(57)【要約】  結晶構造が解明された５´−グルコシルアデノシンの新規な結晶と当該結晶を含有する５´−グルコシルアデノシン結晶含有粉末、及び、それらの医薬品素材としての用途、さらには化粧品素材及び食品素材としての用途を提供することを課題とする。  ５´−グルコシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を提供することによって上記課題を解決する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
５´−グルコシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶。
【請求項２】
粉末Ｘ線回折法において、主な回折角（２θ）として１１．９°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０１１）、１８．９°（ミラー指数：０４０）、１９．８°（ミラー指数：１３０）、２１．９°（ミラー指数：１２１）及び２３．４°（ミラー指数：１４０）を示す請求項１記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶。
【請求項３】
結晶の空間群がＰ２１であり、単位格子の格子定数がａ＝６．５７６８Å、ｂ＝１８．７６８１Å、ｃ＝８．３３８０Åであり、且つ、α＝γ＝９０°、β＝１０４．３５２°の単斜晶系（ｍｏｎｏｃｌｉｎｉｃ）である請求項１又は２記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶。
【請求項４】
５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子を構成する炭素原子、酸素原子、水素原子、窒素原子及び塩素原子が表２及び表３に示す原子座標を有する請求項１乃至３のいずれかに記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶。
【請求項５】
単結晶の形態にある請求項１乃至４のいずれかに記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれかに記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末。
【請求項７】
請求項１乃至５のいずれかに記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を含有する医薬品素材。
【請求項８】
請求項６記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末を含有する化粧品又は食品素材。
【請求項９】
請求項１乃至５のいずれかに記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を含有する用時溶解型注射剤。
【請求項１０】
請求項６記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末を含有する固形製剤。
【請求項１１】
請求項１乃至４のいずれかに記載の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を種晶として用いることにより５´−グルコシルアデノシン含有塩酸溶液から５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を晶析せしめることを特徴とする５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５´−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルアデノシン塩酸塩の新規な結晶と当該結晶を含む結晶含有粉末及びその用途に関し、詳細には、５´−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルアデノシン塩酸塩の新規な結晶と当該結晶を含む結晶含有粉末、並びにその医薬品、化粧品及び食品素材としての用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
アデノシンは、アデニンの９位の窒素原子にリボースがβ−Ｎ−グリコシド結合した構造を有する、核酸を構成するヌクレオシドの一種である。アデノシンは、心臓疾患診断補助剤、感覚神経機能調節剤、気管支収縮性肺疾患剤、抗う蝕及び抗歯周病剤、血行促進剤、美白及びシワ改善用化粧料、養毛剤、疱疹抑制剤、α-グルコシダーゼの基質としての生化学試薬、血液保存剤、α-グルコシダーゼ阻害剤、心疾患治療剤、細胞賦活剤、栄養食品用剤など多岐の用途に用いられている（特許文献１乃至３参照）。しかしながら、アデノシン自体は、水に対する溶解度が５００ｍｇ／１００ｍｌ程度と低く、難水溶性であるため、少量の投与でより効率的に効果を発揮する事が必要とされる医薬品素材等として利用する上で問題となっていた。【０００３】
本出願人は、アデノシンの誘導体について検討を行い、アデノシン分子中のリボースの５位水酸基に１分子のグルコースがα−グルコシド結合を介して結合した、下記化学式１（非特許文献１参照）に示す構造を有する５´−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルアデノシン（以下、「５´−グルコシルアデノシン」と略称する。）が、アデノシンと比較して極めて高い水溶性を示すことを見出し、特許文献４に開示した。この５´−グルコシルアデノシンは、生体内にもともと存在するアデノシンの分解酵素（アデノシンデアミナーゼ）の作用を受けにくいため、生体内においてアデノシンよりも安定でその効果を長時間発揮できること、さらに、生体内にもともと存在する分解酵素（α−グルコシダーゼ）の作用により徐々に分解され、最終的にはＤ−グルコースとアデノシンとにまで完全に分解され代謝されると推察されることから、ヒトに適用しても安全な物質であると考えられる。【０００４】
化学式１：
【化１】
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【０００５】
しかしながら、特許文献４に開示された５´−グルコシルアデノシンは非晶質粉末である。５´−グルコシルアデノシンの非晶質粉末は、吸湿性が大きく、空気中の水分を吸収して容易に固結したり、潮解したり、また流動性を失い易い等、粉体の取扱いや安定性の点で問題があった。そのため、５´−グルコシルアデノシンは、上述したように生体内でアデノシンとして作用する物質として、種々の有用性が期待されながらも、その各種分野への応用はほとんど進展していなかった。【０００６】
一方、一般的に有機化合物の結晶は、分散力や静電相互作用などの比較的弱い分子間力により分子が集合したものであり、多くの準安定構造を取りうるために、しばしば多形の結晶構造を取り得る事が従来から知られている。これは、有機化合物は部分化学構造を複数持つために、分子が３次元的に規則配列する仕方が、１種類以上になり、多形現象が起こりやすくなるからである（非特許文献２参照）。それ故に、結晶多形の数は、通常、時間とその探索に費やした金額に正比例するものであると言われている（非特許文献３参照）。したがって、アデニン、リボース及びグルコースという部分化学構造を有する５´−グルコシルアデノシンは結晶多形を有する可能性が考えられる。したがって、当該物質を医薬品として用いる場合には、結晶構造が溶解性や吸収性、体内動態、生理活性、薬理効果に影響を与える為、これを特定する必要がある。【０００７】
また、５´−グルコシルアデノシンと同様な作用効果が期待される物質である、アデノシン分子中のリボースの水酸基にグリコシル基が導入されたアデノシン配糖体（以下、「アデノシン配糖体」と略称する）について、本出願人がＳＴＮ  ＲＥＧＩＳＴＲＹ  ＦＩＬＥ（商業データベースの化学・技術情報サービス）を用いて調査したところ、５´−Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシルアデノシン、３´−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシルアデノシン、５´−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシルアデノシンなどが確認された（非特許文献４乃至６参照）。しかしながら、このようなアデノシン配糖体の結晶としては、唯一、アデノシン分子中のリボースの水酸基にガラクトシル基がβ結合したアデノシン配糖体（非特許文献７参照）が報告されているのみであり、この事は、非晶質のアデノシン配糖体から必ずしも、結晶が得られるわけではないことを物語っている。しかも、当該文献においては、得られた結晶から融点等のデータは明らかにされているものの、Ｘ線結晶構造解析に必要とされる単結晶は得られていない。したがって、医薬品素材として、良薬の有効成分を担保するに必要とされる当該結晶についての詳細な結晶構造データ、例えば、結晶系や空間群、格子定数などについては一切、報告されていないのである。【０００８】
このように、本出願人の知る限り、医薬品素材に利用可能である結晶構造が明らかなアデノシン配糖体は未だ報告されておらず、このような現状で、上述したように、５´−グルコシルアデノシンについては結晶についての情報は一切なく、５´−グルコシルアデノシンを医薬品素材等として用いる際の問題となっていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００６−１６９２５０号公報
【特許文献２】特開２００９−９６７７７号公報
【特許文献３】特許第３１２１８２７号公報
【特許文献４】特願２０１１−２０２３３号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】鈴木  幸雄ら、ビタミン、第４４巻、第４号、１９６−２００頁（１９７１年）
【非特許文献２】ロジャー・デイビー（Ｒｏｇer  Ｄａｖｅｙ）ら、フロム・モレキュールズ・トゥ・クリスタライザ−ズ（Ｆｒｏｍ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｒｓ）、４４頁（２００９年）（ＯＸＦＯＲＤ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＰＵＢＬＩＣＡＴＩＯＮ）
【非特許文献３】平山  令明、「結晶とはなにか」、２０５−２０６頁（２０１２年）（ブルーバックス）
【非特許文献４】リー・ワン（Ｌｉ  Ｗａｎｇ）ら、ジャーナル・オブ・セパレーション・サイエンス（Ｊｏｕｎａｌｏｆ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ）第３０巻、１４８８−１４９５頁（２００７年）
【非特許文献５】ゼェジュン・リュウ（ＺｅＪｕｎ.  Ｌｉｕ）ら、テトラへドロン・アシンメトリー（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ）第１０巻、第１１号、２１１９−２１２７頁（１９９９年）
【非特許文献６】フリーダー・ダブリュー（Ｆｒｉｅｄｅｒ  Ｗ.）ら、アンゲバンテ・ケミ・インターナショナル・エディション（Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ）第１７巻、第１０号、７７２−７７４頁（１９７８年）
【非特許文献７】鈴木  幸雄ら、「ビタミン」、第４８巻、第１１号、６０５−６１１頁（１９７４年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、５´−グルコシルアデノシンを医薬品素材として用いる際の上記の問題を解決し、５´−グルコシルアデノシンの医薬品素材としての用途を切り拓くために為されたもので、結晶構造が解明された５´−グルコシルアデノシンの新規な結晶と当該結晶を含有する５´−グルコシルアデノシン結晶含有粉末、及び、それらの医薬品素材としての用途、さらには化粧品素材及び食品素材としての用途を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記の課題を解決すべく、５´−グルコシルアデノシンの結晶化について鋭意研究を重ねた結果、本発明者らは、５´−グルコシルアデノシン純度９８％以上の非晶質粉末を塩酸に溶解し、次いでメタノールを添加し、低温下で保持すると５´−グルコシルアデノシンの結晶が析出することを見出し、また、当該結晶が５´−グルコシルアデノシン1分子と塩酸1分子から構成される、従来、未知のまったく新規な５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶であることを見出し、その結晶構造を決定して本発明を完成した。【００１３】
すなわち、本発明は、５´−グルコシルアデノシン1分子と塩酸1分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を提供することによって上記課題を解決するものである。少なくともこのような分子の構成から成る５´―グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は本願出願前には知られておらず、当該結晶は新規な結晶である。【００１４】
また、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、詳細には、粉末Ｘ線回折法において、主な回折角（２θ）として１１．９°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０１１）、１８．９°（ミラー指数：０４０）、１９．８°（ミラー指数：１３０）、２１．９°（ミラー指数：１２１）及び２３．４°（ミラー指数：１４０）を示す結晶である。【００１５】
また、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、より詳細には、結晶の空間群がＰ２１であり、単位格子の格子定数がａ＝６．５７６８Å、ｂ＝１８．７６８１Å、ｃ＝８．３３８０Åであり、且つ、α＝γ＝９０°、β＝１０４．３５２°の単斜晶系（ｍｏｎｏｃｌｉｎｉｃ）の結晶である。【００１６】
加えて、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子を構成する炭素原子、酸素原子、水素原子、窒素原子及び塩素原子が本願明細書の表２及び表３に示す原子座標を有する結晶である。【００１７】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、その好適な一態様において、単結晶の形態にある結晶である。【００１８】
また、本発明は５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末を提供することによっても上記の課題を解決するものである。【００１９】
さらに、本発明は、医薬品素材としての本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を提供することによって、上記の課題を解決するものである。すなわち、結晶構造が解明された本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、５´−グルコシルアデノシンの非晶質粉末に比べて、有効性や安全性の確認が容易であるので、医薬品素材として極めて有用である。【００２０】
加えて、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を種晶として用いて晶析することにより、低純度の５´−グルコシルアデノシン含有溶液から、高収率で製造可能である。すなわち、通常、晶析原料の純度を上げるために晶析工程前に必要とされる吸脱着処理工程、クロマト分離工程を省略することが出来るので、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は容易に大量製造が可能となる。したがって、本発明の結晶と同様な作用効果を有する廉価な結晶含有粉末は、化粧品又は食品素材として有用である。【００２１】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、純度や安定性が高く、水に対して易溶であることから、医薬品用としての用時溶解型の注射剤に有利に利用できる。【００２２】
また、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、他の食品素材と容易に混合可能であり、長期間保存しても褐変や固結を起こしにくいので固形製剤として利用することもできる。【００２３】
さらに、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を種晶として晶析を行うことにより、低純度の５´−グルコシルアデノシン含有溶液から、高収率で製造することができる。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶によれば、その結晶構造が明らかであるので、医薬品素材として用いるのに必要な５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の物理的・化学的性質の解明や、結晶多形の有無を含めた多形現象の解明が極めて容易になるという利点が得られる。また、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は医薬品素材として用いられる場合には、生体内ではＤ−グルコースとアデノシンに完全に分解され、代謝されるので安全である。したがって、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、アデノシンが本来的に有している薬理効果と同様の薬理効果を期待して、アデノシンに比べて極めて水溶性の高い医薬品素材として、より有利に用いることができるという利点が得られる。【００２５】
また、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を種晶として晶析を行うことにより、低純度の５´−グルコシルアデノシン含有溶液から高収率で製造できる。したがって、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、通常、晶析原料の純度を上げるために晶析工程前に必要とされる吸脱着処理工程、クロマト分離工程を省略することが出来る。故に、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は容易に大量製造が可能となる。したがって、本発明の結晶と同様な機能を有する廉価な結晶含有粉末は、化粧品又は食品素材として、より有利に用いることができるという利点が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を用いた結晶化により得られた５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶の顕微鏡写真の一例である。
【図２】５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶の粉末Ｘ線回折パターンの一例である。なお、主な回折角の５つを順にａ〜ｅとし、図に示している。
【図３】Ｘ線結晶構造解析に用いた５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶（０．３７×０．２５×０．０６ｍｍ）の実体顕微鏡写真である。
【図４】５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶の単結晶Ｘ線回折パターンの一例である。
【図５】５´−グルコシルアデノシン塩酸塩のＯＲＴＥＰ図である。
【図６】結晶単位格子における５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子のパッキングを示す結晶構造図である（ａ軸方向）。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
［１］５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶
本発明は、５´−グルコシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の新規な結晶、詳細には、粉末Ｘ線回折法において、主な回折角（２θ）として１１．９°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０１１）、１８．９°（ミラー指数：０４０）、１９．８°（ミラー指数：１３０）、２１．９°（ミラー指数：１２１）及び２３．４°（ミラー指数：１４０）を示す結晶、さらに詳細には、後述する空間群、格子定数、及び結晶系を有し、炭素原子、酸素原子、水素原子、窒素原子及び塩素原子が後記表２及び表３に示される原子座標を有する結晶に係るものである。
【００２８】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、５´−グルコシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶であるかぎり、当該結晶の５´−グルコシルアデノシン純度によって限定されるものではないが、通常、９５％以上、望ましくは、９８％以上、さらに望ましくは、９９％以上の５´−グルコシルアデノシン純度を有するものが好ましい。
【００２９】
本明細書でいう「５´−グルコシルアデノシンの純度」とは、溶液、非晶質粉末、結晶含有粉末、結晶などの形態にある５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の試料を、精製水により０．０１％（ｗ／ｖ）になるよう希釈又は溶解し、０．４５μｍメンブランフィルターにより濾過した後、下記の条件によるＨＰＬＣ分析に供し、ＵＶ２６０ｎｍにおけるクロマトグラムに出現したピークの総面積から計算した５´−グルコシルアデノシンの面積比（百分率）を意味する。
【００３０】
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
ＨＰＬＣ装置：『ＬＣ−２０ＡＤ』（株式会社島津製作所製）
デガッサー：『ＤＧＵ−２０Ａ３』（株式会社島津製作所製）
カラム：『ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ３０３』（株式会社ＹＭＣ製）
サンプル注入量：２０μｌ
溶離液：２０ｍＭ酢酸-酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ３．５/ＭｅＯＨ
（９２／８（容積比））
流  速：０．５ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：ＵＶ検出器『ＳＰＤ−２０Ａ』（株式会社島津製作所製）
測定波長：２６０ｎｍ
データ処理：『クロマトパックＣ−Ｒ７Ａ』（株式会社島津製作所製）
【００３１】
５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、直接、Ｘ線結晶構造解析、すなわち、当業者に公知のＸ線回折による単結晶構造解析（例えば、桜井敏雄著「Ｘ線構造解析の手引き」、裳華房発行（１９８３年）などを参照）に供し、後述する図４に例示するような単結晶Ｘ線回折パターン（回折斑点）が得られれば、その結晶構造が明らかにされる。単結晶構造解析には、市販の単結晶Ｘ線回折装置、例えば、株式会社リガク製のイメージングプレート単結晶自動Ｘ線構造解析装置「Ｒ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ」などを用いればよく、これら市販の単結晶Ｘ線回折装置には、構造解析用のコンピューターソフトウェアが予め搭載されている。
【００３２】
５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、Ｘ線結晶構造解析により、当該結晶における結晶学的パラメーターが決定され、さらに、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子の原子座標（各原子の空間的な位置関係を示す値）及び３次元構造モデルを得ることができる。具体的には、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の原子座標は、
（１）本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶に単色化されたＸ線を照射し、Ｘ線の回折パターンを得る工程；
（２）当該Ｘ線の回折パターンからＸ線回折強度データを得る工程；
（３）直接法（プログラム「ＳＩＲ９２」、エー・アルトマレ（Ａ．Ａｌｔｏｍａｒｅ）ら、ジャーナル・オブ・アプライド・クリスタログラフィー（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．）、第２７巻、４３５頁、（１９９４年））により、初期構造（電子密度図）を得る工程；
（４）５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の化学構造に基づき、電子密度図に炭素原子、酸素原子、水素原子、窒素原子及び塩素原子をそれぞれ割り付け、Ｒ値が最小になるように最小二乗法にて構造を精密化する工程；
を含む手順により原子座標として得ることができる。
【００３３】
本発明の結晶は、空間群がＰ２１であり、単位格子の格子定数がａ＝６．５７６８Å、ｂ＝１８．７６８１Å、ｃ＝８．３３８０Åであり、且つ、α＝γ＝９０°、β＝１０４．３５２°の単斜晶系（ｍｏｎｏｃｌｉｎｉｃ）の結晶である。本発明の結晶は、上記空間群、格子定数、及び結晶系を有する結晶である限り、必ずしも単結晶の形態にあるものに限定されない。
【００３４】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、より具体的には、結晶における５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子の各酸素原子、各炭素原子、各水素原子、各窒素原子及び塩素原子が後述する表２及び表３に示される原子座標を有するものであり、図５に示すＯＲＴＥＰ図を与えるものである。
【００３５】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、結晶構造が明らかで、純度も極めて高く医薬品素材として最適である。当該発明の結晶を医薬品素材として使用する場合の剤形に特に制限はなく、固状、粉末、顆粒、錠剤などの形態で用いることができ、他の医薬品素材との組成物の形態で用いることもできる。他の医薬品素材としては、例えば、粉末状の有効成分、オリゴ糖、乳糖、澱粉、デキストリン、白糖、結晶セルロース、ショ糖エステル、脂肪酸エステルなどの賦形剤、増量剤、シェラックなどのコーティング剤などが挙げられる。
【００３６】
［２］５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶の製造方法
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を製造する原料となる５´−グルコシルアデノシンの由来は特に限定されず、有機合成法によって得られるものであっても、酵素合成法によって得られるものであってもよい。通常、アデノシン共存下で澱粉部分分解物にバチルス・サーキュランスＰＰ７１０株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７７１）由来のα−グルコシル転移酵素、又は、市販のシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（以下、「ＣＧＴａｓｅ」と略称する。）等の糖転移酵素を作用させ、次いで、グルコアミラーゼを作用させ、さらに精製することにより得られる高純度の５´−グルコシルアデノシンが好適である。この酵素合成法によって得られる５´−グルコシルアデノシンは、その製造方法に由来する夾雑物を含んでいる。本明細書でいう「製造方法に由来する夾雑物」とは、製造原料である糖類やアデノシン、５´−グルコシルアデノシン以外の３´−グルコシルアデノシンなどのアデノシン配糖体及びアデノシン分解物などを意味する。
【００３７】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶の調製に用いる高純度の５´−グルコシルアデノシンは、結晶を形成させるために十分に高純度であればよい。結晶を製造するための原料としての５´−グルコシルアデノシンの純度は、通常、９０％以上、望ましくは、９５％以上、より望ましくは、９８％以上、さらに望ましくは９９％以上の５´−グルコシルアデノシン純度を有するものが好適である。
【００３８】
［３］５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末
本明細書でいう「５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末」とは、上記した本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を含有する粉末を意味し、そのような結晶含有粉末における５´−グルコシルアデノシンの純度は、通常、８５．０％以上から９５．０％未満である。また、粉末Ｘ線回折により、主な回折角（２θ）として１１．９°（ミラー指数：０１１）、１８．９°（ミラー指数：０４０）、１９．８°（ミラー指数：１３０）、２１．９°（ミラー指数：１２１）及び２３．４°（ミラー指数：１４０）を示す５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末である。
【００３９】
［４］５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末の製造方法
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末を製造する原料となる５´−グルコシルアデノシンは、結晶含有粉末が形成されるに最低限必要と考えられる純度があれば良く、原料の５´−グルコシルアデノシン含有溶液は、２５％以上、望ましくは、３５％以上、の５´−グルコシルアデノシン純度を有するものであれば、目的とする５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末を原料に対して高収率で製造することが可能である。
【００４０】
本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、上記のように低純度の５´−グルコシルアデノシン含有溶液から高収率で得ることができる。よって、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、通常の晶析工程前に必要とされる吸脱着処理工程、クロマト分離工程を省略することが出来る。したがって、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末は、本発明の結晶と同様な機能を有しつつ、容易に大量製造を行うことができるので、粉末原料を取り扱うことを前提に設計された製造プラントを用いる飲料を含めた化粧品製造、食品製造の各分野において、他の単独若しくは複数の粉末状の化粧品素材、食品素材などに比較的廉価に含有せしめることができるという優れた利点を備えている。
【００４１】
なお、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末と混合させ得る他の粉末状の化粧品素材としては、例えば、白粉（おしろい）、タルク、カオリン、マイカ、セリサイト、澱粉、ベントナイト、シルクパウダー、セルロースパウダー、ナイロンパウダー、バスソルト、ソープチップ、二酸化チタン、二酸化ケイ素（シリカ）、酸化亜鉛などが、また、食品素材としては、例えば、穀粉、澱粉、粉糖、粉末調味料、粉末香辛料、粉末果汁、粉末油脂、粉末ペプチド、粉末卵黄、粉乳、脱脂粉乳、粉末コーヒー、粉末ココア、粉末味噌、粉末醤油、野菜粉末などが挙げられる。
【００４２】
以下、参考例及び実施例に基づき本発明をさらに詳しく説明する。しかしながら、本発明はこれらによってなんら限定されるべきものではない。
【００４３】
＜参考例１：グルコシルアデノシンの調製１＞
アデノシン（試薬特級、和光純薬工業株式会社販売）の濃度が５％（ｗ／ｖ）、デキストリン（商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社販売、水分７．７％）の濃度が３０％（ｗ／ｖ）となるように、それぞれを２ｍＭのＣａＣｌ２水溶液に添加し、５０℃に加温し、撹拌することにより完全に溶解した。１Ｎ塩酸を用いて溶液のｐＨを６．０に調整した後、特許文献４の実験１−１を参照に調製したα−グルコシル転移酵素をデキストリン１ｇ当たり３０単位、イソアミラーゼ(株式会社林原製)をデキストリン１ｇ当たり１，０００単位添加し、５０℃で２４時間酵素反応を行った。次いで、１００℃で１０分間熱処理して酵素を失活させた後、６Ｎ塩酸を用いてｐＨ４．５に調整し、これにグルコアミラーゼ（商品名『ＸＬ−４』、ナガセケムテックス社販売）を、デキストリンの固形分１ｇ当たり１５０単位加え５０℃で２４時間反応させた。反応後、１００℃で１０分間処理することにより酵素反応を停止させた。この反応液に活性炭を加え６０℃で１時間処理した後に珪藻土濾過した。得られた濾液を、弱塩基性陰イオン交換樹脂（『ＷＡ３０』、三菱化学製）２０Ｌを充填したカラムに通液することにより脱塩し、次いで、強酸性陽イオン交換樹脂 (『ＰＫ２１８』、三菱化学製)２５Ｌを充填したカラムにＳＶ＝３で通液することによりアデノシン及びグルコシルアデノシンを吸着させ、混在する糖類を流去し、カラムから糖類が溶出しなくなるまで水押しした。次いで、カチオン交換樹カラムに０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液約１７０ＬをＳＶ＝３で通液することによりカラムに吸着したアデノシン及びグルコシルアデノシンを溶出させ、回収液を６Ｎ塩酸にてｐＨ６に調整した後濃縮した。得られた濃縮液を強酸性陽イオン交換樹脂（『ＸＦＳ−４３２７９Ｎａ型』、ダウエックス社製）２２５Ｌを充填したカラムを用いたクロマトグラフィーに供し溶出液中の５’−グルコシルアデノシン含量の高い画分を集め、濃縮した。この濃縮液を再度上記カラムクロマトグラフィーに供し、溶出液中の５’−グルコシルアデノシン含量が９４％以上の画分を回収、濃縮・減圧乾燥することにより最終的にグルコシルアデノシン含有粉末２４０ｇを得た。本品は、５´−グルコシルアデノシンを約９５％、３´−グルコシルアデノシンを約１．４％含有していた。
【００４４】
上記で調製したグルコシルアデノシン含有粉末４０ｇに精製水１，２００ｍｌを加え溶解し、下記に示す条件でＯＤＳカラムを用いた分取ＨＰＬＣに供することにより、５´−グルコシルアデノシン含有画分を回収した。回収画分を濃縮・凍結乾燥することにより、５´−グルコシルアデノシンを含有する非晶質粉末標品（５´−グルコシルアデノシン純度９９．８％）を合計で約３１ｇ調製した。
【００４５】
＜分取ＨＰＬＣ条件＞
ＨＰＬＣ装置：『ＬＣ−１０ＡＤ』（株式会社島津製作所製）
オートサンプラー：『ＳＩＬ−１０ＡＤｖｐ』（株式会社島津製作所製）
記録計：『Ｃ−Ｒ７Ａｐｌｕｓ』（株式会社島津製作所製）
カラム：『ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ』、φ５０ｍｍ×５００ｍｍ（株式会社ＹＭＣ製）
溶離液：２０ｍＭ酢酸−酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ３．５）／メタノール（９０／１０（容積比））
検  出：ＲＩ検出器『ＲＩ−１０２』（株式会社昭和電工）
流  速：４０ｍｌ／分
温  度：４０℃
【００４６】
＜参考例２：グルコシルアデノシンの調製２＞
アデノシン（試薬特級、東京化成工業株式会社販売）の濃度が１％（ｗ／ｖ）、デキストリン（商品名『パインデックス＃１』、松谷化学株式会社販売）の濃度が１０％（ｗ／ｖ）となるように、それぞれを１０ｍＭ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ５．５）に添加し、５０℃に加温しつつ撹拌することにより完全に溶解させた。この溶液にジオバチルス・ステアロサーモフィラス  Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅ（株式会社林原製造）をデキストリン１ｇ当たり１，０００単位添加し、５０℃で２４時間反応させた。次いで、１００℃で１５分間加熱してＣＧＴａｓｅを失活させた後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム＃２００００』、ナガセケムテックス株式会社販売）をデキストリン１ｇ当たり２６０単位加え、５０℃で２４時間反応させた。得られた反応液を１００℃で１０分間加熱した後、参考例１と同様に活性炭処理、カチオン交換樹脂カラムを用いた吸着分離を行い、アデノシンおよびグルコシルアデノシンを回収し、濃縮、凍結乾燥してグルコシルアデノシン含有非晶質粉末約８０ｇを得た。本品は、５´−グルコシルアデノシンを約２６％、３´−グルコシルアデノシンを約５２％、アデノシンを約２１％含有していた。
以下、実施例に基づき本発明をさらに詳しく説明する。しかしながら、本発明はこれら実施例によってなんら限定されるものではない。
【実施例１】
【００４７】
＜水溶液からの５´−グルコシルアデノシン結晶の調製＞
参考例１で調製した５´−グルコシルアデノシン含有非晶質粉末の７０％（ｗ／ｗ）水溶液１５ｇに６Ｎ塩酸を１２ｍｌ加え溶解した後、４℃で１２時間静置し、結晶化を行なった。晶出した結晶はガラスフィルターにて濾集し、少量のメタノールで洗浄した後、室温で５時間真空乾燥した。この一連の操作により、純度９９．９％の５´−グルコシルアデノシン結晶７．１ｇを原料に対し６７．６％の収率で得た。得られた結晶を被験試料１とした。
【実施例２】
【００４８】
＜有機溶媒添加水溶液からの５´−グルコシルアデノシン結晶の調製＞
参考例１で調製した５´−グルコシルアデノシン含有非晶質粉末２．２ｇに２Ｎ塩酸を２．５ｍｌ加えて溶解した後、９９．５％エタノールを２．５ｍｌ加え、２２℃で２０時間静置し、結晶化を行なった。晶出した結晶はガラスフィルターにて濾集し、冷却した７０％(ｖ／ｖ)エタノール水溶液で洗浄した後、４０℃で４時間真空乾燥した。この一連の操作により、純度９９．６％の５´−グルコシルアデノシン結晶１．１ｇを原料に対して５０％の収率で得た。得られた結晶を被験試料２とした。
【実施例３】
【００４９】
＜５´−グルコシルアデノシンの結晶含有粉末の調製＞
参考例２で調製した５´−グルコシルアデノシン含有非晶質粉末（５´−グルコシルアデノシン純度２６．０％）６．５ｇに、２０％塩酸を１３ｍｌ加え、溶解した後、メタノールを３９ｍｌ加え、さらに種晶として、実施例１で調製した被験試料１を種晶として０．１ｇ添加、混合した後４℃で１２時間静置し、結晶化を行なった。晶出した結晶はガラスフィルターにて濾集し、少量のメタノールで洗浄した後、室温で５時間真空乾燥した。この一連の操作により、純度８６．４％の５´−グルコシルアデノシン結晶含有粉末１．３ｇを原料の５´−グルコシルアデノシンに対して７６．９％の収率で得た。得られた結晶含有粉末を被験試料３とした。
【実施例４】
【００５０】
＜５´−グルコシルアデノシンの結晶の各種分析＞
実施例１、２及び３で調製した被験試料１、２及び３を用いて、以下に示した物性を測定分析した。【００５１】
（１）結晶写真
被験試料２を倒立型顕微鏡（『ＴＭＳ−Ｆ型』、日本分光工業株式会社製）を用いて撮影した写真を図1に示した。【００５２】
（２）粉末Ｘ線回折
粉末Ｘ線回折装置（『Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｐｒｏ  ＭＰＤ』、スペクトリス株式会社製）を用い、試料約５０ｍｇをシリコン製無反射板に乗せ、回転させながらＣｕ対陰極から放射される特性Ｘ線であるＣｕＫα線（Ｘ線管電流４０ｍＡ、Ｘ線管電圧４５ｋｖ、波長１．５４０５Å）による反射法で粉末Ｘ線回折パターンを求めた。被験試料１の粉末Ｘ線回折パターンを図２に示した。図２に示すとおり、被験試料１はその主な回折角（２θ）として１１．９°（ミラー指数：（ｈｋｌ）０１１）、１８．９°（ミラー指数：０４０）、１９．８°（ミラー指数：１３０）、２１．９°（ミラー指数：１２１）及び２３．４°（ミラー指数：１４０）に特徴的な回折ピークを示した。なお、被験試料２及び３についても同様に粉末Ｘ線回折を行ったところ、いずれも被験試料１と同じ回折パターンを示した。したがって、被験試料１乃至３は同じ結晶構造を有する５´−グルコシルアデノシンの結晶であると考えられた。【００５３】
（３）塩素分析
以下に示す装置・カラムはいずれも株式会社島津製作所製のものを用いた。
サプレッサパッケージ：『ＨＩＣ−１０ＡＳＵＰＥＲ』
システムコントローラー：『ＳＣＬ−１０ＡＳＰ』
送液ユニット：『ＬＣ−１０ＡＤ』
脱気ユニット：『ＤＧＵ−１２Ａ』
サンプラ−：『ＳＩＬ−１０ＡＤＶＰ』
電気伝導度検出器：『ＣＤＤ−１０ＡＳＰ』
＜イオンクロマトグラフィー分析条件＞
分析カラム：Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＩＣ−ＳＡ２
移動層：１２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３／０．６ｍＭＮａ２ＣＯ３
流  量：１．０ｍｌ／分
温  度：３０℃
注入量：１０μＬ【００５４】
被験試料２を１０ｍｇ量りとり、純水に溶解し１００ｍｌとした後、調製した試料溶液をイオンクロマトグラフィーに供し、塩素含量を測定した。また、陰イオン標準試料（『Ｐ／Ｎ２２８−３３６０３−９３』、株式会社島津製作所製)を２倍又は４倍希釈したものと原液の３点について同様に測定し、検量線を作成することにより、試料溶液における塩素濃度を算出した。測定の結果、被験試料２の固形物当たりの塩素含量は、７６．９ｍｇ／ｇ、すなわち、７．７％であった。５´−グルコシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の塩素含量の理論値は７．６２％となることから、本結晶は５´−グルコシルアデノシン1分子と塩酸1分子からなる新規な５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶であることが判明した。なお、被験試料１及び３についても同様に塩素分析を行ったところ、いずれも被験試料２と同等の塩素含量を示した。
【実施例５】
【００５５】
＜５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の単結晶の調製＞
参考例１で調製した５´−グルコシルアデノシン含有非晶質粉末２ｇに２Ｎ塩酸を１０ｍｌ加え、攪拌して溶解させ、これに３．４ｍｌの９９．５％（ｖ／ｖ）メタノールを添加し、攪拌し、これを２４℃で７日間保持することにより晶析した。【００５６】
晶出した５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶から、デジタルマイクロスコープ（『ＭＸ−１２００ＩＩ／ＮＤＬ』、株式会社ナカデン製）を接続した実体顕微鏡下で適切な大きさのものを採取し、直ちにパラトンオイルにてコーティングした後、試料ホルダーに搭載し、Ｘ線結晶構造解析用試料とした。【００５７】
Ｘ線結晶構造解析用の結晶を採取した残りの結晶懸濁液から、ガラスフィルターにて濾集した結晶を乾燥させたところ、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶約０．２５ｇを得た。なお、本結晶品の５´−グルコシルアデノシン純度は１００％であった。
【実施例６】
【００５８】
＜５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の単結晶のＸ線結晶構造解析＞
実施例５で調製した５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶を、試料ホルダーに搭載した後に単結晶Ｘ線回折装置（『Ｒ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ−Ｒ』、株式会社リガク製）にセットし、窒素ガス（−１７０℃）雰囲気下にて、振動写真法により下記の条件にて結晶のＸ線回折パターンを測定した。【００５９】
＜Ｘ線回折パターン測定条件＞
Ｘ線源：Ｃｕ
出  力：５０ｋＶ，１００ｍＡ
入射Ｘ線：ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８７Å）
入射Ｘ線サイズ：約０．５ｍｍφ
結晶サイズ：０．３７×０．２５×０．０６ｍｍ
検出器：イメージングプレート
測定温度：約−１７０℃（窒素ガス吹付け法）【００６０】
Ｘ線結晶構造解析に用いた５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の単結晶の実体顕微鏡写真を図３に、そのＸ線回折パターンの一例を図４にそれぞれ示す。【００６１】
Ｘ線回折パターンにおいて、回折斑点（スポット）が数多く確認され、当該結晶が単結晶であることが確認された。なお、Ｘ線回折スポットの形状は比較的良好であったものの、その強度は弱めであった。観測した１７，６４１個の反射（回折）の内、固有の反射は３，５５０個であった。【００６２】
上記Ｘ線回折パターンのＸ線回折強度に基づき、直接法により初期構造を求めるとともに、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の構造式を参考として構造モデルを作成し、さらに３，４３２個の反射に基づき最小二乗法により精密化した。なお、解析ソフトウェアとして、株式会社リガク製の『Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｖｅｒ．３．８．２』を用いた。Ｘ線結晶構造解析によって得られた５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶学的データを表１にまとめた。【００６３】
【表１】
2013168627.tif 000004
【００６４】
表１に示すとおり、得られたＸ線回折強度データから、結晶の属する結晶系は、単斜晶系（ｍｏｎｏｃｌｉｎｉｃ）、空間群は、Ｐ２1、格子定数は、ａ＝６．５７６８Å、ｂ＝１８．７６８１Å、ｃ＝８．３３８０７Å、α＝γ＝９０°、β＝１０４．３５２°、Ｖ＝９９７．０７Å３と決定された。また、結晶の単位格子当たりの５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の分子数を表すＺ値は２となり、本結晶において、結晶の単位格子当たり２分子の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩が含まれていることが判明した。【００６５】
＜分子構造及び結晶構造の解析＞
直接法による解析の結果、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子における窒素原子、塩素原子、酸素原子、炭素原子及び水素原子は、その構造情報に基づき各原子位置に元素を配置することができた。座標データの精密化により得た５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子における窒素原子、塩素原子、酸素原子及び炭素原子の原子座標（ｘ，ｙ，ｚ）とそれぞれの等方性温度因子（Ｂｅｑ）の値を表２に、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子における水素原子の原子座標（ｘ，ｙ，ｚ）とそれぞれの等方性温度因子（Ｂｅｑ）の値を表３に示した。【００６６】
さらに、精密化した座標データから計算して表示した５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子のＯＲＴＥＰ図を図５に示した。また、結晶の単位格子当たりの５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子のパッキング構造を、a軸方向から見た場合の結晶構造図として図６に示した。なお、表２及び表３における窒素原子、塩素原子、酸素原子、炭素原子及び水素原子の番号はそれぞれ図５の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩分子のＯＲＴＥＰ図に記載された窒素原子、塩素原子、酸素原子、炭素原子及び水素原子の番号に対応している。また、表２及び表３における各数値の括弧内の数値は標準偏差を意味する。【００６７】
【表２】
2013168627.tif 000005
【００６８】
【表３】
2013168627.tif 000006
【００６９】
図５に示すＯＲＴＥＰ図において、炭素番号Ｃ１乃至Ｃ５と窒素番号Ｎ１乃至Ｎ５が、５´−グルコシルアデノシン分子におけるアデニンの構造を、炭素番号Ｃ６乃至Ｃ１０がリボースの構造を、また、炭素番号Ｃ１１乃至Ｃ１６がリボース構造の５位水酸基にα−グルコシド結合を介して結合したグルコースの構造を表している。さらに、水素番号Ｈ１と塩素番号Ｃｌ１から、当該結晶が塩酸塩結晶であることも明らかである。一方、図６に示す結晶構造図から、本結晶において、単位格子当たり２分子の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩がパッキングされていることが良く理解できる。なお、図６の結晶構造図には見かけ上数多くの５´−グルコシルアデノシン分子が見られるが、これは単位格子に隣接する他の単位格子にパッキングされた分子も表示されているためである。
【実施例７】
【００７０】
＜５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶の水に対する溶解度＞
５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶（被験試料１）とアデノシン（試薬特級、和光純薬工業株式会社販売）を用いて、以下に示す方法で水に対する溶解度を測定した。【００７１】
それぞれの試料を水に溶解させ、試料が完全に溶けきらない飽和溶液を調製し、ねじ口ボトルに封入測定し、２０℃の恒温槽中で２日間攪拌した。次いで、その溶液を０．４５μｍフィルターを用いて濾過することにより微結晶を除去した後、溶液中の固形分を加熱乾燥法により求め、溶媒１００ｇ当りに換算することにより溶解度を算出した。結果を表４に示した。【００７２】
【表４】
2013168627.tif 000007
【００７３】
表４に見られるとおり、対照のアデノシンの水１００ｇ当りの溶解度が０．４ｇであったのに対して、本発明の５´−グルコシルアデノシンの塩酸塩結晶（被験試料１）のそれは６４．９ｇであり、約１６０倍高い溶解度を示した。
【実施例８】
【００７４】
＜動的水分吸着量＞
５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶（被験試料１）と参考例１で調製した５´−グルコシルアデノシン含有粉末を用いて、以下に示す条件で動的水分吸着量を測定した。【００７５】
水分吸脱着測定装置（『ＩＧＡｓｏｒｐ』、ハイデン社製）で動的水分吸着量を測定した。設定温度を２５℃とし、相対湿度（ＲＨ）は、０から３３．０、４２．７、５２．８、６０．０、７５．２、８４．２、９０．１％まで段階的に測定した。各湿度では、最低１時間保持した後、サンプル重量が平衡に達した時、若しくは２４時間経過した時に次の湿度になるように設定した。各湿度での最終重量から、重量増加率を算出した。【００７６】
各湿度での測定終了時の重量と相対湿度０％の時の重量を元にした重量増加率を表５に示した。【００７７】
【表５】
2013168627.tif 000008
【００７８】
対照とした５´−グルコシルアデノシン含有粉末の相対湿度が９０．１％での重量増加率は約２６％であったのに対して、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩結晶のそれは１％未満と極めて低かった。この結果は、対照の５´−グルコシルアデノシン含有粉末は非晶質粉末であるために吸湿して、重量増加が著しいのに対して、本発明の５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、吸湿性が極めて低いことを物語っている。
【実施例９】
【００７９】
＜用時溶解型の注射剤＞
実施例５の方法で調製した５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の単結晶１質量部と、増量剤としてのぶどう糖９９質量部を水に溶解し、常法に従って、精製濾過してパイロジェンフリーとし、この溶液を２０ｍＬ容アンプルに５´−グルコシルアデノシン塩酸塩１００ｍｇとなるように分注した後、凍結乾燥し、封入して注射剤を製造した。本注射剤は、単体で、または、他のビタミン、ミネラルなどと混合して筋肉内又は静脈内に投与することができる。また、本品は、低温貯蔵の必要もなく、使用に際しての生理食塩水などへの溶解性は極めて良好である。
【実施例１０】
【００８０】
＜皮膚外用剤＞
精製水２０質量部に対し、実施例３の方法で調製した５´−グルコシルアデノシンの塩酸塩の結晶含有粉末を１質量部、α−グルコシルヘスペリジン２質量部、再表０１／０９０３３８号公報に開示された環状四糖（株式会社林原製造）１質量部を添加し、撹拌溶解した後、常法により噴霧乾燥することにより皮膚外用剤を調製した。本品は、表皮及び真皮の組織構造や生理機能の維持、改善を助けるための皮膚外用剤として用いることができる。また、本品は、ケラチノサイト分化促進剤、コラーゲン産生増強剤、美白剤、セラミド合成促進剤或いは保湿剤として利用することも随意である。
【実施例１１】
【００８１】
＜固形製剤＞
実施例３の方法で調製した５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶含有粉末２０質量部に対し、これにショ糖７０質量部、デキストリン１０質量部、適量の香料を加え、混合機を用い撹拌混合し５´−グルコシルアデノシン塩酸塩固形製剤を製造した。本品は、他の食品素材と容易に混合可能であり、長期間保存しても褐変や固結を起こしにくいアデノシン固形製剤である。本品やこれを配合した組成物は、生体内でアデノシンの生理機能を発揮するので、栄養食品用剤として経口的に摂取することができる。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明は、５´−グルコシルアデノシン１分子と塩酸１分子から構成される５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の新規結晶と当該結晶含有粉末、及びそれらの医薬品素材、化粧品素材、食品素材としての用途を提供するものである。本発明に係る５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の結晶は、それ自体が、有効かつ安全で安定した医薬品素材として、アデノシンと同様に、アデノシンが有効であるとされる心臓疾患診断補助剤、感覚神経機能調節剤、気管支収縮性肺疾患剤、抗う蝕及び抗歯周病剤、血行促進剤として使用することができるばかりでなく、美白及びシワ改善用化粧料、養毛剤、疱疹抑制剤、α-グルコシダーゼの基質としての生化学試薬、血液保存剤、α-グルコシダーゼ阻害剤、心疾患治療剤、細胞賦活剤、栄養食品用剤などとして使用することができる。また、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の溶解性、安定性などの固体物性や、結晶多形の有無や転移現象を解明するための試薬としても極めて有用である。本発明は、５´−グルコシルアデノシン塩酸塩の医薬品素材としての用途を大きく切り拓くものであり、その産業上の有用性は極めて大きい。さらに本発明の当該結晶含有粉末は、低純度の５´−グルコシルアデノシン溶液から通常の晶析工程前に必要とされる吸脱着処理工程、クロマト分離工程を省略して製造することが出来る比較的高純度の結晶含有粉末である。故に、本発明の結晶と同様な機能を有しつつ、大量製造が可能な廉価な粉末として、化粧品、食品や食品素材の用途も期待される。
【符号の説明】
【００８３】
図２において
ａ：１１．９°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０１１）のピーク
ｂ：１８．９°（ミラー指数：０４０）のピーク
ｃ：１９．８°（ミラー指数：１３０）のピーク
ｄ：２１．９°（ミラー指数：１２１）のピーク
ｅ：２３．４°（ミラー指数：１４０）のピーク
【００８４】
2013168627.tif 000009
【図１】
2013168627.tif 000010
【図２】
2013168627.tif 000011
【図３】
2013168627.tif 000012
【図４】
2013168627.tif 000013
【図５】
2013168627.tif 000014
【図６】
2013168627.tif 000015
【国際調査報告】
2013168627.tif 000016
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