(57)【要約】  本発明の課題は大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤を提供することである。解決手段は、有効成分としてケフィアを含有してなる大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてケフィアを含有してなる、大腸がん予防剤。
【請求項２】
有効成分としてケフィアを含有してなる、大腸前がん病変抑制剤。
【請求項３】
経口投与用である、請求項１に記載の大腸がん予防剤。
【請求項４】
経口投与用である、請求項２に記載の大腸前がん病変抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケフィアを有効成分として含有する大腸前がん病変抑制剤、及び大腸がん予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本における大腸がんによる死亡率は増加しつつある。ヒト大腸癌についての癌遺伝子や発癌抑制遺伝子の解析が積極的に行われているが、長い年月を要する大腸癌の発生機構の解明は現在なお困難であり、大腸癌の発生に関わる環境要因の様式の解明は容易ではない。【０００３】
一方、大腸前がん病変として知られる病変が、一定期間の経過後に一定割合で大腸がんとなってゆくことが知られている。そして、この大腸前がん病変を抑制すれば、大腸がんの発生もまた抑制されることが知られている。【０００４】
例えば、特許文献１（特開２００６−２９０８５６号公報）には、米糠由来のスフィンゴ糖脂質が、大腸前がん病変を抑制し、大腸がん予防作用を示すことが開示されている。【０００５】
ケフィアは、ロシアのコーカサス地方原産の発酵乳であり、コーカサス地方に由来するケフィアグレイン（ケフィア粒、ケフィア菌）を種菌（スターター）として牛乳等の獣乳を発酵させて製造される。ケフィアグレインは、それ自体があたかも一つの生体として振る舞うものであるが、学術的には各種微生物が天然の共生体となったものであり、Lactobacillus kefiri、並びにLeuconostoc属, Lactococcus属 及び Acetobacter属の各種微生物の１種以上、さらに、乳糖発酵性酵母（例えばKluyveromyces marxianus）及び非乳糖発酵性酵母（例えばSaccharomyces unisporus, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces exiguus）を含んでいる。ケフィアは、発酵乳として美味である点に加えて、各種の健康維持増進機能が指摘されており、健康によい食品として普及しつつある。【０００６】
このケフィアの優れた特性を生かすために、ケフィアに種々の食品成分を添加して、さらに健康維持増進機能に優れた食品を創り出す試みが行われてきた。例えば、特許文献２（ＷＯ２００２／０７６２４０）は、ケフィアにナットウキナーゼを添加した食品を開示している。【０００７】
しかし、ケフィアについて、大腸前がん病変に対する抑制効果、及び大腸がんの予防効果は確認されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００６−２９０８５６号  公開特許公報
【特許文献２】ＷＯ２００２／０７６２４０号  国際公開公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
このように、大腸がんの発生の予防（抑制）と、大腸前がん病変の発生の予防（抑制）とが求められていた。【００１０】
従って、本発明の目的は、大腸がんの発生の予防と、大腸前がん病変の発生の予防（抑制）を可能とする予防剤（抑制剤）を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者は、鋭意研究の結果、ケフィアを経口投与すると大腸前がん病変が抑制され、大腸がんが予防されることを見出して、本発明に到達した。【００１２】
すなわち、本発明は、次の［１］〜［２］にある。
［１］
有効成分としてケフィアを含有してなる、大腸がん予防剤。
［２］
有効成分としてケフィアを含有してなる、大腸前がん病変抑制剤。【００１３】
さらに、本発明は、次の［３］〜［４］にもある。
［３］
経口投与用である、［１］に記載の大腸がん予防剤。
［４］
経口投与用である、［２］に記載の大腸前がん病変抑制剤。【００１４】
このように、本発明は、大腸がん予防剤、大腸がん抑制剤、大腸前がん病変予防剤、大腸前がん抑制剤にもあり、経口投与用大腸がん予防剤、経口投与用大腸がん抑制剤、経口投与用大腸前がん病変予防剤、経口投与用大腸前がん抑制剤にもあり、大腸がん予防用経口投与剤、大腸がん抑制用経口投与剤、大腸前がん病変予防用経口投与剤、大腸前がん抑制用経口投与剤にもある。【００１５】
また、本発明の有効成分であるケフィアは、伝統的な食経験の結果、長期にわたる日常的な摂取も安心して行うことができるものである。従って、本発明は、長期服用用、長期投与用、及び長期摂取用の、上記予防剤及び抑制剤にもある。【００１６】
さらに、本発明は、次の［５］〜［９］にもある。
［５］
ケフィアを投与することによって、大腸がんを予防する方法。
［６］
ケフィアを投与することによって、大腸前がん病変を抑制する方法。
［７］
ケフィアを経口投与する、［５］又は［６］に記載の方法。
［８］
大腸がん予防剤を製造するための、ケフィアの使用。
［９］
大腸前がん病変抑制剤を製造するための、ケフィアの使用。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、大腸前がん病変を抑制（予防）し、大腸がんを予防（抑制）することができる。【００１８】
予防剤又は抑制剤としての摂取は、症状が発生する以前からの長期にわたる日常的な摂取とする必要があるために、強力な効能効果がある薬剤であっても、その副作用や安全性に不安がある場合には、予防剤又は抑制剤としての摂取には適さない。しかし、本発明の抑制剤（予防剤）の有効成分であるケフィアは、歴史的な年月の間、ヒトの飲食に供されてきた食品であるために、高い安全性が担保されており、長期にわたる日常的な摂取も、安心して行うことができる。すなわち、長期にわたる日常的な摂取にも不安なく、大腸前がん病変を抑制（予防）し、大腸がんを予防（抑制）することができることが、本発明の大きな利点である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１Ａ】図１Ａは、正常大腸のＨＥ染色した切片の顕微鏡写真を示す図である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＡＣＦを有する大腸のＨＥ染色した切片の顕微鏡写真を示す図である。
【図１Ｃ】図１Ｃは、正常大腸のアルシアンブルーパス（Ａｌｃｉａｎ  ｂｌｕｅ−ＰＡＳ）染色した切片の顕微鏡写真を示す図である。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ＡＣＦを有する大腸のアルシアンブルーパス（Ａｌｃｉａｎ  ｂｌｕｅ−ＰＡＳ）染色した切片の顕微鏡写真を示す図である。
【図２】図２は、ＡＣＦを有する大腸をメチレンブルー染色した顕微鏡写真を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下に本発明の実施の態様を挙げて、本発明を詳細に説明する。本発明は以下に例示する具体的な実施の態様に限定されるものではない。
【００２１】
上述のように、本発明は、有効成分としてケフィアを含有してなる、大腸がん予防剤、及び大腸前がん病変抑制剤にある。
【００２２】
本発明において使用されるケフィアは、公知の製造方法に基づいて製造することができる。ケフィアは、獣乳すなわち牛、馬、羊、山羊などの乳を発酵させて製造することができるが、好ましくは牛乳へのケフィアグレインの添加、発酵によって製造することができる。さらに、本発明において使用されるケフィアとして、豆乳その他の植物由来原料を出発材料として、これにケフィアグレインを添加して発酵させて製造された豆乳ケフィア及び植物性ケフィアを使用することもできる。これらの製造方法としては、例えば特開昭６２−８３８４２号公報、特開２００６−７５１７６号公報などを参照することができる。本発明において使用されるケフィアとしては、液体及び流動状のケフィア、さらにこれらの凍結乾燥品等の固体が含まれ、これらは粉末、顆粒、これらを内包するカプセル等の形態とすることもでき、公知の方法によって製剤して得られるものも含まれる。
【００２３】
好適に使用可能なケフィアとしては、市販品として、例えば、ＮＫＧケフィア−Ｄ（日本ケフィア株式会社製）、ＮＫＧケフィア−Ｐ（日本ケフィア株式会社製）、ＮＫＧ豆乳ケフィア−ＳＤ（日本ケフィア株式会社製）、ＮＫＧケフィアＹＤ−０１（日本ケフィア株式会社製）、ＮＫＧケフィアＹＬ−０１（日本ケフィア株式会社製）、ＮＫＧケフィアＧ−０７（日本ケフィア株式会社製）を挙げることができる。
【００２４】
本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、ケフィアを有効成分として含有してなるものである。本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、種々の形態のケフィアそれ自体であってもよく、ケフィア以外の成分を含有したものとすることもできる。また、ケフィアは生菌を含有するケフィアであっても良く、死菌を含有するケフィアであってもよい。
【００２５】
本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、投与方法に適した種々の形態とすることができる。本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、トローチ剤、噴霧剤、乳剤、座剤、注射剤、軟膏、テープ剤等の形態とすることができる。経口投与をする場合には、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤等に加工して経口摂取することができる。本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤の投与は、例えば、経口投与、非経口投与が挙げられ、好ましくは経口投与又は経腸投与であり、特に好ましくは経口投与である。本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、飲食品や飼料等に配合して投与することもできる。
【００２６】
本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、飲食品の形態とすることができる。すなわち、本発明は、大腸がん予防及び大腸前がん病変抑制のための機能性食品にもある。機能性食品とした場合に好適な形状として、タブレット状のサプリメントを例示することができる。これによって有効成分の摂取量を正確に把握することができる。さらに、本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、食品添加剤の形態とすることができる。すなわち、本発明は、大腸がん予防及び大腸前がん病変抑制のための食品添加剤にもある。
【００２７】
本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤は、例えば、ケフィアを薬学的に許容され得る賦形剤等の任意の添加剤を用いて製剤化することにより製造できる。製剤化する場合、製剤中のケフィアの含有量は、通常０．０１〜５０質量％、好ましくは０．１〜２５．０質量％である。製剤化にあたっては、薬学的に許容されうる公知の賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。製剤化にあたっては、公知の製造方法を使用することができる。また、本発明の大腸がん予防剤及び大腸前がん病変抑制剤には、必要に応じ、薬品及び食品の分野において慣用されている補助成分、例えば乳糖、ショ糖、液糖、蜂蜜、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、各種ビタミン類、クエン酸、リンゴ酸、アミノ酸、香料、無機塩等を添加することができる。
【００２８】
本発明に係る有効成分であるケフィアの投与量及び投与回数は、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、投与量は、成人１日当たり通常１ｍｇ〜５０ｇの範囲から適宜選択でき、投与回数は、１日１回から数回の範囲から適宜選択できる。ケフィアは、伝統的な食品として歴史的な年月の間、飲食に供されていたものであるために、副作用の心配がなく、安全性が高いために、投与量がさらに多くても何ら問題はない。
【００２９】
大腸前がん病変は、一定期間の経過後に一定割合で大腸がんとなってゆくことが知られている。この大腸前がん病変がどのような環境要因によって発生し、大腸前がん病変のうちで、大腸がんとなってゆく病変と大腸がんとなってゆかない病変が、どのような環境要因によって分岐するかについては、未だ解明されていない。しかし、この大腸前がん病変を抑制すれば、大腸がんの発生もまた抑制されることが知られている。本発明では、実施例に記載の実験によって実証されているように、大腸における大腸前がん病変を抑制することによって、その効果を発揮するものとなっている。
【実施例】
【００３０】
以下に実施例によって本発明をより具体的に説明する。本発明は以下に例示する実施例に限定されるものではない。【００３１】
［材料並びに方法］
動物は5週齢雄ラットF344/DuCrlCrljを日本チャールスリバーより購入し実験に用いた。室温24±2℃並びに湿度55±10%の条件下で、12時間明暗サイクルの部屋で飼育した。餌並びに飲料水は自由に摂取させた。摂餌量並びに摂水量を測定した。【００３２】
餌はオリエンタル酵母のMF粉末餌を用いた。日本ケフィア(株)製の凍結乾燥したNKGケフィアYD−01（90℃  20分殺菌、死菌）、NKGケフィアYL−01（生菌）並びにNKGケフィアG-07（2倍の菌体、生菌）を2%になるように餌に混入し、動物に与えた。餌並びに飲料水は自由摂取させた。餌並びに飲料水の摂取量を測定した。6週齢より15mg/kgのazoxymethane (アゾキシメタン)（AOM, ナード研究所製  尼崎）を皮下に1週間間隔で3回投与した。【００３３】
その後2週目に動物を剖検し、大腸を肛門から盲腸まで（約20cm）を取り出し、長軸にそり開き、糞を除き、襞を平たく広げて、ペーパータオルに挟み、10%中性フォルマリン液で一日以上固定した。ラベルを付け2時間以上水洗した。その後0.1%のメチレンブルー液中でシェイクしながら室温で30分染色した。直ちに実体顕微鏡の一倍以上の倍率で丁寧に肛門から盲腸までを実体顕微鏡で観察して、ACFの個数を計数した。Aberrant crypt foci (ACF)一カ所が複数のAberrant crypt focusから構成されている場合も多いので、ACF一カ所当たりのAC個数をあわせて計数した。この観察と計数を一群10匹に対して行った。これらの計数の結果から、ACFの個数(表の左から2番目：ACF)、全AC数(表の左から3番目:Total AC)、並びにACF一カ所当たりのAC個数の平均(表の右端：Mean AC)を算出した。算出された結果を次の表１に示す。実験群はMF+AOM(MF群)、YD＋AOM （YD群）、YL＋AOM （YL群）、ケフィアG＋AOM（G群）の4群とし、各群10匹を用いた。統計検定はDunnett法を用いた。さらに、その一部を切り出し、アルコールで脱水し、パラフィンに包埋し、3μｍに薄切し、今度は水まで戻し、ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色、アルシアンブルーパス染色等を行い、再度脱水して、オイキットで封入し、顕微鏡で観察し、ACFの形態を観察した。このようにして観察されたＡＣＦの形態の一例を図２（実体顕微鏡  ×２）に示す。図２に示すような実体顕微鏡での観察に基づいて、さらに断面の切片を染色して顕微鏡で観察した。図１Ａ〜Ｄは正常及びＡＣＦを含む断面の切片を比較して染色した顕微鏡写真（×２００）である。【００３４】
【表１】
2010116425.tif 000002
【００３５】
［結果］
摂水量は一日一匹当たりYL群で17.8±2.4mlと減少の傾向が、G群で19.0±2.4mlと増加の傾向があったが、YD群の18.0±2.1ml、MF群の18.3±2.8mlで何れの群間で差は認めなかった。摂餌量は一日一匹当たりG群では11.9±2.1gで、YD群で11.6±5.1gと僅かに増加したが、YL群11.2±2.2g並びにMF群の11.2±2.7gと統計学的に差は認めなかった。屠殺時の体重はG群で209gと増加の傾向が、YD群で200gと減少の傾向があったが、その他の群では206g程度で、群間には有意の差は認められなかった。【００３６】
ACFはMF群で74.8±15.1個に対しYD群、YL群でそれぞれ40.9±19.2、41.2±18.8、G群では52.3±26.0で、何れのケフィア群でもMF群に比べて有意に減少した(表１)。しかしケフィア群間では統計的な有意差は認められなかった。全ACの数はMF群で136.7±32.3であるのに対し、YD群で76.5±34.1、YL群で74.4±32.8、並びにG群で89.2±51.4と同様にMF群に比べて有意差を示した。ACF当たりの平均AC数はMF群で1.82±0.16、YD群で1.92±0.20、YL群で1.87±0.21、G群で1.65±0.16と全ての群で有意差は認めなかった(表１)。【００３７】
図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、及び図１Ｄは、正常大腸とＡＣＦとを比較して、切片をＨＥ染色とアルシアンブルーパス（Ａｌｃｉａｎ  ｂｌｕｅ−ＰＡＳ）染色によってそれぞれ染色して示した顕微鏡写真（×２００）である。図１Ａと図１Ｃは正常大腸、図１Ｂと図１ＤはＡＣＦを有する大腸の写真である。また、図１Ａと図１Ｂは、ＨＥ染色による写真であり、図１Ｃと図１Ｄは、アルシアンブルーパス（Ａｌｃｉａｎ  ｂｌｕｅ−ＰＡＳ）染色による写真である。図１Ｂと図１Ｄの写真中の矢印は、典型的なＡＣＦの位置を示す。これらの観察は、図２に示すような実体顕微鏡での観察に基づいて行った。【００３８】
図２は、ＡＣＦを有する大腸をメチレンブルー染色して示した実体顕微鏡（×２）による顕微鏡写真である。図２の写真中の矢印は、典型的なＡＣＦの位置を示す。【００３９】
以上のように、ケフィアは、大腸前がん病変を、経口投与によって有意に抑制することがわかった。また、このケフィアの効能は、いずれの形態のケフィアでも発揮され、生菌と死菌のいずれの場合でも発揮されるものであった。このケフィアの効能は、動物、特にほ乳類に対して有効に発揮された。
【産業上の利用可能性】
【００４０】
本発明は、大腸前がん病変抑制（予防）剤及び大腸がん予防（抑制）剤を提供する。本発明の抑制剤及び予防剤は、長期にわたる日常的な摂取も、安心して行うことができるために、予防剤又は抑制剤としての摂取に、特に適したものである。このように本発明は、産業上有用な発明である。
【図１Ａ】
2010116425.tif 000003
【図１Ｂ】
2010116425.tif 000004
【図１Ｃ】
2010116425.tif 000005
【図１Ｄ】
2010116425.tif 000006
【図２】
2010116425.tif 000007
【国際調査報告】
2010116425.tif 000008
2010116425.tif 000009
2010116425.tif 000010
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