(57)【要約】オートサンプラにおいてサンプルループに吸入した試料を移動相により注入用ニードルからインジェクションポートを経て分析流路に注入する際に、移動相の送液流量を分析条件で定められた一定流量よりも下げることにより、ニードルとインジェクションポートとの接続部にかかる圧力を低下させてインジェクションポートでの試料残留を抑える。
2010119801.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
移動相の流路に配置されて導入された試料を成分に分離するカラム及び前記カラムにより分離された試料成分を検出する検出器を備えた分析流路と、
送液ポンプにより移動相を供給する移動相送液部と、
注入用ニードル、注入用ニードルに一端が接続されたサンプルループ、インジェクションポート、計量ポンプ及び流路切換バルブを備え、前記流路切換バルブにより前記サンプルループの他端を前記計量ポンプに接続して注入用ニードルからサンプルループへ試料を吸入する試料吸入モードと、前記流路切換バルブによりサンプルループの他端を前記移動相送液部に接続し前記注入用ニードルを前記インジェクションポートから前記分析流路に接続して前記試料吸入モードでの吸入試料の全量を移動相により分析流路に導入する試料導入モードに切り換えられるオートサンプラと、
前記オートサンプラの動作と連動して前記送液ポンプの動作を制御する流量制御部とを備え、
前記流量制御部は前記送液ポンプの流量設定値として前記分析流路での試料成分の分離を行うための第１流量と、それより低流量の第２流量の２つの設定流量をもち、前記分析流路において試料成分が溶出されている時間帯は第１流量となり、前記オートサンプラの試料導入モードにおいて前記試料吸入モードでの吸入試料の全量が前記インジェクションポートを通過する時間帯は第２流量となるように前記送液ポンプの動作を制御するものである液体クロマトグラフ。
【請求項２】
前記流量制御部は前記サンプルループへの試料吸入量と設定された第２流量とから、前記流路切換バルブを試料導入モードに切り換えてから前記送液ポンプを第２流量で動作させる時間帯を自動的に算出するものである請求項１に記載の液体クロマトグラフ。
【請求項３】
前記流量制御部は１つの試料について分析が終了すると前記オートサンプラを次の試料の試料吸入モードに切り換える前に前記送液ポンプによる移動相の流量を第１流量から第２流量に切り換えるものである請求項１又は２に記載の液体クロマトグラフ。
【請求項４】
前記流量制御部は１つの試料についてピーク溶出が終了すると前記オートサンプラを次の試料の試料吸入モードに切り換える前に前記送液ポンプによる移動相の流量を第１流量から第２流量に切り換えるものである請求項１又は２に記載の液体クロマトグラフ。
【請求項５】
前記オートサンプラは前記インジェクションポートが流路切換バルブに直接組み込まれたものである請求項１から４のいずれかに記載の液体クロマトグラフ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は高速液体クロマトグラフを含む液体クロマトグラフに関するものであり、特に全量注入方式の試料注入方式を採用したオートサンプラを備えた液体クロマトグラフに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
高速液体クロマトグラフ用オートサンプラの試料注入方式は、大きく分けると２通りある。吸引した試料の一部をサンプルループに充填した後に分析流路に注入するループ注入方式と、吸引した試料の全量をそのまま分析流路に注入する全量注入方式である。全量注入方式はループ注入方式よりも試料の汚染が少ない方法である。【０００３】
ループ注入方式では、注入用ニードルはサンプルループには接続されておらず、注入用ニードルは吸引ポンプに接続されて試料の吸引と吐出がなされるようになっている。試料をサンプルループに導入するには、吸引ポンプにより試料瓶から試料を注入用ニードルに吸引した後、注入用ニードルをインジェクションポートに接続して注入用ニードル内の試料をインジェクションポートからサンプルループに導入する。その後、流路を切り換えてサンプルループ内の試料を移動相によってカラムに導入する。【０００４】
一方、全量注入方式では、注入用ニードルはサンプルループに接続されている。注入用ニードルを通して試料瓶の試料をサンプルループに吸引した後、注入用ニードルを試料瓶からインジェクションポートに移動させて注入用ニードルの先端部をインジェクションポートに挿入してインジェクションポートと注入用ニードルを接続し、流路を切り換えてサンプルループ内の試料を移動相によって注入用ニードルからインジェクションポートを経てカラムに導入する。【０００５】
インジェクションポートは、中心に貫通穴をもつニードルシールと、ニードルシールを押さえるナットで構成される。注入用ニードルは先端がテーパ状に先細になっている。インジェクションポートに挿入された注入用ニードルは、先端のテーパ部がニードルシールの中心の穴に嵌合し、液漏れのない接続がなされる。【０００６】
本発明は２つの試料注入方式のうちの全量注入方式に関する。全量注入方式において、サンプルループ内の試料を移動相によって注入用ニードルからインジェクションポートを経てカラムに導入する際の移動相は、カラムでの分析に使用する移動相である。そのときの移動相の流量は、分析流路に移動相を定常的に送り出している送液ポンプの設定流量であり、本来の分析条件で定められた一定流量である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−３４３２７１号公報
【特許文献２】特開平５−２５６８３４号公報
【特許文献３】特開２００３−２１５１１８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
サンプルループ内の試料を移動相によって注入用ニードルからインジェクションポートを経てカラムに導入する際、本来の分析条件で定められた一定流量で移動相を送液すると、ニードルとニードルシ−ルとの流路接続部を試料が高圧で通過することになる。ニードルの先端のテーパ部とインジェクションポートのニードルシールの中心の穴とが嵌合して液漏れのない接続がなされているが、それでもニードルとニードルシールとのわずかな隙間に試料の一部が残留し、この部分を汚染することがあった。この汚染が生じると、高速液体クロマトグラフ用オートサンプラとしてのキャリーオーバ性能に影響する。【０００９】
またこのニードルとニードルシールとのわずかな隙間に試料の一部が残留する間題は、分析流路の分離用カラムとして充填剤粒子径が２μｍ以下といった高分離用カラムが使用されている場合など、移動相の送液圧力が高くなる分析条件の場合には一層顕在化する。【００１０】
本発明は、全量注入方式のオートサンプラを備えた高速液体クロマトグラフにおいて、インジェクションポートでの試料残留に起因するキャリーオーバを抑えることを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明では、オートサンプラにおいてサンプルループに吸入した試料を移動相により注入用ニードルからインジェクションポートを経て分析流路に注入する際に、移動相の送液流量を分析条件で定められた一定流量よりも下げることにより、ニードルとインジェクションポートとの接続部にかかる圧力を低下させてインジェクションポートでの試料残留を抑える。【００１２】
そのために、本発明の液体クロマトグラフは、移動相の流路に配置されて導入された試料を成分に分離するカラム及び前記カラムにより分離された試料成分を検出する検出器を備えた分析流路と、送液ポンプにより移動相を供給する移動相送液部と、オートサンプラと、オートサンプラの動作と連動して送液ポンプの動作を制御する流量制御部とを備えている。【００１３】
オートサンプラは、注入用ニードル、注入用ニードルに一端が接続されたサンプルループ、インジェクションポート、計量ポンプ及び流路切換バルブを備えている。オートサンプラは、その流路切換バルブによりサンプルループの他端を計量ポンプに接続して注入用ニードルからサンプルループへ試料を吸入する試料吸入モードと、その流路切換バルブによりサンプルループの他端を移動相送液部に接続し注入用ニードルをインジェクションポートから分析流路に接続して試料吸入モードでの吸入試料の全量を移動相により分析流路に導入する試料導入モードに切り換えられるものである。【００１４】
流量制御部は送液ポンプの流量設定値として分析流路での試料成分の分離を行うための第１流量と、それより低流量の第２流量の２つの設定流量をもち、分析流路において試料成分が溶出されている時間帯は第１流量となり、オートサンプラの試料導入モードにおいて試料吸入モードでの吸入試料の全量がインジェクションポートを通過する時間帯は第２流量となるように送液ポンプの動作を制御するものである。【００１５】
インジェクションポートでの試料残留を抑える目的からは、第２流量は小さい方がよいが、小さすぎるとサンプルループに吸入した試料を分析流路に導入する時間が長くなり、液体クロマトグラフの稼働率が低下する。逆に第２流量が第１流量に近い値になるとインジェクションポートでの試料残留を抑える効果が低下する。ニードルの先端のテーパ部とインジェクションポートのニードルシールの中心の穴との嵌合の程度にも依存するので、実際には試料残留によるキャリーオーバが分析結果に影響を及ぼさない大きさの第２流量の値を実験的に定めるのが好ましい。【００１６】
実施例では、第１流量が１ｍＬ／分のときに第２流量を０．２ｍＬ／分としているが、その値は一例である。それより多い第２流量でもキャリーオーバが問題にならない程度であれば稼働率を優先させるためにいくらか高めの第２流量を設定することができる。【００１７】
流量制御部はサンプルループへの試料吸入量と設定された第２流量とから、流路切換バルブを試料導入モードに切り換えてから送液ポンプを第２流量で動作させる時間帯を自動的に算出するようにすることができる。第２流量で動作させる時間帯がサンプルループへの試料吸入量の全量がインジェクションポートを通過する時間よりも短くなるとインジェクションポートの隙間に試料が残留する虞がでてくる。逆に、第２流量で動作させる時間帯がサンプルループへの試料吸入量の全量がインジェクションポートを通過する時間よりも長くなるとインジェクションポートの隙間に残留する試料はなくなるが分析時間が長くなって液体クロマトグラフの稼働率が低下する。試料吸入量の全量がインジェクションポートを通過する時間は試料吸入量と設定された第２流量とから求めることができるので、流量制御部により計算を行なわせて制御するようにすると作業者の負担が軽くなる。実施に当たっては、送液ポンプを第２流量で動作させる時間帯は、試料吸入量と設定された第２流量とから計算により求められた時間に幾らかの余裕を与えて設定するようにするのが好ましい。【００１８】
流量制御部は１つの試料について分析が終了するとオートサンプラを次の試料の試料吸入モードに切り換える前に送液ポンプによる移動相の流量を第１流量から第２流量に切り換えるものとすることができる。【００１９】
また、流量制御部は１つの試料についてピーク溶出が終了するとオートサンプラを次の試料の試料吸入モードに切り換える前に送液ポンプによる移動相の流量を第１流量から第２流量に切り換えるものとしてもよい。ピーク溶出が終了すると移動相の流量は分析条件として設定された流量でなくてもよいからである。【００２０】
流路切換バルブでのデッドボリウムを低減するためには、オートサンプラはインジェクションポートが流路切換バルブに直接組み込まれたものとするのが好ましい。【００２１】
流路切換バルブの切換えは流路系が一時的に閉鎖される状態を経て行われる。その流路系が閉鎖される状態では移動相の送液ポンプを一定流量で送液しているとバルブの手前の流路内の圧力が高くなる。そのため、バルブ部にバイパスを設けたり、バルブの手前の流路にバンパーを設けたりすることによりその圧力上昇を抑えることが知られている。本発明においてもそのような圧力上昇を抑える手段を設けることができる。そのような圧力上昇を抑える別の手段として、定圧制御方法が提案されているが、これは本発明とは直接の関係はない。その定圧制御方法では、定流量制御と定圧制御の２つの制御様式を設け、バルブを切り換える際に流路が一時的に閉鎖される期間は、ポンプ出口側の圧力が一定になるように、ポンプを定圧制御する。流路が閉鎖されていない期間は、すべて一定流量になるように制御する。また、定圧制御への切換え時には定流量制御時の圧力となるよう制御し、その間の圧力変動が生じないようにする（特許文献２参照。）。【００２２】
その定圧制御方法でポンプを定圧制御する期間はバルブを切り換える際の流路が閉鎖されている期間である。本発明が対象にしているのはバルブの切換えが完了して流路が通じている期間であり、流路が閉鎖されている期間は対象にしていない。その定圧制御方法では、流路が通じている期間は全て定流量制御を行なうのであり、これは本発明の第１流量のみによる制御に相当し、本発明のように、流路が通じている期間における第１流量と第２流量の間の流量切換えは行なっていない。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の液体クロマトグラフでは、液体試料を吸引し、分析流路へ導入する動作を自動的に行うオートサンプラにおいて、ニードルとニードルシールとの流路接続部を試料が低圧で通過するため、ニードルとニードルシールとのわずかな隙間に試料の一部が残留しにくくなり、この部分を汚染することが少なくなる。この効果は、特に移動相の送液圧力が高い分析条件の場合、例えば充填剤の粒子径が２μｍ以下といった高分離用カラムを使用する場合などに顕著なものとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】一実施例を試料吸入モードで示す流路図である。
【図２】同実施例を試料導入モードで示す流路図である。
【図３】同実施例における制御部を示すブロック図である。
【図４】同実施例におけるインジェクションポート部を示す拡大断面図である。
【図５】一実施例における動作を示すフローチャートである。
【図６Ａ】従来例の動作を示すタイムチャートである。
【図６Ｂ】実施例の動作を示すタイムチャートである。
【図７Ａ】従来の液体クロマトグラフによる測定結果を示す試料注入時の図である。
【図７Ｂ】従来の液体クロマトグラフによる測定結果を示すブランク注入時の図である。
【図８Ａ】一実施例の液体クロマトグラフによる測定結果を示す試料注入時の図である。
【図８Ｂ】一実施例の液体クロマトグラフによる測定結果を示すブランク注入時の図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
図１に一実施例の高速液体クロマトグラフを試料吸入モード（ＬＯＡＤ）で示したものである。この高速液体クロマトグラフは、分析流路２、移動相送液部４、オートサンプラ６及び流量制御部８を備えている。
【００２６】
分析流路２は、移動相の流路に配置されて導入された試料を成分に分離する分析用カラム１０、及びカラム１０により分離された試料成分を検出する検出器１２を備えている。検出器１２としては、紫外線吸光度計や質量分析計などを使用することができる。
【００２７】
移動相送液部４は送液ポンプ１４により移動相容器中の移動相１６を供給する。
【００２８】
オートサンプラ６は注入用ニードル２０、サンプルループ２２、インジェクションポート２４、計量ポンプ２６及び流路切換バルブ２８を備えている。
【００２９】
注入用ニードル２０はサンプルループ２２の先端に接続されている。注入用ニードル２０は移送機構（図示略）に保持されている。注入用ニードル２０は、その移送機構により、試料容器内の試料３４に浸る位置、インジェクションポート２４に挿入される位置、及び洗浄ポート３２に挿入される位置の間で移動される。
【００３０】
流路切換バルブ２８は高圧バルブであり、ステータに６つのポートａ〜ｆをもち、ロータの回転によりポートａとｂの間、ポートｃとｄの間及びポートｅとｆの間を接続する図１の状態と、ポートｆとａの間、ポートｂとｃの間及びポートｄとｅの間を接続する図２の状態との間で切り換えることができる。
【００３１】
ポートａは移動相送液部４の送液ポンプ１４の下流に接続されている。ポートｂは分析流路２のカラム１０の入口に接続されている。ポートｃにはインジェクションポート２４が接続されている。ポートｄは低圧バルブ３０の１つのポートｇに接続されている。ポートｅは計量ポンプ２６の一端に接続されている。ポートｆはサンプルループ２２の基端に接続されている。
【００３２】
低圧バルブ３０はステータに５つのポートをもち、ロータの回転により隣接するポート間を接続することができる。ポートｈは洗浄液を収容した容器に接続され、ポートｈから洗浄液を吸入することができる。ポートｉは装置の起動時や洗浄液の種類を変えたりする場合に洗浄液の引き込みを行うためのマニュアルシリンジに接続されている。ポートｊは洗浄ポート３２に接続されている。
【００３３】
インジェクションポート２４はバルブ２８のポートｃに流路によって接続されていてもよいが、この実施例ではデッドボリウムを小さくするために、特許文献３の図２に記載されている構造を採用し、インジェクションポート２４はバルブ２８に直接組み込まれた構造とする。特許文献３は参照してこの明細書に取り込む。インジェクションポート２４は図４に示されるように接続口５２が上を向くように設置されている。
【００３４】
インジェクションポート２４は、その一部が図４に示されるように、中心に接続口５２の開口につながる貫通穴をもつニードルシール５０と、これを押さえるナット（図示略）で構成される。開口５２からインジェクションポート２４に挿入された注入用ニードル２０は、先端のテーパ部がニードルシール５０の中心の穴に嵌合し、液漏れのない接続が可能となる。ニードルシール５０の中心の穴はバルブ２８のパッキンやステータを貫通するパスによりバルブ２８の摺動面に直通しており、試料液体は注入用ニードル２０から最短距離で流路切換を受けてカラム１０に到達することができる。
【００３５】
図４はニードル２０がインジェクションポート２４に挿入されて流路が接続された状態を示している。この状態でニードル２０から試料が送り出されてインジェクションポート２４を通ってバルブ２８の流路に試料が流れる。このときニードル２０とニードルシール５０の接続部にはわずかな隙間ができることがある。ニードル２０から試料を注入するときは、ニードルシール５０の流路の下流にはカラム１０が接続されているため、ニードル２０と接続されたインジェクションポート２４の流路には圧力がかかる。特にカラム１０が充填剤の粒子径が２μｍ以下というような微小な充填剤を用いる高分離用カラムの場合には、分析条件の送液流量でカラム１０に移動相を供給すると、送液圧力が高くなる。ニードル２０から試料を注入するときにその分析条件での送液流量で試料を送液すると、インジェクションポート２４とニードル２０との接続部にもその圧力がかかり、インジェクションポート２４とニードル２０のわずかな隙間５３に試料の一部が残留する虞が高まる。この残留した試料は次の試料の汚染源となってキャリーオーバの性能に影響を及ぼすことがある。
【００３６】
流路切換バルブ２８を図１の状態にすると試料吸入モード（ＬＯＡＤ）となる。このとき、サンプルループ２２の基端部が計量ポンプ２６に接続され、注入用ニードル２０を試料容器内の試料３４中に浸すと、計量ポンプ２６により注入用ニードル２０からサンプルループ２２へ試料３４を吸入することができる。
【００３７】
流路切換バルブ２８を図２の状態にすると試料導入モード（ＩＮＪＣＴ）となる。このとき、サンプルループ２２の基端部が移動相送液部４の送液ポンプ１４に接続され、注入用ニードル２０をインジェクションポート２４に接続すると、インジェクションポート２４から分析流路２に試料吸入モードでの吸入試料の全量を移動相によりカラム１０に導入することができる。
【００３８】
流量制御部８は、図３に示されるように、オートサンプラ６の動作と連動して送液ポンプ１４の動作を制御する。流量制御部８は、コンピュータであるシステムコントローラ又はワークステーションにより実現される。
【００３９】
流量制御部８には、送液ポンプ１４の流量設定値として、分析流路２での試料成分の分離を行うための第１流量と、それより低流量の第２流量の２つの設定流量が設定されている。流量制御部８は、送液ポンプ１４の流量を、分析流路２において試料成分が溶出されている時間帯は第１流量とし、オートサンプラ６の試料導入モードにおいて試料吸入モードでの吸入試料の全量がインジェクションポート２４を通過する時間帯は第２流量とするように送液ポンプ１４の動作を制御する。
【００４０】
流量制御部８は、オートサンプラ６による試料吸入量と設定された第２流量とから、流路切換バルブ２８を試料導入モードに切り換えて分析開始となってから送液ポンプ１４を第２流量で動作させるまでの時間を自動的に算出するようになっている。
【００４１】
流量制御部８は、１つの試料について分析が終了すると、オートサンプラ６が次の試料の試料吸入モードに切り換わる前に送液ポンプ１４による移動相の流量を第１流量から第２流量に切り換えるようになっていてもよく、又は１つの試料についてピーク溶出が終了するとオートサンプラ６が次の試料の試料吸入モードに切り換わる前に送液ポンプ１４による移動相の流量を第１流量から第２流量に切り換えるようになっていてもよい。
【００４２】
次に、この実施例の動作について説明する。図５はその動作をシステムコントローラ又はワークステーションにより実現される流量制御部８側の制御（図の左側）とオートサンプラ６自身による制御（図の右側）に分けて関連づけて示したものである。
【００４３】
最初の試料の分析を開始する時点又は先の試料の分析が終了して次の試料の分析を開始する時点から説明を始める。オートサンプラ６は、バルブ２８を図１の状態にする（ステップＳ１）。このとき流量制御部８は送液ポンプ１４の流量値が分析条件での第１の流量よりも低い流量の第２の流量になるように制御している。
【００４４】
オートサンプラ６は、ニードル２０をインジェクションポート２４から引き抜き、上昇させて洗浄ポート３２へ挿入し（ステップＳ２）、洗浄ポート３２内でニードル２０の先端部の外側を洗浄する。
【００４５】
ニードル２０の洗浄が終わると、オートサンプラ６はニードル２０を分析対象バイアル（試料容器）の位置へ移動し（ステップＳ３）、ニードル２０を下降させて図１のようにニードル２０の先端をバイアル内の試料３４に浸し（ステップＳ４）、計量ポンプ２４を作動させて所定量の試料３４をニードル２０からサンプルループ２２へ吸引する（ステップＳ５）。
【００４６】
次に、オートサンプラ６はニードル２０をバイアルから上昇させて（ステップＳ６）、洗浄ポート３２に挿入し、ニードル２０の先端部の外側を洗浄する。
【００４７】
ニードル２０の洗浄が終わると、オートサンプラ６はニードル２０をインジェクションポート２４へ移動してインジェクションポート２４へ挿入する（ステップＳ７）。そしてバルブ２８を図２の状態に切り換えて分析開始となる（ステップＳ８）。これで、送液ポンプ１４から送られる移動相によりサンプルループ２２内の吸入試料が押し出され、ニードル２０からインジェクションポート２４を経て分析流路２へ導入される。このとき、送液ポンプ１４の流量は分析条件のための送液流量（第１流量）よりも低い流量（第２流量）になっている。
【００４８】
流量制御部８は分析開始からの時間を計時している。流量制御部８は、吸入試料の全てがインジェクションポート２４を通過する時間Ｔ１になったことを検知すると、送液ポンプ１４の流量を分析条件の設定流量（第１流量）に復帰させる（ステップＳ９）。分析開始から送液ポンプ１４の流量を復帰させるまでの時間Ｔ１は、流量制御部８がサンプルループ２２に吸入された試料量と送液ポンプ１４の低流量（第２流量）とから計算し、流量制御部８が保持しており、流量制御部８は計時した時間とその保持している時間Ｔ１とを比較して時間Ｔ１になったことを検知する。
【００４９】
その流量条件で移動相を供給することにより試料はカラム１０へ導入されて分離され、溶出した試料成分が検出器１２で検出されていく。流量制御部８は、分析開始からの時間が分析を終了する時間Ｔ２になったことを検知すると（ステップＳ１０）、送液ポンプ１４の流量値を分析条件で設定された流用値よりも低い第２の第２の流量値に切り換える（ステップＳ１１）。分析終了時間は分析条件として入力され、流量制御部８、又はシステムコントローラもしくはワークステーションの他の部分に設定されており、流量制御部８は計時した時間とその設定された分析終了時間とを比較して分析終了時間になったことを検知する。
【００５０】
その後、オートサンプラ６は、バルブ２８を図１の状態に切り換えて次の試料の分析に備える。
【００５１】
洗浄ポート３２にはニードル２０を洗浄するとき、又は定期的に洗浄液が供給される。洗浄液は洗浄ポート３２の下端から供給されから上端の開口から溢れて排出される。洗浄ポート３２に洗浄液を供給するときは、オートサンプラ６はバルブ３０を洗浄液につながるポートｈがポートｇに接続され、ポートｊとｋの間が接続されるように切り換え、バルブ２８を図２の状態に切り換える。そして、オートサンプラ６は計量ポンプ２６により洗浄液を吸引し、洗浄ポート３２へ供給する。
【００５２】
分析条件での移動相の第１流量で分析を続け、分析時間が終了する前であってもカラムでの試料ピークの溶出が終わればその時点（Ｔ３）で送液ポンプの流量を分析条件のものよりも低い第２流量に切り換えてもよい。溶出が終われば移動相の流量は重要ではなくなるからである。
【００５３】
図６Ａ及び図６Ｂは移動相の送液流量と送液圧力の時間変化を表したものである。図６Ａはインジェクションポートから試料を注入する際も分析の際も同じ設定流量（第１流量）で分析を行う場合の分析シーケンスである。それに対し、図６Ｂは図５で説明したように、試料注入時に送液流量を第２流量に低下させる実施例の分析シーケンスである。
【００５４】
具体的な分析結果を示す。測定は、図５に示したフローチャートに示した動作シーケンスに基づいて行った。試料はカフェイン水溶液（２５０ｍｇ／Ｌ）、移動相は水：メタノール＝７０：３０の溶液である。洗浄液は水、ブランク液は移動相である。送液ポンプ１４による移動相の送液流量は、分析時の設定流量（第１流量）が１ｍＬ／分である。インジェクションポートから試料を注入するときの送液ポンプ１４による移動相の送液流量は、従来は分析時の設定流量のままであり、実施例において低下させる流量（第２流量）が０．２ｍＬ／分である。実施例において、移動相の送液流量を第２流量に低下させる区間は、分析開始（バルブ２８を図２の状態に切り換えた時点）から０．１分間と分析終了前の４．５分間は低流量（第２流量）である。
【００５５】
図７Ａ及び図７Ｂは移動相の送液流量をインジェクションポートから試料を注入するときも分析条件と同じにした従来の方法によるクロマトグラムとキャリーオーバの測定結果である。送液圧力プロットは、送液圧力が全区間を通じて分析条件での送液流量による一定の送液圧力であることを示している。図７Ａは試料を測定した場合である。所定の位置にカフェインのピークが検出されている。図７Ｂはその試料分析を行った直後に、ブランク測定として試料に代えて移動相をインジェクションポートから同じ条件で注入してブランク測定を行なったときの結果である。理想的には、ブランク測定では何のピークも検出されないはずであるが、この場合はカフェインのピークが検出されている。その面積値は試料に対し０．００３４％に相当するものである。これがキャリーオーバによるピークであり、通常の分析であれば次の試料のクロマトグラム中に含まれる測定誤差となるものである。
【００５６】
一方、図８Ａ及び図８Ｂは実施例による測定結果である。分析条件は先に示したとおりである。インジェクションポートから試料を注入するときに移動相の送液流量を下げることによりインジェクションポートを通る試料の注入圧力を下げ、全ての試料がインジェクションポートを通過した後に設定された分析条件の送液流量に戻している。図８Ａは試料を測定したときのもの、図８Ｂはその直後にブランク測定を行ったときのものである。図８Ａ及び図８Ｂの結果によればブランク測定時にキャリーオーバによるピークは検出されていない。
【００５７】
図８Ａ及び図８Ｂの測定結果から、本発明によればキャリーオーバによる誤差を抑えることができ、分析精度の低下を抑えることができることがわかる。
【符号の説明】
【００５８】
２      分析流路
４      移動相送液部
６      オートサンプラ
８      流量制御部
１０      分析用カラム
１２      検出器
１４      送液ポンプ
２０      注入用ニードル
２２      サンプルループ
２４      インジェクションポート
２６      計量ポンプ
２８      流路切換バルブ
【図１】
2010119801.tif 000003
【図２】
2010119801.tif 000004
【図３】
2010119801.tif 000005
【図４】
2010119801.tif 000006
【図５】
2010119801.tif 000007
【図６Ａ】
2010119801.tif 000008
【図６Ｂ】
2010119801.tif 000009
【図７Ａ】
2010119801.tif 000010
【図７Ｂ】
2010119801.tif 000011
【図８Ａ】
2010119801.tif 000012
【図８Ｂ】
2010119801.tif 000013
【国際調査報告】
2010119801.tif 000014
2010119801.tif 000015
2010119801.tif 000016
2010119801.tif 000017