【事件の表示】
　特許第２７７９３４５号「アミラーゼ耐性粒状デンプンの製造法」の請求項１〜１６に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第２７７９３４５号の請求項１〜１６に係る特許を維持する。
【理　由】
［１］手続きの経緯
　本件特許第２７７９３４５号の請求項１〜１６の発明は、平成８年６月７日に出願（優先権主張日１９９５年６月７日　米国）され、平成１０年５月８日に特許権の設定登録がなされ、その後、矢部信彦より特許異議申立てがなされ、平成１１年６月７日付けで特許権者に取消理由通知がなされ、平成１１年１２月２８日付けで特許権者より特許異議意見書が提出され、平成１２年７月２７日付けで特許権者に審尋通知がなされ、平成１２年１１月２２日付けで特許権者より回答書が提出され、平成１３年１月１９日付けで特許権者より上申書が提出され、平成１３年３月７日付けで特許権者に取消理由通知がなされ、平成１３年４月４日付けで特許権者より特許異議意見書と訂正請求書が提出され、平成１３年５月９日付けで特許異議申立人より上申書が提出され、平成１３年５月２５日付けで特許権者に審尋通知がなされ、平成１３年９月７日付けで特許権者より回答書が提出され、平成１３年１２月１４日付けで特許権者より上申書が提出されたものである。　
［２］訂正事項の適否についての判断
１.訂正事項
（１）訂正事項１
　特許請求の範囲の請求項１「少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率およびデンプンと水との混合物の重量に基づいて１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で加熱することにより耐性粒状デンプンを製造する方法。」を
「少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率および１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、加熱することにより耐性粒状デンプンを製造する方法。」と訂正する。
（２）訂正事項２
　段落番号【００１０】における「高アミロースデンプンを約６０〜１６０℃の温度で加熱する」を「高アミロースデンプンを約６０〜１６０℃の温度で、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、加熱する」と訂正する。
（３）訂正事項３
　段落番号【００２２】における「デンプンが粒状状態を維持し、そしてその複屈折性を失わないことが重要である。」を「デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で加熱される。」と訂正する。
（４）訂正事項４
　段落番号【００２３】における『従って、ここで使用されるものとして用語「粒状デンプン」は粒状構造を維持し、そしてある程度の結晶化度を有するデンプンを含む。』を『従って、ここで使用されるものとして用語「粒状デンプン」は粒状状態であり、該粒が複屈折性を示すデンプンを含む。』と訂正する。
２.訂正の目的の適否、訂正の範囲の適否及び特許請求の範囲の拡張・変更の存否
（１）訂正事項１について
　上記訂正事項１は、耐性粒状デンプンを製造する際の加熱条件を、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で加熱するものに限定するものであり、該加熱条件の限定は願書に添付した明細書の段落番号【００２２】、【００２３】及び【００２５】に記載されていたものである。
　したがって、上記訂正事項１は、特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当し、また、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内の訂正であり、また、特許請求の範囲を実質上拡張し、または変更するものでない。
（２）訂正事項２、３及び４について
　上記訂正事項２、３及び４は、いずれも、訂正事項１による特許請求の範囲の請求項１の訂正に伴って発明の詳細な説明の記載を訂正後の特許請求の範囲の請求項１の記載と整合させるためのものである。
　したがって、訂正事項２、３及び４は、明りょうでない記載の釈明を目的とするものに該当し、また、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内の訂正であり、また、特許請求の範囲を実質上拡張し、または変更するものでない。
３.独立特許要件についての判断
　訂正後の特許請求の範囲の請求項１〜１６に係る発明はその特許出願の際独立して特許を受けることができるものである。その理由は下記［３］の特許異議申立てについての判断の項で詳しく述べるのでここでは省略する。
４.むすび
　以上のとおりであるから、上記訂正は、平成１１年改正前の特許法第百二十条の四第二項及び同条第三項において準用する特許法第百二十六条第二項から第四項までの規定に適合するので、当該訂正を認める。
［３］特許異議申立てについての判断
１.特許異議申立ての概要
　特許異議申立人矢部信彦は、特許異議申立証拠として「平成６年度農林水産業特別試験研究成果報告会講演要旨集」、第１３頁〜第１４頁及び添付の表、グラフ及び酵素抵抗性澱粉含量の測定法の説明、〔報告会開催日時〕平成６年１２月９日１０：３０〜１６：００〕〔報告会開催場所〕農林水産省農林交流センター第１セミナー室、〔主催〕農林水産技術会議事務局振興課（甲第１号証、以下「刊行物１」という。）、「応用糖質科学」、第４１巻、第３号（通巻１５５号）、日本応用糖質科学会、平成６年８月３１日発行、第３８４頁（甲第２号証、以下「刊行物２」という。）、特開平４−１３０１０２号公報（甲第３号証、以下「刊行物３」という。）及び印南　敏、桐山修八編「改訂新版・食物繊維」第一出版株式会社、平成７年５月２０日発行、第３４０頁〜第３５８頁（甲第４号証、以下「刊行物４」という。）を提出して、
「本件特許設定登録時の本件請求項１〜１５に係る発明は上記甲第１号証（刊行物１）、甲第２号証（刊行物２）及び甲第３号証（刊行物３）に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであり、また、本件特許設定登録時の本件請求項１６に係る発明は上記甲第１号証（刊行物１）、甲第２号証（刊行物２）、甲第３号証（刊行物３）及び甲第４号証（刊行物４）に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本件特許設定登録時の本件請求項１〜１６に係る発明の特許は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであって、取り消されるべきものである。」
と主張している。
２.本件発明
　本件訂正明細書における請求項１〜１６に係る発明は、訂正明細書の記載からみて、その特許請求の範囲の請求項１〜１６に記載された次の事項により特定されるとおりのものである
「【請求項１】少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率および１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、加熱することにより耐性粒状デンプンを製造する方法。（以下「本件第１発明」という。）
【請求項２】高アミロースデンプンが２０〜４５％の合計湿分含有率を有する請求項１記載の方法。（以下「本件第２発明」という。）
【請求項３】デンプンが９０〜１２０℃の温度に加熱される請求項２記載の方法。（以下「本件第３発明」という。）
【請求項４】高アミロースデンプンがコーンデンプンである請求項１記載の方法。（以下「本件第４発明」という。）
【請求項５】高アミロースデンプンが化学変性されたものである請求項１記載の方法。（以下「本件第５発明」という。）
【請求項６】高アミロースデンプンが３０〜４０重量％の合計湿分含有率であり、そして加熱が９０〜１２０℃の温度で行われる請求項１記載の方法。（以下「本件第６発明」という。）
【請求項７】高アミロースデンプンが少なくとも６５重量％のアミロース含有率である請求項１記載の方法。（以下「本件第７発明」という。）
【請求項８】高アミロースデンプンが２０〜４５％の合計湿分含有率を有し、そして加熱が９０〜１２０℃の温度で行われる請求項７記載の方法。（以下「本件第８発明」という。）
【請求項９】粒状デンプン製品が少なくとも２０％の総食物繊維を有する請求項８記載の方法。（以下「本件第９発明」という。）
【請求項１０】高アミロースデンプンが３０〜４０重量％の総湿分含有率を有する請求項９記載の方法。（以下「本件第１０発明」という。）
【請求項１１】高アミロースデンプンがアミロース増量遺伝子型を有する植物源から抽出された実質的に純粋なデンプンであって、ブタノール精留／エクスクルージョンクロマトグラフィー測定により決定して１０重量％未満のアミロペクチンを含む、請求項１記載の方法。（以下「本件第１１発明」という。）
【請求項１２】高アミロースデンプンが２０〜４５重量％の総湿分含有率を有し、そして加熱が９０〜１２０℃の温度で行われる請求項１１記載の方法。（以下「本件第１２発明」という。）
【請求項１３】請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法により製造された耐性粒状デンプン。（以下「本件第１３発明」という。）
【請求項１４】少なくとも１２％の総食物繊維含有率を有する食物グレードの耐性粒状デンプンを含む食品。（以下「本件第１４発明」という。）
【請求項１５】請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法により調製された耐性粒状デンプンを含む食品。（以下「本件第１５発明」という。）
【請求項１６】シリアル、パン、クラッカー、クッキー、ケーキ、パスタ、飲料物、揚げ物および被覆食品並びにスナックを含む請求項１５記載の食品。（以下「本件第１６発明」という。）
３.刊行物の記載事項
ａ.上記刊行物１（甲第１号証）について
　取消理由に引用された上記刊行物１（甲第１号証）には次の事項が記載されている。
「新食品素材としての難消化性デンプンの開発」
（第１３頁、表題）、
「難消化性デンプン（Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｓｔａｒｃｈ　以下省略してＲＳという）は、食物繊維と同様に小腸の消化酵素の作用を逃れ、大腸に入って微生物に利用されるという食物繊維様の効果をもつ。」（第１３頁第４行〜第６行）、
「ＲＳの含量は、Ｐｒｏｓｋｙ法とＥｎｇｌｙｓｔ法を参考に、試料をＫＯＨ処理で糊化したものを対照にし、試料のα−アミラーゼによる分解の程度より求めた（詳細は表１の脚注３）参照）。」（第１３頁第１０行〜第１１行）、
「市販の３種類のトウモロコシデンプン；うるち（ＮＣＳ）、もち（ｗａｘｙ，ｗｘ，ＷＣＳ）、及びハイアミロース（ａｍｙｌｏｓｅ−ｅｘｔｅｎｄｅｒ，ａｅ，ハイロン５　ＨＣＳ５）については、アミロースをほとんど含まないＷＣＳはもともとＲＳ含量が少ないだけでなく、今回の処理ではほとんどＲＳの増加は見られなかった。２５％程度のアミロースを含むＮＣＳも、もともとＲＳ含量が少なく、湿熱処理ではほとんど影響を受けないが、糊化・凍結・融解処理によりＲＳ含量の大きな増加を示した。」（第１３頁第１６行〜第２０行）、
「コメ、モチゴメ、コムギ、サツマイモ、ジャガイモの市販デンプンを含む９種類のデンプンについて行った結果も、市販高アミローストウモロコシデンプンであるＨｙｒｏｎ５とＨｙｒｏｎ７が、湿熱処理によるＲＳ含量の増加が大きく、増加の程度は処理の温度が高く、時間が長いほど大きくなることがわかった。」（第１３頁第２１行〜第２４行）、
「ＲＳ含量が多くなるＨｙｒｏｎ５やＨｙｒｏｎ７の湿熱処理ではアミロースの低分子化を伴い」（第１３頁第２７行〜第２８行）、
「これをイエローケーキやクッキーへ添加することは可能であるが、日本的な食品（例えば飯米やうどんなど）に加える方法については今後さらに検討が必要である。」（第１３頁第３０行〜第３１行）、
「Ｈｙｌｏｎ５澱粉（王子コーンスターチ）のＲＳ含量は未処理のとき１４.２％で、糊化開始温度が７３℃、糊化ピーク温度が８５℃で、糊化終了温度が１１０℃であり、１００℃で２０分湿熱処理したもののＲＳ含量は２０．０％で、１２０℃で２０分湿熱処理したもののＲＳ含量は３９.８％で、１３０℃で６０分湿熱処理したもののＲＳ含量は４３.１％であり、Ｈｙｌｏｎ７澱粉（王子コーンスターチ）のＲＳ含量は未処理のとき３４.３％で、糊化開始温度が８０℃、糊化ピーク温度が９９℃で、糊化終了温度が１２０℃であり、１００℃で２０分湿熱処理したもののＲＳ含量は４４．４％で、１２０℃で２０分湿熱処理したもののＲＳ含量は５６.５％で、１３０℃で６０分湿熱処理したもののＲＳ含量は６４.６％であること」（第１４頁に記載の表１）。
ｂ.上記刊行物２（甲第２号証）について
　上記刊行物２（甲第２号証）には次の事項が記載されている。
「試料としてノーマルトウモロコシ、モチトウモロコシ、ハイロン５トウモロコシ、ハイロン７トウモロコシ、ウルチ米、モチ米、小麦、サツマイモ、ジャガイモの澱粉を用いた。澱粉の処理方法として脱脂処理、温水処理（５５℃，１週間）、湿熱処理（１００℃，２０分間、または１２０℃，２０分間）を行った。」（第３８４頁第６行〜第９行）、
「未処理澱粉の中では、ハイロン５トウモロコシ澱粉とハイロン７トウモロコシ澱粉が高い難消化性澱粉の含量を示し、湿熱処理するとさらにその含量は増加した。」（第３８４頁第１７行〜第１９行）。
ｃ.上記刊行物３（甲第３号証）について
　取消理由に引用された上記刊行物３（甲第３号証）には次の事項が記載されている。
「湿熱処理澱粉の効率的製造法」（発明の名称）、
「〔従来の技術〕馬鈴薯澱粉やコーンスターチを関係湿度１００％の下で９５〜１００℃で、加熱すると、粒の外観的な変化を伴わずに、物理的な特性が変化することは、１９６７年Ｖ，Ｌ，ＳＡＩＲによってシリアル、ケミストリー（４４巻１月号８頁〜２６頁）に詳しく報告されている。この報告によれば、澱粉を厚さ２センチメートル程の薄い層に広げて、関係湿度１００％の加圧容器に入れ９５〜１００℃で１６時間ほど加熱している。また、澱粉に加湿して水分を１８〜２７％に調節してエアオーブン中で加熱することも試みられている。」（第１頁右下欄第５行〜第１７行）、
「特に、工業的に最も利用し易いコーンスターチは平衡水分が約１３％でもともと糊化温度が高いがこれを湿熱処理で変化させるためには高温度、長時間例えば１２０℃以上で２時間処理するとか或いは、熱処理に先立ち加湿して水分を２０〜２５％とする必要がある。……研究室規模の少量の場合は、湿熱処理澱粉の調整はさほど難しくないが、工業規模で製造しようとする場合効果的な手段がなく商品化されて市場に出回っている例がないのが現状である。」（第２頁左上欄第８行〜同頁右上欄第５行）、
「先ず従来の澱粉の湿熱処理方法における典型的な条件に従って、研究室規模の加圧殺菌装置を用いて加圧蒸気導入による１２９℃で１２０分各種の澱粉を湿熱加圧処理し、得られた澱粉のアミログラフィーを調べた。結果を第１表に示す。
第１表〔水分（処理前）が２１.０重量％である加水コーンスターチの例も示されているもの。〕
上記の結果から明らかなとおり加水したコーンスターチ、馬鈴薯澱粉は、この湿熱処理条件下では、加熱によりほとんど粘性を示さないように変化したが、加水しないコーンスターチは、その変化の程度が少なかった。また加水コーンスターチは全体に固着した状態となり処理後の粉砕が難しかった。」（第３頁右下欄第１行〜第４頁右上欄第７行）。
ｄ.上記刊行物４（甲第４号証）について
　上記刊行物４（甲第４号証）には、食物繊維の食品への応用に関する記載がなされており、食品に利用される食物繊維素材について、パン、マフィン、クッキー、ビスケット、ケーキ、スナック類等の各種食品への食物繊維の添加について、及び食物繊維給源食品を利用した加工食品について記載されている。
４.対比・判断
ａ.本件第１発明について
　訂正明細書の請求項１には「１０〜８０重量％の合計湿分含有率」という記載の直前に「デンプンと水との混合物の重量に基づいて」という記載はないが、本件の願書に添付した明細書、本件特許設定登録時の明細書及び訂正明細書の全体の記載からみて訂正明細書の請求項１における「１０〜８０重量％の合計湿分含有率」は「デンプンと水との混合物の重量に基づいた数値」であることが明らかであり、また、「デンプンと水との混合物の重量に基づいて」との表現が一義的に決まるものであって、「デンプンのみの重量」、又は「水のみの重量」に基づくものではあり得ないものであるから、本件第１発明は実質的には「少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率およびデンプンと水との混合物の重量に基づいて１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、加熱することにより耐性粒状デンプンを製造する方法」をその構成とするものであると解される。
　そして、本件第１発明と上記刊行物１に記載された発明を対比すると、両者は、「少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の範囲内の温度で加熱することにより耐性デンプンを製造する方法。」であるものである点で一致し、（１）上記高アミロースデンプンが、前者では、「デンプンと水との混合物の重量に基づいて１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有するものでもある」のに対して、上記刊行物１に該構成について記載されていない点。（２）上記加熱する時の条件が、前者では、「粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下であるもの」に対して、上記刊行物１に該構成について記載されていない点、及び、（３）製造されるデンプンの性状が前者では、「粒状」であるのに対して、上記刊行物１に該構成について記載されていない点で、相違している。
　そこで、上記相違点について検討する。
ア.上記相違点（１）について
　上記刊行物１においては、分子量の低下に立証されるように（第１３頁第２７行〜第２８行）少なくとも部分的に分解されていることと、ＨｙｌｏｎV及びＨｙｌｏｎVIIのＲＳ含量が、糊化温度よりも高温で加熱し、また、長時間加熱したほうが増加していることからみて、上記刊行物１に記載されている耐性デンプンは、デンプンが糊化した後に老化により耐性デンプンとなるＲＳ−３の老化タイプによるものであると認められるから、上記刊行物１に記載されている耐性デンプンは粒状のものでないと解するのが相当である。
　そして、上記刊行物２には少なくとも４０重量％のアミロース含有率を有する高アミロースデンプンとして本件明細書に例示されている「ＨｙｌｏｎV」及び「ＨｙｌｏｎVII」を６０〜１６０℃の範囲内の温度で加熱することにより耐性デンプンを製造することは記載されているものの、「ＨｙｌｏｎV」及び「ＨｙｌｏｎVII」を６０〜１６０℃の範囲内の温度で加熱することにより耐性デンプンを製造するに際してデンプンと水との混合物の重量に基づいて１０〜８０重量％の合計湿分含有率にするとともにデンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で加熱することにより粒状の耐性デンプンを製造することについては全く記載もされておらず、示唆もされていない。
　また、上記刊行物３における〔従来の技術〕の欄において、湿熱処理により粒の外観的な変化を伴わずに変性デンプンを得ること、及び、水分を１８〜２７％に調節することが記載されているが、上記刊行物３に記載されている〔従来の技術〕というのは、あくまでも、上記刊行物３に係る発明についての従来の技術であり、上記刊行物３に記載されているデンプンの湿熱処理が、その実施例等の記載からみると、α−アミラーゼによる消化性を向上させることを目的としていると認められるから、上記の従来の技術における湿熱処理も、デンプンのα−アミラーゼによる消化性を向上させることを目的としたものであると解するのが相当である。
　そして、上記刊行物１に記載された耐性デンプンを製造する発明に、該発明の目的とは正反対である、易消化性デンプンを製造するという目的のための上記刊行物３に記載されている手段を組み合わせ適用することは、必然性がなく、当業者にとって容易なことであるといえない。
　また、上記甲第４号証には単に食物繊維の食品への応用について記載されているだけであって、粒状の耐性デンプンを製造することについてすら全く記載もされておらず、示唆もされていない。
　してみると、上記相違点（１）は当業者が容易に為し得ることであるということができないものである。
イ.上記相違点（２）、（３）について
　上記アの項で述べたとうり、本件第１発明により製造される耐性デンプンは粒状のものであるのに対して、上記刊行物１に記載されるデンプンはデンプンが糊化した後に老化により耐性デンプンとなるＲＳ−３の老化タイプによるものであると認められるから、上記刊行物１に記載された発明に対して、加熱する時の条件を、粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下であるものにして粒状の耐性デンプンを製造することは、当業者が容易に為し得ることであるといえない。
　してみると、上記相違点（２）、（３）は当業者が容易に為し得ることであるということができないものである。
　以上のとおりであるから、本件第１発明は、上記刊行物１、２及び３に記載された発明に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということができないものであるとともに、上記刊行物１、２、３及び４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということもできないものである。
ｂ.本件第２発明〜本件第１６発明について
　本件第２発明〜本件第１６発明がいずれも直接的或いは間接的に本件第１発明を引用して記載されているものであることを考慮すると、上記アの項で述べたとおり、本件第１発明が上記刊行物１、２及び３に記載された発明に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということができないものであるとともに、上記刊行物１、２、３及び４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということもできないものである以上、本件第２発明〜本件第１６発明のいずれも上記刊行物１、２及び３に記載された発明に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということができないものであるとともに、上記刊行物１、２、３及び４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということもできないものである。
　したがって、本件第１発明〜本件第１６発明のいずれも上記刊行物１、２及び３に記載された発明に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということができないものであるとともに、上記刊行物１、２、３及び４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということもできないものである。
　さらに、上記特許異議申立人は上申書に添付して鈴木繁男・中村道徳編集「澱粉科学実験法」株式会社朝倉書店、１９７９年１０月１日発行、第２４２頁〜第２４５頁（参考資料１）及び中村道徳・貝沼圭二編「澱粉・関連糖質実験法」株式会社学会出版センター、１９８６年１０月１０日発行、第２７３頁〜第２７６頁（参考資料２）を提出しているが、これらの参考資料においては通常の低アミロースデンプンを用いているのに対して、本件発明においては高アミロースのみを用いていること、上記刊行物１第１３頁第１６行〜第１９行に記載されているように、通常のデンプンは湿熱処理の間に有意に総食物繊維を増加しないので、それらは高総食物繊維をもたらさないこと、及び、これらの参考資料では、未処理のデンプンはＢ型回折を示し湿熱処理によってＡ型のＸ線回折に変化しているのに対して、本件発明の高アミロースデンプンのＸ線回折は最初からＢ型であり、湿熱処理によっても変わらないことからみて、これらの参考資料の記載内容を考慮しても、本件第１発明〜本件第１６発明のいずれも上記刊行物１、２及び３に記載された発明に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということができないものであるとともに、上記刊行物１、２、３及び４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるということもできないものである。
　また、上記特許異議申立人は上申書に添付して「Ｎｅｗ　Ｆｏｏｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　１９９８、Ｖｏｌ.４０、Ｎｏ.１２食品加工および資材の新知識」別冊、伊藤　剛・蔵橋嘉樹「食物繊維素材としての湿熱処理ハイアミロースコーンスターチ」食品資材研究会発行、第３１頁〜第３７頁を参考資料３として提出しているが、該参考資料３は本件の優先権主張日である１９９５年６月７日よりも後に発表されたものであるとともに、該参考資料３において「筆者らは，前述したＨＡＣＳをＨＭＴすることによってＲＳを多量に含む素材を開発することに成功し９），現在，……として，市販されている。」（第３２頁第１７行〜第１９行）と記載されているが、該記載箇所に挙げられている参考文献Ｎｏ.９の特開平１０−１９５１０４号公報に係る発明は平成８年１２月２７日に出願されたものであるから、本件の優先権主張日である１９９５年６月７日よりも後に出願されたものであり、また、上記参考資料３に参考文献Ｎｏ.１２及び１３として挙げられているＨＭＴ−ＨＡＣＳに関連して、ＨＭＴ−ＨＡＣＳを含む飼料をラットに投与した研究の論文である２つの文献は、それぞれ１９９７年及び１９９８年に発表されたものであるから、いずれも、本件の優先権主張日である１９９５年６月７日よりも後に発表されたものであるから、上記参考資料３は証拠としては採用できないものである。
５.むすび
　以上のとおりであるから、特許異議申立人矢部信彦が提出した理由及び証拠方法によっては本件第１発明〜本件第１６発明の特許を取り消すことはできない。
　また、他に本件第１発明〜本件第１６発明の特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１３年１２月２８日（２００１．１２．２８）
【訂正の要旨】
訂正の要旨
　特許第２７７９３４５号発明の明細書を本件訂正明細書に添付された訂正明細書のとおりにすなわち、
（ａ）特許請求の範囲の請求項１「少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率およびデンプンと水との混合物の重量に基づいて１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で加熱することにより耐性粒状デンプンを製造する方法。」を、特許請求の範囲の減縮を目的として、「少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率および１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、加熱することにより耐性粒状デンプンを製造する方法。」と訂正する。
（ｂ）段落番号【００１０】における「高アミロースデンプンを約６０〜１６０℃の温度で加熱する」を、明りょうでない記載の釈明を目的として、「高アミロースデンプンを約６０〜１６０℃の温度で、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、加熱する」と訂正する。
（ｃ）段落番号【００２２】における「デンプンが粒状状態を維持し、そしてその複屈折性を失わないことが重要である。」を、明りょうでない記載の釈明を目的として、「デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で加熱される。」と訂正する。
（ｄ）段落番号【００２３】における『従って、ここで使用されるものとして用語「粒状デンプン」は粒状構造を維持し、そしてある程度の結晶化度を有するデンプンを含む。』を、明りょうでない記載の釈明を目的として、『従って、ここで使用されるものとして用語「粒状デンプン」は粒状状態であり、該粒が複屈折性を示すデンプンを含む。』と訂正する。
（５４）【発明の名称】
アミラーゼ耐性粒状デンプンの製造法
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】　少なくとも１２％の総食物繊維含有率のデンプンを提供するために、少なくとも４０重量％のアミロース含有率および１０〜８０重量％の合計湿分含有率を有する高アミロースデンプンを６０〜１６０℃の温度で
、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、
　【請求項２】　高アミロースデンプンが２０〜４５％の合計湿分含有率を有する請求項１記載の方法。
　【請求項３】　デンプンが９０〜１２０℃の温度に加熱される請求項２記載の方法。
　【請求項４】　高アミロースデンプンがコーンデンプンである請求項１記載の方法。
　【請求項５】　高アミロースデンプンが化学変性されたものである請求項１記載の方法。
　【請求項６】　高アミロースデンプンが３０〜４０重量％の合計湿分含有率であり、そして加熱が９０〜１２０℃の温度で行われる請求項１記載の方法。
　【請求項７】　高アミロースデンプンが少なくとも６５重量％のアミロース含有率である請求項１記載の方法。
　【請求項８】　高アミロースデンプンが２０〜４５％の合計湿分含有率を有し、そして加熱が９０〜１２０℃の温度で行われる請求項７記載の方法。
　【請求項９】　粒状デンプン製品が少なくとも２０％の総食物繊維を有する請求項８記載の方法。
　【請求項１０】　高アミロースデンプンが３０〜４０重量％の総湿分含有率を有する請求項９記載の方法。
　【請求項１１】　高アミロースデンプンがアミロース増量遺伝子型を有する植物源から抽出された実質的に純粋なデンプンであって、ブタノール精留／エクスクルージョンクロマトグラフィー測定により決定して１０重量％未満のアミロペクチンを含む、請求項１記載の方法。
　【請求項１２】　高アミロースデンプンが２０〜４５重量％の総湿分含有率を有し、そして加熱が９０〜１２０℃の温度で行われる請求項１１記載の方法。
　【請求項１３】　請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法により製造された耐性粒状デンプン。
　【請求項１４】　少なくとも１２％の総食物繊維含有率を有する食物グレードの耐性粒状デンプンを含む食品。
　【請求項１５】　請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法により調製された耐性粒状デンプンを含む食品。
　【請求項１６】　シリアル、パン、クラッカー、クッキー、ケーキ、パスタ、飲料物、揚げ物および被覆食品並びにスナックを含む請求項１５記載の食品。
【発明の詳細な説明】
　【０００１】
　本発明は高い食物繊維含有率を有する耐性粒状デンプンを調製する方法に関する。より詳細には、本発明は、高アミロースデンプンの所定の加熱湿分処理による耐性粒状デンプンの調製、および、更に、この耐性粒状デンプンの食品中での使用に関する。
　【０００２】
　デンプン、複合炭水化物は２種の多糖類分子を含み、それは、α−１，４−Ｄ−グルコシド結合により結合されたＤ−アンハイドログルコース単位の略直鎖状且つ可撓性のポリマーであるアミロース、および、α−１，６−Ｄ−グルコシド結合により結合されたアミロース鎖の枝分かれポリマーであるアミロペクチンを含む。デンプンは、酵素α−アミラーゼにより小腸内で主として消化される。α−アミラーゼはα−１，４−Ｄ−グルコシド結合を加水分解し、そしてそれ故、デンプンのアミロースフラクションを殆ど完全に単純な糖類に加水分解する。α−アミラーゼはα−１，６−Ｄ−グルコシド結合を加水分解せず、アミロペクチンフラクションの加水分解は不完全になる。
　【０００３】
　あるデンプン加工操作は、単純に耐性デンプンとして知られている、アミラーゼに耐性であるデンプンへとデンプンを転化することが知られている。耐性デンプンは小腸内のアミラーゼにより消化されずに大腸へ進む。研究文献はそれが食物繊維と似た特性を有して挙動することを示している。耐性デンプンは、この為、消化に対して耐性であるから低いカロリー値を有し、そして憩室症および結腸ガンの予防の要因になりそうである。耐性デンプン（ＲＳ）は文献上３種に分類されてきた：ＲＳ−１−物理的に接近不可能なデンプン（例えば、タンパク質または繊維マトリックス内に封入されたデンプン、例えば、ホールグレイン中のデンプン）；ＲＳ−２−無傷の消化耐性天然デンプン粒（例えば、ポテトまたはバナナデンプン）；およびＲＳ−３−老化消化耐性デンプン（Ｅｎｇｌｙｓｔ　ａｎｄ　Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，　“Ｎｅｗ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｄｉｅｔａｒｙ　Ｆｉｂｅｒｓ”，Ｐｌａｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ　１９９０参照）。
　【０００４】
　耐性デンプンを調製するための様々な方法が報告されている。これらの方法の多くは、上記のＲＳ３老化タイプを用いるものであり、それは、デンプンのゲル化後にデンプンのアミロースフラクションが老化または再結晶されることが一般に信じられている。この理論は、可撓性の直鎖状アミロース分子がゲル化後に密の直線状配列に整列し、それがヘリックスまたは球形構造を形成し、α−アミラーゼに接近不可能な多くのα−１，４−Ｄ−グルコシド結合を製造するというものである。
　【０００５】
　１９９１年９月２４日に、Ｒ．ｌｙｅｎｇａｒらに付与された米国特許第５，０５１，２７１号は、デンプンから得られる食品グレードの非消化性の低いカロリー値の増量剤およびその製造方法を開示している。この方法は、デンプンの老化、次に、老化したデンプンの非品質領域を減らしまたはなくすための酵素加水分解または化学加水分解を用いる。
　【０００６】
　Ｙ．Ｐｏｍｍｅｒａｎｚらの１９９０年１２月１３日に公開されたＷＯ　９０／１５１４７は、ゲルを形成させるために煮沸したデンプンペーストを冷却すること、前記ゲルを水中で均質混合すること、α−アミラーゼで非耐性部分を消化除去すること、および低温下で残りの未転化部分を乾燥することにより、純粋な耐性デンプンを調製する方法を開示している。
　【０００７】
　Ｃｈｉｕらに１９９４年１月２５日に付与された米国特許第５，２８１，２７６号は、デンプンスラリーをゲル化すること、酵素でデンプンの枝分かれをなくすこと、および、乾燥または抽出によりデンプン製品を単離することにより、高アミロースデンプンから耐性デンプンを製造する方法を開示している。
　【０００８】
　上記の全ての方法は、大過剰の水中でのデンプンの分散およびゲル化、次に、老化および酵素または酸の使用を伴い、ＲＳ−３タイプの耐性デンプンを生じる。これらの方法は、労力および時間がかかり、そして低い収率となり、高い水分含有率が高価な乾燥工程を招く。
　【０００９】
　天然デンプン粒は特定の結晶化度を有し、そして酵素消化に部分的に耐性であることが知られている。熱処理がデンプンの特性を変えることができることも知られている。しかし、高アミロースデンプンから高い食物繊維含有率を有する耐性粒状デンプンの調製の開示は存在しない。
　【００１０】
　高レベルの食物繊維含有率を有する耐性粒状デンプンを調製するための新規の異なるアプローチが開発された。より詳細には、本発明は、少なくとも４０重量％のアミロース含有率およびデンプンと水との混合物の重量に基づいて約１０〜８０重量％の水含有率を有する高アミロースデンプンを約６０〜１６０℃の温度で
、デンプンが粒状状態であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で、
　【００１１】
　本発明は、更に、上記の加熱湿分処理により調製され、そして少なくとも１２％、好ましくは少なくとも２０重量％の総食物繊維含有率を有する耐性粒状デンプンに関する。
　【００１２】
　本発明は、更に、ここで記載の加熱湿分処理を使用して調製した高食物繊維含有率を有する耐性粒状デンプンを含む食品に関する。
　【００１３】
　本明細書中で用いるものとして、用語「耐性デンプン」は、下記のＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｆｆｉｃｉａｌ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ＡＯＡＣ），６８，６７７（１９８５）のＰｒｏｓｋｙらの方法により測定した総食物繊維含有率（ＴＤＦ）として規定される。
　【００１４】
　アミロース耐性粒状デンプンを調製するのに使用されるデンプンは、天然のまたは転化された数種のデンプンのいずれかであることができる。より詳細には、高アミロースデンプン、即ち、少なくとも４０重量％のアミロースを含むデンプンは本発明での使用に最も適切であることが判った。
　【００１５】
　デンプンは２種のフラクションを含み、そのうちの１種の分子配列は直鎖状であり、そしてもう一方は枝分かれである。デンプンの直鎖状フラクションはアミロースとして知られており、そして枝分かれフラクションはアミロペクチンとして知られている。異なる源、例えば、ポテト、コーン、タピオカおよび米等のデンプンは異なる相対比率のアミロース成分およびアミロペクチン成分であることを特徴とする。幾つかの植物種は遺伝子的に開発されており、それは一方のフラクションが他方のフラクションよりも大きく優勢であることを特徴とする。例えば、通常、約２２〜２８％アミロースを含むある種のコーンは４０％アミロースを含むデンプンを生じるように開発されている。これらの複合種は高アミロースまたはアミロメイズと呼ばれている。
　【００１６】
　高アミロースコーン複合体は高アミロース含有率のデンプンを自然に提供するように開発され、そして１９６３年頃から市販されてきた。本発明で有用な高アミロースデンプンは少なくとも４０重量％アミロース含有率、好ましくは少なくとも６５重量％を有するどんなデンプンであってもよい。高アミロースコーンデンプンは特に適切であったが、他の有用なデンプンは、高アミロース含有率デンプンを生じるまたは生じるようにされた植物種のいずれかから得られたデンプン、例えば、コーン、エンドウ豆、大麦、小麦、ポテト、タピオカおよび米を含む。
　【００１７】
　本発明において有用なデンプン材料は、高アミロースフラワーをも含み、ここで、前記フラワーのデンプン成分は少なくとも４０重量％のアミロース含有率を含むものである。本明細書全体で使用する用語「デンプン」はフラワーを含むことが意図され、そして高アミロース含有率のフラワーが明細書および請求項で参照されるときに、フラワーのデンプン成分のアミロース含有率（例えば、フラワー中のデンプンの量を基準にして４０重量％）を指すことが理解される。このようなフラワーは、通常、タンパク質（約８〜１３重量％）、脂質（約２〜３重量％）および特定の高アミロース含有率を含むデンプン（約８５〜９０重量％）を含む。
　【００１８】
　別の有用な高アミロースデンプンはアミロース増量遺伝子型を有する植物源から抽出された実質的に純粋なデンプンであり、このデンプンは１０重量％未満のアミロペクチンを含む。デンプン基礎材料として有用なこのデンプンは、性物質群の遺伝子複合体である植物品種改良種、特にコーンから得られ、そして、ブタノール精留／エクスクルージョンクロマトグラフィー技術により測定して、少なくとも７５重量％のアミロース、所望により少なくとも８５重量％のアミロース（即ち、典型アミロース）を含む。このデンプンは更に、１０重量％未満、所望により５％未満のアミロペクチンを含み、そして更に、約８〜２５％の低分子量アミロースを含む。デンプンは、好ましくは、多くのアミロース増量変性遺伝子と結合した劣性アミロース増量遺伝子型を有するデンプン保有植物の穀物から実質的に純粋な形態で抽出される。このデンプンおよび調製方法は１９９４年４月５日にＶ．Ｆｅｒｇａｓｏｎらに付与された米国特許第５，３００，１４５号に記載されており、それを参照により明細書中に取り入れる。
　【００１９】
　本発明で使用するデンプンは変性されていてもまたは変性されていなくてもよい。化学変性されたデンプンは、上記の基礎材料のいずれかから得られた転化製品、例えば、酸および／または熱の加水分解作用により調製されたデンプン；次亜塩素酸ナトリウムのような酸化剤での処理により調製された被酸化デンプン；酵素転化または穏やかな酸加水分解により調製された流動性若しくは弱沸騰性デンプン；誘導および架橋デンプンを含む。
　【００２０】
　本発明の耐性粒状デンプンを調製するときに、出発のデンプンは特定量の水または湿分含有率を有し、そして所定の温度に加熱される必要がある。これらの条件下でデンプンを処理することにより、高い含有量の食物繊維を有する粒状耐性デンプンは、以下に記載されるように調製されるであろう。
　【００２１】
　加熱処理されるべきデンプンの合計の湿分または水分含有量は、デンプンと水との混合物の重量に基づいて約１０〜８０重量％、好ましくは２０〜４５重量％、そしてより好ましくは約３０〜４０重量％の範囲であろう。加熱工程の間にこの湿分相対レベルが維持されることが重要である。
　【００２２】
　所定の湿分含有率のデンプンは約６０〜１６０℃、そして好ましくは約９０℃〜１２０℃に加熱される。最も望ましい温度は特定のデンプンおよびアミロース含有率により若干変えることができるが、デンプンが粒状状態
であり、かつ、該粒が複屈折性を示すような湿分および温度条件の組み合わせの下で加熱され
　【００２３】
　高レベルの総食物繊維を得るためのデンプンを処理するための最も望ましい条件は、デンプンの粒状構造が破壊されず、そして粒状物が依然として複屈折性でになるような条件である。しかし、デンプン粒状物が部分的に膨潤するが、結晶が完全に破壊しないような高湿分および高温度のような特定の条件が存在しうる。これらの条件下で、本発明により、デンプン粒状物は完全には破壊されず、そして総植物繊維の増加が得られることができる。従って、ここで使用されるものとして用語「粒状デンプン」は粒状
状態であり、該粒が複屈折性を示す
　【００２４】
　加熱処理後、デンプンは空気乾燥されて平衡湿分状態に達するか、または、フラッシュドライヤーまたは他の乾燥手段を使用して乾燥されうる。
　【００２５】
　上記の所定の条件で加熱されて得られたデンプン製品は顕微鏡で観察したときに、その複屈折性で粒状構造を有することが証明されるであろう。粒状耐性デンプン製品は少なくとも１２重量％、好ましくは少なくとも２０重量％の総食物繊維含有率を有するであろう。総食物繊維量または耐性デンプン含有率は下記のＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｆｆｉｃｉａｌ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｓ（ＡＯＡＣ）、６８，６７７（１９８５）のＰｒｏｓｋｙらにより開発された標準手順を使用して決定される。デンプンの総食物繊維含有率レベルは使用される条件および特定のデンプン出発材料により変わるであろう。
　【００２６】
　得られる粒状デンプン製品は、下記の方法を使用した示差走査熱量計（ＤＳＣ）により示されて、少なくとも９０℃の開始融解温度をも特徴とする。
　【００２７】
　本発明の粒状耐性デンプン製品は食品中に存在する総食物繊維に寄与するように食品中に加えられることができる。デンプン製品が食物繊維補助品として加えられることができる典型的な食品は、そのまま食べられる、膨張したまたは発泡したシリアルのようなシリアル類、および、食べる前に調理されるシリアル；パン、クラッカー、クッキー、ケーキ、マフィン、ロール、ペーストリーおよび他の穀物ベースの材料；パスタ；飲料物；揚げ物および被覆食品、スナック等を含む。
　【００２８】
　所定の食品に加えられ、そして使用されることができる粒状耐性デンプンおよび食物繊維の量は機能的観点から許容されうる量によりおおよそ決められるであろう。換言すれば、使用される粒状耐性デンプンおよび繊維の量は、一般に、食品の官能性評価において許容できるほどの高さであろう。一般に、粒状耐性デンプンは食品の約０．１〜５０重量％、より特には約１〜２５重量％で食品用途において使用されうる。
　【００２９】
　本発明は、更に、次の実施例により例示され、特に指示がないかぎり、全ての部およびパーセントは重量基準であり、そして温度は摂氏温度である。
　【００３０】
　本発明により製造された様々な耐性デンプン製品を評価するのに次の試験手順を使用した。
Ａ．総食物繊維測定
　次の手順はＰｒｏｓｋｙらの
Ｊ．Ａｓｓｏｃ．Ｏｆｆ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．
　【００３１】
試薬：
　（ａ）エタノール９５％ｖ／ｖ、工業銘柄
　（ｂ）エタノール７８％、２０７ｍｌのＨ２０を１Ｌ容積のフラスコに入れる。９５％ＥｔＯＨを希釈する。必要ならば９５％ＥｔＯＨを混合し、そして再び希釈する。混合する。
　（ｃ）アセトン、試薬銘柄
　（ｄ）リン酸塩緩衝液、０．０５Ｍ、ｐＨ６．０。０．８７５ｇのナトリウムリン酸二塩基塩無水物（Ｎａ２ＨＰＯ４）（または１．０９７ｇの二水和物）および６．０５ｇのナトリウムリン酸一塩基塩一水和物（ＮａＨ２ＰＯ４）（または６．８ｇの二水和物）を約７００ｍｌのＨ２Ｏ中に溶解させる。Ｈ２Ｏで１Ｌまで希釈する。ｐＨ計でｐＨをチェックする。
　（ｅ）ターマミル（熱安定性α−アミラーゼ）溶液−Ｎｏ．１２０Ｌ，Ｎｏｖｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｔｏｎ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ　０６８９７。保冷。
　（ｆ）プロティアーゼ、Ｎｏ．Ｐ−５３８０，Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ。保冷。
　（ｇ）アミログルコシダーゼ、Ｎｏ．Ａ−９２６８，Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ。保冷。または、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｃａｔａｌｏｇ　Ｎｏ．ＫＲ−１８５で入手可能な全部で３種の酵素（予備試験した）を含むキット。
　（ｈ）水酸化ナトリウム溶液、０．１７１Ｎ。１Ｌ容積のフラスコに約７００ｍｌのＨ２Ｏ中６．８４ｇのＮａＯＨ　ＡＣＳを溶解。Ｈ２Ｏで希釈。
　（ｉ）リン酸溶液、０．２０５Ｍ。１Ｌ容積のフラスコにＨ２Ｏ中に２３．６ｇのＨ３ＰＯ４を溶解。
　（ｊ）セライトＣ−２１１、酸洗浄されたものであり、Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｃｏｍｐａｎｙ。
　【００３２】
方法：
　試薬のレシデューに対する寄与を測定するために、試料とともにブランクを全体の手順を通して試験する。
　【００３３】
　試料を均質混合し、そして７０℃の真空炉内で一晩乾燥し、デシケーター中で冷却し、そして試料の一部分をドライミルして０．３〜０．５ｍｍメッシュとする。
　【００３４】
　同一の１ｇ試料を０．１ｍｇの精度で計量し、４００ｍｌのトールビーカーに入れる。試料重量は２０ｍｇ以上異なるべきでない。５０ｍｌのｐＨ６．０のリン酸塩緩衝剤を各々のビーカーに入れる。ｐＨをチェックし、必要ならば調節する。０．１ｍｌのターマニル溶液を加える。ビーカーにアルミニウムホイルを覆い、そして沸騰しているＨ２Ｏ浴中に１５分間入れる。５分間隔でゆっくりと振る。沸騰Ｈ２Ｏ中の多数のビーカーにより、ビーカーの内容物が１００℃の内部温度に達することが困難であるときには、インキュベーション時間を増やす。温度計を使用し、１５分間で確実に１００℃になるようにする。Ｈ２Ｏ浴中で合計３０分間は十分であるはずである。
　【００３５】
　溶液を室温に冷却する。１０ｍｌの０．１７１　Ｎ　ＮａＯＨ溶液を加えることにより、ｐＨを７．５±０．１に調節する。
　【００３６】
　５ｍｇのプロティアーゼを加える。（プロティアーゼはスパチュラにくっつくので、使用直前に約０．１ｍｌのリン酸塩緩衝剤で、ピペット必要量で酵素溶液を調製することが好ましいであろう。）
　【００３７】
　ビーカーをアルミニウムホイルで覆う。６０℃で３０分間インキュベートする（加熱前に体積測定）。室温で６０分間、沈殿を形成させる。
　【００３８】
　セライトを含むるつぼを０．１ｍｇまで計量し、その後、洗瓶から７９％ＥｔＯＨのストリームを使用することにより、るつぼ中のセライトのベッドを濡らし、そして再分散させた。ガラス炉板上で均一なマットとしてセライトを吸引した。吸引を維持し、そして定量的に沈殿物を酵素からるつぼに沈殿物を移した。
　【００３９】
　レシデューを３つの２０ｍｌ量の７８％ＥｔＯＨ、２つの１０ｍｌ量の９５％ＥｔＯＨ、および２つの１０ｍｌ量のアセトンで連続的に洗浄した。幾つかの試料では、ガムが生成し、液体をトラップした。そうであれば、濾過を改善するためにスパチュラで表面を破壊する。濾過および洗浄の時間は０．１〜６時間であり、平均で１試料当たりに１．２時間である。長い濾過時間は濾過全体を通して、注意深い間欠的な吸引により避けられる。
　【００４０】
　７０℃の真空炉または１０５℃の空気炉内で、レシデューを含むるつぼを乾燥する。デシケーター中で冷却し、そして０．１ｍｇまで計量する。レシデューの重量を決定するためにるつぼおよびセライト重量を引く。
　【００４１】
　タンパク質およびアッシュの同様の試料からレシデューを分析する。総食物繊維（ＴＤＦ）または耐性デンプンの量を決定するためにレシデューからタンパク質およびアッシュの値を引く。
　【００４２】
ＴＤＦの測定（％）：
ブランク＝ｍｇブランクレシデュー‐（ブランク中の％タンパク質＋ブランク中の％アッシュ）ｘｍｇブランクレシデュー／１００
ＴＤＦの測定（％）：
ＴＤＦ％：ｍｇレシデュー‐（レシデュー中の％タンパク質＋レシデュー中の％アッシュ）／ｍｇ試料（ｗｔ）＊１００
　【００４３】
Ｂ．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
　示差走査熱量測定（ＤＳＣ）データを得るために次の手順を使用した。ＤＳＣ測定は３６００熱分析ステーションおよびＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒグラフィックプロッター２（Ｐｅｒｋｍ−Ｅｌｍｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，　Ｎｏｒｗａｌｋ，　Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）を装備したＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　ＤＳＣ−４装置で各試料に関して行った。〜１０ｍｇのデンプン試料はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　ステンレススチールパンに正確に計量して入れた。約４０ｍｇの脱イオン水を加え、そしてパンをシールし、そして４℃で一晩平衡にした。ＤＳＣ走査を２０℃〜１８０℃で１０℃／分の加熱速度で行った。空のパンを参照試料とした。
　【００４４】
例Ｉ
　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙの製品である、約７０重量％のアミロース含有率を含むＨｙｌｏｎ　（商標）ＶＩＩデンプン（湿分１０．６％）の試料１４００ｇを、標準ブレードを有するダブル遊星型ミキサーであるＲｏｓｓＭｉｘｅｒ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｏｓｓ　ａｎｄ　Ｓｏｎ　Ｃｏｍｐａｎｙ　製）に入れた。６００ｍｌの水を試料に加え、そしてミキサーを閉止し、そしてデンプンおよび水を室温で１０分間混合した。これにより、３７．４％の合計湿分量の試料を得た。温度を１００℃に上げ、特定の時間、連続して混合し、そして３０℃に冷却した。試料をミキサーから取り出し、そして空気乾燥した。幾つかの同一のデンプン試料を同様に調製し、３７．４重量％の合計湿分量とした。試料を全て１００℃に加熱し、そして０．５〜６時間で変えて維持した。試料を、上記の試験手順を使用して、Ｐｒｏｓｋｙ法および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）データを用いて、総食物繊維含有率（ＴＤＦ）に関して分析した。表Ｉに示す結果は１時間および４時間の加熱処理後に、１２．０％から３８．１％および４１．９％にそれぞれ増加したことを示す。融解開始温度Ｔｏは、６７．６℃から８９．４℃および９２℃にそれぞれ増加した。
　【００４５】
　【表１】
　【００４６】
例ＩＩ
　様々な水分量のＨｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプン（７０％アミロース含有率）の試料を例Ｉのように調製した。全ての試料を１００℃に４時間加熱し、そして例ＩのようにＴＤＦおよびＤＳＣ特性を分析した。
　【００４７】
　【表２】
　【００４８】
　結果は、所定量の水分量、特に３７．４％を有するデンプンが加熱処理されたときに、ＴＤＦまたは耐性デンプンが大きく増加することを示す。
　【００４９】
例ＩＩＩ
　様々な量のアミロース量を有する幾つかのデンプン試料を、例Ｉに記載のように、下記の表３に示す条件下で加熱処理した。試料は、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙの製品である、約５０％の高アミロース含有率のＨｙｌｏｎ　Ｖ　；Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ　の別の製品である、７０％のアミロース含有率のＨｙｌｏｎ　Ｖ　；および、本明細書および１９９４年４月５日に付与された米国特許第５，３００，１４５号に記載されている低分子量アミロースを１８．７％含む、７８．３％の高アミロース含有率（通常）のＶＪＲデンプンであった。
　【００５０】
　【表３】
　【００５１】
例ＩＶ
　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙの製品である、流動性（弱沸騰性、酸転化）Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプン（７０％アミロース）の試料を例Ｉに記載の方法により調製した。試料デンプンは３７％合計湿分を有し、そして１００℃に加熱し、そしてそこで２．５時間保持した。加熱処理したデンプンを評価し、そして３６．８％の総食物繊維含有率（ＴＤＦ）を有し、それは２１．３％のＴＤＦを有した同一デンプンの未処理試料より有意に良好であった。
　【００５２】
例Ｖ
　化学変性した、高アミロースデンプンを調製し、次のように加熱処理し、そして評価した。例ＩＩＩに記載の、７８．３％高アミロース含有率（通常）および１８．７％低分子量アミロースを有するＮａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙの製品である、ＶＪＲデンプンを、次の条件下で無水琥珀酸オクテニル、０．９８重量％で変性した。ＶＪＲデンプン（３０００ｇ）を４５００ｍｌの水中でスラリー化し、そして３％ＮａＯＨを用いてスラリーのｐＨを７．６に上げた。ｐＨを７．５〜７．６に維持しながら、攪拌しながら２９．４４ｇの無水琥珀酸オクテニルを加えた。反応がカセイアルカリを消費しなくなったときに、スラリーのｐＨをＨＣｌを用いて５．５に調節し、そしてデンプンをその後、濾過し、そして空気乾燥した。
　【００５３】
　３７％の湿分含有率を有するエステル化したデンプンを、１００℃で２．５時間にわたって例Ｉのように加熱処理した。加熱処理した変性したデンプンを評価し、そして３７．５％の総食物繊維（ＴＤＦ）を有することが判った。これは、熱処理せずに、２５．９％のＴＤＦを有した同一の変性したデンプンより示されたものより有意に良好であった。
　【００５４】
例ＶＩ
　Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプン（７０％アミロース）の試料を、例Ｉのように調製し、そして熱処理し（３７％水分、１００℃、６時間）、そしてオートミールクッキー中の材料として評価した。
　【００５５】
試験配合物−オートミールクッキー
　　　　　　　　　　材料　　　　　　　　　　　　　量％
Ａ．
　Ｂａｋａ−Ｓｎａｋ　　　　　　　　　　　　　　１．７５
試験デンプン　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．００
クイッククッキングロールドオート　　　　　　　２１．６５
ブラウンシュガー　　　　　　　　　　　　　　　１４．１０
小麦粉　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１３．２０
グラニュー糖　　　　　　　　　　　　　　　　　１１．７０
べーキングソーダ　　　　　　　　　　　　　　　　０．４０
Ｂ．
バターまたはマーガリン　　　　　　　　　　　　２１．００
卵　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１０．００
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００％
　【００５６】
調製：
　１．Ａの全ての成分を混合し、均質なコンシステンシーとする。
　２．Ｂのクリームバター
　３．Ａと若干ビートされた卵のドライミックスをバターに加える。混合して均質なコンシステンシーとする。
　４．脱脂クッキーシートにティースプーンで落とす。３７５°Ｆで１０〜１２分間べーク。
　【００５７】
　本発明の耐性デンプンを含む、調製されたクッキー製品は許容できる製品であり、そしてロールドオートを増やして調製した対照配合物よりも広がりがあり、そして適切な味があった。
　【００５８】
例ＶＩＩ
　Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプン（７０％アミロース）の試料を調製し、そして例Ｉのように、２回のサイクルで加熱（３７％水、１００℃）したが、各加熱サイクルの後に製品を３０℃に冷却し、そしてフラッシュ乾燥した。この製品はクラッカーの材料として配合された。
　　　　　　　　　　　　
試験配合物−クラッカー
　　　　　　　　　材料　　　　　　　　　　　　　量％
Ａ．
ソフトシルクケーキ小麦粉　　　　　　　　　　　　５１．１９
試験デンプン　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．２６
グラニュー糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．５２
重炭酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８２
リン酸カルシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８２
塩　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５１
麦芽大麦粉　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．９２
Ｂ．
ショートニング　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．７０
Ｃ．
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０．００
高フルクトースシロップ　　　　　　　　　　　　　　１．９５
重炭酸アンモニウム　　　　　　　　　　　　　　　　１．２８
重硫酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　
　　　０．０３
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００％
　【００５９】
調製
　１．キッチンエイドミキサー（パドルの付いた）を使用して、Ａをドライブレンドする。
　２．Ｂのショートニングを加え、そして＃１の速度で２分間混合する。
　３．Ｃを完全に分散するまで混合する。
　４．Ｃをゆっくりとミキサーに加え、そして＃２の速度で１０分間混合する。
　５．Ｒｏｎｄｏ　Ｓｈｅｅｔｅｒ上で１ｍｍの厚さにシート化する。
　６．４回重ねて、そして最終の厚さ１ｍｍにする。
　７．所望のピースに切断し、そして４２５℃で８分間焼く。
　【００６０】
　本発明の耐性デンプンを含む調製されたクラッカーを、試験デンプンの代わりにＳｏｆｔ−Ａ−Ｓｉｌｋ小麦粉を含む対照、Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩオートブランおよび精製オート繊維を使用した製品とうまく比較した。試験耐性デンプンを含むクラッカーは良好な味および外観の両方を有した。
　【００６１】
例ＶＩＩＩ
　ホットシリアル中での本発明の粒状耐性デンプンを次のように使用し、そして評価した。調製し、そして例Ｉのように加熱処理され（３７．４％湿分、１００℃に４時間加熱）、そして４１．９の％総食物繊維（ＴＤＦ）を有する５ｇのＨｙｌｏｎ　ＶＩＩ高アミロースデンプン（７０％アミロース）を、３５ｇパケットのＱｕａｋｅｒのＩｎｓｔａｎｔ　Ｈｏｔ　Ｃｅｒｅａｌ，Ａｐｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｃｉｎｎａｍｏｎ　に加えた。混合したシリアルブレンドに、熱沸騰水１２６ｇを加えた。追加のシリアルブレンドを同一の方法で調製したが、１１ｇのデンプン試料を含み、そして１４５ｇの熱湯を含んだ。
　【００６２】
　調製したシリアル試料を観測し、そして試験し、そしてデンプンの代わりに等量のロールドオート（Ｒｏｌｌｅｄ　Ｏａｔｓ）を含む対照試料と比較した。粒状耐性デンプンを含むシリアルは対照と比較して、幾分キメが細かく、許容できる口触りおよび香りであった。
　【００６３】
例ＩＸ
　本発明の粒状耐性デンプンを含み、そしてこのようにして繊維強化ケーキを提供する典型的なイエローケーキを次の配合で調製された。
　　　　　　　　　　　　　　　　　　ケーキ配合表
材料
量（ｇ）
砂糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２３７
ショートニング　　　　　　　　　　　　　　　　６４
バニラ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５
インスタントプュアフロフ
（Ｉｎｓｔａｎｔ　Ｐｕｒｅ−Ｆｌｏ　Ｆ）１５６．６
試料デンプン／繊維　　　　　　　　　　　　　７．４
ＮＦＤＭ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１４
ベーキングパウダー　　　　　　　　　　　　　５．５
塩　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．５
全卵　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２０
油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１１０　
合計　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８３０
　【００６４】
　例Ｉにおいて調製した高アミロースデンプン、Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩを使用して、下記の通りにケーキを調製した。４２．３％の総食物繊維含有率（ＴＤＦ）を有する例ＩＩＩのＶＪＲデンプンであった試料デンプン／繊維７．７ｇを使用して別の試料ケーキを配合した。試料デンプン／繊維を加えていない（試料デンプン／繊維の代わりに同一量のケーキ小麦粉を加え、全体を８３０ｇとした）同配合物を使用して対照ケーキを調製した。
　【００６５】
　試料デンプン／繊維の２倍量の１４．８ｇのＨｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプン（１４９．２ｇのケーキ小麦粉）およびｂ）１５．４ｇのＶＪＲデンプン（１４８．６ｇのケーキ小麦粉）を使用して別のケーキを調製した。
　【００６６】
　ケーキを次の通りに調製した。ショートニングをミキサーボールに入れ、若干ホイップした。砂糖を加え、そしてブレンドを均一で軽くなるまでかき混ぜた。そしてバニラを加えた。デンプン、ＮＦＤＭ、ベーキングパウダーおよび塩のドライミックスを製造した。ドライミックスの半分を卵、水および油に加え、そして湿潤材料になるようにブレンドした。残りのドライミックスを加え、ブレンドし、そして中速で２分間混合した。調製した配合物を焼き、そして得られたケーキ製品を観察し、そして次の通りに評価した。
　【００６７】
　【表４】
　【００６８】
　結果は、適切な味を有する許容できるケーキは本発明の粒状耐性デンプンを加えて製造された。
　【００６９】
例Ｘ
　本発明の粒状耐性デンプンを使用して次の通りに調製した。
　Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプンの試料を例Ｉに記載の通りに、１００℃で２．５時間加熱処理した。試料を１７５°Ｆのインプット温度および１５０°Ｆのアウトプット温度でフラッシュ乾燥した。試料デンプンを下記の２種の配合比で調製した。
　【００７０】
　次のように、材料をパスタ形状製品に加工した。小麦粉およびデンプンに水を加え、混合し、そしてドウ材料に加工し、そしてその後、押出機にフィードしてパスタ形状製品に加工した。この製品を１２０°Ｆ乾式バルブおよび１００°Ｆ湿式バルブで炉内で乾燥し、湿分を約７％にした。その後、パスタを沸騰水中で８分間調理した。調理した製品を、外観、硬さおよび味に関して評価し、そして許容できることが判った。
　【００７１】
例ＸＩ
　例Ｉのように調製したＨｙｌｏｎ　ＶＩＩデンプン（ＴＤＦ４１．９％）５．９６ｇをＧａｔｏｒａｄｅフルーツパンチ９４６ｇに加えることによりスポーツ飲料水を調製した。飲料水製品を１８５°Ｆに加熱し、そして熱いまま飲料水容器に満たした。その後、評価まで、飲料水を冷蔵庫に貯蔵した。例ＩＩＩのように調製したＶＲＪデンプン（ＴＤＦ４０．３４％）６．１９ｇを使用して、別の飲料水を同様に調製した。
　【００７２】
　この製品を評価し、幾分かの粒子の沈降を示し、そしてそれ故、粒子を懸濁させるためにある程度の振盪および混合が必要であった。加えたデンプン繊維を含む飲料水はデンプン製品を加えていない飲料水と比較したときに、不快な味または口触りを示さなかった。結果はデンプン製品が様々なタイプの飲料水に有用であることを示す。
　【００７３】
例ＸＩＩ
　この例は、例Ｉ（Ｈｙｌｏｎ　ＶＩＩ）および例ＩＩＩ（ＶＪＲ）の方法により調製された、加熱処理した高アミロースデンプンを含む、直ぐに食べられる押出した膨張シリアル（直接発泡シリアルとも呼ぶ）の調製を例示する。デンプンを次のシリアル配合物に入れた。
　【００７４】
　対照を計量し、１ガロンジャーに装填し、キャップし、そして１００ｒｐｍで３時間ローラーにセットし、十分な混合を確保した。デンプンを含む配合物（１，０００ｇ）をコーンフラワーの一部を置き換えて同様に調製した。Ａｃｒｉｓｏｎ　Ｍｏｄｅｌ　＃１０５体積フィーダーまたはＺｅｒｏｍａｘ　＃Ｅ−２フィーダーのいずれかを用いたＷｅｒｎｅｒ　ａｎｄ　Ｐｆｌｅｎｄｅｒｅｒ　ＺＳＫ−３０二軸スクリュー同時回転押出機（オイルヒートされたバレル）を使用してシリアル混合物を押出した。
　【００７５】
押出条件は次の通りである。
バレル長さ　　　　　　　　　　　　　　　７（Ｌ／Ｄ＝２１）
スクリューコンフィグレーション　　　　　ＳＣ　７−２０Ａａ
スクリュー速度　　　　　　　　　　　　　３５０ｒｐｍ
ダイ直径　　　　　　　　　　　　　　　　　３ｍｍ
ドライフィード速度　　　　　　　　　　　１３ｋｇ／ｈｒ
総インプット湿分　　　　　　　　　　　　１７％
バレル温度　　　　　　　　　　　　　　　８０／１５０／１４０℃
ａ　ＳＣ　７−２０Ａは２個のリバースフライト、２個のニーディングブロックおよび６５〜７５％　トルクを提供する。
　【００７６】
　上記の加工条件を用いてシリアル配合物ブレンドを押出機にフィードした。安定状態の条件になった後（押出物の出口均質性および安定なトルク読み値）、試料をダイ切断し（自動回転ダイカッターを使用して）、そしてダイアルキャリパーを使用して膨張を測定した。その後、Ｎａｒｃｏ機械対流炉内で２００〜２１０℃で２〜５分間試料を焼いた。試料のバルク密度および膨張の評価をした。加熱処理したデンプンを含む試料は、対照と比較して同様の膨張およびバルク密度を提供した（表を参照）。
　【００７７】
　【表５】