(57)【要約】  本発明は、葛花の新たな機能を見出すことにより、葛花の用途拡大を図るとともに、新規なβ３アドレナリン受容体発現亢進剤を提供する。本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は葛花処理物を含有し、白色脂肪細胞における脂肪の分解を促進し、褐色脂肪細胞における脂肪燃焼を促進する脂質代謝向上作用を有するため、抗肥満効果を発揮し、さらには肥満に起因する生活習慣病（例えば、糖尿病）などを予防し得る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
葛花処理物を含有する、β３アドレナリン受容体発現亢進剤。
【請求項２】
前記葛花処理物が、葛花抽出物である、請求項１に記載のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、葛花処理物を含有するβ３アドレナリン受容体発現亢進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
葛は、マメ科の大形蔓性の植物であり、その根から採取される葛澱粉は、古くから和菓子の原料として用いられている。葛の根および花は、それぞれ葛根および葛花と称し、解熱薬、鎮痛薬、鎮痙薬、発汗などの症状に対する漢方薬の原料として用いられている。特に、葛花は、他のマメ科植物とは異なり、肝障害改善作用、二日酔い予防作用、尿窒素代謝改善作用などの様々な作用を有することが明らかとなってきている（特許文献１〜３）。【０００３】
最近では、葛花抽出物が、レプチン作用向上性肥満抑制作用（特許文献４）、抗高血圧作用（特許文献５）、体脂肪低減作用（特許文献６）などを有することも知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第３４５４７１８号公報
【特許文献２】特公平８−３２６３２号公報
【特許文献３】特開昭６４−６８３１８号公報
【特許文献４】特開２００７−１３７８６１号公報
【特許文献５】特開２００６−３０４７６６号公報
【特許文献６】国際公開２００６／１１２４５号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、葛花の新たな機能を見出すことによって、葛花の利用分野を拡大することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、葛花の機能性について鋭意検討したところ、葛花処理物が優れたβ３アドレナリン受容体発現亢進作用を有することを見出した。【０００７】
本発明は、葛花処理物を含有する、β３アドレナリン受容体発現亢進剤を提供する。【０００８】
１つの実施態様においては、上記葛花処理物は、葛花抽出物である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、新たなβ３アドレナリン受容体発現亢進剤が提供される。葛花処理物のβ３アドレナリン受容体発現亢進作用という新たな機能を有することを見出したことにより、葛花の用途を拡大することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】各群のマウスの褐色脂肪細胞におけるｍＲＮＡ量を示すグラフであり、図１（ａ）はＵＣＰ−１のｍＲＮＡ量を示し、図１（ｂ）はβ３アドレナリン受容体のｍＲＮＡ量を示し、そして図１（ｃ）はＰＧＣ−１αのｍＲＮＡ量を示す。
【図２】各群のマウスの白色脂肪細胞におけるｍＲＮＡ量を示すグラフであり、図２（ａ）はβ３アドレナリン受容体のｍＲＮＡ量を示し、図２（ｂ）はＨＳＬのｍＲＮＡ量を示し、図２（ｃ）はＵＣＰ−２のｍＲＮＡ量を示す。
【図３】各群のマウスの白色脂肪細胞におけるｍＲＮＡ量を示すグラフであり、図３（ａ）はＵＣＰ−１のｍＲＮＡ量を示し、図３（ｂ）はＰＰＡＲγのｍＲＮＡ量を示し、そして図３（ｃ）はＬＰＬのｍＲＮＡ量を示す。
【図４】各群のマウスの体重の推移を示すグラフである。
【図５】各群のマウスの摘出した臓器・組織の質量を示すグラフである。
【図６】各群のマウスの体重に対する摘出した臓器・組織の相対質量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、葛花処理物を有効成分として含有する。さらに、本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、必要に応じて、食品、医薬品などの原料として一般的に用いられる成分（以下、「その他の成分」という場合がある）を含有し得る。
【００１２】
（葛花処理物）
葛の花部である葛花は、フラボノイド、サポニン、およびトリプトファン配糖体を含有している。本明細書において、「葛花」とは、蕾から全開した花までの段階で採取した花をいう。
【００１３】
本明細書において、「葛花処理物」とは、葛花に乾燥処理、粉砕処理、および抽出処理のうちの少なくとも１種の処理を施して得られるものをいう。
【００１４】
本明細書において、「葛花乾燥物」は、葛花を乾燥して得られた物をいい、「葛花乾燥粉末」は、葛花を乾燥後破砕または粉砕して得られた乾燥粉末をいい、以下の葛花抽出物を含まない。
【００１５】
本明細書において、特に「葛花抽出物」は、葛花の搾汁、葛花または葛花乾燥物から抽出された抽出液、これらの搾汁または抽出液を濃縮した濃縮液、これらの搾汁または抽出液を乾燥して得られる乾燥粉末（抽出物粉末）などをいう。
【００１６】
以下、葛花処理物である葛花乾燥物、葛花乾燥粉末、および葛花抽出物の調製方法について説明する。
【００１７】
葛花乾燥物は、葛花を、日干し、熱風乾燥などの方法により乾燥することにより得られる。好ましくは、水分含有量が、１０質量％またはそれ以下となるまで乾燥される。
【００１８】
葛花乾燥粉末は、上記葛花乾燥物を粉砕して得られる。粉末化は、当業者が通常用いる方法、例えば、ボールミル、ハンマーミル、ローラーミルなどを用いて行う。
【００１９】
あるいは、葛花乾燥粉末は、採取した葛花を、マスコロイダー、スライサー、コミトロールなどを用いて破砕して葛花破砕物を得、この葛花破砕物を乾燥することによって得られる。
【００２０】
葛花抽出物は、例えば、葛花、葛花破砕物、葛花乾燥物、または葛花乾燥粉末に溶媒を添加し、必要に応じて加温して、抽出を行い、遠心分離または濾過により抽出液を回収することによって得られる。葛花抽出物は、好ましくは、葛花乾燥物または葛花乾燥粉末から抽出することによって得られる。
【００２１】
葛花抽出物を得るために用い得る溶媒としては、水、有機溶媒、含水有機溶媒などが挙げられる。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエテンなどが挙げられる。これらの中で好ましくは極性有機溶媒、より好ましくはエタノール、ｎ−ブタノール、メタノール、アセトン、プロピレングリコール、および酢酸エチルであり、最も好ましくはエタノールである。
【００２２】
抽出方法としては、加熱還流などの加温抽出法、超臨界抽出法などが挙げられる。これらの抽出方法において、必要に応じて加圧して加温を行ってもよい。加温する場合、葛花に添加した溶媒が揮発するのを防ぐ必要がある。加温する場合、抽出温度は、好ましくは５０℃以上、より好ましくは７０℃以上であり、好ましくは１３０℃以下、より好ましくは１００℃以下である。
【００２３】
抽出時間は、抽出原料から十分に可溶性成分が抽出される時間であればよく、抽出温度などに応じて適宜設定すればよい。好ましくは３０分〜４８時間である。例えば、抽出温度が５０℃未満の場合は、好ましくは６時間〜４８時間であり、５０℃以上の場合は、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００２４】
得られた抽出液は、必要に応じて、減圧濃縮、凍結乾燥などの方法により濃縮または乾燥して、液状、ペースト状、または粉末（抽出物粉末）としてもよい。
【００２５】
このようにして得られた葛花抽出物は、イソフラボン類およびサポニン類を含有し得る。葛花抽出物中に、イソフラボン類は、葛花抽出物の乾燥質量に対し、好ましくは３質量％以上、より好ましくは５質量％〜９０質量％含有される。サポニン類は、葛花抽出物中に、好ましくは１質量％以上、より好ましくは２質量％〜５０質量％含有される。
【００２６】
（その他の成分）
本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、葛花処理物の他に、本発明の効果を損なわない範囲で、食品、医薬品などの原料として一般的に用いられる成分を含有し得る。
【００２７】
このような成分としては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体など）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレンなど）、キチン・キトサン、レシチン、ポリフェノール（フラボノイド類、これらの誘導体など）、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテインなど）、キサンチン誘導体（カフェインなど）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチンなど）、ムコ多糖類（ヒアルロン酸、コンドロイチン、デルマタン、ヘパラン、ヘパリン、ケタラン、これらの塩など）、アミノ糖（グルコサミン、アセチルグルコサミン、ガラクトサミン、アセチルガラクトサミン、ノイラミン酸、アセチルノイラミン酸、ヘキソサミン、それらの塩など）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖など）、リン脂質およびその誘導体（スフィンゴミエリン、セラミドなど）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタンなど）、糖アルコール、リグナン類（セサミンなど）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガなど）、麦若葉末などのイネ科植物の緑葉、ケールなどのアブラナ科植物の緑葉、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、調味料などが挙げられる。
【００２８】
（β３アドレナリン受容体発現亢進剤）
本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、上記葛花処理物を有効成分として含有し、さらに、必要に応じて、上記その他の成分を含有し得る。
【００２９】
白色脂肪細胞および褐色脂肪細胞は、脂肪細胞でアドレナリンを感知する唯一の受容体（レセプター）であるβ３アドレナリン受容体を有する。β３アドレナリン受容体は、白色脂肪細胞における脂肪分解および褐色脂肪細胞における脂肪燃焼に関与することが知られている。
【００３０】
本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、β３アドレナリン受容体の発現を亢進することにより、白色脂肪細胞における脂肪の分解を促進し、褐色脂肪細胞における脂肪燃焼を促進する。したがって、本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、脂質代謝向上作用を有するため、抗肥満効果を発揮し、さらには肥満に起因する生活習慣病（例えば、糖尿病）などを予防し得る。
【００３１】
本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤に含有される葛花処理物の量は、特に制限されない。例えば、葛花処理物が葛花抽出物の場合、葛花抽出物の摂取量が乾燥質量換算で、好ましくは１０〜５００ｍｇ／日、より好ましくは１００〜３００ｍｇ／日となるように含有され得る。
【００３２】
本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、食品または医薬品の形態で用い得る。用途に応じて、顆粒、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルなど）、丸剤、粉末状、液状、ティーバッグ状、飴状などの形態に加工される。このように加工されたβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、そのまま食してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよい。粉末などをティーバッグの形態で提供すれば、湯などに浸漬して得られる抽出液を飲料として利用し得る。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００３４】
（実験用マウス）
７週齢の雄性Ｃ５７ｂｌａｃｋ／６Ｊマウス（株式会社日本チャールスリバー製）２４匹に、基本飼料（ＭＦ飼料；オリエンタル酵母工業株式会社製）を与えて８日間馴化した。馴化後、各群の平均体重がほぼ等しくなるように１群８匹の３群に分けた。【００３５】
次いで、１群のマウスには通常飼料を摂取させ（ＬＦ群）、もう１群のマウスには高脂肪飼料を摂取させ（ＨＦ群）、そして残りの１群のマウスには試験飼料（高脂肪飼料に葛花抽出物を配合した飼料）を摂取させた（ＰＴＥ５％群）。各飼料の成分を表１に示す。なお、葛花抽出物は、葛花から熱水抽出して得られる「葛の花エキス」（イソフラボン類１０質量％およびサポニン類１質量％含有：株式会社太田胃散製）を用いた。【００３６】
【表１】
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【００３７】
給餌器としてローデンカフェ（オリエンタル酵母工業株式会社製）用いて、各群のマウスに飼料を摂取させ、脱イオン水を自由摂取させた。試験期間中、各群のマウスの累積摂餌量に群間で差がつかないように調節を行った。なお、摂取量は、測定日の前日に給餌器質量を含む給餌量と摂取後の残餌量とから算出した。【００３８】
各群のマウスに１４日間飼料を摂取させ、週２回体重を測定した。また、飼料摂取開始から１５日目に体重を測定した後、エーテル麻酔下で開腹し、臓器・組織を摘出した。【００３９】
（実施例１：マウスの褐色脂肪細胞における遺伝子発現の検証）
ＬＦ群、ＨＦ群、およびＰＴＥ５％群のマウスの摘出した褐色脂肪細胞における種々の遺伝子発現についてｍＲＮＡを定量した。定量方法は、Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲを用いた。結果を図１に示す。値は、各群のマウスのｍＲＮＡ量の平均値（ＬＦ群を基準とした相対値）を示す。【００４０】
図１に示すように、熱産生に関わるＵＣＰ−１（Uncoupling protein-1）（図１（ａ））およびＵＣＰ−１の上流にあたるβ３アドレナリン受容体（図１（ｂ））において、ＰＴＥ５％群のマウスは、ＬＦ群のマウスおよびＨＦ群のマウスと比較して、発現が有意に亢進したことがわかる（グラフ中の＊、＊＊、および＊＊＊は、それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．００１で有意差があることを示す）。さらに、ＵＣＰ−１の上流にあたるＰＧＣ−１α（Peroxisome proliferator-activated receptor g coactivator-1）（図１（ｃ））において、ＰＴＥ５％群のマウスは、ＬＦ群のマウスと比較して、発現が有意に亢進し、ＨＦ群のマウスと比較しても、亢進傾向が認められた（ｐ＝０．１０）。【００４１】
したがって、葛花抽出物は、褐色脂肪細胞において、ＵＣＰ−１の上流のβ３アドレナリン受容体およびＰＧＣ−１αの発現の亢進を促し、さらに、ＵＣＰ−１自体の発現を亢進させることによって熱産生亢進作用を有することがわかった。【００４２】
（実施例２：マウスの白色脂肪細胞における遺伝子発現の検証）
ＬＦ群、ＨＦ群、およびＰＴＥ５％群のマウスの摘出した精巣周囲脂肪の白色脂肪細胞における種々の遺伝子発現についてｍＲＮＡを定量した。結果を図２および図３に示す。値は、各群のマウスのｍＲＮＡ量の平均値（ＬＦ群を基準とした相対値）を示す。【００４３】
図２に示すように、中性脂肪の分解を促進するＨＳＬ（Hormone sensitive lipase）（図２（ｂ））および熱産生に関わるとされているＵＣＰ−２（Uncoupling protein-2）（図２（ｃ））において、ＰＴＥ５％群のマウスは、ＬＦ群のマウスおよびＨＦ群のマウスと比較して、発現が有意に亢進したことがわかる（グラフ中の＊、＊＊、および＊＊＊は、それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．００１で有意差があることを示す）。さらに、ＨＳＬとＵＣＰ−２との上流にあたるβ３アドレナリン受容体（図２（ａ））において、ＰＴＥ５％群のマウスは、ＨＦ群のマウスと比較して、発現が有意に亢進したことがわかる。図３に示すように、脂肪細胞の分化に関わるＰＰＡＲγ（Peroxisome proliferator-activated receptor γ）（図３（ｂ））、細胞内への脂肪の取り込みに関わるＬＰＬ（Lipo protein lipase）（図３（ｃ））、および熱産生に関わるＵＣＰ−１（図３（ａ））においては、各群のマウス間で有意差は認められなかった。【００４４】
したがって、葛花抽出物は、精巣周囲脂肪の白色脂肪細胞において、β３アドレナリン受容体の発現の亢進に伴って脂肪分解亢進作用および熱産生亢進作用を有することがわかった。【００４５】
（実施例３：マウスの体重推移）
各群のマウスに１４日間飼料を摂取させ、各群のマウスの平均体重を測定した。結果を図４に示す。図４に示すように、飼料摂取開始から１５日目において、ＰＴＥ５％群のマウスおよびＬＦ群のマウスは、ＨＦ群のマウスと比較して、体重の上昇が有意に抑制されていた。【００４６】
したがって、１４日間の短期間であっても、葛花抽出物は、抗肥満作用を有することがわかった。さらに、ＰＴＥ５％群のマウスの体重推移は、ＬＦ群のマウスの体重推移とほぼ同じであり、健康的に成長していることが示唆された。【００４７】
（実施例４：マウスの臓器質量）
全てのマウスを解剖して、肝臓、精巣周囲脂肪、腸間膜脂肪、腎周囲脂肪、および後腹膜脂肪を摘出した。摘出した組織の質量を図５に、摘出した組織の体重に対する相対質量を図６に示す。【００４８】
図５および６に示すように、精巣周囲脂肪、腸間膜脂肪、腎周囲脂肪、後腹膜脂肪、およびこれらを足し合わせた白色脂肪合計のいずれにおいても、組織質量および相対質量の両方とも、ＨＦ群のマウスは、ＬＦ群のマウスと比較して、有意に高い値を示した。一方、ＰＴＥ５％群のマウスは、ＨＦ群のマウスと比較して、有意に低い値を示した。【００４９】
したがって、実施例３における体重の上昇抑制は、脂肪の質量に起因していることが示唆された。なお、肝臓の質量は、各群のマウス間で、有意差は認められなかった。【００５０】
（実施例５：マウスの肝臓への脂肪蓄積の検証）
摘出した肝臓について、脂肪の蓄積状態を検証した。オイルレッド染色試験の結果を表２に、そしてズダンＩＩＩ染色試験結果を表３に示す。なお、表２および３中の１０１〜１０８はＬＦ群の８匹のマウスを示し、２０１〜２０８はＨＦ群の８匹のマウスを示し、そして３０１〜３０８はＰＴＥ５％群の８匹のマウスを示す。【００５１】
【表２】
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【００５２】
【表３】
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【００５３】
表２および３に示すように、オイルレッド染色およびズダンＩＩＩ染色のいずれにおいても、ＬＦ群のマウスとＨＦ群のマウスとは、脂肪肝、脂肪変性、および小葉中心から辺縁性脂肪蓄積について、差異は認められなかった。一方、ＰＴＥ５％群のマウスは、脂肪肝、脂肪変性、および小葉中心から辺縁性脂肪蓄積のいずれにおいても、顕著に改善されていることがわかった。したがって、葛花抽出物は、肝脂肪蓄積抑制作用を有することがわかった。【００５４】
（実施例６：β３アドレナリン受容体に対して、葛花抽出物がアゴニストとして作用するか否かの検証）
葛花抽出物について、受容体の活性に及ぼす効果を検討した。表４に示すヒト由来のβ１〜β３アドレナリン受容体を発現する組換え細胞を用いて、放射標識リガンドのβ１〜β３アドレナリン受容体への結合阻害率を測定した。葛花抽出物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、表４に示すアッセイ系に最終濃度が５０μｇ／ｍＬとなるように添加してインキュベートし、阻害率を測定した。【００５５】
【表４】
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【００５６】
葛花抽出物は、放射標識リガンドのβ１アドレナリン受容体への結合を阻害しなかった。さらに、葛花抽出物は、放射標識リガンドのβ２アドレナリン受容体への結合を１２％しか阻害せず、β３アドレナリン受容体への結合を１％しか阻害しなかった。したがって、葛花抽出物は、β１アドレナリン受容体、β２アドレナリン受容体、およびβ３アドレナリン受容体に対して、アゴニストとして作用しないことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明によれば、葛花処理物を含む新たなβ３アドレナリン受容体発現亢進剤が提供される。本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、β３アドレナリン受容体の発現を亢進することにより、白色脂肪細胞における脂肪の分解を促進し、褐色脂肪細胞における脂肪燃焼を促進する。したがって、本発明のβ３アドレナリン受容体発現亢進剤は、脂質代謝向上作用を有するため、抗肥満効果を発揮し、さらには肥満に起因する生活習慣病（例えば、糖尿病）などを予防し得、脂質代謝向上剤、抗肥満剤、血糖降下剤などとして利用し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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