(57)【要約】  内部にフィルター部材を収容することにより、高い回収効率で細胞を回収できる細胞分離フィルター装置を与える細胞分離フィルター容器と、当該細胞分離フィルター容器内にフィルター部材が収容された細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む細胞含有液の取得方法と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む樹状細胞含有液の製造方法とを提供する。  液体導入口と、液体導出口と、筒状のフィルター部材収容部と、第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部と、を有する細胞分離用フィルター容器において、第１フィルター押え部を３本以上の第１突起から構成し、３本以上の第１突起のそれぞれの先端を結んで形成される多角形の面積と、第１突起の位置におけるフィルター部材収容部の内部空間の断面の面積との比率を所定の範囲内とする。
2018194061.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体導入口と、液体導出口と、フィルター部材収容部と、第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部と、を有する細胞分離用フィルター容器であって、
前記フィルター部材収容部が、両端に開口を有する筒状の部材であって、
前記液体導入口が、前記フィルター部材収容部の一方の開口端側に設けられ、
前記液体導出口が、前記フィルター部材収容部の他方の開口端側に設けられ、
前記第１フィルター押え部は、前記フィルター部材収容部の前記液体導入口側の位置において、前記フィルター部材収容部の内壁面又は内壁面の近傍から、前記フィルター部材収容部の内部空間の断面の中央又は略中央に向かって突出する、３本以上の第１突起からなり、
前記第１フィルター押え部は、前記フィルター部材収容部内にフィルター部材が収容された際に、前記フィルター部材を変形させつつ前記フィルター部材に当接するように設けられ、
前記第２フィルター押え部は、前記第１フィルター押え部と、前記第２フィルター押え部とによって前記フィルター部材が挟み込まれるように、前記フィルター部材収容部の前記液体導出口側の位置に設けられ、
前記第１フィルター押え部を構成する３本以上の前記第１突起のそれぞれの先端を結んで形成される多角形の面積をＡ１とし、前記第１突起の位置における前記フィルター部材収容部の内部空間の断面の面積をＡ２とする場合に、下記式：
面積比率Ｒ１（％）＝Ａ１／Ａ２×１００
で算出される面積比率Ｒ１が、６〜５０％である、細胞分離用フィルター容器。
【請求項２】
前記第２フィルター押え部が、前記フィルター部材収容部の前記液体導出口側の位置において、前記フィルター部材収容部の内壁面又は内壁面の近傍より、前記フィルター部材収容部の内部空間の断面の中央又は略中央に向かって突出する、３本以上の第２突起からなる、請求項１に記載の細胞分離用フィルター容器。
【請求項３】
前記第２フィルター押え部を構成する３本以上の前記第２突起の先端を結んで形成される多角形の面積をＡ３とし、前記第２突起の位置における前記フィルター部材収容部の内部空間の断面の面積をＡ４とする場合に、下記式：
面積比率Ｒ２（％）＝Ａ３／Ａ４×１００
で算出される面積比率Ｒ２が、６〜５０％である、請求項２に記載の細胞分離用フィルター容器。
【請求項４】
前記面積比率Ｒ１が、６〜４０％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞分離用フィルター容器。
【請求項５】
前記面積比率がＲ２が、６〜４０％である、請求項３に記載の細胞分離用フィルター容器。
【請求項６】
前記第１突起の本数が、５本以上１２本以下である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞分離用フィルター容器。
【請求項７】
前記第２突起の本数が、５本以上１２本以下である、請求項３又は５に記載の細胞分離用フィルター容器。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の細胞分離用フィルター容器と、フィルター部材とを有し、
前記フィルター部材が、前記フィルター部材収容部に収容されている、細胞分離用フィルター装置。
【請求項９】
前記フィルター部材が不織布からなる、請求項８に記載の細胞分離用フィルター装置。
【請求項１０】
単球を含む細胞含有液を取得する方法であって、
前記単球と、前記単球よりも平均サイズの小さな細胞である小細胞とを含む粗細胞含有液を、請求項８又は９に記載の細胞分離用フィルター装置内に前記液体導入口から供給した後に前記細胞分離用フィルター装置を通過させることで、前記単球を前記フィルター部材に捕捉させることと、
前記細胞分離用フィルター装置内に回収液を供給することで、前記フィルター部材に捕捉された前記単球を前記回収液中に遊離させて前記細胞含有液を生じさせることと、
前記細胞含有液を前記細胞分離用フィルター装置内から回収することと、
を含む方法。
【請求項１１】
前記回収液を前記液体導出口から供給し、前記細胞含有液を前記液体導入口から回収する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
樹状細胞療法に用いられる樹状細胞含有液を製造する方法であって、
単球と、単球よりも平均サイズの小さな細胞である小細胞とを含む粗細胞含有液を、請求項８又は９に記載の細胞分離用フィルター装置内に前記液体導入口から供給した後に前記細胞分離用フィルター装置を通過させることで、前記単球を前記フィルター部材に捕捉させることと、
前記細胞分離用フィルター装置内に回収液を供給することで、前記フィルター部材に捕捉された前記単球を前記回収液中に遊離させて、細胞含有液を生じさせることと、
前記細胞含有液を前記細胞分離用フィルター装置内から回収することと、
前記細胞含有液に含まれる前記単球を前記樹状細胞に分化させることと、
を含む方法。
【請求項１３】
前記回収液を前記液体導出口から供給し、前記細胞含有液を前記液体導入口から回収する、請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離用フィルター容器と、当該細胞分離用フィルター容器内にフィルター部材が収容された細胞分離用フィルター装置と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む細胞含有液の取得方法と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む樹状細胞含有液の製造方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、血液学や科学テクノロジーの急速な進歩に伴い、全血・骨髄・臍帯血・組織抽出物をはじめとする体液から必要な血液分画のみを分離して患者に投与することで治療効果を高め、さらに、治療に必要のない分画は投与しないことで副作用を抑制する、という治療スタイルが広く普及している。【０００３】
例えば、血液輸血もその１つである。赤血球製剤は、出血及び赤血球が不足する場合、又は赤血球の機能低下により酸素が欠乏している場合に使用される血液製剤である。赤血球製剤には、異常な免疫反応や移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）等の副作用を誘導する白血球は不要である。このため、赤血球製剤では、フィルターで白血球が除去される必要がある。場合によっては白血球に加えて血小板も除去することもある。【０００４】
一方、血小板製剤は、血液凝固因子の欠乏による出血ないし出血傾向にある患者に使用される血液製剤である。血小板製剤の製造のためには、遠心分離により、血小板以外の不要な細胞や成分は除去され、必要とされる血小板成分のみが採取されている。【０００５】
加えて近年、白血病に向けた造血幹細胞移植が盛んに行われるようになっている。造血幹細胞移植では、治療に必要な、造血幹細胞を含む白血球群を分離し投与する方法がとられている。この造血幹細胞のソースとして、ドナーの負担が少ない、増殖能力が優れている、等の利点から、骨髄や末梢血に加えて臍帯血が注目を浴びている。また近年、月経血中にも幹細胞が豊富に存在することが示唆されている。このため、これまで廃棄されていた月経血も貴重な幹細胞ソースとして利用される可能性がある。
また固形癌に治療に対しては樹状細胞療法が盛んに行われている。樹状細胞療法では、患者の血液や細胞培養液から治療のもととなる単球を含む細胞群を分離するケースがある。【０００６】
骨髄や末梢血等移植治療のソースに関して、不要な細胞を除き白血球を分離・純化して投与することが望まれている。また、使用時まで凍結保存する必要性から、凍結保存による赤血球溶血を防ぐことを目的に白血球は分離・純化されている。【０００７】
細胞分離方法として、最近では、赤血球と血小板は捕捉されず白血球のみを捕捉するフィルター材料を用いて白血球を回収する方法も報告されている（特許文献１、特許文献２、及び特許文献３を参照）。従来は遠心分離又は比重液を使用した密度勾配遠心法によって分離操作を行っていたが、フィルターを用いることで操作の簡略化や大型のセルプロセッシング施設が必要ない等の利点がある。
しかしながら、実際に細胞の分離を行う際には、原因は不明ながら、フィルター材料に充填する細胞分離材（フィルター部材）内を血液がうまく通過しなかったり、十分に高い回収率で目的とする種類の細胞を回収できない場合がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００１−５１８７９２号公報
【特許文献２】国際公開第９８／３２８４０号
【特許文献３】特開平１０−３１３８５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記のような事情に鑑み、本発明の目的は、内部にフィルター部材を収容することにより、高い回収効率で細胞を回収できる細胞分離フィルター装置を与える細胞分離フィルター容器と、当該細胞分離フィルター容器内にフィルター部材が収容された細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む細胞含有液の取得方法と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む樹状細胞含有液の製造方法とを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、かかる課題を解決すべく、鋭意検討を進めた。その結果、液体導入口と、液体導出口と、筒状のフィルター部材収容部と、第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部と、を有する細胞分離用フィルター容器において、第１フィルター押え部を３本以上の第１突起から構成し、３本以上の第１突起のそれぞれの先端を結んで形成される多角形の面積と、第１突起の位置におけるフィルター部材収容部の内部空間の断面の面積との比率を所定の範囲内とすることによって上記の課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１１】
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。【００１２】
〔１〕液体導入口と、液体導出口と、フィルター部材収容部と、第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部と、を有する細胞分離用フィルター容器であって、
フィルター部材収容部が、両端に開口を有する筒状の部材であって、
液体導入口が、フィルター部材収容部の一方の開口端側に設けられ、
液体導出口が、フィルター部材収容部の他方の開口端側に設けられ、
第１フィルター押え部は、フィルター部材収容部の液体導入口側の位置において、フィルター部材収容部の内壁面又は内壁面の近傍から、フィルター部材収容部の内部空間の断面の中央又は略中央に向かって突出する、３本以上の第１突起からなり、
第１フィルター押え部は、フィルター部材収容部内にフィルター部材が収容された際に、フィルター部材を変形させつつフィルター部材に当接するように設けられ、
第２フィルター押え部は、第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部とによってフィルター部材が挟み込まれるように、フィルター部材収容部の液体導出口側の位置に設けられ、
第１フィルター押え部を構成する３本以上の第１突起のそれぞれの先端を結んで形成される多角形の面積をＡ１とし、第１突起の位置におけるフィルター部材収容部の内部空間の断面の面積をＡ２とする場合に、下記式：
面積比率Ｒ１（％）＝Ａ１／Ａ２×１００
で算出される面積比率Ｒ１が、６〜５０％である、細胞分離用フィルター容器。【００１３】
〔２〕第２フィルター押え部が、フィルター部材収容部の液体導出口側の位置において、フィルター部材収容部の内壁面又は内壁面の近傍より、フィルター部材収容部の内部空間の断面の中央又は略中央に向かって突出する、３本以上の第２突起からなる、〔１〕に記載の細胞分離用フィルター容器。【００１４】
〔３〕第２フィルター押え部を構成する３本以上の第２突起の先端を結んで形成される多角形の面積をＡ３とし、第２突起の位置におけるフィルター部材収容部の内部空間の断面の面積をＡ４とする場合に、下記式：
面積比率Ｒ２（％）＝Ａ３／Ａ４×１００
で算出される面積比率Ｒ２が、６〜５０％である、〔２〕に記載の細胞分離用フィルター容器。【００１５】
〔４〕面積比率Ｒ１が、６〜４０％である、〔１〕〜〔３〕のいずれか１つに記載の細胞分離用フィルター容器。【００１６】
〔５〕面積比率がＲ２が、６〜４０％である、〔３〕に記載の細胞分離用フィルター容器。【００１７】
〔６〕第１突起の本数が、５本以上１２本以下である、〔１〕〜〔５〕のいずれか１つに記載の細胞分離用フィルター容器。【００１８】
〔７〕第２突起の本数が、５本以上１２本以下である、〔３〕又は〔５〕に記載の細胞分離用フィルター容器。【００１９】
〔８〕〔１〕〜〔７〕のいずれか１つに記載の細胞分離用フィルター容器と、フィルター部材とを有し、
フィルター部材が、フィルター部材収容部に収容されている、細胞分離用フィルター装置。【００２０】
〔９〕フィルター部材が不織布からなる、〔８〕に記載の細胞分離用フィルター装置。【００２１】
〔１０〕単球を含む細胞含有液を取得する方法であって、
単球と、単球よりも平均サイズの小さな細胞である小細胞とを含む粗細胞含有液を、〔８〕又は〔９〕に記載の細胞分離用フィルター装置内に液体導入口から供給した後に前記細胞分離用フィルター装置を通過させることで、単球をフィルター部材に捕捉させることと、
細胞分離用フィルター装置内に回収液を供給することで、フィルター部材に捕捉された単球を回収液中に遊離させて細胞含有液を生じさせることと、
細胞含有液を細胞分離用フィルター装置内から回収することと、
を含む方法。【００２２】
〔１１〕回収液を液体導出口から供給し、細胞含有液を液体導入口から回収する、〔１０〕に記載の方法。【００２３】
〔１２〕樹状細胞療法に用いられる樹状細胞含有液を製造する方法であって、
単球と、単球よりも平均サイズの小さな細胞である小細胞とを含む粗細胞含有液を、〔８〕又は〔９〕に記載の細胞分離用フィルター装置内に液体導入口から供給した後に前記細胞分離用フィルター装置を通過させることで、単球を前記フィルター部材に捕捉させることと、
細胞分離用フィルター装置内に回収液を供給することで、フィルター部材に捕捉された単球を前記回収液中に遊離させて、細胞含有液を生じさせることと、
細胞含有液を細胞分離用フィルター装置内から回収することと、
細胞含有液に含まれる単球を樹状細胞に分化させることと、
を含む方法。【００２４】
〔１３〕回収液を液体導出口から供給し、細胞含有液を液体導入口から回収する、〔１２〕に記載の方法。
【発明の効果】
【００２５】
本発明によれば、内部にフィルター部材を収容することにより、高い回収効率で細胞を回収できる細胞分離フィルター装置を与える細胞分離フィルター容器と、当該細胞分離フィルター容器内にフィルター部材が収容された細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む細胞含有液の取得方法と、当該細胞分離用フィルター装置を用いる工程を含む樹状細胞含有液の製造方法とを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】細胞分離用フィルター容器の１例の概略を示す図である。
【図２】フィルター部材を収容した状態の細胞分離用フィルター装置の１例についての断面を示す図である。
【図３】ノズル付内蓋の１例の概略を示す図である。
【図４】第１フィルター押え部における、第１突起の突出の態様のバリエーションを模式的に示す図である。
【図５】実施例及び比較例で用いた細胞分離用フィルター装置が分解された状態の概略を示す図である。
【図６】実施例及び比較例で用いた細胞分離用デバイスの回路の概略を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明の実施形態について、図面を参照しつつ説明する。
【００２８】
≪細胞分離用フィルター容器≫
細胞分離用フィルター容器２は、液体導入口９と、液体導出口１０と、フィルター部材収容部３と、第１フィルター押え部１２と、第２フィルター押え部１３と、を有する。
以下、細胞分離用フィルター容器について、単に「容器」とも記す。
かかる細胞分離用フィルター容器２内に、不織布等からなるフィルター部材１１を収容することにより、細胞分離用フィルター装置１が構成される。
以下、細胞分離用フィルター装置について単に「フィルター装置」とも記す。
【００２９】
上記の細胞分離用フィルター容器２の構成について以下説明する。
【００３０】
＜フィルター部材収容部＞
フィルター部材収容部３は、両端に開口を有する筒状の部材である。フィルター部材収容部３は、後述するフィルター部材１１を収容する。
以下、フィルター部材収容部３について、収容部３とも記す。
【００３１】
収容部３の形状は、両端に開口を有する筒状である。筒状について、径方向の断面の形状は円形であっても、多角形のような円形以外の形状であってもよい。
収容部３の形状の好ましい具体例としては、例えば、容量約０．１〜４００ｍＬ程度、内径０．１〜１５ｃｍ程度、厚さ０．１〜５ｃｍ程度の円筒状や、一片の長さ０．１〜２０ｃｍ程度の正方形又は長方形で、厚さが０．１〜５ｃｍ程度の四角柱状等が挙げられる。
【００３２】
例えば、図１、図２（ａ）、及び図２（ｂ）に示される、容器２の好ましい態様では、円筒形状の容器２が、円筒状の収容部３と、その上部及び下部にある開口部に蓋をすることができるノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５と、収容部３とノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５とを固定するための環状外蓋６、及び環状外蓋７とで構成される。
【００３３】
ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５には、容器２内部に液体を導入するための液体導入口９と、容器２から液体を排出するための液体導出口１０とがそれぞれ設けられている。
液体導入口９及び液体導出口１０は液体を送液するためのチューブを接続しやすくするために、ノズルで構成されている。前記ノズルの形状や大きさについては特に限定はない。
なお、便宜上、液体導入口９、液体導出口１０と称するが、フィルター装置１の使用時には、液体導入口９から液体が排出されてもよく、液体導出口１０から液体が導入されてもよい。
【００３４】
ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５は栓型になっている。ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５は、それぞれ、収容部３の内腔に押し込まれる。そうすることで、ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５が、収容部３の内面と接して固定される。
ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５のそれぞれと、収容部３との接触面にはシール８が設けられるのが好ましい。このシール８により、ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５と収容部３との気密性を確実にして外部からの微生物等の侵入を防ぐことができる。シール８の好ましい一例としては、例えば、図２（ｂ）に示されるように、ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５それぞれの表面に設けられた溝の周囲に設けられた樹脂製のパッキン（Ｏリング）が挙げられる。シール８の配置や構成については特に限定はない。
【００３５】
ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５は、それぞれ、収容部３に直接固定できるようにされてもよい（図示せず）。ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５と収容部３とが接触する面に、例えば、ネジを設けることでノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５と収容部３とを固定することができる。この場合、図２（ｂ）に示される環状外蓋６、及び環状外蓋７は不要となる。
【００３６】
容器２内では、前記細胞分離材１１が積層されて充填される。例えば、繊維径の異なる細胞分離材１１を２層以上積層したフィルターとすることにより、細胞を捕捉する箇所が分散され、目詰まりの発生が抑制されるとともに、フィルターからの細胞の分離・回収も効率的に行うことができる。なお、繊維径が同じ細胞分離材が連続して積層された部分は、積層された細胞分離材の枚数によらず１層として扱う。
【００３７】
また、容器２には、液体導入口９側に独立して細胞分離材１１内に留まっている非付着細胞を洗浄するための洗浄液導入口（図示せず）が設けられてもよい。また、容器２は、液体導出口１０側に、細胞分離材１１に捕捉された細胞を回収するための細胞回収液導入口（細胞含有液及び洗浄液の流れとは逆方向から細胞回収液を流すため）を、独立して、備えていてもよい（図示せず）。
【００３８】
容器２は、任意の構造材料を使用して作製することができる。構造材料としては、具体的には、非反応性ポリマー、生体親和性金属、合金、及びガラス等が挙げられる。非反応性ポリマーとしては、アクリロニトリルブタジエンスチレンターポリマー（ＡＢＳ）等のアクリルニトリルポリマー；ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレンとヘキサフルオロプロピレンのコポリマー、及びポリ塩化ビニル等のハロゲン化ポリマー；ポリアミド、ポリイミド、ポリスルホン、ポリカードネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニルクロリドアクリルコポリマー、ポリカーボネートアクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリスチレン、及びポリメチルペンテン等が上げられる。容器の材料として有用な金属材料（生体親和性金属、合金）としては、ステンレス鋼や、チタン、白金、タンタル、金、及びそれらの合金や、金メッキ合金鉄、白金メッキ合金鉄、コバルトクロミウム合金、及び窒化チタン被覆ステンレス鋼等が挙げられる。特に好ましくは、耐滅菌製を有する素材である。耐滅菌性を有する素材としては、具体的には、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリイミド、ポリカードネート、ポリスルホン、ポリメチルペンテン等が挙げられる。
【００３９】
＜第１フィルター押え部＞
第１フィルター押え部１２は、収容部３の液体導入口９側の位置において、収容部３の内壁面又は内壁面の近傍から、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央又は略中央に向かって突出する、３本以上の第１突起１２ａからなる。
ここで、内壁面の近傍の位置は、所定の条件を満たす第１突起１２ａを設けることによる、所望する効果が得られる限り特に限定されない。内壁面の近傍の位置は、典型的には、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）において、内壁面からの距離が、収容部３の内部空間についての径方向断面における中央から内壁面までの距離の２０％以内である位置である。
収容部３の内壁面の近傍から第１突起１２ａが突出する場合の具体例としては、例えば、図３に示されるノズル付内蓋４を収容部３にはめ込んで、第１突起１２ａからなる第１フィルター押え部１２を設ける場合が挙げられる。この場合、収容部３の内壁面よりも、ノズル付内蓋４が備える第１環状支持体１２ｂの厚さ分内側の位置から、第１突起１２ａが収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央又は略中央に向かって突出する。
なお、図２（ａ）、及び図３には、第１突起１２ａが３本である場合について図示される。
【００４０】
収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央とは、断面の形状における重心の位置を意味する。収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央は、断面の形状が円形であれば、円の中心であるし、正方形であれば、対角線の交点である。
収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の略中央は、上記の中央の近傍の領域であれば特に限定されない。略中央の範囲をあえて定義すれば、上記の中央を中心とする円形の領域であって、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の面積に対して５０面積％程度の面積を有する円の範囲である。
【００４１】
第１突起１２ａの突出の態様の具体例について、図４（ａ）〜図４（ｄ）に示す。
図４（ａ）には、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央に向かって、同じ長さの複数の第１突起１２ａが真っ直ぐに突出する態様が示される。
図４（ｂ）には、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の略中央の領域に向かうが、中央からずれた方向に向かって、同じ長さの複数の第１突起１２ａが真っ直ぐに突出する態様が示される。
また、図４（ｃ）に示されるように、第１突起１２ａは屈曲しつつ突出してもよい。この場合、第１突起１２ａを、収容部３の径方向断面に対して垂直な方向から観察した形状は、例えば、円弧状でもよく、Ｓ字状でもよく、ジグザグ状でもよい。
さらに、図４（ｄ）に示されるように、複数の第１突起１２ａは、長さの異なる複数種の突起を含んでいてもよい。
これらの中では、図４（ａ）、及び図４（ｂ）に示されるように、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央に向かって、複数の第１突起１２ａが真っ直ぐ突出するのが好ましく、図４（ａ）に示されるように、収容部３の内部空間の断面（径方向断面）の中央に向かって、同じ長さの複数の第１突起１２ａが真っ直ぐに突出するのがより好ましい。
【００４２】
第１突起１２ａの本数は、３本以上であれば特に限定されない。所望する細胞の回収率をより高めやすいことからは、第１突起１２ａの本数は５本以上１２本以下であるのが好ましく、６本以上１０本以下であるのがより好ましい。
第１フィルター押え部１２において、複数の第１突起１２ａは、等間隔で配置されてもよいし、不均一な間隔で配置されてもよい。フィルター部材１１にむらなく細胞を含む液体を浸透させやすい点からは、第１フィルター押え部１２において、複数の第１突起１２ａが、等間隔で配置されるのが好ましい。
【００４３】
第１フィルター押え部１２は、収容部３内に後述するフィルター部材１１が収容された際に、フィルター部材１１を変形させつつフィルター部材１１に当接するように設けられる。
【００４４】
第１フィルター押え部１２を構成する第１突起１２ａの、第１突起１２ａが突出する方向に対して垂直な断面の形状は、特に限定されない。第１突起と、フィルター部材１１とを広い面で接触させやすいことから、典型的には、一辺がフィルター部材１１と当接する矩形であるのが好ましい。
【００４５】
収容部３内にフィルター部材１１が収容される場合、フィルター部材１１は、後述する第２フィルター押え部１３により支持された状態で、第１フィルター押え部１２と当接する。その結果、第１フィルター押え部１２を構成する第１突起１２ａは、フィルター部材１１の第１突起１２ａと当接する表面を、陥没させつつ押し込む。
その結果、フィルター部材１１の第１突起１２ａと当接する部分の付近では、フィルター部材１１が圧縮される。その一方で、フィルター部材１１の第１突起１２ａと当接しない部分の付近ではフィルター部材１１がゆるむ。このゆるみの現象は、フィルター部材１１の弾性（反発力）により生じるものであり、表層における当接部からの距離に応じてゆるみの度合いが部分的に変化する。
そうすると、フィルター部材１１の表層における、複数の第１突起１２ａの先端で形成される多角形に相当する領域では、フィルター部材１１の表層付近の密度が疎になる。他方、フィルター部材１１の表層における、複数の第１突起１２ａに当接する領域やその近傍の領域ではフィルター部材１１の表層付近が密になる。
【００４６】
このように、フィルター部材１１の表層に疎密が形成されることにより、分離対象の細胞のサイズに応じた、回収率の調整を行いやすくなると考えられる。
具体的には、フィルター部材１１が疎である部分では、フィルター部材１１内の表層付近での空孔が広がる一方で、フィルター部材１１の厚さ方向の中心部付近では空孔のサイズが変化しない。そうすると、サイズの小さな細胞を、フィルター部材１１の厚さ方向の中心部付近まで入り込ませることができる。一方で、フィルター部材１１の表層付近では、サイズの大きな空孔にサイズの大きな細胞を捕捉しやすい。
【００４７】
その結果、細胞の捕捉後に、細胞分離用フィルター装置１内に回収液を導入した際に、フィルター部材１１の表層付近の大きな細胞は回収液内に容易に遊離する一方で、フィルター部材１１の厚さ方向中心部付近の小さな細胞は回収液内に遊離しにくい。
【００４８】
上記の理由から、複数の第１突起１２ａの先端で形成される多角形の面積を、収容部３の内部空間の径方向の断面の面積に対して、後述する所定の比率であるようにすることにより、所望するサイズの細胞の回収率を高められると推測される。
【００４９】
具体的には、第１フィルター押え部１２を構成する３本以上の第１突起１２ａのそれぞれの先端を結んで形成される多角形の面積をＡ１とし、第１突起１２ａの位置における収容部３の内部空間の断面（径方向の断面）の面積をＡ２とする場合に、下記式：
面積比率Ｒ１（％）＝Ａ１／Ａ２×１００
で算出される面積比率Ｒ１が、６〜５０％であるように、第１突起１２ａが設けられる。
上記面積比率Ｒ１としては、６〜４０％がより好ましく、６〜３０％がさらにより好ましく、７〜２８％が特に好ましい。
【００５０】
前述の通り、第１突起１２ａによりフィルター部材１１が陥没させつつ押し込まれることにより、フィルター部材１１の表層に疎密が形成される。そして、上記の面積比率Ｒ１が６〜５０％であることにより、フィルター部材１１の表層付近での、サイズの大きな空孔へのサイズの大きな細胞の捕捉しやすさと、サイズの小さな細胞のフィルター部材１１の厚さ方向の中心部付近への閉じ込めやすさとを、適切な程度に調整することができる。また、表層の疎密は液体の流路確保にも大きく関わっている。
具体的には、Ｒ１が６％未満であると、フィルター部材１１の表層において、密である領域が広すぎるため、一部の疎な領域に液体の流路が限定される。その結果、偏流を起こしフィルター効果が得られない。他方で、Ｒ１が５０％超であると、フィルター部材１１の表層において、疎密のコントラストが小さく、また疎である領域が広すぎる。このため、フィルター部材１１内の表層付近で広がった空孔をサイズの大きな細胞が通過する。その結果、サイズの大小に関わらず細胞が厚さ方向のより奥部に閉じ込められ、細胞回収できない、もしくは分離対象の細胞のサイズに応じた回収率の調整が困難となる。
【００５１】
第１フィルター押え部１２は、収容部３の内壁から直接突出するように設けられてもよい。容器２へのフィルター部材１１の収容が容易であることから、第１フィルター押え部１２は、ノズル付内蓋４における容器２の収容部３の内部空間に差し込む先端面に、図３に示されるように、第１環状支持体１２ｂと、第１突起１２ａとから構成されるように設けられるのが好ましい。
第１突起１２ａは、図３に示される通り、第１環状支持体１２ｂにより支持される。
【００５２】
上記のように、第１フィルター押え部１２がノズル付内蓋４に設けられる場合、例えば、図４（ａ）中に点線で示される四角形Ｘが、複数の第１突起１２ａのそれぞれの先端を結んで形成される多角形に相当する。この四角形Ｘの面積が、前述のＡ１に相当する。
他方、図４（ａ）中、第１環状支持体１２ｂの外周に相当する円の面積は、第１突起１２ａの位置における収容部３の内部空間の断面（径方向の断面）の面積であるＡ２に等しい。
【００５３】
＜第２フィルター押え部＞
第２フィルター押え部１３の形状は、容器２の内部にフィルター部材１１を収容した際に、フィルター部材１１の片面から他方の面に向けて通液可能な状態でフィルター部材１１を支持できれば特に限定されない。
上記の条件を満たす第２フィルター押え部１３の具体例としては、メッシュや目皿等が挙げられる。
【００５４】
フィルター装置１に、細胞を含有する液体を通液させる際に、液体導入口９から液体導出口１０へ、又は液体導出口１０から液体導入口９へ液体を良好に流通させやすいことから、第２フィルター押え部１３は、第１フィルター押え部１２と同様に、収容部３の液体導出口１０側の位置において、収容部３の内壁面又は内壁面の近傍より断面（径方向断面）の中央又は略中央に向かって突出する、３本以上の第２突起１３ａから構成されるのが好ましい。
収容部３の内壁面の近傍についての典型的な例は、第１フィルター押え部１２について説明した通りである。
図５では、上記の３本以上の第２突起１３ａから構成される第２フィルター押え部１３を備えるフィルター装置１又は容器２が示される。
【００５５】
第２フィルター押え部が、３本以上の第２突起１３ａから構成される場合、第２突起１３ａの突出のしかたや形状は、第２突起１２ａについて説明した突出のしかたや形状と同様であるのが好ましい。
また、第２フィルター押え部１３を構成する３本以上の第２突起１３ａのそれぞれの先端を結んで形成される多角形の面積をＡ３とし、第２突起１３ａの位置における収容部３の内部空間の断面（径方向の断面）の面積をＡ４とする場合に、下記式：
面積比率Ｒ２（％）＝Ａ３／Ａ４×１００
で算出される面積比率Ｒ２が、６〜５０％であるように、第２突起１３ａが設けられるのが好ましい。
上記面積比率Ｒ２としては、６〜４０％がより好ましく、６〜３０％がさらにより好ましく、７〜２８％が特に好ましい。
Ｒ２が６％未満、又は５０％超である場合には、前述のＲ１の値によっては、Ｒ１が６％未満、又は５０％超である場合について説明した不具合と同様の不具合が生じる場合がある。
【００５６】
以上説明した、細胞分離用フィルター容器２に、後述するフィルター部材１１を収容して細胞分離用フィルター装置１を構成することにより、高い回収率で目的とする細胞を回収しやすい。
【００５７】
≪細胞分離用フィルター装置≫
細胞分離用フィルター装置１は、上記の通り、前述の細胞分離用フィルター容器２に、フィルター部材１１を収容して構成されている。
図６には、前述の細胞分離用フィルター容器２が、収容部３、ノズル付内蓋４、ノズル付内蓋５と、環状外蓋６、及び環状外蓋７から構成される場合の、細胞分離用フィルター装置１の概略分解図が示される。
以下、フィルター部材１１について説明する。
【００５８】
＜フィルター部材＞
フィルター部材１１の形態は、特に限定されず、連通孔構造の多孔質体、繊維の集合体、織物等が挙げられる。好ましくは繊維で構成される織布又は不織布であり、より好ましくは不織布である。
【００５９】
フィルター部材１１の材質としては、例えば、ポリオレフィン（例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、高密度ポリエチレン、及び低密度ポリエチレン等）、ポリエステル、塩化ビニル、ポリビニルアルコール、塩化ビニリデン、レーヨン、ビニロン、ポリスチレン、アクリル系樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクロニトリル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート等）、ナイロン（例えば、脂肪族ポリアミド、芳香族ポリアミド（アラミド））、ポリウレタン、ポリイミド、キュプラ、ケブラー、カーボン、フェノール樹脂、テトロン、パルプ、麻、セルロース、ケナフ、キチン、キトサン、ガラス、及び綿等を挙げることができる。中でも、ポリエステル、ポリプロピレン、アクリル、レーヨン、ナイロン、ポリブチレンテレフタラート、及びポリエチレンテレフタラート等の高分子を好適に用いることができる。フィルター部材１１は、これらの材質のうち、単一の材質からなってもよいし、複数の材質を組み合わせた複合材からなってもよい。
【００６０】
フィルター部材１１の平均繊維径としては、目的の細胞の種類に合わせて適宜選択すればよく特に限定はない。
【００６１】
フィルター部材１１の性能をより向上させるために、フィルター部材１１に親水化処理を行ってもよい。
親水化処理により、目的とする必要細胞以外の細胞における非特異的な捕捉の抑制、細胞含有液を偏り無くフィルター部材１１中に通過させる性能の向上、必要細胞の回収効率向上等の効果が付与され得る。
【００６２】
親水化処理方法としては、
水溶性多価アルコール、水酸基、カチオン基、又はアニオン基を有する化合物、あるいはその共重合体（例えば、ヒドロキシエチルメタクリレート、及びジメチルアミノエチルメタクリレート等を含む単量体の共重合体等）を吸着させる方法；
水溶性高分子（ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等）を吸着させる方法；
疎水性膜に親水性高分子を固定する方法（例えば、表面に親水性モノマーを化学的に結合させる方法等）；
電子線照射する方法；
含水状態で細胞分離フィルターに放射線を照射することで親水性高分子を架橋不溶化する方法；
乾燥状態で熱処理することにより親水性高分子を不溶化し固定する方法；
疎水性膜の表面をスルホン化する方法；
親水性高分子と疎水性ポリマードープとの混合物から膜をつくる方法；
アルカリ（ＮａＯＨ、ＫＯＨ等）の水溶液による処理により膜表面に親水基を付与する方法；
疎水性多孔質膜をアルコールに浸漬した後、水溶性ポリマー水溶液で処理乾燥後、熱処理や放射線等で不溶化処理する方法；又は、
界面活性作用を有する物質を吸着させる方法等が挙げられる。
【００６３】
親水性高分子としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、エチレン−ビニルアルコール共重合体、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、多糖類（セルロース、キチン、キトサン等）、及び水溶性多価アルコール等が挙げられる。
【００６４】
疎水性ポリマーとしては、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン（ポリエチレン、ポリプロピレン等）、アクリル、ウレタン、ビニロン、ナイロン、及びポリエステル等が挙げられる。
【００６５】
回収目的とする細胞のフィルター部材への付着性を向上させるために、細胞付着性のタンパク質や、目的とする幹細胞上の発現されている特異的抗原に対する抗体を、フィルター部材上に固定化してもよい。細胞付着性のタンパク質としては、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、及びコラーゲン等が挙げられる。抗体としては、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ１４０ａ、及びＣＤ２７１等が挙げられるが、これらに限定されない。固定化方法としては、例えば、一般的なタンパク質の固定化方法である、臭化シアン活性化法、酸アジド誘導体法、縮合試薬法、ジアゾ法、アルキル化法、及び架橋法等の方法を任意に用いることができる。
【００６６】
フィルター部材１１の厚さは特に限定されない。フィルター部材１１の厚さは、前述の第１フィルター押え部１２と第２フィルター押え部１３との間隔を考慮して適宜決定される。典型的には、フィルター部材１１の厚さは、３〜２０ｍｍが好ましく、５〜１０ｍｍがより好ましい。
フィルター部材１１の開口径としては、通気度（ｃｃ／ｃｍ２・ｓｅｃ）と厚み（ｍｍ）の積（通気度係数Ｍ）から定義することができる。範囲としては７．０以上１４．２以下が好ましく、９．２以上１０．０以下が最も好ましい。
【００６７】
≪所望する細胞を含む細胞含有液を取得する方法≫
以上説明した細胞分離用フィルター装置を用いる処理により、所望する細胞を含む細胞含有液を取得することができる。
【００６８】
＜細胞＞
取得対象の細胞は、特に限定されない。例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、間葉系幹細胞、脂肪由来間葉系細胞、脂肪由来間質幹細胞、多能性成体幹細胞、骨髄ストローマ細胞、及び造血幹細胞等の多分化能を有する生体幹細胞；Ｔ細胞、Ｂ細胞、キラーＴ細胞（細胞障害性Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、及び制御性Ｔ細胞等のリンパ球系の細胞；マクロファージ、単球、樹状細胞、顆粒球、赤血球、血小板等、神経細胞、筋細胞、線維芽細胞、肝細胞、及び心筋細胞等の体細胞；、及び、遺伝子の導入や分化等の処理を行った細胞が挙げられる。
【００６９】
このような細胞の中では、回収率を高める効果が顕著に表れやすいことから白血球、造血幹細胞及び／又は単核球が好ましく、単球がより好ましい。
なお、白血球としては、末梢血中の好中球、好酸球、及び好塩基球等の顆粒球、並びに単球、及びリンパ球等の単核球が挙げられる。
以下、単球を含む細胞含有液を取得する方法を代表例として説明する。
【００７０】
＜単球を含む細胞含有液を取得する方法＞
単球を含む細胞含有液を取得する好適な方法は、
単球と、単球よりも平均サイズの小さな細胞である小細胞とを含む粗細胞含有液を、前述の細胞分離用フィルター装置１内に液体導入口９から供給した後に細胞分離用フィルター装置１を通過させることで、単球をフィルター部材１１に捕捉させることと、
細胞分離用フィルター装置１内に回収液を供給することで、フィルター部材１１に捕捉された単球を回収液中に遊離させて記細胞含有液を生じさせることと、
細胞含有液を細胞分離用フィルター装置１内から回収することと、
を含む方法である。
【００７１】
粗細胞含有液としては、少なくとも単球と、単球よりも平均サイズの小さな細胞である小細胞とを含む細胞を含む懸濁液であれば特に限定されず用いることができる。かかる小細胞の好適な具体例としては、顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）、リンパ球、赤血球、及び血小板等が挙げられる。例えば、臍帯等の生体組織を酵素処理や破砕処理や抽出処理や分解処理や超音波処理等をした後の懸濁液、血液や骨髄液、臍帯血等の体液、血液や骨髄液を密度勾配遠心処理やろ過処理や酵素処理や分解処理や超音波処理等の前処理をして調製された細胞懸濁液等が粗細胞含有液として例示される。
また、粗細胞含有液は、上記した白血球等の細胞を生体外で培養液や刺激因子等を用いて培養や増殖等をした後の懸濁液であってもよい。
ここで、「粗細胞含有液」とは、細胞分離用フィルター装置１による細胞を取得する処理に供される細胞含有液を意味する。
【００７２】
細胞分離用フィルター装置１の液体導入口９から粗細胞含有液を導入する際には、液体導入口９と液体導出口１０との間に差圧を生じさせればよい。差圧を生じさせる方法は、特に限定されない。かかる方法としては、粗細胞含有液を加圧させる、又は重力差を利用することで細胞分離用フィルター装置１内へ粗細胞含有液の導入させる方法や、液体導出口１０側を減圧して、細胞分離用フィルター装置１内へ粗細胞含有液を吸入する方法等が挙げられる。
このようにして、細胞分離用フィルター装置１内に粗細胞含有液を供給し、粗細胞含有液をフィルター部材１１と接触させて、単球をフィルター部材１１に捕捉させる。
差圧の程度としては、容器２や、フィルター部材１１に破損が生じたり、粗細胞含有液に含まれる細胞の過度の破砕が生じたりしない程度であれば、特に限定されない。
フィルター部材１１は、単球を捕捉できるものを使用すればよい。
【００７３】
次いで、単球を捕捉したフィルター部材１１に回収液を供給することで、フィルター部材１１から単球を回収液中に遊離させ、単球を含む細胞含有液を生成させる。この白血球等を含む回収液を液体導入口９から回収専用のバッグ等に導入することで白血球等を回収することができる。
回収液は、液体導出口１０又は液体導入口９から細胞分離用フィルター装置１内に導入される。また、単球を含む細胞含有液を、細胞分離用フィルター装置１内から回収する方法は特に限定されない。典型的には、液体導入口９から単球を含む細胞含有液が回収される。
回収液の流れによって、フィルター部材１１に捕捉された単球を回収液中に遊離させやすいことから、回収液を、液体導出口１０からフィルター部材１１を通過するように細胞分離用フィルター装置１内に導入するのが好ましい。この場合、所謂逆洗操作を行うのが好ましい。逆洗操作は、液体導出口１０から回収液を導入しつつ、単球を含む細胞含有液をそのまま液体導入口９から回収する操作である。
【００７４】
回収液は、細胞と等張である溶液であれば特に限定はない。回収液の具体例としては、生理食塩液やリンゲル液等の注射溶剤として使用実績のある液や、緩衝液、及び細胞培養用の培地等が挙げられる。特に、細胞含有液の使用が培養工程を経る際は、そのまま培養が行える培地が好ましい。細胞含有液が培養工程を経ずそのまま治療に用いられる際は、生理食塩液等の点滴等に使用実績のある等張液等、安全性が保証されている回収液を使用することが好ましい。
【００７５】
以上説明した操作は、室温下で行われてもよいし、冷蔵温度下で行われてもよい。冷蔵温度下で行われる操作としては、冷蔵された粗細胞含有液の処理が挙げられる。粗細胞含有液の保管としては、冷蔵温度に設定した冷蔵庫による保管、ウォーターバスによる保管、及びドライアイスによる保管等が挙げられる。汎用性から冷蔵庫による保管が好ましい。冷蔵温度としては、１℃以上６℃以下が好ましく、より好ましくは３℃以上５℃以下が好ましい。冷蔵温度が１℃未満では細胞は死滅し、６℃を超えて保存すると細菌が繁殖しコンタミネーションを起こす可能性がある。
【００７６】
また、フィルター部材１１の状態を整えて、単球を捕捉しやすくする観点から、細胞分離用フィルター装置１内に粗細胞含有液を供給する前に、液体導入口９又は液体導出口１０から生理食塩水又は緩衝液を細胞分離用フィルター装置１内に導入し、フィルター部材１１と生理食塩水又は緩衝液とを接触させてもよい。
【００７７】
回収液を用いて単球を含む細胞含有液を生じさせる前に、生理食塩水又は緩衝液を液体導入口９から導入して液体導出口１０から導出させることにより、フィルター内の夾雑成分を除去できる。これにより回収される細胞（単球）内へ不要成分を低減することができる。
【００７８】
≪樹状細胞療法に用いられる樹状細胞含有液を製造する方法≫
前述の細胞分離用フィルター装置１を用いて、樹状細胞療法に用いられる樹状細胞含有液を好適に製造することができる。
かかる方法では、まず、前述の単球を含む細胞含有液の取得方法に従って、単球を含む細胞含有液を取得する。
次いで、得られた細胞含有液に含まれる単球を、周知の種々の方法に従って、樹状細胞に分化させる。典型的には、樹状細胞の分化誘導用のタンパク質キットや、培地が市販されており、これらを用いて、単球から樹状細胞を誘導することができる。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例において本発明に関して詳細に述べるが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。【００８０】
（実施例１〜６、比較例１、及び比較例２）
図５に示されるように、表１に示す高さ（内寸５ｍｍ、又は１２ｍｍ）と直径（内径６０ｍｍ、又は４５ｍｍ）の円筒状の収容部３に、直径６０ｍｍ、又は４５ｍｍの丸型にカットされたポリエステル不織布（目付３５ｇ／ｍ２、フィルター部材１１）を５０枚、もしくは１０５枚充填した。次いで、収容部３の上下の開口部に、第１フィルター押え部を備えるノズル付内蓋４と、第２フィルター押え部を備えるノズル付内蓋５とを差し込んだ。ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５を、これらの上から環状外蓋６、及び環状外蓋７でネジ止めし、図１、２（ａ）、及び２（ｂ）に示されるような構造を有する細胞分離フィルター装置１を作製した。【００８１】
なお、ノズル付内蓋４、及びノズル付内蓋５には、互いに同一の形状の第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部とが設けられた。そして、第１突起１２ａと、第２突起１３ａとは、それぞれ、第１環状支持体１２ｂと、第２環状支持体１３ｂとから、収容部３の径方向断面の中央に向かって真っすぐ突出するように設けられた。
また、第１フィルター押え部と、第２フィルター押え部とにおいて、複数の第１突起１２ａと、複数の第２突起１３ａとを、それぞれ、等間隔であるように設けた。【００８２】
図２（ａ）、図３、及び図５に示される第１フィルター押え部１２及び第２フィルター押え部１３の形状は一例であって、実施例で用いた第１フィルター押え部１２及び第２フィルター押え部１３がそれぞれ有する、第１突起１２ａ及び第２突起１３ａの本数、形状、及び長さは、図２（ａ）、図３、及び図５に示される形状に限定されない。【００８３】
次に、細胞分離用フィルター装置１の液体導入口９と液体導出口１０とに、図６に示される回路を接続して細胞分離用デバイス２２を作製した。【００８４】
図６に示される回路において、液体導入口９にはチューブ１４ａが接続された。このチューブ１４ａには、細胞懸濁液を収容する手段１５及びプライミング用生理食塩水を収容する手段１６に接続されたチューブ１４ｂと、フィルターを通過した回収液を収容する手段（回収バッグ）１７及び回収バッグ等に回収された回収液を回収する手段１８に接続されたチューブ１４ｃとを、流路切り替え手段１９ｃを介して接続された。
チューブ１４ｂには流路切り替え手段１９ｂを介して、細胞懸濁液を収容する手段１５とプライミングやカラムの洗浄に用いる生理食塩水を収容する手段１６とが接続された。
チューブ１４ｃには流路切り替え手段１９ｃを介して、フィルターを通過した回収液を収容する手段１７と回収バッグ等に回収された回収液を回収する手段１８とが接続された。
また、液体導出口１０にはチューブ１４ｄが接続され、且つ流路切り替え手段１９ｄを介して、フィルターを通過した細胞懸濁液を収容する手段（廃液バッグ）２０及び回収液を回収する手段２１が接続された。【００８５】
細胞分離用デバイス２２を用いて細胞（単球）分離操作を実施した。なお、各流路切り替え手段の操作は、細胞分離用フィルター装置１に通液する液体の種類、送液する目的の手段に応じて、適宜行われた。
まず、生理食塩水を収容する手段１６の生理食塩水５０ｍＬ〜１５０ｍＬを用いて細胞分離用フィルター装置１のプライミング操作を行った。その後、廃液バッグ２０に細胞分離用フィルター装置１を通過した生理食塩液を回収した。
次に、細胞懸濁液を収容する手段１５から白血球濃厚液（ＣＰＤで抗凝固したブタ血液）１００ｍＬを、細胞分離用フィルター装置１に重力を利用して通液した。その後、通過液を廃液バッグ２０に回収した。
上記操作で使用した白血球濃厚液は、ＣＰＤで抗凝固したブタ血液を３０００ｒｐｍ、３０分遠心分離して得たバッフィーコートより、処理する白血球数が１．０×１０９ｃｅｌｌｓ〜４．０×１０９ｃｅｌｌｓになるように調製した。
その後、流路切り替え手段１９ｂを用いて、生理食塩水を収容する手段１６の生理食塩水１００ｍＬを細胞分離用フィルター装置１に重力を利用して通液した。次いで、通過液を廃液バッグ２０に回収した。
最後に、生理食塩水５０ｍＬを１０〜５０ｍＬ／秒の流量で、回収液を回収する手段２１としてシリンジを用いて手動で細胞分離用フィルター装置１の液体導出口１０より導入した。次いで、回収液（細胞含有液）を、液体導入口９に接続した回収バッグ１７に回収した。
回収液（細胞含有液）、及び、処理前の細胞懸濁液（粗細胞含有液）の白血球濃度を、血球カウンター（Ｋ−４５００、シスメックス社）により測定した。また、単球濃度に関しては、細胞表面マーカーであるＣＤ１４に対して蛍光標識し、上記血球カウンター及びフローサイトメーター（ＦＡＣＳ  ｃａｎｔｏ、ＢＤ社）により測定した。その後、処理前の細胞懸濁液と回収液の体積より白血球数及び単球数を算出して、白血球回収率、単球回収率をそれぞれ求めた。結果は表１に示した。【００８６】
【表１】
2018194061.tif 000003
【００８７】
表１によれば、所定の面積比率Ｒ１（Ａ１／Ａ２（面積％））が６〜５０％であるように構成された実施例の細胞分離用フィルター装置１を用いる場合、高い回収率で単球を回収できる（さらに純度高く単球を回収できる）一方で、所定の面積比率Ｒ１（Ａ１／Ａ２（面積％））が６〜５０％から外れるように構成された細胞分離用フィルター装置１を用いる場合、低い回収率及び低純度でしか単球を回収できないことが分かる。
【符号の説明】
【００８８】
１  細胞分離用フィルター装置
２  細胞分離用フィルター容器
３  フィルター部材収容部
４、５  ノズル付内蓋
６、７  環状外蓋
８  シール
９  液体導入口
１０  液体導出口
１１  フィルター部材
１２  第１フィルター押え部
１２ａ  第１突起
１２ｂ  第１環状支持体
１３  第２フィルター押え部
１３ａ  第２突起
１３ｂ  第２環状支持体
【図１】
2018194061.tif 000004
【図２】
2018194061.tif 000005
【図３】
2018194061.tif 000006
【図４】
2018194061.tif 000007
【図５】
2018194061.tif 000008
【図６】
2018194061.tif 000009
【国際調査報告】
2018194061.tif 000010
2018194061.tif 000011
2018194061.tif 000012
2018194061.tif 000013