【手続補正書】
【提出日】平成27年7月10日(2015.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高度な胆汁酸塩加水分解酵素(bsh)活性を持つ細菌、その単離物または上清を含む経口組成物であって、前記高度なbsh活性を持つ細菌が30分間かけて測定された時に>2000μmolグリコデオキシコール酸(GDCA)/グラム湿潤細菌細胞ペレット/時でおよび>500μmolタウロデオキシコール酸(TDCA)/グラム湿潤細菌細胞ペレット/時で分解するbsh活性を有し、前記高度なbsh活性が治療上の送達のために安定化され、かつ前記高度なbsh活性が複数の増殖培地成分の結果生じる、経口組成物。
【請求項２】
前記高度なbsh活性を持つ細菌が30分間かけて測定された時に>15000μmolGDCA/グラム湿潤細菌細胞ペレット/時でおよび>2000μmolTDCA/グラム湿潤細菌細胞ペレット/時で分解する、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項３】
担体をさらに含む、請求項1または2に記載の経口組成物。
【請求項４】
前記細菌が生きている、請求項1から3のいずれか一項に記載の経口組成物。
【請求項５】
前記細菌が遊離である、請求項1から4のいずれか一項に記載の経口組成物。
【請求項６】
前記細菌がラクトバチルス(Lactobacillus)、ビフィドバクテリウム(Bifidobacteria)、ペディオコッカス(Pediococcus)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、エンテロコッカス(Enterococcus)またはロイコノストック(Leuconostoc)である、請求項1から5のいずれか一項に記載の経口組成物。
【請求項７】
前記ラクトバチルスがラクトバチルス・ロイテリ(Lactobacillus reuteri)である、請求項6に記載の経口組成物。
【請求項８】
前記ラクトバチルス・ロイテリがラクトバチルス・ロイテリ(NCIMB701359)、ラクトバチルス・ロイテリ(NCIMB701089)、ラクトバチルス・ロイテリ(ATCC55148)、ラクトバチルス・ロイテリ(ATCC23272)、ラクトバチルス・ロイテリ(NCIMB702655)、ラクトバチルス・ロイテリ(LMG18238)、ラクトバチルス・ロイテリ(CCUG32271)、ラクトバチルス・ロイテリ(CCUG32305)、ラクトバチルス・ロイテリ(CCUG37470)、ラクトバチルス・ロイテリ(CCUG44001)またはラクトバチルス・ロイテリ(CCUG44144)である、請求項7に記載の経口組成物。
【請求項９】
前記細菌の濃度が106〜1012CFU/グラムである、請求項1から8のいずれか一項に記載の経口組成物。
【請求項１０】
前記増殖培地が、
ａ．マルトース、またはイヌリンおよびグルコースの組合せを含む炭素源、
ｂ．酵母エキス、麦芽エキス、およびペプトンを含む窒素源、ならびに
ｃ．pH5〜7
を含む、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項１１】
前記窒素源がシステインをさらに含む、請求項10に記載の経口組成物。
【請求項１２】
前記細菌がポリマー中に固定される、請求項1または2に記載の経口組成物。
【請求項１３】
前記ポリマーがアルギン酸、キトサン、アガロース、ペクチン、アガロペクチン、ゲニピンまたはセルロースを含む、請求項12に記載の経口組成物。
【請求項１４】
前記ポリマーが、半透性マイクロカプセルまたはナノカプセルを形成する、請求項12に記載の経口組成物。
【請求項１５】
前記ポリマー性のマイクロカプセルまたはナノカプセルが胃腸条件に対して耐性である、請求項14に記載の経口組成物。
【請求項１６】
前記安定化が、組成物を凍結乾燥、熱乾燥、スプレー乾燥またはフリーズドライすることにより実現される、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項１７】
0.2から10%のマルトデキストリンおよび0.05から0.33%の酵母抽出物、0.05から2.5%のイヌリンおよび0.1%の酵母抽出物、または0.3%のイヌリンを含む溶解保護物質と共に凍結乾燥される、請求項16に記載の経口組成物。
【請求項１８】
液体中で安定化され、液体保存条件が2.5〜10%の増殖培地、50〜99.99%のヨーグルトもしくは他の発酵乳、50〜99.99%の培養上清、または5%のMRSを含む最終保存溶液を含む、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項１９】
前記安定化が、経口組成物を凍結保護溶液中で急速冷凍することにより実現される、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項２０】
前記凍結保護溶液が終濃度0.2〜10%のマルトデキストリンおよび0.05から0.33%の酵母抽出物、0.05から2.5%のイヌリン、0.5Mのトレハロース、0.5Mのフルクトース、0.5Mの乳糖、0.5Mのマルトースまたは50〜99.99%の使用済み培地を含む、請求項19に記載の経口組成物。
【請求項２１】
前記担体がサプリメント、食品製品、飲料、機能性食品または栄養補助食品を含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の経口組成物。
【請求項２２】
前記担体がカプセル、丸剤、ゲルカプセル、液体または溶解性フィルムを含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の経口組成物。
【請求項２３】
トリグリセリド低下剤、HDLを増加させるための薬剤、HDL減少を制限するための薬剤、コレステロール低下剤、アディポカインを調節するための薬剤、肥満のホルモンを調節するための薬剤、血糖降下剤、炎症促進性サイトカインを低減させるための治療薬、ビタミンB12、共役リノール酸(CLA)、ロイテリンおよびロイテリサイクリンからなる群より選択される治療薬をさらに含む、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項２４】
前記bsh活性が、イヌリン、トレハロース、マルトデキストラン、酵母抽出物、ポリエチレングリコール、グリセロール、脂質、乳化脂肪、乳製品、グルコース、フルクトース、ショ糖、多糖、無水生命状態(anhydrobiosis)、ポリコサノール、ポリエチレングリコール(PEG)、植物ステロール、植物スタノールまたはオメガ脂肪酸により安定化される、請求項1に記載の経口組成物。
【請求項２５】
動物の血清コレステロールを低下させるための、胆汁酸を低下させる量の請求項1から24のいずれか一項に記載の経口組成物の使用。
【請求項２６】
動物の血清高密度リポタンパク質(HDL-C)を増加させるため、または動物の血清高密度リポタンパク質(HDL-C)の低減を制限するための、請求項25に記載の使用。
【請求項２７】
動物の血清トリグリセリドを減少させるための、請求項25に記載の使用。
【請求項２８】
動物のアテローム硬化リスク因子を低減させるための請求項25に記載の使用であって、前記アテローム硬化リスク因子が血清ホモシステイン、フィブリノーゲン、C反応性タンパク質、リポタンパク質(a)、尿酸、マトリックスメタロペプチダーゼ9(MMP-9)、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤(PAI-1)またはその抗原、組織プラスミノーゲン活性化因子(tPA)、TNFアルファ、IL-6、P-セレクチン、単球走化性タンパク質-1(MCP-1)、可溶性CD40リガンド(sCD40L)、細胞間接着分子1(ICAM-1)、ミエロペルオキシダーゼ(MPO)、アディポネクチン、レプチン、リポタンパク質関連ホスホリパーゼAおよびインスリンから選択される、使用。
【請求項２９】
動物の動脈硬化指数を低減させるための、胆汁酸を低下させる量の請求項1から24のいずれか一項に記載の経口組成物の使用。
【請求項３０】
前記動脈硬化指数(AI)が式AI=Log(トリグリセリド/HDL-C)またはAI=TC-HDL-C/HDL-Cの少なくとも1つより計算される、請求項29に記載の使用。
【請求項３１】
動物におけるアテローム性動脈硬化またはアテローム性動脈硬化が原因となる変性障害の予防または治療のための、胆汁酸を低下させる量の請求項1から24のいずれか一項に記載の経口組成物の使用。
【請求項３２】
動物において全身の体脂肪を低下させる、または肥満もしくは前肥満状態を治療するための、胆汁酸を低下させる量の請求項1から24のいずれか一項に記載の経口組成物の使用。
【請求項３３】
動物における代謝性疾患または障害の予防または治療のための、胆汁酸を低下させる量の請求項1から24のいずれか一項に記載の経口組成物の使用。
【請求項３４】
前記代謝性疾患または障害が高脂血症、高血糖、高リポタンパク血症、耐糖能障害(IGT)、インスリン抵抗性、前糖尿病状態、I型糖尿病、II型糖尿病またはメタボリックシンドロームを含む、請求項33に記載の使用。
【請求項３５】
血清もしくは肝臓組織における高濃度の脂質もしくはトリグリセリドに関連した肝疾患の予防または治療のための、胆汁酸を低下させる量の請求項1から24のいずれか一項に記載の経口組成物の使用。
【請求項３６】
前記組成物が1日あたり1から4回用いられる、請求項25に記載の使用。
【請求項３７】
前記動物がヒトである、請求項25に記載の使用。
【請求項３８】
bsh産生細菌を炭素源、窒素源およびpH5〜7を含む培地中で増殖させる段階ならびに前記細菌を12から24時間後に回収する段階を含む、30分間かけて測定された時に>2000μmolグリコデオキシコール酸(GDCA)/グラム湿潤細菌細胞ペレット/時でおよび>500μmolタウロデオキシコール酸(TDCA)/グラム湿潤細菌細胞ペレット//時で分解する高度なbsh活性を持つ細菌を調製するための方法。
【請求項３９】
前記炭素源がマルトース、またはイヌリンおよびグルコースの組合せを含み、前記窒素原が酵母エキス、麦芽エキス、およびペプトンを含み、前記pHが約5〜7である、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
前記炭素源がマルトースである、請求項38に記載の方法。
【請求項４１】
前記窒素源が(i)酵母エキスおよび麦芽エキス、酵母エキスおよび牛肉エキス、またはカゼイン加水分解物および麦芽エキス、ならびに(ii)ペプトンまたはトリプトンを含む、請求項38に記載の方法。
【請求項４２】
前記窒素源がシステインをさらに含む、請求項39に記載の方法。
【請求項４３】
前記ペプトンがペプトンno.3である、請求項39に記載の方法。
【請求項４４】
遊離のまたはマイクロカプセル化された細菌を溶解保護物質と共に凍結乾燥する段階をさらに含み、前記溶解保護物質が0.2から10%のマルトデキストリンおよび0.05から0.33%の酵母エキス、0.05から2.5%のイヌリンおよび0.1%の酵母エキス、または0.3%のイヌリンを含む、請求項38から43のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
高度なbsh活性を持つ遊離のまたはマイクロカプセル化された細菌を液体保存条件下で保存する段階をさらに含み、前記液体保存条件が2.5〜10%の増殖培地、50〜99.99%のヨーグルトもしくは他の発酵乳、50〜99.99%の培養上清、または5%のMRSを含む最終保存溶液を含む、請求項38から43のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
組成物および凍結保護溶液をセ氏-80度より低い温度で急速冷凍する段階をさらに含み、前記凍結保護溶液が終濃度0.2〜10%のマルトデキストリンおよび0.05から0.33%の酵母エキス、0.05から2.5%のイヌリン、0.5Mのトレハロース、0.5Mのフルクトース、0.5Mの乳糖、0.5Mのマルトースまたは50〜99.99%の使用済み培地を含む、請求項38から45のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)、アルコール性脂肪性肝疾患(AFLD)、または脂肪肝である、請求項35に記載の使用。