(57)【要約】【課題】LSD1の機能を選択的に阻害することのできる化合物及びLSD1阻害剤を提供する。【解決手段】本発明のフェニルシクロプロピルアミン誘導体は、下記一般式（Ｉ）若しくは（II）（ただし、両式中Ｒ１は水素、置換基が結合していてもよいアルキル基、フェニル基及び複素環基のいずれかを示し、Ｒ２は分枝を有することがあり置換基が結合していてもよいアルキレン基を示し、Ｒ３は置換基が結合していてもよいアルキル基、フェニル基、複素環基及びベンジル基のいずれかを示し、Ｒ４は置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基、置換基が結合していてもよい複素環基、置換基が結合していてもよいアルキルオキシ基、置換基が結合していてもよいフェニルオキシ基、置換基が結合していてもよいアルキルアミノ基及び置換基が結合していてもよいフェニルアミノ基のいずれかを示し、ＸはＯ、ＮＨ２、ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、Ｓ又はＣＨ２を示す）の化合物又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグからなることを特徴とする。2010143582.tif 000028【選択図】図１
2010143582.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）若しくは（II）（ただし、両式中Ｒ１は水素、置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基及び置換基が結合していてもよい複素環基のいずれかを示し、Ｒ２は分枝を有することがあり置換基が結合していてもよいアルキレン基を示し、Ｒ３は置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基、置換基が結合していてもよい複素環基及び置換基が結合していてもよいベンジル基のいずれかを示し、Ｒ４は置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基、置換基が結合していてもよい複素環基、置換基が結合していてもよいアルキルオキシ基、置換基が結合していてもよいフェニルオキシ基、置換基が結合していてもよいアルキルアミノ基及び置換基が結合していてもよいフェニルアミノ基のいずれかを示し、ＸはＯ、ＮＨ２、ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、Ｓ又はＣＨ２を示す）の化合物又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグからなることを特徴とするフェニルシクロプロピルアミン誘導体。
【化１】
2010143582.tif 000026
【請求項２】
下記一般式（１）（ただし、式中Ｒ１は水素又はフェニルアミド基を示し、Ｒ２は分枝を有することのあるアルキレン基を示し、シクロプロピルアミン置換基はメタ位又はパラ位に結合している）の化合物又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグからなることを特徴とする請求項１記載のフェニルシクロプロピルアミン誘導体。
【化２】
2010143582.tif 000027
【請求項３】
Ｒ２はエチレン基であることを特徴とする請求項２記載のフェニルシクロプロピルアミン誘導体。
【請求項４】
Ｒ１はフェニルアミド基であることを特徴とする請求項３に記載のフェニルシクロプロピルアミン誘導体。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか１項に記載のフェニルシクロプロピルアミン誘導体を有効成分として含有することを特徴とするLSD1阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、LSD1の機能を選択的に阻害することのできるフェニルシクロプロピルアミン誘導体及びそれを用いたLSD1阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒストンは、真核生物においてＤＮＡを折りたたんでクロマチン構造を形成するタンパク質であり、遺伝子の発現に深くかかわっている。すなわち、ヒストンは様々な酵素の働きによって化学修飾され、これによりクロマチン構造が変化し、遺伝子の発現が制御されると考えられている。近年、こうしたエピジェネティックな遺伝子制御に関する様々な知見が発見されている。【０００３】
Lysine-specific demethylase（以下「LSD1」という）は、最初に発見されたヒストンの脱メチル化酵素であり、ヒストンH3の4番目のリシン残基のモノメチル化体及びジメチル化体(H3K4me1/2)の脱メチル化反応を触媒し、ホルムアルデヒドを副生する（非特許文献１参照）。また、LSD1は補酵素の一種であるフラビンアデニンジヌクレオチド（以下「ＦＡＤ」という）と複合体をつくり、ＦＡＤが酸化還元のメディエーターとなって、酸素によるリジン残基の酸化が進行する（下記反応式参照）。【０００４】
【化１】
2010143582.tif 000003
【０００５】
一方、LSD1は前立腺がんにおいて過剰発現しており、アンドロゲン受容体（AR）と相互作用してAR依存性の転写を活性化することが明らかになっている。また、LSD1をノックダウンすると、アンドロゲンによって誘発された転写活性化が抑制され、細胞増殖が阻害されるということが報告されている（非特許文献２）。しかし、現在の段階ではLSD1が生体にどのような影響を与えるかなど、生物学的意義に関して不明な点が多い。このため、LSD1の触媒作用を阻害する物質（すなわちLSD1阻害剤）を見つければ、これをLSD1の機能を調べるためのバイオプローブとして用いたり、抗がん剤として応用したりすることが期待できる。【０００６】
しかしながら、現在までに活性が強くて、LSD1の機能を選択的に阻害する低分子量化合物は知られていない。これまでに報告されたLSD1を阻害する低分子量の化合物として、トラニルシプロミン（tranylcypromine）（ａ）やその誘導体が挙げられる（非特許文献１）。【０００７】
【化２】
2010143582.tif 000004
【０００８】
しかし、トラニルシプロミン（ａ）はLSD1阻害活性が弱い(ａ;IC50=21μM)という問題があった。また、LSD1はアミンオキシダーゼファミリーに属しており、ポリアミノオキシダーゼ（ＰＡＯ）やモノアミノオキシダーゼ（MAO）との相同性が高いために、トラニルシプロミン（ａ）やこれまで知られているトラニルシプロミン誘導体はMAO-AやMAO-Bをも阻害してしまい、選択的にLSD1を阻害することができないという欠点があった。【０００９】
トラニルシプロミン（ａ）及びその誘導体以外のLSD1阻害剤として、下記に示すニアラミド（Nialamide）（ｂ）も知られているが、この化合物もMAO阻害剤との選択性はない（非特許文献１）。【００１０】
【化３】
2010143582.tif 000005
【００１１】
一方、触媒メカニズムを基に設計された下記化合物（ｃ）はLSD1に選択的な阻害薬ではあるが、ペプチド化合物であり、極性が高くて分子量も大きいため、細胞膜を通らないという問題がある（非特許文献３）。【００１２】
【化４】
2010143582.tif 000006
【００１３】
また、特許文献１には、下記ポリアミン化合物（ｄ）がLSD1の阻害剤として機能することが記載されている。しかしながら、MAO阻害剤との選択性については何ら言及されていない。また、ポリアミン化合物（ｄ）は成長因子に関わるタンパク質合成や細胞内濃度調節機構に関与するなど、様々な生理活性を持つとされているので、LSD1選択的阻害薬として有用ではない。【００１４】
【化５】
2010143582.tif 000007
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】ＷＯ２００７／０２１８３９
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Biochemistry 2007, 46, 4408-4416
【非特許文献２】Nature 2005, 437, 436-439
【非特許文献３】J.AM.CHEM.SOC.2006,128, 4536-4537
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、上記従来の実情に鑑みてなされたものであり、LSD1の機能を選択的に阻害することのできる化合物及びLSD1阻害剤を提供することを解決すべき課題としている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明者らは、トラニルシプロミンがLSD1の機能を阻害することに注目し、さらにその選択性を高めるべく、トラニルシプロミンの各種誘導体を合成し、そのLSD1阻害効果、MAO阻害効果、癌増殖抑制効果等について鋭意研究を重ねた。その結果、上記課題を解決可能な化合物を発見し、本発明を完成するに至った。【００１９】
すなわち、本発明のフェニルシクロプロピルアミン誘導体は、下記一般式（Ｉ）若しくは（II）（ただし、両式中Ｒ１は水素、置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基及び置換基が結合していてもよい複素環基のいずれかを示し、Ｒ２は分枝を有することがあり置換基が結合していてもよいアルキレン基を示し、Ｒ３は置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基、置換基が結合していてもよい複素環基及び置換基が結合していてもよいベンジル基のいずれかを示し、Ｒ４は置換基が結合していてもよいアルキル基、置換基が結合していてもよいフェニル基、置換基が結合していてもよい複素環基、置換基が結合していてもよいアルキルオキシ基、置換基が結合していてもよいフェニルオキシ基、置換基が結合していてもよいアルキルアミノ基及び置換基が結合していてもよいフェニルアミノ基のいずれかを示し、ＸはＯ、ＮＨ２、ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、Ｓ又はＣＨ２を示す）の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグからなること特徴とする。
【化６】
2010143582.tif 000008
【００２０】
本発明者らの試験結果によれば、上記本発明のフェニルシクロプロピルアミン誘導体（I）及び（II）は、LSD1の阻害活性が高く、MAO-AやMAO-Bなどの阻害作用は、LSD1阻害作用に比べて小さい。すなわち、選択的にLSD1阻害を起こすことができる。このため、LSD1の機能を調べるための生物学的ツールとして好適に用いることができる。また、癌細胞増殖抑制作用も有しており、抗がん剤として利用することも期待される。【００２１】
なお、「プロドラッグ」とは、生体内で加水分解されてフェニルシクロプロピルアミン誘導体（I）又は（II）を再生する化合物をいい、例えばアミノ基の水素をアルカノイル基（アシル基）に置換した誘導体（すなわちアミド化した誘導体）、ヘミアミナールエーテル誘導体、アルコキシカルボニルオキシメチル基に置換した誘導体、N-オキシド誘導体等が挙げられる。
また、薬学上許容される塩としては、また、薬学上許容される塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩等の無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、グリコール酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。また、これらの塩を組み合わせて用いることもできる。【００２２】
上記本発明のフェニルシクロプロピルアミン誘導体（I）又は（II）の中でも、下記一般式（１）（ただし、式中Ｒ１は水素又はフェニルアミド基を示し、Ｒ２は分枝を有することのあるアルキレン基を示し、シクロプロピルアミン置換基はメタ位又はパラ位に結合している）の化合物又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグからなることを特徴とするフェニルシクロプロピルアミン誘導体が好ましい。
【化７】
2010143582.tif 000009
【００２３】
また、Ｒ２はエチレン基とすることが特に好ましい。さらに好ましいのは、下記構造式（２）に示す、フェニルアミド基を有するフェニルシクロプロピルアミン誘導体（２）又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグからなることである。本発明者らの試験結果によれば、この化合物は特にLSD1阻害活性が大きく、MAO阻害との選択性にも優れている。【００２４】
【化８】
2010143582.tif 000010
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明を具体化した実施例について詳細に説明する。
【００２６】
（実施例１）
実施例１では、(S)-トランス-N-3-[3-(2-アミノシクロプロピル) フェノキシ]-1-ベンジルカルバモイルプロピルベンズアミド塩酸塩（NCL-1）を合成した（下記化学式参照）。詳細は以下のとおりである。
【００２７】
【化９】
2010143582.tif 000011
【００２８】
まず、NCL-1を合成するための一方の前駆体として、化合物（９）を以下の反応ルートにしたがって合成した。
【化１０】
2010143582.tif 000012
【００２９】
以下に合成法の詳細を示す。
（ステップ１−１）
トランス-3- (3-ヒドロキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（４）の合成
3- (3-ヒドロキシフェニル)アクリル酸（３）（25.0 g）をメタノール（82 mL）に溶解し、濃硫酸（2.0 mL）を加え、24時間還流した。反応液を濃縮し、残査を酢酸エチル（1000 mL）に溶解させ、水（500 mL）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（500 mL）で洗浄した。有機層を飽和食塩水（500 mL）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮し、化合物（４）（25.9 g, 収率96%）を白色固体として得た。化合物（４）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.60 (1H, d, J = 15.8 Hz), 7.21 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.04 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.98 (1H, t, J =1.8 Hz), 6.82 (1H,dd, J =8.0, 1.8Hz), 6.44 (1H, d, J =15.8 Hz), 3.77 (3H, s).
【００３０】
（ステップ１−２）
トランス-3-(3メトキシメトキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（５）の合成
ステップ１−１で得られたトランス-3- (3-ヒドロキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（４）（25.8 g）をアセトン（220 mL）に溶解し、炭酸カリウム（40.0 g）を加え、室温で20分攪拌した。その溶液にメトキシメチルクロリド（11 mL）をゆっくりと加え、室温で12時間攪拌した。炭酸カリウムをろ過後、ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝10 ：1）で精製し、化合物（５）（27.2 g, 収率84%）を無色の油状物として得た。化合物（５）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.66 (1H, d, J = 16.2 Hz), 7.30 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.20 (1H, s), 7.17 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.07 (1H, dd, J = 8.0, 2.4 Hz), 6.43 (1H, d, J = 16.0 Hz), 5.19 (2H, s), 3.81 (3H, s), 3.49 (3H, s).
【００３１】
（ステップ１−３）
トランス-2-(3-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸メチルエステル（６）の合成
水素化ナトリウム（60%）（6.32 g）とトリメチルスルホニウムヨージド（34.8 g）の混合物に、ジメチルスルホキシド（137 mL）を室温でゆっくりと滴下した。その反応液を室温で1時間攪拌した後、ステップ１−３で得られたトランス-3-(3メトキシメトキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（５）（27.0 g）のジメチルスルホキシド（137 mL）溶液を滴下した。反応液を室温で4時間攪拌した後、10%クエン酸水溶液（500 mL）を加え、酢酸エチル（500 mL）で抽出した。有機層を飽和食塩水（500 mL）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝10 ：1）で精製し、化合物（６）（6.70 g, 収率23%）を無色の油状物として得た。化合物（６）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm) 
d：7.19 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.89 (1H, dd, J =8.0, 2.5 Hz), 6.78 (1H, t, J = 2.5 Hz), 6.74 (1H, d, J =8.0 Hz), 5.16 (2H, s), 3.71 (3H, s), 3.47 (3H, s), 2.51-2.49 (1H, m), 1.92-1.89 (1H, m), 1.61-1.57 (1H, m) 1.34-1.31 (1H, m).
【００３２】
（ステップ１−４）
トランス-2-(3-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸（７）の合成
ステップ１−３で得られたトランス-2-(3-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸メチルエステル（６）（6.70 g）をメタノール（56 mL）に溶解させ、氷冷下、水酸化カリウム（16.0 g）のメタノール溶液（130 mL）を加え、反応液を室温で15時間攪拌した。反応液を濃縮し、残査を水（100 mL）に懸濁させ、ジクロロメタン（100 mL）で洗浄した。水層に2N塩酸を加えて酸性（pH 1）にし、ジクロロメタン（300 mL）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮し、化合物（７）（6.00 g, 収率95%）を無色の油状物として得た。化合物（７）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.20 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.90 (1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz),  6.79 (1H, t, J = 1.9 Hz), 6.75 (1H, d, J = 8.0 Hz), 5.16 (2H, s), 3.48 (3H, s), 2.60-2.56 (1H, m), 1.92-1.89 (1H, m), 1.65 (1H, quintet, J = 5.0 Hz)1.42-1.38 (1H, m).
【００３３】
（ステップ１−５）
トランス- 2-(3-メトキシメトキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（８）の合成
ステップ１−４で得られたトランス-2-(3-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸（７）（6.00 g）をシクロヘキサン（320 mL）に溶解させ、ジフェニルホスホリルアジド（6.7 mL）とトリエチルアミン（4.5 mL）をアルゴン雰囲気下、0 ℃で加えた。反応液を3時間還流後、tert-ブタノール（52 mL）を加え、さらに11時間還流した。反応液を濃縮後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝ 7 ：1）で精製し、化合物（８）（3.70 g, 収率47%）を白色固体として得た。化合物（７）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.17 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.85 (1H, d, J = 9.2 Hz), 6.78 (1H, s), 6.76 (1H, s), 5.15 (2H, s),4.82 (1H, broad s), 3.47 (3H, s)2.72-2.76 (1H, m), 1.98-2.02 (1H, m), 1.45 (9H, s), 1.74-1.16 (2H, m).
【００３４】
（ステップ１−６）
トランス-2-(3-ヒドロキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（９）の合成
ステップ１−５で得られたトランス-2-(3-メトキシメトキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（８）（3.70 g）をジクロロメタン（60 mL）に溶解させ、4N塩酸酢酸エチル溶液（68 mL）を加え、室温で4時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を1,4-ジオキサン（33 mL） と水 (33 mL)に溶解させ、トリエチルアミン (20 mL) と Boc2O (4.6 mL)を加えた。反応液を室温で12時間攪拌後、10%クエン酸溶液（200 mL）に注ぎ、酢酸エチル（300 mL）で抽出した。有機層を飽和食塩水（300 mL）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝ 5 ：1）で精製し、化合物（９）（1.59 g, 収率35%）を無色の油状物として得た。化合物（９）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.10 (1H, d, J = 7.6 Hz), 6.67 (1H, d, J =8.0 Hz), 6.64 (1H, dd, J = 8.0, 2.4 Hz), 6.59 (1H, s), 5.28 (1H, broad s), 4.86 (1H, broad s), 2.69-2.72 (1H, m), 1.97-2.01 (1H, m), 1.46 (9H, s), 1.15-1.12 (2H, m).
【００３５】
さらに、NCL-1を合成するための他方の前駆体として、化合物（１３）を以下の反応ルートにしたがって合成した。
【化１１】
2010143582.tif 000013
【００３６】
以下に合成法の詳細を示す。
（ステップ１−７）
(S)-1-ベンジルカルバモイル-3-ヒドロキシプロピルtert-ブチルカルバメート（１１）の合成
N- tert-ブトキシカルボニル(S) -ホモセリン（１０）（5.50 g）、ベンジルアミン（2.8 mL）、PyBOP（13.1 g）、トリエチルアミン（7.0 mL）をN,N-ジメチルホルムアミド（55 mL）に溶解させ、室温で10時間攪拌した。反応液を水（300 mL）で希釈し、クロロホルム（300 mL）で抽出した。有機層を飽和食塩水（300 mL）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝ 1 ：2）で精製し、化合物（１１）（5.46 g, 収率70%）を白色固体として得た。化合物（１１）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.35-7.32 (2H, m), 7.29-7.25 (3H, m), 6.71 (1H, broad s), 5.58 (1H, d, J = 7.3 Hz), 4.45 (2H, s), 4.35 (1H, s), 3.71 (2H, s), 3.27 (1H, broad s), 2.04-1.98 (1H, m), 1.72-1.85 (1H, m), 1.43 (9H, s)
【００３７】
（ステップ１−８）
(S)-2-アミノ-N-ベンジル-4-ヒドロキシブタンアミド塩酸塩（１２）の合成
ステップ１−７で得られた(S)-1-ベンジルカルバモイル-3-ヒドロキシプロピルtert-ブチルカルバメート（１１）（5.40 g）をジクロロメタン（60 mL）に溶解させ、4N塩酸1,4-ジオキサン溶液（87 mL）を加え、室温で5時間攪拌した。反応液を濃縮し、化合物（4.27 g, 収率100%）を白色固体として得た。化合物（１２）の1H NMRのデータを以下に示す。
d：1H NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
7.44-7.41 (2H, m), 7.34-7.30 (3H, m), 7.27 (1H, broad s), 4.43 (2H, s), 3.94 (1H, d, J = 7.0 Hz) 2.03 (2H, s)
【００３８】
（ステップ１−９）
(S)-N-(1-ベンジルカルバモイル-3-ヒドロキシプロピル)ベンズアミド（１３）の合成
ステップ１−８で得られた(S)-2-アミノ-N-ベンジル-4-ヒドロキシブタンアミド塩酸塩（１２）（118 mg）、安息香酸（60 mg）、PyBOP（303 mg）、トリエチルアミン（0.2 mL）をN,N-ジメチルホルムアミド（1 mL）に溶解させ、室温で20時間攪拌した。反応液を水（100 mL）で希釈し、ジクロロメタン（100 mL）で抽出した。有機層を飽和食塩水（100 mL）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  ｎ-ヘキサン：酢酸エチル＝2：3）で精製し、化合物（１３）（72 mg, 収率47%）を白色固体として得た。化合物（１３）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.79 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.53 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.44 (2H, t, J = 8.0 Hz), 7.33-7.25 (5H, m), 7.06 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.89 (1H, broad s), 4.77 (1H, q, J = 6.4 Hz), 4.47-4.45 (2H, m), 4.32-4.28 (1H, m), 4.22-4.18 (1H, m), 2.28-2.19 (2H, m), 2.03 (3H, s).
【００３９】
<カップリング反応>
ステップ１−１〜ステップ１−６で合成したカップリング前駆体である化合物（９）と、ステップ１−７〜ステップ１−９で合成したカップリング前駆体（１３）とを用いて、化１１に示す合成ルートに従い、光延反応を用いたカップリング反応を行った。
【化１２】
2010143582.tif 000014
【００４０】
以下にカップリング反応の詳細を示す。
（ステップ１−１０）
(S)-トランス-[2-[3-(3-ベンゾイルアミノ-3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル] シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（１４）の合成
ステップ１−９で得られた(S)-N-(1-ベンジルカルバモイル-3-ヒドロキシプロピル)ベンズアミド（１３）（200 mg）と、ステップ１−６で得られたトランス-2-(3-ヒドロキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（９）（230 mg）と、トリフェニルホスフィン（504 mg）とを無水テトラヒドロフラン（3 mL）に溶解させ、氷冷下、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（1mL）を加えた。反応液を室温で5時間攪拌後、濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝ 1 ：1）で精製し、化合物（１４）（64 mg, 収率18%）を淡黄色固体として得た。化合物（１４）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.82 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.52 (1H, t, J = 8.5 Hz), 7.46 (2H, t, J = 8.5 Hz), 7.26-7.21 (5H, m), 7.16 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.92 (1H, s), 6.75 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.63 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.60 (1H, broad s), 4.88 (1H, quartet, J = 6.0 Hz), 4.47 (2H, d, J = 6.0 Hz), 4.32-4.29 (1H, m), 4.13-4.10 (1H, m), 2.65-2.70 (1H, m), 2.43-2.37 (2H, m), 1.99-1.97 (1H, m), 1.45 (9H, s), 1.14-1.10 (2H, m).
【００４１】
（ステップ１−１１）
(S)-トランス-N-3-[3-(2-アミノシクロプロピル) フェノキシ]-1-ベンジルカルバモイルプロピルベンズアミド塩酸塩（NCL-1）の合成
ステップ１−１０で得られた(S)-トランス-[2-[3-(3-ベンゾイルアミノ-3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル] シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（１４）（70 mg）をジクロロメタン（1 mL）に溶解させ、4N塩酸酢酸エチル溶液（0.8 mL）を加え、室温で4時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣をクロロホルム-メタノールから再結晶し、実施例１の化合物（NCL-1）（22 mg, 収率36%）を淡黄色固体として得た。NCL-1の融点、1H NMR、13C NMR、MS (FAB)のデータを示す。
融点 134.8-139.1 ℃
1H NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：7.84 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.54 (1H, t, J = 8.5 Hz), 7.46 (2H, t, J = 8.5 Hz), 7.26-7.17 (6H, m), 6.77 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz), 6.74-6.72 (1H, m), 6.67 (1H, d, J = 1.5 Hz), 4.47-4.37 (2H, m), 4.08 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.28-2.24 (2H, m), 1.35-1.33 (1H, m), 1.29-1.26 (1H, m) 
13C NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：173.93, 170.34, 160.52, 141.32, 139.79, 135.21, 132.96, 130.81, 129.55, 128.54, 128.46, 128.19, 120.00, 114.15, 114.05, 113.84, 65.92, 53.13, 44.15, 32.68, 31.96, 22.58, 13.84
MS (FAB) m/z = 444 (M+)
Anal. Calcd. for C27H30ClN3O3 3/2H2O: C, 63.96; H, 6.56; N, 8.29. 
Found: C, 63.83; H, 6.29; N, 7.98. 3/2
【００４２】
（実施例２）
実施例２では、(S)-トランス-N-3-[4-(2-アミノシクロプロピル)フェノキシ]-1-ベンジルカルバモイルプロピルベンズアミド塩酸塩（NCL-2）を合成した（下記化学式参照）。詳細は以下のとおりである。
【００４３】
【化１３】
2010143582.tif 000015
【００４４】
まず、NCL-2を合成するための一方の前駆体として、化合物（２１）を以下の反応ルートにしたがって合成した。
【００４５】
【化１４】
2010143582.tif 000016
【００４６】
以下に合成法の詳細を示す。
（ステップ２−１）
トランス-3- (4-ヒドロキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（１６）の合成
実施例１のステップ１−１と同様の方法により、3-(4-ヒドロキシフェニル)アクリル酸（１５）（20.0 g）を出発原料とし、化合物（１６）（21.2 g, 収率99%）を白色固体として得た。化合物（１６）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.64 (1H, d, J = 15.8 Hz), 7.43 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.84 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.31 (1H, d, J =15.8 Hz), 5.21 (1H,s), 3.80 (3H, s).
【００４７】
（ステップ２−２）
トランス-3-(4-メトキシメトキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（１７）の合成
実施例１のステップ１−２と同様の方法により、ステップ２−１より得られたトランス-3- (4-ヒドロキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（１６）（10.0 g）より、化合物（１７）（11.1 g, 収率89%）を無色油状物として得た。化合物（１７）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.65 (1H, d, J = 6.2 Hz), 7.47 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.33 (1H, d, J = 6.2 Hz), 5.20 (2H, s), 3.80 (3H, s), 3.48 (3H, s).
【００４８】
（ステップ２−３）
トランス-2-(4-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸メチルエステル（１８）の合成
実施例１のステップ１−３と同様の方法により、ステップ２−２より得られたトランス-3-(4-メトキシメトキシフェニル)アクリル酸メチルエステル（１５）（11.0 g）より、化合物（１８）（1.68 g, 収率14%）を無色油状物として得た。化合物（１８）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.03 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.95 (2H, d, J =8.5 Hz), 5.14 (2H, s), 3.71 (3H, s), 3.46 (3H, s), 2.51-2.47 (1H, m), 1.85-1.81 (1H, m), 1.58-1.54 (1H, m) 1.29-1.25 (1H, m).
【００４９】
（ステップ２−４）
トランス-2-(4-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸（１９）の合成
実施例１のステップ１−４と同様の方法により、ステップ２−３より得られたトランス-2-(4-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸メチルエステル（１８）（1.68 g）より、化合物（１９）（1.50 g, 収率95%）を白色固体として得た。化合物（１９）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.05 (2H, d, J = 6.7 Hz), 6.94 (2H, d, J = 6.7 Hz), 5.12 (2H, s), 3.42 (3H, s), 2.43-2.39 (1H, m), 1.76-1.73 (1H, m), 1.49-1.46 (1H, m), 1.33-1.28 (1H, m).
【００５０】
（ステップ２−５）
トランス- 2-(4-メトキシメトキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（２０）の合成
実施例１のステップ１−５と同様の方法により、ステップ２−４より得られたトランス-2-(4-メトキシメトキシフェニル)シクロプロパンカルボン酸（１９）（1.05 g）より、化合物（２０）（788 mg, 収率56%）を淡黄色固体として得た。化合物（２０）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.07 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.94 (2H, d, J = 8.2 Hz), 5.13 (2H, s), 4.89 (1H, broad s), 3.46 (3H, s), 2.64-2.69 (1H, m), 2.02-1.98 (1H, m), 1.46 (9H, s), 1.12-1.09 (2H, m).
【００５１】
（ステップ２−６）
トランス-2-(4-ヒドロキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（２１）の合成
実施例１のステップ１−６と同様の方法により、ステップ２−５より得られたトランス- 2-(4-メトキシメトキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（２０）（476 mg）より、化合物（２１）（300 mg, 収率74%）を淡黄色油状物として得た。化合物（２１）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：6.94 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.72 (2H, d, J =8.5 Hz), 5.13 (1H, broad s), 4.84 (1H, broad s), 2.60-2.70 (1H, m), 1.98 (1H, m), 2.09-1.96 (1H, m), 1.10-1.05 (2H, m).
【００５２】
NCL-2を合成するための他方の前駆体として、実施例１のステップ１−７〜ステップ１−９で合成した化合物（１３）を用いた。
【００５３】
<カップリング反応>
上記ステップ２−１〜ステップ２−６で合成したカップリング前駆体である化合物（２１）と、化合物（１３）とを用いて、光延反応によるたカップリング反応によって、実施例２の化合物NCL-2を合成した。
【００５４】
【化１５】
2010143582.tif 000017
【００５５】
以下に合成法の詳細を示す。
（ステップ２−７）
(S)-トランス-[2-[4-(3-ベンゾイルアミノ-3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル] シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（２２）の合成
実施例１のステップ１−７と同様の方法により、ステップ２−６より得られたトランス-2-(4-ヒドロキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（２１）（220 mg）と
実施例１のステップ１−７〜１−９で合成したカップリング前駆体（１３）のカップリングを行い、化合物（２２）（83 mg, 収率25%）を淡黄色固体として得た。化合物（２２）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.79 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.53-7.49 (1H, m), 7.41 (2H, t, J = 8.5 Hz), 7.26-7.13 (5H, m), 7.04 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.71 (2H, d, J = 8.5 Hz), 4.94-4.89 (2H, m), 4.46-4.38 (2H, m), 4.25-4.21 (1H, m), 4.08-4.04 (1H, m), 2.55-2.59 (1H, m), 2.43-2.37 (2H, m), 1.95-2.01 (1H, m), 1.45 (9H, s), 1.08 (2H, t, J = 7.0 Hz).
【００５６】
（ステップ２−８）
(S)-トランス-N-3-[4-(2-アミノシクロプロピル) フェノキシ]-1-ベンジルカルバモイルプロピルベンズアミド塩酸塩（NCL-2）の合成
実施例１のステップ１−１１と同様の方法により、ステップ２−７より得られた、(S)-トランス-[2-[4-(3-ベンゾイルアミノ-3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル] シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（２２）（83 mg）より、化合物（NCL-2）（18 mg, 収率25%）を淡黄色固体として得た。NCL-2の融点、1H NMR、13C NMR、MS (FAB)のデータを示す。
融点：141.2-144.5 ℃
1H NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：7.83 (2H, d, J = 7.0 Hz), 7.54 (1H, t, J = 7.0 Hz), 7.45 (2H, t, J = 7.0 Hz), 7.27-7.19 (6H, m), 7.05 (2H, dd, J = 9.0 Hz), 6.84 (2H, d, J = 9.0 Hz), 4.40 (2H, d, J = 8.0 Hz), 4.06 (2H, t, J = 8.0 Hz), 2.74-2.72 (1H, m), 2.42-2.36 (1H, m), 2.29-2.21 (1H, m), 1.34-1.29 (1H, m), 1.26-1.22 (1H, m)
13C NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：173.91, 170.32, 159.23, 139.80, 135.21, 132.93, 131.84, 129.55, 129.52, 128.62, 128.52, 128.48, 128.17, 115.89, 65.95, 53.13, 44.16, 32.70, 31.73, 21.96, 13.41
MS (FAB) m/z = 444 (M+);
Anal. Calcd For C27H30ClN3O3 2H2O: C, 62.84; H, 6.64; N, 8.14.
Found: C, 62.47; H, 6.08; N, 8.21.
【００５７】
（実施例３）
実施例３では、トランス-4-[3-(2-アミノシクロプロピル)フェノキシ]-N-ベンジルブチルアミド塩酸塩（NCL-3）を合成した（下記化学式参照）。詳細は以下のとおりである。
【００５８】
【化１６】
2010143582.tif 000018
【００５９】
<カップリング前駆体>
実施例３では、NCL-3を合成するための前駆体として、実施例１（ステップ１−１〜１−６）で合成した、化合物（９）を用いた。また、NCL-3を合成するためのもう一方の前駆体として、化合物（２４）を次の反応によって合成した。
【化１７】
2010143582.tif 000019
【００６０】
（ステップ３−１）
N-ベンジル-4-クロロブチルアミド（２４）の合成
ベンジルアミン（1.1 mL）とトリエチルアミン（4.5 mL）をジクロロメタン（26 mL）に溶解し、氷冷下、4-クロロブチリルクロリド（２３）（1.5 mL）のジクロロメタン（15 mL）溶液を滴下した。0°Cで30分攪拌後、反応液を水（100 mL）に注ぎ、酢酸エチル（200 mL）で抽出した。有機層を飽和食塩水（100 mL）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝ 3 ：1）で精製し、化合物（２４）（1.26 g, 収率59%）を淡黄色油状物として得た。化合物（２４）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.36-7.26 (5H, m), 5.84 (1H, broad s), 4.44 (2H, d, J = 5.8 Hz), 3.62 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.40 (2H, t, J = 7.0 Hz), 2.14 (2H, quintet, J = 7.0 Hz). 
【００６１】
NCL-3を合成するための他方の前駆体として、実施例１のステップ１−１〜ステップ１−６で合成した化合物（９）を用いた。
【００６２】
<カップリング反応>
上記のようにして合成した化合物（２４）と化合物（９）とを光延反応によってカップリングさせて実施例３の化合物NCL-3を得た。
【化１８】
2010143582.tif 000020
【００６３】
以下に合成法の詳細を示す。
（ステップ３−２）
トランス-2-[3-(3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル]シクロプロピル tert-ブチルカルバメート（２５）の合成
実施例1のステップ１−６で得られたトランス-2-(3-ヒドロキシフェニル)シクロプロピルtert-ブチルカルバメート（９）（400 mg）をアセトニトリル（7.5 mL）に溶解させ、炭酸セシウム（1.54 g）、ヨウ化ナトリウム（70 mg）を加えて、室温で15分間攪拌した。反応液にステップ３−１で得られたN-ベンジル-4-クロロブチルアミド（２５）（900 mg）のアセトニトリル（10 mL）溶液を添加し、9時間加熱還流した。反応液をろ過し、不溶物を取り除き、ろ液を濃縮後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒  n-ヘキサン：酢酸エチル＝ 1：1）で精製し、化合物（２４）（140 mg, 収率21%）を淡黄色油状物として得た。化合物（２５）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.30-7.24 (5H, m), 7.15 (1H, t, J = 7.0 Hz), 6.71 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.66 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.62 (1H, s),  5.85 (1H, broad s), 4.84 (1H, broad s), 4.44 (2H, d, J = 5.8 Hz), 3.99 (2H, t, J = 5.8 Hz), 2.67-2.75 (1H, m), 2.43 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.16-2.13 (2H, m), 2.01-1.96 (1H, m), 1.45 (9H, s), 1.12-1.15 (2H, m).
【００６４】
（ステップ３−３）
トランス-4-[3-(2-アミノシクロプロピル)フェノキシ]-N-ベンジルブチルアミド塩酸塩（NCL-3）の合成
実施例１のステップ１−１１と同様の方法により、ステップ３−２より得られた、トランス-2-[3-(3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル]シクロプロピル tert-ブチルカルバメート（２５）（140 mg）より、実施例３のフェニルシクロプロピルアミン誘導体である化合物（NCL-3）（82 mg, 収率69%）を白色固体として得た。NCL-3の融点、1H NMR、13C NMR、MS (ELC)のデータを示す。
融点：83.3-86.7 °C
1H NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：7.26-7.17 (6H, m), 6.77 (1H, dd, J = 7.6, 2.5 Hz), 6.72 (1H, d, J = 7.6 Hz), 6.69 (1H, s), 4.36 (2H, s), 3.98 (2H, t, J = 6.4 Hz), 2.82-2.80 (1H, m), 2.43 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.32-2.30 (1H, m), 2.10-2.06 (2H, m), 1.39-1.35 (1H, m), 1.32-1.28 (1H, m)
13C NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：175.37, 160.71, 141.30, 140.02, 130.78, 129.53, 128.52, 128.18, 119.68, 113.94 113.81, 68.06, 33.46, 31.96, 26.57, 22.62, 13.84
MS (ELC) m/z: 325 (M+)
Anal. Calcd For C20H25ClN2O2 2/3H2O: C, 64.42; H, 7.12; N, 7.51.
Found: C, 64.44; H, 6.87; N, 7.80.
【００６５】
（実施例４）
実施例４では、トランス-4-[4-(2-アミノシクロプロピル)フェノキシ]-N-ベンジルブチルアミド塩酸塩（NCL-4）を合成した（下記化学式参照）。詳細は以下のとおりである。
【００６６】
【化１９】
2010143582.tif 000021
【００６７】
<カップリング前駆体>
実施例４では、カップリング前駆体は、実施例２におけるステップ２−１〜ステップ２−６で合成した、化合物（２１）を用いた。また、もう一方のカップリング前駆体としては、実施例３におけるステップ３−１で合成した化合物（２４）を用いた。
【００６８】
<カップリング反応>
上記のようにして合成した化合物（２４）と化合物（２１）とを光延反応によってカップリングさせて実施例４の化合物NCL-4を得た。
【００６９】
【化２０】
2010143582.tif 000022
【００７０】
以下に合成法の詳細を示す。
（ステップ４−１）
トランス-2-[4-(3-ベンジルカルバモイルプロポキシ)フェニル]シクロプロピル tert-ブチルカルバメート（２６）の合成
実施例３のステップ３−２と同様の方法により、化合物（２１）（500 mg）と化合物（２４）とをカップリングさせ、実施例４のフェニルシクロプロピルアミン誘導体である化合物（２６）（NCL-3）（82 mg, 収率69%）を白色固体として得た。化合物（２６）の1H NMRのデータを以下に示す。
1H NMR (CDCl3, 500 MHz, d; ppm)
d：7.32-7.24 (5H, m), 7.05 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.75 (2H, d, J = 8.2 Hz), 5.82 (1H, broad s), 4.84 (1H, broad s),  4.44 (2H, d, J = 5.8 Hz), 3.97 (2H, t, J = 5.8 Hz), 2.60-2.70 (1H, m), 2.42 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.16-2.12 (2H, m), 1.97-2.04(1H, m), 1.46 (9H, s), 1.02-1.15 (2H, m).
【００７１】
（ステップ４−２）
トランス-4-[4-(2-アミノシクロプロピル)フェノキシ]-N-ベンジルブチルアミド塩酸塩（NCL-4）の合成
実施例１のステップ１−１１と同様の方法により、ステップ４−１より得られた、化合物（２６）（140 mg）より、実施例４のフェニルシクロプロピルアミン誘導体である化合物（NCL-4）（82 mg, 収率69%）を白色固体として得た。NCL-4の融点、1H NMR、13C NMR、MS (ELC)のデータを示す。
融点：156.3-159.4 °C; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm)
d：7.27-7.21 (5H, m), 7.06 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.83 (2H, d, J = 8.5 Hz), 4.35 (2H, s), 3.95 (2H, t, J = 6.4 Hz), 2.75-2.74 (1H, m), 2.42 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.30-2.27 (1H, m), 2.09-2.05 (2H, m), 1.35-1.32 (1H, m), 1.27-1.24 (1H, m)
d：13C NMR (CD3OD, 500 MHz, d; ppm) 175.34, 159.44, 140.06, 131.58, 129.51, 128.61, 128.53, 128.16, 115.81, 68.17, 44.11, 33.48, 31.73, 26.59, 21.96, 13.40
MS (ELC) m/z: 325 (M+)
Anal. Calcd For C20H25ClN2O2 H2O: C, 63.40; H, 7.18; N, 7.39.
Found: C, 63.50; H, 6.68; N, 7.44.
【００７２】
−評    価−
以上のようにして得られた実施例１〜実施例４の化合物（NCL-1〜NCL-4）について、LSD1阻害活性試験、モノアミンオキシダーゼ阻害活性試験及びHeLa細胞増殖阻害試験を行った。
【００７３】
＜LSD1阻害試験＞
LSD1酵素は以下のようにして調製した。
全長のLSD1（1-851aa）のN末端にヒスチジン5残基を付加した組換えタンパク質をコードするプラスミドを調製し、このプラスミドで形質転換した組換え大腸菌を用いてLSD1を発現させた。その後、組換え大腸菌を超音波処理で溶解し、その可溶性画分をHisTrapクロマトグラフィーで精製し、LSD1酵素溶液を得た。LSD1の酵素活性は、LSD1の脱メチル化反応の際に生成する過酸化水素をペルオキシダーゼと試薬によって発色させ、吸光光度法で定量することにより測定した。すなわち、384ウエルマイクロタイタープレート内で、50mM Hepes-NaOH buffer（pH7.5）、0.1mM 4-アミノアンチピリン、1mM 3,5-ジクロロ-2-ヒドロキシベンゼンスルホン酸、20μM histone H3- lysine 4 dimethyl peptide、0.05μM LSD1、0.35μM horseradish peroxidaseからなる20μlの溶液を25℃で30分間、経時的に酵素反応を測定した。測定にはSpectra Max M2e(Molecular Devices社)を用いて、生成物の515nmでの吸光度を測定して求めた。また、阻害活性については、ジメチルスルホキシド（dimethyl sulfoxide）添加時の酵素活性を100%とし、フェニルシクロプロピルアミン誘導体の添加濃度を様々に変えて残存活性を測定し、50％の活性を阻害する濃度（IC50）を求めた。
【００７４】
LSD1阻害試験の結果を図１に示す。この図に示すように、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）は、いずれもtranylcypromineより高いLSD1阻害活性を示した。また、実施例１〜４のの化合物（NCL-1〜４）中でも、アミノ酸構造を有する実施例１のNCL-1及び実施例２のNCL-2では、極めて高いLSD1阻害活性を示した。
【００７５】
＜モノアミンオキシダーゼ阻害活性測定試験＞
モノアミンオキシダーゼA（MAO-A）及びモノアミンオキシダーゼB（MAO-B）阻害活性の測定を、Promega社のMAO-GloアッセイキットとSigma-Aldrich社から購入したMAO-AおよびMAO-Bを用いて以下のように行った。
12.5 μLの4倍MAO基質（最終濃度40 μM）、12.5 μLの4倍阻害剤溶液（最終濃度0.1~1000 μM）、25 μLのMAO-A（最終濃度 9 unit/mL）あるいは25 μLのMAO-B（最終濃度2.3 unit/mL）を混合し、室温で1時間反応させた。この反応液に50 μLのルシフェリン検出試薬を添加し、室温で20分反応させ、蛍光プレートリーダーも用いて蛍光強度（蛍光測定波長：562 nm）を測定し、IC50値（酵素を50%阻害する阻害剤濃度）を求めた。
【００７６】
MAO-Aに対する阻害活性の結果を図２に示す。この図に示すように、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）は、いずれもtranylcypromineやpargylineより低いMAO A阻害活性を示した。その中でも、アミノ酸構造を有する実施例１のNCL-1及び実施例２のNCL-2では、特に阻害活性が低かった。
また、MAO-Bに対する阻害活性についても、図３に示すように、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）は、いずれもtranylcypromineやpargyline（下記化学式参照）より低いMAO-B阻害活性を示し、その中でも、実施例１のNCL-1及び実施例２のNCL-2では、特に阻害活性が低かった。
【００７７】
【化２１】
2010143582.tif 000023
【００７８】
＜がん細胞増殖阻害＞
（１）HeLa細胞の増殖に対する阻害活性の測定
上記実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）について、ヒト子宮頸がん由来細胞株であるHeLa細胞の増殖に対する化合物の阻害活性を測定することにより評価した。以下にその詳細を示す。
【００７９】
細胞増殖阻害活性は、3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide（MTT）アッセイ法により求めた。このアッセイ法は、生きた細胞のミトコンドリアに含まれるＮＡＤＨがＭＴＴと反応して発色するときの吸光度を測定して、ＮＡＤＨの量を測定することを原理とするものであり、以下の手順で行った。
96ウエルマイクロタイタープレートにHeLa細胞を１ウエルあたり100μlの10%ウシ胎児血清含有RPMI1640培地に5000細胞ずつ播種し、CO2インキュベーターで24時間培養した後、化合物を添加した。48時間培養後、5mg/mlのMTT液を１ウエルあたり10μl入れ、CO2インキュベーターでさらに3時間培養した。可溶化溶液(0.04mol/l 塩酸-イソプロパノール)を１ウエルあたり100μl入れて激しくボルテックス後、Fusion-aFP（PerkinElmer社製）で560nmの吸光度を測定し、細胞の生存量を求めた。また、阻害活性は、ジメチルスルホキシド（dimethyl sulfoxide）添加時の酵素活性を100%とし、フェニルシクロプロピルアミン誘導体の添加濃度を様々に変えて残存活性を測定し、50％の活性を阻害する濃度（IC50）を求めた。
【００８０】
HeLa細胞増殖に対する阻害活性の結果を図４に示す。この図から、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）は、いずれもtranylcypromineよりも高い阻害活性を示し、特に実施例１（NCL-1）及び実施例４（NCL-4）において、顕著な増殖阻害活性を示すことが分かった。
【００８１】
LSD1阻害活性試験、モノアミンオキシダーゼ阻害活性試験及びHeLa細胞増殖阻害試験を行った結果をまとめて表１に示す。この表から、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜NCL-4）のLSD1に対するIC50は、MAO-Aに対するIC50よりも小さく、特に実施例１（NCL-1）及び実施例２（NCL-2）では、LSD1阻害活性についての選択性に極めて優れていることが分かった。また、実施例１の化合物（NCL-1）及び実施例２の化合物（NCL-2）では、MAO-Bに対しても、優れた選択性を有していることが分かった。こうしたLSD1に対する優れた選択性は、実施例１（NCL-1）及び実施例２（NCL-2）が有しているアミノ酸構造に起因するものと推定される。
また、HeLa細胞の細胞増殖に対するGI50の値は、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）のいずれの化合物も、tranylcypromineより遥かに低く、細胞増殖抑制効果が高いことが分かった。
【００８２】
【表１】
2010143582.tif 000024
【００８３】
（２）HeLa細胞以外のがん細胞に対するの増殖に対する阻害活性の測定
また、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）について、ヒト大腸がん由来細胞株であるHCT116、ヒト前立腺がん由来細胞株であるPC-3、ヒト食道がん由来細胞株であるKYSE150、及びヒト神経芽腫由来細胞株であるSH-SY5Yの増殖に対する阻害活性についても、HeLa細胞の場合と同様のMTTアッセイ法により求めた。
【００８４】
HCT116、PC-3、KYSE150及びSH-SY5Yの増殖に対する阻害活性の測定結果を図５〜図８に示す。これらの図から、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）は、いずれのがん細胞に対しても、tranylcypromineよりも高い阻害活性を示すことが分かった。
【００８５】
また、HeLa細胞、HCT116細胞、PC-3細胞、KYSE150細胞及びSH-SY5Y細胞増殖に対して実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）及びtranylcypromineを添加した時のGI50を表２に示す。この表から、実施例１〜４の化合物（NCL-1〜４）は、いずれの細胞に対してもtranylcypromineより遥かにGI50の値が低いことが分かる。
【００８６】
【表２】
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【００８７】
この発明は上記発明の実施の態様及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】LSD1に対する阻害活性を示す図である。
【図２】MAO-Aに対する阻害活性を示す図である。
【図３】MAO-Bに対する阻害活性を示す図である。
【図４】HeLa細胞増殖に対する阻害活性を示す図である。
【図５】HCT116細胞増殖に対する阻害活性を示す図である。
【図６】PC-3細胞増殖に対する阻害活性を示す図である。
【図７】KYSE150細胞増殖に対する阻害活性を示す図である。
【図８】SH-SY5Y細胞増殖に対する阻害活性を示す図である。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明のフェニルシクロプロピルアミン誘導体及びLSD1阻害剤は、LSD1の機能を調べるための生物学的ツールとして用いたり、抗がん剤として用いたりすることができると期待される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2010143582.tif 000031
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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