【事件の表示】
　特許第３１３４３１３号「炭水化物添加培地を用いて微生物を同定する方法」の請求項１ないし１３に係る特許に対する特許異議の申立てについて、次のとおり決定する。
【結　論】
　訂正を認める。
　特許第３１３４３１３号の請求項１ないし１０に係る特許を維持する。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本件特許第３１３４３１３号に係る発明についての出願は、平成６年７月２８日（パリ条約による優先権主張外国庁受理１９９３年７月２８日、フランス国）を国際出願日とする出願であって、平成１２年１２月１日にその特許の設定登録がなされ、その後、栄研化学株式会社より特許異議申立がなされ、取消理由通知がなされ、訂正請求（後日取下げ）がなされた後、再度の取消理由通知がなされ、その指定期間内である平成１４年７月３１日に訂正請求がなされたものである。
　
II．訂正請求
１．訂正の内容
(a)特許請求の範囲の請求項１に係る記載、
「培地中の特定の微生物菌株の存在を検出する方法であり、前記菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体と、１０〜３０g/lのオーダーの濃度の、炭水化物から選ばれた少なくとも１種の化合物とを培地中に添加し、色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ることを特徴とする、前記方法。」を、
「培地中の特定の酵母の菌株の存在を検出する方法であり、前記菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体と、１０〜３０g/lのオーダーの濃度の、単糖類から選ばれた少なくとも１種の化合物とを標準培地中に添加し、色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ることを特徴とする、前記方法。」と訂正する。
(b)特許請求の範囲の請求項１０を削除し、請求項１１を「請求項１０」と訂正する。
(c)特許請求の範囲の請求項１１に係る記載を、
「酵母がカンジダ属に属するものである、請求の範囲第１項〜第９項のいずれかに記載の方法。」と訂正する。
(d)特許請求の範囲の請求項１２及び請求項１３を削除する。
２．訂正の目的の適否、新規事項の有無及び拡張・変更の存否
　訂正事項(a)は、「微生物」を「酵母」に、「炭水化物」を「単糖類」に、「培地」を「標準培地」にそれぞれ訂正するものであるから特許請求の範囲の減縮に該当し、同(b)及び(d)は、請求項を削除するものであるから、特許請求の範囲の減縮に該当し、同(c)は、(b)の訂正に伴うものである。
また、これらの訂正は新規事項に該当せず、実質上特許請求の範囲を拡張し、または変更するものではない。
３．むすび
　以上のとおりであるから、本件訂正請求は、特許法１２０条の４,２項及び同条３項で準用する１２６条２項及び３項の規定に適合するので、請求のとおり当該訂正を認める。
　
III．特許異議申立
１．特許異議申立書の理由の概要
　特許異議申立人 栄研化学株式会社は、甲第１号証乃至甲第５号証を提出し、訂正前の本件請求項１乃至請求項１３に係る発明は、甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明である、若しくは、甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたものであるから特許法２９条１項３号、若しくは同条２項の規定に違反するものである、或いは、本件明細書の記載は不備であるから同法３６条４項の規定に違反するものであるので、特許を受けることができないと主張している。
　　　　　　　　　記
甲第１号証：特開平３−６７５９９号公報    
甲第２号証：特表平５−５０５３１２号公報  
甲第３号証：特開昭６４−２５９６号公報    
甲第４号証：特開昭５７−１４４９９５号公報
甲第５号証：特表平４−５０４８０２号公報  
２．甲各号証の記載内容
　甲第１号証には、「例１」に、「サルモネラ菌を検知できる分離媒体　以下の組成を有する媒体が生産される。」、そして「成分」は「１，２−プロパネジオール」、「ペプトン」、「イースト抽出」、「デオキシコレート」、「ブロモクロロインドキシル」、「ガラクトシド」、「中性赤」及び「寒天」であって、各々「５」、「５」、「２」、「１」、「０．１」、「０．０３」及び「１５」グラム／水１リットルであり、「各種タイプのエンテロバクテリアでこの媒体を４８時間培養し、その後接種することによって次の結果が得られた。サルモネラは、赤コロニーを示し、大腸菌は青、緑コロニーを示し、シトロバクテルは青・紫コロニーを示し、プロテウスは無色のコロニーを示した。」ことが記載され、並びに、「例２」に、「本発明による分離媒体により、ポリオールは粉末物質に吸収される。使用された混合物は以下の組成を示す。」、そして「成分」は「１，２−プロパネジオール／シリカゲル（１０ｇ／１６ｇ）」、「ペプトン」、「イースト抽出」、「デオキシコレート」、「ブロモクロロインドキシルガラクトシド」、「中性赤」及び「寒天」であって、各々「２６」、「５」、「２」、「１」、「０．１」、「０．０３」及び「１５」グラム／水１リットルであり、「各種タイプのエンテロバクテリアでこの媒体を４８時間培養し、その後接種することにより次の結果が得られた。この結果は、例１の目的である培養媒体において観察されたものに類似する。すなわち、サルモネラは赤コロニーを示し、大腸菌は青・緑コロニーを示し、シトロバクテルは青・紫コロニーを示し、プロテウスは無色コロニーを示した。」ことが記載されている。
　甲第２号証は、「サルモネラ属の細菌を検出するための細菌学的分析方法及び培地」に係り、「実施例１」には、「本発明の培地の調製」として、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド０．１g/L及び寒天１５g/L等を含む培地が示され、「実施例２」には、「本発明の培地上で培養した後のサルモネラ菌の選択的検出」として、「得られたコロニーの色によって、細菌の２つの生化学的特徴、すなわちβ−ガラクトシダーゼの産生又は非産生とグルクロン酸又はその塩の発酵又は非発酵を調べることが可能であり、下記の通りである。」として「あざやかな赤色のコロニー」、「青色のコロニー」、「紫色のコロニー」及び「無色のコロニー」を示すこと、そして「上記のあざやかな赤色のコロニーはサルモネラ菌であると推定される。」こと、並びに、「実施例３」には、「２４時間以上培養した後にコロニーを観察することによりサルモネラを選択的に検出するための本発明の培地の調製」として、ソルビトール５〜１０ｇ好ましくは８ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド０．１７ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルコピラノシド０．０１〜０．０５ｇ好ましくは０．０２５ｇ、及び寒天１４ｇ等を含む培地が示され、「実施例４」には、「本発明の検出培地の選択性の例証」として、３２菌株について調べ、「３２菌株のうち、サルモネラ菌株全部しかもこれらの菌株のみが、本発明の培地上で赤色のコロニーすなわちサルモネラ菌の特徴的外観を与えた。β−ガラクトシダーゼの存在を示ししかもグルクロン酸の発酵がないことを示す青い色のコロニーが１菌株すなわちシトロバクター・フロインディイの菌株について認められた。大腸菌３菌株、クレブシェラ４菌株及びシトロバクター・フロインディイ２菌株は、紫色のコロニーを与えた。プロテウス６菌株は透明なコロニー（・・・）の存在を伴って部分的に阻害された。・・・本実施例は本発明の培地の特異性を明確に示す。サルモネラコロニーのみが赤い着色を示した。」ことがそれぞれ記載されている。
　甲第３号証は、「エシエリヒア・コリーの計数方法」に係り、「実施例１」には、グリセロール１０．０％、Ｋ２ＨＰＯ４３．３％、ＫＨ２ＰＯ４１．０％、寒天１５．０％、そして、インドキシル−β−Ｄ−グルクロニド、又は、インドキシル−β−Ｄ−グルコシド等を添加した培地で大腸菌などを培養することが記載されている。
　甲第４号証は、「迅速微生物検査方法」に係り、特許請求の範囲には、
「(1)一定量の検体を含む被検液又は検体を栄養培地で２〜１２時間培養した培養物に非蛍光性ウンベリフエロン誘導体を加えた混合液を一定時間保持するか、又は検体を非蛍光性ウンベリフエロン誘導体を含む栄養培地で２〜１２時間培養した後、混合液又は栄養培地中で遊離される蛍光性ウンベリフエロン誘導体の量を測定し、該誘導体の遊離量に基づいて検体中の微生物数を測定することからなる迅速微生物検査方法。
(3)微生物が一般菌である特許請求の範囲第１項又は第２項記載の微生物検査方法。
(4)微生物が大腸菌群である特許請求の範囲第１項又は第２項記載の微生物検査方法。」が記載されている。
　甲第５号証には、置換インジゴ誘導体を用いる特定の微生物又は微生物群（大腸菌群細菌）に関連する酵素のアッセイ法が記載されている。
３．判断
Ａ．特許法２９条１項３号について
（本件発明１について）
　訂正された請求項１に係る発明（以下、「本件発明１」という。）は、「培地中の特定の酵母の菌株の存在を検出する方法」に関するものであるところ、甲第１号証及び甲第２号証に記載の発明は、サルモネラ菌の存在を検出するものであり、甲第３号証及び甲第５号証に記載の発明は、主に大腸菌の存在を検出するものであって、いずれも細菌に関するものであるから、特定の酵母の菌株の存在を検出する方法に係る本件発明１とは別異のものであり、また、甲第４号証には、一般菌としてサッカロミセス属等の酵母が例示されているものの、色原体と単糖類を添加することについて記載されてない。
　したがって、本件発明１は、甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明であるとはいえない。
（本件発明２乃至１０について）
　訂正された請求項２乃至請求項１０に係る発明（以下、「本件発明２乃至１０」という。）は、本件発明１を引用するものであるから、上記本件発明１についての判断と同様の理由により甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明であるとはいえない。
Ｂ．特許法２９条２項について
（本件発明１について）
　本件発明１は、培地中の特定の酵母の菌株の存在を検出するにあたり、「前記菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体と、１０〜３０g/lのオーダーの濃度の、単糖類から選ばれた少なくとも１種の化合物とを標準培地中に添加し、色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ること」を特徴とするものであるところ、甲第１号証乃至甲第５号証には、色原体と単糖類とを培地に添加することにより、「色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ること」について開示されているところはいない。
　したがって、甲第４号証に酵母についての記載があるとしても、他の甲各号証に記載の事項を組み合わせ、本件発明１のような構成を導くことはできないというべきである。
　そうすると、本件発明１は、甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものであるとはいえない。
（本件発明２乃至１０について）
　本件発明２乃至１０は、本件発明１を引用するものであるから、本件発明１についての判断と同様の理由により、甲第１号証乃至甲第５号証に記載された発明に基づき当業者が容易に発明をすることができたとはいえない。
Ｃ．特許法３６条４項について
　特許異議申立人は、本件明細書には、発明の具体的な構成を表す実施例が記載されていない、すなわち、具体的な手順が全く記載されておらず、誘導色であることの判断が不明である、と主張している。
　しかし、本件明細書には、「実施例」との項を立てて記載するところはないが、本件発明に係る「色原体」についての具体的記載、及び検出される具体的な酵母、並びに、「表Ｉ」として「誘導される発色の例」、及び「表II」として「種々の酵母に対する本発明による発色の例」が、具体的培地組成と誘導色でもって記載されており、本件出願時の技術常識を勘案すれば、本件明細書が当業者が実施できる程度に記載されていないとはいえない。
　したがって、上記特許異議申立人の主張は失当である。
４．むすび
　以上のとおりであるから、特許異議申立の理由及び証拠によっては、本件発明１乃至１０についての特許を取り消すことはできない。
　また他に本件発明１乃至１０についての特許を取り消すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり決定する。
【異議決定日】
平成１４年８月１９日（２００２．８．１９）
【訂正の要旨】
（訂正の要旨）
（ａ）特許請求の範囲の請求項１に係る記載、「培地中の特定の微生物菌株の存在を検出する方法であり、前記菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体と、１０〜３０ｇ／ｌのオーダーの濃度の、炭水化物から選ばれた少なくとも１種の化合物とを培地中に添加し、色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ることを特徴とする、前記方法。」を、特許請求の範囲の減縮を目的として、「培地中の特定の酵母の菌株の存在を検出する方法であり、前記菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体と、１０〜３０ｇ／ｌのオーダーの濃度の、単糖類から選ばれた少なくとも１種の化合物とを標準培地中に添加し、色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ることを特徴とする、前記方法。」と訂正する。
（ｂ）特許請求の範囲の請求項１０、請求項１２及び請求項１３を、特許請求の範囲の減縮を目的として削除する。
（ｃ）特許請求の範囲の請求項１１を「請求項１０」と訂正し、この記載を、「酵母がカンジダ属に属するものである、請求の範囲第１項〜第９項のいずれかに記載の方法。」と、明りょうでない記載の釈明を目的として訂正する。
（５４）【発明の名称】
炭水化物添加培地を用いて微生物を同定する方法
【発明の詳細な説明】
　本発明は、培地中に特定の微生物菌株が存在するかどうかを検出するための方法に関する。
　微生物が病原性であるかもしれないだけでなく、何らかの種類の汚染を示す可能性があることから、微生物の検出は非常に重要であり、特に食品工業、水質管理、または医薬において重要である。
　ある種の培地中において微生物の存在を検出することができる方法は種々あり、それらは、対象とする培地の試料を採取し、次いで適宜培地上または培地中で培養することにより存在する微生物の成長を促進することからなる。
　存在する微生物の検出を簡便にするために、検出培地において、ある微生物に特有の着色化合物を使用することが提案されてきた。
　発色が、問題の微生物と関連した酵素活性を表すことはよくあり、この活性の発現により、着色指示薬により示される培地のｐＨ変化がもたらされる（ＥＰ−Ａ−０　３９５　５３２）か、あるいは発色団化合物（ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）もしくは発蛍光団化合物（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の遊離がもたらされる（ＦＲ−Ａ−２−６８４，１１０号）。
　発色団あるいは発蛍光団とは、一般的には、培地中の、対応する色原体化合物（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ、発色団を含む化合物）もしくは発蛍光団を含む化合物（ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）が酵素により加水分解されることにより得られる化合物である。
　発蛍光団は蛍光により特有の光を放射する。
　発色団化合物は主波長による色を特徴とする。
　既知の発色団化合物としては、特に、インドキシル誘導体、ヒドロキノリン誘導体、あるいはナフトエ酸誘導体やナフチルおよびフェニル誘導体が挙げられる。
　培地中の異なる２種の属の微生物を区別するために、それぞれが個々の微生物の存在に特有の色を有する発色団化合物を遊離するような、２種の色原体を導入する提案がなされた（ＵＳ−Ａ−５−２１０，０２２）。
　これらの培地はすべて、特定属の微生物、例えばサルモネラ、カンジダ、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などを検出し、それらを他の種類と区別するのに有効であるが、同じ培地上の異なる属の多数の微生物を検出することはできず、また同じ属の微生物の中で病原性の種類とその他を区別できない。
　このような区別はすべて、ある種の酵母、例えば酵母に関連した病状の５０％以上の原因であるカンジダ・アルビカンス（
Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ
　ここに、菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体、および高濃度の、炭水化物から選択された少なくとも１種の化合物を培地中に導入し、発色団の基本色とは異なる誘導された色を得ることにより、上記欠点が解消されることが予想外にも見出された。
　誘導された色とは、標準培地中に別にとった、培地中に存在する色原体から遊離した発色団の主波長とは、その主波長が異なるような色を意味する。
　標準培地とは、炭水化物が炭素源としての機能を果たすだけであるような非常に低濃度または濃度０の、通常の同定用培地を意味し、そのような濃度では微生物の挙動を非抑制的に改変して、対象とする微生物の同定において間違いを生じるさせるような誘導効果を回避することができると考えられる。
　発色団の主波長は、対象物の色を測定する任意の標準的方法、特に分光比色計を用いて、光源Ｄ６５としてＣＩＥ（エネルギーに関する国際委員会、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｅｎｅｒｇｙ）に定義するように、日光を対照として評価すればよい。
　従って、本発明は、培地中の特定の微生物菌株の有無を検出する方法であり、この菌株の酵素に対する基質である少なくとも１種の色原体、および高濃度の、炭水化物から選ばれた少なくとも１種の化合物を培地中に導入して、色原体の加水分解後に発色団の基本色とは異なる色を得ることを特徴とする。
　培地はペプトン基本培地であるのが有利である。
　本発明によれば、炭水化物は、天然あるいはその他の全ての糖類を意味し、特に単糖類、殊にペントース類もしくはヘキソース類、好ましくはグルコースが挙げられる。
　炭水化物の高濃度とは、培地に対して１０〜３０ｇ／ｌのオーダーである。
　さらに、酵素の１つがホスファターゼである場合は、ホスフェートを高濃度で添加すると、本発明方法により得られる誘導色の数を増加させうることも見出された。
　従って、本発明は培地が、高濃度、好ましくは１〜３ｇ／ｌのホスフェートを含有する、上記方法にも関する。
　色原体は特に、次のような酵素の基質である：β−ガラクトシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、ホスファターゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−ガラクトシダーゼ、α−マンノシダーゼ、スルファターゼ、エステラーゼ、リパーゼおよびペプチダーゼ。
　培地は少なくとも２種の色原体、殊に化学的に同族の化合物から、好ましくはカップリング反応を生じうる２種の異なる発色団を加水分解により遊離する化合物から選択された色原体を含有するのが有利である。
　カップリング反応は、得られる主波長が、別々にとった２種の発色団の混合物の主波長とは異なるような物理化学的相互作用を意味する。
　好ましくは、色原体はインドキシル系、殊にアルキル化、ハロゲン化またはジハロゲン化インドキシル誘導体である。
　インドキシルから誘導される好ましい発色団には、ブロモインドキシル、クロロインドキシル、ジクロロインドキシル、クロロブロモインドキシル、トリクロロインドキシルおよびメチルインドキシルのインドキシル誘導体、殊に次のような誘導体がある：６‐クロロインドキシル、５‐ブロモインドキシル、３‐ブロモインドキシル、４，６‐ジクロロインドキシル、６，７‐ジクロロインドキシル、５‐ブロモ‐４‐クロロインドキシル、５‐ブロモ−６‐クロロインドキシルまたは４，６，７‐トリクロロインドキシル。
　本発明方法によって検出される微生物とは、酵母類、カビ類または単細胞菌類および細菌類を意味する。
　本発明方法はカンジダ属、殊にカンジダ・アルビカンスやカンジダ・トロピカリス（
Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ
　同様に、本発明方法によって存在の有無を検出しうる細菌類には、特にストレプトコッカス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）
Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
Ｌｉｓｔｅｒｉａ
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）
Ｐｒｏｔｅｕｓ）
　以下に示す例は、本発明方法を説明するものであるが、その範囲を限定するものではない。
　上記結果は、グルコースおよびホスフェートの添加により、同じ培地で利用しうる色の範囲が広がり、この例では異なる７つの種を区別すること、特にカンジダ・アルビカンスを明確に同定しうることが明らかである。
（５７）【特許請求の範囲】
１．培地中の特定の
酵母の
２．培地がペプトン基本培地である、請求の範囲第１項記載の方法。
３．培地が高濃度のホスフェートを含有する、請求の範囲第１項または第２項に記載の方法。
４．ホスフェートの濃度が１〜３ｇ／ｌの範囲内である、請求の範囲第３項に記載の方法。
５．培地が少なくとも２種の色原体を含有する、請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載の方法。
６．色原体が化学的に同族の化合物である、請求の範囲第５項に記載の方法。
７．２種の色原体が、カップリング反応を生じうる、２種の異なる発色団を加水分解により遊離する、請求の範囲第５項または第６項に記載の方法。
８．色原体が、インドキシル系から選択される、請求の範囲第６項または第７項に記載の方法。
９．発色団が、インドキシル誘導体であるブロモインドキシル、クロロインドキシル、ジクロロインドキシル、クロロブロモインドキシル、トリクロロインドキシルおよびメチルインドキシルから、特に６‐クロロインドキシル、５‐ブロモインドキシル、３‐ブロモインドキシル、４，６‐ジクロロインドキシル、６，７‐ジクロロインドキシル、５‐ブロモ‐４‐クロロインドキシル、５‐ブロモ‐６‐クロロインドキシルまたは４，６，７‐トリクロロインドキシルのインドキシル誘導体から選択される、請求の範囲第１項〜第８項のいずれかに記載の方法。
１０
第１項〜第９項のいずれか