【事件の表示】
　特許第２９２６７２２号「アルブミン製剤及びその製造方法」の請求項１ないし４に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結論】
　訂正を認める。
　特許第２９２６７２２号の請求項１ないし３に係る特許を取り消す。
【理由】
１．特許第２９２６７２２号の請求項に係る発明は、昭和６３年１０月２０日に特許出願され、平成１１年５月１４日にその特許について設定登録され、その後井坂紀子、デルタ・バイオテクノロジー・リミテッドからそれぞれ異議申立がなされ、取消通知がなされ、その指定期間内である平成１２年１０月１７日に訂正請求がなされたものである。
２．訂正について
（１）訂正の内容
　訂正前の特許請求の範囲の請求項１を削除すると共に、請求項の項番を繰り上げ、次のとおり訂正するものである。
　「１．アルブミン製剤において、血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤。
　２．血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤の製造方法。
　３．凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行う請求項２記載のアルブミン製剤の製造方法。
　４．硫安濃度２８０−３５０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０−８．０の条件下で硫安分画処理する；ＰＥＧ濃度５−２０％、ｐＨ５．０−６．５の条件下でＰＥＧ分画処理する；エタノール濃度１０−４５（ｖ／ｖ）％、ｐＨ４．５−６．５の条件下でエタノール分画処理する；又はｐＨ４．５−５．０の条件下で等電点分画処理するのいずれかの方法で凝集体を除去する請求項３記載のアルブミン製剤の製造方法。」を
「１．血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、５０〜７０℃で５〜２０時間の加熱処理を施してなるアルブミン製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤の製造方法。
　２．凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行う請求項１記載のアルブミン製剤の製造方法。
　３．硫安分画処理において、硫安濃度２８０〜３５０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０〜８．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、上清に硫安を添加し、硫安濃度４５０ｇ／ｌとして、アルブミンを沈殿させて回収する；ＰＥＧ分画処理において、ＰＥＧ濃度５〜２０％、ｐＨ５．０〜６．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、ＰＥＧ濃度１５〜２５％、ｐＨ４．５〜５．５となるように上清を調整してアルブミンを回収する；エタノール分画処理において、エタノール濃度１０〜２０（ｖ／ｖ）％、ｐＨ４．５〜５．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、エタノール濃度を約４０（ｖ／ｖ）％、ＰＨを約４．８となるように上清を調整してアルブミンを回収する；または、等電点分画処理において、ＰＨ４．５〜５．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、透析または限外渡過によりアルブミンを回収する、請求項３のアルブミン製剤の製造方法。」と訂正する。
（２）訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
　上記訂正事項は、旧請求項１を削除し、旧請求項２を新請求項１とするとともに加熱処理を５０〜７０℃で５〜２０時間で行われることを付加し、旧請求項３を新請求項２とし、引用する請求項番号を訂正し、旧請求項４を新請求項３とするとともに凝集体を除去する手段の条件を付加したものである。
　そして、これらの訂正は、請求項の削除並びに処理条件を明細書第４頁下から３行〜７頁８行に記載されている内容に従って限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮に相当するもので、実質的に特許請求の範囲を拡張または変更するものでなく、また、願書に添付した明細書に記載された事項の範囲内の訂正であることは明らかである。
（３）むすび
　したがって、本件訂正請求は、特許法第１２０条の４第２号の規定に適合し、同条第３項において準用する同法第１２６条第２乃至３項の規定に適合するので、当該訂正を認める。
３．本件発明
　特許第２９２６７２２号の請求項に係る発明は、訂正された明細書の記載からみてその特許請求の範囲の請求項１〜３に記載された、次のとおりのものである。
「１．血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、５０〜７０℃で５〜２０時間の加熱処理を施してなるアルブミン製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤の製造方法。
　２．凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行う請求項１記載のアルブミン製剤の製造方法。
　３．硫安分画処理において、硫安濃度２８０〜３５０ｇ／ｌ、ｐＨ５、０〜８．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、上清に硫安を添加し、硫安濃度４５０ｇ／ｌとして、アルブミンを沈殿させて回収する；ＰＥＧ分画処理において、ＰＥＧ濃度５〜２０％、ｐＨ５．０〜６．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、ＰＥＧ濃度１５〜２５％、ｐＨ４．５〜５、５となるように上清を調整してアルブミンを回収する；エタノール分画処理において、エタノール濃度１０〜２０（ｖ／ｖ）％、ｐＨ４．５〜５．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、エタノール濃度を約４０（ｖ／ｖ）％、ＰＨを約４．８となるように上清を調整してアルブミンを回収する；または、等電点分画処理において、ＰＨ４．５〜５．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、透析または限外渡過によりアルブミンを回収する、請求項３のアルブミン製剤の製造方法。」
４．取消理由に引用した刊行物に記載の事項
　刊行物１（Ｈａｎｓｅｎ　ａｎｄ　Ｅｚｂａｎ、Ｄｅｖｅｌｏｐ．ｂｌｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ、４８、ｐｌ０５−１１２（１９８１）、異議申立人　デルタ、バイオテクノロジー、リミテッドが提出した甲第１号証）には、「精製の主な問題は殺菌（６０℃、１０時間）により形成される高分子量凝集物の含有である。凝集体は免疫学的反応に関する危険性がある。」（第１０５ページ、要約、第３パラグラフ）と記載（訳文参照）され、
「６０℃、半時間での加熱沈降は精製アルブミンの製造に重要な役割を演じていると思われる。すべての熱に弱いタンパク質がこの方法で沈殿する。この方法によると、高分子量の凝集体は６０℃、１０時間の殺菌工程では形成されない。」（第１０５ページ、最終バラグラフ）と記載（訳文参照）され、
「図２　アルブミンプロセス（１９８０）
　血漿　２００ｌ
第１日　２０％　ＰＥＧ３０００　ｐＨ６．８　ｌｇＧｉｖ
　　　　２０％　ＰＥＧ３０００　ｐＨ４．８　アルブミン、不純アルブミン、再溶解
第２日　０．０２Ｍ　カプリル酸　ｐＨ４．８
　　　　６０℃　１／２時間　　　　　　　　　不純物、変性
　　　　４０％　エタノール　ｐＨ４８÷５℃　精製アルブミン÷ＰＥＧ
　真空エバポレーターにおいて乾燥、再溶解、濾過、カプリル酸塩の添加、瓶詰め、６０℃、１０時間で加熱
ＡＬＢＵＭＩＮ　ＮＯＲＤＩＳＫ　２００ｍｇ／ｍｌ
収率：血漿アルブミンの約９０％　　　　　　　　　　　」（第１０７頁、第２図）が記載（訳文参照）されている。
また「図３の最後のポイントは高分子量の凝集体の含量である。普通、この物質は６０℃、１０時間の予防的な加熱処理中に熱に弱い不純物から形成される。１−２ｍｉｏダルトンの分子量のあまりよく特徴付けられていない凝集体が形成される。薬学的には高分子量の凝集体の最大含量は全タンパク質の３．５−５％である。我々はこの限界は高いと考える。この物質はヒトタンパク質から構成されるが、凝集体の形成が免疫原性の決定基を与え、免疫学的な副作用を与える可能性があることは驚くべきことではない。凝集体を高含量でおよび低含量で含む製剤についてのゲルクロマトグラフィーを図４に示す。セファデックスＧ１５０でのゲル濾過によると、１％より低い凝集体を定量することは難しい。我々のアルブミンにおける凝集体の含量はこの限界をはるかに下回るので、我々はセファデックス１５０を使用できない。その結果、我々は検出限界が０．１％より低い（と発表されている）セファロース６Ｂを使用する。我々の分画方法の開発において、目的は高分子量の物質を避けることにあった。この結果、ＡＬＢＵＭＩＮ　ＮＯＲＤＩＳＫにおけるその含量は検出限界である０．１％より低い。」（第１０７ページ、最終パラグラフから第１０８ページ、第１パラグラフにかけて）が記載（訳文参照）されている。
　刊行物２（Ｓｔｏｌｔｚ、ｅｔａｌ．、ＢＩＯ−ＳＣＩＥＮＣＥＳ、ｖｏｌ．６、Ｎｏ．４、ｐ１０３‐１０６（１９８７）、異議申立人　デルタ、バイオテクノロジー、リミテッドが提出した甲第２号証）には、
「最終生産物はほぼ１００％の精製度を有し、わずかなポリマー（＜０．５％）を含有し、疾患に十分耐えうるものであった（実際に試験した５つのロットについて）。」（１０３ページの要約）と記載（訳文参照）され、
「表１　クロマトグラフィーにより得られたアルブミンとコーン氏の方法により得られたアルブミンの特徴の比較
　　　　　　　アルブミンクロマトグラフィー（ａ）　　　コーン氏の方法（ｂ）
精製度　　　　　　　　　　９９％　　　　　　　　　　　　　　９６％
ポリマー　　　　　　　　＜０．５％　　　　　　　　　　　　　２〜４％
Ｈｂ（Ｄ０４０３ｎｍ）　　０．０４　　　　　　　　　　　　０．０９
粘度（４０ｇ／ｌ）　０．８４５ｃｓｔ　　　　　　　　　　　　０．８９２ｃｓｔ」（第１０６ページの表１）が記載（訳文参照）されている。
　刊行物３（Ｍａｕｒｅｌ、ｅｔ　ａｌ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ｖｏｌ．１７５、ｐｌ９‐２４（１９８９）、異議申立人　デルタ、バイオテクノロジー、リミテッドが提出した甲第３号証）には、
「熱凝固によるアルブミンの精製」と題して
「高純度（９４−９８％）のアルブミンが液状血漿を温度６３−７０℃の間で加熱することにより得られる。収率は約９０％である。」（１９頁下から２〜１行）と記載され、
「ポリマー
　熱凝固により精製したアルブミンのＴＳＫ　Ｇ３０００ＳＷカラム（７．５×３００ｍｍ）におけるＨＰＬＣ分析の結果は、ＣＯＨＮ氏法により精製されたアルブミンと比較して図（５）に示される。熱凝固により製造されたアルブミンのクロマトグラムは次のように特徴付けられる：
・　非常に低い濃度のポリマー（＜０．２％）とダイマー（＜２％）
・　平均のモノマー含量（主ピーク）は約９８％　　　　　　　　　」（第２２頁）が記載（訳文参照）されている。
　刊行物４（Ｃｕｒｌｉｎｇ　ｅｔ　ａｌ．、Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｖｏｌ．５、ｐ２８２‐２９２（１９８３）、異議申立人　デルタ、バイオテクノロジー、リミテッドが提出した甲第４号証及び異議申立人　井坂紀子が提出した甲第１号証）には、
「以前の分画に依存した異なる出発物質を用いて、標準化された方法を用いたクロマトグラフィーによりアルブミンを精製した。血漿は寒冷沈降およびｉｘ因子の吸収後、あるいはｌｇＧの単離の後直接使用できる。血漿は遠心され、セファデックスＧ２５において脱塩され、ｐＨが調節され、真性グロブリンをＤＥＡＥおよびＣＭセファロースＣＬ−６Ｂのイオン交換クロマトグラフィーの前に沈降させた。この後、超遠心による濃縮、セファシルＳ−２００でのゲル濾過、最終濃縮、および製剤化が実施される。得られたアルブミンは９９％の純度であり１％未満の凝集タンパク質を含んでいた。」（第２８２頁の要約）と記載（訳文参照）されている。
　また、血清アルブミンをクロマトグラフィー法（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ‐２５，ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ‐６Ｂ，ＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−６Ｂ，Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ‐２００）により精製し、これを６０℃で１０時間加熱処理して得られるアルブミン精製品の純度が９９％、凝集体含量が１％未満であったことが記載されている（２８６頁３〜２２行、２８８頁３〜５行及び表ＩＩＩ）（訳文参照）。
　刊行物５（Ｔａｙｏｔ　ｅｔ　ａｌ．”Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ａｌｂｕｍｉｎ　ｆｏｒ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｕｓｅ”、ｉｎ”Ｃｏｍｐｔｅ‐ｒｅｎｄｕ　ｄｅ　ｌａ　ｒｅｕｎｉｏｎ　ｃｏｏｐｅｒａ、異議申立人　デルタ、バイオテクノロジー、リミテッドが提出した甲第５号証）には、
「製造された１０個の最初のロットについてのゲル濾過による分析は、６０℃、１０時間加熱した後と同様に加熱前も、ポリマーの規則的な不存在、微量のダイマー、および非常に高められたほぼ１００％のモノマーの割合を示している（表２）、図６）。」（第５６頁第１１〜１３行）と記載（訳文参照）されている。
　刊行物６（特公昭５３‐１２９６５号公報、異議申立人　井坂紀子が提出した甲第２号証）には、
「異物蛋白質ならびに変性蛋白質を含むアルブミン原料溶液をカプリル酸の存在において加熱することによってこれら望ましくない要素を熱凝固することによって精製アルブミン、特に人体アルブミンを製造する方法において、溶液のｐＨを４．８〜５．２５の範囲に含まれるようにし、またカプリル酸ナトリウムの量であらわしたカプリル酸量は精製すべき溶液の蛋白質重量の１５〜３０％の範囲とし、また加熱は５０℃〜６４℃の温度で行うことを特徴とする精製アルブミンの製法。」（特許請求の範囲）が記載されている。
　さらに「アルブミンの精製
沈殿物を水の中に再び溶かして約２８０ｌ容積とする。・・タンパク質の割合を２０ｇ／ｌに調整し、この溶液に対してカプリル酸ナトリウム２．４１・１０−２Ｍ／ｌ（・・・）の濃度まで加え、次に・・・ｐＨを５．０〜５．０５の値に調整する。この溶液を約１時間、約６０℃に保持する。このようにして、アルブミン以外の残留たん白質が凝固し、これらたん白質は、最後の痕跡量のヘモグロビンとアルブミン変性フラクシヨンと共に沈殿物として除去される。溶液中には、実際上純粋なアルブミンのみが残る。・・・アルブミンの希釈溶液を濃縮するため、ｐＨ４．８〜４．９、温度−８℃のオーダのエタノール４０％溶液に調整すると沈殿物が生じ、これを集め、再溶解し、・・・アルブミンの実質的に純粋な濃縮溶液約９５ｌをうる。」（８欄２〜２５行）と記載されている。
　同じく刊行物７（ＶｏｘＳａｎｇ．３５：４０５‐４１１（１９７８）、異議申立人　井坂紀子が提出した甲第３号証）には、
「２．８％蛋白質溶液（アルブミン含量７９％）になるように希釈したエタノール画分ＩＶ及びＶに加熱前に、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、カプリル酸ナトリウム（２０ｍＭ）及びＮ‐アセチルトリプトファン（２０ｍＭ）を添加した。・・・３０分撹拌後、２Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨを６．８に調節し、７０℃に温度を上げ、１５分間保持した。・・・ｐＨを４．２に調節し、アルコール濃度を１０％として不純物を遠心分離除去した後、その上清のｐＨを４．８に調節し、エタノール濃度を４０％にしてアルブミンを沈殿させ、回収した」こと（４０６頁左欄１〜右欄４行）が記載されている。
　刊行物８（米国特許第４，２２２，９３４号明細書、異議申立人　井坂紀子が提出した甲第４号証）には、
「ＥＤＴＡと安定化剤としてのカプリル酸ナトリウムを含むアルブミン溶液をｐＨ６．２±０．１、温度約６０℃で約１．５時間加熱し、約１０℃に冷却後、ポリエチレングリコール４０００、濃度１８−２０％を加えて不純物を沈殿させ、アルブミンを含む上清をｐＨ約４．６で等電点沈殿させ、アルブミンのダイマーを含まないアルブミンを回収する方法」（第１欄３１〜４６行、２〜３欄の実施例Ｉ）について示され、
　また、「血漿のｐＨを約６．７に調製し、これを温度約６０℃で約１．５時間加熱し、血漿のｐＨを約５．７に調整し、約−５℃に血漿を冷却して約４０〜４４％となるようにエタノールを加えて不純物を沈殿させ、アルブミンを含む上清をｐＨ約４．８に調整して上清からアルブミンを沈殿させる方法」（第１欄５９行〜２欄２行、第３〜４欄の実施例ＩＩ）が示されている。
５．判断
（１）請求項１に係る発明について
　請求項１に係る発明は、アルブミン製剤の製造方法に関するものであり、血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、５０〜７０℃で５〜２０時間の加熱処理を施してなるアルブミン製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であるアルブミン製剤の製造方法である。
　一方、刊行物１には、殺菌（６０℃、１０時間）に先立って行われる６０℃、半時間の加熱により凝集体含量が０．１％未満のアルブミン製剤の製造方法が示されてる。
　そして、アルブミンを加熱処理することにより、アルブミンが精製できることについては、刊行物３において、６３〜７０℃での加熱により、刊行物４〜５において、６０℃で１０時間の加熱により、刊行物６において、６０℃で１時間の加熱により、刊行物７において、７０℃で１５分の加熱により、刊行物８において、６０℃で１．５時間の加熱により、それぞれアルブミンの精製ができることが示されている。
　これら、刊行物３〜８に記載された前記加熱は、アルブミンの精製のための加熱であり、アルブミンの殺菌のためにとられた加熱というものではない。
　そして、刊行物１の記載は、殺菌（６０℃、１０時間）に先立って行われている凝集体を除去するために行われる６０℃、半時間の加熱により、殺菌のための再度の加熱による沈殿が生ずることがないことを示している。
　一方、前記刊行物３〜８においては、アルブミン中の不純物を除去するため、６０〜７０℃の加熱温度範囲において、種々の加熱時間を採用しているのであるから、刊行物１に記載の殺菌に先立つアルブミンの精製のために行われる、加熱によるアルブミンの精製においての加熱時間に関しては、格別半時間でなければならないという厳密な制限はなく、適宜変更し得る余地があることは当業者であれば容易に理解できることである。
　したがって、請求項１に係る発明において示された、生成した凝集体を除去するための加熱時間については、アルブミンの精製において必要に応じて適宜とりうる範囲内のものといえ、また、生成した凝集体を除去した後の加熱時間についても刊行物１に記載されているところであるから、加熱時間の設定について格別の創意を要したとはいえない。
　また、請求項１に係る発明により奏される効果も当業者の予測し得ない格別顕著な効果であるともいえない。
　してみると、本件請求項１に係る発明である「血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、５０〜７０℃で５〜２０時間の加熱処理を施してなるアルブミン製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤の製造方法」は、刊行物１〜８から、当業者が容易に発明をすることができたものといえる。
（２）請求項２に係る発明について
　請求項２に係る発明は、請求項１に係る発明において、凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行うアルブミン製剤の製造方法に関するものである。
　しかしながら、凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行うことは、前記刊行物１〜８に記載されているように周知である。
　また、請求項２に係る発明により奏される効果も格別顕著であるともいえない。
　そうすると、請求項２に係る発明は、請求項１に係る発明に刊行物１〜８に示された事項を組合わせたものといえるから、結局、請求項１に係る発明と同様、請求項２に係る発明は、刊行物１〜８から容易に発明をすることができたものである。
（３）請求項３に係る発明について
　請求項３に係る発明は、請求項２（ただし、請求項３には、その末尾の引用請求項において「請求項３のアルブミン製剤の製造方法。」となっているが、請求項３は、請求項２を引用して記載されていることは訂正前の明細書から明らかであるから、前記「請求項３のアルブミン製剤の製造方法。」の記載は、「請求項２のアルブミン製剤の製造方法。」の誤記と認める。）に係る発明において、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法でアルブミンを回収するアルブミン製剤の製造方法に関するものである。
　しかしながら、刊行物１〜８には、アルブミンを精製する方法として、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法または等電点分画法が使用できることが示され、刊行物８には、例えば、ポリエチレングリコール４０００、濃度１８−２０％を加えて不純物を沈殿させ、アルブミンを含む上清をｐＨ約４．６で等電点沈殿させ、アルブミンのダイマーを含まないアルブミンを回収する方法が示され、また、血漿を冷却して約４０〜４４％となるようにエタノールを加えて不純物を沈殿させ、アルブミンを含む上清をｐＨ約４．８に調整して上清からアルブミンを沈殿させる方法が示されている。
　そして、本件請求項３で規定している各処理方法における数値については、前記刊行物１〜８に示されているアルブミンの精製技術に基づいて容易に選択できる範囲のものといえ、このような数値の設定に格別の創意があるとはいえない。
　また、請求項３に係る発明により奏される効果も当業者の予測し得ない格別顕著な効果であるともいえない。
　したがって、請求項３に係る発明は、刊行物１〜８から容易に発明をすることができたものである。
６．むすび
　以上のとおりであるから、本件請求項１〜３に係る各発明は、その出願前に頒布された刊行物１〜８に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本件請求項１〜３に係る各発明の特許は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものである。
　したがって、訂正明細書の請求項１〜３に係る各発明の特許は、特許法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１３年３月２７日（２００１．３．２７）
【訂正の要旨】
　訂正の要旨
　訂正前の特許請求の範囲の請求項１を削除すると共に、請求項の項番を繰り上げ、次のとおり訂正するものである。
　「１．アルブミン製剤において、血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤。
　２．血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤の製造方法。
　３．凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行う請求項２記載のアルブミン製剤の製造方法。
　４．硫安濃度２８０−３５０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０−８．０の条件下で硫安分画処理する；ＰＥＧ濃度５−２０％、ｐＨ５．０−６．５の条件下でＰＥＧ分画処理する；エタノール濃度１０−４５（ｖ／ｖ）％、ｐＨ４．５−６．５の条件下でエタノール分画処理する；又はｐＨ４．５−５．０の条件下で等電点分画処理するのいずれかの方法で凝集体を除去する請求項３記載のアルブミン製剤の製造方法。」を、特許請求の範囲の減縮を目的に
「１．血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、５０〜７０℃で５〜２０時間の加熱処理を施してなるアルブミン製剤中の血清アルブミン含量に対する凝集体含量が１重量％以下であることを特徴とするアルブミン製剤の製造方法。
　２．凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行う請求項１記載のアルブミン製剤の製造方法。
　３．硫安分画処理において、硫安濃度２８０〜３５０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０〜８．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、上清に硫安を添加し、硫安濃度４５０ｇ／ｌとして、アルブミンを沈殿させて回収する；ＰＥＧ分画処理において、ＰＥＧ濃度５〜２０％、ｐＨ５．０〜６．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、ＰＥＧ濃度１５〜２５％、ｐＨ４．５〜５．５となるように上清を調整してアルブミンを回収する；エタノール分画処理において、エタノール濃度１０〜２０（ｖ／ｖ）％、ｐＨ４．５〜５．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、エタノール濃度を約４０（ｖ／ｖ）％、ＰＨを約４．８となるように上清を調整してアルブミンを回収する；または、等電点分画処理において、ＰＨ４．５〜５．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、透析または限外渡過によりアルブミンを回収する、請求項３のアルブミン製剤の製造方法。」と訂正する。
（５４）【発明の名称】
アルブミン製剤及びその製造方法
（５７）【特許請求の範囲】
　１．　血清アルブミン含有水溶液を５０〜７０℃で１〜１０時間加熱し、生成した凝集体を除去する工程を含み、
５０〜７０℃で５〜２０時間の加熱処理を施してなるアルブミン
　２．　
凝集体の除去を、硫安分画法、ポリエチレングリコール分画法、アルコール分画法及び等電点分画法のいずれかより選ばれた方法で行う請求項１記載の
　３．　
硫安分画処理において、硫安濃度２８０〜３５０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０〜８．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、上清に硫安を添加し、硫安濃度４５０ｇ／ｌとして、アルブミンを沈殿させて回収する；ＰＥＧ分画処理において、ＰＥＧ濃度５〜２０％、ｐＨ５．０〜６．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、ＰＥＧ濃度１５〜２５％、ｐＨ４．５〜５．５となるように上清を調整してアルブミンを回収する；エタノール分画処理において、エタノール濃度１０〜２０（ｖ／ｖ）％、ｐＨ４．５〜５．５の条件下で凝集体を除去し、次いで、エタノール濃度を約４０（ｖ／ｖ）％、ｐＨを約４．８となるように上清を調整してアルブミンを回収する；または、等電点分画処理において、ｐＨ４．５〜５．０の条件下で凝集体を除去し、次いで、透析または限外濾過によりアルブミンを回収する、請求項３の
【発明の詳細な説明】
＜産業上の利用分野＞
　本発明は、アルブミン製剤及びその製造方法に関し、より詳細には、凝集体含量が低減された血清アルブミン製剤及びその製造方法に関する。
＜従来の技術及び発明が解決しようとする課題＞
　血清アルブミンは血漿中に最も多く含まれている蛋白質で、血液中で浸透圧の維持、栄養物質や代謝物質と結合してその運搬などの機能を果たしている。上記血清アルブミンを含有する製剤は、アルブミンの喪失及びアルブミン合成低下による低アルブミン血症、出血性ショックなどの治療に用いられている。アルブミン製剤は、そこに混入してくる懸念のあるウイルスを不活化するために、通常、アルブミン含有水溶液の状態での加熱処理が汎用されている。このような方法により製造される市販のアルブミン製剤は、製剤中にゲル濾過分析で全蛋白質中Ａ２８０値で５〜１０％の凝集体（通常ポリマーと称されるので、以下、ポリマーという）が存在することが知られている。このポリマーは上記の加熱処理前には殆ど存在しないことから、加熱処理により熱に不安定な夾雑蛋白質の作用でアルブミンが凝集化したものと考えられる。市販のアルブミン製剤は安全に広く使用されていることから、このポリマーが特に人に害を及ぼすとは考えられていないが、加熱変性物であることより、製剤中にできるだけ含有しないことが好ましい。
　本発明は上記の課題を解決すべくなされたもので、ポリマー含量の少ないアルブミン製剤を提供することを目的とする。
＜課題を解決するための手段＞
　上記の課題を解決すべくなされた、本発明のアルブミン製剤は、アルブミン含量に対するポリマー含量が１重量％以下であることを特徴とするものであり、また本発明のアルブミン製剤の製造方法は、アルブミン含有水溶液を加熱し、生成したポリマーを除去する工程を少なくとも含むことを特徴とするものである。なお、生成したポリマーを除去する方法としては、硫安分画法、ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧという）分画法、アルコール分画法及び等電点分画法が好ましい。
　本発明にかかる製剤の主成分であるアルブミンの由来には特に制限がなく、具体的には哺乳動物、例えば、ヒト、ウシ、ウサギ等に由来するものが挙げられ、特にヒト由来のものが使用される。アルブミンを調製するための出発原料としては、例えば、コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分等が例示される。
　本発明のアルブミン製剤の製造方法は、上記アルブミンを含有する水溶液を加熱し、生成したポリマーを除去する工程を少なくとも包含するものである。
　上記の工程において、アルブミン含有水溶液中のアルブミン含量としては、通常、０．１〜３０％（Ｗ／Ｖ、特に明示のない限り以下同様）、好ましくは１〜５％とされ、適当なｐＨ調整剤にてｐＨを５〜９程度に調整するのが好ましい。また、必要に応じて、アルブミンの安定化剤、例えば、Ｎ−アセチルトリプトファンナトリウム、カプリル酸ナトリウム等を単独で又は混合して添加してもよく、これらの安定化剤は１０〜６０ｍＭ、通常、２０〜４０ｍＭ程度の濃度で使用される。上記のアルブミン含有水溶液の加熱条件としては、ポリマーを生成させるに十分な温度及び時間行なえばよく、例えば、５０〜７０℃、好ましくは約６０℃で１〜１０時間、好ましくは約３時間行われる。
　上記で生成したポリマーの除去方法としては蛋白質の精製に用いられる慣用の方法のいずれも用いることができるが、硫安分画法、ＰＥＧ分画法、アルコール分画法及び等電点分画法が好ましく、これらの方法はこの分野で用いられる慣用の方法にて行われる。例えば、硫安分画法を採用する場合においては、加熱処理された溶液に、硫安濃度が２８０〜３５０ｇ／ｌとなるように硫安を添加するとともにｐＨを５．０〜８．０程度に調整してポリマーを沈澱させ、遠心分離等の慣用の手段で除去する。次いで、上清に硫安を添加して硫安濃度を４５０ｇ／ｌ程度とし、アルブミンを沈澱させて回収する。
　ＰＥＧ分画法を採用する場合には、加熱処理された溶液に、ＰＥＧ濃度が５〜２０％となるようにＰＥＧを添加するとともにｐＨを５．０〜６．５程度に調整してポリマーを沈澱させて除去する。次いで、ＰＥＧ濃度が１５〜２５％及びＰＨが４．５〜５．５となるように上清を調整してアルブミンを回収する。上記方法に使用されるＰＥＧの分子量は特に限定されないが、通常、４，０００程度のものが使用される。
　アルコール分画法を採用する場合には、加熱処理された溶液にアルコール、例えばエタノールを添加してエタノール濃度が１０〜４５（Ｖ／Ｖ）％となるようにするとともにｐＨを４．５〜６．５程度、好ましくはエタノール濃度１０〜２０（Ｖ／Ｖ）％、ｐＨ４．５〜５．５となるように調整してポリマーを沈澱させて除去する。次いで、エタノール濃度を約４０（Ｖ／Ｖ）％及びｐＨを約４．８となるように上清を調整してアルブミンを回収する。上記処理は、アルブミンの変性を抑制するため、処理温度を溶液が凍結しない範囲でできるだけ低い温度に維持して行なうのがよい。また、アルブミンの回収は、透析、限外濾過等の膜分離技術を用いて脱エタノールを行なって回収してもよい。なお、前記の硫安分画法やＰＥＧ分画法によると回収アルブミン中に分画剤である硫安やＰＥＧが残存する可能性があるが、アルコール分画法によれば、このような問題が少なくなるのでより好ましい。
　さらに、等電点分画法を採用する場合には、加熱処理された溶液のアルブミン濃度及びイオン強度を低下させた後、ｐＨを４．５〜５．０程度に調整してポリマーを沈澱させて除去する。次いで、透析、限外濾過等の膜分離技術を用いてアルブミンを回収する。
　なお、ポリマーの除去手段は、上記方法に限定されるものではなく、例えば、硫酸ナトリウムを用いた塩析法等、適宜な方法を用いることができる。
　上記工程により精製されたアルブミンは、この分野で慣用の方法にて製剤化される。例えば、回収アルブミンが固体状の場合には注射用蒸溜水等に所望濃度となるように溶解してアルブミン含有水溶液とし、また回収アルブミンが溶液状の場合には濃縮又は希釈して所望濃度となるように調整してアルブミン含有水溶液とした後、バイアル等に充填して加熱処理することによりアルブミン製剤が得られる。上記のアルブミン含有水溶液の濃度としては、５〜２５％程度とされ、さらに必要に応じて、前記の安定化剤を添加してもよい。また加熱処理は、混入する恐れのあるウイルスを不活化するもので、夾雑ウイルスを不活化するに十分な温度及び時間行なえばよく、例えば、５０〜７０℃、好ましくは約６０℃で５〜２０時間、好ましくは約１０時間行われる。
　斯くして得られたアルブミン製剤は、ポリマー含量が１％（アルブミン含量に対する相対重量％、ポリマー量に関しては以下同様）以下であり、また従来のアルブミン製剤と同様な用量、用法にて使用される。
＜発明の効果＞
　本発明のアルブミン製剤はポリマー含量が少なく安全性、安定性等に優れた製剤であり、また本発明のアルブミン製剤の製造方法によれば、加熱処理により生成するポリマーが予め除去されているので、ポリマー含量の少ないアルブミン製剤を得ることができる。特に、ポリマーを除去して精製されたアルブミンは再加熱してもポリマーの生成が極めて少なくなるので、加熱処理を要するアルブミン製剤の製造方法として好適である。
＜実施例＞
　以下、本発明をより詳細に説明するため、実験例及び実施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例によってなんら限定されるものではない。
実験例
　コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分をアセトンで脱アルコールし、アセトンパウダーを得た。次いで、アルブミン濃度が２５％となるように水に溶解し、安定化剤としてＮ−アセチルトリプトファンナトリウム及びカプリル酸ナトリウムをそれぞれ２０ｍＭ添加した。このアルブミン溶液をｐＨ７．０に調整した後、６０℃で加熱処理し、生成するポリマー量をゲル濾過分析法にて測定した。その結果を第１図に示す。第１図から明らかなように、ポリマーの生成量は、約３時間まで経時的に増加するが、３時間以降は略プラトーとなった。これより、３時間程度の加熱処理を行なえばポリマー化は完了することが判明した。
実施例１
　コーン氏の冷アルコール分画によって得られた第Ｖ画分をアセトンで脱アルコールし、アセトンパウダーを得た。次いで、アルブミン濃度が２５％となるように水に溶解し、安定化剤としてＮ−アセチルトリプトファンナトリウム及びカプリル酸ナトリウムをそれぞれ２０ｍＭ添加した。
　このアルブミン溶液をｐＨ７．０に調整した後、６０℃で加熱処理した。
　次いで、上記の加熱処理溶液を生理食塩液で希釈してアルブミン濃度が２．５％となるようにし、ｐＨをそれぞれ５．５及び７．０に調整した液を作製し、硫安を添加しポリマーを沈澱させ、上清中のポリマー含量をゲル濾過分析法により測定した。その結果を第２図に示す。第２図に示されるように、上清中のポリマー含量は硫安濃度の上昇に伴って減少し、いずれのｐＨにおいても、硫安濃度３４０ｇ／ｌ程度とすることによりポリマー含量を著しく低減することができた。
　さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清に硫安を添加し、硫安濃度４５０ｇ／ｌとしてアルブミンを回収した。このアルブミンを脱塩、濃縮し、アルブミン濃度を２５％となるように注射用蒸溜水に溶解させ、実験例と同様に安定化剤を添加した後、バイアルに充填して密封し、６０℃で１０時間加熱してアルブミン製剤を得た。上記加熱処理中に生成するポリマー量を経時的にゲル濾過分析法により測定した。その結果を第３図に示す。第３図に示されるように、該製剤中のポリマー含量は、再加熱前では０％、再加熱後でも１％以下であり、ポリマー含量を著しく低減できた。なお、比較例として、硫安分画していない未処理のアルブミンを、上記と同様にバイアルに充填して加熱処理し心その結果、加熱３〜１０時間後には、ポリマー含量が５〜６％となった。
実施例２
　実施例１と同様にして得られたアルブミン加熱処理溶液を、生理食塩液で希釈してアルブミン濃度が５％になるように調整し、さらにＰＥＧ濃度がそれぞれ１０％及び１５％となるようにＰＥＧを溶解し、１Ｎ塩酸を用いてｐＨを変化させてポリマーを沈澱させ、上清中のポリマー含量をゲル濾過分析法により測定した。その結果を第４図に示す。第４図に示されるように、ＰＥＧ濃度１５％ではｐＨが約５．６で、またＰＥＧ濃度１０％ではｐＨが約４．８でポリマー含量が略零になった。
　さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清にＰＥＧを添加し、ＰＥＧ濃度２０％、ｐＨ４．８としてアルブミンを回収した。回収したアルブミンを実施例１と同様にして製剤化し、加熱処理した。その結果、生成ポリマー量は１％以下であった。
実施例３
　実施例１と同様にして得られたアルブミン加熱処理溶液を、水で希釈してアルブミン濃度が５％となるように調整し、さらにエタノール濃度がそれぞれ１３、１５、１９、２０及び２１（Ｖ／Ｖ）％となるようにエタノールを添加し、そのエタノール濃度を含む０．８Ｍ酢酸緩衝液を用いてｐＨを変化させてポリマーを沈澱させ、上清中のポリマー含量をゲル濾過分析法により測定した。その結果を第５図に示す。第５図に示されるように、エタノール濃度１３（Ｖ／Ｖ）％ではｐＨ約４．８、同１５（Ｖ／Ｖ）％ではｐＨ約４．９、同１９（Ｖ／Ｖ）％ではｐＨ約５．２５、同２０（Ｖ／Ｖ）％ではｐＨ約５．３５、同２１（Ｖ／Ｖ）％ではｐＨ約５．４でポリマー含量が略零になった。
　さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清にエタノールを添加し、エタノール濃度４０（Ｖ／Ｖ）％、ｐＨ４．８としてアルブミンを回収した。回収したアルブミンを実施例１と同様にして製剤化し、加熱処理した。その結果、生成ポリマー量は１％以下であった。
実施例４
　実施例１と同様にして得られたアルブミン加熱処理溶液を水で希釈してアルブミン濃度が０．５、１．２５及び２．５％となるように調整し、１Ｎ塩酸を用いてｐＨを変化させてポリマーを沈澱させ、上清中のポリマー含量をゲル濾過分析法により測定した。その結果を第６図に示す。第６図に示されるように、アルブミン濃度０．５％ではｐＨ約４．５〜５．０、アルブミン濃度１．２５％ではｐＨ約４．５〜４．８の範囲でポリマー含量が略２％以下となった。
　さらに、上記の沈澱したポリマーを除去したのちの上清を限外濾過に付して濃縮した。得られたアルブミンを実施例１と同様にして製剤化し、加熱処理した。その結果、生成ポリマー量は１％以下であった。
【図面の簡単な説明】
　第１図は、未処理アルブミン含有水溶液の加熱処理によるポリマー形成の時間推移を示す図、
　第２図は、硫安分画法による上清中のポリマー含量のｐＨ及び硫安添加量依存性を示す図、
　第３図は、硫安分画法で得られたアルブミン及び未処理アルブミン含有製剤におけるポリマー生成量の時間推移を示す図、
　第４図は、ＰＥＧ分画法における上清中のポリマー含量のＰＥＧ濃度及びｐＨ依存性を示す図、
　第５図は、エタノール分画法における上清中のポリマー含量のエタノール濃度及びｐＨ依存性を示す図、及び
　第６図は、等電点分画法における上清中のポリマー含量のアルブミン濃度及びｐＨ依存性を示す図である。