(57)【要約】  式（Ｂ）で表される化合物（ここで、Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示す）を、分子内環化することにより、式（Ｃ）で表される化合物（ここで、Ｒ１は、前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。2019044946.tif 000118
2019044946.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｂ）
【化１】
2019044946.tif 000083
で表される化合物（ここで、Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示す）を、分子内環化することにより、
式（Ｃ）
【化２】
2019044946.tif 000084
で表される化合物（ここで、Ｒ１は、前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。
【請求項２】
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
分子内環化が、式（Ｂ）で表される化合物を無水トリフルオロ酢酸と反応させることを含む方法により行われる、請求項１から４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
分子内環化が、式（Ｂ）で表される化合物を塩化チオニルと反応させることを含む方法により行われる、請求項１から４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
分子内環化が、塩化アルミニウムの存在下で行われる、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
式（Ｊ）
【化３】
2019044946.tif 000085
で表される化合物（ここで、Ｙは脱離基を示し、Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示す）を、分子内環化することにより、
式（Ｃ）
【化４】
2019044946.tif 000086
で表される化合物（ここで、Ｒ１は、前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。
【請求項１０】
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１２】
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１３】
Ｙがクロロ基である、請求項９から１２のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１４】
Ｙがトリフルオロアセトキシ基である、請求項９から１２のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１５】
分子内環化が、塩化アルミニウムの存在下で行われる、請求項１３に記載の製造方法。
【請求項１６】
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、請求項１４に記載の製造方法。
【請求項１７】
式（Ｄ）
【化５】
2019044946.tif 000087
で表される化合物（ここで、Ｘは脱離基を示し、Ｒ１は保護基で保護されたアミノ基を示す）と、３−ブテン酸を、カップリングし、
式（Ｅ）
【化６】
2019044946.tif 000088
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｅ）で表される化合物を還元し、
式（Ｂ）
【化７】
2019044946.tif 000089
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｂ）で表される化合物を分子内環化し、
式（Ｃ）
【化８】
2019044946.tif 000090
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程、
を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。
【請求項１８】
Ｘがブロモ基、ヨード基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基、又はアリールスルホニルオキシ基である、請求項１７に記載の製造方法。
【請求項１９】
Ｘがブロモ基である、請求項１７に記載の製造方法。
【請求項２０】
Ｘがヨード基である、請求項１７に記載の製造方法。
【請求項２１】
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、請求項１７から２０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２２】
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項１７から２０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２３】
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項１７から２０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２４】
式（Ｄ）で表される化合物と３−ブテン酸をカップリングし、式（Ｅ）で表される化合物へ変換する工程が、酢酸パラジウム（ＩＩ）とトリ（ｏ−トリル）ホスフィンから調製されるパラジウム錯体の存在下にて行われる、請求項１７から２３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２５】
式（Ｅ）で表される化合物を塩基性水溶液に溶解し、第一の有機溶媒により分液洗浄する工程、次いで、塩基性水溶液に酸を加え、第二の有機溶媒により式（Ｅ）で表される化合物を分液抽出する工程、を含む、請求項１７から２４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２６】
第一の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、請求項２５に記載の製造方法。
【請求項２７】
第二の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、請求項２５又は２６に記載の製造方法。
【請求項２８】
塩基性水溶液が、水酸化ナトリウム水溶液である、請求項２５から２７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２９】
式（Ｅ）で表される化合物を還元し、式（Ｂ）で表される化合物へ変換する工程が、式（Ｅ）で表される化合物を溶媒中、パラジウム炭素触媒の存在下で水素と反応させる方法により行われる、請求項１７から２８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項３０】
式（Ｂ）で表される化合物を分子内環化し、式（Ｃ）で表される化合物へ変換する工程が、式（Ｂ）で表される化合物を無水トリフルオロ酢酸と反応させることを含む方法により行われる、請求項１７から２９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項３１】
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、請求項３０に記載の製造方法。
【請求項３２】
式（Ｂ）で表される化合物を分子内環化し、式（Ｃ）で表される化合物へ変換する工程が、式（Ｂ）で表される化合物を塩化チオニルと反応させることを含む方法により行われる、請求項１７から２９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項３３】
分子内環化が、塩化アルミニウムの存在下で行われる、請求項３２に記載の製造方法。
【請求項３４】
請求項１から３３のいずれか１項に記載された方法により製造された
式（Ｃ）
【化９】
2019044946.tif 000091
で表される化合物を出発原料として使用することを特徴とし、
式（Ｃ）で表される化合物を、
式（Ｆ）
【化１０】
2019044946.tif 000092
で表される化合物（ここで、Ｒ１は請求項１から３３のいずれか１項に記載のＲ１と同意義を示し、Ｒ２は保護基で保護されたアミノ基を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｆ）で表される化合物を、
式（Ｇ）
【化１１】
2019044946.tif 000093
で表される化合物（ここで、Ｒ２は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｇ）で表される化合物と、
式（１）
【化１２】
2019044946.tif 000094
で表される化合物を縮合し、
式（Ｈ）
【化１３】
2019044946.tif 000095
で表される化合物（ここで、Ｒ２は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｈ）で表される化合物を、
式（２）
【化１４】
2019044946.tif 000096
で表される化合物へ変換する工程を含む、式（２）で表される化合物の製造方法。
【請求項３５】
Ｒ２がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、請求項３４に記載の製造方法。
【請求項３６】
Ｒ２がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項３４に記載の製造方法。
【請求項３７】
Ｒ２がアセチル基で保護されたアミノ基である、請求項３４に記載の製造方法。
【請求項３８】
式（Ｃ）で表される化合物を、式（Ｆ）で表される化合物へ変換する工程が、（ｉ）塩基の存在下で亜硝酸エステルと反応させニトロソ基を導入するステップ、次いで、（ｉｉ）ニトロソ基由来の窒素原子に保護基を導入するステップ、及び（ｉｉｉ）白金炭素触媒の存在下、水素で還元するステップ、を含む、請求項３４から３７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項３９】
式（Ｆ）で表される化合物を、式（Ｇ）で表される化合物へ変換する工程が、塩酸／エタノールを含む溶媒中で行われる、請求項３４から３８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項４０】
式（Ｇ）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（Ｈ）で表される化合物へ変換する工程が、ｏ−クレゾールを含む溶媒中で行われる、請求項３４から３９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項４１】
式（Ｈ）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程が、メタンスルホン酸を含む溶媒中で行われる、請求項３４から４０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項４２】
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩である、請求項３４から４１のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項４３】
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・ｍ水和物（ここで、ｍは０〜３個の範囲内である）である、請求項３４から４１のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項４４】
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・２水和物である、請求項３４から４１のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項４５】
式（３）
【化１５】
2019044946.tif 000097
で表される化合物を、
式（４）
【化１６】
2019044946.tif 000098
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（４）で表される化合物を、
式（５）
【化１７】
2019044946.tif 000099
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（５）で表される化合物を、
式（６）
【化１８】
2019044946.tif 000100
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（６）で表される化合物と、３−ブテン酸をカップリングし、
式（７）
【化１９】
2019044946.tif 000101
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（７）で表される化合物を、
式（８）
【化２０】
2019044946.tif 000102
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（８）で表される化合物を分子内環化し、
式（９）
【化２１】
2019044946.tif 000103
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（９）で表される化合物を、
式（１０）
【化２２】
2019044946.tif 000104
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（１０）で表される化合物を、
式（１１）
【化２３】
2019044946.tif 000105
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（１１）で表される化合物と、
式（１）
【化２４】
2019044946.tif 000106
で表される化合物を縮合し、
式（１２）
【化２５】
2019044946.tif 000107
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（１２）で表される化合物を、
式（２）
【化２６】
2019044946.tif 000108
で表される化合物へ変換する工程を含む、式（２）で表される化合物の製造方法。
【請求項４６】
式（６）で表される化合物と３−ブテン酸をカップリングし、式（７）で表される化合物へ変換する工程が、酢酸パラジウム（ＩＩ）とトリ（ｏ−トリル）ホスフィンから調製されるパラジウム錯体の存在下にて行われる、請求項４５に記載の製造方法。
【請求項４７】
式（７）で表される化合物を塩基性水溶液に溶解し、第一の有機溶媒により分液洗浄する工程、次いで、塩基性水溶液に酸を加え、第二の有機溶媒により式（７）で表される化合物を分液抽出する工程、を含む、請求項４５又は４６に記載の製造方法。
【請求項４８】
第一の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、請求項４７に記載の製造方法。
【請求項４９】
第二の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、請求項４７又は４８に記載の製造方法。
【請求項５０】
塩基性水溶液が、水酸化ナトリウム水溶液である、請求項４６から４９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５１】
式（８）で表される化合物を分子内環化し、式（９）で表される化合物へ変換する工程が、式（８）で表される化合物を無水トリフルオロ酢酸と反応させることを含む方法により行われる、請求項４５から５０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５２】
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、請求項５１に記載の製造方法。
【請求項５３】
式（９）で表される化合物を、式（１０）で表される化合物へ変換する工程が、（ｉ）塩基の存在下で亜硝酸エステルと反応させニトロソ基を導入するステップ、次いで、（ｉｉ）ニトロソ基由来の窒素原子に保護基を導入するステップ、及び（ｉｉｉ）白金炭素触媒の存在下、水素で還元するステップ、を含む、請求項４５から５２のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５４】
式（１０）で表される化合物を、式（１１）で表される化合物へ変換する工程が、塩酸／エタノールを含む溶媒中で行われる、請求項４５から５３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５５】
式（１１）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（１２）で表される化合物へ変換する工程が、ｏ−クレゾールを含む溶媒中で行われる、請求項４５から５４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５６】
式（１２）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程が、メタンスルホン酸を含む溶媒中で行われる、請求項４５から５５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５７】
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩である、請求項４５から５６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５８】
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・ｍ水和物（ここで、ｍは０〜３個の範囲内である）である、請求項４５から５６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５９】
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・２水和物である、請求項４５から５６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６０】
クロマトグラフィーを使用しないことを特徴とする、請求項１から５９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６１】
式（６）
【化２７】
2019044946.tif 000109
で表される化合物。
【請求項６２】
式（３４）
【化２８】
2019044946.tif 000110
で表される化合物。
【請求項６３】
式（７）
【化２９】
2019044946.tif 000111
で表される化合物。
【請求項６４】
式（８）
【化３０】
2019044946.tif 000112
で表される化合物。
【請求項６５】
請求項３４から６０のいずれか１項に記載された方法により製造された
式（２）
【化３１】
2019044946.tif 000113
で表される化合物を出発原料として使用することを特徴とし、
式（２）で表される化合物と、
式（１３）
【化３２】
2019044946.tif 000114
で表される化合物を縮合することにより、
式（１４）
【化３３】
2019044946.tif 000115
で表される化合物へ変換する工程、を含む、式（１４）で表される化合物の製造方法。
【請求項６６】
請求項６５に記載された方法により製造された
式（１４）
【化３４】
2019044946.tif 000116
で表される化合物を原料として使用することを特徴とし、
（ｉ）抗体を、還元する工程、次いで、
（ｉｉ）上記方法で製造された式（１４）で表される化合物を、還元された抗体と反応させる工程、
を含む、
式（１５）
【化３５】
2019044946.tif 000117
（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体−薬物コンジュゲートの製造方法。
【請求項６７】
抗体が、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＴＲＯＰ２抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、又は抗ＧＰＲ２０抗体である、請求項６６に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体−薬物コンジュゲートの構成要素であるエキサテカンの新規製造方法、及びこれを用いた抗体−薬物コンジュゲートの新規製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がん細胞表面に発現し、かつ細胞に内在化できる抗原に結合する抗体に、細胞毒性を有する薬物を結合させた抗体−薬物コンジュゲート（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；  ＡＤＣ）は、がん細胞に選択的に薬物を送達できることによって、がん細胞内に薬物を蓄積させ、がん細胞を死滅させることが期待できる（非特許文献１〜５）。【０００３】
抗体−薬物コンジュゲートの一つとして、抗体とトポイソメラーゼＩ阻害剤であるエキサテカンを構成要素とする抗体−薬物コンジュゲートが知られている（特許文献１〜８、非特許文献６、７）。これらの抗体−薬物コンジュゲートは、優れた抗腫瘍効果と安全性を有することから、現在、臨床試験が進行中である。【０００４】
エキサテカンの製造方法として、特許文献９から１１に記載された方法が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１４／０５７６８７号
【特許文献２】国際公開第２０１４／０６１２７７号
【特許文献３】国際公開第２０１５／０９８０９９号
【特許文献４】国際公開第２０１５／１１５０９１号
【特許文献５】国際公開第２０１５／１４６１３２号
【特許文献６】国際公開第２０１５／１５５９７６号
【特許文献７】国際公開第２０１５／１５５９９８号
【特許文献８】国際公開第２０１８／１３５５０１号
【特許文献９】特開平５−５９０６１号公報
【特許文献１０】特開平８−３３７５８４号公報
【特許文献１１】国際公開第９６／２６１８１号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13.
【非特許文献２】Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537.
【非特許文献３】Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452.
【非特許文献４】Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637.
【非特許文献５】Howard A. et al., J Clin Oncol 29: 398-405.
【非特許文献６】Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research (2016) 22(20), 5097-5108.
【非特許文献７】Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
エキサテカンは、式（２）【０００８】
【化１】
2019044946.tif 000003
【０００９】
で表される化合物であり、本発明にかかる抗体−薬物コンジュゲートの構成要素となる化合物である。【００１０】
エキサテカンの製造方法として、特許文献９から１１に記載された方法が知られている。かかる製造方法は、以下のように表すことができる。すなわち、式（１９）で表される化合物と無水コハク酸を反応させ式（２０）で表される化合物へ変換し、還元して式（２１）で表される化合物へ変換し、分子内環化反応により式（２２）で表される化合物へ変換し、オキシム化し式（２３）で表される化合物へ変換し、ベックマン転移により式（２４）で表される化合物へ変換し、開環反応により式（２５）で表される化合物へ変換し、アミノ基を保護し式（２６）で表される化合物へ変換し、加水分解し式（２７）で表される化合物へ変換し、分子内環化反応により式（２８）で表される化合物へ変換し、還元により式（２９）で表される化合物へ変換し、酸化により式（９）で表される化合物へ変換し、次いで、窒素原子を導入し式（１０）で表される化合物へ変換し、選択的脱保護により式（１１）で表される化合物へ変換し、式（１）で表される化合物とのＦｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ反応により式（１２）で表される化合物へ変換し、最後に、アセチル基を脱保護することにより、式（２）で表される化合物、すなわちエキサテカンを製造する方法である。しかし、この製造方法は、開環・閉環反応、酸化・還元反応を繰り返し行わなければならないため、工程数が長く、煩雑な操作が必要とされる。従って、工業的に優れた製造方法の開発が望まれている。【００１１】
【化２】
2019044946.tif 000004
【００１２】
本発明の一つの課題は、工程数が短く、工業的に優れたエキサテカンの新規製造方法を見出すことである。さらにこれを用いた抗体−薬物コンジュゲートの新規製造方法を構築することを本発明の他の一つの課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、エキサテカンの製造方法を鋭意検討した結果、工程数が短く、工業的に優れたエキサテカンの新規製造方法を見出した。さらに該製造方法によって製造されたエキサテカンを用いた抗体−薬物コンジュゲートの新規製造方法を構築した。
すなわち、本発明は、
［１］
式（Ｂ）【００１４】
【化３】
2019044946.tif 000005
【００１５】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示す）を、分子内環化することにより、
式（Ｃ）【００１６】
【化４】
2019044946.tif 000006
【００１７】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は、前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。
［２］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［１］に記載の製造方法。
［３］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［１］に記載の製造方法。
［４］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［１］に記載の製造方法。
［５］
分子内環化が、式（Ｂ）で表される化合物を無水トリフルオロ酢酸と反応させることを含む方法により行われる、［１］から［４］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６］
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、［５］に記載の製造方法。
［７］
分子内環化が、式（Ｂ）で表される化合物を塩化チオニルと反応させることを含む方法により行われる、［１］から［４］のいずれか１項に記載の製造方法。
［８］
分子内環化が、塩化アルミニウムの存在下で行われる、［７］に記載の製造方法。
［９］
式（Ｊ）【００１８】
【化５】
2019044946.tif 000007
【００１９】
で表される化合物（ここで、Ｙは脱離基を示し、Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示す）を、分子内環化することにより、
式（Ｃ）【００２０】
【化６】
2019044946.tif 000008
【００２１】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は、前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。
［１０］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［９］に記載の製造方法。
［１１］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［９］に記載の製造方法。
［１２］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［９］に記載の製造方法。
［１３］
Ｙがクロロ基である、［９］から［１２］のいずれか１項に記載の製造方法。
［１４］
Ｙがトリフルオロアセトキシ基である、［９］から［１２］のいずれか１項に記載の製造方法。
［１５］
分子内環化が、塩化アルミニウムの存在下で行われる、［１３］に記載の製造方法。
［１６］
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、［１４］に記載の製造方法。
［１７］
式（Ｄ）【００２２】
【化７】
2019044946.tif 000009
【００２３】
で表される化合物（ここで、Ｘは脱離基を示し、Ｒ１は保護基で保護されたアミノ基を示す）と、３−ブテン酸を、カップリングし、
式（Ｅ）【００２４】
【化８】
2019044946.tif 000010
【００２５】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｅ）で表される化合物を還元し、
式（Ｂ）【００２６】
【化９】
2019044946.tif 000011
【００２７】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｂ）で表される化合物を分子内環化し、
式（Ｃ）【００２８】
【化１０】
2019044946.tif 000012
【００２９】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程、
を含む、式（Ｃ）で表される化合物の製造方法。
［１８］
Ｘがブロモ基、ヨード基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基、又はアリールスルホニルオキシ基である、［１７］に記載の製造方法。
［１９］
Ｘがブロモ基である、［１７］に記載の製造方法。
［２０］
Ｘがヨード基である、［１７］に記載の製造方法。
［２１］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［１７］から［２０］のいずれか１項に記載の製造方法。
［２２］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［７］から［１０］のいずれか１項に記載の製造方法。
［２３］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［１７］から［２０］のいずれか１項に記載の製造方法。
［２４］
式（Ｄ）で表される化合物と３−ブテン酸をカップリングし、式（Ｅ）で表される化合物へ変換する工程が、酢酸パラジウム（ＩＩ）とトリ（ｏ−トリル）ホスフィンから調製されるパラジウム錯体の存在下にて行われる、［１７］から［２３］のいずれか１項に記載の製造方法。
［２５］
式（Ｅ）で表される化合物を塩基性水溶液に溶解し、第一の有機溶媒により分液洗浄する工程、次いで、塩基性水溶液に酸を加え、第二の有機溶媒により式（Ｅ）で表される化合物を分液抽出する工程、を含む、［１７］から［２４］のいずれか１項に記載の製造方法。
［２６］
第一の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、［２５］に記載の製造方法。
［２７］
第二の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、［２５］又は［２６］に記載の製造方法。
［２８］
塩基性水溶液が、水酸化ナトリウム水溶液である、［２５］から［２７］のいずれか１項に記載の製造方法。
［２９］
式（Ｅ）で表される化合物を還元し、式（Ｂ）で表される化合物へ変換する工程が、式（Ｅ）で表される化合物を溶媒中、パラジウム炭素触媒の存在下で水素と反応させる方法により行われる、［１７］から［２８］のいずれか１項に記載の製造方法。
［３０］
式（Ｂ）で表される化合物を分子内環化し、式（Ｃ）で表される化合物へ変換する工程が、式（Ｂ）で表される化合物を無水トリフルオロ酢酸と反応させることを含む方法により行われる、［１７］から［２９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［３１］
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、［３０］に記載の製造方法。
［３２］
式（Ｂ）で表される化合物を分子内環化し、式（Ｃ）で表される化合物へ変換する工程が、式（Ｂ）で表される化合物を塩化チオニルと反応させることを含む方法により行われる、［１７］から［２９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［３３］
分子内環化が、塩化アルミニウムの存在下で行われる、［３２］に記載の製造方法。
［３４］
［１］から［３３］のいずれか１項に記載された方法により製造された
式（Ｃ）【００３０】
【化１１】
2019044946.tif 000013
【００３１】
で表される化合物を出発原料として使用することを特徴とし、
式（Ｃ）で表される化合物を、
式（Ｆ）【００３２】
【化１２】
2019044946.tif 000014
【００３３】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は請求項１から３３のいずれか１項に記載のＲ１と同意義を示し、Ｒ２は保護基で保護されたアミノ基を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｆ）で表される化合物を、
式（Ｇ）【００３４】
【化１３】
2019044946.tif 000015
【００３５】
で表される化合物（ここで、Ｒ２は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｇ）で表される化合物と、
式（１）【００３６】
【化１４】
2019044946.tif 000016
【００３７】
で表される化合物を縮合し、
式（Ｈ）【００３８】
【化１５】
2019044946.tif 000017
【００３９】
で表される化合物（ここで、Ｒ２は前記と同意義を示す）へ変換する工程、次いで、式（Ｈ）で表される化合物を、
式（２）【００４０】
【化１６】
2019044946.tif 000018
【００４１】
で表される化合物へ変換する工程を含む、式（２）で表される化合物の製造方法。
［３５］
Ｒ２がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［３４］に記載の製造方法。
［３６］
Ｒ２がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［３４］に記載の製造方法。
［３７］
Ｒ２がアセチル基で保護されたアミノ基である、［３４］に記載の製造方法。
［３８］
式（Ｃ）で表される化合物を、式（Ｆ）で表される化合物へ変換する工程が、（ｉ）塩基の存在下で亜硝酸エステルと反応させニトロソ基を導入するステップ、次いで、（ｉｉ）ニトロソ基由来の窒素原子に保護基を導入するステップ、及び（ｉｉｉ）白金炭素触媒の存在下、水素で還元するステップ、を含む、［３４］から［３７］のいずれか１項に記載の製造方法。
［３９］
式（Ｆ）で表される化合物を、式（Ｇ）で表される化合物へ変換する工程が、塩酸／エタノールを含む溶媒中で行われる、［３４］から［３８］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４０］
式（Ｇ）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（Ｈ）で表される化合物へ変換する工程が、ｏ−クレゾールを含む溶媒中で行われる、［３４］から［３９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４１］
式（Ｈ）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程が、メタンスルホン酸を含む溶媒中で行われる、［３４］から［４０］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４２］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩である、［３４］から［４１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４３］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・ｍ水和物（ここで、ｍは０〜３個の範囲内である）である、［３４］から［４１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４４］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・無水物である、［３４］から［４１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４５］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・１水和物である、［３４］から［４１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４６］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・２水和物である、［３４］から［４１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４７］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・３水和物である、［３４］から［４１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［４８］
式（３）【００４２】
【化１７】
2019044946.tif 000019
【００４３】
で表される化合物を、
式（４）【００４４】
【化１８】
2019044946.tif 000020
【００４５】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（４）で表される化合物を、
式（５）【００４６】
【化１９】
2019044946.tif 000021
【００４７】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（５）で表される化合物を、
式（６）【００４８】
【化２０】
2019044946.tif 000022
【００４９】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（６）で表される化合物と、３−ブテン酸をカップリングし、
式（７）【００５０】
【化２１】
2019044946.tif 000023
【００５１】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（７）で表される化合物を、
式（８）【００５２】
【化２２】
2019044946.tif 000024
【００５３】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（８）で表される化合物を分子内環化し、
式（９）【００５４】
【化２３】
2019044946.tif 000025
【００５５】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（９）で表される化合物を、
式（１０）【００５６】
【化２４】
2019044946.tif 000026
【００５７】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（１０）で表される化合物を、
式（１１）【００５８】
【化２５】
2019044946.tif 000027
【００５９】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（１１）で表される化合物と、
式（１）【００６０】
【化２６】
2019044946.tif 000028
【００６１】
で表される化合物を縮合し、
式（１２）【００６２】
【化２７】
2019044946.tif 000029
【００６３】
で表される化合物へ変換する工程、次いで、式（１２）で表される化合物を、
式（２）【００６４】
【化２８】
2019044946.tif 000030
【００６５】
で表される化合物へ変換する工程を含む、式（２）で表される化合物の製造方法。
［４９］
式（６）で表される化合物と３−ブテン酸をカップリングし、式（７）で表される化合物へ変換する工程が、酢酸パラジウム（ＩＩ）とトリ（ｏ−トリル）ホスフィンから調製されるパラジウム錯体の存在下にて行われる、［４８］に記載の製造方法。
［５０］
式（７）で表される化合物を塩基性水溶液に溶解し、第一の有機溶媒により分液洗浄する工程、次いで、塩基性水溶液に酸を加え、第二の有機溶媒により式（７）で表される化合物を分液抽出する工程、を含む、［４８］又は［４９］に記載の製造方法。
［５１］
第一の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、［５０］に記載の製造方法。
［５２］
第二の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、［５０］又は［５１］に記載の製造方法。
［５３］
塩基性水溶液が、水酸化ナトリウム水溶液である、［５０］から［５２］のいずれか１項に記載の製造方法。
［５４］
式（８）で表される化合物を分子内環化し、式（９）で表される化合物へ変換する工程が、式（８）で表される化合物を無水トリフルオロ酢酸と反応させることを含む方法により行われる、［５０］から［５３］のいずれか１項に記載の製造方法。
［５５］
分子内環化が、トリフルオロ酢酸を含む溶媒中で行われる、［５４］に記載の製造方法。
［５６］
式（９）で表される化合物を、式（１０）で表される化合物へ変換する工程が、（ｉ）塩基の存在下で亜硝酸エステルと反応させニトロソ基を導入するステップ、次いで、（ｉｉ）ニトロソ基由来の窒素原子に保護基を導入するステップ、及び（ｉｉｉ）白金炭素触媒の存在下、水素で還元するステップ、を含む、［４８］から［５５］のいずれか１項に記載の製造方法。
［５７］
式（１０）で表される化合物を、式（１１）で表される化合物へ変換する工程が、塩酸／エタノールを含む溶媒中で行われる、［４８］から［５６］のいずれか１項に記載の製造方法。
［５８］
式（１１）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（１２）で表される化合物へ変換する工程が、ｏ−クレゾールを含む溶媒中で行われる、［４８］から［５７］のいずれか１項に記載の製造方法。
［５９］
式（１２）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程が、メタンスルホン酸を含む溶媒中で行われる、［４８］から［５８］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６０］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩である、［４８］から［５９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６１］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・ｍ水和物（ここで、ｍは０〜３個の範囲内である）である、［４８］から［５９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６２］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・無水物である、［４８］から［５９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６３］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・１水和物である、［４８］から［５９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６４］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・２水和物である、［４８］から［５９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６５］
式（２）で表される化合物が、メタンスルホン酸塩・３水和物である、［４８］から［５９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［６６］
式（Ｄ）【００６６】
【化２９】
2019044946.tif 000031
【００６７】
で表される化合物（ここで、Ｘは脱離基を示し、Ｒ１は保護基で保護されたアミノ基を示す）と、３−ブテン酸を、カップリングし、
式（Ｅ）【００６８】
【化３０】
2019044946.tif 000032
【００６９】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｅ）で表される化合物の製造方法。
［６７］
Ｘがブロモ基、ヨード基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基、又はアリールスルホニルオキシ基である、［６６］に記載の製造方法。
［６８］
Ｘがブロモ基である、［６６］に記載の製造方法。
［６９］
Ｘがヨード基である、［６６］に記載の製造方法。
［７０］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［６６］から［６９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［７１］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［６６］から［６９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［７２］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［６６］から［６９］のいずれか１項に記載の製造方法。
［７３］
酢酸パラジウム（ＩＩ）とトリ（ｏ−トリル）ホスフィンから調製されるパラジウム錯体の存在下にて行われる、［６６］から［７２］のいずれか１項に記載の製造方法。
［７４］
式（Ｅ）で表される化合物を塩基性水溶液に溶解し、第一の有機溶媒により分液洗浄する工程、次いで、塩基性水溶液に酸を加え、第二の有機溶媒により式（Ｅ）で表される化合物を分液抽出する工程、を含む、［６６］から［７３］のいずれか１項に記載の製造方法。
［７５］
第一の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、［７４］に記載の製造方法。
［７６］
第二の有機溶媒が、２−メチルテトラヒドロフランである、［７４］又は［７５］に記載の製造方法。
［７７］
塩基性水溶液が、水酸化ナトリウム水溶液である、［７４］から［７６］のいずれか１項に記載の製造方法。
［７８］
式（Ｅ）【００７０】
【化３１】
2019044946.tif 000033
【００７１】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は保護基で保護されたアミノ基を示す）を還元し、
式（Ｂ）【００７２】
【化３２】
2019044946.tif 000034
【００７３】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｂ）で表される化合物の製造方法。
［７９］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［７８］に記載の製造方法。
［８０］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［７８］に記載の製造方法。
［８１］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［７８］に記載の製造方法。
［８２］
式（Ｅ）で表される化合物を溶媒中、パラジウム炭素触媒の存在下で水素と反応させる方法により行われる、［７８］から［８１］のいずれか１項に記載の製造方法。
［８３］
式（Ｃ）【００７４】
【化３３】
2019044946.tif 000035
【００７５】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は保護基で保護されたアミノ基を示す）を、
（ｉ）塩基の存在下で亜硝酸エステルと反応させニトロソ基を導入するステップ、次いで、（ｉｉ）ニトロソ基由来の窒素原子に保護基を導入するステップ、及び（ｉｉｉ）白金炭素触媒の存在下、水素で還元するステップを含むことにより、
式（Ｆ）【００７６】
【化３４】
2019044946.tif 000036
【００７７】
で表される化合物（ここで、Ｒ１は前記と同意義を示し、Ｒ２は保護基で保護されたアミノ基を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｆ）で表される化合物の製造方法。
［８４］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［８３］に記載の製造方法。
［８５］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［８３］に記載の製造方法。
［８６］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［８３］に記載の製造方法。
［８７］
Ｒ２がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［８３］から［８６］のいずれか１項に記載の製造方法。
［８８］
Ｒ２がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［８３］から［８６］のいずれか１項に記載の製造方法。
［８９］
Ｒ２がアセチル基で保護されたアミノ基である、［８３］から［８６］のいずれか１項に記載の製造方法。
［９０］
式（Ｆ）【００７８】
【化３５】
2019044946.tif 000037
【００７９】
で表される化合物（ここで、Ｒ１及びＲ２は保護基で保護されたアミノ基を示す）を、塩酸／エタノールを含む溶媒中で、
式（Ｇ）【００８０】
【化３６】
2019044946.tif 000038
【００８１】
で表される化合物（ここで、Ｒ２は前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｇ）で表される化合物の製造方法。
［９１］
Ｒ１がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［９０］に記載の製造方法。
［９２］
Ｒ１がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［９０］に記載の製造方法。
［９３］
Ｒ１がアセチル基で保護されたアミノ基である、［９０］に記載の製造方法。
［９４］
Ｒ２がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［９０］から［９３］のいずれか１項に記載の製造方法。
［９５］
Ｒ２がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［９０］から［９３］のいずれか１項に記載の製造方法。
［９６］
Ｒ２がアセチル基で保護されたアミノ基である、［９０］から［９３］のいずれか１項に記載の製造方法。
［９７］
式（Ｇ）【００８２】
【化３７】
2019044946.tif 000039
【００８３】
で表される化合物（ここで、Ｒ２は保護基で保護されたアミノ基を示す）と、
式（１）【００８４】
【化３８】
2019044946.tif 000040
【００８５】
で表される化合物を、ｏ−クレゾールを含む溶媒中で縮合し、
式（Ｈ）【００８６】
【化３９】
2019044946.tif 000041
【００８７】
で表される化合物（ここで、Ｒ２は前記と同意義を示す）へ変換する工程を含む、式（Ｈ）で表される化合物の製造方法。
［９８］
Ｒ２がアセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基である、［９７］に記載の製造方法。
［９９］
Ｒ２がアセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基である、［９７］に記載の製造方法。
［１００］
Ｒ２がアセチル基で保護されたアミノ基である、［９７］に記載の製造方法。
［１０１］
クロマトグラフィーを使用しないことを特徴とする、［１］から［１００］のいずれか１項に記載の製造方法。
［１０２］
式（６）【００８８】
【化４０】
2019044946.tif 000042
【００８９】
で表される化合物。
［１０３］
式（３４）【００９０】
【化４１】
2019044946.tif 000043
【００９１】
で表される化合物。
［１０４］
式（７）【００９２】
【化４２】
2019044946.tif 000044
【００９３】
で表される化合物。
［１０５］
式（８）【００９４】
【化４３】
2019044946.tif 000045
【００９５】
で表される化合物。
［１０６］
［３４］から［６５］のいずれか１項に記載された方法により製造された
式（２）【００９６】
【化４４】
2019044946.tif 000046
【００９７】
で表される化合物を出発原料として使用することを特徴とし、
式（２）で表される化合物と、
式（１３）【００９８】
【化４５】
2019044946.tif 000047
【００９９】
で表される化合物を縮合することにより、
式（１４）【０１００】
【化４６】
2019044946.tif 000048
【０１０１】
で表される化合物へ変換する工程、を含む、式（１４）で表される化合物の製造方法。
［１０７］
［１０６］に記載された方法により製造された
式（１４）【０１０２】
【化４７】
2019044946.tif 000049
【０１０３】
で表される化合物を原料として使用することを特徴とし、
（ｉ）抗体を、還元する工程、次いで、
（ｉｉ）上記方法で製造された式（１４）で表される化合物を、還元された抗体と反応させる工程、
を含む、
式（１５）【０１０４】
【化４８】
2019044946.tif 000050
【０１０５】
（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体−薬物コンジュゲートの製造方法。
［１０８］
抗体が、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＴＲＯＰ２抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、又は抗ＧＰＲ２０抗体である、［１０７］に記載の製造方法。
［１０９］
抗体が、抗ＨＥＲ２抗体である、［１０８］に記載の製造方法。
［１１０］
抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号１においてアミノ酸番号１乃至４４９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２においてアミノ酸番号１乃至２１４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、［１０９］に記載の製造方法。
［１１１］
抗体−薬物コンジュゲートにおける１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が７から８個の範囲である、［１０９］又は［１１０］に記載の製造方法。
［１１２］
抗体が、抗ＨＥＲ３抗体である、［１０８］に記載の製造方法。
［１１３］
抗ＨＥＲ３抗体が、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である、［１１２］に記載の製造方法。
［１１４］
抗体−薬物コンジュゲートにおける１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が７から８個の範囲である、［１１２］又は［１１３］に記載の製造方法。
［１１５］
抗体が、抗ＴＲＯＰ２抗体である、［１０８］に記載の製造方法。
［１１６］
抗ＴＲＯＰ２抗体が、配列番号５においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号６においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である、［１１５］に記載の製造方法。
［１１７］
抗体−薬物コンジュゲートにおける１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が３から５個の範囲である、［１１５］又は［１１６］に記載の製造方法。
［１１８］
抗体が、抗Ｂ７−Ｈ３抗体である、［１０８］に記載の製造方法。
［１１９］
抗Ｂ７−Ｈ３抗体が、配列番号７においてアミノ酸番号２０乃至４７１に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８においてアミノ酸番号２１乃至２３３に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である、［１１８］に記載の製造方法。
［１２０］
抗体−薬物コンジュゲートにおける１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が３から５個の範囲である、［１１８］又は［１１９］に記載の製造方法。
［１２１］
抗体が、抗ＧＰＲ２０抗体である、［１０８］に記載の製造方法。
［１２２］
抗ＧＰＲ２０抗体が、配列番号９においてアミノ酸番号２０乃至４７２に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１０においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である、［１２１］に記載の製造方法。
［１２３］
抗体−薬物コンジュゲートにおける１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が７から８個の範囲である、［１２１］又は［１２２］に記載の製造方法。
に関する。
【発明の効果】
【０１０６】
本発明により、工程数が短く、工業的に優れたエキサテカンの新規製造方法を提供することができる。さらにこれを用いた抗体−薬物コンジュゲートの新規製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】抗ＨＥＲ２抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【図２】抗ＨＥＲ２抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【図３】抗ＨＥＲ３抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号３）を示す。
【図４】抗ＨＥＲ３抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号４）を示す。
【図５】抗ＴＲＯＰ２抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号５）を示す。
【図６】抗ＴＲＯＰ２抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号６）を示す。
【図７】抗Ｂ７−Ｈ３抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号７）を示す。
【図８】抗Ｂ７−Ｈ３抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号８）を示す。
【図９】抗ＧＰＲ２０抗体重鎖のアミノ酸配列（配列番号９）を示す。
【図１０】抗ＧＰＲ２０抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１０）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０８】
以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これによって本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【０１０９】
［抗体−薬物コンジュゲート］
【０１１０】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートは、好適には、
式（１５）
【０１１１】
【化４９】
2019044946.tif 000051
【０１１２】
（式中、Ａは抗体との結合位置を示す）
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体−薬物コンジュゲートである。
【０１１３】
本発明においては、抗体−薬物コンジュゲートのうち、リンカー及び薬物からなる部分構造を「薬物リンカー」と称する。この薬物リンカーは抗体の鎖間のジスルフィド結合部位（２箇所の重鎖−重鎖間、及び２箇所の重鎖−軽鎖間）において生じたチオール基（言い換えれば、システイン残基の硫黄原子）に結合している。
【０１１４】
本発明の薬物リンカーは、トポイソメラーゼＩ阻害剤であるエキサテカンを構成要素としている。エキサテカンは、式（２）  
【０１１５】
【化５０】
2019044946.tif 000052
【０１１６】
で表される化合物であり、抗腫瘍効果を有するカンプトテシン誘導体である。
【０１１７】
本発明において使用される抗体−薬物コンジュゲートは、
式（１６）
【０１１８】
【化５１】
2019044946.tif 000053
【０１１９】
で表されることもできる。
【０１２０】
ここで、薬物リンカーは抗体とチオエーテル結合によって結合している。また、ｎはいわゆる平均薬物結合数（ＤＡＲ；  Ｄｒｕｇ−ｔｏ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒａｔｉｏ）と同義であり、１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数を示す。
本発明で使用される抗体−薬物コンジュゲートは、がん細胞内に移行した後に、
式（１８）
【０１２１】
【化５２】
2019044946.tif 000054
【０１２２】
で表される化合物を遊離することにより、抗腫瘍効果を発揮する。
【０１２３】
式（１８）で表される化合物は、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートの抗腫瘍活性の本体であると考えられ、トポイソメラーゼＩ阻害作用を有することが確認されている（Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research, 2016, Oct 15;22(20):5097-5108, Epub 2016 Mar 29）。
【０１２４】
式（１８）で表される化合物は、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートのリンカー部分が切断されることにより生じると考えられる、
式（１７）
【０１２５】
【化５３】
2019044946.tif 000055
【０１２６】
で表される化合物のアミナール構造が分解することにより生じると考えられる。
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートは、バイスタンダー効果を有することも知られている(Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046)。
このバイスタンダー効果は、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートが、標的発現がん細胞に内在化した後、遊離された式（１８）で表される化合物が、標的を発現していない近傍のがん細胞に対しても抗腫瘍効果を及ぼすことにより発揮される。
【０１２７】
［エキサテカンの製造］
本発明のエキサテカンの製造は、下記の方法に従って行うことができる。
【０１２８】
【化５４】
2019044946.tif 000056
【０１２９】
［式中、Ｘは脱離基を示し、好適には、ブロモ基、ヨード基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基、又はアリールスルホニルオキシ基を示し、より好適には、ブロモ基又はヨード基を示し、更により好適には、ブロモ基を示す；Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示し、好適には、アセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基を示し、より好適には、アセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基を示し、更により好適には、アセチル基で保護されたアミノ基を示す；Ｒ２は、保護されたアミノ基を示し、好適には、アセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基を示し、より好適には、アセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基を示し、更により好適には、アセチル基で保護されたアミノ基を示す。］
【０１３０】
工程１：
本工程は、式（Ｄ）で表される化合物を、３−ブテン酸とカップリングすることにより、式（Ｅ）で表される化合物へ変換する工程である。式（Ｄ）で表される化合物は、公知の方法を参考に製造することができる。本工程に用いられる３−ブテン酸の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｄ）で表される化合物に対して、１〜１．５当量である。
【０１３１】
カップリング反応は、遷移金属触媒の存在下で行うことができ、好適には、パラジウム触媒の存在下で行うことができる。本工程に用いられるパラジウム触媒は、反応が進行するものであれば特に限定されないが、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、トリフルオロ酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、臭化パラジウム（ＩＩ）、ヨウ化パラジウム（ＩＩ）、塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）などの２価のパラジウム塩及びその錯体や、パラジウムブラック、パラジウムカーボン、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）などの０価パラジウム金属及びその錯体などを用いることができ、好適には、酢酸パラジウム（ＩＩ）を用いることができる。本工程に用いられるパラジウム触媒の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｄ）で表される化合物に対して、０．００３〜０．０３当量である。
【０１３２】
さらに、本工程は、好適には、上記パラジウム触媒の他に、反応系内でパラジウム錯体とするための配位子を用いることができる。本工程に用いることができる配位子としては、例えば、トリフェニルホスフィン、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン、トリ（３−メトキシフェニル）ホスフィン、トリ（４−クロロフェニル）ホスフィン、トリ（２−フリル）ホスフィン、トリ（２−チエニル）ホスフィン、１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン、及びＢｕｃｈｗａｌｄリガンド（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’ −ジメトキシビフェニル（ＳＰｈｏｓ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’ ，６’ −トリイソプロピルビフェニル（ＸＰｈｏｓ）等）を用いることができ、好適には、トリ（ｏ−トリル）ホスフィンを用いることができる。本工程に用いられる配位子の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｄ）で表される化合物に対して、０．００６〜０．０６当量である。
【０１３３】
本工程は、好適には塩基の存在下で行うことができる。本工程に用いられる塩基としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルピペリジン、ピリジン、２−メチルピリジン、２，６−ジメチルピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン、及び１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ウンデク−７−エン等の有機塩基や、炭酸カリウム、水酸化カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、及びカリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド等の無機塩基を挙げることができ、好適には、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、炭酸カリウム、水酸化カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び酢酸カリウムを挙げることができ、より好適には、ジイソプロピルエチルアミンを挙げることができる。本工程に用いられる塩基の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｄ）で表される化合物に対して、２〜３当量である。
【０１３４】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を用いることができ、好適には、テトラヒドロフランを挙げることができる。
【０１３５】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、４５〜８５℃であり、より好適には、テトラヒドロフランの加熱還流下となる温度である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２．５〜１０時間である。
【０１３６】
式（Ｅ）で表される化合物は、式（Ｅ）で表される化合物を塩基性水溶液に溶解し、第一の有機溶媒により分液洗浄する工程、次いで、塩基性水溶液に酸を加え、第二の有機溶媒により式（Ｅ）で表される化合物を分液抽出する工程、を行うことにより、好適に精製することができる。第一の有機溶媒は、好適には、２−メチルテトラヒドロフランである。第二の有機溶媒は、好適には、２−メチルテトラヒドロフランである。塩基性水溶液は、好適には水酸化ナトリウム水溶液である。
【０１３７】
なお、式（Ｅ）で表される化合物には幾何異性体として、Ｅ体とＺ体が存在するが、いずれも式（Ｅ）で表される化合物に包含されており、本発明の範囲に含まれる。本発明の式（Ｅ）で表される化合物は、Ｅ体とＺ体の混合物であっても良く、混合物のまま次の工程に用いることができる。
【０１３８】
また、本工程は、３−ブテン酸の代わりに３−ブテン酸エステルを用いることもできる。かかる場合、式（Ｄ）で表される化合物と３−ブテン酸エステルとのカップリングにより得られた生成物を加水分解することにより、式（Ｅ）で表される化合物へ変換することができる。
【０１３９】
工程２：
本工程は、式（Ｅ）で表される化合物を、還元することにより、式（Ｂ）で表される化合物へ変換する工程である。
【０１４０】
本工程の還元は、反応が進行する限り方法は制限されないが、好適には、水素雰囲気下（好適には、０．０５〜０．６ＭＰａの水素気流下）で、パラジウム触媒、白金触媒、ニッケル触媒、ルテニウム触媒、又はロジウム触媒を用いて行うことができ、より好適には、パラジウム触媒を用いて行うことができ、更により好適には、パラジウム炭素を用いて行うことができ、更により好適には、５％パラジウム炭素を用いて行うことができる。本工程に用いられる５％パラジウム炭素の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程１で用いる式（Ｄ）で表される化合物に対して、５〜８０重量％である。
【０１４１】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、２−メチルテトラヒドロフランを挙げることができる。
【０１４２】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２０〜６０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、０．５〜２時間である。
【０１４３】
工程３：
本工程は、式（Ｂ）で表される化合物を、分子内環化することにより、式（Ｃ）で表される化合物へ変換する工程である。分子内環化は、好適には分子内Ｆｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓアシル化反応により、行うことができる。本工程における分子内Ｆｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓアシル化反応としては、反応が進行する限り方法は制限されないが、好適には、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法、又は、塩化チオニル、塩化スルフリル、塩化オキサリル、オキシ塩化リン、三塩化リン若しくは五塩化リンを用いる方法を挙げることができ、より好適には、無水トリフルオロ酢酸、又は塩化チオニルを用いる方法を挙げることができ、更により好適には、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法を挙げることができる。本工程で用いられる無水トリフルオロ酢酸の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｂ）で表される化合物に対して、１〜３当量である。本工程で用いられる塩化チオニルの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｂ）で表される化合物に対して、１〜３当量である。
【０１４４】
無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、本工程は、好適には、酸の存在下にて行われ、より好適には、トリフルオロ酢酸の存在下にて行われる。塩化チオニル、塩化スルフリル、塩化オキサリル、オキシ塩化リン、三塩化リン若しくは五塩化リンを用いる方法の場合は、本工程は、好適には、塩化アルミニウムの存在下にて行われる。本工程で用いられる塩化アルミニウムの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｂ）で表される化合物に対して、１〜５当量である。
【０１４５】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、及びクロロベンゼン、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、塩化メチレンを挙げることができる。なお、トリフルオロ酢酸を用いる場合は、好適には、トリフルオロ酢酸を溶媒として含むことができる。
【０１４６】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、好適には、−１０℃〜２０℃であり、塩化チオニルを用いる方法の場合、好適には、１０℃〜４０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り方法は制限されないが、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、好適には、２時間〜８時間であり、塩化チオニルを用いる方法の場合、好適には、１時間〜４時間である。
【０１４７】
なお、本工程は、以下の２段階の工程に分けて行うこともできる。
【０１４８】
【化５５】
2019044946.tif 000057
【０１４９】
［式中、Ｙは脱離基を示し、好適には、クロロ基、ブロモ基、ヨード基、フルオロ基、又はトリフルオロアセトキシ基を示し、より好適には、クロロ基、又はトリフルオロアセトキシ基を示す；Ｒ１は、保護基で保護されたアミノ基を示し、好適には、アセチル基、メトキシアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、ピバロイル基、ホルミル基、又はベンゾイル基で保護されたアミノ基を示し、より好適には、アセチル基又はトリフルオロアセチル基で保護されたアミノ基を示し、更により好適には、アセチル基で保護されたアミノ基を示す。］
【０１５０】
工程３Ａは、式（Ｂ）で表される化合物を、式（Ｊ）で表される化合物へ変換する工程である。
【０１５１】
Ｙがクロロ基の場合、好適には、塩化チオニル、塩化スルフリル、塩化オキサリル、オキシ塩化リン、三塩化リン若しくは五塩化リンを用いる方法により本工程を行うことができ、より好適には、塩化チオニルを用いる方法により本工程を行うことができる。本工程で用いられる塩化チオニルの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｂ）で表される化合物に対して、１〜３当量である。Ｙがトリフルオロアセトキシ基の場合、好適には、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法により本工程を行うことができる。本工程で用いられる無水トリフルオロ酢酸の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｂ）で表される化合物に対して、１〜３当量である。本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、及びトリフルオロ酢酸、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、塩化チオニルを用いる方法の場合、好適には、塩化メチレンを挙げることができ、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、好適には、トリフルオロ酢酸を挙げることができる。
【０１５２】
工程３Ｂは、式（Ｊ）で表される化合物を、式（Ｃ）で表される化合物へ変換する工程である。塩化チオニルを用いる方法の場合、好適には、塩化アルミニウムの存在下にて本工程を行うことができる。本工程で用いられる塩化アルミニウムの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｂ）で表される化合物に対して、１〜５当量である。無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、好適には、酸の存在下にて本工程を行うことができ、より好適には、トリフルオロ酢酸の存在下にて本工程を行うことができる。
【０１５３】
工程３Ａ及び工程３Ｂの反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、塩化チオニルを用いる方法の場合、好適には、１０℃〜４０℃であり、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、好適には、−１０℃〜２０℃である。工程３Ａと工程３Ｂを合計した反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、塩化チオニルを用いる方法の場合、好適には、１時間〜４時間であり、無水トリフルオロ酢酸を用いる方法の場合、好適には、２時間〜８時間である。
【０１５４】
工程４：
本工程は、式（Ｃ）で表される化合物を式（Ｆ）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、好適には（ｉ）カルボニル基のα位をニトロソ化（又はオキシム化）するステップ、（ｉｉ）ニトロソ基（又はオキシム基）由来の窒素原子に保護基を導入するステップ、（ｉｉｉ）還元するステップ、により行うことができる。（ｉｉ）と（ｉｉｉ）は順序を入れ替えても良いし、同時に行っても良い。
【０１５５】
（ｉ）のステップで用いられるニトロソ化剤（又はオキシム化剤）は、式（Ｃ）で表される化合物のカルボニル基のα位をニトロソ化（又はオキシム化）できるものであれば特に限定はないが、好適には、亜硝酸エステルを用いることができ、より好適には、亜硝酸アミル、亜硝酸ｎ−ブチル、又は亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチルを用いることができ、更により好適には、亜硝酸アミルを用いることができる。（ｉ）のステップで用いられる亜硝酸アミルの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｃ）で表される化合物に対して、１〜１．６当量である。
【０１５６】
（ｉ）のステップは好適には塩基を用いる。（ｉ）のステップで用いられる塩基としては、式（Ｃ）で表される化合物のカルボニル基のα位のニトロソ化（又はオキシム化）に適用できるものであれば特に制限はないが、好適には、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドを用いることができる。（ｉ）のステップで用いられるカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｃ）で表される化合物に対して、１〜１．５当量である。
【０１５７】
（ｉ）のステップに用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、及びジメチルスルホキシド、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、テトラヒドロフランを挙げることができる。
【０１５８】
（ｉ）のステップの反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、−１０〜２０℃である。本ステップの反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、１．５〜３０時間である。
（ｉｉ）のステップは、Ｒ２におけるアミノ基の保護基の種類に応じて適宜反応条件を設定することができる。Ｒ２がアセチル基で保護されたアミノ基である場合には、（ｉｉ）のステップは、好適には、酢酸中、無水酢酸を用いることができる。
【０１５９】
（ｉｉｉ）のステップは、水素雰囲気下（好適には、０．１５〜１．２ＭＰａの水素気流下）にて、例えば、白金炭素触媒を用いて行うことができるし、亜鉛粉末を用いて行うこともできるが、好適には、白金炭素触媒を用いて行うことができ、より好適には、２％又は５％白金炭素触媒を用いて行うことができる。２％又は５％白金炭素触媒の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｃ）で表される化合物に対して、５〜６０重量％である。（ｉｉｉ）のステップは、（ｉｉ）のステップで用いる溶媒を用いることができる。
（ｉｉ）のステップと（ｉｉｉ）のステップの反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、０〜４０℃である。（ｉｉ）のステップと（ｉｉｉ）のステップの合計した反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２〜８時間である。
【０１６０】
工程５：
本工程は、式（Ｆ）で表される化合物の芳香族アミノ基の保護基を選択的に脱保護し、式（Ｇ）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、Ｒ１及びＲ２におけるアミノ基の保護基の種類に応じて適宜反応条件を設定することができる。Ｒ１及びＲ２がアセチル基で保護されたアミノ基である場合には、本工程は、好適には塩酸を用いて行うことができ、より好適には、２Ｎ塩酸／エタノールを用いて行うことができる。
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、４０〜６０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２〜１４時間である。
【０１６１】
工程６：
本工程は、式（Ｇ）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（Ｈ）で表される化合物へ変換する工程である。式（１）で表される化合物は、米国特許第４７７８８９１号等の記載を参考に製造することができるし、市販のものを用いることもできる。本工程で用いられる式（１）で表される化合物の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｇ）で表される化合物に対して、０．８〜１．２当量である。
【０１６２】
本工程は酸触媒の存在下にて行われる。本工程に用いる酸触媒としては、好適には、ピリジニウム  ｐ−トルエンスルホナートを挙げることができる。本工程に用いる酸触媒は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（Ｇ）で表される化合物に対して、０．０３〜０．３当量である。
【０１６３】
本工程は、好適には、クレゾール又はフェノールを含む溶媒中にて行われ、より好適には、ｏ−クレゾールを含むトルエン中にて行われる。ｏ−クレゾール又はフェノールが存在することにより、式（Ｈ）で表される化合物の析出様相が改善され、収率向上、反応時間短縮等の効果が見られるためである。
【０１６４】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、９０〜１３０℃であり、より好適には、トルエンの加熱還流下となる温度である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、１６〜６４時間である。
【０１６５】
なお、本工程は、反応中間体として、式（Ｋ）で表される化合物及び式（Ｌ）で表される化合物を経由すると考えられる。
【０１６６】
【化５６】
2019044946.tif 000058
【０１６７】
工程７：
本工程は、式（Ｈ）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程である。式（２）で表される化合物は、塩であってもよく、さらに水和物であってもよく、いずれも本発明における「式（２）で表される化合物」の範囲に含まれる。
本工程は、好適には酸の存在下で行うことができ、より好適にはメタンスルホン酸及び水の存在下で行うことができる。
【０１６８】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はないが、好適には２−メトキシエタノール、及びエチルシクロヘキサンを含む溶媒を用いることができ、更に上記の酸を溶媒として含めた場合、より好適には、メタンスルホン酸、水、２−メトキシエタノール、及びエチルシクロヘキサンの混合溶媒を用いることができる。
【０１６９】
本工程は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、８０〜１６０℃で行うことができ、より好適には、メタンスルホン酸、水、２−メトキシエタノール、及びエチルシクロヘキサンの混合溶媒の加熱還流下となる温度にて行うことができる。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、４〜１６時間である。
【０１７０】
式（２）で表される化合物は、好適にはメタンスルホン酸塩として取得することができ、より好適にはメタンスルホン酸塩・ｍ水和物（ここで、ｍは０〜３である）として取得することができ、更により好適には、メタンスルホン酸塩・無水物、メタンスルホン酸塩・１水和物、メタンスルホン酸塩・２水和物、又はメタンスルホン酸塩・３水和物として取得することができ、更により好適には、メタンスルホン酸塩・２水和物として取得することができるが、いずれも本発明の製造方法に使用することができる。上記の水和物数は、結晶取得・乾燥時の湿度を調整することにより、コントロールすることができる。
式（２）で表される化合物は、より好適には、下記の方法に従って製造することができる。
【０１７１】
【化５７】
2019044946.tif 000059
【０１７２】
工程８：
本工程は、式（３）で表される化合物をブロモ化し、式（４）で表される化合物へ変換する工程である。式（３）で表される化合物は、公知の方法により製造したもの又は市販のものを用いることができる。
【０１７３】
本工程に用いられるブロモ化剤としては、反応が進行する限り制限されないが、例えば、臭素やＮ−ブロモスクシンイミドを挙げることができ、好適にはＮ−ブロモスクシンイミドを挙げることができる。本工程に用いられるＮ−ブロモスクシンイミドの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（３）で表される化合物に対して、１〜１．５当量である。本工程は好適には硫酸とその他の溶媒の混合溶媒中にて行うことができる。
【０１７４】
その他の溶媒は、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、又はこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、ヘプタンを挙げることができる。
【０１７５】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、５０〜７０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、０．５〜２時間である。
【０１７６】
工程９：
本工程は、式（４）で表される化合物のニトロ基をアミノ基へ還元し、式（５）で表される化合物へ変換する工程である。本工程に用いられる還元剤は、脱ブロモ化が進行せずに、ニトロ基のみを選択的に還元できるものであればよく、好適には、水素存在下（好適には、０．０５〜０．２ＭＰａの水素気流下）にて白金炭素触媒を用いることができ、より好適には、１％白金炭素触媒を用いることができる。本工程に用いられる白金炭素触媒の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程８で用いる式（３）で表される化合物に対して、５〜４０重量％である。本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はないが、例えば、メタノール、エタノール、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には酢酸エチルを挙げることができる。本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、５０〜７０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２〜８時間である。
【０１７７】
工程１０：
本工程は、式（５）で表される化合物のアミノ基をアセチル化し、式（６）で表される化合物へ変換する工程である。本工程に用いられるアセチル化剤は、例えば、無水酢酸や塩化アセチルを挙げることができ、好適には、無水酢酸を挙げることができる。本工程に用いられる無水酢酸の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程８で用いる式（３）で表される化合物に対して、０．５〜１当量である。本工程は好適には塩基を用いることができる。該塩基としては、反応が進行する限り制限されないが、好適には、トリエチルアミンである。該塩基の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程８で用いる式（３）で表される化合物に対して、０．７５〜１．５当量である。本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はないが、例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には酢酸エチルを挙げることができる。本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、１０〜４０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、３〜１２時間である。
【０１７８】
工程１１：
本工程は、式（６）で表される化合物を、３−ブテン酸とカップリングすることにより、式（７）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程１に記載の方法と同様に行うことができる。
なお、式（７）で表される化合物には幾何異性体として、Ｅ体とＺ体が存在するが、いずれも式（７）で表される化合物に包含されており、本発明の範囲に含まれる。本発明の式（７）で表される化合物は、Ｅ体とＺ体の混合物であっても良く、混合物のまま次の工程に用いることができる。
【０１７９】
工程１２：
本工程は、式（７）で表される化合物を、還元することにより、式（８）で表される化合物へ変換する工程である。
【０１８０】
本工程の還元は、反応が進行する限り方法は制限されないが、好適には、水素雰囲気下（好適には、０．０５〜０．２ＭＰａの水素気流下）で、パラジウム触媒、白金触媒、ニッケル触媒、ルテニウム触媒、又はロジウム触媒を用いて行うことができ、より好適には、パラジウム触媒を用いて行うことができ、更により好適には、パラジウム炭素を用いて行うことができ、更により好適には、５％パラジウム炭素を用いることができる。本工程に用いられる５％パラジウム炭素の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程１１で用いる式（７）で表される化合物に対して、５〜４０重量％である。
【０１８１】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、２−メチルテトラヒドロフランを挙げることができる。
【０１８２】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２０〜６０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、０．５〜２時間である。
【０１８３】
工程１３：
本工程は、式（８）で表される化合物を、分子内環化することにより、式（９）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程３に記載の方法と同様に行うことができる。
【０１８４】
工程１４：
本工程は、式（９）で表される化合物を式（１０）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程４に記載の方法と同様に行うことができる。
【０１８５】
工程１５：
本工程は、式（１０）で表される化合物の芳香族アミノ基の保護基を選択的に脱保護し、式（１１）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程５に記載の方法と同様に行うことができる。
【０１８６】
工程１６：
本工程は、式（１１）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（１２）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程６に記載の方法と同様に行うことができる。
なお、本工程は、反応中間体として、式（３０）で表される化合物及び／又は式（３１）で表される化合物を経由すると考えられる。
【０１８７】
【化５８】
2019044946.tif 000060
【０１８８】
工程１７：
本工程は、式（１２）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程７に記載の方法と同様に行うことができる。
式（２）で表される化合物は、下記の方法に従って製造することもできる。
【０１８９】
【化５９】
2019044946.tif 000061
【０１９０】
工程１８：
本工程は、式（３）で表される化合物をヨード化し、式（３２）で表される化合物へ変換する工程である。式（３）で表される化合物は、公知の方法により製造したもの又は市販のものを用いることができる。
本工程に用いられるヨード化剤としては、反応が進行する限り制限されないが、例えば、よう素やＮ−ヨードスクシンイミドを挙げることができ、好適にはＮ−ヨードスクシンイミドを挙げることができる。本工程に用いられるＮ−ヨードスクシンイミドの量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、式（３）で表される化合物に対して、１〜２当量である。本工程は好適には硫酸とその他の溶媒の混合溶媒中にて行うことができる。
【０１９１】
その他の溶媒は、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、又はこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、ヘプタンを挙げることができる。
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、−１０〜１０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、１〜４時間である。
【０１９２】
工程１９：
本工程は、式（３２）で表される化合物のニトロ基をアミノ基へ還元し、式（３３）で表される化合物へ変換する工程である。本工程に用いられる還元剤は、脱ヨード化が進行せずに、ニトロ基のみを選択的に還元できるものであればよく、好適には、水素存在下（好適には、０．０５〜０．２ＭＰａの水素気流下）にて白金炭素触媒を用いることができる。本工程に用いられる白金炭素触媒の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程１８で用いる式（３）で表される化合物に対して、５〜４０重量％である。本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はないが、例えば、メタノール、エタノール、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には酢酸エチルを挙げることができる。本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、５０〜７０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２〜８時間である。
【０１９３】
工程２０：
本工程は、式（３３）で表される化合物のアミノ基をアセチル化し、式（３４）で表される化合物へ変換する工程である。本工程に用いられるアセチル化剤は、例えば、無水酢酸や塩化アセチルを挙げることができ、好適には、無水酢酸を挙げることができる。本工程に用いられる無水酢酸の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程１８で用いる式（３）で表される化合物に対して、０．５〜１当量である。本工程は好適には塩基を用いることができる。該塩基としては、反応が進行する限り制限されないが、好適には、トリエチルアミンである。該塩基の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程１８で用いる式（３）で表される化合物に対して、０．７５〜１．５当量である。本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はないが、例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には酢酸エチルを挙げることができる。本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、１０〜４０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、３〜１２時間である。
【０１９４】
工程２１：
本工程は、式（３４）で表される化合物を、３−ブテン酸とカップリングすることにより、式（７）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程１に記載の方法と同様に行うことができる。
【０１９５】
工程２２：
本工程は、式（７）で表される化合物を、還元することにより、式（８）で表される化合物へ変換する工程である。
【０１９６】
本工程は、工程１２と同様な方法で行うことができるが、残存するヨウ化物イオンにより触媒活性が低下する可能性があるため、工程１２よりも高い触媒量及び水素圧にて行うことが好ましい。
【０１９７】
本工程の還元は、反応が進行する限り方法は制限されないが、好適には、水素雰囲気下（好適には、０．１５〜０．６ＭＰａの水素気流下）で、パラジウム触媒、白金触媒、ニッケル触媒、ルテニウム触媒、又はロジウム触媒を用いて行うことができ、より好適には、パラジウム触媒を用いて行うことができ、更により好適には、パラジウム炭素を用いて行うことができ、更により好適には、５％パラジウム炭素を用いることができる。本工程に用いられる５％パラジウム炭素の量は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、工程２１で用いる式（３４）で表される化合物に対して、２０〜１６０重量％である。
【０１９８】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、２−メチルテトラヒドロフランを挙げることができる。
【０１９９】
本工程の反応温度は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、２０〜６０℃である。本工程の反応時間は、反応が進行する限り制限されないが、好適には、４〜１６時間である。
【０２００】
工程２３：
本工程は、式（８）で表される化合物を、分子内環化することにより、式（９）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程３に記載の方法と同様に行うことができる。
【０２０１】
工程２４：
本工程は、式（９）で表される化合物を式（１０）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程４に記載の方法と同様に行うことができる。
【０２０２】
工程２５：
本工程は、式（１０）で表される化合物の芳香族アミノ基の保護基を選択的に脱保護し、式（１１）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程５に記載の方法と同様に行うことができる。
【０２０３】
工程２６：
本工程は、式（１１）で表される化合物と、式（１）で表される化合物を縮合し、式（１２）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程１６に記載の方法と同様に行うことができる。
【０２０４】
工程２７：
本工程は、式（１２）で表される化合物を、式（２）で表される化合物へ変換する工程である。本工程は、工程７に記載の方法と同様に行うことができる。
上記の各工程の反応において、反応終了後、各工程の目的化合物は、有機化学の分野で周知の方法に従って、反応混合物から単離され得る。目的化合物は、例えば、（ｉ）必要に応じて触媒等の不溶物を濾去し、（ｉｉ）反応混合物に水及び水と混和しない溶媒（例えば、塩化メチレン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、又は２−メチルテトラヒドロフラン等）を加えて目的化合物を抽出し、（ｉｉｉ）有機層を水洗して、無水硫酸マグネシウム等の乾燥剤を用いて乾燥させ、（ｉｖ）溶媒を留去することによって得られる。得られた目的化合物は、必要に応じ、有機化学の分野で周知の方法（例えば、再結晶、再沈殿、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、又は高速液体クロマトグラフィー等）により、さらに精製することができるが、本発明の製造方法は、好適には、クロマトグラフィーを使用せずに行うことができる。
【０２０５】
本発明の製造方法により得られた式（２）で表される化合物は、好適には、式（１５）
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体−薬物コンジュゲートの製造のために使用することができるが、これに限定されず、他の化学構造を有する抗体−薬物コンジュゲートの製造や、その他の用途のために使用することもできる。
【０２０６】
［薬物リンカー中間体の製造］
【０２０７】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に、好適に使用される薬物リンカー中間体は、式（１４）で表される化合物である。
【０２０８】
【化６０】
2019044946.tif 000062
【０２０９】
式（１４）で表される化合物は、以下のように製造することができる。
【０２１０】
【化６１】
2019044946.tif 000063
【０２１１】
式（２）で表される化合物は、本発明の製造方法により、製造したものを用いることができる。式（１３）で表される化合物は、国際公開第２０１４／０５７６８７号、国際公開第２０１５／０９８０９９号、国際公開第２０１５／１１５０９１号、国際公開第２０１５／１５５９９８号等の記載を参考に製造することができる。
【０２１２】
式（１４）で表される化合物への変換は、式（１３）で表される化合物を、活性エステル、混合酸無水物、又は酸ハロゲン化物等に誘導し、好適には塩基の存在下、式（２）で表される化合物と反応させることにより、行うことができる。
【０２１３】
活性エステルは、例えば、式（１３）で表される化合物を、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、又は１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩（ＷＳＣＤ・ＨＣｌ）等の縮合剤を用いて、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、又はｐ−ニトロフェノール等の添加剤と反応させることにより製造することができる。また、活性エステルは、式（１３）で表される化合物を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩ペンタフルオロフェニルトリフルオロアセテート（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩（ＨＢＴＵ）、シアノホスホン酸ジエチル、又は４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（ＤＭＴＭＭ）等の縮合剤と反応させることにより製造することもできる。
【０２１４】
混合酸無水物は、例えば、式（１３）で表される化合物を、必要に応じて塩基の存在下、クロロ炭酸イソブチルと反応させることにより製造することができる。
【０２１５】
酸ハロゲン化物は、必要に応じて塩基の存在下、塩化チオニル、又はオキザリルクロリド等の酸ハロゲン化物で処理することにより製造することができる。
【０２１６】
本工程に用いられる塩基としては、反応が進行する限り特に制限は無いが、例えば、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルピペリジン、ピリジン、２−メチルピリジン、２，６−ジメチルピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ウンデク−７−エン等の有機塩基や、炭酸カリウム、水酸化カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド等の無機塩基を挙げることができ、好適には、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、炭酸カリウム、水酸化カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウムを挙げることができ、より好適には、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、又はＮ−メチルモルホリンを挙げることができる。
【０２１７】
本工程に用いられる溶媒としては、反応を阻害するものでなければ特に限定はされないが、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼン、アセトン、２−ブタノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができ、好適には、アセトニトリル、ジクロロメタン、メタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、及び水、並びにこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【０２１８】
［抗体の製造］
【０２１９】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、いずれの種に由来してもよいが、好適には、ヒト、ラット、マウス、及びウサギに由来する抗体である。抗体がヒト以外の種に由来する場合は、周知の技術を用いて、キメラ化又はヒト化することが好ましい。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。
【０２２０】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、好適にはがん細胞を標的にできる性質を有するものであり、がん細胞を認識できる特性、がん細胞に結合できる特性、がん細胞内に取り込まれて内在化する特性、及び／又はがん細胞に対する殺細胞活性等を備えているものが好ましい。
【０２２１】
抗体のがん細胞への結合性は、フローサイトメトリーを用いて確認できる。がん細胞内への抗体の取り込みは、（１）治療抗体に結合する二次抗体（蛍光標識）を用いて細胞内に取り込まれた抗体を蛍光顕微鏡で可視化するアッセイ（Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761）、（２）治療抗体に結合する二次抗体（蛍光標識）を用いて細胞内に取り込まれた蛍光量を測定するアッセイ（Molecular Biology of the Cell Vol. 15, 5268-5282, December 2004）、又は（３）治療抗体に結合するイムノトキシンを用いて、細胞内に取り込まれると毒素が放出されて細胞増殖が抑制されるというＭａｂ−ＺＡＰアッセイ（Bio Techniques 28:162-165, January 2000）を用いて確認できる。イムノトキシンとしては、ジフテテリア毒素の触媒領域とプロテインＧとのリコンビナント複合蛋白質も使用可能である。
【０２２２】
抗体の抗腫瘍活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、細胞の増殖の抑制活性を測定することで確認できる。例えば、抗体の標的蛋白質を過剰発現しているがん細胞株を培養し、培養系に種々の濃度で抗体を添加し、フォーカス形成、コロニー形成及びスフェロイド増殖に対する抑制活性を測定することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、例えば、標的蛋白質を高発現しているがん細胞株を移植したヌードマウスに抗体を投与し、がん細胞の変化を測定することによって、抗腫瘍活性を確認できる。
【０２２３】
抗体自体が抗腫瘍効果を有することは、好ましいが、抗体−薬物コンジュゲートは抗腫瘍効果を発揮する化合物を結合させてあるので、抗体自体の抗腫瘍効果は必須ではない。抗腫瘍性化合物の細胞障害性をがん細胞において特異的・選択的に発揮させる目的からは、抗体が内在化してがん細胞内に移行する性質のあることが重要であり、好ましい。
【０２２４】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、公知の手段によって取得することができる。例えば、この分野で通常実施される方法を用いて、抗原となるポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができる。抗原の由来はヒトに限定されず、マウス、ラット等のヒト以外の動物に由来する抗原を動物に免疫することもできる。この場合には、取得された異種抗原に結合する抗体とヒト抗原との交差性を試験することによって、ヒトの疾患に適用可能な抗体を選別できる。
【０２２５】
また、公知の方法（例えば、Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497;Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N.Y.(1980)）に従って、抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させることによってハイブリドーマを樹立し、モノクローナル抗体を得ることもできる。
【０２２６】
なお、抗原は抗原蛋白質をコードする遺伝子を遺伝子操作によって宿主細胞に産生させることによって得ることができる。具体的には、抗原遺伝子を発現可能なベクターを作製し、これを宿主細胞に導入して該遺伝子を発現させ、発現した抗原を精製すればよい。上記の遺伝子操作による抗原発現細胞、或は抗原を発現している細胞株、を動物に免疫する方法を用いることによっても抗体を取得できる。
【０２２７】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、ヒト化（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）抗体であることが好ましく、又はヒト由来の抗体の遺伝子配列のみを有する抗体、すなわちヒト抗体であることが好ましい。これらの抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。
【０２２８】
キメラ抗体としては、抗体の可変領域と定常領域が互いに異種である抗体、例えばマウス又はラット由来抗体の可変領域をヒト由来の定常領域に接合したキメラ抗体を挙げることができる（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855,(1984)）。
【０２２９】
ヒト化抗体としては、異種抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ；ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）のみをヒト由来の抗体に組み込んだ抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）  ３２１，  ｐ．５２２−５２５）、ＣＤＲ移植法によって、異種抗体のＣＤＲの配列に加えて、異種抗体の一部のフレームワークのアミノ酸残基もヒト抗体に移植した抗体（国際公開第９０／０７８６１号）、遺伝子変換突然変異誘発（ｇｅｎｅ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）ストラテジーを用いてヒト化した抗体（米国特許第５８２１３３７号）を挙げることができる。
【０２３０】
ヒト抗体としては、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子を含むヒト染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを用いて作成した抗体（Tomizuka, K. et al., Nature Genetics(1997) 16, p.133-143;Kuroiwa, Y. et. al., Nucl. Acids Res.(1998) 26, p.3447-3448;Yoshida, H. et. al., Animal Cell Technology:Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73(Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999;Tomizuka, K. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA(2000) 97, p.722-727等を参照。）を挙げることができる。或いは、ヒト抗体ライブラリーより選別したファージディスプレイにより取得した抗体（Wormstone, I. M. et. al, Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002)43 (7), p.2301-2308;Carmen, S. et. al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002), 1(2), p.189-203;Siriwardena, D. et. al., Ophthalmology(2002) 109(3), p.427-431等参照。）も挙げることができる。
【０２３１】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体には、抗体の修飾体も含まれる。当該修飾体とは、本発明に係る抗体に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ−結合又はＯ−結合炭水化物鎖への化学部分の結合を有する化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ−結合又はＯ−結合型糖鎖の付加、Ｎ末端又はＣ末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化等）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによってＮ末にメチオニン残基が付加されたもの等が含まれる。また、本発明に係る抗体又は抗原の検出又は単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾体の意味に含まれる。この様な本発明に係る抗体の修飾体は、抗体の安定性及び血中滞留性の改善、抗原性の低減、抗体又は抗原の検出又は単離等に有用である。
【０２３２】
また、本発明に係る抗体に結合している糖鎖修飾を調節すること（グリコシル化、脱フコース化等）によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、国際公開第９９／５４３４２号、国際公開第００／６１７３９号、国際公開第０２／３１１４０号等が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明に係る抗体には当該糖鎖修飾が調節された抗体も含まれる。
【０２３３】
なお、哺乳類培養細胞で生産される抗体では、その重鎖のカルボキシル末端のリシン残基が欠失することが知られており（Journal of Chromatography A, 705: 129-134(1995)）、また、同じく重鎖カルボキシル末端のグリシン、リシンの２アミノ酸残基が欠失し、新たにカルボキシル末端に位置するプロリン残基がアミド化されることが知られている（Analytical Biochemistry, 360: 75-83(2007)）。しかし、これらの重鎖配列の欠失及び修飾は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能（補体の活性化や抗体依存性細胞障害作用等）には影響を及ぼさない。したがって、本発明に係る抗体には、当該修飾を受けた抗体及び当該抗体の機能性断片も含まれ、重鎖カルボキシル末端において１又は２のアミノ酸が欠失した欠失体、及びアミド化された当該欠失体（例えば、カルボキシル末端部位のプロリン残基がアミド化された重鎖）等も包含される。但し、抗原結合能及びエフェクター機能が保たれている限り、本発明に係る抗体の重鎖のカルボキシル末端の欠失体は上記の種類に限定されない。本発明に係る抗体を構成する２本の重鎖は、完全長及び上記の欠失体からなる群から選択される重鎖のいずれか一種であってもよいし、いずれか二種を組み合わせたものであってもよい。各欠失体の量比は本発明に係る抗体を産生する哺乳類培養細胞の種類及び培養条件に影響を受け得るが、本発明に係る抗体は、好ましくは２本の重鎖の双方でカルボキシル末端のひとつのアミノ酸残基が欠失しているものを挙げることができる。
【０２３４】
本発明に係る抗体のアイソタイプとしては、例えばＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）等を挙げることができるが、好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ２を挙げることができる。
【０２３５】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートの製造に使用できる抗体は、特に制限はないが、例えば、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＴＲＯＰ２抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ９８抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＰＨＡ２抗体、抗ＦＧＦＲ２抗体、抗ＦＧＦＲ４抗体、抗ＦＯＬＲ１抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、及び抗ＧＰＲ２０抗体を挙げることができ、好適には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＥＲ３抗体、抗ＴＲＯＰ２抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、及び抗ＧＰＲ２０抗体を挙げることができる。
【０２３６】
本発明において、「抗ＨＥＲ２抗体」とは、ＨＥＲ２（Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｙｐｅ  ２；  ＥｒｂＢ−２）に特異的に結合し、好ましくは、ＨＥＲ２と結合することによってＨＥＲ２発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
【０２３７】
抗ＨＥＲ２抗体としては、例えば、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（米国特許第５８２１３３７号）、及び、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（国際公開第０１／００２４５号）を挙げることができ、好適にはトラスツズマブを挙げることができる。
【０２３８】
本発明において、「トラスツズマブ」は、配列番号１（図１）においてアミノ酸番号１乃至４４９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２（図２）においてアミノ酸番号１乃至２１４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなるヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である。
【０２３９】
本発明において、「抗ＨＥＲ３抗体」とは、ＨＥＲ３（Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｙｐｅ  ３；  ＥｒｂＢ−３）に特異的に結合し、好適には、ＨＥＲ３発現細胞表面上のＨＥＲ３と結合して該ＨＥＲ３発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
【０２４０】
抗ＨＥＲ３抗体としては、例えば、パトリツマブ（ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ；  Ｕ３−１２８７）、Ｕ１−５９（国際公開第２００７／０７７０２８号）、ＭＭ−１２１（ｓｅｒｉｂａｎｔｕｍａｂ）、国際公開２００８／１００６２４号記載の抗ＥＲＢＢ３抗体、ＲＧ−７１１６（ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、及びＬＪＭ−７１６（ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）を挙げることができ、好適には、パトリツマブ、及びＵ１−５９を挙げることができる。
【０２４１】
本発明において、「抗ＴＲＯＰ２抗体」とは、ＴＲＯＰ２（ＴＡＣＳＴＤ２：Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  ２；  ＥＧＰ−１）に特異的に結合し、好ましくは、ＴＲＯＰ２と結合することによってＴＲＯＰ２発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
【０２４２】
抗ＴＲＯＰ２抗体としては、例えば、ｈＴＩＮＡ１−Ｈ１Ｌ１（国際公開第２０１５／０９８０９９号）を挙げることができる。
【０２４３】
本発明において、「抗Ｂ７−Ｈ３抗体」とは、Ｂ７−Ｈ３（Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ＃７  ｈｏｍｏｌｏｇ  ３；  ＰＤ−Ｌ３；  ＣＤ２７６）に特異的に結合し、好ましくは、Ｂ７−Ｈ３と結合することによってＢ７−Ｈ３発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
【０２４４】
抗Ｂ７−Ｈ３抗体としては、例えば、Ｍ３０−Ｈ１−Ｌ４（国際公開第２０１４／０５７６８７号）を挙げることができる。
【０２４５】
本発明において、「抗ＧＰＲ２０抗体」とは、ＧＰＲ２０（Ｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２０）に特異的に結合し、好ましくは、ＧＰＲ２０と結合することによってＧＰＲ２０発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
抗ＧＰＲ２０抗体としては、例えば、ｈ０４６−Ｈ４ｅ／Ｌ７（国際公開第２０１８／１３５５０１号）を挙げることができる。
【０２４６】
［抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーション］
【０２４７】
本発明にかかる抗体−薬物コンジュゲートは、薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）と、チオール基（又はスルフヒドリル基とも言う）を有する抗体を反応させることによって製造することができる。
【０２４８】
スルフヒドリル基を有する抗体は、当業者周知の方法で得ることができる（Hermanson, G. T, Bioconjugate Techniques, pp.56-136, pp.456-493, Academic Press(1996)）。例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）等の還元剤を、抗体内鎖間ジスルフィド１個当たりに対して０．３乃至３モル当量用い、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤を含む緩衝液中で、抗体と反応させることで、抗体内鎖間ジスルフィドが部分的若しくは完全に還元されたスルフヒドリル基を有する抗体を得ることができる。
【０２４９】
さらに、スルフヒドリル基を有する抗体１個あたり、２乃至２０モル当量の薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）を使用して、抗体１個当たり２個乃至８個の薬物が結合した抗体―薬物コンジュゲートを製造することができる。
【０２５０】
製造した抗体−薬物コンジュゲートの抗体一分子あたりの平均薬物結合数の算出は、例えば、２８０ｎｍ及び３７０ｎｍの二波長における抗体−薬物コンジュゲートとそのコンジュゲーション前駆体のＵＶ吸光度を測定することにより算出する方法（ＵＶ法）や、抗体−薬物コンジュゲートを還元剤で処理し得られた各フラグメントをＨＰＬＣ測定により定量し算出する方法（ＨＰＬＣ法）により行うことができる。
【０２５１】
抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーション、及び抗体−薬物コンジュゲートの抗体一分子あたりの平均薬物結合数の算出は、国際公開第２０１４／０５７６８７号、国際公開第２０１５／０９８０９９号、国際公開第２０１５／１１５０９１号、国際公開第２０１５／１５５９９８号、及び国際公開第２０１８／１３５５０１号等の記載を参考に実施することができる。
【０２５２】
本発明において、「抗ＨＥＲ２抗体−薬物コンジュゲート」とは、抗体−薬物コンジュゲートにおける抗体が抗ＨＥＲ２抗体である抗体−薬物コンジュゲートを示す。
【０２５３】
抗ＨＥＲ２抗体は、好適には、配列番号１においてアミノ酸番号１乃至４４９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２においてアミノ酸番号１乃至２１４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である。
【０２５４】
本発明によって製造される抗ＨＥＲ２抗体−薬物コンジュゲートの１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数は、好適には２から８であり、より好適には３から８であり、更により好適には７から８であり、更により好適には７．５から８であり、更により好適には約８である。
【０２５５】
該抗ＨＥＲ２抗体−薬物コンジュゲートは、本発明の製造方法により製造した薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）を用いて、国際公開第２０１５／１１５０９１号等の記載を参考に製造することができる。
【０２５６】
本発明において、「抗ＨＥＲ３抗体−薬物コンジュゲート」とは、抗体−薬物コンジュゲートにおける抗体が抗ＨＥＲ３抗体である抗体−薬物コンジュゲートを示す。
【０２５７】
抗ＨＥＲ３抗体は、好適には、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である。
【０２５８】
本発明によって製造される抗ＨＥＲ３抗体−薬物コンジュゲートの１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数は、好適には２から８であり、より好適には３から８であり、更により好適には７から８であり、更により好適には７．５から８であり、更により好適には約８である。
【０２５９】
該抗ＨＥＲ３抗体−薬物コンジュゲートは、本発明の製造方法により製造した薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）を用いて、国際公開第２０１５／１５５９９８号等の記載を参考に製造することができる。
【０２６０】
本発明において、「抗ＴＲＯＰ２抗体−薬物コンジュゲート」とは、抗体−薬物コンジュゲートにおける抗体が抗ＴＲＯＰ２抗体である抗体−薬物コンジュゲートを示す。
【０２６１】
抗ＴＲＯＰ２抗体は、好適には、配列番号５においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号６においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である。
【０２６２】
本発明によって製造される抗ＴＲＯＰ２抗体−薬物コンジュゲートの１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数は、好適には２から８であり、より好適には３から５であり、更により好適には３．５から４．５であり、更により好適には約４である。
【０２６３】
該抗ＴＲＯＰ２抗体−薬物コンジュゲートは、本発明の製造方法により製造した薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）を用いて、国際公開第２０１５／０９８０９９号等の記載を参考に製造することができる。
【０２６４】
本発明において、「抗Ｂ７−Ｈ３抗体−薬物コンジュゲート」とは、抗体−薬物コンジュゲートにおける抗体が抗Ｂ７−Ｈ３抗体である抗体−薬物コンジュゲートを示す。
【０２６５】
抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、好適には、配列番号７においてアミノ酸番号２０乃至４７１に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８においてアミノ酸番号２１乃至２３３に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である。
【０２６６】
本発明によって製造される抗Ｂ７−Ｈ３抗体−薬物コンジュゲートの１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数は、好適には２から８であり、より好適には３から５であり、更により好適には３．５から４．５であり、更により好適には約４である。
【０２６７】
該抗Ｂ７−Ｈ３抗体−薬物コンジュゲートは、本発明の製造方法により製造した薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）を用いて、国際公開第２０１４／０５７６８７号等の記載を参考に製造することができる。
【０２６８】
本発明において、「抗ＧＰＲ２０抗体−薬物コンジュゲート」とは、抗体−薬物コンジュゲートにおける抗体が抗ＧＰＲ２０抗体である抗体−薬物コンジュゲートを示す。
【０２６９】
抗ＧＰＲ２０抗体は、好適には、配列番号９においてアミノ酸番号２０乃至４７２に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１０においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体である。
【０２７０】
本発明によって製造される抗ＧＰＲ２０抗体−薬物コンジュゲートの１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数は、好適には２から８であり、より好適には３から８であり、更により好適には７から８であり、更により好適には７．５から８であり、更により好適には約８である。
【０２７１】
該抗ＧＰＲ２０抗体−薬物コンジュゲートは、本発明の製造方法により製造した薬物リンカー中間体（好適には式（１４）で表される化合物）を用いて、国際公開第２０１８／１３５５０１号等の記載を参考に製造することができる。
【０２７２】
［医薬組成物］
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートは、１種以上の薬学的に適合性の成分を含み投与され得る。薬学的に適合性の成分は、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートの投与量や投与濃度等に応じて、この分野において通常使用される製剤添加物その他から適宜選択して適用することができる。例えば、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートは、ヒスチジン緩衝剤等の緩衝剤、スクロース又はトレハロース等の賦形剤、並びにポリソルベート８０又はポリソルベート２０等の界面活性剤を含む医薬組成物として投与され得る。
【０２７３】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、患者に対しては全身療法として適用する他、がん組織に局所的に適用して治療効果を期待することができる。
【０２７４】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、哺乳動物に対して好適に使用することができるが、より好適にはヒトに対して使用することができる。
【０２７５】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、好適には、注射剤として使用することができ、より好適には、水性注射剤又は凍結乾燥注射剤として使用することができ、更により好適には、凍結乾燥注射剤として使用することができる。
【０２７６】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物が水性注射剤である場合、好適には、適切な希釈液で希釈した後、静脈内に点滴投与することができる。希釈液としては、ブドウ糖溶液（好適には５％ブドウ糖溶液）や、生理食塩液、等を挙げることができる。
【０２７７】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物が凍結乾燥注射剤である場合、好適には、注射用水により溶解した後、必要量を適切な希釈液で希釈した後、静脈内に点滴投与することができる。希釈液としては、ブドウ糖溶液（好適には５％ブドウ糖溶液）や、生理食塩液等を挙げることができる。
【０２７８】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を投与するために使用され得る導入経路としては、例えば、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、及び腹腔内の経路を挙げることができ、好適には、静脈内の経路を挙げることができる。
【０２７９】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートは、ヒトに対して、１〜１８０日間に１回の間隔で投与することができ、好適には、１週、２週、３週、又は４週に１回の間隔で投与することができ、さらにより好適には、３週に１回の間隔で投与することができる。また、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートは、１回あたり約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇの投与量で投与することができ、好適には、１回あたり０．８〜１２．４ｍｇ／ｋｇの投与量で投与することができる。本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートが抗ＨＥＲ２抗体−薬物コンジュゲートである場合、好適には、１回あたり５．４、６．４、又は７．４ｍｇ／ｋｇの投与量で投与することができ、更により好適には、１回あたり５．４ｍｇ／ｋｇ又は６．４ｍｇ／ｋｇの投与量で投与することができる。
【０２８０】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、がんの治療のために使用することができ、好適には、乳がん、胃がん（胃腺がんと呼ぶこともある）、大腸がん（結腸直腸がんと呼ぶこともあり、結腸がん及び直腸がんを含む）、肺がん（小細胞肺がん及び非小細胞肺がんを含む）、食道がん、唾液腺がん、胃食道接合部腺がん、胆管がん、ページェット病、膵臓がん、卵巣がん、子宮がん肉腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、胃腸間質腫瘍、消化管間質腫瘍、子宮頸がん、扁平上皮がん、腹膜がん、肝臓がん、肝細胞がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、子宮がん、腎臓がん、外陰部がん、甲状腺がん、陰茎がん、白血病、悪性リンパ腫、形質細胞腫、骨髄腫、神経上皮組織性腫瘍、神経鞘性腫瘍、頭頸部がん、皮膚がん、咽頭がん、胆のうがん、胆管がん、中皮腫、及び肉腫からなる群より選択される少なくとも一つのがんの治療のために使用することができ、例えば、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートが抗ＨＥＲ２抗体−薬物コンジュゲートである場合、より好適には、乳がん、胃がん、大腸がん、非小細胞肺がん、食道がん、唾液腺がん、胃食道接合部腺がん、胆管がん、ページェット病、膵臓がん、卵巣がん、及び子宮がん肉腫からなる群より選択される少なくとも一つのがんの治療のために使用することができ、より好適には、乳がん、胃がん、大腸がん、非小細胞肺がん、食道がん、唾液腺がん、胃食道接合部腺がん、胆管がん、及びページェット病からなる群より選択される少なくとも一つのがんの治療のために使用することができ、さらにより好適には、乳がん、胃がん、大腸がん、又は非小細胞肺がんの治療のために使用することができる。
【０２８１】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、がん治療の主要な治療法である薬物療法のための薬剤として選択して使用することができ、その結果として、がん細胞の成長を遅らせ、増殖を抑え、さらにはがん細胞を破壊することができる。これらの作用によって、がん患者において、がんによる症状からの解放や、ＱＯＬの改善を達成でき、がん患者の生命を保って治療効果が達成される。がん細胞の破壊には至らない場合であっても、がん細胞の増殖の抑制やコントロールによってがん患者においてより高いＱＯＬを達成しつつより長期の生存を達成させることができる。
【０２８２】
このような薬物療法においての薬物単独での使用の他、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、アジュバント療法において他の療法と組み合わせて使用することもでき、外科手術や、放射線療法、ホルモン療法等と組み合わせることができる。さらにはネオアジュバント療法における薬物療法として使用することもできる。
【０２８３】
以上のような治療的使用の他、本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、微細な転移がん細胞の増殖を押さえ、さらには破壊するといった予防効果も期待することができる。例えば、転移過程で体液中にあるがん細胞を抑制し破壊する効果や、いずれかの組織に着床した直後の微細ながん細胞に対する抑制、破壊等の効果が期待できる。したがって、特に外科的ながんの除去後においてのがん転移の抑制、予防効果が期待できる。
【０２８４】
本発明によって製造される抗体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、他のがん治療剤と併用して投与することもでき、これによって抗腫瘍効果を増強させることができる。この様な目的で使用される他のがん治療剤として、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、カペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、イリノテカン（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（ＣＰＴ−１１）、ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ペメトレキセド（Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ビンブラスチン（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）、ビノレルビン（Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｓ）、タネスピマイシン（Ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、オキサリプラチン（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、トラスツズマブエムタンシン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）（Ｔ−ＤＭ１）及び国際公開第２００３／０３８０４３号に記載の薬剤、更にＬＨ−ＲＨアナログ（リュープロレリン（Ｌｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）、ゴセレリン（Ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）等）、エストラムスチン・フォスフェイト（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、エストロジェン拮抗薬（タモキシフェン（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（Ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）等）、アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール（Ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、レトロゾール（Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、及びエキセメスタン（Ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）等）等を挙げることができるが、抗腫瘍活性を有する薬剤であれば限定されることはない。
【実施例】
【０２８５】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
実施例中の「１Ｈ−ＮＭＲ」及び「１３Ｃ−ＮＭＲ」は、「核磁気共鳴スペクトル」を意味し、括弧内のＣＤＣｌ３は測定溶媒である重クロロホルムを意味し、ＤＭＳＯ−ｄ６は測定溶媒である重ジメチルスルホキシドを意味し、Ｄ２Ｏは測定溶媒である重水を意味する。内部標準物質としてＴＭＳ（テトラメチルシラン）を用いた。１Ｈ−ＮＭＲにおける多重度は、ｓ＝ｓｉｎｇｌｅｔ、ｄ＝ｄｏｕｂｌｅｔ、ｔ＝ｔｒｉｐｌｅｔ、ｑ＝ｑｕａｒｔｅｔ、ｑｕｉｎｔ＝ｑｕｉｎｔｅｔ、ｍ＝ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ、及びｂｒｓ＝ｂｒｏａｄ  ｓｉｎｇｌｅｔを意味する。【０２８６】
（実施例１）
Ｎ−（３−ブロモ−５−フルオロ−４−メチルフェニル）アセトアミド【０２８７】
【化６２】
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【０２８８】
２−フルオロ−１−メチル−４−ニトロベンゼン（１０．０ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）の濃硫酸（９０％以上、５０ｍＬ）とヘプタン（５０ｍＬ）の溶液を約６０℃に加温した後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１３．８ｇ、７７．４ｍｍｏｌ）を６回に分けて添加した。約６０℃で１時間撹拌した後、室温まで冷却した。得られた反応液を冷水（５０ｍＬ）に添加した。トルエン（５０ｍＬ）を添加して分液後、水層を除去した。次いで有機層を水（５０ｍＬ）、６．５ｗｔ％炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）、５ｗｔ％亜硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた水層に水（５０ｍＬ）、活性炭（１．０ｇ）を添加して、室温で１時間撹拌した後、不溶物を濾別して不溶物をトルエン（２０ｍＬ）で洗浄した。濾液から水層を除去後、有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣（約３０ｍＬ）に酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加して、再度減圧下、濃縮して１−ブロモ−３−フルオロ−２−メチル−５−ニトロベンゼンの酢酸エチル溶液（約３０ｍＬ）を得た。【０２８９】
１−ブロモ−３−フルオロ−２−メチル−５−ニトロベンゼンの酢酸エチル溶液（約３０ｍＬ）に１％白金炭素触媒（２．０ｇ）、酢酸エチル（１２０ｍＬ）を添加した懸濁液を窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．１ＭＰａ）、約６０℃で４時間撹拌し、室温まで冷却した。得られた懸濁液から不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を０．５Ｎ塩酸水（１００ｍＬ）で２回洗浄して有機層を得た。この際の水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出し、有機層を得て、有機層を合致した。その後、６．５ｗｔ％炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）、５ｗｔ％食塩水（５０ｍＬ）で洗浄して、得られた有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣（約３０ｍＬ）に酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加して、再度減圧下、濃縮して３−ブロモ−５−フルオロ−４−メチルアニリンの酢酸エチル溶液（約３０ｍＬ）を得た。
３−ブロモ−５−フルオロ−４−メチルアニリンの酢酸エチル溶液（約２９ｍＬ）に酢酸エチル（３０ｍＬ）を添加した溶液に、トリエチルアミン（７．２ｍＬ、５１．８ｍｍｏｌ）、無水酢酸（３．３ｍＬ、３４．４ｍｍｏｌ）を添加して室温で６時間撹拌した。得られた反応液に１０ｗｔ％食塩水（５０ｍＬ）を添加して分液後、水層を除去した。得られた有機層を減圧下、濃縮後、酢酸エチル（５０ｍＬ）添加して再度減圧下、濃縮した。濃縮残渣（約３０ｍＬ）に酢酸エチル（８０ｍＬ）を加え、４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（１０．９ｍＬ、４３．７ｍｍｏｌ）を添加後、室温下で１時間撹拌した。不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（４０ｍＬ）で洗浄した。濾液に１０ｗｔ％食塩水（４０ｍＬ）を添加後、２５ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液（５．６ｇ）を添加してｐＨを約７とした。水層を除去後、有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣（約３０ｍＬ）にトルエン（１００ｍＬ）を添加して、減圧下濃縮した濃縮残渣（約３０ｍＬ）を５０℃で５時間撹拌後、室温に冷却した。室温にて１２時間撹拌した後、３℃まで冷却して２時間撹拌した。析出した結晶を濾取して、冷トルエン（２０ｍＬ）、冷７５％含水アセトニトリル（２０ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下４０℃で乾燥し、Ｎ−（３−ブロモ−５−フルオロ−４−メチルフェニル）アセトアミドを白色結晶（５．７ｇ、収率３７％）として得た。【０２９０】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４１（１Ｈ，ｓ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），７．２０（１Ｈ，ｂｒｓ），２．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），２．１７（３Ｈ，ｓ）  【０２９１】
（実施例２）
４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸【０２９２】
【化６３】
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【０２９３】
Ｎ−（３−ブロモ−５−フルオロ−４−メチルフェニル）アセトアミド（３０．０ｇ、１２１．９ｍｍｏｌ）、３−ブテン酸（１２．４ｍＬ、１４６．３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（４６．０ｍＬ、２６８．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）の溶液を減圧下、脱気して窒素置換後、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン（１．１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を添加した。再度減圧下、脱気し窒素置換後、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．４ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加し、減圧下、脱気して窒素で置換後５時間加熱還流した。室温に冷却した反応液に活性炭（３．０ｇ）を添加して室温で１時間撹拌した。不溶物を濾別して不溶物を２０％含水テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）で洗浄した。濾液に２−メチルテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）を添加して２５ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液（２３．４ｇ、１４６．３ｍｍｏｌ）を添加した。有機層を除去し、水層に２−メチルテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）、濃塩酸（３６％、２２．２ｇ、２１９．４ｍｍｏｌ）を添加後、塩化ナトリウム（３０ｇ）を添加した。分液後、水層を除去し、有機層を１０ｗｔ％食塩水（９０ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧下、濃縮して幾何異性体を含む４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］−３−ブテン酸を２−メチルテトラヒドロフラン溶液（約１５０ｍＬ）として得た。【０２９４】
幾何異性体を含む４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］−３−ブテン酸を２−メチルテトラヒドロフラン溶液（約１４０ｍＬ）に２−メチルテトラヒドロフラン（３０８ｍＬ）、５％パラジウム炭素（５．６ｇ）を添加した懸濁液を窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．１ＭＰａ）、約４０℃で１時間撹拌し、室温まで冷却した。得られた懸濁液から不溶物を濾別して不溶物を２−メチルテトラヒドロフラン（１１２ｍＬ）で洗浄した。濾液に水（１４０ｍＬ）を添加して１Ｎ塩酸水でｐＨを約２とした。分液後、水層を除去して、得られた有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣に酢酸エチル（４２０ｍＬ）を添加して、減圧下、濃縮した。再度酢酸エチル（４２０ｍＬ）を添加して、減圧下、濃縮して濃縮残渣（約１７０ｍＬ）を得た。５０℃で５時間撹拌後、ヘプタン（１４０ｍＬ）を添加して、室温まで冷却した。析出した結晶を濾取して、酢酸エチル／ヘプタン（３／７）（８４ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥して４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸を白色結晶（２６．１ｇ、収率９１％）として得た。【０２９５】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０８（１Ｈ，ｂｒｓ），９．９７（１Ｈ，ｓ），７．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５，２．０Ｈｚ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），２．５９−２．５４（２Ｈ，ｍ），２．２８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），２．０２（３Ｈ，ｓ），１．７１（２Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）【０２９６】
（実施例３−１）
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド【０２９７】
【化６４】
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【０２９８】
４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸（１２．０ｇ、４７．４ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（２４ｍＬ）の溶液を４℃に冷却後、無水トリフルオロ酢酸（１３．４ｍＬ、９４．８ｍｍｏｌ）を滴下し、約４℃で４時間撹拌した。得られた反応液を５℃に冷却した５０％含水アセトニトリル（１２０ｍＬ）に滴下した。２５ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液（７７．３ｇ）でｐＨを約７とした後、水（５９ｍＬ）を添加した。その後、室温に戻して析出した結晶を濾取して、水（６０ｍＬ）、７５％含水アセトニトリル（６０ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥してＮ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミドを淡黄白色結晶（１０．２ｇ、収率９２％）として得た。【０２９９】
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１２．３１（１Ｈ，ｂｒｓ），８．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ），２．８８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．６６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２，６．０Ｈｚ），２．２２（３Ｈ，ｓ），２．１７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），２．０９（３Ｈ，ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）【０３００】
（実施例３−２）
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド【０３０１】
【化６５】
2019044946.tif 000067
【０３０２】
４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸（５．０ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）の溶液を２℃に冷却後、無水トリフルオロ酢酸（５．６ｍＬ、３９．５ｍｍｏｌ）を滴下し、約５℃で３時間撹拌した。反応液に５０％含水アセトニトリル（５０ｍＬ）を滴下した。２５ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（３３ｍＬ）でｐＨを約７とした後、水（１７ｍＬ）を添加した。その後、室温に戻して析出した結晶を濾取して、水（２５ｍＬ）、７５％含水アセトニトリル（２５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥してＮ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミドを淡黄白色結晶（４．３ｇ、収率９２％）として得た。【０３０３】
（実施例３−３）
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド【０３０４】
【化６６】
2019044946.tif 000068
【０３０５】
４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸（５．０ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）の溶液を２℃に冷却後、無水トリフルオロ酢酸（５．６ｍＬ、３９．５ｍｍｏｌ）を滴下し、約５℃で４時間撹拌した。反応液に１７％含水アセトニトリル（３０ｍＬ）を滴下後、水（２０ｍＬ）を滴下した。２５ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（３３ｍＬ）でｐＨを約７とした後、水（１７ｍＬ）を添加した。その後、室温に戻して析出した結晶を濾取して、水（２５ｍＬ）、７５％含水アセトニトリル（２５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥してＮ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミドを淡黄白色結晶（４．３ｇ、収率９３％）として得た。【０３０６】
（実施例４−１）
Ｎ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミド【０３０７】
【化６７】
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【０３０８】
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド（５．０ｇ、２１．３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）溶液を６℃に冷却し、亜硝酸アミル（３．７ｍＬ、２７．６ｍｍｏｌ）、カリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（２．９ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）を添加した。３℃で１７時間撹拌した後、酢酸（２５ｍＬ）、無水酢酸（２５ｍＬ）を添加後、昇温した。約２０℃で２％白金炭素触媒（１．５ｇ）を添加し、窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．３ＭＰａ）、室温で４時間撹拌した。得られた懸濁液から不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（２５ｍＬ）で洗浄した。濾液に活性炭（０．７ｇ）を添加して、室温で１時間撹拌後、不溶物を濾別、不溶物を酢酸エチル（２５ｍＬ）で洗浄した。濾液を１℃に冷却し、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を滴下した。水層を除去し、再度５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を添加し、水層を除去した。得られた有機層にテトラヒドロフラン（３５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）を添加後、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）を添加してｐＨを約７とした。室温に昇温後、水層を除去し有機層を１０ｗｔ％食塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧下、濃縮し、濃縮残渣とした。濃縮残渣に酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加して減圧下、濃縮した。本操作を合計３回繰り返した濃縮残渣（約２５ｍＬ）を４０℃で５時間撹拌後、室温に冷却し、２℃で３時間撹拌した。析出した結晶を濾取して、冷酢酸エチル（２５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥してＮ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミドを白色結晶（３．７ｇ、収率６０％）として得た。【０３０９】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１１．７６（１Ｈ，ｓ），８．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），６．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４．０，５．４Ｈｚ），３．０８−２．９６（２Ｈ，ｍ），２．７８−２．７２（１Ｈ，ｍ），２．２３（３Ｈ，ｓ），２．１５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），２．１１（３Ｈ，ｓ），１．８８−１．７７（１Ｈ，ｍ）【０３１０】
（実施例４−２）
Ｎ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミド【０３１１】
【化６８】
2019044946.tif 000070
【０３１２】
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド（３５．０ｇ、１４８．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５２５ｍＬ）溶液を４℃に冷却し、亜硝酸アミル（２５．７ｍＬ、１９３．４ｍｍｏｌ）、カリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（２０．０ｇ、１７８．６ｍｍｏｌ）を添加した。１℃で１７時間撹拌した後、酢酸（１７５ｍＬ）、無水酢酸（１７５ｍＬ）を添加後、昇温した。約２０℃で２％白金炭素触媒（１１．８ｇ）を添加し、窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．３ＭＰａ）、室温で３時間撹拌した。得られた懸濁液から不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（１７５ｍＬ）で洗浄した。濾液に活性炭（５．３ｇ）を添加して、室温で２時間撹拌後、不溶物を濾別、不溶物を酢酸エチル（１７５ｍＬ）で洗浄した。濾液を１℃に冷却し、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３５０ｍＬ）を滴下した。水層を除去し、再度５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３５０ｍＬ）を添加し、水層を除去した。得られた有機層にテトラヒドロフラン（２４５ｍＬ）、水（１７５ｍＬ）を添加後、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）を添加してｐＨを約７とした。室温に昇温後、水層を除去し有機層を１０ｗｔ％食塩水（１７５ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧下、濃縮し、濃縮残渣とした。濃縮残渣に酢酸エチル（３５０ｍＬ）を添加して減圧下、濃縮した。本操作を合計３回繰り返した濃縮残渣（約１７５ｍＬ）を４０℃で５時間撹拌後、室温に冷却し、２℃で３時間撹拌した。析出した結晶を濾取して、冷酢酸エチル（１７５ｍＬ）、水（１７５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥して白色結晶（２５．１ｇ）として取得した。
取得した結晶（２４．０ｇ、８２．１ｍｍｏｌ）の２０％含水エタノール（３００ｍＬ）の懸濁液を６５℃に加熱した。活性炭（４．８ｇ）を添加して、７０℃で３０分間撹拌後、不溶物を濾別、不溶物を２０％含水エタノール（７２ｍＬ）で洗浄した。濾液に６０℃で水（３００ｍＬ）を滴下後、２℃まで徐冷し、２時間撹拌した。析出した結晶を濾取して、冷６０％含水エタノール（１２０ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥してＮ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミドを白色結晶（２１．６ｇ、収率５２％）として得た。【０３１３】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１１．７６（１Ｈ，ｓ），８．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），６．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４．０，５．４Ｈｚ），３．０８−２．９６（２Ｈ，ｍ），２．７８−２．７２（１Ｈ，ｍ），２．２３（３Ｈ，ｓ），２．１５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），２．１１（３Ｈ，ｓ），１．８８−１．７７（１Ｈ，ｍ）【０３１４】
（実施例４−３）
Ｎ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミド【０３１５】
【化６９】
2019044946.tif 000071
【０３１６】
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド（３．０ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４５ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、亜硝酸アミル（２．２ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ）、カリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（１．７ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）を添加した。３℃で３時間撹拌した後、酢酸（１５ｍＬ）、無水酢酸（１５ｍＬ）を添加し、２０℃に昇温して１．５時間撹拌した。約３℃で５％白金炭素触媒（０．４ｇ）を添加し、窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．６ＭＰａ）、約５℃で３時間撹拌した。その後、約３０℃で１時間撹拌し、不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（１５ｍＬ）で洗浄した。濾液に活性炭（０．５ｇ）を添加して、室温で２時間撹拌後、不溶物を濾別、不溶物を酢酸エチル（１５ｍＬ）で洗浄した。濾液を約５℃に冷却し、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）を滴下した。水層を除去し、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）を添加し、水層を除去した。得られた有機層に水（１５ｍＬ）を添加後、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）を添加してｐＨを約７とした。室温に昇温後、水層を除去し有機層を１０ｗｔ％食塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧下、濃縮し、濃縮残渣とした。濃縮残渣に酢酸エチル（３０ｍＬ）を添加して減圧下、濃縮した。本操作を合計３回繰り返した濃縮残渣（約１５ｍＬ）を４０℃で５時間撹拌後、室温に冷却し、５℃で２時間以上撹拌した。析出した結晶を濾取して、冷酢酸エチル（１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥してＮ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミドを白色結晶（２．３ｇ、収率６２％）として得た。【０３１７】
（実施例５−１）
Ｎ−（８−アミノ−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）アセトアミド【０３１８】
【化７０】
2019044946.tif 000072
【０３１９】
Ｎ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミド（３．０ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）と２Ｎ塩酸／エタノール（３０ｍＬ）の懸濁液を５０℃で７時間撹拌した。得られた反応液に水（４５ｍＬ）を添加し、１℃に冷却した。１℃でトリエチルアミン（８．６ｍＬ、６１．６ｍｍｏｌ）を滴下後、亜硫酸ナトリウム（２６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。１℃で４時間撹拌後、析出した結晶を濾趣して、冷６０％含水エタノール（３０ｍＬ）、水（１５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥して淡緑色結晶（２．４ｇ）として取得した。取得した淡緑色結晶（１．８ｇ）のアセトン（１８ｍＬ）の懸濁液を５０℃で５時間撹拌後、室温に冷却した。析出した結晶を濾取して、アセトン（９ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、４０℃で乾燥してＮ−（８−アミノ−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）アセトアミドを淡緑色結晶（１．６ｇ、収率８２％）として得た。【０３２０】
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４０（２Ｈ，ｂｒｓ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ），４．５２−４．４３（１Ｈ，ｍ），２．９８−２．８８（１Ｈ，ｍ），２．８７−２．７６（１Ｈ，ｍ），２．１８−２．１０（１Ｈ，ｍ），１．９８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．９０（３Ｈ，ｓ），１．８８−１．７８（１Ｈ，ｍ）【０３２１】
（実施例５−２）
Ｎ−（８−アミノ−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）アセトアミド【０３２２】
【化７１】
2019044946.tif 000073
【０３２３】
２Ｎ塩酸／エタノール（７５ｍＬ）にＮ，Ｎ’−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１，７−ジイル）ジアセトアミド（５．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）を室温で５分割添加し、５０℃で５時間撹拌した。得られた反応液に水（１１３ｍＬ）を添加し、２℃に冷却した。２℃でトリエチルアミン（２２．５ｍＬ、１６１．４ｍｍｏｌ）を滴下後、亜硫酸ナトリウム（４３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。２℃で３時間撹拌後、析出した結晶を濾趣して、冷６０％含水エタノール（５０ｍＬ）、水（２５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥して淡青色結晶（３．９ｇ）として取得した。取得した結晶（１．８ｇ）のアセトン（１８ｍＬ）の懸濁液を５０℃で５時間撹拌後、室温に冷却した。析出した結晶を濾取して、アセトン（９ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、４０℃で乾燥してＮ−（８−アミノ−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）アセトアミドを淡緑色結晶（１．６ｇ、収率８０％）として得た。【０３２４】
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４０（２Ｈ，ｂｒｓ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ），４．５２−４．４３（１Ｈ，ｍ），２．９８−２．８８（１Ｈ，ｍ），２．８７−２．７６（１Ｈ，ｍ），２．１８−２．１０（１Ｈ，ｍ），１．９８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．９０（３Ｈ，ｓ），１．８８−１．７８（１Ｈ，ｍ）【０３２５】
（実施例６−１）
Ｎ−［（９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−イル］アセトアミド【０３２６】
【化７２】
2019044946.tif 000074
【０３２７】
Ｎ−（８−アミノ−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）アセトアミド（１７０．０ｇ、６７９ｍｍｏｌ）と（４Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−７，８−ジヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（１９６．７ｇ、７４７ｍｍｏｌ）のトルエン（８．５Ｌ）懸濁液に、ｏ−クレゾール（５１０ｍＬ）とピリジニウム  ｐ−トルエンスルホナート（２５．６ｇ，１０２ｍｍｏｌ）を加え、３２時間還流した。トルエン（５００ｍＬ）を添加し室温まで冷却し更に２時間撹拌した。析出した結晶を濾過し、濾別した結晶をアセトン（８５０ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下４０℃で乾燥し、黄色結晶のＮ−［（９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−イル］アセトアミド（３１２．５ｇ，収率９６％）を得た。【０３２８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．７９−１．８８（２Ｈ，ｍ），１．９１（３Ｈ，ｓ），２．１３−２．１５（２Ｈ，ｍ），２．３９（３Ｈ，ｓ），３．１３−３．２２（２Ｈ，ｍ），５．２０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２５．６，  １８．９Ｈｚ），５．４２（２Ｈ，ｓ），５．５３−５．５７（１Ｈ，ｍ），６．５２（１Ｈ，ｓ），６．６５−６．６９（０．４Ｈ，ｍ），６．７５（０．４Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），６．９５−６．９９（０．４Ｈ，ｍ），７．０３（０．４Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．１３−７．２７（０．４Ｈ，ｍ）．７．３０（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），９．１９（０．４Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７，  １０．９，  １０．９，  １５．９，  ２２．６，  ２３．１，  ２７．７，  ３０．３，  ４４．０，  ４９．５，  ６５．２，  ７２．３，  ９６．６，  １０９．７，  １０９．９，  １１４．５，  １１８．７，  １１９．１，  １２１．４，  １２３．６，  １２３．７，  １２３．７，  １２５．３，  １２５．５，  １２６．６，  １２８．２，  １２８．９，  １３０．５，  １３６．２，  １３６．３，  １４０．４，  １４５．２，  １４７．８，  １４７．９，  １４９．９，  １５２．３，  １５５．３，  １５６．６，  １６０．３，  １６２．８，  １６９．１，  １７２．４．
ＭＳ（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）．【０３２９】
（実施例６−２）
Ｎ−［（９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−イル］アセトアミド【０３３０】
【化７３】
2019044946.tif 000075
【０３３１】
Ｎ−（８−アミノ−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル）アセトアミド（２．５ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）と（４Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−７，８−ジヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（３．４２ｇ、１２．９９ｍｍｏｌ）のトルエン（１２５ｍＬ）懸濁液に、ｏ−クレゾール（７．５ｍＬ）とピリジニウム  ｐ−トルエンスルホナート（０．７５ｇ，３．００ｍｍｏｌ）を加え、１９時間還流した（中間体として式（３０）で表される化合物及び式（３１）で表される化合物を経由していることを確認した）。【０３３２】
式（３０）で表される化合物：
Ｎ−［（２Ｓ）−８−{[(４Ｓ)−４−エチル−４−ヒドロキシ−３，１０−ジオキソ−３，４，８，１０−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−６−イル]アミノ}−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル］アセトアミド【０３３３】
【化７４】
2019044946.tif 000076
【０３３４】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．８０−１．９３（２Ｈ，ｍ），２．０２−２．１８（８Ｈ，ｍ），３．８０−３．８５（１Ｈ，ｍ），４．６２−４．６８（１Ｈ，ｍ），４．７５−４．８５（ｍ，２Ｈ），５．２０−５．３３（ｍ，２Ｈ），５．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），６．３５（１Ｈ，ｓ），６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），６．８８（１Ｈ，ｓ），６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），１１．１４（１Ｈ，ｓ）.
ＭＳ（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：４９６．５（［Ｍ＋Ｈ］＋）．【０３３５】
式（３１）で表される化合物：
Ｎ−［（２Ｒ）−８−{[(４Ｓ)−４−エチル−４−ヒドロキシ−３，１０−ジオキソ−３，４，８，１０−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−６−イル]アミノ}−６−フルオロ−５−メチル−１−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−イル］アセトアミド【０３３６】
【化７５】
2019044946.tif 000077
【０３３７】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．８０−１．９２（２Ｈ，ｍ），２．０２−２．１８（８Ｈ，ｍ），３．７９（１Ｈ，ｓ），４．６０−４．６８（１Ｈ，ｍ），４．７２−４．８７（ｍ，２Ｈ），５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），５．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），６．３５（１Ｈ，ｓ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），６．８８（１Ｈ，ｓ），７．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），１１．１０（１Ｈ，ｓ）.
ＭＳ（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：４９６．６（［Ｍ＋Ｈ］＋）．【０３３８】
冷却後、トルエンにより液量を１３５ｍＬに調整し、更に２時間撹拌した。析出した結晶を濾過し、濾別した結晶をアセトン（１２．５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下４０℃で乾燥し、黄色結晶のＮ−［（９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−イル］アセトアミド（４．５８ｇ，収率９６％）を得た。【０３３９】
機器データは、実施例６−１に記載の化合物と同様であった。【０３４０】
（実施例７−１）
メタンスルホン酸  （１Ｓ，９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−アミニウム  ２水和物【０３４１】
【化７６】
2019044946.tif 000078
【０３４２】
Ｎ−［（９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−イル］アセトアミド（３００．０ｇ，６２８ｍｍｏｌ）の２−メトキシエタノール（１．５Ｌ）、水（４．５Ｌ）、エチルシクロヘキサン（１．５Ｌ）懸濁液にメタンスルホン酸（１．５Ｌ）を加え、８時間還流した。室温に冷却後分液して有機層を取り除き、３Ｌまで減圧濃縮した。濃縮液を４０℃に加温し、メタノール（６Ｌ）を３０分かけて滴下した。２時間撹拌後、析出した結晶を濾過し、濾別した結晶をメタノール（１．５Ｌ）で洗浄した。【０３４３】
得られた結晶を水（１．２Ｌ）、メタノール（６００ｍＬ）、メタンスルホン酸（１．２Ｌ）に溶解し、活性炭（１５ｇ）を加え３０分間撹拌した。セルロース粉末（１５０ｇ）を添加し３０分間撹拌した後、不溶物を濾別し、不溶物を５０％メタンスルホン酸水（６００ｍＬ）及びメタノール（６００ｍＬ）で洗浄した。濾液を４０℃に加温し、メタノール（４．８Ｌ）を５５分かけて滴下した。２時間撹拌後、析出した結晶を濾過し、濾別した結晶をメタノール（１．５Ｌ）で洗浄した。【０３４４】
得られた結晶をエタノール（６Ｌ）、水（６００ｍＬ）に懸濁し、１．５時間還流した。室温に冷却後、３０分間撹拌し析出した結晶を濾過し、結晶をエタノール（１．５Ｌ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下４０℃で乾燥し、その後４０％ＲＨの空気下で４日間調湿することで、無色結晶のメタンスルホン酸  （１Ｓ，９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−アミニウム  ２水和物（１５２．３ｇ，収率４３％）を得た。【０３４５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６、Ｄ２Ｏ）δ０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．９０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．３５（３Ｈ，ｓ），２．３８−２．４７（１Ｈ，ｍ），２．６４（３Ｈ，ｓ），３．０４−３．１１（１Ｈ，ｍ），３．３０−３．３４（１Ｈ，ｍ），５．０８（１Ｈ，ｓ），５．３４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．７，  １５．９Ｈｚ），５．５０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．７，  １０．４Ｈｚ），７．４１（１Ｈ，ｓ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ  （１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７，  １０．９，  １１．０，  １８．５，  ２０．８，  ２４．７，  ３０．２，  ３９．５，  ４４．５，  ４９．４，  ５５．９，  ６５．２，  ７２．２，  ９５．３，  ９６．９，  １１０．１，  １００．３，  １１９．４，  １２０．５，  １２４．６，  １２４．７，  １２７．５，  １３４．２，  １３５．２，  １３５．２，  １４４．８，  １４７．８，  １４７．９，  １４９．９，  １５２．３，  １５６．６，  １６０．６，  １６２．６，  １７２．３．
ＭＳ（ＥＳＩ）（ｍ／ｚ）：４３６（［Ｍ＋Ｈ］＋）．【０３４６】
（実施例７−２）
メタンスルホン酸  （１Ｓ，９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−アミニウム  【０３４７】
【化７７】
2019044946.tif 000079
【０３４８】
Ｎ−［（９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−イル］アセトアミド（３．５ｇ，７．３ｍｍｏｌ）の精製水（５３ｍL）、２−メトキシエタノール（１８ｍL）、エチルシクロヘキサン（１８ｍL）懸濁液にメタンスルホン酸（１８ｍL）を加えた後、減圧窒素置換を３回繰り返した（５０ｍｂａｒ減圧攪拌後、常圧窒素置換する操作を３回繰り返した）。懸濁液を８５℃に加温後、１１時間攪拌し、反応終了を確認後、２５℃に冷却した。混合物を３８．５ｍＬまで減圧濃縮し、濃縮液を４０℃に加温し、メタノール（１８ｍＬ）を１５分かけて滴下した。６時間撹拌後、メタノール（５３ｍＬ）を２時間かけて滴下し、更に２時間撹拌後、析出した結晶を濾過し、濾別した結晶をメタノール（３５ｍＬ）で洗浄した。【０３４９】
得られた結晶を精製水（１４ｍＬ）、メタンスルホン酸（１４ｍＬ）の混合液に溶解し、３７℃に加温後、メタノール（７ｍＬ）、活性炭（０．３５ｇ）及び濾過助剤（０．７０ｇ，珪藻土：ＣｅｌｐｕｒｅＣ１０００）を加え、減圧窒素置換を３回繰り返した（５０ｍｂａｒ、常圧窒素置換を３回）。懸濁液を２０分間撹拌した後、不溶物を濾別し、不溶物をメタンスルホン酸−精製水−メタノール混液（７ｍＬ，７ｍＬ，３．５ｍＬ）及びメタノール（７ｍＬ）で洗浄した。濾液を３７℃に加温し、メタノール（１０．５ｍＬ）を１５分かけて滴下した。６時間撹拌後、メタノール（４２ｍＬ）を１時間かけて滴下し、更に２時間撹拌後、析出した結晶を濾過し、濾別した結晶をメタノール（３５ｍＬ）で洗浄した。【０３５０】
得られた結晶をエタノール（７０ｍＬ）、水（７ｍＬ）に懸濁し、７３℃で２時間攪拌した。２５℃に冷却後、２時間撹拌し析出した結晶を濾過し、結晶をエタノール（１８ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下４０℃で乾燥し、メタンスルホン酸  （１Ｓ，９Ｓ）−９−エチル−５−フルオロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１０，１３−ジオキソ−２，３，９，１０，１３，１５−ヘキサヒドロ−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−１−アミニウム（１．７２ｇ，収率４４％）を得た。【０３５１】
機器データは、実施例７−１に記載の化合物と同様であった。【０３５２】
（実施例８）
Ｎ−（３−ヨード−５−フルオロ−４−メチルフェニル）アセトアミド【０３５３】
【化７８】
2019044946.tif 000080
【０３５４】
２−フルオロ−１−メチル−４−ニトロベンゼン（５．０ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）の濃硫酸（９０％以上、２５ｍＬ）とヘプタン（２５ｍＬ）の溶液を約１℃に冷却した後、Ｎ−ヨードスクシンイミド（１０．２ｇ、４５．１ｍｍｏｌ）を６回に分けて添加した。約２℃で２時間撹拌した。得られた反応液を冷水（２５ｍＬ）に添加した。トルエン（２５ｍＬ）を添加して分液後、水層を除去した。次いで有機層を水（２５ｍＬ）、６．５ｗｔ％炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）、５ｗｔ％亜硫酸ナトリウム水溶液（２５ｍＬ、３回）、最後に水（２５ｍＬ）で洗浄した。濾液から水層を除去後、有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣（約３０ｍＬ）に酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加して、再度減圧下、濃縮して１−ヨード−３−フルオロ−２−メチル−５−ニトロベンゼンの酢酸エチル溶液（約１５ｍＬ）を得た。【０３５５】
１−ヨード−３−フルオロ−２−メチル−５−ニトロベンゼンの酢酸エチル溶液（約１５ｍＬ）に１％白金炭素触媒（１．１ｇ）、酢酸エチル（４５ｍＬ）を添加した懸濁液を窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．１ＭＰａ）、約６０℃で５時間撹拌し、室温まで冷却した。得られた懸濁液から不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（１５ｍＬ）で洗浄した。濾液を０．５Ｎ塩酸水（５０ｍＬ、２５ｍＬ）で２回洗浄して有機層を得た。この際の水層を酢酸エチル（２５ｍＬ）で抽出し、有機層を得て、有機層を合致した。その後、６．５ｗｔ％炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）、５ｗｔ％食塩水（２５ｍＬ）で洗浄して、得られた有機層を減圧下、濃縮して３−ヨード−５−フルオロ−４−メチルアニリンの酢酸エチル溶液を得た。【０３５６】
３−ブロモ−５−フルオロ−４−メチルアニリンの酢酸エチル溶液に酢酸エチル（２５ｍＬ）を添加した溶液に、トリエチルアミン（３．７ｍＬ、２６．８ｍｍｏｌ）、無水酢酸（１．７ｍＬ、１７．７ｍｍｏｌ）を添加して室温で４時間撹拌した。得られた反応液に１０ｗｔ％食塩水（２５ｍＬ）を添加して分液後、水層を除去した。得られた有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（５．６ｍＬ、２２．６ｍｍｏｌ）を添加後、室温下で１５分撹拌した。不溶物を濾別して不溶物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で洗浄した。濾液に１０ｗｔ％食塩水（２０ｍＬ）を添加後、２５ｗ/ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（２．５ｍＬ）を添加してｐＨを約７とした。水層を除去後、有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣にアセトニトリル（３８ｍＬ）、水（３８ｍＬ）を添加して、２５℃で撹拌した。析出した結晶を濾取して、５０％含水アセトニトリル（１５ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下４０℃で乾燥し、Ｎ−（３−ヨード−５−フルオロ−４−メチルフェニル）アセトアミドを白色結晶（２．８ｇ、収率２９％）として得た。【０３５７】
１Ｈ−ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６１（１Ｈ，ｓ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｂｒｓ），２．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），２．１６（３Ｈ，ｓ）  【０３５８】
（実施例９）
４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸【０３５９】
【化７９】
2019044946.tif 000081
【０３６０】
Ｎ−（３−ヨード−５−フルオロ−４−メチルフェニル）アセトアミド（２．０ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、３−ブテン酸（０．７ｍＬ、８．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２．６ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ）、水（２ｍＬ）の溶液を減圧下、脱気して窒素置換後、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン（６２．３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。再度減圧下、脱気し窒素置換後、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２３．０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、減圧下、脱気して窒素で置換後２時間加熱還流した。室温に冷却した反応液に活性炭（０．２ｇ）、２−メチルテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）を添加して室温で１時間撹拌した。不溶物を濾別して不溶物を２０％含水テトラヒドロフラン（４ｍＬ）で洗浄した。濾液に２−メチルテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）を添加して２５ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液（１．３ｍＬ、８．２ｍｍｏｌ）を添加した。有機層を除去し、水層に２−メチルテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）、濃塩酸（３６％、１．２ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）を添加後、塩化ナトリウム（２ｇ）を添加した。分液後、水層を除去し、有機層を１０ｗｔ％食塩水（６ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧下、濃縮して幾何異性体を含む４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］−３−ブテン酸残渣（１．９ｇ）を得た。【０３６１】
幾何異性体を含む４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］−３−ブテン酸残渣（１．９ｇ）に２−メチルテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）、５％パラジウム炭素（１．７ｇ）を添加した懸濁液を窒素で置換した後、水素で置換した。水素気流下（０．３ＭＰａ）、約４０℃で８時間撹拌し、室温まで冷却した。得られた懸濁液から不溶物を濾別して不溶物を２−メチルテトラヒドロフラン（８ｍＬ）で洗浄した。濾液に水（１０ｍＬ）を添加して１Ｎ塩酸水でｐＨを約２とした。分液後、水層を除去して、得られた有機層を減圧下、濃縮した。濃縮残渣に酢酸エチル（１０ｍＬ）を添加して、約５０℃に加熱後、ヘプタン（１０ｍＬ）を添加して、室温まで冷却した。析出した結晶を濾取して、酢酸エチル／ヘプタン（３／７）（６ｍＬ）で洗浄した。得られた結晶を減圧下、乾燥して４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸を白色結晶（１．４ｇ、収率８１％）として得た。【０３６２】
（実施例１０）
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミド【０３６３】
【化８０】
2019044946.tif 000082
【０３６４】
４−［５−（アセチルアミノ）−３−フルオロ−２−メチルフェニル］ブタン酸（２００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（８６μＬ、１．１８ｍｍｏｌ）、塩化メチレン（４ｍＬ）の溶液に室温、窒素気流下で塩化アルミニウム（２６３ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で２時間撹拌した。得られた反応液に１Ｎ塩酸水溶液（１０ｍｌ）、酢酸エチル（５０ｍｌ）を添加した。水層を除き、有気層を水（１０ｍｌ）、６．５ｗｔ％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。不溶物をろ別後、減圧下で溶媒を留去して得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−８−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−１−イル）アセトアミドを淡黄白色結晶（１２５ｍｇ、収率６７％）として得た。【０３６５】
機器データは、実施例３−１に記載の化合物と同様であった。
【配列表フリーテキスト】
【０３６６】
配列番号１：抗ＨＥＲ２抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号２：抗ＨＥＲ２抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号３：抗ＨＥＲ３抗体の重鎖のアミノ酸配列
配列番号４：抗ＨＥＲ３抗体の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号５：抗ＴＲＯＰ２抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号６：抗ＴＲＯＰ２抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号７：抗Ｂ７−Ｈ３抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号８：抗Ｂ７−Ｈ３抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号９：抗ＧＰＲ２０抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号１０：抗ＧＰＲ２０抗体軽鎖のアミノ酸配列
【図１】
2019044946.tif 000119
【図２】
2019044946.tif 000120
【図３】
2019044946.tif 000121
【図４】
2019044946.tif 000122
【図５】
2019044946.tif 000123
【図６】
2019044946.tif 000124
【図７】
2019044946.tif 000125
【図８】
2019044946.tif 000126
【図９】
2019044946.tif 000127
【図１０】
2019044946.tif 000128
【配列表】
2019044946000001.app
【国際調査報告】
2019044946.tif 000129
2019044946.tif 000130
2019044946.tif 000131
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