(57)【要約】  酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を提供する。  本発明の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤は、キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属およびブドウ科ブドウ属からなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含むことを特徴とする。前記酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤は、キク科アンテミス属の植物の抽出物、ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物を含むことが好ましい。前記キク科アンテミス属の植物は、ローマカミツレであり、前記ドクダミ科ドクダミ属の植物は、ドクダミであり、前記バラ科サンザシ属の植物は、セイヨウサンザシであり、前記ブドウ科ブドウ属の植物は、ブドウであることが好ましい。
2011004733.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属およびブドウ科ブドウ属からなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含むことを特徴とする酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項２】
キク科アンテミス属の植物の抽出物、ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物を含む、請求の範囲１記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項３】
キク科アンテミス属の植物の抽出物およびドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物の少なくとも一方の抽出物と、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物の少なくとも一方の抽出物とを含む、請求の範囲１または２記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項４】
前記キク科アンテミス属の植物が、ローマカミツレであり、
前記ドクダミ科ドクダミ属の植物が、ドクダミであり、
前記バラ科サンザシ属の植物が、セイヨウサンザシであり、
前記ブドウ科ブドウ属の植物が、ブドウである、請求の範囲１から３のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項５】
請求の範囲１から４のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を、酸化タンパク質分解酵素を含む試料に添加する工程を含むことを特徴とする酸化タンパク質分解酵素活性増強化方法。
【請求項６】
請求の範囲１から４のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を、タンパク質と酸化タンパク質分解酵素とを含む試料に添加する工程を含み、
前記タンパク質が、酸化タンパク質および糖化タンパク質の少なくとも一方を含むことを特徴とするタンパク質分解促進方法。
【請求項７】
請求の範囲１から４のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を生体に投与し、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および組織の機能低下を、治療することを特徴とする治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内における酸化反応および糖化反応は、細胞および組織に悪影響を及ぼすことが知られている。特に、酸化反応または糖化反応を受けたタンパク質、すなわち酸化タンパク質または糖化タンパク質は、その生成および蓄積が、糖尿病合併症、アルツハイマー病、白内障、動脈硬化等の疾病、ならびに皮膚等の組織の老化および機能低下の原因となっている（非特許文献１）。このことから、前記酸化タンパク質および前記糖化タンパク質は、傷害タンパク質と呼ばれている。【０００３】
通常、これらの傷害タンパク質は、プロテアソーム、および酸化タンパク質分解酵素（Ｏｘｉｄｉｚｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈｙｄｒｏｌａｓｅ、以下「ＯＰＨ」という。）等のタンパク質分解酵素により分解除去されるが、これらの酵素活性は、加齢と共に低下する（非特許文献２）。このため、前記酵素の活性を増強させることによる、前記疾病、前記組織の老化および組織の機能低下の治療ならびに予防の可能性に期待が寄せられている。【０００４】
前記プロテアソームは、タンパク質を分解する巨大な酵素複合体であり、２６Ｓプロテアソーム、２０Ｓプロテアソーム等がある。前記プロテアソームを活性化する物質は、大豆サポニン、ケール抽出物、シリビン、シラン化合物およびアヤメ抽出物等が知られている（特許文献１〜５）。他方、前記ＯＰＨは、セリンプロテアーゼの一種であり、タンパク質のＮ末端アシル化アミノ酸を遊離するアシルペプチドヒドロラーゼ（Ａｃｙｌｐｅｐｔｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ：ＡＣＰＨ）と同一であり（非特許文献３）、また、アシルアミノ酸遊離酵素（Ａｃｙｌａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ、ＡＡＲＥ）とも呼ばれている。前記ＯＰＨは、ヒト赤血球をはじめ、肝臓、腎臓、脳および心臓等の種々の組織に存在し、前記酸化タンパク質および前記糖化タンパク質を優先的に分解する（非特許文献４）。前記ＯＰＨに関しては、例えば、糖尿病ラットにおいて、血清中の前記ＯＰＨ活性が顕著に上昇すること、前記ＯＰＨ活性の上昇により、前記糖尿病ラット血清中に蓄積したカルボニル化タンパク質（酸化タンパク質）が分解されることが報告されている（非特許文献５）。このように、前記ＯＰＨは、前述の疾病等に密接に関与していることから、前記ＯＰＨの活性の増強が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−１７９５９２号公報
【特許文献２】特許第４２５５４３２号公報
【特許文献３】特開２００８−３０８５０５号公報
【特許文献４】特開２００４−９１３９８号公報
【特許文献５】特開２００７−９９６５０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】後藤ら、実験医学、１８（増刊）、２３２４−２３３１頁、１９９８年
【非特許文献２】Ｂｒｅｕｓｉｎｇ  Ｎ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、Ｖｏｌ．３８９、ｐ．２０３−２０９（２００８）
【非特許文献３】Ｆｕｊｉｎｏら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１４７８，ｐ．１０２−１１２（２０００）
【非特許文献４】Ｆｕｊｉｎｏら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１２４，ｐ．１０７７−１０８５（１９９８）
【非特許文献５】Ｓｈｉｍｉｚｕら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．Ｖｏｌ．３２（９）ｉｎ  ｐｒｅｓｓ（２００９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、ＯＰＨの活性増強化剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属およびブドウ科ブドウ属からなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含むことを特徴とする。【０００９】
本発明のＯＰＨ活性増強化方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、ＯＰＨを含む試料に添加する工程を含むことを特徴とする。【００１０】
本発明のタンパク質分解促進方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、タンパク質とＯＰＨとを含む試料に添加する工程を含み、前記タンパク質が、酸化タンパク質および糖化タンパク質の少なくとも一方を含むことを特徴とする。【００１１】
本発明の治療方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を生体に投与し、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および組織の機能低下を、治療することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、ＯＰＨ活性の増強化が可能である。このため、本発明は、酸化タンパク質および糖化タンパク質等の傷害タンパク質の分解を促進できる。したがって、本発明は、例えば、生体内に生成した前記傷害タンパク質が原因となる疾病、組織の老化および機能低下の治療ならびに予防が可能である。さらに、本発明は、古来利用されてきた植物の抽出物を利用するため、安全性に優れ、また、前記植物抽出物は大量に入手可能なため、生産性にも優れる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、各植物抽出物、それらの混合抽出物、カテキンおよびコントロールについて、ＯＰＨ活性を示す吸光度の経時的変化を表すグラフである。
【図２】図２は、各植物抽出物、それらの混合抽出物およびカテキンについて、反応時間１００分における、コントロールに対するＯＰＨ活性の増減率（％）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明において、酵素活性の増強化は、例えば、酵素の活性化および失活抑制のいずれの意味であってもよい。本発明において、前記ＯＰＨは、アシルアミノ酸遊離酵素（ＡＡＲＥ）またはアシルペプチドヒドロラーゼ（ＡＣＰＨ）ともいう。
【００１５】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、前述のように、キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属およびブドウ科ブドウ属からなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含むことを特徴とする。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の植物のうち、例えば、１種類の抽出物を含んでもよいし、２種類以上の抽出物を含んでもよい。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、キク科アンテミス属の植物の抽出物およびドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物の少なくとも一方の抽出物と、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物の少なくとも一方の抽出物とを含んでもよい。
【００１６】
前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、キク科アンテミス属の植物の抽出物、ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物を含むのが好ましい。前記各抽出物の中でも、前記キク科アンテミス属の植物の抽出物およびドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物は、例えば、ＯＰＨを活性化し、前記バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物は、例えば、ＯＰＨの失活を抑制すると推定される。この推定は、本発明を何ら制限しない。
【００１７】
前記ＯＰＨ活性増強化剤が、キク科アンテミス属の植物の抽出物（Ａ）、ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物（Ｂ）、バラ科サンザシ属の植物の抽出物（Ｃ）およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物（Ｄ）を含む場合、前記各抽出物の配合比（乾燥重量比、Ａ：Ｂ：Ｃ：Ｄ）は、特に制限されないが、例えば、１：０．０１〜１００：０．０１〜１００：０．０１〜１００が好ましい。
【００１８】
前記キク科アンテミス属（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ Ａｎｔｈｅｍｉｓ（Ｃｈａｍａｅｍｅｌｕｍ））の植物は、例えば、ローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｌ．（＝Ｃｈａｍａｅｍｅｌｕｍ ｎｏｂｉｌｅ））等があげられる。前記キク科アンテミス属の植物の抽出物は、例えば、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、植物体全体の抽出物であってもよい。前記キク科アンテミス属の植物の抽出物において、抽出部位は、特に制限されないが、例えば、頭状花の抽出物があげられる。
【００１９】
前記ドクダミ科ドクダミ属（Ｓａｕｒｕｒａｃｅａｅ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ）の植物は、例えば、ドクダミ（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｔｈｕｎｂｅｒｇ）等があげられる。前記ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物は、例えば、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物において、抽出部位は、特に制限されないが、例えば、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮および種子等の地上部の抽出物があげられる。
【００２０】
前記バラ科サンザシ属（Ｒｏｓａｃｅａｅ Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）の植物は、例えば、セイヨウサンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｏｘｙａｃａｎｔｈａ Ｌ．）、サンザシ（Ｃ．ｃｕｎｅａｔａ Ｓｉｅｂ．ｅｔ Ｚｕｃｃ．）等があげられる。前記バラ科サンザシ属の植物の抽出物は、例えば、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、植物体全体の抽出物であってもよい。前記バラ科サンザシ属の植物の抽出物において、抽出部位は、特に制限されないが、例えば、果実の抽出物があげられる。
【００２１】
前記ブドウ科ブドウ属（Ｖｉｔａｃｅａｅ Ｖｉｔｉｓ）の植物は、例えば、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．）、アメリカブドウ（Ｖｉｔｉｓ ｌａｂｒｕｓｃａ Ｌ．）、アマヅル（Ｖ．ｓａｃｃｈａｒｉｆｅｒａ Ｍａｋｉｎｏ）、エビヅル（Ｖ．ｆｉｃｉｆｏｌｉａ Ｂｕｎｇｅ ｖａｒ．ｌｏｂａｔａ（Ｒｅｇｅｌ）Ｎａｋａｉ）、サンカクヅル（Ｖ．ｆｌｅｘｕｏｓａ Ｔｈｕｎｂ．）、ヤマブドウ（Ｖ．ｃｏｉｇｕｅｔｉａｅ Ｐｕｌｌｉａｔ）、欧米雑種ブドウ（Ｖ．ｌａｂｒｕｓｃａｎａ Ｂａｉｌｅｙ）等があげられる。前記ブドウ科ブドウ属の植物の抽出物は、例えば、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ブドウ科ブドウ属の植物の抽出物において、抽出部位は、特に制限されないが、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２２】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記ローマカミツレ、ドクダミ、セイヨウサンザシおよびブドウからなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含むのが好ましい。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の植物のうち、例えば、１種類の抽出物を含んでもよいし、２種類以上の抽出物を含んでもよい。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記ローマカミツレ抽出物およびドクダミ抽出物の少なくとも一方の抽出物と、前記セイヨウサンザシ抽出物およびブドウ抽出物の少なくとも一方の抽出物とを含んでもよい。
【００２３】
前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記ローマカミツレ抽出物、ドクダミ抽出物、セイヨウサンザシ抽出物およびブドウ抽出物を含むのが好ましい。前記各抽出物の中でも、前記ローマカミツレ抽出物およびドクダミ抽出物は、例えば、ＯＰＨを活性化し、前記セイヨウサンザシ抽出物およびブドウ抽出物は、例えば、ＯＰＨの失活を抑制すると推定される。この推定は、本発明を何ら制限しない。
【００２４】
前記ＯＰＨ活性増強化剤が、前記ローマカミツレ抽出物（ａ）、ドクダミ抽出物（ｂ）、セイヨウサンザシ抽出物（ｃ）およびブドウ抽出物（ｃ）を含む場合、前記各抽出物の配合比（乾燥重量比、ａ：ｂ：ｃ：ｄ）は、特に制限されないが、例えば、１：０．０１〜１００：０．０１〜１００：０．０１〜１００が好ましい。
【００２５】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、キク科アンテミス属の植物の頭状花、ドクダミ科ドクダミ属の植物の地上部、バラ科サンザシ属の植物の果実およびブドウ科ブドウ属の植物の葉からなる群から選択される少なくとも一つの抽出物を含むのが好ましい。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の抽出物のうち、例えば、１種類の抽出物を含んでもよいし、２種類以上の抽出物を含んでもよいし、全てを含んでもよい。具体的には、前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記ローマカミツレの頭状花、ドクダミの地上部、セイヨウサンザシの果実およびブドウの葉からなる群から選択される少なくとも一つの抽出物を含むのが好ましい。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の抽出物のうち、例えば、１種類の抽出物を含んでもよいし、２種類以上の抽出物を含んでもよいし、全てを含んでもよい。
【００２６】
本発明において、前記抽出物は、例えば、前述のような抽出部位または植物体全体から得ることができる。前記抽出物の抽出方法は、特に制限されないが、例えば、溶媒抽出法、圧搾法等の公知の方法があげられる。
【００２７】
前記溶媒抽出法に用いる抽出溶媒は、特に制限されないが、例えば、水性溶媒、有機溶媒等があげられる。前記水性溶媒は、特に制限されないが、例えば、水等があげられる。前記有機溶媒は、特に制限されないが、例えば、低級アルコール、多価アルコール、ケトン、エステル、エーテル、ニトリル、芳香族化合物および塩化アルキル等があげられる。前記低級アルコールは、特に制限されないが、例えば、メタノール、エタノールおよび無水エタノール等があげられる。前記多価アルコールは、特に制限されないが、例えば、プロピレングリコールおよび１，３−ブチレングリコール等があげられる。前記ケトンは、特に制限されないが、例えば、アセトンおよびギ酸等があげられる。前記エステルは、特に制限されないが、例えば、酢酸エチル等があげられる。前記エーテルは、特に制限されないが、例えば、ジエチルエーテルおよびジオキサン等があげられる。前記ニトリルは、特に制限されないが、例えば、アセトニトリル等があげられる。前記芳香族化合物は、特に制限されないが、例えば、ベンゼン、トルエンおよびキシレン等があげられる。前記塩化アルキルは、特に制限されないが、例えば、クロロホルム等があげられる。
【００２８】
前記抽出溶媒は、例えば、１種類の溶媒であってもよいし、２種類以上を組み合わせてもよい。また、前記抽出溶媒は、例えば、前記水性溶媒と前記有機溶媒との混合溶媒であってもよい。前記混合溶媒は、特に制限されないが、例えば、エタノール水溶液等の低級アルコール水溶液等があげられる。前記混合溶媒における前記有機溶媒の割合は、特に制限されないが、例えば、１〜９９体積％である。
【００２９】
前記溶媒抽出法は、例えば、前述の抽出部位または植物体全体を原料とし、これを前記抽出溶媒に浸漬して実施できる。前記原料は、例えば、前記浸漬前に、洗浄、乾燥および粉砕等の処理を行ってもよい。前記原料が２種類以上の場合、各原料をそれぞれ抽出処理してもよいし、２種類以上の原料の混合物を抽出処理してもよい。前者の場合、例えば、得られた各抽出物を混合し、混合抽出物としてもよい。前記混合抽出物における各抽出物の混合割合は、特に制限されないが、例えば、等量（重量）であってもよい。例えば、前述の４種類の植物を使用する場合、それぞれの抽出物を１：１：１：１（重量比）で混合し、混合抽出物とするのが好ましい。後者の場合、例えば、前記混合物中の各原料の割合は、特に制限されないが、例えば、等量（重量）であってもよい。例えば、前述の４種類の植物を使用する場合、それぞれの原料を１：１：１：１（乾燥重量比）で混合した混合物を抽出処理することが好ましい。
【００３０】
抽出に用いる前記原料と前記抽出溶媒との割合は、特に制限されないが、前記原料１００ｇ（乾燥重量）に対して、例えば、前記抽出溶媒１〜１０００Ｌであり、好ましくは、１〜１００Ｌである。前記浸漬時間は、例えば、前記原料および前記抽出溶媒の種類および量等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。具体的には、前記原料１００ｇを前記抽出溶媒１０Ｌに浸漬する場合、前記浸漬時間は、例えば、０．５時間以上が好ましく、より好ましくは、０．５〜２４時間である。
【００３１】
また、前記抽出時の前記抽出溶媒の温度は、室温であってもよいし、室温以上または室温以下であってもよく、特に制限されない。前記抽出溶媒が水性溶媒の場合、前記抽出処理は、例えば、熱水抽出が好ましい。前記熱水抽出の場合、前記水性溶媒の温度は、特に制限されないが、例えば、３０℃以上であり、好ましくは、５０〜１００℃である。また、前記熱水抽出の処理時間は、例えば、前記原料の種類および量、ならびに前記水性溶媒の量等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。具体的には、前記原料１００ｇ（乾燥重量）を前記水性溶媒１０Ｌで抽出する場合、前記処理時間は、０．５時間以上が好ましく、より好ましくは０．５〜２４時間である。
【００３２】
前記抽出物は、前記抽出処理後、例えば、精製処理等を施してもよい。前記精製処理は、特に制限されないが、例えば、蒸留処理、ろ過処理、クロマトグラフィー処理および乾燥処理等の公知の方法があげられる。
【００３３】
前記抽出物の形態は、特に制限されないが、例えば、液状、ペースト状および粉末状等があげられ、後述するＯＰＨ活性増強化剤の形態に応じて、適宜選択できる。
【００３４】
前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の抽出物のみを含んでもよいし、前述の抽出物とその他の成分を含む組成物であってもよい。前記成分は、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、吸収促進剤、乳化剤、安定化剤および防腐剤等の各種添加剤を含んでもよい。前記ＯＰＨ活性増強化剤中の前記各種添加剤の配合量は、特に制限されず、適宜設定できる。
【００３５】
前記ＯＰＨ活性増強化剤の形態は、特に制限されないが、例えば、固形状、ゲル状および液状等があげられる。前記形態の具体例としては、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、トローチ剤、点眼剤、液剤、貼付剤、ローション剤および軟膏剤等があげられる。
【００３６】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、生体に投与することにより、生体内におけるＯＰＨの活性を増強化可能である。このため、前記ＯＰＨ活性増強化剤は、後述するように、例えば、生体内の酸化タンパク質または糖化タンパク質が原因となる疾病や、組織の老化および機能低下等の治療方法または予防方法に利用できる。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、一般食品および栄養補助食品等の食品、化粧料、医薬部外品および医薬品等のその他の成分と配合し、組成物として投与してもよい。前記組成物中の前記ＯＰＨ活性増強化剤の配合量は、例えば、前記その他の成分および投与対象等に応じて適宜設定可能であり、特に制限されない。
【００３７】
つぎに、本発明のＯＰＨ活性増強化方法は、前述のように、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、ＯＰＨを含む試料に添加する工程を含む。前記ＯＰＨ活性増強化方法は、例えば、Ｎ末端アシル化アミノ酸の遊離工程を含む方法に利用でき、具体的には、例えば、タンパク質シークエンス解析等に利用可能である。前記タンパク質シークエンス解析において、例えば、解析対象のタンパク質のＮ末端のアシル化アミノ酸を、ＯＰＨにより遊離させる工程を、前記ＯＰＨ活性増強化剤の存在下で行うことにより、前記Ｎ末端アシル化アミノ酸をより効率的に遊離できる。前記タンパク質シークエンス解析は、前記ＯＰＨ活性増強化方法を用いる以外は特に制限されず、従来公知の方法を採用できる。前記遊離工程において、反応液中の前記ＯＰＨ活性増強化剤の添加量は、例えば、解析対象のタンパク質量等に応じて、適宜設定でき、特に制限されない。
【００３８】
本発明のタンパク質分解促進方法は、前述のように、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、タンパク質とＯＰＨとを含む試料に添加する工程を含み、前記タンパク質が、酸化タンパク質および糖化タンパク質の少なくとも一方を含む。前記タンパク質分解促進方法は、例えば、Ｎ末端アシル化アミノ酸の遊離工程を含む方法に利用でき、具体的には、例えば、前述のタンパク質シークエンス解析等に利用可能である。
【００３９】
前記酸化タンパク質および糖化タンパク質は、例えば、加齢または老化病態を示す疾患に伴い修飾を受けたタンパク質、紫外線曝露等により酸化障害を受けたタンパク質、糖により修飾を受けたタンパク質等があげられる。前記タンパク質の修飾は、例えば、酸化、糖化、カルボニル化、アシル化等があげられる。前記カルボニル化には、例えば、ヒドロキシノネナール化、マロンジアルデヒド化、グリコールアルデヒド化、ピラリン化等が含まれる。具体的には、特に制限されないが、例えば、前記酸化タンパク質は、酸化オキシレドキシン等があげられ、前記糖化タンパク質は、ＨｂＡ１ｃ、グリコアルブミン、ＡＧＥｓ（終末糖化産物）化タンパク質等があげられる。
【００４０】
本発明の治療方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を生体に投与し、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および／または組織の機能低下を、治療することを特徴とする。本発明の治療方法は、予防方法でもよい。前記疾病は、例えば、糖尿病合併症、アルツハイマー病、白内障、動脈硬化、骨粗鬆症、リウマチおよび変形性骨関節疾患等があげられる。前記組織は、例えば、皮膚、神経、腎臓、血管、網膜、水晶体、骨、関節、脳組織、肝臓および赤血球等があげられる。前記生体の動物種は、特に制限されないが、例えば、ヒト、またはサル、ウシ、ブタ、イヌおよびネコ等の非ヒト哺乳類、ニワトリ等の鳥類ならびに魚介類等があげられる。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、経口投与および非経口投与があげられる。前記非経口投与は、例えば、経皮投与および静脈注射等の注射等があげられる。前記ＯＰＨ活性増強化剤の形態は、特に制限されず、例えば、前述の形態等があげられる。また、前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述のように、その他の成分と配合した組成物として投与してもよい。前記組成物中の前記ＯＰＨ活性増強化剤の配合量は、前述のように、適宜設定可能であり、特に制限されない。前記ＯＰＨ活性増強化剤の投与量は、例えば、動物種、年齢等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。健常成人が経口摂取する場合、前記ＯＰＨ活性増強化剤を、例えば、前記抽出物(固形物)換算で１０〜２０００ｍｇ摂取するのが好ましく、より好ましくは、５０〜１０００ｍｇである。前記本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記疾病、組織の老化および／または機能低下の治療薬ともいえ、予防薬の意味も含む。
【００４１】
本発明の抽出物は、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および／または機能低下の治療に使用するための、キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属もしくはブドウ科ブドウ属の植物の抽出物である。前記治療は、予防でもよい。本発明の組成物は、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および機能低下の治療に使用するための、キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属およびブドウ科ブドウ属からなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含む組成物である。前記治療は、予防でもよい。本発明の抽出物および組成物において、前記各抽出物、および、前記抽出物を含む組成物は、前述のとおりであり、組み合わせ、使用方法等も同様である。
【実施例】
【００４２】
つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、以下の実施例により制限されない。【００４３】
本例では、植物抽出物および混合抽出物によるＯＰＨ活性への影響を評価した。なお、本例では、前記植物として、ローマカミツレの頭状花、ドクダミの地上部、セイヨウサンザシの果実およびブドウの葉を用いた。ＯＰＨとしては、市販品ＡＡＲＥ（タカラバイオ社製）を使用した。【００４４】
植物抽出物の調製
前記各植物の乾燥物１００ｇを、８０℃の精製水１０Ｌに約５時間浸漬し、各植物の抽出エキスを得た。各抽出エキスをろ過して、残渣を除去し、ろ液約１０ｋｇをそれぞれ回収した。各ろ液をさらに乾燥して溶媒を除去し、粉末の各植物抽出物を得た。また、混合抽出物として、「ＡＧハーブＭＩＸ」（商品名、アークレイ社製）を用いた。これらの各植物抽出物および混合抽出物を、それぞれ、水に溶解して３５ｍｇ／ｍＬの濃度に調製し、これをサンプルとして用いた。【００４５】
ＯＰＨ活性の評価
実施例として、前記サンプルを含む下記組成の反応液４９５μＬを調製した。コントロールは、前記サンプルを無添加とし、前記サンプルに代えて、水５μＬを添加した以外は、同様にして反応液を調製した。参考例として、前記サンプルに代えて、抗酸化剤であるカテキン（商品名「ポリフェノン１００」、栗田工業社製）を添加して反応液を調製した。具体的には、前記サンプルに代えて、３．５ｍｇ／ｍＬのカテキン５μＬを添加した以外は、同様にして反応液を調製した。【００４６】
（反応液）
成分                                配合量（μＬ）
１００ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）      ４８５
０．１Ｕ／ｍＬ  ＡＡＲＥ溶液                                ５
３５ｍｇ／ｍＬ  サンプル                                    ５【００４７】
前記反応液４９５μＬを室温で２０分静置し、さらに、基質として、２００ｍｍｏｌ／ＬのＡＡＰＡ（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニン−ｐ−ニトロアニリド）溶液（カルビオケム社製）５μＬを添加し、３７℃で１００分反応させた。そして、反応開始から所定時間（反応時間０、３０、５０および１００分）経過後に、測定波長４０５ｎｍにおける前記反応液の吸光度を、マイクロプレートリーダーで測定した。なお、前記吸光度は、前記コントロールと比べて高いほど、酵素活性が高いことを示す。これらの結果を図１に示す。図１は、各植物抽出物、それらの混合抽出物、前記カテキンおよび前記コントロールについて、ＯＰＨの活性を示す吸光度の経時的変化を表すグラフである。図１において、横軸は、反応時間（分）であり、縦軸は、測定波長４０５ｎｍにおける吸光度である。図１のグラフにおいて、白丸（○）は前記ローマカミツレ抽出物、白三角（△）は前記ドクダミ抽出物、白四角（□）は前記セイヨウサンザシ抽出物、白菱形（◇）は前記ブドウ抽出物、黒丸（●）は前記混合抽出物、黒三角は前記参考例（カテキン）、黒四角は前記コントロールの測定結果である。さらに、反応時間１００分における吸光度について、下記式から、前記コントロールに対するＯＰＨ活性の増減率（Ｒ、％）を求めた。
Ｒ＝［（ａ−ｂ）／ｂ］×１００
ａ：実施例または参考例の吸光度
ｂ：コントロールの吸光度【００４８】
これらの結果を図２に示す。図２は、各植物抽出物、それらの前記混合抽出物およびカテキンについて、反応時間１００分における、前記コントロールに対するＯＰＨ活性の増減率（％）を示すグラフである。図２において、横軸は、前記コントロールに対するＯＰＨ活性の増減率（％）であり、上から順に、前記混合抽出物、前記ローマカミツレ抽出物、前記ドクダミ抽出物、前記セイヨウサンザシ抽出物、前記ブドウ抽出物、前記カテキンの結果である。【００４９】
図１および図２に示すように、前記コントロールは、反応時間５０分以降において、反応性が低下した。これに対し、前記ローマカミツレ抽出物、前記ドクダミ抽出物、前記セイヨウサンザシ抽出物、前記ブドウ抽出物および前記混合抽出物を使用した全ての実施例について、反応時間１００分において、前記コントロールおよび参考例よりも高い吸光度が確認され、ＯＰＨの活性が増強していることがわかった。特に、前記ローマカミツレ抽出物、前記ドクダミ抽出物および前記混合抽出物は、反応時間５０分の時点で、前記コントロールより高い吸光度を示した。このように、各植物抽出物およびそれらの前記混合抽出物によれば、ＯＰＨの活性を増強できることから、これによって、酸化タンパク質や糖化タンパク質の分解除去を促進可能であるといえる。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明によれば、ＯＰＨ活性の増強化が可能である。このため、本発明は、酸化タンパク質および糖化タンパク質等の傷害タンパク質の分解促進に利用でき、生体内に生成した傷害タンパク質が原因となる疾病、組織の老化および組織の機能低下の治療や予防にも利用できる。また、本発明は、古来利用されてきた植物の抽出物を利用するため、安全性に優れ、前記植物抽出物が大量入手可能なため、生産性にも優れる。本発明は、工業製品、食品、医薬等の幅広い分野に適用可能である。
【図１】
2011004733.tif 000003
【図２】
2011004733.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成23年4月11日(2011.4.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科アンテミス属、ドクダミ科ドクダミ属、バラ科サンザシ属およびブドウ科ブドウ属からなる群から選択される少なくとも一つの植物の抽出物を含むことを特徴とする酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項２】
キク科アンテミス属の植物の抽出物、ドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物を含む、請求の範囲１記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項３】
キク科アンテミス属の植物の抽出物およびドクダミ科ドクダミ属の植物の抽出物の少なくとも一方の抽出物と、バラ科サンザシ属の植物の抽出物およびブドウ科ブドウ属の植物の抽出物の少なくとも一方の抽出物とを含む、請求の範囲１または２記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項４】
前記キク科アンテミス属の植物が、ローマカミツレであり、
前記ドクダミ科ドクダミ属の植物が、ドクダミであり、
前記バラ科サンザシ属の植物が、セイヨウサンザシであり、
前記ブドウ科ブドウ属の植物が、ブドウである、請求の範囲１から３のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項５】
請求の範囲１から４のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を、酸化タンパク質分解酵素を含む試料に添加する工程を含むことを特徴とする酸化タンパク質分解酵素活性増強化方法。
【請求項６】
請求の範囲１から４のいずれか一項に記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を、タンパク質と酸化タンパク質分解酵素とを含む試料に添加する工程を含み、
前記タンパク質が、酸化タンパク質および糖化タンパク質の少なくとも一方を含むことを特徴とするタンパク質分解促進方法。
【国際調査報告】
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