(57)【要約】安全性、経済性及び工業化に優れている、ノビレチン及びタンゲレチンを高濃度に含有する画分を製造する方法を提供することを目的とする。上記目的は、（１−１）柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る工程；（１−２）前記熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る工程；（１−３）前記乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程；（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程；及び（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程を含む、ノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法とその方法で製造されたノビレチン及びタンゲレチン高濃度含有物により解決される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程（１−１）〜（１−３）又は工程（２）と工程（３）及び（４）とを含む、ノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
（１−１）柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る工程
（１−２）前記熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る工程
（１−３）前記乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（２）柑橘類をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程
（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程
【請求項２】
前記工程（１−１）が、柑橘類を５０〜８０℃の温度に維持された熱水で２〜４時間処理して熱水処理物を得る工程である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項３】
前記工程（２）が、柑橘類を５０〜７０℃の温度に維持されたノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で１〜８時間処理してノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項４】
前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒又は前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒が、２０〜１００％（ｖ／ｖ）エタノールである、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項５】
前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒又は前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒が、２０〜５０％（ｖ／ｖ）エタノールである、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項６】
前記工程（４）が、前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を１〜３％（ｗ／ｖ）のアルカリ水溶液で、室温下にて処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項７】
前記柑橘類は、シークワーサー（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）、ウンシュウミカン（Ｃ．ｕｎｓｈｉｕ）、タチバナ（Ｃ．ｔａｃｈｉｂａｎａ）、コウジ（Ｃ．ｌｅｉｏｃａｒｐａ）、ギリミカン（Ｃ．ｔａｒｄｉｖａ）、ジミカン（Ｃ．ｓｕｃｃｏｓａ）、キシュウ（Ｃ．ｋｉｎｏｋｕｎｉ）、コベニミカン（Ｃ．ｅｒｙｔｈｒｏｓａ）、スンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、チチュウカイマンダリン（Ｃ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、キング（Ｃ．ｎｏｂｉｌｉｓ）、ポンカン（Ｃ．ｒｅｔｕｃｕｌａｔａ）、ダンシータンジェリン（Ｃ．ｔａｎｇｅｒｉｎａ）、ハナユ（Ｃ．ｈａｎａｙｕ）、マンダリンオレンジ（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、コウライタチバナ（Ｃ．ｎｉｐｐｏｋｏｒｅａｎａ）、シラヌヒ及び清見からなる群から選ばれる少なくとも１種の植物である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載された製造方法で製造された、ノビレチン及びタンゲレチン含有物。
【請求項９】
前記ノビレチン及びタンゲレチン含有物中のノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上である、請求項８に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物。
【請求項１０】
前記ノビレチン及びタンゲレチン含有物中のシネフリンの含有率が検出下限値未満である、請求項８に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物。
【請求項１１】
ノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、シネフリンの含有率が検出下限値未満である、柑橘類由来のノビレチン及びタンゲレチン含有物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１２年１０月１２日付出願の日本特願２０１２−２２７１７３号の優先権を主張し、その全記載はここに開示として援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、柑橘類由来のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ノビレチン及びタンゲレチンは、柑橘類に含まれるポリメトキシフラボノイドの一種である。ノビレチンは下記式（Ｉ）で表わされる構造を有している。タンゲレチンは、下記式（ＩＩ）で表わされる構造を有している。ノビレチン及びタンゲレチンは、発癌抑制作用、血糖値の低下作用、アルツハイマー型認知症の予防効果等の種々の薬理作用を有するといわれている。【０００４】
【化１】
2014057727.tif 000002
【０００５】
【化２】
2014057727.tif 000003
【０００６】
ポンカンやシークワーサーなどの柑橘類は、ジュースやジャムなどの加工用の原料として用いられることが多い。柑橘類がこのような加工に供される場合、主として果肉が利用され、搾汁後の果肉や果皮などは、搾汁残渣として廃棄されている。しかし、ノビレチン及びタンゲレチンは、果肉よりもこうした搾汁残渣に多く含まれている。柑橘類の搾汁残渣の一部は、精油の抽出や家畜などの飼料として再利用されているが、ノビレチン及びタンゲレチンを含む食品素材の原料としては期待されていない。【０００７】
特開２００５−１４５８２４（以下、「特許文献１」という。該文献の記載はここに開示として援用される。）には、ポンカンの摘果果実を、還流下に３０％エタノールで１時間抽出し、得られた残渣を９０℃以上の熱水で１時間抽出後濃縮し、デカントして上清を得、これを多孔性吸着樹脂に通した後、７０％エタノールで溶出して、ノビレチンを得る方法が記載されている。【０００８】
また、特開２００６−３２７９９８（以下、「特許文献２」という。該文献の記載はここに開示として援用される。）には、オレンジの果皮油を減圧蒸留してリモネンを除いた釜残油とし、この釜残油を薄膜蒸留した後に、約２５倍容の７０％エタノールを加えて加熱還流し、ノビレチン及びタンゲレチンを含有するポリメトキシフラボノイドを製造する方法が開示されている。【０００９】
また、現在市販されている製品としては、株式会社アークレイが販売している製品が知られている（非特許文献１参照、該文献の記載はここに開示として援用される。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００５−１４５８２４
【特許文献２】特開２００６−３２７９９８
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】機能性食品材料−アークレイ＞＞シイクワーシャーエキス「ビレチンの製品使用<URL:http://ebn.arkray.co.jp/products/shiikuwasha-extract/detail-02/>
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
柑橘類に含まれている、ノビレチン、タンゲレチンその他のポリメトキシフラボノイドは、上述したような幾つもの薬理作用を有することから、需要が増加しつつある。そこで、ノビレチン及びタンゲレチンを含有する天然由来物（以下、ノビレチン及びタンゲレチン含有物という）を効率的に製造する方法があれば、ノビレチン及びタンゲレチン含有物を食品素材として利用することが一層期待される。【００１３】
しかし、特許文献１に記載の方法は、還流下に１時間の抽出を行い、その後、さらに９０℃以上の熱水で抽出を行う工程を含み、及びカラムを使用する工程を含むことから、作業者にとって危険が強いられ、かつ、経済性に劣る方法であるという問題がある。【００１４】
特許文献２に記載の方法は、減圧蒸留による釜残油の製造及び薄膜蒸留という工程を含み、さらに大量の７０％エタノールを必要とすることから、危険かつ非経済的な方法であるという問題がある。【００１５】
非特許文献１に記載の製品は、ノビレチン及びタンゲレチンの含有率が１０％前後（ｗ／ｗ）であることから、ノビレチン及びタンゲレチンの含有率の非常に小さい製品であり、食品素材の原料としてはなり得ないという問題がある。【００１６】
そこで、本発明の目的は、従来技術と比較して、安全性があり；使用する溶媒量や工程数が少なくないことから経済性及び工業化に優れており；かつ、ノビレチン及びタンゲレチンの含有率が大きいノビレチン及びタンゲレチン含有物を製造する方法、及びその方法で得られるノビレチン及びタンゲレチン含有物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討した結果、柑橘類を熱水処理及び溶媒抽出処理に供し、又は柑橘類を温溶媒抽出処理に供することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得て、次いでこのノビレチン及びタンゲレチン溶解物を希アルカリで処理することにより、高含有率のノビレチン及びタンゲレチン含有物を得ることに成功した。また、このような方法は、特許文献１や特許文献２に記載の方法と比べて、使用する溶媒量が小さく、温度も低く設定することができ、かつ、簡便な工程からなることから、安全性、経済性及び工業化に優れた方法であることを見出した。本発明はこのような知見に基づいて完成された発明である。【００１８】
したがって、本発明によれば、以下の工程（１−１）〜（１−３）又は工程（２）と工程（３）及び（４）とを含む、ノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法が提供される。
（１−１）柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る工程
（１−２）前記熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る工程
（１−３）前記乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（２）柑橘類をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程
（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程【００１９】
好ましくは、前記工程（４）の後段に、下記工程（５）をさらに含む。
（５）前記ノビレチン及びタンゲレチン含有濃縮物に１０％（ｖ／ｖ）以下のメタノールを加えて処理し、メタノール不溶性成分を得る工程【００２０】
好ましくは、前記工程（１−２）が、前記熱水処理物をろ過して得たろ過残渣を圧搾し、又は圧搾することなく乾燥することにより、前記熱水処理物から水分を除去して乾燥物を得る工程である。【００２１】
好ましくは、前記工程（１−１）が、柑橘類を５０〜８０℃の温度に維持された熱水で２〜４時間処理して熱水処理物を得る工程である。【００２２】
好ましくは、前記工程（２）が、柑橘類を５０〜７０℃の温度に維持されたノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で１〜８時間処理してノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程である。【００２３】
好ましくは、前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒又は前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒が、２０〜１００％（ｖ／ｖ）エタノール、より好ましくは２０〜５０％（ｖ／ｖ）エタノールである。【００２４】
好ましくは、前記工程（４）が、前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を１〜３％（ｗ／ｖ）のアルカリ水溶液で、室温下にて処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程である。【００２５】
好ましくは、前記柑橘類がシークワーサー（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）、ウンシュウミカン（Ｃ．ｕｎｓｈｉｕ）、タチバナ（Ｃ．ｔａｃｈｉｂａｎａ）、コウジ（Ｃ．ｌｅｉｏｃａｒｐａ）、ギリミカン（Ｃ．ｔａｒｄｉｖａ）、ジミカン（Ｃ．ｓｕｃｃｏｓａ）、キシュウ（Ｃ．ｋｉｎｏｋｕｎｉ）、コベニミカン（Ｃ．ｅｒｙｔｈｒｏｓａ）、スンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、チチュウカイマンダリン（Ｃ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、キング（Ｃ．ｎｏｂｉｌｉｓ）、ポンカン（Ｃ．ｒｅｔｕｃｕｌａｔａ）、ダンシータンジェリン（Ｃ．ｔａｎｇｅｒｉｎａ）、ハナユ（Ｃ．ｈａｎａｙｕ）、マンダリンオレンジ（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、コウライタチバナ（Ｃ．ｎｉｐｐｏｋｏｒｅａｎａ）、シラヌヒ及び清見からなる群から選ばれる少なくとも１種の植物である。【００２６】
本発明の別の側面によれば、本発明の方法で製造されたノビレチン及びタンゲレチン含有物が提供される。【００２７】
好ましくは、前記ノビレチン及びタンゲレチン含有物中のノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上である。【００２８】
好ましくは、前記ノビレチン及びタンゲレチン含有物中のシネフリンの含有率が検出下限値未満である。【００２９】
本発明のノビレチン及びタンゲレチン含有物の別の態様として、ノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、シネフリンの含有率が検出下限値未満である、柑橘類由来のノビレチン及びタンゲレチン含有物が提供される。【００３０】
本発明の別の態様として、以下の発明が提供される。
１．柑橘類の果実を圧搾して得た搾汁残渣を、熱水洗浄して熱水洗浄残渣を取得する残渣取得工程と；前記除去残渣を乾燥させ、２０〜４０％エタノールで抽出して抽出物を取得する、エタノール抽出物取得工程と；前記エタノール抽出物を低温で濃縮して濃縮物を得る濃縮物取得工程と；  前記濃縮物に希アルカリを加えて撹拌処理を行い、不溶性成分を取得するアルカリ不溶性成分取得工程と；前記アルカリ不溶性成分をエタノールで溶出させるエタノール溶出工程と；を備える、ノビレチン及びタンゲレチン高濃度含有画分の製造方法。
２．前記柑橘類は、シークワーサー（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）、タチバナ（Ｃ．ｔａｃｈｉｂａｎａ）、コウジ（Ｃ．ｌｅｉｏｃａｒｐａ）、ギリミカン（Ｃ．ｔａｒｄｉｖａ）、ジミカン（Ｃ．ｓｕｃｃｏｓａ）、キシュウ（Ｃ．ｋｉｎｏｋｕｎｉ）、コベニミカン（Ｃ．ｅｒｙｔｈｒｏｓａ）、スンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、チチュウカイマンダリン（Ｃ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、キング（Ｃ．ｎｏｂｉｌｉｓ）、ポンカン（Ｃ．ｒｅｔｕｃｕｌａｔａ）、ダンシータンジェリン（Ｃ．ｔａｎｇｅｒｉｎａ）、ハナユ（Ｃ．ｈａｎａｙｕ）、及びコウライタチバナ（Ｃ．ｎｉｐｐｏｋｏｒｅａｎａ）からなる群から選ばれるものであることを特徴とする。
３．濃縮物取得工程と、前記アルカリ不溶性成分取得工程の間に、前記濃縮物にメタノールを加えて処理し、メタノール不溶性成分を取得するメタノール不溶性成分取得工程をさらに備えることを特徴とする。
４．前記残渣取得工程における加熱乾燥が、５０〜７０℃、１５〜４５分の条件で行われることを特徴とする。
５．前記残渣取得工程における加熱乾燥が、６０℃、３０分の条件で行われることを特徴とする。
６．前記残渣取得工程における熱水抽出が、５０〜８０℃の温浴中にて、２〜４時間の条件で行われることを特徴とする。
７．前記残渣取得工程における熱水抽出が、７０℃、３時間の条件で行われることを特徴とする。
８．前記残渣工程における熱水抽出後残渣の取得が、保留粒子径５μｍ以下のフィルターを用いて行われることを特徴とする。
９．前記エタノール抽出工程における加熱乾燥が、５０〜７０℃、１５〜４５分の条件で行われることを特徴とする。
１０．前記エタノール抽出工程における加熱乾燥が、６０℃、３０分の条件で行われることを特徴とする。
１１．前記エタノール抽出物取得工程におけるエタノール抽出は、２０〜４０％エタノールを用いて、１〜５日間、室温で行われることを特徴とする。
１２．前記エタノール抽出物取得工程におけるエタノール抽出が、３０％エタノールを用いて、室温で行われることを特徴とする。
１３．前記エタノール抽出物取得工程で得られたエタノール抽出液を、５０℃以下の温度で所定の時間濃縮することを特徴とする。
１４．前記アルカリ不溶性成分取得工程におけるアルカリ処理が、１〜３％のアルカリ液で、室温にて、４〜８日間行われることを特徴とする。
１５．前記アルカリ不溶性成分取得工程における不溶性成分の取得が、保留粒子径５μｍ以下のフィルターを用いて行われることを特徴とする。
１６．前記不溶性成分をメタノールで溶出させ、保留粒子径５μｍ以下のフィルターを用いてろ過することを特徴とする。
１７．前記された製造方法で製造された、ノビレチン及びタンゲレチン高濃度含有画分。
１８．前記ノビレチン及びタンゲレチン高濃度含有画分中のノビレチンの含有量が４５％（ｗ／ｖ）であり、タンゲレチンの含有量が２５％（ｗ／ｖ）以上であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００３１】
本発明の方法によれば、従来技術に比して、安全性、工業化かつ経済性に優れた方法であるものとして、ノビレチン及びタンゲレチンを高濃度で含有する柑橘類由来の組成物を製造することが可能である。さらに、本発明のノビレチン及びタンゲレチン含有物によれば、ノビレチン及びタンゲレチン含有物の食品素材、例えば、食品用原料や食品用組成物としての利用が一層期待できる。また、ノビレチン及びタンゲレチンの生理活性を利用して、医薬品及び化粧品の用途に供することもできる。その際、本発明のノビレチン及びタンゲレチン含有物は、単独又は他の添加物と共に、食品用、化粧品用又は医薬品用の粉沫剤、顆粒剤、錠剤、液剤、ペースト剤、カプセル剤、ゲル剤、クリーム剤などの種々の形態で提供され得る。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下に、本発明についてさらに詳細に説明する。
本発明に係るノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法は、原料である柑橘類を加熱及び溶媒抽出に供して得たノビレチン及びタンゲレチン溶解物を希アルカリ処理に供することによって、柑橘類に含まれる糖質や脂肪酸などの成分が除去されたノビレチン及びタンゲレチンを高濃度で含有するノビレチン及びタンゲレチン含有物を不溶性成分として製造することを特徴とする方法である。本発明の方法は、ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程の差異によって、第一及び第二の態様に大別できる。
【００３３】
まず、本発明の方法の第一の態様は、以下の工程（１−１）〜（１−３）と工程（３）及び（４）とを含む。
（１−１）柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る工程
（１−２）前記熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る工程
（１−３）前記乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程
（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程
【００３４】
次に、本発明の方法の第二の態様は、以下の工程（２）と工程（３）及び（４）とを含む。
（２）柑橘類をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程
（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程
【００３５】
本発明における柑橘類はノビレチン及びタンゲレチンを含有する柑橘類植物であれば特に限定されない。本発明における柑橘類としては、例えば、キノット、ジャッファ・オレンジ、ジョッパ、ネーブルオレンジ、バレンシアオレンジ、福原オレンジ、ブラッドオレンジ、ベルガモットなどのオレンジ類；オランジェロ、グレープフルーツなどのグレープフルーツ類；カボス、清岡橙、コブミカン、三宝柑、シークワーサー、シトロン、スダチ、ダイダイ、新姫、ブッシュカン、ゆうこう、柚柑、ユズ、ライム、レモンなどの香酸柑橘類；カクテルフルーツ、カワノナツダイダイ、黄蜜柑、ジャバラ、湘南ゴールド、スウィーティー、夏ミカン、八朔（ハッサク）、はるか、媛小春、日向夏などの雑柑類；安芸の輝き（デコポン）、伊予柑、愛媛果試第２８号、清見、佐賀果試３４号（デコポン）、師恩の恵、シラヌヒ（デコポン）、せとか、せとみ、大将季（デコポン）、タンカン、はるみ、肥の豊（デコポン）、マーコット、麗紅などのタンゴール類；アグリフルーツ、サマーフレッシュ、スイートスプリング、セミノール、タンジェロ、ミネオラなどのタンジェロ類；安政柑、河内晩柑、晩白柚、ブンタン（ザボン）などのブンタン類；温州ミカン、大津四号、カラマンシー、甘平、紀州ミカン、コウジ（柑橘類）、桜島ミカン、タチバナ、藤中みかん、ポンカン、マンダリンオレンジなどのミカン類；カラタチなどのカラタチ属；長葉金柑、長実金柑、寧波金柑、福州金柑、香港金柑、丸実金柑などのキンカン属が挙げられるが、好ましくはシークワーサー（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）、ウンシュウミカン（Ｃ．ｕｎｓｈｉｕ）、タチバナ（Ｃ．ｔａｃｈｉｂａｎａ）、コウジ（Ｃ．ｌｅｉｏｃａｒｐａ）、ギリミカン（Ｃ．ｔａｒｄｉｖａ）、ジミカン（Ｃ．ｓｕｃｃｏｓａ）、キシュウ（Ｃ．ｋｉｎｏｋｕｎｉ）、コベニミカン（Ｃ．ｅｒｙｔｈｒｏｓａ）、スンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、チチュウカイマンダリン（Ｃ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、キング（Ｃ．ｎｏｂｉｌｉｓ）、ポンカン（Ｃ．ｒｅｔｕｃｕｌａｔａ）、ダンシータンジェリン（Ｃ．ｔａｎｇｅｒｉｎａ）、ハナユ（Ｃ．ｈａｎａｙｕ）、マンダリンオレンジ（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、コウライタチバナ（Ｃ．ｎｉｐｐｏｋｏｒｅａｎａ）、シラヌヒ及び清見である。本発明における柑橘類は１種又は２種以上であればよく、上記具体例として挙げた柑橘類の交配種であってもよい。
【００３６】
本発明において利用できる柑橘類の部位は、ノビレチン及びタンゲレチンを含有する部位であれば特に限定されないが、例えば、果実に加えて、果皮、搾汁残渣（搾り粕）、剪定した葉や小枝、これらの乾燥物等も原料として使用することができる。シークワーサーやポンカンなどの場合は、果実、果皮及び搾汁残渣を使用することが、ノビレチンやタンゲレチンの単位重量あたりの含有量が多いことから好ましい。一方で、剪定した葉や小枝等は、単位重量当たりのノビレチンやタンゲレチンの含有量は果皮ほど多くはないが、大量に発生する。このため、これらを使用することで、環境への負荷を軽減することができる可能性がある。
【００３７】
柑橘類の搾汁残渣を得る方法は特に限定されないが、例えば、柑橘類の果実を圧搾機で処理することにより搾汁残渣を得ることができる。圧搾機は特に限定されないが、ロールプレス機やろ布プレス機、遠心ろ過式分離装置等を使用することが、搾汁した果皮を効率よく得られるために好ましい。
【００３８】
柑橘類の果実及び果皮並びに搾汁残渣の乾燥物を得る方法は特に限定されないが、例えば、柑橘類を５０〜７０℃、１５〜４５分の条件で加熱乾燥することにより柑橘類の乾燥物を得ることができる。この際、５０℃未満で乾燥させると、１５〜４５分という短い時間のうちに十分に乾燥させることができない可能性があり、７０℃を越えた温度で乾燥させると、柑橘類中に含まれる成分が乾燥中に変性する可能性がある。そこで、柑橘類を加熱乾燥する際には、約６０℃で約３０分間乾燥させることが好ましい。
【００３９】
工程（１−１）では、柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る。柑橘類を熱水で処理することにより、柑橘類中の糖分を熱水中に溶出するなどして、糖分を除去することができる。熱水は、５０℃以上の温度に維持された熱水であることが好ましい。熱水の温度が５０℃未満である場合は柑橘類中の水溶性夾雑物を十分除去することができない可能性がある。一方、熱水の温度が８０℃を越える場合は、工程作業者にとって危険性があり、かつ、燃料費も要することから、熱水の温度は５０〜８０℃であることがより好ましい。柑橘類を熱水で処理する時間は、柑橘類中の水溶性夾雑物を十分除去することができる時間であれば特に限定されないが、例えば、１時間以上、好ましくは２時間以上、より好ましくは２〜４時間である。工程（１−１）の好ましい態様は、例えば、柑橘類を５０〜８０℃の温度に維持された熱水で２〜４時間処理して熱水処理物を得る工程である。工程（１−１）の具体的な態様としては、特に限定されないが、例えば、蒸留水の中に柑橘類を加えた容器を温浴中に入れて、５０〜８０℃の温度に２〜４時間維持する工程が挙げられる。ここで、熱水処理を、約７０℃、約３時間の条件で行うことがさらに好ましい。
【００４０】
工程（１−１）で得られる熱水処理物は、柑橘類と水との混合物である。そこで、後段の工程（１−２）の乾燥効率や取得効率の観点から、熱水処理物を、保留粒子径５μｍ以下のフィルターを用いてろ過処理することなど、通常知られる固液分離手段により固形分の残渣として取得することが好ましい。フィルターを用いる際は、保留粒子径を３μｍ以下とすると、さらに効率を上げることができる。また、工程（１−１）で用いた柑橘類が果実や果皮である場合は、後段の工程（１−２）の乾燥効率や取得効率の観点から、熱水処理物や熱水処理物の残渣を圧搾するなどして搾汁残渣とすることが好ましい。そこで、本発明の方法において、工程（１−１）の後段に、熱水処理物の残渣を得る工程や熱水処理物の残渣を圧搾することにより搾汁残渣を得る工程を設けることができる。なお、本発明において、熱水処理物は、工程（１−１）で得た熱水処理物に加えて、熱水処理物の残渣や搾汁残渣など、熱水処理物から水分を低減するように加工したものを含む。
【００４１】
工程（１−２）では、工程（１−１）で得られた熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る。この乾燥は熱水処理物の含水率が数十％未満、好ましくは１０％未満になるような乾燥であれば特に限定されないが、約５０〜８０℃、数十分〜数十時間の条件で行う加熱乾燥であることが好ましい。熱水処理物を５０℃未満で乾燥させると、数十分という短い時間のうちに十分に乾燥させることができない可能性があり、一方熱水処理物を８０℃より大きい温度で乾燥させると、熱水処理物に含まれる成分が乾燥中に変性する可能性がある。そこで、工業化に際しては、熱水処理物は、乾燥機などを用いて、約５０〜８０℃で数時間〜数十時間乾燥させることが好ましく、約７０℃で１２〜２４時間がより好ましい。このような乾燥処理によって、工程（１−２）を通じて、ノビレチン及びタンゲレチンを含有し、かつ、含水率が約１０％未満である乾燥物が得られる。
【００４２】
工程（１−３）では、工程（１−２）で得られた乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る。ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒は、ノビレチン及びタンゲレチンを溶解することができる溶媒であれば特に限定されず、例えば、ノビレチン及びタンゲレチンに易溶性の溶媒、具体的にはエタノールや酢酸エチルなどの有機溶媒やこれらの有機溶媒と水との混合溶媒などが挙げられる。ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒として、エタノールと水との混合溶媒を用いる場合、例えば、２０〜１００％（ｖ／ｖ）エタノールとすることができる。ただし、エタノール濃度が２０％（ｖ／ｖ）未満では抽出効率が悪い可能性があり、かつ、エタノール濃度が５０％（ｖ／ｖ）を越えても抽出効率が大きく向上しないことから、ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒としては、２０〜５０％（ｖ／ｖ）エタノールが好ましく、３０％（ｖ／ｖ）エタノールが抽出効率、安全性及び工業化の観点からより好ましい。また、工程（１−３）の処理条件は、乾燥物中のノビレチン及びタンゲレチンが溶媒に溶解するのに適した条件であれば特に限定されず、適宜サンプリングして溶液中のノビレチン及びタンゲレチンの濃度を確認することにより決定すればよいが、例えば、室温下で１〜５日間の条件で実施でき、室温下で３日間とすることが抽出効率の点から好ましい。ノビレチン及びタンゲレチン溶解物中のノビレチン及びタンゲレチンの回収率は特に限定されないが、原料である柑橘類に含まれるノビレチン及びタンゲレチンの想定含有量（５９ｍｇ／ｇ）を基準に、４０％（２３．６ｍｇ／ｇ）以上であることが好ましく、７０％（４１．３ｍｇ／ｇ）以上であることがより好ましく、９０％（５３．１ｍｇ／ｇ）以上であることがさらに好ましく、９５％（５６．１ｍｇ／ｇ）以上であることがなおさらに好ましい。
【００４３】
工程（１−３）によって得られるノビレチン及びタンゲレチン溶解物は一定量の固形分を含む。そこで、後段の工程（４）の処理効率の観点から、工程（１−３）によって得たノビレチン及びタンゲレチン溶解物を、保留粒子径１０μｍ以下のフィルター、好ましくは３μｍ以下のフィルターを用いたろ過などの固液分離手段に供して、液体成分として取得することが好ましい。そこで、本発明において、ノビレチン及びタンゲレチン溶解物には、工程（１−３）によって得られる固形分含有ノビレチン及びタンゲレチン溶解物に加えて、固形分を取り除いた液性ノビレチン及びタンゲレチン溶解物が含まれる。
【００４４】
工程（２）では、柑橘類をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る。工程（２）では、柑橘類中のノビレチン及びタンゲレチンを、ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒により効率よく溶出させるために、工程（２）で用いる柑橘類は搾汁残渣又は搾汁残渣の乾燥物であることが好ましい。ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒は、ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒を５０〜７０℃、好ましくは約６０℃に維持したものである。工程（２）の処理時間は、柑橘類中のノビレチン及びタンゲレチンを溶媒中に十分に溶出することができる時間であれば特に限定されないが、例えば、１時間以上、好ましくは２時間以上、より好ましくは４〜８時間である。工程（２）の溶媒処理で得られるノビレチン及びタンゲレチン溶解物は、工程（１−３）と同様に、保持粒子径１０μｍのカートリッジフィルターを用いたろ過などの固液分離手段に供することにより、液体成分として取得することが好ましい。
【００４５】
本発明の方法は、工程（１−３）又は工程（２）で得られたノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮し、乾燥し、又はその両方をすることにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程（３）を含む。ノビレチン及びタンゲレチン溶解物の濃縮方法は特に限定されないが、例えば、ノビレチン及びタンゲレチン溶解物中の溶媒を低温下で所定の時間をかけて揮散させて乾固状態のノビレチン及びタンゲレチン含有濃縮物とする方法が挙げられる。ノビレチン及びタンゲレチンの濃縮はノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒を除去して減容化したノビレチン及びタンゲレチンの濃縮物が得られれば特に限定されないが、例えば、ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒として２０〜１００％（ｖ／ｖ）エタノールを用いる場合、含有成分の変性防止を考慮して、５０℃以下の温度で、数十分から数時間、好ましくは１０分〜２時間かけて濃縮する。また、ノビレチン及びタンゲレチン溶解物の乾燥方法は特に限定されないが、例えば、ノビレチン及びタンゲレチン溶解物又はその濃縮物を加熱乾燥又は凍結乾燥する方法が挙げられる。
【００４６】
工程（４）では、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る。ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリ処理することにより、溶液中の脂肪酸などの夾雑物成分を除去し、ノビレチン及びタンゲレチンを高濃度で含有するノビレチン及びタンゲレチン含有物を得ることができる。希アルカリは、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物中の夾雑物を分解し、かつ、ノビレチン及びタンゲレチンを分解しないものであれば特に限定されず、例えば、水酸化ナトリウム水溶液及び水酸化カリウム水溶液からなる群から選ばれる希アルカリ水溶液が挙げられる。希アルカリのアルカリ濃度は特に限定されないが、例えば、希アルカリが水酸化ナトリウム水溶液である場合、０．１〜２０％（ｗ／ｖ）とすることができ、好ましくは０．５〜１０％（ｗ／ｖ）であり、より好ましくは１〜３％（ｗ／ｖ）である。
【００４７】
工程（４）のノビレチン及びタンゲレチン濃縮物の希アルカリ処理は、例えば、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物と１〜３％（ｗ／ｖ）のアルカリ溶液とを接触させて、室温下で１〜６日間実施することができる。工程（４）の具体的態様としては、特に限定されるものではないが、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物と１％（ｗ／ｖ）の水酸化ナトリウム水溶液との混合物を、室温にて、１〜２日間攪拌することにより実施され得る。
【００４８】
工程（４）を実施することによって、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物が得られる。ノビレチン及びタンゲレチン含有物を採取するためには、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段を用いることができる。また、ノビレチン及びタンゲレチン含有物は、例えば、食品用原料として使用する場合には、水で洗浄するなどして中和することが好ましい。さらに、ノビレチン及びタンゲレチン含有物は、精製工程に供することができる。例えば、採取及び水洗浄したノビレチン及びタンゲレチン含有物とノビレチン及びタンゲレチン可溶性の溶媒とを混合したものを固液分離することによって、液体成分として不純物が低減されたノビレチン及びタンゲレチン含有物を得ることができる。
【００４９】
本発明の方法によって得られるノビレチン及びタンゲレチン含有物は、従来技術と比較してノビレチン及びタンゲレチンを高濃度で含有する柑橘類由来組成物であるが、例えば、ノビレチン及びタンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上であるノビレチン及びタンゲレチン含有物であることが好ましく、ノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上であるノビレチン及びタンゲレチン含有物であることがより好ましい。
【００５０】
また、本発明者らは、本発明の方法によって得られるノビレチン及びタンゲレチン含有物は、人体にとって悪影響を及ぼす可能性があるシネフリンの含有率が非常に小さいことを見出した。そこで、本発明の方法の好ましい態様は、シネフリンの含有率が０．５％（ｗ／ｖ）未満、好ましくはシネフリンの含有率が検出下限値未満であるノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法である。ノビレチン、タンゲレチン及びシネフリンの含有量は、後述する実施例に記載の方法によって測定できる。
【００５１】
本発明の方法は、本発明の目的を達成し得る限り、上記した工程以外にも種々の工程を加入することができる。例えば、工程（４）の前段に、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物とノビレチン及びタンゲレチン不溶性の有機溶媒とを混合した後、固液分離手段により不溶性成分を得る工程を含むことができる。また、当該工程の後、この不溶性成分とノビレチン及びタンゲレチン可溶性の溶媒とを混合した後、固液分離手段により可溶性成分を得る工程やこの可溶性成分を濃縮する工程を加えることができる。ノビレチン及びタンゲレチン不溶性の有機溶媒は特に限定されないが、例えば、１０％（ｖ／ｖ）以下のメタノール及びエタノールを挙げることができる。
【００５２】
本発明の方法は、別の態様として、柑橘類果実を圧搾及び乾燥して、又は圧搾及び乾燥することなく熱水洗浄して熱水洗浄残渣を取得する残渣取得工程と；前記除去残渣を乾燥させ、２０〜４０％エタノールで抽出して抽出物を取得する、エタノール抽出物取得工程と；前記エタノール抽出物を低温で濃縮して濃縮物を得る濃縮物取得工程と；前記濃縮物に希アルカリを加えて撹拌処理を行い、不溶性成分を取得するアルカリ不溶性成分取得工程と；前記アルカリ不溶性成分をエタノールで溶出させるエタノール溶出工程と；を備える、ノビレチン及びタンゲレチン高濃度含有画分の製造方法として表現することも可能である。
【００５３】
本発明の方法で製造されるノビレチン及びタンゲレチン含有物は、別の態様として、本発明に包含され得る。本発明のノビレチン及びタンゲレチン含有物は、本発明の方法で製造され、かつ、従来技術に比してノビレチン及びタンゲレチンを高濃度で含有する柑橘類由来組成物であれば特に限定されないが、例えば、食品用原料として適用することによる製品製造の際のコストの点から、ノビレチン及びタンゲレチンの含有率は２５％（ｗ／ｖ）以上であるノビレチン及びタンゲレチン含有物であることが好ましく、ノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上であるノビレチン及びタンゲレチン含有物であることがより好ましい。さらに、本発明のノビレチン及びタンゲレチン含有物は、シネフリンの含有率が０．５％（ｗ／ｖ）未満であることがさらに好ましく、シネフリンの含有率が検出下限値未満であることがなおさらに好ましい。また、本発明のノビレチン及びタンゲレチン含有物の別の態様として、ノビレチンの含有率が４５％（ｗ／ｖ）以上であり、タンゲレチンの含有率が２５％（ｗ／ｖ）以上であり、かつ、シネフリンの含有率が検出下限値未満である、柑橘類由来のノビレチン及びタンゲレチン含有物が提供される。
【００５４】
以下に、本発明の方法の具体的態様として、シークワーサーを圧搾した搾汁残渣搾り粕を原料として、ノビレチン及びタンゲレチンの高濃度含有画分を製造する方法を説明するが、本発明の方法は以下のものに限定されない。
【００５５】
まず、シークワーサーを水で洗浄し、その後、シークワーサーの果実をそのまま圧搾できる各種の圧搾機で圧搾処理を行う。こうした圧搾機としては、例えば、２つの圧縮ロールの間に１０〜２０メッシュのエンドレスのネットを挟んで回転させ、連続的に供給されるシークワーサーの果実をこれら２つの圧縮ロールで圧搾するロールプレス搾汁機、シークワーサーの果実をろ布に包んで圧縮し搾汁するろ布プレス機、遠心ろ過式分離装置等を挙げることができる。
【００５６】
果汁を圧搾した搾汁残渣を所定の量、例えば、約３００〜約５００ｇ（湿重量）秤量する。次いで、この残渣を、例えば、約５０〜約７０℃にて、ドライヤー等を用いて乾燥させる。乾燥させた搾汁残渣の重量（乾燥重量）を秤量した後、乾燥搾汁残渣を適当な容器に入れ、ここに、上記乾燥重量の１〜２倍容の蒸留水を加えて、この容器を約６０〜約８０℃の温浴中に移し、１〜３時間抽出する。抽出後、ビーカーを温浴から出して自然冷却させ、その後に、例えば、保留粒子径５μｍ以下のろ紙をブッフナーロートに敷いて、抽出液の全量を吸引ろ過し、残渣をろ別する。
【００５７】
得られた残渣を、再び、上記と同様に、約５０〜約７０℃にて、ドライヤー等を用いて乾燥させ、秤量する。乾燥重量の２〜３倍容のエタノールを加えて、室温にて２〜４日間抽出を行う。次いで、上記と同様に、抽出液全量を吸引ろ過し、残渣をろ別する。ろ液を約３０〜４０℃で約１５〜約６０分間濃縮する。
【００５８】
得られた濃縮物に、この濃縮物の８〜１０倍容の１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加えて、室温にてよく混合する。室温にて１〜２日間、例えば、スターラーを用いてこの混合液を撹拌し続ける。その後、例えば、保留粒子径５μｍ以下のろ紙をロートにセットして自然ろ過し、可溶性成分と不溶性成分とを分離する。得られた不溶性成分を、１〜２倍容の水で洗浄する。残った不溶性成分を５〜１０倍容のエタノールで溶出させる。その後エタノール可溶部分を室温にて約１５〜約６０分間濃縮する。濃縮後の液量は濃縮前の重量の約１／１５〜１／２０となり、この液量を測定する。
【００５９】
この濃縮液に、液量の８〜１０倍容の約０．５〜２％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加えてよく混合する。次いで、室温にて４〜８日間、例えば、スターラーを用いてこの混合液を撹拌し続ける。その後、例えば、保留粒子径５μｍ以下のろ紙をロートにセットして自然ろ過し、残渣をろ別する。以上のようにして、ノビレチンとタンゲレチンとを高含有率で含有する画分を得ることができる。
【００６０】
以下に、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００６１】
ノビレチン及びタンゲレチンの含有量（ｍｇ）は、カラムとしてＤｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−５カラム及び移動相としてＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝７０：３０を用いて、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、測定波長２１５．０ｎｍに設定して、それぞれ約８〜９分、約１１〜１２分のリテンション・タイムを有するピークとして検量線法により測定した。【００６２】
シネフリンの含有量（ｍｇ）は、カラムとしてＤｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−５カラム及び移動相としてＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＝２：９８（０．１％ＴＦＡ入り）を用いて、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、測定波長２２３．０ｎｍに設定して、それぞれ約８〜９分のリテンション・タイムを有するピークとして検量線法により測定した。【００６３】
（実施例１）
沖縄県東村産のシークワーサーの搾り粕５００ｇをよく洗浄し、１８００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間加熱処理した。得られた加熱処理物を、保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。残渣を圧搾機にかけて搾汁した。【００６４】
搾汁後の搾汁残渣３００ｇ（湿重量）を秤量し、ドライヤー（パナソニック社製、品番  ＥＨ５１０１Ｐ  ターボドライ）を用いて、約６０℃で３０分間乾燥させ、乾燥果皮１５０ｇを得た。ここに、搾汁残渣の重量の２倍容の３０％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液３２００ｍｇを得た（表１中の「エタノール抽出後（１）」）。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、濃縮液を得た。【００６５】
濃縮液を１０倍容の１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加えてスターラーで１日間、室温にて撹拌した。得られた不溶性成分を、２倍容の水で洗浄した。残った不溶性成分を５〜１０倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールで溶出させた。次いでエタノール溶出成分を、ブッフナーロートを用いて沈殿物をろ別した。得られたろ液の濃縮乾固物６６．３ｍｇ中のノビレチンとタンゲレチンとの含有量は、ＨＰＬＣで測定したところ、表１に示すとおり、それぞれ３４．０ｍｇ及び１６．８ｍｇであり、含有率は約７７重量％であった。なお、回収率（％）は、シークワーサーの搾り粕５００ｇに含まれるノビレチン及びタンゲレチンの含有量を５００ｍｇと想定して求めた。【００６６】
【表１】
2014057727.tif 000004
【００６７】
（実施例２）
沖縄県東村産のシークワーサーの搾り粕５００ｇをよく洗浄し、１８００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間加熱処理した。得られた加熱処理物を、保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。【００６８】
残渣５００ｇ（湿重量）を秤量し、ドライヤー（パナソニック社製、品番  ＥＨ５１０１Ｐ  ターボドライ）を用いて、約６０℃で３０分間乾燥させ、乾燥果皮２２５ｇを得た。ここに、搾汁残渣の重量の２倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液を得た。ろ液を濃縮乾固し濃縮乾固物１３．１ｇを得た（表２中の「エタノール抽出後（１）」）。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、濃縮液を得た。【００６９】
濃縮液を１０倍容の１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加えてスターラーで１日間、室温にて撹拌した。得られた不溶性成分を、２倍容の水で洗浄した。残った不溶性成分を５〜１０倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールで溶出させた。次いでエタノール溶出成分を、ブッフナーロートを用いて沈殿物をろ別した。ろ液を濃縮乾固し、得られたノビレチン及びタンゲレチン高含有物７６．０ｍｇ中のノビレチンとタンゲレチンとの含有量は、ＨＰＬＣで測定したところ、表２に示すとおり、それぞれ４３．９ｍｇ及び２６．８ｍｇであり、含有率は約９３重量％であった。下記の表２中、ノビレチン及びタンゲレチンの含有量、含有率及び回収率は、上記実施例１と同様にして求めた。【００７０】
【表２】
2014057727.tif 000005
【００７１】
（実施例３）
シークワーサーの搾り粕５０ｇ（湿重量）を秤量し、ドライヤー（パナソニック社製、品番  ＥＨ５１０１Ｐ  ターボドライ）を用いて、約６０℃で３０分間乾燥させ、乾燥果皮１５ｇを得た。得られた乾燥果皮に１００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間加熱抽出した。得られた抽出液を、保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。【００７２】
得られた残渣を乾燥させ、ここに重量の２倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液を得た（表３中の「エタノール抽出後（１）」）。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、乾固の状態の濃縮液１．１５ｇを得た。ここに、得られた濃縮液重量の２倍容の１０％（ｖ／ｖ）メタノールを加えて溶解させ、４×１５ｇで３０分間、室温にて遠心し、１０％メタノール不溶性成分と可溶性成分とに分離した。【００７３】
得られた１０％（ｖ／ｖ）メタノール不溶性成分に１倍容の５０％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、４×１０ｇで３０分間、室温にて遠心し、さらに、不溶性成分と可溶性成分とに分けた。可溶性成分を４０℃にて３０分間濃縮し、１０倍容の１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリム水溶液を加えてスターラーで６日間、室温にて撹拌した。次いで保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、沈殿物をろ液とろ別した。得られた沈殿物を２倍容の水で洗浄し、次いで５〜１０倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールで溶出させた。次いでエタノール溶出成分を、ブッフナーロートを用いて沈殿物をろ別した。得られたろ液を濃縮乾固して、ノビレチン及びタンゲレチン高含有精製物２８．４ｍｇを得た。高含有精製物中のノビレチンとタンゲレチンとの含有量は、ＨＰＬＣで測定したところ、表３に示すとおり、それぞれ１４．１ｍｇ及び１１．２ｍｇであり、含有率は約８９重量％であった。下記の表３中、ノビレチン及びタンゲレチンの含有量、含有率及び回収率は、上記実施例１と同様にして求めた。【００７４】
【表３】
2014057727.tif 000006
【００７５】
以上のようにして、ノビレチンとタンゲレチンとを高濃度に含有する画分を得た。得られた画分は、これまで製造されてきた画分よりも数倍高い濃度でノビレチンとタンゲレチンとを含むため、これらの化合物を簡便に製造することができるようになる。また、本発明の方法によって得られた高濃度画分を用いることで、これらの化合物及びそれらの類縁体の製造の際にコスト面での優位性が高くなる。【００７６】
（実施例４）
下記ロット１〜３のノビレチン及びタンゲレチンを高濃度で含有する粉沫を得た。【００７７】
［ロット１］
乾燥シークワーサー搾り粕７０ｋｇを３０％（ｖ／ｖ）エタノール４５０Ｌを用いて、６０℃で２時間抽出を行った。抽出経過後１時間及び２時間の抽出物並びにその後濃縮した抽出物をサンプリングしてカートリッジフィルター（保持粒子径１０μｍ）でろ過した後、ろ液を濃縮して溶液の量を１３０Ｌに減じた。当該溶液と同量（１３０Ｌ）の２％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加え、溶液を室温で一晩攪拌した。その後、溶液を遠心分離して、沈殿粉沫３１９ｇ（湿重量）を得た。得られた粉沫を水に浸漬した後にろ過するという操作を二度繰り返した。水で洗浄して再度ろ過した後に、ろ紙上の残渣をエタノールに浸漬させた。残渣を吸引ろ過し、得られたエタノール抽出液を濃縮し、ノビレチン及びタンゲレチン高含有粉沫６２．５ｇ（ノビレチン含有率４２．８ｗｔ％、タンゲレチン含有率４５．９ｗｔ％）を得た。結果を表４に示す。
【表４】
2014057727.tif 000007
【００７８】
［ロット２］
乾燥シークワーサー搾り粕５５ｋｇを３０％（ｖ／ｖ）エタノール４５０Ｌを用いて、６０℃で１時間抽出を行い、室温で一晩静置後、カートリッジフィルター（保持粒子径１０μｍ）でろ過した後、ろ液を濃縮して溶液の量を８０Ｌに減じた。当該溶液と同量の２％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加え、溶液を６℃に冷やしながら攪拌した。その後、溶液を遠心分離して、水酸化ナトリウム処理物１５３４ｇを得た。得られた水酸化ナトリウム処理物のうち１２９４ｇを水で洗浄した。その後遠心分離を行い、上清と沈殿物に分離した。沈殿物を凍結乾燥した後、水で洗浄した後の粉沫９２．６ｇを得た。再度水洗浄した後の粉沫をエタノールに溶かし吸引ろ過を行った。エタノール溶出成分を濃縮し、ノビレチン及びタンゲレチン高含有粉沫５８．２ｇ（ノビレチン含有率５４．２ｗｔ％、タンゲレチン含有率３６．０ｗｔ％）を得た。回収率は２４．３％であった。【００７９】
［ロット３］
乾燥シークワーサー搾り粕５５ｋｇを３０％（ｖ／ｖ）エタノール４５０Ｌを用いて、６０℃で１時間抽出を行い、室温で一晩静置後、カートリッジフィルター（保持粒子径１０μｍ）でろ過した後、ろ液を濃縮して溶液の量を９５Ｌに減じた。当該溶液の５Ｌをスプレードライし、９０Ｌの濃縮液に同量の２％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を加え、溶液を２０〜２５℃に維持して撹拌した。その後、溶液を遠心分離して、水酸化ナトリウム処理物を２６０ｇ得た。この水酸化ナトリウム処理物を水で洗浄した。その後遠心分離を行い、沈殿物を凍結乾燥し、水洗浄した後の粉沫９０．７ｇを得た。再度水洗浄した後の粉沫をエタノールに溶かし吸引ろ過を行った。エタノール溶出成分を濃縮し、ノビレチン及びタンゲレチン高含有粉末７６．３ｇ（ノビレチン含有率５０．２ｗｔ％，タンゲレチン含有率３１．２ｗｔ％）を得た。回収率は２５．２％であった。【００８０】
（実施例５）
シークワーサーの搾り粕乾燥物５５ｇを３０％（ｖ／ｖ）エタノール４５０ｍｌに浸し、７０℃の湯浴中で２時間抽出を行った。抽出液を不織布でろ過をした。抽出液を一部濃縮し秤量、ＨＰＬＣ測定を行いノビレチン及びタンゲレチンの含量を算出した。同様の方法で、３０％（ｖ／ｖ）エタノールの代わりに４０％（ｖ／ｖ）、５０％（ｖ／ｖ）、７０％（ｖ／ｖ）エタノールを用いて行った。回収率は乾燥搾り粕５５ｇに含まれていると想定される２７５ｍｇで計算した。結果を表５に示す。
【表５】
2014057727.tif 000008
【００８１】
（実施例６）
乾燥シークワーサー搾り粕５５ｋｇを３０％（ｖ／ｖ）エタノール４５０Ｌ、６０℃で６時間抽出を行い、室温で一晩静置後、カートリッジフィルター（保持粒子径１０μｍ）でろ過、濃縮を行い溶液の量を１３０Ｌに減らして、シークワーサー抽出液とした。このシークワーサー抽出液の凍結乾燥粉末５ｇ（ノビレチン  １９５ｍｇ（３．９重量％）、タンゲレチン１００ｍｇ（２．０重量％）含有）に１％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液を３０ｍｌ加えて、シークワーサーアルカリ処理物を得た。このアルカリ処理物を１６時間循環攪拌した後に遠心分離して、沈殿物１を得た。この沈殿物１を水で洗浄した後に、遠心分離して、沈殿物２を得た。この工程は上清液が中性になるまで行った。最終的に得られた沈殿物を乾燥したもの（１．１ｇ）に１００％（ｖ／ｖ）エタノールを加えたものを遠心分離して得たろ液を濃縮して粉沫３４４ｍｇを得た。この粉沫には、ノビレチン１５９ｍｇ（４６．３重量％）及びタンゲレチン８７ｍｇ（２５．３重量％）が含まれていた。本法によれば、凍結乾燥粉末に含まれていたノビレチン及びタンゲレチンを８０％以上回収することができた。【００８２】
（実施例７）
乾燥シークワーサー搾り粕５５ｋｇを３０％（ｖ／ｖ）エタノール４５０Ｌ、６０℃で６時間抽出を行い、室温で一晩静置後、カートリッジフィルター（保持粒子径１０μｍ）でろ過、濃縮を行い溶液の量を１３０Ｌに減らして、シークワーサー抽出液とした。このシークワーサー抽出液の濃縮乾固物４．５ｇ（ノビレチン１７５ｍｇ（３．９重量％）、タンゲレチン９０ｍｇ（２．０重量％）含有）に１ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液を３０ｍｌ加えて、シークワーサーアルカリ処理物を得た。このアルカリ処理物を１６時間循環攪拌した後に遠心分離して、沈殿物１を得た。この沈殿物１を水で洗浄した後に、遠心分離して、沈殿物２を得た。この工程は上清液が中性になるまで行った。最終的に得られた沈殿物を乾燥したもの（７６０ｍｇ）に１００％（ｖ／ｖ）エタノールを加えたものを遠心分離して得たろ液を濃縮して粉沫３４４ｍｇを得た。このろ液には、ノビレチン１５９ｍｇ（４４．２重量％）及びタンゲレチン８７ｍｇ（２２．７重量％）が含まれていた。本法によれば、濃縮液に含まれていたノビレチン及びタンゲレチンを６０％以上回収することができた。【００８３】
（参考例１）
シークワーサーの葉５８９ｇ（湿重量）を秤量し、乾燥機（東京理化器械（株）、ＷＦＯ−１００１ＳＤ）を用いて、約８０℃で１６時間乾燥させ、乾燥葉２１８ｇを得た。得られた乾燥葉のうち５ｇに１００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間、加熱抽出した。得られた抽出液を、保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。【００８４】
得られた残渣を乾燥させ、ここに重量の２倍容の３０％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液を得た。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、乾固状態の濃縮液を得た。ここに、得られた濃縮液重量の等倍容の水と酢酸エチルを加えて溶解させ、分液を行った。酢酸エチル可溶成分を濃縮し、ノビレチン含有率２４．４ｗｔ％、タンゲレチン含有率１１．２ｗｔ％の抽出物を得た。【００８５】
（参考例２）
シークワーサーの乾燥葉５ｇに１００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間、加熱抽出した。得られた抽出液を、保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。【００８６】
得られた残渣を乾燥させ、ここに重量の２倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液を得た。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、乾固状態の濃縮液を得た。ここに、得られた濃縮液重量の等倍容の水と酢酸エチルを加えて溶解させ、分配抽出をおこなった。酢酸エチル可溶成分を濃縮し、ノビレチン含有率６．９ｗｔ％、タンゲレチン含有率５．２ｗｔ％の抽出物を得た。【００８７】
（参考例３）
シークワーサーの乾燥葉５ｇに１００ｍＬの約７０℃の蒸留水を加えて約７０℃の湯浴中に入れ、３時間、加熱抽出した。得られた抽出液を、保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、残渣を得た。【００８８】
得られた残渣を乾燥させ、ここに重量の２倍容の１００％（ｖ／ｖ）エタノールを加えて、室温で、３日間エタノール抽出を行った。保留粒子径３μｍのろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、Ｎｏ．１３１）を敷いたブッフナーロートを用いて吸引ろ過し、ろ液を得た。得られたろ液をロータリーエバポレータで濃縮し、乾固状態の濃縮液を得た。ここに、得られた濃縮液重量の等倍容の水と酢酸エチルを加えて溶解させ、分液をおこなった。酢酸エチル可溶成分を濃縮し、ノビレチン含有率６．９ｗｔ％、タンゲレチン含有率５．２ｗｔ％の抽出物を得た。同様の方法で、１００％（ｖ／ｖ）エタノールの代わりに３０％（ｖ／ｖ）エタノール、５０％（ｖ／ｖ）エタノール及び７０％（ｖ／ｖ）のエタノールを用いて、それぞれ抽出を行った。結果を表６に示す。【００８９】
【表６】
2014057727.tif 000009
【００９０】
以上より、エタノール濃度が上昇すると、酢酸エチル抽出物重量は増加するが、ノビレチン及びタンゲレチンの含有量は、３０％（ｖ／ｖ）エタノール又は５０％（ｖ／ｖ）エタノールを使用したときに多く、これらの濃度のエタノールを用いたときに抽出効率が高いことが示された。以上のようにして、シークワーサーの葉からも、ノビレチンとタンゲレチンとを高濃度に含有する画分を得た。得られた画分は、これまで製造されてきた画分よりも数倍高い濃度でノビレチンとタンゲレチンとを含むため、これらの化合物を簡便に製造することができるようになる。また、本発明の方法によって得られた高濃度画分を用いることで、これらの化合物及びそれらの類縁体の製造の際にコスト面での優位性が高くなる。
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明は、食品、医薬品及び化粧品の分野で有用であり、特にクリーム剤、ゲルクリーム剤、化粧水として、又はこれらに配合できる点で有用である。
【手続補正書】
【提出日】平成26年11月27日(2014.11.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程（１−１）〜（１−３）又は工程（２）と工程（３）及び（４）とを含む、ノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
（１−１）柑橘類を熱水で処理することにより熱水処理物を得る工程
（１−２）前記熱水処理物を乾燥することにより乾燥物を得る工程
（１−３）前記乾燥物をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（２）柑橘類をノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で処理することによりノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程
（３）前記ノビレチン及びタンゲレチン溶解物を濃縮及び／又は乾燥することにより、ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を得る工程
（４）前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を希アルカリで処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程
【請求項２】
前記工程（１−１）が、柑橘類を５０〜８０℃の温度に維持された熱水で２〜４時間処理して熱水処理物を得る工程である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項３】
前記工程（２）が、柑橘類を５０〜７０℃の温度に維持されたノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒で１〜８時間処理してノビレチン及びタンゲレチン溶解物を得る工程である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項４】
前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒又は前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒が、２０〜１００％（ｖ／ｖ）エタノールである、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項５】
前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である溶媒又は前記ノビレチン及びタンゲレチン可溶性である温溶媒が、２０〜５０％（ｖ／ｖ）エタノールである、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項６】
前記工程（４）が、前記ノビレチン及びタンゲレチン濃縮物を１〜３％（ｗ／ｖ）のアルカリ水溶液で、室温下にて処理することにより、不溶性成分としてノビレチン及びタンゲレチン含有物を得る工程である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【請求項７】
前記柑橘類は、シークワーサー（Ｃｉｔｒｕｓ  ｄｅｐｒｅｓｓａ）、ウンシュウミカン（Ｃ．ｕｎｓｈｉｕ）、タチバナ（Ｃ．ｔａｃｈｉｂａｎａ）、コウジ（Ｃ．ｌｅｉｏｃａｒｐａ）、ギリミカン（Ｃ．ｔａｒｄｉｖａ）、ジミカン（Ｃ．ｓｕｃｃｏｓａ）、キシュウ（Ｃ．ｋｉｎｏｋｕｎｉ）、コベニミカン（Ｃ．ｅｒｙｔｈｒｏｓａ）、スンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、チチュウカイマンダリン（Ｃ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、キング（Ｃ．ｎｏｂｉｌｉｓ）、ポンカン（Ｃ．ｒｅｔｕｃｕｌａｔａ）、ダンシータンジェリン（Ｃ．ｔａｎｇｅｒｉｎａ）、ハナユ（Ｃ．ｈａｎａｙｕ）、マンダリンオレンジ（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サンキ（Ｃ．ｓｕｎｋｉ）、コウライタチバナ（Ｃ．ｎｉｐｐｏｋｏｒｅａｎａ）、シラヌヒ及び清見からなる群から選ばれる少なくとも１種の植物である、請求項１に記載のノビレチン及びタンゲレチン含有物の製造方法。
【国際調査報告】
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