(57)【要約】  強度近視は、網膜剥離、近視性網脈絡膜委縮、近視性脈絡膜新生血管、緑内障、白内障のリスクが増すことから、近視進行予防法の確立が期待される。しかし、強度近視の原因であると考えられる軸性近視については、現在有効な予防または治療法がない。本発明は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が眼軸の延長を抑制する作用を有することを見出したことにより完成したものであり、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を有効成分とする軸性近視の予防または治療効果に優れた薬剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を有効成分とする軸性近視の予防または治療剤。
【請求項２】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が、（Ｒ）−（＋）−トランス-Ｎ−（４−ピリジル）−４−（１−アミノエチル）−シクロヘキサンカルボキシアミド、１−（５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン、１−（１−ヒドロキシ−５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン、（Ｓ）−（＋）−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン、（Ｓ）−（＋）−４−グリシル−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン、Ｎ−（４−ピリジル）−Ｎ’−（２，４，６−トリクロロフェニル）ウレア、および、３−（４−ピリジル）−１Ｈ−インドールからなる群より選択された化合物またはその塩である請求項１に記載の軸性近視の予防または治療剤。
【請求項３】
点眼投与用である請求項１または２に記載の軸性近視の予防または治療剤。
【請求項４】
硝子体内投与用である請求項１または２に記載の軸性近視の予防または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、軸性近視の予防または治療剤に関するものである。より詳細には、本発明は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を有効成分とする軸性近視の予防または治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近視は、角膜を通過した光が網膜上で結像せず、網膜の手前で結像するために明確に像を捕らえることができない状態をいう。近視は調節性近視と軸性近視の２つに大別される。調節性近視は、長時間の近業による調節、すなわち毛様体筋の収縮亢進による水晶体屈折力の増加が関与しているといわれている。通常、近業を中止すれば毛様体筋は弛緩し調節が解除されるが、長時間の近用作業での収縮状態が固定し近視が顕在化する状態を調節性近視という。一方、軸性近視は、眼軸長（角膜から網膜までの長さ）が延長するため無限遠からの光線が網膜の前で結像するものである。強度近視は眼軸の延長が原因といわれており、各種実験により、眼軸の延長は網膜と中枢神経系の両者が関与していると考えられている（非特許文献１参照）。【０００３】
近視進行の予防の試みのひとつとして、毛様体筋の収縮亢進による屈折性近視のメカニズムに対して毛様体筋の緊張を改善する方法として、トロピカミド（ミドリンＭ（登録商標））の点眼療法が試みられているが、その効果は統計学的に有意なものではない（非特許文献１参照）。アトロピンは、その毛様体筋弛緩作用による調節の遮断、動物実験での眼軸長延長の抑制、ドパミン放出による網膜細胞の眼球の成長阻害、正常な眼球の成長を阻害する下垂体由来の成長ホルモンの分泌抑制、といった作用により近視の進行を抑制すると考えられ、統計学的に有意に近視進行を抑制したという台湾での報告があるが、接触性皮膚炎、散瞳による羞明、霧視、紫外線による網膜や水晶体への影響といった短中長期的な副作用が問題となる（非特許文献１参照）。ピレンゼピンは動物実験レベルで眼軸長の延長抑制による形態覚遮断近視を予防したが（非特許文献１参照）、米国で実施された８歳〜１２歳の小児を対象とした２年間の臨床試験において、調節性近視（水晶体の屈折）については有意差が認められたが、眼軸長については有意差が認められなかった（非特許文献２参照）。【０００４】
特許文献１には、トランスフォーミング増殖因子ＴＧＦ−β調節物質を有効成分とする眼軸長制御剤が開示されているが、未だ臨床使用には至っていない。このように、動物実験レベルでは眼軸の延長を抑制する薬剤が見出されているものの、現時点において軸性近視に有効であることが臨床的に証明された薬剤はない。【０００５】
Ｒｈｏキナーゼは、低分子量ＧＴＰ結合タンパク質Ｒｈｏの標的タンパク質として同定された細胞内セリン／スレオニン酸化酵素である。ＲｈｏキナーゼにはＲＯＣα（Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅα、ＲＯＣＫ−ＩＩとも称する）およびＲＯＣβ（Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅβ、ＲＯＣＫ−Ｉとも称する）の２つのアイソフォームがあり、両酵素は体内に広く発現しているが、ＲＯＣαは特に脳と骨格筋に強く発現していることが知られている。
Ｒｈｏキナーゼは、収縮、増殖、遊走、遺伝子発現誘導などの細胞の生理機能に深く関与していることが明らかとなっており、今日までの動物モデルやヒトにおける検討により、Ｒｈｏキナーゼが心血管系疾患を中心とした様々な疾患の病態に深く関与していることが知られている。そのため、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、これらの疾患の治療に有用であることが示唆されている。具体的には、血管平滑筋の過収縮に起因する疾患（冠動脈攣縮、脳血管攣縮、高血圧、肺高血圧、突然死など）、動脈硬化性疾患（狭心症、心筋梗塞、再狭窄、脳梗塞、高血圧性血管疾患、心不全など）、骨粗しょう症、勃起障害、腎疾患、癌、インスリン抵抗性、気管支喘息、緑内障などの治療薬としての可能性が示唆されている（非特許文献３、特許文献２参照）。現に、我が国においてもＲｈｏキナーゼ阻害剤であるファスジルを有効成分とするくも膜下出血後の脳血管攣縮およびこれに伴う脳虚血症状の改善を効能・効果とする点滴静注液が医薬品として承認され、臨床使用されている。【０００６】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は眼科分野においても有用であることが示唆されており、例えば、緑内障の治療薬として臨床応用が試みられている。特許文献３には、Ｒｈｏキナーゼ阻害活性を有する化合物を含有してなる緑内障予防・治療剤が開示されている。これは、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が、眼圧降下作用、視神経乳頭血流改善作用および房水流出促進作用を有することを見出したことに基づくものである。特許文献４には、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤とプロスタグランジン類との組み合わせからなる緑内障治療剤が、特許文献５にはＲｈｏキナーゼ阻害剤とβ遮断薬との組み合わせからなる緑内障治療剤が、それぞれ開示されている。また、特許文献６には、Ｒｈｏキナーゼ阻害活性を有する化合物を含有してなる眼精疲労の予防・治療剤、および、仮性近視の予防・治療剤が開示されている。これは、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が、毛様体筋の収縮を抑制し、毛様体筋の持続的異常緊張を原因とする眼精疲労および仮性近視の予防・治療剤としての有用性を見出したことに基づくものである。【０００７】
しかしながら、上記の眼圧降下作用、視神経乳頭血流改善作用、房水流出促進作用および毛様体筋の収縮抑制作用は、いずれも眼軸長の延長抑制を示唆するものではなく、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が軸性近視の予防または治療に有用であることを予測できるものではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平９−３０１８９１号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ９８／０６４３３号パンフレット
【特許文献３】国際公開ＷＯ００／０９１６２号パンフレット
【特許文献４】特開２００４−１０７３３５号公報
【特許文献５】特開２００４−１８２７２３号公報
【特許文献６】特開２００４−２７７４３２号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】吉野健一、学童児の近視治療について、「治療」2005年（Vol.87）8月臨時増刊号、p1388-1392
【非特許文献２】Siatkowski RM, Cotter SA, Crockett RS, Miller JM, Novack GD, Zadnik K; U.S. Pirenzepine Study Group. Two-year multicenter, randomized, double-masked, placebo-controlled, parallel safety and efficacy study of 2%pirenzepineophthalmicgelinchildrenwithmyopia. J AAPOS. In Press Corrected Proof, Available online 25 March 2008
【非特許文献３】田原俊介・下川宏明、Ｒｈｏキナーゼ研究の進展と阻害剤の将来展望、「YAKUGAKU ZASSHI」, 127(3), p501-514, (2007)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
近視矯正は、眼鏡や各種コンタクトレンズ、屈折矯正手術の進歩によりその対処法の選択肢は増えたが、近視は主に両眼性で、非可逆的に進行し、社会的に活動性の高い年齢層が冒されるという特徴から、近視であること自体がＱＯＬの低下につながる。一方、医学的には、強度近視に伴う網膜剥離、近視性網脈絡膜委縮、近視性脈絡膜新生血管、緑内障、白内障のリスクが増すことで、より重篤な眼疾患の合併も懸念されることから、進行が著しい学童期の近視や成人になってから発症する近視における近視進行予防法の確立が期待されている（非特許文献１参照）。
特に、強度近視の原因であると考えられる軸性近視については、現時点で有効な予防方法や治療法がないため、軸性近視を予防または治療することが可能となれば、ＱＯＬの向上につながるのみならず、上記の重篤な眼疾患発症のリスクも低減すると考えられる。それゆえ、軸性近視の予防または治療薬として臨床的に有効な薬剤の開発が強く望まれている。
そこで、本発明は、軸性近視の予防または治療効果に優れた薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が眼軸の延長を抑制する作用を有することを見出し、当該作用によりＲｈｏキナーゼ阻害剤が軸性近視の予防または治療剤の優れた有効成分となり得ることを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、軸性近視の予防または治療剤に関し、以下の発明を包含する。
［１］Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を有効成分とする軸性近視の予防または治療剤。
［２］Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が、（Ｒ）−（＋）−トランス-Ｎ−（４−ピリジル）−４−（１−アミノエチル）−シクロヘキサンカルボキシアミド、１−（５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン、１−（１−ヒドロキシ−５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン、（Ｓ）−（＋）−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン、（Ｓ）−（＋）−４−グリシル−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン、Ｎ−（４−ピリジル）−Ｎ’−（２，４，６−トリクロロフェニル）ウレア、および、３−（４−ピリジル）−１Ｈ−インドールからなる群より選択された化合物またはその塩である前記［１］に記載の軸性近視の予防または治療剤。
［３］点眼投与用である前記［１］または［２］に記載の軸性近視の予防または治療剤。
［４］硝子体内投与用である前記［１］または［２］に記載の軸性近視の予防または治療剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の軸性近視の予防または治療剤は、眼軸長の延長抑制作用を有するＲｈｏキナーゼ阻害剤を有効成分とするので、軸性近視の予防または治療に極めて有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を有効成分とする軸性近視の予防または治療剤である。本発明においてＲｈｏキナーゼ阻害剤とは、低分子量ＧＴＰ結合タンパク質Ｒｈｏの活性化に伴い活性化されるセリン／スレオニンキナーゼの機能を阻害する化合物を意味する。また、本発明において軸性近視とは、眼軸長（角膜から網膜までの長さ）の延長により、角膜を通過した光が網膜上で結像せず、網膜の手前で結像するために明確に像を捕らえることができない状態の近視を意味する。
【００１４】
本発明者らは、ニワトリ（ヒヨコ）の視覚遮断近視モデルにおいて、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を硝子体内に投与すると眼軸長の延長を有意に抑制することを見出した。この知見は、眼軸長の延長にＲｈｏキナーゼが関与していること、すなわち軸性近視の発症にＲｈｏキナーゼが関与していることを示すものであり、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が軸性近視の予防または治療に極めて有用であることを初めて明らかにしたものである。
【００１５】
したがって、本発明の軸性近視の予防または治療剤に用いられるＲｈｏキナーゼ阻害剤は、Ｒｈｏキナーゼの機能を阻害する化合物であればよく、特に限定されるものではない。本発明の軸性近視の予防または治療剤に好適に用いられるＲｈｏキナーゼ阻害剤として、（Ｒ）−（＋）−トランス-Ｎ−（４−ピリジル）−４−（１−アミノエチル）−シクロヘキサンカルボキシアミド、１−（５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン、１−（１−ヒドロキシ−５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン、（Ｓ）−（＋）−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン、（Ｓ）−（＋）−４−グリシル−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン、Ｎ−（４−ピリジル）−Ｎ’−（２，４，６−トリクロロフェニル）ウレア、または、３−（４−ピリジル）−１Ｈ−インドールが挙げられる。
【００１６】
（Ｒ）−（＋）−トランス-Ｎ−（４−ピリジル）−４−（１−アミノエチル）−シクロヘキサンカルボキシアミド（(R)-(+)-trans-N-(4-Pyridyl)-4-(1-aminoethyl)-cyclohexanecarboxamide）は、Ｙ２７６３２とも称される。本化合物は下記式（Ｉ）で表される構造を有し、強力なＲＯＣＫ−ＩおよびＲＯＣＫ−ＩＩの選択的阻害剤として知られている（参考文献：M. Uehata, et al. Calcium sensitization of smooth muscle mediated by a Rho-associated protein kinase in hypertension. Nature 389, 990 (1997)）。
【００１７】
１−（５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン（1-(5-Isoquinolinesulfonyl)homopiperazine）は、ファスジル（Fasudil）、またはＨＡ１０７７とも称される。本化合物は下記式（ＩＩ）で表される構造を有し、くも膜下出血後の脳血管攣縮およびこれに伴う脳虚血症状の改善薬の有効成分として、我が国で承認されている（参考文献：M. Shirotani, et al. A new type of vasodilator, HA1077, an isoquinoline derivative, inhibits proliferation of bovine vascular smooth muscle cells in culture. J. Pharmacol. Exp. Ther. 259, 738 (1991) ）。
【００１８】
１−（１−ヒドロキシ−５−イソキノリンスルフォニル）ホモピペラジン（1-(1-Hydroxy-5-isoquinolinesulfonyl)homopiperazine）は、ヒドロキシファスジル（Hydroxyfasudil）、またはＨＡ１１００とも称される。本化合物はファスジルの活性代謝物であり、下記式（ＩＩＩ）で表される構造を有する（参考文献：H. Shimokawa, et al. Rho-kinase-mediated pathway induces enhanced myosin light chain phosphorylations in a swine model of coronary artery spasm. Cardiovasc. Res. 43, 1029 (1999)）。
【００１９】
（Ｓ）−（＋）−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン（(S)-(+)-2-Methyl-1-[(4-methyl-5-isoquinolinyl)sulfonyl]homopiperazine）は、Ｈ１１５２とも称される。本化合物はＲＯＣＫ−ＩＩに選択性の高いファスジル誘導体であり、下記式（ＩＶ）で表される構造を有する（参考文献：M. Ikenoya, et al. Inhibition of rho-kinase-induced myristoylated alanine-rich C kinase substrate (MARCKS) phosphorylation in human neuronal cells by H-1152, a novel and specific Rho-kinase inhibitor. J. Neurochem. 81, 9 (2002)）。
【００２０】
（Ｓ）−（＋）−４−グリシル−２−メチル−１−［（４−メチル−５−イソキノリニル）スルフォニル］ホモピペラジン（(S)-(+)-4-Glycyl-2-methyl-1-[(4-methyl-5-isoquinolinyl)sulfonyl]homopiperazine）は、上記Ｈ１１５２のグリシル体であり、グリシル−Ｈ１１５２とも称される。本化合物は下記式（Ｖ）で表される構造を有し、Ｈ１１５２より高いＲＯＣＫ−ＩＩ選択性を有する（Tamura et al. Development of specific Rho-kinase inhibitors and their clinical application. Biochim.Biophys.Acta 1754, 245 (2005)）。
【００２１】
Ｎ−（４−ピリジル）−Ｎ’−（２，４，６−トリクロロフェニル）ウレア（N-(4-Pyridyl)-N’-(2,4,6-trichlorophenyl)urea）は、下記式（ＶＩ）で表される構造を有する（A. Takami, et al. Design and synthesis of Rho kinase inhibitors (I). Bioorg. Med. Chem. 12, 2115 (2004)）。
【００２２】
３−（４−ピリジル）−１Ｈ−インドール（3-(4-Pyridyl)-1H-indole）は、下記式（ＶＩＩ）で表される構造を有する（J.C. Yarrow, et al. Screening for cell migration inhibitors via automated microscopy reveals a Rho-kinase inhibitor. Chem. Biol. 12, 385 (2005)）。
【００２３】
【化１】
2010010702.tif 000002
【００２４】
本発明の軸性近視の予防または治療剤に好適に用いられるＲｈｏキナーゼ阻害剤として例示した上記化合物（上記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ））は、薬理学的に許容される塩として用いることもできる。このような塩としては、例えば無機塩基、有機塩基等の塩基との塩、無機酸、有機酸、塩基性または酸性アミノ酸等の酸付加塩が挙げられる。無機塩基としては、例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属；ならびにアルミニウム、アンモニウム等が挙げられる。有機塩基としては、例えばエタノールアミン等の第一級アミン；ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン等の第二級アミン；トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、トリエタノールアミン等の第三級アミン等が挙げられる。無機酸としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等が挙げられる。有機酸としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等が挙げられる。塩基性アミノ酸としては、例えばアルギニン、リジン、オルニチン等が挙げられる。酸性アミノ酸としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸等が挙げられる。
【００２５】
上記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）で表される化合物は公知のＲｈｏキナーゼ阻害剤であり、各化合物またはその塩は市販されている。また、上記各化合物の参考文献を参照することにより、容易に製造することができる。
【００２６】
本発明の軸性近視の予防または治療剤は、例えば、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤またはその塩と医薬上許容される担体とを混合することにより製造することができる。医薬上許容される担体としては、固形製剤において、賦形剤（例えば、乳糖、トウモロコシ澱粉、マンニトール、結晶セルロース等）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、コロイドシリカ等）、結合剤（シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、トラガカントガム、ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（例えば、馬鈴薯澱粉、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、キチン、キトサン等）などが、また液状製剤において、非水性ビヒクル（例えば、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類、オリーブ油、アーモンド油、ゴマ油、綿実油、ヒマシ油、トウモロコシ油等の油脂類、油性エステルなど）、溶解補助剤（例えば、ポリビニルピロリドン、シクロデキストリン、カフェイン、ポリエチレングリコール等）、懸濁化剤（例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート８０等の界面活性剤、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、ソルビットシロップ等の親水性高分子など）、増粘剤（例えば、卵黄レシチン、ゼラチン、アラビアゴム、トラガカントガム、メチルセルロース、ペクチン等）、等張化剤（例えば、ソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、グルコース、塩化ナトリウム等）、乳化剤（例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン等）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酒石酸緩衝剤、酢酸緩衝剤等）、無痛化剤（例えば、ベンジルアルコール等）などが適宜配合される。また、必要に応じて保存剤（例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール等）、キレート剤（例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、縮合リン酸ナトリウム等）、抗酸化剤（例えば、亜硝酸塩、アスコルビン酸、システイン等）、着色剤（例えば、タール色素、カンゾウエキス、リボフラビン等）、甘味剤（グルコース、シュークロース、サッカリン等）、着香剤（例えば、バニリン、メントール等）、芳香剤（例えば、ウイキョウ油、メントール等）などを常法に従って添加してもよい。上記以外に、寒天、カゼイン、コラーゲン等が医薬上許容される担体として例示される。
【００２７】
本発明の軸性近視の予防または治療剤は、経口的または非経口的に投与される。経口投与用の製剤としては、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形製剤や、乳剤、シロップ剤、懸濁剤等の液状製剤が挙げられる。非経口投与用の製剤としては、例えば注射剤、軟膏剤、点眼剤等が挙げられる。本発明の軸性近視の予防または治療剤は、効果の点から眼局所投与用の形態で用いることが好ましい。眼局所投与用の製剤としては、点眼剤、注射剤（硝子体内注射剤、結膜下注射剤、テノンのう下注射剤）、眼軟膏剤、眼科用ゲル剤が挙げられる。本発明の軸性近視の予防または治療剤は、点眼剤または硝子体内注射剤の形態で用いることが好ましい。また、これらの製剤を徐放剤とすることが好ましい。投与間隔を空けることが可能となり投与回数を少なくできるからである。特に、眼局所への頻回の注射は合併症のリスクを高めるので、注射剤において徐放剤を用いることが好ましい。徐放剤は、公知の方法により製造することができる。具体的には、例えば生体分解性高分子（ポリ乳酸など）、天然高分子（コラーゲン、ヒアルロン酸など）、合成高分子（メタアクリル酸コポリマーなど）などの微粒子に薬剤を含有させた徐放剤が挙げられる。
【００２８】
注射剤は、例えばＲｈｏキナーゼ阻害剤またはその塩を、前記した保存剤、等張化剤、溶解補助剤等とともに注射用水に溶解させることにより水性注射剤として、あるいはプロピレングリコール，オリーブ油，ゴマ油，綿実油等に溶解あるいは懸濁させることにより油性注射剤として製造することができる。
【００２９】
水性点眼剤は、例えば精製水を加熱し、保存剤を溶解した後、溶解補助剤を加え、次いでＲｈｏキナーゼ阻害剤またはその塩を加えて完全に溶解させることにより製造することができる。この際、必要により緩衝剤、等張化剤、キレート剤、増粘剤等を用いてもよい。
【００３０】
水性懸濁点眼剤は、水性点眼剤に用いられる添加剤の他に、さらに前記した懸濁化剤を適宜選択して用いることにより製造することができる。水性点眼剤および水性懸濁点眼剤は、点眼に通常使用されるｐＨ範囲内に調整して用いることが好ましく、通常４〜９、好ましくは５〜８である。
【００３１】
非水性点眼剤は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤またはその塩をアルコール類（例えばエタノール、エチレングリコール、マクロゴール、プロピレングリコール、グリセリン等）等の水溶性溶剤や油脂類（例えばオリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、綿実油、ヒマシ油、トウモロコシ油等）等の油性溶剤に溶解あるいは懸濁させることにより製造することができる。
【００３２】
眼軟膏剤は、例えばワセリン、プラスチベース、流動パラフィン等を基剤として適宜選択して用いることにより製造することができる。
【００３３】
眼科用ゲル剤は、例えばカルボキシビニルポリマー、エチレン無水マレイン酸ポリマー、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ゲランゴム等を基剤として適宜選択して用いることにより製造することができる。
【００３４】
本発明の軸性近視の予防または治療剤における有効成分の量は、製剤の０．０００１〜１００重量％であり、好ましくは０．００１〜５０重量％である。投与量、投与回数は、年齢、体重、投与形態により異なるが、成人に対し点眼剤として使用する場合には、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を０．０００１〜１０ｗ／ｖ％、好ましくは０．００１〜１ｗ／ｖ％含有する製剤を、１日あたり数回、好ましくは１〜６回、１回数滴、好ましくは１〜３滴投与することができ、硝子体内注射剤として使用する場合には、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を０．０００１〜１０ｗ／ｗ％、好ましくは０．００１〜１ｗ／ｗ％含有する製剤を、４週〜８週ごとに１回投与することができる。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。【００３６】
〔実施例１：ニワトリ近視モデルを用いた眼軸長抑制試験（Ｉ）〕
（１）ニワトリ視覚遮断近視モデル
生後６日齢のヒヨコ（白色レグホン）を入手し、ビニールテープを用いて作製したマスクで片眼を遮蔽した。遮蔽は常に右眼に行い、左眼は対照とした。ヒヨコは通常の飼育条件で飼育した。【００３７】
（２）Ｒｈｏキナーゼ阻害剤
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤として、Ｙ２７６３２二塩酸塩（和光純薬工業製、上記式（Ｉ）参照、以下「Ｙ２７６３２」と略記する）およびヒドロキシファスジル塩酸塩（ＳＩＧＭＡ社製、上記式（ＩＩＩ）参照、以下「ヒドロキシファスジル」と略記する）を使用した。Ｙ２７６３２は生理食塩水を用いて５０μＭに調製した。ヒドロキシファスジルは生理食塩水を用いて１ｍＭに調製した。対照には生理食塩水を使用した。【００３８】
（３）投与方法
遮蔽によって近視誘導中のヒヨコに、Ｙ２７６３２またはヒドロキシファスジルを週に１回（７日ごとに）硝子体腔に注射した。具体的には、ヒヨコをケタラール（登録商標）とセラクタール（登録商標）で麻酔した後、インスリン注射用シリンジを用いて角膜輪から２ｍｍ程度外側に刺入した。
Ｙ２７６３２投与群には、Ｙ２７６３２の５０μＭ溶液を５０μｌ硝子体内に注入した。ヒヨコの眼球容積は約１ｍｌであるため、Ｙ２７６３２の最終眼内濃度は約２．５μＭになる。Ｙ２７６３２投与群の対照群には、生理食塩水を５０μｌ硝子体内に注入した。
ヒドロキシファスジル投与群には、ヒドロキシファスジルの１ｍＭ溶液を１μｌ取り、これを２０μｌに希釈して硝子体内に注入した。ヒヨコの眼球容積は約１ｍｌであるため、ヒドロキシファスジルの最終眼内濃度は約１μＭになる。ヒドロキシファスジル投与群の対照群には、生理食塩水を２０μｌ硝子体内に注入した。【００３９】
（４）眼球の計測
近視を誘導して４週間後にヒヨコを屠殺、眼球を摘出して、左右眼球の大きさをキャリパで測定した。軸性近視の程度を眼軸縦方向の長さ（眼軸長）および横方向の最大直径（最大横径）で評価した。左右の眼軸長差および最大横径差を算出し、その差を近視の程度とし、対照群における近視誘導の程度と上記薬剤を注入した場合の近視誘導の程度の差を比較した。【００４０】
（５）結果
Ｙ２７６３２投与群および対照群の結果を表１に示した。表１から明らかなように、Ｙ２７６３２投与群は、対照群と比較して有意に眼軸長および最大横径を減少させた。【００４１】
【表１】
2010010702.tif 000003
【００４２】
ヒドロキシファスジル投与群および対照群の結果を表２に示した。表２から明らかなように、ヒドロキシファスジル投与群は、対照群と比較して有意に眼軸長および最大横径を減少させた。【００４３】
【表２】
2010010702.tif 000004
【００４４】
以上のように、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤がヒヨコモデルにおける軸性近視の進行を有意に抑制したことから、眼軸の延長にＲｈｏキナーゼが関与していることが明らかとなった。【００４５】
〔実施例２：ニワトリ近視モデルを用いた眼軸長抑制試験（ＩＩ）〕
（１）ニワトリ視覚遮断近視モデル
実施例１と同様にニワトリ視覚遮断近視モデルを作製した。すなわち、生後６日齢のヒヨコ（白色レグホン）を入手し、ビニールテープを用いて作製したマスクで片眼を遮蔽した。遮蔽は常に右眼に行い、左眼は対照とした。ヒヨコは通常の飼育条件で飼育した。【００４６】
（２）Ｒｈｏキナーゼ阻害剤
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤として、ヒドロキシファスジル塩酸塩（ＳＩＧＭＡ社製、上記式（ＩＩＩ）参照、以下「ヒドロキシファスジル」と略記する）を使用した。ビーエスエスプラス（登録商標、アルコン社製）に溶解させたヒドロキシファスジル（濃度１０ｍＭ）の５０μｌを生理食塩水で１０００μｌに希釈し、濃度５００ｎｍｏｌ／１０００μｌのヒドロキシファスジル溶液を調製して使用した。【００４７】
（３）投与方法
遮蔽によって近視誘導中のヒヨコに、ヒドロキシファスジルを１日１回、４週間毎日点眼した。具体的には、インスリン皮下投与用針付注射筒「ロードーズ」３０Ｇ（ベクトン・ディッキンソン社製）を用いて、上記ヒドロキシファスジル溶液を１滴（約５μｌ）点眼した。点眼は右眼および左眼に行った。
対照群には、ビーエスエスプラスを週に１回（７日ごとに）硝子体内に注入した。具体的には、ヒヨコの角膜輪部（上耳側）から約３ｍｍのところに、上記「ロードーズ」を用い、水晶体および強膜の軟骨組織を避けて硝子体内に注入した。注入は右眼および左眼に合計４回行った。【００４８】
（４）眼球の計測
近視を誘導して４週間後にヒヨコを屠殺、眼球を摘出して、左右眼球の大きさをキャリパで測定した。軸性近視の程度を眼軸縦方向の長さ（眼軸長）および横方向の最大直径（最大横径）で評価した。左右の眼軸長差および最大横径差を算出し、その差を近視の程度とし、対照群における近視誘導の程度とヒドロキシファスジルを点眼した場合の近視誘導の程度の差を比較した。【００４９】
（５）結果
結果を表３に示した。表３から明らかなように、ヒドロキシファスジルの点眼投与群は、対照群と比較して有意に眼軸長および最大横径を減少させた。【００５０】
【表３】
2010010702.tif 000005
【００５１】
〔実施例３：製造例〕
処方１：点眼剤
滅菌精製水にＹ２７６３２二塩酸塩（(R)-(+)-trans-N-(4-Pyridyl)-4-(1-aminoethyl)-cyclohexanecarboxamide 2HCl）、リン酸２水素ナトリウム・２水和物および塩化ナトリウムを溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整した後、滅菌精製水で全量を１００ｍｌとして、以下の処方の点眼剤を調製した。
１００ｍｌ中
・Ｙ２７６３２二塩酸塩                    ０．０１ｇ
・リン酸２水素ナトリウム・２水和物        ０．１ｇ
・塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
・水酸化ナトリウム                        適量
・滅菌精製水                              適量
なお、上記処方例１と同様にして、Ｙ２７６３２二塩酸塩を１００ｍｌ中に０．１ｇおよび０．００１ｇ含有する点眼剤を調製することができる。【００５２】
処方２：点眼剤
滅菌精製水にヒドロキシファスジル塩酸塩（1-(1-Hydroxy-5-isoquinolinesulfonyl)homopiperazine HCl）、リン酸２水素ナトリウム・２水和物および塩化ナトリウムを溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整した後、滅菌精製水で全量を１００ｍｌとして、以下の処方の点眼剤を調製した。
１００ｍｌ中
・ヒドロキシファスジル塩酸塩              ０．０１ｇ
・リン酸２水素ナトリウム・２水和物        ０．１ｇ
・塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
・水酸化ナトリウム                        適量
・滅菌精製水                              適量
なお、上記処方例２と同様にして、ヒドロキシファスジル塩酸塩を１００ｍｌ中に０．１ｇおよび０．００１ｇ含有する点眼剤を調製することができる。【００５３】
処方３：注射剤
菌精製水にＹ２７６３２二塩酸塩（(R)-(+)-trans-N-(4-Pyridyl)-4-(1-aminoethyl)-cyclohexanecarboxamide 2HCl）および塩化ナトリウムを溶解し、滅菌精製水で全量を１００ｍｌとして、以下の処方の注射剤を調製した。
１００ｍｌ中
・Ｙ２７６３２二塩酸塩                    ０．００１ｇ
・塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
・滅菌精製水                              適量
なお、上記処方例３と同様にして、Ｙ２７６３２二塩酸塩を１００ｍｌ中に０．０１ｇおよび０．０００１ｇ含有する注射剤を調製することができる。【００５４】
処方４：注射剤
菌精製水にヒドロキシファスジル塩酸塩（1-(1-Hydroxy-5-isoquinolinesulfonyl)homopiperazine HCl）および塩化ナトリウムを溶解し、滅菌精製水で全量を１００ｍｌとして、以下の処方の注射剤を調製した。
１００ｍｌ中
・ヒドロキシファスジル塩酸塩              ０．００１ｇ
・塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
・滅菌精製水                              適量
なお、上記処方例４と同様にして、ヒドロキシファスジル塩酸塩を１００ｍｌ中に０．０１ｇおよび０．０００１ｇ含有する注射剤を調製することができる。【００５５】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【国際調査報告】
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2010010702.tif 000009
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