(57)【要約】  抗生物質を用いずとも、甲殻類のウイルスによる感染症を予防・治療し得る方法、及び、ウイルス感染症の予防・治療用飼料を提供することを目的とする。本発明は、甲殻類のウイルス感染症の予防・治療方法であって、甲殻類に、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを、体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与することを特徴とする方法である。また本発明は、有効成分として、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを１ｐｐｍ以上含有し、有効成分である補酵素Ｑが体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与されることを特徴とする、甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料でもある。【特許請求の範囲】
【請求項１】
甲殻類のウイルス感染症の予防・治療方法であって、甲殻類に、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを、体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与することを特徴とする方法。
【請求項２】
甲殻類の飼育方法であって、甲殻類に、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを、体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与することにより、ウイルス感染を原因とする生産性低下を防止または軽減する方法。
【請求項３】
甲殻類がエビ又はカニである請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ウイルスがホワイトスポットウイルスである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
有効成分として、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを１ｐｐｍ以上含有し、有効成分である補酵素Ｑが体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与されることを特徴とする、甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甲殻類を飼育するに際し、補酵素Ｑを投与することによりウイルスによる感染症を予防・治療する方法、及び、補酵素Ｑを有効成分として含有する甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
エビやカニ等の甲殻類を養殖する場合、多くは経済性を高めるために高密度で飼育されている。そのため、各種ウイルスや細菌等に感染しやすく、また、その感染が広がりやすい環境下にある。いったん感染した場合には、養殖区域内での感染が急速に広まり、生育不良・死亡率の増加等により、大きく生産性が低下するため、著しい経済損失を被ることが大きな問題となっている。【０００３】
一方、無脊椎動物である甲殻類では、脊椎動物、例えば、魚類、鳥類、哺乳類の場合とは免疫機構が大きく異なっている。甲殻類等の無脊椎動物では、脊椎動物が持つ液性免疫である抗体や細胞性免疫による適応免疫の防御機構を保有しておらず、食作用などの細胞性因子と抗菌ペプチドなどによる体液性因子のみからなる自然免疫系のみに依存している。したがって通常脊椎動物ではなし得ることのできる免疫防御機構が甲殻類では期待できないケースの方が多い。【０００４】
こうした問題に対して、これまでは抗生物質を投与することで対応してきたが、現在既に、欧州や韓国では、甲殻類の増体（体重増加）や感染予防目的での抗生物質の使用が禁止されており、日本を含め多くの国でも抗生物質の使用が禁止される方向に進んでいる。そのため、抗生物質を使用せずにウイルスや細菌などの感染による生産性低下を回避する方法が求められてきた。【０００５】
このような背景の下、甲殻類の感染症を予防又は治療する方法として、特許文献１に、ラクチュロース以外のオリゴ糖を有効成分とするウイルス症に対する薬剤が提案されている。しかし本薬剤はその効果の程度などから養殖現場で汎用的に使用されるには至っていない。また、特許文献２に、プロアントシアニジンを用いることで、養殖海水の溶存酸素濃度の減少を抑制し、斃死をなくすことができるという甲殻類の飼育方法が提案されているが、本方法もまたその効果の程度などから養殖現場で汎用的に使用されるには至っていない。つまり、抗生物質の代替となる汎用的な方法が確立されていないのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平１０−４５６０５
【特許文献２】特開２００２−１９９８４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本願発明は、抗生物質を用いずとも、甲殻類のウイルスによる感染症を予防・治療し得る方法、並びに甲殻類のウイルスの感染症の予防・治療用飼料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決すべく、鋭意、研究を重ねた結果、驚くべきことに、補酵素Ｑが、甲殻類のウイルス感染による生産性の低下を回避し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００９】
すなわち、本発明は、甲殻類のウイルス感染症の予防・治療方法であって、甲殻類に、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを、体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与することを特徴とする方法である。【００１０】
また、本発明は、甲殻類の飼育方法であって、甲殻類に、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを、体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与することにより、ウイルス感染を原因とする生産性低下を防止または軽減する方法である。【００１１】
さらに本発明は、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを１ｐｐｍ以上含有し、有効成分である補酵素Ｑが体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の投与量で投与されることを特徴とする、甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、抗生物質あるいはその他の化学的薬剤を用いずとも甲殻類のウイルスによる感染症を予防又は治療することができ、ひいては、これら感染症を原因とする甲殻類の養殖における生産性低下を防止あるいはその影響を軽減することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、甲殻類に補酵素Ｑまたは補酵素Ｑを含有する飼料を投与することで、ウイルスによる甲殻類の感染症を予防及び／又は治療する方法であり、また、甲殻類の養殖において、補酵素Ｑまたは補酵素Ｑを含有する飼料を投与することで、上記ウイルス感染症による生産性の低下を防止又は軽減する甲殻類の飼育方法でもある。
【００１４】
本発明の対象となる甲殻類としては特に制限されず、養殖対象となる一般的な甲殻類として、例えば、エビ、カニ、フジツボ、オキアミ等が挙げられるが、好ましくは、エビ、カニであり、特に好ましくはエビである。エビとしては特に制限されないが、例えば、ブラックタイガー（ウシエビ）、バナメイエビ、クルマエビ、ボタンエビ、甘エビ、コウライエビ（大正エビ）、クマエビ、伊勢エビ、ロブスター等を挙げることができ、好ましくは、ブラックタイガー、バナメイエビ、クルマエビ等が挙げられる。カニとしては特に制限されないが、例えば、ズワイガニ、中国モクズガニ（上海ガニ）、紅ズワイガニ、毛ガニ、タラバガニ、アブラガニ等を挙げることができる。
【００１５】
本発明で用いられる補酵素Ｑとは、下記式（１）で表される酸化型補酵素Ｑ及び／又は下記式（２）で表される還元型補酵素Ｑを表す。本明細書において、補酵素Ｑとのみ記載した場合は、酸化型、還元型を問わず、両者が混在する場合には混合物全体を表すものである。
【００１６】
【化１】
2014003069.tif 000002
【００１７】
【化２】
2014003069.tif 000003
【００１８】
補酵素Ｑは、動植物中に広く存在し、極めて安全性が高いことが知られている。本発明で使用される補酵素Ｑは、化学合成、微生物による発酵や天然物からの抽出等の製造形態を問わずいずれの補酵素Ｑも使用することができるが、微生物による発酵によって製造されるものが好ましく、そのなかでも酵母又は細菌による発酵によって製造されるものがより好ましい。また、微生物による発酵や天然物からの抽出によって製造された補酵素Ｑを使用する場合、補酵素Ｑの効果を十分に発揮する観点から、精製された補酵素Ｑを使用するのが好ましい。この場合、例えば補酵素Ｑの純度としては特に制限されないが、通常８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、特に好ましくは９７％以上である。上限は言うまでもなく１００％である。
【００１９】
補酵素Ｑは、その起源となる生物によって、前記式（１）及び（２）においてｎで表される側鎖の長さが異なっており、甲殻類の中では、ｎ＝１０である補酵素Ｑ１０を生合成するものが多い。この観点から、本発明で用いられる補酵素Ｑとしては、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０の含量が５０％以上であるものを用いる必要がある。全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０の含量としては、好ましくは７０％以上、さらに好ましくは８０％以上、特に好ましくは９０％以上、とりわけ好ましくは９５％以上である。上限は特に限定されず、１００％であってもかまわないが、通常９９．５％程度で十分である。
【００２０】
また、本発明で使用される補酵素Ｑは、酸化型補酵素Ｑ、還元型補酵素Ｑのどちらか一方に限定はされず、これらの混合物であってもよく、それらの混合割合も制限されないが、経済性の観点から酸化型補酵素Ｑや、酸化型補酵素Ｑを主成分（例えば60％以上）とする混合物を使用するのが好ましい。
【００２１】
本発明の予防・治療方法の対象となる甲殻類の感染症は、ウイルスを主因とするものである。本発明の対象となるウイルスとしては、甲殻類の養殖において重大な生産性低下を引き起こす、ホワイトスポットウイルス、イエローヘッド病ウイルス、タウラ症候群ウイルス、伝染性皮下造血器壊死症ウイルス、バキュロウイルス、急性ウイルス血症ウイルス、ヘパトパンクリアティックパルボウイルス、中腸腺壊死症ウイルス、RV−PJ感染症ウイルス等が挙げられる。この中でも本発明の方法は、ホワイトスポットウイルスによる感染症に対して特に有効である。
【００２２】
本発明でいう、ウイルスによる感染を原因とする生産性低下とは、ウイルス感染に伴う、死亡率増加や体重減少／成長遅延等の甲殻類の養殖における漁獲高の減少を意味する。すなわち、本発明の方法により、ウイルス感染による死亡率増加や体重減少を回避・抑制し、本来期待される漁獲高に近づけることができる。言うまでもなく、ウイルスに感染した後の回復を早めることにより、体重の減少／成長遅延を回避・抑制することも本発明の範疇である。
【００２３】
本発明において、感染症の主因がウイルスである場合に、補酵素Ｑの使用量と予防・治療効果の関係が、特定の数値をピークとし有効な範囲が限られたベルシェイプとなることが初めて見いだされた。この観点から、本発明においては、甲殻類の体重１ｋｇあたりの補酵素Ｑの投与量が１．２〜８ｍｇ／日となるように補酵素Ｑや補酵素Ｑを含有する飼料を投与する必要がある。補酵素Ｑの投与量の下限としては、上記範囲を満たす限り特には限定されないが、好ましくは体重１ｋｇあたり１．５ｍｇ／日以上、より好ましくは１．８ｍｇ／日以上、特に好ましくは２ｍｇ／日以上である。上限も上記範囲であれば特に限定されないが、好ましくは体重１ｋｇあたり６ｍｇ／日以下、より好ましくは５ｍｇ／日以下である。
【００２４】
本発明において、補酵素Ｑや補酵素Ｑを含有する飼料を甲殻類に投与・摂取させる期間としては、補酵素Ｑの量や摂取の目的、対象甲殻類の種類、ウイルスの種類、体重、日齢、供与飼料、飼育環境等によって異なるため、一概に規定できないが、補酵素Ｑの効果を十分に発揮させるためには、一般的には１週間以上継続して投与・摂取させるのが好ましい。より好ましくは４週間以上であり、さらに好ましくは８週間以上である。
【００２５】
本発明において、補酵素Ｑや補酵素Ｑを含有する飼料を甲殻類に投与・摂取させる時期としては、補酵素Ｑの量や摂取の目的、対象甲殻類の種類、ウイルスの種類、体重、日齢、供与飼料、飼育環境等によって異なるため、一概には規定できないが、例えば水温・季節などの環境状況から感染が予想される時期や近隣で感染が発生した場合に予防的に投与・摂取させても良く、あるいは実際に感染が確認されてから治療目的で投与・摂取させてもよい。一般的には、特定時期に限定されず、飼育全期間に投与することが好ましい。
【００２６】
本発明においては、補酵素Ｑを直接、粉体状態、あるいは溶液状態で経口剤として甲殻類に投与することも出来る。当該経口剤としては、例えば粉末剤であってもよく、結合剤を加えて顆粒剤としても良い。また、粉末剤や顆粒剤を打錠した錠剤やチュアブル錠としても良いし、カプセルに充填してカプセル剤としても構わない。またいわゆる、経口剤の他、補酵素Ｑを乳化製剤あるいは水溶化製剤として、養殖槽の海水に直接添加しても良い。
【００２７】
また、本発明においては、補酵素Ｑを飼料に混ぜて甲殻類に与えるのが、投与の簡便性から好ましい。すなわち、全補酵素Ｑ中の補酵素Ｑ１０含量が５０％以上である補酵素Ｑを有効成分として含有する、甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料も本発明の一態様である。
【００２８】
飼料への補酵素Ｑの添加方法については、特に制限されるものではない。ただし、補酵素Ｑとして微生物等の生物由来のものを用いる場合には、本発明の効果を最大化する観点からは、生物体の乾燥物や破砕物として添加するのではなく、生物体から抽出・分離され、部分的あるいは完全に精製された補酵素Ｑを添加するのが好ましい。
【００２９】
補酵素Ｑは、直接飼料に添加混合してもよく、また、必要に応じて補酵素Ｑを添加した飼料添加物やプレミックスを、飼料に添加して補酵素Ｑ含有飼料としても良いし、補酵素Ｑ含有飼料として、顆粒剤や錠剤、チュアブル錠等の形態の飼料としてもよい。飼料中に補酵素Ｑを均一に混合させる観点からは、補酵素Ｑを直接飼料に混合するよりも、補酵素Ｑ含有飼料添加物、あるいは補酵素Ｑ含有プレミックスとした後に、当該補酵素Ｑ含有飼料添加物や補酵素Ｑ含有プレミックスを飼料へと混合するのが好ましい。
【００３０】
飼料中の補酵素Ｑ含有量は、甲殻類の種類、体重、週齢、供与飼料、飼育環境等により異なり、一概には規定できないが、対象となる甲殻類の飼料の摂取量を勘案し、有効成分である補酵素Ｑの投与量が甲殻類の体重１ｋｇあたり１．２〜８ｍｇ／日の範囲内となるよう、適宜調整して決定すれば良い。具体的には、飼料中の補酵素Ｑ含有量として、通常１ｐｐｍ以上、好ましくは１０ｐｐｍ以上、より好ましくは５０ｐｐｍ以上、さらに好ましくは１００ｐｐｍ以上、特に好ましくは１２０ｐｐｍ以上である。上限は、特に限定されないが、通常８００ｐｐｍ以下、好ましくは６００ｐｐｍ以下、より好ましくは５００ｐｐｍ以下、さらに好ましくは４００ｐｐｍ以下、特に好ましくは３００ｐｐｍ以下である。好適には１００〜４００ｐｐｍの範囲で使用し得る。なお、補酵素Ｑを含有する飼料と、含有しない飼料を併用することも出来、その場合はこの限りではない。
【００３１】
補酵素Ｑ含有飼料添加物や補酵素Ｑ含有プレミックスを用いて、本発明の補酵素Ｑ含有飼料を調製する場合、当該飼料添加物またはプレミックスにおける補酵素Ｑの含有量は、特に制限されないが、通常１重量％以上、好ましくは２重量％以上、より好ましくは３重量％以上である。また、上限も特に制限されないが、通常２０重量％以下、好ましくは１５重量％以下、より好ましくは１０重量％以下である。
【００３２】
本発明で補酵素Ｑを添加混合するための、甲殻類用飼料の原料は特に制限されず、一般に用いられている原料が使用される。そのような原料として、例えば、穀類（とうもろこし、マイロ、大麦、小麦等）、糟糠類（米ぬか、籾殻、ふすま等）、植物性油粕類（大豆油粕、菜種油粕等）、動物性飼料（魚粉、骨肉粉等）、食塩、オリゴ糖類、二酸化ケイ素やケイ酸類等のケイ素含有化合物、各種ビタミン類、ミネラル類（炭酸カルシウム、第２リン酸カルシウム、ゼオライト等）、アミノ酸類および有機酸類等が挙げられる。またこれら原料があらかじめ混合された市販の混合飼料を用いることもできる。
【００３３】
また、補酵素Ｑ含有飼料添加物や補酵素Ｑ含有プレミックスに添加混合できる成分としては、上記原料の他に、生菌剤（例えば、エンテロコッカス類、バチルス類、ラクトバチルス類、ビフィズス菌類等）、抗酸化剤（例えば、エトキシン、ジブチルヒドキシトルエン等）、防かび剤（例えば、プロピオン酸、プロピオン酸カルシウム等）、粘結剤（例えば、アルギン酸ナトリウム、カゼインナトリウム、カルボキシメチルセルロース等）、乳化剤（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等）、アミノ酸（例えば、ＤＬ−アラニン、Ｌ−アルギニン、塩酸Ｌ−リジン等）、ビタミン（例えば、Ｌ−アスコルビン酸、β−カロチン、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール等）、ミネラル（例えば、塩化カリウム、クエン酸鉄、酸化マグネシウム等）、色素（例えばアスタキサンチン、カンタキサンチン等）、酵素（例えばアミラーゼ、フィターゼ、リパーゼ等）、有機酸（ギ酸、酢酸、乳酸等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
さらに、上記補酵素Ｑの他に薬剤学的に許容される他の製剤素材を、常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが挙げられる。
【００３５】
上記酸化防止剤としては特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などが挙げられる。
【００３６】
上記吸収促進剤としては特に限定されず、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。
【００３７】
本発明の甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料を甲殻類用の生産性低下の防止又は軽減のために使用する場合、当該飼料中に抗酸化物質あるいは抗酸化酵素を共に含有させる事ができる。抗酸化物質としては特に限定はされないが、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピロロキノリンキノン、ピクノジェノール、フラバジェノール、又はセレンなどが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。また、抗酸化酵素としては、特に限定はされないが、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、又はアスコルビン酸ペルオキシダーゼなどが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。
【００３８】
さらに、本発明の甲殻類のウイルス感染症の予防・治療用飼料を甲殻類の生産性低下の防止又は軽減のために使用する場合、既存の免疫賦活剤を当該飼料中に共に含有させることができる。免疫賦活剤としては特に限定はされないが、フコイダン、β―グルカンなどの多糖類、ラクトフェリン、プロポリス、ビフィズス菌などが挙げられる。
【００３９】
上記本発明の方法によって、抗生物質あるいはその他の薬剤を用いずとも、甲殻類のウイルスによる感染症を予防・治療でき、ひいては感染症による甲殻類の生産性の低下を回避あるいはその影響を軽減することができる。
【実施例】
【００４０】
以下に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこの実施例のみに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４１】
（飼料の作成）
魚粉、ミネラル、ビタミンなどを含む市販のエビ用飼料に、酸化型補酵素Ｑ１０をそれぞれ０．０２％、０．１％量添加し、水を加えて充分に混合し、乾燥して、酸化型補酵素Ｑ１０含有プレミックスを調製した。それらに、市販のエビ用飼料と水を加え、造粒・乾燥を行い、酸化型補酵素Ｑ１０の含有量がそれぞれ２００ｐｐｍまたは１０００ｐｐｍのエビ用飼料を作製した。なお、対照群には補酵素Ｑ１０が添加されていない市販のエビ用飼料をそのまま使用した。
（試験方法）
クルマエビを用い、平均体重が同程度となるように２０尾ずつ３群に選別し、それぞれ、市販のエビ用飼料（対照群）、２００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料、１０００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を、下記強制感染の７日前から感染後１５日後まで投与した。試験期間のクルマエビの体重と飼料摂取量から、２００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、クルマエビ体重１ｋｇに対し１日あたり２ｍｇ（２ｍｇ／ｋｇ投与群）、１０００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、クルマエビ体重１ｋｇに対し１日あたり１０ｍｇ（１０ｍｇ／ｋｇ投与群）となった。【００４２】
強制感染は、以下のようにして実施した。すなわち、ホワイトスポットウイルス（ＷＳＶ）に感染し死亡したクルマエビ４尾から頭胸部（殻除去）・遊泳脚を取り出して滅菌海水中でホモジナイズし、遠心分離を行い、得られた上澄液を滅菌海水に加えて混合した後、感染用ポリ容器中の３０Lの海水に懸濁し、よく撹拌した。その中に試験に使用するエビを２時間浸漬してウイルスに感染させた。【００４３】
強制感染後、各群の症状の発現および死亡の有無を調べた。
（試験結果）
各群の強制感染後の死亡数の推移を表１に示す。表１に示したとおり、酸化型補酵素Ｑ１０を含有する飼料を投与した群では、感染６日目以降の死亡が見られなかったのに対し、対照区では６日目以降も死亡が続いた。また、累積の死亡率は対照区が９０％であったのに対して、補酵素Ｑ１０  ２ｍｇ／ｋｇ投与群では２５％、補酵素Ｑ１０  １０ｍｇ／ｋｇ投与群では６５％と死亡率の大幅な改善が見られた。また、補酵素Ｑの投与量は多ければよいというものではなく、むしろ、１０ｍｇ／ｋｇ投与群では２ｍｇ／ｋｇ投与群に比べて効果が低下し、補酵素Ｑの投与量に対して死亡率の抑制効果にベルシェイプの傾向が見られることがわかった。
【００４４】
【表１】
2014003069.tif 000004
【実施例２】
【００４５】
（飼料の作成）
魚粉、ミネラル、ビタミンなどを含む市販のエビ用飼料に、酸化型補酵素Ｑ１０を０．１％量添加し、水を加えて充分に混合し、乾燥して、酸化型補酵素Ｑ１０含有プレミックスを調製した。それに、酸化型補酵素Ｑ１０の濃度がそれぞれ８０ｐｐｍ、１６０ｐｐｍ、４００ｐｐｍとなるように、市販のエビ用飼料と水を加え、造粒・乾燥を行い、酸化型補酵素Ｑ１０を含有するエビ用飼料を作製した。なお、対照群には補酵素Ｑ１０が添加されていない市販のエビ用飼料をそのまま使用した。
（試験方法）
クルマエビを用い、平均体重が同程度となるように２０尾ずつ４群に選別し、それぞれ、市販のエビ用飼料（対照群）、８０ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料、１６０ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料、４００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を、下記強制感染の７日前から感染後７日後まで投与した。試験期間のクルマエビの体重と飼料摂取量から、８０ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、クルマエビ体重１ｋｇに対し１日あたり１ｍｇ（１ｍｇ／ｋｇ投与群）、１６０ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、クルマエビ体重１ｋｇに対し１日あたり２ｍｇ（２ｍｇ／ｋｇ投与群）、４００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、クルマエビ体重１ｋｇに対し１日あたり５ｍｇ（５ｍｇ／ｋｇ投与群）となった。【００４６】
強制感染は、以下のようにして実施した。ホワイトスポットウイルス（ＷＳＶ）に感染し死亡したクルマエビ４尾から頭胸部（殻除去）・遊泳脚を取り出して滅菌海水中でホモジナイズし、遠心分離を行い、得られた上澄液を滅菌海水に加えて混合してＷＳＶ液を調製した。このＷＳＶ液０．１ｍＬを試験に使用するクルマエビの第３腹節部に打中し、ウイルスに感染させた。【００４７】
強制感染後、各群の症状の発現および死亡の有無を調べた。
（試験結果）
各群の強制感染７日後の死亡数を表２に示す。表２に示したとおり、酸化型補酵素Ｑ１０を１日あたり２ｍｇ／ｋｇもしくは５ｍｇ／ｋｇ投与した群で、顕著な死亡数の改善が見られること、また、５ｍｇ／ｋｇ投与群と比較してより投与量の少ない２ｍｇ／ｋｇでの効果の方が若干高いことがわかった。
【００４８】
【表２】
2014003069.tif 000005
【００４９】
（参考例１）
（飼料の作成）
魚粉、ミネラル、ビタミンなどを含む市販のエビ用飼料に、酸化型補酵素Ｑ１０の濃度がそれぞれ２０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、５００ｐｐｍとなるよう酸化型補酵素Ｑ１０を添加、混合して２種類の飼料を製造し、試験飼料とした。対照群には魚粉、ミネラル、ビタミンなどを含む市販のエビ用飼料をそのまま使用した。
（試験方法）
購入した孵化後１２日目のバナメイエビを用い、３週間予備飼育した後、平均体重が０．１３±０．０１ｇとなるように３群に選別した。選別されたエビは、ビブリオ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｈａｒｖｅｉ（菌数：１×１０8ｃｆｕ／ｍｌ））を拡散した海水に４０分間浸してＶｉｂｒｉｏ  ｈａｒｖｅｉに感染させたのち、水槽に収容した。それぞれの群に、市販のエビ用飼料（対照群）、補酵素Ｑ１０を２０ｐｐｍ含有する試験飼料、補酵素Ｑ１０を１００ｐｐｍ含有する試験飼料、補酵素Ｑ１０を５００ｐｐｍ含有する試験飼料を与えながら、２８日間養殖した。試験期間のバナメイエビの体重と飼料摂取量から、２０ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、バナメイエビ体重１ｋｇに対し１日あたり０．８ｍｇ（０．８ｍｇ／ｋｇ投与群）、１００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、バナメイエビ体重１ｋｇに対し１日あたり４ｍｇ（４ｍｇ／ｋｇ投与群）、５００ｐｐｍの酸化型補酵素Ｑ１０含有飼料を与えた群の酸化型補酵素Ｑ１０の投与量は、バナメイエビ体重１ｋｇに対し１日あたり２０ｍｇ（２０ｍｇ／ｋｇ投与群）となった。【００５０】
なお、各水槽に閉鎖循環式濾過槽を併設し、アンモニアおよび亜硝酸を制御するために閉鎖循環濾過槽内に硝化細菌（Ｐｏｎｄｐｒｏｔｅｃｔ、ノバザイムズバイオロジカルズ社製）を０．３ｇ／Ｌの割合で加え、０．２Ｌ／分にて循環した。また、毎週、塩分を測定して蒸発した分の蒸留水を加えて塩分を一定値（３０ｐｓｕ）に調整した。【００５１】
ビブリオ菌感染から１４,２１,２８日後に、それぞれ各群の生残数を計数した。
（試験結果）
各群のバナメイエビの生残率を表３に示す。生残率は、試験期間を通じて、対照群に比べ、酸化型補酵素Ｑ１０を投与した群の方が高く、またその投与量が多いほどその効果が高まることが確認された。ビブリオ菌といった細菌による感染では、ウイルスによる感染とは異なり、ベルシェイプとはならないことがわかる。
【００５２】
【表３】
2014003069.tif 000006
【製造例１】
【００５３】
（補酵素Ｑ１０含有プレミックス）
下記配合割合で、酸化型補酵素Ｑ１０、二酸化ケイ素、ゼオライトを均一に混合した後、この混合物を脱脂米ぬかに加え、再度、均一に混合し、下記組成からなる酸化型補酵素Ｑ１０を５重量％含むプレミックスを調製した。
酸化型補酵素Ｑ１０：  ５重量％
二酸化ケイ素      ：１０重量％
ゼオライト        ：１０重量％
脱脂米ぬか        ：７５重量％
【製造例２】
【００５４】
（補酵素Ｑ１０含有飼料）
製造例１で作成した酸化型補酵素Ｑ１０含有プレミックスに、脱脂米ぬか、大豆粕及び魚粉を加え、均一に混合し、下記組成からなる酸化型補酵素Ｑ１０を１００ｐｐｍ含有する甲殻類用飼料を調製した。
酸化型補酵素Ｑ１０：１００ｐｐｍ
二酸化ケイ素      ：２００ｐｐｍ
ゼオライト        ：２００ｐｐｍ
脱脂米ぬか        ：１９．９５％
大豆粕            ：３０．００％
魚粉              ：５０．００％
【国際調査報告】
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