(57)【要約】要約課題  被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊している粒子浮遊液中の粒子の凝集を指標とする、被検試料中の被測定物の検査試薬であって、保存中に自己凝集が起きず、かつ、測定時にも非特異的凝集がほとんど起きない検査試薬及びそれを用いた被検試料中の被測定物の測定方法を提供すること。解決手段  被測定物を測定するための検査試薬は、30ms/cm以上の電気伝導度を有する緩衝液であるＡ液と、被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊している粒子浮遊液であって6.5 ms/cm以下の電気伝導度を有するＢ液とを少なくとも含む。
2010101213.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
30ms/cm以上の電気伝導度を有する緩衝液であるＡ液と、被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊している粒子浮遊液であって6.5 ms/cm以下の電気伝導度を有するＢ液とを少なくとも含む、前記被測定物を測定するための検査試薬。
【請求項２】
前記Ａ液の電気伝導度が200ms/cm以下である請求項１に記載の検査試薬。
【請求項３】
前記被測定物捕捉物質が抗体若しくはその抗原結合性断片、又は抗原である請求項１又は２に記載の検査試薬。
【請求項４】
前記不溶性担体粒子がラテックス粒子である請求項１ないし３のいずれか１項に記載の検査試薬。
【請求項５】
前記ラテックス粒子がポリスチレンラテックス粒子である請求項４に記載の検査試薬。
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれか１項に記載の検査試薬を用いた、被検試料中の被測定物の測定方法であって、前記Ａ液と、前記Ｂ液と、前記被検試料とを混合する工程と、得られた混合液中の前記粒子の凝集の程度を測定する工程とを含み、かつ、少なくとも前記Ａ液と前記Ｂ液とは測定操作開始の直前に混合する、被検試料中の被測定物の測定方法。
【請求項７】
前記被検試料が、尿、髄液、又は糞便である請求項６に記載の測定方法。
【請求項８】
前記被検試料が血液、血清又は血漿である請求項６に記載の測定方法。
【請求項９】
請求項１ないし５のいずれか１項に記載の検査試薬を少なくとも含む、検査試薬キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊している粒子浮遊液中の粒子の凝集を指標とする、被検試料中の被測定物の検査試薬及びそれを用いた該被測定物の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体や抗原を不溶性担体粒子上に担持した粒子が浮遊する粒子浮遊液を検査試薬として用い、被検試料と反応させた後、粒子の凝集の程度を指標として被検試料中の被測定物（抗原や抗体）を測定する方法は、免疫凝集法として知られており広く用いられている。【０００３】
抗体を担持した不溶性担体は、特定の環境下でＮａＣｌ濃度が一定濃度以下の低いイオン強度の液相中や、逆に一定濃度以上という高いイオン強度での液相中で分散することが報告されている。【０００４】
ＮａＣｌ濃度が一定濃度以下の低いイオン強度、つまり電気伝導度が低い溶媒で浮遊したタンパク質を担持した不溶性担体は分散性や感度を効率よく得ることには優れている。しかし、生体物質中の夾雑物質からのイオンの混入により非特異的凝集が起きる場合がある。【０００５】
生体試料中には目的物質の免疫反応に影響を与える妨害物質が生体試料中に存在することが知られている。免疫反応の妨害物質の影響を回避するために様々な添加物を用いた試薬を用いる方法が広く利用されている。例えば、目標とする物質を検出するための反応液と、妨害物質の影響を回避することができる物質を共存させた第２の試薬である緩衝液を用いる方法が知られている。緩衝液は生理食塩液に近い電気伝導度（約１５〜２０ｍｓ／ｃｍ）を持つ溶液を利用することが多い。低い電気伝導度条件で浮遊された抗体を担持した不溶性担体を用いた測定系では、測定時に反応液と緩衝液を混合するだけで非特異的凝集を起こる場合があった。【０００６】
免疫凝集法等で、試薬の感度を高めるために各種の添加剤（例：ポリエチレングリコール、グアニジン）を用いることもある。しかしながら、添加剤を用いると電気伝導度が増加し、測定時に試薬液と緩衝液と混合するだけで非特異的凝集を起こす場合があった。【０００７】
一方、高い電気伝導度条件下で浮遊されたタンパク質を担持した不溶性担体を用いる場合、数時間以内の短時間であれば自己凝集を起こさない。しかし、数日間或いは数ヵ月間以上の長期にわたる保存では自己凝集を起こし、保存ができない場合があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開2005-351643号公報
【特許文献２】特許第3095541号
【特許文献３】特開昭57-182168号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】J.Biomater.Sci.Polymer Edn,Vol.10,No.11,PP.1093-1105 (1999)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊している粒子浮遊液中の粒子の凝集を指標とする、被検試料中の被測定物の検査試薬であって、保存中に自己凝集が起きず、かつ、測定時にも非特異的凝集がほとんど起きない検査試薬及びそれを用いた被検試料中の被測定物の測定方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、検査試薬を粒子浮遊液と緩衝液を別個に含む２液系とすると共に、粒子浮遊液の電気伝導度を特定の値よりも低くし、緩衝液の電気伝導度を、通常検査試薬として用いられている緩衝液の電気伝導度よりも高い、特定の値よりも高くし、測定操作を開始する直前に緩衝液と粒子浮遊液を混合して測定を行うことにより、保存中に自己凝集が起きず、かつ、測定時にも非特異的凝集を抑制し得ることを見出し、本発明を完成した。【００１２】
すなわち、本発明は、30ms/cm以上の電気伝導度を有する緩衝液であるＡ液と、被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊している粒子浮遊液であって6.5 ms/cm以下の電気伝導度を有するＢ液とを少なくとも含む、前記被測定物を測定するための検査試薬を提供する。また、本発明は、上記本発明の検査試薬を用いた、被検試料中の被測定物の測定方法であって、前記Ａ液と、前記Ｂ液と、前記被検試料とを混合する工程と、得られた混合液中の前記粒子の凝集の程度を測定する工程とを含み、かつ、少なくとも前記Ａ液と前記Ｂ液とは測定操作開始の直前に混合する、被検試料中の被測定物の測定方法を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、試薬の保存中に自己凝集が起きず、また、測定時にも非特異的凝集がほとんど起きないので、被検試料中の被測定物を正確に測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】自動測定装置を用いて本発明の方法を実施する際における、Ａ液、Ｂ液及び被検試料の混合方法の１態様を示す図である。
【図２】自動測定装置でＹ字型のチューブを用いて本発明の方法を実施する際における、Ａ液、Ｂ液及び被検試料の混合方法の他の１態様を示す図である。
【図３】濾過チューブを用いて本発明の方法を実施する際における、Ａ液、Ｂ液及び被検試料の混合方法のさらに他の１態様を示す図である。
【図４】本発明の実施例で作成した検量線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
上記の通り、本発明の試薬は、緩衝液であるＡ液と、粒子浮遊液であるＢ液とを含む。Ａ液とＢ液とは、別々の容器に収容された別個の液であり、測定操作の開始直前に混合されるものである。混合の態様については後述する。
【００１６】
Ａ液（緩衝液）
緩衝液であるＡ液に含まれる緩衝剤は、検査試薬に通常用いられている周知の緩衝剤であってよく、例えばアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン等のアミノ酸；クエン酸、マレイン酸、グルタル酸等のカルボン酸塩；リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム等のリン酸塩；炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム等の炭酸塩；グッドの緩衝剤等が好ましく使用可能であり、トリス緩衝剤、グッド緩衝剤、リン酸系緩衝剤が好適に用いられるが、緩衝剤はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
Ａ液の電気伝導度は、30ms/cm以上であり、好ましくは35ms/cm以上である。電気伝導度の上限は特に限定されないが、通常、電気伝導度は200ms/cm以下、好ましくは100ms/cm以下である。Ａ液の電気伝導度を30ms/cm以上とすることにより、測定時の非特異的凝集が顕著に抑制される。従来から検査試薬において広く用いられている緩衝液としては、生理食塩水と同程度の電気伝導度を持つもの、すなわち、電気伝導度が15〜20ms/cm程度のものが用いられている。従って、本発明では、通常よりも高い電気伝導度を有する緩衝液を用いることを１つの特徴とする。なお、電気伝導度は、広く市販されている電気伝導率計を用いた常法により測定することができる。電気伝導度の測定は室温下で行う。
【００１８】
Ａ液の電気伝導度は、上記した緩衝剤の濃度を調節したり、水溶性イオン性化合物を添加することにより任意の値に調節することができる。使用可能な好ましい水溶性イオン性化合物としては、例えばナトリウムやカリウム等のアルカリ金属やマグネシウムやカルシウム等のアルカリ土類金属の塩化物、臭化物、ヨウ化物、炭酸塩、炭酸水素塩、酢酸塩、硫酸塩や、ミョウバン類等が挙げられる。中でもNaClが簡便で好ましい。市販の電気伝導率計を用いれば、液の電気伝導度はリアルタイムで測定可能であるので、電気伝導度を測定しながら水溶性イオン性化合物を添加することにより、容易に所望の電気伝導度を達成することができる。
【００１９】
Ｂ液（粒子浮遊液）
上記の通り、Ｂ液中には、被測定物捕捉物質が不溶性担体粒子上に担持された粒子が浮遊状態で含まれる。この浮遊粒子は、何ら限定されるものではなく、従来から検査試薬において用いられている周知の粒子であってよい。
【００２０】
すなわち、被測定物捕捉物質としては、測定しようとする被測定物と特異的に結合できるものであればよく、抗原抗体反応やリガンド−レセプター反応等の特異的結合反応により被測定物と結合できるものである。抗原抗体反応を利用した方法は、免疫凝集法と呼ばれる周知の免疫測定法であり、被測定物が抗原である場合には該抗原と抗原抗体反応する抗体やその抗原結合性断片（抗原との結合性を維持する、Fab断片やF(ab')2断片等）が担持される。被測定物が抗体である場合でも、抗体は抗原でもあるので、該抗体と抗原抗体反応する抗体やその抗原結合性断片が担持される。また、これらの抗体は、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよい。
【００２１】
被測定物が抗原の場合、被測定物は、例えばＣＲＰ（C-反応性蛋白質）、前立腺特異抗原、フェリチン、β−２マイクログロブリン、ミオグロビン、メガリン、ポドカリキシントランスフェリン、アルブミン、クレアチニン等のタンパク質マーカー、各種腫瘍マーカー、ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＴＧ等のリポ蛋白、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、アストロウイルス、ＨＡＶ、ＨＢs、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＥＢＶ等のウイルス抗原、クラミジア・トラコマティス、溶連菌、百日咳菌、ヘリコバクター・ピロリ、レプトスピラ、トレポネーマ・パリダム、トキソプラズマ・ゴンディ、ボレリア、レジオネラ属菌、炭疽菌、MRSA等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ脂質抗原、ヒト絨毛製ゴナドトロピン等のペプチドホルモン、ステロイドホルモン等のステロイド、エピネフリンやモルヒネ等の生理活性アミン類、ビタミンＢ類等のビタミン類、プロスタグランジン類、テトラサイクリン等の抗生物質、農薬、環境ホルモン等が挙げられるがこれらに限定されるものではない。好ましい例として、ＣＲＰ、前立腺特異抗原、フェリチン及びβ−２マイクログロブリン等の抗原が挙げられる。
【００２２】
被測定物が抗体の場合、被測定物は、上記のタンパク質マーカー、各種腫瘍マーカー、リポ蛋白、ウイルス抗原、細菌抗原、細菌等が産生する毒素、ペプチドホルモン、ステロイド、生理活性アミン類、ビタミン類、抗生物質、農薬、環境ホルモン等の抗原と特異的に反応する抗体等が挙げられる。
【００２３】
被測定物が抗原の場合は被測定物と結合する被測定物捕捉物質を抗体として担体粒子に感作させる。被測定物を抗体とする場合には被測定物と結合する被測定物捕捉物質を担体粒子に抗原を感作させる。被測定物がリガンドの場合は被測定物と結合する被測定物捕捉物質をレセプターとして担体粒子に感作させ、被測定物がレセプターの場合は被測定物と結合する被測定物捕捉物質を担体粒子にリガンドとする。
【００２４】
不溶性担体も従来から検査試薬において用いられている周知のものであってよく、例えばポリエチレンやポリスチレン等の樹脂ラテックス、アルミナ、シリカ、金コロイド、磁性粒子等の粒子が挙げられる。これらの不溶性担体の中ではラテックス粒子、特にポリスチレンラテックス粒子が好適に用いられる。
【００２５】
Ｂ液中の浮遊粒子の濃度は、用いる被測定物捕捉物質の種類や、被測定物の種類、被検試料中の被測定物の予測される濃度等に基づいて適宜設定されるが、通常、粒子濃度は0.01〜0.5%程度である。
【００２６】
Ｂ液の電気伝導度は、6.5ms/cm以下、好ましくは5ms/cm以下である。Ｂ液の電気伝導度が6.5ms/cm以下の場合、保存中の粒子の自己凝集が防止され、また、測定時の非特異的凝集もほとんど起きない。電気伝導度の下限は特にないが、通常、電気伝導度は0.1ms/cm以上である。6.5ms/cm以下の電気伝導度は、Ｂ液の溶媒として例えば水、アルコール（例えばエタノール等）、糖液（例えばグルコース、スクロース、マルトース、ラクトース等）等を用いることにより達成される。Ｂ液には上記電気伝導度が達成される範囲内で、塩化ナトリウムや緩衝剤を添加してもよい。
【００２７】
本発明の検査試薬には、検査対象物質を検出するための呈色試薬や反応性試薬、コレステロールオキシダーゼやコレステロールエステラーゼ等の酵素、界面活性剤、抗体の安定化や非特異的な反応を抑制するためのタンパク等、比重を調整するための糖類、グリセロール等を添加剤として併用してもよい。これらの添加剤は、Ａ液又はＢ液に添加してもよく、測定時にＡ液やＢ液とは別の試薬（さらに別の液）として添加してもよい。
【００２８】
測定方法
上記本発明の検査試薬を用いた本発明の測定方法は、Ａ液と、Ｂ液と、被検試料とを混合する工程と、得られた混合液中の前記粒子の凝集の程度を測定する工程とを含む。
【００２９】
被検試料としては、上記した、被測定物である抗原や抗体等を含むかもしれないものであれば何ら限定されるものではない。もっとも、測定時の非特異的凝集は、被検試料中の夾雑物質からのイオン混入によると推測されるので、本発明は、人体又は動物、好ましくは人体から採取した被検試料に適用される場合に最も威力を発揮する。このような被検試料として、例えば血液、血清、尿、髄液、汗、リンパ液、だ液、胃液等の液体、糞便、毛髪、角質、爪等が挙げられ、血液、血清、血漿、尿、髄液、又は糞便、特に血液由来の血液、血清、又は血漿が好適に用いられる。
【００３０】
Ａ液、Ｂ液、被検試料の混合は、これら３者（検査試薬が別個の添加剤を含む場合にはさらにその添加剤）を混合することができればその順序は限定されず、３者を同時に混合する方法、Ａ液とＢ液を混合後、被検試料を混合する方法、Ａ液と被検試料を混合後、Ｂ液と混合する方法等が挙げられる。自動測定装置を用いる凝集法も広く行われており、本発明においても、市販の自動測定装置を好ましく用いることができる。自動測定装置を用いる場合の、Ａ液、Ｂ液、被検試料の混合の態様としては、例えば図１〜図２に示すものを挙げることができる。図１の方法では、下の液を先に、上の液を後から添加する。図２に示す方法は、Ｙ字形チューブを用いた方法であり、Ａ液とＢ液を合流させて混合した後、該混合液を被検試料と混合する。図３に示す方法は、濾過チューブを使った混合方法であり、Ａ液をチューブ内に入れ、被検試料をフィルターに入れ、Ａ液、被検試料を混合濾過し、Ｂ液中に滴下する。なお、混合後、撹拌することが好ましい。
【００３１】
少なくともＡ液とＢ液の混合は、測定操作の開始直前に行う。ここで、「測定操作」は、混合液中の粒子の凝集の程度を測定する操作であり、通常は、吸光度又は濁度の測定である。「直前」は、測定操作開始前１０分以内、好ましくは５分以内である。Ａ液とＢ液を測定操作の開始直前に混合することにより、本発明の効果である、保存時の自己凝集防止や測定時の非特異的凝集の防止が達成される。また、混合時の各液の温度は、反応を行う温度としておくことが好ましく、通常、室温〜３７℃である。
【００３２】
混合後、従来と同様、通常、１分間〜１時間程度、好ましくは３分間〜１５分間程度反応を行う。凝集の程度は、従来と同様、通常、光学的方法により測定され、好ましくは吸光度又は濁度を測定することにより行われる。種々の既知濃度の標準試料について測定を行い、濃度と測定値（吸光度等）との関係をプロットして検量線を作成し、被検試料について得られた測定値を検量線に当てはめることにより被検試料中の被測定物を測定することができる。なお、「測定」は、検出、定量、半定量のいずれをも包含する意味で用いている。
【００３３】
検査試薬キット
上記本発明の検査試薬を用いた本発明の検査試薬キットは、Ａ液、Ｂ液及び容器等、検査に必要な薬品及び部品からなる。
【００３４】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００３５】
実施例１〜３、比較例１〜５
以下の通り、浮遊されたタンパク質を担持した不溶性担体粒子を含む粒子浮遊液（Ｂ液）の自己凝集の違いを測定した。また、生理食塩水をブランク検体とし、緩衝液（Ａ液）の電気伝導度を変えた反応条件下での非特異的凝集の違いを評価した。また、ＣＲＰの測定により感度の違いを評価した。【００３６】
使用材料
Ａ液：１００ｍＭトリス含有の緩衝液に、電気伝導度をモニターしながら塩化ナトリウムを添加し、所定の電気伝導度とした。電気伝導度８ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム濃度５０ｍＭ、比較例１、５）、１６ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム濃度１５０ｍＭ、比較例２）、３５ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム濃度４００ｍＭ、実施例１）、７５ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム濃度１０００ｍＭ、実施例２、比較例３，４）、２００ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム濃度５０００ｍＭ、実施例３）。【００３７】
Ｂ液：市販の抗ＣＲＰ抗体を０．２５ｍｇ／ｍＬ担持した平均粒径２２０ｎｍのポリスチレンラテックス０．１％を水中に分散させてなる反応液に、塩化ナトリウムを添加して所定の電気伝導度とした。電気伝導度５ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム：５０ｍＭ、実施例１〜３、比較例１，２）、１５ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム：１５０ｍＭ、比較例３）、７８ｍｓ／ｃｍ（塩化ナトリウム：１０００ｍＭ、比較例４、５）。【００３８】
方法
上記のＢ液の初期の吸光度と１ヵ月後の吸光度を測定して、自己凝集の有無を確認した。【００３９】
ブランクの被検試料として生理食塩水を用い、上記のＡ液とＢ液を混合した試薬を自動分析装置で測定して、試薬の非特異的凝集を確認した。すなわち、日立７１８０型（商品名）自動分析装置上で、生理食塩水２．４μＬに上記のＡ液１２０μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した後、５分間放置後、上記Ｂ液を１２０μＬ添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を５７０ｎｍの吸光度変化量として測定した。【００４０】
ＣＲＰの測定は被検試料として、ＣＲＰを０．０５ｍｇ／ｄＬ含む溶液を用い、上記のＡ液とＢ液を混合した試薬を自動分析装置で測定して、吸光度変化量を確認した。すなわち、日立７１８０型（商品名）自動分析装置上で、ＣＲＰ０．０５ｍｇ／ｄＬ溶液２．４μＬに上記のＡ液１２０μＬを添加し、この混合液を３７℃で撹拌混合した後、５分間放置後、上記Ｂ液を１２０μＬ添加し、更に３７℃で撹拌混合した。約５分間の凝集反応を５７０ｎｍの吸光度変化量として測定した。【００４１】
評価方法
自己凝集は、０．１％ポリスチレンラテックス粒子分散液の吸光度と、Ｂ液の吸光度の差を保存の前後でそれぞれ算出し、以下の判定基準に従って各電気伝導度における自己凝集を評価した。【００４２】
判定基準
0.1%ポリスチレンラテックス粒子分散液の吸光度を基準として、
○：差が１５％以下
×：差が１５％超【００４３】
測定時の非特異的凝集は、自動分析装置における生理食塩水測定時の吸光度変化量を以下の判定基準に従って評価した。【００４４】
判定基準
○：吸光度変化量ΔＡｂｓの１００００倍が２０以下
×：吸光度変化量ΔＡｂｓの１００００倍が２０超【００４５】
ＣＲＰ測定
ＣＲＰの測定は、ブランクである生理食塩液とＣＲＰ０．０５ｍｇ／ｄＬ溶液測定時の吸変化量の差を算出し、感度を比較した。【００４６】
電気伝導度の測定
Ａ液及びＢ液の電気伝導度の測定は、東亜電波工業（株）社製電気伝導率計ＣＭ−６０Ｇ型を用いて行った。
（電極：ＣＴ−５７１０１Ｂ、温度：２５℃）【００４７】
結果
結果を下記表１に示す。【００４８】
【表１】
2010101213.tif 000003
【００４９】
表１に示されるように、Ｂ液の電気伝導度が本発明で規定される範囲よりも高い比較例３〜５では、１ヶ月保存後に自己凝集が生じた（比較例３では混合直後から自己凝集した）。また、Ａ液の電気伝導度が本発明で規定される範囲よりも低い比較例１及び２では、生理食塩水を測定した場合でも吸光度が変化し、すなわち、非特異的凝集が起きた。【００５０】
次に、非特異的凝集が起きない実施例１〜３と比較例３〜５をＣＲＰ０．０５ｍｇ／ｄＬ溶液測定時の吸光度変化量について比較した。実施例１〜３が比較例３〜５よりも高い吸光度変化量を示した。また、実施例２と比較例５はＡ液とＢ液の電気伝導度がほぼ逆に設定されており、最終的な電気伝導度はほぼ同じである。しかし、本発明で規定するようにＢ液をＡ液より低く電気伝導度を設定した実施例２の方がより高い吸光度を示した。【００５１】
従って、本発明で規定する電気伝導度を有する緩衝液であるＡ液とＢ液とを少なくとも含む検査試薬及び測定方法は、Ｂ液のラテックス粒子の自己凝集を防ぐことが出来、保存性に優れていた。また、非特異的凝集を防ぎ且つ高感度な測定を実現できた。【００５２】
実施例３
検量線作成
上記実施例２の試薬を用い、種々の濃度のＣＲＰを含む標準溶液を用いて上記と同様に測定を行い、キャリブレーションを行った。得られた吸光度変化量とＣＲＰ濃度の関係を図４に示す。【００５３】
図４に示されるように、ＣＲＰ濃度に依存して吸光度が変化しており、この試薬を用いてＣＲＰの定量が可能であることが明らかになった。【００５４】
実施例４
血清検体の測定
上記実施例２の試薬を用い、血清検体について上記と同様にＣＲＰの測定を行った。測定を２０回繰返し行い、その再現性を調べた。結果を表２に示す。【００５５】
【表２】
2010101213.tif 000004
【００５６】
表２に示されるように、本発明の方法により得られる、実際の血清検体についての測定結果の再現性は極めて高かった。
【図１】
2010101213.tif 000005
【図２】
2010101213.tif 000006
【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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