(57)【要約】  関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置の提供。  本発明の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する工程と、前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する工程と、
前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項２】
抗ＴＮＦα抗体薬が、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＩＮＦ））である請求項１に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項３】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量である請求項１から２のいずれかに記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項４】
ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する請求項３に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項５】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する手段と、
前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項６】
抗ＴＮＦα抗体薬が、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＩＮＦ））である請求項５に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項７】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量である請求項５から６のいずれかに記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項８】
ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する請求項７に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、関節リウマチ寛解目的にＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α）を標的にした生物学的製剤が使用されるようになり、その有効性が認められるようになってきた。インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＩＮＦ））は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体から成るＴＮＦαをターゲットとする生物学的製剤で、関節リウマチの活動性を抑えることがＤＡＳ（Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｓｃｏｒｅ）２８と呼ばれる臨床的指標を用いて既に知られている。また、インフリキシマブは、関節リウマチの活動性を抑えるのみならず、関節リウマチに伴う骨破壊も抑制することが報告されている。【０００３】
しかし、このように顕著な有効性を持ち合わせているにもかかわらず、インフリキシマブ無効の関節リウマチ症例も存在する。さらに、インフリキシマブにはニューモシスティス肺炎や、肺結核等の感染症を惹起しやすい副作用もあるため、投与前にインフリキシマブの有効性を予測することで、より確実に効く症例にインフリキシマブを投与することができ、無駄な副作用を回避することもできうる。【０００４】
インフリキシマブの有効性予測因子を同定する試みはこれまでのところいくつか報告が認められる（非特許文献１、２参照）。それらは、インフリキシマブ有効例と無効例との間で比較した後ろ向き試験により、有効例と関連する遺伝子発現をアルゴリズムで解析したものが多く、前向き試験等で確認し得た確実なインフリキシマブ有効性予測因子は、まだ同定されていない。【０００５】
また、ＡＤＡＭＴＳ（ａ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ  ｍｏｔｉｆｓ）５は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。特に、変形性関節症モデルマウスにおいて、ＡＤＡＭＴＳ５の欠失が軟骨破壊を抑制することが報告されている。
しかしながら、ＡＤＡＭＴＳ５の発現量と、関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の有効性との相関は知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｌａｑｕｒｒｅ  Ｔ，  Ｇａｕｔｈｉｅｒ−Ｊａｕｎｅａｕ  Ａ，  Ｂａｎｓａｒｄ  Ｃ，  Ｄｅｒａｍｂｕｒｅ  Ｃ，  Ｈｉｒｏｎ  Ｍ，  Ｖｉｔｔｅｃｏｑ１  Ｏ，  Ｄａｖｅａｕ  Ｍ，  Ｍｅｊｊａｄ  Ｏ，  Ｄａｒａｇｏｎ  Ａ，  Ｔｒｏｎ  Ｆ，  Ｌｅ  Ｌｏeｔ  Ｘ，  Ｓａｌｉｅｒ  Ｊ-Ｐ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  ２００６；  ８：  Ｒ１０５
【非特許文献２】Ｔｒｏｃｍｅ  Ｃ，  Ｍａｒｏｔｔｅ  Ｈ，  Ｂａｉｌｌｅｔ  Ａ，  Ｐａｌｌｏｔ-Ｐｒａｄｅｓ  Ｂ，  Ｇａｒｉｎ  Ｊ，  Ｇｒａｎｇｅ  Ｌ，  Ｍｉｏｓｓｅｃ  Ｐ，  Ｔｅｂｉｂ  Ｊ，  Ｂｅｒｇｅｒ  Ｆ，  Ｎｉｓｓｅｎ  ＭＪ，  Ｊｕｖｉｎ  Ｒ，  Ｍｏｒｅｌ  Ｆ，  Ｇａｕｄｉｎ  Ｐ．  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２００８．  Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、インフリキシマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が少ないほど、インフリキシマブが有効であるという知見である。インフリキシマブ投与前の血中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量によって、インフリキシマブの有効性を予測できないかを前向き試験により行った報告は従来には無く、前記知見は、本発明者らによる新たな知見である。
なお、後ろ向き試験とは、過去と現在のデータを扱う試験であり、前向き試験とは、これから生じる現象を観察する試験である。後ろ向き試験ではすでに判明している事項を扱うので研究者によるバイアスが入りやすいのに対して、前向き試験では結果がわかっていないために、バイアスがかかりにくく、より信頼のおける結果が得られる点で優れている。【０００９】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する工程と、
前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜２＞  抗ＴＮＦα抗体薬が、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＩＮＦ））である前記＜１＞に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜３＞  被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量である前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜４＞  ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する前記＜３＞に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜５＞  被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する手段と、
前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜６＞  抗ＴＮＦα抗体薬が、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＩＮＦ））である前記＜５＞に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜７＞  被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量である前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜８＞  ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する前記＜７＞に記載の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量と、インフリキシマブ投与１４週後のＤＡＳ２８の変化率（ＤＡＳ％ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）との相関を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置）
本発明の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する工程（測定工程）と、前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程（評価工程）とを少なくとも含み、更に必要に応じて、その他の工程を含んでいる。
本発明の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する手段（測定手段）と、前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段（評価手段）とを少なくとも含み、更に必要に応じて、その他の手段を含んでいる。
【００１３】
＜測定工程、及び測定手段＞
前記測定工程は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する工程である。
前記測定手段は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を測定する手段である。
【００１４】
−被検体由来の試料−
前記被検体由来の試料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、末梢血、関節滑膜、関節液などが挙げられる。中でも、末梢血が、採取が簡便である点で、好ましい。
前記被検体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、ヒトなどが挙げられる。
【００１５】
−ＡＤＡＭＴＳ５−
前記ＡＤＡＭＴＳ（ａ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ  ｍｏｔｉｆｓ）５は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。
前記ＡＤＡＭＴＳ５遺伝子の塩基配列は、例えば、ヒトにおいて公知であり、その塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）などの公共データベースを通じて容易に入手することができる。例えば、ヒトＡＤＡＭＴＳ５遺伝子の塩基配列は、ＮＣＢＩ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿００７０３８で入手可能ある。
【００１６】
−含有量の測定−
前記被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ５の含有量の測定方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ｍＲＮＡの発現量を測定する方法、タンパク質の発現量を測定する方法などが挙げられる。
【００１７】
前記ｍＲＮＡの発現量を測定する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＤＮＡアレイ法、ノーザンブロット法などが挙げられる。
前記ｍＲＮＡの発現量を測定する装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ装置、リアルタイムＰＣＲ装置、ＤＮＡアレイ装置、ノーザンブロット装置などが挙げられる。前記装置は、前記測定手段として好適に使用することができる。
【００１８】
前記リアルタイムＰＣＲ法の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、検量線を作成し、その検量線からサンプルの定量を行う方法（検量線法）が挙げられる。
前記検量線法に用いる鋳型ＤＮＡコントロールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、健常人から採取・精製した全ｃＤＮＡや、ＡＤＡＭＴＳ５  ｃＤＮＡを組み込んだプラスミドなどが挙げられる。
前記リアルタイムＰＣＲ法に用いるプライマーとしては、ＡＤＡＭＴＳ５を増幅することができるものであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記リアルタイムＰＣＲ法における内在性コントロールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、β−アクチン、ＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）などが挙げられる。
【００１９】
＜評価工程、及び評価手段＞
前記評価工程は、前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程である。
前記評価手段は、前記ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段である。
【００２０】
−抗ＴＮＦα抗体薬−
前記抗ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α）抗体薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＩＮＦ））が好適に挙げられる。
【００２１】
−指標−
前記指標としては、ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を使用する。
【００２２】
−評価−
前記関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＡＤＡＭＴＳ５の含有量が、関節リウマチ患者の中で低い場合には、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
具体例としては、前記指標として、ＡＤＡＭＴＳ５を用いた場合（詳細は、後述する実施例１参照）、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が、０．６×１／２５より小さい場合に、関節リウマチに対して抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
前記評価を行う装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、電子計算機（コンピュータ）などが挙げられる。前記装置は、前記評価手段として好適に使用することができる。
【００２３】
また、前記評価においては、抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測することも可能である。
前記ＤＡＳ２８とは、Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅの略で、関節リウマチの疾患活動性をスコア化しようということでヨーロッパリウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）が定めたものであり、Ｆｒａｎｓｅｎ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２００５；  ２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）：  Ｓ９３−Ｓ９９に記載されている。
前記抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、関節リウマチ患者の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５  ｍＲＮＡの含有量を、後述する実施例１で示すグラフ（図１参照）に当てはめ、ＤＡＳ２８が、抗ＴＮＦα抗体薬投与前から低下する割合を算出し、抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測することができる。
【実施例】
【００２４】
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。【００２５】
（実施例１）
＜ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とした、関節リウマチに対するインフリキシマブの有効性予測＞
平成１９年１０月から平成２０年４月までに埼玉医科大学総合医療センター・リウマチ膠原病内科外来を受診した関節リウマチ患者のうち、インフリキマブを投与された患者３０例を対象とした。【００２６】
−測定工程−
末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量の測定
インフリキシマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血  ２．５ｍＬを採取し、ＰＡＸｇｅｎｅ  ＲＮＡ採血管（登録商標、日本ベクトン・ディッキンソン社製）に刺入後、ＰＡＸｇｅｎｅ  Ｂｌｏｏｄ  ＲＮＡ  Ｋｉｔ（登録商標、ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。前記全ＲＮＡを逆転写酵素を用いて全ｃＤＮＡに変換した。前記全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡとして、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定した。なお、プライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  （登録商標）  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  （００１９９８４１＿ｍ１，  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製））を使用した。
上記により得られたＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの含有量は、β−ａｃｔｉｎ（内在性コントロール）のｍＲＮＡとの相対量で定量化を行った。
なお、β−ａｃｔｉｎのプライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（Ｐｒｅ−Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ  ＴａｑＭａｎ（登録商標）  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ｈｕｍａｎ  ＡＣＴＢ，  ＮＭ＿００１１０１  ，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製））を使用した。【００２７】
−評価工程−
関節リウマチ患者の関節リウマチ活動性は、インフリキシマブ投与前、及び投与１４週後のＤＡＳ２８［ＤＡＳ２８（０ｗ）、ＤＡＳ２８（１４ｗ）］で評価した。
インフリキシマブが有効か否かは、ＤＡＳ２８（１４ｗ）を用いたＥＵＬＡＲ改善基準によって、反応性良好（ｇｏｏｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、中等度反応（ｍｏｄｅｒａｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、反応なし（ｎｏ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）とした。
なお、ＥＵＬＡＲ改善基準とは、ヨーロッパリウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）が定めたものであり、Ｆｒａｎｓｅｎ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２００５；  ２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）：  Ｓ９３−Ｓ９９に記載されている。【００２８】
投与１４週後におけるＥＵＬＡＲ改善基準に基づくインフリキシマブの有効性は、反応性良好が１６例、中等度反応が６例、反応なしが８例であった。また、寛解例（ＤＡＳ２８（１４ｗ）＜２．６）は、１４例であった。【００２９】
−−Ｒ群とＮＲ群との比較−−
上記インフリキシマブ投与関節リウマチ患者３０例を、Ｒ群（中等度反応＋反応性良好）と、ＮＲ群（反応なし）とに群分けし、両者のインフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量を健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で比較した結果、ＮＲ群と比較してＲ群では、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量は有意に低かった（表１参照）。
【表１】
2010038840.tif 000002
【００３０】
また、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が、０．６×１／２５より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、０．６×１／２５以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)とした場合の分類を表２に示す。
【表２】
2010038840.tif 000003
【００３１】
表２の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表３に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ａ／（Ａ＋Ｃ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｂ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ａ／（Ｂ＋Ａ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｃ）×１００
なお、上記式中Ａ〜Ｄは、以下のとおりである。
Ａ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群であり、Ｒ群に分類された症例
Ｂ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群であり、ＮＲ群に分類された症例
Ｃ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群であり、Ｒ群に分類された症例
Ｄ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群であり、ＮＲ群に分類された症例【００３２】
【表３】
2010038840.tif 000004
表３の結果から、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群の場合に、Ｒ群となることを予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、１００％と高く、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対するインフリキシマブの薬効を予測することができることが示された。【００３３】
−−ＧＲ群とＮＧＲ群との比較−−
上記インフリキシマブ投与関節リウマチ患者３０例を、ＧＲ群（反応性良好）と、ＮＧＲ群（反応なし＋中等度反応）とに群分けし、両者のインフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量を、健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で比較した結果、ＮＧＲ群と比較してＧＲ群では、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量は有意に低かった（表４参照）。
【表４】
2010038840.tif 000005
【００３４】
また、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が、０．６×１／２５より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、０．６×１／２５以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)とした場合の分類を表５に示す。
【表５】
2010038840.tif 000006
【００３５】
表５の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表６に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｅ／（Ｅ＋Ｇ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｈ／（Ｈ＋Ｆ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｅ／（Ｆ＋Ｅ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｈ／（Ｈ＋Ｇ）×１００
なお、上記式中Ｅ〜Ｈは、以下のとおりである。
Ｅ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｆ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
Ｇ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｈ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例【００３６】
【表６】
2010038840.tif 000007
表６の結果から、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群の場合に、ＧＲ群となることを予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、７５．０％と高く、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対するインフリキシマブの薬効を予測することができることが示された。【００３７】
−−Ｒｅ群とＮｒｅ群との比較−−
上記インフリキシマブ投与関節リウマチ患者３０例を、Ｒｅ（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：寛解）群と、Ｎｒｅ（ｎｏｎ−ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：非寛解）群とに群分けし、両者のインフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量を、健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で比較した結果、Ｎｒｅ群と比較してＲｅ群では、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量は有意に低かった（表７参照）。
【表７】
2010038840.tif 000008
【００３８】
また、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が、０．６×１／２５より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、０．６×１／２５以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)とした場合の分類を表８に示す。
【表８】
2010038840.tif 000009
【００３９】
表８の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表９に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｉ／（Ｉ＋Ｋ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｌ／（Ｌ＋Ｊ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｉ／（Ｊ＋Ｉ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｌ／（Ｌ＋Ｋ）×１００
なお、上記式中Ｉ〜Ｌは、以下のとおりである。
Ｉ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群であり、Ｒｅ群に分類された症例
Ｊ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群であり、Ｎｒｅ群に分類された症例
Ｋ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群であり、Ｒｅ群に分類された症例
Ｌ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群であり、Ｎｒｅ群に分類された症例【００４０】
【表９】
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表９の結果から、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が低値群の場合に、寛解（Ｒｅ群となる）を予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、６８．８％と高かった。また、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡ発現量が高値群の場合に、寛解を否定する陰性予測率（ＮＰＶ）も７８．６％と高かった。そのため、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、寛解をも予測することができることが示された。【００４１】
−−インフリキシマブ投与後のＤＡＳ２８の予測−−
インフリキシマブ投与前のＤＡＳ２８と比較したインフリキシマブ投与１４週後のＤＡＳ２８の変化率（ＤＡＳ％ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）と、インフリキシマブ投与前の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量との相関を検討した結果を図１に示す。
図１に示されるように、インフリキシマブ投与前のＤＡＳ２８と比較したインフリキシマブ投与１４週後のＤＡＳ２８の変化率（ＤＡＳ％ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）と、インフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量との間に負の相関（ｒ＝−０．６）が認められた。
このことは即ち、被検体由来の試料中のインフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が少ないほど、関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬が有効であること、及び、被検体由来の試料中のインフリキシマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量によって、抗ＴＮＦα抗体薬投与後におけるＤＡＳ２８を予測できることを示している。【００４２】
＜既報告との比較１＞
−Ｌｕｑｕｅｒｒｅらの報告との比較−
インフリキシマブの有効性をリアルタイムＰＣＲ法と、アルゴリズムとを用いて予測したＬｕｑｕｅｒｒｅらの報告（Ｌａｑｕｒｒｅ  Ｔ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  ２００６；  ８：  Ｒ１０５）と、本発明とを比較した。
前記報告では、インフリキシマブ投与前のＤＡＳ２８と、インフリキシマブ投与１４週後のＤＡＳ２８とを比較し、その減少量（ΔＤＡＳ）が１．２未満を有効と定義し、その場合の陽性予測率（ＰＰＶ）は、７５％（２０転写物）、１００％（８転写物）であった。
一方、上述した実施例１について、前記Ｌｕｑｕｅｒｒｅらの報告と同じ定義で陽性予測率を算出すると、９３．８％であった。
Ｌｕｑｕｅｒｒｅらの報告は後ろ向き試験であるのに対し、本発明は前向き試験である点で、優れていると言える。
【表１０】
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【００４３】
＜既報告との比較２＞
−Ｔｒｏｃｍｅらの報告との比較−
インフリキシマブの有効性をリアルタイムＰＣＲ法と、アルゴリズムとを用いて予測したＴｒｏｃｍｅらの報告（Ｔｒｏｃｍｅ  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２００８．  Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）と、本発明とを比較した。
前記報告では、ＡＣＲ７０（米国リウマチ学会で作成された慢性関節リウマチの臨床症状の改善度の基準で７０％改善が認められた場合で、Ｆｅｌｓｏｎ  ＤＴ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３６：  ７２９−７４０，  １９９３に記載されている）の場合を有効、ＡＣＲ２０（米国リウマチ学会で作成された慢性関節リウマチの臨床症状の改善度の基準で２０％改善）に満たない場合を無効と定義し、その場合の感度は９７．１％、特異度は９７．５％であった。
一方、上述した実施例１について、前記Ｔｒｏｃｍｅらの報告とほぼ同じ定義（ＤＡＳ２８で、ｇｏｏｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ群を有効、ｎｏ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ群を無効）で感度、特異度を算出すると、感度は７５％、特異度は１００％であった。
Ｔｒｏｃｍｅらの報告の有効性予測試験は後ろ向き試験であるのに対し、本発明は前向き試験である点で、優れていると言える。
【表１１】
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【００４４】
＜既報との比較３＞
−ＤＮＡチップ研究所のＲＮＡチェックとの比較−
インフリキシマブの有効性をマイクロアレイと、アルゴリズムとを用い、前向き試験で予測したＤＮＡチップ研究所のＲＮＡチェックと、本発明とを比較した。
前記キットでは、ＡＣＲ５０の場合を有効と定義し、その場合の陽性予測率（ＰＰＶ）は４６．６％であり、陰性予測率（ＮＰＶ）は４４．４％であった。
一方、上述した実施例１について、前記キットとほぼ同じ定義（ＤＡＳ２８で、ｇｏｏｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ群を有効）で陽性予測率、陰性予測率を算出すると、陽性予測率は７５％、陰性予測率は７１．４％であった。
以上により、同じ前向き試験であっても本発明による有効性予測率は、ＤＮＡチップ研究所のＲＮＡチェックよりも優れていることがわかった。
【表１２】
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【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、前記薬投与前のワンポイントにおけるＡＤＡＭＴＳ５の含有量によって、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができるので、医学的診断及び治療の分野において、好適に利用できる。
本発明の関節リウマチに対する抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置は、前記薬投与前のワンポイントにおけるＡＤＡＭＴＳ５の含有量によって、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができるので、医学的診断及び治療の分野において、好適に利用できる。
【図１】
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【国際調査報告】
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