(57)【要約】  学習・記憶障害を伴う中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物の提供。一般式Ｉ：2013191236.tif 000024において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４（シネンセチン）、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、およびＲ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２（６−デメトキシノビレチン）から選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含んでなる、中枢神経変性疾患の改善および／または治療用の組成物。
2013191236.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
2013191236.tif 000017
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２
から選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含んでなる、中枢神経変性疾患の改善および／または治療用の組成物。
【請求項２】
有効成分が、式Ｉ−４：
【化２】
2013191236.tif 000018
で表される化合物Ｓ４である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
有効成分が、式Ｉ−４：
【化３】
2013191236.tif 000019
で表される化合物Ｓ４と、式Ｉ−３：
【化４】
2013191236.tif 000020
で表される化合物Ｓ３および／または式Ｉ−２：
【化５】
2013191236.tif 000021
で表される化合物Ｓ２との混合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
中枢神経変性疾患が、学習障害または記憶障害である、請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
記憶障害が記憶の獲得障害、保持障害もしくは想起障害、記銘障害、追想障害、記憶増進障害、記憶減退障害または記憶錯誤障害である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
記憶障害が記憶の獲得障害または記銘障害である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
中枢神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項８】
中枢神経変性疾患の改善および／または治療がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性の増大、または記憶形成機能の増大によりもたらされる、請求項１〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項９】
化合物Ｓ４、Ｓ３およびＳ２が柑橘類の果皮の乾燥物から水抽出したものである、請求項１〜８のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１０】
柑橘類がＣｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ  Ｂｌａｎｃｏ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）、橘または大紅蜜柑である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
さらに威霊仙、烏薬、延胡索、黄蓍、黄ゴン、黄柏、遠志、カッ香、葛根、乾姜、甘草、桔梗、菊花、枳実、杏仁、桂皮、紅花、香附子、厚朴、牛膝、呉茱萸、五味子、柴胡、山梔子、地黄、芍薬、生姜、升麻、神麹、石膏、川キュウ、前胡、蒼朮、蘇木、蘇葉、大黄、大棗、大腹皮、沢瀉、竹ジョ、知母、釣藤鈎、天麻、天門冬、当帰、桃仁、人参、麦芽、麦門冬、半夏、白シ、白朮、檳榔子、茯苓、防已、芒硝、防風、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、竜胆、和羌活およびこれらの二以上の組み合わせからなる群から選択される生薬成分を配合してなる、請求項１〜１０のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１２】
経口投与形態である、請求項１〜１１のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１３】
経口投与形態が細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス剤の形態である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
一般式Ｉ：
【化６】
2013191236.tif 000022
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２
から選択される少なくとも１つの化合物、および添加成分を含む食品。
【請求項１５】
式Ｉ−４：
【化７】
2013191236.tif 000023
で表される化合物Ｓ４を含む、請求項１４に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、学習・記憶障害を伴う中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代の高齢化社会において、アルツハイマー病およびパーキンソン病などの中枢神経変性疾患の患者が増大し、社会問題となっている。中でもアルツハイマー病は認知機能障害、学習・記憶障害などを伴う進行性中枢神経変性疾患であり、その原因として学習・記憶に重要なＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体の機能を低下させるアミロイドβペプチドの重合および蓄積による神経変性が考えられている（非特許文献１を参照のこと）。【０００３】
一般に、記憶は少なくとも３つの過程、すなわち記憶の獲得（以下、本明細書において「記銘」とも称する；ｅｎｃｏｄｉｎｇ）、保持（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）および想起（以下、本明細書において「追想」とも称する；ｒｅｃａｌｌ）の過程からなり、これら３つの過程のメカニズムは異なると考えられている。アルツハイマー病では神経変性が進行すると、新たに覚え込む能力すなわち記憶の獲得（または学習）ないし記銘が阻害されると共に、過去に獲得した記憶の保持と想起もできない状況になる。その結果、本疾患の中核症状である学習・記憶の障害が顕著になると理解される。【０００４】
このうち、記憶の保持および想起能力を改善する作用を有する天然フラボノイド類の一つとして、式（Ｉ−５）：
【化１】
2013191236.tif 000003
で示されるノビレチン（Ｎｂ）が知られており（特許文献１または非特許文献１もしくは２を参照のこと）、ノビレチンはまた、神経細胞に対して神経突起伸長作用を有することも知られている（特許文献２を参照のこと）。
同様に、天然フラボノイド類の一つである、式（Ｉ−１）：
【化２】
2013191236.tif 000004
で示されるタンゲレチン（Ｓ１）には、神経細胞に対して神経突起伸長作用を有することが知られている（特許文献２を参照のこと）。【０００５】
学習・記憶形成の神経回路の海馬では、学習・記憶を制御する重要な神経細胞内シグナル伝達経路として、ＮＭＤＡ受容体とリンクしたサイクリックアデノシン３’，５’−１リン酸（ｃＡＭＰ）／ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）／ＥＲＫ（細胞外シグナル調節キナーゼ）／ｃＡＭＰ応答配列（ＣＲＥ）結合タンパク質（ＣＲＥＢ）系が、近年、明らかにされた。この神経細胞内シグナル伝達経路（ｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＥＲＫ／ＣＲＥＢシグナル伝達経路）は活性化されると学習・記憶能力が亢進し、同時にｃＡＭＰ応答配列（ＣＲＥ）依存的転写活性（以下、本明細書において「ＣＲＥ依存的転写活性」とも称する）の増大が起こることが明らかにされている（非特許文献３を参照のこと）。また、アルツハイマー病患者の脳ではｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＥＲＫ／ＣＲＥＢシグナル伝達経路の機能が低下していることが示唆されている（非特許文献４を参照のこと）。事実、このことを裏付ける証拠も報告されている（非特許文献５を参照のこと）。
このＣＲＥ依存的転写活性は、学習記憶能力のみならず、ドーパミン（ＤＡ）の生合成酵素であるチロシン水酸化酵素の転写調節にも関連することが分かっている。【０００６】
本発明者らは先に、ノビレチンを高い割合で含有する特殊な柑橘類果皮の乾燥物（Ｎチンピ、橘皮及び大紅蜜柑の果皮など）からの抽出エキスが、従来の柑橘類果皮乾燥物（陳皮）からの抽出エキスと比較して優位な中枢神経変性疾患改善効果を示すこと、ならびに、ＣＲＥ依存的転写活性および学習・記憶障害改善作用を示すことを開示した（特許文献３を参照のこと）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開２００５／０８２３５１号公報
【特許文献２】特開２００２−６０３４０号公報
【特許文献３】国際公開２０１１／１０５５６８号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】日薬理誌  （Ｆｏｌｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｊｐｎ．）  １３２，１５５−１５９  （２００８）
【非特許文献２】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｖｏｌ．  ３２１，Ｎｏ．２，ｐｐ．７８４−７９０（２００７）
【非特許文献３】Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １，５９５−６０１（１９９８）
【非特許文献４】Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ２７，３３−４０（２００６）
【非特許文献５】Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８２４，３００−３０３（１９９９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
このような状況下、ノビレチン（Ｎｂ）およびタンゲレチン（Ｓ１）の抗中枢神経変性疾患活性、特にアルツハイマー病の改善および／または治療効果を凌駕する化合物が開発されれば、本疾患における有望な根本治療薬の開発の実現が期待できる。その実現は、現代の高齢化社会における認知症などの難治進行性神経疾患の克服に向けた大きな前進となる。
さらに、学習・記憶障害のうちノビレチンのように記憶の保持および想起の障害を改善するだけでなく、記憶の保持障害および想起障害に加えて記憶の獲得障害および記銘障害のいずれも改善してノビレチンを凌駕する活性を持つ化合物が開発されれば、新たな作用機序を持つ認知症、特にアルツハイマー病等の治療薬等への応用が可能となり、その結果従来医薬品より優れた薬効を持ち、有用な薬の創生が期待される。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、特許文献３において、ノビレチン高含有陳皮（以下、本明細書において「Ｎチンピ」とも称する）、橘皮及び大紅蜜柑の果皮の中枢神経変性疾患改善効果、特にＣＲＥ依存的転写促進活性は、Ｎチンピ、橘皮及び大紅蜜柑の果皮中に含まれる濃度のノビレチンが示す促進活性を超える値を示すことを見出した。このことから、このＮチンピ、橘皮及び大紅蜜柑の果皮のＣＲＥ依存的転写促進活性は、その中に含まれるノビレチンとそれ以外の成分との協働作用に起因すると発想し、鋭意、その活性本体の探索研究を進めた。その結果、本発明において、天然フラボノイドの一種で特定の構造を持つ複数の化合物またはそれらの特定の組み合わせが、Ｎチンピ及び上記の２つの柑橘果皮の活性に貢献することを突き止めた。とりわけ、それらの化合物のなかの１つ、シネンセチンの当該活性への貢献度は大きく、しかもその活性強度はノビレチンおよびタンゲレチンのＣＲＥ依存的転写促進活性をはるかに超えていることを初めて見出した。さらに驚いたことに、シネンセチンは記憶の保持障害および想起障害だけでなく、記憶の獲得障害および記銘障害をも改善することが本発明において証明された。本発明者らは、以上のこれまで誰も発見できなかった事実に基づいて本発明に到達した。【００１１】
即ち、本発明は、以下の通りである。
項１：一般式Ｉ：
【化３】
2013191236.tif 000005
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４（シネンセチン）、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２（６−デメトキシノビレチン）
から選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含んでなる、中枢神経変性疾患の改善および／または治療用の組成物。【００１２】
項２：有効成分が、式Ｉ−４：
【化４】
2013191236.tif 000006
で表される化合物Ｓ４である、項１に記載の組成物。【００１３】
化合物Ｓ４（シネンセチン）は、ＣＲＥ依存的転写活性の増大効果が極めて高い点で好ましい。【００１４】
項３：有効成分が、式Ｉ−４：
【化５】
2013191236.tif 000007
で表される化合物Ｓ４（シネンセチン）と、式Ｉ−３：
【化６】
2013191236.tif 000008
で表される化合物Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）および／または式Ｉ−２：
【化７】
2013191236.tif 000009
で表される化合物Ｓ２（６−デメトキシノビレチン）との混合物である、項１に記載の組成物。【００１５】
項４：中枢神経変性疾患がアルツハイマー病、学習障害、記憶障害、パーキンソン病、ピック病またはハンチントン病である、項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。【００１６】
項５：中枢神経変性疾患が学習障害または記憶障害である、項１〜４のいずれか１つに記載の組成物。【００１７】
項６：記憶障害が記憶の獲得障害、保持障害もしくは想起障害、記銘障害、追想障害、記憶増進障害、記憶減退障害または記憶錯誤障害である、項５に記載の組成物。【００１８】
項７：記憶障害が記憶の獲得障害または記銘障害である、項６に記載の組成物。【００１９】
項８：中枢神経変性疾患がアルツハイマー病である、項４に記載の組成物。【００２０】
項９：中枢神経変性疾患がパーキンソン病である、項４に記載の組成物。【００２１】
項１０：中枢神経変性疾患の改善および／または治療がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性（ＣＲＥ依存的転写活性）の増大、または記憶形成機能の増大によりもたらされる、項１〜９のいずれか１つに記載の組成物。【００２２】
項１１：中枢神経変性疾患の改善および／または治療がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性（ＣＲＥ依存的転写活性）の増大、または記憶の獲得、記憶の保持もしくは想起能力の増大によりもたらされる、項１〜１０のいずれか１つに記載の組成物。【００２３】
項１２：化合物Ｓ４、Ｓ３およびＳ２が柑橘類の果皮の乾燥物から水抽出したものである、項１〜１１のいずれか１つに記載の組成物。【００２４】
項１３：柑橘類がＣｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ  Ｂｌａｎｃｏ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）、橘または大紅蜜柑である、項１２に記載の組成物。【００２５】
項１４：さらに威霊仙、烏薬、延胡索、黄蓍、黄ゴン、黄柏、遠志、カッ香、葛根、乾姜、甘草、桔梗、菊花、枳実、杏仁、桂皮、紅花、香附子、厚朴、牛膝、呉茱萸、五味子、柴胡、山梔子、地黄、芍薬、生姜、升麻、神麹、石膏、川キュウ、前胡、蒼朮、蘇木、蘇葉、大黄、大棗、大腹皮、沢瀉、竹ジョ、知母、釣藤鈎、天麻、天門冬、当帰、桃仁、人参、麦芽、麦門冬、半夏、白シ、白朮、檳榔子、茯苓、防已、芒硝、防風、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、竜胆、和羌活およびこれらの二以上の組み合わせからなる群から選択される生薬成分を配合してなる、項１〜１３のいずれか１つに記載の組成物。【００２６】
項１５：経口投与形態である、項１〜１４のいずれか１つに記載の組成物。【００２７】
項１６：経口投与形態が細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス剤の形態である、項１５に記載の組成物。【００２８】
項１７：中枢神経変性疾患治療用の医薬組成物である、項１〜１６のいずれか１つに記載の組成物。【００２９】
項１８：一般式Ｉ：
【化８】
2013191236.tif 000010
［式中、各記号は項１に記載のものと同義である］
で示される化合物から選択される少なくとも１つの化合物を有効量にて治療を必要とする対象に投与することを特徴とする、中枢神経変性疾患の治療方法。【００３０】
項１９：中枢神経変性疾患の改善および／または治療のための一般式Ｉ：
【化９】
2013191236.tif 000011
［式中、各記号は項１に記載のものと同義である］
で示される化合物から選択される少なくとも１つの化合物の使用。【００３１】
項２０：一般式Ｉ：
【化１０】
2013191236.tif 000012
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２
から選択される少なくとも１つの化合物、および添加成分を含む食品。【００３２】
項２１：式Ｉ−４：
【化１１】
2013191236.tif 000013
で表される化合物Ｓ４を含む、項２０に記載の食品。【００３３】
項２２：中枢神経変性疾患改善用の食品である、項２０または２１のいずれか１つに記載の食品。
【発明の効果】
【００３４】
本発明に係るＳ４（シネンセチン）は、従来から知られているノビレチン（Ｎｂ）およびタンゲレチン（Ｓ１）のＣＲＥ依存的転写活性の促進効果をはるかに超えるＣＲＥ依存的転写増強活性を有する。さらに、Ｓ４は、記憶の保持および想起の障害のみならず、ノビレチンには認められない記憶の獲得障害および記銘障害の改善作用を持つことから、中枢神経変性疾患、特にアルツハイマー病の顕著な改善および／または治療効果を示す。他方、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）は、Ｆｒ．２−２（非ノビレチン分画）の成分である上記のＳ４（シネンセチン）やＳ１（タンゲレチン）と協働してＣＲＥ依存的転写活性の増大に働くユニークな活性により、認知症などの中枢神経変性疾患の改善および／または治療において優れた効果を示す。【００３５】
本発明に係るＳ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）はまた、ＰＫＡ／ＥＲＫ／ＣＲＥＢシグナル伝達を活性化し、アルツハイマー病の症状の一つである学習・記憶障害を改善および／または治療する効果を有する。本発明に係るＳ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）は特に、学習・記憶障害改善効果のうち、記憶の獲得、保持および想起能力ならびに記銘能力および追想能力の増強効果を示す。より好ましくは記憶の獲得能力または記銘能力の増強効果である。ＣＲＥ依存的転写活性はドーパミン合成の律速酵素のチロシン水酸化酵素の転写増大にも密接に関わっていることから、さらに、本発明に係るＳ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）はまた、ドーパミン（ＤＡ）合成・促進作用もしくはドーパミン合成・分泌促進作用によるパーキンソン病の改善および／または治療効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、本発明に係るフラボノイド化合物（Ｓ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）、およびＳ２（６−デメトキシノビレチン））の、Ｎチンピ抽出物からの分離工程の前段部分を示す。
【図２】図２は、本発明に係るＳ４、Ｓ３およびＳ２ならびに比較化合物（ノビレチン（Ｎｂ）およびタンゲレチン（Ｓ１））の化学構造を示す。
【図３】図３は、海馬神経細胞における、本発明に係るＳ４、Ｓ３およびＳ２ならびに比較化合物（ＮｂおよびＳ１）のＣＲＥ依存的転写活性を示す。図中、＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）；§§  ｐ＜０．０１はＮｂとの有意差を示す。
【図４】図４は、海馬神経細胞における、本発明に係るシネンセチン（Ｓ４）および比較化合物ノビレチン（Ｎｂ）のＣＲＥ依存的転写活性の濃度変化依存性を示す。図中、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）を示す。
【図５】図５は、海馬神経細胞における、ポリメトキシフラボノイド類画分（Ｆｒ．２、Ｆｒ．２−１およびＦｒ．２−２；各濃度はＮチンピ中の含有比率に対応する）、Ｆｒ．２−１およびＦｒ．２−２で再構成した混合画分（Ｆｒ．２−１＋Ｆｒ．２−２；各濃度はＮチンピ中の含有比率に対応する）、再構成したメトキシフラボノイド類（ＲＥＣ；シネンセチン（０．２２２μｇ／ｍＬ）＋６−デメトキシタンゲレチン（０．１３５μｇ／ｍＬ）＋６−デメトキシノビレチン（０．１７７ｍｇ／ｍＬ）＋タンゲレチン（０．５８５ｍｇ／ｍＬ）＋ノビレチン（１．８９μｇ／ｍＬ，  ５．０μＭ）；各濃度はＮチンピ中の含有比率に対応する）および対照（生理食塩水）のＣＲＥ依存的転写活性を示す。図中、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照との有意差（検定結果）を示す。
【図６】図６は、海馬神経細胞における、濃度を３０μＭに統一したポリメトキシフラボノイド類画分（Ｆｒ．２、Ｆｒ．２−１およびＦｒ．２−２）およびノビレチン並びに対照（生理食塩水）のＣＲＥ依存的転写活性を示す。図中、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照との有意差（検定結果）を示す。
【図７】図７は、シネンセチンのＭＫ８０１誘発性の記憶の獲得障害の改善効果を示す。縦軸はすくみ行動（％）を示し、横軸はショック事象（回数）を示す。図中、＊＊＊  ｐ＜０．００１、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、§§  ｐ＜０．０１、§§§  ｐ＜０．００１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。
【図８】図８は、ＭＫ８０１誘発性の記憶の保持および想起障害に対するシネンセチンの作用を示す。縦軸はすくみ行動（％）を示す。図中、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、§§§  ｐ＜０．００１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。
【図９】図９は、画分２（Ｆｒ．２）のＭＫ８０１誘発性の記憶の獲得障害の改善効果を示す。図中、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、＃＃  ｐ＜０．０１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。
【図１０】図１０は、ＭＫ８０１誘発性の記憶の保持および想起障害に対する画分２（Ｆｒ．２）の作用を示す。図中、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、＃＃  ｐ＜０．００１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。
【図１１】図１１は、ノビレチン投与における学習試行の結果を示す。
【図１２】図１２は、ノビレチン投与における確認試行の結果を示す。図中、＊は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、＃は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、本発明を実施するための形態を詳細に説明する。
本発明で有効成分として用いるポリメトキシフラボノイド化合物は、Ｓ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）の三種のうちの少なくとも一種の化合物である。有効成分は、Ｓ４、Ｓ３およびＳ２からなる群から選択される任意の二化合物の混合物であってもよく、これら三種の化合物の混合物であってもよい。
この内、Ｓ４（シネンセチン）は、式Ｉ−４：
【化１２】
2013191236.tif 000014
で表され、
Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）は、式Ｉ−３：
【化１３】
2013191236.tif 000015
で表され、および
Ｓ２（６−デメトキシノビレチン）は、式Ｉ−２：
【化１４】
2013191236.tif 000016
で表される化合物である。
【００３８】
本発明に係るポリメトキシフラボノイドＳ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）は一般的に柑橘類植物の果皮より得られる化合物である。柑橘類は、日本橘（Ｃｉｔｒｕｓ  ｔａｃｈｉｂａｎａ）、高麗橘（Ｃ．ｎｉｐｐｏｎｏｋｏｒｅａｎａ）、花柚、四季橘、枳実、橙（Ｃｉｔｒｕｓ  ａｕｒａｎｔｉｕｍ）、地中海マンダリン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、ダンシータンジェリン、大紅蜜柑（Ｃｉｔｒｕｓ  ａｕｒａｎｔｉｕｍ）、コベニミカン（Ｃ．ｅｒｙｔｈｒｏｓａ）、無核紀州、福来蜜柑、カプチー、太田椪柑、ヒラキシュウ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｋｉｎｏｋｕｎｉ）、サンキツ、クレオパトラ、柑子（Ｃｉｔｒｕｓ  ｌｅｉｏｃａｒｐａ）、ギリミカン、イーチャンレモン（Ｃ．  ｗｉｌｓｏｎｉｉ  Ｔａｎａｋａ）、温州蜜柑（Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ  Ｍａｒｋｏｖｉｃｈ）、Ｃｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ  Ｂｌａｎｃｏ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）、シークワーサー（平実檸檬、Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）、柚子（Ｃｉｔｒｕｓ  ｊｕｎｏｓ）、文旦、日向夏、椪柑（Ｃｉｔｒｕｓ  ｔａｎｇｅｒｉｎａ）、夏蜜柑（Ｃｉｔｒｕｓ  ｎａｔｓｕｄａｉｄａｉ）、ネーブルオレンジ、八朔（Ｃｉｔｒｕｓ  ｈａｓｓａｋｕ）、イヨおよび臭橙（Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｐｈａｅｒｏｃａｒｐａ）からなる群から選択される植物である。
柑橘類の果皮は、陳皮や橘皮などの生薬として、市場に多く流通している。
陳皮とは、例えば温州蜜柑（Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ  Ｍａｒｃｏｗｉｃｚ）またはＣｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ  Ｂｌａｎｃｏ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の成熟した果皮を意味し、橘皮とは、例えば日本橘または高麗橘などの橘の成熟した果皮を意味する。
【００３９】
本発明において原料として用いる陳皮類（すなわち、Ｎチンピ、橘皮或いは大紅蜜柑の果皮など）は、上記柑橘類の果皮を歩留まり（乾燥後質量／乾燥前質量の割合）が、２０〜５０％となるような条件にて乾燥した物質を意味する。加熱乾燥条件としては、温度５０〜１００℃にて１〜３時間が挙げられ、好ましくは温度６０℃にて２時間である。
【００４０】
本発明に係る化合物は、上記柑橘類の果皮からの抽出物（すなわち、Ｎチンピ、橘皮或いは大紅蜜柑の果皮などからの抽出物）を原料とするものであり、好ましくは水抽出により得られる抽出物である。本明細書における好ましい水抽出は、６０〜１００℃における水による抽出である。
【００４１】
本発明に係るポリメトキシフラボノイドＳ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）は、上記抽出物を更に通常の分画手段、例えば、カラムクロマトグラフィーによる分離を経て単離することができる。
【００４２】
＜一般的製造法＞
Ｎチンピ抽出物を出発原料に用いた分離法の非限定的な例を、図１に示す。この図に基づき、Ｓ４、Ｓ３およびＳ２の分離方法の概要を説明する。
即ち、所定量のＮチンピ抽出物を極性溶媒（例えば、３０％アセトニトリル／７０％精製水等）中に懸濁し、表面処理シリカゲル（例えば、オクタデシルシリル化シリカゲル（ＯＤＳ）等）を充填した固相抽出カラムに通液させる。流出液の組成を適宜分析し（例えば、薄層クロマトグラフィー等）、成分の分離性を確認しつつ、極性溶媒（例えば、３０％アセトニトリル／７０％精製水等）をカラムに流し、溶出液を減圧濃縮することにより、Ｆｒ．１が得られる。さらに疎水性溶出溶媒（例えば、メタノール等）を用いて、次の溶出画分を得、減圧下で溶媒を留去するとＦｒ．２が得られる。
次いで、Ｆｒ．２について、極性溶媒（例えば、４０％アセトニトリル／６０％精製水等）を溶離液としたＯＤＳカラムクロマトグラフィーを行う。溶離液の極性を変化させて（例えば、アセトン／ヘキサン（１：１）、ならびに酢酸エチル／ヘキサン（４：１）等の組合せなど）、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返すことにより、高純度のノビレチンからなるＦｒ．２−１が得られる。一方、ノビレチンを含有しない画分はＦｒ．２−２とする。
ここで得られたＦｒ．２−１は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってノビレチンの存在が確認された、高純度のノビレチン（Ｎｂ）からなるノビレチン画分であり、Ｆｒ．２−２はＦｒ．２からＦｒ．２−１を除いた非ノビレチン画分である。
【００４３】
次に、上記で得られたＦｒ．２−２（非ノビレチン画分）は親水性を調節した溶離液（例えば、６０％メタノール／４０％精製水等）を用いて、ＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより繰り返し分離精製する。得られた溶離液を濃縮後、再結晶等により精製することにより、４種類の結晶性の物質を単離することができ、これらをＳ１〜Ｓ４と称する。Ｓ１〜Ｓ４をＩＲ、ＵＶ、１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲおよびＥＳＩ−ＭＳによって分析することにより、それらの構造を決定することができる。
【００４４】
次に、本発明に係る組成物の薬理活性について説明する。
本発明に係るポリメトキシフラボノイドＳ４（シネンセチン）、Ｓ３（６−デメトキシタンゲレチン）およびＳ２（６−デメトキシノビレチン）の少なくとも一つを含んでなる組成物は、中枢神経変性疾患の改善および／または治療に用いることができる。
【００４５】
ここで、本発明の実施態様において、中枢神経変性疾患の改善および／または治療は、ｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性（ＣＲＥ依存的転写活性）の増大によりもたらされ、さらには当該活性の増大に基づく記憶の獲得、記憶の保持および想起能力などの記憶形成機能の増大によりもたらされる。故に、ＣＲＥ依存的転写活性の増大は、記憶形成機能障害の改善に寄与し、学習記憶能力のみならず、ドーパミン（ＤＡ）合成・分泌促進およびそれに伴うパーキンソン病の改善にも寄与する。
【００４６】
また、ある実施態様において、中枢神経変性疾患の改善および／または治療は、ＣＲＥ依存的転写活性促進によりもたらされる。
【００４７】
また、ある実施態様において、中枢神経変性疾患は、学習および／または記憶の障害に係わる疾患であり、好ましくは学習障害または記憶障害である。中枢神経変性疾患は、より好ましくは、記憶の獲得、保持および／または想起障害、記銘障害、追想障害、記憶増進障害、記憶減退障害または記憶錯誤障害であり、特に好ましくは、記憶の獲得障害または記銘障害である。
【００４８】
また、ある実施態様において、中枢神経変性疾患はアルツハイマー病である。
【００４９】
また、ある実施態様において、中枢神経変性疾患はパーキンソン病であり、その改善および／または治療は、ドーパミン合成能促進作用によりもたらされる。
【００５０】
本明細書において用語「中枢神経変性疾患」としては、アルツハイマー病、特に学習・記憶障害、パーキンソン病、ピック病、ハンチントン病などが挙げられる。
本明細書において用語「記憶障害」としては、記憶の獲得、保持および／または想起障害、記銘障害、追想障害、記憶増進障害、記憶減退障害、記憶錯誤障害などが挙げられる。
【００５１】
本発明に係る化合物（Ｓ４、Ｓ３およびＳ２）の抗アルツハイマー病活性および／または抗パーキンソン病活性としては、中枢神経変性疾患の発症メカニズムに関与する学習・記憶障害の改善またはドーパミン合成の促進が挙げられる。具体的には、ＣＲＥ（ｃＡＭＰ応答配列）依存的転写活性、ドーパミン含量上昇活性、ドーパミン分泌促進活性などである。
より詳細には、本発明の中枢神経変性疾患の改善および／または治療用の組成物は、有効成分（Ｓ４、Ｓ３、Ｓ２またはこれらの組み合わせ）の含有量および各成分間の比率に応じた活性の程度を示してもよい。例えば、上記３化合物の合計含有量が同一の場合には、ＣＲＥ依存的転写活性が最も高いＳ４（シネンセチン）の比率が高い組成物が、全体として高いＣＲＥ依存的転写活性を示す。
【００５２】
本明細書において学習・記憶障害は、記憶過程における以下の三つの能力を低下させる障害である：記憶の獲得ないし記銘（ｅｎｃｏｄｉｎｇ）、保持（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）および想起ないし追想（ｒｅｃａｌｌ）能力。本明細書において用語「獲得」および「記銘」とは情報を記憶として取り込むことであり、「保持」とは取り込まれた情報を保存ないし維持することであり、「想起」および「追想」とは保存ないし維持された情報を思い出すことを意味する。
【００５３】
本発明に係る化合物（Ｓ４、Ｓ３およびＳ２）に、生薬成分および／または添加成分を更に適宜配合することにより、本発明の組成物を製造することができる。本明細書において、本発明の組成物は中枢神経変性疾患用治療薬であってもよく、当該治療薬としては、抗アルツハイマー病薬および／または抗パーキンソン病薬、すなわち抗アルツハイマー病活性および／または抗パーキンソン病活性を有する医薬品が挙げられる。
【００５４】
本明細書において用語「医薬品」は、ヒトおよび動物における疾患の診断、治療および／または予防のための物質を意味し、生薬を含む医薬品、例えば生薬製剤および漢方薬を含む。好ましい医薬品は、経口投与形態であり、より好ましくは細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス剤である。
【００５５】
本明細書において用語「食品」は、いわゆる健康食品と、当局の許可等の有無や食品の目的、機能等の違いによって区別される、特定保健用食品および栄養機能食品などの保健機能食品とを含む。本明細書における好ましい食品の形態は、細粒、ゼリーの素、ピール、ジャムまたは茶であり、より好ましくは細粒または茶である。
【００５６】
本発明における中枢神経変性疾患の改善および／または治療用の組成物における、有効成分としてのＳ４、Ｓ３およびＳ２の含有率（本明細書において「有効量」とも称する）は、対象の使用目的（医薬品か食品か）、性別、症状等に応じて適宜調整することができるが、該組成物１００重量％に対して通常約０．００１〜約５重量％、好ましくは、約０．０１〜約３重量％、より好ましくは、約０．０２〜約１．２重量％の範囲である。
【００５７】
本明細書における生薬成分としては、例えば威霊仙、烏薬、延胡索、黄蓍、黄（オウ）ゴン、黄柏、遠志、カッ香（コウ）、葛根、乾姜、甘草、桔梗、菊花、枳実、杏仁、桂皮、紅花、香附子、厚朴、牛膝、呉茱萸、五味子、柴胡、山梔子、地黄、芍薬、生姜、升麻、神麹、石膏、川（セン）キュウ、前胡、蒼朮、蘇木、蘇葉、大黄、大棗、大腹皮、沢瀉、竹（チク）ジョ、知母、釣藤鈎、天麻、天門冬、当帰、桃仁、人参、麦芽、麦門冬、半夏、白（ビャク）シ、白朮、檳榔子、茯苓、防已、芒硝、防風、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、竜胆、和羌活およびこれらの二以上の組み合わせが挙げられる。
本発明に係る化合物（Ｓ４、Ｓ３およびＳ２）は、生薬成分として本発明の組成物に配合されていてもよい。
【００５８】
本明細書における添加成分としては、当分野で通常用いられるものであれば特に限定されず、例えばアスコルビン酸、アスパルテーム、アップル香料、オレンジ香料、カラギナン、カラメル、カルナウバロウ、カルメロース、カルメロースカルシウム、還元麦芽糖液糖、還元麦芽糖水飴、含水二酸化ケイ素、キシリトール、クエン酸、クエン酸三ナトリウム、グラニュー糖、軽質無水ケイ酸、ゲル化剤（ＦＧ−２２６６、新田ゼラチン株式会社）、合成ケイ酸アルミニウム・ヒドロキシプロピルスターチ・結晶セルロース、サラシミツロウ、酸化チタン、食塩、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、タルク、デキストリン、トウモロコシデンプン、乳糖、ハチミツ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微粒二酸化ケイ素、プルラン、ペクチン、マルトース、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、メチルセルロース、レシチン、ローカストビーンガムおよびこれらの組み合わせが挙げられる。
【００５９】
添加成分は、当分野で通常用いられる配合比率にて配合されてもよく、例えば本発明の組成物１００重量％に対して通常０．０〜７０．０重量％、好ましくは５．０〜５０．０重量％、より好ましくは１０．０〜４０．０重量％である。
【実施例】
【００６０】
以下の実施例において、化合物Ｓ４、Ｓ３およびＳ２を抽出するための出発原料に用いたＮチンピは小太郎漢方製薬株式会社から入手可能である。【００６１】
＜製造例１＞（Ｎチンピ抽出物の製造）
本発明で用いる出発原料のＮチンピを以下のようにして製造した。
ノビレチンを高い割合（０．４４重量％）で含有するＣｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ  Ｂｌａｎｃｏ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の果皮を陰干し、日干しまたは加熱乾燥することによりＮチンピを製造した。加熱乾燥は、歩留まり（乾燥後質量／乾燥前質量の割合）が陳皮について２０〜５０％となるまで行い、温度６０℃にて２時間加熱乾燥した。こうして得られたＮチンピを細切りしたもの約１０ｇに純水４００ｍＬを加えて加熱した。混合物が沸騰した後、１００℃にて１時間かけて抽出した。次いで、ガーゼ（２枚）を通してろ過し、ろ液を凍結乾燥してＮチンピ抽出物を得た。Ｎチンピ抽出物の収量は３．５ｇ、収率は３５％であった。【００６２】
＜実施例１＞
製造例１のようにして得られたＮチンピ抽出物を乾燥重量で８１．１１ｇ用い、以下に示す手順で分離を行った。
Ｎチンピ抽出物８１．１１ｇをフラスコ中で３０％アセトニトリル／７０％精製水３６０ｍＬに懸濁し、バリアンボンドエルートＣ１８（１０ｇ）中に通液させた。３０％アセトニトリル／７０％精製水１００ｍＬをカラムに流し、溶出液を減圧濃縮するとＦｒ．１が得られた（７９．９５ｇ）。さらにメタノール５０ｍＬで溶出し、得られた溶出液を減圧で溶媒を留去するとＦｒ．２が得られた（１．１６ｇ）。Ｆｒ．２（０．５０５ｇ）について、４０％アセトニトリル／６０％精製水を溶離液としたＯＤＳカラムクロマトグラフィーを行い、さらにアセトン／ヘキサン（１：１）、ならびに酢酸エチル／ヘキサン（４：１）を溶離液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し、ノビレチンを含む画分を合わせて高純度のノビレチンからなるＦｒ．２−１が得られた（０．２２４ｇ）。さらに、ノビレチンを含有しない画分は合わせてＦｒ．２−２とした（０．３１４ｇ）。図１に、Ｎチンピ抽出物含有成分のカラムクロマトグラフィー等の分離操作を示した。
この様にして、Ｆｒ．１（７９．９５ｇ）、ならびに、Ｆｒ．２−１（０．２２４ｇ）およびＦｒ．２−２（０．３１４ｇ）を得た。Ｆｒ．２−１は、以下の分析の項で説明する様に、ノビレチン（Ｎｂ）と同定された。
Ｆｒ．２−２（非ノビレチン画分）については、薄層クロマトグラフィーでの分析の結果、複数の成分を含有することが判ったので、以下の実施例２に示す手順で更にカラムクロマトグラフィーによる分離を進めた。【００６３】
＜実施例２＞（Ｆｒ．２−２のカラムクロマトグラフィーによる分離）
Ｆｒ．２−２（２００ｍｇ）をＯＤＳカラムクロマトグラフィーに付し、４０％アセトニトリル／６０％精製水を溶出溶媒として分画した。さらに６０％メタノール／４０％精製水を溶出溶媒としたＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより精製、再結晶して、Ｓ１（２０ｍｇ）、Ｓ２（１１ｍｇ）、Ｓ３（１２ｍｇ）およびＳ４（１４ｍｇ）を得た。
Ｓ４、Ｓ３、Ｓ２およびＳ１はそれぞれ、以下の分析の項で説明する様に、シネンセチン（Ｓ４）、デメトキシタンゲレチン（Ｓ３）、デメトキシノビレチン（Ｓ２）およびタンゲレチン（Ｓ１）であると同定された。【００６４】
実施例１および２で得られた結果を図２に示す。【００６５】
＜分析例＞
実施例１および２で得られた各分画成分を、ＩＲ、ＵＶ、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＥＳＩ−ＭＳによって分析することにより、それらの構造を決定した。得られた結果を以下に示す。【００６６】
＜ＮチンピエキスのＦｒ．２−１の分析結果＞
Ｆｒ．２−１は、以下のデータ及び市販標準品とのＴＬＣおよびＨＰＬＣによる比較により、ノビレチンと同定された。
無色針状晶；ＵＶ：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２４８(４．２３)、２６９(４．１９)、３３１(４．３５)；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。【００６７】
＜ＮチンピエキスのＦｒ．２−２から単離した化合物Ｓ１〜Ｓ４の分析結果＞
［Ｓ１］：以下のデータにより、タンゲレチン（Ｓ１）と同定された。
無色針状晶；ｍｐ  １５０−１５１℃；ＩＲｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ−１：１６５０、１６０８、１５１４、１４６５、１４０８、１３６４、１２６６、１１８２、１１１０、１０７４、１０１９、９７０、８３０；ＵＶ：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：３２３（４．４６）、２７０（４．３１）；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。【００６８】
［Ｓ２］：以下のデータにより、６−デメトキシノビレチン（Ｓ２）と同定された。
無色針状晶；ｍｐ  １９９−２００℃；ＩＲ  λｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ−１：１６４０、１６０１、１５１４、１４２７、１３２７、１２５９、１２３４、１１２４、１０４８、１０２１、８４３；ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：３３８（４．３１）、２６９（４．２９）、２４８（４．２７）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ７．５７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７、２．８Ｈｚ）、７．４０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、６．６０（１Ｈ、ｓ）、６．４２（１Ｈ、ｓ）、３．９９（３Ｈ、ｓ）、３．９７（３Ｈ、ｓ）、３．９５（３Ｈ、ｓ）、３．９４（３Ｈ×２、ｓ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  １７７．８、１６０．５、１５６．４、１５６．３、１５１．９、１５１．７、１４９．２、１３０．７、１２４．０、１１９．５、１１１．１、１０８．９、１０８．５、１０７．１、９２．４、６１．５、５６．５、５６．３、５６．０、５５．９；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。【００６９】
［Ｓ３］以下のデータにより、６−デメトキシタンゲレチン（Ｓ３）と同定された。
無色針状晶；ｍｐ  ２１３−２１４℃；ＩＲ  λｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ−１：１６３８、１５９８、１５１０、１３４２、１２４９、１２１１、１１８４、１１１２、１０４８、８４１、８０２；ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）；３１０（４．２９）、２６９（４．３７）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  ７．８６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．３Ｈｚ）、７．００（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．３Ｈｚ）、６．５８（１Ｈ、ｓ）、６．４１（１Ｈ、ｓ）、３．９８（３Ｈ、ｓ）、３．９６（３Ｈ、ｓ）、３．９３（３Ｈ、ｓ）、３．８６（３Ｈ、ｓ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  １７７．８、１６２．１、１６０．６、１５６．４、１５６．２、１５１．９、１３０．７、１２７．６、１２３．８、１１４．４、１０９．０、１０６．９、９２．５、６１．５、５６．６、５６．２、５５．４；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。【００７０】
［Ｓ４］以下のデータにより、シネンセチン（Ｓ４）と同定された。
無色針状晶；ｍｐ  １７５−１７６℃；ＩＲ  λｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  １６３６、１６０１、１５１６、１４２１、１３２６、１２５３、１１２１、１０２２、８４３；ＵＶ  λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：３２９（４．３９）、２３９（４．３０）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  ７．５０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１０．７、２．５Ｈｚ）、７．３１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）、６．９５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ）、６．７８（１Ｈ、ｓ）、６．５９（１Ｈ、ｓ）、３．９８（３Ｈ、ｓ）、３．９７（３Ｈ、ｓ）、３．９６（３Ｈ、ｓ）、３．９４（３Ｈ、ｓ）、３．９０（３Ｈ、ｓ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  １７７．２、１６１．１、１５７．７、１５４．５、１５２．６、１５１．８、１４９．３、１４０．４、１２４．１、１１９．６、１１２．９、１１１．１、１０８．７、１０７．４、９６．２、６２．２、６１．５、５６．３、５６．１、５６．０；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。【００７１】
＜薬理活性試験例＞
上記実施例で得られた化合物Ｓ１〜Ｓ４、ノビレチン（Ｎｂ）およびポリメトキシフラボノイド類画分（Ｆｒ．２、Ｆｒ．２−１、Ｆｒ．２−２）について以下のインビトロおよびインビボ試験を行った。【００７２】
［一般的試験手順１］
以下の試験例１および２で用いた一般的試験手順は以下のとおりである。
（ラット胎仔初代海馬神経細胞の培養）
妊娠Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットを１２時間周期の明暗サイクルにて給餌・給水して飼育した。妊娠１８日目のラット（Ｅ１８）からイソフルラン深麻酔下にて腹部正中切開により無菌的に子宮を摘出した。実体顕微鏡下、氷冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中にて胎仔の海馬を摘出し、神経細胞分散液（住友ベークライト）で組織を分散させ、１０００ｒｐｍにて４分間遠心分離した後、上清を除去した。次いで、細胞ペレットを分散液（住友ベークライト）中にて分散させ、さらにピペッティングにより十分分散させた細胞に除去液（住友ベークライト）を加えて９００ｒｐｍにて５分間遠心分離した後、上清を除去した。
次に、ペレットをＮｅｕｒｏｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ５００ｍＬ／フェノール・レッド不含、５０倍Ｂ２７  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １０ｍＬ、０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン、０．００５％ペニシリン−ストレプトマイシン）を用いて懸濁し、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングした皿またはプレートに播種した。培養１日後に培地交換し、その後３〜４日おきに培地を半量交換し、１０μＭ  Ａｒａ−Ｃを含有する培地中３７℃にて５％ＣＯ２インキュベーター内で１４日間培養した。
なお、薬物処置実験用試験培地は、Ａｒａ−Ｃ不含のＮｅｕｒｏｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍを用いた。【００７３】
（ＣＲＥ依存的転写活性の測定）
ラット海馬神経細胞を初代培養した後、レポータージーンアッセイを行った。海馬神経細胞を４８ウェルプレートに８×１０４細胞／ウェルで播種し、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍで１０〜１４日間培養した。レポータープラスミド（０．１μｇ／ウェル）、ウミシイタケｐｈＲＧ−ＴＫプラスミド（０．０１μｇ／ウェル）をリポフェクション法にてトランスフェクトし、１６時間培養。Ａｒａ−Ｃ無添加のＮｅｕｒｏｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｂ−２７  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、Ｌ−グルタミン、ペニシリン−ストレプトマイシンを含む）で希釈し、被検体を８時間処置した。
転写活性の測定はＰｒｏｍｅｇａ社製のＤｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（登録商標）Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて行った。海馬神経細胞をＰａｓｓｉｖｅ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で可溶化後、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅｇｅｎｔ  ＩＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＳｔｏｐ＆Ｇｌｏ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を混和し、ルミノメーターで蛍光値を測定した。【００７４】
（統計学的解析１）
実験結果はｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（Ｔｕｋｅｙ）を用いて評価した。有意水準を両側５％として検定し、ｐ＜０．０５を有意とした。【００７５】
［試験例１］（海馬神経細胞における本発明に係る化合物（Ｓ４、Ｓ３、Ｓ２）および比較化合物（ＮｂおよびＳ１）のＣＲＥ依存的転写活性（インビトロ試験））
本試験例において、本発明に係る化合物（Ｓ４、Ｓ３、Ｓ２）のＣＲＥ依存的転写活性を比較化合物（ＮｂおよびＳ１）のＣＲＥ依存的転写活性と比較した。【００７６】
上記試験手順１に記載のように、３０μＭの濃度の本発明に係る化合物（Ｓ４、Ｓ３、Ｓ２）および同一濃度の比較化合物（ＮｂおよびＳ１）で処置した。
得られた結果を図３に示した。図中、全ての組み合わせでＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（ｐｏｓｔ  Ｔｕｋｅｙ）検定。値は平均値±標準誤差；検体数  ｎ＝４；＊  ｐ＜０．０５、＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）；§§  ｐ＜０．０１はＮｂとの有意差を、それぞれ示す。
（考察１）
図３に示されるように、シネンセチン（Ｓ４）は、ノビレチン（Ｎｂ）のＣＲＥ依存的転写活性を大きく超えるＣＲＥ依存的転写活性を示した。また、６―デメトキシタンゲレチン（Ｓ３）および６−デメトキシノビレチン（Ｓ２）も、ノビレチン（Ｎｂ）およびタンゲレチン（Ｓ１）と比べて、同等のＣＲＥ依存的転写活性を示した。
これらの結果は、本発明に係るシネンセチン（Ｓ４）、６−デメトキシタンゲレチン（Ｓ３）および６−デメトキシノビレチン（Ｓ２）は、記憶形成機能の増大作用を有することが示され、当該作用を通してアルツハイマー病の治療につながり得ることを示唆している。【００７７】
［試験例２］（海馬神経細胞における本発明に係るシネンセチン（Ｓ４）および比較化合物ノビレチン（Ｎｂ）のＣＲＥ依存的転写活性の濃度依存性（インビトロ試験））
本試験例において、本発明に係るシネンセチン（Ｓ４）および比較化合物ノビレチン（Ｎｂ）のＣＲＥ依存的転写活性の濃度依存性を比較した。
上記試験手順１に記載のように、Ｓ４の薬効の濃度依存性を確認するため、１〜３０μＭの濃度のＳ４および比較化合物Ｎｂを用いた。
得られた結果を図４に示した。図中、全ての組み合わせでＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（ｐｏｓｔ  Ｔｕｋｅｙ）検定。値は平均値±標準誤差；検体数  ｎ＝４；＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）を示す。【００７８】
（考察２）
図４に示されるように、シネンセチン（Ｓ４）に極めて強力なＣＲＥ依存的転写活性の促進作用を認めた。すなわち、ノビレチン（Ｎｂ）は３０μＭで最大活性を示すが、その３０分の１の濃度、つまり１μＭでシネンセチン（Ｓ４）は同等の活性を示し、またその最大活性はノビレチン（Ｎｂ）のそれの２倍強であった。この様に、本発明に係るシネンセチン（Ｓ４）には、従来のノビレチン（Ｎｂ）よりもはるかに強いＣＲＥ依存的転写活性が認められ、ノビレチン（Ｎｂ）を凌駕していた。それ故に、ノビレチン（Ｎｂ）より低用量で効果を発揮できるシネンセチン（Ｓ４）は、安全性が高く、ノビレチン（Ｎｂ）を凌駕する学習・記憶障害改善作用を示し、より効果的にアルツハイマー病の認識機能障害を改善することが示唆された。【００７９】
［試験例３］（海馬神経細胞におけるＮチンピ由来画分のＣＲＥ依存的転写活性（インビトロ試験））
本試験例において、本発明に係るＮチンピ由来画分のＣＲＥ依存的転写活性を比較化合物（ＮｂおよびＳ１）のＣＲＥ依存的転写活性と比較した。
上記試験手順１に記載のように、実施例１で得られたポリメトキシフラボノイド画分（Ｆｒ．２）、ノビレチン画分（Ｆｒ．２−１）、非ノビレチン画分（Ｆｒ．２−２）、Ｆｒ．２−１およびＦｒ．２−２で再構成した混合画分（Ｆｒ．２−１＋Ｆｒ．２−２）および再構成したメトキシフラボノイド類（ＲＥＣ；シネンセチン  ０．２２２μｇ／ｍＬ＋６−デメトキシタンゲレチン  ０．１３５μｇ／ｍＬ＋６−デメトキシノビレチン  ０．１７７ｍｇ／ｍＬ＋タンゲレチン  ０．５８５ｍｇ／ｍＬ＋ノビレチン  １．８９μｇ／ｍＬ（５．０μＭ））のＣＲＥ依存的転写活性について試験した。
得られた結果を図５に示した。試料濃度は、Ｆｒ．２について４．２９μｇ／ｍＬ、Ｆｒ．２−１について１．８９μｇ／ｍＬ、Ｆｒ．２−２について２．６７μｇ／ｍＬ、Ｆｒ．２−１＋Ｆｒ．２−２について４．５６μｇ／ｍＬ、ＲＥＣについて３．００９μｇ／ｍＬとし、Ｎチンピ中の画分量に比した検体量とした。図中、全ての組み合わせでＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（ｐｏｓｔ  Ｔｕｋｅｙ）検定。値は平均値±標準誤差；検体数  ｎ＝４；＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）を示す。
また、ノビレチン濃度３０μＭに相当する１２μｇ／ｍＬを基準として、Ｆｒ．２、Ｆｒ．２−１およびＦｒ．２−２を１２μｇ／ｍＬの試料濃度としたデータを図６に示す。図中、全ての組み合わせでＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（ｐｏｓｔ  Ｔｕｋｅｙ）検定。値は平均値±標準誤差；検体数  ｎ＝４；＊＊  ｐ＜０．０１、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）を示す。【００８０】
（考察３）
図５に示されるように、海馬神経細胞における短期記憶から長期記憶への変換に係るＣＲＥ依存的転写活性において、ノビレチンを５μＭしか含まない再構成した混合画分（Ｆｒ．２−１＋Ｆｒ．２−２）と再構成したポリメトキシフラボノイド類（ＲＥＣ）のサンプルで、ノビレチン画分（Ｆｒ．２−１）より強い活性が確認された。また、これら２種の再構成サンプルは同等の活性であり、シネンセチンに６−デメトキシタンゲレチンや６−デメトキシノビレチンが加味されることで、ＣＲＥ依存的転写活性の増大に働き、認知症などの中枢神経変性疾患の改善および／または治療において優れた効果を示している。
図６に示されるように、非ノビレチン画分であるＦｒ．２−２は、ノビレチンを含まないにもかかわらず、同濃度でノビレチンよりも活性が高いことが確認され、図３で示されたシネンセチン等の効果が再確認された。
また、試験例１で得られた結果を考慮すれば、再構成したメトキシフラボノイド類（ＲＥＣ）のＣＲＥ依存的転写活性が意味することは、６−デメトキシタンゲレチン（Ｓ３）および６−デメトキシノビレチン（Ｓ２）は、シネンセチン（Ｓ４）およびタンゲレチン（Ｓ１）との協働作用によりＲＥＣのＣＲＥ依存的転写活性の発現、さらにはＦｒ．２の活性発現に貢献するというユニークな活性を示す点であるということもできる。【００８１】
［試験例４］（本発明に係るシネンセチン（Ｓ４）の学習・記憶障害改善作用（インビボ試験））
本試験例のインビボ試験において、ＭＫ８０１誘発性記憶障害モデルマウスを用いて、行動薬理学的に学習・記憶障害に対する本発明のシネンセチン（Ｓ４）の薬効を検討した。
具体的には、ＭＫ８０１誘発性学習・記憶障害に対するシネンセチンの慢性投与による作用を検討した。マウスを３群に分け、シネンセチン２５ｍｇ／ｋｇを１群に、残り２群に生理食塩水を７日間連続的に経口投与した。７日目にこれらを投与した９０分後にグルタミン酸受容体サブタイプの一つであるＭＫ８０１（８０μｇ／ｋｇ）を２群に、生理食塩水を対照群に腹腔内投与した。その３０分後に恐怖条件付け学習（記憶の獲得）試験を行った。
恐怖付け学習試験において、マウスを透明なボックスに入れ、２分間自由に探索させた後、０．７  ｍＡ、２  ｓの電気刺激を与えた（ショック事象）。これを３回繰り返して学習試行を行い、記憶の獲得および記銘能力を評価した（すなわち、通電後１分間の停止状態（Ｆｒｅｅｚｉｎｇ％））。
得られた結果を図７に示す。図中、縦軸はすくみ行動（％）を示し、横軸はショック事象（回数）を示す。「ｃｏｎｔｒｏｌ」は生理食塩水のみを投与された群を意味し、「ＭＫ８０１」は生理食塩水およびＭＫ８０１（８０μｇ／ｋｇ）を投与された群を意味し、「Ｓ２５＋ＭＫ８０１」はシネンセチン（２５ｍｇ／ｋｇ）およびＭＫ８０１（８０μｇ／ｋｇ）を投与された群を意味する。また、全ての組み合わせでＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（ｐｏｓｔ  Ｔｕｋｅｙ）検定。＊＊＊  ｐ＜０．００１、＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、§§  ｐ＜０．０１、§§§  ｐ＜０．００１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。【００８２】
学習（記憶の獲得）試行の２４時間後に、マウスを再び透明なボックスに入れ、マウスのすくみ行動、すなわち呼吸以外のすべての動作が停止した状態を指標とした確認（記憶の保持および想起）試行を行い、学習・記憶行動として５分間の測定により記憶の保持、想起能力および追想能力を評価した（すなわち、通電後５分間の停止状態（Ｆｒｅｅｚｉｎｇ％））。
得られた結果を図８に示す。図中、縦軸はすくみ行動（％）を示す。全ての組み合わせでＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（ｐｏｓｔ  Ｔｕｋｅｙ）検定。＊＊＊＊  ｐ＜０．０００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、§§§  ｐ＜０．００１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。【００８３】
（考察４）
図７および図８に示されるように、ＭＫ８０１の処置により、学習および記憶の結果として認められるすくみ行動が有意に減少したが、シネンセチンの投与により学習試行および確認試行のいずれの場合もその減少について改善効果が認められた。特に学習試行では、本発明のシネンセチンを投与したマウスは、ＭＫ８０１の処置を受けたことにより学習・記憶機能が阻害されて忘却しやすくなっているにもかかわらず、すくみ行動の減少が有意に軽減された。【００８４】
［試験例５］（Ｆｒ．２による学習・記憶障害改善作用（インビボ試験））
上記試験例４にて、シネンセチンに代えて、Ｆｒ．２（９２．８ｍｇ／ｋｇ）の経口投与による作用を検討した。得られた学習試行の結果を図９に示す。図中、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照（生理食塩水）との有意差（検定結果）、＃＃  ｐ＜０．０１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。
また、得られた確認試行の結果を図１０に示す。図中、＊＊＊  ｐ＜０．００１は対照との有意差（検定結果）、＃＃  ｐ＜０．００１は「ＭＫ８０１」との有意差を示す。【００８５】
（考察５）
図９に示されるように、学習（記憶の獲得）試行において、メトキシフラボノイド類を主とするＦｒ．２がＭＫ８０１の処置によるすくみ行動の減少を対照に近い状態まで強く改善する効果が認められた。
図１０に示されるように、確認（記憶の保持および想起）試行においても、ＭＫ８０１による記憶障害を優位に改善することが確認された。【００８６】
［比較例１］（ノビレチンによる学習・記憶障害改善作用（インビボ試験））
上記試験例４にて、シネンセチンに代えて、ノビレチン（５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与による作用を検討した。結果を図１１および図１２に示す。【００８７】
図１１に示されるように、学習試行において、ＭＫ８０１の処置によるすくみ行動の減少は、ノビレチンを腹腔内投与しても改善しなかった。図１２に示されるように、確認試行では、ノビレチン投与の効果が認められた。
すなわち、ノビレチン（腹腔内投与）は、記憶の保持および想起の障害の改善効果を有するのみであることが確認された。【００８８】
＜製剤例＞（本発明の組成物の製造）
本発明の組成物を以下のとおり製造した。
［製剤例１］細粒剤Ａ
Ｎチンピ３．０  ｇ、当帰３．０  ｇ、釣藤鈎３．０  ｇ、川キュウ３．０  ｇ、白朮４．０  ｇ、茯苓４．０  ｇ、柴胡２．０  ｇ、甘草１．５  ｇおよび半夏５．０  ｇ（合計２８．５  ｇ）の比率で、合計量が２００〜８００  ｋｇになるよう生薬を配合し、水２０００〜８０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。得られた抽出物を遠心分離機を用いて回転数１０００〜５０００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤（抑肝散加陳皮半夏エキス）を得た。
得られた抑肝散加陳皮半夏エキス６．１  ｇに対し、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖、プルランおよびメタケイ酸アルミン酸マグネシウムからなる添加物２．９  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩３０号〜５０号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ａを得た。
得られた細粒剤Ａ  ９．０  ｇには、Ｎチンピ３．０  ｇと他の生薬とを配合した抑肝散加陳皮半夏エキスが６．１  ｇ含有されており、目安として細粒剤Ａ  ９．０  ｇを成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００８９】
［製剤例２］細粒剤Ｂ
橘皮３．０  ｇ、檳榔子４．０  ｇ、厚朴３．０  ｇ、桂皮３．０  ｇ、蘇葉１．５  ｇ、甘草１．０  ｇ、大黄１．０  ｇ、生姜１．０  ｇ、木香１．０  ｇ、呉茱萸１．０  ｇおよび茯苓３．０  ｇ（合計２２．５  ｇ）の比率で、合計量が２００〜８００  ｋｇになるよう生薬を配合し、水２０００〜８０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜５０００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤（九味檳榔湯エキス）を得た。
得られた九味檳榔湯エキス３．７  ｇに対し、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖、プルランおよびメタケイ酸アルミン酸マグネシウムからなる添加物２．３  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩３０号〜５０号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｂを得た。
得られた細粒剤Ｂ  ６．０  ｇには、橘皮３．０  ｇと他の生薬とを配合した九味檳榔湯エキスが３．７  ｇ含有されており、目安として細粒剤Ｂ  ６．０  ｇを成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００９０】
［製剤例３］細粒剤Ｃ
Ｎチンピ２．４  ｇ、釣藤鈎２．４  ｇ、半夏２．４  ｇ、麦門冬２．４  ｇ、茯苓２．４  ｇ、人参１．６  ｇ、防風１．６  ｇ、菊花１．６  ｇ、甘草０．８  ｇ、生姜０．８  ｇおよび石膏４．０  ｇ（合計２２．４  ｇ）の比率で、合計量が２００〜８００  ｋｇになるよう生薬を配合し、水２０００〜８０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜５０００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤（釣藤散エキス）を得た。
得られた釣藤散エキス４．４８  ｇに対し、含水二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウムおよびトウモロコシデンプンからなる添加物１．５２  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩３０号〜５０号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｃを得た。
得られた細粒剤Ｃ  ６．０  ｇには、Ｎチンピ２．４  ｇと他の生薬とを配合した釣藤散エキスが４．４８  ｇ含有されており、目安として細粒剤Ｃ  ６．０  ｇを成人１日あたり３回に分けて服用する。【００９１】
［製剤例４］細粒剤Ｄ
Ｎチンピまたは橘皮５０  ｋｇを水５００〜２０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜２５００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤を得た。
得られたエキス剤７．２  ｇに対し、微粒二酸化ケイ素およびショ糖脂肪酸エステルからなる添加物１．８  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて回転数４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩３０号〜４２号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｄを得た。
得られた細粒剤Ｄ  ９．０  ｇには、エキス剤が７．２  ｇ（Ｎチンピまたは橘皮２０  ｇに相当する）含有されており、目安として細粒剤Ｄ  ９．０  ｇを成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００９２】
［製剤例５］茶剤
Ｎチンピまたは橘皮を８５０〜４７５０μｍ角に切断し、切断したＮチンピまたは橘皮３〜７  ｇを紙または布の袋に入れて茶剤とした。
得られた茶剤を成人１日あたり３回（１袋／回）で浸出して服用する。【００９３】
［製剤例６］生薬末−細粒剤Ｅ
Ｎチンピまたは橘皮を粉砕機を用いて回転数２０００〜３５００  ｒｐｍ、目開き０．５〜３．０  ｍｍで粗砕し、さらに製粉機を用いて回転数５０００〜８０００  ｒｐｍ、目開き１５０μｍで粉砕し、生薬末とした。得られた生薬末１０  ｇに対し、含水二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウムおよびトウモロコシデンプンからなる添加物９．２  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて回転数４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩３０号〜４２号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒剤Ｅを得た。
得られた細粒剤Ｅ  １９．２  ｇには、Ｎチンピまたは橘皮１０  ｇが含有されており、目安として細粒剤Ｅ  １９．２〜３８．４  ｇを成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００９４】
［製剤例７］煎剤
Ｎチンピまたは橘皮１０〜３０  ｇを２０倍量の水２００〜６００  ｍＬで、１００℃１時間煎じて水を半量にし、ろ過して煎剤とした。
得られた煎剤１００〜３００  ｍＬには、Ｎチンピまたは橘皮１０〜３０  ｇが含有されており、目安として煎剤１００〜３００  ｍＬを成人１日あたり３回に分けて服用する。【００９５】
［製剤例８］カプセル剤
Ｎチンピまたは橘皮５０  ｋｇを水５００〜２０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜２５００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤を得た。
得られたエキス剤１０  ｇに対し、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム・ヒドロキシプロピルスターチ・結晶セルロース、トウモロコシデンプン、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウムおよびカルメロ−スカルシウムからなる添加物４．７５  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて回転数４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩３０号〜４２号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、細粒を得た。この細粒４００  ｍｇを当分野にて通常用いられる市販のカプセルに充填し、カプセル剤を得た。
得られたカプセル剤１３個（４７０〜４８０  ｍｇ／個）には、エキス剤が３．６  ｇ（Ｎチンピまたは橘皮１０  ｇに相当する）含有されており、目安としてカプセル剤１３〜２６個を成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００９６】
［製剤例９］コート錠剤
Ｎチンピまたは橘皮５０  ｋｇを水５００〜２０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜２５００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤を得た。
得られたエキス剤１０  ｇに対し、マルトース、乳糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムおよびステアリン酸マグネシウムからなる添加物９．１  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて回転数４  ｒｐｍ、２０分間混合し、高速回転式打錠機を用いて回転数２０〜５５  ｒｐｍ、一次圧縮０．６  ｍｍ以上、二次圧縮０．４  ｍｍ以上で打錠し、１錠３５０  ｍｇの素錠を得た。ヒドロキシプロピルメチルセルロース、タルク、酸化チタンおよびカラメルからなるコーティング剤１．１  ｇを水／エタノール混液（３：７〜１０：０）に溶解または懸濁し、コーティング機を用いて排気温４０〜５５℃、流量２００〜４００  ｍＬ／ｍｉｎ、回転数４〜６  ｒｐｍで得られた素錠をコーティングし、微量のカルナウバロウとサラシミツロウを用いて回転数１  ｒｐｍ、排気温２０〜３０℃で艶出しを行い、１錠３７０  ｍｇのコート錠剤とした。
得られたコート錠剤２０錠には、エキス剤が３．６  ｇ（Ｎチンピまたは橘皮１０  ｇに相当する）含有されており、目安としてコート錠剤２０〜４０錠を成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００９７】
［製剤例１０］顆粒剤
Ｎチンピまたは橘皮５０  ｋｇを水５００〜２０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜２５００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤を得た。
得られたエキス剤１０  ｇに対し、カルメロースカルシウム、含水二酸化ケイ素、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムおよびステアリン酸マグネシウムからなる添加物４０  ｇの比率で、合計量が５０〜４００  ｋｇの範囲で配合し、容器回転型混合機を用いて回転数４  ｒｐｍ、２０分間混合し、乾式造粒装置を用いてロール圧４９０〜２５００  Ｐａで成型して整粒し、篩１２号〜４２号間にて粒子分級（カセットスクリーン）し、顆粒剤を得た。
得られた顆粒剤１８  ｇには、エキス剤が３．６  ｇ（Ｎチンピまたは橘皮１０  ｇに相当する）含有されており、目安として顆粒剤１８〜３６  ｇを成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。【００９８】
［製剤例１１］ゼリー剤
Ｎチンピまたは橘皮５０  ｋｇを水５００〜２０００  Ｌにて、抽出缶を用いて６０〜１００℃、３０〜１８０分間抽出した。遠心分離機を用いて回転数１０００〜２５００  ｒｐｍでろ過して固液分離した後、コイル回転型濃縮機を用いて８  ｋＰａ以下の減圧下で濃度約１０〜４０％まで濃縮した。濃縮液を、噴霧乾燥機を用いて回転数１００００〜２００００  ｒｐｍ、給気温度１３０〜１８０℃、排気温度６０〜１２０℃で噴霧乾燥し、エキス剤を得た。
得られたエキス剤１０  ｇに対し、カラギナン、ローカストビーンガム、還元麦芽糖液糖、キシリトール、アップル香料、レシチンおよびクエン酸からなる添加物４０  ｇの比率で、合計量が１０〜３０  ｋｇの範囲で配合し、混合攪拌機を用いて回転数５０〜１５０  ｒｐｍで混合し、等量の８０℃以上の温水を攪拌しながら加え、１５℃以下に冷却してゼリー剤とした。
得られたゼリー剤１８  ｇには、エキス剤が３．６  ｇ（Ｎチンピまたは橘皮１０  ｇに相当する）含有されており、目安としてゼリー剤１８〜３６  ｇを成人１日あたり２〜３回に分けて服用する。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明の中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物は、アルツハイマー病およびパーキンソン病などの中枢神経変性疾患を改善する、医薬品または食品として有用であり、該疾患の有望な根本治療薬の含有成分としても利用可能である。本発明の中枢神経変性疾患の改善および／または治療用組成物は特に、記憶の獲得、保持および想起能力の増強に有用である。
【図１】
2013191236.tif 000025
【図２】
2013191236.tif 000026
【図３】
2013191236.tif 000027
【図４】
2013191236.tif 000028
【図５】
2013191236.tif 000029
【図６】
2013191236.tif 000030
【図７】
2013191236.tif 000031
【図８】
2013191236.tif 000032
【図９】
2013191236.tif 000033
【図１０】
2013191236.tif 000034
【図１１】
2013191236.tif 000035
【図１２】
2013191236.tif 000036
【手続補正書】
【提出日】平成26年4月9日(2014.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
2013191236.tif 000037
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２
から選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含んでなり、
ノビレチンを含まない、中枢神経変性疾患の改善および／または治療用の組成物。
【請求項２】
有効成分が、式Ｉ−４：
【化２】
2013191236.tif 000038
で表される化合物Ｓ４である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
有効成分が、式Ｉ−４：
【化３】
2013191236.tif 000039
で表される化合物Ｓ４と、式Ｉ−３：
【化４】
2013191236.tif 000040
で表される化合物Ｓ３および／または式Ｉ−２：
【化５】
2013191236.tif 000041
で表される化合物Ｓ２との混合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
中枢神経変性疾患が記憶の獲得障害、記銘障害、またはパーキンソン病である、請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
中枢神経変性疾患の改善および／または治療がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性の増大、記憶形成機能の増大、ドーパミン含量の上昇またはドーパミン分泌の促進によりもたらされる、請求項１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
化合物Ｓ４、Ｓ３およびＳ２が柑橘類の果皮の乾燥物から水抽出したものである、請求項１〜５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項７】
柑橘類がシトラス・レチクラータ・ブランコ（ルタシー）、橘または大紅蜜柑である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
さらに威霊仙、烏薬、延胡索、黄蓍、黄ゴン、黄柏、遠志、カッ香、葛根、乾姜、甘草、桔梗、菊花、枳実、杏仁、桂皮、紅花、香附子、厚朴、牛膝、呉茱萸、五味子、柴胡、山梔子、地黄、芍薬、生姜、升麻、神麹、石膏、川キュウ、前胡、蒼朮、蘇木、蘇葉、大黄、大棗、大腹皮、沢瀉、竹ジョ、知母、釣藤鈎、天麻、天門冬、当帰、桃仁、人参、麦芽、麦門冬、半夏、白シ、白朮、檳榔子、茯苓、防已、芒硝、防風、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、竜胆、和羌活およびこれらの二以上の組み合わせからなる群から選択される生薬成分を配合してなる、請求項１〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項９】
経口投与形態である、請求項１〜８のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項１０】
経口投与形態が細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス剤の形態である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
一般式Ｉ：
【化６】
2013191236.tif 000042
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２
から選択される少なくとも１つの化合物、および添加成分を含み、
ノビレチンを含まない、食品。
【請求項１２】
式Ｉ−４：
【化７】
2013191236.tif 000043
で表される化合物Ｓ４を含む、請求項１１に記載の食品。
【手続補正書】
【提出日】平成27年5月15日(2015.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
2013191236.tif 000044
において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメトキシ基であってＲ５がＨである化合物Ｓ４、
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ１およびＲ３がＨである化合物Ｓ３、および
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５がメトキシ基であってＲ３がＨである化合物Ｓ２
から選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含んでなり、
ノビレチンを含まない、記憶の獲得障害または記銘障害の改善および／または治療用の組成物。
【請求項２】
有効成分が、式Ｉ−４：
【化２】
2013191236.tif 000045
で表される化合物Ｓ４である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
有効成分が、式Ｉ−４：
【化３】
2013191236.tif 000046
で表される化合物Ｓ４と、式Ｉ−３：
【化４】
2013191236.tif 000047
で表される化合物Ｓ３および／または式Ｉ−２：
【化５】
2013191236.tif 000048
で表される化合物Ｓ２との混合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
記憶の獲得障害または記銘障害の改善および／または治療がｃＡＭＰ応答配列依存的転写活性の増大、記憶形成機能の増大、ドーパミン含量の上昇またはドーパミン分泌の促進によりもたらされる、請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
化合物Ｓ４、Ｓ３およびＳ２が柑橘類の果皮の乾燥物から水抽出したものである、請求項１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
柑橘類がシトラス・レチクラータ・ブランコ（ルタシー）、橘または大紅蜜柑である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
さらに威霊仙、烏薬、延胡索、黄蓍、黄ゴン、黄柏、遠志、カッ香、葛根、乾姜、甘草、桔梗、菊花、枳実、杏仁、桂皮、紅花、香附子、厚朴、牛膝、呉茱萸、五味子、柴胡、山梔子、地黄、芍薬、生姜、升麻、神麹、石膏、川キュウ、前胡、蒼朮、蘇木、蘇葉、大黄、大棗、大腹皮、沢瀉、竹ジョ、知母、釣藤鈎、天麻、天門冬、当帰、桃仁、人参、麦芽、麦門冬、半夏、白シ、白朮、檳榔子、茯苓、防已、芒硝、防風、牡丹皮、麻黄、木通、木香、益母草、竜胆、和羌活およびこれらの二以上の組み合わせからなる群から選択される生薬成分を配合してなる、請求項１〜６のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項８】
経口投与形態である、請求項１〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項９】
経口投与形態が細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス剤の形態である、請求項８に記載の組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成27年9月14日(2015.9.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ−４：
【化１】
2013191236.tif 000049
で表される化合物Ｓ４を有効成分として含んでなり、
ノビレチンを含まない、記憶の獲得障害または記銘障害の改善および／または治療用の組成物。
【請求項２】
経口投与形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
経口投与形態が細粒剤、茶剤、煎剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、ゼリー剤、散剤、液剤、シロップ剤またはエキス剤の形態である、請求項２に記載の組成物。
【国際調査報告】
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