【手続補正書】
【提出日】平成27年2月24日(2015.2.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マウスであって、該マウスのゲノムが、
（ａ）内因性重鎖定常領域遺伝子の上流での、１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入と；
（ｂ）内因性軽鎖定常領域遺伝子の上流での、１つ以上のヒトＶＬ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＬ遺伝子セグメントの挿入と；
（ｃ）該マウスにおいて機能的なＡＤＡＭ６タンパク質をコードする異所性核酸配列と
を含むことにより、該マウスは、
（ｉ）妊性であり；かつ
（ｉｉ）抗原で免疫されると、以下：
（Ａ）該重鎖定常領域遺伝子によってコードされる重鎖定常ドメインに連結された、該１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントによってコードされる重鎖可変ドメインと；
（Ｂ）該内因性軽鎖定常領域遺伝子によってコードされる軽鎖定常ドメインに連結された、該１つ以上のヒトＶＬ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＬ遺伝子セグメントによってコードされる軽鎖可変ドメインと
を含む抗体を産生し、ここで、該抗体が該抗原に特異的に結合する
ことを特徴とする、マウス。
【請求項２】
前記異所性核酸配列が前記内因性重鎖の遺伝子座に存在する、請求項１に記載のマウス。
【請求項３】
前記異所性核酸配列がヒト免疫グロブリン重鎖配列内に位置する、請求項２に記載のマウス。
【請求項４】
前記異所性核酸配列が２つのヒトＶＨ遺伝子セグメント間に位置する、請求項３に記載のマウス。
【請求項５】
前記異所性核酸配列が、前記内因性重鎖遺伝子座以外の位置に存在する、請求項１に記載のマウス。
【請求項６】
前記異所性核酸配列が、ＶＨ遺伝子セグメントとＤＨ遺伝子セグメントの間に位置する、請求項５に記載のマウス。
【請求項７】
前記挿入が、少なくとも１８のヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１から２７までのヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から６までのヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項８】
前記挿入が、少なくとも３９のヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１から２７までのヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から６までのヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項９】
前記挿入が、少なくとも８０のヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１から２７までのヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から６までのヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む、請求項１に記載のマウス。
【請求項１０】
前記マウスが内因性のＶＨ、ＤＨおよびＪＨ遺伝子セグメントを欠失する、請求項１に記載のマウス。
【請求項１１】
前記１つ以上のヒトＶＬ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＬ遺伝子セグメントがＶκ遺伝子セグメントおよびＪκ遺伝子セグメントである、請求項１に記載のマウス。
【請求項１２】
前記内因性軽鎖定常領域がマウスＣκ領域である、請求項１１に記載のマウス。
【請求項１３】
前記挿入が、少なくとも１６のヒトＶκ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から５までのヒトＪκ遺伝子セグメントを含む、請求項１１に記載のマウス。
【請求項１４】
前記挿入が、少なくとも３０のヒトＶκ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から５までのヒトＪκ遺伝子セグメントを含む、請求項１１に記載のマウス。
【請求項１５】
前記挿入が、少なくとも４０のヒトＶκ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から５までのヒトＪκ遺伝子セグメントを含む、請求項１１に記載のマウス。
【請求項１６】
前記マウスが内因性のＶκおよびＪκ遺伝子セグメントを欠失する、請求項１１に記載のマウス。
【請求項１７】
単離されたマウス細胞であって、該細胞のゲノムが、
（ａ）内因性重鎖定常領域遺伝子の上流での、１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入と；
（ｂ）内因性軽鎖定常領域遺伝子の上流での、１つ以上のヒトＶＬ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＬ遺伝子セグメントの挿入と；
（ｃ）該マウスにおいて機能的なＡＤＡＭ６タンパク質をコードする異所性核酸配列と
を含む、単離されたマウス細胞。
【請求項１８】
前記細胞が胚性幹（ＥＳ）細胞である、請求項１７に記載の単離された細胞。
【請求項１９】
マウスを作製する方法であって、請求項１８に記載のＥＳ細胞を宿主胚に導入する工程、代理母において該宿主胚を妊娠させる工程、および、該ＥＳ細胞に全部または一部由来する後代を該代理母に出産させる工程、を包含する、方法。
【請求項２０】
前記細胞がＢ細胞である、請求項１７に記載の単離された細胞。
【請求項２１】
請求項２０に記載のＢ細胞から作製される、ハイブリドーマ。
【請求項２２】
遺伝子改変されたマウスであって、該マウスのゲノムが、
（ａ）ＡＤＡＭ６遺伝子の異所性配置と；
（ｂ）内因性マウス重鎖遺伝子座への、１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含むヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座であって、該ヒトＶＨ、ＤＨおよびＪＨ遺伝子セグメントは、重鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結されている、ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座と
を含むことにより、該マウスは、
（ｉ）妊性であり；かつ
（ｉｉ）抗原で免疫されると、該重鎖定常領域遺伝子によってコードされる重鎖定常ドメインに連結された、該１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントによってコードされる重鎖可変ドメインを含む抗体を産生し、ここで、該抗体が該抗原に特異的に結合する
ことを特徴とする、マウス。
【請求項２３】
前記挿入が、雄性マウスの細胞または組織のＡＤＡＭ６活性を低減または消去する、請求項２２に記載のマウス。
【請求項２４】
前記ＡＤＡＭ６遺伝子が、前記ヒト重鎖可変領域遺伝子座に存在する、請求項２２に記載のマウス。
【請求項２５】
前記ＡＤＡＭ６遺伝子が、前記ヒト重鎖可変領域遺伝子座以外の位置に存在する、請求項２２に記載のマウス。
【請求項２６】
前記ＡＤＡＭ６遺伝子が、マウスＡＤＡＭ６ａ遺伝子および／またはマウスＡＤＡＭ６ｂ遺伝子を含む、請求項２２に記載のマウス。
【請求項２７】
前記１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、少なくとも１８、少なくとも３９、または、少なくとも８０のヒトＶＨ遺伝子セグメントを含む、請求項２２に記載のマウス。
【請求項２８】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座が、少なくとも１８のヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１から２７までのヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から６までのヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む、請求項２２に記載のマウス。
【請求項２９】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座が、少なくとも３９のヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１から２７までのヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から６までのヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む、請求項２２に記載のマウス。
【請求項３０】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座が、少なくとも８０のヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１から２７までのヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、少なくとも１から６までのヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む、請求項２２に記載のマウス。
【請求項３１】
前記定常領域遺伝子がマウス定常領域遺伝子である、請求項２２に記載のマウス。
【請求項３２】
前記マウス定常領域遺伝子が、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４およびこれらの組み合わせから選択される定常領域を含む、請求項３１に記載のマウス。
【請求項３３】
１つ以上のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪκ遺伝子セグメントの前記内因性κ軽鎖遺伝子座への挿入をさらに含む、請求項２２に記載のマウス。
【請求項３４】
前記１つ以上のヒトＶκ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪκ遺伝子セグメントが、齧歯動物の軽鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結される、請求項３３に記載のマウス。
【請求項３５】
単離されたマウス細胞であって、該細胞のゲノムが、
（ａ）ＡＤＡＭ６遺伝子の異所性配置と；
（ｂ）内因性マウス重鎖遺伝子座への、１つ以上のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つ以上のヒトＤＨ遺伝子セグメントおよび１つ以上のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含むヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座であって、該ヒトＶＨ、ＤＨおよびＪＨ遺伝子セグメントは、重鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結されている、ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座と
を含む、単離されたマウス細胞。
【請求項３６】
前記細胞が胚性幹細胞である、請求項３５に記載の単離された細胞。
【請求項３７】
請求項３６に記載の胚性幹細胞から作製される、マウス胚。
【請求項３８】
前記細胞がＢ細胞である、請求項３５に記載の単離された細胞。
【請求項３９】
請求項３８に記載のＢ細胞から作製される、ハイブリドーマ。
【請求項４０】
請求項３５に記載の単離された細胞から作製される、不死化細胞。
【請求項４１】
対象となる抗原に特異的な抗体を提供する方法であって、該方法は、
（ｉ）該対象となる抗原で、請求項２２の（ａ）および（ｂ）を含むゲノムを有する請求項２２に記載のマウスを免疫する工程；
（ｉｉ）工程（ｉ）の該マウスから、該抗原に対して特異的な抗体を産生する少なくとも１つのＢ細胞を単離する工程；ならびに
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の該抗体を産生する少なくとも１つの細胞を培養して、該産生された抗体を得る工程
を包含する、方法。
【請求項４２】
工程（ｉｉｉ）がさらに、工程（ｉｉ）の前記細胞を用いてハイブリドーマを作製し、該ハイブリドーマを培養することを包含する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
工程（ｉｉ）で得られた前記少なくとも１つのＢ細胞が、工程（ｉ）からの前記マウスの脾臓、リンパ節または骨髄に由来する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
工程（ｉ）における前記対象となる抗原での前記マウスの免疫が、タンパク質、ＤＮＡ、ＤＮＡとタンパク質の組み合わせ、または、該抗原を発現する細胞を用いて行われる、請求項４１に記載の方法。