）は、頭部造影ＭＲＩ検査により、症例６の患者の髄膜腫を撮影した結果を示す写真である。各写真の上部には撮影日が記載されている。【００９９】
図２０（ａ）及び（ｂ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図２０（ｃ）はペプチドワクチン組成物を４回投与後の結果であり、図２０（ｄ）はペプチドワクチン組成物を８回投与後の結果である。【０１００】
また、図２１は、頭部造影ＭＲＩ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の体積を測定した結果を示すグラフである。図２１中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、それまで急速増大傾向であった髄膜腫の体積の増大速度が軽減した。【０１０１】
また、図２２は、頭部造影ＣＴ検査の結果に基づいて、各検査日における髄膜腫の腫瘍内血液量を測定した結果を示すグラフである。図２２中、矢印はワクチン組成物の投与開始時を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、髄膜腫の腫瘍内血液量が低下傾向を示したことが明らかとなった。【０１０２】
以上の結果から、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７患者の神経鞘腫及び髄膜腫に対する、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合性のペプチドワクチンの投与の有効性が明らかとなった。【０１０３】
［実験例７］
（組織学的解析）
症例１の患者の、ペプチドワクチン組成物の投与前及び投与後の腫瘍組織におけるＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２の発現量を定量的ＲＴ−ＰＣＲにより測定した。【０１０４】
図２３は、定量的ＲＴ−ＰＣＲの結果を示すグラフである。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与後に、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２の発現量が低下したことが明らかとなった。【０１０５】
続いて、症例１の患者の、ペプチドワクチン組成物の投与前及び投与後の腫瘍組織の切片を免疫染色し、ＣＤ３４の発現を検討した。ＣＤ３４の発現は血管内皮細胞の存在を示す。【０１０６】
図２４（ａ）及び（ｂ）は、免疫染色の結果を示す顕微鏡写真である。倍率は４０倍である。図２４（ａ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図２４（ｂ）はペプチドワクチン組成物の投与後の結果である。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与前には、大型の血管が多数認められたのに対し、ペプチドワクチン組成物の投与後には、大型の血管はほとんど認められないことが明らかとなった。【０１０７】
続いて、症例１の患者の、ペプチドワクチン組成物の投与前及び投与後の腫瘍組織の切片を免疫染色し、ＦＯＸＰ３陽性細胞の存在を検出した。ＦＯＸＰ３陽性細胞は制御性Ｔ細胞である。【０１０８】
図２５（ａ）及び（ｂ）は、免疫染色の結果を示す顕微鏡写真である。倍率は４０倍である。図２５（ａ）はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であり、図２５（ｂ）はペプチドワクチン組成物の投与後の結果である。図２５（ａ）及び（ｂ）中、矢印はＦＯＸＰ３陽性細胞の存在を示す。その結果、ペプチドワクチン組成物の投与前には、制御性Ｔ細胞の存在が認められたのに対し、ペプチドワクチン組成物の投与後には、制御性Ｔ細胞の存在が認められないことが明らかとなった。【０１０９】
続いて、症例１の患者の、ペプチドワクチン組成物の投与前及び投与後の腫瘍組織の切片を免疫染色し、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−βを三重染色した。【０１１０】
図２６は、免疫染色の結果を示す蛍光顕微鏡写真である。図２６中、「Ｐｒｅ−ｖａｃｃｉｎｅ」はペプチドワクチン組成物の投与前の結果であることを示し、「Ｐｏｓｔ−ｖａｃｃｉｎｅ」はペプチドワクチン組成物の投与後の結果であることを示す。また、「ＤＡＰＩ」は４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドールで核を染色した結果であることを示し、「Ｍｅｒｇｅ」は画像を合成した結果であることを示す。【０１１１】
その結果、ペプチドワクチン組成物の投与前には、周皮細胞が欠落し、ＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２が高発現する巨大な血管が多く形成されていたのに対し、ペプチドワクチン組成物の投与後には、周皮細胞に覆われた小型の血管が多く存在することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１１２】
本発明によれば、脳神経疾患を効果的に治療することができるペプチドワクチン及びペプチドワクチン組成物を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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