【事件の表示】
　特願２００１−５４６９５３「電流滴定バイオセンサーテストストリップ」拒絶査定不服審判事件〔平成１３年　６月２８日国際公開、ＷＯ０１／４６４５７、平成１５年　６月　３日国内公表、特表２００３−５１８２４９〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯
　本願は、２０００年１２月１４日（パリ条約による優先権主張１９９９年１２月２２日、米国）を国際出願日とする出願であって、平成１８年９月１５日付けで拒絶査定がされ、これに対し平成１８年１２月２５日に拒絶査定不服審判の請求がなされるとともに、同日付けで手続補正がなされたものである。
　
　
２．平成１８年１２月２５日付けの手続補正についての補正却下の決定
［補正却下の決定の結論］
　平成１８年１２月２５日付けの手続補正を却下する。
［理由］
（１）補正後の本願発明
　平成１８年１２月２５日付けの手続補正は、特許請求の範囲を補正するものであり、平成１４年７月５日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１
「【請求項１】
　サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸を検出するテストストリップ装置において、
　基板；
　前記基板上に配置された少なくとも１個の電極；ならびに
　前記少なくとも１個の電極と連通している試薬であって、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸のレベルを指示する電気出力信号を発生させる上で有効な形で前記サンプルと反応性であり、ヘキサシアノ鉄(III)酸塩、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸の酸化を触媒する上で有効な触媒量の第１の酵素、前記第１の酵素に対応する補因子、および還元型の前記補因子の電気化学的酸化を触媒する上で有効な触媒量の第２の酵素を含んでなる試薬
を有することを特徴とする前記装置。」
を、
「【請求項１】　
　サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸を検出するテストストリップ装置において、
　基板；
　前記基板上に配置された少なくとも１個の電極；ならびに
　前記少なくとも１個の電極と連通している試薬であって、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸のレベルを指示する電気出力信号を発生させる上で有効な形で前記サンプルと反応性であり、ヘキサシアノ鉄(III)酸塩、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸の酸化を触媒する上で有効な触媒量の
ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ
ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ
乾燥試薬フィルムである
　を有することを特徴とする前記装置。」（以下、「本願補正発明」という。）
と、補正することを含むものである。（下線は補正箇所を示す。）
　上記補正は、第１の酵素について「ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ」とする限定および、試薬について「乾燥試薬フィルムである」とする限定を、それぞれ付加するものであるから、平成１８年改正前の特許法第１７条の２第４項第２号の特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　そこで、本願補正発明が特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（平成１８年改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するか）について、以下に検討する。
　
（２）引用刊行物記載の発明
引用例１
　原査定の拒絶の理由に引用され、本願優先日前に頒布された国際公開第９９／１９５０７号には、以下の記載がある。（なお、翻訳文は、特表２００１−５２０３６７号公報による。）
（ａ）「The NADH and NADPH mediators can be used in the manufacture of amperometric enzyme sensors for an analyte, where the analyte is a substrate of an NAD-or NADP-dependent enzyme present in the sensor, such as those of the kind described in EP 125867-A. Accordingly, amperometric enzyme sensors of use in assaying for the presence of an analyte in a sample, especially an aqueous sample, can be made. For example, the sample can be a complex biological sample such as a biological fluid (e. g., whole blood, plasma, or serum) and the analyte can be a naturally occurring metabolite (e. g., glucose, D-3-hydroxybutyrate, ethanol, lactate, or cholesterol) or an introduced substance such as a drug. 」（第９頁第１９〜２７行）
「     【００３４】
  ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨメディエーターは、ＥＰ１２５８６７−Ａに記載されているもののように、センサーに存在するＮＡＤ又はＮＡＤＰ依存性酵素の基質を分析物とする電流滴定酵素センサーの製造で使用することができる。従って、試料、特に水性試料中の分析物の存在をアッセイするのに使用する電流滴定酵素センサーを製造することができる。例えば、試料は生物体液（例えば全血、血漿又は血清）等の複雑な生物学的試料とすることができ、分析物は天然代謝物（例えばグルコース、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸、エタノール、乳酸又はコレステロール）又は導入物質（例えば薬物）とすることができる。」（翻訳文）
（ｂ）「A non-limiting list of enzymes that can be used in conjunction with the new mediators is provided in Table 1. 
  Amperometric enzyme sensors adopting the mediators of the present invention generally use a test element, for example, a single-use strip. A disposable test element can carry a working electrode, for example, with the test reagents including the enzyme, the nicotinamide cofactor (i. e., NAD+ or NADP+), the mediators of the present invention for generation of a current indicative of the level of analyte, and a reference/counter electrode. The test reagents can be in one or more ink-based layers associated with the working electrode in the test element. Accordingly, the sensor electrodes can, for example, include an electrode area formed by printing, spraying, or other suitable deposition technique. 
  Referring to Figs. 1 and 2, an electrode support 1, typically made of PVC, polycarbonate, or polyester, or a mixture of polymers (e. g., Valox, a mixture of polycarbonate and polyester) supports three printed tracks of electrically conducting carbon ink 2,3, and 4. The printed tracks define the position of the working electrode 5 onto which the working electrode ink 16 is deposited, the reference/counter electrode 6, the fill indicator electrode 7, and contacts 8,9, and 10. 
  The elongated portions of the conductive tracks are respectively overlaid with silver/silver chloride particle tracks 11,12, and 13 (with the enlarged exposed area 14 of track 12 overlying the reference electrode 6), and further overlaid with a layer of hydrophobic electrically insulating material 15 that leaves exposed only positions of the reference/counter electrode 14, the working electrode 5, the fill indicator electrode 7, and the contact areas 8,9, and 10. This hydrophobic insulating material serves to prevent short circuits. Because this insulating material is hydrophobic, it can serve to confine the sample to the exposed electrodes. A suitable insulating material is Sericard, commercially available from Sericol, Ltd. (Broadstairs, Kent, UK). 
Optionally, a first mesh layer 17, a second insulative layer 18, a second mesh layer 19, a third insulative layer 20, and a tape 21 can overlay the hydrophobic insulating material. 
  Respective ink mixtures can be applied onto a conductive track on a carrier, for example, in close proximity to a reference electrode 14 connected to a second track. In this way, a sensor can be produced, which is capable of functioning with a small sample of blood or other liquid covering the effective electrode area 5. The mixtures are preferably, but not exclusively, applied to the carrier by screen printing. 
  In general, NAD (P)-dependent dehydrogenases catalyze reactions according to the equation: 
RH2 + NAD(P)+ → R + NAD(P)H + H+ 
where RH2 represents the substrate (analyte) and R the product. In the process of the forward reaction, NAD (P)+ (i. e., NAD+ or NADP+) is reduced to NAD(P)H. Suitable amperometric biosensors provide an electrochemical mediator that can reoxidize NAD(P)H, thereby regenerating NAD(P)+. Reoxidation occurs at an electrode to generate a current that is indicative of the concentration of the substrate. 」（第１０頁第９行〜第１２頁第６行）
「      【００３７】
  新規メディエーターと併用可能な酵素の非限定的な例を表１に示す。
      【００３８】
    【表１】
      【００３９】
  本発明のメディエーターを使用する電流滴定酵素センサーは一般に試験エレメント、例えば使い捨てストリップを使用する。使い捨て試験エレメントは、例えば酵素等の試薬、ニコチンアミド補因子（即ちＮＡＤ＋又はＮＡＤＰ＋）、分析物の濃度を表す電流を発生するための本発明のメディエーターを含む作用電極と、参照／対電極を備えることができる。試薬は試験エレメントで作用電極に結合した１層以上のインク層に添加することができる。従って、センサー電極は例えば印刷、吹付又は他の適当な付着技術により形成した電極域を含むことができる。
      【００４０】
  図１及び２について説明すると、一般にＰＶＣ、ポリカーボネート、ポリエステル又はポリマー混合物（例えばポリカーボネートとポリエステルの混合物であるＶａｌｏｘ）から作製した電極支持体１に３本の導電性カーボンインクの印刷トラック２，３及び４を支持する。印刷トラックは作用電極インク１６を付着する作用電極５と、参照／対電極６と、充填指示電極７と、接点８，９及び１０の位置を規定する。
      【００４１】
  （トラック１２の幅広露出域１４が参照電極６に重なるように）導電性トラックの細長部分に夫々銀／塩化銀粒子トラック１１，１２及び１３を積層し、更に参照／対電極１４と作用電極５と充填指示電極７と接点域８，９及び１０の位置のみが露出するように疎水性電気絶縁材料層１５を積層する。この疎水性絶縁材料は短絡を防止する役割をもつ。この絶縁材料は疎水性であるため、露出した電極に試料を閉じ込めることができる。利用可能な絶縁材料の１例はＳｅｒｉｃｏｌ  Ｌｔｄ．（Ｂｒｏａｄｓｔａｉｒｓ，Ｋｅｎｔ，英国）から市販されているＳｅｒｉｃａｒｄである。場合により、第１のメッシュ層１７と、第２の絶縁層１８と、第２のメッシュ層１９と、第３の絶縁層２０と、テープ２１を疎水性絶縁材料に積層してもよい。
      【００４２】
  各インク混合物は例えば第２のトラックに接続した参照電極１４のごく近傍でキャリヤー上の導電性トラックに付着することができる。こうして、有効電極域５を覆う少量の血液又は他の液体試料と作用することが可能なセンサーを作製することができる。混合物は必須ではないが、スクリーン印刷によりキャリヤーに付着すると好ましい。
      【００４３】
  一般に、ＮＡＤ（Ｐ）依存性デヒドロゲナーゼは式：
        ＲＨ２＋ＮＡＤ（Ｐ）＋  →  Ｒ＋ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ＋Ｈ＋（式中、ＲＨ２は基質（分析物）であり、Ｒは生成物である）に従って反応を触媒する。順反応過程では、ＮＡＤ（Ｐ）＋（即ちＮＡＤ＋又はＮＡＤＰ＋）はＮＡＤ（Ｐ）Ｈに還元される。適当な電流滴定バイオセンサーはＮＡＤ（Ｐ）Ｈを再酸化してＮＡＤ（Ｐ）＋を再生する電気化学メディエーターを提供する。電極で再酸化が生じ、基質の濃度を表す電流を発生する。」（翻訳文）
（ｃ）「The reference electrode/counter electrode may be a classic silver/silver chloride electrode but it may also be identical to the working electrode in construction. In one embodiment the two separate conductive tracks may both be coated with an appropriate formulation of enzyme, cofactor and mediator in a binder and filler containing aqueous vehicle to yield a coating. In those cases in which the coating is non-conductive, e. g. when the filler is a non-conductor, a common coating may overlay both electrodes. When a potential is applied one of the electrodes will function as a reference/counter electrode by absorbing the electrons liberated at the other, working, electrode. The mediator at the reference/counter electrode will simply become reduced as a result of interaction with the electron flow at its electrode. 
  The reaction layer which yields the desired behavior is obtained by formulating the working electrode with binder and filler ingredients. The object is to allow the sample to interact with the enzyme, cofactor and mediator but to also ensure that these chemically active ingredients remain in the immediate vicinity of the surface of the electrode. The binder ingredient should include materials which readily increase the viscosity of aqueous media and promote the formation of films or layers. 
Typical of such materials are the polysaccharides such as guar gum, alginate, locust bean gum, carrageenan and xanthan. Also helpful are materials commonly known as film formers such as polyvinyl alcohol (PVA), polyvinyl pyrrole, cellulose acetate, carboxymethyl cellulose and poly (vinyl oxazolidinone). The filler ingredient should be a particulate material which is chemically inert to the oxidation reduction reactions involved in the measurement and insoluble in aqueous media. It may be electrically conductive or non-conductive. Typical materials include carbon, commonly in the form of graphite, titanium dioxide, silica and alumina. 
  The active electrode may be conveniently produced by formulating the enzyme, cofactor, mediator and binder and filler ingredients into an aqueous vehicle and applying it to the elongated, electrically insulating carrier having conducting tracks. The formulation may be applied by printing such as screen printing or other suitable techniques. The formulation may also include other ingredients such as a buffer to protect the enzyme during processing, a protein stabilizer to protect the enzyme against denaturation and a defoaming agent. These additional ingredients may also have an effect on the properties of the reaction layer. 
  The working electrode typically has a dry thickness between about 2 and 50 microns preferably between about 10 and 25 microns. The actual dry thickness will to some extent depend upon the application technique used to apply the ingredients which make up the working electrode. For instance thicknesses between about 10 and 25 microns are typical for screen printing. 
  However, the thickness of the reaction layer is not solely a function of the dry thickness of the working electrode but also depends upon the effect of the sample on the working electrode. In the case of aqueous samples the formulation of the working electrode ingredients will effect the degree of water uptake this layer displays. 
  The filler typically makes up between about 20 and 30 weight percent of the aqueous vehicle. The amounts of the other ingredients are typically less than about 1 weight percent of the aqueous vehicle and are adjusted empirically to achieve the desired end properties. For instance, the amount of buffer and protein stabilizer are adjusted to achieve the desired degree of residual enzyme activity. In this regard one may use more enzyme and less stabilizer or less enzyme and more stabilizer to achieve the same final level of enzyme activity. The amount of binder and defoaming agent should be adjusted to give suitable viscosities for the method of application with higher viscosities being suitable for screen printing and lower viscosities being suitable for rotogravure printing. 
  A suitable aqueous ink formulation can be formulated in accordance with Table 2 with the balance being deformer, buffer, enzyme activity enhancers and water to make up 1 gram of formulated ink. 
TABLE 2 
」（第１６頁第１７行〜第１８頁第１５行）
「      【００５７】
  参照／対電極は従来の銀／塩化銀電極でもよいし、作用電極と同一構造でもよい。１態様では、結合剤と充填剤を含む水性ビヒクルに酵素、補因子及びメディエーターを加えた適当な配合物を２本の個々の導電性トラックの両方に被覆してコーティングを形成してもよい。コーティングが非導電性の場合、例えば充填剤が非導体である場合には、慣用コーティングで両者電極を覆ってもよい。電位を加えると、電極の一方は他方の作用電極で遊離する電子を吸収することにより参照／対電極として機能する。参照／対電極のメディエーターは単にその電極における電子流との相互作用の結果として還元される。
      【００５８】
  結合剤成分と充填剤成分を作用電極に配合することにより、所望の挙動を生じる反応層が得られる。その目的は、試料を酵素、補因子及びメディエーターと相互作用させるだけでなく、これらの化学的に活性な成分を電極の表面のすぐ近傍に止めることである。結合剤成分は水性媒体の粘度を容易に増加し、膜又は層の形成を助長する材料を含むことが望ましい。このような材料の典型例はグアーガム、アルギン酸塩、イナゴマメガム、カラギーナン及びキサンタン等の多糖類である。ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロール、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロース及びポリ（ビニルオキサゾリジノン）等の膜形成剤として一般に知られている材料も有用である。充填剤成分は測定に関与する酸化還元反応に対して化学的に不活性であり且つ水性媒体に不溶性の粒状材料が望ましい。導電性でも非導電性でもよい。典型的な材料としては、一般にグラファイト形態のカーボン、二酸化チタン、シリカ及びアルミナが挙げられる。
      【００５９】
  作用電極は酵素、補因子、メディエーター、結合剤成分及び充填剤成分を水性ビヒクルに配合し、導電性トラックをもつ細長形電気絶縁キャリヤーに付着することにより簡便に作製することができる。配合物はスクリーン印刷等の印刷や他の適当な技術により付着することができる。配合物は更に処理中に酵素を保護する緩衝液、酵素を変性から保護するタンパク質安定剤及び脱泡剤等の他の成分を加えてもよい。これらの付加成分は反応層の性質に作用するものでもよい。
      【００６０】
  作用電極は一般に約２〜５０ミクロン、好ましくは約１０〜２５ミクロンの乾燥厚さをもつ。実際の乾燥厚さは作用電極を構成する成分を付着するために使用する付着技術にある程度まで依存する。例えば、スクリーン印刷では約１０〜２５ミクロンの厚さが一般的である。
      【００６１】
  しかし、反応層の厚さは作用電極の乾燥厚さだけでなく、作用電極に及ぼす試料の作用にも依存する。水性試料の場合には、作用電極成分の組成がこの層の水分吸収度に影響する。
      【００６２】
  充填剤は一般に水性ビヒクルの約２０〜３０重量％を構成する。他の成分の量は一般に水性ビヒクルの約１重量％未満であり、所望の最終性質を達成するように実験により調節する。例えば、緩衝液とタンパク質安定剤の量は所望度の残留酵素活性を達成するように調節する。この点では、同一最終レベルの酵素活性を達成するように酵素と安定剤の使用量を増減することができる。結合剤と脱泡剤の量は付着法に適した粘度を与えるように調節すべきであり、スクリーン印刷には高粘度が適しており、グラビア印刷には低粘度が適している。
      【００６３】
  利用可能な水性インク配合物は表２に従って調製することができ、残余の脱泡剤、緩衝液、酵素活性増進剤及び水を加えてインク配合物１ｇとする。
      【００６４】
    【表２】
」（翻訳文）
（ｄ）「D-3-Hydroxybutyrate dehydrogenase(HBDH; EC 1.1.1.30) from Pseudomonas sp. was purchased from Toyobo Co., Ltd. p-Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) and D, L-3-hydroxybutyric acid were supplied by Boehringer Mannheim.」（第２３頁第５〜８行）
「      【００８０】
　シュードモナス種からのＤ−３−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ（ＨＢＤＨ；ｅｃ１．１．１．３０）はＴｏｙｏｂｏ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。ｐ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）とＤ，Ｌ−３−ヒドロキシ酪酸はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ製品とした。」
（ｅ）「EXAMPLE 2 
Evaluation of Meldola's Blue and 1,10-PQ in Dry Strips containing HBDH: Screen-printed electrodes were produced from an aqueous carbon ink incorporating 1,10-PQ or MB at a level of 2.4 or 4.3 mg/g ink, respectively, together with the enzyme HBDH (120 units/g ink) and NAD+ (110 mg/g ink). The ink also contained a polysaccharide binder.」（第２６頁第９〜１４行）
「      【００９１】
  実施例２
  ＨＢＤＨを含む乾式ストリップにおけるメルドラブルーと１，１０−ＰＱの評価
  夫々２．４又は４．３ｍｇ／ｇインクの１，１０−ＰＱ又はＭＢと、酵素ＨＢＤＨ（１２０単位／ｇインク）及びＮＡＤ＋（１１０ｍｇ／ｇインク）を含む水性カーボンインクからスクリーン印刷電極を作製した。インクに多糖結合剤も加えた。」（翻訳文）
　
　上記記載によれば、引用例１には、
「試料は生物体液とすることができ、分析物はＤ−３−ヒドロキシ酪酸とすることができ、電極支持体と、作用電極と、参照／対電極を備えることができ、３−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼである酵素、ＮＡＤ＋、１，１０−フェナントロリンキノンやメルドラブルーなどから選ばれるメディエーター、膜又は層の形成を助長する材料を含む結合剤成分及び充填剤成分を作用電極に配合することにより、得られる反応層を付着させ、作用電極は約１０〜２５ミクロンの乾燥厚さをもち、順反応過程では、ＮＡＤ＋はＮＡＤＨに還元され、ＮＡＤＨを再酸化してＮＡＤ＋を再生する電気化学メディエーターにより電極で再酸化が生じ、基質の濃度を表す電流を発生する、使い捨てストリップを使用する試験エレメント。」の発明（以下、「引用例１発明」という。）が記載されていると認めることができる。
　
引用例２
　原査定の拒絶の理由に引用され、本願優先日前の平成９年に頒布された刊行物である R.Antiochia ら, Purification and sensor applications of oxygen insensitive, thermophilic diaphorase, ANALYTICA CHIMICA ACTA, Vol.345 (1997), p.17-28 には、以下の記載がある。
（ａ）「In general the diaphorase enzymes show a low degree of substrate specificity for the oxidant so a wide variety of mediators can be screened for effective use in amperometric biosensors. The direct oxidation of NADH at solid electrodes suffers from high overpotentials [9-11]. In attempts to overcome this, several strategies have been adopted [12-14] and one of the most successful uses diaphorase [15,16]. Mediated electron transfer to diaphorases has been investigated by a number of groups [3,4,17] as the reoxidation of the mediator at the electrode occurs at much lower potentials than for NAD(P)H so that background currents (interference) are decreased, provided the mediator does not itself react with the interferent.
  Since the nicotinamides are cofactors for several hundred dehydrogenases, mediated oxidation of NAD(P)H via diaphorase offers a way to couple substrates of these enzymes to amperometric sensors via the cycling of NAD(P)H, as illustrated in Scheme 1.
  This means that generic sensors for the determination of many substances of analytical interest can be produced. Moreover co-immobilisation of a dehydrogenase and diaphorase on a polymer membrane allows multiple determinations to be made and reduces the cost of the analysis. In addition the close proximity of co-immobilisation-coupled enzymes often results in substrate channelling thus increasing the net flux of initial substrate to final product. The propensity of most diaphorases to use dioxygen as the electron acceptor means that some of the substrate is oxidised via a mediator independent pathway thus lowering the sensitivity of the electrode. However the diaphorase described in this paper is dioxygen independent and thus well suited to these sensor applications.」（第１８頁左欄第１６行〜同頁右欄第２１行）
「　一般に、ジアフォラーゼ酵素は、酸化体に対して低い基質特異性を示すため、電流測定バイオセンサーにおいて広範囲多種のメディエータが有効に使用できる。固体電極におけるＮＡＤＨの直接酸化は高い過電圧が必要となる[9-11]。このため、いくつかの手法が適用されてきた[12-14]が、最も成功した手法の一つがジアフォラーゼの使用である[15,16]。ジアフォラーゼを介する電子移動は、多くのグループで研究されており[3,4,17]、電極でのメディエータの再酸化がＮＡＤ（Ｐ）Ｈよりも低い電位で起こり、このためバックグランド電流（干渉）が減少し、メディエータ自身も干渉しない。
　ニコチンアミドは、数百の脱水素酵素の補因子であるため、ジアフォラーゼを介したＮＡＤ（Ｐ）Ｈの酸化は、図式１に示されるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ回路を介する電流測定センサーにおけるこれらの酵素の基質の組み合わせを提供する。
　このことは、分析対象の多様な物質を測定しうる総括的センサーを作ることが可能であることを意味する。さらに、脱水素酵素とジアフォラーゼを共に高分子膜に固定することにより多くの測定ができ、分析コストが減少する。加えて、近接して固定化された酵素の組により、基質の経路において、最初の物質から最終生成物の生成量を増大する。多くのジアフォラーゼは電子受容体として酸素分子を使用し、独自の機構でメディエータを介して酸化を行うため電極の感度が低下する基質もある。しかし、この文献に記述したジアフォラーゼは、酸素分子と独立であり、これらのセンサーへの適用に適合していた。」（翻訳文）
（ｂ）「2.7. Enzyme immobilisation
・・・
Co-immobilisation on Immobilon membranes was carried out by premixing 5 μl (0.4 U) of diaphorase and 5-25 μl(0.4-2 U) of the dehydrogenase and then adding the entire volume to the membrane, allowing it to react for 30 min and then washing as described above for diaphorase alone.」（第１９頁右欄第２９行、第２１頁左欄第１８〜２３行）
「２．７．酵素の固定化
・・・
Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ膜の共固定化は、５μｌ（0.4Ｕ）のジアフォラーゼと、５〜２５μｌ（0.4〜2Ｕ）の脱水素酵素を予め混合し、次に膜全体に加え、３０分反応させ、そしてジアフォラーゼ単独の場合として記載した様に洗浄を行った。」（翻訳文）
（ｃ）「2.8. Biosensor assembly
  A Universal Sensors (Metairie, LA) probe and ABD amperometric biosensor was employed with a platinum working electrode and silver/silver chloride reference electrode. The currents were recorded on an Amel model 868 (Milan, Italy).
  The electrode assembly was covered with the enzyme membrane and then a polycarbonate protective membrane (0.33 μm pore size), both held in place by an ‘0’ring. The internal filling solution was 0.1 M potassium chloride and the assembly was held together by a jacket.」（第２１頁左欄第２４行〜第２２頁左欄第６行）
「２．８．バイオセンサー装置
　Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｅｎｓｏｒｓ（Ｍｅｔａｉｒｉｅ，　ＬＡ） のプローブとＡＢＤの電流測定バイオセンサーを、白金作用電極と銀／塩化銀参照電極として使用した。電流はＡｍｅｌ ｍｏｄｅｌ８６８（Ｍｉｌａｎ，　Ｉｔａｌｙ）により記録した。
　電極装置は、酵素膜およびポリカーボネート保護膜（孔径0.33μｍ）で覆い、両者はＯリングにより配置した。内部溶液は0.1Mの塩化カリウムで、装置はジャケットに保持した。」（翻訳文）
（ｄ）「2.9. Measurement procedure
After assembly the biosensor was immersed in a chamber containing 5 ml of 0.1 M phosphate buffer, pH 7, containing 3 mmoll-1 potassium hexacyanoferrate(III). A potential of 250 mV was applied until a stable baseline current was obtained (typically about 5 min). In the case of NADH measurements, aliquots of a standard solution of NADH were added and the steady state currents recorded. Determinations of dehydrogenase substrates were made by including 1 mm01 1-l NAD+ or NADP+ in the chamber prior to addition of the substrate.」
「２．９．測定方法
　組み立て後のバイオセンサーを５ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７、３ｍｍｏｌ／ｌのヘキサシアノ鉄(III)酸カリウムを含む容器に浸漬した。ベースラインの電流が安定するまで（典型的には約５分）２５０ｍＶの電圧を印加した。ＮＡＤＨを測定する場合はＮＡＤＨ標準溶液を加えて定常電流を記録した。脱水素酵素の基質を測定する場合は基質を加える前に１ｍｍｏｌ／ｌのＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋を容器に含ませた。」（翻訳文）
　
　これらの記載によれば、引用例２には
「ジアフォラーゼと脱水素酵素を固定化した酵素膜で覆った電極装置と、ヘキサシアノ鉄(III)酸カリウムを含む容器を用い、脱水素酵素の基質を測定する場合に、基質を加える前に１ｍｍｏｌ／ｌのＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋を容器に含ませて、電極装置を容器に浸漬する電流測定バイオセンサー。」が記載されていると認められる。
　
引用例３
　原査定の拒絶の理由に引用され、本願優先日前の平成１年に頒布された刊行物である A.Bergel ら, Enzymatic Amplification for Spectrophotometric and Electrochemical Assays of NAD+ and NADH, ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, Vol.179, p.382-388 (1989) には、以下の記載がある。
（ａ）「The purpose of this paper is to propose original procedures, based on the enzymatic amplification principle, for assaying the sum of the reduced and oxidized forms of the pyridine coenzyme. Such a measurement will be particularly interesting in many sectors of biology, medicine, or biotechnology, for instance, for the control of pyridine coenzyme’s enzymatic active quantity during the course of enzymatic production.
  The method, outlined in the diagrams of Table 1, consists in associating two enzymatic reactions so that the product of the first one is the substrate of the second, the amplification being carried out on the NAD+/NADH couple. The spectrophotometric detection reaction uses a dye with a high absorption coefficient. The electrochemical detection reaction involves a substance that exchanges electrons with an electrode very easily.」（第３８３頁左欄第９行〜同頁右欄第３行）
「この論文の目的は、酵素の増幅原理に基づいた、ピリジン補酵素の還元型および酸化型の合計を測定する独自の手法を提供することである。このような測定は特に生物学、医学やバイオテクノロジーの多くの分野において、例えば、酵素による生産において、ピリジン補酵素の酵素活性量を制御する特に興味深い。
　方法は、表１に概略が描かれているように、２つの酵素反応が関連し、最初の生成物は二番目の基質となり、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨの組み合わせにより増幅される。分光測定反応は高い吸収係数を有する染料を使用する。電気化学測定反応は、電極で電子を容易に交換する物質を含む。」（翻訳文）
（ｂ）「Reaction 4: phosphate buffer 0.2 M, pH 7.0. The procedure was identical to 3, with ,β-D-glucose and Fe(CN)63- in solution initially, and β-D-glucose dehydrogenase and diaphorase in the reaction chamber.」（第３８４頁右欄第３７〜４０行）
「反応４：リン酸緩衝液0.2Ｍ、ｐＨ7.0。３と同一の手順で。最初はβ−Ｄ−グルコースとＦｅ（ＣＮ）６３−の溶液で、そしてβ−Ｄ−グルコースデヒドロゲナーゼとジアフォラーゼを反応容器に加える。」（翻訳文）
（ｃ）「In the case of reaction 4, the electrochemical oxidation of glucose at the ferrocyanide ion oxidation potential was sufficiently low for the difficulties encountered with the previous sensor to be avoided.
  Figure 4 shows the results obtained under the following operating conditions: β-D-glucose, 30 mM; Fe(CN)63-, 10 mM, β-D-glucose dehydrogenase, 11 U/ml; diaphorase, 90 U/ml (straight line a). The current/concentration ratio was 0.27 μA・μM-1.」（第３８６頁第１２〜２０行）
「反応４の場合、グルコースの電気化学的酸化におけるフェロシアン酸イオンの酸化電位が十分に低く、以前のセンサーでの問題は回避された。
　図４は、以下の条件で得られた結果を示す：β−Ｄ−グルコース、３０ｍＭ；Ｆｅ（ＣＮ）６３−、１０ｍＭ；β−Ｄ−グルコースデヒドロゲナーゼ、１１Ｕ／ｍｌ；ジアフォラーゼ、９０Ｕ／ｍｌ（直線ａ）。電流／濃度率は0.27μＡ・μＭ−１」（翻訳文）
　
　これらの記載によれば、引用例３には、
「２つの酵素反応が関連してＮＡＤ＋／ＮＡＤＨの組み合わせにより増幅される、β−Ｄ−グルコース、Ｆｅ（ＣＮ）６３−、β−Ｄ−グルコースデヒドロゲナーゼ、ジアフォラーゼを用いる電気化学測定反応。」が記載されていると認められる。
　
（３）対比
　本願補正発明と引用例１発明とを対比すると、引用例１発明の「使い捨てストリップ」は、「分析物はＤ−３−ヒドロキシ酪酸とすることができ」るものであるから、本願補正発明の「サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸を検出するテストストリップ装置」に相当する。また、引用例１発明の「電極支持体」、「３−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼである酵素」および「ＮＡＤ＋」は、それぞれ、本願補正発明の「基板」、「サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸の酸化を触媒する上で有効な触媒量のヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ」および「ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼに対応する補因子」に相当する。そして、「ヘキサシアノ鉄(III)酸塩」が本願明細書段落【００１４】の記載からメディエーターであることから、引用例１発明の「１，１０−フェナントロリンキノンやメルドラブルーなどから選ばれるメディエーター」と本願補正発明の「ヘキサシアノ鉄(III)酸塩」とは、メディエーターである点で共通している。また、引用例１発明の「作用電極」および「参照／対電極」は、電極支持体１の上に配置されるものであるから、本願補正発明の「前記基板上に配置された少なくとも１個の電極」に相当する。さらに、引用例１発明の「順反応過程では、ＮＡＤ＋はＮＡＤＨに還元され、ＮＡＤＨを再酸化してＮＡＤ＋を再生する電気化学メディエーターにより電極で再酸化が生じ、基質の濃度を表す電流を発生する」ことは、本願補正発明の「サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸のレベルを指示する電気出力信号を発生させる上で有効な形で前記サンプルと反応性」であることに相当する。また、引用例１発明の「反応膜」は、膜又は層の形成を助長する材料を含む結合剤成分を含み、作用電極に付着させ、その結果作用電極が約１０〜２５ミクロンの乾燥厚さをもつものであるから、本願補正発明の「乾燥試薬フィルム」に相当し、引用例１発明の反応膜に含まれる「３−ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼである酵素」、「ＮＡＤ＋」、「１，１０−フェナントロリンキノンやメルドラブルーなどから選ばれるメディエーター」等の試薬は、本願補正発明の「少なくとも１個の電極と連通している試薬」に相当する。
　したがって、両者は、
「サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸を検出するテストストリップ装置において、
　基板；
　前記基板上に配置された少なくとも１個の電極；ならびに
　前記少なくとも１個の電極と連通している試薬であって、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸のレベルを指示する電気出力信号を発生させる上で有効な形で前記サンプルと反応性であり、メディエーター、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸の酸化を触媒する上で有効な触媒量のヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ、前記ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼに対応する補因子、を含んでなる乾燥試薬フィルムである試薬を有する前記装置。」である点で一致し、以下の点で相違している。
［相違点］本願補正発明では、メディエーターとしてヘキサシアノ鉄(III)酸塩を含み、さらに還元型の前記補因子の電気化学的酸化を触媒する上で有効な触媒量の第２の酵素を含んでいるのに対し、引用例１発明では、メディエーターとして１，１０−フェナントロリンキノンやメルドラブルーなどから選ばれる化合物を含み、第２の酵素を含んでいない点。
　
（４）判断
　上記相違点について検討する。
　引用例２および引用例３に記載されているように、脱水素酵素とＮＡＤ＋／ＮＡＤＨを用いてＮＡＤＨの酸化電流を測定する際に、メディエーターとしてヘキサシアノ鉄(III)塩酸を用い、ＮＡＤＨを酸化させるための酵素としてジアフォラーゼを用いることは周知の事項であり、ジアフォラーゼを用いることにより、電極の酸化電位を低下させるという効果も知られている。
　どのようなメディエーターを採用するかは、周知のメディエーターのなかから当業者が適宜選択しうることであるから、引用例１発明において、１，１０−フェナントロリンキノン等の代わりにヘキサシアノ鉄(III)塩鉄を採用することは当業者が容易に想到しうることである。また、ＮＡＤＨの酸化電流を測定するにあたり、感度を向上させようとすることは一般に認識されている課題である。そして、ジアフォラーゼが、乾燥状態で試験片に含浸させて分析に用いられることも、例えば、特開昭６２−９３６６２号公報（特許請求の範囲、第３頁右下欄第１２行〜第４頁左上欄第５行）、特開昭５９−５５２００号公報（特許請求の範囲、第７頁左上欄第１０行〜同頁右上欄第２行）に記載されるように一般に知られていることである。したがって、引用例１発明の使い捨てストリップにおいて、引用例２および引用例３に記載された周知のジアフォラーゼを第２の酵素として採用することは、当業者が容易に想到し得ることである。
　
　そして、本願明細書記載の効果は、引用例１および上記周知技術から当業者が予測しうる範囲のものである。
　
　よって、本願補正発明は、引用例１および上記周知技術に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。
　
（５）むすび
　以上のとおり、平成１８年１２月２５日付け手続補正は、平成１８年改正前の特許法第１７条の２第５項で準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するものであり、同法１５９条第１項で読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下されるべきものである。
　
　
３．本願発明について
　以上のとおり、平成１８年１２月２５日付けの手続補正は、上記のとおり却下されたので、本願の請求項１に係る発明は、平成１４年７月５日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される以下のとおりのものと認められる。
「【請求項１】
　サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸を検出するテストストリップ装置において、
　基板；
　前記基板上に配置された少なくとも１個の電極；ならびに
　前記少なくとも１個の電極と連通している試薬であって、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸のレベルを指示する電気出力信号を発生させる上で有効な形で前記サンプルと反応性であり、ヘキサシアノ鉄(III)酸塩、前記サンプル中の３−ヒドロキシ酪酸の酸化を触媒する上で有効な触媒量の第１の酵素、前記第１の酵素に対応する補因子、および還元型の前記補因子の電気化学的酸化を触媒する上で有効な触媒量の第２の酵素を含んでなる試薬
を有することを特徴とする前記装置。」（以下、「本願発明」という。）
　
（１）引用刊行物記載の発明
　原査定の拒絶の理由に引用された引用例およびその記載事項は、前記「２．（２）」に記載したとおりである。
　
（２）対比・判断
　本願発明は、本願補正発明における、第１の酵素を「ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ」とする限定および、試薬を「乾燥試薬フィルムである」とする限定を、それぞれ省いたものである。
　そうすると、本願発明の構成要件をすべて含み、さらに限定を付加したものに相当する本願補正発明が、前記「２．（４）」に記載したとおり、引用例１および上記周知技術に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本願発明も同様の理由により、当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
（３）むすび
　上記のとおり、本願発明は、引用例１および上記周知技術に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、その他の請求項に係る発明についての判断を示すまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。