(57)【要約】  メタボリック症候群又はその構成疾患の評価に有用な新規指標（マーカー）を提供することを課題とする。血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）が与える値を指標として、メタボリック症候群又はその構成疾患の罹患状態或いは発症リスクを評価する。
2010103585.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）：
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
が与える値を指標として、メタボリック症候群又はその構成疾患である糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症の罹患状態を評価する方法。
【請求項２】
以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）：
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
が与える値を指標として、メタボリック症候群又はその構成疾患である糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症の発症リスクを評価する方法。
【請求項３】
式中のＣが、以下の（１）〜（３）のいずれかである、［１］又は［２］に記載の方法、
（１）正又は負の整数、
（２）１、
（３）４０５。
【請求項４】
以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）：
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
からなる、メタボリック症候群又はその構成疾患である糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症のリスクマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はメタボリック症候群又はその構成疾患（糖尿病・高血圧症・高脂血症・動脈硬化症）の罹患状態又は発症リスクを評価する方法に関する。本出願は、２００９年３月８日に出願された日本国特許出願第２００９−５４３１４号に基づく優先権を主張するものであり、当該特許出願の全内容は参照により援用される。
【背景技術】
【０００２】
肥満、すなわち内臓脂肪の蓄積は、高血圧、高脂血症、糖尿病などを介してメタボリック症候群の基盤となり、将来的な心血管疾患を増加させる（非特許文献１）。メタボリック症候群は単なるインスリン抵抗性のみならず、酸化ストレス（非特許文献２）や脂肪組織低酸素状態（非特許文献３）など、肥満に関連した病態を包括したものであり、脂質代謝異常や動脈硬化の誘因となっている。【０００３】
アディポネクチンは脂肪細胞より分泌され、その血中濃度は肥満により減少し、肥満改善により増加する為、メタボリック症候群の指標とされている。これまで様々な研究によって、メタボリック症候群の状態でアディポネクチン濃度が低下する事が示されており（非特許文献４）、また低アディポネクチン血症と心血管疾患との関連も報告されている（非特許文献５）。【０００４】
一方、インスリン抵抗性の指標として、HOMA-IR（Homeostasis model assessment-Insulin Resistance）が用いられている。HOMA-IRは、その基礎となるインスリン抵抗性の有無を簡便に調べるために考え出された指標の1つであり（非特許文献６）、空腹時インスリン値（μU/ml）×空腹時血糖値（mg/dl）／405で表わされる。HOMA-IRはグルコースクランプ法で測定したインスリン抵抗性の値と良好な相関を示すとされるが、高血糖や非肥満者では必ずしも良好な指標とはなり得ない（非特許文献７）。尚、空腹時インスリン値と空腹時血糖値及びアディポネクチン値を利用してインスリン抵抗性を評価する方法が提案されている（特許文献１）。当該方法によれば従来のグルコースクランプ法と相関性の高い評価結果が得られるとされる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−９８１００号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Gami, A.S., et al., Metabolic Syndrome and Risk of Incident Cardiovascular Events and Death: A Systematic Review and Meta-Analysis of Longitudinal Studies. Journal of the American College of Cardiology, 2007. 49(4): p. 403-414.
【非特許文献２】Fujita, K., et al., Systemic Oxidative Stress is Associated With Visceral Fat Accumulation and the Metabolic Syndrome. Circulation Journal, 2006. 70(11): p. 1437-1442.
【非特許文献３】Hosogai, N., et al., Adipose Tissue Hypoxia in Obesity and Its Impact on Adipocytokine Dysregulation. Diabetes, 2007. 56(4): p. 901-911.
【非特許文献４】Wang, J., et al., Adiponectin and Metabolic Syndrome in Middle-aged and Elderly Chinese. Obesity, 2007. 16(1): p. 172-178.
【非特許文献５】Kumada, M., et al., Association of Hypoadiponectinemia With Coronary Artery Disease in Men. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2003. 23(1): p. 85-89.
【非特許文献６】Matthews, D.R., et al., Homeostasis model assessment: insulin resistance and β-cell function from fasting plasma glucose and insulin concentrations in man. Diabetologia, 1985. 28(7): p. 412-419.
【非特許文献７】Hamaguchi T, M.J., Namba M., Homeostasis model assessment as a clinical index of insulin resistance. Nippon Rinsho., 2006. 64(Suppl 9): p. 5.
【非特許文献８】Alberti, K.G.M.M., P. Zimmet, and J. Shaw, Metabolic syndrome ‐ a new world-wide definition. A Consensus Statement from the International Diabetes Federation. Diabetic Medicine, 2006. 23(5): p. 469-480.
【非特許文献９】Oka R, Reassessment of the cutoff values of waist circumference and visceral fat area for identifying Japanese subjects at risk for the metabolic syndrome. Diabetes Research and Clinical Practice. 2008;79(3):474-481.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
メタボリック症候群を簡便且つ精度よく評価する新たな指標を提供することが切望されている。また、メタボリック症候群を将来発症する危険性（発症リスク）を評価することへのニーズも高い。そこで本発明の課題は、メタボリック症候群又はその構成疾患の罹患状態或いは発症リスクの評価に有用な新規指標（マーカー）を見出し、これらの要望に応えることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは血中アディポネクチン濃度とHOMA-IRに注目し、これらの指標とメタボリック症候群との関係について大規模集団を用いて解析した。その結果、血中アディポネクチン濃度をHOMA-IRで除した値が、血中アディポネクチン濃度とHOMA-IRの両者の特性を補完し合い、総合的にメタボリック症候群の罹患状態を評価できることが判明した。また、当該値が、メタボリック症候群発症の危険性を予測する上で有用であることが示された。これらの知見に基づき、以下の発明が提供される。
［１］以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）：
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
が与える値を指標として、メタボリック症候群又はその構成疾患である糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症の罹患状態を評価する方法。
［２］以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）：
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
が与える値を指標として、メタボリック症候群又はその構成疾患である糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症の発症リスクを評価する方法。
［３］式中のＣが、以下の（１）〜（３）のいずれかである、［１］又は［２］に記載の方法、
（１）正又は負の整数、
（２）１、
（３）４０５。
［４］以下の計算式（式中の／は除算を、Ｃは定数をそれぞれ表す）：
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
からなる、メタボリック症候群又はその構成疾患である糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症のリスクマーカー。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】大規模解析の被験者の背景と各検査値を示す表。平均値±標準偏差又は％で示した。＊傾斜分布のため、相乗平均を用いた。統計処理はスチューデントのｔ検定による。
【図２】各検査値と各指標（血中アディポネクチン濃度、血中アディポネクチン濃度／HOMA-IR）との相関を示す表。ピアソンの相関係数が示される。
【図３】血中アディポネクチン濃度別四分位によるメタボリック症候群罹患率を示すグラフ（左は男性、右は女性）。グラフ中のｎは該当する被験者数を表す。4×2カイ二乗検定により評価した。
【図４】血中アディポネクチン濃度／HOMA-IR  四分位によるメタボリック症候群罹患率を示すグラフ（左は男性、右は女性）。グラフ中のｎは該当する被験者数を表す。4×2カイ二乗検定により評価した。
【図５】メタボリック症候群の危険因子数によるアディポネクチンとアディポネクチン/HOMA-IRの相乗平均値。グラフ中のｎは該当する被験者数を表す。エラーバーは標準誤差を示す。一元配置分散分析(ANOVA)により評価した。
【図６】アディポネクチンとアディポネクチン/HOMA-IRによるメタボリック症候群の罹患予測の比較（左は男性、右は女性）。ROC曲線（受診者動作特性曲線）の曲線下面積（AUC）により評価した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明はメタボリック症候群又はその構成疾患の評価に有用な新たな指標（マーカー）を提供する。「メタボリック症候群」とは、肥満・内臓脂肪の蓄積を基盤としてインスリン抵抗性、動脈硬化惹起性リポ蛋白異常、高血圧を合併し、心血管病に罹るリスクが高くなった状態をいう。メタボリック症候群の診断基準を以下に示す。尚、特に言及しない限り、本明細書では国際糖尿病連合（IDF）基準を優先的に適用する。その理由は、日本内科学会等８学会による日本基準に関してはその腹囲の決定に議論があるからである（Oka R, Reassessment of the cutoff values of waist circumference and visceral fat area for identifying Japanese subjects at risk for the metabolic syndrome. Diabetes Research and Clinical Practice. 2008;79(3):474-481.を参照)。
（１）日本内科学会等８学会による日本基準（日本内科学金雑誌 第94巻 第4号・平成17年4月10日を参照）
以下の(a)に加え、(b)〜(d)の中の二つ以上を満たす。
(a)腹囲：  ≧85cm（男性）、≧90cm（女性）
(b)中性脂肪：  ≧150mg/dl  かつ／又はHDL-C：  ＜40mg/dl
(c)血圧：  ≧130/85mmhg
(d)空腹時血糖：  ≧110mg/dl
【００１１】
（２）国際糖尿病連合（IDF）基準（非特許文献５を参照）
以下の(a)に加え、(b)〜(e)の中の二つ以上を満たす。
(a)腹囲：  ≧90cm（男性）、≧80cm（女性）
(b)中性脂肪：  ≧150mg/dl
(c)空腹時血糖：  ≧100mg/dl
(d)HDL-C：  ＜40mg/dl（男性）、＜50mg/dl（女性）
(e)血圧：  ≧130/85mmhg
【００１２】
「その構成疾患」とは、糖尿病、高血圧症、高脂血症若しくは動脈硬化症を指す。動脈硬化症は、脳動脈硬化症及び冠動脈硬化症を含む。
【００１３】
本発明が提供する指標（以下、「本発明の指標」とも呼ぶ）は、空腹時インスリン値と空腹時血糖値を乗じた値で血中アディポネクチン濃度を除するものであり、次の計算式（以下、「本発明の数式」とも呼ぶ）で表される。尚、式中の／は除算を表す。
血中アディポネクチン濃度／（空腹時インスリン値×空腹時血糖値）×Ｃ
【００１４】
上記の式においてＣは定数である。定数Ｃは特に限定されないが、計算を容易にするため、好ましくは定数Ｃを正又は負の整数とする。この場合の定数Ｃの具体例は１である。また、定数Ｃを４０５に設定することができる。この場合、上記式はインスリン抵抗性の指標であるHOMA-IRを用いて次のように表すことができる。
血中アディポネクチン濃度／HOMA-IR
【００１５】
血中アディポネクチン濃度、空腹時インスリン値及び空腹時血糖値の単位は特に限定されない。例えば、血中アディポネクチン濃度の単位をμg/mLとし、空腹時インスリン値の単位をμU/mlとし、空腹時血糖値の単位をmg/dlとする。
【００１６】
本発明の第１の局面は、本発明の数式が与える値を指標としてメタボリック症候群又はその構成疾患の罹患状態を評価する方法を提供する。「メタボリック症候群又はその構成疾患の罹患状態を評価する」とは、これらの疾患に罹患している可能性ないし確率を把握することをいう。従って、本発明の方法を実施すると、例えば、対象疾患に罹患している可能性が低い、高い、中程度等の評価・判定結果が得られる。当該結果は、診察を受ける契機になることは勿論のこと、生活習慣を見直す機会にもなり、非常に有用である。尚、ここでの評価・判定は、その判定基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
【００１７】
本発明の指標は、メタボリック症候群のみならず、その構成疾患の罹患状態の評価にも有用であるが、本発明の好ましい一態様では、本発明の指標をメタボリック症候群の罹患状態を総合的に評価することに用いる。即ち、この態様においては、メタボリック症候群を対象疾患とする。
【００１８】
後述の実施例の欄に示した解析結果から明らかな通り、本発明の指標の値が低いとメタボリック症候群又はその構成疾患に罹患している可能性は高くなり、本発明の指標の値が高いと同可能性は低くなる。従って、被検者について本発明の指標の値を求めた結果、低値であれば罹患の可能性は高いと判定することができ、これとは逆に高値を示すようであれば罹患の可能性は低いと判定することができる。より正確且つ有益な判定を行うため、罹患の可能性が異なる複数のグループを設定し、グループ分毎、本発明の指標の値の範囲を関連付けておくとよい。以下に一例を示す。
【００１９】
グループ１（罹患の可能性は高い）：指標の値≦ａ
グループ２（罹患の可能性は中程度）：ａ＜指標の値＜ｂ
グループ３（罹患の可能性は低い）：ｂ≦指標の値
【００２０】
グループを分ける境界値（上記の例ではａとｂ）は、後述の実施例に示した解析のごとく、メタボリック症候群を罹患する者を含む多数の被験者を対象とした大規模解析の結果より導き出すことができる。後述の実施例の結果より導き出した境界値の一例（４つのグループに区分けした例）を示すと次の通りである。尚、この例では、指標として「血中アディポネクチン濃度／HOMA-IR」を採用している。
（男性の場合）
グループ１（罹患の可能性が非常に高い）：指標の値＜約9
グループ２（罹患の可能性が高い）：約9≦指標の値＜約13
グループ３（罹患の可能性が低い）：約13≦指標の値＜約18
グループ４（罹患の可能性が非常に低い）：約18≦指標の値
【００２１】
（女性の場合）
グループ１（罹患の可能性が非常に高い）：指標の値＜約7
グループ２（罹患の可能性が高い）：約7≦指標の値＜約13
グループ３（罹患の可能性が低い）：約13≦指標の値＜約27
グループ４（罹患の可能性が非常に低い）：約27≦指標の値
【００２２】
本発明の第２の局面では、本発明の数式が与える値を指標としてメタボリック症候群又はその構成疾患の発症リスクを評価する方法が提供される。「メタボリック症候群又はその構成疾患の発症リスクを評価する」とは、これらの疾患を将来発症する危険性（易罹患性）を把握することをいう。本発明の方法によればこれらの疾患の発症リスクが判定されることになり、将来の発症に備えることができる。即ち、予防医学的見地から重要且つ有意義な示唆が与えられる。尚、ここでの評価・判定は、その判定基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
【００２３】
後述の実施例の欄に示した解析結果が示唆するように、本発明の指標の値が低いとメタボリック症候群又はその構成疾患の発症リスクは高くなり、本発明の指標の値が高いと同発症リスクは低くなる。従って、被検者について本発明の指標の値を求めた結果、低値であれば発症リスクは高いと判定することができ、これとは逆に高値を示すようであれば発症リスクは低いと判定することができる。第１の局面の場合と同様に、より正確且つ有益な判定を行うため、発症リスクの異なる複数のグループを設定しておき、グループ分毎、本発明の指標の値の範囲を関連付けておくとよい。
【００２４】
本発明の指標の値を経時的に（好ましくは定期的に）求め、その変動を調べるとよい。低い値で推移するようであれば、将来、発症する可能性（即ち発症リスク）が高いと判定することができる。これとは逆に高い値で推移するようであれば、通常、発症リスクは低いとの判定結果となる。一方、値の低下が認められたときには、発症リスクが高まったと考えることができ、この場合には発症リスクが高いとの判定結果に加えて、生活習慣の改善を促すことが可能となる。この例からも明らかなとおり、本発明の指標の値を経時的に調べ、その変動を把握することは、生活習慣を見直しその改善を図る契機を与え得るものであり、極めて有益といえる。
【００２５】
尚、メタボリック症候群又はその構成疾患に罹患している可能性（第１の局面）又は、将来的な発症リスク（第２の局面）の片方に的を絞って評価するのではなく、総合的な評価、即ちメタボリック症候群又はその構成疾患に対する危険度を評価することも可能である。
【００２６】
本発明の方法を実施する際の検体としては全血、血漿又は血清を用いる。好ましくは血漿又は血清を用いる。血漿や血清の調製は常法に従えばよい。尚、本明細書では、血液検体中のアディポネクチン濃度のことを「血中アディポネクチン濃度」という。用語「血中アディポネクチン濃度」は、用語「全血中アディポネクチン濃度」、用語「血漿アディポネクチン濃度」及び用語「血清アディポネクチン濃度」を包括する表現として使用される。
【００２７】
血中アディポネクチン濃度は、これに限定されるものではないが、好ましくは免疫学的手法を利用して測定する。免疫学的手法によれば迅速に且つ感度よくアディポネクチン濃度を測定できる。また、操作も簡便である。免疫学的手法によるアディポネクチン濃度の測定ではアディポネクチンに特異的結合性を有する物質が使用される。当該物質としては通常は抗アディポネクチン抗体が使用されるが、アディポネクチンに特異的結合性を有し、その結合量を測定可能な物質であれば抗アディポネクチン抗体に限らず使用することができる。
【００２８】
免疫学的手法により血中アディポネクチン濃度を測定する方法として、現在はELISA法（酵素免疫測定法：Enzyme −Linked Immuno Sorbent Assay）が主に用いられている。他にRIA法（放射性免疫測定法 Radio Immuno Assay）も使用されている。また、ラテックス凝集法を原理とするヒトアディポネクチン測定キット（例えば、Latex turbidometric immunoassay（Otsuka Pharmaceutical））も普及してきており、このようなキットを利用してアディネクチン濃度を測定してもよい。
【００２９】
空腹時インスリン値及び空腹時血糖値の測定は常法で行えばよい。空腹時インスリン値の測定法の例としてEIA法（酵素免疫測定法：Enzyme Immuno Assay）、IRMA法（免疫放射定量法：Immuno Radio Metric Assay）を挙げることができる。他方、空腹時血糖値の測定法としてヘキソナーゼ・G-6-PDH法、電極法、グルコースデヒドロゲナーゼ法を例示することができる。
【００３０】
本発明の適用範囲は日本人に限られない。即ち、日本人以外のモンゴロイドやその他の人種（コーカサイド等）に対しても本発明を適用可能である。但し、日本人又は日本人と遺伝的に近い集団（例えば日本人集団に対して中国人集団や韓国人集団は近い）に対して本発明は特に有効である。従って、本発明における被検者は好ましくはモンゴロイド（日本人、中国人、韓国人など）であり、更に好ましくは日本人である。
【実施例】
【００３１】
肥満に基づく病態を包括したメタボリック症候群に対する新規な指標を見出すべく、血中アディポネクチン濃度とHOMA-IRの２つの指標に注目して検討することにした。また、高齢者における基準値を設け、将来的なリスクの評価に関しても考察を加えた。【００３２】
１．方法
KING Study (NCT 00262691)は2004年に始まった50歳以上の日本人一般住民3975名(男性1712人・女性2263人)を対象とした、心血管疾患前向き研究である。北名古屋市の一般住民に対し、健康診断時に説明を行い、同意の得られた方のみを対象としている。全例に血液採取を行い、血中アディポネクチン濃度および血中インスリン濃度を測定した3297名(男性1456人・女性1841人)を解析の対象とした。メタボリック症候群の診断基準は国際糖尿病学会(IDF)基準（非特許文献８）を採用した。【００３３】
２．結果
血中アディポネクチン濃度は女性では男性に比べ明らかに高い濃度を示し、また若年者よりも高齢者で高値を示した（図１）。さらにはメタボリック症候群のそれぞれの構成要素と強く相関した（図１）。特にHDLや中性脂肪などと強い相関を示した（図１）。一方、HOMA-IRは、女性より男性が高い傾向にあった（図１）。また、総コレステロールを除いた、各メタボリック症候群の構成要素と強く相関していた（図２）。特に血糖、HbA1c、腹囲などと強い相関を示した（図２）。【００３４】
「血中アディポネクチン濃度／HOMA-IR」では、両指標の特性を補完し合い、総合的にメタボリック症候群の評価ができていることが分かる（図２）。【００３５】
血中アディポネクチン濃度を濃度別にグループ分けし、4群を作成したところ、群間でメタボリック症候群の有病率には有意な相違が見られた（図３）。HOMA-IRで補正した値、即ち「血中アディポネクチン濃度／HOMA-IR」によれば、群間でのメタボリック症候群の罹患者をさらに正確にグループ分けすることができた（図４）。男性ではアディポネクチン／HOMA-IRが9.3未満であればメタボリック症候群罹患率が35％以上となり、18.1以上であれば同罹患率が3％未満になる事が分かる。また女性ではアディポネクチン／HOMA-IRが6.7未満であればメタボリック症候群罹患率が50％以上となり、27.0以上であれば同罹患率が5％未満になることが分かる。【００３６】
今回の対象は50歳以上の高齢者であることから、以上の結果は、若年者においてアディポネクチン／HOMA-IRが男性で9.3未満、女性で6.7未満のまま推移すれば、50歳以上になった時にメタボリック症候群発症の危険性を疫学的に予測するものといえる。このように、アディポネクチン／HOMA-IRの値は、メタボリック症候群のリスク評価の指標として有用であることが示唆された。【００３７】
メタボリック症候群の危険因子保有数が増えると、アディポネクチンの平均値は低下した。アディポネクチン/HOMA-IRの平均値は、さらに低下していた（図５）。メタボリック症候群の危険因子から高血糖を除いて検討した場合にも、メタボリック症候群の危険因子保有数が増えると、アディポネクチンの平均値は低下し、アディポネクチン/HOMA-IRの平均値はさらに低下していた（図示せず）。一方、アディポネクチン/HOMA-IRによるメタボリック症候群の罹患予測は、アディポネクチン単独の時よりも優れていた（図６）。【００３８】
大規模解析の結果、メタボリック症候群を単項目で評価できる、優れた指標(マーカー)が見出された。当該指標は、将来的なメタボリック症候群発症の疫学的指標としても有用であるといえる。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明はメタボリック症候群又はその構成疾患に対する新規指標を提供する。当該指標を用いることによって、メタボリック症候群又はその構成疾患の罹患状態の評価及びこれらの疾患を将来発症するリスクの評価が可能となる。発症リスクの評価は、早期受診を促す契機や、生活習慣を見直しその改善を図る契機となり、予防医学的見地から極めて有用である。【００４０】
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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