【手続補正書】
【提出日】平成27年7月23日(2015.7.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの全血において増強された細胞効力を有する増強されたαらせんポリペプチドをスクリーニングする方法であって、該増強されたαらせんポリペプチドは、該ポリペプチドの第一のアミノ酸および第二のアミノ酸を接続する架橋剤を含み、該方法は、
（ａ）親αらせんポリペプチドの第一のアミノ酸および第二のアミノ酸を接続する架橋剤を含む親αらせんポリペプチドを提供する工程；
（ｂ）標的に結合するのに必須ではない該親αらせんポリペプチドの少なくとも１つのアミノ酸側鎖が、改変されたαらせんポリペプチドにおいて置換されること以外は、該親ポリペプチドの配列と同じ配列を有する、架橋剤を含む改変されたポリペプチドを産生する工程と；
（ｃ）ヒト血清の存在および／または非存在において、細胞内標的に対する該改変されたαらせんポリペプチドの結合によって、該改変されたαらせんポリペプチドのインビトロの活性（ＥＣ５０）を測定する工程と；
（ｄ）ヒト血清タンパク質に対する該改変されたαらせんポリペプチドの見かけの親和性（Ｋｄ＊）を決定する工程と；
（ｅ）該改変されたαらせんポリペプチドが、該親αらせんポリペプチドのＫｄ＊よりも高いＫｄ＊および該親αらせんポリペプチドのＥＣ５０以下のＥＣ５０を有する場合、該改変されたαらせんポリペプチドを増強されたポリペプチドとして選択する工程と、
を包含する、方法。
【請求項２】
前記改変されたポリペプチドが、前記親ポリペプチド中の少なくとも１つの酸性側鎖を中性側鎖で置き換えることによって産生され、該親ポリペプチド中の該酸性側鎖が、疎水性が高い側鎖に隣接しており、かつ、標的への結合に必須ではない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記改変されたαらせんポリペプチドが１〜７００マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する場合、該改変されたαらせんポリペプチドを増強されたαらせんポリペプチドとして選択する工程をさらに包含する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記増強されたαらせんポリペプチドが７０マイクロモル濃度未満のＫｄ＊を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記増強されたαらせんポリペプチドが１〜１０マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記増強されたαらせんポリペプチドが０．１〜５０％というヒト血液中の推定遊離画分を保有し、ここで該推定遊離画分が式
【数１】
2014221801.tif 000001
によって規定され、かつ［ＨＳＡ］総が７００マイクロモル濃度である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
前記増強されたαらせんポリペプチドが０．５〜１０％というヒト血液中の推定遊離画分を保有し、ここで該推定遊離画分が式
【数２】
2014221801.tif 000002
によって規定され、かつ［ＨＳＡ］総が７００マイクロモル濃度である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
前記増強されたαらせんポリペプチドが細胞膜を透過する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
前記第一のアミノ酸および前記第二のアミノ酸のうちの少なくとも１つがα，α−二置換アミノ酸である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】
前記第一のアミノ酸および前記第二のアミノ酸の両方がα，α−二置換されている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
前記第一のアミノ酸および前記第二のアミノ酸が、２つまたは３つのアミノ酸で隔てられている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
前記架橋剤が、６と１４との間の連続した結合を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
前記架橋剤が、８と１２との間の連続した結合を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１４】
前記増強されたαらせんポリペプチドが、１８原子〜２６原子の環を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１５】
前記第一のアミノ酸および前記第二のアミノ酸が、６つのアミノ酸で隔てられている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１６】
前記架橋剤が、８と１６との間の連続した結合を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１７】
前記架橋剤が、１０と１３との間の連続した結合を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１８】
前記増強されたαらせんポリペプチドが、２９原子〜３７原子の環を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１９】
前記架橋剤が、α−らせんの１ターン〜５ターンまでの間に架かる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２０】
前記架橋剤がα−らせんの１ターンに架かる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２１】
前記架橋剤がα−らせんの２ターンに架かる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２２】
前記架橋剤の長さがα−らせんの１ターンあたり５Å〜９Åである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２３】
前記増強されたαらせんポリペプチドがｐＨ７．４で正味の正の電荷を担持する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２４】
前記増強されたαらせんポリペプチドが、ハロゲン、アルキル基、蛍光性部分、親和性標識、標的化部分または放射性同位元素のうちの１つ以上を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２５】
前記改変されたαらせんポリペプチドが治療効果を提供する場合、該改変されたαらせんポリペプチドを前記増強されたαらせんポリペプチドとして選択する工程をさらに包含する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２６】
前記改変されたαらせんポリペプチドが、３マイクロモル濃度以下というヒト血清タンパク質に対するみかけの親和性を有する場合、該改変されたαらせんポリペプチドを前記増強されたαらせんポリペプチドとして選択する工程をさらに包含する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２７】
前記改変されたαらせんポリペプチドが、１０マイクロモル濃度以下というヒト血清タンパク質に対するみかけの親和性を有する場合、該改変されたαらせんポリペプチドを前記増強されたαらせんポリペプチドとして選択する工程をさらに包含する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２８】
前記改変されたαらせんポリペプチドが、対応する非架橋ポリペプチドに比べて改善された、エネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過する能力を有する場合、該改変されたαらせんポリペプチドを前記増強されたαらせんポリペプチドとして選択する工程をさらに包含する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２９】
前記親ポリペプチドが、疎水性が高い側鎖に隣接する酸性側鎖からなるジペプチドモチーフを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１または２に記載の方法に従って選択される、架橋剤を含む増強されたαらせんポリペプチドであって、該架橋剤は、該増強されたαらせんポリペプチドの第一のアミノ酸と第二のアミノ酸を接続し、該増強されたαらせんポリペプチドが、エネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過し、かつ、細胞内標的に結合する、ポリペプチド。
【請求項３１】
ＢＣＬ−２ファミリーメンバーの異常な発現または活性に関連する障害の処置または制御に使用するための、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法に従って選択された、増強されたαらせんポリペプチドを含む組成物。
【請求項３２】
過剰増殖性細胞における、ＭＡＭＬタンパク質とＮｏｔｃｈタンパク質またはＣＳＬタンパク質との間の相互作用または結合によって媒介される過剰増殖性の疾患または状態の処置または制御に使用するための、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法に従って選択された、増強されたαらせんポリペプチドを含む組成物。
【請求項３３】
請求項１または２に記載の方法であって、ここでＫｄ＊が式
【数３】
2014221801.tif 000003
によって規定され、
ここでｎが１であり、かつＥＣ５０がヒト血清の非存在下での全細胞アッセイで測定されるインビトロの効力であり、かつＥＣ’５０がＮ％のヒト血清における全細胞アッセイで測定されたインビトロの効力であり、Ｐが（Ｎ／１００）×（７００）マイクロモル濃度である、方法。
【請求項３４】
請求項３０に記載の増強されたαらせんポリペプチドであって、該増強されたαらせんポリペプチドは、エネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過し、かつ細胞内標的に結合し、該増強されたαらせんポリペプチドが細胞膜を透過する能力は、細胞を、フルオレセイン化架橋ポリペプチドとともにインキュベートし、細胞の蛍光を測定することによって測定される、ポリペプチド。
【請求項３５】
前記酸性側鎖および前記疎水性が高い側鎖が、前記標的に結合するのに必須ではなく、それぞれ、中性側鎖および疎水性がより低い側鎖で置き換えられている、請求項２に記載の方法。