(57)【要約】本発明は、静脈投与可能であり、肺特異的な治療剤を提供することを目的とする。本発明は、医薬化合物を含有する徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ静脈内投与されることを特徴とする肺特異的治療剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬化合物を含有する徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ
静脈内投与されることを特徴とする
肺特異的治療剤。
【請求項２】
前記医薬化合物が、肺疾患治療薬である、請求項１に記載の肺特異的治療剤。
【請求項３】
前記肺疾患治療薬が、ステロイド薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬、Ｍ３受容体拮抗薬、ＰＧＩ２アゴニスト、エラスターゼ阻害剤、β２アドレナリン受容体作動薬、体内再生因子、及び体内再生因子の誘導剤からなる群より選択される１種以上である、請求項２に記載の肺特異的治療剤。
【請求項４】
前記肺疾患治療薬が、ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット、ツルブテロール、サルメテロール及びそれらの塩からなる群より選択される１種以上である、請求項２に記載の肺特異的治療剤。
【請求項５】
前記肺疾患治療薬が、ｂ−ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＥＧＦ、ＳＤＦ−１、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、ＨＭＧＢ１、Ｇ−ＣＳＦ及び細胞外マトリックスからなる群より選択される１種以上の体内再生因子である、請求項３に記載の肺特異的治療剤。
【請求項６】
前記肺疾患治療薬が、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、ＡＴ１受容体拮抗剤（ＡＲＢ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）作動薬及びホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤からなる群より選択される１種以上の体内再生因子の誘導剤である、請求項３に記載の肺特異的治療剤。
【請求項７】
前記再生因子の誘導剤がＰＧＩ２アゴニストであり、当該ＰＧＩ２アゴニストが、一般式（Ｉ）
【化１】
2014069401.tif 000020
（式中、
【化２】
2014069401.tif 000021
は
【化３】
2014069401.tif 000022
を表わし、
Ｒ１は、水素原子又はＣ１〜４アルキル基を表わし、
Ｒ２は、（ｉ）水素原子、（ｉｉ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｉｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、（ｉｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環、（ｖ）ベンゼン環又はＣ４〜７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜４アルキル基、又は（ｖｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環で置換されているＣ１〜４アルキル基を表わし、
Ｒ３は、（ｉ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、（ｉｉｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環、（ｉｖ）ベンゼン環又はＣ４〜７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜４アルキル基、又は（ｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環で置換されているＣ１〜４アルキル基を表わし、
ｅは３〜５の整数を表わし、ｆは１〜３の整数を表わし、ｐは１〜４の整数を表わし、ｑは１又は２を表わし、ｒは１〜３の整数を表わす。ただし、
【化４】
2014069401.tif 000023
が前記（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）で示される基である場合には、−（ＣＨ２）ｐ−及び＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｓ−は、環上のａ又はｂの位置に結合するものとし、Ｒ２及びＲ３中の環は、１個から３個のＣ１〜４アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基又はトリハロメチル基で置換されていてもよいものとする。）
で示される化合物又はその塩である、請求項６に記載の肺特異的治療剤。
【請求項８】
前記ＰＧＩ２アゴニストが、（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸である、請求項７に記載の肺特異的治療剤。
【請求項９】
前記ＰＧＩ２アゴニストが、
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）、
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）、
ＰＧＩ２誘導体であるカルバサイクリン誘導体及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上である、請求項７に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１０】
前記徐放性マイクロスフェアが、ゼラチンハイドロゲル、リポソーム、脂質、ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、ポリジオキサン及びこれらの混合物からなる群より選択される生体分解性高分子を含有する、請求項１に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１１】
前記マイクロスフェアの数平均粒子径が２０〜４０μｍであり、最大粒子径が１００μｍ以下である、請求項１に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１２】
マイクロスフェアとしての１回投与量が６ｍｇ／ｋｇ以下である、請求項１に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１３】
ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット、ツルブテロール、サルメテロール及びその塩からなる群より選択される肺疾患治療薬；並びに
ゼラチンハイドロゲル、リポソーム、脂質、ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、ポリジオキサン、及びこれらの混合物からなる群より選択される１種以上の生体分解性高分子
を含有するマイクロスフェア徐放性製剤である、
請求項２に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１４】
前記生体分解性高分子の重量平均分子量が、１，０００〜５０，０００である、請求項２に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１５】
（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸、
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）、
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）、及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上の前記肺疾患治療薬；並びに
ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、及びこれらの混合物からなる群より選択される生体分解性高分子
を含有する徐放性マイクロスフェアを含有する、
請求項２に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１６】
ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット及びツルブテロール、サルメテロール；
（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸；
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）；
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）；
ＰＧＩ２誘導体であるカルバサイクリン誘導体及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上の肺疾患治療薬
を含有し、
数平均粒子径が２０〜４０μｍであり、最大粒子径が１００μｍ以下である徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ
徐放性マイクロスフェアとしての１回投与量が６ｍｇ／ｋｇ以下である、
請求項１に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１７】
前記肺疾患が、急性肺炎、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、喘息、難治性喘息、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性肺障害（ＡＬＩ）、呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス、慢性特発性肺血栓塞栓症、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性線維症、過敏性肺炎、肺癌、肥満低換気症候群、肺胞低換気症候群、及び肺臓移植慢性拒絶からなる群より選択される１種以上である、請求項２〜１６のいずれか１項に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１８】
前記肺疾患が、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、及び全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）からなる群より選択される１種以上である、請求項２〜１６のいずれか１項に記載の肺特異的治療剤。
【請求項１９】
医薬化合物を肺へ選択的に移行させる方法であって、
当該医薬化合物を含有する徐放性マイクロスフェアを静脈内投与することを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺疾患特異的治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、肺疾患治療剤における、肺特異的投与法としては吸入剤（経肺投与製剤）が開発・検討されている。吸入剤は、従来、肺局所作用を期待して全身性副作用を回避するための投与方法であり、肺特異的投与法としての吸入剤の開発においては、肺に持続的に医薬化合物を到達させ、その肺における量を維持するには、製剤、粒子径、刺激性、薬物代謝、及び物性等において解決すべき多くの問題点がある。【０００３】
また、対象患者に関しても、吸入器の取り扱いの困難さ、頻回吸入（持続性）、アドヒアランスの低下、肺疾患患者の吸入力の弱さ、痰による気道閉塞、及び末梢病変細気道閉塞による医薬化合物到達性、副作用回避のための口腔内残留薬物のうがい等による除去の必要性等の問題点がある。
従って、多くの場合、肺特異的投与法として効果的な吸入剤の開発は困難である。【０００４】
吸入剤は、従来、エアゾール剤が多かったが、噴霧に用いられるフロンガスの使用が禁止となり、ガスを使用しない粉末吸入剤（ＤＰＩ，  ｄｒｙ  ｐｏｗｄｅｒ  ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ）が多く使われるようになった。医薬品粉末のみでは器具などに付着、残留するため、乳糖などの不活性な担体と二次粒子を形成させ、付着性を低下させ、吸入しやすくする必要がある。現在、喘息治療用の吸入剤として、副腎皮質ステロイド薬（ステロイド）やβ２刺激剤（ＬＡＢＡ）との配合剤などが多く用いられているが、吸入ステロイドを使用する際には、感染症予防のために口やのどにある不必要な薬を取るために、吸入後にうがいをする必要がある。また、医薬品粉末を含む錠剤やカプセル剤をセットし、吸入するカセット式専用吸入器を用いる場合も多いが、高齢者や小児には取り扱いが困難な場合が多い。【０００５】
一方、経口剤、貼付剤や静注剤等の全身投与製剤は、血中濃度上昇に伴う全身性の副作用発現のため、薬効と副作用との乖離度が問題となる。【０００６】
肺疾患としては、例えば、急性肺炎、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、喘息、難治性喘息、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性肺障害（ＡＬＩ）、呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス、慢性特発性肺血栓塞栓症、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性線維症、過敏性肺炎、肺癌、肥満低換気症候群、肺胞低換気症候群、及び肺臓移植慢性拒絶等が挙げられるが、特に重要な疾患は、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、喘息、ＣＯＰＤ、及びＳＩＲＳ等である。
これらの疾患に関しては、吸入剤、貼付剤、経口剤、及び点滴静注剤等が開発されているが、十分に効果的な薬剤はない。【０００７】
以下に代表的な肺疾患治療薬の現状と問題点を記述する。【０００８】
１．喘息、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
呼吸器疾患治療剤の国内市場規模は３，０２１億円（２００９年）で、そのうちの約６割が喘息治療剤である。また、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の市場規模は３３２億円であるが、ＣＯＰＤの潜在患者数は約５３０万人とも言われる中、実際に治療を受けている患者はその１割にも満たないという現状である。今後の患者数増加に伴い市場規模も拡大が予想される。【０００９】
全国の喘息患者数は８８．８万人で、人口１万人あたり喘息患者数は６９．８８人（２００８年）であり、年々増加傾向を示している。喘息治療としてはステロイド、β２受容体作動薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ）、抗コリン薬、テオフィリン製剤等が使用される。喘息治療は気道の炎症を抑制することが必要であるため、ステロイド剤が第一選択薬として使用されるが、副作用等発現のため、一般的には吸入剤（経肺投与製剤）として使用される。吸入用ステロイド薬にはフルチカゾン（商品名：フルナーゼ）、ベクロメタゾン（商品名：キュバール）等がある。また、長期作用性β２作動薬（ＬＡＢＡ）（例、サルメテロール等）とステロイド薬が配合された吸入剤（商品名：アドエアー、シムビコート等）も使用されている。しかし、吸入剤は、吸入器の取り扱い、頻回吸入、アドヒアランスの低下、吸入力が弱い、痰による気道閉塞及び患部への医薬化合物到達性等も問題となっており、効果的な吸入剤の使用は困難な場合が多い。【００１０】
吸入薬の使用が困難な小児及び高齢者等には、経口喘息治療薬としてロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ）が使用され、リモデリング予防・改善効果、運動誘発性喘息、アスピリン喘息などに、使用が推奨されている。代表的なＬＴＲＡには、プランルカスト（商品名：オノン）、モンテルカスト（商品名：シングレア）等があるが、ロイコトリエンが関与しない喘息もあり、約４０％の患者には効果が見られない。【００１１】
その他、アドレナリンβ２刺激剤には、吸入薬としてはサルメテロール（製剤名：セレベント）、貼付薬にはツロブテロール（製剤名：ホクナリンテープ）、経口薬にはプロカテロール（製剤名：メプチン）、クレンブテロール（製剤名：スピロペント）、ファルモテロール（製剤名：アトック）等などがある。また、気管支平滑筋を弛緩させるフォスフォジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤であるテオフィリン（商品名：テオドール）や気管支平滑筋の収縮を抑制する抗コリン薬（Ｍ３受容体拮抗薬）としてイプラトロピウム（製剤名：アトロベント）等があるが、ステロイド薬に勝る効果を示す医薬化合物及び薬剤はない。尚、抗コリン薬は緑内障・前立腺肥大などの患者に禁忌である。【００１２】
ＷＨＯの試算では、２００５年では世界の慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者は中等症以上で８，０００万人で、世界中で年間３００万人がＣＯＰＤにより命を落とし、死亡原因の第４位を占めているが、今後１０年間でさらに３０％増加すると予測している。日本では厚生労働省の統計によると、２００１年にＣＯＰＤで受診した患者数は３４万人であるが、潜在患者数は５３０万人（２００４年）であり、１４，４１６人（全死亡数の１．３％）がＣＯＰＤにより死亡（２００５年）し、死亡原因の１０位を占めている。また、男性に限ると７位を占めている。【００１３】
ＣＯＰＤにおける薬物療法の中心は気管支拡張薬（例、抗コリン薬、β２刺激薬、テオフィリン薬）であり、効果や副作用の面から吸入薬が推奨されており、主として長時間作用性の吸入抗コリン薬や吸入β２刺激薬が使用されている。気流閉塞が重症で増悪を繰り返す場合は、長時間作用性β２刺激薬と吸入用ステロイドの配合薬も使用されている。【００１４】
抗コリン薬（Ｍ３拮抗剤）としては、ＣＯＰＤ治療の第一選択薬として吸入剤であるチオトロピューム（商品名：スピリーバー）が使用されており、ＣＯＰＤにおける気管支拡張効果や症状改善効果は、長時間作用性β２刺激薬よりも優れている。ただし、前立腺肥大による排尿障害のある患者や、緑内障患者に禁忌となっている。主な副作用は、口渇、心悸亢進、嘔気、排尿困難、イレウス等が発症する。【００１５】
β２作動薬の貼付薬であるツロブテロールテープ（商品名：ホクナリンテープ）は吸入薬に比べて気管支拡張効果は劣るが、吸入困難な高齢者にも使用しやすい製剤である。副作用として、心悸亢進、振戦、頭痛、悪心、嘔吐等が発症する。【００１６】
ＰＤＥ阻害剤であるテオフィリンは、ＣＯＰＤにおける気管支拡張効果は吸入剤に比べて劣るが、近年、テオフィリンによる気道の抗炎症作用が注目されており、治療薬として期待されている。しかし、有効血中濃度の範囲が狭いので、血中濃度モニタリングを適切に行う必要がある。【００１７】
これらは全て残された細気管支を拡張し、肺機能を一時的に改善するための医薬化合物又は製剤であり、肺胞破壊を抑制、又は再生する医薬化合物及び製剤はまだない。【００１８】
２．間質性肺炎（肺線維症）
間質性肺炎（肺線維症）は、難病に指定され、死亡率の高い疾患であるが、効果的な医薬化合物及び製剤が無い。２００８年より、日本ではピルフェニドン（商品：ピレスパ）が発売されたが、日本でのみ承認されており、光線過敏症や肝機能障害などの副作用が発症する。特発性肺線維症（病理組織分類では通常型間質性肺炎）に対してはこの薬剤のみが上市されているが、その効果は十分ではないと言われている。【００１９】
３．肺高血圧症
肺動脈性肺高血圧症は、難病に指定されており、厚生労働省の統計（平成２１年）によると、日本における肺動脈性肺高血圧症（特発性及び遺伝性肺動脈性肺高血圧症）の患者数は年々増加の傾向にあり、平成２０年度の患者数は１，１４０人と報告されている。また、１年に１００人程度の人が肺高血圧症を発症している。一方、膠原病（関節リウマチ等）等により肺高血圧症が併発していることが報告されている。【００２０】
肺高血圧症の重症度や病態により、治療方法を選択するが、効果的な薬剤としては、持続静注薬として、エポプロステノールナトリウム（ＰＧＩ２・Na、商品名：フローラン）がある。重度の肺高血圧症に対して使用され、現在使用できる治療薬の中で最も効果があるが、薬剤の半減期が約６分と非常に短いため、薬液を常時持続的に中心静脈カテーテルから体内へ投与する必要がある。その他、海外では、他のＰＧＩ２誘導体製剤（カルバサイクリン系誘導体）で、吸入剤や皮下注射剤もあるが、副作用として血圧低下、頭痛、顔面潮紅、顎痛、下痢、悪心、発疹などが発症する。その他、経口剤として、ＰＤＥＶ阻害剤（シルデナフィル）、ＥＴ−１拮抗剤（ボセンタン）、およびＰＧＩ２誘導体であるベラプロスト等があるが、軽症、中等症患者が適応となる。【００２１】
４．ＳＩＲＳ
全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）は、多臓器不全（ＭＯＦ）へ発展しうるという点で重要な疾患であるが効果的な治療薬はない。グルココルチコイドステロイドと好中球エラスターゼ阻害剤（シレベスタット、商品名：エラスポール）が使用可能である。ＭＯＦは往々にして致命的な転帰をたどることから、ＳＩＲＳの段階で集中治療を行ない、多臓器不全状態への発展を阻止することが求められている。【００２２】
世界的にこれらの難治性肺疾患をターゲットとした新規医薬品の開発が展開されつつあるが、フロンガスの使用禁止に伴い、粉末吸入剤の開発や吸入器の開発、及び呼吸器疾患患者の吸入力の弱さ等により、さらに有効的な肺特異的治療法が期待されている。
このため、経口剤、静注剤及び経皮投与剤が開発されているが、全身投与に伴う、全身性副作用との乖離が少ない場合が多い。【００２３】
本発明者らのグループは、以前、プロスラグランジン（ＰＧ）類の薬理作用を検討する中で、体内再生因子との作用類似性から、これらのＰＧ類が、各種体内再生因子を産生誘導する可能性に着目して検討を行った。検討した結果、ＰＧ類の中で、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の産生を促進させるＩＰ受容体（ＰＧＩ２）、ＥＰ２受容体及びＥＰ４受容体の各作動薬が、正常ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）とヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）の共培養下で、管腔形成促進作用を有することを見出した。さらに検討した結果、これらの作動薬は、線維芽細胞、平滑筋細胞、血管内皮細胞及びマクロファージ等から各種体内再生因子を誘導することを見出した。更なる検討の結果、体内再生因子の誘導剤として、主に血管内皮細胞にて生合成されるＰＧＩ系（ＩＰ受容体）を選択し、非ＰＧ骨格のオキシム（ＯＸ）誘導体でありトロンボキサン（ＴＸ）Ａ２合成酵素阻害活性を併せ持つ選択的ＩＰ受容体作動薬である（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸（以下、化合物１と称する場合がある）を選択した（特許文献２）。【００２４】
ＰＧ類はオータコイドに分類され、必要な部位で、必要な時に、必要な量が生合成され、作用発現後、速やかに局所にて代謝失活する。よって、ホルモン類とは異なり、全身循環することはない。本発明者らのグループは、ＰＧ類の臨床応用においては、科学的不安定性による短い血中半減期、全身投与においては注射剤では血管拡張作用に伴う降圧作用、頭痛、フラッシング等、経口剤においては、降圧作用に加えて、下痢誘発作用、腸重積発症等が問題となっていた。これらの問題点を回避する目的で、疾患局所への持続性製剤の直接投与の可能性を検討した。【００２５】
血管新生を必要とする虚血部位又は組織修復を必要とする損傷部局所に化合物１を持続的に放出することができれば、虚血部残存血管の血管拡張作用及び血小板凝集抑制作用における血流量増加作用に加えて、損傷局所近傍で各種体内再生因子を持続的に産生誘導させることが可能となり、全身投与に比較し、副作用の少ないＤＤＳ（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ）製剤が創製可能であると考えた。さらに、虚血部位又は組織損傷近傍局所において、血管新生（再生）及び組織修復が起こる期間の持続放出製剤化が可能であれば、全身投与における副作用が少なく、かつ投与回数の少ない投与コンプライアンスが改善された薬剤の創製が可能であると考えた。【００２６】
本発明者らのグループは、種々検討した結果、化合物１の構造的特徴から、乳酸／グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）とのマイクロスフェア（ＭＳ）製剤（以下、化合物１・ＭＳと称する場合がある）を作製することを見出した。化合物１・ＭＳは、投与部位において、乳酸とグリコール酸に加水分解され、含まれている化合物１がほぼ線形的に生体へ放出される様に製剤設計されている。現在、ＰＬＧＡの分子量、乳酸／グリコール酸比及び粒子径等を変化させることにより、１週間〜６ヶ月の徐放性製剤が見出されている（特許文献１、特許文献２）。
また、同様に化合物１・ＭＳを皮下投与又は筋注投与することにより、長期間の点滴静注様の製剤として使用が可能となる。【００２７】
化合物１の薬理作用について検討した結果、化合物１と線維芽細胞や平滑筋細胞等との培養下で、各種体内再生因子を産生促進し、抗アポトーシス作用、血管新生促進作用、幹細胞分化誘導作用、抗線維化作用等により組織修復を行うことが明らかとなった。体内再生因子とは、例えば、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ−１）、各種の線維芽細胞増殖因子（ａ／ｂ−ＦＧＦ）、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、アンジオポエチン、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、軟骨細胞成長因子（ＧＤＦ）、白血球増殖抑制因子（ＬＩＦ）、ＨＭＢＧ１、及びＫＬＦ（クルッペル様転写因子）等、又はそのファミリーの増殖因子等が挙げられる。
また、「体内再生因子」には、細胞外マトリックス（例、フィブロネクチン類、ラミニン類、プロテオグリカン類等）及び細胞接着因子（例、カドヘリン類、インテグリン類等）等も包含される。
「体内再生因子」は、好ましくは、例えば、ｂ−ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＳＤＦ−１、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、ＨＩＦ−１、ＨＭＧＢ−１、Ｇ−ＣＳＦ、および細胞外マトリックスからなる群より選択される１種以上であることができる。
これらの薬理作用により、化合物１は、各種臓器傷害、例えば、心疾患（例えば、心筋梗塞、狭心症、上室性頻脈性不整脈、うっ血性心不全、拡張不全、特発性心筋症、拡張型心筋症、心房細動、心筋炎、心臓移植慢性拒絶等）、肝疾患（例えば、劇症肝炎、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、脂肪肝、肝移植等）、腎疾患（例えば、急性腎障害（ＡＫＩ）、慢性腎臓病（ＣＫＤ）、糸球体腎炎、腎硬化症、透析患者腎障害、虚血性腎障害、尿細管輸送異常症、クッシング症候群、尿細管間質性疾患等）、肺疾患（例えば、急性肺炎、肺線維症、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、難治性喘息、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性肺障害（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス、間質性肺炎、過敏性肺炎等）、膵疾患（例えば、糖尿病、慢性膵炎等）、骨疾患（例えば、変形性関節炎、関節リウマチ、骨粗鬆症、骨折、骨壊死、骨膜損傷等）、糖尿病性合併症（例えば、神経障害、皮膚潰瘍、腎症等）、歯科疾患（例えば、歯周病、抜歯創、口腔創傷、歯周組織障害等）、神経疾患（例えば、糖尿病性神経障害、脊柱管狭窄症、脊髄損傷、筋委縮性側索硬化症（ＡＬＳ）等）、皮膚潰瘍、褥瘡、脱毛等、および臓器・組織移植（例えば、肝臓移植、腎臓移植、肺臓移植、膵島移植、膵臓移植等）の予防および／または治療剤として有用であることが知られており、このことは、例えば、国際公開第２００４／０３２９６５号および国際公開第２００８／０４７８６３号明細書に詳しく開示されている。【００２８】
また、化合物１は、病態により進行していたＥＲＫ１／２のリン酸化をｃＡＭＰ／ＰＫＡの活性化により抑制し、線維芽細胞の遊走・増殖・コラーゲン産生を抑制することが見出された（非特許文献１）。
一方、化合物１は、抗アポトーシス作用及び抗ネクローシス作用により細胞保護効果を示した。また、これらの保護効果は抗ＨＧＦ中和抗体の投与により減弱した（非特許文献２）。化合物１の各種薬理作用等については文献（非特許文献３、非特許文献４）に記載されている。【００２９】
また、本発明者らのグループ等は、化合物１の難治性肺疾患に対する多くの効果をすでに見出している。
ＨＧＦは、中村等により１９８４年に発見された（非特許文献５）が、その後、多くの研究者により、肝臓だけでなく肺臓においても、肺傷害後の肺胞毛細血管及び肺胞上皮細胞に対して増殖因子として組織修復に重要な役割を担っていることが証明された。また、ＨＧＦは胎児期の肺胞構築及び末梢気道上皮細胞に対する作用も示されている（非特許文献６）。
これらの結果から、ＨＧＦは細気管支上皮細胞に対する急性、あるいは慢性的な炎症、酸化ストレスから引き起こされる肺細胞傷害を防御、あるいは治癒させることが示され、ＨＧＦは細気管支上皮細胞に対する急性、あるいは慢性的な炎症、酸化ストレスから引き起こされる肺細胞傷害を防御、あるいは治癒させることが示された。
よって、ＨＧＦは、急性肺傷害（非特許文献７）である、ＡＲＤＳ（Ａｄｕｌｔ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ＳＩＲＳ（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び肺高血圧症（非特許文献８）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ）（非特許文献９、非特許文献１０）、難治性喘息（非特許文献１１）等に有効であることが示唆されている。
一方、ＨＧＦは、慢性線維性疾患の病態形成に重要なＴＧＦ−β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−β）の発現を抑制するにより、強力な抗線維化作用を有することが証明され（非特許文献１２）、抗線維化剤として肺線維症（非特許文献１３）等にも有効であることが示唆されている。【００３０】
同様に、化合物１は、線維芽細胞、平滑筋細胞、血管内皮細胞及びマクロファージ等からＨＧＦ等を産生促進することから、肺高血圧症、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び（難治性）喘息等への臨床応用が期待出来る。【００３１】
重症肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）治療薬における第一選択薬（ＷＨＯ−ＦＣＩＶ）はエポプロステノール（ＰＧＩ２・Ｎａ塩点滴静注剤）であるが、２４時間点滴静注であり、連続投与により効果が減弱（耐性）するため、投与量の増量が必要である。化合物１は、モノクロタリン誘発ラット肺高血圧症モデルを用いて、反復皮下投与（非特許文献１４）、反復経口投与（非特許文献１５）及び化合物１・ＭＳの間歇皮下投与（非特許文献１６）により、耐性発現を抑制し、肺動脈中膜肥厚抑制、肺動脈圧抑制、右心肥大抑制及び生存率の延長等で有効性が確認されている。
肺線維症は、国内においてペリフェリドンが承認されたのみで、その臨床効果は尚十分ではない。化合物１はブレオマイシン誘発肺線維症モデルを用いて、化合物１原薬での反復皮下投与（非特許文献１７）、反復経口投与（非特許文献１８）及び化合物１・ＭＳの間歇皮下投与により、肺重量、肺線維化、肺ハイドロキシプロリン含量及び生存率の延長等で有効性を認めている。
ＣＯＰＤはタバコ煙溶液誘発ＣＯＰＤモデルにて、化合物１・ＭＳの単回皮下投与により肺胞破壊抑制作用、呼吸機能改善効果等の有効性が確認されている（後記の薬理効果試験４に記載）。
また、喘息は、急性・慢性・難治性のＯＶＡ誘発喘息モデル（非特許文献１９、非特許文献２０）及びダニ誘発喘息モデル（非特許文献２１、非特許文献２２）にて気道過敏性、胚細胞過形成、粘膜下線維化及び気管支平滑筋細胞の増生等の抑制が確認されている。
また、これらの効果は、病態発現後の治療投与においても有効性を示し、リバース・リモデリング効果を認めた。また、これらの効果に対して、抗ＨＧＦ中和抗体又はＩＰ受容体拮抗剤（ＣＡＹ１０４４９）の投与により、その作用は減弱又は消失した。【００３２】
本発明者らのグループは、化合物１の徐放性製剤化（ＭＳ）の検討により、１週間〜６ヶ月に１回程度の皮下投与又は筋肉内投与により長期間点滴静注様の血中動態を示す製剤として、化合物１と生体分解性高分子である各種乳酸重合体（ＰＬＡ）、グリコール酸重合体（ＰＧＡ）及び乳酸／グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を用いて、マイクロスフェア製剤（化合物１−ＭＳ）をすでに見出している（特許文献１、特願２０１２−２０８７９９（未公開））。例えば、ＰＬＡ０００５、ＰＬＡ００１０、ＰＬＡ００２０、ＰＬＡ００５０、ＰＧＡ０００５、ＰＧＡ００１０、ＰＧＡ００２０、ＰＧＡ００５０、ＰＬＧＡ７５２０、ＰＬＧＡ７５５０、ＰＬＧＡ５０２０、又はＰＬＧＡ５０５０（５−５０）（和光純薬／三井化学）等がある。
なお、ＰＬＡ０００５とは乳酸重合体の重量平均分子量５，０００のものを、ＰＬＡ００１０とは乳酸重合体の重量平均分子量１０，０００のものを、ＰＬＡ００５０とは乳酸重合体の重量平均分子量５０，０００のものを表す。
同様に、ＰＧＡ０００５とはグリコール酸重合体の重量平均分子量５，０００のものを表し、ＰＧＡ００５０とは同重量平均分子量５０，０００のものを表す。また、ＰＬＧＡ７５２０とは、乳酸７５モル％、グリコール酸２５モル％の共重合体で、重量平均分子量２０，０００のものを表し、ＰＬＧＡ７５５０とは、乳酸７５モル％、グリコール酸２５モル％の共重合体で、重量平均分子量５０，０００のものを表す。
好ましくは、生体分解性高分子として、１，０００〜５０，０００の重量平均分子量を有するポリ乳酸（ＰＬＡ）、乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、またはポリグリコール酸（ＰＧＡ）を用いて作製したＭＳ製剤を１〜５種混合してもよい。例えば、ＰＬＡ００２０を用いて化合物１のＭＳ剤を作製した場合には、１６週間程度の徐放性ＭＳ製剤が作製される。【００３３】
一方、化合物１を含む各種医薬品化合物、酵素的に不安定なホルモンまたは体内再生因子等の蛋白製剤およびその活性部位を含むペプタイド製剤類は、上記生体分解性高分子だけでなく、ゼラチンハイドロゲル（特許文献３〜６等）、リポソームまたは脂質（特許文献７、非特許文献２３等）等を用いて、各種薬剤の徐放性マイクロスフェア（MS）製剤の作製が可能である。医薬品化合物としては、各種増殖因子等の蛋白質として、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂ-ＦＧＦ）およびその他のＦＧＦ、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）、アンギオポイエチンなどの増殖因子、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）等、ならびに、各種サイトカイン、ケモカイン、アドレナメジュリン、細胞外マトリックスなどが挙げられている。
例えば、前記特許文献３においては、ｂ−FGFのゼラチン徐放剤の作製は、１０ｗｔ％濃度の酸性ゼラチンをグルタルアルデヒドにより化学架橋した後、架橋剤を不活性化する。次に蒸留水にて数回洗浄し、架橋含水率９０．３％ゼラチンハイドロゲルを得る。続いて１００μｇのｂ-ＦＧＦを含む０．０５Ｍ濃度のリン酸緩衝液（ｐＨ  ７．４，  ＰＢＳ  ５００μｌ）を滴下し、ｂ-ＦＧＦ水溶液をゼラチンハイドロゲルへ浸み込ませることによってｂ-ＦＧＦ含浸ゼラチンハイドロゲルのMS製剤を得ることができる。本MS製剤は冠状動脈狭窄または閉塞を治療するための医薬組成物として記載されている。
得られるゼラチンハイドロゲル粒子の平均粒径は、上述の粒子作製時におけるゼラチン濃度、ゼラチン水溶液とオリーブ油との体積比、および撹拌スピードなどにより変化する。一般には粒径は１〜１０００μｍであり、目的に応じて適宜必要なサイズの粒子をふるい分けて使用すればよい。
本方法により、各種成長因子、サイトカイン、モノカイン、リンホカイン、その他の生理活性物質などの生体吸収性高分子ハイドロゲルを用いた徐放化製剤が作製される（非特許文献２４〜２６）。【００３４】
ゼラチンハイドロゲルとは、上記ゼラチンを用いて種々の化学的架橋剤とゼラチン分子間に化学架橋を形成させて得られるハイドロゲルのことである。化学的架橋剤としては、例えばグルタルアルデヒド、例えばＥＤＣ等の水溶性カルボジイミド、例えばプロピレンオキサイド、ジエポキシ化合物、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、チオール基、イミダゾール基などの間に化学結合を作る縮合剤を用いることができる。好ましいものは、グルタルアルデヒドである。また、ゼラチンは、熱処理又は紫外線照射によっても化学架橋することもできる。また、これらの架橋処理を組み合わせて用いることもできる。さらに、塩架橋、静電的相互作用、水素結合、疎水性相互作用などを利用した物理架橋によりハイドロゲルを作製することも可能である。【００３５】
例えば、ゼラチンハイドロゲルに固定化された状態では、ｂ-ＦＧＦはハイドロゲルからほとんど放出されないが、生体内でハイドロゲルが分解されるにつれて、ゼラチン分子が水可溶性となり、それに伴って、ゼラチン分子に固定化されているｂ-ＦＧＦが放出されるようになる。すなわち、ハイドロゲルの分解によって、ｂ-ＦＧＦの徐放性を制御することができる。ハイドロゲルの分解性は、ハイドロゲル作製時における架橋程度を調節することにより変えることができる。また、ｂ-ＦＧＦがゼラチンと相互作用することによって、これらの生体内での安定性、例えば酵素分解抵抗性などが向上する。【００３６】
リポソーム製剤とは、生体膜を構成しているリン脂質や糖脂質から構成される細胞様微粒子であり、水溶性や脂溶性の医薬品化合物を包含することにより、徐放性DDS製剤として使用されている。
使用されるリン脂質としては、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、 ホスファチジルイノシトール、カルジオリピン、卵黄レシチン、水素添加卵黄レシチン、 大豆レシチンまたは水素添化大豆レシチン等のグリセロリン脂質類；スフィンゴミエリン、セラミドホスホリルエタノールアミンまたはセラミドホスホリルグリセロール等のスフィンゴリン脂質類；およびプラスマローゲン類等が挙げられる。
また、糖脂質としては、例えばジガラクトシルジグリセリドまたはガラクトシルジグリセリド硫酸エステル等のグリセロ脂質類；およびガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドG7、ガングリオシドG6、又はガングリオシドG4等のスフィンゴ糖脂質類等が挙げられる。
徐放性製剤は、体内再生因子（例えば、HGF、ｂ−FGF、SDF-1、HMGB-1、LIF、HIF-1等）をコードする遺伝子を含むものであってもよい。
また、特許文献８及び非特許文献２７においては、水難溶性物質であるラパマイシンやシンバスタチンの徐放製剤の製造方法であって、疎水性基が付加されているゼラチン誘導体をもちいて徐放性製剤を作製することが可能であることが示されている。疎水性基が付加されているゼラチン誘導体とは、ゼラチン分子に疎水性基を共有結合させて誘導体化したゼラチンを表す。疎水性基としては、例えば、ポリ乳酸（PLA）、ポリグリコール酸（PGA）、ポリ−ε−カプロラクトンなどのポリエステル類、コレステロールやホスファチジルエタノールアミンなどの脂質、アルキル基、ベンゼン環を含む芳香族基、複素芳香族基など、およびこれらの混合物が挙げられる。【００３７】
特許文献９には、抗腫瘍性化学療法薬を主体とする肺疾患に対する生分解性粒子の吸入剤又は点滴静注剤が明記されている。
当該特許文献９には、数平均粒子径が２０μｍ（２００００ｎｍ）〜５０μｍ（５００００ｎｍ）のマイクロスフェア（ＭＳ）製剤についての記載はない。【００３８】
特許文献１０においては、ｂ−ＦＧＦ  及びＨＧＦタンパクをゼラチンハイドロゲルを用いて、徐放化を行い、徐放剤を経口又は非経口投与することにより、肺高血圧症に有効であることが記載されている。しかし、ゼラチンハイドロゲル粒子の平均粒子径は、１〜１０００μｍであり、特に粒子径に対して限定はされず、また、投与は腹腔内投与の実施例があるのみである。即ち、肺組織特異的（ＤＤＳ）な投与を目的としてものではなく、単なる生体内でのタンパクの徐放化を目的とした使用法である。
特許文献１１においては、同様に、ｂ−ＦＧＦ，ＨＧＦ等のゼラチンハイドロゲル徐放剤を用いて、経肺投与により肺気腫に有効であることが記載されている。当該製剤においてより好ましい粒子サイズは、約０．１μｍ〜２０μｍである旨が記載されており、粒子径（２０〜４０μｍ）の好適な具体例の記載は無い。また、当該製剤は経肺投与に使用されるものである。
また、非特許文献２８においては、ｂＦＧＦ徐放ゼラチンマイクロスフェアを肺動脈投与することにより、肺気腫に有効であることが述べられているが、粒子径に限定した記載ななく、また、動脈投与は熟練した医療従事者を必要とする。【００３９】
以上のように、従来、薬物徐放性ＭＳ剤（特に、数平均粒子径が２０〜４０μｍである薬物徐放性ＭＳ剤）を間歇的に静脈内投与することによる、選択的肺疾患治療剤に関する特許等の報告は存在しない。【００４０】
一方、本発明者らは、低分子化合物である化合物１等の乳酸・グリコール酸共重合体（PLGA）・マイクロスフェア（MS）剤を用いて、基礎的に疾患局所投与（ASO、心筋梗塞、拡張型心筋症、糖尿病性神経障害等）および点滴静注様の血中動態を示す皮下投与製剤（慢性腎臓病、脳梗塞慢性期、喘息、COPD、肺高血圧症、肺線維症等）にて、有効性を報告している（特許文献２および特許文献１）が、これらには静脈内投与にて肺特異的に薬剤を到達及び維持させる方法の記載はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００４１】
【特許文献１】国際公開２００８／０４７８６３号
【特許文献２】国際公開２００４／０３２９６５号
【特許文献３】特開２００４−１１５４１３号公報
【特許文献４】特許第４４５９５４３号公報
【特許文献５】特許第４６８５０９０号公報
【特許文献６】特開２００８−１３７９７５号号公報
【特許文献７】特開平７−４１４３２号公報
【特許文献８】特開２００８−１３７９７５号公報
【特許文献９】特表２０１１−５１６４４３号公報
【特許文献１０】特開２００４−９１４５０号公報
【特許文献１１】特開２００５−２０６４９１号公報
【非特許文献】
【００４２】
【非特許文献１】Am J Respir Crit Care Med 177, p.195-201, 2008年
【非特許文献２】Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 302: G420-G429, 2012年
【非特許文献３】細胞, 43(10), p.26-35, 2011年
【非特許文献４】細胞, 44(2), p.34-40, 2012年
【非特許文献５】Biochem.Biophys.Res.Comm, 122, p.145-1459, 1984年
【非特許文献６】Development, 125, p.1315-1324, 1998年
【非特許文献７】Am J Respir Crit Care Med, 162, p.707-715, 2000年
【非特許文献８】Cirulation, 110:p.2896-2902, 2004年
【非特許文献９】Am J Respir Cell Mol Biol, 26, p.525-533, 2002年
【非特許文献１０】Circulation 111, p.1407-1414, 2005年
【非特許文献１１】Am J Respir Cell Med Bio, 32, 268-280, 2005年
【非特許文献１２】Nature Medicine, 5, p.226-230, 1999年
【非特許文献１３】Am J Respir Crit Care Med, 156, p.1937-1944, 1997年
【非特許文献１４】Am J Respir Crit Care Med, 172,p.1575-1580, 2005年
【非特許文献１５】Circ J 77: 2127-2133、2013年
【非特許文献１６】Am J Respir Crit Care Med, 177,p.195-201, 2008年
【非特許文献１７】Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 290, p.L59-L65, 2006年
【非特許文献１８】European Respiratory Society (ERS2010), Barcelona 2010, Annual Congress spain
【非特許文献１９】Clinical & Experimental Allergy, 40, p.317-326, 2009年
【非特許文献２０】Am J Respir Cell Mol Biol., 47(2), p.170-177, 2012年
【非特許文献２１】第60回 日本アレルギー学会秋季学術大会, 2010年
【非特許文献２２】ATS・2011 international conference/American Thoracic Society/Colorado Denver
【非特許文献２３】Arch. Biochem. Biophys., 212, 196, 1981年
【非特許文献２４】Adv.Drug Derliv.Rev.,31,287-301, 1998年
【非特許文献２５】J.R.Soc.Interface,6 Suppl.3,S311-S324, 2009年
【非特許文献２６】J.Biomater.Sci.Polym.Edn.,12,77-88, 2001年
【非特許文献２７】Drug Deliv Syst, 23(3), p.394, 2008年
【非特許文献２８】日本胸部外科学会雑誌, Vol 51, p281, 2003年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４３】
前述のように、本発明者らのグループは、既に、低分子化合物のマイクロスフェア（ＭＳ）製剤を開発し、その皮下投与又は筋肉内投与での臨床応用についてすでに報告しているが、これに加えて、肺特異的疾患治療剤の開発が望まれている。従って、本発明は静脈投与可能な肺特異的疾患治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００４４】
本発明者らは、ＭＳ製剤を静脈内投与することにより、肺組織特異的に蓄積し、肺にて徐々に薬剤がリリースすることにより肺疾患特異的に効果を示すことを見出し、更なる研究の結果、肺疾患特異的治療剤の開発に成功した。【００４５】
本発明は、次の態様を含む。【００４６】
項１．
医薬化合物を含有する徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ
静脈内投与されることを特徴とする
肺特異的治療剤。
項２．
前記医薬化合物が、肺疾患治療薬である、項１に記載の肺特異的治療剤。
項３．
前記肺疾患治療薬が、ステロイド薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬、Ｍ３受容体拮抗薬、ＰＧＩ２アゴニスト、エラスターゼ阻害剤、β２アドレナリン受容体作動薬、体内再生因子、及び体内再生因子の誘導剤からなる群より選択される１種以上である、項２に記載の肺特異的治療剤。
項４．
前記肺疾患治療薬が、ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット、ツルブテロール、サルメテロール及びそれらの塩からなる群より選択される１種以上である、項２に記載の肺特異的治療剤。
項５．
前記肺疾患治療薬が、ｂ−ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＥＧＦ、ＳＤＦ−１、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、ＨＭＧＢ１、Ｇ−ＣＳＦ、および細胞外マトリックスからなる群より選択される１種以上の体内再生因子である、項３に記載の肺特異的治療剤。
項６．
前記肺疾患治療薬が、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、ＡＴ１受容体拮抗剤（ＡＲＢ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）作動薬及びホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤からなる群より選択される１種以上の体内再生因子の誘導剤である、項３に記載の肺特異的治療剤。
項７．
前記再生因子の誘導剤がＰＧＩ２アゴニストであり、当該ＰＧＩ２アゴニストが、一般式（Ｉ）
【化１】
2014069401.tif 000002
（式中、
【化２】
2014069401.tif 000003
は
【化３】
2014069401.tif 000004
を表わし、
Ｒ１は、水素原子又はＣ１〜４アルキル基を表わし、
Ｒ２は、（ｉ）水素原子、（ｉｉ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｉｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、（ｉｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環、（ｖ）ベンゼン環又はＣ４〜７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜４アルキル基、又は（ｖｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環で置換されているＣ１〜４アルキル基を表わし、
Ｒ３は、（ｉ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、（ｉｉｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環、（ｉｖ）ベンゼン環又はＣ４〜７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜４アルキル基、又は（ｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環で置換されているＣ１〜４アルキル基を表わし、
ｅは３〜５の整数を表わし、ｆは１〜３の整数を表わし、ｐは１〜４の整数を表わし、ｑは１又は２を表わし、ｒは１〜３の整数を表わす。ただし、
【化４】
2014069401.tif 000005
が前記（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）で示される基である場合には、−（ＣＨ２）ｐ−及び＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｓ−は、環上のａ又はｂの位置に結合するものとし、Ｒ２及びＲ３中の環は、１個から３個のＣ１〜４アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基又はトリハロメチル基で置換されていてもよいものとする。）
で示される化合物又はその塩である、項６に記載の肺特異的治療剤。
項８．
前記ＰＧＩ２アゴニストが、（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸である、項７に記載の肺特異的治療剤。
項９．
前記ＰＧＩ２アゴニストが、
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）、
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）、
ＰＧＩ２誘導体であるカルバサイクリン誘導体及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上である、項７に記載の肺特異的治療剤。
項１０．
前記徐放性マイクロスフェアが、ゼラチンハイドロゲル、リポソーム、脂質、ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、ポリジオキサン及びこれらの混合物からなる群より選択される生体分解性高分子を含有する、項１に記載の肺特異的治療剤。
項１１．
前記マイクロスフェアの数平均粒子径が２０〜４０μｍであり、最大粒子径が１００μｍ以下である、項１に記載の肺特異的治療剤。
項１２．
マイクロスフェアとしての１回投与量が６ｍｇ／ｋｇ以下である、項１に記載の肺特異的治療剤。
項１３．
ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット、ツルブテロール、サルメテロール及びその塩からなる群より選択される肺疾患治療薬；並びに
ゼラチンハイドロゲル、リポソーム、脂質、ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、ポリジオキサン、及びこれらの混合物からなる群より選択される１種以上の生体分解性高分子
を含有するマイクロスフェア徐放性製剤である、
項２に記載の肺特異的治療剤。
項１４．
前記生体分解性高分子の重量平均分子量が、１，０００〜５０，０００である、項２に記載の肺特異的治療剤。
項１５．
（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸、
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）、
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）、及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上の前記肺疾患治療薬；並びに
ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、及びこれらの混合物からなる群より選択される生体分解性高分子
を含有する徐放性マイクロスフェアを含有する、
項２に記載の肺特異的治療剤。
項１６．
ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット、ツルブテロール、サルメテロール；
（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸；
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）；
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）；
ＰＧＩ２誘導体であるカルバサイクリン誘導体及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上の肺疾患治療薬
を含有し、
数平均粒子径が２０〜４０μｍであり、最大粒子径が１００μｍ以下である徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ
徐放性マイクロスフェアとしての１回投与量が６ｍｇ／ｋｇ以下である、
項１に記載の肺特異的治療剤。
項１７．
前記肺疾患が、急性肺炎、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、喘息、難治性喘息、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性肺障害（ＡＬＩ）、呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス、慢性特発性肺血栓塞栓症、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性線維症、過敏性肺炎、肺癌、肥満低換気症候群、肺胞低換気症候群、及び肺臓移植慢性拒絶からなる群より選択される１種以上である、項２〜１６のいずれか１項に記載の肺特異的治療剤。
項１８．
前記肺疾患が、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、及び全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）からなる群より選択される１種以上である、項２〜１６のいずれか１項に記載の肺特異的治療剤。
項１９．
医薬化合物を肺へ選択的に移行させる方法であって、
当該医薬化合物を含有する徐放性マイクロスフェアを静脈内投与することを特徴とする方法。
【発明の効果】
【００４７】
本発明によれば、静脈投与可能であり、肺特異的な疾患治療剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】製剤例１のｉｎ  ｖｉｔｒｏリリース試験のグラフである。
【図２】製剤例３のｉｎ  ｖｉｔｒｏリリース試験のグラフである。
【図３】製剤例４のｉｎ  ｖｉｔｒｏリリース試験のグラフである。
【図４】製剤例１のラットｉｎ  ｖｉｖｏ皮下投与における血中動態試験のグラフである。
【図５】肺高血圧症モデルにおける製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ（陰性対照））の静脈内投与での生存率曲線のグラフである。
【図６】製剤例１（化合物１・ＭＳ）の静脈内投与での延命効果のグラフである。
【図７】肺動脈圧（右室圧）のグラフである。
【図８】右室圧／左室圧比のグラフである。
【図９】右心重量比のグラフである。
【図１０】化合物３および化合物７に対するＴＸＡ２合成酵素阻害剤；オザグレルの併用投与効果増強作用のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明の肺特異的治療剤は、
医薬化合物を含有する徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ
静脈内投与されることを特徴とする。
【００５０】
徐放性マイクロスフェア
本発明の肺特異的治療剤は、徐放性マイクロスフェアを含有する。
【００５１】
一般に、マイクロスフェア（又はマイクロカプセル）とは、高分子から形成されるシェルに医薬化合物が内包された小さな球状（粒子径が１〜９９９μｍ）の剤形を意味する。
【００５２】
本明細書中、肺特異的とは、肺に選択的に移行することを意味する。肺への選択的な移行は、本発明の肺特異的治療剤が肺において選択的にトラップされることに基づくと考えられるが、本発明はこのメカニズムに限定されるものではない。肺への選択的な移行は、例えば、本発明の肺特異的治療剤、又はこれに含有される医薬化合物の肺における濃度の測定により直接的に確認でき、又は本発明の形態を選択したことによる薬効の向上によっても間接的に確認できる。
【００５３】
医薬化合物
本発明において「医薬化合物」としては、様々な用途又は作用の医薬化合物を用いることができ、その例としては、例えば、肺疾患治療薬である、抗血栓剤、循環改善剤、平滑筋拡張剤、鎮痛剤若しくは抗炎症剤、局麻剤、代謝改善剤、エラスターゼ阻害剤、プロスタグランジン類、体内再生因子、及びその誘導剤等が挙げられる。本発明において用いられる「医薬化合物」には、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。
【００５４】
本発明において用いられる「医薬化合物」は、例えば、低分子化合物、タンパク質、若しくはポリペプチド又は糖タンパク質（例、細胞外マトリックス、細胞接着因子）、ポリヌクレオチド（例、センスヌクレオチド、アンチセンスヌクレオチド、デコイヌクレオチド）、ワクチン又は抗体等の様々な物質であることができる。
【００５５】
本発明において用いられる「医薬化合物」は、例えば、フリー体、塩、溶媒和物（例、水和物）、複合体等の様々な形態であることができる。
【００５６】
本発明において用いられる「医薬化合物」は、好ましくは肺への投与が望まれる化合物である。
本発明において用いられる「医薬化合物」は、好ましくは肺疾患治療薬である。
【００５７】
「肺疾患治療薬」は、例えば、ステロイド薬（例、ベクロメタゾン、フルチカゾン）、ロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ）（例、モンテルカスト）、Ｍ３受容体拮抗薬（例、チオトロピューム、イミダフェナシン）、ＰＧＩ２アゴニスト（例、ベラプロスト、カルバサイクリン）、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、エラスターゼ阻害剤（例、シレベスタット）、β２アドレナリン受容体作動薬（例、ツルブテロール、サルメテロール）、体内再生因子、及び体内再生因子の誘導剤からなる群より選択される１種以上であることができる。
肺疾患としては、例えば、急性肺炎、肺線維症、間質性肺炎（急性間質性肺炎、びまん性間質性肺炎、リンパ性間質性肺炎等）、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、喘息、難治性喘息、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性肺障害（ＡＬＩ）、呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス（肺、眼、心臓、及び皮膚サルコイドーシス等）、慢性特発性肺血栓塞栓症、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性線維症、過敏性肺炎、肥満低換気症候群、肺胞低換気症候群、肺癌、肺臓移植慢性拒絶等が挙げられる。本発明は、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、喘息、ＣＯＰＤ、及びＳＩＲＳ等から選択される１以上の疾患に好適に適用される。
当該「肺疾患治療薬」は、好ましくは、例えば、ステロイド剤、β２作動薬、ＬＴ拮抗薬、Ｍ３拮抗薬、プロスタグランジン類、エラスターゼ阻害剤、体内再生因子及びその産生誘導剤からなる群より選択される１種以上であることができる。
当該「肺疾患治療薬」は、好ましくは、例えば、ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット及びツルブテロール、サルメテロール及びそれらの塩からなる群より選択される１種以上であることができる。
【００５８】
「抗血栓剤」としては、例えば、ヘパリン製剤（例、ヘパリンナトリウム、ヘパリンカルシウム、ダルテパンナトリウム等）、経口抗凝固薬（例、ワーファリンカリウム等）、抗トロンビン薬（例、メシル酸ガベキサート、メシル酸ナファモスタット、アルガトロバン等）、抗血小板凝集抑制薬（例、アスピリン、ジピリダモール、塩酸チクロピジン、ベラプロストナトリウム、シロスタゾール、オザグレルナトリウム、オザグレル塩酸塩、塩酸サルポグレラート、イコサペント酸エチル等）、血栓溶解薬（例、ウロキナーゼ、チソキナーゼ、アルテプラーゼ、ナテプラーゼ、モンテプラーゼ、パミテプラーゼ等）、ファクターＸａ阻害薬、ファクターＶＩＩａ阻害薬等が挙げられる。
【００５９】
「循環改善剤」としては、例えば、酒石酸イフェンプロジル、アニラセタム、塩酸ドネペジル、塩酸アマンタジン、ニセルゴジン、イブジラスト、パパベリン系、ニコチン系、カルシューム拮抗剤（例、ニフェジピン、アムロジピン、ジルチアゼパム、アゼルニジピン等）、β受容体作動薬（エフェドリン、サルブタモール、プロカテロール、サルメテロール、マブテロール等）、α受容体抑制薬（例、ウラジピル、テラゾシン、ドキサゾシン、ブナゾシン、プラゾシン等）、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬；ＡＲＢ（例、ロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタン等）、ＰＤＥ阻害剤（例、テオフィリン、ミルリノン、タダラフィル、ジピリダモール、シルデナフィル等）等が挙げられる。
【００６０】
「鎮痛剤若しくは抗炎症剤」としては、例えばアスピリン、インドメタシン、ジクロフェナク、メロキシカム、セレコキシブ等の非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コデイン、モルヒネ等のオピオイド鎮痛薬、ペンタゾシン、塩酸ブプレノルフィン、臭化水素酸エプタゾシン等が挙げられる。
【００６１】
「局麻剤」としては、例えば、ステロイド剤、プロカイン、塩酸コカイン、塩酸リドカイン、塩酸ロピバカイン等が挙げられる。
【００６２】
「代謝改善剤」としては、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（例えば、アトロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン等）等の高脂血症剤；及びＰＰＡＲγ作動薬（例、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン等のチアゾリジン誘導体、アディポネクチン、レプチン等）、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（例、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン等）、ＧＬＰ−１作動薬等の糖尿病薬が挙げられる。
【００６３】
「エラスターゼ阻害剤」としては、シレベスタット等が挙げられる。
「プロスタグランジン類」としては、例えば、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２、ＰＧＩ２又はそれらの誘導体、リポＰＧＥ１、６−オキシ−ＰＧＥ１、６−オキシ−ＰＧＥ１誘導体、オルノプロスト、リマプロスト、エンプロスチル、ミソプロストール等が挙げられる。
【００６４】
「体内再生因子」は、例えば、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、各種の線維芽細胞増殖因子（ａ／ｂ−ＦＧＦ）、形質転換増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、アンジオポエチン、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ストローマ細胞由来因子（ＳＤＦ−１）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、軟骨細胞成長因子（ＧＤＦ）、白血球増殖抑制因子（ＬＩＦ）、ＨＭＧＢ１、及びＫＬＦ（クルッペル様転写因子）等、又はそのファミリーの増殖因子等が挙げられる。
また、「体内再生因子」には、細胞外マトリックス（例、フィブロネクチン類、ラミニン類、プロテオグリカン類等）及び細胞接着因子（例、カドヘリン類、インテグリン類等）等も包含される。
「体内再生因子」は、好ましくは、例えば、ｂ−ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＥＧＦ、ＳＤＦ−１、ＨＭＧＢ１、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、Ｇ−ＣＳＦ、および細胞外マトリックスからなる群より選択される１種以上であることができる。
【００６５】
「体内再生因子の誘導剤」は、体内再生因子の産生を誘導する剤であり、その例としては、例えば、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、コレラ毒素（Ｃｈｏｌｅｒａ  ｔｏｘｉｎ）、８−ブロモ−ｃＡＭＰ、ジブチリル−ｃＡＭＰ、ホルスコリン（Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）、ＡＴ１受容体拮抗剤（ＡＲＢ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）作動薬、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、ＩＬ−１、ＴＮＦ−α及びＩＮＦ等がある。
また、本発明の肺疾患治療剤の医薬品化合物として、および、予防および／または治療効果を補完および／または増強する他の併用剤には、上記したメカニズムに基づいて、現在までに見出されているものだけでなく、今後見出されるものも含まれる。
【００６６】
「体内再生因子の誘導剤」は、好ましくは、例えば、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、ＡＴ１受容体拮抗剤（アンジオテンシンＩＩタイプ1拮抗剤；ＡＲＢ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）作動薬、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤からなる群より選択される１種以上であることができ、より好ましくは、例えば、ＰＧＩ２アゴニスト、ＥＰ２アゴニスト及びＥＰ４アゴニストから選択される１種以上であることができ、更に好ましくは、例えば、ＰＧＩ２アゴニストであることができる。
【００６７】
本発明で用いられるＰＧＩ２アゴニストには、例えば、ＰＧＥ１及びＰＧＩ２、それらの誘導体（例、６−オキシーＰＧＥ１、オルノプロスト、リマプロスト、エンプロスチル、ミソプロストール等）、そのプロドラッグ、それらの持続性製剤（徐放性製剤）（例、リポＰＧＥ１等）が包含される。また、ＥＰ２およびＥＰ４アゴニストとしては、各種ＰＧＥ誘導体、そのプロドラッグ、それらの持続性製剤（徐放性製剤）が包含される。
本明細書中、ＥＰ２アゴニストとしては、現在までに知られているＥＰ２アゴニストや今後見出されるＥＰ２アゴニストをすべて包含する。好ましいＥＰ２アゴニストとしては、欧州特許公開第0860430号、米国特許第6110969号、WO99/33794号、欧州特許公開第974580号、WO95/19964号、WO98/28264号、WO99/19300号、欧州特許公開第0911321号、WO98/58911号、米国特許第5698598号、米国特許第6376533号、米国特許第4132738号、または米国特許第3965143号明細書に記載の化合物が挙げられ、特に好ましいＥＰ２アゴニストは、（５Ｚ，９β，１１α，１３Ｅ）−１７，１７−プロパノ−１１，１６−ジヒドロキシ−９−クロロ−２０−ノルプロスタ−５，１３−ジエン酸およびその塩である。
本明細書中、ＥＰ４アゴニストとしては、現在までに知られているＥＰ４アゴニストや今後見出されるＥＰ４アゴニストをすべて包含する。好ましいＥＰ４アゴニストとしては、WO00/03980号、WO99/02164号、WO00/16760号、WO00/18744号、WO00/21542号、WO00/38663号、WO00/38690号、WO00/38667号、WO00/40248号、WO00/54808号、WO00/54809号、WO01/10426号、欧州特許出願公開第1110949号、欧州特許出願公開第1121939号、欧州特許出願公開第1132086号、WO200172268号、特開2002-104939号、WO02/42268号、特開2002-179595号、WO02/47669号、WO02/64564号、WO03/035064号、WO03/053923号、または米国特許第6552067号明細書に記載の化合物が挙げられ、特に好ましいＥＰ４アゴニストは、（１１α，１３Ｅ，１５α）−９−オキソ−１１，１５−ジヒドロキシ−１６−（３−メトキシメチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノル−５−チアプロスト−１３−エン酸およびそのエステルである。
【００６８】
また、体内再生因子がタンパク質である場合、体内再生因子の誘導剤は、当該タンパク質をコードする遺伝子であってもよい。
【００６９】
本明細書中、ＰＧＩ２アゴニスト（ＩＰ受容体作動薬）としては、現在までに知られているＰＧＩ２アゴニストや今後見出されるＰＧＩ２アゴニストをすべて包含する。
【００７０】
例えば、ＰＧＩ２アゴニストとして、一般式（Ｉ）で示される化合物又はその塩が好ましい。
【００７１】
一般式（Ｉ）：
【化５】
2014069401.tif 000006
【００７２】
一般式（Ｉ）中、
【化６】
2014069401.tif 000007
は、好ましくは、
【化７】
2014069401.tif 000008
であり、より好ましくは、
【化８】
2014069401.tif 000009
である。
【００７３】
一般式（Ｉ）中、Ｒ２は、好ましくは、
（ｉｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、
（ｉｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環、
（ｖ）ベンゼン環又はＣ４〜７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜４アルキル基、又は
（ｖｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環で置換されているＣ１〜４アルキル基であり、
より好ましくは、
（ｉｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、又は
（ｉｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環
である。
【００７４】
一般式（Ｉ）中、Ｒ３は、好ましくは、
（ｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、
（ｉｉｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環、
（ｉｖ）ベンゼン環又はＣ４〜７シクロアルキル基で置換されているＣ１〜４アルキル基、又は
（ｖ）窒素原子１個を含む４〜７員単環で置換されているＣ１〜４アルキル基であり、
より好ましくは、
（ｉｉ）フェニル基又はＣ４〜７シクロアルキル基、又は
（ｉｉｉ）窒素原子１個を含む４〜７員単環である。
【００７５】
一般式（Ｉ）で示される化合物又はその塩は、より好ましくは、オキシム誘導体である、次の化合物である。
化合物１：（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸
【化９】
2014069401.tif 000010
化合物２：（Ｚ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸
【化１０】
2014069401.tif 000011
【００７６】
また、他のＰＧＩ２アゴニストとしては、例えば、
ベラプロストナトリウム（化合物３）：（（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸ナトリウム塩）、
ＯＰ−２５０７（化合物４）：（５−｛（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−５−ヒドロキシ−４−［（１Ｅ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−（シス−４−プロピルシクロヘキシル）プロプ−１−エニル］−３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール−２−イル｝ペンタン酸メチルエステル）、
ＭＲＥ−２６９（化合物５）：２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸、
化合物５の誘導体である、化合物６（ＮＳ−３０４）：２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）―Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝−Ｎ−（メチルスルフォニル）アセトアミド、
ＰＧＥ１誘導体である、オルノプロスト（化合物７）：（１７Ｓ，２０−ジメチル−６−オキソ−プロスタグランジンＥ１メチルエステル）、および
ＰＧＥ１誘導体である、リマプロスト：（（Ｅ）−７−｛（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−［（３Ｓ，５Ｓ）−Ｅ−３ヒドロキシ−５−メチル−１−ノネニル］−５−オキソシクロペンチル｝−２−ヘプトン酸）、並びに
ＰＧＩ２誘導体である、カルバサイクリン誘導体等が挙げられる。
【００７７】
一般式（Ｉ）で示される化合物又はその塩のなかでも、ＭＳ剤の作製には、化学的に安定な化合物１、３又は化合物５が好ましい。
【００７８】
今回新たに、線維芽細胞に化合物１を添加することにより、ＨＭＧＢ１（high mobility group B１）を産生促進することを見出した（後記の薬理試験６に記載）。これらのサイトカイン産生促進作用から、化合物１は、新たに線維芽細胞等から骨髄細胞動員因子（ＨＭＧＢ１等）を産生し、血中に放出されることにより骨髄から骨髄間葉系幹細胞（MSC）及び血管内皮細胞前駆細胞（EPC）等が血中に供給され、供給されたMSCは骨髄細胞集積因子（ＳＤＦ−１等）により損傷部位に集積する。集積されたMSCは各組織に必要な細胞群を分化増殖させるエフェクター因子（ＨＧＦ、ＶＥＧＦ等）により血管・組織再生効果を示すことが示唆された。  例えば、化合物１の抗心不全作用は、ＳＤＦ−１受容体（CXCR4）拮抗剤（PLoS ONE 8(7): e69302、2013）や、抗ＨＧＦ中和抗体（Biomedicine & Aging Pathology 1： 90-96、2011）、抗ＶＥＧＦ中和抗体（Clinical Science 112； 607-616、2007）等により減弱することが確認されている。
【００７９】
また、新たに化合物１は、TXA2合成酵素阻害作用を併せ持つため、内因性ＰＧＩ２およびＰＧＥ２の産生を促進させることが確認された（後記の薬理試験６に記載）。
【００８０】
よって、化合物１はＴＸＡ２合成酵素阻害作用を併せ持つことにより、ＩＰ受容体作動薬のみならず、ＰＧＥ２作用（ＥＰ２およびＥＰ４受容体作動薬）をも有することが確認された。今回、新たに化合物１の薬理作用としてＨＭＧＢ１および内因性ＰＧＥ２等の産生促進作用が見出されたことにより、新たな対象疾患への効果が期待できることが明らかとなった。
【００８１】
新たな疾患には、例えば、日本国において厚生労働省が実施する難治性疾患克服研究事業の臨床調査研究分野の対象に指定された特定疾患（２０１２年には１３０余の疾患）が含まれる。
当該特定疾患のなかでも、例えば、ベーチェット病、脊髄性筋萎縮症、多発性硬化症、球脊髄性筋萎縮症、重症筋無力症、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、全身性エリテマトーデス、肥大型心筋症、スモン、拘束型心筋症、再生不良性貧血、ミトコンドリア病、リンパ脈管筋腫症(LAM)、重症多形滲出性紅斑（急性期）、強皮症／皮膚筋炎、多発性筋炎、黄色靭帯骨化症、特発性血小板減少性紫斑病、間脳下垂体機能障害、結節性動脈周囲炎、PRL分泌異常症、結節性多発動脈炎、ゴナドトロピン分泌異常症、顕微鏡的多発血管炎、ADH分泌異常症、潰瘍性大腸炎、大動脈炎症候群、クッシング病、ビュルガー病（バージャー病）、先端巨大症、天疱瘡、下垂体機能低下症、脊髄小脳変性症、クローン病。劇症肝炎、悪性関節リウマチ、パーキンソン病およびその関連疾患、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、アミロイドーシス、後縦靱帯骨化症、ハンチントン病、モヤモヤ病(ウィリス動脈輪閉塞症)、特発性拡張型（うっ血型）心筋症、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、オリーブ橋小脳萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、表皮水疱症(接合部型及び栄養障害型)、膿疱性乾癬、 広範脊柱管狭窄症、原発性胆汁性肝硬変、重症急性膵炎、特発性大腿骨頭壊死症、混合性結合組織病、原発性免疫不全症候群、特発性間質性肺炎、網膜色素変性症、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、肺動脈性肺高血圧症、神経線維腫症Ｉ型／神経線維腫症II型、亜急性硬化性全脳炎、バット・キアリ（Budd-Chiari）症候群、慢性血栓塞栓性肺高血圧症、ライソゾーム病、ファブリー病、および副腎白質ジストロフィー等に効果が期待できる。
【００８２】
ＰＧＩ２アゴニスト（ＩＰアゴニスト）として本発明で使用される前記一般式（Ｉ）で示されるオキシム（ＯＸ）誘導体である化合物１又はその非毒性塩は、血小板凝集抑制、血小板粘着抑制、血管拡張、胃酸分泌抑制作用を有していることから、血栓症、動脈硬化、虚血性心疾患、胃潰瘍、高血圧等の予防及び／又は治療に有用である旨が、米国特許第５４８０９９８号明細書に開示されている。
【００８３】
また、体内再生因子の産生誘導に基づく、血管新生作用、各種幹細胞の分化誘導作用、抗アポトーシス作用、抗線維化作用等による各種細胞又は臓器障害に関する記載は、国際公開２００４／０３２９６５及び国際公開２００８／０４７８６３明細書に開示されている。
【００８４】
［一般式（Ｉ）で示される化合物の製造方法］
本発明で用いるＰＧＩ２アゴニストのうち、例えば、一般式（Ｉ）で示される化合物の製造方法は、米国特許第５４８０９９８号明細書に開示されている。
【００８５】
例えば、（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸（化合物１）は、米国特許第５４８０９９８号明細書の実施例２（ｇ）に記載されている。
ベラプロストナトリウム：（（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸ナトリウム塩）（ベラプロストナトリウム；化合物３）の製造方法は、国際公開第１９９６／０２６７２１号明細書に開示されている。
【００８６】
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269；化合物５）及びその誘導体である（化合物６）の製造方法は、国際公開０２／０８８０８４号明細書に開示されている。
【００８７】
本発明においては、化合物１を包含する、各種体内再生因子誘導剤、体内再生因子蛋白、その活性部位を含むペプチド類、その遺伝子、および各種医薬品化合物の１種を単独で用いてもよいし、これらの２種以上を組み合わせて用いてもよい。また、これらは、後記生体分解性高分子である各種乳酸・グリコール酸共重合体、乳酸重合体、ゼラチンハイドロゲル、およびリポソームであるマイクロスフェアー製剤であってもよく、これらを１種単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００８８】
高分子
本発明に用いられる徐放性マイクロスフェアは、シェルを形成する高分子として、好ましくは生体分解性高分子を含有する。これにより、本発明に用いられる徐放性マイクロスフェアは、医薬化合物を徐放する性質を備えることができる。
生体分解性高分子からの徐放の速度の制御機構には、分解制御型、拡散制御型及び膜透過制御型等がある。
生体分解性高分子は、天然高分子、又は合成高分子であることができる。
【００８９】
生体分解性高分子としては、例えば、脂肪酸エステル重合体又はその共重合体、ポリアクリル酸エステル類、ポリヒドロキシ酪酸類、ポリアルキレンオキサレート類、ポリオルソエステル、ポリカーボネート及びポリアミノ酸類等の天然高分子、又は合成高分子が挙げられる。
脂肪酸エステル重合体又はその共重合体としては、例えば、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリジオキサン（ＰＤＳ）、ポリクエン酸、ポリリンゴ酸、ポリエチレンサクシネート、ポリブチレンサクシネート、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリブチレンテレフタレート・アジペート、ゼラチン、ゼラチンハイドロゲル、コラーゲン、アテロコラーゲン、フィブリン、ヒアルロン酸又は乳酸／グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリα−シアノアクリル酸エステル、ポリβ−ヒドロキシ酪酸、ポリトリメチレンオキサート、ポリオルソエステル、ポリオルソカーボネート、ポリエチレンカーボネート、ポリγ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸、ポリビニルアルコール、ポリエステルカーボネート、ポリ酸無水物、ポリシアノアクリレート、ポリホスファゼン、リポソーム、及びポリＬ−アラニンが挙げられる。
乳酸−グリコール酸共重合物としては、乳酸及びグリコール酸の組成比が約１００／０〜約５０／５０（Ｗ／Ｗ）であるものが好ましい。
生体分解性高分子は、１種を単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
生体分解性高分子は、好ましくは、ゼラチンハイドロゲル、リポソーム、脂質、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、乳酸／グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリグルコール酸又は乳酸／グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、及びポリジオキサンから選択される１種以上であり、より好ましくは、ゼラチンハイドロゲル、ポリ乳酸、及びポリグルコール酸又は乳酸／グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）から選択される１種以上であり、更に好ましくは、ゼラチンハイドロゲル、及びポリ乳酸及び乳酸／グリコール酸共重合体から選択される１種以上である。
前記徐放性マイクロスフェア製剤は、好適な徐放性の観点から、好ましくは、ゼラチンハイドロゲル、リポソーム、脂質、ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、ポリグリコール酸、ポリジオキサン又はこれらの混合物から選択される生体分解性高分子を含有する。
【００９０】
本発明に使用される生体分解性高分子の重量平均分子量は、生体分解性高分子の種類等によって異なるが、好ましくは、１，０００〜５０，０００である。
より具体的には、乳酸／グリコール酸共重合体の場合、その平均分子量は約１，０００〜約８００，０００が好ましく、約１，０００〜約１００，０００がより好ましい。
また、ポリ乳酸の場合、その重量平均分子量は約１，０００〜約１００，０００が好ましく、より好ましくは約１，０００〜約５０，０００である。
乳酸−グリコール酸共重合物の場合、その重量平均分子量は、約１，０００〜約１００，０００が好ましく、約１，０００〜５０，０００がより好ましい。
【００９１】
本明細書中、重量平均分子量は、ゲルパーミェーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定したポリスチレン換算の分子量をいう。
【００９２】
これらの、生体分解性高分子は、自体公知の製造方法に従って合成できる。
【００９３】
本発明に用いられる徐放性マイクロスフェアは、初期バースト等を抑制するために、キトサン、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、トコフェロール（ビタミンＥ）又はアミノ酸類（例えばアルギン酸等）等を含有してもよい。
【００９４】
赤血球は直径７〜８μｍ、厚さは２μｍ程度であるので、ＭＳ剤の数平均粒子径がこれとほぼ同程度以下の約１０μｍ以下である場合は、ＭＳ剤の効率的に長期間、肺にトラップされることはないと考えられる。よって、本発明のＭＳ剤が肺に高率でトラップされるためには、その数平均粒子径は、好ましくは１０μｍ以上、より好ましくは、２０μｍ以上である。
また、Weibelの計算によれば，ヒト正常肺には３００〜５００μｍ径の小動脈が１０万〜２０万個あり、その各々が５０〜３００μｍ径の微小動脈を１００個、１０〜５０μｍ径の細動脈を２０００個、１０μｍ径以下の毛細血管を２０万個含むと言われている（核医学 16：927-931，1979）。
よって、肺塞栓を高率に起こさないためには、本発明のＭＳ剤の最大粒子径が３００μｍ未満であること（言い換えると、本発明のＭＳ剤が、粒子径３００μｍ以上の粒子を含有しないこと）が好ましい。本発明のＭＳ剤の最大粒子径は、より好ましくは１００μｍ以下、更に好ましくは５０μｍ以下である。
本発明の好適な態様において、徐放性マイクロスフェアの数平均粒子径は、１０〜５０μｍの範囲内、より好ましくは２０〜４０μｍの範囲内であり、且つ、その最大粒子径は、１００μｍ以下である。
徐放性マイクロスフェアがこのような粒子径を有することにより、本発明の肺特異的治療剤は、肺において選択的にトラップされ、肺特異的であることができる。
本発明に用いられる徐放性マイクロスフェアの数平均粒子径及び最大粒子径は、篩過により所望する数平均粒子径及び最大粒子径の徐放性マイクロスフェアの選択する方法等の公知の方法によって調整できる。
例えば、徐放性マイクロスフェアの粒子径は、製造時における被験物質の濃度、および撹拌速度等により調節することができる。
【００９５】
前記した生体分解性高分子の量は、本発明の目的が達成される限り、有効成分の薬理活性の強さ、及び目的とする薬物放出速度等に応じて変えることができ、例えば当該生理活性物質に対して約０．２〜１０，０００倍（質量比）の量で用いられ、好ましくは約１〜１，０００倍（質量比）、さらに好ましくは約１〜１００倍（質量比）の量で用いられる。
【００９６】
本発明で用いられる徐放性マイクロスフェアは、例えば水中乾燥法（例えば、ｏ／ｗ法、ｗ／ｏ法、ｗ／ｏ／ｗ法等）、相分離法、噴霧乾燥法、超臨界流体による造粒法などの公知の方法によって製造できる。
例えば、前記したＰＧＩ２アゴニストを含有する徐放性マイクロスフィアーの製造方法は、国際公開第２００４／０３２９６５号、特許第４４９７３２０号及び国際公開第２００８／０４７８６３号に開示されている。
本発明で用いられる徐放性マイクロスフェアは、かかる製造方法又はこれに準じる方法によって製造できる。
【００９７】
本発明で用いられる徐放性マイクロスフェアの毒性は非常に低いものであり、医薬として使用するために十分安全である。
【００９８】
本発明の肺特異的治療剤は、当該徐放性マイクロスフェアを含有し、親油性の場合は、好ましくはｏ／ｗエマルジョンであり、親水性の場合は、好ましくはｗ／ｏエマルジョン、又はｗ／ｏ／ｗエマルジョンである。
【００９９】
本発明の肺特異的治療剤は、例えば、前記徐放性マイクロスフェアを、水性の分散媒に分散することにより製造される。
水性分散媒としては、例えば、蒸留水に、等張化剤（例、塩化ナトリウム、ブドウ糖、、マンニトール、ソルビトール、グリセリンなど）、分散剤（例、Tween 80、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム）、保存剤（例、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、フェノール）、及び無痛化剤（例、ブドウ糖、グルコン酸カルシウム、塩酸プロカイン）等から選択される１種以上の添加剤を溶解させて得られる溶液が挙げられる。
【０１００】
本発明の肺特異的治療剤は静注投与によって投与される。投与回数は、単回又は複数回であることができ、投与期間は、例えば、１週間〜６ヶ月、好ましくは１週間〜４週間であることができる。投与頻度は、例えば、週１回〜月１回程度であることができる。複数回の反復投与の場合は、初回投与の徐放期間終了後に静注投与を行う。
本発明の肺特異的治療剤は、肺にて選択的にトラップされ、医薬化合物が肺組織中に徐々に放出され、治療効果を発揮する。
従って、静注投与は、有効性及び安全性を確認しながら、間歇的（例えば、１週間間隔）に複数回行ってもよい。
また、前述のような週１回〜月１回程度の患者の負担が小さい頻度の投与でも、治療効果を持続させられるので、投与コンプライアンスの向上が可能である。
【０１０１】
医薬品化合物として、化合物１、３又は化合物５の代りに、例えば、ステロイド薬（ベクロメタゾン  ４００μｇ／日、吸入；フルチカゾン  ２００μｇ／日、吸入）、ロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ）（モンテルカスト  １０ｍｇ／日、経口）、Ｍ３受容体遮断薬（チオトロピューム  ５μｇ／日、吸入；イミダフェナシン  ２００μｇ／日、経口）、ＰＧＩ２誘導体（ベラプロスト  １８０μｇ／日、経口）及びβ２アドレナリン受容体刺激薬（ツルブテロール  ２ｍｇ／日、貼付；サルメテロール  １００μｇ／日、吸入）も同様に乳酸／グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ゼラチンハイドロゲル及び／又はリポソーム等とのマイクロスフェア（ＭＳ）製剤を作製することが出来る。各括弧内には、臨床で使用されている代表的な治療薬と投与量例及びその投与法を記載した。
【０１０２】
これらの医薬品化合物の吸入剤では、臨床投与量は有効成分として５〜４００μｇ／日であり、１日数回投与される。よって、例えば、この有効成分としての最大投与量である４００μｇの４週間での総投与量は１１．２ｍｇとなり、有効成分を１０％含有する徐放性マイクロスフェアでは、マイクロスフェアとしての総投与量は１１２ｍｇとなる。当該徐放性マイクロスフェアとしての投与量は、実施例（薬理効果試験１）に示した無影響量である、５．８ｍｇ／ｋｇ（３４８ｍｇ／ヒト）以下であり、この値は、粒子径が２０〜４０μｍである徐放性マイクロスフェアの静脈内投与においても微小肺塞栓を発症しない安全な投与量と言える。
すなわち、本発明の肺特異的治療剤では、４週間分の投与量の医薬品化合物を単回で静脈内投与しても、微小肺塞栓を発症せずに安全な投与できる。
【０１０３】
更に、静脈内投与される本発明の肺特異的治療剤は、経口剤又は貼付剤のような全身投与製剤に対して、好ましくは１０倍以上の肺組織選択性が得られる。
この場合、有効成分としての投与量が１０ｍｇ／日（４週間の総投与量は２８０ｍｇ）という比較的大量の投与が必要な医薬化合物の場合について試算すると、例えば、本発明の肺特異的治療剤の徐放性マイクロスフェア（ここでは、従来製剤の１０倍の肺選択性を有し、有効成分を１０％含有すると想定する）を含有する本発明の肺特異的治療剤の徐放性マイクロスフェアとしての投与量は２８０ｍｇ／ヒトである。この値もまた、前述の実施例（薬理効果１）に示した無影響量である３４８ｍｇ／ヒト以下である。従って、この場合においても、本発明の肺特異的治療剤では、従来の製剤での４週間分の投与量の医薬品化合物を単回で静脈内投与しても、微小肺塞栓を発症せずに安全な投与できる。
【０１０４】
本発明者らは、正常動物に比し、モノクロタリン誘発ラット肺高血圧症モデルにおいて、ＴＸＡ２（代謝物である１１−デヒドローＴＸＢ２濃度にて測定した）の血中濃度が上昇し、病態悪化の原因であることを見出した。また、ＰＧＩ２（エポプロステロール）の投与において、さらに血中のＴＸＡ２濃度が上昇することを見出している。また、本モデルにＰＧＩ２アゴニスト作用とＴＸＡ２合成酵素阻害作用を有する化合物１を反復投与することにより、血中ＴＸＡ２濃度の上昇は抑制されたことから、化合物１は反復投与においても効果の減弱（耐性）がないことが示唆され、生存率、肺動脈圧、右室肥大、および肺動脈中膜肥厚等において有効性が確認された（Am J Respir Crit Care Med  172,1575-1580(2005)）。
血小板凝集抑制作用や血管拡張作用を有するＰＧＩ２アゴニスト（例えば、ＰＧＩ２や化合物３）の反復投与にて、生体内バランスを保持するために、生体は血小板凝集作用や血管収縮作用を有するＴＸＡ２産生が増加することにより、ＰＧＩ２アゴニスト作用が減弱（耐性）する。
今回、ＰＧＩ２アゴニストの反復投与に対して、ＴＸＡ２合成酵素阻害剤（例えば、オザグレルまたはその塩）の併用投与は、ＴＸＡ２産生を抑制するために、ＴＸＡ２産生によるＰＧＩ２アゴニスト作用の減弱（耐性）を抑制し、効果が持続するために、配合剤として有用であることを見出した。
薬理効果試験５に、肺高血圧症モデルにおける化合物３、化合物７およびオザグレル塩酸塩の各々の単独効果と、併用効果、および化合物１との効果比較を示した。
即ち、本発明者らは、エポプロステロール、ＰＧＥ１（アルプロスタジル）、またはカルバサイクリン誘導体の様な、ＰＧＩ２アゴニストの注射剤に対しては、ＴＸＡ２合成酵素阻害剤の注射剤であるオザグレルナトリウム（商品：カタクロット）やＴＸＡ２受容体拮抗剤の併用投与または配合剤が有用であることを新しく見出した。また、同様に、ＰＧＩ２アゴニストの経口剤であるベラプロストナトリウム（化合物３）やＰＧＥ誘導体（オルノプロスト（化合物７）、リマプロスト、エンプロスチル、ミソプロストール等）に対しては、ＴＸＡ２合成酵素阻害剤の経口剤であるオザグレル塩酸塩（ベガ）やＴＸＡ２受容体拮抗剤の併用投与または配合剤が有用であることを新しく見出した。
本発明の肺疾患特異的治療剤の投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人一人当たり、活性体として、一回につき、１ｎｇから１０００ｍｇの範囲で、１週に一回、４週に一回、３ヶ月に一回、又は６カ月に一回から数回程度静脈内投与される。
【０１０５】
もちろん前記したように、投与量は種々の条件により変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、また範囲を越えて投与の必要な場合もある。
【０１０６】
本発明の肺特異的治療剤の１回の投与量は、有効成分である医薬化合物の種類及び含有量、並びに対象疾患等によって異なるが、通常、１０ｍｇ／ｋｇ−体重以下（６００ｍｇ／ヒト以下）であり、微小肺塞栓を高度に防止する観点から好ましくは、６ｍｇ／ｋｇ−体重以下（又は、３６０ｍｇ／ヒト以下）である。
【０１０７】
本発明の徐放性製剤の静注療法の適応は、例えば、急性肺炎、肺線維症、間質性肺炎、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、喘息、難治性喘息、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性肺障害（ＡＬＩ）、呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、サルコイドーシス、慢性特発性肺血栓塞栓症、びまん性汎細気管支炎、過敏性肺炎、肺癌、肥満低換気症候群、肺胞低換気症候群、肺臓移植慢性拒絶等の肺疾患に関する。
【０１０８】
本発明の肺特異的治療剤は、治療効果の補完又は増強、動態又は吸収改善、投与量の低減、或いは副作用の軽減等の目的で、他の薬剤又は治療方法と組み合わせて、用いてもよい。このような他の薬剤又は治療方法には、現在までに見出されているものだけでなく今後見出されるものも含まれる。
【０１０９】
本発明の肺疾患特異的治療剤は、１つの製剤中に複数の成分、又は各々の徐放性製剤を配合した配合剤の形態で投与してもよく、また別々の製剤にして投与する形態をとってもよい。この別々の製剤にして投与する場合には、同時投与及び時間差による投与が含まれる。また、時間差による投与は、本発明の薬剤を先に投与し、他の薬剤を後に投与してもよいし、他の薬剤を先に投与し、本発明の薬剤を後に投与してもかまわず、それぞれの投与方法は同じでも異なっていてもよい。
【０１１０】
その他の別々に投与する薬剤は、低分子化合物であってもよく、また高分子のタンパク、ポリペプチド、ポリヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡ、遺伝子）、アンチセンス、デコイ、抗体であるか、又はワクチン、組織から分離された幹細胞、ｉＰＳ細胞や体細胞等であってもよい。また、他の薬剤として、化合物１、化合物３又は化合物５の反復経口剤、又は、これらの化合物の徐放性製剤の間歇皮下投与又は筋肉内投与でもよい。他の薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明の薬剤の配合比は、投与対象の年齢及び体重、投与方法、投与時間、対象疾患、症状、組み合わせなどにより適宜選択することができる。例えば、本発明に併用される薬剤１質量部に対し、他の薬剤を０．０１乃至１００質量部用いればよい。他の薬剤は以下に示す同種群及び異種群から任意に選択される１種又は２種以上を適宜の割合で組み合わせて投与してもよい。
【０１１１】
尚、マイクロスフェア徐放製剤の静注投与における反復投与又は２種以上の複数回投与の場合には、初回投与製剤の徐放期間が経過した後に投与を行う。
【０１１２】
上記肺疾患特異的治療剤により、予防及び／又は治療効果を奏する疾患は特に限定されず、本発明の肺疾患の予防及び／又は治療効果を補完及び／又は増強する疾患であればよい。
【０１１３】
本発明の肺特異的治療剤の別の好適な一態様においては、
肺特異的治療剤は、
（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸（化合物１）、
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）、２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（MRE-269）（化合物５）、及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上の前記肺疾患治療薬；並びに
ポリ乳酸、乳酸／グリコール酸共重合体、及びこれらの混合物からなる群より選択される生体分解性高分子
を含有する徐放性マイクロスフェアを含有する。
【０１１４】
本発明の肺特異的疾患治療剤の別の好適な一態様においては、
肺特異的疾患治療剤は、
ベクロメタゾン、フルチカゾン、モンテルカスト、チオトロピューム、イミダフェナシン、ベラプロスト、カルバサイクリン、シレベスタット、ツルブテロール、サルメテロール；
（Ｅ）−［５−［２−［１−フェニル−１−（３−ピリジル）メチリデンアミノオキシ］エチル］−７，８−ジヒドロナフタレン−１−イルオキシ］酢酸（化合物１）；
（±）−（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，８ｂＳ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸（ベラプロスト）；
２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン―２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（化合物５）；
ＰＧＩ２誘導体であるカルバサイクリン誘導体及び
それらの塩からなる群より選択される１種以上の肺疾患治療薬
を含有し、
数平均粒子径が２０〜４０μｍであり、最大粒子径が１００μｍ以下である徐放性マイクロスフェアを含有し、かつ
徐放性マイクロスフェアとしての１回投与量が６ｍｇ／ｋｇ以下である。
【０１１５】
また、肺臓特異的であることにより、投与総量の少量化、治療効果の向上、副作用軽減、投与コンプライアンスの向上及び経済的効果等が期待できる。
【実施例】
【０１１６】
以下に、本発明の実施例として製剤作製法、薬理試験を示すが、これは本発明をよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。【０１１７】
１．徐放性ＭＳの製造
製剤例１；化合物１の徐放性ＭＳ
乳酸／グリコール酸共重合体（以下、ＰＬＧＡと略記する）（ポリ乳酸：グリコール酸＝１：１（モル％）、重量平均分子量５０，０００、ＰＬＧＡ５−５０、三井化学）６７０ｍｇと化合物１（１７０ｍｇ；Ｓｉｇｍａ社Ｎｏ．０２２６４）のジクロロメタン／メタノール（９．４ｍＬ）溶液を調製した。ホモジナイザー（Ｔ．Ｋ．ホモミキサー、プライミクス）を用いて、３，５００ｒｐｍで撹拌した０．１％ポリビニルアルコール（ナカライテスク株式会社）水溶液（ｐＨ３．０、１Ｎ塩酸により調整）２Ｌ中に、上記で調製した溶液を加え、室温で１分間撹拌し、Ｏ／Ｗエマルジョンとした。このＯ／Ｗエマルジョンを室温で４時間撹拌し、ジクロロメタンを揮発させ、油相を固化させた後、遠心分離器（日立、０５ＰＲ−２２）を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、注射用蒸留水（３５ｍＬ）で分散後、遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０液（３５ｍＬ）で分散後、遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、注射用蒸留水（３５ｍＬ）で分散後、再び遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、沈殿物を少量の蒸留水で再分散後、凍結乾燥機（ＦＺ−６ＰＶ，ラブコンコ）を用いて凍結乾燥することによって、化合物１のマイクロスフェア（ＭＳ）製剤を製造した。
かくして、製剤例１のＭＳとして、化合物１の含有率；１４．９％、数平均粒子径；３０．３μｍ、最大粒子径；１００μｍ以下のＭＳ（化合物１・ＭＳ）を得た。なお、化合物１の含有率及び粒子径は、後述の方法により測定した。以下の製剤例も同様である。【０１１８】
製剤例２；陰性対照
乳酸／グリコール酸共重合体（以下、ＰＬＧＡと略記する）（乳酸：グリコール酸＝１：１（モル％）、重量平均分子量５０，０００、ＰＬＧＡ５−５０、三井化学）６７０ｍｇのジクロロメタン／メタノール（９．４ｍＬ）溶液を調製した。それ以降の操作は製剤例１と同様に行なうことにより、ＰＬＧＡのマイクロスフェア（ＭＳ）を製造した。
かくして、製剤例２のＭＳ（陰性対照）として、医薬化合物を含有しない、数平均粒子径；３３．８μｍ、最大粒子径；１００μｍ以下のＭＳ（ＰＬＧＡ・ＭＳ（陰性対照））を得た。【０１１９】
製剤例３；化合物３の徐放性ＭＳ
乳酸／グリコール酸共重合体（以下、ＰＬＧＡと略記する）（ポリ乳酸：グリコール酸＝１：１（モル％）、重量平均分子量５０，０００、ＰＬＧＡ５−５０、三井化学）４０ｍｇと化合物３（１０ｍｇ；Ｃａｙｍａｎ社Ｎｏ．１８２３０）のジクロロメタン／メタノール（４ｍＬ）溶液を調製した。ＴＫロボミックス（特殊機化、ＭＡＲＫ  ＩＩ  ２．５型）を用いて、３，０００ｒｐｍで撹拌した０．１％ポリビニルアルコール（ナカライテスク株式会社）水溶液（ｐＨ３．０、１Ｎ塩酸により調整）１００ｍＬ中に、上記で調製した溶液を加え、室温で０．５分間撹拌し、Ｏ／Ｗエマルジョンとした。このＯ／Ｗエマルジョンを室温で２時間撹拌し、ジクロロメタンを揮発させ、油相を固化させた後、遠心分離器（日立、０５ＰＲ−２２）を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、注射用蒸留水（３５ｍＬ）で分散後、遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０液（３５ｍＬ）で分散後、遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、注射用蒸留水（３５ｍＬ）で分散後、再び遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、沈殿物をドライアイス−メタノールに浸し、凍結後、減圧下で乾燥させることによって、化合物３のマイクロスフェア（ＭＳ）を製造した。
かくして、製剤例３のＭＳとして、化合物３の含有率；８．９％、数平均粒子径；２４．９μｍ、最大粒子径；１００μｍ以下のＭＳ（化合物３・ＭＳ）を得た。【０１２０】
製剤例４；化合物５の徐放性ＭＳ
乳酸／グリコール酸共重合体（以下、ＰＬＧＡと略記する）（乳酸：グリコール酸＝１：１（モル％）、重量平均分子量５０，０００、ＰＬＧＡ５−５０、三井化学）４０ｍｇと化合物５（１０ｍｇ；Ｃａｙｍａｎ社Ｎｏ．１００１０４１２）のジクロロメタン／メタノール（４ｍＬ）溶液を調製した。ＴＫロボミックス（特殊機化、ＭＡＲＫ  ＩＩ  ２．５型）を用いて、３，０００ｒｐｍで撹拌した０．１％ポリビニルアルコール（ナカライテスク株式会社）水溶液（ｐＨ３．０、１Ｎ塩酸により調整）１００ｍＬ中に、上記で調製した溶液を加え、室温で０．５分間撹拌し、Ｏ／Ｗエマルジョンとした。このＯ／Ｗエマルジョンを室温で２時間撹拌し、ジクロロメタンを揮発させ、油相を固化させた後、遠心分離器（日立、０５ＰＲ−２２）を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、注射用蒸留水（２ｍＬ）で分散後、遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０液（２ｍＬ）で分散後、遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除き、注射用蒸留水（２ｍＬ）で分散後、再び遠心分離器を用いて、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。最終的に上清を除き、沈殿物をドライアイス−メタノールに浸し、凍結後、減圧下で乾燥させることによって、化合物５のマイクロスフェア（ＭＳ）を製造した。
かくして、製剤例４のＭＳとして、化合物５の含有率；１６．３％、数平均粒子径；３５．３μｍ、最大粒子径；１００μｍ以下のＭＳ（化合物５・ＭＳ）を得た。【０１２１】
製剤試験例１；封入効率測定
製剤例１、３及び４で製造したマイクロスフェア（それぞれ約１０ｍｇ）に適当な内部標準含有のアセトニトリル溶液を加えて、超音波処理し、溶解した。この各溶液中の化合物１の含有量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定し、マイクロスフェア中の化合物１、３、５の封入効率を次式により算出した。
封入効率（％）＝（測定含有量／理論上の含有量）×１００
その結果、製剤例１、３、４のマイクロスフェアと共に、７０％以上の封入効率であり、含有率；８％〜１８％、及び数平均粒子径；２４〜３６μｍのマイクロスフェアであった。またこれらの製剤には、数平均粒子径１００μｍ以上のマイクロスフェアは含まれていなかった。【０１２２】
製剤試験例２；ｉｎ  ｖｉｔｒｏリリース試験及び粒子径測定
製剤例１、３及び４で製造したマイクロスフェア（ＭＳ）を、サンプリングポイント毎に３ｍｇを秤量し（ｎ＝３）、０．２（ｗ／ｖ）％  Ｔｗｅｅｎ８０含有  １／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）  １０ｍＬを加え、ボルテックス（１０秒）及び超音波（２０秒）により、均一に分散させた後、３７℃恒温層で静置させた。経時的に容器ごとサンプリングし、遠心分離（２，０００ｒｐｍ、５分）して上清４ｍＬと、残りの上清を除いて得られたペレットを冷凍保存した。
このペレットにＤＭＳＯ  １０ｍＬを加えて、ボルテックス（１０秒）を用いて、ＭＳを十分に溶解させた。この溶液  ３００μＬに、ＩＳ液Ｂを２００μＬ及び移動相（ｐＨ３）５００μＬを加えて十分に混和した。また、上清も同様、３００μＬに、ＩＳ液Ｂを２００μＬ及び移動相（ｐＨ３）５００μＬを加えて十分に混和した。遠心分離（１２，０００ｒｐｍ、３分）の後、上清を１０μＬ、ＨＰＬＣにインジェクションした。
＜ＨＰＬＣ条件＞
装置      ：クロマトグラフ（Ｓｈｉｍａｚｕ  ＬＣ−１０ＡＴ）、ＵＶ検出器（Ｓｈｉｍａｚｕ  ＳＰＤ−１０Ａ）、データ解析機器（Ｓｈｉｍａｚｕ  Ｃ−Ｒ７Ａ）
検出        ：ＵＶ−２６５ｎｍ
カラム      ：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＣＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０（４．６ｍｍｉ．ｄ×１５０ｍｍ）
カラム温度：２５℃付近の一定温度
移動相      ：アセトニトリル：水：トリエチルアミン＝１０００：９００：３
（水：トリエチルアミン＝９００：３の溶液をリン酸でｐＨ３に調整）
流速        ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
内部標準物質（ＩＳ）：ｎ−プロピルパラベン【０１２３】
・粒子径測定；
コールターカウンター（ＭｕｌｔｉｓｉｚｅｒＩＩＩ，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）にて測定した。【０１２４】
製剤例１で製造したＭＳのリリース結果を図１に、製剤例３で製造したＭＳのリリース結果を図２に、製剤例４で製造したＭＳのリリース結果を図３に示した。
その結果、製剤例１のＭＳ（化合物１・ＭＳ）は約４週間で９０％以上をリリースし、製剤例３のＭＳ（化合物３・ＭＳ）は約２週間で９０％以上をリリースし、製剤例４のＭＳ（化合物５・ＭＳ）は約２週間で８５％以上をリリースした。【０１２５】
製剤試験例２；ｉｎ  ｖｉｖｏリリース試験
ＳＤ系雄性ラット（ＳＰＦ）日本エスエルシー株式会社（浜松）を用いて血中動態を測定した。化合物１量として１０ｍｇ相当量／ｋｇを２３Ｇディスポーザル注射針（テルモ）及びディスポーザル注射筒２．５ｍＬ用（テルモ）を用いて懸濁液を背部皮下に単回投与を行った。投与量は５ｍＬ／ｋｇで投与した。各群の例数は、５匹で行った。
各採血ポイントにて、ヘパリンを通した２３Ｇ注射針付ディスポシリンジを用いて０．５ｍＬの血液を頚静脈より採取し、遠心分離（１２，０００ｒｐｍ、１０分、４℃）後、血漿を凍結保存（−３０℃）した。試験終了後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにて化合物１の血中濃度を測定した。
＜ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ測定法＞
ＭＳ／ＭＳ条件；
ＭＳ／ＭＳ：ＡＰＩ  ４０００
Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｍｏｄｅ：ＥＳＩ
Ｉｏｎ  ｐｏｌａｒｉｔｙ  ｍｏｄｅ：ｐｏｓｉｔｉｖｅ
Ｍｏｎｉｔｏｒ  ｉｏｎ：（表１に記載）
【表１】
2014069401.tif 000012
＊：目標値に対してｍ／ｚ  ±０．５以内でイオン強度が最も強い値を適宜選択した。
結果；製剤例１のラット皮下投与における血中動態を図４に示した。製剤例１は４週間程度の血中動態の持続性を示した。【０１２６】
薬理効果試験１；製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ（陰性対照））の静脈内投与における安全性試験
Ｓｌｃ；Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（５週齢）にイソフルラン吸入麻酔後、モノクロタリン（ＭＣＴ）水溶液の６０ｍｇ／ｋｇ（３ｍＬ／ｋｇ容量）をディスポーザブル注射筒及びディスポーザブル２７Ｇ注射針を用いて背部皮下に投与し、肺高血圧症モデルを作製した。なお、モデル作製日を０日目とした。ＭＣＴ投与直後に製剤例２のＰＬＧＡ・ＭＳ（陰性対照）を各投与量にて皮下投与を行い、４２日間の生存率を評価した。
尚、２〜６群の被験物質は、１群の媒体（0.2w/v% Tween80生理食塩液）に懸濁し、１０ｍＬ／ｋｇにて静脈内投与した。
以下同様に媒体に懸濁し、静脈内投与または皮下投与を行った。
試験群構成を表２に示した。
【表２】
2014069401.tif 000013
＊：投与量は、製剤例２が製剤例１と同じく化合物１を含有（１７．４％）していると仮定した場合の化合物１としての投与量（相当量）を示す。丸括弧内は実際に投与したＰＬＧＡ・ＭＳの投与量を示す。【０１２７】
１群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後に０．２ｗ／ｖ％  Ｔｗｅｅｎ  ８０生理食塩液（媒体）を１０ｍＬ／ｋｇで間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
２群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後にＰＬＧＡ・ＭＳを１．７４ｍｇ／ｋｇ間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
３群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後にＰＬＧＡ・ＭＳを５．８ｍｇ／ｋｇ、間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
４群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後にＰＬＧＡ・ＭＳを１７．４ｍｇ／ｋｇ、間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
５群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後にＰＬＧＡ・ＭＳを５８ｍｇ／ｋｇ、間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
６群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後にＰＬＧＡ・ＭＳを０．５８ｍｇ／ｋｇ、静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
生存率曲線を図５に示した。【０１２８】
媒体投与群（１群）の生存率は２０％であった。
陰性対照であるＰＬＧＡ・ＭＳの０．５８ｍｇ／ｋｇ（６群）、１．７４ｍｇ／ｋｇ投与群（２群）及び５．８ｍｇ／ｋｇ投与群（３群）の生存率は、媒体投与群（１群）と比較して同等の生存率を示した。
一方、ＰＬＧＡ・ＭＳの１７．４ｍｇ／ｋｇ投与群（４群）及びＰＬＧＡ・ＭＳの５８ｍｇ／ｋｇ投与群（５群）では、媒体投与群（１群）、ＰＬＧＡ・ＭＳの０．５８ｍｇ／ｋｇ（６群）、１．７４ｍｇ／ｋｇ（２群）及び５．８ｍｇ／ｋｇ（３群）投与群と比較して短命傾向を示した。
以上の結果より、肺高血圧症モデルにおけるＰＬＧＡ・ＭＳの静脈内投与での無毒性用量は５．８ｍｇ／ｋｇ（化合物１投与の１ｍｇ／ｋｇ相当量）投与量以下と確認された。５．８ｍｇ／ｋｇはヒト投与量に換算すると、３４８ｍｇ／ヒト投与量となり、静脈内投与が困難な投与量であった。
尚、本肺高血圧症モデルは、肺組織中の微小肺動脈が閉塞することにより、肺血流に抵抗性が増大し、肺動脈圧が上昇することにより、右心不全により死亡する疾患であるため、肺塞栓に対する感受性は高いモデルである。肺線維症、喘息及びＣＯＰＤ等は、気管支や肺胞組織の疾患であるため、肺血流に抵抗のある肺高血圧症や膠原病患者に比し、（微小）肺塞栓に対する感受性は低く、より安全性は高い。【０１２９】
薬理効果試験２；製剤例１（化合物１・ＭＳ）の静脈内投与での延命効果及び用量相関の検討
薬理効果試験１と同様のモデル系にて評価を行った。試験群構成を表３に示した。
【表３】
2014069401.tif 000014
＊：１群でのＰＬＧＡ・ＭＳ（陰性対照）（製剤例２）の投与量は、薬理効果試験１の結果から決定した。１群では、５群と同じＰＬＧＡ・ＭＳ相当量を投与した。また、２〜５群での投与量は、化合物１としての投与量を示した。【０１３０】
１群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後に製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ）を５．８ｍｇ／ｋｇ（化合物１投与の１ｍｇ／ｋｇ相当量）、間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
２群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）を０．０３ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
３群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）を０．１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
４群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）を０．３ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
５群：モデル作製直後及びモデル作製２１日後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）を１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）間歇静脈内投与した（計２回投与）。モデル作製４２日後まで生存率にて評価した。
生存率曲線の結果を図６に示した。【０１３１】
陰性対照であるＰＬＧＡ・ＭＳの５．８ｍｇ／ｋｇ（化合物１投与の１ｍｇ相当／ｋｇ）投与群（１群）の生存率は２０％であった。
製剤例１（化合物１・ＭＳ）の０．０３ｍｇ／ｋｇ投与群（２群）及び０．１ｍｇ／ｋｇ投与群（３群）の生存率は４０％であり、ＰＬＧＡ・ＭＳの５．８ｍｇ／ｋｇ（化合物１投与の１ｍｇ／ｋｇ相当量）投与群（１群）と比較し生存率の延長傾向が認められた。
一方、製剤例１（化合物１・ＭＳ）の０．３ｍｇ／ｋｇ（４群）及び１ｍｇ／ｋｇ投与群（５群）の生存率は、製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ）の５．８ｍｇ／ｋｇ（化合物１投与の１ｍｇ／ｋｇ相当量）投与群（１群）と比較し生存率の延長が認められた。
即ち、製剤１における化合物１の投与量として、０．０３ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ間歇静脈内投与にて、用量相関的に生存率の延長効果が認められた。【０１３２】
薬理効果試験３；製剤例１（化合物１・ＭＳ）の静脈内投与及び皮下投与での途中屠殺解析比較試験
薬理効果試験１と同様のモデル系にて評価を行った。試験群構成を表４に示した。
【表４】
2014069401.tif 000015
＊；２群の製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ）の投与量は、薬理効果試験１及び２の結果より決定した。
３〜５群の投与量は製剤中に含まれる化合物１の投与量を示す。
１群：正常対照群；モノクロタリン投与の代わりに局方注射用水を投与した。正常モデル作製直後に０．２ｗ／ｖ％  Ｔｗｅｅｎ  ８０生理食塩液（媒体）を単回静脈内投与した。モデル作製２１〜２５日後に評価した。
２群：陰性対照群；モデル作製直後に製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ）の５．８ｍｇ／ｋｇ（化合物１投与の１ｍｇ／ｋｇ相当量）、単回静脈内投与した。モデル作製２１〜２５日後に評価した。
３群：モデル作製直後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）の１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）を単回静脈内投与した。モデル作製２１〜２５日後に評価した。
４群：モデル作製直後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）の１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）を単回皮下投与した。モデル作製２１〜２５日後に評価した。
５群：陽性対照群；モデル作製直後に製剤例１（化合物１・ＭＳ）の１０ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）を単回皮下投与した。モデル作製２１〜２５日後に評価した。
ＭＣＴ投与２１〜２５日後に、全動物生存下で、全動物の肺動脈圧（右室圧）、右室圧／左室圧比及び右心重量比（ＲＶ／ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｐｌｕｓ  ｓｅｐｔａｌ  ｗｅｉｇｈｔ）を求めた。
また、３群、および４群の、肺臓における化合物１の含有量を測定した。【０１３３】
測定方法；肺動脈圧（右室圧）および左室圧の測定法；
動物をペントバルビタールナトリウム（６４．８ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔後、気管挿管し、人工呼吸器に接続した。胸骨正中切開により開胸し、右室および左室の心尖部から、カテーテル（Ｍｉｌｌｅｒ、Ｍｉｃｒｏ−Ｔｉｐ  Ｃａｔｈｅｔｅｒ，  Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  Ｓｉｚｅ；１．４Ｆｒ）を挿入し、肺動脈圧（右室圧）及び左室圧をダイレクトに測定した。測定はカテーテルと血圧トランスデューサを接続し、血圧測定用アンプを用いて測定した。【０１３４】
結果を図７、８及び９に示した。
正常群（１群）に比し、ＭＣＴ投与動物への製剤例２（ＰＬＧＡ・ＭＳ）静注群（陰性対照；２群）は、肺動脈圧（右室圧）、右室圧／左室圧比及び右心重量比はいずれも有意に上昇し、肺高血圧症病態を示したが、製剤例１（化合物１・ＭＳ）の１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）を単回静脈内投与群（３群）は、いずれも有意に減少した。一方、製剤例１（化合物１・ＭＳ）の１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）単回皮下投与群（４群）は、いずれも効果を示さす、２群（陰性対照群）とほぼ同値を示したが、同  １０ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）単回皮下投与群（５群）は、製剤例１（化合物１・ＭＳ）の１ｍｇ／ｋｇ（化合物１として）単回静脈内投与群（３群）とほぼ同等の効果を示した。
ＭＳ剤の静脈内投与は、同皮下投与に比し、１０倍以上の肺疾患特異的治療効果を示した。【０１３５】
薬理効果試験３の肺臓における化合物１の含有量の測定法：
肺臓重量に対して4倍量の蒸留水・エタノールを加え、ホモジネートし、その一部にアセトニトリルを加え、撹拌し、遠心上精を採取・濃縮し、溶媒に溶解後、製剤試験例２と同条件にて、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ測定を行い、肺臓中含量を測定した。
その結果（表５）、２群（Cont）では化合物１の濃度はいずれも認められなかったが、３群での肺組織中濃度の平均は、76.35ng/ｇ、４群での肺組織中濃度の平均は、0.659ng/ｇとなり、３群／４群比は、115.9倍となった。即ち、静注投与は皮下注投与に比し、約120倍の肺組織濃度が認められ、肺選択性が確認された。
【表５】
2014069401.tif 000016
【０１３６】
薬理効果試験４；製剤例１の皮下投与におけるＣＯＰＤへの有効性
モルモットを用い、タバコ煙溶液及びＬＰＳ（リポポリサッカリド）の気管内投与による短期ＣＯＰＤモデルを用いて、呼吸機能、肺機能、及び肺組織の変化に対する製剤例１の効果を検討した。
文献（Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ２００９，  ３２（９）：１５５９−１５６４）に従い、モルモットにタバコ煙溶液を１６日間及びＬＰＳを３日間（Ｄａｙ  １〜１９）気管内投与してＣＯＰＤモデルを作製した．製剤例１は化合物１として１０ｍｇ／ｋｇをＤａｙ１に単回皮下投与した。
即ち、生理食塩液１ｍＬ当たりタバコ（ハイライト（商品名）、日本たばこ産業社）１本の主流煙をバブルさせることにより、タバコ煙溶液を作製した。また、ＬＰＳ（リポポリサッカライド；和光純薬工業）は生理食塩液を加えて溶解し、５００μｇ／ｍＬの濃度に調製し、各々は凍結保存した。モルモットは、日本エスエルシー株式会社製Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系（雄性）モルモット（７週齢）を使用した。
Ｄａｙ  １〜Ｄａｙ  ４、Ｄａｙ  ６〜Ｄａｙ  ９、Ｄａｙ  １１〜Ｄａｙ  １４  及びＤａｙ  １６〜Ｄａｙ  １９に、気管内投与器具を用いてタバコ煙溶液２００μＬ／ａｎｉｍａｌをモルモットの気管内に１日１回投与した。また、Ｄａｙ  ５、Ｄａｙ  １０及びＤａｙ  １５に、ＬＰＳ溶液（５００μｇ／ｍＬ）２００μＬ／ａｎｉｍａｌをモルモットの気管内に投与した。
正常群には、Ｄａｙ  １〜Ｄａｙ  １９まで、生理食塩液２００μＬ／ａｎｉｍａｌを気管内に１日１回投与した。正常群、対照群及び製剤例１は、Ｄａｙ１に単回皮下投与し、Ｄａｙ２０日に評価した。  尚、正常群及び対照群は、媒体のみを単回皮下投与を行い、製剤例１投与群は、製剤例１；（化合物１として）１０ｍｇ／ｋｇを単回皮下投与した。
呼吸機能の測定は、総合呼吸機能解析システム（Ｐｕｌｍｏｓ−Ｉ，Ｍ・Ｉ・Ｐ・Ｓ社）を用い、ｄｏｕｂｌｅ  ｆｌｏｗ  ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈ法でモルモットの呼吸機能（気道抵抗、１回換気量）を覚醒下で測定した。それぞれ１００呼吸分を測定し、その平均値を各測定日における測定値とした。
尚、気道抵抗とは主に気道収縮及び気道閉塞の指標で、１回換気量とは安静換気において吸入される空気量を表し、ガス交換の指標で、気道閉塞の指標となる。【０１３７】
肺機能の測定は、モルモットをウレタン１．２  ｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）麻酔下で気管内にチューブを挿入固定し、肺機能測定装置（ＢｉｏＳｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｍａｎｅｕｖｅｒｓ，Ｂｕｘｃｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）を用い、モルモットの肺機能（残気量、機能的残気量）を測定した。
尚、機能的残気量とは安静呼吸の状態で肺内に残存する空気量を表し、過膨張の指標である。残気量とは最大呼出した状態で肺内に存在する空気量を表し、機能的残気量と同様にＣＯＰＤ罹患の指標となる。【０１３８】
平均肺胞径の測定及び病理評価；気管内に挿入したチューブを介して１０％中性緩衝ホルマリン液を  ２５  ｃｍＨ２Ｏの圧で４時間注入した後、１０％中性緩衝ホルマリン液に２４時間浸漬して固定した後、常法に従いＨ．Ｅ．  染色を施した組織標本を作製し、顕微鏡下で組織学的検討を行った。
Ｈ．Ｅ．染色を施した組織標本の肺胞画像を、デジタルカメラにて撮影した。撮影した画像をオリンパス画像解析装置（ＤＰ  ７０，オリンパス光学工業）に取り込み、平均肺胞径（ｍｅａｎ  ｌｉｎｅｒ  ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ  ：ＭＬＩ）を測定した。画像上に５０本の等間隔、等長のグリッドを当てた。検定するグリット長は総延長１０  ｍｍ（一定）とした。
視野の中から、胸膜部分、血管及び末梢気道を取り除いた部分について、１グリットあたりにクロスする肺胞壁の数を数えた。グリット長を肺胞壁のクロス数で除してＭＬＩを算出する。各個体あたり１０視野のＭＬＩを測定し、その平均値を個体のＭＬＩ値とした。
Ｄａｙ２０でのこれらの測定結果を表１に示した。
【表６】
2014069401.tif 000017
正常群の気道抵抗（ｓＲａｗ）は、Ｄａｙ２０で１．３６７  ｃｍＨ２Ｏ・ｓｅｃを推移した。
対照群のｓＲａｗは、正常群と比較してＤａｙ  ２０で有意に高値であり、Ｄａｙ  ２０のｓＲａｗは２．１１４  ｃｍＨ２Ｏ・ｓｅｃであった。
一方、製剤１投与群のｓＲａｗは、Ｄａｙ  ２０で対照群と比較して有意差に低値な１．５０１  ｃｍＨ２Ｏ・ｓｅｃであった。
正常群の１回換気量（ＴＶ）は、３．１６５ｍＬを推移した。対照群のＴＶは、２．８９７ｍＬに減少したが、正常群と比較して有意差は認められなかった。一方、製剤例１の単回皮下投与群におけるＴＶは、３．５４４ｍＬで、対照群と比較して有意な高値を示した。【０１３９】
残気量（residual volume，ＲＶ）は、正常群は３．５２７ｍＬであった。対照群のＲＶは５．６８３ｍＬであり、正常群と比較して有意に高値であった。一方、製剤例１の単回皮下投与群におけるＲＶは３．９６９ｍＬであり、対照群と比較して有意な低値であった．【０１４０】
機能的残気量（functional residual capacity，ＦＲＣ）は、正常群は７．２７４ｍＬであった。対照群のＦＲＣは８．７６８ｍＬであり、正常群と比較して有意に高値であった。一方、製剤例１の単回皮下投与群におけるＦＲＣは７．５７２ｍＬであり、対照群と比較して有意な低値であった．【０１４１】
平均肺胞径（mean linear intercepts(MLI)）は、正常群は４５．５μｍであった。
対照群のＭＬＩは５１．９μｍであり、正常群と比較して有意に高値であった。一方、製剤例１の単回皮下投与群のＭＬＩは、４７．０μｍであり、対照群と比較して有意に低値であり、肺胞破壊（肺気腫）を抑制していることが確認された。
組織学的検査においては、対照群の肺では右側前葉、中間葉及び後葉に肺胞への肺胞マクロファージ浸潤、炎症性細胞浸潤、肺胞壁内、血管及び気管支周囲への単核細胞浸潤、肺胞壁肥厚及び異物性肉芽腫性炎が観察された。これらの結果から、対照群は、ＣＯＰＤの病態を発症していることが確認された。一方、製剤例１の単回皮下投与においては、肺の後葉及び中葉の組織変化を抑制した。【０１４２】
以上の結果から、モルモットにおけるタバコ煙溶液及びＬＰＳ溶液の気管内投与によるＣＯＰＤモデルにおいて、気道抵抗、機能的残気量、残気量の増加、組織学的検査及び肺胞破壊に対して、製剤例１の単回皮下投与（化合物１として１０ｍｇ／ｋｇ）は、有効性が確認された。
本有効性試験結果から、製剤例１の化合物１として１０ｍｇ／ｋｇ、単回皮下投与と同程度以上の有効性が、製剤例１の化合物１として１ｍｇ／ｋｇ、単回静脈内投与で得られることが明らかになった。【０１４３】
薬理効果試験５；肺高血圧症モデルにおける化合物３および化合物７へのオザグレル塩酸塩の併用効果の検討
Ｓｌｃ；Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（５週齢）にイソフルラン吸入麻酔後、モノクロタリン（ＭＣＴ）水溶液の６０  ｍｇ／ｋｇ（３  ｍＬ／ｋｇ容量）をディスポーザブル注射筒及びディスポーザブル２７Ｇ注射針を用いて背部皮下に投与し、肺高血圧症モデルを作製した。
ＭＣＴ投与直後から４２日まで１日２回、次表の通り、各被験物質を反復経口投与した。
被験物質は、０．５  ％  ＣＭＣ−Ｎａ水溶液に懸濁し、５ｍＬ／ｋｇにて反復経口投与した。
【表７】
2014069401.tif 000018
化合物３（ＰＧＩ２アゴニスト）、および化合物７（ＰＧＥ１誘導体）の経口投与量である０．１ｍｇ／ｋｇは、降圧作用を示さない最大耐量であり、オザグレル塩酸塩（ＴＸＡ２合成酵素阻害剤；ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社Ｎｏ．０９７０２）の投与量である１００ｍｇ／ｋｇは、ＴＸＡ２合成酵素を完全に阻害する量である。
生存率変化を図１０に示した。
結果；本肺高血圧症モデルにおいては、化合物３（２群）、化合物７（５群）およびオザグレル（３群）の各々単独投与においては、媒体群（１群）と同様な生存率曲線を示し、生存率延長効果は認められなかった。
尚、ＭＣＴ誘発肺高血圧軽傷モデルにおいて、化合物３は単独でも有効を示し、ＰＤＥＶ阻害剤（シルデナフィル）との相乗効果を示したとの報告（Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６９：３４−３８，２００４）があるが、今回のＭＣＴ誘発肺高血圧重症モデルと異なり、軽傷モデルで評価されている。また、作用メカニズムの異なる、ＰＤＥＶ阻害剤との併用効果である。
一方、化合物３とオザグレルの併用投与群（４群）および化合物７とオザグレルの併用投与群（６群）は、媒体群（１群）および各々の単独投与群（２、３、５群）に比して、生存率の延長を示し、併用投与が有効であった。
また、化合物３は、欧米において、無作為化二重盲検試験が行われ比較的短期間（１２週後）の運動耐容能は改善された（Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ３９：１４９６−１５０２，２００２）が、長期（１年後）の効果では有意差を認められなかった（Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ４１：２１１９−２１２５，２００３）。これらの結果から、ベラプロスト（化合物３）は長期投与により、血中でのＴＸＡ２産生能が増加することにより、耐性を示すことが明らかとなった。
よって、ＰＧＩ２（エポプロステロール）とオザグレルナトリウムの併用点滴静注（配合）剤、および化合物３（ベラプロスト）またはＰＧＥ１誘導体である化合物７（オルノプロスト）とオザグレル塩酸塩の併用経口投与（配合）剤の有用性が明らかとなった。【０１４４】
薬理効果試験６；化合物１の線維芽細胞培養における各種サイトカインおよびPGｓ産生促進作用
正常ヒト新生児包皮皮膚線維芽細胞（Fibrocell NHDF(NB)  )供給元：クラボウを、5×106 cells/mL/４８wellシャーレーにてコンフルエントになるまで培養（DMEM  １０％FBS）し、DMEM（無血清）に培地交換２４時間後、DMEM(０．２％FBS)培地に交換するとともに、化合物１（１μM）および媒体（DMSO）を添加し、72時間培養を行った（n＝3）。
培養液中の各種サイトカインをELISA法にて、また、各種プロスタグランジンをEIA法にて測定した。
その結果を表８に示した。これから明かなように、ＳＤＦ−１、ＨＧＦ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦに加えて、新たにHMGB1およびPGｓ（PGI2およびPGE2）の産生促進作用が確認された。
【表８】
2014069401.tif 000019
尚、ＰＧＩ２は、その分解物（6-keto-PGF１α）にて測定した。
【図１】
2014069401.tif 000024
【図２】
2014069401.tif 000025
【図３】
2014069401.tif 000026
【図４】
2014069401.tif 000027
【図５】
2014069401.tif 000028
【図６】
2014069401.tif 000029
【図７】
2014069401.tif 000030
【図８】
2014069401.tif 000031
【図９】
2014069401.tif 000032
【図１０】
2014069401.tif 000033
【国際調査報告】
2014069401.tif 000034
2014069401.tif 000035
2014069401.tif 000036
2014069401.tif 000037
2014069401.tif 000038
2014069401.tif 000039