【手続補正書】
【提出日】平成27年5月20日(2015.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞を提供すること；および
ターゲットタンパク質をコードする核酸を該細胞に導入すること
を含み、
ここで、該少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体の発現を含み、該細胞が、該ターゲットタンパク質を改変Ｎ−グリコシル化形態で生産する、
改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質を生産する方法。
【請求項２】
前記Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体が、ＭＮＮ４またはＭＮＮ４の生物学的に活性な変異体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体が、ＰＮＯ１またはＰＮＯ１の生物学的に活性な変異体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物活性変体が、ＭＮＮ６またはＭＮＮ６の生物学的に活性な変異体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が、外鎖伸長部（ＯＣＨ１）活性の欠損を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記さらに遺伝子操作された細胞が、以下：
前記ＯＣＨ１活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の欠失；
前記ＯＣＨ１活性を有する突然変異形態のタンパク質の発現；または
前記ＯＣＨ１活性を有するタンパク質の機能的発現に干渉するＲＮＡ分子の導入もしくは発現
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質を単離することをさらに含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記ターゲットタンパク質が、外因性タンパク質である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ターゲットタンパク質が、内因性タンパク質である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記ターゲットタンパク質が、哺乳動物タンパク質である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記ターゲットタンパク質が、ヒトタンパク質である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ターゲットタンパク質が、病原体タンパク質、リソソームタンパク質、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または融合タンパク質である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記融合タンパク質が、病原体タンパク質、リソソームタンパク質、成長因子、サイトカインまたはケモカインと抗体またはその抗原結合フラグメントとの融合体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ターゲットタンパク質が、リソソーム貯蔵障害（ＬＳＤ）に関連したタンパク質である、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ターゲットタンパク質が、グルコセレブロシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼまたはガラクトセレブロシダーゼである、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記ターゲットタンパク質が、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ヘキソサミニダーゼ、ベータ−Ｄ−マンノシダーゼ、アルファ−Ｌ−フコシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、アリールスルファターゼＡ、アルファ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、アスパルチルグルコサミニダーゼ、イズロネート−２−スルファターゼ、アルファ−グルコサミニド−Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、ベータ−Ｄ−グルコロニダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アルファ−Ｌ−マンノシダーゼ、アルファ−ノイラミニダーゼ、ホスホトランスフェラーゼ、酸性リパーゼ、酸性セラミダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、チオエステラーゼ、カテプシンＫ、およびリポタンパク質リパーゼからなる群より選択される、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態が、１つ以上のＮ−グリカン構造を含む、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質が、均一である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記改変グリコシル化を含有する改変ターゲット分子の割合が、少なくとも２０％、または、少なくとも３０％、または、少なくとも４０％、または、少なくとも５０％、または、少なくとも７５％、または、少なくとも９０％である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞が、少なくとも１つの追加の修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの追加の修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリコシル化活性の欠損を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記欠損が、ＡＬＧ３活性の欠損である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの修飾が、前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の欠失を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの修飾が、前記Ｎ−グリコシル化活性を有する突然変異形態のタンパク質の発現を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記少なくとも１つの修飾が、前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質の機能的発現に干渉するＲＮＡ分子の導入または発現を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記少なくとも１つの修飾が、Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質の発現を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
発現される前記タンパク質が、前記細胞内の外因性核酸によってコードされたタンパク質である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
発現される前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、アルファ−マンノシダーゼである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記さらに遺伝子操作された細胞が、少なくとも３つの追加の修飾Ｎ−グリコシル化活性を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項３０】
前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、外因性タンパク質である、請求項２６〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、哺乳動物タンパク質である、請求項２６〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、ヒトタンパク質である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、下等真核生物タンパク質である、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記下等真核生物が、真菌、トリパノソーマ、または原生動物である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記下等真核生物が、Ｔｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｈａｒｚｉａｎｕｍ、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓからなる群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記ターゲット糖タンパク質のマンノシル残基の少なくとも約３０％が、リン酸化される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記糖タンパク質の追加のプロセッシングをさらに含む、請求項１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記追加のプロセッシングが、インビトロで行われる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記追加のプロセッシングが、インビボで行われる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記追加のプロセッシングが、前記修飾糖タンパク質への異種部分の付加を含む、請求項３７〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記異種部分が、ポリマーまたは担体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記追加のプロセッシングが、前記改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質の酵素的または化学的処理を含む、請求項３７〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記追加のプロセッシングが、マンノシダーゼ、マンナナーゼ、ホスホジエステラーゼ、グルコシダーゼまたはグリコシルトランスフェラーゼでの前記改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質の処理を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
前記追加のプロセッシングが、フッ化水素酸での前記改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質の処理を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記追加のプロセッシングが、前記改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質のリン酸化を含む、請求項３７〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
請求項１〜４５のいずれかに記載の方法によって生産される、改変Ｎ−グリコシル化を有する単離されたタンパク質。
【請求項４７】
医薬的に許容される担体または賦形剤と、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法によって生産される、改変Ｎ−グリコシル化を有する単離されたタンパク質と、を含む医薬組成物。
【請求項４８】
少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むように遺伝子操作された、単離されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞であって、ここで、該少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体の発現を含む、単離された細胞。
【請求項４９】
前記Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすタンパク質またはその生物学的に活性な変異体が、ＭＮＮ４またはＭＮＮ４の生物学的に活性な変異体である、請求項４８に記載の単離された細胞。
【請求項５０】
前記Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすタンパク質またはその生物学的に活性な変異体が、ＰＮＯ１またはＰＮＯ１の生物学的に活性な変異体である、請求項４８に記載の単離された細胞。
【請求項５１】
前記Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物活性変体が、ＭＮＮ６またはＭＮＮ６の生物学的に活性な変異体である、請求項４８に記載の単離された細胞。
【請求項５２】
前記細胞が、外鎖伸長部（ＯＣＨ１）活性の欠損を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項４８に記載の単離された細胞。
【請求項５３】
前記さらに遺伝子操作された細胞が、以下：
前記ＯＣＨ１活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の欠失；
前記ＯＣＨ１活性を有する突然変異形態のタンパク質の発現；または
前記ＯＣＨ１活性を有するタンパク質の機能的発現に干渉するＲＮＡ分子の導入もしくは発現
を含む、請求項５２に記載の単離された細胞。
【請求項５４】
前記細胞が、少なくとも１つの追加の修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項４８〜５３のいずれかに記載の単離された細胞。
【請求項５５】
前記少なくとも１つの追加の修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリコシル化活性の欠損を含む、請求項５４に記載の単離された細胞。
【請求項５６】
前記欠損が、ＡＬＧ３活性の欠損である、請求項５５に記載の単離された細胞。
【請求項５７】
前記修飾が、前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の欠失を含む、請求項５４に記載の単離された細胞。
【請求項５８】
前記修飾が、前記Ｎ−グリコシル化活性を有する突然変異形態のタンパク質の発現を含む、請求項５４に記載の単離された細胞。
【請求項５９】
前記修飾が、前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質の機能的発現に干渉するＲＮＡ分子の導入または発現を含む、請求項５４に記載の単離された細胞。
【請求項６０】
前記修飾が、Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質の発現を含む、請求項５４に記載の単離された細胞。
【請求項６１】
発現される前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、アルファ−マンノシダーゼである、請求項６０に記載の単離された細胞。
【請求項６２】
前記さらに遺伝子操作された細胞が、少なくとも３つの追加の修飾Ｎ−グリコシル化活性を含む、請求項５４に記載の単離された細胞。
【請求項６３】
前記Ｎ−グリコシル化活性を有するタンパク質が、ヒトタンパク質である、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載の単離された細胞。
【請求項６４】
請求項４７に記載の組成物であって、該組成物の被験体への投与によって治療することができる障害を治療するためのものであり、ここで、該被験体は、該組成物の投与によって治療することができる疾患を有するまたは有することが疑われる、組成物。
【請求項６５】
前記障害が、代謝異常である、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
前記代謝異常が、リソソーム貯蔵障害（ＬＳＤ）である、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記リソソーム貯蔵障害が、ゴーシェ病、テイ−サックス病、ポンペ病、ニーマン−ピック病、またはファブリ病である、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記タンパク質が、ＬＳＤに関連したものである、請求項６４〜６７のいずれかに記載の組成物。
【請求項６９】
前記タンパク質が、グルコセレブロシダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼまたはアルファ−ガラクトシダーゼである、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記タンパク質が、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ヘキソサミニダーゼ、ベータ−Ｄ−マンノシダーゼ、アルファ−Ｌ−フコシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、アリールスルファターゼＡ、アルファ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、アスパルチルグルコサミニダーゼ、イズロネート−２−スルファターゼ、アルファ−グルコサミニド−Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、ベータ−Ｄ−グルコロニダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アルファ−Ｌ−マンノシダーゼ、アルファ−ノイラミニダーゼ、ホスホトランスフェラーゼ、酸性リパーゼ、酸性セラミダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、チオエステラーゼ、カテプシンＫ、およびリポタンパク質リパーゼからなる群より選択される、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記被験体が、改変Ｎ−グリコシル化を有するタンパク質の投与によって治療することができる疾患を有すると決定されている、請求項６４〜７０のいずれかに記載の方法。
【請求項７２】
前記被験体がヒトである、請求項６４〜７１のいずれかに記載の組成物。
【請求項７３】
少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞から調製された細胞溶解産物とターゲットタンパク質を接触させることを含み、該細胞溶解産物と該ターゲットタンパク質の接触が、結果として、改変されたＮ−グリコシル化形態の該ターゲットタンパク質を生じさせ、ここで、該少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体の発現を含む、改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質を生産する方法。
【請求項７４】
Ｎ−グリコシル化活性を有する１つ以上のタンパク質とターゲットタンパク質を接触させることを含み、該Ｎ−グリコシル化活性を有する１つ以上のタンパク質が、少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞から得られ、および該Ｎ−グリコシル化活性を有する１つ以上のタンパク質と該ターゲット分子の接触が、結果として、改変されたＮ−グリコシル化形態の該ターゲットタンパク質を生じさせ、ここで、該少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体の発現を含む、改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質を生産する方法。
【請求項７５】
Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞の実質的に純粋な培養物であって、これらのうちの実質的な数が少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性を含むように遺伝子操作され、ここで、該少なくとも１つの修飾Ｎ−グリコシル化活性が、Ｎ−グリカンのマンノシルリン酸化を果たすことができるタンパク質またはその生物学的に活性な変異体の発現を含む、培養物。
【請求項７６】
細胞の１つ以上の亜集団を含有し、それぞれの亜集団が、異なる修飾グリコシル化活性を含む、請求項７５に記載の細胞の実質的に純粋な培養物。