【手続補正書】
【提出日】平成27年9月11日(2015.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルシフェラーゼに基づくアッセイを行う方法において、
野生型として分泌されるルシフェラーゼを真核細胞中で発現させるステップであって、当該真核細胞中において当該ルシフェラーゼが細胞内で発現するように当該ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くステップ；
ルシフェラーゼ活性を、前記ルシフェラーゼと、ルシフェラーゼを活性フォールド型へ転換させるのに適した環境を与える試薬組成物とを接触させることにより回復させるステップであって、当該試薬組成物が、臭化物陰イオン、キレータ、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファからなる群より選択される試薬を含むステップ；
前記ルシフェラーゼとルシフェラーゼ酵素の基質とを接触させるステップ；および
生物発光を検出または測定するステップ；
を具えることを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、活性化型の前記ルシフェラーゼがシステイン残基間にジスルフィド結合を有することを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、前記活性を回復するステップが細胞可溶化過程を含むことを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、前記方法がレポータ遺伝子アッセイの中で用いられることを特徴とする方法。
【請求項５】
ルシフェラーゼに基づくアッセイを行う方法において、
野生型として分泌されるルシフェラーゼを真核細胞中で発現させるステップであって、当該真核細胞中において当該ルシフェラーゼが細胞内で発現するように当該ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くステップ；
前記ルシフェラーゼと、前記ルシフェラーゼを活性状態へ転換させるのに適した環境を与える試薬組成物とを接触させるステップであって、当該試薬組成物が、臭化物陰イオン、キレータ、酸化還元バッファ、酸化剤、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含むステップ；
前記ルシフェラーゼとルシフェラーゼ酵素の基質とを接触させるステップ；および
生物発光を検出または測定するステップ；
を具えることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法において、活性状態の前記ルシフェラーゼがシステイン残基間にジスルフィド結合を含むことを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項５に記載の方法がさらに細胞可溶化過程を含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項５に記載の方法において、前記方法がレポータ遺伝子アッセイの中で用いられることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項５に記載の方法において、前記ルシフェラーゼの活性状態への転換が、不活性状態から活性状態への転換、または、部分的活性または低い活性状態からより高い活性状態への転換を意味することを特徴とする方法。
【請求項１０】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ量を検出または定量する方法において、当該方法が：
（ａ）前記サンプルを、臭化物陰イオン、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含む試薬組成物と接触させるステップ；
（ｂ）前記サンプルを、前記ルシフェラーゼ酵素の基質と接触させるステップ；および
（ｃ）前記サンプル中の生物発光を検出または定量するステップ；
を含み、前記組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする方法。
【請求項１１】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ量を検出または定量する方法において、当該方法が：
（ａ）前記サンプルを、前記ルシフェラーゼを活性状態に転換できる環境を与える試薬組成物と接触させるステップであって、当該試薬組成物が臭化物陰イオン、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含むステップ；
（ｂ）前記サンプルを、前記ルシフェラーゼ酵素の基質と接触させるステップ；および
（ｃ）前記サンプル中の生物発光を検出または定量するステップ；
を含み、前記組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法において、前記ルシフェラーゼの活性状態への転換が、不活性状態から活性状態への転換、または、部分的活性または低い活性状態からより高い活性状態への転換を意味することを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１１に記載の方法において、ステップ（ｂ）がステップ（ａ）と同時に起きる、またはステップ（ａ）の後に続くことを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載の方法において、前記ルシフェラーゼがセレンテラジンまたはその類似化合物または誘導体を基質として利用することを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１１に記載の方法において、前記ルシフェラーゼが海洋起源であることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１１に記載の方法において、活性状態の前記ルシフェラーゼがシステイン残基間にジスルフィド結合を有することを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１１に記載の方法において、前記ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことにより細胞内で発現することを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１１に記載の方法において、前記方法がレポータ遺伝子アッセイの一部であることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１１に記載の方法が、前記サンプルを非イオン性界面活性剤と接触させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１１に記載の方法が、前記サンプルを両性イオン性界面活性剤と接触させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１１に記載の方法において、前記試薬組成物がキレータおよび酸化還元バッファの１つまたは２つ以上を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
細胞または細胞サンプル中の組み換えルシフェラーゼの量および／または活性を測定する方法において、当該方法が：
（ａ）前記細胞または細胞サンプルを可溶化して細胞可溶化物を調製するステップ；
（ｂ）前記細胞可溶化物を、臭化物陰イオン、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含む試薬組成物と接触させるステップ；
（ｃ）前記ルシフェラーゼの基質を加えるステップ；
（ｄ）前記サンプル中の生物発光を検出するステップ；
を含み、前記組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする方法。
【請求項２３】
細胞または細胞サンプル中の組み換えルシフェラーゼの量および／または活性を測定する方法において、当該方法が：
（ａ）前記細胞または細胞サンプルを可溶化して細胞可溶化物を調製するステップ；
（ｂ）前記細胞可溶化物を、前記ルシフェラーゼを活性状態に転換できる環境を与える試薬組成物と接触させるステップであって、当該試薬組成物が臭化物陰イオン、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含むステップ；
（ｃ）前記ルシフェラーゼの基質を加えるステップ；
（ｄ）前記サンプル中の生物発光を検出するステップ；
を含み、前記組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法において、前記ルシフェラーゼの活性状態への転換が、不活性状態から活性状態への転換、または、部分的活性または低い活性状態からより高い活性状態への転換を意味することを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２３に記載の方法において、ステップ（ｃ）がステップ（ｂ）と同時に起きる、またはステップ（ｂ）の後に続くことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２３に記載の方法において、前記ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２３に記載の方法において、前記試薬組成物がキレータおよび酸化還元バッファの１つまたは２つ以上を含むことを特徴とする方法。
【請求項２８】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のための試薬組成物において、当該試薬組成物が臭化物陰イオンおよびルシフェラーゼ基質を含み、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする試薬組成物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の試薬組成物が、非イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項３０】
請求項２８に記載の試薬組成物が、両性イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項３１】
請求項２８に記載の試薬組成物が、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、ｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上をさらに含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項３２】
請求項２８に記載の試薬組成物において、前記臭化物陰イオンが少なくとも１ｍＭの濃度で存在することを特徴とする試薬組成物。
【請求項３３】
請求項２８に記載の試薬組成物において、前記臭化物陰イオンが５ｍＭ乃至５００ｍＭの濃度で存在することを特徴とする試薬組成物。
【請求項３４】
請求項２８に記載の試薬組成物において、前記ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことを特徴とする試薬組成物。
【請求項３５】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のための試薬組成物において、当該試薬組成物が臭化物陰イオンおよび、セレンテラジンまたはその類似化合物または誘導体を含み、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする試薬組成物。
【請求項３６】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のための試薬組成物において、当該試薬組成物が臭化物陰イオンおよびルシフェラーゼ基質を含み；当該試薬組成物がルシフェラーゼを含まず、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする試薬組成物。
【請求項３７】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のための試薬組成物において、当該試薬組成物が臭化物陰イオン、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファ、およびルシフェラーゼ基質の１つまたは２つ以上を含み、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とする試薬組成物。
【請求項３８】
請求項３５ないし３７のいずれか１項に記載の試薬組成物が非イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項３９】
請求項３５ないし３７のいずれか１項に記載の試薬組成物が両性イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項４０】
請求項３５ないし３７のいずれか１項に記載の試薬組成物がキレータおよび酸化還元バッファの１つまたは２つ以上を含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項４１】
請求項３５ないし３７のいずれか１項に記載の試薬組成物において、前記ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことを特徴とする試薬組成物。
【請求項４２】
請求項３５ないし３６のいずれか１項に記載の試薬組成物が、さらに１つまたは２つ以上のキレータ、酸化剤または酸化還元バッファ、ならびにｐＨが８．０よりも高いバッファを含むことを特徴とする試薬組成物。
【請求項４３】
請求項３５ないし３７のいずれか１項に記載の試薬組成物において、前記臭化物陰イオンが少なくとも１ｍＭの濃度で存在することを特徴とする試薬組成物。
【請求項４４】
請求項３５ないし３７のいずれか１項に記載の試薬組成物において、前記臭化物陰イオンが５ｍＭ乃至５００ｍＭの濃度で存在することを特徴とする試薬組成物。
【請求項４５】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のためのキットにおいて、当該キットが臭化物陰イオンおよびルシフェラーゼ基質を含み、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とするキット。
【請求項４６】
請求項４５に記載のキットが非イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とするキット。
【請求項４７】
請求項４５に記載のキットが両性イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とするキット。
【請求項４８】
請求項４５に記載のキットがキレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含むことを特徴とするキット。
【請求項４９】
請求項４５に記載のキットにおいて、前記臭化物陰イオンが少なくとも１ｍＭの濃度で存在することを特徴とする試薬組成物。
【請求項５０】
請求項４５に記載のキットにおいて、前記臭化物陰イオンが５ｍＭ乃至５００ｍＭの濃度で存在することを特徴とする試薬組成物。
【請求項５１】
請求項４５に記載のキットにおいて、前記ルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことを特徴とするキット。
【請求項５２】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のためのキットにおいて、当該キットが臭化物陰イオンおよび、セレンテラジンまたはその類似化合物または誘導体を含み、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とするキット。
【請求項５３】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のためのキットにおいて、当該キットが臭化物陰イオンおよびルシフェラーゼ基質を含み；臭化物陰イオンを含む当該キット構成物がルシフェラーゼを含まず、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とするキット。
【請求項５４】
サンプル中の組み換えルシフェラーゼ由来のＡＴＰ非依存性生物発光の検出または定量のためのキットにおいて、当該キットが臭化物陰イオン、キレータ、酸化剤、酸化還元バッファ、およびｐＨが８．０よりも高いバッファ、およびルシフェラーゼ基質の１つまたは２つ以上を含み、当該組み換えルシフェラーゼが非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であることを特徴とするキット。
【請求項５５】
請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキットが非イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とするキット。
【請求項５６】
請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキットが両性イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とするキット。
【請求項５７】
請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキットがキレータおよび酸化還元バッファの１つまたは２つ以上を含むことを特徴とするキット。
【請求項５８】
請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキットにおいて、前記組み換えルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことを特徴とするキット。
【請求項５９】
請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキットにおいて、前記臭化物陰イオンが少なくとも１ｍＭの濃度で存在することを特徴とするキット。
【請求項６０】
請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキットにおいて、前記臭化物陰イオンが５ｍＭ乃至５００ｍＭの濃度で存在することを特徴とするキット。
【請求項６１】
ルシフェラーゼに基づくアッセイを実行するためのシステムにおいて：
非分泌型または野生型として分泌されるルシフェラーゼの誘導体であるルシフェラーゼを発現する真核細胞と；
前記ルシフェラーゼを活性状態に転換できる環境を与える試薬組成物において、当該試薬組成物が臭化物陰イオン、キレータ、酸化還元バッファ、酸化剤、およびｐＨが８．０よりも高いバッファの１つまたは２つ以上を含む試薬組成物と；
前記ルシフェラーゼ酵素の基質と；および
生物発光を測定するための検出器と；
を具えることを特徴とするシステム。
【請求項６２】
請求項６１に記載のシステムにおいて、活性状態の前記ルシフェラーゼがシステイン残基間にジスルフィド結合を有することを特徴とするシステム。
【請求項６３】
請求項６１に記載のシステムが細胞可溶化バッファをさらに具えることを特徴とするシステム。
【請求項６４】
請求項６１に記載のシステムがレポータ遺伝子アッセイをさらに具えることを特徴とするシステム。
【請求項６５】
請求項６１に記載のシステムにおいて、前記ルシフェラーゼの活性状態への転換が、不活性状態から活性状態への転換、または、部分的活性または低い活性状態からより高い活性状態への転換を意味することを特徴とするシステム。
【請求項６６】
請求項６１に記載のシステムにおいて、前記検出器がルミノメータ、シンチレーション・カウンタ、フォトメータ、フォトマルチプライア・フォトメータ、フォトエマルジョン・フィルム、および電荷結合素子からなる群より選択されることを特徴とするシステム。
【請求項６７】
請求項６１に記載のシステムが９６ウェル・プレートをさらに具えることを特徴とするシステム。
【請求項６８】
請求項６１に記載のシステムにおいて、前記組み換えルシフェラーゼが機能的シグナルペプチドを欠くことを特徴とするシステム。
【請求項６９】
請求項６１に記載のシステムにおいて、前記試薬組成物がキレータおよび酸化還元バッファの１つまたは２つ以上を含むことを特徴とするシステム。