【事件の表示】
　平成１０年特許願第９９４６６号「イオン交換液体クロマトグラフィーによるタンパク質類の測定方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１１年１０月２９日出願公開、特開平１１−２９５２８８〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯・本願発明
　本願は、平成１０年４月１０日の出願であって、その請求項１に係る発明は、平成２０年１２月１日付けの手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される次のとおりのものと認める。
 「イオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、用いられる充填剤が、イオン交換容量が、充填剤の乾燥重量１ｇ当たり１１．３〜１６．６μｅｑであり、かつ、用いられる溶離液が、５〜８００ｍＭの濃度で、用いられる溶離液を測定途中に変化させることを特徴とするイオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法。」（以下、「本願発明」という。）
　
２．引用刊行物の記載事項
　当審における拒絶に理由に引用された本願出願前に頒布された刊行物１ないし刊行物４には、以下の事項がそれぞれ記載されている。 下線は、当審で付与したものである。
　
(刊行物１：特開平３−７３８４８号公報の記載事項) 
（1a）「１．疎水性架橋重合体粒子の表面部分に親水性重合体の層が形成された被覆重合体粒子からなり、該親水性重合体の層の厚さが１０〜３００Åである、液体クロマトグラフィー用充填剤。」（特許請求の範囲請求項１）
（1b）「本発明は、クロマトグラフィー用充填剤、特に水系のゲル浸透クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーに適した液体クロマトグラフィー用充填剤およびその製造法に関する。」（第１頁右下欄２行〜５行）
（1c）従来技術として、
「ＩＥＣ用充填剤として最もよく用いられているゲルには、スチレン−ジビニルベンゼンの架橋共重合体粒子の表面にイオン交換基を導入したゲルおよびスチレン、ジビニルベンゼンとイオン交換基を有する単量体との架橋共重合体ゲルがある。これらのゲルにおいても、上記ＧＰＣ用ゲルと同様、架橋度が不充分であるという理由で、あるいは、
イオン交換基が粒子内部に存在するため膨潤・収縮しやすいという理由で、耐圧性に劣る。
（1d）「本発明は上記従来の欠点を解決するものであり、その目的とするところは、タンパクなどの親水性物質の分離に適したクロマトグラフィー用充填剤であって、
耐圧性が高く、膨潤・収縮が少なく、かつタンパクなどの非特異吸着が少ない充填剤およびその製造法を提供することにある。
（1e）「本発明の充填剤は、疎水性架橋重合体を骨格とし、親水性重合体で該疎水性架橋重合体の表面部分が被覆された２層構造の重合体粒子である。そして、親水性重合体からなる被覆層の平均的な厚さは、１０〜３００Åである。被覆層の厚さは、後述の実施例中に記載の「被覆層の平均厚さの測定方法」に従って測定される。
平均厚さが１０Åより小さい場合は被覆が不完全であり、疎水性架橋重合体粒子の表面が露出している部分が生じやすい。このような露出部分があると、被分離物質（例えば、タンパク）が充填剤に非特異的に吸着する可能性がある。平均厚さが３００Åを越える場合は、被覆層自身の膨潤・収縮が無視できなくなり、分析中に、充填剤の分離能が低下したり、圧力が上昇したりする。さらに、溶離液との平衡化に時間がかかるようになるために分析時間が長くなるか、あるいは、分離能が低下する。
粒子表面の親水性の度合、イオン交換能などが調節できるので、分析あるいは分離を目的とする親水性物質の種類に応じた所望のＩＥＣあるいはＧＰＣ用の充填剤が得られうる。この充填剤は広いｐＨ範囲において使用することが可能である。さらに、上記のように耐圧性が大きく、膨潤・収縮の度合が極めて低いため、粒径の微小化が図れ、その結果、高精度での分離が可能となる。高圧条件下での使用が可能なため、迅速分析がなされ得る。
（1f）「実施例５
　疎水性重合性単量体として疎水性非架橋性単量体であるスチレン１００ｇと疎水性架橋性単量体であるジビニルベンゼン２００ｇを用い、実施例３に準じて疎水性架橋重合体を調製した。さらに親水性単量体として陽イオン交換能を有するアクリル酸５０ｇを用い、実施例１と同様に操作してＩＥＣ用充填剤を得、その評価を行った。
　その結果、
耐圧性については１５０ｋｇ／ｃｍ
２
まで圧力損失と流速とが比例した。膨潤性試験を行ったところ、溶離液を４０ｍＭのリン酸緩衝液から２００ｍＭのリン酸緩衝液に変えた場合、カラム圧力の上昇は認められなかった。滴定により充填剤表面のイオン交換能を定量したところ０．０８ｍｅｑ／ｇであった。充填剤を硝酸銀溶液で処理して上記の方法にしたがって被覆層の厚さを測定したところ約３０Åであった。
数種のタンパク（Ｓｉｇｍａ社製）の混合物の分析を行った。溶離は、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０、以下Ａ液と表す）；およびＡ液と５００ｍＭ　ＮａＣｌ（ｐＨ７．０）との等量混合物（以下Ｂ液と表す）を用い、Ａ液１００％からＢ液１００％へのリニアグラジエント法により行った。
ヒト血液の分析を行った。その結果得られたクロマトグラムを第１１図に示す。第１１図および後述の第１３図、第１５図において、２８はＨｂＡ
１ａ
およびＡ
１ｂ
、２９は胎児性Ｈｂ（Ｆ）、３０は不安定型ＨｂＡ
１ｃ
、３１は安定型ＨｂＡ
１ｃ
、そして３２はＨｂＡ
０
に起因するピークである。
（1g）「比較例５
　疎水性重合性単量体として疎水性非架橋性単量体であるスチレン１００ｇと疎水性架橋性単量体であるジビニルベンゼン２００ｇを用い、実施例３に準じて疎水性架橋重合体を調製した。さらに親水性単量体として陽イオン交換能を有するアクリル酸１０ｇを用い、実施例１と同様に操作してＩＥＣ用充填剤を得、その評価を行った。
　その結果、
耐圧性については１５０ｋｇ／ｃｍ
２
まで圧力損失と流速とが比例した。膨潤性試験を行ったところ、溶離液を４０ｍＭのリン酸緩衝液から２００ｍＭのリン酸緩衝液に変えた場合、カラム圧力の上昇は認められなかった。滴定により充填剤表面のイオン交換能を定量したところ０．００５ｍｅｑ／ｇであった。充填剤を硝酸銀溶液で処理して上記の方法にしたがって被覆層の厚さを測定したところ、約８Åであり、表面の１部に被覆されていない箇所が観察された。
（1h）「（発明の効果）
　本発明によれば、このように、
耐圧性に優れ、かつ膨潤・収縮が少なく、タンパクの非特異的吸着がない水系の液体クロマトグラフィー用充填剤
各種親水性物質の単離もしくは分析に広範囲で利用され得る。
　
(刊行物２：特開平２−８５７５８号公報の記載事項)
（2a）「（１）イオンクロマトグラフィー用のイオン交換性複合組成物において、
 　実質的にイオン交換容量を持たず約２ミクロンないし５０ミクロンの範囲の平均粒度を有する水不溶性疎水性の支持材粒子と、
　この支持材粒子の表面に疎水性的に結合されており、そして上記支持材粒子の平均粒度よりも小さくかつ約０．０１ないし約１０ミクロンの範囲の平均粒度を有する水不溶性疎水性の、イオン交換性官能基の導入された表面材粒子の被覆層と
 からなるイオン交換性組成物。」（特許請求の範囲請求項１）
（2b）「表面材粒子はその複合材粒子をイオン交換クロマトグラフィーカラム中に正しく充填したときにイオン分離材として有効であるようにするのに充分な共有結合的に結合したイオン交換基濃度を有する必要がある。この目的には、約１２００μｅｑ／ｇ（１ｇ当りのマイクロ当量）までの交換容量が有効であって、好ましい範囲は約５−１２００μｅｑ／ｇであり、そしてより好ましくは約５−２００μｅｑ／ｇである。・・・・・このような交換容量の値は通常のイオン交換に用いる樹脂のイオン交換容量よりも非常に低く、と言うのはイオン交換容量が低下するとその交換物質の上で分離されるイオンはより弱く保持され、それによってより希薄な溶離剤の使用を許容するからである。一方、より希薄な溶離剤は分析の間の背景値干渉を低下させ、それによってその系の検出限度を下げる。
　本発明に従えば、もしその低い交換容量が粒子の表面層にのみ極在する場合には、これが表面層と深部層との間で、より均一に分布している場合（通常のイオン交換材の場合がそうである）に比べて種々のイオンの極めてシャープな分離がもたらされるものと信じられる。」（第４頁右下欄６行〜第５頁左上欄９行）
（2c）「得られるイオン交換性複合組成物は種々のイオンのクロマトグラフィー分離及びそれらの分析的定量のための充填剤として有用である。加えて、これらの組成物はアミノ酸類、アルコール類、炭水化物類、抗生物質類、ペプチド類、
蛋白質
の分析にも使用することができる。
（2d）「次にこの得られたスチレン系ラテックスと前記例１のＡの強塩基性メタクリレートラテックスを用いて例１のＢに記述した方法で一連の複合樹脂を作り、表面材樹脂と支持材樹脂との型を変えたときの交換容量及びその他の諸性質を比較した
（第１表参照）
　
第１表には、種々のラテックス被覆複合樹脂の交換容量（ｍｅｑ／ｇ）として、支持樹脂ＸＡＤ−８中間極性アクリルエステル、被覆ラテックス１）の複合樹脂のイオン交換容量が０．０１４±０．００２であり、支持樹脂ＸＡＤ−１１極性アマイド、被覆ラテックス１）の複合樹脂のイオン交換容量が０．０１５±０．００２であることが記載されている。
（2e）「例３
　２０−２６ミクロンの平均粒子直径を有する樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＸＡＤ−１の上に前記例１のＡにおいて得られた弱塩基性樹脂を被覆した（例１のＢに記述したと同様に）。得られた複合樹脂、及び前記例１に記述した強塩基性樹脂被覆の複合樹脂（但し２０−２６ミクロンのＸＡＤ−１支持材樹脂を用いて作ったもの）をそれぞれ２５０×２ｍｍ（内直径）のガラスライニングした鋼鉄製カラムの中に充填した。上記の弱塩基性樹脂充填カラムと強塩基性樹脂充填カラムとはそれぞれ０．０１８ｍｅｑ／ｇ及び０．０２０ｍｅｑ／ｇの交換容量を有しており、これらをｐＨ４．６５の１．２５×１０−４Ｍのフタル酸ナトリウムの溶離液を用いて操作した。」（第８頁左下欄６行〜１９行）
（2f）「例４
　非常に低い交換容量（０．００５ｍｅｑ／ｇ）を有する弱塩基性メタクリレートラテックスで被覆されたＸＡＤ−１樹脂の充填材を例１に記述したと同様にして調製した。３．７×１０−５Ｍのフタル酸ナトリウム溶離剤をｐＨ６．５において硫酸イオンの分離に用いた。検出器の波長（間接的分光分析検出）は２２４ｎｍであった（交換容量の低い充填材は低い溶離剤濃度を許容し、それによって背景値水準を低下させて検出限界濃度を下げる）。この低交換容量ラテックスカラムを用いて１０ｐｐｂの硫酸イオンのクロマトグラムを取った。検出限界は内輪に見積もって４ｐｐｂ（０．４ｎｇ）と評価された。この値はこれまで報告されている実験的な検出限界よりも低く・・・・・、そしてより大きな交換容量の市販のカラムを用いての硫酸イオンの検出限界よりも約５倍低い値である。」（第９頁左上欄６行〜右上欄５行）
　
(刊行物３：特開平３−２９３５６３号公報の記載事項)
（3a）「（ｉｉ）Ｈｂの測定
　第１図に示す装置を用い、上記（ｉ）項で得られた全血試料およびＬ−ＨｂＡ１ｃ除去試料中のＨｂＡ１ｃの分析を行った。この測定装置としては液体クロマトグラフィーシステムＳＳＬＣ−２０（積水化学工業株式会社製）を用い、該装置のイオン交換カラム３１にはＭＩＣＲＯＮＥＸＡ１ｏＨＳ２（積水化学工業株式会社製）を、そして検出器１７には可視検出器を波長４１５ｎｍにセットして使用した。溶血試薬としては、０．００５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）１００ｍｌに溶血剤としてトリトンＸ−１００（和光純薬社製）０．１ｍｌを加えて調製したものを用いた。
溶離液には、Ａ液として２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）、そしてＢ液として１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）を用い、ステップグラジエント法により流速２ｍｌ／分で８分間溶出を行った。
　
(刊行物４：特開平７−１５９３９１号公報の記載事項)
（4a）「【００３５】次に、分離対象成分ごとに好ましいカラムおよび移動相を例示する。
【００３６】(1) 蛋白質
ＧＰＣ用充填剤を詰めたカラムを使用し、移動相にはリン酸緩衝液等を用いるか、または、充填剤表面を各種アミノ基、カルボキシル基等で修飾したイオン交換タイプの充填剤を詰めたカラムを使用し、移動相にはリン酸緩衝液等を用いる。」
（4b）「【００４９】＜実施例＞実施例として、糖尿病の臨床検査項目であるグリコヘモグロビンの分析を行う。糖尿病の臨床検査項目としては、グルコヘモグロビンのうち一般的にＨｂＡｌｃが測定されているので、ＨｂＡｌｃの定量を主目的として、本発明によるグラジエント方法を用いてＨｂＡｌｃの溶出を行う。
【００５０】
グラジエント法としては３種類の成分からなる移動相（移動相Ｉ、移動相IIおよび移動層III ）を用いたステップグラジエント法を適用する。
【００６１】・・・
　カラム：ＭＩＣＲＯＮＥＸ−Ａｌｃ（積水化学工業社製）
　
移動相：Ｉ液（リン酸系緩衝液、ｐＨ＝６．０、塩濃度＝１４０ｍＭ）
II液（リン酸系緩衝液、ｐＨ＝６．０、塩濃度＝１８０ｍＭ）
III 液（リン酸系緩衝液、ｐＨ＝７．２、塩濃度＝３２０ｍＭ）
　
３．対比・判断
　上記刊行物１の記載事項（上記(1a)(1f)）から、刊行物１には、
「疎水性架橋重合体粒子の表面部分に親水性重合体の被覆層が形成された被覆重合体粒子からなり、充填剤表面のイオン交換能が０．０８ｍｅｑ／ｇ、被覆層の厚さ約３０Åの液体クロマトグラフィー用充填剤を用いて、イオン交換液体クロマトグラフィーにより、血液中のＨｂＡ１ａ、Ａ１ｂ、Ｈｂ(Ｆ)、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ、ＨｂＡ０を測定する方法」の発明（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
　そこで、本願発明と刊行物１発明とを比較する。
（ア）刊行物１発明の「ＨｂＡ１ａ、Ａ１ｂ、Ｈｂ(Ｆ)、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ、ＨｂＡ０」は、本願発明の「ヘモグロビン類」に相当する。
（イ）刊行物１発明の「充填剤表面のイオン交換能」の単位「ｍｅｑ／ｇ」は、乾燥充填剤１ｇ当たりのイオン交換容量であることは、当業者にとって明らかなことであり、イオン交換クロマトグラフィーでイオン交換容量に主として寄与するのは、充填剤の表面のイオン交換基の量であるから、刊行物１発明の「充填剤表面のイオン交換能」は、本願発明の「イオン交換容量」に相当する。
（ウ）刊行物１発明も本願発明も、充填剤の乾燥重量１ｇ当たり所定のイオン交換容量の充填剤を用いる点では共通している。
　したがって、両者の間には、以下の一致点及び相違点がある。
　
（一致点）
　イオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、充填剤の乾燥重量１ｇ当たり所定のイオン交換容量の充填剤を用いる方法である点。 
　
（相違点１）
　本願発明では、溶離液が、５〜８００ｍＭの濃度であり、溶離液を測定途中に変化させるのに対して、刊行物１発明では、溶離液の濃度が規定されず、溶離液の濃度を変化させることも規定されていない点。
　
（相違点２）
　充填剤の乾燥重量１ｇ当たりの所定のイオン交換容量が、本願発明では、１１．３〜１６．６μｅｑであるのに対して、刊行物１発明では、０．０８ｍｅｑ、つまり、８０μｅｑである点。 
　
　そこで、上記相違点について検討する。
（相違点１について）
　刊行物１には、数種のタンパクの混合物のイオン交換クロマトグラフィーをリニアグラジエント法により行うことが記載されているところ（上記(1f)）、刊行物３、４にも記載されるように、ヘモグロビン類の測定を、溶離液として５〜８００ｍMの濃度範囲に含まれるものを用い、イオン交換クロマトグラフィーのステップグラジエント法、つまり溶離液を測定途中に変化させる方法で行うことは、本願出願前の周知技術であるから、刊行物１発明において、溶離液として、５〜８００ｍＭの濃度のものを用い、溶離液を測定途中に変化させるようにすることは、当業者が容易になし得たものといえる。
　
（相違点２について）
　刊行物１には、従来技術の問題点として、イオン交換基を有する単量体との共重合体ゲルでは、イオン交換基が粒子内部に存在するため膨潤・収縮しやすく耐圧性に劣ることが記載され（上記(1c)）、充填剤の耐圧性に影響する膨潤・収縮のしやすさは、イオン交換基の量が一因であることが理解できる。
　さらに、刊行物１には、発明の目的として、耐圧性が高く、膨潤・収縮が少なく、かつタンパクなどの非特異吸着が少ないタンパクなどの親水性物質の分離に適したクロマトグラフィー用充填剤を提供することが記載され（上記(1d)）、表面の親水性重合体の被覆層が膨潤・収縮しないように、その厚さを３００Å以下とすること、厚さの下限については、被覆が不完全にならないように１０Åとすることが記載され（上記(1e)）、比較例５には、被覆層の厚さが約８Åで、イオン交換能が０．００５ｍｅｑ／ｇ（５μｅｑ／ｇ）の場合、表面の一部に被覆されていない箇所があったことが記載されている（上記(1g)）。
　これらのことから、表面の親水性重合体被覆層の厚さは、重合体粒子が膨潤により耐圧性に問題が生じず、かつ、表面の親水性のイオン交換基が均一に存在するように設定されるといえるところ、上記のとおり、充填剤の膨潤・収縮のしやすさは、イオン交換基の量が一因であるといえることから、イオン交換基の量、つまりイオン交換容量も同様に充填剤の膨潤・収縮の程度及び表面のイオン交換基の均一性を考慮して最適化されるべきものといえる。そして、刊行物２の第１表（上記(2g)）には、イオン交換容量ｍｅｑ／ｇが、０．０１４±０．００２、０．０１５±０．００２、つまり、約１４μｅｑ／ｇ及び１５μｅｑ／ｇの複合樹脂が得られたことが記載され、分析対象の一つとして蛋白質も例示され、このような分析の詳細は装置類を含めて公知であることも記載されている（上記(2c)）。
　さらに、刊行物１には、粒子表面の親水性の度合、イオン交換能などの調節ができるので、分析を目的とした親水性物質の種類に応じた所望のイオン交換クロマトグラフィー用充填剤が得られることが記載されていることから（上記(1e)）、イオン交換能は、分析対象に応じて最適化するものであるといえる。
　そうすると、刊行物１発明において、ヘモグロビン測定に適した溶離液の濃度範囲や溶離液の濃度を変化させるという液体クロマトグラフィーの条件の採用に応じて、充填剤の膨潤・収縮が少なくなるように、イオン交換容量を最適化し、イオン交換容量の範囲を充填剤の乾燥重量１ｇ当たり１１．３〜１６．６μｅｑとすることは、当業者が容易になし得たことといえる。そして、この程度のイオン交換量の充填剤は、上記のとおり刊行物２に記載されるように知られており、通常は採用しないというものでもない。
　
（本願発明の効果について）
　耐圧性・耐膨潤性に優れ、溶離液の平衡化時間が短く、短時間で高精度でヘモグロビンの分析が可能で、カラム寿命が長いという本願発明の効果は、刊行物１に記載された、親水性重合体の被覆層が厚すぎると、被覆層自身の膨潤・収縮が無視できなくなり、分析中に充填剤の分離能が低下したり、圧力が上昇したりすること、溶離液との平衡化に時間がかかるようになるために分析時間が長くなるか、あるいは、分離能が低下すること（上記(1e)）、及び、刊行物１に発明の効果として、充填剤が膨潤・収縮せず耐圧性に優れ、タンパク質の非特異的吸着がないと記載されていること（上記(1h)）、さらに、ヘモグロビンの測定を溶離液の塩濃度を所定の範囲で変化させるグラジエント法で行う刊行物３、４に記載されるような周知技術から予測しうるものであり、格別顕著なものともいえない。
　
４．むすび
　以上のとおり、本願請求項１に係る発明は、刊行物１ないし４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　よって、結論のとおり審決する。