(57)【要約】  スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の作用を効率的に発揮するレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、ＰＣ−ＳＯＤ）を有効成分として含有する、特に特発性（急性）、或いは慢性間質性肺炎の治療のための吸入剤を提供することであり、下記一般式（Ｉ）：            ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）で表されるＰＣ−ＳＯＤを有効成分とすることを特徴とする吸入剤である。
2010064522.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とする吸入剤。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とする請求項１に記載の吸入剤。
【請求項３】
ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の吸入剤。
【請求項４】
ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の吸入剤。
【請求項５】
スーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とする請求項３または４に記載の吸入剤。
【請求項６】
ｎが２〜１０の整数である請求項２ないし５のいずれかに記載の吸入剤。
【請求項７】
ｍが１〜１２の整数である請求項１ないし６のいずれかに記載の吸入剤。
【請求項８】
さらに安定化剤を含有することを特徴とする請求項１ないし７のいずれかに記載の吸入剤。
【請求項９】
安定化剤が糖であることを特徴とする請求項８に記載の吸入剤。
【請求項１０】
糖がシュークロースであることを特徴とする請求項９に記載の吸入剤。
【請求項１１】
シュークロースが、活性炭処理されたシュークロースであることを特徴とする請求項１０に記載の吸入剤。
【請求項１２】
吸入用微粉末製剤の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の吸入剤。
【請求項１３】
吸入用水溶液又は懸濁液製剤の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の吸入剤。
【請求項１４】
経気道投与される請求項１〜１３のいずれかに記載の吸入剤。
【請求項１５】
間質性肺炎の治療又は予防に用いるための請求項１〜１３のいずれかに記載の吸入剤。
【請求項１６】
間質性肺炎が制癌剤の副作用として発症することを特徴とする請求項１〜１３のいずれかに記載の吸入剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はスーパーオキサイドジスムターゼ含有吸入剤に係わり、詳細には、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＰＣ−ＳＯＤと記載する場合もある）を有効成分として含有する、特に間質性肺炎等の肺疾患治療のための吸入剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＳＯＤと記載する場合もある）は、１９６５年Huberらによって牛の血液から抗炎症蛋白質として抽出され、活性酸素の一つであるスーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）を特異的に消去することが明らかにされた生理活性蛋白質である。生体内においては、活性酸素は主に好中球、マクロファージ等の食細胞から殺菌のために放出されるが、通常余剰の活性酸素に対してはＳＯＤをはじめとする種々の抗酸化物質が存在し、活性酸素による正常細胞への傷害を防御している。【０００３】
しかしながら、ＳＯＤ等の抗酸化物質による抗酸化能力を超えて活性酸素が過剰に存在すると、その近くに存在する物質、特に細胞膜が活性酸素により攻撃され、種々の病態が発現してくる。事実、活性酸素はその強力な組織障害性が証明されて以来、炎症、アレルギー、虚血再灌流による組織障害、抗癌剤による肺線維症など多くの病態の発生・増悪因子になることが明らかにされてきた。【０００４】
このような状況の中、活性酸素を特異的に消去するＳＯＤが見出され、その臨床的応用の可能性について広く検討されている。本発明者らもＳＯＤの臨床的活用性について鋭意検討してきたなかで、ＳＯＤの臨床的効果を高めるためには、腎臓からの排泄を抑えて血中濃度を維持すること、さらに細胞膜への親和性を高めて細胞膜上に存在する過剰の活性酸素を消去することが重要であると考え、種々の修飾型ＳＯＤを検討し、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）を提案してきている（特許文献１、特許文献９）。【０００５】
このＰＣ−ＳＯＤは、遺伝子組み換え技術によりＣｕ／Ｚｎ−ヒトスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を調製した後、化学的にレシチン誘導体（フォスファチジルコリン誘導体：ＰＣ）をＳＯＤ１分子（２量体）あたり平均４分子結合させたレシチン化ＳＯＤである。ＰＣ−ＳＯＤは、細胞膜に対して高い親和性を有し、病変部位において発症因子である虚血・再灌流障害やアントラサイクリン系抗癌剤誘発心筋症等の活性酸素が関与する疾患に対する高い治療効果が認められており、既にこのＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする急性心不全治療剤（特許文献２）、抗ウイルス剤（特許文献３）、ループス腎炎治療剤（特許文献４）、脳血管障害に伴う機能障害改善剤（特許文献５）、抗線維化剤（特許文献６）あるいは抗アレルギー疾患処置剤（特許文献７）、熱傷治療剤（特許文献８）等を種々提案してきている。【０００６】
ところで、肺炎とは病原体が肺胞領域に侵入し、増殖して、生体反応を引き起こした感染症であり、一方、間質性肺炎は肺胞隔壁を主な病変部位（肥厚、細胞浸潤、線維化を主体）とし、炎症・線維化が遷延化する疾患である。この間質性肺炎には、原因がはっきりしているものと、原因のわからないものに分けられており、炎症により細胞やコラーゲンなどが増加し、肺胞の壁が厚くなり、酸素の取り込み量が低下し、息苦しい状態（呼吸困難）に陥る、難治性の疾患である。
間質性肺炎には一過性のものもあるが、多くは肺の硬化が徐々に進行し、更に不可逆性に増悪して、肺が硬くなり、呼吸が維持できない肺線維症に進行する。【０００７】
その間質性肺炎の中でも特発性間質性肺炎（idiopathic interstitial pueumonias：ＩＩＰ）は一つの疾患ではなく、原因不明の間質性肺炎の総称であり、アメリカでの特発性肺線維症（idiopathic pulmonary fibrosis：ＩＰＦ）とほぼ同義語である。日本においては、１９８１年間質性肺疾患調査研究班によって提唱された病名であり、その症状は、多くは緩徐に進行するが、急性増悪を来すことがあり、いずれも予後不良で、死の転帰をとることが多い。
現在、日本においては、臨床病理学的疾患単位として、特発性肺線維症、非特異性間質性肺炎、急性間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連性間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、リンパ球性間質性肺炎などに分類されている。【０００８】
特発性間質性肺炎は、その原因は不明であり、肺の線維化は、多様な遺伝子背景に加え、炎症・免疫の関与が想定されている。
近年、制癌剤の副作用として間質性肺炎が発症することが知られており、特にゲフィチニブの重要な副作用として間質性肺炎が問題となっている。【０００９】
いずれにしても、間質性肺炎の発症に伴う細胞障害作用の誘導、或いはアレルギー反応の誘発には、スーパーオキサイドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることでこれらの誘導を抑制させ、結果的に間質性肺炎の治療を行うことができるものと考えられる。
そこで本発明者は、かかる考え方に立脚して、先に提案している細胞親和性の高いレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）を用いて、間質性肺炎患者、更には特発性間質性肺炎患者に対する治療効果を検討した結果、このＰＣ−ＳＯＤが効果的な治療効果を発揮するものであることを確認している。【００１０】
しかしながら、その効果は未だ十分なものとはいえず、更なる改良が求められていた。
かかる現状下において、本発明者は更なる検討を行い、ＰＣ−ＳＯＤを肺組織に直接投与する経気道投与、或いは噴霧投与が肺組織におけるＰＣ−ＳＯＤ濃度を高濃度に維持し、間質性肺炎に極めて有効なものであることを確認し、本発明を完成させるに至った。
これまで、ＰＣ−ＳＯＤ自体を直接肺組織に経気道投与し、間質性肺炎、特に特発性間質性肺炎の治療を行おうとする考え方は具体的には存在しなかった。その点で本発明は極めて特異的なものであるといえる。【００１１】
【特許文献１】特開平９−１１７２７９号公報
【特許文献２】特開平９−５２８４３号公報
【特許文献３】特開平９−５９１７８号公報
【特許文献４】特開平９−１１０７１７号公報
【特許文献５】特開平１０−３３８６４５号公報
【特許文献６】特開２００１−２５８５号公報
【特許文献７】特開２００１−１５１６９５号公報
【特許文献８】特開２００６−１６９１２８号公報
【特許文献９】特開２００１−６４１９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって本発明は、上記の現状に鑑み、ＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする間質性肺炎のための吸入剤を提供し、特に特発性（急性）、或いは慢性間質性肺炎の治療のための吸入剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的態様として、
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とする吸入剤である。【００１４】
より好ましくは、本発明で使用する式（Ｉ）で示されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼにおいて、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とする吸入剤である。【００１５】
さらに本発明は、具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であり、具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とする吸入剤である。【００１６】
最も具体的には、本発明はスーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とする吸入剤である。【００１７】
さらに本発明は、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼと共にその安定化剤を含有する吸入剤であり、安定化剤として糖成分、特にシュークロースを含有させた吸入剤である。【００１８】
最も具体的には、本発明は吸入用微粉末製剤の形態、或いは吸入用水溶液又は懸濁液製剤の形態にあることを特徴とする吸入剤であり、経気道投与される吸入剤である。【００１９】
また本発明は、間質性肺炎の治療又は予防に用いるための吸入剤であり、特に、間質性肺炎が制癌剤の副作用として発症することを特徴とする吸入剤である。【００２０】
なお、本発明における間質性肺炎とは特発性間質性肺炎を含み、臨床病理学的疾患単位として、特発性肺線維症、非特異性間質性肺炎、急性間質性肺炎、特発性器質化肺炎、呼吸細気管支炎関連性間質性肺疾患、剥離性間質性肺炎、リンパ球性間質性肺炎などに分類される疾患をも含むものである。
【発明の効果】
【００２１】
本発明は、間質性肺炎の発症として、例えば薬剤投与、或いはその代謝物による細胞障害作用の誘導、或いはアレルギー反応の誘発がなされ、その誘発には、スーパーオキサイドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることでこれらの誘導を効果的に抑制させ、その結果、間質性肺炎の有効な治療を行えるものである。また、制癌剤の副作用のひとつである間質性肺炎の有効な治療剤としても使用することができる。
これまで効果的な間質性肺炎治療剤が存在しなかった状況下において、特異的なＰＣ−ＳＯＤを投与すること、特に経気道投与することにより肺組織へ高濃度でＰＣ−ＳＯＤを投与することが可能となり、その治療効果は極めて高いものである利点を有している。【００２２】
また、本発明に使用するＰＣ−ＳＯＤは、従来のＳＯＤに比較して細胞膜への親和性に優れたものであり、局所的に病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上安定化剤として糖成分、特にシュークロースを一緒に含有させることにより、ＰＣ−ＳＯＤ自体の安定性に優れたものとなり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮し、効果的に間質性肺炎の治療を行い得る点で、特に優れたものである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】実施例２における肺胞洗浄液中の全細胞数を示した図である。
【図２】実施例２における肺胞マクロファージの結果を示した図である。
【図３】実施例２におけるリンパ球の結果を示した図である。
【図４】実施例２における好中球の結果を示した図である。
【図５】実施例３における肺組織中のハイドロキシプロリン量の結果を示した図である。
【図６】実施例４における肺胞洗浄液中の全細胞数を示した図である。
【図７】実施例４における肺胞マクロファージの結果を示した図である。
【図８】実施例４におけるリンパ球の結果を示した図である。
【図９】実施例４における好中球の結果を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明が提供する間質性肺炎治療剤において使用されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）において、「レシチン」とはフォスファチジルコリンを意味する通常のレシチンをいい、「リゾレシチン」とはレシチンのグリセロールの２位に結合している脂肪酸１分子がとれて、２位の炭素原子に水酸基が結合した化合物をいう。【００２５】
本発明で有効成分として使用するＰＣ−ＳＯＤは、通常リゾレシチンの２位の水酸基に化学的架橋剤を結合させたレシチン誘導体を、ＳＯＤに１個以上結合させて得ることができる。このＰＣ−ＳＯＤは、次式（Ｉ）：
ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表すことができる。【００２６】
ここで使用するＳＯＤ’は、生体内の活性酸素（Ｏ２−）の分解というその本来の機能を発揮し得る限りにおいて、その起源は特に限定されるものではなく、各種の動植物または微生物に由来するＳＯＤ残基を広く用いることができる。しかしながら、医薬品としての用途を考慮した場合には生体内での抗原性を可能な限り減らすことが好ましい。したがって、使用するＳＯＤ’としては、本発明の間質性肺炎治療剤を投与する対象に応じて適宜適切なＳＯＤ残基を選択することが好ましい。【００２７】
例えば、現実の間質性肺炎患者を対象に投与しようとするものであるから、投与による生体内における抗原性をできるだけ減らすために、ヒト由来のＳＯＤ残基を用いることが好ましい。したがって、本発明の間質性肺炎治療用のＳＯＤとしては、抗原性を考慮し、ヒト由来のＳＯＤを使用するのがよい。【００２８】
ヒト由来のＳＯＤとしては、ヒト由来のＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ（活性中心に銅と亜鉛を含むヒト由来のＳＯＤ；以下、ヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと略記する場合もある）が、細胞内における発現量が多く、また遺伝子工学的手法による生産技術が既に確立しており、大量に調製することが可能であるために、特に好ましく使用される。【００２９】
このヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤには、ヒト組織または培養細胞から製造される天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；遺伝子工学的手法により製造されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと実質上同一のアミノ酸配列を有する組み換えヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤにおけるアミノ酸配列式中の一部のアミノ酸を欠失、付加、置換、あるいは化学的に修飾若しくは改変したＳＯＤ等があり、いずれのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤであってもよい。【００３０】
そのなかでも、天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤのアミノ酸配列式における１１１位のアミノ酸（システイン：Ｃｙｓ）がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤが好ましい。かかるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤは、例えば特許文献１（特開平９−１１７２７９号公報）にその詳細が記載されており、その方法に従って得ることができる。
したがって、特許文献１（特開平９−１１７２７９号公報）に記載されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの調製は、本明細書の一部を構成し、本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤを素材として得ることができる。【００３１】
本発明で使用する式（Ｉ）で表されるＰＣ−ＳＯＤにおいて、Ｂで示される「グリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基」は、具体的には次式（ＩＩ）：
−Ｏ−ＣＨ(ＣＨ２ＯＲ)[ＣＨ２ＯＰ(Ｏ)(Ｏ−)(ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋(ＣＨ３)３)]
（ＩＩ）
（式中、Ｒは脂肪酸残基（アシル基）である）
で表される。【００３２】
Ｒで示される脂肪酸残基（アシル基）としては、炭素数１０〜２８の飽和または不飽和脂肪酸残基が好ましく、より好ましくは、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、イコサノイル基、ドコサノイル基、その他の炭素数１４〜２２の飽和脂肪酸残基であり、特に好ましくは炭素数１６を有する飽和脂肪酸残基であるパルミトイル基である。【００３３】
また、一般式（Ｉ）においてＱで示される化学的架橋は、ＳＯＤとレシチンとを架橋して化学的に結合（共有結合）させ得るものであれば特に限定されない。そのような化学的架橋としては、残基：−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）が特に好ましい。この残基は、式：ＨＯ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−ＯＨで表される直鎖状のジカルボン酸、その無水物、エステル、ハロゲン化物等の両端に存在する水酸基（但し、無水物、エステル、ハロゲン化物の場合には、両端に存在する水酸基に該当する部分）を除いた残基である。【００３４】
一般式（Ｉ）においてＱが上記の直鎖状のジカルボン酸残基である場合には、Ｑはその一端において前記した式（ＩＩ）のリゾレシチン残基の水酸基由来の酸素とエステル結合により結合している。また、エステル結合をしたＱの他端は、ＳＯＤのアミノ基とアミド結合などにより直接結合している。
なお、上記化学的架橋の残基においてｎとしては２以上の整数であり、好ましくは２〜１０の整数である。【００３５】
また、式（Ｉ）においてｍとしてはＳＯＤ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数を表している。したがって、ｍは１以上の整数であり、１〜１２、特に４であることが好ましい。【００３６】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤの製造方法、すなわちレシチン誘導体とＳＯＤ、好ましくはヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの結合方法は、例えば、特許文献１に記載の方法により行うことができる。【００３７】
その好ましいＰＣ−ＳＯＤの化学構造を模式的に示すと、以下のＰＣ−ＳＯＤが特に好ましい。【００３８】
【化１】
2010064522.tif 000003
（ｍは、結合したレシチン誘導体数）【００３９】
すなわち、E. coliを宿主として遺伝子組み換えにより製造したヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの遊離アミノ基に、レシチン誘導体を平均４分子共有結合させたものである。【００４０】
本発明が提供する吸入剤、特に間質性肺炎治療のための吸入剤において用いるＰＣ−ＳＯＤは、医薬として使用できる程度に精製され、かつ、医薬として混入が許されない物質を実質的に含まないものであることが好ましい。例えば、ＰＣ−ＳＯＤは、２，５００Ｕ／ｍｇ（２．５ｋＵ／ｍｇ）以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものを用いるのが好ましく、３，０００Ｕ／ｍｇ（３．０ｋＵ／ｍｇ）以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものがより好ましい。
なお、本発明において１Ｕ（ユニット）とは、ｐＨ７．８／３０℃の条件下でＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）を用いてJ. Biol. Chem., vol.244, No.22 6049-6055 (1969) に記載の方法に準じて測定し、ＮＢＴの還元速度を５０％阻害するＰＣ−ＳＯＤの酵素量を表す。【００４１】
本発明が提供する吸入剤は、かくして調製されたＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする吸入剤である。かかる吸入剤とは、気管、気管支、肺等へ到達させるための医薬組成物を意味し、好適には、点鼻剤又は経鼻若しくは経肺投与に適した組成物であり、特に経肺投与に適した組成物である。【００４２】
本発明の吸入剤は、上記したＰＣ−ＳＯＤを有効成分として用いて、粉末、溶液又は懸濁液の形態として製造することができる。【００４３】
吸入剤を粉末として製造する場合には、有効成分である上記したＰＣ−ＳＯＤをそのまま、若しくは賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、矯味・矯臭剤などの添加剤を加えて微細化することにより製造することができる。【００４４】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトールのような糖類；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α−デンプン、デキストリン若しくはカルボキシメチルデンプンのような澱粉誘導体；結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムのようなセルロース誘導体；アラビアゴム、デキストラン、プルラン等の有機系賦形剤；或いは軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム若しくはメタケイ酸アルミニウムマグネシウムのようなケイ酸誘導体；リン酸カルシウムのようなリン酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；または硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機賦形剤を挙げることができる。【００４５】
滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイダルシリカ；ビーガム若しくはゲイ蝋のようなワックス類：ホウ酸；アジピン酸；硫酸ナトリウム；硫酸塩；グリコール；フマール酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬ−ロイシン；脂肪酸ナトリウム塩；ラウリル硫酸ナトリウム若しくはラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水ケイ酸若しくはケイ酸水和物のようなケイ酸類；または上記した澱粉誘導体を挙げることができる。【００４６】
結合剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン若しくはマクロゴール、或いは上記した賦形剤と同様の化合物が挙げることができる。【００４７】
崩壊剤としては、例えば、前記した賦形剤と同様の化合物、またはクロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム若しくは架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・セルロース類を挙げることができる。【００４８】
安定化剤としては、例えば、メチルパラベン若しくはプロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール若しくはフェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール若しくはクレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；ソルビン酸等を挙げることができる。
また、矯味・矯臭剤としては、通常使用されている甘味料、酸味料若しくは香料等を挙げることができる。【００４９】
本発明が提供する吸入剤において、吸入剤を溶液または懸濁剤として製造する場合には、例えば、ＰＣ−ＳＯＤを水または水と補助溶媒、例えば、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールのようなアルコール系の補助溶媒の混合物に溶解又は懸濁させることにより製造することができる。そのような溶液又は懸濁液は、さらに防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、等張化剤、吸収促進剤、増粘剤等を含有することができる。【００５０】
防腐剤としては塩化ベンザルコニウムを、可溶化剤としてはポリソルベート或いは界面活性剤を、等張化剤としては塩化ナトリウム等を挙げることができる。また、懸濁液は、懸濁化剤（例えば、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）をさらに添加してもよい。【００５１】
上記のようにして製造した吸入剤は、吸入剤の分野での一般的な手段、例えば、スポイト、ピペット、カニューレ又はアトマイザーやネブライザーなどの噴霧器を用いて霧状をして鼻腔内又は口腔内に、或いは気管、気管支、肺等へ直接投与される。噴霧器を用いる場合には、適当な噴射剤（例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタンのようなクロロフルオロカーボン、または二酸化炭素等のガス等）と共に加圧バッグの形にされたエアゾールとして噴霧するか、ネブライザーを用いて投与することができる。【００５２】
本発明の吸入剤にあっては、有効成分であるＰＣ−ＳＯＤと共に安定化剤を含有するものがよい。そのような安定化剤としては、例えば糖成分をあげることができる。糖成分としては医薬的に使用される糖成分であれば特に限定されないが、なかでもシュークロースが好ましい。したがって、本発明が提供する最も好ましい吸入剤は、ＰＣ−ＳＯＤと共にシュークロースを含有する組成物である。シュークロースとしては医薬品として使用できる程度に精製されたものが好ましく、特に活性炭で処理されたシュークロースを用いるのがよい。かかるシュークロースをＰＣ−ＳＯＤと共に使用することにより、長期間保存によるＰＣ−ＳＯＤの活性低下を防ぐことができ、安定性が高く、凍結乾燥した場合であっても、その性状が特に良好な吸入用組成物として調製することができる。【００５３】
本発明が提供する吸入剤、特に間質性肺炎治療用の吸入剤におけるＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの配合比率は、投与量、製剤の形態等に応じて適宜決定することができ、特に限定されるものではない。
しかしながら、ＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの重量比として、０．１／１００〜８０／１００程度の範囲内にあることが好ましく、０．４／１００〜６０／１００程度がより好ましい。【００５４】
また、本発明が提供する吸入剤を用いて間質性肺炎療剤を行う場合の有効成分であるＰＣ−ＳＯＤの量および製剤の投与量は、製剤調製の方法、剤形、対象疾患の程度、患者の年齢、体重によって異なり、一概に限定できないが、例えば臨床量として成人１人１日当たり０．５〜１００ｍｇ（１５００〜３０万Ｕ）を例示することができる。また投与回数についても一概に限定できないが、１日１回ないし１日数回の投与を行うことも可能である。
【実施例】
【００５５】
以下に本発明を、具体的実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。【００５６】
実施例１：ブレオマイシン誘発肺傷害モデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの効果
ＩＣＲ系マウス（６〜８週齢、体重：２８〜３２ｇ）にブレオマイシン５ｍｇ／ｋｇを経気道投与し、肺傷害を作成した。
肺傷害の形成の確認は、肺胞洗浄液中のマクロファージ、リンパ球、好中球を測定して細胞浸潤状態（炎症状態）を確認し、また、ハイドロキシプロリン量（コラーゲン量）を測定して線維化状態を確認した。
この肺傷害モデルマウスを対象に、各濃度のＰＣ−ＳＯＤを一日一回、静脈内投与（intravenous）、経気道投与（intratracheal）、及び肺吸入投与（inhalation）による種々の投与経路で投与した。
最後の投与から６時間後にマウスを安楽死させ、血清、肺組織を回収し、血清中及び肺組織中のＰＣ−ＳＯＤの濃度を、ＥＬＩＳＡ法により測定した。
その結果を下記表１にまとめた。【００５７】
【表１】
2010064522.tif 000004
【００５８】
上記の表中の結果より明らかなように、ブレオマイシン誘発の肺傷害モデルマウスに対してＰＣ−ＳＯＤを経気道投与した場合には、肺組織におけるＰＣ−ＳＯＤの濃度は、血清中濃度に比較して約３３倍の濃度を示していた。
また、ＰＣ−ＳＯＤを肺吸入投与（inhalation）した場合には、肺組織におけるＰＣ−ＳＯＤの濃度は、血清中濃度に比較して約１５０倍高濃度であった。【００５９】
実施例２：ブレオマイシン誘発肺傷害（急性）モデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの経気道投与の効果
ＩＣＲ系マウス（６〜８週齢、体重：２８〜３２ｇ）にブレオマイシン５ｍｇ／ｋｇを経気道投与し、肺傷害を作成した。肺傷害形成の確認は、実施例１と同様である。
これらの肺傷害モデルマウスを対象に、ＰＣ−ＳＯＤを、０．１５、０．７５、１．５、３．０、１５及び３０ｋＵ／ｋｇの各濃度５％キシリトールに溶解し、各マウスあたり１５μＬ用量で、一日一回３日間にわたり経気道投与（intratracheal）した。
３日後にマウスから肺胞洗浄液を回収し、全細胞をカウントした。また、肺胞マクロファージ、リンパ球および好中球の各細胞をディフクイック法により染色し、その細胞数をカウントした。【００６０】
図１に肺胞洗浄液中の全細胞数を示し、図２に肺胞マクロファージの結果を、図３にリンパ球の結果を、図４に好中球の結果を示した。
なお、図中＊は対ブレオマイシン投与群に対して有意差ありを示す。
図中に示した結果からも判明するように、ブレオマイシン誘発の急性肺傷害モデルマウスに対してＰＣ−ＳＯＤを経気道投与した結果、ＰＣ−ＳＯＤの０．７５ｋＵ／ｋｇ以上の投与量で、有意に傷害を抑制していることが判明した。【００６１】
実施例３：ブレオマイシン誘発肺傷害（慢性）モデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの経気道投与の効果
ＩＣＲ系マウス（６〜８週齢、体重：２８〜３２ｇ）にブレオマイシン５ｍｇ／ｋｇを経気道投与し、肺傷害を作成した。肺傷害形成の確認は、実施例１と同様である。
この肺傷害モデルマウスを対象に、ＰＣ−ＳＯＤを、０．１５、０．７５、１．５及び１５ｋＵ／ｋｇの各濃度５％キシリトールに溶解し、各マウスあたり１５μＬ用量で、一日一回１４日間にわたり経気道投与（intratracheal）した。
１５日目にマウスを安楽死させ、肺組織の切片を作成し、Ｈ＆Ｅ染色及びマッソントリクローム染色を行い肺組織の変化を観察し、また肺組織中のハイドロキシプロリン量（コラーゲン量）を定量し、肺の線維化状態を観察した。
なお、対照としてＰＣ−ＳＯＤを溶解しない５％キシリトール溶液を投与した例をおいた。【００６２】
ブレオマイシン誘発の慢性肺傷害モデルマウスに対してＰＣ−ＳＯＤを経気道投与した結果、肺組織の観察においては、ＰＣ−ＳＯＤの０．７５ｋＵ／ｋｇ以上の投与マウスにおいて、肺組織の浸潤が認められなかった。
肺組織中のハイドロキシプロリン量の結果を図５に示した。
なお図中、＊は対照群に対して有意差ありを示し、＃は対ブレオマイシン投与群に対して有意差ありを示す。
図中に示した結果からも判明するように、ブレオマイシン誘発の慢性肺傷害モデルマウスに対してＰＣ−ＳＯＤを肺吸入経気道投与した結果、ＰＣ−ＳＯＤの０．７５ｋＵ／ｋｇ以上の投与量で、有意に傷害を抑制していることが判明した。【００６３】
実施例４：ブレオマイシン誘発肺傷害（急性）モデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの肺吸入投与（inhalation）の効果
ＩＣＲ系マウス（６〜８週齢、体重：２８〜３２ｇ）にブレオマイシン５ｍｇ／ｋｇを経気道投与し、肺傷害を作成した。肺傷害形成の確認は、実施例１と同様である。
この肺傷害モデルマウスを対象に、６０及び３００ｋＵの各濃度のＰＣ−ＳＯＤを１０ｍＬの溶液に溶解し、超音波式ネブライザーを用いて各マウスに一日一回３日間にわたり肺吸入投与（inhalation）した。
３日後にマウスから肺胞洗浄液を回収し、全細胞をカウントした。また、肺胞マクロファージ、リンパ球および好中球の各細胞をディフクイック法により染色し、その細胞数をカウントした。【００６４】
図６に肺胞洗浄液中の全細胞数を示し、図７に肺胞マクロファージの結果を、図８にリンパ球の結果を、図９に好中球の結果を示した。
なお、図中＊は対ブレオマイシン投与群に対して有意差ありを示す。
図中に示した結果からも判明するように、ブレオマイシン誘発の急性肺傷害モデルマウスに対してＰＣ−ＳＯＤを肺吸入投与（inhalation）した結果、ＰＣ−ＳＯＤの６０ｋＵの投与量で、有意に傷害を抑制していることが判明した。【００６５】
以上の実施例１〜４の結果から、本発明の有効成分であるＰＣ−ＳＯＤは、ブレオマイシン誘発の肺傷害モデルに対して、経気道投与、肺吸入投与（ネブライザー）により有意に傷害を抑制していた。このことから、本発明の吸入剤は、間質性肺炎等の肺疾患に対してその治療効果の有用性が確認された。
それに基づく、ヒトに対する臨床試験結果を、以下の実施例に示す。【００６６】
実施例５：ＰＣ−ＳＯＤネブライザー（nebulizer）投与の臨床試験例
１．肝腎機能に障害のない男性健常成人を対象に、ＰＣ−ＳＯＤネブライザー（nebulizer）投与の安全性について検討した。
［試験対象］  事前に十分なインフォームドコンセントを実施し、同意を得た２０歳以上５０歳以下の健常男性８名。
［方法］  プラセボ対照で、単盲検試験で実施した。【００６７】
（１）単回投与：
健常人８名のうち、６名をＰＣ−ＳＯＤ投与群、２名をプラセボ投与群として盲検下に割付け、ＰＣ−ＳＯＤ投与群には投与量としてＰＣ−ＳＯＤの４０ｍｇを、プラセボ投与群には識別できないプラセボを、注射用蒸留水に溶解し、約３０分かけてネブライザーにより１回（単回）投与した。
安全性の検証は、専門医師により臨床症状と臨床検査値の異常により判定した。
その結果、ＰＣ−ＳＯＤ投与群はプラセボ投与群と比較して、安全性に差は無かった。【００６８】
（２）反復投与：
健常人８名のうち、６名をＰＣ−ＳＯＤ投与群、２名をプラセボ投与群として盲検下に割付け、ＰＣ−ＳＯＤ投与群には投与量としてＰＣ−ＳＯＤの１６ｍｇを、プラセボ投与群には識別できないプラセボを、注射用蒸留水に溶解し、約３０分かけてネブライザーにより投与した。
１日１回午前中に投与した。７日間連続投与し、入院により臨床症状を観察した。
安全性の検証は、専門医師により臨床症状と臨床検査値の異常により判定した。
その結果、ＰＣ−ＳＯＤ投与群はプラセボ投与群と比較して、安全性に差は無かった。【００６９】
２．肝腎機能に障害のない中等症の特発性間質性肺炎患者を対象に、ＰＣ−ＳＯＤネブライザー投与の有効性と安全性について検討した。
［試験対象］  事前に十分なインフォームドコンセントを実施し、同意を得た２０歳以上８０歳以下の特発性間質性肺炎患者８名で、男女を問わない。
なお、特発性間質性肺炎患者の診断は、Ｘ線とＨＲＣＴにより特発性間質性肺炎と診断された患者である。【００７０】
［方法］
特発性間質性肺炎患者８名のうち、６名をＰＣ−ＳＯＤ投与群、２名をプラセボ投与群に盲検下に割付け、ＰＣ−ＳＯＤ投与群には投与量としてＰＣ−ＳＯＤの８ｍｇを、プラセボ投与群には識別できないプラセボを、注射用蒸留水に溶解し、約３０分かけてネブライザーにより投与した。
１日１回午前中に投与した。２８日間連続投与し、入院により臨床症状を観察した。
有効性は、間質性肺炎の予後決定因子として知られ肺炎のバイオマーカーであるＳＰ−Ａ（注１）で評価した。
［結果］
ＰＣ−ＳＯＤ投与群では投与前値に比較して投与後のＳＰ−Ａ値は有意に下がり、ＰＣ−ＳＯＤ投与群はプラセボ投与群と比較して、ＳＰ−Ａ値が改善していた。
安全性は、専門医師により臨床症状と臨床検査値の異常により判定した。
その結果、ＰＣ−ＳＯＤ投与群は、プラセボ投与群と比較して安全性に差は無かった。
注１：Brent W. Kinder, Serum Surfactant Protein-A is a Strong Predictor of Early Mortality in Idiopathic Pulmonary Fibrosis. CHEST 2009; 135:1557-1563【００７１】
以上の臨床試験例の結果から、本発明の有効成分であるＰＣ−ＳＯＤは、ヒトに対して副作用のない安全なものであり、間質性肺炎等の肺疾患に対して肺吸入投与（ネブライザー）することにより、有意に間質性肺炎に対してその治療効果の有用性が認められた。【００７２】
実施例６：製剤例
吸入用液剤（１）
ＰＣ−ＳＯＤが１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）を５％キシリトール水溶液に溶解し、吸入用液剤を調製する。【００７３】
吸入用液剤（２）
ＰＣ−ＳＯＤが１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）、ポリエチレングリコール１０％（ｗ／ｗ）、プロピレングリコール２０％（ｗ／ｗ）、残部精製水で吸入用液剤を調製する。【００７４】
吸入用散剤
ＰＣ−ＳＯＤが５％（ｗ／ｗ）、残部シュークロース（微細粉末状）で吸入用散剤を調製する。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
以上記載したように、本発明が提供する吸入剤は、ＳＯＤとして特異的なＰＣ−ＳＯＤを有効成分とするものであり、従来のＳＯＤに比較して細胞膜等への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が極めて高いものである。
本発明は、そのＰＣ−ＳＯＤを肺組織等へ直接吸入投与しうる吸入剤であり、ＳＯＤの効果により、細胞障害を誘導するスーパーオキシドアニオンなどの活性酸素を消去することにより、これらの誘導を効果的に抑制させ、その結果、間質性肺炎の有効な治療を行えるものであり、医療上の価値は多大なものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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