【手続補正書】
【提出日】平成27年10月21日(2015.10.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
変異ペプチド配列を含む単離されたＧ−ＣＳＦポリペプチドであって、前記変異ペプチド配列が、前記単離されたポリペプチドに対応する野生型ポリペプチドには存在しないＯ結合型グリコシル化部位をコードし、前記Ｏ結合型グリコシル化部位が、プロリン残基からの距離がアミノ酸残基１０個未満であり、前記結合型グリコシル化部位が、ＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼによって認識される、単離されたＧ−ＣＳＦポリペプチド。
【請求項２】
前記Ｇ−ＣＳＦポリペプチドが、Ｍ１ＸｎＴＰＬＧＰまたはＭ１ＢｏＰＺｍＸｎＴＰＬＧＰ
（式中、上付き文字は、野生型Ｇ−ＣＳＦアミノ酸配列（配列番号３）におけるそのアミノ酸の位置を示し、下付き文字ｎおよびｍは、０〜３から選択される整数であり、
ＸおよびＢのうちの少なくとも１つはＴｈｒまたはＳｅｒであり、
ＸおよびＢのうちの複数がＴｈｒまたはＳｅｒであるとき、これらの部分のアイデンティティは独立に選択され、
Ｚは、グルタミン酸または任意の非荷電アミノ酸から選択される）
の式で表される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記変異ペプチド配列が、ＭＶＴＰＬＧＰ、ＭＱＴＰＬＧＰ、ＭＩＡＴＰＬＧＰ、ＭＡＴＰＬＧＰ、ＭＰＴＱＧＡＭＰＬＧＰ、ＭＶＱＴＰＬＧＰ、ＭＱＳＴＰＬＧＰ、ＭＧＱＴＰＬＧＰ、ＭＡＰＴＳＳＳＰＬＧＰ、およびＭＡＰＴＰＬＧＰＡからなる配列群から選択される、請求項２に記載の変異Ｇ−ＣＳＦポリペプチド。
【請求項４】
前記Ｇ−ＣＳＦポリペプチドが、Ｍ１ＴＰＸｎＢｏＯｒＰ
（式中、上付き文字は、配列番号３におけるそのアミノ酸の位置を示し、
下付き文字ｎ、ｏ、およびｒは、０〜３から選択される整数であり、
Ｘ、Ｂ、およびＯのうちの少なくとも１つはＴｈｒまたはＳｅｒであり、
Ｘ、Ｂ、およびＯのうちの複数がＴｈｒまたはＳｅｒであるとき、これらの部分のアイデンティティはそれぞれ独立に選択される）
の式で表される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記変異ペプチド配列が、ＭＴＰＴＬＧＰ、ＭＴＰＴＱＬＧＰ、ＭＴＰＴＳＬＧＰ、ＭＴＰＴＱＧＰ、ＭＴＰＴＳＳＰ、Ｍ１ＴＰＱＴＰ、Ｍ１ＴＰＴＧＰ、Ｍ１ＴＰＬＴＰ、Ｍ１ＴＰＮＴＧＰ、ＭＴＰＬＧＰ（Ｇ−ＣＳＦ  ｍｕｔ  ＃４）、Ｍ１ＴＰＶＴＰ、Ｍ１ＴＰＭＶＴＰ、およびＭＴ１Ｐ２ＴＱＧＬ３Ｇ４Ｐ５Ａ６Ｓ７からなる配列群から選択される、請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記Ｇ−ＣＳＦポリペプチドが、ＬＧＸ５３ＢｏＬＧＩ
（式中、上付き文字は、野生型Ｇ−ＣＳＦアミノ酸配列（配列番号３）におけるそのアミノ酸の位置を示し、
Ｘは、ヒスチジン、セリン、アルギニン、グルタミン酸、またはチロシンであり、
Ｂは、トレオニンまたはセリンであり、
ｏは、０〜３の整数である）
の式で表される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記変異ペプチド配列が、ＬＧＨＴＬＧＩ、ＬＧＳＳＬＧＩ、ＬＧＹＳＬＧＩ、ＬＧＥＳＬＧＩ、およびＬＧＳＴＬＧＩからなる配列群から選択される、請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記Ｇ−ＣＳＦポリペプチドが、Ｐ１２９ＺｍＪｑＯｒＸｎＰＴ
（式中、上付き文字は、野生型Ｇ−ＣＳＦアミノ酸配列（配列番号３）におけるそのアミノ酸の位置を示し、
Ｚ、Ｊ、Ｏ、およびＸは、ＴｈｒまたはＳｅｒからそれぞれ独立に選択され、
ｍ、ｑ、ｒ、およびｎは、０〜３からそれぞれ独立に選択される整数である）
の式で表される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記変異ペプチド配列が、Ｐ１２９ＡＴＱＰＴ、Ｐ１２９ＴＬＧＰＴ、Ｐ１２９ＴＱＧＰＴ、Ｐ１２９ＴＳＳＰＴ、Ｐ１２９ＴＱＧＡＰＴ、Ｐ１２９ＮＴＧＰＴ、ＰＡＬＱＰＴＱＴ、Ｐ１２９ＡＬＴＰＴ、Ｐ１２９ＭＶＴＰＴ、Ｐ１２９ＡＳＳＴＰＴ、Ｐ１２９ＴＴＱＰ、Ｐ１２９ＮＴＬＰ、Ｐ１２９ＴＬＱＰ、ＭＡＰ１２９ＡＴＱＰＴＱＧＡＭ、およびＭＰ１２９ＡＴＴＱＰＴＱＧＡＭからなる配列群から選択される、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記Ｇ−ＣＳＦポリペプチドが、ＰＺｍＵｓＪｑＰ６１ＯｒＸｎＢｏＣ
（式中、上付き文字は、野生型Ｇ−ＣＳＦアミノ酸配列（配列番号３）におけるそのアミノ酸の位置を示し、
Ｚ、Ｊ、Ｏ、およびＵのうちの少なくとも１つは、トレオニンまたはセリンから選択され、
Ｚ、Ｊ、Ｏ、およびＵのうちの複数がトレオニンまたはセリンであるとき、各々はそれぞれ独立に選択され、
ｍ、ｓ、ｑ、ｒ、ｎ、およびｏは、０〜３からそれぞれ独立に選択される整数である）
の式で表される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記変異ペプチド配列が、Ｐ６１ＴＳＳＣ、Ｐ６１ＴＳＳＡＣ、ＬＧＩＰＴＡ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＩＰＴＱ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＩＰＴＱＧ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＩＰＱＴ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＩＰＴＳ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＩＰＴＳ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＩＰＴＱＰ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＴＰＷＡＰ６１ＬＳＳＣ、ＬＧＴＰＦＡ  Ｐ６１ＬＳＳＣ、Ｐ６１ＦＴＰ、およびＳＬＧＡＰ５８ＴＡＰ６１ＬＳＳからなる配列群から選択される、請求項１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記Ｇ−ＣＳＦポリペプチドが、θａＧｐＪｑＯｒＰ１７５ＸｎＢｏＺｍＵｓΨｔ
（式中、上付き文字は、野生型Ｇ−ＣＳＦアミノ酸配列（配列番号３）におけるそのアミノ酸の位置を示し、
Ｚ、Ｕ、Ｏ、Ｊ、Ｇ、θ、Ｂ、およびＸのうちの少なくとも１つはトレオニンまたはセリンであり、
Ｚ、Ｕ、Ｏ、Ｊ、Ｇ、θ、Ｂ、およびＸのうちの複数がトレオニンまたはセリンであるとき、それらはそれぞれ独立に選択され、
θは場合によってはＲであり、Ｇは場合によってはＨであり、
記号Ψは、任意の非荷電アミノ酸残基またはグルタミン酸を表し、ａ、ｐ、ｑ、ｒ、ｎ、ｏ、ｍ、ｓ、およびｔは、０〜３からそれぞれ独立に選択される整数である）
の式で表される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記変異ペプチド配列が、ＲＨＬＡＱＴＰ１７５、ＲＨＬＡＧＱＴＰ１７５、ＱＰ１７５ＴＱＧＡＭＰ、ＲＨＬＡＱＴＰ１７５ＡＭ、ＱＰ１７５ＴＳＳＡＰ、ＱＰ１７５ＴＳＳＡＰ、ＱＰ１７５ＴＱＧＡＭＰ、ＱＰ１７５ＴＱＧＡＭ、ＱＰ１７５ＴＱＧＡ、ＱＰ１７５ＴＶＭ、ＱＰ１７５ＮＴＧＰ、およびＱＰ１７５ＱＴＬＰからなる配列群から選択される、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
配列Ｐ１３３ＴＱＴＡＭＰ１３９、Ｐ１３３ＴＱＧＴＭＰ、Ｐ１３３ＴＱＧＴＮＰ、Ｐ１３３ＴＱＧＴＬＰ、およびＰＡＬＱＰ１３３ＴＱＴＡＭＰＡから選択される変異ペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
請求項１に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項１６】
請求項１５に記載の核酸を含む発現カセット。
【請求項１７】
請求項１５に記載の核酸を含む細胞。
【請求項１８】
以下から選択される式を有する、請求項１に記載のポリペプチド
【化１】
2015110650.tif 000001
（式中、ＡＡは、前記変異ペプチド配列の内部にある、ヒドロキシル部分を含むアミノ酸側鎖であり、Ｘは、修飾基またはサッカリル部分である）。
【請求項１９】
Ｘが、シアリル、ガラクトシル、およびＧａｌ−Ｓｉａ部分から選択される基を含み、前記シアリル、ガラクトシル、およびＧａｌ−Ｓｉａのうちの少なくとも１つが修飾基を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
Ｘが以下の部分
【化２】
2015110650.tif 000002
（式中、Ｄは、−ＯＨおよびＲ１−Ｌ−ＨＮ−から選択されるメンバーであり、
Ｇは、Ｒ１−Ｌ−および−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択されるメンバーであり、
Ｒ１は、直鎖状または分枝状のポリ（エチレングリコール）残基を含む部分から選択されるメンバーを含む部分であり、
Ｌは、結合、置換または非置換のアルキル、および置換または非置換のヘテロアルキルから選択されるメンバーであるリンカーであり、
ＤがＯＨであるとき、ＧはＲ１−Ｌ−であり、Ｇが−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであるとき、ＤはＲ１−Ｌ−ＮＨ−である）
を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
Ｘが以下の構造
【化３】
2015110650.tif 000003
（式中、Ｌは、置換もしくは非置換のアルキル、または置換もしくは非置換のヘテロアルキル基であり、ｎは、０〜約５００の整数から選択される）
を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
Ｘが以下の構造
【化４】
2015110650.tif 000004
（式中、ｓは、０〜２０の整数から選択される）
を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１に記載のポリペプチドの複合糖質を作製する方法であって、
（ａ）遺伝子組換えによってポリペプチドを生産するステップと、
（ｂ）前記Ｏ結合型グリコシル化部位において、修飾された糖で前記ポリペプチドを酵素的にグリコシル化するステップと、を含む方法。
【請求項２４】
修飾された糖と複合糖質を形成している請求項１に記載のポリペプチドを有効量含む、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の医薬組成物。
【請求項２５】
前記修飾された糖が、ポリ（エチレングリコール）およびメトキシポリ（エチレングリコール）（ｍ−ＰＥＧ）から選択されるメンバーで修飾されている、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
治療を必要とする対象にＧ−ＣＳＦによる治療を提供する方法であって、請求項２４に記載の医薬組成物を有効量、前記対象に投与するステップを含む方法。