【手続補正書】
【提出日】平成27年3月26日(2015.3.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）機能性分子を含有し、表面にチオール基を有するシリカナノ粒子と、マレイミド基及びアミノ基を有するリンカー分子とを溶媒中に共存させ、これにより前記チオール基と前記マレイミド基との間でチオエーテル結合を形成させて、リンカー分子が結合した機能性分子含有シリカナノ粒子を得る工程、及び
ｂ）前記のリンカー分子が結合した機能性分子含有シリカナノ粒子と、カルボジイミドと、抗体とを水系溶媒中に共存させ、前記リンカー分子が有するアミノ基と、前記抗体が有するカルボキシル基との間でアミド結合を形成させる工程
を含む、標識抗体の製造方法。
【請求項２】
前記抗体がフラグメント抗体、一本鎖抗体、及びダイアボディーから選ばれる抗体である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記フラグメント抗体がＦ（ａｂ’）２又はＦａｂであり、前記一本鎖抗体がｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、又は、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を含むポリアミノ酸である、請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記抗体がフラグメント抗体である、請求項２又は３に記載の製造方法。
【請求項５】
工程ａ）における溶媒が非プロトン性溶媒である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
非プロトン性溶媒が、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ピリジン、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−シクロヘキシルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、及びＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドから選ばれる、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
リンカー分子の構造が、２価の脂肪族基もしくはアリーレン基又はこれらの組み合わせを介してマレイミド基とアミノ基とが連結した構造である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
標識抗体の平均粒径が２０〜５００ｎｍである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
機能性分子が、蛍光分子、吸光分子、磁性分子、放射性分子及びｐＨ感受性分子からなる群から選ばれる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
機能性分子を含有し、表面にチオール基を有するシリカナノ粒子において、表面に存在するチオール基の密度が０．００２〜０．２個／ｎｍ２であり、該チオール基の量により抗体の結合量が制御される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
機能性分子を含有するシリカナノ粒子を標識粒子とし、その表面にリンカーを介して抗体が結合してなる標識抗体であって、
前記の機能性分子を含有するシリカナノ粒子と前記リンカーとがチオエーテル結合により連結し、前記抗体と前記リンカーとの連結構造が、＊−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（＊は抗体側を示す。）である、標識抗体。
【請求項１２】
前記抗体がフラグメント抗体、一本鎖抗体、及びダイアボディーから選ばれる抗体である、請求項１１に記載の標識抗体。
【請求項１３】
前記フラグメント抗体がＦ（ａｂ’）２又はＦａｂであり、前記一本鎖抗体がｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、又は、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を含むポリアミノ酸である、請求項１２に記載の標識抗体。
【請求項１４】
前記抗体がフラグメント抗体である、請求項１２又は１３に記載の標識抗体。
【請求項１５】
リンカーが、２価の脂肪族基もしくはアリーレン基又はこれらの組み合わせを有する、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の標識抗体。
【請求項１６】
平均粒径が２０〜５００ｎｍである、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の標識抗体。
【請求項１７】
請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の標識抗体が分散媒中に分散してなるコロイド。
【請求項１８】
分散媒が緩衝液である、請求項１７に記載のコロイド。
【請求項１９】
請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の標識抗体を含む分析試薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明の課題は下記の手段により達成された。
＜１＞
ａ）機能性分子を含有し、表面にチオール基を有するシリカナノ粒子と、マレイミド基及びアミノ基を有するリンカー分子とを溶媒中に共存させ、これにより前記チオール基と前記マレイミド基との間でチオエーテル結合を形成させて、リンカー分子が結合した機能性分子含有シリカナノ粒子を得る工程、及び
ｂ）前記のリンカー分子が結合した機能性分子含有シリカナノ粒子と、カルボジイミドと、抗体とを水系溶媒中に共存させ、前記リンカー分子が有するアミノ基と、前記抗体が有するカルボキシル基との間でアミド結合を形成させる工程
を含む、標識抗体の製造方法。
＜２＞
前記抗体がフラグメント抗体、一本鎖抗体、及びダイアボディーから選ばれる抗体である、前記＜１＞に記載の製造方法。
＜３＞
前記フラグメント抗体がＦ（ａｂ’）２又はＦａｂであり、前記一本鎖抗体がｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、又は、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を含むポリアミノ酸である、前記＜２＞に記載の製造方法。
＜４＞
前記抗体がフラグメント抗体である、前記＜２＞又は＜３＞に記載の製造方法。
＜５＞
工程ａ）における溶媒が非プロトン性溶媒である、前記＜１＞〜＜４＞のいずれか１項に記載の標識抗体の製造方法。
＜６＞
非プロトン性溶媒が、ジメチルスルホキシド、スルホラン、ピリジン、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−シクロヘキシルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、及びＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドから選ばれる、前記＜５＞に記載の製造方法。
＜７＞
リンカー分子の構造が、２価の脂肪族基もしくはアリーレン基又はこれらの組み合わせを介してマレイミド基とアミノ基とが連結した構造である、前記＜１＞〜＜６＞のいずれか１項に記載の製造方法。
＜８＞
標識抗体の平均粒径が２０〜５００ｎｍである、前記＜１＞〜＜７＞のいずれか１項に記載の製造方法。
＜９＞
機能性分子が、蛍光分子、吸光分子、磁性分子、放射性分子及びｐＨ感受性分子からなる群から選ばれる、前記＜１＞〜＜８＞のいずれか１項に記載の製造方法。
＜１０＞
機能性分子を含有し、表面にチオール基を有するシリカナノ粒子において、表面に存在するチオール基の密度が０．００２〜０．２個／ｎｍ２であり、該チオール基の量により抗体の結合量が制御される、前記＜１＞〜＜９＞のいずれか１項に記載の製造方法。
＜１１＞
機能性分子を含有するシリカナノ粒子を標識粒子とし、その表面にリンカーを介して抗体が結合してなる標識抗体であって、
前記の機能性分子を含有するシリカナノ粒子と前記リンカーとがチオエーテル結合により連結し、前記抗体と前記リンカーとの連結構造が、＊−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（＊は抗体側を示す。）である、標識抗体。
＜１２＞
前記抗体がフラグメント抗体、一本鎖抗体、及びダイアボディーから選ばれる抗体である、前記＜１１＞に記載の標識抗体。
＜１３＞
前記フラグメント抗体がＦ（ａｂ’）２又はＦａｂであり、前記一本鎖抗体がｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、又は、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域を含むポリアミノ酸である、前記＜１２＞に記載の標識抗体。
＜１４＞
前記抗体がフラグメント抗体である、前記＜１２＞又は＜１３＞に記載の標識抗体。
＜１５＞
リンカーが、２価の脂肪族基もしくはアリーレン基又はこれらの組み合わせを有する、前記＜１１＞〜＜１４＞のいずれか１項に記載の標識抗体。
＜１６＞
平均粒径が２０〜５００ｎｍである、前記＜１１＞〜＜１５＞のいずれか１項に記載の標識抗体。
＜１７＞
前記＜１１＞〜＜１６＞のいずれか１項に記載の標識抗体が分散媒中に分散してなるコロイド。
＜１８＞
分散媒が緩衝液である、前記＜１７＞に記載のコロイド。
＜１９＞
前記＜１１＞〜＜１６＞のいずれか１項に記載の標識抗体を含む分析試薬。