(57)【要約】  本発明は、様々な疾病状態を導く原因となるヒトサイトメガロウイルスＨＣＭＶに対し、ｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域に特異的に結合し、優れた中和能を有するモノクローナル抗体およびその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。本発明は、ＨＣＭＶに対して、ＡＤ１領域の不連続配列に特異的に結合する中和能および細胞間感染阻止能の優れたモノクローナル抗体ならびにその抗原結合断片、その抗体または断片を含む医薬組成物等を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＡＤ1領域に存在する配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、および配列番号２７のアミノ酸配列から成る不連続配列をエピトープとして認識する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に特異的に結合し、その生物活性を中和し得るモノクローナル抗体であって、
（ｉ）重鎖の可変領域が、
(a)配列番号１３のアミノ酸配列、および配列番号１３のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b) 配列番号１４のアミノ酸配列、および配列番号１４のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、および配列番号２２で示されるアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）軽鎖の可変領域が、
(a)配列番号１６のアミノ酸配列、および配列番号１６のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b) 配列番号１７のアミノ酸配列、および配列番号１７のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列、および配列番号１８のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項３】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＨＣＭＶ-ｇＢ糖タンパク質の５４９〜５８０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２３）および５９６〜６４０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２４）の領域に存在する２以上の不連続配列から成るエピトープに特異的に結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項４】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＨＣＭＶ-ｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域にある配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、および配列番号２７のアミノ酸配列から成る不連続配列をエピトープとして認識する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項５】
請求項３または４に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
(a)配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号２２のアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
(a)配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項６】
請求項５に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
(a)配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
(a)配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項７】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a) 配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号１０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、ならびに
(b) 配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号１２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項８】
請求項７に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a)配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、および
(b) 配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項９】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a) 配列番号２もしくは６のアミノ酸配列、配列番号２もしくは６のアミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号２もしくは６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）、ならびに
(b) 配列番号４もしくは８のアミノ酸配列、配列番号４もしくは８のアミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号４もしくは８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片；
【請求項１０】
請求項９に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a)配列番号２または６のアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）、および
(b)配列番号４または８のアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
前記抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項１〜１０のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（λ）である、請求項１〜１１のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
ＨＣＭＶの実験室株（ＡＤ１６９）に対するヒト繊維芽細胞下での５０％プラーク形成阻止濃度が０．０５μｇ／ｍＬ（約０．３nＭ）以下である請求項１〜１２のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
ヒト繊維芽細胞（ＭＲＣ−５）にあらかじめＨＣＭＶの実験室株(ＡＤ１６９)を感染させた系で、０．２μｇ／ｍＬ（約１．３ｎＭ）以下で５０%以上の細胞間感染阻止能を有する請求項１〜１３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片および薬学的に許容可能な担体を含む、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）が関与する疾患を予防または治療するための医薬組成物。
【請求項１６】
ＨＣＭＶが関与する疾患が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、もしくは脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症、（ｃ）前記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎、もしくは聴覚障害、または（ｅ）新生児もしくは乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、もしくは単核症である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＨＣＭＶｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８、および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸、および該核酸と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸から選択される単離された核酸。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を組込んだベクター。
【請求項１９】
請求項１８に記載のベクターが導入された宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１９に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片の作製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヒトサイトメガロウイルス（human Cytomegalovirus）（以下「ＨＣＭＶ」と称す場合がある）に結合するモノクローナル抗体、ならびにその抗原結合性断片に関する。特に、ＨＣＭＶのｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に結合するヒトのモノクローナル抗体ならびにその抗原結合性断片に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は、ヒトヘルペスウイルス６型（ＨＨＶ−６）やヒトヘルペスウイルス７型（ＨＨＶ−７）と同じヘルペスウイルス科βヘルペスウイルス亜科に属する。直径約１８０ｎｍで、野生株では１６５個の遺伝子をコードし、そのゲノムサイズは約２３５ｋｂｐ（非特許文献１、および２）の２本鎖ＤＮＡウイルスで、ヘルペスウイルス科の中では最大である。
ＨＣＭＶは、種特異性が強く、ヒト以外の動物には感染しないが、ヒトには広く感染し、ヒトの体内においては広汎な組織に親和性がある。
しかも一度感染すると宿主の免疫が確立した後も排除されることなく終生保持されることとなる。【０００３】
ＨＣＭＶは、一度感染すると生涯にわたって潜状感染し、日本人成人では９割以上が既に感染してウイルスを保有しているが、健常人でウイルスが活性化して病気を引き起こすことはまれである。
しかしながら、エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態においては、この潜伏感染していたＨＣＭＶの再活性化が起こり、間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの、場合によっては死に至る重篤なＨＣＭＶ感染症を引き起こすことがある（非特許文献３、および４）。
又、胎児期に妊婦がＨＣＭＶの初感染を受け、妊婦から胎児へ胎盤を経由してＨＣＭＶ感染が波及すると、先天性ＣＭＶ感染症(congenital cytomegalovirus disease：巨細胞封入体症または先天性巨細胞封入体症(cytomegalic inclusion disease)とも呼ばれている。）を発症し、流産、死産、生後間もない死亡を引き起こす。または、死亡しない場合も低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎や聴覚障害などを引き起こすことがある。更に、新生児や乳児期においても、母親からのＨＣＭＶ抗体の移行が不十分であった場合、産道、母乳、尿、または唾液などを介したＨＣＭＶ感染により、肝機能異常、間質性肺炎、単核症などを発症する場合もある（非特許文献３,４,および５）。【０００４】
ＨＣＭＶ感染症は、世界的な問題となっており上記ＨＣＭＶによる様々な病態の発症を抑制、若しくはその病態を緩和することができる予防乃至治療薬の開発が進められている。近年は、ＨＣＭＶの増殖を抑える抗ウイルス薬としてガンシクロビル（非特許文献６および７）、ホスカルネット（非特許文献８）、バルガンシクロビル（非特許文献９）などが開発されている。
ガンシクロビルは細胞内で活性型のガンシクロビル-三リン酸になり、ＤＮＡポリメラーゼの基質であるデオキシグアノシン-三リン酸（ｄＧＴＰ）と競合的に拮抗することにより、ＤＮＡポリメラーゼを阻害することでウイルスＤＮＡの合成を妨害する抗ウイルス薬で、主にエイズなど免疫不全状態におけるサイトメガロウイルス網膜炎の治療や、ＣＤ４リンパ球数１００／ｍｍ３以下の進行したＨＩＶ感染症におけるサイトメガロウイルス網膜炎の発症抑制に使用されており、医薬品としての認可も受けている。
しかしながら、ガンシクロビル等の抗ウイルス剤には造血障害など種々の副作用があることが報告されており、その使用態様は上記の如く、極限られたものとなる。【０００５】
ガンシクロビルの副作用として、最も頻度が高く、注意を要するのは、骨髄抑制に伴う血液障害である。白血球や赤血球、血小板が異常に減少し、その初期症状として、発熱や喉の痛み、異常なだるさ、皮下出血等の出血傾向が認められる。場合によっては、精神神経系に異常が見られ、頭痛、目眩、不眠、思考の異常、不安感等を生じる。
又、動物実験では催奇形性、変異原性、癌原性が報告されており、妊娠中は使用することができない。
その他、先天性ＨＣＭＶ感染症の重症例にガンシクロビルを使用することで、神経学的後遺症発現の減少や難聴の進行改善等の効果があるとされているが（非特許文献１０）、やはりガンシクロビルの副作用である骨髄抑制、催奇形性、癌原性の問題については十分かつ慎重な検討が必要となる。
バルガンシクロビルは、ガンシクルビルのＬ−バリンエステルであり、経口投与されたのち腸管および肝臓のエステラーゼによりガンシクロビルに変換される。従って、作用機作および副作用はガンシクロビルと同じであり、骨髄抑制、催奇形性、癌原性の問題があり、日本では主にエイズなど免疫不全状態におけるサイトメガロウイルス網膜炎の治療薬としての承認が得られている。
一方、ホスカルネットは、ピロリン酸の類似物質でＤＮＡポリメラーゼのピロリン酸結合部位に直接作用してＤＮＡポリメラーゼを阻害することにより、ＨＣＭＶの増殖を抑制する。ガンシクロビル耐性のＨＣＭＶに対しても有効である。主たる副作用としては、嘔気、貧血、血清クレアチニン上昇、嘔吐、低マグネシウム血症、低カリウム血症、知覚異常などがあり、特にショック、腎障害が高頻度で出現するので慎重な投薬が必要である。日本ではエイズ患者でＨＣＭＶ網膜炎と確定診断された患者または臨床的にＨＣＭＶ網膜炎が強く疑われる患者においてのみ使用が許可されており、感染予防の目的では使用しないこととされている（非特許文献８）。【０００６】
以上より、上述したＨＣＭＶによる種々の疾病の発症を予防、若しくは症状を緩和することができ、且つ副作用のない薬剤の開発が強く望まれていた。そのような中、これまでに抗ＨＣＭＶ抗体としては臨床開発が２件行われており、1つが特許文献３に記載の抗ＨＣＭＶ抗体「Ｃ２３(開発時にはＴＩ−２３と呼ばれる。)」で、ｇＢ糖タンパク質のＡＤ２領域を認識する抗体であり、他が特許文献４に記載の抗ＨＣＭＶ抗体「ＳＤＺ  ＭＳＬ  １０９」で、ＨＣＭＶ表面のｇＨ糖タンパク質を認識するモノクローナル抗体であった。特に、Ｃ２３は、プラーク法で求めた５０％阻止濃度が、０．５μｇ／ｍＬと高い中和活性が報告されているにもかかわらず（非特許文献１１）、途中で開発を断念している。
一方、ＨＣＭＶのワクチン開発に関しても鋭意行われているにもかかわらず、いまだ臨床使用に耐えられるものが得られていないのが現状である。
更にまた、近年はヒト由来の抗ＣＭＶ高力価ガンマグロブリン製剤が開発され、米国においては、腎移植に伴うＨＣＭＶ感染症の発症予防の適応で承認されている。しかしながら、抗ＣＭＶ高力価ガンマグロブリン製剤はヒト由来の血液製剤であるため、さまざまな問題も抱えている。例えば、ヒト由来ガンマグロブリンの混合物であるがために、ロット間の活性のばらつきが大きいこと、かつ活性が低いこと、および供給量に限界があること、さらには未知の病原性ウイルスや病原体の混入などのリスクが常に付きまとっている等である。
そこで、ＨＣＭＶに結合し、その感染性を中和すること（その生物学的活性を喪失させること）のできるモノクローナル抗体（以下「抗ＨＣＭＶ抗体」と称す場合がある）は、ＨＣＭＶによる様々な病態の予防乃至治療薬として期待されることから、例えば、免疫不全状態の患者において、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病に対する予防乃至治療戦略上、有用である。
即ち、ＨＣＭＶの活性を喪失させて疾病の発症を予防、若しくは症状を緩和するのに、ＨＣＭＶに対して強い親和性と高い中和能をもち、且つアレルギー反応を示さないヒト由来の抗ＨＣＭＶ抗体を、所謂「抗体医薬」として投与するのが特に有効であると考えられた。【０００７】
しかしながら、現在までに報告されているＨＣＭＶ阻害抗体（例えば、特許文献１、２、３、４、および５）では、ＨＣＭＶに対して親和性および中和能等の点において十分ではなかったので、ＨＣＭＶの生物活性を充分に阻止し、ＨＣＭＶによって引き起こされる様々な疾病の発症を予防、若しくは症状を緩和することを期待できるには至らなかった。
その為、異物認識応答を起こさないヒトのモノクローナル抗体であって、ＨＣＭＶに対する親和性、特異性および中和能に優れ、予防乃至治療薬としてもその活用を期待することのできる抗ＨＣＭＶ抗体、ならびにその抗原結合性断片の開発が強く望まれていた。
更には、昨今、ＨＣＭＶの生体内での増殖を抑えるためには、中和活性のみならず、細胞間感染の阻止の重要性が指摘されており、（非特許文献１２および１３）、細胞間感染阻害活性を合わせ持つ抗ＨＣＭＶ抗体が切望されていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表平８−５０２４０３号公報
【特許文献２】特表平８−５０６３２５号公報
【特許文献３】ＷＯ８７／０３６０２
【特許文献４】ＷＯ９３／０２１９５２
【特許文献５】ＷＯ２００７／０９４４２３
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Davison, A.J. et al.,The human cytomegalovirus genome revisited: comparison with the chimpanzee cytomegalovirus genome. J. Gen. Virol., 2003;84: p17-28
【非特許文献２】Dolan, A. et al., Genetic content of wild-type human  cytomegalovirus. J. Gen. Virol., 2004; 85: p1301-1312
【非特許文献３】多屋  馨子, 感染症の話：サイトメガロウイルス感染症, Infectiou Diseases Weekly Report Japan. 2003; 第15週:10-14
【非特許文献４】Griffiths, P.D., The treatment of cytomegalovirus infection. J. Anti. Chemo., 2002; 49: ｐ243-253
【非特許文献５】Demmler, G.J.,Congential cytomegalovirus infection  and disease. Seminars in Pediatric Infection Diseases. Seminors in Pediatric Infectious Diseases, 1999; 10: p195-200
【非特許文献６】Freitas,V.R. et al.,Activity of 9-(1,3-dihydroxy-2-Propoxymethel)guanine compared with that of acyclovir against human.monkey, and rodent cytomegaloviruses.Anti. Agent Chemo., 1985; 28: p240-245
【非特許文献７】田辺三菱製薬株式会社、抗サイトメガロウイルス化学療法剤  デノシン点滴静注用500mg、ガンシクロビル製剤添付文書、（2007年10月改訂）
【非特許文献８】アストラゼネカ株式会社、抗ウイルス剤  点滴注射用ホスカルビル２４ｍｇ／ｍＬ  ホスカルネットナトリウム水和物注射剤添付文書、（2007年6月  改訂）
【非特許文献９】田辺三菱製薬株式会社、抗サイトメガロウイルス化学療法剤  バリキサ錠4500mg、バルガンシクロビル塩酸塩製剤添付文書、（2007年10月改訂）
【非特許文献１０】Kimberlin,D.W.et al.,Effect of ganciclovir therapy on hearing in symptomatic congental cytomegalovirus disease involving the central nervous system; randomized, controlled trial. J. Pediatr., 2003; 143: 16-25
【非特許文献１１】Masuho,T.,et al., Human monoclonal antibodies neutralizing human cytomegalovirus. J.Gen.Virol, 1987; 68: p1457-1461
【非特許文献１２】Navarro、D.et al.,  Glycoprotein  B  of  human  cytomegalovirus  promotes  virion  penetration  into  cells,  transmission  of  infection from cell to cell, and fusion of infected cells. Virology,1993; 197:p143-158
【非特許文献１３】Ohizumi, Y., Neutralizing mechanism of two human monoclonal antibodies against human cytomegalovirus glycoprotein130/55. J. Gen. Virol., 1992; 73: p2705-2707
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
以上のことより、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を十分に阻害する抗体または抗原結合性断片は、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な病気に対する治療戦略上、若しくは予防戦略上有用であると考えられる。【００１１】
一方、現在、医薬品として承認されている抗体医薬の大部分は、その投与量が1日当たり数ｍｇ〜数百ｍｇと非常に多くかつ高価である。抗体医薬品を除くこれまでに上市されているバイオ医薬品の多くが、１日当たり数十μｇ〜１ｍｇの投薬量である。これに比較すると、抗体医薬品の一日に必要な投与量は、これまでのバイオ医薬品の約１０倍から１０００倍と大幅な開きがある。ＨＣＭＶは様々な疾病状態を導き、それらの疾患の治療は、新生児、小児、および妊婦に及ぶ可能性を考慮すると、活性が高く治療用量が少ないこと、治療費が低く抑えられることなどは重要な課題である。即ち、抗体医薬といえども高い生物活性のものが求められており、親和性に優れかつ高い中和能を有するほど医療費などの面から医薬品としては有用性が高いということになる。【００１２】
また、抗体医薬品については、必要生産量が大幅に増加しているが生産設備は世界的に不足状態にある。これらの状況から、親和性、及び中和能に優れた抗体であれば、より少ない量で効果を発揮することができるため、より高い親和性及び中和能を有するヒト抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体が望まれている。しかも、本来ＨＣＭＶは体内において広汎な組織および細胞種に感染性を有しており（Sinzger, C. et al., Curr Top Microbiol Immunol., 2008; 325: p63-83）、抗ＨＣＭＶV抗体が臨床効果を示す上では、繊維芽細胞型および上皮細胞・内皮細胞型のいずれのタイプが感染宿主細胞となっても、有効な中和活性を有することが重要であると考えられる。【００１３】
さらに、ＨＣＭＶの生体内での感染拡大の様式を考慮すると、当該抗ＨＣＭＶ抗体には単なる中和能のみならず細胞間感染阻止能を併せ持つ抗体が切望されている。さらにまた、医薬品としての有効性・安全性を考慮すると、様々な疾病状態を導く原因となるＨＣＭＶに対し、高い中和能と細胞間感染阻止能を有するヒト由来のモノクローナル抗体およびその抗原結合性断片を含む医薬組成物の提供が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記のような抗体を取得するために鋭意努力した結果、ＨＣＭＶｇＢ糖タンパク質上のＡＤ１領域に存在するこれまで報告のない不連続エピトープを特異的に認識する抗体であって、高い中和能と高い細胞間感染阻止能を併せ持つヒトモノクローナル抗体を創意工夫により取得することに成功し、本発明を完成した。【００１５】
即ち、本発明は、以下に記載する、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその結合性断片、その抗体または結合性断片をコードするＤＮＡ（ポリヌクレオチド）、そのＤＮＡを含有するベクター、そのベクターを含有する宿主細胞などに関する。【００１６】
［１］ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＡＤ1領域に存在する配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、および配列番号２７のアミノ酸配列から成る不連続配列をエピトープとして認識する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［２］ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に特異的に結合し、その生物活性を中和し得るモノクローナル抗体であって、
（ｉ）重鎖の可変領域が、
(a)配列番号１３のアミノ酸配列、および配列番号１３のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b) 配列番号１４のアミノ酸配列、および配列番号１４のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、および配列番号２２で示されるアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）軽鎖の可変領域が、
(a)配列番号１６のアミノ酸配列、および配列番号１６のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b) 配列番号１７のアミノ酸配列、および配列番号１７のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列、および配列番号１８のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
［３］上記［２］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＨＣＭＶ-ｇＢ糖タンパク質の５４９〜５８０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２３）および５９６〜６４０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２４）の領域に存在する２以上の不連続配列から成るエピトープに特異的に結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［４］上記［２］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＨＣＭＶ-ｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域にある配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、および配列番号２７のアミノ酸配列から成る不連続配列をエピトープとして認識する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［５］上記［３］または［４］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
(a)配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号２２のアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
(a)配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
［６］上記［５］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
(a)配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
(a)配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
(b)配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［７］上記［２］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a) 配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号１０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、ならびに
(b) 配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号１２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［８］上記［７］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a)配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、および
(b) 配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［９］上記［２］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a) 配列番号２もしくは６のアミノ酸配列、配列番号２もしくは６のアミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号２もしくは６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）、ならびに
(b) 配列番号４もしくは８のアミノ酸配列、配列番号４もしくは８のアミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号４もしくは８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片；
［１０］上記［９］に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
(a)配列番号２または６のアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）、および
(b)配列番号４または８のアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
［１１］上記抗体がヒトモノクローナル抗体である、上記［１］〜［１０］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１２］上記抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（λ）である、上記［１］〜［１１］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１３］ＨＣＭＶの実験室株（ＡＤ１６９）に対するヒト繊維芽細胞下での５０％プラーク形成阻止濃度が０．０５μｇ／ｍＬ（約０．３nＭ）以下である上記［１］〜［１２］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１４］ヒト繊維芽細胞（ＭＲＣ−５）にあらかじめＨＣＭＶの実験室株(ＡＤ１６９)を感染させた系で、０．２μｇ／ｍＬ（約１．３ｎＭ）以下で５０%以上の細胞間感染阻止能を有する上記［１］〜［１３］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
［１５］上記［１］〜［１４］のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片および薬学的に許容可能な担体を含む、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）が関与する疾患を予防または治療するための医薬組成物。
［１６］ＨＣＭＶが関与する疾患が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、もしくは脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症、（ｃ）上記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）上記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎、もしくは聴覚障害、または（ｅ）新生児もしくは乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、もしくは単核症である、上記［１５］に記載の医薬組成物。
［１７］ＨＣＭＶｇＢ糖タンパク質のＡＤ1領域に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８、および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸、および該核酸と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸から選択される単離された核酸。
［１８］上記［１７］に記載の核酸を組込んだベクター。
［１９］上記［１８］に記載のベクターが導入された宿主細胞。
［２０］上記［１９］に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、上記［１］〜［１４］のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片の作製方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体、特に、ＨＣＭＶ-ｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性断片は、例えば免疫不全状態において、様々な疾病の原因となるＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を喪失（中和）させ、ＨＣＭＶに対して優れた中和能を発揮することができる。また、本発明に係る抗ＨＣＭＶ-ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１抗体がヒトのモノクローナル抗体である実施形態では、免疫原性を有さず、免疫反応も見られないという利点がある。【００１８】
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体の一つの実施形態はまた、ＨＣＭＶに対して高い細胞間感染阻止能または細胞間感染阻害活性を有する。ＨＣＭＶの生体内での感染拡大の様式を考慮すると、当該抗ＨＣＭＶ抗体は単なる中和能のみならず細胞間感染阻止能を併せ持つことは有利である。【００１９】
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＭＶに対して高い中和能および感染拡大阻害活性を有するうえ、ヒトモノクローナル抗体の実施形態については免疫原性を有しないので、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、および血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの様々な病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症、（ｃ）前記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎や聴覚障害、（ｅ）新生児や乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、単核症などの予防乃至治療薬として有用であると考えられる(非特許文献３、４、および５)。【００２０】
また、本発明に係る特に好ましいヒトのモノクローナル抗体を含む医薬組成物は、極めて少ない量で有効である。【００２１】
さらに、昨今、抗ＨＣＭＶ抗体としては、ｇＨ、ｇＬなどｇＢ糖タンパク質以外の種々の表面抗原をターゲットとした研究もおこなわれているが、下記（１）〜（３）の様な状況を踏まえると、本発明の抗体のように、ｇＢ糖タンパク質の、特にＡＤ１領域に特異的に結合し高い中和活性を有する抗体は、ＨＣＭＶ感染症の予防乃至治療薬として非常に有用である。【００２２】
（１）HCMV等の生体内でのウイルス増殖を抑えるためには、中和活性のみならず、細胞間感染の阻止の重要性が指摘されている（非特許文献１２および１３）中で、最近のｇＢ糖タンパク質の研究において、ウイルス粒子の細胞への侵入や細胞間感染には、ｇＢが重要な役割を果たしていることが示されており（Isaacson,M.K. et al., Human cytomegalovirus glycoprotein B is required for virus entry and cell-to-cell spread but not for virion attachment, assembly, or egress. J.Virology,2009; 83: p3891-3903）、ｇＢに対する抗体は細胞間感染阻害にも寄与する可能性が高い。
（２）ＨＣＭＶの感染に必須のｇＢ糖タンパク質の中でも、ＡＤ１領域はｇＢの機能や立体構造の形成に必須の部分であり（Qadri,I. et al., Assembly of conformational-dependent neutralizing domains on glycoprotein B of human cytomegalovirus. J.Gen.Virol,1992; 73; p2913-2921；およびBritt, W.J. et al., Antigenic domain is required for oligomerization of human cytomegalovirus glycoprotein B. J.Virol.,2005; 79: p4066-4079）、かつ臨床分離のウイルス株でも変異の少ない部分として知られており、ＡＤ１に対する抗体は幅広いスペクトルを有する可能性がある。
（３）ＡＤ２領域の抗体に比べ、ｇＢ上の長い領域に及ぶ不連続エピトープを認識するAD1抗体は特異性が高く、他の生体分子との交差反応により予期せぬ副作用を生ずる可能性は低いと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体を産生する抗体産生細胞クローン分離の手順をフローチャートで表した図である。
【図２】ＥＶ２０３８ ＣＤＲ−Ｈ３を構成する１６残基のアミノ酸の非保存的アミノ酸置換におけるＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図３】ＥＶ２０３８  Ｈ鎖の１２１, １２３, １２４, １２６番目の保存的アミノ酸置換におけるＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図４】ＥＶ２０３８  Ｈ鎖の１２５番目のプロリンをプロリンとアルギニン以外の全てのアミノ酸に置換した場合のＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図５】ＥＶ２０３８ ＣＤＲ−Ｈ３を構成するアミノ酸のうち、上記図２の非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１に対する結合能が低下しなかったアミノ酸残基に対して、保存的アミノ酸置換におけるＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図６】ＥＶ２０３８  ＣＤＲ−Ｈ３を構成するアミノ酸のうち、非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１に対する結合能が低下したアミノ酸残基で１２５番目のプロリンを除く残基（１２１, １２３, １２４,および １２６番目の計４残基）を対象に２箇所若しくは４箇所を同時に置換したバリアントを計４種作製し（２箇所置換体：Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ａ, Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ｓ,４箇所置換体：Ｌ１２１Ｉ/Ｗ１２３Ｙ/Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ａ, Ｌ１２１Ｉ/Ｗ１２３Ｙ/Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ｓ）、ＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図７】ＥＶ２０３８  ＣＤＲ−Ｈ３を構成するアミノ酸のうち、非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１との結合能が低下したアミノ酸残基で１２５番のプロリンを除く残基（１２１, １２３, １２４,および １２６番目の計４残基）を対象に欠失、挿入のバリアントを各1種作製し（Ｅ１２２ｄｅｌ,および Ｇ１２６＿Ｄ１２７ｉｎｓＥ）、ＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図８】ＥＶ２０３８  ＣＤＲ−Ｈ２領域の７９番目のアミノ酸残基のバリアントにおけるＡＤ１に対する結合能を評価したものである。
【図９】（Ａ）は、エピトープ領域の解析に使用したｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域の欠失変異体のクローンを図示したものであり、（Ｂ）は、それら欠失変異体を使用したウエスタン・ブロット分析結果を示した図である。
【図１０】（Ａ）は、ペプチドアレイを用いたＥＶ２０３８のエピトープ・マッピングの結果を示した図である。（Ｂ）では、上記の解析結果をｇＢ糖タンパク質のアミノ酸配列上に図示すると共に、ＥＶ２０３８の欠失変異体を使用した解析結果、および過去に報告のあったＩＴＣ５２のエピトープ配列を示した。
【図１１】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体の中和活性を評価した結果を示すグラフである。（Ａ）補体存在下で、陰性コントロールであるＨＣＭＶに特異性のないヒトモノクローナル抗体（ｈＩｇＧ)と、抗ＡＤ１抗体であるＥＶ２００１(特許文献５において開示)のヒトサイトメガロウイルス(ＡＤ１６９株)に対する中和活性を示すグラフ；（Ｂ）補体存在下で、ｈＩｇＧと抗ＨＣＶＭモノクローナル抗体（ＥＶ２０３８およびＨＣＭＶ１６）のヒトサイトメガロウイルス(ＡＤ１６９株)に対する中和活性を示すグラフ；（Ｃ）補体非存在下で、陰性コントロールであるｈＩｇＧとＥＶ２００１のヒトサイトメガロウイルス(ＡＤ１６９株)に対する中和活性を示すグラフ；および（Ｄ）補体非存在下で、ｈＩｇＧと抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体（ＥＶ２０３８およびＨＣＭＶ１６）のヒトサイトメガロウイルス(ＡＤ１６９株)に対する中和活性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
1．本発明に係る抗体またはその抗原結合性断片
本願発明の一実施形態によれば、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）のｇＢ糖タンパク質に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る抗体またはその抗原結合性断片が提供される。より具体的な実施形態では、ＨＣＭＶのｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に存在する不連続エピトープに特異的に結合し、該タンパク質の生物活性を中和し得る抗体またはその抗原結合性断片が提供される。
【００２５】
「ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）のｇＢ糖タンパク質」（または「ＨＣＭＶ ｇＢ糖タンパク質」もしくは「ＨＣＭＢ-ｇＢ糖タンパク質」）は、ＨＣＭＶのエンベロープを構成する主要な糖タンパク質の１つであり、ウイルス粒子の細胞への侵入、細胞融合およびウイルスの細胞間感染に寄与していることが知られている。ＨＣＭＶ ｇＢ糖タンパク質のアミノ酸配列（ＨＣＭＶウイルスの代表株であるAD169株のアミノ酸配列）は、公に利用可能な配列データベース（Swiss-Prot）からアクセッション番号：P06473のタンパク質のアミノ酸配列（配列番号１３７）として入手可能である。
「ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）のｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域」または「ＨＣＭＶ ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域」とは、ＨＣＭＶ ｇＢ糖タンパク質のアミノ酸配列中の552-635位の連続するアミノ酸残基からなる領域のことをいう（Wagnerら， Journal of Virology, Vol. 66, No. 9, Sept. 1992, p.5290-5297）。
本明細書中、「エピトープ」とは、当該分野で通常使用される意味で使用され、抗体が結合する相手としての、抗原分子の小さな部分構造を意味する（岩波  生物学事典  第４版（１９９６年第１刷発行））。
【００２６】
本発明のさらにより具体的な実施形態によれば、ＡＤ１領域に存在する不連続エピトープは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質の５４９〜５８０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２３）および５９６〜６４０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２４）の領域に存在する。さらにより具体的には、上記不連続エピトープは、配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、および配列番号２７のアミノ酸配列からなる。
【００２７】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、その一実施形態において、
(a)配列番号２または６のアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）、および
(b)配列番号４または８のアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）を含有し、この抗体または抗原結合性断片は、ヒトサイトメガロウイルスのｇB糖タンパク質に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る。
【００２８】
あるいは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片はまた、
(a)配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、および
(b) 配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有し、ヒトサイトメガロウイルスのｇＢ糖タンパク質に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る。
【００２９】
あるいは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片はさらに、
（ｉ）重鎖の可変領域のＣＤＲ（Complementarity Determining Region）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列が、それぞれ、
(a)配列番号１３のアミノ酸配列、
(b) 配列番号１４のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１５のアミノ酸配列、
を含有し、
（ｉｉ）軽鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列が、それぞれ、
(a)配列番号１６のアミノ酸配列、
(b) 配列番号１７のアミノ酸配列、および、
(c)配列番号１８のアミノ酸配列、
を含有し、ヒトサイトメガロウイルスのｇＢ糖タンパク質に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る。
【００３０】
さらに、本発明の抗体またはその抗原結合性断片にはまた、ヒトサイトメガロウイルスのｇＢ糖タンパク質に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る、上記の抗体または抗原結合性断片の機能的等価物も含まれ、それらは、例えば、
(a)配列番号２もしくは６のアミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号２もしくは６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）、ならびに
(b)配列番号４もしくは８のアミノ酸配列において、１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号４もしくは８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）を含有する。
【００３１】
あるいは、上記の抗体または抗原結合性断片の機能的等価物はまた、
(a)配列番号１０のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号１０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、ならびに
(b)配列番号１２のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、もしくはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、または配列番号１２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する。
【００３２】
あるいは、上記の抗体または抗原結合性断片の機能的等価物はさらに、
（ｉ）
(a)配列番号１３のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１、
(b)配列番号１４のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２、および
(c)配列番号１５のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列、および配列番号２２で示されるアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３、ならびに
（ｉｉ）
(a)配列番号１６のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１、
(b)配列番号１７のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２、および
(c)配列番号１８のアミノ酸配列中１〜数個のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含有する。
【００３３】
上記機能的等価物のアミノ酸配列中の変異の数の上限は、ＨＣＭＶのｇＢ糖タンパク質に特異的に結合し、その生物活性を中和し得るか否かを指標に決定し得る。ＨＣＭＶの中和活性は、例えば、後述の実施例９および１０に記載される方法により評価することができる。また、細胞間感染阻止能の評価は、例えば、実施例１１に示される方法により評価することができる。
【００３４】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、すなわち、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖であってジスルフィド結合によって相互接続されたものからなる免疫グロブリン分子を指すものとする。本願発明におけるモノクローナル抗体も、各々２本の軽鎖（Ｌ鎖）および重鎖（Ｈ鎖）を含む免疫グロブリン分子からなる。各Ｈ鎖は、Ｈ鎖可変部領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」と称す場合がある）とＨ鎖不変部領域（Ｈ鎖不変部領域は３つのドメインからなり、それぞれ「ＣＨ１」、「ＣＨ２」、「ＣＨ３」と称す場合がある（総称：ＣＨ））からなる。各Ｌ鎖は、Ｌ鎖可変部領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」と称す場合がある）とＬ鎖不変部領域（Ｌ鎖不変部領域は１つのドメインからなり、「ＣＬ」と称す場合がある）からなる。
【００３５】
特にＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、抗体の結合特異性に関与する点で重要である。抗体はＬＣＶＲおよびＨＣＶＲのアミノ酸残基を主に通じて標的抗原と相互作用するので、可変部領域内のアミノ酸配列は可変部領域の外にある配列よりも個々の抗体間の違いが大きい。更に、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲにおいても、各種抗体間でより一定に保たれたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域と相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができる。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、それぞれ３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、これらはＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端まで配列している。
【００３６】
抗体の「抗原結合性断片」（または単に「抗体断片」）という用語は、抗原（例えばＨＣＭＶ）に特異的に結合する能力を持つ１つまたは複数の抗体のフラグメントを指す。なお、そのフラグメントには抗原に特異的に結合する最小限のアミノ酸配列を有するペプチドも含むものとする。また抗原に特異的に結合する抗体の可変領域や相補性決定領域を有する１本鎖抗体（ｓｃＦＶ）や二重特異性抗原、多特異性抗原なども「抗原結合性断片」に含まれる。なお、本明細書においては、簡略化のために、「抗体または抗原結合性断片」のことを単に「抗体」ともいう。
「ＨＣＭＶの生物活性を中和し得る抗体」とは、ＨＣＭＶもしくはＨＣＭＶ感染細胞に結合することによってＨＣＭＶの生物活性を阻害する抗体を指すものとする。
「ＨＣＭＶの生物活性」としては、代表的には、以下（ａ）〜（ｅ）に例示する疾患を引き起こすＨＣＭＶの活性が含まれるが、これらに限定されず、活性化されたＨＣＭＶの活動が原因で引き起こされる種々の疾患を誘発するＨＣＭＶの活性が含まれる：
（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの様々な病気；
（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症；
（ｃ）前記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡；
（ｄ）前記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎や聴覚障害；
（ｅ）新生児や乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、単核症等（非特許文献３、４、および５）。
【００３７】
本明細書で使用される「ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病」という用語は、その疾患にかかっている被験対象がＨＣＭＶを有することがその疾患の病態生理の原因でありまたはその疾患を悪化させる一因である、ということが示されまたはそうであると考えられる疾病およびその他の疾患を含むものとする。従って、ＨＣＭＶの生物活性が疾病の原因となる疾患は、ＨＣＭＶの生物活性の阻害によってその疾患の症状および／または進行が緩和されることが予測される疾患である。このような疾患は、例えば上述の抗ＨＣＭＶ抗体を使用して症状を緩和もしくは治癒することが可能である。具体的には、その疾患にかかっている被験対象の生物学的流体中の抗ＨＣＭＶ抗体濃度を高める（例えば、被験対象の血清や血漿、滑液中の抗ＨＣＭＶ抗体の濃度を高める）ことによって上記疾患を証明することができる。
【００３８】
本明細書で使用される、「阻害効果」、「阻害」、「抑制」、「阻害し得る」等々の用語は、抗原（ＨＣＭＶ）に起因する生物活性を約５〜１００％、好ましくは１０〜１００％、より好ましくは２０〜１００％、より好ましくは３０〜１００％、より好ましくは４０〜１００％、より好ましくは５０〜１００％、より好ましくは６０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、さらに好ましくは８０〜１００％、低減させることをいう。
【００３９】
可変部領域のアミノ酸配列は、大半の抗体−抗原相互作用を担っているため、特定の天然発生型の抗体を由来とする可変部領域配列またはＣＤＲ部分の配列を、異なる性質を持った異なる抗体由来の不変部領域またはフレームワーク配列に移植した状態で含有するような発現ベクターを構築すると、特定の天然発生型抗体の性質を模倣する組換え抗体を発現させることができる。
そのために、もとの抗体のものと同様な結合特性を有するインタクト組換え抗体を作り直す際に、特定の抗体の配列全体を得る必要はない。その抗体の重鎖および軽鎖の可変部領域配列若しくはＣＤＲ部分の配列があれば、この目的にとって充分な場合もある。
【００４０】
配列番号１３、１４、および、１５は、それぞれ、重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸配列である。また配列番号１６、１７、および１８は、それぞれ、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に対応するアミノ酸配列である。したがって、本発明の好ましい抗体は、配列番号１３、１４、１５、１６、１７、および１８がそれぞれ重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に相当するに相当する場合である。しかし、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るモノクローナル抗体であれば、配列番号１３、１４、１５、１６、１７、および１８がそれぞれ重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に相当するに必要はない。特に重鎖のＣＤＲ−３に関しては、配列番号２２で表示されるアミノ酸配列群の中から選ばれたアミノ酸配列であってもよい。また、上記中和活性を有する限り、ＣＤＲ配列は、配列番号１３、１４、１５、１６、１７、および１８の各群から選ばれたアミノ酸配列において、１〜数個（具体的には、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１〜２個または１個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列であってもよい。
ＣＤＲ以外のアミノ酸配列は特に限定されず、ＣＤＲ以外のアミノ酸配列が他の抗体、特に、他種の抗体由来である、いわゆるＣＤＲ移植抗体も本発明の抗体に包含される。この内、ＣＤＲ以外のアミノ酸配列もヒト由来である抗体が好ましいが、必要に応じてフレームワーク領域（ＦＲ）に１ないし数個（具体的な数は上記と同様）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異があってもよい。これら抗体の作製方法は公知の方法を用いることができる(Riechmann L, et al., Reshaping human antibodies for therapy. Nature, 332：323-327, 1988）。本発明においては、勿論、完全ヒト抗体が好ましい。
【００４１】
本発明のタンパク質のアミノ酸配列において1以上のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせがされたとは、同一配列中の任意かつ1もしくは複数のアミノ酸配列中の位置において、1または複数のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、または付加があることを意味し、欠失、置換、挿入および付加のうち2種以上が同時に生じてもよい。
ところで、自然界のタンパク質を構成しているアミノ酸は、それらの側鎖の特性によって群分け可能であり、例えば、同様な特性を有するアミノ酸群としては、芳香族アミノ酸（チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）、塩基性アミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、中性アミノ酸（セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン）、炭化水素鎖を有するアミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン）、およびその他（グリシン、メチオニン、システイン）の群などに分類できる。
非天然型のアミノ酸も含めた相互に置換可能なアミノ酸残基の例としては、下記の様な群わけもあり、同一群に含まれるアミノ酸残基は相互に置換可能である。A群：ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、ノルバリン、アラニン、2-アミノブタン酸、メチオニン、o-メチルセリン、t-ブチルグリシン、t-ブチルアラニン、シクロヘキシルアラニン；   B群：アスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、2-アミノアジピン酸、2-アミノスベリン酸；   C群：アスパラギン、グルタミン；   D群：リジン、アルギニン、オルニチン、2,4-ジアミノブタン酸、2,3-ジアミノプロピオン酸；   E群：プロリン、3-ヒドロキシプロリン、4-ヒドロキシプロリン；  F群：セリン、スレオニン、ホモセリン；  G群：フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン。
【００４２】
本発明において、さらに好ましい抗体は、(a)配列番号１０のアミノ酸配列；配列番号１０のアミノ酸配列において、１〜数個（具体的には、１〜９個、１〜８個、１〜７個、１〜６個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１〜２個または１個）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列；または配列番号１０のアミノ酸配列と９５％以上（好ましくは、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上または９９．５％以上）の同一性を有するアミノ酸配列で示される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、(b)配列番号１２のアミノ酸配列；配列番号１２のアミノ酸配列中１〜数個（具体的な数は上記と同様）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列；または配列番号１２のアミノ酸配列と９５％以上（具体的な％は上記と同様）の同一性を有するアミノ酸配列で示される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ)を含有する。
【００４３】
なお、アミノ酸配列や塩基配列の同一性は、カーリンおよびアルチュールによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Proc. Natl． Acad．Sci． USA 872264-2268, 1990; proc Natl Acad Sci USA 90： 5873, 1993）を用いて決定できる。ＢＬＡＳＴのアルゴリズムに基づいたＢＬＡＳＴＮやＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている（Altschul SF, et al： J Mol Biol 215： 403, 1990）。ＢＬＡＳＴＮを用いて塩基配列を解析する場合は、パラメーターは、例えばｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２とする。また、ＢＬＡＳＴＸを用いてアミノ酸配列を解析する場合は、パラメーターは、例えばscore=50、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合は、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。
【００４４】
本発明において、さらに好ましい抗体は、(a)配列番号１０のアミノ酸配列で示される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および、(b)配列番号１２のアミノ酸配列で示される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する。
本発明において、さらに好ましい抗体は、(a)配列番号６のアミノ酸配列；配列番号６のアミノ酸配列において、１〜数個（具体的な数は上記と同様）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列；または配列番号６のアミノ酸配列と９５％以上（具体的な％は上記と同様）の同一性を有するアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）、および(b)配列番号８のアミノ酸配列；配列番号８のアミノ酸配列において、１〜数個（具体的な数は上記と同様）のアミノ酸残基の欠失、置換、挿入、付加、またはこれらのいずれか２つ以上の組み合わせの変異を有するアミノ酸配列；または配列番号８のアミノ酸配列と９５％以上（具体的な％は上記と同様）の同一性を有するアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）を含有する。
【００４５】
本発明において最も好ましい抗体は、配列番号６のアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）、および配列番号８のアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）を含有する、完全ヒトモノクローナル抗体である。また、本発明において好ましい抗体のクラス（サブクラス）はＩｇＧ１（λ）である。
【００４６】
上述した本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体又はその抗原結合性断片は、様々な疾病の原因となるＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和させ、従来の抗ＨＣＭＶ抗体よりさらに高い中和能を有することを特徴とする。
ここで「特異的に結合する」とは、所定の抗原を認識してそれに結合すること言う。
典型的には、本発明の抗体のＨＣＭＶ（特に、ヒトＨＣＭＶ）との解離定数（Ｋｄ値）は、好ましくは１×１０−７Ｍ以下、より好ましくは１×１０−８Ｍ以下、さらに好ましくは１×１０−９Ｍ以下であり、最も好ましくは１×１０−１０Ｍ以下である。抗体とＨＣＭＶとの解離定数を測定するには、公知の方法を用いることができる。例えば、チップ上に固定化した抗ＨＣＭＶ抗体を用いてＢＩＡＣＯＲＥＴ１００（登録商標）のような蛋白質相互作用解析装置により測定することができる。
【００４７】
抗ＨＣＭＶ抗体の中和能については、免疫染色法による感染阻止率やプラーク形成阻止率を調べることにより評価出来る。即ち、ＨＣＭＶの代表的な株であるＡＤ１６９株やＴｏｗｎｅ株を感染可能な細胞培養系に接種する際に、あらかじめ一定時間種々の濃度の抗ＨＣＭＶ抗体と接触させ、その後それらを細胞に接種し、感染２４時間後に免疫染色によりＨＣＭＶ感染細胞数を計測し感染阻止率を求めたり、もしくは感染５〜６日後に形成されるプラーク数からその阻止率を求めることによって抗ＨＣＭＶ抗体の中和活性を測定することができる。
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、ＡＤ１６９株に対する中和活性として、１μｇ／ｍＬ（約７nＭ）以下、より好ましくは、０．１μｇ／ｍＬ（約０．７nＭ）以下で、さらにより好ましくは０．０５μｇ／ｍＬ（約０．３ｎＭ）以下で、最も好ましくは約０．０３μｇ／ｍＬ（約０．２ｎＭ）以下で約５０％のプラーク形成阻止能を有する。
また、細胞間感染阻止能としては、あらかじめＨＣＭＶに感染した細胞を一定時間培養後、その細胞培養系に種々の濃度の抗ＨＣＭＶ抗体を添加することにより、細胞間感染の阻害効果を評価することが出来る。
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合性断片は、好ましくは、終濃度２μｇ／ｍＬ（約１３nＭ）以下、より好ましくは、０．５μｇ／ｍＬ（約３nＭ）以下で、さらにより好ましくは０．２μｇ／ｍＬ（約０．１３ｎＭ）以下で５０%以上の細胞間感染阻止能を有する。
【００４８】
なお、本願発明の抗体は、完全長の抗体若しくはその抗原結合性断片、または可変部領域を示す配列番号６、８、１０または１２のアミノ酸配列や、相補性決定領域（ＣＤＲ）を示す配列番号１３〜１８のアミノ酸配列をもとにすれば、当該技術分野における周知の技術によって、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得る組換えヒトモノクローナル抗体、モノクローナル抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体も含む）、またはそれらの抗原結合性断片を得ることができる。これらの抗体は本願発明の技術的範囲内に属するものである。
例えば、重鎖および軽鎖のシグナル配列はタンパク質成熟の過程で切断され、最終的な抗体の特性には寄与しないが、欠けている配列を追加するためには、クローン化されたｃＤＮＡ配列を、ライゲーションまたはＰＣＲ増幅法により、合成オリゴヌクレオチドに組み合わせることができる。
代替的には、可変領域全体を一組の短い、重複のあるオリゴヌクレオチドとして合成し、ＰＣＲ増幅法で組み合わせて、完全に人工的な可変領域クローンを作製することもできる。
【００４９】
２．本発明に係る抗体等をコードする核酸
本願発明の別の実施形態によれば、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸、および該核酸と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸から選択される単離された核酸が提供される。
好ましくは、上記核酸はＤＮＡまたはＲＮＡであり、より好ましくはＤＮＡである。
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸であって、２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸と高い同一性を有する単離された核酸も本願発明に含まれる。ここで、「高い同一性を有する」とは、高ストリンジェントな条件下で所定の核酸配列に対してハイブリダイズすることができる程度の配列同一性を意味し、例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％、またはそれを超える同一性を有することを意味する。
「高ストリンジェントな条件」は、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃の条件である（例えば、J.SambrookらのMolecular Cloning, A Laboratory Manual 2nd ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989),  特に１１．４５節"Conditions for Hybridization of Oligonucleotide Probes"参照）。これらの条件において、温度を上げるほど高い同一性を有するポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）が効率的に得られることが期待できる。ただし、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度、プローブ濃度、プローブの長さ、イオン強度、時間、塩濃度など複数の要素が考えられ、当業者であればこれら要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
【００５０】
上記高ストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸としては、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８および２２のいずれかのアミノ酸配列をコードする核酸と、例えば、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上または９９％以上の同一性を有する核酸が含まれる。
塩基配列の同一性は、上述した同一性検索アルゴリズムなどを利用して決定することが出来る（Proc. Natl． Acad．Sci． USA 872264-2268, 1990; Proc Natl Acad Sci USA 90： 5873, 1993）。
なお、本発明で好ましい核酸は、配列番号１０および１２のアミノ酸配列を共にコードするＤＮＡ、さらに好ましくは、配列番号６および８のアミノ酸配列を共にコードするＤＮＡである。さらにより好ましい核酸は、配列番号２および４のアミノ酸配列を共にコードするＤＮＡである。
もっとさらにより好ましい核酸は、配列番号５および７の核酸を共に含む核酸であり、さらにより好ましい核酸は、配列番号１ならびに３の核酸の両方を含む核酸である。
【００５１】
３．本発明に係るベクター、宿主細胞および抗体の作製方法
本発明は、上記核酸を組込んだベクターおよびそのベクターが導入された宿主細胞、これらを用いる抗体の作製方法にも関する。
本発明の抗体は、公知の方法を用いた組換えヒト抗体としても作製できる（Nature,312:643,1984 、Nature,321:522,1986など参照）。例えば、本発明の抗体は、本発明に係るベクターを導入した宿主細胞を培養し、培養上清などから、産生された抗体を精製することによって作製することができる。より具体的には、ＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを同一細胞または別のヒト細胞より作製したヒト抗体ＣＨおよび／またはヒト抗体ＣＬをコードする遺伝子を含有する動物細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト抗体発現ベクターを構築し、動物細胞へ導入し発現させることにより製造することができる。
【００５２】
本発明の抗体のＶＨまたはＶＬをコードする核酸を組み込むベクターとしては、必ずしも限定されないが、蛋白質遺伝子等の発現に汎用され、特に抗体遺伝子の発現に適合するベクターまたは高発現用ベクターが好ましい。好適な例としては、ＥＦプロモーターおよび／またはＣＭＶエンハンサーを含有するベクターが挙げられる。また、通常ＶＨまたはＶＬをコードする核酸を組み込んだ発現ベクターをそれぞれ作製し、宿主細胞にコトランスフェクトするが、単一の発現ベクターに組み込んでも良い。
発現ベクターを導入する宿主細胞としては、必ずしも限定されないが、蛋白質遺伝子等の発現に汎用され、特に抗体遺伝子の発現に適合する細胞が好ましい。例えば、細菌（大腸菌等）、放線菌、酵母、昆虫細胞（ＳＦ９等）、哺乳類細胞（ＣＯＳ−１、ＣＨＯ、ミエローマ細胞等）が挙げられる。
【００５３】
組換抗体を工業的に生産するためには、一般的には当該抗体を安定して高生産する組換動物細胞株、例えば、ＣＨＯ細胞株が利用される。そのような組換細胞株の作製、クローン化、高発現のための遺伝子増幅およびスクリーニングは公知の方法を用いることができる（例えば、Omasa T.: J. Biosci. Bioeng., 94, 600-605, 2002等参照）。
【００５４】
本発明は重鎖２本と軽鎖２本からなる抗体のほかに、本発明の抗体の抗原結合性断片も含まれる。抗原結合性断片としては、例えばＦａｂ （fragment of antigen binding ）、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')２があり、抗体の活性断片をリンカー等で結合したものとして例えば一本鎖抗体（single chain Fv ：ｓｃＦｖ）やジスルフィド安定化抗体（disulfide stabilized Fv ：ｄｓＦｖ）があり、抗体の活性断片を含むペプチドとして例えばＣＤＲ を含有するペプチドが挙げられる。これらは、本発明の抗体を適当な蛋白分解酵素で処理する方法または遺伝子組換技術等、公知の方法で製造することができる。
抗体の精製は、塩析法、ゲル濾過法、イオン交換クロマト法またはアフィニティークロマト法等の公知の精製手段を用いて行うことができる。
【００５５】
その他、近年開発された、遺伝子工学技術を活用して組み換え抗体（リコンビナント抗体）をファージ表面に発現させる、ファージディスプレイ抗体技術により、人工的にＶＨ、ＶＬ遺伝子をシャッフリングさせ多様化したｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）抗体をファージ融合タンパクとして発現させ、特異抗体を得ることもできる。この技術は、免疫を回避でき、さらに細胞融合法に変わるヒト化抗体作製技術として高く評価されている。この技術を用いて、本願明細書における配列番号２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８および２２のアミノ酸配列を参考に作製した特異抗体またはその抗原結合性断片であれば、本願発明の技術的範囲内に属する。
また更には、近年開発された抗体の糖鎖部分の修飾により抗体のＡＤＣＣ活性を大幅に改善するポテリジェント（Ｐｏｔｅｌｌｅｇｅｎｔ）技術を本願発明の抗体に応用して得られた抗体（Niwa R., et al, Clin.Cancer Res., 10,6248-6255(2004)参照）や、ＣＤＣ活性を改善するコンプリジェント（Ｃｏｍｐｌｅｇｎｅｎｔ）技術を本願発明の抗体に応用して得られた抗体（Kanda S., et al, Glycobiology, 17, 104-118(2007)参照）も、本発明の技術範囲に属する。
【００５６】
なお、抗体作製の手法として、通常はマウス、ウサギ、ヤギ等の実験動物を利用してポリクローナル抗体や、モノクローナル抗体を取得することが行われているが、このようにして得られる抗体は用いた動物種に特徴的な配列を有しているので、そのままヒトに投与するとヒト免疫系により異物として認識され、ヒト抗動物抗体応答が起こる（即ち、抗体の抗体を作ってしまう）ことがある。
本発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、健常人などの血液由来の抗体産生細胞から得ることができ、それは完全ヒト抗体である。この完全ヒト抗体は、抗体医薬として人体に投与したとしても、免疫原性を有さず、免疫反応は見られないものと考えられる。
なお、本願発明の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体においては、従来の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体よりさらに高い中和能を有するため、より少ない投与量で同程度の治療効果が期待できる。
【００５７】
次に、本発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体およびその抗原結合性断片を得た工程について説明するが、本発明に係る抗体等を得る手法はこれらの記載に何ら限定されるものではなく、上述したとおり、当該技術分野における通常の変更ができることは言うまでもない。
【００５８】
本発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体およびその抗原結合性断片は、健常人の血液から種々の工程を経て、該抗体を産生する細胞クローンを分離し、抗体産生細胞クローンの培養上清より得られた抗体について、アフィニティー精製を行うことによって得ることができる。
【００５９】
１）ＨＣＭＶに対する完全ヒト抗体産生細胞クローンの分離
健常人の血液からＢリンパ球を分離し、該Ｂリンパ球の増殖を誘導する。増殖誘導の方法自体は公知であり、例えばガンの誘因因子となる「エプスタイン・バールウイルス（ＥＢウイルス）」（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ）（以下、ＥＢＶと称す）を用いたトランスフォーム法（D.Kozborら）により、行うことができる。
即ち、上記Ｂリンパ球をＥＢＶに感染させて増殖誘導し、増殖させた細胞を抗体産生細胞ライブラリとする。
【００６０】
２）抗体産生細胞ライブラリからモノクローナル抗体の回収
増殖誘導させた細胞からモノクローナル抗体を回収する方法はモノクローナル抗体の作製 において常用されている周知の方法により行うことができる。
前記抗体産生細胞ライブラリの中からＨＣＭＶに結合する抗体を作り出すリンパ球クローンを選別、その培養上清から抗体を取り出す。即ち、前記抗体産生細胞ライブラリから限界希釈法によりＨＣＭＶに結合する抗体を産生する細胞集団（クローン）を選択する。
ＨＣＭＶと結合するクローンの検出には、ＨＣＭＶ由来の抗原および標識マウス抗ヒトＩｇＧ抗体を用いたＥＬＩＳＡを採用するのが好ましい。
選択された抗体陽性細胞集団を培養し、スクリーニングを繰り返すことによって、目的とする抗体のみを産生する細胞集団（クローン）を得ることができる
以上の抗体産生細胞クローンの分離までの工程を表すフローチャートを図１に示す。
【００６１】
３）ＰｒｏｔｅｉｎＡもしくはＧを用いたアフィニティー精製
抗ＨＣＭＶ抗体を精製するには、選抜された細胞を、ローラ瓶、２リットル入りスピナー・フラスコ、または他の培養系で増殖させることができる。
得られた培養上清を濾過し、濃縮してからプロテインＡあるいはプロテインＧ−セファロース（ＧＥヘルスケア社）などによるアフィニティ・クロマトグラフィにかけて当該タンパク質を精製することができる。緩衝液をＰＢＳに交換し、ＯＤ280または好ましくはネフェロメータ分析により、濃度を判定できる。
アイソタイプはアイソタイプ抗原に特異的な方法で調べることができる。
【００６２】
このようにして得られた抗ＨＣＭＶ抗体は、ヒト体内で感作されたＢリンパ球から作製した完全ヒト抗体であるので、抗体に対する免疫反応の可能性が低い。
又、抗体産生細胞クローン作製に関して、Ｂリンパ球に感染して増殖誘導させる活性があるＥＢウイルスを利用している点も特徴である。
ＥＢウイルス法の利点は、ヒトの体内で作られるナチュラルな抗体を作製できる点および親和性の高い抗体が得られる点である。例えば、ＨＣＭＶに対するヒト抗体は、マウスを人工的に免疫して作られた抗体より約１０〜１００倍親和性が高いことが判明している。
ＥＢウイルス感染で増殖したBリンパ球集団は抗体産生細胞のライブラリとなる。
このライブラリから特定の抗体産生細胞クローンを分離しヒト抗体を得ることができる。
【００６３】
４．本発明に係る抗体を含有する医薬組成物
次に、本発明は、上記抗体またはその抗原結合部分および薬学的に許容可能な担体を含む、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）が関与する疾患を予防または治療するための医薬組成物を提供する。
【００６４】
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＭＶに対して、従来の抗ＨＣＭＶ抗体より高い中和能を有するので、ＨＣＭＶが関与する疾患（ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病）の予防乃至治療薬として有用である。ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる疾患は、ＨＣＭＶ活性の阻害によってその疾患の症状および／または進行が緩和されることが予測される疾患である。
【００６５】
本明細書で使用される「ＨＣＭＶが関与する疾患」という用語は、その疾患にかかっている被験対象がＨＣＭＶを有することが、その疾患の病態病理の原因であり、またはその疾患を悪化させる一因である、ということが示され、またはそうであると考えられる疾病およびその他の疾患を含むものとする。即ち、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＭＶに対して高い中和能を有するので、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの様々な病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症、（ｃ）前記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎や聴覚障害、（ｅ）新生児や乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、単核症などの予防乃至治療薬としても期待できる（非特許文献３，４、および５）。
【００６６】
本明細書で使用される「医薬品として許容される担体」には、生理学的に適合可能な任意の、または全ての溶媒、分散媒、コーティング、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。
医薬品として許容される担体の例には、水、塩類溶液、リン酸緩衝化生理食塩水、デキ
ストロース、グリセロール、エタノールなどの１種または複数、ならびにこれらの組合せが含まれる。注射剤などとして使用される場合、ｐＨ調節剤や等張剤、例えば糖や、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。医薬品として許容される担体には、さらに、湿潤剤や乳化剤、防腐剤、緩衝剤、安定化剤など、抗体または抗体部分の保存性または有効性を増大させる少量の補助物質を含めることができる。
【００６７】
本発明の組成物は、様々な剤型にすることができる。そのような組成物には、例えば、溶液（例えば注射可能であり輸液可能な溶液）や分散液、懸濁液、錠剤、カプセル、トローチ、ピル、粉末、リポソーム、坐剤など、液体、半固体、固体の剤型が含まれる。好ましい形は、意図される投与形態および治療の適用例により異なる。一般に好ましい組成物は、他の抗体でヒトを受動免疫化するために使用されるものと同様の組成物など、注射可能または輸液可能な溶液の形にあるものである。好ましい投与形態は、非経口的なもの（例えば静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内から）である。好ましい実施形態では、抗体は、静脈輸液または静脈注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、抗体は筋肉内注射または皮下注射によって投与される。
【００６８】
本発明の抗体および抗体断片は、非経口投与に適する医薬品組成物に組み込むことができる。抗体または抗体部分は、単独種類を使用する場合には、０．１〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する注射可能な製剤として調製することが好ましい。一方、複数種類の抗体を混合して使用する場合には、０．００１〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する注射可能な製剤として調製することが好ましい。なお、その複数種類の抗体の混合割合は、適宜設定することができる。
【００６９】
注射可能な製剤は、有効成分を液体に溶解したものまたは有効成分を凍結乾燥させたものを、フリントまたはアンバーバイアル、アンプル、またはプレフィルドシリンジに入れたもので構成することができる。緩衝剤は、ｐＨ５．０〜７．０（最適な場合、ｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適な場合は５〜１０ｍＭのＬ−ヒスチジンにすることができる。その他の適切な緩衝剤には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、またはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。濃度０〜３００ｍＭの溶液（液体剤型に関しては、最適な場合、１５０ｍＭ）の浸透圧を変えるために、塩化ナトリウムを使用することができる。凍結乾燥させた剤型には、凍結保護物質、主に０〜１０％（最適な場合、０．５〜５．０％）のスクロースを含めることができる。その他の適切な凍結保護物質にはマンニトール、トレハロースおよびラクトースが含まれる。凍結乾燥させた剤型には、増量剤、主に１〜１０％のマンニトール（最適な場合、２〜４％）を含めることができる。液体および凍結乾燥させた剤型の両方には、安定剤、主に１〜５０ｍＭ（最適な場合、５〜１０ｍＭ）のＬ−メチオニンを使用することができる。その他の適切な安定剤にはグリシン、アルギニンおよびポリソルベート８０等が含まれ、ポリソルベート８０の場合、０〜０．０５％（最適な場合、０．００５〜０．０１％）を含めることができる。他の界面活性剤には、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００７０】
本医薬組成物は、一般に、製造および貯蔵の条件下で無菌または安定でなければならない。この組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高い薬物濃度に適するその他のオーダーされた構造として、処方することができる。無菌の注射可能な溶液は、必要とされる量の活性化合物（すなわち抗体または抗体部分）を、必要な場合には上述の成分の１つまたは組合せと共に適切な溶媒に混ぜ、その後、濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、活性化合物を、基本的な分散媒および上記列挙したものから必要とされるその他の成分を含有する無菌ビークル（vehicle）に混ぜることによって、分散液を調製する。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌粉末製剤の場合、好ましい調製方法は、前に述べたその滅菌濾過溶液の凍結真空乾燥および噴霧乾燥であり、それによって、活性成分の粉末に加え、任意の他の所望の成分を含んだ組成物が得られる。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、また、分散液の場合には必要とされる粒度を維持することによって、また、界面活性剤を使用することによって、維持することができる。注射可能な組成物の長期にわたる吸収は、その組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩やゼラチンを含めることによって行うことができる。
【００７１】
本医薬組成物には、補助的な活性化合物も組み入れることができる。ある実施形態では、本発明の抗体または抗体部分は、ＨＣＭＶが原因となる疾患を治療するのに有用な１種または複数の他の治療薬と一緒に処方し、またはそのような他治療薬と同時に投与する。例えば、本発明の抗ＨＣＭＶ抗体または抗体部分は、他の標的に結合する１つまたは複数の他の抗体（例えば、ＨＣＭＶの他の結合サイトに結合する抗体）と一緒に処方し、またはそのような他の抗体と同時に投与することができる。さらに、本発明の１つまたは複数の抗体は、前述の治療薬のうち２種またはそれ以上の種類を組み合わせて使用することができる。そのような組合せによる療法は、投与された治療薬のより低い用量を有利に利用することができ、したがって、様々な単一療法に伴う可能性ある毒性または合併症が回避される。
【００７２】
なお、本明細書中に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸配列と配列番号との関係は以下のとおりである。
配列番号１
シグナル配列を含む、ＨＣＭＶのｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に対する抗体（以下、「抗ＡＤ１抗体」）（ＥＶ２０３８）のＨ鎖をコードするヌクレオチド配列を表す。
配列番号２
シグナル配列を含む、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列を表す。
配列番号３
シグナル配列を含む、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖をコードするヌクレオチド配列を表す。
配列番号４
シグナル配列を含む、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖のアミノ酸配列を表す。
配列番号５
シグナル配列を含まない、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖をコードするヌクレオチド配列を表す。
配列番号６
シグナル配列を含まない、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列を表す。
配列番号７
シグナル配列を含まない、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖をコードするヌクレオチド配列を表す。
配列番号８
シグナル配列を含まない、抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖のアミノ酸配列を表す。
配列番号９
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を表す。
配列番号１０
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を表す。
配列番号１２
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を表す。
配列番号１４
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を表す。
配列番号１５
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を表す。
配列番号１６
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を表す。
配列番号１７
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を表す。
配列番号１８
抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を表す。
配列番号１９
実施例でＥＶ２０３８ CDR-H3バリアントを作製する際に使用した38 Hind-Sプライマーのヌクレオチド配列を表す。
配列番号２０
実施例でＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントを作製する際に使用した38 Not-Aプライマーのヌクレオチド配列を表す。
配列番号２１
実施例でＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントを作製する際に使用した塩基配列確認用プライマーのヌクレオチド配列を表す。
配列番号２２
抗ＡＤ１抗体のＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列中のコンセンサスアミノ酸配列を表す。
配列番号２３
実施例に示す欠失変異法によりエピトープが存在する領域として同定されたＨＣＭＶ  ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域の５４９位〜５８０位までのアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を表す。
配列番号２４
実施例に示す欠失変異法によりエピトープが存在する領域として同定されたＨＣＭＶ  ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域の５９６位〜６４０位までのアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を表す。
配列番号２５
実施例に示すペプチドアレイ法によりエピトープ領域として同定されたＨＣＭＶ  ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域の５４９位〜５６０位までのアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を表す。
配列番号２６
実施例に示すペプチドアレイ法によりエピトープ領域として同定されたＨＣＭＶ  ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域の５６９位〜５７６位までのアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を表す。
配列番号２７
実施例に示すペプチドアレイ法によりエピトープ領域として同定されたＨＣＭＶ  ｇＢ糖タンパク質ＡＤ１領域の６２５位〜６３２位までのアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を表す。
配列番号２８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１７位のバリン（Ｖ）をリジン（Ｋ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号２９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１８位のトレオニン（Ｔ）をトリプトファン（Ｗ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１９位のアルギニン（Ｒ）をバリン（Ｖ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２０位のアスパラギン酸（Ｄ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をグルタミン酸（Ｅ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２２位のグルタミン酸（Ｅ）をロイシン（Ｌ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２３位のトリプトファン（Ｗ）をトレオニン（Ｔ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をアスパラギン酸（Ｄ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をアルギニン（Ｒ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２７位のアスパラギン酸（Ｄ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号３９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２８位のチロシン（Ｙ）をアスパラギン（Ｎ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２９位のチロシン（Ｙ）をアスパラギン（Ｎ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３０位のメチオニン（Ｍ）をグルタミン（Ｑ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３１位のアスパラギン酸（Ｄ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３２位のバリン（Ｖ）をリジン（Ｋ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をバリン（Ｖ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をプロリン（Ｐ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号４９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２３位のトリプトファン（Ｗ）をチロシン（Ｙ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２３位のトリプトファン（Ｗ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２３位のトリプトファン（Ｗ）をプロリン（Ｐ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２３位のトリプトファン（Ｗ）をロイシン（Ｌ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２３位のトリプトファン（Ｗ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をロイシン（Ｌ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をメチオニン（Ｍ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をプロリン（Ｐ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をバリン（Ｖ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号５９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）をプロリン（Ｐ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）をセリン（Ｓ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）をアスパラギン（Ｎ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）をトレオニン（Ｔ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をグリシン（Ｇ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をロイシン（Ｌ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をバリン（Ｖ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号６９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をセリン（Ｓ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をトレオニン（Ｔ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をアスパラギン（Ｎ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をグルタミン（Ｑ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をアスパラギン酸（Ｄ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をグルタミン酸（Ｅ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をリジン（Ｋ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をヒスチジン（Ｈ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をシステイン（Ｃ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をメチオニン（Ｍ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号７９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をチロシン（Ｙ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をトリプトファン（Ｗ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２５位のプロリン（Ｐ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１７位のバリン（Ｖ）をロイシン（Ｌ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１７位のバリン（Ｖ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１８位のトレオニン（Ｔ）をセリン（Ｓ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１８位のトレオニン（Ｔ）をリジン（Ｋ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１９位のアルギニン（Ｒ）をリジン（Ｋ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１１９位のアルギニン（Ｒ）をトレオニン（Ｔ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２０位のアスパラギン酸（Ｄ）をグルタミン酸（Ｅ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号８９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２０位のアスパラギン酸（Ｄ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２２位のグルタミン酸（Ｅ）をアスパラギン酸（Ｄ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２２位のグルタミン酸（Ｅ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２７位のアスパラギン酸（Ｄ）をグルタミン酸（Ｅ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２７位のアスパラギン酸（Ｄ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２８位のチロシン（Ｙ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２８位のチロシン（Ｙ）をトリプトファン（Ｗ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２９位のチロシン（Ｙ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２９位のチロシン（Ｙ）をトリプトファン（Ｗ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３０位のメチオニン（Ｍ）をフェニルアラニン（Ｆ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号９９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３０位のメチオニン（Ｍ）をイソロイシン（Ｉ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１００
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３１位のアスパラギン酸（Ｄ）をグルタミン酸（Ｅ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０１
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３１位のアスパラギン酸（Ｄ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０２
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３２位のバリン（Ｖ）をチロシン（Ｙ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０３
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１３２位のバリン（Ｖ）をセリン（Ｓ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０４
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をバリン（Ｖ）に、１２６位のグリシン（Ｇ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０５
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２４位のイソロイシン（Ｉ）をバリン（Ｖ）に、１２６位のグリシン（Ｇ）をセリン（Ｓ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０６
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をイソロイシン（Ｉ）に、１２３位のトリプトファン（Ｗ）をチロシン（Ｙ）に、１２４位のイソロイシン（Ｉ）をバリン（Ｖ）に、１２６位のグリシン（Ｇ）をアラニン（Ａ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０７
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２１位のロイシン（Ｌ）をイソロイシン（Ｉ）に、１２３位のトリプトファン（Ｗ）をチロシン（Ｙ）に、１２４位のイソロイシン（Ｉ）をバリン（Ｖ）に、１２６位のグリシン（Ｇ）をセリン（Ｓ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０８
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２２位のグルタミン酸（Ｅ）を欠失させた変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１０９
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の１２６位のグリシン（Ｇ）と１２７位のアスパラギン酸（Ｄ）の間にグルタミン酸（Ｅ）を挿入した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１０
本発明の抗ＡＤ１抗体（ＥＶ２０３８）のＨ鎖のアミノ酸配列中の７９位のアスパラギン（Ｎ）をグルタミン（Ｑ）に置換した変異体のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１１
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１２
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１３
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド３）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１４
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド４）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１５
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド５）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１６
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド６）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１７
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド７）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１８
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド８）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１１９
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド９）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２０
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１０）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２１
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１１）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２２
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１２）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２３
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１３）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２４
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１４）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２５
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１５）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２６
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１６）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２７
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１７）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２８
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１８）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１２９
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド１９）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３０
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２０）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３１
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２１）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３２
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２２）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３３
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２３）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３４
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２４）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３５
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２５）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３６
実施例８で作製、使用した合成ペプチド（表５のペプチド２６）のアミノ酸配列を表す。
配列番号１３７
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）のｇＢ糖タンパク質のアミノ酸配列（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：  Ｐ０６４７３）を表す。
【００７３】
なお、本明細書の実施例１〜６の中に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸配列と配列番号との関係は表１のとおりである。
【表１】
2010114106.tif 000002
【００７４】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限されるものではない。
本実施例において使用する手順は、特に言及しない限り、Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Third Edition) (Sambrookら、Cold Spring Harbour Laboratory Press，2001）で参照することができる。
【実施例】
【００７５】
実施例１．ＨＣＭＶに対する完全ヒト抗体産生細胞クローンの分離
抗体産生細胞クローンの分離までのフローチャートを図1に示す。
血清中の抗ＨＣＭＶ抗体が高値であるヒトの末梢血からＢリンパ球を分離し、ＥＢＶを感染させた。感染細胞を９６ウェルプレートに播種し、およそ３週間培養した後、培養上清中の抗ＨＣＭＶ抗体のスクリーニングを行った（1次スクリーニング）。スクリーニングはＨＣＭＶの主要な中和エピトープであるＡＤ１およびＡＤ２（J. Virol., 65, 138-146 (1991), J. Gen. Virol., 73, 2375-2383 (1992), J. Virol., 66, 5290-5297 (1992), J. Virol., 67, 703-710 (1993)）に対する抗体をターゲットとし、ＧＳＴ融合ＨＣＭＶ−ＡＤ１またはＧＳＴ融合ＨＣＭＶ−ＡＤ２をコートした９６ウェルプレートを用いて、ＥＬＩＳＡ法により行った。抗ＨＣＭＶ抗体産生が確認された各ウェルの細胞を希釈し、それぞれ新たな９６ウェルプレートに播種した。約３週間培養後、抗ＨＣＭＶ抗体産生の2次スクリーニングを行った。得られた抗体陽性ウェルの細胞を、新たな９６ウェルプレートにウェル当たり１〜３０ヶ播種した。この限界希釈培養によるクローニング操作の結果、目的抗体を産生している細胞クローンを得た。【００７６】
実施例２．抗体アイソタイプおよびサブクラスの確認
分離した抗体産生細胞クローンの培養上清を用い、産生する抗体のアイソタイプをＥＬＩＳＡ法により確認した（文献：Curr Protoc Immunol. 2001 May; Chapter 2: Unit 2.2参照）。ＥＬＩＳＡはＧＳＴ融合ＨＣＭＶ−ＡＤ１またはＡＤ２をコートした９６ウェルプレートを用い、２次抗体としてそれぞれのアイソタイプおよびサブクラスに特異的な抗体を使用した。その結果、得られた抗ＨＣＭＶ抗体のアイソタイプおよびサブクラスを表２に示す。
【表２】
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【００７７】
実施例３．抗ＨＣＭＶ抗体をコードするＤＮＡのクローニング
抗体産生細胞のｔｏｔａｌ−ＲＮＡから、Ｏｌｉｇｏ−ｄＴプライマーを用いて逆転写し、得られたｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ法による抗体遺伝子の増幅を行った。ＰＣＲに使用したプライマーは、ヒトＩｇＧ抗体Ｈ鎖およびＬ鎖をコードするｃＤＮＡのデータベースをもとに設計した。完全長のＨ鎖ｃＤＮＡおよびＬ鎖ｃＤＮＡを増幅するため、５’末端側プライマーは翻訳開始点を、３’末端側プライマーは翻訳終止点を有している。【００７８】
実施例４．塩基配列に基づく抗体のアミノ酸配列の決定
ＰＣＲ法により増幅した抗体Ｈ鎖およびＬ鎖のｃＤＮＡをプラスミドベクターに挿入し、ＡＢＩシークエンサーによりそれぞれの塩基配列を確認した。得られた塩基配列より、シグナル配列、及び抗体Ｈ鎖およびＬ鎖のアミノ酸配列を決定した。
また、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の解析には、Ｋａｂａｔの方法を用いた（www.bioinf.org.uk:Dr.Andrew C.R. Martin’s Group, Antibodies: General Information）。得られた抗ＨＣＭＶ抗体（ＥＶ２０３８）のＣＤＲ配列を配列番号１３〜１８に示す。具体的には、ＥＶ２０３８のＨ鎖ＣＤＲ１、Ｈ鎖ＣＤＲ２、Ｈ鎖ＣＤＲ３、Ｌ鎖ＣＤＲ１、Ｌ鎖ＣＤＲ２、およびＬ鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、および１８に示す。
ところで、これまでにＡＤ１抗体として報告されているモノクローナル抗体との類似性を調べるために、可変領域のアミノ酸配列がＧｅｎＢａｎｋ等に掲載されている抗体について、ＥＶ２０３８のＣＤＲ配列との比較を行った。既知のヒトまたはマウス由来のＡＤ１抗体の各種ＣＤＲ配列をＫａｂａｔ法で定め、同様に定めたＥＶ２０３８のＣＤＲ配列とそれぞれ比較した。表３中、個々のＣＤＲの相同性は、比較対象となるアミノ酸残基の数(分母)と当該ＣＲＤ部分でＥＶ２０３８と位置と種類が一致したアミノ酸残基の数（分子）から求めた相同性（％）である。また、全体（％）は、個々のＣＤＲの比較で得られた分母となるアミノ酸残基の数と分子となるアミノ酸残基の数をそれぞれ合計し、得られた合計の分母および分子のアミノ酸残基数から相同性（％）を求めたものである。表３に示すようにＥＶ２０３８は既知のＡＤ１抗体とは相同性が全く認められず、これまで報告されているＡＤ１抗体とはＣＤＲ配列に大きな差異があることが明らかになった。
【表３】
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【００７９】
実施例５．得られた抗体遺伝子が抗ＨＣＭＶ抗体をコードしていることの確認
得られたＨ鎖およびＬ鎖のｃＤＮＡをそれぞれ発現ベクターに挿入し、２９３Ｔ細胞に同時に導入した。遺伝子導入はリポフェクタミン（Invitrogen）とプラス試薬（Invitrogen）により、メーカー推奨条件で行った（Invitrogen のカタログ：Cat.No.18324-111,  Cat.No.18324-012,またはCat.No.18324-020）。２日後に培養上清を回収し、抗ヒトＩｇＧ抗体およびＧＳＴ融合ＨＣＭＶ−ＡＤ１をコートした９６ウェルプレートを用いたＥＬＩＳＡ法により、培養上清中の抗体がヒトＩｇＧ抗体であること、およびＨＣＭＶ−ＡＤ１に結合することを確認した。【００８０】
実施例６．抗体タンパクの産生
得られた抗ＨＣＭＶ抗体発現プラスミドをＣＨＯ細胞に導入した。遺伝子導入は上述の２９３Ｔ細胞の場合と同様の方法を採用した。セレクションマーカー存在下で培養することにより、抗体を恒常的に産生するＣＨＯ細胞クローンを得た。
同抗体安定産生ＣＨＯ細胞を無血清培地中で培養し、培養上清を回収した。この培養上清をＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムに添加し、アフィニティー精製により精製抗体を得た。カラムはＨｉＴｒａｐ ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ ＦＦ（ＧＥヘルスケア社）のプレパックカラムを使用し、精製条件はカラムメーカー推奨条件とした。精製後、抗体のＨＣＭＶ−ＡＤ１またはＨＣＭＶ−ＡＤ２結合性をＥＬＩＳＡにより確認した。また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる約５０ｋＤａの抗体Ｈ鎖と約２５ｋＤａの抗体Ｌ鎖の確認を行った。【００８１】
実施例７．バリアントの作製とそれらの結合活性
本発明の抗体又はその結合性断片の特性に影響するアミノ酸配列を検討すべく、特に、ＣＤＲ−Ｈ３領域（アミノ酸番号１１７〜１３２）について調べた。尚、ＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸残基の番号は、配列番号２で示したシグナル配列も含む重鎖のアミノ酸配列のＮ末（メチオニン）からの順位でもって表記した。【００８２】
ところで、自然界のタンパク質を構成しているアミノ酸は、それらの側鎖の特性によって群分け可能であり、例えば、同様な特性を有するアミノ酸としては、芳香族アミノ酸（チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）、塩基性アミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、中性アミノ酸（セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン）、炭化水素鎖を有するアミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン）、およびその他（グリシン、メチオニン、システイン）の群などに分類できる。【００８３】
本項において「保存的アミノ酸置換」とは特性の似通ったアミノ酸間の置換、すなわち、主として上記の同じ群内でのアミノ酸置換をさす。この置換においては、オリジナルのタンパク質の特性に顕著に影響しないか、またはそれを顕著に変えないと考えられる。一方、「非保存的アミノ酸置換」とは、上記とは異なりオリジナルのアミノ酸と大きく特性の異なるアミノ酸への置換をいう。【００８４】
（１）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントの作製
ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３を構成している１６残基のアミノ酸について２ステップＰＣＲ法を用いて各1種類ずつ非保存的アミノ酸置換を行ない、バリアント （Ｖ１１７Ｋ， Ｔ１１８Ｗ， Ｒ１１９Ｖ, Ｄ１２０Ｉ, Ｌ１２１Ｅ, Ｅ１２２Ｌ, Ｗ１２３Ｔ, Ｉ１２４Ｄ, Ｐ１２５Ｒ, Ｇ１２６Ｆ, Ｄ１２７Ｉ, Ｙ１２８Ｎ, Ｙ１２９Ｎ, Ｍ１３０Ｑ, Ｄ１３１Ｉ, Ｖ１３２Ｋ）を作製した。まず、３８Ｈｉｎｄ−Ｓ (ＣＡＣＣＡＡＧＣＴＴＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＴＣ：配列番号１９)と置換部位のリバースプライマーのペアで前半部の遺伝子断片を、置換部位フォワードプライマーと３８Ｎｏｔ−Ａ (ＡＴＡＡＧＡＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＣＡＣＴＣＡＴＴＴＡＣＣ：配列番号２０)のペアで後半部の遺伝子断片を得た。これらを鋳型として２ｎｄ ＰＣＲを行ない、完全長のバリアント抗体遺伝子を得た。その後、抗体遺伝子をおよびＮｏｔ Ｉの制限酵素処理にて末端を粘着にしたのち、抗体産生用プラスミドに組み込んだ。各バリアントの塩基配列の確認は塩基配列確認用プライマー(ＡＣＣＡＧＡＣＡＴＡＡＴＡＧＣＴＧＡＣＡＧ：配列番号２１)を使用し、３１３０ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ABI社）を用いて推奨プロトコールに則り確認した。【００８５】
（２）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントの抗体発現確認
得られたバリアントプラスミド（Ｈ鎖）をＬ鎖のオリジナルプラスミドとともにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ (Invitrogen社) の推奨プロトコールに則り、ＣＨＯ細胞に共遺伝子導入し、４８時間後の培養上清を採取した。抗ヒトＩｇＧ抗体（０．２５ μｇ／ｗｅｌｌ）を固相化したＩｍｍｕｎｏ ｐｌａｔｅ (Maxi sorp, Nunc社)に対し、段階希釈した培養上清を室温で1時間反応させた。２次抗体として、抗ヒトイムノグロブリンＧガンマおよび抗ヒトイムノグロブリンＧラムダ（MBL社）を同じく室温で１1時間反応させた。発色剤としてＴＭＢ基質を含むＳｕｒｅ Ｂｌｕｅ (MPL社)を５０μＬ／ｍＬ添加して室温で３０分静置後、１．５Ｍリン酸を等量加え、マイクロプレートリーダー（680XR, BIO-RAD社）を用いて４５０ ｎｍの吸光波長を測定した。ガンマ鎖とラムダ鎖の吸光度から抗体の有無と定量を行なった。【００８６】
（３）ＥＬＩＳＡによるＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントのＡＤ１に対する結合能評価
５μｇ／ｍLのＡＤ１を固相化したＩｍｍｕｎｏ ｐｌａｔｅ (Poly sorp, Nunc社)に、ラムダ鎖を基準に１μg／ｍＬの濃度に調整した抗体を希釈系列で反応させた。その後、先述と同様にＥＬＩＳＡを行なった。得られたバリアントおよびＥＶ２０３８（オリジナル）の４５０ｎｍでの吸光度からバリアントのＡＤ１抗原に対する結合能を評価した。その結果、ＥＶ２０３８  ＣＤＲ−Ｈ３の１２２番目を除く１２１〜１２６番目までの残基の非保存的なアミノ酸置換がＡＤ１への結合能を著しく低下させたことから、これらの残基がＡＤ１のパラトープとして重要であることが示唆された（図２）。【００８７】
（４）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントの作製２
非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１に対する結合能が低下した５つのアミノ酸残基のうち、１２１番目,１２３番目,１２４番目，及び１２６番目の４箇所のアミノ酸残基については、むしろ特性の近似したアミノ酸への置換を試みた。使用したアミノ酸はそれぞれ５種類で、具体的には、（図３）に示したようなバリアントを作製した。尚、１２５番目のプロリンについてはオリジナル以外のすべての天然アミノ酸への置換を行なった(図４)。バリアントは先述のごとく作製した。【００８８】
（５）ＥＬＩＳＡによるＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントのＡＤ１に対する結合能評価
５ μｇ／ｍＬの-ＡＤ１を固相化したＩｍｍｕｎｏ ｐｌａｔｅ (Poly sorp, Nunc社)に、ラムダ鎖を基準に１ μｇ／ｍＬの濃度に調整した抗体を希釈系列で反応させた。その後、先述と同様にＥＬＩＳＡを行ない、バリアントのＡＤ１に対する結合能を評価した。１２１, １２３, １２４, １２６番目のアミノ酸については、保存的アミノ酸に則ったアミノ酸置換では大部分がＡＤ１に対する結合能を保持していた（図３）。しかし、１２５番目のプロリンについては他全ての天然型アミノ酸(１９種類)による置換においてもＡＤ１に対する結合能が認められることはなかった（図４）。このことから、本発明におけるＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３において、１２５番目のプロリンは当該抗体のＡＤ１結合特性に必須のアミノ酸であることが示された。【００８９】
（６）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントの作製３
非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１との結合能が低下しなかったアミノ酸残基（１１７〜１２０番目、１２２番目、１２７〜１３２番目の計１１残基）について同様の方法で保存的アミノ酸置換についても実施し、ＡＤ１における結合能評価を確認した。その結果、この領域における保存的なアミノ酸置換を持つバリアント（Ｖ１１７Ｌ, Ｖ１１７Ｉ, Ｔ１１８Ｓ, Ｔ１１８Ｋ, Ｒ１１９Ｋ, Ｒ１１９Ｔ, Ｄ１２０Ｅ, Ｄ１２０Ａ, Ｅ１２２Ｄ, Ｅ１２２Ａ, Ｄ１２７Ｅ, Ｄ１２７Ａ, Ｙ１２８Ｆ, Ｙ１２８Ｗ, Ｙ１２９Ｆ, Ｙ１２９Ｗ, Ｍ１３０Ｆ, Ｍ１３０Ｉ, Ｄ１３１Ｅ, Ｄ１３１Ａ, Ｖ１３２Ｙ, Ｖ１３２Ｓ）は非保存的アミノ酸置換時同様、ＡＤ１における結合能を保持していることが明らかになった（図５）。【００９０】
（７）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントの作製４
非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１との結合能が低下したアミノ酸残基で１２５番のプロリンを除く残基（１２１, １２３, １２４,および １２６番目の計４残基）を対象に２箇所若しくは４箇所を同時に置換したバリアントを計４種作製し（２箇所置換体：Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ａ, Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ｓ,４箇所置換体：   Ｌ１２１Ｉ/Ｗ１２３Ｙ/Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ａ, Ｌ１２１Ｉ/Ｗ１２３Ｙ/Ｉ１２４Ｖ/Ｇ１２６Ｓ）、ＡＤ１に対する結合能を評価した。その結果、これらの重複置換のバリアントは、いずれもＡＤ１に対する結合能を保持していることが明らかになった（図６）。【００９１】
（８）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３バリアントの作製５
非保存的アミノ酸置換においてＡＤ１との結合能が低下したアミノ酸残基で１２５番のプロリンを除く残基（１２１, １２３, １２４,および １２６番目の計４残基）を対象に欠失、挿入のバリアントを各1種作製し（Ｅ１２２ｄｅｌ,および Ｇ１２６＿Ｄ１２７ｉｎｓＥ）、ＡＤ１に対する結合能を評価した。その結果、Ｅ１２２ｄｅｌおよびＧ１２６＿Ｄ１２７ｉｎｓＥともにＡＤ１に対する結合能が完全に消失した。このことから、この部位（１２１〜１２６番）におけるアミノ酸残基の数（６残基）がＡＤ１への結合に重要であることが示唆された（図７）。【００９２】
これらの結果を総合するとＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列としては、下記の様なコンセンサス 配列が考えられる。
ＸｎＸｎＸｎＸｎＸ１ＸｎＸ２Ｘ３ＰＸ４ＸｎＸｎＸｎＸｎＸｎＸｎ（配列番号２２）
但し、Ｘｎ = 全ての天然型アミノ酸
Ｘ１ = Ｌ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡ
Ｘ２ = Ｗ、ＹまたはＦ
Ｘ３ = Ｉ、Ｖ、ＬまたはＭ
Ｘ４ = Ｇ、Ｓ、ＡまたはＴ【００９３】
（９）ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ２バリアントの作製
ＣＤＲ−Ｈ３以外の保存的な置換がＡＤ１に対する結合能に影響するか否かを調べるために、ＥＶ２０３８のＣＤＲ−Ｈ２に位置するＮ７９をＮ７９Ｑにしたバリアントを他のバリアントと同様の方法で作製し、ＡＤ１に対する結合能を確認した。結果から、ＣＤＲ−Ｈ２に位置するＮ７９をＮ７９Ｑにしたバリアントにおいても、ＡＤ１に対する結合能は失われないことが証明された（図８）。【００９４】
尚、本項で作製したバリアントのＨ鎖のアミノ酸配列（シグナル配列も含む）の配列番号の一覧を表４に示す。
【表４】
2010114106.tif 000005
【００９５】
実施例８．抗ＨＣＭＶ ＡＤ１抗体のエピトープマッピング
これらＡＤ１抗体のｇＢ糖タンパク質上の結合部位を確認するために、ＨＣＭＶｇＢのＡＤ１がクローニングされた発現ベクターにＰＣＲ法で欠失変異を導入し、ＡＤ１の様々な部分が欠失したタンパク質を発現する大腸菌変異体シリーズを作製した。これらの変異体大腸菌を培養、発現誘導した後、セルライセートを抗原として標準的なウェスタンブロット分析を行った。対照としては、ＥＶ２０３８及び置換部位の異なるバリアントでＡＤ１に対する結合能を有するものを代表として２種選択した。選択したバリアントの１つは、ＣＤＲ−Ｈ３のループ構造（Shirai,H.,et al., FEBS Letters, 1996；399：p1-8）の上部に位置する１２４番目のイソロイシン部分（非保存的アミノ酸置換でＡＤ１結合活性が認められなかった部位の１つ）の置換体で、その部位の保存的アミノ酸置換体Ｉ１２４Ｖである。他は、ＣＤＲ−Ｈ３のループ構造の根元部分に位置する１３２番目のバリンの非保存的アミノ酸置換体Ｖ１３２Ｋである。
ＥＶ２０３８、Ｉ１２４Ｖ、およびＶ１３２Ｋは、いずれもクローン番号＃０、＃１２、＃１３、＃１４、＃１５、および＃１９に結合し、ＥＶ２０３８およびそのバリアントは、いずれもアミノ酸残基５４９〜５８０（ＳＣＶＴＩＮＱＴＳＶＫＶＬＲＤＭＮＶＫＥＳＰＧＲＣＹＳＲＰＶＶＩ:配列番号２３）、および５９６〜６４０（ＥＤＮＥＩＬＬＧＮＨＲＴＥＥＣＱＬＰＳＬＫＩＦＩＡＧＮＳＡＹＥＹＶＤＹＬＦＫＲＭＩＤＬＳＳ:配列番号２４）の間にエピトープが存在することが判明した（図９および１０）。尚、抗原とするＨＣＭＶ ＡＤ１６９株のｇＢのアミノ酸配列は、アクセッション番号Ｐ０６４７３の配列を参照し開始コドンのメチオニンから順に番号をつけて表記した。【００９６】
更に、ＥＶ２０３８については、ペプチドアレイで更に詳細なエピトープを決定した。アミノ酸残基５４８〜６４１の範囲で１２残基のペプチドを４残基ずつずらして２６種のペプチドを合成した（表５）。各ペプチドはＣ末端を誘導体化セルロース膜の表面に結合し、３．７ｍｍ×３．７ｍｍの個別スポットとして固相合成した（SPOTs法、Sigma Genosys)。ＥＶ２０３８が結合するペプチドの決定は標準的なドットブロット分析で行った。ＥＶ２０３８はペプチド番号３、７、８、２１、および２２に結合し（図１０）、エピトープはアミノ酸残基５４９〜５６０  (ＳＣＶＴＩＮＱＴＳＶＫＶ:配列番号２５)、アミノ酸残基５６９〜５７６  (ＳＰＧＲＣＹＳＲ：配列番号２６)、アミノ酸残基６２５〜６３２  (ＹＥＹＶＤＹＬＦ：配列番号２７)と決定した。
ところで、ＡＤ１領域を認識する抗体としては、ＩＴＣ５２等でアミノ酸残基５７０〜５７９及びアミノ酸残基６０６〜６１９の不連続エピトープを認識すること(WO93／21952  およびJ.Virol, 67; p703-710(1993))が報告されているが、少なくともアミノ酸残基５６９〜５７６ (ＳＰＧＲＣＹＳＲ：配列番号２６)を除いた２つのエピトープ配列部分は、過去のＡＤ１抗体における報告では認められず、ＥＶ２０３８はこれまでに報告されているＡＤ１抗体とは異なる不連続配列を認識する抗体であることが示された（図１０）。【００９７】
ところで、ＡＤ１領域を認識する抗体としては、ＩＴＣ５２等でアミノ酸残基５７０〜５７９及びアミノ酸残基６０６〜６１９の不連続エピトープを認識すること(WO93／21952  およびJ.Virol, 67; p703-710(1993))が報告されているが、少なくともアミノ酸残基５６９〜５７６ (ＳＰＧＲＣＹＳＲ：配列番号２６)を除いた２つのエピトープ配列部分は、過去のＡＤ１抗体における報告では認められず、ＥＶ２０３８はこれまでに報告されているＡＤ１抗体とは異なる不連続配列を認識する抗体であることが示された（図１０）。
【表５】
2010114106.tif 000006
【００９８】
実施例９．中和活性評価
（１）免疫染色法
抗ＨＣＭＶ抗体（ＥＶ２０３８）の有効性評価として中和活性を確認した。中和活性はヒト胎児肺由来正常繊維芽細胞（ＭＲＣ―５：理研BRC No.RCB0211）に対するＨＣＭＶ（ＡＤ１６９株）感染の抗体による阻止率で評価した。方法はＡｂａｉら（Journal of Immunological Methods 322 2007 82-93）に倣った。要約すると以下の通りである。ウイルス液と精製抗体に補体（５％）を加えて１時間おき、その後、ＭＲＣ−５細胞に接種（３７℃、１時間）した。細胞は２回洗浄し、２０時間培養した後、ＨＣＭＶの前早期タンパク質であるＩＥ１を免疫蛍光染色により検出した。ＨＣＭＶ感染細胞の計測は画像解析ソフトＩｍａｇｅ Ｊ  （http://rsbweb.nih.gov/ij/）で行なった。【００９９】
図１１は、抗ＨＣＭＶ抗体の中和活性を評価した結果である。陰性コントロールとしては、ＨＣＭＶに特異性を有しないヒトモノクローナル抗体(ｈＩｇＧ)を、陽性コントロールはＨＣＭＶの中和エピトープの一つであるｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｈ (ｇＨ) に結合するマウスモノクローナル抗体（clone name ＨＣＭＶ１６, AbD serotec : 2470-5437）を使用した。それぞれの抗体のＨＣＭＶ感染阻止率を、同濃度のｈＩｇＧを加えた場合の感染阻止率に対するパーセントで表示した。補体を加えた場合の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）はＥＶ２０３８が０．５８μｇ／ｍＬで、ＥＶ２００１より低濃度で有効な中和活性を有することを確認した。また、補体を加えない場合ＥＶ２００１では有効な中和活性を確認できないのに対して、ＥＶ２０３８のＩＣ５０は０．５７μｇ／ｍＬと、補体存在下と同等の中和活性を有することを確認した（表６）。
【表６】
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【０１００】
（２）プラーク法
前記評価で高い中和活性を示したＥＶ２０３８について、更に、プラーク法（Masuho, Y. et al., J. Gen. Virol., 1987; 68: p1457-1461）での感染阻止活性を評価した。ウイルス株としてはＨＣＭＶ実験室株として代表されるＡＤ１６９、Ｔｏｗｎｅ、Ｄａｖｉｓ、Ｍｅｒｌｉｎ株およびＨＣＭＶ臨床分離株であるＴ-１３７,ＭＤＵ-１を使用した。方法を要約すると以下の通りである。５０〜１００ＰＦＵのウイルス液と段階希釈した所定の濃度の精製抗体を混和し、３７℃、１時間インキュベーションした後、４８ウェルマイクロプレートで単層化した繊維芽細胞（ＭＲＣ-５）または網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ-１９）に接種した。接種後、３７℃、２時間インキュベーションした後、培養上清を除去し、２回洗浄した後、２％ ＦＣＳを含む通常培地で３７℃で培養した。ウイルス感染細胞の死による明瞭なプラークの形成が確認されるまで、実験室株で５〜６日、臨床分離株で１０〜１２日培養した後、５％ホルマリンを加えて細胞を固定し、０．０２５％クリスタルバイオレットで染色した。染色後、ウェルあたりのプラーク数を計数し、抗ＨＣＭＶ抗体の感染阻止率を算出した。
表７は、プラーク法によりＥＶ２０３８の中和活性を評価した結果である。陰性コントロールにはＨＣＭＶに特異性を有しないヒトモノクローナル抗体(ｈＩｇＧ)を、陽性コントロールには米国において腎移植に伴うＨＣＭＶ感染症の発症予防適応で承認されている抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン製剤ＣｙｔｏＧａｍ（CSL Behring, CytoGam Cytomegalovirus immune globulin intravenous, Prescribing information. (Revised July 2008)）を使用した。
ＨＣＭＶは繊維芽細胞に対する感染様式と上皮細胞および内皮細胞に対する感染様式で侵入機構が異なることが報告されており（Sinzger, C. et al., Curr Top Microbiol Immunol., 2008; 325: p63-83）、ＡＤ１６９株およびＴｏｗｎｅ 株に代表される実験室株の多くは繊維芽細胞で複数回の継代を経たことで、上皮細胞および内皮細胞への感染性を失っているとされている（Dai Wang, et al., J. Virol., 2005; 79: p10330-10338）。一方で、本来ＨＣＭＶは体内において広汎な組織および細胞種に感染性を有しており（Sinzger, C. et al., Curr Top Microbiol Immunol., 2008; 325: p63-83）、抗ＨＣＭＶ抗体が臨床効果を示す上では、繊維芽細胞型および上皮細胞・内皮細胞型のいずれのタイプが感染宿主細胞となっても、有効な中和活性を有することが重要であると考えられる。
本発明の抗ＨＣＭＶ抗体（ＥＶ２０３８）は、実験室株の繊維芽細胞への感染においてＩＣ５０で０．０１２- ０．０３７μｇ／ｍＬを示すことを確認した。また、上皮細胞・内皮細胞への感染性を保存する臨床分離株（ＭＤＵ-１）の繊維芽細胞への感染においてはＩＣ５０が０．０４４μｇ／ｍＬであるのに対して、上皮細胞への感染においても０．０４０μｇ／ｍＬと、繊維芽細胞型および上皮細胞・内皮細胞型のいずれの細胞種においても同等の優れた中和活性を有することを確認した。また、ＥＶ２０３８は、市販されている抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン製剤ＣｙｔｏＧａｍに比べてもＡＤ１６９株に対して約２０００倍も高活性であり、かつ臨床開発が行われた実績があるＣ２３に対しても文献値（Masuho, Y. et al., J. Gen. Virol., 1987; 68: p1457-1461）より約２０倍高活性であった。
【表７】
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【０１０１】
実施例１０．ＥＶ２０３８バリアント抗体の中和活性評価
ＥＶ２０３８のバリアントの中から置換部位の異なる２種類のバリアントを選択し中和活性を確認した。１つは、非保存的アミノ酸置換はでＡＤ１結合活性が認められなかった１２４番目のイソロイシン部分（ＣＤＲ−Ｈ３のループ構造の上部部分）のアミノ酸の置換体で、その部位の保存的アミノ酸置換体Ｉ１２４Ｖを用いた。他は、非保存的アミノ酸置換においてもオリジナルと同等のＡＤ１結合活性が認められた１３２番目（ＣＤＲ−Ｈ３のループ構造の根元部分）の非保存的アミノ酸置換体Ｖ１３２Ｋである。方法は前述のＡｂａｉら（Journal of Immunological Methods 322 2007 82-93）に倣った。  陰性コントロールとしてはＨＣＭＶに特異性のないヒトモノクローナル抗体(ｈＩｇＧ)を、陽性コントロールとしてはＣＭＶの中和エピトープの一つであるｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｈ (ｇＨ) に結合するマウスモノクローナル抗体（clone name ＨＣＭＶ１６, AbD serotec : 2470-5437）を使用した。それぞれの抗体のＨＣＭＶ感染阻止率を、同濃度のｈＩｇＧを加えた場合の感染阻止率に対するパーセントで求めた。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）はＩ１２４Ｖが０．４５μｇ／ｍＬ、Ｖ１３２Ｋが１．２０μｇ／ｍＬと、いずれもＥＶ２０３８とほぼ同等の活性が認められた。【０１０２】
実施例１１．細胞間感染阻止能の評価
さらに、ＥＶ２０３８の有効性評価の一つとして、ＨＣＭＶに感染したヒト胎児肺由来正常線維芽細胞(ＭＲＣ-５)を用いて、ＥＶ２０３８の細胞間感染阻止活性について評価した。評価方法はNavarroら(Virology. 1993; 197: p143-158)の方法に準じた。具体的には、ＨＣＭＶ（ＡＤ１６９) を感染させて２４時間経過したＭＲＣ−５を用い、抗体を１０ mｇ/ｍＬ（約６７ｎＭ）からの４倍希釈系列で加えた。細胞は感染６日後に固定し、感染早期発現タンパク質であるＩＥ１を免疫染色により検出した。ＨＣＭＶ感染細胞の計測は画像解析ソフトＩｍａｇｅＪで行なった。その結果、抗ＡＤ１抗体であるＥＶ２０３８を感染後の細胞に添加することによって、ウイルスの細胞間感染を顕著に阻害することが明らかとなった（表８）。
尚、表中  (1)＋＋＋は、１００−７５％の阻害、(2)＋＋は、７５-５０％の阻害、(3)＋は、５０-２５％の阻害、(4)±は、２５−０％の阻害を示し、(5)−は、感染拡大阻害効果が認められなかったことを意味する。【０１０３】
Ｎａｖａｒｒｏら(Virology. 1993; 197: p143-158)の報告では、最も高活性の抗体（ＣＨ１７７−３，およびＣＨ２４４−４など）で１０ mｇ/ｍＬの濃度で１００−７５％の阻害を示す例が示されているたが、ＥＶ２０３８では、１０〜０．６３μｇ／ｍＬの濃度範囲において１００−７５％の細胞感染阻害が認められ、更に０．１６μｇ／ｍＬ（１．０７ｎＭ）でも７５−５０％の細胞間感染阻害効果が認められた。
【表８】
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【０１０４】
以上の性質より、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、免疫不全患者における間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの病気や、新生児や乳児期においてＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、単核症などの予防乃至治療薬として、新たな切り口をもたらすものであると考えられる。【０１０５】
上述のとおり、本発明を特定の態様について特記したが、これらの態様はもっぱら説明上のものであって制約的なものではない。本発明の範囲は、特許請求の範囲の要件内のあらゆる変化、変形をなし得るものであり、これらは本発明の技術的範囲内に属するものである。
【産業上の利用可能性】
【０１０６】
本発明の抗HCMV抗体、およびその抗体を含む医薬組成物は、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症、（ｃ）前記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎や聴覚障害、（ｅ）新生児や乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、単核症などの予防乃至治療薬としても期待できる。
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図１】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成22年12月27日(2010.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（削除）
【請求項２】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に特異的に結合し、その生物活性を中和し得るモノクローナル抗体であって、
（ｉ）重鎖の可変領域が、
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列、および配列番号１３のアミノ酸配列中１〜４個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列、および配列番号１４のアミノ酸配列中１〜４個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列、および配列番号２２で示されるアミノ酸配列の中で配列番号１５と比較し１〜４個のアミノ酸残基の置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）軽鎖の可変領域が、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列、および配列番号１６のアミノ酸配列中１〜４個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列、および配列番号１７のアミノ酸配列中１〜４個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列、および配列番号１８のアミノ酸配列中１〜４個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項３】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）重鎖の可変領域が、
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列、および配列番号１３のアミノ酸配列中１〜２個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列、および配列番号１４のアミノ酸配列中１〜２個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列、および配列番号２２で示されるアミノ酸配列の中で配列番号１５と比較し１〜２個のアミノ酸残基の置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）軽鎖の可変領域が、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列、および配列番号１６のアミノ酸配列中１〜２個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列、および配列番号１７のアミノ酸配列中１〜２個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列、および配列番号１８のアミノ酸配列中１〜２個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項４】
請求項３に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）重鎖の可変領域が、
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列、および配列番号１４のアミノ酸配列中１個のアミノ酸残基の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列、および配列番号２２で示されるアミノ酸配列の中で配列番号１５と比較し１〜２個のアミノ酸残基の置換を有するアミノ酸配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）軽鎖の可変領域が、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項５】
請求項４に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、または配列番号２８−３１、３３、３８−４７、４９、５０、５４，５５，５７，６０，６１，６３，および８２−１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列中に含まれる重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含有する抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項６】
請求項５に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項７】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列、または配列番号１０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、ならびに
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列、または配列番号１２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項８】
請求項７に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、および
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項９】
請求項２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号２もしくは６のアミノ酸配列、または配列番号２もしくは６のアミノ酸配列と９８％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）、ならびに
（ｂ）配列番号４もしくは８のアミノ酸配列、または配列番号４もしくは８のアミノ酸配列と９８％以上の同一性を有するアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
請求項９に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号２または６のアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）、および
（ｂ）配列番号４または８のアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
前記抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項４〜１０のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（λ）である、請求項４〜１１のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
ＨＣＭＶの実験室株（ＡＤ１６９）に対するヒト繊維芽細胞下での５０％プラーク形成阻止濃度が０．０５μｇ／ｍＬ（約０．３ｎＭ）以下である請求項４〜１２のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
ヒト繊維芽細胞（ＭＲＣ−５）にあらかじめＨＣＭＶの実験室株（ＡＤ１６９）を感染させた系で、０．２μｇ／ｍＬ（約１．３ｎＭ）以下で５０％以上の細胞間感染阻止能を有する請求項４〜１３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
請求項４〜１４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片および薬学的に許容可能な担体を含む、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）が関与する疾患を予防または治療するための医薬組成物。
【請求項１６】
ＨＣＭＶが関与する疾患が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、もしくは脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる先天性ＣＭＶ感染症、（ｃ）前記先天性ＣＭＶ感染症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記先天性ＣＭＶ感染症により死亡しない場合における低出生体重、肝脾腫、黄疸、血小板減少性紫斑病、小頭症、精神発育障害、知能発達遅延、脈絡網膜炎、もしくは聴覚障害、または（ｅ）新生児もしくは乳児期におけるＨＣＭＶ感染により発症する肝機能異常、間質性肺炎、もしくは単核症である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＨＣＭＶｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に特異的に結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸であって、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１３〜１８、２８−３１、３３、３８−４７、４９、５０、５４，５５，５７，６０，６１，６３，８２−１０７、および１１０からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸、および該核酸と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸から選択される単離された核酸。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を組込んだベクター。
【請求項１９】
請求項１８に記載のベクターが導入された宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１９に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、請求項４〜１４のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片の作製方法。
【請求項２１】
請求項７に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、または配列番号２８−３１、３３、３８−４７、４９、５０、５４，５５，５７，６０，６１，６３，８２−１０７、および１１０からなる群から選択されるアミノ酸配列中に含まれる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のアミノ酸配列、ならびに
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
請求項９に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号２もしくは６のアミノ酸配列、または配列番号２８−３１、３３、３８−４７、４９、５０、５４，５５，５７，６０，６１，６３，８２−１０７、１１０、もしくはそれらのシグナル配列を含まないアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）、および
（ｂ）配列番号４または８のアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項２３】
請求項４〜１４、２１、または２２のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＨＣＭＶ−ｇＢ糖タンパク質の５４９〜５８０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２３）および５９６〜６４０位の連続するアミノ酸残基からなるアミノ酸配列（配列番号２４）の領域に存在する２以上の不連続配列からなるエピトープに特異的に結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項２４】
請求項４〜１４、２１、または２２のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ＨＣＭＶ−ｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域にある配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、および配列番号２７のアミノ酸配列からなる不連続配列をエピトープとして認識する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【手続補正書】
【提出日】平成24年2月22日(2012.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）ｇＢ糖タンパク質のＡＤ１領域に特異的に結合する、モノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ｉ）
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列、ならびに
（ｉｉ）
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列、および、
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項２】
請求項１に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、および
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖（Ｈ鎖）、および
（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖（Ｌ鎖）
を含有する、抗体もしくはその抗原結合性断片。
【請求項４】
前記抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（λ）である、請求項１〜３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項６】
配列番号１０のアミノ酸をコードする核酸及び配列番号１２のアミノ酸配列をコードする核酸を組込んだベクター。
【請求項７】
請求項６に記載のベクターが導入された宿主細胞。
【請求項８】
配列番号１０のアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター及び配列番号１２のアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターが導入された宿主細胞。
【請求項９】
請求項７又は請求項８に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、請求項１〜４のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片の作製方法。
【国際調査報告】
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