(57)【要約】【課題】  本発明は，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される細胞障害を抑制したＮＳＡＩＤｓ含有外用剤や当該外用剤を製造するための製造方法を提供することを目的とする。【解決手段】  本発明は，２糖類の一例であるトレハロースと非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）とが分子間化合物を形成することで，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制することができるという知見に基づくものである。２糖類としては，トレハロース以外のものを用いてもよい。【選択図】図７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）と２糖類との分子間化合物を含み，これにより，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制する外用剤。
【請求項２】
前記分子間化合物は，
前記ＮＳＡＩＤｓと前記２糖類とを含む混合溶液を乾燥させて得られたものである，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項３】
前記２糖類は，トレハロースであり，
前記分子間化合物は，
前記ＮＳＡＩＤｓと前記トレハロースとを１０：１〜１：５０の重量比で含む，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項４】
前記ＮＳＡＩＤｓは，酸性ＮＳＡＩＤｓである，請求項１に記載の外用剤。
【請求項５】
前記ＮＳＡＩＤｓは，
インドメタシン，イブプロフェン，アスピリン，ジクロフェナクナトリウム，メフェナム酸，ピロキシカム，ロキソプロフェン，ケトプロフェン，フルルビブロフェン，サリチル酸グリコール，グリチルレチン酸，ロキソニン，スプロフェン，ブフェキサマク，ウフェナマート，ジメチルイソプロピルアズレン，５−アミノサルチル酸及びナプロキセンのいずれか１つ又は２つ以上を含む，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項６】
前記ＮＳＡＩＤｓは，フェルビナクである，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項７】
油脂性基剤をさらに含む，請求項１に記載の外用剤。
【請求項８】
共溶媒をさらに含む，請求項１に記載の外用剤。
【請求項９】
局所麻酔剤をさらに含む，請求項１に記載の外用剤。
【請求項１０】
リドカイン，テトラカイン，プロカイン，ジブカイン，ベンゾカイン，ブピバカイン，メピバカイン，アミノ安息香酸エチル，パラブチルアミノ安息香酸ジエチルアミノエチル，メプリルカイン，オキシポリエトキシドデカン，ロートエキス，又はその塩のいずれかの１種又は２種以上をさらに含む，請求項１に記載の外用剤。
【請求項１１】
前記ＮＳＡＩＤｓは，インドメタシンであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ８０〜９５℃と２６０〜２７０℃に存在する，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１２】
前記ＮＳＡＩＤｓは，イブプロフェンであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第３のピークと第４のピークの頂点が，それぞれ１７５〜１９０℃と１３０〜１４５℃に存在する，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１３】
前記ＮＳＡＩＤｓは，アスピリンであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ１１０〜１２０℃と１３５〜１４５℃に存在する，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１４】
前記ＮＳＡＩＤｓは，ジクロフェナクナトリウムであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ９０〜１００℃と１３０〜１４５℃に存在する，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１５】
前記ＮＳＡＩＤｓは，メフェナム酸であり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ２２５〜２３５℃と９０〜１１０℃に存在し，さらに，１８０〜１９０℃及び２５０〜２６５℃にもピークが存在する，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１６】
前記ＮＳＡＩＤｓは，ピロキシカムであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，９０〜１０５℃と１９５〜２０５℃に存在し，前記１９５〜２０５℃における第２のピークは，１９０〜２２０℃におけるメインピークである，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１７】
前記ＮＳＡＩＤｓは，５−アミノサルチル酸であり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が２０７〜２１５℃にピークが存在し，９５〜１０５℃にピークが存在しない曲線である，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１８】
前記ＮＳＡＩＤｓは，ケトプロフェンであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が９０〜９５℃及び２３０〜２３５℃にピークが存在し，１８０〜２２０℃にピークが存在しない曲線である，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項１９】
前記ＮＳＡＩＤｓは，ナプロキセンであり，
前記分子間化合物は，
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が９０〜９５℃及び２３４〜２３７℃にピークが存在し，２２５〜２３３℃にピークが存在しない曲線である，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項２０】
前記２糖類は，マルトースである，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項２１】
前記２糖類は，トレハロース，マルトース，ショ糖，及びラクトースから選択された１つ以上を含む，
請求項１に記載の外用剤。
【請求項２２】
非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）と２糖類とを含む混合溶液を調製する工程と，
前記混合溶液を乾燥させる工程と，
を含み，
前記乾燥させる工程は，乾燥させた混合溶液と基剤とを混合する工程を含み，
これにより，前記ＮＳＡＩＤｓと前記２糖類とが分子間化合物を形成することでＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制することが可能な外用剤を製造する，
外用剤の製造方法。
【請求項２３】
非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）と２糖類とを含む混合溶液を調製する工程と，
前記混合溶液を乾燥させる工程と，
乾燥させた前記混合溶液と，基剤と，共溶媒とを混合する工程と，
を含み，
これにより，前記混合溶液の乾燥により得られる分子間化合物と，前記共溶媒と，前記基剤との混合物である外用剤を製造する，
外用剤の製造方法。
【請求項２４】
前記２糖類は，トレハロース，マルトース，ショ糖，及びラクトースから選択された１つ以上を含む，
請求項２３又は請求項２４に記載の外用剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）と２糖類との分子間化合物を含む外用剤及び当該外用剤の製造方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来，ＮＳＡＩＤｓは，消炎鎮痛作用を有する外用剤として広く使用されている。しかし，ＮＳＡＩＤｓは，副作用として細胞障害を誘発する。そのため，ＮＳＡＩＤｓを含む外用剤は，皮膚障害を惹起するという問題がある。【０００３】
特開平８−２０８４５９号公報（特許文献１）には，トレハロース及びトレハロース誘導体を配合した経皮投与用テープ剤が開示されている。そして，同公報には，テープ剤に含まれる薬剤の例としてＮＳＡＩＤｓが記載されている。そして，テープ剤がＮＳＡＩＤｓを含む場合，そのＮＳＡＩＤｓによって皮膚障害が発生する可能性がある。なお，同公報におけるトレハロースは，テープ剤の基剤によるカブレを防止するために用いられているにすぎない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−２０８４５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚障害作用を効果的に抑制できる外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は，２糖類（例えば，トレハロース）とＮＳＡＩＤｓとが分子間化合物を形成することで，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚障害作用を効果的に抑制できるという知見に基づくものである。【０００７】
本発明の第１の側面は，非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）と２糖類との分子間化合物を含み，これにより，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制することができる外用剤に関する。後述する実施例に示されたとおり，ＮＳＡＩＤｓと２糖類とが分子間化合物を形成すると，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚への障害が効果的に抑制される。よって，本発明の外用剤は，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制する作用を有する外用剤として好適に用いることができる。もっとも，本発明の外用剤は，ＮＳＡＩＤｓによる消炎鎮痛作用をも有するものである。【０００８】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，分子間化合物がＮＳＡＩＤｓと２糖類とを含む混合溶液を乾燥させて得られたものである。後述する実施例に示されたとおり，本発明のＮＳＡＩＤｓとトレハロースを共溶解した混合溶液を乾燥させることで，分子間化合物を得ることができる。そして，このようにして得られた分子間化合物を含むことで，効果的にＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚細胞への障害が抑制される。ここで，２糖類としては，トレハロース，マルトース，ショ糖，及びラクトースから選択された１つ以上を用いることが可能である。【０００９】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，上記２糖類がトレハロースであり，分子間化合物は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとを１０：１〜１：５０の重量比で含む。後述する実施例で示されたとおり，このような重量比であれば，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間化合物を形成する。そして，このような分子間化合物を含む外用剤は，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚障害を効果的に抑制することができる。【００１０】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓが酸性ＮＳＡＩＤｓのものである。さらに，本発明のＮＳＡＩＤｓは，酸性ＮＳＡＩＤｓとして，インドメタシン，イブプロフェン，アスピリン，ジクロフェナクナトリウム，メフェナム酸，ピロキシカム，フェルビナク，ロキソプロフェン，ケトプロフェン，フルルビブロフェン，サリチル酸グリコール，グリチルレチン酸，ロキソニン，スプロフェン，ブフェキサマク，ウフェナマート，５−アミノサルチル酸及びナプロキセンのいずれか１つ又は２つ以上を含むことが好ましい。後述する実施例で示されたとおり，酸性ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物を含む外用剤を用いることで，効果的にＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚障害を抑制することができる。【００１１】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，油脂性基剤をさらに含む外用剤である。すなわち，この態様は，ＮＳＡＩＤｓと２糖類との分子間化合物を含む疎水性軟膏に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＮＳＡＩＤｓによる細胞障害を抑制する効果は，疎水性軟膏を含む場合に著しく高まった。よって，本発明の外用剤は，油脂性基剤を含むものが好ましい。【００１２】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，共溶媒をさらに含む。後述するように，共溶媒は，ＮＳＡＩＤｓと２糖類との分子間化合物を安定化する。よって，外用剤が共溶媒をさらに含むことで，上記分子間化合物を含む外用剤は，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制する作用を有する外用剤として好適に用いることができる。【００１３】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，局所麻酔剤をさらに含む外用剤である。局所麻酔剤の例は，リドカイン，テトラカイン，プロカイン，ジブカイン，ベンゾカイン，ブピバカイン，メピバカイン，アミノ安息香酸エチル，パラブチルアミノ安息香酸ジエチルアミノエチル，メプリルカイン，オキシポリエトキシドデカン，ロートエキス，又はその塩のいずれかの１種又は２種以上である。【００１４】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓがインドメタシンである。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ８０〜９５℃と２６０〜２７０℃に存在するものであることが好ましい。【００１５】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，イブプロフェンである。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第３のピークと第４のピークの頂点が，それぞれ１７５〜１９０℃と１３０〜１４５℃に存在するものであることが好ましい。なお，分子間化合物の第１のピーク及び第２のピークは，それぞれ９５〜１０５℃及び７０〜８０℃の領域に存在するものが好ましい。さらに，分子間化合物のＤＳＣ曲線が，１１０〜１３０℃の領域及び２００〜２１０℃の領域にピークが存在しないものが好ましい。【００１６】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，アスピリンである。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ１１０〜１２０℃と１３５〜１４５℃に存在するものであることが好ましい。【００１７】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，ジクロフェナクナトリウムである。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ９０〜１００℃と１３０〜１４５℃に存在するものであることが好ましい。【００１８】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，メフェナム酸である。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，それぞれ２２５〜２３５℃と９０〜１１０℃に存在する。さらに，分子間化合物は，１８０〜１９０℃及び２５０〜２６５℃にもピークが存在する。さらに，第１のピーク及び第２のピークの頂点の絶対値（ＤＳＣ測定値）は，ＤＳＣによる測定で得られた前記メフェナム酸のＤＳＣ曲線の９０〜１１０℃及び２２５〜２３５℃に存在するピークの頂点の絶対値よりも大きいものであることが好ましい。【００１９】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，ピロキシカムである。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線の第１のピークと第２のピークの頂点が，９０〜１０５℃と１９５〜２０５℃に存在する。１９５〜２０５℃における第２のピークは，１９０〜２２０℃におけるメインピーク（その領域における最も強度の強いピーク）である。さらに，第１のピーク及び第２のピークの頂点の絶対値は，ＤＳＣによる測定で得られたピロキシカムのＤＳＣ曲線の９０〜１０５℃及び１９５〜２０５℃に存在するピークの頂点の絶対値よりも小さいものであることが好ましい。【００２０】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，５−アミノサルチル酸である。この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が２０７〜２１５℃にピークが存在し，９５〜１０５℃にピークが存在しない曲線である。【００２１】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，ケトプロフェンである。そして，この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が９０〜９５℃及び２３０〜２３５℃にピークが存在し，１８０〜２２０℃にピークが存在しない曲線である。【００２２】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓは，ナプロキセンである。そして，この態様では，分子間化合物は，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が９０〜９５℃及び２３４〜２３７℃にピークが存在し，２２５〜２３３℃にピークが存在しない曲線である。【００２３】
本発明の第２の側面は，非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）とトレハロースとを含む混合溶液を調製する工程と，混合溶液を乾燥させる工程とを含む，外用剤の製造方法である。そして，混合溶液を乾燥させる工程は，乾燥させた混合溶液と基剤とを混合する工程を含む。後述する実施例で示されたとおり，このような製造方法を用いることで，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間相互作用して分子間化合物を形成し，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制する外用剤を製造することができる。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の外用剤は，２糖類とＮＳＡＩＤｓとの分子間化合物を含むので，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される皮膚障害を抑制したＮＳＡＩＤｓ含有外用剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は，トレハロース単独，インドメタシン単独，インドメタシン・トレハロース混合，あるいはインドメタシン・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図２】図２は，トレハロース単独，イブプロフェン単独，イブプロフェン・トレハロース混合，あるいはイブプロフェン・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図３】図３は，トレハロース単独，アスピリン単独，アスピリン・トレハロース混合，あるいはアスピリン・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図４】図４は，トレハロース単独，ジクロフェナク単独，ジクロフェナクナトリウム・トレハロース混合，あるいはジクロフェナクナトリウム・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図５】図５は，トレハロース単独，ピロキシカム単独，ピロキシカム・トレハロース混合，あるいはピロキシカム・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図６】図６は，トレハロース単独，メフェナム酸単独，メフェナム酸・トレハロース混合，あるいはメフェナム酸・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図７】図７は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースの分子間化合物を含む軟膏製剤が，ＮＳＡＩＤｓによって誘発される細胞障害を抑制することを示す図面に替わるグラフである。
【図８】図８は，本発明の実施例３における対照実験の細胞毒性試験結果を示す，図面に替わるグラフである。
【図９】図９は，実施例３において，外用剤に含ませるＮＳＡＩＤｓとして，インドメタシンを用いたときの細胞毒性試験結果を示す，図面に替わるグラフである。
【図１０】図１０は，実施例３において，外用剤に含ませるＮＳＡＩＤｓとして，ジクロフェナクを用いたときの細胞毒性試験結果を示す，図面に替わるグラフである。
【図１１】図１１は，実施例３において，外用剤に含ませるＮＳＡＩＤｓとして，イブプロフェンを用いたときの細胞毒性試験結果を示す，図面に替わるグラフである。
【図１２】図１２は，実施例３において，外用剤に含ませるＮＳＡＩＤｓとして，ピロキシカムを用いたときの細胞毒性試験結果を示す，図面に替わるグラフである。
【図１３】図１３は，実施例３において，外用剤に含ませるＮＳＡＩＤｓとして，フェルビナクを用いたときの細胞毒性試験結果を示す，図面に替わるグラフである。
【図１４】図１４は，本発明の実施例４において，マルトースを用いてＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成したときの細胞毒性試験結果を，他の結果とともに示す，図面に替わるグラフである。
【図１５】図１５は，トレハロース単独，５−ＡＳＡ単独，５−ＡＳＡ・トレハロース混合，あるいは５−ＡＳＡ・トレハロース凍結乾燥のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図１６】図１６は，トレハロース単独，ケトプロフェン単独，ケトプロフェン・トレハロース混合，あるいはケトプロフェン・トレハロース凍結乾燥物のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図１７】図１７は，トレハロース単独，ナプロキセン単独，ナプロキセン・トレハロース混合，あるいはナプロキセン・トレハロース凍結乾燥物のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。
【図１８】図１８は，アスピリン単独，トレハロース，アスピリン及びトレハロースの混合物，及びアスピリン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。
【図１９】図１９は，５−ＡＳＡ単独，トレハロース，５−ＡＳＡ及びトレハロースの混合物，及び５−ＡＳＡ及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。
【図２０】図２０は，ジクロフェナク単独，トレハロース，ジクロフェナク及びトレハロースの混合物，及びジクロフェナク及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２０（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２０（ｂ）は，図２０（ａ）の部分拡大図２０である。
【図２１】図２１は，インドメタシン単独，トレハロース，インドメタシン及びトレハロースの混合物，及びインドメタシン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２１（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２１（ｂ）は，図２１（ａ）の部分拡大図２１である。
【図２２】図２２は，イブプロフェン単独，トレハロース，イブプロフェン及びトレハロースの混合物，及びイブプロフェン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２２（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２２（ｂ）は，図２２（ａ）の部分拡大図２２である。
【図２３】図２３は，ケトプロフェン単独，トレハロース，ケトプロフェン及びトレハロースの混合物，及びケトプロフェン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２３（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２３（ｂ）は，図２３（ａ）の部分拡大図２３である。
【図２４】図２４は，ナプロキセン単独，トレハロース，ナプロキセン及びトレハロースの混合物，及びナプロキセン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２４（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２４（ｂ）は，図２４（ａ）の部分拡大図２４である。
【図２５】図２５は，ピロキシカム単独，トレハロース，ピロキシカム及びトレハロースの混合物，及びピロキシカム及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２５（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２５（ｂ）は，図２５（ａ）の部分拡大図２５である。
【図２６】図２６は，メフェナム酸単独，トレハロース，メフェナム酸及びトレハロースの混合物，及びメフェナム酸及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図２６（ａ）は，６５０〜４０００ｃｍ−１の領域におけるスペクトルである。図２６（ｂ）は，図２６（ａ）の部分拡大図２６である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明の第１の側面は，非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）とトレハロースとの分子間化合物（本発明による化合物）を含み，これにより，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制することができる外用剤に関する。すなわち，本発明の外用剤は，ＮＳＡＩＤｓの有する鎮痛消炎作用を発揮しつつ，ＮＳＡＩＤｓが誘発する皮膚障害を抑制することができる。
【００２７】
本発明において，ＮＳＡＩＤｓは特に限定されず，公知のＮＳＡＩＤｓを用いることができる。ＮＳＡＩＤｓの例は，酸性ＮＳＡＩＤｓと塩基性ＮＳＡＩＤｓである。酸性ＮＳＡＩＤｓには，カルボン酸系ＮＳＡＩＤｓとエノール酸系ＮＳＡＩＤｓがある。カルボン酸系ＮＳＡＩＤｓの例は，アスピリン及びサリチル酸ナトリウムのサリチル酸系ＮＳＡＩＤｓ，インドメタシン及びエトドラクのアリール酢酸系ＮＳＡＩＤｓ，イブプロフェン，ナプロキセン，ケトプロフェン及びロキソプロフェンのプロピオン酸系ＮＳＡＩＤｓ，メフェナム酸及びトルフェナム酸のフェナム酸系ＮＳＡＩＤｓ，ジクロフェナクナトリウム及びフェルビナクのフェニル酢酸系ＮＳＡＩＤｓである。エノール酸系の例は，ケトフェニルブタゾン，及びクロフェゾンのピラゾロン系ＮＳＡＩＤｓ，ピロキシカム，ロルノキシカム，テノキシカム，メロキシカム及びアンピロキシカムのオキシカム系ＮＳＡＩＤｓである。塩基性ＮＳＡＩＤｓの例は，エピリゾール，チアラミド，及びエルモファゾンである。また，ＮＳＡＩＤｓの例としては，酸性のものや塩基性のものとは別のＮＳＡＩＤｓ，すなわち，その他に分類されるＮＳＡＩＤｓを用いることも可能である。その他に分類されるＮＳＡＩＤｓとしては，ジメチルイソプロピルアズレンを挙げることができる。本発明の外用剤は，酸性ＮＳＡＩＤｓ，塩基性ＮＳＡＩＤｓ，及びその他に分類されるＮＳＡＩＤｓのいずれをも使用することができる。本発明のＮＳＡＩＤｓは，好ましくは，酸性ＮＳＡＩＤｓである。後述する実施例で示されたとおり，本発明の外用剤は，酸性ＮＳＡＩＤｓを含むため，効果的に細胞障害を抑制することができる。本発明の分子間化合物は，１種または２種以上のＮＳＡＩＤｓを含んでもよい。酸性ＮＳＡＩＤｓの中では，インドメタシン，イブプロフェン，アスピリン，ジクロフェナクナトリウム，メフェナム酸，ピロキシカム，フェルビナク，ロキソプロフェン，ケトプロフェン，フルルビブロフェン，サリチル酸グリコール，グリチルレチン酸，ロキソニン，スプロフェン，ブフェキサマク及びウフェナマートのいずれか１つ又は２つ以上を含むことが好ましい。ＮＳＡＩＤｓを２種以上の含む場合は，同分類（例えば，サリチル酸系ＮＳＡＩＤｓ同士）のものを２種以上含んでもよいし，他分類（例えば，サリチル酸系ＮＳＡＩＤｓとアリール酢酸系ＮＳＡＩＤｓ）のものを２種以上含んでもよい。このようなＮＳＡＩＤｓは公知の方法で作製してもよいし，市販のものを適宜利用してもよい。
【００２８】
ＮＳＡＩＤｓは，化合物単体であってもよいし，化合物の塩，化合物の溶媒和物（水和物など）であってもよい。
【００２９】
本発明において，トレハロースとは，２分子のＤ−グルコースが結合した二糖である。トレハロースには，互いに結合様式が相違するα，α体（α−Ｄ−グルコピラノシル＝α−Ｄ−グルコミラノシド（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ  α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ），α，β（β−Ｄ−グルコピラノシル＝α−Ｄ−グルコピラノシド（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ  α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ））体及びβ，β体（β−Ｄ−グルコピラノシル＝β−Ｄ−グルノピラノシド（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｙｌ  β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ））とよばれる３種類の異性体が存在する。本発明においては，これらの異性体の１又は複数が全体として有効量含まれてさえいれば，その調製方法，純度及び性状は問わない。トレハロースは，市販のものを適宜利用することができる。
【００３０】
本明細書において，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとからなる化合物のほか，他の物質がさらに加わった化合物であってもよい。また，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物は，塩，水和物，又は溶媒和物であってもよい。ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの混合物と，分子間化合物とを区別する方法の例は，ＤＳＣ（示差走査熱量測定）法，ＦＴＩＲ（フーリエ変換赤外分光）法，ＸＰＳ（Ｘ線光電子分光分析）法，及びＮＭＲ（核磁気共鳴）法である。分子間化合物は，２以上の物質が分子間相互作用により結合した化合物を意味する。分子間相互作用とは，２以上の分子同士が結合力を介して相互作用することをいう。このような分子間相互作用の例は，イオン結合，錯体結合，疎水結合，水素結合，及びファンデルワールス結合である。ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間化合物を形成していることは，公知の方法を用いて調べることができる。
【００３１】
本発明において，外用剤に含まれるＮＳＡＩＤｓの量は，外用剤の全量を１００重量部としたときに，０．０１〜１０重量部があげられる。外用剤に含まれるＮＳＡＩＤｓの量は，当業者であれば，用いるＮＳＡＤＩｓの種類，外用剤の用途及び外用剤の剤形に応じて適宜決定することができる。外用剤に含まれるトレハロースの量は，外用剤の全量を１００重量部したときに，０．００１〜５０重量部があげられる。
【００３２】
本発明の外用剤において，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースの混合比は，１０：１〜１：５０があげられる。ＮＳＡＩＤｓの割合が多すぎると，分子間化合物が十分に形成されなくなるので好ましくない。一方，トレハロースの割合が多すぎると，ＮＳＡＩＤｓの薬理効果が弱くなるので好ましくない。よって，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースの混合比は，５：１〜１：４５が好ましく，２：１〜１：４０がより好ましく，１：１〜１：３０がさらに好ましい。
【００３３】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，本発明の外用剤は，さらに共溶媒を含む。本発明において，外用剤に含ませる共溶媒の量は，外用剤の全量を１００重量部としたときに，１〜５０重量部であればよい。本発明において，共溶媒は，親水性及び油脂性の両方の性質をもつ溶媒である。本発明のＮＳＡＩＤｓは油脂性を示すものが多い。それに対して，トレハロースは親水性である。このようにＮＳＡＩＤｓとトレハロースとは異なる性質を有するため，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとを含む外用剤は，製剤中又は製剤後に，両化合物の間で形成されている分子間相互作用が消滅する場合がある。この結果，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとは，分子間化合物ではなく，それぞれ個別の化合物となる。このように，本発明の外用剤において，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物は，必ずしも製剤中及び製剤後に安定であるとはいえない。そこで，外用剤中に，ＮＳＡＩＤｓ及びトレハロースの両方と親和性が高い共溶媒が含まれると，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの間の分子間相互作用を安定に保つことができる。よって，本発明の外用剤に共溶媒を含むことで，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間相互作用した分子間化合物が製剤中及び製剤後に外用剤中に安定して存在することができる。よって，本発明の外用剤が共溶媒を含むことで，トレハロースによるＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害抑制作用が効果的に得らえる。
【００３４】
本発明の外用剤において，共溶媒の例は，アルコール系溶媒，エーテル系溶媒，グリセリン，プロピレングリコール，及びそれらの混合物である。アルコール系溶媒の例は，メタノール，エタノ−ル，イソプロパノール，液状フェノール，及びベンジルアルコールである。エーテル系溶媒の例は，テトラヒドロフラン，及びジオキサンである。本発明において，好ましい共溶媒は，アルコール系溶媒であり，さらに好ましくはエタノール，又は液状フェノールである。アルコール系溶媒は細胞膜透過性が高い。本発明の外用剤が，細胞膜透過性の高いアルコール系溶媒を含むことで，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物の細胞膜透過性もあがる。このように，本発明の外用剤は共溶媒としてアルコール系溶媒を含むことで，ＮＳＡＩＤｓの細胞膜透過性があがるので，細胞内におけるＮＳＡＩＤｓの薬理効果を高めることができる。そして，アルコール系溶媒の中でも，エタノール及び液状フェノールは細胞障害作用が小さい。よって，本発明の外用剤は，共溶媒としてエタノール又は液状フェノールを用いることで，共溶媒による細胞障害を抑えつつ，効果的にＮＳＡＩＤｓの薬理効果を得ることもできる。
【００３５】
本発明の第１の側面の好ましい態様は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物として，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとを含む混合溶液を乾燥させて得られたものを用いるものである。後述する実施例で示されたとおり，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースを共溶解した後に乾燥させて得られた分子間化合物を含むことで，外用剤は細胞障害を好適に抑制することができる。
【００３６】
本発明の外用剤は，外用剤用基剤を含んでもよい。外用剤用基剤の例は，油脂性基剤（疎水性基材），親水性基剤，及び懸濁性基剤である。
【００３７】
本発明の油脂性基剤の例は，脂肪酸エステル，芳香族カルボン酸エステル，リン酸エステル，高級脂肪酸トリグリセライド，界面活性剤，テルペン類，ワセリン，流動パラフィン，プラスチベース，シリコン，天然ゴム，合成ゴム，樹脂，ラノリン，ミツロウ，サラシミツロウ，カカオ脂，ラウリン脂，単軟膏及びウイテプゾールである。油脂性基剤は，一種又は二種以上を混合して使用できる。本発明の分子間化合物は，油脂性基剤と直接混合することもできるが，溶解補助剤を用いて油脂性基剤中に均一に分散させてもよい。
【００３８】
本発明において，油脂性基剤として使用する脂肪酸エステルは，そのアルコール成分が一価又は多価アルコールであり，脂肪酸成分が一価又は多価脂肪酸であり，これらのアルコール及び脂肪酸は，不飽和結合を有してもよい。脂肪酸エステルの例は，ステアリン酸メチル，ステアリン酸ステアリル，ソルビタンモノステアレート，ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート，ステアリン酸モノグリセライド，パルミチン酸モノグリセライド，オレイン酸モノグリセライド，及びセバシン酸ジオクチルである。芳香族カルボン酸エステルの例は，フタル酸ジステアリル，フタル酸ジオクチル，フタル酸ジデシル，フタル酸ジシクロヘキシル，フタル酸ジフェニル，及びフタル酸ジベヘニルである。リン酸エステルの例は，ラウリルリン酸，ステアリルリン酸，及びリン酸トリオレイル，リン酸トリデシルである。高級脂肪酸トリグリセライドの例は，植物性油脂や動物性油脂である。植物性油脂の例は，ホホバ油，オリーブ油，ひまし油，ハッカ油，及びサフラワー油である。動物性油脂の例は，牛脂脂肪酸トリグリセライド，豚脂，及びスクワランである。
【００３９】
本発明の親水性基剤の例は，親水軟膏，バニシングクリーム，親水ワセリン，精製ラノリン，吸水軟膏，加水ラノリン，親水プラスチベース，コールドクリーム，及びマクロゴール類（ポリエチレングリコール）軟膏，グリセリン，及び流動パラフィンである。懸濁性基剤の例は，無脂肪性軟膏及びＦＡＰＧ基剤である。
【００４０】
本発明の外用剤は，薬学的に許容される担体又は媒体をさらに含んでもよい。本発明の外用剤に含まれる薬学的に許容される担体又は媒体の例は，安定化剤，抗酸化剤，保存剤，乳化剤，及び基剤である。安定化剤の例は，アルブミン，ゼラチン，ソルビトール，マンニトール，乳糖，ショ糖，マルトース，及びグルコースである。抗酸化剤の例は，亜硫酸ナトリウム，アスコルビン酸，トコフェノール，塩酸システイン，チオグリコール酸，及びカテコールである。保存剤の例は，フェノール性物質，安息香酸，ソルビン酸，ホウ砂，チメロサール，及び塩化ベンザルコニウムである。乳化剤の例は，オレイン酸カルシウム，ラウリル硫酸ナトリウム，ポリソルベート，アラビアゴム，アルギン酸ナトリウム，ペクチン，及びセネガサポニンである。なお，本発明の外用剤に含まれる薬学的に許容される担体又は媒体は，当業者であれば，公知の薬学的に許容される担体又は媒体から適宜選択して利用することができる。
【００４１】
本発明の外用剤は，さらに局所麻酔剤を含んでもよい。「局所麻酔剤」は，従来医療用局所麻酔剤として使用されているものであれば特に限定はされない。局所麻酔剤の例は，リドカイン，テトラカイン，プロカイン，ジブカイン，ベンゾカイン，ブピバカイン，メピバカイン，アミノ安息香酸エチル，パラブチルアミノ安息香酸ジエチルアミノエチル，メプリルカイン，オキシポリエトキシドデカン，ロートエキスおよびこれらの塩であり，これらより１種または２種以上を選択して使用することが好ましい。これら局所麻酔剤のうち，リドカイン，テトラカイン，プロカイン，ジブカイン，ベンゾカイン，ブピバカイン，メピバカイン，又はその塩が好ましく，リドカインが特に好ましい。局所麻酔剤を構成する化合物の塩として，塩酸塩，炭酸塩，又は硫酸塩があげられる。
【００４２】
また，使用される「局所麻酔剤」は，アミノ基，カルボニル基などの陽イオン基を有するものが好ましい。陽イオン基とＮＳＡＩＤｓのカルボキシル基がイオン結合することによって，それぞれのイオン基部分を疎水性部分により被覆して薬物動態を改善し，皮膚刺激性が改善されると考えられるからである。たとえば，アミノ安息香酸エチルは，カルボニル基及び１級アミノ基を有し，テトラカインは，カルボニル基及び１級・３級アミノ基を有し，プロカインは，カルボニル基及び１級・３級アミノ基を有し，リドカインは，カルボニル基及び２級・３級アミノ基を有し，メピバカインは，カルボニル基及び２級・３級アミノ基を有し，ブピバカインは，カルボニル基及び２級・３級アミノ基を有する。このため，ＮＳＡＩＤｓと相互作用し皮膚刺激性が改善されると考えられる。
【００４３】
本発明の分子間化合物と局所麻酔剤の配合割合は，特に制限されないが，本発明の分子間化合物１重量部に対する局所麻酔剤の割合を０．１〜１．５重量部とするのが好ましい。同様に，両者のモル比も特に制限されないが，本発明の分子間化合物に対する局所麻酔剤のモル比が０．１〜１．８となる様に配合するのが好ましい。
【００４４】
本発明の第２の側面は，非ステロイド系消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）とトレハロースとが分子間相互作用して分子間化合物を形成し，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制する外用剤の製造方法に関する。本発明の製造方法は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとを含む混合溶液を調製する工程（ステップ１）と；混合溶液を乾燥させる工程（ステップ２）と；乾燥させる工程で乾燥させた分子間化合物と基剤とを混合する工程（ステップ３）とを含む。通常，外用剤を製造する場合，外用剤に含ませる物質は，そのまま外用剤用の基剤に加えて混合される。しかし，この通常の方法では，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間化合物を形成しない。そのため，通常の方法で製造された外用剤では，ＮＳＡＩＤｓによって細胞障害が引き起こされる可能性がある。一方，本発明の製造方法は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースを共溶解して混合溶液をつくり，その混合溶液を乾燥させる工程をあえて含む。後述する実施例に示されたとおり，本発明の製造方法で製造した分子間化合物は，トレハロースがＮＳＡＩＤｓと分子間化合物を形成する。トレハロースがＮＳＡＩＤｓと分子間化合物を形成することで，ＮＳＡＩＤｓによる細胞障害作用は抑制される。よって，本発明の製造方法を用いれば，ＮＳＡＩＤｓ誘発性細胞障害が効果的に抑制される外用剤を製造することができる。
【００４５】
本発明において，混合溶液を調製する工程（ステップ１）は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースを共溶解した混合溶液を調製する工程である。ＮＳＡＩＤｓ及びトレハロースを共溶解させる溶液としては，水，蒸留水，イオン交換水，ミリＱ（ＭｉｌｉＱ）水，生理食塩水など製剤に用いられる公知の溶液を用いることができる。混合溶液は，あらかじめ別々に溶解させたトレハロース溶液とＮＳＡＩＤｓ溶液を混合して調製してもよいし，トレハロース又はＮＳＡＩＤｓの一方を溶解させた溶液に，粉末状の他方を混合・溶解させて調製してもよく，溶液に粉末状のトレハロース及びＮＳＡＩＤｓを加え混合・溶解させて調製させてもよい。また，溶けにくいＮＳＡＩＤｓを溶解させるために，エタノールなどで一度溶解した後，共溶解させる溶液に混合させてもよい。本工程において，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースを共溶解させる溶液の量は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースが溶解できる量であれば特に限定されない。共溶解させる溶液の具体的な量は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースの全量に対して１倍〜１００倍の量である。本工程において，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの混合は，攪拌混合，又は振とう混合で混合することができる。撹拌混合時の攪拌速度は０．５回転／分〜１００回転／分とすればよい。振とう混合時の振とう速度は５〜２００回／分とすればよい。当業者であれば，ＮＳＡＩＤｓ，トレハロース，及び共溶解させる溶液の量に応じて適宜攪拌速度又は振とう速度を設定することができる。本工程において混合溶液を調製するときの温度は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースが溶解できる温度であれば特に限定されない。具体的な温度は，５〜５０℃である。
【００４６】
本発明おいて，乾燥工程（ステップ２）は，共溶解した混合溶液を乾燥させて分子間化合物を得る工程である。本発明の乾燥工程の例は，凍結乾燥工程，流動層造粒乾燥工程，スプレードライ工程，又は乾燥粉砕造粒工程である。
【００４７】
［凍結乾燥工程］
本発明において，凍結乾燥工程は，減圧下で凍結状態の試料から水を昇華させる工程である。凍結乾燥工程は，以下の工程で行われる。（１）試料（混合溶液）を室温４℃，常圧下に２〜３時間置き，冷却する（冷却工程）。（２）室温−５０℃，常圧下に１２〜１５時間置き，凍結させる（凍結工程）。（３）室温−２０℃，常圧下に４〜６時間置き結晶化させる。（結晶化工程）。（４）室温−５０℃，常圧下に１４〜１６時間置き，再凍結させる（再凍結工程）。（５）室温−１３℃，圧力１０〜２０ｋＰａ下（高真空下）に２４〜２６時間置く（第１乾燥工程）。（６）室温２４℃，圧力１０〜２０ｋＰａ下（高真空下）に１０〜１２１時間置く（第２乾燥工程）。（７）室温２４℃，常圧下に置く。このように凍結乾燥法では，低温で凍結させ，高真空下で水分（氷）を昇華させて除いていく。本発明の凍結乾燥物は，上記の方法で製造できる。しかし，上記工程に限定されるものではなく，当業者であれば，適宜各工程の温度，圧力，時間などのパラメータに変更を加えることができる。
【００４８】
［流動層造粒乾燥工程］
本発明において，流動層造粒乾燥工程は，水分を含む試料に温風を当てて流動させながら，造粒乾燥する工程である。流動層造粒乾燥工程は，公知の流動層造粒乾燥機を用いて以下の工程で行われる。（１）試料（混合溶液）を撹拌しながら，温度５０〜１００℃，風速１〜２ｍ／ｓの温風を１０〜３０分あてる（略乾燥工程）。（２）試料に温度２０〜５０℃，風速２〜３ｍ／ｓの温風３０分〜１時間あてる（造粒工程）。（３）試料に温度５０〜１００℃，風速１〜２ｍ／ｓの温風を３０分〜２時間あてる（乾燥工程）。（４）試料に温度５〜２０℃，風速１〜２ｍ／ｓの冷風を１０〜６０分あてる（冷却工程）。このように流動造粒乾燥工程では，試料に温風をあて，試料を空中で流動させながら，乾燥させることで造粒していく。本発明の分子間化合物は，上記工程で製造することができる。しかし，上記工程に限定されるものではなく，当業者であれば，試料の水分量などに応じて，適宜各工程の温度，風速等のパラメータを変更することができる。
【００４９】
［スプレードライ工程］
本発明において，スプレードライ（噴霧乾燥）工程は，試料溶液を熱風とともに細い孔径のノズルから噴霧し，チャンバー内で微小な液滴とし，短時間で乾燥させる工程である。スプレードライ工程は，公知のスプレードライヤー（噴霧乾燥機）を用いて，以下の工程で行われる。（１）試料（混合溶液）を孔径０．５〜１ｍｍのノズルから，１００〜３００℃の熱風とともに，チャンバー内に，空気圧０．５〜２．５ｋｇ／ｍ２，流量２５〜５０Ｌ／ｍｉｎで噴霧する（噴霧工程）。（２）噴霧した試料に温度１５０〜３００℃，速度０．５〜１ｍ／ｓの熱風をあて，３０秒〜５分乾燥させる（乾燥工程）。このようにスプレードライ工程では，試料を高温チャンバー内にスプレーしてできた微小な液滴に熱風をあてることで，分子間化合物が造粒される。本発明の分子間化合物は，上記工程で製造することができる。しかし，本発明は，上記工程に限定されるものではなく，当業者であれば，適宜各工程の温度，時間等のパラメータを変更することができる。
【００５０】
［乾燥粉砕造粒工程］
本発明において，乾燥粉砕造粒工程は，水分を含む試料を乾燥させた後，粉砕することで造粒物を得る工程である。乾燥粉砕造粒工程は，以下の工程で行われる。（１）試料（混合溶液）に５０〜８０℃の温風をあてながら，撹拌速度１０〜１００回転／分で１〜５時間撹拌する（乾燥工程）。（２）乾燥した試料に５〜１５℃の冷風をあて，冷却させる（冷却工程）。（３）冷却させた試料を粉砕機で粉砕する（粉砕工程）。（４）粉砕した試料を所定サイズのふるい機でふるいにかける（ふるい工程）。このように乾燥粉砕造粒工程では，一度大きな塊として製造した試料を粉砕することで所望サイズの粒が製造される。本発明の分子間化合物は，上記工程で製造することができる。しかし，上記工程に限定されるものではなく，当業者であれば，適宜各工程の温度，時間等のパラメータを変更することができる。
【００５１】
なお，本発明の乾燥工程において，得られる分子間化合物の含水率（質量％）は０．０１〜５０％が好ましい。分子間化合物の含水率が高すぎると，製剤後，分子間化合物と基剤とが分離しやすくなる。そのため，本発明の分子間化合物の含水率は，３０％以下が好ましく，２０％以下がより好ましく，１０％以下がさらに好ましい。
【００５２】
本発明において，混合工程（ステップ３）は，乾燥工程で得られる分子間化合物と基剤とを混合する工程である。混合工程（ステップ３）では，まず基剤をその基剤の融点以上に加温して溶解させる。溶解後，基剤に，分子間化合物を加えて均一に混ざるまで撹拌する。なお，分子間化合物は，一度溶解した基剤を，その融点付近まで冷却した後に加えてもよい。本発明の混合工程において，基剤と分子間化合物とを撹拌するには，ニーダーなど公知の撹拌機を用いることができる。撹拌速度が速すぎると分子間化合物の分子間相互作用が壊れてしまう。そして，回転速度が遅すぎると，基剤と分子間化合物が均一に混ざりあうまでに時間がかかりすぎてしまう。そのため，本発明の混合工程における撹拌速度は，１〜１００回転／分があげられ，２〜５０回転／分が好ましく，５〜２０回転／分がより好ましい。なお，本発明の製造方法の混合工程において，基剤に加える分子間化合物は，分子間化合物の大きさが大きすぎると基剤と均一に混ざりにくい。
【００５３】
本発明の製造方法で使用する分子間化合物と基剤の混合比は，２：１〜１：１００があげられる。当業者であれば，分子間化合物と基剤の混合比は，乾燥させた分子間化合物中に含まれるＮＳＡＩＤｓの種類及び量に応じて適宜変更することができる。なお，本発明の製造方法では，分子間化合物及び基剤に薬学的に許容される担体又は媒体を加えてもよい。本発明の製造方法に用いられる薬学的に許容される担体又は媒体の例は，安定化剤，抗酸化剤，保存剤，及び乳化剤である。安定化剤の例は，アルブミン，ゼラチン，ソルビトール，マンニトール，乳糖，ショ糖，マルトース，及びグルコースである。抗酸化剤の例は，亜硫酸ナトリウム，アスコルビン酸，トコフェノール，塩酸システイン，チオグリコール酸，及びカテコールである。保存剤の例は，フェノール性物質，安息香酸，ソルビン酸，ホウ砂，チメロサール，及び塩化ベンザルコニウムである。乳化剤の例は，オレイン酸カルシウム，ラウリル硫酸ナトリウム，ポリソルベート，アラビアゴム，アルギン酸ナトリウム，ペクチン，及びセネガサポニンである。当業者であれば，上記薬学的に許容される担体又は媒体を適宜選択し，本発明の製造工程に適量を加えることができる。
【００５４】
本発明の外用剤の製造方法によれば，トレハロースがＮＳＡＩＤｓと分子間化合物を形成するので，ＮＳＡＩＤｓによる細胞障害が効果的に抑制される外用剤を製造することができる。なお，当業者であれば，ＮＳＡＩＤｓの種類や特性，外用剤の剤形や用途に応じて，適宜各工程のパラメータを変更することができる。
【００５５】
本発明は，混合溶液を調製する工程（ステップ１）において，混合溶液に共溶媒を含ませても良い。または，本発明は，分子間化合物と基剤とを混合する工程（ステップ３）において，分子間化合物と基剤に加えて共溶媒を含ませてもよい。
【００５６】
混合溶液を調製する工程（ステップ１）で共溶媒を添加する場合，共溶媒を添加した混合溶液の全量を１００重量部としたとき，共溶媒の量は，１〜５０重量部であればよい。
【００５７】
本発明は，混合溶液を調製する工程（ステップ１）において，混合溶液に共溶媒を含ませてもよい。本発明において，分子間化合物と基剤とを混合する工程（ステップ３）で，共溶媒を加える場合，添加する共溶媒の量は，外用剤全量を１００重量部とすると０．１〜１０重量部であればよい。なお，本発明において，製剤化した後に外用剤中に共溶媒が存在している方が，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースの分子間化合物を安定化するので好ましい。ステップ１で混合溶液に共溶媒を加えると，乾燥する工程（ステップ２）で共溶媒の一部が蒸発してしまう。そのため，共溶媒は，分子間化合物と基剤とを混合する工程（ステップ３）において加えられる方が好ましい。
【００５８】
本発明の外用剤の剤形の例は，油性軟膏剤，親水軟膏剤，坐剤，パップ剤，スプレー剤，ゲル剤，ローション剤，点眼剤，及びクリーム剤である。当業者であれば，公知の方法を用いて，使用方法に応じて，適宜所望の剤形で外用剤を製造することができる。
【００５９】
外用剤としてのパップ剤では，グリセリン，プロピレングリコール等の多価アルコール，ゼラチン等の天然高分子，カルボキシビニルポリマー等の合成高分子，ポリブデン等の粘着性付与剤，カオリン等の保形剤，その他防腐剤，ゲル化剤等を基剤成分として用いることが多いが，この発明でもこれらの公知の成分を用いることができ，また必要に応じて，本発明の分子間化合物以外の有効成分を添加することもできる。
【００６０】
この発明の外用剤を製造する方法は特に限定されない。例えば本発明の分子間化合物と親油性アミンを予め油性溶剤中に溶解してから，この油性溶液を外用剤の基剤中に添加することで外用剤を製造してもよく，また本発明の分子間化合物と親油性アミンと油性溶剤とをそれぞれ別個に基剤中に投入して，投入後本発明の分子間化合物が親油性アミンと共に油性溶剤に溶解させることで外用剤を製造してもよい。
【００６１】
あるいは，軟膏剤のような剤型の外用剤の場合には，熱時液化するが室温では固化して適度な粘稠度をもつ油性溶剤を用い，この油性溶剤中に温時，本発明の分子間化合物と親油性アミンを加えて溶解することにより，外用剤を製造してもよい。これにより，他の基剤成分を用いないで外用剤を製造することができる。
【００６２】
坐剤は，たとえば，特開２０００−２１２０６５号公報に開示された方法を用いて製造できる。この場合，坐剤に関する基剤および薬物は，特に限定されるものではなく，たとえばハードファット，カカオ脂，グリセロゼラチン，水素添加植物油，種々の分子量を持つポリエチレングリコール混合物，ポリエチレングリコール脂肪酸エステルなど安全性等を考慮してせいぞうすればよい。たとえば坐剤基剤を溶融し，これに薬物および必要な他の成分を均一に分散または溶解して，一定の温度条件下で坐剤の鋳型に充填し，室温付近で固化させることにより坐剤を製造することができる。
【００６３】
外用液剤の場合は，界面活性剤の使い方いかんによって乳液タイプのものから透明な可溶化タイプのものまで調製でき，エアゾール剤は基剤の組成成分を適宜選択することにより飛散型のものからムース型のものまで調製することができる。
【００６４】
軟膏剤の場合は，本発明の分子間化合物と親油性アミンを油性溶剤に溶解した油性溶液を，例えば他の油性基剤中に練り込むことによって油性軟膏とすることができるが，適当量の水を加え，かつ界面活性剤を巧妙に使えばＯ／Ｗ型あるいはＷ／Ｏ型の軟膏剤を調製することもできる。また，坐剤は軟膏剤の延長線上にあるものとして，基剤の硬さをやや硬めとし，その融点を体温によって溶解するように調節すればよい。
【００６５】
さらに，貼付剤としては，例えば本発明の分子間化合物の溶解した前記油性溶液を含水パップ剤の基剤と混練することによって，含水パップ剤を調製することができる。また，ゴム又はプラスチック系の基剤と混練することによってプラスター剤等を調製することができる。
【００６６】
本発明のＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間相互作用して形成される分子間化合物を含む外用剤は，ＮＳＡＩＤｓが有する抗炎症作用，鎮痛作用，及び解熱作用を有する。本発明のＮＳＡＩＤｓとトレハロースとが分子間相互作用して形成される分子間化合物を含む外用剤は，ＮＳＡＩＤｓによる細胞障害が抑制されるので，ＮＳＡＩＤｓが治療及び予防に有効な疾患の患者に，本発明の外用剤を有効量投与する治療方法又は予防方法として好適に利用することができる。すなわち，本発明は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物を含む外用剤を対象に投与する治療方法又は予防方法をも提供する。
【００６７】
また，本発明は，ＮＳＡＩＤｓ誘発性皮膚障害を抑制する外用剤を製造するための，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物の使用をも提供する。この使用においては，先に説明したすべての態様を組み合わせて用いることができる。
【００６８】
また，上述した説明では，ＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成する化合物として，トレハロースを例に挙げて説明した。しかし，本発明においては，トレハロースに代えて，マルトース，ショ糖，又はラクトースを用いて，ＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成してもよい。又は，トレハロース，マルトース，ショ糖，及びラクトースから成る２糖類の群から選択された２つ以上の２糖類を用いて，ＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成してもよい。なお，２糖類に限られることはなく，ＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成可能な化合物であればいかなるものであっても用いることができる。このように，分子間化合物を形成することにより，ＮＳＡＩＤｓによる皮膚障害作用の発生を抑制することができる。さらには，外用剤がマルトース，ショ糖，及びラクトースのいずれかを含む場合，外用剤の安定化剤としても機能させることができる。
【００６９】
以下，本発明の実施例について記載するが，本発明は実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００７０】
トレハロース・ＮＳＡＩＤｓの分子間相互作用の検討
１．被験物質
ＮＳＡＩＤｓとして，アスピリン，インドメタシン，イブプロフェン，ジクロフェナクナトリウムを使用した。アスピリン，インドメタシン，イブプロフェンは和光純薬工業株式会社から，ジクロフェナクナトリウムはカイマン（Ｃａｙｍａｎ）化学株式会社から購入した。トレハロースは株式会社林原生物化学研究所製，カルボキシメチルセルロース・ナトリウム（ＣＭＣ・Ｎａ）は第一工業製薬株式会社製のものを使用した。【００７１】
２．トレハロース・ＮＳＡＩＤｓ凍結乾燥物の調製
トレハロースは精製水（ミリＱグレード（ｍｉｌｌｉＱ水））にて３０％（ｗ／ｖ）溶液を調製した。各種ＮＳＡＩＤｓは，エチルアルコール（９９．５％）にて適量を溶解し，トレハロース溶液と望ましい比率にて混合し，十分に撹拌した後，凍結乾燥機（東京理化器機株式会社製，ＥＹＥＬＡ  凍結乾燥機，ＦＤＵ−１１００）を用いて４８時間以上乾燥させた。【００７２】
具体的には，以下の手順で行った。
（１）トレハロースをミリＱ（ｍｉｌｌｉＱ）水に溶解し，３０ｗ／ｖ％トレハロース溶液を作製した。
（２）１．０ｇＮＳＡＩＤｓを２．０ｍＬエチルアルコールに溶解した。
（３）必要量のトレハロース溶液を各ＮＳＡＩＤｓ溶解エチルアルコール溶液に添加した。インドメタシン及びイブプロフェンは，この段階で必要量のトレハロース溶液を全量加えると沈殿する。そのため，沈殿しない最大量のトレハロース溶液を添加したのち，１０〜２０分程度撹拌した。
（４）最終エチルアルコール濃度が１０％以下（より好ましくは５％以下）になるように，ｍｉｌｌｉＱ水を適量加えた。アスピリン及びジクロフェナクナトリウムは，沈殿がほぼ見られないので，この段階で１０〜２０分程度撹拌した。
（５）凍結乾燥機（東京理化器機株式会社製，ＥＹＥＬＡ  凍結乾燥機，ＦＤＵ−１１００）にかけ，４８時間以上乾燥させた。【００７３】
トレハロース・ＮＳＡＩＤｓの分子間相互作用の検討
ＮＳＡＩＤｓ（インドメタシン，イブプロフェン，アスピリン，ジクロフェナク，ピロキシカム，及びメフェナム酸）とトレハロースの分子間相互作用を検討するために示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）を用いて測定を行った。それぞれ，トレハロース単独，ＮＳＡＩＤｓ単独，トレハロースとＮＳＡＩＤｓの混合物，トレハロースとＮＳＡＩＤｓとの凍結乾燥物に対してＤＳＣを用いて測定を行った。トレハロースとＮＳＡＩＤｓの重量比は下記表５に示した。
【表１】
2011010456.tif 000003
【００７４】
ＤＳＣ測定結果を図１〜図６に示した。図１はインドメタシン，図２はイブプロフェン，図３はアスピリン，図４はジクロフェナク，図５はピロキシカム，図６はメフェナム酸のＤＳＣ結果を示す。図１〜図６中，「混合」はトレハロースとＮＳＡＩＤｓの混合品のＤＳＣ測定結果を示す。図１〜図６中，「凍結乾燥」はトレハロースとＮＳＡＩＤｓの凍結乾燥物のＤＳＣ測定結果を示す。図１〜図６中，縦軸は，トレハロース単独又はＮＳＡＩＤｓ単独ではそれぞれの単位モルあたりの熱流（Ｗ／ｍｏｌ）を示し，混合又は凍結乾燥はトレハロース量の単位モルあたりの熱流（Ｗ／ｍｏｌ）を示す。図１〜図６中，横軸は温度（セ氏温度）を示す。【００７５】
図１〜図６の結果，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースを混合しただけのピークは，ＮＳＡＩＤｓ単独及びトレハロース単独のピークを足し合わせたピークに近い。それに対し，凍結乾燥したものは，トレハロース由来の１２０℃のピークが消滅又は１２０℃より低温又は高温側にシフトしている。このことから，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースの間に相互作用があることが示された。【００７６】
さらに，図１に示した結果から，インドメタシンとトレハロースの混合物には，９８〜１０２℃に第１のピーク，１９０〜２１０℃に第２のピーク，及び１１５〜１２５℃に第３のピークが存在することが明らかになった。なお，第１のピークは，ＤＳＣ曲線において最も高いピーク（ＤＳＣ測定値の絶対値が大きいピーク）をさす。この混合物の結果は，トレハロース単独のＤＳＣ曲線のピークとほぼ一致する。それに対し，インドメタシンとトレハロースの凍結乾燥物では，８０〜９５℃に第１のピーク，及び２６０℃〜２７０℃（特に２６４℃〜２６６℃）に第２のピークが存在することが明らかになった。また，インドメタシンとトレハロースの凍結乾燥物は，２７０℃〜２８０℃にも第３のピークが観測された。さらに，インドメタシンとトレハロースの凍結乾燥物では，インドメタシンとトレハロースの混合物にみられる１９０〜２１０℃のトレハロース由来のピークが見られない。このように混合物と凍結乾燥物とでＤＳＣの結果が異なることから，インドメタシンとトレハロースを共溶解後，凍結乾燥することで，インドメタシンとトレハロースの分子間化合物が形成されたことが明らかになった。【００７７】
図２に示した結果から，イブプロフェンとトレハロースの混合物には，９８〜１０２℃に第１のピーク，７０〜８０℃に第２のピーク，１９０〜２１０℃に第３のピーク及び１１５〜１２５℃に第４のピークが存在することが明らかになった。この混合物の結果は，トレハロース単独及びイブプロフェン単独のＤＳＣ曲線のピークとほぼ一致する。それに対し，インドメタシンとトレハロースの凍結乾燥物には，９８〜１０２℃に第１のピーク，７０〜８０℃に第２のピーク，１７５〜１９０℃に第３ピーク，及び１３０〜１４５℃に第４のピークが存在することが明らかになった。インドメタシンとトレハロースの凍結乾燥物のＤＳＣ曲線のうち１７５〜１９０℃のピークと１３０〜１４５℃のピークは，イブプロフェンとトレハロースの混合物には存在しないことが明らかになった。このように混合物と凍結乾燥物とでＤＳＣの結果が異なることから，イブプロフェンとトレハロースを共溶解後，凍結乾燥することで，イブプロフェンとトレハロースの分子間化合物が形成されたことが明らかになった。【００７８】
図３に示した結果から，アスピリンとトレハロースの混合物には，１４５〜１５０℃に第１のピーク，及び９８〜１０２℃に第２のピークが存在することが明らかになった。それに対して，アスピリンとトレハロースの凍結乾燥物には，１１０〜１２０℃（特に１１８〜１１９℃）に第１のピーク，及び１３５〜１４５℃に第２のピークが存在することが明らかになった。アスピリンとトレハロースの凍結乾燥物には，９８〜１０２℃においてアスピリン由来のピークが見られない。さらに，アスピリンとトレハロースの凍結乾燥物には，１９０〜２２０℃におけるアスピリン由来のピークも見られない。一方，アスピリンとトレハロースの混合物には，１１０〜１２０℃において強度の強いピークは見られない。このように混合物と凍結乾燥物とでＤＳＣの結果が異なることから，アスピリンとトレハロースを共溶解後，凍結乾燥することで，アスピリンとトレハロースの分子間化合物が形成されたことが明らかになった。【００７９】
図４に示した結果から，ジクロフェナクナトリウムとトレハロースの混合物には，９５〜１１０℃に第１のピーク，及び１９０〜２２０℃に第２のピークが存在することが明らかになった。それに対して，ジクロフェナクナトリウムとトレハロースの凍結乾燥物には，９０〜１００℃に第１のピーク，及び１３５〜１４５℃に第２のピークが存在することが明らかになった。ジクロフェナクナトリウムとトレハロースの混合物には１３５〜１４５℃にピークが見られない。一方，ジクロフェナクナトリウムとトレハロースの凍結乾燥物には１９０〜２２０℃にピークが見られない。ジクロフェナクナトリウムとトレハロースの混合物には１１０〜１２０℃（特に１１９℃付近）にピークが見られるものの，ジクロフェナクナトリウムとトレハロースの凍結乾燥物には，１１０〜１２０℃にピークが見られない。このように混合物と凍結乾燥物とでＤＳＣの結果が異なることから，ジクロフェナクとトレハロースを共溶解後，凍結乾燥することで，ジクロフェナクとトレハロースの分子間化合物が形成されたことが明らかになった。【００８０】
図５に示した結果から，メフェナム酸とトレハロースの混合物には，９８〜１０２℃に第１のピーク，２２５〜２３５℃に第２のピーク，及び１９０〜２１０℃に第３のピークが存在することが明らかになった。また，メフェナム酸とトレハロースの混合物には，１１５〜１２５℃に第４のピークが存在する。それに対して，メフェナム酸とトレハロースの凍結乾燥物には，２２５〜２３５℃に第１のピーク，及び９０〜１１０℃に第２のピークが存在することが明らかになった。さらに，メフェナム酸とトレハロースの凍結乾燥物には，１８０〜１９０℃（１８５℃〜１８７℃）にもピークが存在した。さらに，メフェナム酸とトレハロースの凍結乾燥物には，２５０〜２６５℃（２５５℃〜２６０℃）にもピークが存在した。メフェナム酸とトレハロースの凍結乾燥物には，１１５〜１２５℃にピークがみられない。そして，凍結乾燥物の第１のピーク及び第２のピークの頂点の絶対値（ＤＳＣ測定値の絶対値）は，メフェナム酸単独のＤＳＣ曲線における２２５〜２３５℃及び９０〜１１０℃のピーク頂点の絶対値よりも大きい。このように混合物と凍結乾燥物とでＤＳＣの結果が異なり，さらにメフェナム酸単独と凍結乾燥物のＤＳＣの結果も異なることから，メフェナム酸とトレハロースを共溶解後，凍結乾燥することで，メフェナム酸とトレハロースの分子間化合物が形成されたことが明らかになった。【００８１】
図６に示した結果から，ピロキシカムとトレハロースの混合物には，９８〜１０２℃に第１のピーク，２２５〜２３５℃に第２のピーク，及び２０５〜２１５℃に第３のピークが存在することが明らかになった。ピロキシカムとトレハロースの混合物には，１２０〜１３０℃においてもピークが存在する。それに対して，ピロキシカムとトレハロースの凍結乾燥物には，９０〜１０５℃に第１のピーク，及び１９５〜２０５℃（特に１９８〜２００℃）に第２のピークが存在することが明らかになった。一方，ピロキシカムとトレハロースの凍結乾燥物には，２０５〜２１５℃にピークが存在しない。または，少なくとも，ピロキシカムとトレハロースの凍結乾燥物は，１９０〜２２０℃において，１９５〜２０５℃（特に１９８〜２００℃）に主なピークが存在する。
そして，凍結乾燥物の第１のピーク及び第２のピークの頂点の絶対値は，ピロキシカム単独のＤＳＣ曲線における９０〜１０５℃及び１９５〜２０５℃のピーク頂点の絶対値よりも大きい。このように混合物と凍結乾燥物とでＤＳＣの結果が異なり，さらにピロキシカム単独と凍結乾燥物のＤＳＣの結果も異なることから，ピロキシカムとトレハロースを共溶解後，凍結乾燥することで，ピロキシカムとトレハロースの分子間化合物が形成されたことが明らかになった。
【実施例２】
【００８２】
ＮＳＡＩＤｓ含有軟膏製剤の細胞生存率への影響
ＮＳＡＩＤｓ含有軟膏製剤の細胞生存率への影響について，ヒト皮膚再構築モデルであるテストスキン（ＴＥＳＴ  ＳＫＩＮ）（ＴＯＹＯＢＯ社製）を用いて検討した。表２に示したＮＳＡＩＤｓとトレハロースを含む分子間化合物製剤は，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースを含む混合溶液を凍結乾燥させることで得られた。各ＮＳＡＩＤｓ含有軟膏剤は，各ＮＳＡＩＤｓが下記表２の右側に示した最終濃度（ｗ／ｖ％）となるように，各分子間化合物製剤と親水軟膏とを混合することで得られた。シリコンリングでシーリングしたテストスキン表面に各ＮＳＡＩＤｓ含有軟膏剤１００ｍｇを塗布した。その後，テストスキンを３７℃インキュベータ内で２０時間培養した。組織を傷つけないように，表面に塗布した軟膏を洗浄した。ＭＴＴ溶解アッセイ培地でさらに３時間培養後，ＭＴＴ発色を確認し，培養皮膚をパンチで切断した。切断した組織片を０．０４Ｍの塩酸−イソプロピルアルコール（ＨＣｌ−ＩＰＡ）溶液３００μＬに浸漬し，室温，遮光下にて青色ホルマザンを１６時間抽出した。抽出溶液を分光光度計にて測定した。５７０ｎｍの吸光度より細胞の生存率を算出した。その結果を図７に示した。図７において，符号ｔｒｅはトレハロースを示し，ｉｎｄｏはインドメタシンを示し，（ｌｙｏ）は凍結乾燥を示し，ｄｉｃはジクロフェナクを示し，ｉｂｕはイブプロフェンを示し，ｐｉｒｏはピロキシカムを示し，ｆｅｌはフェルビナクを示す。また，図７における「コントロール」は，軟膏を添加せずに培養皮膚単体で２０時間培養し，その後，上記と同様の手順でＭＴＴアッセイを行った場合を示しており，対照実験に相当する。したがって，図７における「コントロール」は，細胞生存率１００％の基準となっている。
【表２】
2011010456.tif 000004
【００８３】
図７の結果，いずれのＮＳＡＩＤｓにおいても，ＮＳＡＩＤｓ単独投与に比べて，トレハロースと分子間相互作用させたものの方が細胞の生存率が高いことが明らかになった。よって，トレハロースとＮＳＡＩＤｓを分子間相互作用させることで，ＮＳＡＩＤｓによる細胞障害を抑制することができることが示された。
【実施例３】
【００８４】
培養皮膚でのＮＳＡＩＤｓの細胞毒性試験
ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの混合物と，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物との細胞毒性を検証する実験（細胞毒性試験）を行った。【００８５】
実施例３における細胞毒性試験の結果として得られる，実施例２と同様の細胞生存率を図８〜図１３に示す。各図中，Ｈｐｈｉ−Ｏは，親水軟膏を示し，Ｈｐｈｏ−Ｏは，疎水性軟膏を示す。図８は，ＮＳＡＩＤｓを含有しない場合の対照実験の細胞生存率を示している。具体的には，図８は，左から（１）コントロール，（２）親水軟膏，（３）トレハロース・親水軟膏，（４）疎水性軟膏，及び（５）トレハロース・疎水性軟膏の細胞毒性試験結果を示している。図９〜図１３は，ＮＳＡＩＤｓを含有する場合の細胞毒性試験結果を示している。具体的には，図９〜図１３は，左から（１）コントロール，（２）ＮＳＡＩＤｓ・親水軟膏，（３）ＮＳＡＩＤｓ・トレハロース（混合物）・親水軟膏，（４）ＮＳＡＩＤｓ・トレハロース（分子間化合物：凍結乾燥）・親水軟膏，（５）ＮＳＡＩＤｓ・疎水性軟膏，（６）ＮＳＡＩＤｓ・トレハロース（混合物）・疎水性軟膏，及び（７）ＮＳＡＩＤｓ・トレハロース（分子間化合物：凍結乾燥）・疎水性軟膏を示す。ここで，図９〜図１３における「コントロール」とは，培養皮膚単体で培養したものである。「混合物」とは，トレハロースと，ＮＳＡＩＤｓとを別々に乳鉢ですりつぶした後，トレハロース及びＮＳＡＩＤｓを所定量，軟膏に配合することで得られたものである。「分子間化合物：凍結乾燥」とは，トレハロースと，ＮＳＡＩＤｓとの混合物を凍結乾燥させることで得られる化合物を，ＮＳＡＩＤｓが所定量となるように軟膏に配合することで得られたものである。ＮＳＡＩＤｓとして，インドメタシン（図９），ジクロフェナク（図１０），イブプロフェン（図１１），ピロキシカム（図１２），及びフェルビナク（図１３）を用いた。【００８６】
図８から，ＮＤＡＩＤｓを含まない対照実験では，細胞毒性がほとんど観測されなかった。一方，図９〜図１３から，ＮＳＡＩＤｓを含む場合，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの混合物に比べて，ＮＳＡＩＤｓとトレハロースとの分子間化合物は，ＮＳＡＩＤｓに由来する細胞毒性を著しく抑制できることがわかった。特に分子間化合物による細胞毒性の抑制は，疎水性軟膏を用いた場合に顕著であった。よって，本発明の外用剤は，疎水性軟膏を用いた場合により有効に用いることが示された。
【実施例４】
【００８７】
実施例４では，実施例２と同様の実験を，トレハロースに代えて，マルトースを用いて行った。すなわち，マルトースとＮＳＡＩＤｓとで分子間化合物を形成した。
具体的には，重量比が１：２０のジクロフェナク−マルトース（Ｄｉｃ−Ｍａｌ）凍結乾燥物を，ジクロフェナクの最終濃度が１ｍＭとなるようにＤＭＥＭ培地（シグマ社製）に添加し，完全に溶解させた。この培地を上皮細胞Ｃａ９−２２細胞に加え，１６時間培養した。その後，細胞の生存率を測定した。細胞生存率の測定には，インビトロジェン社製，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（登録商標）のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ生存率毒性キットを用いた。【００８８】
ＮＳＡＩＤｓとして，ジクロフェナクを用いた場合の細胞生存率測定結果を図１４に示す。なお，図１４には，ジクロフェナクを用いていない場合（コントロール），ジクロフェナクのみを用い分子間化合物を形成しなかった場合（Ｄｉｃ），及びトレハロースを用いた場合（Ｔｒｅ）についての結果も示されている。なお，ジクロフェナク−トレハロース凍結乾燥物（Ｄｉｃ−Ｔｒｅ）は，ジクロフェナクとトレハロースの重量比を１：２０とした。【００８９】
図１４から分かるように，マルトースを用いて，ＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成させても，トレハロースの場合と同等又はそれ以上の細胞保護効果（すなわち，細胞障害作用抑制効果）を発揮することが分かった。ここで，マルトースもトレハロースも同じ２糖類である。したがって，２糖類であれば，ＮＳＡＩＤｓとの間で分子間化合物を形成させることで，ＮＳＡＩＤｓによる細胞障害作用を抑制することが示唆される。２糖類としては，マルトース及びトレハロースの他に，ショ糖やラクトースを挙げることができる。
【実施例５】
【００９０】
５−アミノサルチル酸（５−ＡＳＡ）のＤＳＣ測定  
実施例１と同様にして５−ＡＳＡについてもＤＳＣ実験を行った。図１５は，トレハロース単独，５−ＡＳＡ単独，５−ＡＳＡ・トレハロース混合，あるいは５−ＡＳＡ・トレハロース凍結乾燥物のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。【００９１】
図１５に示されるように，５−ＡＳＡ・トレハロース混合では，９５〜１０５℃に第１のピークが見られ，２００〜２０５℃に第２のピークがみられた。５−ＡＳＡ・トレハロース凍結乾燥物では，２０７〜２１５℃にピークがみられた。一方，５−ＡＳＡ・トレハロース凍結乾燥物では，９５〜１０５℃にピークが見られなかった。
【実施例６】
【００９２】
ケトプロフェンのＤＳＣ測定  
実施例１と同様にしてケトプロフェンについてもＤＳＣ実験を行った。図１６は，トレハロース単独，ケトプロフェン単独，ケトプロフェン・トレハロース混合，あるいはケトプロフェン・トレハロース凍結乾燥物のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。【００９３】
図１６に示されるように，ケトプロフェン・トレハロース凍結乾燥物では，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が９０〜９５℃及び２３０〜２３５℃にピークが存在し，１８０〜２２０℃にピークが存在しない曲線であった。
【実施例７】
【００９４】
ナプロキセンのＤＳＣ測定  
実施例１と同様にしてナプロキセンについてもＤＳＣ実験を行った。図１７は，トレハロース単独，ナプロキセン単独，ナプロキセン・トレハロース混合，あるいはナプロキセン・トレハロース凍結乾燥物のＤＳＣ結果を示す図面に替わるグラフである。【００９５】
図１７に示されるように，ナプロキセン・トレハロース凍結乾燥物では，示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による測定で得られたＤＳＣ曲線が９０〜９５℃及び２３４〜２３７℃にピークが存在し，２２５〜２３３℃にピークが存在しない曲線であった。
【実施例８】
【００９６】
本実施例８では，ＮＳＡＩＤｓ−トレハロース分子間化合物（凍結乾燥物）のＦＴ−ＩＲスペクトルを，ＮＳＡＩＤｓ及びトレハロース混合物のＦＴ−ＩＲスペクトルとを比較することで，分子間化合物が存在することを確認した。【００９７】
ＮＳＡＩＤｓ−トレハロース分子間化合物のデータを，サリチル酸系ＮＳＡＩＤｓ，アリール酢酸系ＮＳＡＩＤｓ，プロピオン酸系ＮＳＡＩＤｓ，オキシカム系ＮＳＡＩＤｓ，及びフェナム酸系ＮＳＡＩＤｓに区分し，ＦＴ−ＩＲデータを測定した。【００９８】
ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ法）にて，測定するサンプルはＮＳＡＩＤｓとトレハロースが1：1のモル比になるようにした。その理由は，ＦＴ−ＩＲでは微量分析のため，トレハロースの量が多いと，分子間化合物のスペクトルが埋もれてしまうためである。なおアスピリンについては，アスピリン：トレハロースのモル比が２:１で測定した。【００９９】
ＦＴ−ＩＲの測定は以下のようにして行った。ＫＢｒを薬サジで適量取り，乳鉢ですり潰した。ＫＢｒを均一に細かくすり潰した後，測定するサンプルを薬さじで適量を入れて同様にすり潰した。ＫＢｒとサンプルが均一に混ざった後に，鋳型に入れ，圧力（２０ｋＰａ）を加えながら，ＫＢｒの薄膜のプレートを作製した。プレートを，ＦＴ−ＩＲ(ＦＴ−ＩＲ６１５ＪＡＳＣＯ)にセットし，６５０〜４０００ｃｍ−１の条件にて，測定した。【０１００】
サリチル酸系ＮＳＡＩＤｓの代表としてアスピリン及び５−ＡＳＡにおいて分子間化合物が形成されているか否かにつきＦＴ−ＩＲスペクトルを測定した。【０１０１】
図１８は，アスピリン単独，トレハロース，アスピリン及びトレハロースの混合物，及びアスピリン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は，２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９３１ｃｍ−１にピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。【０１０２】
トレハロース,アスピリン,混合物,凍結乾燥物をそれぞれ測定した結果，混合物と凍結乾燥物のスペクトル形状を比較すると，ＯＨ基とＣＨ基付近において変化が見られた。特に，凍結乾燥物のスペクトルは，ＯＨ基，ＣＨ基の両方においてブロード化し，ＣＨ基のトップピークが変化していた。このことからトレハロースとアスピリンが相互作用していることが考えられた。【０１０３】
図１９は，５−ＡＳＡ単独，トレハロース，５−ＡＳＡ及びトレハロースの混合物，及び５−ＡＳＡ及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物では２９０７ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９２７ｃｍ−１にピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,５−ＡＳＡ,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物の比較においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。ＯＨ基のピークが凍結乾燥物でブロード化し，ＣＨ基のピークトップも変化した。このことから，トレハロースと５−ＡＳＡが相互作用していることが考えられた。【０１０４】
アリール酸系ＮＳＡＩＤｓの代表としてジクロフェナク及びインドメタシンにおいて分子間化合物が形成されているか否かにつきＦＴ−ＩＲスペクトルを測定した。【０１０５】
図２０は，ジクロフェナク単独，トレハロース，ジクロフェナク及びトレハロースの混合物，及びジクロフェナク及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９３３ｃｍ−１付近にＣＨ基のピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,ジクロフェナク,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物の比較においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。ＯＨ基のスペクトルの形状とＣＨ基ピークトップの位置が変化した。この結果から，トレハロースとジクロフェナクが相互作用していることが考えられた。【０１０６】
図２１は，インドメタシン単独，トレハロース，インドメタシン及びトレハロースの混合物，及びインドメタシン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９２７ｃｍ−１付近にＣＨ基のピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,インドメタシン,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物の比較においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。凍結乾燥物において，ＯＨ基のスペクトルの形状とＣＨ基のピークトップの位置が変化した。トレハロースとインドメタシンが相互作用していることが考えられた。【０１０７】
プロピオン酸系ＮＳＡＩＤｓの代表としてイブプロフェン，ケトプロフェン及びナプロキセンにおいて分子間化合物が形成されているか否かにつきＦＴ−ＩＲスペクトルを測定した。【０１０８】
図２２は，イブプロフェン単独，トレハロース，イブプロフェン及びトレハロースの混合物，及びイブプロフェン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９２２ｃｍ−１付近にＣＨ基のピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,イブプロフェン,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物の比較においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。凍結乾燥物のＯＨ基とＣＨ基がブロード化し，ＣＨ基ではピークトップの位置が変化した。この結果から，トレハロースとイブプロフェンが相互作用していることが考えられた。【０１０９】
図２３は，ケトプロフェン単独，トレハロース，ケトプロフェン及びトレハロースの混合物，及びケトプロフェン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９２２ｃｍ−１付近にＣＨ基のピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,ケトプロフェン,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物の比較においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。凍結乾燥物のＯＨ基とＣＨ基がブロード化し，ＣＨ基のピークトップの位置が変化した。この結果から，トレハロースとケトプロフェンが相互作用していることが考えられた。【０１１０】
図２４は，ナプロキセン単独，トレハロース，ナプロキセン及びトレハロースの混合物，及びナプロキセン及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９３８ｃｍ−１付近にＣＨ基のピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,ナプロキセン,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。凍結乾燥物のＯＨ基とＣＨ基がブロード化し，ＣＨ基のピークトップの位置も変化した。この結果から，トレハロースとナプロキセンが相互作用していることが考えられた。【０１１１】
オキシカム系ＮＳＡＩＤｓの代表としてピロキシカムにおいて分子間化合物が形成されているか否かにつきＦＴ−ＩＲスペクトルを測定した。【０１１２】
図２５は，ピロキシカム単独，トレハロース，ピロキシカム及びトレハロースの混合物，及びピロキシカム及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。混合物は２９０７ｃｍ−１にピークトップが存在した。凍結乾燥物は２９３２ｃｍ−１付近にＣＨ基のピークトップが存在した。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物は３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,ピロキシカム,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物の比較においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。凍結乾燥物のＯＨ基がブロード化し，ＣＨ基のピークトップの位置が変化した。この結果から，トレハロースとピロキシカムが相互作用していることが考えられた。【０１１３】
フェナム系ＮＳＡＩＤｓの代表としてメフェナム酸において分子間化合物が形成されているか否かにつきＦＴ−ＩＲスペクトルを測定した。【０１１４】
図２６は，メフェナム酸単独，トレハロース，メフェナム酸及びトレハロースの混合物，及びメフェナム酸及びトレハロースの凍結乾燥物のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。図中符号１は，ＣＨ基のピークトップを示す。ＣＨ基のピークトップは混合物と凍結乾燥物とで変化が見られなかった。図中符号２は，ＯＨ基のピークトップを示す。混合物３５００ｃｍ−１付近にピークトップが存在した。凍結乾燥物ではピークがブロード化した。トレハロース,メフェナム酸,混合物,凍結乾燥物それぞれを測定した結果，混合物と凍結乾燥物においては，ＯＨ基とＣＨ基のスペクトルの形状が変化していた。ＣＨ基のピークトップの波数は変化していないものの，スペクトルの形状はブロード化した。このことから，トレハロースとメフェナム酸が相互作用していることが考えられた。
【産業上の利用可能性】
【０１１５】
本発明は，医薬産業において用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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