【手続補正書】
【提出日】平成27年2月6日(2015.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソーム処方物であって、該リポソーム処方物は、抗新生物薬物を含むリポソームを含み、抗新生物薬物の総量の少なくとも５０％が沈殿している、処方物。
【請求項２】
空のリポソームをさらに含む、請求項１に記載のリポソーム処方物。
【請求項３】
前記抗新生物薬物は、イリノテカン、トポテカン、９−アミノカンプトセシン、１０，１１−メチレンジオキシカンプトセシン、９−ニトロカンプトセシン、ＴＡＳ１０３、７−（４−メチル−ピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトセシン、および７−（２−Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル）−２０（Ｓ）−カンプトセシンからなる群より選択されるカンプトセシン；またはビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシンからなる群より選択されるビンカアルカロイドである、請求項１〜２のいずれか１項に記載のリポソーム処方物。
【請求項４】
前記抗新生物薬物対脂質の割合が、約０．０５〜０．９：１（ｗ／ｗ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のリポソーム処方物。
【請求項５】
前記リポソームが、スフィンゴミエリンおよびコレステロールを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のリポソーム処方物。
【請求項６】
組成物であって、該組成物は、
ａ）抗新生物薬物；ならびに
ｂ）中にカプセル化された、溶液中の抗新生物薬物および沈殿した形態の抗新生物薬物を有するリポソーム、
を含み、ここで、該リポソーム中の該沈殿した形態の抗新生物薬物は、該抗新生物薬物の総量の少なくとも５０％であり、該リポソームは、スフィンゴミエリンおよびコレステロールを含み、該抗新生物薬物対脂質の割合が０．０５〜０．９：１である、
組成物。
【請求項７】
抗新生物薬物の血漿循環半減期を調節するための組成物であって、該組成物は、
中にカプセル化された、溶液中の抗新生物薬物、および沈殿した形態の抗新生物薬物を有するリポソーム、
を含み、ここで、該リポソーム中の沈殿した形態の抗新生物薬物の量は、抗新生物薬物の総量の少なくとも５０％であり、該リポソームは、スフィンゴミエリンおよびコレステロールを含む、
組成物。
【請求項８】
前記抗新生物薬物は、
（ａ）カンプトセシン；
（ｂ）ビンカアルカロイド；または
（ｃ）それらの組み合わせ、
である、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
前記カンプトセシンが、イリノテカン、トポテカン、９−アミノカンプトセシン、１０，１１−メチレンジオキシカンプトセシン、９−ニトロカンプトセシン、ＴＡＳ１０３、７−（４−メチル−ピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトセシン、および７−（２−Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル）−２０（Ｓ）−カンプトセシンからなる群より選択されるメンバーである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記カンプトセシンがトポテカンである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ビンカアルカロイドが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンオレルビン、およびビンデシンからなる群より選択されるメンバーである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記溶液中の抗新生物薬物と前記沈殿した形態の抗新生物薬物とが異なる、請求項６〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗新生物薬物対脂質の割合が、０．１〜０．５：１（ｗ／ｗ）である、請求項６〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記リポソームが、スフィンゴミエリンおよびコレステロールを、７５／２５モル％／モル％スフィンゴミエリン／コレステロールから３０／５０モル％／モル％スフィンゴミエリン／コレステロールの範囲の比で含む、請求項６〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記リポソームが、スフィンゴミエリンおよびコレステロールを、
（ａ）３０／５０モル％／モル％；
（ｂ）４０／４５モル％／モル％；
（ｃ）５５／４５モル％／モル％；または
（ｄ）７５／２５モル％／モル％；
の比で含む、請求項６〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
カプセル化された活性薬剤を有さないリポソームをさらに含む、請求項６〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
活性薬剤を含むリポソーム対カプセル化された薬剤を有さないリポソームの割合が、
（ａ）１：０．５〜１：１０００；
（ｂ）１：１〜１：１００；
（ｃ）１：２〜１：１０；または
（ｄ）１：３〜１：５
である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物は、前記抗新生物薬物の沈殿を増強する成分を含む、請求項６〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記成分は、モノアニオン、ジアニオン、トリアニオン、または多価アニオンである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
溶液中のビノレルビンおよび沈殿した形態のビノレルビンを有するリポソームを含む組成物であって、該リポソーム中の該沈殿した形態のビノレルビンは、該ビノレルビンの総量の少なくとも５０％であり、該リポソームは、スフィンゴミエリンおよびコレステロールを、７５／２５モル％／モル％スフィンゴミエリン／コレステロールから３０／５０モル％／モル％スフィンゴミエリン／コレステロールの範囲の比で含み、該ビノレルビンの脂質に対する割合は、０．２〜０．３：１（ｗ／ｗ）である、組成物。
【請求項２１】
癌の処置のための医薬の製造における、請求項６〜２０のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
（Ｂ．結果）
１．薬物動態および薬物漏出。トポテカンの血漿薬物動態および薬物漏出に対するリポソームカプセル化および薬物  対  脂質比の影響を、ＩＣＲマウスにおいて２４時間にわたり試験した。トポテカンのリポソームカプセル化（薬物  対  脂質比、０．１１、ｗｔ／ｗｔ）は、この薬物の薬物動態パラメーターに対して劇的な影響を与えた（図７、上部；および表１を参照のこと）。５ｍｇ／ｋｇ用量のトポテカンでは、遊離薬物に対するリポソーム薬物について、血漿ＡＵＣにおいて１６４倍の増加、Ｃｍａｘにおいて２４倍の増加および血漿α半減期において２４倍の増加が観察された（表１を参照のこと）。歴史的には、リポソーム薬物のＡＵＣおよび血清半減期における大きな改善により、疾患部位（例えば、腫瘍）への薬物の送達（「疾患部位標的化」として公知のプロセス）の増強が得られた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
この研究において用いた処方物を、Ｍｇ−Ａ２３１８７イオノフォア法により調製した。ｉｖ投与して最初の１０〜３０分後に、最初に薬物が急激に放出され（図７、下部を参照のこと）、続いてより緩やかな放出相が生じた。Ｍｎ−Ａ２３１８７処方物およびＭｇ−Ａ２３１８７処方物についてのｔｌ／２放出は、それぞれ、約３時間および約５〜７時間であった；しかし、２４時間では、いずれの処方物においても薬物はほとんど存在しなかった。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
２．最大寛容用量。単一および複数用量のＭＴＤ研究を、腫瘍保有Ｂａｌｂ／ｃマウス、ＢＤＦ−１マウスおよびＮＣｒ  ｎｕ／ｎｕマウスにおいて行った。個々のマウスの体重を、各研究の間中モニターして、遊離トポテカンおよびリポソームトポテカンの全身的な寛容性を評価し、可能ならば、ＭＴＤを確立した。リポソームトポテカンの最大寛容用量は、単一投与に関して１０ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄｘ３スケジュールに関して７．５ｍｇ／ｋｇおよびｑ３ｄｘ４スケジュールに関して５ｍｇ／ｍｌであった。マウスにおける１回の静脈内注入後の遊離トポテカンの報告されたＬＤ５０は、７５ｍｇ／Ｍ２（約２５ｍｇ／ｋｇ）であった［ＨｙｃａｍｔｉｎＴＭ製品小論］；しかし、４０ｍｇ／ｋｇまでの用量で体重減少はほとんど観察されなかったが、これは、急性応答に起因したＭＴＤと考えられた。薬物量は、制限されていたので、４０ｍｇ／ｋｇより高い用量（５〜１０分にわ
たり投与された）については追求しなかった。ｑｄｘ５スケジュールに対する遊離トポテカンのＬＤ１０は、１４ｍｇ／Ｍ２／用量（約４．７ｍｇ／ｋｇ／用量）であることが以前に示されている（Ｇｒｏｃｈｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．２０：７０６−７１３（１９９２））。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
遊離のトポテカンを単回静脈内用量として投与すると、Ｌ１２１０モデルにおける生存に対して、最小の効果しか有さなかった。最高用量の遊離のトポテカンでは、生存中央値１３日（４４％  ＩＬＳ）が観察された。この群において、１つの長期生存体（６０日）が存在した。対照的に、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのいずれかのリポソームトポテカンの単回静脈内（ｉ．ｅ．）投与は、６０日目で１００％の生存を生じた。１ｍｇ／ｋｇ用量についての生存中央値は１３日（４４％  ＩＬＳ）であり、そして生存曲線は、３０ｍｇ／ｋｇで投与された遊離トポテカンの生存曲線とほぼ同一であった−３０倍の効力増強−。より高用量（３０ｍｇ／ｋｇ）のリポソームトポテカンでは、毒性死が観察された。リポソームトポテカンについてのＭＴＤは、単回静脈内投与の後、ＢＤＦ−１マウスにおいて２０ｍｇ／ｋｇであった。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
このＣＴ−２６モデルにおいて、トポテカンの単回用量の投与は、生存に対して穏やかな影響を有し、用量範囲５〜４０ｍｇ／ｋｇにわたって２３〜６０％のＩＬＳ％を生じた。しかし、リポソームカプセル化トポテカンは、５ｍｇ／ｋｇより大きい用量では非常に活性であり、９０日目で１００％の生存（８／８）を生じた。１０ｍｇ／ｋｇでは、８７．５％の生存（７／８）が９０日目に観察されたが、死んだ動物の腫瘍負荷は非常に低く、このことは、この動物が、他の要因（例えば、骨髄抑制に関連する感染）に起因して死んだかもしれないことを示唆する。リポソームトポテカンに関する用量応答が観察され、２ｍｇ／ｋｇ用量は、５４％のＩＬＳ％を生じた。これは、ＭＥＤであることが決定され、そしてこれは、４０ｍｇ／ｋｇの遊離トポテカンを使用して達成されるＩＬＳ％（５８％）に匹敵した−２０倍の効力増強−。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
進行した（ｓｔａｇｅｄ）（１００〜３００ｍｍ３）ＭＸ−１腫瘍において、遊離のトポテカンは、腫瘍増殖の用量依存性阻害を示した（表１を参照のこと）。最高用量（４０ｍｇ／ｋｇ）において、最適Ｔ／Ｃ％  ２４％が得られたが、一方、１０ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇについての最適Ｔ／Ｃ％は、それぞれ、６６％および７８％であった。薬物関連死は観察されず、そしてすべての動物は、この研究を通じて体重を増した。トポテカンのリポソームカプセル化は、Ｔ／Ｃ％に対して顕著な影響を有し、２ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの薬物の単回投与の後、それぞれ、最適Ｔ／Ｃ％が８％、−４９％および−６２％であった。負のＴ／Ｃ％値は、もとの進行した（ｓｔａｇｅｄ）腫瘍サイズ（１００〜３００ｍｍ３）からの腫瘍体積の後退を示す。ＮＣＩのガイドラインによると、最適Ｔ／Ｃ％が＜１０％であることは、有意な活性と見なされ、一方、＜４２％の値は、薬物を開発へとさらに前進させるために許容可能な最低限度である（Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｔ．編、Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｅｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｅｓｔｉｎｇ．「Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅ：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｎｃａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｒｏｖａｌ」（Ｂ．Ｔｅｉｃｈｅｒ編）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ（１９９７））。リポソームカプセル化は、トポテカンの毒性を増加し、遊離トポテカンについてのＭＩＤを、＞４０ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇへと減少させた。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
一般に、このＬＸ−１モデルは、遊離薬物およびリポソームカプセル化薬物の両方について、ＭＸ−１モデルよりもトポテカンの効果に対して感受性が低い（表１を参照のこと）。用量３０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇの遊離トポテカンについての最適Ｔ／Ｃ％は、それぞれ、４３％、５５％、および６７％であった。抗腫瘍活性が、カプセル化を介して改善され、用量３０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇについてのＴ／Ｃ％が、それぞれ、８％、１１％、および１３％となった。興味深いことに、このリポソームトポテカン用量のすべてが、類似する活性を示した。これは、初期の研究であり、他のモデルにおけるその後の研究は、用量＜５ｍｇ／ｋｇで始まる用量応答を示す。このことは、カンプトテシンクラス化合物（およびおそらく他の抗腫瘍性薬剤）が「自己制限的」効力を示し得、それにより臨界閾値用量を超える用量では、さらなる活性の利点が全く観察されないという知見（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １４００：３０１〜３１９（１９９８））と、一致する。この状況は、おそらく、その薬物が制限された腫瘍細胞への接近を有する場合かまたはその薬物が腫瘍血管に対して作用して破壊する（すなわち、抗脈管形成活性を有する）場合に、生じ得る。両方の場合において、より高用量の薬物は、ごく小量の利点しか有さないと予期される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
（Ｄ．マウス腫瘍モデルおよびヒト腫瘍モデルにおける効力研究：多数回用量研究）
（１．ＭＸ−１ヒト乳癌腫）  複数回投与および薬物に対する腫瘍の長期曝露の効果を調べるために、２つの複数用量プロトコル（ｑ３ｄｘ４スケジュールおよびｑ７ｄｘ３スケジュール）を、ＭＸ−１異種移植片において調べた。ｑ４ｄｘ３スケジュールにおいて、遊離トポテカンは、２．５ｍｇ／ｋｇ／用量および１０ｍｇ／ｋｇ／用量では中程度の活性を示し、１．２５ｍｇ／ｋｇ／用量では、最小の活性を示した（表ＩＩを参照のこと）。この投与スケジュールに関する遊離トポテカンの最適Ｔ／Ｃ％値は、１．２５ｍｇ／ｋｇ／用量、２．５ｍｇ／ｋｇ／用量および１０ｍｇ／ｋｇ／用量について、それぞれ、５５％、３０％、および２７％であった。同じ投与スケジュールで投与されたカプセル化トポテカンについて、最適Ｔ／Ｃ％値は、０．５ｍｇ／ｋｇ／用量、１．２５ｍｇ／ｋｇ／用量、２．５ｍｇ／ｋｇ／用量および５ｍｇ／ｋｇ／用量について、それぞれ、１５％、１００％、１００％、および１００％であった。後退したすべての腫瘍を、６０日間モニターした。＞１．２５ｍｇ／ｋｇ／用量のリポソームトポテカンで処理したすべての動物は、この期間の終わりに、腫瘍を有さないと見なされた。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
ｑ７ｄｘ３投与スケジュールにおいて、５ｍｇ／ｋｇ／用量または１０ｍｇ／ｋｇ／用量のいずれの遊離トポテカンを用いても、ほとんど活性は観察されなかった（表ＩＩを参照のこと）。同じ用量で、リポソームトポテカンは、進行した（ｓｔａｇｅｄ）腫瘍の完全な後退を誘導した。しかし、この投与スケジュールにおいて、１０ｍｇ／ｋｇ／用量は毒性があり過ぎた。そして、６／６毒性死（または安楽死）が２４日目に観察されたので、この研究のこの部分は停止した。