(57)【要約】  細胞診検査のスループットを向上させるために、固定液を洗浄する工程が最小限でも適正な標本の作成ができるように生物学的材料の不動化を行うための組成物と、該組成物をコーティングした固体支持体を用いて生物学的材料を分析する方法とを開発する。  本発明はポリアリルアミン系ポリマーを含む生物学的材料の不動化を行うための組成物であって、該ポリアリルアミン系ポリマーのアミノ基は、少なくとも一部が変性した第１級アミノ基か、第１級アミノ基及び第２級アミノ基か、第１級アミノ基及び第３級アミノ基か、第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基かである、組成物を提供する。本発明は、本発明の組成物をコーティングした、生物学的材料の不動化を行うための顕微鏡スライドガラスと、本発明の顕微鏡スライドガラスを用いて生物学的材料を分析する方法を提供する。
2010123039.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリアリルアミン系ポリマーを含み、該ポリマーのアミノ基は、少なくとも一部が変性した第１級アミノ基か、第１級アミノ基及び第２級アミノ基か、第１級アミノ基及び第３級アミノ基か、第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基かであることを特徴とする、生物学的材料の不動化を行うための組成物。
【請求項２】
前記変性した第１級アミノ基は、第２級アミド基又はアルコキシカルボニル基であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記変性した第１級アミノ基は、前記ポリマーの同一分子中のアミノ基の２５−７５％であることを特徴とする、請求項１又は２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
ポリアリルアミン系ポリマーを含み、該ポリマーのアミノ基は、第１級アミノ基か、第１級アミノ基及び第２級アミノ基か、第１級アミノ基及び第３級アミノ基か、第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基かであって、第１級アミノ基のみのポリマーは、側鎖に第２級アミド基又はアルコキシカルボニル基を含むことを特徴とする、生物学的材料の不動化を行うための組成物。
【請求項５】
前記第２級アミド基又はアルコキシカルボニル基の数は、前記ポリマーの同一分子中の第１級アミノ基の数の３分の１ないし３倍であることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基は、それぞれ、第１級アミノ基及び／又は第２級アミノ基が変性していることを特徴とする、請求項１又は４に記載の組成物。
【請求項７】
前記ポリマーは変性ポリアリルアミンであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記変性ポリアリルアミンは、第１級アミノ基がアシル基又はアルコキシカルボニル基に置換されることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記アシル基又はアルコキシカルボニル基の炭素原子数は２又は３であることを特徴とする、請求項２、４、５及び８のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１０】
前記アシル基は、アセチル基又はプロピオニル基であることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ポリマーの同一分子中のアミノ基の２５−７５％が変性されることを特徴とする、請求項７ないし１０のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリアミン系ポリマーは、二酸化硫黄及び／又はマレイン酸が共重合されることを特徴とする、請求項１ないし１１のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１３】
前記ポリマーは、アリルアミンと、ジアリルアミン又はジアリルメチルアミンとの共重合体であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ポリマーは、ポリジアリルアミン又はポリジアリルメチルアミンであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリマーの平均分子量は３，０００ないし５４，０００であることを特徴とする、請求項１ないし１４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１６】
前記生物学的材料の不動化は、固定剤の存在下で行うことを特徴とする、請求項１ないし１５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１７】
前記固定剤は、０．０４ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドであることを特徴とする、請求項１６のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１８】
前記生物学的材料は臨床検査試料であることを特徴とする、請求項１ないし１７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１９】
前記生物学的材料は細胞診検査試料であることを特徴とする、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記生物学的材料は子宮頸部細胞診検査試料であることを特徴とする、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１ないし２０のいずれか１つに記載の組成物をコーティングしたことを特徴とする、生物学的材料の不動化を行うための固体支持体。
【請求項２２】
請求項１ないし２０のいずれか１つに記載の組成物をコーティングするステップを含むことを特徴とする、生物学的材料の不動化を行うための固体支持体の製造方法。
【請求項２３】
請求項１ないし２０のいずれか１つに記載の組成物をコーティングしたことを特徴とする、顕微鏡スライドガラス。
【請求項２４】
請求項２３に記載の顕微鏡スライドガラスを用いて生物学的材料を分析する方法であって、
（１）前記生物学的材料を、固定剤を含む液に浸漬して固定するステップと、
（２）固定された前記生物学的材料を分離するステップと、
（３）分離された前記生物学的材料を水溶液に懸濁するステップと、
（４）前記水溶液を前記顕微鏡スライドガラスに戴置して、該顕微鏡スライドガラス上に前記生物学的材料を不動化させるステップとを含むことを特徴とする、生物学的材料を分析する方法。
【請求項２５】
前記ステップ（３）の水溶液は固定剤を含むことを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ステップ（３）の水溶液は０．０４ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドを含むことを特徴とする、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
（５）前記ステップ（４）において前記生物学的材料が不動化された顕微鏡スライドガラスを染色するステップを含むことを特徴とする、請求項２４ないし２６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２８】
請求項２３に記載の顕微鏡スライドガラスを保持するホルダと、自動分注機ユニットと、ロボットアームを備えたピペッタユニットとを含むことを特徴とする、請求項２５ないし２７のいずれか１つに記載の方法を実行するための分析システム。
【請求項２９】
遠心機ユニットを含むことを特徴とする、請求項２８に記載の分析システム。
【請求項３０】
請求項２３に記載の顕微鏡スライドガラスを含むことを特徴とする、請求項２５ないし２７のいずれか１つに記載の方法を実行するためのキット。
【請求項３１】
採取された生物学的材料を固定し保存するための試薬を含むことを特徴とする、請求項３０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的材料の不動化を行うための組成物、具体的には、ポリアミン系ポリマーを含む生物学的材料の不動化を行うための組成物と、該組成物をコーティングした固体支持体と、該固体支持体を用いて生物学的材料を分析する方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞診検査は、患者の臓器から採取された細胞を含む生物学的材料を顕微鏡スライドガラスに戴置した状態で染色処理し顕微鏡観察することによって悪性細胞の有無等を診断する方法として広く用いられている。【０００３】
前記生物学的材料は染色及び洗浄処理の際に剥離しないようにスライド上にしっかりと不動化される必要がある。前記生物学的材料は負に荷電しているので、従来は、正荷電を有するカチオン性ポリマーを含む組成物を用いて前記生物学的材料を不動化していた（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平１１−１４９０９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
生物学的材料の固定液はホルムアルデヒド、アルコール等を含む。これらの成分は、従来のカチオン性ポリマーをコーティングしたスライドガラスと前記生物学的材料との親和性を低下させる作用がある。そのため、従来のカチオン性ポリマーを含む組成物を使用する場合には、生物学的材料を十分洗浄して前記固定液の成分を除去しなければならなかった。しかし、固定液を洗浄する工程を繰り返すことは時間及びコストがかかる。そこで、細胞診検査のスループットを向上させるためには、固定液を洗浄する工程が最小限でも適正な標本の作成ができるように生物学的材料の不動化を行うための組成物と、該組成物をコーティングした固体支持体と、該固体支持体を用いて生物学的材料を分析する方法と、該方法を実行するための分析システム及びキットとを開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、生物学的材料の不動化を行うための組成物を提供する。本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物は、ポリアリルアミン系ポリマーを含み、該ポリマーのアミノ基は、少なくとも一部が変性した第１級アミノ基か、第１級アミノ基及び第２級アミノ基か、第１級アミノ基及び第３級アミノ基か、第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基かである。【０００７】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記変性した第１級アミノ基は、第２級アミド基又はアルコキシカルボニル基の場合がある。【０００８】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記変性した第１級アミノ基は、前記ポリマーの同一分子中のアミノ基の２５−７５％の場合がある。【０００９】
本発明は、生物学的材料の不動化を行うための組成物を提供する。本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物は、ポリアリルアミン系ポリマーを含み、該ポリマーのアミノ基は、第１級アミノ基か、第１級アミノ基及び第２級アミノ基か、第１級アミノ基及び第３級アミノ基か、第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基かであって、第１級アミノ基のみのポリマーは、側鎖に第２級アミド基又はアルコキシカルボニル基を含む。【００１０】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記第２級アミド基又はアルコキシカルボニル基の数は、前記ポリマーの同一分子中の第１級アミノ基の数の３分の１ないし３倍の場合がある。【００１１】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記第２級アミノ基及び／又は第３級アミノ基は、それぞれ、第１級アミノ基及び／又は第２級アミノ基が変性している場合がある。【００１２】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリマーは変性ポリアリルアミンの場合がある。【００１３】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記変性ポリアリルアミンは、第１級アミノ基がアシル基又はアルコキシカルボニル基に置換される場合がある。【００１４】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記アシル基又はアルコキシカルボニル基の炭素原子数は２又は３の場合がある。【００１５】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記アシル基は、アセチル基又はプロピオニル基の場合がある。【００１６】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリマーの同一分子中のアミノ基の２５−７５％が変性される場合がある。【００１７】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリアミン系ポリマーは、二酸化硫黄及び／又はマレイン酸が共重合される場合がある。【００１８】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリマーは、アリルアミンと、ジアリルアミン又はジアリルメチルアミンとの共重合体の場合がある。【００１９】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリマーは、ポリジアリルアミン又はポリジアリルメチルアミンの場合がある。【００２０】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリマーの平均分子量は３，０００ないし５４，０００の場合がある。【００２１】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記ポリマーを含む溶液の濃度は０．０５ないし０．２ｗ／ｖ％の場合がある。【００２２】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記生物学的材料の不動化は、固定剤の存在下で行う場合がある。【００２３】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記固定剤は、０．０４ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドの場合がある。【００２４】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記生物学的材料は臨床検査試料の場合がある。【００２５】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記生物学的材料は細胞診検査試料の場合がある。【００２６】
本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物において、前記生物学的材料は子宮頸部細胞診検査試料の場合がある。【００２７】
本発明は、本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物をコーティングした、生物学的材料の不動化を行うための固体支持体を提供する。【００２８】
本発明は、本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物をコーティングするステップを含む、生物学的材料の不動化を行うための固体支持体の製造方法を提供する。【００２９】
本発明は、本発明の生物学的材料の不動化を行うための組成物をコーティングした、生物学的材料の不動化を行うための顕微鏡スライドガラスを提供する。【００３０】
本発明は、本発明の顕微鏡スライドガラスを用いて生物学的材料を分析する方法を提供する。本発明の方法は、（１）前記生物学的材料を、固定剤を含む液に浸漬して固定するステップと、（２）固定された前記生物学的材料を分離するステップと、（３）分離された前記生物学的材料を水溶液に懸濁するステップと、（４）前記水溶液を前記顕微鏡スライドガラスに戴置して、該顕微鏡スライドガラス上に前記生物学的材料を不動化させるステップとを含む。【００３１】
本発明の生物学的材料を分析する方法において、前記ステップ（３）の水溶液は固定剤を含む場合がある。【００３２】
本発明の生物学的材料を分析する方法において、前記ステップ（３）の水溶液は０．０４ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドを含む場合がある。【００３３】
本発明の生物学的材料を分析する方法は、（５）前記ステップ（４）において前記生物学的材料が不動化された顕微鏡スライドガラスを染色するステップを含む場合がある。【００３４】
本発明は、本発明の生物学的材料を分析する方法を実行するための分析システムを提供する。本発明の分析システムは、本発明の顕微鏡スライドガラスを保持するホルダと、自動分注機ユニットと、ロボットアームを備えたピペッタユニットとを含む。【００３５】
本発明の分析システムは、遠心機ユニットを含む場合がある。【００３６】
本発明は、本発明の生物学的材料を分析する方法を実行するためのキットを提供する。本発明のキットは本発明の顕微鏡スライドガラスを含む。【００３７】
本発明のキットは、採取された生物学的材料を固定し保存するための試薬を含む場合がある。【００３８】
本発明の生物学的材料は、被験者から採取された細胞、組織、体液等を含むが、これらに限定されない。本発明の生物学的材料は、ヒト、マウス、ラット及びハムスターを含むがこれらに限定されない生物種由来の培養細胞の場合がある。本発明の生物学的材料は、光学顕微鏡で観察することにより、前記臓器に腫瘍、炎症その他の病理学的変化の有無を検査するために利用される場合と、生化学、免疫学、分子生物学その他の手法による検査のために利用される場合とがあるが、これらに限定されない。【００３９】
本発明の生物学的材料は細胞診検査試料の場合がある。前記細胞診検査試料は、婦人科性器（外陰、膣壁、後膣円蓋部、頸部、頸管内膜、体部等）、呼吸器（喀痰、気管支、肺胞、洗浄液等）、体腔液、泌尿器（尿、洗浄液、腎、前立腺、精巣等）、乳腺（乳頭分泌物、穿刺吸引）、甲状腺、副甲状腺、消化器（口腔、咽頭、唾液腺、食道、胃、小腸、大腸、肝臓、胆道、膵臓）、脳（脳、髄液、中枢神経）、リンパ節、骨、軟部臓器、造血臓器（血液、骨髄）を含むが、これらに限定されない被検者の臓器から採取される場合がある。本発明の細胞診検査試料は子宮頸部から採取される場合がある。【００４０】
本明細書において、生物学的材料の不動化とは、顕微鏡スライドガラスを含む固体支持体の表面への生物学的材料の結合であって、該結合は、その後の細胞化学的技術のための処理、例えば、洗浄、透徹、染色等の処理の際に前記生物学的材料が前記固体支持体から脱離しない程度に強い結合をいう。【００４１】
本明細書においてポリアリル（ａｌｌｙｌ）アミン系ポリマーとは、アリルアミン、ジアリルアミン、ジアリル（−Ｒ）アミン、（−Ｒ）２アリルアミンからなるグループから選択される少なくとも１種類のモノマーが重合したポリマーをいう。本発明のポリアリルアミン系ポリマーには、ポリアリルアミン、ポリジアリルアミン、ポリジアリル（−Ｒ）アミン、ポリ（−Ｒ）２アリルアミンが含まれる。ポリアリルアミンは第１級アミンモノマーであるアリルアミンだけが重合したポリマーであり、ポリジアリルアミンは第２級アミンモノマーであるジアリルアミンだけが重合したポリマーであり、ポリジアリル（−Ｒ）アミン及びポリ（−Ｒ）２アリルアミンは第３級アミンモノマーだけが重合したポリマーである。ここでＲは、炭素原子数１−２０のｎ−アルキル基又はｉｓｏ−アルキル基か、炭素原子数６−１２のアリル基かであって、ヒドロキシル基、ポリエチレングリコール鎖を含むがこれらに限定されない置換基を有する場合がある。またポリアリルアミン系ポリマーには、第１級アミンモノマーと第２級アミンモノマーとの共重合体と、第１級アミンモノマーと第３級アミンモノマーとの共重合体とが含まれる。【００４２】
本発明の固体支持体への生物学的材料の不動化に影響のないことを条件として、本発明のポリアリルアミン系ポリマーは、主鎖に、二酸化硫黄、マレイン酸その他の化合物が重合してもかまわないし、側鎖が変性されてもかまわない。本発明において変性とは、本発明のポリアリルアミン系ポリマーの側鎖のアミノ基の水素原子が他の原子又は原子団と共有結合による修飾を施されることをいう。すなわち、本発明のポリアリルアミン系ポリマーは、未変性ポリアリルアミン系ポリマーと、変性ポリアリルアミン系ポリマーとを含む。本明細書のポリマーについて、「変性（アシル化、アルコキシカルボニル化等を含む）」又は「未変性」と特に記載されない場合には、「変性ポリマー及び／又は未変性ポリマー」を意味する。本発明の変性ポリアリルアミン系ポリマーとは、未変性ポリアリルアミン系ポリマー分子の少なくとも一部のアミノ基において、水素原子が他の原子又は原子団と置換されたポリマーをいう。したがって、本発明のポリマー中の第２級アミノ基又は第３級アミノ基は、第２級アミンモノマー又は第３級アミンモノマーに由来する場合もあるが、それぞれ、第１級アミンモノマー又は第２級アミンモノマーに由来するが、モノマーの重合反応の後に変性される場合がある。【００４３】
本発明の変性ポリアリルアミン系ポリマーは、同一分子内の中のアミノ基の１−９５％が変性されることが好ましく、同一分子内の中のアミノ基の１０−８０％が変性されることがより好ましく、同一分子内の中のアミノ基の２５−７５％が変性されることがさらにより好ましい。本発明のポリマーにおける同一分子内の中のアミノ基のうち変性アミノ基の割合は、ＮＭＲ法、コロイド滴定法その他の当業者に周知の方法で決定することができる。【００４４】
本発明の変性ポリアリルアミン系ポリマーにおいてアミノ基の水素原子を置換する原子団は、炭素原子数１−２０のｎ−アルキル基又はｉｓｏ−アルキル基か、炭素原子数６−１２のアリル基かであって、ヒドロキシル基、ポリエチレングリコール鎖を含むがこれらに限定されない置換基を有する場合がある。前記原子団は、アシル基又はアルコキシカルボニル基であることが好ましい。前記原子団は、炭素原子数２−６のアシル基又はアルコキシカルボニル基であることがより好ましく、アセチル基、プロピオニル基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基であることがさらに好ましく、アセチル基及びプロピオニル基であることがさらにより好ましい。これらの原子団で本発明のポリマーのアミノ基の水素原子を置換する方法は当業者に周知である。例えば、アセチル基で置換する場合には、ポリマーを無水酢酸と反応させる。【００４５】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーのアミノ基が他の１種類又は２種類以上のカチオンとのイオン結合を行っていてもかまわない。本明細書において、ポリアリルアミン系ポリマーの「遊離塩基」とは、前記カチオンとの結合がないものをいい、フリータイプともよばれることがある。ポリアリルアミン系ポリマーの「塩」とは、前記カチオンとの結合があるものをいう。好ましいポリアリルアミン系ポリマーの塩には、塩酸塩及び酢酸塩を含むが、これらに限定されない。【００４６】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーは商業的に入手可能であり、その合成方法は当業者に周知である。本発明のポリアリルアミン系ポリマーの平均分子量は、本発明の固体支持体への生物学的材料の不動化に影響のないことを条件として、５００ないし１，０００，０００の範囲内であればよい。本発明のポリアリルアミン系ポリマーの平均分子量は、２，０００ないし１００，０００の範囲内であることが好ましく、３，０００ないし５４，０００の範囲内であることがより好ましい。ポリアリルアミン系ポリマーのうち、ポリジアリルアミンの場合には、３，０００ないし８０００の範囲内であることが望ましい。アリルアミン及びジアリルアミンの共重合体の場合、好ましい分子量はポリマー中に含まれるアリルアミン及びジアリルアミンの割合に依存する。アリルアミン及びジアリルアミンの割合が１：１の場合には、３，０００ないし５４，０００の範囲内であることが好ましく、３：１の場合には、３，０００ないし１００，０００の範囲内であることが好ましく、１：３の場合には、３，０００ないし３０，０００の範囲内であることが好ましい。分子量の範囲は、アリルアミン及びジアリルアミンの割合によって変化するため、これらに限定されるものではない。本発明のポリアリルアミン系ポリマーの平均分子量及び多分散度（Ｍｗ／Ｍｎ）は、ゲル浸透クロマトグラフィ法その他の当業者に周知の測定法によって決定することができる。本発明のポリアリルアミン系ポリマーの平均分子量は多分散を示す場合がある。【００４７】
本明細書において、共重合体とは２種類以上の単量体が重合して生成された高分子化合物を指し、前記共重合体の重合形式は、交互共重合、ブロック共重合、ランダム共重合、グラフト共重合及びこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。本発明のポリアリルアミン系ポリマーに含まれる共重合体は、本発明の固体支持体への生物学的材料の不動化に影響のないことを条件として、２種類以上の単量体がいかなる割合で共重合されてもかまわない。【００４８】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーは、脱イオン水、エタノールその他の当業者に周知の溶媒に溶解することができる。本発明のポリアリルアミン系ポリマーの濃度は、本発明の固体支持体への生物学的材料の不動化に影響のないことを条件として、いかなる濃度であってもかまわないが、０．０１ないし１ｗ／ｖ％の範囲内が好ましく、０．０５ないし０．２ｗ／ｖ％の範囲内であることがより好ましい。【００４９】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーを含む溶液は、遊離型ポリアリルアミンを前記溶媒に溶解した後、塩酸又は水酸化ナトリウムその他当業者に周知の酸又は塩基を用いてｐＨを調製することができる。また前記ｐＨは適切な緩衝液で安定化される場合がある。前記ポリアリルアミン系ポリマーを含む溶液のｐＨは、本発明の固体支持体への生物学的材料の不動化に影響のないことを条件として、いかなるｐＨであってもかまわないが、９ないし１２の範囲内であることが好ましく、１０ないし１１の範囲内であることがより好ましい。【００５０】
本明細書において、ポリアリルアミン系ポリマーをコーティングするとは、ポリアリルアミン系ポリマー溶液を固体支持体に噴霧又は塗布するか、ポリアリルアミン系ポリマー溶液に固体支持体を浸漬することをいう。【００５１】
本明細書において固体支持体とは、顕微鏡スライドガラスの他、マルチウェルプレート、ラテックス凝集法用微粒子及び表面プラズモン共鳴法用センサーチップを含むが、これらに限定されない。【００５２】
前記固体支持体は、疎水性表面処理及び／又は疎水性樹脂のコーティングを施すことにより、該固体支持体の表面のうち特定の場所だけに本発明のポリアリルアミン系ポリマーがコーティングされる場合がある。【００５３】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーがコーティングされた固体支持体は、該ポリアリルアミン系ポリマーのみがコーティングされる場合の他、前記ポリアリルアミン系ポリマーとともに他のいずれかのポリマー組成物がコーティングされる場合も含む。【００５４】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーがコーティングされた固体支持体は、風乾又は加熱乾燥によって乾燥処理を施されることが望ましい。【００５５】
本発明のポリアリルアミン系ポリマーがコーティングされた固体支持体は、前記乾燥処理の後、脱イオン水その他の水性溶媒でリンスされる場合がある。リンス処理により、共染、すなわち、染色に用いる色素が生物学的材料ではなく前記ポリアリルアミン系ポリマーと反応する非特異的染色が起こりにくくなる。本発明のポリアリルアミン系ポリマーは共染が起こらない条件であっても、固定液の洗浄が不完全で固定液の成分を含む溶液中で生物学的材料を不動化することができる。【００５６】
本発明の固定液は、固定剤を含む水性溶液をいう。前記固定剤は、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、ジアルデヒドを含むがこれらに限定されないアルデヒドと、メタノール、エタノールを含むがこれらに限定されないアルコールと、アセトンと、ピクリン酸とからなるグループから選択される１種類または２種類以上の化合物の場合がある。好ましい固定剤はホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド及び／又はジアルデヒドである。【００５７】
本発明の生物学的材料の処理方法において、固定液に懸濁された生物学的材料は、遠心によって該固定液から分離される。前記固定液を除去した後、０．１ｍＬ程度の固定液が前記生物学的材料とともに遠心管に残っていて、新鮮な脱イオン水２ｍＬからなる洗浄液で洗浄された後、本発明のポリアリルアミン系ポリマーがコーティングされた顕微鏡スライドガラス上に戴置される。固定液をさらに除去する場合には、固定液を除去した遠心管に１０ｍＬの新鮮な脱イオン水からなる予洗液で洗浄された後、２度目の遠心によって前記生物学的材料が分離され、前記予洗液が除去されたのち、新鮮な脱イオン水２ｍＬからなる洗浄液で洗浄された後、本発明のポリアリルアミン系ポリマーがコーティングされた顕微鏡スライドガラス上に戴置される。いずれの遠心においても、０．１ｍＬ程度の溶液が沈殿した生物学的材料とともに遠心管に残る。したがって、予洗を行わない場合には固定液は２０倍に希釈され、予洗を行う場合には固定液はさらに１００倍に希釈されると考えられる。本明細書の実施例に示すとおり、予洗の有無によって生物学的材料のスライドガラスへの不動化の程度は大きな影響を受ける。以下の実施例で用いた固定液は０．８ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドを含むので、予洗を行わない場合には、本発明の組成物をコーティングされた顕微鏡スライド上に生物学的材料が不動化される際には０．０４ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドが存在する。【００５８】
本発明の生物学的材料が細胞診検査試料の場合には、顕微鏡スライドガラス上に少なくとも５，０００個の細胞が不動化されることが好ましい。細胞診検査、主に子宮頸部細胞診に用いる標本の適否に関する基準であるベセスダシステム２００１では、１枚の標本について保存状態がよく鮮明に見える扁平上皮細胞が最低でも５，０００個含まれていると推定されなければならないと規定されているからである。以下の実施例で細胞が顕微鏡スライドガラスに不動化する程度（細胞不動化度）は、最大を１０点とする１０段階の指数で定性的に評価された。細胞不動化度が４点以上のとき、顕微鏡スライドガラス上に少なくとも５，０００個の細胞が不動化され、ベセスダシステム２００１の基準を満足する。【００５９】
本発明の生物学的材料を分析する方法を実行するための分析システムのうち、本発明の顕微鏡スライドガラスを保持するホルダと、自動分注機ユニットと、ロボットアームを備えたピペッタユニットとは、当業者に周知である。前記分析システムは、遠心機ユニット及び／又は本発明の生物学的材料を分析する方法を説明するマニュアルを含む場合がある。【００６０】
本発明の生物学的材料を分析する方法を実行するためのキットは、本発明の組成物をコーティングした顕微鏡スライドガラスの他、本発明の生物学的材料を採取するための器具、採取された生物学的材料を固定し保存するための試薬、本発明の生物学的材料を分析する方法を説明するマニュアル等を含む場合がある。前記試薬は少なくとも０．８ｗ／ｖ％のホルムアルデヒドを含む。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１Ａ】異なる平均分子量の５０％アセチル化ポリアリルアミンを含む溶液の濃度と、該溶液に浸漬することによりコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度の関係を示すグラフ。
【図１Ｂ】異なる平均分子量の未変性ポリアリルアミンを含む溶液の濃度と、該溶液に浸漬することによりコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度との関係を示すグラフ。
【図２Ａ】予洗処理を施された細胞について、平均分子量１５，０００のアシル化ポリアリルアミンのアシル化の程度と、該アシル化ポリアリルアミンがコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度との関係を示すグラフ。
【図２Ｂ】予洗処理を施されない細胞について、平均分子量１５，０００のアシル化ポリアリルアミンのアシル化の程度と、該アシル化ポリアリルアミンがコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度との関係を示すグラフ。
【図３】予洗処理を施されない細胞について、さまざまなポリアリルアミン系ポリマーでコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度を示すグラフ。
【図４Ａ】コーティングされた等モル共重合体の濃度及び平均分子量と、細胞不動化度との関係を示すグラフ。
【図４Ｂ】コーティングされたポリアリルアミンの濃度及び平均分子量と、細胞不動化度との関係を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
【００６３】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【実施例１】
【００６４】
１．ポリアリルアミンのアセチル化の細胞不動化度への影響
１−１．方法
未変性ポリアリルアミン
日東紡績株式会社から購入された未変性ポリアリルアミンは、平均分子量が３０００、５０００、８０００及び１５０００（カタログ番号はそれぞれ、ＰＡＡ−０３、ＰＡＡ−０５、ＰＡＡ−０８及びＰＡＡ−１５Ｃ）であった。【００６５】
５０％アセチル化ポリアリルアミンの合成
かき混ぜ機、ジムロート還流器、滴下ロート、温度計を備えた４ツ口５ｌ丸底セパラブルフラスコに、分子量１５０００の１５％ポリアリルアミン水溶液を３４４３ｇ（未変性アリルアミンモノマー単位で６．０モル）が仕込まれ、フラスコを氷水で冷やし２００ｒｐｍで撹拌しながら、無水酢酸３１５．７７ｇ（３．００モル）をゆっくり滴下し、４時間かけて全量滴下された。反応時の温度は０〜５°Ｃに保持された。引き続きフラスコを冷やしながら撹拌して同温度を維持しながら、１８．４１％の水酸化ナトリウム水溶液６６７．３１ｇ（３．０７モル）が滴下され、副生した酢酸が中和された。中和された反応混合液は、特公平７−６８２８９公報に記載の方法で電気透析に付され、４４時間かけて脱塩され、アセチル化ポリアリルアミン遊離塩基が単離された。該アセチル化ポリアリルアミン遊離塩基の水溶液中の水が重水に置換され、ＮＭＲ測定に供された。アミノ基に結合するメチレン基の水素と、アミド基に結合するメチレン基の水素とに対応するＮＭＲ波形の面積比から、アセチル化ポリアリルアミンのアセチル化度が５０％と算出された。前記アセチル化ポリアリルアミンの平均分子量の多分散度（Ｍｗ／Ｍｎ）は、２．６３７ないし２．７３０であった。【００６６】
顕微鏡スライドガラスのコーティング
撥水性樹脂を被覆した顕微鏡スライドガラスは、前記５０％アセチル化ポリアリルアミン溶液か、未変性ポリアリルアミン溶液かに１０秒間浸漬され、引き上げた後、風乾された。その後、脱イオン水でリンス処理され、風乾され、保存された。【００６７】
固定液の調製
固定液は、０．８ｗ／ｖ％ホルムアルデヒド、２２ｗ／ｖ％エタノール及び１．５ｗ／ｖ％メタノールの水溶液を用いた。【００６８】
生物学的材料の調製
社内ボランティアから採取した細胞診検査試料を前記固定液で固定した。【００６９】
固定液の除去
前記固定液で固定された細胞は８００Ｇで５分間遠心され、前記固定液が除去された。沈殿した細胞ペレットには前記固定液が約０．１ｍＬ含まれた。【００７０】
予洗処理
前記固定液が除去された細胞ペレットに、脱イオン水１０ｍＬからなる予洗液が添加され、懸濁された細胞は８００Ｇで５分間遠心され、前記予洗液が除去された。沈殿した細胞ペレットには前記予洗液が約０．１ｍＬ含まれた。【００７１】
細胞のコーティング
前記固定液が除去された細胞ペレットか、前記予洗液が除去された細胞ペレットかに脱イオン水２ｍＬからなる洗浄液が添加され、攪拌及び懸濁の後、０．３ｍＬが、前記５０％アセチル化ポリアリルアミンか、未変性ポリアリルアミンかでコーティングされたスライドガラス上に戴置され、１０分間静置された。細胞が不動化されたスライドは１００％エタノール又は脱イオン水で洗浄された。【００７２】
細胞の染色
細胞の吸着後、細胞を染色するために細胞診検査で慣用されるパパニコロウ染色が施された。細胞が吸着されたスライドは、ヘマトキシリン溶液で１分半、ＯＧ−６で２分間染色された。その後、ＥＡ−５０で３分間染色された。染色後は、脱水・透徹処理され、封入された。【００７３】
スライドの細胞不動化度の測定
パパニコロウ染色後、顕微鏡の１視野あたりの細胞の数を観察して、５０％アセチル化ポリアリルアミン又は未変性ポリアリルアミンの細胞不動化度は、最大を１０とする１０段階の指数で定性的に評価された。細胞不動化度が４点以上のとき、顕微鏡スライドガラス上に少なくとも５，０００個の細胞が不動化され、ベセスダシステム２００１の基準を満足する。【００７４】
１−２．結果
図１Ａは、異なる平均分子量の５０％アセチル化ポリアリルアミンを含む溶液の濃度と、該溶液に浸漬することによりコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度の関係を示すグラフである。プロット点のそれぞれは、５０％アセチル化ポリアリルアミンの分子量が、３０００（◇）、５０００（■）、８０００（▲）及び１５０００（□）であることを示す。分子量１５０００では、０．０３１２５％（ｗ／ｖ）、０．０６２５％（ｗ／ｖ）及び０．１２５％（ｗ／ｖ）の濃度で細胞不動化度の評価指数が最大の１０を示した。図１Ｂは、異なる平均分子量の未変性ポリアリルアミンを含む溶液の濃度と、該溶液に浸漬することによりコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度との関係を示すグラフである。プロット点のそれぞれは、未変性ポリアリルアミンの分子量が、３０００（◇）、５０００（■）、８０００（▲）及び１５０００（□）であることを示す。分子量３０００では、０．０３１２５％（ｗ／ｖ）及び０．０６２５％（ｗ／ｖ）の濃度で細胞不動化度の評価指数が９を示した。以上の結果から、分子量１５０００の５０％アセチル化ポリアリルアミンは０．１２５％（ｗ／ｖ）以下の濃度で、分子量３０００の未変性ポリアリルアミンは０．０６２５％（ｗ／ｖ）以下の濃度で細胞不動化度が最大であることが示された。また、未変性ポリアリルアミンよりも５０％アセチル化ポリアリルアミンの方が細胞不動化度が高く、より多くの細胞が吸着された。これは、未変性ポリアリルアミンがアシル化されると細胞不動化度が増大することを示唆する。これは、アミノ基がアシル化すると疎水性が高まるため、イオン結合に加えて疎水結合の寄与によって細胞不動化度が増大すると考えられる。
【実施例２】
【００７５】
２．アシル化の種類及び割合と、予洗処理の有無との細胞不動化度への影響
２−１．方法
２５％アセチル化ポリアリルアミンの合成
無水酢酸が１５７．８９ｇ（１．５モル）、水酸化ナトリウムが１４．８３％の水酸化ナトリウム水溶液４２５．７７ｇ（１．５８モル）が用いられた以外は、実施例１と同様に操作し、２５％アセチル化ポリアリルアミン遊離塩基が得られた。【００７６】
７５％アセチル化ポリアリルアミンの合成
無水酢酸が４７３．６５ｇ（４．５０モル）、水酸化ナトリウムが１８．４１％の水酸化ナトリウム水溶液１０００．９７ｇ（４．６１モル）が用いられた以外は、実施例１と同様に操作し、７５％アセチル化ポリアリルアミン遊離塩基が得られた。【００７７】
２５％プロピオニル化ポリアリルアミンの合成
かき混ぜ機、ジムロート還流器、滴下ロート、温度計を備えた４ツ口３ｌ丸底セパラブルフラスコに、分子量約１５０００の１５％ポリアリルアミン水溶液（ＰＡＡ−１５Ｃ）が１７６３ｇ（未変性アリルアミンモノマー単位で３．０モル）仕込まれ、フラスコを氷水で冷やし２００ｒｐｍで撹拌しながら、無水プロピオン酸１００．６３ｇ（０．７５モル）がゆっくり滴下され、６時間かけて全量滴下された。反応時の温度は０〜５°Ｃに保持された。引き続きフラスコを冷やしながら撹拌して同温度に保持しながら、１１．２５％の水酸化ナトリウム水溶液２７９．９８ｇ（０．７９モル）が滴下され、副生したプロピオン酸が中和された。【００７８】
得られた中和後の液は、実施例１と同様に電気透析に付され、２８時間かけて脱塩され、２５％プロピオニル化ポリアリルアミン遊離塩基が生成された。ここで、前記２５％プロピオニル化ポリアリルアミン遊離塩基、すなわち遊離塩基型２５％プロピオニル化ポリアリルアミンとは、原料のポリアリルアミンのアミノ基に対し２５％プロピオニル化された重合体である。この水溶液中の水は実施例１と同様に置換され、ＮＭＲの測定に用いられた。【００７９】
５０％プロピオニル化ポリアリルアミンの合成
無水プロピオン酸の量を２０１．２５ｇ（１．５０モル）、水酸化ナトリウムを１１．２５％の水酸化ナトリウム水溶液５５９．９６ｇ（１．５８モル）用いた以外は、上記と同様に操作し、遊離塩基型５０％プロピオニル化ポリアリルアミンが得られた。【００８０】
顕微鏡スライドガラスのコーティング
撥水性樹脂を被覆した顕微鏡スライドガラスは、前記ポリマーの０．１ｗ／ｖ％水溶液中にスライドガラスが１０秒間浸漬され、引き上げた後、風乾された。その後、脱イオン水でリンス処理され、風乾され、保存された。【００８１】
細胞懸濁液の調製
細胞は実施例１で説明された方法で調製された。本実施例では、予洗処理を施された後洗浄液に懸濁された細胞と、予洗処理を施されないで固定液が除去された後直接洗浄液に懸濁された細胞とが用いられた。【００８２】
浸漬細胞のスライドへの吸着、染色及び細胞不動化度の測定は、原則として実施例１で説明された方法に従って実施された。【００８３】
２−２．結果
図２Ａは、予洗処理を施された細胞について、平均分子量１５，０００のアシル化ポリアリルアミンのアシル化の程度と、該アシル化ポリアリルアミンがコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度との関係を示すグラフである。対照として、未変性ポリアリルアミンでコーティングされたスライドが用いられた。アセチル化ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数（ハッチング入りの棒）は、アセチル化０％で９．５、アセチル化２５％で９．５、アセチル化５０％で１０、アセチル化７５％で９であった。また、プロピオニル化ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数（黒塗りの棒）は、プロピオニル化０％で９．５、プロピオニル化２５％で９、プロピオニル化５０％で１０であった。以上の結果から、予洗処理を施された細胞を用いた場合には、ポリアリルアミンのアシル化の種類及び割合によって、細胞不動化度にほとんど違いはないことが示された。図２Ｂは、予洗処理を施されない細胞について、平均分子量１５，０００のアシル化ポリアリルアミンのアシル化の程度と、該アシル化ポリアリルアミンがコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度との関係を示すグラフである。アセチル化ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数（ハッチング入りの棒）は、アセチル化０％で２、アセチル化２５％で４、アセチル化５０％で６、アセチル化７５％で５であった。また、プロピオニル化ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数（黒塗りの棒）は、プロピオニル化０％で２、プロピオニル化２５％で４、プロピオニル化５０％で６．５であった。以上の結果から、予洗処理を施されない細胞を用いた場合には、未変性ポリアリルアミンのアセチル化及びプロピオニル化は、ともに５０％で最大の細胞不動化度を示した。しかし、予洗処理を施されない細胞を用いた場合には、予洗処理を施された細胞を用いた場合と比較して、細胞不動化度の評価指数は減少した。この減少は、予洗処理を施されないことによって固定液の除去が不十分となり、固定液中に含まれる何らかの成分がポリマーの細胞不動化を阻害したためであると考えられる。【００８４】
ここで、未変性ポリアリルアミンのアシル化は、ポリアリルアミンのカチオン密度を低下させ、細胞不動化度の低下を生じさせるとも考えられる。しかし、予洗処理を施されない細胞を用いた場合では、５０％アシル化ポリアリルアミンは、未変性ポリアリルアミンと比較して、非常に高い細胞不動化度を示した（図２Ｂ）。この要因として、ポリアリルアミンのアシル化にともなって疎水性が増大し、細胞が疎水結合によってより吸着されやすくなったことが考えられる。また、予洗処理を施されない細胞を用いた場合において、未変性ポリアリルアミンのアシル化にともなって細胞不動化度の評価指数が増大することを考慮すると、前記疎水結合は残存する固定液中の成分によって阻害されないと考えられる。７５％アシル化ポリアリルアミンで細胞不動化度が減少したことは、ホルムアルデヒド存在下での細胞の不動化には、疎水結合とイオン結合の両方が必要であって、７５％までアシル化の程度が上がってしまうとイオン結合の寄与が低減するためであると考えられる。
【実施例３】
【００８５】
３．細胞不動化度に対する他のポリアリルアミン系ポリマーの影響
３−１．方法
他のポリアリルアミン系ポリマーとして、平均分子量３０００（図３のグラフでは、「ＭＷ３Ｋ」と表記される。）の未変性ポリジアリルアミン（日東紡績、ＰＡＳ−２１、図３のグラフでは、「未変性（２級）」と表記される。）、未変性ポリジアリルメチルアミン（ｐＨ９．０に調製、日東紡績、ＰＡＳ−２２、図３のグラフでは、「未変性（３級）」と表記される。）、未変性アリルアミン及び未変性ジアリルアミンの等モル共重合体（日東紡績、ＰＡＡ−Ｄ１１−３、図３のグラフでは、「未変性（１級／２級）」と表記される。）、未変性アリルアミン及び未変性ジアリルメチルアミンの等モル共重合体（日東紡績、ＰＡＡ−１１１２、図３のグラフでは、「未変性（１級／３級）」と表記される。）を用意した。これらの未変性ポリマーと、実施例１の平均分子量３０００の５０％アセチル化ポリアリルアミン（図３のグラフでは、「アセチル５０％（１級）」と表記される。）と、未変性ポリアリルアミン（図３のグラフでは、「未変性（１級）」と表記される。）と、平均分子量１５０００の５０％アセチル化ポリアリルアミン（図３のグラフでは、「アセチル５０％（１級、ＭＷ１５Ｋ）」と表記される。）とについて、実施例１及び２と同様にして、コーティングされたスライドガラスを調製し、予洗処理を施されない細胞について細胞不動化度を評価した。【００８６】
３−２．結果
図３は、予洗処理を施されない細胞について、さまざまなポリアリルアミン系ポリマーでコーティングされたスライドガラスの細胞不動化度を示すグラフである。未変性ポリジアリルアミンと、未変性アリルアミン及びジアリルアミンの等モル共重合体とは、平均分子量１５０００の５０％アセチル化ポリアリルアミンに匹敵する細胞不動化度であった。この結果、アセチル化、プロピオニル化のようなアシル化の他に、未変性ポリアリルアミンの第１級アミノ基を第２級アミノ基に置換することによっても、予洗処理を施されない細胞についての細胞不動化度を向上させることができた。これは、第２級アミノ基は第１級アミノ基より塩基性が高く、かつ疎水性が高いため、細胞が不動化されやすくなったと考えられる。
【実施例４】
【００８７】
４．ポリアリルアミン及び等モル共重合体の濃度及び平均分子量と、細胞不動化度との関係
４−１．方法
等モル共重合体及びポリアリルアミン
日東紡績株式会社から購入された未変性アリルアミン（第１級）及び未変性ジアリルアミン（第２級）の等モル共重合体（以下、「等モル共重合体」という。）は、平均分子量が、３０００、１５０００、２２０００及び４８０００（カタログ番号はそれぞれ、ＰＡＡ−Ｄ１１−３、ＰＡＡ−Ｄ１１−１５、ＰＡＡ−Ｄ１１−２２及びＰＡＡ−Ｄ１１−４８）であった。日東紡績株式会社から購入されたポリアリルアミンは、平均分子量が、３０００、１５０００及び２５０００（カタログ番号はそれぞれ、ＰＡＡ−３、ＰＡＡ−１５Ｃ及びＰＡＡ−２５）であった。また、シグマアルドリッジから購入されたポリアリルアミンは、平均分子量が６５０００（カタログ番号：４７９１４４）であった。【００８８】
スライドの細胞不動化度の評価
等モル共重合体及びポリアリルアミンは、実施例１ないし３と同様にスライドガラスにコーティングされ、予洗処理を施されていない細胞を用いて細胞不動化度が評価された。なお、各実験は２回行われた。【００８９】
４−２．結果
等モル共重合体のスライドガラスの結果
図４Ａは、コーティングされた等モル共重合体の濃度及び平均分子量と、細胞不動化度との関係を示すグラフである。０．０５％等モル共重合体の細胞不動化度の評価指数は、平均分子量３０００で４、平均分子量１５０００で６、平均分子量２２０００で８、平均分子量４８０００で９であった。０．１％等モル共重合体の細胞不動化度の評価指数は、平均分子量３０００で７、平均分子量１５０００で８、平均分子量２２０００で７、平均分子量４８０００で９であった。０．２％等モル共重合体の細胞不動化度の評価指数は、平均分子量３０００で７、平均分子量１５０００で７、平均分子量２２０００で８、平均分子量４８０００で７であった。なお、平均分子量が５４０００の等モル共重合体（ＰＡＡ−Ｄ１１−５４）の細胞不動化度の評価指数は、それぞれの濃度で、平均分子量が４８０００の等モル共重合体と同程度であった（データは示されていない。）。以上の結果から、平均分子量が大きくなるにつれて、等モル共重合体の細胞不動化度は高くなることが示された。高分子量の等モル共重合体では、０．０５％の低濃度でも細胞不動化度が減少しないことも示された。【００９０】
ポリアリルアミンのスライドガラスの結果
図４Ｂは、コーティングされたポリアリルアミンの濃度及び平均分子量と、細胞不動化度との関係を示すグラフである。０．０５％ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数は、平均分子量３０００で３、平均分子量１５０００、２５０００及び６５０００で４であった。０．１％ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数は、平均分子量３０００で３、平均分子量１５０００で４、平均分子量２５０００で３、平均分子量６５０００で４であった。０．２％ポリアリルアミンの細胞不動化度の評価指数は、平均分子量３０００で３、平均分子量１５０００で４、平均分子量２５０００で３、平均分子量６５０００で５であった。以上の結果から、ポリアリルアミンの細胞不動化度の最大値は、平均分子量６５０００で、濃度０．２％で５であったが、等モル共重合体の細胞不動化度の最大値よりも低いことが示された。【００９１】
結論
実施例１ないし４の実験結果から、アセチル化、プロピオニル化のようなアシル化と、未変性ポリアリルアミンの第１級アミノ基の第２級アミノ基への置換との他に、第１級アリルアミン及び第２級アリルアミンの共重合体化によっても、細胞不動化度の向上が、予洗処理を施された細胞だけでなく予洗処理を施されない細胞でも認められた。また、共重合体の平均分子量を大きくすることによっても、細胞不動化度の向上が認められた。これは、分子量の高い共重合体では、疎水性が向上すること、一分子あたりの結合点が増大することにより、細胞との接着性が向上するものと考えられる。
【図１Ａ】
2010123039.tif 000003
【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【国際調査報告】
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2010123039.tif 000011
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