(57)【要約】  新たなマラリア治療薬を提供する。  本発明のマラリア治療薬は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする、マラリア治療薬。
【請求項２】
前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質および前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合物質の少なくとも一方である、請求項１記載のマラリア治療薬。
【請求項３】
前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する、請求項２記載のマラリア治療薬。
【請求項４】
前記結合物質は、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２または３記載のマラリア治療薬。
【請求項５】
前記誘導物質は、ＲＩＦＩＮタンパク質もしくはＲＩＦＩＮタンパク質の部分、またはこれらをコードする核酸を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のマラリア治療薬。
【請求項６】
前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域を含む、請求項５記載のマラリア治療薬。
【請求項７】
前記ＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮタンパク質を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のマラリア治療薬。
【請求項８】
前記結合阻害物質の誘導物質およびアジュバントを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のマラリア治療薬。
【請求項９】
患者に、請求項１から８のいずれか一項に記載のマラリア治療薬を投与することを特徴とする、マラリアの治療方法。
【請求項１０】
被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法。
【請求項１１】
リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする、マラリア重症化マーカー。
【請求項１２】
前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、請求項１１記載のマラリア重症化マーカー。
【請求項１３】
被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする、マラリアの重症化の危険度を試験する方法。
【請求項１４】
前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、請求項１３記載の試験方法。
【請求項１５】
リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、
請求項１３または１４記載の試験方法に用いることを特徴とする、試験試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアの感染予防および感染時の症状の重症化を抑制するために、ワクチンの開発が行なわれている。しかしながら、現在、臨床上有効なマラリアワクチンは開発されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
そこで、本発明は、新たなマラリア治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
前記本発明の課題を解決するために、本発明のマラリア治療薬（以下、「治療薬」ともいう）は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする。【０００５】
本発明のマラリアの治療方法（以下、「治療方法」ともいう）は、患者に、前記本発明のマラリア治療薬を投与することを特徴とする。【０００６】
本発明のマラリア治療用候補物質のスクリーニング方法（以下、「スクリーニング方法」ともいう）は、被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする。【０００７】
本発明のマラリア重症化マーカー（以下、「マーカー」ともいう）は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする。【０００８】
本発明のマラリアの重症化の危険度を試験する方法（以下、「試験方法」ともいう）は、被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする。【０００９】
本発明の試験試薬は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、
前記本発明の試験方法に用いることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、新たなマラリア治療薬を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。
【図２】図２は、実施例２におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。
【図３】図３は、実施例３におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。
【図４】図４は、実施例４におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。
【図５】図５は、実施例５におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。
【図６】図６は、実施例６におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。
【図７】図７は、実施例７におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。
【図８】図８は、実施例８におけるＩｇＭの産生量を示すグラフである。
【図９】図９は、実施例９におけるＮＫ細胞の活性を示すグラフである。
【図１０】図１０は、実施例１０におけるＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに結合する感染赤血球の数を示すグラフである
【図１１】図１１は、実施例１１におけるＲＩＦＩＮタンパク質に結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を示すグラフである。
【図１２】図１２は、実施例１２におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。
【図１３】図１３は、実施例１２におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明において、「治療」は、症状の進行の防止（予防）、阻害（停止）、もしくは抑制、重症化の防止（予防）、阻害（停止）、もしくは抑制、症状の改善もしくは寛解、または予後の改善の意味を含み、いずれの意味でもよい。
【００１３】
本発明において、「重症化」は、脳性マラリアおよび重症貧血の意味を含み、いずれの意味でもよいし、両者を意味してもよい。前記脳性マラリアは、例えば、Blantyre coma score＜３と定義される。また、前記重症貧血は、例えば、blood haemoglobin＜５ｇ／ｄＬと定義される。Blantyre coma scoreは、例えば、下記評価項目（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の合計値である。前記血液ヘモグロビン濃度（blood haemoglobin）の測定方法は、例えば、シアンメトヘモグロビン法である。
【００１４】
（評価項目）
（ａ）最良運動反応
痛み部位の認識(指関節を肋骨に擦る)：Score 2
痛み刺激に対し四肢を引っ込める(ペンで親指の爪床を押し付ける)：Score 1
無反応：Score 0
（ｂ）言語反応
適切な泣き：Score 2
うめき声もしくは不適切な泣き：Score 1
無反応：Score 0
（ｃ）眼球運動
視線を動かす（母親の顔を追う）：Score 1
視線を動かさない：Score 0
【００１５】
以下、本発明について、例を挙げて説明する。ただし、本発明は、以下の説明に制限されない。また、各発明の説明は、特に言及がない限り、他の発明の説明として援用できる。
【００１６】
＜マラリア治療薬＞
本発明のマラリア治療薬は、前述のように、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする。本発明の治療薬は、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の治療薬によれば、マラリアを治療できる。また、後述するように、本発明の治療薬は、例えば、マラリアの重症化を防止（予防）できる。このため、本発明の治療薬は、例えば、マラリアの重症化防止薬（予防薬）ということもできる。
【００１７】
本発明者らは、鋭意研究の結果、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）が感染した赤血球で発現するＲＩＦＩＮが、Ｂ細胞、ＮＫ細胞等の免疫系細胞に発現するＬＩＬＲＢ１と結合し、前記免疫系細胞の機能を抑制するとの知見を得た。また、本発明者らは、重症のマラリア患者の赤血球では、軽症のマラリア患者（非重症のマラリア患者）の赤血球と比較して、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合性が高いこと、すなわち、ＬＩＬＲＢ１結合性のＲＩＦＩＮタンパク質の発現が高いとの知見を得た。さらに、本発明者らは、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質を共存させることにより、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの発生を阻害できるとの知見を得た。これらの知見から、本発明者らは、熱帯熱マラリア原虫が、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を介して、免疫系を回避し、マラリアの重症化を惹起していることを見出し、本発明を確立するに至った。本発明の治療薬によれば、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を直接的または間接的に阻害できるため、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの発生を阻害できる。このため、本発明の治療薬によれば、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合による前記免疫系細胞の機能抑制を防止または解除できる。したがって、本発明の治療薬によれば、例えば、マラリアの重症化を防止する等のマラリアの治療ができる。
【００１８】
本発明において、ＲＩＦＩＮの由来は、例えば、熱帯熱マラリア原虫である。前記熱帯熱マラリア原虫由来のＲＩＦＩＮは、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、熱帯熱マラリア原虫のＲＩＦＩＮは、タンパク質として、例えば、下記アミノ酸配列があげられる。なお、括弧内の「Genbank：」の後に示す文字列は、各ＲＩＦＩＮタンパク質のＧｅｎｂａｎｋにおけるアクセッション番号である（以下、同様）。熱帯熱マラリア原虫のＲＩＦＩＮは、ｍＲＮＡとして、例えば、下記表１に示すＮＣＢＩアクセッション番号で登録されている塩基配列があげられる。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１（配列番号１、PF3D7_0100200、GenBank:CAB89210.1）
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【００２１】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２（配列番号２、PF3D7_0900200、GenBank:CAD51688.1)
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【００２２】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質３（配列番号３、PF3D7_0223100、GenBank:CZT98243.1)
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【００２３】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質４（配列番号４、PF3D7_1254800、GenBank:CZT99701.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITPRHIQTTRLLCECELYMSNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDDRMIEKRQKCKDRCNKEIEKIILKDKIEKELTETFATLNTNITNEDIPTCICKKSVADKIEKTCLKYGGALGGGVMPGLGLIGGNSVYILANYETINAFIAKTIEELEGIPGITKLFGAKISQFVTPAVFRKPMSLVETILSEKKKLCLCAANKNELLCRGMNPNVPETLPKKIEVAVNEVLSSVNDTWATATTPTTFFTNPIILSAIAILVIVIIMVIIYLILRYRRKQKIKKKLQYIKLLKE
【００２４】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質５（配列番号５、PF3D7_0700200、GenBank:CZT62652.1)
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【００２５】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質６（配列番号６、PF3D7_1100400、GenBank:CZT98672.1)
MKIHYINILLFALPLNILVNNQRNHNNSTYHTSNTKTIKSHRSLCECELYAQSNYENDQEMKDVIKEFNDRTAQRFEEYNERMQVKKDQCKEQCDKEIQQIILKDKIEKELTERFSALETKIDTNDILTCICEKSVTDKFEKTCLKCSGIFATAVPELGLIGGTVVYAAAVKAATKAGMEAALVGLESVNGLRGLLGEKIKDLVTTTNFQCPNALMGLVQNVKDTQCVGAAAQSQVFCKGLLPESTSRIIQKAAAAGREGAEAYNTTFSDSTTITAFLTDPIVISAIVVISIVVILLIIYLILRYRRKIKMNKKLQYIKLLKE
【００２６】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質７（配列番号７、PF3D7_1480000、GenBank:CZU00495.1)
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【００２７】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質８（配列番号８、PF3D7_0600300、GenBank:CAG25174.1)
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【００２８】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質９（配列番号９、PF3D7_0632700、GenBank:CAG25139.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHYITRTPKATTRSLSECELYAPSNYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDHRMKTTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQNDAIPTCVCEKSVADKVEKNCMKCTQNLGGIVAPSSGVLAGIAEGALYVWRDAEIVAAIAAAKEAGAAKGAAVGIKEGIKVLLNRLNTDFGLSPVRIKELESVINGTNYTDVTFIYEAIYTTYKRSCVPVDVSVRFTVADTDLTFCESVWNQTLAVSQRNMGTSPLPIIQKTAQKIVSDANFTAAATAETATEEATTTLTAKNTGEVNATYMGYQTPIIASIVAILVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００２９】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１０（配列番号１０、PF3D7_0632200、GenBank:CAG25134.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHQKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERVQNTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKIEKELNEKFSALHTDIQSDDIPTCICEMSMADKVEKGCLRCVGVFGGGIAPSVGLLGGLGIYVWKPGALKVAITAALNANSVKIAAAANAAGEAMGVKTVIEGLKALNVHGLCPDLFESIGTKIHYTNAEEIAKIIVAKYRATCNLSTGTSSTQAMCKQFDYTFGMRIRLGSPVEYGPPPASAIPDTVKKVVAGAEQAAEAKAANVRTTISSKIITEETDVINTIYMSNQTAIIASIIAIVIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００３０】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１１（配列番号１１、PF3D7_0100400、GenBank:CAB89212.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITSRHIQTTRLLCECELYTPNYDNDPEMKSVMQQFHDRTTQRFHEYDENLKEKRQKCKDKCDKEIQKIILKDKIEKELTEKFSSLQTDIHSDAIPTCICEKSLADKVEKNCLKCTQNLGKIVAPSSGVLAGISEAALSVWKTTEIAAAMELAKQAGAAAGLKAGHLAGTNAVIEQLRTLGIYFVGDKLLETIIDVTNYMNVSFIYDKVYSHYTTSCTPSLVNDQLVGTFNTSDPFCNLVHSNLQGSFYRSSAQTIIYEKVEEAVAGAEQAATTKTAVMTPIYTTEFTAKNIAEVEAATTSYYTPIIASIVAIVIIVLIMVIIYLILRYRRKMKLKKKLQYIKLLEE
【００３１】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１２（配列番号１２、PF3D7_1254400、GenBank:CZT99697.1)
MMLNYTNILLFYLSLNILSSSSEVYNQRNHFITYTPKRSTRLLCECELYTSIFDNDPEMKSLIEHFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCREQCDKEIQKIILKDKLEKELAEKFVTLQTDIQSDAIPTCICEKSLADKVEKTCLKCGGVLGGGVTPAWGFLSGIVYTGWKAAALAAATKEAIAEGAAKGAAAGTKAGIKAVMDVLYSDFGLSIEGVQKMGLVLSATNYKDVPMITKALYSKFQVSSCLRGGPVPGVPPVRPTDGTFCSAMLEKILAQENVVKQNSLEGSIKSVVNQIVTEAKSAAVSETAKVTASETETLKATNIAAVNATYASSQTAIIASIIAIVVIILIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００３２】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１３（配列番号１３、PF3D7_0732900、GenBank:CAD51067.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHNSTTHHTLKIPITRLLCECELYAPSNYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMKTTRQKCREQCDKEIEKIILKDKLEKELMDKFATLHTDMQSDAIPTCVCEKSVADKTEKVCLNCGKTMGAVAPAWGLISGLWYATWSQYVSAKILEVGISEGIKEGLTQIMKFTISLYPKANLPNITVTQMLSSGKFTNNVTLFDMVQHINNTMYTTLEAEEYSKFCGVVSSMAKYKNITFNRTYGKYSTAVTEAVTQGKTNAINTLTPATNTLTTAIIASMVAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００３３】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１４（配列番号１４、PF3D7_1040500、GenBank:CZT98660.1)
MKVHYINILLFVIPLNILINDQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSVADKMEKGCLRCGSILGAAMPEMGSIGGSLLSALSAWKPVAIEAAEKAAIAKATDLATQAGMREVVLKIEQFLKNFTEKEGLVNFTSVVNKSNFKCPTALFQNANELLSDSCIPDEVTNRTSTFCSTIAYGEKTTFEPFAQAGATTFQETLTAKTPVLQARYTAAVKTAYGGYQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００３４】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１５（配列番号１５、PF3D7_0600500、GenBank:CAG25176.1)
MKIHYTNILLFALPLNILVNTHKKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLDTDIQSDAIPSCVCEKSIAEKAEKGCLRCGYGLGSVAPMIGLTGSVAVNVWKTAELAAAMELAKQAGAAAGIKAGHLAGTKVVIDQLHTLGIYFVGGKPLESIIHVTNYMNVSVIYDKVYSHYTTLCTPRFVIDRPVGDFIFSGPVCNLVQPNHQGIWVKSSAQAIIKKKVEEAVAEGTQAADVVAKNTADEVTKAAIKTSTEAIDAATTTYYTPIIASIVAIVLIVLIMVIIYKILRYRRKRKMKKKLQYIKLLEE
【００３５】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１６（配列番号１６、PF3D7_1254200、GenBank:CZT99695.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLTTLETKIDTNDIPTCVCEKSMTDKVEKGCLRCGRNLGVAVPGLGVLGAYGAHSIVKVAMATAEKVGIQLGIDAGNAAGIKAVIEALNSSLNIDNLGGITLDTVLKGNNFKNIDFLVYILTDKYNTTCTVSNTEVETLLCYIGKEKPTLPYTLIQSNVRKAVAEATEVATSTTEEMTTIYTTQELSKVTSTGAILSNPIIISFIVIVIVVIIFLIIYLILRYRRKKKTKKKLQYIKLLKE
【００３６】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１７（配列番号１７、PF3D7_0400700、GenBank:CAD49098.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPTTRLLCECELYSPANYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELAEKFVTLQTDIQNDAIPTCVCEKSIADKVEKGCLRCVGVFGGGVMPGFGTIGGTALYALNQLKPAVFKAAIKAALEEGAAEILAAGIEAGDAAGMNVVRYGLRYLHVHELFPVIFDSFVKTRPYNEITSIANSILLKYGPTCTGLDNNSPPAACTKFQLNLGIHKKIGAMIDTHGTPASTAIRQGLEGILEEATQTAEAAAKIAEKGVAAEITARETALIEAGFNSSITSINASIFAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００３７】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１８（配列番号１８、PF3D7_1040700、GenBank:CZT98662.1)
MKFSYFNILLFSIPLNILINDQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYSPDNYDNDAEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMQSKRMQCKDRCDKEIQKIILKDKIEKELSQHLSTLETNIDTNDIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGYGLGTVAPTVGLIGAVAVNELKKAAMAIAIKDAIAEGLVAGETARIQASIKAVILGIKSKFRIDTLGGEVLESIITAQKYDDVSLISESIYMQYQSTCLPQYVGHGADLSKPICHTVYTLDFVQGKVHVPGSLQGSIKKALEKIVAEAKSNAVSETANVTTRQTAVFESRNIAAVDATYASYQTAIVASVVAILVIVLVMLIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
【００３８】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質１９（配列番号１９、PF3D7_0500400、GenBank:CAD51370.1)
MKFSYFNILLFSIPLNILINDHSKYSSCKHTSNSKTTKPHRSLYECGLYSPANNDNDPEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMQSKRMQCKEQCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLNTLETKIDTDDIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGYGLGTVAPTVGLIGAVAVHVWKPMALEAAIEAAIAKSAAEISAAANAAGIQAGKIAVIESLKKLYVDYFWPEMSNYILNMSHYNGVANLTAFIHEPKFNVCKDAGEVILDKCNAFDMGFGILKKDGVTNGLLPKDAVPRVLKGIVGQAEGPAKVAADAARQTVTAEITEKETAAINTIFMSKQTAIIASVVAIVVIVLIMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
【００３９】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２０（配列番号２０、PF3D7_1255100、GenBank:CZT99704.1)
MKIHYINILLFPLKLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLTTLETKITTDDIPTCLCEKSVADKMEKTCLRCAGVLGGGVMPGMGLIDGSLLGAISVLKPAAIIAAKDAALAEATALATQAGMREVVLKIEQFLKLFSEKEKIFDLKLIVNKSNFSCGSSLFQNAKELANKSCVAKPNGSYTSFCNSITYSRVEPFNGYAQAGITKYNETLPLQKALLEKAKVDAVNTTYAAYHTSIIASIVAVVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４０】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２１（配列番号２１、PF3D7_1300400、GenBank:CAD52146.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMAQQFSTLHTDIQSDDIPTCICEKSLADKVEKGCLRCAQNLGGVAPGWGLLSGFGYVTWSQYISGIAAKAAADAGLKAGVKVGLVNAVKIVTKTLDGFGEVPTMDWAKLIAFGDFSDGVTLHAIFKNLNNMMNCYLDSGKYSQFSTVVQKFAENPRSYATPYSTEVTEVTKAVADAKTGVLTKAGNATSSLSTGITASIIAIVVIVLIMVIIYLVLRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４１】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２２（配列番号２２、PF3D7_0732200、GenBank:CAD51061.1)
MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCHKEIEKIILKDKMEKQMAQQLTTLETKIGTDDIPTCVCEKSMADKMEKDCLRCTYGLGTLAPTVGLIGSVAVGAWKPTALKAAIVAAQKAGDAAGVAAGEAAGKKAVILALQHFKLDNLFPEIYNAIVKIRHYADVKNFSVAIVEEHSLKCQSLDLKVTTNPTCETFEFNIGMRIPDSSFVEPVDQVVPEVLDSLVGNIKEVAEAKAAEVAAAKTAEFKIANVGAVESTYGSCQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
【００４２】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２３（配列番号２３、PF3D7_0115600、GenBank:CAD48968.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECDIYTSIYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMQGKRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDMQSDSIPTCVCEKSVADKVEKNYMKCTQNLGGIVAPSSGVLAGIAELGLSAWKTTALKTAIAAAEQAGAAKGLAAGAAKGATRLIELIQSTFKIQNIAGKSLGTFIDATNYNNGPFIYQAIYTKFEMSLCLPVFPGVDPVPGAVRDPTFCNLFEKFVPTNGSSNRDSIINAIETYVQPFVSDAKFTAAATAETATEEATAVLITKKTGEVTTTYASYQTAIIASIVAILVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４３】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２４（配列番号２４、PF3D7_1101100、GenBank:CZT98679.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYAPSNYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELNEKFLTLQTDIQNDAIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGSILGAAMPEVGSIGGGLLYALNAWKPKALEAAIAAAKELAITEATNAGVKTVVSEINKLLAKFKQHEILFELKPIVNKSNFSCGSSLFQRAEELASKSCVAQPNGSYTSFCNTILNGEKTTFKPFAQAGANTYEKTLTTETPVLQARYTAAVKTAYGGYQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４４】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２５（配列番号２５、PF3D7_0401400、GenBank:CAD49104.1)
MKVHYINILLFALPLNILVINQRNHNNSTYHTSNTKLTKTHRTLCECELYAPSNYENDPEMKELMENFNHQSSERFREYDERIQDKRKQFKEQCEKDIQKIILKDKIEKELTEKLSTLQTDISTNDIPTCVCEKSLADKMEKTCLKCGGVLGTAVPELGLIGGSVIYSAAQAAAAKLGVAKAIELMKKIYNLGNVSFIDWTNLINVGNYSHRMSLVGIVNKVNNMCQIKDPEGNVVFCFAKQNMRGGAGKFAQTISEQAGNAAIKAGETANVKFAEMTSVGTIFSDPIVISATVVVTIAVILIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４５】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２６（配列番号２６、PF3D7_1000200、GenBank:CZT98249.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDNDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKERCDKEIQKIILKHKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSLADKTEKFCHNCGYGLGSVAPNIGLLGGPGIYVWKIAALAAAKEFAEKAGAAMGKAAGDAAGAAELIRGLKALNIDKLFNESLGLVFDGTNYNNTEYIFKAIFSKFNESCMPRPPGSVPGPVIDRAFCDTVDTLVLPSGTGSQTSASTNAVIKEYVKPIVSNAKFTAEATAQTAAEEATNLALKTNTNAVNATYASSQTAIIVSIAAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４６】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２７（配列番号２７、PF3D7_0937500、GenBank:CAD52049.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITARHIQTTRLLCECELFSPQNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDERMKTTRQECKEQCDKEIQKIILKDKMEKQMAEKLSTLETKINTDDIPTCVCEKSMADKTEKFCLNCGKNMAAIAPWWGLVCGSGYAGWLHSAMAAAIDKAIAEGAAAGIKAGHLAGTNAVIEQLRTLGIYFVGNKQLETIIDVTNYMNVSFIYDKVYSHYITLCTPRPVNGHLVSNFNFSDRFCKLFHQKDLVSLDIKSVKAIIKKNVEEAVAGAEQAAKAEVSNVTATKTTEFTTKNIAEVEAATTSYYTPIIASIVAIVIIVLIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４７】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２８（配列番号２８、PF3D7_1000500、GenBank:CZT98252.1)
MKVHYFNILLFALPLNILVSSPKKNPSITQKRPTRRLLCECELYAPANYDSVPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMKQELTTLETKITTDDIPTCICEKSLADKVEKGCLRCGGVFGGGVAPGVGLLGGIGQLGLDVWKAAAIKAATEYALTEGAAKGLAAGNAHGMNIVIYHLKELLIDKLVPNICKTVSSTGDYTRVINFSKLIIQKRGAMCGADGGTLSKDMCTQININLGTVLRNGKANLPDKEAVPKVLNRLVSQADKAANEVAKDTSQSVAVKITEQQTAAINATYTSWQIAITASVIAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４８】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質２９（配列番号２９、PF3D7_1479700、GenBank:CZU00492.1)
MKVHYINILLFALPLDILEHNKNEPHTTPNHTQTTRSLCECELYSPANNDNDPEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMVEQFSTLQTDIQSDAIPTCVCEKSIEDKVEKGCLRCGSILGAAMPELGSVGGSLLYALNTWKPAAIIAAKEAALAEATDLATQAGIDTVVAQLKIEGLLASFTVKQRLVDLSSIVTSSTYNNGAILHKSAMELASSYCHFEGTQSTPPFCSTIKYGQTTNFVRYAKAGSAAFKTEFASKSATLTKAKVGAVEATYGGYHISIISSIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００４９】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質３０（配列番号３０、PF3D7_0632400、GenBank:CAG25136.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPTTRLLCECDLYIPNYDNDPQMKKIMENFDRQTSQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKIDKELTEKFATLQTDIQNDAIPTCVCEKSLADKVEKTCLKCGGVLGGGVTPAWGLISGIVYTGWKAAALAAAKKLAAEAGAAEGASQGAAAGATRLIELIQSTFQVQNIAGQSLESIFTAQTYTDVSNITKALFNEYAEICLPIFTDSVPVRGVRYNISSPICTFVEEGILATSRDKGGSPITFIEKKVETMVSKAEGVATARAADVAAAKTAEFEATKVGAVEATYAGYHTTIIASIIAILIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００５０】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質３１（配列番号３１、PF3D7_0101000、GenBank:CAX51180.1)
MKVHCYNILLFSFTLIILLLSSSQVNNQMNHYNTAHMKNTEPIKSYRSLCECELYTSMYDDDPEMKEILHDFDRQTSQRFEEYNERLLENKQKCKEQCEKDIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSIADKMEKECLRCAQNLGGIVAPSSGVLAGIAEGALIVWKPAAIKAAKAAAAKAASDAATQAGMNAVRLEIKKLLEMFTGKPGYVDLLPIVKESTYKNGSALVDSAKKLFVESGKLEGLDRMPVFYNTVIDYPGPSNIKGFGKIGSDAYEAAFTSQKGTLEATKVGEVNTTYGGCQTAITASVIAIVVIILIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００５１】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質３２（配列番号３２、PF3D7_1400600、GenBank:CZT99711.1)
MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDESLQSKRKQCKDQCDKEIQKIILKDKIEKEFTEKLSTLQTDITTKDIPTCVCEKSLADKMEKVCLKCAQNLGGIVAPSTGVLGEIAALAVNAWKTTALKNAIAAAQKAGDAAGKIAGESKGVETIIGILEQYYSIYELKGTPLKSFFATTHYTDISNIATVIDTELNTSCGLNSLANQAICGLRTKLGLVAKPGQVMVTQKEAITKMITNVVHKSEITAEAAKTEVAATKTAAAIKMNTEAIEAATTPYYTPIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLN
【００５２】
熱帯熱マラリア原虫  ＲＩＦＩＮタンパク質３３（配列番号３３、PF3D7_1040300、GenBank:CZT98658.1)
MKFNYTNIILFSLSLNILLLSSRVYNKRNHKSIILHTSNENPIKTHRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDERMKTTRQECKEQCDKEIQKIILKDRLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSLADKTEKFCLNCGVQLGGGVLQASGLLGGIGQLGLDAWKAAALVTAKELAEKAGAAAGLKAGDIHGMKIVIEGLKALKVDTLKSGIFNSFVNNSHYTEVTGLAIAIDTEMNEVCSATYIGIHPICVVREKLGVIPKAGGTMVKQKDAITNVLKQALEKATQSAEALSETTAEDVAAKLTAQKTGAINTIFMSNQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
【００５３】
ＲＩＦＩＮは、例えば、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮを含むことが好ましい。前記ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮは、例えば、下記ＲＩＦＩＮがあげられる。ＲＩＦＩＮは、例えば、ＬＩＬＲＢ１へより強く結合することから、PF3D7_1254800（配列番号４）、PF3D7_0223100（配列番号３）、PF3D7_1100400（配列番号６）、PF3D7_0632700（配列番号９）、PF3D7_0700200（配列番号５）、およびPF3D7_0100200（配列番号１）が好ましい。なお、括弧内の「Genbank：」の後に示す文字列は、各ＲＩＦＩＮのＧｅｎｂａｎｋにおけるアクセッション番号である。
PF3D7_0100200(配列番号１、GenBank: CAB89210.1)
PF3D7_0900200(配列番号２、GenBank: CAD51688.1)
PF3D7_0223100(配列番号３、GenBank: CZT98243.1)
PF3D7_1254800(配列番号４、GenBank: CZT99701.1)
PF3D7_0700200(配列番号５、GenBank: CZT62652.1)
PF3D7_1100400(配列番号６、GenBank: CZT98672.1)
PF3D7_1480000(配列番号７、GenBank: CZU00495.1)
PF3D7_0600300(配列番号８、GenBank: CAG25174.1)
PF3D7_0632700(配列番号９、GenBank: CAG25139.1)
PF3D7_0632200(配列番号１０、GenBank: CAG25134.1)
PF3D7_0100400(配列番号１１、GenBank: CAB89212.1)
PF3D7_1254400(配列番号１２、GenBank: CZT99697.1)
【００５４】
本発明において、ＬＩＬＲＢ１（Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1）の由来は、例えば、ヒトである。前記ヒト由来のＬＩＬＲＢ１は、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、ヒト由来のＬＩＬＲＢ１は、ｍＲＮＡとして、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NM_001081637.2で登録されている下記の塩基配列（配列番号３４）、タンパク質として、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001075106.2で登録されている下記のアミノ酸配列（配列番号３５）があげられる。なお、下記ＬＩＬＲＢ１  ｍＲＮＡの塩基配列およびＬＩＬＲＢ１  タンパク質のアミノ酸配列において、下線で示す領域が、後述する実施例のＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの作成で使用したＬＩＬＲＢ１の細胞外領域に対応する領域である。
【００５５】
ヒトＬＩＬＲＢ１  ｍＲＮＡ（配列番号３４）
CTCAGCCTGGGCGGCACAGCCAGATGCGAGATGCGTCTCTGCTGATCTGAGTCTGCCTGCAGCATGGACCTGGGTCTTCCCTGAAGCATCTCCAGGGCTGGAGGGACGACTGCCATGCACCGAGGGCTCATCCATCCACAGAGCAGGGCAGTGGGAGGAGACGCCATGACCCCCATCCTCACGGTCCTGATCTGTCTCGGGCTGAGTCTGGGCCCCCGGACCCACGTGCAGGCAGGGCACCTCCCCAAGCCCACCCTCTGGGCTGAACCAGGCTCTGTGATCACCCAGGGGAGTCCTGTGACCCTCAGGTGTCAGGGGGGCCAGGAGACCCAGGAGTACCGTCTATATAGAGAAAAGAAAACAGCACCCTGGATTACACGGATCCCACAGGAGCTTGTGAAGAAGGGCCAGTTCCCCATCCCATCCATCACCTGGGAACACACAGGGCGGTATCGCTGTTACTATGGTAGCGACACTGCAGGCCGCTCAGAGAGCAGTGACCCCCTGGAGCTGGTGGTGACAGGAGCCTACATCAAACCCACCCTCTCAGCCCAGCCCAGCCCCGTGGTGAACTCAGGAGGGAATGTAACCCTCCAGTGTGACTCACAGGTGGCATTTGATGGCTTCATTCTGTGTAAGGAAGGAGAAGATGAACACCCACAATGCCTGAACTCCCAGCCCCATGCCCGTGGGTCGTCCCGCGCCATCTTCTCCGTGGGCCCCGTGAGCCCGAGTCGCAGGTGGTGGTACAGGTGCTATGCTTATGACTCGAACTCTCCCTATGAGTGGTCTCTACCCAGTGATCTCCTGGAGCTCCTGGTCCTAGGTGTTTCTAAGAAGCCATCACTCTCAGTGCAGCCAGGTCCTATCGTGGCCCCTGAGGAGACCCTGACTCTGCAGTGTGGCTCTGATGCTGGCTACAACAGATTTGTTCTGTATAAGGACGGGGAACGTGACTTCCTTCAGCTCGCTGGCGCACAGCCCCAGGCTGGGCTCTCCCAGGCCAACTTCACCCTGGGCCCTGTGAGCCGCTCCTACGGGGGCCAGTACAGATGCTACGGTGCACACAACCTCTCCTCCGAGTGGTCGGCCCCCAGCGACCCCCTGGACATCCTGATCGCAGGACAGTTCTATGACAGAGTCTCCCTCTCGGTGCAGCCGGGCCCCACGGTGGCCTCAGGAGAGAACGTGACCCTGCTGTGTCAGTCACAGGGATGGATGCAAACTTTCCTTCTGACCAAGGAGGGGGCAGCTGATGACCCATGGCGTCTAAGATCAACGTACCAATCTCAAAAATACCAGGCTGAATTCCCCATGGGTCCTGTGACCTCAGCCCATGCGGGGACCTACAGGTGCTACGGCTCACAGAGCTCCAAACCCTACCTGCTGACTCACCCCAGTGACCCCCTGGAGCTCGTGGTCTCAGGACCGTCTGGGGGCCCCAGCTCCCCGACAACAGGCCCCACCTCCACATCTGCAGGCCCTGAGGACCAGCCCCTCACCCCCACCGGGTCGGATCCCCAGAGTGGTCTGGGAAGGCACCTGGGGGTTGTGATCGGCATCTTGGTGGCCGTCATCCTACTGCTCCTCCTCCTCCTCCTCCTCTTCCTCATCCTCCGACATCGACGTCAGGGCAAACACTGGACATCGACCCAGAGAAAGGCTGATTTCCAACATCCTGCAGGGGCTGTGGGGCCAGAGCCCACAGACAGAGGCCTGCAGTGGAGGTCCAGCCCAGCTGCCGATGCCCAGGAAGAAAACCTCTATGCTGCCGTGAAGCACACACAGCCTGAGGATGGGGTGGAGATGGACACTCGGCAGAGCCCACACGATGAAGACCCCCAGGCAGTGACGTATGCCGAGGTGAAACACTCCAGACCTAGGAGAGAAATGGCCTCTCCTCCTTCCCCACTGTCTGGGGAATTCCTGGACACAAAGGACAGACAGGCGGAAGAGGACAGGCAGATGGACACTGAGGCTGCTGCATCTGAAGCCCCCCAGGATGTGACCTACGCCCAGCTGCACAGCTTGACCCTCAGACGGGAGGCAACTGAGCCTCCTCCATCCCAGGAAGGGCCCTCTCCAGCTGTGCCCAGCATCTACGCCACTCTGGCCATCCACTAGCCCAGGGGGGGACGCAGACCCCACACTCCATGGAGTCTGGAATGCATGGGAGCTGCCCCCCCAGTGGACACCATTGGACCCCACCCAGCCTGGATCTACCCCAGGAGACTCTGGGAACTTTTAGGGGTCACTCAATTCTGCAGTATAAATAACTAATGTCTCTACAATTTTGAAATAAAGCAACAGACTTCTCAATAATCAATGAAGTAGCTGAGAAAACTAAGTCAGAAAGTGCATTAAACTGAATCACAATGTAAATATTACACATCAAGCGATGAAACTGGAAAACTACAAGCCACGAATGAATGAATTAGGAAAGAAAAAAAGTAGGAAATGAATGATCTTGGCTTTCCTATAAGAAATTTAGGGCAGGGCACGGTGGCTCACGCCTGTAATTCCAGCACTTTGGGAGGCCGAGGCGGGCAGATCACGAGTTCAGGAGATCGAGACCATCTTGGCCAACATGGTGAAACCCTGTCTCTCCTAAAAATACAAAAATTAGCTGGATGTGGTGGCAGTGCCTGTAATCCCAGCTATTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCAGGGAGTCAGAGGTTTCAGTGAGCCAAGATCGCACCACTGCTCTCCAGCCTGGCGACAGAGGGAGACTCCATCTCAAATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAA
【００５６】
ヒトＬＩＬＲＢ１  タンパク質（配列番号３５）
MTPILTVLICLGLSLGPRTHVQAGHLPKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTAPWITRIPQELVKKGQFPIPSITWEHTGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLELVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVTLQCDSQVAFDGFILCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSNSPYEWSLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGERDFLQLAGAQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQFYDRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRSTYQSQKYQAEFPMGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLTHPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTSAGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVILLLLLLLLLFLILRHRRQGKHWTSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKHTQPEDGVEMDTRQSPHDEDPQAVTYAEVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLDTKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDVTYAQLHSLTLRREATEPPPSQEGPSPAVPSIYATLAIH
【００５７】
本発明において、前記結合阻害物質は、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害できればよい。前記阻害は、例えば、直接的な阻害でもよいし、間接的な阻害でもよい。前記阻害は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質およびＬＩＬＲＢ１タンパク質を、前記結合阻害物質の存在下で複合体を形成させた場合のＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との複合体の形成量が、例えば、前記結合阻害物質の非存在下で複合体を形成させた場合と比較して、（例えば、有意に）低下していることを意味する。ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との複合体形成は、例えば、後述の実施例を参照し、標識化されたＲＩＦＩＮタンパク質またはＬＩＬＲＢ１タンパク質を、それぞれ、ＬＩＬＲＢ１タンパク質またはＲＩＦＩＮタンパク質を発現する対象と接触させ、前記接触後、前記対象における前記標識を検出することにより、測定できる。前記測定は、例えば、フローサイトメータ等を用いて実施できる。
【００５８】
前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合物質等があげられる。前記結合阻害物質が前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質の場合、前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する結合物質であることが好ましい。前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する結合物質は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域の一部または全部に結合する。前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域および保存領域は、例えば、下記アミノ酸領域を意味する。
【００５９】
（ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域および保存領域）
PF3D7_0100200(配列番号１、GenBank: CAB89210.1)
可変領域：配列番号１のアミノ酸配列における１６４〜２９１番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号１のアミノ酸配列における４３〜１４４番目のアミノ酸領域
PF3D7_0900200(配列番号２、GenBank: CAD51688.1)
可変領域：配列番号２のアミノ酸配列における１６７〜３３３番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号２のアミノ酸配列における４２〜１４３番目のアミノ酸領域
PF3D7_0223100(配列番号３、GenBank: CZT98243.1)
可変領域：配列番号３のアミノ酸配列における１６２〜２８８番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号３のアミノ酸配列における３９〜１３６番目のアミノ酸領域
PF3D7_1254800(配列番号４、GenBank: CZT99701.1)
可変領域：配列番号４のアミノ酸配列における１６６〜２７５番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号４のアミノ酸配列における３９〜１３９番目のアミノ酸領域
PF3D7_0700200(配列番号５、GenBank: CZT62652.1)
可変領域：配列番号５のアミノ酸配列における１６７〜２８１番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号５のアミノ酸配列における４５〜１４６番目のアミノ酸領域
PF3D7_1100400(配列番号６、GenBank: CZT98672.1)
可変領域：配列番号６のアミノ酸配列における１７５〜２８１番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号６のアミノ酸配列における４５〜１４７番目のアミノ酸領域
PF3D7_1480000(配列番号７、GenBank: CZU00495.1)
可変領域：配列番号７のアミノ酸配列における１６７〜３００番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号７のアミノ酸配列における３８〜１４２番目のアミノ酸領域
PF3D7_0600300(配列番号８、GenBank: CAG25174.1)
可変領域：配列番号８のアミノ酸配列における１６６〜３２９番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号８のアミノ酸配列における４０〜１４５番目のアミノ酸領域
PF3D7_0632700(配列番号９、GenBank: CAG25139.1)
可変領域：配列番号９のアミノ酸配列における１６５〜３３４番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号９のアミノ酸配列における３９〜１４４番目のアミノ酸領域
PF3D7_0632200(配列番号１０、GenBank: CAG25134.1)
可変領域：配列番号１０のアミノ酸配列における１６８〜３３４番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号１０のアミノ酸配列における４２〜１４３番目のアミノ酸領域
PF3D7_0100400(配列番号１１、GenBank: CAB89212.1)
可変領域：配列番号１１のアミノ酸配列における１６４〜３２９番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号１１のアミノ酸配列における３９〜１４６番目のアミノ酸領域
PF3D7_1254400(配列番号１２、GenBank: CZT99697.1)
可変領域：配列番号１２のアミノ酸配列における１６９〜３３６番目のアミノ酸領域
保存領域：配列番号１２のアミノ酸配列における４４〜１４８番目のアミノ酸領域
【００６０】
前記結合阻害物質の種類は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。具体例として、前記結合阻害物質がペプチドまたはタンパク質の場合、前記結合阻害物質は、例えば、抗体またはその抗原結合断片があげられる。前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体でもよいし、ポリクローナル抗体でもよい（以下、同様）。前記結合阻害物質がペプチドまたはタンパク質の場合、前記結合阻害物質は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合するタンパク質またはペプチド、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合するタンパク質またはペプチド等があげられる。前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合するタンパク質またはペプチドは、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の可溶化物またはそのＲＩＦＩＮタンパク質結合断片等があげられる。前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の可溶化物は、例えば、抗体のＦｃ領域（fragment crystallizable region）と、ＬＩＬＲＢ１タンパク質またはそのＲＩＦＩＮタンパク質結合断片との融合タンパク質があげられる。前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合するタンパク質またはペプチドは、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＲＩＦＩＮタンパク質のデコイペプチド等があげられる。前記ＲＩＦＩＮタンパク質のデコイペプチドは、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質のＬＩＬＲＢ１タンパク質への結合を阻害し、かつＬＩＬＲＢ１タンパク質を活性化しないペプチドである。前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の活性化は、例えば、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の機能が発揮されることを意味する。前記ペプチドは、例えば、環状ペプチドまたは特殊環状ペプチドであってもよい（以下、同様）。前記結合阻害物質が核酸の場合、前記結合阻害物質は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合核酸分子、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合核酸分子等があげられる。前記結合核酸分子は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡおよびＲＮＡからなるアプタマー等があげられる。前記結合阻害物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
【００６１】
前記結合阻害物質の誘導物質は、例えば、患者（以下、「投与対象」ともいう）に投与した際に、前記投与対象において、前記結合阻害物質を誘導する物質である。前記結合阻害物質は、抗体が好ましい。前記誘導物質の種類は、例えば、ペプチド、タンパク質、核酸等があげられる。前記誘導物質は、例えば、効率よく前記結合阻害物質を誘導できることから、後述のアジュバントと併用することが好ましい。前記誘導物質は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質もしくは前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質もしくは前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の部分、またはいずれか１つ以上をコードするポリヌクレオチド等があげられる。前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を効果的に阻害する結合阻害物質を誘導できることから、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域を含むことが好ましい。この場合、前記誘導物質は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域の一部または全部を含む。前記誘導物質が前記ポリヌクレオチドである場合、前記ポリヌクレオチドは、例えば、ベクターに機能的に連結されている。前記ベクターは、例えば、アデノウイルスベクター等の公知のベクターがあげられる。前記ポリヌクレオチドは、例えば、デオキシリボヌクレオチドからなるＤＮＡでもよいし、リボヌクレオチドからなるＲＮＡでもよいし、ＤＮＡおよびＲＮＡからなるポリヌクレオチドでもよい。前記誘導物質は、例えば、前記投与対象において、前記結合阻害物質の発現を誘導してもよい。この場合、前記誘導物質は、例えば、低分子化合物の合成酵素、ペプチド、もしくはタンパク質をコードするポリヌクレオチドおよび前記結合阻害物質である核酸の鋳型となる核酸を含むポリヌクレオチド、またはこれを含むベクター等があげられる。前記誘導物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
【００６２】
前記発現抑制物質は、特に制限されず、例えば、前記ＲＩＦＩＮ遺伝子または前記ＬＩＬＲＢ１遺伝子のｍＲＮＡの発現を抑制する物質、発現したｍＲＮＡを切断する物質および発現したｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳を抑制する物質等があげられる。具体例としては、例えば、ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡ干渉剤、アンチセンス、リボザイム等があげられる。前記発現抑制物質は、例えば、熱帯熱マラリア原虫のＲＩＦＩＮ遺伝子および前記患者のＬＩＬＲＢ１遺伝子の少なくとも一方の塩基配列を編集可能な遺伝子編集システムでもよい。前記遺伝子編集システムは、例えば、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９等の公知のゲノム編集システムでもよいし、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ１３等の公知のｍＲＮＡの編集システムでもよい。前記発現抑制物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
【００６３】
本発明の治療薬は、前記結合阻害物質、前記誘導物質、および前記発現抑制物質のうちいずれか１つ以上を含めばよく、２つを含んでもよいし、全てを含んでもよい。
【００６４】
本発明の治療薬の種類がペプチド、タンパク質、または核酸である場合、前記ペプチド、前記タンパク質、および前記核酸は、例えば、１以上のアミノ酸または１以上のヌクレオチドが修飾および／または改変されてもよい。
【００６５】
前記修飾は、特に制限されず、例えば、ペプチドまたはタンパク質のＮ末端、Ｃ末端、もしくは側鎖の修飾、核酸の塩基、糖、リン酸基、または糖リン酸骨格の修飾等があげられる。
【００６６】
本発明の治療薬がペプチドまたはタンパク質である場合、前記ペプチドまたはタンパク質の改変体は、例えば、前記ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなるペプチドまたはタンパク質、および／または前記ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるペプチドまたはタンパク質があげられる。前記ペプチドまたはタンパク質がＲＩＦＩＮタンパク質またはその部分である場合、前記改変体は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。また、前記ペプチドまたはタンパク質がＬＩＬＲＢ１タンパク質またはその部分である場合、前記改変体は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記ペプチドまたはタンパク質がＲＩＦＩＮタンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片である場合、前記改変体は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。前記ペプチドまたはタンパク質がＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片である場合、前記改変体は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記「１もしくは数個」は、例えば、１〜７６個、１〜５６個、１〜３７個、１〜１８個、１〜１５個、１〜１１個、１〜７個、１〜３個、１または２個である。本発明において、個数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものである。つまり、例えば、「１〜５個」との記載は、「１、２、３、４、５個」の全ての開示を意味する（以下、同様）。前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記「同一性」は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
【００６７】
本発明の治療薬が核酸である場合、前記核酸の改変体は、例えば、前記核酸の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド、および／または前記核酸の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記核酸がＲＩＦＩＮタンパク質またはその部分をコードする核酸である場合、前記改変体によりコードされるタンパク質またはペプチドは、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。また、前記核酸がＬＩＬＲＢ１タンパク質またはその部分をコードする核酸である場合、前記改変体によりコードされるタンパク質またはペプチドは、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記核酸がＲＩＦＩＮタンパク質に結合する核酸である場合、前記改変体は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。前記核酸がＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する核酸である場合、前記改変体は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記「１もしくは数個」は、例えば、１〜２２８個、１〜１６８個、１〜１１１個、１〜５４個、１〜４５個、１〜３３個、１〜２１個、１〜９個、１〜６個、１〜３個、１または２個である。前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
【００６８】
本発明の治療薬は、例えば、薬学的に許容される担体等のその他の成分を含んでもよい。この場合、本発明の治療薬は、例えば、「医薬組成物」ということもできる。前記その他の成分は、特に制限されず、例えば、保存剤、抗酸化剤、キレート剤、安定化剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤等があげられる。前記保存剤は、例えば、チメロサール、２−フェノキシエタノール等があげられる。前記キレート剤は、例えば、エチレンジアミン４酢酸、グリコールエーテルジアミン４酢酸等があげられる。
【００６９】
本発明の治療薬が前記誘導物質を含む場合、本発明の治療薬は、前述のように、アジュバントを含むことが好ましい。この場合、本発明の治療薬は、例えば、「ワクチン」または「ワクチン組成物」ということもできる。前記アジュバントは、特に制限されず、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、塩化アルミニウム、リポポリ多糖（ＬＰＳ）、Poly(I:C)（Polyinosinic-polycytidylic acid）、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、ＣｐＧオリゴヌクレオチド等を含むＴｏｌｌ様受容体刺激剤、サポニン等の公知のアジュバントがあげられる。
【００７０】
本発明の治療薬は、例えば、投与対象に投与することで、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を直接または間接的に阻害可能である。具体例として、前記結合阻害物質は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合することにより、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合、またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に対するＲＩＦＩＮタンパク質の結合を阻害する。また、前記誘導物質は、例えば、前記投与対象において、前記結合阻害物質を誘導し、これにより、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合、またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に対するＲＩＦＩＮタンパク質の結合を阻害する。さらに、前記発現抑制物質は、例えば、前記投与対象におけるＲＩＦＩＮタンパク質またはＬＩＬＲＢ１タンパク質の発現を抑制することにより、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合、またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に対するＲＩＦＩＮタンパク質の結合を阻害する。
【００７１】
本発明の治療薬は、例えば、前述のように、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を直接的または間接的に阻害できるため、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの発生を阻害またはシグナルを抑制できる。このため、本発明の治療薬によれば、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合による前記免疫系細胞の機能抑制を防止または解除できる。このため、本発明の治療薬は、例えば、前記結合阻害物質、前記誘導物質および／または前記発現抑制物質に加えて、または代えてＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制するシグナル抑制物質を含んでもよい。前記シグナル抑制物質は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のアンタゴニスト、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のシグナル伝達タンパク質の活性抑制物質、前記結合阻害物質、前記誘導物質、前記発現抑制物質等があげられる。前記シグナル抑制物質の種類は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。前記シグナルの抑制は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパクおよびＬＩＬＲＢ１タンパク質のリガンド（例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質）を、前記シグナル抑制物質の存在下で複合体を形成させた場合のＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの量が、例えば、前記シグナル抑制物質の非存在下でのＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの量と比較して、（例えば、有意に）低下していることを意味する。前記シグナルの量は、例えば、後述の実施例を参照し、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルが発生した場合に、レポーター遺伝子を発現するレポーター細胞を用いて、測定できる。前記測定は、例えば、フローサイトメータ等を用いて実施できる。
【００７２】
本発明において、前記投与対象（患者）は、例えば、ヒトおよびヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ、モルモット、ネコ等があげられる。
【００７３】
本発明の治療薬の投与量は、特に制限されず、例えば、前記治療薬の種類、前記投与対象の種類、症状、年齢、投与方法等により適宜設定できる。具体例として、本発明の治療薬がペプチドであり、前記治療薬をヒトに投与する場合、１回あたりの前記ペプチドの投与量は、例えば、０．８〜３０ｍｇ、１０〜３０ｍｇである。前記ペプチドの投与回数は、特に制限されず、例えば、１〜３回である。
【００７４】
また、本発明の治療薬がタンパク質であり、前記治療薬をヒトに投与する場合、１回あたりの前記タンパク質の投与量は、例えば、１〜１００ｍｇ、１０〜１０００ｍｇである。前記タンパク質の投与回数は、特に制限されず、例えば、１〜５回である。
【００７５】
本発明の治療薬の投与形態（剤形）は、特に制限されず、例えば、液剤、懸濁剤、乳剤、注射剤、噴霧剤、粉末剤等があげられる。
【００７６】
本発明の治療薬の投与方法は、特に制限されず、例えば、静脈注射、筋肉注射、皮下投与、皮内投与、経皮投与、直腸投与、腹腔内投与、局所投与、経鼻投与、舌下投与等があげられる。
【００７７】
本発明の治療薬の製造方法は、特に制限されず、例えば、前記治療薬の種類に応じて、公知の方法を採用できる。本発明の治療薬が低分子化合物を含む場合、前記低分子化合物は、例えば、その構造に応じて、公知の方法により製造できる。
【００７８】
本発明の治療薬がペプチドを含む場合、前記ペプチドの製造方法は、例えば、化学的合成方法、前記ペプチドを含むタンパク質の分解により生産する方法、組換えＤＮＡ技術を使用した合成方法等があげられる。前記化学的合成方法の場合、前記ペプチドは、例えば、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、tert-ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）等の保護基を用いた公知の有機合成方法により製造できる。前記ペプチドを含むタンパク質の分解による場合、前記ペプチドは、例えば、前記ペプチドを含むタンパク質を、プロテアーゼ、ペプチダーゼ等の公知のタンパク質分解酵素で分解することにより製造できる。前記ペプチドを含むタンパク質の分解条件は、例えば、前記ペプチドを含むタンパク質の種類、前記タンパク質分解酵素の基質特異性等に応じて適宜設定できる。前記組換えＤＮＡ技術を使用する場合、前記ペプチドは、例えば、前記ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを作成する。そして、前記ペプチドの発現系を作製し、発現した前記ペプチドを単離することにより製造できる。前記発現系は、例えば、前記発現ベクターを宿主に導入することで作製できる。前記宿主は、例えば、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、細菌等の公知の宿主があげられる。また、前記組換えＤＮＡ技術を使用する場合、前記ペプチドは、例えば、前記ペプチドをコードするポリヌクレオチドと、公知の無細胞翻訳系とを使用してもよい。そして、前記無細胞翻訳系により、前記ポリヌクレオチドから翻訳された前記ペプチドを単離することにより製造できる。
【００７９】
本発明の治療薬がタンパク質を含む場合、前記タンパク質の製造方法は、例えば、化学的合成方法、組み換えＤＮＡ技術を使用した合成方法等があげられる。前記タンパク質の製造方法の説明は、例えば、前記ペプチドの製造方法の説明において、「ペプチド」を「タンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。前記タンパク質が抗体を含む場合、前記抗体の製造方法は、例えば、前記タンパク質の製造方法と同様でもよいし、前記動物に、前記抗体の抗原で免疫し、血清を回収する方法でもよいし、前記抗体を生産するハイブリドーマ等の細胞を培養する方法でもよい。
【００８０】
本発明の治療薬が核酸を含む場合、前記核酸の製造方法は、特に制限されず、例えば、ホスホロアミダイト法等の化学的合成方法、組み換えＤＮＡ技術を使用した合成方法等があげられる。前記核酸がアプタマーを含む場合、前記アプタマーは、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質等を用いて、ＳＥＬＥＸ法により取得できる。
【００８１】
＜マラリアの治療方法＞
本発明のマラリアの治療方法は、前述のように、患者に、前記本発明のマラリア治療薬を投与することを特徴とする。本発明の治療方法は、前記患者に、前記本発明のマラリア治療薬を投与することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の治療方法によれば、マラリアの重症化を防止する等のマラリアの治療ができる。本発明の治療方法は、例えば、前記本発明の治療薬の説明を援用できる。
【００８２】
本発明の治療方法は、例えば、後述の本発明の試験方法において、マラリアが重症化する危険があるとする患者に対して、実施してもよい。この場合、本発明の治療方法は、例えば、本発明の試験方法と組合せて実施してもよく、マラリアの重症化の危険度を試験する具体的な工程の説明は、本発明の試験方法の説明を援用できる。前記患者は、マラリアに未感染の患者でもよいし、マラリアに感染している患者でもよいし、マラリアに感染しているか不明の患者でもよい。
【００８３】
＜マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法＞
本発明のマラリア治療用候補物質のスクリーニング方法は、前述のように、被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする。本発明のスクリーニング方法は、マラリア治療用候補物質が、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質とのとの結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記本発明の治療薬および治療方法の説明を援用できる。
【００８４】
前記結合物質の種類は、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、核酸等があげられる。前記ＲＩＦＩＮは、例えば、マラリアを効果的に治療できることから、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮであることが好ましい。
【００８５】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記被検物質との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記検出工程において、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合の検出方法は、特に制限されず、例えば、公知のタンパク質間の結合の検出方法が採用でき、例えば、後述の実施例を参照できる。
【００８６】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記被検物質を生体（投与対象）に投与する工程、前記生体から生体試料を取得する工程、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記生体試料との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記投与工程において、前記被検物質の投与条件は、例えば、前記本発明の治療薬の説明を援用できる。前記投与工程および取得工程は、任意の工程であり、なくてもよい。この場合、前記検出工程では、前記生体試料として、例えば、前記被検物質を投与された生体から取得された生体試料を使用する。前記生体試料は、特に制限されず、例えば、血液、血漿、血清等があげられる。
【００８７】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に前記被検物質を接触させる工程、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と前記被検物質との結合を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。
【００８８】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現系に前記被検物質を共存させて、前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１を発現させる工程、前記発現系における前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現量が、前記被検物質を共存させていないコントロールの発現系よりも低い前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記検出工程において、検出対象の前記発現は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の発現でもよいし、前記ＲＩＦＩＮ遺伝子または前記ＬＩＬＲＢ１遺伝子のｍＲＮＡの転写でもよい。前記タンパク質の発現およびｍＲＮＡの発現の検出方法は、特に制限されず、例えば、公知の方法を採用できる。
【００８９】
本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記結合阻害物質、前記誘導物質および／または前記発現抑制物質に加えて、または代えてＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制するシグナル抑制物質をマラリア治療用候補物質として選択してもよい。前記シグナル抑制物質は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のアンタゴニスト、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のシグナル伝達タンパク質等のシグナル伝達分子の活性抑制物質、前記結合阻害物質、前記誘導物質、前記発現抑制物質等があげられる。本発明のスクリーニング方法が前記マラリア治療用候補物質としてシグナル抑制物質を選択する場合、本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質等のＬＩＬＲＢ１タンパク質のリガンドと、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記被検物質との共存下、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを検出する工程、および前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記検出工程において、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの検出方法は、特に制限されず、例えば、公知のシグナル伝達分子の検出方法が採用でき、例えば、後述の実施例におけるレポーター細胞を使用できる。
【００９０】
＜マラリア重症化マーカー＞
本発明のマラリア重症化マーカーは、前述のように、リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする。本発明のマーカーは、ＲＩＦＩＮをマーカーとすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のマーカーによれば、例えば、被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現を測定することで、被検者のマラリアの重症化の危険度を試験できる。本発明のマーカーは、例えば、前記本発明の治療薬、治療方法、およびスクリーニング方法の説明を援用できる。前記マラリアは、例えば、前記熱帯熱マラリア原虫の感染によるマラリアである。前記ＲＩＦＩＮは、例えば、マラリアの重症化とより高い相関を示すことから、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮであることが好ましい。
【００９１】
＜試験方法＞
本発明のマラリアの重症化の危険度を試験する方法は、前述のように、被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする。本発明の試験方法は、マラリア重症化マーカーとして、ＲＩＦＩＮの発現を測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の試験方法によれば、被検者のマラリアの重症化の危険度を試験できる。本発明の試験方法は、例えば、前記本発明の治療薬、治療方法、スクリーニング方法、およびマーカーの説明を援用できる。
【００９２】
本発明の試験方法によれば、例えば、マラリアの症状の進行の可能性、重症化の可能性、予後の評価等を評価できる。前記マラリアは、例えば、前記熱帯熱マラリア原虫の感染によるマラリアである。
【００９３】
前記被検者は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物等があげられ、前記非ヒト動物は、前述のように、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ等の哺乳類があげられる。
【００９４】
前記生体試料の種類は、特に制限はされず、例えば、生体から分離した、体液、体液由来細胞、器官、組織または細胞等があげられる。前記体液は、例えば、血液があげられ、具体例として、例えば、全血等があげられる。前記体液由来細胞は、例えば、血液由来細胞があげられ、具体的には、血球、白血球、赤血球、リンパ球等の血球細胞があげられる。前記熱帯熱マラリア原虫が感染した患者において、ＲＩＦＩＮは、例えば、赤血球に発現していることから、血液を含む生体試料、または赤血球を含む生体試料が好ましい。
【００９５】
測定対象であるＲＩＦＩＮの発現は、例えば、ＲＩＦＩＮ遺伝子のｍＲＮＡおよびＲＩＦＩＮタンパク質の発現があげられる。前記発現は、例えば、前記生体試料について、前記ｍＲＮＡまたは前記タンパク質のいずれか一方のみを測定してもよいし、両方を測定してもよい。これらの測定方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。具体例として、前記ｍＲＮＡ発現の測定方法は、例えば、逆転写（Reverse transcription：ＲＴ）−ＰＣＲ法等の逆転写反応を利用した遺伝子増幅法等があげられる。具体的には、例えば、ｍＲＮＡから逆転写反応でｃＤＮＡを合成し、前記ｃＤＮＡを鋳型として遺伝子増幅する方法である。また、前記タンパク質発現の測定方法は、例えば、免疫抗体法、ＥＬＩＳＡ法、フローサイトメトリーおよびウエスタンブロット法等があげられる。また、ＲＩＦＩＮタンパク質発現は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を用いて測定してもよい。この場合、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質としては、例えば、後述のＬＩＬＲＢ１−Ｆｃを使用できる。前記ＲＩＦＩＮは、例えば、マラリアの重症化とより高い相関を示すことから、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮであることが好ましい。
【００９６】
前記測定工程では、例えば、前記ＲＩＦＩＮの発現の有無を測定してもよいし、前記ＲＩＦＩＮの発現量を測定してもよい。
【００９７】
本発明の試験方法は、例えば、さらに、前記被検者の生体試料（以下、「被検生体試料」ともいう）におけるＲＩＦＩＮの発現に基づき、前記被検者のマラリアの重症化の危険度を試験する試験工程を含む。前記測定工程における測定結果がＲＩＦＩＮの発現量の場合、前記試験工程では、例えば、前記被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を、基準値と比較することにより、前記被検者のマラリアの重症化の危険度を試験する試験工程を含む。前記基準値は、特に制限されず、例えば、健常者、重症のマラリア患者、および重症化の進行度ごとのマラリア患者のＲＩＦＩＮの発現量があげられる。予後の評価の場合、前記基準値は、例えば、同じ被検者の治療後のＲＩＦＩＮの発現量であってもよい。
【００９８】
前記基準値は、例えば、前述のような、健常者および／または重症のマラリア患者から単離した生体試料（以下、「基準生体試料」ともいう）を用いて、得ることができる。また、予後の評価の場合、例えば、同じ被検者から治療後に単離した基準生体試料を用いてもよい。前記基準値は、例えば、前記被検者の被検生体試料と同時に測定してもよいし、予め測定してもよい。後者の場合、例えば、前記被検者の被検生体試料を測定する度に、基準値を得ることが不要となるため、好ましい。前記被検者の被検生体試料と前記基準生体試料は、例えば、同じ条件で採取し、同じ条件でＲＩＦＩＮの測定を行うことが好ましい。
【００９９】
前記試験工程において、被検者のマラリアの重症化の危険度の評価方法は、特に制限されず、例えば、前記測定工程の測定結果により適宜決定できる。前記測定結果が、前記ＲＩＦＩＮの発現の有無の場合、例えば、以下のように実施できる。具体例として、前記被検者の被検生体試料において、前記ＲＩＦＩＮが発現していると、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性があるまたは危険性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料において、前記ＲＩＦＩＮが発現していないと、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性がないまたは危険性が低いと評価できる。また、前記測定結果が、前記ＲＩＦＩＮの発現量の場合、前記評価方法は、例えば、前記基準値の種類によって適宜決定できる。具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記健常者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に高い場合、前記重症のマラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記マラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に高い場合、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性があるまたは危険性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記健常者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と同じ場合（有意差がない場合）、前記健常者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に低い場合、および／または、前記重症のマラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に低い場合、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性がないまたは危険性が低いと評価できる。また、前記試験工程において、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を、前記重症化の進行度ごとのマラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と比較することで、マラリアの重症化の進行度を評価できる。具体的には、前記被検者の被検生体試料が、例えば、いずれかの重症化の進行度の前記基準生体試料と同程度の発現量の場合（有意差がない場合）、前記被検者は、前記重症化の進行度の可能性があると評価できる。
【０１００】
前記試験工程において、予後の状態を評価する場合、例えば、前述と同様に評価してもよいし、基準値として、同じ被検者の治療後の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を使用して評価することもできる。具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記基準値よりも有意に高い場合、前記被検者は、前記治療後、再発または悪化（重症化）の危険性があると評価できる。また、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記基準値と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記基準値よりも有意に低い場合、前記被検者は、前記治療後、再発の危険性がないもしくは危険性が低いと評価できる。
【０１０１】
本発明においては、例えば、同じ被検者の生体試料を経時的に採取し、前記生体試料におけるＲＩＦＩＮ発現量を比較してもよい。これによって、例えば、経時的に発現量が増加すれば、重症化の可能性が高くなった等の判断が可能であり、経時的に発現量が低下すれば、重症化の可能性が低くなったまたは治癒してきた等の判断が可能である。
【０１０２】
＜試験試薬＞
本発明の試験試薬は、前述のように、リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、前記本発明の試験方法に用いることを特徴とする。本発明の試験方法は、ＲＩＦＩＮの発現測定試薬を、前記本発明の試験方法に用いることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の試験試薬によれば、前記本発明の試験方法を簡便に実施できる。
【０１０３】
前記発現測定試薬は、前記ＲＩＦＩＮの発現が測定できればよく、前記発現測定試薬の種類は、特に制限されない。前記ＲＩＦＩＮの発現測定試薬は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質の発現測定試薬でもよく、ＲＩＦＩＮ遺伝子のｍＲＮＡの発現測定試薬でもよい。
【０１０４】
前者は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質があげられ、具体例として、抗体またはその抗原結合断片があげられる。この場合、本発明の試験試薬は、例えば、さらに、ＲＩＦＩＮタンパク質と前記抗体またはその抗原結合断片との結合を検出する検出物質を含むことが好ましい。前記検出物質は、例えば、前記抗体またはその抗原結合断片に対する検出可能な標識化抗体と、前記標識に対する基質等の組合せがあげられる。
【０１０５】
後者は、例えば、ＲＩＦＩＮ遺伝子のｍＲＮＡを逆転写により増幅する試薬があげられ、具体例として、ポリｄＴ、ランダムプライマー、逆転写酵素、ｄＮＴＰ、ＤＮＡポリメラーゼ、プライマー等があげられる。前記プライマーは、例えば、ＲＩＦＩＮ遺伝子の塩基配列に基づいて適宜設計できる。
【０１０６】
＜マラリアの重症化の診断方法および診断試薬＞
本発明のマラリアの重症化の診断方法は、被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する工程を含むことを特徴とする。また、本発明のマラリアの重症化の診断試薬は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含むことを特徴とする。本発明診断方法および診断試薬は、例えば、前記本発明の試験方法および試験試薬の説明を援用できる。
【０１０７】
＜マラリア治療薬の使用＞
本発明は、マラリアの治療に使用するためのリフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質である。本発明は、マラリア治療薬の製造のためのリフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質の使用である。本発明のマラリア治療薬の使用は、例えば、前記本発明の治療薬、治療方法、スクリーニング方法、マーカー、試験方法、および試験試薬の説明を援用できる。
【０１０８】
以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【０１０９】
［実施例１］
ＬＩＬＲＢ１が、熱帯熱マラリア原虫が感染した赤血球に結合することを確認した。【０１１０】
（１）ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの調製
ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ融合タンパク質をコードするプラスミド（ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ発現ベクター）は、下記参考文献１の方法と同様にして作製した。また、ビオチン化されたＬＩＬＲＢ１−Ｆｃタンパク質を生産するため、Ｃ末端にAviTagが付与されたＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ発現ベクター（Ａｖｉ−ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ発現ベクター）は、ＬＩＬＲＢ１−ＦｃをコードするポリヌクレオチドをｐＣＡＧＧＳ発現ベクターに挿入することにより、作製した。前記ＬＩＬＲＢ１−ＦｃおよびＡｖｉ−ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ発現ベクターは、トランスフェクション試薬（PEI Max、Polysciences Inc.社製）を用い、添付のプロトコルに従い、２９３Ｔ細胞（RIKEN Cell Bankより入手）に導入した。そして、前記２９３Ｔ細胞を培養することにより、ＬＩＬＲＢ１−ＦｃおよびＡｖｉ−ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃを含む培養上清を取得した。Protein Aを用いて、得られた培養上清からＬＩＬＲＢ１−ＦｃおよびＡｖｉ−ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃを精製した。
参考文献１：Hirayasu, K. et al., “Microbially cleaved immunoglobulins are sensed by the innate immune receptor LILRA2.”, Nat. Microbiol., 2016, vol. 1, Article number:16054【０１１１】
（２）熱帯熱マラリア原虫臨床株の調製
熱帯熱マラリア原虫（以下、「原虫」ともいう）の臨床株は、タイ国のメーホンソーン県メーサリエン郡（Mae Sariang district, Mae Hong Son Province）に居住するマラリア患者（患者１〜７）から分離し、限界希釈することで調製した。前記臨床株は、ヒト赤血球（日本赤十字社から入手、Ｏ型、ヘマトクリット２％）を添加したRPMI-1640培地（20% AlbuMAXI（商標）、25 mmol/L HEPES、0.225%重炭酸ナトリウム、0.38 mmol/L ヒポキサチンおよび10 g/mL ゲンタマイシンを含有）で培養した。培養条件は、９０％Ｎ２、５％ＣＯ２、および５％Ｏ２雰囲気下とし、培養温度は、３７℃とした。【０１１２】
（３）熱帯熱マラリア原虫の培養
原虫株３Ｄ７、ＣＤＣ１、Ｋ１、ＦＣＲ３およびＤｄ２、ならびに前記臨床株は、ヒト赤血球を含む１０％ヒト血清含有RPMI-1640培地で培養した。後述する遺伝子組換え原虫は、１０％ヒト血清および25 ng/mL ピリメタミン（ＳＩＧＭＡ社製）含有RPMI-1640培地で維持した。５％Ｄ−ソルビトールを用い、原虫は、リング期（Ring Stage）に同期させた。また、トロホゾイト期（trophozoite stage）およびシゾント期（schizont stage）の原虫は、パーコール密度勾配遠心分離法（ＧＥヘルスケア社製）により調製した。各熱帯熱マラリア原虫は、ＰＣＲによりマイコプラズマ汚染を定期的に検査した。【０１１３】
（４）ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃと感染赤血球との結合
ＬＩＬＲＢ１−ＦｃをＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ  Ｆｃ抗体と混合し、複合体を形成させた。つぎに、前記複合体を、３Ｄ７株または前記臨床株（患者１由来）を感染させた感染赤血球とインキュベートすることにより、前記感染赤血球を、前記複合体で染色した。前記染色後、得られたサンプルをフローサイトメトリーにより解析した。コントロール１は、前記原虫を感染させなかった以外は同様にして、コントロール２は、ＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ  Ｆｃ抗体のみを用いた以外は同様にして解析した。これらの結果を図１に示す。【０１１４】
図１は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図１において、（Ａ）は、原虫を感染させなかった赤血球の結果を示し、（Ｂ）は、３Ｄ７株を感染させた感染赤血球の結果を示し、（Ｃ）は、前記臨床株を感染させた感染赤血球の結果を示す。図１（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸は、前方散乱光（ＦＳＣ）を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合量（Fc-binding-APC）を示す。図１（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、コントロール１および２では、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合が観察されなかった。これに対して、実施例（LILRB1-Fc）では、３Ｄ７株または前記臨床株のいずれの原虫が感染した感染赤血球に対しても、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの感染赤血球への結合が観察された。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃが、熱帯熱マラリア原虫が感染した感染赤血球に結合することがわかった。【０１１５】
［実施例２］
ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、熱帯熱マラリア原虫の臨床株が感染した赤血球に結合することを確認した。【０１１６】
前記患者１〜７から分離された原虫の臨床株を用い、前記実施例１と同様にして、感染赤血球を、ＬＩＬＲＢ１−ＦｃとＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ  Ｆｃ抗体との複合体で染色した。また、前記感染赤血球は、核染色剤（Vybrant（登録商標）DyeCycle（商標）Green）を用いて、核染色を実施した。前記染色後、得られたサンプルをフローサイトメトリーにより解析した。コントロール１は、前記臨床株を感染させなかった以外は同様にして、コントロール２は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに代えて、ＬＩＬＲＡ２−Ｆｃ融合タンパク質を添加した以外は同様にして解析した。なお、ＬＩＬＲＡ２−Ｆｃは、前記参考文献１と同様にして作製した。これらの結果を図２に示す。【０１１７】
図２は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２において、横軸は、核染色剤（Nuclear staining-VG）の蛍光強度を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）を示す。また、図中の数値は、実施例における核染色剤陽性であり、かつＬＩＬＲＢ１−Ｆｃが結合する赤血球の割合を示す。図２に示すように、コントロール１（Uninfected erythrocytes）およびコントロール２（黒色のプロット）では、臨床分離株の感染を示す、核染色剤陽性群において、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これに対して、実施例（グレーのプロット）では、患者１、３、４および６由来の臨床株が感染した赤血球に対して、効率よく結合した。なお、患者２および５由来の原虫が感染した感染赤血球において、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これは、原虫が感染赤血球の表面上に発現させる抗原を、宿主の状態により変化させることによると推定される。なお、この推定は、本発明を何ら制限しない。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、熱帯熱マラリア原虫の臨床株が感染した感染赤血球に結合することがわかった。【０１１８】
［実施例３］
ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、異なるステージまたは異なる種類の熱帯熱マラリア原虫が感染した感染赤血球に結合することを確認した。【０１１９】
前記実施例１（３）に記載の方法により、リング期に同期させた原虫が感染した感染赤血球、トロホゾイト期の原虫が感染した感染赤血球、およびシゾント期の原虫が感染した感染赤血球を調製した。前記原虫は、患者６由来の原虫を用いた。そして、前記臨床株に代えて、前記リング期、トロホゾイト期またはシゾント期の原虫が感染した感染赤血球を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、解析した。また、ステージの異なる原虫に代えて、ＣＤＣ１株、Ｋ１株、ＦＣＲ３株、Ｄｄ２株を用いた以外は同様にして、解析した。さらに、コントロールは、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに代えて、ＬＩＬＲＡ２−Ｆｃを添加した以外は同様にして解析した。これらの結果を図３に示す。【０１２０】
図３は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図３において、横軸は、核染色剤（Nuclear staining-VG）の蛍光強度を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）を示す。図３において、（Ａ）は、異なるステージの原虫が感染した感染赤血球の結果を示し、（Ｂ）は、異なる種類の原虫が感染した感染赤血球の結果を示す。また、図３（Ａ）において、各ドットプロットは、左から、リング期の原虫が感染した感染赤血球の結果（ring）、トロホゾイト期の原虫が感染した感染赤血球の結果（mid trophozoite）、およびシゾント期の原虫が感染した感染赤血球の結果（schizont）を示す。図３（Ｂ）において、各ドットプロットの上の名称は、原虫株の名称を示す。また、図３において、図中の数値は、実施例における核染色剤陽性群であり、かつＬＩＬＲＢ１−Ｆｃが結合する赤血球の割合を示す。図３（Ａ）に示すように、いずれのステージの原虫が感染した感染赤血球においても、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃが結合した。ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃは、特に、トロホゾイト期またはシゾント期の原虫が感染した感染赤血球によく結合した。また、図３（Ｂ）に示すように、コントロール（黒色のプロット）では、原虫の感染を示す、核染色剤陽性群において、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これに対して、実施例（グレーのプロット）では、ＣＤＣ１株、Ｋ１株、およびＤｄ２株のいずれの原虫が感染した感染赤血球においても、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合が観察された。なお、ＦＣＲ３株が感染した感染赤血球において、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これは、原虫が感染赤血球の表面上に発現させる抗原を、宿主の状態により変化させることによると推定される。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、異なるステージおよび異なる種類の熱帯熱マラリア原虫が感染した感染赤血球に結合することがわかった。また、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、ＭＨＣクラス１分子を認識することが知られている。しかしながら、実施例１〜３で使用している赤血球には、ＭＨＣクラス１分子は発現していない。このため、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃは、赤血球上に発現する熱帯熱マラリア原虫由来の分子をリガンドして結合していることがわかった。【０１２１】
［実施例４］
ＬＩＬＲＢ１タンパク質のリガンドが、ＲＩＦＩＮタンパク質であることを確認した。また、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、様々なＲＩＦＩＮタンパク質と結合することを確認した。【０１２２】
（１）熱帯熱マラリア原虫３Ｄ７株を用いたクローニング
ＡＰＣ標識抗ＩｇＧ−Ｆｃ抗体を後述のＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ融合タンパク質と混合し、複合体を形成させた。つぎに、前記複合体を、３Ｄ７株が感染した感染赤血球に結合させた。さらに、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに結合した感染赤血球を富化した。前記富化後の感染赤血球を限界希釈し、原虫の単クローンを取得した。具体的には、富化された感染赤血球内の原虫について、５％Ｄ−ソルビトールの存在下で培養することにより、リング期に同期させた。新たな培地に交換後、さらに４８時間の培養後、シゾント後期の原虫を、６３（ｖ／ｖ）％パーコール（Amersham Pharmacia Biotech社製）密度勾配遠心分離法により精製した。精製された原虫は、培養液（１０％Ｏ型ヒト血清含有RPMI-1640培地、parasitemia：１％、hematocrit：２％）と混合し、Ｔ−７５フラスコで培養した。前記培養は、ＢＮＰ−１１０インキュベータ（タバイエスペック株式会社製）を用い、９０％Ｎ２、５％ＣＯ２、および５％Ｏ２雰囲気下で、３７℃１時間実施した。前記培養後、前記フラスコのキャップを固く閉め、１細胞の赤血球に対して複数の原虫の感染が生じないように、オービタルシェーカーを用い、１００ｒｐｍで、前記フラスコを振盪した。前記フラスコ中の原虫のステージは、２時間毎にギムザ染色で確認した。前記原虫の大半が、リング期に移行したことを確認後、前記原虫を含む培養液を、新たな培養液（３％ヘマトクリット）により希釈した。前記希釈された原虫（０．５原虫／０．２ｍＬ）を９６ウェルのフラットボトムプレートに播種した。そして、半量の培養液を４８時間毎に交換し、２週間培養した。前記培養後、１プレートあたり約２０ウェルにおいて、前記原虫が、検出された。各ウェルについて、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が結合する赤血球を含むか否かは、フローサイトメトリー解析により、スクリーニングした。これにより、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が結合するＦ２クローンと、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が結合しないＤ１１クローンを取得した。【０１２３】
（２）ＬＩＬＲＢ１リガンドの同定
前記実施例１（１）で得られたＡｖｉ−ＬＩＬＲＢ１−ＦｃをＢｉｒＡビオチンリガーゼでビオチン化した。つぎに、感染赤血球のゴースト細胞を調製した。具体的には、感染赤血球のゴースト細胞は、感染赤血球と、RPMI-1640培地をＤＤＷ（２回蒸留水）で５倍希釈した低浸透液（感染赤血球の体積４０倍量）とを混合し、４℃、１５分間インキュベート後、１５０００ｒｐｍ、１５分間遠心し、さらに、低浸透液で３回洗浄することで取得した。なお、Ｆ２クローンおよびＤ１１クローンのシゾント期の原虫が感染した感染赤血球を用いて、前記感染赤血球のゴースト細胞を調製した。つぎに、Ｆ２クローンおよびＤ１１クローンのシゾント期の原虫が感染した感染赤血球から得たゴースト細胞を、ビオチン化ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃとインキュベート後、0.25 mmol/L 3,3-dithiobis(sulfosuccinimidyl propionate) (DTSSP、Thermo Scientific社製)で架橋処理した。その後、ゴースト細胞をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で洗浄し、２−メルカプトエタノール無しのサンプルバッファーでボイルした。前記ボイル後、ストレプトアビジンセファロースを用いて、ボイル後のサンプルからＬＩＬＲＢ１−Ｆｃを含む共沈物を得た。前記共沈物は、50 mmol/L ＤＴＴ（ジチオトレイトール）で溶出し、トリプシン処理後、質量分析（LC-MS/MS）に供した。MS/MSスペクトルは、ソフトウェア（Mascot）を用いて解析した。コントロールは、ビオチン化ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃで処理していないゴースト細胞を用いた以外は、同様にして解析した。また、同様の解析を独立して、さらに１回実施した。【０１２４】
この結果、独立した２回のいずれの解析においても、Ｆ２クローンが感染した感染赤血球のみから、ＲＩＦＩＮタンパク質の部分配列と一致するアミノ酸配列（ＦＨＥＹＤＥＲ（配列番号３６））が得られた。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、原虫の感染により発現する赤血球上のＲＩＦＩＮタンパク質をリガンドとすることがわかった。【０１２５】
（３）遺伝子組換え原虫の作製
ＲＩＦＩＮ遺伝子は、熱帯熱マラリア原虫において複数種類存在することが知られている。そこで、様々なＲＩＦＩＮ遺伝子を発現する遺伝子組換え原虫を作製し、ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、ＲＩＦＩＮタンパク質との結合を確認した。具体的には、ＲＩＦＩＮ遺伝子を発現する遺伝子組換え原虫を作製するために、前記ＲＩＦＩＮタンパク質のアミノ酸配列に基づき、対応するゲノム領域の塩基配列を特定した。そして、前記ゲノム領域の塩基配列に基づき、プライマーを設計し、前記プライマーを用いてイントロンを含む各ＲＩＦＩＮ遺伝子の全長を３Ｄ７株のゲノムからＰＣＲにより増幅した。得られた増幅断片を、ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに挿入することにより、１９種類のＲＩＦＩＮ遺伝子が挿入されたＰｆＣＥＮ５発現ベクターを取得した。つぎに、挿入されたＲＩＦＩＮ遺伝子の定常領域および可変領域の塩基配列を解読し、前記塩基配列が、3D7 genome version 3（release 32、PlasmoDB、http://plasmodb.org）と一致することを確認した。また、得られたＰｆＣＥＮ５発現ベクターのｃＤＮＡの塩基配列を、ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに特異的なプライマー（5’-TTATCCTTATTTTTTAATAACTGCC-3’（配列番号３７）および5’-GTTCGTGGCATTCCAC-3’（配列番号３８））を用いて解読した。その結果、いずれのＰｆＣＥＮ５発現ベクターにおいても、イントロンは正確にスプライシングされていた。なお、ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに導入されていたＲＩＦＩＮ遺伝子は、下記の通りである。【０１２６】
（ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに導入されていたＲＩＦＩＮ遺伝子）
PF3D7_1254800、PF3D7_0223100、PF3D7_1100400、PF3D7_0632700、PF3D7_0700200、PF3D7_0100200、PF3D7_0900200、PF3D7_0600300、PF3D7_1480000、PF3D7_0100400、PF3D7_0632200、PF3D7_1254400、PF3D7_1479700、PF3D7_0632400、PF3D7_0101000、PF3D7_1000200、PF3D7_0732200、PF3D7_0937500、PF3D7_1300400【０１２７】
遺伝子組換え原虫を作製するため、新鮮な赤血球にＲＩＦＩＮ−ＰｆＣＥＮ５発現ベクターをエレクトロポレーションでトランスフェクション後、前記赤血球に、３Ｄ７株を感染させた。前記感染から４日後、ピリメサミン含有RPMI-1640培地で前記感染赤血球を培養した。その後、遺伝子組換え原虫は、ヒト赤血球を添加した25 ng/mLピリメサミンおよび１０％ヒト血清含有RPMI-1640培地で、培養および維持した。また、コントロールの遺伝子組換え原虫は、ＧＦＰ遺伝子を挿入したＰｆＣＥＮ５発現ベクターを用いた以外は、同様にして作製した。【０１２８】
（４）ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との結合の確認
前記臨床株に代えて、前記遺伝子組換え原虫を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、解析した。コントロールは、前記遺伝子組換え原虫に代えて、前記コントロールの遺伝子組換え原虫を用いた以外は同様にして解析した。これらの結果を図４に示す。【０１２９】
図４は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図４において、横軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）を示し、縦軸は、カウント数を示す。図４において、図中の実線で示すヒストグラムは、実施例を示し、グレーで示すヒストグラムは、コントロールを示す。また、各ヒストグラムの上の名称は、遺伝子組換え原虫に導入されたＲＩＦＩＮ遺伝子名を示す。図４に示すように、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃは、いずれのＲＩＦＩＮ遺伝子が導入された遺伝子組換え原虫に対しても結合した。すなわち、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃは、いずれのＲＩＦＩＮタンパク質とも結合した。また、ＬＩＬＲＢ１は、PF3D7_1254800（配列番号４）、PF3D7_0223100（配列番号３）、PF3D7_1100400（配列番号６）、PF3D7_0632700（配列番号９）、PF3D7_0700200（配列番号５）、およびPF3D7_0100200（配列番号１）がコードするタンパク質に対し、特に強く結合した。なお、前記ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに代えて、ＲＩＦＩＮ遺伝子のＣ末端にＨｉｓタグが付加されたＰｆＣＥＮ５発現ベクターを用いた場合も、同様の結果が得られた。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、様々なＲＩＦＩＮタンパク質と結合することがわかった。【０１３０】
［実施例５］
ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合することを確認した。【０１３１】
ＲＩＦＩＮ遺伝子（PF3D7_1254800）のＮ末端側の保存領域またはＣ末端側の可変領域（それぞれ、配列番号４のアミノ酸配列における３９〜１３９番目および１６６〜２７５番目のアミノ酸領域）をコードするポリヌクレオチドと、ＰＩＬＲαの膜貫通領域および細胞内領域（配列番号３９のアミノ酸配列における１９６〜２５６番目のアミノ酸領域）をコードするポリヌクレオチドとを連結し、ｐＭＥ１８ｓ発現ベクターに挿入した。これにより、ＲＩＦＩＮ遺伝子の保存領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターおよび可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターを作製した。前記融合タンパク質の発現ベクターにより発現する保存領域を含む融合タンパク質（配列番号４０）および可変領域を含む融合タンパク質（配列番号４１）のアミノ酸配列は、下記の通りである。【０１３２】
ＰＩＬＲαタンパク質のアミノ酸配列（配列番号３９）
MALLISLPGGTPAMAQILLLLSSACLHAGNSERSNRKNGFGVNQPESCSGVQGGSIDIPFSFYFPWKLAKDPQMSIAWRWKDFHGEFIYNSSLPFIHEHFKGRLILNWTQGQTSGVLRILNLKESDQTRYFGRVFLQTTEGIQFWQSIPGTQLNVTNATCTPTTLPSTTAATSAHTQNDITEVKSANIGGLDLQTTVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDPKENPKDNNIVYASISLSSPTSPGTAPNLPVHGNPQEETVYSIVKAK【０１３３】
保存領域を含む融合タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４０）
MRAWIFFLLCLAGRALAASDYKDDDDKLECECELYMSNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDDRMIEKRQKCKDRCNKEIEKIILKDKIEKELTETFATLNTNITNEDIPTCICKKSVADKIEKTCLKITVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDP【０１３４】
可変領域を含む融合タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４１）
MRAWIFFLLCLAGRALAASDYKDDDDKLEYETINAFIAKTIEELEGIPGITKLFGAKISQFVTPAVFRKPMSLVETILSEKKKLCLCAANKNELLCRGMNPNVPETLPKKIEVAVNEVLSSVNDTWATATTPTTFFTNPITVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDP【０１３５】
つぎに、２９３Ｔ細胞に、前記トランスフェクション試薬を用い、添付のプロトコルにしたがって、前記保存領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターまたは前記可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターを導入した。この際に、同時にＧＦＰ遺伝子を含む発現ベクターを、前記２９３Ｔ細胞に導入した。そして、前記感染赤血球に代えて、前記ベクター導入後の２９３Ｔ細胞を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、解析した。また、コントロール１は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに代えて、ＡＰＣ標識化抗ＦＬＡＧ抗体を添加した以外は同様にして解析した。コントロール２は、前記ベクター未導入の２９３Ｔ細胞を用いた以外は同様にして解析した。これらの結果を図５に示す。【０１３６】
図５は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図５において、横軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）またはＡＰＣ標識化抗ＦＬＡＧ抗体の結合量（ＦＬＡＧ−ＡＰＣ）を示し、縦軸は、カウント数を示す。図５において、各ヒストグラムは、左から、可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターを導入された２９３Ｔ細胞の結果（Variable region）および保存領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターの結果（Conserved region）を示す。図５において、図中の実線で示すヒストグラムは、実施例またはコントロール１を示し、グレーで示すヒストグラムは、コントロール２を示す。なお、図５は、ＧＦＰ陽性細胞にゲートをかけて示している。図５の下段のヒストグラムに示すように、ＡＰＣ標識化抗ＦＬＡＧ抗体での染色により、保存領域を含む融合タンパク質および可変領域を含む融合タンパク質が、同程度発現していることが確認できた。図５の上段のヒストグラムに示すように、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃは、可変領域を含む融合タンパク質に結合するのに対し、保存領域を含む融合タンパク質にはほとんど結合しなかった。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域により結合することがわかった。すなわち、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、ＲＩＦＩＮタンパク質の保存領域と比較して、ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に対して、より特異的に結合することがわかった。【０１３７】
［実施例６］
ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合することを確認した。【０１３８】
（１）組換えＲＩＦＩＮタンパク質の調製
Ｃ末端にＨｉｓタグが付加された組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、以下のようにして調製した。まず、ＲＩＦＩＮ（PF3D7_1254800）のＣ末端側の可変領域（配列番号４のアミノ酸配列における１６６〜２７５番目のアミノ酸領域）のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドについて、コドン最適化を行なった。つぎに、コドン最適化されたポリヌクレオチドを、Ｎ末端にＨｉｓタグを付加可能なｐＥＴ−１５ｂ発現ベクターに挿入した。得られたｐＥＴ−１５ｂ発現ベクターを用いて、常法により、大腸菌（E. Coli BL21（DE3））の形質転換を行なった。得られた形質転換体をＩＰＴＧ（イソプロピル-β-チオガラクトピラノシド）存在下で培養し、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を発現させた。前記発現後、形質転換体を回収および破砕し、TALON metal affinity chromatographyを用い、破砕液から組換えＲＩＦＩＮタンパク質を精製した。そして、精製後の組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、リフォールディングした。【０１３９】
（２）ＬＩＬＲＢ１タンパク質発現２９３Ｔ細胞の調製
ＬＩＬＲＢ１をコードするポリヌクレオチドを、ｐＭＸｓ発現ベクターに挿入した。つぎに、２９３Ｔ細胞に、前記トランスフェクション試薬を用い、添付のプロトコルにしたがって、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を発現する発現ベクターを導入した。これにより、ＬＩＬＲＢ１タンパク質発現２９３Ｔ細胞を取得した。【０１４０】
（３）組換えＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合
前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質発現２９３Ｔ細胞と、前記精製後の組換えＲＩＦＩＮタンパク質を混合し、インキュベートした。前記インキュベート後、さらに、ＡＰＣ標識化抗Ｈｉｓ抗体（clone 28-75、ＷＡＫＯ社製）で染色した。得られたサンプルについて、フローサイトメトリーにより解析した。この結果を図６に示す。【０１４１】
図６は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図６において、横軸は、横軸は、ＲＩＦＩＮの結合量（RIFIN-binding-APC）を示し、縦軸は、カウント数を示す。図６に示すように、組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１に結合した。この結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合することがわかった。【０１４２】
［実施例７］
ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してシグナルを誘導することを確認した。【０１４３】
（１）レポーター細胞の作製
ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞は、下記参考文献２と同様にして作製した。具体的には、前記ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞は、マウスＴ細胞ハイブリドーマに、ＮＦＡＴ−ＧＦＰ、ＦＬＡＧ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＡＰ１２、およびＬＩＬＲＢ１の細胞外ドメインとＰＩＬＲβとを融合させた融合タンパク質をレトロウィルスで遺伝子導入することで取得した。
参考文献２：Shiroishi, M. et al., “Efficient leukocyte Ig-like receptor signaling and crystal structure of disulfide-linked HLA-G dimer.", J. Biol. Chem., 2006, vol.281, pages 10439-10447, 【０１４４】
（２）レポーターアッセイ
前記実施例６（１）で作製した組換えＲＩＦＩＮタンパク質（１０μｇ／ｍＬ）を９６ウェルプレートに固相化した。つぎに、前記ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞を、１×１０５細胞／ウェルとなるように播種し、１６時間培養した。培養温度は、３７℃とし、５％ＣＯ２雰囲気下で実施した。前記培養後、ＬＩＬＲＢ１シグナルにより生じるＧＦＰの発現を、フローサイトメトリーにより解析した。コントロール１は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を固相化しなかった以外は同様にして、解析した。また、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質に代えて、実施例４（３）のPF3D7_1254800をコードするベクターが導入された遺伝子組換え原虫を用いた以外は同様にして、解析した。コントロール２は、遺伝子組換え原虫を添加せず、レポーター細胞のみを用いた以外は同様にして、解析した。これらの結果を図７に示す。【０１４５】
図７は、フローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図７において（Ａ）は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を用いた結果を示し、（Ｂ）は、遺伝子組換え原虫を用いた結果を示す。図７（Ａ）において、横軸は、ＧＦＰの発現量（LILRB1-GFP reporter）を示し、縦軸は、カウント数を示し、実線で示すヒストグラムは、実施例を示し、グレーで示すヒストグラムは、コントロール１を示す。また、図７（Ｂ）において、横軸は、ＧＦＰの発現量（LILRB1-GFP reporter）を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）を示す。図７（Ａ）に示すように、コントロール１では、ＧＦＰの発現が誘導されないのに対し、組換えＲＩＦＩＮタンパク質の添加群では、ＧＦＰの発現が誘導された。また、図７（Ｂ）に示すように、コントロール２（Control）では、ＧＦＰの発現が誘導されないのに対し、遺伝子組換え原虫の添加群では、ＧＦＰが誘導された。これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してシグナルを誘導することがわかった。【０１４６】
［実施例８］
ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してＢ細胞の活性化を抑制することを確認した。【０１４７】
（１）ＲＩＦＩＮタンパク質発現ＣＨＯ細胞の作製
前記トランスフェクション試薬を用い、添付のプロトコルにしたがって、前記実施例５の可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターと、ＣＤ８を発現する発現ベクターとを、ＣＨＯ細胞（RIKEN Cell Bankより入手）にトランスフェクションした。そして、autoMACS（登録商標）Pro Separator（Miltenyi Biotec社製）を用い、ＣＤ８陽性ＲＩＦＩＮ陽性細胞を分離した。【０１４８】
（２）Ｂ細胞の活性の測定
末梢血単核球（PBMC）はフィコール密度勾配遠心分離法により健常者血液から分離した。つぎに、ＰＢＭＣと、ＣＤ８陽性ＲＩＦＩＮ陽性細胞とを、１：２の割合（細胞数の比）で混合し、２４時間培養した。培養温度は、３７℃とし、５％ＣＯ２雰囲気下で実施した。前記培養後、ＰＢＭＣを、Ｋ３ＣｐＧ（２μｇ／ｍＬ）で３日間刺激した。前記刺激後、培養上清を回収し、前記培養上清中のＩｇＭ濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。コントロール１は、ＰＩＬＲαの膜貫通領域に代えて、ヒトＭＤＡ５（human melanoma differentiation-associated protein 5）を融合させた融合タンパク質を含む発現ベクターを用いた以外は同様にして、測定した。また、ＰＢＭＣと、前記遺伝子組換えマラリアが感染した感染赤血球とを１：１００の割合（細胞数の比）で混合し、１６時間培養した以外は同様にして、測定した。コントロール２は、ＰＢＭＣのみを用い、Ｋ３ＣｐＧで刺激しなかった以外は同様にして、コントロール３は、前記遺伝子組換えマラリアに代えて、ＧＦＰを導入した遺伝子組換えマラリアを用いた以外は同様にして、測定した。これらの結果を図８に示す。【０１４９】
図８は、ＩｇＭの産生量を示すグラフである。図８（Ａ）および（Ｂ）において、横軸が、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＩｇＭの産生量を示す。図８（Ａ）に示すように、ＲＩＦＩＮタンパク質を膜上に発現するＣＨＯ細胞（LILRB1+RIFIN-CHO）と共培養した場合、細胞膜上にＲＩＦＩＮタンパク質が発現しないコントロール１（Mock-CHO）と比較し、ＩｇＭの産生量が低下した。また、図８（Ｂ）に示すように、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現する遺伝子組換え原虫(LILRB1+RIFIN-transgenic)と共培養した場合、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現しないコントロール３（Mock-transgenic）と比較して、ＩｇＭの産生量が低下し、バックグラウンド（コントロール２（Control））と同程度のＩｇＭ産生量となった。Ｂ細胞は、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を発現していることが知られている。このため、これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介して、Ｂ細胞の活性化を抑制することがわかった。【０１５０】
［実施例９］
ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してＮＫ細胞の活性化を抑制することを確認した。【０１５１】
（１）ＲＩＦＩＮタンパク質発現Ｋ５６２細胞の作製
ＲＩＦＩＮタンパク質を発現するＫ５６２細胞は、下記参考文献３を参照し、レトロウイルス遺伝子発現システムにより樹立した。具体的には、前記実施例５の可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターから、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを切り出し、ｐＭＸ発現ベクターに挿入した。得られたｐＭＸ発現ベクターおよびＰＬＡＴ−Ｅレトロウイルスパッケージング細胞を用い、前記発現ベクターを含むレトロウイルスを調製した。そして、前記レトロウイルスを、前記Ｋ５６２細胞（東北大学加齢医学研究所から入手）に感染させることにより、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現するＫ５６２細胞（RIFIN-K562）を作製した。
参考文献３：Morita, S.et.al., “Plat-E: an efficient and stable system for transient packaging of retroviruses.”, Gene therapy, 2000, vol. 7, pages 1063-1066【０１５２】
（２）ＮＫ細胞の活性の測定
15 μmol/L Calcein AM (Thermo Fisher Scientific社製)を含む完全培地（組成：１０％熱不活化ＦＣＳ含有、フェノールレッド不含RPMI-1640培地）の存在下、RIFIN-K562を３７℃３０分間培養することにより、標識化した。前記標識化後、前記完全培地で２回洗浄し、RIFIN-K562を５×１０３／１００μＬとなるように前記完全培地で懸濁した。ＮＫ細胞株であるＮＫＬ細胞（Lanier博士（カルフォルニア大学）から入手）は、２回完全培地で洗浄した。前記洗浄後、ＮＫＬ細胞およびRIFIN-K562を、Ｅ：Ｔ比（ＮＫ細胞株の細胞数：RIFIN-K562の細胞数）が、５０：１、２５：１または１２．５：１となるように９６ウェルプレートに播種した。前記播種後、前記プレートを１００×ｇ、５分間遠心し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で、４時間培養した。つぎに、前記プレートを１５００ｒｐｍ、２分間遠心し、培養上清の蛍光をTriStar LB941（Berthold Technologies社製）で測定した（実験放出、experimental release）。また、RIFIN-K562を、２％Triton X-100含有完全培地で処理することにより、最大放出（maximamu release）を測定した。コントロールは、ＮＫＬ細胞を播種しなかった以外は同様にして、測定した（自然放出、spontaneous release）。ＮＫ細胞の活性（溶解率）は、下記式（１）により算出した。コントロールは、RIFIN-K562に代えて、Ｋ５６２細胞を用いた以外は同様にして、算出した。これらの結果を図９に示す。なお、ＮＫＬ細胞株がＬＩＬＲＢ１を発現していることは、フローサイトメトリーにより確認している。【０１５３】
溶解率＝（実験放出−自然放出）／（最大放出−自然放出）  ・・・（１）【０１５４】
図９は、ＮＫ細胞の活性を示すグラフである。図９において、横軸は、Ｅ：Ｔ比を示し、縦軸は、溶解率（Lysis（％））を示す。図９に示すように、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現するＫ５６２細胞と共培養した場合、コントロールと比較して、ＮＫ細胞の溶解率が低下した。すなわち、ＲＩＦＩＮタンパク質により、ＮＫ細胞の活性化が抑制された。これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してＮＫ細胞の活性化を抑制することがわかった。【０１５５】
［実施例１０］
重症のマラリア患者では、軽症のマラリア患者（非重症のマラリア患者）と比較して、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合性が高いことを確認した。【０１５６】
タンザニアの重症のマラリア患者（ｎ＝９）または軽症のマラリア患者（ｎ＝３０）から採血した。前記採血後、ＬＩＬＲＢ１−ＦｃまたはＬＩＬＲＡ２−Ｆｃ（コントロール）を固相化したペトリディッシュに血液を播種し、培養した。前記培養開始後２４時間以内に前記ペトリディッシュを洗浄し、ペトリディッシュに結合していない原虫が感染した感染赤血球を除去した。ペトリディッシュに結合した原虫が感染した感染赤血球は、グルタールアルデヒドで固定後、ギムザ染色し、カウントした。そして、各患者について、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃを固相化したペトリディッシュに結合した原虫が感染した感染赤血球の数から、ＬＩＬＲＡ２−Ｆｃを固相化したペトリディッシュに結合した原虫が感染した感染赤血球の数を引き、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに結合する感染赤血球の数を算出した。なお、重症のマラリア患者は、脳性マラリアの患者および重症貧血の患者とした。また、脳性マラリアの患者は、Blantyre coma score＜３と定義し、重症貧血の患者は、blood haemoglobin ＜５ｇ／ｄＬと定義した。また、Blantyre coma scoreおよびblood haemoglobinは、前述の方法により算出した。また、軽症のマラリア患者は、非重症のマラリア患者とした。これらの結果を図１０に示す。【０１５７】
図１０は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに結合する感染赤血球の数を示すグラフである。図１０において、横軸は、患者の種類を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに結合する感染赤血球の数（IEs binding to LILRB1(Relative number of IESs)）を示す。図１０に示すように、重症のマラリア患者は（severe Malaria）は、軽症のマラリア患者（non-severe Malaria）と比較して、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃに結合する感染赤血球の数が有意に高かった。これらの結果から、重症のマラリア患者では、軽症のマラリア患者と比較して、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合性が高いことがわかった。すなわち、重症のマラリア患者の感染赤血球では、ＬＩＬＲＢ１タンパク質と結合するＲＩＦＩＮタンパク質がよく発現しているため、ＬＩＬＲＢ１タンパク質と感染赤血球との相互作用が生じ、マラリアの重症化に関与していると推定された。なお、この推定は、本発明を何ら制限しない。【０１５８】
［実施例１１］
ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との相互作用の阻害が、マラリアの重症化の抑制に重要であることを確認した。【０１５９】
前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質をビーズに固相化した。つぎに、前記固相化ビーズと、２２２名のタンザニア人由来の血漿とをそれぞれ反応させた。前記反応後、前記固相化ビーズに結合したＩｇＧの結合を、Luminex（Thermo Fisher Scientific社製）により解析し、ＲＩＦＩＮタンパク質結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を算出した（RIFIN-1）。カットオフ値は、マラリアを罹ったことのない４３名のヨーロッパドナーの平均値の２ＳＤとした。また、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質に代えて、PF3D7_1254200の可変領域の組換えＲＩＦＩＮタンパク質を用いた以外は同様にして、算出した（RIFIN-2）。なお、前記割合は、年齢毎に算出した。これらの結果を図１１に示す。【０１６０】
図１１は、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を示すグラフである。図１１において、横軸は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質の種類および年齢を示し、縦軸は、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を示す。また、各組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、左から、１歳まで（０−１）、１歳を超え３歳まで（１−３）、３歳を超え６歳まで（３−６）、６歳を超え１０歳まで（６−１０）、１０歳を超え１５歳まで（１０−１５）、１５歳を超え３０歳まで（１５−３０）、および３０歳を超え６０歳まで（３０−６０）のタンザニア人における結果を示す。図１１に示すように、２種類のＲＩＦＩＮタンパク質に対して、いずれの年齢においても同程度のＩｇＧ抗体の獲得がみられた。また、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＩｇＧ抗体は、１〜３歳という早期に獲得されることがわかった。これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が感染初期において重要であり、宿主側の防御免疫において重要なターゲットとなっていると推定された。このことから、生体において、ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との相互作用を阻害することにより、マラリアの重症化が抑制できることが推定された。なお、これらの推定は、本発明を何ら制限しない。【０１６１】
［実施例１２］
抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との相互作用を阻害できることを確認した。また、抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制できることを確認した。【０１６２】
（１）抗ＲＩＦＩＮ抗体含有血清の調製
抗ＲＩＦＩＮ抗体を作製するために、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質を、アジュバント（TiterMax Gold、TiterMax USA, Inc.社製）と混和し、マウス（Balb/c（ｎ＝２）およびICR（ｎ＝２））に免疫した。具体的には、６週齢のメスのBalb/cマウスとICRマウスに、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質を１匹あたり５０μｇずつ、感染動物実験施設において免疫した。２週間後採血し、血清を得た。【０１６３】
マウス血清中の抗ＲＩＦＩＮ抗体の有無を調べるために、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質を固相化したビーズ（RIFINビーズ）への結合を調べた。具体的には、RIFINビーズは、 Aldehyde／Sulfate Latex beads（3.8μm、invirtogen社製、 A37304）に、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質をカップリングすることにより作製した。そして、RIFINビーズと、ＰＢＳで100倍希釈した各血清を１５分間インキュベートした。つぎに、ＰＢＳで洗浄後、抗mouse IgG抗体（Jackson社製、５μｇ／ｍＬ）で１５分間染色した。前記染色後、RIFINビーズを、フローサイトメトリーにより解析した。この結果、いずれの血清も、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する抗体、すなわち、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含むことが確認できた。【０１６４】
（２）抗ＲＩＦＩＮ抗体によるＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合阻害
抗ＲＩＦＩＮ抗体が、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との相互作用を阻害するかどうかを調べるために、RIFINビーズへのＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合を抗ＲＩＦＩＮ抗体含有血清で阻害できるかどうかを解析した。具体的には、前記RIFINビーズと、ＰＢＳで１００倍希釈した各血清を１５分間インキュベートした。つぎに、ＰＢＳで洗浄後、前述のように、ＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ  Ｆｃ抗体と複合体を形成させたＬＩＬＲＢ１−Ｆｃ（１０μｇ／ｍＬ）で１５分間染色した。前記染色後、RIFINビーズを、フローサイトメトリーで解析した。コントロール１は、前記血清を添加しなかった以外は同様にして、コントロール２は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を免疫していないマウス由来の血清を用いた以外は同様にして、コントロール３は、複合体を形成していないＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ  Ｆｃ抗体のみを用いた以外は同様にして、解析した。これらの結果を図１２に示す。【０１６５】
図１２は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図１２において、横軸は、ＬＩＬＲＢ１−Ｆｃの結合量を示し、縦軸は、カウント数を示す。図１２に示すように、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含まないコントロール１および２では、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合が観察された。これに対して、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含む血清を添加した場合、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合は阻害され、バックグラウンド（コントロール３）と同程度となった。これらの結果から、抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害できることがわかった。【０１６６】
（３）抗ＲＩＦＩＮ抗体によるＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの抑制
９６ウェルプレートに、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質（１０μｇ／ｍＬ）を固相化した。つぎに、前記ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞を、１×１０５細胞／ウェルとなるように播種した。さらに、前記血清を、１００倍希釈となるように各ウェルに添加し、１８時間培養した。培養温度は、３７℃とし、５％ＣＯ２雰囲気下で実施した。前記培養後、ＬＩＬＲＢ１シグナルにより生じるＧＦＰの発現を、フローサイトメトリーにより解析した。コントロールは、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を免疫していないマウス由来の血清を用いた以外は同様にして、解析した。これらの結果を図１３に示す。【０１６７】
図１３は、フローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１３において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＧＦＰの発現量（LILRB1-GFP reporter）を示す。図１３に示すように、コントロールでは、ＧＦＰの発現が誘導されるのに対し、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含む血清を添加した場合、ＧＦＰの発現は、ほとんど誘導されなかった。また、前述のように、抗ＲＩＦＩＮ抗体は、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する。このため、これらの結果から、抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害することにより、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制できることがわかった。【０１６８】
前述のように、生体において、ＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合により、マラリアの重症化を誘導していると推定される。また、このマラリアの重症化は、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルにより、Ｂ細胞、ＮＫ細胞等の免疫細胞の活性化を抑制することに起因すると考えられる。抗ＲＩＦＩＮ抗体等のＲＩＦＩＮタンパク質と、ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質は、前述のように、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制できる。したがって、本発明の結合阻害物質、誘導物質、および発現抑制物質により、直接または間接的に、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害することで、生体においてマラリアの重症化を抑制できるといえる。【０１６９】
以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。【０１７０】
この出願は、２０１７年１１月２８日に出願された日本出願特願２０１７―２２８２２６を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。【０１７１】
＜付記＞
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする、マラリア治療薬。
（付記２）
前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質および前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合物質の少なくとも一方である、付記１記載のマラリア治療薬。
（付記３）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する、付記２記載のマラリア治療薬。
（付記４）
前記結合物質は、抗体またはその抗原結合断片を含む、付記２または３記載のマラリア治療薬。
（付記５）
前記誘導物質は、ＲＩＦＩＮタンパク質もしくはＲＩＦＩＮタンパク質の部分、またはこれらをコードする核酸を含む、付記１から４のいずれかに記載のマラリア治療薬。
（付記６）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域を含む、付記５記載のマラリア治療薬。
（付記７）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮタンパク質を含む、付記１から６のいずれかに記載のマラリア治療薬。
（付記８）
前記結合阻害物質の誘導物質およびアジュバントを含む、付記１から７のいずれかに記載のマラリア治療薬。
（付記９）
前記発現抑制物質は、前記ＲＩＦＩＮ遺伝子または前記ＬＩＬＲＢ１遺伝子のｍＲＮＡの発現を抑制する物質、発現したｍＲＮＡを切断する物質および発現したｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳を抑制する物質からなる群から選択された少なくとも一つである、付記１記載のマラリア治療薬。
（付記１０）
患者に、付記１から９のいずれかに記載のマラリア治療薬を投与することを特徴とする、マラリアの治療方法。
（付記１１）
被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法。
（付記１２）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記被検物質との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１３）
前記被検物質を生体に投与する工程、
前記生体から生体試料を取得する工程、
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記生体試料との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１４）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に前記被検物質を接触させる工程、
前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と前記被検物質との結合を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１５）
前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現系に前記被検物質を共存させて、前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１を発現させる工程、
前記発現系における前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現量が、前記被検物質を共存させていないコントロールの発現系よりも低い前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１６）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記１１から１５のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（付記１７）
リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする、マラリア重症化マーカー。
（付記１８）
前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、付記１７記載のマラリア重症化マーカー。
（付記１９）
被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする、マラリアの重症化の危険度を試験する方法。
（付記２０）
前記測定工程において、ＲＩＦＩＮの発現量を測定する、付記１９記載の試験方法。
（付記２１）
前記被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を、基準値と比較することにより、前記被検者のマラリアの重症化の危険度を試験する試験工程を含み、
前記基準値が、健常者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量またはマラリアの重症患者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量である、付記２０記載の試験方法。
（付記２２）
前記試験工程において、前記被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記健常者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも高い場合、前記マラリアの重症患者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と同じ場合または、前記マラリアの重症患者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも高い場合に、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性があるとする、付記２１記載の試験方法。
（付記２３）
前記生体試料が、血液を含む、付記１９から２２のいずれかに記載の試験方法
（付記２４）
前記生体試料が、赤血球を含む、付記１９から２３のいずれかに記載の試験方法。
（付記２５）
前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、付記１９から２４のいずれかに記載の試験方法。
（付記２６）
前記ＲＩＦＩＮの発現は、ＲＩＦＩＮタンパク質の発現およびＲＩＦＩＮ  ｍＲＮＡの発現の少なくとも一方である、付記１９から２５のいずれかに記載の試験方法。
（付記２７）
リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、
付記１９から２６のいずれかに記載の試験方法に用いることを特徴とする、試験試薬。
（付記２８）
前記発現測定試薬は、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質、およびＲＩＦＩＮと前記結合物質との結合を検出する検出試薬を含む、付記２７記載の試験試薬。
（付記２９）
前記発現測定試薬は、ＲＩＦＩＮ遺伝子  ｍＲＮＡを逆転写により増幅する試薬である、付記２７記載の試験試薬。
【産業上の利用可能性】
【０１７２】
以上説明したように、本発明のマラリア治療薬によれば、マラリアを治療できる。このため、本発明は、例えば、臨床分野等において極めて有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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