【誤訳訂正書】
【提出日】平成27年1月8日(2015.1.8)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換え真核生物宿主細胞により発現される抗体のジスルフィド結合の還元を防止する方法であって、該真核生物宿主細胞のＴｒｘ系の酵素のレベルを減少させることを含み、それにより収集前（ＣＦＦ）又は収集培養液（ＨＣＣＦ）において、抗体のジスルフィド結合の還元が阻害される方法。
【請求項２】
Ｔｒｘ系の酵素のレベルが減少した組換え真核生物宿主細胞中でポリペプチドを発現することを含み、それにより、収集前（ＣＦＦ）又は収集培養液（ＨＣＣＦ）において、抗体のジスルフィド結合の還元が阻害される、ポリペプチドを製造するための方法。
【請求項３】
酵素が、チオレドキシンレダクターゼ、Ｇ６ＰＤ又はヘキソキナーゼである、請求項１又は２の方法。
【請求項４】
酵素レベルが、アンチセンスヌクレオチドを含む核酸分子により減少させられる、請求項３の方法。
【請求項５】
酵素レベルが、干渉ＲＮＡにより減少させられる、請求項３の方法。
【請求項６】
酵素レベルが、ｓｉＲＮＡの使用により減少させられる、請求項５の方法。
【請求項７】
前記ｓｉＲＮＡ又はアンチセンスヌクレオチドが、チオレドキシンレダクターゼ遺伝子配列に特異的に結合する、請求項４又は６の方法。
【請求項８】
チオレドキシンレダクターゼ遺伝子配列がＣＨＯのチオレドキシンレダクターゼ遺伝子配列である、請求項７の方法。
【請求項９】
真核生物宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項７の方法。
【請求項１０】
哺乳動物宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項９の方法。
【請求項１１】
発酵後のプロセシング中に抗体におけるジスルフィド結合の還元を阻害する方法であって、組換えＣＨＯ細胞中で抗体を発現させること、及び、発酵後に、前記組換えＣＨＯ細胞の収集培養液のｐＨを低下させることを含む方法。
【請求項１２】
組換えＣＨＯ細胞中で抗体を発現させること、及び、発酵後に、前記組換えＣＨＯ細胞の収集培養液のｐＨを低下させることにより抗体におけるジスルフィド結合の還元を阻害することを含む、抗体を製造するための方法。
【請求項１３】
組換え宿主細胞中で発現された抗体におけるジスルフィド結合の還元を阻害する方法であって、発酵後に、前記組換え宿主細胞の収集前又は収集培養液へ空気散布することを含む方法。
【請求項１４】
組換え宿主細胞中で抗体を発現させること、及び、発酵後に、前記組換え宿主細胞の収集前又は収集培養液へ空気散布することにより抗体におけるジスルフィド結合の還元を阻害することを含む、抗体を製造するための方法。
【請求項１５】
収集前又は収集培養液が空気で少なくとも３０％飽和されるまで、前記空気散布（空気スパージ）が継続される、請求項１３又は１４の方法。
【請求項１６】
収集前又は収集培養液が空気で３０％から１００％飽和されるまで、前記空気散布（空気スパージ）が継続される、請求項１３又は１４の方法。
【請求項１７】
収集前又は収集培養液中の溶存酸素（ｄＯ２）量が少なくとも１０％である、請求項１３又は１４の方法。
【請求項１８】
収集前又は収集培養液中の溶存酸素（ｄＯ２）量が少なくとも３０％である、請求項１３又は１４の方法。
【請求項１９】
宿主細胞が真核生物宿主細胞である、請求項１３から１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
真核生物宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項１９の方法。
【請求項２１】
哺乳動物宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
宿主細胞が原核生物宿主細胞である、請求項１３から１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
原核生物宿主細胞が細菌細胞である、請求項２２の方法。
【請求項２４】
細菌細胞が大腸菌細胞である、請求項２３の方法。
【請求項２５】
抗体が、治療用抗体又はその生物学的に機能的な断片である、請求項１から２４の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
治療用抗体の生物学的に機能的な断片が、抗体断片から形成されたＦａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄＡｂ、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、直鎖抗体、単鎖抗体分子、ミニボディ、ダイアボディ、及び多重特異的抗体から選択される、請求項２５の方法。
【請求項２７】
治療用抗体又はその生物学的に機能的な断片が、抗ＨＥＲ２抗体；抗ＣＤ２０抗体；抗ＩＬ−８抗体；抗ＶＥＧＦ抗体；抗ＣＤ４０抗体，抗ＣＤ１１ａ抗体；抗ＣＤ１８抗体；抗ＩｇＥ抗体；抗Ａｐｏ−２レセプター抗体；抗組織因子（ＴＦ）抗体；抗ヒトα４β７インテグリン抗体；抗ＥＧＦＲ抗体；抗ＣＤ３抗体；抗ＣＤ２５抗体；抗ＣＤ４抗体；抗ＣＤ５２抗体；抗Ｆｃレセプター抗体；抗癌胎児抗原（ＣＥＡ）抗体；乳房上皮細胞に対する抗体；結腸癌細胞に結合する抗体；抗ＣＤ３８抗体；抗ＣＤ３３抗体；抗ＣＤ２２抗体；抗ＥｐＣＡＭ抗体；抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体；抗ＲＳＶ抗体；抗ＣＭＶ抗体；抗ＨＩＶ抗体；抗肝炎抗体；抗ＣＡ１２５抗体；抗αｖβ３抗体；抗ヒト腎細胞癌抗体；抗ヒト１７−１Ａ抗体；抗ヒト結腸直腸腫瘍抗体；ＧＤ３ガングリオシドに対する抗ヒトメラノーマ抗体Ｒ２４；抗ヒト扁平上皮癌；及び抗ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）抗体、及び抗ＨＬＡＤＲ抗体からなる群から選択される、請求項２５又は２６の方法。
【請求項２８】
治療用抗体又はその生物学的に機能的な断片が、ＨＥＲレセプター、ＶＥＧＦ、ＩｇＥ、ＣＤ２０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ４０、又はＤＲ５に結合する、請求項２５又は２６の方法。
【請求項２９】
前記ＨＥＲレセプターがＨＥＲ１及び／又はＨＥＲ２である、請求項２８の方法。
【請求項３０】
ＨＥＲレセプターがＨＥＲ２である、請求項２９の方法。
【請求項３１】
前記治療用抗体が、配列番号１６、１７、１８、及び１９からなる群から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項３０の方法。
【請求項３２】
前記治療用抗体がＣＤ２０に結合する抗体である、請求項２８の方法。
【請求項３３】
前記治療用抗体が、配列番号１から１５からなる群から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項３１の方法。
【請求項３４】
前記治療用抗体が、ＶＥＧＦに結合する抗体である、請求項２８の方法。
【請求項３５】
前記治療用抗体が、配列番号２０から２５からなる群から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項３４の方法。
【請求項３６】
前記治療用抗体がＣＤ１１ａに結合する抗体である、請求項２８の方法。
【請求項３７】
前記治療用抗体が、配列番号２６から２９からなる群から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項３６の方法。
【請求項３８】
前記治療用抗体がＤＲ５レセプターに結合する、請求項２８の方法。
【請求項３９】
前記治療用抗体が、Ａｐｏｍａｂｓ１．１、２．１、３．１、４．１、５．１、５．２、５．３、６．１、６．２、６．３、７．１、７．２、７．３，８．１、８．３、９．１、１．２、２．２、３．２、４．２、５．２、６．２、７．２、８．２、９．２、１．３、２．２、３．３、４．３、５．３、６．３、７．３、８．３、９．３、及び２５．３からなる群から選択される、請求項３８の方法。
【請求項４０】
前記治療用抗体がＡｐｏｍａｂ８．３又はＡｐｏｍａｂ７．３である、請求項３９の方法。
【請求項４１】
前記治療用抗体がＡｐｏｍａｂ７．３である、請求項４０の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
本発明のこの態様の他の実施態様では、チオレドキシン阻害剤は金属イオンであり、ここで、金属イオンは、限定するものではないが、Ｈｇ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｃｏ２＋、及びＭｎ２＋からなる群から選択されうる。金属イオンが硫酸銅の形態で添加される場合、有効阻害濃度は一般に、約５μＭと約１００μＭの間、又は約１０μＭと約８０μＭの間、又は約１５μＭと約５０μＭの間である。硫酸銅の最小阻害濃度もまた変動するが、典型的には、硫酸銅が、収集前又は収集培養液中のチオレドキシン濃度の少なくとも約２倍の濃度で添加される場合に達する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
【図１】透析実験：透析バッグ内のオクレリズマブ（ｒｈｕＭＡｂ２Ｈ７−変異体Ａ）がインキュベーション期間中にインタクトなまま残ったことを証明するバイオアナライザー分析から得られたゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図２】透析実験：透析バッグ外のオクレリズマブがインキュベーション期間中に還元されたことを示すバイオアナライザー分析から得られたゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。これは、図に示されたインタクトな抗体（〜１５０ｋＤａ）の消失と抗体断片の形成によって証明される。４８時間の時点（レーン７）で、還元された抗体は、おそらくは収集細胞培養液（ＨＣＣＦ）中での還元活性の喪失の結果として再酸化されたようである。２８ｋＤａマーカーの直ぐ上に見えるバンドは抗体軽鎖から生じている。インキュベーション開始前にＨＣＣＦ中に有意な量の遊離軽鎖が既に存在していた。ＨＣＣＦ中における過剰な遊離の軽鎖及び軽鎖二量体の存在は、オクレリズマブ生産細胞株に典型的である。
【図３】透析実験からの遊離チオールレベル：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ)中の精製オクレリズマブは透析バッグ内にあり、オクレリズマブを含むＨＣＣＦはバッグ外にあった。透析バッグ内（ボックス印）及び透析バッグ外（菱形印）の遊離チオールは数時間以内に比較できる量に達したが、これは、透析バッグ内と透析バッグ外との間でのＨＣＣＦ中の小分子成分の良好な交換を示している。
【図４】チオレドキシン系及び抗体還元に関与する他の反応：チオレドキシン（Ｔｒｘ）、チオレドキシンレダクターゼ（ＴｒｘＲ）及びＮＡＤＰＨを含むチオレドキシン系は、タンパク質中のジスルフィド結合の還元のための水素供与体系として機能する。Ｔｒｘはチオール−ジスルフィド交換を通して多くの酸化還元反応を触媒するＣＸＸＣ活性部位モチーフを有する小単量体タンパク質である。酸化ＴｒｘはＴｒｘＲを介してＮＡＤＰＨによって還元されうる。ついで、還元Ｔｒｘはタンパク質中のジスルフィドの還元を触媒することができる。チオレドキシン系に必要とされるＮＡＤＰＨはペントースリン酸経路及び解糖における反応を介して提供される。
【図５】チオレドキシン系のインビトロ活性：ＰＢＳ中の０．１ｍＭのＴｒｘＲ（ラット肝臓）、５ｍＭのＴｒｘ（ヒト）、及び１ｍＭのＮＡＤＰＨと共にインタクトなオクレリズマブ（１ｍｇ／ｍＬ）をインキュベートすると、オクレリズマブの還元が生じ、オクレリズマブは２１時間以内に完全に還元したことを証明するバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図６】オーロチオグルコースにより阻害されるチオレドキシン系のインビトロ活性：上記の図５の注釈に記載されたものと同じ反応混合物にオーロチオグルコース（ＡＴＧ）を添加すると、オクレリズマブの還元が効果的に阻害される。これは、バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像によって見られる（各レーンが時点を表す）。
【図７】金チオリンゴ酸により阻害されるチオレドキシン系のインビトロ活性：上記の図５の注釈に記載されたものと同じ反応混合物に１ｍＭの濃度で金チオリンゴ酸（ＡＴＭ）を添加すると、オクレリズマブの還元が効果的に阻害される。これは、バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像に見られる（各レーンが時点を表す）。
【図８】チオレドキシン系のインビトロ活性：１０ｍＭのヒスチジン硫酸バッファー中の０．１ｍＭのＴｒｘＲ（ラット肝臓）、５ｍＭのＴｒｘ（ヒト）、及び１ｍＭのＮＡＤＰＨと共にインタクトなオクレリズマブ（１ｍｇ／ｍＬ）をインキュベートすると、１時間以内にオクレリズマブの還元が生じることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図９】ＣｕＳＯ４により阻害されるチオレドキシン系のインビトロ活性：図８の注釈に記載されたものと同じ反応混合物に５０μＭの濃度でＣｕＳＯ４を添加すると、バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像に見られるようにオクレリズマブの還元が効果的に阻害される（各レーンが時点を表す）。
【図１０】オクレリズマブの還元：３Ｌの発酵槽から生成されたホモジナイズされたＨＣＣＦを使用するインキュベーション実験でオクレリズマブが還元されることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図１１】オーロチオグルコースによるＨＣＣＦ中のオクレリズマブ還元の阻害：図１０に示すインキュベーション実験で使用されたものと同じＨＣＣＦに１ｍＭのオーロチオグルコースを添加すると、オクレリズマブの還元が効果的に阻害されることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図１２】金チオリンゴ酸によるＨＣＣＦ中のオクレリズマブ還元の阻害：図１０に示すインキュベーション実験で使用されたものと同じＨＣＣＦに１ｍＭの金チオリンゴ酸を添加すると、オクレリズマブの還元が効果的に阻害されることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図１３】ＨＣＣＦ中での還元活性の消失：数回の凍結融解サイクルを受けたオクレリズマブの大規模製造実験の一つ（「ベータ」実験）からのＨＣＣＦはインキュベーション実験で使用したときオクレリズマブの還元を示さなかった。これは、バイオアナライザー分析（各レーンが時点を表す）によって示され、同じ発酵バッチからの新鮮に融解されたＨＣＣＦに先に見られた抗体還元と対比することができる。
【図１４】ＮＡＤＰＨの添加により回復されるＨＣＣＦ中の消失還元活性：図１３において上述した条件下で還元活性が失われたＨＣＣＦ中に５ｍＭの濃度でＮＡＤＰＨを添加した後、オクレリズマブの還元がバイオアナライザーアッセイにおいて再び観察された（各レーンが時点を表す）。
【図１５】グルコース−６−リン酸の添加により回復されるＨＣＣＦ中の消失還元活性：図１３において上述した処理のために還元活性が失われたＨＣＣＦ中に１０ｍＭの濃度でＧ６Ｐを添加した後、オクレリズマブの還元がバイオアナライザーアッセイにおいて再び観察された（各レーンが時点を表す）。
【図１６】オクレリズマブ還元：大規模製造実験（「アルファ」実験）からのＨＣＣＦを使用するインキュベーション実験でオクレリズマブが還元されることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図１７】ＥＤＴＡはオクレリズマブの還元を阻害する：図１６において還元活性が証明されたＨＣＣＦにＥＤＴＡが２０ｍＭの濃度で添加されたアルファ実験からのＨＣＣＦを使用するインキュベーション実験でオクレリズマブの還元が阻害されることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンが時点を表す）。
【図１８】グルコース−６−リン酸の添加により回復されるがＥＤＴＡによる還元阻害のない「ベータ実験」ＨＣＣＦ中の消失還元活性：還元活性が失われているＨＣＣＦ（図１３参照）中に５ｍＭ及び２０ｍＭのＥＤＴＡ濃度でＧ６Ｐを添加した後、オクレリズマブの還元がバイオアナライザーアッセイにおいて観察された（各レーンが時点を表す）。図１７に示された結果と異なり、ＥＤＴＡの存在はオクレリズマブの還元を阻止しなかった。
【図１９】オクレリズマブの還元の阻害：（ｉ）ＥＤＴＡの添加、（ｉｉ）ＣｕＳＯ４の添加、又は（ｉｉｉ）５．５へのｐＨの調節による。独立に使用した（１）ＥＤＴＡの添加、（２）ＣｕＳＯ４の添加、及び（３）５．５へのｐＨの調節の３通りの異なった方法の全てがオクレリズマブの還元の阻害に効果的であった。これは、プロテインＡ溶離プール中にほぼ１００％のインタクトな（１５０ｋＤａ）抗体が残ったことを示す定量バイオアナライザーの結果によって証明された。これに対して、オクレリズマブは、２０時間のＨＣＣＦ保持時間後にコントロールＨＣＣＦ中で完全に還元された。
【図２０】空気スパージングによるオクレリズマブの還元の阻害：ＨＣＣＦへの空気スパージングはオクレリズマブジスルフィド結合還元の阻害に効果的であった。これは、プロテインＡ溶離プール中にほぼ１００％のインタクトな（１５０ｋＤａ）抗体が残ったことを示す定量バイオアナライザー結果によって証明された。これに対して、オクレリズマブは、５時間の窒素スパージング後にコントロールＨＣＣＦ中で完全に還元された。
【図２１】抗Ｈｅｒ２抗体（トラスツズマブ）のＶＬ（配列番号２４）アミノ酸配列を示す。
【図２２】抗Ｈｅｒ２抗体（トラスツズマブ）のＶＨ（配列番号２５）アミノ酸配列を示す。
【図２３】典型的な大規模製造プロセスの幾つかの工程を示す概略図である。
【図２４】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）。
【図２５】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋１ｍＭのＡＴＧ。
【図２６】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋０．６μＭのＡＴＧ（６：１  ＡＴＧ：ＴｒｘＲ）。
【図２７】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋０．４μＭのＡＴＧ（４：１  ＡＴＧ：ＴｒｘＲ）。
【図２８】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋０．２μＭのＡＴＧ（２：１  ＡＴＧ：ＴｒｘＲ）。
【図２９】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋０．１ｍＭの金チオリンゴ酸（ＡＴＭ）。
【図３０】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋０．０１ｍＭの金チオリンゴ酸（ＡＴＭ）。
【図３１】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋２０μＭのＣｕＳＯ４（４：１  Ｃｕ２＋：Ｔｒｘ）。
【図３２】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋１０μＭのＣｕＳＯ４（２：１  Ｃｕ２＋：Ｔｒｘ）。
【図３３】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋５μＭのＣｕＳＯ４（１：１  Ｃｕ２＋：Ｔｒｘ）。
【図３４】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋５３２μＭのシスタミン（２０：１  シスタミン：２Ｈ７ジスルフィド）。
【図３５】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋２６６μＭのシスタミン（１０：１  シスタミン：２Ｈ７ジスルフィド）。
【図３６】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋１３３μＭのシスタミン（５：１  シスタミン：２Ｈ７ジスルフィド）。
【図３７】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋２６．６μＭのシスタミン（１：１  シスタミン：２Ｈ７ジスルフィド）。
【図３８】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）（ｐＨ＝７．６）＋２．６ｍＭシスチン。
【図３９】バイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像：２Ｈ７（変異体Ａ）＋１ｍＭのＮＡＤＰＨ＋５μＭのチオレドキシン＋１０ｍＭのヒスチジン硫酸中の０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ（組換え体）＋２．６ｍＭのＧＳＳＧ（酸化型グルタチオン）。
【図４０】再構築された酵素還元系。１ｍｇ／ｍｌの２Ｈ７（変異体Ａ）＋１０μｇ／ｍＬのヘキソキナーゼ、５０μｇ／ｍＬのグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、５μＭのチオレドキシン、０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ、２ｍＭのグルコース、０．６ｍＭのＡＴＰ、２ｍＭのＭｇ２＋、及びｐＨ＝７．３８の５０ｍＭのヒスチジン硫酸バッファー中の２ｍＭのＮＡＤＰ。
【図４１】チオレドキシン系はＮＡＤＰＨを必要とする。１ｍｇ／ｍｌの２Ｈ７（変異体Ａ）＋５μＭのチオレドキシン、０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ、及びｐＨ＝７．３８の５０ｍＭのヒスチジン硫酸バッファー中の２ｍＭのＮＡＤＰ。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
４．ＣｕＳＯ４によって阻害されるチオレドキシン系のインビトロ活性
ＣｕＳＯ４を、２０μＭ（４：１  Ｃｕ２＋：Ｔｒｘ）；１０μＭ（２：１  Ｃｕ２＋：Ｔｒｘ）；及び５μＭ（１：１  Ｃｕ２＋：Ｔｒｘ）の濃度で上述のオクレリズマブ混合物に加えた。図３１−３３に示されるように、ＣｕＳＯ４は、２０μＭ及び１０μＭの濃度でオクレリズマブのチオレドキシンに誘発された還元を効果的に阻害する（図３１及び３２）が、５μＭの濃度は還元の完全な阻害には不十分である（図３３）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６９】
８．酵素的還元系のインビトロ活性
図４０は、インタクトなオクレリズマブ（「２Ｈ７」ヒト化抗ＣＤ２０抗体、変異体Ａ）（１ｍｇ／ｍＬ）を１０μｇ／ｍＬのヘキソキナーゼ、５０μｇ／ｍＬのグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、５μＭのチオレドキシン、０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ、２ｍＭのグルコース、０．６ｍＭのＡＴＰ、２ｍＭのＭｇ２＋、及びｐＨ７．３８で緩衝させた５０ｍＭのヒスチジン硫酸中の２ｍＭのＮＡＤＰと共にインキュベートすると、約１時間以内にオクレリズマブの還元が生じることを示すバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像（各レーンは時点を表す）を示す。既知のグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤である０．１ｍＭのＨＤＥＡの添加は還元を阻害しない。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７０】
９．酵素還元系のインビトロ活性はＮＡＤＰＨを必要とする
図４１のバイオアナライザー分析からのゲル様デジタル画像に示されるように、インタクトなオクレリズマブ（１ｍｇ／ｍＬ）を５μＭのチオレドキシン、０．１μＭのチオレドキシンレダクターゼ、及び５０ｍＭのｐＨ７．３８のヒスチジン硫酸バッファー中の２ｍＭのＮＡＤＰと共にインキュベートした場合、オクレリズマブ抗体の還元を生じない。オクレリズマブの還元は、ヘキソキナーゼ及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ及びＮＡＤＰＨを生成するためのその基質なしには生じ得ない。