(57)【要約】  播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）又は感染性ＤＩＣの診断に有効なマーカーを提供する。  本発明のＤＩＣの検出方法では、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する。本発明の感染性ＤＩＣの検出方法では、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーを測定する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する、播種性血管内凝固症候群の検出方法。
【請求項２】
播種性血管内凝固症候群が疑われる患者又は播種性血管内凝固症候群患者から採取した試料中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する工程、及び
ｓＣＤ１４−ＳＴ値が非播種性血管内凝固症候群患者と比較して高値である場合に播種性血管内凝固症候群であると判断する工程
を含む、請求項１に記載の播種性血管内凝固症候群の検出方法。
【請求項３】
前記判断工程において、ｓＣＤ１４−ＳＴ値と予め決定した閾値とを比較する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
該ｓＣＤ１４−ＳＴを免疫学的測定方法で測定する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記播種性血管内凝固症候群が感染性播種性血管内凝固症候群であり、ｓＣＤ１４−ＳＴに加え、更に試料中の凝固関連マーカーを測定する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
感染性播種性血管内凝固症候群が疑われる患者又は感染性播種性血管内凝固症候群患者から採取した試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーを測定する工程、及び
ｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値が感染性非播種性血管内凝固症候群患者と比較して変化している場合に感染性播種性血管内凝固症候群であると判断する工程
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記判断工程において、測定されたｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値とそれぞれの予め決定した閾値とを比較する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記凝固関連マーカーが、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体、血小板数、プロテインＣから少なくとも一つ選ばれる、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
該ｓＣＤ１４−ＳＴを免疫学的測定方法で測定する、請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
播種性血管内凝固症候群を検出するキットであって、
（ａ）ｓＣＤ１４−ＳＴに特異的な抗体、
（ｂ）試料中のｓＣＤ１４−ＳＴの量と播種性血管内凝固症候群との相関を示す標準データ、
（ｃ）取扱説明書
を含む、該キット。
【請求項１１】
感染性播種性血管内凝固症候群を検出するキットであって、
（ａ）ｓＣＤ１４−ＳＴに特異的な抗体、
（ｂ）凝固関連マーカー測定用試薬、
（ｃ）試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値と感染性播種性血管内凝固症候群との相関を示す標準データ、
（ｄ）取扱説明書
を含む、該キット。
【請求項１２】
前記凝固関連マーカーが、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体、血小板数、プロテインＣから少なくとも一つ選ばれる、請求項１１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、播種性血管内凝固症候群（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ：ＤＩＣ）を検出する方法と、該方法を実施するキットに関する。また、本発明は、感染性播種性血管内凝固症候群（感染性ＤＩＣ）を検出する方法と、該方法を実施するキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）は消費性凝固障害による出血傾向と、微小血管内血栓による臓器障害を特徴とした死亡率の極めて高い症候群であり、早期診断と早期治療が患者の生命の維持や予後の改善に必要である。従来から、ＤＩＣの診断には厚生労働省が定める診断基準を初め、様々な凝固線溶系分子マーカー〔例えば、可溶性フィブリンモノマー（ＳＦ）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ（ＤＤ）、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）、プラスミン・α２プラスミンインヒビター複合体（ＰＩＣ）〕の測定等が臨床現場で行われている。その他、厚生労働省基準を修正したＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準や急性期ＤＩＣ診断基準がある。しかし、厚生労働省基準やＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準は感度が低く、急性期ＤＩＣ診断基準は特異度が低いことが知られる。そのため、更に精度の高い診断を行うための検討が行われており（非特許文献１）、例えば、更に感度や特異度が高いマーカーの発見が切望されている。【０００３】
ＤＩＣは、悪性腫瘍、白血病、又は重症感染症（もしくは重症敗血症）など重篤な基礎疾患に合併して起こる疾患である。特に、重症敗血症の約３５％はＤＩＣを合併し、ＤＩＣを合併すると死亡率は非ＤＩＣと比べて２２．２〜２６．５％から４０〜４６．２％に上昇することから、敗血症性ＤＩＣを診断することは、敗血症の予後を改善するために非常に重要である。【０００４】
全てのＤＩＣには必ず基礎疾患が存在することから、まず、基礎疾患の治療が行われる。例えば、急性白血病や進行癌に対する化学療法、敗血症に対する感受性のある抗生剤治療などがある。このように基礎疾患が多岐にわたっているため、どのような病態にあるのか把握することが、有効な治療法を選択する上で重要である。同じＤＩＣと診断されても間違った治療を行うと重篤な状態に陥ってしまうのは言うまでも無い。敗血症性ＤＩＣの場合には、アンチトロンビン製剤を中心とする治療に難知性であった患者において、抗凝固作用に加え抗炎症作用を合わせもつ遺伝子組み換えトロンボモジュリン製剤で治療効果が上がることが報告されている（非特許文献２）。【０００５】
従来、敗血症性ＤＩＣであることは、敗血症あるいはＤＩＣの診断基準に基づいて、医師の判断により診断している。例えば、先述のとおり、ＤＩＣの診断には厚生労働省が定める診断基準を初め、様々な凝固線溶系分子マーカー〔例えば、可溶性フィブリンモノマー（ＳＦ）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ（ＤＤ）、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）、プラスミン・α２プラスミンインヒビター複合体（ＰＩＣ）〕の測定等が臨床現場で行われている。その他、厚生労働省基準を修正したＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準や急性期ＤＩＣ診断基準がある。しかし、厚生労働省基準やＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準は感度が低く、急性期ＤＩＣ診断基準は特異度が低いことが知られる。【０００６】
一方、敗血症の診断には、血液培養、白血球数、体温、画像診断、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の持続期間などの血液生化学所見等を指標とされている。また、簡便に敗血症を検出可能なマーカーとしてプロカルシトニン（ＰＣＴ）やｓＣＤ１４−ＳＴが報告されている。【０００７】
敗血症において試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ値は健常人よりも非常に高く、ｓＣＤ１４−ＳＴを測定して敗血症を診断することが開示されている（非特許文献３、特許文献１）。また、ｓＣＤ１４−ＳＴをその特異的抗体によって測定することも開示されている（特許文献１、特許文献２）。また、その早期検出及び重篤度を評価する方法が開示されている（特許文献２、非特許文献３−５）。このように、ｓＣＤ１４−ＳＴは、細菌感染を伴う敗血症を精度良く診断できることが知られているが、ＤＩＣの検出に有用である報告はない。【０００８】
以上のように、未だ、敗血症性ＤＩＣ（もしくは感染性ＤＩＣ）の診断を簡便に精度良く行えるマーカーの報告はなく、医師は敗血症性ＤＩＣ（もしくは感染性ＤＩＣ）の診断に苦慮しているのが実情であり、そのようなマーカーの発見が切望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特許第４０４０６６６号明細書
【特許文献２】特開２００５−１０６６９４号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】医学のあゆみ  ２０１１;２３８（１）：６３−６８．
【非特許文献２】医学のあゆみ  ２０１１；２３８（１）：１１４−１１９．
【非特許文献３】Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ２００５；１１：２３４−２３８．
【非特許文献４】Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅｓ  ２０１０；４８：２５−２７．
【非特許文献５】Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  ２００４；２５：１６８９−１６９４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の課題は、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、あるいは、感染性ＤＩＣの診断に有効なマーカーを提供することにある。感染性ＤＩＣが疑われた後、それに対する適切な治療方針を迅速に決定することが求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記課題の解決手段を鋭意探求する中で、本発明者は、臨床試験において、血液中のｓＣＤ１４−ＳＴの量と播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）との関係を検討していたところ、ｓＣＤ１４−ＳＴは、ＤＩＣ患者に対し高い感度と特異性をもって反応する特異的なマーカーであり、その測定値あるいは程度から、ＤＩＣを検出できることを発見し、本発明を完成した。特に感染の有無に関わらず、ＤＩＣを検出できることは、驚くべき発見であった。【００１３】
また、本発明者は、感染性播種性血管内凝固症候群（感染性ＤＩＣ）が疑われた際に、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーを測定することにより、その測定値あるいは程度から、簡便に感染性ＤＩＣを検出し、またその病態を把握することが可能となる特異的なマーカーであることを発見し、本発明を完成した。【００１４】
本発明は、
［１］試料中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する、播種性血管内凝固症候群の検出方法、
［２］播種性血管内凝固症候群が疑われる患者又は播種性血管内凝固症候群患者から採取した試料中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する工程、及び
ｓＣＤ１４−ＳＴ値が非播種性血管内凝固症候群患者と比較して高値である場合に播種性血管内凝固症候群であると判断する工程
を含む、［１］の播種性血管内凝固症候群の検出方法、
［３］前記判断工程において、ｓＣＤ１４−ＳＴ値と予め決定した閾値とを比較する、［２］の方法、
［４］該ｓＣＤ１４−ＳＴを免疫学的測定方法で測定する、［１］〜［３］のいずれかの方法、
［５］前記播種性血管内凝固症候群が感染性播種性血管内凝固症候群であり、ｓＣＤ１４−ＳＴに加え、更に試料中の凝固関連マーカーを測定する、［１］の方法、
［６］感染性播種性血管内凝固症候群が疑われる患者又は感染性播種性血管内凝固症候群患者から採取した試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーを測定する工程、及び
ｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値が感染性非播種性血管内凝固症候群患者と比較して変化している場合に感染性播種性血管内凝固症候群であると判断する工程
を含む、［５］の方法、
［７］前記判断工程において、測定されたｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値とそれぞれの予め決定した閾値とを比較する、［６］の方法、
［８］前記凝固関連マーカーが、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体、血小板数、プロテインＣから少なくとも一つ選ばれる、［５］〜［７］のいずれかの方法、
［９］該ｓＣＤ１４−ＳＴを免疫学的測定方法で測定する、［５］〜［８］のいずれかの方法、
［１０］播種性血管内凝固症候群を検出するキットであって、
（ａ）ｓＣＤ１４−ＳＴに特異的な抗体、
（ｂ）試料中のｓＣＤ１４−ＳＴの量と播種性血管内凝固症候群との相関を示す標準データ、
（ｃ）取扱説明書
を含む、該キット、
［１１］感染性播種性血管内凝固症候群を検出するキットであって、
（ａ）ｓＣＤ１４−ＳＴに特異的な抗体、
（ｂ）凝固関連マーカー測定用試薬、
（ｃ）試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値と感染性播種性血管内凝固症候群との相関を示す標準データ、
（ｄ）取扱説明書
を含む、該キット、
［１２］前記凝固関連マーカーが、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体、血小板数、プロテインＣから少なくとも一つ選ばれる、［１１］のキット
に関する。【００１５】
本明細書において「ヒトｓＣＤ１４−ＳＴ」（別称としてプレセプシン（登録商標）ともいう）とは、特許第４０４０６６６号明細書に記載の「第１の態様の可溶性ＣＤ１４抗原」を意味し、より具体的には、下記の１）〜３）の性質を有する可溶性ＣＤ１４抗原である。
１）非還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥでは、分子量１３±２ｋＤａ、
２）Ｎ末端配列に配列番号１のアミノ酸配列を有する、及び
３）配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体に特異的に結合する。【００１６】
配列番号１：
Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu LeuAsp Asp Glu 
1               5                   10      
配列番号２：
Arg Val Asp AlaAsp Ala Asp Pro Arg Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys 
1               5                   10                  15      【００１７】
本明細書における「感染」とは、細菌、真菌、寄生虫、またはウイルスなどの感染が挙げられる。
感染の存在を確認する方法としては、特に限定するものではないが、一般的に行われている血液培養の他に遺伝子同定法（ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲなど）、画像診断、超音波診断、内視鏡検査、生検などが挙げられる（Ａｍ  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  １９８８；１６：１２８−１４０）。【００１８】
本発明書における「感染症」とは、微生物の正常組織への侵襲もしくはその存在に対する炎症反応によって特徴付けられる現象である（Ｃｈｅｓｔ  １９９２;１０１（６）：１６４４−１６５５）。感染症を引き起こす病原体には、細菌、真菌、寄生虫、またはウイルスが挙げられる。菌血症、敗血症、重症敗血症及び敗血症性ショックは、「感染症」の中に含まれる。菌血症は、血液中に生菌が存在している状態である（細菌感染症  最新内科学大系  第２７巻  １９９４：６９−８４）。敗血症は、感染によって引き起こされた全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）であり、体内の感染病巣から細菌や真菌などの微生物およびその代謝産物が持続的に血液中に移行している状態である。【００１９】
本明細書における「敗血症」とは、感染によって引き起こされた全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）である。すなわち、感染症が全身に波及したもので非常に重篤な状態であり、無治療ではショック、ＤＩＣ、多臓器不全などから死に至ることもある。「敗血症」の診断は上記感染の存在に加え、例えば、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）診断項目である以下４項目のうち２項目以上を満たす状態の事を言う（Ｃｈｅｓｔ  １９９２；１０１（６）：１６４４−１６５５）。
１）体温＞３８℃または＜３６℃
２）心拍数＞９０回／分
３）呼吸数＞２０回／分またはＰａＣＯ２＞３２Ｔｏｒｒ
４）白血球数＞１２０００、＜４０００／ｍｍ３または未熟型白血球＞１０％【００２０】
本明細書における「感染性ＤＩＣ」とは、感染症（もしくは敗血症）を基礎疾患として有する播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）である。例えば、重症敗血症の約３５％はＤＩＣを合併すると言われている。従来法では、「感染性ＤＩＣ」（もしくは「敗血症性ＤＩＣ」）の診断は、医師が、上記感染症（もしくは敗血症）の診断基準及びＤＩＣの診断基準に即して総合的に判断し、その病態を把握する。
また、その治療法はそれぞれの病態の対処療法であり、例えば、感染症（もしくは敗血症）の治療のためには抗菌剤など、及び、ＤＩＣの治療のためには抗凝固剤などが適宜使用される。
【発明の効果】
【００２１】
本発明方法によれば、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）又は感染性ＤＩＣの発症を迅速に精度良く検出することができることから、適切な治療方針を策定することができる。
また、本発明のキットは、本発明方法に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】臨床試験に登録された患者（４９名）に関して、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（２３例）と非ＤＩＣ群（２６例）に分類し、来院時に採取した検体のｓＣＤ１４−ＳＴ値、プロカルシトニン（ＰＣＴ）値、インターロイキン−６（ＩＬ−６）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図２】図１と同じ分類を行った患者に関して、来院時に採取した検体のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）値、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図３】臨床試験に登録された患者（４９名）に関して、厚生労働省ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（２３例）と非ＤＩＣ群（２６例）に分類し、来院時に採取した検体のｓＣＤ１４−ＳＴ値、プロカルシトニン（ＰＣＴ）値、インターロイキン−６（ＩＬ−６）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図４】図３と同じ分類を行った患者に関して、来院時に採取した検体のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）値、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図５】臨床試験に登録された患者（４９名）に関して、ＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（２３例）と非ＤＩＣ群（２６例）に分類し、来院時に採取した検体のｓＣＤ１４−ＳＴ値、プロカルシトニン（ＰＣＴ）値、インターロイキン−６（ＩＬ−６）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図６】図５と同じ分類を行った患者に関して、来院時に採取した検体のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）値、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図７】実施例２の急性期ＤＩＣ基準で行ったＲＯＣ分析の結果から、ｓＣＤ１４−ＳＴの臨床感度および特異度を示すグラフである。横軸はｓＣＤ１４−ＳＴ値、縦軸は感度あるいは特異度を示す。
【図８】実施例３の厚生労働省ＤＩＣ基準で行ったＲＯＣ分析の結果から、ｓＣＤ１４−ＳＴの臨床感度および特異度を示すグラフである。横軸はｓＣＤ１４−ＳＴ値、縦軸は感度あるいは特異度を示す。
【図９】実施例２の急性期ＤＩＣ基準で行ったＲＯＣ分析の結果から、Ｄ−ｄｉｍｅｒの臨床感度および特異度を示すグラフである。横軸はＤ−ｄｉｍｅｒ値、縦軸は感度あるいは特異度を示す。
【図１０】実施例３の厚生労働省ＤＩＣ基準で行ったＲＯＣ分析の結果から、Ｄ−ｄｉｍｅｒの臨床感度および特異度を示すグラフである。横軸はＤ−ｄｉｍｅｒ値、縦軸は感度あるいは特異度を示す。
【図１１】実施例２の急性期ＤＩＣ基準で行ったＲＯＣ分析の結果から、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の臨床感度および特異度を示すグラフである。横軸はＦＤＰ値、縦軸は感度あるいは特異度を示す。
【図１２】実施例３の厚生労働省ＤＩＣ基準で行ったＲＯＣ分析の結果から、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の臨床感度および特異度を示すグラフである。横軸はＦＤＰ値、縦軸は感度あるいは特異度を示す。
【図１３】臨床試験に登録された患者（４９名）のうち非感染であったＳＩＲＳまたは非感染性疾患の症例１３例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（４例）と非ＤＩＣ群（９例）に分類し、来院時に採取した検体のｓＣＤ１４−ＳＴ値、プロカルシトニン（ＰＣＴ）値、インターロイキン−６（ＩＬ−６）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図１４】図１３と同じ分類を行った患者に関して、来院時に採取した検体のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）値、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図１５】臨床試験に登録された患者（４９名）のうち、感染を伴う敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックまたは感染性疾患の症例３３例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、ｓＣＤ１４−ＳＴを測定し、ＤＩＣスコア別のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図１６】図１５と同じ症例３３例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、プロカルシトニン（ＰＣＴ）を測定し、ＤＩＣスコア別のＰＣＴの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図１７】図１５と同じ症例３３例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）を測定し、ＤＩＣスコア別のＣＲＰの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図１８】図１５と同じ症例３３例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、インターロイキン−６（ＩＬ−６）を測定し、ＤＩＣスコア別のＩＬ−６の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図１９】臨床試験に登録された患者（４９名）に関して、非感染群（ＳＩＲＳ及び非感染性疾患）１３例と感染群（敗血症、重症敗血症、敗血症性ショック及び感染性疾患）３６例に分類し、感染症検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ値の有用性をＲＯＣ分析により評価した結果を示すグラフである。
【図２０】臨床試験に登録された患者（４９名）のうち、感染を伴った敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックまたは感染性疾患の症例３６例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（１９例）と非ＤＩＣ群（１７例）に分類し、感染性ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ値の有用性をＲＯＣ分析により評価した結果を示すグラフである。
【図２１】臨床試験に登録された患者（４９名）のうち、感染を伴う敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックまたは感染性疾患の症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、Ｄ−ｄｉｍｅｒを測定し、ＤＩＣスコア別のＤ−ｄｉｍｅｒの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２２】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）を測定し、ＤＩＣスコア別のＦＤＰの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２３】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、血小板（Ｐｌｔ）を測定し、ＤＩＣスコア別の血小板の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２４】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、プロトロンビン時間（ＰＴ）（秒）を測定し、ＤＩＣスコア別のＰＴ（秒）の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２５】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、プロトロンビン時間（ＰＴ）（％）を測定し、ＤＩＣスコア別のＰＴ（％）の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２６】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、ＩＮＲ値を測定し、ＤＩＣスコア別のＩＮＲ値の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２７】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を測定し、ＤＩＣスコア別のＡＰＴＴの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２８】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）を測定し、ＤＩＣスコア別のフィブリノーゲンの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図２９】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、アンチトロンビンIII（ＡＴIII）を測定し、ＤＩＣスコア別のアンチトロンビンIIIの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３０】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、乳酸（Ｌａｃｔ）を測定し、ＤＩＣスコア別の乳酸の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３１】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体（ＴＡＴ）を測定し、ＤＩＣスコア別のＴＡＴの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３２】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、プラスミン・α２プラスミンインヒビター複合体（ＰＩＣ）を測定し、ＤＩＣスコア別のＰＩＣの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３３】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、プロテインＣ（ＰＣ）を測定し、ＤＩＣスコア別のプロテインＣの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３４】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、トロンボモジュリン（ＴＭ）を測定し、ＤＩＣスコア別のトロンボモジュリンの測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３５】図２１と同じ症例２６例を対象として、ＤＩＣスコアを求めると共に、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）・プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）複合体（Ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１）を測定し、ＤＩＣスコア別のＴｏｔａｌ  ＰＡＩ−１の測定値分布を比較した結果を示す箱ひげ図である。
【図３６】臨床試験に登録された患者（４９名）のうち非感染であったＳＩＲＳまたは非感染性疾患の症例１３例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（４例）と非ＤＩＣ群（９例）に分類し、来院時に採取した検体のｓＣＤ１４−ＳＴ値、プロカルシトニン（ＰＣＴ）値、インターロイキン−６（ＩＬ−６）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【図３７】図３６と同じ分類を行った患者に関して、来院時に採取した検体のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）値、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）値それぞれに対して、ＤＩＣ検出における有用性をＲＯＣ分析により比較を行った結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の検出方法（以下、本発明方法と称する）では、被検対象者、特に、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）が疑われる患者又はＤＩＣ患者から採取した試料中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する。また、本発明方法において感染性ＤＩＣを検出する場合には、感染性播種性血管内凝固症候群（感染性ＤＩＣ）が疑われる患者又は感染性ＤＩＣ患者から採取した試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーを測定する。
【００２４】
本発明で使用可能な凝固関連マーカーは、例えば、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）、血小板数（Ｐｌｔ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、ＩＮＲ値、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）、アンチトロンビンIII（ＡＴIII）（定量・活性）、乳酸（Ｌａｃｔ）、トロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）、α２プラスミンインヒビター・プラスミン複合体（ＰＩＣ）、プロテインＣ（ＰＣ、定量・活性）、トロンボモジュリン（ＴＭ）、及び組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）・プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）複合体（Ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１）、プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）、可溶性フィブリン（ＳＦ）、Ｅ−セレクチン等であり、好ましくは、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、ＴＡＴ、血小板数、ＰＣである。
【００２５】
ｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定方法それ自体は公知であり、市販の測定試薬や測定装置を使用することもできる。タンパク質の各種の公知分析方法としては、例えば、抗体を用いる免疫学的分析方法、電気泳動等の生化学的分析方法により実施することができ、臨床検査用の自動分析機を使用することもできる。ＲＮＡアプタマーなど、抗体と類似の性質を有する物質を利用する分析方法も本発明の一部である。
【００２６】
例えば、特許第４０４０６６６号明細書には、ヒトｓＣＤ１４−ＳＴの測定方法、より具体的には、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチド（特許第４０４０６６６号明細書に記載のＳ６８ペプチド）を抗原として作製したポリクローナル抗体（Ｓ６８抗体）、モノクローナル抗体（Ｆ１１４６−１７−２抗体）と、抗ＣＤ１４抗原モノクローナル抗体（例えば、Ｆ１０３１−８−３抗体、Ｆ１１０６−１３−３抗体等）との組合せを用いたサンドイッチＥＩＡ系〔特許第４０４０６６６号明細書の実施例７−（１）〕が開示されており、本発明方法に適用することができる。
また、後述する実施例に示すように、ｓＣＤ１４−ＳＴの測定試薬は、磁性粒子を使用した化学発光酵素免疫測定法により、自動化学発光免疫測定装置（ＰＡＴＨＦＡＳＴ；三菱化学メディエンス社）を使用することもできる。
【００２７】
本発明方法で用いる試料としては、ｓＣＤ１４−ＳＴ（所望により凝固関連マーカー）の測定が可能である限り、特に限定されるものではなく、例えば、血液試料（例えば、全血、血漿、血清）を用いることができる。当業者であれば、適宜、選択して使用することができる。
【００２８】
本発明方法では、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の上昇を、ＤＩＣの指標とする。例えば、後述する実施例に示すように、ＤＩＣ患者では有意にｓＣＤ１４−ＳＴ値が高くなる。具体的には実施例５や実施例８に示すように、ｓＣＤ１４−ＳＴのカットオフ値（閾値）が１１００ｐｇ／ｍＬと高値であり、これを用いて、高い感度や特異度でＤＩＣを判断できる。このように、本発明方法では、ｓＣＤ１４−ＳＴ値が高値を示す場合には、ＤＩＣを起こしていると判定できる。一方、ｓＣＤ１４−ＳＴ値が低値を示す場合には、ＤＩＣを起こしていないと判定することができる。例えば、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が健常人や非ＤＩＣ患者の分位数（例えば、中央値）より高ければ、ＤＩＣを起こしていると判定できる。また、Ｃｏｘ回帰やロジスティック回帰などの統計学的手法によって行うことができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。
【００２９】
本発明方法において、ＤＩＣを検出するためのｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の閾値は、種々条件、例えば、性別、年齢などにより変化することが予想されるが、当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して、その集団から得られたデータを用いて統計学的処理を行うことにより、判定用閾値を決定することができる。前記母集団としては、健常人群、非ＤＩＣ群、ＤＩＣ群の各病態の種類群などが選択できる。後述する実施例５では、非ＤＩＣ群、ＤＩＣ群のＲＯＣ分析から、１１００ｐｇ／ｍＬの最適カットオフ値を決定している。本発明方法では、判定用閾値を決定し、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値と判定用閾値を比較することにより、医師の判断を必要とすることなく、自動的に、ＤＩＣの検出を行うことができる。
【００３０】
ＤＩＣを検出するためのカットオフ値は、ＤＩＣ群と非ＤＩＣ群の分布から適宜設定することが好ましい。具体的には、１５０〜１００００ｐｇ／ｍＬ、好ましくは２５０〜５０００ｐｇ／ｍＬ、より好ましくは５００〜２３００ｐｇ／ｍＬが挙げられる。当業者であれば、この範囲において、過度な試行錯誤なく適切に１点のカットオフ値も設定することができる。
【００３１】
また、本発明方法では、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ値及び凝固関連マーカー値の上昇または低下を、感染性ＤＩＣの指標とする。例えば、後述する実施例１１及び実施例１４に示すように、感染性ＤＩＣがあった場合には、ｓＣＤ１４−ＳＴ値、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）値、プロトロンビン時間（ＰＴ（秒））値、ＩＮＲ値、乳酸値、トロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）値、α２プラスミンインヒビター・プラスミン複合体（ＰＩＣ値）、トロンボモジュリン（ＴＭ値）、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）・プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）複合体（ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１）値が高くなり、一方、血小板（Ｐｌｔ）数値、ＰＴ（％）値、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）値、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）値、アンチトロンビンIII（ＡｔIII）値（％）、プロテインＣ（ＰＣ）値（％）は低くなる。特にｓＣＤ１４−ＳＴと前記凝固関連マーカーを組み合わせて指標とすることが好ましく、更に好ましくは、ｓＣＤ１４−ＳＴと、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、ＴＡＴ、血小板数、ＰＣから少なくとも一つ選ばれる凝固関連マーカーを組み合わせて使用することができる。また、更に、複数の敗血症マーカーあるいは凝固関連マーカーを組み合わせて使用することができる。
【００３２】
例えば、ｓＣＤ１４−ＳＴが高値であり、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰあるいはＴＡＴが高値あるいは血小板数またはＰＣ値が低値である場合は感染性ＤＩＣを起こしていると判定でき、ｓＣＤ１４−ＳＴが低値であるか、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰあるいはＴＡＴが低値あるいは血小板数またはＰＣ値が高値である場合は感染性ＤＩＣを起こしていないと判定できる。高値あるいは低値とは、それぞれの値が、健常人や感染性非ＤＩＣ等の分位数（例えば、中央値）と比較して示すことができる。比較は、Ｃｏｘ回帰やロジスティック回帰などの統計学的手法によって行うことができる。判定のための基準は、事前に用意しておいた「閾値」を使用することができる。
【００３３】
本発明方法において、感染性ＤＩＣを検出するためのｓＣＤ１４−ＳＴ濃度及び凝固関連マーカーの測定値の閾値は、種々条件、例えば、性別、年齢などにより変化することが予想されるが、当業者であれば、被験者に対応する適当な母集団を適宜選択して、その集団から得られたデータを統計学的処理することにより、判定用閾値を決定することができる。前記母集団としては、健常人群、ＤＩＣ群、非ＤＩＣ群、非感染症群、感染症群、ＳＩＲＳ群、敗血症群、重症敗血症群、敗血症性ショック群、敗血症の各病態重症度群、敗血症の各病態の種類群、感染性ＤＩＣ群、感染性非ＤＩＣ群などが選択できる。ｓＣＤ１４−ＳＴ値は、後述する実施例１３のように、９００〜１０００ｐｇ／ｍＬの最適カットオフ値を決定している。また、後述する実施例１５のように、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値は６．１８μｇ／ｍＬあるいは１０μｇ／ｍＬ、ＦＤＰ値は２５μｇ／ｍＬあるいは３５μｇ／ｍＬ、ＴＡＴ値は１０ｎｇ／ｍＬあるいは２６ｎｇ／ｍＬ、血小板値は１２×１０４個／μＬ、実施例２０のように、ＰＣ値は４５％あるいは５５％の最適カットオフ値を決定している。本発明方法では、判定用閾値を決定し、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値及び凝固関連マーカーの測定値を判定用閾値と比較することにより、医師の判断を必要とすることなく、自動的に、感染性ＤＩＣの検出を行うことができる。
【００３４】
感染性ＤＩＣを検出するためのカットオフ値は、感染性ＤＩＣ群と感染性非ＤＩＣ群の分布から適宜設定することが好ましい。例えば、ｓＣＤ１４−ＳＴ値としては、１５０〜１００００ｐｇ／ｍＬ、好ましくは２５０〜５０００ｐｇ／ｍＬ、より好ましくは５００〜２３００ｐｇ／ｍＬが挙げられる。当業者であれば、この範囲において、過度な試行錯誤なく適切に１点のカットオフ値も設定することができる。
【００３５】
本発明方法において、検体の採取時期は、ＤＩＣ又は感染性ＤＩＣの疑いが生じた段階、治療を行った後などが好ましい。経時的に採取して測定することにより、適切に病態の変化を把握することができる。
【００３６】
本発明のＤＩＣ検出用キットは、本発明方法を実施するのに用いることができ、
（ａ）ｓＣＤ１４−ＳＴに特異的な抗体、
（ｂ）試料中のｓＣＤ１４−ＳＴの量とＤＩＣとの相関を示す標準データ、
（ｃ）取扱説明書
を含む。
【００３７】
また、本発明の感染性ＤＩＣ検出用キットは、本発明方法を実施するのに用いることができ、
（ａ）ｓＣＤ１４−ＳＴに特異的な抗体、
（ｂ）凝固関連マーカー測定用試薬、
（ｃ）試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値と感染性ＤＩＣとの相関を示す標準データ、
（ｄ）取扱説明書
を含む。
【００３８】
本発明のキットに用いる前記抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体のいずれであることもできる。また、ｓＣＤ１４−ＳＴへの特異的結合能を保持する抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はＦｖとして、キットに用いることもできる。
【００３９】
更に、前記抗体は、そのままの状態でキットに用いることもできるし、利用する免疫学的手法に基づいて、それに適した形態、例えば、ラテックス凝集免疫測定法を利用するのであれば、ラテックス担体に固定した状態で、磁性粒子などを利用した高感度測定法を利用するのであれば、磁性粒子に固定した状態で、イムノクロマトグラフ法などの基板を利用する方法であれば、基板に固定した状態で、標識物質（例えば、酵素、蛍光物質、化学発光物質、放射性同位体、ビオチン、アビジン）による標識の必要があれば、標識化した状態で、キットに用いることもできる。
本発明のキットに用いることができる凝固関連マーカー測定用試薬は、当業者であれば、公知の試薬を適宜組み合わせて使用することができる。
【００４０】
本発明のＤＩＣ検出用キットに含まれる前記標準データは、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴの量とＤＩＣとの相関を示すものである限り、特に限定されるものではないが、例えば、判定用閾値、あるいは、判定用閾値を算出するためのオリジナルデータ又は統計処理データなどを挙げることができる。また、本発明の感染性ＤＩＣ検出用キットに含まれる前記標準データは、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値と感染性ＤＩＣとの相関を示すものである限り、特に限定されるものではないが、例えば、判定用閾値、あるいは、判定用閾値を算出するためのオリジナルデータ又は統計処理データなどを挙げることができる。該標準データは、前記取扱説明書中に記載されても良いし、別にデータシートとして添付しても良い。また、添付される文書の形態は、紙、ＣＤ−ＲＯＭ等の電子媒体、ホームページ等からのダウンロードも含まれる。
【００４１】
また、本発明のＤＩＣ検出用キットに含まれる前記取扱説明書は、少なくとも、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴの量とＤＩＣとの関係に言及するものであれば、特に限定するものではなく、前記言及に加え、例えば、本発明のキットを使用する免疫学的測定の実施手順に関する説明、得られた測定値に基づいてＤＩＣを検出する手順に関する説明、キット自体の保存・取り扱いなどに関する注意事項などを含むことができる。また、本発明の感染性ＤＩＣ検出用キットに含まれる前記取扱説明書は、少なくとも、試料中のｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカーの測定値と感染性ＤＩＣとの関係に言及するものであれば、特に限定するものではなく、前記言及に加え、例えば、本発明のキットを使用する免疫学的測定の実施手順に関する説明、得られた測定値に基づいて予後を予測する手順に関する説明、キット自体の保存・取り扱いなどに関する注意事項などを含むことができる。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。【００４３】
≪試験対象１≫
実施例１〜１５、比較例１、参考例１は、以下を試験対象とした。
１施設の臨床現場で一定期間、登録された救急患者を対象に行った。なお、この試験は倫理委員会の承認を得て行った。試験に登録された患者は、救急病院に入院した１８才以上の男女で、以下４項目のうち１項目以上を満たした場合を対象とした。
１）体温＞３８℃または＜３６℃
２）心拍数＞９０回／分
３）呼吸数＞２０回／分またはＰａＣＯ２＞３２Ｔｏｒｒ
４）白血球数＞１２０００、＜４０００／ｍｍ３または未熟型白血球＞１０％【００４４】
この試験に登録された症例は全４９例であり、下記の実施例に示すように、各々のＤＩＣ診断基準に従って、ＤＩＣ患者群及び非ＤＩＣ患者群に分類した。
また、別途、以下のように基礎疾患の有無を分類した。感染症を伴わない全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）９例、敗血症６例、重症敗血症１２例、敗血症性ショック１０例、非感染性疾患（感染症、ＳＩＲＳどちらも該当しない状態）４例、感染性疾患（感染症であるがＳＩＲＳは伴っていない状態）８例であった。
各患者のＤＩＣの判定は、３つのＤＩＣ診断基準、すなわち急性期ＤＩＣ診断基準、厚生労働省ＤＩＣ診断基準、ＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準を用いて実施した。以下に、それぞれの診断基準の定義を示す。【００４５】
【表１】
2013168602.tif 000002
注意
１）血小板数減少はスコア算定の前後いずれの２４時間以内でも可能。
２）プロトロンビン時間（ＰＴ）比（検体ＰＴ秒／正常対照値）ＩＳＩ＝１．０の場合はＩＮＲに等しい。各施設においてＰＴ比１．２に相当する秒数の延長または活性値の低下を使用してもよい。
３）フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の代替としてＤ−ｄｉｍｅｒを使用してもよい。各施設の測定キットにより別表の換算表を使用する。【００４６】
【表２】
2013168602.tif 000003
【００４７】
【表３】
2013168602.tif 000004
【００４８】
また、基礎疾患の有無は以下に基づいて分類した。
「ＳＩＲＳ」とは、下記４項目のうち２項目以上を満たす状態の事を言う〔Ｃｈｅｓｔ  １９９２；１０１（６）：１６４４−１６５５〕。
１）体温＞３８℃または＜３６℃
２）心拍数＞９０回／分
３）呼吸数＞２０回／分またはＰａＣＯ２＞３２Ｔｏｒｒ
４）白血球数＞１２０００、＜４０００／ｍｍ３または未熟型白血球＞１０％【００４９】
「感染症」とは、微生物の正常組織への侵襲もしくはその存在に対する炎症反応によって特徴付けられる現象の事を言う（Ｃｈｅｓｔ  １９９２;１０１（６）：１６４４−１６５５）。感染症を引き起こす病原体には、細菌、真菌、寄生虫、またはウイルスが挙げられる。菌血症、敗血症、重症敗血症及び敗血症性ショックは、「感染症」の中に含まれる。【００５０】
「敗血症」とは、感染を伴うＳＩＲＳのことを言う。感染症の診断には炎症所見、臓器症状、起炎菌の同定が必要であり、診断は医師によって確定される。但し、起炎菌の同定に際しては無菌的に血液、髄液、胸腹水等から採取することが望ましく、喀痰、尿、皮膚等を材料に用いた場合は常在菌に留意する。なお、起炎菌の同定が不可能であった場合においては、医師の総合的な判断から敗血症の診断を行うことができる。【００５１】
「重症敗血症」とは、敗血症のなかで、臓器機能障害・循環不全（乳酸アシドーシス、乏尿、急性意識障害など）あるいは血圧低下（収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇまたは平時の収縮期血圧より４０ｍｍＨｇ以上の血圧低下）を合併した状態である。【００５２】
「敗血症性ショック」とは、重症敗血症のなかで、適切な補液でも血圧低下（収縮期血圧＜９０ｍｍＨｇまたは平時の収縮期血圧より４０ｍｍＨｇ以上の血圧低下）が持続する状態である。血管作動薬使用により血圧が維持されている場合でも、臓器機能障害・循環不全（乳酸アシドーシス、乏尿、急性意識障害など）がある。【００５３】
ｓＣＤ１４−ＳＴの測定に使用するサンプルとしては、定法に従って患者から入院後にＥＤＴＡ全血を採取しｓＣＤ１４−ＳＴを測定した。同様にプロカルシトニン（ＰＣＴ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）はＥＤＴＡ血漿を採取し、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、アンチトロンビンIII（ＡＴIII）、トロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）、α２プラスミンインヒビター・プラスミン複合体（ＰＩＣ）、プロテインＣ（ＰＣ）、組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）・プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）複合体（Ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１）はクエン酸血漿を採取して、それぞれの測定に使用した。血小板数（Ｐｌｔ）はＥＤＴＡ加血液を採取し、乳酸（Ｌａｃｔ）は除蛋白上清を採取し、トロンボモジュリン（ＴＭ）は血清を採取して、それぞれの測定に使用した。入院後とは、入院してから３時間以内のことを示す。【００５４】
≪実施例１：敗血症マーカーの測定≫
ｓＣＤ１４−ＳＴの測定は、特許第４０４０６６６号明細書の実施例７−（１）を改変して行った。すなわち、アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）標識したポリクローナル抗体（Ｓ６８抗体）と、磁性粒子（ＪＳＲ社製）に固定化したモノクローナル抗体（Ｆ１０３１−８−３抗体）を使用し、自動化学発光酵素免疫測定装置であるＰＡＴＨＦＡＳＴ（三菱化学メディエンス社製）で測定した。アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）標識したポリクローナル抗体（Ｓ６８抗体）は、該ポリクローナル抗体（Ｓ６８抗体）のＦａｂ’画分を調製し、マレイミド法によりＡＬＰと結合させて作製した。発光基質は、ＣＤＰ−ｓｔａｒ（アプライドバイオシステム社製）を使用した。
測定は以下の手順に従って行った。まず、検体を磁性粒子固定化抗体とＡＬＰ標識抗体を反応させ、検体中のｓＣＤ１４−ＳＴと前記２つの抗体で複合体を形成させた後、この複合体を磁力体で収集し、結合しなかったＡＬＰ標識抗体を除いた。発光基質を加え、発光量をｓＣＤ１４−ＳＴ量として検出した。【００５５】
プロカルシトニン（ＰＣＴ）の測定は、エクルーシス試薬ブラームスＰＣＴ（ロシュ・ダイアグノスティックス社）を用いて測定を行った。
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、イムライズＩＬ−６（シーメンスヘルスケア・ダイアグノスティクス社）を用いて測定を行った。
Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）は、ＣＲＰ−ラテックスＸ２「生研」（デンカ生研社）を用いて測定を行った。測定機器は、日立７１７０Ｓ（日立ハイテク社）を用いた。【００５６】
≪実施例２：急性期ＤＩＣ診断基準に基づいた各項目のＤＩＣ診断能評価≫
臨床試験に登録された症例４９例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（２３例）と非ＤＩＣ群（２６例）に分類し、ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びフィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の有用性をＲＯＣ分析により比較を行った。ｓＣＤ１４−ＳＴの測定は、実施例１に従って行った。ＰＣＴの測定は、エクルーシス試薬ブラームスＰＣＴ（ロシュ・ダイアグノスティックス社）を用いて測定を行った。ＩＬ−６は、イムライズＩＬ−６（シーメンスヘルスケア・ダイアグノスティクス社）を用いて測定を行った。ＣＲＰは、ＣＲＰ−ラテックスＸ２「生研」（デンカ生研社）を用いて測定を行った。測定機器は、日立７１７０Ｓ（日立ハイテク社）を用いた。Ｄ−ｄｉｍｅｒは、ナノピアＤダイマー（積水メディカル社）を用いて測定を行った。測定機器は、コアプレスタ２０００（積水メディカル社）を用いた。ＦＤＰは、ナノピアＰ−ＦＤＰ（積水メディカル社）を用いて測定を行った。測定機器は、コアプレスタ２０００（積水メディカル社）を用いた。図１及び図２において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。【００５７】
ＡＵＣをそれぞれ求めたところ、ｓＣＤ１４−ＳＴは０．８３４、ＰＣＴは０．７９１、ＩＬ−６は０．７３４、ＣＲＰは０．５６７、Ｄ−ｄｉｍｅｒは０．８２４、ＦＤＰは０．８１０であり、ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣが最も大きかった。この結果からｓＣＤ１４−ＳＴは既存の指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰ等に対し有用であることが確認された。【００５８】
≪実施例３：厚生労働省ＤＩＣ診断基準に基づいた各項目のＤＩＣ診断能評価≫
実施例２と同じ症例４９例を対象に、厚生労働省ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（１３例）と非ＤＩＣ群（３６例）に分類し、ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びフィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の有用性をＲＯＣ分析により比較を行った。ｓＣＤ１４−ＳＴ、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＩＬ−６、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びＦＤＰの測定は、実施例２と同様の方法で行った。図３及び図４において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。
ＡＵＣをそれぞれ求めたところ、ｓＣＤ１４−ＳＴは０．８４２、ＰＣＴは０．７３９、ＩＬ−６は０．６９７、ＣＲＰは０．６３４、Ｄ−ｄｉｍｅｒは０．７４１、ＦＤＰは０．７３１であり、ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣが最も大きかった。この結果からｓＣＤ１４−ＳＴは既存の指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰ等に対し有用であることが確認された。【００５９】
≪実施例４：ＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準に基づいた各項目のＤＩＣ診断能評価≫
実施例２と同じ症例４９例を対象に、ＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（１５例）と非ＤＩＣ群（３４例）に分類し、ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びフィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の有用性をＲＯＣ分析により比較を行った。結果を図３に示す。ｓＣＤ１４−ＳＴ、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＩＬ−６、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びＦＤＰの測定は、実施例２と同様の方法で行った。図５及び図６において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。
ＡＵＣをそれぞれ求めたところ、ｓＣＤ１４−ＳＴは０．８５３、ＰＣＴは０．６９４、ＩＬ−６は０．６６５、ＣＲＰは０．６０５、Ｄ−ｄｉｍｅｒは０．８０７、ＦＤＰは０．８０５であり、ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣが最も大きかった。この結果からｓＣＤ１４−ＳＴは既存の指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰ等に対し有用であることが確認された。【００６０】
≪実施例５：ＤＩＣ診断におけるｓＣＤ１４−ＳＴカットオフ値評価≫
実施例２または実施例３で行ったＲＯＣ分析の結果から、ｓＣＤ１４−ＳＴの臨床感度および特異度を図７、図８に示す。図７から、ｓＣＤ１４−ＳＴ値が１０３３ｐｇ／ｍＬの場合に、臨床感度は７８．３％、特異度７６．９％となり、最適のカットオフ値と考えられた。また、図８から、ｓＣＤ１４−ＳＴ値が１１７０ｐｇ／ｍＬの場合に、臨床感度は７６．９％、特異度７５．０％であり最適のカットオフ値と考えられた。これらの結果から、ｓＣＤ１４−ＳＴによるＤＩＣ検出法のカットオフ値は、１１００ｐｇ／ｍＬが最適であると考えられた。【００６１】
≪実施例６：ＤＩＣ診断におけるＤ−ｄｉｍｅｒカットオフ値評価≫
実施例２または実施例３で行ったＲＯＣ分析の結果から、Ｄ−ｄｉｍｅｒの臨床感度および特異度を図９、図１０に示す。図９から、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値が１０．１μｇ／ｍＬの場合に、臨床感度は７８．３％、特異度８４．６％となり、最適のカットオフ値と考えられた。また、図１０から、Ｄ−ｄｉｍｅｒ値が１１．３μｇ／ｍＬの場合に、臨床感度は６９．２％、特異度６９．４％であり最適のカットオフ値と考えられた。これらの結果から、Ｄ−ｄｉｍｅｒによるＤＩＣ検出法のカットオフ値は、１１μｇ／ｍＬが最適であると考えられた。【００６２】
≪実施例７：ＤＩＣ診断におけるＦＤＰカットオフ値評価≫
実施例２または実施例３で行ったＲＯＣ分析の結果から、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の臨床感度および特異度を図１１、図１２に示す。図１１から、ＦＤＰ値が２０μｇ／ｍＬの場合に、臨床感度は７３．９％、特異度７３．１％となり、最適のカットオフ値と考えられた。また、図１２から、ＦＤＰ値が２５μｇ／ｍＬの場合に、臨床感度は６９．２％、特異度７２．２％であり最適のカットオフ値と考えられた。これらの結果から、ＦＤＰによるＤＩＣ検出法のカットオフ値は、２３μｇ／ｍＬが最適であると考えられた。【００６３】
≪実施例８：ＤＩＣ診断における各項目の臨床感度・特異性≫
実施例５〜実施例７によって評価したｓＣＤ１４−ＳＴ、Ｄ−ｄｉｍｅｒおよびフィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）のカットオフ値を用いて、臨床感度、特異度、陽性反応的中率および陰性反応的中率をまとめた結果を表４に示す。この結果からｓＣＤ１４−ＳＴは、急性期ＤＩＣ基準、厚生労働省ＤＩＣ基準、ＩＳＴＨ  ｏｖｅｒｔ−ＤＩＣ診断基準のいずれの基準を使用しても、既存の指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰに対し同等以上であり、特に感度および陰性反応的中率が高く有用であることが確認された。【００６４】
【表４】
2013168602.tif 000005
【００６５】
≪実施例９：非感染群におけるＤＩＣ診断に対する有用性≫
実施例２の症例４９例のうち、非感染であったＳＩＲＳまたは非感染性疾患の症例１３例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（４例）と非ＤＩＣ群（９例）に分類し、ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びフィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の有用性をＲＯＣ分析により比較を行った。結果を図１３、図１４に示す。図１３、図１４において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。
ＡＵＣをそれぞれ求めたところ、ｓＣＤ１４−ＳＴは０．８０６、ＰＣＴは０．７７８、ＩＬ−６は０．６３９、ＣＲＰは０．５８３、Ｄ−ｄｉｍｅｒは０．７６４、ＦＤＰは０．７９２であり、ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣが最も大きかった。この結果からｓＣＤ１４−ＳＴは感染の有無に関わらず、既存の指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰ等に対し有用であることが確認された。ｓＣＤ１４−ＳＴ値のカットオフ値は、６００ｐｇ／ｍＬの場合に臨床感度が７５．０％、特異度が１００％となり、最適と考えられた。【００６６】
≪実施例１０：ＤＩＣ患者に対する抗凝固療法実施の指標としての各マーカーの有用性≫
実施例２と同じ症例４９例のうち、急性期ＤＩＣ診断基準に従って分類されたＤＩＣ群（２３例）を用いて、各マーカーのカットオフ値未満またはカットオフ値以上の症例における抗凝固療法実施率の比較を行い、結果を表５に示す。この結果から、ｓＣＤ１４−ＳＴはカットオフ値未満の症例群に対しカットオフ値以上の症例群の方が抗凝固療法の実施割合が大きかった。一方で、Ｄ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰは、カットオフ値未満の症例群よりもカットオフ値以上の症例群の方が抗凝固療法の実施割合が小さかった。従って、ｓＣＤ１４−ＳＴは既存のＤＩＣの指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰよりも抗凝固療法を実施するか否かの指標として有用なマーカーであることが示唆された。【００６７】
【表５】
2013168602.tif 000006
【００６８】
≪実施例１１：感染群の各ＤＩＣスコアに対する敗血症マーカーの測定値分布≫
試験に登録された症例４９例のうち、感染を伴う敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックまたは感染性疾患の症例３３例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に基づいてＤＩＣスコア（点）を求め、各ＤＩＣスコア別のｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）の測定値分布を比較した。ｓＣＤ１４−ＳＴの測定は、実施例１に従って行った。【００６９】
Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定による多群間統計解析を行った結果、表６に示すとおり、ｓＣＤ１４−ＳＴはｐ値＝０．０２１４、ＰＣＴはｐ値＝０．０４３６、ＩＬ−６はｐ値＝０．０７２９、ＣＲＰはｐ値＝０．３９９４であり、ｓＣＤ１４−ＳＴはＰＣＴ、ＩＬ−６、ＣＲＰに対し有意差を認めた。ｓＣＤ１４−ＳＴは、感染性ＤＩＣスコアを最も反映するマーカーと考えられた。図１５〜１８に、各ＤＩＣスコアに各マーカーの中央値と症例数を示した。【００７０】
【表６】
2013168602.tif 000007
【００７１】
さらに、多群間統計解析により有意差を認めたｓＣＤ１４−ＳＴ及びＰＣＴについては、同患者群を感染性非ＤＩＣ（ＤＩＣスコア４点未満）（ｎ＝１５）と感染性ＤＩＣ（ＤＩＣスコア４点以上）（ｎ＝１８）に分類し、それぞれのｓＣＤ１４−ＳＴまたはＰＣＴの測定値からＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定による２群間統計解析を行った。その結果、ｓＣＤ１４−ＳＴはｐ＝０．００７５、ＰＣＴはｐ＝０．０３２９となり、ｓＣＤ１４−ＳＴが感染性ＤＩＣ検出に最も有用であることが示された。
また、ｓＣＤ１４−ＳＴ値は、ＤＩＣスコアが高くなるのに従って上昇することから、ｓＣＤ１４−ＳＴ値からＤＩＣの程度を把握することが可能であることが示唆された。【００７２】
≪実施例１２：ｓＣＤ１４−ＳＴの感染症検出能及びカットオフ値評価≫
試験に登録された症例４９例を対象に、非感染群（ＳＩＲＳ及び非感染性疾患）１３例と感染群（敗血症、重症敗血症、敗血症性ショック及び感染性疾患）３６例に分類し、感染症検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴの有用性をＲＯＣ分析により評価を行った。図１９において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。
ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣは０．８３３であり、有用であることが確認された。また、臨床感度／特異度が最大となるｓＣＤ１４−ＳＴ値は６４７ｐｇ／ｍＬであり、その臨床感度は８３．３％、特異度７６．９％であった。この結果から、感染症検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴのカットオフ値は６００〜７００ｐｇ／ｍＬが最適であると考えられた。【００７３】
≪実施例１３：感染群におけるｓＣＤ１４−ＳＴのＤＩＣ検出能及びカットオフ値評価≫
試験に登録された症例４９例のうち、感染を伴った敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックまたは感染性疾患の症例３６例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（１９例）と非ＤＩＣ群（１７例）に分類し、感染性ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴの有用性をＲＯＣ分析により評価を行った。図２０において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。
ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣは０．８１１であり、有用であることが確認された。また、臨床感度／特異度が最大となるｓＣＤ１４−ＳＴ値は９２９ｐｇ／ｍＬであり、その臨床感度は９４．７％、特異度６４．７％であった。この結果から、感染性ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴのカットオフ値は９００〜１０００ｐｇ／ｍＬが最適であると考えられた。【００７４】
≪実施例１４：感染群の各ＤＩＣスコアに対する凝固関連マーカーの測定値分布≫
試験に登録された症例４９例のうち、感染を伴った敗血症、重症敗血症、敗血症性ショックまたは感染性疾患の症例２６例を対象に、各ＤＩＣスコア別のＤ−ｄｉｍｅｒ、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）、血小板（Ｐｌｔ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、ＩＮＲ値、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）、アンチトロンビンIII（ＡＴIII）、乳酸（Ｌａｃｔ）、トロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）、α２プラスミンインヒビター・プラスミン複合体（ＰＩＣ）、プロテインＣ（ＰＣ）、トロンボモジュリン（ＴＭ）及び組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）・プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）複合体（Ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１）の測定値分布を比較した。Ｄ−ｄｉｍｅｒは、ナノピアＤダイマー（積水メディカル社）を用いて測定を行った。ＦＤＰは、ナノピアＰ−ＦＤＰ（積水メディカル社）を用いて測定を行った。血小板は、セルパックII（シスメックス社）を用いて測定を行った。ＰＴは、コアグピアＰＴ−Ｓ（積水メディカル社）を用いて測定を行った。ＡＰＴＴは、コアグピアＡＰＴＴ−Ｓ（積水メディカル社）を用いて測定を行った。フィブリノーゲンは、コアグピアＦｂｇ（積水メディカル社）を用いて測定を行った。アンチトロンビンIIIは、ステイシアＣＬＥＩＡ  ＴＡＴ（三菱化学メディカル社）を用いて測定を行った。乳酸は、デタミナ−ＬＡ（協和メディックス社）を用いて測定を行った。ＴＡＴは、ステイシアＣＬＥＩＡ  ＴＡＴ（三菱化学メディカル社）を用いて測定を行った。ＰＩＣは、エルピアエースＰＰＩII（三菱化学メディエンス社）を用いて測定を行った。プロテインＣは、エルピアエースＰＣII（三菱化学メディエンス社）を用いて測定を行った。トロンボモジュリンは、ステイシアＣＬＥＩＡ  ＴＭ（三菱化学メディカル社）を用いて測定を行った。Ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１は、ＬＰＩＡ  ｔＰＡＩテスト（三菱化学メディカル社）を用いて測定を行った。
Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定による多群間統計解析を行った結果を、表７に示した。Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、血小板及びＴＡＴは、感染性ＤＩＣスコアを反映するマーカーと考えられた。図２１〜３５に、各ＤＩＣスコアに各マーカーの中央値と症例数を示した。【００７５】
【表７】
2013168602.tif 000008
【００７６】
次に、多群間統計解析により有意差を認めたＤ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、血小板及びＴＡＴについては、同患者群を感染性非ＤＩＣ（ＤＩＣスコア４点未満）（ｎ＝１４）と感染性ＤＩＣ（ＤＩＣスコア４点以上）（ｎ＝１２）に分類し、それぞれのＤ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、血小板またはＴＡＴの測定値からＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定による２群間統計解析を行った。その結果、Ｄ−ｄｉｍｅｒはｐ＝０．００１７、ＦＤＰはｐ＝０．００３７、血小板はｐ＝０．０４６４、ＴＡＴはｐ＝０．０００２となり、Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、血小板及びＴＡＴが感染性ＤＩＣ検出に有用であることが示された。【００７７】
≪実施例１５：ｓＣＤ１４−ＳＴと凝固関連マーカーを組み合わせた感染性ＤＩＣ検出能の評価≫  試験に登録された症例４９例のうち、敗血症マーカー（ｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）及びＣ反応性蛋白（ＣＲＰ））及び凝固関連マーカー（Ｄ−ｄｉｍｅｒ、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）、血小板（Ｐｌｔ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、ＩＮＲ値、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）、アンチトロンビンIII（ＡＴIII）、乳酸（Ｌａｃｔ）、トロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）、α２プラスミンインヒビター・プラスミン複合体（ＰＩＣ）、プロテインＣ（ＰＣ）、トロンボモジュリン（ＴＭ）及び組織プラスミノーゲンアクチベータ（ｔＰＡ）・プラスミノーゲンアクチベータインヒビター（ＰＡＩ−１）複合体（Ｔｏｔａｌ  ＰＡＩ−１）の測定値がすべて確認された４４例を対象に、ｓＣＤ１４−ＳＴとＤ−ｄｉｍｅｒ（表８〜表１０）、ｓＣＤ１４−ＳＴとＦＤＰ（表１１〜表１３）、ｓＣＤ１４−ＳＴと血小板（表１４〜表１５）、ｓＣＤ１４−ＳＴとＴＡＴ（表１６〜表１８）の組み合わせで感染性ＤＩＣ検出能の評価を行った。ｓＣＤ１４−ＳＴのカットオフ値は、実施例１２または１３で得られた値から設定した。Ｄ−ｄｉｍｅｒのカットオフ値は、従来多用されている６．１８μｇ／ｍＬまたは実施例１３と同様の手順により求め設定した１０μｇ／ｍＬを用いた。ＦＤＰのカットオフ値は、従来多用されている２５μｇ／ｍＬまたは実施例１３と同様の手順により求め設定した３５μｇ／ｍＬを用いた。血小板のカットオフ値は、従来多用されている１２×１０４個／μＬを用いた。ＴＡＴのカットオフ値は、従来多用されている１０ｎｇ／ｍＬまたは実施例１３と同様の手順により求め設定した２６ｎｇ／ｍＬを用いた。評価にあたって、各条件の臨床感度、特異度、陰性反応的中率、陽性反応的中率を算出した。【００７８】
（Ａ）Ｄ−ｄｉｍｅｒ【００７９】
【表８】
2013168602.tif 000009
【００８０】
【表９】
2013168602.tif 000010
【００８１】
【表１０】
2013168602.tif 000011
【００８２】
（Ｂ）フィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）【００８３】
【表１１】
2013168602.tif 000012
【００８４】
【表１２】
2013168602.tif 000013
【００８５】
【表１３】
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【００８６】
（Ｃ）血小板（Ｐｌｔ）【００８７】
【表１４】
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【００８８】
【表１５】
2013168602.tif 000016
【００８９】
（Ｄ）トロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）【００９０】
【表１６】
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【００９１】
【表１７】
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【００９２】
【表１８】
2013168602.tif 000019
【００９３】
結果から、ｓＣＤ１４−ＳＴ及び凝固関連マーカー（Ｄ−ｄｉｍｅｒ、ＦＤＰ、血小板及びＴＡＴ）単独による検出法は、いずれも臨床感度が高いが特異度は低かった。一方、ｓＣＤ１４−ＳＴと凝固関連マーカーを組み合わせることにより、臨床感度は変わらず特異度が上昇した。以上のことから、感染性ＤＩＣ検出に対してｓＣＤ１４−ＳＴとＤ−ｄｉｍｅｒ、ｓＣＤ１４−ＳＴとＦＤＰ及びｓＣＤ１４−ＳＴとＴＡＴの組み合わせを用いることにより、臨床感度と特異度が８０％以上となり、従来の指標では無かった臨床感度と特異度を併せ持つ指標であり、非常に有用であることを確認した。【００９４】
≪比較例１：ＰＣＴとＴＡＴを組み合わせた感染性ＤＩＣ検出能の評価≫
実施例１５と同じ症例４４例を対象に、プロカルシトニン（ＰＣＴ）とトロンビン−アンチトロンビン複合体（ＴＡＴ）の組み合わせ（表１９〜表２０）による感染性ＤＩＣ検出能の評価を行った。ＰＣＴのカットオフ値は、従来多用されている０．５ｎｇ／ｍＬ及び２．０ｎｇ／ｍＬを用いた。ＴＡＴのカットオフ値は、従来多用されている１０ｎｇ／ｍＬを用いた。評価にあたって、各条件の臨床感度、特異度、陰性反応的中率、陽性反応的中率を算出した。【００９５】
【表１９】
2013168602.tif 000020
【００９６】
【表２０】
2013168602.tif 000021
【００９７】
結果から、ＰＣＴとＴＡＴの組み合わせによる感染性ＤＩＣ検出法は、臨床感度と特異度共に８０％以上を満たす条件はなく、実施例１５のｓＣＤ１４−ＳＴとＴＡＴの組み合わせと比較しても劣る結果となった。ｓＣＤ１４−ＳＴは、従来敗血症マーカーとして知られているＰＣＴと比較し、感染性ＤＩＣ検出に対し有用であることが示された。【００９８】
≪試験対象２≫
実施例１６〜２０は、以下を試験対象とした。
１施設の臨床現場で、試験対象１と同様の基準により登録された症例全８７例を対象に評価を行った。その内、疾患名が決定された症例は８４例あり、詳細には、感染症を伴わない全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）１９例、敗血症８例、重症敗血症１４例、敗血症性ショック２１例、非感染性疾患（感染症、ＳＩＲＳどちらも該当しない状態）１２例、感染性疾患（感染症であるがＳＩＲＳは伴っていない状態）１０例であった。【００９９】
≪実施例１６：敗血症マーカーのＤＩＣにおける多重ロジスティック回帰分析≫
疾患名が決定された症例８４例を対象に、多重ロジスティック回帰分析（ステップワイズ法）を行った。分析にあたり、目的変数を急性期ＤＩＣ診断基準（非ＤＩＣ群またはＤＩＣ群）、説明変数をｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）とし、単位オッズ比を連続変数が１単位だけ変化した場合で行った。効果に対する尤度比検定の結果、ｓＣＤ１４−ＳＴがオッズ比１．００１５７２、９５％ＣＩが１．０００８６５−１．００２４４６、ｐ＜０．０００１となりもっとも有用であった。【０１００】
≪実施例１７：凝固関連マーカーのＤＩＣにおける多重ロジスティック回帰分析≫
疾患名が決定された症例８４例を対象に、多重ロジスティック回帰分析（ステップワイズ法）を行った。分析にあたり、目的変数を急性期ＤＩＣ診断基準（非ＤＩＣ群またはＤＩＣ群）、説明変数をアンチトロンビンIII（ＡＴIII）、プロテインＣ（ＰＣ）、トロンボモジュリン（ＴＭ）とし、単位オッズ比を連続変数が１単位だけ変化した場合で行った。効果に対する尤度比検定の結果、プロテインＣがオッズ比０．９４４３７７、９５％ＣＩが０．９１８８４２−０．９６５２３９、ｐ＜０．０００１となりもっとも有用であった。【０１０１】
≪実施例１８：ｓＣＤ１４−ＳＴとＰＣの敗血症有無に関するＲＯＣ解析及びカットオフ値評価≫
疾患名が決定された症例８４例のうち、ｓＣＤ１４−ＳＴ及びプロテインＣ（ＰＣ）の測定値がすべて確認された８０例（敗血症群：４０例、非敗血症群：４０例）を対象にＲＯＣ解析を行ったところ、ＡＵＣはｓＣＤ１４−ＳＴが０．９２５（ｐ＜０．０００１）、ＰＣが０．８３３（ｐ＜０．０００１）であった。また、カットオフ値はｓＣＤ１４−ＳＴが６４７ｐｇ／ｍＬ（感度＝９３．０％、特異度＝７５．６％）、ＰＣが４７％（感度＝７７．５％、特異度＝８０．０％）となった。以上の結果から、カットオフ値はｓＣＤ１４−ＳＴが６５０ｐｇ／ｍＬ、ＰＣが４５％で好適と考えられた。【０１０２】
≪実施例１９：ｓＣＤ１４−ＳＴとＰＣのＤＩＣ有無に関するＲＯＣ解析及びカットオフ値評価≫
疾患名が決定された症例８４例のうち、ｓＣＤ１４−ＳＴ及びプロテインＣ（ＰＣ）の測定値がすべて確認された８１例（ＤＩＣ群：３６例、非ＤＩＣ群：４５例）を対象にＲＯＣ解析を行ったところ、ＡＵＣはｓＣＤ１４−ＳＴが０．８３６（ｐ＜０．０００１）、ＰＣが０．８９１（ｐ＜０．０００１）であった。また、カットオフ値はｓＣＤ１４−ＳＴが８９９ｐｇ／ｍＬ（感度＝８１．６％、特異度＝８０．９％）、ＰＣが５５％（感度＝８９．２％、特異度＝７５．６％）となった。以上の結果から、カットオフ値はｓＣＤ１４−ＳＴが９００ｐｇ／ｍＬ、ＰＣが５５％で好適と考えられた。【０１０３】
≪実施例２０：ｓＣＤ１４−ＳＴとＰＣを組み合わせた感染性ＤＩＣ検出能の評価≫
疾患名が決定された症例８４例のうち、ｓＣＤ１４−ＳＴ及びプロテインＣ（ＰＣ）の測定値がすべて確認された８１例を対象に、実施例１５と同様にｓＣＤ１４−ＳＴとＰＣ（表２１〜表２２）の組み合わせで感染性ＤＩＣ検出能の評価を行った。カットオフ値は、実施例１８または１９で得られた値から設定した。評価にあたって、各条件の臨床感度、特異度、陰性反応的中率、陽性反応的中率を算出した。【０１０４】
【表２１】
2013168602.tif 000022
【０１０５】
【表２２】
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【０１０６】
結果から、実施例１５と同様にｓＣＤ１４−ＳＴ及びＰＣ単独による検出法は、いずれも臨床感度が高いが特異度は低かった。一方、ｓＣＤ１４−ＳＴとＰＣを組み合わせることにより特異度が上昇した。感染性ＤＩＣ検出に対してｓＣＤ１４−ＳＴとＰＣの組み合わせを用いることにより、臨床感度と特異度が８０％以上となり、従来の指標では無かった臨床感度と特異度を併せ持つ指標であり、非常に有用であることを確認した。【０１０７】
≪参考例１：非感染群におけるＤＩＣ診断に対する有用性≫
実施例１２の非感染群、すなわち、非感染であったＳＩＲＳまたは非感染性疾患の症例１３例を対象に、急性期ＤＩＣ診断基準に従ってＤＩＣ群（４例）と非ＤＩＣ群（９例）に分類し、ＤＩＣ検出におけるｓＣＤ１４−ＳＴ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、Ｄ−ｄｉｍｅｒ及びフィブリン・フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）の有用性をＲＯＣ分析により比較を行った。
ＰＣＴの測定は、エクルーシス試薬ブラームスＰＣＴ（ロシュ・ダイアグノスティックス社）を用いて測定を行った。ＩＬ−６は、イムライズＩＬ−６（シーメンスヘルスケア・ダイアグノスティクス社）を用いて測定を行った。ＣＲＰは、ＣＲＰ−ラテックスＸ２「生研」（デンカ生研社）を用いて測定を行った。測定機器は、日立７１７０Ｓ（日立ハイテク社）を用いた。Ｄ−ｄｉｍｅｒは、ナノピアＤダイマー（積水メディカル社）を用いて測定を行った。測定機器は、コアプレスタ２０００（積水メディカル社）を用いた。ＦＤＰは、ナノピアＰ−ＦＤＰ（積水メディカル社）を用いて測定を行った。測定機器は、コアプレスタ２０００（積水メディカル社）を用いた。【０１０８】
結果を図３６、図３７に示す。図３６、図３７において、横軸は「１−特異度」であり、縦軸は「感度」である。
ＡＵＣをそれぞれ求めたところ、ｓＣＤ１４−ＳＴは０．８０６、ＰＣＴは０．７７８、ＩＬ−６は０．６３９、ＣＲＰは０．５８３、Ｄ−ｄｉｍｅｒは０．７６４、ＦＤＰは０．７９２であり、ｓＣＤ１４−ＳＴのＡＵＣが最も大きかった。この結果からｓＣＤ１４−ＳＴは感染の有無に関わらず、既存の指標であるＤ−ｄｉｍｅｒやＦＤＰ等に対し有用であることが確認された。ｓＣＤ１４−ＳＴ値のカットオフ値は、６００ｐｇ／ｍＬの場合に臨床感度が７５．０％、特異度が１００％となり、最適と考えられた。
【産業上の利用可能性】
【０１０９】
本発明は、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の検出及びその病態の把握に利用することができる。ＤＩＣが疑われる患者からＤＩＣ患者を特定することもできるし、ＤＩＣ患者に対して経時的に測定することによって、状態をモニタリングすることができ、適切な治療方針の策定に役立てることができる。
また、本発明は、感染性播種性血管内凝固症候群（感染性ＤＩＣ）の検出及びその病態の把握に利用することができる。感染性ＤＩＣが疑われる患者から感染性ＤＩＣ患者を特定することもできるし、感染性ＤＩＣ患者に対して経時的に測定することによって、状態をモニタリングすることができ、適切な治療方針の策定に役立てることができる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変形や改良は本発明の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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