(57)【要約】  ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤又はペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物を提供すること。  ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤；ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用の組成物（好適には、医薬組成物、飲食品組成物、又は飼料組成物）；粘膜上皮細胞及び／又は樹状細胞のペプチドグリカン認識タンパク質であることが好適である。
2018168449.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物。
【請求項２】
前記ペプチドグリカン認識タンパク質が、粘膜上皮細胞及び／又は樹状細胞のペプチドグリカン認識タンパク質である、請求項１に記載の産生促進用組成物。
【請求項３】
前記ペプチドグリカン認識タンパク質が、ＰＧＬＹＲＰ１、ＰＧＬＹＲＰ２、ＰＧＬＹＲＰ３、及びＰＧＬＹＲＰ４からなる群から選択される１種又は２種以上のタンパク質である、請求項１又は２に記載の産生促進用組成物。
【請求項４】
前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、及びビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の産生促進用組成物。
【請求項５】
前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の産生促進用組成物。
【請求項６】
前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１）、ビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）、及びビフィドバクテリウム・インファンティスＭ−６３（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２３）からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の産生促進用組成物。
【請求項７】
前記組成物が、免疫調節のために用いられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の産生促進用組成物。
【請求項８】
ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として投与する、免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善方法。
【請求項９】
ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として投与する、体内でペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進する方法。
【請求項１０】
免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善用の、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌。
【請求項１１】
ペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進するための、ビフィドバクテリウム属細菌の使用。
【請求項１２】
ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物を製造するための、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物、並びにペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用の医薬、飲食品組成物及び飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内の上皮細胞をはじめ、免疫系の細胞により産生される、ディフェンシンやリゾチームなどの抗菌タンパク質は、腸管内腔側の粘膜面に大量に存在し、外来病原体の侵入を阻止する生体防御の一端を担っている。
近年、これらのタンパク質に加えて、グラム陽性細菌の主要な細胞壁構成成分であるペプチドグリカンを標的とする抗菌タンパク質として、ペプチドグリカン認識タンパク質（Peptidoglycan Recognition Protein；ＰＧＬＹＲＰ）が、哺乳類において見出されている。
このペプチドグリカン認識タンパク質が発現する組織は、主に、鼻腔、眼、口腔、唾液、肺、食道、胃、腸管等の粘膜に存在し、粘膜組織中の樹状細胞等の免疫細胞や、血液、肝臓、及び骨髄にも存在している。【０００３】
このタンパク質は自然免疫系のみを免疫システムとして有する昆虫において初めて発見され、免疫応答を促す受容体として働くだけでなく、ペプチドグリカンを酵素的に分解する活性を有しており、免疫応答に重要な役割を果たしている。
ショウジョウバエなどの昆虫では、１３種類のＰＧＬＹＲＰファミリーが存在し、その中で哺乳類においては、４つのファミリー（ＰＧＬＹＲＰ１〜４）が進化的に保存されている。
これらＰＧＬＹＲＰ１〜４の４つのタンパク質は、それぞれ異なる構造や機能を持ち、発現する組織も異なることが報告されている。【０００４】
ＰＧＬＹＲＰ１は、多形核白血球の顆粒中に発現が認められている。また、ＰＧＬＹＲＰ１にはリステリア菌等に対する抗菌作用等が知られている（非特許文献１）。
ＰＧＬＹＲＰ２は、ペプチドグリカンを構成するムラミン酸とＬ−アラニン間を切断するアミダーゼ活性を有し、血中や腸管、皮膚で発現が認められている（非特許文献２）。また、ＰＧＬＹＲＰ２には、カンジタ菌等に対する抗菌作用及び抗炎症的な免疫調節作用等が知られている（非特許文献３及び４）。
ＰＧＬＹＲＰ３と４は、食道や腸管、口腔、皮膚などで発現が認められている。また、ＰＧＬＹＲＰ３及びＰＧＬＹＲＰ４には、黄色ブドウ球菌等に対する抗菌作用等が知られている（非特許文献５）。
このように、ＰＧＬＹＲＰ１〜４は抗菌活性を有していることが知られている。【０００５】
これらＰＧＬＹＲＰ１〜４の機能は未解明な部分が多く、これらについて、抗菌作用以外にも種々の機能についての研究がなされている。
ＰＧＬＹＲＰ１のノックアウトマウスはグラム陽性細菌に対する易感染性を示すことから、これらのタンパク質は生体の免疫機能において重要な役割を担っていると考えられる。【０００６】
また、ＰＧＬＹＲＰ２は、非特許文献２に示すように、アミダーゼ活性を有するＰＧＬＹＲＰ２は直接的な殺菌作用を示すほか、ペプチドグリカンを分解することでペプチドグリカンによる過剰な免疫応答を抑制することが示唆されており、正常な免疫機能の維持において重要だと考えられる。【０００７】
これらのことから、生体の免疫機能を十分に発揮させるためには、これら４つのペプチドグリカン認識タンパク質（ＰＧＬＹＲＰ１〜４）の発現を効果的に制御することが重要である。【０００８】
また、有益なペプチドグリカン認識タンパク質を安価に且つ大量に得る方法を提供するため、特許文献１には、ペプチドグリカン認識タンパク質をコードする遺伝子のクローン化、該遺伝子を組み込んだ組み換えベクターを得て、該組み換えベクターにより形質転換した形質転換体の培養によりＰＧＬＹＲＰを製造することが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平１０−１７９１７１号公報
【特許文献２】特開２０１２−２２３１３４号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Infect Immun. 2011 Feb;79(2):858-66.
【非特許文献２】Cell Microbiol. 2006; 8(7): 1059-1069.
【非特許文献３】Genet Mol Res. 2013 Dec 13;12(4):6743-51.
【非特許文献４】PLoS One. 2015 Jun 3;10(6):e0128039.
【非特許文献５】J Biol Chem. 2006 Mar 3;281(9):5895-907.
【非特許文献６】Immunobiology. 2012; 217(4): 412-419.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
特許文献１は、ペプチドグリカン認識タンパク質で有名なリゾチームの工業的生産のように、ペプチドグリカン認識タンパク質を工業的に大量生産する技術であって、このペプチドグリカン認識タンパク質を外部からヒトに投与するという考え方である。
しかし、生物本来の生体機能を活かして生体内においてペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進させようとするアプローチの研究は、生体内の機能が複雑なこともあり、十分とはいえなかった。
そこで、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤又はペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
そして、本発明者らは、正常な粘膜系生細胞を用いて、この生細胞からペプチドグリカン認識タンパク質が生体機能をうまく活用して産生促進できるかどうかを鋭意検討した。
その結果、本発明者らは、合成や天然の化合物ではなく、全く意外にもビフィドバクテリウム属細菌に、ペプチドグリカン認識タンパク質（特にＰＧＬＹＲＰ１、２、３及び４）産生促進作用を見出し、本発明を完成させた。【００１３】
複雑な生体内でのペプチドグリカン認識タンパク質の発現促進と、投与された細菌との関連メカニズムについて依然不明な点が多い。
例えば、非特許文献６において、非病原性のBacillus subtilis及びLactobacillus rhamnosus GG、日和見感染のMicrococcus luteusや病原性のStaphylococcus aureusが、ペプチドグリカン認識タンパク質の１種であるＰＧＬＹＲＰ３を発現させることが報告されている。しかしながら、非特許文献６からは、これら以外の細菌において、また、どのような系統の細菌であれば、ＰＧＬＹＲＰ３を発現させることが可能かは明確ではなく、不明である。
そして、ペプチドグリカン認識タンパク質の発現促進とビフィドバクテリウム属細菌との関連性に関する報告はない。【００１４】
また、ビフィドバクテリウム属細菌は生菌において腸内菌叢を改善することが知られているが、これは、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌が悪玉細菌との関係で腸内菌叢内の割合を増殖等にて優先化し、これを維持することで腸内環境改善に繋がっている。
これに対し、本技術では、ビフィドバクテリウム属細菌が、生体内にある粘膜組織又は樹状細胞等にあるペプチドグリカン認識タンパク質産生機構に対して作用し、この産生促進を発現させるものであり、標的対象が異なる。
しかも、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、粘膜組織又は樹状細胞等を利用して、ペプチドグリカン認識タンパク質を産生させ、ＰＧＬＹＲＰの抗菌作用等により組織内に侵入してくる細菌の感染症を抑制したり、抗炎症物質の量調整等より生体内の免疫機構を調節したりするので、作用機序もその効果も異なる。【００１５】
このようなことからも、ビフィドバクテリウム属細菌が、粘膜組織又は樹状細胞等を利用して、生体内でペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進させることは新しい用途の提供であり、この作用は全く予測し得ない結果である。【００１６】
前記課題を解決する本技術は、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤又は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物を提供するものである。また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質増量組成物、抗菌用組成物、又は殺菌用組成物としてもよい。
また、本技術は、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用の医薬組成物、飲食品組成物、又は飼料組成物も提供するものである。
また、本技術は、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として投与する、免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善方法を提供するものである。また、本技術は、体内でペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進する方法、ペプチドグリカン認識タンパク質増量方法、抗菌方法、又は殺菌方法としてもよい。ペプチドグリカン認識タンパク質の増量方法において、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を、粘膜組織又は樹状細胞に接触させることが好適である。
また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進に用いるためのビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を提供するものである。
また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進のためのビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の使用を提供するものである。該使用は、非治療的使用又はIn vitroでの使用であってもよい。
また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物へのビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の使用を提供するものである。
また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物の製造のためのビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の使用を提供するものである。
また、本技術は、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を使用することを特徴とする、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用の飲食品組成物の製造方法を提供するものである。
さらに、本技術は、以下の（１）〜（７）を好ましい態様としている。
（１）前記ペプチドグリカン認識タンパク質が、粘膜上皮細胞及び／又は樹状細胞のペプチドグリカン認識タンパク質である。
（２）前記ペプチドグリカン認識タンパク質が、ＰＧＬＹＲＰ１、ＰＧＬＹＲＰ２、ＰＧＬＹＲＰ３、及びＰＧＬＹＲＰ４からなる群から選択される１種又は２種以上のタンパク質である。
（３）前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、及びビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である。
（４）前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である。
（５）前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１）、ビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）、及びビフィドバクテリウム・インファンティスＭ−６３（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２３）からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である。
（６）ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤又はペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物は、免疫調節のために用いられる。
（７）前記細菌は、経口摂取によって、体内のペプチドグリカン認識タンパク質を産出又は増量させて、抗菌作用又は殺菌作用を発現させるために用いられる。
【発明の効果】
【００１７】
本技術によれば、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤又はペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物を提供することができる。
なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本技術中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ビフィドバクテリウム属細菌の刺激がブタ末梢血由来樹状細胞のＰＧＬＹＲＰの発現に及ぼす影響。図中*は、Student's t-testで、control群との有意差（P<0.05）を表す。
【図２】ビフィドバクテリウム属細菌の処置がブタ腸管上皮細胞（ＰＩＥ細胞）のＰＧＬＹＲＰの発現に及ぼす影響。図中*は、Student's t-testで、control群との有意差（P<0.05）を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の好ましい実施形態について説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。なお、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００２０】
本技術は、ビフィドバクテリウム属に属する細菌（以下、「ビフィドバクテリウム属細菌」ともいう）を有効成分として含有するペプチドグリカン認識タンパク質（以下、「ＰＧＬＹＲＰ」ともいう）産生促進剤である。また、本技術のペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤は、ビフィドバクテリウム属に属する細菌を有効成分として含有する限りにおいて、他の成分を含むことを妨げるものではない。したがって、本技術において、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤とペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物とは同等である。当該組成物としては、医薬組成物及び飲食品組成物、動物飼料組成物等が挙げられる。
【００２１】
本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌は、特に限定されない。
本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌は、ヒト又はヒト以外の動物の腸内環境を整えることができるプロバイオティクスに使用可能な細菌が、長期摂取しても安全性が高いため、好ましい。
本技術に使用するビフィドバクテリウム属細菌は、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）属細菌、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）属細菌及びビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）属細菌等からなる群から選ばれる１種又は２種以上の細菌が挙げられる。なお、以下、それぞれ「ロンガム属細菌」、「ブレーベ属細菌」、「インファンティス属細菌」ともいう。
このうち、ロンガム属細菌、ブレーベ属細菌及びインファンティス属細菌からなる群から選ばれる１種又は２種以上の細菌の混合物が好ましい。
また、ビフィドバクテリウム属細菌の形態は、特に制限されず、生菌体、殺菌体、湿潤菌、乾燥菌及びこれらの破砕物等、任意の形態の何れでもよい。この形態のうち、湿潤又は乾燥の状態を問わないが、生菌体及び／又は殺菌体が好ましく、生菌体がより好ましい。
【００２２】
ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）属細菌は、乳幼児、小児、成人及び老人と幅広い年齢層で、ヒトの腸内に存在する細菌であり、安全性が高い。
ロンガム属細菌には、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用のうち、特にＰＧＬＹＲＰ１〜４産生促進作用がある。
また、ロンガム属細菌は、樹状細胞からのＰＧＬＹＲＰ１〜４産生促進作用を有し、このうち、強いＰＧＬＹＲＰ１、３及び４産生促進作用を有する。
また、ロンガム属細菌は、粘膜組織（好適には腸管上皮細胞）からのＰＧＬＹＲＰ１〜４の産生促進作用を有し、このうち、強いＰＧＬＹＲＰ３産生促進作用を有する。
【００２３】
ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）属細菌は、乳幼児、小児の年齢層で見られ、ヒトの腸内に存在する細菌であり、安全性が高い。しかし、ブレーベ属細菌は、年齢とともに減少し成人及び老人になると減少又は存在しなくなる細菌である。
ブレーベ属細菌には、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用のうち、特にＰＧＬＹＲＰ１〜４産生促進作用がある。
また、ブレーベ属細菌は、樹状細胞からのＰＧＬＹＲＰ１〜４産生促進作用を有し、何れもコントロールの約１０倍以上強い産生促進作用を有し、特にＰＧＬＹＲＰ３及び４産生促進作用では際立って顕著である。
また、ブレーベ属細菌は、粘膜組織（好適には腸管上皮細胞）からのＰＧＬＹＲＰ１〜４の産生促進作用を有し、何れもコントロールの約２倍以上の強い産生促進作用を有する。
【００２４】
ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）属細菌は、乳幼児、小児の年齢層で見られ、ヒトの腸内に存在する細菌であり、安全性が高い。しかし、当該細菌は、年齢とともに減少し成人及び老人になると減少又は存在しなくなる細菌である。
インファンティス属細菌には、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用のうち、特にＰＧＬＹＲＰ１〜４産生促進作用がある。
また、インファンティス属細菌は、粘膜組織（好適には腸管上皮細胞）からのＰＧＬＹＲＰ１、３及び４の産生促進作用を有し、このうち、コントロールの約２倍以上の強いＰＧＬＹＲＰ１及び４産生促進作用を有する。
【００２５】
前記ロンガム属細菌のうち、［１］ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９（以下、「ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＢＢ５３６」ともいう。）が好ましい。
前記ブレーベ属細菌のうち、［２］ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９（以下、「ビフィドバクテリウム・ブレーベ  Ｍ−１６Ｖ」ともいう。）が好ましい。
前記インファンティス属細菌のうち、［３］ビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８（以下、「ビフィドバクテリウム・インファンティス  Ｍ−６３」ともいう。）が好ましい。
前記ビフィドバクテリウム属細菌のうち、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、ビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８からなる群から選ばれる１種又は２種以上の細菌の混合物が、好ましい。
なお、［１］ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９は、ビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１）と同一の細菌であり、好ましい態様においては、いずれの細菌を用いてもよい。また、［２］ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９は、ビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）と同一の細菌であり、好ましい態様においては、いずれの細菌を用いてもよい。さらに、［３］ビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８は、ビフィドバクテリウム・インファンティスＭ−６３（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２３）と同一の細菌であり、好ましい態様においては、いずれの細菌を用いてもよい。
また、これらは、それぞれ特許文献２（特開2012-223134号公報）に開示されている公知菌である。
【００２６】
［１］ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９は、米国の保存機関であるAmerican Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）（米国、２０１１０  バージニア州  マナサス  ユニバーシティ・ブルバード  １０８０１）に、ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９の受託番号で寄託されている。また、ビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１）は、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に、２０１８年１月２６日にＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたものである。
［２］ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９と［３］ビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８は、ベルギーの保存機関であるBelgian Coordinated Collections of Microorganisms（ＢＣＣＭ）（ベルギー、Ｂ−１０００  ブリュッセル  シアンス通り（ウェーテンスカップ通り）８）に、それぞれＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９とＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８の受託番号で寄託されている。
また、［２］ビフィドバクテリウム・ブレーベＭ‐１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）は、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に、２０１８年１月２６日にＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたものである。
［３］ビフィドバクテリウム・インファンティスＭ−６３（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２３）は、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室）に、２０１８年１月２６日にＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２３の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされたものである。
これら［１］、［２］及び［３］のビフィドバクテリウム細菌は、上記保存機関又は国際寄託機関より一般に入手可能である。
【００２７】
［１］ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、［２］ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９及び［３］ビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８のこれら各細菌と同一の細菌とは、同属の細菌であって、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、これら各細菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくはこれら各細菌と同一の菌学的性質を有する。
さらに、本技術の効能が損なわれない限り、これら各細菌から、変異処理、遺伝子組換え、自然変異株の選択等によって育種された細菌であってもよい。
【００２８】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌（例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガムＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９等）は、それらを培養することにより容易に増殖させることができる。
本技術のビフィドバクテリウム属細菌を培養する方法は、ビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培養温度は２５〜５０℃でよく、３０〜４０℃であることが好ましい。培養は、嫌気条件下で行うことが好ましく、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。
【００２９】
前記ビフィドバクテリウム属細菌を培養する培地としては、特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる培地を必要により適宜修正して用いることができる。当該培地の炭素源としては、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて使用できる。当該培地の窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩類や硝酸塩類を使用できる。また、当該培地の無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、当該培地にはペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。また、当該培地として、調製済みの培地としては、例えばＭＲＳ培地を好適に用いることができる。
【００３０】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、培養後、得られた培養物をそのまま用いてもよく、希釈又は濃縮して用いてもよく、培養物から回収した菌体を用いてもよい。細菌は、生菌であっても死菌であってもよく、生菌及び死菌の両方であってもよいが、生菌であることが好ましい。
また、本技術の効能を損なわない限り、培養後に加熱、及び凍結乾燥等の種々の追加操作を行うことができる。追加の操作は、生菌の生残性が高いものであることが好ましい。
【００３１】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用を有する。また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ＰＧＬＹＲＰ１〜４の産生促進作用を有する。
【００３２】
ここで、ペプチドグリカン認識タンパク質は、体内に侵入した異物を認識して排除する自然系免疫システムを調節する機能が知られている（非特許文献２及び非特許文献６参照）。
自然系免疫とは、受容体を介して、侵入してきた病原体又は異常になった自己の細胞を感知し、それを排除する仕組みである。一般的に、免疫に関与する細胞として、主に好中球やマクロファージ、樹状細胞といった食細胞が知られている。
【００３３】
また、ペプチドグリカン認識タンパク質は、一般的に抗菌作用又は殺菌作用を有し、細菌感染症の予防、治療又は改善を期待されている。また、ペプチドグリカン認識タンパク質は、グラム陽性菌及び陰性菌の何れでも作用することが知られている。
細菌感染症は、表皮や粘膜の常在菌又は通過菌が、粘膜のバリア機能が低下している部位、毛包や感染等の皮膚バリア機能の低下している部位、又は創傷部等から侵入して生じる。感染が成立するかどうかは、菌量、毒性等の細菌側の要因と、宿主の細胞機構の相対的な力関係により左右される。このため、ペプチドグリカン認識タンパク質が産生促進され増量されると、この抗菌作用も量的に増大する。
【００３４】
すなわち、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用を有するので、ペプチドグリカン認識タンパク質が関与する免疫調節作用を有し、また、細菌感染症の予防、治療又は改善作用を有する。また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、体内のペプチドグリカン認識タンパク質産生促進機構を利用して体内から抗菌成分又は殺菌成分であるペプチドグリカン認識タンパク質を増量させることができる。よって、本技術は、体内に存在する感染症に関与する細菌に対する治療又は改善方法として、また抗菌方法又は殺菌方法として、使用することができるので、粘膜バリア形成による感染症予防方法とは異なる用途といえる。
また、本技術は、樹状細胞由来のＰＧＬＹＲＰ及び腸管由来のＰＧＬＹＲＰの産生促進作用を有する。
また、本技術は、免疫調節機能に関与するペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進できるので、免疫増強作用を有する。
【００３５】
なお、「免疫調節」とは、ペプチドグリカン認識タンパク質の発現量の増減により、免疫機構（免疫システムの細胞からの分泌物）の増減を図ることをいう。例えば、ＰＧＬＹＲＰ発現を亢進することで、ＰＧＬＹＲＰによるペプチドグリカンの分解を促進し、ＰＧＬＹＲＰ以外のペプチドグリカン認識受容体（Toll-like receptor 2等）の活性化で誘導される炎症性サイトカインの過剰発現を落とすことなどが挙げられる。
【００３６】
また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用のうち、ＰＧＬＹＲＰ１、ＰＧＬＹＲＰ２、ＰＧＬＹＲＰ３、ＰＧＬＹＲＰ４からなる群から選ばれる１種又は２種以上のタンパク質の産生促進作用を有する。ＰＧＬＹＲＰ１、ＰＧＬＹＲＰ２、ＰＧＬＹＲＰ３及びＰＧＬＹＲＰ４には、抗菌作用や免疫調節作用があることが知られているが、これらの作用機構は未解明な部分が多く、今後の研究により明らかにされるであろう。
【００３７】
従って、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤、ＰＧＬＹＲＰ１産生促進剤、ＰＧＬＹＲＰ２産生促進剤、ＰＧＬＹＲＰ３産生促進剤、ＰＧＬＹＲＰ４産生促進剤、免疫調節剤、細菌感染症の予防・治療・改善剤、免疫増強剤の有効成分として含有させることができる。
【００３８】
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、組成物の有効成分として含有させることができ、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用、ＰＧＬＹＲＰ１産生促進用、ＰＧＬＹＲＰ２産生促進用、ＰＧＬＹＲＰ３産生促進用、ＰＧＬＹＲＰ４産生促進用、免疫調節用、細菌感染症の予防・治療・改善用、免疫増強用等として使用することができる。また、当該組成物は、医薬用、飲食品用及び動物飼料用等として使用することができる。
【００３９】
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進する方法、ＰＧＬＹＲＰ１〜４の産生を促進する方法、免疫を調節する方法、細菌感染症の予防・治療・改善方法、免疫増強方法に使用することができる。
また、本技術は、ペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進するための、ビフィドバクテリウム属細菌及びその使用を提供することができる。その他、ＰＧＬＹＲＰ１〜４産生促進するため；免疫調節するための；免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患・症状の予防・治療・改善するため；又は免疫増強するためのビフィドバクテリウム属細菌及びその使用を提供することができる。
また、本技術は、上述のペプチドグリカン認識タンパク質の産生促進用等の製剤又は組成物を製造するために、ビフィドバクテリウム属細菌及びその使用を提供することができる。
【００４０】
本技術は、適用対象であるヒト若しくはヒト以外の動物に使用してもよく、また治療目的使用であっても、非治療目的であってもよい。
「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。
「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転；悪化の防止又は遅延；進行の逆転、防止又は遅延をいう。
「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止や遅延、又は適用対象の疾患若しくは症状の発症の危険性の低下をいう。
【００４１】
本技術において、本技術のビフィドバクテリウム属細菌の他に、必要に応じて、任意の成分を組み合わせて使用してもよい。任意成分として、医薬品、飲食品又は飼料等において許容される成分を適宜使用すればよい。任意成分として、例えば、糖類、糖アルコール類、多糖類、ｐＨ調整剤、脂肪酸エステル類、矯味矯臭剤、香料、賦形剤等が挙げられる。
本技術の製剤又は組成物は、公知の製造方法にて製造することができる。
【００４２】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）である。なお、ＣＦＵはＣｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔを示す。
本技術のロンガム属細菌（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）である。
本技術のブレーベ属細菌（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）である。
本技術のインファンティス属細菌（生菌又は死菌）の含有量又は使用量は、特に限定されないが、前記組成物中、好ましくは１×１０３〜１×１０１２ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、より好ましくは１×１０５〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）、さらに好ましくは１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／ｇ（又はｃｅｌｌｓ（個）／ｇ）である。
【００４３】
本技術において、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を、ペプチドグリカン認識タンパク質を産生する組織に投与することが、産生促進効果を高めるため、また局所療法が行えるため、望ましい。当該組織として、血中若しくは粘膜中に存在する樹状細胞、及び粘膜（例えば、眼、鼻腔、口腔、肺、食道、胃、腸管等）が好ましい。  また、組織培養中の他の微生物の汚染のリスクを低減するために、ビフィドバクテリウム属細菌を培地組成に添加してもよい。
また、本技術のビフィドバクテリウム属細菌を、樹状細胞及び/又は粘膜の培養細胞を含む培地に添加し、培養することで、ペプチドグリカン認識タンパク質を産出することができる。培養方法は、有用物質が産出できるような公知の動物細胞培養方法（例えば、菌及び／又は細胞の固定化等）を用いればよい。産出された培地中のペプチドグリカン認識タンパク質を、公知の分離精製方法にて、さらに分離精製すればよい。
【００４４】
本技術は、特に限定されないが、粘膜組織に作用できる投与形態を取ることが好ましく、これとして、例えば、経口摂取、経鼻投与、舌下投与、点眼投与、吸入投与、経直腸投与等が挙げられ、このうち、経口摂取が、簡便で安全性が高いのでより好ましい。
また、本技術は、樹状細胞に作用できる投与形態として、上記粘膜組織に作用できる投与の他、例えば、注射（静脈内投与、筋肉投与、皮下投与）、経皮投与等が挙げられる。
【００４５】
本技術のビフィドバクテリウム属細菌（生菌又は死菌）の１日当たりの投与量は、特に限定されないが、１日当たり１×１０３〜１×１０１２ＣＦＵ／日（又はｃｅｌｌｓ（個）／日）であることが好ましく、１×１０５〜１×１０１１ＣＦＵ／日（又はｃｅｌｌｓ（個）／日）であることがより好ましく、１×１０７〜１×１０１０ＣＦＵ／日（又はｃｅｌｌｓ（個）／日）であることがさらに好ましい。
また、本技術の投与間隔は、特に限定されず、１日１回でもよく、複数回に分けて行ってもよいが、好ましくは１日１回が簡便かつ効能が得られるので好ましい。
【００４６】
ビフィドバクテリウム属細菌を医薬品に利用する場合、該医薬品は、経口投与及び非経口投与のいずれでもよいが、経口投与及び粘膜に作用する投与が好ましい。非経口投与としては、例えば、注射（血液、皮膚、筋肉等）、直腸投与、吸入等が挙げられる。経口投与の剤形としては、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤、軟膏等が挙げられる。
【００４７】
また、製剤化に際しては、ビフィドバクテリウム属細菌の他に、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。更に、公知の又は将来的に見出される疾患の予防又は治療の効果を有する成分を、目的に応じて併用することも可能である。
【００４８】
更に、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合、座剤、噴霧剤、軟膏剤、貼付剤、注射剤等に製剤化することができる。
【００４９】
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、カゼイン酵素処理物のみ又は各分離・各精製画分のみを製剤化してもよく、適宜、製剤担体を配合する等して製剤化してもよい。
【００５０】
また、前記製剤担体としては、剤形に応じて、各種有機又は無機の担体を用いることができる。固形製剤の場合の担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００５１】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。
【００５２】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
【００５３】
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
【００５４】
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
【００５５】
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
【００５６】
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
【００５７】
ビフィドバクテリウム属細菌をヒト若しくは動物用の飲食品に利用する場合、公知の飲食品に添加して調製することもできるし、飲食品の原料中に混合して新たな飲食品を製造することもできる。
【００５８】
前記飲食品は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料（ペット用を含む）等のほか、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子類、飲料、これら以外の市販品等が挙げられる。
【００５９】
小麦粉製品としては、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等が挙げられる。
即席食品類としては、例えば、即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等が挙げられる。
農産加工品としては、例えば、農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等が挙げられる。
水産加工品としては、例えば、水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等が挙げられる。
畜産加工品としては、例えば、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等が挙げられる。
乳・乳製品としては、例えば、加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等が挙げられる。
油脂類としては、例えば、バター、マーガリン類、植物油等が挙げられる。
基礎調味料としては、例えば、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等が挙げられ、前記複合調味料・食品類として、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等が挙げられる。
冷凍食品としては、例えば、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等が挙げられる。
菓子類としては、例えば、キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子等が挙げられる。
【００６０】
飲料類としては、例えば、炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等が挙げられる。
上記以外の市販食品としては、例えば、ベビーフード、ふりかけ、お茶漬けのり等が挙げられる。
【００６１】
また、本技術で定義される飲食品は、保健用途が表示された飲食品として提供・販売されることも可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。
【００６２】
また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００６３】
一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００６４】
また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示等を挙げることができる。より具体的には、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
【００６５】
ビフィドバクテリウム属細菌を飼料に利用する場合、公知の飼料に添加して調製することもできるし、飼料の原料中に混合して新たな飼料を製造することもできる。
【００６６】
前記飼料の原料としては、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦等の穀類；ふすま、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；脱脂粉乳、ホエー、魚粉、骨粉等の動物性飼料類；ビール酵母等の酵母類；リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；アミノ酸類；糖類等が挙げられる。また、前記飼料の形態としては、例えば、愛玩動物用飼料（ペットフード等）、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
【００６７】
このように、本技術は、飲食品、飲食品組成物、機能性食品、医薬品等の幅広い分野に使用することができる。
【００６８】
また、本技術は、以下の構成を採用することも可能である。
〔１〕  ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤。
当該ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用医薬、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用飲食品組成物、又はペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用飼料としてもよく、これらに添加して使用してもよい。前記細菌は、経口摂取によって、体内のペプチドグリカン認識タンパク質を増量させて、体内で抗菌作用又は殺菌作用を発現させるために用いてもよい。
【００６９】
〔２〕  前記ペプチドグリカン認識タンパク質が、粘膜上皮細胞及び／又は樹状細胞のペプチドグリカン認識タンパク質である、〔１〕に記載の産生促進剤。
〔３〕  前記ペプチドグリカン認識タンパク質が、ＰＧＬＹＲＰ１、ＰＧＬＹＲＰ２、ＰＧＬＹＲＰ３、及びＰＧＬＹＲＰ４からなる群から選択される１種又は２種以上のタンパク質である、〔１〕又は〔２〕に記載の産生促進剤。
〔４〕  前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、及びビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である、〔１〕〜〔３〕のいずれか一項に記載の産生促進剤。
【００７０】
〔５〕  前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である、〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載の産生促進剤。
〔６〕  前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２１）、ビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２２）、及びビフィドバクテリウム・インファンティスＭ−６３（ＮＩＴＥ  ＢＰ−０２６２３）からなる群から選択される１種又は２種以上の細菌である、〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載の産生促進剤。
〔７〕  免疫調節のために用いられる、〔１〕〜〔６〕のいずれか１項に記載の産生促進剤。
〔８〕  前記ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進剤が、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用医薬、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用飲食品組成物、又はペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用飼料である、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項に記載の産生促進剤。
【００７１】
〔９〕  ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を含有する、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物。
当該組成物は、医薬用、飲食品用、飼料用、免疫調整用、細菌感染予防・治療・改善用としてもよい。
当該ペプチドグリカン認識タンパク質が、前記〔２〕又は〔３〕のタンパク質であってもよい。
当該細菌が、前記〔４〕、〔５〕又は〔６〕の細菌であってもよい。
〔１０〕  ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として投与する、免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善方法。
〔１１〕  ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を使用する、免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善方法。
〔１２〕  ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を有効成分として投与する、体内でペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進する方法。
〔１３〕  免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善用の、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌
又は免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善のための、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の使用。
〔１４〕  ペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進用の、ビフィドバクテリウム属細菌、又は
ペプチドグリカン認識タンパク質の産生を促進するための、ビフィドバクテリウム属細菌の使用。
【００７２】
〔１５〕  ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物を製造するための、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌の使用。
〔１６〕ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を使用することを特徴とする、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物の製造方法、又は免疫調節機能又は細菌感染症に関連する疾患又は症状の予防、治療、又は改善するための組成物の製造方法。
好適には、前記製造方法において、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌を添加する工程を含むものであってもよい。
より好適には、前記組成物が、飲食品組成物、発酵飲食品組成物又は発酵乳であってもよい。
〔１７〕前記〔９〕〜〔１６〕は、前記〔２〕〜〔８〕の何れかを選択することができる。
【実施例】
【００７３】
以下に実施例を用いて本発明を説明するが、本発明は当該実施例に限定されるものではない。【００７４】
〔試験菌体〕
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＢＢ５３６（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９）（以下、「ＢＢ５３６」ともいう）。
ビフィドバクテリウム・ブレーベ  Ｍ−１６Ｖ（ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９）（以下、「Ｍ−１６Ｖ」ともいう）。
ビフィドバクテリウム・インファンティス  Ｍ−６３（ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８）（以下、「Ｍ−６３」ともいう）。【００７５】
〔実施例1〕
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＢＢ５３６（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９）とビフィドバクテリウム・ブレーベ  Ｍ−１６Ｖ（ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９）が、ブタ末梢血由来樹状細胞のペプチドグリカン認識タンパク質の発現に及ぼす影響を評価した。【００７６】
（試験菌体の調製）
ビフィドバクテリウム属細菌は0.05%システインを含むMRS（de Man Rogasa Sharpe）培地（Difco）で16時間培養し、回収した菌体をリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄した。菌体は加熱殺菌処理（63℃, 30 min）を行い、2.5×109/ mLに調整されたものを試験に用いた。【００７７】
（ブタ末梢血由来免疫担当細胞の調製）
真空採血管に採取したブタ血液を予めLympholyte-Mammal（CEDARLANE, HornBy, Ontario, Canada）3 mLを分注したチューブに細胞懸濁液4 mLを重層し，遠心（1800 rpm, 60 min, 20℃）により免疫担当細胞層を分離し、回収後RPMI培地で洗浄し、細胞数をカウントした。【００７８】
（樹状細胞分化誘導）
得られた免疫担当細胞を12 well plateに1×107cells / mLとなるように播種しインキュベート（37℃, 1時間）した。その後、付着細胞である単球のみを残し、培地を除去した。プレートに付着した細胞を、IL-4, GM-CSF（20 ng / mL）のサイトカインを含むRPMI培地で5日間、37℃、5%CO2条件下で培養を行った後、これらのサイトカインに加えさらにLPS（1μg / mL）を含む培地で2日間培養し成熟樹状細胞へと分化させた。【００７９】
（試験菌体による成熟樹状細胞の刺激）
分化誘導した成熟樹状細胞に、試験菌体懸濁液20 μL/ wellを添加し、37℃、5%CO2条件下で６時間培養を行った。PBSで2回洗浄後、各wellにTRIzol reagent（Invitrogen）を500 μLずつ加え、1.5 mLマイクロチューブに移し、定量的RT-PCRのためのサンプルとした。【００８０】
（Total RNAの抽出とcDNAの合成）
定量的RT-PCRのためのサンプルを、室温で10 min放置した後、200 μLクロロホルムを添加し混和後3分間放置した。遠心（15000 rpm, 15 min, 4℃）後、水層部分を回収し、2-プロパノールを等量加え、よく撹拌し10分間静置後、遠心（15000 rpm, 15 min, 20℃）した。得られたペレットを75%エタノールで洗浄し、遠心（15000 rpm, 15 min, 4℃）後再びペレットを得た。50℃のブロックインキュベーター上でエタノールを完全に除去してからRNase free waterに溶解し、Total RNA溶液を得た。濃度および純度はNanoDrop（R） ND-1000 Spectrophotometerで測定した。QuantiTect（R） Reverse Transcription Kit （QIAGEN）を用い、付属のマニュアルに従ってcDNAを合成した。【００８１】
（定量的RT-PCR）
得られたcDNAを用いて、定量的RT-PCRによりペプチドグリカン認識タンパク質の発現を評価した。定量的RT-PCRはTaqMan（R）gene expression assay kit（Life Technologies,PGLYRP1 / Ss03377775_u1, PGLYRP2 / Ss03381121_u1, PGLYRP3 /Ss04327108_m1, PGLYRP4 /Ss04326811_m1, ACTB /Ss03376563_uH）により、Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System（Life Technologies）を使用して行った。ACTB（β-actin）を内部標準として測定し、遺伝子の定量的解析に用いるスタンダードにはGeneArt Strings(TM)の人工遺伝子合成サービスを利用し、TaqMan（R）gene expression assayにおけるAssay locationから前後100 bp（Total 200 bp）で配列を設計したプラスミドDNAを用いた。結果の解析にはABI PRISM 7300 Real Time PCR Systemを用いた。分析した結果として得られた曲線から、指数関数的増幅領域の任意の蛍光値でのCt値（Threshold cycle）から標準直線を算出した。使用したプラスミドDNAの配列を表１に示した（Porcine PGLYRP1（列番号１）、Porcine PGLYRP2（列番号２）、Porcine PGLYRP３（列番号３）、Porcine PGLYRP４（列番号４）、Porcine β-actin（列番号５））。【００８２】
【表１】
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【００８３】
（結果）
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＢＢ５３６、及びビフィドバクテリウム・ブレーベ  Ｍ−１６Ｖのそれぞれで刺激された成熟樹状細胞のＰＧＬＹＲＰファミリーの発現量を、無刺激の場合の発現を１として、図１に示した。
ＢＢ５３６及びＭ−１６Ｖのいずれの刺激においても、ＰＧＬＹＲＰファミリーの発現増強が認められた。
具体的には、ＰＧＬＹＲＰ１について、ＢＢ５３６刺激により１２．２倍、Ｍ−１６Ｖ刺激により８．９倍の発現増強が認められた。
ＰＧＬＹＲＰ２について、ＢＢ５３６刺激により１．７３倍、Ｍ−１６Ｖ刺激により１０．９倍の発現増強が認められた。
ＰＧＬＹＲＰ３について、ＢＢ５３６刺激により４．４倍、Ｍ−１６Ｖ刺激により１７１．１倍の発現増強が認められた。
ＰＧＬＹＲＰ４について、ＢＢ５３６刺激により６．０倍、Ｍ−１６Ｖ刺激により３６９．４倍の発現増強が認められた。
ＰＧＬＹＲＰ１以外について、Ｍ−１６Ｖ刺激における発現増強がより強いものとなり、菌による差異が認められた。【００８４】
〔実施例２〕
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＢＢ５３６（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９）とビフィドバクテリウム・ブレーベ  Ｍ−１６Ｖ（ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９）、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  Ｍ−６３（ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８）のそれぞれが、ブタ腸管上皮細胞（ＰＩＥ細胞）のペプチドグリカン認識タンパク質の発現に及ぼす影響を評価した。【００８５】
（試験菌体の調製）
実施例１と同様に行った。
（ブタ腸管上皮細胞の調製）
ＰＩＥ細胞（PLOS ONE, Vol.8 No.3,p1-12(2013））をコラーゲン（TypeＩ）コート済みの250 mL フラスコ（SUMILON, Tokyo, Japan）にて、DMEM（10 % FCS, 100 mg / mL penicillin, 100U / mL streptomysin, high glucose, L-glutamine, 0.11 mg / mL sodiumpyruvate ;GIBCO）により培養した。コンフルエントに達したところで、PBSにより2回洗浄し、上皮buffer（0.1M Na2HPO4/ 12H2O, 0.45M Sucrose, 0.36 % EDTA / 4Na, BSA）による処理（37℃, 5 min）の後、トリプシン溶液（0.25 % trypsin, 0.02 % EDTA in PBS）を用いてプレートから細胞をはがすためにインキュベート（37℃, 5 min）し、遠心分離（1200 rpm, 5 min, 4℃）により細胞を回収し、細胞数を計測した。【００８６】
（ＰＩＥ細胞の菌体による処理）
細胞をコラーゲン（TypeＩ）コート済みの12 well plateに3.0 ×104 cells / wellで播種し、37℃、5 % CO2条件下で10日間培養を行った。10日目のＰＩＥ細胞に、試験菌体懸濁液を100 MOI（multiplicity of infection）となるように菌体を添加し、37℃、5%CO2条件下で６時間培養を行った。培養後、細胞をPBSで2回洗浄し、wellをPBSで2回洗浄後、各wellにTRIzol reagent（Invitrogen）を500 μLずつ加え、1.5 mLマイクロチューブに移し、定量的RT-PCRのためのサンプルとした。【００８７】
（Total RNAの抽出とcDNAの合成）
実施例１と同様に行った。
（定量的RT-PCR）
実施例１と同様に行った。【００８８】
（結果）
各ビフィドバクテリウム属細菌で処理されたＰＩＥ細胞のＰＧＬＹＲＰファミリーの発現量を、無刺激の場合の発現を１として図２に示した。
Ｍ−１６Ｖの処理は、ＰＧＬＹＲＰ１〜４全てにおける発現を有意に増強した。ＢＢ５３６の処理は、ＰＧＬＹＲＰ３を有意に増強した。Ｍ−６３の処理は、ＰＧＬＹＲＰ１およびＰＧＬＹＲＰ４の発現を有意に増強した。【００８９】
以上のように、本技術のビフィドバクテリウム属細菌は、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進作用効果を発揮する。そして、本技術のペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物は、医薬用、飲食品用、飼料用、ペット用と幅広い用途に使用でき、また、細菌系の感染症の予防、改善又は治療等に有効に使用することができる。【００９０】
［製造例１］
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８の群から選ばれる１種又は２種以上の細菌をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。当該菌末と、牛乳又は脱脂乳とを均一に混合しつつ、（Ａ）乳タンパク質  ３．５質量％以上、（Ｂ）乳脂肪  ３．５質量％以下、（Ｃ）炭水化物  ５．０質量％以上、及び（Ｄ）カルシウム  ０．１５質量％以上を含むように調整する。これにより、ビフィズス菌入りのペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物（乳飲料）を得る。菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１〜４週間以上、毎日２００ｍＬを摂取する。
これは、免疫増強用飲食品としても又はインフルエンザ対策や風邪対策の飲食品として摂取可能であり、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進効果が期待できる。【００９１】
［製造例２］
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８の群から選ばれる１種又は２種以上の細菌をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の顆粒状（菌末）を、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用組成物（顆粒状又はタブレット状）として、得る。当該顆粒状の菌末を、菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間毎日摂取する。
これは、感染症対策用飲食品として摂取可能であり、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進効果が期待できる。【００９２】
［製造例３］
ビフィドバクテリウム・ロンガム  ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２９、及びビフィドバクテリウム・インファンティス  ＢＣＣＭ  ＬＭＧ２３７２８の群から選ばれる１種又は２種以上の細菌をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の顆粒状（菌末）を、発酵乳原料に添加し、発酵乳を得る。当該ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進用発酵乳を、菌の摂取量が１×１０８〜１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間以上毎日摂取する。
これは、感染症対策用飲食品として摂取可能であり、ペプチドグリカン認識タンパク質産生促進効果が期待できる。
【受託番号】
【００９３】
（１）ビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（受託番号：NITE BP-02621）（受託日：２０１８年１月２６日）、受託先：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（２）ビフィドバクテリウム・ブレーベＭ−１６Ｖ（受託番号：NITE BP-02622）（受託日：２０１８年１月２６日）、受託先：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
（３）ビフィドバクテリウム・インファンティスＭ−６３（受託番号：NITE BP-02623）（受託日：２０１８年１月２６日）、受託先：〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室、独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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