(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩を含有してなる、アルツハイマー病の予防及び／又は治療剤を提供する。式（Ｉ）及び（ＩＩ）中各記号は添付の明細書に記載の通りである。2019004321.tif 000020
2019004321.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）：
【化１】
2019004321.tif 000014
又は式（II）：
【化２】
2019004321.tif 000015
〔式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。〕
で示される化合物又はその塩を含有してなる、アルツハイマー病の予防ｈｙ又は治療剤。
【請求項２】
Ｒ1が臭素原子である、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
Ｒ２がメチル基又はイソプロピル基であり、Ｒ3がイソプロピル基、イソブチル基、sec−ブチル基又はベンジル基である、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
前記化合物がα-エルゴクリプチン、ブロモクリプチン、エルゴクリスチン、ジヒドロエルゴクリスチン、エルゴタミン及びジヒドロエルゴタミンからなる群より選択される少なくとも１種の化合物又はその塩である、請求項１に記載の剤。
【請求項５】
前記化合物がブロモクリプチン又はその塩である、請求項４に記載の剤。
【請求項６】
前記アルツハイマー病がプレセニリン1の変異に起因する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
【請求項７】
哺乳動物に対して、式（I）：
【化３】
2019004321.tif 000016
又は式（II）：
【化４】
2019004321.tif 000017
〔式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。〕
で示される化合物又はその塩の有効量を投与することを特徴とする、該哺乳動物におけるアルツハイマー病の予防又は治療方法。
【請求項８】
アルツハイマー病の予防又は治療における使用のための、式（I）：
【化５】
2019004321.tif 000018
又は式（II）：
【化６】
2019004321.tif 000019
〔式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。〕
で示される化合物又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病の予防及び/又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、ペプチド型麦角アルカロイドを含有してなる、アルツハイマー病の予防及び/又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（AD）は、認知機能低下、人格の変化を主な症状とする認知症の一種である。AD脳病変の特徴としては、神経細胞の変性消失とそれに伴う大脳萎縮、老人斑の多発、神経原線維変化（NFT）の多発があげられる。このうち、老人斑は、アミロイドβ（Aβ）ペプチドの凝集蓄積であることが知られている。Aβは、アミロイド前駆タンパク質（APP）のβ-及びγ-セクレターゼによる切断の結果産生する38 - 43アミノ酸からなるペプチドである。このうち、Aβ42は凝集能および神経細胞毒性が高いことが知られており、家族性アルツハイマー病（FAD）の原因変異を有する細胞において、Aβ42/40比の上昇が認められることが報告されている。【０００３】
従来より、Aβ量、特にAβ42量を減少させることが、ADの発症を抑制するためのキーポイントになることが広く認識されている。このことは、β-またはγ-セクレターゼの調節薬のいくつかが、プレセニリン１（PSEN1）又は変異APPを過剰発現したマウスモデルにおいて、AD発症を改善することが示されていることからも明らかである。
しかし、これらの調節薬は、ADモデルマウスを用いた前臨床試験において大きな成功を得たにもかかわらず、ヒトへ転用した場合、多くの臨床試験において失敗に終わっている。【０００４】
これまでに、抗体療法の結果から、老人斑をはじめとするAβ蓄積に起因する病変は可逆的であることが示されている。しかし、残念ながらAβの蓄積を解消したとしても、臨床的な有効性は得られておらず、軽度認知障害（Mild cognitive impairment, MCI）に至るよりも前の段階での介入が必要と考えられている。MCIに至る前段階でもすでにAβの病理的変化は先行していることがアミロイドPET（ポジトロン・エミッション・トモグラフィー）で示されており、非常に多く存在すると予測されるAD予備群に対する、発症前段階での介入が必要である。特に優性遺伝病ネットワーク（DIAN）研究をはじめとした予防治療の重要性が強調されている。しかし、このような対象に非常に高価な抗体医薬の積極的な適用は現実的でない。また、多くのAβを標的とした化合物を用いた内服治療も試みられてきたが、副作用の問題もあり発売に至ったものはない。
従って、薬物の安全性の解決と先制治療（早期治療）がAβを標的とする薬剤を有効とするためには重要であると考えらえる。【０００５】
また一方で、高齢化社会の進展に伴うAD患者の急増は医療経済を圧迫している。2010年時点でAD患者3500万人にかかる医療費は年間6040億ドルであり、2050年にはAD患者が1億1400万人に増加し、さらに医療費が高騰することが予測される。このような状況の下、AD治療に対する、ドラッグ・リポジショニング、すなわち、既存薬の転用が重要視されている（非特許文献１）。既存薬は、すでに膨大な安全性や体内動態に関する臨床情報が蓄積されており（Chembl databaseなど）、安全性が確立されている。そのため、臨床症状はないが、アミロイド検査で陽性と判定されたAD予備群に対する先制治療としての介入が期待できる。実際に、Valsartan（降圧薬）、Liraglutide（抗糖尿病薬）が臨床治験に進んでいる。このように、AD治療におけるドラッグ・リポジショニングの重要性は今後さらに増すものと予測される。【０００６】
ところで、患者由来のiPS細胞（疾患iPS細胞）から分化誘導された病因となる細胞は、in vitroで患者の病態を再現していると予測されることから、有力な薬効評価系として期待されている。ヒトiPS細胞由来神経細胞に関する最近の報告では、薬物応答性を評価するツールとしてのヒト神経細胞の重要性が強調されている（非特許文献２−４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Front. Biosci. (Schol. Ed). 7,184-8 (2015)
【非特許文献２】PLoS One 6, e25788 (2011)
【非特許文献３】JAMA Neurol. 71, 1481-9 (2014)
【非特許文献４】Stem Cell Reports 1,491-498 (2013)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、アルツハイマー病に対する、新規且つ有効な予防及び／又は治療手段等を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を達成すべく、まず家族性AD患者より樹立した人工多能性幹細胞（induced pluripotent stem cell: iPS細胞）から、大脳皮質神経細胞を分化誘導した。この神経細胞を用いて、ADの病原物質であるアミロイドベータ蛋白（amyloid beta: Aβ）の代謝動態をモニタリングする実験系を構築した。この実験系を用いて、既存薬ライブラリーのスクリーニング解析を実施し、Aβ産生を減少させる薬剤を探索した。探索の結果、ブロモクリプチン（bromocriptine mesylate）添加が、Aβの産生を減らすこと、及びブロモクリプチンの類似化合物も同様にAβ産生を減少させることを見出した。本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。【００１０】
すなわち、本発明は以下の通りのものである。
［１］式（I）：【００１１】
【化１】
2019004321.tif 000003
【００１２】
又は式（II）：【００１３】
【化２】
2019004321.tif 000004
【００１４】
〔式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。〕
で示される化合物又はその塩を含有してなる、アルツハイマー病の予防及び／又は治療剤。
［２］Ｒ1が臭素原子である、［１］に記載の剤。
［３］Ｒ２がメチル基又はイソプロピル基であり、Ｒ3がイソプロピル基、イソブチル基、sec−ブチル基又はベンジル基である、［１］又は［２］に記載の剤。
［４］前記化合物がα-エルゴクリプチン、ブロモクリプチン、エルゴクリスチン、ジヒドロエルゴクリスチン、エルゴタミン及びジヒドロエルゴタミンからなる群より選択される少なくとも１種の化合物又はその塩である、［１］に記載の剤。
［５］前記化合物がブロモクリプチン又はその塩である［４］に記載の剤。
［６］前記アルツハイマー病がプレセニリン1の変異に起因する、［１］〜［５］のいずれかに記載の剤。
［７］  哺乳動物に対して、式（I）：【００１５】
【化３】
2019004321.tif 000005
【００１６】
又は式（II）：【００１７】
【化４】
2019004321.tif 000006
【００１８】
〔式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。〕
で示される化合物又はその塩の有効量を投与することを特徴とする、該哺乳動物におけるアルツハイマー病の予防及び／又は治療方法。
［８］アルツハイマー病の予防及び／又は治療における使用のための、式（I）：【００１９】
【化５】
2019004321.tif 000007
【００２０】
又は式（II）：【００２１】
【化６】
2019004321.tif 000008
【００２２】
〔式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。〕
で示される化合物又はその塩。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、これまで効果的な予防又は治療薬が存在しなかった、アルツハイマー病に対する予防及び/又は治療が可能となる。特に、安全性が確認されている既存薬を有効成分とするものは、副作用の懸念が少ない。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ドパミン塩酸塩、SKF38393、ブロモクリプチン又はPD168077を用いたドパミン受容体刺激によるAβ産生低下作用の結果を示す。横軸は添加した化合物の培地中での濃度、縦軸はDMSOを添加したコントロールと比較した場合のAβ産生量の相対的な割合を示す（それぞれ、n=3）。エラーバーは、標準偏差を示す。
【図２】図２は、非麦角系2型ドパミン受容体アゴニスト（Talipexole、Pramipexole、Ropinirole）によるAβ産生低下作用の結果を示す。横軸は添加した化合物の培地中での濃度、縦軸はDMSOを添加したコントロールと比較した場合のAβ産生量の相対的な割合を示す（それぞれ、n=3）。エラーバーは、標準偏差を示す。
【図３】図３は、麦角系2型ドパミン受容体アゴニスト（Cabergoline、Pergolide）によるAβ産生低下作用の結果を示す。横軸は添加した化合物の培地中での濃度、縦軸はDMSOを添加したコントロールと比較した場合のAβ産生量の相対的な割合を示す（それぞれ、n=3）。
【図４】図４は、ブロモクリプチン類似化合物（Alpha-Ergocryptine、Ergocristine、Dihydroergotamine Mesylate、Ergotamine Tartrate、Dihydroergocristine mesylate）によるAβ産生低下作用の結果を示す。横軸は添加した化合物の培地中での濃度、縦軸はDMSOを添加したコントロールと比較した場合のAβ産生量の相対的な割合を示す（それぞれ、n=3）。エラーバーは、標準偏差を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明を説明する。本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常に用いられる意味を有する。
【００２６】
本発明は、ペプチド型麦角アルカロイドを含有することを特徴とする、アルツハイマー病の予防及び/又は治療剤（以下「本発明の医薬」ともいう）を提供する。
【００２７】
本発明において、「ペプチド型麦角アルカロイド」（以下「本発明の化合物」と略記する場合がある）とは、エルゴペプチン(ergopeptine)とも呼ばれ、エルゴリン環において、リゼルグ酸誘導体のアミド基と同位置に３つのペプチドなどが付加した誘導体を意味する。この構造は、プロリンと他の2つのαアミノ酸を含み、これらがシクロールで結合されている。本発明で用いるペプチド型麦角アルカロイドの構造式を以下の式（I）又は(II)として示す。
【００２８】
【化７】
2019004321.tif 000009
【００２９】
【化８】
2019004321.tif 000010
【００３０】
上記式（I）及び(II)中、
Ｒ１は、水素原子又はハロゲン原子を示し；
Ｒ２及びＲ3は、それぞれ独立して、炭素数１〜５の直鎖若しくは分岐状のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基を示す。
【００３１】
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられる。後述の実施例に示す通り、Aβ42/40比率低下の観点からは、本発明の化合物のエルゴリン環構造内2位のブロモ基修飾が好ましいため、ハロゲン原子としては、臭素原子が好ましい。アルキル基としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、n−ペンチル、イソペンチル、tert−ペンチル、ネオペンチル、２−ペンチル、３−ペンチルなどの基が挙げられ、Ｒ２としては、メチル基及びイソプロピル基が好ましく、Ｒ3としては、イソプロピル基、イソブチル基及びsec−ブチル基が好ましい。アリール基としては、フェニル基、ベンジル基、トリル基、o-キシリル基、ナフチル基などが挙げられ、好ましくはベンジル基である。
【００３２】
後述の実施例で記載する通り、Aβ産生量の低下作用には、式（I）又は式(II)で示さるペプチド型麦角アルカロイドの有する構造が重要であることが示された。従って、本発明に用いることができるペプチド型麦角アルカロイドとしては、式(I)又は式(II)で示されるものであれば特に制限されないが、具体例として、例えば、Ｒ２位のアミノ酸がバリンであるエルゴトキシン類、Ｒ２位のアミノ酸がアラニンであるエルゴタミン類が挙げられる。エルゴトキシン類としては、例えば、表1に示すような、エルゴクリスチン（ergocristine）、ジヒドロエルゴクリスチン(dihydroergocristine)、エルゴコルニン（ergocornine）、ジヒドロエルゴコルニン（dihydroergocornine）、α-エルゴクリプチン（α-ergocryptine）（及びその化合物のＲ１の水素原子が臭素原子で置換された化合物であるブロモクリプチン（bromocriptine）)、ジヒドロα-エルゴクリプチン（dihydroα-ergocryptine）、β-エルゴクリプチン（β-ergocryptine）、ジヒドロβ-エルゴクリプチン（dihydroβ-ergocryptine）などが挙げられ、エルゴタミン類としては、エルゴタミン（ergotamine）、ジヒドロエルゴタミン（dihydroergotamine）、エルゴバリン（ergovaline）、ジヒドロエルゴバリン（dihydroergovaline）、α-エルゴシン（α-ergosine）、ジヒドロα-エルゴシン（dihydroα-ergosine）、β-エルゴシン（β-ergosine）、ジヒドロβ-エルゴシン（dihydroβ-ergosine）などが挙げられる。中でも、α-エルゴクリプチン、ブロモクリプチン、エルゴクリスチン、ジヒドロエルゴクリスチン、エルゴタミン及びジヒドロエルゴタミンが好ましい。
【００３３】
【表１】
2019004321.tif 000011
【００３４】
本発明の化合物は、市販品を用いるか、あるいは各化合物についてそれぞれ自体公知の方法により製造することができる。例えば、米国における各化合物の販売元は、Drugs@FDA（http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm）等により知ることができる。また、ブロモクリプチンは、例えば、米国特許第3752814号明細書、米国特許第3752888号明細書などに記載された方法又はこれらに準ずる方法に従って製造することができ、他の化合物も同様に製造することができる。
【００３５】
本発明の化合物には、フリー体だけでなく、その薬理学的に許容される塩も包含されるものとする。薬理学的に許容される塩は化合物の種類によって異なるが、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩等）、アルミニウム塩、アンモニウム塩等の無機塩基塩、並びにトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン等の有機塩基塩などの塩基付加塩、あるいはメシル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩等の有機酸塩などの酸付加塩が挙げられる。
【００３６】
本発明の化合物が、光学異性体、立体異性体、位置異性体、回転異性体等の異性体を有する場合には、いずれか一方の異性体も混合物も当該化合物に包含される。例えば、表１に記載のいずれかの化合物に光学異性体が存在する場合には、ラセミ体から分割された光学異性体も当該化合物に包含される。これらの異性体は、自体公知の合成手法、分離手法（例、濃縮、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶等）、光学分割手法（例、分別再結晶法、キラルカラム法、ジアステレオマー法等）等によりそれぞれを単品として得ることができる。
【００３７】
本発明の化合物は、結晶であってもよく、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても本発明の化合物に包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、結晶化することによって製造することができる。
【００３８】
本発明の化合物は、溶媒和物（例、水和物等）であっても、無溶媒和物（例、非水和物等）であってもよく、いずれも本発明の化合物に包含される。
【００３９】
また、同位元素（例、3H、14C、35S、125I等）等で標識された化合物も、本発明の化合物に包含される。
【００４０】
本発明において、治療対象となるアルツハイマー病（AD）は、孤発性及び家族性のいずれのADであってもよい。家族性ADの場合、原因遺伝子は特に制限されず、アミロイド前駆体タンパク質（Amyloid Precursor Protein; APP）、プレセニリン１(Presenilin 1; PSEN1)、プレセニリン2（Presenilin 2; PSEN2）の遺伝子等をはじめとする任意の既知原因遺伝子であり得る。
このようなAPP変異としては、dup APP 変異、APP KM670/671NL 変異、APP D678N 変異、APP E682K 変異、APP A692G 変異、APP E693K 変異、APP E693Q 変異、APP E693G 変異、APP E693del(APP E693Δ) 変異、APP D694N 変異、APP L705V 変異、APP A713T 変異、APP T714A 変異、APP T714I 変異、APP V715M 変異、APP V715A 変異、APP I716V 変異、APP I716F 変異、APP I716T 変異、APP V717I 変異などが挙げられる。
プレセニリン１変異としては、PSEN1 A79V 変異、PSEN1 V82L 変異、PSEN1 ΔI83/M84 変異、PSEN1 L85P 変異、PSEN1 V89L 変異、PSEN1 C92S 変異、PSEN1 V94F 変異、PSEN1 V96F 変異、PSEN1 V97L 変異、PSEN1 F105I 変異、PSEN1 F105L 変異、PSEN1 L113Q 変異、PSEN1 L113P 変異、PSEN1 Intron4; InsTAC 変異、PSEN1 Y115H 変異、PSEN1 Y115D 変異、PSEN1 Y115C 変異、PSEN1 T116N 変異、PSEN1 T116I 変異、PSEN1 P117A 変異、PSEN1 P117S 変異、PSEN1 P117R 変異、PSEN1 P117L 変異、PSEN1 E120K 変異、PSEN1 E120D 変異、PSEN1 E123K 変異、PSEN1 N135D 変異、PSEN1 N135S 変異、PSEN1 A136G 変異、PSEN1 F139V 変異、PSEN1 F139K 変異、PSEN1 F139T 変異、PSEN1 F139I 変異、PSEN1 I143F 変異、PSEN1 I143N 変異、PSEN1 I143T 変異、PSEN1 F146L 変異、PSEN1 F146V 変異、PSEN1 F146I 変異、PSEN1 T147I 変異、PSEN1 L153V 変異、PSEN1 Y154N 変異、PSEN1 Y154C 変異、PSEN1 InsFI 変異、PSEN1 H163Y 変異、PSEN1 H163R 変異、PSEN1 W165G 変異、PSEN1 W165C 変異、PSEN1 L166del 変異、PSEN1 L166H 変異、PSEN1 L166P 変異、PSEN1 L166R 変異、PSEN1 ΔI167変異、PSEN1 ΔI168 変異、PSEN1 S169P 変異、PSEN1 S169L 変異、PSEN1 S170F 変異、PSEN1 L171P 変異、PSEN1 L173W 変異、PSEN1 L173F 変異、PSEN1 L174F 変異、PSEN1 L174R 変異、PSEN1 F177L 変異、PSEN1 F177S 変異、PSEN1 S178P 変異、PSEN1 G183V 変異、PSEN1 E184D 変異、PSEN1 G206S 変異、PSEN1 G206D 変異、PSEN1 G206A 変異、PSEN1 G206V 変異、PSEN1 G209R 変異、PSEN1 G209E 変異、PSEN1 G209V 変異、PSEN1 I213L 変異、PSEN1 I213F 変異、PSEN1 I213T 変異、PSEN1 H214D 変異、PSEN1 H214Y 変異、PSEN1 G217D 変異、PSEN1 L219F 変異、PSEN1 L219P 変異、PSEN1 Q222R 変異、PSEN1 Q222H 変異、PSEN1 Q223R 変異、PSEN1 L226F 変異、PSEN1 L226R 変異、PSEN1 I229F 変異、PSEN1 A231T 変異、PSEN1 A231V 変異、PSEN1 F233L 変異、PSEN1 F233V 変異、PSEN1 F233T 変異、PSEN1 F233I 変異、PSEN1 L235V 変異、PSEN1 L235P 変異、PSEN1 F237I 変異、PSEN1 F237L 変異、PSEN1 T245P 変異、PSEN1 A246E 変異、PSEN1 L248R 変異、PSEN1 L250V 変異、PSEN1 L250S 変異、PSEN1 Y256S 変異、PSEN1 A260V 変異、PSEN1 V261L 変異、PSEN1 V261F 変異、PSEN1 L262F 変異、PSEN1 C263R 変異、PSEN1 C263F 変異、PSEN1 P264L 変異、PSEN1 G266S 変異、PSEN1 P267S 変異、PSEN1 P267L 変異、PSEN1 R269G 変異、PSEN1 R269H 変異、PSEN1 L271V 変異、PSEN1 V272A 変異、PSEN1 E273A 変異、PSEN1 T274R 変異、PSEN1 R278K 変異、PSEN1 R278T 変異、PSEN1 R278I 変異、PSEN1 R278S 変異、PSEN1 E280A 変異、PSEN1 E280G 変異、PSEN1 L282V 変異、PSEN1 L282F 変異、PSEN1 L282R 変異、PSEN1 P284S 変異、PSEN1 P284L 変異、PSEN1 A285V 変異、PSEN1 L286V 変異、PSEN1 L286P 変異、PSEN1 Δ9 変異、PSEN1 Δ9Finn 変異、PSEN1 869-22_869-23ins18 変異、PSEN1 T291P 変異、PSEN1 R358Q 変異、PSEN1 S365A 変異、PSEN1 S365Y 変異、PSEN1 R377F 変異、PSEN1 G378E 変異、PSEN1 G378V 変異、PSEN1 L381V 変異、PSEN1 G384A 変異、PSEN1 F386S 変異、PSEN1 S390I 変異、PSEN1 V391F 変異、PSEN1 L392V 変異、PSEN1 L392P 変異、PSEN1 G394V 変異、PSEN1 N405S 変異、PSEN1 A409T 変異、PSEN1 C410Y 変異、PSEN1 V412I 変異、PSEN1 L418F 変異、PSEN1 L420R 変異、PSEN1 L424V 変異、PSEN1 L424F 変異、PSEN1 L424H 変異、PSEN1 L424R 変異、PSEN1 A426P 変異、PSEN1 A431E 変異、PSEN1 A431V 変異、PSEN1 A434C 変異、PSEN1 L435F 変異、PSEN1 P436S 変異、PSEN1 P436Q 変異、PSEN1 I439V 変異、PSEN1 ΔT440 変異などが挙げられる。
プレセニリン2変異としては、PSEN2 R71W 変異、PSEN2 A85V 変異、PSEN2 T122P 変異、PSEN2T122R 変異、PSEN2 N141I 変異、PSEN2 V148I 変異、PSEN2 F174V 変異、PSEN2 S175C 変異、PSEN2 Y231C 変異、PSEN2 Q228L 変異、PSEN2 F239V 変異、PSEN2 F239I 変異、PSEN2 T430F 変異、PSEN2 D439A 変異などが挙げられる。
【００４１】
本発明の医薬において、本発明の化合物を２種以上用いる場合、あるいは他の治療薬と併用する場合、これらの化合物は、それぞれ単独で製剤化してもよいし、合剤としてもよい。前者の場合、各製剤を同一対象に対して同時にまたは時間差をおいて投与することができる。
【００４２】
本発明の医薬は、有効成分である本発明の化合物をそのまま単独で、または薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤等と混合し、適当な剤型の医薬組成物として経口的又は非経口的に投与することができる。
【００４３】
経口投与のための組成物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等が挙げられる。一方、非経口投与のための組成物としては、例えば、注射剤、坐剤等が用いられ、注射剤は静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤等の剤形を包含しても良い。これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マンニトール、ソルビトールのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α澱粉、デキストリンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルランのような有機系賦形剤；及び、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機系賦形剤である）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビーズワックス、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；及び、上記澱粉誘導体である）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、及び、前記賦形剤と同様の化合物である）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・セルロース類である）、乳化剤（例えば、ベントナイト、ビーガムのようなコロイド性粘土；水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムのような金属水酸化物；ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウムのような陰イオン界面活性剤；塩化ベンザルコニウムのような陽イオン界面活性剤；及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルのような非イオン界面活性剤である）、安定剤（メチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；及び、ソルビン酸である）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等である）、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造される。
【００４４】
本発明の医薬の有効成分である本発明の化合物の投与量は、化合物の種類、投与対象の症状、齢、体重、薬物受容性等の種々の条件により変化し得るが、経口投与の場合には、１回当たり下限0.1mg（好適には0.5mg）、上限1000mg（好適には500mg）を、非経口的投与の場合には、１回当たり下限0.01mg（好適には0.05mg）、上限100mg（好適には50mg）を、成人に対して１日当たり1乃至6回投与することができる。症状に応じて増量もしくは減量してもよい。特に、本発明の化合物が上記疾患以外の疾患に対する医薬品として、既に上市されている場合には、各化合物について、安全性が確認されている範囲で、適宜投与量を選択することができる。例えば、化合物の安全性に関する情報は、アメリカ国立医学図書館が運営するDailyMed（http://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/index.cfm）より入手することができる。
【００４５】
さらに、本発明の医薬は、他の薬剤、例えば、BACE inhibitor IV、JNJ-40418677、Semagacestat、AcitretinなどのAβ病態改善作用が既知である化合物、Sulfide slindac、Imanitib、Flurbiprofen、Donepezil、Rivastigmine、Galanthamine、Memantinなどの既存のAD治療薬、本発明者らが見出したCilostazol、Cromolyn、Fluvastatin、Probucol、TopiramateなどのAβの産生低下作用を有する化合物と併用してもよい。併用する場合の好ましい組合せとして、本発明の化合物、Cromolyn及びTopiramateの組合せ、あるいは本発明の化合物、Cilostazol及びProbucolの組合せが挙げられる。本発明の医薬及びこれらの他の薬剤は、同時に、順次又は別個に投与することができる。
【００４６】
本発明の化合物の有効量又は本発明の医薬を哺乳動物（予防及び／又は治療の対象とする動物）に投与する予防及び／又は治療方法も、本発明に含まれる。該動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒト）が挙げられ、好ましくはヒトである。有効量、投与量やその他の事項については、上記で記載した通りである。
【００４７】
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００４８】
後述の実施例では、以下のようにして実験を行った。
１．神経細胞の作製
プレセニリン１遺伝子にG384Aヘテロ接合変異を持つ家族性アルツハイマー病患者から樹立したiPS細胞から、大脳皮質神経細胞を分化誘導しアッセイに用いた。大脳皮質神経細胞分化誘導するため、iPS細胞にNeurogenin2遺伝子を導入し、ドキシサイクリンを添加して5日間一過的に発現させることにより、ヒトiPS細胞を大脳皮質神経へと分化させた。【００４９】
２．化合物調整
表2の化合物は全て、DMSOに25 mMで溶解し使用した。【００５０】
【表２】
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【００５１】
３．Aβアッセイ
大脳皮質神経細胞を、96 well plate（CORNING社Edge plate）に、10万細胞/wellで播種したのち3日目に、培地を全量交換し、その際に各種各濃度の化合物を添加した。48時間後に培地を回収し、400 g 5分間の遠心処理により死細胞の混入を防ぎ、-80℃で、Aβ測定まで保存した。
培養上清中の微量Aβ測定には、SECTOR Imager 2400（Meso Scale Discovery, U.S.A）を検出装置として使用し、SULFO-TAG標識抗体を電気化学発光法により検出し定量化した。-80℃で凍結していた培養上清25 μLを氷上で解凍し、Human (6E10) Abeta 3-Plex Base Kit（Meso Scale Discovery, U.S.A）のキットプロトコルに従い、Aβ1-40, 1-42の培養上清中濃度をそれぞれ測定した。【００５２】
実施例１：Aβ産生を減少させる薬剤の探索
家族性アルツハイマー病（Alzheimer’s disease: AD）患者より樹立した人工多能性幹細胞（induced pluripotent stem cell: iPS細胞）から、大脳皮質神経細胞を高純度かつ再現性の高い迅速法で分化誘導した。この神経細胞を用いて、ADの病原物質であるアミロイドベータ蛋白（amyloid beta: Aβ）の代謝動態をモニタリングする実験系を構築した。このAD患者由来大脳皮質神経細胞は、家族性ADの原因遺伝子であるPSEN1にG384Aヘテロ接合体変異を持つため、毒性Aβとして知られるAβ42サブタイプの産生が増加し、最も存在量の多いAβ40サブタイプの産生に対する比率ratio Aβ42/40が高い。この実験系を用いて、既存薬ライブラリーのスクリーニング解析を実施し、Aβ産生を減少させる薬剤を探索した。探索の結果、ブロモクリプチン（bromocriptine mesylate）添加が、Aβの産生を減らすことを見出した（図1）。Aβ低下作用は、Aβ40よりもAβ42サブタイプの産生を効率的に低下させ、結果としてAβ42/40比率を低下させた（図１）。【００５３】
実施例２：Aβ産生低下とドパミン受容体刺激作用との関係の検討
ブロモクリプチンは、ドパミン受容体（dopaminergic receptor: DR）に対してアゴニスト作用を持つことから、パーキンソン病治療薬として認可されている。ドパミン受容体刺激作用がAβ産生低下に働くかどうか、あるいはブロモクリプチンの構造自体がドパミン受容体を介さない作用機序でAβ産生を低下させるかどうかを決定するため、以下の検討を行った。【００５４】
（１）Aβ産生低下作用とDR（dopamine receptor）サブタイプについての検討
ブロモクリプチンはDRのうち、2型DR（dopamine receptor type 2: D2R）に高い親和性を持ち、D2R選択性が高い。そこで、D2R以外のDRサブタイプを刺激することでAβ産生が変化するかどうか検討した。1型及び5型に選択的なDRアゴニストであるSKF38393、4型DRに選択的DRアゴニストであるPD168077、さらに非選択的DRアゴニストであるドパミン塩酸塩を、それぞれ0.0016, 0.008, 0.04, 0.2, 1, 5, 25 μMの濃度で大脳皮質神経細胞に添加した。しかし、いずれの化合物もAβ産生を変化させなかった（図1）。この結果から、1型DR、4型、5型DRの刺激は、Aβ産生に関与しないことが特定された。【００５５】
（２）Aβ産生低下作用と2型DR受容体刺激作用についての検討
次に、ブロモクリプチンのAβ産生低下作用は、D2Rアゴニスト作用によるものか、D2R刺激経路以外によるものかを探索した。ブロモクリプチンはその構造骨格の特性から麦角系D2Rアゴニストとして分類される。一方で、麦角構造を持たない非麦角系D2Rアゴニストも同様にパーキンソン病治療薬として広く臨床応用されているが、ブロモクリプチンとは化合物構造が大きく異なる。非麦角系D2Rアゴニストとして、Talipexole (B-HT 920 dihydrochloride)、Pramipexole dihydrochloride、Ropinirole hydrochlorideを、それぞれ0.0016, 0.008, 0.04, 0.2, 1, 5, 25 μMの濃度で大脳皮質神経細胞に添加した。しかし、いずれの化合物もAβ産生を変化させなかった（図2）。
一方で、麦角系D2Rアゴニストとして、Cabergoline、Pergolide mesylateを、0.0016, 0.008, 0.04, 0.2, 1, 5, 25 μMの濃度で大脳皮質神経細胞に添加した。すると、Cabergolineは25 μMで、Pergolide mesylateは5, 25 μMでAβ産生低下作用を示した（図3）。【００５６】
これらの結果から、ブロモクリプチンのAβ産生低下作用は、D2R受容体刺激作用でなはなく、ブロモクリプチンの有する構造自体が重要であることが示唆された。【００５７】
（３）エルゴリン骨格を持つ化合物とAβ産生低下作用の関連性探索
麦角系D2Rアゴニストであるブロモクリプチンは、エルゴリン環構造にプロリン・バリン・ロイシンの3つのペプチドが結合したペプチド型アルカロイド構造を持つ。ペプチド型アルカロイド構造は、エルゴリン環骨格に結合した3つのペプチドの組合せで様々な類似化合物が存在し異なる生理活性を持つことが知られている。ブロモクリプチンのAβ産生低下作用が、これらの構造に共通して見られるか、また類似構造のうちどの構造がAβ産生低下作用にとって有用であるか検討した。【００５８】
ブロモクリプチン類似化合物を探索するため、ChEMBLデータベース（https://www.ebi.ac.uk/chembl/）にSMILES形式で記載したブロモクリプチン構造を読み込ませ、similarity searchを実行した（http://www.ebi.ac.uk/chebi/userManualForward.do）。結果、DB:ChEMBL_version 21に登録された1,928,903化合物から、Tanimoto coefficientに基いて類似性の高い化合物を探索し、カットオフを80%以上として定め、市販購入可能なalpha-ergocryptine、ergocristine、ergotamine tartrate、dihydroergocristine mesylate、dihydroergotamine mesylateを抽出し、Aβ産生低下作用を検討した（表3）。【００５９】
【表３】
2019004321.tif 000013
【００６０】
これらすべての薬剤で、ブロモクリプチン同様にAβ産生低下作用が見られた（図4）。その中で、ブロモクリプチンのエルゴリン環構造内にあるブロモ基がないα-エルゴクリプチンは、ブロモクリプチンと同様にAβ産生低下作用を示したものの、Aβ40と42を同程度に低下させ、Aβ42/40比率は変化させなかった。このことから、Aβ42/40比率低下には、エルゴリン環構造内にあるブロモ基修飾が重要であることが示された。
さらに、ペプチド型アルカロイド構造に含まれる3つのペプチドの組み合わせについては、Aβ産生低下作用の軽重に大きな影響はなく、ergocristine（プロリン・バリン・フェニルアラニン）、ergotamine tartrate（プロリン・アラニン・フェニルアラニン）、dihydroergocristine mesylate（プロリン・バリン・フェニルアラニン）、dihydroergotamine mesylate（プロリン・アラニン・フェニルアラニン）は同様にAβ産生低下作用を示した。【００６１】
以上のことから、Aβ産生量の低下のためにはペプチド型麦角アルカロイドの構造が作用し、さらにエルゴリン環構造内2位のブロモ基修飾がAβ42/40比率低下作用に重要であることが示された。【００６２】
本出願は、日本国で出願された特願２０１７−１２６８０８（出願日：２０１７年６月２８日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明の化合物は、アルツハイマー病の予防及び／又は治療に有用である。特に、他の疾患に対する医薬品として既に上市されている薬剤は、安全性等の臨床及び非臨床データが蓄積されており、また、周辺化合物のライブラリーが既に存在するため、低コストにかつ迅速に、神経変性症を予防及び／又は治療可能な医薬品を開発できる可能性がある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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