(57)【要約】  魚類または甲殻類への生存限界温度耐性の付与。  アルギニンを含有する魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤およびアルギニンを給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法の提供。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルギニンを含有することを特徴とする魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項２】
さらに、トリプトファンを含有することを特徴とする請求項１記載の魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項３】
魚類がマダイ、ヒラメ、ブリ、カンパチ、トラフグ、マグロ、ウナギ、アユまたはニジマスであり、甲殻類がクルマエビ、ウシエビ、ホワイトレッグシュリンプまたはガザミであることを特徴とする請求項１または２記載の魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項４】
アルギニン含量が３．５％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項記載の甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項５】
アルギニン含量が３．５〜５．０％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする請求項４記載の甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項６】
トリプトファン含量が０．６％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする請求項２〜５のいずれか１項記載の甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項７】
トリプトファン含量が１．６〜２．０％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする請求項６記載の甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項８】
アルギニン含量が３.０％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項記載の魚類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項９】
アルギニン含量が３．０〜５．０％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする請求項８記載の魚類の生存限界温度耐性付与剤。
【請求項１０】
対象が甲殻類である場合、アルギニン含有量が３．５％（ｗ／ｗ）以上となるようにアルギニンを水産用飼料に添加して給餌することを特徴とし、対象が魚類である場合、アルギニン含有量が３.０％（ｗ／ｗ）以上となるようにアルギニンを水産用飼料に添加して給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項記載の魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤を給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１２】
魚類がマダイ、ヒラメ、ブリ、カンパチ、トラフグ、マグロ、ウナギ、アユまたはニジマスであり、甲殻類がクルマエビ、ウシエビ、ホワイトレッグシュリンプまたはガザミであることを特徴とする請求項１０または１１記載の魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１３】
養殖場の水温が２９℃以上または１２℃以下における請求項１０〜１２のいずれか１項記載の魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１４】
養殖場の水温が２９〜３３℃または７〜１２℃における請求１３記載の魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１５】
養殖場の水温が２９℃以上または１２℃以下において、１日あたり魚類または甲殻類の体重１ｋｇにつき８００ｍｇ以上のアルギニンを含有する飼料を給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１６】
さらに、１日あたり魚類または甲殻類の体重１ｋｇにつき１８０ｍｇ以上のトリプトファンを含有する飼料を給餌することを特徴とする請求項１５記載の魚類または甲殻類の養殖方法。
【請求項１７】
甲殻類の生存限界温度耐性付与剤を製造するためのアルギニンの使用。
【請求項１８】
アルギニン含有量が３．５％（ｗ／ｗ）以上となるように水産用飼料に添加する、請求項１７記載のアルギニンの使用。
【請求項１９】
アルギニン含有量が３．５〜５．０％（ｗ／ｗ）となるように水産用飼料に添加する、請求項１８記載のアルギニンの使用。
【請求項２０】
魚類の生存限界温度耐性付与剤を製造するためのアルギニンの使用。
【請求項２１】
アルギニン含有量が３．０％（ｗ／ｗ）以上となるように水産用飼料に添加する、請求項２０記載のアルギニンの使用。
【請求項２２】
アルギニン含有量が３．０〜５．０％（ｗ／ｗ）となるように水産用飼料に添加する、請求項２１記載のアルギニンの使用。
【請求項２３】
魚類または甲殻類に生存限界温度耐性を付与するためのアルギニン。
【請求項２４】
水産用飼料中に３．５％（ｗ／ｗ）以上となるように含め甲殻類に給餌するか、または水産用飼料中に３．０％（ｗ／ｗ）以上となるように含め魚類に給餌する、請求項２３記載のアルギニン。
【請求項２５】
水温が２９℃以上または１２℃以下における魚類または甲殻類に、１日あたり体重１ｋｇにつき８００ｍｇ以上を給餌する、請求項２３または２４記載のアルギニン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルギニンを含有する魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤およびアルギニンを給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
魚類および甲殻類は変温動物のため恒温動物にくらべ、環境温度変化に弱く、水温が個体の生存限界から外れると死を招くという生物的特徴を持つ。近年の地球環境の温暖化等の異常気象現象の到来により、夏季は魚類または甲殻類を養殖する養殖池の水温が２９〜３０℃を超えることが多く養殖対象である魚類または甲殻類の大量死をもたらすことが問題となっている。一方、冬季は、養殖池の水温が７℃以下になり養殖対象である魚類または甲殻類の大量死をもたらすことも問題となっている。【０００３】
甲殻類の養殖と、短期間の温度変化に由来する魚類のストレスを軽減する方法としては、DHAまたはそのエステルおよび／またはリン脂質を含有する飼料を給餌する方法が知られている（特許文献１）。
【特許文献１】特開平９−１２１７８４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、魚類または甲殻類がより長期間の異常水温状態における飼育に耐えることを可能とする添加剤および養殖方法はなく、その開発が望まれている。【０００５】
本発明の目的は、魚類または甲殻類に生存限界温度耐性を付与する新規製剤を提供すること、およびその製剤を使用することによって魚類または甲殻類の非適温度を超える水温、すなわち生存限界温度においても、魚類または甲殻類が生存可能な養殖方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは鋭意工夫した結果、アルギニンを飼料に添加して魚類および甲殻類を飼育すると、本来これらの水産動物が生存不能な水温領域においても、魚類または甲殻類の飼育が可能であることを見出した。本発明者らは、この知見を基に本発明を完成させるに至った。【０００７】
なお、魚介類に対してアミノ酸を栄養素として飼料に添加する方法は知られており（特開２００１−２３１４６１号公報）、クルマエビの成長のために最適なアルギニンまたはトリプトファンの含有量は、各々飼料中３．０％または１．０％であることが知られている（金澤昭夫：エビ・カニ類の増養殖（橘高二郎ら編）、恒星社厚生閣、東京、１９９６、２２６−２５０）。甲殻類の共食いを防ぐためにトリプトファンまたはその誘導体を飼料に添加する方法（特開平５−７４６３号公報、特開平６−７８６８７号公報）、魚類の成長を促進させるためにアラニンと共にアルギニン3.5mmol/Kgを筋肉注射することにより魚類のインスリン分泌を促進する方法(特開２００７−４９９３８号公報)が知られている。しかし、アルギニンによる魚類または甲殻類への生存限界温度耐性付与の薬理効果は知られておらず、本発明者らによって初めて見出されたことである。【０００８】
すなわち、本発明は、下記（１）〜（２５）に関する。【０００９】
（１）  アルギニンを含有することを特徴とする魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１０】
（２）  さらに、トリプトファンを含有することを特徴とする（１）の魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１１】
（３）  魚類がマダイ、ヒラメ、ブリ、カンパチ、トラフグ、マグロ、ウナギ、アユまたはニジマスであり、甲殻類がクルマエビ、ウシエビ、ホワイトレッグシュリンプまたはガザミであることを特徴とする（１）または（２）の魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１２】
（４）  アルギニン含量が３．５％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかの甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１３】
（５）  アルギニン含量が３．５〜５．０％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする（４）の甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１４】
（６）  トリプトファン含量が０．６％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする（２）〜（５）のいずれかの甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１５】
（７）  トリプトファン含量が１．６〜２．０％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする（６）の甲殻類の生存限界温度耐性付与剤。【００１６】
（８）  アルギニン含量が３．０％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかの魚類の生存限界温度耐性付与剤。【００１７】
（９）  アルギニン含量が３．０〜５．０％（ｗ／ｗ）であることを特徴とする（８）の魚類の生存限界温度耐性付与剤。【００１８】
（１０）  対象が甲殻類である場合、アルギニン含有量が３．５％（ｗ／ｗ）以上となるようにアルギニンを水産用飼料に添加して給餌することを特徴とし、対象が魚類である場合、アルギニン含有量が３．０％（ｗ／ｗ）以上となるようにアルギニンを水産用飼料に添加して給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法。【００１９】
（１１）  （１）〜（９）のいずれかの魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤を給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法。【００２０】
（１２）  魚類がマダイ、ヒラメ、ブリ、カンパチ、トラフグ、マグロ、ウナギ、アユまたはニジマスであり、甲殻類がクルマエビ、ウシエビ、ホワイトレッグシュリンプまたはガザミであることを特徴とする（１０）または（１１）の魚類または甲殻類の養殖方法。【００２１】
（１３）  養殖場の水温が２９℃以上または１２℃以下における（１０）〜（１２）いずれかの魚類または甲殻類の養殖方法。【００２２】
（１４）  養殖場の水温が２９〜３３℃または７〜１２℃における（１３）の魚類または甲殻類の養殖方法。【００２３】
（１５）  養殖場の水温が２９℃以上または１２℃以下において、１日あたり魚類または甲殻類の体重１ｋｇにつき８００ｍｇ以上のアルギニンを含有する飼料を給餌することを特徴とする魚類または甲殻類の養殖方法。【００２４】
（１６）  さらに、１日あたり魚類または甲殻類の体重１ｋｇにつき１８０ｍｇ以上のトリプトファンを含有する飼料を給餌することを特徴とする（１５）の魚類または甲殻類の養殖方法。【００２５】
（１７）  甲殻類の生存限界温度耐性付与剤を製造するためのアルギニンの使用。【００２６】
（１８）  アルギニン含有量が３．５％（ｗ／ｗ）以上となるように水産用飼料に添加する、（１７）のアルギニンの使用。【００２７】
（１９）  アルギニン含有量が３．５〜５．０％（ｗ／ｗ）となるように水産用飼料に添加する、（１８）のアルギニンの使用。【００２８】
（２０）  魚類の生存限界温度耐性付与剤を製造するためのアルギニンの使用。【００２９】
（２１）  アルギニン含有量が３．０％（ｗ／ｗ）以上となるように水産用飼料に添加する、（２０）のアルギニンの使用。【００３０】
（２２）  アルギニン含有量が３．０〜５．０％（ｗ／ｗ）となるように水産用飼料に添加する、（２１）のアルギニンの使用。【００３１】
（２３）  魚類または甲殻類に生存限界温度耐性を付与するためのアルギニン。【００３２】
（２４）  水産用飼料中に３．５％（ｗ／ｗ）以上となるように含め甲殻類に給餌するか、または水産用飼料中に３．０％（ｗ／ｗ）以上となるように含め魚類に給餌する、（２３）のアルギニン。【００３３】
（２５）  水温が２９℃以上または１２℃以下における魚類または甲殻類に、１日あたり体重１ｋｇにつき８００ｍｇ以上を給餌する、（２３）または（２４）のアルギニン。【００３４】
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2008-190853号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、アルギニン含有製剤を投与した試験区と比較製剤を投与した対照区における高温度負荷後のクルマエビの生残率推移の結果を示す。
【図２】図２は、アルギニン含有製剤を投与した試験区と比較製剤を投与した対照区における高温度負荷後のマダイの生残率推移の結果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下、本発明を詳細に説明する。【００３７】
本発明のアルギニンを含有することを特徴とする魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤とは、アルギニンを通常の魚類または甲殻類の栄養量より過剰に投与することにより、非適温度下において生育障害を軽減させるまたは生存限界温度において生存率を向上させる効果を有する水産用製剤である。【００３８】
本発明において非適温度とは、魚類または甲殻類が生育障害を発生する温度から致死に至る温度、すなわち生存限界温度までの温度領域であり、非適温度と生存限界温度を含めた温度領域は生物種によって異なるが通常は７〜１２℃および２９〜３３℃である。【００３９】
また、本発明のアルギニンを含有することを特徴とする魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤は、アルギニンに加えてトリプトファンを有効量含むものでも良い。さらに一般に水産用医薬品、飼料用添加剤は飼料に添加されて給餌されるため、一般的な水産用飼料ペレットに含まれる成分を含んでいても良い。【００４０】
本発明のアルギニンを含有する魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤はアルギニンを含有し、魚類または甲殻類が摂取できるものであればどのようなものでも良く、単に水産用飼料にアルギニンを有効量配合したもの、給餌前に飼料に添加するために特別に調製されたアルギニンの配合製剤等があげられるが、アルギニンの薬理効果を効率良く発現させるためには、水産用飼料にアルギニンを添加して形成されたものであることが好ましい。【００４１】
水産用飼料は、魚類または甲殻類の水産用飼料として用いられる飼料であればどのようなものでも良いが、例えばドライペレット、モイストペレット等の水産用飼料ペレットを用いても良く、通常はドライペレットを用いることが好ましい。該水産用飼料ペレットは、市販品または通常水産用飼料に用いられる成分を常法により配合して作製したものを用いることができる。【００４２】
水産用飼料は、天然成分から構成される水産用飼料に、エリスロマイシン製剤、アンピシリン製剤、プラジクアンテル製剤、塩化リゾチーム製剤、塩酸オキシテトラサイクリン製剤、スピラマイシン製剤、ニフルスチレン酸ナトリウム製剤、塩酸リンコマイシン製剤、フルメキン製剤、グルタチオン製剤等の水産用医薬品、ビタミンＣ、ビタミンＢ１、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等のビタミン類、リジン、メチオニン、ヒスチジン等のアミノ酸類等の栄養補給物質、β−カロチン、アスタキサンチン、カンタキサンチン等の色素等（以下、これらの物質を総称して水産用添加物質と呼ぶ）が混合または展着された水産用飼料であってもよい。【００４３】
これらの水産用添加物質は、飼料中好ましくは０．０１〜１０％（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは１．０〜５．０％（ｗ／ｗ）含まれる。水産用飼料が含有する他の成分としては、粗蛋白質、粗脂肪、粗繊維、粗灰分等があげられる。【００４４】
アルギニンを水産用飼料と混合し、甲殻類の生存限界温度付与剤として使用する場合、甲殻類用飼料中に通常含まれるアルギニンと併せて最終的にアルギニンを３．５％（ｗ／ｗ）以上含有すれば良いが、高濃度では成長障害が生じる可能性があるため、好ましくはアルギニンを３．５〜７．０％（ｗ／ｗ）、とりわけ好ましくは３．５〜５．０％（ｗ／ｗ）を含有すれば良い。【００４５】
更にトリプトファンを前記アルギニン含有水産用飼料に混合する場合は、最終的にトリプトファン０．６％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは１.６％（ｗ／ｗ）以上を配合すれば良いが、トリプトファンの場合成長阻害の観点から含有量の上限を３．０％以下にすることが好ましく、とりわけ好ましくはトリプトファン１．６〜２．０％（ｗ／ｗ）を含有すれば良い。【００４６】
なお、甲殻類用水産飼料には天然原料由来のアルギニンが約２.８〜３．０％（ｗ／ｗ)、トリプトファンが約０．５〜１．０％（ｗ／ｗ)予め栄養素として存在する場合があるが、その場合は前記の終濃度から飼料中の天然原料由来のアルギニンおよびトリプトファンのそれぞれの含量を除した、アルギニンおよびトリプトファンのそれぞれの必要量を添加すればよい。【００４７】
したがって、本発明においては甲殻類用飼料に天然原料由来のアルギニンを含めて含有量が、３．５％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは３．５〜７．０％（ｗ／ｗ）、とりわけ好ましくは３．５〜５．０％（ｗ／ｗ）となるべく、アルギニンを０．５〜０．７％（ｗ／ｗ)以上、好ましくは０．５〜４．２％（ｗ／ｗ)、とりわけ好ましくは０．５〜２．２％（ｗ／ｗ)添加することを必要とし得る。更に必要により、甲殻類用飼料に天然原料由来のトリプトファンを含めて含有量が、０．６％（ｗ／ｗ）以上、好ましくは１．６〜２．０％（ｗ／ｗ）となるべく、トリプトファンを０．１％（ｗ／ｗ)以上、好ましくは０．６〜１．５％（ｗ／ｗ)加えても良い。【００４８】
アルギニンを水産用飼料と混合し、魚類の生存限界温度付与剤として使用する場合、魚類用飼料中に含まれる天然原料由来のアルギニンと併せて最終的にアルギニンを３．０％（ｗ／ｗ）以上含有すれば良いが、高濃度では成長障害が生じる可能性があるため、アルギニンを３．０〜７．０％（ｗ／ｗ）、とりわけ好ましくは３．０〜５．０％（ｗ／ｗ）を含有すれば良い。【００４９】
なお、魚類用飼料には天然原料由来のアルギニンが約１．７〜２．６％（ｗ／ｗ)、予め栄養素として存在する場合があるが、その場合は前記の終濃度から飼料中の含量を除したアルギニンをそれぞれ添加すればよい。【００５０】
したがって、本発明においては魚類用飼料に天然原料由来のアルギニンを含めて含有量が、好ましくは３．０〜７．０％（ｗ／ｗ）、とりわけ好ましくは３．０〜５．０％（ｗ／ｗ）となるべく、アルギニンを好ましくは０．４〜５．３％（ｗ／ｗ)、とりわけ好ましくは０．４〜３．３％（ｗ／ｗ)添加することを必要とし得る。【００５１】
アルギニンを含有することを特徴とする魚類または甲殻類の生存限界温度耐性付与剤の製造方法は、アルギニンを予め前記所望量含むよう調製した飼料製剤原料をペレットとして製造しても良いし、市販の水産用飼料のペレットに前記所望量のアルギニンを添加しても良い。【００５２】
アルギニンを予め前記所望量含むよう調製した飼料製剤原料をペレットとして製造する方法としては、アルギニンが所望量含まれるのであればどのような方法でも良いが、たとえば以下のような造粒法による製剤の製造が挙げられる。【００５３】
予めアルギニンを甲殻類用飼料ペレットの場合はペレット終濃度として３．５％（ｗ／ｗ）以上、魚類用飼料ペレットの場合はペレット終濃度として３．０％以上、必要によりトリプトファンおよび水産用添加物質を前記所望量配合されるよう調製された飼料原料に対して、飼料原料に対して約３〜１０％の魚油、レシチン、ステロール類等の油脂を1種以上混合した油脂類を加え、更に必要により水、含水エタノール等から選ばれる水溶媒を原料合計量に対して１０〜４０％加え混合した後、押し出し造粒機、流動層造粒機により生存限界温度耐性付与剤を製造する。【００５４】
また、市販の水産用飼料ペレットにアルギニンを展着させる方法はとくに制限はないが、例えば、以下のような方法をあげることができる。すなわち、水産用飼料ペレットに対して好ましくは０．１〜２０％（ｖ／ｗ）、さらに好ましくは１．０〜１０％（ｖ／ｗ）の水をトレイ等に入れ、その中にペレットを入れ浸漬する方法、あるいはスプレー等を用いて水を噴霧する方法により飼料ペレットを含水させる。【００５５】
次に、水産用飼料ペレットの重量に対して、甲殻類用飼料ペレットの場合は終濃度として３．５％（ｗ／ｗ）以上、魚類用飼料ペレットの場合は終濃度として３．０％（ｗ／ｗ）以上、のアルギニンを、必要により前記所望量のトリプトファンおよび水産用添加物質を加え、水産用飼料ペレットの表面にそのままふりかけるか、あるいは篩等を用いてふりかける。【００５６】
また、別法として水、緩衝液、エタノール等適当な溶媒に、甲殻類用飼料ペレットの場合、飼料ペレット重量に対して終濃度として３．５％（ｗ／ｗ）以上、魚類用飼料ペレットの場合は終濃度として３．０％（ｗ／ｗ）以上の、アルギニンを、必要により前記所望量のトリプトファンおよび水産用添加物質を溶解または懸濁させ、得られた溶解液または懸濁液に水産用ペレットを浸漬させるか、または該溶解液または懸濁液を水産用飼料ペレットに噴霧することにより、アルギニンを水産用飼料ペレットの表面に展着させてもよい。展着後の水産用添加物質の含有量は、水産用飼料ペレットに対して０．０１〜１０％（ｗ／ｗ）であることが好ましく、１．０〜５．０％（ｗ／ｗ）であることがさらに好ましい。【００５７】
前記ペレット状に加工した生存限界温度耐性付与剤は、アルギニンをより効率良く吸収させるため、コーティング剤によりコーティングを行っても良い。【００５８】
本発明に用いるコーティング剤はどのようなものでも良いが、植物性のツエインを用いることが好ましく、コーティングされた生存限界温度耐性付与剤は、ツエインの終濃度が、好ましくは１．０〜１５％（ｗ／ｖ）、より好ましくは２．０〜１０％（ｗ／ｖ）、さらに好ましくは４．０〜８．０％（ｗ／ｖ）となるように、ツエインを好ましくは５０〜９０％（ｖ／ｖ）、さらに好ましくは５０〜７０％（ｖ／ｖ）のアルコール水溶液に溶解して製造することができる。【００５９】
ツエインは公知の方法（例えば、特公平０７−８４４７７号公報、特公平０７−２５７９７、特開平０５−３０９１７号公報、特開昭６１−１６７７００号公報に記載の方法）により調製することができる。【００６０】
また、ツエインは市販のもの（例えば、昭和産業株式会社製）を用いてもよい。ツエインを溶解するアルコールとしては、エタノール、食用アルコール等があげられるがエタノールを用いることが好ましい。【００６１】
該コーティング剤には、必要により可塑剤として脂肪酸等を０．１〜３０％（ｗ／ｖ）、好ましくは１．０〜１０％（ｗ／ｖ）加えてもよい。脂肪酸としては、細胞に対する融合活性の高い脂肪酸が好ましく、例えばオレイン酸、リノール酸、リノレン酸、イコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸やアルコール水溶液に溶解可能な上記脂肪酸で構成されるモノグリセライドやレシチンがあげられるが、オレイン酸がとくに好ましく用いられる。【００６２】
コーティング剤でコーティングする方法は、水産用飼料ペレットをコーティングできる方法であればいずれの方法でもよい。例えば、水産用飼料ペレットをコーティング剤中に浸漬させる方法、または水産用飼料ペレットにコーティング剤をスプレー等で噴霧してコーティングする方法等をあげることができる。【００６３】
具体的には、ツエインの濃度が、好ましくは１．０〜１５％（ｗ／ｖ）、より好ましくは２．０〜１０％（ｗ／ｖ）、さらに好ましくは４．０〜８．０％（ｗ／ｖ）の濃度となるように、ツエインを好ましくは５０〜９０％（ｖ／ｖ）、さらに好ましくは５０〜７０％（ｖ／ｖ）のアルコール水溶液に溶解しておき、これをコーティング剤として上記浸漬による方法あるいはスプレー等により噴霧する方法により、水産用飼料ペレットをコーティングする。コーティング後、室温で０．５〜１時間放置することで、コーティングされた水産用飼料ペレット（以下、本発明の水産用飼料と略す）を得ることができる。コーティング後の本発明の生存限界温度耐性付与剤に対するコーティング剤の含有量は、１．０〜１０％（ｗ／ｗ）であることが好ましく、２．０〜３．０％（ｗ／ｗ）であることがさらに好ましい。【００６４】
本発明の魚類または甲殻類の養殖方法は、魚類または甲殻類に生存限界温度耐性を付与するため、1日あたり魚類または甲殻類の体重１ｋｇにつき８００ｍｇ以上のアルギニンを含有する飼料を魚類または甲殻類に給餌することを特徴とする。当該養殖方法は、養殖場の水温が上記非適温度または生存限界温度において用いることが可能である。本養殖方法の給餌期間は１〜４ヵ月間好ましくは２ヵ月であり得る。【００６５】
本発明の魚類または甲殻類の養殖方法は更に、１日あたり魚類または甲殻類の体重１ｋｇにつき１８０ｍｇ以上のトリプトファンを含有する飼料を魚類または甲殻類に給餌してもよい。【００６６】
本発明の養殖方法の対象となる魚類としては、マダイ、ヒラメ、ブリ、カンパチ、トラフグ、マグロ、ウナギ、アユ、ニジマス等が挙げられ、甲殻類としては、クルマエビ、ウシエビ、ホワイトレッグシュリンプ、ガザミが挙げられ、好ましくはマダイ、ヒラメ、ブリ、カンパチ、クルマエビの養殖に用いる。【００６７】
本発明の養殖方法におけるアルギニンの給餌方法としては、前記水産飼料ペレットに加工した生存限界温度耐性付与剤を給与しても良いが、アルギニンを飼料に添加する方法、単にアルギニンを給餌する方法等どのような方法を用いても良い。【００６８】
本発明の養殖方法には、種苗生産（稚魚生産）のみを行う増養殖および親魚までの生産を行う養殖を含む。
【実施例】
【００６９】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。【００７０】
実施例１  アルギニン含有製剤の甲殻類への影響
（Ｉ）アルギニン３．５％（ｗ／ｗ）含有製剤の製造
【表１】
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【００７１】
上記表１に示した油脂類を除く動物性原料、植物性原料、その他（天然原料由来のアルギニン３．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン０．６％（ｗ／ｗ）を含む）およびアルギニン（０．５％（ｗ／ｗ））からなる原料成分９４．８ｋｇを粉砕機により粗粉砕した後、更に微粉砕分級機(ホソカワミクロン社製)で微粉砕した。【００７２】
得られた微粉砕原料をブレンダー（ネオテック社製）に入れ、更に表１に記載した油脂類５．２ｋｇと、水３００ｋｇを加え混合を行った。【００７３】
混合して製造したスラリーを、押し出し造粒機（ビューラー社製）にかけ６０℃の温度で成型した後、１００℃の温度で乾燥させた（日本乾燥機製）。【００７４】
得られたペレットを篩分し粒径０．２mmで、比較製剤（アルギニンを３．０％（ｗ／ｗ）含有）よりアルギニンが０．５％（ｗ／ｗ）増量されたアルギニン３．５％（ｗ／ｗ）含有生存限界温度耐性付与剤（製剤１）を製造した。なお、本実施例において比較製剤は、上記表１に示した原料組成からアミノ酸類アルギニンのみを除いた原料を用いて、実施例１と同様の方法により製造したエビ用市販飼料である。【００７５】
（ＩＩ）アルギニン４．０％（ｗ／ｗ）含有製剤の製造
【表２ａ】
2010010794.tif 000004
【００７６】
表２ａに示した原料（天然原料由来のアルギニン３．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン０．６％（ｗ／ｗ）を含む）を用いて、実施例１と同様の方法により、比較製剤の市販飼料よりアルギニンが１．０％（ｗ／ｗ）増量された、アルギニン４．０％（ｗ／ｗ）含有生存限界温度耐性付与剤（製剤２）を製造した。【００７７】
（ＩＩＩ）アルギニン５．０％（ｗ／ｗ）含有製剤の製造
【表２ｂ】
2010010794.tif 000005
【００７８】
表２ｂに示した原料（天然原料由来のアルギニン３．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン０．６％（ｗ／ｗ）を含む）を用いて、実施例１と同様の方法により、比較製剤の市販飼料よりアルギニンが２．０％（ｗ／ｗ）およびトリプトファンが１．０％（ｗ／ｗ）増量された、アルギニン５．０％（ｗ／ｗ）含有生存限界温度耐性付与剤（製剤３）を製造した。【００７９】
（ＩＶ）甲殻類の養殖・高温度耐性試験
（１）供試クルマエビ
野外の養殖場から搬入した平均体重１２．５ｇのクルマエビを水温２５±１℃で1週間馴致飼育したのち、以下の試験に供した。【００８０】
（２）飼育方法
容量１トンのFRP角水槽４台の底面に、２０ｃｍの厚さとなるよう砂を敷いたのち、上記のエビを１水槽あたり４６尾ずつ収容し、水温２５℃から1日に１℃ずつ昇温し、３０℃に達したのちに試験を開始した。【００８１】
試験期間中は、水温３０℃から1週間後ごとに１℃ずつ昇温し、３０〜３３℃で計4週間飼育した。【００８２】
（３）給餌試験
1区にはアルギニンを３．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン０．６％（ｗ／ｗ）含有する比較製剤を与え対照区とした。2区には、比較製剤に比べアルギニンを０．５％（ｗ／ｗ）増量（アルギニン３．５％（ｗ／ｗ）含有）した製剤１を、３区には比較例に比べアルギニンを１．０％（ｗ／ｗ）増量（アルギニン４．０％（ｗ／ｗ）含有）した製剤２を、また４区には比較例に比べアルギニンを２．０％（ｗ／ｗ）増量（アルギニン５．０％（ｗ／ｗ）含有）した製剤３を与えた。【００８３】
試験開始2日前(水温２８℃)から3日間（試験開始日、水温３０℃）は上記製剤を各区ともに体重の２．０％（ｗ／ｗ）量となるように与え、その後は残餌が無い場合に０．５％（ｗ／ｗ）ずつ増量し、残餌がみられた場合は０．５％（ｗ／ｗ）減量する方法によって４週間給餌した。【００８４】
（４）効果評価方法
アルギニン（およびトリプトファン）投与区および対照区における試験期間中の死亡尾数、生残率、残餌量、摂餌量、増体重量および脱皮状況について調べ、その効果を評価した。【００８５】
（５）試験結果
【表３】
2010010794.tif 000006
【００８６】
アルギニン（およびトリプトファン）投与区と対照区における試験成績を表３に、また試験開始後における生残率の推移の結果を図1に示した。【００８７】
対照区においては、水温を３０℃に設定した試験開始時の2日後から死亡がみられ、4週間後の試験終了時までに４７．８％が死亡したのに対し、製剤１投与の２区は対照区よりもかなり遅く6日後から死亡が見られ、終了時までに４５．７％が死亡した。一方、製剤２投与の３区では試験開始後17日後からようやく死亡が見られたが、終了時までに１０．９％が死亡し、製剤３投与の４区では２５日後から死亡が見られ、終了時までに僅か６．５％が死亡した。対照区および２区と３区および４区の死亡率および生残率には有意な差が見られた（ｐ＜０．０５）。【００８８】
水温別の死亡率を対比すると、３０℃においては対照区で２１．７％の死亡が見られたものが製剤１投与の２区では４．３％、製剤２および製剤３投与の３区および４区では０％であり、３１℃においては対照区で２２．２％、製剤１投与の２区で２５．０％の死亡率が見られたものの製剤２および製剤３投与の３区および４区は０％であった。また、３２℃においては対照区で１０．７％、製剤１投与の２区で１８．７％、製剤２投与の３区で２．２％、製剤３投与の４区で０％、３３℃においては対照区で４．０％、製剤１投与の２区で７．４％、製剤２投与の３区で６．８％、製剤３投与の４区で６．５％であった。【００８９】
以上の事実からアミノ酸成長必要量が配合された飼料(アルギニン含有量３．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン含有量０．６％（ｗ／ｗ）)を給餌した対照区ではクルマエビの約半数が３０〜３１℃で死亡したものの、０．５％（ｗ／ｗ）のアルギニンを増量した製剤1(アルギニン含有量３．５％（ｗ／ｗ）、トリプトファン含有量０．６％（ｗ／ｗ）)投与の２区では、３０℃で死亡するエビはほとんど見られず、３１〜３２℃で約半数が死亡した。また、アルギニンを１．０％（ｗ／ｗ）増量した製剤２(アルギニン含有量４．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン含有量０．６％（ｗ／ｗ）)投与の３区では生存限界温度を遥かに超えた３２〜３３℃の温度領域で１０．９％死亡し、アルギニンを２．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファンを１．０％（ｗ／ｗ）増量した製剤３(アルギニン含有量５．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン含有量１．６％（ｗ／ｗ）)投与の４区では３０〜３２℃での死亡が全く見られず、３３℃で６．５％が死亡したのみであった。【００９０】
以上、アルギニンの飼料への添加により、高温領域における生存限界温度に対する耐性が付与されることが明らかとなった。【００９１】
（Ｖ）甲殻類の養殖・低温度耐性試験
（１）供試クルマエビ
野外の養殖場から搬入した平均体重１４ｇのクルマエビを水温１５±１℃で1週間馴致飼育したのち、以下の試験に供した。【００９２】
（２）飼育方法
容量１トンのFRP角水槽４台の底面に、２０ｃｍの厚さとなるよう砂を敷いたのち、上記のエビを１水槽あたり５０尾ずつ収容し、水温１５℃から1日に１℃ずつ降温し、１２℃に達したのちに試験を開始した。【００９３】
試験期間中は、水温１２℃から1週間後ごとに１℃ずつ降温し、１２〜７℃で計４２日間飼育した。【００９４】
（３）給餌試験
上記と同じく1区にはアルギニンを３．０％（ｗ／ｗ）含有する比較製剤を与え対照区とした。2区には、比較製剤に比べアルギニンを０．５％（ｗ／ｗ）増量（アルギニン含有量３．５％（ｗ／ｗ））した製剤１を、３区には比較製剤に比べアルギニンを１．０％（ｗ／ｗ）増量（アルギニン含有量４．０％（ｗ／ｗ））した製剤２を、また４区には比較製剤に比べアルギニンを２．０％（ｗ／ｗ）およびトリプトファンを１．０％（ｗ／ｗ）増量（アルギニン含有量５．０％（ｗ／ｗ）、トリプトファン含有量１．６％（ｗ／ｗ））した製剤３を与えた。【００９５】
試験開始２日前(水温１４℃)から3日間（試験開始日、水温１２℃）は上記製剤を各区ともに体重の１％（ｗ／ｗ）量となるように与え、その後は残餌が無い場合に０．５％（ｗ／ｗ）ずつ増量し、残餌がみられた場合は０．５％（ｗ／ｗ）減量する方法によって４２日間給餌した。【００９６】
（４）効果評価方法
アルギニン（およびトリプトファン）投与区および対照区における試験期間中の死亡尾数、生残率、残餌量、摂餌量、増体重量および脱皮状況について調べ、その効果を評価した。【００９７】
（５）試験結果
【表４】
2010010794.tif 000007
【００９８】
アルギニン（およびトリプトファン）投与区と対照区における試験成績を表４に示した。【００９９】
水温が１２〜１１℃においては全ての区に死亡は見られなかったが、水温１０〜９℃では、対照区のエビの８％が死亡し、製剤１〜３投与の２〜４区には死亡は見られなかった。水温８〜７℃においては、対照区の５０％が死亡したのに対し、製剤１投与の２区が２０％、製剤２投与の３区が４％死亡したが、製剤３投与の４区には死亡が見られなかった。試験終了時における累積死亡率は、対照区が５８％であったのに対し、製剤１〜３投与の２，３，４区は、それぞれ２０，４，０％であり、対照区と２〜４区の死亡率および生残率には有意な差が認められた（ｐ＜０．０５）。【０１００】
また、製剤投与区と対照区には、死亡率だけでなく、摂餌量にも差異が見られた。すなわち、対照区においては、水温１２℃までは１日あたり体重の０．５〜１％（ｗ／ｗ）程度を摂餌したものの、１１℃以下では摂餌せず、総摂餌量が３０．３ｇであったのに対し、製剤１投与の２区では、水温１１℃においても摂餌し、総摂餌量は７５．３ｇであった。また、製剤２投与の３区は、水温１２〜１０℃に設定の１４日間に、１日あたり体重の０．５〜２％（ｗ／ｗ）量摂餌し、総摂餌量は１１１．６ｇであり、製剤３投与の４区は、水温１２〜１０℃に設定の１５日間に、１日あたり０．５〜２％量（ｗ／ｗ）を摂餌し、総摂餌量は１２４．４ｇであった。【０１０１】
以上、アルギニンの飼料への添加により、高温度の生存限界水温下のみならず、低温度限界水温下においても耐性が付与されることが明らかになるとともに、低水温でも摂餌し、成長することが確認された。【０１０２】
実施例２  アルギニン含有製剤の魚類への影響
（Ｉ）アルギニン３．０％（ｗ／ｗ）含有製剤の製造
【表５ａ】
2010010794.tif 000008
【０１０３】
表５ａに示した原料（天然原料由来のアルギニン３．０％（ｗ／ｗ）を含む）を用いて、実施例１と同様の方法により、アルギニンを３．０％（ｗ／ｗ）含有する生存限界温度耐性付与剤（製剤４）を製造した。なお、本実施例において比較製剤は、アルギニン２．５％（ｗ／ｗ）を含む魚類用飼料である。【０１０４】
（ＩＩ）アルギニン４．０％（ｗ／ｗ）含有製剤の製造
【表５ｂ】
2010010794.tif 000009
【０１０５】
表５ｂに示した原料（天然原料由来のアルギニン３．０％（ｗ／ｗ）を含む）を用いて、実施例１と同様の方法により、アルギニンを４．０％（ｗ／ｗ）含有する生存限界温度耐性付与剤（製剤５）を製造した。【０１０６】
（ＩＩＩ）アルギニン５．０％（ｗ／ｗ）含有製剤の製造
【表５ｃ】
2010010794.tif 000010
【０１０７】
表５ｃに示した原料（天然原料由来のアルギニン３．０％（ｗ／ｗ）を含む）を用いて、実施例１と同様の方法により、アルギニンを５．０％（ｗ／ｗ）含有する生存限界温度耐性付与剤（製剤６）を製造した。【０１０８】
（ＩＶ）魚類の養殖・高温度耐性試験
（１）供試魚
長崎県の種苗生産場から搬入した平均体重５２ｇのマダイを水温２５±１℃で１週間馴致飼育したのち、以下の試験に供した。【０１０９】
（２）飼育方法
容量５００リットルの円形水槽に、上記のマダイを１区あたり（すなわち、１水槽あたり）３０尾ずつ収容し、水温２５℃から１日に１℃ずつ昇温し、２９℃に達したのちに試験を開始した。【０１１０】
試験期間中は、水温２９℃から１週間ごとに１℃ずつ昇温し、２９〜３３℃まで、計５週間飼育した。【０１１１】
（３）給餌試験
１区にはアルギニンを２.５％(w/w)含む比較製剤を与え対照区とした。２区にはアルギニンを３.０％（ｗ／ｗ）含む製剤４を、３区にはアルギニンを４.０％（ｗ／ｗ）含む製剤５を、また４区にはアルギニンを５．０％（ｗ／ｗ）含む製剤６を与えた。【０１１２】
試験開始２日前（水温２７℃）から３日間（試験開始日、水温２９℃）は上記製剤を各区ともに体重の２.０％（ｗ／ｗ）量となるように与え、その後は残餌がない場合には０.５％（ｗ／ｗ）ずつ増量し、残餌がみられた場合は０.５％（ｗ／ｗ）減量する方法によって５週間給餌した。【０１１３】
（４）効果評価方法
アルギニン投与区および対照区における試験期間中の死亡尾数、生残率、残餌量、摂餌量、増体重量について調べ、アルギニンの効果を評価した。【０１１４】
（５）試験結果
【表６】
2010010794.tif 000011
【０１１５】
アルギニン投与区と対照区における試験成績を表６に、また試験開始後における生残率の推移を図２に示した。【０１１６】
対照区においては、水温を２９℃に設定した試験開始時の２日後から死亡がみられ、３１℃に設定した１４日後までに１０％が死亡し、２３日後の３２℃水温下で１００％が死亡した。一方、試験区においては、製剤４投与の２区が３１℃水温下の１７日後から死亡しはじめ、試験終了時までに６６．７％が死亡し、製剤５投与の３区では３３℃水温下の２９日後に３.３％（１尾）が死亡したのみであり、製剤６投与の４区は試験終了時までに死亡する個体はみられず、全ての魚が生存した。【０１１７】
水温別の死亡率を比較すると、２９〜３０℃においては対照区に１０％の死亡がみられたのに対し、いずれの試験区にも死亡はみられず、３１℃においては対照区で２０％、製剤４投与の２区で６.７％が死亡したものの、製剤５投与の３区および製剤６投与の４区では死亡がみられなかった。３２℃においては、対照区の全ての魚と、製剤４投与の２区の５０％が死亡したのに対し、製剤５投与の３区および製剤６投与の４区では死亡がみられなかった。また、３３℃においては製剤５投与の３区のみに３．３％の死亡がみられたものの、対照区および製剤６投与の４区では死亡がみられなかった。【０１１８】
このように、マダイの成長に必要なアミノ酸量が配合された比較製剤（アルギニン含有量２.５％（ｗ／ｗ））を給餌した対照区では、３２℃までに全ての魚が死亡したのに対し、アルギニンを増量添加した製剤を給餌した試験区においては３３℃水温下の試験終了時までに製剤６（アルギニン含有量５．０％（ｗ／ｗ））投与の４区では全く死亡がみられなかった。【０１１９】
以上のことから、魚類に、成長に必要な量を超えるアルギニンを投与することによって、高温領域における生存限界温度に対する耐性が付与されることが明らかとなった。【０１２０】
（Ｖ）甲殻類の養殖・低温度耐性試験
（１）供試魚
長崎県の種苗生産場から搬入した平均体重５２ｇのマダイを水温１５±１℃で１週間馴致飼育したのち、以下の試験に供した。【０１２１】
（２）飼育方法
容量５００リットルの円形水槽に、上記のマダイを１区あたり（すなわち１水槽あたり）３０尾ずつ収容し、水温１５℃から１日に１℃ずつ降温し、１２℃に達したのちに試験を開始した。【０１２２】
試験期間中は、水温１２℃から１週間後ごとに１℃ずつ水温冷却装置を用いて降温し、１２〜８℃まで３５日間飼育した。【０１２３】
（３）給餌試験
１区にはアルギニンを２.５％(w/w)含む比較製剤を与え対照区とした。２区にはアルギニンを３.０％（ｗ／ｗ）含有する製剤４を、３区にはアルギニン４．０％（ｗ／ｗ）含有する製剤５を、また４区にはアルギニン５．０％（ｗ／ｗ）含有する製剤６を与えた。【０１２４】
試験開始２日前（水温１４℃）から３日間（試験開始日、水温１２℃）は上記飼料を各区ともに体重の１％（ｗ／ｗ）量となるように与え、その後は残餌がない場合には０.５％（ｗ／ｗ）ずつ増量し、残餌がみられた場合は０.５％（ｗ／ｗ）減量する方法によって３５日間給餌した。【０１２５】
（４）効果評価方法
アルギニン投与区および対照区における試験期間中の死亡尾数、生残率、残餌量、摂餌量、増体重量について調べ、アルギニンの効果を評価した。【０１２６】
（５）試験結果
【表７】
2010010794.tif 000012
【０１２７】
アルギニン投与区と対照区における試験成績を表７に示した。【０１２８】
水温が１２〜１１℃においては、全ての区に死亡はみられなかったが、水温１０〜９℃では、対照区のマダイの１３.３％が死亡し、製剤４投与の２区で６.７％死亡したが、製剤５投与の３区および製剤６投与の４区で死亡はみられなかった。水温８℃においては、対照区のマダイの４０％が死亡したのに対し、製剤４投与の２区で２０％、製剤５投与の３区で６.７％死亡したものの、製剤６投与の４区で死亡はみられなかった。【０１２９】
また、製剤投与区と対照区には、死亡率だけでなく、摂餌量にも差異がみられた。すなわち、対照区においては水温１２℃および１１℃の前半までは１日あたり体重の０.５〜１.０％（ｗ／ｗ）程度を摂餌したものの、１１℃の後半から摂餌せず、総摂餌量が１６１ｇであったのに対し、製剤４投与の２区では１０℃の後半まで摂餌し、総摂餌量は２６６ｇであった。また、製剤５投与の３区は水温１２〜１０℃に設定の２１日間に、１日あたり体重の０.５〜１.５％（ｗ／ｗ）を摂餌し、総摂餌量は３４９ｇであり、製剤６投与の４区は水温１２〜９℃に設定の２３日間に、１日あたり体重の０.５〜１.５％（ｗ／ｗ）量を摂餌し、総摂餌量は３９６ｇであった。【０１３０】
以上のことから、アルギニンを増量添加した飼料を魚類に投与することによって、高温度の生存限界水温下のみならず、低温度限界水温下においても耐性が付与されることが明らかになるとともに、低水温でも摂餌し、成長することが認められた。
【産業上の利用可能性】
【０１３１】
本発明により、安定した養殖効果が得られる魚類または甲殻類の生存温度限界耐性付与剤および、魚類および甲殻類の生存限界水温領域を超える温度領域においても魚類または甲殻類が生存可能な養殖方法が提供される。【０１３２】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
2010010794.tif 000013
【図２】
2010010794.tif 000014
【国際調査報告】
2010010794.tif 000015
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2010010794.tif 000019
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