(57)【要約】  腎疾患の重症度の推定や鑑別、或いは予後推定などに有用な新たなバイオマーカーを提供することを課題とする。ベイシジンからなる腎疾患用のバイオマーカー及びその用途として腎障害度推定法、IgA腎症鑑別法、急性腎障害検査法、予後推定法などが提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベイシジンからなり、ループス腎炎、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症及び急性進行性糸球体腎炎からなる群より選択される腎疾患における腎障害度推定用バイオマーカー。
【請求項２】
前記ベイシジンが血中ベイシジンである、請求項１に記載の腎障害度推定用バイオマーカー。
【請求項３】
前記腎疾患がループス腎炎又は急性進行性糸球体腎炎である、請求項１又は２に記載の腎障害度推定用バイオマーカー。
【請求項４】
ループス腎炎、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症及び急性進行性糸球体腎炎からなる群より選択される腎疾患における腎障害度を推定する方法であって、血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標とした腎障害度推定法。
【請求項５】
以下のステップ（１）及び（２）を含む、請求項４に記載の腎障害度推定法：
（１）血中ベイシジン及び／又は尿中ベイシジンを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、腎障害度を推定するステップ。
【請求項６】
前記腎疾患がループス腎炎又は急性進行性糸球体腎炎である、請求項４又は５に記載の腎障害度推定法。
【請求項７】
ステップ（１）に加えて以下のステップ（１’）も実施し、ステップ（２）ではステップ（１）とステップ（１’）の検出結果に基づき、腎障害度を推定する、請求項５又は６に記載の腎障害度推定法。：
（１’）血中補体因子C3、血中抗DNA抗体、尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、及び尿蛋白からなる群より選択される一以上のバイオマーカーを検出するステップ。
【請求項８】
ステップ（１’）において、血中補体因子C3を検出する、請求項７に記載の腎障害度推定法。
【請求項９】
血中補体因子C3、血中抗DNA抗体、尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、及び尿蛋白からなる群より選択される一以上のバイオマーカーと、血中ベイシジンとからなる、腎障害度推定用マーカーセット。
【請求項１０】
ベイシジンからなる、IgA腎症鑑別用バイオマーカー。
【請求項１１】
血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標としたIgA腎症の鑑別法。
【請求項１２】
前記指標が血中ベイシジン量であり、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症及び急性進行性糸球体腎炎からなる群より選択される一以上の疾患との鑑別に用いられる、請求項１１に記載の鑑別法。
【請求項１３】
前記指標が尿中ベイシジン量であり、糖尿病性腎症及び／又は急性進行性糸球体腎炎との鑑別に用いられる、請求項１１に記載の鑑別法。
【請求項１４】
以下のステップ（１）及び（２）を含む、請求項１１に記載の鑑別法：
（１）血中ベイシジン及び／又は尿中ベイシジンを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、罹患する腎疾患がIgA腎症であるか否かを判定するステップ。
【請求項１５】
ベイシジンからなる、急性腎障害早期検出用バイオマーカー。
【請求項１６】
血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標とした急性腎障害の検査法。
【請求項１７】
以下のステップ（１）及び（２）を含む、請求項１６に記載の検査法：
（１）血中ベイシジン及び／又は尿中ベイシジンを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、急性腎障害の発症可能性を判定するステップ。
【請求項１８】
急性腎障害が術後の虚血性急性腎障害である、請求項１７に記載の検査法。
【請求項１９】
虚血状態を引き起こす施術時から術後１日までの間に採取した尿を用いてステップ（１）を実施する、請求項１７に記載の検査法。
【請求項２０】
虚血状態を引き起こす施術開始から１２時間以内に採取した尿を用いてステップ（１）を実施する、請求項１７に記載の検査法。
【請求項２１】
手術が、大血管手術、人工心肺装置を用いる開心術、臓器移植術又は腎腫瘍部分腎切除術である、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の検査法。
【請求項２２】
ステップ（１）に加えて以下のステップ（１’）も実施し、ステップ（２）ではステップ（１）とステップ（１’）の検出結果に基づき、急性腎障害の発症可能性を判定する、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の検査法：
（１’）尿中ミッドカイン（MK）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、尿中インターロイキン18（IL-18）、尿中腎障害分-1（KIM-1）、β-N-アセチル-D-グルコミニダーゼ(NAG）及び尿中肝型脂肪酸結合蛋白（L-FABP）からなる群より選択される一以上のバイオマーカーを検出するステップ。
【請求項２３】
ベイシジンからなる、腎機能に関する予後推定用バイオマーカー。
【請求項２４】
血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標とした、腎機能に関する予後推定法。
【請求項２５】
将来発症し得る急性腎障害の重症度を推定する方法である、請求項２４に記載の予後推定法。
【請求項２６】
抗ベイシジン抗体からなる、腎障害度推定用、IgA腎症鑑別用、急性腎障害検査用又は腎機能に関する予後推定用の試薬。
【請求項２７】
請求項２６に記載の試薬を含む、腎障害度推定用、IgA腎症鑑別用、急性腎障害検査用又は腎機能に関する予後推定用のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は腎疾患のバイオマーカーに関する。詳しくは、腎障害度推定用のバイオマーカー及びその用途、IgA腎症鑑別用のバイオマーカー及びその用途、急性腎障害早期検出用のバイオマーカー及びその用途、並びに腎疾患の予後推定用バイオマーカー及びその用途に関する。本出願は、２０１２年６月６日に出願された日本国特許出願第２０１２−１２８５８８号に基づく優先権を主張するものであり、当該特許出願の全内容は参照により援用される。
【背景技術】
【０００２】
近年、増加の一途をたどる透析導入患者の原疾患の中心は、糖尿病性腎症や急速進行性・慢性糸球体腎炎であり、その増加と共に今後も末期腎不全患者数は大幅な増加が予想される。これらの疾患の発症・進行過程では、必ず炎症機転や免疫機構の異常調節（Dysregulation）のどちらか、もしくは両者を契機とする。しかしながら、これらに対する治療戦略はステロイド療法を中心とした免疫抑制療法に頼り、過去数十年にわたり革新的な進歩はみられない。それ故に多くの要因が複雑に絡み合う腎疾患の早期診断と炎症・免疫の両者に関与する画期的治療法の開発は急務である。特に、多臓器に波及する可能性の高い炎症系細胞浸潤を伴う微小血管内皮障害に対する治療標的の探求はその重篤な合併症の観点から必須の課題である。【０００３】
これまでにも腎疾患を対象としたバイオマーカーの探索が行われており、いくつかのバイオマーカーが報告されている（特許文献１、非特許文献１〜６等）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００９／１０７３８４号パンフレット
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Mishra J, et al., Lancet. 2005 Apr 2-8;365(9466):1231-8.
【非特許文献２】Prikh CR et al., Kidney Int. 2006 Jul;70(1):199-203. Epub 2006 May 17.
【非特許文献３】Han WK et al., Kidney Int. 2002 Jul;62(1):237-44.
【非特許文献４】Nakamura T. et al., American journal of Kidney Diseases, Vol 47, No 3(March), 2006:pp439-444
【非特許文献５】Yamamoto T. et al., J Am Soc Nephrol 18:2894-2902, 2007
【非特許文献６】Coca SG. et al., Kidney Int 19:Dec Review, 2007
【非特許文献７】Miyauchi T et al., J. Biochem. 110 (5), 770-774 (1991)
【非特許文献８】Nabeshima K. et al., Pathol Int. 56(7): 359-367, 2006
【非特許文献９】Kato N. et al., Am J Pathol. 2011 178(2):572-9.
【非特許文献１０】Kato N. et al., J Am Soc Nephrol. 2009;20(7):1565-76.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
現状では、腎疾患の確定診断には侵襲的な腎生検による腎組織採取が必須である。また、疾患の重症度は組織障害に相関することが多いため、治療に際し腎生検を避けられない。しかしながら、病状により施行しえない症例もあり、このような場合には推定による治療を行わざるを得なかった。重症度を反映する鋭敏なバイオマーカーがあれば、このような状況を打開することができる。そこで、本発明の課題の一つは腎疾患の重症度の推定を可能にするバイオマーカーを提供することにある。一方、上記の通り、腎疾患に対するバイオマーカーが見出されているものの、いずれのバイオマーカーも、対象疾患ないし病態が限られており、実用性の点でも一長一短がある。また、単一のバイオマーカーで得られる情報には限界がある。そこで本発明は、腎疾患の鑑別や予後推定などに有用な新たなバイオマーカーを提供することも課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決すべく研究を進める中で本発明者らは、ベイシジン（以下、「Bsg」と称する。）に着目した。ベイシジンは炎症機転・免疫の制御の重要な因子としてクローニングされ（非特許文献７）、世界的にも癌領域で特に注目されている。Bsgは心臓、赤血球や炎症系細胞（マクロファージや好中球）等において臓器特異性な糖鎖をもつ糖タンパクとして存在し、血管新生・腫瘍の浸潤と転移に関与する。MMPファミリーや血管内皮増殖因子(VEGF)受容体2の調節をベイシジンが行うことも報告されている（非特許文献８）。しかし、腎臓領域におけるBsgに関する知見や応用は極めて少ない。本発明者らは、Bsgが他臓器と比して腎皮髄境界より皮質の尿細管間質細胞に豊富に存在し、炎症系細胞の遊走を誘導することによって急性腎尿細管間質障害を引き起こすこと（非特許文献９）、及びMMPファミリーを誘導し腎線維化を促進すること（非特許文献１０）を報告した。【０００８】
本発明者らは、腎疾患に対する新たなバイオマーカー及び治療標的の候補としてBsgを捉え、これまでに得られた知見を基礎としつつ、当科に蓄積されている数多くの臨床検体（血漿・尿・腎組織）を利用して検討を進めることで、早期診断方法及び治療戦略の確立を目指した。鋭意検討の末、腎障害度とBsg濃度との間に強い相関を認め、腎障害度を推定するためのバイオマーカーとしてBsgが極めて有用であることが判明した。また一方で、IgA腎症の鑑別に対してもBsgが有用であるとの知見が得られた。更には、急性腎障害の早期検出、及び腎機能に関する予後推定の指標としてもBsgが優れていることが判明した。以下に示す発明は主としてこれらの知見ないし成果に基づく。
［１］ベイシジンからなり、ループス腎炎、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）及び急性進行性糸球体腎炎（RPGN）からなる群より選択される腎疾患における腎障害度推定用バイオマーカー。
［２］前記ベイシジンが血中ベイシジンである、［１］に記載の腎障害度推定用バイオマーカー。
［３］前記腎疾患がループス腎炎又は急性進行性糸球体腎炎である、［１］又は［２］に記載の腎障害度推定用バイオマーカー。
［４］ループス腎炎、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症及び急性進行性糸球体腎炎からなる群より選択される腎疾患における腎障害度を推定する方法であって、血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標とした腎障害度推定法。
［５］以下のステップ（１）及び（２）を含む、［４］に記載の腎障害度推定法：
（１）血中ベイシジン及び／又は尿中ベイシジンを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、腎障害度を推定するステップ。
［６］前記腎疾患がループス腎炎又は急性進行性糸球体腎炎である、［４］又は［５］に記載の腎障害度推定法。
［７］ステップ（１）に加えて以下のステップ（１’）も実施し、ステップ（２）ではステップ（１）とステップ（１’）の検出結果に基づき、腎障害度を推定する、［５］又は［６］に記載の腎障害度推定法。：
（１’）血中補体因子C3、血中抗DNA抗体、尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、及び尿蛋白からなる群より選択される一以上のバイオマーカーを検出するステップ。
［８］ステップ（１’）において、血中補体因子C3を検出する、［７］に記載の腎障害度推定法。
［９］血中補体因子C3、血中抗DNA抗体、尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、及び尿蛋白からなる群より選択される一以上のバイオマーカーと、血中ベイシジンとからなる、腎障害度推定用マーカーセット。
［１０］ベイシジンからなる、IgA腎症鑑別用バイオマーカー。
［１１］血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標としたIgA腎症の鑑別法。
［１２］前記指標が血中ベイシジン量であり、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症及び急性進行性糸球体腎炎からなる群より選択される一以上の疾患との鑑別に用いられる、［１１］に記載の鑑別法。
［１３］前記指標が尿中ベイシジン量であり、糖尿病性腎症及び／又は急性進行性糸球体腎炎との鑑別に用いられる、［１１］に記載の鑑別法。
［１４］以下のステップ（１）及び（２）を含む、［１１］に記載の鑑別法：
（１）血中ベイシジン及び／又は尿中ベイシジンを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、罹患する腎疾患がIgA腎症であるか否かを判定するステップ。
［１５］ベイシジンからなる、急性腎障害早期検出用バイオマーカー。
［１６］血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標とした急性腎障害の検査法。
［１７］以下のステップ（１）及び（２）を含む、［１６］に記載の検査法：
（１）血中ベイシジン及び／又は尿中ベイシジンを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、急性腎障害の発症可能性を判定するステップ。
［１８］急性腎障害が術後の虚血性急性腎障害である、［１７］に記載の検査法。
［１９］虚血状態を引き起こす施術時から術後１日までの間に採取した尿を用いてステップ（１）を実施する、［１７］に記載の検査法。
［２０］虚血状態を引き起こす施術開始から１２時間以内に採取した尿を用いてステップ（１）を実施する、［１７］に記載の検査法。
［２１］手術が、大血管手術、人工心肺装置を用いる開心術、臓器移植術又は腎腫瘍部分腎切除術である、［１７］〜［２０］のいずれか一項に記載の検査法。
［２２］ステップ（１）に加えて以下のステップ（１’）も実施し、ステップ（２）ではステップ（１）とステップ（１’）の検出結果に基づき、急性腎障害の発症可能性を判定する、［１７］〜［２０］のいずれか一項に記載の検査法：
（１’）尿中ミッドカイン（MK）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、尿中インターロイキン18（IL-18）、尿中腎障害分-1（KIM-1）、β-N-アセチル-D-グルコミニダーゼ(NAG）及び尿中肝型脂肪酸結合蛋白（L-FABP）からなる群より選択される一以上のバイオマーカーを検出するステップ。
［２３］ベイシジンからなる、腎機能に関する予後推定用バイオマーカー。
［２４］血中ベイシジン量又は尿中ベイシジン量を指標とした、腎機能に関する予後推定法。
［２５］将来発症し得る急性腎障害の重症度を推定する方法である、［２４］に記載の予後推定法。
［２６］抗ベイシジン抗体からなる、腎障害度推定用、IgA腎症鑑別用、急性腎障害検査用又は腎機能に関する予後推定用の試薬。
［２７］［２６］に記載の試薬を含む、腎障害度推定用、IgA腎症鑑別用、急性腎障害検査用又は腎機能に関する予後推定用のキット。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】腎疾患患者の血清Bsg濃度（左）と尿中Bsg濃度（右）の比較。腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者（MGA）とループス腎炎の患者（ループス）の間で比較した。
【図２】ループス腎炎患者の血清Bsg濃度と各種指標（検査値）との相関性。Cr値（左上）、尿蛋白（右上）、血中尿素窒素（BUN）値（左下）及び抗ds-DNA抗体（右下）との相関性を調べた。
【図３】ループス腎炎患者の尿中Bsg濃度と各種指標（検査値）との相関性。血清Cr値（左上）、尿蛋白（右上）、収縮期血圧（左下）及び抗ds-DNA抗体（右下）との相関性を調べた。
【図４】血清Bsg濃度と全身性エリトマトーデス（SLE）活動性スコアとの相関性。SLE活動性スコアであるSLEDAI（Bombardier C. et al., Arthritis Rheum, 35(6): 630-640. 1992.）とSLAM（24の臨床所見と8の検査値。American Rheumatism Association Glossary Committee: Dictionary of Rheumatic Diseases. Vol. I. New York, Contact Associates, 1982）との相関性を調べた。
【図５】尿中Bsg濃度とSLE活動性スコア（SLEDAIとSLAM）との相関性。
【図６】ループス腎炎に特徴的な指標である活動性インデックス（上）及び慢性化インデックス（下）。
【図７】ループス腎炎患者のBsg濃度と活動性インデックス及び慢性化インデックスとの相関性。血清Bsg濃度と活動性インデックスとの相関性（左上）、尿中Bsg濃度と活動性インデックスとの相関性（右上）、血清Bsg濃度と慢性化インデックスとの相関性（左下）及び尿中Bsg濃度と慢性化インデックスとの相関性（右下）を調べた。
【図８】（ａ）健常コントロールと急性尿細管壊死（ATN）症例の血漿Bsg濃度。（ｂ）健常コントロールと急性尿細管壊死（ATN）症例の尿中Bsg濃度。（ｃ）血漿Bsg濃度と尿中Bsg濃度の相関性。（ｄ）血漿Bsg濃度と尿中L-FABP濃度との相関性。（ｄ）尿中Bsg濃度と尿中L-FABP濃度との相関性。
【図９】組織の活動性スコアに基づくROC解析の結果。活動性スコア≧７をoutcomeとしてROC解析を行った。AUCはROC曲線の下の面積（Area under the ROC curve）、TPFは真陽性率（True Positive Fraction）、FRPは偽陽性率（False Positive Fraction）を表す。
【図１０】多重ロジスティック回帰分析の結果（左）とROC解析の結果（右）。Bは回帰係数、SEは標準誤差、ORはオッズ比、CIは信頼区間、Pはp値、AUCはROC曲線の下の面積、TPFは真陽性率、FRPは偽陽性率を表す。
【図１１】高い診断能を示したバイオマーカーの組合せ。AUCはROC曲線の下の面積、CIは信頼区間を表す。
【図１２】腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者（MGA）、ループス腎炎（Lupus）、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）及びIgA腎症（IgA）の患者背景。
【図１３】疾患毎の血清Bsg濃度。N.S.：有意差なし。
【図１４】疾患毎の尿中Bsg濃度。N.S.：有意差なし。
【図１５】Bsg濃度による腎疾患鑑別チャート。ループス腎炎（ループス）、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）、慢性腎症（MN）、IgA腎症（IgA）及び急性進行性糸球体腎炎（RPGN）について、疾患毎の血清Bsg濃度と尿中Bsg濃度のレベルを模式的に表した。
【図１６】血清Bsg濃度のROC曲線（receiver-operating characteristic curve）解析の結果。横軸は（１−特異度）、縦軸は感度である。ループス腎炎（Lupus）（上段左）、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）（上段中央）、糖尿病性腎症（DMN）（上段右）、急性進行性糸球体腎炎（RPGN）（下段左）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）（下段中央）及び慢性腎症（MN）（下段右）とIgA腎症（IgA）との鑑別を行った。括弧内の数字は症例数。IgA腎症の症例数（n）は43。
【図１７】尿中Bsg濃度のROC（receiver-operating characteristic curve）曲線解析の結果。横軸は（１−特異度）、縦軸は感度である。ループス腎炎（Lupus）（上段左）、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）（上段中央）、糖尿病性腎症（DMN）（上段右）、急性進行性糸球体腎炎（RPGN）（下段左）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）（下段中央）及び慢性腎症（MN）（下段右）とIgA腎症（IgA）との鑑別を行った。括弧内の数字は症例数。IgA腎症の症例数（n）は43。
【図１８】尿中Bsg濃度（尿中Crで補正）の推移。急性腎障害を呈する症例（AKI群  n=38）と呈しない症例（non-AKI群  n=60）を比較した。■：AKI群の尿中Bsg濃度、◆： non-AKI群の尿中Bsg濃度  ＊P<0.01、＊＊P<0.05
【図１９】尿中Bsg濃度（尿中Crで補正）の推移。待機的腹部大動脈瘤術を施行した32例の尿サンプルを用い、急性腎障害を呈する症例（●）と呈しない症例（○）を比較した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
１．腎障害度の推定
本発明の第１の局面は腎障害度の推定に関する。後述の実施例に示すように、本発明者らの検討の結果、腎障害度の高い症例では血清Bsg濃度及び尿中Bsg濃度が高くなる傾向を認めるとともに、ループス腎炎に関してBsg量（特に血清Bsg濃度）は、腎障害に関する既存の検査項目ないし指標（血清クレアチニン値、血中尿素窒素値、活動性インデックス）と強い相関を示した。当該知見に基づき、この局面では特定の腎疾患における腎障害度を推定するためのバイオマーカー及びその用途が提供される。
【００１１】
１−１．腎障害度推定用のバイオマーカー
本明細書において「腎障害度推定用のバイオマーカー」とは、特定の腎疾患を罹患する患者における腎組織の障害度の指標となる生体分子のことをいう。ここでの「特定の腎疾患」は、ループス腎炎、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）又は急性進行性糸球体腎炎（RPGN）である。従って、本発明のバイオマーカーは、これらの中のいずれかの疾患に罹患する患者又は罹患している可能性のある患者に対して適用されることになる。尚、本明細書において、用語「腎障害度」は「重症度」及び「進行度」と同義であり、これらの用語は置換可能に用いられる。
【００１２】
「ループス腎炎」とは、全身性エリトマトーデス（SLE）に伴う腎障害の総称である。従って、ループス腎炎を罹患する患者の重症度を推定することはSLEの診断に役立つ点で有意義であり且つ重要である。ループス腎炎では、糸球体、尿細管、間質など広範な領域に病変が認められる。
【００１３】
「糖尿病性腎症（DMN）」とは、糖尿病に伴う腎病変であり、糸球体の硬化やサンギウム領域に結節性病変を認める。
【００１４】
「巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）」とは、糸球体内で巣状局所性の糸球体硬化を特徴とするネフローゼ症候群をいう。微小変化ネフローゼ症候群に類似するが、高率で腎不全に陥り予後不良である。
【００１５】
「急性進行性糸球体腎炎（RPGN）」は、急速に腎機能が障害され、急性腎不全へと進行する疾患である。多くの症例では半月体形成性糸球体腎炎又は管外増殖性糸球体腎炎を呈する。
【００１６】
上記の通り、ループス腎炎についてBsg量（特に血清Bsg濃度）は、腎障害に関する既存の検査項目ないし指標（血清クレアチニン値、血中尿素窒素、活動性インデックス）と強い相関を示した。この事実を考慮すれば、ループス腎炎における腎障害度を推定するためのバイオマーカーとしてBsgは特に有用である。一方、RPGNでは血清Bsgレベルの顕著な上昇を認めた。このことはRPGNにおいてBsgの応答性（感度）が特に良いことを意味する。当該事実を考慮すれば、RPGNにおける腎障害度を推定するためのバイオマーカーとしてのBsgの有用性も非常に高い。現状では、ループス腎炎の鑑別には組織染色、病理学的検索等が必要であり、生検を避けられない。本発明によれば、生検を伴うことなく、ループス腎炎における腎障害度、即ち重症度を把握でき、より適切な治療方針の決定が可能になる。一方、RPGNは急速に進行する病態であり、治療方針の決定は急務を要する。本発明によれば、RPGNについても、生検を伴うことなく、治療方針の決定に役立つ情報を提供できる。
【００１７】
本発明のバイオマーカーはベイシジン（Bsg）からなる。Bsgは別名CD147又はEMMPRINと呼ばれ、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜糖蛋白質である。上記の通り、Bsgは、心臓、赤血球や炎症系細胞（マクロファージや好中球）等において臓器特異性な糖鎖をもつ糖タンパクとして存在し、血管新生・腫瘍の浸潤と転移に関与する。MMPファミリーや血管内皮増殖因子(VEGF)受容体2の調節をBsgが行うことも報告されている（非特許文献８）。その他、Bsgの作用・機能として、雄性および雌性不妊への関与、進行性網膜変性症（視細胞変性）への関与、乳酸代謝の促進、脾臓における赤血球寿命の制御、炎症系細胞の遊走促進等が知られている。
【００１８】
Bsgは宮内らによってクローニングされた（非特許文献７）。公共のデータベースに登録されている、Bsgのアミノ酸配列（GenBank, ACCESSION：BAA08109, DEFINITION: basigin [Homo sapiens].）を配列表の配列番号１に示す。
【００１９】
血中Bsg濃度と尿中Bsg濃度の間に一定の相関性を認めた事実から（後述の実施例を参照）、血中又は尿中のBsgをバイオマーカーとして用いることができる。尚、生体中に存在するBsgではなく、生体から採取された（即ち分離された）検体中のBsgが本発明のバイオマーカーとして利用される。
【００２０】
ここで、血漿Bsgをサンプルとした検討（後述の実施例）において、Bsgは単独でも腎炎活動性マーカーとして有用であることが判明した。この事実に従えば、特に血中Bsgは有用なバイオマーカーである。
【００２１】
また、血中Bsgに他のバイオマーカーを組み合わせることによって、診断能が向上することが判明した（後述の実施例）。そこで、本発明は、血中Bsgと他のバイオマーカーとを組み合わせた腎障害度推定用マーカーセットも提供する。ここでの他のバイオマーカーとしては、血中補体因子C3、血中抗DNA抗体、尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）及び尿蛋白からなる群より選択されるものが用いられる。二以上のバイオマーカーを選択し、血中Bsgに組み合わせてもよい。
【００２２】
１−２．腎障害度推定法
本発明のバイオマーカーの用途の一つとして、腎障害推定法が提供される。本発明は、特定の疾患、即ちループス腎炎、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）又は急性進行性糸球体腎炎（RPGN）の腎障害度の推定に利用される。好ましくは、ループス腎炎又はRPGNの腎障害度の推定に利用される。
【００２３】
本発明の腎障害度推定法では血中Bsg量又は尿中Bsg量を判定指標に用いる。具体的には、本発明の腎障害推定法では次のステップ（１）及び（２）を実施する。
（１）血中Bsg及び／又は尿中Bsgを検出するステップ
（２）検出結果に基づき、腎障害度を推定するステップ
【００２４】
ステップ（１）
ステップ（１）では、被検者から採取された検体を用意し、その中に存在するBsgを検出する。本明細書において「ベイシジン（Bsg）を検出する」とは、Bsg量を測定すること、即ち検体のBsg濃度を明らかにすることと同義である。厳密な定量は必須ではなく、半定量的にBsg量を測定することにしてもよい。例えば、Bsg量が所定の基準量を超えるか否かが判別可能なように検出を行う。検体としては血液検体（全血、血清、血漿など）又は尿検体を用いる。両検体についてBsgの検出を行うことにしてもよい。その場合には、通常、ステップ（２）において、各検体についての結果を総合して判定する。後述の実施例に示した実験結果を踏まえると、腎機能に関する既存の検査項目ないし指標との間に一層強い相関性を認めた点において、尿中Bsgよりも血中Bsgの方が優れた指標であるといえる。そこで、好ましい態様では検体として血液検体を用いる。但し、この場合においても、尿検体を併用してもよい。尚、血液検体として、好ましくは、血清又は血漿を用いる。
【００２５】
血中Bsg及び尿中Bsgの検出方法は特に限定されないが、好ましくは免疫学的手法を利用する。免疫学的手法によれば迅速に且つ感度よくBsg濃度を測定できる。また、操作も簡便である。免疫学的手法によるBsg濃度の測定ではBsgに特異的結合性を有する物質が使用される。当該物質としては通常は抗Bsg抗体が用いられるが、Bsgに特異的結合性を有し、その結合量を測定可能な物質であれば抗Bsg抗体に限らず使用することができる。既にBsgは精製、同定されており、Bsgに特異的結合性を示す抗体は常法で調製可能である。尚、抗Bsg抗体（抗CD147抗体）は各社（例えばabcam社、Bay bioscience社）が販売している。
【００２６】
測定法として、ラテックス凝集法、蛍光免疫測定法（FIA法）、酵素免疫測定法（EIA法）、放射免疫測定法（RIA法）、ウエスタンブロット法を例示することができる。好ましい測定法としては、FIA法及びEIA法（ELISA法を含む）を挙げることができる。これらの方法によれば高感度、迅速且つ簡便に検出可能である。FIA法では蛍光標識した抗体を用い、蛍光をシグナルとして抗原抗体複合体（免疫複合体）を検出する。一方、EIA法では酵素標識した抗体を用い、酵素反応に基づく発色ないし発光をシグナルとして免疫複合体を検出する。各測定法は標準的なプロトコールで実施することができるが、当業者であれば、検出目的に合わせて、条件や手順の一部を改良することは容易である。
【００２７】
ELISA法は検出感度が高いことや特異性が高いこと、定量性に優れること、操作が簡便であること、多検体の同時処理に適することなど、多くの利点を有する。ELISA法を利用する場合の具体的な操作法の一例を以下に示す。まず、抗Bsg抗体を不溶性支持体に固定化する。具体的には例えばマイクロプレートの表面を抗Bsg抗体で感作する（コートする）。このように固相化した抗体に対して尿検体を接触させる。この操作の結果、固相化した抗Bsg抗体に対する抗原（Bsg）が尿検体中に存在していれば免疫複合体が形成される。洗浄操作によって非特異的結合成分を除去した後、酵素を結合させた抗体を添加することで免疫複合体を標識し、次いで酵素の基質を反応させて発色させる。そして、発色量を指標として免疫複合体を検出する。
【００２８】
非競合法に限らず、競合法（検体とともに抗原を添加して競合させる方法）を用いることにしてもよい。また、検体中のBsgを標識化抗体で直接検出する方法を採用しても、或いはサンドイッチ法を採用してもよい。サンドイッチ法では、エピトープの異なる２種類の抗体（捕捉用抗体及び検出用抗体）が用いられる。ELISA法の詳細については数多くの成書や論文に記載されており、各方法の実験手順や実験条件を設定する際にはそれらを参考にできる。尚、Bsg用（CD147用）のELISAキットは各社（例えばフナコシ株式会社、TransGenic社、R&D Systems社）が販売している。
【００２９】
本発明の一態様では、血中Bsg及び／又は尿中Bsgだけでなく、腎障害度の指標となる他のバイオマーカーも検出し、両者の検出結果を腎障害度の推定に用いる。即ち、この態様ではステップ（１）に加えて以下のステップ（１’）も実施し、ステップ（２）ではステップ（１）とステップ（１’）の検出結果に基づき、腎障害度を推定する。
（１’）血中補体因子C3、血中抗DNA抗体、尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL）、及び尿蛋白からなる群より選択される一以上のバイオマーカーを検出するステップ。
【００３０】
ここで使用する他のバイオマーカーは、Bsgとの併用によって高い診断能を示したものであり、的中率及び／又は信頼性のより高い推定結果をもたらす。好ましい態様では、最も高い診断能を示した組合せとなるように、血中補体因子C3を検出することにする。
【００３１】
ステップ（１’）における各バイオマーカーの測定方法は常法に従えばよい。例えば、Bsgの測定の場合と免疫学的測定法を採用することができる。
【００３２】
ステップ（２）
ステップ（２）では、ステップ（１）の検出結果に基づき、腎障害度を推定する。腎障害度の推定は定性的、定量的のいずれであってもよい。定性的推定と定量的推定の例を以下に示す。判定に用いる基準値やカットオフ値は、使用する検体、区別すべき障害度のレベル、要求される精度（信頼度）などを考慮して決定すればよい。定性的判定を行う場合、検体として血清を用いるのであれば、基準値を例えば2,000pg/ml〜3,000pg/ml(具体例は2500pg/ml)の間で設定することができ、検体として尿を用いるのであれば、基準値を例えば尿中ケレアチニン補正値で50〜200（具体例は100）の間で設定することができる。尚、ここでの判定は、その判定基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。尚、ここでの推定は、その判断基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
（定性的推定の例１）
基準値よりも測定値（Bsg量）が高いときに「腎障害度が高い」と推定し、基準値よりも測定値が低いときに「腎障害度が低い」と推定する。
（定性的推定の例２）
反応性が認められた（陽性の）ときに「腎障害度が高い」と推定し、反応性が認められない（陰性の）ときに「腎障害度が低い」と推定する。
【００３３】
（定量的推定の例）
以下に示すように測定値の範囲毎に腎障害度（グレード又はステージ）を予め設定しておき、測定値から腎障害度を推定する。
測定値＜ａ：低度障害（グレードI又はステージIとしてもよい）
ａ≦測定値＜ｂ：低中等度障害（グレードII又はステージII）
ｂ≦測定値＜ｃ：中等度障害（グレードIII又はステージIIIとしてもよい）
ｃ≦測定値＜ｄ：高中等度障害（グレードIV又はステージIVとしてもよい）
ｄ＜測定値：高度障害（グレードV又はステージVとしてもよい）
この例では５段階に区分したが、区分数は任意に設定できる。区分数の例は２〜１０、好ましくは３〜６である。
【００３４】
１−３．腎障害度推定用試薬及びキット
本発明はさらに腎障害度推定用試薬及びキットも提供する。本発明の試薬は抗Bsg抗体からなる。抗Bsg抗体は、Bsgに対する特異的結合性を有する限り、その種類や由来などは特に限定されない。また、ポリクローナル抗体、オリゴクローナル抗体（数種〜数十種の抗体の混合物）、及びモノクローナル抗体のいずれでもよい。ポリクローナル抗体又はオリゴクローナル抗体としては、動物免疫して得た抗血清由来のIgG画分のほか、抗原によるアフィニティー精製抗体を使用できる。Bsg抗体が、Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、dsFv抗体などの抗体断片であってもよい。
【００３５】
抗Bsg抗体は、免疫学的手法、ファージディスプレイ法、リボソームディスプレイ法などを利用して調製することができる。免疫学的手法によるポリクローナル抗体の調製は次の手順で行うことができる。抗原（Bsg又はその一部）を調製し、これを用いてウサギ等の動物に免疫を施す。生体試料を精製することにより抗原を得ることができる。また、組換え型抗原を用いることもできる。組換え型BSGは、例えば、BSGをコードする遺伝子（遺伝子の一部であってもよい）を、ベクターを用いて適当な宿主に導入し、得られた組換え細胞内で発現させることにより調製することができる。
【００３６】
免疫惹起作用を増強するために、キャリアタンパク質を結合させた抗原を用いてもよい。キャリアタンパク質としてはKLH（Keyhole Limpet Hemocyanin）、BSA（Bovine Serum Albumin）、OVA（Ovalbumin）などが使用される。キャリアタンパク質の結合にはカルボジイミド法、グルタルアルデヒド法、ジアゾ縮合法、MBS（マレイミドベンゾイルオキシコハク酸イミド）法などを使用できる。一方、CD46（又はその一部）を、GST、βガラクトシダーゼ、マルトース結合タンパク、又はヒスチジン（His）タグ等との融合タンパク質として発現させた抗原を用いることもできる。このような融合タンパク質は、汎用的な方法により簡便に精製することができる。
【００３７】
必要に応じて免疫を繰り返し、十分に抗体価が上昇した時点で採血し、遠心処理などによって血清を得る。得られた抗血清をアフィニティー精製し、ポリクローナル抗体とする。
【００３８】
一方、モノクローナル抗体については次の手順で調製することができる。まず、上記と同様の手順で免疫操作を実施する。必要に応じて免疫を繰り返し、十分に抗体価が上昇した時点で免疫動物から抗体産生細胞を摘出する。次に、得られた抗体産生細胞と骨髄腫細胞とを融合してハイブリドーマを得る。続いて、このハイブリドーマをモノクローナル化した後、目的タンパク質に対して高い特異性を有する抗体を産生するクローンを選択する。選択されたクローンの培養液を精製することによって目的の抗体が得られる。一方、ハイブリドーマを所望数以上に増殖させた後、これを動物（例えばマウス）の腹腔内に移植し、腹水内で増殖させて腹水を精製することにより目的の抗体を取得することもできる。上記培養液の精製又は腹水の精製には、プロテインG、プロテインA等を用いたアフィニティークロマトグラフィーが好適に用いられる。また、抗原を固相化したアフィニティークロマトグラフィーを用いることもできる。更には、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、硫安分画、及び遠心分離等の方法を用いることもできる。これらの方法は単独ないし任意に組み合わされて用いられる。
【００３９】
Bsgへの特異的結合性を保持することを条件として、得られた抗体に種々の改変を施すことができる。このような改変抗体を本発明の試薬としてもよい。
【００４０】
抗Bsg抗体として標識化抗体を使用すれば、標識量を指標に結合抗体量を直接検出することが可能である。従って、より簡便な検査法を構築できる。その反面、標識物質を結合させた抗Bsg抗体を用意する必要があることに加えて、検出感度が一般に低くなるという問題点がある。そこで、標識物質を結合させた二次抗体を利用する方法、二次抗体と標識物質を結合させたポリマーを利用する方法など、間接的検出方法を利用することが好ましい。ここでの二次抗体とは、抗Bsg抗体に特異的結合性を有する抗体であって例えばウサギ抗体として抗Bsg抗体を調製した場合には抗ウサギIgG抗体を使用できる。ウサギやヤギ、マウスなど様々な種の抗体に対して使用可能な標識二次抗体が市販されており（例えばフナコシ株式会社やコスモ・バイオ株式会社など）、本発明の試薬に応じて適切なものを適宜選択して使用することができる。
【００４１】
標識物質としては例えば、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、オレゴングリーン等の蛍光色素、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等の酵素、ルミノール、アクリジン色素等の化学又は生物発光化合物、32P、131I、125I等の放射性同位体、及びビオチンを挙げることができる。
【００４２】
一態様では、本発明の試薬はその用途に合わせて固相化されている。固相化に用いる不溶性支持体は特に限定されない。例えばポリスチレン樹脂、ポリカーボネート樹脂、シリコン樹脂、ナイロン樹脂等の樹脂や、ガラス等の水に不溶性の物質からなる不溶性支持体を用いることができる。不溶性支持体への抗体の担持は物理吸着又は化学吸着によって行うことができる。
【００４３】
本発明のキットは主要構成要素として本発明の試薬を含む。検査法を実施する際に使用するその他の試薬（緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素の基質、発色試薬など）及び／又は装置ないし器具（容器、反応装置、蛍光リーダーなど）をキットに含めてもよい。また、標準試料としてBsgをキットに含めることが好ましい。尚、通常、本発明のキットには取り扱い説明書が添付される。
【００４４】
２．IgA腎症の鑑別診断
本発明の第２の局面はIgA腎症の鑑別診断に関する。後述の実施例に示す通り、各種腎疾患における血清Bsg濃度と尿中Bsg濃度を比較・評価した結果、IgA腎症症例は、他の腎疾患群とは異なり、対照とした腎組織上異常所見を認めなかった症例とBsg濃度の実質的な上昇を認めなかった。この事実を踏まえ、BsgがIgA腎症の鑑別に有用であることを確認するため、ROC曲線（Receiver Operating Characteristic curve）解析を行った。その結果、高い感度及び特異度が得られることがわかり、IgA腎症と他の腎疾患（ループス腎炎、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）、慢性腎症（MN）、急性進行性糸球体腎炎（RPGN））との間の鑑別にBsgが有用であることが裏付けられた。これらの知見に基づき、この局面では、IgA腎症鑑別用のバイオマーカー及びその用途が提供される。以下、この局面の詳細について説明するが、第１の局面と共通する事項については、第１の局面での説明を援用することにする。
【００４５】
２−１．IgA腎症鑑別用のバイオマーカー
本明細書において「IgA腎症鑑別用のバイオマーカー」とは、IgA腎症の鑑別の指標となる生体分子のことをいう。IgA腎症は、IgAを主体とする免疫複合体（顆粒状沈着物）が糸球体メサンギウム領域に沈着することを特徴とする腎疾患である。患者の40%前後が腎不全に進行し、予後不良である。尿所見及び血液検査により補助的な情報は得られるものの、生検以外にIgA腎症を鑑別する手段がないのが現状である。光学顕微鏡による所見ではメサンギウム増殖性腎炎を呈し、蛍光抗体法による所見ではメサンギウム領域にIgAの顆粒状沈着を認め、電子顕微鏡による所見では傍メサンギウム領域に高電子密度の沈着物を認める。
【００４６】
IgA腎症は、慢性化する腎疾患の中で極めて症例数が多く、IgA腎症を簡便に鑑別できる手段の提供が望まれるとことである。本発明のバイオマーカーは当該ニーズに応えるものであり、その有用性は高い。
【００４７】
本発明のバイオマーカーはBsgからなる。Bsgの詳細については上記の通りである。血中Bsg濃度と尿中Bsg濃度の間に一定の相関性を認めた事実から（後述の実施例を参照）、血中又は尿中のBsgをバイオマーカーとして用いることができる。尚、生体中に存在するBsgではなく、生体から採取された（即ち分離された）検体中のBsgが本発明のバイオマーカーとして利用される。
【００４８】
２−２．IgA腎症の鑑別法
本発明のバイオマーカーの用途の一つとしてIgA腎症の鑑別法が提供される。本発明の鑑別法によれば、罹患している腎疾患に関して、「IgA腎症である」又は「IgA腎症以外の腎疾患である」との判定結果が得られる。一つ又は二つ以上の特定の腎疾患との鑑別に本発明を利用することもできる。その場合には、例えば、「IgA腎症である」又は「IgA腎症ではなく、特定の腎疾患である」と判定する。ここでの特定の腎疾患は例えば、ループス腎炎、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）、慢性腎症（MN）又は急性進行性糸球体腎炎（RPGN）である。
【００４９】
本発明の鑑別法では血中Bsg量及び／又は尿中Bsg量を判定指標に用いる。具体的には、本発明の鑑別法では次のステップ（１）及び（２）を実施する。
（１）血中Bsg及び／又は尿中Bsgを検出するステップ
（２）検出結果に基づき、罹患する腎疾患がIgA腎症であるか否かを判定するステップ
【００５０】
ステップ（１）は第１の局面のステップ（１）と同様に実施できるため、上記の記載を援用することにし、重複する説明を省略する。尚、後述の実施例に示した実験結果に鑑みれば、血清Bsg濃度は、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）及び急性進行性糸球体腎炎（RPGN）からなる群より選択される一以上の疾患との鑑別に特に有効であり、同様に、尿中Bsg濃度については、糖尿病性腎症（DMN）及び／又は急性進行性糸球体腎炎（RPGN）との鑑別に特に有効である。そこで、鑑別の対象（ループス腎炎、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）、糖尿病性腎症（DMN）、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）、慢性腎症（MN）、急性進行性糸球体腎炎（RPGN）等）に応じて血液検体と尿検体を使い分けることにしてもよい。或いは、両方の検体を併用しつつ、片方については補助的に用いることにしてもよい。
【００５１】
ステップ（２）
ステップ（２）では、ステップ（１）の検出結果に基づき、罹患する腎疾患がIgA腎症であるか否かを判定する。ここでの判定は定性的、定量的のいずれであってもよい。定性的判定と定量的判定の例を以下に示す。判定に用いる基準値やカットオフ値は、使用する検体、鑑別の対象、要求される精度（信頼度）などを考慮して決定すればよい。定性的判定を行う場合、検体として血清を用いるのであれば、基準値を例えば2,000pg/ml〜3,000pg/ml(具体例は2500pg/ml)の間で設定することができ、検体として尿を用いるのであれば、基準値を例えば尿中ケレアチニン補正値で50〜200（具体例は100）の間で設定することができる。尚、ここでの判定は、その判定基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
（定性的判定の例１）
基準値よりも測定値（Bsg量）が低いときに「IgA腎症である」又は「IgA腎症である可能性が高い」と判定し、基準値よりも測定値が高いときに「IgA腎症以外の腎疾患である」又は「IgA腎症以外の腎疾患である可能性が高い」と判定する。基準値よりも測定値が高いときに「IgA腎症ではなく、特定の腎疾患である」又は「IgA腎症ではなく、特定の腎疾患である可能性が高い」との判定を行うこともできる。
（定性的判定の例２）
反応性が認めらない（陰性の）ときに「IgA腎症である」又は「IgA腎症である可能性が高い」と判定し、反応性が認められた（陽性の）ときに「IgA腎症以外の腎疾患である」又は「IgA腎症以外の腎疾患である可能性が高い」或いは「IgA腎症ではなく、特定の腎疾患である」又は「IgA腎症ではなく、特定の腎疾患である可能性が高い」と判定する。
【００５２】
（定量的判定の例）
以下に示すように測定値の範囲毎に「IgA腎症である可能性（％）」を予め設定しておき、測定値から「IgA腎症である可能性（％）」を判定する。
測定値＜ａ： IgA腎症である可能性は８０％より大きい
ａ≦測定値＜ｂ：IgA腎症である可能性は２０％〜８０％
ｂ＜測定値： IgA腎症である可能性は２０％未満
この例では３段階に区分したが、区分数は任意に設定できる。区分数の例は２〜１０、好ましくは２〜５である。
【００５３】
２−３．IgA腎症鑑別用試薬及びキット
本発明は更にIgA腎症鑑別用試薬及びキットを提供する。本発明の試薬は抗Bsg抗体からなる。抗Bsg抗体については、第１の局面の試薬の場合と同様であるのでその説明を省略する。本発明のキットは主要構成要素として本発明の試薬を含む。鑑別法を実施する際に使用するその他の試薬（緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素の基質、発色試薬など）及び／又は装置ないし器具（容器、反応装置、蛍光リーダーなど）をキットに含めてもよい。また、標準試料としてBsgをキットに含めることが好ましい。尚、通常、本発明のキットには取り扱い説明書が添付される。
【００５４】
３．急性腎障害（AKI）の早期検出
本発明の第３の局面は急性腎障害（以下、「AKI」とも称する」）の早期検出に関する。後述の実施例に示すように、本発明者らの検討の結果、将来、急性腎障害を発症する患者では、術後の早い段階から尿中Bsg濃度の上昇を認めた。当該知見に基づき、この局面では、AKI早期検出用のバイオマーカー及びその用途が提供される。以下、この局面の詳細について説明するが、第１の局面と共通する事項については、第１の局面での説明を援用することにする。
【００５５】
３−１．急性腎障害早期検出用のバイオマーカー
本明細書において「急性腎障害（AKI）のバイオマーカー」とは、AKIの発症可能性の指標となる生体分子のことをいう。「急性腎障害（AKI）」とは、急速に腎機能が低下する病態の総称である。従って「急性腎障害（AKI）」には、腎前性腎障害、腎性腎障害（急性尿細管壊死（ATN）、尿細管間質性腎炎、糸球体腎炎など）、及び腎後性腎障害が含まれる。糸球体疾患や尿路感性症については、続発性に急性尿細管障害を来さない限り「急性腎障害（AKI）」に含まれないものとする。従って、続発性に急性尿細管障害を来す場合には、糸球体疾患や尿路感染症も本発明の適用対象となる。
【００５６】
狭義のAKIは、腎前性腎障害、即ち一次性に急性尿細管障害を来す病態であるATNを指す。本発明は、狭義のAKIの早期検出に特に有用である。ATNには虚血性AKI、中毒性AKI又は敗血症性AKIが含まれる。虚血性AKIの例としては、腹部大動脈瘤置換術などの大血管手術、心臓弁置換術など人工心肺装置を用いる開心術、臓器移植術、又は腎腫瘍部分腎切除術等の術後に生ずるもの、うっ血性心不全、造影剤投与（例えば狭心症や心筋梗塞等を対象とした造影剤検査の際）、肝腎症候群又は血栓性微小血管障害に伴い生ずるもの、カルシニューリン阻害薬、アンギオテンシン変換酵素阻害薬・アンギオテンシンII受容体拮抗薬・非ステロイド性消炎鎮痛剤などの薬剤によるものが挙げられるが、これに限られない。他方、中毒性AKIの例としては、外因性因子として抗菌薬、抗癌剤などの薬剤、内因性因子としてヘム色素（ヘモグロビン尿・ミオグロビン尿）、多発性骨髄腫などの異常蛋白、尿酸・メソトレキセートといった結晶成分などに起因するものが含まれる。
【００５７】
本発明のバイオマーカーはBsgからなる。Bsgの詳細については上記の通りである。血中又は尿中のBsgをバイオマーカーとして用いることができるが、好ましくは尿中Bsgをバイオマーカーとする。尚、生体中に存在するBsgではなく、生体から採取された（即ち分離された）検体中のBsgが本発明のバイオマーカーとして利用される。
【００５８】
３−２．急性腎障害（AKI）の検査法
本発明のバイオマーカーの用途の一つとしてAKIの検査法が提供される。本発明の検査法は、AKIの発症可能性の判定（発症の早期予測）に利用される。好ましくは狭義のAKI、即ち急性尿細管壊死（ATN）の発症可能性の判定に利用される。本発明の検査法は、虚血性AKI、中毒性AKI及び敗血症性AKIの発症可能性の判定に有用である。
【００５９】
本発明の検査法を入院時や集中治療室（ICU）入室時に実施することにしてもよい。微小変化群（minimal change）がAKIに進展するか否かを判定するために本発明の検査法を行うことも可能である。尚、ネフローゼ症候群の最も頻度の多い原因である「微小変化群(minimal change)」はその1〜2割に乏尿性急性腎不全を呈する事が知られている。
【００６０】
本発明の検査法では血中Bsg量及び／又は尿中Bsg量を判定指標に用いる。具体的には、本発明の検査法では次のステップ（１）及び（２）を実施する。
（１）血中Bsg及び／又は尿中Bsgを検出するステップ；
（２）検出結果に基づき、AKIの発症可能性を判定するステップ。
【００６１】
ステップ（１）
ステップ（１）は第１の局面のステップ（１）と同様に実施できるため、上記の記載を援用することにし、重複する説明を省略する。
【００６２】
検体を採取する時期（タイミング）は特に限定されないが、AKIを発症する患者では術後の早い段階で尿中Bsg量が上昇した事実に鑑みれば、腹部大動脈瘤置換術、心臓弁置換術、臓器移植術、又は腎腫瘍部分腎切除術等の術後に生じ得る虚血性AKIの発症可能性を判定する場合、好ましくは、虚血状態を引き起こす施術時から術後１日までの間に採取した検体を用いてステップ（１）を実施し、さらに好ましくは、虚血状態を引き起こす施術開始から１２時間以内（術中、術後のいずれでもよい）に採取した尿を用いてステップ（１）を実施する。このように早い段階で採取した尿検体を用いることにより、AKIの発症を早期に予測できる。ここでの「虚血状態を引き起こす施術」とは、血管のクランプや人工心肺操作等が該当する。具体例を示すと、腹部大動脈瘤術の場合は大動脈遮断が「虚血状態を引き起こす施術」に該当する。
【００６３】
本発明の一態様では、血中Bsg及び／又は尿中Bsgだけでなく、AKIの指標となる他のバイオマーカーも検出し、両者の検出結果をAKIの発症可能性の判定に用いる。即ち、この態様ではステップ（１）に加えて以下のステップ（１’）も実施し、ステップ（２）ではステップ（１）とステップ（１’）の検出結果に基づき、AKIの発症可能性を判定する。
（１’）尿中ミッドカイン（NK）、尿中好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（NGAL:neutrophil gelatinase-associated lipocaline）、尿中インターロイキン18（IL-18:Interleukin 18）、尿中腎障害分子-1（KIM-1: kidney injury molecule-1）、β-N-アセチル-D-グルコミニダーゼ(NAG）及び尿中肝型脂肪酸結合蛋白（L-FABP: liver type fatty acid-binding protein）からなる群より選択される一以上のバイオマーカーを検出するステップ。
【００６４】
この態様によれば、異なる二以上の指標に基づき判定するため、的中率及び／又は信頼性のより高い検査結果が得られる。各バイオマーカー（Bsgを含む）の変動にはそれぞれ固有の特性があり、複数のバイオマーカーを組み合わせることによって、AKIの発症可能性の的中率や信頼性を高めることが可能となる。また、予後推定、急性尿細管壊死（ATN）と腎炎・腎症との鑑別などに有益な情報も得られる。
【００６５】
的中率及び／又は信頼性を高めるという観点からは、原則として、ステップ（１’）における検出対象のバイオマーカーの数は多いほどよい。そこで、好ましくはステップ（１’）において二つ以上のバイオマーカーを検出対象（例えば、MKとNGALの二つ、NGALとIL-18の二つ、MKとNGALとIL-18の三つなど）とする。
【００６６】
ステップ（１’）における各バイオマーカーの測定方法は特に限定されない。例えば、Bsgの測定の場合と免疫学的測定法を採用することができる。各バイオマーカーの測定は標準的方法又は既報の方法に準ずればよい。例えば、MKの測定に関しては優れたEIA法（特開平１０−１６０７３５号公報を参照）及びELISA法（S. Ikematsu, et al.Br. J. Cancer 2000;83）が開発されており、当該方法又は当該方法に準じた方法で測定することにしてもよい。当業者であれば、検出目的に合わせて、条件や手順の一部を改良することは容易である。また、Mishra J, et al., Lancet. 2005 Apr 2-8;365(9466):1231-8.にはNGALの測定法（ウエスタンブロット法及びELISA法）の説明がある。Prikh CR et al., Kidney Int. 2006 Jul;70(1):199-203. Epub 2006 May 17. にはNGALの測定法（ELISA法）及びIL-18の測定法（ELISA法）の説明がある。Han WK et al., Kidney Int. 2002 Jul;62(1):237-44.にはKIM-1の測定法（ウエスタンブロット法及びELISA法）の説明がある。Nakamura T. et al., American journal of Kidney Diseases, Vol 47, No 3(March), 2006:pp439-444及びYamamoto T. et al., J Am Soc Nephrol 18:2894-2902, 2007にはL-FABPの測定法（ELISA法）の説明がある。
【００６７】
これらのバイオマーカーを測定する場合の尿検体を採取する時期（タイミング）は特に限定されない。過去の報告を考慮して、或いは予備実験の結果に従い、尿検体の採取する時期を適宜設定すればよい。
【００６８】
ステップ（２）
ステップ（２）では、ステップ（１）の検出結果（ステップ（１’）も実施する場合にはステップ（１）及び（１’）の検出結果）に基づき、AKIの発症可能性を判定する。発症可能性の判定は定性的、定量的のいずれであってもよい。定性的判定と定量的判定の例を以下に示す。判定に用いる基準値やカットオフ値は、使用する検体、区別すべき障害度のレベル、要求される精度（信頼度）などを考慮して決定すればよい。定性的判定を行う場合、検体として血清を用いるのであれば、基準値を例えば2,000pg/ml〜3,000pg/ml(具体例は2500pg/ml)の間で設定することができ、検体として尿を用いるのであれば、基準値を例えば尿中ケレアチニン補正値で50〜200（具体例は100）の間で設定することができる。尚、ここでの判定は、その判定基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
（定性的判定の例１）
基準値よりも測定値（Bsg量）が高いときに「発症可能性が高い」と判定し、基準値よりも測定値が低いときに「発症可能性が低い」と判定する。
（定性的判定の例２）
反応性が認められた（陽性の）ときに「発症可能性が高い」と判定し、反応性が認められない（陰性の）ときに「発症可能性が低い」と判定する。
【００６９】
（定量的判定の例）
以下に示すように測定値の範囲毎に発症可能性（％）を予め設定しておき、測定値から発症可能性（％）を判定する。
測定値＜ａ：発症可能性は１０％未満
ａ≦測定値＜ｂ：発症可能性は１０％以上３０％未満
ｂ≦測定値＜ｃ：発症可能性は３０％以上５０％未満
ｃ≦測定値＜ｄ：発症可能性は５０％以上７０％未満
ｄ＜測定値：発症可能性は７０％以上
この例では５段階に区分したが、区分数は任意に設定できる。区分数の例は２〜１０、好ましくは３〜６である。
【００７０】
Bsgに加えて他のバイオマーカー（尿中MK、尿中NGAL、尿中IL-18、尿中KIM-1、尿中NAG及び尿中L-FABPからなる群より選択される一以上のバイオマーカー）も利用する場合の判定手法の一例を示すと、まずBsgの検出結果に基づき発症可能性を判定し、発症可能性が高いとの判定結果が出れば他のバイオマーカーの検出を追加で実施し、そして他のバイオマーカーの検出結果に基づき発症可能性の最終的な判定を下す。この例では、Bsgの検出結果を一次的な判定に利用し、他のバイオマーカーの検出結果を最終判定に利用するという判定手法を採用する。これとは逆に、他のバイオマーカーの検出結果を一次的な判定に利用し、Bsgの検出結果を最終判定に利用することにしてもよい。
【００７１】
３−３．急性腎障害（AKI）検査用試薬及びキット
本発明はさらにAKI検査用試薬及びキットも提供する。本発明の試薬は抗Bsg抗体からなる。抗Bsg抗体については、第１の局面の試薬の場合と同様であるのでその説明を省略する。本発明のキットは主要構成要素として本発明の試薬を含む。検査法を実施する際に使用するその他の試薬（緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素の基質、発色試薬など）及び／又は装置ないし器具（容器、反応装置、蛍光リーダーなど）をキットに含めてもよい。また、標準試料としてBsgをキットに含めることが好ましい。さらには、Bsg以外のバイオマーカー（尿中MK、尿中NGAL、尿中IL-18、尿中KIM-1、尿中NAG及び尿中L-FABPからなる群より選択される一以上のバイオマーカー）を検出するための試薬や当該試薬を使用する際に必要な他の試薬、器具などをキットに含めることも可能である。尚、通常、本発明のキットには取り扱い説明書が添付される。
【００７２】
４．腎機能に関する予後推定
本発明の第４の局面は腎機能に関する予後推定に関する。後述の実施例に示すように、本発明者らの検討の結果、将来発症するAKIのステージと尿中Bsg濃度の間に一定の相関を認めた。当該知見に基づき、この局面では、腎機能に関する予後推定用のバイオマーカー及びその用途が提供される。以下、この局面の詳細について説明するが、第１の局面と共通する事項については、第１の局面での説明を援用することにする。
【００７３】
４−１．腎機能に関する予後推定用のバイオマーカー
本明細書において「腎機能に関する予後推定用のバイオマーカー」とは、腎機能に関する予後の推定の指標となる生体分子のことをいう。「腎機能に関する予後」とは腎機能の将来の状態をいい、腎機能障害を引き起こしうるイベントを受けた患者の将来の腎機能の状態と、腎機能障害を罹患した患者の将来の腎機能の状態を包括する。「腎機能障害を引き起こしうるイベント」には、虚血性AKI、中毒性AKI及び敗血症性AKIのすべてが包含される。虚血性AKIの例としては、腹部大動脈瘤置換術などの大血管手術、心臓弁置換術など人工心肺装置を用いる開心術、臓器移植術、又は腎腫瘍部分腎切除術等の術後に生ずるもの、うっ血性心不全、造影剤投与（例えば狭心症や心筋梗塞等を対象とした造影剤検査の際）、肝腎症候群又は血栓性微小血管障害に伴い生ずるもの、カルシニューリン阻害薬、アンギオテンシン変換酵素阻害薬・アンギオテンシンII受容体拮抗薬・非ステロイド性消炎鎮痛剤などの薬剤によるものが挙げられるが、これに限られない。他方、中毒性AKIの例としては、外因性因子として抗菌薬、抗癌剤などの薬剤、内因性因子としてヘム色素（ヘモグロビン尿・ミオグロビン尿）、多発性骨髄腫などの異常蛋白、尿酸・メソトレキセートといった結晶成分などに起因するものが含まれる。
【００７４】
本発明のバイオマーカーはBsgからなる。Bsgの詳細については上記の通りである。血中又は尿中のBsgをバイオマーカーとして用いることができるが、好ましくは尿中Bsgをバイオマーカーとする。尚、生体中に存在するBsgではなく、生体から採取された（即ち分離された）検体中のBsgが本発明のバイオマーカーとして利用される。
【００７５】
４−２．腎機能に関する予後推定法
本発明のバイオマーカーの用途の一つとして、腎機能に関する予後推定法が提供される。本発明の予後推定法では血中Bsg量及び／又は尿中Bsg量を判定指標に用い、血中Bsg量及び／又は尿中Bsg量を検出するステップ（ステップ（１））及び、検出結果に基づき予後を推定するステップ（ステップ（２））を実施する。ステップ（１）は第１の局面のステップ（１）と同様であるのでその説明を省略する。
【００７６】
本発明の第３の局面の場合と同様に、他のバイオマーカーを併用することも可能である。特に、MKを併用することが好ましい。この態様によれば、異なる二以上の指標に基づき判定するため、的中率及び／又は信頼性のより高い検査結果が得られる。他のバイオマーカーの詳細については、上記の通りであるため、ここでの説明は省略する。
【００７７】
続くステップ（２）では、血中Bsg量及び／又は尿中Bsg量を指標として予後の推定を行う。予後の推定は定性的、定量的のいずれであってもよい。定性的推定と定量的推定の例を以下に示す。判定に用いる基準値やカットオフ値は、使用する検体、区別すべき障害度のレベル、要求される精度（信頼度）などを考慮して決定すればよい。定性的判定を行う場合、検体として血清を用いるのであれば、基準値を例えば2,000pg/ml〜3,000pg/ml(具体例は2500pg/ml)の間で設定することができ、検体として尿を用いるのであれば、基準値を例えば尿中ケレアチニン補正値で50〜200（具体例は100）の間で設定することができる。尚、ここでの推定は、その判断基準から明らかな通り、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
（定性的推定の例１）
基準値よりも測定値（Bsg量）が高いときに「予後不良である」と推定し、基準値よりも測定値が低いときに「予後がよい」と推定する。
（定性的判定の例２）
反応性が認められた（陽性の）ときに「予後不良である」と推定し、反応性が認められない（陰性の）ときに「発症可能性が低い」と推定する。
【００７８】
（定量的推定の例）
以下に示すように測定値の範囲毎に対応するステージを予め設定しておき、測定値から該当するステージを決定する。
測定値＜ａ：AKIを発症しない可能性が高い
ａ≦測定値＜ｂ：ステージIのAKIを発症する可能性が高い
ｂ≦測定値＜ｃ：ステージIIのAKIを発症する可能性が高い
ｃ＜測定値：ステージIIIのAKIを発症する可能性が高い
この例では４段階に区分したが、区分数は任意に設定できる。区分数の例は２〜５である。ここでのステージは、2007年にAcute Kidney Injury Network (AKIN)により提唱された以下の分類に基づき設定することができる。
ステージI：ベースラインから1.5倍以上の血中クレアチニン値もしくは0.3mg/dl以上の上昇を認める症例
ステージII：ベースラインから2倍以上の血中クレアチニン値を認める症例
ステージIII：ベースラインから3倍以上の血中クレアチニン値を認める症例、若しくは血清クレアチニン値4mg/dl以上で0.5mg/dl以上の急激な上昇を認めるか血液浄化療法の施行をされた症例
【００７９】
４−３．腎機能に関する予後推定用試薬及びキット
本発明は更に、腎機能に関する予後推定用の試薬及びキットを提供する。本発明の試薬は抗Bsg抗体からなる。抗Bsg抗体については、第１の局面の試薬の場合と同様であるのでその説明を省略する。本発明のキットは主要構成要素として本発明の試薬を含む。予後推定法を実施する際に使用するその他の試薬（緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素の基質、発色試薬など）及び／又は装置ないし器具（容器、反応装置、蛍光リーダーなど）をキットに含めてもよい。また、標準試料としてBsgをキットに含めることが好ましい。さらには、Bsg以外のバイオマーカー（特にMK）を検出するための試薬や当該試薬を使用する際に必要な他の試薬、器具などをキットに含めることも可能である。尚、通常、本発明のキットには取り扱い説明書が添付される。
【実施例】
【００８０】
腎疾患に対する新たなバイオマーカー及び治療標的の候補としてベイシジンに注目し、以下に示す各種検討を行った。【００８１】
１．腎障害度とBsg濃度（Bsg値）との関連
（１）対象・方法
腎疾患患者67例（ループ腎炎57例、腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者10例）の血清検体及び尿検体について、ELISA法を用いてBsg濃度を測定した。ELISA法にはSoluble EMMPRIN kit（R&D systems社）を用いた。尿中Bsg濃度は尿中クレアチニン（Cr）値で補正した。血清Bsg濃度及び尿中Bsg濃度についてループス腎炎との関連を調べた。【００８２】
一方、既存の各種指標（血清クレアチニン（Cr）、尿蛋白、血中尿素窒素（BUN）、抗ds-DNA抗体等）との相関も調べることにした。ループス腎炎57例については、SLE活動性スコアであるSLEDAI（Bombardier C. et al., Arthritis Rheum, 35(6): 630-640. 1992.）とSLAM（24の臨床所見と8の検査値。American Rheumatism Association Glossary Committee: Dictionary of Rheumatic Diseases. Vol.I. New York, Contact Associates, 1982）との相関、及びループス腎炎に特徴的な指標である活動性インデックス（図６上）及び慢性化インデックス（図６下）との相関も調べた。【００８３】
（２）結果・考察
Bsg濃度の測定結果を図１に示す。血清Bsg濃度（図１左）、尿中Bsg濃度（図１右）のいずれについても、腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者に比してループス腎炎患者は有意に高い値を示した。一方、Bsg濃度と既存の各種検査項目との相関を調べたところ、血清Bsg濃度はCr値及びBUN値と強い相関を示す一方で（図２）、尿蛋白量及び抗ds-DNA抗体値とは相関しなかった。尿中Bsg濃度については血清Cr値との間で相関を示した（図３）。このように、腎障害度が高い場合（即ちCr値やBUN値が高い場合）にBsg濃度も高い傾向を認めた。【００８４】
Bsg濃度と全身性エリトマトーデス（SLE）活動性スコアとの相関についても調べた。その結果、尿中Bsg濃度とSLAMとの間に若干の相関を認めた以外、Bsg濃度とSLE活動性スコアとの間に相関はなかった（図４、５）。即ち、Bsg濃度は全身の病勢を反映しないことが明らかとなった。対照的に、血清Bsg濃度及び尿中Bsg濃度と、ループス腎炎に特徴的な指標（図６）との間に強い相関を認めた（図７）。即ち、Bsg濃度は、ループス腎炎に特異性が高いことが示された。【００８５】
以上の通り、Bsg濃度はループス腎炎に特異性が高く、腎障害度の指標（マーカー）として有効であることが判明した。尚、各検討において血清Bsg濃度と尿中Bsg濃度は概ね同様の傾向を示すものの、腎障害度の既存の指標（例えばCr値）との相関性は血清Bsg濃度の方が強いことに鑑みれば、血清Bsg濃度の方がより有用且つ重要であるといえる。【００８６】
２．腎障害度とBsg濃度との関連２
名古屋大学およびその関連病院から収集された腎生検組織標本と同時期に採取された血漿・尿をサンプルとして、腎障害度とBsg濃度との関係を解析した。図８に示す通り、急性尿細管壊死（ATN)群のBsg値は、健常者（コントロール）に比して、血漿および尿中でともに有意に高値であった。また、虚血時に上昇するとされる尿中L-FABP（既に保険収載済）と正の相関を示した。【００８７】
３．マーカーの組合せによる診断
ループス腎炎64症例について、組織の活動性スコア（管内増殖、好中球浸潤、内皮下沈着、フィブリノイド壊死／核崩壊、細胞性半月体、尿細管間質炎症細胞浸潤）を算出し、Bsg値との相関を調べた。活動性のある腎炎とは一般的に活動性スコア7点以上をさすことから、組織活動性スコア7点以上をoutcomeとしたROC解析を行った。比較のために、既存のバイオマーカーについても解析した。【００８８】
結果を図９に示す。AUCが0.8以上となったのは血漿Bsg値のみであった。この結果は、血漿Bsg値が単独でも腎炎活動性を示すバイオマーカーになることを示唆する。更に高い診断能を得ることを目指し、バイオマーカーの組合せを検討した。臨床応用を考慮すれば、二つのマーカーの併用が好ましいといえる。この考えの下、各種組合せについて多重ロジスティック回帰分析を行い、その結果を基にROC解析を行った。ROC解析の結果を図１０及び図１１に示す。血漿Bsgを含む組合せ（血漿Bsgと血漿補体因子C3、血漿Bsgと血漿抗DNA抗体、血漿Bsgと尿中MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1）、血漿Bsgと尿中NGAL、血漿Bsgと尿蛋白（UP））が高い診断能を示した。最も高い診断能を示したのは血漿Bsgと血漿補体因子C3の組合せであり、そのAUCは0.92であった。【００８９】
以上の通り、血中のBsgは単独でも腎炎活動性を示すバイオマーカーとして有用であり、且つ他のバイオマーカーと併用すると一層高い診断能が得られることが明らかとなった。また、血中のBsgとの併用に適したバイオマーカーが特定された。【００９０】
４．各種腎疾患症例のBsg濃度
（１）対象・方法
腎疾患患者296例の血清検体及び尿検体について、ELISA法を用いてBsg濃度を測定した。ELISA法にはSoluble EMMPRIN kit（R&D systems社）を用いた。尿中Bsg濃度は尿中Cr値で補正した。疾患毎に血清Bsg濃度及び尿中Bsg濃度を集計し、比較した。尚、腎疾患患者296例の内訳は次の通りである。腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者（コントロール）、ループス腎炎（Lupus）、微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）及びIgA腎症（IgA）については、患者背景の詳細を図１２に示す。
腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者（MGA）：10例
ループス腎炎（Lupus）：57例
微小変化ネフローゼ症候群（MCNS）：45例
糖尿病性腎症（DMN）：24例
急性進行性糸球体腎炎（RPGN）：43例
IgA腎症（IgA）：43例
巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）：34例
慢性腎症（MN）：40例【００９１】
（２）結果・考察
疾患毎の血清Bsg濃度及び尿中Bsg濃度をそれぞれ図１３及び図１４に示す。血清Bsg濃度及び尿中Bsg濃度は概ね同じ傾向を示した。注目すべきことに、IgA腎症のみ、微小変化群と同様にBsg濃度が上昇していない（腎生検を試みたが、病理組織検索上、異常所見を認めない患者とIgA腎症の間に有意差なし）。また、糖尿病性腎症（DMN）及び巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）ではBsg濃度が高く、急性進行性糸球体腎炎（RPGN）で最大のBsg濃度を示した。以上の結果を図１５に模式的に表した。図１５に示すように、Bsg濃度のレベルによって各疾患を特徴付けることができる。即ち、これらの疾患の鑑別にBsg濃度を利用できる。特に、Bsg濃度の上昇を認めない（Bsg濃度が低レベルである）点においてIgA腎症は特徴的である。この事実はBsg濃度がIgA腎症の鑑別に特に有効であることを意味する。【００９２】
鑑別用バイオマーカーとしてのBsg濃度の有効性を検証するため、IgA腎症の鑑別に関して更に検討を加えることにした。具体的には、血清Bsg濃度と尿中Bsg濃度のそれぞれについて、ROC（Receiver Operating Characteristic curve）解析を行った。結果を図１６（血清Bsg濃度）及び図１７（尿中Bsg濃度）に示す。カットオフ値を3600pg/mlに設定し、感度及び特異度並びにAUC（area under the curve：ROC曲線の下の面積）を算出した。図示の通り、概ね高い感度及び特異度が得られており、IgA腎症の鑑別診断にBsg濃度が有用であることがわかる。また、血清Bsg濃度は糖尿病性腎症（DMN）（感度は    0.875、特異度は0.884、AUCは0.900）、急性進行性糸球体腎炎（RPGN）（感度は0.930、特異度は0.860、AUCは0.945）又は巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）（感度は0.853、特異度は0.860、AUCは0.930）との鑑別において、尿中Bsg濃度については糖尿病性腎症（DMN）（感度は0.875、特異度は 0.907、AUCは0.947）又は急性進行性糸球体腎炎（RPGN）（感度は0.953、特異度は0.907、AUCは0.974）との鑑別において、特に優れた指標であるといえる。【００９３】
５．術後の急性腎障害（AKI）とBsg濃度の関連１
（１）対象・方法
名古屋大学医学部附属病院で集中治療室に入室し、文書による同意が得られた98症例を対象として、尿中Bsg濃度と術後のAKIとの関連を調べた。術前から術後12時間にわたって、経時的に一般検査とともに尿中Bsg濃度をELISA法で測定した。AKI群(2007年にAcute Kidney Injury Network (AKIN)により提唱された分類をもとに定義)とnon-AKI群の間で比較・評価した。また、AKI群についてはステージ間の比較も行った。【００９４】
（２）結果・考察
試験結果を図１８に示す。AKI群では術後の早い段階から尿中Bsg濃度が有意に上昇し、高値を維持した（図１８）。また、AKIのステージI〜IIIの間で、尿中Bsg濃度に実質的な相違を認めた（データ示さず）。以上の結果より、術後に尿中Bsg濃度が上昇する症例は、術後AKIを呈する可能性が極めて高いことが明らかとなった。即ち、尿中Bsg濃度を指標（マーカー）に利用すれば、早期にAKIの発症予測が可能であることが判明した。また、尿中Bsg濃度とAKIのステージとの間に一定の相関が認められた事実は、尿中Bsgが腎機能の予後推定の指標（マーカー）としても有用であることを示唆する。尚、悪性疾患や年齢による、Bsg濃度への影響は見られなかった。【００９５】
６．術後の急性腎障害（AKI）とBsg濃度の関連２
（１）対象
2005年12月から2007年5月までに名古屋大学医学部附属病院で待機的腹部大動脈瘤術を施行し、文書による同意が得られた下記32例を対象として、尿中Bsg濃度と術後のAKIとの関連を調べた。
性別：男性29例、女性3例
年齢：72±8歳
病型：腎動脈上2例、腎動脈下30例
人工血管：I型11例、Y型21例
推算GFR：56.9±21.8 (ml/min/1.73m2)【００９６】
（２）方法
前向き観察試験を実施した。経時的に一般検査とともに尿中Bsg濃度をELISAで測定した。AKI群(2007年にAcute Kidney Injury Network (AKIN)により提唱された分類をもとに定義)とnon-AKI群の間で比較・評価した。【００９７】
（３）結果・考察
試験結果を図１９に示す。AKI群では術後の早い段階から尿中Bsg濃度を認め、術後1日では、non-AKI群との間に有意差を示した。AKI群では、現在、臨床で使用されている指標であるクレアチニン（Cre)よりも早い段階でBsg濃度が上昇することが示された。即ち、尿中Bsg濃度を指標（マーカー）に利用すれば、早期にAKIの発症予測が可能であることが裏づけられた。
【産業上の利用可能性】
【００９８】
本発明の検査法では血中Bsg量又は尿中Bsg量を指標として腎障害度の推定、IgA腎症の鑑別、急性腎障害の検査又は腎機能に関する予後の推定を行う。本発明の検査法によれば、新たな指標に基づく客観的な判定が可能となる。本発明の検査法が提供する情報（検査結果）は、病状の把握やより適切な治療方針の決定等に有用である。【００９９】
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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