(57)【要約】  本発明は、自然免疫及びそれに続くリンパ球の免疫を、細胞を痛めつけることなく活性化させることのできる効果的な免疫賦活物質を有する免疫増強組成物を提供することを目的とするものであり、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラスフシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラスソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有するものであることを特徴とする、免疫増強組成物である。
2010095463.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質
を有効成分として有するものであることを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項２】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、少なくともその９８重量％以上が、平均分子量１，０００Ｄａ以下の親水性低分子物質である
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項４】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、樹状細胞、ミクログリア細胞、ランゲルハンス細胞、又はクッパー細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項５】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、又は骨芽細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項６】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、Ｔｈ１７又はＴｈ１を分化又は活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項７】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、ＩＬ−２１産生を増強させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項８】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におき、エアレーションを行うことによって得られるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項９】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
アレルギー疾患又は自己免疫疾患に罹患した対象における抗炎症剤として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１０】
請求項９記載の免疫増強組成物において、
前記アレルギー疾患又は自己免疫疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１１】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
病原性細菌又は病原性ウイルスに対するワクチンのアジュバンドとして使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１２】
請求項１１記載の免疫増強組成物において、
前記病原性細菌又は病原性ウイルスは、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶからなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択される疾患に罹患した対象を治療又は予防するための医薬又は動物薬として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１４】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
食品若しくは飼料として用いられるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１５】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物を製造する方法であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を用意する工程と、
前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を分解する工程と
を有することを特徴とする、方法。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法において、
前記分解する工程は、前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におき、エアレーションを行うことによって行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項１７】
自然免疫に関連する疾患に罹患した哺乳動物を治療若しくは予防する方法であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有する免疫増強組成物の治療上有効な量を用意する工程と、
前記用意した免疫増強組成物の治療上有効な量を前記哺乳動物に投与する工程と
を有することを特徴とする、方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法において、
前記哺乳動物はヒトである
ことを特徴とする、方法。
【請求項１９】
請求項１７記載の方法において、
前記投与する工程は経口的に行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項２０】
請求項１７記載の方法において、
前記投与する工程は非経口的に行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項２１】
請求項２０記載の方法において、
前記非経口的に行われる投与する工程は、血管内投与、組織周囲および組織内注射、皮下注射、点眼投与、点鼻投与、経皮的投与、粘膜投与から選択されるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項２２】
請求項１７記載の方法において、
前記自然免疫に関連する疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎を含むアレルギー疾患又は自己免疫疾患、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶを含む病原性細菌又は病原性ウイルス関連疾患、肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自然免疫を刺激することによって、抗菌作用、抗ウイルス作用、抗炎症作用、及び抗癌作用を増強させると共に、リンパ球系の免疫システムに影響を与え炎症を抑制させる組成物に関する。【０００２】
具体的には、本発明に係る組成物は、自然免疫の受容体であるＴＬＲやＮＬＲおよびＲＩＧなどを刺激し、それに引き続き、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞を含む自然免疫応答細胞を活性化させると共に、Ｔｈ１７およびＴｈ１、或いはＴｒｅｇ等の自然免疫と連動するリンパ球系免疫を活性化させる。また、過剰な免疫反応を抑制するＩＬ−２１を産生させる一連の免疫プロセスの活性を誘導することによって、抗癌作用、抗菌作用、抗ウイルス作用、抗炎症作用を増強させＣＴＬの暴走に起因する自己免疫作用を緩和する。
【背景技術】
【０００３】
近年、生活習慣の多様化に伴う各種疾患の増加に比例して、自然免疫の果たす役割の重要さが増しつつある。米国のＮＩＨ助成プロジェクトの一つＳｔｅｖｅｎＢ．Ｍｉｚｅｌによる研究では、自然免疫のリガンドの一つであるフランジェリンとペスト菌ワクチンとの結合体によりワクチンに対するアジュバンド効果が約５０万倍に増強されることが明らかにされた。その成果は自然免疫の可能性の大きさを示唆するものであり、自然免疫リガンドのアジュバンド効果に期待が寄せられつつある（非特許文献１および非特許文献２参照）。【０００４】
自然免疫の受容体またはその類似センサーは、広く動物、植物、微生物に存在している。具体的には、脊椎動物の自然免疫受容体としては、ＴＬＲ（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＮＬＲ（Ｎｏｄ−ｌｉｋｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、及びＲＬＲ（ＲＩＧ−ｌｉｋｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）が細胞の内外に存在し、菌やウイルスなどが分解されてできた物質（リガンド）によって菌やウイルスなどの外敵を検知し、パターン認識で判別している。リガンドは分解される菌やウイルスの種類によって複数生成され、一般的に、生成された物質もその濃度も異なるため、それらのリガンド群の組み合わせにより認識されるパターンが微妙に異なって識別され、自然免疫応答されている。【０００５】
ヒトの上皮細胞などの自然免疫応答細胞では、細胞膜上でＴＬＲ−１&２、ＴＬＲ−６&２、ＴＬＲ−４&ＭＤ−２、ＴＬＲ−５が働き、エンドゾームや食細胞の食包内でリソゾーム酵素群により分解された菌やウイルスの核酸（ＤＮＡやＲＮＡ）の分解断片がＴＬＲ−３、ＴＬＲ−７、ＴＬＲ−８、ＴＬＲ−９を活性化させる。細胞質内には菌の低分子分解物を感知する受容体であるＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＩＰ５、ＩＰＡＦなどの菌の低分子分解物を感知するＮＬＲ受容体やウイルスの低分子分解物や核酸を感知するＲＩＧやＭＤＡ−５などが働いている。【０００６】
これら自然免疫のセンサーである受容体は、それぞれの菌やウイルスの分解物を感知した組み合わせのパターンに従って様々な抗菌のためのインターロイキンやＩ型のインターフェロン（ＩＦＮ−αファミリ−やＩＮＦ−βそしてＩＮＦ−λ）、又はこれらの類似物質を放出して、近隣細胞に感知させる。そして、それを感知した細胞群がディフェンシン、カテリシジン、デルミシジンなどの抗菌物質やＩＳＧと呼ばれる数百種類に及ぶ抗ウイルス物質群を一斉に放出することで、外敵から味方の細胞群を防御している。ここで、急速に変化してゆくウイルスに対抗して生体が多数の抗ウイルス物質を放出している事実は、本発明に係る組成物を必要とする理由の一つとなっている。【０００７】
自然免疫の受容体の第２の役割は、腸管を持つ多細胞生物に存在する食細胞を活性化することである。食細胞は動く自然免疫の責任分担された細胞として発達し、ヒトではマクロファージや好中球などがその役割を担っている。特にマクロファージは免疫の司令官として重要な役割を担っている。自然免疫のセンサーである受容体群が刺激されるとマクロファージや好中球とその仲間達が活性化し、菌やウイルスなどの外敵と闘う体制になる。【０００８】
ヤツメウナギとメクラウナギを除く脊椎動物では、リンパ球系の自己、非自己を識別する免疫系が発達し免疫システムを補強している。特に、哺乳類ではこのリンパ球系の免疫システムが補体系を基礎に高度化し強化された。しかしその反面、アレルギー疾患や自己免疫疾患で苦しむことになった。【０００９】
特に、哺乳類では、マクロファージ、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、ミクログリアなどの自然免疫応答細胞の受容体がそれぞれのリガンド（特異的な刺激物）の存在を感知すると、Ｔ細胞を分化させるＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＴＧＦ−βなどのインターロイキンおよび分化したＴ細胞を活性化させるＩＬ−１β、ＩＬ−２３、ＩＬ−２並びに分化したＴ細胞の活性を抑えるＩＬ−２、ＩＬ−２５、ＩＬ−２７、ＩＬ−６などが、そのパターン認識の結果に従って分泌される。【００１０】
これらのプロセスは、Ｔｈ１７またはナチュラルキラーＴ細胞からＩＬ−２１を放出させ自己を攻撃する抗体を持つＢ細胞や記憶Ｔ細胞をアポトーシス又は抑制させて自己免疫疾患に陥ることを防いでいる。【００１１】
自然免疫のリガンドの様々な組み合わせ、抗原と自然免疫のリガンドとの組み合わせなどによって、プロセスに多様なると変化と作用の差異をもたらすことがＤＮＡマイクロアレイによるＤＮＡから発現したＲＮＡの動態解析により解明されてきた。これは、ＤＮＡやＲＮＡの動態解析の技術の進歩により、自然免疫やリンパ球系免疫（いわゆる獲得免疫）発現のプロセス、細胞のアポトーシス経路、炎症コントロール（抗菌、抗癌）経路、抗ウイルス経路へのスイッチング、炎症並びに炎症抑制のプロセスなどの変化が時系列で捉えられるようになったためである。【００１２】
このような自然免疫のＴＬＲ、ＮＬＲ、ＲＬＲの受容体とそれに続く生理プロセスの解明は、医療に革命をもたらす可能性を秘めている。すなわち、従来の医学では治療が困難とされる「各種の癌疾患や前癌段階のポリープ形成」、「ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、ＨＨＶおよび新型インフルエンザなどのウイルス疾患」、「抗生物質による耐性菌や体内潜伏菌」、「各種アレルギー疾患などの炎症性の疾患」、「各種自己免疫による炎症性の疾患」などへの根本的な解決への道が開けるものと期待されている。【００１３】
このような技術の流れを背景として、Ａ．「自然免疫のリガンドの効果的組み合わせ」、Ｂ．「抗原ワクチンと自然免疫のリガンドの組み合わせ」が極めて重要な意味を持つようになった。【００１４】
たとえば、従来、自然免疫リガンドとして普及しているものにＬＰＳとＲ−８４８とイミダキノリン、そしてフランジェリンがある。ＬＰＳは、ＴＬＲ４とＭＤ２を活性化するリガンドであり、  イミダキノリンやその誘導体であるＲ−８４８はＴＬＲ７を活性化するリガンドで、フランジェリンはＴＬＲ５を活性化するリガンドである。【００１５】
イミダキノリンとＲ−８４８は同じＴＬＲ７活性でも異なる種類のＩＦＮ−αを産生させるため、イミダキノリンはＨＰＶ（パピロ−マウイルス）の治療薬として、Ｒ−８４８はＨＨＶ（ヘルペスウィルイス）の治療薬として使われている。同じ受容体の活性でもリガンドの違いによってその作用は異なってくることを示している。【００１６】
また、ＭＤＰ（ムラミルジペプチド）とその誘導体も１９８５年代頃から注目された自然免疫リガンドでＴＬＲ−２を活性化する。誘導体のＭＤＰ−Ｌｙｓがアジュバントとして医薬品となっている。最近、ＮＬＲを活性化することで再注目を浴びているが、単独使用されることはなく、ＬＰＳやリピドＡなど他のリガンドと組み合わせることでそのリガンド効果を高めることができることが分かっている。【００１７】
さらに、特許文献１では、ＩＬ−１２産生の細菌や酵母とＩＬ−１２非産生の細菌や酵母を組み合わせた菌から作られた複合リガンドで、意外にもＩＬ−１０を産生するということを発見している。【００１８】
このように複合リガンドは、単一リガンドにない相乗効果をもたらし、かつ作用点を分散させることでＬＰＳ（エンドトキシン）というリガンドにもし弊害があるとすればそのリスク分散を可能にすることができる。このような理由から複合的に働くリガンドの開発が強く求められている。特にフランジェリンの強力なアジュバンド効果が発見されてからは重要な意味をもつに至った。【００１９】
現在の医療は、一つの壁に突き当たっている。頼りにされている抗生物質は、ウイルスには効かず、耐性菌を生むという深刻な問題を抱えている。また、アナフィラキシーを起こすという副作用もある。ステロイドなどのホルモン剤や免疫抑制剤は免疫の弱体化を通して病原菌や日和見菌への感染という危険を増大させるが、その使用でヒトを含む生命体を正常化することはできない。また、インヒビターによる治療も生体の正常なシステムを阻害することによる弊害が強く指摘されている。根治しない薬剤を使い続けることは医療費の増大にも影響を与えている。この壁を打破する観点からも、安全で優れた自然免疫活性リガンドの実現が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】特開２００８−３１１５３号公報
【特許文献２】特開２００６−２６５２１２号公報
【特許文献３】特表２００７−５０６７８９号公報
【特許文献４】特表２００６−５１４６０１号公報
【特許文献５】特表２００５−５３０７１６号公報
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｒｉｂｕｎｅ  ２００５．６．１６
【非特許文献２】Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００９  Ｊａｎ；１６（１）：２１−８．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｎｏｖ  ５
【非特許文献３】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２８２，Ｉｓｓｕｅ４８，３４６０５−３４６１０，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ３０，２００７
【非特許文献４】Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  Ｋ．ｅｔ．ａｌ：Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１８  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｂｏｔｈ  Ｔｈ１  ａｎｄ  Ｔｈ２  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１９，４２３−４７４，２００１
【非特許文献５】医学書院  標準免疫学ｐ２０９〜ｐ２１１
【非特許文献６】中西憲司「ＩＬ−１８とスーパーＴｈ１型アレルギー炎症」兵庫医科大学
【非特許文献７】Ｉｍｍｕｎｉｔｙ３０（１）：１０８−１１９，２００９
【非特許文献８】Ｎａｔｕｒｅ  ２００８年７月１７日号Ｖｏｌ．４５４  Ｎｏ．７２０２／Ｐ．３５０−３５２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
本発明は、このような状況を鑑みてなされたものであり、細胞障害性のない効果的な組成物（リガンドまたはアジュバンド）を提供することを目的とする。さらに詳しく述べれば、炎症疾患を誘発しない抗菌効果、抗ウイルス効果、抗癌効果、及びＣＴＬの暴走抑制を含む炎症抑制効果を有する安全性の高い組成物（リガンドまたはアジュバンド）を提供することを目的とする。【００２３】
また、本発明は、細胞膜を容易に透過できる低分子組成物（低分子リガンド）を提供することを目的とする。細胞膜を容易に透過できることは、細胞表面と細胞内部のエンドゾームおよび細胞質に立体的に存在する自然免疫受容体を複合的に刺激することが可能になることを意味する。【００２４】
同様に、本発明は、自然免疫受容体を立体的に刺激する組成物（リガンド）を提供することを目的とする。立体的な組成物（リガンド）の実現によって、その相乗効果を期待することができ、安全性をさらに高めることが可能になるからである。さらに、低分子化により、腸管や皮膚からも容易に吸収可能な免疫活性剤を提供することも可能になる。また、低分子であるが故に抗体に攻撃されない組成物（リガンド）が実現でき、注射剤としても使用可能になる。【００２５】
さらに、本発明は、アジュバンドとして利用できる組成物を提供することを目的とする。  
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明の発明者の一人である御手洗薫は、好気性の土壌菌類を大分県佐伯市近郊の山中の森林で採取し、長年培養した結果、個性の強い安定した共生菌群を得、さらに鋭意研究・実験を重ねた結果、本発明を完成するに至ったものである。【００２７】
また、本発明者らは、その共生菌群の菌体を分解して得た低分子分解物を、発病したＨＩＶ患者に与えたところ、その容態が著しく改善し、エイズ発症の指標であるＣＤ４も１ヶ月以内という短期で著しく増加し全員が元気になることを見出し、この共生菌群を「ＭＲＥ共生菌群」と名付けた。このことは、ＭＲＥ共生菌群の分解生成物が、患者における自然免疫を増強させ、その疾患を治療することができるものであることを意味する。すなわち、本願発明は、対象が有する免疫を増強させることができる、ＭＲＥ共生菌群の分解生成物を含む自然免疫増強組成物を提供するものである。【００２８】
したがって、本発明の第一の主要な観点によれば、自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物であって、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有するものであることを特徴とする、免疫増強組成物が提供される。【００２９】
また、本発明の一実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、少なくともその９８重量％以上が、平均分子量１，０００Ｄａ以下の親水性低分子物質である。【００３０】
また、本発明の別の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞を活性化させるものである。【００３１】
本発明の別の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、樹状細胞、ミクログリア細胞、ランゲルハンス細胞、又はクッパー細胞を活性化させるものである。【００３２】
さらに他の本発明の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、又は骨芽細胞を活性化させるものである。【００３３】
さらに他の本発明の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、Ｔｈ１７又はＴｈ１を分化又は活性化させるものである。【００３４】
さらに他の本発明の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、ＩＬ−２１産生を増強させるものである。【００３５】
また、本発明の別の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におき、エアレーションを行うことによって得られるものであることが好ましい。【００３６】
また、本発明の別の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、アレルギー疾患又は自己免疫疾患に罹患した対象における抗炎症剤として使用されるものである。【００３７】
このような場合、前記アレルギー疾患又は自己免疫疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎からなる群から選択されることができる。【００３８】
また、本発明の他の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、病原性細菌又は病原性ウイルスに対するワクチンのアジュバンドとして使用されるものである。【００３９】
この場合、前記病原性細菌又は病原性ウイルスは、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶからなる群から選択されることができる。【００４０】
また、本発明の別の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択される疾患に罹患した対象を治療又は予防するための医薬又は動物薬として使用されるものである。【００４１】
本発明の他の実施形態によれば、このような免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、食品若しくは飼料として用いられるものである。【００４２】
本発明の第二の主要な観点によれば、自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物を製造する方法であって、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を用意する工程と、前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を分解する工程とを有することを特徴とする、方法が提供される。【００４３】
また、本発明の一実施形態によれば、このような方法において、前記分解する工程は、前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におき、エアレーションを行うことによって行われるものである。【００４４】
本発明の第三の主要な観点によれば、自然免疫に関連する疾患に罹患した哺乳動物を治療若しくは予防する方法であって、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有する免疫増強組成物の治療上有効な量を用意する工程と、前記用意した免疫増強組成物の治療上有効な量を前記哺乳動物に投与する工程とを有することを特徴とする、方法が提供される。【００４５】
また、本発明の一実施形態によれば、このような方法において、前記哺乳動物はヒトである。【００４６】
また、本発明の他の実施形態によれば、このような方法において、前記投与する工程は経口的に行われるものである。【００４７】
また、本発明の他の実施形態によれば、このような方法において、前記投与する工程は非経口的に行われるものである。【００４８】
この場合、前記非経口的に行われる投与する工程は、血管内投与、組織周囲および組織内注射、皮下注射、点眼投与、点鼻投与、経皮的投与、粘膜投与から選択されるものであることが好ましい。【００４９】
さらに別の本発明の実施形態によれば、このような方法において、前記自然免疫に関連する疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎を含むアレルギー疾患又は自己免疫疾患、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶを含む病原性細菌又は病原性ウイルス関連疾患、肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択されることができる。【００５０】
なお、上記した以外の本発明の特徴及び顕著な作用・効果は、次の発明の実施形態の項及び図面を参照することで、当業者にとって明確となる。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、ナイーブＴ細胞がＴｈ１７、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｒｅｇに分化していくプロセスを示した概略図である。
【図２】図２は、ヒトの血液を使ったＩＬ−２１の産生試験のグラフである。Ａ〜Ｅの５人の無刺激（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とＭＲＥ飲料６％希釈液を添加した場合のＩＬ−２１の産生濃度を比較している。
【図３】図３は、ヒトの血液を使ったＩＦＮ−αの産生試験のグラフである。Ａ〜Ｄの４人の無刺激（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とＭＲＥ飲料６％希釈液を添加した場合のＩＦＮ−αの産生濃度を比較している。
【図４】図４は、マクロファージ単独でのＴＮＦ−α産生試験のグラフである。無刺激（Ｃｏｎｔｏｌ）、ＬＰＳ（エンドトキシン）とＭＲＥ６％希釈液をマクロファージに添加した場合のＴＮＦ−αの産生濃度を比較している。
【図５】図５は、ヒトの血液を使ったＩＦＮ−γの産生試験のグラフである。Ａ〜Ｄの４人の無刺激（Ｃｏｎｔｒｏｌ）とＭＲＥ飲料６％希釈液を添加した場合のＩＦＮ−γの産生濃度を比較している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
上述したように、本発明によれば、ＭＲＥ共生菌群の菌体分解で生じる低分子の免疫賦活物質を利用して自然免疫活性を含む免疫機能を効果的に増強させる免疫増強組成物を提供することができる。【００５３】
ここで、前記ＭＲＥ共生菌群は、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るものであり、いずれも好気性の細菌類である。【００５４】
また、本発明において使用される「低分子」とは、細胞膜を通過し細胞内部に影響を与えることができる分子量を持つ分子を意味するものである。【００５５】
さらに詳しくは、本発明によれば、好気性グラム陽性菌群と好気性グラム陰性菌群とからなるＭＲＥ共生菌群をリソゾーム酵素群またはリソゾーム類似酵素群により菌体分解することによって、低分子ペプチド、糖鎖、糖脂質、低分子核酸分解物などを含む菌体分解生成物からなる細胞膜透過可能な低分子の免疫賦活物質を得ることができる。【００５６】
この免疫賦活物質は、細胞膜を透過可能であるため細胞膜表面に存在するＴＬＲ受容体群ばかりでなく、エンドゾームや食包に存在する内部のＴＬＲ受容体群、そして細胞深部に存在する細菌感受性のＮＬＲ受容体群やウイルス感受性のＲＬＲ受容体などにも到達し、深みのある立体的なリガンド刺激を自然免疫応答細胞に与えることになる。【００５７】
そして、このＭＲＥ共生菌群の菌体分解で得られた免疫賦活物質は、そのほぼ９９％が親水性の分子量３，０００以下の物質であり、ＭＤＰ類似物質を含むオリゴペプチドやオリゴ糖鎖および一本鎖ＲＮＡなどの成分から構成され、いわゆるプロテアーゼなどの一般的な消化酵素では得られない細胞毒性のない低分子リガンド成分となっている。そのため、このＭＲＥ共生菌群から得られた免疫増強組成物は、生体内においてリガンドとして機能することができる。また、複数の混在した菌から得られたリガンドであるため多様であり自然免疫受容体は様々なパターンの認識刺激を同時に受けることになる。これが、ＭＲＥ共生菌群から得られた低分子の免疫増強組成物の特徴である。【００５８】
なお、以下に説明する本願発明に係る実施形態および実施例においては、上記のようなＭＲＥ共生菌群から得られた「免疫増強組成物」を、便宜上、「ＭＲＥ複合リガンド」と呼ぶことがあるが、いずれも同意若しくは同義である。【００５９】
また、本願発明において使用される「リガンド」とは、免疫受容体などに特異的に結合することで受容体の活性化を起こす物質をいい、複合リガンドとは、複数のリガンドの混合物または結合物をいうものとする。また、アジュバンドとして働くことも「リガンド」に含まれる。【００６０】
本願発明に係るＭＲＥ複合リガンド（免疫増強組成物、以下同）は、細胞内外の自然免疫受容体を刺激してマクロファージ、樹状細胞、クッパー細胞、ミクログリア細胞、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞などの自然免疫系の免疫細胞のおよび粘膜や皮膚の上皮細胞、繊維芽細胞、腸管に存在するパ−ネット細胞などを活性化させることができる。【００６１】
また、この活性化によりＩ型のインターフェロンが産生され、このインターフェロンの放出により近隣細胞から抗菌、抗ウイルス物質が一斉に産生される。【００６２】
さらに、本願発明に係るＭＲＥ複合リガンドによる自然免疫系の免疫細胞の活性化によって、インターロイキンなどの物質が血液やリンパ液の中に分泌する。これにより、リンパ球であるＴ細胞を、抗菌力、抗ウイルス力、抗癌力を増強するＴｈ１およびＴＨ１７という状態へ分化し活発化させることができる。【００６３】
そして、これらの一連の免疫活性化プロセスに引き続き、炎症抑制、組織修復のプロセスを時系列的に推し進めることとなる。特に、本願発明に係るＭＲＥ複合リガンドは、ＴＨ１７等から、自己免疫を抑制する機能を有するＩＬ−２１を産生することができる。【００６４】
本発明は、このように、抗菌、抗ウイルス、抗癌、抗炎症効果とそれに引き続く自己免疫抑制効果を有する新規な低分子免疫賦活物質を有する免疫増強組成物を提供することができ、これにより、上述した本願発明に係る課題を解決するものである。【００６５】
ここで、本発明を具体的に説明すると、本願発明は、上述したように、高濃度培養することなく菌体分解して十分な効果を発揮する優れた免疫賦活物質を生成するＭＲＥ共生菌群という新規の微生物共生菌群を発見し、それを利用した免疫増強組成物を提供するものである。そして、このＭＲＥ共生菌群は、好気性グラム陽性菌および好気性グラム陰性菌からなる５種類の菌から構成されている。これらの菌群は単なる自然に存在する菌の混合物ではなく、様々な土壌菌と海産物に付着した菌を長期間培養し続けた結果、当初の菌の激しい生存競争を経て、その競争の中で互いの役割分担を見出し、さらに菌の変異または進化に伴って安定的に変化し出現した個性的な５種類の菌から成る共生菌群である。【００６６】
このＭＲＥ共生菌を構成する５種類の菌群は、好気性グラム陽性菌であるバシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９、識別番号ＭＫ−００５）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６、識別番号ＭＫ−００１）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）（識別番号ＭＫ−００４）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７、識別番号ＭＫ−００２）、及び好気性グラム陰性菌であるコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８、識別番号ＭＫ−００３）から成るものである。【００６７】
ここで、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６（平成２０年３月１９日に寄託された受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１５４８より移管）、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７（平成２０年３月１９日に寄託された受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１５４９より移管）、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８（平成２０年３月１９日に寄託された受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１５５０より移管）、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９（平成２１年２月２日に寄託された受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１７６０より移管）は、独立法人産業総合技術研究所の生物寄託センターに寄託されている菌である。【００６８】
続いて、本願発明における「共生菌群」の特徴について説明する。複数の菌を混合して培養すると周知のように一時的に不安定な状況が生まれる。発酵で利用される麹菌と酵母菌や枯草菌と他のバシラス菌のように栄養の棲み分けも起こるが、一方では激しい有機物の争奪戦やフリーラジカルによる互いの攻撃、そして富栄養価下でも一定の割合で起こる内胞子化に伴うバシラス菌によるペプチド型抗生物質による攻撃や近年解明された酵母菌による抗生物質（ペプチド）による反撃など激しい生存競争が繰り広げられる。そのような激しい生存競争の時期を経て、栄養に対する棲み分けや抗生物質に対する耐性の獲得そしてフリーラジカルの除去能力を持つ短鎖ペプチドや分子シャペロンの放出による酵素変性に対する防御などに加え、まったく異なる種の菌同士で互いの生存や成長を助ける低分子ヘプチドを交換しあうことまで知られている。最終的には、プラスミドを含む遺伝子の交換によって互いの能力を交換することで微生物群の全体の共存と安定性を図ろうとする。【００６９】
また、本願発明に係るＭＲＥ共生菌群は、それらが生育可能な環境下であれば如何なる条件下においても生育されることができ、具体的には、分子生物学分野において通常用いられる培養条件で生育可能である。例えば、後述するように、培養曝気槽において、エアレーション（曝気）を行いつつ、魚粉１０ｋｇ、米ぬか１０ｋｇ、油カス５ｋｇ、肉汁１ｋｇの栄養源に加え、さらに硫酸マグネシュウム等のミネラル等の存在下において、ＰＨ６．０〜６．８、培養温度２５℃〜３５℃、及び適度なエアレーションによって培養することができる。好ましくは、前記栄養源は、魚粉５ｋｇ、米ぬか５ｋｇ、油カス２．５ｋｇ、肉汁０．５ｋｇである。なお、本願発明に係るＭＲＥ共生菌群の培養条件は、これらの設定条件に限定されるものではない。【００７０】
本願発明に係るＭＲＥ共生菌群では、遺伝子交換を活発にする段階まで進行し、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．のように菌体融合に近い不思議な菌体にまで変異、進化している。【００７１】
ここでＭＲＥ共生菌を構成する個々の菌について説明する。  
ＭＲＥ共生菌を構成するそれぞれの菌の１６ＳｒＤＮＡは、次の通りである。【００７２】
【化１】
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【００７３】
【表１】
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【００７４】
本願発明において、これらＭＲＥ共生菌の培養は、公知の好気性Ｂａｃｉｌｌｕｓ菌と同じ方法で培養できる。一般的な寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ａｇａ）の培養プレートでも曝気した液体容器の中でも可能である。【００７５】
［菌体分解の方法］
ここで、本願発明に係るＭＲＥ共生菌群を菌体分解して、低分子のＭＲＥ複合リガンドを得る２つの方法を以下に説明する。【００７６】
第一の方法は、ＭＲＥ共生菌群をリソゾーム酵素群で分解して低分子複合リガンドを得る方法である。【００７７】
第二の方法は、ＭＲＥ共生菌群のスポア形成過程で出現する原始的なリソゾーム相同の母細胞融解酵素群で分解して低分子複合リガンドを得る方法である。【００７８】
これらの方法を取る理由は、通常の消化酵素や普通のプロテアーゼなどの分解酵素では、細胞膜を透過するのに必要な分子量のリガンドが得られないためである。【００７９】
これに対して、動物のリソゾームや植物の液胞や果実などで分泌される酵素群は、細胞の内のオルガネラや高分子物質を一括してバルクで低分子まで分解する能力を持っている。
リソゾーム酵素群は、細胞内で老朽化したオルガネラを分解して若返らせるためのオートファジーや癌細胞やウイルス感染細胞がアポトーシスする最終段階で出現する酵素群で、特に細胞内に侵入してきた細菌をエンドゾーム内で分解する際に活躍することが知られている。【００８０】
その相同酵素群は、動物、植物、微生物のオートファジーやアポトーシスの過程で顔を出すことが知られている。植物ではプロセシング酵素と呼ばれ、液胞ないまたは果実の形成過程で出現する酵素群でもある。これらの酵素群により菌体は細胞膜を透過できるほど小さい低分子に分解されることになる。【００８１】
本願発明に係るリソゾーム酵素群としては、核酸分解酵素であるリボヌクレアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ等、コラーゲン分解酵素であるカテプシンＬ、アスパラギン酸プロテアーゼであるカテプシンＤ及びカテプシンＥ、システインプロテアーゼであるカテプシンＫ、カテプシンＢ、及びカテプシンＳ、セリンプロテアーゼであるカテプシンＧ、アミノペプチターゼであるカテプシンＨなどの強力で多機能な能力をもつ蛋白質分解酵素、さらにアリールスルファターゼ、βグルクロシダーゼ、エステラーゼ、酸性フォスファターゼなどに加え、糖鎖分解酵素では、スフィンゴ脂質を分解するαガラクトシターゼ、βヘキソサミニダーゼＡおよびＢ、アリルスルファダーゼＡ、ガラクトシトルセラミダーゼ、グルコシルセラミダーゼ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、酸性セラミダ−ゼなど、糖蛋白を分解するαフコシダーゼ、αおよびβマンノシダーゼ、ノイラミニダーゼ、アスーパールチルグルコサミニダーゼ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼなど、ムコ多糖類を分解するαイズロニダーゼ、イズロネート−スルファダーゼ、ヘパランＮスルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、６スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、βガラクトシターゼ、アリルスルファダーゼＢ、βグルクロニダーゼなど、並びに、酸性リパーゼのようなコレステリルエステルや脂肪分解の酵素、さらに、重要なものに病原性の原核微生物などの細胞壁を形成するペプチドグリカン層を分解するムラミターゼ、ムコペプチドヒドロラーゼなどを含む５０以上の分解酵素を使用することができる。また、カテプシンＫに類似した青パパイヤのリソゾーム相同分解酵素であるパパインなども利用可能である。【００８２】
これらのリソゾーム酵素群は、弱酸性（ＰＨ６．３〜ＰＨ６．８）で働き、通常の消化酵素の活動が抑制される高温領域（３８℃〜４２℃）で活性を高める性質がある。さらに、その中には非常に分解力の高いものが多く通常の消化酵素の５，０００倍から１万倍の分解力をもつものまで存在する。【００８３】
本願発明に係るＭＲＥ共生菌群からＭＲＥ複合リガンドを得る第一の方法は、これらのリソゾーム酵素群の中から細胞壁分解酵素とカテプシン類および核酸分解酵素を組み合わせて使う方法である。【００８４】
細胞壁分解酵素としては、ムラミターゼ、ムコペプチドヒドロラーゼなどが使用され、カテプシンとしては、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＬおよびカテプシンＫまたはハパインなどが、核酸分解酵素としては、リボヌクレアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼなどが使用される。これらの酵素は、ＤＮＡやプラスミドへの遺伝子組み込みによっても作ることが可能であるが、魚類（ウナギを含む）を無菌の状態で高温（３８℃〜４５℃）、湿潤な環境で自己分解させることで得ることもできる。ハパインなどの果実が熟されるときに産生されるリソゾーム酵素群を使用することによって得ることもできる。【００８５】
しかし、この第一の方法は、様々な酵素のブレンド割合を変化させて菌体分解を調整できるという長所がある反面、現状では酵素が高価なうえ、扱いが難しく、特別な装置を必要とするものもあるので、コスト高になるという欠点がある。【００８６】
ＭＲＥ共生菌群から低分子複合リガンドを得る第二の方法は、スポア形成過程で放出される原始的な母細胞融解酵素をそのまま利用する方法である。酵素配合の割合は変えることはできないが、極めて低コストでの大量生産が可能で優れたリガンドが得られる。この方法は、ＭＲＥ共生菌群のスポア化に伴って放出される母細胞融解酵素群を菌体分解に利用して低分子複合リガンドを得る方法である。【００８７】
なお、本願発明において用いられる「母細胞融解酵素群」又は「母細胞融解酵素」とは、菌類細胞のスポア形成過程において産生されるリソゾーム相同酵素群のことを指すものである。【００８８】
本願発明に係る低分子のＭＲＥ複合リガンドの製造は、第一段階ではＭＲＥ共生菌群を混合培養液に投入し、魚粉、米ぬか、油カス、肉汁などおよび硫酸マグネシュウムなどのミネラルを菌の栄養物として、培養ＰＨ６．０〜６．８、培養温度２５℃〜３５℃で、充分なエアレーション（曝気：溶存酸素濃度０．１ｍｇ／Ｌ〜１．０ｍｇ／Ｌ）を加えた培養条件下で培養する。ＭＲＥ菌群の増殖と安定化を待って、一切の栄養を絶って飢餓状態下に置き、エアレーション（曝気）を続行すると窒素成分の枯渇をトリガーにスポア化（内胞子化）が起こる。この場合、スポア化する前の栄養細胞を別の曝気槽に移すとさらに品質の安定したものが得られる。このようにして、ＭＲＥ共生菌の菌体を低分子まで分解することが可能になる。【００８９】
本願発明に係る菌体分解の過程をさらに詳しく述べると、菌相互の共生関係を構築し、安定した菌の共生体の栄養細胞状態にある混合菌をその栄養細胞から分泌された消化酵素群を含むこの培養液と共に別の曝気培養槽に分別する。この曝気培養槽でシリカ以外の栄養を一切与えずエアレーションを続行する。共生状態にあるＭＲＥ菌群のオートファゴゾーム相同の母細胞融解が始まりリソゾーム相同の母細胞融解酵素群を放出しつつ菌の母細胞はバルク分解し消滅して行く。スポア化が完了したことを確認した上でエアレーション（酸素供給）を止めるとスポア（胞子）は一斉に沈殿を始め透明な上澄み液を得る。こうして得られた上澄み液を０．２μｍのメンブランで加圧ろ過し残存スポアを除去した後、さらに０．０２μｍのフィルターで微小スポアや不純物を除去する。こうして、ＭＲＥ共生菌体群のスポア形成の際の母細胞融解酵素群を利用することにより効果的な低分子のＭＲＥ複合リガンドを得ることができる。また、分別プロセスを工夫することで連続生産も可能になる。【００９０】
このようにＭＲＥ共生菌では、高濃度生産しなくても十分に有効なＭＲＥ複合リガンドを得ることができるが、高濃度生産をすることもまた可能である。その場合、栄養細胞化とスポア化を繰り返すと、栄養細胞が複合リガンドを吸収してしまって効率が悪くなることと抗生物質の産生が増えるため、高密度培養した後に一気にスポア化することが大切である。スポア化に際してシリカの栄養を与えることでさらに効率よくなることはすでに公知である。【００９１】
一気にスポア化したものは、抗生物質もほとんど含まれず検出限界以下となった。【００９２】
このようにして得られた低分子複合リガンドは、次のような分子量分布を持つオリゴペプチド、一本鎖のＲＮＡ低分子分解物、オリゴ糖鎖や糖脂質、ＭＤＰ（ムラミルジペプチド）類似物質およびフランジェリン分解物などが含まれている。【００９３】
ＭＲＥ複合リガンドの分子量分布を以下に示すと表２のようになる。【００９４】
【表２】
2010095463.tif 000009
【００９５】
このように本発明のＭＲＥ複合リガンドは、その９８％以上がオリゴペプチド、オリゴ糖鎖、オリゴレベルの核酸の他、オリゴ領域の糖ペプチドや糖脂質を含む１０００以下の親水性の低分子物質で構成されている。このようにして得られた低分子複合リガンドは、エンドトキシンのような毒性を持たず、また、低分子であるので抗体による直接の攻撃を受けない。【００９６】
また、ＭＲＥ複合リガンドは、ＬＰＳやペプチドグリカンの存在を検出できるエンドトキシン検査によっても、検出限界以下との結果が出ており、ＬＰＳやペプチドグリカンが含まれていないことが証明されている。また、マクロファージやナチュラルキラー細胞などの活性試験をするために行う細胞障害試験でも浸透圧によって破壊される限界濃度まで細胞障害がないことが分かっている。また、うさぎを使用した急性毒性試験もクリアしている。【００９７】
このように低分子化することで、毒性の極めて少ないリガンドが得られるというメリットのほかに、腸管からの吸収や粘膜からの吸収できるので、飲料として高効率に摂取できるという大切なメリットもある。親水性でかつ分子量がオリゴ領域なので理論的には皮膚からの吸収も可能である。【００９８】
つぎに、本発明のＭＲＥ複合リガンドによる自然免疫活性とそれに続く一連の免疫プロセス活性を明らかにするために、ヒトのマクロファージを使用したＤＮＡマイクロアレイによる網羅的なＤＮＡ動態解析とリアルタイムＰＣＲによる確認試験を実施した。【００９９】
また、ヒトの血液の免疫細胞群（マクロファージ、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｔ細胞群、Ｂ細胞群など）を分離して、ＭＲＥ複合リガンドによる各サイトカインの産生量について抗体を利用して調べた。【０１００】
使用したＭＲＥ複合リガンド含有原液は、ＭＲＥ複合リガンド含有低分子成分を８０μｇ／ｍｌ含有している。【０１０１】
予備試験として、ＴＮＦ−αの産生量をリアルタイムＰＣＲによって測定し、表３のように通常の９０．４６倍の産生という結果を得た。ここで、Ｍｅｄは無刺激を意味する。ＬＰＳｐは、エンドトキシンで刺激の場合。ＭＲＥ１／１０はＭＲＥ複合リガンド含有原液を１０倍希釈したもの、以下１００倍希釈、１０００倍希釈したものである。比較のためのＬＰＳｐの濃度は１００ｎｇ／ｍｌである。【０１０２】
【表３】
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【０１０３】
このようにマクロファージ単独ではＭＲＥ複合リガンド含有原液の１０倍希釈液による刺激によりＴＮＦ−αは、その産生量が平常の９０．４６倍に達し、比較のＬＳＰｓと比べても７．５倍産生している。このことはＭＲＥ複合リガンドが高いマクロファージ活性力があることを示している（図４参照）。【０１０４】
一方、ＴＮＦ−αの産生力が高いからと言って、炎症を促進するということではないということに注意をする必要がある。この数値は、マクロファージ活性能力が高いことを示しているにすぎない。【０１０５】
なぜなら、生命は炎症を起こす物質を発現しながら同時に僅かに炎症を抑制する物質を出すというように、常にバランスを取りつつ波のように免疫プロセスを進行させていくことが今回の網羅的なＤＮＡ動態解析により浮かび上がってきた。【０１０６】
その一つの証拠に、表４に示すように、さまざまな免疫細胞を含むヒトの血液を使用したＭＲＥ複合リガンド含有原液による刺激ではＴＮＦ−αを産生することはなく、また、多くの臨床治験からも反対に抗炎症作用があることが確認されている。【０１０７】
【表４】
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【０１０８】
このことは、免疫のプロセス全体を通じてリガンド効果やアジュバンド効果を評価する必要があり、単にあるリガンドによってあるサイトカインが産生したから効くという単純な理屈は通用しないことを示している。【０１０９】
ＭＲＥ複合リガンドでは、自然免疫活性とそれに引き続く抗ウイルス、抗菌、抗炎症、組織修復という免疫プロセスを活性化させ生体を正常化させることができる。いわば、画期的リガンドまたはアジュバンドと言えるものである。【０１１０】
この自然免疫活性化からリンパ球免疫活性化、そして抗炎症、組織修復へのプロセスを時系列順にさらに詳細に説明することにする。【０１１１】
Ａ．自然免疫受容体（ＴＬＲ、ＮＬＲ、ＲＬＲ）の活性化
このＭＲＥ複合リガンドは、自然免疫の受容体であるＴＬＲ−２，ＴＬＲ−７，ＴＬＲ−８とＮＬＲ−２を含むＮＬＲ群が活性化させることが網羅的なＤＮＡ動態解析によって確認された。ＴＬＲ−２は、細胞表面に存在する自然免疫の受容体で、グラム陽性菌のペプチドグリカン、リボテイコ酸、リボ蛋白質、ウイルスの糖蛋白、真菌の多糖類などを感知する。ＭＲＥ複合リガンドでは、分子量１０００以下のＭＤＰ様のペプチドグリカン分解物が作用している。【０１１２】
ＴＬＲ−７とＴＬＲ−８は、両方とも細胞のエンドゾームに存在して、一本鎖ＲＮＡを感知する受容体であるとともに、菌やウイルスが菌体分解された低分子物質を感知する受容体でもある。本発明のＭＲＥ低分子複合リガンドでは、分子量１０００以下の一本鎖ＲＮＡを検知していると思われる。そして、この事実は、本発明がＲＮＡウイルスに対する高いアジュバント効果が期待できることを意味している。【０１１３】
また、ＮＬＲ−２を含むＮＬＲは、細胞内部に存在する原始的な受容体で、細菌やウイルスなどが低分子分解されたものを検知することができる。特に、ＮＬＲ−２は、マクロファージや樹状細胞、ランゲルハンス細胞、クッパー細胞などのＡＰＣ（抗原提示細胞）に特異的に発現している受容体である。ＭＲＥ低分子複合リガンドにより活性化されるこのＮＬＲ受容体群は、ＭＤＰ類似物質などの低分子リガンド類を検知することができ、これもまたアジュバントとしても非常に有効な働きをすることが期待できると言える。【０１１４】
このように、本発明のＭＲＥ低分子複合リガンドは、細胞表面に存在する受容体、エンドゾームに存在する受容体、細胞内に存在する受容体と３つの自然免疫のセンサーによって立体的に感知されていることがわかる。【０１１５】
Ｂ．マクロファージ活性とナチュラルキラー細胞活性化
つぎに、ＭＲＥ複合リガンドにより動物の自然免疫の主役であるマクロファージ活性とナチュラルキラー細胞活性および好中球遊走を誘発するマクロファージからのＩＬ−８産生が確認された。好中球は自然免疫の食細胞の一つである。【０１１６】
ここでＭＲＥ複合リガンドのマクロファージの活性化試験のデータを見ると、無刺激の培養液ではＮＯ産生能が０．４４６μＭであるのに対し、ＭＲＥ複合リガンド含有原液の１０倍希釈液ではＮＯ産生能２４．０５９μＭとなり、ＬＰＳｐの０．１ｎｇ／ｍｌ液による１８．７１２μＭより大きい値となっている。【０１１７】
さらに重要なことに、表５に示すようにＬＰＳでは濃度が上がると生存細胞数は低下するのに対し、ＭＲＥ複合リガンドでは濃度が上がると生存細胞数が増加する点である。これはＭＲＥ複合リガンドとしての優れた点であり、アジュバンドとして利用するときにも免疫細胞の生存率を高めながら免疫増強するので有利であることを意味している。【０１１８】
【表５】
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【０１１９】
このマクロファージの生存細胞試験は、マクロファージのプレート付着率をクリスタルバイオレットで染色し５７０ｎｍの吸光度を用いて生存細胞数の指標として測定をした。【０１２０】
また、ナチュラルキラー細胞でも、後述するように、ヒトの血液を用いたＭＲＥ複合リガンド含有原液のＮＫ活性化試験で、平均１．７３倍（５６．２／Ｖｅｒｙ  Ｈｉｇｈ）という結果を得ている。【０１２１】
Ｃ．自然免疫受容体刺激からそのパターンに従ったスウィッチングプロセス  
リガンドやアジュバンドがＴＬＲ、ＮＬＲ、ＲＬＲなどの自然免疫受容体を刺激すると、細胞の活性化が誘導されると共にその多様なパターンに従って、「抗ウイルス物質産生プロセス」「炎症開始および遅延的炎症抑制プロセス（抗菌、抗癌、炎症修復プロセス）」「アポトーシスのプロセス」へと移行する３種類のプロセスへのスウィッチング（切り替え）が行われる。【０１２２】
本発明に係るＭＲＥ複合リガンドが対象において作用すると、前者２つのプロセスが進行し、「アポトーシスのプロセス」が阻止されていることが網羅的ＤＮＡ動態解析であきらかになった。【０１２３】
「アポトーシスへのプロセス」は、ＦＡＤＤがアポトーシスのトリガーとなって、カスパーゼ８酵素やカスパーゼ１０酵素が活性化し、実行部隊酵素であるカテプシンＤやカテプシンＢなどのアポトーシス分解酵素群を誘発する一連のアポトーシスを引き起こすプロセスである。【０１２４】
本願発明においては、アポトーシスを誘導する遺伝子群のＡＰ１類の発現は通常レベルにあり、アポトーシスを抑制する遺伝子であるＪＵＮ（通常の６．７７４０９倍）が発現し、アポトーシスを引き起こすチトクロームＣがミトコンドリアから放出されないように防御している遺伝子ＳＯＤ２（通常の８．９９９６３倍）も発現してアポトーシスを阻止していることが確認された。【０１２５】
Ｄ．自然免疫受容体刺激からＩ型インターフェロンの産生へのプロセス
「抗ウイルス物質産生プロセス」は、自然免疫本来のプロセスの一つで、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＲＧＲなどの刺激により、ＴＲＡＭおよびＴＲＩＦの発現が起こり、それに続いてＩＫＫの活性、ＩＲＡＫ３、ＩＲＡＫ７などの活性というように一連のプロセス活性が伝搬してゆき、その結果Ｉ型のＩＮＦ−α（現在１３種類知られている）とＩＮＦ−βが産生され細胞外に放出される。このプロセスは単細胞時代に作られた仕組みと考えられているが、ヒトなどではこれらのインターフェロンの放出によって上皮細胞や粘膜細胞など近隣細胞から抗ウイルス物質であるＩＳＧ（数百種類知られている）を一斉に放出させる。【０１２６】
このプロセスは自然免疫本来の役割でもあり、刺激のパターンによって産生する抗ウイルス物質であるＩＳＧの組み合わせが異なってくることが知られている。例えばインフルエンザでは、ＩＦＩＴ１、Ｇ１Ｐ３、Ｇ１Ｐ２、ＯＡＳ１、Ｍ１Ｘ１、ＩＦＩＨ１、ＩＦＩＴ３、ＲＩＧ−Ｉ、ＧＢＰ１、ＬＡＭＰ３、ＩＲＦ７、ＩＳＧＦ３Ｇ、ＷＡＲＳ、ＰＳＭＢＳ、ＢＴＣ、ＳＯＣＳ１、ＳＥＲＰＩＮＧ１などの抗ウイルス物質を放出して、ウイルスの変異に対処した抗ウイルス効果を発揮している。ＭＲＥ複合リガンドでは、このプロセスの事前に活性化することにより、インフルエンザなどのウイルスを感染したときに即座に強力にＩ型インターフェロンを作り出すことが可能になり、抗ウイルス力を効果的に増強させる。つまりアジュバンド効果が極めて高いものとなる。【０１２７】
ＭＲＥ複合リガンドによる自然免疫受容体刺激によって、ウイルスが存在しない状態で、実際にＩ型インターフェロンの産生が起こることを次のように確認した。【０１２８】
表６は、ウイルス感染のない状態でＭＲＥ複合リガンドによってＩ型インターフェロンの遺伝子の発現がどのくらい増加するかについて網羅的ＤＮＡ動態解析を使って明らかにしたものである。【０１２９】
【表６】
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【０１３０】
このように、ＭＲＥ複合リガンドで、ＩＦＮ−αとＩＮＦ−βの有意な増加がみられている。【０１３１】
後述するように、採血した新鮮なヒトの血液を使ったＭＲＥ複合リガンドによるＩ型インターフェロン産生の測定でも、ＩＮＦ−αの産生量がさらに多くなっている（図３参照）。
このようにＭＲＥ複合リガンドは、抗ウイルスのためのアジュバンドとしても副作用のない効果をもつと考えられる。【０１３２】
ＭＲＥ複合リガンドによるマクロファージへの刺激により、表７のような抗菌物質の遺伝子が直接発現していた。【０１３３】
【表７】
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【０１３４】
このプロセスは解明されていないが、Ｔｈ１７細胞を経ないで直接抗菌物質を放出されるプロセスも同様に活性化されると思われる。【０１３５】
これらのプロセスは、マクロファージの兄弟である樹状細胞、ミクログリア細胞、クッパー細胞、ランゲルハンス細胞、繊維化細胞の他、同じ自然免疫受容体を発現する上皮細胞やケラチノサイトおよび気管、消化管、尿管を含む各臓器に配置された自然免疫応答細胞の活性化も同様に起こることになる。【０１３６】
Ｅ．炎症開始および遅延的炎症抑制プロセス＝抗菌、抗癌、炎症修復プロセス
このプロセスは、自然免疫の受容体刺激からＴ細胞を活性化させるインターロイキン類を産生するまでのプロセスで、つぎの２段階のプロセスからなっている。【０１３７】
第１段階のプロセスでは、ＴＬＲ受容体の刺激によりＭＹＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ４活性化、ＴＲＡＦ６などのプロセスを経てＮＦ−κＢからＩ−κＢを分離、ＮＦ−κＢを活性化させる。【０１３８】
また、ＮＬＲ受容体では、リガンドの刺激を受けたＮＬＲ受容体がペアになって、ＲＩＣＫがＮＬＲのＣＡＲＤを介して結合する。するとＲＩＣＫにユビキチン化が起こり、ＴＡＫ１やＭＥＭＯなどの複合体がさらに結合して、ＩＫＫβを活性化しＮＦ−κＢからＩ−κＢを分離、ＮＦ−κＢを活性化させる。【０１３９】
こうして活性化したＮＦ−κＢはＡＰ−１と共にＤＮＡに結合して働き、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８を含むケモカインなどを産生する。そして第１段階の終わりに、第２段階のトリガー（引き金）であるＩκＢ−ζを産生することにより第２段階へ移行する。【０１４０】
第２段階のプロセスでは、ＤＮＡ上で働くＮＦ−κＢ、ＡＰ−１にＩκＢ−ζが加わり、ＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−６その他を産生し、Ｔリンパ球系の免疫を制御することになる。【０１４１】
表８は、ヒトマクロファージを使ってＭＲＥ複合リガンドで刺激した場合の網羅的ＤＮＡ動態解析による第一段階プロセスの遺伝子発現の結果を示したものである。この結果は、リアルタイムＰＣＲ分析の結果とも一致しているものであった。【０１４２】
ＭＲＥ複合リガンドによる第１段階活性化のプロセスでは、ＩＬ−１βとＴＮＦ−α、そしてＩＬ−８を含むケモカインの産生が盛んに行われている瞬間を捉えたものであり、炎症プロセスに遅延して始まるＮＦ−κＢの働きを抑制する炎症抑制遺伝子群が活発化の勢いが増して、ＮＦ−κＢの遺伝子発現が低下してきた状況を表している。【０１４３】
そして、ＴＮＡ−αなどによる自らの細胞のアポトーシス誘導をブロックするためにＪＵＮやＳＯＤ２が発現し、ＳＯＣＳ３によって自然免疫受容体からの必要以上の刺激を受けて炎症を過剰に進行させないようにしている。【０１４４】
この制御系がうまく機能しているために、過剰なＮＦ−κＢをユビキチン化してプロテアゾームで分解する働きのあるＰＤＬＩＭ２は稼働する必要はなく１．０７２１３３７と通常の値であった。【０１４５】
そして、この瞬間では第１段階から第２段階へ移行する鍵をにぎるＩκＢ−ζが急激に上昇しているタイミングを捉えている。【０１４６】
【表８】
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【０１４７】
遅延型炎症抑制
第１段階に遅延して炎症を抑える遅延型炎症抑制遺伝子群が発現する。これらの遺伝子群はＮＦ−κＢとＡＰ−１の働きを抑制する。すなわち、炎症プロセスに遅延して炎症抑制プロセスが進行することが、今回のＭＲＥ複合リガンドによる解析で明らかになった。【０１４８】
【表９】
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【０１４９】
ここで、表９に示すように、ＴＮＦＡＩＰ６はＮＦ−κＢを強く抑制する遺伝子でＴＮＦ−α産生を制御する強い抗炎症作用をもっていて３７．０４２４倍という高い値で発現している。ＴＮＦＡＩＰ３もまた、ＮＦ−κＢとＡＰ−１の発現を抑制する遺伝子で、これも１８．８３０８倍と高い値である。その他にＪＵＮ、ＳＯＤ２、ＳＯＣＳ３が働いていることはすでに述べた通りである。【０１５０】
第２段階目のプロセスはＩ−κＢ−ζがトリガー（引き金）になって引き起こされる。ＮＦ−κＢとＡＰ−１は数多くすでに核酸と結合して働いているので、遅延炎症抑制遺伝子群が活発化しＮＦ−κＢとＡＰ−１の新たな供給は減少していく。【０１５１】
新しく作り出されたＩκＢ−ζがトリガーとなって、すでに核酸と結合しているＮＦ−κＢと結合し、同じくすでに核酸と結合しているＡＰ−１と共にＴ細胞を制御する４つのグループのサイトカイン群を産生、分泌する。マクロファージなどでは、Ｍ１活性では、「ＩＬ−１２ｐ４０」、「ＩＬ−６およびＩＬ−２３ｐ１９」をＭ２活性では「ＩＬ−４」、「ＴＧＦ−βおよびＩＬ−２」などのサイトカインを産生する。続いて、細胞内に常に作られているｐ３５と結合して、ＩＬ−１２ｐ４０はＩＬ−１２へ、ＩＬ−２３ｐ１９はＩＬ−２３になる。【０１５２】
表１０は、ＭＲＥ複合リガンド刺激による第２段階開始の遺伝子発現の様子を現わしている。この解析の瞬間ではＩ−κＢ−ζトリガーが通常の２０．０１１５倍と急増しており、ＮＦ−κＢとＡＰ−１はその産生が炎症抑制の遺伝子群の発現強化により低下している状態である。【０１５３】
【表１０】
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【０１５４】
しかし、発現を低下させているＮＦ−κＢやＡＰ−１はすでに核酸（ＤＮＡ）に結合しているので、ＩκＢ−ζの発現が急上昇することによりＩＬ−６、ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ−１２ｐ４０の産生を開始しており、通常の１．４倍〜１．８倍の値となっていて上昇し始めている。
このことから分かるように、ＭＲＥ複合リガンドでは、明らかにＭ１活性を発現している。
このことは、ＭＲＥ複合リガンドを使用した人の血液からのＩＬ−２３産生が通常の２．１１倍になる後述する事実からも裏付けられている。【０１５５】
このように、ＭＲＥ複合リガンドは、マクロファージとその兄弟であるミクログリア、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、クッパー細胞などをＭ１活性に導き、抗菌作用、抗ウイルス作用の効果を発揮する。また、アポトーシスした癌細胞の残骸に対する貪食活動を活発にさせる。【０１５６】
通常、Ｍ１活性による抗菌作用、抗ウイルス作用の結果、菌体やウイルスが低分子分解を受け除去されると、マクロファージのＭ１活性は菌やウイルスの低分子分解物をシグナルとしてＭ２活性へ切り替わると考えられている。Ｍ２活性は炎症を抑制し、繊維牙細胞を活性化して炎症などで破壊された組織を修復する後処理プロセスである。実施例をみると、このＭ２においてもＭＲＥ複合リガンドが重要な役割を果たしていることを示唆している。【０１５７】
また、後述する発見により、ＭＲＥ複合リガンドは従来の抗菌、抗ウイルス作用、又は抗癌作用の発現をするＭ１活性のプロセスとは別に、アレルギー疾患や自己免疫疾患を含む炎症性疾患に対して抗炎症作用を持つプロセスを同時進行させるという優れた性質を持つことが明らかになった。【０１５８】
Ｆ．ＭＲＥ複合リガンドによるＴ細胞の分化とその後のプロセス活性
活性化されたマクロファージやその兄弟から放出された４組のサイトカイン群は、図１に示すように、Ｔｈ１７、Ｔｒｅｇ、Ｔｈ１、Ｔｈ２というＴ細胞の４つの状態をコントロールする。【０１５９】
マクロファージのＭ１活性では、Ｔｈ１７およびＴｈ１を誘導し、マクロファージのＭ２活性では、ＴｒｅｇまたはＴｈ２を誘導する。なお、本発明に係るＭＲＥ複合リガンドは、Ｔｈ１７とＴｒｅｇとを誘導し、Ｔｈ１とＴｈ２との誘導を抑制する性質を有するものであることが判明している。【０１６０】
自然免疫の受容体刺激による一連のフロセスを経て産生されたサイトカイン群の中のＩＬ−１２ｐ４０とＩＬ−２３ｐ１９は、細胞内に常在しているｐ３５と結合して、それぞれＩＬ−１２とＩＬ−２３となる。【０１６１】
これら４組のサイトカイン群は、Ｔ細胞を次のようにコントロールする（図１参照）。【０１６２】
Ｍ１活性では、
１） ＩＬ−１２は、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４）をＴｈ１へ分化、活性化させる。
２） ＩＬ−６はナイーブＴ細胞（ＣＤ４）をＴｈ１７へ分化させ、ＩＬ−２３とＩＬ−１βは、Ｔｈ１７を活性化させる。【０１６３】
Ｍ２活性では、
３） ＩＬ−４は、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４）をＴｈ２へ分化、活性化させる。
４） ＴＧＦ−βは、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４）をＴｒｅｇへ分化させ、ＩＬ−２はＴｒｅｇを活性化させる。【０１６４】
そして、Ｍ１活性に引き続くＴｈ１とＴｈ１７のプロセスは抗菌、抗ウイルス、抗癌、アレルギー抑制などの働きがあり、Ｍ２活性に引き続くＴｈ２はアレルギー反応のプロセスへ、Ｔｒｅｇのプロセスには、炎症抑制と組織修復と自己免疫抑制（免疫寛容）の働きがある。【０１６５】
ここで、Ｔｈ１は、ＩＬ−１２による作用によりＩＮＦγを産生。マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞などの貪食作用や遊走性を活性化。ＮＯなどのフリーラジカルを産生して細胞内殺菌力を強化。ＣＤ８−Ｔ細胞であるＣＴＬ（キラーＴ細胞）活性を高めて癌細胞やウイルス内在細胞を殺傷する細胞性免疫を増大することにより、細胞内に寄生する細菌やウイルスを排除するプロセスを誘導する。主に抗体に非依存的な抗菌、抗ウイルスプロセスである。細胞殺傷性自己免疫疾患や遅延型アレルギーを起こすプロセスでもある。【０１６６】
Ｔｈ２は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３を産生し、ＣＤ４−Ｔ細胞を介してＢ細胞からＩｇＥ抗体を放出させる。ＩｇＥではマスト細胞や好塩基球からヒスタミンを分泌することにより寄生虫などの大型の生物を排除するために働いている。また、ＩＬ−５を産生することによって好酸球からＥＰＯを放出し鼻づまりなどの遅延性のアレルギー疾患誘発することでも知られている。【０１６７】
Ｔｈ１７は、ＩＬ−１やＩＬ−２３の作用によりＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１などを産生。液性免疫を増大することにより、抗体産生を活発にして細胞外細菌や真菌を排除する。さらに、好中球の貪食作用を増進し、主に上皮細胞、好中球からディフェンシンなどの抗菌物質を放出させ、また、細胞外マトリックスの再構築を通して上皮バリアを強化する。最近ＩＬ−２１の産生が確認され、新たなプロセスが解明されつつある（非特許文献３参照）。【０１６８】
Ｔｒｅｇは、腸管免疫を特徴付けるものであり、ＴＧＦ−βによって誘導され、ＩＬ−１０を産生し、炎症抑制や免疫寛容を誘導するプロセスと考えられている。特に腸内細菌の多い腸管は、通常はリンパ球免疫が暴走しないようにＴｒｅｇ状態に保たれており、その防御力を粘膜の上皮細胞やパーネット細胞の自然免疫に委ねるとともに、バイエル板を通して分泌性の抗体であるＩｇＡを腸管内に分泌させ腸内細菌をコントロールしている。また、Ｔｒｅｇは、アレルギーを起こすＴｈ１やＩｇＥを分泌するＢ細胞、そして自己免疫疾患を起こすＣＴＬ(キラーＴ細胞)をアポトーシスまたは抑制することで、炎症を抑えることでも知られている。【０１６９】
ＭＲＥ複合リガンドでは、マクロファージのＭ１活性のプロセスから引き続いて、前表の結果に示されているようにＩＬ−２３ｐ１９とＩＬ−１２ｐ４０が増加しＩＬ−４は変化せずＴＧＦ−βはむしろ減少傾向にあることから、Ｔｈ１７とＴｈ１を活性化し、Ｔｈ２とＴｒｅｇは活性化しないことが示された。また、ＭＲＥ複合リガンドが潰瘍性大腸炎やクローン病などの炎症を抑制することから、実際の腸管においてＭＲＥ複合リガンドによるＴｒｅｇ正常化のプロセスもまた炎症抑制や免疫寛容に寄与しているものと考えられる。【０１７０】
このことを明らかにするために、採取した人の血液を管理された条件下によりＭＲＥ複合リガンドで刺激して産生してきたＩＬ−２３の量を測定した結果を表１１に示した。【０１７１】
【表１１】
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【０１７２】
ＭＲＥ複合リガンド含有液によってＩＬ−２３の産生量は平均でも通常の１．９２倍に増加しており、興味深い事実は高年齢になるほどＩＬ−２３が高い値になる傾向にある。従って、ＭＲＥ複合リガンドはマクロファージなどのＭ１活性を増加させ、引き続きＴｈ１７およびＴｈ１を活性化させることで、細胞性免疫と液性免疫を高め抗菌、抗ウイルス、抗癌効果を発揮する。このことは、実施例で示したものも含む臨床治験とも一致するものである。【０１７３】
新たな抗炎症プロセスの発見
さて他方、ＭＲＥ複合リガンドがＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８などの炎症性のサイトカインの遺伝子群を極めて強く活性化し、またＴｈ１７およびＴｈ１のプロセスを活性化するにも関わらず、なぜかＭＲＥ複合リガンド含む飲料により顎炎や潰瘍性大腸炎やアトピーの炎症などが著しく改善されるかという分子生理学のデータと臨床上の所見との矛盾が生じた。【０１７４】
この矛盾を解決するために、発明者らは、ＤＮＡアレイを使用したマクロファージの網羅的ＤＮＡ動態解析やヒトの血液を使ったサイトカイン産生の時系列推移に注目し鋭意検討した。その結果、ＭＲＥ複合リガンドが従来のＬＰＳなどのリガンドにはない新たな免疫プロセスを発現していることを確認した。その第一点は、ＭＲＥ複合リガンドによるＩＬ−１８産生の抑制作用である。今回のＤＮＡ動態解析により、表１２のようにＭＲＥ複合リガンドがＩＬ−１８産生を抑制していることが見出された。これは注目すべき発見であった。【０１７５】
【表１２】
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【０１７６】
ＩＬ−１８は炎症性疾患に深く関わるサイトカインで、従来のＬＰＳなどのＭ１リガンドの刺激で酵素であるカスパーゼ１を生成、このカスパーゼ１がＩＬ−１８の前駆物質を切断してＩＬ−１８を産生する。そして、ＩＬ−１８はＩＬ−１２の存在下でＴｈ１細胞やＮＫ細胞に作用してＩＮＦ−γ産生を強力に誘導する。なぜなら、ＩＬ−１２がＴｈ１細胞やＮＫ細胞にＩＬ−１８のレセプターを増やすからである。また逆に、Ｔｈ１細胞が産生するＩＮＦ−γはマクロファージからのＩＬ−１２やＩＬ−１８の産生を促し、さらにそれがＴｈ１細胞を刺激することで炎症を持続拡大するサイクルが形成されることになる。【０１７７】
このように、普通マクロファージのＭ１活性を起こすＬＰＳのようなリガンドでは、ＩＬ−１２とＩＬ−１８が共に上昇することになる。【０１７８】
しかし、ＭＲＥ複合リガンドでは、ＩＬ−１２やＩＬ−２３の産生を活発化しながら、ＩＬ−１８産生を抑制するという事実があきらかになった。これを裏付ける事実として、カスパーゼ１を発現させる遺伝子のＣＡＳＰ１が通常の０．６７５９０倍とＭＲＥ複合リガンドによって抑制されており、ヒトの血液を使用したＩＦＮ−γ産生試験でもこれを確認する結果が得られている（図５参照）。【０１７９】
さて、ＩＬ−１８の特徴として、ＩＬ−１２やＩＬ−２３とＩＬ−１８とが同時に過剰産生されると腸や肝臓で重篤な臓器障害や自己免疫疾患が起こることが知られている。また、逆にＩＬ−２とＩＬ−１８の共存下では、ＩＬ−４やＩＬ−１３の産生が促進されＴｈ２プロセスの活性化によるＩｇＥ産生が起こり、肥満細胞や好塩基球からヒスタミンが放出さる。続いて、ＩＬ−５が産生されると好酸球からＥＰＯが放出され鼻閉などの炎症性疾患が引き起こされることになる。【０１８０】
また、ＩＬ−１８は肥満細胞や好塩基球を単独で直接刺激して、ＩｇＥを介さず、ヒスタミンを放出したり、ＩＬ−４、ＩＬ−１３産生を誘導したりすることも明らかにされている。【０１８１】
特に、ＩＬ−１３は、気管支喘息や肺線維症を誘発するサイトカインとしても知られている（非特許文献４参照）。【０１８２】
さらに、Ｔｈ１細胞にＩＬ−１８と本来Ｔｒｅｇ細胞を活性化するＩＬ−２が作用すると、Ｔｈ１細胞がスーパーＴｈ１と呼ばれる細胞に変身して、本来Ｔｈ２のサイトカインであるＩＬ−１３を放出して気管支喘息や肺線維症を引き起こす。黄色ぶどう球菌によるアトピー性皮膚炎も同様なメカニズムで増悪化が起こると考えられている（非特許文献６）。【０１８３】
このことは注目すべき事実である。なぜなら、ＩＬ−１８は、トリガーとして、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１７細胞などを炎症と非炎症という２つの状態にスウィッチングさせていると考えられるからである。【０１８４】
ＩＬ−１８の増加を伴う炎症促進型活性化プロセスにおいては、Ｔｈ１細胞では自己免疫疾患を引き起こし、Ｔｈ２細胞ではアレルギー疾患を引き起こす。ＩＬ−１８の減少を伴う炎症抑制活性化プロセスでは細胞内抗菌作用、抗ウイルス作用、抗癌作用など細胞性免疫を増強させる。【０１８５】
Ｔｈ２細胞では、ＩＬ−１８の共存下でＩＬ−４やＩＬ−１３などを産生しアレルギー疾患を誘発する。ＩＬ−１８が少ない場合は腸管や乳腺からＩｇＡ分泌するように、分泌性の免疫プロセスが活性化する。【０１８６】
Ｔｒｅｇ細胞でも同様にＩＬ−１８というトリガーの出現で、ＩｇＥを伴わず、肥満細胞や好酸球を直接刺激してアレルギー症状を起こすことになる。Ｔｈ１７でもＩＬ−１８をトリガーとして炎症促進のプロセスと炎症抑制のプロセスへと分岐されると考えることができる。【０１８７】
Ｔｈ１７では、ＩＬ−１８の増大で炎症性のＩＬ−１７ＡやＩＬ−２２が誘導され液性免疫のプロセスを活性化する。また、ＩＬ−１７Ａが過剰に産生されると炎症を盛んにして慢性関節炎、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬などの自己免疫疾患を引き起こすことが知られている。ＩＬ−２２は乾癬との関係が深くαディフェンシンであるｈＮＰ−３を過剰産生させる。【０１８８】
ＩＬ−１８が減少すると炎症を抑制するＩＬ−１７ＦやＩＬ−２１が誘導され、ＩＬ−１７Ｆが抗体産生やディフェンシン分泌を活発にするなど抗菌、抗ウイルス力を高める液性免疫プロセスを活性化する。特に、ＩＬ−１７は好中球からＨＮＰ１〜２およびＨＮＰ４〜６などのαディフェンシンの産生を、上皮細胞からｈＢＤ１〜４のβディフェンシンの産生を促すことが知られている（非特許文献７参照）。【０１８９】
注目すべきＭＲＥ複合リガンドの働きの第二点目は、このＩＬ−２１の増加作用である。
ＭＲＥ複合リガンドは、炎症を引き起こすＩＬ−１８の産生を抑制することで、アレルギーや自己免疫疾患を含む炎症を抑制する効果が期待され、実際に炎症性の疾患での臨床治験結果と一致している。【０１９０】
さらに、後述するように、ヒトの血液を採血して測定したサイトカイン試験でもＭＲＥ複合リガンドによりＩＬ−２１が通常の２倍近く増加することが確認された（図２参照）。臨床的にもＭＲＥ複合リガンドを服用している非ホジキン型のリンパ種の患者（６２歳女性）の血中のＩＬ−２１が著しく上昇しているのを偶然確認している。この患者の全身への転移癌は消失傾向にあり、元々のリンパ腫も縮小傾向にあることもまた確認された。【０１９１】
ＩＬ−２１は、抗ウイルス物質の分泌やナチュラルキラー細胞を増殖させて抗癌作用を高めるサイトカインで（特許文献４および特許文献５参照。実施例８〜実施例１３参照）、別に、自己免疫疾患を引き起こすＴ細胞とＢ細胞をアポトーシスさせる働きもあると報告されている（特許文献３参照）。【０１９２】
このＩＬ−２１については、マクロファージＭ１細胞からＩＬ−１２が放出され、そのＩＬ−１２が直接ＮＫＴ細胞（ナチュラル、キラーＴ細胞）に作用して、ＩＬ−２１を産生誘導するプロセスが存在することが知られている（特許文献２参照）。【０１９３】
しかし、ＭＲＥ複合リガンドでは、ＩＬ−２３の増加に伴いＩＬ−２１が増加し、かつＩＬ−１２やＩＦＮ−γを産生していないヒトの血液中でもＩＬ−２１が増加している場合もあることが確認されており、むしろＩＬ−１２からＮＫＴ細胞の活性化のルート以外のプロセスが主に働いていることが推測された（図２と図５参照）。また、上記の特許文献２の例では、大きな分子量の単体リガンドがＴＬＲレセプターに作用することを利用しており、本発明が複合的な低分子リガンドを利用して細胞内部のＮＬＲなどの自然免疫レセプターを含めた立体的に刺激する方法とはその原理を全く異なることが暗示された。【０１９４】
その新しい原理とは、最近、Ｔｈ１７活性によりＴｈ１７からＩＬ−２１が産生誘導されることが解明され（非特許文献３参照）、さらにそのＩＬ−２１がＴｈ１７細胞の分化を促しＩＬ−１やＩＬ−２３の刺激などでＩＬ−２１を分泌するというサイクルを持つことも明らかになってきた（非特許文献８）。【０１９５】
このようにＭＲＥ複合リガンドは、主にＴｈ１７の非炎症活性によりＩＬ−２１を産生させると共に、補助的にＩＬ−１２を通したＮＫＴ細胞活性によるＩＬ−２１産生のルートも利用しているということができる。しかも、実際のヒトを含む脊椎動物では、ＭＲＥ複合リガンド以外のリガンドの刺激を常に受けており、この２つのＩＬ−２１産生ルートも常に変化することになる。そのケースでは、ＭＲＥ複合リガンドはアジュバンドとしての性格が強くなり、そのアジュバンドとしての優れた効果を発揮することとなる。【０１９６】
また、ＭＲＥ複合リガンドでは、マクロファージが炎症を抑制するときに出現するカテプシンＥの遺伝子も通常の１．２倍発現していた。【０１９７】
このように、ＭＲＥ複合リガンドは、抗菌、抗ウイルス、抗癌の免疫プロセスへの活性を保ちながら、炎症を静めるという驚くべき働きをしている。これらの事実は、後に述べる臨床治験でも確認されている。【０１９８】
従来の炎症を静める医薬品であるステロイド剤や免疫抑制剤は抗菌力を低下させるという重大な欠陥があった。また、抗生物質はウイルスに効かず、また、恐ろしい耐性菌を作るという欠点やアナフィラキシーという呼吸困難などを伴う副作用もあった。ＭＲＥリガンドは、これらの欠点を持たず抗菌、抗ウイルスにも抗炎症にも同時に効果のある画期的な免疫活性剤となっている。【０１９９】
さらに、組織修復を促すサイトカインの一つＦＧＦ２も通常の２．５２５倍発現しており、組織損傷を早期に回復させる力もありこれも臨床治験と一致している。【０２００】
本発明のＭＲＥ複合リガンドは、以上のように、マクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、上皮細胞、ケラチノイド、繊維化細胞などを含む細胞内外の自然免疫受容体を立体的にＭ１活性化することにより、ディフェンシンやＩＳＧなどの抗菌、抗ウイルス物質を分泌させると共に、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞も活性化して癌細胞やウイルス内在細胞をアポトーシスさせる。それに引き続き、ＮＦ−κＢのプロセスを２段階に活性化してＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８を含むケモカインを分泌すると同時に複数の炎症抑制物質やミトコンドリアＳＯＤを産生してＴＮＦ−αなどによる細胞損傷を阻止。さらにＩＬ−６、ＩＬ−１２やＩＬ−２３などのＴリンパ球のサイトカインを産生、ナイーブＴ細胞をＴｈ１７細胞およびＴｈ１細胞に分化、活性化させる。また、ＭＲＥ複合リガンドは様々な炎症疾患の引き金になるＩＬ−１８を抑制して、Ｔｈ１７活性とＴｈ１活性をスイッチングして非炎症性プロセスへと誘導する。Ｔｈ１７は、このスイッチングによってＩＬ−２１およびＩＬ−１７Ｆを産生。さらにこのＩＬ−２１がナイーブＴ細胞を非炎症性Ｔｈ１７へ分化するサイクルが働く。ＩＬ−１７Ｆは、炎症を伴わずに液性免疫プロセスが活性化して抗体産生を高めるほか、直接自然免疫の抗菌物質であるディフェンシンや抗ウイルス物質などを分泌して、抗菌、抗ウイルス力効果を発揮する。さらに、ＩＬ−１２の放出により、ＩＦＮ−γの産生を経ずにＮＫＴ細胞からＩＬ−２１を産生させる。これらのＩＬ−２１は、直接ＮＫ細胞の活性を増大させ抗癌作用を発揮するほか、自己免疫疾患を引き起こすＴ細胞やＢ細胞をアポトーシスさせて、自己免疫を抑制する。さらに、マクロファージのＭ１活性から、Ｍ２活性へと誘導され組織修復が行われるプロセスを経る経過を辿り、抗菌作用、抗癌作用、抗ウイルス作用、アレルギー抑制、抗炎症作用、組織修復作用、自己免疫抑制の作用が進行する。また、マクロファージ活性は、その食作用も活発化し、血液やリンパ液そして組織体液中の老廃物、異物の除去を促進する。【０２０１】
アジュバンドとしての有用性
なお、本発明の炎症を抑制するリガンドという特性は、様々なワクチンの炎症性の副作用を低減するという性質をもった優れたアジュバントとしての利用を可能にする。
ＭＲＥ複合リガンドをアジュバンドとして組み合わせて用いるワクチンには、インフルエンザ、ワクチンやペスト菌のワクチンなどの抗ウイルス、抗菌ワクチンの他、新世代のＬＰＳ、ペプチドグリカン、リポアラビノマンナン、ザイモザン、リポペプチド、リポテイコ酸、ＲＳＶ  Ｆ  タンパク質、ファイブロネクチンＥＤＡドメイン、ＨＳＰ６０、フラジェリン、非メチル化ＣｐＧ  ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ポリイノシンポリシチジン酸、イミダゾキノリン系化合物、βグルカン、丸山ワクチン、マイコバクテリウムボビス、及びＯＫ−４３２などのＴＬＲリガンドおよびそれと結合したウイルスを含む菌体成分のワクチンも含まれる。【０２０２】
キノコや薬草の分解物とのブレンド
ＭＲＥ複合リガンドは、他の免疫リガンドや免疫アジュバンドとブレンドして使用可能である。特に、糖鎖系の免疫活性成分とは相性がよく、霊芝、夏虫冬草、白樺茸、キチンキトサン、ヒメマッタケなどの糖鎖成分を含有するものを分子量８０００以下に分解してＭＲＥ複合リガンドに加えると４９％〜６０％のマクロファージ活性（生存数とＮＯ産生）の増加が見られた。これは、ＭＲＥ複合リガンドが優れたアジュバンドとして機能し得ることを示している。【０２０３】
癌をアポトーシス誘導する成分を含む原料との併用
紅豆杉、レスベラトロール、ケルセチンなどの癌のアポトーシスを復活させる物質との併用による癌治療法も極めて有効である。【０２０４】
リアルタイムＰＣＲとＤＮＡマイクロアレイ
なお、ＤＮＡマイクロアレイによるＤＮＡ動態解析は、バイオマトリックス研究所のＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  １．０  ＳＴ  Ａｒｒａｙで行った。【０２０５】
リアルタイムＰＣＲは、次のような条件下で実施した。  
１．被験液に用いる細胞は、ヒト末梢血単球由来のＴＨＰ−１細胞（ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ８８０８１２０１）を非動化した牛胎児血清とアンピシリンナトリウムに抗生物質の硫酸カナマイシンを添加してＲＰＭＩ１６４０培地にて培養し、細胞濃度を２×Ｅ６個／ｍｌに調整して使用した。
２．細胞刺激は、細胞懸濁液を１．５ｍｌずつ事前調整した６穴プレートの各ウェルに加え被検液とし、陰性対照と陽性対照のウェルを決めて、陽性対照ウェルに調整した刺激サンプルを添加し、よく振り混ぜた後、３７℃の５％炭酸ガスインキュベータに移し３時間培養を行った。
３．トータルＲＮＡの抽出は、ＴＲＩｚｏｌの手順に従って抽出、調整した。各サンプルについて２６Ｇの注射針を付けた１ｍｌのシリンジを使い１０ストローク液を出し入れしてＤＮＡの切断を行い、調整後４℃で１４０００ｒｐｍの遠心分離を１５分間行いＲＮＡを分離抽出した。
４．このＲＮＡを精製した後、アガロースゲル電気泳動法で品質評価を行った。
５．精製ＲＮＡから残存ＤＮＡを除去するためにＤＮＡｓｅＩ処理を行い、ｃＤＮＡの合成をした。
６．ｃＤＮＡの合成には、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｒ  Ｆｉｒｓｔ  ｃＤＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔを用いて、そのマニュアルに従って合成した。
７．この合成したｃＤＮＡを鋳型にして、リアルタイムＰＣＲを実施してデータを得た。
ＤＮＡマイクロアレイには、この手順によって得られたＲＮＡを使用し、網羅的な遺伝子発現を解析した。【０２０６】
このように本発明のＭＲＥ複合リガンドは、自然免疫およびそれに引き続くリンパ球系の後天免疫のプロセスを活性化させると共に、炎症を抑制して組織修復力を高める働きを持っている。そのため本発明のＭＲＥ複合リガンドは、抗菌作用、抗癌作用、抗ウイルス作用、抗炎症作用、組織修復作用、老廃物除去作用を持っている。【０２０７】
先に述べたように、本発明のＭＲＥ複合リガンドが強力な自然免疫活性力を持つＬＰＳ（エンドトキシン）の７．５４倍もの刺激力があることがリアルタイムＰＣＲによるＴＮＦ−α産生試験で明らかにされた。同時に、数々の抗炎症成分の出現とミトコンドリアＳＯＤの産生で、血液中ではＴＮＡαは増加せず細胞障害を起こさないことも明らかにされた。そして、ＭＲＥ複合リガンドがＬＰＳのように細胞毒性がないという優れた特性をもつことも確認された。ＬＰＳでは、その濃度を増すに従ってマクロファージの生存数が減少するのに対し、ＭＲＥ複合リガンドの濃度が増すとマクロファージの生存数が増すという事実が示された。【０２０８】
本発明のＭＲＥ複合リガンドは、極性の低いほとんど電荷を持たないオリゴレベルの低分子リガンドなので、細胞壁を容易に通過することが可能で、細胞表面に発現しているＴＲＬ受容体だけでなく、細胞内のエンドゾームに発現しているや細胞質に存在するＮＬＲ受容体やＲＬＲ受容体をも立体的かつ複合的に刺激、活性化することができる。このような低分子のリガンドは腸壁から容易に吸収することが可能であり、また、抗体の攻撃を受けないので有効成分を精製した上で静脈注射用としても使用可能である。この性質は、濃度が増すと細胞を保護し細胞生存を増す性質と共に他のリガンドにないという優れた特性と相乗効果をもたらすものである。【０２０９】
さて、このような特性を持つ本発明のＭＲＥ複合リガンドによる多様で動的な免疫活性効果を説明することにする。【０２１０】
マクロファージ活性
表１３および表１４は、［実施例１］で作られたＭＲＥ複合リガンド含有原液を希釈し、ヒトのマクロファージに作用させて、そのＮＯ産生量とマクロファージの生存細胞数を測定したものである。【０２１１】
【表１３】
2010095463.tif 000020
【０２１２】
【表１４】
2010095463.tif 000021
【０２１３】
この測定結果を見るとＭＲＥ複合リガンド含有原液のＮＯ産生はＬＰＳのＮＯ産生よりも多い値を示し、特に３００倍希釈では、２．１９倍もＮＯ産生が高くなっている。一方、ＭＲＥ複合リガンド含有原液ではＮＯ値が増加しているにも関わらず、ＭＲＥ複合リガンド含有原液のマクロファージ生存細胞指標は増加しており、ＬＰＳでは減少しているのと逆の傾向を示している。ここでは数値を示さなかったが浸透圧限界までＭＲＥ複合リガンド含有原液の濃度を増加させても細胞障害が起こらなかったことを付記する。つまり、ＭＲＥ複合リガンドは、細胞障害を起こさず、むしろマクロファージの生存率を高めるマクロファージ活性効果がある免疫活性剤であると言えるものである。【０２１４】
抗菌効果
最初にＭＲＥ複合リガンド含有原液に直接の殺菌作用がないことを大腸菌、緑膿菌、黄色ぶどう球菌、カンジダ、クロコウジカビを使用した発育阻止確認試験で確認した。したがって、ＭＲＥ複合リガンド含有原液には抗生物質を含む殺菌物質は一切含まれておらず、臨床治験で見られる抗菌効果はすべて免疫力によるものだと言うことができる。【０２１５】
また、本発明に係るＭＲＥ複合リガンドによる抗菌効果は、以下のようにまとめることができる。すなわち、１つ目は、マクロファージの貪食作用増強による抗菌効果であり、２つ目は、マクロファージ、上皮細胞、ケラチノイドなどからのディフェンシンを含む抗菌物質の放出による抗菌効果である。具体的にはマクロファージから抗菌物質であるＰＴＸ３が通常の７．２７倍の放出されていることが確認された。【０２１６】
また、３つ目は、Ｔｈ１７活性を経由した好中球の貪食活性の増強による抗菌効果であり、貪食された菌は好中球のアズール顆粒に存在するα−ディフェンシンであるＨＮＰ１〜６により殺菌される。αディフェンシンは溶血性など細胞障害を起こすので専ら好中球の内部で利用される。【０２１７】
さらに、４つ目として、Ｔｈ１７細胞から産生されるＩＬ−１７Ｆの作用によって、上皮細胞やケラチノイドからβディフェンシンであるｈＢＤ１〜４が分泌されることが挙げられる。また、炎症性のＩＬ−２２はケラチノイドからｈＢＤ３を分泌させて抗菌するが、乾癬ではＩＬ−２２とｈＢＤ３が過剰分泌されている。ＭＲＥ複合リガンドはＩＬ−２２を抑制する効果はないので、乾癬を治癒することはできないし、臨床治験とも一致している。【０２１８】
そして、５つ目は、Ｔｈ１７の活性化を通してＣＤ４液性免疫プロセスが活性化しＢ細胞からＩｇＧが、粘膜上皮細胞からＩｇＡが分泌され抗菌効果をもたらす点である。このＴｈ１７を活性化するのがＩＬ−２３とＩＬ−１であり、ＭＲＥ複合リガンド含有原液による活性化ではＩＬ−１Ｂが通常の４７．６４倍、ＩＬ−１Ａが通常の６．３０倍の遺伝子発現をしており、またＩＬ−２３Ａが通常の１．７８倍（上昇中の値）の遺伝子発現をしている。採決されたヒトの血液を使ったＩＬ−２３の産生試験でも平均で通常の１．９２倍の分泌が確認されている（表１１参照）。【０２１９】
抗ウイルス効果
ＭＲＥ複合リガンドによるＨＩＶ疾患やＨＣＶ疾患でのウイルスの不活性化には注目に値するものがある。【０２２０】
ＭＲＥ複合リガンドによる抗ウイルスプロセスには、次のプロセスがある。【０２２１】
１つ目は、自然免疫受容体であるＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９およびＲＩＧ１、ＭＡＤ５がＭＲＥ複合リガンドなどによって刺激されてＩＮＦ−αやＩＮＦ−βなどを直接放出するプロセスである。マクロファージ、ミクログリアなどからは、ＩＮＦ−αが、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノイド、骨芽細胞などからＩＮＦ−βが主に放出される。これらＩＮＦ−αとＩＮＦ−βは、ＩＮＦ受容体を持つ近隣の細胞に感知され、ＩＳＧなどの抗ウイルス物質を一斉に放出して抗ウイルス効果を発揮する。【０２２２】
ＭＲＥ複合リガンドでは、マクロファージのインターフェロン遺伝子の発現は表１５のようであった。【０２２３】
【表１５】
2010095463.tif 000022
【０２２４】
ＭＲＥ複合リガンドの自然免疫受容体刺激により、直接ＩＦＮ−α５が通常の１．６倍、ＩＦＮ−α６が通常の１．２倍、そしてＩＮＦ−βが通常の１．４倍発現している。ＩＦＮ−λはＮＫ細胞を活性化するインターフェロンでウイルス感染細胞を攻撃する能力を高める働きをする。【０２２５】
このことは、ＭＲＥ複合リガンドで採血したヒトの血液を刺激して測ったＩ型ＩＦＮ−α産生によっても裏付けられた。【０２２６】
【表１６】
2010095463.tif 000023
【０２２７】
表１６で示されたように、平均で通常の２．８９倍ものＩＦＮ−αを実際に産生しているのが分かる。【０２２８】
これらは、あくまでもリガンドとしての値であり、実際にウイルス感染があった場合には、ＭＲＥ複合リガンドはアジュバンドとして働き、さらに高いＩＮＦ−α値を得ることになる。【０２２９】
２つ目は、ＩＬ−２１を通したＩ型のＩＦＮ産生である。ＭＲＥ複合リガンドでは、非炎症性Ｔｈ１７のプロセスを活性化し、ＩＬ−２１を産生する。このＩＬ−２１はＮＫ細胞を活性化すると共に、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、マクロファージなどからＩ型のＩＦＮ産生を促し、ＩＦＮ−αやＩＦＮ−βはさらに多くの細胞から抗ウイルス物質を放出させる働きをする。【０２３０】
３つ目は、ＭＲＥ複合リガンドがＴｈ１７からＩＬ−１７Ｆを産生し液性免疫のプロセスを活性化するアジュバンドとして働き、実際にウイルス感染があった場合にウイルスに対する抗体産生を増強する役割を果たす。【０２３１】
４つ目には、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）、そして細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）によるウイルス感染細胞の排除である。
ＭＲＥ複合リガンドでは、表１８のようにナチュラルキラー細胞の活性化をする。また、ＭＲＥ複合リガンドはＴｈ１２プロセスを活性化することからＣＴＬを含む細胞性免疫を高めウイルス感染細胞や癌細胞を排除するプロセスも活性化するがメインではない。【０２３２】
５つ目には、１９９０年代にオリゴペプチドによるウイルスの不活性化が発見されており、ＭＲＥ複合リガンドにはオリゴペプチドが９０％以上占めているため、このプロセスが働いていることを否定できない。【０２３３】
このように、ＭＲＥ複合リガンドは、５つのプロセスの活性化により優れた抗ウイルス効果をもつこととなる。【０２３４】
ここで、本願発明において、「ウイルス」とは、ヒト免疫不全ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、ヒトパピロ−マウイルス、ヒトヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスを始め、魚類以上の脊椎動物が感染するＤＮＡ型およびＲＮＡ型ウイルスを含むものとする。【０２３５】
抗癌効果
癌細胞は、一般に前癌細胞のアポトーシス障害によって癌化する。その原因が、フリーラジカルによる癌抑制遺伝子の損傷が原因でも、子宮頚癌のようにＨＰＶによるＰ５３分解促進によるものでも、膵臓癌のようにストレスなどのＨＳＰ（ヒ−トショック蛋白質）によるアポトーシス阻害の場合でも、常にアポトーシス障害があって癌化が引き起こされる。【０２３６】
紅豆杉やケフレチンやレスベラトロールのように不死化した癌細胞を再びアポトーシス機能を回復させる物質も存在するが、免疫プロセスでは細胞障害性のＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＴＬ）およびＮＫＴ細胞、そしてＮＫ細胞が癌細胞や癌ウイルス感染細胞に接着し、パーフォリンで細胞に穴を開け、グランザイムで癌細胞をアポトーシスへ誘導することによって抗癌効果を発揮する。【０２３７】
一方、ＴＮＦ−αも、ミトコンドリアからチトクロームＣを放出させカスパーゼ８を活性化させて癌細胞をアポトーシス誘導するプロセスを活性化させる。しかしＴＮＦ−αは、一般の細胞への障害性も高く、ＨＩＶ発症の引き金にもなる物質として知られている。
またＣＴＬは、ＩＬ−１２によって活性化されたＴｈ１プロセスにより細胞性免疫が強められてＣＴＬを活性化させる。しかし、このＣＴＬはＣ型肝炎ウイルスやＨＩＶに感染した細胞を破壊して肝炎やＨＩＶを発症させ、細胞障害性の自己免疫疾患も引き起こす。
ＭＲＥ複合リガンドの抗癌効果は、主にナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）によって行われ、それにＣＴＬ細胞やＮＫＴ細胞が加わり抗癌効果を高める。【０２３８】
ＮＫ細胞は、ＭＲＥ複合リガンドにより次のプロセスを経て活性化され抗癌効果を発揮する。【０２３９】
１つ目は、自然免疫受容体の刺激により、Ｉ型のインターフェロンを産生させ直接ＮＫ細胞を活性化するプロセスで早期に効果が現れるプロセスである。【０２４０】
【表１７】
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【０２４１】
ＭＲＥ複合リガンドでは、表１７のようにＮＫ細胞を強く活性化することで知られているＩＮＦ−λ（ＩＬ−２８Ａ）が通常の１．８４倍も遺伝子発現しており、ＩＮＦ−α、ＩＮＦ−βと共に抗癌効果を高めている。【０２４２】
また、肺や肝臓に癌細胞を転移されるケモカインのＣＸＶＲ４は通常の０．６７倍と抑制され癌の転移を抑えている。【０２４３】
２つ目は、ＭＲＥ複合リガンドによる非炎症性Ｔｈ１７プロセスを通じたＩＬ−２１産生によるＮＫ細胞の活性化による抗癌効果である。【０２４４】
３つ目は、ＩＬ−１２から直接ＮＫＴ細胞に作用してＩＬ−２１を産生し、ＮＫ細胞を活性化するプロセスである。【０２４５】
４つ目は、ＩＬ−１２によりＴｈ１プロセスを活性化してＩＮＦγを産生。ＣＴＬを活性化して抗癌効果を高めるプロセスである。このようにＭＲＥ複合リガンドでは、３つのプロセスからＮＫ細胞を活性化できる。【０２４６】
表１８は、ＮＫ細胞の癌細胞殺傷能力を比較試験したものである。リガンドを一切添加しないの場合と実施例１で作られたＭＲＥ複合リガンド含有原液を希釈した液を添加した場合を比較している。【０２４７】
【表１８】
2010095463.tif 000025
【０２４８】
ＮＫ細胞の癌細胞殺傷能力試験の方法と手順は次の通りである。【０２４９】
採血後３０時間以内の全血を試験に使用した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ比重遠心法によりＰＭＢＣを分離後、ＲＰＭＩ  １６４０（１０％ＦＢＳ含有）にて洗浄しＥｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌとした。これを以下の４条件でＰＢＭＣ  ４．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、２４時間培養した（５％ＣＯ２、３７℃）。【０２５０】
なお、ＭＲＥ複合リガンド含有原液添加濃度は、ＭＲＥ複合リガンド含有原液の１日摂取目安量１００ｍｌおよび標準的なヒトの血液量４，５００ｍｌから、ＭＲＥ発酵原液が血中に１００％吸収された場合の濃度６．６６％（ｖ／ｖ）を基準として濃度設定した。
（１）Ｃｏｎｔｒｏｌ（＝添加なし）
（２）ＭＲＥ複合リガンド含有原液  添加（培養時濃度０．０６％（ｖ／ｖ））
（３）ＭＲＥ複合リガンド含有原液  添加（培養時濃度０．６０％（ｖ／ｖ））
（４）ＭＲＥ複合リガンド含有原液  添加（培養時濃度６．００％（ｖ／ｖ））
培養後、Ｅｕ３＋により標識した骨髄性白血病由来Ｋ５６２細胞をＴａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌとしてＥｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌと混合し、４時間培養した（５％ＣＯ２、３７℃）。このときＥｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌとＴａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌの混合比率はＥ／Ｔ＝４０：１で混合した。４時間培養後、各ウェル中に遊離したＥｕ３＋量を時間分解蛍光測定により測定し、ＮＫ細胞の癌細胞殺傷能力活性を算出した。得られた数値は、癌細胞であるＫ５６２細胞の何％をＮＫ細胞が殺傷したかを表している。【０２５１】
活性評価の判定は、５１以上がＶｅｒｙ  Ｈｉｇｈ、４２〜５１がＨｉｇｈ、２４〜４２がＳｔａｎｄａｒｄ、１４〜２４がＬｏｗ、１４以下がＶｅｒｙ  Ｌｏｗとなっている。【０２５２】
このように、ＭＲＥ複合リガンドは、ＮＫ細胞を多様なルートで活性化することができ、癌をＶｅｒｙ  Ｈｉｇｈのレベルでアポトーシスに導くことができる。【０２５３】
しかも、アポトーシスの残骸は、速やかにマクロファージが貪食し、抗癌剤や放射線照射のように癌細胞をネクローシスさせることがないので、炎症や悪液体質を引き起こさずに癌は自然に縮小してゆくのが見られる。【０２５４】
ＭＲＥ複合リガンドは、静脈注射により犬の肝臓癌（実施例８参照）、飲料による非ホジキンリンパ癌（実施例１３参照）、腎臓癌の透析患者で良い結果が得られている（実施例３１参照）。この結果は、ＩＬ−２１投与の臨床結果とほぼ一致している（特許文献４）。また、ウイルス性の癌の前癌症状であるポリープの消失も観察された。【０２５５】
そして、ＭＲＥ複合リガンドでは、炎症を伴わず癌細胞を縮小させる制癌効果をもつことが明らかとなった。【０２５６】
ここで、癌とは、ガン腫、肉腫、腫瘍、上皮腫、白血病、リンパ腫、ポリープ、および硬性ガン、悪性転換、新生物など「正常でない細胞」が含まれるものとする。
なぜなら、ＮＫ細胞は、「正常性」を逸脱した細胞のみを選んで排除する自然免疫細胞だからである（非特許文献５）。【０２５７】
抗炎症効果
ＭＲＥ複合リガンドは、抗菌作用、抗ウイルス作用、抗癌作用という働きを維持しながら、同時に抗炎症作用、組織修復作用という働きを持つという他のリガンドにはない優れた性質をもっている。抗炎症作用は、ＭＲＥ複合リガンドの注目すべき性質でもある。【０２５８】
また、本願発明に係るＭＲＥ複合リガンドは、次のプロセスによって炎症を抑制している。【０２５９】
１つ目は、一貫した免疫活性プロセスをパルス状に活性化するために、活性化とそれに遅延した抑制化が時間差でパルス状に進行し、生命体としてのバランスと恒常性を保っていることが分かる。ＴＬＲ、ＮＬＲ、ＲＬＲの刺激からＮＦ−κＢとＡＰ−１の活性化を経て、ＩＬ１Ｂ（４７．６４１）とＴＮＦＡ（２１．１８２）およびＩＬ−８（２０．４３１）の遺伝子発現が最大になると、プロセスの第２段階目の「引き金」となるＮＦＫＢＩＺ（２０．０１１）の遺伝子発現が盛んになり、次の産生物であるＩＬ−６（１．４０５）、ＩＬ−１２Ｂ（１．８３７）、ＩＬ−２３Ａ（１．７８４）などを産生し始める。それと同時に、第１段階目のＮＦ−κＢを強く抑制するＴＮＦＡＩＰ６（３７．１４２）とＴＮＦＡＩＰ３（１８．８３０）の遺伝子発現が著しく増大し、遊離ＮＦ−κＢをブロックして不活化するＮＦＫＢＩＡ（８．４２５）、ＮＦＫＢＩＤ（２．１０１）、ＩＫＢＫＥ（１．４４７）などの遺伝子が発現、ＮＦ−κＢの遺伝子であるＮＦＫＢ１（２．７９４）とＮＦＫＢ２（２．５３４）の発現が低下していく、というように進行していく（カッコ内は、通常と比べた遺伝発現倍率）。このようにＭＲＥ複合リガンドによるプロセスでは、不必要な炎症は抑制されていく。慢性炎症では、この抑制過程が働かなくなる状態と考えられる。ＭＲＥ複合リガンドによって炎症性疾患が回復するのが見られるが、このプロセスの正常化も貢献していると考えられている。【０２６０】
２つ目は、ＭＲＥ複合リガンドによる炎症性疾患のトリガー（引き金）であるＩＬ−１８の産生を抑制する。ＩＬ−１８産生の減少によって、非炎症性のＴｈ１７プロセス、非炎症性のＴｈ１プロセス、非炎症性のＴｈ２プロセスが活性化する。【０２６１】
ＭＲＥ複合リガンドでは、非炎症性のＴｈ１７プロセスと非炎症性のＴｈ１プロセス活性化される。Ｔｈ１７からは、非炎症性の液性免疫を活性化させるＩＬ−１７ＦとＮＫ細胞を活性化させるＩＬ−２１が分泌される。Ｔｈ１からは、ＩＮＦ−γが産生され細胞性免疫を高める。そして、双方のプロセスとも抗菌力および抗ウイルス力を保持しながらＩＬ−１８の抑制によって自己免疫やアレルギー疾患を含む炎症性疾患を鎮める働きをする。【０２６２】
３つ目は、ＩＬ−２１産生によるアレルギー疾患および自己免疫疾患の沈静化である。
次表に、ＭＲＥ複合リガンドによるヒトの血液からのＩＬ−２１試験の結果を示した。【０２６３】
ＮＫ細胞のＩＬ−２１産生試験の方法と手順は次の通りである。【０２６４】
採血後３０時間以内の全血を試験に使用した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ比重遠心法によりＰＭＢＣを分離後、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含有）にて洗浄しＥｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌとした。これを下記の条件でＰＢＭＣ４．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、２４時間培養した（５％ＣＯ２、３７℃）。なお、ＭＲＥ複合リガンド含有原液添加濃度は、ＭＲＥ複合リガンド含有原液の１日摂取目安量１００ｍｌおよび標準的なヒトの血液量４，５００ｍｌから、ＭＲＥ複合リガンド含有原液が血中に１００％吸収された場合の濃度６．６６％（ｖ／ｖ）を基準として濃度設定した。【０２６５】
こうして得たＰＢＭＣに対し、以下の条件でＭＲＥ複合リガンド含有原液のＩＬ−２１産生に与える影響を評価した。
（Ａ）Ｃｏｎｔｒｏｌ（添加なし）
ＰＢＭＣ  １．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ＰＨＡＰ−１０μｇ／ｍｌ、２４時間培養（５％ＣＯ２、３７℃）
（Ｂ）ＭＲＥ複合リガンド含有原液添加
ＰＢＭＣ  １．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ、ＰＨＡＰ−１０μｇ／ｍｌ、ＭＲＥ複合リガンド含有原液６．００％（ｖ／ｖ）、２４時間培養（５％ＣＯ２、３７℃）
【表１９】
2010095463.tif 000026
【０２６６】
表１９のように、ＭＲＥ複合リガンド含有液によってＩＬ−２１の産生量は平均でも通常の２．１１倍に増加しており、注目すべきは元々ＩＬ−２１が低レベルにしか発現していないヒトの方が著しい増加をしている傾向にあることが分かる。【０２６７】
ＩＬ−２１は、抗ウイルス成分の分泌やナチュラルキラー細胞を増殖させて抗癌作用を高めるサイトカインで、また、アレルギーや自己免疫疾患を引き起こすＴ細胞とＢ細胞をアポトーシスさせる働きもあることが知られている。【０２６８】
ＭＲＥ複合リガンドでは、このようにヒトの血液中で実際にＩＬ−２１を著しく上昇することが確認され、臨床治験でも実施例１５〜実施例２０のようにその抗炎効果をはっきりと裏付けている。【０２６９】
また、前述の表４でも、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの濃度が、ヒトの血中で、リガンドなどの刺激のない状態で平均２３２．８ｎｇ／ｍｌであるものが、ＭＲＥ複合リガンドによる刺激を与えても平均２２１．８  ｎｇ／ｍｌ  と微減少している。この結果は、単独のマクロファージにＭＲＥ複合リガンドによる同レベルの刺激で、通常の３７．０４２倍遺伝子発現している（図４参照）ことと比較して考えるとき、その炎症抑制効果は明らかである。【０２７０】
このようなＭＲＥ複合リガンドによるＩＬ−２１産生誘導作用は、種々の免疫疾患、例えば、アレルギー性疾患（特にアレルギー性喘息、花粉症、アトピー性皮膚炎、湿疹、食物過敏症、蕁麻疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎等などのＩｇＥ調節アレルギー性疾患（Ｉ型アレルギー反応が関与する疾患））、
自己免疫疾患（慢性関節リウマチ、クローン病、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎、多発性軟骨炎、結節性動脈周囲炎、強直性脊椎炎、リウマチ熱、シェーグレン症候群、ベーチェット病、甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、グレーブス病、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性血液疾患（溶血性貧血、真性赤血球性貧血、特発性血小板減少症、再生不良性貧血等）、乾癬、糸球体腎炎、ループス腎炎、ウェゲナー肉芽腫症、サルコイドーシス、橋本病、川崎病、膠原病）、
移植による拒絶、炎症状態（関節及び筋肉における炎症及び疼痛（慢性関節リウマチ、リウマチ様骨髄炎、骨関節症、尿酸性関節炎等）、皮膚の炎症性状態（湿疹等）、眼の炎症性状（結膜炎等）、炎症を伴う肺の障害（喘息、気管支炎等）、炎症を伴う消化器の状態（アフタ性潰瘍、クローン病、萎縮性胃炎、いぼ状胃炎、潰瘍性大腸炎、脂肪便症、限局性回腸炎、過敏性腸症候群等）、歯肉炎、（手術又は障害後の炎症、疼痛、腫脹）、炎症に関連した発熱や疼痛、炎症性慢性腎状態（糸球体腎炎、ループス腎炎、膜性腎炎等）、ぶどう膜炎、接触皮膚炎等）、ショック（敗血性ショック、アナフィラキシー性ショック、成人型呼吸窮迫性症候群等）、癌（肺癌、胃癌、結腸癌、肝癌、ホジキン症等）、ウイルス疾患（肝炎等）等の予防、治療に有用であることを示している。【０２７１】
組織修復作用
一般的にマクロファージのＭ１（ＧＭ）からＭ２（Ｍ）への転換によって、炎症抗菌状態から炎症抑制、組織修復へと働きが切り替わるプロセスにより組織修復が行われると考えられている。【０２７２】
この転換は何によってもたらされるかはいまだ解明されていない。しかし、現実には細菌やウイルスの侵入によりディフェンシンなどの抗菌物質や抗ウイルス物質そして補体が放出され殺菌、さらに好中球、マクロファージなどの食細胞が貪食して処理する初期段階。
その防御網が突破され、好中球が破壊されると、好中球内のリソゾーム酵素群が放出され炎症が始まる。細菌の破片を感受した樹状細胞、マクロファージ、上皮細胞から非常時をしらせる炎症性サイトカイン群が分泌される。さらに細菌の数が多いと免疫細胞が動員され組織的な炎症へと進展していく。炎症部位では、局所的に温度を上げＰＨを酸性側にすることで細菌やウイルスの活動を低下させると同時にリソゾーム酵素を含む非常時の酵素群が活動しやすい環境をつくる。これが炎症の段階のプロセスである。【０２７３】
侵入した細菌を破壊尽くすと破壊した細菌の断片はリソゾーム酵素により低分子化され、その一部がマクロファージや樹状細胞および血管内皮細胞などの抗原提示能力のある細胞（ＡＰＣ）のＬＨＡ受容体（動物ではＭＨＣ受容体）で感知されその情報は記憶Ｔ細胞と記憶Ｂ細胞に格納される。他の一部は、マクロファージの自然免疫系のＴＬＲ受容体、ＮＬＲ受容体、ＲＬＲ受容体で感知され、その抗菌完了のリガンドのパターンを認識してマクロファージはＭ１状態からＭ２状態へ切り替えをして、ＩＬ−１０およびＩＬ−２を放出するとともに、組織修復を促すＦＧＦを産生して線維芽細胞や骨芽細胞などを活性化する。その際に低分子リガンドが抗菌完了パターンのシグナルになるとも言われている。【０２７４】
ＭＲＥ複合リガンドは、まさに菌体をリソゾームで低分子分解して得られたものであり、組織修復効果を期待できた。そして、マイクロアレイによるＤＮＡ動態分析で、組織修復を促すサイトカインの一つＦＧＦ２が通常の２．５２５倍発現しているのを見いだした。
臨床治験でもＭＲＥ複合リガンドの組織修復作用を確認できた（実施例２５〜実施例２９参照）。【０２７５】
老廃物除去作用
マクロファージのＭ１活性化は、マクロファージの貪食活動も活性化する。このため血液やリンパ球および組織の中で、死んだ細胞や異物および酸化ＬＤＬのような酸化毒素を貪食分解して、その残渣を胆汁の中に捨てる体内浄化の働きをしている。Ｍ１活性化をするＭＲＥ複合リガンドには、マクロファージの活性化を通じて老廃物除去作用をもたらす効果がある。【０２７６】
このようにＭＲＥ複合リガンドは、抗炎症作用と抗菌作用、抗ウイルス作用、抗癌作用を同時に持つという優れた性質をもっている。しかも、オリゴ領域の低分子であるがゆえに腸から粘膜からも容易に吸収される。さらに、飲料としても外用剤としてもまた精製することで注射剤としても利用可能である。【０２７７】
本願発明に係るＭＲＥ複合リガンドの働きは、全体として、リンパ球免疫を抑制して、自然免疫を増強する性質を持つということができる。【０２７８】
また、本発明に係る免疫増強組成物は、ヒト及びイヌ等を含む哺乳動物に投与されることによって、上述したような様々な自然免疫刺激効果を発揮するものである。また、この場合、投与の方法は、本発明に係る免疫増強組成物がその機能を発揮し得るような状態で投与されるものであれば、医学又は医療分野で通常行われている如何なる投与方法であっても良い。例えば、経腸的または経口的に投与されることができ、または非経口的に行われるものであっても良い。非経口的に行われる投与方法としては、血管内投与、組織周囲および組織内注射、皮下注射等が挙げられ、皮膚や粘膜に直接塗布されても良い。また、点眼投与、点鼻投与、経皮的投与、粘膜投与されることもできる。【０２７９】
また、本願発明に係る免疫増強組成物は、その機能を発揮し得るような態様であれば、医学又は医療分野、若しくは分子生物学分野において通常用いられる如何なる剤形によっても投与されることができる。例えば、本願発明に係る免疫増強組成物は、液体の組成物として投与されることができるが、この場合、原液であっても、希釈液であっても良い。【０２８０】
次に、本発明の効果に関して実施例を示して説明する。しかし、本発明は以下に記載された実施例に限定されるものではなく、様々な変更及び修飾は当業者によって容易になされることが理解されるであろう。【０２８１】
ＭＲＥ複合リガンドの製造
［実施例１／ＭＲＥ共生菌群の培養と内胞子化によるＭＲＥ複合リガンド含有原液の作成］
本発明で利用されるＭＲＥ複合リガンド含有原液は、ＭＲＥ共生菌群の栄養細胞から分泌された消化酵素群と内胞子化（スポア化）に伴って放出されるリソゾーム酵素相同のバルク型酵素群との混合された酵素群によって、ＭＲＥ共生菌群の自身の菌体を低分子領域まで分解して作られる。【０２８２】
ＭＲＥ菌群の培養は、好気性グラム陽性菌の公知の一般的な培養方法で培養した。まず１．２ｍ３の培養曝気槽に１０００リットルの水を入れエアレーション（曝気）を行った。その培養曝気槽に魚粉１０ｋｇ、米ぬか１０ｋｇ、油カス５ｋｇ、肉汁１ｋｇを栄養物として与え、さらに硫酸マグネシュウムとシリカなどのミネラルを適量加えた。さらに菌体を投入し、培養ＰＨ６．０〜６．８および培養温度２５℃〜３５℃の培養条件下で、かつ溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ〜１．２ｍｇ／Ｌになるようにエアレーション（曝気）を加えながらＭＲＥ共生菌培養した。【０２８３】
菌の十分な増殖と安定化を待って栄養細胞状態にあるＭＲＥ菌群をその培養液と共に別の曝気式の培養槽に分別する。この培養曝気槽でＭＲＥ菌群の一切の栄養を絶って飢餓状態下に置き、さらに２５℃〜３５℃の条件下でエアレーションを加え続けると窒素成分の枯渇オートリガーにＭＲＥ共生菌群の内胞子化が始まる。培養液の透明度が一気に増すのを待ってエアレーション（酸素供給）を止めると、内胞子は一斉に沈殿を始め透明な上澄み液を得る。【０２８４】
こうして得られた上澄み液をさらに０．２ミクロンのメンブレンで加圧ろ過し、低分子のＭＲＥ複合リガンド含有原液を得る。このＭＲＥ複合リガンド含有原液には、３．６ｍｇ／ｍｌの有機成分が存在し、その中にＭＲＥ複合リガンド成分を８０μｇ／ｍｌ含有している。なお、本願明細書において、上述のようにして得た「ＭＲＥ複合リガンド含有原液」を「ＭＲＥ原液」と呼び、特別に言及する場合を除いて、「ＭＲＥ複合リガンドの希釈」と表現される場合には、「ＭＲＥ複合リガンド含有原液の希釈」又は「ＭＲＥ原液の希釈」を指すものである。【０２８５】
臨床治験例
抗ウイルス効果
［実施例２／エイズ（ＨＩＶ）］
売血によって約８００人の半数以上がＨＩＶに感染したアジアの農村で、発症した２０人を選び医薬品は一切使用せず本発明の飲料１日２００ｍｌを１カ月飲んでもらった。飲料を飲んだ３人と飲まないでエイズ薬を使用した１人について、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の全Ｔ細胞に対する割合（ＣＤ４＋／ＣＤ３）および血液１ｍｌ当たりのＣＤ４陽性Ｔ細胞数をフローサイトメトリー法で測定し表２０のような結果を得た。【０２８６】
本発明の飲料を飲用した２０名全員が１年後には仕事を含めて元気に日常生活を送っている。副作用の報告は一つもない。【０２８７】
【表２０】
2010095463.tif 000027
【０２８８】
［実施例３／Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）］  
男性４８歳。Ｃ型肝炎で、インターフェロンとリバビリンの治療をしてもウイルス量が２８，０００／ｍｌ、ＡＬＴ（ＧＰＴ）が６２１、ＡＳＴ（ＧＯＴ）が５８６とあまり下がらず、ＭＲＥ飲料を飲用し始める。ウルソに加えて５０ｍｌを１日３回飲用する。３か月経てウイルス量をＰＣＲで測定し、１２８００／ｍｌに下がっていた。ＡＬＴ（ＧＰＴ）が４８、ＡＳＴ（ＧＯＴ）が５２と著しく改善されていた。【０２８９】
［実施例４／子宮頸がん（ＨＰＶ）］  
女性５０歳。子宮頸部のウイルス感染発症(子宮頚癌の原因ウイルスＨＰＶ）。ＭＲＥ混合リガンド飲料３０ｍｌを１日２回（朝晩）摂取。２か月後の検査でクラス３ａからクラス２ａへ改善された。【０２９０】
［実施例５／かぜを引きやすい体質］
女児６歳。病弱でよく風邪を引く。時折３８．５度以上の高熱が続くこともあった。ＭＲＥ飲料１日２回２０ｍｌを飲み続けて３か月、風邪を引かなくなった。【０２９１】
［実施例６／いぼ（ＨＰＶ）］  
男性７１歳。手の指にイボができ仕事に支障をきたしていた。ＭＲＥ飲料５０ｍｌ毎日２飲み続けて６か月でイボが目立たなくなるほど縮小していった。イボは、ＨＰＶ（ヒト・パピローマ・ウイルス）が原因と言われている。【０２９２】
［実施例７／帯状疱疹］  
女性６０歳。ＭＲＥ複合リガンド飲料３０ｍｌを１日２回摂取と共に患部へ塗布。１〜２日で改善した。ヘルペスや帯状疱疹には飲用と同時に塗布すると治りが速い。【０２９３】
抗菌効果
［実施例８／慢性感染］  
女性５８歳。全身の菌感染（日和見感染）により疲れてくると足の甲、足首、くるぶし、手の親指などと毎回異なった個所が腫れて炎症を起こす。リューマチ因子はマイナスで、抗生物質を服用すると治るということを繰り返してきた。そのうち抗生物質が効かなくなり、ＭＲＥ飲料を試しに１日５０ｍｌを２回飲ようになった。その結果、月１〜３回発症していたものが、約半年に１回の発症で済んでいる。増加していた血小板も減少してきた。【０２９４】
［実施例９／辱創］  
女性８０歳。床擦れで化膿する。ＭＲＥ飲料を辱創部分にスプレーした後、ガーゼに浸して湿布した。化膿が治まり始め、１か月後には辱創が小さくなり、傷口から発生する臭いも軽減した。【０２９５】
抗癌効果
［実施例１０／肝臓癌］  
１２歳オスの高齢犬。肝癌で水も餌も取れなくなり、ベターっと動けない状態になっていた。治療の方法がないので、試しにＭＲＥ飲料を約１５ｍｌ静脈に注射した。３日目に起き上がり水を飲み始めたので、水にＭＲＥ飲料１００ｍｌを加えて飲ませたところ餌も食べ始めそのまま元気になる。動物病院の医師からも癌は縮小したようだ完治ですと言われる。【０２９６】
［実施例１１／肝臓癌］  
１３歳オスの高齢雑種犬。山口県の大学の獣医学部にて、「肝臓に悪性腫瘍がいくつもできており手の施しようがない。」と診断された。手術もできない状態なので、毎日ＭＲＥ飲料を水に薄めて飲ませた。１週間後、大学で再診、癌が大きくなっていないとの診断を受ける。その後、犬が積極的にＭＲＥ飲料を飲み始め日増しに元気を回復し、１か月後には家の中を走り回るようになった。３か月後のレントゲン検診では、癌が縮小して小さくなっていた。外出の散歩も食事も通常に戻って元気に飛び跳ねている。【０２９７】
［実施例１２／肝臓癌］  
女性７５歳。肝臓癌と糖尿病を併発、インシュリン注射を使用。ＭＲＥ飲料５０ｍｌを１日２回飲む。２か月ほどで、癌細胞が縮小し、インシュリン注射前の血糖値が低下してきた。【０２９８】
［実施例１３／肝機能改善］  
男性４２歳。肝機能検査で、ＡＬＴ（ＧＰＴ）の値が６４。ＭＲＥリガンド飲料３０ｍｌを１日２回摂取。１か月後の検査でＡＬＴ値５８、２か月後の検査でＡＬＴ値が３３と正常になる。【０２９９】
［実施例１４／前立腺癌］  
男性６１歳。血液のＰＳＡ値３０００μｇ／ｍｌを越える末期の前立腺癌。骨転移寸前の状態で口からの吐血がある。手術は不能で、抗アンドロゲン作用のあるカソデックスと４週間に１度女性ホルモン剤のリュープリンを皮下注射する。一時、ＰＳＡ値は１にまで下降したが、また再燃する。そこで、カソデックスを効果の高いオダインに変更する。しかし、オダインは重篤な肝障害を起こす恐れがある。血液検査でＰＳＡは０．９２であったが、ＡＳＴ（ＧＯＴ）が５６（正常値１１〜３０）で、ＡＬＴ（ＧＰＴ）が１９６（正常値４〜３０）に上昇。これ以上この状態が続くと苦痛を伴う抗癌剤に移行するため、ＭＲＥ飲料を１日２５０ｍｌ毎日飲み続けた。その結果、ＰＳＡ値もＡＳＴ、ＡＬＴ値もすべて正常に保つことができた。ビールや煙草を飲みながら週に１〜２回テニスを楽しむことができるようになった。【０３００】
［実施例１５／胃癌］  
男性７０歳。肝臓癌から胃に転移して腫瘍が大きくなる。そのため食事が取れなくなる。点滴による治療と共に、ＭＲＥ飲料３０ｍｌを１日２回服用。１〜２か月すると、胃と肝臓の腫瘍が縮小し始め、４か月目には食事ができるようになった。５カ月目の検査ではほとんど消滅しているように見えた。【０３０１】
［実施例１６／大腸癌］  
男性６９歳。大腸癌で入院。ＭＲＥリガンド飲料８０ｍｌを１日２回摂取。飲用後、腫瘍マーカーが下がりだし、１カ月後腫瘍自体も小さくなる。摘出手術を行ったがリンパなどへの転移はない。【０３０２】
［実施例１７／膵臓癌］  
男性６６歳。膵臓癌で抗癌剤治療をしている。また、糖尿病でインシュリンも注射している。ＭＲＥリガンド飲料１日３０ｍｌを摂取していて数カ月たつが体調がとてもよい。【０３０３】
［実施例１８／直腸癌］  
女性７８歳。人工肛門装着。家族は医師から不治の宣告を受ける。ＭＲＥリガンド飲料を初日２本（１８００ｍｌ）、２日目１本（９００ｍｌ）、３日目１本（９００ｍｌ）を飲む。その後の検査で、骨まで転移していた癌も含めて消失していた。【０３０４】
［実施例１９／肺癌］  
男性７６歳。肺癌から骨に転移して抗癌剤のＴＳ−１を服用。当初は効果があり回復を期待したが、その後効果が薄れてきた。痛み・便秘が激しくホスピスで麻薬・便秘薬による治療を行う。ＭＲＥリガンド飲料３０ｍｌを１日３回摂取。３週間後の検診で肺癌が消失（骨には残存）。仕事に復帰できた。【０３０５】
［実施例２０／悪性リンパ腫］  
女性６２歳。ステージ４の非ホジキンリンパ腫で、全身に転移し、耳の下のあごの部分にゴム毬のような腫瘍を形成。抗癌剤など一切の医薬品治療をせず、ドクタ−の管理のもとに、ビタミンＣの大量静注、と共にＭＲＥ飲料５０ｍｌを１日２回飲用する。３か月後、血中のＩＬ−２１が著しく上昇し、転移した転移癌が縮小を始め耳の下のあごの部分の腫瘍も柔らかくなってきた。【０３０６】
抗炎症効果
［実施例２１／顎の関節炎］  
男性６４歳。右側の顎関節の炎症で１か月ほど口が開けられない状態となる。虫歯が原因ではないかと歯の治療をしたが、まったく治らず。ＭＲＥ飲料１日１００ｍｌを飲みはじめた。翌日には顎の熱が引き、痛みが軽くなり、３日後には口を開けることが可能になり普通に食事ができるほど回復した。約１週間後には正常に戻った。【０３０７】
［実施例２２／蕁麻疹］  
女性３１歳。原因不明の蕁麻疹様の発疹が全身に毎日のように出る。ＭＲＥ飲料を５０ｍｌ飲んでもらう。飲むと１時間ほどでかゆみが軽くなり我慢できる程度になった。
翌日、また発疹したので１日２回飲んでもらうことにした。１か月過ぎる頃には、蕁麻疹様の発疹が出なくなった。【０３０８】
［実施例２３／蕁麻疹］  
女性５４歳。５００円玉くらいの大きさの蕁麻疹が飲用２日で小指大に小さくなり、引っ込むのに１週間くらいかかっていたのが２〜３日で引っ込み、肌がつるつるしてきた。【０３０９】
［実施例２４／潰瘍性大腸炎］  
女性４９歳。潰瘍性大腸炎で定期的に入退院を繰り返す。ペンタサとサラソーピリンなどの副作用のためかなりひどい蕁麻疹様の薬疹を併発するためステロイド剤を使用する。本発明のＭＲＥ飲料を１日２００ｍｌ飲み始め、約１か月後に薬疹が起こらなくなる。その後、通院と投薬を中止。ＭＲＥ飲料を飲み始めてから約１０か月目の内視鏡検査での炎症所見が見られなくなった。その後、食事療法とＭＲＥ飲料を継続。整腸剤以外の投薬を一切せずに潰瘍性大腸炎の症状は起きていない。【０３１０】
［実施例２５／アトピー性皮膚炎］  
女性３１歳。顔を含めて全身各所の皮膚に腫れと痒みを伴うアトピー様の炎症で苦しむ。ＭＲＥ飲料を化粧水のようにスプレーすると腫れと痒みが一時的にかなり軽減することを見出した。ＭＲＥ飲料３０ｍｌを１日２回飲用すると２か月ほどで湿疹が出にくくなってきた。【０３１１】
［実施例２６／スズメ蜂］  
男性６５歳。スズメ蜂に刺されたので、急いでＭＲＥ飲料を頭にかけたら、腫れることなく回復した。【０３１２】
［実施例２７／ムカデ］  
男性２８歳。ムカデに足を刺されて４か月経っても腫れが引かず靴下のゴム跡が食い込むようにくっきりと残っていた。ＭＲＥ飲料１日１回３０ｍｌを飲用したところ、１０日目から腫れが引いてきた。まだ、うっかりして飲むのを忘れると腫れが出て、飲むと腫れが引く状態にある。【０３１３】
［実施例２８／アレルギー性鼻炎］  
女性１５歳。アレルギー性鼻炎。ＭＲＥ飲料３０ｍｌを１日２回飲用。３週間で症状が改善した。【０３１４】
糖尿病と高血圧
［実施例２９／糖尿病］  
男性５６歳。糖尿病で空腹時血糖値が１５２〜３９６の範囲を変動し回復せず、Ａ１Ｃが８．６を超える値となった。ＭＲＥ飲料を１日１８０ｍｌ飲み始めて、１か月目に空腹時血糖値が１３４でＡ１Ｃ７．６に下がる。２か月目には空腹時血糖値が９０でＡ１Ｃ７．３、３か月目には空腹時血糖値が８９でＡ１Ｃ５．８、４か月目には空腹時血糖値が９１でＡ１Ｃ５．０となり正常値になった。【０３１５】
［実施例３０／糖尿病］  
男性６８歳。父親も兄も糖尿病で死亡。本人は、インシュリンを打つ寸前まで悪化。ＭＲＥ飲料を１年近く飲み続け、医師より糖尿病は良くなっていると言われ、薬を止めることができた。それ以後、血糖値が高いと言われたことはなく、本人は毎日酒を２合飲んで快調と言っている。【０３１６】
［実施例３１／高血圧］  
男性７０歳。最高血圧１６０、最低血圧９８であったが、ＭＲＥ飲料３０ｍｌを１日２回飲用。１か月後に、最高血圧１４０台、最低血圧８０台に下がった。【０３１７】
［実施例３２／高血圧］  
男性７２歳。血圧１６０−９０。ＭＲＥリガンド飲料５０ｍｌを１日２回飲用。１ヵ月後に血圧が１３０−８０。３ｃｍくらいあったシミも小さくなる。【０３１８】
組織修復効果（骨折と傷の回復）
［実施例３３／手術跡の創傷］  
男性６１歳。腹部の手術をしたが、糖尿病があるため抜糸するまでに少なくとも６か月掛かかると言われた。ＭＲＥ飲料１日１回５０ｍｌを飲用。１週間で抜糸できた。【０３１９】
［実施例３４／靭帯損傷］  
男性４２歳。左膝の靭帯損傷でリハビリを行っても「歩行は可能だけれども走るのは困難」と診断された。５年経ても走ったり無理をしたりすると左足の痛みが起こる状態が治らず。ＭＲＥ飲料を飲み始めて２週間後、自転車を長時間運転しても左足の痛みを感じなくなっているのに気が付く。試しに走ってみたら僅か５ｍだが走ることができた。その後もＭＲＥ飲料を飲み続けて１０ｍ、２０ｍと走る距離を伸ばすことができた。１週間飲用を中止したら長時間の自転車運転に痛みを感じ、走っても違和感を覚えた。５キロマラソンを目標に走る距離を伸ばす努力をしている。【０３２０】
［実施例３５／骨折］  
女性８８歳。骨折で医師から繋がるまで半年かかると言われた。ＭＲＥ飲料を飲用したところ、１か月で骨が繋がった。【０３２１】
［実施例３６／足の低温火傷］  
女性７３歳。ひどい足の低温火傷で１カ月治療しても肉芽が上がらず回復せず。ＭＲＥ飲料３０ｍｌを１日２回飲用。１週間で肉芽が上がり始めた。【０３２２】
［実施例３７／にきび跡］  
女性６１歳。高校生のとき「にきび」を潰して鼻に凸凹の「にきび跡」ができる。ＭＲＥ飲料を１日５０ｍｌ飲む。約２ヵ月目に「にきび跡」が小さくなりはじめ、６か月目には完全ではないがかなり縮小して皮膚の凸凹が目立たなくなってきた。全体の皮膚の肌理も細かくなった。【０３２３】
［実施例３８／手術後の飛蚊症］  
男性５１歳。網膜剥離の手術後飛蚊症になった。ＭＲＥ飲料を１日５０ｍｌ飲用したところ２週間で改善が見られ、血圧も１５０以上あつたものが１３０を越えることがなくなった。【０３２４】
［実施例３９／腎機能改善］  
男性５１歳。腎臓透析をしている患者。【０３２５】
【表２１】
2010095463.tif 000028
【０３２６】
表２１に示すように、ＭＲＥ飲料を飲用する以前にはＢＵＮ値にあまり変動がなかったのが、飲用後コントロール値以内の値ではあるが、ＭＲＥ飲料を飲み始めて徐々に低下してきた。なによりも元気が出てきたと喜んでいる。ＭＲＥ飲料を服用して３か月目の透析後の値が正常値になってきたことに注意。【０３２７】
詳細なデータは得られていないが、他に、ＭＲＥ飲料を飲用している腎臓透析患者が２人いる。一人は自力で尿が少しでるようになってきた。２人とも元気になり農作業や職場へ復帰している。【０３２８】
健常者への試験飲用例
［実施例４０／健常者への試験飲用］  
ＭＲＥ飲料を試験飲用した健康な７２人にアンケートを実施した。７２人中の５８人が尿の出が良くなったと記述している。また、７２人中４１人がかぜを引かなくなったと感じている。肌に艶が出てきた人は７２人中６８人に上った。薬草などで便秘になる人を含めて、副作用らしいものは見当たらなかった。むしろ便秘がよくなったという人が１２人いた。【０３２９】
その他、本発明は、さまざまに変形可能であることは言うまでもなく、上述した一実施形態に限定されず、発明の要旨を変更しない範囲で種々変形可能である。
【図１】
2010095463.tif 000029
【図２】
2010095463.tif 000030
【図３】
2010095463.tif 000031
【図４】
2010095463.tif 000032
【図５】
2010095463.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】平成22年12月17日(2010.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有するものであり、
前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該菌類を内胞子化させ、さらに前記培養液から当該内胞子化された菌類を含む不純物を除去することによって得られるものであることを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項２】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、少なくともその９８重量％以上が、平均分子量１，０００Ｄａ以下の親水性低分子物質である
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項４】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、樹状細胞、ミクログリア細胞、ランゲルハンス細胞、又はクッパー細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項５】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、又は骨芽細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項６】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、Ｔｈ１７又はＴｈ１を分化又は活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項７】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、ＩＬ−２１産生を増強させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
アレルギー疾患又は自己免疫疾患に罹患した対象における抗炎症剤として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１０】
請求項９記載の免疫増強組成物において、
前記アレルギー疾患又は自己免疫疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１１】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
病原性細菌又は病原性ウイルスに対するワクチンのアジュバンドとして使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１２】
請求項１１記載の免疫増強組成物において、
前記病原性細菌又は病原性ウイルスは、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶからなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択される疾患に罹患した対象を治療又は予防するための医薬又は動物薬として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１４】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
食品若しくは飼料として用いられるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１５】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物を製造する方法であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を用意して培養する工程と、
前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を分解する工程と、
前記菌類を培養した培養液から不純物を除去する工程と
を有するものであり、
前記分解する工程は、前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該菌類を内胞子化させることによって行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項１６】
（削除）
【請求項１７】
自然免疫に関連する疾患に罹患した哺乳動物を治療若しくは予防する方法であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有する免疫増強組成物の治療上有効な量を用意する工程と、
前記用意した免疫増強組成物の治療上有効な量を前記哺乳動物に投与する工程と
を有することを特徴とする、方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法において、
前記哺乳動物はヒトである
ことを特徴とする、方法。
【請求項１９】
請求項１７記載の方法において、
前記投与する工程は経口的に行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項２０】
請求項１７記載の方法において、
前記投与する工程は非経口的に行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項２１】
請求項２０記載の方法において、
前記非経口的に行われる投与する工程は、血管内投与、組織周囲および組織内注射、皮下注射、点眼投与、点鼻投与、経皮的投与、粘膜投与から選択されるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項２２】
請求項１７記載の方法において、
前記自然免疫に関連する疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎を含むアレルギー疾患又は自己免疫疾患、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶを含む病原性細菌又は病原性ウイルス関連疾患、肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、方法。
【手続補正書】
【提出日】平成23年10月17日(2011.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有するものであり、
前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該菌類を内胞子化させ、さらに前記培養液から当該内胞子化された菌類を含む不純物を除去することによって得られるものであることを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項２】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、少なくともその９８重量％以上が、平均分子量１，０００Ｄａ以下の親水性低分子物質である
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項４】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、樹状細胞、ミクログリア細胞、ランゲルハンス細胞、又はクッパー細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項５】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、又は骨芽細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項６】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、Ｔｈ１７又はＴｈ１を分化又は活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項７】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、ＩＬ−２１産生を増強させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項８】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
アレルギー疾患又は自己免疫疾患に罹患した対象における抗炎症剤として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項９】
請求項８記載の免疫増強組成物において、
前記アレルギー疾患又は自己免疫疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１０】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
病原性細菌又は病原性ウイルスに対するワクチンのアジュバンドとして使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１１】
請求項１０記載の免疫増強組成物において、
前記病原性細菌又は病原性ウイルスは、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶからなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１２】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択される疾患に罹患した対象を治療又は予防するための医薬又は動物薬として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
食品若しくは飼料として用いられるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１４】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物を製造する方法であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を用意して培養する工程と、
前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を分解する工程と、
前記菌類を培養した培養液から不純物を除去する工程と
を有するものであり、
前記分解する工程は、前記用意された１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該菌類を内胞子化させることによって行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項１５】
自然免疫に関連する疾患に罹患した哺乳動物を治療若しくは当該疾患を予防する薬剤を製造するための、免疫増強組成物の使用であって、
前記免疫増強組成物は、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として治療上有効な量で有するものであり、
前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群から選択される１若しくはそれ以上の菌類を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該菌類を内胞子化させ、さらに前記培養液から当該内胞子化された菌類を含む不純物を除去することによって得られるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１６】
請求項１５記載の使用において、
前記哺乳動物はヒトである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１７】
請求項１５記載の使用において、
前記薬剤は経口的に投与されるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１８】
請求項１５記載の使用において、
前記薬剤は非経口的に投与されるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１９】
請求項１８記載の使用において、
前記薬剤は、血管内投与、組織周囲および組織内注射、皮下注射、点眼投与、点鼻投与、経皮的投与、粘膜投与から選択される非経口的投与によって投与されるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項２０】
請求項１５記載の使用において、
前記自然免疫に関連する疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎を含むアレルギー疾患又は自己免疫疾患、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶを含む病原性細菌又は病原性ウイルス関連疾患、肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、使用。
【手続補正書】
【提出日】平成24年1月20日(2012.1.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として有するものであり、
前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該共生菌群を内胞子化させ、さらに前記培養液から当該内胞子化された共生菌群を含む不純物を除去することによって得られるものであることを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項２】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、少なくともその９８重量％以上が、平均分子量１，０００Ｄａ以下の親水性低分子物質である
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項４】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、樹状細胞、ミクログリア細胞、ランゲルハンス細胞、又はクッパー細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項５】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、上皮細胞、繊維芽細胞、ケラチノサイト、又は骨芽細胞を活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項６】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、Ｔｈ１７又はＴｈ１を分化又は活性化させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項７】
請求項１記載の免疫増強組成物において、
前記免疫賦活物質は、ＩＬ−２１産生を増強させるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項８】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
アレルギー疾患又は自己免疫疾患に罹患した対象における抗炎症剤として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項９】
請求項８記載の免疫増強組成物において、
前記アレルギー疾患又は自己免疫疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１０】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
病原性細菌又は病原性ウイルスに対するワクチンのアジュバンドとして使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１１】
請求項１０記載の免疫増強組成物において、
前記病原性細菌又は病原性ウイルスは、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶからなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１２】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択される疾患に罹患した対象を治療又は予防するための医薬又は動物薬として使用されるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１３】
請求項１記載の免疫増強組成物において、この免疫増強組成物は、
食品若しくは飼料として用いられるものである
ことを特徴とする、免疫増強組成物。
【請求項１４】
自然免疫を刺激することによって対象が有する免疫を増強させる免疫増強組成物を製造する方法であって、
バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群を用意して培養する工程と、
前記用意された共生菌群を分解する工程と、
前記菌類を培養した培養液から不純物を除去する工程と
を有するものであり、
前記分解する工程は、前記用意された共生菌群を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該共生菌群を内胞子化させることによって行われるものである
ことを特徴とする、方法。
【請求項１５】
自然免疫に関連する疾患に罹患した哺乳動物を治療若しくは当該疾患を予防する薬剤を製造するための、免疫増強組成物の使用であって、
前記免疫増強組成物は、バシラスｓｐ．（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０９）、リシニバシラス  フシフォルミス（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０６）、バシラス  ソノレンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｏｎｏｒｅｎｓｉｓ）、リシニバシラスｓｐ．（Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０７）、及びコマモナスｓｐ．（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｓｐ．）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２０８）から成るＭＲＥ共生菌群を分解することによって生じる免疫賦活物質を有効成分として治療上有効な量で有するものであり、
前記免疫賦活物質は、前記ＭＲＥ共生菌群を生育に適した培養条件下で培養し、得られた培養液を飢餓状態におくことにより当該共生菌群を内胞子化させ、さらに前記培養液から当該内胞子化された共生菌群を含む不純物を除去することによって得られるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１６】
請求項１５記載の使用において、
前記哺乳動物はヒトである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１７】
請求項１５記載の使用において、
前記薬剤は経口的に投与されるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１８】
請求項１５記載の使用において、
前記薬剤は非経口的に投与されるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項１９】
請求項１８記載の使用において、
前記薬剤は、血管内投与、組織周囲および組織内注射、皮下注射、点眼投与、点鼻投与、経皮的投与、粘膜投与から選択される非経口的投与によって投与されるものである
ことを特徴とする、使用。
【請求項２０】
請求項１５記載の使用において、
前記自然免疫に関連する疾患は、顎関節炎、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎を含むアレルギー疾患又は自己免疫疾患、日和見感染菌、ＨＩＶ、ＨＣＶ、及びＨＰＶを含む病原性細菌又は病原性ウイルス関連疾患、肝臓癌、前立腺癌、大腸癌、直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、悪性リンパ腫、糖尿病、高血圧、創傷、靭帯損傷、骨折、低温火傷、ニキビ、飛蚊症、辱創、蕁麻疹からなる群から選択されるものである
ことを特徴とする、使用。
【国際調査報告】
2010095463.tif 000034
2010095463.tif 000035
2010095463.tif 000036
2010095463.tif 000037
2010095463.tif 000038