(57)【要約】【課題】  コレステロール代謝を促進し、血中のコレステロール増加に伴う様々な症状を治療、改善または予防することができる新たな薬剤を提供する。【解決手段】  本発明者らは、アルクチゲニンが、コレステロールから胆汁酸への変換を促進する効果を有することを新たに見出した。本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進剤、胆汁酸合成促進用組成物および胆汁酸合成促進用食品組成物を提供する。【選択図】      図1
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進剤。
【請求項２】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進用組成物。
【請求項３】
前記アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有する、請求項2に記載の胆汁酸合成促進用組成物。
【請求項４】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進用食品組成物。
【請求項５】
前記アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有する、請求項4に記載の胆汁酸合成促進用食品組成物。
【請求項６】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成酵素の発現促進剤。
【請求項７】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸排出促進剤。
【請求項８】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、肝臓におけるコレステロール代謝促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝臓においてコレステロールから胆汁酸への合成を促進することができる胆汁酸合成促進剤、胆汁酸合成促進用組成物および胆汁酸合成促進用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
コレステロールは、生体の様々な生理現象に関わる重要な成分である。しかし、血液内のコレステロール量が過剰になると、たとえば動脈硬化症などの生活習慣病を引き起こすことが知られている。コレステロールは、血液内でタンパク質と複合体を形成し、リポタンパク質として存在する。このリポタンパク質のうち、低比重リポタンパク質コレステロール（LDLコレステロール）が動脈硬化を促進するといわれている。そのため、血液内の脂質、特にLDLコレステロールを減少させることによって、動脈硬化症を改善することができると考えられる。【０００３】
コレステロールは、肝臓において胆汁酸に変換され、腸から排泄される。胆汁酸合成は、余分なコレステロールを体外に排出するための主要なメカニズムである。このようなコレステロールの胆汁酸への変換を促進することにより、血中コレステロール増加によって生じる様々な症状を治療、改善または予防することが可能であると考えられる。【０００４】
コレステロールは、肝臓において、CYP7A1およびCYP8B1などの胆汁酸合成酵素によって胆汁酸に変換される（非特許文献1）。胆汁酸は、腸管に分泌された後、一部は排泄される。残りの胆汁酸は、腸から再吸収され、肝臓に戻る。胆汁酸は、肝臓と腸管との間を循環することによりリサイクルされる。コレステロールから胆汁酸への変換は、再吸収されて肝臓に戻った胆汁酸によって制御される。肝臓に戻った胆汁酸は、核内受容体であるFXR（farnesoid X receptor）に結合してこれを活性化する。活性化されたFXRは、別の核内受容体であるSHP（small heterodimer partner）の発現を誘導する。SHPは、Cyp7a1およびCyp8b1などの胆汁酸合成酵素遺伝子の発現を抑制する作用を有する。また、FXRは、腸管においてFGF15（Fibroblast growth factor 15）の発現を促進させる。FGF15は、肝臓の受容体FGF4に結合し活性化することにより、胆汁酸合成酵素遺伝子であるCyp7a1およびCyp8b1の発現を抑制する。【０００５】
脂質代謝を促進するための薬剤として、たとえば特許文献1には、オキアミタンパク質を有効成分とする脂質代謝改善剤が開示されている。特許文献1記載の脂質代謝改善剤は、コレステロール吸収阻害あるいは胆汁酸排泄効果により血中コレステロールを低下させるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開2010-095456号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Hepatology, 2012, Vol.56, No.3, p.1034-1043.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、コレステロール代謝を促進し、血中のコレステロール増加に伴う様々な症状を治療、改善または予防することができる新たな薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、アルクチゲニンを投与したレプチン受容体欠損モデルの糞中の胆汁酸量を測定したところ、Control群と比較して胆汁酸量が増加していることを見出した。また、本発明者らは、アルクチゲニン投与群（AG群）では、Control群と比較して、胆汁酸合成酵素であるCyp8b1を正に制御するとともに、胆汁酸合成を抑制する作用を持つ、肝臓のSHP、FXRおよびFGF4R、並びに小腸のFGF15およびSHPを負に制御することを見出した。すなわち、本発明者らは、アルクチゲニンが、コレステロールから胆汁酸への変換を促進する効果を有することを新たに見出し、本発明を完成させた。【００１０】
本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進剤を提供する。【００１１】
また本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進用組成物を提供する。【００１２】
また本発明は、上記胆汁酸合成促進用組成物において、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有する胆汁酸合成促進用組成物を提供する。【００１３】
また本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進用食品組成物を提供する。【００１４】
また本発明は、上記胆汁酸合成促進用食品組成物において、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有する胆汁酸合成促進用食品組成物を提供する。【００１５】
また本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成酵素の発現促進剤を提供する。【００１６】
また本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸排出促進剤を提供する。【００１７】
また本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、肝臓におけるコレステロール代謝促進剤を提供する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明は、胆汁酸合成を促進する作用を有するため、コレステロール代謝を促進し、血中のコレステロール増加に伴う様々な症状を治療、改善または予防することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】Control群およびAG群における糞中胆汁酸量（μmol/L）を示すグラフ。
【図２】Control群およびAG群における肝臓中総コレステロール量（mg/dL）を示すグラフ。
【図３】Control群およびAG群における肝臓のCyp8b1、SHP、FXRおよびFGF4Rの相対的mRNA発現量を示すグラフ。
【図４】Control群およびAG群における小腸のFGF15およびSHPの相対的mRNA発現量を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物を提供する。
【００２１】
胆汁酸は、肝臓内でコレステロールから合成される、コラン酸骨格を持つステロイド誘導体の総称である。本発明において、胆汁酸には、たとえばコール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸およびリトコール酸などの非結合胆汁酸；タウロコール酸、グリココール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、グリコリトコール酸およびタウロリトコール酸などの結合胆汁酸、並びにこれらの塩および抱合体が含まれる。また、本発明における胆汁酸には、ヒトにおいて見られる胆汁酸だけでなく、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類および魚類等の胆汁中に見られる種々の胆汁酸が含まれる。
【００２２】
本明細書において「胆汁酸の合成」とは、肝臓におけるコレステロールから胆汁酸への合成、変換または代謝をいう。本明細書において「胆汁酸合成を促進する」ことには、胆汁酸の合成を開始させること、速めること、加速させることおよび増加させることなどが含まれる。胆汁酸合成が促進されたことは、肝臓における胆汁酸の量の増加、肝臓におけるコレステロールの減少、糞中における胆汁酸量の増加および胆汁酸合成酵素の発現量の増加などにより決定することができる。
【００２３】
本発明の胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する。アルクチゲニンおよびアルクチインは、ゴボウ等の植物に含まれるジフェニルプロパノイド（リグナン類）の1つである。アルクチインは、アルクチゲニンの前駆体であり、生体内で代謝されてアルクチゲニンになることが知られている。アルクチゲニンおよび／またはアルクチインとして、化学的に合成したアルクチゲニンおよび／またはアルクチインを用いてもよいし、植物から単離したアルクチゲニンおよび／またはアルクチインを用いてもよい。また、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインとして、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを含む植物そのものまたはこの植物の抽出物を用いてもよい。アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを含む植物には、たとえばゴボウ（スプラウト・葉・根茎・ゴボウシ）、アイノコレンギョウ（花・葉・果実・根茎）、チョウセンレンギョウ（花・葉・果実・根茎）、レンギョウ（花・葉・果実・根茎）、シナレンギョウ（花・葉・果実・根茎）、ベニバナ、ヤグルマギク、アメリカオニアザミ、サントリソウ（ギバナアザミ）、カルドン、ゴロツキアザミ、アニウロコアザミ、ゴマ、モミジヒルガオ、シンチクヒメハギ、チョウセンテイカカズラ、テイカカズラ、ムニンテイカカズラ、ヒメテイカカズラ、トウキョウチクトウ、ケテイカカズラ、リョウカオウ、オオケタデ、ヤマザクラ、シロイヌナズナ、アマランス、クルミ、エンバク、スペルタコムギ、軟質コムギ、メキシコイトスギおよびカヤが含まれる。なかでも、ゴボウ（特にゴボウシおよびゴボウスプラウト）およびレンギョウ（特に葉）は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインの含有量が高いため好ましい。植物そのものを用いる場合、生または乾燥して刻んだもの、或いは乾燥して粉末としたものを用いることができる。
【００２４】
アルクチゲニンおよび／またはアルクチインとして植物の抽出物を用いる場合、抽出物は、たとえば以下の方法によって植物から調製してもよい。本発明において使用される抽出物は、たとえばアルクチゲニンおよび／またはアルクチインを含む植物から、酵素変換工程および有機溶媒による抽出工程の2段階により抽出してもよい。
【００２５】
酵素変換工程は、植物に内在する酵素であるβ-グルコシダーゼにより、該植物に含まれているアルクチインをアルクチゲニンに酵素変換する工程である。具体的には、植物を乾燥し切栽したものを適切な温度に保持することにより内在のβ-グルコシダーゼを作用させて、アルクチインからアルクチゲニンへの反応を進行させる。たとえば、切裁した植物に水などの任意の溶液を加えて、30℃付近の温度（20〜50℃）の間にて攪拌することなどにより、植物を任意の温度に保持することができる。
【００２６】
有機溶媒による抽出工程は、任意の適切な有機溶媒を使用して、植物からアルクチゲニンおよびアルクチインを抽出する工程である。すなわち、上記の酵素変換工程によりアルクチゲニンが高含量となった状態で、適切な溶媒を添加して、植物から抽出物（エキス）を抽出する工程である。たとえば、植物に適切な溶媒を添加して、適切な時間加熱攪拌して抽出物を抽出する。また、加熱攪拌以外にも、加熱還流、ドリップ式抽出、浸漬式抽出または加圧式抽出法などの当業者に公知の任意の抽出法を使用して、抽出物を抽出することができる。
【００２７】
アルクチゲニンは水難溶性であることから、有機溶媒を添加することにより、アルクチゲニンの収率を向上させることができる。有機溶媒は、任意の有機溶媒を使用することができる。たとえば、メタノール、エタノールおよびプロパノールなどのアルコール、並びにアセトンを使用することができる。安全性の面を考慮すると、有機溶媒として30％量のエタノールを使用することが好ましい。抽出物から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物を得ることができる。
【００２８】
本発明の胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、任意の形態の製剤であることができる。胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、経口投与製剤として、たとえば糖衣錠、バッカル錠、コーティング錠およびチュアブル錠等の錠剤；トローチ剤；丸剤；散剤；硬カプセル剤および軟カプセル剤を含むカプセル剤；顆粒剤；ならびに懸濁剤、乳剤、シロップ剤およびエリキシル剤等の液剤などであることができる。
【００２９】
また、本発明の胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、静脈注射、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、経皮投与、経鼻投与、経肺投与、経腸投与、口腔内投与および経粘膜投与などの非経口投与製剤であることができる。本発明の胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、たとえば、注射剤、経皮吸収テープ、エアゾール剤および坐剤などであることができる。
【００３０】
また、本発明の胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、外用剤として提供されることができる。本発明の外用剤は、医薬品および化粧品などであることができる。本発明の外用剤は、皮膚、頭皮、毛髪、粘膜および爪などに適用するための外用剤であることができる。外用剤には、たとえばクリーム剤、軟膏剤、液剤、ゲル剤、ローション剤、乳液剤、エアゾール剤、スティック剤、シートマスク剤、固形剤、泡沫剤、オイル剤およびチック剤等の塗布剤；パップ剤、プラスター剤、テープ剤およびパッチ剤等の貼付剤；並びにスプレー剤などが含まれる。
【００３１】
また、本発明の胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物は、食用に適した形態であることができ、たとえば固形状、液状、顆粒状、粒状、粉末状、カプセル状、クリーム状およびペースト状などであってもよい。
【００３２】
本発明の胆汁酸合成促進用組成物は、医薬品、化粧品および食品などに用いるための組成物であることができる。本発明の胆汁酸合成促進用組成物は、医薬品、化粧品および食品に通常用いられる任意の成分をさらに含むことができる。たとえば、本発明の胆汁酸合成促進用組成物は、薬学的に許容される基剤、担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤および着色剤などをさらに含んでもよい。
【００３３】
胆汁酸合成促進用組成物に使用する担体および賦形剤の例には、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、デキストリン、馬鈴薯デンプン、トウモロコシデンプン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムおよび結晶セルロースなどを含む。
【００３４】
結合剤の例には、デンプン、ゼラチン、シロップ、トラガントゴム、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースなどを含む。
【００３５】
崩壊剤の例には、デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびカルボキシメチルセルロースカルシウムなどを含む。
【００３６】
滑沢剤の例には、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、タルクおよびマクロゴールなどを含む。着色剤は、医薬品、化粧品および食品に添加することが許容されている任意の着色剤を使用することができる。
【００３７】
また、胆汁酸合成促進用組成物は、必要に応じて、白糖、ゼラチン、精製セラック、ゼラチン、グリセリン、ソルビトール、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレートおよびメタアクリル酸重合体などで一層以上の層で被膜してもよい。
【００３８】
また、胆汁酸合成促進用組成物は、必要に応じて、pH調節剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤、防腐剤、希釈剤、コーティング剤、甘味剤、香料および可溶化剤などを添加してもよい。
【００３９】
本発明はまた、本発明の胆汁酸合成促進用組成物を含有する医薬品を提供する。本発明の医薬品は、コレステロールから胆汁酸への合成を促進するための医薬品であることができる。また、本発明の医薬品は、血中コレステロール増加に関連する種々の症状を治療、改善および予防するための医薬品であることができ、たとえば脂質異常症、動脈硬化、狭心症、心筋梗塞、脳卒中、脳梗塞および脳出血を治療、改善および予防するための医薬品であることができる。
【００４０】
本発明はまた、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する胆汁酸合成促進用食品組成物を提供する。本発明の胆汁酸合成促進用食品組成物は、上述した胆汁酸合成促進剤および胆汁酸合成促進用組成物と同様に構成されることができる。本発明の食品組成物は、脂質異常症、動脈硬化、狭心症、心筋梗塞、脳卒中、脳梗塞および脳出血などの疾患および状態を改善または予防するための食品組成物であることができる。
【００４１】
本明細書において「食品組成物」には、一般的な飲食品だけでなく、病者用食品、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品およびサプリメントなどが含まれる。一般的な飲食品には、たとえば各種飲料、各種食品、加工食品、液状食品（スープ等）、調味料、栄養ドリンクおよび菓子類などが含まれる。本明細書において「加工食品」とは、天然の食材（動物および植物など）に対し加工および／または調理を施したものをいい、たとえば肉加工品、野菜加工品、果実加工品、冷凍食品、レトルト食品、缶詰食品、瓶詰食品およびインスタント食品などが含まれる。本発明の食品組成物は、胆汁酸合成を促進する旨またはコレステロール代謝を促進する旨の表示を付した食品であってもよい。また、本発明の食品組成物は、袋および容器等に封入された形態で提供されてもよい。本発明において使用する袋および容器は、食品に通常使用される任意の袋および容器であることができる。
【００４２】
本発明の胆汁酸合成促進剤、胆汁酸合成促進用組成物および胆汁酸合成促進用食品組成物におけるアルクチゲニンおよび／またはアルクチインの含有量は、胆汁酸合成を促進する効果を発揮できる量であればよく、適用する対象、目的および投与方法（摂取方法）に応じて適宜設定することができる。たとえばヒトに経口摂取させる場合、好ましくはアルクチゲニンおよび／またはアルクチインを1日あたりの摂取量が10〜2000mgとなるように含むことができる。
【００４３】
本発明はまた、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸合成酵素の発現促進剤を提供する。胆汁酸合成酵素には、たとえばCYP7A1およびCYP8B1などが含まれる。アルクチゲニンは、後述する実施例において示すように、胆汁酸合成酵素の発現を促進する作用を有する。また、アルクチゲニンは、胆汁酸合成酵素の発現を負に制御する作用を持つSHP、FXR、FGF4RおよびFGF15などの種々の因子の発現を抑制する作用を有する。
【００４４】
本明細書において、遺伝子の「発現を促進する」とは、たとえば遺伝子由来の転写産物の量を増加させることおよび遺伝子由来のタンパク質の量を増加させることなどを意味する。また、本明細書において「発現を抑制する」とは、たとえば遺伝子由来の転写産物の量を減少させることおよび遺伝子由来のタンパク質の量を減少させることなどを意味する。
【００４５】
本発明の胆汁酸合成酵素の発現促進剤は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有してもよい。また、本発明の胆汁酸合成酵素の発現促進剤は、上述した本発明の胆汁酸合成促進剤、胆汁酸合成促進用組成物および胆汁酸合成促進用食品組成物と同様に構成されることができる。
【００４６】
本発明の胆汁酸合成酵素の発現促進剤は、胆汁酸合成酵素の発現を促進することにより、コレステロールから胆汁酸への合成を促進することができる。したがって、本発明の胆汁酸合成酵素の発現促進剤は、コレステロール代謝を改善し、血中のコレステロール増加に伴う様々な症状を治療、改善または予防することができる。
【００４７】
本発明はまた、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、胆汁酸排出促進剤を提供する。本明細書において「胆汁酸排出」とは、胆汁酸の体外への排出をいい、たとえば胆汁酸が腸管から糞中に排泄されることをいう。
【００４８】
本発明の胆汁酸排出促進剤は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有してもよい。また、本発明の胆汁酸排出促進剤は、上述した本発明の胆汁酸合成促進剤、胆汁酸合成促進用組成物および胆汁酸合成促進用食品組成物と同様に構成されることができる。本発明の胆汁酸排出促進剤は、コレステロール代謝を改善し、血中のコレステロール増加に伴う様々な症状を治療、改善または予防することができる。
【００４９】
本発明はまた、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを有効成分として含有する、肝臓におけるコレステロール代謝促進剤を提供する。本明細書において「コレステロール代謝」とは、コレステロールを別の化合物に変換すること、たとえばコレステロールを胆汁酸に変換することをいう。
【００５０】
本発明の肝臓におけるコレステロール代謝促進剤は、アルクチゲニンおよび／またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有してもよい。また、本発明の肝臓におけるコレステロール代謝促進剤は、上述した本発明の胆汁酸合成促進剤、胆汁酸合成促進用組成物および胆汁酸合成促進用食品組成物と同様に構成されることができる。本発明の肝臓におけるコレステロール代謝促進剤は、コレステロール代謝を改善し、血中のコレステロール増加に伴う様々な症状を治療、改善または予防することができる。
【実施例】
【００５１】
以下に実施例を示し、本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００５２】
（酵素活性の測定）
ゴボウシ中のβ−グルコシダーゼ活性は、以下の方法で測定した。産地やロットが異なるゴボウシをウイレー氏粉砕機により粉砕し、このゴボウシ粉砕品0.1gを10mLの水で希釈し、試料溶液とした。【００５３】
基質溶液として、p-ニトロフェニル-β-D-グルコピラノシド0.15gに水を加えて25mLに定容し、20mmol/L p-ニトロフェニル-β-D-グルコピラノシド水溶液を調製した。0.1mol/L酢酸緩衝液1mLに20mmol/L p-ニトロフェニル-β-D-グルコピラノシド水溶液0.5mLを加えて、反応混液を調製し、37℃で約5分予備加熱を行った。【００５４】
反応混液に試料溶液0.5mL加えて37℃で15分反応させた後、反応停止液である0.2mol/L炭酸ナトリウム水溶液を2mL加えて反応を停止させた。この液の400nmにおける吸光度を測定し、酵素反応を行わないブランク溶液からの変化量から下式により酵素活性を求めた。
酵素活性（U/g）＝（試料溶液の吸光度-ブランク溶液の吸光度）×4mL×1／18.1（p-ニトロフェノールの上記測定条件下でのミリモル分子吸光係数：cm2／μmol)×1／光路長(cm)×1／反応時間（分）×1／0.5mL×1／試料溶液濃度（g／mL）。【００５５】
（実施例1  ゴボウシ抽出物の製造1）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス（抽出物）を抽出した。ゴボウシ（酵素活性8.23U/g）を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75％が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを29〜33℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した。次いで、エタノール265Lを加えて85℃に昇温し、さらに60分間加熱還流した。この溶液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25％量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.2％および7.1％であり、アルクチゲニン／アルクチイン（重量比）＝0.89のゴボウシ抽出物粉末（デキストリン20％含有）が得られた。【００５６】
（実施例2  ゴボウシ抽出物の製造2）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス（抽出物）を抽出した。ゴボウシ（酵素活性8.23U/g）を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75％が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜33℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した後、エタノール265Lを加えて85℃に昇温し、さらに30分間加熱還流した。この溶液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25％量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.0％および6.8％であり、アルクチゲニン／アルクチイン（重量比）＝0.87のゴボウシ抽出物粉末（デキストリン20％含有）が得られた。【００５７】
（実施例3  ゴボウシ抽出物の製造3）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス（抽出物）を抽出した。ゴボウシ（酵素活性7.82U/g）を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75％が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜32℃に保温した水560Lに加えて40分間攪拌した後、60分後にエタノール258Lを加えて85℃に昇温し、さらに30分間加熱還流した。この液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25％量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.2％および6.7％であり、アルクチゲニン／アルクチイン（重量比）＝0.93のゴボウシ抽出物粉末（デキストリン20％含有）が得られた。【００５８】
（実施例4  ゴボウシ抽出物の製造4）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス（抽出物）を抽出した。ゴボウシ（酵素活性7.82U/g）を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75％が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜32℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した後、エタノール253Lを加えて85℃に昇温し、さらに40分間加熱還流した。この液を遠心分離し、得られた抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25％量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.4％および7.2％であり、アルクチゲニン／アルクチイン（重量比）＝0.89のゴボウシ抽出物粉末（デキストリン20％含有）が得られた。【００５９】
（実施例5  シナレンギョウ葉抽出物の製造1）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、シナレンギョウ葉からエキス（抽出物）を抽出した。アルクチイン2.53％およびアルクチゲニン0.76％を含有するレンギョウ葉小刻み50gに水350mLを加えて37℃で30分間保温後、エタノール150mLを添加し30分間加熱抽出した。この溶液を100メッシュ篩を用いて固液分離し、凍結乾燥を行うことにより、アルクチゲニン含量が5.62％のシナレンギョウ葉抽出物18.62gを得た。【００６０】
（実施例6  シナレンギョウ葉抽出物の製造2）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、シナレンギョウ葉からエキス（抽出物）を抽出した。アルクチイン7.38％およびアルクチゲニン0.78％を含有するレンギョウ葉小刻み720gに水5Lを加えて37°Cで30分間保温後、エタノール2.16Lを添加し30分間加熱抽出した。この溶液を100メッシュ篩を用いて固液分離し、凍結乾燥を行うことにより、アルクチゲニン含量が9.55％のシナレンギョウ葉抽出物343.07gを得た。【００６１】
（実施例7  ゴボウシ抽出物粉末配合顆粒剤）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて顆粒剤を製造した。「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。すなわち、下記（1）〜（3）の成分をとり、顆粒状に製した。これを1.5ｇずつアルミラミネートフィルムに充填し、1包あたりゴボウシ抽出物粉末を0.5ｇ含有する顆粒剤を得た。【００６２】
（1）実施例2のゴボウシ抽出物粉末                33.3％
（2）乳糖                                        65.2％
（3）ヒドロキシプロピルセルロース                1.5％
合計                                        100％【００６３】
（実施例8  ゴボウシ抽出物粉末配合顆粒剤）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて顆粒剤を製造した。「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。すなわち、下記（1）〜（3）の成分をとり、顆粒状に製した。これを3.0ｇずつアルミラミネートフィルムに充填し、1包あたりゴボウシ抽出物粉末を2ｇ含有する顆粒剤を得た。【００６４】
（1）実施例2のゴボウシ抽出物粉末                66.7％
（2）乳糖                                        30.3％
（3）ヒドロキシプロピルセルロース                3.0％
合計                                        100％【００６５】
（実施例9  ゴボウシ抽出物粉末配合錠剤）
本発明の胆汁酸合成促進用組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて錠剤を製造した。「日局」製剤総則、錠剤の項に準じて錠剤を製した。すなわち、下記（1）〜（6）の成分をとり、錠剤を得た。【００６６】
（1）実施例2のゴボウシ抽出物粉末                37.0％
（2）結晶セルロース                              45.1％
（3）カルメロースカルシウム                      10.0％
（4）クロスポピドン                              3.5％
（5）含水二酸化ケイ素                            3.4％
（6）ステアリン酸マグネシウム                    1.0％
合計                                        100％【００６７】
（実施例10  胆汁酸合成に対するアルクチゲニンの効果）
［実験動物］
レプチン受容体欠損モデルである、5週齢の雄性db/dbマウス（BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/Jcl、日本クレア社より購入）を使用して、1週間の予備飼育後に実験を開始した。動物は温度23.0±5℃、湿度50.0±10%、12時間の明暗サイクルの環境下で飼育した。動物実験は慶應義塾大学動物実験委員会の承認を得て、慶應義塾大学動物実験規定に基づき実施した。【００６８】
［実験方法］
予備飼育後に、マウスを（a）Control群および（b）アルクチゲニン投与群（AG群）の2群にわけ（各群n=8）、Control群には精製飼料（AIN-93G）を、AG群にはアルクチゲニン（>98.0%）0.2%配合の精製飼料を9週間自由摂取させた。投与終了後、18時間の絶食を行い、麻酔下で腹部大静脈より採血し、肝臓および小腸を採取した。【００６９】
［糞中胆汁酸量の測定］
投与期間終了時に各群の飼育ケージから糞を回収し、糞中胆汁酸量を測定した。プールした糞の乾燥粉末10 mgを90%エタノール0.2 mLに懸濁して65℃で１時間インキュベートし、遠心分離後の上清と沈澱物の洗液を合わせて回収した。溶媒を蒸発乾固後、残渣に90%エタノール0.5 mLを加えて溶解したものを測定用サンプルとした。測定にはUltra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS、Waters社製）を用いた。図1は、Control群およびAG群における糞中胆汁酸量（μmol/L）を示すグラフである。AG群では、Control群と比較して糞中の総胆汁酸量が多かった。【００７０】
［肝臓中総コレステロールの測定］
各群から得られた肝臓をホモジネートし、脂質抽出キット（Lipid Extraction Kit (Chloroform-Free)、Cell Biolabs, Inc.）を用いて総脂質を抽出した。脂質抽出液からコレステロールE-テストワコー（和光純薬）を用いて総コレステロール値を測定した。図2は、Control群およびAG群における肝臓中総コレステロール量（mg/dL）を示すグラフである。AG群では、Control群と比較して肝臓中の総コレステロール量が少なかった。【００７１】
［肝臓コレステロール代謝関連遺伝子の発現量］
各群について、得られた臓器からtotal RNAの抽出およびcDNA合成を行った後、qPCRにより肝臓コレステロール代謝関連遺伝子である肝臓のCyp8b1、SHP、FXRおよびFGF4R、並びに小腸のFGF15およびSHPの発現量を比較した。コントロールとして、18S rRNAを用いた。qPCRのためのプライマーは、18S（F: TTCTGGCCAACGGTCTAGACAAC（配列番号1）、R: CCAGTGGTCTTGGTGTGCTGA（配列番号2））、Cyp8b1（F: GGAAGCCAAGAAGTCGTTCA（配列番号3）、R: GACGCAGACTCTCCTCCATC（配列番号4））、SHP（F: CAAGGAGTATGCGTACCTGAAG（配列番号5）、R: GGCTCCAAGACTTCACACAGT（配列番号6））、FXR（F:CAAAATGACTCAGGAGGAGTACG（配列番号7）、R: GCCTCTCTGTCCTTGATGTATTG（配列番号8））、FGF4R（F:GAGGCATGCAGTATCTGG（配列番号9）、R: CAAAGTCAGCGATCTTCATCACA（配列番号10））、FGF15(F: CCAGTGGTCTTGGTGTGCTGA（配列番号11）、R: GGCCTGGATGAAGATGATATGGA（配列番号12）)を用いた。【００７２】
図3は、Control群およびAG群における肝臓のCyp8b1、SHP、FXRおよびFGF4Rの相対的mRNA発現量を示す。図3における値は、6匹の平均±標準誤差（Mean±S.E.M）を表す。Student’s t-testの結果、p値が0.05より小さい場合には「*」を、0.01より小さい場合には「**」を付した。AG群では、Control群と比較して、Cyp8b1の発現量が有意に高く、SHP、FXRおよびFGF4Rの発現量が有意に低かった。【００７３】
図4は、Control群およびAG群における小腸のFGF15およびSHPの相対的mRNA発現量を示す。AG群では、Control群と比較して、小腸のFGF15およびSHPの発現量が低かった。【００７４】
これらの結果から、アルクチゲニンは、肝臓のCyp8b1の発現を促進する一方で、肝臓のSHP、FXRおよびFGF4R、並びに小腸のFGF15およびSHPの発現を抑制することが示された。したがって、アルクチゲニンが、肝臓におけるコレステロール代謝を促進し、胆汁酸の合成および排出を促進する作用を有することが強く示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明は、胆汁酸合成を促進することにより、コレステロールの代謝を促進することができるため、コレステロール増加に伴う種々の症状を治療、改善または予防するための医薬および食品などに好適に利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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