(57)【要約】  骨芽前駆細胞の骨芽細胞への分化及び骨芽細胞の石灰化を促進する骨形成促進剤の提供。  TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）レセプターに結合する物質を有効成分として含む骨形成促進剤であって、当該物質がTRAIL又は抗TRAILレセプター抗体である、骨形成促進剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）レセプターに結合する物質を有効成分として含む骨形成促進剤であって、当該物質がTRAIL又は抗TRAILレセプター抗体である、骨形成促進剤。
【請求項２】
骨芽細胞への分化を促進する、請求項１記載の骨形成促進剤。
【請求項３】
骨芽細胞の石灰化作用を促進する、請求項１記載の骨形成促進剤。
【請求項４】
さらに、BMP-2を含む請求項１〜３のいずれか１項に記載の促進剤。
【請求項５】
TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）又は抗TRAILレセプター抗体を含む、BMP-2と併用される骨形成促進剤。
【請求項６】
TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）又は抗TRAILレセプター抗体を投与することを含む骨形成を促進する方法。
【請求項７】
さらに、BMP-2を投与することを含む、請求項６記載の骨形成を促進する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、TNFファミリー分子の一つであるTRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド：TNF related apoptosis-inducing ligand）又は抗TRAILレセプター抗体を有効成分とする骨形成促進剤及び促進方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
TNFファミリー分子の一つであるTRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド：TNF related apoptosis-inducing ligand）は癌細胞にアポトーシスを誘導することが知られている。従来、骨代謝の分野においてTRAILは骨芽細胞に対してもアポトーシスを誘導すると考えられていた。【０００３】
従来より、ペプチドD等のRANKL結合分子が骨芽細胞への分化促進および骨形成を増強し得ることが報告されている（特許文献１を参照）。【０００４】
また、TRAILに対するアゴニスト、例えば抗TRAILアゴニスト抗体が、細胞表面上のTRAILに作用し骨芽細胞又は骨芽細胞に分化し得る細胞に対しシグナルを伝達し、分化促進し得ることが報告されている（特許文献２を参照）。しかし、これはTRAILに結合し、逆シグナルを入れるTRAILアゴニスト抗体の作用であり、TRAIL自身の骨に対する作用は知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第5191487号公報
【特許文献２】特開2010-138106号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化及び骨芽細胞の石灰化を促進する骨形成促進剤、及び該骨形成促進剤を用いた骨形成促進方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ペプチドD（W9ペプチド）（特許第5191487号公報）のメカニズム解析の一環としてTNF/TNFレセプターパラレルファミリーの因子を候補として解析し、その解析の中でTRAIL又は抗TRAILレセプター抗体の骨芽細胞分化/石灰化作用を見出した。すなわち、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体が骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞に作用し、骨芽細胞への分化を促進し、さらに骨芽細胞に作用し、石灰化を促進することが明らかとした。この知見は、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体自身がTRAILレセプターに結合して順方向のシグナルを入れるというものであった。従来は、細胞表面のTRAILに結合し、逆シグナルを入れる抗TRAILアゴニスト抗体の作用により骨芽細胞等が分化することは報告されていたが、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体自身が抗TRAILアゴニスト抗体の作用を受けることなく、TRAILレセプターを介し骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞に直接作用し、骨芽細胞への分化を促進し、さらに骨芽細胞に作用し、石灰化を促進することは知られていなかった。【０００８】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
[１]  TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）レセプターに結合する物質を有効成分として含む骨形成促進剤であって、当該物質がTRAIL又は抗TRAILレセプター抗体である、骨形成促進剤。
[２]  骨芽細胞への分化を促進する、[１]の骨形成促進剤。
[３]  骨芽細胞の石灰化作用を促進する、[１]の骨形成促進剤。
[４]  さらに、BMP-2を含む[１]〜[３]のいずれかの促進剤。
[５]  TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）又は抗TRAILレセプター抗体を含む、BMP-2と併用される骨形成促進剤。
[６]  TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド）又は抗TRAILレセプター抗体を投与することを含む骨形成を促進する方法。
[７]  さらに、BMP-2を投与することを含む、[６]の骨形成を促進する方法。
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2017-128971号の開示内容を包含する。
【発明の効果】
【０００９】
TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体自身が抗TRAILアゴニスト抗体の作用を受けることなく、骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞に直接TRAILレセプターを介して作用し、骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化を促進すると共に、骨芽細胞に作用し、石灰化を促進し、骨形成を促進するので、骨粗鬆症等の骨代謝疾患の予防又は治療に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】TRAILが骨芽細胞の石灰化の促進により骨形成の誘導を示す図である。
【図２】TRAILによる骨芽細胞の石灰化の促進がTRAIL中和抗体により抑制されることを示す図である。
【図３】TRAILとBMP-2による相乗的な骨形成の誘導効果を示す図である。
【図４】抗TRAILレセプター抗体によるヒト間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化促進及び石灰化の促進により骨形成の誘導を示す図である。
【図５】TRAILレセプター抗体によるマウス骨芽前駆細胞を用いた骨形成の誘導を示す図である。
【図６】TRAILレセプター抗体によるヒト間葉系幹細胞を用いた骨形成の誘導を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】
本発明は、TRAIL（腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド：TNF related apoptosis-inducing ligand）レセプターに結合する物質を有効成分として含む、骨形成促進剤である。
【００１３】
TRAILレセプターに結合する物質として、TRAIL及び抗TRAILレセプター抗体が挙げられる。
TRAILは、抗TRAILアゴニスト抗体の作用を受けることなく骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞に直接作用し、骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化を促進すると共に、骨芽細胞に作用し、石灰化を促進し、骨形成を誘導し促進する。すなわち、骨芽細胞による石灰化によりリン酸カルシウムが沈着し、骨基質が形成される。
【００１４】
TRAILは、骨芽前駆細胞、間葉系幹細胞又は骨芽細胞のTRAILレセプター（TRAIL-R1(DR4)、TRAIL-R2(DR5)）に結合し、骨芽前駆細胞又は骨芽細胞に順方向のシグナルを入れ、その結果分化や石灰化を促進し、あるいは骨形成を促進すると考えられる。ここで、順方向のシグナルとは、リガンドがレセプターに結合してレセプターを発現している細胞内にシグナルを入れるというリガンドからレセプターへの方向のシグナルをいう。TRAILレセプターには細胞内にシグナルを入れる上記のTRAIL-R1、TRAIL-R2以外に、デコイレセプターとしてTRAIL-R3(DcR1)、TRAIL-R4(DcR2)、Osteoprotegerinが知られている。
【００１５】
TRAILの由来種は限定されないが、ヒトに投与する場合はヒト由来のTRAILを用いることが好ましい。ヒト由来のTRAILの全長アミノ酸配列を、配列番号１に表す。配列番号１に表すアミノ酸配列は１例であり、本発明のTRAILにはTRAILのアイソフォームも含まれる。
【００１６】
本発明で骨形成促進剤の有効成分として用いるTRAILは全長タンパク質でもよいし、全長タンパク質の断片ペプチドであってTRAILの活性を有する断片ペプチドでもよい。また、ヒトTRAILを用いる場合、配列番号１に表されるアミノ酸配列を有する全長タンパク質でもよいし、その類似体でもよい。例えば、配列番号１に表されるアミノ酸配列を有するTRAILの類似体として、例えば、TRAIL又はその断片ペプチドのアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつTRAILの活性を有するタンパク質若しくはペプチドを含む。ここで、１又は数個とは１〜９個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１若しくは２個である。
【００１７】
このようなアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列として、アミノ酸配列と、BLAST（Basic Local Alignment Search Tool at the National Center for Biological Information（米国国立生物学情報センターの基本ローカルアラインメント検索ツール））等（例えば、デフォルトすなわち初期設定のパラメータ）を用いて計算したときに、少なくとも85％以上、好ましくは90％以上、さらに好ましくは95％以上、特に好ましくは97％以上の配列同一性を有しているものが挙げられる。
【００１８】
抗TRAILレセプター抗体は、公知の方法により、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体として得ることができ、モノクローナル抗体が好ましい。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマに産生されるもの、及び遺伝子工学的手法により抗体遺伝子を含む発現ベクターで形質転換した宿主に産生されるものを含む。モノクローナル抗体産生ハイブリドーマは、TRAILレセプター又はその断片ペプチドを感作抗原として用いて、公知の手法により、作製することができる。本発明の抗TRAILレセプター抗体は、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト型化（Humanized）抗体をも含む。このような抗体としてはキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体が挙げられ、いずれも公知の方法を用いて製造することができる。キメラ抗体は、得た抗体V領域をコードするDNAを得て、ヒト抗体C領域をコードするDNAと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる。ヒト型化抗体は、再構成（reshaped）ヒト抗体ともいう。ヒト型化抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えばマウス抗体の相補性決定領域（CDR; complementarity determining region）をヒト抗体の相補性決定領域へ移植したものであり、公知の方法により作製することができる（欧州特許出願公開番号EP 125023号公報、WO 96/02576 号公報参照）。キメラ抗体及びヒト型化抗体のＣ領域には、ヒト抗体のものが使用され、例えばＨ鎖では、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４を、Ｌ鎖ではＣκ、Ｃλを使用することができる。また、抗体又はその産生の安定性を改善するために、ヒト抗体Ｃ領域を修飾してもよい。
【００１９】
ヒト抗体はまた、例えばヒト抗体遺伝子座を導入し、ヒト由来抗体を産生する能力を有するトランスジェニック動物に抗原を投与することにより得ることができる。該トランスジェニック動物としてマウスが挙げられ、ヒト抗体を産生し得るマウスの作出方法は、例えば、国際公開第WO02/43478号パンフレットに記載されている。
【００２０】
抗TRAILレセプター抗体は、完全抗体だけでなく、その機能的断片も含む。抗体の機能的断片とは、抗体の一部分（部分断片）であって、抗体の抗原への作用を1つ以上保持するものを意味し、具体的にはF（ab'）2 、Fab'、Fab、Fv、ジスルフィド結合Fv、一本鎖Fv（scFv）、及びこれらの重合体等が挙げられる（D.J.King., Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies., 1998 T.J.International Ltd）。
【００２１】
また、モノクローナル抗体を用いる場合、１種類のみのモノクローナル抗体を用いてもよいが、認識するエピトープが異なる２種類以上、例えば２種類、３種類、４種類又は５種類のモノクローナル抗体を用いてもよい。
【００２２】
抗TRAILレセプター抗体は、TRAILと同様に骨芽細胞上のTRAILレセプターに直接結合して骨芽前駆細胞又は骨芽細胞に順方向のシグナルを入れ、その結果分化や石灰化を促進し、あるいは骨形成を促進する。抗TRAILレセプター抗体は、TRAILの活性を模倣する。
【００２３】
TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体は、骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞に作用し、骨芽前駆細胞若しくは間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化を促進すると共に、骨芽細胞に作用し、石灰化を促進し、骨形成を促進するので、骨形成を増強する医薬組成物の有効成分として用いることができる。特に、骨形成が阻害され、骨密度や骨量減少を伴う骨代謝疾患の治療又は予防のために用いることができる。このような、骨形成の促進により治療することができる骨代謝疾患としては、骨粗鬆症、若年性骨粗鬆症、骨溶解性骨疾患、骨壊死、関節リウマチ、変形性関節症による骨の低下、炎症性関節炎、骨髄炎、グルココルチコイド処置、歯周の骨の喪失、加齢による骨の喪失、骨形成不全、高カルシウム血症、上皮小体機能亢進症、骨軟化症、骨石灰脱失症、パジェット病、転移性の骨疾患、癌による骨の喪失、及びその他の骨量減少症が挙げられる。
【００２４】
この中でも、骨粗鬆症、若年性骨粗鬆症、骨溶解性骨疾患、骨壊死、関節リウマチ、変形性関節症による骨の低下、炎症性関節炎、骨髄炎、グルココルチコイド処置、歯周の骨の喪失、加齢による骨の喪失、癌による骨の喪失が好ましい。
【００２５】
また、骨密度が著しく低い被験体や既存骨折のある被験体等の骨折リスクの高い被験体患者に投与することにより、骨折リスクを低減させることができる。
【００２６】
TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体を含む骨形成促進剤は、経口で投与しても、また、皮下投与、筋肉注射、静脈注射、直腸投与、経皮投与等の非経口で投与してもよい。TRAILを含む骨形成促進剤の被験体への投与量は、症状、年齢、体重などによって異なるが、通常、経口投与では、成人に対して、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体の量で1日約0.01mg〜1000mgであり、これらを1回、又は数回に分けて投与することができる。また、非経口投与では、1回約0.01mg〜1000mgを皮下注射、筋肉注射、静脈注射等によって投与することができる。
【００２７】
TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体を有効成分として含む骨形成促進剤は、製剤分野において通常用いられる薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤を含む。たとえば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、ステアリン酸マグネシウムなどが使用される。注射用の水性液としては、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液などが使用され、適当な溶解補助剤、たとえばアルコール、プロピレングリコールなどのポリアルコール、非イオン界面活性剤などと併用してもよい。油性液としては、ゴマ油、大豆油などが使用され、溶解補助剤としては安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどを併用してもよい。
【００２８】
骨形成を促進するTRAIL又は抗TRAILレセプター抗体は、BMP（Bone morphogenetic protein；骨形成タンパク質）ファミリーメンバー（BMP)と併用してもよい。TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体とBMPを併用することにより、相乗的な骨分化効果を奏することができる。TRAILとBMPは共同作用し、骨芽細胞又は骨芽細胞に分化し得る細胞の分化、増殖、成熟、石灰化を促進し、骨形成を促し、骨量増強等を引き起こし得る。BMPファミリーメンバーとしては、BMP-4、BMP-2、BMP-7、BMP-6等が挙げられる。この中でもBMP-2が好ましい。TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体とBMPを組合せた組合せ製剤または組合せキットを包含する。さらに、本願発明は、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体を含む、BMPと併用される医薬組成物を包含する。TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体とBMPは、同時に投与しても、別々に投与してもよい。また、順次に投与してもよく、投与順は、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体が先でもよいし、BMPが先でもよい。BMPの投与量は限定されないが、1回約0.01mg〜1000mgである。
【００２９】
さらに、本発明は、TRAIL又は抗TRAILレセプター抗体を被験体に投与することを含む、被験体における骨形成を促進する方法、及びTRAIL若しくは抗TRAILレセプター抗体、並びにBMPを被験体に投与することを含む、被験体における骨形成を促進する方法を包含する。
【実施例】
【００３０】
本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。【００３１】
実施例に用いた培養細胞及び試薬
培養細胞  
マウス骨芽前駆細胞（MC3T3-E1細胞）はRIKENから販売されている株を用いた。E1細胞はαMEM（SIGMA）に10％ FBS（JRH）を添加した維持培地で培養した。【００３２】
試薬  
アリザリンレッドはナカライテスク社製を用いた。  細胞固定には4％ パラホルムアルデヒド溶液（Wako）もしくは95% エタノール溶液（Wako）を用いた。mTRAIL(マウスTRAIL)はR&D社の組換えタンパク質を用いた。【００３３】
骨芽細胞分化用培地は維持用培地に100 nMのデキサメサゾン（Wako）、50μg/mLのL-アスコルビン酸（Wako）及び10 mMのβグリセロリン酸（SIGMA）を添加して作製した。【００３４】
抗マウスTRAILポリクローナル抗体及び抗マウスTRAILモノクローナル抗体はR&D社製を用いた。【００３５】
実施例１  TRAILによる骨形成の誘導
MC3T3-E1を1×104個/wellずつ48wellプレート(Nunc)に播種した。CO2インキュベーター内で培養し、細胞がコンフルエント状態になったのを確認後、培養液を骨芽細胞分化用培地に交換した。【００３６】
この骨芽細胞分化用培地に、2.5、5.0及び7.5 ng/mLのmTRAILを加え、2〜3日毎に培地を交換した。培養開始から17日目で細胞を4 ％ PFAで固定し、1 ％のアリザリンレッド溶液を200μL加えて染色した。その結果、図１に示したように、濃度依存的にアリザリン染色の強度が＋、＋＋、＋＋＋と上昇した。【００３７】
また上記試験と同様に、MC3T3-E1を1×104個/wellずつ48wellプレート(Nunc)に播種した。CO2インキュベーター内で培養し、細胞がコンフルエント状態になったのを確認後、培養液を骨芽細胞分化用培地に交換した。【００３８】
次は、mTRAILを10 ng/mL加えた群に、さらに抗マウスTRAILポリクローナル抗体（R&D）を0.2μg/mLもしくは抗マウスTRAILモノクローナル抗体（R&D）を1.0μg/mLを添加し、2〜3日毎に培地を交換した。培養開始から13日目で細胞を4 ％ PFAで固定し、1％のアリザリンレッド溶液を200μL加えて染色した。その結果、図２に示したように、mTRAIL 10 ng/mLを添加することによってMC3T3-E1細胞では、アリザリン染色陽性の骨芽細胞分化・石灰化が促進されていたが、中和抗体を添加することで、骨芽細胞の分化・石灰化能が抑制されることが確認できた。【００３９】
これらの結果から、mTRAILが直接的に骨芽前駆細胞に作用して石灰化を促進し、骨形成を誘導することが示された(図１及び図２)。【００４０】
実施例２  TRAILとBMPを併用した場合の相乗的な骨分化作用
MC3T3-E1を1×104個/wellずつ48wellプレート(Nunc)に播種した。CO2インキュベーター内で培養し、細胞がコンフルエント状態になったのを確認後、培養液を骨芽細胞分化用培地に交換した。【００４１】
この骨芽細胞分化用培地に、10 ng/mLのmTRAIL（R&D）を加え、さらに25 ng/mL rhBMP-2(オリエンタル酵母社製)を添加した群を作製した。各々2〜3日毎に培地を交換した。培養開始から12日目で細胞を95％エタノールで固定し、1％のアリザリンレッド溶液を200μL加えて染色した。その結果、図３に示したように、mTRAIL単独でも無添加群に対し、アリザリン染色の強度が＋レベルで上昇していたが、さらにBMP-2を少量添加することで＋＋レベルの相乗的な骨分化作用が確認できた。【００４２】
実施例３  抗TRAILレセプター抗体を用いた骨分化作用
ヒト間葉系幹細胞（Lonza）を1×104個/wellずつ24wellプレート(コーニング)に播種した。CO2インキュベーター内で培養し、細胞がコンフルエント状態になったのを確認後、培養液を骨芽細胞分化用培地に交換した。この骨芽細胞分化用培地に、0.2及び1.0 μg/mLの抗TRAILレセプター(DR5)ポリクローナル抗体（Invitrogen）を添加した群を作製した。各々2〜3日毎に培地を交換した。培養開始から15日目で細胞を4 ％ PFAで固定し、1％のアリザリンレッド溶液を200μL加えて染色した。その結果、図４に示したように、抗TRAILレセプター抗体単独でも無添加群に対し、アリザリン染色の強度が濃度依存的に＋から＋＋に上昇した。これは抗TRAILレセプター抗体がTRAILと同様にTRAILレセプターに結合して骨芽細胞の分化・石灰化を促進したことを示している。【００４３】
実施例４  抗TRAILレセプター抗体による骨形成の誘導
培養細胞  
マウス骨芽前駆細胞（MC3T3-E1細胞）はRIKENから販売されている株を用いた。E1細胞はαMEM（SIGMA）に10％ FBS（JRH）を添加した維持培地で培養した。【００４４】
試薬  
アリザリンレッドはナカライテスク社製を用いた。  細胞固定にはWakoの4％パラホルムアルデヒド溶液(Nacalai)もしくは95%エタノール溶液（Wako）を用いた。【００４５】
骨芽細胞分化用培地は維持用培地に100 nMのデキサメサゾン（Wako）、50μg/mLのL-アスコルビン酸（Wako）及び10 mMのβグリセロリン酸（SIGMA）を添加して作製した。【００４６】
抗TRAILレセプター（DR5）抗体はSanta Cruz社のモノクローナル抗体（クローン：MD5-1）を用いた。【００４７】
４−１  抗TRAILレセプター抗体によるマウス骨芽前駆細胞を用いた骨形成の誘導
MC3T3-E1を1×104個/wellずつ48wellプレート(Nunc)に播種した。CO2インキュベーター内で培養し、細胞がコンフルエント状態になったのを確認後、培養液を骨芽細胞分化用培地に交換した。【００４８】
この骨芽細胞分化用培地に、1及び4μg/mLの抗TRAILレセプター（DR5）モノクローナル抗体を加え、2〜3日毎に培地を交換した。培養開始から18日目で細胞を95％ エタノールで固定し、1％のアリザリンレッド溶液を200μL加えて染色した。その結果、図５に示したように、濃度依存的にアリザリン染色の強度が＋＋、＋と上昇した。【００４９】
４−２  TRAILレセプター抗体によるヒト間葉系幹細胞を用いた骨形成の誘導
hMSC (Lonza)を3×104個/wellずつ24wellプレート(Nunc)に播種した。CO2インキュベーター内で培養し、細胞が70%コンフルエント状態になったのを確認後、培養液を骨芽細胞分化用培地に交換した。【００５０】
この骨芽細胞分化用培地に、2μg/mLの抗TRAILレセプター（DR5）モノクローナル抗体を加え、2〜3日毎に培地を交換した。培養開始から17日目で細胞を4％PFAにて固定し、1％のアリザリンレッド溶液を400μL加えて染色した。その結果、図６に示したように、アリザリン染色の強度が＋と上昇した。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
TRAIL及び抗TRAILレセプター抗体を含む骨形成促進剤は、骨代謝疾患の予防又は治療に用いることができる。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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