(57)【要約】  ＩＬ−１７に対する良質なアプタマーを提供すること。  ＩＬ−１７に対する阻害活性を有するアプタマー；ＩＬ−１７に対する結合活性又は阻害活性を有するアプタマー及び機能性物質（例えば、親和性物質、標識用物質、酵素、薬物送達媒体、又は薬物など）を含む複合体；ＩＬ−１７に対する結合活性又は阻害活性を有するアプタマー、又は当該アプタマー及び機能性物質を含む複合体を含む医薬、診断薬及び標識剤など。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１７に結合するアプタマー。
【請求項２】
ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー。
【請求項３】
ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合は阻害するが、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７受容体との結合は阻害しないアプタマー。
【請求項４】
配列番号５８の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー。
【請求項５】
配列番号５９又は６０の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー。
【請求項６】
ピリミジンヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項４または５に記載のアプタマー。
【請求項７】
以下（ａ）又は（ｂ）のいずれかである、請求項１に記載のアプタマー：
（ａ）配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）を含むアプタマーであって、該アプタマーに含まれるヌクレオチドにおいて、
（ｉ）各ピリミジンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、フッ素原子であるか、あるいは水素原子、ヒドロキシ基及びメトキシ基からなる群より選ばれる原子又は基で置換されており、
（ｉｉ）各プリンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、ヒドロキシ基であるか、あるいは水素原子、メトキシ基及びフッ素原子からなる群より選ばれる原子又は基で置換されている、アプタマー；
（ｂ）配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）において、１又は数個のヌクレオチドが置換、欠失、挿入又は付加されたヌクレオチド配列を含むアプタマーであって、該アプタマーに含まれるヌクレオチドにおいて、
（ｉ）各ピリミジンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、フッ素原子であるか、あるいは水素原子、ヒドロキシ基及びメトキシ基からなる群より選ばれる原子又は基で置換されており、
（ｉｉ）各プリンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、ヒドロキシ基であるか、あるいは水素原子、メトキシ基及びフッ素原子からなる群より選ばれる原子又は基で置換されている、アプタマー。
【請求項８】
配列番号５８、５９又は６０の配列を含んでいる、請求項７記載のアプタマー。
【請求項９】
配列番号４０又は４４の配列を含んでいる、請求項７記載のアプタマー。
【請求項１０】
アプタマーに含まれるヌクレオチドが修飾されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載のアプタマー。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマー及び機能性物質を含む複合体。
【請求項１２】
機能性物質が、親和性物質、標識用物質、酵素、薬物送達媒体又は薬物である、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を含む医薬。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を含む自己免疫疾患、癌、アレルギー、又はその他炎症と関連する治療又は予防に用いる医薬。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を含む診断薬。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を含む検出用プローブ。
【請求項１７】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を含むＩＬ−１７精製用担体。
【請求項１８】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を用いることを特徴とする、ＩＬ−１７の検出方法。
【請求項１９】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載のアプタマーあるいは請求項１１又は１２に記載の複合体を用いることを特徴とする、ＩＬ−１７の精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ−１７に対するアプタマー及びその利用方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１７（ＩＬ−１７またはＣＴＬＡ−８）はＴｈ１７細胞によって分泌されるサイトカインで、炎症性疾患や自己免疫疾患、感染症と深く関係している。ヒトＩＬ−１７はＮ末端にシグナルペプチドを含む１５５アミノ酸から構成される２０〜３０ｋＤａの糖タンパク質である。分子内に６個のシステイン残基と１ヶ所のＮ結合型糖鎖結合部位を有する。成熟体は１３６アミノ酸から成り、通常ダイマーで存在する。【０００３】
ＩＬ−１７ファミリータンパク質としては、ＩＬ−１７Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆの６種類のたんぱく質が知られている。一般にＩＬ−１７はＩＬ−１７Ａのことを示す。ＩＬ−１７ＥはＩＬ−２５とも呼ばれている。ヒトＩＬ−１７とヒトＩＬ−１７Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆのアミノ酸配列の相同性はそれぞれ２５，２８，２２，２７，４４％で、ＩＬ−１７Ｆが最も相同性が高い。また、マウスＩＬ−１７およびマーモセットＩＬ−１７とは６３％および９０％の相同性を有する。受容体としてＩＬ−１７ＲＡ，ＩＬ−１７ＲＢ，ＩＬ−１７ＲＣ，ＩＬ−１７ＲＤ，ＩＬ−１７ＲＥが知られている。ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆはホモダイマーまたはヘテロダイマーを形成し、ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣと結合する。ＩＬ−１７とＩＬ−１７ＲＡの結合はＫｄ値が約１０−７と弱く、ＩＬ−１７ＲＣの関与が重要である可能性が示唆されている。【０００４】
Ｔｈ１７細胞はＩＬ−１７を産生するＣＤ４＋Ｔ細胞である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞をＩＬ−２３で刺激するとＩＬ−１７産生が誘導される。一方、Ｔｈ１７細胞の分化誘導にはＴＧＦ−βとＩＬ−６が重要な役割を果たしている。ＴＧＦ−βとＩＬ−６はナイーブＴ細胞に作用して、ＲＯＲｇｔ（転写因子）の発現を誘導する。ＲＯＲｇｔを欠損させるとＴｈ１７細胞が分化できなくなることや、逆にＲＯＲｇｔを強制発現することによりナイーブＴ細胞をＩＬ−１７産生細胞へと分化させられることから、この転写因子がＴｈ１７細胞分化に重要であると考えられている。ＲＯＲｇｔの発現誘導にはＩＬ−６によるＳＴＡＴ３の活性化が重要であるが、逆にＩＬ−２によるＳＴＡＴ５の活性化は発現を抑制する。ＩＬ−２は調節性Ｔ細胞の分化に必要であり、ＩＬ−２欠損マウスは重篤な自己免疫を発症するが、これは調節性Ｔ細胞が減少すると同時にＴｈ１７細胞の過剰分化が起こるためであると考えられている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでナイーブＴ細胞をＴＧＦ−β単独で刺激すると、Ｔｈ１７ではなく調節性Ｔ細胞が誘導される。Ｔｈ１細胞が産生するＩＦＮ−γやＴｈ２細胞が産生するＩＬ−４などはＴｈ１７細胞分化に抑制的に働く。【０００５】
ＩＬ−１７が受容体に結合すると、Ａｃｔ−１、ＴＲＡＦ６を介してＮＦ−κＢ経路やＭＡＰキナーゼ経路、Ｃ／ＥＢＰ経路が活性化され、炎症性サイトカインやケモカインが誘導される。例えば、ＩＬ−１７はマクロファージに作用してＩＬ−１、ＴＮＦ、ＭＭＰ−９などの発現を誘導する。この他、線維芽細胞や内皮細胞などの結合組織系細胞、樹状細胞前駆細胞などの免疫系細胞に作用してＩＬ−６やＩＬ−１、ＩＣＡＭ−１など各種サイトカインや受容体の発現を誘導することが知られている。【０００６】
ＩＬ−１７の産生にはＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γなどのサイトカインが関与する。一方、これらのサイトカインはＩＬ−１７によって産生が誘導される。ＩＬ−１７は他のサイトカインと相乗的に作用することが知られている。【０００７】
ＩＬ−１７は炎症性疾患や自己免疫疾患などと深い関係にあることがわかっている。慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ベーチェット病、移植拒絶、腎炎症候群、炎症性腸疾患、喘息、多発性硬化症、歯周病などの患者でＩＬ−１７の発現が上昇していることが知られている。また、ＩＬ−１７欠損マウスでは、慢性関節リウマチのモデルであるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、多発性硬化症のモデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、ＤＮＦＢやＴＮＣＢによる接触型過敏症反応、メチル化ＢＳＡによる遅延型過敏症反応、ＯＶＡ誘導による気道過敏症反応などが顕著に抑制されることが報告されている。【０００８】
ＩＬ−１７は癌とも関係している。ＳＣＩＤマウスの皮下に非小細胞肺癌細胞を移植したところ、ＩＬ−１７を高発現させたマウスでは癌細胞の増殖が促進されることが報告されている。また、子宮頸癌や卵巣癌とも関係していることが報告されている。【０００９】
ＩＬ−１７は感染症と関係している。ＩＬ−１７ＲノックアウトマウスはＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ感染、Ｔｏｘｓｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ感染などに高感受性である。ＩＬ−１７産生はリポ多糖（ＬＰＳ）やＢｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉやＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅなどの菌体成分により誘導される。これらの成分は抗原提示細胞に作用してＩＬ−２３を誘導することにより、ＩＬ−１７産生を促進すると考えられている。ＩＬ−１７ＲノックアウトマウスではＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染後、肺感染局所において好中球の遊走と機能に重要な役割を果たしているＣＸＣＬ１やＣＸＣＬ２、Ｇ−ＣＳＦなどの産生が低下しており、好中球の遊走に障害が認められる。【００１０】
ところで、近年、ＲＮＡアプタマーの治療薬、診断薬、試薬への応用が注目されており、いくつかのＲＮＡアプタマーが臨床段階あるいは実用化段階に入っている。２００４年１２月には世界初のＲＮＡアプタマー医薬であるＭａｃｕｇｅｎが加齢黄斑変性症の治療薬として米国で承認された。ＲＮＡアプタマーとはタンパク質などの標的物質に特異的に結合するＲＮＡのことで、ＳＥＬＥＸ法（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｂｙ  Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）を用いて作製することができる（特許文献１〜３参照）。ＳＥＬＥＸ法とは、１０１４個程度の異なるヌクレオチド配列を持つＲＮＡのプールから、標的物質に特異的に結合するＲＮＡを選別してくる方法である。使用されるＲＮＡは４０残基程度のランダム配列をプライマー配列で挟み込んだ構造をしている。このＲＮＡプールを標的物質と会合させて、フィルターなどを用いて標的物質に結合したＲＮＡのみを回収する。回収したＲＮＡはＲＴ−ＰＣＲで増幅し、これを次のラウンドの鋳型として用いる。この作業を１０回程度繰り返すことにより、標的物質と特異的に結合するＲＮＡアプタマーを取得することができる場合がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開ＷＯ９１／１９８１３号パンフレット
【特許文献２】国際公開ＷＯ９４／０８０５０号パンフレット
【特許文献３】国際公開ＷＯ９５／０７３６４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、ＩＬ−１７に対するアプタマー及びその利用方法などを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討した結果、ＩＬ−１７に対する良質なアプタマーを作製することに成功し、もって本発明を完成するに至った。【００１４】
即ち、本発明は、以下の発明などを提供するものである：
［１］ＩＬ−１７に結合するアプタマー；
［２］ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー；
［３］ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合は阻害するが、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７受容体との結合は阻害しないアプタマー；
［４］配列番号５８の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー；
［５］配列番号５９又は６０の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー；
［６］ピリミジンヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、［４］または［５］に記載のアプタマー；
［７］以下（ａ）又は（ｂ）のいずれかである、［１］に記載のアプタマー：
（ａ）配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）を含むアプタマーであって、該アプタマーに含まれるヌクレオチドにおいて、
（ｉ）各ピリミジンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、フッ素原子であるか、あるいは水素原子、ヒドロキシ基及びメトキシ基からなる群より選ばれる原子又は基で置換されており、
（ｉｉ）各プリンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、ヒドロキシ基であるか、あるいは水素原子、メトキシ基及びフッ素原子からなる群より選ばれる原子又は基で置換されている、アプタマー；
（ｂ）配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）において、１又は数個のヌクレオチドが置換、欠失、挿入又は付加されたヌクレオチド配列を含むアプタマーであって、該アプタマーに含まれるヌクレオチドにおいて、
（ｉ）各ピリミジンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、フッ素原子であるか、あるいは水素原子、ヒドロキシ基及びメトキシ基からなる群より選ばれる原子又は基で置換されており、
（ｉｉ）各プリンヌクレオチドのリボースの２’位が、同一又は異なって、ヒドロキシ基であるか、あるいは水素原子、メトキシ基及びフッ素原子からなる群より選ばれる原子又は基で置換されている、アプタマー；
［８］配列番号５８、５９又は６０の配列を含んでいる、［７］記載のアプタマー；
［９］配列番号４０又は４４の配列を含んでいる、［７］記載のアプタマー；
［１０］アプタマーに含まれるヌクレオチドが修飾されている、［１］〜［９］のいずれか一に記載のアプタマー；
［１１］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマー及び機能性物質を含む複合体；
［１２］機能性物質が、親和性物質、標識用物質、酵素、薬物送達媒体又は薬物である、［１１］に記載の複合体；
［１３］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を含む医薬；
［１４］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を含む自己免疫疾患、癌、アレルギー、又はその他炎症と関連する治療又は予防に用いる医薬；
［１５］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を含む診断薬；
［１６］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を含む検出用プローブ；
［１７］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を含むＩＬ−１７精製用担体；
［１８］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を用いることを特徴とする、ＩＬ−１７の検出方法；
［１９］［１］〜［１０］のいずれか一に記載のアプタマーあるいは［１１］又は［１２］に記載の複合体を用いることを特徴とする、ＩＬ−１７の精製方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のアプタマーまたは複合体は、炎症性疾患や癌、アレルギー、感染症などの疾患に対する医薬、あるいは診断薬、試薬として有用であり得る。本発明のアプタマーまたは複合体はまた、ＩＬ−１７の精製及び濃縮、ＩＬ−１７の標識、並びにＩＬ−１７の検出及び定量に有用であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】配列番号１で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を黒丸で示す。
【図２】配列番号２で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を黒丸で示す。
【図３】配列番号２９で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を黒丸で示す。
【図４】配列番号７で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を四角と＊（アスタリスク）で示す。
【図５】配列番号１３で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を四角と＊（アスタリスク）で示す。
【図６】配列番号３０で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を四角と＊（アスタリスク）で示す。
【図７】配列番号１で表されるアプタマー（Ａｐｔ１）がヒトＩＬ−１７に結合することを示すセンサーグラムである。
【図８】配列番号１で表されるアプタマーがヒトＩＬ−１７Ｆに結合しないことを示すセンサーグラムである。
【図９】配列番号４０で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を黒丸で示す。
【図１０】配列番号４４で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムにより予想される二次構造を示す図である。共通配列を四角と＊（アスタリスク）で示す。
【図１１】配列番号１で表されるアプタマー（Ａｐｔ１）がヒトＩＬ−１７とヒトＩＬ−１７Ｒの結合を阻害することを示すセンサーグラムである。
【図１２】配列番号４４で表されるアプタマーがＩＬ−１７シグナリングの阻害活性を有していることを示す図である。黒丸はコントロールＤＮＡを、黒三角は抗ＩＬ−１７中和抗体を、黒四角はアプタマーをそれぞれ示す。
【図１３】アプタマーによるＥＡＥモデルマウスの発症抑制実験の結果を示す図である。黒丸はコントロール群を、黒四角はアプタマー１ｍｇ／ｋｇ投与群を、黒三角はアプタマー３ｍｇ／ｋｇ投与群を、バツ印はアプタマー１０ｍｇ／ｋｇ投与群をそれぞれ示す。また＊（アスタリスク）はＰ＜０．０５を、＊＊はＰ＜０．０１を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、ＩＬ−１７に対して結合活性を有するアプタマーを提供する。本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７の活性を阻害し得る。
【００１８】
アプタマーとは、所定の標的分子に対する結合活性を有する核酸分子をいう。アプタマーは、所定の標的分子に対して結合することにより、所定の標的分子の活性を阻害し得る。本発明のアプタマーは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、修飾核酸又はそれらの混合物であり得る。本発明のアプタマーはまた、直鎖状又は環状の形態であり得る。
【００１９】
ＩＬ−１７に対する阻害活性とは、ＩＬ−１７が保有する任意の活性に対する阻害能を意味する。例えば、ＩＬ−１７は免疫系細胞や結合組織系細胞などに作用して各種サイトカインやケモカインの産生を誘導する。従って、ＩＬ−１７に対する阻害活性とはこれらのサイトカインやケモカインなどの産生を阻害する活性のことである。これらサイトカインやケモカインの発現は炎症性細胞の遊走や活性化を導くので、ＩＬ−１７の阻害活性とはそれらの活性の阻害を意味する。
【００２０】
ＩＬ−１７とはＣＤ４＋Ｔ細胞であるＴｈ１７細胞が産生するサイトカインで、例えばＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｄｅ  ＡＡＨ６７５０５やＮＰ００２１８１で表されるアミノ酸配列を持つタンパク質である。ＩＬ−１７はＩＬ−１７ＡまたはＣＴＬＡ−８と呼ばれることもある。本発明で示すＩＬ−１７は動物体内で作られる他、マウスなどの哺乳細胞、昆虫細胞、大腸菌などの細胞を用いて作製することができ、更に、化学合成によっても作ることができる。培養細胞や化学合成によって作製する場合、容易に変異体を作製することができる。ここで変異体とはアミノ酸が数個置換されたものや一部分のアミノ酸配列を意味し、本来ＩＬ−１７が有している少なくとも一つ以上の活性を有しているタンパク質またはペプチドを意味する。アミノ酸が置換される場合、置換アミノ酸は天然のアミノ酸であってもよいし非天然のアミノ酸であってもよい。本発明で言うＩＬ−１７はこれらの変異体を含む。
【００２１】
ＩＬ−１７受容体とはＩＬ−１７が結合する細胞表面タンパク質を意味する。ＩＬ−１７受容体ファミリーとしてＩＬ−１７ＲＡ，ＩＬ−１７ＲＢ，ＩＬ−１７ＲＣ，ＩＬ−１７ＲＤ，ＩＬ−１７ＲＥが知られている。本発明で言うＩＬ−１７受容体とは天然のアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよいし、その変異体であってもよい。ここで変異体とはアミノ酸が数個置換されたものや一部分のアミノ酸配列を意味し、ＩＬ−１７に対して結合活性を有するタンパク質またはペプチドを意味する。本発明は、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマーを提供する。
【００２２】
本発明のアプタマーは、任意の哺乳動物に由来するＩＬ−１７に対する阻害活性を有し得る。このような哺乳動物としては、例えば、霊長類（例、ヒト、サル）、げっ歯類（例、マウス、ラット、モルモット）、並びにペット、家畜及び使役動物（例、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）が挙げられる。
【００２３】
本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７の任意の部分に結合し、その活性を阻害し得るものである限り特に限定されないが、ｇｇａｕａｇｃｇａａｇｕｃａｕｕｇａｇｃｇｃｃ（配列番号４０）の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマーであることが好ましい。この配列は、後述する配列番号１、２および２９で表されるヌクレオチド配列の共通配列(配列番号５８)であって、ＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測される二次構造が同じ形状であるものを含む（図9参照）。
【００２４】
本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７の任意の部分に結合し、その活性を阻害し得るものである限り特に限定されないが、ｇｇｕｃｕａｇｃｃｇｇａｇｇａｇｕｃａｇｕａａｕｃｇｇｕａｇａｃｃ（配列番号４４）の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマーであることが好ましい。この配列は、後述する配列番号６〜２１、３０および３１で表されるヌクレオチド配列の共通配列(配列番号５９)（あるいは後述する配列番号７、９、１３、２１および３０で表されるヌクレオチド配列の共通配列(配列番号６０)）であって、ＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測される二次構造が同じ形状であるものを含む（図１０参照）。
【００２５】
本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７の任意の部分に結合し、その活性を阻害し得るものである限り特に限定されないが、ｇａｕａｇｃｇａａｇｕｃａｕｕｇａｇｃｇｃ（配列番号５８）の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマーであることが好ましい。この配列は、後述する配列番号１、２および２９で表されるヌクレオチド配列の共通配列であって、ＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測される二次構造が同じ形状であるものである（図１〜３参照）。
【００２６】
本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７の任意の部分に結合し、その活性を阻害し得るものである限り特に限定されないが、ｇｇａｇｕｃａｇ（配列番号５９）の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマーであることが好ましい。この配列は、後述する配列番号６〜２１、３０および３１で表されるヌクレオチド配列の共通配列であって、ＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測される二次構造が同じ形状であるものである（図４〜６参照）。
【００２７】
また本発明のアプタマーは、ｇｇａｇｇａｇｕｃａｇｕａａｕｃ（配列番号６０）の配列を含んでいる、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマーであることが好ましい。この配列は、後述する配列番号７、９、１３、２１および３０で表されるヌクレオチド配列の共通配列であって、ＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測される二次構造が同じ形状であるものである（図４〜６参照）。
【００２８】
本発明のアプタマーの長さは特に限定されず、通常、約１０〜約２００ヌクレオチドであり得るが、例えば約１００ヌクレオチド以下であり、好ましくは約５０ヌクレオチド以下であり、より好ましくは約４０ヌクレオチド以下であり、最も好ましくは約３５ヌクレオチド以下であり得る。総ヌクレオチド数が少なければ、化学合成及び大量生産がより容易であり、かつコスト面でのメリットも大きい。また、化学修飾も容易であり、生体内安定性も高く、毒性も低いと考えられる。
【００２９】
本発明のアプタマーに含まれる各ヌクレオチドはそれぞれ、同一又は異なって、リボース（例、ピリミジンヌクレオチドのリボース、プリンヌクレオチドのリボース）の２’位においてヒドロキシ基を含むヌクレオチド（即ち、未置換であるヌクレオチド）であるか、あるいはリボースの２’位において、ヒドロキシ基が、任意の原子又は基で置換（修飾）されているヌクレオチド（本発明において、「置換ヌクレオチド」または「修飾ヌクレオチド」と記載する場合がある）であり得る。
【００３０】
このような任意の原子又は基としては、例えば、水素原子、フッ素原子又は−Ｏ−アルキル基（例、−Ｏ−Ｍｅ基）、−Ｏ−アシル基（例、−Ｏ−ＣＨＯ基）、アミノ基（例、−ＮＨ２基）で置換されているヌクレオチドが挙げられる。本発明のアプタマーはまた、少なくとも１種（例、１、２、３又は４種）のヌクレオチドが、リボースの２’位において、ヒドロキシ基、又は上述した任意の原子又は基、例えば、水素原子、フッ素原子、ヒドロキシ基及び−Ｏ−Ｍｅ基からなる群より選ばれる少なくとも２種（例、２、３又は４種）の基を含む修飾ヌクレオチドであり得る。
【００３１】
本発明のアプタマーにおいてはまた、全てのピリミジンヌクレオチドが、リボースの２’位において、同一または異なって、フッ素原子で置換されるヌクレオチドであるか、又は上述した任意の原子又は基、好ましくは、水素原子、ヒドロキシ基及びメトキシ基からなる群より選ばれる原子または基で置換されているヌクレオチドであり得る。
【００３２】
本発明のアプタマーにおいてはまた、全てのプリンヌクレオチドが、リボースの２’位において、同一または異なって、ヒドロキシ基で置換されるヌクレオチドであるか、又は上述した任意の原子又は基、好ましくは、水素原子、メトキシ基及びフッ素原子からなる群より選ばれる原子または基で置換されるヌクレオチドであり得る。
【００３３】
本発明のアプタマーにおいてはまた、全てのヌクレオチドが、リボースの２’位において、ヒドロキシ基、又は上述した任意の原子又は基、例えば、水素原子、フッ素原子、ヒドロキシ基及び−Ｏ−Ｍｅ基からなる群より選ばれる同一の基を含むヌクレオチドであり得る。
【００３４】
本発明のアプタマーはまた、ＩＬ−１７の活性を阻害し得るが、ＩＬ−１７Ｆの活性を阻害し得ないという特徴を有し得る。また本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合は阻害するが、ＩＬ−１７ＦとＩＬ−１７受容体との結合は阻害しないという特徴を有し得る。ＩＬ−１７Ｆはホモロジー４４％のＩＬ−１７ファミリータンパク質であり、最もＩＬ−１７に類似している。
【００３５】
本発明のアプタマーはまた、
（ａ）配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）を含むアプタマー；
（ｂ）配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）において１又は数個のヌクレオチドが置換、欠失、挿入又は付加されたヌクレオチド配列を含むアプタマー；
（ｃ）上記（ａ）の複数の連結物、上記（ｂ）の複数の連結物、上記（ａ）及び（ｂ）の複数の連結物からなる群より選ばれる連結物；
であり得る。
【００３６】
上記（ａ）〜（ｃ）のうち、好ましいものは、配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列が、配列番号５８、５９または６０の配列である、（ａ）〜（ｃ）である。
【００３７】
上記（ａ）〜（ｃ）のうち、好ましいものは、配列番号１〜５４のいずれかから選択されるヌクレオチド配列が、配列番号４０または４４の配列である、（ａ）〜（ｃ）である。
【００３８】
上記（ｂ）において、置換、欠失、挿入又は付加されるヌクレオチド数は、数個である限り特に限定されないが、例えば約３０個以下、好ましくは約２０個以下、より好ましくは約１０個以下、さらにより好ましくは５個以下、最も好ましくは４個、３個、２個又は１個であり得る。上記（ｃ）において連結はタンデム結合にて行われ得る。また、連結に際し、リンカーを利用してもよい。リンカーとしては、ヌクレオチド鎖（例、１〜約２０ヌクレオチド）、非ヌクレオチド鎖（例、−（ＣＨ２）ｎ−リンカー、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−リンカー、ヘキサエチレングリコールリンカー、ＴＥＧリンカー、ペプチドを含むリンカー、−Ｓ−Ｓ−結合を含むリンカー、−ＣＯＮＨ−結合を含むリンカー、−ＯＰＯ３−結合を含むリンカー）が挙げられる。上記複数の連結物における複数とは、２以上であれば特に限定されないが、例えば２個、３個又は４個であり得る。
【００３９】
上記（ａ）〜（ｃ）に含まれる各ヌクレオチドはそれぞれ、同一又は異なって、リボース（例、ピリミジンヌクレオチドのリボース）の２’位においてヒドロキシ基を含むヌクレオチドであるか、あるいはリボースの２’位において、ヒドロキシ基が、任意の基（例、水素原子、フッ素原子又は−Ｏ−Ｍｅ基）で置換されているヌクレオチドであり得る。
例えば、上記（ａ）〜（ｃ）に含まれる各ヌクレオチドにおいて、
（ｉ）各ピリミジンヌクレオチドが、リボースの２’位において、同一または異なって、フッ素原子で置換されるヌクレオチドであるか、又は上述した任意の原子又は基、好ましくは、水素原子、ヒドロキシ基及びメトキシ基からなる群より選ばれる原子または基で置換されており；
（ｉｉ）各プリンヌクレオチドが、リボースの２’位において、同一または異なって、ヒドロキシ基で置換されるヌクレオチドであるか、又は上述した任意の原子又は基、好ましくは、水素原子、メトキシ基及びフッ素原子からなる群より選ばれる原子または基で置換されている；
アプタマーであってもよい。本発明は、上記アプタマーも提供する。
【００４０】
本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７に対する結合性、安定性、薬物送達性等を高めるため、各ヌクレオチドの糖残基（例、リボース）が修飾されたものであってもよい。糖残基において修飾される部位としては、例えば、糖残基の２’位、３’位及び／又は４’位の酸素原子を他の原子に置き換えたものなどが挙げられる。修飾の種類としては、例えば、フルオロ化、Ｏ−アルキル化（例、Ｏ−メチル化、Ｏ−エチル化）、Ｏ−アリル化、Ｓ−アルキル化（例、Ｓ−メチル化、Ｓ−エチル化）、Ｓ−アリル化、アミノ化（例、−ＮＨ２）が挙げられる。このような糖残基の改変は、自体公知の方法により行うことができる（例えば、Ｓｐｒｏａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１９，７３３−７３８；Ｃｏｔｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１９，２６２９−２６３５；Ｈｏｂｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７３），Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２，５１３８−５１４５参照）。
【００４１】
本発明のアプタマーはまた、ＩＬ−１７に対する結合性等を高めるため、核酸塩基（例、プリン、ピリミジン）が改変（例、化学的置換）されたものであってもよい。このような改変としては、例えば、５位ピリミジン改変、６および／または８位プリン改変、環外アミンでの改変、４−チオウリジンでの置換、５−ブロモ又は５−ヨード−ウラシルでの置換が挙げられる。また、ヌクレアーゼ及び加水分解に対して耐性であるように、本発明のアプタマーに含まれるリン酸基が改変されていてもよい。例えば、Ｐ（Ｏ）Ｏ基が、Ｐ（Ｏ）Ｓ（チオエート）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（ジチオエート）、Ｐ（Ｏ）ＮＲ２（アミデート）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｒ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（ホルムアセタール）又は３’−アミン（−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−）で置換されていてもよい〔ここで各々のＲ又はＲ’は独立して、Ｈであるか、あるいは置換されているか、又は置換されていないアルキル（例、メチル、エチル）である〕。
連結基としては、−Ｏ−、−Ｎ−又は−Ｓ−が例示され、これらの連結基を通じて隣接するヌクレオチドに結合し得る。
改変はまた、キャッピングのような３’及び５’の改変を含んでもよい。
【００４２】
改変はさらに、ポリエチレングリコール、アミノ酸、ペプチド、ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｄＴ、核酸、ヌクレオシド、Ｍｙｒｉｓｔｏｙｌ、Ｌｉｔｈｏｃｏｌｉｃ−ｏｌｅｙｌ、Ｄｏｃｏｓａｎｙｌ、Ｌａｕｒｏｙｌ、Ｓｔｅａｒｏｙｌ、Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ、Ｏｌｅｏｙｌ、Ｌｉｎｏｌｅｏｙｌ、その他脂質、ステロイド、コレステロール、カフェイン、ビタミン、色素、蛍光物質、抗癌剤、毒素、酵素、放射性物質、ビオチンなどを末端に付加することにより行われ得る。このような改変については、例えば、米国特許第５，６６０，９８５号、同第５，７５６，７０３号を参照のこと。
【００４３】
本発明のアプタマーは、本明細書中の開示及び当該技術分野における自体公知の方法により化学合成することができる。アプタマーは、リン酸基の負電荷を利用したイオン結合、リボースを利用した疎水結合および水素結合、核酸塩基を利用した水素結合やスタッキング結合など多様な結合様式により標的物質と結合する。特に、構成ヌクレオチドの数だけ存在するリン酸基の負電荷を利用したイオン結合は強く、タンパク質の表面に存在するリジンやアルギニンの正電荷と結合する。このため、標的物質との直接的な結合に関わっていない核酸塩基は置換することができる。特に、ステム構造の部分は既に塩基対が作られており、また、二重らせん構造の内側を向いているので、核酸塩基は、標的物質と直接結合し難い。従って、塩基対を他の塩基対に置換してもアプタマーの活性は減少しない場合が多い。ループ構造など塩基対を作っていない構造においても、核酸塩基が標的分子との直接的な結合に関与していない場合に、塩基の置換が可能である。リボースの２’位の修飾に関しては、まれにリボースの２’位の官能基が標的分子と直接的に相互作用していることがあるが、多くの場合無関係であり、他の修飾分子に置換可能である。このようにアプタマーは、標的分子との直接的な結合に関与している官能基を置換または削除しない限り、その活性を保持していることが多い。また、全体の立体構造が大きく変わらないことも重要である。
【００４４】
アプタマーは、ＳＥＬＥＸ法及びその改良法（例えば、Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｎａｔｕｒｅ，３４６，８１８−８２２；Ｔｕｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，５０５−５１０）を利用することで作製することができる。ＳＥＬＥＸ法ではラウンド数を増やしたり、競合物質を使用することで、標的物質に対してより結合力の強いアプタマーが濃縮され、選別されてくる。よって、ＳＥＬＥＸのラウンド数を調節したり、及び／又は競合状態を変化させることで、結合力が異なるアプタマー、結合形態が異なるアプタマー、結合力や結合形態は同じであるが塩基配列が異なるアプタマーを得ることができる場合がある。また、ＳＥＬＥＸ法にはＰＣＲによる増幅過程が含まれるが、その過程でマンガンイオンを使用するなどして変異を入れることで、より多様性に富んだＳＥＬＥＸを行うことが可能となる。
【００４５】
ＳＥＬＥＸで得られるアプタマーは標的物質に対して親和性が高い核酸であり、そのことは標的物質の活性部位に結合することを意味しない。従って、ＳＥＬＥＸで得られるアプタマーは必ずしも標的物質の機能に作用するとは限らない。ＩＬ−１７は塩基性タンパク質であり、核酸が非特異的に結合しやすいと考えられる。活性部位に結合しないアプタマーはその標的物質の活性に影響を及ぼさない。実際、コントロールで用いたＲＮＡはＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の結合を阻害しなかった。
【００４６】
このようにして選ばれた活性のあるアプタマーは、最適化ＳＥＬＥＸを行うことで、更に高性能化することが可能である。最適化ＳＥＬＥＸとは、ある配列が決まっているアプタマーの一部をランダム配列にしたテンプレートや１０〜３０％程度のランダム配列をドープしたテンプレートを作製して、再度ＳＥＬＥＸを行うものである。
【００４７】
ＳＥＬＥＸで得られるアプタマーは７０ヌクレオチド程度の長さがあり、これをそのまま医薬にすることは難しい。そこで、試行錯誤を繰り返し、容易に化学合成ができる５０ヌクレオチド程度以下の長さまで短くする必要がある。
ＳＥＬＥＸで得られるアプタマーはそのプライマー設計に依存して、その後の最小化作業のしやすさが変わる。うまくプライマーを設計しないと、ＳＥＬＥＸによって活性のあるアプタマーが選別できたとしても、その後の開発が不可能となる。本発明では２３ヌクレオチド（配列番号４０）や３３ヌクレオチド（配列番号４４）でも活性を保持しているアプタマーを得ることができ、これらの配列がＩＬ−１７と結合するために特に重要であることがわかった。
【００４８】
アプタマーは化学合成が可能であるので改変が容易である。アプタマーはＭＦＯＬＤプログラムを用いて二次構造を予測したり、Ｘ線解析やＮＭＲ解析によって立体構造を予測することで、どのヌクレオチドを置換または欠損することが可能か、また、どこに新たなヌクレオチドを挿入可能かある程度予測することができる。予測された新しい配列のアプタマーは容易に化学合成することができ、そのアプタマーが活性を保持しているかどうか既存のアッセイ系により確認することができる。
【００４９】
得られたアプタマーの標的物質との結合に重要な部分が、上記のような試行錯誤を繰り返すことにより特定できた場合、その配列の両端に新しい配列を付加しても、多くの場合活性は変化しない。新しい配列の長さは特に限定されるものではない。
【００５０】
修飾に関しても配列と同様に高度に設計又は改変可能である。
【００５１】
以上のように、アプタマーは高度に設計又は改変可能である。本発明はまた、所定の配列（例、ステム部分、インターナルループ部分、ヘアピンループ部分及び一本鎖部分から選ばれる部分に対応する配列：以下、必要に応じて固定配列と省略する）を含むアプタマーを高度に設計又は改変可能であるアプタマーの製造方法を提供する。
【００５２】
例えば、このようなアプタマーの製造方法は、下記：
【００５３】
2010008001.tif 000002
【００５４】
〔上記において、（Ｎ）ａはａ個のＮからなるヌクレオチド鎖を示し、（Ｎ）ｂは、ｂ個のＮからなるヌクレオチド鎖を示し、Ｎはそれぞれ、同一又は異なって、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｕ及びＴ（好ましくは、Ａ、Ｇ、Ｃ及びＵ）からなる群より選ばれるヌクレオチドである。ａ、ｂはそれぞれ、同一又は異なって、任意の数であり得るが、例えば１〜約１００、好ましくは１〜約５０、より好ましくは１〜約３０、さらにより好ましくは１〜約２０又は１〜約１０であり得る。〕で表されるヌクレオチド配列からなる単一種の核酸分子又は複数種の核酸分子（例、ａ、ｂの数等が異なる核酸分子のライブラリ）、及びプライマー用配列（ｉ）、（ｉｉ）にそれぞれ対応するプライマー対を用いて、固定配列を含むアプタマーを製造することを含む。
【００５５】
本発明はまた、本発明のアプタマー及びそれに結合した機能性物質を含む複合体を提供する。本発明の複合体におけるアプタマーと機能性物質との間の結合は共有結合、又は非共有結合であり得る。本発明の複合体は、本発明のアプタマーと１以上（例、２又は３個）の同種又は異種の機能性物質とが結合したものであり得る。機能性物質は、本発明のアプタマーに何らかの機能を新たに付加するもの、あるいは本発明のアプタマーが保持し得る何らかの特性を変化（例、向上）させ得るものである限り特に限定されない。機能性物質としては、例えば、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、糖質、単糖、ポリヌクレオチド、ヌクレオチドが挙げられる。機能性物質としてはまた、例えば、親和性物質（例、ビオチン、ストレプトアビジン、標的相補配列に対して親和性を有するポリヌクレオチド、抗体、グルタチオンセファロース、ヒスチジン）、標識用物質（例、蛍光物質、発光物質、放射性同位体）、酵素（例、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ）、薬物送達媒体（例、リポソーム、ミクロスフェア、ペプチド、ポリエチレングリコール類）、薬物（例、カリケアマイシンやデュオカルマイシンなどミサイル療法に使用されているもの、シクロフォスファミド、メルファラン、イホスファミドまたはトロホスファミドなどのナイトロジェンマスタード類似体、チオテパなどのエチレンイミン類、カルムスチンなどのニトロソ尿素、テモゾロミドまたはダカルバジンなどのリースト剤、メトトレキセートまたはラルチトレキセドなどの葉酸類似代謝拮抗剤、チオグアニン、クラドリビンまたはフルダラビンなどのプリン類似体、フルオロウラシル、テガフールまたはゲムシタビンなどのピリミジン類似体、ビンブラスチン、ビンクリスチンまたはビンオレルビンなどのビンカアルカロイド及びその類似体、エトポシド、タキサン、ドセタキセルまたはパクリタキセルなどのポドフィロトキシン誘導体、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトキサントロンなどのアントラサイクリン類及び類似体、ブレオマイシン及びミトマイシンなどの他の細胞毒性抗生物質、シスプラチン、カルボプラチン及びオキザリプラチンなどの白金化合物、ペントスタチン、ミルテフォシン、エストラムスチン、トポテカン、イリノテカン及びビカルタミド）、毒素（例、リシン毒素、リア毒素及びベロ毒素）が挙げられる。これらの機能性分子は最終的に取り除かれる場合がある。更に、トロンビンやマトリックスメタルプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ＦａｃｔｏｒＸなどの酵素が認識して切断することができるペプチド、ヌクレアーゼや制限酵素が切断できるポリヌクレオチドであってもよい。
【００５６】
本発明のアプタマーまたは複合体は、例えば、医薬又は診断薬、検査薬、試薬として使用され得る。特に、自己免疫疾患および炎症を伴う疾患の医薬又は診断薬、検査薬、試薬として有用である。
ここで自己免疫疾患および炎症を伴う疾患としては、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、シェーグレン症候群、多発性筋炎（ＰＭ）、皮膚筋炎（ＤＭ）、リウマチ性関節炎（慢性関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ））、炎症性腸炎（クローン病など）、進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、結節性動脈周囲炎（ＰＮ）、甲状腺疾患（バセドウ病など）、ギラン・バレー症候群、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫溶血性貧血、重症筋無力症（ＭＧ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、Ｉ型糖尿病、乾癬、喘息、好中球機能異常、好酸球性肺炎、突発性肺線維症、過敏性肺炎、食道癌、甲状腺癌、膀胱癌、大腸癌、胃癌、膵臓癌、胸部癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、神経芽細胞腫、ニューログラストーマ、グリオブラストーマ、子宮癌、子宮頚癌、卵巣癌、ウィルムス腫瘍、前立腺癌、移植時の拒絶反応、移植片対宿主病、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、蕁麻疹、術後癒着、子宮内膜症、成人性歯周炎、気管支炎、ＣＯＰＤ、感染症など挙げられる。特に、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、炎症性腸炎、強皮症、喘息、移植片対宿主病が挙げられる。
【００５７】
また本発明のアプタマーまたは複合体は、薬物送達剤、インビボイメージング用プローブ、ＩＬ−１７の血中濃度測定用プローブ、組織染色用プローブ、ＥＬＩＳＡ用プローブ、ＩＬ−１７の分離精製用リガンドとしても使用され得る。
【００５８】
ＩＬ−１７は線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、樹状細胞前駆細胞、骨髄由来間質細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、好中球などの各種細胞に作用することが知られている。ＩＬ−１７はこれらの細胞に作用することで各種サイトカイン、ケモカイン、受容体の産生および発現を誘導する。具体的にはＣＸＣＬ１  （ＫＣまたはＧｒｏα）、ＣＸＣＬ２（ＭＩＰ２またはＧｒｏβ）、ＣＸＣＬ５（ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ１１（Ｅｏｔａｘｉｎ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ３α）、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１９、ＴＮＦ、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ２）、ＮＯＳ２（ｉＮＯＳ）、ＬＣＮ２（２４ｐ３）、ＤＥＦＢ４（ＢＤ２）、Ｓ１００Ａ７（Ｐｓｏｒｉａｓｉｎ）、Ｓ１００Ａ８（Ｃａｌｇｒａｎｕｌｉｎ  Ａ）、Ｓ１００Ａ９（Ｃａｌｇｒａｎｕｌｉｎ  Ｂ）、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＥＲＥＧ、ＳＯＣＳ３、ＴＮＦＳＦ１１（ＲＡＮＫＬ）、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１３、ＴＩＭＰ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＰＧＥ２、ＳＣＦ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣなどが挙げられる。従って、本発明のアプタマーまたは複合体は、これらの細胞およびサイトカイン、ケモカインなどに関係した疾患の医薬又は診断薬、検査薬、試薬として使用され得る。
【００５９】
ＩＬ−１７はその受容体に結合することでＡｃｔ１やＴＲＡＦ６を活性化し、ＮＦ−κＢ経路やＭＡＰキナーゼ経路、Ｃ／ＥＢＰ経路などを活性化する。従って、本発明のアプタマーまたは複合体は、これらのシグナル伝達経路の活性化に関係した疾患の医薬又は診断薬、検査薬、試薬として使用され得る。
【００６０】
本発明のアプタマーまたは複合体はまた、自己免疫疾患（例、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、シェーグレン症候群、多発性筋炎（ＰＭ）、皮膚筋炎（ＤＭ）、リウマチ性関節炎（慢性関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ））、炎症性腸炎（クローン病など）、進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、結節性動脈周囲炎（ＰＮ）、甲状腺疾患（バセドウ病など）、ギラン・バレー症候群、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫溶血性貧血、重症筋無力症（ＭＧ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、Ｉ型糖尿病、乾癬、喘息、好中球機能異常、好酸球性肺炎、突発性肺線維症、過敏性肺炎）、癌（例、食道癌、甲状腺癌、膀胱癌、大腸癌、胃癌、膵臓癌、胸部癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、神経芽細胞腫、ニューログラストーマ、グリオブラストーマ、子宮癌、子宮頚癌、卵巣癌、ウィルムス腫瘍、前立腺癌）、移植疾患（例、拒絶反応、移植片対宿主病）、アレルギー（例、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、蕁麻疹）、その他炎症と関連する疾患（例、術後癒着、子宮内膜症、成人性歯周炎、気管支炎、ＣＯＰＤ）、感染症などの種々の疾患の予防又は治療に使用され得る。特に、本発明のアプタマーは、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、炎症性腸炎、強皮症、喘息、移植片対宿主病の予防又は治療に使用され得る。
【００６１】
本発明の医薬は、医薬上許容される担体が配合されたものであり得る。医薬上許容される担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム−グリコール−スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【００６２】
経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水、オレンジジュースのような希釈液に有効量のリガンドを溶解させた液剤、有効量のリガンドを固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、サッシェ剤又は錠剤、適当な分散媒中に有効量の有効成分を懸濁させた懸濁液剤、有効量の有効成分を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤等である。
【００６３】
また、本発明の医薬は必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性などの目的のため、自体公知の方法でコーティングすることができる。コーティングに用いられるコーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン８０、プルロニックＦ６８、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、オイドラギット（ローム社製、ドイツ，メタアクリル酸・アクリル酸共重合体）および色素（例、ベンガラ、二酸化チタンなど）などが用いられる。当該医薬は、速放性製剤、徐放性製剤のいずれであってもよい。徐放の基材としては、例えば、リポソーム、アテロコラーゲン、ゼラチン、ヒドロキシアパタイト、ＰＬＧＡなどが挙げられる。
【００６４】
非経口的な投与（例えば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所投与、腹腔内投与、経鼻投与、経肺投与など）に好適な製剤としては、水性及び非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性及び非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。当該製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量あるいは複数回投与量ずつ容器に封入することができる。また、有効成分及び医薬上許容される担体を凍結乾燥し、使用直前に適当な無菌の溶媒に溶解又は懸濁すればよい状態で保存することもできる。更に注射液剤以外にも、吸入剤、軟膏剤も可能である。吸入剤の場合、凍結乾燥状態の有効成分を微細化し適当な吸入デバイスを用いて吸入投与する。吸入剤には、更に必要に応じて従来より使用されている界面活性剤、油、調味料、シクロデキストリンまたはその誘導体等を適宜配合することができる。
【００６５】
ここで界面活性剤としては、例えばオレイン酸、レシチン、ジエチレングリコールジオレエート、テトラヒドロフルフリルオレエート、エチルオレエート、イソプロピルミリステート、グリセリルトリオレエート、グリセリルモノラウレート、グリセリルモノオレエート、グリセリルモノステアレート、グリセリルモノリシノエート、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ポリエチレングリコール４００、セチルピリジニウムクロリド、ソルビタントリオレエート（商品名スパン８５）、ソルビタンモノオレエート（商品名スパン８０）、ソルビタンモノラウエート（商品名スパン２０）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（商品名ＨＣＯ−６０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（商品名ツイーン２０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（商品名ツイーン８０）、天然資源由来のレシチン（商品名エピクロン）、オレイルポリオキシエチレン（２）エーテル（商品名ブリジ９２）、ステアリルポリオキシエチレン（２）エーテル（商品名ブリジ７２）、ラウリルポリオキシエチレン（４）エーテル（商品名ブリジ３０）、オレイルポリオキシエチレン（２）エーテル（商品名ゲナポル０−０２０）、オキシエチレンとオキシプロピレンとのブロック共重合体（商品名シンペロニック）等が挙げられる。油としては、例えばトウモロコシ油、オリーブ油、綿実油、ヒマワリ油等が挙げられる。また、軟膏剤の場合、適当な医薬上許容される基剤（黄色ワセリン、白色ワセリン、パラフィン、プラスチベース、シリコーン、白色軟膏、ミツロウ、豚油、植物油、親水軟膏、親水ワセリン、精製ラノリン、加水ラノリン、吸水軟膏、親水プラスチベース、マクロゴール軟膏等）を用い、有効成分と混合し製剤化し使用する。
【００６６】
吸入剤は常法に従って製造することができる。すなわち、上記本発明のアプタマーまたは複合体を粉末または液状にして、吸入噴射剤および／または担体中に配合し、適当な吸入容器に充填することにより製造することができる。また上記本発明のアプタマーまたは複合体が粉末の場合は通常の機械的粉末吸入器を、液状の場合はネブライザー等の吸入器をそれぞれ使用することもできる。ここで噴射剤としては従来公知のものを広く使用でき、フロン−１１、フロン−１２、フロン−２１、フロン−２２、フロン−１１３、フロン−１１４、フロン−１２３、フロン−１４２ｃ、フロン−１３４ａ、フロン−２２７、フロン−Ｃ３１８、１，１，１，２−テトラフルオロエタン等のフロン系化合物、プロパン、イソブタン、ｎ−ブタン等の炭化水素類、ジエチルエーテル等のエーテル類、窒素ガス、炭酸ガス等の圧縮ガス等を例示できる。
【００６７】
本発明の医薬の投与量は、有効成分の種類・活性、病気の重篤度、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、通常、成人１日あたり有効成分量として約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０００１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００５〜約１ｍｇ／ｋｇであり得る。
【００６８】
本発明はまた、本発明のアプタマーまたは複合体が固定化された固相担体を提供する。固相担体としては、例えば、基板、樹脂、プレート（例、マルチウェルプレート）、フィルター、カートリッジ、カラム、多孔質材が挙げられる。基板は、ＤＮＡチップやプロテインチップなどに使われているものなどであり得、例えば、ニッケル−ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）基板やガラス基板、アパタイト基板、シリコン基板、アルミナ基板などで、これらの基板にポリマーなどのコーティングを施したものが挙げられる。樹脂としては、例えば、アガロース粒子、シリカ粒子、アクリルアミドとＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの共重合体、ポリスチレン架橋ジビニルベンゼン粒子、デキストランをエピクロロヒドリンで架橋した粒子、セルロースファイバー、アリルデキストランとＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの架橋ポリマー、単分散系合成ポリマー、単分散系親水性ポリマー、セファロース、トヨパールなどが挙げられ、また、これらの樹脂に各種官能基を結合させた樹脂も含まれる。本発明の固相担体は、例えば、ＩＬ−１７の精製、及びＩＬ−１７の検出、定量に有用であり得る。
【００６９】
本発明のアプタマーまたは複合体は、自体公知の方法により固相担体に固定できる。例えば、親和性物質（例、上述したもの）や所定の官能基を本発明のアプタマーまたは複合体に導入し、次いで当該親和性物質や所定の官能基を利用して固相担体に固定化する方法が挙げられる。本発明はまた、このような方法を提供する。所定の官能基は、カップリング反応に供することが可能な官能基であり得、例えば、アミノ基、チオール基、ヒドロキシ基、カルボキシル基が挙げられる。本発明はまた、このような官能基が導入されたアプタマーを提供する。
【００７０】
本発明はまた、ＩＬ−１７の精製及び濃縮方法を提供する。特に本発明はＩＬ−１７を他のファミリータンパク質から分離することが可能である。本発明の精製及び濃縮方法は、本発明の固相担体にＩＬ−１７を吸着させ、吸着したＩＬ−１７を溶出液により溶出させることを含み得る。本発明の固相担体へのＩＬ−１７の吸着は自体公知の方法により行うことができる。例えば、ＩＬ−１７を含有する試料（例、細菌又は細胞の培養物又は培養上清、血液）を、本発明の固相担体又はその含有物に導入する。ＩＬ−１７の溶出は、中性溶液等の溶出液を用いて行うことができる。中性溶出液は特に限定されるものではないが、例えばｐＨ約６〜約９、好ましくは約６．５〜約８．５、より好ましくは約７〜約８であり得る。中性溶液はまた、例えば、カリウム塩（例、ＮａＣｌ、ＫＣｌ）、マグネシウム塩（例、ＭｇＣｌ２）、界面活性剤（例、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｒｉｔｏｎ、ＮＰ４０）、グリセリンを含むものであり得る。本発明の精製及び濃縮方法はさらに、ＩＬ−１７の吸着後、洗浄液を用いて固相担体を洗浄することを含み得る。洗浄液としては、例えば、尿素、キレート剤（例、ＥＤＴＡ）、Ｔｒｉｓ、酸、アルカリ、Ｔｒａｎｆｅｒ  ＲＮＡ、ＤＮＡ、Ｔｗｅｅｎ  ２０などの表面活性剤、ＮａＣｌなどの塩を含むものなどが挙げられる。本発明の精製及び濃縮方法はさらに、固相担体を加熱処理することを含み得る。かかる工程により、固相担体の再生、滅菌が可能である。
【００７１】
本発明のアプタマーまたは複合体は、検出用プローブ、特にＩＬ−１７の検出用プローブとして利用することができる。アプタマーの標識方法としては特に限定されず、自体公知の方法が適用可能である。このような方法としては、例えば放射性同位元素による標識、蛍光色素や蛍光蛋白質による標識などが挙げられる。
【００７２】
本発明はまた、ＩＬ−１７の検出及び定量方法を提供する。特に本発明はＩＬ−１７を他のファミリータンパク質と区別して検出及び定量することができる。本発明の検出及び定量方法は、本発明のアプタマーを利用して（例、本発明の複合体及び固相担体の使用により）ＩＬ−１７を測定することを含み得る。ＩＬ−１７の検出及び定量方法は、抗体の代わりに本発明のアプタマーを用いること以外は、免疫学的方法と同様の方法により行われ得る。従って、抗体の代わりに本発明のアプタマーを用いることにより、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（例、直接競合ＥＬＩＳＡ、間接競合ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ウエスタンブロット法（例、ウエスタンブロット法における二次抗体の代わりとしての使用）、免疫組織化学的染色法、セルソーティング法等の方法と同様の方法により、検出及び定量を行うことができる。このような方法は、例えば、生体又は生物学的サンプルにおけるＩＬ−１７量の測定、ＩＬ−１７が関連する疾患の診断に有用であり得る。
【００７３】
本明細書中で挙げられた特許及び特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、本明細書での引用により、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
【００７４】
以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は下記実施例等に何ら制約されるものではない。
【実施例】
【００７５】
実施例１：ＩＬ−１７に特異的に結合する核酸の作製
ＩＬ−１７に特異的に結合する核酸はＳＥＬＥＸ法を用いて作製した。ＳＥＬＥＸはＥｌｌｉｎｇｔｏｎらの方法（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４６，８１８−８２２，１９９０）及びＴｕｅｒｋらの方法（Ｔｕｅｒｋ  ａｎｄ  Ｇｏｌｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，５０５−５１０，１９９０）を改良して行った。標的物質としてヒトＩＬ−１７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）を用いた。ＩＬ−１７はアミノカップリングによってアガロース樹脂（ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，ＧＥヘルスケア社製）に固定化した。アミノカップリングはＧＥヘルスケア社の仕様書にそって行った。固定化量は、固定化前のＩＬ−１７溶液と固定化直後の上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより調べることで確認した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果、上清からはＩＬ−１７のバンドは検出されず、使用したＩＬ−１７のほぼ全てがカップリングされたことが確認された。約４００ｐｍｏｌのＩＬ−１７が約１０μＬの樹脂に固定化されたことになる。【００７６】
最初のラウンドで用いたＲＮＡ（３０Ｎ−ＲＮＡ）は、化学合成によって得られたＤＮＡをＤｕｒａＳｃｒｉｂｅＴＭ  Ｔ７  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ社製）を用いて転写して得た。この方法によって得られたＲＮＡはピリミジンヌクレオチドのリボースの２’位がフルオロ化されたものである。ＤＮＡ鋳型として以下に示す３０ヌクレオチドのランダム配列の両端にプライマー配列を持った長さ８９ヌクレオチドのＤＮＡを用いた。ＤＮＡ鋳型とプライマーは化学合成によって作製した。以下に用いたＤＮＡ鋳型とプライマーを示す。【００７７】
ＤＮＡ鋳型：
５’−ｔｃａｃａｃｔａｇｃａｃｇｃａｔａｇｇ−３０Ｎ−ｃａｔｃｔｇａｃｃｔｃｔｃｔｃｃｔｇｃｔｃｃｃ−３’（配列番号５５）
プライマーＦｗｄ：
５’−ｔａａｔａｃｇａｃｔｃａｃｔａｔａｇｇｇａｇｃａｇｇａｇａｇａｇｇｔｃａｇａｔｇ−３’（配列番号５６）
プライマーＲｅｖ：
５’−ｔｃａｃａｃｔａｇｃａｃｇｃａｔａｇｇ−３’（配列番号５７）【００７８】
ＮはＡ、Ｇ、Ｃ又はＴのいずれか一つを示す。プライマーＦｗｄはＴ７ＲＮＡポリメラーゼのプロモーター配列を含んでいる。最初のラウンドで用いたＲＮＡプールのバリエーションは理論上１０１４であった。【００７９】
ＩＬ−１７が固定化された樹脂にＲＮＡプールを加え、３０分室温で保持した。３０分後、ＩＬ−１７に結合しないＲＮＡを取り除くために、溶液Ａで樹脂を洗浄した。ここで溶液Ａは１４５ｍＭ塩化ナトリウム、５．４ｍＭ塩化カリウム、１．８ｍＭ塩化カルシウム、０．８ｍＭ塩化マグネシウム、２０ｍＭトリス（ｐＨ７．６）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０の混合溶液である。ＩＬ−１７に結合したＲＮＡは、溶出液を加えて室温で１０分間攪拌することで回収した。溶出液として溶液Ａに、６Ｍグアニジン塩酸塩を加えｐＨ７．６に調製したものを用いた。回収されたＲＮＡはＲＴ−ＰＣＲで増幅し、ＤｕｒａＳｃｒｉｂｅＴＭ  Ｔ７  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔで転写して次のラウンドのプールとして用いた。以上を１ラウンドとし、同様の作業を８ラウンド行った。ＳＥＬＥＸ終了後、ＰＣＲ産物をｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）にクローニングし、大腸菌株ＤＨ５α（Ｔｏｙｏｂｏ社製）にトランスフォーメーションした。シングルコロニーからプラスミドを抽出後、ＤＮＡシーケンサー（３１３０ｘｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＡＢＩ社製）で４８クローンの塩基配列を調べた。【００８０】
ＳＥＬＥＸを６ラウンド行った後に配列を調べたところ、配列に収束が見られた。配列番号１で表される配列は１１配列存在し、２塩基置換体が１配列存在した。配列番号２で表される配列は６配列存在した。配列番号３〜６で表される配列は２配列存在した。配列番号７〜２８で表される配列は１配列であった。配列番号１と２で表される配列にはｇａｕａｇｃｇａａｇｕｃａｕｕｇａｇｃｇｃ（配列番号５８；２１ヌクレオチド）の共通配列が含まれていた。また、配列番号６〜２１で表される配列にはｇｇａｇｕｃａｇ（配列番号５９；８ヌクレオチド）の共通配列が含まれていた。配列番号１と２で表される配列の二次構造をＭＦＯＬＤプログラム（Ｍ．Ｚｕｋｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１（１３），３４０６−３４１５，２００３）を用いて予測したところ、共通配列の部分が同じ形状となった（図１および２参照）。【００８１】
次にＳＥＬＥＸ８ラウンドの配列を調べた。６ラウンドよりも収束しており、配列番号１と２で表される配列がそれぞれ２５配列と７配列存在した。配列番号１で表される配列の２塩基置換体が１配列、配列番号２で表される配列の１塩基置換体が１配列存在した。配列番号２９〜３１で表される配列はそれぞれ４、３、２配列存在した。配列番号３２〜３６で表される配列は１配列存在した。配列番号２９で表される配列には配列番号５８の共通配列が含まれていた。配列番号２９で表される配列の２次構造をＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測したところ、共通配列の部分が配列番号１と２で表される配列に含まれていた共通配列と同じ形状となった（図３参照）。また、配列番号３０と３１で表される配列には配列番号５９の共通配列が含まれていた。更に、配列番号７、９、１３、２１および３０で表される配列にはｇｇａｇｇａｇｕｃａｇｕａａｕｃ（配列番号６０；１６ヌクレオチド）の共通配列が含まれていた。配列番号６０で表わされる共通配列は配列番号５９を含有する。これらの配列の二次構造をＭＦＯＬＤプログラムを用いて予測したところ、共通配列の部分が同じ形状となった（図４〜６参照）。配列番号５９で表わされる共通配列を四角で囲み、配列番号６０で表わされる共通配列の残りの配列に＊（アスタリスク）を付けた。【００８２】
以下にそれぞれのヌクレオチド配列を示す。なお、各ヌクレオチドにおける括弧は、リボースの２’位の修飾を示す。またＦはフッ素原子を示し、ＭはＯＭｅを示す。具体的には、ｃ（Ｆ）はリボースの２’位がフッ素原子で置換されたシチジンを示し、ｕ（Ｆ）はリボースの２’位がフッ素原子で置換されたウリジンを示す。またａ（Ｍ）はリボースの２’位がＯＭｅで置換されたアデノシンを示し、ｇ（Ｍ）はリボースの２’位がＯＭｅで置換されたグアノシンを示し、ｃ（Ｍ）はリボースの２’位がＯＭｅで置換されたシチジンを示す（以下同様）。
また各配列の先頭は５’末端であり、終端が３’末端である。【００８３】
配列番号１：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｇｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ａｇａｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００８４】
配列番号２：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００８５】
配列番号３：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇａａｃ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００８６】
配列番号４：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇａｇａｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００８７】
配列番号５：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｇａａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００８８】
配列番号６：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００８９】
配列番号７
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｇａｇｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９０】
配列番号８
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９１】
配列番号９
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９２】
配列番号１０
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９３】
配列番号１１
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９４】
配列番号１２
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９５】
配列番号１３
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９６】
配列番号１４
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９７】
配列番号１５
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｇｇａａａａａａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９８】
配列番号１６
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｇａｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【００９９】
配列番号１７
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ａｇｇｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａａｃ（Ｆ）ｇａａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１００】
配列番号１８
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｇｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａａａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０１】
配列番号１９
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｇｇｇｇｇｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０２】
配列番号２０
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｇａａｇｇｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０３】
配列番号２１
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａａｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０４】
配列番号２２
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ａａａｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇａｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０５】
配列番号２３
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａａａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａａａｕ（Ｆ）ｇｇｇｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０６】
配列番号２４
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇａｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０７】
配列番号２５
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｇｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａａａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０８】
配列番号２６
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｇｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ａｇａｇｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１０９】
配列番号２７
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｇａｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１０】
配列番号２８
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａａａａｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａａｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａａｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１１】
配列番号２９：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１２】
配列番号３０：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１３】
配列番号３１：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａａｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１４】
配列番号３２：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｇｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｕ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｇｇａｇ【０１１５】
配列番号３３：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１６】
配列番号３４：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇａｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１７】
配列番号３５：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｇｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａａａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１８】
配列番号３６：
ｇｇｇａｇｃ（Ｆ）ａｇｇａｇａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇａｃ（Ｆ）ａａａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇａ【０１１９】
配列番号１〜６および２９〜３６で表される核酸のＩＬ−１７に対する結合活性を表面プラズモン共鳴法により評価した。測定にはＢＩＡｃｏｒｅ社製の２０００を用いた。センサーチップにはストレプトアビジンが固定化されているＳＡチップを用いた。これに、５’末端にビオチンが結合している１６ヌクレオチドのＰｏｌｙ  ｄＴを６００ＲＵ程度結合させた。リガンドとなる核酸は、３’末端に１６ヌクレオチドのＰｏｌｙ  Ａを付加し、ｄＴとＡの結合によりＳＡチップに固定化した。固定化量は約８００ＲＵとした。アナライト用のヒトＩＬ−１７は０．５μＭに調製し、非特異的吸着を軽減するために０．１ｍｇ／ｍＬのｔＲＮＡを加えたものを２０μＬインジェクトした。ランニングバッファーには溶液Ａを用いた。測定の結果、配列番号１〜６および２９〜３６で表される核酸の全てが、ネガティブコントロールの３０Ｎよりも有意にＩＬ−１７に結合することがわかった。ここで３０Ｎとは３０ヌクレオチドのランダム配列を含む、ＳＥＬＥＸの１ラウンド目に使用した核酸プールのことである。一例として配列番号１で表されるアプタマー（Ａｐｔ１）とヒトＩＬ−１７との結合の様子を示すセンサーグラムを図７に示す。以上より、配列番号１〜６および２９〜３６で表される核酸はＩＬ−１７に結合するアプタマーであることが示された。【０１２０】
配列番号１〜６および２９〜３６で表されるＩＬ−１７アプタマーが同じファミリーのＩＬ−１７Ｆに結合するかどうか表面プラズモン共鳴法で調べた。ＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列の相同性は５０％である。実験にはＲ＆Ｄ社製のＩＬ−１７Ｆ（１３３５−ＩＮＳ／ＣＦ）を用い、上述と同様にｔＲＮＡを加えて非特異吸着を軽減させた状態でおこなった。その結果、配列番号１〜６および２９〜３６で表されるアプタマーの全てがＩＬ−１７Ｆに結合しないことがわかった。一例として、配列番号１で表されるアプタマーがヒトＩＬ−１７Ｆに結合しないことを示すセンサーグラムを図８に示す。以上より、配列番号１〜６および２９〜３６で表されるアプタマーはＩＬ−１７に特異的に結合することがわかった。【０１２１】
実施例２：配列番号１、２、３０で表されるアプタマーの短小化
配列番号１、２、３０で表されるアプタマーの短小化をおこない、配列番号３７〜４４で表される核酸を化学合成により作製した。これらの核酸がＩＬ−１７に対して結合活性を有しているかどうか、実施例１と同様に表面プラズモン共鳴法により調べた。その結果、これら全ての核酸がＩＬ−１７に対して結合活性を有していることがわかった。配列番号４０で表されるアプタマーは、配列番号１、２、２９で表されるアプタマーに含まれる共通配列（配列番号５８）を含むもので、２３ヌクレオチドの長さである。配列番号４４で表されるアプタマーは配列番号３０で表されるアプタマーに含まれる共通配列を含むもので、３３ヌクレオチドの長さである。また、配列番号４４で表されるアプタマーは、配列番号６〜２１、３０、３１に含まれる８ヌクレオチドの共通配列（配列番号５９）および配列番号７、９、１３、２１および３０に含まれる１６ヌクレオチドの共通配列（配列番号６０）を含む。配列番号４０と４４で表されるアプタマーのＭＦＯＬＤプログラムによる二次構造予測を図９と１０にそれぞれ示す。図９において、共通配列は黒丸で示した。図１０において、配列番号６〜２１、３０、３１との共通配列に四角、配列番号７、９、１３、２１および３０とのみ共通の配列に＊印（アスタリスク）を記した。【０１２２】
以下にそれぞれのヌクレオチド配列を示す。
配列番号３７：配列番号１で表されるアプタマーの改変体で５４ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｇｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ａｇａｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇ【０１２３】
配列番号３８：配列番号３７で表されるアプタマーの改変体で４０ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｇｃ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ａｇａｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）【０１２４】
配列番号３９：配列番号３８で表されるアプタマーの改変体で３３ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｇｃ（Ｆ）ａｇａｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）【０１２５】
配列番号４０：配列番号３９で表されるアプタマーの改変体で２３ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１２６】
配列番号４１：配列番号３９で表されるアプタマーの改変体で２７ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｇｇｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１２７】
配列番号４２：配列番号２で表されるアプタマーの改変体で４１ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）【０１２８】
配列番号４３：配列番号３０で表されるアプタマーの改変体で５２ヌクレオチドの長さのアプタマー
ａｇａｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇａｕ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ｇ【０１２９】
配列番号４４：配列番号３０で表されるアプタマーの改変体で３３ヌクレオチドの長さのアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３０】
実施例３：配列番号４０で表されるアプタマーの変異体の作製
配列番号４０で表されるアプタマーに一ヶ所変異を加えた変異体を作製し、ＩＬ−１７に対する結合活性を表面プラズモン共鳴法により評価した。変異体の配列と修飾を以下に示す。【０１３１】
配列番号４５：配列番号４０で表されるアプタマーに（ｕ（Ｆ）１６：ｃ（Ｆ）１６）の変異を加えたアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３２】
配列番号４６：配列番号４０で表されるアプタマーに（ｇ２１：ａ２１）の変異を加えたアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３３】
配列番号４７：配列番号４０で表されるアプタマーに（ｃ（Ｆ）７：ａ（Ｍ）７）の変異を加えたアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇａ（Ｍ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３４】
配列番号４８：配列番号４０で表されるアプタマーに（ｕ（Ｆ）１２：ａ（Ｍ）１２）の変異を加えたアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇａ（Ｍ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３５】
配列番号４０−２：配列番号４０で表されるアプタマーのａ３にＯＭｅの修飾を加えたアプタマー
ｇｇａ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３６】
配列番号４０−３：配列番号４０で表されるアプタマーのｃ（Ｆ）７をｃ（Ｍ）７にしたアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｍ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３７】
配列番号４０−４：配列番号４０で表されるアプタマーのｇ１９にＯＭｅの修飾を加えたアプタマー
ｇｇａｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｕ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ｇａｇ（Ｍ）ｃ（Ｆ）ｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１３８】
これらのアプタマーは全てＩＬ−１７と結合した。これは、配列番号４０で表されるアプタマーは、数個の変異を入れても、修飾方法を変えても、ＩＬ−１７に対して結合活性を有していることを示している。【０１３９】
実施例４：ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害するアプタマー
配列番号１〜６および２９〜４４で表されるアプタマーが、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）の結合を阻害するかどうかを、表面プラズモン共鳴法を用いて調べた。
ＢＩＡｃｏｒｅ社のプロトコールに従って、ＣＭ５センサーチップにＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ（２１１８１，ＰＩＥＲＣＥ）を固定化した。そこに、ＩｇＧのＦｃ部分が融合したヒトＩＬ−１７Ｒ−Ｆｃ（１７７−ＩＲ，Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を約９００ＲＵ固定化した。アナライトとしてＩＬ−１７（０．１１μＭ）とアプタマー（０．３３μＭ）を混合して１５分保持したものを流した。もしアプタマーがＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒの結合を阻害する場合はセンサーグラムのシグナルは上がらないが、もし阻害しない場合は三者複合体を形成しシグナルが上がることが予想される。阻害実験を開始する前にＩＬ−１７ＲにＩＬ−１７が結合することを確認した。またネガティブコントロールとして、ＩＬ−１７と３０Ｎを混ぜたものを用いた。３０Ｎは、３０ヌクレオチドのランダム配列を含む、ＳＥＬＥＸの１ラウンド目に使用した核酸プールのことである。実験の結果、配列番号１〜６および２９〜４４で表されるアプタマーの全てがＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒの結合を阻害することがわかった。一方、３０Ｎは阻害活性を示さなかった。一例として配列番号１で表されるアプタマーがＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒの結合を阻害していることを示すセンサーグラムを図１１に示す。
以上より、配列番号１〜６および２９〜４４で表されるアプタマーはＩＬ−１７の阻害剤として使用できることが示された。【０１４０】
実施例５：配列番号４４で表されるアプタマーの変異体の作製
配列番号４４で表されるアプタマーに変異を加えた変異体を作製し、ＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒの結合を阻害するかどうかを、実施例６と同様に、表面プラズモン共鳴法を用いて調べた。変異体の配列と修飾を以下に示す。【０１４１】
配列番号４９：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ７）欠失の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１４２】
配列番号５０：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ１４：ａ１４）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇａａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１４３】
配列番号５１：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ２０：ａ２０）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１４４】
配列番号５２：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ１ｇ２ｕ（Ｆ）３ｃ（Ｆ）４：  Ｇ１Ｇ２Ｇ３Ｇ４、ｇ３０ａ３１ｃ（Ｆ）３２ｃ（Ｆ）  ３３：Ｃ３０Ｃ３１Ｃ３２Ｃ３３）の変異を加えたアプタマー。ここで、大文字はデオキシヌクレオチドを示す。
ＧＧＧＧｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａＣＣＣＣ【０１４５】
配列番号４４−１：配列番号４４で表されるアプタマーに（ａ１９ｇ２０：ａ（Ｍ）１９ｇ（Ｍ）２０）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１４６】
配列番号４４−２：配列番号４４で表されるアプタマーに（ａ１５ｇ１６：ａ（Ｍ）１５ｇ（Ｍ）１６）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１４７】
配列番号５３：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ２７）以降を欠失させたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇ【０１４８】
配列番号５４：配列番号４４で表されるアプタマーの（ｇ１ｇ２ｕ（Ｆ）３）と（ａ３１ｃ（Ｆ）３２ｃ（Ｆ）３３）を欠失させたアプタマー
ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇ【０１４９】
配列番号４４−３：配列番号４４で表されるアプタマーに（ａ６ｇ７：ａ（Ｍ）６ｇ（Ｍ）７）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１５０】
配列番号４４−４：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ１０ｇ１１：ｇ（Ｍ）１０ｇ（Ｍ）１１）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１５１】
配列番号４４−５：配列番号４４で表されるアプタマーに（ａ１２ｇ１３：ａ（Ｍ）１２ｇ（Ｍ）１３）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１５２】
配列番号４４−６：配列番号４４で表されるアプタマーに（ｇ１４ａ１５：ｇ（Ｍ）１４ａ（Ｍ）１５）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）
配列番号４４−７：配列番号４４で表されるアプタマーに（ａ２２ａ２３：ａ（Ｍ）２２ａ（Ｍ）２３）の変異を加えたアプタマー
ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）【０１５３】
配列番号４４−８：配列番号４４で表されるアプタマーの５’末端にＰＥＧ４０（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ２−４００ＧＳ２、日本油脂社製）を付加、３’末端にｉｄＴ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｄＴ）を付加したアプタマー。
ＰＥＧ４０−ｇｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｕ（Ｆ）ａｇｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｇａｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）−ｉｄＴ【０１５４】
これらのアプタマーは全てＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）の結合を阻害した。これは、配列番号４４で表されるアプタマーは数個の変異を入れたり修飾方法を変えても、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）の結合に対して阻害活性を有していることを示している。【０１５５】
実施例６：アプタマーは培養細胞のＩＬ−１７シグナリングを阻害する
配列番号４４で表されるアプタマーが、ＩＬ−１７による細胞刺激を阻害できるか、正常ヒト皮膚繊維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｄｅｒｍａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；ＮＨＤＦ；三光純薬）を用いて確認した。ＮＨＤＦ細胞はＩＬ−１７による細胞刺激で、細胞外にインターロイキン６（ＩＬ−６）を産生する。ＮＨＤＦ細胞をヒトＩＬ−１７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）（４０ｎｇ／ｍｌ）で刺激する際、培地中にアプタマー（配列番号４４で表されるアプタマー）を加え、２４時間後に産生されるＩＬ−６を酵素免疫定量（ＥＬＩＳＡ）法（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ：  Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により測定した。ＩＬ−６の産生阻害結果を図１２に示す。測定の結果、アプタマーを加えると濃度依存的にＩＬ−６の産生が抑制されているのが確認できた。また、抗ＩＬ−１７中和抗体（ＭＡＢ４２１、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）よりも高い阻害効果を得られた。一方、コントロールＲＮＡは阻害活性を示さなかった。ここで、コントロールＲＮＡとは３０ヌクレオチドのランダム配列を含む、ＳＥＬＥＸの１ラウンド目に使用した核酸プールのことである。以上のことから、本発明のアプタマーは生存している細胞に対してもＩＬ−１７シグナリングの高い阻害活性を有していることが示された。【０１５６】
実施例７：アプタマーによるＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎）モデルマウスの発症抑制実験
ヒト多発性硬化症のマウスモデルとして知られるＥＡＥモデルマウスを用いてアプタマーによる発症への影響を解析した。３００μｇのＭｙｅｌｉｎ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ３５−５５（ＭＯＧ３５−５５）（ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ）を５００μｇの結核死菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を含む不完全Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  ａｄｊｕｖａｎｔとともにエマルジョン化し、野生型Ｃ５７ＢＬ／６（メス、８週齢）の腋下部及び腰部に皮下投与し、感作した。さらに、感作直後及び４８時間後に２００ｎｇの百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｔｏｘｉｎ）を２００μＬのＰＢＳに溶かし、尾静脈内投与しＥＡＥを誘導した。以後、毎日以下の基準により臨床症状を評価した。
野生型マウス群（ｎ＝１０）および配列番号４４−８で表されるアプタマー投与群（１ｍｇ／ｋｇ，３ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇそれぞれｎ＝１０）に対して毎日臨床スコアを付け、臨床症状の評価を行った。臨床スコア値は、０：症状なし、０．５：尾が半分垂れる、１：尾が垂れる、２：歩行障害、３：片足麻痺、４：両後肢麻痺、５：前肢片側麻痺、６：前肢麻痺・死亡を示し、ＭＯＧ３５−５５投与後２５日までの全ての動物のスコアを記録した。【０１５７】
配列番号４４−８で表されるアプタマーは生理食塩水に溶解し、ＭＯＧ３５−５５投与日から２日に１回の間隔で計１３回投与した。コントロール群として生理食塩水を同量同様に投与した。
臨床症状評価の経過を図１３に示す。コントロール群と比較し、配列番号４４−８で表されるアプタマー１ｍｇ／ｋｇ投与群に於いて有意差はみられなかった。一方、配列番号４４−７で表されるアプタマー３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ投与群では、統計学的有意差をもって臨床症状の軽減が見られた。統計学的有意差は、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定およびＤｕｎｎｅｔｔ法を用いて解析した。図中に統計学的有意差（＊：Ｐ＜０．０５，＊＊：Ｐ＜０．０１）を示す。以上の結果は、ＩＬ−１７に対するアプタマーが多発性硬化症等自己免疫疾患の治療薬として利用できる可能性を強く示唆する。
【産業上の利用可能性】
【０１５８】
本発明のアプタマーまたは複合体は、炎症性疾患や癌、アレルギー、感染症などの疾患に対する医薬、あるいは診断薬、試薬として有用であり得る。本発明のアプタマーまたは複合体はまた、ＩＬ−１７の精製及び濃縮、ＩＬ−１７の標識、並びにＩＬ−１７の検出及び定量に有用であり得る。
本出願は、日本で出願された特願２００８−１８３２３３を基礎としており、それらの内容は本明細書にすべて包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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