(57)【要約】  より低分子量で、合成工程数が少なく、製造コストの安価な美白剤を開発する必要がある。  本発明は、４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む美白剤を提供する。本発明は、本発明の美白剤を含む美白用皮膚外用組成物、化粧料組成物及び医薬品組成物を提供する。本発明は、４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を投与するステップを含む、皮膚を美白にする美容方法を提供する。本発明の美白剤及び皮膚を美白にする美容方法において、前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び／又は４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの場合がある。【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含むことを特徴とする、美白剤。
【請求項２】
前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンであることを特徴とする、請求項１に記載の美白剤。
【請求項３】
前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンであることを特徴とする、請求項１に記載の美白剤。
【請求項４】
経口投与剤であることを特徴とする、請求項１ないし３に記載の美白剤。
【請求項５】
請求項１ないし３のいずれか１つに記載の美白剤を含むことを特徴とする、美白用皮膚外用組成物。
【請求項６】
請求項１ないし３のいずれか１つに記載の美白剤を含むことを特徴とする、食品組成物。
【請求項７】
請求項１ないし３のいずれか１つに記載の美白剤を含むことを特徴とする、医薬品組成物。
【請求項８】
４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含むことを特徴とする、皮膚外用組成物。
【請求項９】
４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を投与するステップを含むことを特徴とする、皮膚を美白にする美容方法。
【請求項１０】
前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンであることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンであることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤と、皮膚を美白にする美容方法とに関し、具体的には、４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む美白剤と、該美白剤を投与するステップを含む皮膚を美白にする美容方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の色素であるメラニンは、表皮の基底膜付近に存在するメラノサイトによって産生され、表皮細胞に抱き込まれた形で表皮細胞とともに皮膚表面に移動して、最終的に垢として皮膚から剥がれ落ちる。皮膚の黒化やシミ、ソバカス等の色素異常は、表皮内におけるメラニンの異常増加、沈着によって生じ、紫外線、女性ホルモン、遺伝的要因などの関与が指摘されている。そこで、メラニン生成を抑制することによって皮膚色素の沈着を軽減する美白剤が開発されてきた（特許文献１及び２、非特許文献１及び２）。【０００３】
例えば、還元剤のハイドロキノンは美白効果があり、紫外線による色素斑形成の予防剤として医薬部外品として指定されている。また、メラニン合成の最初の２段階の反応を触媒する酵素であるチロシナーゼに対する阻害活性を有する化合物は美白剤として有用であると考えられている。これまでに、ゲンチジン酸メチル、ベンズイミダゾール、レゾルシノール等の化合物が美白剤として開発されている（特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第６８５２７４７号公報
【特許文献２】米国特許出願公開第２００９／００２３７９２号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，５：２６３−２６６（１９９０）．
【非特許文献２】Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５７：６６３−６７２（１９９９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、ハイドロキノンには皮膚刺激性等の副作用と、チャイニーズハムスターＶ７９細胞における突然変異原活性とが知られている（非特許文献１）。ゲンチジン酸メチルにはかかる突然変異原活性はないとされるが、ゲンチジン酸メチルの分子量が１６８であり、より低分子量で、合成工程数が少なく、製造コストの安価な美白剤を開発する必要がある。また、かかる美白剤を含む医薬品、化粧品及び食品と、該美白剤を投与するステップを含む皮膚を美白にする美容方法とを開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む美白剤を提供する。【０００８】
本発明の美白剤において、前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び／又は４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの場合がある。【０００９】
本発明は、本発明の美白剤を含む化粧料組成物を提供する。【００１０】
本発明の化粧料組成物は皮膚外用剤の場合がある。【００１１】
本発明は、本発明の美白剤を含む食品組成物を提供する。【００１２】
本発明は、本発明の美白剤を含む医薬品組成物を提供する。【００１３】
本発明の医薬品組成物は皮膚外用剤の場合がある。【００１４】
本発明は、４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を投与するステップを含む、皮膚を美白にする美容方法を提供する。【００１５】
本発明の皮膚を美白にする美容方法において、前記４−シス−ヒドロキシプロリンは４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び／又は４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの場合がある。【００１６】
本発明の皮膚を美白にする美容方法において、前記化合物を投与するステップは皮膚表面への外用の場合がある。【００１７】
本発明の皮膚を美白にする美容方法において、前記化合物を投与するステップは経口適用の場合がある。【００１８】
本発明は、４−シス−ヒドロキシプロリンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物の、皮膚の色素異常を伴う疾患を治療するための医薬品組成物を製造するための使用を提供する。本発明の医薬品組成物を製造するための使用において、前記４−シス−ヒドロキシプロリンは、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び／又は４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの場合がある。【００１９】
ヒドロキシプロリンは、水酸基の位置が３位又は４位（位置異性体）か、その立体異性体がシス体又はトランス体（幾何異性体）か、プロリンがＤ体又はＬ体（光学異性体）かによって８種類の立体異性体が存在する。ヒドロキシプロリンは自然界では一般的に４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンとして存在するが、他の立体異性体の存在は極めて限定されていることが知られている。以下に４−ヒドロキシプロリンの幾何異性体及び光学異性体の構造式を示す。【００２０】
【化１】
2010113590.tif 000002
【００２１】
本明細書において「ヒドロキシプロリン」はプロリンのＬ−体又はＤ−体の複素環の３位又は４位が水酸化された化合物の全てをいう。このうち４位が水酸化された化合物には、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリン、４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンが含まれる。本発明において「４−シス−ヒドロキシプロリン」とは、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンのみと、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンのみと、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンとのうちいずれかをいう。【００２２】
本発明において「美白」又は「皮膚を美白にする」とは、皮膚の黒化やシミ、ソバカス等の色素異常を消失、軽減及び／又は予防することをいう。美白化の作用機序は、メラノサイトの分化抑制、チロシナーゼ等のメラニン産生酵素の阻害によるメラノサイト内でのメラニン生成の抑制と、産生されたメラニンの分解、還元、脱色化等と、表皮内メラニンの排泄促進とを含むが、これらに限られない。【００２３】
本明細書において、「皮膚の色素異常を伴う疾患」とは、雀卵斑、肝斑、色素性母斑、青色母斑、太田母斑、後天性真皮メラノサイトーシス、網状肢端色素沈着症、進行性肢端黒皮症、老人性色素斑、色素沈着型接触皮膚炎、日焼け、光線性花弁状色素斑、光線性白斑黒皮症、化学・薬剤性色素沈着、アジソン病、妊娠による色素沈着、クロウ・深瀬症候群等を含むが、これらに限定されない。【００２４】
本発明において４−シス−ヒドロキシプロリンの誘導体とは、４−シス−ヒドロキシプロリンの美白化効果を損なわないことを条件として、４−シス−ヒドロキシプロリンを構成する水素以外の原子がいずれかの原子団と共有結合したものを指す。前記いずれかの原子団は、Ｎ−フェニルアセチル基、４，４’−ジメチトキシトリチル（ＤＭＴ）基等のような保護基と、タンパク質、ペプチド、糖、脂質、核酸等のような生体高分子と、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリビニル、ポリエステル等のような合成高分子と、エステル基等のような官能基とを含むがこれらに限定されない。前記エステル基は、例えば、メチルエステル、エチルエステルその他の脂肪族エステルか、芳香族エステルかを含む場合がある。【００２５】
本発明において４−シス−ヒドロキシプロリンの塩とは、４−シス−ヒドロキシプロリンの美白化効果を損なわないことを条件として、金属塩、アミン塩等を含むいずれかの塩をいう。前記金属塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等を含む場合がある。前記アミン塩は、トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩等を含む場合がある。【００２６】
本発明の４−シス−ヒドロキシプロリンは、以下の実施例に示すとおり、単体で培養マウスＢ１６メラノーマ細胞に対して３３．３〜３３３ｐｐｍ又は１１．１〜３３．３ｐｐｍの濃度範囲でメラニン量の低減効果を有する。したがって、本発明の医薬品組成物と、化粧品組成物と、食品組成物とに含まれる４−シス−ヒドロキシプロリンの量は、この濃度範囲の４−シス−ヒドロキシプロリン単体が生体皮膚組織のメラノサイトに送達されることを条件として、いかなる含有量であってもかまわない。本発明の組成物が外用剤の場合における４−シス−ヒドロキシプロリンの含有量は、本発明の組成物全量中０．００００１５重量％から５０重量％か配合可能な最大重量濃度かまでの範囲であればよい。すなわち前記組成物が外用剤の場合における４−シス−ヒドロキシプロリンの含有量は、０．００００３重量％〜３０重量％が望ましく、０．０００３重量％〜３重量％が最も望ましい。本発明の組成物が内服剤の場合における４−シス−ヒドロキシプロリンの含有量は、０．００００１重量％〜１００重量％の範囲であればよい。本発明の組成物が内服剤の場合における４−シス−ヒドロキシプロリンの含有量は、０．００００２重量％〜８０重量％が望ましく、０．０００２重量％〜６０重量％であることが最も望ましい。なお、本発明の組成物として４−シス−ヒドロキシプロリンの一日摂取量の下限は体重１ｋｇあたり０．０１ｎｇ、０．１ｎｇ又は１ｎｇであればよい。【００２７】
本発明の化粧品組成物は、４−シス−ヒドロキシプロリンの美白効果を損なわないことを条件として、医薬部外品を含む化粧品や医薬品等の皮膚外用剤等に用いられる他の成分を、必要に応じて適宜配合することができる。前記他の成分（任意配合成分）としては、例えば、油分、界面活性剤、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤等が挙げられる。【００２８】
本発明の化粧品組成物とは、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤及び化粧品組成物に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。【００２９】
本発明の食品組成物は、４−シス−ヒドロキシプロリン単体、４−シス−ヒドロキシプロリンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によって４−シス−ヒドロキシプロリンを放出できる誘導体に加えて、４−シス−ヒドロキシプロリンの美白効果を損なわないことを条件として、調味料、着色料、保存料その他の食品として許容される成分を含む場合がある。【００３０】
本発明の食品組成物は、例えば、清涼飲料、グミ、キャンディー、錠菓等、従来食品組成物に用いるものであればいずれでもよく、このような例示に限定されるものでない。【００３１】
本発明の医薬品組成物は、４−シス−ヒドロキシプロリン単体、４−シス−ヒドロキシプロリンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によって４−シス−ヒドロキシプロリンを放出できる誘導体に加えて、４−シス−ヒドロキシプロリンの美白効果を損なわないことを条件として、さらに、他の疾患の治療に有効な成分及び／又は薬学的に許容される添加物を１種類又は２種類以上含む場合がある。前記添加物は、希釈剤及び膨張剤と、結合剤及び接着剤と、滑剤と、流動促進剤と、可塑剤と、崩壊剤と、担体溶媒と、緩衝剤と、着色料と、香料と、甘味料と、防腐剤及び安定化剤と、吸着剤と、当業者に知られたその他の医薬品添加剤とを含むが、これらに限られない。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１Ａ】４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量の効果を示すグラフ。
【図１Ｂ】４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量の効果を示すグラフ。
【図１Ｃ】４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量の効果を示すグラフ。
【図１Ｄ】４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量の効果を示すグラフ。
【図２Ａ】４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量低減の効果を示すグラフ。
【図２Ｂ】４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量低減の効果を示すグラフ。
【図２Ｃ】４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの混合溶液の細胞増殖及びメラニン量低減の効果を示すグラフ。
【図３Ａ】４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量低減の効果を示すグラフ。
【図３Ｂ】４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量低減の効果を示すグラフ。
【図３Ｃ】異なる比率で混合された４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの混合液の細胞増殖及びメラニン量低減の効果を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。
【実施例１】
【００３４】
細胞培養
細胞はマウスＢ１６メラノーマ細胞を用いた。前記細胞は１ｘ１０５個／ウェルとなるように６ウェルプレートに播種され、１０％  ウシ胎児血清を添加した市販の培地（Ｅａｇｌｅ  ＭＥＭ、  日水製薬）を用いて培養された。前記細胞は、３７°Ｃ、５％ＣＯ２及び飽和水蒸気雰囲気下で培養された。【００３５】
試薬
本発明の実施例において用いられるヒドロキシプロリンのうち、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリン及び４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンはシグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社から購入され、４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンはＢａｃｈｅｍ社から購入された。【００３６】
ヒドロキシプロリンの添加
ヒドロキシプロリンの細胞増殖及びメラニン量低減の効果を検討する場合には、上記２４時間細胞培養後に、４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン、４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリン、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンのさまざまな濃度の濃縮水溶液を用意して、同一体積を添加後に、３日間培養して実験に用いた。なお対照実験では前記体積の水が添加された。【００３７】
細胞数の定量
試験物質溶液添加から３日後に培地を吸引除去した後、１０％のａｌａｍａｒＢｌｕｅ（商標、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ、バイオソース・インターナショナル）溶液を含むＥａｇｌｅ’ｓ−ＭＥＭ培地を添加して、３７℃で反応させた。３０分後に励起波長５４４ｎｍ、測定波長５９０ｎｍで蛍光を測定し、その値を細胞数の相対値として、試験物質無添加群（溶媒のみ添加）に対する試験物質添加群の細胞数比率（％細胞数）を算出した。％細胞数が高いほど細胞毒性が低いことを意味し、８０％未満のとき「毒性あり」と判断した。【００３８】
細胞数定量の結果
図１Ａ−Ｄ（ハッチング入りの棒）にさまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン、４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリン、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞のコントロールを１００％としたときの細胞数を調べた実験結果を示す。図１Ａは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３．３３ｐｐｍで９５％、１１．１ｐｐｍで１０３％、３３．３ｐｐｍで９９％、３３３ｐｐｍで１０１％及び２６９０ｐｐｍで９４％であった。図１Ｂは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３．３３ｐｐｍで９８％、１１．１ｐｐｍで１００％、３３．３ｐｐｍで１０１％、３３３ｐｐｍで１０５％及び２６９０ｐｐｍで１０９％であった。図１Ｃは、さまざまな濃度で４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３．３３ｐｐｍで９３％、１１．１ｐｐｍで９２％、３３．３ｐｐｍで８４％であった。図１Ｄは、さまざまな濃度で４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３．３３ｐｐｍで９７％、１１．１ｐｐｍで９８％、３３．３ｐｐｍで１０１％及び３３３ｐｐｍで９２％であった。以上の結果から、コントロールを１００％としたときの細胞数は、４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンでは２６９０ｐｐｍまで、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンでは３３．３ｐｐｍまで、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンでは３３３ｐｐｍまでの濃度で認められず、マウスＢ１６メラノーマ細胞の細胞生存に影響しないことが示された。【００３９】
メラニンの定量
培地を吸引除去し、バッファー（リン酸緩衝液５０ｍＭ、ｐＨ６．８）を用いて３回洗浄した後、１Ｎ  ＮａＯＨを添加して細胞を溶解し、４７５ｎｍの吸光度を測定した。この値をメラニン量の相対値として、試験物質無添加群（溶媒のみ添加）に対する試験物質添加群のメラニン量比率（％）を算出した。メラニン量比率が低いほどメラニン生成抑制効果が高いことを意味する。【００４０】
メラニン量の評価
前記測定法によって得られたメラニン量の測定値を用いて、４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン、４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリン、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した細胞のメラニンの量を対照実験の細胞のメラニンの量で除算した百分率を算出してメラニン量率とした。【００４１】
メラニン定量の結果
図１Ａ−Ｄ（黒塗りの棒）にさまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン、４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリン、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞のメラニン量低減の効果を調べた実験結果を示す。図１Ａは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３．３３ｐｐｍで１０３％、１１．１ｐｐｍで１０８％、３３．３ｐｐｍで１０５％、３３３ｐｐｍで１０４％及び２６９０ｐｐｍで１０７％であった。図１Ｂは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３．３３ｐｐｍで９７％、１１．１ｐｐｍで９９％、３３．３ｐｐｍで９９％、３３３ｐｐｍで１０１％及び２６９０ｐｐｍで１１０％であった。図１Ｃは、さまざまな濃度で４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３．３３ｐｐｍで９２％、１１．１ｐｐｍで８３％及び３３．３ｐｐｍで３０％であった。図１Ｄは、さまざまな濃度で４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３．３３ｐｐｍで１００％、１１．１ｐｐｍで９８％、３３．３ｐｐｍで９６％及び３３３ｐｐｍで３２％であった。以上の結果から、４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−トランス−Ｄ−ヒドロキシプロリンにはメラニン量低減の効果がないことが示された。また、４−シス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンには濃度依存的にメラニン量低減の効果があることが示された。【００４２】
４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの混合液による細胞増殖及びメラニン定量試験
４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの混合液は、４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンが等量となるように調製されて実験に供された。細胞培養と、細胞数及びメラニンの定量及び評価とは前記実施例と同様に行なった。【００４３】
混合液の細胞増殖試験の結果
図２Ａ−Ｃ（ハッチング入りの棒）にさまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンと、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンと、両者の混合液とを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞の細胞増殖を調べた実験結果を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で２回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。図２Ａは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３３．３ｐｐｍで９５％、５０ｐｐｍで１００％、１００ｐｐｍで９８％及び３３３ｐｐｍで１０２％であった。図２Ｂは、さまざまな濃度で４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３３．３ｐｐｍで９７％、５０ｐｐｍで９３％、１００ｐｐｍで９５％及び３３３ｐｐｍで８９％であった。図２Ｃは、さまざまな濃度で両者の混合液を添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、６６．６ｐｐｍで９７％、１００ｐｐｍで１００％、２００ｐｐｍで９８％及び６６６ｐｐｍで１００％であった。以上の結果から、コントロールを１００％としたときの細胞数は４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの混合液の濃度が６６．６ｐｐｍないし６６６ｐｐｍでは認められず、マウスＢ１６メラノーマ細胞の細胞増殖に影響を与えないことが明らかとなった。【００４４】
混合液のメラニン定量の結果
図２Ａ−Ｃ（黒塗りの棒）にさまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンと、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンと、両者の混合液とを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞のメラニン量の低減の効果を調べた実験結果を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で２回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。図２Ａは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３３．３ｐｐｍで１０３％、５０ｐｐｍで１０４％、１００ｐｐｍで１０８％及び３３３ｐｐｍで１１２％であった。図２Ｂは、さまざまな濃度で４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３３．３ｐｐｍで９０％、５０ｐｐｍで８５％、１００ｐｐｍで７２％及び３３３ｐｐｍで３２％であった。図２Ｃは、さまざまな濃度で前記混合液を添加した後のメラニン量率を示し、６６．６ｐｐｍで９７％、１００ｐｐｍで９３％、２００ｐｐｍで８６％及び６６６ｐｐｍで５７％であった。以上の結果から、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンは３３．３ｐｐｍから濃度依存的に顕著にメラニン合成を抑制することが示された。しかし、両者の混合液を添加したものでは、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを単独で添加した量と等量が添加されているにもかかわらず、顕著なメラニン量の抑制を示さなかった。【００４５】
さまざまな混合比率の混合液の細胞増殖及びメラニン量の低減試験
４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを異なる混合比率で調製した混合液を用いて、細胞増殖及びメラニン量の低減試験を実施した。細胞培養、定量及び評価は上記実施例と同様に行なった。【００４６】
さまざまな混合比率の混合液の細胞増殖試験の結果
図３（ハッチング入りの棒）にさまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンと、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンと、前記混合液とを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞の細胞増殖を調べた実験結果を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で２回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。図３Ａは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３３３ｐｐｍで１００％、４８０ｐｐｍで９６％、６６６ｐｐｍで１０２％及び１３３２ｐｐｍで９９％であった。図３Ｂは、さまざまな濃度で４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３３．３ｐｐｍで９３％、５０ｐｐｍで９２％、１００ｐｐｍで９１％及び３３３ｐｐｍで８８％であった。図３Ｃは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの異なる混合比率の混合液（４−シス−Ｄ：４−トランス−Ｌ）を添加した後のコントロールを１００％としたときの細胞数を示し、３３３ｐｐｍ：３３３ｐｍで９８％、３３３ｐｐｍ：４８０ｐｐｍで９９％、３３３ｐｐｍ：６６６ｐｐｍで１００％及び３３３ｐｐｍ：１３３２ｐｐｍで９８％であり、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリン及び４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの混合液の添加は、対照と同様のコントロールを１００％としたときの細胞数を示した。【００４７】
さまざまな混合比率の混合液のメラニン定量の結果
図３（黒塗りの棒）にさまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンと、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンと、前記混合液とを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞のメラニン量低減能を調べた実験結果の測定値を示す。各実験条件の誤差棒は同一条件で２回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。図３Ａは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３３３ｐｐｍで１０３％、４８０ｐｐｍで９９％、６６６ｐｐｍで１０７％及び１３３２ｐｐｍで１０２％であった。図３Ｂは、さまざまな濃度で４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを添加した後のメラニン量率を示し、３３．３ｐｐｍで９２％、５０ｐｐｍで８４％、１００ｐｐｍで７５％及び３３３ｐｐｍで３７％であった。図３Ｃは、さまざまな濃度で４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリン及び４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンの異なる混合比率の混合液（４−シス−Ｄ：４−トランス−Ｌ）を添加した後のメラニン量率を示し、３３３ｐｐｍ：３３３ｐｍで６２％、３３３ｐｐｍ：４８０ｐｐｍで６６％、３３３ｐｐｍ：６６６ｐｐｍで７２％及び３３３ｐｐｍ：１３３２ｐｐｍで６９％であった。以上の結果から、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリン及び４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの混合液の添加は、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを単独で添加した際に示す濃度依存的なメラニン量の抑制を阻害することが示された。しかし、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンに対する４−トランス−Ｌ−ヒドロキシプロリンの濃度を高くしても、メラニン量の抑制を著しく抑制することはなかった。【００４８】
本発明にもとづいて４−シス−ヒドロキシプロリンを含む、乳液製剤、貼付剤、錠剤、ソフトカプセル、顆粒、ドリンク、キャンディー、クッキー、味噌、フレンチドレッシング、マヨネーズ、フランスパン、醤油、ふりかけ、調味料・納豆のたれ、納豆、もろみ黒酢、クリーム、ボディー用クリーム、ジェル剤、ピールオフマスク、含浸マスク、乳液、化粧水及びエアゾール剤の配合例を以下に示す。これらの配合例は例示を目的として列挙されるものであって本発明の技術的範囲を限定することを意図するものではない。【００４９】
配合例１（乳液製剤）
（組成物）                        配合量（重量％）
４−シス−ヒドロキシプロリン              ０．４２
ベヘニルアルコール                        ０．２
セタノール                                ０．５
グリセリンモノ脂肪酸エステル              １．８
硬化ヒマシ油ＰＯＥ（６０）                １．０
白色ワセリン                              ２．０
流動パラフィン                          １０．０
ミリスチン酸イソプロピル                  ３．０
メチルポリシロキサン（６ｃｓ）            １．５
濃グリセリン                            １３．０
ジプロピレングリコール                    ２．０
カルボキシビニルポリマー                  ０．２５
ヒアルロン酸ナトリウム                    ０．００５
水酸化カリウム                            適量
乳酸                                      適量
エデト酸ナトリウム                        適量
エチルパラベン                            適量
精製水                                    残余

１００．０００【００５０】
配合例２（貼付剤）
（組成物）                              配合量（重量％）
４−シス−ヒドロキシプロリン                    ０．３
ポリアクリル酸                                  ３．０
ポリアクリル酸ナトリウム                        ２．５
ゼラチン                                        ０．５
カルボキシメチルセルロースナトリウム            ４．０
ポリビニルアルコール                            ０．３
濃グリセリン                                  １４．０
１，３−ブチレングリコール                    １２．０
水酸化アルミニウム                              ０．１
エデト酸ナトリウム                              ０．０３
メチルパラベン                                  ０．１
精製水                                          残余

１００．００  【００５１】
配合例３（錠剤）
（組成物）                              配合量（ｍｇ／１錠中）
４−シス−ヒドロキシプロリン                  ３６０．５
乳糖                                          １０２．４
カルボキシメチルセルロースカルシウム            ２９．９
ヒドロキシプロピルセルロース                      ６．８
ステアリン酸マグネシウム                          ５．２
結晶セルロース                                  １０．２

５１５．０  【００５２】
配合例４（錠剤）
（組成物）                            配合量（ｍｇ／１錠中）
ショ糖エステル                                ７０
結晶セルロース                                ７４
メチルセルロース                              ３６
グリセリン                                    ２５
４−シス−ヒドロキシプロリン                ４７５
Ｎ−アセチルグルコサミン                    ２００
ヒアルロン酸                                １５０
ビタミンＥ                                    ３０
ビタミンＢ６                                  ２０
ビタミンＢ２                                  １０
α−リポ酸                                    ２０
コエンザイムＱ１０                            ４０
セラミド（コンニャク抽出物）                  ５０
Ｌ−プロリン                                ３００

１５００    【００５３】
配合例５（ソフトカプセル）
（組成物）                          配合量（ｍｇ／１カプセル中）
食用大豆油                                ５３０
トチュウエキス                              ５０
ニンジンエキス                              ５０
４−シス−ヒドロキシプロリン              １００
ローヤルゼリー                              ５０
マカ                                        ３０
ＧＡＢＡ                                    ３０
ミツロウ                                    ６０
ゼラチン                                  ３７５
グリセリン                                １２０
グリセリン脂肪酸エステル                  １０５

１５００【００５４】
配合例６（ソフトカプセル）
（組成物）                          配合量（ｍｇ／１カプセル中）
玄米胚芽油                                ６５９
４−シス−ヒドロキシプロリン              ５００
レスベラトロール                              １
ハス胚芽エキス                            １００
エラスチン                                １８０
ＤＮＡ                                      ３０
葉酸                                        ３０

１５００【００５５】
配合例７（顆粒）
（組成物）                        配合量（ｍｇ／１包中）
４−シス−ヒドロキシプロリン            ４００
ビタミンＣ                              １００
大豆イソフラボン                        ２５０
還元乳糖                                ３００
大豆オリゴ糖                              ３６
エリスリトール                            ３６
デキストリン                              ３０
香料                                      ２４
クエン酸                                  ２４

１２００【００５６】
配合例８（ドリンク）
（組成物）                          配合量（ｇ／６０ｍＬ中）
トチュウエキス                              １．６
ニンジンエキス                              １．６
４−シス−ヒドロキシプロリン                １．６
還元麦芽糖水飴                            ２８
エリスリトール                              ８
クエン酸                                    ２
香料                                        １．３
Ｎ−アセチルグルコサミン                    １
ヒアルロン酸Ｎａ                            ０．５
ビタミンＥ                                  ０．３
ビタミンＢ６                                ０．２
ビタミンＢ２                                ０．１
α−リポ酸                                  ０．２
コエンザイムＱ１０                          １．２
セラミド（コンニャク抽出物）                ０．４
Ｌ−プロリン                                ２
精製水                                      残余

６０【００５７】
配合例９（キャンディー）
（組成物）                      配合量（重量％）
砂糖                                  ５０
水飴                                  ４８
４−シス−ヒドロキシプロリン            １
香料                                    １

１００【００５８】
配合例１０（クッキー）
（組成物）                        配合量（重量％）
薄力粉                                  ４５．０
バター                                  １７．５
グラニュー糖                            ２０．０
４−シス−ヒドロキシプロリン              ４．０
卵                                      １２．５
香料                                      １．０

１００．０【００５９】
配合例１０（クッキー）の製造方法
バターを撹拌しながらグラニュー糖を徐々に添加し、卵、デカペプチド、ＧＡＢＡ及び香料を添加して撹拌した。十分に混合した後、均一に振るった薄力粉を加えて低速で撹拌し、塊状で冷蔵庫で寝かせた。その後、成型し１７０°Ｃ１５分間焼成しクッキーとした。【００６０】
配合例１１（味噌）
（組成物）                    配合量（ｇ）
大豆                                １０００
米麹                                １０００
塩                                    ４２０
４−シス−ヒドロキシプロリン          １５８
水                                      残余

４０００【００６１】
配合例１１（味噌）の製造方法
米こうじと塩とをよく混ぜ合わせる。洗浄した大豆を３倍量の水に一晩つけた後に水を切り、新しい水を加えながら煮込み、ざるにあける。煮汁（種水）を集め、４−シス−ヒドロキシプロリンを１０％ｗ／ｖとなるように溶解する。煮あがった豆を直ちにすりつぶし、塩を混ぜた米麹を加えて、上記の４−シス−ヒドロキシプロリンを溶解した種水を足しながら粘土程の固さになるまでむらなく混ぜ合わせる。団子状に丸めたものを桶に隙間のない様に隅々まで、しっかりと詰め込み、表面を平らにしてラップで覆い密封する。３箇月後に容器を移し変え、表面を平らにしてラップで覆う。なお、４−シス−ヒドロキシプロリンを種水に加える代わりに、４−シス−ヒドロキシプロリンを多く産生する米麹を用いてもよい。また、市販の味噌に４−シス−ヒドロキシプロリンか、あるいはその塩を加えてもよい。【００６２】
配合例１２（フレンチドレッシング）
（組成物）                        配合量（ｇ）
サラダ油                                ２７．０
酢                                      ３０．０
塩化ナトリウム                            ０．９
４−シス−ヒドロキシプロリン              １．１
胡椒                                      １．０

６０．０  【００６３】
配合例１２（フレンチドレッシング）の製造方法
酢に塩化ナトリウム及び４−シス−ヒドロキシプロリンを加えた後に、よく攪拌して溶解する。サラダ油を加えて、よく攪拌し胡椒を加える。【００６４】
配合例１３（マヨネーズ）
（組成物）                    配合量（ｇ）
サラダ油                            １３４．０
酢                                      ５
塩化ナトリウム                          ０．９
４−シス−ヒドロキシプロリン            １
卵黄                                  １８
砂糖                                    ０．２
胡椒                                    ０．９

１６０．０【００６５】
配合例１３（マヨネーズ）の製造方法
卵黄（室温）に酢、塩化ナトリウム、４−シス−ヒドロキシプロリンと、胡椒とを加えて、泡立て器で十分に攪拌する。サラダ油を少しずつ加えながら攪拌を継続してエマルジョンにする。最後に砂糖を加えて攪拌する。【００６６】
配合例１４（フランスパン）
（組成物）                      配合量（ｇ）
強力粉                                １４０
薄力粉                                  ６０
塩化ナトリウム                            ３
砂糖                                      ６
４−シス−ヒドロキシプロリン              ２
ドライイースト                            ４
ぬるま湯                              １２８

３４３【００６７】
配合例１４（フランスパン）の製造方法
ぬるま湯に砂糖１ｇ及びドライイーストを入れて予備発酵させる。強力粉、薄力粉、塩化ナトリウム及び砂糖５ｇと、４−シス−ヒドロキシプロリンとをボウルに入れ、その中に予備発酵させたイーストを入れる。十分捏ねた後に球状にして３０°Ｃで一次発酵させる。生地を再度捏ねてから休ませた後に適当な形に整形して電子発酵機を用いて最終発酵させる。クープを入れて２２０°Ｃのオーブンで３０分間焼く。【００６８】
配合例１５（醤油）
（組成物）                          配合量（ｇ）
市販の醤油                                ９９０
４−シス−ヒドロキシプロリン                １０

１０００【００６９】
配合例１５（醤油）の製造方法
市販の醤油に４−シス−ヒドロキシプロリンを加えてよく攪拌する。また、４−シス−ヒドロキシプロリンか、あるいはその塩を加える代わりに、４−シス−ヒドロキシプロリンを多く産生する麹を用いて醤油を醸造してもよい。【００７０】
配合例１６（ヨーグルト）
（組成物）                      配合量（ｇ）
牛乳                                  ８８０
Ｌ．ブルガリカス菌                      ５０
Ｓ．サーモフィルス菌                    ５０
４−シス−ヒドロキシプロリン            ２０

１０００【００７１】
配合例１６（ヨーグルト）の製造方法
４０°Ｃ〜４５°Ｃで発酵させる。他の市販の種菌を用いてもよく、市販のヨーグルトに４−シス−ヒドロキシプロリンを加えてもよい。また、４−シス−ヒドロキシプロリンか、あるいはその塩を加える代わりに、４−シス−ヒドロキシプロリンを多く産生する菌を用いてもよい。【００７２】
配合例１７（ふりかけ）
（組成物）                        配合量（ｇ）
４−シス−ヒドロキシプロリン            ５０
のり                                    １５
Ｌ−グルタミン酸Ｎａ                    １０
塩化ナトリウム                            ２
煎りごま                                １０
さば削り節                              １０
砂糖                                      １
醤油                                      ２

１００【００７３】
配合例１８（調味料・納豆のたれ）
（組成物）                          配合量（ｇ）
市販の納豆のたれ                          ９．９
４−シス−ヒドロキシプロリン              ０．１

１０【００７４】
配合例１９（納豆）
（組成物）                        配合量（ｇ）
市販の納豆                              １９．９
４−シス−ヒドロキシプロリン              ０．１

２０【００７５】
配合例１９（納豆）の製造方法
４−シス−ヒドロキシプロリンか、あるいはその塩を加える代わりに、４−シス−Ｄ−ヒドロキシプロリンを多く産生する菌を用いて納豆を作ってもよい。【００７６】
配合例２０（もろみ黒酢）
（組成物）                        配合量（ｇ）
市販のもろみ黒酢                        ９５０
４−シス−ヒドロキシプロリン              ５０

１０００【００７７】
配合例２０（もろみ黒酢）の製造方法
４−シス−ヒドロキシプロリンか、あるいはその塩を加える代わりに、４−シス−ヒドロキシプロリンを多く産生する菌を用いて酢、黒酢、もろみを作ってもよい。【００７８】
配合例２１（クリーム）
（組成物）                                            配合量（％）
流動パラフィン                                              ３
ワセリン                                                    １
ジメチルポリシロキサン                                      １
ステアリルアルコール                                        １．８
ベヘニルアルコール                                          １．６
グリセリン                                                  ８
ジプロピレングリコール                                      ５
マカデミアナッツ油                                          ２
硬化油                                                      ３
スクワラン                                                  ６
ステアリン酸                                                ２
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                          ０．５
２−エチルヘキサン酸セチル                                  ４
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                              ０．５
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                        ３
水酸化カリウム                                              ０．１５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．０５
トリメチルグリシン                                          ２
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム  １
酢酸トコフェロール                                          ０．１
４−シス−ヒドロキシプロリン                                ４
パラベン                                                    適量
エデト酸３ナトリウム                                        ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン            ０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル    ０．０５
色剤                                                        適量
カルボキシビニルポリマー                                    ０．０５
精製水                                                      残余

１００．００【００７９】
配合例２２（ボディー用クリーム）
（組成物）                                          配合量（％）
ジメチルポリシロキサン                                      ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                          １３
ドデカメチルシクロヘキサシロキサン                        １２
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体            １
エタノール                                                  ２
イソプロパノール                                            １
グリセリン                                                  ３
ジプロピレングリコール                                      ５
ポリエチレングリコール６０００                              ５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．０５
酢酸トコフェロール                                          ０．１
４−シス−ヒドロキシプロリン                                ５
ウイキョウエキス                                            ０．１
ハマメリスエキス                                            ０．１
ニンジンエキス                                              ０．１
Ｌ−メントール                                              適量
パラオキシ安息香酸エステル                                  適量
エデト酸三ナトリウム                                        ０．０５
ジモルホリノピリダジノン                                    ０．０１
トリメトキシ桂皮酸メチルビス（トリメチルシロキシ）
シリルイソペンチル    ０．１
黄酸化鉄                                                    適量
チタン酸コバルト                                            適量
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト                １．５
ポリビニルアルコール                                        ０．１
ヒドロキシエチルセルロース                                  ０．１
トリメチルシロキシケイ酸                                    ２
香料                                                        適量
精製水                                                      残余

１００．００【００８０】
配合例２３（ジェル剤）
（組成物）                                            配合量（％）
ジメチルポリシロキサン                                      ５
グリセリン                                                  ２
１，３−ブチレングリコール                                  ５
ポリエチレングリコール１５００                              ３
ポリエチレングリコール２００００                            ３
オクタン酸セチル                                            ３
クエン酸                                                    ０．０１
クエン酸ナトリウム                                          ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．１
４−シス−ヒドロキシプロリン                                ２
酢酸トコフェロール                                          ０．１
オウゴンエキス                                              ０．１
ユキノシタエキス                                            ０．１
エデト酸三ナトリウム                                        ０．１
キサンタンガム                                              ０．３
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−２）
０．０５
寒天末                                                      １．５
フェノキシエタノール                                        適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                  適量
精製水                                                      残余

１００．００【００８１】
配合例２４（ピールオフマスク）
（組成物）                                          配合量（％）
エタノール                                                １０
１，３−ブチレングリコール                                  ６
ポリエチレングリコール４０００                              ２
オリーブ油                                                  １
マカデミアナッツ油                                          １
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル                        ０．０５
乳酸                                                        ０．０５
乳酸ナトリウム                                              ０．１
Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム                  ０．１
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム      ０．１
４−シス−ヒドロキシプロリン                              １０
魚コラーゲン                                                ０．１
コンドロイチン硫酸トリウム                                  ０．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム                        ０．２
ポリビニルアルコール                                      １２
パラオキシ安息香酸エステル                                  適量
香料                                                        適量
精製水                                                      残余

１００．００【００８２】
配合例２５（含浸マスク）
（組成物）                                配合量（％）
グリセリン                                      １
１，３−ブチレングリコール                      ８
キシリット                                      ２
ポリエチレングリコール１５００                  ２
ローズマリー油                                  ０．０１
セージ油                                        ０．１
クエン酸                                        ０．０２
クエン酸ナトリウム                              ０．０８
ヘキサメタリン酸ナトリウム                      ０．０１
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン      ０．１
４−シス−ヒドロキシプロリン                    ０．５
バーチエキス                                    ０．１
ラベンダー油                                    ０．０１
キサンタンガム                                  ０．０５
カルボキシビニルポリマー                        ０．１５
パラオキシ安息香酸エステル                      適量
精製水                                          残余

１００．００【００８３】
配合例２６（乳液）
（組成物）                                      配合量（％）
流動パラフィン                                        ７
ワセリン                                              ３
デカメチルシクロペンタシロキサン                      ２
ベヘニルアルコール                                    １．５  
グリセリン                                            ５
ジプロピレングリコール                                ７
ポリエチレングリコール１５００                        ２
ホホバ油                                              １
イソステアリン酸                                      ０．５
ステアリン酸                                          ０．５
ベヘニン酸                                            ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット          ３
２−エチルヘキサン酸セチル                            ３
モノステアリン酸グリセリン                            １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン          １
水酸化カリウム                                        ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                            ０．０５
グリチルレチン酸ステアリル                            ０．０５
４−シス−ヒドロキシプロリン                          １
ローヤルゼリーエキス                                  ０．１
酵母エキス                                            ０．１
酢酸トコフェロール                                    ０．１
アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム                      ０．１
エデト酸三ナトリウム                                  ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン      ０．１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                  ０．１
カルボキシビニルポリマー                              ０．１５
パラベン                                              適量
香料                                                  適量
精製水                                                残余

１００．００【００８４】
配合例２７（乳液）
（組成物）                                    配合量（％）
ジメチルポリシロキサン                              ２
ベヘニルアルコール                                  １
バチルアルコール                                    ０．５
グリセリン                                          ５
１，３−ブチレングリコール                          ７
エリスリトール                                      ２
硬化油                                              ３
スクワラン                                          ６
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット        ２
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル        １
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン        １
４−シス−ヒドロキシプロリン                        ０．３
水酸化カリウム                                      適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム                          ０．０５
フェノキシエタノール                                適量
カルボキシビニルポリマー                            ０．１
精製水                                              残余

１００．００【００８５】
配合例２８（化粧水）
（組成物）                                            配合量（％）
エチルアルコール                                            ５
グリセリン                                                  １
１，３−ブチレングリコール                                  ５
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン
デシルテトラデシルエーテル        ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                  ０．０３
トリメチルグリシン                                          １
ポリアスパラギン酸ナトリウム                                ０．１
α−トコフェロール  ２−Ｌ−アスコルビン酸
リン酸ジエステルカリウム      ０．１
チオタウリン                                                ０．１
４−シス−ヒドロキシプロリン                                ８
ＥＤＴＡ３ナトリウム                                        ０．１
カルボキシビニルポリマー                                    ０．０５
水酸化カリウム                                              ０．０２
フェノキシエタノール                                        適量
香料                                                        適量
精製水                                                      残余

１００．００【００８６】
配合例２９（化粧水）
（組成物）                                  配合量（％）
エタノール                                        １０
ジプロピレングリコール                              １
ポリエチレングリコール１０００                      １
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                  １
ホホバ油                                            ０．０１
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                  ０．１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                      ０．２
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                    ０．１５
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム        ０．１
クエン酸                                            ０．０５
クエン酸ナトリウム                                  ０．２
水酸化カリウム                                      ０．４
グリチルリチン酸ジカリウム                          ０．１
塩酸アルギニン                                      ０．１
Ｌ−アスコルビン酸  ２−グルコシド                  ２
４−シス−ヒドロキシプロリン                        ０．５
エデト酸三ナトリウム                                ０．０５
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                ０．０１
ジブチルヒドロキシトルエン                          適量
パラベン                                            適量
海洋深層水                                          ３
香料                                                適量
精製水                                              残余

１００．００【００８７】
配合例３０（エアゾール尿素外用剤原液）
（組成物）                          配合量（重量％）
エタノール                                １５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０          １．５
ジフェンヒドラミン                          １．０
ジブカイン                                  ２．０
酢酸トコフェロール                          ０．５
４−シス−ヒドロキシプロリン                ０．１
イソステアリン酸                            ０．１
１，３−ブチレングリコール                  ３．０
ポリエチレングリコール４００                ３．０
カンフル                                    ０．０５
尿素                                      ２０．０
精製水                                      残余

１００．００【００８８】
配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）
（組成物）                      配合量（重量％）
エアゾール尿素外用剤原液              ６５．０
ジメチルエーテル                      ３５．０

１００．００【００８９】
配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）の充填方法
エアゾール尿素外用剤原液及びジメチルエーテルを内面テフロン（登録商標）コート処理耐圧エアゾールアルミ缶に充填してエアゾール剤を調製する。
【図１Ａ】
2010113590.tif 000003
【図１Ｂ】
2010113590.tif 000004
【図１Ｃ】
2010113590.tif 000005
【図１Ｄ】
2010113590.tif 000006
【図２Ａ】
2010113590.tif 000007
【図２Ｂ】
2010113590.tif 000008
【図２Ｃ】
2010113590.tif 000009
【図３Ａ】
2010113590.tif 000010
【図３Ｂ】
2010113590.tif 000011
【図３Ｃ】
2010113590.tif 000012
【国際調査報告】
2010113590.tif 000013
2010113590.tif 000014
2010113590.tif 000015
2010113590.tif 000016
2010113590.tif 000017
2010113590.tif 000018