(57)【要約】ガラス繊維より引っ張り強度が強く、かつ標識体の放出がよい基材を標識体乾燥パッドとして備えた、高感度に被検出成分を検出することができるラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置を提供する。本発明によると、支持板と、試料供給部と、被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、吸収部とを有し、繊維径が０．０５〜１０μｍの繊維を含む不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置が提供される。
2010126011.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持板と、
試料供給部と、
被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、
前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、
吸収部とを有し、
繊維径が０．０５〜１０μｍの繊維を含む不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項２】
前記繊維が、合成繊維であることを特徴とする請求項１に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項３】
前記不織布は、複数の前記繊維が互いに接着した不織布であることを特徴とする請求項２に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項４】
前記不織布が、複数の繊維成分が互いに接着されてなる割繊型複合繊維を割繊処理した割繊繊維により形成された不織布であることを特徴とする請求項２に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項５】
前記割繊型複合繊維が、繊維径が６μｍから２０μｍである第１の繊維成分の断面外周に繊維径が１μｍから１０μｍである第２の繊維成分を複数配置した構造を有するものであることを特徴とする請求項４に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項６】
前記標識成分が金コロイド粒子、白金コロイド粒子、ラテックス粒子、磁性粒子、酵素の何れかにより標識されていることを特徴とする請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項７】
前記標識成分および前記捕捉物質は、前記被検出物と結合する抗体または抗原結合性断片であることを特徴とする請求項６に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項８】
前記被検出物が、微生物、臨床マーカーである生体由来物質、農薬、環境ホルモンまたは、それらの分解物であることを特徴とする請求項７に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項９】
前記被検出物をラテラルフロー方式メンブレンアッセイ法で検出または定量することを特徴とする請求項８に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項１０】
前記展開部に前記標識成分が放出されたことを検証するための検証部をさらに有することを特徴とする請求項９に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【請求項１１】
複数の種類の前記被検出物を検出するために、前記標識成分及び前記捕捉物質をそれぞれ複数の種類用いることを特徴とする請求項１０に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臨床検査用の簡易検査キットに関する。特にラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ウイルスや細菌等の病原体感染の有無、妊娠の有無などの様々な検査を短時間で行う簡易検査試薬やキットが開発されている。これらは、病原体構成成分、ホルモン等が検出あるいは定量の対象である。このような簡易検査試薬の多くは、特別な設備、機器を必要とせず操作も簡便で安価であるという特徴を有している。【０００３】
例えば、妊娠検査試薬は一般薬局で販売されており、また病原体の検査試薬は病院、診療所で広く使用されている。病原体の検査に関しては、感染の有無が確認されれば、早い段階で治療措置を施すことができるため、医療の場における簡易検査試薬の重要性が高まってきている。【０００４】
現在、簡易検査の方法として、抗原抗体反応を利用した免疫測定法が一般的に知られており、ラテラルフロー方式の検査試薬が多く販売されている。この検査試薬の原理は、ニトロセルロースメンブレンに対して、被検出物を含む検体試料を水平方向に展開させ、メンブレン上に被検出物と特異的に結合する標識体の複合体を形成させる方法である。この標識体を検出または定量することにより、被検出物を検出または定量することができる。【０００５】
このラテラルフロー免疫測定法の一つの形態としては、ニトロセルロース等のメンブレンストリップ上に被検出物に特異的に結合する抗体を捕捉物質として固相化した検出部、及び被検出物に特異的に結合する標識体を含む標識体部を備えた検査デバイスに、被検出物を含む検体試料を一定量供給して、被検出物−標識体の複合体を形成させながら展開して、検出部でこの複合体を捕捉することで標識体を検出あるいは定量する。【０００６】
前記のようなメンブレンを用いた測定系において、従来は標識体として被検出物に特異的に結合する抗体に金粒子を標識したものが広く用いられていたが、最近では金粒子に代え着色ラテックス粒子、蛍光ラテックス粒子、磁性ラテックス粒子等を用いた測定系が確立され、測定対象もより拡大されつつある。特にラテラルフロー免疫測定法では、抗体を調製することができれば、広範囲の対象病原微生物抗原が測定可能となるので、有力な簡易検査試薬として大いに期待されている。【０００７】
一般的には、ラテラルフロー免疫測定法は、測定（反応）に要する時間が５〜１５分である。インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ノロウイルス等の検出と治療措置に急を要する項目の簡易検査としては、より短時間で高感度な測定方法が求められており、多くの改良研究が行われている。【０００８】
標識体は、被検出物と特異的に結合する抗体にマーカーとしてラテックス粒子を標識し、凍結乾燥、または温風乾燥（自然乾燥も含む）させた状態で用いているが、検出試験の際に標識体の放出および復元に時間がかかり、また標識体が展開されずに滞留することがあるため、迅速に高感度検出を行うには問題がある。【０００９】
このような問題に対する解決手段として、例えば特許文献１は、界面活性剤を用いることで標識体を検体試料中で速やかに復元・展開すること、糖類を含有させることで乾燥工程中のラテックス粒子の自己凝集を抑制すること等を開示している。【００１０】
一方で、標識体を含ませる基材に着目すると、ラテックス粒子等の標識体を含ませる基材としてよく使用されるガラス繊維をシート状に加工した素材は、標識体の放出はよいが、引っ張り強度が弱く製造工程での制約を受けるという欠点がある。また、引っ張り強度が強い素材としては合成繊維があるが、この基材に標識体を乾燥させた標識体乾燥パッドからの標識体の放出は悪く、短時間での高感度な簡易検出試薬には適さないという欠点がある。このようにこれまでは、標識体の放出がよく、かつ引っ張り強度が強い標識体乾燥パッドとしての基材は使用されてこなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００８−２０３１３５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ガラス繊維より引っ張り強度が強く、かつ標識体の放出がよい基材を標識体乾燥パッドとして備えた、高感度に被検出成分を検出することができるラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一実施形態によると、支持板と、試料供給部と、被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、吸収部とを有し、繊維径が０．０５〜１０μｍの繊維を含む不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置が提供される。【００１４】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記繊維が、合成繊維であってもよい。【００１５】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記不織布は、複数の前記繊維が互いに接着した不織布であってもよい。【００１６】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記不織布が、複数の繊維成分が互いに接着されてなる割繊型複合繊維を割繊処理した割繊繊維により形成された不織布であってもよい。【００１７】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記割繊型複合繊維が、繊維径が６μｍから２０μｍである第１の繊維成分の断面外周に繊維径が１μｍから１０μｍである第２の繊維成分を複数配置した構造を有してもよい。【００１８】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記標識成分が金コロイド粒子、白金コロイド粒子、ラテックス粒子、磁性粒子、酵素の何れかにより標識されてもよい。【００１９】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記標識成分および前記捕捉物質は、前記被検出物と結合する抗体または抗原結合性断片であってもよい。【００２０】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記被検出物が、微生物、臨床マーカーである生体由来物質、農薬、環境ホルモンまたは、それらの分解物であってもよい。【００２１】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記被検出物をラテラルフロー方式メンブレンアッセイ法で検出または定量してもよい。【００２２】
簡易メンブレンアッセイ装置において、前記展開部に前記標識成分が放出されたことを検証するための検証部をさらに有してもよい。【００２３】
簡易メンブレンアッセイ装置において、複数の種類の前記被検出物を検出するために、前記標識成分及び前記捕捉物質をそれぞれ複数の種類用いてもよい。【００２４】
ここで複合繊維とはそれぞれ繊維の長さ方向に連続した複数の繊維成分が側面同士において接着したものをいい、材料の異なる繊維成分を２種類以上含むものであればよい。【００２５】
さらに割繊型複合繊維とは、複合繊維を構成する各繊維成分が分割可能な構造を有する複合繊維をいう。【００２６】
また、割繊処理とは例えば割繊型複合繊維に高圧水流を当てる方法や熱を加える方法、溶剤に浸す方法等の繊維成分間の接着方法に合わせた方法により、割繊型複合繊維を構成する繊維成分ごとに分割することをいい、分割された各繊維成分を割繊繊維という。【００２７】
なお、不織布はスパンボンド法で製造することが好ましい。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によると、ガラス繊維より引っ張り強度が強く、かつ標識体の放出がよい基材を標識体乾燥パッドとして備えた、高感度に被検出成分を検出することができるラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明の一実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００の模式図
【図２】本発明の一実施形態に係る割繊型複合繊維２００の模式図
【図３】本発明の一実施形態に係る割繊処理した割繊型複合繊維２５０の模式図
【図４】本発明の一実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置３００の模式図
【符号の説明】
【００３０】
１００    実施形態１に係る簡易メンブレンアッセイ装置
１１０    プラスチック板
１２０    検出部
１３０    コントロールライン
１４０    ニトロセルロースメンブレン
１５０    吸収パッド
１６０    標識体乾燥パッド
１７０    サンプル供給パッド
２００    割繊型複合繊維
２０１    コア繊維成分
２０２    極細割繊繊維成分
２５０    割繊処理した割繊型複合繊維
３００    実施形態２に係る簡易メンブレンアッセイ装置
３２１    検出部Ａ
３２３    検出部Ｂ
３３０    コントロールライン
３６０    標識体乾燥パッド
【発明を実施するための形態】
【００３１】
上述したように、標識体乾燥パッドには一般的にガラス繊維や不織布が用いられるが、ガラス繊維をシート状に加工した場合には、標識体の放出はよいが、引っ張り強度が弱く製造工程での制約を受けるという欠点があった。また、合成繊維を用いた場合には、引っ張り強度は強いが、標識体の放出は悪いという欠点があった。これらの欠点を克服する方法を鋭意検討した。
【００３２】
例えば、ガラス繊維に要求される引っ張り強度を付与するために、他の材料と組み合わせた複合材料による不織布とすることが考えられるが、単純に合成繊維の不織布との組み合わせでは、標識体の放出効率の改善効果は期待できない。
【００３３】
そこで、合成繊維の不織布で標識体の放出効率を向上させることを検討した。合成繊維とガラス繊維の特性を比較すると、ガラス繊維は繊維径が小さいことから、極細の合成繊維の不織布を用いて標識体乾燥パッドを形成することを見出した。
【００３４】
本発明に係る標識体部の標識体乾燥パッドは、引っ張り強度が強い、複数の極細繊維成分が互いに接着した不織布により形成する。極細繊維の不織布を形成する方法としては、割繊型複合繊維のウエブを割繊処理することにより生成する方法、メルトブロー法、直接紡糸法でウエブを形成して不織布とする方法、海島構造繊維の海部を溶解して島部で不織布を形成する方法、レーザ延伸、エレクトロスピニング等がある。本発明に係る標識体部の標識体乾燥パッドは、繊維径が０．０５  μｍ〜１０  μｍの極細繊維を主に含む不織布であれば、いずれの製造方法を用いてもよく、これらに限定されるものではない。
【００３５】
以下に一実施形態に係る本発明の簡易メンブレンアッセイ装置について、図を参照して説明する。なお、以下の実施形態は本発明の簡易メンブレンアッセイ装置の例であり、本発明の簡易メンブレンアッセイ装置は以下の実施形態に限定されるわけではない。また、同様の構成については同じ符号を付し、改めて説明しない場合がある。
【００３６】
（実施形態１）
本発明の実施形態に係るラテラルフロー免疫測定法は、被検出物を捕捉するための捕捉物質が結合したメンブレンを備えた簡易メンブレンアッセイ装置を用いる、検体試料中の被検出物の簡易メンブレンアッセイ法である。本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置は、標識体部を構成する基材として、極細繊維からなる不織布を用いて、検体試料中の被検出物の存在を検出あるいは定量することを特徴とする。
【００３７】
本明細書において、ラテラルフロー免疫測定法とは、被検出物と特異的に結合する捕捉試薬や検出用物質が塗布されたメンブレンに対して、被検出物を含む溶液を水平方向に展開させ、被検出物に特異的に結合する捕捉物質、被検出物、被検出物に特異的に結合する標識体の複合体をメンブレン上に形成させて、標識体を検出あるいは定量することによって、被検出物の検出または定量を行う方法である。
【００３８】
典型的には、被検出物と捕捉物質及び標識体を反応させて、捕捉物質−被検出物−標識体という構造を有するサンドイッチ状の複合体をメンブレン上に形成させ、標識体を検出することにより、この複合体の存在を検出する方法である。この方法では検体試料中の被検出物の存在の有無を短時間に簡便に検査することができる。
【００３９】
図１は、本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００の模式図である。図１の上が上面図、下が断面図である。簡易メンブレンアッセイ装置１００は、例えば、支持基板であるプラスチック板１１０上に、検出部１２０、コントロールライン１３０が形成されたニトロセルロースメンブレン１４０、ろ紙で形成された吸収パッド１５０、標識体が乾燥化されて保持される標識体乾燥パッド１６０、及び調製した検体試料を供給するために設置されたサンプル供給パッド１７０がそれぞれ積層されている。
【００４０】
吸収パッド１５０の一方の端部領域とニトロセルロースメンブレン１４０の一方の端部領域、ニトロセルロースメンブレン１４０の他方の端部領域と標識体乾燥パッド１６０の一方の端部領域、標識体乾燥パッド１６０の他方の端部領域とサンプル供給パッド１７０の一方の端部領域がそれぞれ重ね合わされており、これにより連続したラテラルフローの流路が形成されている。
【００４１】
本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００は、標識体乾燥パッド１６０として極細繊維を主に含む不織布（極細繊維不織布）を用いる点を除き、アッセイ装置の構成自体は周知のものであってよい。
【００４２】
（標識体乾燥パッド用極細繊維不織布）
本実施形態に係る標識体乾燥パッドに用いる極細繊維不織布の詳細について以下に説明する。本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布の製造方法を、割繊型複合繊維のウエブを割繊処理する方法を例に説明する。
【００４３】
ここで複合繊維とはそれぞれ繊維の長さ方向に連続した複数の繊維成分が互いに側面で接着したものをいい、材料の異なる繊維成分を２種類以上含むものである。また、割繊型複合繊維とは、複合繊維を構成する各繊維成分が分割可能な構造を有する複合繊維をいう。
【００４４】
図２は割繊型複合繊維２００の構造の一例を示す模式図である。割繊型複合繊維２００は、例えば、コア繊維成分２０１と極細割繊繊維成分２０２を含む。
【００４５】
割繊型複合繊維２００は、例えば、６  μｍから２０  μｍの繊維径からなるコア繊維成分２０１の断面外周に  １  μｍから１０  μｍの繊維径からなる極細割繊繊維成分２０２を複数配置した構造を有するものが好ましい。
【００４６】
また、割繊型複合繊維２００の一例としてコア繊維成分２０１の断面外周に極細繊維成分２０２が複数配置された構造のものについて例示しているが、繊維径１  μｍから１０  μｍの２つの繊維成分が接合された２層型並列構造の割繊繊維、繊維径１  μｍから１０  μｍの２つの繊維成分が交互に積層された多層型多重並列構造の割繊型複合繊維等であってもよい。
【００４７】
本実施形態に係る各繊維を構成する素材としてはその強度の点から、ナイロン、ビニロン、アクリル、ポリオレフィン、ポリウレタン、ポリエステル等の合成繊維を用いることができる。割繊型複合繊維２００において、コア繊維成分２０１がポリエチレン樹脂のようなポリオレフィン系樹脂からなり、極細割繊繊維成分２０２がポリエステル系樹脂からなるものが好ましい一例である。これらの素材からなる不織布を標識体乾燥パッド１６０に用いた場合、標識体乾燥パッド１６０からの標識体の放出効率が向上する。
【００４８】
本実施形態に係る極細繊維不織布は、例えば、長繊維不織布を得る製法であるスパンボンド法により製造される。スパンボンド法により生成される繊維の繊維長は長いため、このような繊維長の長い繊維を主に含む極細繊維不織布は、本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布に要求される十分な引っ張り強度を提供することができる。本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布は、１  μｍから１０  μｍの繊維径からなる極細割繊繊維成分を主に含むものであれば、メルトブロー法等を用いて製造してもよい。
【００４９】
割繊型複合繊維２００は製造されると、例えば割繊型複合繊維に高圧水流を当てる水流割繊方法（スパンレース法）、熱を加える方法、溶剤に浸す方法等の繊維成分間の接着方法に合わせた方法やニードルパンチ法等により割繊型複合繊維を構成する繊維成分ごとに分割する割繊処理を施す。
【００５０】
図３は割繊処理後の複合繊維２５０を示す模式図である。６  μｍから  ２０μｍの繊維径を有するコア割繊繊維２０１と、１  μｍから１０  μｍの繊維径を有する極細割繊繊維２０２とに割繊され、それぞれの繊維が解離する。解離したコア割繊繊維２０１と極細割繊繊維２０２とは、緻密に交絡し、不織布を形成する。
【００５１】
本実施形態において、割繊型複合繊維からなる繊維径が１  μｍから１０  μｍの極細繊維を主に含む極細繊維不織布を標識体乾燥パッドとして用いた場合について言及しているが、割繊型複合繊維以外の方法で製造した不織布であっても、繊維径が０．０５  μｍから１０  μｍの極細繊維を主に含む極細繊維不織布であれば、標識体乾燥パッドとして用いることができる。
【００５２】
（被検出物）
ここで、本実施形態に係る被検出物としては何ら限定されるものではなく、各種病原体、各種臨床マーカー等、抗体と抗原抗体反応することが可能ないかなる物質であってもよい。具体例として、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ＨＡＶ、ＨＢｓ、ＨＩＶ、ノロウイルス、ロタウイルス等のウイルス抗原、ＭＲＳＡ、Ａ群溶連菌、Ｂ群溶連菌、レジオネラ属菌等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ、クラミジア・トラコマティス、ヒト絨毛性ゴナドトロピン等のホルモン、Ｃ反応タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、各種腫瘍マーカー、農薬、環境ホルモン等を例示することができる。
【００５３】
上記の病原微生物もしくは該病原微生物由来のタンパク質等の物質またはそれらに対する抗体等を被検出物として用いる場合、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、アデノウイルス、Ａ群溶連菌、肺炎マイコプラズマ、ロタウイルス及びノロウイルス等のように、大流行し、ごく短時間に特定する必要がある病原体の診断に、極めて有用である。
【００５４】
なお、被検出物は、単独で免疫反応を誘起できる抗原であってもよいし、単独では免疫反応を誘起できないが抗体と抗原抗体反応により結合することが可能なハプテンであってもよい。
【００５５】
（捕捉物質）
本実施形態に係る捕捉物質は、免疫測定する被検出物と抗原抗体反応する抗体であれば、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。
【００５６】
本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００には、抗体に代え、または抗体とともに、該抗体の抗原結合性断片を標識体に結合させてもよい。抗原結合性断片とは、例えば、抗体のＦａｂやＦ（ａｂ’）２断片等のように、対応抗原と抗原抗体反応可能な抗体断片である。これらの抗原結合性断片は、周知の通り、抗体をパパインやペプシンのようなタンパク質分解酵素で処理し、精製することにより得られる。また、遺伝子工学的に生産した抗体やその抗原結合性断片を用いることもできる。
【００５７】
（標識体）
本実施形態に係る標識体としては、金コロイド粒子、白金コロイド粒子、着色ラテックス粒子、磁性粒子、蛍光発光性粒子、酵素等が挙げられる。
【００５８】
本実施形態に係る標識体には、被検出物と抗原抗体反応する抗体及びその抗原結合性断片、またはその何れかが結合している。これにより、標識体は、抗体や抗原結合性断片を介して被検出物に結合することができる。標識体に結合させる抗体や抗原結合性断片には、上述の捕捉物質とは被検出物に対する結合特性が異なる抗体や抗原結合性断片を用いることが好ましい。結合特性、つまり、抗体や抗原結合性断片が結合（認識）する被検出物の部位が異なることによって、捕捉物質と標識体との結合部位が競合することを防ぎ、被検出物の検出効率が低下することを回避できる。
【００５９】
（標識体乾燥パッド）
本実施形態に係る標識体乾燥パッドの製造方法について説明する。標識体が乾燥する過程において、標識体は、標識体乾燥パッドとして用いられる部材の繊維に付着した状態で乾燥する。所定量の標識体を含む溶液を本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布に塗布、スプレーまたは浸漬等の方法により染み込ませる。その後、温風乾燥や自然乾燥等により乾燥化する。
【００６０】
繊維径が０．０５  μｍ〜１０  μｍである極細繊維を主に含む本実施形態に係る極細繊維不織布において、単位長さ当たりの繊維の表面積は、繊維径が  １０μｍ〜３０  μｍの繊維に比べ大きくなる。これにより、標識体が不織布全体に、より分散された状態で均一に乾燥する。また、極細繊維を主に含む本実施形態に係る極細繊維不織布では、毛細管現象によるサンプル液の流れが促進される。
【００６１】
これにより、本実施形態に係る標識体乾燥パッドにおいては、乾燥化された標識体の復元時における放出が促進され、測定系への反応に関与する成分の供給量が向上し、効率的に反応が進行するようになるため、ラテラルフロー方式の免疫測定試薬を用いて、被検出物を迅速で高感度に測定することができる。
【００６２】
（測定方法）
次に本実施形態の簡易メンブレンアッセイ装置を用いた免疫測定法について説明する。まず検体を検体浮遊／抽出用緩衝液に浮遊／抽出させた検体試料を調製する。検体試料は、被検出物に応じた公知技術を用いて調製することができる。
【００６３】
プラスチック板１１０上に積層されたニトロセルロースメンブレン１４０上に、被検出物と抗原抗体反応する抗体を標識体で標識した標識体乾燥パッド１６０を備え、さらに被検出物と抗原抗体反応する抗体を捕捉物質としてライン状に固相化された検出部１２０、捕捉物質が結合している位置の下流の位置に標識体を結合することができる物質、例えば被検出物と同等の反応性を有する物質または標識体に結合する抗体を固相したコントロールライン１３０を備えたアッセイ装置のサンプル供給パッド１７０に前記検体試料を供給する。
【００６４】
被検出物を含む検体試料は、毛細管現象によりメンブレン上を水平方向に移動しながら標識体を展開するので、被検出物が存在すれば、被検出物−標識体の複合体を形成する。さらに検出部１２０に到達するとそのライン上に、捕捉物質−被検出物−標識体の複合体が形成される。この複合体中の標識体により、複合体の存在を検出し、その結果、検体試料中の被検出物の有無を判定する。また、検証部であるコントロールライン１３０により、標識体が標識体乾燥パッドから放出され、捕捉物質が結合したメンブレン上を流れたことを試験ごとに確認することができる。
【００６５】
なお、検出部１２０は、被検出物質と抗原抗体反応し、かつ、標識体上の抗体またはその抗原結合性断片と同時に被検出物に結合することが可能な、抗体またはその抗原結合性断片をライン状に固相化した領域である。反応に関与しなかった他の成分等は、吸収パッド１５０に吸収される。
【００６６】
以上説明したように、本実施形態の本発明に係る簡易メンブレンアッセイ装置は、標識体乾燥パッドに極細繊維不織布を用いることにより、標識体乾燥パッドに要求される十分な引っ張り強度とともに、毛細管現象によるサンプル液の流れが促進されることで乾燥化された標識体の復元時における放出効率が向上し、被検出物を迅速で高感度に測定することができる。
【００６７】
（実施形態２）
実施形態２は、検出部１２０に替えて、２つの検出部を設ける点で実施形態１と異なる。図４は、実施形態２に係る簡易メンブレンアッセイ装置３００の模式図である。簡易メンブレンアッセイ装置３００は、検出部Ａ３２１及び検出部Ｂ３２３を有する。また、検出部Ａ３２１及び検出部Ｂ３２３への変更に対応したコントロールライン３３０及び標識体乾燥パッド３６０を有する。以下、２つの検出部を設ける例について述べるが、検出部は２つに限定されるものではない。
【００６８】
これは、例えば下記実施例に記載するように、Ａ型インフルエンザウイルスとＢ型インフルエンザウイルスのような２種類の被検出物をそれぞれ捕捉し、検出するためのものである。このため、検出部Ａ３２１及び検出部Ｂ３２３には、それぞれ被検出物が異なる抗体や抗原結合性断片を捕捉物質としてライン状に固相化する。
【００６９】
このような検出部を複数設けることにより、複数種類の被検出物を同時に測定することが可能である。それぞれの抗体や抗原結合性断片の抗原抗体反応の特異性が高い場合には、被検出物を２種類以上検出する簡易メンブレンアッセイ装置を実現することができる。
【００７０】
なお、複数種類の被検出物の検出は、展開部であるニトロセルロースメンブレン上のそれぞれの検出部の位置により検出及び識別ができる。また、標識体に着色ラテックス粒子や蛍光発光性粒子等を用いた場合には、それぞれの標識体の色や蛍光物質を変えることにより、容易な識別が可能となる。
【００７１】
また同様に、それぞれ被検出物が異なる抗体や抗原結合性断片を結合させた２種類の標識体を作製する。標識体乾燥パッド３６０には、このように作製した２種類の標識体を実施形態１で説明した繊維径が０．０５  μｍ〜１０  μｍである極細繊維を主に含む極細繊維不織布に染み込ませて乾燥化する。
【００７２】
極細繊維を主に含む本実施形態に係る標識体乾燥パッド３６０は、従来の標識体乾燥パッドよりも、標識体が不織布全体に分散された状態で均一に乾燥しており、毛細管現象によるサンプル液の流れが促進される。
【００７３】
これにより、本実施形態に係る標識体乾燥パッドにおいては、乾燥化された標識体の復元時における放出が促進され、測定系への反応に関与する成分の供給量が向上し、効率的に反応が進行する。このため、２種類以上の標識体を用いることにより、染み込ませる標識体１種類あたりの所定量が少なくなる場合においても、ラテラルフロー方式の免疫測定試薬を用いて、被検出物を迅速で高感度に測定することができる。
【００７４】
このとき、本実施形態に係るコントロールライン３３０には、上述の２種類の標識体を捕捉可能な抗体や抗原結合性断片をライン状に固相化する。これにより、標識体が標識体乾燥パッドから放出され、捕捉物質が結合したメンブレン上を流れたことを試験ごとに確認することができる。
【００７５】
これら以外の構成要件は、実施形態１と同様のものを用いることができ、実施形態２に係る簡易メンブレンアッセイ装置を用いることによって、複数種類の被検出物を１つの簡易メンブレンアッセイ装置で、同時に検出することができる。
【実施例】
【００７６】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。ただし、本発明は下記実施例に限定されるものではない。【００７７】
（標識体乾燥パッド用不織布の物性の比較）
実施例１と比較例１〜３で用いる不織布の物性を表１に示す。
【表１】
2010126011.tif 000003
【００７８】
比較例１のガラス繊維は引っ張り強度が弱く、製造機器での使用には適さなかった。実施例１、比較例２、比較例３は合成繊維からなる不織布であるため、強度が強く製造機器での使用も可能であった。【００７９】
（標識体乾燥パッドからの標識体の放出率の測定）
実施例１、比較例１〜３について、以下の通り、ラテックス粒子を標識した標識体パッドの放出性を評価した。【００８０】
（１．ラテックス粒子を標識した標識体乾燥パッドの作製）
検出用の抗体として抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体および、抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を用いた。標識体としてラテックスを用い、ラテックスに抗インフルエンザウイルス抗体を共有結合させラテックス浮遊液を調製した。調製したラテックス浮遊液を上述の各種繊維複合体に塗布し、乾燥させて、標識体乾燥パッドを作製した。【００８１】
（２．ラテックス粒子放出率の測定）
上記の方法で作製した標識体乾燥パッドを所定の緩衝液に浸し、撹拌することでラテックス粒子を溶出させた。この溶出液の吸光度（Ａ）を測定するとともに、パッドに塗布した量と同量の標識体を所定の緩衝液に添加した液を対照液として、この試料の吸光度（Ｂ）も測定した。これらの結果から以下のようにパッドからの標識体の放出率を求めた。
放出率（％）＝吸光度Ａ／吸光度Ｂ×１００【００８２】
（３．結果）
得られた結果を表２に示す。
【表２】
2010126011.tif 000004
【００８３】
実施例１の放出率が最も高く、比較例１と比較例２が同等の放出率で、比較例３の放出率が一番低かった。実施例１からの標識体の放出効率が高いことが確認された。【００８４】
（ラテラルフロー免疫測定法によるインフルエンザウイルス抗原の検出）
（１．検査デバイスの作製）
簡易メンブレンアッセイ装置は図４に示すものと同様の構成のものを用いた。ニトロセルロースメンブレン１４０をプラスチック板１１０でバッキングした短冊状の部材に、抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体および、抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を線状に塗布し、温風下でよく乾燥させた。これの上端に重ねて吸収パッド１５０を設置した。さらにニトロセルロースメンブレン１４０の下端に重ねて標識体乾燥パッド３６０を設置し、これに重ねて検体を供給するサンプル供給パッド１７０を設けた。これにプラスチックシートでサンプルパッドの一部が露出するように他の部分を覆ったものを所定の幅に裁断して、検査デバイスを作製した。【００８５】
（２．試験）
検体として、Ａ型インフルエンザウイルス及びＢ型インフルエンザウイルスを用いた。検体は検体浮遊、抽出用の所定の緩衝液を用いて、２倍段階希釈を行い試料とした。次に検査デバイスを水平に置き、検体試料並びに、抽出用の所定の緩衝液のみからなる陰性対照試料をサンプル供給パッド１７０に５０μＬ供給し、標識体を展開させた。判定は８分後に検出部の着色ラインの有無を目視にて観察して行った。
着色ライン有り：陽性（＋）
着色ライン無し：陰性（−）【００８６】
実施例１及び比較例１から３はそれぞれ上記の試験に用いた各不織布と同様であり、標識体乾燥パッド３６０として用いて試験を行った。【００８７】
（３．結果）
インフルエンザウイルス抗原の検出結果を表３に示す。実施例１においてＡ型インフルエンザウイルスの判定は１：３２００まで陽性を示し、比較例１から比較例３のＡ型の判定に比べ、検出感度が高かった。また、実施例１においてＢ型インフルエンザウイルスの判定は１：１６００まで陽性を示し、比較例１から比較例３のＢ型の判定に比べ、感度が高かった。なお、陰性対照試料は全ての実施例、比較例において陰性を示した。【００８８】
実施例１は、Ａ型インフルエンザウイルスでは比較例１から比較例３よりも少量のウイルスを検出している。Ｂ型インフルエンザウイルスにおいても、実施例１は、比較例１から比較例３よりも少量のウイルスを検出している。この検出感度試験の結果は、上記の標識体の放出率の測定結果を反映しており、標識体の放出率が高くなると検出感度も高くなる。【００８９】
本発明の実施形態に係る標識体乾燥パッドを使用することで、標識体乾燥パッドからの標識体の放出効率が向上し、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスを高感度に検出できることがわかる。
【表３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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