【手続補正書】
【提出日】平成27年4月9日(2015.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の順番で以下の工程：
ａ）  ｉ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、
ii）疎水性相互作用クロマトグラフィー、
iii）アフィニティークロマトグラフィー、および
iv）イオン交換クロマトグラフィー
より選択される第１のクロマトグラフィー工程、
ｂ）  ｉ）陰イオン交換クロマトグラフィー、
ii）陽イオン交換クロマトグラフィー、
iii）ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、
iv）疎水性相互作用クロマトグラフィー、および
ｖ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー
より選択される第２のクロマトグラフィー工程、
ｃ）  ｉ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、
ii）陰イオン交換クロマトグラフィー、
iii）陽イオン交換クロマトグラフィー、および
iv）疎水性相互作用クロマトグラフィー
より選択される第３のクロマトグラフィー工程
を含むことを特徴とする、原核細胞においてリコンビナント製造された非グリコシル化異種ポリペプチドの精製のための選択肢を提供する方法であって、
ここで、
−  金属リガンドと相互作用できるポリペプチドの場合に、前記第１のクロマトグラフィー工程はアフィニティークロマトグラフィーまたは疎水性電荷誘導クロマトグラフィーであり、
−  ６．０未満の等電点を有するポリペプチドの場合に、前記第２のクロマトグラフィー工程はヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー工程ではなく、
−  低または高等電点を有するポリペプチドについて、前記第３のクロマトグラフィー工程はフロースルーモードで行うことができ、
ここで、上記方法に非グリコシル化ポリペプチドを供した後に得られる純度が、選択されたクロマトグラフィー工程の順序の種類に依存せずに同等である、方法。
【請求項２】
前記原核細胞がE. coli細胞であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記アフィニティークロマトグラフィーが金属キレートクロマトグラフィーであることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項４】
前記非グリコシル化異種ポリペプチドが、成長因子のアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはインターフェロンもしくはインターフェロン変異体より選択されることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
工程ｃ）の後に、
ｄ）前記ポリペプチドをＰＥＧ化すること
である追加の工程を含むことを特徴とする、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
前記工程ａ）およびｂ）が陽イオン交換クロマトグラフィー工程であることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
以下の工程：
ａ）前記異種ポリペプチドをコードする核酸を含む原核細胞を前記異種ポリペプチドの発現に適した条件で培養すること、
ｂ）培養液または原核細胞から前記異種ポリペプチドを回収すること、
ｃ）請求項１記載の方法で前記異種ポリペプチドを精製すること
を含むことを特徴とする、原核細胞における非グリコシル化異種ポリペプチドのリコンビナント製造のための方法。
【請求項８】
以下の工程：
ａ）前記異種ポリペプチドの発現および前記異種ポリペプチドを含有する封入体の形成に適した条件で、前記異種ポリペプチドをコードする核酸を含む前記原核細胞を培養すること、
ｂ）原核細胞から前記封入体を回収すること、
ｃ）前記封入体から前記異種ポリペプチドを溶解および再生すること、
ｄ）請求項１記載の方法で前記異種ポリペプチドを精製すること
を含むことを特徴とする、封入体による原核細胞における非グリコシル化異種ポリペプチドのリコンビナント製造のための方法。
【請求項９】
第３のクロマトグラフィー工程の後に得られたポリペプチド溶液におけるエンドトキシン、および／またはE. coli DNA、および／またはE. coli細胞タンパク質の含量が、第１のクロマトグラフィー工程前の含量と比べて減少していることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
第１のクロマトグラフィー工程が疎水性電荷誘導クロマトグラフィーであり、第２のクロマトグラフィー工程がヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーまたは陽イオン交換クロマトグラフィーより選択され、第３のクロマトグラフィー工程が疎水性電荷誘導クロマトグラフィーまたは陰イオン交換クロマトグラフィーより選択される、三つの逐次クロマトグラフィー工程の順序を含む、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−１変異体の精製のための方法。
【請求項１１】
第１のクロマトグラフィー工程が疎水性電荷誘導クロマトグラフィーであり、第２のクロマトグラフィー工程が陰イオン交換クロマトグラフィー工程であり、第３のクロマトグラフィー工程が疎水性電荷誘導クロマトグラフィーである、三つの逐次クロマトグラフィー工程の順序を含む、ＩＦＮα−２ａの精製のための方法。
【請求項１２】
第１のクロマトグラフィー工程が疎水性相互作用クロマトグラフィーであり、第２のクロマトグラフィー工程が陽イオン交換クロマトグラフィー工程であり、第３のクロマトグラフィー工程が疎水性相互作用クロマトグラフィーである、三つの逐次クロマトグラフィー工程の順序を含む、ＩＦＮα−２ａの精製のための方法。
【請求項１３】
以下の順番で以下の工程：
ａ）  原核細胞においてリコンビナント製造された非グリコシル化異種ポリペプチドを提供すること、
ｂ）  ｉ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、
ii）疎水性相互作用クロマトグラフィー、
iii）アフィニティークロマトグラフィー、および
iv）イオン交換クロマトグラフィー
より選択される第１のクロマトグラフィー工程、
ｃ）  ｉ）陰イオン交換クロマトグラフィー、
ii）陽イオン交換クロマトグラフィー、
iii）ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、および
iv）疎水性相互作用クロマトグラフィー
より選択される第２のクロマトグラフィー工程、
ｄ）  ｉ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、
ii）陰イオン交換クロマトグラフィー、
iii）陽イオン交換クロマトグラフィー、および
iv）疎水性相互作用クロマトグラフィー
より選択される第３のクロマトグラフィー工程
を含む、原核細胞においてリコンビナント製造された非グリコシル化ＰＥＧ化異種ポリペプチドを製造する方法であって、前記非グリコシル化異種ポリペプチドを工程ｄ）の後でＰＥＧ化する方法。
【請求項１４】
第１のクロマトグラフィー工程が疎水性相互作用クロマトグラフィーまたは金属アフィニティークロマトグラフィーより選択され、第２のクロマトグラフィー工程が陽イオン交換クロマトグラフィーであり、第３のクロマトグラフィー工程が陰イオン交換クロマトグラフィーである、三つの逐次クロマトグラフィー工程の順序を含む、ＰＥＧ化ＩＦＮα−２ａの製造のための方法であって、前記第３のクロマトグラフィー工程の後で、精製非グリコシル化非ＰＥＧ化ＩＦＮα−２ａをＰＥＧ化する方法。
【請求項１５】
第１のクロマトグラフィー工程が疎水性相互作用クロマトグラフィーであり、第２のクロマトグラフィー工程が陽イオン交換クロマトグラフィーであり、第３のクロマトグラフィー工程が疎水性電荷誘導クロマトグラフィーである、三つの逐次クロマトグラフィー工程の順序を含む、ＰＥＧ化インターフェロンの製造のための方法であって、前記第３のクロマトグラフィー工程の後に、精製非グリコシル化非ＰＥＧ化ＩＦＮをＰＥＧ化する方法。
【請求項１６】
以下の順序で以下の工程：
ａ）  ｉ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、
ii）疎水性相互作用クロマトグラフィー、
iii）アフィニティークロマトグラフィー、および
iv）イオン交換クロマトグラフィー
より選択される第１のクロマトグラフィー工程、
ｂ）  ｉ）陰イオン交換クロマトグラフィー、
ii）陽イオン交換クロマトグラフィー、
iii）ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、
iv）疎水性相互作用クロマトグラフィー、および
ｖ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー
より選択される第２のクロマトグラフィー工程、
ｃ）  ｉ）疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、
ii）陰イオン交換クロマトグラフィー、
iii）陽イオン交換クロマトグラフィー、および
iv）疎水性相互作用クロマトグラフィー
より選択される第３のクロマトグラフィー工程
を含むことを特徴とする、原核細胞においてリコンビナント製造された非グリコシル化異種ポリペプチドの精製のための方法であって、
ここで、
−  金属リガンドと相互作用できるポリペプチドの場合に、前記第１のクロマトグラフィー工程はアフィニティークロマトグラフィーまたは疎水性電荷誘導クロマトグラフィーであり、
−  ６．０未満の等電点を有するポリペプチドの場合に、前記第２のクロマトグラフィー工程はヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー工程ではなく、
−  低または高等電点を有するポリペプチドについて、前記第３のクロマトグラフィー工程はフロースルーモードで行うことができ、
ここで、三つのクロマトグラフィー工程の少なくとも二つの異なる順序が、同等の純度で精製非グリコシル化異種ポリペプチドをもたらす方法。