(57)【要約】【課題】ＨＮＯの放出を精密に時空間制御でき、安定性に優れていて長期保存が可能な光作動型ＨＮＯ供与体を提供する。【解決手段】本発明は下記構造式で示されるアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体である。この化合物は光照射によってアシルニトロソ化合物を発生させ、さらにアシルニトロソ化合物が分解してＨＮＯを発生させる。2010052993.tif 000019【選択図】図２
2010052993.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式で示されるアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体（ただしＲは少なくとも１つのカルボキシル基を有する置換基を示す）。
【化１】
2010052993.tif 000015
【請求項２】
下記構造式で示される化合物（ただしＲ´は分枝を有してもよいアルキレン基を示す）又は該化合物のカルボキシル基とアミノカルボン酸のアミノ基とがアミド結合した化合物であることを特徴とする請求項１記載のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体。
【化２】
2010052993.tif 000016
【請求項３】
下記構造式（Ａ）又は（Ｂ）で示される化合物であることを特徴とする請求項１又は２に記載のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体。
【化３】
2010052993.tif 000017
【請求項４】
下記アントラセン誘導体（Ｃ）（ただしＲは少なくとも１つのカルボキシル基を有する置換基を示す）と、下記ニトロベンゼン誘導体（Ｄ）とを酸化剤存在下で環化付加させることを特徴とする請求項１記載のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体の製造方法。
【化４】
2010052993.tif 000018
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれか１項記載のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体からなる光作動型ＨＮＯ供与体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光の照射によってＨＮＯを放出するアシルニトロソ誘導体環化付加アントラセン誘導体、及びそれを用いた光作動型ＨＮＯ供与体に関する。
【背景技術】
【０００２】
一酸化窒素（ＮＯ）の一電子還元体であるニトロキシル（ＨＮＯ）は、新たな生物活性を有する窒素酸化物として近年注目され始め、様々な性質や作用が明らかとなってきた。とりわけ心血管系に対しては血管を拡張する作用を示し、このため医療への応用が期待されている。【０００３】
しかし、ＨＮＯは反応性が高く、速やかに二量化を起こしてＮ２Ｏ及びＨ２Ｏとなるため存在寿命は非常に短く、保存や直接投与ができない。このため、その研究はなかなか進展していないのが現状である。【０００４】
こうしたＨＮＯの不安定性を考慮し、ＨＮＯの生理活性作用を詳しく研究するための物質として、時間の経過とともにニトロキシル（ＨＮＯ）を少しずつ発生する、ニトロキシル供与体（以下「ＨＮＯ供与体」という）が知られている。【０００５】
現在ＨＮＯ供与体としてよく知られているものにAngeli's salt（Ｎａ２Ｎ２Ｏ３）（下記化学式（１）参照）がある。このAngeli's saltは温度やｐＨによってＨＮＯの発生速度を変化させることができる。しかし、生体内での温度やｐＨを制御することは困難であるため、これによってＨＮＯ濃度を生体内で制御することは難しい。また、Angeli's saltのＨＮＯの放出速度は遅いという欠点もある。
【化１】
2010052993.tif 000003
【０００６】
Angeli's salt以外でＨＮＯを放出することが知られている化合物として、アシルニトロソ化合物（下記化学式（２）参照））がある。
【化２】
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【０００７】
具体例としては、Ｎ−ヒドロキシ尿素由来のアシルニトロソ化合物が９，１０−ジメチルアントラセンに付加した環化付加体（３）（Ｒ＝Ｈ，４−ニトロソベンジル）が挙げられる（非特許文献１）。これらの環化付加体（３）は４０℃前後において漸次逆Diels-Alder反応により熱分解して、アシルニトロソ化合物を生成し、さらにはアシルニトロソ化合物が分解してＨＮＯが発生する。しかし、この化合物は非常に不安定であるため、直接取り扱うことは困難である
【化３】
2010052993.tif 000005
【０００８】
本発明者らは、上記環化付加体（３）の置換基Ｒに光吸収性の官能基を導入することにより、通常、直接光反応では進行しないといわれている逆Diels-Alder反応が光照射によって起こってアシルニトロソ化合物を生成し、さらにこれが分解してＨＮＯが発生することを見いだしている（非特許文献２）。この結果は、光の照射の場所と強度とを制御することにより、ＨＮＯの放出を時空間制御できることを意味するものであり、ＨＮＯの医療への応用のブレークスルーとなる技術として期待されている。【０００９】
【非特許文献１】Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14(2004)5565-5568
【非特許文献２】Y. Adachi, H. Nakagawa, K Matsuo, T. Suzuki and N.Miyata，Chem. Commun., 2008,5149-5151
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、上記非特許文献２に記載のアシルニトロソ化合物と９，１０−ジメチルアントラセンとの環化付加体は、ＨＮＯの放出を時空間制御できるものの、光を照射しない場合においても、ある程度のＨＮＯ生成が起こるため、精密なＨＮＯ放出の制御を行なうことが困難であった。また、暗所であっても保存が困難であるという問題も有していた。
本発明は、上記従来の実情に鑑みてなされたものであって、ＨＮＯの放出を精密に時空間制御でき、安定性に優れていて長期保存が可能な光作動型ＨＮＯ供与体を提供することを解決すべき課題としている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、アシルニトロソ化合物とアントラセン誘導体との環化付加体構造を種々合成し、評価を行なった。その結果、下記構造式で示されるアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体が、上記課題を解決できることを見出し、本発明を解決するに至った。【００１２】
すなわち、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、下記構造式で示される（ただしＲは少なくとも１つのカルボキシル基を有する置換基を示す）ことを特徴とする。
【化４】
2010052993.tif 000006
【００１３】
本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、光を照射することにより逆Diels-Alder反応が起こり、アシルニトロソ化合物が発生する。これは、光吸収性を示すニトロベンゼン置換基が光を吸収し、熱緩和されることによって起こるものと推定される。そして、さらにはアシルニトロソ化合物が分解されてＨＮＯが発生する。このため、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、光照射の場所及び時間を制御することにより、ＨＮＯの放出の速度や場所を正確に制御することができる光作動型ＨＮＯ供与体として用いることができる。さらには、９位と１０位の置換基にカルボン酸基が導入されているため、水溶性にも優れている。このため、生体投与においても血液等に溶解可能であり、外部からの光の照射位置と強度とを制御することにより、任意の位置で任意の濃度のＨＮＯを発生させることができる。【００１４】
また、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、暗所における安定性に優れており、長期保存が可能である。これは、次のような理由によるものと考えられる。すなわち、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体のアシルニトロソ基の窒素に結合した水素と、それに近接するＲ基のカルボキシ基との間で水素結合が生じる（本発明者らは、このような水素結合が存在することを、光非照射時におけるＮＭＲスペクトルから確認している）。そして、この水素結合の結合力により、逆Diels-Alder反応におけるアントラセン部とアシルニトロソ部との解離は起こり難くなり、比較的安定に存在することができるのである。
また、光照射によるエネルギーは、常温における熱エネルギーより遥かに大きいため、水素結合の存在があっても、逆Diels-Alder反応を起こすに十分なエネルギーが供給され得る。このため、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、光非照射時により安定であり、光照射時に効率よくＨＮＯを産生することができる。【００１５】
したがって、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体によれば、ＨＮＯの放出を精密に時空間制御でき、安定性に優れていて長期保存が可能であり、水に溶けやすくて生体系への投与が可能な光作動型ＨＮＯ供与体を提供することができる。【００１６】
本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、下記アントラセン誘導体（Ｃ）（ただしＲは少なくとも１つのカルボキシル基を有する置換基を示す）と、下記ニトロベンゼン誘導体（Ｄ）とを過ヨウ素酸ナトリウム等の酸化剤存在下で環化付加させることによって容易に製造することができる。ここで、酸化剤はニトロベンゼン誘導体（Ｄ）のヒドロキシルアミノ基をニトロソ基に酸化してアシルニトロソ化合物とする役割を果たす。そして、さらにアシルニトロソ化合物のニトロソ基部分がアントラセン誘導体（Ｃ）の９位及び１０位の炭素に環化付加（すなわちDiels-Alder反応）して本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体となる。
【化５】
2010052993.tif 000007
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】化合物（Ａ）の各種ｐＨ溶液におけるＮＭＲスペクトルである。
【図２】実施例１の暗所及び光照射下におけるＥＳＲスペクトルである。
【図３】比較例２の暗所及び光照射下におけるＥＳＲスペクトルである。
【図４】実施例１の暗所及び光照射下における経過時間とＮ２Ｏ生成量の関係を示すグラフである（ＤＭＳ０：水＝９：１）。
【図５】実施例１の暗所及び光照射下における経過時間とＮ２Ｏ生成量の関係を示すグラフである（ＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝９：１）。
【図６】実施例１の暗所及び光照射下における経過時間とＮ２Ｏ生成量の関係を示すグラフである（ＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝１：９）。
【図７】実施例１のＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝９：１及び１：９における光照射下でのＥＳＲスペクトルである。
【図８】実施例２の暗所及び光照射下における経過時間とＮ２Ｏ生成量の関係を示すグラフである（ＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝９：１）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、たとえば下記構造式で示される化合物（ただしＲ´は分枝を有してもよいアルキレン基を示す）が挙げられる。さらには、下記構造式で示される化合物のカルボキシル基とアミノカルボン酸のアミノ基とがアミド結合した化合物が挙げられる。アミノカルボン酸としては、アスパラギン酸等のアミノ酸を用いることもできる。
【化６】
2010052993.tif 000008
【００１９】
以下、本発明をさらに具体化した実施例１について、比較例と比較しつつ詳述する。【００２０】
(実施例１)
アシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体（A）の合成
実施例１では、下記構造式で示されるアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体（A）を合成した。以下に、その詳細について述べる。【００２１】
【化７】
2010052993.tif 000009
【００２２】
＜アントラセンジカルボン酸(A-4)の合成＞
９，１０−ジブロモアントラセン(A-1)を出発物質として、以下に示す合成ルートに従い、アントラセンジカルボン酸(A-4)を合成した。以下にその詳細を示す。
【化８】
2010052993.tif 000010
【００２３】
（ステップ１−１）A-2の合成
９，１０−ジブロモアントラセン（A-1）(1680 mg, 5.0 mmol)と、アクリル酸ｔ-ブチル(14.5mL,100mmol)と、トリエチルアミン(14.0 mL,100 mmol)と、酢酸パラジウム(123.5mg,0.55 mmol)と、トリ-Ｏ-トリルホスフィン(334.8mg,1.10mmol)とをN,N-ジメチルホルムアミド(25mL)に溶解し、１２０℃で３時間加熱した。放冷後、水を加え酢酸エチルで抽出を行った。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー(AcOEt /n-hexane =0/1 to1/10)によって分離し、黄色固体（A-2）を2169mg (100 %)得た。ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, δ; ppm) 8.51 (2H, d, J = 16.1 Hz), 8.26 (4H, dd, J = 3.2, 6.8 Hz), 7.53 (4H, dd, J = 3.2, 6.8 Hz), 6.32 (2H, d, J = 16.1 Hz), 1.63 (18H, s).【００２４】
（ステップ１−２）A-3の合成
上記のようにして得られた化合物（A-2）(1410.6 mg,3.27mmol)と酢酸パラジウム(74.08mg,0.33mmol)とをN,N-ジメチルホルムアミド(50mL)に溶解し、６０℃に加熱し、蟻酸カリウム(1455.3 mg,17.3mmol)を入れ、４時間撹拌した。放冷後、水を加え酢酸エチルで抽出を行った。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー(Toluene/n-hexane=1/1to4/1)により分離し、黄色固体（A-3）を935.3mg(66 %)得た。ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, δ; ppm) 8.33 (4H, dd  J = 3.2, 6.8 Hz), 7.54 (4H, dd, J = 3.2, 6.8 Hz), 3.92 (4H, t, J = 8.51 Hz), 2.69 (4H, t, J = 8.51 Hz), 1.49 (18H, s).【００２５】
（ステップ１−３）A-4の合成
上記のようにして得られた(A-3)(1046.4 mg, 2.41 mmol)をジクロロメタン(20 mL)に溶解し、トリフルオロ酢酸(11.1 mL,145 mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣をヘキサンに懸濁させ、ろ別した。これをテトラヒドロフランとヘキサンから再結晶し、黄色固体（A-4）を590.9 mg(76 %)得た。ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (DMSO, 500 MHz, δ; ppm) 12.33 (2H, br), 8.36 (4H, dd J = 3.0, 7.0 Hz), 7.59 (4H, dd, J = 3.2, 6.9 Hz), 3.86 (4H, t, J = 8.2 Hz), 2.62 (4H, t, J = 8.1 Hz).【００２６】
＜アシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体（Ａ）の合成＞
さらに、ｐ−ニトロフェニルイソシアネート(A-5)を出発物質とし、下記合成ルートに従ってニトロベンゼン誘導体(A-7)を合成し、さらに上記のようにして得たアントラセンジカルボン酸(A-4)と、ニトロベンゼン誘導体(A-7)との間でDiels-Alder反応を行い、アシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体（Ａ）を合成した。詳細を以下に示す。
【化９】
2010052993.tif 000011
【００２７】
（ステップ１−４）A-６の合成
Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）ヒドロキシルアミン(234.2mg,2.0mmol)を脱水テトラヒドロフランに溶解した溶液に、氷冷下においてp-ニトロイソシアネート(A-5)(328.2 mg, 2.0 mmol)を加え、20分撹拌した。溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー(AcOEt / n-hexane = 0/1 to 2/3)によって分離し、黄色固体(A-6)を512.5 mg(91 %)得た。ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz, δ; ppm) 8.63 (1H, s), 8.21 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.63 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.33 (1H, s), 4.86 (1H, m), 4.09 (1H, m), 3.66 (1H, m), 1.90 (2H, m), 1.64 (4H, m). 【００２８】
（ステップ１−５）A-7の合成
化合物(A-6)(512.5 mg,1.82 mmol)をメタノール(25 mL)に溶解し、p-トルエンスルホン酸一水和物(31.4 mg,0.18mmol)を加え、室温で43時間撹拌した。溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー(AcOEt /n-hexane = 0/1 to 3/2)によって分離し、黄色固体（A-7）を344.3mg(96 %)得た。ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz, δ; ppm) 9.51 (1H, s), 9.29 (1H, s), 9.16 (1H, s), 8.16 (2H, d, J = 9.5 Hz), 7.92 (2H, d, J = 9.5 Hz).【００２９】
（ステップ１−６）Ａの合成
（A-7）(100.0 mg,0.310 mmol)と過ヨウ素酸ナトリウム (132.6 mg, 0.620 mmol)とをアセトン(15 mL)に溶解し、アセトン(15 mL)と水(15 mL)の混合溶媒に溶解した（A-7）(122.3mg, 0.620 mmol)を10分かけて氷冷下で滴下し、3.5時間撹拌した。そして水を加え、ジクロロメタンによって抽出し、抽出液を飽和食塩水で洗浄した。さらに、2N塩酸、飽和食塩水の順で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを入れて脱水を行った。その後溶媒を留去し、黄色固体（Ａ）を79.6 mg (50 %)得た。ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (DMSO, 500 MHz, δ; ppm) 9.20 (1H, s), 8.12 (2H, d, J = 9.4 Hz), 7.65 (2H, d, J = 9.1 Hz), 7.51 (4H, m), 7.33-7.28 (4H, m), 3.4 (2H, overlap), 3.15 (2H, t, J = 6.3 Hz), 2.86 (2H, t, J = 5.7 Hz), 2.79 (2H, t, J = 8.2 Hz); 13C-NMR (CD3OD, 500 MHz, δ; ppm); 178.23, 177.37, 160.84, 146.06, 145.96, 144.07, 128.56, 128.30, 125.51, 123.29, 122.57, 119.91, 119.83, 82.88, 67.85, 31.17, 29.28, 26.21, 23.89【００３０】
また、化合物（Ａ）の各種ｐＨ溶液におけるＮＭＲスペクトルを測定し、ウレイド部の窒素に結合した水素のシグナルを測定した。その結果、図１に示すように、ウレイド部の窒素に結合した水素のシグナルは、ｐＨが高くなるに連れて低磁場側にシフトし、かつブロードになった。このことから、化合物（Ａ）はｐＨが７以上においてウレイド部の窒素に結合した水素は、近接するカルボン酸基と水素結合を形成していると推測された。【００３１】
(比較例１)
比較例１はAngeli’s salt（市販品）をそのまま使用した。【００３２】
(比較例２〜４)
比較例２〜４は下記化１０に示すアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体であり、アントラセン骨格の９位と１０位にメチル基が導入されている（実施例１ではアントラセン骨格の９位と１０位にカルボン酸基が導入されている）。これら比較例２〜４の化合物は、９，１０−ジメチルアントラセンと、相当するヒドロキシニトロソ化合物とを、過ヨウ素酸存在下で環化付加させることによって得た。手順については実施例１に準じて行なった（非特許文献２に記載の方法と同じであり、詳細については同文献を参照されたい）。【００３３】
【化１０】
2010052993.tif 000012
【００３４】
＜評  価＞
以上のようにして得られた実施例１及び比較例の化合物について、ＨＮＯ供与体としての評価を（１）電子スピン共鳴（ＥＳＲ）スペクトルによるＦｅ（II）−ＮＯ錯体生成の分析、（２）ＧＣ−ＭＳによるＮ２Ｏ生成速度の測定（Ｎ２ＯはＨＮＯの二量化によって生成するためＨＮＯ生成の指標となる）、の２つの方法により行なった。また、実施例１及び比較例１〜４の化合物についての水−ＤＭＳＯ混合溶媒への溶解性について評価を行なった。【００３５】
（ＥＳＲスペクトルの測定）
実施例１及び比較例１の化合物を、ＤＭＳＯ：水＝９：１混合溶媒に0.05mMの濃度となるように溶かし、さらにここへＨｅｍｅ−Ｆｅ（III）を0.5mMの濃度となるように加えた溶液を調製し、電子スピン共鳴（ＥＳＲ）スペクトを測定した。測定は暗所及び光照明下（100W Hgランプ 330nm〜380nm）で10分間ごとに測定した。【００３６】
その結果、図２に示すように、実施例１の化合物では暗所下においてシグナルが観測されないのに対し、光照射下では、矢印で示す３本のシグナルが明瞭に観測された。この３本のシグナルは、実施例１の化合物が分解して生じたＨＮＯがＦe(III)と反応して生じる錯体の不対電子に基づくシグナルである。これに対し、比較例２の化合物では、図３に示すように、暗所下においても上記錯体の不対電子に基づくシグナルが僅かに観測された。【００３７】
以上の結果から、実施例１の化合物は、外部からの光の照射位置と強度とを制御することにより、任意の位置で任意の濃度のＨＮＯを発生させることができるのに対し、比較例２では、暗所でも徐々にＨＮＯが発生してしまうため、正確な制御ができないことが分かる。【００３８】
（ＧＣ−ＭＳの測定）
実施例１及び比較例１〜４の化合物について、ＧＣ−ＭＳによるＮ２Ｏの測定を行なった。測定方法は以下のとおりである。
すなわち、実施例１及び比較例１〜４の化合物を0.5mMの濃度となるようにＤＭＳＯ：水＝９：１の溶液を調整し、容量４ｍＬの密封した石英製容器に入れ、暗所および光照明下（１００Ｗ  Ｈｇランプ 330nm-380nm）で１０分ごとに気相を一定量採取し、ＧＣ−ＭＳ測定を行って、ＨＮＯの二量化により生成したＮ２Ｏ量を定量した。
Ｎ２Ｏの発生量はAngeli’s salt（１．５μｍｏｌ）の分解から計算で求めた。すなわち、Angeli’s salt（１．５μｍｏｌ）を0.5mMの濃度となるよう溶解し、上記と同様の方法で暗所および光照明下で１０分ごとに気相を一定量採取し、ＧＣ−ＭＳ測定を行って、ＨＮＯより生成したＮ２Ｏ量を定量した。
また、Ｎ２Ｏの捕捉剤として２−メルカプトエタノールをＨＮＯ供与体に対して１０当量加え、ＧＣ−ＭＳを測定し、これとの比較により、Ｎ２Ｏの定量測定を行なった。【００３９】
ＧＣ−ＭＳの測定結果を表１に示す。
【表１】
2010052993.tif 000013
【００４０】
表１から、実施例１の化合物は比較例２〜４と比較して、暗所下におけるＮ２Ｏの発生量が少なく、光照射下におけるＮ２Ｏ発生量は同程度であり、暗所下と光照射下とにおけるＮ２Ｏ発生量の差が顕著であることが分かった。Ｎ２ＯはＨＮＯの二量化によって生成するためＨＮＯ生成の指標となる。このため、実施例１の化合物は、外部からの光の照射位置と強度とを制御することにより、任意の位置で任意の濃度のＨＮＯを発生させることができるのに対し、比較例２〜４では、暗所でも徐々にＨＮＯが発生してしまうため、正確な制御ができないことが分かった。【００４１】
また、実施例１の化合物（Ａ）について、溶媒の違いによるＮ２Ｏの発生量の差を調べるため、溶媒をＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝９：１及びＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝１：９（いずれも容量比）に代えて、同様にＧＣ−ＭＳ測定を行った。その結果、図４〜６に示すように、いずれの溶媒中においても、光照射時は遮光時と比較してＮ２Ｏの発生量が顕著に多くなった。また、遮光時の安定性はＤＭＳＯ：水＝９：１＜ＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝９：１緩衝溶液＜ＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝１：９という結果になり、水の割合が多い（すなわち極性の高い）ほど、Ｎ２Ｏの発生速度（すなわちＨＮＯの発生速度）が速くなることが分かった。このことは、水の存在割合が多い生体内におけるＨＮＯ供与剤として有利な性質といえる。【００４２】
さらに、実施例１の化合物（Ａ）について、ＨＮＯの発生以外に、ＮＯが競争的に発生しているか否かを調べるため、ＥＳＲスピントラッピング法によって光照射下におけるＮＯの測定を行った。溶媒はＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝９：１及びＤＭＳＯ：50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）＝１：９（いずれも容量比）の２種類にて測定した。また、ラジカルトラッピング剤としてカルボキシ−ＰＴＩＯを用いた。【００４３】
その結果、図７に示すように、50mMTris緩衝液の割合が多くなれば、ＮＯの発生は少なくなることが分かった。この結果と、上記結果（すなわち50mMTris緩衝液の割合が少ないとＮ２Ｏの発生速度（すなわちＨＮＯの発生速度）が速くなるという結果）とから、極性の低い溶媒中では、ＨＮＯの発生と競争的にＮＯの発生も生じていることが示唆された。ただし、生体内は極性の大きな水の存在割合が多いため、生体内ではＮＯの発生は少なく、ＨＮＯ供与剤としての有用性は大きい。【００４４】
（溶解性測定）
実施例１及び比較例２〜４の化合物について、ＤＭＳＯ−水混合溶媒中での溶解性について試験を行なった。すなわち、実施例１及び比較例２〜４の化合物のＤＭＳＯ溶液を数滴、水に加えて、ＤＭＳＯ：水＝５：９５（容量比）の混合溶媒としたものを調製した。その結果、実施例１の化合物は変化が無かったのに対し、比較例２〜４の化合物は濁りを生じた。また、実施例１の化合物を上記の方法で溶解させた場合、数百μｍｏｌのレベルで溶解することが分かった。以上の結果から、実施例１の化合物は生物実験に利用できる程度の水溶解性を示すことがわかった。【００４５】
(実施例２)
アシルニトロソ化合物付加アントラセンテトラカルボン酸誘導体(Ｂ)の合成
アシルニトロソ化合物付加アントラセンテトラカルボン酸誘導体(Ｂ)は実施例１における中間体として用いたアントラセンジカルボン酸(A-4)を出発物質として、以下に示す合成ルートで合成した。詳細を以下に示す。
【化１１】
2010052993.tif 000014
【００４６】
（ステップ２−１）Ｂ−１の合成
アントラセンジカルボン酸(A-4)（200mg, 0.621 mmol）と、H-Asp(OtBu)-OtBu・HCl(350mg, 1.24 mmol)と、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（357.1 mg, 1.86 mmol）と、ブタノール１水和物（285.3 mg, 1.86 mmol）と、トリエチルアミン（0.17mL）とを、３５ｍＬのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で３時間撹拌した。その後、反応混合物に水および酢酸エチルを加えて分液した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。続いてろ過し、溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー(AcOEt /n-hexane =0/1 to 1/1)により分離し、黄色固体（B-1）を281.6 mg (58 %)得た。得られた化合物（B-1）の１Ｈ―ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (DMSO, 500 MHz, δ; ppm) 8.42 (2H, d J = 7.9 Hz), 8.37 (4H, dd, J = 3.3, 5.3 Hz), 7.59 (4H, dd, J = 3.0, 5.4 Hz), 4.55 (2H, q, J = 7.3 Hz), 3.79 (4H, t J = 8.2 Hz), 2.65 (2H, m), 2.55 (4H, overlap), 1.42 (36H, s).【００４７】
（ステップ２−２）Ｂ−２の合成
ステップ２−１で合成した化合物(B-1)（265.2 mg, 0.34 mmol）を、ジクロロメチル１５ｍＬに溶解し、トリフルオロ酢酸２．０ｍＬを加え、室温にて２４時間撹拌した。続いて、反応混合物の溶媒を留去し、トリフルオロ酢酸１５ｍＬに溶解し、更に室温にて１２時間撹拌した。続いて、反応混合の溶媒を留去し、再結晶（テトラヒドロフラン/n-ヘキサン）して、黄色固体（B-２）を151.9 mg (74 %)得た。得られた化合物（B-２）の１Ｈ―ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (CD3OD, 500 MHz, δ; ppm) 8.40 (4H, dd, J = 3.3, 5.1 Hz), 7.54 (4H, dd, J = 3.0, 5.0 Hz), 4.75 (2H, t, J = 6.9 Hz), 3.95 (4H, t, J = 7.9 Hz), 2.71 (4H, m), 2.70 (4H, m).【００４８】
（ステップ２−３）Ｂの合成
ステップ２−２で合成した化合物（Ｂ−２）（70 mg, 0.127 mmol）とNaIO4 (54.2 mg, 0.253 mmol)をアセトン１０ｍＬに懸濁させ、そこへ化合物A-7(49.9 mg, 0.253 mmol)をアセトン７ｍＬと水１０ｍＬの混合溶媒に溶解した溶液を０℃冷却下２０分間かけて加え、さらに０℃にて５時間撹拌した。その後、反応混合物に水を投入し、酢酸エチルによって抽出を行った。そして、有機層を４規定の塩酸で洗浄した後、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。その後ろ過し、溶媒を留去しつつ濃縮し、この濃縮液にｎ−ヘキサンを加えて析出させることにより、アシルニトロソ化合物付加アントラセンテトラカルボン酸誘導体(Ｂ)４８.５ｍｇを明黄色固体として得た。１Ｈ―ＮＭＲデータを以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz, δ; ppm) 9.39 (1H, br), 8.55 (1H, d, J = 7.6 Hz), 8.38 (1H, d, J = 8.2 Hz), 8.09 (2H, d, J = 9.1 Hz), 7.76 (2H, d, J = 9.1 Hz), 7.55 (4H, m), 7.30 (4H, m), 4.64 (2H, m), 2.50 (2H, overlap), 3.16 (2H, m), 2.55-2.78 (8H, m).【００４９】
（ＥＳＲスペクトルの測定）
実施例２の化合物を50mMTris緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解し、実施例１の場合と同様にしてＥＳＲスペクトルを測定した。その結果、図８に示すように、光照射時によってＮ２Ｏの発生量が明確に増大することが分かった。実施例２の化合物であるアントラセンテトラカルボン酸(B)は、水系の溶媒にＤＭＳＯ等の有機溶媒を添加しなくても溶解が可能であり、生体への投与に好適である。【００５０】
この発明は、上記発明の実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、ＨＮＯの放出を精密に時空間制御でき、水に溶けやすくて生体系への投与が可能であり、安定性に優れていて長期保存が可能な光作動型ＨＮＯ供与体として利用することができる。ＨＮＯは、新たな生物活性を有する窒素酸化物として心血管系に対しては血管を拡張する作用を示すことから、本発明のアシルニトロソ化合物付加アントラセン誘導体は、ＨＮＯ供与体として、医療への研究用試薬として利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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