(57)【要約】  再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、直接的に単一工程で効率的にメタクリル酸を生産する方法の提供。  炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、メタクリル酸生成能を有する微生物を用いてメタクリル酸を製造する方法を提供する。このメタクリル酸の製造方法によれば、メタクリル酸生成能を有する微生物を利用することで、石油由来の原料を使用することなく、バイオマスから安全かつ簡便にメタクリル酸を生産することができる。
2014038216.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタクリル酸生成能を有する微生物を用いて、メタクリル酸及び／又はそのエステルを製造する方法。
【請求項２】
メタクリル酸及び／又はそのエステルを０．０４ｐｐｍ以上蓄積させる、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、メタクリル酸生成能を有する微生物を用いてメタクリル酸及び／又はそのエステルを生成する、請求項１または２記載の製造方法。
【請求項４】
メタクリル酸生成能を有する微生物が、イソ酪酸あるいはバリンを含む有機物からメタクリル酸を生成可能な微生物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
メタクリル酸生成能を有する微生物が、配列番号１〜４１に記載された塩基配列のいずれかに対して８１％以上の同一性を示す塩基配列からなる１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物である請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
メタクリル酸生成能を有する微生物が、配列番号４２〜４９に記載された塩基配列のいずれかに対して８１％以上の同一性を示す塩基配列からなるＬＳＵｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物である請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
メタクリル酸生成能を有する微生物が、シュードモナス（Pseudomonas）属、バシラス（Bacillus）属、スフィンゴバクテリウム(Sphingobacterium）属、コマモナス（Comamonas）属、ブレバンディモナス（Brevundimonas）属、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属、オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属、ペドバクター（Pedobacter）属、パエニバシラス（Paenibacillus）属、アクロモバクター（Achromobacter）属、アシネトバクター（Acinetobacter）属、シュワネラ（Shewanella）属、リストネラ（Listonella）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属、メソリゾビウム（Mesorhizobium）属、リゾビウム（Rhizobium）属、パラコッカス（Paracoccus）属、キサントバクター（Xanthobacter）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、ゲオバシラス（Geobacillus）属、ロドコッカス（Rhodococcus）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、カンディダ（Candida）属またはアスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物である請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
アルコールアシルトランスフェラーゼの存在下、メタクリリル−ＣｏＡにアルコールまたはフェノール類を作用させて、メタクリル酸エステルを製造する請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
アルコールアシルトランスフェラーゼが植物由来である請求項８記載の製造方法。
【請求項１０】
請求項７記載のメタクリル酸生成能を有する微生物。
【請求項１１】
請求項１０記載の微生物由来のメタクリル酸合成に関与する酵素。
【請求項１２】
請求項１１記載の酵素をコードする遺伝子。
【請求項１３】
炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、メタクリル酸生成能を有する微生物により産生されたメタクリル酸及び／又はそのエステル。
【請求項１４】
メタクリル酸生成能を有する微生物と、メタクリル酸及び／又はそのエステルと、を含有する該微生物の培養物。
【請求項１５】
以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される蛋白質からなる、請求項１１記載の酵素。（ａ）配列番号５０または５２に示すアミノ酸配列からなる蛋白質。（ｂ）配列番号５０または５２に示すアミノ酸配列からなる蛋白質と４５％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、且つイソブチリル−ＣｏＡ脱水素酵素活性を有する蛋白質。（ｃ）配列番号５０または５２に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び又は付加したアミノ酸配列からなり、且つイソブチリル−ＣｏＡ脱水素酵素活性を有する蛋白質。
【請求項１６】
請求項１５に記載の酵素を使用することを含むメタクリル酸及び／又はそのエステルの製造方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、メタクリル酸及び／又はそのエステルの製造方法に関する。より詳しくは、メタクリル酸生成能を有する微生物を用いたメタクリル酸等の製造方法及び該微生物並びに該製造方法により得られるメタクリル酸等に関する。
【背景技術】
【０００２】  メタクリル酸は塗料及び樹脂改質剤等の原料として有用であり、そのエステルはアクリル樹脂の原料として工業的に極めて重要な化合物である。【０００３】  メタクリル酸誘導体を化学的に製造する方法としては、青酸とアセトンを原料としてアセトンシアンヒドリンを経由するＡＣＨ法、イソブチレン又はｔｅｒｔ−ブタノールを原料とするＣ４酸化法などが実用化されている。これら化学的な製造方法は、化石原料に依存しており、また多くのエネルギーを必要とする。【０００４】  近年では、地球温暖化防止及び環境保護の観点から、従来の化石原料の代替となる炭素源として、再生可能な生物由来資源（再生可能原料）を用いることが注目されている。例えば、天然に存在する微生物を利用し、糖などの天然物からメタクリル酸の前駆体となる２−ヒドロキシイソ酪酸及び３−ヒドロキシイソ酪酸を生産する方法が提案されている（特許文献１、２及び非特許文献１参照）。しかし、これらの方法は、前駆体を脱水してメタクリル酸を生成する工程を、依然として化学的な手法に依存している。【０００５】  また、複数の酵素遺伝子を導入した、天然に存在しない組換え微生物を用いてグルコースからメタクリル酸を生成する方法が提案されているが、これらは既知の酵素反応及びそれから類推される仮想の酵素反応を単に組み合わせて提案したにすぎず、実証されたものではない（特許文献３〜５参照）。【０００６】  一方で、天然に存在する微生物で、メタクリル酸を生産する能力を有する光合成細菌が知られている（非特許文献２）。しかし、この光合成細菌は、３−メルカプトイソ酪酸という天然には存在しない特殊な化合物をメタクリル酸に変換するものに過ぎない。【０００７】  さらに、特許文献６には、アクリリル−ＣｏＡとアルコールの存在下、加水分解酵素を作用させて、アクリル酸エステルを製造する方法が開示されている。同文献にはメタクリル酸エステルについても同様に製造が可能な旨が示唆されている。しかし、酵素の多様性、基質特異性を考慮すると一部の加水分解酵素でアクリル酸エステルの製造が可能であることを示したに過ぎず、構造が異なるメタクリル酸エステルが同様に加水分解酵素により製造可能であるかは不明であった。さらに、反応機構の異なる他の種類の酵素で製造できるかどうかは、全く不明であった。また、特許文献６記載の加水分解酵素によりエステルを合成した場合、生成したエステルがそもそも加水分解活性で分解されてしまうことが予想され、効果的な製造方法とは考えにくい。【０００８】  一方、アルコールアシルトランスフェラーゼ（以下ＡＡＴ）はフルーティーフレーバー合成酵素として知られている。特許文献７には、特定の果実中に含まれる同酵素遺伝子を同定し、果実フレーバーである各種エステルの合成方法を提案している。しかしながら、メタクリル酸エステルがこれらの酵素で合成可能かどうかは報告されておらず全く不明であった。【０００９】  以上のように、いくつかの提案あるいは検討がなされているものの、実際に微生物によりメタクリル酸誘導体を製造した例はなく、有効な製造方法の確立が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２００７／１１０３９４号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００８／１４５７３７号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００９／１３５０７４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２０１１／０３１８９７号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２０１２／１３５７８９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００７／０３９４１５号パンフレット
【特許文献７】国際公開第００／３２７８９号パンフレット
【特許文献８】特表２０１１−５１９５６１号公報
【特許文献９】特開２０１１−２００１３３号公報
【特許文献１０】特開平５−６４５８９号公報
【特許文献１１】特開平１０−３３７１８５号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｇｒｅｅｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ,２０１２, １４, １９４２−１９４８
【非特許文献２】Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ, １９９４, ７, ５８９−５９３
【非特許文献３】Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ２０００， ３２４， ２４１−２５８
【非特許文献４】Ｆｕｎｇａｌ  Ｇｅｎｅｔ．  Ｂｉｏｌ．， ２００８， ４５， １８０−１８９
【非特許文献５】Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， １９９９， １４５， ２３２３−２３３４
【非特許文献６】Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  Ｒｅｖｉｅｗ， １９７６， ４０， ４２−５４  （１９７６）
【非特許文献７】Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｅｖｏｌ．， ２００９， ６９， １７６−１９３
【非特許文献８】Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ２０００， ３２４， １２９−１３８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】  従来の化学的に製造する方法、例えばＡＣＨ法では、酸によるアセトンシアンヒドリンの酸化処理を要し、大量の廃酸が生じる。また、各ステップで分離や精製が必要であり、エネルギー消費が大きくなるという問題があった。そのため、炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、直接的に単一工程で効率的にメタクリル酸を生産することができる微生物を利用したメタクリル酸の製造方法が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【００１３】  上記課題解決のため、本発明者等は、微生物によるメタクリル酸誘導体の生成能を有する微生物について広く探索を行い、多くの微生物でメタクリル酸を生成しうることを見出した。【００１４】  また、以下に示すように、これらメタクリル酸誘導体の生成能を有する微生物は、ある特定の機能を有する微生物群であり、一定の共通性を有することを見出すとともに、それらの探索方法についても見出すことに成功した。【００１５】  まず、本発明者らは、バリン代謝ルート上の遺伝子（分岐鎖ケト酸脱水素酵素（以下ＢＣＫＡＤ）およびイソブチリル−ＣｏＡ脱水素酵素（以下ＡＣＤ））を導入した大腸菌組換え体を作製して、菌体反応により、２−オキソイソ吉草酸から、バリン代謝経路の中間体であるメタクリル酸誘導体の生成を試みた。しかしながら、目的物であるメタクリル酸誘導体の生成は認められず、イソ酪酸の生成が認められた。また、本組換え体より細胞抽出液を調製し、補因子等を添加して、ＢＣＫＡＤ及びＡＣＤのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの活性を測定したところ、両活性が認められた。これらのことから、ｉｎ  ｖｉｖｏおいては、ＢＣＫＡＤ反応は進行しているものの、ＡＣＤ反応は進行していないと判断した。【００１６】  哺乳類においては分岐鎖アミノ酸の代謝あるいは脂肪酸のβ−酸化で知られている脱水素反応では、ミトコンドリア内で進行し、脱離された電子は電子伝達フラボタンパク質（ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ  ｆｌａｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）を経て呼吸鎖へ伝達されることが知られている。すなわち、これらと同等の機能を持たない微生物に、単に外来ＡＣＤを導入しただけでは、本反応は進行しないと推定した。実際、上記のように大腸菌組換え体においてＡＣＤ反応は進行しなかった。【００１７】  本発明者らは、この新たな課題を解決すべく微生物によるメタクリル酸誘導体の生産能を有する微生物について広く探索を行い、微生物でメタクリル酸を生成しうることおよび、さらにＡＣＤの基質であるイソブチリル−ＣｏＡを代謝できる微生物を用いることで、この課題を解決できることを見出した。イソブチリル−ＣｏＡを代謝できる微生物とは、バリン資化生菌及びイソ酪酸資化生菌などが挙げられる。これらの微生物は、例えばバリンを唯一炭素源及び／又は窒素源として、あるいはイソ酪酸を唯一炭素源として生育させることにより、自然界より取得できる。【００１８】  さらに、本発明者等は、前記メタクリル酸生産能を有する微生物にＡＡＴの作用を追加することにより、アルコール存在下でメタクリル酸エステルが製造可能なことを見出した。【００１９】  加えて、本発明者等は、前記微生物由来のメタクリル酸合成に関与する酵素およびその酵素をコードする遺伝子について鋭意検討した結果、メタクリル酸誘導体の生産に有用な酵素が存在することを明らかにし、その酵素タンパク質を特定することに成功した。そして、これら酵素タンパク質を組み合わせることで、メタクリル酸誘導体が合成されることを見出した。こうして、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下の通りである。【００２０】（１）メタクリル酸生成能を有する微生物を用いて、メタクリル酸及び／又はそのエステルを製造する方法。（２）メタクリル酸及び／又はそのエステルを０．０４ｐｐｍ以上蓄積させる、（１）の製造方法。（３）炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、メタクリル酸生成能を有する微生物を用いてメタクリル酸及び／又はそのエステルを生成する、（１）または（２）の製造方法。（４）メタクリル酸生成能を有する微生物が、イソ酪酸あるいはバリンを含む有機物からメタクリル酸を生成可能な微生物である、（１）〜（３）のいずれかの製造方法。（５）メタクリル酸生成能を有する微生物が、配列番号１〜４１に記載された塩基配列のいずれかに対して８１％以上の同一性を示す塩基配列からなる１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物である（１）〜（４）のいずれかの製造方法。（６）メタクリル酸生成能を有する微生物が、配列番号４２〜４９に記載された塩基配列のいずれかに対して８１％以上の同一性を示す塩基配列からなるＬＳＵｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物である（１）〜（４）のいずれかの製造方法。（７）メタクリル酸生成能を有する微生物が、シュードモナス（Pseudomonas）属、バシラス（Bacillus）属、スフィンゴバクテリウム(Sphingobacterium）属、コマモナス（Comamonas）属、ブレバンディモナス（Brevundimonas）属、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属、オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属、ペドバクター（Pedobacter）属、パエニバシラス（Paenibacillus）属、アクロモバクター（Achromobacter）属、アシネトバクター（Acinetobacter）属、シュワネラ（Shewanella）属、リストネラ（Listonella）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属、メソリゾビウム（Mesorhizobium）属、リゾビウム（Rhizobium）属、パラコッカス（Paracoccus）属、キサントバクター（Xanthobacter）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、ゲオバシラス（Geobacillus）属、ロドコッカス（Rhodococcus）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、カンディダ（Candida）属またはアスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物である（１）〜（６）のいずれかの製造方法。（８）ＡＡＴの存在下、メタクリリル−ＣｏＡにアルコールまたはフェノール類を作用させて、メタクリル酸エステルを製造する（１）〜（７）のいずれかの製造方法。（９）ＡＡＴが植物由来である（８）の製造方法。（１０）（７）のメタクリル酸生成能を有する微生物。（１１）（１０）の微生物由来のメタクリル酸合成に関与する酵素。（１２）（１１）の酵素をコードする遺伝子。（１３）炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、メタクリル酸生成能を有する微生物により産生されたメタクリル酸及び／又はそのエステル。（１４）メタクリル酸生成能を有する微生物と、メタクリル酸及び／又はそのエステルと、を含有する該微生物の培養物。（１５）以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される蛋白質からなる、（１１）記載の酵素。（ａ）配列番号５０または５２に示すアミノ酸配列からなる蛋白質。（ｂ）配列番号５０または５２に示すアミノ酸配列からなる蛋白質と４５％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、且つＡＣＤ活性を有する蛋白質。（ｃ）配列番号５０または５２に示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ���が欠失、置換及び又は付加したアミノ酸配列からなり、且つＡＣＤ活性を有する蛋白質。（１６）（１５）の酵素を使用することを含むメタクリル酸及び／又はそのエステルの製造方法。（１７）メタクリル酸生成能を有する微生物が、スフィンゴバクテリウム(Sphingobacterium）属、コマモナス（Comamonas）属、ブレバンディモナス（Brevundimonas）属、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属、オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属、ペドバクター（Pedobacter）属、パエニバシラス（Paenibacillus）属、アクロモバクター（Achromobacter）属、アシネトバクター（Acinetobacter）属、シュワネラ（Shewanella）属、リストネラ（Listonella）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属、メソリゾビウム（Mesorhizobium）属、パラコッカス（Paracoccus）属、キサントバクター（Xanthobacter）属、ゲオバシラス（Geobacillus）属、ロドコッカス（Rhodococcus）属またはカンディダ（Candida）属に属する微生物である（１）〜（７）のいずれかの製造方法。【００２１】  また、本発明者らは、ＡＡＴがメタクリル酸エステルを合成しうる活性を有すること見出した。すなわち、本発明は、他の一側面において以下の通りである。【００２２】（１Ａ）ＡＡＴの存在下、メタクリリル−ＣｏＡにアルコールまたはフェノール類を作用させて、メタクリル酸エステルを合成する工程を含むメタクリル酸エステルの製造方法。（２Ａ）メタクリル酸エステルを０．００１ｍＭ以上蓄積させる（１Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（３Ａ）イソブチリル−ＣｏＡあるいは３−ヒドロキシイソブチリル−ＣｏＡからメタクリリル−ＣｏＡを製造する工程をさらに含む、（１Ａ）または（２Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（４Ａ）イソブチリル−ＣｏＡが２−オキソイソ吉草酸から製造されることを特徴とする、（３Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（５Ａ）ＡＡＴが植物由来である（１Ａ）から（４Ａ）のいずれかに記載のメタクリル酸エステルの製造方法。（６Ａ）植物が、ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｌｅｓ）目、バラ（Ｒｏｓａｌｅｓ）目、ツツジ（Ｅｒｉｃａｌｅｓ）目、ウリ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｌｅｓ）目、アブラナ（Ｂｒａｓｓｉｃａｌｅｓ）目およびクスノキ（Ｌａｕｒａｌｅｓ）目からなる群から選択されるいずれかの目に属するものである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（７Ａ）植物が、バショウ（Ｍｕｓａ）科、バラ（Ｒｏｓａｌｅｓ）科、ツツジ（Ｅｒｉｃａｌｅｓ）科、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）科、ウリ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｌｅｓ）科、パパイア（Ｃａｒｉｃａ）科およびクスノキ（Ｌａｕｒａｌｅｓ）科からなる群から選択されるいずれかの科に属するものである(５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（８Ａ）植物が、バショウ（Ｍｕｓａ）属、オランダイチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ）属、リンゴ（Ｍａｌｕｓ）属、アンズ（Ａｒｍｅｎｉａｃａ）属、ナシ（Ｐｙｒｕｓ）属、スノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）属、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）属、キュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ）属、パパイア（Ｃａｒｉｃａ）属およびワニナシ（Ｐｅｒｓｅａ）属からなる群から選択されるいずれかの属に属するものである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（９Ａ）植物が、バナナ、イチゴ、リンゴ、ウメ、��イヨウナシ、ブルーベリー、キウイ、メロン、パパイアおよびアボカドなる群から選択されるいずれかである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（１０Ａ）ＡＡＴを発現するように遺伝子導入された遺伝子組み換え微生物を用いる（１Ａ）〜（９Ａ）のいずれかに記載のメタクリル酸エステルの製造方法。（１１Ａ）植物が、バショウ属、リンゴ属、サクラ属、ナシ属、スノキ属、マタタビ属、キュウリ属、パパイア属又はワニナシ属に属する植物から選択されるいずれかである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（１２Ａ）植物が、バショウ属、リンゴ属、ナシ属、マタタビ属、キュウリ属、パパイア属又はワニナシ属に属する植物から選択されるいずれかである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（１３Ａ）植物が、バナナ、リンゴ、ウメ、セイヨウナシ、ブリーベリー、キウイ、メロン、パパイアおよびアボカドからなる群より選択されるいずれかである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。（１４Ａ）植物が、バナナ、リンゴ、セイヨウナシ、キウイ、メロン、パパイアおよびアボカドからなる群より選択されるいずれかである（５Ａ）のメタクリル酸エステルの製造方法。【００２３】  さらに、本発明者らは、微生物由来の、ＡＣＤの機能を有する特定のタンパク質が、高効率にイソブチリル−ＣｏＡをメタクリリル−ＣｏＡに変換する能力のあることを見出した。さらに、１）イソブチリル−ＣｏＡを生成する酵素であるＢＣＫＡＤを組み合わせることにより、２−オキソイソ吉草酸からメタクリリル−ＣｏＡが合成されること、２）ＡＡＴと組み合わせることにより、イソブチリル−ＣｏＡからメタクリル酸エステルが合成されること、３）メタクリリル−ＣｏＡ加水分解活性を有する酵素と組み合わせることにより、イソブチリル−ＣｏＡからメタクリル酸が合成されることを見出した。すなわち、本発明は、さらなる他の一側面において以下の通りである。【００２４】（１Ｂ）下記（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択されるＡＣＤ遺伝子が導入された形質転換体。（ａ）配列番号５０または５２で示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝子、（ｂ）配列番号５１または５３で示す塩基配列からなる遺伝子、（ｃ）配列番号５０または５２で示すアミノ酸配列からなるタンパク質と４５％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、且つＡＣＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子、及び（ｄ）配列番号５０または５２で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、ＡＣＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（２Ｂ）ＡＣＤ遺伝子に加え、更にＢＣＫＡＤ複合体遺伝子が導入された、（１Ｂ）の形質転換体。（３Ｂ）ＢＣＫＡＤ複合体遺伝子が、下記（ｅ）〜（ｈ）からなる群より選択される遺伝子である、（２Ｂ）の形質転換体。（ｅ）配列番号５４、５６、５８および６０で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子。（ｆ）配列番号５５、５７、５９および６１で示す塩基配列からなる遺伝子。（ｇ）配列番号５４、５６、５８および６０で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズし、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（ｈ）配列番号５４、５６、５８および６０で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（４Ｂ）ＢＣＫＡＤ複合体遺伝子が、下記（ｉ）〜（ｌ）からなる群より選択される遺伝子である、（２Ｂ）の形質転換体。（ｉ）配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子。（ｊ）配列番号６３、６５、６７および６９で示す塩基配列からなる遺伝子。（ｋ）配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズし、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（ｌ）配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（５Ｂ）ＢＣＫＡＤ複合体遺伝子が、下記（ｍ）〜（ｐ）からなる群より選択される遺伝子である、（２Ｂ）の形質転換体。（ｍ）配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列を有する３つのポリペプチドをコードする遺伝子。（ｎ）配列番号７１、７３および７５で示す塩基配列からなる遺伝子。（ｏ）配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列を有する３つのポリペプチドをコードする遺伝子の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズし、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（ｐ）配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（６Ｂ）形質転換体が、グルコースから２−オキソイソ吉草酸の代謝経路を有する宿主に遺伝子導入されたものである、（１Ｂ）〜（５Ｂ）のいずれかの形質転換体。（７Ｂ）更にＡＡＴ活性を有する酵素遺伝子が導入された、（１Ｂ）〜（６Ｂ）のいずれかの形質転換体。（８Ｂ）更にメタクリリル−ＣｏＡを加水分解する活性を有する酵素遺伝子が導入された、（１Ｂ）〜（７Ｂ）のいずれかの形質転換体。（９Ｂ）（１Ｂ）の形質転換体を使用し、ＡＣＤ活性を有するタンパク質を発現させ、これを使用することを含むメタクリリル−ＣｏＡの製造方法。（１０Ｂ）（２Ｂ）〜（５Ｂ）のいずれかの形質転換体を使用して、ＡＣＤ活性とイソ吉草酸脱水素酵素活性を有するタンパク質とを発現させ、これらを使用することを含むメタクリリル−ＣｏＡの製造方法。（１１Ｂ）（１Ｂ）の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択されるＡＣＤ遺伝子を宿主に導入し、前記宿主と同一または異なる宿主に、（３Ｂ）から（５Ｂ）の（ｅ）〜（ｈ）、（ｉ）〜（ｌ）及び（ｍ）〜（ｐ）からなる群より選択されるＢＣＫＡＤ複合体遺伝子を導入して、ＡＣＤ活性とイソ吉草酸脱水素酵素活性を有するタンパク質とを発現させ、これらを使用することを含むメタクリリル−ＣｏＡの製造方法。【００２５】  以下に、本発明における用語について説明する。【００２６】  「メタクリル酸」（ＩＵＰＡＣ名：２−メチル−２−プロペン酸）は、化学式ＣＨ2＝Ｃ（ＣＨ3）ＣＯＯＨを有する化合物を意味し、その任意の塩あるいはイオン化した形態をも含む。メタクリル酸の塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩などが挙げられる。【００２７】  「メタクリル酸エステル」とは、式１で示される化合物である。式１において、Ｒは直鎖あるいは分岐の炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。炭化水素基は、飽和又は不飽和の非環式であってもよく、飽和又は不飽和の環式であってもよい。好ましくは直鎖あるいは分岐鎖の炭素数１〜１０の無置換のアルキル基、アラルキル基またはアリール基である。特に好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、２−ヘキシル基、ジメチルブチル基、エチルブチル基、ヘプチル基、オクチル基および２−エチルヘキシル基の炭素数１〜８のアルキル基、ベンジル基またはフェニル基である。【００２８】  ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ−Ｒ    （式１）【００２９】  「メタクリル酸誘導体」とは、上述したメタクリル酸及びメタクリル酸エステルに加え、メタクリロイル基（ＣＨ２＝ＣＣＨ３ＣＯＯ−）を含む化合物の総称である。メタクリロイル基を含む化合物としては、メタクリリル−ＣｏＡが挙げられる。【００３０】  「メタクリル酸生成能」とは、再生可能原料を炭素源及び／又はエネルギー源としてメタクリル酸を生成する能力を意味する。「生成」とは、生体におけるメタクリル酸の合成と分解の総和（即ちバランス）をいうのであって、合成に限るものではない。【００３１】  「再生可能原料」とは、天然資源、例えば、動物、植物又は微生物由来の資源であり、この資源は自然のプロセスにより、人間などの利用速度以上に再構築され得るものである。この資源は、これが消費されるのと同じだけの速さでこれ自体再生可能でなければならない。例えば、植物性物質は、天然の材料源に目立った減少をもたらすほど植物性物質を消費することなく栽培することができるという利点を有する。  「バイオマス」とは、再生可能な、生物由来の有機性エネルギー等として利用することができる資源全般を意味する。バイオマスには、植物性材料、動物性材料及び生分解性廃棄物などが含まれる。  「炭素源」とは、微生物が同化可能であり、新しい細胞を作り出すのに使用できる有機化合物を意味する。  「エネルギー源」とは、炭素源が代謝中間体を経て細胞構成成分に同化されるために必要なエネルギー分子（ATP）を生成するための化合物全般を意味する。微生物が、ATPを生成するための代謝すなわち異化の過程に必要なエネルギー源を種々の化合物の酸化反応に求める場合、これらの化合物は「エネルギー源」となる。  「再生可能原料の利用」とは、再生可能原料から燃料成分及び各種有機物等を得るための、ガス化、液化、糖化、酵素処理、発酵、発酵産物蒸留、加水分解、脱水、濃縮及び乾燥などの各種処理工程を少なくと��１つ含む、再生可能原料の統合的利用方法を意味する。【００３２】  「微生物」とは、一般的定義に従って、全ての種類の細菌、古細菌、ラン藻等の原核生物、酵母、糸状菌、粘菌、原生生物等の真核生物、及びウイルスなどを意味し、さらには動物及び植物の分化していない細胞、並びに、組織培養物も含まれる。本発明における「微生物」は、特にメタクリル酸生成能を有する微生物を意味する。さらに、メタクリル酸生成能を含むものであって、培養物、培地（培養物から菌体を除去したもの）、菌体（培養菌体及び洗浄菌体のいずれも含む）、菌体を破砕あるいは溶菌させた菌体処理物、前記培地及び／又は細胞を精製処理することにより得られるメタクリル酸生成活性を有する組成物（粗酵素液、精製酵素）などをも含む概念としても用いる。  「誘導株」とは、一般に、ある微生物株から天然に又は化学的若しくは物理的処理によって誘導される菌株である。本発明においては、特に、メタクリル酸生成能を有する微生物株から誘導され、依然として再生可能原料を炭素源及び／又はエネルギー源としてメタクリル酸を生成する能力を保持する菌株を意味する。【００３３】  「接触」とは、微生物と物質（再生可能原料）を一定時間曝露処理することを意味する。具体的には、再生可能原料を含む水性媒体に微生物を添加し、懸濁混合することを意味する。その際、微生物の増殖があっても構わない。  「水性媒体」とは、水、あるいは水を主成分とする水溶液及びゲル（寒天）を指し、溶解していない液体・固体が分散したものも含む。  「気相」とは培養槽（微生物を培養する容器）又は反応槽（反応を行う容器）において液体（培地等）が占める部分を除いた気体や水蒸気等が占める部分をいう。【００３４】  「培養」とは、微生物あるいは多細胞生物の細胞を人工的な環境下で増殖させることを意味する。  「培養物」とは、菌体、培養液、無細胞抽出液、細胞膜などの培養により得られるものを意味する。無細胞抽出液は、培養後の菌体を、例えばリン酸ナトリウム緩衝液を加えてホモジナイザーなどで物理的に破砕した後、遠心（１５，０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ，４℃）し、未破砕菌や細胞膜が除かれた上清を回収することにより得ることができる。【００３５】  「エステル化」とは、アルコールと脂肪酸から脱水によってエステルを生成する反応をいう。さらに、他のアルコールとのアルコール交換反応によって新たなエステルを生成する場合のエステルや、多価アルコールの部分エステルを生成する反応を包含する。
【発明の効果】
【００３６】  本発明により、炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、直接的に単一工程で効率的にメタクリル酸を生産する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】２−オキソイソ吉草酸からメタクリル酸エステルへの製造工程を示す図である。
【図２】メタクリル産生菌の培養液中に産生されたメタクリル酸のＣＧ／ＭＳ分析結果を示すトータルイオンクロマトグラフである（実施例２）。
【図３】メタクリル産生菌の培養液中に産生されたメタクリル酸のＣＧ／ＭＳ分析結果を示すマススペクトルである（実施例２）。
【図４】ＬｉｇＤホモログ遺伝子欠失用プラスミドの構造を示す図である。
【図５】Ｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ法を用いた遺伝子欠失用プラスミドの作製方法を説明する図である。
【図６】ＡＣＤ−ＡＡＴ両発現用プラスミドの構造を示す図である。
【図７】ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動による組換えタンパク質の発現を示す図である。矢印は目的タンパク質の位置を示す。（Ａ）宿主を大腸菌ＪＭ１０９とし、ベクターとしてｐＴｒｃ９９Ａを用いた、表記の遺伝子が導入された組換え体の細胞抽出液（Ｂ）宿主を大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）とし、ベクターとしてｐＥＴ１９ｂを用いた、表記の遺伝子が導入された組換え体の細胞抽出液（Ｃ）ａｃｄＨ遺伝子が導入された組換え体の細胞抽出液。
【発明を実施するための形態】
【００３８】  以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【００３９】１．メタクリル酸及び／又はそのエステルの製造方法  本発明に係るメタクリル酸及び／又はそのエステルの製造方法（以下、単に「メタクリル酸の製造方法」とも称する）では、炭素源及び／又はエネルギー源としての、再生可能原料及び／又は該再生可能原料の利用から生じるバイオマスから、メタクリル酸生成能を有する微生物を用いてメタクリル酸を製造する。具体的には、メタクリル酸生成能を有する微生物を再生可能原料及び／又はバイオマスと接触させる工程により、メタクリル酸を製造する。より具体的には、前記微生物を再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体中で培養することによって水性媒体中にメタクリル酸を得る。
【００４０】（１）微生物  本発明に係るメタクリル酸の製造方法で用いる微生物には、メタクリル酸生成能を有する微生物であれば特に限定されない。微生物には、例えば以下のような微生物を利用できる。微生物には、以下の微生物から選択される１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
【００４１】［原核生物の好ましい目］  本発明に適した原核微生物として、具体的なものとして、例えば、ロドスピリルム目（Rhodospirillales）、ロドバクター目（Rhodobacterales）、スフィンゴモナス目（Sphingomonadales）、カウロバクター目（Caulobacterales）、リゾビウム目（Rhizobiales）、パルブルアーキュラ目（Parvularculales）、バークホルデリア目（Burkholderiales）、ヒドロゲノフィルス目（Hydrogenophilales）、ナイセリア目（Neisseriales）、ニトロソモナス目（Nitrosomonadales）、ロドサイクルス目（Rhodocyclales）、クロマチウム目（Chromatiales）、アシドチオバシラス目Acidithiobacillales、キサントモナス目（Xanthomonadales）、チオスリックス目（Thiotrichales）、オセアノスピリルム目（Oceanospirillales）、シュードモナス目（Pseudomonadales）、アルテロモナス目（Alteromonadales）、ビブリオ目（Vibrionales）、エアロモナス目（Aeromonadales）、サリニスファエラ目（Salinisphaerales）、レジオネラ目（Legionellales）、デスルフォバクター目（Desulfobacterales）、デスルファルクルス目（Desulfarculales）、デスルフロモナス目（Desulfuromonadales）、シントロフォバクター目（Syntrophobacterales）、デロビブリオ目（Bdellovibrionales）、ミクソコックス目（Myxococcales）、アシドバクテリウム目（Acidobacteriales）、アクチノバクテリア目（Actinomycetales）、ビフィドバクテリウム目（Bifidobacteriales）、ルブロバクター目（Rubrobacterales）、ソリルブロバクター目（Solirubrobacterales）、バシラス目（Bacillales）、ラクトバシラス目（Lactobacillales）、クロストリジウム目（Clostridiales）、サーモアナエロバクター目（Thermoanaerobacterales）、ナトロアナエロビウス目（Natranaerobiales）、スフィンゴバクテリア目（Sphingobacteriales）、バクテロイデス目（Bacteroidales）、サイトファガ目（Cytophagales）、フラボバクテリウム目（Flavobacteriales）、デイノコッカス目（Deinococcales）、サーマス目（Thermales）、ゲマティモナス目（Gemmatimonadales）、フソバクテリア目（Fusobacteriales）、クロロフレクサス目（Chloroflexales）、ヘルペトシフォン目（Herpetosiphonales）、サーモミクロビア目（Thermomicrobiales）、サーモトーガ目（Thermotogales）、デフェリバクター目（Deferribacterales）、スルフォロブス目（Sulfolobales）、デスルフロコックス目（Desulfurococcales）、サーモプロテウス目（Thermoproteales）、アキディロブス目（Acidilobales）、ハロバクテリウム目（Halobacteriales）、サーモプラズマ目（Thermoplasmatales）およびアーケオグロブス目（Archaeoglobales）に属する微生物が挙げられる。
【００４２】  この中でも好ましい微生物は、ロドスピリルム目（Rhodospirillales）、ロドバクター目（Rhodobacterales）、スフィンゴモナス目（Sphingomonadales）、カウロバクター目（Caulobacterales）、リゾビウム目（Rhizobiales）、パルブルアーキュラ目（Parvularculales）、バークホルデリア目（Burkholderiales）、ヒドロゲノフィルス目（Hydrogenophilales）、ナイセリア目（Neisseriales）、ニトロソモナス目（Nitrosomonadales）、ロドサイクルス目（Rhodocyclales）、クロマチウム目（Chromatiales）、キサントモナス目（Xanthomonadales）、チオスリックス目（Thiotrichales）、オセアノスピリルム目（Oceanospirillales）、シュードモナス目（Pseudomonadales）、アルテロモナス目（Alteromonadales）、ビブリオ目（Vibrionales）、エアロモナス目（Aeromonadales）、サリニスファエラ目（Salinisphaerales）、レジオネラ目（Legionellales）、デスルフォバクター目（Desulfobacterales）、デスルファルクルス目（Desulfarculales）、デスルフロモナス目（Desulfuromonadales）、シントロフォバクター目（Syntrophobacterales）、デロビブリオ目（Bdellovibrionales）、ミクソコックス目（Myxococcales）、アシドバクテリウム目（Acidobacteriales）、アクチノバクテリア目（Actinomycetales）、ルブロバクター目（Rubrobacterales）、ソリルブロバクター目（Solirubrobacterales）、バシラス目（Bacillales）、ラクトバシラス目（Lactobacillales）、クロストリジウム目（Clostridiales）、サーモアナエロバクター目（Thermoanaerobacterales）、ナトロアナエロビウス目（Natranaerobiales）、スフィンゴバクテリア目（Sphingobacteriales）、バクテロイデス目（Bacteroidales）、サイトファガ目（Cytophagales）、フラボバクテリウム目（Flavobacteriales）、デイノコッカス目（Deinococcales）、サーマス目（Thermales）、ゲマティモナス目（Gemmatimonadales）、フソバクテリア目（Fusobacteriales）、クロロフレクサス目（Chloroflexales）、ヘルペトシフォン目（Herpetosiphonales）、サーモミクロビア目（Thermomicrobiales）、サーモトーガ目（Thermotogales）、デフェリバクター目（Deferribacterales）、スルフォロブス目（Sulfolobales）、デスルフロコックス目（Desulfurococcales）、サーモプロテウス目（Thermoproteales）、アキディロブス目（Acidilobales）、ハロバクテリウム目（Halobacteriales）、サーモプラズマ目（Thermoplasmatales）およびアーケオグロブス目（Archaeoglobales）に属する微生物である。
【００４３】  さらに実験的にメタクリル酸誘導体の生成が確認できている特に好ましい微生物としてはロドバクター目（Rhodobacterales）、スフィンゴモナス目（Sphingomonadales）、カウロバクター目（Caulobacterales）、リゾビウム目（Rhizobiales）、バークホルデリア目（Burkholderiales）、シュードモナス目（Pseudomonadales）、アルテロモナス目（Alteromonadales）、ビブリオ目（Vibrionales）、アクチノバクテリア目（Actinomycetales）、バシラス目（Bacillales）およびスフィンゴバクテリア目（Sphingobacteriales）に属する微生物である。
【００４４】［原核生物の好ましい科］  ロドスピリルム目（Rhodospirillales）に属するものとしてはロドスピリルム科（Rhodospirillaceae）およびアセトバクター科（Acetobacteraceae）、ロドバクター目（Rhodobacterales）に属するものとしてはロドバクター科（Rhodobacteraceae）およびヒフォモナス科（Hyphomonadaceae）、スフィンゴモナス目（Sphingomonadales）に属するものとしてはスフィンゴモナス科（Sphingomonadaceae）およびエリスロバクター科（Erythrobacteraceae）、カウロバクター目（Caulobacterales）に属するものとしてはカウロバクター科（Caulobacteraceae）、リゾビウム目（Rhizobiales）に属するものとしてはリゾビウム科（Rhizobiaceae）、キサントバクター科（Xanthobacteraceae）、ブルセラ科（Brucellaceae）、フィロバクテリウム科（Phyllobacteriaceae）、アウランチモナス科（Aurantimonadaceae）、ブラディリゾビウム科（Bradyrhizobiaceae）、メチロバクテリウム科（Methylobacteriaceae）、ヒフォミクロビウム科（Hyphomicrobiaceae）、ロドビウム科（Rhodobiaceae）およびメチロシスティス科（Methylocystaceae）、パルブルアーキュラ目（Parvularculales）に属するものとしてはパルブルアーキュラ科（Parvularculaceae）、バークホルデリア目（Burkholderiales）に属するものとしてはバークホルデリア科（Burkholderiaceae）、アルカリゲネス科（Alcaligenaceae）、コマモナス科（Comamonadaceae）およびオキサロバクター科（Oxalobacteraceae）、ヒドロゲノフィルス目（Hydrogenophilales）に属するものとしてはヒドロゲノフィルス科（Hydrogenophilaceae）、ナイセリア目（Neisseriales）に属するものとしてはナイセリア科（Neisseriaceae）、ニトロソモナス目（Nitrosomonadales）に属するものとしてはニトロソモナス科（Nitrosomonadaceae）、ロドサイクルス目（Rhodocyclales）に属するものとしてはロドサイクルス科（Rhodocyclaceae）、クロマチウム目（Chromatiales））に属するものとしてはクロマチウム科（Chromatiaceae）およびエクトチオロドスピラ科（Ectothiorhodospiraceae）、アシドチオバシラス目（Acidithiobacillales）に属するものとしてはアシドチオバシラス科（Acidithiobacillaceae）、キサントモナス目（Xanthomonadales）に属するものとしてはキサントモナス科（Xanthomonadaceae）、チオスリックス目（Thiotrichales）に属するものとしてはフランシセラ科（Francisellaceae）およびピスキリケッチア科（Piscirickettsiaceae）、オセアノスピリルム目（Oceanospirillales）に属するものとしてはオセアノスピリルム科（Oceanospirillaceae）、ハヘラ科（Hahellaceae）、ハロモナス科（Halomonadaceae）およびアルカニヴォラックス科（Alcanivoracaceae）、シュードモナス目（Pseudomonadales）に属するものとしてはシュードモナス科（Pseudomonadaceae）およびモラクセラ科（Moraxellaceae）、アルテロモナス目（Alteromonadales）に属するものとしてはアルテロモナス科（Alteromonadaceae）、シェワネラ科（Shewanellaceae）、フェリモナス科（Ferrimonadaceae）、イディオマリナ科（Idiomarinaceae）、コルウェリア科（Colwelliaceae）およびシュードアルテロモナス科（Pseudoalteromonadaceae）、ビブリオ目（Vibrionales）に属するものとしてはビブリオ科（Vibrionaceae）、エアロモナス目（Aeromonadales）に属するものとしてはエロモナス科（Aeromonadaceae）、サリニスファエラ目（Salinisphaerales）に属するものとしてはサリニスファエラ科（Salinisphaeraceae）、レジオネラ目（Legionellales）に属するものとしてはレジオネラ科（Legionellaceae）���よびコクシエラ科（Coxiellaceae）、デスルフォバクター目（Desulfobacterales）に属するものとしてはデスルフォバルブス科（Desulfobulbaceae）、デスルファルクルス目（Desulfarculales）に属するものとしてはデスルファルクルス科（Desulfarculaceae）、デスルフロモナス目（Desulfuromonadales）に属するものとしてはゲオバクター科（Geobacteraceae）、シントロフォバクター目（Syntrophobacterales）に属するものとしてはシントロフォバクター科  （Syntrophobacteraceae）およびシントロファス科（Syntrophaceae）、デロビブリオ目（Bdellovibrionales）に属するものとしてはデロビブリオ科（Bdellovibrionaceae）およびバクテリオヴォラックス科（Bacteriovoracaceae）、ミクソコックス目（Myxococcales）に属するものとしてはシストバクター科（Cystobacteraceae）、ミクソコックス科（Myxococcaceae）、ポリアンギウム科（Polyangiaceae）およびコフレリア科（Kofleriaceae）、アシドバクテリウム目（Acidobacteriales）に属するものとしてはアシドバクテリウム科（Acidobacteriaceae）、アシディミクロビウム目（Acidimicrobiales）に属するものとしてはアシディミクロビウム科（Acidimicrobiaceae）、アクチノバクテリア目（Actinomycetales）に属するものとしてはストレプトスポランギウム科（Streptosporangiaceae）、ノカルジオプシス科（Nocardiopsaceae）、サーモモノスポラ科（Thermomonosporaceae）、シュードノカルディア科（Pseudonocardiaceae）、アクチノシンネーマ科（Actinosynnemataceae）、ミクロモノスポラ科（Micromonosporaceae）、アクチノポリスポラ科（Actinopolysporaceae）、プロピオニバクテリウム科（Propionibacteriaceae）、ノカルジオイデス科（Nocardioidaceae）、コリネバクテリウム科（Corynebacteriaceae）、ノカルディア科（Nocardiaceae）、ゴルドニア科（Gordoniaceae）、デイエッチア科（Dietziaceae）、マイコバクテリウム科（Mycobacteriaceae）、ツカムレラ科（Tsukamurellaceae）セグニリパラス科（Segniliparaceae）、ミクロバクテリウム科（Microbacteriaceae）、マイクロコッカス科（Micrococcaceae）、デルマバクター科（Dermabacteraceae）、デルマトフィラス科（Dermatophilaceae）、ブレビバクテリウム科（Brevibacteriaceae）、セルロモナス科（Cellulomonadaceae）、イントラスポランギウム科（Intrasporangiaceae）、ヨネシア科（Jonesiaceae）、ラロバクター科（Rarobacteraceae）、フランキア科（Frankiaceae）、アシドサーマス科（Acidothermaceae）、ナカムラエラ科（Nakamurellaceae）、クリプトスポランギウム科（Cryptosporangiaceae）、ゲオデルマトフィラス科（Geodermatophilaceae）、グリコミセス科（Glycomycetaceae）、アクチノマイセス科Actinomycetaceae）、ストレプトマイセス科（Streptomycetaceae）、カテニュリスポラ科（Catenulisporaceae）およびキネオスポリア科（Kineosporiaceae）、ビフィドバクテリウム目（Bifidobacteriales）に属するものとしてはビフィドバクテリウム科（Bifidobacteriaceae）、ルブロバクター目（Rubrobacterales）に属するものとしてはルブロバクター科（Rubrobacteraceae）、ソリルブロバクター目（Solirubrobacterales）に属するものとしてはコネクシバクター科（Conexibacteraceae）、バシラス目（Bacillales）に属するものとしてはバシラス科（Bacillaceae）、アリシクロバシラス科（Alicyclobacillaceae）、パエニバシラス科（Paenibacillaceae）、プラノコッカス科（Planococcaceae）、スポロラクトバシラス科（Sporolactobacillaceae）およびサーモアクチノミセス科（Thermoactinomycetaceae）、ラクトバシラス目（Lactobacillales）に属するものとしてはラクトバシラス科（Lactobacillaceae）、ロイコノストック科（Leuconostocaceae）、アエロコッカス科（Aerococcaceae）、カルノバクテリウム科（Carnobacteriaceae）およびストレプトコッカス科（Streptococcaceae）、クロストリジウム目（Clostridiales）に属するものとしてはクロストリジウム科（Clostridiaceae）、シントロフォモナス科（Syntrophomonadaceae）、ユウバクテリウム科（Eubacteriaceae）、ペプトコッカス科（Peptococcaceae）、ペプトストレプトコッカス科（Peptostreptococcaceae）、ラクノスピラ科（Lachnospiraceae）およびオシロスピラ科（Oscillospiraceae）、サーモアナエロバクター目（Thermoanaerobacterales）に属するものとしてはサーモアナエロバクター科（Thermoanaerobacteraceae）、ナトロアナエロビウス目（Natranaerobiales）に属するものとしてはナトロアナエロビウス科（Natranaerobiaceae）、スフィンゴバクテリア目（Sphingobacteriales）に属するものとしてはスフィンゴバクテリウム科（Sphingobacteriaceae）およびサプロスピラ科（Saprospiraceae）、バクテロイデス目（Bacteroidales）に属するものとしてはバクテロイデス科（Bacteroidaceae）、マリニラビリア科（Marinilabiliaceae）、プレボテラ科（Prevotellaceae）およびポルフィロモナス科（Porphyromonadaceae）、サイトファガ目（Cytophagales）に属するものとしてはサイトファガ科（Cytophagaceae）およびフラモヴァーガ科（Flammeovirgaceae）、フラボバクテリウム目（Flavobacteriales）に属するものとしてはフラボバクテリウム科（Flavobacteriaceae）、デイノコッカス目（Deinococcales）に属するものとしてはデイノコッカス科（Deinococcaceae）、サーマス目（Thermales）に属するものとしてはサーマス科（Thermaceae）、ゲマティモナス目（Gemmatimonadales）に属するものとしてはゲマティモナス科（Gemmatimonadaceae）、フソバクテリア目（Fusobacteriales）に属するものとしてはフソバクテリア科（Fusobacteriaceae）、クロロフレクサス目（Chloroflexales）に属するものとしてはクロロフレクサス科（Chloroflexaceae）、ヘルペトシフォン目（Herpetosiphonales）に属するものとしてはヘルペトシフォン科（Herpetosiphonaceae）、サーモミクロビア目（Thermomicrobiales）に属するものとしてはサーモミクロビア科（Thermomicrobiaceae）、サーモトーガ目（Thermotogales）に属するものとしてはサーモトーガ科（Thermotogaceae）、デフェリバクター目（Deferribacterales）に属するものとしてはデフェリバクター科（Deferribacteraceae）、スルフォロブス目（Sulfolobales）に属するものとしてはスルフォロブス科（Sulfolobaceae）、デスルフロコックス目（Desulfurococcales）に属するものとしてはデスルフロコッカス科（Desulfurococcaceae）、サーモプロテウス目（Thermoproteales）に属するものとしてはサーモプロテウス科（Thermoproteaceae）、アキディロブス目（Acidilobales）に属するものとしてはアキディロブス科（Acidilobaceae）、ハロバクテリウム目（Halobacteriales）に属するものとしてはハロバクテリウム科（Halobacteriaceae）、サーモプラズマ目（Thermoplasmatales）に属するものとしてはサーモプラズマ科（Thermoplasmataceae）、ピクロフィルス科（Picrophilaceae）およびフェロプラズマ科（Ferroplasmaceae）、アーケオグロブス目（Archaeoglobales）に属するものとしてはアーケオグロブス科（Archaeoglobaceae）が挙げられる。
【００４５】  この中でも好ましい微生物は、ロドスピリルム科（Rhodospirillaceae）、アセトバクター科（Acetobacteraceae）、ロドバクター科（Rhodobacteraceae）、ヒフォモナス科（Hyphomonadaceae）、スフィンゴモナス科（Sphingomonadaceae）、エリスロバクター科（Erythrobacteraceae）、カウロバクター科（Caulobacteraceae）、リゾビウム科（Rhizobiaceae）、キサントバクター科（Xanthobacteraceae）、ブルセラ科（Brucellaceae）、フィロバクテリウム科（Phyllobacteriaceae）、アウランチモナス科（Aurantimonadaceae）、ブラディリゾビウム科（Bradyrhizobiaceae）、メチロバクテリウム科（Methylobacteriaceae）、ヒフォミクロビウム科（Hyphomicrobiaceae）、ロドビウム科（Rhodobiaceae）、メチロシスティス科（Methylocystaceae）、パルブルアーキュラ科（Parvularculaceae）、バークホルデリア科（Burkholderiaceae）、アルカリゲネス科（Alcaligenaceae）、コマモナス科（Comamonadaceae）、オキサロバクター科（Oxalobacteraceae）、ナイセリア科（Neisseriaceae）、ニトロソモナス科（Nitrosomonadaceae）、ロドサイクルス科（Rhodocyclaceae）、クロマチウム科（Chromatiaceae）、エクトチオロドスピラ科（Ectothiorhodospiraceae）、キサントモナス科（Xanthomonadaceae）、フランシセラ科（Francisellaceae）、ピスキリケッチア科（Piscirickettsiaceae）、オセアノスピリルム科（Oceanospirillaceae）、ハヘラ科（Hahellaceae）、ハロモナス科（Halomonadaceae）、アルカニヴォラックス科（Alcanivoracaceae）、シュードモナス科（Pseudomonadaceae）、モラクセラ科（Moraxellaceae）、アルテロモナス科（Alteromonadaceae）、シェワネラ科（Shewanellaceae）、フェリモナス科（Ferrimonadaceae）、イディオマリナ科（Idiomarinaceae）、コルウェリア科（Colwelliaceae）、シュードアルテロモナス科（Pseudoalteromonadaceae）、ビブリオ科（Vibrionaceae）、エロモナス科（Aeromonadaceae）、サリニスファエラ科（Salinisphaeraceae）、レジオネラ科（Legionellaceae）、コクシエラ科（Coxiellaceae）、デスルフォバルブス科（Desulfobulbaceae）、デスルファルクルス科（Desulfarculaceae）、ゲオバクター科（Geobacteraceae）、シントロフォバクター科（Syntrophobacteraceae）、シントロファス科（Syntrophaceae）、デロビブリオ科（Bdellovibrionaceae）、バクテリオヴォラックス科（Bacteriovoracaceae）、シストバクター科（Cystobacteraceae）、ミクソコックス科（Myxococcaceae）、ポリアンギウム科（Polyangiaceae）、コフレリア科（Kofleriaceae）、アアシドバクテリウム科（Acidobacteriaceae）、アシディミクロビウム科（Acidimicrobiaceae）、ストレプトスポランギウム科（Streptosporangiaceae）、ノカルジオプシス科（Nocardiopsaceae）、サーモモノスポラ科（Thermomonosporaceae）、シュードノカルディア科（Pseudonocardiaceae）、アクチノシンネーマ科（Actinosynnemataceae）、ミクロモノスポラ科（Micromonosporaceae）、ノカルジオイデス科（Nocardioidaceae）、コリネバクテリウム科（Corynebacteriaceae）、ノカルディア科（Nocardiaceae）、ゴルドニア科（Gordoniaceae）、デイエッチア科（Dietziaceae）、マイコバクテリウム科（Mycobacteriaceae）、ツカムレラ科（Tsukamurellaceae）セグニリパラス科（Segniliparaceae）、ミクロバクテリウム科（Microbacteriaceae）、マイクロコッカス科（Micrococcaceae）、デルマバクター科（Dermabacteraceae）、セルロモナス科（Cellulomonadaceae）、イントラスポランギウム科（Intrasporangiaceae）、フランキア科（Frankiaceae）、アシドサーマス科（Acidothermaceae）、ナカムラエラ科（Nakamurellaceae）、ゲオデルマトフィラス科（Geodermatophilaceae）、グリコミセス科（Glycomycetaceae）、ストレプトマイセス科（Streptomycetaceae）、カテニュリスポラ科（Catenulisporaceae）、ルブロバクター科（Rubrobacteraceae）、コネクシバクター科（Conexibacteraceae）、バシラス科（Bacillaceae）、アリシクロバシラス科（Alicyclobacillaceae）、パエニバシラス科（Paenibacillaceae）、ラクトバシラス科（Lactobacillaceae）、カルノバクテリウム科（Carnobacteriaceae）クロストリジウム科（Clostridiaceae）、シントロフォモナス科（Syntrophomonadaceae）、ユウバクテリウム科（Eubacteriaceae）、ペプトコッカス科（Peptococcaceae）、ラクノスピラ科（Lachnospiraceae）、オシロスピラ科（Oscillospiraceae）、サーモアナエロバクター科（Thermoanaerobacteraceae）、ナトロアナエロビウス科（Natranaerobiaceae）、スフィンゴバクテリウム科（Sphingobacteriaceae）、サプロスピラ科（Saprospiraceae）、ポルフィロモナス科（Porphyromonadaceae）、サイトファガ科（Cytophagaceae）、フラボバクテリウム科（Flavobacteriaceae）、デイノコッカス科（Deinococcaceae）、サーマス科（Thermaceae）、ゲマティモナス科（Gemmatimonadaceae）、フソバクテリア科（Fusobacteriaceae）、クロロフレクサス科（Chloroflexaceae）、ヘルペトシフォン科（Herpetosiphonaceae）、サーモミクロビア科（Thermomicrobiaceae）、サーモトーガ科（Thermotogaceae）、デフェリバクター科（Deferribacteraceae）、スルフォロブス科（Sulfolobaceae）、デスルフロコッカス科（Desulfurococcaceae）、サーモプロテウス科（Thermoproteaceae）、アキディロブス科（Acidilobaceae）、ハロバクテリウム科（Halobacteriaceae）、サーモプラズマ科（Thermoplasmataceae）、ピクロフィルス科（Picrophilaceae）、フェロプラズマ科（Ferroplasmaceae）およびアーケオグロブス科（Archaeoglobaceae）に属する微生物である。
【００４６】  さらに実験的にメタクリル酸誘導体の生成が確認できている特に好ましい微生物としては、ロドバクター科  （Rhodobacteraceae）、スフィンゴモナス科（Sphingomonadaceae）、カウロバクター科（Caulobacteraceae）、リゾビウム科（Rhizobiaceae）、キサントバクター科（Xanthobacteraceae）、ブルセラ科（Brucellaceae）、フィロバクテリウム科（Phyllobacteriaceae）、アルカリゲネス科（Alcaligenaceae）、コマモナス科（Comamonadaceae）、シュードモナス科（Pseudomonadaceae）、モラクセラ科（Moraxellaceae）、シェワネラ科（Shewanellaceae）、ビブリオ科（Vibrionaceae）、ノカルディア科（Nocardiaceae）、ストレプトマイセス科（Streptomycetaceae）、バシラス科（Bacillaceae）、パエニバシラス科（Paenibacillaceae）およびスフィンゴバクテリウム科（Sphingobacteriaceae）に属する微生物である。
【００４７】［原核生物の好ましい属］  ロドスピリルム科（Rhodospirillaceae）に属するものとしてはMagnetospirillum属、Rhodospirillum属、Azospirillum属およびTistrella属、アセトバクター科（Acetobacteraceae）に属するものとしてはAcetobacter属、Acidiphilium属およびGluconacetobacter属、ロドバクター科（Rhodobacteraceae）に属するものとしてはRhodobacter属、Paracoccus属、Ruegeria属、Jannaschia属、Roseobacter属、Dinoroseobacter属、Pseudovibrio属、Phaeobacter属、Octadecabacter属およびAhrensia属、ヒフォモナス科（Hyphomonadaceae）に属するものとしてはHyphomonas属、Maricaulis属、Hirschia属、スフィンゴモナス科（Sphingomonadaceae）に属するものとしてはSphingomonas属、Novosphingobium属、Sphingopyxis属、Sphingobium属、Lutibacterium属およびZymomonas属、エリスロバクター科（Erythrobacteraceae）に属するものとしてはErythrobacter属、カウロバクター科（Caulobacteraceae）に属するものとしてはBrevundimonas属、Caulobacter属、Phenylobacterium属およびAsticcacaulis属、リゾビウム科（Rhizobiaceae）に属するものとしてはAgrobacterium属、Rhizobium属およびSinorhizobium属、キサントバクター科（Xanthobacteraceae）に属するものとしてはXanthobacter属およびAzorhizobium属、ブルセラ科（Brucellaceae）に属するものとしてはBrucella属およびOchrobactrum属、フィロバクテリウム科（Phyllobacteriaceae）に属するものとしてはMesorhizobium属およびChelativorans属、アウランチモナス科（Aurantimonadaceae）に属するものとしてはAurantimonas属、ブラディリゾビウム科（Bradyrhizobiaceae）に属するものとしてはBradyrhizobium属、Agromonas属、Rhodopseudomonas属およびNitrobacter属、メチロバクテリウム科（Methylobacteriaceae）に属するものとしてはMethylobacterium属、ヒフォミクロビウム科（Hyphomicrobiaceae）に属するものとしてはHyphomicrobium属、Rhodomicrobium属およびPelagibacterium属、ロドビウム科（Rhodobiaceae）に属するものとしてはParvibaculum属、メチロシスティス科（Methylocystaceae）に属するものとしてはMethylocystis属、パルブルアーキュラ科（Parvularculaceae）に属するものとしてはParvularcula属、バークホルデリア科（Burkholderiaceae）に属するものとしてはBurkholderia属、Ralstonia属、Cupriavidus属および、Polynucleobacter属、アルカリゲネス科（Alcaligenaceae）に属するものとしてはAchromobacter属、Alcaligenes属、Bordetella属、Taylorella属、Pusillimonas属およびOligella属、コマモナス科（Comamonadaceae）に属するものとしてはComamonas属、Alicycliphilus属、Delftia属、Ramlibacter属、Rhodoferax属、Variovorax属、Polaromonas属、Acidovorax属およびVerminephrobacter属、オキサロバクター科（Oxalobacteraceae）に属するものとしてはHerminiimonas属、Herbaspirillum属およびCollimonas属、ヒドロゲノフィルス科（Hydrogenophilaceae）に属するものとしてはHydrogenophilus属およびThiobacillus属、ナイセリア科（Neisseriaceae）に属するものとしてはChromobacterium属、Laribacter属およびPseudogulbenkiania属、ニトロソモナス科（Nitrosomonadaceae）に属するものとしてはNitrosomonas属およびNitrosospira属、ロドサイクルス科（Rhodocyclaceae）に属するものとしてはAromatoleum属、Azoarcus属、Dechloromonas属、Thauera属およびAzospira(Dechlorosoma)属、クロマチウム科（Chromatiaceae）に属するものとしてはRheinheimera属、Thiosphaera属およびNitrosococcus属、エクトチオロドスピラ科（Ectothiorhodospiraceae）に属するものとしてはHalorhodospira属、アシドチオバシラス科（Acidithiobacillaceae）に属するものとしてはAcidithiobacillus属、キサントモナス科に属す��ものとしてはXanthomonas属、Stenotrophomonas属、Pseudoxanthomonas属およびRhodanobacter属、フランシセラ科（Francisellaceae）に属するものとしてはFrancisella属、ピスキリケッチア科（Piscirickettsiaceae）に属するものとしてはCycloclasticus属、オセアノスピリルム科（Oceanospirillaceae）に属するものとしてはOceanospirillum属およびMarinospirillum属、ハヘラ科（Hahellaceae）に属するものとしてはHahella属、ハロモナス科（Halomonadaceae）に属するものとしてはHalomonas属、アルカニヴォラックス科（Alcanivoracaceae）に属するものとしてはAlcanivorax属およびKangiella属、シュードモナス科（Pseudomonadaceae）に属するものとしてはPseudomonas属およびAzotobacter属、モラクセラ科（Moraxellaceae）に属するものとしてはAcinetobacter属およびPsychrobacter属、アルテロモナス科（Alteromonadaceae）に属するものとしてはAlishewanella属、Alteromonas属、Glaciecola属、Marinobacter属、Marinobacterium属およびSaccharophagus属、シェワネラ科（Shewanellaceae）に属するものとしてはShewanella属、フェリモナス科（Ferrimonadaceae）に属するものとしてはFerrimonas属、イディオマリナ科（Idiomarinaceae）に属するものとしてはIdiomarina属、コルウェリア科（Colwelliaceae）に属するものとしてはColwellia属、シュードアルテロモナス科（Pseudoalteromonadaceae）に属するものとしてはPseudoalteromonas属、ビブリオ科（Vibrionaceae）に属するものとしてはListonella属、Vibrio属およびPhotobacterium属、エロモナス科（Aeromonadaceae）に属するものとしてはAeromonas属およびOceanimonas属、サリニスファエラ科（Salinisphaeraceae）に属するものとしてはSalinisphaera属、レジオネラ科（Legionellaceae）に属するものとしてはLegionella属、コクシエラ科（Coxiellaceae）に属するものとしてはCoxiella属、デスルフォバルブス科（Desulfobulbaceae）に属するものとしてはDesulfococcus属、Desulfobacterium属およびDesulfatibacillum属、デスルファルクルス科（Desulfarculaceae）に属するものとしてはDesulfobulbus属およびDesulfarculus属、ゲオバクター科（Geobacteraceae）に属するものとしてはGeobacter属、シントロフォバクター科（Syntrophobacteraceae）に属するものとしてはSyntrophobacter属、シントロファス科（Syntrophaceae）に属するものとしてはSyntrophus属およびDesulfomonile属、デロビブリオ科（Bdellovibrionaceae）に属するものとしてはBdellovibrio属、バクテリオヴォラックス科（Bacteriovoracaceae）に属するものとしてはBacteriovorax属、シストバクター科（Cystobacteraceae）に属するものとしてはStigmatella属、ミクソコックス科（Myxococcaceae）に属するものとしてはMyxococcus属およびAnaeromyxobacter属、ポリアンギウム科（Polyangiaceae）に属するものとしてはSorangium属、コフレリア科（Kofleriaceae）に属するものとしてはHaliangium属、アシドバクテリウム科（Acidobacteriaceae）に属するものとしてはAcidobacterium属およびGranulicella属、アシディミクロビウム科（Acidimicrobiaceae）に属するものとしてはIlumatobacter属、ストレプトスポランギウム科（Streptosporangiaceae）に属するものとしてはStreptosporangium属、Acrocarpospora属、Herbidospora属、Microbispora属、Nonomuraea属、Planobispora属およびPlanomonospora属、ノカルジオプシス科（Nocardiopsaceae）に属するものとしてはNocardiopsis属およびThermobifida属、サーモモノスポラ科（Thermomonosporaceae）に属するものとしてはActinocorallia属、Actinomadura属およびThermomonospora属、シュードノカルディア科（Pseudonocardiaceae）に属するものとしてはPseudonocardia属、Actinoalloteichus属、Amycolatopsis属、Kibdelosporangium属、Saccharomonospora属、Saccharopolyspora属、Saccharothrix属、Streptoalloteichus属、Thermobispora属およびThermocrispum属、アクチノシンネーマ科（Actinosynnemataceae）に属するものとしてはActinokineospora属およびActinosynnema属、ミクロモノスポラ科（Micromonosporaceae）に属するものとしてはMicromonospora属、Actinoplanes属、Catellatospora属、Couchioplanes属、Dactylosporangium属、Pilimelia属、Salinispora属およびVerrucosispora属、アクチノポリスポラ科（Actinopolysporaceae）に属するものとしてはActinopolyspora属、プロピオニバクテリウム科（Propionibacteriaceae）に属するものとしてはPropionibacterium属およびLuteococcus属、ノカルジオイデス科（Nocardioidaceae）に属するものとしてはNocardioides属、Aeromicrobium属、Kribbella属およびPimelobacter属、コリネバクテリウム科（Corynebacteriaceae）に属するものとしてはCorynebacterium属、ノカルディア科（Nocardiaceae）に属するものとしてはNocardia属およびRhodococcus属、ゴルドニア科（Gordoniaceae）に属するものとしてはGordonia属、デイエッチア科（Dietziaceae）に属するものとしてはDietzia属、マイコバクテリウム科（Mycobacteriaceae）に属するものとしてはMycobacterium属およびAmycolicicoccus属、ツカムレラ科（Tsukamurellaceae）に属するものとしてはTsukamurella属、セグニリパラス科（Segniliparaceae）に属するものとしてはSegniliparus属、ミクロバクテリウム科（Microbacteriaceae）に属するものとしてはMicrobacterium属、Agromyces属、Clavibacter属、Curtobacterium属およびRathayibacter属、マイクロコッカス科（Micrococcaceae）に属するものとしてはMicrococcus属、Arthrobacter属、Citricoccus属、Renibacterium属、Kocuria属およびRothia属、デルマバクター科（Dermabacteraceae）に属するものとしてはBrachybacterium属、Dermacoccus属、Demetria属およびKytococcus属、デルマトフィラス科（Dermatophilaceae）に属するものとしてはDermatophilus属、ブレビバクテリウム科（Brevibacteriaceae）に属するものとしてはBrevibacterium属、セルロモナス科（Cellulomonadaceae）に属するものとしてはCellulomonas属およびOerskovia属、イントラスポランギウム科（Intrasporangiaceae）に属するものとしてはIntrasporangium属、Janibacter属、Terrabacter属およびSerinicoccus属、ヨネシア科（Jonesiaceae）に属するものとしてはJonesia属、ラロバクター科（Rarobacteraceae）に属するものとしてはRarobacter属、フランキア科（Frankiaceae）に属するものとしてはFrankia属、アシドサーマス科（Acidothermaceae）に属するものとしてはAcidothermus属、ナカムラエラ科（Nakamurellaceae）に属するものとしてはNakamurella属、クリプトスポランギウム科（Cryptosporangiaceae）に属するものとしてはCryptosporangium属、ゲオデルマトフィラス科（Geodermatophilaceae）に属するものとしてはGeodermatophilus属、グリコミセス科（Glycomycetaceae）に属するものとしてはGlycomyces属およびStackebrandtia属、アクチノマイセス科Actinomycetaceae）に属するものとしてはArcanobacterium属、ストレプトマイセス科（Streptomycetaceae）に属するものとしてはStreptomyces属およびKitasatospora属、カテニュリスポラ科（Catenulisporaceae）に属するものとしてはCatenulispora属、キネオスポリア科（Kineosporiaceae）に属するものとしてはKineosporia属およびKineococcus属、ビフィドバクテリウム科（Bifidobacteriaceae）に属するものとしてはBifidobacterium属、ルブロバクター科（Rubrobacteraceae）に属するものとしてはRubrobacter属、コネクシバクター科（Conexibacteraceae）に属するも���としてはConexibacter属、バシラス科（Bacillaceae）に属するものとしてはBacillus属、Geobacillus属、Oceanobacillus属、Lysinibacillus属およびHalobacillus属、アリシクロバシラス科（Alicyclobacillaceae）に属するものとしてはAlicyclobacillus属およびKyrpidia属、パエニバシラス科（Paenibacillaceae）に属するものとしてはPaenibacillus属およびBrevibacillus属、プラノコッカス科（Planococcaceae）に属するものとしてはPlanococcus属およびKurthia属、スポロラクトバシラス科（Sporolactobacillaceae）に属するものとしてはSporolactobacillus属、サーモアクチノミセス科（Thermoactinomycetaceae）に属するものとしてはThermoactinomyces属、ラクトバシラス科（Lactobacillaceae）に属するものとしてはLactobacillus属およびPediococcus属、ロイコノストック科（Leuconostocaceae）に属するものとしてはLeuconostoc属およびWeissella属、アエロコッカス科（Aerococcaceae）に属するものとしてはAerococcus属およびGlobicatella属、カルノバクテリウム科（Carnobacteriaceae）に属するものとしてはAlloiococcus属およびCarnobacterium属、ストレプトコッカス科（Streptococcaceae）に属するものとしてはStreptococcus属、クロストリジウム科（Clostridiaceae）に属するものとしてはClostridium属およびAlkaliphilus属、シントロフォモナス科（Syntrophomonadaceae）に属するものとしてはSyntrophomonas属およびSyntrophothermus属、ユウバクテリウム科（Eubacteriaceae）に属するものとしてはEubacterium属、ペプトコッカス科（Peptococcaceae）に属するものとしてはPeptococcus属、Desulfitobacterium属、Desulfotomaculum属およびPelotomaculum属、ペプトストレプトコッカス科（Peptostreptococcaceae）に属するものとしてはPeptostreptococcus属、ラクノスピラ科（Lachnospiraceae）に属するものとしてはButyrivibrio属およびRoseburia属、オシロスピラ科（Oscillospiraceae）に属するものとしてはOscillibacter属、サーモアナエロバクター科（Thermoanaerobacteraceae）に属するものとしてはThermoanaerobacter属およびCarboxydothermus属、ナトロアナエロビウス科（Natranaerobiaceae）に属するものとしてはNatranaerobius属、スフィンゴバクテリウム科（Sphingobacteriaceae）に属するものとしてはSphingobacterium属、Pedobacter属およびMucilaginibacter属、サプロスピラ科（Saprospiraceae）に属するものとしてはHaliscomenobacter属、バクテロイデス科（Bacteroidaceae）に属するものとしてはBacteroides属、マリニラビリア科（Marinilabiliaceae）に属するものとしてはMarinilabilia属、プレボテラ科（Prevotellaceae）に属するものとしてはPrevotella属、ポルフィロモナス科（Porphyromonadaceae）に属するものとしてはPorphyromonas属およびOdoribacter属、サイトファガ科（Cytophagaceae）に属するものとしてはFlexibacter属、Spirosoma属およびRunella属、フラモヴァーガ科（Flammeovirgaceae）に属するものとしてはFlammeovirga属、フラボバクテリウム科（Flavobacteriaceae）に属するものとしてはFlavobacterium属、Chryseobacterium属およびMaribacter属、デイノコッカス科（Deinococcaceae）に属するものとしてはDeinococcus属、サーマス科（Thermaceae）に属するものとしてはThermus属、Meiothermus属、Oceanithermus属およびMarinithermus属、ゲマティモナス科（Gemmatimonadaceae）に属するものとしてはGemmatimonas属、フソバクテリア科（Fusobacteriaceae）に属するものとしてはFusobacterium属およびIlyobacter属、クロロフレクサス科（Chloroflexaceae）に属するものとしてはRoseiflexus属、ヘルペトシフォン科（Herpetosiphonaceae）に属するものとしてはHerpetosiphon属、サーモミクロビ���科（Thermomicrobiaceae）に属するものとしてはThermomicrobium属、サーモトーガ科（Thermotogaceae）に属するものとしてはThermotoga属、Thermosipho属およびFervidobacterium属、デフェリバクター科（Deferribacteraceae）に属するものとしてはDeferribacter属、Calditerrivibrio属およびFlexistipes属、スルフォロブス科（Sulfolobaceae）に属するものとしてはMetallosphaera属およびAcidianus属、デスルフロコッカス科（Desulfurococcaceae）に属するものとしてはAeropyrum属、サーモプロテウス科（Thermoproteaceae）に属するものとしてはPyrobaculum属、Caldivirga属およびVulcanisaeta属、アキディロブス科（Acidilobaceae）に属するものとしてはAcidilobus属、ハロバクテリウム科（Halobacteriaceae）に属するものとしてはHalobacterium属、Halococcus属、Haloarcula属、Haloquadratum属、Natronomonas属、Halorubrum属、Haloterrigena属、Natrialba属、Halalkalicoccus属およびHalogeometricum属、サーモプラズマ科（Thermoplasmataceae）に属するものとしてはThermoplasma属、ピクロフィルス科（Picrophilaceae）に属するものとしてはPicrophilus属、フェロプラズマ科（Ferroplasmaceae）に属するものとしてはFerroplasma属、アーケオグロブス科（Archaeoglobaceae）に属するものとしてはArchaeoglobus属およびFerroglobus属が挙げられる。さらに、分類上の目の定まらない微生物としてPolymorphum属、Micavibrio属、Simiduia属、Leptothrix属、Thiomonas属、Rubrivivax属およびMethylibium属が、バシラス目（Bacillales）に属し分類上の科の定まらない微生物としてExiguobacterium属、クロストリジウム目（Clostridiales）に属し分類上の科の定まらない微生物としてAnaerococcus属が挙げられる。
【００４８】  この中でも好ましい微生物は、分岐鎖アミノ酸の代謝経路中の酵素を有することが示唆されるMagnetospirillum属、Rhodospirillum属、Azospirillum属、Tistrella属、Acidiphilium属、Rhodobacter属、Paracoccus属、Ruegeria属、Jannaschia属、Roseobacter属、Dinoroseobacter属、Pseudovibrio属、Phaeobacter属、Octadecabacter属、Hyphomonas属、Maricaulis属、Hirschia属、Sphingomonas属、Novosphingobium属、Sphingopyxis属、Sphingobium属、Erythrobacter属、Brevundimonas属、Caulobacter属、Phenylobacterium属、Asticcacaulis属、Agrobacterium属、Rhizobium属、Sinorhizobium属、Xanthobacter属、Azorhizobium属、Brucella属、Ochrobactrum属、Mesorhizobium属、Chelativorans属、Aurantimonas属、Bradyrhizobium属、Agromonas属、Rhodopseudomonas属、Nitrobacter属、Methylobacterium属、Rhodomicrobium属、Pelagibacterium属Parvibaculum属、Methylocystis属、Parvularcula属、Burkholderia属、Ralstonia属、Cupriavidus属、Polynucleobacter属、Achromobacter属、Bordetella属、Taylorella属、Pusillimonas属、Comamonas属、Alicycliphilus属、Delftia属、Ramlibacter属、Rhodoferax属、Variovorax属、Polaromonas属、Acidovorax属、Verminephrobacter属、Herminiimonas属、Herbaspirillum属、Collimonas属、Chromobacterium属、Laribacter属、Pseudogulbenkiania属、Nitrosomonas属、Nitrosospira属、Aromatoleum属、Azoarcus属、Dechloromonas属、Thauera属、Azospira (Dechlorosoma)属、Rheinheimera属、Nitrosococcus属、Halorhodospira属、Xanthomonas属、Stenotrophomonas属、Pseudoxanthomonas属、Rhodanobacter属、Francisella属、Cycloclasticus属、Oceanospirillum属、Hahella属、Halomonas属、Alcanivorax属、Kangiella属、Pseudomonas属、Azotobacter属、Acinetobacter属、Psychrobacter属、Alishewanella属、Alteromonas属、Glaciecola属、Marinobacter属、Marinobacterium属、Saccharophagus属、Shewanella属、Ferrimonas属、Idiomarina属、Colwellia属、Pseudoalteromonas属、Listonella属、Vibrio属、Photobacterium属、Aeromonas属、Oceanimonas属、Salinisphaera属、Legionella属、Coxiella属、Desulfococcus属、Desulfobacterium属、Desulfatibacillum属、Desulfobulbus属、Desulfarculus属、Geobacter属、Syntrophobacter属、Syntrophus属、Desulfomonile属、Bdellovibrio属、Bacteriovorax属、Stigmatella属、Myxococcus属、Anaeromyxobacter属、Sorangium属、Haliangium属、Acidobacterium属、Granulicella属、Ilumatobacter属、Streptosporangium属、Nocardiopsis属、Thermobifida属、Thermomonospora属、Pseudonocardia属、Amycolatopsis属、Saccharomonospora属、Saccharopolyspora属、Thermobispora属、Actinosynnema属、Micromonospora属、Salinispora属、Verrucosispora属、Nocardioides属、Kribbella属、Corynebacterium属、Nocardia属、Rhodococcus属、Gordonia属、Dietzia属、Mycobacterium属、Amycolicicoccus属、Tsukamurella属、Segniliparus属、Microbacterium属、Micrococcus属、Arthrobacter属、Citricoccus属、Renibacterium属、Kocuria属、Kytococcus属、Cellulomonas属、Intrasporangium属、Serinicoccus属、Frankia属、Acidothermus属、Nakamurella属、Geodermatophilus属、Stackebrandtia属、Streptomyces属Catenulispora属、Rubrobacter属、Conexibacter属、Bacillus属、Geobacillus属、Oceanobacillus属、Lysinibacillus属、Halobacillus属、Alicyclobacillus属、Kyrpidia属、Paenibacillus属Lactobacillus属、Carnobacterium属、Clostridium属、Alkaliphilus属、Syntrophomonas属、Syntrophothermus属、Eubacterium属、Desulfitobacterium属、Desulfotomaculum属、Pelotomaculum属、Butyrivibrio属、Roseburia属、Oscillibacter属、Thermoanaerobacter属、Carboxydothermus属、Natranaerobius属、Sphingobacterium属、Pedobacter属、Haliscomenobacter属、Porphyromonas属、Odoribacter属、Spirosoma属、Runella属、Maribacter属、Deinococcus属、Thermus属、Meiothermus属、Oceanithermus属、Marinithermus属、Gemmatimonas属、Fusobacterium属、Ilyobacter属、Roseiflexus属、Herpetosiphon属、Thermomicrobium��、Thermotoga属、Thermosipho属、Fervidobacterium属、Deferribacter属、Calditerrivibrio属、Flexistipes属、Metallosphaera属、Aeropyrum属、Pyrobaculum属、Caldivirga属、Vulcanisaeta属、Acidilobus属、Haloarcula属、Haloquadratum属、Natronomonas属、Halorubrum属、Haloterrigena属、Natrialba属、Halalkalicoccus属、Halogeometricum属、Thermoplasma属、Picrophilus属、Ferroplasma属、Archaeoglobus属、Ferroglobus属、Polymorphum属、Micavibrio属、Simiduia属、Leptothrix属、Thiomonas属、Rubrivivax属、Methylibium属、Exiguobacterium属およびAnaerococcus属に属する微生物である。
【００４９】  さらに実験的にメタクリル酸誘導体の生成が確認できている特に好ましい微生物としては、Paracoccus属、Sphingomonas属、Brevundimonas属、Agrobacterium属、Rhizobium属、Xanthobacter属、Ochrobactrum属、Mesorhizobium属、Achromobacter属、Comamonas属、Pseudomonas属、Acinetobacter属、Shewanella属、Listonella属、Rhodococcus属、Streptomyces属Bacillus属、Geobacillus属、Paenibacillus属、Sphingobacterium属およびPedobacter属に属する微生物である。
【００５０】［原核生物の好ましい種］〔シュードモナス属〕  シュードモナス（Pseudomonas）属に分類される微生物としては、例えば、シュードモナス・エルギノーサ(Pseudomonas  aeruginosa)、シュードモナス・アガリシ(Pseudomonas  agarici)、シュードモナス・アルカリゲネス(Pseudomonas  alcaligenes)、シュードモナス・アミグダレ(Pseudomonas  amygdale)、シュードモナス・アングイリセプチカ(Pseudomonas  anguiliseptica)、シュードモナス・アンチミクロビカ(Pseudomonas  antimicrobica)、シュードモナス・アスプレニ(Pseudomonas  aspleni)、シュードモナス・オーランチアカ(Pseudomonas  aurantiaca)、シュードモナス・オーレオファシエンス(Pseudomonas  aureofaciens)、シュードモナス・アベラナエ(Pseudomonas  avellanae)、シュードモナス・アゾトフォルマンス(Pseudomonas  azotoformans)、シュードモナス・バレアリカ(Pseudomonas  balearica)、シュードモナス・ベイジェリンスキイ(Pseudomonas  beijerinsckii)、シュードモナス・ベテリ(Pseudomonas  beteli)、シュードモナス・ボレオポリス(Pseudomonas  boreopolis)、シュードモナス・カルボキシヒドロゲナ(Pseudomonas  carboxyhydrogena)、シュードモナス・カリカパパヤエ(Pseudomonas  caricapapayae)、シュードモナス・シコリイ(Pseudomonas  cichorii)、シュードモナス・シッシコラ(Pseudomonas  cissicola)、シュードモナス・シトロネロリス(Pseudomonas  citronellolis)、シュードモナス・コロナファシエンス(Pseudomonas  coronafaciens)、シュードモナス・コルガテ(Pseudomonas  corrugate)、シュードモナス・ドゥードロフィイ(Pseudomonas  doudoroffii)、シュードモナス・エキノイズス(Pseudomonas  echinoids)、シュードモナス・エロンガテ(Pseudomonas  elongate)、シュードモナス・フィクセレクタエ(Pseudomonas  ficuserectae)、シュードモナス・フラベッセンス(Pseudomonas  flavescens)、シュードモナス・フレクテンス(Pseudomonas  flectens)、シュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas  fluorescens)、シュードモナス・フラギ(Pseudomonas  fragi)、シュードモナス・フルバ(Pseudomonas  fulva)、シュードモナス・フスコバギナエ(Pseudomonas  fuscovaginae)、シュードモナス・ゲリディコラ(Pseudomonas  gelidicola)、シュードモナス・ゲニクラタ(Pseudomonas  geniculata)、シュードモナス・グラテイ(Pseudomonas  glathei)、シュードモナス・ハロフィラ(Pseudomonas  halophila)、シュードモナス・ヒビシコラ(Pseudomonas  hibiscicola)、シュードモナス・フッチエンシス(Pseudomonas  huttiensis)、シュードモナス・イネルス(Pseudomonas  iners)、シュードモナス・ランセロタ(Pseudomonas  lancelota)、シュードモナス・レモイグネイ(Pseudomonas  lemoignei)、シュードモナス・ルンデンシス(Pseudomonas  lundensis)、シュードモナス・ルテオラ(Pseudomonas  luteola)、シュードモナス・マルギナリス(Pseudomonas  marginalis)、シュードモナス・メリアエ(Pseudomonas  meliae)、シュードモナス・メンドシナ(Pseudomonas  mendocina)、シュードモナス・ムシドレンス(Pseudomonas  mucidolens)、シュードモナス・モンテイリ(Pseudomonas  monteilli)、シュードモナス・ナウチカ(Pseudomonas  nautica)、シュードモナス・ニトロレデュセンス(Pseudomonas  nitroreducens)、シュードモナス・オレオボランス(Pseudomonas  oleovorans)、シュードモナス・オリジハビタンス(Pseudomonas  oryzihabitans)  、シュードモナス・パーツシノゲナ(Pseudomonas  pertucinogena)、シュードモナス・フェナジニウム(Pseudomonas  phenazinium)、シュードモナス・ピクトルム(Pseudomonas  pictorum)、シュードモナス・シュードアルカリゲネス(Pseudomonas  pseudoalcaligenes)、シュードモナス・プチダ(Pseudomonas  putida)、シュードモナス・ピロシニア(Pseudomonas  pyrrocinia)、シュードモナス・レシノボランス(Pseudomonas  resinovorans)、シュードモナス・ローデシアエ(Pseudomonas  rhodesiae)、シュードモナス・サッカロフィラ(Pseudomonas  saccharophila)、シュードモナス・サバスタノイ(Pseudomonas  savastanoi)、シュードモナス・スピノサ(Pseudomonas  spinosa)、シュードモナス・スタニエリ(Pseudomonas  stanieri)、シュードモナス・ストラミナエ(Pseudomonas  straminae)、シュードモナス・スツッツェリ(Pseudomonas  stutzeri)、シュードモナス・シンキサンタ(Pseudomonas  synxantha)、シュードモナス・シリンガエ(Pseudomonas  syringae)、シュードモナス・シジギイ(Pseudomonas  syzygii)、シュードモナス・タエロレンス(Pseudomonas  taetrolens)、シュードモナス・トラアシイ(Pseudomonas  tolaasii)、シュードモナス・ベロニイ(Pseudomonas  veronii)、シュードモナス・ビリディフラバ(Pseudomonas  viridiflava)、シュードモナス・ブルガリス(Pseudomonas  vulgaris)、シュードモナス・ウィスコンシエンシス(Pseudomonas  wisconsinensis)等が挙げられる。
【００５１】〔バシラス属〕  バシラス属（Bacillus）に分類される微生物としては、例えば、バシラス・セレウス（Bacillus  cereus）、バシラス・サブティリス（Bacillus  subtilis）、バシラス・チューリンゲンシス（Bacillus  thuringiensis）、バシラス・アシディセラー（Bacillus  acidiceler）、バシラス・アシディコーラ（Bacillus  acidicola）、バシラス・アエオリウス（Bacillus  aeolius）、バシラス・アエリウス（Bacillus  aerius）、バシラス・アエロフィルス（Bacillus  aerophilus）、バシラス・アガラドヘレンス（Bacillus  agaradhaerens）、バシラス・アキバイ（Bacillus  akibai）、バシラス・アルカリフィルス（Bacillus  alcalophilus）、バシラス・アルギコーラ（Bacillus  algicola）、バシラス・アルカリジアゾトロフィカス（Bacillus  alkalidiazotrophicus）、バシラス・アルカリテルリス（Bacillus  alkalitelluris）、バシラス・アルティチュジニス（Bacillus  altitudinis）、バシラス・アルベアユエンシス（Bacillus  alveayuensis）、バシラス・アミロリクエファシエンス（Bacillus  amyloliquefaciens）、バシラス・アンスラシス（Bacillus  anthracis）、バシラス・アクイマリス（Bacillus  aquimaris）、バシラス・アレノシイ（Bacillus  arenosi）、バシラス・アルセニシセレナティス（Bacillus  arseniciselenatis）、バシラス・アルセニカス（Bacillus  arsenicus）、バシラス・アーヴァイ（Bacillus  arvi）、バシラス・アサヒイ（Bacillus  asahii）、バシラス・アトロファエウス（Bacillus  atrophaeus）、バシラス・アウランティアカス（Bacillus  aurantiacus）、バシラス・アキサクィエンシス（Bacillus  axarquiensis）、バシラス・アゾトフォーマンス（Bacillus  azotoformans）、バシラス・バディウス（Bacillus  badius）、バシラス・バーバリカス（Bacillus  barbaricus）、バシラス・バタビエンシス（Bacillus  bataviensis）、バシラス・ベンゾボランス（Bacillus  benzoevorans）、バシラス・ボゴリエンシス（Bacillus  bogoriensis）、バシラス・ボロニフィルス（Bacillus  boroniphilus）、バシラス・ブタノリボランス（Bacillus  butanolivorans）、バシラス・カーボニフィルス（Bacillus  carboniphilus）、バシラス・セセンベンシス（Bacillus  cecembensis）、バシラス・セルロシリティカス（Bacillus  cellulosilyticus）、バシラス・チャガノレンシス（Bacillus  chagannorensis）、バシラス・シービー（Bacillus  cibi）、バシラス・サーキュランス（Bacillus  circulans）、バシラス・クラーキー（Bacillus  clarkii）、バシラス・クラウシー（Bacillus  clausii）、バシラス・コアギュランス（Bacillus  coagulans）、バシラス・コアウイレンシス（Bacillus  coahuilensis）、バシラス・コーニー（Bacillus  cohnii）、バシラス・デシシフロンディス（Bacillus  decisifrondis）、バシラス・デコロラチオニス（Bacillusdecolorationis）、バシラス・ドレンテンシス（Bacillus  drentensis）、バシラス・エダフィカス（Bacillus  edaphicus）、バシラス・エンドフィティカス（Bacillus  endophyticus）、バシラス・ファラギニス（Bacillus  farraginis）、バシラス・フォスティディオサス（Bacillus  fastidiosus）、バシラス・ファルマス（Bacillus  firmus）、バシラス・フレクサス（Bacillus  flexus）、バシラス・ホラミニス（Bacillus  foraminis）、バシラス・フォルディ（Bacillus  fordii）、バシラス・フォルティス（Bacillus  fortis）、バシラス・フマリオリィ（Bacillus  fumarioli）、バシラス・フニクラス（Bacillus  funiculus）、バシラス・ガラクトシディリティカス（Bacillus  galactosidilyticus）、バシラス・ゲラティニ（Bacillus  gelatini）、バシラス・ギブソニー（Bacillus  gibsonii）、バシラス・ハルマパラス（Bacillus  halmapalus）、バシラス・ハロデュランス（Bacillus  halodurans）、バシラス・ハロフィルス（Bacillus  halophilus）、バシラス・ヘミセルロシリティカス（Bacillus  hemicellulosilyticus）、バシラス・ハーバーステイネンシス（Bacillus  herbersteinensis）、バシラス・ホリコシー（Bacillus  horikoshii）、バシラス・ホルティ（Bacillus  horti）、バシラス・フミ（Bacillus  humi）、バシラス・ファジンポエンシス（Bacillus  hwajinpoensis）、バシラス・イドリエンシス（Bacillus  idriensis）、バシラス・インディカス（Bacillus  indicus）、バシラス・インファンティス（Bacillus  infantis）、バシラス・インファーナス（Bacillus  infernus）、バシラス・インソリタス（Bacillus  insolitus）、バシラス・イサベリエ（Bacillus  isabeliae）、バシラス・チョッカリ（Bacillus  jeotgali）、バシラス・コリエンシス（Bacillus  koreensis）、バシラス・クルーウィッチアエ（Bacillus  krulwichiae）、バシラス・レヘンシス（Bacillus  lehensis）、バシラス・レンタス（Bacillus  lentus）、バシラス・リケニホルミス（Bacillus  licheniformis）、バシラス・リトラリス（Bacillus  litoralis）、バシラス・ルシフェレンシス（Bacillus  luciferensis）、バシラス・マカウエンシス（Bacillus  macauensis）、バシラス・マキアエ（Bacillus  macyae）、バシラス・マラシテンシス（Bacillus  malacitensis）、バシラス・マンナニリティカス（Bacillus  mannanilyticus）、バシラス・マリナス（Bacillus  marinus）、バシラス・マリスフラビィ（Bacillus  marisflavi）、バシラス・マシリエンシス（Bacillus  massiliensis）、バシラス・メガテリウム（Bacillus  megaterium）、バシラス・メタノリカス（Bacillus  methanolicus）、バシラス・モジャベンシス（Bacillus  mojavensis）、バシラス・ムシラギノサス（Bacillus  mucilaginosus）、バシラス・ムラリス（Bacillus  muralis）、バシラス・ムリマルティニ（Bacillus  murimartini）、バシラス・ミコイデス（Bacillus  mycoides）、バシラス・ネールソニー（Bacillus  nealsonii）、バシラス・ニアベンシス（Bacillus  niabensis）、バシラス・ニアシニ（Bacillus  niacini）、バシラス・ノバリス（Bacillus  novalis）、バシラス・オデッセイ（Bacillus  odysseyi）、バシラス・オクヘンシス（Bacillus  okhensis）、バシラス・オクヒデンシス（Bacillus  okuhidensis）、バシラス・オレロニウス（Bacillusoleronius）、バシラス・オシメンシス（Bacillus  oshimensis）、バシラス・パリダス（Bacillus  pallidus）、バシラス・パナシテラエ（Bacillus  panaciterrae）、バシラス・パタゴニエンシス（Bacillus  patagoniensis）、バシラス・プラコルチディス（Bacillus  plakortidis）、バシラス・ポチェオネンシス（Bacillus  pocheonensis）、バシラス・ポリゴニ（Bacillus  polygoni）、バシラス・シュードアルカリフィルス（Bacillus  pseudalcaliphilus）、バシラス・シュードファーマス（Bacillus  pseudofirmus）、バシラス・シュードミコイデス（Bacillus  pseudomycoides）、バシラス・シクロデュランス（Bacillus  psychrodurans）、バシラス・フィクロサッカロリティカス（Bacillus  psychrosaccharolyticus）、バシラス・フィクロトレランス（Bacillus  psychrotolerans）、バシラス・プミラス（Bacillus  pumilus）、バシラス・ピクナス（Bacillus  pycnus）、バシラス・キングダオネンシス（Bacillus  qingdaonensis）、バシラス・ルリス（Bacillus  ruris）、バシラス・サフ��ンシス（Bacillus  safensis）、バシラス・サラリウス（Bacillus  salarius）、バシラス・サリフィルス（Bacillus  saliphilus）、バシラス・シュリジェリー（Bacillus  schlegelii）、バシラス・セレナターセナティス（Bacillus  selenatarsenatis）、バシラス・セレニティレドセンス（Bacillus  selenitireducens）、バシラス・セオハエアネンシス（Bacillus  seohaeanensis）、バシラス・サックレトニー（Bacillus  shackletonii）、バシラス・シルベストリス（Bacillus  silvestris）、バシラス・シンプレックス（Bacillus  simplex）、バシラス・シラリス（Bacillus  siralis）、バシラス・スミシー（Bacillus  smithii）、バシラス・ソリ（Bacillus  soli）、バシラス・ソノレンシス（Bacillus  sonorensis）、バシラス・スフェリカス（Bacillus  sphaericus）、バシラス・スポロサーモデュランス（Bacillus  sporothermodurans）、バシラス・ストラトスフェリカス（Bacillus  stratosphericus）、バシラス・サブテラネウス（Bacillus  subterraneus）、バシラス・タエアネンシス（Bacillus  taeanensis）、バシラス・テクィレンシス（Bacillus  tequilensis）、バシラス・サーマンタルクティカス（Bacillus  thermantarcticus）、バシラス・サーモアミロボランス（Bacillus  thermoamylovorans）、バシラス・サーモクローカー（Bacillus  thermocloacae）、バシラス・チオパランス（Bacillus  thioparans）、バシラス・ツスシー（Bacillus  tusciae）、バシラス・バリスモーチス（Bacillus  vallismortis）、バシラス・ベデリ（Bacillus  vedderi）、バシラス・ベレゼンシス（Bacillus  velezensis）、バシラス・ビエトナメンシス（Bacillus  vietnamensis）、バシラス・ビレティ（Bacillus  vireti）、バシラス・ワコエンシス（Bacillus  wakoensis）、バシラス・ヴェイヘンステファネンシス（Bacillus  weihenstephanensis）等が挙げられる。
【００５２】〔スフィンゴバクテリウム属〕  スフィンゴバクテリウム（Sphingobacterium）属に分類される微生物としては、例えば、スフィンゴバクテリウム・マルチボーラム（Sphingobacterium  multivorum）、スフィンゴバクテリウム・スピリチボーラム（Sphingobacterium  spiritivorum）、スフィンゴバクテリウム・アリメンタリウム（Sphingobacterium  alimentarium）、スフィンゴバクテリウム・アンフイエンス（Sphingobacterium  anhuiense）、スフィンゴバクテリウム・アンタークチカム（Sphingobacterium  antarcticum）、スフィンゴバクテリウム・バンブサエ（Sphingobacterium  bambusae）、スフィンゴバクテリウム・カナデンス（Sphingobacterium  canadense）、スフィンゴバクテリウム・コンポスチ（Sphingobacterium  composti）、スフィンゴバクテリウム・デジョネンス（Sphingobacterium  daejeonense）、スフィンゴバクテリウム・ファシウム（Sphingobacterium  faecium）、スフィンゴバクテリウム・ヘパリナム（Sphingobacterium  heparinum）、スフィンゴバクテリウム・キタヒロシマエンス（Sphingobacterium  kitahiroshimense）、スフィンゴバクテリウム・ラクティス（Sphingobacterium  lactis）、スフィンゴバクテリウム・ミズタニー（Sphingobacterium  mizutaii）、スフィンゴバクテリウム・ネマトシダ（Sphingobacterium  nematocida）、スフィンゴバクテリウム・ピスシウム（Sphingobacterium  piscium）、スフィンゴバクテリウム・シャイエンス（Sphingobacterium  shayense）、スフィンゴバクテリウム・シヤンゲンス（Sphingobacterium  siyangense）、スフィンゴバクテリウム・タルポフィラム（Sphingobacterium  thalpophilum）、スフィンゴバクテリウム・ウェンキシニアエ（Sphingobacterium  wenxiniae）等が挙げられる。
【００５３】〔コマモナス属〕  コマモナス（Comamonas）属に分類される微生物としては、例えば、コマモナス・アシドボランス（Comamonas  acidovorans）、コマモナス・アクアティカ（Comamonas  aquatica）、コマモナス・バディア（Comamonas  badia）、コマモナス・コムポスティ（Comamonas  composti）、コマモナス・デニトリフィカンス（Comamonas  denitrificans）、コマモナス・グラヌリ（Comamonas  granuli）、コマモナス・カーステリッシ（Comamonas  kerstersii）、コマモナス・コレンシス（Comamonas  koreensis）、コマモナス・ニトラティボランス（Comamonas  nitrativorans）、コマモナス・オドントターミッツ（Comamonas  odontotermites）、コマモナス・テラエ（Comamonas  terrae）、コマモナス・テリジェナ（Comamonas  terrigena）、コマモナス・テストステロニ（Comamonas  testosteroni）、カマモナス・チオオキシダンス（Comamonas  thiooxydans）、コマモナス・ゾングリアニ（Comamonas  zonglianii）等が挙げられる。
【００５４】〔ブレバンディモナス属〕  ブレバンディモナス（Brevundimonas）属に分類される微生物としては、例えば、ブレバンディモナス・アルバ（Brevundimonas  alba）、ブレバンディモナス・アウランティアカ（Brevundimonas  aurantiaca）、ブレバンディモナス・バクテロイデス（Brevundimonas  bacteroides）、ブレバンディモナス・バソルティス（Brevundimonas  basaltis）、ブレバンディモナス・バラタ（Brevundimonas  bullata）、ブレバンディモナス・ディミヌタ（Brevundimonas  diminuta）、ブレバンディモナス・インターメディア（Brevundimonas  intermedia）、ブレバンディモナス・クワンチュネンシス（Brevundimonas  kwangchunensis）、ブレバンディモナス・レンタ（Brevundimonas  lenta）、ブレバンディモナス・メディターラネア（Brevundimonas  mediterranea）、ブレバンディモナス・ナスダエ（Brevundimonas  nasdae）、ブレバンディモナス・オレイ（Brevundimonas  olei）、ブレバンディモナス・サブビブリオイデス（Brevundimonas  subvibrioides）、ブレバンディモナス・テラエ（Brevundimonas  terrae）、ブレバンディモナス・バンカンニーティ（Brevundimonas  vancanneytii）、ブレバンディモナス・バリアビリス（Brevundimonas  variabilis）、ブレバンディモナス・ベシキュラリス（Brevundimonas  vesicularis）、ブレバンディモナス・ビスコサ（Brevundimonas  viscosa）等が挙げられる。
【００５５】〔スフィンゴモナス属〕  スフィンゴモナス（Sphingomonas）属に分類される微生物としては、例えば、スフィンゴモナス・アバシ（Sphingomonas  abaci）、スフィンゴモナス・アドハエシバ（Sphingomonas  adhaesiva）、スフィンゴモナス・アエロラータ（Sphingomonas  aerolata）、スフィンゴモナス・アクアティーリス（Sphingomonas  aquatilis）、スフィンゴモナス・アサッカロリティカ（Sphingomonas  asaccharolytica）、スフィンゴモナス・アスタキサンチニファシエンス（Sphingomonas  astaxanthinifaciens）、スフィンゴモナス・アウランティアカ（Sphingomonas  aurantiaca）、スフィンゴモナス・アゾティファイゲンス（Sphingomonas  azotifigens）、スフィンゴモナス・アゾトフォルナンス（Sphingomonas  azotofornans）、スフィンゴモナス・カプスラータ（Sphingomonas  capsulata）、スフィンゴモナス・チャングバイエンシス（Sphingomonas  changbaiensis）、スフィンゴモナス・クロロフェノリカ（Sphingomonas  chlorophenolica）、スフィンゴモナス・サイナレ（Sphingomonas  cynarae）、スフィンゴモナス・デシカビリス（Sphingomonas  desiccabilis）、スフィンゴモナス・ドクドネンシス（Sphingomonas  dokdonensis）、スフィンゴモナス・エキノイデス（Sphingomonas  echinoides）、スフィンゴモナス・エンドフィティカ（Sphingomonas  endophytica）、スフィンゴモナス・ファエニ（Sphingomonas  faeni）、スフィンゴモナス・フェニカ（Sphingomonas  fennica）、スフィンゴモナス・ギンセノシディミュータンス（Sphingomonas  ginsenosidimutans）、スフィンゴモナス・ハロアロマティカマンス（Sphingomonas  haloaromaticamans）、スフィンゴモナス・ヘルビシドボランス（Sphingomonas  herbicidovorans）、スフィンゴモナス・ヒューミ（Sphingomonas  humi）、スフィンゴモナス・インサラエ（Sphingomonas  insulae）、スフィンゴモナス・ジャポニカ（Sphingomonas  japonica）、スフィンゴモナス・ジャスピシ（Sphingomonas  jaspsi）、スフィンゴモナス・ジェジュエンシス（Sphingomonas  jejuensis）、スフィンゴモナス・コレエンシス（Sphingomonas  koreensis）、スフィンゴモナス・マクロゴルタビダス（Sphingomonas  macrogoltabidus）、スフィンゴモナス・マリー（Sphingomonas  mali）、スフィンゴモナス・メロニス（Sphingomonas  melonis）、スフィンゴモナス・モルスコーラム（Sphingomonas  molluscorum）、スフィンゴモナス・ミューコシシマ（Sphingomonas  mucosissima）、スフィンゴモナス・ナタトリア（Sphingomonas  natatoria）、スフィンゴモナス・オリゴフェノリカ（Sphingomonas  oligophenolica）、スフィンゴモナス・パニー（Sphingomonas  panni）、スフィンゴモナス・パラポウシモビリス（Sphingomonas  parapaucimobilis）、スフィンゴモナス・パウシモビリス（Sphingomonas  paucimobilis）、スフィンゴモナス・フィロスフェレ（Sphingomonas  phyllosphaerae）スフィンゴモナス・ピテュイトサ（Sphingomonas  pituitosa）、スフィンゴモナス・ポリアロマティシボランス（Sphingomonas  polyaromaticivorans）、スフィンゴモナス・プルーニ（Sphingomonas  pruni）、スフィンゴモナス・ローサ（Sphingomonas  rosa）、スフィンゴモナス・ローゼイフラバ（Sphingomonas  roseiflava）、スフィンゴモナス・ルブラ（Sphingomonas  rubra）、スフィンゴモナス・サングイニス（Sphingomonas  sanguinis）、スフィンゴモナス・ソリー（Sphingomonas  soli）、スフィンゴモナス・スベリファシエンス（Sphingomonas  suberifaciens）、スフィンゴモナス・サブテラニア（Sphingomonas  subterranea）、スフィンゴモナス・テラエ（Sphingomonas  terrae）、スフィンゴモナス・トゥルーペリ（Sphingomonas  trueperi）、スフィンゴモナス・ウルシンコラ（Sphingomonas  ursincola）、スフィンゴモナス・ウイッチ（Sphingomonas  wittichii）、スフィンゴモナス・ヤブーチャエ（Sphingomonas  yabuuchiae）、スフィンゴモナス・ヤノイクエ（Sphingomonas  yanoikuyae）、スフィンゴモナス・ユナネンシス（sphingomonas  yunnanensis）等が挙げられる。
【００５６】〔オクロバクテリウム属〕  オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属に分類される微生物としては、例えば、オクロバクテリウム・アンスロピ（Ochrobactrum  anthropi）、オクロバクテリウム・サイティシ（Ochrobactrum  cytisi）、オクロバクテリウム・デジョネンス（Ochrobactrum  daejeonense）、オクロバクテリウム・ガリニファエシス（Ochrobactrum  gallinifaecis）、オクロバクテリウム・グリグノネンス（Ochrobactrum  grignonense）、オクロバクテリウム・ハエモフィラム（Ochrobactrum  haemophilum）、オクロバクテリウム・インターメディウム（Ochrobactrum  intermedium）、オクロバクテリウム・ルピニ（Ochrobactrum  lupini）、オクロバクテリウム・オリゼ（Ochrobactrum  oryzae）、オクロバクテリウム・シューディンターミディウム（Ochrobactrum  pseudintermedium）、オクロバクテリウム・シュードグリグノネンス（Ochrobactrum  pseudogrignonense）、オクロバクテリウム・チオフェニボランス（Ochrobactrum  thiophenivorans）、オクロバクテリウム・トリティシ（Ochrobactrum  tritici）等が挙げられる。
【００５７】〔ペドバクター属〕  ペドバクター（Pedobacter）属に分類される微生物としては、例えば、ペドバクター・アフリカヌス（Pedobacter  africanus）、ペドバクター・アグリ（Pedobacter  agri）、ペドバクター・アルビアス（Pedobacter  alluvius）、ペドバクター・アクアティリス（Pedobacter  aquatilis）ペドバクター・ボリアリス（Pedobacter  borealis）、ペドバクター・カエニ（Pedobacter  caeni）、ペドバクター・コンポスティ（Pedobacter  composti）、ペドバクター・クリオコニティス（Pedobacter  cryoconitis）、ペドバクター・デチャンギンシス（Pedobacter  daechungensis）、ペドバクター・ドゥラクエ（Pedobacter  duraquae）、ペドバクター・ギンセンギソリ（Pedobacter  ginsengisoli）、ペドバクター・ハートニウス（Pedobacter  hartonius）、ペドバクター・ヘパリヌス（Pedobacter  heparinus）、ペドバクター・ヒマライエンシス（Pedobacter  himalayensis）、ペドバクター・ジョングニュンゲンシス（Pedobacter  jeongneungensis）、ペドバクター・コリーンシス（Pedobacter  koreensis）、ペドバクター・レンタス（Pedobacter  lentus）、ペドバクター・メタボリパウパー（Pedobacter  metabolipauper）、ペドバクター・ニャケンシス（Pedobacter  nyackensis）、ペドバクター・パナシテラエ（Pedobacter  panaciterrae）、ペドバクター・ピスシウム（Pedobacter  piscium）、ペドバクター・ロゼウス（Pedobacter  roseus）、ペドバクター・サルタンス（Pedobacter  saltans）、ペドバクター・スティーニ（Pedobacter  steynii）、ペドバクター・サウォネンシス（Pedobacter  suwonensis）、ペドバクター・テリコラ（Pedobacter  terricola）等が挙げられる。
【００５８】〔パエニバシラス属〕  パエニバシラス（Paenibacillus）属に分類される微生物としては、例えば、パエニバシラス・アエスツアリ（Paenibacillus  aestuarii）、パエニバシラス・アルギノリティカス（Paenibacillus  alginolyticus）、パエニバシラス・アルゴリフォンティコラ（Paenibacillus  algorifonticola）、パエニバシラス・アルベイ（Paenibacillus  alvei）、パエニバシラス・アマイロリティカス（Paenibacillus  amylolyticus）、パエニバシラス・アピアリウス（Paenibacillus  apiarius）、パエニバシラス・アサメンシス（Paenibacillus  assamensis）、パエニバシラス・アゾリドセンス（Paenibacillus  azoreducens）、パエニバシラス・アゾトフィキサンス（Paenibacillus  azotofixans）パエニバシラス・バーシノネンシス（Paenibacillus  barcinonensis）、パエニバシラスバレンゴルトジ（Paenibacillus  barengoltzii）、パエニバシラス・キャンピナセンシス（Paenibacillus  campinasensis）、パエニバシラス・セルトシりティカス（Paenibacillus  cellulosilyticus）、パエニバシラス・チベンシス（Paenibacillus  chibensis）、パエニバシラス・チティノリティカス（Paenibacillus  chitinolyticus）、パエニバシラス・チョンドロイティナス（Paenibacillus  chondroitinus）、パエニバシラス・カードラノリティカス（Paenibacillus  curdlanolyticus）、パエニバシラス・ダエジョネンシス（Paenibacillus  daejeonensis）、パエニバシラス・ダラス（Paenibacillus  durus）、パエニバシラス・エヒメンシス（Paenibacillus  ehimensis）、パエニバシラス・エルギ（Paenibacillus  elgii）、パエニバシラス・フィリシス（Paenibacillus  filicis）パエニバシラス・フリゴリレシステンス（Paenibacillus  frigoriresistens）、パエニバシラス・ガンスエンシス（Paenibacillus  gansuensis）、パエニバシラス・ギンセンギフミ（Paenibacillus  ginsengihumi）、パエニバシラス・グルカノリティクス（Paenibacillus  glucanolyticus）、パエニバシラス・グリカノリティクス（Paenibacillus  glycanilyticus）、パエニバシラス・グラミニス（Paenibacillus  graminis）、パエニバシラス・ホドガエンシス（Paenibacillus  hodogayensis）、パエニバシラス・ホーデイ（Paenibacillus  hordei）、パエニバシラス・ヒューミカス（Paenibacillus  humicus）、パエニバシラス・イリノイセンシス（Paenibacillus  illinoisensis）、パエニバシラス・ジャミラエ（Paenibacillus  jamilae）、パエニバシラス・コベンシス（Paenibacillus  kobensis）、パエニバシラス・コレオボランス（Paenibacillus  koleovorans）、パエニバシラス・コンシデンシス（Paenibacillus  konsidensis）、パエニバシラス・クリブベンシス（Paenibacillus  kribbensis）、パエニバシラス・ラーバエ・サブスピーシーズ・ラーバエ（Paenibacillus  larvae  subsp.  larvae）、パエニバシラス・ラーバエ・サブスピーシーズ・パルビファシエンス（Paenibacillus  larvae  subsp.  pulvifaciens）、パエニバシラス・ロータス（Paenibacillus  lautus）、パエニバシラス・マセランス（Paenibacillus  macerans）、パエニバシラス・マクアリエンシス・サブスピーシーズ・デフェンサー（Paenibacillus  macquariensis  subsp.  defensor）、パエニバシラス・メンデリ（Paenibacillus  mendelii）、パエニバシラス・モトブエンシス（Paenibacillus  motobuensis）、パエニバシラス・ナファタレノボランス（Paenibacillus  naphthalenovorans）、パエニバシラス・ネマトフィラス（Paenibacillus  nematophilus）、パエニバシラス・オーシャニセディミニス（Paenibacillus  oceanisediminis）、パエニバシラス���オドリファー（Paenibacillus  odorifer）、パエニバシラス・パブリ（Paenibacillus  pabuli）、パエニバシラス・パサデネンシス（Paenibacillus  pasadenensis）、パエニバシラス・ペオリエ（Paenibacillus  peoriae）、パエニバシラス・ホエニシス（Paenibacillus  phoenicis）、パエニバシラス・ピニ（Paenibacillus  pini）、パエニバシラス・ピニフミ（Paenibacillus  pinihumi）、パエニバシラス・ポリミキサ（Paenibacillus  polymyxa）、パエニバシラス・プエリ（Paenibacillus  pueri）、パエニバシラス・リグイ（Paenibacillus  rigui）、パエニバシラス・ステリファー（Paenibacillus  stellifer）、パエニバシラス・タイワネンシス（Paenibacillus  taiwanensis）、パエニバシラス・テラエ（Paenibacillus  terrae）、パエニバシラス・テリゲナ（Paenibacillus  terrigena）、パエニバシラス・サーモフィラス（Paenibacillus  thermophilus）、パエニバシラス・チアミノリティカス（Paenibacillus  thiaminolyticus）、パエニバシラス・ツンドラエ（Paenibacillus  tundrae）、パエニバシラス・バリダス（Paenibacillus  validus）、パエニバシラス・バルネリス（Paenibacillusvulneris）、パエニバシラス・ウーポネンシス（Paenibacillus  wooponensis）、パエニバシラス・キシラニックカスティカス（Paenibacillus  xylaniclasticus）等が挙げられる。
【００５９】〔アクロモバクター属〕  アクロモバクター（Achromobacter）属に分類される微生物としては、例えば、アクロモバクター・アーセニトキシダンス（Achromobacter  arsenitoxydans）、アクロモバクター・チョリノファガム（Achromobacter  cholinophagum）、アクロモバクター・サイクロクラステス（Achromobacter  cycloclastes）、アクロモバクター・デニトリフィカンス（Achromobacter  denitrificans）、アクロモバクター・フィシェリ（Achromobacter  fischeri）、アクロモバクター・ハートレビ（Achromobacter  hartlebii）、アクロモバクター・イモビリス（Achromobacter  immobilis）、アクロモバクター・インソリタス（Achromobacter  insolitus）、アクロモバクター・ラクトリティカス（Achromobacter  lactolyticus）、アクロモバクター・ライティカス（Achromobacter  lyticus）、アクロモバクター・メタノロフィラ（Achromobacter  methanolophila）、アクロモバクター・ペスティファー（Achromobacter  pestifer）、アクロモバクター・ピーチャウディ（Achromobacter  piechaudii）、アクロモバクター・ルーハランディ（Achromobacter  ruhlandii）、アクロモバクター・スパニオス（Achromobacter  spanios）、アクロモバクター・ビスコサス（Achromobacter  viscosus）、アクロモバクター・キセロシス（Achromobacter  xerosis）、アクロモバクター・キシロソキシダンス（Achromobacter  xylosoxidans）、アクロモバクター・キシロソキシダンス・サブスピーシーズ・デニトリフィカンス（Achromobacter  xylosoxidans  subsp.  denitrificans）、アクロモバクター・キシロソキシダンス・サブスピーシーズ・キシロソキシダンス（Achromobacter  xylosoxidans  subsp.  xylosoxidans）等が挙げられる。
【００６０】〔アシネトバクター属〕  アシネトバクター（Acinetobacter）属に分類される微生物としては、例えば、アシネトバクター・バウマニ（Acinetobacter  baumannii）、アシネトバクター・バイリイ（Acinetobacter  aylyi）、アシネトバクター・ベイジェリンキイ（Acinetobacter  beijerinckii）、アシネトバクター・ブレジニエ（Acinetobacter  bereziniae）、アシネトバクター・ボウベテイ（Acinetobacter  boubetii）、アシネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter  calcoaceticus）、アシネトバクター・ガーネリ（Acinetobacter  gerneri）、アシネトバクター・グリモンティ（Acinetobacter  grimontii）、アシネトバクター・ギロウイエ（Acinetobacter  guilouiae）、アシネトバクター・ジレンバーギイ（Acinetobacter  gyllenbergii）、アシネトバクター・ハエモリティカス（Acinetobacter  haemolyticus）、アシネトバクター・ジョンソニイ（Acinetobacter  johnsonii）、アシネトバクター・ジュニ（Acinetobacter  junii）、アシネトバクター・キョンギエンシス（Acinetobacter  kyonggiensis）、アシネトバクター・ロウフォイ（Acinetobacter  lwoffii）、アシネトバクター・オレビボランス（Acinetobacter  oleivorans）、アシネトバクター・パルブス（Acinetobacter  parvus）、アシネトバクター・サイクロトレランス（Acinetobacter  psychrotolerans）アシネトバクター・ラジオレシステンス（Acinetobacter  radioresistens）、アシネトバクター・シンドレリ（Acinetobacter  schindleri）、アシネトバクター・ソリ（Acinetobacter  soli）、アシネトバクター・タンドイ（Acinetobacter  tandoii）、アシネトバクター・タータロゲネス（Acinetobacter  tartarogenes）、アシネトバクター・テジェランバーギエ（Acinetobacter  tjernbergiae）、アシネトバクター・トウネリ（Acinetobacter  towneri）、アシネトバクター・アーシンギイ（Acinetobacterursingii）、アシネトバクター・ベネチアナス（Acinetobacter  venetianus）等が挙げられる。
【００６１】〔シュワネラ属〕  シュワネラ（Shewanella）属に分類される微生物としては、例えば、シュワネラ・ピエゾトランス（Shewanella  piezotolerans）、シュワネラ・アバイシ（Shewanella  abyssi）、シュワネラ・アフィニス（Shewanella  affinis）、シュワネラ・アルガエ（Shewanella  algae）、シュワネラ・アルギディピシコラ（Shewanella  algidipiscicola）、シュワネラ・アマゾネンシス（Shewanella  amazonensis）、シュワネラ・アクイマリーナ（Shewanella  aquimarina）、シュワネラ・アークティカ（Shewanella  arctica）、シュワネラ・アトランティカ（Shewanella  atlantica）、シュワネラ・バルティカ（Shewanella  baltica）、シュワネラ・バサルティス（Shewanella  basaltis）、シュワネラ・ベンシカ（Shewanella  benthica）、シュワネラ・キャンダデンシス（Shewanella  candadensis）、シュワネラ・チリケンシス（Shewanella  chilikensis）、シュワネラ・コルウェリアナ（Shewanella  colwelliana）、シュワネラ・コラリイ（Shewanella  corallii）、シュワネラ・デコラレイショニス（Shewanella  decolorationis）、シュワネラ・デニトリフィカンス（Shewanella  denitrificans）、シュワネラ・ドンガエンシス（Shewanella  donghaensis）、シュワネラ・フィデリス（Shewanella  fidelis）、シュワネラ・フォディナエ（Shewanella  fodinae）、シュワネラ・フリギディマリーナ（Shewanella  frigidimarina）、シュワネラ・ガエトブリ（Shewanella  gaetbuli）、シュワネラ・ゲリディマリナ（Shewanella  gelidimarina）、シュワネラ・グラシアリピシコラ（Shewanella  glacialipiscicola）、シュワネラ・ゴフェリ（Shewanella  gopherii）、シュワネラ・ハフヒエンシス（Shewanella  hafniensis）、シュワネラ・ハリファクセンシス（Shewanella  halifaxensis）、シュワネラ・ハリオティス（Shewanella  haliotis）、シュワネラ・ハネダイ（Shewanella  hanedai）、シュワネラ・ジャポニカ（Shewanella  japonica）、シュワネラ・カイレイティカ（Shewanella  kaireitica）、シュワネラ・リビングストネンシス（Shewanella  ivingstonensis）、シュワネラ・ロイヒカ（Shewanella  loihica）、シュワネラ・マリーナ（Shewanella  marina）、シュワネラ・マリニンテスティナ（Shewanella  marinintestina）、シュワネラ・マリスフラビ（Shewanella  marisflavi）、シュワネラ・モーヒュアエ（Shewanella  morhuae）、シュワネラ・オレヤナ（Shewanella  olleyana）、シュワネラ・オネイデンシス（Shewanella  oneidensis）、シュワネラ・パシフィカ（Shewanella  pacifica）、シュワネラ・ピリナ（Shewanella  pealeana）、シュワネラ・プニュマトファリ（Shewanella  pneumatophori）、シュワネラ・プロファンダ（Shewanella  profunda）、シュワネラ・プトレファシエンス（Shewanella  putrefaciens）、シュワネラ・サイラエ（Shewanella  sairae）、シュワネラ・スクレジリアナ（Shewanella  schlegeliana）、シュワネラ・セディミニス（Shewanella  sediminis）、シュワネラ・スルゲンシス（Shewanella  surugensis）、シュワネラ・ヴェシキュロサ（Shewanella  vesiculosa）、シュワネラ・バイオレイシア（Shewanella  violacea）、シュワネラ・ワクスマニ（Shewanella  waksmanii）、シュワネラ・ウーディイ（Shewanella  woodyi）、シュワネラ・キサメネンシス（Shewanella  xiamenensis）等が挙げられる。
【００６２】〔リストネラ属〕  リストネラ（Listonella）属に分類される微生物としては、例えば、リストネラ・アンギララ（Listonella  anguillara）、リストネラ・アンギララム（Listonella  anguillarum）、リストネラ・ペラギア（Listonella  pelagia）等が挙げられる。
【００６３】〔アグロバクテリウム属〕  アグロバクテリウム（Agrobacterium）属に分類される微生物としては、例えば、アグロバクテリウム・アギル（Agrobacterium  agile）、アグロバクテリウム・オーレウム（Agrobacterium aureum）、アグロバクテリウム・アゾトフィラム（Agrobacterium azotophilum）、アグロバクテリウム・ジプソフィリー（Agrobacterium gypsophilae）、アグロバクテリウム・ルテウム（Agrobacterium luteum）、アグロバクテリウム・シュードツガエ（Agrobacterium pseudotsugae）、アグロバクテリウム・リゾーゲネス（Agrobacterium rhizogenes）、アグロバクテリウム・フェルギネウム（Agrobacterium ferrugineum）、アグロバクテリウム・サンギネウム（Agrobacterium sanguineum）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tumefaciens）、アグロバクテリウム・ビスコサム（Agrobacterium viscosum）、アグロバクテリウム・ビティス（Agrobacterium vitis）等が挙げられる。
【００６４】〔メソリゾビウム属〕  メソリゾビウム（Mesorhizobium）属に分類される微生物としては、例えば、メソリゾビウム・アルビジエ（Mesorhizobium  albiziae）、メソリゾビウム・アモルファエ（Mesorhizobium amorphae）、メソリゾビウム・オーストラリカム（Mesorhizobium australicum）、メソリゾビウム・カラゲイネ（Mesorhizobium caraganae）、メソリゾビウム・チャコエンス（Mesorhizobium chacoense）、メソリゾビウム・シセリ（Mesorhizobium ciceri）、メソリゾビウム・ゴビエンス（Mesorhizobium gobiense）、メソリゾビウム・ロティ（Mesorhizobium loti）、メソリゾビウム・メディテラニュウム（Mesorhizobium mediterraneum）、メソリゾビウム・メタリデュランス（Mesorhizobium metallidurans）、メソリゾビウム・オポテュニスタム（Mesorhizobium opportunistum）、メソリゾビウム・プルリファリウム（Mesorhizobium plurifarium）、メソリゾビウム・ファクイイ（Mesorhizobium huakuii）、メソリゾビウム・セプテントリオナーレ（Mesorhizobium septentrionale）、メソリゾビウム・シャングリレンス（Mesorhizobium shangrilense）、メソリゾビウム・タリメンス（Mesorhizobium tarimense）、メソリゾビウム・テンパラータム（Mesorhizobium temperatum）、メソリゾビウム・チオガンゲティカム（Mesorhizobium thiogangeticum）、メソリゾビウム・ティエンシャネンス（Mesorhizobium tianshanense）等が挙げられる。
【００６５】〔リゾビウム属〕  リゾビウム（Rhizobium）属に分類される微生物としては、例えば、リゾビウム・アラミ（Rhizobium  alamii）、リゾビウム・アルカリソリ（Rhizobium  alkalisoli）、リゾビウム・セルロシライティカム（Rhizobium  cellulosilyticum）、リゾビウム・ダエジェオネンス（Rhizobium  daejeonense）、リゾビウム・エンドフィティカム（Rhizobium  endophyticum）、リゾビウム・エトリ（Rhizobium  etli）、リゾビウム・ファバエ（Rhizobium  fabae）、リゾビウム・ガリカム（Rhizobium  gallicum）、リゾビウム・ギアルディニ（Rhizobium  giardinii）、リゾビウム・グラハミ（Rhizobium  grahamii）、リゾビウム・ハイナネンセ（Rhizobium  hainanense）、リゾビウム・フアウトレンス（Rhizobium  huautlense）、リゾビウム・ガレガーエ（Rhizobium  galegae）、リゾビウム・インディカ（Rhizobium  indica）、リゾビウム・インディカス（Rhizobium  indicus）、リゾビウム・インディゴフフェラエ（Rhizobium  indigoferae）、リゾビウム・ラリームーレイ（Rhizobium  larrymoorei）、リゾビウム・レグミノサルム（Rhizobium  leguminosarum）、リゾビウム・ロイカエナエ（Rhizobium  leucaenae）、リゾビウム・ロエセンス（Rhizobium  loessense）、リゾビウム・ルピニ（Rhizobium  lupini）、リゾビウム・ラシタナム（Rhizobium  lusitanum）、リゾビウム・メソシニカム（Rhizobium  mesosinicum）、リゾビウム・ミルオネンス（Rhizobium  miluonense）、リゾビウム・モンゴレンス（Rhizobium  mongolense）、リゾビウム・マルチホスピティウム（Rhizobium  multihospitium）、リゾビウム・ナガージュナ・ナガレンシス（Rhizobium  nagarjuna  nagarensis）、リゾビウム・オリゼ（Rhizobium  oryzae）、リゾビウム・ファゼオリ（Rhizobium  phaseoli）、リゾビウム・ピシ（Rhizobium  pisi）、リゾビウム・ピュセンス（Rhizobium  pusense）、リゾビウム・ラジオバクター（Rhizobium  radiobacter）、リゾビウム・リゾゲンス（Rhizobium  rhizogenes）、リゾビウム・ルビ（Rhizobium  rubi）、リゾビウム・セレニティレデゥセンス（Rhizobium  selenitireducens）、リゾビウム・ソリ（Rhizobium  soli）、リゾビウム・スラエ（Rhizobium  sullae）、リゾビウム・ティベティカム（Rhizobium  tibeticum）、リゾビウム・トリフォリ（Rhizobium  trifolii）、リゾビウム・トロピシ（Rhizobium  tropici）、リゾビウム・ツクストレンス（Rhizobium  tuxtlense）、リゾビウム・アンディコラ（Rhizobium  undicola）、リゾビウム・ヴァリダム（Rhizobium  validum）、リゾビウム・ヴィティス（Rhizobium  vitis）、等が挙げられる。
【００６６】〔パラコッカス属〕  パラコッカス（Paracoccus）属に分類される微生物としては、例えば、パラコッカス・アエストゥアリ（Paracoccus  aestuarii）、パラコッカス・アルカリフィルス（Paracoccus alcaliphilus）、パラコッカス・アルケニファー（Paracoccus alkenifer）、パラコッカス・アミノフィラス（Paracoccus aminophilus）、パラコッカス・アミノボランス（Paracoccus aminovorans）、パラコッカス・ベイビュエンシス（Paracoccus beibuensis）、パラコッカス・ベンガレンシス（Paracoccus bengalensis）、パラコッカス・チネンシス（Paracoccus chinensis）、パラコッカス・デニトリフィカンス（Paracoccus denitrificans）、パラコッカス・ハロフィラス（Paracoccus halophilus）、パラコッカス・ホミーンシス（Paracoccus homiensis）、パラコッカス・コクリ（Paracoccus kocurii）、パラコッカス・カエニ（Paracoccus caeni）、パラコッカス・コンドラティーバエ（Paracoccus kondratievae）、パラコッカス・コーリエンシス（Paracoccus koreensis）、パラコッカス・マリナス（Paracoccus marinus）、パラコッカス・メチルテンス（Paracoccus methylutens）、パラコッカス・オーシャネンス（Paracoccus oceanense）、パラコッカス・パントトロファス（Paracoccus pantotrophus）、パラコッカス・セリニフィルス（Paracoccus seriniphilus）、パラコッカス・ソルベンティボランス（Paracoccus solventivorans）、パラコッカス・サルフロキシダンス（Paracoccus sulfuroxidans）、パラコッカス・チオシアナタス（Paracoccus thiocyanatus）、パラコッカス・ベルスタス（Paracoccus versutus）、パラコッカス・イーイ（Paracoccus yeei）、パラコッカス・ゼアキサンチニファシエンス（Paracoccus zeaxanthinifaciens）等が挙げられる。
【００６７】〔キサントバクター属〕  キサントバクター（Xanthobacter）属に分類される微生物としては、例えば、キサントバクター・アギリス（Xanthobacter  agilis）、キサントバクター・アミノキシダンス（Xanthobacter aminoxidans）、キサントバクター・オートロフィカス（Xanthobacter autotrophicus）、キサントバクター・フラバス（Xanthobacter flavus）、キサントバクター・ターゲッティディス（Xanthobacter tagetidis）、キサントバクター・ビスコーサス（Xanthobacter viscosus）等が挙げられる。
【００６８】〔ストレプトマイセス属〕  ストレプトマイセス（Streptomyces）属に分類される微生物としては、例えば、ストレプトマイセス・アビコエンシス（Streptomyces  abikoensis）、ストレプトマイセス・アブラビエンシス（Streptomyces  aburaviensis）、ストレプトマイセス・アブラビエンシス・サブスピーシーズ・タフトフォルミス（Streptomyces  aburaviensis  subsp.  tuftformis）、ストレプトマイセス・アクロモゲネス（Streptomyces  achromogenes）、ストレプトマイセス・アクロモゲネス・サブスピーシーズ・アクロモゲネス（Streptomyces  achromogenes  subsp.  achromogenes）、ストレプトマイセス・アクロモゲネス・サブスピーシーズ・ラブラディリス（Streptomyces  achromogenes  subsp.  rubradiris）、ストレプトマイセス・アクロモゲネス・サブスピーシーズ・ステレプトゾティカス（Streptomyces  achromogenes  subsp.  streptozoticus）、ストレプトマイセス・アクロモゲネス・サブスピーシーズ・トメイマイセティカス（Streptomyces  achromogenes  subsp.  tomaymyceticus）、ストレプトマイセス・アシディスカビエス（Streptomyces  acidiscabies）、ストレプトマイセス・アシドレシスタンス（Streptomyces  acidoresistans）、ストレプトマイセス・アクリミシニ（Streptomyces  acrimycini）、ストレプトマイセス・アクトゥオサス（Streptomyces  actuosus）、ストレプトマイセス・アクレオラタス（Streptomyces  aculeolatus）、ストレプトマイセス・アデフォスフォリティカス（Streptomyces  adephospholyticus）、ストレプトマイセス・アフガニエンシス（Streptomyces  afghaniensis）、ストレプトマイセス・アフリカヌス（Streptomyces  africanus）、ストレプトマイセス・アグロメラタス（Streptomyces  agglomeratus）、ストレプトマイセス・アヒグロスコピカス（Streptomyces  ahygroscopicus）、ストレプトマイセス・アキヨシエンシス（Streptomyces  akiyoshiensis）、ストレプトマイセス・アラノシニカス（Streptomyces  alanosinicus）、ストレプトマイセス・アルバドゥンカス（Streptomyces  albaduncus）、ストレプトマイセス・アルビアキシアリス（Streptomyces  albiaxialis）、ストレプトマイセス・アルビドクロモゲネス（Streptomyces  albidochromogenes）、ストレプトマイセス・アルビドフラブス（Streptomyces  albidoflavus）、ストレプトマイセス・アルビダス（Streptomyces  albidus）、ストレプトマイセス・アルビレティクリ（Streptomyces  albireticuli）、ストレプトマイセス・アルボクロモゲネス（Streptomyces  albochromogenes）、ストレプトマイセス・アルボシネレセンス（Streptomyces  albocinerescens）、ストレプトマイセス・アルボファシエンス（Streptomyces  albofaciens）、ストレプトマイセス・アルボフラブス（Streptomyces  alboflavus）、ストレプトマイセス・アルボグリセオルス（Streptomyces  albogriseolus）、ストレプトマイセス・アルボヘルバタス（Streptomyces  albohelvatus）、ストレプトマイセス・アルボロングス（Streptomyces  albolongus）、ストレプトマイセス・アルボニガー（Streptomyces  alboniger）、ストレプトマイセス・アルボピヌス（Streptomyces  albospinus）、ストレプトマイセス・アルボスポレウス（Streptomyces  albosporeus）、ストレプトマイセス・アルボスポレウス・サブスピーシーズ・ラビロマイセティカス（Streptomyces  albosporeus  subsp.  labilomyceticus）、ストレプトマイセス・アルボビナセウス（Streptomyces  albovinaceus）、ストレプトマイセス・アルボバリディス（Streptomyces  alboviridis）、ストレプトマイセス・アルブルス（Streptomyces  albulus）、ストレプトマイセス・アルブス（Streptomyces  albus）、ストレプトマイセス・アルブス・サブスピーシーズ・アルブス（Streptomyces  albus  subsp.  albus）、ストレプトマイセス・アルブス・サブスピーシーズ・コレイマイセティカス（Streptomyces  albus  subsp.  coleimyceticus）、ストレプトマイセス・アルブス・サブスピーシーズ・パソシディカス（Streptomyces  albus  subsp.  pathocidicus）、ストレプトマイセス・アルカロフィラス（Streptomyces  alcalophilus）、ストレプトマイセス・アルムクイスティイ（Streptomyces  almquistii）、ストレプトマイセス・アルニ（Streptomyces  alni）、ストレプトマイセス・アルチオティカス（Streptomyces  althioticus）、ストレプトマイセス・アマガサケンシス（Streptomyces  amagasakensis）、ストレプトマイセス・アマクサエンシス（Streptomyces  amakusaensis）、ストレプトマイセス・アムボファシエンス（Streptomyces  ambofaciens）、ストレプトマイセス・アミノフィラス（Streptomyces  aminophilus）、ストレプトマイセス・アナンディイ（Streptomyces  anandii）、ストレプトマイセス・アンガストマイセティカス（Streptomyces  angustmyceticus）、ストレプトマイセス・アンソクロモゲネス・サブスピーシーズ・アンソクロモゲネス（Streptomyces  ansochromogenes  subsp.  ansochromogenes）、ストレプトマイセス・アンソシアニカス（Streptomyces  anthocyanicus）、ストレプトマイセス・アンチバイオティカス（Streptomyces  antibioticus）、ストレプトマイセス・アンチフィブリノリティカス（Streptomyces  antifibrinolyticus）、ストレプトマイセス・アンチマイコティカス（Streptomyces  antimycoticus）、ストレプトマイセス・アヌラトス（Streptomyces  anulatus）、ストレプトマイセス・アオミエンシス（Streptomyces  aomiensis）、ストレプトマイセス・アラビカス（Streptomyces  arabicus）、ストレプトマイセス・アルダス（Streptomyces  ardus）、ストレプトマイセス・アレナエ（Streptomyces  arenae）、ストレプトマイセス・アルゲンテオラス（Streptomyces  argenteolus）、ストレプトマイセス・アルゲンテオラス・サブスピーシーズ・トヨナケンシス（Streptomyces  argenteolus  subsp.  toyonakensis）、ストレプトマイセス・アルギラセウス（Streptomyces  argillaceus）、ストレプトマイセス・アルメニアカス（Streptomyces  armeniacus）、ストレプトマイセス・アルメントサス（Streptomyces  armentosus）、ストレプトマイセス・アルシティエンシス（Streptomyces  arsitiensis）、ストレプトマイセス・アスコミシニカス（Streptomyces  ascomycinicus）、ストレプトマイセス・アジアティカス（Streptomyces  asiaticus）、ストレプトマイセス・アステロスポルス（Streptomyces  asterosporus）、ストレプトマイセス・アトラタス（Streptomyces  atratus）、ストレプトマイセス・アトロアウランティアカス（Streptomyces  atroaurantiacus）、ストレプトマイセス・アトロシアネウス（Streptomyces  atrocyaneus）、ストレプトマイセス・アトロファシエンス（Streptomyces  atrofaciens）、ストレプトマイセス・アトロファッカス（Streptomyces  atrolaccus）、ストレプトマイセス・アトロオリバセウス（Streptomyces  atroolivaceus）、ストレプトマイセス・アトロビオラセウス（Streptomyces  atroviolaceus）、ストレプトマイセス・アトロビレンス（Streptomyces  atrovirens）、ストレプトマイセス・アウランティアコグリセウス（Streptomyces  aurantiacogriseus）、ストレプトマイセス・アウランティアカス（Streptomyces  aurantiacus）、ストレプトマイセス・アウランティオグリセウス（Streptomyces  aurantiogriseus）、ストレプトマイセス・アウラタス（Streptomyces  auratus）、ストレプトマイセス・アウレオサーキュレイタス（Streptomyces  aureocirculatus）、ストレプトマイセス・アウレオファシエンス（Streptomyces  aureofaciens）、ストレプトマイセス・アウレオモノピディアレス（Streptomyces  aureomonopodiales）、ストレプトマイセス・アウレオレクタス（Streptomyces  aureorectus）、ストレプトマイセス・アウレオバーティシラタス（Streptomyces  aureoverticillatus）、ストレプトマイセス・アウレウス（Streptomyces  aureus）、ストレプトマイセス・アウリンギネウス（Streptomyces  aurigineus）、ストレプトマイセス・アベラネウス（Streptomyces  avellaneus）、ストレプトマイセス・アベルメクティニウス（Streptomyces  avermectinius）、ストレプトマイセス・アルベミティリス（Streptomyces  avermitilis）、ストレプトマイセス・アビセニエ（Streptomyces  avicenniae）、ストレプトマイセス・アビディニイ（Streptomyces  avidinii）、ストレプトマイセス・アキシネラエ（Streptomyces  axinellae）、ストレプトマイセス・アズレウス（Streptomyces  azureus）、ストレプトマイセス・バーネンシス（Streptomyces  baarnensis）、ストレプトマイセス・バシラリス（Streptomyces  bacillaris）、ストレプトマイセス・バディウス（Streptomyces  badius）、ストレプトマイセス・バリーンシス（Streptomyces  baliensis）、ストレプトマイセス・バムバーギーンシス（Streptomyces  bambergiensis）、ストレプトマイセス・バングラデシェンシス（Streptomyces  bangladeshensis）、ストレプトマイセス・バングラデシエンシス（Streptomyces  bangladeshiensis）、ストレプトマイセス・ベイジアンゲンシス（Streptomyces  beijiangensis）、ストレプトマイセス・ベルス（Streptomyces  bellus）、ストレプトマイセス・ベルス・サブスピーシーズ・サーロレロサス（Streptomyces  bellus  subsp.  cirolerosus）、ストレプトマイセス・バーネンシス（Streptomyces  bernensis）、ストレプトマイセス・ビカラー（Streptomyces  bicolor）、ストレプトマイセス・ビファーカス（Streptomyces  bifurcus）、ストレプトマイセス・バイキニエンシス（Streptomyces  bikiniensis）、ストレプトマイセス・バイキニエンシス・サブスピーシーズ・ゾーボネンシス（Streptomyces  bikiniensis  subsp.  zorbonensis）、ストレプトマイセス・ブラストマイセティカス（Streptomyces  blastmyceticus）、ストレプトマイセス・ブルンシス（Streptomyces  bluensis）、ストレプトマイセス・ボビリ（Streptomyces  bobili）、ストレプトマイセス・ボトロペンシス（Streptomyces  bottropensis）、ストレプトマイセス・ブラシリエンシス（Streptomyces  brasiliensis）、ストレプトマイセス・ブレビスポロラス（Streptomyces  brevisprorus）、ストレプトマイセス・ブラネオグリセウス（Streptomyces  brunneogriseus）、ストレプトマイセス・バンゴエンシス（Streptomyces  bungoensis）、ストレプトマイセス・カカオイ（Streptomyces  cacaoi）、ストレプトマイセス・カカオイ・サブスピーシーズ・アソエンシス（Streptomyces  cacaoi  subsp.  asoensis）、ストレプトマイセス・カカオイ・サブスピーシーズ・カカオイ（Streptomyces  cacaoi  subsp.  cacaoi）、ストレプトマイセス・カエレスティス（Streptomyces  caelestis）、ストレプトマイセス・カエリカス（Streptomyces  caelicus）、ストレプトマイセス・カエルレウス（Streptomyces  caeruleus）、スト��プトマイセス・カエシウス（Streptomyces  caesius）、ストレプトマイセス・カリフォルニカス（Streptomyces  californicus）、ストレプトマイセス・カルブス（Streptomyces  calvus）、ストレプトマイセス・カナディエンシス（Streptomyces  canadiensis）、ストレプトマイセス・カナリウス（Streptomyces  canarius）、ストレプトマイセス・カンディダス（Streptomyces  candidus）、ストレプトマイセス・カネセンス（Streptomyces  canescens）、ストレプトマイセス・カングリンゲンシス（Streptomyces  cangkringensis）、ストレプトマイセス・カニフェルス（Streptomyces  caniferus）、ストレプトマイセス・カヌス（Streptomyces  canus）、ストレプトマイセス・カピリスピラリス（Streptomyces  capillispiralis）、ストレプトマイセス・カポアムス（Streptomyces  capoamus）、ストレプトマイセス・カピューエンシス（Streptomyces  capuensis）、ストレプトマイセス・カーノサス（Streptomyces  carnosus）、ストレプトマイセス・カパティカス（Streptomyces  carpaticus）、ストレプトマイセス・カーピネンシス（Streptomyces  carpinensis）、ストレプトマイセス・カスタネオグロビスポラス（Streptomyces  castaneoglobisporus）、ストレプトマイセス・カスタネウス（Streptomyces  castaneus）、ストレプトマイセス・カステラレンシス（Streptomyces  castelarensis）、ストレプトマイセス・カテヌラエ（Streptomyces  catenulae）、ストレプトマイセス・カトレヤ（Streptomyces  cattleya）、ストレプトマイセス・カボーレンシス（Streptomyces  cavourensis）、ストレプトマイセス・カボーレンシス・サブスピーシーズ・カボーレンシス（Streptomyces  cavourensis  subsp.  cavourensis）、ストレプトマイセス・セビマレンシス（Streptomyces  cebimarensis）、ストレプトマイセス・セルロスタティカス（Streptomyces  cellostaticus）、ストレプトマイセス・セルロファブス（Streptomyces  celluloflavus）、ストレプトマイセス・ベルロサエ（Streptomyces  cellulosae）、ストレプトマイセス・キャムパビティイ（Streptomyces  champavatii）、ストレプトマイセス・チャトレウシス（Streptomyces  chartreusis）、ストレプトマイセス・チャトタヌーゲンシス（Streptomyces  chattanoogensis）、ストレプトマイセス・チェオナネンシス（Streptomyces  cheonanensis）、ストレプトマイセス・チアングマイエンシス（Streptomyces  chiangmaiensis）、ストレプトマイセス・チバエンシス（Streptomyces  chibaensis）、ストレプトマイセス・クロロクロモゲネス（Streptomyces  chlorochromogenes）、ストレプトマイセス・クレストマイセティカス（Streptomyces  chrestomyceticus）、ストレプトマイセス・クレストマイセティカス・サブスピーシーズ・ラビセンス（Streptomyces  chrestomyceticus  subsp.  rubescens）、ストレプトマイセス・クロモフスカス（Streptomyces  chromofuscus）、ストレプトマイセス・クロモゲナス（Streptomyces  chromogenus）、ストレプトマイセス・クリセウス（Streptomyces  chryseus）、ストレプトマイセス・クリソマラス（Streptomyces  chrysomallus）、ストレプトマイセス・クリソマラス・サブスピーシーズ・フミガタス（Streptomyces  chrysomallus  subsp.fumigatus）、ストレプトマイセス・チュングフェンシス（Streptomyces  chungwhensis）、ストレプトマイセス・シネレオレクタス（Streptomyces  cinereorectus）、ストレプトマイセス・シネレオルバー（Streptomyces  cinereoruber）、ストレプトマイセス・シネレオルバー・サブスピーシーズ・シネレオルバー（Streptomyces  cinereoruber  subsp.cinereoruber）、ストレプトマイセス・シネレオルバー・サブスピーシーズ・フルクトファーメンタンス（Streptomyces  cinereoruber  subsp.  fructofermentans）、ストレプトマイセス・シネレオスピヌス（Streptomyces  cinereospinus）、ストレプトマイセス・シネレウス（Streptomyces  cinereus）、ストレプトマイセス・シネロクロモゲネス（Streptomyces  cinerochromogenes）、ストレプトマイセス・シンナバリヌス（Streptomyces  cinnabarinus）、ストレプトマイセス・シンナモカスタネウス（Streptomyces  cinnamocastaneus）、ストレプトマイセス・シンナモネンシス（Streptomyces  cinnamonensis）、ストレプトマイセス・シンナモネウス（Streptomyces  cinnamoneus）、ストレプトマイセス・シンナモネウス・サブスピーシーズ・アルボスポラス（Streptomyces  cinnamoneus  subsp.  albosporus）、ストレプトマイセス・シンナモネウス・サブスピーシーズ・フォルマ・アザコルタ（Streptomyces  cinnamoneus  subsp.  forma  azacoluta）、ストレプトマイセス・シンナモネウス・サブスピーシーズ・ラノサス（Streptomyces  cinnamoneus  subsp.  lanosus）、ストレプトマイセス・シンナモネウス・サブスピーシーズ・スパーサス（Streptomyces  cinnamoneus  subsp.  sparsus）、ストレプトマイセス・サーキュレイタス（Streptomyces  circulatus）、ストレプトマイセス・サーレイタス（Streptomyces  cirratus）、ストレプトマイセス・シスカウカシカス（Streptomyces  ciscaucasicus）、ストレプトマイセス・シトレオフルオレセンス（Streptomyces  citreofluorescens）、ストレプトマイセス・シトレウス（Streptomyces  citreus）、ストレプトマイセス・シトリカラー（Streptomyces  citricolor）、ストレプトマイセス・クラビファー（Streptomyces  clavifer）、ストレプトマイセス・クラブリゲルス（Streptomyces  clavuligerus）、ストレプトマイセス・コアサービタス（Streptomyces  coacervatus）、ストレプトマイセス・コクレンシス（Streptomyces  cocklensis）、ストレプトマイセス・コエレッセンス（Streptomyces  coelescens）、ストレプトマイセス・コエリアタス（Streptomyces  coeliatus）、ストレプトマイセス・コエリコファブス（Streptomyces  coelicoflavus）、ストレプトマイセス・コエリカラー（Streptomyces  coelicolor）、ストレプトマイセス・コエルレオアウランティアカス（Streptomyces  coeruleoaurantiacus）、ストレプトマイセス・コエルレオフスカス（Streptomyces  coeruleofuscus）、ストレプトマイセス・コエルレオプルナス（Streptomyces  coeruleoprunus）、ストレプトマイセス・コエルレオルビダス（Streptomyces  coeruleorubidus）、ストレプトマイセス・コエルレセンス（Streptomyces  coerulescens）、ストレプトマイセス・コリヌス（Streptomyces  collinus）、ストレプトマイセス・コリヌス・サブスピーシーズ・アルベセンス（Streptomyces  collinus  subsp.  albescens）、ストレプトマイセス・コロンビエンシス（Streptomyces  colombiensis）、ストレプトマイセス・コレイラス（Streptomyces  coralus）、ストレプトマイセス・コーコルシイ（Streptomyces  corchorusii）、ストレプトマイセス・コリオファシエンス（Streptomyces  coriofaciens）、ストレプトマイセス・コスタリカヌス（Streptomyces  costaricanus）、ストレプトマイセス・クレイテリファー（Streptomyces  craterifer）、ストレプトマイセス・クレメウス（Streptomyces  cremeus）、ストレプトマイセス・クロセウス（Streptomyces  croceus）、ストレプトマイセス・クリルタリヌス（Streptomyces  crystallinus）、ストレプトマイセス・クラコイ（Streptomyces  curacoi）、ストレプトマイセス・クスピドスポラス（Streptomyces  cuspidosporus）、ストレプトマイセス・シアネフスカタス（Streptomyces  cyaneofuscatus）、ストレプトマイセス・シアネグリセウス（Streptomyces  cyaneogriseus）、ストレプトマイセス・シアネウス（Streptomyces  cyaneus）、ストレプトマイセス・シアノアルバス（Streptomyces  cyanoalbus）、ストレプトマイセス・シアノカラー（Streptomyces  cyanocolor）、ストレプトマイセス・シアノゲナス（Streptomyces  cyanogenus）、ストレプトマイセス・シアノグリセウス（Streptomyces  cyanogriseus）、ストレプトマイセス・シアリンドスポラス（Streptomyces  cylindosporus）、ストレプトマイセス・ダゲスタニカス（Streptomyces  daghestanicus）、ストレプトマイセス・ダバウェンシス（Streptomyces  davawensis）、ストレプトマイセス・デコイカス（Streptomyces  decoyicus）、ストレプトマイセス・ダマイニイ（Streptomyces  demainii）、ストレプトマイセス・ディアスタティカス（Streptomyces  diastaticus）、ストレプトマイセス・ディアスタティカス・サブスピーシーズ・アルデシアカス（Streptomyces  diastaticus  subsp.  ardesiacus）、ストレプトマイセス・ディアスタティカス・サブスピーシーズ・ディアスタティカス（Streptomyces  diastaticus  subsp.  diastaticus）、ストレプトマイセス・ディアスタトクロモゲネス（Streptomyces  diastatochromogenes）、ストレプトマイセス・ディアスタトクロモゲネス・サブスピーシーズ・ルテウス（Streptomyces  diastatochromogenes  subsp.  luteus）、ストレプトマイセス・ディスタリカス（Streptomyces  distallicus）、ストレプトマイセス・ジャカルテンシス（Streptomyces  djakartensis）、ストレプトマイセス・ドロズドウィクツィイ（Streptomyces  drozdowiczii）、ストレプトマイセス・ダーラメンシス（Streptomyces  durhamensis）、ストレプトマイセス・ダーミトレンシス（Streptomyces  durmitorensis）、ストレプトマイセス・エブロスポレウス（Streptomyces  eburosporeus）、ストレプトマイセス・エキナトス（Streptomyces  echinatus）、ストレプトマイセス・エキノルバー（Streptomyces  echinoruber）、ストレプトマイセス・エデレンシス（Streptomycesederensis）、ストレプトマイセス・エルグレテウス（Streptomyces  elgreteus）、ストレプトマイセス・エリザベシイ（Streptomyces  elizabethii）、ストレプトマイセス・エメイエンシス（Streptomyces  emeiensis）、ストレプトマイセス・エンダス（Streptomyces  endus）、ストレプトマイセス・エニソカエシリス（Streptomyces  enissocaesilis）、ストレプトマイセス・エリダニ（Streptomyces  eridani）、ストレプトマイセス・エルムペンス（Streptomyces  erumpens）、ストレプトマイセス・エリスロクロモゲネス（Streptomyces  erythrochromogenes）、ストレプトマイセス・エリスログリセウス（Streptomyces  erythrogriseus）、ストレプトマイセス・エスピノサス（Streptomyces  espinosus）、ストレプトマイセス・ユーロシディカス（Streptomyces  eurocidicus）、ストレプトマイセス・ユーロパエイスカビエイ（Streptomyces  europaeiscabiei）、ストレプトマイセス・ユリサーマス（Streptomyces  eurythermus）、ストレプトマイセス・エクスフォリアタス（Streptomyces  exfoliatus）、ストレプトマイセス・ファシキュレイタス（Streptomyces  fasiculatus）、ストレプトマイセス・フェレウス（Streptomyces  felleus）、ストレプトマイセス・フェラリティス（Streptomyces  ferralitis）、ストレプトマイセス・ファーベンス・サブス��ーシーズ・メルロスポルス（Streptomyces  fervens  subsp.  melrosporus）、ストレプトマイセス・フィセラス（Streptomyces  ficellus）、ストレプトマイセス・フィラメントサス（Streptomyces  filamentosus）、ストレプトマイセス・フィリピネンシス（Streptomyces  filipinensis）、ストレプトマイセス・フィムブリアトス（Streptomyces  fimbriatus）、ストレプトマイセス・フィミィカリウス（Streptomyces  fimicarius）、ストレプトマイセス・フィンレイ（Streptomyces  finlayi）、ストレプトマイセス・フラベオルス（Streptomyces  flaveolus）、ストレプトマイセス・フラベウス（Streptomyces  flaveus）、ストレプトマイセス・フラビドフスカス（Streptomyces  flavidofuscus）、ストレプトマイセス・フラビドビレンス（Streptomyces  flavidovirens）、ストレプトマイセス・フラビドビレンス・サブスピーシーズ・フスカス（Streptomyces  flavidovirens  subsp.  fuscus）、ストレプトマイセス・フラビスクレオティカス（Streptomyces  flaviscleroticus）、ストレプトマイセス・フラボクロモゲネス（Streptomyces  flavochromogenes）、ストレプトマイセス・フラボファンギニー（Streptomyces  flavofungini）、ストレプトマイセス・フラボフュスカス（Streptomyces  flavofuscus）、ストレプトマイセス・フラボグリセウス（Streptomyces  flavogriseus）、ストレプトマイセス・フラボマクロスポルス（Streptomyces  flavomacrosporus）、ストレプトマイセス・フラボレクタス（Streptomyces  flavorectus）、ストレプトマイセス・フラボトリシニ（Streptomyces  flavotricini）、ストレプトマイセス・フラボトリシニ・サブスピーシーズ・シュードクロモゲネス（Streptomyces  flavotricini  subsp.  pseudochromogenes）、ストレプトマイセス・フラボバリアビリス（Streptomyces  flavovariabilis）、ストレプトマイセス・フラボビレンス（Streptomyces  flavovirens）、ストレプトマイセス・フラボビリディス（Streptomyces  flavoviridis）、ストレプトマイセス・フラバズ（Streptomyces  flavus）、ストレプトマイセス・フロキュラス（Streptomyces  flocculus）、ストレプトマイセス・フロリダエ（Streptomyces  floridae）、ストレプトマイセス・フロレセンス（Streptomyces  fluorescens）、ストレプトマイセス・フラディアエ（Streptomyces  fradiae）、ストレプトマイセス・フラディアエ・サブスピーシーズ・アシニカラー（Streptomyces  fradiae  subsp.  acinicolor）、ストレプトマイセス・フラディアエ・サブスピーシーズ・イタリカス（Streptomyces  fradiae  subsp.  italicus）、ストレプトマイセス・フラギリス（Streptomyces  fragilis）、ストレプトマイセス・フラグメンタンス（Streptomyces  fragmentans）、ストレプトマイセス・フラグメンタンス・サブスピーシーズ・アクアティカ（Streptomyces  fragmentans  subsp.  aquatica）、ストレプトマイセス・フルビシムス（Streptomyces  fulvissimus）、ストレプトマイセス・フルボロベウス（Streptomyces  fulvorobeus）、ストレプトマイセス・フルボビオラセウス（Streptomyces  fulvoviolaceus）、ストレプトマイセス・フルボビリディス（Streptomyces  fulvoviridis）、ストレプトマイセス・フマヌス（Streptomyces  fumanus）、ストレプトマイセス・フミガティスクレロティカス（Streptomyces  fumigatiscleroticus）、ストレプトマイセス・ファンギシディカス（Streptomyces  fungicidicus）、ストレプトマイセス・ファーロンガス（Streptomyces  furlongus）、ストレプトマイセス・ファーロンガス・サブスピーシーズ・ファーロンガス（Streptomyces  furlongus  subsp.  furlongus）、ストレプトマイセス・フスコアトラス（Streptomyces  fuscoatrus）、ストレプトマイセス・ガボナエ（Streptomyces  gabonae）、ストレプトマイセス・ガルブス（Streptomyces  galbus）、ストレプトマイセス・ガリラエウス（Streptomyces  galilaeus）、ストレプトマイセス・ガリナリウス（Streptomyces  gallinarius）、ストレプトマイセス・ガンシディカス（Streptomyces  gancidicus）、ストレプトマイセス・ガングトケンシス（Streptomyces  gangtokensis）、ストレプトマイセス・ガンマイセカス（Streptomyces  gannmycicus）、ストレプトマイセス・ガーデン（Streptomyces  garden）、ストレプトマイセス・ガードネリ（Streptomyces  gardneri）、ストレプトマイセス・ゲダネンシス（Streptomyces  gedanensis）、ストレプトマイセス・ゲラティカス（Streptomyces  gelaticus）、ストレプトマイセス・ゲルダナマイシニナス（Streptomyces  geldanamycininus）、ストレプトマイセス・ガイシリエンシス（Streptomyces  geysiriensis）、ストレプトマイセス・ガーナエンシス（Streptomyces  ghanaensis）、ストレプトマイセス・ギブソニイ（Streptomyces  gibsonii）、ストレプトマイセス・ギンセンギソリ（Streptomyces  ginsengisoli）、ストレプトマイセス・グロセッセンス（Streptomyces  glaucescens）、ストレプトマイセス・グラウシニガー（Streptomyces  glauciniger）、ストレプトマイセス・グロコスポルス（Streptomyces  glaucosporus）、ストレプトマイセス・グロクス（Streptomyces  glaucus）、ストレプトマイセス・グロビファー（Streptomyces  globifer）、ストレプトマイセス・グロウビスポラス（Streptomyces  globisporus）、ストレプトマイセス・グロウビスポラス・サブスピーシーズ・ガウカシカス（Streptomyces  globisporus  subsp.  caucasicus）、ストレプトマイセス・グロウビスポラス・サブスピーシーズ・グロウビスポラス（Streptomyces  globisporus  subsp.  globisporus）、ストレプトマイセス・グロボサス（Streptomyces  globosus）、ストレプトマイセス・グロメラタス（Streptomyces  glomeratus）、ストレプトマイセス・グロメロアウランティアカス（Streptomyces  glomeroaurantiacus）、ストレプトマイセス・グロマロクロモゲンシス（Streptomyces  glomerochromogenes）、ストレプトマイセス・ゴビトリシニ（Streptomyces  gobitricini）、ストレプトマイセス・ゴシキエンシス（Streptomyces  goshikiensis）、ストレプトマイセス・ゴウゲロティイ（Streptomyces  gougerotii）、ストレプトマイセス・グラミネアラス（Streptomyces  graminearus）、ストレプトマイセス・グラミネウス（Streptomyces  gramineus）、ストレプトマイセス・グラミノファシエンス（Streptomyces  graminofaciens）、ストレプトマイセス・グリセイニガー（Streptomyces  griseiniger）、ストレプトマイセス・グリセイヌス（Streptomyces  griseinus）、ストレプトマイセス・グリセオアウランティアカス（Streptomyces  griseoaurantiacus）、ストレプトマイセス・グリセオブルネウス（Streptomyces  griseobrunneus）、ストレプトマイセス・グリセオカルネウス（Streptomyces  griseocarneus）、ストレプトマイセス・グリセオクロモゲネス（Streptomyces  griseochromogenes）、ストレプトマイセス・グリセオクロモゲネス・サブスピーシーズ・スイタエンシス（Streptomyces  griseochromogenes  subsp.  suitaensis）、ストレプトマイセス・グリセオファシエンス（Streptomyces  griseofaciens）、ストレプトマイセス・グリセオフラバス（Streptomyces  griseoflavus）、ストレプトマイセス・グリセオフラバス・サブスピーシー���・ピリンディカス（Streptomyces  griseoflavus  subsp.  pyrindicus）、ストレプトマイセス・グリセオフュスカス（Streptomyces  griseofuscus）、ストレプトマイセス・グリセオインカーナタス（Streptomyces  griseoincarnatus）、ストレプトマイセス・グリセオロアルブス（Streptomyces  griseoloalbus）、ストレプトマイセス・グリセオロサフュスカス（Streptomyces  griseolosuffuscus）、ストレプトマイセス・グリセオルス（Streptomyces  griseolus）、ストレプトマイセス・グリセオルテウス（Streptomyces  griseoluteus）、ストレプトマイセス・グリセオマイシニ（Streptomyces  griseomycini）、ストレプトマイセス・グリセオプラヌス（Streptomyces  griseoplanus）、ストレプトマイセス・グリセオルーベンス（Streptomyces  griseorubens）、ストレプトマイセス・グリセオルバー（Streptomyces  griseoruber）、ストレプトマイセス・グリセオルビギノザス（Streptomyces  griseorubiginosus）、ストレプトマイセス・グリセオスピラリス（Streptomyces  griseospiralis）、ストレプトマイセス・グリセオスポレウス（Streptomyces  griseosporeus）、ストレプトマイセス・グリセオストラミネウス（Streptomyces  griseostramineus）、ストレプトマイセス・グリセオバーティシラタス（Streptomyces  griseoverticillatus）、ストレプトマイセス・グリセオビリディス（Streptomyces  griseoviridis）、ストレプトマイセス・グリセウス（Streptomyces  griseus）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・ブルネウス（Streptomyces  griseus  subsp.  bruneus）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・デシデウス（Streptomyces  griseussubsp.  desideus）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・エリゼンシス（Streptomyces  griseus  subsp.  erizensis）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・フォーミカス（Streptomyces  griseus  subsp.  formicus）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・グリセウス（Streptomyces  griseus  subsp.  griseus）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・パーパレウス（Streptomyces  griseus  subsp.  purpureus）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・ロドクロウス（Streptomyces  griseus  subsp.  rhodochrous）、ストレプトマイセス・グリセウス・サブスピーシーズ・ソルビフィシエンス（Streptomyces  griseus  subsp.  solvifaciens）、ストレプトマイセス・グアンデュエンシス（Streptomyces  guanduensis）、ストレプトマイセス・グルバーゲンシス（Streptomyces  gulbargensis）、ストレプトマイセス・ジシュース（Streptomyces  gypseus）、ストレプトマイセス・ハイナネンシス（Streptomyces  hainanensis）、ストレプトマイセス・ハリクロナエ（Streptomyceshaliclonae）、ストレプトマイセス・ハロトレランス（Streptomyces  halotolerans）、ストレプトマイセス・ハルステディイ（Streptomyces  halstedii）、ストレプトマイセス・ハワイエンシス（Streptomyces  hawaiiensis）、ストレプトマイセス・ハゼリエンシス（Streptomyces  hazeliensis）、ストレプトマイセス・ホーペイエンシス（Streptomyceshebeiensis）、ストレプトマイセス・ヘイミ（Streptomyces  heimi）、ストレプトマイセス・ヘリオマイシニ（Streptomyces  heliomycini）、ストレプトマイセス・ヘルバティカス（Streptomyces  helvaticus）、ストレプトマイセス・ヘネタス（Streptomyces  henetus）、ストレプトマイセス・ハーバリカラー（Streptomyces  herbaricolor）、ストレプトマイセス・ヘテロモーファス（Streptomyces  heteromorphus）、ストレプトマイセス・ヒムグリエンシス（Streptomyces  himgriensis）、ストレプトマイセス・ヒロシメンシス（Streptomyces  hiroshimensis）、ストレプトマイセス・ヒルスタス（Streptomyces  hirsutus）、ストレプトマイセス・ホートン（Streptomyces  horton）、ストレプトマイセス・ヒュミダス（Streptomyces  humidus）、ストレプトマイセス・ヒュミダス・サブスピーシーズ・アンティツモリス（Streptomyces  humidus  subsp.  antitumoris）、ストレプトマイセス・ヒュミファー（Streptomyces  humifer）、ストレプトマイセス・ヒュミフェルス（Streptomyces  humiferus）、ストレプトマイセス・ハンダンゲンシス（Streptomyces  hundungensis）、ストレプトマイセス・ヒャリヌス（Streptomyces  hyalinus）、ストレプトマイセス・ハイドラバデンシス（Streptomyces  hyderabadensis）、ストレプトマイセス・ハイドロゲナンス（Streptomyces  hydrogenans）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces  hygroscopicus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・アボマイセティカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  aabomyceticus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・アンガストマイセティカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  angustmyceticus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・アザロマイセティカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  azalomyceticus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・クリスタロゲネス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  crystallogenes）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・デコイカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  decoyicus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・デュアマイセティカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  duamyceticus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・ゲルダヌス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  geldanus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・グレボサス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  glebosus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・ヒアロマイセティカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  hialomyceticus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・ハイグロスコピカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  hygroscopicus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・ハイグロスコピウス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  hygroscopius）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・リモネウス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  limoneus）、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・オサマイセティカス（Streptomyces  hygroscopicus  subsp.  ossamyceticus）、ストレプトマイセス・ハイグロスピノサス（Streptomyces  hygrospinosus）、ストレプトマイセス・イアカイルス（Streptomyces  iakyrus）、ストレプトマイセス・イナエクアリス（Streptomyces  inaequalis）、ストレプトマイセス・インディアエンシス（Streptomyces  indiaensis）、ストレプトマイセス・インディカス（Streptomyces  indicus）、ストレプトマイセス・インディゴカラー（Streptomyces  indigocolor）、ストレプトマイセス・インディゴフェラス（Streptomyces  indigoferus）、ストレプトマイセス・インドネシエンシス（Streptomyces  indonesiensis）、ストレプトマイセス・インサイニス（Streptomyces  insignis）、ストレプトマイセス・インターメディウス（Streptomyces  intermedius）、ストレプトマイセス・イヌシテイタス（Streptomyces  inusitatus）、ストレプトマイセス・イポモエアエ（Streptomyces  ipomoeae）、ストレプトマイセス・イラネンシス（Streptomyces  iranensis）、ストレプトマイセス・イシガキエンシス（Streptomyces  ishigakiensis）、ストレプトマイセス・ジャマイセンシス（Streptomyces  jamaicensis）、ストレプトマイセス・ジャンシナス（Streptomyces  janthinus）、ストレプトマイセス・ジャベンシス（Streptomycesjavensis）、ストレプトマイセス・ジェタイシエンシス（Streptomyces  jietaisiensis）、ストレプトマイセス・ジュジュイ（Streptomyces  jujuy）、ストレプトマイセス・ジュモンジネンシス（Streptomyces  jumonjinensis）、ストレプトマイセス・カガワエンシス（Streptomyces  kagawaensis）、ストレプトマイセス・カゴシマヌス（Streptomyces  kagoshimanus）、ストレプトマイセス・カナマイセティカス（Streptomyces  kanamyceticus）、ストレプトマイセス・カニハラエンシス（Streptomyces  kaniharaensis）、ストレプトマイセス・カーナタケンシス（Streptomyces  karnatakensis）、ストレプトマイセス・カスガエンシス（Streptomyces  kasugaensis）、ストレプトマイセス・カスガスピナス（Streptomyces  kasugaspinus）、ストレプトマイセス・カトラエ（Streptomyces  katrae）、ストレプトマイセス・ケンタケンシス（Streptomyces  kentuckensis）、ストレプトマイセス・クハンダレンシス（Streptomyces  khandalensis）、ストレプトマイセス・キタセトエンシス（Streptomyces  kitasatoensis）、ストレプトマイセス・コベネンシス（Streptomyces  kobenensis）、ストレプトマイセス・コヤンゲンシス（Streptomyces  koyangensis）、ストレプトマイセス・クレインスキイ（Streptomyces  krainskii）、ストレプトマイセス・クンミンゲンシス（Streptomyces  kunmingensis）、ストレプトマイセス・カーサノビイ（Streptomyces  kurssanovii）、ストレプトマイセス・クウェイティエンシス（Streptomyces  kuwaitiensis）、ストレプトマイセス・ラベダエ（Streptomyces  labedae）、ストレプトマイセス・ラセイ（Streptomyces  laceyi）、ストレプトマイセス・ラキュラツスポラス（Streptomyces  laculatusporus）、ストレプトマイセス・ラエテビオラセウス（Streptomyces  laeteviolaceus）、ストレプトマイセス・ラナタス（Streptomyces  lanatus）、ストレプトマイセス・ラネンシス（Streptomyces  lannensis）、ストレプトマイセス・ラサリエンシス（Streptomyces  lasaliensis）、ストレプトマイセス・ラテリティウス（Streptomyces  lateritius）、ストレプトマイセス・ラウレンティイ（Streptomyces  laurentii）、ストレプトマイセス・ラベンドフォリアエ（Streptomyces  lavendofoliae）、ストレプトマイセス・ラベンデゥラエ（Streptomyces  lavendulae）、ストレプトマイセス・ラベンデゥラエ・サブスピーシーズ・フスカス（Streptomyces  lavendulae  subsp.  fuscus）、ストレプトマイセス・ラベンデゥラエ・サブスピーシーズ・グラッサーリウス（Streptomyces  lavendulae  subsp.  grasserius）、ストレプトマイセス・ラベンデゥラエ・サブスピーシーズ・ラベンデゥラエ（Streptomyces  lavendulae  subsp.  lavendulae）、ストレプトマイセス・ラベンデゥラレクタス（Streptomyces  lavendularectus）、ストレプトマイセス・ラベンデゥリグリセウス（Streptomyces  lavenduligriseus）、ストレプトマイセス・ラベンデゥロカラー（Streptomyces  lavendulocolor）、ストレプトマイセス・ラズレウス（Streptomyces  lazureus）、ストレプトマイセス・レビス（Streptomyces  levis）、ストレプトマイセス・レボリス（Streptomyces  levoris）、ストレプトマイセス・リバニー（Streptomyces  libani）、ストレプトマイセス・リバニー・サブスピーシーズ・リバニー（Streptomyces  libani  subsp.  libani）、ストレプトマイセス・リバニー・サブスピーシーズ・ルーファス（Streptomyces  libani  subsp.  rufus）、ストレプトマイセス・リエノマイシニー（Streptomyces  lienomycini）、ストレプトマイセス・リエスケイ（Streptomyces  lieskei）、ストレプトマイセス・リラセウス（Streptomyces  lilaceus）、ストレプトマイセス・リラシノファルブス（Streptomyces  lilacinofulvus）、ストレプトマイセス・リラシヌス（Streptomyces  lilacinus）、ストレプトマイセス・リモサス（Streptomyces  limosus）、ストレプトマイセス・リンコルネンシス（Streptomyces  lincolnensis）、ストレプトマイセス・リプマニイ（Streptomyces  lipmanii）、ストレプトマイセス・リサンドリ（Streptomyces  lisandri）、ストレプトマイセス・リトモシディニー（Streptomyces  litmocidini）、ストレプトマイセス・リビダンス（Streptomyces  lividans）、ストレプトマイセス・リビドクラバタス（Streptomyces  lividoclavatus）、ストレプトマイセス・リビダス（Streptomyces  lividus）、ストレプトマイセス・ロイデンシス（Streptomyces  loidensis）、ストレプトマイセス・ローモンデンシス（Streptomyces  lomondensis）、ストレプトマイセス・ロンギスポロフラバス（Streptomyces  longisporoflavus）、ストレプトマイセス・ロンギスポロルバー（Streptomyces  longispororuber）、ストレプトマイセス・ロンギスポラス（Streptomyces  longisporus）、ストレプトマイセス・ロンギシマス（Streptomyces  longissimus）、ストレプトマイセス・ロングウーデンシス（Streptomyces  longwoodensis）、ストレプトマイセス・ルセンシス（Streptomyces  lucensis）、ストレプトマイセス・ルーナリンハレンシス（Streptomyces  lunalinharensis）、ストレプトマイセス・ルーナリンハレシイ（Streptomyces  lunalinharesii）、ストレプトマイセス・ルリディスケイビエイ（Streptomyces  luridiscabiei）、ストレプトマイセス・ルリダス（Streptomyces  luridus）、ストレプトマイセス・ルシタヌス（Streptomyces  lusitanus）、ストレプトマイセス・ルシタヌス・サブスピーシーズ・テトラサイクリニ（Streptomyces  lusitanus  var.  tetracyclini）、ストレプトマイセス・ルテイレティクリ（Streptomyces  luteireticuli）、ストレプトマイセス・ルテオカラー（Streptomyces  luteocolor）、ストレプトマイセス・ルテオグリセウス（Streptomyces  luteogriseus）、ストレプトマイセス・ルテオルテセンス（Streptomyces  luteolutescens）、ストレプトマイセス・ルテオスポレウス（Streptomyces  luteosporeus）、ストレプトマイセス・ルテオバーティシラタス（Streptomyces  luteoverticillatus）、ストレプトマイセス・ライディカス（Streptomyces  lydicus）、ストレプトマイセス・マクロモマイセティカス（Streptomyces  macromomyceticus）、ストレプトマイセス・マクロスポレウス（Streptomyces  macrosporeus）、ストレプトマイセス・マクロスポルス（Streptomyces  macrosporus）、ストレプトマイセス・マイゼウス（Streptomyces  maizeus）、ストレプトマイセス・マラキティカス（Streptomyces  malachiticus）、ストレプトマイセス・マラキティカス・サブスピーシーズ・グリセオスピノサス（Streptomyces  malachiticus  subsp.  griseospinosus）、ストレプトマイセス・マラキトフュスカス（Streptomyces  malachitofuscus）、ストレプトマイセス・マラキトレクタス（Streptomyces  malachitorectus）、ストレプトマイセス・マラキトスピナス（Streptomyces  malachitospinus）、ストレプトマイセス・マレーエンシス（Streptomyces  malayensis）、ストレプトマイセス・マレーシエンシス（Streptomyces  malaysiensis）、ストレプトマイセス・マニプレンシス（Streptomyces  manipurensis）、ストレプトマイセス・マリナス（Streptomyces  marinus）、ストレプトマイセス・マリティマス（Streptomyces  maritimus）、ストレプトマイセス・マーロッコネンシス（Streptomyces  marokkonensis）、ストレプトマイセス・マシュエンシス（Streptomyces  mashuensis）、ストレプトマイセス・マサスポレウス（Streptomyces  massasporeus）、ストレプトマイセス・マテンシス（Streptomyces  matensis）、ストレプトマイセス・マウベカラー（Streptomyces  mauvecolor）、ストレプトマイセス・メイテニ（Streptomyces  mayteni）、ストレプトマイセス・メディオシディカス（Streptomyces  mediocidicus）、ストレプトマイセス・メディオラニ（Streptomyces  mediolani）、ストレプトマイセス・メガスポラス（Streptomyces  megasporus）、ストレプトマイセス・メラノゲネス（Streptomyces  melanogenes）、ストレプトマイセス・メラノスポロファシエンス（Streptomyces  melanosporofaciens）、ストレプトマイセス・メントウゴウエンシス（Streptomyces  mentougouensis）、ストレプトマイセス・メキシカヌス（Streptomyces  mexicanus）、ストレプトマイセス・ミシガネンシス（Streptomyces  michiganensis）、ストレプトマイセス・ミシガネンシス・サブスピーシーズ・アミロリティカス（Streptomyces  michiganensis  subsp.  amylolyticus）、ストレプトマイセス・ミクロフラバス（Streptomyces  microflavus）、ストレプトマイセス・ミクロスポラス（Streptomyces  microsporus）、ストレプトマイセス・ミハラエンシス（Streptomyces  miharaensis）、ストレプトマイセス・ミノエンシス（Streptomyces  minoensis）、ストレプトマイセス・ミヌティスクレロティカス（Streptomyces  minutiscleroticus）、ストレプトマイセス・ミラビリス（Streptomyces  mirabilis）、ストレプトマイセス・ミサキエンシス（Streptomyces  misakiensis）、ストレプトマイセス・ミサワネンシス（Streptomyces  misawanensis）、ストレプトマイセス・ミシオネンシス（Streptomyces  misionensis）、ストレプトマイセス・モバラエンシス（Streptomyces  mobaraensis）、ストレプトマイセス・モデレイタス（Streptomyces  moderatus）、ストレプトマイセス・モノマイシニ（Streptomyces  monomycini）、ストレプトマイセス・モーダースキイ（Streptomyces  mordarskii）、ストレプトマイセス・モルーカエンス（Streptomyces  morookaense）、ストレプトマイセス・モルーカエンシス（Streptomyces  morookaensis）、ストレプトマイセス・ムコフラバス（Streptomyces  mucoflavus）、ストレプトマイセス・マルチスピラリス（Streptomyces  multispiralis）、ストレプトマイセス・ムリナス（Streptomyces  murinus）、ストレプトマイセス・ムタビリス（Streptomycesmutabilis）、ストレプトマイセス・ムトマイシニ（Streptomyces  mutomycini）、ストレプトマイセス・マイカロファシエンス（Streptomyces  mycarofaciens）、ストレプトマイセス・ミキソゲネス（Streptomyces  myxogenes）、ストレプトマイセス・ナガニシイ（Streptomyces  naganishii）、ストレプトマイセス・ナニンゲンシス（Streptomyces  nanningensis）、ストレ��トマイセス・ナンシェンシス（Streptomyces  nanshensis）、ストレプトマイセス・ナラエンシス（Streptomyces  naraensis）、ストレプトマイセス・ナーボネンシス（Streptomyces  narbonensis）、ストレプトマイセス・ナシュビレンシス（Streptomyces  nashvillensis）、ストレプトマイセス・ナタレンシス（Streptomyces  natalensis）、ストレプトマイセス・ネブロサス（Streptomyces  neburosus）、ストレプトマイセス・ネオカリベリス（Streptomyces  neocaliberis）、ストレプトマイセス・ネトロプシス（Streptomyces  netropsis）、ストレプトマイセス・ネヤガワエンシス（Streptomyces  neyagawaensis）、ストレプトマイセス・ニゲラス（Streptomyces  nigellus）、ストレプトマイセス・ニガー（Streptomyces  niger）、ストレプトマイセス・ニグレセンス（Streptomyces  nigrescens）、ストレプトマイセス・ニグリファシエンス（Streptomyces  nigrifaciens）、ストレプトマイセス・ニグログリセオウス（Streptomyces  nigrogriseolus）、ストレプトマイセス・ニグロビオレンス（Streptomyces  nigroviolens）、ストレプトマイセス・ニトロスポレウス（Streptomyces  nitrosporeus）、ストレプトマイセス・ニベオラバー（Streptomyces  niveoruber）、ストレプトマイセス・ニベウス（Streptomyces  niveus）、ストレプトマイセス・ノビリス（Streptomyces  nobilis）、ストレプトマイセス・ノボリトエンシス（Streptomyces  noboritoensis）、ストレプトマイセス・ノドサス（Streptomyces  nodosus）、ストレプトマイセス・ノドサス・サブスピーシーズ・アスカエンシス（Streptomyces  nodosus  subsp.  asukaensis）、ストレプトマイセス・ノガラター（Streptomyces  nogalater）、ストレプトマイセス・ノジリエンシス（Streptomyces  nojiriensis）、ストレプトマイセス・ノウルセイ（Streptomyces  noursei）、ストレプトマイセス・ノバエカエサレアエ（Streptomyces  novaecaesareae）、ストレプトマイセス・ノボバーティシラス（Streptomyces  novoverticillus）、ストレプトマイセス・オークラセイスクレロティカス（Streptomyces  ochraceiscleroticus）、ストレプトマイセス・オクロスポラス（Streptomyces  ochrosporus）、ストレプトマイセス・オドリファー（Streptomyces  odorifer）、ストレプトマイセス・オゲエンシス（Streptomyces  ogaensis）、ストレプトマイセス・オイディオスポラス（Streptomyces  oidiosporus）、ストレプトマイセス・オリバセイスクレロティカス（Streptomyces  olivaceiscleroticus）、ストレプトマイセス・オリバセオビリディス（Streptomyces  olivaceoviridis）、ストレプトマイセス・オリバセウス（Streptomyces  olivaceus）、ストレプトマイセス・オリボクロモゲンシス（Streptomyces  olivochromogenes）、ストレプトマイセス・オリボクロモゲンシス・サブスピーシーズ・サイトビリナス（Streptomyces  olivochromogenes  subsp.  cytovirinus）、ストレプトマイセス・オリボグリセウス（Streptomyces  olivogriseus）、ストレプトマイセス・オリボバーティシラタス（Streptomyces  olivoverticillatus）、ストレプトマイセス・オリボビリディス（Streptomyces  olivoviridis）、ストレプトマイセス・オーミヤエンシス（Streptomyces  omiyaensis）、ストレプトマイセス・オリノシー（Streptomyces  orinoci）、ストレプトマイセス・オーナタス（Streptomyces  ornatus）、ストレプトマイセス・オスマニエンシス（Streptomyces  osmaniensis）、ストレプトマイセス・オストレオグリセウス（Streptomyces  ostreogriseus）、ストレプトマイセス・オワシエンシス（Streptomyces  owasiensis）、ストレプトマ���セス・パクトム（Streptomyces  pactum）、ストレプトマイセス・パダナス（Streptomyces  padanus）、ストレプトマイセス・パリダス（Streptomyces  pallidus）、ストレプトマイセス・パナカグリ（Streptomyces  panacagri）、ストレプトマイセス・パナシテラエ（Streptomyces  panaciterrae）、ストレプトマイセス・パナイエンシス（Streptomyces  panayensis）、ストレプトマイセス・パラドキサス（Streptomyces  paradoxus）、ストレプトマイセス・パラグアエンシス（Streptomyces  paraguayensis）、ストレプトマイセス・パルブルス（Streptomyces  parvulus）、ストレプトマイセス・パルブス（Streptomyces  parvus）、ストレプトマイセス・パウシディアスタティカス（Streptomyces  paucidiastaticus）、ストレプトマイセス・パウシスポレウス（Streptomyces  paucisporeus）、ストレプトマイセス・パウシスポロゲネス（Streptomyces  paucisporogenes）、ストレプトマイセス・パウラス（Streptomyces  paulus）、ストレプトマイセス・ペルビエンシス（Streptomyces  peruviensis）、ストレプトマイセス・ペウセティウス  （Streptomyces  peucetius）、ストレプトマイセス・ペウセティウス・サブスピーシーズ・カエシウス（Streptomyces  peucetius  subsp.  caesius）、ストレプトマイセス・ペウセティウス・サブスピーシーズ・カーネウス（Streptomyces  peucetius  subsp.  carneus）、ストレプトマイセス・ファエオクロモゲネス（Streptomyces  phaeochromogenes）、ストレプトマイセス・ファエオファシエンス（Streptomyces  phaeofaciens）、ストレプトマイセス・ファエオルテイクロモゲネス（Streptomyces  phaeoluteichromatogenes）、ストレプトマイセス・ファエオルテイグリセウス（Streptomyces  phaeoluteigriseus）、ストレプトマイセス・ファエオパーピュレウス（Streptomyces  phaeopurpureus）、ストレプトマイセス・ファエオバーティシレイタス・サブスピーシーズ・タカツキエンシス（Streptomyces  phaeoverticillatus  subsp.  takatsukiensis）、ストレプトマイセス・ファエオバリディス（Streptomyces  phaeoviridis）、ストレプトマイセス・ファレトラエ（Streptomyces  pharetrae）、ストレプトマイセス・フェモルファス（Streptomyces  phemorphus）、ストレプトマイセス・フィトハビタンス（Streptomyces  phytohabitans）、ストレプトマイセス・ピロサス（Streptomyces  pilosus）、ストレプトマイセス・ピロビオロフスカス（Streptomyces  piloviolofuscus）、ストレプトマイセス・ピオモゲネス（Streptomyces  piomogenus）、ストレプトマイセス・プラテンシス（Streptomyces  platensis）、ストレプトマイセス・プラテンシス・サブスピーシーズ・クラレンシス（Streptomyces  platensis  subsp.  clarensis）、ストレプトマイセス・プラテンシス・サブスピーシーズ・マルビナス（Streptomyces  platensis  subsp.  malvinus）、ストレプトマイセス・プラテンシス・サブスピーシーズ・ロビゴシディカス（Streptomyces  platensis  subsp.  robigocidicus）、ストレプトマイセス・プリカタス（Streptomyces  plicatus）、ストレプトマイセス・プラムベウス（Streptomyces  plumbeus）、ストレプトマイセス・プラムビレシステンス（Streptomyces  plumbiresistens）、ストレプトマイセス・プルリカラレッセンス（Streptomyces  pluricolorescens）、ストレプトマイセス・ポリアンティバイオティカス（Streptomyces  polyantibioticus）、ストレプトマイセス・ポリクロモゲネス（Streptomyces  polychromogenes）、ストレプトマイセス・ポリクロモゲネス・サブスピーシーズ・アレニコラス（Streptomyces  polychromogenes  subsp.  arenicolus）、ストレプトマイセス・プーネンシス（Streptomyces  poonensis）、ストレプトマイセス・プラエコックス（Streptomyces  praecox）、ストレプトマイセス・プラシノピロサス（Streptomyces  prasinopilosus）、ストレプトマイセス・プラシノスポルス（Streptomyces  prasinosporus）、ストレプトマイセス・プラシヌス（Streptomyces  prasinus）、ストレプトマイセス・（Streptomyces  pristinaespiralis）、ストレプトマイセス・（Streptomyces  propurpuratus）、ストレプトマイセス・プルニカラー（Streptomyces  prunicolor）、ストレプトマイセス・プサモティカス（Streptomyces  psammoticus）、ストレプトマイセス・シュードエキノスポレウス（Streptomyces  pseudoechinosporeus）、ストレプトマイセス・シュードグリセオルス（Streptomyces  pseudogriseolus）、ストレプトマイセス・シュードグリセオルス・サブスピーシーズ・フルコファーメンタンス（Streptomyces  pseudogriseolus  subsp.  glucofermentans）、ストレプトマイセス・シュードベネズエラエ（Streptomyces  pseudovenezuelae）、ストレプトマイセス・パルチャー（Streptomyces  pulcher）、ストレプトマイセス・プルベラセウス（Streptomyces  pulveraceus）、ストレプトマイセス・プニセウス（Streptomyces  puniceus）、ストレプトマイセス・プニセウス・サブスピーシーズ・ドリセウス（Streptomyces  puniceus  subsp.  doliceus）、ストレプトマイセス・プニシスカビエイ（Streptomyces  puniciscabiei）、ストレプトマイセス・パーペオクロモゲネス（Streptomyces  purpeochromogenes）、ストレプトマイセス・パーペオフュスカス（Streptomyces  purpeofuscus）、ストレプトマイセス・パープラッセンス（Streptomyces  purpurascens）、ストレプトマイセス・パープレオフスカス（Streptomyces  purpureofuscus）、ストレプトマイセス・パープレオフスカス・サブスピーシーズ・アコアグランス（Streptomyces  purpureofuscus  subsp.  acoagulans）、ストレプトマイセス・パープレウス（Streptomyces  purpureus）、ストレプトマイセス・パープロゲネイスクレロティカス（Streptomyces  purpurogeneiscleroticus）、ストレプトマイセス・ピリドマイセティカス（Streptomyces  pyridomyceticus）、ストレプトマイセス・レイスモクロモゲネス（Streptomyces  racemochromogenes）、ストレプトマイセス・ラセモサス（Streptomyces  racemosus）、ストレプトマイセス・ラジオピュグナンス（Streptomyces  radiopugnans）、ストレプトマイセス・ラフィノサス（Streptomyces  raffinosus）、ストレプトマイセス・ラメウス（Streptomyces  rameus）、ストレプトマイセス・ラモシスシムス（Streptomyces  ramosissimus）、ストレプトマイセス・ラムローサス（Streptomyces  ramulosus）、ストレプトマイセス・ラングーン（Streptomyces  rangoon）、ストレプトマイセス・ラングーンエンシス（Streptomyces  rangoonensis）、ストレプトマイセス・ラパマイシンカス（Streptomyces  rapamycincus）、ストレプトマイセス・レシフェンシス（Streptomyces  recifensis）、ストレプトマイセス・レクティビオラセウス（Streptomyces  rectiviolaceus）、ストレプトマイセス・レフュイネウス・サブスピーシーズ・サーモトレランス（Streptomyces  refuineus  subsp.  thermotolerans）、ストレプトマイセス・レガリス（Streptomyces  regalis）、ストレプトマイセス・レゲンシス（Streptomyces  regensis）、ストレプトマイセス・レジストマイシフィカス（Streptomyces  resistomycificus）、ストレプトマイセス・レティクリ・サブスピーシーズ・プロトマイシカス（Streptomyces  reticuli  subsp.  protomycicus）、ストレプトマイセス・レティクリスカビエイ（Streptomyces  reticuliscabiei）、ストレプトマイセス・リゾスファエリカス（Streptomyces  rhizosphaericus）、ストレプトマイセス・リボシディフィカス（Streptomyces  ribosidificus）、ストレプトマイセス・リモファシエンス（Streptomyces  rimofaciens）、ストレプトマイセス・リモーサス（Streptomyces  rimosus）、ストレプトマイセス・リモーサス・サブスピーシーズ・パロモマイシナス（Streptomyces  rimosus  subsp.  paromomycinus）、ストレプトマイセス・リモーサス・サブスピーシーズ・リモーサス（Streptomyces  rimosus  subsp.  rimosus）、ストレプトマイセス・リシリエンシス（Streptomyces  rishiriensis）、ストレプトマイセス・ロベフスカス（Streptomyces  robefuscus）、ストレプトマイセス・ロシェイ（Streptomyces  rochei）、ストレプトマイセス・ローサ（Streptomyces  rosa）、ストレプトマイセス・ローサ・サブスピーシーズ・ノトエンシス（Streptomyces  rosa  subsp.  notoensis）、ストレプトマイセス・ロゼイスクレロティカス（Streptomyces  roseiscleroticus）、ストレプトマイセス・ロゼオアルバス（Streptomyces  roseoalbus）、ストレプトマイセス・ロゼオアウランティウス（Streptomyces  roseoaurantius）、ストレプトマイセス・ロゼオクロモゲネス（Streptomyces  roseochromogenes）、ストレプトマイセス・ロゼオクロモゲナス（Streptomyces  roseochromogenus）、ストレプトマイセス・ロゼオクロモゲナス・サブスピーシーズ・アルボサイクリニ（Streptomyces  roseochromogenus  subsp.  albocyclini）、ストレプトマイセス・ロゼオシネレウス（Streptomyces  roseocinereus）、ストレプトマイセス・ロゼオディアスタティカス（Streptomyces  roseodiastaticus）、ストレプトマイセス・ロゼオフラバス（Streptomyces  roseoflavus）、ストレプトマイセス・ロゼオフルバス（Streptomyces  roseofulvus）、ストレプトマイセス・ロゼオグリセウス（Streptomyces  roseogriseus）、ストレプトマイセス・ロゼオリラシナス（Streptomyces  roseolilacinus）、ストレプトマイセス・ロゼオラス（Streptomyces  roseolus）、ストレプトマイセス・ロゼオルテウス（Streptomyces  roseoluteus）、ストレプトマイセス・ロゼオプラタス（Streptomyces  roseoplatus）、ストレプトマイセス・ロゼオルーベンス（Streptomyces  roseorubens）、ストレプトマイセス・ロゼオスポラス（Streptomyces  roseosporus）、ストレプトマイセス・ロゼオバーティシラタス（Streptomyces  roseoverticillatus）、ストレプトマイセス・ロゼオビオラセウス（Streptomyces  roseoviolaceus）、ストレプトマイセス・ロゼオビオラセンス（Streptomyces  roseoviolascens）、ストレプトマイセス・ロゼオビリディス（Streptomyces  roseoviridis）、ストレプトマイセス・ロゼウス（Streptomyces  roseus）、ストレプトマイセス・ルバー（Streptomyces  ruber）、ストレプトマイセス・ルビカラー（Streptomyces  rubicolor）、ストレプトマイセス・ルビダス（Streptomyces  rubidus）、ストレプトマイセス・ルビギノソヘルボルス（Streptomyces  rubiginosohelvolus）、ストレプトマイセス・ルビギノーサス（Streptomyces  rubiginosus）、ストレプトマイセス・ルブリレティクリ（Streptomyces  rubrireticuli）、ストレプトマイセス・ルブロサイアノディアスタティカス・サブスピーシーズ・ピガー（Streptomyces  rubrocyanodiastaticussubsp.  piger）、ストレプトマイセス・ルブログリセウス（Streptomyces  rubrogriseus）、ストレプトマイセス・ルブロラベンデゥラエ（Streptomyces  rubrolavendulae）、ストレプトマイセス・ルブロバールコサス（Streptomyces  rubroverrucosus）、ストレプトマイセス・ルブラス（Streptomyces  rubrus）、ストレプトマイセス・ルフォクロモゲネス（Streptomyces  rufochromogenes）、ストレプトマイセス・ルトガーセンシス（Streptomyces  rutgersensis）、ストレプトマイセス・レンシス（Streptomyces  ryensis）、ストレプトマイセス・サハチロイ（Streptomyces  sahachiroi）、ストレプトマイセス・サカイエンシス（Streptomyces  sakaiensis）、ストレプトマイセス・サリナラム（Streptomyces  salinarum）、ストレプトマイセス・サムプソニイ（Streptomyces  sampsonii）、ストレプトマイセス・サングリエリー（Streptomyces  sanglieri）、ストレプトマイセス・サナンエンシス（Streptomyces  sannanensis）、ストレプトマイセス・サンヌレンシス（Streptomyces  sannurensis）、ストレプトマイセス・サンエンシス（Streptomyces  sanyensis）、ストレプトマイセス・サプロフィティカス（Streptomyces  saprophyticus）、ストレプトマイセス・サラセティカス（Streptomyces  saraceticus）、ストレプトマイセス・サヤマエンシス（Streptomyces  sayamaensis）、ストレプトマイセス・スカビエイー（Streptomyces  scabiei）、ストレプトマイセス・スカブリスポルス（Streptomyces  scabrisporus）、ストレプトマイセス・スクレログラヌラタス（Streptomyces  sclerogranulatus）、ストレプトマイセス・スクレロティアルス（Streptomyces  sclerotialus）、ストレプトマイセス・スコピフォルミス（Streptomyces  scopiformis）、ストレプトマイセス・セディ（Streptomyces  sedi）、ストレプトマイセス・セノエンシス（Streptomyces  senoensis）、ストレプトマイセス・ソウレンシス（Streptomyces  seoulensis）、ストレプトマイセス・セプタタス（Streptomyces  septatus）、ストレプトマイセス・セリアニマタス（Streptomyces  serianimatus）、ストレプトマイセス・セタエ（Streptomyces  setae）、ストレプトマイセス・セトネンシス（Streptomyces  setonensis）、ストレプトマイセス・セトニイ（Streptomyces  setonii）、ストレプトマイセス・シャンキシエンシス（Streptomyces  shaanxiensis）、ストレプトマイセス・シオダエンシス（Streptomyces  shiodaensis）、ストレプトマイセス・ショウドエンシス（Streptomyces  showdoensis）、ストレプトマイセス・シンデネンシス（Streptomyces  sindenensis）、ストレプトマイセス・シオヤエンシス（Streptomyces  sioyaensis）、ストレプトマイセス・ソディイフィルス（Streptomyces  sodiiphilus）、ストレプトマイセス・ソマリエンシス（Streptomyces  somaliensis）、ストレプトマイセス・スパディシス（Streptomyces  spadicis）、ストレプトマイセス・スパーソゲネス（Streptomyces  sparsogenes）、ストレプトマイセス・スパーサス（Streptomyces  sparsus）、ストレプトマイセス・スペシアリス（Streptomyces  specialis）、ストレプトマイセス・スペクタビリス（Streptomyces  spectabilis）、ストレプトマイセス・スペイボナエ（Streptomyces  speibonae）、ストレプトマイセス・スフェロイデス（Streptomyces  spheroides）、ストレプトマイセス・スピニクロモゲネス（Streptomyces  spinichromogenes）、ストレプトマイセス・スピニコウマレンシス（Streptomyces  spinicoumarensis）、ストレプトマイセス・スピノベルコサス（Streptomyces  spinoverrucosus）、ストレプトマイセス・スピラリス（Streptomyces  spiralis）、ストレプトマイセス・スピロバーティシラタス（Streptomyces  spiroverticillatus）、ストレプトマイセス・スポンギアエ（Streptomyces  spongiae）、ストレプトマイセス・スポロシネレウス（Streptomyces  sporocinereus）、ストレプトマイセス・スポロクリベイタス（Streptomyces  sporoclivatus）、ストレプトマイセス・スポロラベウス（Streptomyces  spororaveus）、ストレプトマイセス・スポロベルコサス（Streptomyces  sporoverrucosus）、ストレプトマイセス・ステフィスバーゲンシス（Streptomyces  steffisburgensis）、ストレプトマイセス・ステフィスバーゲンシス・サブスピーシーズ・ステフィスバーゲンシス（Streptomyces  steffisburgensis  subsp.  steffisburgensis）、ストレプトマイセス・ステリスカビエイ（Streptomyces  stelliscabiei）、ストレプトマイセス・ストラミネウス（Streptomyces  stramineus）、ストレプトマイセス・サブルティラス（Streptomyces  subrutilus）、ストレプトマイセス・サダネンシス（Streptomyces  sudanensis）、ストレプトマイセス・スルフォノファシエンス（Streptomyces  sulfonofaciens）、ストレプトマイセス・スルフレウス（Streptomyces  sulphureus）、ストレプトマイセス・スビセウス（Streptomyces  sviceus）、ストレプトマイセス・シンネマトフォルマンス（Streptomyces  synnematoformans）、ストレプトマイセス・タナシエンシス（Streptomyces  tanashiensis）、ストレプトマイセス・タナシエンシス・サブスピーシーズ・セファロマイセティカス（Streptomyces  tanashiensis  subsp.  cephalomyceticus）、ストレプトマイセス・タテヤメンシス（Streptomyces  tateyamensis）、ストレプトマイセス・トウリカス（Streptomyces  tauricus）、ストレプトマイセス・テンダエ（Streptomyces  tendae）、ストレプトマイセス・テネブラリウス（Streptomyces  tenebrarius）、ストレプトマイセス・テンジマリエンシス（Streptomyces  tenjimariensis）、ストレプトマイセス・ターミタム（Streptomyces  termitum）、ストレプトマイセス・テスタセウス（Streptomyces  testaceus）、ストレプトマイセス・テタヌセムス（Streptomyces  tetanusemus）、ストレプトマイセス・サーモアルカリトラレンス（Streptomyces  thermoalcalitolerans）、ストレプトマイセス・サーモアトロビリディス（Streptomyces  thermoatroviridis）、ストレプトマイセス・サーモカルボキシドボランス（Streptomyces  thermocarboxydovorans）、ストレプトマイセス・サーモカルボキシダス（Streptomyces  thermocarboxydus）、ストレプトマイセス・サーモカスタネウス（Streptomyces  thermocastaneus）、ストレプトマイセス・サーモコエルレセンス（Streptomyces  thermocoerulescens）、ストレプトマイセス・サーモコプロフィラス（Streptomyces  thermocoprophilus）、ストレプトマイセス・サーモシアネオマキュレイタス（Streptomyces  thermocyaneomaculatus）、ストレプトマイセス・サーモシアネオビオラセウス（Streptomyces  thermocyaneoviolaceus）、ストレプトマイセス・サーモディアステイティカス（Streptomyces  thermodiastaticus）、ストレプトマイセス・サーモフラバス（Streptomyces  thermoflavus）、ストレプトマイセス・サーモグリセビオラセウス（Streptomyces  thermogriseoviolaceus）、ストレプトマイセス・サーモグリセウス（Streptomyces  thermogriseus）、ストレプトマイセス・サーモハイグロスコピカス・サブスピーシーズ・ラビギノサス（Streptomyces  thermohygroscopicus  subsp.  rubiginosus）、ストレプトマイセス・サーモリラシナス（Streptomyces  thermolilacinus）、ストレプトマイセス・サーモリネアタス（Streptomyces  thermolineatus）、ストレプトマイセス・サーモルテウス（Streptomyces  thermoluteus）、���トレプトマイセス・サーモルテウス・サブスピーシーズ・フスカス（Streptomyces  thermoluteus  subsp.  fuscus）、ストレプトマイセス・サーモニトリフィカンス（Streptomyces  thermonitrificans）、ストレプトマイセス・サーモオリバセウス・サブスピーシーズ・フスカス（Streptomyces  thermoolivaceus  subsp.  fuscus）、ストレプトマイセス・サーモオリバセウス・サブスピーシーズ・サーモオリバセウス（Streptomyces  thermoolivaceus  subsp.  thermoolivaceus）、ストレプトマイセス・サーモフィラス（Streptomyces  thermophilus）、ストレプトマイセス・サーモスピノシスポラス（Streptomyces  thermospinosisporus）、ストレプトマイセス・サーモトレランス（Streptomyces  thermotolerans）、ストレプトマイセス・サーモビオラセウス（Streptomyces  thermoviolaceus）、ストレプトマイセス・サーモビオラセウス・サブスピーシーズ・アピンゲンス（Streptomyces  thermoviolaceus  subsp.  apingens）、ストレプトマイセス・サーモビオラセウス・サブスピーシーズ・サーモビオラセウス（Streptomyces  thermoviolaceus  subsp.  thermoviolaceus）、ストレプトマイセス・サーモバルガリス（Streptomyces  thermovulgaris）、ストレプトマイセス・シングヒレンシス（Streptomyces  thinghirensis）、ストレプトマイセス・チオルテウス（Streptomyces  thioluteus）、ストレプトマイセス・スレオマイセティカス（Streptomyces  threomyceticus）、ストレプトマイセス・トルロサス（Streptomyces  torulosus）、ストレプトマイセス・トサエンシス（Streptomyces  tosaensis）、ストレプトマイセス・トキシファーティリス（Streptomyces  toxifertilis）、ストレプトマイセス・トキシトリシニ（Streptomyces  toxytricini）、ストレプトマイセス・トヨカエンシス（Streptomyces  toyocaensis）、ストレプトマイセス・トリアングラタス（Streptomyces  triangulatus）、ストレプトマイセス・トリカラー（Streptomyces  tricolor）、ストレプトマイセス・トリカラミニカス（Streptomyces  triculaminicus）、ストレプトマイセス・トリオスティニカス（Streptomyces  triostinicus）、ストレプトマイセス・トリトレランス（Streptomyces  tritolerans）、ストレプトマイセス・ツキヨネンシス（Streptomyces  tsukiyonensis）、ストレプトマイセス・ツシマエンシス（Streptomyces  tsusimaensis）、ストレプトマイセス・チュバーシディカス（Streptomyces  tubercidicus）、ストレプトマイセス・ツイラス（Streptomyces  tuirus）、ストレプトマイセス・ツメマセランス（Streptomyces  tumemacerans）、ストレプトマイセス・ツムリ（Streptomyces  tumuli）、ストレプトマイセス・ツーギディスカビエス（Streptomyces  turgidiscabies）、ストレプトマイセス・アムブリナス（Streptomyces  umbrinus）、ストレプトマイセス・アムブロサス（Streptomyces  umbrosus）、ストレプトマイセス・バリアビィス（Streptomyces  variabilis）、ストレプトマイセス・バリエガタス（Streptomyces  variegatus）、ストレプトマイセス・バリウス（Streptomyces  varius）、ストレプトマイセス・バーソビエンシス（Streptomyces  varsoviensis）、ストレプトマイセス・バスタス（Streptomyces  vastus）、ストレプトマイセス・ベロサス（Streptomyces  vellosus）、ストレプトマイセス・ベンダーゲンシス（Streptomyces  vendargensis）、ストレプトマイセス・ベネズエラエ（Streptomyces  venezuelae）、ストレプトマイセス・ベルネ（Streptomyces  verne）、ストレプトマイセス・バーシペリス（Streptomyces  versipellis）、ストレプトマイセス・バーティシレイタス（Streptomyces  verticillatus）、ストレプトマイセス・バーティシラス（Streptomyces  verticillus）、ストレプトマイセス・ビアトナメンシス（Streptomyces  vietnamensis）、ストレプトマイセス・ビナセウス（Streptomyces  vinaceus）、ストレプトマイセス・ビナセウスドラッパス（Streptomyces  vinaceusdrappus）、ストレプトマイセス・ビオラセオクロモゲネス（Streptomyces  violaceochromogenes）、ストレプトマイセス・ビオラセオラタス（Streptomyces  violaceolatus）、ストレプトマイセス・ビオラセオレクタス（Streptomyces  violaceorectus）、ストレプトマイセス・ビオラセオルバー（Streptomyces  violaceoruber）、ストレプトマイセス・ビオラセオルビダス（Streptomyces  violaceorubidus）、ストレプトマイセス・ビオラセウス（Streptomyces  violaceus）、ストレプトマイセス・ビオラセウスニガー（Streptomyces  violaceusniger）、ストレプトマイセス・ビオラルス（Streptomyces  violarus）、ストレプトマイセス・ビオラセンス（Streptomyces  violascens）、ストレプトマイセス・ビオレンス（Streptomyces  violens）、ストレプトマイセス・ビオロルーベンス（Streptomyces  violorubens）、ストレプトマイセス・ビレンス（Streptomyces  virens）、ストレプトマイセス・バーギニアエ（Streptomyces  virginiae）、ストレプトマイセス・バーギニアエ・サブスピーシーズ・リポキサエ（Streptomyces  virginiae  subsp.  lipoxae）、ストレプトマイセス・ビリダンス（Streptomyces  viridans）、ストレプトマイセス・ビリディファシエンス（Streptomyces  viridifaciens）、ストレプトマイセス・ビリディフラバス（Streptomyces  viridiflavus）、ストレプトマイセス・ビリディス（Streptomyces  viridis）、ストレプトマイセス・ビリディビオラセウス（Streptomyces  viridiviolaceus）、ストレプトマイセス・ビリドブルンネウス（Streptomyces  viridobrunneus）、ストレプトマイセス・ビリドクロモゲネス（Streptomyces  viridochromogenes）、ストレプトマイセス・ビリドクロモゲネス・サブスピーシーズ・コマベンシス（Streptomyces  viridochromogenessubsp.  komabensis）、ストレプトマイセス・ビリドクロモゲネス・サブスピーシーズ・サルフォマイシニ（Streptomyces  viridochromogenes  subsp.  sulfomycini）、ストレプトマイセス・ビリドディアステイティカス（Streptomyces  viridodiastaticus）、ストレプトマイセス・ビリドゲネス（Streptomyces  viridogenes）、ストレプトマイセス・ビリドスポラス（Streptomyces  viridosporus）、ストレプトマイセス・ビリドバールコサス（Streptomyces  viridoverrucosus）、ストレプトマイセス・ビタミノフィラス（Streptomyces  vitaminophilus）、ストレプトマイセス・バルガリス（Streptomyces  vulgaris）、ストレプトマイセス・ウェドモレンシス（Streptomyces  wedmorensis）、ストレプトマイセス・ウェリングトニアエ（Streptomyces  wellingtoniae）、ストレプトマイセス・ウェラエンシス（Streptomyces  werraensis）、ストレプトマイセス・ウィルモレイ（Streptomyces  willmorei）、ストレプトマイセス・ウィスターリオプシス（Streptomyces  wistariopsis）、ストレプトマイセス・ウーレンシス（Streptomyces  woolensis）、ストレプトマイセス・キサントクロモゲネス（Streptomyces  xanthochromogenes）、ストレプトマイセス・キサントシディカス（Streptomyces  xanthocidicus）、ストレプトマイセス・キサントリティカス（Streptomyces  xantholiticus）、ストレプトマイセス・キサントファエウス（Streptomyces  xanthophaeus）、ストレプトマイセス・キシアメネンシス���Streptomyces  xiamenensis）、ストレプトマイセス・キシングハイエンシス（Streptomyces  xinghaiensis）、ストレプトマイセス・キシロファガス（Streptomyces  xylophagus）、ストレプトマイセス・ヤングリネンシス（Streptomyces  yanglinensis）、ストレプトマイセス・ヤニイ（Streptomyces  yanii）、ストレプトマイセス・ヤテンシス（Streptomyces  yatensis）、ストレプトマイセス・ヤオチョネンシス（Streptomyces  yeochonensis）、ストレプトマイセス・ヤレバネンシス（Streptomyces  yerevanensis）、ストレプトマイセス・ヨグヤカーテンシス（Streptomyces  yogyakartensis）、ストレプトマイセス・ヨコスカネンシス（Streptomyces  yokosukanensis）、ストレプトマイセス・ヨウソウフィエンシス（Streptomyces  youssoufiensis）、ストレプトマイセス・ユンナネンシス（Streptomyces  yunnanensis）、ストレプトマイセス・ザオマイセティカス（Streptomyces  zaomyceticus）、ストレプトマイセス・ザレンシス（Streptomyces  zelensis）、ストレプトマイセス・ジンシレシステンス（Streptomyces  zinciresistens）等が挙げられる。
【００６９】〔ゲオバシラス属〕  ゲオバシラス（Geobacillus）属に分類される微生物としては、例えば、ゲオバシラス・カルドプロテオライティカス（Geobacillus  caldoproteolyticus）、ゲオバシラス・カルドキシロシライティカス（Geobacillus  caldoxylosilyticus）、ゲオバシラス・デビリス（Geobacillus  debilis）、ゲオバシラス・ガラクトシダシウス（Geobacillus  galactosidasius）、ゲオバシラス・ガーゲンシス（Geobacillus  gargensis）、ゲオバシラス・ジュラシカス（Geobacillus  jurassicus）、ゲオバシラス・カウストフィラス（Geobacillus  kaustophilus）、ゲオバシラス・リトゥアニカス（Geobacillus  lituanicus）、ゲオバシラス・パリダス（Geobacillus  pallidus）、ゲオバシラス・ステアロサーモフィラス（Geobacillus  stearothermophilus）、ゲオバシラス・ストロムボリエンシス（Geobacillus  stromboliensis）、ゲオバシラス・サブテラネウス（Geobacillus  subterraneus）、ゲオバシラス・テピダマンス（Geobacillus  tepidamans）、ゲオバシラス・サーモカテヌレイタス（Geobacillus  thermocatenulatus）、ゲオバシラス・サーモデニトリフィカンス（Geobacillus  thermodenitrificans）、ゲオバシラス・サーモデニトリフィカンス・サブスピーシーズ・カリダス（Geobacillus  thermodenitrificans  subsp.  calidus）、ゲオバシラス・サーモグルコシダシウス（Geobacillus  thermoglucosidasius）、ゲオバシラス・サーモレオボランス（Geobacillus  thermoleovorans）、ゲオバシラス・トエビ（Geobacillus  toebii）、ゲオバシラス・ウゼンシス（Geobacillus  uzensis）、ゲオバシラス・バルカニ（Geobacillus  vulcani）、ゲオバシラス・ザリハエ（Geobacillus  zalihae）等が挙げられる。
【００７０】〔ロドコッカス属〕  ロドコッカス（Rhodococcus）属に分類される微生物としては、例えば、ロドコッカス・ロドクロウス（Rhodococcus  rhodochrous）、ロドコッカス・エリスロポリス（Rhodococcus erythropolis）、ロドコッカス・エクイ（Rhodococcus equi）、ロドコッカス・ロドニ（Rhodococcus rhodnii）、  ロドコッカス・コラリヌス（Rhodococcus corallinus）、ロドコッカス・ルブロペルチンクタス（Rhodococcus rubropertinctus）、ロドコッカス・コプロフィラス（Rhodococcus coprophilus）、ロドコッカス・グロベルルス（Rhodococcus globerulus）、ロドコッカス・クロロフェノリカス（Rhodococcus chlorophenolicus）、ロドコッカス・ルテウス（Rhodococcus luteus）、ロドコッカス・アイシェンシス（Rhodococcus aichiensis）、ロドコッカス・チュブエンシス（Rhodococcus chubuensis）、ロドコッカス・マリス（Rhodococcus maris）、ロドコッカス・ファシエンス（Rhodococcus fascines）等が挙げられる。
【００７１】〔原核生物の好ましいその他の種〕  さらに、Magnetospirillum属に分類される微生物としてはMagnetospirillum  magneticum、Rhodospirillum属に分類される微生物としてはRhodospirillum  rubrum、Rhodospirillum  centenumおよびRhodospirillum  photometricum、Azospirillum属に分類される微生物としては、Azospirillum  lipoferumおよびAzospirillum  brasilense、Tistrella属に分類される微生物としてはTistrella  mobilis、Acidiphilium属に分類される微生物としてはAcidiphilium  cryptumおよびAcidiphilium  multivorum、Rhodobacter属に分類される微生物としてはRhodobacter  sphaeroidesおよびRhodobacter  capsulatus、Ruegeria属に分類される微生物としてはRuegeria  pomeroyi、Roseobacter属に分類される微生物としてはRoseobacter  denitrificansおよびRoseobacter  litoralis、Dinoroseobacter属に分類される微生物としてはDinoroseobacter  shibae、Phaeobacter属に分類される微生物としてはPhaeobacter  gallaeciensis、Octadecabacter属に分類される微生物としてはOctadecabacter  antarcticusおよびOctadecabacter  arcticus、Hyphomonas属に分類される微生物としてはHyphomonas  neptunium、Maricaulis属に分類される微生物としてはMaricaulis  maris、Hirschia属に分類される微生物としてはHirschia  baltica、Novosphingobium属に分類される微生物としてはNovosphingobium  aromaticivorans、Sphingopyxis属に分類される微生物としてはSphingopyxis  alaskensis、Sphingobium属に分類される微生物としてはSphingobium  japonicumおよびSphingobium  chlorophenolicum、Erythrobacter属に分類される微生物としてはErythrobacter  litoralis、Caulobacter属に分類される微生物としてはCaulobacter  crescentusおよびCaulobacter  segnis、Phenylobacterium属に分類される微生物としてはPhenylobacterium  zucineum、Asticcacaulis属に分類される微生物としてはAsticcacaulis  excentricus、Sinorhizobium属に分類される微生物としてはSinorhizobium  meliloti、Sinorhizobium  medicaeおよびSinorhizobium  fredii、Azorhizobium属に分類される微生物としてはAzorhizobium  caulinodans、Brucella属に分類される微生物としてはBrucella  melitensis、Brucella  abortus、Brucella  suis、Brucella  ovis、Brucella  canis、Brucella  microti、Brucella  pinnipedialisおよびBrucella  ceti、Aurantimonas属に分類される微生物としてはAurantimonas  manganoxydans、Bradyrhizobium属に分類される微生物としてはBradyrhizobium  japonicum、Agromonas属に分類される微生物としてはAgromonas  oligotrophica、Rhodopseudomonas属に分類される微生物としてはRhodopseudomonas  palustris、Nitrobacter属に分類される微生物としてはNitrobacter  winogradskyiおよびNitrobacter  hamburgensis、Methylobacterium属に分類される微生物としてはMethylobacterium  extorquens、Methylobacterium  radiotoleransおよびMethylobacterium  nodulans、Rhodomicrobium属に分類される微生物としてはRhodomicrobium  vannielii、Pelagibacterium属に分類される微生物としてはPelagibacterium  halotolerans、Parvibaculum属に分類される微生物としてはParvibaculum  lavamentivorans、Parvularcula属に分類される微生物としてはParvularcula  bermudensis、Burkholderia属に分類される微生物としてはBurkholderia  mallei、Burkholderia  pseudomallei、Burkholderia  thailandensis、Burkholderia  vietnamiensis、Burkholderia  cenocepacia、Burkholderia  ambifaria、Burkholderia  multivorans、Burkholderia  cepacia、Burkholderia  xenovorans、Burkholderia  phymatum、Burkholderia  phytofirmans、Burkholderia  glumae、Burkholderia  rhizoxinica、Burkholderia  gladioli、Burkholderia  phenoliruptrixおよびBurkholderia  oklahomensis、Ralstonia属に分類される微生物としてはRalstonia  solanacearum、Ralstonia  pickettiiおよびRalstonia  eutropha、Cupriavidus属に分類され��微生物としてはCupriavidus  metallidurans、Cupriavidus  taiwanensisおよびCupriavidus  necator、Polynucleobacter属に分類される微生物としてはPolynucleobacter  necessarius、Bordetella属に分類される微生物としてはBordetella  pertussis、Bordetella  parapertussis、Bordetella  petriiおよびBordetella  avium、Taylorella属に分類される微生物としてはTaylorella  equigenitalis、Alicycliphilus属に分類される微生物としてはAlicycliphilus  denitrificans、Delftia属に分類される微生物としてはDelftia  acidovorans、Ramlibacter属に分類される微生物としてはRamlibacter  tataouinensis、Rhodoferax属に分類される微生物としてはRhodoferax  ferrireducens、Variovorax属に分類される微生物としてはVariovorax  paradoxus、Polaromonas属に分類される微生物としてはPolaromonas  naphthalenivorans、Acidovorax属に分類される微生物としてはAcidovorax  citrulli、Acidovorax  ebreusおよびAcidovorax  avenae、Verminephrobacter属に分類される微生物としてはVerminephrobacter  eiseniae、Herminiimonas属に分類される微生物としてはHerminiimonas  arsenicoxydans、Herbaspirillum属に分類される微生物としてはHerbaspirillum  seropedicae、Collimonas属に分類される微生物としてはCollimonas  fungivorans、Chromobacterium属に分類される微生物としてはChromobacterium  violaceum、Laribacter属に分類される微生物としてはLaribacter  hongkongensis、Pseudogulbenkiania属に分類される微生物としてはPseudogulbenkiania  ferrooxidans、Nitrosomonas属に分類される微生物としてはNitrosomonas  europaea、Nitrosospira属に分類される微生物としてはNitrosospira  multiformis、Aromatoleum属に分類される微生物としてはAromatoleum  aromaticum、Dechloromonas属に分類される微生物としてはDechloromonas  aromatica、Azospira  (Dechlorosoma)属に分類される微生物としてはAzospira  oryzae(Dechlorosoma  suillum)、Rheinheimera属に分類される微生物としてはRheinheimera  nanhaiensis、Nitrosococcus属に分類される微生物としてはNitrosococcus  oceani、Halorhodospira属に分類される微生物としてはHalorhodospira  halophila、Xanthomonas属に分類される微生物としてはXanthomonas  campestris、Xanthomonas  axonopodis、Xanthomonas  oryzae、Xanthomonas  albilineansおよびXanthomonas  citri、Stenotrophomonas属に分類される微生物としてはStenotrophomonas  maltophilia、Pseudoxanthomonas属に分類される微生物としてはPseudoxanthomonas  suwonensisおよびPseudoxanthomonas  spadix、Francisella属に分類される微生物としてはFrancisella  tularensisおよびFrancisella  novicida、Cycloclasticus  属に分類される微生物としてはCycloclasticus  zancles、Hahella属に分類される微生物としてはHahella  chejuensis、Halomonas属に分類される微生物としてはHalomonas  elongata、Alcanivorax属に分類される微生物としてはAlcanivorax  borkumensisおよびAlcanivorax  dieselolei、Kangiella属に分類される微生物としてはKangiella  koreensis、Azotobacter属に分類される微生物としてはAzotobacter  vinelandii、Psychrobacter属に分類される微生物としてはPsychrobacter  arcticusおよびPsychrobacter  cryohalolentis、Alishewanella属に分類される微生物としてはAlishewanella  jeotgali、Alteromonas属に分類される微生物としてはAlteromonas  macleodii、Glaciecola属に分類される微生物としてはGlaciecola  nitratireducens、Glaciecola  psychrophilaおよびGlaciecola  punicea、Marinobacter属に分類される微生物としてはMarinobacter  aquaeolei、Marinobacter  hydrocarbonoclasticus、Marinobacter  adhaerens、Marinobacter  algicolaおよびMarinobacter  manganoxydans、Marinobacterium属に分類される微生物としてはMarinobacterium  stanieri、Saccharophagus属に分類される微生物としてはSaccharophagus  degradans、Ferrimonas属に分類される微生物としてはFerrimonas  balearica、Idiomarina属に分類される微生物としてはIdiomarina  loihiensisおよびIdiomarina  baltica、Colwellia属に分類される微生物としてはColwellia  psychrerythraea、Pseudoalteromonas属に分類される微生物としてはPseudoalteromonas  haloplanktis、Pseudoalteromonas  atlanticaおよびPseudoalteromonas  tunicata、Vibrio属に分類される微生物としてはVibrio  parahaemolyticus、Vibrio  vulnificus、Vibrio  harveyi、Vibrio  furnissii、Vibrio  tubiashii、Vibrio  sinaloensis、Vibrio  rotiferianus、Vibrio  orientalis、Vibrio  harveyi、Vibrio  coralliilyticus、Vibrio  caribbenthicus、Vibrio  brasiliensisおよびVibrio  alginolyticus、Photobacterium属に分類される微生物としてはPhotobacterium  profundum、Aeromonas属に分類される微生物としてはAeromonas  hydrophila、Aeromonas  salmonicidaおよびAeromonas  veronii、Salinisphaera属に分類される微生物としてはSalinisphaera  shabanensis、Legionella属に分類される微生物としてはLegionella  pneumophilaおよびLegionella  longbeachae、Coxiella属に分類される微生物としてはCoxiella  burnetii、Desulfococcus属に分類される微生物としてはDesulfococcus  oleovorans、Desulfobacterium属に分類される微生物としてはDesulfobacterium  autotrophicum、Desulfatibacillum属に分類される微生物としてはDesulfatibacillum  alkenivorans、Desulfobulbus属に分類される微生物としてはDesulfobulbus  propionicus、Desulfarculus属に分類される微生物としてはDesulfarculus  baarsii、Geobacter属に分類される微生物としてはGeobacter  metallireducens、Geobacter  uraniireducensおよびGeobacter  bemidjiensis、Syntrophobacter属に分類される微生物としてはSyntrophobacter  fumaroxidans、Syntrophus属に分類される微生物としてはSyntrophus  aciditrophicus、Desulfomonile属に分類される微生物としてはDesulfomonile  tiedjei、Bdellovibrio属に分類される微生物としてはBdellovibrio  bacteriovorusおよびBdellovibrio  exovorus、Bacteriovorax属に分類される微生物としてはBacteriovorax  marinus、Stigmatella属に分類される微生物としてはStigmatella  aurantiaca、Myxococcus属に分類される微生物としてはMyxococcus  xanthusおよびMyxococcus  fulvus、Anaeromyxobacter属に分類される微生物としてはAnaeromyxobacter  dehalogenans、Sorangium属に分類される微生物としてはSorangium  cellulosum、Haliangium属に分類される微生物としてはHaliangium  ochraceum、Acidobacterium属に分類される微生物としてはAcidobacterium  capsulatum、Granulicella属に分類される微生物としてはGranulicella  tundricola、Ilumatobacter属に分類される微生物としてはIlumatobacter  coccineum、Streptosporangium属に分類される微生物としてはStreptosporangium  roseum、Nocardiopsis属に分類される微生物としてはNocardiopsis  dassonvillei、Thermobifida属に分類される微生物としてはThermobifida  fusca、Thermomonospora属に分類される微生物としてはThermomonospora  curvata、Pseudonocardia属に分類される微生物としてはPseudonocardia  dioxanivorans、Amycolatopsis属に分類される微生物としてはAmycolatopsis  mediterranei、Saccharomonospora属に分類される微生物としてはSaccharomonospora  viridisおよびSaccharomonospora  xinjiangensis、Saccharopolyspora属に分類される微生物としてはSaccharopolyspora  erythraeaおよびSaccharopolyspora  spinosa、Thermobispora属に分類される微生物としてはThermobispora  bispora、Actinosynnema属に分類される微生物としてはActinosynnema  mirum、Micromonospora属に分類される微生物としてはMicromonospora  aurantiaca、Salinispora属に分類される微生物としてはSalinispora  tropicaおよびSalinispora  arenicola、Verrucosispora属に分類される微生物としてはVerrucosispora  maris、Kribbella属に分類される微生物としてはKribbella  flavida、Corynebacterium属に分類される微生物としてはCorynebacterium  jeikeium、Corynebacterium  urealyticum、Corynebacterium  glutamicum、Corynebacterium  ammoniagenesおよびCorynebacterium  kroppenstedtii、Nocardia属に分類される微生物としてはNocardia  farcinica、Nocardia  brasiliensisおよびNocardia  cyriacigeorgica、Gordonia属に分類される微生物としてはGordonia  bronchialis、Gordonia  neofelifaecisおよびGordonia  terrae、Dietzia属に分類される微生物としてはDietzia  cinnamea、Mycobacterium属に分類される微生物としてはMycobacterium  tuberculosis、Mycobacterium  bovis、Mycobacterium  leprae、Mycobacterium  avium、Mycobacterium  smegmatis、Mycobacterium  ulcerans、Mycobacterium  vanbaalenii、Mycobacterium  gilvum、Mycobacterium  abscessus、Mycobacterium  marinu、Mycobacterium  massiliense、Mycobacterium  phlei、Mycobacterium  thermoresistibile、Mycobacterium  tusciae、Mycobacterium  xenopiおよびMycobacterium  rhodesiae、Amycolicicoccus属に分類される微生物としてはAmycolicicoccus  subflavus、Tsukamurella属に分類される微生物としてはTsukamurella  paurometabola、Segniliparus属に分類される微生物としてはSegniliparus  rotundus、Microbacterium属に分類される微生物としてはMicrobacterium  testaceum、Micrococcus属に分類される微生物としてはMicrococcus  luteus、Arthrobacter属に分類される微生物としてはArthrobacter  arilaitensis、Arthrobacter  chlorophenolicus、Arthrobacter  globiformisおよびArthrobacter  phenanthrenivorans、Renibacterium属に分類される微生物としてはRenibacterium  salmoninarum、Kocuria属に分類される微生物としてはKocuria  rhizophila、Kytococcus属に分類される微生物としてはKytococcus  sedentarius、Cellulomonas属に分類される微生物としてはCellulomonas  fimi、Intrasporangium属に分類される微生物としてはIntrasporangium  calvum、Serinicoccus属に分類される微生物としてはSerinicoccus  profundi、Frankia属に分類される微生物としてはFrankia  alni、Acidothermus属に分類される微生物としてはAcidothermus  cellulolyticus、Nakamurella属に分類される微生物としてはNakamurella  multipartita、Geodermatophilus属に分類される微生物としてはGeodermatophilus  obscurus、Stackebrandtia属に分類される微生物としてはStackebrandtia  nassauensis、Catenulispora属に分類される微生物としてはCatenulispora  acidiphila、Rubrobacter属に分類される微生物としてはRubrobacter  xylanophilus、Conexibacter属に分類される微生物としてはConexibacter  woesei、Oceanobacillus属に分類される微生物としてはOceanobacillus  iheyensis、Lysinibacillus属に分類される微生物としてはLysinibacillus  sphaericus、Halobacillus属に分類される微生物としてはHalobacillus  halophilus、Alicyclobacillus属に分類される微生物としてはAlicyclobacillus  acidocaldarius、Kyrpidia属に分類される微生物としてはKyrpidia  tusci、Brevibacillus属に分類される微生物としてはBrevibacillus  choshinensis、Lactobacillus属に分類される微生物としてはLactobacillus  buchneri、、Clostridium属に分類される微生物としてはClostridium  acetobutylicum、Clostridium  perfringens、Clostridium  kluyveri、Clostridium  cellulovorans、Clostridium  difficileおよびClostridium  sticklandii、Alkaliphilus属に分類される微生物としてはAlkaliphilus  metalliredigensおよびAlkaliphilus  oremlandii、Syntrophomonas属に分類される微生物としてはSyntrophomonas  wolfei、Syntrophothermus属に分類される微生物としてはSyntrophothermus  lipocalidus、Eubacterium属に分類される微生物としてはEubacterium  rectaleおよびEubacterium  limosum、Desulfitobacterium属に分類される微生物としてはDesulfitobacterium  hafniense、Desulfotomaculum属に分類される微生物としてはDesulfotomaculum  reducens、Pelotomaculum属に分類される微生物としてはPelotomaculum  thermopropionicum、Butyrivibrio属に分類される微生物としてはButyrivibrio  proteoclasticus、Roseburia属に分類される微生物としてはRoseburia  hominis、Oscillibacter属に分類される微生物としてはOscillibacter  valericigenes、Thermoanaerobacter属に分類される微生物としてはThermoanaerobacter  tengcongensis、Carboxydothermus属に分類される微生物としてはCarboxydothermus  hydrogenoformans、Natranaerobius属に分類される微生物としてはNatranaerobius  thermophilus、Haliscomenobacter属に分類される微生物としてはHaliscomenobacter  hydrossis、Porphyromonas属に分類される微生物としてはPorphyromonas  gingivalisおよびPorphyromonas  asaccharolytica、Odoribacter属に分類される微生物としてはOdoribacter  splanchnicus、Spirosoma属に分類される微生物としてはSpirosoma  linguale、Runella属に分類される微生物としてはRunella  slithyformis、Deinococcus属に分類される微生物としてはDeinococcus  radiodurans、Deinococcus  geothermalis、Deinococcus  deserti、Deinococcus  maricopensis、Deinococcus  proteolyticusおよびDeinococcus  gobiensis、Thermus属に分類される微生物としてはThermus  thermophilus、Thermus  agnaticus、Thermus  flavus、Thermus  caldophilus、Thermus  ruderおよびThermus  scotoductus、Meiothermus属に分類される微生物としてはMeiothermus  ruberおよびMeiothermus  silvanus、Oceanithermus属に分類される微生物としてはOceanithermus  profundus、Marinithermus属に分類される微生物としてはMarinithermus  hydrothermalis、Gemmatimonas属に分類される微生物としてはGemmatimonas  aurantiaca、Fusobacterium属に分類される微生物としてはFusobacterium  nucleatum、Ilyobacter属に分類される微生物としてはIlyobacter  polytropus、Roseiflexus属に分類される微生物としてはRoseiflexus  castenholzii、Herpetosiphon属に分類される微生物としてはHerpetosiphon  aurantiacus、Thermomicrobium属に分類される微生物としてはThermomicrobium  roseum、Thermotoga属に分類される微生物としてはThermotoga  lettingae、Thermosipho属に分類される微生物としてはThermosipho  melanesiensisおよびThermosipho  africanus、Fervidobacterium属に分類される微生物としてはFervidobacterium  nodosum、Deferribacter属に分類される微生物としてはDeferribacter  desulfuricans、Calditerrivibrio属に分類される微生物としてはCalditerrivibrio  nitroreducens、Flexistipes属に分類される微生物としてはFlexistipes  sinusarabici、Metallosphaera属に分類される微生物としてはMetallosphaera  sedula、Aeropyrum属に分類される微生物としてはAeropyrum  pernix、Pyrobaculum属に分類される微生物としてはPyrobaculum  aerophilum、Pyrobaculum  islandicum、Pyrobaculum  calidifontisおよびPyrobaculum  neutrophilum、Caldivirga属に分類される微生物としてはCaldivirga  maquilingensis、Vulcanisaeta属に分類される微生物としてはVulcanisaeta  distributa、Acidilobus属に分類される微生物としてはAcidilobus  saccharovorans、Haloarcula属に分類される微生物としてはHaloarcula  marismortui、Haloquadratum属に分類される微生物としてはHaloquadratum  walsbyi、Natronomonas属に分類される微生物としてはNatronomonas  pharaonis、Halorubrum属に分類される微生物としてはHalorubrum  lacusprofundi、Haloterrigena属に分類される微生物としてはHaloterrigena  turkmenica、Natrialba属に分類される微生物としてはNatrialba  magadii、Halalkalicoccus属に分類される微生物としてはHalalkalicoccus  jeotgali、Halogeometricum属に分類される微生物としてはHalogeometricum  borinquense、Thermoplasma属に分類される��生物としてはThermoplasma  acidophilumおよびThermoplasma  volcanium、Picrophilus属に分類される微生物としてはPicrophilus  torridus、Ferroplasma属に分類される微生物としてはFerroplasma  acidarmanus、Archaeoglobus属に分類される微生物としてはArchaeoglobus  fulgidusおよびArchaeoglobus  veneficus、Ferroglobus属に分類される微生物としてはFerroglobus  placidus、Polymorphum属に分類される微生物としてはPolymorphum  gilvum、Micavibrio属に分類される微生物としてはMicavibrio  aeruginosavorus、Simiduia属に分類される微生物としてはSimiduia  agarivorans、Leptothrix属に分類される微生物としてはLeptothrix  cholodnii、Thiomonas属に分類される微生物としてはThiomonas  intermedia、Rubrivivax属に分類される微生物としてはRubrivivax  gelatinosus、Methylibium属に分類される微生物としてはMethylibium  petroleiphilum、Anaerococcus属に分類される微生物としてはAnaerococcus  prevotiiが特に好ましい。
【００７２】［真核生物の好ましい目］  真核生物に属する微生物としては、ユーロチウム目（Eurotiales）、サッカロミケス目（Saccharomycetales）、カプノディウム目（Capnodiales）、プレオスポラ目（Pleosporales）、クロボキン目（Ustilaginales）、シロキクラゲ目（Tremellales）、シストフィロバシディウム目（Cystofilobasidiales）、ビョウタケ目（Helotiales）、チャワンタケ目（Pezizales）、サルノコシカケ目（Polyporales）、ハラタケ目（Agaricales）、プクシニア目（Pucciniales）、マグナポルテ目（Magnaporthales）、フンタマカビ目（Sordariales）、ミクロアスクス目（Microascales）、ニクザキン目（Hypocreales）、スポリディオボルス目（Sporidiobolales）、モチビョウキン目（Exobasidiales）、マラッセジア目（Malasseziales）、ホネタケ目（Onygenales）、ラブルベニア目（Laboulbeniales）およびケカビ目(Mucorales)に属する微生物が挙げられる。
【００７３】  さらに実験的にメタクリル酸誘導体の生成が確認できている特に好ましい微生物としてはユーロチウム目（Eurotiales）およびサッカロミケス目（Saccharomycetales）に属する微生物である。
【００７４】［真核生物の好ましい科および属］  カプノディウム目（Capnodiales）に分類される微生物としてはMycosphaerella属、Zygophiala属、Zymoseptoria属、Cladosporium属およびCapnodium属、プレオスポラ目（Pleosporales）に分類される微生物としてはPreussia属、Brachycladium属、Cochliobolus属、Pleospora属、Pleospora属、Leptosphaeria属、Leptosphaerulina属、Phaeosphaeria属およびPyrenophora属、クロボキン目（Ustilaginales）に分類される微生物としてはPseudozyma属、Tolyposporium属およびUstilago属、シロキクラゲ目（Tremellales）に分類される微生物としてはBulleromyces属、Filobasidiella（Cryptococcus）属、Bullera属、Fellomyces属、Kockovaella属およびTrichosporon属、シストフィロバシディウム目（Cystofilobasidiales）に分類される微生物Mrakia属、Xanthophyllomyces属およびUdeniomyces属、ビョウタケ目（Helotiales）に分類される微生物としてはBotryotinia属、Monilia属、Monilinia属およびSclerotinia属、チャワンタケ目（Pezizales）に分類される微生物としてはPeziza属、Morchella属、Helvella属、Ascodesmis属、Ascobolus属およびTuber属、サルノコシカケ目（Polyporales）に分類される微生物としてはMycoleptodonoides属、Mycoaciella属、Parmastomyces 属およびPostia属、ハラタケ目（Agaricales）に分類される微生物としてはArthromyces 属、Mycenoporella属、Laccaria属、Moniliophthora属、Coprinopsis属およびSchizophyllum属、プクシニア目（Pucciniales）に分類される微生物としてはPuccinia属、Melampsora属、Cronartium属、Cyttaria属、Coleosporium属、Blastospora属およびRavenelia属、マグナポルテ目（Magnaporthales）に分類される微生物としてはMagnaporthe属、フンタマカビ目（Sordariales）に分類される微生物としてはPodospora属、Neurospora属、Sordaria属、Chaetomium属、Thielavia属、Myceliophthora 属およびMonotosporella属、ミクロアスクス目（Microascales）に分類される微生物としてはMicroascus属、Nodulosphaeria属Okeanomyces属およびCeratocystis属、ニクザキン目（Hypocreales）に分類される微生物としてはFusarium属、Nectria属、Hypocrea属、Hypomyces属、Trichoderma属、Cordyceps属、Claviceps属およびAcremonium属、スポリディオボルス目（Sporidiobolales）に分類される微生物としてはRhodosporidium属、Rhodotorula属、Sporidiobolus属およびSporobolomyces属、モチビョウキン目（Exobasidiales）に分類される微生物としてはGraphiola属、Exobasidium属およびDicellomyces属、マラッセジア目（Malasseziales）に分類される微生物としてはMalassezia属、ホネタケ目（Onygenales）に分類される微生物としてはGymnoascus属、Eremascus属、Arthroderma属、Coccidioides属、Paracoccidioides属、Uncinocarpus属Trichophyton属およびAjellomyces属、ラブルベニア目（Laboulbeniales）に分類される微生物としてはRhachomyces属、Rickia属、Stigmatomyces属およびCeratomyces属、ケカビ目(Mucorales) に分類される微生物としてはAbsidia属、Mucor属、Rhizomucor属およびRhizopus属に属する微生物が挙げられる。  ユーロチウム目（Eurotiales）に分類される微生物としてはNeopetromyces属、Aspergillus属、Neosartorya属、Byssochlamys属、Emericella属、Eupenicillium属、Eurotium属、Hemicarpenteles属、Penicillium属、Talaromyces属およびMonascus属が挙げられる。  サッカロミケス目（Saccharomycetales）に分類される微生物としてはArthroascus属、Guilliermondella属、Clavispora属、Metschnikowia属、Lipomyces 属、Endomyces属、Ascoidea属、Cephaloascus属、Wickerhamiella属 、Zygoascus 属、Trichomonascus属 Aciculoconidium属、Ambrosiozyma属、Blastobotrys属、Botryozyma属、Brettanomyces属、Myxozyma属、Ogataea属、Komagataella属、Trigonopsis属、Schizoblastosporion属およびSympodiomyces属が挙げられる。さらに、サッカロミケス目（Saccharomycetales）に属する微生物で、好ましい微生物としては、サッカロミケス科（Saccharomycodaceae）、ピキア科（Pichiaceae）、ジポドアスクス科（Dipodascaceae）およびmitosporic Saccharomycetalesに分類される微生物が挙げられる。その科に属する微生物としてはHanseniaspora属、Kloeckera属、Saccharomycodes属、Nadsonia属、Ashbya属、Citeromyces属、Dekkera属、Issatchenkia属、Kluyveromyces属、Pachysolen属、Saccharomyces属、Saturnispora属、Tetrapisispora属、Torulaspora属、Zygosaccharomyces属、Zygotorulaspora属、Eremothecium属、Lachancea属、Vanderwaltozyma属、Naumovozyma属、Kazachstania属、Eremothecium属、Williopsis属、Pichia属、Yarrowia属、Dipodascus属、Arxula属、Galactomyces属、Geotrichum属、Babjevia属、Debaryomyces属、Schwanniomyces属、Priceomyces属、Yamadazyma属、Scheffersomyces属、Meyerozyma属、Lodderomyces属、Sporopachydermia属 およびCandida属が挙げられる。
【００７５】  真核生物に属するものの中で、その他の属としては、Botryosphaeria属、Helicomyces属、Aureobasidium属、Selenophoma 属、Melanotaenium属、Otospora属、Glomus属、Allomyces属、Rhizidiomyces属、Hyphochytrium属、Schizosaccharomyces属、Filobasidium属、Lophodermium属、Dothidea属、Oidium属、Amorphotheca属、Scytalidium属、Taphrina属、Strangospora属、Chytridium属、Pneumocystis属、Sclerotium属、Neolecta属、Septobasidium属、Xylaria属、Pestalotiopsis属、Phomopsis属、Sydowiella属、Coniochaetidium属、Sporothrix属、Moleospora 属、Verticillium属、Microascales属、Leucosporidium属、Microstroma属およびThraustochytrium属が挙げられる。
【００７６】  この中でも好ましい微生物は、分岐鎖アミノ酸の代謝経路中の酵素を有することが示唆されるZymoseptoria属、Phaeosphaeria属、Pyrenophora属、Ustilago属、Ashbya属、Kluyveromyces属、Saccharomyces属、Yarrowia属、Debaryomyces属、Scheffersomyces属、Meyerozyma属、Lodderomyces属、Candida属、Filobasidiella（Cryptococcus）属、Botryotinia属、Sclerotinia属、Tuber属、Postia属、Laccaria属、Moniliophthora属、Coprinopsis属、Schizophyllum属、Puccinia属、Magnaporthe属、Podospora属、Neurospora属、Sordaria属、Thielavia属、Myceliophthora属、Fusarium属、Nectria属、Malassezia属、Aspergillus属、Neosartorya属、Arthroderma属、Coccidioides属、Paracoccidioides属、Uncinocarpus属、Trichophyton属およびAjellomyces属に分類される微生物である。
【００７７】  さらに実験的にメタクリル酸誘導体の生成が確認できている特に好ましい微生物としては、Saccharomyces属、Candida属およびAspergillus属に分類される微生物である。
【００７８】［真核生物の好ましい種］〔サッカロマイセス属〕  サッカロマイセス（Saccharomyces）属に分類される微生物としては、例えば、サッカロマイセス・バーネティ（Saccharomyces  barnettii）、サッカロマイセス・バイヤヌス（Saccharomyces bayanus）、サッカロマイセス・バイヤヌス・バー・ウバルム（Saccharomyces bayanus var. uvarum）、サッカロマイセス・ボウラーディ（Saccharomyces boulardii）、サッカロマイセス・ブルデリ（Saccharomyces bulderi）、サッカロマイセス・カリオカヌス（Saccharomyces cariocanus）、サッカロマイセス・セレビッシェ（Saccharomyces cerevisiae）、サッカロマイセス・カステリイ（Saccharomyces castellii）、サッカロマイセス・ダイレネンシス（Saccharomyces dairenensis）、サッカロマイセス・ディアスタティカス（Saccharomyces diastaticus）、サッカロマイセス・ドウグラシ（Saccharomyces douglasii）、サッカロマイセス・エグジクス（Saccharomyces exiguus）、サッカロマイセス・ヒューマティカス（Saccharomyces humaticus）、サッカロマイセス・クルイベリ（Saccharomyces kluyveri）、サッカロマイセス・クドリアベゼビイ（Saccharomyces kudriavzevii）、サッカロマイセス・クナシレンシス（Saccharomyces kunashirensis）、サッカロマイセス・マティニアエ（Saccharomyces martiniae）、サッカロマイセス・ミカタエ（Saccharomyces mikatae）、サッカロマイセス・ナガニシイ（Saccharomyces naganishii）、サッカロマイセス・ノバルバリエタティス（Saccharomyces novalvarietatis）、サッカロマイセス・パラドキサス（Saccharomyces paradoxus）、サッカロマイセス・パストリアヌス（Saccharomyces pastorianus）、サッカロマイセス・ロシニイ（Saccharomyces rosinii）、サッカロマイセス・ロウクシイ（Saccharomyces rouxii）、サッカロマイセス・ステラタス（Saccharomyces stellatus）、サッカロマイセス・サーバジイ（Saccharomyces servazzii）、サッカロマイセス・スペンセロラム（Saccharomyces spencerorum）、サッカロマイセス・トランシバレンシス（Saccharomyces transvaalensis）、サッカロマイセス・ツリセンシス（Saccharomyces turicensis）、サッカロマイセス・ヤクシマエンシス・バー・ヤクシマエンシス（Saccharomyces yakushimaensis var. yakushimaensis）、サッカロマイセス・ユニスポラス（Saccharomyces unisporus）、サッカロマイセス・ウバラム（Saccharomyces uvarum）等が挙げられる。
【００７９】〔カンディダ属〕  カンディダ（Candida）属に分類される微生物としては、例えば、カンディダ・アアセリ（Candida  aaseri）、カンディダ・アフリカナ（Candida  africana）、カンディダ・アグリプティニア（Candida  aglyptinia）、カンディダ・アグレスティス（Candida  agrestis）、カンディダ・アカバネンシス（Candida  akabanensis）、カンディダ・アライ（Candida  alai）、カンディダ・アルビカンス（Candida  albicans）、カンディダ・アリシャニカ（Candida  alishanica）、カンディダ・アルロシフェリイ（Candida  allociferrii）、カンディダ・アマパエ（Candida  amapae）、カンディダ・アムブロシアエ（Candida  ambrosiae）、カンディダ・アムフィキシアエ（Candida  amphixiae）、カンディダ・アナトミアエ（Candida  anatomiae）、カンディダ・アンキュデンシス（Candida  ancudensis）、カンディダ・アンダマネンシス（Candida  andamanensis）、カンディダ・アングリカ（Candida  anglica）、カンディダ・アンネリセアエ（Candida  anneliseae）、カンディダ・アンティランカエ（Candida  antillancae）、カンディダ・アヌタエ（Candida  anutae）、カンディダ・アピコラ（Candida  apicola）、カンディダ・アピス（Candida  apis）、カンディダ・アピス・バー・アピス（Candida  apis  var.  apis）、カンディダ・アクアエテクストリス（Candida  aquaetextoris）、カンディダ・アラビノファーメンタンス（Candida  arabinofermentans）、カンディダ・アーカナ（Candida  arcana）、カンディダ・アスカラフィダラム（Candida  ascalaphidarum）、カンディダ・アジアティカ（Candida  asiatica）、カンディダ・アトビ（Candida  atbi）、カンディダ・アタカポラム（Candida  atakaporum）、カンディダ・アセンセンシス（Candida  athensensis）、カンディダ・アトランティカ（Candida  atlantica）、カンディダ・アトモスファエリカ（Candida  atmosphaerica）、カンディダ・オーリンギエンシス（Candida  auringiensis）、カンディダ・オーリス（Candida  auris）、カンディダ・オーリタ（Candida  aurita）、カンディダ・オーストロマリナ（Candida  austromarina）、カンディダ・アジマ（Candida  azyma）、カンディダ・バールカララデンシス（Candida  barrocoloradensis）、カンディダ・バティスタエ（Candida  batistae）、カンディダ・ビーチイ（Candida  beechii）、カンディダ・バータエ（Candida  bertae）、カンディダ・バーセティイ（Candida  berthetii）、カンディダ・ビトゥミニフィラ（Candida  bituminiphila）、カンディダ・ブラックウェラエ（Candida  blackwellae）、カンディダ・ブランキイ（Candida  blankii）、カンディダ・ブラッタエ（Candida  blattae）、カンディダ・ブラッタリアエ（Candida  blattariae）、カンディダ・ボヒエンシス（Candida  bohiensis）、カンディダ・ボイディニイ（Candida  boidinii）、カンディダ・ボカトラム（Candida  bokatorum）、カンディダ・ボレティコラ（Candida  boleticola）、カンディダ・ボリトセリ（Candida  bolitotheri）、カンディダ・ボンビ（Candida  bombi）、カンディダ・ボンビコラ（Candida  bombicola）、カンディダ・ボンダーゼウィアエ（Candida  bondarzewiae）、カンディダ・ボビナ（Candida  bovina）、カンディダ・ブリブロラム（Candida  bribrorum）、カンディダ・ブラムプティ（Candida  brumptii）、カンディダ・ブエナビスタエンシス（Candida  buenavistaensis）、カンディダ・ビネンシス（Candida  buinensis）、カンディダ・ブルルネンシス（Candida  bullrunensis）、カンディダ・ブティリ（Candida  butyri）、カ��ディダ・カカオイ（Candida  cacaoi）、カンディダ・カンバーラエンシス（Candida  canberraensis）、カンディダ・カンタレリ（Candida  cantarellii）、カンディダ・カリオシリグニコラ（Candida  cariosilignicola）、カンディダ・カーポフィラ（Candida  carpophila）、カンディダ・カリイコラ（Candida  caryicola）、カンディダ・カセイノリティカ（Candida  caseinolytica）、カンディダ・カステリ（Candida  castellii）、カンディダ・カストレンシス（Candida  castrensis）、カンディダ・カテヌラタ（Candida  catenulata）、カンディダ・ヴェルロリティカ（Candida  cellulolytica）、カンディダ・セラムバイセダラム（Candida  cerambycidarum）、カンディダ・チャウリオデス（Candida  chauliodes）、カンディダ・チッカサウォラム（Candida  chickasaworum）、カンディダ・チレンシス（Candida  chilensis）、カンディダ・チロプテロラム（Candida  chiropterorum）、カンディダ・チョクタウォラム（Candida  choctaworum）、カンディダ・チリソメリダラム（Candida  chrysomelidarum）、カンディダ・シドリ（Candida  cidri）、カンディダ・シフェリイ（Candida  ciferrii）、カンディダ・クレリダラム（Candida  cleridarum）、カンディダ・コイポメンシス（Candida  coipomensis）、カンディダ・コリキュロサ（Candida  colliculosa）、カンディダ・コングロバタ（Candida  conglobata）、カンディダ・コリダリ（Candida  corydali）、カンディダ・シリンドラセア（Candida  cylindracea）、カンディダ・ダジエンシス（Candida  dajiaensis）、カンディダ・ダニエリアエ（Candida  danieliae）、カンディダ・ダベンポーティ（Candida  davenportii）、カンディダ・ダビシアナ（Candida  davisiana）、カンディダ・デフォルマンス（Candida  deformans）、カンディダ・デンドリカ（Candida  dendrica）、カンディダ・デンドロネマ（Candida  dendronema）、カンディダ・デロドンティ（Candida  derodonti）、カンディダ・デザーティコラ（Candida  deserticola）、カンディダ・デデンシアエ（Candida  diddensiae）、カンディダ・デグビオエンシス（Candida  digboiensis）、カンディダ・ディバーサ（Candida  diversa）、カンディダ・ドッシイ（Candida  dosseyi）、カンディダ・ドリマイディス（Candida  drimydis）、カンディダ・ドロソフィラエ（Candida  drosophilae）、カンディダ・ドゥブリニエンシス（Candida  dubliniensis）、カンディダ・イアサネンシス（Candida  easanensis）、カンディダ・エダックス（Candida  edax）、カンディダ・エラテリダラム（Candida  elateridarum）、カンディダ・エレガンス（Candida  elegans）、カンディダ・エムベロラム（Candida  emberorum）、カンディダ・エンドマイチダラム（Candida  endomychidarum）、カンディダ・エントモフィラ（Candida  entomophila）、カンディダ・エピンギアエ（Candida  eppingiae）、カンディダ・エレモフィリア（Candida  eremophlia）、カンディダ・エルガテンシス（Candida  ergatensis）、カンディダ・エルノビイ（Candida  ernobii）、カンディダ・エチェルシイ（Candida  etchellsii）、カンディダ・エサノリカ（Candida  ethanolica）、カンディダ・ファマタ（Candida  famata）、カンディダ・ファマタ・バー・ファマタ（Candida  famata  var.  famata）、カンディダ・フェニカ（Candida  fennica）、カンディダ・ファーメンタティ（Candida  fermentati）、カンディダ・ファーメンティカレンス（Candida  fermenticarens）、カンディダ・フロリコラ（Candida  floricola）、カンディダ・フラビアティリス（Candida  fluviatilis）、カンディダ・フラギ（Candida  fragi）、カンディダ・フラギコラ（Candida  fragicola）、カンディダ・フレイシュシイ（Candida  freyschussii）、カンディダ・フレドリチ（Candida  friedrichii）、カンディダ・フリジョレンセンシス（Candida  frijolensensis）、カンディダ・フラクタス（Candida  fructus）、カンディダ・フカザワエ（Candida  fukazawae）、カンディダ・フクヤマネンシス（Candida  fukuyamanensis）、カンディダ・フィンフィコラ（Candida  fungicola）、カンディダ・フィジフォーマタ（Candidafusiformata）、カンディダ・ギラクタ（Candida  galacta）、カンディダ・ガリス（Candida  galis）、カンディダ・ガトゥネンシス（Candida  gatunensis）、カンディダ・ゲオチャレス（Candida  geochares）、カンディダ・ガーマニカ（Candida  germanica）、カンディダ・ガナエンシス（Candida  ghanaensis）、カンディダ・ギガンテンシス（Candida  gigantensis）、カンディダ・ガルブラタ（Candida  glabrata）、カンディダ・グラエボサ（Candida  glaebosa）、カンディダ・グロボサ（Candida  globosa）、カンディダ・グルコソフィラ（Candida  glucosophila）、カンディダ・ゴルベビイ（Candida  golubevii）、カンディダ・ゴーガシイ（Candida  gorgasii）、カンディダ・ゴシンギカ（Candida  gosingica）、カンディダ・ゴトイ（Candida  gotoi）、カンディダ・グロペンギセリ（Candida  gropengiesseri）、カンディダ・グアイモラム（Candida  guaymorum）、カンディダ・ギリーモンディ（Candida  guilliermondii）、カンディダ・ハエムロニイ（Candida  haemulonii）、カンディダ・ハロニトラトフィラ（Candida  halonitratophila）、カンディダ・ハロフィラ（Candida  halophila）、カンディダ・ハセガワエ（Candida  hasegawae）、カンディダ・ヘレニカ（Candida  hellenica）、カンディダ・ホルミ（Candida  holmii）、カンディダ・ホミレントマ（Candida  homilentoma）、カンディダ・ホーデイ（Candida  hordei）、カンディダ・ヒシンツィビュエンシス（Candida  hsintzibuensis）、カンディダ・フミリス（Candida  humilis）、カンディダ・ハンガリカ（Candida  hungarica）、カンディダ・ハングチュナナ（Candida  hungchunana）、カンディダ・インコムニス（Candida  incommunis）、カンディダ・インコンスピキュア（Candida  inconspicua）、カンディダ・インゲンス（Candida  ingens）、カンディダ・インセクタレンス（Candida  insectalens）、カンディダ・インセクタマンス（Candida  insectamans）、カンディダ・インセクトラム（Candida  insectorum）、カンディダ・インセクトサ（Candida  insectosa）、カンディダ・インターメディア（Candida  intermedia）、カンディダ・インターメディア・バー・インターメディア（Candida  intermedia  var.  intermedia）、カンディダ・イポモエアエ（Candida  ipomoeae）、カンディダ・イシワダエ（Candida  ishiwadae）、カンディダ・ジャポニカ（Candida  japonica）、カンディダ・ジャルーニイ（Candida  jaroonii）、カンディダ・ジェフリエシ（Candida  jeffriesii）、カンディダ・ジアンシヘンシス（Candida  jianshihensis）、カンディダ・ジウフェンゲンシス（Candida  jiufengensis）、カンディダ・カンチャナブリエンシス（Candida  kanchanaburiensis）、カンディダ・カオーシウンゲンシス（Candida  kaohsiungensis）、カンディダ・カラワイエウィ（Candida  karawaiewii）、カンディダ・カシナゴコラ（Candida  kashinagacola）、カンディダ・カズオイ（Candida  kazuoi）、カンディダ・ケフィール（Candida  kefyr）、カンディダ・カオヤイエンシス（Candida  khaoyaiensis）、カンディダ・ク��メレンシス（Candida  khmerensis）、カンディダ・コフュエンシス（Candida  kofuensis）、カンディダ・クラビエンシス（Candida  krabiensis）、カンディダ・クリシイ（Candida  krissii）、カンディダ・クルイシ（Candida  kruisii）、カンディダ・クルセイ（Candida  krusei）、カンディダ・クルソイデス（Candida  krusoides）、カンディダ・クノラム（Candida  kunorum）、カンディダ・クンウィエンシス（Candida  kunwiensis）、カンディダ・ラビドゥリダラム（Candida  labiduridarum）、カンディダ・ラクティスコンデンシ（Candida  lactis-condensi）、カンディダ・ラエムソネンシス（Candida  laemsonensis）、カンディダ・ラムビカ（Candida  lambica）、カンディダ・ラセネンシス（Candida  lassenensis）、カンディダ・ラウレリアエ（Candida  laureliae）、カンディダ・ランドレエ（Candida  leandrae）、カンディダ・レセピシ（Candida  lessepsii）、カンディダ・レバンティナ（Candida  levantina）、カンディダ・リドングシャニカ（Candida  lidongshanica）、カンディダ・リグニコラ（Candida  lignicola）、カンディダ・リグノハビタンス（Candida  lignohabitans）、カンディダ・リグノフィラ（Candida  lignophila）、カンディダ・リグノサ（Candida  lignosa）、カンディダ・リポリティカ（Candida  lipolytica）カンディダ・リトサエアエ（Candida  litsaeae）カンディダ・ランクイヒューエンシス（Candida  llanquihuensis）、カンディダ・ロデラエ（Candida  lodderae）、カンディダ・ランディナ（Candida  lundiana）、カンディダ・ラジタニアエ（Candida  lusitaniae）、カンディダ・リコパーディナエ（Candida  lycoperdinae）、カンディダ・リキソソフィラ（Candida  lyxosophila）、カンディダ・マエサ（Candida  maesa）、カンディダ・マグノリアエ（Candida  magnoliae）、カンディダ・マルトサ（Candida  maltosa）、カンディダ・マニトファシエンス（Candida  mannitofaciens）、カンディダ・マリス（Candida  maris）、カンディダ・マリティマ（Candida  maritima）、カンディダ・マクシイ（Candida  maxii）、カンディダ・メリビオシカ（Candida  melibiosica）、カンディダ・メリニイ（Candida  melinii）、カンディダ・メンブレニファシエンス（Candida  membranifaciens）、カンディダ・メサンテリカ（Candida  mesenterica）、カンディダ・メタプシロシス（Candida  metapsilosis）、カンディダ・メサノロベセンス（Candida  methanolovescens）、カンディダ・メサノソーボサ（Candida  methanosorbosa）、カンディダ・メシリカ（Candida  methylica）カンディダ・ミカエリ（Candida  michaelii）、カンディダ・ミレイ（Candida  milleri）、カンディダ・モギ（Candida  mogii）、カンディダ・モコエナイ（Candida  mokoenaii）、カンディダ・モリシアナ（Candida  molischiana）、カンディダ・モンタナ（Candida  montana）、カンディダ・モラコティアエ（Candida  morakotiae）、カンディダ・ムシフェラ（Candida  mucifera）、カンディダ・マルチゲミス（Candida  multigemmis）、カンディダ・ムサエ（Candida  musae）、カンディダ・マイセタンギ（Candida  mycetangii）、カンディダ・ナエオデンドラ（Candida  naeodendra）、カンディダ・ナコンラッチャシメンシス（Candida  nakhonratchasimensis）、カンディダ・ナナスポラ（Candida  nanaspora）、カンディダ・ナタレンシス（Candida  natalensis）、カンディダ・ニーランディカ（Candida  neerlandica）、カンディダ・ネモデンドラ（Candida  nemodendra）、カンディダ・ニューストネンシス（Candida  neustonensis）、カンディダ・ニトラティボランス（Candida  nitrativorans）、カンディダ・ニトラトフィラ（Candida  nitratophila）、カンディダ・ノダエンシス（Candida  nodaensis）、カンディダ・ノンソーボフィラ（Candida  nonsorbophila）、カンディダ・ノーベゲンシス（Candida  norvegensis）、カンディダ・ノーベギカ（Candida  norvegica）、カンディダ・ノバキイ（Candida  novakii）、カンディダ・オブツサ・バー・オブツサ（Candida  obtusa  var.  obtusa）、カンディダ・オデントソバエ（Candida  odintsovae）、カンディダ・オレフィラ（Candida  oleophila）、カンディダ・オリバエ（Candida  olivae）、カンディダ・オンタリオエンシス（Candida  ontarioensis）、カンディダ・オオイテンシス（Candida  ooitensis）、カンディダ・オルバ（Candida  orba）、カンディダ・オレゴネンシス（Candida  oregonensis）、カンディダ・オーソプシロシス（Candida  orthopsilosis）、カンディダ・オートニイ（Candida  ortonii）、カンディダ・オバリス（Candida  ovalis）、カンディダ・オキセントニアエ（Candida  oxycentoniae）、カンディダ・パロデス（Candida  pallodes）、カンディダ・パルミオレフィラ（Candida  palmioleophila）、カンディダ・パルマイレンシス（Candida  palmyrensis）、カンディダ・パルディゲナ（Candida  paludigena）、カンディダ・パナメンシス（Candida  panamensis）、カンディダ・パナメリカナ（Candida  panamericana）、カンディダ・パラポリモーファ（Candida  parapolymorpha）、カンディダ・パラプシロシス（Candida  parapsilosis）、カンディダ・パラプシロシス・バー・パラプシロシス（Candida  parapsilosis  var.  parapsilosis）、カンディダ・パラルゴーサ（Candida  pararugosa）、カンディダ・パタニエンシス（Candida  pattaniensis）、カンディダ・ペルタタ（Candida  peltata）、カンディダ・ペオリアエンシス（Candida  peoriaensis）、カンディダ・ペトロヒューエンシス（Candida  petrohuensis）、カンディダ・ファングンゲンシス（Candida  phangngensis）、カンディダ・ピカチョエンシス（Candida  picachoensis）、カンディダ・ピセアエ（Candida  piceae）、カンディダ・ピグナリアエ（Candida  pignaliae）、カンディダ・ピメンシス（Candida  pimensis）、カンディダ・ピニ（Candida  pini）、カンディダ・ピントロペシイ（Candida  pintolopesii）、カンディダ・ピントロペシイ・バー・ピントロペシイ（Candida  pintolopesii  var.  pintolopesii）、カンディダ・ピントロペシイ・バー・スルーフィアエ（Candida  pintolopesii  var.  sloofiae）、カンディダ・ピナス（Candida  pinus）、カンディダ・プルテイ（Candida  plutei）、カンディダ・ポリモーファ（Candida  polymorpha）、カンディダ・ポミフィラ（Candida  pomiphila）、カンディダ・ポンデロサエ（Candida  ponderosae）、カンディダ・ポプリ（Candida  populi）、カンディダ・ポウェリイ（Candida  powellii）、カンディダ・プラチュアペンシス（Candida  prachuapensis）、カンディダ・プルニコラ（Candida  prunicola）、カンディダ・シュードフロスキュロラム（Candida  pseudoflosculorum）、カンディダ・シュードグラエボサ（Candida  pseudoglaebosa）、カンディダ・シュードハエムロニイ（Candida  pseudohaemulonii）、カンディダ・シュードインターメディア（Candida  pseudointermedia）、カンディダ・シュードジゥフェンゲンシス（Candida  pseudojiufengensis）、カンディダ・シュードラムビカ（Candida  pseudolambica）、カンディダ・シュードベンダークリフティ（Candida  pseudovanderkliftii）、カンディダ・フィジクロフィラ（Candida  psychrophila）、カンディダ・���ルチェリマ（Candida  pulcherrima）、カンディダ・ピラリダエ（Candida  pyralidae）、カンディダ・クエルシトラサ（Candida  quercitrusa）、カンディダ・クエルクーム（Candida  quercuum）、カンディダ・レイレネンシス（Candida  railenensis）、カンディダ・ラルネンシス（Candida  ralunensis）、カンディダ・ラノンゲンシス（Candida  ranongensis）、カンディダ・ラチャシメンシス（Candida  ratchasimensis）、カンディダ・レスティンガエ（Candida  restingae）、カンディダ・レバーサ（Candida  reversa）、カンディダ・ルハギイ（Candida  rhagii）、カンディダ・ロブネティアエ（Candida  robnettiae）、カンディダ・ロゴペリキュロサ（Candida  rugopelliculosa）、カンディダ・ルゴーザ（Candida  rugosa）、カンディダ・ルゴーザ・バー・ルゴーザ（Candida  rugosa  var.  rugosa）、カンディダ・サガミナ（Candida  sagamina）、カンディダ・サイトアナ（Candida  saitoana）、カンディダ・サケ（Candida  sake）、カンディダ・サルマンティセンシス（Candida  salmanticensis）、カンディダ・サニティ（Candida  sanitii）、カンディダ・サンタマリアエ（Candida  santamariae）、カンディダ・サンタマリアエ・バー・メンブレニファシエンス（Candida  santamariae  var.  membranifaciens）、カンディダ・サンタマリアエ・バー・サンタマリアエ（Candida  santamariae  var.  santamariae）、カンディダ・サントジャコベンシス（Candida  santjacobensis）、カンディダ・サンイエンシス（Candida  sanyiensis）、カンディダ・サラブリエンシス（Candida  saraburiensis）、カンディダ・サボニカ（Candida  savonica）、カンディダ・スチャタビイ（Candida  schatavii）、カンディダ・セキイ（Candida  sekii）、カンディダ・セクアネンシス（Candida  sequanensis）、カンディダ・サーギペンシス（Candida  sergipensis）、カンディダ・シハタエ（Candida  shehatae）、カンディダ・シハタエ・バー・イセクトサ（Candida  shehatae  var.  insectosa）、カンディダ・シハタエ・バー・リグノサ（Candida  shehatae  var.  lignosa）、カンディダ・シハタエ・バー・シハタエ（Candida  shehatae  var.  shehatae）、カンディダ・ジーアメンシス（Candida  siamensis）、カンディダ・シルバエ（Candida  silvae）、カンディダ・シルバノラム（Candida  silvanorum）、カンディダ・シルバティカ（Candida  silvatica）、カンディダ・シルビカルトリクス（Candida  silvicultrix）、カンディダ・シノラボランティウム（Candida  sinolaborantium  ）、カンディダ・シセペンシス（Candida  sithepensis）、カンディダ・スルーフィアエ（Candida  slooffiae）、カンディダ・スマグサ（Candida  smagusa）、カンディダ・スミスソニイ（Candida  smithsonii）、カンディダ・ソジャエ（Candida  sojae）、カンディダ・ソラニ（Candida  solani）、カンディダ・ソリコラ（Candida  solicola）、カンディダ・ソンクキイ（Candida  sonckii）、カンディダ・ソングカラエンシス（Candida  songkhlaensis）、カンディダ・ソノレンシス（Candida  sonorensis）、カンディダ・ソフィアエレギナエ（Candida  sophiaereginae）、カンディダ・ソーボフィラ（Candida  sorbophila）、カンディダ・ソーボサ（Candida  sorbosa）、カンディダ・ソーボシボランス（Candida  sorbosivorans）、カンディダ・ソーボキシロサ（Candida  sorboxylosa）、カンディダ・スパンドベンシス（Candida  spandovensis）、カンディダ・スファエリカ（Candida  sphaerica）、カンディダ・スタウントニカ（Candida  stauntonica）、カンディダ・ステラタ（Candida  stellata）、カンディダ・ステリマリコラ（Candida  stellimalicola）、カンディダ・ステリ（Candida  stri）、カンディダ・スシフィラ（Candida  succiphila）、カンディダ・スエシカ（Candida  suecica）、カンディダ・スセペンシス（Candida  suthepensis）、カンディダ・スワナリティ（Candida  suwanaritii）、カンディダ・スズキイ（Candida  suzukii）、カンディダ・タカマツズケンシス（Candida  takamatsuzukensis）、カンディダ・タカタ（Candida  takata）、カンディダ・タリアエ（Candida  taliae）、カンディダ・タマニエンシス（Candida  tammaniensis）、カンディダ・タノトレランス（Candida  tannotolerans）、カンディダ・タンティチャロエニアエ（Candida  tanticharoeniae）、カンディダ・タンザワエンシス（Candida  tanzawaensis）、カンディダ・タオユアニカ（Candida  taoyuanica）、カンディダ・タータリボランス（Candida  tartarivorans）、カンディダ・テムノチラエ（Candida  temnochilae）、カンディダ・テヌイス（Candida  tenuis）、カンディダ・テパエ（Candida  tepae）、カンディダ・テレブラ（Candida  terebra）、カンディダ・テラボラム（Candida  terraborum）、カンディダ・テトリギダラム（Candida  tetrigidarum）、カンディダ・タイランディカ（Candida  thailandica）、カンディダ・タイムエアンゲンシス（Candida  thaimueangensis）、カンディダ・ゼアエ（Candida  theae）、カンディダ・サーモフィリカ（Candida  thermophila）、カンディダ・ティルニイ（Candida  tilneyi）、カンディダ・トレランス（Candida  tolerans）、カンディダ・トレシイ（Candida  torresii）、カンディダ・トリトマエ（Candida  tritomae）、カンディダ・トロピカリス（Candida  tropicalis）、カンディダ・トロピカリス・バー・トロピカリス（Candida  tropicalis  var.  tropicalis）、カンディダ・トリポデンドロニ（Candida  trypodendroni）、カンディダ・ツチヤエ（Candida  tsuchiyae）、カンディダ・ツクバエンシス（Candida  tsukubaensis）、カンディダ・ツムリコラ（Candida  tumulicola）、カンディダ・ウルミ（Candida  ulmi）、カンディダ・ユティリス（Candida  utilis）、カンディダ・バシニイ（Candida  vaccinii）、カンディダ・バルデビアナ（Candida  valdiviana）、カンディダ・バリダ（Candida  valida）、カンディダ・ベンダーワルティ（Candida  vanderwaltii）、カンディダ・バリアビリス（Candida  variabilis）、カンディダ・バーティオバラエ（Candida  vartiovaarae）、カンディダ・ベロナエ（Candida  veronae）、カンディダ・バーサティリス（Candida  versatilis）、カンディダ・ビナリア（Candida  vinaria）、カンディダ・ビニ（Candida  vini）、カンディダ・ビスワナジイ（Candida  viswanathii）、カンディダ・ワンチェルニアエ（Candida  wancherniae）、カンディダ・ウィカーハミ（Candida  wickerhamii）、カンディダ・ウォナノラム（Candida  wounanorum）、カンディダ・ウヨミンゲンシス（Candida  wyomingensis）カンディダ・キシストビ（Candida  xestobii）、カンディダ・キシロテリニ（Candida  xyloterini）、カンディダ・ユアンシャニカス（Candida  yuanshanicus）、カンディダ・ユコラム（Candida  yuchorum）、カンディダ・ゼプリニナ（Candida  zemplinina）、カンディダ・ズィラノイデス（Candida  zeylanoides）、カンディダ・ズィラノイデス・バー・ズィラノイデス（Candida  zeylanoides  var.  zeylanoides）等が挙げられる。
【００８０】〔アスペルギルス属〕  アスペルギルス（Aspergillus）属に分類される微生物としては、例えば、アスペルギルス・アカンソスポラス（Aspergillus  acanthosporus）、アスペルギルス・アコラムナリス（Aspergillus  acolumnaris）、アスペルギルス・アキュレアタス（Aspergillus  aculeatus）、アスペルギルス・アエネウス（Aspergillus  aeneus）、アスペルギルス・アフィニス（Aspergillus  affinis）、アスペルギルス・アラハバデイ（Aspergillus  allahabadii）、アスペルギルス・アリアセウス（Aspergillus  alliaceus）、アスペルギルス・アルタセウス（Aspergillus  alutaceus）、アスペルギルス・アムビグス（Aspergillus  ambiguus）、アスペルギルス・アムステロダミ（Aspergillus  amstelodami）、アスペルギルス・アミロボラス（Aspergillus  amylovorus）、アスペルギルス・アノマラス（Aspergillus  anomalus）、アスペルギルス・アンソデスミス（Aspergillus  anthodesmis）、アスペルギルス・アピカ（Aspergillus  apica）、アスペルギルス・アペンディキュレイタス（Aspergillus  appendiculatus）、アスペルギルス・アレナリウス（Aspergillus  arenarius）、アスペルギルス・アスパレセンス（Aspergillus  asperescens）、アスペルギルス・アセシウス（Aspergillus  athecius）、アスペルギルス・アウランティオブルネウス（Aspergillus  aurantiobrunneus）、アスペルギルス・アウレイタス（Aspergillus  auratus）、アスペルギルス・アウレイタス・バー・アシダス（Aspergillus  aureus  var.  acidus）、アスペルギルス・アウレイタス・バー・ミノー（Aspergillus  aureus  var.  minor）、アスペルギルス・アウレオフルゲンス（Aspergillus  aureofulgens）、アスペルギルス・アウレオラタス（Aspergillus  aureolatus）、アスペルギルス・アウレオラス（Aspergillus  aureolus）、アスペルギルス・アウリコマス（Aspergillus  auricomus）、アスペルギルス・アベニセウス（Aspergillus  avenaceus）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus  awamori）、アスペルギルス・アワモリ・バー・フメウス（Aspergillus  awamori  var.  fumeus）、アスペルギルス・アワモリ・バー・フスカス（Aspergillus  awamori  var.  fuscus）、アスペルギルス・アワモリ・バー・ミニマス（Aspergillus  awamori  var.minimus）、アスペルギルス・アワモリ・バー・ピセウス（Aspergillus  awamori  var.  piceus）、アスペルギルス・バタタス（Aspergillus  batatas）、アスペルギルス・ビカラー（Aspergillus  bicolor）、アスペルギルス・ビプラナス（Aspergillus  biplanus）、アスペルギルス・ビスポラス（Aspergillus  bisporus）、アスペルギルス・ボムバイシス（Aspergillus  bombycis）、アスペルギルス・ブラシリエンシス（Aspergillus  brasiliensis）、アスペルギルス・ブレビペス（Aspergillus  brevipes）、アスペルギルス・ブリッジリ（Aspergillus  bridgeri）、アスペルギルス・ブルネオユニセリアタス（Aspergillus  brunneo-uniseriatus）、アスペルギルス・ブルネオユニセリアタス・バー・ナナス（Aspergillus  brunneo-uniseriatus  var.  nanus）、アスペルギルス・カエレイタス（Aspergillus  caelatus）、アスペルギルス・カエジーラス（Aspergillus  caesiellus）、アスペルギルス・カエスピトサス（Aspergillus  caespitosus）、アスペルギルス・キャンペステリス（Aspergillus  campestris）、アスペルギルス・キャンディダス（Aspergillus  candidus）、アスペルギルス・カーボナリウス（Aspergillus  carbonarius）、アスペルギルス・カーニュス（Aspergillus  carneus）、アスペルギルス・カーノイ（Aspergillus  carnoyi）��アスペルギルス・セルロサエ（Aspergillus  cellulosae）、アスペルギルス・サービナス（Aspergillus  cervinus）、アスペルギルス・チェバリエリ（Aspergillus  chevalieri）、アスペルギルス・チェバリエリ・バー・インターメディウス（Aspergillus  chevalieri  var.  intermedius）、アスペルギルス・クリセラス（Aspergillus  chrysellus）、アスペルギルス・シナモメウス（Aspergillus  cinnamomeus）、アスペルギルス・シトリスポラス（Aspergillus  citrisporus）、アスペルギルス・クラバトフラバス（Aspergillus  clavatoflavus）、アスペルギルス・クラバトナニカ（Aspergillus  clavatonanica）、アスペルギルス・クラバトナニカス（Aspergillus  clavatonanicus）、アスペルギルス・クラバタス（Aspergillus  clavatus）、アスペルギルス・クレイストミヌタス（Aspergillus  cleistominutus）、アスペルギルス・コニカス（Aspergillus  conicus）、アスペルギルス・コンジャンクタス（Aspergillus  conjunctus）、アスペルギルス・コレミフォルミス（Aspergillus  coremiiformis）、アスペルギルス・コルガタス（Aspergillus  corrugatus）、アスペルギルス・クラッシハイファエ（Aspergillus  crassihyphae）、アスペルギルス・クレメウス（Aspergillus  cremeus）、アスペルギルス・クリステイタス（Aspergillus  cristatus）、アスペルギルス・クルストサス（Aspergillus  crustosus）、アスペルギルス・クリスタリナス（Aspergillus  crystallinus）、アスペルギルス・デフレクタス（Aspergillus  deflectus）、アスペルギルス・ディモルフィカス（Aspergillus  dimorphicus）、アスペルギルス・ディバーサス（Aspergillus  diversus）、アスペルギルス・ドロシカス（Aspergillus  dorothicus）、アスペルギルス・ドゥリカウリス（Aspergillus  duricaulis）、アスペルギルス・エブルネオクレメウス（Aspergillus  eburneocremeus）、アスペルギルス・エキヌレイタス（Aspergillus  echinulatus）、アスペルギルス・エジプティアカス（Aspergillus  egyptiacus）、アスペルギルス・エレガンス（Aspergillus  elegans）、アスペルギルス・エリプティカス（Aspergillus  ellipticus）、アスペルギルス・エロンガタス（Aspergillus  elongatus）、アスペルギルス・フェネリアエ（Aspergillus  fennelliae）、アスペルギルス・フィクーム（Aspergillus  ficuum）、アスペルギルス・フィシェリ（Aspergillus  fischeri）、アスペルギルス・フィシェリ・バー・ブラジリエンシス（Aspergillus  fischeri  var.  brasiliensis）、アスペルギルス・フィシェリ・バー・グラバー（Aspergillus  fischeri  var.  glaber）、アスペルギルス・フィシェリ・バー・スピノサス（Aspergillus  fischeri  var.  spinosus）、アスペルギルス・フラッシェントラエゲリ（Aspergillus  flaschentraegeri）、アスペルギルス・フラビペス（Aspergillus  flavipes）、アスペルギルス・フラボファーカタス（Aspergillus  flavofurcatus）、アスペルギルス・フラバス（Aspergillus  flavus）、アスペルギルス・フラバス・バー・カラムナリス（Aspergillus  flavus  var.  columnaris）、アスペルギルス・フラバス・バー・フラバス（Aspergillus  flavus  var.  flavus）、アスペルギルス・フラバス・バー・ソジャエ（Aspergillus  flavus  var.  sojae）、アスペルギルス・フロキュロサス（Aspergillus  flocculosus）、アスペルギルス・フロリフォルミス（Aspergillus  floriformis）、アスペルギルス・フォエティダス（Aspergillus  foetidus）、アスペルギルス・フォエティダス・バー・アシダス（Aspergillus  foetidus  var.  acidus）、アスペルギルス・フォエティダス・バー・パリダス��Aspergillus  foetidus  var.  pallidus）、アスペルギルス・フォベオレイタス（Aspergillus  foveolatus）、アスペルギルス・フレセニイ（Aspergillus  fresenii）、アスペルギルス・フルティキュロサス（Aspergillus  fruticulosus）、アスペルギルス・フマリカス（Aspergillus  fumaricus）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus  fumigatus）、アスペルギルス・フミガタス・バー・アカラムナリス（Aspergillus  fumigatus  var.  acolumnaris）、アスペルギルス・フミガタス・バー・エリプティカス（Aspergillus  fumigatus  var.  ellipticus）、アスペルギルス・フミガタス・バー・フミガタス（Aspergillus  fumigatus  var.  fumigatus  ）、アスペルギルス・フミガタス・バー・ヘルボラス（Aspergillus  fumigatus  var.  helvolus）、アスペルギルス・ファニキュロサス（Aspergillus  funiculosus）、アスペルギルス・ギガンテウス（Aspergillus  giganteus）、アスペルギルス・グラバー（Aspergillus  glaber）、アスペルギルス・グラウカス（Aspergillus  glaucus）、アスペルギルス・ゴラクピュレンシス（Aspergillus  gorakhpurensis）、アスペルギルス・グラシリス（Aspergillus  gracilis）、アスペルギルス・グラヌレイタス（Aspergillus  granulatus）、アスペルギルス・グラヌロサス（Aspergillus  granulosus）、アスペルギルス・ジムノサーダエ（Aspergillus  gymnosardae）、アスペルギルス・ハロフィリカス（Aspergillus  halophilicus）、アスペルギルス・ヘリコスリクス（Aspergillus  helicothrix）、アスペルギルス・ヘネバギイ（Aspergillus  hennebergii）、アスペルギルス・ヘテロカーヨティカス（Aspergillus  heterocaryoticus）、アスペルギルス・ヘテロモーファス（Aspergillus  heteromorphus）、アスペルギルス・ヘテロサリカス（Aspergillus  heterothallicus）、アスペルギルス・イイズカエ（Aspergillus  iizukae）、アスペルギルス・イムプリカタス（Aspergillus  implicatus）、アスペルギルス・インズエタス（Aspergillus  insuetus）、アスペルギルス・インズリコラ（Aspergillus  insulicola）、アスペルギルス・イヌイ（Aspergillus  inuii）、アスペルギルス・イタコニカス（Aspergillus  itaconicus）、アスペルギルス・イボリエンシス（Aspergillus  ivoriensis）、アスペルギルス・ジャナス（Aspergillus  janus）、アスペルギルス・ジャナス・バー・ブレビス（Aspergillus  janus  var.  brevis）、アスペルギルス・ジャナス・バー・ジャナス（Aspergillus  janus  var.  janus）、アスペルギルス・ジャポニカス（Aspergillus  japonicus）、アスペルギルス・ジャポニカス・バー・アトロフスカス（Aspergillus  japonicus  var.  atrofuscus）、アスペルギルス・ジャポニカス・バー・ビリディフラバス（Aspergillus  japonicus  var.  viridiflavus）、アスペルギルス・カムバレンシス（Aspergillus  kambarensis）、アスペルギルス・カナガワエンシス（Aspergillus  kanagawaensis）、アスペルギルス・カワチイ（Aspergillus  kawachii）、アスペルギルス・レイノサス（Aspergillus  lanosus）、アスペルギルス・レントゥラス（Aspergillus  lentulus）、アスペルギルス・レポリス（Aspergillus  leporis）、アスペルギルス・ロイコカーパス（Aspergillus  leucocarpus）、アスペルギルス・ロンギベシカ（Aspergillus  longivesica）、アスペルギルス・ラクエンシス（Aspergillus  luchuensis）、アスペルギルス・ラクノウエンシス（Aspergillus  lucknowensis）、アスペルギルス・ルテオニガー（Aspergillus  luteo-niger）、アスペルギルス・マリグナス（Aspergillus  malignus）、アスペルギルス・マルドラタス（Aspergillus  malodoratus��、アスペルギルス・マンギニイ（Aspergillus  manginii）、アスペルギルス・メディウス（Aspergillus  medius）、アスペルギルス・メレウス（Aspergillus  melleus）、アスペルギルス・マイクロセファラス（Aspergillus  microcephalus）、アスペルギルス・マイクロビリディシトリナス（Aspergillus  microviridicitrinus）、アスペルギルス・マイクロサイスティカス（Aspergillus  microcysticus）、アスペルギルス・ミニマス（Aspergillus  minimus）、アスペルギルス・ミヨコエンシス（Aspergillus  miyokoensis）、アスペルギルス・モンテビデンシス（Aspergillus  montevidensis）、アスペルギルス・マルチカラー（Aspergillus  multicolor）、アスペルギルス・ムタビリス（Aspergillus  mutabilis）、アスペルギルス・ヌドゥランス（Aspergillus  nidulans）、アスペルギルス・ヌドゥランス・バー・アクリステイタス（Aspergillus  nidulans  var.  acristatus）、アスペルギルス・ヌドゥランス・バー・デンタタス（Aspergillus  nidulans  var.  dentatus）、アスペルギルス・ヌドゥランス・バー・エキヌレイタス（Aspergillus  nidulans  var.  echinulatus）、アスペルギルス・ヌドゥランス・バー・レイタス（Aspergillus  nidulans  var.  latus）、アスペルギルス・ヌドゥランス・バー・ロゼウス（Aspergillus  nidulans  var.  roseus）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus  niger）、アスペルギルス・ニガー・ムト・シナモメウス（Aspergillus  niger  mut.  cinnamomeus）、アスペルギルス・ニガー・バー・インターメディウス（Aspergillus  niger  var.  intermedius）、アスペルギルス・ニガー・バー・マクロスポラス（Aspergillus  niger  var.  macrosporus）、アスペルギルス・ニガー・バー・ナヌス（Aspergillus  niger  var.  nanus）、アスペルギルス・ニガー・バー・ニガー（Aspergillus  niger  var.  niger）、アスペルギルス・ニガー・バー・ニガー・エフ・ヘネゲルギイ（Aspergillus  niger  var.  niger  f.  hennebergii）、アスペルギルス・ニガー・バー・フォエニシス（Aspergillus  niger  var.  phoenicis）、アスペルギルス・ニガー・ムト・シエマニ（Aspergillus  niger  mut.  schiemanni）、アスペルギルス・ニベオグラウカス（Aspergillus  niveoglaucus）、アスペルギルス・ニベウス（Aspergillus  niveus）、アスペルギルス・ニベウス・バー・インディカ（Aspergillus  niveus  ver.  indica）、アスペルギルス・ノミウス（Aspergillus  nomius）、アスペルギルス・ヌタンス（Aspergillus  nutans）、アスペルギルス・オケラセオロセウス（Aspergillus  ochraceoroseus）、アスペルギルス・オケラセウス（Aspergillus  ochraceus）、アスペルギルス・オーナタス（Aspergillus  ornatus）、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus  oryzae）、アスペルギルス・オリゼ・バー・ブルネウス（Aspergillus  oryzae  var.  brunneus）、アスペルギルス・オリゼ・バー・エフュサス（Aspergillus  oryzae  var.  effusus）、アスペルギルス・オリゼ・バー・マグナスポラス（Aspergillus  oryzae  var.  magnasporus）、アスペルギルス・オリゼ・バー・オリゼ（Aspergillus  oryzae  var.  oryzae）、アスペルギルス・オリゼ・バー・スポロフラバス（Aspergillus  oryzae  var.  sporoflavus）、アスペルギルス・オリゼ・バー・バリアビリス（Aspergillus  oryzae  var.  variabilis）、アスペルギルス・オリゼ・バー・ビリディス（Aspergillus  oryzae  var.  viridis）、アスペルギルス・オスティアヌス（Aspergillus  ostianus）、アスペルギルス・パリダス（Aspergillus  pallidus）、アスペルギルス・パナメンシス（Aspergillus  panamensis）、アスペルギルス・パラドキサス（Aspergillus  paradoxus）、アスペルギルス・パラスティカス（Aspergillus  parasiticus）、アスペルギルス・パラスティカス・バー・グロボサス（Aspergillus  parasiticus  var.  globosus）、アスペルギルス・パラベセシウス（Aspergillus  parvathecius）、アスペルギルス・パーブラス（Aspergillus  parvulus）、アスペルギルス・ペニシリオフォルミス（Aspergillus  penicillioformis）、アスペルギルス・ペニシリオイデス（Aspergillus  penicillioides）、アスペルギルス・パーシイ（Aspergillus  persii）、アスペルギルス・ペトラキ（Aspergillus  petrakii）、アスペルギルス・ペイロネリ（Aspergillus  peyronelii）、アスペルギルス・フィアリセプタス（Aspergillus  phialiseptus）、アスペルギルス・フォエニシス（Aspergillus  phoenicis）、アスペルギルス・プロリフェランス（Aspergillus  proliferans）、アスペルギルス・プロツベラス（Aspergillus  protuberus）、アスペルギルス・シュードデフレクタス（Aspergillus  pseudodeflectus）、アスペルギルス・シュードグラウカス（Aspergillus  pseudoglaucus）、アスペルギルス・シュードタマリ（Aspergillus  pseudotamarii）、アスペルギルス・プルベルレンタス（Aspergillus  pulverulentus）、アスペルギルス・プルビナス（Aspergillus  pulvinus）、アスペルギルス・パニセウス（Aspergillus  puniceus）、アスペルギルス・クアドリシンクタス（Aspergillus  quadricinctus）、アスペルギルス・クアドリネアタス（Aspergillus  quadrilineatus）、アスペルギルス・クエルシナス（Aspergillus  quercinus）、アスペルギルス・クエルシナス・バー・ペトラキ（Aspergillus  quercinus  var.  petrakii）、アスペルギルス・ラペリ（Aspergillus  raperi）、アスペルギルス・レキュベイタス（Aspergillus  recurvatus）、アスペルギルス・レペンス（Aspergillus  repens）、アスペルギルス・リストリクタス（Aspergillus  restrictus）、アスペルギルス・リゾポダス（Aspergillus  rhizopodus）、アスペルギルス・ロバスタス（Aspergillus  robustus）、アスペルギルス・ルバー（Aspergillus  ruber）、アスペルギルス・ルガロサス（Aspergillus  rugulosus）、アスペルギルス・サイトイ・バー・カゴシマエンシス（Aspergillus  saitoi  var.  kagoshimaensis）、アスペルギルス・サルビコラ（Aspergillus  salviicola）、アスペルギルス・サクレロティオラム（Aspergillus  sclerotiorum）、アスペルギルス・セプルタス（Aspergillus  sepultus）、アスペルギルス・シルバティカス（Aspergillus  silvaticus）、アスペルギルス・ソジャエ（Aspergillus  sojae）、アスペルギルス・スパーサス（Aspergillus  sparsus）、アスペルギルス・スパスレイタス（Aspergillus  spathulatus）、アスペルギルス・スペクタビリス（Aspergillus  spectabilis）、アスペルギルス・スペランセウス（Aspergillus  spelunceus）、アスペルギルス・スペルネウス（Aspergillus  speluneus）、アスペルギルス・スピヌソサス（Aspergillus  spinulosus）、アスペルギルス・ステレイタス（Aspergillus  stellatus）、アスペルギルス・ステレイタス・バー・アステレイタス（Aspergillus  stellatus  var.  astellatus）、アスペルギルス・ステラメニウス（Aspergillus  stramenius）、アスペルギルス・ストリエイタス（Aspergillus  striatus）、アスペルギルス・ストロマトイデス（Aspergillus  stromatoides）、アスペルギルス・サボリバセウス（Aspergillus  subolivaceus）、アスペルギルス・サブセシリス（Aspergillus  subsessilis）、アスペルギルス・サルフュレウス（Aspergillus  sulphureus）、アスペルギルス・サ��フュレウス・バー・ミニマス（Aspergillus  sulphureus  var.  minimus）、アスペルギルス・サンダーバニ（Aspergillus  sunderbanii）、アスペルギルス・サイドウイ（Aspergillus  sydowii）、アスペルギルス・タマリ（Aspergillus  tamarii）、アスペルギルス・ターダス（Aspergillus  tardus）、アスペルギルス・テレウス（Aspergillus  terreus）、アスペルギルス・テレウス・バー・アフリカナス（Aspergillus  terreus  var.  africanus）、アスペルギルス・テレウス・バー・アウレウス（Aspergillus  terreus  var.  aureus）、アスペルギルス・テレウス・バー・バエディジニ（Aspergillus  terreus  var.baedijnii  ）、アスペルギルス・テレウス・バー・グロボサス（Aspergillus  terreus  var.  globosus）、アスペルギルス・テレウス・バー・テレウス（Aspergillus  terreus  var.  terreus）、アスペルギルス・テリコラ（Aspergillus  terricola）、アスペルギルス・テリコラ・バー・アメリカナ（Aspergillus  terricola  var.  americana）、アスペルギルス・テリコラ・バー・インディカス（Aspergillus  terricola  var.  indicus）、アスペルギルス・テスタセオカラランス（Aspergillus  testaceocolorans）、アスペルギルス・サーモミュテイタス（Aspergillus  thermomutatus）、アスペルギルス・ソミイ（Aspergillus  thomii）、アスペルギルス・トゴエンシス（Aspergillus  togoensis）、アスペルギルス・トノフィラス（Aspergillus  tonophilus）、アスペルギルス・トキシカリウス（Aspergillus  toxicarius）、アスペルギルス・ツビンゲンシス（Aspergillus  tubingensis）、アスペルギルス・アムブロサス（Aspergillus  umbrosus）、アスペルギルス・アンギイス（Aspergillus  unguis）、アスペルギルス・ユニレイテラリス（Aspergillus  unilateralis）、アスペルギルス・ウサミ・ムト・シロウサミ（Aspergillus  usamii  mut.  shirousamii）、アスペルギルス・ウサミ・バー・シロウサミ（Aspergillus  usamii  var.  shiro-usamii）、アスペルギルス・ウスタス（Aspergillus  ustus）、アスペルギルス・ウバラム（Aspergillus  uvarum）、アスペルギルス・バデンシス（Aspergillus  vadensis）、アスペルギルス・バリアンス（Aspergillus  varians）、アスペルギルス・バーシカラー（Aspergillus  versicolor）、アスペルギルス・ビオラセオフスカス（Aspergillus  violaceofuscus）、アスペルギルス・ビオラセウス（Aspergillus  violaceus）、アスペルギルス・ビリディヌタンス（Aspergillus  viridinutans）、アスペルギルス・ビティス（Aspergillus  vitis）、アスペルギルス・ビティス・バー・モンティビデンシス（Aspergillus  vitis  var.  montevidensis）、アスペルギルス・ウェンティ（Aspergillus  wentii）、アスペルギルス・ウェンティ・バー・ミニマス（Aspergillus  wentii  var.  minimus）、アスペルギルス・ザオキンゲンシス（Aspergillus  zhaoqingensis）、アスペルギルス・ゾナタス（Aspergillus  zonatus）等が挙げられる。
【００８１】〔真核生物の好ましいその他の種〕  さらに、Zymoseptoria属に分類される微生物としてはZymoseptoria  tritici、Phaeosphaeria属に分類される微生物としてはPhaeosphaeria  nodorum、Pyrenophora属に分類される微生物としてはPyrenophora  teres、Ustilago属に分類される微生物としてはUstilago  maydis、Ashbya属に分類される微生物としてはAshbya  gossypii  (Eremothecium  gossypii)、Kluyveromyces属に分類される微生物としてはKluyveromyces  lactis、Yarrowia属に分類される微生物としてはYarrowia  lipolytica、Debaryomyces属に分類される微生物としてはDebaryomyces  hansenii、Scheffersomyces属に分類される微生物としてはScheffersomyces  stipitis、Meyerozyma属に分類される微生物としてはMeyerozyma  guilliermondii、Lodderomyces属に分類される微生物としてはLodderomyces  elongisporus、Filobasidiella（Cryptococcus）属に分類される微生物としてはCryptococcus  neoformans、Cryptococcus  gattiiおよびCryptococcus  amylolentus、Botryotinia属に分類される微生物としてはBotryotinia  fuckeliana、Sclerotinia属に分類される微生物としてはSclerotinia  sclerotiorum、Tuber属に分類される微生物としてはTuber  melanosporum、Postia属に分類される微生物としてはPostia  placenta、Laccaria属に分類される微生物としてはLaccaria  bicolor、Moniliophthora属に分類される微生物としてはMoniliophthora  perniciosa、Coprinopsis属に分類される微生物としてはCoprinopsis  cinerea、Schizophyllum属に分類される微生物としてはSchizophyllum  commune、Puccinia属に分類される微生物としてはPuccinia  graminis、Magnaporthe属に分類される微生物としてはMagnaporthe  oryzae、Podospora属に分類される微生物としてはPodospora  anserina、Neurospora属に分類される微生物としてはNeurospora  crassa、Sordaria属に分類される微生物としてはSordaria  macrospora、Thielavia属に分類される微生物としてはThielavia  terrestris、Myceliophthora属に分類される微生物としてはMyceliophthora  thermophila、Fusarium属に分類される微生物としてはFusarium  graminearum、Nectria属に分類される微生物としてはNectria  haematococca、Malassezia属に分類される微生物としてはMalassezia  globosa、Neosartorya属に分類される微生物としてはNeosartorya  fischeri、Arthroderma属に分類される微生物としてはArthroderma  benhamiae、Coccidioides属に分類される微生物としてはCoccidioides  immitisおよびCoccidioides  posadasii、Paracoccidioides属に分類される微生物としてはParacoccidioides  brasiliensis、Uncinocarpus属に分類される微生物としてはUncinocarpus  reesii、Trichophyton属に分類される微生物としてはTrichophyton  verrucosum、Ajellomyces属に分類される微生物としてはAjellomyces  capsulatus、Hypocrea属に分類される微生物としてはHypocrea  rufa、Acremonium属に分類される微生物としてはAcremonium  chrysogenum、Penicillium属に分類される微生物としてはPenicillium  camembertii、Ogataea属に分類される微生物としてはOgataea  minuta、Komagataella属に分類される微生物としてはKomagataella  pastoris、Trigonopsis属に分類される微生物としてはTrigonopsis  variabilis、Schizosaccharomyces属に分類される微生物としてはSchizosaccharomyces  pombe、Scytalidium属に分類される微生物としてはScytalidium  thermophirumが挙げられる。
【００８２】  以上、原核および真核微生物で実験的にメタクリル酸誘導体の生成が確認できている特に好ましい属は以下に示す通りである。シュードモナス（Pseudomonas）属、バシラス（Bacillus）属、スフィンゴバクテリウム(Sphingobacterium）属、コマモナス（Comamonas）属、ブレバンディモナス（Brevundimonas）属、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属、オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属、ペドバクター（Pedobacter）属、パエニバシラス（Paenibacillus）属、アクロモバクター（Achromobacter）属、アシネトバクター（Acinetobacter）属、シュワネラ（Shewanella）属、リストネラ（Listonella）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属、メソリゾビウム（Mesorhizobium）属、リゾビウム（Rhizobium）属、パラコッカス（Paracoccus）属、キサントバクター（Xanthobacter）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、ゲオバシラス（Geobacillus）属、ロドコッカス（Rhodococcus）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、カンディダ（Candida）属またはアスペルギルス（Aspergillus）属に属する微生物である。
【００８３】  その中でもより好ましくは、スフィンゴバクテリウム(Sphingobacterium）属、コマモナス（Comamonas）属、ブレバンディモナス（Brevundimonas）属、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属、オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属、ペドバクター（Pedobacter）属、パエニバシラス（Paenibacillus）属、アクロモバクター（Achromobacter）属、アシネトバクター（Acinetobacter）属、シュワネラ（Shewanella）属、リストネラ（Listonella）属、アグロバクテリウム（Agrobacterium）属、メソリゾビウム（Mesorhizobium）属、パラコッカス（Paracoccus）属、キサントバクター（Xanthobacter）属、ゲオバシラス（Geobacillus）属、ロドコッカス（Rhodococcus）属またはカンディダ（Candida）属に属する微生物である。
【００８４】［好ましい菌株］  本発明に係るメタクリル酸の製造方法で用いるメタクリル酸生成能を有する微生物の特に好ましい例としては、以下の高いメタクリル酸生成能を有する菌株が挙げられる（後述する実施例参照）。
【００８５】（ｉ）シュードモナス（Pseudomonas）属に属する、Ｂ２５−２株（独立行政法人  製品評価技術基盤機構(ＮＩＴＥ)、特許微生物寄託センター（郵便番号292-0818、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）、受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５１）、Ｄ２２−１株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５２）、Ｄ４３−１株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５３）、Ｄ２５株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５４）、Ｄ２６株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５５）、Ｄ２９株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５６）、Ｄ４１−２株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５７）又はPseudomonas putida NBRC12996。
【００８６】（ｉｉ）バシラス（Bacillus）属に属する、Ｇ１株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５８）、Ｇ２（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５９）株、Ｒ１株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４６０）、Bacillus subtilis NBRC12210、Bacillus badius ATCC14574、Bacillus megaterium NBRC15308又はBacillus simplex ATCC49097。
【００８７】（ｉｉｉ）スフィンゴバクテリウム（Sphingobacterium）属に属する、Ｂ１３株（受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４６１）。（ｉｖ）コマモナス（Comamonas）属に属する、Comamonas terrigena NBRC13299。（ｖ）ブレバンディモナス（Brevundimonas）属に属する、Brevundimonas diminuta ATCC11568、Brevundimonas vesicularis ATCC11426又はBrevundimonas subvibrioides NBRC16000。（ｖｉ）スフィンゴモナス（Sphingomonas）属に属する、Sphingomonas paucimobilis NBRC 13935。（ｖｉｉ）オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属に属する、Ochrobactrum sp. NBRC12951、Ochrobactrum intermedium NBRC15820、Ochrobactrum intermedium NBRC13694、Ochrobactrum anthropic ATCC49237、Ochrobactrum grignonense NBRC 102586又はOchrobactrum lupini NBRC 102587。（ｖｉｉｉ）ペドバクター（Pedobacter）属に属する、Pedobacter heparinus NBRC12017。（ｉｘ）パエニバシラス（Paenibacillus）属に属する、Paenibacillus sp. NBRC13157。（ｘ）アクロモバクター（Achromobacter）属に属する、Achromobacter denitrificans NBRC12669。（ｘｉ）アシネトバクター（Acinetobacter）属に属する、Acinetobacter haemolyticus ATCC17906又はAcinetobacter junii ATCC17908。（ｘｉｉ）シュワネラ（Shewanella）属に属する、Shewanella fodinae NBRC105216。（ｘｉｉｉ）リストネラ（Listonella）属に属する、Listonella anguillarum ATCC19264。（ｘｉｖ）アグロバクテリウム（Agrobacterium）属に属する、Agrobacterium luteum NBRC15768。（ｘｖ）メソリゾビウム（Mesorhizobium）属に属する、Mesorhizobium loti ATCC700743。（ｘｖｉ）リゾビウム（Rhizobium）属に属する、Rhizobium leguminosarum ATCC10004。（ｘｖｉｉ）パラコッカス（Paracoccus）属に属する、Paracoccus aminophilus NBRC16710。（ｘｖｉｉｉ）キサントバクター（Xanthobacter）属に属する、Xanthobacter autotrophicus ATCC35674。（ｘｉｘ）ストレプトマイセス（Streptomyces）属に属する、Streptomyces griseus NBRC13350。（ｘｘ）ゲオバシラス（Geobacillus）属に属する、Geobacillus  stearothermophilus   NBRC12983。（ｘｘｉ）ロドコッカス・エリスロポリスが挙げられる。より好ましい株としては、ロドコッカス・エリスロポリスＰＲ−４株、ロドコッカス・エリスロポリスＫＡ２−５−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＩＧＴＳ８株、ロドコッカス・エリスロポリスＤ−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＨ−２株、ロドコッカス・エリスロポリスＮ１−３６株、ロドコッカス・エリスロポリスＩ−１９株、ロドコッカス・エリスロポリスＥＣＲＤ−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＢ１株、ロドコッカス・エリスロポリスＳＹ−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＵＭ３株、ロドコッカス・エリスロポリスＵＭ９株又はロドコッカス・エスピーＴ０９株等が挙げられ、特に好ましくはロドコッカス・エリスロポリスＰＲ−４株が挙げられる。（ｘｘｉｉ）サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属する、Saccharomyces cerevisiae NBRC1136、Saccharomyces cerevisiae NBRC2347又はSaccharomyces paradoxus NBRC10609。（ｘｘｉｉｉ）カンディダ（Candida）属に属する、Candida utilis NBRC1086又はCandida parapsilosis ATCC22019。（ｘｘｉｖ）アスペルギルス（Aspergillus）属に属する、Aspergillus niger ATCC6275、Aspergillus flavus NBRC8558又はAspergillus oryzae NBRC4255。
【００８８】［スクリーニング等による微生物の選択方法］  メタクリル酸生成能を有する微生物は、土壌、河川水、湖沼水、海水、汚泥、動物、植物、昆虫などから、アミノ酸又は脂肪酸の資化性を指標に平板分離法や集積培養法などのスクリーニングにより見出すことができる。
【００８９】  具体的にはバリンおよびイソ酪酸の資化性、および／またはメタクリル酸生成能を評価することより、本発明に適した微生物を選択することができる。バリン又はイソ酪酸の資化性は、例えば、０．１〜１％のバリン又はイソ酪酸を炭素源とする合成培地での生育を観察することで評価することができる。メタクリル酸生成能は、例えば、同培養液中にメタクリル酸の生成を分析することで評価できる。あるいは同培養で得られた菌体をバリン又はイソ酪酸を０．１〜１％含む溶液と接触させ、同反応液中のメタクリル酸の生成を分析することで評価できる。反応は３０℃で５〜１２０時間振とうすればよい。好ましくは、前記評価によりメタクリル酸誘導体をを０．０４ｐｐｍ以上生成する能力を有する微生物であることが望ましい。
【００９０】  あるいは、微生物の菌学的性質（培養的性質、形態的性質、生理学的性質、化学分類学的性質及び遺伝学的性質）により、本発明に適した微生物を選択することができる。例えば、微生物のｒＲＮＡ遺伝子の同一性から、本発明の微生物を選択することができる。具体的には、配列番号１〜４９に記載された塩基配列のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含むｒＲＮＡ遺伝子を有する微生物から選択できる。
【００９１】  さらに、本発明に適した微生物は上述の分類学上の目、科または属に属する微生物の中から選択し、ｒＲＮＡ遺伝子情報を組み合わせることで効率的に絞り込むことができる。
【００９２】  なお、ｒＲＮＡ遺伝子の解析および同定方法は、例えば、「遺伝子解析法  １６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列決定法（日本放線菌学会編  放線菌の分類と同定、ｐｐ８８−１１７  ２００１）」、「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｅｃｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１０、  ３１−４２、１９９５」および「第１６改正日本薬局方；遺伝子解析による微生物の迅速同定法」等を参照することができる。好ましくは、これらの菌学的性質と、バリン又はイソ酪酸の資化性およびメタクリル酸生成能の指標を組み合わせ、本発明に適した微生物を選択する。そうすることで既存のタイプカルチャーから選択することも可能である。
【００９３】［誘導株］  微生物として、メタクリル酸生成能を有する微生物（例えば上記（ｉ）〜（ｘｘｉｖ）の菌株）から天然に又は化学的若しくは物理的処理によって誘導され、依然として再生可能原料及び／又はバイオマスを炭素源及び／又はエネルギー源としてメタクリル酸を生成する能力を保持する誘導株を用いてもよい。誘導株には以下に示す「変異株」や「遺伝子改変株」が含まれる。
【００９４】［変異株］  変異株は、メタクリル酸生成能を有する微生物に、化学的若しくは物理的処理（例えばγ線照射など）によって、遺伝子変異を誘発して得ることができる。［遺伝子改変株］  遺伝子改変株は、メタクリル酸生成能を有する微生物に、下記のようにして活性が強化された、あるいは活性を欠損又は低下させた株である。
【００９５】  活性の強化とは、菌体外から微生物へ導入された遺伝子に基づいて当該微生物での酵素遺伝子（由来を問わず）の発現量が増大することを意味し、酵素をコードする遺伝子を微生物の菌体外から菌体内に導入することの他に、微生物がゲノム上に保有する酵素遺伝子のプロモーター活性を強化すること又は他のプロモーターと置換することによって酵素遺伝子を強発現させたもの、或いは当該酵素遺伝子のリプレッサー活性を低減化又は不活化することの結果として当該酵素活性を強化させることを含む。なお、遺伝子導入やゲノム上の遺伝子の置換などは常法により行うことができる。
【００９６】  遺伝子改変株は、メタクリル酸合成反応を阻害する酵素の活性を欠損又は低下させた遺伝子改変を行った改変株であってもよい。活性の「欠損」又は「低下」とは、当該微生物での当該酵素遺伝子の発現が全く無なくなるか減少することを意味し、当該酵素遺伝子に置換、欠失又は挿入が起こることの他に、微生物がゲノム上に保有する酵素遺伝子のプロモーター活性を低下させること又は他のプロモーターと置換することによって酵素遺伝子の発現を抑制させたもの、或いは当該酵素遺伝子のリプレッサー活性を強化又は活性化することの結果として当該酵素活性を低減させることを含む。なお、これらの遺伝子改変は、常法に従って行えばよい。
【００９７】  好ましい改変株としては、以下に示す（ａ）又は（ｂ）の少なくとも一方の特徴を有する改変株が挙げられる。（ａ）ＢＣＫＡＤ遺伝子及び／又はＡＣＤ遺伝子が導入されたことにより、メタクリル酸生成活性が強化されている。（ｂ）エノイルＣｏＡヒドラターゼ遺伝子、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼ遺伝子及び／又は３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ遺伝子の欠損又は不活化により、メタクリル酸生成活性が強化されている。欠損又は不活化は、遺伝子の全部又は塩基配列の一部に置換、欠失もしくは挿入により行う。
【００９８】［遺伝子組換え株］  加えて、微生物として、メタクリル酸生成能を有する微生物から同定されるメタクリル酸合成に関与する酵素を、メタクリル酸生成能を有さない微生物に遺伝子導入することによって、新たに再生可能原料及び／又はバイオマスを炭素源及び／又はエネルギー源としてメタクリル酸を生成する能力を付与した株を用いることもできる。遺伝子組換え株の作製に当たっては、上記の遺伝子改変株の作製と同様の手法により行うことができる。
【００９９】［近縁株］  さらに、微生物として、メタクリル酸生成能を有する微生物（例えば上記（ｉ）〜（ｘｘｉｖ）の菌株）の近縁種であって、同様に再生可能原料及び／又はバイオマスを炭素源及び／又はエネルギー源としてメタクリル酸を生成する能力を保持する株を用いることもできる。近縁種は、例えば、核酸の塩基配情報をもとに分子系統解析を行って得ることができる。近縁種は、具体的には、リボゾームＲＮＡ遺伝子（ｒＲＮＡ遺伝子；以下ｒＤＮＡ）の塩基配列の相同性解析によって得ることができる。
【０１００】  好ましい近縁種として以下が挙げられる。（1）シュードモナス（Pseudomonas）属に属し、上記（ｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１〜８）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（2）バシラス（Bacillus）属に属し、上記（ｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号９〜１５）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（3）スフィンゴバクテリウム（Sphingobacterium）属に属し、上記（ｉｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１６）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（4）コマモナス（Comamonas）属に属し、上記（ｉｖ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１７）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（5）ブレバンディモナス（Brevundimonas）属に属し、上記（ｖ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１８〜２０）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（6）スフィンゴモナス（Sphingomonas）属に属し、上記（ｖｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号２１）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（7）オクロバクテリウム（Ochrobactrum）属に属し、上記（ｖｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号２２〜２６）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（8）ペドバクター（Pedobacter）属に属し、上記（ｖｉｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号２７）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（9）パエニバ��ラス（Paenibacillus）属に属し、上記（ｉｘ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号２８）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（10）アクロモバクター（Achromobacter）属に属し、上記（ｘ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号２９）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（11）アシネトバクター（Acinetobacter）属に属し、上記（ｘｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３０〜３１）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（12）シュワネラ（Shewanella）属に属し、上記（ｘｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３２）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（13）リストネラ（Listonella）属に属し、上記（ｘｉｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３３）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（14）アグロバクテリウム（Agrobacterium）属に属し、上記（ｘｉｖ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３４）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（15）メソリゾビウム（Mesorhizobium）属に属し、上記（ｘｖ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３５）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（16）リゾビウム（Rhizobium）属に属し、上記（ｘｖｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３６）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（17）パラコッカス（Paracoccus）属に属し、上記（ｘｖｉｉ）の菌株の１６���  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３７）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（18）キサントバクター（Xanthobacter）属に属し、上記（ｘｖｉｉｉ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３８）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（19）ストレプトマイセス（Streptomyces）属に属し、上記（ｘｉｘ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３９）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（20）ゲオバシラス（Geobacillus）属に属し、上記（ｘｘ）の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号４０）に示す部分塩基配列に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物。（21）ロドコッカス・エリスロポリスＰＲ−４株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号４１）に対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含む１６Ｓ  ｒＤＮＡを有する微生物が挙げられる。（22）サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属し、上記（ｘｘｉｉ）の菌株のＬＳＵｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号４２〜４４）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含むＬＳＵｒＤＮＡを有する微生物。（23）カンディダ（Candida）属に属し、上記（ｘｘｉｉｉ）の菌株のＬＳＵｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号４５〜４６）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含むＬＳＵｒＤＮＡを有する微生物。（24）アスペルギルス（Aspergillus）属に属し、上記（ｘｘｉｖ）の菌株のＬＳＵｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号４７〜４９）のいずれかに対して８１％以上、好ましくは８８％以上、より好ましくは９５%以上、より好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９．５％以上の同一性を有する塩基配列を含むＬＳＵｒＤＮＡを有する微生物。
【０１０１】  また、近縁種は、菌学的性質を適宜組み合わせた情報をもとに既存のタイプカルチャーから選択することも可能である。
【０１０２】  ここで、配列の「同一性」とは、塩基配列の場合であれば、比較すべき２つの塩基配列の塩基ができるだけ多く一致するように両塩基配列を整列させ、一致した塩基数を、全塩基数で除したものを百分率で表したものである。上記整列の際には、必要に応じ、比較する２つの配列の一方又は双方に適宜ギャップを挿入する。このような配列の整列化は、例えばＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、ＣＬＵＳＴＡＬＷ等の周知のプログラムを用いて行なうことができる。ギャップが挿入される場合、上記全塩基数は、１つのギャップを１つの塩基として数えた塩基数となる。このようにして数えた全塩基数が、比較する２つの配列間で異なる場合には、同一性（％）は、長い方の配列の全塩基数で、一致した塩基数を除して算出される。アミノ酸配列の同一性についても同様である。
【０１０３】  さらに、本発明に係るメタクリル酸及び／又はメタクリル酸エステルの製造方法では、メタクリル酸生成能を有する微生物にＡＡＴ遺伝子及び／又はＡＣＤ遺伝子を導入した組換え微生物を用いて、再生可能原料及び／又はバイオマスと接触させる工程により、メタクリル酸及び／又はメタクリル酸エステルを製造することもできる。
【０１０４】［メタクリル酸生成能を有する微生物にＡＡＴ遺伝子を導入した組換え微生物の作製］〔ＡＡＴ〕  ＡＡＴは、アルコールまたはフェノール類にアシル−ＣｏＡのアシル基を転移させてエステルを合成する触媒作用を有する酵素である。ＡＡＴは、種々の果物におけるエステルの生成に関与していると言われている。ＡＡＴはショウガ目（バナナ）、バラ目（イチゴ、リンゴ、ナシ、モモ）、ウリ目（メロン）、ツツジ目（キウイ）、シソ目（オリーブ）、ナス目（トマト）、ムクロジ目（レモン、マンゴー）等の植物に存在することが知られている。
【０１０５】  本発明において使用するＡＡＴは、メタクリリル−ＣｏＡとアルコールまたはフェノール類を原料に、メタクリル酸エステルを製造する能力を有する生体由来の触媒であれば、特に限定されず、その種類及び起源を問わない。酵素源としては植物由来のものが好ましく、その中でも被子植物に分類されるものが好ましい。
【０１０６】  本発明に適したＡＡＴは以下の方法により、前記植物から選択することが可能である。組織の適当な部位を必要に応じて裁断することにより取得する。その裁断部位にメタクリリル−ＣｏＡとアルコールまたはフェノール類を含む溶液を添加し、振とうし、一定時間反応させる。その反応液中のメタクリル酸エステルの有無をＧＣ（ガスクロマトグラフィー）により確認することにより、合成活性を確認可能である。具体的には、例えば、果肉あるいは果皮を裁断し、それに１〜１０ｍＭのメタクリリル−ＣｏＡ、０．３５Ｍ  ＫＣｌおよび５〜５０倍モル量のｎ−ブタノールを含む溶液を添加し、３０℃で１〜１０時間振とうする。反応終了後、ＧＣによりメタクリル酸エステルの有無を確認することにより、本発明に応用可能なＡＡＴを選択することができる。
【０１０７】  アルコールまたはフェノール類は以下の式「Ｒ−ＯＨ」で示される化合物である。アルコールまたはフェノール類の構造は、メタクリル酸エステルに対応することから、その構造は、前記式１のＲと同じ定義であり、直鎖あるいは分岐の炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。炭化水素基は、飽和又は不飽和の非環式であってもよく、飽和又は不飽和の環式であってもよい。好ましくは直鎖あるいは分岐の炭素数１〜１０の無置換のアルコール、アラルキルアルコールまたはフェノール類であり、特に好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチルアルコール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、ｎ−ヘキシルアルコール、イソヘキシルアルコール、２−ヘキシルアルコール、ジメチルブチルアルコール、エチルブチルアルコール、ヘプチルアルコール、オクチルアルコール、２−エチルヘキシルアルコールの炭素数１〜８のアルキルアルコール、ベンジルアルコールまたはフェノールである。
【０１０８】  本発明に適したＡＡＴの酵素源として、具体的なものとして、例えば、ショウガ目（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｌｅｓ）、バラ目（Ｒｏｓａｌｅｓ）、ツツジ目（Ｅｒｉｃａｌｅｓ）、ウリ目（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｌｅｓ）、アブラナ目（Ｂｒａｓｓｉｃａｌｅｓ）、クスノキ目（Ｌａｕｒａｌｅｓ）、イネ目（Ｐｏａｌｅｓ）、ヤシ目（Ａｒｅｃａｌｅｓ）、クサスギカズラ目（Ａｓｐａｒａｇａｌｅｓ）、ユキノシタ目（Ｓａｘｉｆｒａｇａｌｅｓ）、ナデシコ目（Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｌｅｓ）、ブドウ目（Ｖｉｔａｌｅｓ）、キントラノオ目（Ｍａｌｐｉｇｈｉａｌｅｓ）、カタバミ目（Ｏｘａｌｉｄａｌｅｓ）、マメ目（Ｆａｂａｌｅｓ）、ムクロジ目（Ｓａｐｉｎｄａｌｅｓ）、アオイ目（Ｍａｌｖａｌｅｓ）、フトモモ目（Ｍｙｒｔａｌｅｓ）、キンポウゲ目（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｌｅｓ）、ナス目（Ｓｏｌａｎａｌｅｓ）、シソ目（Ｌａｍｉａｌｅｓ）、リンドウ目（Ｇｅｎｔｉａｎａｌｅｓ）およびキク目（Ａｓｔｅｒａｌｅｓ）からなる群から選択されるいずれかの目に属するものである。これらの中で、好ましくは、ショウガ目（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｌｅｓ）、バラ目（Ｒｏｓａｌｅｓ）、ツツジ目（Ｅｒｉｃａｌｅｓ）、ウリ目（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｌｅｓ）、アブラナ目（Ｂｒａｓｓｉｃａｌｅｓ）およびクスノキ目（Ｌａｕｒａｌｅｓ）からなる群から選択されるいずれかの目に属するものである。
【０１０９】  ショウガ目に属するものとしてはバショウ科（Ｍｕｓａｃｅａｅ）およびショウガ科（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）、バラ目に属するものとしてはバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）およびクワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）、ツツジ目に属するものとしてはツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）、カキノキ科（Ｅｂｅｎａｃｅａｅ）およびツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）、ウリ目に属するものとしてはウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）、アブラナ目に属するものとしてはパパイア科（Ｃａｒｉｃａｃｅａｅ）およびアブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）、クスノキ目に属するものとしてはクスノキ科（Ｌａｕｒａｃｅａｅ）、イネ目に属するものとしてはパイナップル科（Ｂｒｏｍｅｌｉａｃｅａｅ）およびイネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）、ヤシ目に属するものとしてはヤシ科（Ａｒｅｃａｃｅａｅ）、クサスギカズラ目に属するものとしてはラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）およびアヤメ科（Ｉｒｉｄａｃｅａｅ）、ユキノシタ目に属するものとしてはスグリ科（Ｇｒｏｓｓｕｌａｒｉａｃｅａｅ）、ナデシコ目に属するものとしてはナデシコ科（Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）、ブドウ目に属するものとしてはブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）、キントラノオ目に属するものとしてはキントラノオ科（Ｍａｌｐｉｇｈｉａｃｅａｅ）、トケイソウ科（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａｃｅａｅ）、トウダイグサ科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）およびヤナギ科（Ｓａｌｉｃａｃｅａｅ）、カタバミ目に属するものとしてはカタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）、マメ目に属するものとしてはマメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）、ムクロジ目に属するものとしてはミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）、ムクロジ科（Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ）およびウルシ科（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ）、アオイ目に属するものとしてはアオイ科（Ｍａｌｖａｃｅａｅ）、フトモモ目に属するものとしてはミソハギ科（Ｌｙｔｈｒａｃｅａｅ）、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）およびフトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）、キンポウゲ目に属するものとしてはキンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）およびケシ科（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ）、ナス目に属するものとしてはナス科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）、シソ目に属するものとしてはモクセイ科（Ｏｌｅａｃｅａｅ）、クマツヅラ科（Ｖｅｒｂｅｎａｃｅａｅ）およびシソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）、リンドウ目に属するものとしてはキョウチクトウ科（Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ）、キク目（Ａｓｔｅｒａｌｅｓ）に属するものとしてはキク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）の植物が好ましい。上記植物の近縁種も利用することができる。これらの中でさらに好ましくは、バショウ科（Ｍｕｓａｃｅａｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）、ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）、ウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）、パパイア科（Ｃａｒｉｃａｃｅａｅ）およびクスノキ科（Ｌａｕｒａｃｅａｅ）に属する植物である。
【０１１０】  具体的にはバショウ科に属するものとしてはバショウ（Ｍｕｓａ）属、ショウガ科（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）に属するものとしてはショウガ属（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ）、バラ科に属するものとしてはオランダイチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ）属、リンゴ（Ｍａｌｕｓ）属、サクラ（Ｐｒｕｎｕｓ）属、ナシ（Ｐｙｒｕｓ）属、ビワ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ）属、ボケ（Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ）属、キイチゴ（Ｒｕｂｕｓ）属およびバラ（Ｒｏｓａ）属、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）に属するものとしてはイチジク（Ｆｉｃｕｓ）属、ツツジ科に属するものとしてはスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）属、マタタビ科に属するものとしてはマタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）属、カキノキ科に属するものとしてはカキノキ（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ）属、ツバキ科に属するものとしてはツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ）属、ウリ科に属するものとしてはキュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ）属およびスイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ）属、パパイア科に属するものとしてはパパイア（Ｃａｒｉｃａ）属およびヴァスコンセレア（Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｌｅａ）属、アブラナ科に属するものとしてはシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）属、クスノキ科に属するものとしてはワニナシ（Ｐｅｒｓｅａ）属、パイナップル科に属するものとしてはアナナス属（Ａｎａｎａｓ）、イネ科に属するものとしてはイネ（Ｏｒｙｚａ）属、コムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）属、オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ）属、トウモロコシ（Ｚｅａ）属、モロコシ（Ｓｏｒｇｈｕｍ）属およびヤマカモジグサ（Ｂｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍ）属、ヤシ科に属するものとしてはココヤシ（Ｃｏｃｏｓ）属、ラン科に属するものとしてはバンダ（Ｖａｎｄａ）属、アヤメ科に属するものとしてはアヤメ（Ｉｒｉｓ）属、スグリ科に属するものとしてはスグリ（Ｒｉｂｅｓ）属、ナデシコ科に属するものとしてはカスミソウ属（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ）、ブドウ科に属するものとしてはブドウ（Ｖｉｔｉｓ）属、キントラノオ科に属するものとしてはヒイラギトラノオ（Ｍａｌｐｉｇｈｉａ）属、トケイソウ科に属するものとしてはトケイソウ（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ）属、トウダイグサ科に属するものとしてはトウゴマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ）属、ヤナギ科に属するものとしてはヤマナラシ（Ｐｏｐｕｌｕｓ）属、カタバミ科に属するものとしてはゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ）属、マメ科に属するものとしてはウマゴヤシ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ）属、ハウチワマメ（Ｌｕｐｉｎｕｓ）属、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ）属およびチョウマメ（Ｃｌｉｔｏｒｉａ）属、ミカン科に属するものとしてはミカン（Ｃｉｔｒｕｓ）属およびアエグレ（Ａｅｇｌｅ）属、ムクロジ科に属するものとしてはレイシ（Ｌｉｔｃｈｉ）属、ウルシ科に属するものとしてはマンゴー（Ｍａｎｇｉｆｅｒａ）属、アオイ科に属するものとしてはドリアン（Ｄｕｒｉｏ）属およびカカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ）属、ミソハギ科に属するものとしてはザクロ（Ｐｕｎｉｃａ）属、アカバナ科に属するものとしてはサンジソウ（Ｃｌａｒｋｉａ）属、フトモモ科に属するものとしてはバンジロウ（Ｐｓｉｄｉｕｍ）属、キンポウゲ科に属するものとしてはルイヨウショウマ（Ａｃｔａｅａ）属、ケシ科に属するものとして���ケシ（Ｐａｐａｖｅｒ）属、ナス科に属するものとしてはナス（Ｓｏｌａｎｕｍ）属、トウガラシ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ）属、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）属およびツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ）属、モクセイ科に属するものとしてはオリーブ（Ｏｌｅａ）属、クマツヅラ科に属するものとしてはグランデュラリア（Ｇｌａｎｄｕｌａｒｉａ）属、シソ科に属するものとしてはアキギリ（Ｓａｌｖｉａ）属、キョウチクトウ科に属するものとしてはラウオルフィア（Ｒａｕｖｏｌｆｉａ）属およびニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ）属、キク科に属するものとしてはカミツレ（Ｃｈａｍａｅｍｅｌｕｍ）属の植物が好ましい。その中でも、バショウ属、オランダイチゴ属、リンゴ属、サクラ属、ナシ属、スノキ属、マタタビ属、キュウリ属、パパイア属又はワニナシ属に属する植物がより好ましい。バショウ属、リンゴ属、サクラ属、ナシ属、スノキ属、マタタビ属、キュウリ属、パパイア属又はワニナシ属に属する植物が特に好ましい。バショウ属、リンゴ属、ナシ属、マタタビ属、キュウリ属、パパイア属又はワニナシ属に属する植物が特に好ましい。
【０１１１】  さらに、具体的にはバショウ属に属するものとしてはバナナ（Ｍｕｓａ  ｘ  ｐａｒａｄｉｓｉａｃａ）、バショウ（Ｍｕｓａ  ｂａｓｊｏｏ）、ヒメバショウ（Ｍｕｓａ  ｃｏｃｃｉｎｅａ）およびマレーヤマバショウ（Ｍｕｓａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）、ショウガ属に属するものとしてはショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、オランダイチゴ属に属するものとしてはイチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｘ  ａｎａｎａｓｓａ）、バージニアイチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、チリイチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｃｈｉｌｏｅｎｓｉｓ）およびエゾノヘビイチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｖｅｓｃａ）、リンゴ属に属するものとしてはリンゴ（Ｍａｌｕｓ  ｐｕｍｉｌａ、Ｍａｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ、Ｍａｌｕｓ  ｂａｃｃａｔａ）、ハナカイドウ（Ｍａｌｕｓ  ｈａｌｌｉａｎａ）、カイドウズミ（Ｍａｌｕｓ  ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａ）およびイヌリンゴ（Ｍａｌｕｓ  ｐｒｕｎｉｆｏｌｉａ）、サクラ属に属するものとしてはウメ（Ｐｒｕｎｕｓ  ｍｕｍｅ）、セイヨウミザクラ（Ｐｒｕｎｕｓ  ａｖｉｕｍ）、モモ（Ｐｒｕｎｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ）、アンズ（Ｐｒｕｎｕｓ  ａｒｍｅｎｉａｃａ）、アーモンド（Ｐｒｕｎｕｓ  ｄｕｌｃｉｓ）、スモモ（Ｐｒｕｎｕｓ  ｓａｌｉｃｉｎａ）およびセイヨウスモモ（Ｐｒｕｎｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、ナシ属に属するものとしてはセイヨウナシ（Ｐｙｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、ナシ（Ｐｙｒｕｓ  ｐｙｒｉｆｏｌｉａ）、マメナシ（Ｐｙｒｕｓ  ｃａｌｌｅｒｙａｎａ）およびヤセイセイヨウナシ（Ｐｙｒｕｓ  ｐｙｒａｓｔｅｒ）、ビワ属に属するものとしてはビワ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ボケ属に属するものとしてはカリン（Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、キイチゴ属に属するものとしてはラズベリー（Ｒｕｂｕｓ  ｉｄａｅｕｓ）およびブラックラズベリー（Ｒｕｂｕｓ  ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ）、バラ属に属するものとしてはハマナス（Ｒｏｓａ  ｒｕｇｏｓａ）、イチジク属に属するものとしてはイチジク（Ｆｉｃｕｓ  ｃａｒｉｃａ）、スノキ属に属するものとしてはブリーベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｃｏｒｙｍｂｏｓｕｍ、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ）、ビルベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、コケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｖｉｔｉｓ-ｉｄａｅａ）およびツルコケモモ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｏｘｙｃｏｃｃｏｓ）、マタタビ属に属するものとしてはキウイ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、サルナシ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、シマサルナシ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｒｕｆａ）およびマタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｐｏｌｙｇａｍａ）、カキノキ属に属するものとしてはカキ（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ  ｋａｋｉ）、ツバキ属に属するものとしてはチャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、キュウリ属に属するものとしてはキュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｓａｔｉｖｕｓ）、メロン（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｍｅｌｏ）、ニシインドコキュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ａｎｇｕｒｉａ）およびツノニガウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｍｅｔｕｌｉｆｅｒ）、スイカ属に属するもの��してはスイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）、パパイア属に属するものとしてはパパイア（Ｃａｒｉｃａ  ｐａｐａｙａ）、ヴァスコンセレア属に属するものとしてはマウンテンパパイア（Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｌｅａ  ｃｕｎｄｉｎａｍａｒｃｅｎｓｉｓ）、シロイヌナズナ属に属するものとしてはシロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）およびミヤマハタザオ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｌｙｒａｔａ）、ワニナシ属に属するものとしてはアボカド（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）、アナナス属に属するものとしてはパイナップル（Ａｎａｎａｓ  ｃｏｍｏｓｕｓ）、イネ属に属するものとしてはイネ（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ）、コムギ属に属するものとしてはコムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、オオムギ属に属するものとしてはオオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、トウモロコシ属に属するものとしてはトウモロコシ（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）、モロコシ属に属するものとしてはモロコシ（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｂｉｃｏｌｏｒ）、ヤマカモジグサ属に属するものとしてはセイヨウヤマカモジ（Ｂｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍ  ｄｉｓｔａｃｈｙｏｎ）、ココヤシ属に属するものとしてはココナッツ（Ｃｏｃｏｓ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）、バンダ属に属するものとしてはバンダ（Ｖａｎｄａ  ｈｙｂｒｉｄ  ｃｕｌｔｉｖａｒ）、アヤメ属に属するものとしてはオランダアヤメ（Ｉｒｉｓ  ｘ  ｈｏｌｌａｎｄｉｃａ）、スグリ属に属するものとしてはクロスグリ（カシス）（Ｒｉｂｅｓ  ｎｉｇｒｕｍ）、カスミソウ属に属するものとしてはカスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）、ブドウ属に属するものとしてはブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｖｉｔｉｓ  ｌａｂｒｕｓｃａ）、ヒイラギトラノオ属に属するものとしてはアセロラ（Ｍａｌｐｉｇｈｉａ  ｇｌａｂｒａ）、トケイソウ属に属するものとしてはパッションフルーツ（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ  ｅｄｕｌｉｓ）、トウゴマ属に属するものとしてはトウゴマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、ヤマナラシ属に属するものとしてはコットンウッド（Ｐｏｐｕｌｕｓ  ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ）、ゴレンシ属に属するものとしてはスターフルーツ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、ウマゴヤシ属に属するものとしてはタルウマゴヤシ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ  ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）、ハウチワマメ属に属するものとしてはルピナス（シロバナハウチワマメ）（Ｌｕｐｉｎｕｓ  ａｌｂｕｓ）、ダイズ属に属するものとしてはダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）、チョウマメ属に属するものとしてはチョウマメ（Ｃｌｉｔｏｒｉａ  ｔｅｒｎａｔｅａ）、ミカン属に属するものとしてはレモン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｌｉｍｏｎ）、スダチ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｕｄａｃｈｉ）、カボス（Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｐｈａｅｒｏｃａｒｐａ）、グレープフルーツ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｘ  ｐａｒａｄｉｓｉ）、ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｊｕｎｏｓ）ライム（Ｃｉｔｒｕｓ  ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ）およびオレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、アエグレ属に属するものとしてはアエグレ・マルメロス（Ａｅｇｌｅ  ｍａｒｍｅｌｏｓ）、レイシ属に属するものとしてはライチ（Ｌｉｔｃｈｉ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、マンゴー属に属するものとしてはマンゴー（Ｍａｎｇｉｆｅｒａ  ｉｎｄｉｃａ）、ドリアン属に属するものとしてはドリアン（Ｄｕｒｉｏ  ｚｉｂｅｔｈｉｎｕｓ）、カカオ属に属するものとしてはカカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａｃａｏ）、ザクロ属に属するものとしてはザクロ（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）、サンジソウ属に属するものとしてはフェアリーファンズ（ｆａｉｒｙ  ｆａｎｓ）（Ｃｌａｒｋｉａ  ｂｒｅｗｅｒｉ）およびレッドリボンズ（Ｒｅｄ  ｒｉｂｂｏｎｓ）（Ｃｌａｒｋｉａ  ｃｏｎｃｉｎｎａ）、バンジロウ属に属するものとしてはグァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ）、ルイヨウショウマ属に属するものとしてはアメリカショウマ（Ａｃｔａｅａ  ｒａｃｅｍｏｓａ）、ケシ属に属するものとしてはケシ（Ｐａｐａｖｅｒ  ｓｏｍｎｉｆｅｒｕｍ）、オニゲシ（Ｐａｐａｖｅｒ  ｏｒｉｅｎｔａｌｅ）およびハカマオニゲシ（Ｐａｐａｖｅｒ  ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ）、ナス属に属するものとしてはトマト（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）、トウガラシ属に属するものとしてはピーマン（Ｃａｐｓｉｃｕｍ  ａｎｎｕｕｍ）およびハバネロ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ  ｃｈｉｎｅｎｓｅ）、タバコ属に属するものとしてはタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ａｔｔｅｎｕａｔａ）、ツクバネアサガオ属に属するものとしてはペチュニア（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｘ  ｈｙｂｒｉｄａ）、オリーブ属に属するものとしてはオリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ）、グランデュラリア属に属するものとしてはビジョザクラ（Ｇｌａｎｄｕｌａｒｉａ  ｘ  ｈｙｂｒｉｄａ）、アキギリ属に属するものとしてはサルビア（Ｓａｌｖｉａ  ｓｐｌｅｎｄｅｎｓ）、ラウオルフィア属に属するものとしてはインドジャボク（Ｒａｕｖｏｌｆｉａ  ｓｅｒｐｅｎｔｉｎａ）、ニチニチソウ属に属するものとしてはニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）、カミツレ属に属するものとしてはローマカミツレ（Ｃｈａｍａｅｍｅｌｕｍ  ｎｏｂｉｌｅ）が特に好ましい。その中でも、バナナ、イチゴ、リンゴ、ウメ、セイヨウナシ、ブリーベリー、キウイ、メロン、パパイアおよびボカドが好ましい。バナナ、リンゴ、ウメ、セイヨウナシ、ブリーベリー、キウイ、メロン、パパイアおよびボカドがより好ましい。バナナ、リンゴ、セイヨウナシ、キウイ、メロン、パパイアおよびボカドが特に好ましい。
【０１１２】  本発明において、植物の分類はＡＰＧ植物分類体系第３版（Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｌｉｎｎｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  ２００９，  １６１，  １０５１２１）に従うものとする。
【０１１３】  ＡＡＴを選択するに際しては、前記ＡＡＴ遺伝子を単離し、例えば一般的な宿主ベクター系に導入し、該ベクター系で形質転換した微生物を利用して評価選択することも可能である。たとえば、ＡＡＴ遺伝子はいくつか公表されているものある（例えば、特許文献７参照）。該情報に基づきＤＮＡプローブを作製し、たとえば、ＰＣＲに用いるプライマーを作製し、ＰＣＲを行うことにより該遺伝子を単離することもできる。また、ＡＡＴ遺伝子の塩基配列を通常の方法で全合成することも可能である。これら遺伝子情報が公知なＡＡＴがメタクリル酸エステルの合成活性を有するかどうかについては、前記の方法で同様に確認することができる。一方、遺伝子情報の不明なＡＡＴについては、ＡＡＴを精製し、そのタンパク質をもとに遺伝子工学的な手法により遺伝子情報を得ることができる。
【０１１４】  本発明において、好ましいＡＡＴ遺伝子としては、その翻訳産物がメタクリル酸エステルを製造する能力を有していれば、特に限定されず、前記ＡＡＴ酵素源の中から適宜選択される。特に好ましくは、リンゴ由来ＡＡＴ遺伝子（配列番号７７）、イチゴ由来ＡＡＴ遺伝子（配列番号７９）、イチゴ由来ＡＡＴ遺伝子（配列番号８１）が挙げられる。
【０１１５】  なお、本発明においてＡＡＴ遺伝子には野生型のアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を含み、メタクリリル−ＣｏＡとアルコールからメタクリル酸エステルを生成する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子も含まれる。
【０１１６】  ここで用語「数個」とは、１〜４０個、好ましくは１〜２０個、より好ましくは１０個以下をいう。遺伝子に変異を導入するには、Ｋｕｎｋｅｌ法や  Ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ法等の公知手法により、部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キット、例えばＱｕｉｋＣｈａｎｇｅＴＭ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（ストラタジーン社）、ＧｅｎｅＴａｉｌｏｒＴＭ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（インビトロジェン社）、ＴａＫａＲａ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｕｔａｎ−Ｋ、Ｍｕｔａｎ−Ｓｕｐｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｋｍ等：タカラバイオ社）等を用いることができる。あるいは、変異を含む配列を有する遺伝子全体を人工合成してもよい。
【０１１７】  本発明において、ＤＮＡの塩基配列の確認は、慣用の方法により配列決定することにより行うことができる。例えば、サンガー法に基づき、適当なＤＮＡシークエンサーを利用して配列を確認することも可能である。
【０１１８】  また、本発明においてＡＡＴ遺伝子には、野生型のアミノ酸配列からなるタンパク質と９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９．５％以上、さらに好ましくは９９．９％以上の同一性を示し、メタクリリル−ＣｏＡとアルコールからメタクリル酸エステルを生成する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子も含まれる。
【０１１９】  さらに、本発明においてＡＡＴ遺伝子には、野生型の塩基配列に対する相補的な塩基配列を有するポリヌクレオチドに対してストリンジェントな条件でハイブリダイズし、メタクリリル−ＣｏＡとアルコールとからメタクリル酸エステルを生成する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子も含まれる。  本明細書において、ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．」（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９））、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７−１９９７））等を参照することができる。  本明細書において、ストリンジェントな条件は、例えば、ＤＮＡを固定したナイロン膜を、６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣは塩化ナトリウム８．７６ｇ、クエン酸ナトリウム４．４１ｇを１リットルの水に溶かしたもの）、１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ、０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％ポリビニルピロリドン、０．１％フィコールを含む溶液中で６５℃にて２０時間プローブとともに保温してハイブリダイゼーションを行う条件を挙げることができるが、これに限定されるわけではない。当業者であれば、このようなバッファーの塩濃度、温度等の条件に加えて、その他のプローブ濃度、プローブの長さ、反応時間等の諸条件を加味し、ハイブリダイゼーションの条件を設定することができる。ハイブリダイゼーション後の洗浄条件として、例えば、「２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」、「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」、よりストリンジェントな条件としては、例えば、「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」、「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、５０℃」等の条件を挙げることができる。
【０１２０】  さらに、本発明においてＡＡＴ遺伝子には、野生型の塩基配列とＢＬＡＳＴ等（例えば、デフォルトすなわち初期設定のパラメータ）を用いて計算したときに、８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上の同一性を有する塩基配列からなり、メタクリリル−ＣｏＡとアルコールとからメタクリル酸エステルを生成する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子も含まれる。また、上記ＡＡＴ遺伝子のコドンは、形質転換に用いる微生物のコドン使用頻度に合わせて変換されたものであっても良い。
【０１２１】〔ＡＡＴ遺伝子を導入した組換え微生物の作製〕  本願発明であるメタクリル酸生成能を有する微生物を宿主として、上記ＡＡＴ遺伝子をコードするＤＮＡを導入して当該微生物内でタンパク質に転写翻訳させることで、メタクリル酸エステルの製造を可能とする。さらに、メタクリル酸生成活性を強化する酵素遺伝子（例えば、ＡＣＤ、ＢＣＫＡＤ等の遺伝子）を同時に導入してもよい。
【０１２２】  遺伝子導入方法については特に制限はないが、導入されるＤＮＡは、ベクターに組込まれた形態にあることが好ましい。すなわち、ＡＡＴ遺伝子を前記宿主細胞で発現可能な形態でベクターに組込み、これを宿主細胞に導入する。これらベクターには、宿主微生物中で自立複製可能なもの、微生物ゲノム中に組込まれるものなどがあるが、ＡＡＴ遺伝子を保持するものであれば特に限定されず、それぞれの微生物に適したベクターを用いることができる。Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属細菌や類縁菌においては、エレクトロポレーションなどにより導入されたＤＮＡがゲノムに組込まれやすいという性質を有することを利用して、発現可能なＡＡＴ遺伝子を含むＤＮＡ断片をゲノムに挿入することも可能である。ＡＡＴ遺伝子を含む複数の遺伝子を細胞内に導入したい場合には、それぞれが発現可能な形態で、１つまたは複数の発現ベクターに組込むことができる。
【０１２３】  本発明において使用可能なベクターには、プラスミドベクター、ファージ（ウィルス）ベクター、コスミドベクターおよび人工染色体ベクターなどが含まれ、さらに、１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子および適当な発現調節配列を含むことができる。多くの宿主・ベクター系が知られているが、必要に応じて、同様の手法にて開発することができる。
【０１２４】  例えば、ロドコッカス属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）に属する微生物に導入するためのベクターとしては、ｐＫ１、ｐＫ２、ｐＫ３およびｐＫ４、並びにｐＳＪ０３４（特開平１０−３３７１８５号参照）、ｐＳＪ０２３およびｐＳＪ００２（特開平１０−２４８６７号を参照）等（これらに限定されない）、公知のベクターを用いることができる。また、公知のベクターを所望の構成に改変したものも用いることができる。ｐＳＪ０２３は形質転換体Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ  ＡＴＣＣ１２６７４／ｐＳＪ０２３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６２３２）として産業総合技術研究所  特許生物寄託センターに寄託されている。
【０１２５】  上記ＡＡＴ遺伝子とベクターへの挿入は、当業者に知られた遺伝子組換え技術を用いて行うことができる。例えば、制限酵素切断とライゲーションキットを用いる方法、トポイソメラーゼを用いる方法、Ｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎキット（タカラバイオ）等を利用することができる。ベクターに挿入される遺伝子は、宿主生物中で各遺伝子にコードされるタンパク質の転写翻訳を調節することが可能なプロモーターの下流に、連結して挿入される。また、挿入の際に必要であれば、適当なリンカーを付加してもよい。また、必要に応じて、遺伝子を導入しようとする宿主微生物において利用可能なターミネーター配列、エンハンサー配列、スプライシングシグナル配列、ポリＡ付加シグナル配列、ＳＤ配列やＫｏｚａｋ配列などのリボソーム結合配列、選択マーカー遺伝子などを連結することができる。選択マーカー遺伝子の例としては、アンピシリン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、クロラムフェニコール耐性遺伝子等の薬剤耐性遺伝子の他、アミノ酸や核酸等の栄養素の細胞内生合成に関与する遺伝子、あるいはルシフェラーゼ等の蛍光タンパク質をコードする遺伝子などを挙げることができる。挿入にともない、ＤＮＡがコードするアミノ酸配列の一部を置換してもよい。
【０１２６】  上記の点から、本発明の一例において、ロドコッカス属用のベクターとしてｐＫ４に変異処理を行い取得したｐＬＫ００５を用いることが特に好ましい。ｐＬＫ００５のプロモーターの３’下流に配置されるようにＡＡＴ遺伝子を連結・挿入して、プロモーターによってＡＡＴ遺伝子を発現する発現プラスミドベクターを構築することができる。
【０１２７】  ベクターには、ＡＡＴ遺伝子群を単独またはその他メタクリル酸生成活性を強化する酵素遺伝子群より選択されるいずれか１個の遺伝子を挿入しても良いし、複数個の遺伝子を挿入しても良い。ベクターに挿入される遺伝子について用いられる場合「複数個」とは２〜５個、２〜４個、好ましくは２〜３個の遺伝子を挿入することが可能である。また、一つのベクターに複数個の遺伝子が挿入される場合、これらの遺伝子はオペロンを形成することが好ましい。ここで「オペロン」とは、同一のプロモーターの制御下に転写される１またはそれ以上の遺伝子から構成される核酸配列単位である。
【０１２８】  上記の遺伝子、好ましくはベクターの形態にある遺伝子は、当業者に知られた方法によって、宿主微生物に導入される。宿主微生物への組換えベクターの導入方法としては、宿主微生物に適した方法であれば特に限定されるものではなく、例えば、エレクトロポレーション法、スフェロプラスト法、酢酸リチウム法、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、接合伝達法等が挙げられる。
【０１２９】（２）メタクリル酸の製造工程（２−１）培養によるメタクリル酸の製造  本発明に係るメタクリル酸の製造方法では、前記微生物を再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体中で培養することによって培養物中にメタクリル酸を得ることができる。
【０１３０】［培地］  微生物培養に用いられる再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体（培地）は、微生物が増殖可能な、少なくとも一種類の炭素源を含む十分な栄養素を含む固形培地又は液体培地とされる。ある実施形態において、培地は、細胞の生存及び増殖に最適なｐＨ及び塩濃度に有利に処方される。
【０１３１】  再生可能原料及びバイオマスは、メタクリル酸を産生することができれば特に制限はない。再生可能原料及びバイオマスは、植物性材料、動物性材料及び生分解性廃棄物等であってよい。好適な再生可能原料及びバイオマスは、ポリペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー又は大豆等の抽出物である。これらの抽出物はそのまま、あるいは一部精製して用いられる。再生可能原料は、多糖類、オリゴ糖類及び単糖類であるグルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、キシロース及びアラビノース並びにこれらの誘導体であってよい。さらに、再生可能原料及びバイオマスには、これらの糖類から誘導又は代謝によって生じる脂質、アミノ酸類、有機酸類およびアルコール類を用いることもできる。好適な再生可能原料としては、グルコース、フルクトース、キシロース等の糖類；バリン、アラニン、ロイシン、リジン、グルタミン酸等のアミノ酸類；酢酸、ピルビン酸、乳酸、アセト酢酸、アセト乳酸、２−オキソイソ吉草酸、酪酸、イソ酪酸、プロピオン酸、リンゴ酸、フマル酸、クエン酸、コハク酸等の酸；エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール等のアルコールが挙げられる。これらの再生可能原料は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用することができる。
【０１３２】  培地中の再生可能原料及び／又はバイオマスの濃度は、メタクリル酸を産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０５〜２０（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．１〜１５（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．２〜１０（ｗ／ｖ）％とされる。０．２（ｗ／ｖ）％以上用いるのは微生物のメタクリル酸産生能が上昇するからであり、１０（ｗ／ｖ）％以下とするのはそれ以上添加しても飛躍的な効果の上昇が認められないからである。
【０１３３】  培地には、無機窒素源又は無機金属塩類等を添加しても良い。無機窒素源としては、例えば、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸又は有機酸のアンモニウム塩等が用いられる。
【０１３４】  窒素源の培地中における濃度は、メタクリル酸を産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０１〜１０（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０５〜８（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．１〜４（ｗ／ｖ）％とされる。
【０１３５】  無機金属塩としては、例えば、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等が用いられる。
【０１３６】  無機塩類の培地中における濃度は、メタクリル酸を産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．００１〜１．６（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．００５〜１．３（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．０１〜１（ｗ／ｖ）％とされる。０．０１（ｗ／ｖ）％以上用いるのは微生物のメタクリル酸産生能が上昇するからであり、１（ｗ／ｖ）％以下とするのはそれ以上添加しても飛躍的な効果の上昇が認められないからである。
【０１３７】  この他、培地には、微量金属、ビタミンなどが必要に応じて添加される。また、必要に応じて微生物の生育に必要な各種の有機物、無機物、界面活性剤あるいは通常用いられる消泡剤などを培地中に追添加することができる。
【０１３８】［培養条件］  培地への微生物の播種は、従来公知の手法によって行えばよい。培養方法も、特に限定されず、振盪培養、通気撹拌培養及び静置培養などの公知手法を用いることができる。
【０１３９】  微生物の培養条件は、微生物が生育し、かつメタクリル酸を生成する限りにおいて特に限定されない。培養は、好気的条件下で行われても嫌気的条件下で行われてもよい。
【０１４０】  ｐＨ、温度及び培養時間は、微生物が生育し、かつメタクリル酸を生成し得る条件であれば特に限定されない。ｐＨは、好ましくは３〜１０、より好ましくは４〜９、さらに好ましくは５〜８とされる。温度は、好ましくは１０〜４５℃、より好ましくは１５〜４０℃、さらに好ましくは２０〜３５℃とされる。培養時間は、好ましくは１０〜１０００時間、より好ましくは１５〜４８０時間、さらに好ましくは２０〜２４０時間とされる。
【０１４１】  これらの培養条件は、再生可能原料及び／又はバイオマスの利用量に対するメタクリル酸の産生量の比率を最大化するように、菌株毎に適宜選択又は最適化される。なお、炭素源の量及び培養条件を適宜調整することで、メタクリル酸の産生量を調整することもできる。
【０１４２】  メタクリル酸を０．０４ｐｐｍ以上蓄積させるための好適な条件としては、ｐＨ５．５〜７．５の条件下、再生可能原料及び／又はバイオマスの濃度を直接あるいは間接的に０．１％以上に維持し、温度を２０〜４０℃の範囲に調整し、３時間以上反応させる。さらに、培養液中の微生物の濃度は、培養液の環境が微生物または培養細胞の増殖にとって不適切となって死滅する比率が高くならない範囲で、高い状態で維持することが効率よい生産性を得るのに好ましく、例えば、乾燥重量として２ｇ／Ｌ以上に維持することで良好な生産効率が得られ、生成物の蓄積濃度を向上させることができる。
【０１４３】（２−２）休止菌体反応によるメタクリル酸の製造  本発明に係るメタクリル酸の製造方法では、上述のように、再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体中で、増殖を伴う微生物の培養を行う方法の他に以下の方法も採用できる。微生物が増殖能を有していてもいなくてもよく、予め培養した微生物を再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体に接触させ、実質的に増殖を伴わない休止菌体反応によりメタクリル酸を産生させることもできる。
【０１４４】［反応液］  休止菌体反応に用いられる再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体（反応液）に含まれる再生可能原料及びその濃度は、上記の培養によるメタクリル酸の製造の場合と同様であってよい。
【０１４５】  反応液には、無機金属塩類等を添加しても良い。無機金属塩としては、例えば、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等が用いられる。
【０１４６】  無機塩類の反応液中における濃度は、メタクリル酸を産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０００１〜２（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０００３〜１．３（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．００１〜１（ｗ／ｖ）％とされる。
【０１４７】  この他、反応液には、微量金属、ビタミンなどが必要に応じて添加される。また、必要に応じて反応に必要な各種の有機物、無機物、界面活性剤あるいは通常用いられる消泡剤などを反応液中に追添加することができる。
【０１４８】［反応条件］  休止菌体反応には、予め培養した微生物の培養液をそのまま用いるか、あるいはろ過又は遠心分離などで回収した菌体を使用する。回収した微生物は、適当な緩衝液等に再懸濁させ、任意の菌濃度にして用いることができる。緩衝液等には、生理食塩水、リン酸カリウム緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液及びホウ酸−水酸化ナトリウム緩衝液などが用いられる。
【０１４９】  また、休止菌体反応には、回収した微生物の処理物（例えば、破砕物、粗酵素又は精製酵素など）を使用することもできる。さらに、微生物又はその処理物を公知の方法で適当な担体に固定化し、その固定化物を反応に使用してもよい。
【０１５０】  反応条件は、メタクリル酸を生成する限りにおいて特に限定されない。反応は、好気的条件下で行われても嫌気的条件下で行われてもよい。反応方法も、特に限定されず、振盪反応、通気撹拌反応及び静置反応などの公知手法を用いることができる。
【０１５１】  ｐＨ、温度及び反応時間は、メタクリル酸を生成し得る条件であれば特に限定されない。ｐＨは、好ましくは３〜１０、より好ましくは４〜９、さらに好ましくは５〜８とされる。温度は、好ましくは１０〜４５℃、より好ましくは１５〜４０℃、さらに好ましくは２０〜３５℃とされる。培養時間は、好気的条件で好ましくは１０〜１８０時間、より好ましくは１５〜１５０時間、さらに好ましくは２０〜１２０時間とされる。
【０１５２】  また、生成したメタクリル酸を分離する目的で、あらかじめ、有機溶媒を添加し、２相系で反応させることも可能である。有機溶媒としては、例えば直鎖状、分岐状又は環状の、飽和又は不飽和脂肪族炭化水素、飽和又は不飽和芳香族炭化水素等を単独で又は２種以上を混合して用いることができる。具体的には、例えば、炭化水素系溶媒（例えばペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレンなど）、ハロゲン化炭化水素系溶媒（例えば塩化メチレン、クロロホルムなど）、エーテル系溶媒（例えばジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジメトキシエタンなど）、エステル系溶媒（例えばギ酸メチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル）などが挙げられる。これらの有機溶媒を添加しておくことで、生成したメタクリル酸が有機相に移行し、効率的に反応が進行する場合がある。
【０１５３】  これらの反応条件は、再生可能原料及び／又はバイオマスの利用量に対するメタクリル酸の産生量の比率を最大化するように、菌株毎に適宜選択又は最適化される。なお、炭素源の量及び反応条件を適宜調整することで、メタクリル酸の産生量を調整することもできる。
【０１５４】  本発明に係るメタクリル酸の製造方法においては、上述した培養によるメタクリル酸の製造と休止菌体反応によるメタクリル酸の製造を適宜組み合わせて行ってもよい。２つの方法を組み合わせることによって、より効率的なメタクリル酸の生産が可能となる。さらに、本発明に係るメタクリル酸の製造方法では、培地あるいは休止菌体反応液として調製した再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体に微生物を接触させる方法以外に、再生可能原料及び／又はバイオマスに直接微生物を接触させる方法も採用可能である。
【０１５５】  メタクリル酸を０．０４ｐｐｍ以上蓄積させるための好適な条件としては、ｐＨ５．５〜７．５の条件下、再生可能原料及び／又はバイオマスの濃度を直接あるいは間接的に０．１％以上に維持し、温度を２０〜４０℃の範囲に調整し、３時間以上反応させる。さらに、反応液中の微生物の濃度は、高い状態で維持することが効率よい生産性を得るのに好ましく、例えば、乾燥重量として２ｇ／Ｌ以上に維持することで良好な生産効率が得られ、生成物の蓄積濃度を向上させることができる。
【０１５６】（２−３）メタクリル酸の回収  培地中又は反応液中に生成したメタクリル酸及びその生成量は、高速液体クロマトグラフィー及びＬＣ−ＭＳなどの通常の方法を用いて検出し、測定することができる。
【０１５７】  メタクリル酸は、ろ過、遠心分離、真空濃縮、イオン交換又は吸着クロマトグラフィー、溶媒抽出、蒸留及び結晶化などの周知の操作を必要に応じて適宜組み合わせて用いることにより、培地又は反応液中から分離・精製できる。
【０１５８】  得られたメタクリル酸からは、エステル化反応によってメタクリル酸エステルを製造できる。さらに、メタクリル酸生成能を有する微生物（例えば上記（ｉ）〜（ｘｘｉｖ）の菌株）に、メタクリル酸のエステル化反応に関与する酵素を遺伝子導入し、メタクリル酸エステルを製造することもできる。
【０１５９】（３）メタクリル酸エステルの製造工程（３−１）培養によるメタクリル酸エステルの製造  本発明において、メタクリル酸エステルの製造は、メタクリル酸生成能を有する微生物およびそれら誘導株にＡＡＴ遺伝子が導入された遺伝子組み換え微生物を、再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体中で培養することによって培養菌体又は培養物中にメタクリル酸エステルを生成蓄積させ、該培養菌体又は培養物又は培養容器気相部からメタクリル酸エステルを回収することにより行われる。
【０１６０】［培地］  微生物の培養に用いられる再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体（培地）は、微生物が増殖可能な、少なくとも一種類の炭素源を含む十分な栄養素を含む固形培地又は液体培地とされる。ある実施形態において、培地は、細胞の生存及び増殖に最適なｐＨ及び塩濃度に有利に処方される。
【０１６１】  再生可能原料及びバイオマスは、メタクリル酸エステルを産生することができれば特に制限はない。再生可能原料及びバイオマスは、植物性材料、動物性材料及び生分解性廃棄物等であってよい。好適な再生可能原料及びバイオマスは、ポリペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー又は大豆等の抽出物である。これらの抽出物はそのまま、あるいは一部精製して用いられる。再生可能原料は、多糖類、オリゴ糖類及び単糖類であるグルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、キシロース及びアラビノース並びにこれらの誘導体であってよい。さらに、再生可能原料及びバイオマスには、これらの糖類から誘導又は代謝によって生じる脂質、アミノ酸類、有機酸類およびアルコール類を用いることもできる。好適な再生可能原料としては、グルコース、フルクトース、キシロース等の糖類；バリン、アラニン、ロイシン、リジン、グルタミン酸等のアミノ酸類；酢酸、ピルビン酸、乳酸、アセト酢酸、アセト乳酸、２−オキソイソ吉草酸、酪酸、イソ酪酸、プロピオン酸、リンゴ酸、フマル酸、クエン酸、コハク酸等の酸；エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール等のアルコールが挙げられる。これらの再生可能原料は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用することができる。
【０１６２】  培地中の再生可能原料及び／又はバイオマスの濃度は、メタクリル酸エステルを産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０５〜２０（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．１〜１５（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．２〜１０（ｗ／ｖ）％とされる。０．２（ｗ／ｖ）％以上用いるのは微生物のメタクリル酸産生能が上昇するからであり、１０（ｗ／ｖ）％以下とするのはそれ以上添加しても飛躍的な効果の上昇が認められないからである。
【０１６３】  培地には、目的のメタクリル酸エステルに応じて、アルコールまたはフェノール類を添加する。アルコールまたはフェノール類は、上述のものを使用することが好ましい。これらのアルコールまたはフェノール類は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用することができる。  アルコールまたはフェノール類の培地中における濃度は、メタクリル酸エステルを産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０１〜２０（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０５〜１０（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．１〜５（ｗ／ｖ）％とされる。また、アルコールまたはフェノール類は、予め培地に添加しておくこともできるし、培養を行いながら連続的に又は２回以上に分けて間欠的に添加することもできる。
【０１６４】  培地には、無機窒素源又は無機金属塩類等を添加しても良い。無機窒素源としては、例えば、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸又は有機酸のアンモニウム塩等が用いられる。  窒素源の培地中における濃度は、メタクリル酸エステルを産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０１〜１０（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０５〜８（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．１〜４（ｗ／ｖ）％とされる。  無機金属塩としては、例えば、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等が用いられる。  無機塩類の培地中における濃度は、メタクリル酸エステルを産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．００１〜１．６（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．００５〜１．３（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．０１〜１（ｗ／ｖ）％とされる。０．０１（ｗ／ｖ）％以上用いるのは微生物のメタクリル酸エステル産生能が上昇するからであり、１（ｗ／ｖ）％以下とするのはそれ以上添加しても飛躍的な効果の上昇が認められないからである。  この他、培地には、微量金属、ビタミンなどが必要に応じて添加される。また、必要に応じて微生物の生育に必要な各種の有機物、無機物、界面活性剤あるいは通常用いられる消泡剤などを培地中に追添加することができる。
【０１６５】［培養条件］  培地への微生物の播種は、従来公知の手法によって行えばよい。培養方法も、特に限定されず、振盪培養、通気撹拌培養及び静置培養などの公知手法を用いることができる。  微生物の培養条件は、微生物が生育し、かつメタクリル酸エステルを生成する限りにおいて特に限定されない。培養は、好気的条件下で行われても嫌気的条件下で行われてもよい。  ｐＨ、温度及び培養時間は、微生物が生育し、かつメタクリル酸エステルを生成し得る条件であれば特に限定されない。ｐＨは、好ましくは３〜１０、より好ましくは４〜９、さらに好ましくは５〜８とされる。温度は、好ましくは１０〜４５℃、より好ましくは１５〜４０℃、さらに好ましくは２０〜３５℃とされる。培養時間は、好ましくは１０〜１０００時間、より好ましくは１５〜４８０時間、さらに好ましくは２０〜２４０時間とされる。  これらの培養条件は、再生可能原料及び／又はバイオマスの利用量に対するメタクリル酸エステルの産生量の比率を最大化するように、菌株毎に適宜選択又は最適化される。なお、炭素源の量及び培養条件を適宜調整することで、メタクリル酸エステルの産生量を調整することもできる。
【０１６６】  メタクリル酸エステルを０．０４ｐｐｍ以上蓄積させるための好適な条件としては、ｐＨ５．５〜７．５の条件下、再生可能原料及び／又はバイオマスの濃度を直接あるいは間接的に０．１％以上に、且つアルコールまたはフェノール類の濃度を直接あるいは間接的に０．１％以上に維持し、温度を２０〜４０℃の範囲に調整し、３時間以上反応させる。さらに、培養液中の微生物の濃度は、培養液の環境が微生物または培養細胞の増殖にとって不適切となって死滅する比率が高くならない範囲で、高い状態で維持することが効率よい生産性を得るのに好ましく、例えば、乾燥重量として２ｇ／Ｌ以上に維持することで良好な生産効率が得られ、生成物の蓄積濃度を向上させることができる。
【０１６７】（３−２）休止菌体反応によるメタクリル酸エステルの製造  本発明に係るメタクリル酸エステルの製造方法では、上述のように、再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体中で、増殖を伴う微生物の培養を行う方法の他に以下の方法も採用できる。微生物が増殖能を有していてもいなくてもよく、予め培養した微生物を再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体に接触させ、実質的に増殖を伴わない休止菌体反応によりメタクリル酸エステルを産生させることもできる。
【０１６８】［反応液］  休止菌体反応に用いられる再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体（反応液）に含まれる再生可能原料及びその濃度は、上記の培養によるメタクリル酸エステルの製造の場合と同様であってよい。  休止菌体反応に用いられるアルコールまたはフェノール類及びその濃度は、上記の培養によるメタクリル酸エステルの製造の場合と同様であってよい。  反応液には、無機金属塩類等を添加しても良い。無機金属塩としては、例えば、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等が用いられる。  無機塩類の反応液中における濃度は、メタクリル酸エステルを産生することができれば特に限定されない。濃度は、例えば、０．０００１〜２（ｗ／ｖ）％、好ましくは０．０００３〜１．３（ｗ／ｖ）％、より好ましくは０．００１〜１（ｗ／ｖ）％とされる。  この他、反応液には、微量金属、ビタミンなどが必要に応じて添加される。また、必要に応じて反応に必要な各種の有機物、無機物、界面活性剤あるいは通常用いられる消泡剤などを反応液中に追添加することができる。
【０１６９】［反応条件］  休止菌体反応には、予め培養した微生物の培養液をそのまま用いるか、あるいはろ過又は遠心分離などで回収した菌体を使用する。回収した微生物は、適当な緩衝液等に再懸濁させ、任意の菌濃度にして用いることができる。緩衝液等には、生理食塩水、リン酸カリウム緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液及びホウ酸−水酸化ナトリウム緩衝液などが用いられる。  また、休止菌体反応には、回収した微生物の処理物（例えば、破砕物、粗酵素又は精製酵素など）を使用することもできる。さらに、微生物又はその処理物を公知の方法で適当な担体に固定化し、その固定化物を反応に使用してもよい。  反応条件は、メタクリル酸エステルを生成する限りにおいて特に限定されない。反応は、好気的条件下で行われても嫌気的条件下で行われてもよい。反応方法も、特に限定されず、振盪反応、通気撹拌反応及び静置反応などの公知手法を用いることができる。  ｐＨ、温度及び反応時間は、メタクリル酸を生成し得る条件であれば特に限定されない。ｐＨは、好ましくは３〜１０、より好ましくは４〜９、さらに好ましくは５〜８とされる。温度は、好ましくは１０〜４５℃、より好ましくは１５〜４０℃、さらに好ましくは２０〜３５℃とされる。反応時間は、好気的条件で好ましくは５〜１８０時間、より好ましくは１０〜１５０時間、さらに好ましくは１５〜１２０時間とされる。
【０１７０】  また、生成したメタクリル酸エステルを分離する目的で、あらかじめ、有機溶媒を添加し、２相系で反応させることも可能である。有機溶媒としては、例えば直鎖状、分岐状又は環状の、飽和又は不飽和脂肪族炭化水素、飽和又は不飽和芳香族炭化水素等を単独で又は２種以上を混合して用いることができる。具体的には、例えば、炭化水素系溶媒（例えばペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレンなど）、ハロゲン化炭化水素系溶媒（例えば塩化メチレン、クロロホルムなど）、エーテル系溶媒（例えばジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジメトキシエタンなど）、エステル系溶媒（例えばギ酸メチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル）などが挙げられる。これらの有機溶媒を添加しておくことで、生成したメタクリル酸エステルが有機相に移行し、効率的に反応が進行する場合がある。
【０１７１】  これらの反応条件は、再生可能原料及びバイオマスの利用量に対するメタクリル酸エステルの産生量の比率を最大化するように、菌株毎に適宜選択又は最適化される。なお、炭素源の量及び反応条件を適宜調整することで、メタクリル酸エステルの産生量を調整することもできる。
【０１７２】  メタクリル酸エステルを０．０４ｐｐｍ以上蓄積させるための好適な条件としては、ｐＨ５．５〜７．５の条件下、再生可能原料及び／又はバイオマスの濃度を直接あるいは間接的に０．１％以上に、且つアルコールまたはフェノール類の濃度を直接あるいは間接的に０．１％以上に維持し、温度を２０〜４０℃の範囲に調整し、３時間以上反応させる。さらに、反応液中の微生物の濃度は高い状態で維持することが効率よい生産性を得るのに好ましく、例えば、乾燥重量として２ｇ／Ｌ以上に維持することで良好な生産効率が得られ、生成物の蓄積濃度を向上させることができる。
【０１７３】  本発明に係るメタクリル酸エステルの製造方法においては、上述した培養によるメタクリル酸エステルの製造と休止菌体反応によるメタクリル酸エステルの製造を適宜組み合わせて行ってもよい。２つの方法を組み合わせることによって、より効率的なメタクリル酸エステルの生産が可能となる。さらに、本発明に係るメタクリル酸エステルの製造方法では、培地あるいは休止菌体反応液として調製した再生可能原料及び／又はバイオマスを含む水性媒体に微生物を接触させる方法以外に、再生可能原料及び／又はバイオマスに直接微生物を接触させる方法も採用可能である。
【０１７４】（３−３）メタクリル酸エステルの回収  培地中又は反応液中に生成したメタクリル酸エステル及びその生成量は、高速液体クロマトグラフィー及びＬＣ−ＭＳなどの通常の方法を用いて検出し、測定することができる。また、培養容器又は反応容器の気相部（ヘッドスペース部）に揮発したメタクリル酸エステル及びその生成量は、ガスクロマトグラフィーなどの通常の方法を用いて検出し、測定することができる。  メタクリル酸エステルは、ろ過、遠心分離、真空濃縮、イオン交換又は吸着クロマトグラフィー、溶媒抽出、蒸留及び結晶化などの周知の操作を必要に応じて適宜組み合わせて用いることにより、培地又は反応液中から分離・精製できる。
【０１７５】２．メタクリル酸合成に関与する酵素およびその遺伝子  本発明の一側面であるメタクリル酸合成に関与する酵素およびその遺伝子について以下詳述する。
【０１７６】  本発明者らはメタクリル酸誘導体の生産能を有する微生物について広く探索を行い、微生物でメタクリル酸を生成しうることを見出した。その合成ルートは探索の経緯および先行技術よりバリン分解経路と推定された。
【０１７７】  バリン分解経路は遺伝病との関係から、ヒトやラットなどについての研究が進んでいる（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  ３２４：  ２４１−２５８  （２０００））。しかし、微生物のバリン分解経路中の酵素に関する知見は少なく、詳細については不明であった。糸状菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓについて、ｓｃｄＡ遺伝子が欠損した変異株の解析から、ｓｃｄＡ遺伝子産物がイソロイシン、バリン及び短鎖脂肪酸の代謝に関与し、複数の代謝経路に働くアシルＣｏＡ脱水素酵素活性を有することを示唆する結果が示されている（Ｆｕｎｇａｌ  Ｇｅｎｅｔ．  Ｂｉｏｌ．  ４５：１８０−１８９  （２００８））。この結果は間接的な評価であり、この酵素が実際にメタクリル酸生成に有効であるかどうかは不明であった。他には微生物由来の酵素については、細菌のひとつである放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属  についての情報があるのみであった（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １４５：２３２３−２３３４  （１９９９））。前記文献においては、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ  よりＡＣＤ遺伝子（ａｃｄＨ）がクローニングされ、大腸菌組換え体から調製された部分精製酵素を用いて、イソブチリル−ＣｏＡからのメタクリリル−ＣｏＡの生成が確認されている。本発明者らも、この追試を行い、大腸菌を宿主とする組換え体において顕著な酵素タンパク質の発現を認めたものの、ＡＣＤ活性については、極微弱な活性を認めるのみであり、本酵素はメタクリル酸合成に適するものではないと判断した。
【０１７８】  そこで、本発明者らは微生物のメタクリル酸合成に関与する酵素を有効利用する目的で、他の微生物の酵素遺伝子の探索を行った結果、下記のようにして有用な酵素を見出した。
【０１７９】  本発明であるメタクリル酸生産能を有する微生物の中から、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属およびＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属を選択した。
【０１８０】  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属微生物についてはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａやＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについてバリン資化能が知られている（Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  Ｒｅｖｉｅｗ  ４０：４２−５４  （１９７６））。Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属微生物のバリン資化能については知られていなかったが、本発明の過程で、メタクリル酸生産能を有することを発明者らが実験的に確認した。これらの属の中から、ゲノム配列が公開されているＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１とＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４について、メタクリル酸合成に関与が推定されるＡＣＤを有しているという仮定のもと、相同性検索により候補のリストアップを行った。
【０１８１】  ヒトのＡＣＤとされるＡＣＡＤ８に対して高い同一性を示す細菌のホモログ遺伝子の存在については、過去の文献に記載がある（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｅｖｏｌ．  ６９：１７６−１９３  （２００９））（ただし、実験的に活性は確認されてはいない）。また、上記のゲノム配列が公開されているＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１及びＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４の両細菌については、アシルＣｏＡ脱水素酵素とアノテーションされているＯｐｅｎ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）が存在する、という情報のみが知られていた。
【０１８２】  両細菌のゲノム配列情報について、ヒトＡＣＡＤ８のアミノ酸配列に対して相同性を検索し、相同性が見いだされた計６種のＯＲＦの遺伝子をＰＣＲ法により増幅・取得し、大腸菌用の発現ベクターに組み込んだ。これらを用いて組換え体を作製し、組換え体におけるホモログタンパク質の発現と組換え体細胞抽出液のＡＣＤ活性を調べた。
【０１８３】［ＡＣＤ］  その結果、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１よりＰＡ＿ａｃｄ１と命名した遺伝子とＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４よりＲＥ＿ａｃｄ１と命名した遺伝子が導入された組換え体に極めて高い活性を得ることができた（配列番号５１及び５３）。ＰＡ＿ａｃｄ１とＲＥ＿ａｃｄ１はそのコードするアミノ酸配列（配列番号５０及び５２）において相互に５７％の同一性を示した。一方、活性が認められなかったＰＡ＿ａｃｄ２、ＲＥ＿ａｃｄ２や微弱な活性しか認められなかったａｃｄＨ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）については、高い活性が認められたＰＡ＿ａｃｄ１とＲＥ＿ａｃｄ１とのアミノ酸レベルでのホモロジーは以下に示すとおりであった。ＰＡ＿ａｃｄ２は、ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１とそれぞれ４０％および４１％の同一性を示した。ＲＥ＿ａｃｄ２は、ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１とそれぞれ３６％の同一性を示した。ａｃｄＨは、ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１とそれぞれ３８％および３６％の同一性を示した。
【０１８４】  すなわち、メタクリル酸合成に有用なＡＣＤのひとつとしては、（Ａ）ＰＡ＿ａｃｄ１またはＲＥ＿ａｃｄ１がコードするアミノ酸配列（配列番号５０または５２）からなるもの、および（Ｂ）ＰＡ＿ａｃｄ１またはＲＥ＿ａｃｄ１がコードするアミノ酸配列（配列番号５０または５２）とアミノ酸配列レベルにおいて、４５％以上の同一性を、より好ましくは６０％の同一性を、更に好ましくは８０％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、ＡＣＤ活性を有する酵素である。若しくは、（Ｃ）ＰＡ＿ａｃｄ１またはＲＥ＿ａｃｄ１がコードするアミノ酸配列（配列番号５０または５２）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、ＡＣＤ活性を有する酵素である。
【０１８５】  また、ＰＡ＿ａｃｄ１とＲＥ＿ａｃｄ１はそのコードするアミノ酸配列（配列番号５０及び５２）のＣ末端から７０アミノ酸残基において、６９％の同一性を示した。一方、活性が認められなかったＰＡ＿ａｃｄ２、ＲＥ＿ａｃｄ２や微弱な活性しか認められなかったａｃｄＨ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）については、高い活性が認められたＰＡ＿ａｃｄ１とＲＥ＿ａｃｄ１とのＣ末端から７０アミノ酸残基におけるアミノ酸レベルでのホモロジーは以下に示すとおりであった。ＰＡ＿ａｃｄ２は、ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１とそれぞれ４３％および４３％の同一性を示した。ＲＥ＿ａｃｄ２は、ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１とそれぞれ３８％の同一性を示した。ａｃｄＨは、ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１とそれぞれ４３％および３８％の同一性を示した。
【０１８６】  本発明において、メタクリル酸の合成に有用なＡＣＤの他の態様は（Ｄ）ＰＡ＿ａｃｄ１またはＲＥ＿ａｃｄ１がコードするアミノ酸配列（配列番号５０または５２）のＣ末端から７０アミノ酸残基におけるアミノ酸配列と、６０％以上の同一性を、より好ましくは６５％以上の同一性を、更に好ましくは８０％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、ＡＣＤ活性を有する酵素である。
【０１８７】  本発明のメタクリル酸の製造方法において特に有用なＡＣＤの遺伝子のひとつとしては以下からなる群より選択される遺伝子である。（ａ）配列番号５０または５２で示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝子、（ｂ）配列番号５１または５２で示す塩基配列からなる遺伝子、（ｃ）配列番号５０または５２で示すアミノ酸配列からなるタンパク質と４５％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、且つＡＣＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子、及び（ｄ）配列番号５０または５２で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、ＡＣＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
【０１８８】  本発明においてＡＣＤはメタクリル酸合成酵素のひとつとして有用であり、且つ、本発明であるメタクリル酸生成能を有する微生物由来あれば、特に限定されない。
【０１８９】  より好ましくは、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓおよびＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓに由来するものであり、好ましい株としては、ロドコッカス・エリスロポリスＰＲ−４株、ロドコッカス・エリスロポリスＫＡ２−５−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＩＧＴＳ８株、ロドコッカス・エリスロポリスＤ−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＨ−２株、ロドコッカス・エリスロポリスＮ１−３６株、ロドコッカス・エリスロポリスＩ−１９株、ロドコッカス・エリスロポリスＥＣＲＤ−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＢ１株、ロドコッカス・エリスロポリスＳＹ−１株、ロドコッカス・エリスロポリスＵＭ３株、ロドコッカス・エリスロポリスＵＭ９株又はロドコッカス・エスピーＴ０９株等が挙げられ、特に好ましくはロドコッカス・エリスロポリスＰＲ−４株が挙げられる。
【０１９０】  以上、メタクリル酸合成に関与している酵素のひとつであるＡＣＤおよびその遺伝子の取得について記載した。
【０１９１】［ＢＣＫＡＤ］  続けて、メタクリル酸合成に関与しているＢＣＫＡＤについて記載する。ＢＣＫＡＤは２−オキソイソ吉草酸からイソブチリル−ＣｏＡを生成させることができる酵素である。本発明であるメタクリル酸生産能を有する微生物からＢＣＫＡＤおよびその遺伝子を取得することができる。
【０１９２】  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａやＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来のＢＣＫＡＤは、４つのポリペプチドからなる複合体であり（配列番号５４、５６、５８および６０）、それらの遺伝子（配列番号５５、５７、５９および６１）はオペロンを形成していることが知られている（Methods in Enzymology (2000) 324: 129-138）。
【０１９３】  その取得方法としては、例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１のゲノム配列からＢＣＫＡＤオペロン全体を増幅するためのＰｒｉｍｅｒを設計し、ゲノムＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ反応によりオペロン全体を増幅して大腸菌用の発現ベクターに組込むことにより、ＢＣＫＡＤを発現するためのベクターを構築することができる。これを用いて組換え体を作製し、ＢＣＫＡＤ遺伝子およびＢＣＫＡＤを取得することができる。
【０１９４】  本発明においてＢＣＫＡＤはメタクリル酸合成に有用な酵素のひとつとして有用であり、且つ、本発明であるメタクリル酸生成能を有する微生物由来のものであれば、その遺伝子に特に限定はないが、例えば、下記（ｅ）〜（ｈ）、（ｉ）〜（ｌ）、または（ｍ）〜（ｐ）からなる群より選択される遺伝子が例示される。（e）配列番号５４、５６、５８および６０で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子。（ｆ）配列番号５５、５７、５９および６１で示す塩基配列からなる遺伝子。（ｇ）配列番号５４、５６、５８および６０で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズし、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（ｈ）配列番号５４、５６、５８および６０で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
【０１９５】（i）配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子。（ｊ）配列番号６３、６５、６７および６９で示す塩基配列からなる遺伝子。（ｋ）配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列を有する４つのポリペプチドをコードする遺伝子の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズし、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（ｌ）配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列アミノ酸配列からなり、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
【０１９６】（ｍ）配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列を有する３つのポリペプチドをコードする遺伝子。（ｎ）配列番号７１、７３および７５で示す塩基配列からなる遺伝子。（ｏ）配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列を有する３つのポリペプチドをコードする遺伝子の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズし、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。（ｐ）配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入したアミノ酸配列からなり、且つＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子。
【０１９７】  本発明において、ＢＣＫＡＤをコードする遺伝子は、上記配列に限定されるものではなく、上記の配列番号記載の塩基配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約７０％以上、さらに好ましくは約８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、さらに特に好ましくは約９５％以上、最も好ましくは約９８％以上の同一性を有する塩基配列を有する遺伝子も、それがＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする限り、ＢＣＫＡＤをコードする遺伝子に含まれる。
【０１９８】  本発明においてＢＣＫＡＤは、例えば、配列番号５４、５６、５８および６０に示されるアミノ酸、配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列または配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列を有するものが挙げられる。
【０１９９】  本発明において、ＢＣＫＡＤは、上記配列を有するものに限定されるものではなく、上記の配列番号記載のアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約７０％以上、さらに好ましくは約８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、さらに特に好ましくは約９５％以上、最も好ましくは約９８％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質も本発明におけるＢＣＫＡＤに含まれる。
【０２００】  上記の同一性の数値は、配列解析ソフトウェアであるＧＥＮＥＴＹＸ（株式会社ゼネティクス）を用いて、ホモロジー解析プログラムを実行することにより求められる。その際のパラメータは、デフォルトの設定（初期設定）とする。
【０２０１】  また、本発明においてＢＣＫＡＤには、配列番号５４、５６、５８および６０に示されるアミノ酸、配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列または配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、付加及び／又は挿入されたアミノ酸配列を含み、かつＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質も含まれる。
【０２０２】  より具体的には、以下のアミノ酸配列を含み、かつＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質が挙げられる。（ｉ）配列番号５４、５６、５８および６０に示されるアミノ酸、配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列または配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列において、１〜２０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜２個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号５４、５６、５８および６０に示されるアミノ酸、配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列または配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列の１〜２０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜２個）のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号５４、５６、５８および６０に示されるアミノ酸、配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列または配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列に１〜２０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜２個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号５４、５６、５８および６０に示されるアミノ酸、配列番号６２、６４、６６および６８で示すアミノ酸配列または配列番号７０、７２および７４で示すアミノ酸配列に１〜２０個（例えば１〜１０個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜２個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（ｖ）上記（ｉ）〜（ｉｖ）を組み合わせたアミノ酸配列が挙げられる。
【０２０３】  アミノ酸配列の１個または数個のアミノ酸が置換する場合は、類似するアミノ酸残基間の保存的置換が好ましい。例えばアミノ酸は、その側鎖の性質に基づいて、疎水性アミノ酸（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｆ，Ｐ，Ｗ，Ｙ，Ｖ）、親水性アミノ酸（Ｒ，Ｄ，Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇ，Ａ，Ｖ，Ｌ，Ｉ，Ｐ）、水酸基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｓ，Ｔ，Ｙ）、硫黄原子含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃ，Ｍ）、カルボン酸及びアミド含有側鎖を有するアミノ酸（Ｄ，Ｎ，Ｅ，Ｑ）、塩基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｒ，Ｋ，Ｈ）、芳香族含有側鎖を有するアミノ酸（Ｈ，Ｆ，Ｙ，Ｗ）に分類される。各群に分類されたアミノ酸は、相互に置換したときに、当該ポリペプチドの活性が維持される可能性が高いことが知られており、そのようなアミノ酸相互の置換が好ましい。例えば、グリシンとプロリン、グリシンとアラニンまたはバリン、ロイシンとイソロイシン、グルタミン酸とグルタミン、アスパラギン酸とアスパラギン、システインとスレオニン、スレオニンとセリン又はアラニン、リジンとアルギニン間での置換を挙げることができる。
【０２０４】  また、前述したアミノ酸配列の欠失、置換、付加及び／又は挿入に対応して、配列番号５５、５７、５９および６１で示す塩基配列、配列番号６３、６５、６７および６９で示す塩基配列又は配列番号７１、７３および７５で示す塩基配列において、数個の塩基に欠失、置換、付加及び／又は挿入等の変異が生じた塩基配列も、それが本発明においてＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする限り、ＢＣＫＡＤをコードする遺伝子に含まれる。なお、欠失、置換、付加及び／又は挿入される塩基の個数は、３０個以下、好ましくは１５個以下、特に好ましくは６個以下である。さらに、配列番号５５、５７、５９および６１で示す塩基配列からなる遺伝子、配列番号６３、６５、６７および６９で示す塩基配列からなる遺伝子又は配列番号７１、７３および７５で示す塩基配列からなる遺伝子と相補的な塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡも、これがＢＣＫＡＤ活性を有するタンパク質をコードする限り、ＢＣＫＡＤをコードする遺伝子に含まれる。
【０２０５】  以上、メタクリル酸合成に関与している酵素の例として、ＡＣＤおよびＢＣＫＡＤについて酵素蛋白およびそれら遺伝子の取得について記載した。本発明においては、さらにメタクリル酸合成に直接あるいは間接的に関与しているその他の酵素およびその遺伝子についても同様に取得することが可能である。
【０２０６】  例えば、メタクリル酸合成に関与している酵素はその活性を指標に、通常の方法を用いて精製することが可能である。また、そのタンパク質をもとに遺伝子工学的な手法により遺伝子情報を得ることができる。あるいは、本発明であるメタクリル酸合成能を有する微生物について、全ゲノム配列を決定する。そのゲノム配列から、目的酵素をコードする遺伝子配列に関する公知情報を用いて相同性検索を用いて相同性の高い遺伝子配列を探し、その遺伝子を公知の方法で単離あるいは全合成し、一般的な宿主ベクター系に導入し、該ベクター系で形質転換した微生物によって候補タンパクを発現させ、目的酵素の活性を評価することで、選択可能である。なお、次世代シーケンサーの普及により、同業者であれば、微生物の全ゲノム配列は容易に解析可能である。
【０２０７】  さらに、本発明であるメタクリル酸合成能を有する微生物には、ＡＣＤの脱水素反応で脱離された電子の受容体およびその伝達系に関わるタンパク質およびその遺伝子が含まれており、それらに関しても本願発明に含まれる。
【０２０８】  加えて、メタクリル酸合成能を有する微生物から得られたメタクリル酸合成に関与している酵素はそれぞれ単独あるいは複数で、メタクリル酸誘導体およびその中間体の製造が可能である。例えば、ＢＣＫＡＤでは２−オキソイソ吉草酸からイソブチリル−ＣｏＡを製造可能であり、ＡＣＤではイソブチリル−ＣｏＡからメタクリリル−ＣｏＡの製造が可能である。ＢＣＫＡＤおよびＡＣＤの両者の反応を組み合わせることで、２−オキソイソ吉草酸からメタクリリル−ＣｏＡの製造が可能である。さらにＡＡＴあるいはメタクリリル−ＣｏＡを加水分解する活性を有する酵素を加えることで、メタクリル酸エステルあるいはメタクリル酸の製造がそれぞれ可能となる。
【０２０９】  メタクリル酸合成に関与している酵素は上述のように遺伝子を単離し、一般的な宿主ベクターを利用して、組換え体（形質転換体）を作製、前記組換え体を培養することで取得できる。宿主としては、細菌では大腸菌、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属などが挙げられ、酵母ではＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属、Ｐｉｃｈｉａ属、糸状菌ではＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属などが挙げられる。酵素（タンパク質）の取得を目的にする場合においては、大腸菌を用いることが簡便であり、効率もよく好ましい。メタクリル酸合成に関与している酵素の複数を同一の宿主に発現させることも可能である。形質転換体の培養液から酵素の取得は、例えば、菌体を回収後、菌体を破砕、抽出、遠心分離等の方法により採取することができる。  こうして得られた酵素は、その酵素が作用する条件下で、原料となる化合物と接触させることにより、それぞれの目的産物を得ることができる。
【実施例】
【０２１０】  以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。【０２１１】＜実施例１：メタクリル酸生産菌の探索＞  日本国内の異なる地点から採取した土壌及び昆虫を微生物源として、集積培養によりメタクリル酸生産菌の探索を行った。バリンの代謝中間体にはメタクリル酸の誘導体であるメタクリリル−ＣｏＡが含まれることから、培地にはＬ−バリンを含むものを用い、バリンの資化性を指標としてスクリーニングを行った。【０２１２】［土壌からの分離］  滅菌水５ｍＬに土壌を適量加えて撹拌し、静置後、適量の上清を１０ｍｌ液体培地に添加した。培地の組成を以下に示す。    Ｋ2ＨＰＯ4  １．０  ｇ／ｌ    ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．２  ｇ／ｌ    ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１  ｇ／ｌ    ＣａＣｌ2  ０．０１  ｇ／ｌ    Ｌ−バリン  ５．０  ｇ／ｌ    ｐＨ  ７．０【０２１３】  ３０℃にて３〜７日間振とう培養した。生育してきた菌株を同培地に植え継ぎ馴養培養を数回行った。その後、同培地に１．５％の寒天を加えた寒天培地に播種し、３０℃で４８時間培養し、コロニーを形成させた。白金耳を用いてコロニーをかき取り寒天培地（ＬＢ培地、寒天１．５％）に植菌し、３０℃にて４８時間培養し、分離株（Ｂ２５−２株、Ｄ２２−１株、Ｄ４３−１株、Ｄ２５株、Ｄ２６株、Ｄ２９株、Ｄ４１−２株、Ｒ１株、Ｂ１３株）を取得した。ＬＢ培地の組成は、１％バクトトリプトン、０．５％バクトイーストエキス、０．５％ＮａＣｌである。【０２１４】［昆虫からの分離］  採取したアオオサムシ（Carabus  insulicola）を飢餓状態で２日間飼育した後、虫体を９５％エタノール及び滅菌した生理食塩水でそれぞれ２回洗浄した。虫体腹部を分離し０．３ｍＬの滅菌水に懸濁した後、上清０．１ｍＬをＬＢ液体培地に添加し３０℃で４８時間培養した。適量の培養上清を１０ｍｌ液体培地に添加した。培地の組成を以下に示す。    Ｋ2ＨＰＯ4  １．０  ｇ／ｌ    ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．２  ｇ／ｌ    ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１  ｇ／ｌ    ＣａＣｌ2  ０．０１  ｇ／ｌ    Ｌ−バリン  ５．０  ｇ／ｌ    ｐＨ  ７．０【０２１５】  ３０℃にて３〜７日間振とう培養した。生育してきた菌株を同培地に植え継ぎ馴養培養を数回行った。その後、同培地に１．５％の寒天を加えた寒天培地に播種し、３０℃で４８時間培養し、コロニーを形成させた。白金耳を用いてコロニーをかき取り寒天培地（ＬＢ培地、寒天１．５％）に植菌し、３０℃にて４８時間培養し、分離株（Ｇ１株、Ｇ２株）を取得した。【０２１６】  これらの分離株の菌学的性質を以下の表に示す。表中、「＋」は陽性、「−」は陰性、「＋ｗ」は弱い反応を意味する。【０２１７】（１）シュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｂ２５−２の菌学的性質【表１−１】
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【表１−２】
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【０２１８】  常法に従って、Ｂ２５−２株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１）を決定した。【０２１９】  Ｂ２５−２株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  orizihabitans  ＩＡＭ（東京大学分子細胞生物学研究所カルチャーコレクション）１５６８株（ＮＢＲＣ１０２１９９）及びPseudomonas  japonica  ＩＡＭ  １５０７１株（ＮＢＲＣ１０３０４０）に対し９９．２％の最も高い同一性を示した。（ＮＢＲＣ株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構バイオテクノロジーセンターから入手可能である。）【０２２０】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｂ２５−２株は、シュードモナス属（Pseudomonas）の種で形成されるクラスターに含まれた。また、Ｂ２５−２株は、シュードモナス属（Pseudomonas）のクラスターにおいて、いずれの既知種とも異なり、独立した分子系統学的位置を示した。【０２２１】  Ｂ２５−２株は硝酸塩を還元せず、アルギニンヒドロラーゼ活性を示し、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｄ−マンノース及びグルコン酸カリウムなどを資化し、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンニトールなどを資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生し、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示し、でんぷんを加水分解しなかった。これらの性状は、シュードモナス属（Pseudomonas）の性状に矛盾点がないと考えられるが、いずれの既知種の性状とも一致しなかった。【０２２２】  よって、Ｂ２５−２株はシュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）と同定された。Ｂ２５−２株は、２０１２年１１月７日付で、独立行政法人  製品評価技術基盤機構(ＮＩＴＥ)、特許生物寄託センター（郵便番号292-0818、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５１として国際寄託されている。【０２２３】（２）シュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｄ２２−１の菌学的性質【表２−１】
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【表２−２】
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【０２２４】  常法に従って、Ｄ２２−１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号２）を決定した。【０２２５】  Ｄ２２−１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  agarici  ＬＭＧ２１１２株に対し９８．８％の最も高い同一性を示した。【０２２６】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｄ２２−１株は、シュードモナス属（Pseudomonas）の種で形成されるクラスターに含まれた。また、Ｄ２２−１株は、Pseudomonas  abietaniphilaとクラスターを形成したが、両者の間には距離が認められた。【０２２７】  Ｄ２２−１株は硝酸塩を還元せず、アルギニンヒドロラーゼ活性を示し、ウレアーゼ活性を示さず、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｄ−マンノース及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンなどを資化し、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンニトールなどを資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生せず、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示した。これらの性状は、シュードモナス属（Pseudomonas）の性状に一致すると考えられるが、いずれの既知種の性状とも一致しなかった。【０２２８】  よって、Ｄ２２−１株はシュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）と同定された。Ｄ２２−１株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５２として国際寄託されている。【０２２９】（３）シュードモナス・ウムソンゲンシス（Pseudomonas  umsongensis）Ｄ４３−１の菌学的性質【表３−１】
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【表３−２】
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【０２３０】  常法に従って、Ｄ４３−１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号３）を決定した。【０２３１】  Ｄ４３−１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  umsongensis  Ｐｓ３３−１０株に対し１００％の最も高い同一性を示した。【０２３２】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｄ４３−１株は、シュードモナス属（Pseudomonas）の種で形成されるクラスターに含まれた。また、Ｄ４３−１株は、Pseudomonas  umsongensis及びPseudomonas  mohniiとクラスターを形成し、これら２種と同一の分子系統学的位置を示した。【０２３３】  Ｄ４３−１株は硝酸塩を還元し、アルギニンヒドロラーゼ活性を示し、ウレアーゼ活性を示さず、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンノースなどを資化し、Ｄ−マンニトール及びＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンなどを資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生し、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示した。これらの性状は、Pseudomonas  umsongensisの性状とほぼ一致した。【０２３４】  よって、Ｄ４３−１株はPseudomonas  umsongensisと同定された。Ｄ４３−１株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５３として国際寄託されている。【０２３５】（４）シュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｄ２５の菌学的性質【表４−１】
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【表４−２】
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【０２３６】  常法に従って、Ｄ２５株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号４）を決定した。【０２３７】  Ｄ２５株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  putida  ＡＴＣＣ  １２６３３株、Pseudomonas  fuscovaginae  ＭＡＦＦ  ３０１１７７株、Pseudomonas  asplenii  ＡＴＣＣ  ２３８３５株及びPseudomonas  agarici  ＬＭＧ  ２１１２株に対し９９．０％の最も高い同一性を示した。【０２３８】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｄ２５株は、シュードモナス属（Pseudomonas）の種で形成されるクラスターに含まれた。また、Ｄ２５株は、シュードモナス属（Pseudomonas）のクラスターにおいて、いずれの既知種とも異なり、独立した分子系統学的位置を示した。【０２３９】  Ｄ２５株は硝酸塩を還元し、アルギニンヒドロラーゼ活性を示し、ウレアーゼ活性を示さず、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンニトールなどを資化し、Ｄ−マンノースやマルトースなどを資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生せず、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示した。これらの性状は、シュードモナス属（Pseudomonas）の性状に一致すると考えられるが、高い相同性が示唆された、Pseudomonas  putida、Pseudomonas  fuscovaginae、Pseudomonas  asplenii及びPseudomonas  agariciとは、資化性や蛍光色素産生の点で相違が認められた。【０２４０】  よって、Ｄ２５株はシュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）と同定された。Ｄ２５株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５４として国際寄託されている。【０２４１】（５）シュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｄ２６の菌学的性質【表５−１】
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【表５−２】
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【０２４２】  常法に従って、Ｄ２６株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号５）を決定した。【０２４３】  Ｄ２６株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  putida  ＡＴＣＣ  １２６３３株、Pseudomonas  fuscovaginae  ＭＡＦＦ  ３０１１７７株及びPseudomonas  asplenii  ＡＴＣＣ  ２３８３５株に対し９８．６％の最も高い同一性を示した。【０２４４】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｄ２６株は、シュードモナス属（Pseudomonas）の種で形成されるクラスターに含まれた。また、D25株は、Pseudomonas  putida、Pseudomonas  fuscovaginae、Pseudomonas  asplenii及びPseudomonas  agariciとクラスターを形成し、このうち、Pseudomonas  putida、Pseudomonas  fuscovaginae及びPseudomonas  aspleniiの３種と同一の分子系統学的位置を示した。【０２４５】  Ｄ２６株は硝酸塩を還元し、アルギニンヒドロラーゼ活性及びウレアーゼ活性を示さず、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンノースなどを資化し、マルトース及びアジピン酸を資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生し、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示し、でんぷんを加水分解しなかった。これらの性状は、近縁性が示唆された、Pseudomonas  putida、Pseudomonas  fuscovaginae及びPseudomonas  aspleniiの性状と類似点があるものの、相違も確認された。特に、硝酸塩を還元し、アルギニンヒドロラーゼ活性を示さない点はこれらの種と異なった。【０２４６】  よって、Ｄ２６株はシュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）と同定された。Ｄ２６株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５５として国際寄託されている。【０２４７】（６）シュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｄ２９の菌学的性質【表６−１】
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【表６−２】
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【０２４８】  常法に従って、Ｄ２９株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号６）を決定した。【０２４９】  Ｄ２９株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  vancouverensis  ＤｈＡ−５１株に対し９９．６％の最も高い同一性を示した。【０２５０】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｄ２９株は、Pseudomonas  umsongensis、Pseudomonas  mohnii、Pseudomonas  graminisとクラスターを形成し、このうちPseudomonas  umsongensis及びPseudomonas  mohniiと同一の分子系統学的位置を示した。【０２５１】  Ｄ２９株は硝酸塩を還元し、アルギニンヒドロラーゼ活性を示し、ウレアーゼ活性を示さず、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンノースなどを資化し、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、マルトース及びアジピン酸を資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生せず、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示た。これらの性状は、近縁性が示唆された、Pseudomonas  umsongensis及びPseudomonas  mohniiの性状と類似点があるものの、相違も確認された。特に、アルギニンヒドロラーゼ活性を示さない点はこれらの２種のいずれとも異なり、硝酸塩を還元する点は、Pseudomonas  mohniiの性状と異なった。【０２５２】  よって、Ｄ２９株はシュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）と同定された。Ｄ２９株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５６として国際寄託されている。【０２５３】（７）シュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｄ４１−２の菌学的性質【表７−１】
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【表７−２】
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【０２５４】  常法に従って、Ｄ４１−２株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号７）を決定した。【０２５５】  Ｄ４１−２株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、シュードモナス属（Pseudomonas）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Pseudomonas  vancouverensisＤｈＡ−５１株に対し９９．８％の最も高い同一性を示した。【０２５６】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｄ４１−２株は、シュードモナス属（Pseudomonas）の種で形成されるクラスターに含まれた。またＤ４１−２株は、Pseudomonas  vancouverensis及びPseudomonas  mooreiとクラスターを形成し、これら２種と同一の分子系統学的位置を示した。【０２５７】  Ｄ４１−２株は硝酸塩を還元し、アルギニンヒドロラーゼ活性を示し、ゼラチンを加水分解せず、グルコース、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンノースなどを資化し、マルトース及びアジピン酸を資化せず、Kings'B寒天培地で蛍光色素を産生し、運動性を示し、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は共に陽性を示した。これらの性状は、帰属が示唆された、Pseudomonas  vancouverensis及びPseudomonas  mooreiの性状と類似点が多く認められたが、相違も確認された。特に、蛍光色素を産生し、硝酸塩を還元する点は、Pseudomonas  mooreiの性状と異なり、アルギニンヒドロラーゼ活性を示す点は、Pseudomonas  vancouverensisの性状と異なった。【０２５８】  よって、Ｄ４１−２株はシュードモナス・エスピー（Pseudomonas  sp.）と同定された。Ｄ４１−２株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５７として国際寄託されている。【０２５９】（８）バシラス・シューリンゲンシス（Bacillus  thuringiensis）Ｇ１の菌学的性質【表８−１】
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【表８−２】
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【０２６０】  常法に従って、Ｇ１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号９）を決定した。【０２６１】  Ｇ１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、バシラス属（Bacillus）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Bacillus  thuringiensis  ＡＴＣＣ  １０７９２株に対し９９．８％の最も高い同一性を示した。【０２６２】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｇ１株は、バシラス属（Bacillus）の種で形成されるクラスターに含まれた。またＧ１株は、Bacillus  thuringiensisとクラスターを形成し、両者は同一の分子系統学的位置を示した。【０２６３】  Ｇ１株は、グリセロール、リボース及びグルコースを発酵し、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース及びガラクトースなどを発酵せず、β−ガラクトシダーゼ活性やウレアーゼ活性を示さず、クエン酸を利用し、インドールを産生せず、アセトインを産生し、硝酸塩を還元せず、４５℃で生育せず、嫌気条件下で生育し、でんぷんを加水分解した。これらの性状は、帰属が示唆された、Bacillus  thuringiensisの性状とほぼ一致したが、硝酸塩を還元しない点は、Bacillus  thuringiensisの典型的な性状と異なった。生理・生化学性状の相違については、株レベルの違いの可能性も否定できない。【０２６４】  よって、Ｇ１はBacillus  thuringiensisと同定された。Ｇ１株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５８として国際寄託されている。【０２６５】（９）バシラス・シューリンゲンシス（Bacillus  thuringiensis）Ｇ２の菌学的性質【表９−１】
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【表９−２】
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【０２６６】  常法に従って、Ｇ２株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１０）を決定した。【０２６７】  Ｇ２株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、バシラス属（Bacillus）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Bacillus  thuringiensis  ＡＴＣＣ  １７０９２株に対し９９．２％の最も高い同一性を示した。【０２６８】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｇ２株は、バシラス属（Bacillus）の種で形成されるクラスターに含まれた。またＧ２株は、Bacillus  thuringiensisとクラスターを形成し、両者は同一の分子系統学的位置を示した。【０２６９】  Ｇ２株は、グリセロール、リボース及びグルコースを発酵し、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース及びガラクトースなどを発酵せず、β−ガラクトシダーゼ活性やウレアーゼ活性を示さず、クエン酸を利用し、インドールを産生せず、アセトインを産生し、硝酸塩を還元せず、４５℃で生育せず、嫌気条件下で生育し、でんぷんを加水分解した。これらの性状は、帰属が示唆された、Bacillus  thuringiensisの性状とほぼ一致したが、硝酸塩を還元しない点は、Bacillus  thuringiensisの典型的な性状と異なった。生理・生化学性状の相違については、株レベルの違いの可能性も否定できない。【０２７０】  よって、Ｇ２株はBacillus  thuringiensisと同定された。Ｇ２株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４５９として国際寄託されている。【０２７１】（１０）バシラス・エスピー（Bacillus  sp.）Ｒ１の菌学的性質【表１０−１】
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【表１０−２】
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【０２７２】  常法に従って、Ｒ１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１１）を決定した。【０２７３】  Ｒ１株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、バシラス属（Bacillus）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Bacillus  oceanisediminis  Ｈ２株に対し９８．９％の最も高い同一性を示した。【０２７４】  １６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列に基づく簡易分子系統解析の結果、Ｒ１株は、バシラス属（Bacillus）の種で形成されるクラスターに含まれた。またＲ１株は、Bacillus  oceanisediminisとクラスターを形成し、近縁であることが示された。【０２７５】  Ｒ１株は、グリセロール、リボース及びＤ−キシロースなどを酸化し、Ｄ−アラビノース及びＬ−キシロースなどを酸化せず、アルギニンヒドロラーゼ活性を示さず、ゼラチンを加水分解し、硝酸塩を還元し、芽胞を形成し、４５℃で生育せず、でんぷんを加水分解しなかった。これらの性状は、近縁性が示唆された、Bacillus  oceanisediminisの性状と類似点はあるものの、相違点も認められた。特に、アルギニンヒドロラーゼ活性を示さず、４５℃で生育せず、でんぷんを加水分解しない点などは、Bacillus  oceanisediminisの性状と異なった。【０２７６】  よって、Ｒ１株はバシラス・エスピー（Bacillus  sp.）と同定された。Ｒ１株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４６０として国際寄託されている。【０２７７】（１１）スフィンゴバクテリウム・エスピー（Sphingobacterium  sp.）Ｂ１３の菌学的性質【表１１−１】
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【表１１−２】
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【０２７８】  常法に従って、Ｂ１３株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（配列番号１６）を決定した。【０２７９】  Ｂ１３株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列は、スフィンゴバクテリウム属（Sphingobacterium）の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、Sphingobacterium  siyangense  ＳＹ１株に対し９７．４％の最も高い同一性を示した。【０２８０】  Ｂ１３株は硝酸塩を還元せず、グルコースを発酵せず、ウレアーゼ及びβ-ガラクトシダーゼ活性を示し、エスクリン及びゼラチンを加水分解し、グルコース、Ｄ−マンノース及びマルトースなどを資化し、Ｌ−アラビノース及びＤ−マンニトールなどを資化せず、運動性を示さず、カタラーゼ活性を示し、インドールを産生しなかった。これらの性状は、スフィンゴバクテリウム属（Sphingobacterium）の性状に一致すると考えられるが、Ｂ１３株の性状と一致する既知種は見当たらなかった。【０２８１】  よって、Ｂ１３株はスフィンゴバクテリウム・エスピー（Sphingobacterium  sp.）と同定された。Ｂ１３株は、２０１２年１１月７日付で、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４６１として国際寄託されている。【０２８２】＜実施例２：合成培地を用いたメタクリル酸の製造＞  実施例１で取得された分離株を用いて合成培地中でのメタクリル酸製造を行った。【０２８３】  Ｄ２２−１株、Ｄ４１−２株又はＤ４３−１株を寒天培地（ＬＢ培地、寒天１．５％）に生育させ、１０ｍｌ液体培地に１白金耳植菌した。培地の組成を以下に示す。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１９〜２２時間培養を行った（前培養）。    Ｋ2ＨＰＯ4  １．０  ｇ／ｌ    ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．２  ｇ／ｌ    ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１  ｇ／ｌ    ＣａＣｌ2  ０．０１  ｇ／ｌ    Ｌ−バリン  ５．０  ｇ／ｌ    ｐＨ  ７．０【０２８４】  ２ｍｌ前培養液を１００ｍＬ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。培地の組成は前培養培地と同じである。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、４４〜７２時間培養を行った（本培養）。【０２８５】  本培養後、本培養液を遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分）し、上清画分を分画した。培養液上清中に含まれる化合物をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ分析条件は以下の通りである。    装置：ｅ２６９５（Ｗａｔｅｒｓ社製）    カラム：有機酸分析用イオン排除型ポリマーカラムＴ−１３２−Ｅ（ＷＡＫＯ社製）    溶離液：０．１％（ｖ／ｖ）リン酸溶液    流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ    カラム温度：４０℃    サンプル注入量：１０μｌ    分析時間：４０ｍｉｎ    検出器：ＵＶ【０２８６】  分析サンプルは溶離液にて適宜希釈し、いずれもＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理して用いた。分析の結果、メタクリル酸と同じ溶離時間（３１．１５分）にピークが認められた。「表１２」に本培養終了時の各培養液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０２８７】
【表１２】
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【０２８８】  上記ピークについてＣＧ／ＭＳ分析を行った。ＧＣ／ＭＳ分析条件は以下の通りである。    装置：６８９０／５８７５Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）    カラム：ＤＢ−ＦＦＡＰカラム（Ｊ＆Ｗ社製）    キャリアー：Ｈｅ    オーブン温度：５０℃（１min）の後、５℃／minで１５０℃まで昇温し、さらに２０℃／minで２５０℃まで昇温した。    注入口温度：２００℃    カラム流量：１ｍｌ／min（コンスタントフローモード）    スプリット比：１／５０    サンプル注入量：１μｌ    検出器：ＭＳＤ（ＥＩ）【０２８９】  得られたトータルイオンクロマトグラフを図２に、観測したピークのマススペクトルを図３に示す。解析の結果、メタクリル酸と同じ保持時間（１７．１５min）に観測されたピークがメタクリル酸であることが確認できた。【０２９０】＜実施例３：天然培地を用いたメタクリル酸の製造＞  実施例１で取得された分離株を用いて天然培地中でのメタクリル酸製造を行った。【０２９１】  Ｇ２株を寒天培地（ＬＢ培地、寒天１．５％）に生育させ、１０ｍｌ液体培地に１白金耳植菌した。培地の組成を以下に示す。３７℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間培養を行った（前培養）。    トリプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  １０ｇ／ｌ    酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ５ｇ／ｌ    ＮａＣｌ  １０ｇ／ｌ    ｐＨ７．０【０２９２】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。培地の組成は前培養培地と同じである。３７℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間培養を行った。【０２９３】  本培養後、本培養液を遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分）し、上清画分を分画した。実施例２に記載の方法により、培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間（３１．１５分）にピークが認められた。培養液中のメタクリル酸濃度は１．０ｐｐｍであった。【０２９４】＜実施例４：休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  実施例１で取得された分離株を用いて休止菌体反応によりメタクリル酸の製造を行った。【０２９５】  Ｂ２５−２株、Ｄ２２−１株、Ｄ４３−１株、Ｄ２５株、Ｄ２６株、Ｄ２９株、Ｄ４１−２株、Ｇ１株、Ｇ２株、Ｒ１株、Ｂ１３株を寒天培地（ＬＢ培地、寒天１．５％）に生育させ、１０ｍｌ液体培地に１白金耳植菌した。培地の組成を以下に示す。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１９〜２２時間培養を行った（前培養）。    Ｋ2ＨＰＯ4  １．０  ｇ／ｌ    ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．２  ｇ／ｌ    ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１  ｇ／ｌ    ＣａＣｌ2  ０．０１  ｇ／ｌ    Ｌ−バリン  ５．０  ｇ／ｌ    ｐＨ  ７．０【０２９６】  ２ｍＬ前培養液を１００ｍＬ液体培地（培地１００ｍＬ／５００ｍＬ容三角フラスコ）に植菌した。培地の組成は前培養培地と同じである。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、６９〜７６時間培養を行った（本培養）。【０２９７】  本培養後、本培養液４０ｍLを５０ｍＬ容コニカルチューブに移し遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分）し���菌体を得た。この菌体に休止菌体反応溶液を１０ｍＬ加えて休止菌体反応を行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー、ｐＨ７．０である。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０rpm）、好気条件にて、２４時間行った。【０２９８】  実施例２に記載の方法により、休止菌体反応溶液中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間（３１．１５分）にピークが認められた。「表１３」に休止菌体反応終了時の各反応液のメタクリル酸濃度を示す。【０２９９】
【表１３】
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【０３００】＜実施例５：Pseudomonas属を用いた合成培地でのメタクリル酸の製造＞  Pseudomonas  putida  NBRC12996を寒天培地（ＬＢ培地、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌ液体培地に１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１〜４日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３０１】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３０２】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、2日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３０３】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３０４】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。培養液上清中に含まれる化合物は２種類の分析条件で分析した。ＨＰＬＣ分析条件は以下の通りである。【０３０５】  分析条件Ａ    装置：ｅ２６９５（Ｗａｔｅｒｓ社製）    カラム：有機酸分析用イオン排除型ポリマーカラムＴ−１３２−Ｅ（ＷＡＫＯ社製）    溶離液：０．１％（ｖ／ｖ）リン酸溶液    流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ    カラム温度：４０℃    サンプル注入量：１０μｌ    分析時間：４０ｍｉｎ    検出器：ＵＶ  分析条件Ｂ    装置：ＪＡＳＣＯ  ＵＶ−９７０、ＣＯ−９６０、ＰＵ−９８０、ＤＧ−１５８０−５４（日本分光社製）    カラム：ＩｎｅｒｔｓｉｌRＯＤＳ−３Ｖ（ＧＬサイエンス社製）    溶離液：２０％（ｖ／ｖ）メタノール、０．２％（ｖ／ｖ）リン酸溶液    流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ    カラム温度：４０℃    サンプル注入量：５μｌ    分析時間：１５ｍｉｎ    検出器：ＵＶ【０３０６】  分析の結果、分析条件Ａでも分析条件Ｂでもメタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。本培養終了時の培養液上清中のメタクリル酸濃度は０．２ｐｐｍであった。【０３０７】＜実施例６：Brevundimonas属、Ochrobactrum属、Paracoccus属を用いた合成培地でのメタクリル酸の製造＞  Brevundimonas  subvibrioides  NBRC16000、Ochrobactrum  grignonense  NBRC102586、Ochrobactrum  lupini  NBRC102587、Paracoccus  aminophilus  NBRC16710を寒天培地に生育させた（プレート培養）。プレート培養用の培地組成を以下に示す。【０３０８】  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  １０ｇ  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｇ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ  １ｌ  Ａｇｅｒ  １５ｇ  ｐＨ７．０【０３０９】  １０ｍｌ液体培地にプレート培養で生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、３〜４日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３１０】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３１１】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３１２】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３１３】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表１４」に本培養終了時の各培養液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３１４】
【表１４】
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【０３１５】＜実施例７：Sphingomonas属、Ochrobactrum属、Paenibacillus属、Mesorhizobium属を用いた合成培地でのメタクリル酸の製造＞  Sphingomonas  paucimobilis  NBRC13935、Ochrobactrum  intermedium  NBRC15820、Paenibacillus  sp.  NBRC13157、Mesorhizobium  loti  ATCC700743をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌ液体培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０rpm）、好気条件にて、１〜４日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３１６】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３１７】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、３〜６日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３１８】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３１９】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ｂで培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表１５」に本培養終了時の各培養液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３２０】
【表１５】
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【０３２１】＜実施例８：Bacillus属を用いた合成培地でのメタクリル酸の製造＞  Bacillus  badius  ATCC14574をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌニュートリエント培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１日間培養を行った（前培養）。【０３２２】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、８日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３２３】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３２４】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した２種類の分析条件で培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、分析条件Ａでも分析条件Ｂでもメタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。本培養終了時の培養液上清中のメタクリル酸濃度は分析条件Ａで２．０ｐｐｍ、分析条件Ｂで２．４ｐｐｍであった。【０３２５】＜実施例９：Ochrobactrum属を用いた天然培地でのメタクリル酸の製造＞  Ochrobactrum  sp.  NBRC12951をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソンアンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、８日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３２６】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３２７】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ｂで培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、本培養終了時の培養液上清中のメタクリル酸濃度は３．１ｐｐｍであった。【０３２８】＜実施例１０：Brevundimonas属を用いた天然培地でのメタクリル酸の製造＞  Brevundimonas  diminuta  ATCC11568をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌニュートリエント培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１日間培養を行った（前培養）。前培養液と４０％グリセロール水溶液を１：１で混合し、−８０℃で凍結保存した。【０３２９】  凍結保存した前培養液を室温で融解し、０．５ｍｌを１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３３０】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３３１】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ｂで培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、本培養終了時の培養液上清中のメタクリル酸濃度は３７．０ｐｐｍであった。【０３３２】＜実施例１１：酵母を用いたメタクリル酸の製造＞  Candida  utilis  NBRC1086をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌ液体培地に生育した菌を１白金耳植菌し、２４℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３３３】  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２０ｇ／ｌ  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２０ｇ／ｌ  グルコース  ２０  ｇ／ｌ【０３３４】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、２４℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３３５】  グルコース  ２．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  （ＮＨ4）2ＳＯ4  ６．０ｇ／ｌ  ＫＣｌ  ２．４ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．１２ｇ／ｌ  Ｈ3ＰＯ4  ３．０ｇ／ｌ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ２．４ｇ／ｌ  ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１ｇ／ｌ  ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．１２ｇ／ｌ  ＭｎＳＯ4・４−６Ｈ2Ｏ  ０．０２４ｇ／ｌ  ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ  ０．００６ｇ／ｌ  ＣａＣｌ2  ０．１２ｇ／ｌ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘ  ３０ｍｌ【０３３６】  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘの組成を以下に示す。    ビオチン  ０．２ｇ／ｌ    パントテン酸カルシウム  ２ｇ／ｌ    葉酸  ０．００２ｇ／ｌ    塩酸チアミン  ０．４ｇ／ｌ    リボフラビン  ０．２ｇ／ｌ    ニコチン酸  ０．４ｇ／ｌ    塩酸ピリドキシン  ０．４／ｌｇ    イノシトール  １ｇ／ｌ    ｐ−アミノ安息香酸  ０．２ｇ／ｌ【０３３７】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、本培養終了時の培養液上清中のメタクリル酸濃度は０．１ｐｐｍであった。【０３３８】＜実施例１２：カビを用いたメタクリル酸の製造＞  Aspergillus  flavus  NBRC8558、Aspergillus  oryzae  NBRC4255をポテトデキストロース寒天培地（日水製薬社製）に生育させた。生育した菌糸と胞子を滅菌水５ｍｌに懸濁し、その１ｍｌを１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。２４℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３３９】  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  ＮａＮＯ３  ２．５ｇ／ｌ  Ｋ２ＨＰＯ４  １．２５ｇ／ｌ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．６３ｇ／ｌ  ＫＣｌ  ０．６３ｇ／ｌ  ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１３ｇ／ｌ  小麦ふすま  ５ｇ／ｌ  ｐＨ７．０【０３４０】  本培養後、本培養液を遠心分離（７５００ｒｐｍ、１５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａと分析条件Ｂで培養液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、分析条件Ａでも分析条件Ｂでもメタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表１６」に本培養終了時の各培養液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３４１】
【表１６】
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【０３４２】＜実施例１３：Sphingomonas属、Pedobacter属、Bacillus属、Listonella属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Sphingomonas  paucimobilis  NBRC13935、Pedobacter  heparinus  NBRC12017、Bacillus  subtilis  NBRC12210、Listonella  anguillarum  ATCC19264をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌ液体培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１〜３日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３４３】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３４４】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、3〜６日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３４５】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３４６】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３４７】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表１７」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３４８】
【表１７】
2014038216.tif 000030
（ND：Not  Detected）
【０３４９】＜実施例１４：Ochrobactrum属、Paracoccus属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Ochrobactrum  grignonense  NBRC102586、Ochrobactrum  lupini  NBRC102587、Paracoccus  aminophilus  NBRC16710を寒天培地に生育させた（プレート培養）。プレート培養用の培地組成を以下に示す。【０３５０】  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  １０ｇ  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｇ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ  １ｌ  Ａｇｅｒ  １５ｇ  ｐＨ７．０【０３５１】  １０ｍｌ液体培地にプレート培養で生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、３〜４日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３５２】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３５３】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３５４】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３５５】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３５６】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表１８」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３５７】
【表１８】
2014038216.tif 000031
【０３５８】＜実施例１５：Bacillus属、Streptomyces属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Bacillus  megaterium  NBRC15308、Bacillus  simplex  ATCC49097、Streptomyces  griseus  NBRC13350をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌニュートリエント培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１日間培養を行った（前培養）。【０３５９】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３６０】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３６１】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３６２】  Streptomyces  griseus  NBRC13350は休止菌体反応開始５時間後、Bacillus  megaterium  NBRC15308とBacillus  simplex  ATCC49097は２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表１９」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３６３】
【表１９】
2014038216.tif 000032
【０３６４】＜実施例１６：Comamonas属、Acinetobacter属、Xanthobacter属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Comamonas  terrigena  NBRC13299、Acinetobacter  junii  ATCC17908、Xanthobacter  autotrophicus  ATCC35674をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンドカンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌニュートリエント培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１日間培養を行った（前培養）。【０３６５】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３６６】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３６７】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリンまたはイソ酪酸、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３６８】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表２０」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３６９】
【表２０】
2014038216.tif 000033
（ND：Not  Detected）
【０３７０】＜実施例１７：Ochrobactrum属、Achromobacter属、Acinetobacter属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Ochrobactrum  sp.  NBRC12951、Ochrobactrum  intermedium  NBRC13694、Ochrobactrum  anthropi  ATCC49237、Achromobacter  denitrificans  NBRC12669、Acinetobacter  haemolyticus  ATCC17906をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、３〜４日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３７１】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３７２】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３７３】  Ochrobactrum属は休止菌体反応開始５時間後と２４時間後、Achromobacter  denitrificans  NBRC12669と  Acinetobacter  haemolyticus  ATCC17906は休止菌体反応開始５時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表２１」と「表２２」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０３７４】
【表２１】
2014038216.tif 000034
【０３７５】
【表２２】
2014038216.tif 000035
【０３７６】＜実施例１８：Shewanella属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Shewanella  fodinae  NBRC  105216をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、３日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３７７】  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  １０ｇ  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｇ  Ｓｅａ  ｗａｔｅｒ（海産微細藻類用ダイゴ人工海水ＳＰ、日本製薬株式会社製）  ７５０ｍｌ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ  ２５０ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  ｐＨ７．２−７．４【０３７８】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３７９】  休止菌体反応開始２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、メタクリル酸濃度は０．１ｐｐｍであった。【０３８０】＜実施例１９：Agrobacterium属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Agrobacterium  luteum  NBRC15768を２５℃で寒天培地に生育させた（プレート培養）。プレート培養用の培地組成を以下に示す。【０３８１】  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  １０ｇ  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｇ  Ｓｅａ  ｗａｔｅｒ（海産微細藻類用ダイゴ人工海水ＳＰ、日本製薬株式会社製）  ７５０ｍｌ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ  ２５０ｍｌ  Ａｇｅｒ  １５ｇ  ｐＨ７．２−７．４【０３８２】  生育した菌を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、２５℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、３日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３８３】  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  １０ｇ  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｇ  Ｓｅａ  ��ａｔｅｒ（海産微細藻類用ダイゴ人工海水ＳＰ、日本製薬株式会社製）  ７５０ｍｌ  Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ  ｗａｔｅｒ  ２５０ｍｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  ｐＨ７．２−７．４【０３８４】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３８５】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件ＡとＢで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、メタクリル酸濃度は５時間後で０．１ｐｐｍ、２４時間後で０．１ｐｐｍであった。【０３８６】＜実施例２０：Brevundimonas属、Rhizobium属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Brevundimonas  vesicularis  ATCC11426、Rhizobium  leguminosarum  ATCC10004をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌ液体培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、４日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。前培養液と４０％グリセロール水溶液を１：１で混合し、−８０℃で凍結保存した。【０３８７】  Ｎａ2ＨＰＯ4（無水）  ６．０  ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4  ３．０  ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．５ｇ／ｌ  ＮＨ4Ｃｌ  １．０  ｇ／ｌ  １Ｍ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １ｍｌ  １Ｍ  ＣａＣｌ2  ０．１ｍｌ  １％  Ｔｈｉａｍｉｎ  １ｍｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３８８】  凍結保存した前培養液を室温で融解し、０．５ｍｌを１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３８９】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３９０】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った��反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３９１】  Brevundimonas  vesicularis  ATCC11426は休止菌体反応開始５時間後、Rhizobium  leguminosarum  ATCC10004は２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ｂで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、Brevundimonas  vesicularis  ATCC11426は０．７ｐｐｍ、Rhizobium  leguminosarum  ATCC10004は１．６ｐｐｍであった。【０３９２】＜実施例２１：Brevundimonas属を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Brevundimonas  diminuta  ATCC11568をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５％）に生育させた。１０ｍｌニュートリエント培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、１日間培養を行った（前培養）。前培養液と４０％グリセロール水溶液を１：１で混合し、−８０℃で凍結保存した。【０３９３】  凍結保存した前培養液を室温で融解し、０．５ｍｌを１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。３０℃、ロータリーシェーカー（２３０rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０３９４】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０３９５】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０３９６】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ｂで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、メタクリル酸濃度は５時間後で３３．０ｐｐｍ、２４時間後で３７．０ｐｐｍであった。【０３９７】＜実施例２２：好熱菌を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Geobacillus  stearothermophilus  NBRC  12983をニュートリエント寒天培地（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製、寒天１．５���）に生育させた。１０ｍｌ液体培地に生育した菌を１白金耳植菌し、３７℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２日間培養を行った（前培養）。前培養用の培地組成を以下に示す。【０３９８】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  グルコース  ２．０  ｇ／ｌ【０３９９】  生育した菌を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、２５℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、５日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０４００】  ニュートリエント培地  ８ｇ／ｌ  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ【０４０１】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０４０２】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められ、メタクリル酸濃度は５時間後で０．４ｐｐｍ、２４時間後で０．３ｐｐｍであった。【０４０３】＜実施例２３：酵母を用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Saccharomyces  cerevisiae  NBRC1136、Saccharomyces  cerevisiae  NBRC2347、Saccharomyces  paradoxus  NBRC10609、Candida  parapsilosis  ATCC22019を寒天培地に生育させた（プレート培養）。プレート培養用の培地組成を以下に示す。Saccharomyces属は３０℃、Candida属は２４℃で培養を行った。【０４０４】  酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２０ｇ／ｌ  ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２０ｇ／ｌ  グルコース  ２０  ｇ／ｌ  Ａｇｅｒ  １５ｇ／ｌ【０４０５】  １０ｍｌ液体培地に生育した菌を１白金耳植菌し、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２〜７日間培養を行った（前培養）。Saccharomyces属は３０℃、Candida属は２４℃で培養を行い、前培養の培地は培地１または２を用いた。培地組成を以下に示す。【０４０６】  培地１    酵母エキス（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２０ｇ／ｌ    ポリペプトン（ベクトン・ディッキンソン  アンド  カンパニー社製）  ２０ｇ／ｌ    グルコース  ２０  ｇ／ｌ【０４０７】  培地２    グルコース  ２．０ｇ／ｌ    Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ    （ＮＨ4）2ＳＯ4  ６．０ｇ／ｌ    ＫＣｌ  ２．４ｇ／ｌ    ＮａＣｌ  ０．１２ｇ／ｌ    Ｈ3Ｐ��4  ３．０ｇ／ｌ    ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ２．４ｇ／ｌ    ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１ｇ／ｌ    ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．１２ｇ／ｌ    ＭｎＳＯ4・４−６Ｈ2Ｏ  ０．０２４ｇ／ｌ    ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ  ０．００６ｇ／ｌ    ＣａＣｌ2  ０．１２ｇ／ｌ    Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘ  ３０ｍｌ【０４０８】  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘの組成を以下に示す。    ビオチン  ０．２ｇ／ｌ    パントテン酸カルシウム  ２ｇ／ｌ    葉酸  ０．００２ｇ／ｌ    塩酸チアミン  ０．４ｇ／ｌ    リボフラビン  ０．２ｇ／ｌ    ニコチン酸  ０．４ｇ／ｌ    塩酸ピリドキシン  ０．４／ｌｇ    イノシトール  １ｇ／ｌ    ｐ−アミノ安息香酸  ０．２ｇ／ｌ【０４０９】  １ｍｌ前培養液を１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２〜３日間培養を行った（本培養）。また、Saccharomyces属は３０℃、Candida属は２４℃で培養を行った。本培養用の培地組成を以下に示す。【０４１０】  グルコース  ２．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリンまたはイソ酪酸  ２．０  ｇ／ｌ  （ＮＨ4）2ＳＯ4  ６．０ｇ／ｌ  ＫＣｌ  ２．４ｇ／ｌ  ＮａＣｌ  ０．１２ｇ／ｌ  Ｈ3ＰＯ4  ３．０ｇ／ｌ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ２．４ｇ／ｌ  ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１ｇ／ｌ  ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．１２ｇ／ｌ  ＭｎＳＯ4・４−６Ｈ2Ｏ  ０．０２４ｇ／ｌ  ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ  ０．００６ｇ／ｌ  ＣａＣｌ2  ０．１２ｇ／ｌ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘ  ３０ｍｌ【０４１１】  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘの組成を以下に示す。    ビオチン  ０．２ｇ／ｌ    パントテン酸カルシウム  ２ｇ／ｌ    葉酸  ０．００２ｇ／ｌ    塩酸チアミン  ０．４ｇ／ｌ    リボフラビン  ０．２ｇ／ｌ    ニコチン酸  ０．４ｇ／ｌ    塩酸ピリドキシン  ０．４／ｌｇ    イノシトール  １ｇ／ｌ    ｐ−アミノ安息香酸  ０．２ｇ／ｌ【０４１２】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を３ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。５０ｍＬ容コニカルチューブに菌体懸濁液３ｍｌと休止菌体反応溶液を３ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリンまたはイソ酪酸、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。「表２３」に培養および休止菌体反応条件を示す。【０４１３】
【表２３】
2014038216.tif 000036
【０４１４】  Saccharomyces  cerevisiae  NBRC2347とCandida  parapsilosis  ATCC22019は休止菌体反応開始５時間後、Saccharomyces  cerevisiae  NBRC1136とSaccharomyces  paradoxus  NBRC10609は２４時間後に反応液１．６ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件Ａで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表２４」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０４１５】
【表２４】
2014038216.tif 000037
【０４１６】＜実施例２４：カビを用いた休止菌体反応によるメタクリル酸の製造＞  Aspergillus  niger  ATCC6275、Aspergillus  flavus  NBRC8558、Aspergillus  oryzae  NBRC4255をポテトデキストロース寒天培地（日水製薬社製）に生育させた。生育した菌糸あるいは胞子を滅菌水５ｍｌに懸濁し、その１ｍｌを１００ｍｌ液体培地（培地１００ｍｌ／５００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌した。２４℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、2日間培養を行った（本培養）。本培養用の培地組成を以下に示す。【０４１７】  Ｌ−バリン  ２．０  ｇ／ｌ  ＮａＮＯ3  ２．５ｇ／ｌ  Ｋ2ＨＰＯ4  １．２５ｇ／ｌ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．６３ｇ／ｌ  ＫＣｌ  ０．６３ｇ／ｌ  ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  ０．０１３ｇ／ｌ  小麦ふすま  ５ｇ／ｌ  ｐＨ７．０【０４１８】  本培養後、本培養液全量を２２５ｍｌ容遠心チューブに移し、遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分）し、上清を除去して菌体を得た。この菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を４０ｍｌ添加して菌体を懸濁、再度同条件で遠心し、上清を除去して洗浄菌体を得た。洗浄菌体に５０ｍＭ  りん酸バッファー  ｐＨ７．０を１０ｍｌ添加して菌体懸濁液を調製した。菌体懸濁液を５０ｍＬ容コニカルチューブに移し、休止菌体反応溶液を１０ｍｌ加えて休止菌体反応を行った。反応は、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  rpm）、好気条件にて、２４時間行った。休止菌体反応溶液の組成は、５．０ｇ／ｌ  Ｌ−バリン、５０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ７．０である。【０４１９】  休止菌体反応開始５時間後と２４時間後に反応液約２ｍｌを採取した。反応液は遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分）し、上清画分をＤＩＳＭＩＣ−１３ＣＰ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ａｃｅｔａｔｅ  ０．２μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）にてフィルター濾過処理した。実施例５に記載した分析条件ＡとＢで反応液上清中に含まれる化合物を分析した。その結果、メタクリル酸と同じ溶離時間にピークが認められた。「表２５」に休止菌体反応における反応液上清中のメタクリル酸濃度を示す。【０４２０】
【表２５】
2014038216.tif 000038
（ND：Not  Detected）
【０４２１】＜実施例２５：Pseudomonas属、Bacillus属、Brevundimonas属、Ochrobactrum属、Acinetobacter属を用いた同一性比較＞  GENETYX  CORPORATIONの遺伝情報処理ソフトウェアGENETYX  ver.10のホモロジー解析プログラムを用いて、配列番号１〜８、９〜１５、１８〜２０、２２〜２６、３０〜３１、４２〜４４、４５〜４６、４７〜４９に示す各微生物の１６Ｓ  ｒＤＮＡ又はＬＳＵ  ｒＤＮＡの塩基配列の同一性をそれぞれ比較した。「表２６〜３３」に結果を示す。【０４２２】  配列番号１〜８【表２６】
2014038216.tif 000039
【０４２３】  配列番号９〜１５【表２７】
2014038216.tif 000040
【０４２４】  配列番号１８〜２０【表２８】
2014038216.tif 000041
【０４２５】  配列番号２２〜２６【表２９】
2014038216.tif 000042
【０４２６】  配列番号３０〜３１【表３０】
2014038216.tif 000043
【０４２７】  配列番号４２〜４４【表３１】
2014038216.tif 000044
【０４２８】  配列番号４５〜４６【表３２】
2014038216.tif 000045
【０４２９】  配列番号４７〜４９【表３３】
2014038216.tif 000046
【０４３０】＜参考例１：接合伝達用レシピエントＰＲ４ＫＳの作製＞  ロドコッカス・エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＰＲ４（製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門；受託番号：ＮＢＲＣ  １００８８７）を特開２０１１‐２００１３３号公報に記載の方法により改変し、１２０ｍｇ／Ｌのクロラムフェニコールに耐性を示し、且つカナマイシン耐性遺伝子を欠失した誘導株を作製し、ＰＲ４ＫＳ株と命名した。【０４３１】  具体的には、クロラムフェニコール耐性を強化するために、ＭＹＫ培地（０．５％  ｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎｅ、０．３％  ｂａｃｔ  ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ、０．３％  ｍａｌｔ  ｅｘｔｒａｃｔ、０．２％  ＫＨ２ＰＯ４、０．２％  Ｋ２ＨＰＯ４）中のクロラムフェニコールの濃度を１０ｍｇ／ｍＬから始めて１２０ｍｇ／ｍＬまで段階的に徐々に高めつつ、ＰＲ４株を継代培養することにより自然変異を誘発し、１２０ｍｇ／ｍＬのクロラムフェニコールに耐性を有する誘導株ＲｈＣｍＳＲ−０９株を得た。【０４３２】  次いで、上記ＲｈＣｍＳＲ−０９株を、特開２０１１‐２００１３３号公報に記載のカナマイシン耐性遺伝子欠失変異導入用プラスミドｐＫＭ０４３を保有する大腸菌株と１：１の比率で混合して培養し、接合伝達によりＲｈＣｍＳＲ−０９株内にｐＫＭ０４３を導入後、カナマイシン硫酸塩２００ｍｇ／Ｌ及びクロラムフェニコール５０  ｍｇ／Ｌ含有ＭＹＫ寒天培地（０．５％  ｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎｅ、０．３％  ｂａｃｔ  ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ、０．３％  ｍａｌｔ  ｅｘｔｒａｃｔ、０．２％  ＫＨ２ＰＯ４、０．２％  Ｋ２ＨＰＯ４、１．５％寒天）にて培養することにより、ｐＫＭ０４３がＲｈＣｍＳＲ−０９株ゲノム内に挿入された相同組換え株を得た。前記相同組換え株を、１０％スクロース含有ＭＹＫ寒天培地にて培養し、得られたコロニーの中からカナマイシン感受性株となった誘導株、すなわちカナマイシン耐性遺伝子欠失変異誘導株ＰＲ４ＫＳ株を得た。【０４３３】＜参考例２：ＬｉｇＤホモログ遺伝子のクローニングと遺伝子欠失用プラスミドの作製＞  ＰＲ４ＫＳ株のＬｉｇＤホモログ遺伝子（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｏ：  ＹＰ＿００２７６７９６９）を標的遺伝子とした。ＬｉｇＤ遺伝子周辺配列を含む約５．４  ｋｂのＤＮＡをＰＣＲにより増幅後、特開２０１１‐２００１３３号公報に記載された、ｓａｃＢ遺伝子がカナマイシン耐性遺伝子の下流且つ同方向に導入されたプラスミドベクターｐＫ１９ｍｏｂｓａｃＢ１にクローニングし、プラスミドｐＴＪ００１を得た。ＰＣＲ条件は以下の通りである。【０４３４】プライマー  ＧＢ−１３８：  ５’−  ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＡＣＣＧＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＧＧＴＧＴＣ  −３’  （配列番号９４）  ＧＢ−１３９：  ５’−  ＧＧＴＣＴＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＴＧＴＴＣＣＡＡＴＧＣＧ  −３’（配列番号９５）【０４３５】反応液組成：  滅菌水                                      ２２  μｌ  ２×ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ（タカラバイオ社製）  ２５  μｌ  ＧＢ−１３８                                  １  μｌ  ＧＢ−１３９                                  １  μｌ  ＰＲ４ＫＳゲノム（５０  ｎｇ／μｌ）          １  μｌ  総量                                        ５���  μｌ【０４３６】温度サイクル  ９８℃  １０秒、５５℃  １０秒及び７２℃  １２０秒の反応を３５サイクル【０４３７】  ｐＴＪ００１内部のＬｉｇＤホモログ遺伝子全長（約２．３  ｋｂ）を欠失させＬｉｇＤホモログ遺伝子の上流及び下流配列のみを残存させた、ＬｉｇＤホモログ遺伝子欠失用プラスミドｐＴＪ００２を作製した（図４参照）。ｐＴＪ００２は、標的であるＬｉｇＤホモログ遺伝子の開始コドン付近の配列と終始コドン付近の配列の両方を含み、それぞれ開始コドンから上流方向又は終始コドンから下流方向に伸長するように設計されたプライマーＧＢ−１４０とＧＢ−１４１によりｐＴＪ００１内部の配列を増幅することにより得られたＬｉｇＤホモログ遺伝子を含まないＰＣＲ産物により大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換して、環状ＤＮＡとすることにより取得した。ＰＣＲの条件は以下の通りである。【０４３８】プライマー  ＧＢ−１４０：  ＧＡＧＧＡＡＡＴＧＧＴＣＡＣＡＧＧＧＣＧＡＧＡＡＴＡＧＧＴＴＧ  （配列番号９６）  ＧＢ−１４１：  ＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＧ  （配列番号９７）【０４３９】反応液組成  滅菌水                                      ２２  μｌ  ２×ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ（タカラバイオ社製）  ２５  μｌ  ＧＢ−１４０                                  １  μｌ  ＧＢ−１４１                                  １  μｌ  ｐＴＪ００１                                  １  μｌ  総量                                        ５０  μｌ【０４４０】温度サイクル  ９８℃  １０秒、５０度  １０秒及び７２℃  １８０秒の反応を３０サイクル【０４４１】  ＰＣＲ終了後、サンプル１μｌを用い、０．７％アガロースゲル電気泳動により断片の確認を行ったところ、断片の増幅が認められた。上記プラスミドｐＴＪ００２製造手順において、ＰＲ４株からのゲノム抽出にはＷｉｚａｒｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を、制限酵素により切断したＤＮＡ断片及びＰＣＲ産物の精製にはＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を、ＤＮＡ同士の接続にはＤＮＡ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ＜Ｍｉｇｈｔｙ  Ｍｉｘ＞（タカラバイオ社製）を、プラスミドの抽出にはＱＩＡｐｒｅｐ  ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いた。【０４４２】＜参考例３：ＰＲ４ＫＳのＬｉｇＤホモログ遺伝子欠失誘導株の作製＞  大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｓ１７−１λｐｉｒをｐＴＪ００２により形質転換したものをドナーとし、参考例１の方法により得られたＰＲ４ＫＳをレシピエントとして、特開２０１１‐２００１３３号公報に記載の方法と同様に接合伝達を行い、相同組換えによって生じた１３株のＬｉｇＤホモログ遺伝子欠失誘導株を得た。前記欠失誘導株から１株を選び、ＰＲ４ＫＳΔｌｉｇＤ誘導株と命名した。【０４４３】＜実施例２６：ロドコッカス属細菌用プラスミドｐＬＫ００５及びそれを用いたニトリルヒドラターゼ発現用プラスミドｐＳＪ２０１の作製＞（１）ｐＬＫ００５の取得と解析  ｐＫ４（特開平５−６４５８９号公報参照）を用いて、上記エレクトロポレーション法によりロドコッカス  ｓｐ.  Ｎ７７５（独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター  寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−９６１）を形質転換した。得られた形質転換体を１０ｍｌのＭＹＫ培地に植菌し、３０℃にて１日培養した。これをクリーンベンチ内で紫外線を照射することにより変異処理を行った。変異処理を行った培養液を５０〜４００μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＭＹＫ寒天培地に塗布し、３０℃にて３日間培養した。【０４４４】  寒天培地上に現れた複数のコロニーをそれぞれＭＹＫ培地にて培養し、形質転換体よりプラスミドを回収した。回収したプラスミドを用いてロドコッカス  ｓｐ.  Ｎ７７５を再度形質転換して、形質転換体のカナマイシン耐性度が向上しているかどうかを調べた。その結果、明らかにカナマイシン耐性度が向上している形質転換体が数株認められた。【０４４５】  カナマイシン耐性度が向上することが認められたプラスミドの塩基配列を調べたところ、ｐＫ４のカナマイシン耐性遺伝子の上流域の配列に変化が起こっていること（８塩基配列ＧＴＴＧＴＡＧＧの重複）が認められた。このカナマイシン耐性度が向上することが認められたプラスミドをｐＬＫ００５と命名した。【０４４６】（２）ｐＳＪ０４０の作製  プラスミドｐＳＪ０３４は、特開平１０−３３７１８５号公報記載の方法によりプラスミドｐＳＪ０２３から作製したものである。ｐＳＪ０３４には３カ所のＥｃｏＲＩ制限酵素部位が存在するが、このうちの１カ所をＳｐｅＩ部位に変換したプラスミドｐＳＪ０４０を作製した。作製方法は、ｐＳＪ０３４を制限酵素ＥｃｏＲＩにより部分分解し、タカラＢｌｕｎｔｉｎｇキットを用いて切断個所の平滑化を行った。ＳｐｅＩリンカーの存在下でライゲーション反応を行い、反応液を用いて大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。形質転換体を培養後、プラスミドを抽出し、ＳｐｅＩリンカーが挿入されたプラスミドを選別した。ｐＳＪ０３４の３つのＥｃｏＲＩ部位のうち、カナマイシン耐性遺伝子の下流に存在するＥｃｏＲＩ部位にＳｐｅＩリンカーが挿入されたものをｐＳＪ０４０と命名した。【０４４７】（３）ｐＳＪ２０１の構築  ｐＬＫ００５をＨｉｎｄＩＩＩで切断し、約２．１ｋｂの断片を調製した。一方、ｐＳＪ０４０をＨｉｎｄＩＩＩで切断し、約９．８ｋｂの断片を調製した。これらの２断片を用いてライゲーション反応を行い、反応液を用いて大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。形質転換体を培養後、プラスミドを抽出し、その塩基配列を確認した結果、ｐＬＫ００５由来の変異配列（ＧＴＴＧＴＡＧＧの重複）を持ち、それ以外はｐＳＪ０４０と同様の配列を有するプラスミドをｐＳＪ２０１と命名した。【０４４８】＜実施例２７：ＰＲ４ＫＳΔｌｉｇＤ誘導株のＲＥ＿ａｃｄ１／ＲＥ＿ｅｃｈＡ／ＲＥ＿ｈｃｈＡ／ＲＥ＿ｍｍｓＢ遺伝子欠失誘導株の作製＞（１）Ｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ法を用いた遺伝子欠失用プラスミドの作製  ＰＲ４ＫＳ株のＲＥ＿ａｃｄ１／ＲＥ＿ｅｃｈＡ／ＲＥ＿ｈｃｈＡ／ＲＥ＿ｍｍｓＢ遺伝子を標的遺伝子としたＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（タカラバイオ社製）による遺伝子欠失用プラスミドの作製を行った（図５参照）。【０４４９】  標的遺伝子の上流及び下流配列のＤＮＡをＰＣＲにより増幅した。ＰＣＲ条件は以下の通りである。【０４５０】断片１用プライマー  ＭＭＡ−０６１：  ＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＧＣＴＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＡＧＡＣ  （配列番号９８）  ＭＭＡ−０６２：  ＡＧＴＧＴＧＡＧＧＡＡＡＧＴＧＴＴＣＣＧＡＴＣＡＧＴＴＣＡＴ  （配列番号９９）断片２用プライマー  ＭＭＡ−０６３：  ＣＡＣＴＴＴＣＣＴＣＡＣＡＣＴＣＧＴＣＧＡＧＡＧＴＡＴＧＡＧ  （配列番号１００）  ＭＭＡ−０６４：  ＣＧＧＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＧＡＣＧＡＡＣＡＡＣＧＡＧＡＣ  （配列番号１０１）【０４５１】反応液組成  鋳型（ＰＲ４  ｗｉｌｄ  ｔｙｐｅゲノムＤＮＡ）              １μｌ  ２×ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ  Ｍａｘ  Ｐｒｅｍｉｘ（TAKARA社製）２５μｌ  Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                            １μｌ  Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                            １μｌ  Ｄ．Ｗ．                                                  ２２μｌ  Ｔｏｔａｌ                                                ５０μｌ【０４５２】温度サイクル  ９８℃  １０秒、６０℃  １０秒及び７２℃  １２０秒の反応を３０サイクル【０４５３】  ＰＣＲ終了後、サンプル１μｌを用い、０．７％アガロースゲル電気泳動により断片の確認を行ったところ、断片の増幅が認められた。ＰＣＲ産物（断片１及び断片２）をＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を使用し、バッファー置換を行い、以下に示すＩｎ−Ｆｕｓｉｏｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔによる反応に用いた。【０４５４】（２）Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔによるベクターと目的断片の連結及び形質転換  Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔを用い、上記断片とベクターの連結を行った。反応条件は以下の通りである。【０４５５】反応液組成  ５ｘ  Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｐｒｅｍｉｘ  ２μｌ  ベクター断片                                            １．５μｌ  ＤＮＡ断片１                                                １μｌ  ＤＮＡ断片２                                                ２μｌ  Ｄ．Ｗ．                                                ３．５μｌ  Ｔｏｔａｌ                                                １０μｌ【０４５６】  上記反応液を５０℃で１５分間インキュベートした後、氷上で冷却し、大腸菌ＪＭ１０９株の形質転換に用いた。大腸菌形質転換体の選択はカナマイシン硫酸塩５０  ｍｇ／Ｌを含むＬＢ寒天培地（以下、  ＬＢ  Ｋｍ５０寒天培地）にて行った。得られた形質転換体よりＭｉｎｉ  ｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いてプラスミドを調製し、目的のプラスミドを得た。プラスミドの確認はＸｂａＩ制限酵素処理後の断片サイズ及び挿入断片とベクターの接続領域の配列を調べることにより行った。目的のプラスミドをｐＭＭＡ３０２と命名した。【０４５７】（３）ＰＲ４ＫＳΔｌｉｇＤ誘導株の相同組換え誘導株及び遺伝子欠失誘導株の作製  ＰＲ４ＫＳΔｌｉｇＤ株コンピテントセル２０μｌに  ｐＭＭＡ３０２を１μｌ添加し、氷上で１０分間インキュベートした。インキュベートした上記溶液を氷冷したエレクトロポレーションキュベット（０．１ｃｍ）に全量移し、１．５ｋＶ  （２００Ω）の高電圧をかけ、直ちに６００μｌのＬＢ液体培地を加え、３０℃にて６時間静置した。２００μｌをＬＢ  Ｋｍ１０寒天培���に撒き３０℃にて４日間培養した。生育したコロニーをＬＢ  Ｋｍ１０寒天培地にストリークし、４日間培養した後、以下に示した条件によりコロニーＰＣＲを行い相同組換え誘導株の確認を行った。【０４５８】プライマー  ＭＭＡ−０６９：  ＧＣＧＣＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＣ（配列番号１０２）  ＭＭＡ−０７０：  ＧＣＧＡＣＧＣＴＣＡＴＣＧＡＧＡＴＣＴＣ（配列番号１０３）【０４５９】反応液組成  鋳型                                                    ４．０μｌ  ２×ＭｉｇｈｔｙＡｍｐＢｕｆｆｅｒ（TAKARA社製）        ５．０μｌ  Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                      ０．２５μｌ  Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                      ０．２５μｌ  Ｄ．Ｗ．                                                ０．３μｌ  MightyAmpDNAPolymerase（TAKARA社製）                    ０．２μｌ  Ｔｏｔａｌ                                            １０．０μｌ【０４６０】温度サイクル  ９８℃  １０秒、６８℃  １８０秒の反応を３０サイクル【０４６１】  相同組換え誘導株であることが認められたコロニーをＬＢ培地２００μｌに懸濁し、１００μｌをＬＢ＋１０％  Ｓｕｃｒｏｓｅ寒天培地に撒き、３日間培養した。生育したコロニーからカナマイシン感受性となっているものを選択し、これらについてコロニーＰＣＲにより目的の遺伝子欠失を確認した。その結果、ＰＲ４ＫＳΔｌｉｇＤ誘導株よりＲＥ＿ａｃｄ１、ＲＥ＿ｅｃｈＡ、ＲＥ＿ｈｃｈＡ、ＲＥ＿ｍｍｓＢの４遺伝子を欠失したものが得られ、ＤＭＡ００８株と命名した。【０４６２】＜実施例２８：ロドコッカス属細菌におけるＡＣＤ又はＡＡＴ発現用プラスミドの作製＞  ロドコッカス属に属する微生物においてＡＣＤ又はＡＡＴを発現させるためのプラスミドを作製した。【０４６３】  ＡＣＤ又はＡＡＴそれぞれの発現用プラスミドを作製するために、ＰＣＲによりそれぞれの遺伝子ＤＮＡを増幅した。ＰＣＲ条件は以下の通りである。【０４６４】ＲＥ＿ａｃｄ１用プライマー  ＭＭＡ−１１４  ＧＧＴＣＴＡＧＡＡＴＧＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧＡＧＣＧ（配列番号１２６）  ＭＭＡ−０２２  ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＴＣＡＣＧＣＴＴＴＴＣＧＡＴＣＡＡＴＡＣ（配列番号１１５）【０４６５】ＭｐＡＡＴ１用プライマー  ＭＭＡ−１０９  ＧＧＴＣＴＡＧＡＡＴＧＡＡＡＴＣＡＴＴＣＴＣＡＧＴＡＣＴＴＣＡＧ（配列番号１２７）  ＭＭＡ−０４５  ＣＧＧＴＡＣＧＣＧＣＧＧＡＴＣＴＴＣＣＡＧＡＧ（配列番号８３）【０４６６】ＲＥ＿ａｃｄ１用鋳型  Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４野生株ゲノムＤＮＡ【０４６７】ＭｐＡＡＴ１用鋳型  プラスミドｐＡＡＴ００１（実施例４５参照）【０４６８】反応液組成  鋳型                                                        １μｌ  ２×PrimeSTAR  Max  Premix（TAKARA社製）                  ２５μｌ  Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                            １μｌ  Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                            １μｌ  Ｄ．Ｗ．                                                  ２２μｌ  Ｔｏｔａｌ                                                ５０μｌ【０４６９】温度サイクル：  ９８℃  １０秒、６０℃  １０秒、７２℃  ６０秒の反応を３０サイクル【０４７０】  ＰＣＲ終了後、ＰＣＲ産物をＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を使用し、バッファー置換を行い、得られた断片を制限酵素ＸｂａＩ及びＳｓｅ８３８７Ｉで処理した。また、実施例２６で作製したｐＳＪ２０１もＸｂａＩ及びＳｓｅ８３８７Ｉで処理し、エタノール沈殿を行った後、再び滅菌水で溶解し、Ｓｈｒｉｍｐ  Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈｅｔａｓｅ（ＳＡＰ）処理を行った。上記ＰＣＲ断片及びｐＳＪ２０１由来大断片を、０．７％  アガロースゲル電気泳動後にＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を用いて精製した。制限酵素処理反応条件、ＳＡＰ処理条件及びライゲーション反応条件は以下の通りである。【０４７１】制限酵素処理反応組成  ＰＣＲ増幅断片                            ２０μｌ  １０×Ｍ                                    ５μｌ  ０．１％ＢＳＡ                              ５μｌ  ＸｂａＩ（ＴＡＫＡＲＡ社製）                ２μｌ  Ｓｓｅ８３８７Ｉ（ＴＡＫＡＲＡ社製）        ２μｌ  Ｄ．Ｗ．                                  １６μｌ  Ｔｏｔａｌ                                ５０μｌ【０４７２】ＳＡＰ処理反応組成  ベクター断片（ｐＳＪ２０１）              ４４μｌ  １０×ＳＡＰ  Ｂｕｆｆｅｒ                  ５μｌ  ＳＡＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）                １μｌ  Ｔｏｔａｌ                                ５０μｌ【０４７３】ライゲーション反応組成  ベクター断片                                ４μｌ  目的断片                                    １μｌ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｍｉｘ（ＴＡＫＡＲＡ社製）３μｌ  Ｔｏｔａｌ                                  ８μｌ【０４７４】  上記組成で混合したライゲーション反応液を用いて大腸菌ＪＭ１０９株の形質転換を行った。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、制限酵素ＸｂａＩ及びＳｓｅ８３８７Ｉ処理後にアガロース電気泳動を行い、目的サイズの断片が挿入されていることを確認した。また、挿入断片とベクターの接続領域の塩基配列解析により目的のプラスミドであることを確認した。ＲＥ＿ａｃｄ１遺伝子及びＭｐＡＡＴ１遺伝子が導入されたプラスミドを、それぞれｐＭＭＡ４０１及びｐＡＡＴ３０１と命名した。【０４７５】＜実施例２９：ロドコッカス属形質転換用ＡＣＤ及びＡＡＴ両発現プラスミドの作製＞  以下に実施例２７で得られたＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属微生物でメタクリル酸エステルを製造するためのプラスミドの作製を行った。【０４７６】  ＲＥ＿ａｃｄ１遺伝子発現用プラスミドｐＭＭＡ４０１のＲＥ＿ａｃｄ１遺伝子の下流に、ＭｐＡＡＴ１遺伝子発現用プラスミドｐＡＡＴ３０１を鋳型にしてＰＣＲ反応により得られた「ニトリラーゼプロモーター＋ＭｐＡＡＴ１遺伝子」断片を挿入した。【０４７７】「ニトリラーゼプロモーター＋ＭｐＡＡＴ１遺伝子」断片の増幅は下記のように行った。【０４７８】プライマー  ＭＭＡ−１３３（Ｓｓｅ−ＰｒｏＦｗ）：  ＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＴＧＣＡＣＴＣＣＧＣＴＧＣＧＡＣＡＴＧＴＡＴＣＧＡ  （配列番号１０４）  ＭＭＡ−１３１（Ｓｓｅ−００１Ｒｖ）：  ＡＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＧＡＴＣＴＡＡＧＧＴＴＧＴＴＡＣＡ  （配列番号１０５）【０４７９】ＰＣＲ反応組成  鋳型（ｐＡＡＴ３０１）                                      １μ���  ２×ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ  Ｍａｘ  Ｐｒｅｍｉｘ（TAKARA社製）１０μｌ  Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ（１０  μＭ）                        ０．６μｌ  Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ（１０  μＭ）                        ０．６μｌ  Ｄ．Ｗ．                                                ７．８μｌ  Ｔｏｔａｌ                                                ２０μｌ【０４８０】温度サイクル  ９８℃  ５秒、６０℃  ５秒、７２℃  ４５秒の反応を３０サイクル【０４８１】  こうして得られた「ニトリラーゼプロモーター＋ＭｐＡＡＴ１遺伝子」断片を制限酵素Ｓｓｅ８３８７Ｉで処理した。一方、ｐＭＭＡ４０１もＳｓｅ８３８７Ｉで処理後、ＳＡＰ処理を行った。これらのＤＮＡ断片を０．７％アガロースゲル電気泳動を行った後、Ｇｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を用いて精製した。制限酵素処理反応条件及びライゲーション反応条件は以下の通りである。【０４８２】制限酵素処理反応組成（ＡＡＴ断片）  ＰＣＲ増幅断片                              ４０μｌ  １０×Ｍバッファー                            ５μｌ  ０．１％  ＢＳＡ                              ４μｌ  Ｓｓｅ８３８７Ｉ（ＴＡＫＡＲＡ社製）          １μｌ  Ｔｏｔａｌ                                  ５０μｌ【０４８３】制限酵素処理反応組成（ベクター断片）  ｐＭＭＡ４０１（ベクター）                    ３μｌ  １０×Ｍバッファー                            ４μｌ  ０．１％  ＢＳＡ                              ４μｌ  ＡＰ                                          １μｌ  Ｓｓｅ８３８７Ｉ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）        １μｌ  Ｄ．Ｗ．                                    ２７μｌ      Ｔｏｔａｌ                                  ４０μｌ【０４８４】ライゲーション反応組成  ｐＭＭＡ４０１                                １μｌ  挿入断片                                      ２μｌ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｍｉｘ（ＴＡＫＡＲＡ社製）  ３μｌ  Ｔｏｔａｌ                                    ６μｌ【０４８５】  上記組成で混合したライゲーション反応液を用いて大腸菌ＪＭ１０９株の形質転換を行った。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出した。制限酵素Ｓｓｅ８３８７Ｉ処理後にアガロース電気泳動を行い、目的サイズの断片が挿入されていることを確認した。得られたプラスミドの挿入断片の接続領域の塩基配列解析により目的のプラスミドであることを確認し、本プラスミドをｐＡＣＤＡＡＴ１と命名した。上記手法と同様の手法を用い配列の異なるＡＣＤ及びＡＡＴ両発現用プラスミドを計６種（ｐＡＣＤＡＡＴ２、ｐＡＣＤＡＡＴ３、ｐＡＣＤＡＡＴ４、ｐＡＣＤＡＡＴ６、及びｐＡＣＤＡＡＴ８）作製した（図６参照）。【０４８６】＜実施例３０：Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属を用いたメタクリル酸の製造＞  実施例２７の（３）で得られたＤＭＡ００８株を、プラスミドｐＭＭＡ４０１により形質転換した。得られた組換え体（ＤＭＡ００８／ｐＭＭＡ４０１）を用いて休止菌体反応によりメタクリル酸の製造を行った。以下に示すＭ９／Ｆｒｃ／Ｋｍ１０液体培地（ワッセルマン試験管）２ｍＬに１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（１８０  ｒｐｍ）、好気条件にて、２日間培養を行った（前培養）。【０４８７】Ｍ９／Ｆｒｃ／Ｋｍ１０液体培地  ６．０  ｇ／Ｌ  Ｎａ２ＨＰＯ４   ３．０  ｇ／Ｌ  ＫＨ２ＰＯ４   ０．��  ｇ  ／Ｌ  ＮａＣｌ          １．０  ｇ／Ｌ  ＮＨ４Ｃｌ                  １  ｍＭ  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  １  ｍＭ  ＣａＣｌ２  ０．０１  ｇ／Ｌ  Ｔｈｉａｍｉｎｅ  ２．０  ｇ／Ｌ  フルクトース  １０  μｇ／Ｌ  カナマイシン【０４８８】  前培養液を１００ｍＬＭ９／Ｆｒｃ／Ｋｍ１０液体培地（培地１００ｍＬ／５００ｍＬ容三角フラスコ）に１ｍＬ植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  ｒｐｍ）、好気条件にて、３日間培養を行った（本培養）。【０４８９】  本培養後、本培養液４０ｍＬを５０ｍＬ容コニカルチューブに移し遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分）し、菌体を得た。この菌体を用い以下の反応を行った。５０ｍＬ容量のコニカルチューブに、１ｍｌの反応液を加え、３０℃、ロータリーシェーカー（１８０ｒｐｍ）、好気条件にて、２４時間行った。【０４９０】反応液組成  ＯＤ６３０＝１０  菌体  （終濃度）  ５．０ｇ／ｌ  ２−オキソイソ吉草酸（終濃度）  ５０ｍＭ  リン酸バッファー／ｐＨ７．０（終濃度）【０４９１】  反応後、反応液上清を適量採取して以下のＨＰＬＣ条件にて分析を行った結果、１２ｐｐｍのメタクリル酸を検出した。【０４９２】ＨＰＬＣ分析条件  装置：Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５  カラム：ＩＣｓｅｐ  ＵＳＰ  Ｌ−１７，  φ  ４．０  ｍｍ×２５０  ｍｍ  移動相：０．０１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  流量：  ０．３５  ｍｌ／ｍｉｎ  ランタイム：２０  ｍｉｎ  カラム温度：４０  ℃  サンプル温度：２０  ℃  検出：ＵＶ  ２１０  ｎｍ【０４９３】＜実施例３１：Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属を用いたメタクリル酸ブチルの製造＞  実施例２７の（３）で得られたＤＭＡ００８株にプラスミドｐＡＣＤＡＡＴ１、ｐＡＣＤＡＡＴ２、ｐＡＣＤＡＡＴ３、ｐＡＣＤＡＡＴ４、ｐＡＣＤＡＡＴ６、及びｐＡＣＤＡＡＴ８をそれぞれ形質転換した。得られた組換え体（ＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ１、ＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ２、ＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ３、ＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ４、ＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ６及びＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ８）を用いて休止菌体反応によりメタクリル酸エステルの製造を行った。２ｍｌＬＢ  Ｋｍ１０液体培地（ワッセルマン試験管）に１白金耳植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（１８０  ｒｐｍ）、好気条件にて、２日間培養を行った（前培養）。前培養液を１００ｍＬＬＢ  Ｋｍ１０（培地１００ｍＬ／５００ｍＬ容三角フラスコ）に１ｍｌ植菌し、３０℃、ロータリーシェーカー（２３０  ｒｐｍ）、好気条件にて、３日間培養を行った（本培養）。なお、コントロールには、プラスミドＤＭＡ００８／ｐＬＫ００５を用いた。【０４９４】  本培養後、培養液４０ｍＬを５０ｍＬ容コニカルチューブに移し、遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分）し、菌体を得た。この菌体を用い以下の反応を行った。１０ｍｌ容量のガラスサンプル瓶に、１ｍｌの反応液を加え、３０℃、ロータリーシェーカー（１８０ｒｐｍ）、好気条件にて、１８時間行った。【０４９５】反応液組成  ＯＤ６３０＝１０  菌体  （終濃度）  ５．０ｇ／ｌ  ２−オキソイソ吉草酸（終濃度）  ４０ｍＭ  アルコール（終濃度）  ５０ｍＭ  リン酸バッファー／ｐＨ７．５（終濃度）【０４９６】  アルコールとして、ｎ−ブタノール���用いた。【０４９７】  反応後、反応液に１ｍＬのアセトニトリルを添加しよく混和した後、シリンジフィルターＤＩＳＭＩＣ／穴径０．４５μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を用いて濾過後、実施例４９記載のＨＰＬＣ分析にて分析した。表３４に１８時間後の生成物の分析結果を示した。【０４９８】ＡＣＤ及びＡＡＴ両発現Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ組換え体によるメタクリル酸ブチルの生成【表３４】
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【０４９９】＜実施例３２：Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属を用いたメタクリル酸エステルの製造＞  実施例２７の（３）で得られたＤＭＡ００８株を、プラスミドｐＡＣＤＡＡＴ１によりそれぞれ形質転換した。得られた組換え体（ＤＭＡ００８／ｐＡＣＤＡＡＴ１）を用いて休止菌体反応によりメタクリル酸エステルの製造を行った。また、コントロールとして、ＤＭＡ００８／ｐＬＫ００５を用いた。実施例３１記載の方法を用いて、組換え体の培養を行い菌体を得た。【０５００】反応液組成  ＯＤ６３０＝１０  菌体  （終濃度）  ５．０ｇ／ｌ  ２−オキソイソ吉草酸（終濃度）  ４０ｍＭ  アルコール（終濃度）  ５０ｍＭ  リン酸バッファー／ｐＨ７．５（終濃度）【０５０１】  アルコールとして、ｎ−ブタノール、イソブタノール、２−エチルヘキシルアルコールを用いた。【０５０２】  反応後、反応液に１ｍＬのアセトニトリルを添加しよく混和した後、シリンジフィルターＤＩＳＭＩＣ／穴径０．４５μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を用いて濾過後、実施例９Ｂ記載のＨＰＬＣ分析にて分析した。表３５に１８時間後の生成物の分析結果を示した。【０５０３】ＡＣＤ及びＡＡＴ両発現Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ組換え体によるメタクリル酸エステルの生成【表３５】
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【０５０４】＜実施例３３：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１からのＡＣＤホモログ（ＡＣＤ）遺伝子のクローニングと高発現組換え体の作製＞  メタクリル酸生産能を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属微生物のメタクリル酸合成に関与する遺伝子の単離を行った。＜ゲノムＤＮＡの調製＞  ＬＢ寒天培地（１％バクトトリプトン、０．５％バクトイ−ストエキス、０．５％  ＮａＣｌ、１．５％寒天）上で生育させたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１株（ＮＢＲＣ１０６０５２）を１０ｍＬのＬＢ液体培地に植菌し、３７℃にて１５時間振盪培養を行った。培養終了後、２ｍＬの培養液より菌体を遠心により回収し、Ｗｉｚａｒｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いてゲノムＤＮＡ５０μＬを取得した。【０５０５】＜発現ベクターへのクローニング＞  得られたゲノムＤＮＡを鋳型にして、ＡＣＤをコ−ドすることが推定された遺伝子を含むＤＮＡ断片を、発現ベクターに容易に導入可能な制限酵素認識部位が付加された形となるようオリゴヌクレオチドを設計し、ＰＣＲ法により調製した。【０５０６】
【表３６】
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【０５０７】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＭＡ−００３：  ５’−  ＧＡＣＣＣＡＴＧＧＡＴＴＴＣＧＡＣＣＴＣＡＣＣＧＡＡＧＡＡＣ  −３’        （配列番号１０６）  ＭＭＡ−００４：  ５’−  ＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＴＧＣＧＡＴＧＧＴＴＣＧＣＧＧＣＧＴＴＣ  −３’        （配列番号１０７）  ＭＭＡ−０２０：  ５’−  ＧＧＡＣＡＴＧＴＴＴＣＧＴＧＡＴＣＣＧＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＡＣ  −３’        （配列番号１０８）  ＭＭＡ−００６：    ５’−  ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＡＴＣＧＡＣＧＣＴＡＧＣＣＣＴＧ  −３’      （配列番号１０９）  ＭＭＡ−０１８：  ５’−  ＧＧＡＣＡＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＣＣＡＧ  −３’        （配列番号１１０）  ＭＭＡ−００８：  ５’−  ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＧＣＣＧＴＴＧＣＧＧＡＡＡＣＧＡＣＧＧ  −３’        （配列番号１１１）  ＭＭＡ−０１９：  ５’−  ＧＧＣＣＡＴＧＧＴＡＣＣＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＴＴＣＡＧＣＴＣ  −３’        （配列番号１１２）  ＭＭＡ−０１０：  ５’−  ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＣＴＣＧＣ  −３’        （配列番号１１３）【０５０８】反応液組成  滅菌水                                          ２２  μＬ  ２×ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ（タカラバイオ社製）      ２５  μＬ  Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ                      １  μＬ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ                      １  μＬ  ゲノムＤＮＡ                                      １  μＬ  総量                                            ５０  μＬ【０５０９】温度サイクル  ９８℃  １０秒、５５℃  １５秒及び７２℃  １５０秒の反応を３０サイクル【０５１０】  得られた増幅産物のバンドをＱＩＡｑｕｉｃｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）で精製した。ＰＡ＿ａｃｄ１については、精製したＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩ（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）およびＳｓｅ８３８７Ｉ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）で切断した。ＰＡ＿ａｃｄ２〜ＰＡ＿ａｃｄ４については、制限酵素ＢｓｐＨＩ（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）およびＳｓｅ８３８７Ｉ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）で切断した。アガロースゲル電気泳動により分離を行い、ゲルから目的のバンドを切り出し、精製を行った。精製にはＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を用い、３０μＬの滅菌水に溶出した。【０５１１】  精製したＤＮＡ（５μＬ）、ＮｃｏＩおよびＳｓｅ８３８７Ｉで予め消化しておいたベクターｐＴｒｃ９９Ａ（１μＬ）、蒸留水（４μＬ）およびｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｉ（ＤＮＡ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｖｅｒ．２（タカラバイオ（株）））（１０μＬ）を混合し１２時間、１６℃でインキュベ−トすることでＰＣＲ増幅産物とベクターをライゲーションした。【０５１２】  大腸菌ＪＭ１０９株をＬＢ培地１ｍＬに接種し３７℃、５時間好気的に前培養し、この培養物  ０．４ｍＬをＳＯＢ培地４０ｍＬ（２％バクトトリプトン、０．５％バクトイ−ストエキス、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２）に加え、１���℃で２０時間培養した。この培養物を遠心分離により集菌した後、冷却したＴＦ溶液（２０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ６．０）、２００ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２、４０ｍＭ  ＭｎＣｌ２）を１３ｍＬ加え、０℃で１０分間放置した。その後、再度遠心し、上澄を除いた後、沈殿した大腸菌を冷却したＴＦ溶液３．２ｍＬに懸濁し、０．２２ｍＬのジメチルスルフォキシドを加え０℃で１０分間放置した。【０５１３】  こうして作製したコンピテントセル２００μＬに上記のライゲーション溶液を１０μＬ加え、０℃で３０分放置後、４２℃で３０秒間ヒ−トショックを与え、０℃で２分間冷却後、ＳＯＣ培地（２０ｍＭグルコ−ス、２％バクトトリプトン、０．５％バクトイ−ストエキス、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２）１ｍＬを添加して３７℃にて１時間振盪培養した。【０５１４】  培養後、１００μＬずつＬＢＡｍｐ寒天培地（アンピシリン１００ｍｇ／Ｌ、１．５％寒天を含有するＬＢ培地）に塗布し、さらに３７℃で培養した。寒天培地上に生育した形質転換体コロニ−複数個を１．５ｍＬのＬＢＡｍｐ培地（アンピシリン１００ｍｇ／Ｌを含有するＬＢ培地）にて３７℃で一晩培養し、集菌後ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いてプラスミドＤＮＡを調製した。  得られた組換えプラスミドＤＮＡについて、その塩基配列をＣＥＱ  ＤＴＣＳ  Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  Ｋｉｔおよび蛍光シ−ケンサＣＥＱ  ２０００ＸＬ  ＤＮＡ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（いずれもＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ、米国）を用いて確認し、プラスミドｐＭＭＡ００２〜ｐＭＭＡ００５と命名した（表３６）。【０５１５】  ｐＥＴ１６ｂベクターについても同様の操作によりＡＣＤホモログ遺伝子を挿入し、得られたプラスミドをｐＭＭＡ１０２〜ｐＭＭＡ１０５と命名した（表３６）。ただし、ｐＥＴ１６ｂにはＳｓｅ８３８７Ｉ部位が無いため、ｐＥＴ１６ｂのＢａｍＨＩ部位にＳｓｅ８３８７Ｉ切断配列を含むリンカーを挿入したものを予め作製し、これをベクターとして用いた。【０５１６】＜実施例３４：Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４株からのＡＣＤホモログ遺伝子のクローニングと高発現組換え体の作製＞  メタクリル酸生産能を有するＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属微生物のメタクリル酸合成に関与する遺伝子の単離を行った。＜ゲノムＤＮＡの調製＞  ＬＢ寒天培地培地（ＬＢ培地、１．５％寒天）上で生育させたＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４株（ＮＢＲＣ１００８８７）を１０ｍＬのＬＢ液体培地に植菌し、３０℃にて３６時間振盪培養を行った。培養終了後、２ｍＬの培養液より菌体を遠心により回収し、Ｗｉｚａｒｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いてゲノムＤＮＡ１００μＬを取得した。【０５１７】＜高発現ベクターへのクローニング＞  得られたゲノムＤＮＡを鋳型にして、ＡＣＤをコ−ドすることが推定された遺伝子を含むＤＮＡ断片を、発現ベクターに容易に導入可能な制限酵素認識部位が付加された形となるようオリゴヌクレオチドを設計し、ＰＣＲ法により調製した。【０５１８】
【表３７】
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【０５１９】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＭＡ−０２１：  ５’−ＧＧＡＣＡＴＧＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＧＡＴＧＡＣＧＡＧＣＧ  −３’  （配列番号１１４）  ＭＭＡ−０２２：  ５’−ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＴＣＡＣＧＣＴＴＴＴＣＧＡＴＣＡＡＴＡＣ  −３’（配列番号１１５）  ＭＭＡ−０２３：  ５’−ＣＣＡＣＡＴＧＴＣＣＧＡＴＴＡＣＣＴＴＧＣＣＡＣＣＧＧＡＧＣ  −３’  （配列番号１１６）  ＭＭＡ−０２４：    ５’−ＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＴＣＴＴＣＴＴＧＧＧＧＴＴＣＧＴＣＡＣＡＡＣ  −３’  （配列番号１１７）【０５２０】  ＰＣＲ反応による増幅は、実施例３３と同様にして行った。  得られた増幅産物のバンドをＱＩＡｑｕｉｃｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）で精製し、制限酵素ＰｃｉＩ（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）およびＳｓｅ８３８７Ｉ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）で切断した。以下の操作は実施例３３と同様に行い、ｐＴｒｃ９９ＡをベクターとするプラスミドｐＭＭＡ００９及び０１０、ｐＥＴ１６ｂをベクターとするプラスミドｐＭＭＡ１０９及び１１０を得た（表３７）。【０５２１】＜実施例３５：ＡＣＤホモログ遺伝子を発現させた組換え体からの細胞抽出液の調製とタンパク質の発現解析＞  実施例３３及び３４で作製したＡＣＤホモログ遺伝子を含む発現プラスミドを用いて、大腸菌ＪＭ１０９（ｐＭＭＡ００２〜ｐＭＭＡ００５、ｐＭＭＡ００９及び０１０の場合）または大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＭＭＡ１０２〜ｐＭＭＡ１０５、ｐＭＭＡ１０９及び１１０の場合）を形質転換した。大腸菌ＪＭ１０９の形質転換株は以下のようにして培養を行った。【０５２２】  大腸菌組換え体を１ｍＬの１００μｇ／ｍＬアンピシリンを含むＬＢ培地に植菌し、３７℃にて７時間前培養を行った。培養液を０．１ｍＬ取り、１００ｍＬの同培地（１００μｇ／ｍＬアンピシリン、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（以下、ＩＰＴＧ）含有）に加え、３７℃にて１５時間振盪培養した。得られた培養液から遠心分離（３，７００×ｇ、１０分間、４℃）により菌体を回収し、１０ｍＭリン酸−ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した後、同緩衝液に懸濁した。対照株としてＪＭ１０９／ｐＴｒｃ９９Ａを用いた。【０５２３】  大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）の形質転換株は以下のようにして培養を行った。大腸菌組換え体を１ｍＬの１００μｇ／ｍＬアンピシリンを含むＬＢ培地に植菌し、３７℃にて１４時間前培養を行った。培養液を０．１ｍＬ取り、１００ｍＬの同培地（１００μｇ／ｍＬアンピシリン）に加え、３７℃にてＯＤが０．３になるまで振盪培養した後、終濃度が１ｍＭになるようにＩＰＴＧを添加し更に数時間振盪培養した。得られた培養液から遠心分離（３，７００×ｇ、１０分間、４℃）により菌体を回収し、１０ｍＭリン酸−ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した後、同緩衝液に懸濁した。対照株としてＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ１６ｂを用いた。【０５２４】  得られた菌体懸濁液から１ｍＬを取り、以下のようにして細胞抽出液を調製した。超音波破砕機ＶＰ−３００（タイテック、日本）を用いて、氷冷しながら���秒間隔でパルス出力し３分間破砕した。次に遠心分離を行い（１０，０００×ｇ、５分間、４℃）、得られた上清を細胞抽出液として採取した。【０５２５】  ＳＤＳゲル電気泳動によるタンパク質の分析は以下のようにして行った。細胞抽出液を適宜希釈した後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動用サンプル溶液（０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、４％ｗ／ｖ  ＳＤＳ、０．２Ｍ  ジチオスレイトール、２０％ｖ／ｖグリセロール、微量ブロモフェノールブルー）と混合し、９８℃５分間加熱し変性処理を行う。１０％ポリアクリルアミドゲルを作製し、変性処理済みサンプルを１レーンあたり５μＬずつ用い、電気泳動分析を行った（図７）。【０５２６】＜実施例３６：細胞抽出液のＡＣＤ活性の測定＞  ＡＣＤ活性は、以下のようにイソブチリル−ＣｏＡを基質としたメタクリリル−ＣｏＡの生成により測定した。１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）中に終濃度がそれぞれ６ｍＭの１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチル硫酸塩、０．４ｍＭのフラビンアデニンジヌクレオチドおよび１ｍＭのイソブチリル−ＣｏＡを含む溶液１．８４ｍＬに、実施例３５のようにして得られた細胞抽出液０．１６ｍＬを加え、２ｍＬとした。３７℃で３０分間反応後、セントリカット超ミニＷ−１０（倉敷紡績株式会社）を用いた限外濾過により除タンパク質を行い反応を停止させ、以下の条件にてＨＰＬＣによる分析を行った。結果を表３８に示した。ＰＡ＿ａｃｄ１およびＲＥ＿ａｃｄ１には高いＡＣＤ活性が認められ、これら酵素により、イソブチリル−ＣｏＡからメタクリリル−ＣｏＡの生産できることが確認できた。【０５２７】ＨＰＬＣ分析条件  カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ  移動相：３０％ＭｅＯＨ，５０ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４，ｐＨ５．７  流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ  カラム温度：３５℃  検出：ＵＶ２５４ｎｍ（２１０ｎｍ）  注入量１０μｌ  反応溶液を移動相で１０倍希釈し測定。【０５２８】
【表３８】
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【０５２９】＜実施例３７：ＢＣＫＡＤ遺伝子のクローニングと高発現組換え体の作製、細胞抽出液の調製、及びタンパク質の発現解析＞  遺伝子のクローニングと発現プラスミドの作製および組換え体の作製は、実施例３３と同様にして行った。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１株のゲノムＤＮＡを鋳型にして、ＢＣＫＡＤ複合体遺伝子をコ−ドする遺伝子オペロン全体を含むＤＮＡ断片を、表３９に示すプライマーを用いてＰＣＲ法により調製した。得られた断片を制限酵素ＢｓｐＨＩとＳｓｅ８３８７Ｉにより消化し、実施例３３と同様にしてベクターｐＴｒｃ９９Ａ及びｐＥＴ１６ｂに挿入して組換えプラスミド（ｐＷＡ１０８及びｐＷＡ００８）を得た。【０５３０】
【表３９】
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【０５３１】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＡＡ−１５：  ５’−  ＧＧＣＣＴＧＴＣＡＴＧＡＧＴＧＡＴＴＡＣＧＡＧＣＣＧ  −３’  （配列番号１１８）  ＭＡＡ−１６：  ５’−  ＣＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＴＴＣＧＣＧＧＧＡＡＴＣＡＧＡＴＧＴＧＣ  −３’（配列番号１１９）【０５３２】  上記のようにして得られた大腸菌組換え体ＪＭ１０９／ｐＷＡ１０８を実施例３５と同様にして培養を行った。（本組換え体の場合は、理由は不明であるがＩＰＴＧの添加は行わなくても高いタンパク質の発現が認められたことから、ＩＰＴＧの添加を行わないで実施した。）大腸菌組換え体ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＷＡ００８の場合には、実施例３５と同様にして培養を行った。細胞抽出液の調製およびＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動による、タンパク質の発現解析は、実施例３５と同様に実施した。【０５３３】＜実施例３８：Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属細菌からのＢＣＫＡＤ遺伝子（クラスター１）のクローニングと高発現組換え体の作製＞  Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属細菌においてはＢＣＫＡＤ遺伝子についての知見がなかったことから、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１株のＢＣＫＡＤ複合体遺伝子のアミノ酸配列を元にＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４株のゲノム配列をホモロジー検索したところ２つの候補遺伝子クラスターを見出した。これらをクラスター１とクラスター２とした。【０５３４】  クラスター１はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１株と同様に４つの遺伝子は、配列番号６３、６５、６７、６９で示される塩基配列からなり、そのコードするアミノ酸配列は、配列番号６２、６４、６６、６８である。クラスター２は３つの遺伝子は、各々配列番号７１、７３、７５で示される塩基配列からなり、そのコードするアミノ酸配列は、各々配列番号７０、７２、７４であった。【０５３５】  クラスター１のＢＣＫＡＤ複合体遺伝子のクローニングと発現プラスミドの作製および組換え体の作製は、実施例３３と同様にして行った。Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４株のゲノムＤＮＡを鋳型にして、ＢＣＫＡＤ複合体遺伝子をコ−ドする遺伝子オペロン全体を含むＤＮＡ断片を、下記に示すプライマーを用いてＰＣＲ法により調製した。得られた断片を制限酵素ＢｓｐＨＩとＳｓｅ８３８７Ｉにより消化し、実施例３３と同様にしてベクターｐＴｒｃ９９Ａに挿入して組換えプラスミド（ｐＭＭＡ０１９）を得た。【０５３６】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＭＡ−１８７：  ５’−  ＧＧＴＣＡＴＧＡＣＴＣＴＴＧＴＣＧＡＧＣＣＣＴＴＧ  −３’  （配列番号１２０）  ＭＭＡ−１４０：  ５’−  ＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＣＴＣＴＴＣＴＧＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣ  −３’（配列番号１２１）【０５３７】＜実施例３９：Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ属細菌からのＢＣＫＡＤ遺伝子（クラスター２）のクローニングと高発現組換え体の作製＞  クラスター２のＢＣＫＡＤ複合体遺伝子のクローニングと発現プラスミドの作製および組換え体の作製は、以下の様にして行った。Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ  ＰＲ４株のゲノムＤＮＡを鋳型にして、下記に示すプライマーを用いてＰＣＲ法により調製した。【０５３８】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＭＡ−１８８：  ５’−  ＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＣＣＡＴＧＡＴＣＧＡＣＡＡＣＣＴＣＧＡＴＴＡ  −３’  （配列番号１２２）  ＭＭＡ−１８９：  ５’−    ＣＴＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＴＣＧＴＴＣＣＴＴＴＴＴＡＣＡＧ  −３’（配列番号１２３）【０５３９】  上記ＰＣＲ産物及びＮｃｏＩおよびＳｓｅ８３８７Ｉで予め消化しておいたベクターｐＴｒｃ９９ＡをＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社）を用いて、製品説明書に従って末端配列の組換えを行いつなげた。上記インフュージョン反応液２μＬを用いて、実施例３３と同様にして大腸菌ＪＭ１０９株の形質転換を行い、得られた形質転換体より組換えプラスミド（ｐＭＭＡ０２０）を得た。【０５４０】＜実施例４０：ＢＣＫＡＤ遺伝子高発現組換え体の細胞抽出液の活性測定＞  ＢＣＫＡＤ活性は、以下のように２−オキソイソ吉草酸を基質としたイソブチリル−ＣｏＡの生成により測定した。【０５４１】  １００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）中に終濃度がそれぞれ１ｍＭ  のＭｇＣｌ２、０．２ｍＭのチアミンピロリン酸、１ｍＭのＣｏＡ−ＳＨ及び２ｍＭ  ＤＴＴを含む溶液０．７ｍＬに、実施例３７のようにして得られた細胞抽出液０．２ｍＬを加え、０．９ｍＬとした。これに２−オキソイソ吉草酸カルシウム塩０．１ｍＬ（終濃度４ｍＭ）を加え３７℃で３０分間反応後、セントリカット超ミニＷ−１０（倉敷紡績株式会社）を用いた限外濾過により除タンパク質を行い反応を停止させ、以下の条件にてＨＰＬＣによる分析を行った。その結果、ＪＭ１０９／ｐＷＡ１０８では０．８３ｍＭ、ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＷＡ００８では０．８８ｍＭのイソブチリル−ＣｏＡの生成が認められた。【０５４２】ＨＰＬＣ分析条件  カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ  移動相：３５％ＭｅＯＨ，５０ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４，ｐＨ５．７  流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ  カラム温度：３５℃  検出：ＵＶ  ２５４ｎｍ（２１０ｎｍ）  注入量１０μｌ  反応溶液を移動相で１０倍希釈し測定。【０５４３】＜実施例４１：ＢＣＫＡＤ遺伝子高発現組換え体およびＡＣＤホモログ遺伝子を発現させた組換え体からの細胞抽出液混合物による２−オキソイソ吉草酸からのメタクリリル−ＣｏＡの合成＞  １００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）中に終濃度がそれぞれ１ｍＭＭｇＣｌ２、０．２ｍＭのチアミンピロリン酸、１ｍＭＣｏＡ−ＳＨ、２ｍＭＤＴＴ、２ｍＭニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、０．０４ｍＭフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、２ｍＭバリンを含む溶液０．６ｍＬに、実施例３５及び４０のようにして得られた細胞抽出液（ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ００２及びＪＭ１０９／ｐＷＡ１０８）各０．１ｍＬを加え、０．８ｍＬとした。これに２−オキソイソ吉草酸カルシウム塩０．１ｍＬ（終濃度４ｍＭ）を加え３７℃で３０分間反応後、ＨＰＬＣによりイソブチリル−ＣｏＡの生成を確認するとともに、０．１ｍＬの１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチル硫酸塩（終濃度６ｍＭ）を加え更に３時間反応させた。反応後、セントリカット超��ニＷ−１０（倉敷紡績株式会社）を用いた限外濾過を行った。除タンパク質を行うことにより反応を停止させ、ＨＰＬＣによる分析を行った。その結果、０．２ｍＭのメタクリリル−ＣｏＡの生成が認められた。【０５４４】＜実施例４２：メタクリル酸ブチルの合成＞  １００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）中に終濃度がそれぞれ６ｍＭ１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチル硫酸塩、０．４ｍＭＦＡＤおよび１ｍＭイソブチリル−ＣｏＡを含む溶液１．８４ｍＬに実施例３５のようにして得られたＡＣＤ活性を有する細胞抽出液０．１６ｍＬを加え、反応液２ｍＬに調整した。３７℃で３０分間反応させ、実施例４１に示すＨＰＬＣ条件にて分析を行った。その結果、イソブチリル−ＣｏＡのピークは消失し、メタクリリル−ＣｏＡの生成が認められた。【０５４５】  こうして得られたメタクリリル−ＣｏＡが生成した反応液を用いて、ＡＡＴ活性を有するバナナの果肉及びｎ−ブチルアルコールと反応させることにより、メタクリル酸ブチルの生成を認めた。すなわち、バナナの皮を取り除き、果肉をカッターで約１ミリ厚さにスライスし、さらにそれを４分割した。スライスしたバナナ１ｇ、前記メタクリリル−ＣｏＡ合成反応液０．９ｍＬ、３．５ＭＫＣｌ溶液０．１ｍＬおよびｎ−ブチルアルコール５μＬを５０ｍＬフラスコに加え、密閉し、３０℃で２時間反応させた。反応後、１００ｍＬフラスコのヘッドスペース１５０μＬを採取して以下のＧＣ条件にて分析を行ったところ、０．０１５ｍＭのメタクリル酸ブチルが生成していた。【０５４６】ＧＣ分析条件  カラム：ＤＢ−ＷＡＸ，  ３０ｍ×０．３２ｍｍ  カラム温度：５０℃・５ｍｉｎ→５℃／ｍｉｎ→１００℃（計１５ｍｉｎ）  キャリアガス：Ｈｅ  Ｉｎｊｅｃｔ：２００℃  スプリットレス（サンプリングタイム１ｍｉｎ）  Ｄｅｔｅｃｔ：２５０℃  ＦＩＤ      注入量：１５０μＬ【０５４７】  なお、メタクリル酸ブチルの濃度は濃度の既知の水溶液調整し、１００ｍＬフラスコに同水溶液を２ｍＬ入れ、３０℃で３０ｍｉｎインキュベートした後にヘッドスペースを同様の方法で採取してＧＣ分析し、検量線を作成して算出した。＜実施例４３：大腸菌用ＢＣＫＡＤとＡＣＤの共発現用プラスミドの作製＞  ＡＣＤ遺伝子（ＰＡ＿ａｃｄ１遺伝子）を含むＤＮＡ断片を、実施例３７で作製したｐＷＡ１０８のＢＣＫＡＤの下流にＩｎ−ＦｕｓｉｏｎＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｋｉｔ（タカラバイオ社製ＴＡＫＡＲＡ）を用いて挿入し、ＢＣＫＡＤとＡＣＤの共発現用プラスミドｐＭＭＡ２０１およびｐＭＭＡ２０２を作製した。また、同様にして、ＢＣＫＡＤ遺伝子を含むＤＮＡ断片が、実施例３３で作製されたｐＭＭＡ００２のＰＡ＿ａｃｄ１遺伝子の下流に挿入された共発現用プラスミドｐＭＭＡ２０３およびｐＭＭＡ２０４を作製した。詳細を以下に示す。【０５４８】（１）  プラスミドｐＭＭＡ２０１の作製  実施例３３で作製したｐＭＭＡ１０２を鋳型にしてＰＡ＿ａｃｄ１遺伝子をＰＣＲ法により増幅した。ＰＣＲ条件は以下の通りである。【０５４９】Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０３９  ＴＡＧＡＧＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＴＣＣＣＧＣＧＡＡＡＴ（配列番号１２８)Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ���０４０  ＧＣＴＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＣＡＡＣＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＴＴ（配列番号１２９)【０５５０】反応液組成  鋳型（ｐＭＭＡ１０２）                          １μ１  ２×PrimeSTAR  Max  Premix（TAKARA社製）      ２５μ１  ＦＷ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                １μ１  Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ（２０  μＭ）                １μ１  Ｄ．Ｗ．                                      ２２μ１   Ｔｏｔａｌ                                    ５０μ１【０５５１】温度サイクル  ９８℃  １０秒、６０℃  １０秒及び７２℃  １２０秒の反応を３０サイクル【０５５２】  ＰＣＲ終了後、サンプル１μｌを用い、０．７％アガロースゲル電気泳動により断片の確認を行ったところ、約１．１ｋｂの断片の増幅が認められた。ＰＣＲ産物をＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を使用して簡易精製を行い、ＰＣＲ断片を得た。【０５５３】  一方、プラスミドｐＷＡ１０８を制限酵素Ｓｓｅ８３８７Ｉにより切断し、ベクター側断片とした。上記両断片を以下に示すＩｎ−Ｆｕｓｉｏｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔによる反応に用いた。【０５５４】反応液組成  ５x  In-Fusion  HD  Enzyme  Premix      ２μｌ  ベクター側断片                      １．５μｌ  ＰＣＲ断片                              １μｌ  Ｄ．Ｗ．                            ３．５μｌ  Ｔｏｔａｌ                            １０μｌ【０５５５】  上記反応液を５０℃で１５分間インキュベートした後、氷上で冷却し、大腸菌ＪＭ１０９株の形質転換に用いた。大腸菌形質転換体の選択はＬＢＡｍｐ寒天培地にて行った。得られた形質転換体から実施例３３に記載の方法によりプラスミドを調製し、目的のプラスミドを得た。プラスミドの確認は制限酵素ＸｂａＩ及びＳｓｅ８３８７Ｉによる処理後の断片サイズ及び挿入断片とベクターの接続領域の配列を調べることにより行った。目的のプラスミドをｐＭＭＡ２０１と命名した。【０５５６】（２）プラスミドｐＭＭＡ２０２の作製  実施例３３で作製したｐＭＭＡ１０２を鋳型にしてＰＡ＿ａｃｄ１遺伝子をＰＣＲ法により増幅した。ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒは以下の通りである。【０５５７】Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０４２  ＴＡＧＡＧＴＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＴＣＴＡＧＡＡＡＴＡＡＴＴＴＴＧＴＴＴＡ（配列番号１３０)Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０４０  ＧＣＴＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＣＡＡＣＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＴＴ（配列番号１２９)【０５５８】  上記と同様にして、本ＰＣＲ断片と、制限酵素Ｓｓｅ８３８７Ｉにより切断されたプラスミドｐＷＡ１０８をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔを用いて接続し、目的のプラスミドをｐＭＭＡ２０２と命名した。【０５５９】（３）プラスミドｐＭＭＡ２０３の作製  実施例３７で作製したｐＷＡ００８を鋳型にしてＢＣＫＡＤ遺伝子をＰＣＲ法により増幅した。ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒは以下の通りである。【０５６０】Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０４１  ＣＣＡＴＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＡＣＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＴＣＣＣＧＣＧＡＡＡＴ  （配列番号１３１)Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０４０  ＧＣＴＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＣＡＡＣＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＴＴ  （配列番号１２９)【０５６１】  反���方法とＰＣＲ断片の取得は（１）で記載されたように行った。【０５６２】  一方、ＰＡ＿ａｃｄ１遺伝子を含むプラスミドｐＭＭＡ００２を制限酵素Ｓｓｅ８３８７Ｉにより切断し、ベクター側断片とした。（１）と同様にして、両断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔによる反応を行い、反応液を用いて大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。得られた形質転換体からプラスミドを得、（１）と同様にしてプラスミドの確認を行った。目的のプラスミドをｐＭＭＡ２０３と命名した。【０５６３】（４）プラスミドｐＭＭＡ２０４の作製  実施例３７で作製したｐＷＡ００８を鋳型にしてＢＣＫＡＤ遺伝子をＰＣＲ法により増幅した。ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒは以下の通りである。【０５６４】Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０４３  ＣＣＡＴＣＧＣＡＴＣＣＴＧＣＡＣＣＴＣＴＡＧＡＡＡＴＡＡＴＴＴＴＧＴＴＴＡ  （配列番号１３２)Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ  ＭＭＡ−０４０  ＧＣＴＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＣＡＡＣＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＴＴ  （配列番号１２９)【０５６５】  反応方法とＰＣＲ断片の取得は（１）で記載されたように行った。上記と同様にして、本ＰＣＲ断片と、制限酵素Ｓｓｅ８３８７Ｉにより切断されたプラスミドｐＭＭＡ００２をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔを用いて接続し、目的のプラスミドをｐＭＭＡ２０４と命名した。【０５６６】＜実施例４４：ＢＣＫＡＤおよびＡＣＤを発現させた大腸菌組換え体細胞抽出液による２−オキソイソ吉草酸からのメタクリリル−ＣｏＡの合成（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）＞  実施例３５記載の方法と同様にして、ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０４株の細胞抽出液を得た。対照株としてＪＭ１０９／ｐＴｒｃ９９Ａを用いた。実施例４０記載の方法と同様にして、ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０４細胞抽出液に２−オキソイソ吉草酸カルシウム塩０．１ｍＬ（終濃度４ｍＭ）を加え３７℃で３０分間反応後、ＨＰＬＣによりイソブチリル−ＣｏＡの生成を確認するとともに、０．１ｍＬの１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチル硫酸塩（終濃度６ｍＭ）を加え更に３時間反応させた。反応後、セントリカット超ミニＷ−１０（倉敷紡績株式会社）を用いた限外濾過による除タンパク(反応停止)を行い、以下の条件にてＨＰＬＣによる分析を行った。【０５６７】ＨＰＬＣ分析条件  カラム：Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ ＯＤＳ−ＵＧ１２０（資生堂）, 粒子径μｍ, ２．０ ｍｍ  Ｉ．Ｄ．×２５０ ｍｍ  移動相：２５％ＭｅＯＨ，５０ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４，ｐＨ５．７  流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ    カラム温度：３５℃    検出：ＵＶ２５４ｎｍ（２１０ｎｍ）  注入量１０μｌ  反応溶液を移動相で１０倍希釈し測定。【０５６８】  その結果、０．１ｍＭのメタクリリル−ＣｏＡの生成が認められた。大腸菌組換え体によって発現させたＢＣＫＡＤおよびＡＣＤは１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチル存在下において、２−オキソイソ吉草酸からメタクリリル−ＣｏＡを製造できることが確認できた。【０５６９】＜参考例４：ＢＣＫＡＤおよびＡＣＤを発現させた大腸菌組換え体を用いた２−オキソイソ吉草酸からのメタクリル酸の合成（ｉｎ  ｖｉｖｏ）＞  ＢＣＫＡＤおよびＡＣＤを発現させた大腸菌組換え体を��いて２−オキソイソ吉草酸からのメタクリル酸あるいはのメタクリリル−ＣｏＡの合成を実施した。【０５７０】  ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０１株、ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０２株、ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０３株及びＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０４株を１ｍＬの１００μｇ／ｍＬアンピシリンを含むＬＢＡｍｐ培地（アンピシリン１００ｍｇ／Ｌ）に植菌し、３７℃にて６時間前培養を行った。培養液を０．１ｍＬ取り、１００ｍＬの同培地（１ｍＭ  ＩＰＴＧ含有）に加え、３７℃にて１８時間振盪培養した。得られた培養液１０ｍＬ取り、０．５％２−オキソイソ吉草酸カルシウムを含んだ９０ｍＬのＬＢＡｍｐ培地に加え、３７℃にて２５時間振盪培養した。培養終了後、培養液をフィルター濾過し、以下の条件にてＨＰＬＣによる分析を行った。【０５７１】ＨＰＬＣ分析条件  カラム：Ｗａｋｏｐａｋ  Ｗａｋｏｂｅａｄｓ−Ｔ−１３２−Ｅ,  φ７．８ｍｍ×３００ｍｍ  移動相：０．１％  リン酸  流量：０．５  ｍｌ／ｍｉｎ  カラム温度：４０  ℃  検出：ＵＶ  ２１０  ｎｍ  注入量：５  ｕｌ【０５７２】  その結果、メタクリル酸およびタクリリル−ＣｏＡの生成は認められず、１４．２ｍＭのイソ酪酸の生成が認められた。すなわち、大腸菌おけるｉｎ  ｖｉｖｏ反応では、メタクリル酸あるいはメタクリリル−ＣｏＡの合成はできないことが示された。【０５７３】生成イソ酪酸濃度【表４０】
2014038216.tif 000053
【０５７４】＜参考例５：ＢＣＫＡＤおよびＡＣＤを発現させた大腸菌組換え体休止菌体を用いた２−オキソイソ吉草酸からのメタクリル酸の合成＞  実施例３５記載の方法と同様にして、ＪＭ１０９／ｐＭＭＡ２０１株を培養した。得られた培養液から遠心分離（３，７００×ｇ、１０分間、４℃）により菌体を回収し、１０ｍＭリン酸−ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した後、同緩衝液に懸濁し菌体懸濁液を得た。本菌体懸濁液を用いて、以下のように休止菌体反応液３ｍＬを調製し、３０℃、１８０ｒｐｍにて２４時間反応を行った。【０５７５】休止菌体反応液組成  ５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）  ０．５％２−オキソイソ吉草酸カルシウム  ＯＤ１０菌体懸濁液【０５７６】    反応終了後、反応液をフィルター濾過し、参考例４に記載の条件にてＨＰＬＣによる分析を行った。その結果、メタクリル酸の生成は認められず、１５．２ｍＭのイソ酪酸の生成が認められた。参考例４と同様に、休止菌体反応において大腸菌ではメタクリル酸あるいはメタクリリル−ＣｏＡの合成はできないことが示された。【０５７７】＜参考例６：Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ  Ａ３（２）からのＡＣＤ遺伝子（ａｃｄＨ）のクローニングと発現組換え体の作製、細胞抽出液の調製、タンパク質の発現解析及びＡＣＤ活性の測定＞  実施例３３〜３２に記載された方法により、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ  Ａ３（２）由来のａｃｄＨ遺伝子を組み込んだ発現組換え体を作製し、細胞抽出液の調製、タンパク質の発現解析及びＡＣＤ活性の測定を行った。タンパク質の発現解析結果は図７（Ｃ）に、酵素活性測定結果は表３８に示した。なお、プラスミド作製時、ＰＣＲに用いたオリゴヌクレオチドは以下のとおりである。【０５７８】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＭＡ−００１：  ５’−ＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＣＣＣＧＡＡＣ  −３’  （配列番号１２４）  ＭＭＡ−００２：  ５’−ＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＣＡＧＣＣＣＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＣ  −３’  （配列番号１２５）【０５７９】＜参考例７：AATによるメタクリル酸イソブチルの合成＞  バナナの皮を取り除き、果肉をカッターで約１ミリ厚さにスライスし、さらにそれを４分割した。スライスしたバナナ２ｇ、２．３ｍＭメタクリリル−ＣｏＡおよび０．３５ＭＫＣｌを含む溶液２ｍｌおよび５μｌイソブチルアルコールを１００ｍｌフラスコに順に加えた。密閉し、３０℃で反応させた。１、２または３時間後の生成したメタクリル酸イソブチルを含む反応混合物を、１００ｍｌフラスコのヘッドスペース１５０μｌを採取して以下のＧＣ条件にて分析を行った。その結果を表４１に示す。【０５８０】
【表４１】
2014038216.tif 000054
【０５８１】ＧＬＣ分析条件  カラム：ＤＢ−ＷＡＸ，  ３０ｍ×０．３２ｍｍ  カラム温度：５０℃・５ｍｉｎ→５℃／ｍｉｎ→１００℃（計１５ｍｉｎ）  キャリアガス：Ｈｅ  Ｉｎｊｅｃｔ：２００℃  スプリットレス（サンプリングタイム１ｍｉｎ）  Ｄｅｔｅｃｔ：２５０℃  ＦＩＤ      注入量：１５０μｌ【０５８２】  なお、メタクリル酸エステルの濃度は、初めに濃度既知の水溶液を調整し、１００ｍｌフラスコに同水溶液を２ｍｌ入れ、３０℃で３０ｍｉｎインキュベートした後にヘッドスペースを同様の方法で採取してＧＣ分析し、検量線を作成して算出した。【０５８３】＜参考例８：AATによるメタクリル酸ブチルの合成＞  イソブチルアルコールの代わりにｎ−ブチルアルコールを用いた以外は参考例７と同様に実施した。その結果を表４２に示す。【０５８４】
【表４２】
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【０５８５】＜参考例９：AATによるメタクリル酸ブチルの合成２＞  表４３に示す植物片を２ｇ、２．３ｍＭメタクリリル−ＣｏＡおよび０．３５Ｍ  ＫＣｌを含む溶液２ｍｌおよび１０μｌのｎ−ブチルアルコールを１００ｍｌフラスコに順に加えた。密閉し、３０℃で反応させた。メタクリル酸エステルの分析は参考例７と同様に実施した。その結果を表４３に示す。【０５８６】
【表４３】
2014038216.tif 000056
【０５８７】＜参考例１０：AATによるメタクリル酸エチルの合成＞  表４４に示す植物片を２ｇ、２．３ｍＭ  メタクリリル−ＣｏＡおよび０．３５Ｍ  ＫＣｌを含む溶液２ｍｌおよび６．４μｌ  エチルアルコールを１００ｍｌフラスコに順に加えた。密閉し、３０℃で反応させた。メタクリル酸エステルの分析は参考例７と同様に実施した。その結果を表４４に示す。【０５８８】
【表４４】
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【０５８９】＜参考例１１：AATによるメタクリル酸メチルの合成＞  表４５に示す植物片を２ｇ、２．３ｍＭメタクリリル−ＣｏＡおよび０．３５Ｍ  ＫＣｌを含む溶液２ｍｌおよび４．４μｌ  メチルアルコールを１００ｍｌフラスコに順に加えた。密閉し、３０℃で反応させた。メタクリル酸エステルの分析は参考例７と同様に実施した。その結果を表４５に示す。【０５９０】
【表４５】
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【０５９１】＜実施例４５：植物由来ＡＡＴ遺伝子が導入された大腸菌組換え体の作製＞  配列番号７７、７９及び８１に示される植物由来ＡＡＴ遺伝子をタカラバイオ株式会社で委託合成した。  リンゴＡＡＴ（ＭｐＡＡＴ１）：アミノ酸配列（配列番号７６）、塩基配列（配列番号７７）  イチゴＡＡＴ（ＳＡＡＴ）：アミノ酸配列（配列番号７８）、塩基配列（配列番号７９）  イチゴＡＡＴ（ＶＡＡＴ）：アミノ酸配列（配列番号８０）、塩基配列（配列番号８１）【０５９２】  これらの合成した遺伝子断片はベクターｐＭＤ１９に挿入され、それぞれｐＡＡＴ００１〜００３と命名した。（表４６）これらのｐＡＡＴ００１〜００３を鋳型にして、ＡＡＴ遺伝子を含むＤＮＡ断片を、発現ベクターに容易に導入可能な制限酵素認識部位が付加された形となるようオリゴヌクレオチドを設計し、ＰＣＲ法により調製した。【０５９３】オリゴヌクレオチドプライマー  ＭＭＡ−０４４：５’−ＧＴＴＴＧＣＡＣＧＣＣＴＧＣＣＧＴＴＣＧＡＣＧ−３’（配列番号８２）  ＭＭＡ−０４５：５’−ＣＧＧＴＡＣＧＣＧＣＧＧＡＴＣＴＴＣＣＡＧＡＧ−３’（配列番号８３）【０５９４】反応液組成  滅菌水                                          ２２  μＬ  ２×ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ（タカラバイオ社製）      ２５  μＬ  Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ                      １  μＬ    Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｉｍｅｒ                      １  μＬ  ゲノムＤＮＡ                                      １  μＬ  総量                                            ５０  μＬ【０５９５】温度サイクル  ９８℃  １０秒、５５℃  １５秒及び７２℃  １５０秒の反応を３０サイクル【０５９６】  得られた増幅産物のバンドをＱＩＡｑｕｉｃｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）で精製した。精製した各ＤＮＡを制限酵素ＰａｇＩ（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）およびＳｓｅ８３８７Ｉ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ中に切断認識部位が含まれる）で切断した。アガロースゲル電気泳動により分離を行い、ゲルから目的のバンドを切り出し、精製を行った。精製にはＧｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＦＡＶＯＲＧＥＮ社製）を用い、３０μＬの滅菌水に溶出した。【０５９７】  精製したＤＮＡ（５μＬ）、ＮｃｏＩおよびＳｓｅ８３８７Ｉで予め消化しておいたベクターｐＴｒｃ９９Ａ（１μＬ）、蒸留水（４μＬ）およびｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｉ（ＤＮＡ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｖｅｒ．２（タカラバイオ（株）））（１０μＬ）を混合し１２時間、１６℃でインキュベートすることでＰＣＲ増幅産物とベクターをライゲーションした。【０５９８】  実施例３３の方法と同様に作製したコンピテントセル２００μＬに上記のライゲーション溶液を１０μＬ加え、０℃で３０分放置後、４２℃で３０秒間ヒ−トショックを与え、０℃で２分間冷却後、ＳＯＣ培地１ｍＬを添加して３７℃にて１時間振盪培養した。【０５９９】  培養後、１００μＬずつＬＢＡｍｐ寒天培地（アンピシリン１００ｍｇ／Ｌ、１．５％寒天を含有するＬＢ培地）に塗布し、さらに３７℃で培養した。寒天培地上に生育した形質転換体コロニー複数個を１．５ｍＬのＬＢＡｍｐ培地（アンピシリン１００ｍｇ／Ｌを含有するＬＢ培地）に��３７℃で一晩培養し、集菌後ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いてプラスミドＤＮＡを調製した。【０６００】  得られた組換え各プラスミドＤＮＡについて、その塩基配列をＣＥＱ  ＤＴＣＳ  Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  Ｋｉｔおよび蛍光シ−ケンサＣＥＱ  ２０００ＸＬ  ＤＮＡ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（いずれもＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ、米国）を用いて確認し、プラスミドｐＡＡＴ１０１〜ｐＡＡＴ１０３と命名した（表４６）。【０６０１】  ｐＥＴ１６ｂベクターについても同様の操作によりＡＡＴ遺伝子を挿入し、得られたプラスミドをｐＡＡＴ２０１〜ｐＡＡＴ２０３と命名した（表４６）。ただし、ｐＥＴ１６ｂにはＳｓｅ８３８７Ｉ部位が無いため、ｐＥＴ１６ｂのＢａｍＨＩ部位にＳｓｅ８３８７Ｉ切断配列を含むリンカーを挿入したものを予め作製し、これをベクターとして用いた。【０６０２】  プラスミドｐＡＡＴ１０１〜ｐＡＡＴ１０３はＪＭ１０９株に導入し、組換え体ＪＭ１０９／  ｐＡＡＴ１０１〜ｐＡＡＴ１０３を得た。プラスミドｐＡＡＴ２０１〜ｐＡＡＴ２０３はＢＬ２１（ＤＥ３）株に導入し、組換え体ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＡＡＴ２０１〜ｐＡＡＴ２０３を得た。【０６０３】
【表４６】
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【０６０４】＜実施例４６：ＡＡＴ遺伝子を発現させた大腸菌組換え体からの細胞抽出液の調製＞（１）ｐＴｒｃ９９Ａをベクターとして用いた大腸菌組換え体の培養  実施例４５で得られた大腸菌組換え体ＪＭ１０９／ｐＡＡＴ１０１〜ｐＡＡＴ１０３を１ｍｌの１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地に植菌し、３７℃にて７時間前培養を行った。培養液を０．１ｍｌ取り、１００ｍｌの同培地（１００μｇ／ｍｌアンピシリン、１ｍＭＩＰＴＧ含有）に加え、３７℃にて１５時間振盪培養した。得られた培養液から遠心分離（３，７００×ｇ、１０分間、４℃）により菌体を回収し、１０ｍＭリン酸−ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した後、同緩衝液に懸濁した。対照株としてＪＭ１０９／ｐＴｒｃ９９Ａを用いた。【０６０５】（２）ｐＥＴ１６ｂをベクターとして用いた大腸菌組換え体の培養  実施例４５で得られた大腸菌組換え体ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＡＡＴ２０１〜ｐＡＡＴ２０３を１ｍＬの１００μｇ／ｍＬアンピシリンを含むＬＢ培地に植菌し、３７℃にて１４時間前培養を行った。培養液を０．１ｍＬ取り、１００ｍＬの同培地（１００μｇ／ｍＬアンピシリン）に加え、３７℃にてＯＤが０．３になるまで振盪培養した後、終濃度が１ｍＭになるようにＩＰＴＧを添加し更に数時間振盪培養した。得られた培養液から遠心分離（３，７００×ｇ、１０分間、４℃）により菌体を回収し、１０ｍＭリン酸−ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄した後、同緩衝液にＯＤ６（６３０ｎｍ）になるよう懸濁した。対照株としてＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ１６ｂを用いた。【０６０６】（３）細胞抽出液の調製  得られた菌体懸濁液から細胞抽出液を調製した。超音波破砕機ＶＰ−１５Ｓ（タイテック、日本）を用いて、出力コントロ−ル４、ＤＵＴＹ  ＣＹＣＬＥ  ４０％、ＰＵＬＳ、ＴＩＭＥＲ＝Ｂモ−ド１０ｓの条件で菌体懸濁液を氷冷しながら１分間破砕した。次に遠心分離を行い（１０，０００×ｇ、５分間、４℃）、得られた上清（細胞抽出液）１ｍｌを採取した。【０６０７】＜実施例４７：ＡＡＴ遺伝子組換え体細胞抽出液を用いたメタクリル酸ブチルの合成＞  実施例４６に記載された方法で調製された細胞抽出液を用いて以下の反応を行った。反応液の終濃度が７ｍＭメタクリリル−ＣｏＡと４０．５ｍＭｎ−ブタノールとなるようにメタクリリル−ＣｏＡとアルコールの溶液が０.８ｍｌ入った１０ｍｌ容量のセプタム付サンプル瓶（ＧＣ用）に、０．２ｍｌの細胞抽出液を添加することにより反応を開始した。セプタム付サンプル瓶を３０℃で１〜５時間インキュベートして反応させた。【０６０８】  セプタム付サンプル瓶のヘッドスペースの気体を参考例７と同様に分析した。結果を表４７に示した。【０６０９】
【表４７】
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【０６１０】＜実施例４８：ＡＡＴ遺伝子組換え体細胞抽出液を用いたメタクリル酸エステルの合成＞  アルコールとして、メタノール、エタノールまたはｎ−ブタノールを用い、細胞抽出液に、ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＡＡＴ２０１（リンゴ）由来のものを用いて、実施例４７と同様にして反応を行った。表４８に５時間後の生成物の分析結果を示した。【０６１１】
【表４８】
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【０６１２】＜実施例４９：ＡＡＴ遺伝子組換え体細胞抽出液を用いたメタクリル酸エステルの合成２＞  アルコールとして、イソブタノール、フェノール、ベンジルアルコールまたは２−エチルヘキシルアルコールを用い、実施例４６で得られたＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＡＡＴ２０１（リンゴ）の細胞抽出液で以下の反応を行った。【０６１３】  反応液の終濃度が１ｍＭメタクリリル−ＣｏＡと４０ｍＭアルコールとなるようにメタクリリル−ＣｏＡとアルコールを含む０.８ｍｌの溶液が入った１０ｍｌ容量のセプタム付サンプル瓶（ＧＣ用）に、０．２ｍｌの細胞抽出液を添加することにより反応を開始した。セプタム付サンプル瓶を３０℃で１〜５時間インキュベートして反応させた。反応終了後、セプタム付サンプル瓶中の反応液に１ｍＬのアセトニトリルを添加しよく混和した。その後、シリンジフィルターＤＩＳＭＩＣ／穴径０．４５μｍ（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）を用いて濾過後、ＨＰＬＣ分析に供した。表４９に５時間後の生成物の分析結果を示した。【０６１４】ＡＡＴ遺伝子組換え体を用いたメタクリル酸エステル（メタクリル酸イソブチル、メタクリル酸フェニル、メタクリル酸ベンジル、メタクリル酸２−エチルヘキシル）の合成【表４９】
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【０６１５】ＨＰＬＣ分析条件  装置：Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５  カラム：Ｓｈｉｓｅｉｄｏ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０  ５  μｍ  移動相：６５  ％  ＭｅＯＨ,  ０．２％  リン酸  流量：  ０．２５  ｍｌ／ｍｉｎ  カラム温度：３５℃  検出：ＵＶ  ２１０  ｎｍ  注入量：１０μＬ【０６１６】＜比較例１：酵母由来ＡＡＴ遺伝子組換え体細胞抽出液によるメタクリル酸エステルの合成反応＞  実施例４５と同様にして酵母由来ＡＡＴ遺伝子発現プラスミドを作製し（表５０）、これらを用いて大腸菌を形質転換しＡＡＴ発現組換え体を得た。【０６１７】酵母由来ＡＡＴ遺伝子発現用プラスミド【表５０】
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【０６１８】  実施例４６と同様にして細胞抽出液を調製し、実施例４７と同様にメタクリリル−ＣｏＡとｎ-ブタノールを基質にしてメタクリル酸ブチルの合成反応を行った。その結果、メタクリル酸ブチルの生成は認められなかった。一方、アセチル−ＣｏＡとｎ−ブタノールを基質にした場合には、酢酸ブチルの生成が認められた。すなわち、酵母由来のＡＡＴにはメタクリル酸エステルを製造する能力は認められなかった。【０６１９】酵母ＡＡＴ遺伝子組換え体を用いたエステルの生成【表５１】
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【産業上の利用可能性】
【０６２０】  本発明に係るメタクリル酸の製造方法によれば、化学的な手法に依らず、微生物を利用してリサイクル可能な生物由来資源（再生可能原料）からメタクリル酸を製造できる。従来のＡＣＨ法では、酸によるアセトンシアンヒドリンの酸化処理を要し、大量の廃酸が生じる。また、各ステップで分離や精製が必要であり、エネルギー消費が大きくなる。一方、本発明に係るメタクリル酸の製造方法によれば、バイオマスから直接的に単一工程で効率的かつ簡便にメタクリル酸を生産することができる。これに伴って、安全面、環境面、設備面、作業面及びコスト面等での負荷が低減される。また、メタクリル酸の原料をバイオマス由来のものへ転換することで環境中への二酸化炭素の排出量を削減することも可能となる。
【配列表フリーテキスト】
【０６２１】配列番号８２：ＭＭＡ−０４４配列番号８３：ＭＭＡ−０４５配列番号８４：ＭＭＡ−００３配列番号８５：ＭＭＡ−００４配列番号８８：ＭＭＡ−０３１配列番号８９：ＭＭＡ−０３２配列番号９２：ＭＡＡ−１５配列番号９３：ＭＡＡ−１６配列番号９４：ＧＢ−１３８配列番号９５：ＧＢ−１３９配列番号９６：ＧＢ−１４０配列番号９７：ＧＢ−１４１配列番号９８：ＭＭＡ−０６１配列番号９９：ＭＭＡ−０６２配列番号１００：ＭＭＡ−０６３配列番号１０１：ＭＭＡ−０６４配列番号１０２：ＭＭＡ−０６９配列番号１０３：ＭＭＡ−０７０配列番号１０４：ＭＭＡ−１３３配列番号１０５：ＭＭＡ−１３１配列番号１０６：ＭＭＡ−００３配列番号１０７：ＭＭＡ−００４配列番号１０８：ＭＭＡ−０２０配列番号１０９：ＭＭＡ−００６配列番号１１０：ＭＭＡ−０１８配列番号１１１：ＭＭＡ−００８配列番号１１２：ＭＭＡ−０１９配列番号１１３：ＭＭＡ−０１０配列番号１１４：ＭＭＡ−０２１配列番号１１５：ＭＭＡ−０２２配列番号１１６：ＭＭＡ−０２３配列番号１１７：ＭＭＡ−０２４配列番号１１８：ＭＡＡ−１５配列番号１１９：ＭＡＡ−１６配列番号１２０：ＭＭＡ−１８７配列番号１２１：ＭＭＡ−１４０配列番号１２２：ＭＭＡ−１８８配列番号１２３：ＭＭＡ−１８９配列番号１２４：ＭＭＡ−００１配列番号１２５：ＭＭＡ−００２配列番号１２６：ＭＭＡ−１１４配列番号１２７：ＭＭＡ−１０９配列番号１２８：ＭＭＡ−０３９配列番号１２９：ＭＭＡ−０４０配列番号１３０：ＭＭＡ−０４２配列番号１３１：ＭＭＡ−０４１配列番号１３２：ＭＭＡ−０４３
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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