(57)【要約】本発明は、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価するための診断剤を提供する。本発明は、パーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価するための診断剤を提供する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、一定レベル以上である場合、被験体は、免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
パーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による被験体における癌に対する治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤。
【請求項２】
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、請求項１に記載の診断剤。
【請求項３】
前記癌が肺癌である、請求項１または２に記載の診断剤。
【請求項４】
前記パーフォリンの発現レベルが、血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項５】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項６】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項７】
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項５または６に記載の診断剤。
【請求項８】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項７に記載の診断剤。
【請求項９】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項７に記載の診断剤。
【請求項１０】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項６に記載の診断剤。
【請求項１１】
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１０に記載の診断剤。
【請求項１２】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項６に記載の診断剤。
【請求項１３】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１２に記載の診断剤。
【請求項１４】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１３に記載の診断剤。
【請求項１５】
パーフォリンのタンパク質に結合する手段と
該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段と
を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのキット。
【請求項１６】
パーフォリンの発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのバイオマーカー。
【請求項１７】
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するために、該被験者から分離した生体検体についてパーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する方法。
【請求項１８】
パーフォリンの発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
【請求項１９】
前記パーフォリンは、血液試料におけるものである、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記パーフォリンの発現レベルが、パーフォリンのタンパク質の発現レベルである、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
パーフォリンに加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、ＣＤ１３７、ＴＮＦα、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６またはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、請求項１７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための、免疫チェックポイント阻害剤を含むコンパニオン試薬であって、免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３３】
抗ＰＤ−１抗体による癌に対する治療の効果を評価するための、抗ＰＤ−１抗体を含むコンパニオン試薬であって、該抗ＰＤ−１抗体投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３４】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項３３に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３５】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項３３に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３６】
ニボルマブによるがん治療の効果を評価するための、ニボルマブを含むコンパニオン試薬であって、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３７】
ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベル約１．２倍以上である場合、前記被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３６に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３８】
ペムブロリズマブによる癌に対する治療の効果を評価するための、ペムブロリズマブを含むコンパニオン試薬であって、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３９】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３７に記載のコンパニオン試薬。
【請求項４０】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３９に記載のコンパニオン試薬。
【請求項４１】
ＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤。
【請求項４２】
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、請求項４１に記載の診断剤。
【請求項４３】
前記癌が肺癌である、請求項４１または４２に記載の診断剤。
【請求項４４】
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、血液試料中のＣＤ１３７のタンパク質のレベルである、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項４５】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項４６】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項４７】
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性であることが示される、請求項４６に記載の診断剤。
【請求項４８】
ＣＤ１３７のタンパク質に結合する手段と
該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段と
を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのキット。
【請求項４９】
ＣＤ１３７の発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのバイオマーカー。
【請求項５０】
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するために、該被験者から分離した生体検体についてＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する方法。
【請求項５１】
ＣＤ１３７の発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
【請求項５２】
前記ＣＤ１３７は、血液試料におけるものである、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、パーフォリンのタンパク質の発現レベルである、請求項５０〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項５０〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＣＤ１３７に加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、パーフォリン、ＴＮＦα、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６またはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、請求項５０〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）によるがん治療の効果を評価するためのマーカー、診断剤、キットおよび方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
正常の体内では、免疫監視機構が働いており、がん化した細胞を排除する。活性化したＣＤ８陽性、細胞傷害性Ｔ細胞は、がん化された細胞の癌抗原を認識して、サイトカイン、パーフォリン、グランザイムＢを放出することで、がん細胞をアポトーシスに至らせる（非特許文献１）。一方がん細胞は、がん細胞表面上のＰＤ−Ｌ１と、Ｔ細胞表面上のＰＤ−１を結合させ、Ｔ細胞を不活性化することによって、免疫監視機構から逃避する。抗ＰＤ−１抗体であるニボルマブおよびペムブロリズマブは、ヒト型モノクローナル抗体で、この免疫監視機構からの逃避を防ぐ薬剤である。ニボルマブおよびペムブロリズマブは、ＰＤ−１に結合し、ＰＤ−Ｌ１からの活性化抑制シグナルを阻害することで、Ｔ細胞を再活性化する。再活性化されたＴ細胞の働きにより、がん細胞は、アポトーシスに至る。【０００３】
ニボルマブおよびペムブロリズマブは、様々ながん種で臨床試験（治験）が行われており、化学療法の治療歴のある進行期がん患者において、高い奏効率および、無増悪生存期間、全生存期間の延長を示している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Voskoboinik  I,  Whisstock  JC,  Trapani  JA.  Perforin  and  granzymes:  function,  dysfunction  and  human  pathology.  Nat  Rev  Immunol.  2015  Jun;15(6):388-400.
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果をパーフォリンの発現レベルを測定することによって評価することができることを見出した。パーフォリンは、健常者においても発現されているタンパク質であるため、パーフォリンががん治療の効果を評価するために使用することができることは予想外なことであった。さらに、驚くべきことに、免疫チェックポイント阻害剤の種類によって、パーフォリンの発現レベルの挙動に差が見られることが明らかになった。これにより、効果的な予測因子が見いだされ、ニボルマブおよびペムブロリズマブにより生じる費用を削減することができる。【０００６】
したがって、本発明は、以下を提供する。
（項目１）
パーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による被験体における癌に対する治療の効果を評価するための診断剤。
（項目２）
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、項目１に記載の診断剤。
（項目３）
前記癌が肺癌である、項目１または２に記載の診断剤。
（項目４）
前記パーフォリンの発現レベルが、血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルである、項目１〜３のいずれか一項に記載の診断剤。
（項目５）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目１〜４のいずれか一項に記載の診断剤。
（項目６）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目１〜５のいずれか一項に記載の診断剤。
（項目７）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目６に記載の診断剤。
（項目８）
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目７に記載の診断剤。
（項目９）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目６に記載の診断剤。
（項目１０）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目９に記載の診断剤。
（項目１１）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１０に記載の診断剤。
（項目１２）
パーフォリンのタンパク質に結合する手段と
該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段と
を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのキット。
（項目１３）
パーフォリンの発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのバイオマーカー。
（項目１４）
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するために、該被験者から分離した生体検体についてパーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する方法。
（項目１５）
パーフォリンの発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
（項目１６）
前記パーフォリンは、血液試料におけるものである、項目１４または１５に記載の方法。
（項目１７）
前記パーフォリンの発現レベルが、パーフォリンのタンパク質の発現レベルである、項目１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目１４〜１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、項目１９に記載の方法。
（項目２３）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
パーフォリンに加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、ＣＤ１３７、ＴＮＦαまたはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、項目１４〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための、免疫チェックポイント阻害剤を含むコンパニオン試薬であって、免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
（項目２７）
ニボルマブによるがん治療の効果を評価するための、ニボルマブを含むコンパニオン試薬であって、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
（項目２８）
ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベル約１．２倍以上である場合、前記被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目２６に記載のコンパニオン試薬。
（項目２９）
ペムブロリズマブによる癌に対する治療の効果を評価するための、ペムブロリズマブを含むコンパニオン試薬であって、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
（項目３０）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目２８に記載のコンパニオン試薬。
（項目３１）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目３０に記載のコンパニオン試薬。
（項目３２）
ＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための診断剤。
（項目３３）
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、項目３２に記載の診断剤。
（項目３４）
前記癌が肺癌である、項目３２または３３に記載の診断剤。
（項目３５）
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、血液試料中のＣＤ１３７のタンパク質のレベルである、項目３１〜３４のいずれか一項に記載の診断剤。
（項目３６）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目３１〜３４のいずれか一項に記載の診断剤。
（項目３７）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目３２〜３６のいずれか一項に記載の診断剤。
（項目３８）
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性であることが示される、項目３７に記載の診断剤。
（項目３９）
ＣＤ１３７のタンパク質に結合する手段と
該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段と
を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのキット。
（項目４０）
ＣＤ１３７の発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのバイオマーカー。
（項目４１）
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するために、該被験者から分離した生体検体についてＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する方法。
（項目４２）
ＣＤ１３７の発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
（項目４３）
前記ＣＤ１３７は、血液試料におけるものである、項目４１または４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、パーフォリンのタンパク質の発現レベルである、項目４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
ＣＤ１３７に加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、パーフォリン、ＴＮＦαまたはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、項目４１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１Ａ）
パーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による被験体における癌に対する治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤。
（項目２Ａ）
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、項目１Ａに記載の診断剤。
（項目３Ａ）
前記癌が肺癌である、項目１Ａまたは２Ａに記載の診断剤。
（項目４Ａ）
前記パーフォリンの発現レベルが、血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルである、項目１Ａ〜３Ａのいずれか一項に記載の診断剤。
（項目５Ａ）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目１Ａ〜４Ａのいずれか一項に記載の診断剤。
（項目６Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目１Ａ〜５Ａのいずれか一項に記載の診断剤。
（項目７Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目５Ａまたは６Ａに記載の診断剤。
（項目８Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目７Ａに記載の診断剤。
（項目９Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目７Ａに記載の診断剤。
（項目１０Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目６Ａに記載の診断剤。
（項目１１Ａ）
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１０Ａに記載の診断剤。
（項目１２Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目６Ａに記載の診断剤。
（項目１３Ａ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１２Ａに記載の診断剤。
（項目１４Ａ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１３Ａに記載の診断剤。
（項目１５Ａ）
パーフォリンのタンパク質に結合する手段と
該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段と
を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのキット。
（項目１６Ａ）
パーフォリンの発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのバイオマーカー。
（項目１７Ａ）
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するために、該被験者から分離した生体検体についてパーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する方法。
（項目１８Ａ）
パーフォリンの発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
（項目１９Ａ）
前記パーフォリンは、血液試料におけるものである、項目１７Ａまたは１８Ａに記載の方法。
（項目２０Ａ）
前記パーフォリンの発現レベルが、パーフォリンのタンパク質の発現レベルである、項目１７Ａ〜１９Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目２１Ａ）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目１７Ａ〜２０Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目２２Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目２１Ａに記載の方法。
（項目２３Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目２１Ａまたは２２Ａに記載の方法。
（項目２４Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目２３Ａに記載の方法。
（項目２５Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目２３Ａに記載の方法。
（項目２６Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、項目２２Ａに記載の方法。
（項目２７Ａ）
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、項目２２Ａに記載の方法。
（項目２８Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、項目２２Ａに記載の方法。
（項目２９Ａ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、項目２８Ａに記載の方法。
（項目３０Ａ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、項目２９Ａに記載の方法。
（項目３１Ａ）
パーフォリンに加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、ＣＤ１３７、ＴＮＦα、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６またはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、項目１７Ａ〜３０Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目３２Ａ）
免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための、免疫チェックポイント阻害剤を含むコンパニオン試薬であって、免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
（項目３３Ａ）
抗ＰＤ−１抗体による癌に対する治療の効果を評価するための、抗ＰＤ−１抗体を含むコンパニオン試薬であって、該抗ＰＤ−１抗体投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、コンパニオン試薬。
（項目３４Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目３３Ａに記載のコンパニオン試薬。
（項目３５Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目３３Ａに記載のコンパニオン試薬。
（項目３６Ａ）
ニボルマブによるがん治療の効果を評価するための、ニボルマブを含むコンパニオン試薬であって、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
（項目３７Ａ）
ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベル約１．２倍以上である場合、前記被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目３６Ａに記載のコンパニオン試薬。
（項目３８Ａ）
ペムブロリズマブによる癌に対する治療の効果を評価するための、ペムブロリズマブを含むコンパニオン試薬であって、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
（項目３９Ａ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目３７Ａに記載のコンパニオン試薬。
（項目４０Ａ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目３９Ａに記載のコンパニオン試薬。
（項目４１Ａ）
ＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤。
（項目４２Ａ）
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、項目４１Ａに記載の診断剤。
（項目４３Ａ）
前記癌が肺癌である、項目４１Ａまたは４２Ａに記載の診断剤。
（項目４４Ａ）
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、血液試料中のＣＤ１３７のタンパク質のレベルである、項目４１Ａ〜４３Ａのいずれか一項に記載の診断剤。
（項目４５Ａ）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目４１Ａ〜４４Ａのいずれか一項に記載の診断剤。
（項目４６Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目４１Ａ〜４５Ａのいずれか一項に記載の診断剤。
（項目４７Ａ）
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性であることが示される、項目４６Ａに記載の診断剤。
（項目４８Ａ）
ＣＤ１３７のタンパク質に結合する手段と
該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段と
を含む、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのキット。
（項目４９Ａ）
ＣＤ１３７の発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するためのバイオマーカー。
（項目５０Ａ）
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するために、該被験者から分離した生体検体についてＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する方法。
（項目５１Ａ）
ＣＤ１３７の発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
（項目５２Ａ）
前記ＣＤ１３７は、血液試料におけるものである、項目５０Ａまたは５１Ａに記載の方法。
（項目５３Ａ）
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、パーフォリンのタンパク質の発現レベルである、項目５０Ａ〜５２Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目５４Ａ）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目５０Ａ〜５３Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目５５Ａ）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目５４Ａに記載の方法。
（項目５６Ａ）
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、項目５５Ａに記載の方法。
（項目５７Ａ）
ＣＤ１３７に加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、パーフォリン、ＴＮＦα、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６またはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、項目５０Ａ〜５６Ａのいずれか一項に記載の方法。
（項目１Ｂ）
免疫チェックポイント阻害剤による被験体における癌に対する治療の効果を評価または予測するための方法であって、該方法は、パーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する工程を含む、方法。
（項目２Ｂ）
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、項目１Ｂに記載の方法。
（項目３Ｂ）
前記癌が肺癌である、項目１Ｂまたは２Ｂに記載の方法。
（項目４Ｂ）
前記パーフォリンの発現レベルが、血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルである、項目１Ｂ〜３Ｂのいずれか一項に記載の方法。
（項目５Ｂ）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目１Ｂ〜４Ｂのいずれか一項に記載の方法。
（項目６Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目１Ｂ〜５Ｂのいずれか一項に記載の方法。
（項目７Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目５Ｂまたは６Ｂに記載の方法。
（項目８Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目７Ｂに記載の方法。
（項目９Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、項目７Ｂに記載の方法。
（項目１０Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目６Ｂに記載の方法。
（項目１１Ｂ）
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１０Ｂに記載の方法。
（項目１２Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目６Ｂに記載の方法。
（項目１３Ｂ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１２Ｂに記載の方法。
（項目１４Ｂ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１３Ｂに記載の方法。
（項目１５Ｂ）
癌を有する被験体における癌を治療する方法であって、該方法は、
免疫チェックポイント阻害剤を該被験体に投与する工程と、
該免疫チェックポイント阻害剤投与後の該被験体における血清中パーフォリンタンパク質のレベルを、該免疫チェックポイント阻害剤投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルと比較する工程と、
免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、該免疫チェックポイント阻害剤の投与を継続する工程と
を含む、方法。
（項目１６Ｂ）
癌を有する被験体における癌を治療する方法であって、該方法は、
該被験体における血清中パーフォリンタンパク質のレベルを測定する工程と、  免疫チェックポイント阻害剤を該被験体に投与する工程と、
該抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、該ＰＤ−１抗体を該被験体に投与する工程と
を含む、方法。
（項目１７Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１６Ｂに記載の方法。
（項目１８Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１６Ｂに記載の方法。
（項目１９Ｂ）
癌を有する被験体における癌を治療する方法であって、該方法は、
ニボルマブを該被験体に投与する工程と、
該ニボルマブ投与後２日目の該被験体における血清中パーフォリンタンパク質のレベルを、該ニボルマブ投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルと比較する工程と、
ニボルマブ投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、および／または、ニボルマブ投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、所定のレベルよりも高い場合、該ニボルマブの投与を継続する工程と
を含む、方法。
（項目２０Ｂ）
ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベル約１．２倍以上である場合、前記被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目１９Ｂに記載の方法。
（項目２１Ｂ）
癌を有する被験体における癌を治療する方法であって、該方法は、
ペムブロリズマブを該被験体に投与する工程と、
該ペムブロリズマブ投与後２日目の該被験体における血清中パーフォリンタンパク質のレベルを、該ペムブロリズマブ投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルと比較する工程と、
ペムブロリズマブ投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前または投与開始時の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、該ペムブロリズマブの投与を継続する工程と
を含む、方法。
（項目２２Ｂ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目２１Ｂに記載の方法。
（項目２３Ｂ）
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、項目２２Ｂに記載の方法。
（項目２４Ｂ）
免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するための方法であって、該方法は、ＣＤ１３７の発現レベルを検出、測定または定量する工程を含む、方法。
（項目２５Ｂ）
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、項目２４Ｂに記載の方法。
（項目２６Ｂ）
前記癌が肺癌である、項目２４Ｂまたは２５Ｂに記載の方法。
（項目２７Ｂ）
前記ＣＤ１３７の発現レベルが、血液試料中のＣＤ１３７のタンパク質のレベルである、項目２４Ｂ〜２６Ｂのいずれか一項に記載の方法。
（項目２８Ｂ）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、項目２４Ｂ〜２７Ｂのいずれか一項に記載の方法。
（項目２９Ｂ）
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、項目２４Ｂ〜２９Ｂのいずれか一項に記載の方法。
（項目３０Ｂ）
抗ＰＤ−１抗体投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１１０ｐｇ以上である場合、被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性であることが示される、項目２９Ｂに記載の方法。【０００７】
本発明において、上記１または複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供されうることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のバイオマーカーを使用して、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１はニボルマブ処置患者（PR例、66歳女性、肺腺癌）の治療前後の代表的なＣＴ画像を示す。ニボルマブ5サイクル投与後、左上葉肺癌（矢印）の縮小を認めた。
【図２】図２はニボルマブ処置患者（PD例、49歳男性、肺腺癌）の治療前後を示す。ニボルマブ4サイクル投与後、右肺尖部腫瘍（矢印）の増大を認めた。
【図３】図３はペムブロリズマブ処置患者（PR例、72歳女性、肺低分化癌）の治療前後を示す。ペムブロリズマブ2サイクル投与後、左下葉肺癌（矢印）の縮小を認めた。
【図４】図４はペムブロリズマブ処置患者（PD例、76歳男性、肺扁平上皮癌）の治療前後を示す。投与前、右肺門部肺癌を認め、閉塞性無気肺（a、矢印）。ペムブロリズマブ4サイクル投与後、胸水の出現（b、矢印）、気管分岐部下リンパ節は投与前（c、矢印）と比べ増大を認めた（d、矢印）。
【図５】図５は、ニボルマブ投与前のパーフォリンの血清中濃度の分布を示す。
【図６】図６は、ニボルマブ投与中のパーフォリンの血清中濃度の推移を示す。上段は、すべての症例を示し、下段は、３ヶ月予後があった症例のみを示す。横軸は、１：投与前、２：投与開始２日目、３：投与開始８日目、４：投与開始１５日目を示す。縦軸は、投与前の濃度を１とした場合の倍率変化を示している。
【図７】図７は、ニボルマブ投与中のパーフォリンの血清中濃度の推移を示す。横軸は、１：投与前、２：投与開始２日目、３：投与開始８日目、４：投与開始１５日目を示す。縦軸は、血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図８】図８は、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリン濃度の投与前に対する比の分布を示す。左のグラフは、すべての症例を示し、右のグラフは、３ヶ月予後があった症例のみを示す。
【図９】図９は、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの血清中濃度の分布を示す。
【図１０】図１０は、ペムブロリズマブ投与中のパーフォリンの血清中濃度の推移を示す。上段は、すべての症例を示し、下段は、３ヶ月予後があった症例のみを示す。横軸は、１：投与前、２：投与開始２日目、３：投与開始８日目、４：投与開始１５日目、５：投与開始２２日目を示す。縦軸は、投与前の濃度を１とした場合の倍率変化を示している。
【図１１】図１１は、ペムブロリズマブ投与中のパーフォリン血清中濃度の推移を示す。横軸は、１：投与前、２：投与開始２日目、３：投与開始８日目、４：投与開始１５日目、５：投与開始２２日目を示す。縦軸は、血清中濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図１２】図１２は、ペムブロリズマブ投与開始２２日目のパーフォリン濃度の投与前に対する比の分布を示す。
【図１３】図１３は、ニボルマブ投与中のＣＤ１３７の血清中濃度の推移を示す。横軸は、１：投与前、２：投与開始２日目、３：投与開始８日目、４：投与開始１５日目を示す。縦軸は、投与前の濃度を１とした場合の倍率変化を示している。
【図１４】図１４は、ペムブロリズマブ投与中のＣＤ１３７の血清中濃度の推移を示す。横軸は、１：投与前、２：投与開始２日目、３：投与開始８日目、４：投与開始１５日目、５：投与開始２２日目を示す。縦軸は、投与前の濃度を１とした場合の倍率変化を示している。
【図１５Ａ】図１５Ａは、ペムブロリズマブにおけるパーフォリン２２日目／１日目の比の最適カットオフ値およびＲＯＣ曲線を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ペムブロリズマブにおけるパーフォリン２２日目／１日目の比の最適カットオフ値で２群に分けた患者群の生存曲線（ＰＦＳ）を示す。ｃｕｔ＝１は、カットオフ値を超えた群、ｃｕｔ＝０はカットオフ値を超えなかった群を示す。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、ペムブロリズマブにおけるパーフォリン２２日目／１日目の比の最適カットオフ値で２群に分けた患者群の生存曲線（ＯＳ）を示す。ｃｕｔ＝１は、カットオフ値を超えた群、ｃｕｔ＝０はカットオフ値を超えなかった群を示す。
【図１６Ａ】図１６Ａは、ペムブロリズマブにおけるパーフォリン１日目の測定値の最適カットオフ値およびＲＯＣ曲線を示す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、ペムブロリズマブにおけるパーフォリン１日目の測定値の最適カットオフ値で２群に分けた患者群の生存曲線（ＰＦＳ）を示す。ｃｕｔ＝１は、カットオフ値を超えた群、ｃｕｔ＝０はカットオフ値を超えなかった群を示す。
【図１６Ｃ】図１６Ｃは、ペムブロリズマブにおけるパーフォリン１日目の測定値の最適カットオフ値で２群に分けた患者群の生存曲線（ＯＳ）を示す。ｃｕｔ＝１は、カットオフ値を超えた群、ｃｕｔ＝０はカットオフ値を超えなかった群を示す。
【図１７Ａ】図１７Ａは、ニボルマブにおけるパーフォリン１日目の測定値の最適カットオフ値およびＲＯＣ曲線を示す。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、ニボルマブにおけるパーフォリン１日目の測定値の最適カットオフ値で２群に分けた患者群の生存曲線（ＰＦＳ）を示す。ｃｕｔ＝１は、カットオフ値を超えた群、ｃｕｔ＝０はカットオフ値を超えなかった群を示す。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、ニボルマブにおけるパーフォリン１日目の測定値の最適カットオフ値で２群に分けた患者群の生存曲線（ＯＳ）を示す。ｃｕｔ＝１は、カットオフ値を超えた群、ｃｕｔ＝０はカットオフ値を超えなかった群を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００１１】
（用語の定義）
本明細書において「約」とは、本明細書で使用される場合、後に続く数値の±１０％を意味する。
【００１２】
本明細書において、「がん免疫療法」とは、生物の有する免疫機能を用いてがんを治療する方法をいう。がん免疫療法には、大きく分けて、がんに対する免疫機能を強化することによるがん免疫療法と、がんの免疫回避機能を阻害することによるがん免疫療法が存在する。さらに、がん免疫療法には、体内での免疫機能を賦活化する能動免疫療法と、体外で免疫機能を賦活化させた、または増殖させた免疫細胞を体内に戻すことによる受動免疫療法とがある。がん免疫療法は、免疫チェックポイントを調整することによっても達成し得る。発明に記載される方法によって、このようながん免疫療法の治療効果に対する応答性を予測あるいは判定することができることを見出した。
【００１３】
本明細書において「免疫チェックポイント」とは、本明細書で使用される場合、免疫担当細胞（Ｔ細胞を含む）上に発現し、リガンドと結合することによって、当該免疫担当細胞に対し免疫応答を阻害するシグナルを伝達する分子をいう。免疫チェックポイントおよびそのリガンドには、例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＢＴＮＬ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ４８、ＣＤ８０、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＣＤ６０、ＣＤ８６またはＶＩＳＴＡ等の分子が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、本発明における「免疫チェックポイント阻害剤」とは、免疫チェックポイントとそのリガンドとの結合を阻害することにより、当該免疫チェックポイントによるシグナル伝達を阻害する薬剤をいう。
【００１４】
免疫チェックポイント阻害剤を用いた免疫チェックポイント（阻害）療法は、近年大きな注目を集めている（Pardoll  DM.  The  blockade  of  immune  checkpoints  in  cancer  immunotherapy.  Nat  Rev  Cancer.  2012  Mar  22;12(4):252-64.）。がん細胞は、様々なタンパク質を表面に発現させるが、これが、Ｔ細胞などの免疫細胞による攻撃からの回避につながっているため、通常の状態では、生体の免疫機能のみではがん組織を排除できなくなっていると考えられている。免疫チェックポイント阻害剤は、そのようながん組織から免疫機能への抑制的シグナルの伝達を司る、リガンド−受容体相互作用等を阻害することによって、生体の免疫機能による効率的ながんの排除を可能にするものである。
【００１５】
免疫チェックポイント阻害剤の代表的な例は、ＰＤ−１阻害剤である。ＰＤ−１阻害剤としては、抗ＰＤ−１抗体であるニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ；オブジーボＴＭとして販売されている）およびペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ；キイトルーダＴＭとして販売されている）が挙げられるがこれらに限定されない。１つの好ましい実施形態では、ニボルマブが対象として選択され得る。別の実施形態では、ペムブロリズマブが対象として選択され得る。もちろん、他のＰＤ−１阻害剤についても同程度に本発明を利用することができると考えられる。
【００１６】
免疫チェックポイント阻害剤の他の例としては、ＰＤ−Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体であるアベルマブ、デュルバルマブまたはアテゾリズマブ）が挙げられる。
【００１７】
免疫チェックポイント阻害剤の他の例としては、ＣＴＬＡ−４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体であるイピリムマブまたはトレメリルマブ）が挙げられる。
【００１８】
さらなる実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ−３（Ｔ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｍｕｃｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−３）、ＬＡＧ−３（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ−３）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）、またはＴＩＧＩＴ（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎ）などの免疫チェックポイントタンパク質を標的としてもよい。
【００１９】
上記のような免疫チェックポイントは、自己組織への免疫応答を抑制していると考えられるが、ウイルスなどの抗原が生体内に長期間存在する場合にもＴ細胞に免疫チェックポイントが増加する。腫瘍組織についても、生体内に長期間存在する抗原となっているため、これらの免疫チェックポイントによって抗腫瘍免疫を回避していると考えられ、上記のような免疫チェックポイント阻害剤は、このような回避機能を無効化し、抗腫瘍効果を奏する。
【００２０】
本発明において対象となるがんとしては、肺がん、非小細胞肺がん、腎（腎細胞）がん、前立腺がん、胃がん、精巣がん、肝（臓）がん、皮膚がん、メルケル細胞がん、食道がん、黒色腫、すい臓がん、膵がん、骨腫瘍・骨肉腫、大腸がん、軟部腫瘍、胆道がん、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫（古典的ホジキンリンパ腫などのホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、膀胱がん、喉頭がん、子宮がん（体部・頸部）、頭頸部がん、卵巣がん、乳がん、高頻度マイクロサテライト不安定性を有する固形がん（ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形がん）、悪性胸膜中皮腫、舌がんなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の１つの実施形態では、肺がんを有する被験体のＴＣＲ多様性を、被験体のがん免疫療法に対する応答性の指標として用いる方法が提供される。特定の実施形態において、本発明において対象となるがんは、肺悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞がん、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形がん、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択され得る。
【００２１】
本明細書において「パーフォリン」とは、キラーＴ細胞やナチュラル・キラー細胞が行う標的細胞の破壊を実質的に担っている分子量６万５０００〜７万の糖蛋白である。これまで、キラー細胞類から分泌され、標的細胞の膜に埋まり込み、そこで孔を形成し、その細胞を破壊することが知られている。ヒトではｃ９−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｃ９ＲＰ）とも呼ばれる。奥村等はマウス、ヒトでのクローン化に成功し、ラットでの報告と合わせて３種間でのアミノ酸配列の保存性の高さが確認されている。パーフォリン遺伝子は、マウスの第１０染色体（Trapaniら、1990、J  Exp  Med、171:545-557）およびヒトの第１７染色体（Shinkaiら、1989、Immunogenetics、30:452-457）に位置づけられている。エキソン１は非翻訳配列をコードし、全タンパク質が、エキソン２の一部およびエキソン３の全部（これは３’非翻訳領域も含む）によりコードされることが判明した。マウス（Kwonら、1989、Biochem  Biophys  Res  Commun、158:1-10；Lowreyら、1989、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、86:247-251）、ヒト（LichtenheldおよびPodack、1989、J.Immunol.、143:4267-4274）およびラット（Ishikawaら、1989、J.Immunol.、143:3069-3073）。
【００２２】
パーフォリンは、ヒトｍＲＮＡのＲｅｆＳｅｑは、NM_005041またはNM_001083116であり、タンパク質のＲｅｆＳｅｑは、NP_001076585またはNP_005032であり、ＵｎｉＰｒｏｔは、Ｐ１４２２２である。
【００２３】
本明細書において「バイオマーカー」は、本明細書で使用される場合、試料中で検出することができる指標、例えば、予測的、診断的及び／又は予後診断的指標を指す。バイオマーカーは、ある特定の分子的、病理的、組織学的及び／又は臨床的特性によって特徴付けられる特定のサブタイプの疾患又は障害（例えば、癌）の指標の役割をすることができる。一部の実施態様では、バイオマーカーは遺伝子である。バイオマーカーには、ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ）、ポリヌクレオチドコピー数の変化（例えば、ＤＮＡコピー数）、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド及びポリヌクレオチドの修飾（例えば翻訳後修飾）、炭水化物、及び／又は糖脂質をベースとした分子マーカーが含まれる。
【００２４】
本明細書において「発現レベル」とは、本明細書において使用される場合、生物学的試料中のバイオマーカーの量を指す。本明細書で使用される場合、「発現」とは、遺伝子からタンパク質が合成されること及びＲＮＡが合成されることの両方を意味する。特定の実施形態では、「発現」は、遺伝子からタンパク質が合成されることを意味する。
【００２５】
（好ましい実施形態）
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。これらの実施形態について、当業者は適宜、任意の実施形態を組み合わせ得る。
【００２６】
本発明者らは、発現レベル（血清試料中のパーフォリンのタンパク質のレベル）に基づき、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価することが可能であることを初めて見出した。驚くべきことに、本発明者は、さらに、抗ＰＤ−１抗体の種類によって、パーフォリンの発現レベルの経時的な挙動が異なることを見出した。例えば、ニボルマブが投与された患者において、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される。ニボルマブが投与された患者は、予想外にも、投与開始８日以降は、投与前よりもパーフォリンの発現レベルが低下する傾向があり、２日目にパーフォリンの発現レベルを測定することが重要であることが明らかになった。一方、ペムブロリズマブが投与された患者は、ニボルマブが投与された患者とは対照的に、投与後パーフォリンの発現レベルは、投与前と比べて同等または高い発現レベルを維持しており、投与開始２２日目でも、投与前のパーフォリンの発現レベルよりも高かった。ニボルマブおよびペムブロリズマブは同じ抗ＰＤ−１抗体であるにもかかわらず、パーフォリンの発現レベルの挙動が異なっていることは予想外であった。
【００２７】
さらに、より詳細に解析を行ったところ、驚くべきことに、免疫チェックポイント阻害剤の投与前のパーフォリンレベルが一定レベルを超えていた場合、免疫チェックポイント阻害剤の投与に対して応答性または安定状態である可能性があることが明らかになった。
【００２８】
（診断剤）
１つの態様において、本発明は、パーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤を提供する。１つの実施形態において、パーフォリンの発現レベルが、血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルであり得る。
【００２９】
がん免疫療法に対する応答は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１（Ｎｅｗ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｕｒｓ：Ｒｅｖｉｓｅｄ  ＲＥＣＩＳＴ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  （ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１））に基づいて決定することができる。
【００３０】
がん治療の効果は、腫瘍のサイズの変化などから、完全奏効（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ＣＲ）、部分奏効（Ｐａｒｔｉａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ：ＰＲ）、進行（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ：ＰＤ）または安定（Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ：ＳＤ）として判定することができる。
【００３１】
本明細書において、「奏効患者」（Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）とは、がん治療に対して、完全奏効または部分奏効を示す被験体をいう。本明細書において、「非奏効患者」（Ｎｏｎ−Ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）とは、がん治療に対して、進行または安定を示す被験体をいう。
【００３２】
被験体のがん治療に対する応答性は、被験体が「奏効患者」であることを含む。したがって、被験体のがん治療に対する応答性の判断は、被験体が奏効患者であるか非奏効患者であるかを判断することを含む。
【００３３】
（キット）
別の態様において、本発明は、パーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価するためのキットを提供する。いくつかの実施形態において、パーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段は、パーフォリンのタンパク質に結合する手段と、該結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段とを含んでもよい。特定の実施形態では、パーフォリンのタンパク質に結合する手段として、パーフォリンに結合することができる任意の化合物、タンパク質、ペプチド、核酸が挙げられる。特定の実施形態では、パーフォリンのタンパク質に結合する手段は、抗パーフォリン抗体である。抗パーフォリン抗体は、標識されていてもされていなくてもよい。標識されていない場合は、抗パーフォリン抗体の結合に基づいてパーフォリンのタンパク質発現レベルを検出、測定または定量する手段として、抗パーフォリン抗体を特異的に認識する酵素標識された抗体（二次抗体）を使用し得る。標識の有無またはレベルが、パーフォリンの有無またはレベルを示す。そのような手段としては、当該分野で公知の手段、例えば、ＥＬＩＳＡなどが挙げられるが、これに限定されない。
【００３４】
（バイオマーカー）
別の態様において、本発明は、パーフォリンの発現レベルからなる、被験体における免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価するためのバイオマーカーを提供する。さらなるバイオマーカーとしては、グランザイムＢ、ＦＡＳリガンド、ＴＮＦα、ＣＤ１３７、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６を使用することができる。これらのバイオマーカーは単独で使用されてもよい。
【００３５】
（方法）
別の実施形態において、本発明は、被験者における免疫チェックポイント阻害剤によるがん治療の効果を評価するために、該被験者から分離した生体検体についてパーフォリンの発現レベルを検出、測定または定量する方法を提供する。さらに別の実施形態において、本発明は、パーフォリンの発現レベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法を提供する。
【００３６】
（コンパニオン試薬）
別の態様において、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための、免疫チェックポイント阻害剤を含むコンパニオン試薬を提供する。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示され得る。
【００３７】
免疫チェックポイント阻害剤としてニボルマブがコンパニオン試薬に含まれる実施形態において、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示され得る。特定の実施形態では、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。
【００３８】
免疫チェックポイント阻害剤としてペムブロリズマブがコンパニオン試薬に含まれる実施形態において、ペムブロリズマブを含むコンパニオン試薬であって、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。特定の実施形態では、ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。さらなる実施形態において、ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。
【００３９】
また、血清中パーフォリンタンパク質のレベルを測定し、被験体が非奏効患者であると判断することができ、免疫チェックポイント阻害剤を投与しない、または投与を中断もしくは中止するという判断も行うことができる。
【００４０】
本発明の組成物は、好ましくは医薬組成物であり、その有効成分として含まれる免疫チェックポイント阻害剤としては、例えば、ＰＤ−１阻害剤が挙げられる。ＰＤ−１阻害剤としては、抗ＰＤ−１抗体である、ニボルマブまたはペムブロリズマブが挙げられる。
【００４１】
組成物は、エアゾール、液剤、エキス剤、エリキシル剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、軟膏、散剤、錠剤、溶液、懸濁液、エマルジョン等の任意の剤形に製剤化することができる。組成物は、当技術分野で公知の任意の薬学的に許容される添加物および／または賦形剤を含んでよい。
【００４２】
本発明の組成物は、当業者によって決定される任意の適切な経路によって投与することができ、限定されるものではないが、静脈注射、点滴、経口、非経口、経皮などを挙げることができる。
【００４３】
本発明（診断剤、キット、方法、コンパニオン試薬等）のいくつかの実施形態において、使用され得る試料は、痰、血液、羊水、血漿、血清、精液、唾液、骨髄、尿、腹水、および胸水等が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、血清試料が使用され得る。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態において、測定されるパーフォリンの発現レベルは、前記試料中のタンパク質の発現レベルである。特定の実施形態において、測定されるパーフォリンの発現レベルは、血清試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルであり得る。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態において、使用され得る免疫チェックポイント阻害剤は、小分子化合物、抗体、タンパク質、ペプチド、核酸等挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体であり、好ましくは、ニボルマブまたはペムブロリズマブである。免疫チェックポイント阻害剤の投与回数および投与量は、当業者であれば、毒性、有効性等を考慮して適切に設定することができる。免疫チェックポイント阻害剤の製造者の指示に従ってもよい。典型的には、オプジーボ（登録商標）（ニボルマブ）が投与される場合、2週間毎、3mg/kgの製剤を静脈投
与され、キイトルーダ（登録商標）（ペムブロリズマブ）が投与される場合、3週間毎、200ｍｇの製剤を静脈投与され得る。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示され得る。上記発現レベルを満たしている限り、発現レベルの上限は特に限定されるものではないが、発現レベルの上限は典型的には約１５０００ｐｇである。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態において、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇ、約５１００ｐｇ〜約５９００ｐｇ、約５２００ｐｇ〜約５８００ｐｇ、約５３００ｐｇ〜約５７００ｐｇ、または約５４００ｐｇ〜約５６００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示され得る。本発明の特定の実施形態において、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５５００ｐｇ以上、より好ましくは約５４５０ｐｇ以上である場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示され得る。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態において、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇ、約６１００ｐｇ〜約６９００ｐｇ、約６２００ｐｇ〜約６９５０ｐｇ、約６３００ｐｇ〜約６９００ｐｇ、約６４００ｐｇ〜約６８５０ｐｇ、約６５００ｐｇ〜約６８００ｐｇ、約６５５０ｐｇ〜約６７５０ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示され得る。本発明の特定の実施形態において、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６５００ｐｇ以上、より好ましくは、約６６００ｐｇである場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示され得る。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態において、ニボルマブが投与された患者において、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ、約７０００ｐｇ、約８０００ｐｇ、約９０００ｐｇ、約１００００ｐｇ、約１１０００ｐｇ、または約１２０００ｐｇ以上である場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。さらなる実施形態において、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルよりも少なくとも約１．０５倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．１５倍、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．２５倍、少なくとも約１．３倍、少なくとも約１．４倍、または少なくとも約１．５倍高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。特定の実施形態では、ニボルマブが投与された患者において、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルよりも少なくとも約１．２倍高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。好ましい実施形態において、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であり得る。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態において、ペムブロリズマブが投与された患者において、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降の任意の時点のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降３サイクル目前の任意の時点（投与サイクルが３週間の場合、投与開始１日目〜２２日目）パーフォリンの発現レベルと、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルとが比較され得る。いくつかの実施形態において、ペムブロリズマブが投与された患者において、ペムブロリズマブの投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示され得る。
【００５１】
測定する対象としては、パーフォリンの他に、グランザイムＢ、ＦＡＳリガンド、ＴＮＦα、ＣＤ１３７、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６が挙げられる。
【００５２】
（ＣＤ１３７）
本発明において、免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果の指標として、パーフォリンに代えてＣＤ１３７を使用することができる。ＣＤ１３７のＲｅｆＳｅｑは、代表的に、ＮＭ＿００１５６１（ｍＲＮＡ），ＮＰ＿００１５５２（タンパク質）である。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）投与前の血清中ＣＤ１３７タンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり約１００ｐｇ、約１１０ｐｇ、約１２０ｐｇ、約１３０ｐｇ、約１４０ｐｇ、約１５０ｐｇ以上である場合、被験体は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）による処置に対して応答性であることが示され得る。ＣＤ１３７は、上記任意の実施形態において、パーフォリンに代えて使用され得ることが理解され得る。
【００５３】
本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも１つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「２つの値」の「範囲内」と明記した場合、その範囲には２つの値自体も含む。
【００５４】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
【００５５】
以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供するものではない。したがって、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【００５６】
以下に実施例を記載する。必要な場合、以下の実施例において、全ての実験は、和泉市立病院倫理委員会で承認されたガイドラインに従って実施した。また、文部科学省・厚生労働省・経済産業省作成の「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」（平成26年12月22日26文科振第475号厚生労働省発科1222第1号医政発1222  第1号）の指針にのっとって行った。また、ヒト遺伝子解析研究の倫理指針に準拠した。実験は、徳洲会グループ共同治験審査委員会における審査後、承認のもとに実施した。試薬類は具体的には実施例中に記載した製品(Perforin  ELISA  development  kit,  コスモバイオ社,  MABTECH)を使用したが、他メーカー（Abcam、フナコシ）の同等品でも代用可能である。【００５７】
（実施例１：ニボルマブ投与によるパーフォリン発現の変化）
本実施例では、ニボルマブが投与された非小細胞肺癌を有する患者における血清中のパーフォリンレベルを測定し評価した。【００５８】
（選択基準）
本試験では、以下の基準をすべて満たす患者を対象とした。【００５９】
1)非小細胞肺癌であることが組織診又は細胞診により確認された患者
2)Stage  IIIB/IV期又は再発の非小細胞肺癌と診断された患者
3)ニボルマブ投与予定の患者
4)同意取得時の年齢が20歳以上の患者（性別は問わない）
5)本研究の参加にあたり十分な説明を受けた後、患者本人の自由意思による文書同意が得られた患者
（除外基準）
以下のいずれかに抵触する患者は本研究に組み入れないこととした。【００６０】
1)オプジーボ（登録商標）製剤の成分に対し過敏症の既往歴を有する患者
2)他の免疫チェックポイント阻害剤を投与中の患者
3)研究責任者が研究対象者として不適当と判断した患者【００６１】
（試験方法）
1)ニボルマブ治療
ニボルマブの投与及び副作用の管理については、通常診療として実施した。すなわち、ニボルマブ（遺伝子組み換え）として、1回3mg/kg(体重)を2週間隔で点滴静注した。ニボルマブの投与は、原疾患の進行（Progressive  disease：PD）（もしくは治療中止基準に抵触する）まで継続した。【００６２】
2)血清の採取
初回ニボルマブの投与前（投与1日前から投与直前の間）、投与翌日（Ｄay2）、8日後（Day8）、および15日後（Ｄａｙ15）に血液３mｌをベノジェクトＩＩ（真空採血管）に採取した。転倒混和した容器を常温で5〜10分間静置し、3,500rpm、5分間の遠心分離を行った。1.5mｌの上清（血清）を300μLずつ3本のエッペンドルフチューブ（1.5mｌ程度のもの）に分注し、冷凍保存（-80度以下）した。【００６３】
3)細胞傷害性T細胞活性化酵素測定
市販されている測定キット（Enzyme-Linked  ImmunoSorbent  Assay：ELISA）を用い、グランザイムＢおよびＣＤ１３７については２倍希釈、パーフォリンについては４〜２０倍希釈した血清の細胞傷害性T細胞の活性化酵素を測定した。細胞傷害性T細胞の活性化酵素量と、ニボルマブの肺癌に対する最良総合効果（RECISTガイドライン1.1版に基づく判定）を比較した。【００６４】
（結果）
図１および図２は、それぞれＰＲおよびＰＤと診断されたニボルマブ処置患者の治療前後の代表的なＣＴ画像を示す。以下の表１は、ニボルマブ処置患者の血清中のパーフォリン実測値を示す。【００６５】
【表１】
2019207942.tif 000002
【００６６】
単位は、ｐｇ／ｍｌである。ｐａｔｉｅｎｔ  ９、１５、２８および２９は３ヶ月以内に死亡し症例である。ｐａｔｉｅｎｔ  １３および１５は、それぞれ皮疹および肝炎に起因してパーフォリン濃度の急な上昇が生じたと推測される。ｄａｙ１は、投与１日前から投与直前の間を意味する。【００６７】
図５は、ニボルマブ投与前のパーフォリン血清中濃度の分布を示す。ＰＲ患者は、ニボルマブ投与前のパーフォリンの血清中濃度が比較的高い傾向が見られた。ほとんどがＰＤ患者では、投与前のパーフォリンの血清中濃度が９０００ｐｇ／ｍｌ以下であったのに対し、ＰＲ患者では、５例中３例が、９０００ｐｇ／ｍｌ以上であった。図６および図７は、ニボルマブ投与中のパーフォリンの血清中濃度の推移を示す。図８は、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリン濃度の投与前に対する比の分布を示す。ＰＲの２例は、２日目にパーフォリンの上昇（投与前と比べて約１．２倍以上）が確認され、その後低下傾向が見られた。ｐａｔｉｅｎｔ  １８は、投与前のパーフォリンの血清中濃度が９０００ｐｇ／ｍｌ以下であったが、２日目のパーフォリン血清中濃度が投与前よりも約１．３倍となっていた。ＳＤおよびＰＤ患者においては、２日目のパーフォリン血清中濃度が、投与前より１．２倍となったのは、１９症例中わずか４例であり、そのうち１例は皮疹による急上昇と推測される。【００６８】
以上より、ニボルマブが投与された患者のうちＰＲと判断された患者は、ｐａｔｉｅｎｔ  １６を除き、以下の基準に該当した。
（１）投与前のパーフォリン血清中濃度が、約９０００ｐｇ／ｍｌ以上である。
（２）投与開始２日目のパーフォリン濃度の投与前に対する比が約１．２以上である。【００６９】
ｐａｔｉｅｎｔ  １６は、初めはＳＤと診断され、のちにＰＲに変更となった症例である。【００７０】
（実施例２：ペムブロリズマブ投与によるパーフォリン発現の変化）
（選択基準）
本試験では、以下の基準をすべて満たす患者を対象とした。【００７１】
1)非小細胞肺癌であることが組織診又は細胞診により確認された患者
2)Stage  IIIB/IV期又は再発の非小細胞肺癌と診断された患者
3)非小細胞肺癌の組織で、PD-L1の発現が陽性と診断された方
4)ペムブロリズマブ投与予定の患者
5)同意取得時の年齢が20歳以上の患者（性別は問わない）
6)本研究の参加にあたり十分な説明を受けた後、患者本人の自由意思による文書同意が得られた患者【００７２】
（除外基準）
以下のいずれかに抵触する患者は本研究に組み入れないこととした。【００７３】
1)キイトルーダ（登録商標）製剤の成分に対し過敏症の既往歴を有する患者
2)他の免疫チェックポイント阻害剤を投薬中の患者
3)研究責任者が研究対象者として不適当と判断した患者
（試験方法）
1)ペムブロリズマブ治療
ペムブロリズマブの投与及び副作用の管理については、通常診療として実施した。すなわち、ペムブロリズマブ（遺伝子組み換え）として、1回200mgを3週間隔で点滴静注した。ペムブロリズマブの投与は、原疾患の進行（Progressive  disease：PD）（もしくは治療中止基準に抵触する）まで継続した。【００７４】
2)血清の採取
初回ペムブロリズマブの投与前（投与1日前から投与直前の間）、投与翌日（Day2）、8日後（Day8）、15日後(Day15)、22日後（Day22）に血液3mLをベノジェクトＩＩ（真空採血管）に採取した。転倒混和した容器を常温で5〜10分間静置し、3,500rpm、5分間の遠心分離を行った。1.5mLの上清（血清）を330μLずつ3本のエッペンドルフチューブ（1.5mL程度のもの）に分注し、冷凍保存（-80度以下）した。【００７５】
3)細胞傷害性T細胞活性化酵素測定
市販されている測定キット（Enzyme-Linked  ImmunoSorbent  Assay：ELISA）を用い、グランザイムＢおよびＣＤ１３７については２倍希釈、パーフォリンについては４〜２０倍希釈した血清の細胞傷害性T細胞の活性化酵素を測定した。細胞傷害性T細胞の活性化酵素量と、ペムブロリズマブの肺癌に対する最良総合効果（RECISTガイドライン1.1版に基づく判定）を比較した。【００７６】
（結果）
図３および図４は、それぞれＰＲおよびＰＤと診断されたペムブロリズマブ処置患者の治療前後の代表的なＣＴ画像を示す。以下の表２は、ペムブロリズマブ処置患者の血清中のパーフォリン実測値を示す。【００７７】
【表２】
2019207942.tif 000003
【００７８】
単位は、ｐｇ／ｍｌである。ｐａｔｉｅｎｔ  ２、１０および１１は３ヶ月以内に死亡し症例である。ｐａｔｉｅｎｔ  １７は、シュードプログレッションが認められた。ｄａｙ１は、投与１日前から投与直前の間を意味する。【００７９】
図９は、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリン血清中濃度の分布を示す。投与前のパーフォリン血清中濃度は、ＰＲ、ＳＤ、ＰＤの間で大きな差はみられなかった。図１０および図１１は、ペムブロリズマブ投与中のパーフォリンの血清中濃度の推移を示す。ＰＲ処置患者では、投与中、パーフォリンの血清中濃度の増加傾向が認められる。特に、図１２に示されるように、ペムブロリズマブの２サイクル目開始直後（投与開始２２日目）のパーフォリンの血清中濃度の投与前に対する比の分布に示されるように、ＰＲ処置患者において、シュードプログレッションが認められた患者（ｐａｔｉｅｎｔ  １７）を除き、投与開始２２日目のパーフォリンの血清中濃度の投与前に対する比が約１．２以上となっていた。他方、ＳＤおよびＰＤ処置患者では、投与開始２２日目のパーフォリンの血清中濃度の投与前に対する比が約１．２以上となった症例は認められなかった。【００８０】
以上より、ペムブロリズマブが投与された患者のうちＰＲと判断された患者は、シュードプログレッションが認められた患者（ｐａｔｉｅｎｔ  １７）を除き、投与開始２２日目のパーフォリンの血清中濃度の投与前に対する比が約１．２以上という基準に該当した。【００８１】
（実施例３：ＣＤ１３７の測定）
実施例１および２において採取した血液試料を用いて、ＣＤ１３７の血清中濃度を測定した。測定は、フィルジェン株式会社に依頼し、Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）  Ａｓｓａｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｍｉｘｅｄ  Ｍｕｌｔｉ−Ａｎａｌｙｔｅ  Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．，  ｃａｔ．＃  ＬＸＳＡＨＭ−１０）またはＲａｙＢｉｏ（Ｒ）Ｈｕｍａｎ  ＴＮＦＲＳＦ９  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ  （ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ，  ＃ＥＬＨ−ＴＮＦＲＳＦ９）を使用して測定された。【００８２】
結果を図１３および図１４に示す。図１３は、ニボルマブ処置患者（ＰＲ、ＳＤおよびＰＤ）のＣＤ１３７の血清中濃度の推移を示し、図１４は、ペムブロリズマブ処置患者（ＰＲおよびＰＤ）のＣＤ１３７の血清中濃度の推移を示す。ＰＲ患者における投与前のＣＤ１３７の血清中濃度は、ＰＤ患者よりも高い傾向が認められる。すべてのＰＲ患者における投与前のＣＤ１３７の血清中濃度は、１１０ｐｇ／ｍｌ以上であったのに対し、すべてのＰＤ患者における投与前のＣＤ１３７の血清中濃度は、１１０ｐｇ／ｍｌ以下であった。
（実施例４：統計解析）
本実施例では、実施例１および２において試験した血液試料に、ニボルマブ投与患者１１名およびペムブロリズマブ９名の血液試料をさらに加えて、合計ニボルマブ投与患者４０名およびペムブロリズマブ２７名の血液試料を測定した。【００８３】
血液試料の測定は、パーフォリンおよびＣＤ１３７についてはＥＬＩＳＡ、その他についてはＦｉｌｇｅｎ社に委託しＭａｇｎｅｔｉｃ  Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）  Ａｓｓａｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｍｉｘｅｄ  Ｍｕｌｔｉ−Ａｎａｌｙｔｅ  Ｋｉｔにより行った。さらに、測定結果について詳細に統計解析を行った。統計解析は株式会社ダイナコムに委託して行った。以下の変数について解析を行った。【００８４】
（ペムブロリズマブの変数）
"patient"：症例番号
"age"：年齢
"sex"：性別（０＝男性、１＝女性）
"histotype"：組織型（０＝腺癌、１＝扁平上皮癌、２＝それ以外）
"smoking"：喫煙歴（０＝無、１＝有）
"previous.treatment"：前治療歴（０＝無、１＝有）
"PD.L1.expression"：ＰＤ−Ｌ１発現（０＝５０％未満、１＝５０％以上）
"EGFR.mutation"：ＥＧＦＲ変異（０＝無、１＝有）
"ALK.fusion"：ＡＬＫ融合遺伝子（０＝無、１＝有）
"treatment..times."：治療回数（２０１８年７月３１日までに何度治療したか）
"adverse.effects1"：副作用（０＝無、１＝グレード１および２、２＝グレード３および４）
"adverse.effects2"：副作用（０＝無、１＝有）
"pseudo.progression"：シュードプログレッション（０＝無、１＝有）
"best.response..BR."：最大効果（０＝ＰＲ、１＝ＳＤ、２＝ＰＤ）
"BR.days"：最大効果判定日
"event.PFS"：無増悪生存期間
"PFS.days"：ＰＦＳ判定日
"event.OS"：全生存期間
"OS.days"：ＯＳ判定日
"p"：２２日目のパーフォリン値／１日目のパーフォリン値（０＝１．２未満、１＝１．２以上；症例11，23、day22検体なし）
"p.2"：２２日目のパーフォリン値／１日目のパーフォリン値（０＝１．２未満、１＝１．２以上；NA=検体無し、または、3ヶ月未満で死亡、PDのため1回投与のみ）
"p.3"：２２日目のパーフォリン値／１日目のパーフォリン値（０＝１．３未満、１＝１．３以上；症例11，23、day22検体なし）
"p.4"：２２日目のパーフォリン値／１日目のパーフォリン値（０＝１．３未満、１＝１．３以上；NA=検体無し、または、3ヶ月未満で死亡、PDのため1回投与のみ）
"ILD"：間質性肺炎（０＝無、１＝有）
"CEA1"：CEA値（投与前）
"CEA2"：CEA値（投与後3か月）
"SCC1"：SCC値（投与前）
"SCC2"：SCC値（投与後3か月）
"CYFRA1"：CYFRA値（投与前）
"CYFRA2"：CYFRA値（投与後3か月）
"temp.1"：体温（投与前）
"temp.2"：体温（投与後1日以内）
"CRP.1"：CRP値（投与前）
"CRP.2"：CRP値（投与後3週間）
"LDH.1"：LDH値（投与前）
"LDH.2"：LDH値（投与後3週間）
"KL.6.1"：KL-6値（投与前）
"KL.6.2"：KL-6値（投与後3週間）
"p.day1"：perforin値(day1)
"p.day2"：perforin値(day2)
"p.day8"：perforin値(day8)
"p.day15"：perforin値(day15)
"p.day22"：perforin値(day22)
"cd.day1"：CD137値(day1)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day2"：CD137値(day2)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day8"：CD137値(day8)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day15"：CD137値(day15)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day22"：CD137値(day22)ELISAで測定した検体のみ
"cd.l.day1"：CD137値(day1)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day2"：CD137値(day2)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day8"：CD137値(day8)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day15"：CD137値(day15)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day22"：CD137値(day22)Luminex  assayで測定した検体を含める
"BR"：最大効果（０＝ＰＲ、１＝ＳＤ+ＰＤ）
"p.day2.1"：perforin  day2/day1比  (p.day2/p.day1)
"p.day8.1"：perforin  day8/day1比  (p.day8/p.day1)
"p.day15.1"：perforin  day15/day1比  (p.day15/p.day1)
"p.day22.1"：perforin  day22/day1比  (p.day22/p.day1)
"cd.day2.1"：CD137  day2/day1比(cd.day2/cd.day1)
"cd.day8.1"：CD137  day8/day1比(cd.day8/cd.day1)
"cd.day15.1"：CD137  day15/day1比(cd.day15/cd.day1)
"cd.day22.1"：CD137  day22/day1比(cd.day22/cd.day1)
"cd.l.day2.1"：CD137  day2/day1比(cd.l.day2/cd.l.day1)
"cd.l.day8.1"：CD137  day8/day1比(cd.l.day8/cd.l.day1)
"cd.l.day15.1"：CD137  day15/day1比(cd.l.day15/cd.l.day1)
"cd.l.day22.1"：CD137  day22/day1比(cd.l.day22/cd.l.day1)
"temp"：体温の投与前後差(temp.2-temp.1)
"CRP"：CRPの投与前後比(CRP.2/CRP.1)
"LDH"：LDHの投与前後比(LDH.2/LDH.1)
"KL.6"：KL.6の投与前後比(KL.6.2/KL.6.1)
"CEA"：CEAの投与前後比(CEA.2/CEA.1)
"SCC"：SCCの投与前後比(SCC.2/SCC.1)
"CYFRA"：CYFRAの投与前後比(CYFRA.2/CYFRA.1)【００８５】
（ニボルマブの変数）
"patient"：症例番号
"age"：年齢
"sex"：性別（０＝男性、１＝女性）
"histotype"：組織型（０＝腺癌、１＝扁平上皮癌、２＝それ以外）
"smoking"：喫煙歴（０＝無、１＝有）
"previous.treatment"：前治療歴（０＝無、１＝有）
"PD.L1.expression"：ＰＤ−Ｌ１発現（０＝５０％未満、１＝５０％以上）
"EGFR.mutation"：ＥＧＦＲ変異（０＝無、１＝有）
"ALK.fusion"：ＡＬＫ融合遺伝子（０＝無、１＝有）
"treatment..times."：治療回数（２０１８年７月３１日までに何度治療したか）
"adverse.effects1"：副作用（０＝無、１＝グレード１および２、２＝グレード３および４）
"adverse.effects2"：副作用（０＝無、１＝有）
"pseudo.progression"：シュードプログレッション（０＝無、１＝有）
"best.response..BR."：最大効果（０＝ＰＲ、１＝ＳＤ、２＝ＰＤ）
"BR.days"：最大効果判定日
"event.PFS"：無増悪生存期間
"PFS.days"：ＰＦＳ判定日
"event.OS"：全生存期間
"OS.days"：ＯＳ判定日
"ILD"：間質性肺炎（０＝無、１＝有）"CEA1"：CEA値（投与前）
"CEA2"：CEA値（投与後3か月）
"SCC1"：SCC値（投与前）
"SCC2"：SCC値（投与後3か月）
"CYFRA1"：CYFRA値（投与前）
"CYFRA2"：CYFRA値（投与後3か月）
"temp.1"：体温（投与前）
"temp.2"：体温（投与後2日以内）
"CRP.1"：CRP値（投与前）
"CRP.2"：CRP値（投与後15日）
"LDH.1"：LDH値（投与前）
"LDH.2"：LDH値（投与後15日）
"KL.6.1"：KL-6値（投与前）
"KL.6.2"：KL-6値（投与後15日）
"p.day1"：perforin値(day1)
"p.day2"：perforin値(day2)
"p.day8"：perforin値(day8)
"p.day15"：perforin値(day15)
"cd.day1"：CD137値(day1)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day2"：CD137値(day2)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day8"：CD137値(day8)ELISAで測定した検体のみ
"cd.day15"：CD137値(day15)ELISAで測定した検体のみ
"cd.l.day1"：CD137値(day1)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day2"：CD137値(day2)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day8"：CD137値(day8)Luminex  assayで測定した検体を含める
"cd.l.day15"：CD137値(day15)Luminex  assayで測定した検体を含める
"BR"：最大効果（０＝ＰＲ、１＝ＳＤ+ＰＤ）
"p.day2.1"：perforin  day2/day1比  (p.day2/p.day1)
"p.day8.1"：perforin  day8/day1比  (p.day8/p.day1)
"p.day15.1"：perforin  day15/day1比  (p.day15/p.day1)
"cd.day2.1"：CD137  day2/day1比(cd.day2/cd.day1)
"cd.day8.1"：CD137  day8/day1比(cd.day8/cd.day1)
"cd.day15.1"：CD137  day15/day1比(cd.day15/cd.day1)
"cd.l.day2.1"：CD137  day2/day1比(cd.l.day2/cd.l.day1)
"cd.l.day8.1"：CD137  day8/day1比(cd.l.day8/cd.l.day1)
"cd.l.day15.1"：CD137  day15/day1比(cd.l.day15/cd.l.day1)
"temp"：体温の投与前後差(temp.2-temp.1)
"CRP"：CRPの投与前後比(CRP.2/CRP.1)
"LDH"：LDHの投与前後比(LDH.2/LDH.1)
"KL.6"：KL.6の投与前後比(KL.6.2/KL.6.1)
"CEA"：CEAの投与前後比(CEA.2/CEA.1)
"SCC"：SCCの投与前後比(SCC.2/SCC.1)
"CYFRA"：CYFRAの投与前後比(CYFRA.2/CYFRA.1)
"p"：perforin  day2/day1比(0=1.2未満、1=1.2以上)
"p.10ng"perforin値(day1)(0=10ng/ml未満、1=10ng/ml以上)【００８６】
以下の変数はLog10対数変換を行った：
CEA1,CEA2,SCC1,SCC2,CYFRA1,CYFRA2,CRP.1,CRP.2,LDH.1,LDH.2,KL.6.1,KL.6.2,p.day1,p.day2,p.day8,p.day15,p.day22,p.day2.1,p.day8.1,p.day15.1,p.day22.1,cd.day1,cd.day2,cd.day8,cd.day15,cd.day22,cd.day2.1,cd.day8.1,cd.day15.1,cd.day22.1,cd.l.day1,cd.l.day2,cd.l.day8,cd.l.day15,cd.l.day22,cd.l.day2.1,cd.l.day8.1,cd.l.day15.1,cd.l.day22.1,CRP,LDH,KL.6,CEA,SCC,CYFRA。【００８７】
（用語解説）
ロジスティック回帰分析
２値の目的変数（例：生存と死亡、病気の発症の有無などのイベント）に対し、その確率を予測するための統計モデルを構築する手法。オッズ比は各因子の目的変数への影響を表し、１より大きい場合はイベントが起こるリスクを高め、１より小さい場合はリスクを低くすることを表す。【００８８】
Ｃｏｘ回帰分析
生存時間を説明する統計モデル（Ｃｏｘの比例ハザードモデル）を構築する手法。ロジスティック回帰分析と似た手法であるが、ロジスティック回帰分析が観察終了時点の状態だけを扱うのに対し、Ｃｏｘ回帰分析は２値の変数に加えて期間を考慮した手法である。ハザード比もオッズ比と同様、イベント発生のリスクの指標になる。【００８９】
ＭＩＣＥ法：Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  Ｉｍｐｕｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｈａｉｎｅｄ  Ｅｑｕａｔｉｏｎｓ
ＭＩＣＥ法では、以下のような処理を行って欠測値の推定を行っている。はじめに連続的な量であれば平均値、カテゴリーデータであれば最頻値を求めて、仮のデータとして代入する。この状態では精度が悪いかもしれないが、すべての数値が埋め込まれた状態になる。ここから繰り返し処理で、欠測値が収束するまで、次のような処理を指定回数だけ行う。もともと欠測値だったセル一つを選び、そのカラムを目的変数として、それ以外のカラムを説明変数に見立て、線形予測（カテゴリーデータの場合は多項ロジスティック回帰など）を行い、前の値を更新する。次の欠測値の位置に着目して同様に再度予測を行い、その値を更新する。これを順番に欠測値に対して繰り返し行い、一定の安定性が出るまで繰り返して補完を行う方法である。【００９０】
ＬＡＳＳＯ
統計モデルを構築する手法の一つ。
・説明変数がサンプル数より多くても計算できる。
・説明変数を選択しつつ、その回帰係数を得ることができる。
・代表となる説明変数を自動的に選択してくれるので、多重共線性の問題（説明変数同士の相関が高いときに解が求まらないこと）が発生しない。
といった特徴が挙げられる。【００９１】
ＬＡＳＳＯは代表となる説明変数を選択するため、できるだけ少ない説明変数でモデルを構築したい場合に適している。また、ＬＡＳＳＯはパラメーターαを変更することによりＥｌａｓｔｉｃ  Ｎｅｔとして機能させることができる。Ｅｌａｓｔｉｃ  Ｎｅｔでは相関の高い変数をほぼ同時に選択するため、関連する代替可能な説明変数も含めて拾い上げたい場合に適している。【００９２】
Ｌｅａｖｅ−ｏｎｅ−ｏｕｔ  ｃｒｏｓｓ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ
いくつものモデルを作製したときに、どのモデルが最適であったのかを検討する際に使用する解析方法。全サンプルから１つのサンプルを除き、残りのサンプルでモデルを作製したときに、あらかじめ抜いていたサンプルを正確に予測することができるかを検定する。【００９３】
ＬＡＳＳＯの場合では、パラメーターλを振ることでモデルに採用される説明変数の数が変化する。その中から最適なモデルを選択する基準として、以下の２つの基準がよく用いられる。
・λｍｉｎ：  予測残差の平均値が最小となる位置
・λｍｉｎ＋１ＳＥ：  λｍｉｎより標準誤差分だけ予測残差が大きくなる位置（ｓｉｍｐｌｅｓｔ  ｍｏｄｅｌ）【００９４】
ダミー変数
カテゴリ型のデータを０または１で表現し直した変数。
今回のケースでは、例えば組織型（ｈｉｓｔｏｔｙｐｅ）は腺、扁平上皮、その他（数値なら０，１，２）のいずれかの値をとる変数だが、これを以下の表のように表現する。例えばｈｉｓｔ０の場合、ｈｉｓｔｏｔｙｐｅが０の症例は１、０以外の場合は０、というように変換している。
【表３】
2019207942.tif 000004
【００９５】
１  単変量解析
１．１  データ前処理
治療前後のデータがある変数に関しては、比を計算した。いくつかの変数では上側に裾が伸びた分布をしており、正規分布に近づけるため対数変換を行った。【００９６】
観察中に転院した症例に関しては、生存のまま観察終了とするため、ｅｖｅｎｔ．ＯＳの値を０に修正した。死因不明の変死の症例に関しては、生存時間解析の対象から除外した。【００９７】
１．２  ヒストグラム
Ｂｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅをＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤに分類し、ヒストグラムを描画した。【００９８】
１．３  分布の確認（先生の以前の解析を再現）
ｐｅｒｆｏｒｉｎのｄａｙ１の濃度、ｐｅｒｆｏｒｉｎの比、ＣＤ１３７のｄａｙ１の濃度をそれぞれＢｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅのカテゴリごとにプロットし、分布を確認した。実施例１および２における症例のみの場合と、本実施例における新しい症例を加えた場合でそれぞれ確認した。また、３か月未満で死亡の症例を除いた場合と除かない場合でそれぞれ確認を行った。
結果、実施例１〜３の結果と同様の分布が見られた。また、新しい症例を加えた場合と加えない場合とでほぼ同様の傾向が見られたため、以降の解析はすべて新しい症例を含めて行った。【００９９】
１．４  ログ・ランク検定
データをｐｅｒｆｏｒｉｎ比やｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｂａｓｅｌｉｎｅ値で２群に分けてＰＦＳ、ＯＳそれぞれで生存曲線を描画し、ログ・ランク検定を用いて群間で生存関数に差があるかどうか解析した。【０１００】
カットオフ値は、実施例１および２に基づき、Ｂｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ（ＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤ）を分ける解析で用いていたカットオフ値（ｐｅｒｆｏｒｉｎ比１．２、ｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｂａｓｅｌｉｎｅ値１０  ｎｇ／ｍｌ）で行った。また、３か月未満で死亡の症例を除いた場合と除かない場合でそれぞれ確認を行った。【０１０１】
その結果、２群間で生存時間の差は見られなかった。ここで用いたカットオフ値はＢｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅを分類するために設定されたものであり、生存時間の判定には適していない可能性がある。
１．５  単変量Ｃｏｘ回帰
続いて各変数がＰＦＳあるいはＯＳにどのように寄与するかを調べるため、単変量Ｃｏｘ回帰分析を行った。【０１０２】
表中のＣｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔは推定された予測式の係数であり、値が正の場合はその変数が生存期間を短くする方向に、負の場合は生存期間を長くする方向に働くことを示す。予測式は、「Ｃｏｘの比例ハザードモデル」と呼ばれる、死亡確率を予測するための数式を指す。Ｃｏｘの比例ハザードモデルは以下のような形式で表される。
λ（ｔ，Ｘ）＝λ０（ｔ）ｅｘｐ（β１ｘ１＋…＋βｎｘｎ）
式中、λ（ｔ，Ｘ）は、時刻ｔにおける死亡確率を表し、
Ｘ＝ｘ１，…，ｘｎは各説明変数の計測値を表し、
β１，…，βｎはＣｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓを表す。【０１０３】
ハザード比はイベント発生（ここでは増悪や死亡）のリスクの指標となる数値であり、１より大きい場合は生存時間を短く、１より小さい場合は生存時間を長くすることを表す。ハザード比の９５％信頼区間が１をまたぐ場合は、その変数がどちらの方向にも寄与しないことになるが、反対に１をまたがない場合はリスクを大きく、あるいは小さくする方向に影響しているといえる。【０１０４】
ワルド検定は回帰係数が０でないかどうか（すなわち、その変数が生存時間に寄与しているかどうか）を調べる検定であり、以下に示す表にそのＰ値を示した。３か月未満で死亡の症例を除いた場合と除かない場合でそれぞれ確認を行った。【０１０５】
全症例での解析では、ｐｅｒｆｏｒｉｎ測定値を含むいくつかの変数でワルド検定Ｐ値が有意水準０．０５を下回っており、有意に生存時間に寄与する因子が見つかっている（表４および表５）。一方、３か月未満で死亡の症例を除いた場合では、全症例の場合に比べ有意な変数が少なくなっている。これについては早くに死亡する症例を除いたことにより、データが均質化しすぎてしまい、死亡のリスクを高める要因の情報が失われたと考えられる。【０１０６】
２  多変量解析
２．１  データ前処理
単変量解析と同様に、対数変換を行い、観察中に転院した症例のｅｖｅｎｔ．ＯＳの値を０に修正した。変死の症例に関しては、生存時間解析の対象から除外した。【０１０７】
欠測値補完はＭＩＣＥ法により行う。まず目的変数が欠測の症例を除外し、半数以上が欠測の変数、値が１種類しかない変数を除外した。解析の目的に合わせて解析対象とする変数、症例だけを含むデータセットを作成し、それぞれに対してＭＩＣＥ法を適用して欠測値補完を行った。【０１０８】
欠測値補完後、カテゴリ変数のうち、最も頻度が少ない値が１０％に満たない変数は以降の解析から除外した。値が３種類以上のカテゴリ変数はダミー変数化した。【０１０９】
治療開始前後のデータがある場合は、比を計算して変数を追加した。
【表４】
2019207942.tif 000005
【表５】
2019207942.tif 000006
【０１１０】
２．２  多変量Ｃｏｘ回帰（一回投与時点のデータ）
一回投与時点（治療開始後、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂでは２２日以内、ｎｉｖｏｌｕｍａｂでは１５日以内）のデータを用いてＰＦＳ、ＯＳそれぞれを目的変数とした多変量Ｃｏｘ回帰を行い、生存時間に寄与する変数の組み合わせを探索した。Ｅｌａｓｔｉｃ  ｎｅｔとＬＡＳＳＯを用い、生存時間に強く寄与する変数を選択した。過剰適合を防ぐため、Ｌｅａｖｅ−ｏｎｅ−ｏｕｔ  ｃｒｏｓｓ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎによって最適な変数の組み合わせを決定した。今回はできるだけ汎用性の高いモデルを構築するため、ＬＡＳＳＯで選択された変数の組み合わせを用いて回帰モデルを作成した。単変量解析と同様に、それぞれの変数の回帰係数、ハザード比と９５％信頼区間、ワルド検定Ｐ値を示した。作成したモデルを用い、３か月、６か月、１２か月時点での生存率を予測するためのノモグラムを作成した。さらに、作成したモデルに全症例のデータを適用して予測値を算出し、その予測値が全員の予測値の中央値を超えるかどうかで高リスク群、低リスク群に分けた。リスク群別の生存曲線を示し、群間で生存時間に差があるかどうか調べるためにログ・ランク検定を行った。【０１１１】
ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂのＰＦＳについての多変量Ｃｏｘ回帰では、選択された変数にｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ２／ｄａｙ１比、ｄａｙ８／ｄａｙ１比およびｄａｙ２２測定値が含まれていた。ｄａｙ２／ｄａｙ１比が増加するにつれて増悪のリスクを高める方向に、ｄａｙ２２測定値は増加するにつれて増悪のリスクを減らす方向に影響していることが確認された（表６）。ここで、表６のｓｍｏｋｉｎｇに注目すると、ハザード比が１を下回るので、喫煙によって増悪のリスクが低下するという結果になっている。この結果に関しては、非喫煙者が非常に少なく（２７例中３例）、非喫煙者の予後が悪い方に偏っていたためだと考えられ、予後予測因子に含めるかどうかについては検討の余地がある。ｓｍｏｋｉｎｇに限らずほかの変数でも、予測因子として採用する意味があるかどうか検討する必要がある。【０１１２】
一方、ＯＳについての多変量Ｃｏｘ回帰ではｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ８／ｄａｙ１比が選択され、死亡のリスクを高める方向に影響することがわかった（表７）。ｎｉｖｏｌｕｍａｂのＰＦＳの多変量Ｃｏｘ回帰では、ｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１測定値が選択されたが、有意ではなかった。またＯＳ（５．２．２）ではｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ２測定値、ｄａｙ２／ｄａｙ１比、ｄａｙ８／ｄａｙ１比を含むモデルが作成できたが、いずれの変数も有意ではなかった。
【表６】
2019207942.tif 000007
【表７】
2019207942.tif 000008
【０１１３】
さらに３か月未満で死亡の症例を除くことが妥当であるかどうか確かめた。【０１１４】
まず、ＯＳを予測するための以下のＬＡＳＳＯのｌａｍｂｄａ．ｍｉｎモデルの予測式にすべての症例のデータを適用し、予測値を算出した。続いて３か月未満で死亡の症例がすべて入るようにこの予測値のカットオフを設定し、カットオフを超えた症例をＧｒｏｕｐ１と定義した。ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂでは５症例（５症例すべて３か月未満で死亡の症例）、ｎｉｖｏｌｕｍａｂでは８症例（うち７症例が３か月未満で死亡）がＧｒｏｕｐ１として分類された。【０１１５】
２．３  多変量Ｃｏｘ回帰（一回投与時点のデータ、Ｇｒｏｕｐ１を除く）
上記の解析により、３か月未満で死亡の症例を一つのリスク群として予測可能であることを示した。続いて、Ｇｒｏｕｐ１を除いたデータセットを用いて多変量でのＣｏｘ回帰分析を行った。上記の解析と同様にＥｌａｓｔｉｃ  ｎｅｔとＬＡＳＳＯで変数選択を行い、Ｌｅａｖｅ−ｏｎｅ−ｏｕｔ  ｃｒｏｓｓ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎにより最適な変数の組み合わせを決定し、回帰モデルを作成した。それぞれの変数の回帰係数、ハザード比と９５％信頼区間、ワルド検定Ｐ値を示した。【０１１６】
作成したモデルを用い、３か月、６か月、１２か月時点での生存率を予測するためのノモグラムを作成した。またモデルの予測値を用いて高リスク群、低リスク群に分け、生存曲線を示し、ログ・ランク検定を行った。【０１１７】
ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂでは、ＰＦＳ、ＯＳともにモデルは作成できなかった。この原因については、死亡のリスクが高いＧｒｏｕｐ１を除いたことによって、リスクの程度が似たような症例ばかりになってしまい、リスクを引き上げる要因が何なのかという情報が失われたか、あるいは症例数が不足していたためだと考えられる。一方、ｎｉｖｏｌｕｍａｂの場合、ＰＦＳのモデルでは、ｐｅｒｆｏｒｉｎの変数は選択されなかった。ＯＳのモデルではｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１測定値が１０ｎｇ／ｍｌ以上であるかどうかの変数（ｐ．１０ｎｇ）が選択されたが、有意ではなかった。よって、生存時間解析では高リスク群（Ｇｒｏｕｐ１）を除いてもモデルを改善することはできなかった。
２．４  ロジスティック回帰【０１１８】
治療開始当日、あるいは一回投与時点でのデータを用いてＢｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ（ＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤ）を予測する解析を試みた。Ｅｌａｓｔｉｃ  ｎｅｔとＬＡＳＳＯで変数選択を行い、Ｌｅａｖｅ−ｏｎｅ−ｏｕｔ  ｃｒｏｓｓ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎにより最適な変数の組み合わせを決定し、回帰モデルを作成した。一時治療のデータを用いる場合、Ｇｒｏｕｐ１を除く場合と除かない場合でそれぞれモデルを作成した。それぞれの変数の回帰係数、オッズ比と９５％信頼区間、ワルド検定Ｐ値を示した。【０１１９】
作成したモデルを用い、ＳＤまたはＰＤになる可能性を予測するためのノモグラムを作成した。また作成したモデルのＲＯＣ曲線を示した。ＡＵＣは０．５〜１の範囲をとり、１に近いほど判別性能が高いことを表す指標値である。
ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂでは、全症例のデータを用いるとｐｅｒｆｏｒｉｎの変数は選択されなかった。治療開始当日と一回投与時点で共通して、前治療歴とＬＤＨ関連の変数がリスクを高める因子として選択された。一回投与時点のデータでＧｒｏｕｐ１を除くと、前治療歴とＬＤＨに加え、ｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ２２／ｄａｙ１比が選択されたが有意ではなかった（表８）。このモデルのＡＵＣは０．９４５と高かった。【０１２０】
ｎｉｖｏｌｕｍａｂでは全症例を用いた解析では変数が選択されず、モデルを構築できなかった。一回投与時点のデータでＧｒｏｕｐ１を除く場合、ＥＧＦＲ  ｍｕｔａｔｉｏｎとともにｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１５／ｄａｙ１比が選択されたが、有意ではなかった（表９）。このモデルのＡＵＣは０．７９１であった。
【表８】
2019207942.tif 000009
【表９】
2019207942.tif 000010
【０１２１】
３  最適カットオフ値（単変量解析）
最後にｐｅｒｆｏｒｉｎの測定値を用いてＢｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅを判別するカットオフ値の解析を試みた。本来はカットオフ値の算出と性能評価を別のデータセットで行うが、今回は症例数が少ないためカットオフ値の算出と性能評価に同じデータを用いている。そのため、過剰適合の可能性があることに留意する。【０１２２】
３．１  最適カットオフ値（ＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤ）
ｐｅｒｆｏｒｉｎのｄａｙ  ｘ／ｄａｙ１比でＢｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅのＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤの２群を判別するための最適カットオフ値を求めた。カテゴリ別のボックスプロットと、判定に用いたＲＯＣ曲線とＡＵＣを示した。またカットオフ値で２群に分けた生存曲線をＰＦＳ、ＯＳでそれぞれ描画し、ログ・ランク検定を行った。さらに単変量Ｃｏｘ回帰分析を行い、ハザード比と９５％信頼区間、ワルド検定Ｐ値を求めた。【０１２３】
まずＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤに分けた場合、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂでは全症例の場合、Ｇｒｏｕｐ１を除いた場合ともにｄａｙ２２／ｄａｙ１比でＡＵＣが０．７を超えており、最も高かった。カットオフ値は１．１８５で、実施例２における１．２と近い値となった（図１５Ａ〜図１５Ｃ、表１０）。ただし、このカットオフ値を用いたログ・ランク検定とＣｏｘ回帰の結果は有意ではないため、このカットオフ値はＢｅｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅの判別には適しているが、生存時間の判別には適していない可能性がある。一方、ｎｉｖｏｌｕｍａｂではｄａｙ１５／ｄａｙ１比でＡＵＣが最も高かったが、０．６程度と判別性能は十分とはいえなかった（表１１）。またこのカットオフ値以下の症例は３７例中２例のみとなっており、外れ値を拾っていることがわかる。
【表１０】
2019207942.tif 000011
【表１１】
2019207942.tif 000012
【０１２４】
３．２  最適カットオフ値（ＰＲ＋ＳＤ  ｖｓ  ＰＤ）
同様の手順でＰＲ＋ＳＤ  ｖｓ  ＰＤに分け、ｐｅｒｆｏｒｉｎ比とｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１測定値の最適カットオフ値を求める解析を行った。Ｇｒｏｕｐ１を除くとＰＤの件数が極端に少なくなるため、全症例の解析のみを行った。【０１２５】
ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂでは、ｐｅｒｆｏｒｉｎ比はどの日数でもＡＵＣ０．６前後と十分な予測性能は得られなかった。診断に用いるためには、少なくともＡＵＣ０．７以上必要であり、好ましくは０．８以上である。最もＡＵＣが高いｄａｙ８／ｄａｙ１比では、ＰＦＳ、ＯＳともにリスクを高める方向に影響するという結果が得られた（表１２）。ｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１では、６６３１．１６  ｐｇ／ｍｌでＡＵＣが０．８を超えており、ＰＦＳ、ＯＳともにリスクを低下させる方向に影響することが分かった（表１２、図１６Ａ〜図１６Ｃ）。ｎｉｖｏｌｕｍａｂでも同じくｐｅｒｆｏｒｉｎ比ではＡＵＣ＝０．６前後となっており、十分な予測性能は得られなかった（表１３）。ｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１測定値では５４５０．４６ｐｇ／ｍｌというカットオフ値でＡＵＣ＝０．７程度であり、ＰＦＳ、ＯＳともにリスクを低下させる方向に影響することが分かった（表１３、図１７Ａ〜図１７Ｃ）。
【表１２】
2019207942.tif 000013
【表１３】
2019207942.tif 000014
【０１２６】
４  まとめ
・単変量Ｃｏｘ回帰の結果、ｐｅｒｆｏｒｉｎを含むいくつかの変数が生存時間に影響を与えていることが示された。【０１２７】
・一回投与時点のデータを用いて多変量Ｃｏｘ回帰を行ったところ、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂではｄａｙ２／ｄａｙ１比は増悪のリスクを高める方向に、ｄａｙ２２測定値は増悪のリスクを減らす方向に影響していることが確認された。また、ｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ８／ｄａｙ１比が死亡のリスクを高める方向に影響することがわかった。【０１２８】
・多変量Ｃｏｘ回帰の結果、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂのＰＦＳでは喫煙によって増悪のリスクが低下するという結果になっている。この結果に関しては、非喫煙者が非常に少なく、予後が悪い方に偏っていたためだと考えられる。ｓｍｏｋｉｎｇに限らずほかの変数でも、予測因子として採用するかどうか、その意味を考慮して検討する必要がある。【０１２９】
・一回投与時点のデータを用いて３か月未満で死亡する症例を含む高リスク群（Ｇｒｏｕｐ１）を予測し、高リスク群を除いて生存時間解析を行ったが、モデルを改善することはできなかった。【０１３０】
・ＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤを判別するロジスティック回帰分析では、Ｇｒｏｕｐ１を除いた場合に限り、ｐｅｒｆｏｒｉｎの変数を含むモデルが構築された。しかし、ｐｅｒｆｏｒｉｎ関連の有意な変数は見つからなかった。【０１３１】
・ＰＲ  ｖｓ  ＳＤ＋ＰＤを判別する最適カットオフ値を解析すると、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂではｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ２２／ｄａｙ１比の１．１８５という値で最も判別性能が高かった。しかし、このカットオフ値は生存時間には影響を与えていなかった。【０１３２】
・ＰＲ＋ＳＤ  ｖｓ  ＰＤを判別する最適カットオフ値を解析すると、ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、ｎｉｖｏｌｕｍａｂともにｐｅｒｆｏｒｉｎ  ｄａｙ１測定値が最も判別に適しており、ＰＦＳ、ＯＳともにリスクを低下させる方向に影響していた。【０１３３】
（注記）
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本出願は、２０１８年４月２７日に出願された日本国出願特願２０１８−８６６６９号に基づく優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参考として援用される。
【産業上の利用可能性】
【０１３４】
免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）によるがん治療の効果を評価するためのマーカー、診断剤、キットおよび方法が提供される。このような技術に基づく製剤等に関連する産業（製薬等）において利用可能な技術が提供される。
【図１】
2019207942.tif 000015
【図２】
2019207942.tif 000016
【図３】
2019207942.tif 000017
【図４】
2019207942.tif 000018
【図５】
2019207942.tif 000019
【図６】
2019207942.tif 000020
【図７】
2019207942.tif 000021
【図８】
2019207942.tif 000022
【図９】
2019207942.tif 000023
【図１０】
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【図１１】
2019207942.tif 000025
【図１２】
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【図１３】
2019207942.tif 000027
【図１４】
2019207942.tif 000028
【図１５Ａ】
2019207942.tif 000029
【図１５Ｂ】
2019207942.tif 000030
【図１５Ｃ】
2019207942.tif 000031
【図１６Ａ】
2019207942.tif 000032
【図１６Ｂ】
2019207942.tif 000033
【図１６Ｃ】
2019207942.tif 000034
【図１７Ａ】
2019207942.tif 000035
【図１７Ｂ】
2019207942.tif 000036
【図１７Ｃ】
2019207942.tif 000037
【手続補正書】
【提出日】令和1年7月9日(2019.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による被験体における癌に対する治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤。
【請求項２】
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、請求項１に記載の診断剤。
【請求項３】
前記癌が肺癌である、請求項１または２に記載の診断剤。
【請求項４】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項５】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項６】
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項４または５に記載の診断剤。
【請求項７】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項６に記載の診断剤。
【請求項８】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項６に記載の診断剤。
【請求項９】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項５に記載の診断剤。
【請求項１０】
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項９に記載の診断剤。
【請求項１１】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項５に記載の診断剤。
【請求項１２】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１１に記載の診断剤。
【請求項１３】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１２に記載の診断剤。
【請求項１４】
被験者における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するために、該被験者から分離した生体検体について血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルを検出、測定または定量する方法。
【請求項１５】
血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
【請求項１６】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体において、ＰＦＳおよび／またはＯＳが、前記値以下である被験体と比べて延長される可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体において、ＰＦＳおよび／またはＯＳが前記値以下である被験体と比べて延長される可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
パーフォリンに加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、ＣＤ１３７、ＴＮＦα、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６またはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、請求項１４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための、免疫チェックポイント阻害剤を含むコンパニオン試薬であって、免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３０】
抗ＰＤ−１抗体による癌に対する治療の効果を評価するための、抗ＰＤ−１抗体を含むコンパニオン試薬であって、該抗ＰＤ−１抗体投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３１】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項２８に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３２】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項２８に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３３】
ニボルマブによるがん治療の効果を評価するための、ニボルマブを含むコンパニオン試薬であって、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３４】
ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベル約１．２倍以上である場合、前記被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３３に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３５】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３４に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３６】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３５に記載のコンパニオン試薬。
【手続補正書】
【提出日】令和1年10月18日(2019.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルを検出、測定または定量する手段を含む、免疫チェックポイント阻害剤による被験体における癌に対する治療の効果を評価または予測するための診断剤または予測診断剤。
【請求項２】
前記癌が、悪性黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、メルケル細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、ＭＳＩ−Ｈｉｇｈ固形癌、悪性胸膜中皮腫、頭頚部癌および尿路上皮癌からなる群から選択される、請求項１に記載の診断剤。
【請求項３】
前記癌が肺癌である、請求項１または２に記載の診断剤。
【請求項４】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の診断剤。
【請求項５】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項４に記載の診断剤。
【請求項６】
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項４または５に記載の診断剤。
【請求項７】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項６に記載の診断剤。
【請求項８】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項６に記載の診断剤。
【請求項９】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、ニボルマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項５に記載の診断剤。
【請求項１０】
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項９に記載の診断剤。
【請求項１１】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの投与２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項５に記載の診断剤。
【請求項１２】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１１に記載の診断剤。
【請求項１３】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項１２に記載の診断剤。
【請求項１４】
被験体における免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価または予測するために、該被験体から分離した生体検体について血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルを検出、測定または定量する方法。
【請求項１５】
血液試料中のパーフォリンのタンパク質のレベルを、免疫チェックポイント阻害剤による癌の処置に対する応答性の指標とする方法。
【請求項１６】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブまたはペムブロリズマブである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ＰＤ−１抗体投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体において、ＰＦＳおよび／またはＯＳが、前記値以下である被験体と比べて延長される可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前または投与開始時のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体において、ＰＦＳおよび／またはＯＳが前記値以下である被験体と比べて延長される可能性があることが示される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記投与前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、前記投与開始２日目のパーフォリンの発現レベルが、前記投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブの２サイクル目以降のパーフォリンの発現レベルが、投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルより高い場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目のパーフォリン発現レベルが、ペムブロリズマブ投与前のパーフォリンの発現レベルの約１．２倍以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
パーフォリンに加えて、ＦＡＳリガンド、グランザイムＢ、ＣＤ１３７、ＴＮＦα、ＣＹＦＲＡ、ＣＲＰ、ＬＤＨ、ＫＬ−６またはこれらの任意の組合せの発現レベルが測定される、請求項１４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
免疫チェックポイント阻害剤による癌に対する治療の効果を評価するための、パーフォリンの検出剤を含むコンパニオン試薬であって、免疫チェックポイント阻害剤投与後の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、免疫チェックポイント阻害剤投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルより高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３０】
抗ＰＤ−１抗体による癌に対する治療の効果を評価するための、パーフォリンの検出剤を含むコンパニオン試薬であって、該抗ＰＤ−１抗体投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ以上、約５５００ｐｇ以上、約６０００ｐｇ以上、または約６５００ｐｇ以上である場合、前記被験体は、抗ＰＤ−１抗体による処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３１】
前記抗ＰＤ−１抗体がニボルマブであり、ニボルマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約５０００ｐｇ〜約６０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ニボルマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項３０に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３２】
前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブであり、ペムブロリズマブ投与開始前のパーフォリンの発現レベルが、血清１ｍｌあたり約６０００ｐｇ〜約７０００ｐｇの範囲内の任意の値以上である場合、前記被験体は、ペムブロリズマブによる処置に対して応答性または安定状態である可能性があることが示される、請求項３０に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３３】
ニボルマブによるがん治療の効果を評価するための、パーフォリンの検出剤を含むコンパニオン試薬であって、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、被験体が免疫チェックポイント阻害剤による処置に対して応答性であることが示される、コンパニオン試薬。
【請求項３４】
ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、血清１ｍｌあたり９０００ｐｇ以上である場合、および／または、ニボルマブ投与後２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ニボルマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベル約１．２倍以上である場合、前記被験体がニボルマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３３に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３５】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルよりも高い場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３４に記載のコンパニオン試薬。
【請求項３６】
ペムブロリズマブの少なくとも投与開始２２日目の血清中パーフォリンタンパク質のレベルが、ペムブロリズマブ投与前の血清中パーフォリンタンパク質のレベルの約１．２倍以上である場合、該被験体がペムブロリズマブによる処置に対して応答性であることが示される、請求項３５に記載のコンパニオン試薬。
【国際調査報告】
2019207942.tif 000038
2019207942.tif 000039
2019207942.tif 000040
2019207942.tif 000041
2019207942.tif 000042
2019207942.tif 000043
2019207942.tif 000044
2019207942.tif 000045