(57)【要約】  簡易な構造を有し、精密な送液制御を必要とすることなく、簡易な操作で分析を実施することができ、精度が高い分析結果を迅速に得ることができるような、体液成分の分析器具を提供する。  体液試料が内部に供給される試料供給口（２）と、そこから延出する流路（３）を介して連通する反応室（４）とを備え、反応室（４）内には第一試薬（４２）と、表面が被覆層（４４）により覆われている第二試薬（４３）とが離隔して設けられ、被覆層（４４）は体液試料のみと接触しても溶解せず、第一試薬（４２）は被覆層を溶解する被覆層溶解剤を含有するよう構成する。これによって、器具の内部を複数の反応室を設けることなく、また精密な送液を行うことなく、体液試料と複数の試薬との反応を一つの反応室内で順次起こし、体液成分を高い精度で分析することが可能となる。
2011001530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液試料が内部に供給される試料供給口と、
前記試料供給口から延出する流路と、
前記流路に連通する反応室と、
前記反応室に設けられた第一試薬と、
前記第一試薬から離隔して設けられ、その表面が被覆層により覆われている第二試薬とを備え、
前記被覆層は前記体液試料のみと接触しても溶解せず、
前記第一試薬が前記被覆層を溶解する被覆層溶解剤を含有する
ことを特徴とする体液成分の分析器具。
【請求項２】
前記被覆層がアルギン酸と二価金属との塩からなり、
前記被覆層溶解剤がエチレンジアミン四酢酸とアルカリ金属との塩からなる
ことを特徴とする請求項１に記載の体液成分の分析器具。
【請求項３】
前記被覆層がアルギン酸カルシウムからなる
ことを特徴とする請求項２に記載の体液成分の分析器具。
【請求項４】
前記第二試薬がアルギン酸ナトリウムを含有し、
前記被覆層が前記第二試薬の表面に塩化カルシウムを滴下することにより形成される
ことを特徴とする請求項３に記載の体液成分の分析器具。
【請求項５】
前記反応室を取り囲む壁面が不通水性を有し、かつ前記壁面の少なくとも一部が通気性を有する
ことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の体液成分の分析器具。
【請求項６】
不通水性であり通気性の通気プレートと、
前記通気プレートの一の板面に当接するよう配置され、不通水性であり不通気性の第一封止プレートと、
前記通気プレートの他の板面に当接するよう配置され、不通水性であり不通気性の第二封止プレートとを備え、
前記通気プレートは板厚方向に貫通する貫通孔を有し、
前記貫通孔と前記第一封止プレートと前記第二封止プレートとにより前記反応室が区画され、
前記第一試薬が前記第一封止プレートに付着されており、
前記第二試薬が前記第二封止プレートに付着されている
ことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の体液成分の分析器具。
【請求項７】
前記第一封止プレートおよび第二封止プレートのうち、前記反応室に隣接する部分が光透過性を有する
ことを特徴とする請求項６に記載の体液成分の分析器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体液中の特定成分の迅速かつ高精度な測定を、簡易に実施することができる体液成分の分析器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
体液中の特定成分の分析を迅速かつ高精度に実施することができる簡便な装置として、体液試料を滴下してその内部で複数の反応を起こさせ、反応後の体液試料の物理量を測定することによって分析対象の成分を測定できるように構成された体液成分の分析器具が、広く用いられている。【０００３】
例えば、分析対象が高比重リポ蛋白（以下ＨＤＬと称す）中のコレステロール（以下ＨＤＬ−Ｃと称す）である場合、分画を必要とすることなくリポ蛋白に対する界面活性剤の特異性の差を利用し選択的にＨＤＬ−Ｃを測定するという、いわゆる直接法を利用した、試験片状の分析器具が知られている（特許文献１参照）。特許文献１に開示される分析器具は、ＨＤＬ−Ｃを特異的に測定するために、滴下された体液試料に対し、まずＨＤＬ以外のリポ蛋白の溶解を妨げる試薬を反応させ、次にＨＤＬに対する可溶化性能が高い試薬を反応させた後、コレステロール測定用酵素試薬と反応させるよう構成されている。しかし、分析対象の成分を測定するために複数の異なる反応を所定の順に起こさせる必要があるため、特許文献１に開示される分析器具では、体液試料の進行方向に沿って、それぞれの反応を起こすための試薬を多孔質体の所定の位置に層状に配置する必要があった。また、体液試料の移動は多孔質体の中でのクロマト作用に依存するため、反応時間を一定に制御することが困難であった。【０００４】
また、分析対象がグルコースである場合については、体液中のグルコースを簡単に測定できる分析器具も知られている（特許文献２参照）。特許文献２では、還元酵素を用いて体液中のグルコースを分析する分析器具が開示されているが、体液に含まれるアスコルビン酸は還元性を有しており、これにより還元発色剤が呈色するため、アスコルビン酸は測定における正誤差の要因となる。また、酸化酵素を用いて体液中のグルコースを分析する形態とした場合、過酸化水素をペルオキシターゼとアスコルビン酸とが競合して奪い合うため、アスコルビン酸は測定における負誤差の要因となる。そこで、特許文献２に開示される分析器具では、アスコルビン酸の還元性の影響を除去するために、体液試料をアスコルビン酸オキシターゼが備えられた試料処理室に一定時間滞留させることによって、体液試料とアスコルビン酸オキシターゼとを反応させてアスコルビン酸を酸化分解し、その後精密な送液制御をおこなって測光室に体液試料を移送し、測光室にて呈色反応を起こさせるという構成が採用されている。すなわち、従来の分析器具においては、阻害因子を除去する第一反応を起こす室と、分析対象の成分を測定するための第二反応を起こす室とを分離して設ける必要があった。また、分析器具内部で微量の体液試料を移送するために、精密な送液制御が可能な装置を別途必要としていた。【０００５】
上述の通り、体液中の特定の成分を分析しようとすると、まず体液試料に含まれる阻害因子を除去する第一反応を起こし、第一反応が完了した後で、分析対象の成分を測定するための第二反応を起こさせるような手順を必要とする場合がある。そして、この分析の手順を簡易な器具により実施しようとする場合、第一反応を起こす室と第二反応を起こす室とを分離して設ける必要がある上に、精密な送液制御が可能な装置を別途必要とするという問題があった。【０００６】
そこで、簡易な構造を有し、精密な送液制御を必要とすることなく、簡易な操作で分析を実施することができ、精度が高い分析結果を迅速に得ることができるような、体液成分の分析器具が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第３６８６３２６号公報
【特許文献２】特許第３４８０８７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明が解決しようとする課題は、簡易な構造を有し、精密な送液制御を必要とすることなく、簡易な操作で分析を実施することができ、精度が高い分析結果を迅速に得ることができるような、体液成分の分析器具を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、前記課題を解決するためになされたもので、請求項１に記載の発明は、体液試料が内部に供給される試料供給口と、前記試料供給口から延出する流路と、前記流路に連通する反応室と、前記反応室に設けられた第一試薬と、前記第一試薬から離隔して設けられ、その表面が被覆層により覆われている第二試薬とを備え、前記被覆層は前記体液試料のみと接触しても溶解せず、前記第一試薬が前記被覆層を溶解する被覆層溶解剤を含有することを特徴とする体液成分の分析器具である。【００１０】
請求項１に記載の発明によれば、試料供給口に体液試料を供給した後反応室に送液すると、まず体液試料に第一試薬が溶解して第一反応が始まり、第一反応が終了した後第一試薬に含まれる被覆層溶解剤により被覆層が溶解し第二試薬が露出し、体液試料に第二試薬が溶解して第二反応が始まる。すなわち、器具の内部を複数の反応室を設けることなく、また精密な送液を行うことなく、一つの反応室内で複数の反応を順次起こすことが可能な体液成分の分析器具を提供することができる。【００１１】
請求項２に記載の発明は前記被覆層がアルギン酸と二価金属との塩からなり、前記被覆層溶解剤がエチレンジアミン四酢酸とアルカリ金属との塩からなることを特徴とする請求項１に記載の体液成分の分析器具である。【００１２】
請求項２に記載の発明によれば、反応室に流入した体液試料に第一試薬が溶解して反応室内に放出されるエチレンジアミン四酢酸の錯化反応により、被覆層の二価金属が除去されて被覆層が破壊され、第二試薬が反応室内で露出するよう構成された体液成分の分析器具を提供することができる。【００１３】
請求項３に記載の発明は、前記被覆層がアルギン酸カルシウムからなることを特徴とする請求項２に記載の体液成分の分析器具である。【００１４】
請求項３に記載の発明によれば、第二試薬を安全にかつ確実に被覆する被覆層を備えた体液成分の分析器具を提供することができる。【００１５】
請求項４に記載の発明は、前記第二試薬がアルギン酸ナトリウムを含有し、前記被覆層が前記第二試薬の表面に塩化カルシウムを滴下することにより形成されることを特徴とする請求項３に記載の体液成分の分析器具である。【００１６】
請求項４に記載の発明によれば、簡便な方法で、第二試薬の表面を覆う被覆層を形成することが可能な体液成分の分析器具を提供することができる。【００１７】
請求項５に記載の発明は、前記反応室を取り囲む壁面が不通水性を有し、かつ前記壁面の少なくとも一部が通気性を有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の体液成分の分析器具である。【００１８】
請求項５に記載の発明によれば、精密な送液制御をすることなく、試料供給口を与圧するだけで体液試料を確実に反応室に移送することが可能な体液成分の分析器具を提供することができる。【００１９】
請求項６に記載の発明は、不通水性であり通気性の通気プレートと、前記通気プレートの一の板面に当接するよう配置され、不通水性であり不通気性の第一封止プレートと、前記通気プレートの他の板面に当接するよう配置され、不通水性であり不通気性の第二封止プレートとを備え、前記通気プレートは板厚方向に貫通する貫通孔を有し、前記貫通孔と前記第一封止プレートと前記第二封止プレートとにより前記反応室が区画され、前記第一試薬が前記第一封止プレートに付着されており、前記第二試薬が前記第二封止プレートに付着されていることを特徴とする請求項５に記載の体液成分の分析器具である。【００２０】
請求項６に記載の発明によれば、第一封止プレートに第一試薬を付着し、第二封止プレートに第二試薬を付着しさらに被覆層を形成した後、通気プレートと第一封止プレートと第二封止プレートとを積層することによって構成することが可能な体液成分の分析器具を提供することができる。【００２１】
請求項７に記載の発明は、前記第一封止プレートおよび第二封止プレートのうち、前記反応室に隣接する部分が光透過性を有することを特徴とする請求項６に記載の体液成分の分析器具である。【００２２】
請求項７に記載の発明によれば、第二反応が終了した後反応室の光学的変化量を測定することにより体液成分を分析することが可能な体液成分の分析器具を提供することができる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、試料供給口に体液試料を供給した後反応室に送液すると、まず体液試料に第一試薬が溶解して第一反応が始まり、第一反応が終了した後第一試薬に含まれる被覆層溶解剤により被覆層が溶解し第二試薬が露出し、体液試料に第二試薬が溶解して第二反応が始まる。すなわち、器具の内部を複数の反応室を設けることなく、また精密な送液を行うことなく、体液成分を分析することが可能な体液成分の分析器具を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本発明の実施の形態に係る体液成分の分析器具を示す平面図である。
【図２】図１におけるＡ−Ａ断面を示す断面図である。
【図３】本発明の実施の形態に係る体液成分の分析器具を示す分解斜視図である。
【図４】図１におけるＡ−Ａ断面のうち反応室を拡大した拡大断面図であって、体液試料が反応室に流入した後の試薬の溶解を示した図である。
【図５】本発明の実施例および比較例における、吸光度の時間変化を示す図である。
【図６】本発明の実施例および比較例における、試料中のアスコルビン酸の濃度による吸光度の変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
次に、この発明の実施の形態について図面に基づき説明する。なお、以下に述べる実施の形態は、本発明の好適な実施の形態であるから、技術的に好ましい種々の限定が付されているが、本発明の範囲は、以下の説明において特に本発明を限定する旨の記載がない限り、これらの態様に限られるものではない。
【００２６】
図１〜図３に、本発明に係る体液成分の分析器具の実施の形態を示す。図１は本実施の形態に係る体液成分の分析器具の平面図であり、図２は図１におけるＡ−Ａ断面を示す断面図であり、図３は本実施の形態に係る体液成分の分析器具の分解斜視図である。また、図４に、図１におけるＡ−Ａ断面のうち反応室を拡大した拡大断面図において、体液試料が反応室に流入した後の試薬の溶解を示す。なお、本実施の形態は、体液試料として血漿試料を滴下してグルコースを測定する形態となっている。
【００２７】
まず、本実施の形態に係る体液成分の分析器具の構造について説明する。図１〜３に示すように、本実施の形態に係る体液成分の分析器具１は、第一封止プレート１１と、通気プレート１２と、第二封止プレート１３とが積層されて構成されている。通気プレート１２の一の板面１２ａと第一封止プレート１１の内方板面１１ａとが当接し、通気プレート１２の他の板面１２ｂと第二封止プレート１３の内方板面１３ａとが当接し、当接する面同士は両面テープなどの接着層（図示なし）を介して互いに接着されて構成されている。
【００２８】
第一封止プレート１１には板厚方向に貫通する貫通孔２１が設けられており、試料供給口２を形成している。通気プレート１２にも貫通孔２１と略同心位置に板厚方向に貫通する貫通孔２２が設けられ、貫通孔２２からは溝３１が延出している。溝３１と第一封止プレート１１の内方板面１１ａおよび第二封止プレート１３の内方板面１３ａとで囲まれた領域が、試料供給口２から延出する流路３を区画している。
【００２９】
なお、試料供給口２に血球成分を分離する血球分離膜（図示なし）を設置し、全血試料を当該血球分離膜に滴下して、血球成分が除去された体液試料が試料供給口２に流入するよう構成することも可能である。
【００３０】
通気プレート１２には溝３１と連通し、板厚方向に貫通する貫通孔４１が設けられている。貫通孔４１と第一封止プレート１１の内方板面１１ａおよび第二封止プレート１３の内方板面１３ａとで囲まれた領域が反応室４を区画している。反応室４の中において、第一封止プレート１１の内方板面１１ａには、第一試薬４２が付着されているとともに、第二封止プレート１３の内方板面１３ａには、第二試薬４３が付着されている。さらに、被覆層４４が第二試薬４３の表面を覆うよう設けられている。この構成により、第一試薬４２と第二試薬４３とを反応室４内において離隔して設けることが容易となる。
【００３１】
なお、第二試薬４３および被覆層４４を第一封止プレート１１の内方板面１１ａに、第一試薬４２を第二封止プレート１３の内方板面１３ａに設けることも可能であるし、反応室４内における別の位置にこれらの試薬を離隔して設けることも可能である。また、反応後の反応室４における光学的変化量を測定する際に外部から反応室４まで光が到達するよう、第一封止プレート１１および第二封止プレート１３のうち、少なくとも貫通孔４１と略同心位置にある部分、すなわち反応室４に隣接する部分については、光透過性を有するよう構成されている。開孔が設けられた光透過性を有さない膜（図示なし）を第一封止プレート１１および第二封止プレート１３に貼着したり、光透過性を付与する領域の周囲に光透過性を有さない塗料（図示なし）を塗布することなどによって、光透過性を有する部分の大きさを設定することができる。
【００３２】
次に各構成要素の材質について説明する。第一封止プレート１１および第二封止プレート１３は不通気性でありかつ不通水性であり、材質としては、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）やＡＳ樹脂のようなプラスチック材料が、加工が容易であるため好適である。しかし、体液試料が漏出することがない流路を形成することができれば、これに限定されるものではない。
【００３３】
通気プレート１２は不通水性であるとともに通気性であり、材質としては、不通水性であり通気性のある多孔質材が好適に用いられる。孔および溝の加工が容易であり、反応室４を取り囲む壁面の一部が通気性を有することになり、ここから空気が逃げるため、空気抜き孔等を設けることなく体液試料を反応室４まで移送することが可能となるからである。不通水性で通気性のある多孔質材として、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）や、撥水処理を施したセルロースアセテートおよびセルロース混合エステルなどが、好適に使用される。なお、反応室４の壁面から外部に連通する空気抜き孔を設けることもでき、その場合通気プレート１２について、不通水性であり通気性のある材料に代えて不通気性でありかつ不通水性の材料を用いることも可能となる。
【００３４】
第一試薬４２は、体液試料に溶解して第一反応が発生するよう、第二試薬４３は、第一反応が終了した後の体液試料に溶解して第二反応が発生するよう構成されている。なお、第一反応は、分析対象の成分の測定を阻害する阻害因子が除去される反応であり、第二反応は、分析対象の成分が測定可能となるように、光学的特性や電気的特性などの物理量が変化する反応である。第二反応が終了した後、体液試料は光学的特性や電気的特性などの物理量の変化を呈するため、その変化量を測定することにより体液成分を分析することができる。本実施の形態では、第二反応が終了した後の体液試料の光学的変化量を測定することにより体液成分を分析することができる。なお、反応室４に電極などを設けることによって、電気的特性の変化を測定して体液成分を分析するよう構成することも可能である。
【００３５】
第二試薬４３は、その表面が被覆層４４により覆われており、被覆層４４は体液試料と接触しても溶解しないような材質で構成されている。第一試薬４２は被覆層４４を溶解する被覆層溶解剤を含有している。すなわち、第一反応が終了した後、体液試料に溶け出した被覆層溶解剤の作用により被覆層４４が溶解して第二試薬４３が露出し、体液試料に第二試薬４３が溶解して第二反応が始まる。なお、被覆層４４の厚さおよび第一試薬４２に含まれる被覆層溶解剤の濃度を調節することによって、体液試料が反応室４に流入してから第二試薬４３が露出するまでの時間をコントロールすることが可能である。本実施形態では、被覆層４４はアルギン酸と二価金属との塩からなり、第一試薬４２に含まれる被覆層溶解剤はエチレンジアミン四酢酸とアルカリ金属との塩からなる。この構成によると、体液試料のみとの接触によっても被覆層４４は溶解しないが、体液試料に溶解した第一試薬４２に含まれる被覆層溶解剤のエチレンジアミン四酢酸の錯化反応により、被覆層４４の二価金属が除去されて被覆層４４が破壊され、第二試薬４３が露出することになる。
【００３６】
第二試薬４３を被覆層４４で覆う方法は任意であるが、第二試薬４３にアルギン酸ナトリウムを含有させておき、第二試薬４３を第二封止プレート１３に付着させた後、その表面に塩化カルシウムを滴下すると、第二試薬４３の表面がアルギン酸カルシウムに変化するため、簡便な方法で、反応に影響を及ぼさないアルギン酸カルシウムからなる被覆層４４が、第二試薬４３の表面を覆うように形成することができ、好適である。なお、第二試薬４３中のアルギン酸ナトリウムの濃度および第二試薬４３に滴下する塩化カルシウムの濃度を調節することによって、形成される被覆層４４の厚さを調節することができる。そしてさらに、第一試薬４２に含まれるエチレンジアミン四酢酸の濃度を調節することにより、体液試料が反応室４に流入してから第二試薬４３が露出するまでの時間を、容易にコントロールすることができる。
【００３７】
なお、本実施の形態において、還元酵素を使用してグルコースを測定する場合、第一試薬４２は、グルコース脱水素酵素とジアホラーゼとを含有しつつ、阻害因子であるアスコルビン酸を除去するため、アスコルビン酸オキシターゼをも含有するよう調製し、第二試薬４３は、還元発色剤を含有するよう調製するのが好適である。また、酸化酵素を使用してグルコースを測定する場合には、第一試薬４２は、アスコルビン酸オキシターゼと酸化縮合発色剤とを含有するよう調製し、第二試薬４３はグルコース酸化酵素とペルオキシターゼとを含有するよう調製するのが好適である。アスコルビン酸とペルオキシダーゼとの競合によって呈色の低下を生じないよう、グルコース酸化酵素の反応が進む前にアスコルビン酸を除去するためである。
【００３８】
ここで、本実施の形態における分析対象であるグルコースに代えて、ＨＤＬ−Ｃを分析対象とするよう構成することもできる。この場合、第一試薬４２については、ＨＤＬ以外のリポ蛋白の溶解を妨げる界面活性剤などの試薬を含有するよう調製し、第二試薬４３については、ＨＤＬに対する可溶化性能が高い界面活性剤などの試薬とコレステロール測定用酵素試薬とを含有するよう調製すればよい。
【００３９】
次に、本実施の形態に係る体液成分の器具を用いた分析の手順および体液成分の分析器具の作用について、図１〜４に基づいて説明する。
【００４０】
まず、血漿から成る体液試料を試料供給口２に滴下し、その後試料供給口２を与圧する。なおここで、試料供給口２に血球分離膜を設置した場合には、体液試料として全血試料を血球分離膜に滴下することができ、血球分離膜により血球成分が除去された体液試料が、試料供給口２に流入することになる。
【００４１】
通気プレート１２は通気性を有しつつ不通水性を有し、そのため反応室４の壁面も通気性を有するため、体液試料は流路３を通り反応室４に流入し、そこに留まる。体液試料が反応室４に流入してから以降の反応室４の拡大断面図を図４に示す。図４において５は体液試料を指す。図４（ａ）は体液試料５が反応室４に流入した直後の図である。
【００４２】
反応室４において、体液試料５と接触することによって、第一試薬４２が体液試料５に溶解し始める。一方、第二試薬４３は被覆層４４により覆われており、また被覆層４４は体液試料５のみとの接触によっても溶解しないため、第二試薬４３はまだ露出しない。そして時間の経過により、第一試薬４２は体液試料５に完全に溶解する（図４（ｂ）参照）。
【００４３】
第一試薬４２が体液試料５に溶解することによって第一反応が進行し、体液試料５中に存在する、分析対象の成分の測定を阻害する阻害因子が除去される。それと同時に、第一試薬４２に含まれている被覆層溶解剤が体液試料５に溶け出し、被覆層溶解剤による被覆層４４の溶解が進行する。そして被覆層４４が破壊されると第二試薬４３が露出する。この段階で第一反応は終了しており、すでに阻害因子は除去されている。露出した第二試薬４３は体液試料５に溶解してゆき、第二反応が進行する。そして時間の経過により第二試薬４３は体液試料５に完全に溶解し、第二反応も終了する（図４（ｃ）参照）。第二反応が終了すると、光学的特性や電気的特性などの物理量の変化により分析対象の成分が測定可能となる。本実施の形態では、第二反応により体液試料５の光学的特性が変化し、反応室４における光学的特性の変化を測定することによって、分析対象の成分を測定することができるよう構成されている。
【００４４】
（実施例）
ここで、本発明に係る分析器具の効果を確認するため、本実施の形態に係る体液成分の分析器具の具体的実施例と、比較例とを用いて試料を分析し、その結果について比較を行った。
【００４５】
分析対象はグルコースとした。グルコース濃度が既知の試料に、阻害因子であるアスコルビン酸を添加したものを、実施例および比較例に適用した。具体的には、グルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬで共通であり、アスコルビン酸の濃度がそれぞれ０ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｄＬおよび２０ｍｇ／ｄＬの、三種の試料を用いて比較した。また、反応室４の隙間、すなわち第一封止プレート１１の内方板面１１ａと第二封止プレート１３の内方板面１３ａとの間の距離は１５０μｍであり、反応室４に試料を移送して第一試薬４２および第二試薬４３を溶解した後、反応室４に６３０ｎｍの光を照射して吸光度を測定した。
【００４６】
本実施例に用いた第一試薬、第二試薬および被覆層の調製を以下に示す。
【００４７】
（第一試薬）
グルコース脱水素酵素  １２０Ｕ／Ｌ（反応時）
ジアホラーゼ  ４０Ｕ／Ｌ（反応時）
ＰＩＰＥＳ緩衝剤  １５０ｍＭ（反応時）
アスコルビン酸オキシターゼ  １０００Ｕ／Ｌ（反応時）
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム  ０．５％（反応時）
ソルビトール  ２％（反応時）
【００４８】
（第二試薬および第一被覆層形成剤）
酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（β−ＮＡＤ）  ２０ｍＭ（反応時）
水溶性テトラゾリウム塩（ＷＳＴ−８）  ４０ｍＭ（反応時）
アルギン酸ナトリウム  １％（反応時）
【００４９】
（第二被覆層形成剤）
塩化カルシウム  ０．５％（反応時）
【００５０】
なお、上記の、第二試薬および第一被覆層形成剤を調製し第二封止プレート１３に付着（１．４ｍｍのセル部に３００ｎＬを滴下し、１０％ＲＨ環境下にて自然乾燥）した後、この表面に上記第二被覆層形成剤たる塩化カルシウムを１５０ｎＬ滴下して、１０％ＲＨ環境下にて自然乾燥すると、第二試薬および第一被覆層形成剤の表面がアルギン酸カルシウムに変化して、第二試薬の表面を覆う被覆層が形成される。
【００５１】
（比較例）
比較例としては、上記実施例での第一試薬におけるアスコルビン酸オキシターゼと、第二被覆膜形成剤とを除いたものを用いた。
【００５２】
実施例に係る体液成分の分析器具を用いた測定値と、比較例に係る体液成分の分析器具を用いた測定値との比較結果を、図５および図６に示す。図５は、実施例および比較例における吸光度の時間変化を示す図である。図６は、実施例および比較例における試料中のアスコルビン酸の濃度による吸光度の変化を示す図である。なお、図５における横軸は試料が反応室４に流入してからの経過時間を示し、縦軸は吸光度を示している。図６における横軸はアスコルビン酸の濃度を示し、縦軸は吸光度を示している。
【００５３】
図５に示すように、比較例では、反応室４に試料が流入してすぐに吸光度が上昇し始めており、またアスコルビン酸の濃度によって吸光度が異なっており、三種の試料いずれについても時間の経過とともに吸光度が上昇していくが、アスコルビン酸の濃度が高いほど高い吸光度で推移していることがわかる。
【００５４】
これに対して実施例では、反応室４に試料が流入してから約６０秒間は吸光度がほぼ不変である。これは、被覆層４４の存在により第二試薬４３が試料に溶解せず第二反応が起こらないためであり、この約６０秒間の間に第一試薬４２が試料に溶解し、被覆層４４の溶解が徐々に進行していることを示している。そして、被覆層４４が破壊されて第二試薬４３が試料に溶解し始め、第二反応が進行するに従って吸光度が上昇する。
【００５５】
そして実施例では、三種の試料における吸光度の時間変化は、アスコルビン酸の濃度に違いによらずほぼ同じである。これは、第二反応に先立つ第一反応によって阻害因子たるアスコルビン酸がすでに酸化分解されているため、第二反応における吸光度変化に影響を及ぼしていないことを示している。
【００５６】
図６はアスコルビン酸の濃度による吸光度の変化を示している。なお、比較例については、試料が反応室４に流入してから３００秒経過後の吸光度を、実施例については試料が反応室４に３６０秒経過後の吸光度を示している。実施例については、試料が反応室４に流入してから約６０秒経過後に第二試薬４３の溶解が始まるため、比較例および実施例いずれについても、第二試薬４３の溶解が始まってから約３００秒経過後の吸光度を示している。図示の通り、比較例では、アスコルビン酸の濃度の増加に従って吸光度の測定値は正誤差が増加する傾向が見られたが、実施例ではアスコルビン酸の濃度にかかわらず吸光度の測定値はほぼ一定となっている。すなわち、本発明に係る体液成分の分析器具を用いることにより、阻害因子の除去を行う第一反応が終了した後、吸光度の変化が生じる第二反応を開始することができ、高精度な体液成分の分析が可能となっていることが示されている。
【符号の説明】
【００５７】
１  体液成分の分析器具
１１  第一封止プレート
１２  通気プレート
１３  第二封止プレート
２  試料供給口
２１  貫通孔
２２  貫通孔
３  流路
３１  溝
４  反応室
４１  貫通孔
４２  第一試薬
４３  第二試薬
４４  被覆層
５  体液試料
【図１】
2011001530.tif 000003
【図２】
2011001530.tif 000004
【図３】
2011001530.tif 000005
【図４】
2011001530.tif 000006
【図５】
2011001530.tif 000007
【図６】
2011001530.tif 000008
【国際調査報告】
2011001530.tif 000009
2011001530.tif 000010
2011001530.tif 000011
2011001530.tif 000012