(57)【要約】  本発明は、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および／又は脂肪肝を治療および／又は予防するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物、特にＳＭＴＰ−７、１４、１９、４３Ｄおよび４４Ｄを含む医薬または食品に関する。  一般式（Ｉ）：2010110026.tif 000030  一般式（ＩＩ）：2010110026.tif 000031  （式中、Ｒ１は、存在しても存在しなくてもよく、Ｒ１が存在する場合、Ｒ１は少なくとも１つの−ＯＨ基を表し、ｎ２は０又は１の整数を表す。）  一般式（ＩＩＩ）：2010110026.tif 000032（式中、Ｒ２は存在しても存在しなくてもよく、Ｒ２が存在する場合、Ｒ２は−ＯＨ基、−ＣＯＯＨ基からなる群から選択される、少なくとも１つの置換基を表す。）
2010110026.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防または治療するための、一般式（Ｉ）：
2010110026.tif 000027
（式中、ｎは、０〜１０の整数を表す）、
、一般式（ＩＩ）：
2010110026.tif 000028
（式中、Ｒ1は、存在しても存在しなくてもよく、Ｒ1が存在する場合、Ｒ1は少なくとも１つの-ＯＨ基を表し、ｎ２は０又は１の整数を表す。）の化合物、および／または一般式（ＩＩＩ）：
2010110026.tif 000029
（式中、Ｒ2は存在しても存在しなくてもよく、Ｒ2が存在する場合、Ｒ2は-ＯＨ基、-ＣＯＯＨ基からなる群から選択される、少なくとも１つの置換基を表す）の化合物又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物を含む医薬。
【請求項２】
メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物を含む食品。
【請求項３】
メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防するための食品または予防もしくは治療するための医薬を製造するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物の使用。
【請求項４】
メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防または治療するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および／又は脂肪肝を治療および／又は予防するための医薬または食品に関する。具体的には、本発明は、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および／又は脂肪肝を治療および／又は予防するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物の使用に関するものであり、より具体的には、SMTP-7、SMTP-14、19、43Dおよび44Dと命名される化合物の使用に関する。すなわち、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物含む抗メタボリックシンドローム剤、抗肥満剤、抗高血糖症剤、抗高脂血症剤、抗脂肪肝剤、より具体的には、SMTP-7、14、19、43Dおよび／または44Dを含む抗メタボリックシンドローム剤、抗肥満剤、抗高血糖症剤、抗高脂血症剤、抗脂肪肝剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糸状菌Stachybotrys microsporaの生産する一群の新規トレプニルフェノール化合物で、Stachybotrys microspora triprenyl phenols(SMTPs)と命名された化合物群は、局所的な血栓溶解コントロール薬剤の開発を目指して本発明者によって発見されたものである（非特許文献１〜４、特許文献３および４）。【０００３】
SMTPsは、プラスミノーゲンに作用し、そのコンホメーション変化を導くことで、アクチベーター による活性化の感受性とプラスミノーゲンのフィブリンへの結合能を増加させ、線溶反応を促進することが明らかにされており（非特許文献４）、SMTPを血栓溶解促進剤として利用することが考えられている（非特許文献１および５、特許文献３および４）。さらに、線溶反応が組織リモデリングや組織再生に関与することから、慢性肝炎および腎炎モデルのマウスにおいてSMTP-7（オルニプラビン）の治癒促進効果が検証され、その有用性が示された（特許文献１および２）。【０００４】
本発明では、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のSMTP化合物、特にSMTP-7、14、19、43Dおよび44Dの持つ薬理作用をさらに探るべく、肥満モデル動物に対して実験を行った。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】WO2007/040082 A1
【特許文献２】WO2007/094071 A1
【特許文献３】特許第４２５７０２６
【特許文献４】ＷＯ２００７／１１１２０３
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】蓮見惠司：線溶を促進する微生物由来低分子化合物  日本血栓止血学会誌 12, 314-319(2001)
【非特許文献２】Shinohara C, Hasumi K, Hatsumi W, Endo A. Staplabin, a novel fungal triprenyl phenol which stimulates the binding of plasminogen to fibrin and U937 cells.  J.Antibiot.(Tokyo) 49: 961-966 (1996)
【非特許文献３】Kohyama T, Hasumi K, Hamanaka A, Endo A. SMTP-1 and -2, novel analogs of staplabin produced by Stachybotrys microspora IFO30018.  J. Antibiot. (Tokyo) 50, 172 174 (1997)
【非特許文献４】Hasumi K, ohyama S, Kohyama T, Ohsaki Y, Takayasu R, Endo A. Isolation of SMTP-3, 4, 5 and -6, novel; analogs of staplabin, and their effectson plasminogen activation and fibrinolysis.  J. Antibiot. (Tokyo) 51, 1059-1068 (1998)
【非特許文献５】Hu W, Narasaki R, Ohyama S, Hasumi K Selective production of staplabin and SMTPs in cultures of Stachybotrys microspora fed with precursor amines.  J. Antibiot. (Tokyo) 54, 962-966 (2001)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物、特にSMTP-7、14、19、43Dおよび／または44Dを含むメタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および／又は脂肪肝を治療および／又は予防するための医薬または食品を提供する。本発明は、抗メタボリックシンドローム剤、抗肥満剤、抗高血糖症剤、抗高脂血症剤および／又は抗脂肪肝剤を製造するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物、特にSMTP-7、14、19、43Dおよび／または44Dの使用を提供する。本発明は、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および／又は脂肪肝を治療および／又は予防するための方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）のSMTP化合物、特にSMTP-7、14、19、43Dおよび／または44Dが肥満に付随して起こる様々な病態を大いに改善したことをここで示す。【０００９】
本発明は、本発明者らによる上記知見に基づくものであり、上記課題を解決するための手段は、下記のとおりである： 
（１）メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防または治療するための、一般式（Ｉ）：
2010110026.tif 000003
（式中、ｎ１は、０〜１０の整数を表す）、
、一般式（ＩＩ）：
2010110026.tif 000004
（式中、Ｒ1は、存在しても存在しなくてもよく、Ｒ1が存在する場合、Ｒ1は少なくとも１つの-ＯＨ基を表し、ｎ２は０又は１の整数を表す。）の化合物、および／または一般式（ＩＩＩ）：
2010110026.tif 000005
（式中、Ｒ2は存在しても存在しなくてもよく、Ｒ2が存在する場合、Ｒ2は-ＯＨ基、-ＣＯＯＨ基からなる群から選択される、少なくとも１つの置換基を表す）の化合物又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物を含む医薬；
（２）メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物を含む食品；
（３）メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防するための食品または予防もしくは治療するための医薬を製造するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物の使用；
（４）メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防または治療するための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および／または（ＩＩＩ）の化合物又はそれらの薬学的に許容され得る塩、エステル若しくは溶媒和物の使用。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを治療または予防するための医薬品または食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ob/obマウスに対するSMTP-7の影響を示す。（A）体重推移（ｇ）（4から5日目にかけて絶食を行ったために、一ヶ所体重が落ち込んでいる）、（B）体重に占める肝臓重量の割合（％）、（C）体重に占める内臓脂肪重量の割合（％）、（D）血漿総コレステロール量（mg/dL）、（E）血漿トリグリセライド量（mg/dL）、（F）血漿遊離脂肪酸量（mg/dL）、（G）血漿GPT活性量（IU/mL）そして（H）随時血糖量（mg/dL）。コントロールは、生理食塩水（Saline）投与群を示し、SMTPは、SMTP-7投与群を示す。データは、平均±SEM（n = 5）で表される。*：P < 0.05、**：P < 0.01
【図２】対照群（コントロール；生理食塩水投与群）とSMTP-7投与群の肝臓写真（A）、Oil Red O 染色した肝組織切片の顕微鏡写真（B）、および肝臓のコレステロールおよびトリグリセリドレベル（C）である。目視により脂肪肝が抑制されていることがわかる（A）。さらに、Oil Red O染色で、対照群の肝臓では赤色に染まった脂肪細胞が多数見られたが、ＳＭＴＰ−７投与群ではほとんど見られず（B）、また、肝臓中のコレステロールおよびトリグリセリドの定量の結果（C）、脂肪肝が抑制されていることが示された。肝臓の写真、Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ  染色した肝組織切片の顕微鏡写真は、各群の代表例を示す。肝臓のコレステロールおよびトリグリセリドの定量データは、平均±SEM（n = 5）で表される。**：P < 0.01
【図３】経口ブドウ糖負荷試験（OGTT）時の血糖値を示す。コントロールは、生理食塩水投与群を示し、SMTPは、SMTP-7投与群を示す。データは、平均±SEM（n = 5）で表される。**：P < 0.01
【図４】OGTT時のインスリン値を示す。右上のグラフは、この時の血糖値を示す。コントロールは、生理食塩水投与群を示し、SMTPは、SMTP-7投与群を示す。データは、平均±SEM（n = 5）で表される。*：P < 0.05。
【図５】ob/obマウスの肝臓内mRNA レベルの比較を示す。コントロールは、生理食塩水投与群を示し、SMTPは、SMTP-7投与群を示す。データは、平均±SEM（n = 5）で表される。*：P < 0.05、**：P < 0.01。mRNAレベル値は、リアルタイムＰＣＲで蛍光強度を自動測定することにより測定し、βアクチンmRNA発現量で補正をかけて算出した。
【図６】ob/obマウスの内臓脂肪内mRNA レベルの比較を示す。コントロールは、生理食塩水投与群を示し、SMTPは、SMTP-7投与群を示す。データは、平均±SEM（n = 5）で表される。*：P < 0.05、**：P < 0.01。mRNAレベル値は、リアルタイムＰＣＲで蛍光強度を自動測定することにより測定し、βアクチンmRNA発現量で補正をかけて算出した。
【図７】対照群およびＳＭＴＰ−７投与群の内臓脂肪組織切片の顕微鏡写真である。対照群（コントロール）およびＳＭＴＰ−７投与群の内臓脂肪組織を観察したところ、対照群では肥満細胞の肥大が見られたのに対し、ＳＭＴＰ−７投与群では脂肪細胞の肥大が顕著に抑制されていた。
【図８（１）】SMTP-7(1，3，10mg/kg)の自由摂食条件下高脂肪食負荷正常マウス1ヶ月反復腹腔内投与自由摂食群（n=10）、SMTP-7  1mg/kg群（n=10）、SMTP-7  3mg/kg群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）の１〜２６日における平均摂餌量（ｇ／日・マウス）の経時的変化。
【図８（２）】自由摂食群（n=10）、SMTP-7  1mg/kg群（n=10）、SMTP-7  3mg/kg群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）における２６日間の平均合計摂餌量（ｇ／２６日・マウス）。自由摂食群：66.80±3.47（g）、SMTP-7  1mg/kg群：63.79±5.87（g）、SMTP-7  3mg/kg群：61.81±5.40（g）およびSMTP-7  10mg/kg群：51.58±4.27（g）。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（３）】自由摂食群（n=10）、SMTP-7  1mg/kg群（n=10）、SMTP-7  3mg/kg群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）の１〜２６日における平均体重（ｇ／マウス）の経時的変化。
【図８（４）】自由摂食群（n=10）、SMTP-7  1mg/kg群（n=10）、SMTP-7  3mg/kg群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）の平均体重の変化量（ｇ／マウス）。２６日目の体重から１日目の体重を差し引いた体重の変化量の１０匹マウスの平均値。自由摂食群：1.65±1.13（g）、SMTP-7  1mg/kg群：2.02±1.65（g）、SMTP-7  3mg/kg群：0.24±1.35（g）およびSMTP-7  10mg/kg群：-3.20±1.56（g）。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  3mg/kg群  ｐ＜０．０５。自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（５）】自由摂食群（n=10）、SMTP-7  1mg/kg群（n=10）、SMTP-7  3mg/kg群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。自由摂食群の試験前：36.56±0.17（℃）；試験後：36.36±0.27（℃）、SMTP-7  1mg/kg群の試験前：36.65±0.08（℃）；試験後：36.48±0.22（℃）、SMTP-7  3mg/kg群の試験前：36.74±0.14（℃）；試験後：36.54±0.23（℃）、SMTP-7  10mg/kg群の試験前：36.68±0.09（℃）；試験後：36.53±0.23（℃）。ｔ−検定：SMTP-7  1mg/kg群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０５、SMTP-7  3mg/kg群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０５。
【図８（６）】ALT（GPT）。自由摂食群：60.1±36.5（U/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：55.2±20.9（U/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：44.9±25.5（U/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：32.4±14.3（U/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（７）】ALP（アルカリフォスファターゼ）。自由摂食群：161.4±22.8（U/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：150.5±27.8（U/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：146.5±18.2（U/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：138.7±18.3（U/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（８）】tBIL（総ピルビリン）。自由摂食群：0.092±0.010（mg/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：0.102±0.019（mg/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：0.131±0.040（mg/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：0.179±0.056（mg/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-7  3mg/kg群  ｐ＜０．０１。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（９）】Glu（血糖）。自由摂食群：286.3±46.5（mg/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：260.5±32.7（mg/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：238.6±48.2（mg/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：229.0±48.4（mg/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-7  3mg/kg群  ｐ＜０．０５。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（１０）】TCho（総コレステロール）。自由摂食群：193.3±20.7（mg/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：198.0±24.2（mg/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：193.4±22.9（mg/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：158.0±10.3（mg/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（１１）】PL（リン脂質）。自由摂食群：359.6±30.3（mg/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：363.1±50.1（mg/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：359.5±36.0（mg/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：310.7±17.1（mg/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群に対するSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。Dunnett検定：自由摂食群に対するSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（１２）】TP（総タンパク質）。自由摂食群：5.29±0.20（g/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：5.21±0.23（g/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：5.28±0.21（g/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：5.00±0.18（g/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（１３）】ALB（アルブミン）。自由摂食群：1.75±0.07（g/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：1.77±0.07（g/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：1.75±0.07（g/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：1.62±0.08（g/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（１４）】HDL-Cho（高比重リポたんぱく質）。自由摂食群：90.5±5.6（mg/dL）、SMTP-7  1mg/kg群：88.1±6.5（mg/dL）、SMTP-7  3mg/kg群：90.0±5.2（mg/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：75.0±2.9（mg/dL）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図８（１５）】AcAc（アセト酢酸）。自由摂食群：13.3±6.2（μmol/L）、SMTP-7  1mg/kg群：11.1±3.7（μmol/L）、SMTP-7  3mg/kg群：11.1±2.1（μmol/L）、SMTP-7  10mg/kg群：8.6±3.2（μmol/L）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（１６）】肝臓重量。自由摂食群：1.55906±0.29271（g）、SMTP-7  1mg/kg群：1.50821±0.27940（g）、SMTP-7  3mg/kg群：1.45685±0.25377（g）、SMTP-7  10mg/kg群：1.30947±0.18743（g）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（１７）】肝臓重量／体重比。自由摂食群体重：42.15±2.96（g）、SMTP-7  1mg/kg群体重：42.09±2.98（g）、SMTP-7  3mg/kg群体重：40.75±3.88（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：37.03±2.81（g）、n=10。自由摂食群の肝臓重量／体重比：3.680±0.520（％）、SMTP-7  1mg/kg群の肝臓重量／体重比：3.566±0.470（％）、SMTP-7  3mg/kg群の肝臓重量／体重比：3.556±0.337（％）、SMTP-7  10mg/kg群の肝臓重量／体重比：3.525±0.325（％）。
【図８（１８）】腎臓重量。自由摂食群：0.37347±0.02628（g）、SMTP-7  1mg/kg群：0.35040±0.02661（g）、SMTP-7  3mg/kg群：0.34861±0.01910（g）、SMTP-7  10mg/kg群：0.34447±0.02646（g）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-7  3mg/kg群  ｐ＜０．０５。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（１９）】腎臓重量／体重比。自由摂食群体重：42.15±2.96（g）、SMTP-7  1mg/kg群体重：42.09±2.98（g）、SMTP-7  3mg/kg群体重：40.75±3.88（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：37.03±2.81（g）、n=10。自由摂食群の腎臓重量／体重比：0.890±0.089（％）、SMTP-7  1mg/kg群の腎臓重量／体重比：0.836±0.063（％）、SMTP-7  3mg/kg群の腎臓重量／体重比：0.862±0.098（％）、SMTP-7  10mg/kg群の腎臓重量／体重比：0.933±0.091（％）。
【図８（２０）】精巣上体脂肪重量。自由摂食群：2.32916±0.32371（g）、SMTP-7  1mg/kg群：2.59909±0.27933（g）、SMTP-7  3mg/kg群：2.27288±0.39170（g）、SMTP-7  10mg/kg群：1.96127±0.32576（g）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（２１）】精巣上体脂肪重量／体重比。自由摂食群体重：42.15±2.96（g）、SMTP-7  1mg/kg群体重：42.09±2.98（g）、SMTP-7  3mg/kg群体重：40.75±3.88（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：37.03±2.81（g）、n=10。自由摂食群の精巣上体脂肪重量／体重比：5.541±0.777（％）、SMTP-7  1mg/kg群の精巣上体脂肪重量／体重比：6.166±0.382（％）、SMTP-7  3mg/kg群の精巣上体脂肪重量／体重比：5.570±0.779（％）、SMTP-7  10mg/kg群の精巣上体脂肪重量／体重比：5.293±0.750（％）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  1mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（２２）】腹腔内脂肪重量。自由摂食群：1.90895±0.41656（g）、SMTP-7  1mg/kg群：2.06955±0.31361（g）、SMTP-7  3mg/kg群：1.87496±0.60434（g）、SMTP-7  10mg/kg群：1.39595±0.33912（g）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（２３）】腹腔内脂肪重量／体重比。自由摂食群体重：42.15±2.96（g）、SMTP-7  1mg/kg群体重：42.09±2.98（g）、SMTP-7  3mg/kg群体重：40.75±3.88（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：37.03±2.81（g）、n=10。自由摂食群の腹腔内脂肪重量／体重比：4.496±0.728（％）、SMTP-7  1mg/kg群の腹腔内脂肪重量／体重比：4.898±0.462（％）、SMTP-7  3mg/kg群の腹腔内脂肪重量／体重比：4.518±1.058（％）、SMTP-7  10mg/kg群の腹腔内脂肪重量／体重比：3.739±0.693（％）。ｔ−検定：自由摂食群に対するSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（２４）】全腹腔内脂肪（精巣上体脂肪＋腹腔内脂肪）重量。自由摂食群：4.23811±0.59867（g）、SMTP-7  1mg/kg群：4.66864±0.57736（g）、SMTP-7  3mg/kg群：4.14784±0.86968（g）、SMTP-7  10mg/kg群：3.35722±0.54727（g）、n=10。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。Dunnett検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図８（２５）】全腹腔内脂肪重量／体重比。自由摂食群体重：42.15±2.96（g）、SMTP-7  1mg/kg群体重：42.09±2.98（g）、SMTP-7  3mg/kg群体重：40.75±3.88（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：37.03±2.81（g）、n=10。自由摂食群の全腹腔内脂肪重量／体重比：10.038±1.047（％）、SMTP-7  1mg/kg群の全腹腔内脂肪重量／体重比：11.063±0.760（％）、SMTP-7  3mg/kg群の全腹腔内脂肪重量／体重比：10.091±1.341（％）、SMTP-7  10mg/kg群の全腹腔内脂肪重量／体重比：9.032±1.020（％）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-7  1mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図９（１）】SMTP-7(10mg/kg)のペアーフィード条件下高脂肪食負荷正常マウス1ヶ月反復腹腔内投与ペアーフィード群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）の１〜２６日における体重（ｇ）の経時的変化。
【図９（２）】ペアーフィード群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）における２６日間の体重変化率（ｇ／２６日・マウス）。ペアーフィード群：-2.26±1.54（g）およびSMTP-7  10mg/kg群：-3.31±0.66（g）。
【図９（３）】ペアーフィード群（n=10）およびSMTP-7  10mg/kg群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。ペアーフィード群の試験前：36.74±0.22（℃）；試験後：35.64±0.25（℃）、SMTP-7  10mg/kg群の試験前：36.75±0.16（℃）；試験後：36.44±0.14（℃）。ｔ−検定：ペアーフィード群の投与前vs投与後  ｐ＜０．０１、SMTP-7  10mg/kg群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、ペアーフィード群の試験後vsSMTP-7  10mg/kg群の試験後  ｐ＜０．０１。
【図９（４）】CPK（クレアチニンリン酸化酵素）。ペアーフィード群：296.9±142.0（U/L）、SMTP-7  10mg/kg群：453.3±162.7（U/L）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図９（５）】ALP（アルカリフォスファターゼ）。ペアーフィード群：145.4±12.8（U/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：126.2±11.2（U/dL）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群に対するSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図９（６）】tBIL（総ピルビリン）。ペアーフィード群：0.101±0.009（mg/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：0.188±0.031（mg/dL）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図９（７）】ALB（アルブミン）。ペアーフィード群：1.79±0.06（g/dL）、SMTP-7  10mg/kg群：1.66±0.05（g/dL）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図９（８）】AcAc（アセト酢酸）。ペアーフィード群：12.7±1.1（μmol/L）、SMTP-7  10mg/kg群：10.7±1.6（μmol/L）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０1。
【図９（９）】肝臓重量。ペアーフィード群：1.33906±0.15943（g）、SMTP-7  10mg/kg群：1.43198±0.18769（g）、n=10。
【図９（１０）】肝臓重量／体重比。ペアーフィード群体重：38.28±2.81（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：36.98±2.76（g）、n=10。ペアーフィード群の肝臓重量／体重比：3.492±0.237（％）、SMTP-7  10mg/kg群の肝臓重量／体重比：3.866±0.350（％）。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図９（１１）】精巣上体脂肪重量。ペアーフィード群：2.11652±0.30113（g）、SMTP-7  10mg/kg群：1.75568±0.28536（g）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図９（１２）】精巣上体脂肪重量／体重比。ペアーフィード群体重：38.28±2.81（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：36.98±2.76（g）、n=10。ペアーフィード群の精巣上体脂肪重量／体重比：5.523±0.622（％）、SMTP-7  10mg/kg群の精巣上体脂肪重量／体重比：4.755±0.719（％）。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  1mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図９（１３）】腸管脂肪＋腎周囲脂肪。ペアーフィード群：1.91696±0.34459（g）、SMTP-7  10mg/kg群：1.51826±0.31945（g）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０５。
【図９（１４）】腸管脂肪＋腎周囲脂肪／体重比。ペアーフィード群体重：38.28±2.81（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：36.98±2.76（g）、n=10。ペアーフィード群の腸管脂肪＋腎周囲脂肪／体重比：4.979±0.637（％）、SMTP-7  10mg/kg群の腸管脂肪＋腎周囲脂肪／体重比：4.071±0.587（％）。ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図９（１５）】全腹腔内脂肪（精巣上体脂肪＋腸管脂肪＋腎周囲脂肪）重量。ペアーフィード群：4.03348±0.59508（g）、SMTP-7  10mg/kg群：3.27394±0.47377（g）、n=10。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図９（１６）】全腹腔内脂肪重量／体重比。ペアーフィード群体重：38.28±2.81（g）、SMTP-7  10mg/kg群体重：36.98±2.76（g）、n=10。ペアーフィード群の全腹腔内脂肪重量／体重比：10.503±1.082（％）、SMTP-7  10mg/kg群の全腹腔内脂肪重量／体重比：8.826±0.851（％）。ｔ−検定：ペアーフィード群vsSMTP-7  10mg/kg群  ｐ＜０．０１。
【図１０（１）】MTP-7,14,19,43D,44D(10mg/kg)のペアーフィード条件下ob/obマウス1週間反復腹腔内投与自由摂食群（n=10）、SMTP-7群（n=10）、SMTP-14g群（n=10）、SMTP-19群（n=10）、SMTP-43D群（n=10）およびSMTP-44D群（n=10）における７日間の平均合計摂餌量（ｇ／７日・マウス）。自由摂食群：35.8±3.0（g）、SMTP-7群：24.7±2.6（g）、SMTP-14群：28.0±2.4（g）、SMTP-19群：24.2±2.5（g）、SMTP-43D群：23.9±2.7（g）およびSMTP-44D群：27.1±1.7（g）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-14群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-19群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-43D群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-44D群  ｐ＜０．０１、SMTP-7群vsSMTP-14群  ｐ＜０．０１、SMTP-7群vsSMTP-44D群  ｐ＜０．０５。
【図１０（２）】自由摂食群（n=10）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）、SMTP-7群（n=10）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）、SMTP-14群（n=10）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）、SMTP-19群（n=10）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）、SMTP-43D群（n=10）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）およびSMTP-44D群の平均体重の変化量（ｇ／マウス）。７日目の体重から１日目の体重を差し引いた体重の変化量の１０匹マウスの平均値。自由摂食群：3.48±1.06（g）、SMTP-7群に対するペアーフィード群：-0.07±1.79（g）、SMTP-7群：0.92±1.01（g）、SMTP-14群に対するペアーフィード群：1.20±1.11（g）、SMTP-14群：2.21±0.84（g）、SMTP-19群に対するペアーフィード群：0.53±0.89（g）、SMTP-19群：0.41±0.89（g）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群：0.59±0.85（g）、SMTP-43D群：0.86±0.67（g）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群：1.33±0.98（g）およびSMTP-44D群：1.60±0.69（g）。ｔ−検定：自由摂食群vs各群  ｐ＜０．０１、SMTP-14群のペアーフィード群vsSMTP-14群  ｐ＜０．０５、SMTP-7群vsSMTP-19群  ｐ＜０．０１。
【図１０（３−１）】SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）およびSMTP-7群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。SMTP-7群に対するペアーフィード群の試験前：35.4±0.4（℃）；試験後：32.4±0.6（℃）、SMTP-7群の試験前：35.4±0.6（℃）；試験後：36.1±0.3（℃）。ｔ−検定：SMTP-7群に対するペアーフィード群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-7群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-7群に対するペアーフィード群の試験後vsSMTP-7群の試験後  ｐ＜０．０１。
【図１０（３−２）】SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）およびSMTP-14群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。SMTP-14群に対するペアーフィード群の試験前：35.5±0.5（℃）；試験後：32.7±1.0（℃）、SMTP-14群の試験前：35.3±0.5（℃）；試験後：35.9±0.3（℃）。ｔ−検定：SMTP-14群に対するペアーフィード群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-14群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０５、SMTP-14群に対するペアーフィード群の試験後vsSMTP-14群の試験後  ｐ＜０．０１。
【図１０（３−３）】SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）およびSMTP-19群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。SMTP-19群に対するペアーフィード群の試験前：35.3±0.5（℃）；試験後：32.3±1.1（℃）、SMTP-19群の試験前：35.4±0.4（℃）；試験後：35.6±0.4（℃）。ｔ−検定：SMTP-19群に対するペアーフィード群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-19群に対するペアーフィード群の試験後vsSMTP-19群の試験後  ｐ＜０．０１。
【図１０（３−４）】SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）およびSMTP-43D群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。SMTP-43D群に対するペアーフィード群の試験前：35.6±0.2（℃）；試験後：33.1±0.5（℃）、SMTP-43D群の試験前：35.5±0.3（℃）；試験後：35.9±0.3（℃）。ｔ−検定：SMTP-43D群に対するペアーフィード群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-43D群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-43D群に対するペアーフィード群の試験後vsSMTP-43D群の試験後  ｐ＜０．０１。
【図１０（３−５）】SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）およびSMTP-44D群（n=10）の平均直腸温度の試験前後の変化。SMTP-44D群に対するペアーフィード群の試験前：35.2±0.4（℃）；試験後：33.2±1.0（℃）、SMTP-44D群の試験前：35.5±0.4（℃）；試験後：35.7±0.3（℃）。ｔ−検定：SMTP-4４D群に対するペアーフィード群の試験前vs試験後  ｐ＜０．０１、SMTP-44D群に対するペアーフィード群の試験後vsSMTP-44D群の試験後  ｐ＜０．０１。
【図１０（４）】Glu（血漿グルコース）。自由摂食群：512.4±93.8（mg/dL）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：379.3±138.9（mg/dL）、SMTP-7群（n=10）：385.3±199.3（mg/dL）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：346.6±96.6（mg/dL）、SMTP-14群（n=10）：328.7±60.6（mg/dL）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：437.7±136.9（mg/dL）、SMTP-19群（n=10）：352.3±79.6（mg/dL）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：448.2±77.5（mg/dL）、SMTP-43D群（n=10）：355.2±60.7（mg/dL）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：586.0±164.5（mg/dL）およびSMTP-44D群（n=10）：423.4±87.7（mg/dL）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群のペアーフィード群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-14群のペアーフィード群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-14群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-19群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-43D群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-44D群  ｐ＜０．０１、SMTP-43D群のペアーフィード群vsSMTP-43D群  ｐ＜０．０１、SMTP-44D群のペアーフィード群vsSMTP-44D群  ｐ＜０．０１。
【図１０（５）】TCho（血漿中総コレステロール）。自由摂食群：221.8±37.2（mg/dL）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：203.6±28.4（mg/dL）、SMTP-7群（n=10）：163.1±15.8（mg/dL）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：215.0±32.9（mg/dL）、SMTP-14群（n=10）：176.9±20.0（mg/dL）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：224.6±26.1（mg/dL）、SMTP-19群（n=10）：175.2±22.3（mg/dL）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：213.4±18.9（mg/dL）、SMTP-43D群（n=10）：166.2±14.5（mg/dL）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：224.1±18.8（mg/dL）およびSMTP-44D群（n=10）：176.1±17.8（mg/dL）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０１、SMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群のペアーフィード群vsSMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０１。
【図１０（６）】TG（血漿中トリグリセライド）。自由摂食群：51.4±23.9（mg/dL）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：122.4±79.7（mg/dL）、SMTP-7群（n=10）：82.3±38.9（mg/dL）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：107.3±43.7（mg/dL）、SMTP-14群（n=10）：67.7±22.9（mg/dL）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：92.6±36.7（mg/dL）、SMTP-19群（n=10）：43.3±8.2（mg/dL）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：66.8±16.2（mg/dL）、SMTP-43D群（n=10）：46.5±15.0（mg/dL）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：78.9±52.3（mg/dL）およびSMTP-44D群（n=10）：34.5±9.4（mg/dL）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群のペアーフィード群またはSMTP-7群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-14群またはSMTP-19群のペアーフィード群  ｐ＜０．０１、SMTP-14群のペアーフィード群vs SMTP-14群  ｐ＜０．０５、SMTP-19群のペアーフィード群vs SMTP-19群  ｐ＜０．０１、SMTP-43D群のペアーフィード群vs SMTP-43D群  ｐ＜０．０１、SMTP-44D群のペアーフィード群vs SMTP-44D群  ｐ＜０．０５、SMTP-7群vs SMTP-19群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０１、SMTP-7群vs SMTP-43D群  ｐ＜０．０５。
【図１０（７）】NEFA（遊離脂肪酸）。自由摂食群：1137.1±223.1（μEq/mL）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：1403.7±289.7（μEq/mL）、SMTP-7群（n=10）：847.4±141.1（μEq/mL）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：1332.4±195.9（μEq/mL）、SMTP-14群（n=10）：830.0±208.2（μEq/mL）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：1267.6±161.1（μEq/mL）、SMTP-19群（n=10）：806.0±169.0（μEq/mL）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：1159.9±124.1（μEq/mL）、SMTP-43D群（n=10）：834.4±163.7（μEq/mL）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：1105.6±288.7（μEq/mL）およびSMTP-44D群（n=10）：723.0±142.1（μEq/mL）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群のペアーフィード群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０１、SMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群のペアーフィード群vs SMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０１。
【図１０（８）】AST（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）。自由摂食群：418.0±126.6（U/L）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：557.6±194.2（U/L）、SMTP-7群（n=10）：392.6±113.4（U/L）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：564.4±211.5（U/L）、SMTP-14群（n=10）：397.3±171.9（U/L）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：502.6±122.4（U/L）、SMTP-19群（n=10）：370.7±120.1（U/L）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：440.3±89.2（U/L）、SMTP-43D群（n=10）：309.8±68.4（U/L）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：410.7±100.9（U/L L）およびSMTP-44D群（n=10）：293.1±140.0（U/L L）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-43D群  ｐ＜０．０５、SMTP-7群、SMTP-19群またはSMTP-44D群のペアーフィード群vs SMTP-7群、SMTP-19群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０５、SMTP-43D群のペアーフィード群vsSMTP-43D群  ｐ＜０．０１。
【図１０（９）】ALT（アラニンアミノトランスフェラーゼ）。自由摂食群：525.3±178.3（U/L）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：554.0±232.9（U/L）、SMTP-7群（n=10）：438.9±142.0（U/L）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：593.9±232.8（U/L）、SMTP-14群（n=10）：400.7±171.0（U/L）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：610.8±143.9（U/L）、SMTP-19群（n=10）：401.8±145.6（U/L）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：564.0±145.5（U/L）、SMTP-43D群（n=10）：334.5±76.1（U/L）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：540.8±125.2（U/L L）およびSMTP-44D群（n=10）：363.5±158.4（U/L L）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-43D群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-44D群  ｐ＜０．０５、SMTP-14群またはSMTP-44D群のペアーフィード群vs SMTP-14群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０５、、SMTP-19群またはSMTP-43D群のペアーフィード群vs SMTP-19群またはSMTP-43D群  ｐ＜０．０１。
【図１０（１０）】ALP（アルカリフォスファターゼ）。自由摂食群：1300.5±293.5（U/L）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：852.9±199.8（U/L）、SMTP-7群（n=10）：621.8±134.5（U/L）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：946.2±288.8（U/L）、SMTP-14群（n=10）：707.1±223.3（U/L）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：968.7±217.5（U/L）、SMTP-19群（n=10）：622.9±160.9（U/L）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：925.7±196.7（U/L）、SMTP-43D群（n=10）：505.7±65.4（U/L）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：1012.4±222.3（U/L）およびSMTP-44D群（n=10）：734.2±226.7（U/L）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群またはSMTP-43D群のペアーフィード群  ｐ＜０．０１、自由摂食群vsSMTP-14群、SMTP-19群またはSMTP-44D群のペアーフィード群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-7群、SMTP-14群、SMTP-19群、SMTP-43D群またはSMTP-44D群  ｐ＜０．０１、SMTP-7群、SMTP-19群またはSMTP-43D群のペアーフィード群vs SMTP-7群、SMTP-19群またはSMTP-43D群  ｐ＜０．０１、SMTP-44D群のペアーフィード群vs SMTP-44D群  ｐ＜０．０５、SMTP-7群vs SMTP-43D群  ｐ＜０．０５。
【図１０（１１）】肝臓重量。自由摂食群：8.54±1.42（g）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：7.43±0.66（g）、SMTP-7群（n=10）：7.92±1.06（g）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：8.01±0.45（g）、SMTP-14群（n=10）：8.02±1.09（g）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：7.51±0.77（g）、SMTP-19群（n=10）：7.92±0.43（g）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：7.13±0.53（g）、SMTP-43D群（n=10）：7.85±0.52（g）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：7.76±0.48（g）およびSMTP-44D群（n=10）：7.99±0.43（g）。ｔ−検定：自由摂食群vsSMTP-7群のペアーフィード群  ｐ＜０．０５、自由摂食群vsSMTP-43D群のペアーフィード群  ｐ＜０．０１、SMTP-43D群のペアーフィード群vs SMTP-43D群  ｐ＜０．０１。
【図１０（１２）】腎臓重量。自由摂食群：0.69±0.11（g）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：0.70±0.10（g）、SMTP-7群（n=10）：0.67±0.04（g）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：0.69±0.08（g）、SMTP-14群（n=10）：0.65±0.03（g）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：0.69±0.02（g）、SMTP-19群（n=10）：0.66±0.03（g）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：0.66±0.03（g）、SMTP-43D群（n=10）：0.66±0.04（g）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：0.65±0.04（g）およびSMTP-44D群（n=10）：0.66±0.03（g）。ｔ−検定： SMTP-19群のペアーフィード群vs SMTP-19群  ｐ＜０．０１。
【図１０（１３）】内臓脂肪重量。自由摂食群：15.42±1.06（g）、SMTP-7群に対するペアーフィード群（n=10）：15.35±0.69（g）、SMTP-7群（n=10）：14.77±0.73（g）、SMTP-14群に対するペアーフィード群（n=10）：15.08±0.65（g）、SMTP-14群（n=10）：15.38±0.81（g）、SMTP-19群に対するペアーフィード群（n=10）：15.39±0.60（g）、SMTP-19群（n=10）：15.03±0.87（g）、SMTP-43D群に対するペアーフィード群（n=10）：14.82±0.89（g）、SMTP-43D群（n=10）：15.59±0.86（g）、SMTP-44D群に対するペアーフィード群（n=10）：15.86±0.52（g）およびSMTP-44D群（n=10）：15.06±0.62（g）。ｔ−検定： SMTP-44D群のペアーフィード群vs SMTP-44D群  ｐ＜０．０１。SMTP-7群vs SMTP-43D群  ｐ＜０．０５。なお、全内臓脂肪、全腹腔内脂肪、内臓脂肪、腹腔内脂肪、精巣上体脂肪、腸管脂肪、腎周囲脂肪の関係は、内臓＝腹腔内、内臓（腹腔内）脂肪＝腸管脂肪＋腎周囲脂肪、全内臓（腹腔内）脂肪＝精巣上体脂肪＋内臓（腹腔内）脂肪を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明における「メタボリックシンドローム」とは、内臓脂肪型肥満に、高血糖症、高血圧症および高脂血症からなる群から選択される少なくとも２つを合併した症状を有する代謝症候群を意味する。メタボリックシンドロームの診断基準は、国際糖尿病連合、日本肥満学会、NCEP-ATPIIIのいずれかを採用することができる。基準は、改定されるので、改定された基準が採用されても良い。
【００１３】
国際糖尿病連合（IDF）基準(2005年)では、
腹囲男性90cm、女性80cm以上が必須、
かつ、
血圧130/85mmHg以上、
中性脂肪150mg/dL以上、
HDLc男性40mg/dL未満、HDLc女性50mg/dL未満、
血糖100mg/dL以上
からなる4項目中2項目以上が該当する場合であり、
日本肥満学会（JASSO）基準(2005年)では、
腹囲男性85cm、女性90cm以上が必須、
かつ、
血圧130/85mmHg以上、 
中性脂肪150mg/dL以上またはHDLc40mg/dL未満、 
血糖110mg/dL以上 
からなる3項目中2項目以上が該当する場合であり、
改訂NCEP-ATPIII基準(2005年) では、
腹囲男性90cm、女性80cm以上、 
血圧130/85mmHg以上、 
中性脂肪150mg/dL以上、 
HDLc男性40mg/dL未満、HDLc女性50mg/dL未満、 
血糖100mg/dL以上 
からなる5項目中3項目以上が該当する場合である。
【００１４】
肥満とは、正常な状態に比べて体重が多い状態、あるいは体脂肪が過剰に蓄積した状態を意味するが、肥満診断基準として、日本肥満学会基準が採用される。例えば、成人においては、BMI25以上が肥満とされるが、基準は、改定されるので、改定された基準が採用されても良い。また、世界では、一般に、BMIが25以上を肥満傾向、30以上を肥満と呼んでいるので、各国の基準を採用しても良い。また、肥満には、BMIが正常値であっても、腹腔内臓器の周囲に脂肪が貯まる内臓脂肪型肥満も含まれる。
【００１５】
高血糖症とは、健常なヒトの場合、空腹時血糖値はおおよそ80-100mg/dl程度であり、これより高い血糖の状態を意味する。基準は、改定されるので、改定された基準が採用されても良い。高血糖症は、好ましくは糖尿病である。より好ましくは、高インスリン血症、インスリン抵抗性症候群、２型糖尿病である。
【００１６】
高脂血症には、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール血症、低ＨＤＬコレステロール血症、高トリグリセリド血症（高ＴＧ血症）が含まれる。
【００１７】
高コレステロール血症は、血液中の総コレステロール値が高い（220mg/dL以上）タイプの脂質異常症を意味する。
【００１８】
高LDLコレステロール血症は、コレステロールの担体である低比重リポ蛋白（LDL）が血液中に多く存在する（140mg/dL以上）タイプの脂質異常症を意味する。
【００１９】
低HDLコレステロール血症は、血液中の高比重リポ蛋白（HDL）が少ない（40mg/dL未満）タイプの脂質異常症を意味する。
【００２０】
高トリグリセリド血症 (高TG血症)は、血液中にトリグリセリドが多く存在する（150mg/dL以上）タイプの脂質異常症を意味する。
【００２１】
基準は、改定されるので、改定された基準が採用されても良い。
【００２２】
脂肪肝とは、肝臓に脂肪が蓄積した状態を指す。より具体的には、脂肪滴をもつ肝細胞数が、肝細胞の総数の３分の１以上に現れるようになった状態を指す。
【００２３】
高血圧症とは、収縮期血圧が140以上または拡張期血圧が90以上に保たれた状態を意味する。基準は、改定されるので、改定された基準が採用されても良い。また、高血圧は、虚血性心疾患、脳卒中、腎不全などの発症リスクとなることから、高血圧症には、虚血性心疾患、脳卒中、腎不全なども含まれる。
【００２４】
メタボリックシンドロームを治療するとは、上記メタボリックシンドロームの診断基準（内臓脂肪型肥満に、高血糖症、高血圧症および高脂血症からなる群から選択される少なくとも２つを合併した症状）に該当しなくなるように、メタボリックシンドロームの診断基準の少なくとも１つを改善することを意味する。
【００２５】
肥満を治療するとは、正常値となるように、体重および／または脂肪重量を減少させることを意味する。
【００２６】
高血糖症を治療するとは、正常値となるように、血糖値および／または血液中のインスリン量を減少させることを意味する。
【００２７】
高脂血症を治療するとは、正常値となるように、血液中の総コレステロール量、低比重リポ蛋白（LDL）量および／またはトリグリセリド量を減少させる、および／または高比重リポ蛋白（HDL）の量を増加させることを意味する。
【００２８】
脂肪肝を治療するとは、脂肪滴をもつ肝細胞数が、肝細胞の総数の３分の１より少ない状態にすることを意味する。
【００２９】
肥満を予防するとは、正常値を超えないように、体重および／または脂肪重量を増加させないことを意味する。
【００３０】
高血糖症を予防するとは、正常値を超えないように、血糖値および／または血液中のインスリン量を増加させないことを意味する。
【００３１】
高脂血症を予防するとは、正常値を超えないように、血液中の総コレステロール量、低比重リポ蛋白量および／またはトリグリセリド量を増加させないこと、および／または、正常値を下回らないように、高比重リポ蛋白（HDL）量を減少させないことを意味する。
【００３２】
脂肪肝を予防するとは、脂肪滴をもつ肝細胞数が、肝細胞の総数の３分の１を超えないようにすることを意味する。
【００３３】
本発明の一般式（Ｉ）：
2010110026.tif 000006
（式中、ｎ１は、０〜１０の整数を表す）のSMTP化合物は、特許第４２５７０２６、あるいはＷＯ２００７／１１１２０３に記載される方法で合成できる。簡単には、糸状菌Stachybotrys microsporaを、下記一般式（ＩＶ）： 
2010110026.tif 000007
で表される化合物をアミンとして添加した培地中で培養することにより一般式（Ｉ）の化合物は培養液中に蓄積するので、培養液から精製することで得ることができる。
【００３４】
好ましくは、化合物（Ｉ）：
2010110026.tif 000008
である。
【００３５】
より好ましくは、立体配座を考慮したＳＭＴＰ-7である。SMTP-7（orniplabin）とは、以下の式：
2010110026.tif 000009
で示されるトレプニルフェノール化合物を意味する。SMTP-7（orniplabin）は、糸状菌Stachybotrys microsporaを、アミンとしてL-オルニチンを添加して培養して公知の方法（非特許文献１〜４）で精製して入手することができる。
【００３６】
本発明の一般式（ＩＩ）：
2010110026.tif 000010
（式中、Ｒ1は、存在しても存在しなくてもよく、Ｒ1が存在する場合、Ｒ1は少なくとも１つの-ＯＨ基を表し、ｎ２は０又は１の整数を表す。）の化合物は、特許第４２５７０２６、あるいはＷＯ２００７／１１１２０３に記載される方法で合成できる。簡単には、糸状菌Stachybotrys microsporaを、下記一般式（Ｖ）：
2010110026.tif 000011
（式中、Ｒ1は、存在しても存在しなくてもよく、Ｒ1が存在する場合、Ｒ1は少なくとも１つの-ＯＨ基を表し、ｎ２は０又は１の整数を表す。）で表される化合物をアミンとして添加した培地中で培養することにより一般式（ＩＩ）の化合物は培養液中に蓄積するので、培養液から精製することで得ることができる。
【００３７】
好ましくは、化合物（ＩＩＩ）：
2010110026.tif 000012
化合物（ＩＶ）：
2010110026.tif 000013
化合物（Ｖ）：
2010110026.tif 000014
である。
【００３８】
より好ましくは、立体配座を考慮したＳＭＴＰ-14：
2010110026.tif 000015
ＳＭＴＰ-43Ｄ：
2010110026.tif 000016
ＳＭＴＰ-44Ｄ：
2010110026.tif 000017
である。
【００３９】
ＳＭＴＰ-14、43Ｄ、44Ｄは、それぞれＬ−チロシン、Ｄ−２−フェニルグリシン、４−ヒドロキシ−Ｄ−フェニルグリシンをアミンとして添加した培地中で培養することにより培養液中に蓄積するので、培養液から精製することでそれぞれを得ることができる。
【００４０】
本発明の一般式（ＩＩＩ）：
2010110026.tif 000018
（式中、Ｒ2は存在しても存在しなくてもよく、Ｒ2が存在する場合、Ｒ2は-ＯＨ基、-ＣＯＯＨ基からなる群から選択される、少なくとも１つの置換基を表す）は、特許第４２５７０２６、あるいはＷＯ２００７／１１１２０３に記載される方法で合成できる。簡単には、下記一般式（ＶＩ）：
2010110026.tif 000019
（式中、Ｒ2は存在しても存在しなくてもよく、Ｒ2が存在する場合、Ｒ2は-ＯＨ基、-ＣＯＯＨ基からなる群から選択される、少なくとも１つの置換基を表す）で表される化合物をアミンとして添加した培地中で培養することにより一般式（ＩＩＩ）の化合物は培養液中に蓄積するので、培養液から精製することで得ることができる。
【００４１】
好ましくは、化合物（ＩＩＩ）：
2010110026.tif 000020
である。
より好ましくは、ＳＭＴＰ-19：
2010110026.tif 000021
である。
【００４２】
SMTP-19は、ｐ−アミノ安息香酸をアミンとして添加した培地中で培養することにより培養液中に蓄積するので、培養液から精製することでそれぞれを得ることができる。
【００４３】
本発明の化合物は、薬学的に許容しえるその塩（酸付加塩、塩基塩）あってもよい。また、有機合成などの手法により得られても良い。
本発明の化合物は、薬学的に許容しえるそのエステル若しくは溶媒和物であってもよい。
【００４４】
薬学的に許容されうる塩として、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸等の無機酸及び有機酸との塩が挙げられる。また、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、アンモニア、アミン塩、トリアルキルアミン塩等の塩基塩も挙げられる。このような塩は、標準的な技術を使用して当業者により極めて容易に形成することができる。
【００４５】
また、炭素数１〜１０個のアルコールまたはカルボン酸など、好ましくは、メチルアルコール、エチルアルコール、酢酸、又はプロピオン酸などが、本発明の化合物の薬学的に許容され得るエステルの形成に好適である。
【００４６】
また、水などが、本発明の化合物の薬学的に許容され得る溶媒和の形成に好適である。
【００４７】
本発明の医薬は、例えば錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬若しくは軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤又は懸濁剤の剤形で経口投与してよい。また、例えば坐剤を使用して直腸内に投与してよい。また、例えば軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤又は液剤を使用して局所的又は経皮的に投与してよい。また、例えば、注射剤を使用して非経口的、例えば静脈内、筋肉内、皮下、脊髄内又は皮内的に投与してよい。
【００４８】
本発明の医薬は、薬学的に不活性な無機又は有機の賦形剤と混合してもよい。錠剤、糖衣錠又は硬ゼラチンカプセル剤に適切な賦形剤の例には、乳糖、トウモロコシデンプン若しくはその誘導体、タルク又はステアリン酸若しくはその塩などが挙げられる。軟ゼラチンカプセル剤に使用される適切な賦形剤の例には、植物油、ロウ、脂肪、半固体又は液体ポリオール等が挙げられる。液剤及びシロップ剤の調製のための賦形剤の例には、水、ポリオール、サッカロース、転化糖及びグルコースなどが挙げられる。注射剤のための賦形剤の例には、水、アルコール、ポリオール、グリセリン及び植物油などが挙げられる。坐剤及び局所又は経皮適用のための賦形剤の例には、天然又は硬化油、ロウ、脂肪及び半固体又は液体ポリオールなどが挙げられる。また、防腐剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、着香剤、浸透圧を変える塩、緩衝剤、被膜剤又は酸化防止剤などを含んでよい。さらに、他の治療上有用な薬剤を含んでよい。
【００４９】
使用の好ましい形態は、静脈内、筋肉内又は経口投与であり、最も好ましくは経口投与である。本発明の化合物が有効量として投与される用量は、特定の活性成分の性質、患者の年齢と要件及び投与方法によって決まる。例えば静脈内投与の場合には、成人１日当り有効成分量として１から２５mg／ｋｇの投与、経口投与の場合には、成人１日当り有効成分量として２から２００mg／ｋｇの投与が望ましい。
【００５０】
メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを有する患者は、哺乳動物、好ましくは、イヌ、ネコ等の愛玩動物、ヒト、より好ましくは、ヒトである。
【００５１】
また、本発明は、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを予防するための食品であってもよい。また、食品添加物であってもよい。
【実施例１】
【００５２】
以下に本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。【００５３】
１、材料と実験方法
SMTP-7の精製
Stachybotrys microspora ＩＦＯ３００１８株（財団法人発酵研究所）の胞子を種培養用培地１００ｍｌの入った５００ｍｌ容三角フラスコに接種し、ロータリーシェイカーを用いて１８０ｒｐｍ，２５℃で４日間にわたり種培養を行った。種培養用培地は、グルコース（４％）、大豆ミール（０．５％）、ポリペプトン（０．３％）、粉末酵母エキス（０．３％）を水に溶かし、ＨＣｌを用いてｐＨ５．８に調製し、消泡剤ＣＢ４４２（０．０１％）（０．１ｇ／ｍｌアセトン溶液を１ｍｌ／Ｌ添加）（日本油脂化学，日本）を加え、培養器に１００ｍｌずつ分注後、オートクレーブ（１２１℃，１５ｍｉｎ）を行ったものを使用した。【００５４】
この培養液５ｍｌを、本培養培地１００ｍｌの入った５００ｍ１容三角フラスコに接種し、ロータリーシェイカーを用いて１８０ｒｐｍ，２５℃で６日間にわたり本培養を行った。【００５５】
本培養用培地（制限培地）は、スクロース（５％）、粉末酵母エキス（０．１％），ＮａＮＯ３（０．３％）、Ｋ２ＨＰＯ４（０．１％）、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（０．０５％）、ＫＣ１（０．０５％）、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（０．０００２５％）、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（０．００１５％）、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（０．０００６５％）を水に溶かし、ＨＣｌを用いてｐＨ５．８に調製し、消泡剤ＣＢ４４２（０．０１％）（０．１ｇ／ｍｌアセトン溶液を１ｍｌ／Ｌ添加）（日本油脂化学，日本）を加え培養器に１００ｍｌずつ分注後、オートクレーブ（１２１℃，１５ｍｉｎ）を行ったものを使用した。【００５６】
接種した日を培養０日目とし、培養４日目（９６時間後）に１００mgのＬ−オルニチンを培地に添加して生産用培地とし、さらに二日間培養を継続した。２日後に、メタノールを２００ｍｌ／フラスコ添加し、ロータリーシェイカーを用いて１８０ｒｐｍ，２５℃で約２時間にわたり振盪して抽出を行った。【００５７】
培養物を減圧濾過して得られた培養上清のメタノールを留去し、残った水相にリン酸を加えてｐＨ２に調整した。これを低温下で一晩〜１週間静置し、遠心分離（１２，０００ｒｐｍ×３０分）で沈殿物を回収した。沈殿物に適量のアセトンを加え、再度遠心分離（１２，０００ｒｐｍ×３０分）によって上清と沈殿に分け、うち上清を回収した。これを減圧乾固し、得られた油状残渣を、ＭｅＯＨで約１００mg／ｍｌに溶解して、LiChrolut（登録商標）ＲＰ−１８固相抽出カラムに通して、Inertsil ＰＲＥＰ−ＯＤＳカラム（３０×２５０ｍｍ；ＧＬサイエンス（日本、東京））での分取ＨＰＬＣに供した。０．１％ギ酸水とＭｅＯＨの混合溶媒で、ＭｅＯＨ比率が８０％から２０分間で１００％まで変化させるグラジエント溶出を行い、（カラム温度４０℃、流速２５ｍｌ／分）、保持時間１１〜１５分で溶出された分画から、本実施例にかかるＳＭＴＰ−７を得た。【００５８】
薬剤調整
SMTP-7：本研究室において精製されたSMTP-7の乾固物に、等量の0.3 N NaOH及び生理食塩水（0.9% NaCl）を加えて、50 mg/ml溶液を調製した。その後0.3 N HClと生理食塩水を用いて、10 mg/ml, pHが弱アルカリから中性付近となるように調整し、濾過滅菌を行い小分けにして-30℃に凍結保存したものを使用した。【００５９】
実験スケジュール
［表１］
2010110026.tif 000022
【００６０】
動物飼育環境と薬剤投与
５週齢のオスのob/obマウス（日本チャールズリバー B6.V-Lepob/J）を1週間の馴化の後、１群５匹になるよう体重で群わけを行った。また、摂餌量を対照群と統一するためペアフィーディングを行った。SMTP-7を１０mg/kgで腹腔内投与し、体重と２４時間の摂餌量を測定した。２日目の同じ時間にSMTP-7を投与し、同時に対照群に生理食塩水を投与し、対照群1日目とした。その際、対照群のエサ箱には１日前にSMTP-7投与群が食べた量と同量のエサしか加えないようにする。水は自由に摂取させた。【００６１】
経口ブドウ糖負荷試験（OGTT）
方法はAlberts P., Nilsson C., Goran S., Selen G., et al. Selective Inhibition of 11β-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1 improves Hepatic Insulin Sensivity in Hyperglycemic Mice Strains. Endcrinol. 144: 4755-4762. (2003)に従った。薬剤投与5日目にOGTTを行った。12時間の絶食、および最終投与より2時間後にD-glucoseを2 g/kg経口投与した。グルコース投与前、および投与後15、30、60、120分後に少し切断した尾からヘパリンコートしたヘマトクリット管を用いて採血し、3,000 rpm 10分遠心分離し、血漿を得た。その後、グルコースCII−テストワコー（和光純薬株式会社）で血糖値を、超高感度マウスインスリン測定キット（株式会社 森永生科学研究所）でインスリンを測定した。【００６２】
解剖
薬剤投与7日目に、絶食はせず最終投与より６時間後に解剖を行った。肝臓、内臓脂肪および血漿を採取した。【００６３】
血漿の生化学的検査
得られた血漿を用いて、随時血糖、総コレステロール、トリグリセライド、遊離脂肪酸、GPTを測定した。血糖値は、グルコースＣII−テストワコー（和光純薬株式会社）を用いて、付属の指示書に従って測定した。総コレステロールは、コレステロール E-テストワコー（和光純薬株式会社）を用いて、付属の指示書に従って測定した。トリグリセライドは、トリグリセライド E-テストワコー（和光純薬株式会社）を用いて、付属の指示書に従って測定した。遊離脂肪酸は、（株）ＢＭＬに委託して測定した。GPTはトランスアミナーゼＣII−テストワコー（和光純薬株式会社）を用いて、付属の指示書に従って測定した。【００６４】
RT-PCR
SMTP-7の投与による遺伝子発現変化を調べるためにReal Time-PCR（RT-PCR）を行った。作業は全てRNaseフリーの器具および試薬を使用して行った。【００６５】
ob/obマウスより摘出した肝臓または内臓脂肪組織100 mgに対し、１mlのTRIzol（登録商標）Reagent（Invitrogen）を加えホモジナイズした。室温で5分インキュベートした後、０．２mlのクロロホルムを加え15秒ほどボルテックスした。さらに室温で３分インキュベート後、12,000×g 15分 4℃で遠心分離した。上清の水層を新しいチューブに移し、０．５mlのイソプロピルアルコールを加えた。室温で１０分インキュベートした後、12,000×g 10分 4℃で遠心分離した。上清を取り除き得られたTotal RNAに1 mlの75%エタノールを加えて軽くボルテックス後、7,500×g 5分 4℃で遠心分離した。上清を取り除いた後、清潔なペーパータオル上にチューブを伏せてTotal RNAを乾燥させた。RNaseとDNaseフリーの滅菌水に溶解し、RNA量を定量した。0.5 μg相当のRNAをPrime Script RT reagent Kit（タカラバイオ株式会社）を用いて逆転写した。【００６６】
逆転写反応は、市販のキットを用いた（タカラバイオ  ＲＰ083Ａ）。具体的には、キットの指示に従い、primeScript Buffer (リアルタイム用)  １×（終濃度）、PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5mM (終濃度)、Oligo dT Primer 25pmol (終濃度)、Randam 6 mer 50pmol (終濃度)、total RNA（500ng）に、滅菌水（RNaseとDNaseフリー）を加え反応液10μｌを調整した。逆転写反応は、37℃、15分で行い、その後85℃、5秒で逆転写酵素を熱失活させた。【００６７】
前述の方法で得た逆転写物 (逆転写前20ngのRNAに相当する量)をテンプレートとして、以下のようにリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（RealTime PCR）により各mRNA発現量を測定した。【００６８】
RT-PCRは、上記逆転写後試料（20 ng RNAに相当する量）、下記各プライマー、市販のリアルタイム検出PCR用試薬キット（SYBR PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time) （タカラバイオ、RR083A）を用いた。具体的には、キットの指示書に従い、上記逆転写後試料（20 ng RNAに相当する量）、SYBR Premix Ex Taq II  1×（終濃度）、PCR forward primer  0.4μM（終濃度）、PCR reverse primer  0.4μM（終濃度）となるよう反応液（25μL）を調整した。【００６９】
反応チューブあたり25μLとなるように上記反応液を調整し、反応チューブにキャップをしたあと、Thermal Cycler Dice Real Time System (タカラバイオ、TP800)にセットした。PCR反応は初期変性を９５℃、１０秒行った後、PCR反応を変性工程９５℃、５秒、アニーリング工程６０℃、２０秒の条件で行った（サイクル数：３０〜４５サイクル）。反応開始後、蛍光強度をリアルタイムで自動測定することにより、各mRNA発現量を測定し、βアクチンmRNA発現量で補正をかけて算出した。検討した遺伝子は、G6Pase (glucose-6-phosphatase)、PEPCK (phosphenolpyruvate carboxykinase)、GCK（glucokinase）、ACC（acetyl-CoA carboxylase）、FAS（fatty acid synthase）、SCD-1（stearoyl-CoA desaturase）とした。【００７０】
RT-PCRに使用した、G6Pase、PEPCK、GCK、ACC、FAS、SCD-1、βアクチンのプライマーの配列を以下に示す。Fは、forward primer、Rはreverse primerを意味する。プライマーは、オペロンバイオテクノロジー 株式会社に合成を依頼して入手した。【００７１】
beta Actin-F:5'-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-3'（配列番号１）
beta Actin-R:5'-ATGGAGCCACCGATCCACA-3' （配列番号２）
ACC-F: 5'-GGATGACAGGCTTGCAGCTATG-3' （配列番号３）
ACC-R: 5'-GGAACGTAAGTCGCCGGATG-3' （配列番号４）
FAS-F: 5'-GCAGCAAGTGTCCACCAACAA-3' （配列番号５）
FAS-R: 5'-CTCATCGGAGCGCAGGATAGA-3' （配列番号６）
Scd-1-F: 5'-GCCTGTACGGGATCATACTGGTTC-3' （配列番号７）
Scd-1-R: 5'-CCAGAGCGCTGGTCATGTAGTAGA-3' （配列番号８）
G6Pase-F: 5'-GGATCCTGGGACAGACACACAA-3' （配列番号９）
G6Pase-R: 5'-TGTCAACACCTCTGGCCTCAC-3' （配列番号１０）
GCK-F: 5'-TACGACCGGATGGTGGATGA-3' （配列番号１１）
GCK-R: 5'-ACCAGCTCGCCCATGTACTTTC-3' （配列番号１２）
PEPCK-F: 5'-GTGTTTGTAGGAGCAGCCATGAGA-3' （配列番号１３）
PEPCK-R: 5'-GCCAGGTATTTGCCGAAGTTGTAG-3' （配列番号１４）
SHP-1-F: 5'-AGGGCACGATCCTCTTCAACC-3' （配列番号１５）
SHP-1-R: 5'-CAGGGCTCCAAGACTTCACACA-3' （配列番号１６）【００７２】
２、結果
２．１、ob/obマウスに与えるSMTP-7の代謝改善作用
まず、SMTP-7に抗肥満作用があるのか確認するために、代表的な肥満モデルであるob/obマウスに対しSMTP-7を10 mg/kg、対照群（コントロール）には生理食塩水を腹腔内投与した。【００７３】
投与2日目より対照群に比べ有意に体重増加を抑制する働きがあることがわかった（図1A）。さらに、内臓脂肪（87%）だけでなく、肥満によって増大する肝臓重量も有意に抑えられた（78%）（図1B、C）。総コレステロール値（78%）、随時血糖値（63%）、遊離脂肪酸（78%）も有意に減少させることが明らかとなった（図1D、F、H）。トリグリセライドに関しては、絶食させず解剖したため統計的に有意な差は見られないながらも、減少させる傾向があることが確認された（74%）（図1E）。また、肝障害の指標となる酵素pyruvate-glutamate transaminase(GPT 別名ALT)がSMTP-7投与によって活性が低下する傾向にあることがわかった（78%）（図1G）。（カッコ内の数値は、対照群との比較におけるSMTP-7投与群において得られた数値のパーセンテージを示す。）【００７４】
さらに、SMTP-7投与群と対照群の肝臓を比較すると、SMTP-7投与群では脂肪肝が抑えられているのが目視でも明確にわかり（図２Ａ）、さらに中性脂質を検出する Oil Red O 染色による肝組織切片の顕微鏡観察、肝臓中のコレステロールおよびトリグリセリドの定量結果から、SMTP-7の脂肪肝抑制作用が明らかとなった（図２ＢおよびＣ）。【００７５】
２．２、経口ブドウ糖負荷試験（Oral glucose tolerance test、OGTT)
ob/obマウスは肥満に伴いインスリン抵抗性を併発する（Alberts, P., Ronquist-Nii, Y., Larsson, C. Effect of high-fat diet on KKAy and ob/ob mouse liver and adipose tissue corticosterone and 11-dehydrocorticosterone concentrations. Horm Metab Res. 2005 Jul;37(7):402-7）ことから、耐糖性改善能を検討するためOGTTを行った（図3）。【００７６】
SMTP-7を投与した個体では、空腹時血糖が対照群に対し有意に減少したほか、グルコース投与後の急激な血糖値上昇および、グルコース投与後30分までの血糖値を有意に抑える働きがあることがわかった。【００７７】
そこで再度別個体を用いてOGTTを行い、グルコース投与後30分までの血糖値とインスリン濃度を測定した（図4）。この実験においても血糖低下に高い再現性が得られたほか、SMTP-7投与群においてグルコース投与後15分での血漿インスリン値が有意に減少し、その他の採血点でも減少する傾向にあることが確認された。【００７８】
２．３、SMTP-7がob/obマウスの遺伝子発現に与える影響
2.1、2.2の結果より、SMTP-7に抗肥満および耐糖性改善作用があることが示された。また、耐糖性の改善は糖新生に関わる遺伝子や脂肪酸関連遺伝子の発現量の低下を伴うことが予測されるため、摘出した肝臓よりtotal RNAを抽出しこれらの遺伝子のRT-PCRを行った。【００７９】
今回測定した遺伝子のほとんどが、SMTP-7を投与することによって有意に発現低下、あるいは低下する傾向があることが明らかとなった（図5）。糖新生の主要な酵素であるG6PaseおよびPEPCKの発現量の低下は、インスリン抵抗性の改善と一致する結果である。また、今回SMTP-7によって、脂肪酸合成の第一ステップを触媒するACCと脂肪酸合成の大半を触媒するFASの発現量が低下したことは、脂肪酸合成が減少したことを示し、インスリン抵抗性に付随する諸症状（例えば、脂質異常）の改善に貢献したと考えられる。加えて、肥満マウスの肝臓や脂肪組織において高い発現にあるScd-1の発現が、ＳＭＴＰ-７投与群において低下したことは、抗肥満作用の一因と考えられる。一方、GCKの発現量は対照群（コントロール）と差異はなかった（図5）。【００８０】
一方、脂肪組織でのmRNAの発現量も測定した（図6）。糖新生に中心的な働きを果たす肝臓ではSMTP-7によって糖代謝に関係する遺伝子が発現低下する傾向が顕著に見られた一方、脂肪酸代謝などを主に行っている脂肪組織では、Scd-1とFASの遺伝子発現低下が顕著に現れる形となった。【００８１】
２．４、肥満モデルにおけるＳＭＴＰ−７の作用による肝臓の変化
図７は、内臓脂肪組織の変化を示す。脂肪細胞が肥大化すると、インスリン抵抗性を惹起する種々の物質（TNFα、脂肪酸、レジスチン）、肥満中枢を刺激して食欲を抑制するレプチン、インスリン受容体の感受性を良くするアディポネクチンの分泌低下等が起こることが知られている。ＳＭＴＰ−７投与群ではこの脂肪細胞の肥大が抑制されており、前述したように血糖値、血漿インスリンレベルも有意に低いことが示されている。
【実施例２】
【００８２】
SMTP-7(1，3，10mg/kg)の自由摂食条件下高脂肪食負荷正常マウス1ヶ月反復腹腔内投与
１、材料と実験方法
１−１、被験物質（薬剤）調製と投与：
SMTP-7・Na塩をPBS溶液（pH9.2-9.3）に溶解（0.25mg/mL、0.75 mg/mL、2.5 mg/mL）し、投与容量4mL/kgとして、1ヶ月反復腹腔内投与した。【００８３】
2010110026.tif 000023
【００８４】
１−３、方法・測定：
C57-BL/6J（雄，入荷時4週齢，ジャクソン・ラボより日本チャールズリバーを介して購入）を、2週間馴化後、高脂肪食（D12451(Research Diet)、45%fat/kcal）にて17週間飼育した。その後、体重により1群10匹の群わけを実施した。被験物質を、1日1回25-28日間、自由摂食条件下にて腹腔内投与し、投与終了翌日、非絶食下に解剖し、採血と臓器所採取を実施した。血漿の生化学的検査は、日立 小型生化学自動分析装置「7070」を用いて行った。ビークル群にはPBS溶液（pH9.2-9.3）4mL/kgを投与した。【００８５】
１−４、統計：
ビークル群と各被験物質投与群の２群間において、等分散を仮定した２標本による検定（t-検定）を実施し、危険率5%以下を有意差ありとした。また、ビークル群と被験物質投与群間のDunnett型検定も実施し、危険率5%以下を有意差ありとした。【００８６】
２、結果
結果を図８（１）〜（２５）に示す。ビークル群（自由摂取群）と比較して、SMTP-7 10 mg/kg群において有意な摂餌量と体重の低下が見られた。また、試験前後での直腸温の変化は、SMTP-7 1 mg/kg群、およびSMTP-7 3 mg/kg群において有意な差となった（有意な低下）。血糖値は、SMTP-7 3 mg/kg群、およびSMTP-7 10 mg/kg群において、ビークル群と比較して有意に低下した。アセト酢酸（ＡｃＡｃ）は、SMTP-7 10 mg/kg群において、ビークル群と比較して有意に低下した。全腹腔内脂肪量およびその体重比は、SMTP-7 10 mg/kg群において、ビークル群と比較して有意に低下した。【００８７】
３、結論
これらの結果は、SMTP-7の抗メタボリック作用が遺伝的肥満モデル（ob/obマウス）以外の正常マウスの食事性肥満モデル（高脂肪食負荷モデル）においても有効性であることを示唆するが、SMTP-7 10 mg/kg群において摂餌量の低下が見られることから、SMTP-7が摂食阻害もたらし、これが上記代謝改善に貢献したのか、あるいは、直接的にSMTP-7が代謝改善作用を示したのか明確ではない。そこで、以下の実施例３に示すように、ペアーフィード条件でSMTP-7の作用を検討した。
【実施例３】
【００８８】
SMTP-7(10mg/kg)のペアーフィード条件下高脂肪食負荷正常マウス1ヶ月反復腹腔内投与
１、材料と実験方法
１−１、被験物質（薬剤）調製と投与：
SMTP-7・Na塩をPBS溶液（pH9.2-9.3）に溶解し、終濃度2.5mg/mLとし、投与容量4mL/kgとして，腹腔内投与した。【００８９】
2010110026.tif 000024
【００９０】
１−３、方法・測定：
C57-BL/6J（雄，入荷時4週齢，ジャクソン・ラボより日本チャールズリバーを介して購入）を、2週間馴化後、高脂肪食（D12451(Research Diet)、45% fat/kcal）にて17週間飼育した。その後、体重により1群10匹の群わけを実施した。また、摂餌量を対照群と統一するためペアフィーディングを行った。すなわち、対応する対照群（ペアフィーディング群）に与える摂餌量を、前日の化合物投与群の摂餌量に合わせた。１日目にSMTP-7を１０mg/kgで腹腔内投与し、体重と２４時間の摂餌量を測定した。２日目の同じ時間にSMTP-7を投与し、同時にペアーフィード群にPBS（ｐＨ9.2-9.3）溶液を投与し、ペアーフィード群１日目とした。その際、ペアーフィード群のエサ箱には１日前にSMTP-7投与群の摂餌量と同量の飼料しか加えないようにした。飲水は，自由摂取させた。被験物質を、1日1回25-28日間、ペアーフィード条件下にて腹腔内投与し、投与終了翌日、非絶食下に解剖し、採血と臓器所採取を実施した。血漿の生化学的検査は、日立 小型生化学自動分析装置「7070」を用いて行った。【００９１】
１−４、統計：
ペアーフィード群と各被験物質投与群の２群間において、等分散を仮定した２標本による検定（t-検定）を実施し、危険率5%以下を有意差ありとした。【００９２】
２、結果
結果を図９（１）〜（１６）に示す。直腸温は，SMTP-7により有意に増加し、基礎代謝量減少の抑制が認められた。また、アセト酢酸および内臓脂肪を有意に減少させ、抗糖尿病作用が認められた。さらに，ALPを有意に減少させ，肝機能低下を抑制した。【００９３】
３、結論
これらの結果は、SMTP-7の抗メタボリック作用が遺伝的肥満モデル（ob/obマウス）以外の正常マウスの食事性肥満モデル（高脂肪食負荷モデル）においても有効であることを示している。
【実施例４】
【００９４】
SMTP-14、43Ｄ、44Ｄ、19の調製
実施例１のSMTP-7の生産の場合における、L-オルニチンの添加の代わりに、ＳＭＴＰ−１４の生産の場合はＬ−チロシン、ＳＭＴＰ−４３Ｄの生産の場合はＤ−２−フェニルグリシン、ＳＭＴＰ−４４Ｄの生産の場合は４−ヒドロキシ−Ｄ−フェニルグリシンまたはＳＭＴＰ−１９の生産の場合はｐ−アミノ安息香酸を添加して、実施例１と同様に培養することで、ＳＭＴＰ−14、ＳＭＴＰ−４３Ｄ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ、ＳＭＴＰ−１９をそれぞれ培養液中に生産させ、実施例１と同様に培養液よりＳＭＴＰ−14、ＳＭＴＰ−４３Ｄ、ＳＭＴＰ−４４Ｄ、ＳＭＴＰ−１９をそれぞれ精製した（また、特許文献４参照）。
【実施例５】
【００９５】
SMTP-7,14,19,43D,44D(10mg/kg)のペアーフィード条件下ob/obマウス1週間反復腹腔内投与
１、材料と実験方法
１−１、被験物質（薬剤）調製，投与：
SMTP-7、14、19、43D、44Dのナトリウム塩を生理食塩水に溶解し、終濃度2.5mg/mLとし、投与容量4mL/kgとして、1週間反復腹腔内投与した。【００９６】
2010110026.tif 000025
【００９７】
１−３、方法・測定：
９週齢のオスのob/obマウス（日本チャールズリバー B6.V-Lepob/J）を１週間の馴化の後、１群１０匹になるよう体重で群わけを行った。また、摂餌量を対照群と統一するためペアフィーディングを行った。すなわち、対応する対照群（ペアフィード群）に与える摂餌量を、前日の化合物投与群の摂餌量に合わせた。SMTP-7を１０mg/kgで腹腔内投与し、体重と２４時間の摂餌量を測定した。２日目の同じ時間にSMTP-7を投与し、同時に対照群に生理食塩水（ｐＨ9.2-9.3）を投与し、対照群１日目とした。その際、対照群のエサ箱には１日前にSMTP-7投与群の摂餌量と同量の飼料しか加えないようにした。同様に、ＳＭＴＰ−１４、ＳＭＴＰ−１９、ＳＭＴＰ−４３Ｄ、またはＳＭＴＰ−４４Ｄを用いた実験にも、それぞれ対応する対照群（ペアーフィード群）を設定した。飲水は、自由摂取させた。薬剤投与７日目に、最終投与より６時間後に非絶食下に解剖を行った。肝臓、腎臓、内臓脂肪および血漿を採取した。血漿の生化学的検査は、日立小型生化学自動分析装置「7070」を用いて行った。【００９８】
２、結果
結果を図１０（１）〜（１３）に示す。高脂肪食負荷により減少した直腸温は、SMTP-7の投与により有意に増加し、基礎代謝量減少の抑制が認められた。また、SMTP-7により総コレステロールおよび遊離脂肪酸を有意に減少させ、脂質低下およびインスリン抵抗性改善作用が認められた。さらに、SMTP-7は肝障害の指標であるASTおよびALPを有意に改善した。【００９９】
同様に、SMTP-14の投与により直腸温は有意に増加し、基礎代謝量減少の抑制が認められた。また、SMTP-14により総コレステロール、トリグリセリドおよび遊離脂肪酸を有意に減少させ、脂質低下およびインスリン抵抗性改善作用が認められた。さらに、SMTP-14は肝障害の指標であるALTを有意に改善した。【０１００】
SMTP-19の投与により直腸温は有意に増加し、基礎代謝量減少の抑制が認められた。また、SMTP-19により総コレステロール、トリグリセリドおよび遊離脂肪酸を有意に減少させ、脂質低下およびインスリン抵抗性改善作用が認められた。さらに、SMTP-19はAST、ALTおよびALPを有意に減少させ、肝機能低下を抑制した。【０１０１】
SMTP-43Dの投与により直腸温は有意に増加し、基礎代謝量減少の抑制が認められた。また、SMTP-43Dによりグルコース、総コレステロール、トリグリセリドおよび遊離脂肪酸を有意に減少させ、脂質低下およびインスリン抵抗性改善作用が認められた。さらに、SMTP-43DはAST、ALTおよびALPを有意に減少させ、肝機能低下を抑制した。【０１０２】
SMTP-44Dの投与により直腸温は有意に増加し、基礎代謝量減少の抑制が認められた。また、SMTP-44Dによりグルコース、総コレステロール、トリグリセリド、遊離脂肪酸および内臓脂肪量を有意に減少させ、脂質低下、インスリン抵抗性改善作用が認められた。さらに、SMTP-44DはAST、ALTおよびALPを有意に減少させ、肝機能低下を抑制した。【０１０３】
３、結論
これらの結果は、検討した誘導体（SMTP-7,14,19,43D,44D）の全てが脂質低下作用等の抗メタボリック作用を有していることを示している。すなわち、下記一般式（ＶＩＩ））：
2010110026.tif 000026
（式中、Ｒは任意の置換基を示す。）のＲ部分を除いた構造（ＳＭＴＰの基本骨格）を二つ有するＳＭＴＰ−７以外に、ＳＭＴＰの基本骨格が一つからなるＳＭＴＰ化合物群であっても、SMTPの基本骨格があれば、SMTP化合物には抗メタボリック作用があることを示唆している。
【産業上の利用可能性】
【０１０４】
本発明は、メタボリックシンドローム、肥満、高血糖症、高脂血症および脂肪肝からなる群から選択される少なくとも１つを治療および／または予防するために有用である。
【図３】
2010110026.tif 000033
【図４】
2010110026.tif 000034
【図５】
2010110026.tif 000035
【図６】
2010110026.tif 000036
【図８（１）】
2010110026.tif 000037
【図８（２）】
2010110026.tif 000038
【図８（３）】
2010110026.tif 000039
【図８（４）】
2010110026.tif 000040
【図８（５）】
2010110026.tif 000041
【図８（６）】
2010110026.tif 000042
【図８（７）】
2010110026.tif 000043
【図８（８）】
2010110026.tif 000044
【図８（９）】
2010110026.tif 000045
【図８（１０）】
2010110026.tif 000046
【図８（１１）】
2010110026.tif 000047
【図８（１２）】
2010110026.tif 000048
【図８（１３）】
2010110026.tif 000049
【図８（１４）】
2010110026.tif 000050
【図８（１５）】
2010110026.tif 000051
【図８（１６）】
2010110026.tif 000052
【図８（１７）】
2010110026.tif 000053
【図８（１８）】
2010110026.tif 000054
【図８（１９）】
2010110026.tif 000055
【図８（２０）】
2010110026.tif 000056
【図８（２１）】
2010110026.tif 000057
【図８（２２）】
2010110026.tif 000058
【図８（２３）】
2010110026.tif 000059
【図８（２４）】
2010110026.tif 000060
【図８（２５）】
2010110026.tif 000061
【図９（１）】
2010110026.tif 000062
【図９（２）】
2010110026.tif 000063
【図９（３）】
2010110026.tif 000064
【図９（４）】
2010110026.tif 000065
【図９（５）】
2010110026.tif 000066
【図９（６）】
2010110026.tif 000067
【図９（７）】
2010110026.tif 000068
【図９（８）】
2010110026.tif 000069
【図９（９）】
2010110026.tif 000070
【図９（１０）】
2010110026.tif 000071
【図９（１１）】
2010110026.tif 000072
【図９（１２）】
2010110026.tif 000073
【図９（１３）】
2010110026.tif 000074
【図９（１４）】
2010110026.tif 000075
【図９（１５）】
2010110026.tif 000076
【図９（１６）】
2010110026.tif 000077
【図１０（１）】
2010110026.tif 000078
【図１０（２）】
2010110026.tif 000079
【図１０（３−１）】
2010110026.tif 000080
【図１０（３−２）】
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【図１０（３−３）】
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【図１０（３−４）】
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【図１０（３−５）】
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【図１０（４）】
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【図１０（５）】
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【図１０（６）】
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【図１０（７）】
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【図１０（８）】
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【図１０（９）】
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【図１０（１０）】
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【図１０（１１）】
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【図１０（１２）】
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【図１０（１３）】
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【図１】
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【図２】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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