(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリアンテス属（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  Ｌ．）に属する植物より得られる酸性ヘテロ多糖類と、シロキクラゲ（Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ  Ｂｅｒｋ）より得られる酸性ヘテロ多糖類とを含有する外用剤組成物。
【請求項２】
ポリアンテス属に属する植物がチューベローズ（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  ｔｕｂｅｒｏｓａ  Ｌ．）であり、酸性ヘテロ多糖類がチューベローズの組織培養によって得られたものである請求項１記載の外用剤組成物。
【請求項３】
シロキクラゲより得られる酸性ヘテロ多糖類が子実体からの抽出または菌体の液体培養により得られたものである請求項１記載の外用剤組成物。
【請求項４】
ポリアンテス属に属する植物より得られる酸性ヘテロ多糖類および、シロキクラゲより得られる酸性ヘテロ多糖類の含有量がそれぞれ０．０００１〜１０重量％である請求項１〜３のいずれか１項記載の外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は外用剤組成物に関し、さらに詳しくは皮膚の保湿効果、保護効果、柔軟・平滑化等の効果、使用感および安定性に優れた皮膚化粧料、毛髪化粧料、外用医薬品等の外用剤組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、外用剤、特に化粧料用保湿剤としては、グリセリン、ソルビトール等の低分子量物質、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のＮＭＦ（天然保湿因子）成分などが用いられてきたが、近年、ムコ多糖類をはじめとする生体高分子物質や種々の植物抽出物が保湿剤として利用されている。しかしながら、植物由来の多糖類は、増粘剤、ゲル化剤等として用いられていることからも明らかなように、保湿機能を発揮するのに十分な量を用いると系が増粘し、肌への感触が悪くなったり、また、天然高分子物質は安定性に問題があるなどの欠点があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、保湿効果、使用感および安定性等に優れた天然高分子物質を含有する外用剤組成物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
このような実情において、本発明者は鋭意検討を行った結果、ポリアンテス属植物由来の酸性ヘテロ多糖類とシロキクラゲ由来の酸性ヘテロ多糖類とを組合せて配合した外用剤は、保湿効果、使用感および安定性等に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、ポリアンテス属（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  Ｌ．）に属する植物より得られる酸性ヘテロ多糖類と、シロキクラゲ（Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ  Ｂｅｒｋ）より得られる酸性ヘテロ多糖類とを含有する外用剤組成物を提供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明において用いる酸性ヘテロ多糖類を得るためのポリアンテス属（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  Ｌ．）に属する植物としてはチューベローズ（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  ｔｕｂｅｒｏｓａ  Ｌ．）が好ましく、チューベローズ由来の酸性ヘテロ多糖類は、例えば以下の方法により得ることができる。
【０００７】
組織培養法：
チューベローズの花等の一部を外殖片とし、基本培地に植物ホルモンと炭素源としての糖を加えた培地を用いてカルスを誘導する。このカルスをさらに液体培地に移して振とう培養し、この培養物から細胞を遠沈または濾過によって除去した後、濃縮し、濃縮液にエタノールを加えて沈澱させ、沈澱物を凍結乾燥することにより酸性ヘテロ多糖類を得る。
【０００８】
本方法では、外殖片として、チューベローズはその花、茎、葉、鱗茎、根等の器官または組織の一部が使用されるが、特に花の一部が好ましい。
【０００９】
カルス誘導用の基本培地としては、植物組織培養に通常用いられるＭｕｒａｓｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｇａｍｂｏｒｇの培地、Ｗｈｉｔｅの培地、Ｔｕｌｅｃｋｅの培地、Ｎｉｔｓｃｈ  ＆  Ｎｉｔｓｃｈの培地などが用いられ得る。
【００１０】
この基本培地には植物ホルモンを添加する必要があり、植物ホルモンとしては、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）等のオーキシン類；フルフリルアミノプリン（カイネチン）、ベンジルアデニン（ＢＡ）、ジメチルアミノプリン（２ｉＰ）等のサイトカイニン類が挙げられる。その中でも、２，４−Ｄ単独、もしくはＮＡＡとＢＡの組合せ、またはＮＡＡとカイネチンの組合せが良好な結果を与える。カルス誘導に必要な植物ホルモン濃度は、２，４−Ｄ単独の場合は５×１０−４Ｍ〜１×１０−７Ｍ、ＮＡＡとＢＡまたはＮＡＡとカイネチンの組合せの場合は、ＮＡＡの濃度は５×１０−４Ｍ〜１×１０−７Ｍ、ＢＡまたはカイネチンの濃度は１×１０−４Ｍ〜１×１０−７Ｍである。
【００１１】
カルス誘導培地には上記の基本培地と植物ホルモンのほかに炭素源として糖が加えられる。糖としては、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプンなどが挙げられるが、通常はサッカロースが用いられる。
【００１２】
カルス誘導は固体培地でも液体培地でも可能であるが、通常は固体培地が用いられる。
【００１３】
誘導されたカルスは上記のカルス誘導培地で同じ形態を維持したまま１０代以上にわたって継代培養をすることができる。継代培養用の培地としては、通常基本培地としてＬｉｎｓｍａｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｍｕｒａｓｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇの培地、植物ホルモンとして１×１０−４Ｍ〜１×１０−７Ｍの２，４−Ｄまたは１×１０−４Ｍ〜１×１０−７ＭのＮＡＡと１×１０−４Ｍ〜１×１０−７ＭのＢＡ、炭素源としては、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプン等が用いられるが、この中でサッカロースが好ましく、その添加量は１〜６％が好ましい。
【００１４】
カルスから多糖類を製造するには、カルスを寒天培地等の固体培地、液体培地で培養するが、液体培地で培養するのが特に好ましい。
【００１５】
基本培地としてはカルス誘導培地と同じもの、例えば、Ｍｕｒａｓｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｇａｍｂｏｒｇの培地、Ｗｈｉｔｅの培地、Ｔｕｌｅｃｋｅの培地、Ｎｉｔｓｃｈ  ＆  Ｎｉｔｓｃｈの培地などが用いられ得るが、この中でＭｕｒａｓｉｇｅ−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地が好ましい。
【００１６】
植物ホルモンの種類および濃度は多糖類の生産性に関係があり、例えば２，４−Ｄ、ＮＡＡ、ＩＡＡ、ＩＢＡ等のオーキシン類；カイネチン、ＢＡ、２ｉＰ等のサイトカイニン類；ジベレリンＡ３（ＧＡ３）等のジベレリン類等が使用される。この中で、２，４−Ｄ、ＮＡＡを単独で、またはＮＡＡとＢＡもしくはカイネチンを組合せて用いるのが好ましい。その濃度は、２，４−ＤまたはＮＡＡを単独で用いる場合は５×１０−４Ｍ〜１×１０−７Ｍ、特に１×１０−４Ｍ〜５×１０−６Ｍが；ＮＡＡとＢＡまたはＮＡＡとカイネチンを組合せて用いる場合には、ＮＡＡの濃度は１×１０−４Ｍ〜１×１０−７Ｍ、特に１×１０−４Ｍ〜５×１０−６Ｍ、ＢＡまたはカイネチンの濃度は５×１０−５Ｍ〜１×１０−９Ｍ、特に１×１０−５Ｍ〜１×１０−７Ｍが好ましい。
【００１７】
炭素源としては、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプンなどが用いられる。多糖類の生産は添加する炭素源の種類にはあまり強く影響されるものではなく、通常サッカロースが用いられる。炭素源の濃度と多糖類の生産量との間にもあまり深い関係はないが、一般には１〜６％が好ましい。
【００１８】
培養法は特に制限されないが、通常、２０〜３０℃の温度で１５〜３０日間行うのが好ましく、また振とう培養が好ましい。
【００１９】
このようにして得られた培養物から多糖類を採取するには、例えば培養物から細胞を遠沈または濾過等によって除去した後、培養液をロータリーエバポレーター等を用いて濃縮し、濃縮液にエタノールを加えて沈澱させ、沈澱物を凍結乾燥することによって行われる。
【００２０】
本発明で用いるシロキクラゲ（Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ  Ｂｅｒｋ）由来の酸性ヘテロ多糖類は、例えば以下の方法により得ることができる。
【００２１】
子実体からの抽出：
乾燥したシロキクラゲを水で洗浄し、これに水を加えて抽出を行い、固形物を取り出して再度同様の抽出を行って抽出液を得る。この抽出液と先に得られた抽出液とを合わせ、遠心分離を行って上清を得、上清を濃縮し、これにエタノール等を加えて沈澱を生じさせ、この沈澱物を乾燥させて酸性ヘテロ多糖類を得る。
【００２２】
菌体の液体培養：
シロキクラゲ菌体の液体培養条件は、シロキクラゲ菌体が増殖し得る条件であれば特に限定されない。通常液体培養の培地としては、炭素源、窒素源、無機塩を含有する培地が利用でき、その他、天然栄養源、ビタミン、アミノ酸等を加えたものも用いることができる。炭素源としては、前記と同様の糖類が挙げられる。炭素源としては、ペプトン、尿素、アンモニウム塩などが挙げられる。また、無機塩としては、塩化カリウム、硫酸鉄、硫酸マグネシウム、リン酸塩などが挙げられ、これらは必要に応じて添加することができる。天然栄養源としては、麦芽エキス、酵母エキス、カゼイン加水分解物、ココナッツミルク、ポテトエキスなどが挙げられる。
【００２３】
培養条件は、温度２０〜３２℃、ｐＨ５〜７で、５〜２０日間振とう培養、通気攪拌培養などの方法により好気的条件下で行うのが好ましい。最初から本培養を行うこともできるが、あらかじめ小規模な前培養を行い、これを本培養に接種して行うのが好ましい。
【００２４】
液体培養後の培養液は、通常の方法により除菌を行い、培養液を加熱殺菌し、濾過したものをそのまま用いることもでき、さらに分画・精製して用いることもできる。また、上記培養液及び分画・精製物は必要に応じて濃縮または希釈して用いることもでき、さらに凍結乾燥やスプレードライ等の方法により乾燥させ、乾燥粉末として用いることもできる。
【００２５】
本発明の外用剤組成物における酸性ヘテロ多糖類の含有量は、十分な効果を発揮させる点から、ポリアンテス属植物由来のものおよびシロキクラゲ由来のものそれぞれ０．０００１〜１０重量％（以下単に％で示す）とすることが好ましく、０．００１〜５％とすることが特に好ましい。
【００２６】
本発明の外用剤組成物は、その使用形態において、薬用皮膚外用剤と化粧料に大別される。
【００２７】
薬用皮膚外用剤としては、例えば薬効成分を含有する各種軟膏剤を挙げることができる。軟膏剤としては、油性基剤をベースとするもの、油／水、水／油型の乳化系基剤をベースとするもののいずれであってもよい。薬効成分としては、特に制限はなく、例えば鎮痛消炎剤、鎮痒剤、殺菌消毒剤、収斂剤、皮膚軟化剤、ホルモン剤等を必要に応じて適宜使用することができる。
【００２８】
また、化粧料としては、種々の形態、例えば水／油、油／水型乳化化粧料、クリーム、化粧乳液、化粧水、油性化粧料、口紅、ファンデーション、ヘアートニック、整髪剤、養毛剤、育毛剤等の皮膚化粧料とすることができる。
【００２９】
これらの外用剤の調製に当り、好適に用いられる油性成分としては、例えば流動パラフィン、パラフィンワックス、セレシン、スクワラン等の炭化水素；蜜ロウ、鯨ロウ、カルナバロウなどのワックス類；オリーブ油、椿油、ホホバ油、ラノリンなどの天然動植物油脂；シリコーン油、脂肪酸、高級アルコールおよびこれらを反応して得られるエステル油等が挙げられる。
【００３０】
また、界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油アルキル硫酸エステル、ポリオキシエチレンアルキル硫酸エステル、アルキルリン酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルリン酸エステル、脂肪酸アルカリ金属塩、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等が用いられる。また、本発明の乳化組成物にはさらに各種任意成分を配合することができ、例えば粘度調整剤としてポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロースなどの高分子化合物；ゼラチン、タラカントガムなどの天然ガム類；エタノール、イソプロパノール等のアルコール類が、保湿剤としてはプロピレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール、乳液、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等が、さらに防腐剤としてはパラオキシ安息香酸エステル、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、フェノキシエタノール等がそれぞれ挙げられる。
【００３１】
【発明の効果】
本発明の外用剤組成物は、チューベローズ由来の酸性ヘテロ多糖類とシロキクラゲ由来の酸性ヘテロ多糖類とを配合することによって、皮膚の保湿効果、保護効果および安定性に優れ、滑らかな使用感を有する。
【００３２】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３３】
製造例１
チューベローズ由来の再生ヘテロ多糖類の製造：
開花２〜７日前のチューベローズの蕾を切り取り、７０％エタノールおよび１％次亜塩素酸ナトリウムにより滅菌した後、滅菌水で洗浄し、適当な大きさに切り外殖片としてカルス誘導培地に置床した。
【００３４】
カルス誘導培地には０．８％の寒天を含むＬｉｎｓｍａｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地を用い、植物ホルモンとしてα−ナフチル酢酸１×１０−５Ｍとベンジルアデニン１×１０−６Ｍ、炭素源として３％シュークロースを添加した。培養は２５±２℃で３０日間行い、３０日後それぞれの外殖片からカルスが誘導された。
【００３５】
これらのカルスは外殖片から切り離し、カルス誘導培地と同一組成の培地を用いて同一条件下で培養した。３０日おきに繰り返し新しい培地にカルスを移植して増殖した後、上記カルス誘導培地と同様の成分から成る、寒天を含まない液体培地を用いて振とう培養を行った。培地の量は、２００ｍｌ容の三角フラスコ当り８０ｍｌとし、カルスは新鮮重量で２ｇを接種し、２５±２℃、１２０ｒｐｍで３０日間振とう培養した。
【００３６】
この培養液１Ｌから遠心分離により細胞を除き、培養液をロータリーエバポレーターを用いて濃縮した。濃縮培養液２５０ｍｌに７５０ｍｌのエタノールを加え、５℃で２４時間静置し沈澱を得た。
【００３７】
この沈澱を遠心分離により回収し、７０％エタノールで洗浄した後、凍結乾燥により水分を除去し、チューベローズ由来の多糖類２．９ｇを得た。多糖類を構成する成分はアラビノース、ガラクトース、グルコース、マンノースおよびキシロースと酸性糖としてグルクロン酸であり、酸性ヘテロ多糖類であった。
【００３８】
製造例２
シロキクラゲ由来の酸性多糖類の製造
乾燥したシロキクラゲ５０ｇを冷水にて洗浄し、水５Ｌを加えて１００℃、１時間抽出を行い、ガーゼを用いて固形物を除き、抽出液約２Ｌを得た。上記固形物を再度同様の抽出を行い、ガーゼを用いて固形物を除き、抽出液約２Ｌを得た。該抽出液を最初に得られた抽出液とあわせた後、遠心分離を行い、透明な上清を約３．５Ｌ得た。
【００３９】
次に、この上清をロータリーエバポレーターを用いて約５００ｍｌに濃縮し、濃縮物にエタノールを１．５Ｌ加え生じた沈澱物を濾別した。この沈澱物を凍結乾燥し、４．２ｇのシロキクラゲ多糖類を得た。多糖類を構成する成分はグルコース、マンノースおよびキシロースと酸性糖としてグルクロン酸であり、酸性ヘテロ多糖類であった。
【００４０】
実施例１
下記に示す処方、製法により化粧水を調製し、その保湿効果および使用感を調べた。
【００４１】
【表１】
0003577146.tif 000002
【００４２】
（製法）
精製水に（１）、（２）、（３）、（５）、（６）を加温溶解し、室温に戻した後、エタノールに（４）、（８）、（９）を溶解したものをゆっくりと加えて可溶化し、濾過して化粧水を得た。
【００４３】
試験例１
実施例１で得た化粧水を用いて、保湿効果試験を行った。すなわち健常人の前腕部に本発明品および比較品を０．０２ｍｌ／４ｃｍ２塗布し、１時間後の角層水分量を測定した（ｎ＝５、測定装置：ＩＢＳ社製ＳＫＩＣＯＮ−２００）。結果を次表に示す。
【００４４】
【表２】
0003577146.tif 000003
【００４５】
本発明品塗布部位の水分量は、比較品塗布部位より明らかに増加しており、チューベローズ由来多糖類とシロキクラゲ由来多糖類を配合した化粧水は高い保湿効果を有することが確認された。
【００４６】
試験例２
２０〜３５才の女性２０名に対し、使用中の滑らかさとその持続性、きしみ、べたつき、しっとり感の項目について、本発明品と比較品の使用テスト（コンペア評価）を行った。結果を次表に示す。
【００４７】
【表３】
0003577146.tif 000004
【００４８】
チューベローズ由来多糖類とシロキクラゲ由来多糖類配合化粧水は、使用中の滑らかさと、その持続性が高く、しっとり感が強いわりにはべたつきが少なく、きしみも比較的少ないという優れた使用感であった。