(57)【要約】  検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、［d］ポリアニオンの存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。
【請求項２】
検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。
【請求項３】
検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。
【請求項４】
第四級アンモニウム塩が、トリメチルアルキルアンモニウム塩又はベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩である請求項１〜３のいずれかに記載の測定方法。
【請求項５】
第三級アミンが、ジメチルアルキルアミンである請求項１〜３のいずれかに記載の測定方法。
【請求項６】
生成する物質が、過酸化水素である請求項１〜５のいずれかに記載の測定方法。
【請求項７】
過酸化水素の測定が、過酸化水素測定用試薬を用いて行われる請求項６記載の測定方法。
【請求項８】
生成する物質が、還元型補酵素である請求項１〜５のいずれかに記載の測定方法。
【請求項９】
還元型補酵素の測定が、還元型補酵素測定用試薬を用いて行われる請求項８記載の測定方法。
【請求項１０】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。
【請求項１１】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。
【請求項１２】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。
【請求項１３】
さらに、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素と検体との反応で生成する物質を測定する試薬を含有する、請求項１０〜１２のいずれかに記載の測定用試薬。
【請求項１４】
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素と検体との反応で生成する物質が、過酸化水素である、請求項１３記載の測定用試薬。
【請求項１５】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。
【請求項１６】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。
【請求項１７】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。
【請求項１８】
さらに、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素と検体との反応で生成する物質を測定する試薬を含有する、請求項１５〜１７のいずれかに記載の測定用試薬。
【請求項１９】
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素と検体との反応で生成する物質が、還元型補酵素である、請求項１８記載の測定用試薬。
【請求項２０】
第四級アンモニウム塩が、トリメチルアルキルアンモニウム塩又はベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩である請求項１０〜１９のいずれかに記載の測定用試薬。
【請求項２１】
第三級アミンが、ジメチルアルキルアミンである請求項１０〜１９のいずれかに記載の測定用試薬。
【請求項２２】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール酸化酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。
【請求項２３】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール酸化酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。
【請求項２４】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール酸化酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。
【請求項２５】
さらに、過酸化水素測定用試薬を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有する請求項２２〜２４のいずれかに記載の測定用キット。
【請求項２６】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
酸化型補酵素、及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール脱水素酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］、酸化型補酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。
【請求項２７】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
酸化型補酵素、及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール脱水素酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］、酸化型補酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。
【請求項２８】
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
酸化型補酵素、及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール脱水素酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］、酸化型補酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定用キット。
【請求項２９】
さらに、還元型補酵素測定用試薬を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、請求項２６〜２８のいずかに記載の測定用キット。
【請求項３０】
第四級アンモニウム塩が、トリメチルアルキルアンモニウム塩又はベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩である請求項２２〜２９のいずれかに記載の測定用キット。
【請求項３１】
第三級アミンが、ジメチルアルキルアミンである請求項２２〜２９のいずれかに記載の測定用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体中に含まれる低密度リポ蛋白（以下、ＬＤＬという）中のコレステロール（以下、ＬＤＬ−Ｃと略記する。）の測定方法及び測定用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＬＤＬは、末梢細胞にコレステロールを供給する役割を有し、冠動脈硬化症をはじめとする各種動脈硬化症の直接的因子である。ＬＤＬ−Ｃの増加は動脈硬化性疾患の主要な危険因子の１つであり、分別定量することは臨床上有用である。
従来からのＬＤＬ−Ｃの定量方法は、超遠心法、電気泳動法、フリードワルド（Friedewald）式による演算方法などが挙げられる。【０００３】
超遠心法は、リポ蛋白の比重の差を利用し、超遠心分離機を用いてＬＤＬを分離したのち、そのコレステロール量を測定する方法である（非特許文献１）。
しかしながら、超遠心法による分離操作は煩雑で、迅速性、簡便性などの面で欠点がある。
電気泳動法は、リポ蛋白の電荷の差を利用し、アガロースゲルなどを支持体として分離する方法やリポ蛋白の粒子サイズの差を利用し、ポリアクリルアミドゲルを支持体として分離する方法などがある。しかしながら、電気泳動法は定量性に乏しく、簡便性、経済性などの面で問題がある。【０００４】
フリードワルド式による演算方法では、総コレステロール（以下、Ｔ−Ｃと略記する。）、高密度リポ蛋白（以下、ＨＤＬという）中のコレステロール（以下、ＨＤＬ−Ｃと略記する。）及び総トリグリセライド（以下、Ｔ−ＴＧと略記する。）の測定値から、次の計算式に従いＬＤＬ−Ｃ量を算出する（非特許文献２）。
（ＬＤＬ−Ｃ)＝(Ｔ−Ｃ)−（ＨＤＬ−Ｃ)−(Ｔ−ＴＧ)／５
しかしながら、この方法は、血清中のＴ−ＴＧの含有量や食事の影響を受けるため、正確性に問題がある。【０００５】
また近年、超遠心法などの分離操作を必要とせず、汎用の自動分析機装置に搭載可能なＬＤＬ−Ｃの定量方法も報告されている。
それらの中でＬＤＬ−Ｃを定量する方法としては、以下の方法が知られている。【０００６】
ＬＤＬ以外のリポ蛋白に作用する界面活性剤の存在下において、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを作用させ、生じた過酸化水素を消去することにより、被検試料中のＨＤＬ、超低密度リポ蛋白（以下、ＶＬＤＬという）及びカイロミクロン中のコレステロールを消去する第１工程と、次いで、被検試料中の残存コレステロールを定量する第２工程とからなる被検試料中のＬＤＬ−Ｃの定量方法（特許文献１）。【０００７】
血清に対し、ポリオキシエチレンアルキレンフェニルエーテル及びポリオキシエチレンアルキレントリベンジルフェニルエーテルから選ばれる界面活性剤、並びにコレステロール測定用酵素試薬を添加し、リポ蛋白質のうちＨＤＬ中及びＶＬＤＬ中のコレステロールを優先的に反応させた後に、残りのコレステロールの反応量を測定するＬＤＬ−Ｃの定量方法（特許文献２）。【０００８】
生体試料に対し、ポリオキシエチレン誘導体とポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体、並びにコレステロール測定用酵素を添加し、リポ蛋白質のうちＬＤＬ−Ｃを選択的に測定する方法（特許文献３）。
生体試料に対し、ジメチル−α−シクロデキストリン又は／及びポリ−β−シクロデキストリンの存在下で測定を行うことを特徴とする、ＬＤＬ−Ｃの測定法（特許文献４）。【０００９】
カイロミクロン、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬのいずれか１種以上を含む試料中のコレステロールを直接、選択的に測定する方法において、リン脂質、リン脂質類似基を含有する化合物の存在下、試料中のＬＤＬ−Ｃを定量する方法（特許文献５）。
しかしながら、検体中のＬＤＬ−Ｃをより簡便かつ正確に測定する方法及びキットが求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開平１０−３８８８８号公報
【特許文献２】特開平９−３１３２００号公報
【特許文献３】ＷＯ００／１７３８８パンフレット
【特許文献４】特開平１１−３０６１７号公報
【特許文献５】特開２００２−２０２３１４号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】アドバンスド・リピッド・リサーチ（Adv. Lipid Res.）、第６巻、１頁、１９６８年
【非特許文献２】クリニカル・ケミストリー（Clin. Chem.）、第１８巻、４９９頁、１９７２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、検体中のＬＤＬ−Ｃを簡便かつ正確に測定するための方法、試薬及びキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らはＬＤＬ−Ｃの測定方法について鋭意検討を重ねた結果、特定の界面活性剤及びポリアニオンの存在下で、検体と、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを反応させることで、ＬＤＬ以外のリポ蛋白質中のコレステロールを消去することなく、また、リポ蛋白質の物理的な分画操作を行うことなく、検体中のＬＤＬ−Ｃを簡便かつ正確に測定できることを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、下記（１）〜（３１）に関する。【００１４】
（１）検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。【００１５】
（２）検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。【００１６】
（３）検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法。【００１７】
（４）第四級アンモニウム塩が、トリメチルアルキルアンモニウム塩又はベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩である（１）〜（３）のいずれかに記載の測定方法。
（５）第三級アミンが、ジメチルアルキルアミンである（１）〜（３）のいずれかに記載の測定方法。
（６）生成する物質が、過酸化水素である（１）〜（５）のいずれかに記載の測定方法。
（７）過酸化水素の測定が、過酸化水素測定用試薬を用いて行われる（６）記載の測定方法。
（８）生成する物質が、還元型補酵素である（１）〜（５）のいずれかに記載の測定方法。
（９）還元型補酵素の測定が、還元型補酵素測定用試薬を用いて行われる（８）記載の測定方法。【００１８】
（１０）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。【００１９】
（１１）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。【００２０】
（１２）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。【００２１】
（１３）さらに、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素と検体との反応で生成する物質を測定する試薬を含有する、（１０）〜（１２）のいずれかに記載の測定用試薬。
（１４）コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素と検体との反応で生成する物質が、過酸化水素である、（１３）記載の測定用試薬。【００２２】
（１５）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。【００２３】
（１６）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。【００２４】
（１７）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン；及び、
コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用試薬。【００２５】
（１８）さらに、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素と検体との反応で生成する物質を測定する試薬を含有する、（１５）〜（１７）のいずれかに記載の測定用試薬。
（１９）コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素と検体との反応で生成する物質が、還元型補酵素である、（１８）記載の測定用試薬。
（２０）第四級アンモニウム塩が、トリメチルアルキルアンモニウム塩又はベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩である（１０）〜（１９）のいずれかに記載の測定用試薬。
（２１）第三級アミンが、ジメチルアルキルアミンである（１０）〜（１９）のいずれかに記載の測定用試薬。【００２６】
（２２）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール酸化酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。【００２７】
（２３）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール酸化酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。【００２８】
（２４）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール酸化酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。
（２５）さらに、過酸化水素測定用試薬を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有する（２２）〜（２４）のいずれかに記載の測定用キット。【００２９】
（２６）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
酸化型補酵素、及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール脱水素酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］、酸化型補酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。【００３０】
（２７）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
酸化型補酵素、及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール脱水素酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］、酸化型補酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロール測定用キット。【００３１】
（２８）［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［d］ポリアニオン、
酸化型補酵素、及び、コレステロールエステル加水分解酵素からなる群より選ばれる少なくとも１つを含む第一試薬、コレステロール脱水素酵素を含む第二試薬を含有し、上記［a］〜［d］、酸化型補酵素及びコレステロールエステル加水分解酵素のそれぞれを第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、検体中の低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定用キット。【００３２】
（２９）さらに、還元型補酵素測定用試薬を第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有することを特徴とする、（２６）〜（２８）のいずかに記載の測定用キット。
（３０）第四級アンモニウム塩が、トリメチルアルキルアンモニウム塩又はベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩である（２２）〜（２９）のいずれかに記載の測定用キット。
（３１）第三級アミンが、ジメチルアルキルアミンである（２２）〜（２９）のいずれかに記載の測定用キット。
【発明の効果】
【００３３】
本発明により、検体中のＬＤＬ−Ｃを簡便かつ正確に測定するための方法、試薬及びキットが提供される。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明による検体中のＬＤＬ−Ｃの測定法は、遠心分離などの物理的方法によるリポ蛋白の分画操作を必要としない方法である。また、ＬＤＬ−Ｃの測定に先立って検体中のＬＤＬ以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去することなく、検体中のＬＤＬ−Ｃを測定する方法である。またＬＤＬ−Ｃの測定に先立って、検体中のＬＤＬ以外のリポ蛋白中のコレステロールを測定することなく、検体中のＬＤＬ−Ｃを測定する方法である。
【００３５】
本発明の測定方法の１態様は、検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物、ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする方法である。
【００３６】
本発明の測定方法の別の態様は、検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする方法である。
【００３７】
さらに、本発明の測定方法の別の態様は、検体と、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせとを、
［a］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル；
［b1］ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物；
［b2］ポリオキシエチレンアルケニルエーテル、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル及びポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；
［c］第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウムからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤；及び、
［d］ポリアニオン
の存在下に反応させ、該反応で生成する物質又は消費される物質を測定することを特徴とする方法である。
【００３８】
いずれの態様においても、
［１］検体と酵素類との反応を、界面活性剤及びポリアニオンの共存下に行う工程；
［２］上記［１］の工程で生成する物質又は消費される物質を測定する工程；
［３］予め、既知濃度のＬＤＬ−Ｃを用いて作成された、ＬＤＬ−Ｃ濃度と、該生成する物質又は該消費される物質由来の情報量との関係を表す検量線と、上記［２］での測定値とを相関付ける工程；及び、
［４］検体中のＬＤＬ−Ｃ濃度を決定する工程
を含む。ここで、検体との反応で用いられる酵素類とは、(i)コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素の組み合わせ、又は、(ii)コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素の組み合わせである。
【００３９】
本発明の測定方法において、検体と酵素類との反応で生成する物質としては、例えば過酸化水素、還元型補酵素等が挙げられ、検体と酵素類との反応で消費される物質としては、例えば酸素分子等が挙げられる。生成した過酸化水素は、例えば過酸化水素電極や後述の過酸化水素測定用試薬を用いて測定することができる。生成した還元型補酵素は、例えば還元型補酵素の吸光度を測定する方法や後述の還元型補酵素測定用試薬を用いる方法等が挙げられる。還元型補酵素の吸光度の測定において使用される波長は、３００〜５００ｎｍが好ましく、３３０〜４００ｎｍがより好ましく、３４０ｎｍが特に好ましい。消費される酸素分子は、例えば酸素電極を用いて測定することができる。
【００４０】
本発明の測定方法において用いられる検体としては、例えば全血、血漿、血清等が挙げられ、血漿及び血清が好ましい。また、本発明の測定方法においては、健常人由来の検体のみならず、中性脂肪（ＴＧ）が高い高ＴＧ検体も使用することができる。
【００４１】
本発明におけるコレステロールエステル加水分解酵素としては、コレステロールエステルを加水分解する能力を有する酵素であれば特に制限はなく、例えば動物、植物又は微生物由来のコレステロールエステラーゼ、リポプロテインリパーゼの他、遺伝子工学的な手法により製造されるコレステロールエステラーゼ、リポプロテインリパーゼ等も用いることができる。
【００４２】
コレステロールエステル加水分解酵素としては、無修飾のコレステロールエステル加水分解酵素の他、化学的に修飾されたコレステロールエステル加水分解酵素も使用することができる。また、コレステロールエステル加水分解酵素としては市販品を使用することもできる。
【００４３】
市販されているコレステロールエステル加水分解酵素としては、コレステロールエステラーゼ（ＣＯＥ−３１１；東洋紡績社製）、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ−３１１；東洋紡績社製）、コレステロールエステラーゼIII（ＣＨＥIII；天野製薬社製）等が挙げられる。また、本発明においては、２種類以上のコレステロールエステル加水分解酵素を組み合わせて用いることもできる。
【００４４】
コレステロールエステル加水分解酵素の化学修飾において当該酵素を修飾する基（化学修飾基）としては、例えばポリエチレングリコールを主成分とする基、ポリプロピレングリコールを主成分とする基、ポリプロピレングリコールとポリエチレングリコールの共重合体を有する基、水溶性多糖類を含有する基、スルホプロピル基、スルホブチル基、ポリウレタン基、キレート機能を有する基等が挙げられるが、ポリエチレングリコールを主成分とする基が好ましい。水溶性多糖類としては、例えばデキストラン、プルラン、可溶性デンプン等が挙げられる。
【００４５】
コレステロールエステル加水分解酵素を化学的に修飾するための試薬（化学修飾剤）としては、上記の化学修飾基と、酵素のアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基等と反応し得る官能基又は構造とを併せ持つ化合物等が挙げられる。酵素中のアミノ基と反応し得る官能基又は構造としては、例えばカルボキシル基、活性エステル基（Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド基等）、酸無水物、酸塩化物、アルデヒド、エポキシド基、１，３−プロパンスルトン、１，４−ブタンスルトン等が挙げられる。酵素中のカルボキシル基と反応し得る官能基又は構造としては、例えばアミノ基等が挙げられる。酵素中のスルフヒドリル基と反応性がある基又は構造としては、例えばマレイミド基、ジスルフィド、α−ハロエステル（α−ヨードエステル等）等が挙げられる。
【００４６】
化学修飾剤として、市販品を使用することもできる。市販されている化学修飾剤としては、ポリエチレングリコールを主成分とする基とＮ−ヒドロキシサクシンイミド基とを有するサンブライトＶＦＭ−４１０１、サンブライトＭＥ−０５０ＡＳ、サンブライトＤＥ−０３０ＡＳ（いずれも日油社製）、ポリアルキレングリコールを主成分とする基と酸無水物構造とを有するサンブライトＡＫＭシリーズ（例えば、サンブライトＡＫＭ−１５１０等）、サンブライトＡＤＭシリーズ、サンブライトＡＣＭシリーズ（いずれも日油社製）、ポリエチレングリコールを主成分とする基とエポキシド基とを有するＥＰＯＸ−３４００、Ｍ−ＥＰＯＸ−５０００（いずれもSheawater Polymers社製）、キレート機能を有する基と酸無水物構造とを有するジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ペンタ無水二酢酸（DTPA anhydride；同仁化学研究所社製）等が挙げられる。
【００４７】
コレステロールエステル加水分解酵素の化学修飾は、例えば以下の方法で行うことができるが、本方法に限定されるものではない。まず、コレステロールエステル加水分解酵素をｐＨ８．０以上の緩衝液（例えばＨＥＰＥＳ緩衝液）に溶解し、０〜５５℃で０．０１〜５００倍モル量の化学修飾剤を添加し、５分間〜５時間攪拌する。酵素反応においては、化学的に修飾されたコレステロールエステル加水分解酵素として、この反応液そのもののみならず、必要に応じて限外濾過膜等により未反応の化学修飾剤等を除去したものも、使用することもできる。
【００４８】
本発明の測定方法におけるコレステロールエステル加水分解酵素の濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中の濃度は通常０．００１〜８００Ｕ／ｍＬであり、０．０１〜３００Ｕ／ｍＬが好ましい。
【００４９】
本発明におけるコレステロール酸化酵素としては、コレステロールを酸化して過酸化水素を生成する能力を有する酵素であれば特に制限はなく、例えば動物、植物又は微生物由来のコレステロールオキシダーゼの他、遺伝子工学的な手法により製造されるコレステロールオキシダーゼ等も用いることができ、コレステロールオキシダーゼ（ＣＨＯＤＩ；協和発酵工業社製）、コレステロールオキシダーゼ（ＣＨＯＤＩ；キッコーマン社製）、コレステロールオキシダーゼ（ＣＨＯ−ＣＥ；キッコーマン社製）、コレステロールオキシダーゼ（ＣＯＯ−３２１；東洋紡績社製）等の市販品を用いることもできる。また、本発明においては、２種類以上のコレステロール酸化酵素を組み合わせて用いることもできる。
【００５０】
コレステロール酸化酵素は、無修飾の酵素であっても、化学的に修飾された酵素であってもよい。化学的に修飾されたコレステロール酸化酵素は、例えば前述の化学修飾剤を用いて、前述の化学修飾方法により作製することができる。
【００５１】
本発明の測定方法におけるコレステロール酸化酵素の濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中の濃度は通常０．００１〜８００Ｕ／ｍＬであり、０．０１〜３００Ｕ／ｍＬが好ましい。
【００５２】
本発明におけるコレステロール脱水素酵素としては、酸化型補酵素の存在下にコレステロールを酸化して還元型補酵素を生成する能力を有する酵素であれば特に制限はなく、例えば動物、植物又は微生物由来のコレステロールデヒドロゲナーゼの他、遺伝子工学的な手法により製造されるコレステロールデヒドロゲナーゼ等も用いることができる。コレステロールデヒドロゲナーゼ“Amano” 5 （ＣＨＤＨ５；天野エンザイム社製）等の市販品を用いることもできる。また、本発明においては、２種類以上のコレステロール脱水素酵素を組み合わせて用いることもできる。コレステロール脱水素酵素は、無修飾の酵素であっても、化学的に修飾された酵素であってもよい。化学的に修飾されたコレステロール脱水素酵素は、例えば前述の化学修飾剤を用いて、前述の化学修飾方法により作製することができる。
【００５３】
本発明の測定方法におけるコレステロール脱水素酵素の濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定を可能とする濃度であれば特に制限はないが、反応液中の濃度は通常０．００１〜８００Ｕ／ｍＬであり、０．０１〜３００Ｕ／ｍＬが好ましい。
【００５４】
本発明のコレステロール脱水素酵素を用いた測定法においては、酸化型補酵素が使用される。酸化型補酵素としては、例えばＮＡＤ、ＮＡＤＰ、チオ（thio）−ＮＡＤ、チオ（thio）−ＮＡＤＰ等が挙げられる。
【００５５】
本発明において用いられるポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレンアルキルアリールエーテル（以下、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルと略記する）におけるアルキルとしては例えばオクチル、ノニル、デシル、ドデシルなどが挙げられ、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルにおけるアリールとしてはフェニル等が挙げられる。ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルにおけるＰＯＥ・ＰＯＡの重合様式としてはとくに制限はなく、例えば、ブロック重合型、ランダム重合型の重合様式のものが挙げられる。ブロック重合型としては、例えばジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー、テトラブロックコポリマー等が挙げられる。ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルにおけるポリオキシアルキレン（ＰＯＡ）としては、ポリオキシエチレン以外のポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる。ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルの具体例としては、エマルゲンＬ４０等（花王社製）、アクロネセスＫＰ１８９Ｒ、アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０、アクロネセスＮＰ−１８９Ｒ(以上、日油社製)等が挙げられる。
【００５６】
ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン縮合物（以下、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物と略記する）におけるＰＯＥ・ＰＯＡの重合様式としてはとくに制限はなく、例えば、ブロック重合型、ランダム重合型の重合様式のものが挙げられる。ブロック重合型としては、例えばジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー、テトラブロックコポリマー等が挙げられる。ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物におけるポリオキシアルキレン（ＰＯＡ）としては、ポリオキシエチレン以外のポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる。ポリオキシアルキレン（ＰＯＡ）の分子量としては、５００〜６０００であり、好ましくは１５００〜４０００である。ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物の分子量としては、５００〜１２０００であり、好ましくは１５００〜８０００である。
【００５７】
ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物の具体例としては、プルロニックＬ−１２１、プルロニックＰ−１０３、プルロニックＦ−１０８（以上、旭電化社製）、プロノンＢ−２０４、アクロネセスＢ−２０８(以上、日油社製)等が挙げられる。
【００５８】
ポリオキシエチレンアルケニルエーテル（以下、ＰＯＥアルケニルエーテルと略記する）のアルケニルとしては、炭素数８〜３０の例えば、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、ドデセニル、トリデセニル、テトラデセニル、ペンタデセニル、ヘキサデセニル、ヘプタデセニル、オクタデセニル、オレイル、ノナデセニル、エイコセニル、ヘンエイコセニル、ドコセニル、トリコセニル、テトラコセニル、ペンタコセニル、ヘキサコセニル、ヘプタコセニル、オクタコセニル、ノナコセニル、トリアコンテニル等が挙げられ、オレイルが好ましい。ＰＯＥアルケニルエーテルのポリオキシエチレンのオキシエチレンの重合度としては、好ましくは２〜８０であり、より好ましくは４〜６０である。ＰＯＥアルケニルエーテルの具体例としては、ＢＬＡＵＮＯＮ ＥＮ−１５３０、ＢＬＡＵＮＯＮ  ＥＮ−１５４０、ＢＬＡＵＮＯＮ  ＥＮ−１５６０（青木油脂社製）、ノニオンＥ−２１５、ノニオンＥ−２３０，ノニオンＥ−２３５、ＮＯＦＡＢＬＥ  ＥＡＯ−９０２０（以上、日油社製）等が挙げられる。
【００５９】
ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル（以下、ＰＯＥ分岐アルキルエーテルと略記する）の分岐アルキルとしては炭素数６〜３０の例えば、イソヘキシル、イソヘプチル、イソオクチル、イソノニル、イソデシル、イソウンデシル、イソドデシル、イソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデシル、イソヘキサデシル、イソヘプタデシル、イソオクタデシル、イソノナデシル、イソイコシル、オクチルドデシル、イソヘネイコシル、イソドデシル、イソトリコシル、イソテトラコシル、デシルテトラデシル、イソペンタコシル、イソヘキサコシル、ドデシルテトラデシル、イソヘプタコシル、イソオクタコシル、イソノナコシル、イソトリアコンシル等が挙げられ、炭素数１６以上の分岐アルキルが好ましい。炭素数１６以上の分岐アルキルとしては、例えばイソヘキサデシル、イソヘプタデシル、イソオクタデシル、イソノナデシル、イソイコシル、オクチルドデシル、イソヘネイコシル、イソドデシル、イソトリコシル、イソテトラコシル、デシルテトラデシル、イソペンタコシル、イソヘキサコシル、ドデシルテトラデシル、イソヘプタコシル、イソオクタコシル、イソノナコシル、イソトリアコンシル等が挙げられる。ＰＯＥ分岐アルキルエーテルのポリオキシエチレンのオキシエチレンの重合度としては、好ましくは２〜８０であり、より好ましくは４〜６０である。ＰＯＥ分岐アルキルエーテルの具体例としては、ノニオンＩＣ２３５、ノニオンＩＣ２３０、ノニオンＩＣ２３５、ノニオンＯＤ２２５、ノニオンＯＤ２３０、ノニオンＯＤ２３５（以上、日油社製）、ＥＭＡＬＥＸ  １６１５、ＥＭＡＬＥＸ  １６２５、ＥＭＡＬＥＸ  １８１５、ＥＭＡＬＥＸ  １８２０、ＥＭＡＬＥＸ  １８２５、ＥＭＡＬＥＸ  ＯＤ−１０、ＥＭＡＬＥＸ  ＯＤ−１６、ＥＭＡＬＥＸ  ＯＤ−２０、ＥＭＡＬＥＸ  ＯＤ−２５、ＥＭＡＬＥＸ  ＯＤ−２５ＪＪ、ＥＭＡＬＥＸ  ２４２０、ＥＭＡＬＥＸ  ２４２５（以上、日本エマルジョン社製）等が挙げられる。
【００６０】
ポリオキシエチレン・ポリオキシアルキレン分岐アルキルエーテル（以下、ＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルと略記する）の分岐アルキルとしては、炭素数６〜３０の例えば、イソヘキシル、イソヘプチル、イソオクチル、イソノニル、イソデシル、イソウンデシル、イソドデシル、イソトリデシル、イソテトラデシル、イソペンタデシル、イソヘキサデシル、イソヘプタデシル、イソオクタデシル、イソノナデシル、イソイコシル、オクチルドデシル、イソヘネイコシル、イソドデシル、イソトリコシル、イソテトラコシル、デシルテトラデシル、イソペンタコシル、イソヘキサコシル、ドデシルテトラデシル、イソヘプタコシル、イソオクタコシル、イソノナコシル、イソトリアコンシル等が挙げられ、イソテトラコシル、デシルテトラデシルが好ましい。ＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルにおけるＰＯＥ・ＰＯＡの重合様式としてはとくに制限はなく、例えば、ブロック重合型、ランダム重合型の重合様式のものが挙げられる。ブロック重合型としては、例えばジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー、テトラブロックコポリマー等が挙げられる。ＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルにおけるポリオキシアルキレン（ＰＯＡ）としては、ポリオキシエチレン以外のポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる。ＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルの具体例としては、ユニルーブＭＴ−０６２０Ｂ、ユニルーブ５０ＭＴ−２２００Ｂ、ユニルーブ２０ＭＴ−２０００Ｂ、ユニルーブＭＩＬ−０８２２Ｂ（以上、日油社製）、ＰＥＮ−４６２０、ＰＥＮ−４６３０（以上、日光ケミカルズ社製）等が挙げられる。
【００６１】
第四級アンモニウム塩としては、トリメチルアルキルアンモニウム塩、ベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩等が挙げられる。
トリメチルアルキルアンモニウム塩のアルキルとしては炭素数６〜３０の例えば、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル、ペンタコシル、ヘキサコシル、ヘプタコシル、オクタコシル、ノナコシル、トリアコンシルなど等が挙げられ、炭素数８〜２０のアルキルが好ましい。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。トリメチルアルキルアンモニウム塩の塩としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、水酸化物などが挙げられる。トリメチルアルキルアンモニウム塩としては、例えばｎ−オクチルトリメチルアンモニウムクロリド、デシルトリメチルアンモニウムブロミド、臭化ラウリルトリメチルアンモニウム、ｎ−ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド、ｎ−テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド、トリメチルテトラデシルアンモニウムクロリド、トリメチルセチルアンモニウムクロリド、トリメチルステアリルアンモニウムクロリド等が挙げられ、その市販品としては、例えばカチオンＢＢ、カチオンＰＢ−４０、カチオンＰＢ−３００、カチオンＶＢ、カチオンＦＢ、カチオンＡＴ２−５００（以上、日油社製）等が挙げられる。
【００６２】
ベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩のアルキルとしては炭素数６〜３０の例えば、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル、ペンタコシル、ヘキサコシル、ヘプタコシル、オクタコシル、ノナコシル、トリアコンシルなど等が挙げられ、炭素数８〜２０のアルキルが好ましい。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。ベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩の塩としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、水酸化物などが挙げられる。ベンジルジメチルアルキルアンモニウム塩としては、ベンジルジメチルデシルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルデシルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルラウリルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロリド水和物、ベンジルセチルジメチルアンモニウムクロリド水和物、ベンジルジメチルステアリルアンモニウムクロリド水和物等が挙げられ、その市販品としては、カチオンＭ２−１００、カチオンＦ２−３５Ｒ、カチオンＦ２−４０Ｅ、カチオンＦ２−５０（以上、日油社製）、モリミン１０−Ｂ、モリミン１２−Ｂ、モリミン１４-Ｂ（以上、モーリン化学社製）等が挙げられる。
【００６３】
第三級アミンとしては、ジメチルアルキルアミン等が挙げられる。ジメチルアルキルアミンのアルキルとしては炭素数６〜３０の例えば、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル、ペンタコシル、ヘキサコシル、ヘプタコシル、オクタコシル、ノナコシル、トリアコンシルなど等が挙げられ、炭素数８〜２０のアルキルが好ましい。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。ジメチルアルキルアミンの具体例としては、ジメチルオクチルアミン、ジメチルデシルアミン、ジメチルドデシルアミン、ジメチルテトラデシルアミン、ジメチルセチルアミン、ジメチルステアリルアミン等が挙げられ、その市販品としては、三級アミンＢＢ、三級アミンＦＢ、三級アミンＡＢＴ（以上、日油社製）等が挙げられる。
【００６４】
第二級アミンとしては、メチルアルキルアミン等が挙げられる。メチルアルキルアミンのアルキルとしては炭素数６〜３０の例えば、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル、ペンタコシル、ヘキサコシル、ヘプタコシル、オクタコシル、ノナコシル、トリアコンシルなど等が挙げられ、炭素数８〜２０のアルキルが好ましい。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。メチルアルキルアミンの具体例としては、メチルオクチルアミン、メチルデシルアミン、メチルドデシルアミン、メチルテトラデシルアミン、メチルセチルアミン、メチルステアリルアミン等が挙げられる。
【００６５】
第一級アミンとしては、アルキルアミン等が挙げられる。アルキルアミンのアルキルとしては炭素数６〜３０の例えば、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル、ペンタコシル、ヘキサコシル、ヘプタコシル、オクタコシル、ノナコシル、トリアコンシルなど等が挙げられ、炭素数８〜２０のアルキルが好ましい。炭素数８〜２０のアルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル等が挙げられる。アルキルアミンの具体例としては、オクチルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、セチルアミン、ステアリルアミン等が挙げられ、アルキルアミンの市販品としては、アミンＢＢ、アミンＰＢ、アミンＭＢ、アミンＡＢ（以上、日油社製）等が挙げられる。
【００６６】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法において、[a]ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルと、[b]ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、ＰＯＥアルケニルエーテル、ＰＯＥ分岐アルキルエーテル及びＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤（以下、界面活性剤bと記す）とを用いる場合、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル及び界面活性剤bの濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はないが、それぞれの界面活性剤について、通常０．０００１〜２０％であり、好ましくは０．００１〜５％である。
【００６７】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法において、[a]ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルと、[b1]ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物とを用いる場合、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル及びＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物の濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はないが、それぞれの界面活性剤について、通常０．０００１〜２０％であり、好ましくは０．００１〜５％である。
【００６８】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法において、[a]ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルと、[b1]ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物と、[b2]ＰＯＥアルケニルエーテル、ＰＯＥ分岐アルキルエーテル及びＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルからなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤（以下、界面活性剤b2と記す）とを用いる場合、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物及び界面活性剤b2の濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はないが、それぞれの界面活性剤について、通常０．０００１〜２０％であり、好ましくは０．００１〜５％である。
【００６９】
第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン及び第四級アンモニウム塩からなる群より選ばれる１つ以上の界面活性剤（以下、界面活性剤cと記す）の濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はないが、通常０．００００１〜２０％であり、好ましくは０．０００１〜５％である。
【００７０】
ポリアニオンの具体例としては、デキストラン硫酸もしくはその塩、ヘパリンもしくはその塩、リンタングステン酸又はその塩、硫酸化シクロデキストリン又はその塩、硫酸化オリゴ糖又はその塩等が挙げられるが、デキストラン硫酸もしくはその塩が好ましい。デキストラン硫酸としては、例えば分子量が４万、８万、２０万、５０万、１００万、２００万等のデキストラン硫酸が挙げられる。硫酸化オリゴ糖としては、例えば硫酸化アガロース、硫酸化トレハロース、コンドロイチン硫酸等が挙げられる。塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩等が挙げられる。また、本発明においては、ポリアニオンを２種以上用いてもよい。本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法におけるポリアニオンの濃度としては、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする濃度であれば特に制限はないが、通常０．０００５〜１０％であり、好ましくは０．００５〜１％である。
【００７１】
本発明において用いられる水性媒体は、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする水性媒体であれば特に制限はなく、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等を含み、緩衝液が好ましい。
【００７２】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法におけるｐＨは、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とするｐＨであればいずれでもよいが、例えばｐＨ４〜１０が挙げられる。水性媒体として緩衝液を用いる場合には、設定するｐＨに応じた緩衝剤を用いることが望ましい。緩衝液に用いる緩衝剤としては、例えばトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝剤、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、グッドの緩衝剤等が挙げられる。
【００７３】
グッドの緩衝剤としては、例えば２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、２−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−ヒドロキシ−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、３−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、３−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕プロパンスルホン酸〔（Ｈ）ＥＰＰＳ〕、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）等が挙げられる。
【００７４】
緩衝液の濃度は測定に適した濃度であれば特に制限はされないが、０．００１〜２．０ｍｏｌ／Ｌが好ましく、０．００５〜１．０ｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００７５】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法における反応温度は、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする温度であれば特に制限はないが、１０〜５０℃が好ましく、３０〜４０℃がより好ましい。汎用の自動分析装置で設定される反応温度は通常３７℃である。
【００７６】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法における反応時間は、本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法を可能とする反応時間であれば特に制限はないが、１〜６０分間が好ましく、２〜３０分間がより好ましい。
【００７７】
本発明のＬＤＬ−Ｃの測定方法において、ＬＤＬ−Ｃの測定は、例えば反応により生成した過酸化水素や還元型補酵素を測定することにより行う。また、反応において消費される酸素量を測定することにより行ってもよい。
【００７８】
生成した過酸化水素の量は、例えば過酸化水素電極や過酸化水素測定用試薬を用いて測定することができる。過酸化水素測定用試薬は、生成した過酸化水素を検出可能な物質へ変換するための試薬である。検出可能な物質としては、例えば色素、発光等が挙げられるが、色素が好ましい。検出可能な物質が色素の場合には、過酸化水素測定用試薬は、酸化発色型色原体及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質を含有する。酸化発色型色原体としては、例えば後述の酸化発色型色原体が挙げられる。検出可能な物質が発光の場合には、過酸化水素測定用試薬は、化学発光物質を含有する。化学発光物質としては、例えばルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アクリジニウムエステル等が挙げられる。
【００７９】
過酸化水素測定用試薬として、酸化発色型色原体及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質を含有する試薬を用いる場合には、過酸化水素は、過酸化活性物質の存在下に酸化発色型色原体と反応して色素を生成し、生成した色素を測定することにより、測定することができる。また、化学発光物質を含有する過酸化水素測定用試薬を用いる場合には、過酸化水素は、化学発光物質と反応してフォトンを生じ、生じたフォトンを測定することにより、測定することができる。
【００８０】
酸化発色型色原体としては、例えばロイコ型色原体、酸化カップリング発色型色原体等が挙げられる。ロイコ型色原体は、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の存在下、単独で色素へ変換される物質である。具体的には、テトラメチルベンジジン、ｏ−フェニレンジアミン、１０−Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＣＣＡＰ）、１０−Ｎ−メチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＭＣＤＰ）、Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン ナトリウム塩（ＤＡ−６４）、１０−Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン ナトリウム塩（ＤＡ−６７）、４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン、ビス〔３−ビス（４−クロロフェニル）メチル−４−ジメチルアミノフェニル〕アミン（ＢＣＭＡ）等が挙げられる。
【００８１】
酸化カップリング発色型色原体は、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の存在下、２つの化合物が酸化的カップリングして色素を生成する物質である。２つの化合物の組み合わせとしては、カプラーとアニリン類との組み合わせ、カプラーとフェノール類との組み合わせ等が挙げられる。
【００８２】
カプラーとしては、例えば４−アミノアンチピリン（４−ＡＡ）、３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン等が挙げられる。
【００８３】
アニリン類としては、Ｎ−（３−スルホプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン（ＴＯＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン（ＭＡＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン（ＤＡＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン（ＴＯＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−メチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジ（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−メトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−サクシニルエチレンジアミン（ＥＭＳＥ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−アセチルエチレンジアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−４−フルオロ−３，５−ジメトキシアニリン（Ｆ−ＤＡＯＳ）、Ｎ−［２−（サクシニルアミノ）エチル］−２−メトキシ−５−メチルアニリン（ＭＡＳＥ）、Ｎ−エチル−Ｎ−［２−（サクシニルアミノ）エチル］−２−メトキシ−５−メチルアニリン（Ｅｔ−ＭＡＳＥ）等が挙げられる。
【００８４】
フェノール類としては、フェノール、４−クロロフェノール、３−メチルフェノール、３−ヒドロキシ−２，４，６−トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ）等が挙げられる。
【００８５】
過酸化水素の測定において、過酸化活性物質の濃度は、測定に適した濃度であれば特に制限はないが、過酸化活性物質としてペルオキシダーゼを用いる場合は、１〜１００ｋＵ／Ｌが好ましい。また、酸化発色型色原体の濃度は、過酸化水素の測定に適した濃度であれば特に制限はないが、０．０１〜１０ｇ／Ｌが好ましい。
【００８６】
還元型補酵素の測定方法としては、例えば生成した還元型補酵素の吸光度を測定する方法、還元型補酵素測定用試薬を用いる方法等が挙げられる。還元型補酵素の吸光度を測定する方法における吸光度としては、３００〜５００ｎｍが好ましく、３３０〜４００ｎｍがより好ましく、３４０ｎｍ付近が特に好ましい。還元型補酵素測定用試薬は、生成した還元型補酵素を検出可能な物質へ変換するための試薬である。検出可能な物質としては、例えば色素等が挙げられる。検出可能な物質が色素の場合の還元型補酵素測定用試薬としては、例えばジアホラーゼ、電子キャリアー及び還元発色型色原体を含有する試薬が挙げられる。電子キャリアーとしては、例えば１−メトキシ−５−メチルフェナジウムメチルサルフェート等が挙げられる。還元型補酵素測定用試薬として、ジアホラーゼ、電子キャリアー及び還元発色型色原体を含有する試薬を用いる場合には、還元発色型色原体が変換されて生成した色素を定量することにより、還元型補酵素を定量することができる。
【００８７】
還元発色型色原体としては、例えば３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム ブロミド（ＭＴＴ）、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム モノナトリウム塩（ＷＳＴ−１）、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム モノナトリウム塩（ＷＳＴ−３）等が挙げられる。
【００８８】
（ＬＤＬ−Ｃ測定用試薬）
本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用試薬は、本発明のＬＤＬ−Ｃ測定方法に用いることができ、保存、流通及び使用適したキットの形態を取ることができる。本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用キットとしては、例えば２試薬系のキット、３試薬系のキット等が挙げられるが、第一試薬と第二試薬とからなる２試薬系のキットが好ましい。
【００８９】
本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用試薬及び測定用キットは、凍結乾燥された状態でも、水性媒体に溶解された状態でもよい。凍結乾燥された状態の試薬又はキットを用いて検体中のＬＤＬ−Ｃを測定する場合には、当該試薬は水性媒体に溶解して使用される。該水性媒体としては、例えば前述の水性媒体等が挙げられる。
【００９０】
本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用試薬及び測定用キットにおいては、前述のコレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素、酸化型補酵素、コレステロール脱水素酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、ＰＯＥアルケニルエーテル、ＰＯＥ分岐アルキルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテル、第四級アンモニウム塩、第三級アミン、第二級アミン、第一級アミン、ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、還元型補酵素測定用試薬を用いることができる。
【００９１】
第一試薬と第二試薬とからなる２試薬系のＬＤＬ−Ｃ測定用キットにおいては、コレステロールエステル加水分解酵素は、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を用いるＬＤＬ−Ｃ測定に用いられる２試薬系のＬＤＬ−Ｃ測定用キットにおいては、コレステロール酸化酵素は第一試薬に含有されず、第二試薬に含有される。また、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素及び酸化型補酵素を用いるＬＤＬ−Ｃ測定に用いられる２試薬系のＬＤＬ−Ｃ測定用キットにおいては、コレステロール脱水素酵素は第一試薬に含有されず、第二試薬に含有され、酸化型補酵素は第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
【００９２】
ＰＯＥ・ＰＯＡアリールエーテルは、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有されてもよいが、第二試薬に含有される態様が好ましい。
界面活性剤bは、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
【００９３】
第四級アンモニウム塩は、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
第三級アミンは、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
第二級アミンは、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
第一級アミンは、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
ポリアニオンは第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有される。
【００９４】
過酸化水素測定用試薬は、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有されてもよいが、当該試薬が酸化カップリング型色原体を含有する場合には、酸化カップリング型色原体の２つの化合物、すなわち、カプラーとアニリン類、又は、カプラーとフェノール類はそれぞれ別々の試薬に含有される態様が好ましい。還元性補酵素測定用試薬は、第一試薬、第二試薬のいずれか又は両方に含有されてもよいが、第一試薬、第二試薬の両方に含有されることが好ましい。
【００９５】
本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用試薬及び測定用キットには、必要に応じて、水性媒体、安定化剤、防腐剤、影響物質消去剤、反応促進剤等が含有されてもよい。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体等が挙げられる。安定化剤としては、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、シュークロース、塩化カルシウム等が挙げられる。防腐剤としては、例えばアジ化ナトリウム、抗生物質等が挙げられる。影響物質消去剤としては、例えばアスコルビン酸の影響を消去するためのアスコルビン酸オキシダーゼ等が挙げられる。反応促進剤としては、例えばコリパーゼ、ホスホリパーゼ等の酵素、硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム等の塩類等が挙げられる。
【００９６】
以下に、本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用試薬の具体的態様を記すが、本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用試薬はこれらに限定されない。
・試薬１
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有する試薬。
・試薬２
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
【００９７】
・試薬３
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有する試薬。
・試薬４
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
【００９８】
・試薬５
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素及びコレステロール酸化酵素を含有する試薬。
・試薬６
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素及び過酸化水素測定用試薬を含有する試薬。
【００９９】
・試薬７
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有する試薬。
・試薬８
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素、コレステロール脱水素酵素及び還元型補酵素測定用試薬を含有する試薬。
【０１００】
・試薬９
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有する試薬。
・試薬１０
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素、コレステロール脱水素酵素及び還元型補酵素測定用試薬を含有する試薬。
【０１０１】
・試薬１１
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素及びコレステロール脱水素酵素を含有する試薬。
・試薬１２
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素、酸化型補酵素、コレステロール脱水素酵素及び還元型補酵素測定用試薬を含有する試薬。
【０１０２】
以下に、本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用キットの具体的態様を記すが、本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用キットはこれらに限定されない。
・キット１
第一試薬
ポリアニオン
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット２
第一試薬
ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット３
第一試薬
ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０３】
・キット４
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット５
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット６
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０４】
・キット７
第一試薬
ポリアニオン
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット８
第一試薬
ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット９
第一試薬
ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０５】
・キット１０
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット１１
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット１２
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０６】
・キット１３
第一試薬
ポリアニオン
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット１４
第一試薬
ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット１５
第一試薬
ポリアニオン、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０７】
・キット１６
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット１７
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット１８
第一試薬
ポリアニオン、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０８】
・キット１９
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット２０
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット２１
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１０９】
・キット２２
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット２３
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット２４
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１０】
・キット２５
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット２６
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット２７
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１１】
・キット２８
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット２９
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット３０
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１２】
・キット３１
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット３２
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット３３
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１３】
・キット３４
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット３５
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット３６
第一試薬
ポリアニオン、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１４】
・キット３７
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット３８
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット３９
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１５】
・キット４０
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット４１
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット４２
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１６】
・キット４３
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b2
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット４４
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b2、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット４５
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b2、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１７】
・キット４６
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b2、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット４７
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b2、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット４８
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b2、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１８】
・キット４９
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット５０
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロール酸化酵素
・キット５１
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１１９】
・キット５２
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、過酸化水素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
・キット５３
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロール酸化酵素
・キット５４
第一試薬
ポリアニオン、界面活性剤b、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、過酸化水素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール酸化酵素
【０１２０】
・キット５５
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット５６
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット５７
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２１】
・キット５８
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット５９
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット６０
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２２】
・キット６１
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット６２
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット６３
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２３】
・キット６４
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット６５
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット６６
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２４】
・キット６７
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット６８
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット６９
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２５】
・キット７０
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット７１
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット７２
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤b2、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２６】
・キット７３
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット７４
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット７５
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２７】
・キット７６
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット７７
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット７８
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２８】
・キット７９
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット８０
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット８１
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１２９】
・キット８２
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット８３
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット８４
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３０】
・キット８５
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット８６
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット８７
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３１】
・キット８８
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット８９
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット９０
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b2、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３２】
・キット９１
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット９２
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット９３
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３３】
・キット９４
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット９５
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット９６
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３４】
・キット９７
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b2
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット９８
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b2、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット９９
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b2、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３５】
・キット１００
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b2、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット１０１
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b2、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット１０２
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b2、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３６】
・キット１０３
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット１０４
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロール脱水素酵素
・キット１０５
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３７】
・キット１０６
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、還元型補酵素測定用試薬
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
・キット１０７
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロール脱水素酵素
・キット１０８
第一試薬
ポリアニオン、酸化型補酵素、界面活性剤b、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素
第二試薬
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、界面活性剤b、界面活性剤c、還元型補酵素測定用試薬、コレステロールエステル加水分解酵素、コレステロール脱水素酵素
【０１３８】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を何ら限定するものではない。尚、本実施例及び比較例においては、下記メーカーの試薬、酵素及び界面活性剤を使用した。
【０１３９】
試薬
ＭＯＰＳ（同仁化学研究所社製）
ＤＯＳＥ（ダイトーケミックス社製）
硫酸ナトリウム（関東化学社製）
デキストラン硫酸ナトリウム（分子量５０万）（アマシャム社製）
リンタングステン酸（ナカライテスク社製）
４−アミノアンチピリン（埼京化成社製）
【０１４０】
酵素
ペルオキシダーゼ（東洋紡績社製）
ＣＨＯ−ＣＥ（コレステロール酸化酵素；キッコーマン社製）
ＬＰＬ−３１１（コレステロールエステル加水分解酵素；東洋紡績社製）
【０１４１】
界面活性剤
ナイミーンＳ−２２０（ポリオキシエチレンオクタデシルアミン；日油社製）
ナイミーンＬ−２０７（ポリオキシエチレンドデシルアミン；日油社製）
エチレンジアミンＥＯ４０ＰＯ４０（エチレンジアミンポリオキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物；日油社製）
【０１４２】
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル
エマルゲンＬ４０（花王社製）
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ（日油社製）
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０（日油社製）
ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物
プルロニックＬ１２１（旭電化社製）
アクロネセスＢ２０８（日油社製）
ＰＯＥアルケニルエーテル
ＢＬＡＵＮＯＮ  ＥＮ−１５４０（青木油脂社製）
ＢＬＡＵＮＯＮ  ＥＮ−１５３０（青木油脂社製）
ノニオンＥ−２３０（日油社製）
ＰＯＥ分岐アルキルエーテル
ノニオンＯＤ２３５（日油社製）
ＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテル
ＰＥＮ−４６２０（日光ケミカルズ社製）
ＰＥＮ−４６３０（日光ケミカルズ社製）
【０１４３】
四級アンモニウム塩
ｎ−オクチルトリメチルアンモニウムクロリド（東京化成工業社製）
デシルトリメチルアンモニウムブロミド（東京化成工業社製）
塩化ラウリルトリメチルアンモニウム（ナカライテスク社製）
トリメチルテトラデシルアンモニウムクロリド（東京化成工業社製）
塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム（ナカライテスク社製）
トリメチルステアリルアンモニウムクロリド（東京化成工業社製）
ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロリド水和物（東京化成工業社製）
ベンジルセチルジメチルアンモニウムクロリド水和物（東京化成工業社製）
ベンジルジメチルステアリルアンモニウムクロリド水和物（東京化成工業社製）
カチオンＢＢ（日油社製）
カチオンＭ２−１００（日油社製）
モリミン１０Ｂ（モーリン化学社製）
モリミン１２Ｂ（モーリン化学社製）
第三級アミン
三級アミンＢＢ（日油社製）
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｎーデシルアミン（東京化成工業社製）
第一級アミン
アミンＢＢ（日油社製）
アミンＰＢ（日油社製）
アミンＭＢ（日油社製）
【実施例】
【０１４４】
［実施例１］
以下の第一試薬（試薬Ａ）及び第二試薬（試薬ａ）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＡａ１〜Ａａ１６）を調製した。
第一試薬（試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ａ１〜ａ１６）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
エマルゲンＬ４０                            ７  ｇ／Ｌ  
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
界面活性剤c  ［第１表にその種類（化合物名又は製品名）と濃度を示す］【０１４５】
［比較例１］
以下の第一試薬（試薬Ａ）及び第二試薬（試薬ａ０）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＡａ０）を調製した。
第一試薬（試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ａ０）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
エマルゲンＬ４０                            ７  ｇ／Ｌ  
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１４６】
［実施例２］
実施例１及び比較例１の各キットを用いて、ヒト血清３０検体中のＬＤＬ−Ｃを以下の手順により測定した。
（１）検量線の作成
標準液として、生理食塩水（ＬＤＬ−Ｃ濃度：０．０ｍｇ／ｄＬ）及び血清（ＬＤＬ−Ｃ濃度：１４０ｍｇ／ｄＬ）を、実施例１及び比較例１の各キットを用いて、それぞれ日立７１７０Ｓ形自動分析装置により、ＬＤＬ−Ｃ濃度と「吸光度」との間の関係を示す検量線を作成した。
ここでの「吸光度」とは、以下の反応で測定された２つの吸光度（Ｅ１及びＥ２）を基に、Ｅ２からＥ１を差し引くことにより得られた値を表す。
反応セルへ標準液（３μＬ）と第一試薬（０．１５ｍＬ）とを添加し３７℃で５分間加温し、反応液の吸光度（Ｅ１）を主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍで測定し、次いで、この反応液に第二試薬（０．０５ｍＬ）を添加しさらに３７℃で５分間加温し、反応液の吸光度（Ｅ２）を主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍで測定した。【０１４７】
（２）ヒト血清検体と実施例１及び比較例１の各キットとの反応による当該検体における「吸光度」の測定
（１）の検量線の作成において用いた標準液の代わりにヒト血清検体を用いる以外は（１）の「吸光度」の算出方法と同様の方法により、当該検体に対する「吸光度」を測定した。【０１４８】
（３）ヒト血清検体中のＬＤＬ−Ｃ濃度の決定
（２）で測定出した「吸光度」と、（１）で作成した検量線とから、各検体中のＬＤＬ−Ｃ濃度を決定した。【０１４９】
次いで、キットとして市販のＬＤＬ−Ｃ測定用キットであるデタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃ（協和メデックス社製）を用いて、検体として同じヒト血清３０検体を用いて、上記と同様の手順により、それぞれの検体中のＬＤＬ−Ｃを測定した。
実施例１及び比較例１の各キットを用いた測定と、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃキットとを用いた測定との間の相関係数を第１表に示す。【０１５０】
［実施例３］
本発明のＬＤＬ−Ｃ測定用キットが高ＴＧ血清に適用できるか否かを検討した。正常血清および高ＴＧ血清（ＴＧ  １０００ｍｇ／ｄＬ以上）から超遠心法を用いて比重１．００６から１．０６３に存在するＬＤＬを分取した。分取したＬＤＬを、コレステロール量が１００ｍｇ／ｄＬになるように調節し、実施例１及び比較例１の各キットを用いて、実施例２と同様の方法により測定した。更に、以下の式（Ｉ）【０１５１】
【数１】
2010055916.tif 000002
【０１５２】
を用いて、ＬＤＬ−Ｃ測定値における高ＴＧ血清の正常血清に対する測定値比を算出した。ここで、測定値比が１に近い程、高ＴＧ血清中のＬＤＬ−Ｃが正確に測定できることを意味する。測定値比を第１表に記す。【０１５３】
【表１】
2010055916.tif 000003
【０１５４】
第１表より、四級アンモニウム塩、第三級アミン又は第一級アミンを含有するキット（キットＡａ１〜Ａａ１６）を用いた測定においては、界面活性剤cを含有しないキット（キットＡａ０）を用いた測定に比較して、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、より良い相関関係が認められることが判明した。【０１５５】
更に、四級アンモニウム塩、第三級アミン又は第一級アミンを含有するキット（キットＡａ１〜Ａａ１６）を用いた測定においては、界面活性剤cを含有しないキット（キットＡａ０）を用いた測定に比較して、測定値比が高く、しかも、より１に近いことが判明した。従って、本発明のキットを用いることにより、高ＴＧ検体においても、ＬＤＬ−Ｃを正確に測定できることが判明した。【０１５６】
［比較例２］
以下の第一試薬（試薬Ａ）及び第二試薬（試薬ｂ１〜ｂ３）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（Ａｂ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｂ１〜ｂ３）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
エマルゲンＬ４０                            ７  ｇ／Ｌ  
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
界面活性剤  （第２表にその種類と濃度を示す）【０１５７】
［比較例３］
キットとして、比較例２のＡｂ１〜Ａｂ３それぞれのキットを用いて、検体として、実施例２で使用した検体と同じヒト血清３０検体を用いて、実施例２と同様の方法により、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との相関係数を算出した。その結果を第２表に示す。【０１５８】
【表２】
2010055916.tif 000004
【０１５９】
第２表より、第四級アンモニウム塩、第三級アミン又は第一級アミンを含有するキット（キットＡａ１〜Ａａ１６）を用いた測定においては、含窒素ポリオキシエチレン系界面活性剤を含有する比較例２のキット（キットＡｂ１〜Ａｂ３）を用いた測定に比較して、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、より良い相関関係が認められることが判明した。【０１６０】
［実施例４］
以下の第一試薬（試薬Ｂ）及び第二試薬（試薬ａ３）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＢａ３）を調製した。
第一試薬（試薬Ｂ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
リンタングステン酸                          ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ａ３）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
エマルゲンＬ４０                            ７  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
塩化ラウリルトリメチルアンモニウム          ０．０６  ｇ／Ｌ【０１６１】
［比較例４］
以下の第一試薬（試薬Ｃ）及び第二試薬（試薬ａ３）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＣａ３）を調製した。
第一試薬（試薬Ｃ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ａ３）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
エマルゲンＬ４０                            ７  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
塩化ラウリルトリメチルアンモニウム          ０．０６  ｇ／Ｌ【０１６２】
［実施例５］
キットとして、実施例１のＡａ３、実施例４のＢａ３、比較例４のＣａ３のキットを用いて、検体として、実施例２で使用した検体と同じヒト血清３０検体を用いて、実施例２と同様の方法により、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との相関係数を算出した。その結果を第３表に示す。【０１６３】
【表３】
2010055916.tif 000005
【０１６４】
第３表より、ポリアニオンを含有するキット（キットＡａ３、Ｂａ３）を用いた測定においては、ポリアニオンを含有しない比較例４のキット（キットＣａ３）を用いた測定に比較して、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、より良い相関関係が認められることが判明した。【０１６５】
［実施例６］
以下の第一試薬（試薬Ａ）及び第二試薬（試薬ｃ１、ｄ１、ｄ２、ｅ１、ｅ２）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（Ａｃ１、Ａｄ１、Ａｄ２、Ａｅ１、Ａｅ２）を調製した。
第一試薬（試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｃ１、ｄ１、ｄ２、ｅ１、ｅ２）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
界面活性剤  （第４表にその種類と濃度を示す）【０１６６】
［比較例５］
以下の第一試薬（試薬Ａ）及び第二試薬（試薬ｆ１、ｆ２、ｇ１、ｇ２）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（Ａｆ１、Ａｆ２、Ａｇ１、Ａｇ２）を調製した。
第一試薬（試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｆ１、ｆ２、ｇ１、ｇ２）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
界面活性剤  （第４表にその種類と濃度を示す）【０１６７】
［実施例７］
キットとして、実施例６のキット（キットＡｃ１、Ａｄ１、Ａｄ２、Ａｅ１、Ａｅ２）、比較例５のキット（キットＡｆ１、Ａｆ２、Ａｇ１、Ａｇ２）の各キットを用いて、検体として、実施例２で使用した検体と同じヒト血清３０検体を用いて、実施例２と同様の方法により、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との相関係数を算出した。その結果を第４表に示す。【０１６８】
【表４】
2010055916.tif 000006
【０１６９】
第４表より、実施例６のキット（キットＡｃ１、Ａｄ１、Ａｄ２、Ａｅ１、Ａｅ２）を用いた測定においては、界面活性剤bを含まない比較例５のキット（キットＡｆ１、Ａｆ２）、及び、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテルを含まない比較例５のキット（キットＡｇ１、Ａｇ２）を用いた測定に比較して、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、より良い相関関係が認められることが判明した。【０１７０】
［実施例８］
以下の第一試薬（試薬Ｄ）及び第二試薬（試薬ｈ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＤｈ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｄ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ＰＥＮ−４６２０                            ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｈ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ８  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．０  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７１】
［実施例９］
以下の第一試薬（試薬Ｅ）及び第二試薬（試薬ｈ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＥｈ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｅ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ＰＥＮ−４６３０                            ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｈ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ８  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．０  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７２】
［実施例１０］
以下の第一試薬（試薬Ｆ）及び第二試薬（試薬ｉ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＦｉ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｆ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ＢＬＡＵＮＯＮ  ＥＮ−１５３０              ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｉ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ５  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７３】
［実施例１１］
以下の第一試薬（試薬Ｆ）及び第二試薬（試薬ｊ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＦｊ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｆ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ＢＬＡＵＮＯＮ  ＥＮ−１５３０              ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｊ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ                    ９  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７４】
［実施例１２］
以下の第一試薬（試薬Ｇ）及び第二試薬（試薬ｉ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＧｉ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｇ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ノニオンＥ−２３０                          ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｉ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ５  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７５】
［実施例１３］
以下の第一試薬（試薬Ｇ）及び第二試薬（試薬ｊ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＧｊ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｇ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ノニオンＥ−２３０                          ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｊ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ                    ９  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７６】
［実施例１４］
以下の第一試薬（試薬Ｈ）及び第二試薬（試薬ｉ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＨｉ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｈ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ノニオンＯＤ２３０                          ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｉ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ５  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７７】
［実施例１５］
以下の第一試薬（試薬Ｈ）及び第二試薬（試薬ｊ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＨｊ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｈ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ノニオンＯＤ２３０                          ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｊ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ                    ９  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７８】
［実施例１６］
以下の第一試薬（試薬Ｈ）及び第二試薬（試薬ｋ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＨｋ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｈ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ノニオンＯＤ２３０                          ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｋ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ                    ９  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ５  ｇ／Ｌ
トリメチルデシルアンモニウムクロリド        ０．５  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１７９】
［実施例１７］
以下の第一試薬（試薬Ｉ）及び第二試薬（試薬ｌ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＩｌ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｉ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
アクロネセスＢ２０８                        １．３  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ３１１                                ０．４  ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｌ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ５  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．１  ｇ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ【０１８０】
［実施例１８］
以下の第一試薬（試薬Ｊ）及び第二試薬（試薬ｍ１）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＪｍ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｊ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
アクロネセスＢ２０８                        １  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｍ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ７  ｇ／Ｌ  
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
カチオンＢＢ                                ０．２  ｇ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
ＬＰＬ３１１                                １．２  ｋＵ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ【０１８１】
［実施例１９］
キットとして、実施例８〜１８記載の各キットを用いて、検体として、実施例２で使用した検体と同じヒト血清３０検体を用いて、実施例２と同様の方法により測定を行い、各検体中のＬＤＬ−Ｃの濃度を決定した。同様に、同じ検体について、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いて測定を行い、各検体中のＬＤＬ−Ｃの濃度を決定した。次いで、実施例８〜１８の各キットを用いた測定と、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間の相関係数を算出した。その結果を第５表に示す。【０１８２】
【表５】
2010055916.tif 000007
【０１８３】
第５表より、第一試薬にＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物、ＰＯＥアルケニルエーテル、ＰＯＥ分岐アルキルエーテル又はＰＯＥ・ＰＯＡ分岐アルキルエーテルを含有するキットにおいても、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、非常によい相関関係が認められることが判明した。【０１８４】
［実施例２０］
以下の第一試薬（試薬Ｋ）及び第二試薬（試薬ｎ１〜ｎ４）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＫｎ１〜Ｋｎ４）を調製した。
第一試薬（試薬Ｋ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  １．０  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
アクロネセスＢ２０８                        １  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
ＬＰＬ３１１                                ０．４  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｎ１〜ｎ４）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ−４０              ７  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ
界面活性剤c（第６表にその種類と濃度を示す）【０１８５】
［実施例２１］
以下の第一試薬（試薬Ｌ）及び第二試薬（試薬ｏ１〜ｏ５）からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＬｏ１〜Ｌｏ５）を調製した。
第一試薬（試薬Ｌ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ６．５）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．７５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｏ１〜５）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
アクロネセスＫＰ１８９Ｒ                    １３  ｇ／Ｌ
プルロニックＬ１２１                        ７  ｇ／Ｌ
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                ２．０  ｋＵ／Ｌ
界面活性剤c（第６表にその種類と濃度を示す）【０１８６】
［実施例２２］
キットとして、実施例２０及び実施例２１の各キットを用いて、検体として、実施例２で使用した検体と同じヒト血清３０検体を用いて、実施例２と同様の方法により測定を行い、各検体中のＬＤＬ−Ｃの濃度を決定した。同様に、同じ検体について、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いて測定を行い、各検体中のＬＤＬ−Ｃの濃度を決定した。次いで、実施例２０及び２１の各キットを用いた測定と、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間の相関係数を算出した。その結果を第６表に示す。【０１８７】
【表６】
2010055916.tif 000008
【０１８８】
第６表より、ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＡ縮合物及び界面活性剤cを含有するキットにおいても、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、非常によい相関関係が認められることが判明した。【０１８９】
［実施例２３］
以下の第一試薬及び第二試薬からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＭｐ１、Ａｑ１、Ｍｒ１）を調製した。
第一試薬（試薬Ｍ又は試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
界面活性剤b2  （第７表にその種類と濃度を示す）
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｐ１、ｑ１、ｒ１）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル  （第７表にその種類と濃度を示す）
界面活性剤b1  （第７表にその種類と濃度を示す）
界面活性剤b2  （第７表にその種類と濃度を示す）
界面活性剤c   （第７表にその種類と濃度を示す）
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１９０】
［比較例６］
以下の第一試薬及び第二試薬からなるＬＤＬ−Ｃ測定用キット（キットＭｐ０、Ａｑ０、Ｍｒ０）を調製した。
第一試薬（試薬Ｍ又は試薬Ａ）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
デキストラン硫酸ナトリウム                  ０．５  ｇ／Ｌ
硫酸ナトリウム                              ２  ｇ／Ｌ
ＤＯＳＥ                                    ０．３  ｇ／Ｌ
界面活性剤b2  （第７表にその種類と濃度を示す）
ペルオキシダーゼ                            １０  ｋＵ／Ｌ
第二試薬（試薬ｐ０、ｑ０、ｒ０）
ＭＯＰＳ（ｐＨ７．０）                      ２０  ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                      ０．５  ｇ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                            ２０  ｋＵ／Ｌ
ＰＯＥ・ＰＯＡアルキルアリールエーテル  （第７表にその種類と濃度を示す）
界面活性剤b1  （第７表にその種類と濃度を示す）
界面活性剤b2  （第７表にその種類と濃度を示す）
ＬＰＬ−３１１                              １．５  ｋＵ／Ｌ
ＣＨＯ−ＣＥ                                １．０  ｋＵ／Ｌ【０１９１】
［実施例２４］
キットとして、実施例２３のキット（キットＭｐ１、Ａｑ１、Ｍｒ１）、及び、比較例６のキット（キットＭｐ０、Ａｑ０、Ｍｒ０）の各キットを用いて、検体として、ヒト血清３０検体（実施例２で使用した検体とは異なる検体）を用いて、実施例２と同様の方法により、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との相関係数を算出した。その結果を第７表に示す。【０１９２】
【表７】
2010055916.tif 000009
【０１９３】
第７表より、実施例２３のキット（キットＭｐ１、Ａｑ１、Ｍｒ１）を用いた測定においては、界面活性剤cを含まない比較例６のキット（キットＭｐ０、Ａｑ０、Ｍｒ０）を用いた測定に比較して、デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃを用いた測定との間に、より良い相関関係が認められることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【０１９４】
本発明により、メタボリックシンドロームや動脈硬化等の診断に有用なＬＤＬ−Ｃの測定方法、測定用試薬及び測定用キットが提供される。
【国際調査報告】
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2010055916.tif 000011
2010055916.tif 000012
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