(57)【要約】  本発明は、化学的及び物理学的安定性に優れる、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸及びその薬理学的に許容される塩の結晶並びにその医薬用途を提供することを目的としている。本発明は、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸又はその薬理学的に許容される塩の結晶を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸又はその薬理学的に許容される塩の結晶。
【請求項２】
粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）６．２、１３．３、１７．０、１９．６、２２．２及び２３．０°にピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項３】
示差熱熱重量同時測定において、２３７〜２４７℃に熱吸収ピークを有する、請求項２記載の結晶。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）５．７、６．１、７．９、１２．２、１２．３、１２．９、１３．４、１６．２及び１７．０°にピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）５．５、５．９、７．６、１２．０、１２．５、１３．２、１６．６及び２３．１°にピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項６】
Ｘ線回折示差走査熱量同時測定において、回折角２θ（°）１２．０、１３．８、１８．１、１９．３、１９．９及び２２．８°にピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項７】
粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）１１．６、１２．０及び１７．１°にピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）５．７、６．２、１０．９、１１．５、１３．３、１７．０及び１９．６°にピークを有する、請求項１記載の結晶。
【請求項９】
前記塩は、カリウム塩である、請求項１記載の結晶。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）４．１、７．６、８．２、８．８、１０．０、１４．２、１５．２及び１９．２°にピークを有する、請求項９記載の結晶。
【請求項１１】
水和物結晶である、請求項９又は１０記載の結晶。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項記載の結晶を有効成分として含有する、医薬。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項記載の結晶を有効成分として含有する、炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、多発性硬化症又は白血病の治療剤又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリシン誘導体の結晶及びその医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品は、流通や保管等の長期過程に渡って品質が保持される必要があり、有効成分となる化合物又はその薬理学的に許容される塩には、化学的及び物理学的に高い安定性が要求されている。このため、医薬品の有効成分となる化合物又はその薬理学的に許容される塩は、非晶質体に比べて高い安定性が期待できる結晶が採用されることが一般的である。【０００３】
医薬品の有効成分となる化合物の結晶をスクリーニングする過程においては、結晶を得るための最適条件及び塩種を見出すことが困難なだけでなく、結晶が得られた場合であっても、しばしば結晶多形の存在が問題となることが多い。それぞれの有効成分となる化合物の結晶形は、分子単位では同一構造であるにも関わらず分子充填様式が異なるために、化学的及び物理学的な安定性に差異を生じるからである。【０００４】
また、医薬品の有効成分として採用する結晶形の選択を誤れば、保管時の外部環境によって純度低下、水和度の変化、結晶形転移等が起こり、化合物を一定の品質に維持することが困難となるため、結晶形によっては薬効の低下や副作用等の不測の事態を招くことになる。このため、医薬品の有効成分となる化合物の結晶の取得に成功した場合には、その結晶多形についても厳密な評価検討が必要とされている。【０００５】
一方、以下の化学式（Ｉ）で示される（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸は、炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、多発性硬化症及び白血病に対しての治療効果を発揮することが知られている（特許文献１〜４）。
【化１】
2014051056.tif 000002
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００６／０６８２１３号
【特許文献２】国際公開第２００７／１４５２８２号
【特許文献３】国際公開第２００７／１４８６４８号
【特許文献４】国際公開第２００７／１４８６７６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、化合物の構造から、結晶多形の有無、結晶を形成する塩種又は安定な結晶形を予測することは不可能であり、さらに結晶を形成できない化合物や安定に保存可能な結晶が得られない化合物も存在する場合もあることから、化合物又はその薬理学的に許容される塩ごとに結晶を形成させる条件を種々検討する必要がある。また、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸については、医薬品の有効成分として高い有効性が認められているにも関わらず、その薬理学的に許容される塩を含めた結晶多形の存在はおろか、そもそも結晶の形成の可否すら知られていないのが現状であり、最適な結晶形の取得が医薬品として開発する上での重要な課題となっていた。【０００８】
そこで本発明は、化学的及び物理学的安定性に優れる、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸及びその薬理学的に許容される塩の結晶並びにその医薬用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意研究を重ねた結果、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸の結晶並びにその薬理学的に許容される塩及びその水和物の結晶の取得に成功し、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸としてはＡ形、Ｂ形、Ｃ形、Ｄ形、Ｆ形、Ｇ形及びＨ形結晶の結晶多形が存在することを見出すとともに、そのカリウム塩にはＥ形結晶が存在することを見出し、本発明を完成させた。Ａ形、Ｃ形、Ｄ形、Ｅ形、Ｇ形及びＨ形結晶は、高温条件下における物理学的安定性に優れ、Ｂ形及びＥ形結晶は、晶析工程において、光学純度の向上が認められ、精製効率の面で極めて優れ、中でもＡ形結晶は、低吸湿性であり、かつ各種製剤基剤との接触下でも化学的に極めて安定な特性を示すものであった。【００１０】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（１４）に記載した結晶及びその医薬用途を提供する。
（１）  （Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸又はその薬理学的に許容される塩の結晶。
（２）  粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）６．２、１３．３、１７．０、１９．６、２２．２及び２３．０°にピークを有する、上記（１）に記載の結晶。
（３）  示差熱熱重量同時測定において、２３７〜２４７℃に熱吸収ピークを有する、上記（２）に記載の結晶。
（４）  粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）５．７、６．１、７．９、１２．２、１２．３、１２．９、１３．４、１６．２及び１７．０°にピークを有する、上記（１）に記載の結晶。
（５）  粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）５．５、５．９、７．６、１２．０、１２．５、１３．２、１６．６及び２３．１°にピークを有する、上記（１）に記載の結晶。
（６）  Ｘ線回折示差走査熱量同時測定において、回折角２θ（°）１２．０、１３．８、１８．１、１９．３、１９．９及び２２．８°にピークを有する、上記（１）に記載の結晶。
（７）  粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）１１．６、１２．０及び１７．１°にピークを有する、上記（１）に記載の結晶。
（８）  粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）５．７、６．２、１０．９、１１．５、１３．３、１７．０及び１９．６°にピークを有する、上記（１）に記載の結晶。
（９）  上記塩は、カリウム塩である、上記（１）に記載の結晶。
（１０）  粉末Ｘ線回折において、回折角２θ（°）４．１、７．６、８．２、８．８、１０．０、１４．２、１５．２及び１９．２°にピークを有する、上記（９）に記載の結晶。
（１１）  水和物結晶である、上記（９）又は（１０）に記載の結晶。
（１２）  上記（１）〜（１１）のいずれかに記載の結晶を有効成分として含有する、医薬。
（１３）  上記（１）〜（１１）のいずれかに記載の結晶を有効成分として含有する、炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、多発性硬化症又は白血病の治療剤又は予防剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の結晶は、非晶質体に比べて化学的及び物理学的安定性に優れ、医薬品の有効成分として好適に使用できる。また本発明の結晶は、炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、多発性硬化症又は白血病の治療剤又は予防剤の有効成分として利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＡ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【図２】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＡ形結晶の示差熱熱重量同時測定により得られた示差熱分析曲線及び熱重量曲線を示す図である。
【図３】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のカリウム塩のＥ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【図４】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のカリウム塩のＥ形結晶の示差熱熱重量同時測定により得られた示差熱分析曲線及び熱重量曲線を示す図である。
【図５】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＤ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【図６】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＢ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【図７】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＣ形結晶のＸ線回折示差走査熱量同時測定により得られたＸ線回折を示す図である。
【図８】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＦ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【図９】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＧ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【図１０】（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸のＨ形結晶の粉末Ｘ線回折測定により得られた粉末Ｘ線回折図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の結晶は、（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸（以下、「本化合物」と表記することがある）の結晶又はその薬理学的に許容される塩の結晶であることを特徴としており、これらの水和物結晶も含まれるものである。（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸の結晶の代表的なものとしては、以下に詳細に説明するＡ形結晶、Ｂ形結晶、Ｃ形結晶、Ｄ形結晶、Ｆ形結晶、Ｇ形結晶及びＨ形結晶を挙げることができ、そのカリウム塩の結晶としては、Ｅ形結晶を挙げることができる。
【００１４】
（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸又はその薬理学的に許容される塩のそれぞれの結晶形は、粉末Ｘ線回折測定若しくは粉末Ｘ線回折示差走査熱量同時測定（以下、「ＸＲＤ−ＤＳＣ」）により得られる粉末Ｘ線回折図（以下、「ＸＲＤ回折図」）が示す特徴的なピーク又は示差熱熱重量同時測定（以下、「ＴＧ−ＤＴＡ」）により得られる示差熱分析曲線（以下、「ＤＴＡ曲線」）が示す吸熱若しくは発熱ピークによって識別することができる。なお、ＸＲＤ回折図及びＤＴＡ曲線は測定条件によって多少変わり得るものであり、例えば、ＸＲＤ回折図における回折角２θは、一般的に±０．２°程度の誤差は許容されるものである。
【００１５】
本化合物の薬理学的に許容される塩としては、塩基又は酸との塩が挙げられ、塩基との塩としては、例えば、ナトリウム塩若しくはカリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩若しくはマグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニア、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピペリジン若しくはジシクロヘキシルアミン等のアミン塩、又は、アルギニン若しくはリジン等の塩基性アミノ酸塩が挙げられ、酸との塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩若しくはリン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、シュウ酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、コハク酸塩若しくはパモ酸塩等の有機カルボン酸塩又はメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸若しくはカンファースルホン酸等の有機スルホン酸塩が挙げられ、ナトリウム塩、カリウム塩、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−トルエンスルホン酸塩が好ましく、カリウム塩がより好ましい。
【００１６】
本化合物のＡ形結晶は、図１に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）６．２、１３．３、１７．０、１９．６、２２．２及び２３．０°に特徴的なピークを有する。また、本化合物のＡ形結晶は、図２に示すＤＴＡ曲線を与え、２３９℃、すなわち２３７〜２４７℃の範囲に吸熱ピークを有する。
【００１７】
本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は、図３に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）４．１、７．６、８．２、８．８、１０．０、１４．２、１５．２及び１９．２°に特徴的なピークを有する。また、本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は、図４に示す熱重量曲線を与え、２５℃から１２４℃付近に加熱することで３．５重量％、すなわち２〜７重量％の吸脱着容易な水の蒸発による重量減少を示し、同じく図４に示すＤＴＡ曲線にて、１５０〜２００℃の範囲になだらかな吸熱ピークを有する。
【００１８】
本化合物のＤ形結晶は、図５に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）５．７、６．１、７．９、１２．２、１２．３、１２．９、１３．４、１６．２及び１７．０°に特徴的なピークを有する。
【００１９】
本化合物のＢ形結晶は、図６に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）５．５、５．９、７．６、１２．０、１２．５、１３．２、１６．６及び２３．１°に特徴的なピークを有する。
【００２０】
本化合物のＣ形結晶は、図７に示すように、ＸＲＤ−ＤＳＣによるＸＲＤ回折図において、回折角２θ（°）１２．０、１３．８、１８．１、１９．３、１９．９及び２２．８°に特徴的なピークを有する。
【００２１】
本化合物のＦ形結晶は、図８に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）５．９、７．９、１１．７、１２．４、１２．７、１６．７、１８．２、２１．１及び２３．８°に特徴的なピークを有する。
【００２２】
本化合物のＧ形結晶は、図９に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）１１．６、１２．０及び１７．１°に特徴的なピークを有する。
【００２３】
本化合物のＨ形結晶は、図１０に示すように、粉末Ｘ線回折測定によるＸＲＤ回折図において回折角２θ（°）５．７、６．２、１０．９、１１．５、１３．３、１７．０及び１９．６°に特徴的なピークを有する。
【００２４】
Ａ形、Ｂ形、Ｄ形、Ｆ形及びＧ形結晶の粉末Ｘ線回折測定は、粉末Ｘ線回折装置を用いて、以下の条件で測定することができる。なお、測定試料は、試料板（材質：ケイ素；深さ：０．２ｍｍ）に試料を充填し、試料表面を平らにならして作製される。
【００２５】
≪粉末Ｘ線回折条件≫
Ｘ線源                ：  ＣｕＫα線
＊湾曲結晶モノクロメータ（グラファイト）を使用
出力                  ：  ４０ｋＶ／５０ｍＡ
発散スリット          ：  １／２°
発散縦制限スリット    ：  ５ｍｍ
散乱スリット          ：  １／２°
受光スリット          ：  ０．１５ｍｍ
検出器                ：  シンチレーションカウンタ
スキャン方式          ：  ２θ／θスキャン、連続スキャン
測定範囲（２θ）      ：  ３〜３５°
スキャン速度（２θ）  ：  ４°／ｍｉｎ
計数ステップ（２θ）  ：  ０．０２°
【００２６】
Ｅ形結晶の粉末Ｘ線回折測定は、粉末Ｘ線回折装置を用いて、以下の条件で測定することができる。なお、測定試料は、試料板（材質：ケイ素；深さ：０．２ｍｍ）に試料を充填し、試料表面を平らにならして作製される。
【００２７】
≪粉末Ｘ線回折条件≫
Ｘ線源                ：  ＣｕＫα線
＊湾曲結晶モノクロメータ（グラファイト）を使用
出力                  ：  ４０ｋＶ／５０ｍＡ
発散スリット          ：  １／２°
発散縦制限スリット    ：  ５ｍｍ
散乱スリット          ：  １／２°
受光スリット          ：  ０．１５ｍｍ
検出器                ：  シンチレーションカウンタ
スキャン方式          ：  ２θ／θスキャン、連続スキャン
測定範囲（２θ）      ：  ３〜３５°
スキャン速度（２θ）  ：  ５°／ｍｉｎ
計数ステップ（２θ）  ：  ０．１０°
【００２８】
上記の結晶は、カリウム塩のＥ形の水和物結晶であってもよく、カリウム塩のＥ形結晶と同様の化学的及び物理学的安定性を保持するものである。ここで、カリウム塩のＥ形の水和物結晶を形成している結晶水は、結晶構造の隙間に取り込まれた層間水又は中に閉じ込められたクラスレートであり、湿度又は温度変化に対して含水量が連続的に変化する。
【００２９】
Ｈ形結晶の粉末Ｘ線回折測定は、粉末Ｘ線回折装置を用いて、以下の条件で測定することができる。なお、測定試料は、試料板（材質：ケイ素；深さ：０．２ｍｍ）に試料を充填し、試料表面を平らにならして作製される。
【００３０】
≪粉末Ｘ線回折条件≫
Ｘ線源                ：  ＣｕＫα線
＊湾曲結晶モノクロメータ（グラファイト）を使用
出力                  ：  ４０ｋＶ／５０ｍＡ
発散スリット          ：  １／２°
発散縦制限スリット    ：  ５ｍｍ
散乱スリット          ：  １／２°
受光スリット          ：  ０．１５ｍｍ
検出器                ：  シンチレーションカウンタ
スキャン方式          ：  ２θ／θスキャン、連続スキャン
測定範囲（２θ）      ：  ３〜３５°
スキャン速度（２θ）  ：  ２°／ｍｉｎ
計数ステップ（２θ）  ：  ０．０２°
【００３１】
Ｃ形結晶の粉末Ｘ線回折測定は、ＸＲＤ−ＤＳＣ装置を用いて、以下の条件で測定することができる。なお、測定試料は、試料板（材質：アルミニウム；深さ：０．２ｍｍ）に試料を充填し、試料表面を平らにならして作製される。
【００３２】
≪粉末Ｘ線回折条件≫
Ｘ線源                ：  ＣｕＫα線
＊湾曲結晶モノクロメータ（グラファイト）を使用
出力                  ：  ４０ｋＶ／５０ｍＡ
測定温度              ：  室温
発散スリット          ：  １°
発散縦制限スリット    ：  ５ｍｍ
散乱スリット          ：  １°
受光スリット          ：  ０．３ｍｍ
検出器                ：  シンチレーションカウンタ
スキャン方式          ：  ２θ／θスキャン、連続スキャン
測定範囲（２θ）      ：  ３〜３５°
スキャン速度（２θ）  ：  ４０°／ｍｉｎ
計数ステップ（２θ）  ：  ０．０４°
【００３３】
吸熱ピークとは、ＤＴＡ曲線が示すピークトップの温度をいう。ここでＤＴＡ曲線を得るためのＴＧ−ＤＴＡは、ＴＧ−ＤＴＡ装置を用いて、以下の条件で測定できる。
【００３４】
≪ＴＧ−ＤＴＡ条件≫
昇温速度  ：  ５℃／分
雰囲気    ：  窒素（流速：８００ｍＬ／ｍｉｎ）
試料セル  ：  アルミニウムオープンセル
試料量    ：  １０〜１１ｍｇ（Ａ形結晶測定時）
４〜５ｍｇ（Ｅ形結晶測定時）
【００３５】
本化合物のＡ形結晶は、任意の形態の本化合物を０．１〜１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１〜１５ｍｇ／ｍＬの濃度で、沸点以下の温度で、アルコール系、芳香族系、エーテル系、ケトン系、エステル系又はハロゲン系溶媒に溶解し、０〜３０℃で１〜３０日間、開放下で静置又は撹拌して得ることができる。
【００３６】
また、本化合物のＡ形結晶は、参考例１で調製した本化合物の非晶質体を０．１〜１０００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５〜２５０ｍｇ／ｍＬの濃度で、０〜３０℃で、アルコール系、芳香族系、エーテル系、ケトン系、エステル系又はハロゲン系溶媒に溶解し、０〜３０℃で１〜３０日間静置又は撹拌して得ることができる。
【００３７】
本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は、参考例２で調製した本化合物のカリウム塩の非晶質体を０．１〜２０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｍＬの濃度でアルコール系又はケトン系溶媒に溶解し、０〜３０℃で１〜３０日間静置又は撹拌して得ることができる。
【００３８】
また、本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は、任意の形態の本化合物を０．１〜２０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｍＬの濃度でアルコール系又はケトン系溶媒に溶解し、１〜５当量の水酸化カリウムを加えて、１０〜３００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは７０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度になるまで濃縮し、析出物を確認後、０〜３０℃で１〜１２０時間静置して得ることができる。
【００３９】
本化合物のＤ形結晶は、任意の形態の本化合物を、任意の割合のエステル系溶媒とアルコール系溶媒の混合溶媒に溶解し、１０〜３００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは７０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度になるまで濃縮し、析出物を確認後、０〜３０℃で１〜１２０時間静置して得ることができる。
【００４０】
本化合物のＢ形結晶は、参考例４で製造した（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチルに、１〜１０ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加えて懸濁させて２５〜８０℃で１〜１０時間撹拌した後、１〜１０ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液を加え、エーテル系及びエステル系溶媒で抽出後の溶液を１０〜３００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは７０〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度になるまで濃縮し、析出物を確認後、０〜３０℃で１〜１２０時間静置して得ることができる。
【００４１】
本化合物のＣ形結晶は、本化合物のＢ形結晶を７０〜１５０℃、好ましくは９０〜１３０℃に加熱することで得ることができる。
【００４２】
本化合物のＦ形結晶は、任意の形態の本化合物を、０．１〜２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度で、０〜３０℃で、エーテル系溶媒に溶解し、溶媒が目視で残存しなくなるまで１０〜４０℃で濃縮することで得ることができる。
【００４３】
本化合物のＧ形結晶は、任意の形態の本化合物を０．１〜１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１〜１５ｍｇ／ｍＬの濃度で、０〜３０℃で、アルコール系溶媒に溶解し、１０〜４０℃で濃縮することで得ることができる。
【００４４】
本化合物のＨ形結晶は、任意の形態の本化合物を０．０５〜５０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは０．１〜１５ｍｇ／ｍＬの濃度で、０〜３０℃で、エステル系溶媒に溶解し、１０〜４０℃で濃縮することで得ることができる。
【００４５】
上記のアルコール系溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール、１−ペンタノール又は３−メチル−1−ブタノールが挙げられるが、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール又は２−ブタノールが好ましい。
【００４６】
上記の芳香族系溶媒としては、例えば、ベンゼン、クロロベンゼン、トルエン、キシレン又はクメンが挙げられるが、トルエンが好ましい。
【００４７】
上記のエーテル系溶媒としては、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ｔ−ブチルメチルエーテル又は１，４−ジオキサンが挙げられるが、エチルエーテル、テトラヒドロフラン又はｔ−ブチルメチルエーテルが好ましい。
【００４８】
上記のケトン系溶媒としては、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン又はメチルブチルケトンが挙げられるが、アセトン、メチルエチルケトン又はメチルイソブチルケトンが好ましい。
【００４９】
上記のエステル系溶媒としては、例えば、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル又は酢酸ｎ−ブチル挙げられるが、ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル又は酢酸イソブチルが好ましい。
【００５０】
上記のハロゲン系溶媒としては、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン又は１，２−ジクロロエテンが挙げられるが、クロロホルムが好ましい。
【００５１】
本化合物又はその薬理学的に許容される塩の結晶は、例えば、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、サル、ウシ、ヒツジ又はヒト）に対する、炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、多発性硬化症又は白血病、の治療又は予防に有効な医薬として用いることができる。
【００５２】
本化合物若しくはその薬理学的に許容される塩の結晶又はその水和物を医薬として臨床投与する場合の用量は、症状、年齢、体重、性別又は投与方法等に応じて適宜選択されるが、例えば注射剤の場合には、成人に対して有効成分量として１日０．０１ｍｇ〜５ｇ、経口剤の場合には０．１ｍｇ〜１０ｇが好適であり、それぞれ１回又は数回に分けて投与することができる。
【００５３】
本化合物又はその薬理学的に許容される塩の結晶を医薬として臨床投与する場合の剤形としては、薬理学的に許容される投与形態であれば特に限定されるものではなく、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等の経口剤、又は、吸入剤、注射剤、点眼剤、点鼻剤、坐剤、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤若しくは貼付剤等の非経口剤が挙げられる。これらの剤形は製剤分野で一般的に用いられる方法に従って調製できる。この場合、必要に応じて、製剤分野において一般的に用いられる賦形剤、安定化剤、保存剤、緩衝剤、溶解補助剤、乳化剤、希釈剤又は等張化剤等の添加剤が適宜混合されていてもよい。上記の剤形の調製に用いられる、薬理学的に許容される添加剤としては、例えば、結合剤（ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ソルビトール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール又はトラガント等）、賦形剤（白糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、エリスリトール、結晶セルロース、エチルセルロース、コーンスターチ、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン等）、崩壊剤（部分アルファ化デンプン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン又は低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）又は滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、タルク、シリカ又はショ糖脂肪酸エステル等）が挙げられる。
【００５４】
本化合物又はその薬理学的に許容される塩の結晶を有効成分として含有する医薬は、投与ユニット当たり、本化合物の結晶を０．００１〜９０重量％含有することが好ましく、０．０１〜７０重量％含有することがより好ましい。
【実施例】
【００５５】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５６】
（実施例１）：本化合物のＡ形結晶の製造（方法１）
特許文献１記載の方法により製造した本化合物（１９．０ｇ）をフラスコに量り取り、酢酸エチル（７５ｍＬ）を加えて懸濁し、室温で１時間撹拌した。固体を濾取し、酢酸エチル（１５ｍＬ）で洗浄後、減圧乾燥した。得られた固体（１４．８ｇ）をフラスコに量り取り、テトラヒドロフラン（１１０ｍＬ）を加えて加熱還流下で溶解した。この溶液に、ｎ−ヘキサン（１１０ｍＬ）を加えて室温まで放冷した。さらに０℃まで冷却し、０℃で３０分間撹拌した。析出物を濾取し、ｎ−ヘキサン／テトラヒドロフラン＝２／１（ｖ／ｖ）の混液（３０ｍＬ）で洗浄後、減圧乾燥し、本化合物のＡ形結晶を白色粉末として１３．４ｇ（収率７１％）得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折装置（株式会社リガク社；２２００／ＲＩＮＴ  ｕｌｔｉｍａ＋ＰＣ）を用いた粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡ装置（株式会社リガク社；ＴＧ８１０Ｄ）を用いたＴＧ−ＤＴＡを行った。これら測定の結果を、図１及び図２に示す。
回折角２θ  ：  ６．２、１３．３、１７．０、１９．６、２２．２、２３．０°
吸熱ピーク  ：  ２３９℃【００５７】
（参考例１）：本化合物の非晶質体の調製
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１．２ｇ）をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解し、エバポレーターでテトラヒドロフランが２ｍL程度残存するまで減圧濃縮後、直ちに真空ポンプで減圧乾燥し、引き続き、８０℃に加熱しながら１９時間減圧乾燥をして、本化合物の非晶質体を得た。【００５８】
（参考例２）：本化合物のカリウム塩の非晶質体の調製
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（４１７ｍｇ）を２００ｍＬのフラスコに加え、テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）を加えて溶解した。この溶液中に、メタノール（２０ｍＬ）を加えて溶解した水酸化カリウム（４７ｍｇ）の溶液を加えた。エバポレーターで濃縮後、１５時間減圧乾燥をして、４６５ｍｇ（収率１００％）の本化合物のカリウム塩の非晶質体を得た。【００５９】
（参考例３）：（Ｓ）−２−（２，６−ジクロロベンゾイルアミノ）ペンタ−４−エン酸エチルの製造
【化２】
2014051056.tif 000003
２０００ｍＬのフラスコにＬ−アリルグリシンエチルエステルトシル酸塩（１００ｇ）を量り取り、系内をアルゴン雰囲気に置換した後、トルエン（５００ｍＬ）とトリエチルアミン（８８．５ｍＬ）とを加えて懸濁した。この懸濁液を０℃に冷却した後、塩化２，６−ジクロロベンゾイル（５０．０ｍＬ）を２０分間かけて滴下し、０℃で４５分間撹拌した。反応液に炭酸水素ナトリウム（５６ｇ）を水（８５０ｍＬ）に溶解して加え、撹拌後、分液した。水層をトルエン（４００ｍＬ）で抽出した後、有機層を合わせて水（４００ｍＬ）で洗浄した。有機層を２８５ｍＬまで減圧濃縮し、得られたトルエン溶液を０℃に冷却した。この溶液にヘプタン（１０００ｍＬ）を滴下し、０℃で２時間撹拌した。析出物を濾取し、氷冷したヘプタン（２００ｍＬ）で洗浄後、減圧乾燥して、８８．３ｇ（収率８８％）の（Ｓ）−２−（２，６−ジクロロベンゾイルアミノ）ペンタ−４−エン酸エチルを得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 1.31 (3H, t, J =7.1Hz), 2.66 (1H, m), 2.80 (1H, m), 4.20-4.30 (2H, m), 4.93 (1H, ddd, J =5.4, 5.4, 7.8Hz), 5.15 (1H, d, J =9.8Hz), 5.19 (1H, d, J =15.6Hz), 5.78 (1H, m), 6.41 (1H, br.d, J =5.4Hz), 7.25-7.34 (3H, m).【００６０】
（参考例４）：（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチルの製造
【化３】
2014051056.tif 000004
１００ｍＬのフラスコに、参考例３で製造した（Ｓ）−２−（２，６−ジクロロベンゾイルアミノ）ペンタ−４−エン酸エチル（５．００ｇ）、特許文献１記載のＮ−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−イソプロピルピリミジン−２−アミン（５．６３ｇ）、炭酸カリウム（４．３７ｇ）、臭化テトラｎ−ブチルアンモニウム（５．１０ｇ）及び酢酸パラジウム（７１．０ｍｇ）を順次加え、系内をアルゴン雰囲気に置換した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４５．０ｍＬ）及びエタノール（５．０ｍＬ）を加え、撹拌しながら系内を再度アルゴン雰囲気に置換した。５０〜５５℃で１７時間撹拌した後、反応液を室温まで冷却し、酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えた後、水（１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を５％チオ硫酸ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）で２回洗浄した。洗浄後の有機層に硫酸ナトリウム（２０．０ｇ）を加えて乾燥し、さらに活性炭（２．５０ｇ）を加えて室温で撹拌した。活性炭を濾別した後、濾液を減圧濃縮し、粗生成物を８．４９ｇ得た。粗生成物（１．０１ｇ）をナスフラスコに量り取り、２−プロパノール（４．０ｍＬ）を加えて溶解し、続いて、ｎ−ヘキサン（８．０ｍＬ）を加えて室温、開放状態で２４時間撹拌した。析出物を確認した後、析出物を濾取して減圧乾燥を行い、０．６４４ｇの（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチルを得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 1.15 (6H, d, J =6.8Hz), 1.33 (3H, t, J =7.1Hz), 2.79-2.90 (1H, m), 2.90-3.03 (1H, m) 4.18-4.36 (2H, m), 4.95-5.06 (1H, m), 5.06-5.23 (1H, m), 6.07-6.21 (1H, m), 6.41-6.59 (3H, m), 7.07 (2H, d, J =8.1Hz), 7.19-7.42 (4H, m), 8.28 (2H, d, J =4.9Hz).【００６１】
（実施例２）：本化合物のＡ形結晶の製造（方法２）
参考例１で調製した本化合物の非晶質体（２５ｍｇ）を硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、飽和溶解度と比較して過剰量のアセトン（１２．５ｍＬ）を加え、室温で撹拌し、希薄溶液を調製した。これを室温、開放状態で静置した。析出物を確認した後、パスツールピペットで溶媒を取り除き、３０分間減圧乾燥を行い、本化合物のＡ形結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、結果が図１及び図２と一致することを確認した。【００６２】
（実施例３）：本化合物のＡ形結晶の製造（方法３）
参考例１で調製した本化合物の非晶質体（２５ｍｇ）を硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、室温で撹拌しながらアセトン（１００μＬ）を加えて溶解した。これを室温、気密状態で静置した。析出物を確認した後、パスツールピペットで溶媒を取り除き、３０分間減圧乾燥を行い、本化合物のＡ形結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、結果が図１及び図２と一致することを確認した。【００６３】
（実施例４）：本化合物のカリウム塩のＥ形結晶の製造（方法１）
参考例２で調製した本化合物のカリウム塩の非晶質体（２０ｍｇ）を硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、アセトン（１０ｍＬ）を加え、室温で撹拌し溶解した。これを室温、開放状態で静置した。析出物を確認した後、パスツールピペットで溶媒を取り除き、３０分間減圧乾燥を行い、本化合物のカリウム塩のＥ形結晶を粉末で得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定、ＴＧ−ＤＴＡ、誘導結合プラズマ質量分析によるカリウム含量の測定及び１Ｈ−ＮＭＲ測定を行った。粉末Ｘ線回折の測定の結果を図３に、ＴＧ−ＤＴＡの結果を図４に示す。
回折角２θ  ：  ４．１、７．６、８．２、８．８、１０．０、１４．２、
１５．２、１９．２°
カリウム含量：  ６．９％
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 1.08 (6H, d, J =6.8Hz), 2.58-2.72 (1H, m), 2.72-2.85 (1H, m), 3.94-4.10 (1H, m), 4.96-5.16 (1H, m), 6.18-6.35 (1H, m), 6.42(1H, d, J =15.9Hz), 6.61 (1H, t, J =4.8Hz),7.03 (2H, d, J =8.3Hz), 7.27-7.54 (5H, m), 7.80 (1H, br.s), 8.28 (2H, d, J =4.6Hz).【００６４】
（実施例５）：本化合物のカリウム塩のＥ形結晶の製造（方法２）
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１．４０ｇ）を１０００ｍＬフラスコに量り取り、エタノール（４００ｍＬ）を加え、溶解した。この溶液中に、エタノールに溶解した水酸化カリウム（１５８ｍｇ）の溶液を加えた。エバポレーターで濃縮し、析出物が確認できた時点で濃縮を終了し、室温にて１５時間静置した。析出物を濾取して減圧乾燥し、８７２ｍｇ（収率５６％）の本化合物のカリウム塩のＥ形結晶を白色粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、結果が図３及び図４と一致することを確認した。【００６５】
（実施例６）：本化合物のＤ形結晶の製造
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１５０ｍｇ）をフラスコに量り取り、酢酸エチル（５０ｍＬ）及びエタノール（５０ｍＬ）を加えて溶解した。エバポレーターで濃縮し、析出物が確認できた時点で濃縮を終了し、室温にて２４時間静置した。析出物を濾取して減圧乾燥し、本化合物のＤ形結晶を白色粉末で得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定を行った。測定の結果を図５に示す。
回折角２θ  ：  ５．７、６．１、７．９、１２．２、１２．３、１２．９、
１３．４、１６．２、１７．０°【００６６】
（実施例７）：本化合物のＢ形結晶の製造
５００ｍＬのフラスコに参考例４で製造した（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチル（５２８ｍｇ）を量り取り、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１０ｍＬ）を加えて懸濁した。この懸濁液を４５〜５５℃で５時間撹拌した。撹拌開始から１時間の時点でテトラヒドロフラン（１ｍＬ）を加えて系内を均一にした。反応液を０℃まで冷却し、４ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（８．５ｍＬ）を加えた。テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）を加えた後、酢酸エチル（２０ｍＬ）を加えて抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で２回洗浄した後、エタノール（５ｍＬ）を加えて減圧濃縮した。析出物が確認できた時点で濃縮を終了し、析出物を濾取し、エタノール（５ｍＬ）で洗浄後、減圧乾燥し、本化合物のＢ形結晶（一番晶）を１２０ｍｇ得た。また、濾液を開放下で静置した。析出物を確認した後、析出物を濾取して減圧乾燥し、本化合物のＢ形結晶（二番晶）を６６ｍｇ得た。一番晶と混合した結晶（合計１８６ｍｇ、収率３８％）について、粉末Ｘ線回折の測定を行った。測定の結果を図６に示す。
回折角２θ  ：  ５．５、５．９、７．６、１２．０、１２．５、１３．２、
１６．６、２３．１°【００６７】
（実施例８）：本化合物のＣ形結晶の製造
実施例７で製造した本化合物のＢ形結晶（３．１ｍｇ）を試料板（材質：アルミニウム；深さ：０．２ｍｍ）に量り取り、ＸＲＤ−ＤＳＣ装置にて１３０℃に加熱し、本化合物のＣ形結晶を得た。約１３０℃に加熱した状態で粉末Ｘ線回折の測定を行った。測定の結果を図７に示す。
回折角２θ  ：  １２．０、１３．８、１８．１、１９．３、１９．９、
２２．８°【００６８】
≪ＸＲＤ−ＤＳＣのＤＳＣ条件≫
昇温速度  ：  ５℃／分
雰囲気    ：  窒素（流速：５０ｍＬ／ｍｉｎ）【００６９】
（実施例９）：本化合物のＦ形結晶の製造
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１．４１ｇ）をテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶解し、エバポレーターを用いて室温でテトラヒドロフランが目視で残存しなくなるまで約３０分間減圧濃縮し、本化合物のＦ形結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定を行った。測定の結果を図８に示す。
回折角２θ  ：  ５．９、７．９、１１．７、１２．４、１２．７、１６．７、１８．２、２１．１、２３．８°【００７０】
（実施例１０）：本化合物のＧ形結晶の製造
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１０４ｍｇ）をメタノール（１５ｍＬ）に溶解し、エバポレーターを用いて室温でメタノールが目視で残存しなくなるまで約２０分間減圧濃縮し、本化合物のＧ形結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定を行った。測定の結果を図９に示す。
回折角２θ  ：  １１．６、１２．０、１７．１°【００７１】
（実施例１１）：本化合物のＨ形結晶の製造
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１０．４ｍｇ）を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、エバポレーターを用いて室温で酢酸エチルが目視で残存しなくなるまで約２０分間減圧濃縮し、本化合物のＨ形結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定を行った。測定の結果を図１０に示す。
回折角２θ  ：  ５．７、６．２、１０．９、１１．５、１３．３、１７．０、１９．６°【００７２】
（試験例１）：吸湿性評価
最大平衡時間        ：  １８０分間
測定範囲            ：  相対湿度５％〜相対湿度９５％〜相対湿度５％
測定間隔            ：  相対湿度５％【００７３】
併せて結晶形の変化の有無を評価するため、吸湿性評価試験後のＡ形及びＥ形結晶並びに非晶質体について、粉末Ｘ線回折の測定を行った。その結果を表１に示す。【００７４】
【表１】
2014051056.tif 000005
【００７５】
表１に示すように、本化合物のＡ形結晶は、加湿に伴う重量増加量にほとんど変化はなく、結晶形にも変化はなかった。本化合物の非晶質体の吸湿量との比較から、Ａ形結晶は低吸湿性であることが明らかとなった。また、本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は、加湿に伴い大きな重量増加を示したが、結晶形には変化はなかった。これらの結果から、Ａ形結晶及びＥ形結晶は、加湿に対して物理学的安定性に優れている結晶であることが明らかとなった。【００７６】
（試験例２）：溶解性評価
本化合物のＡ形結晶及び非晶質体（各３０．０ｍｇ）をそれぞれ硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、３７℃に調整した温湿度試験槽（ノードアα；アメフレックス社）内にて、日本薬局方第１６改正崩壊試験液第２液（１０ｍＬ）を加え、懸濁状態で撹拌した。２時間撹拌後の懸濁液（１．５ｍＬ）をメスピペットで量り取り、１．５ｍＬエッペンドルフチューブに加え、遠心分離機（ＭＤ−１６Ｎ；パソリナ社）を用いて、１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。遠心分離後の上澄み液（１ｍＬ）をホールピペットで量り取り、２０〜５０ｍＬの所定量のメスフラスコに入れ、日本薬局方第１６改正崩壊試験液第２液で全量を２０〜５０ｍＬの所定量に合わせ、高速液体クロマトグラフィー（以下、「ＨＰＬＣ」）の分析用試料溶液とした。以下の条件でＨＰＬＣにより分析用試料溶液の濃度を定量することで、３７℃における日本薬局方第１６改正崩壊試験液第２液に対する溶解度を評価した。なお、ＨＰＬＣの移動相に用いるリン酸（ナトリウム）緩衝液（ｐＨ２．２）は、リン酸二水素ナトリウム２水和物（６．２４ｇ）を量り取り、蒸留水（２Ｌ）を加えて溶解した後、撹拌しながらｐＨが２．２となるまでリン酸を加えて調製した。また、本化合物のカリウム塩のＥ形結晶の３７℃における日本薬局方第１６改正崩壊試験液第２液に対する溶解度については、Ｅ形結晶（１０．３ｍｇ）を１０ｍＬ遠沈管に量り取り、３７℃に調整した温湿度試験槽（ノードアα）内にて、撹拌しながら日本薬局方第１６改正崩壊試験液第２液をマイクロピペットで１００μＬずつ加え、目視にて固形物が完全に溶解することを確認したときの濃度以上を溶解度とした。その結果を表２に示す。【００７７】
≪ＨＰＬＣ条件≫
検出器          ：  紫外可視吸光光度計（測定波長：２６０ｎｍ）
カラム          ：  クロモリス  パフォーマンスＲＰ−１８ｅ（メルク）
内径３ｍｍ、長さ１０ｃｍ
移動相Ａ        ：  リン酸（ナトリウム）緩衝液（ｐＨ２．２）
移動相Ｂ        ：  アセトニトリル
移動相Ｂの組成  ：  ０〜４分：５→７０％、
４〜５分：７０％、
５〜５．１分：７０→５％、
５．１〜６．５分：５％
流量            ：  ３．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度      ：  ４０℃
試料注入量      ：  １０μＬ【００７８】
【表２】
2014051056.tif 000006
【００７９】
表２に示すように、本化合物のＡ形結晶及び非晶質体が１ｍｇ／ｍＬ以下の溶解度であったのに対し、本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は５０ｍｇ／ｍＬ以上の溶解度を示した。この結果から、Ｅ形結晶が、溶解性において極めて優れていることが明らかとなった。【００８０】
（試験例３）：熱に対する物理学的安定性評価
本化合物のＢ形、Ｄ形、Ｇ形及びＨ形結晶のＴＧ−ＤＴＡを行い、ＤＴＡ曲線より発熱又は吸熱変化の有無を確認することで、熱に対する物理学的安定性を評価した。結果を表３に示す。【００８１】
≪Ｂ形、Ｇ形及びＨ形結晶のＴＧ−ＤＴＡ条件≫
昇温速度  ：  ５℃／分
雰囲気    ：  窒素（流速：５０ｍＬ／ｍｉｎ）
試料セル  ：  アルミニウムオープンセル
試料量    ：  ８〜１０ｍｇ（Ｂ形結晶測定時）
試料量    ：  ４〜６ｍｇ（Ｇ形結晶測定時）
試料量    ：  １〜３ｍｇ（Ｈ形結晶測定時）
≪Ｄ形結晶のＴＧ−ＤＴＡ条件≫
昇温速度  ：  ５℃／分
雰囲気    ：  窒素（流速：８００ｍＬ／ｍｉｎ）
試料セル  ：  アルミニウムオープンセル
試料量    ：  ８〜１０ｍｇ【００８２】
【表３】
2014051056.tif 000007
【００８３】
表３に示すように、本化合物のＢ形結晶は、２９−４６℃で互変転移を起こした後、７３−９３℃でＣ形に結晶転移し、さらに１５０−１７０℃でＣ形からＡ形に結晶転移した。本化合物のＤ形結晶は、１５０−１７０℃でＡ形に結晶転移した。本化合物のＧ形結晶は、１５０−１７０℃でＡ形に結晶転移した。本化合物のＨ形結晶は、１９５−２１５℃でＡ形に結晶転移した。これらの結果から、Ｃ形、Ｄ形及びＧ形結晶は、１５０℃未満の高温加熱下であっても物理学的に安定であることが明らかとなった。Ｈ形結晶は、１９５℃未満の高温加熱下であっても物理学的に安定であることが明らかとなった。【００８４】
（試験例４）：固体安定性評価
本化合物のＡ形及び本化合物のカリウム塩のＥ形結晶並びに非晶質体について、６０℃、気密状態で４週間保存し、以下の条件でのＨＰＬＣにより、保存前後の純度を測定した。また、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、保存による結晶形の変化の有無を評価した。結果を表４に示す。なお、ＨＰＬＣの移動相に用いるリン酸（カリウム）緩衝液（ｐＨ２．２）（以下、「リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）」）は、リン酸二水素カリウム（５．４４ｇ）を量り取り、蒸留水（２Ｌ）を加えて溶解した後、撹拌しながらｐＨが２．２となるまでリン酸を加えて調製した。また、ＨＰＬＣの分析用試料は、本化合物の各結晶（５．０ｍｇ）及び非晶質体（５．０ｍｇ）を５０ｍＬメスフラスコにそれぞれ量り取り、アセトニトリル（２５ｍＬ）を加えて溶解した後、リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）で全量を５０ｍＬにして調製した。【００８５】
≪ＨＰＬＣ条件≫
検出器          ：  紫外可視吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム          ：  カプセルパックＣ１８  ＭＧＩＩ（資生堂）
内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍ、粒子径５μｍ
移動相Ａ        ：  リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）／アセトニトリル
＝７０：３０（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ        ：  アセトニトリル／リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）
＝７０：３０（ｖ／ｖ）
移動相Ｂの組成  ：  ０〜８０分：０→１００％、
８０〜８５分：１００％、
８５〜８６分：１００→０％、
８６〜９５分：０％
流量            ：  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度      ：  ４０℃
試料注入量      ：  ２５μＬ【００８６】
【表４】
2014051056.tif 000008
【００８７】
表４に示すように、本化合物のＡ形及び本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は、その純度にほとんど変化はなかった。また、Ａ形及びＥ形結晶は、保存中に結晶形の変化は認められなかった。これらの結果から、Ａ形及びＥ形結晶は、非晶質体に比べて化学的安定性に極めて優れており、かつ、物理学的安定性も極めて優れていることが明らかとなった。【００８８】
（試験例５）：賦形剤との配合下における安定性評価
本化合物のＡ形結晶（２０ｍｇ）と、乳糖（２００ｍｇ；ＤＭＶ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ（登録商標）グレード  ２００Ｍ）、Ｄ−マンニトール（２００ｍｇ；東和化成；マンニット（登録商標）グレード  Ｐ）、トウモロコシデンプン（２００ｍｇ；日澱化学；グレード  ＳＴ−Ｃ）又は結晶セルロース（２００ｍｇ；旭化成；セオラス（登録商標）グレード  ＰＨ−１０１）とを褐色のガラス製バイアル瓶中に量り取り、蒸留水（３０μＬ）を加えてガラス棒で混合し、配合試料を調製した。配合後の試料を４０℃、開放状態で４週間保存し、以下の条件でＨＰＬＣにより、保存前後の純度を測定した。結果を表５に示す。なお、ＨＰＬＣの分析用試料は、ガラス製バイアル瓶中の各配合試料にメタノール（１０ｍＬ）を加え、懸濁状態で超音波洗浄機を用いて超音波を１０分間照射した後、懸濁液を１０ｍＬ遠沈管に分取し、遠心分離機を用いて３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、得られた遠心分離後の上澄み液（１ｍＬ）をホールピペットで量り取り、２０ｍＬメスフラスコに入れ、試料溶解液［リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）／アセトニトリル＝５０：５０（ｖ／ｖ）］で全量を２０ｍＬにして調製した。【００８９】
≪ＨＰＬＣ条件≫
検出器          ：  紫外可視吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム          ：  カプセルパックＣ１８  ＭＧＩＩ（資生堂）
内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍ、粒子径５μｍ
移動相Ａ        ：  リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）／アセトニトリル
＝７０：３０（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ        ：  アセトニトリル／リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）
＝７０：３０（ｖ／ｖ）
移動相Ｂの組成  ：  ０〜８０分：０→１００％、
８０〜８５分：１００％、
８５〜８６分：１００→０％、
８６〜９５分：０％
流量            ：  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度      ：  ４０℃
試料注入量      ：  ２５μＬ【００９０】
【表５】
2014051056.tif 000009
【００９１】
表５に示すように、本化合物のＡ形結晶は、製剤処方で使用頻度の高い乳糖、Ｄ−マンニトール、トウモロコシデンプン及び結晶セルロースのいずれの賦形剤と配合してもその純度は保存前後でほとんど変化はなかった。これらの結果から、Ａ形結晶は、基本製剤賦形剤との接触下においても配合変化を受けず、化学的安定性に極めて優れていることが明らかとなった。【００９２】
（試験例６）：各種製剤基剤との配合下における安定性評価
本化合物のＡ形結晶（２０ｍｇ）、乳糖（１１０ｍｇ；ＤＭＶ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｐｈａｒｍａｔｏｓｅ（登録商標）２００Ｍ）及びトウモロコシデンプン（６０ｍｇ；日澱化学；グレード  ＳＴ−Ｃ）を褐色のガラス製バイアル瓶中に加えて混合した後、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（１０ｍｇ；信越化成工業）、クロスカルメロースナトリウム（１０ｍｇ；旭化成ケミカルズ）、ヒドロキシプロピルセルロース（１０ｍｇ；日本曹達）、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース（１０ｍｇ；信越化成工業）を加え、さらに蒸留水（３０μＬ）を添加してガラス棒で混合し、配合試料を調製した。配合後の試料を４０℃、開放状態で４週間保存し、以下の条件でＨＰＬＣにより、保存前後の純度を測定した。結果を表６に示す。なお、ＨＰＬＣの分析用試料は、褐色のガラス製バイアル瓶中の各配合試料にメタノール（１０ｍＬ）を加え、懸濁状態で超音波洗浄機を用いて超音波を１０分間照射した後、懸濁液を１０ｍＬ遠沈管に分取し、遠心分離機を用いて３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、得られた遠心分離後の上澄み液（１ｍＬ）をホールピペットで量り取り、２０ｍＬメスフラスコに入れ、試料溶解液［リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）／アセトニトリル＝５０：５０（ｖ／ｖ）］で全量を２０ｍＬにして調製した。【００９３】
≪ＨＰＬＣ条件≫
検出器          ：  紫外可視吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム          ：  カプセルパックＣ１８  ＭＧＩＩ（資生堂）
内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍ、粒子径５μｍ
移動相Ａ        ：  リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）／アセトニトリル
＝７０：３０（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ        ：  アセトニトリル／リン酸緩衝液（ｐＨ２．２）
＝７０：３０（ｖ／ｖ）
移動相Ｂの組成  ：  ０〜８０分：０→１００％、
８０〜８５分：１００％、
８５〜８６分：１００→０％、
８６〜９５分：０％
流量            ：  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度      ：  ４０℃
試料注入量      ：  ２５μＬ【００９４】
【表６】
2014051056.tif 000010
【００９５】
表６に示すように、本化合物のＡ形結晶は、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース及びクロスカルメロースナトリウムのような崩壊剤、並びに、ヒドロキシプロピルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロースのような結合剤のいずれの製剤基剤と配合してもその純度は保存前後でほとんど変化はなかった。これらの結果から、Ａ形結晶は、基本製剤基剤との接触下においても配合変化を受けず、化学的安定性に極めて優れていることが明らかとなった。【００９６】
（試験例７）：光学純度に係る精製効率の評価
実施例１で記載した本化合物のＡ形結晶、実施例７で記載した本化合物のＢ形結晶及び実施例５で記載した本化合物のカリウム塩のＥ形結晶の調製前後の光学純度を以下の条件でのＨＰＬＣにより測定した。なお、Ｂ形結晶については、まず、参考例４で記載した（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチルの粗生成物（化学純度：８５％）を出発物質として光学純度を測定した。次に、粗生成物（１．００ｇ）をナスフラスコに量り取り、２−プロパノール（４．０ｍＬ）を加えて溶解した後、ｎ−ヘキサン（８．０ｍＬ）を加えて室温、開放状態で２４時間撹拌し、析出物を確認した後、析出物を濾取して減圧乾燥を行うことで、化学純度を高めた（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチル（０．６４４ｇ、化学純度：９３％）を得、実施例７に記載した方法にて本化合物のＢ形結晶を調製し、本結晶の光学純度を測定した。結果を表７に示す。なお、ＨＰＬＣの移動相に用いるリン酸（カリウム）緩衝液（ｐＨ２．０）は、リン酸二水素カリウム（５．４４ｇ）を量り取り、蒸留水（２Ｌ）を加えて溶解した後、撹拌しながらｐＨが２．０となるまでリン酸を加えて調製した。【００９７】
≪（Ｓ，Ｅ）−２−（２，６−ジクロロベンズアミド）−５−［４−（イソプロピル−ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ペント−４−エン酸エチルの光学純度を測定するためのＨＰＬＣ条件≫
検出器          ：  紫外可視吸光光度計（測定波長：２５４ｎｍ）
カラム          ：  ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＤ−Ｈ（ダイセル）
内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍ、粒子径５μｍ
移動相          ：  ０．１％ジエチルアミン含有ヘキサン／エタノール
＝９４：６（ｖ／ｖ）
分析時間        ：  ２０分
流量            ：  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度      ：  ４０℃
試料注入量      ：  １０μＬ
試料濃度        ：  ０．５ｍｇ／ｍＬ
試料希釈液      ：  エタノール／ヘキサン＝６０：４０（ｖ／ｖ）【００９８】
≪本化合物又は本化合物のカリウム塩の光学純度を測定するためのＨＰＬＣ条件≫
検出器          ：  紫外可視吸光光度計（測定波長：２６０ｎｍ）
カラム          ：  ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＪ−ＲＨ（ダイセル）
内径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍ、粒子径５μｍ
移動相          ：  リン酸（カリウム）緩衝液（ｐＨ２．０）／
アセトニトリル＝７２．５：２７．５（ｖ／ｖ）
分析時間        ：  ３０分
流量            ：  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度      ：  ４０℃
試料注入量      ：  ５μＬ
試料濃度        ：  ０．４ｍｇ／ｍＬ
試料希釈液      ：  アセトニトリル／水＝８０：２０（ｖ／ｖ）【００９９】
【表７】
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【０１００】
表７に示すように、本化合物のＡ形結晶は調製前後で光学純度が向上する結果が得られた。また、本化合物のＢ形結晶及び本化合物のカリウム塩のＥ形結晶は調製前後おいて光学純度が大幅に向上し、光学純度に係る精製効率に極めて優れている結晶であることが明らかとなった。【０１０１】
（実施例１２）：溶媒留去の方法が本化合物の結晶の結晶形に与える影響
本化合物の結晶の製造において、溶媒留去の方法が得られる結晶の結晶形に与える影響を確認するべく、溶媒としてテトラヒドロフラン、メタノール及び酢酸エチルの３種類を、溶媒留去の方法として下記の方法１〜３を、それぞれ用い、結晶を製造した。
方法１：室温、開放状態で１〜５日間、溶媒を蒸発
方法２：エバポレーターを用いて、溶媒が目視で残存しなくなるまで約２０〜３０分間減圧濃縮
方法３：エバポレーターを用いて、溶媒が２ｍL程度残存するまで減圧濃縮後、直ちに真空ポンプで減圧乾燥【０１０２】
Ｅｎｔｒｙ１  溶媒：テトラヒドロフラン  溶媒留去の方法：方法１
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（２５ｍｇ）を硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、テトラヒドロフラン（２ｍL）を加えて、室温で撹拌し、希薄溶液を調製し静置した。静置から５時間後に析出物を確認し、静置から１日後にテトラヒドロフランが完全に蒸発していることを確認した。３０分間減圧乾燥を行い、本化合物の結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、結果が図１及び図２と一致することから、Ａ形結晶であることを確認した。【０１０３】
Ｅｎｔｒｙ２  溶媒：メタノール  溶媒留去の方法：方法１
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（２５ｍｇ）を硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、メタノール（８ｍL）を加えて、室温で撹拌し、希薄溶液を調製し静置した。静置から３日後に析出物を確認し、静置から５日後にメタノールが完全に蒸発していることを確認した。３０分間減圧乾燥を行い、本化合物の結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、結果が図１及び図２と一致することから、Ａ形結晶であることを確認した。【０１０４】
Ｅｎｔｒｙ３  溶媒：酢酸エチル  溶媒留去の方法：方法１
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（２５ｍｇ）を硼硅酸ガラス製バイアル瓶に量り取り、酢酸エチル（１２．５ｍL）を加えて、７５℃に加熱しながら攪拌し、希薄溶液を調製し静置した。静置から５時間後に析出物を確認し、静置から１日後にパスツールピペットで溶媒を取り除き、３０分間減圧乾燥を行い、本化合物の結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定及びＴＧ−ＤＴＡを行い、結果が図１及び図２と一致することから、Ａ形結晶であることを確認した。【０１０５】
Ｅｎｔｒｙ４  溶媒：テトラヒドロフラン  溶媒留去の方法：方法２
実施例９が、これに相当する。【０１０６】
Ｅｎｔｒｙ５  溶媒：メタノール  溶媒留去の方法：方法２
実施例１０が、これに相当する。【０１０７】
Ｅｎｔｒｙ６  溶媒：酢酸エチル  溶媒留去の方法：方法２
実施例１１が、これに相当する。【０１０８】
Ｅｎｔｒｙ７  溶媒：テトラヒドロフラン  溶媒留去の方法：方法３
参考例１が、これに相当する。【０１０９】
Ｅｎｔｒｙ８  溶媒：メタノール  溶媒留去の方法：方法３
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（１００ｍｇ）を５０ｍLメスフラスコに量り取り、メタノール（１５ｍＬ）に溶解し、溶媒を留去し、０〜３０℃で３０分間減圧乾燥し、本化合物の結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定を行い、図９と一致することから、Ｇ形結晶であることを確認した。【０１１０】
Ｅｎｔｒｙ９  溶媒：酢酸エチル  溶媒留去の方法：方法３
実施例１で調製した本化合物のＡ形結晶（２９．３ｍｇ）を２００ｍLメスフラスコに量り取り、酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解し、溶媒を留去し、０〜３０℃で３０分間減圧乾燥をし、本化合物の結晶を粉末として得た。得られた結晶について、粉末Ｘ線回折の測定を行い、図１０と一致することから、Ｈ形結晶であることを確認した。【０１１１】
【表８】
2014051056.tif 000012
【０１１２】
表８に示すように、本化合物は、同一の溶媒であっても、溶媒留去の方法が異なると、異なる結晶形が得られることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１１３】
本発明の結晶は、医薬、特に炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、多発性硬化症又は白血病の治療剤又は予防剤として利用できる。
【図１】
2014051056.tif 000013
【図２】
2014051056.tif 000014
【図３】
2014051056.tif 000015
【図４】
2014051056.tif 000016
【図５】
2014051056.tif 000017
【図６】
2014051056.tif 000018
【図７】
2014051056.tif 000019
【図８】
2014051056.tif 000020
【図９】
2014051056.tif 000021
【図１０】
2014051056.tif 000022
【国際調査報告】
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2014051056.tif 000024
2014051056.tif 000025
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