(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−カルニチンまたはアルカノイル−Ｌ−カルニチン、または薬学的に許容されるそれらの塩を含む輸血用血液の保存のための安定化溶液。
【請求項２】
アルカノイル−Ｌ−カルニチンが、アセチル−、プロピオニル−、ブチリル−、イソブチリル−、バレリル−およびイソバレリル−Ｌ−カルニチンの中から選ばれるものである、請求項１記載の溶液。
【請求項３】
Ｌ−カルニチンまたはアルカノイル−Ｌ−カルニチン、または薬学的に許容される塩の１種を０．５−１０．０ｍＭ／Ｌ、および好ましくは４−６ｍＭ／Ｌ含むものである、請求項１記載の溶液。
【請求項４】
以下の組成物：
グルコース                  ８０−１２０  ｍＭ／Ｌ
マンニトール                ４０−６０  ｍＭ／Ｌ
Ｋ２ＨＰＯ４                  ２４−２８  ｍＭ／Ｌ
ＫＨ２ＰＯ４                  １２−１６  ｍＭ／Ｌ
クエン酸カリウム            １５−２０  ｍＭ／Ｌ
Ｌ−カルニチン分子内塩      ４−６  ｍＭ／Ｌ
を特徴とする請求項３記載の溶液。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、輸血用血液保存剤としてのＬ−カルニチン、アルカノイル−Ｌ−カルニチンおよび薬学的に許容されるそれらの塩の新規の非治療的使用に関する。
【０００２】
すなわち、本発明は、Ｌ−カルニチン、アルカノイル−Ｌ−カルニチンまたは薬学的に許容されるそれらの塩を含む、輸血用血液の保存のための新規安定化溶液に関する。
【０００３】
アルカノイル−Ｌ−カルニチンにより表されるものは、アセチル−、プロピオニル−、ブチリル−、イソブチリル−、バレリル−およびイソバレリル−Ｌ−カルニチンである。簡単化のために、以下では、Ｌ−カルニチンだけについて述べるが、その記載は、上述のアルカノイル−Ｌ−カルニチンおよび薬学的に許容されるそれらの塩にも適用されるものと理解すべきである。
【０００４】
周知のように、Ｌ−カルニチンは、ベータ−酸化が行われるミトコンドリア内の脂肪酸の転位（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）に必要である。
Ｌ−カルニチンの種々の使用が公知であるが、これらの全ては治療的性質のものである。例えば、Ｌ−カルニチンは、心臓血管の分野において急性および慢性の心筋虚血、狭心症、心不全および不整脈の治療に使用されている。
【０００５】
腎臓病学の分野において、Ｌ−カルニチンは、定期的に血液透析を受けている尿毒症患者に投与され、筋無力症および筋痙攣発作を防御する。
他の治療的使用は、ＨＤＬ：ＬＤＬ＋ＶＬＤＬ比の正常化および総合経口栄養剤に関連している。しかしながら、前述のＬ−カルニチンの公知の治療的使用および本発明に記載の使用との間には何ら関係はない。
【０００６】
溶液状態での血液の良好な保存のための重要な要素は、温度および安定化溶液の組成であることは周知である。
温度は、赤血球を損傷することなく、赤血球の代謝活性を減少させ得る温度でなければならない。最適の温度は４℃±２℃である。
【０００７】
安定化溶液は、血液を凝固不可能にし、赤血球細胞の解糖活性を減少させ、同時に適当な基質を供給することにより上記活性の働きをを可能にし得るものでなければならない。
【０００８】
安定化溶液の効果は、最適温度における種々の保存期間の後に、インビトロにおける赤血球の変化およびそのインビボにおける赤血球の生存の両方を観察することにより判定される。
【０００９】
インビトロにおける赤血球の変化は、赤血球により放出されるヘモグロビンの量、赤血球の浸透および機械的ぜい弱性、それらの形状および体積における変化およびそれらが受ける化学的変化を測定することにより検査され得る。
【００１０】
安定化溶液は、以前は、１４日以上２１日間しか血液の良好な保存が、可能でなかった。
例えば、もし血液を、過去において、最も広く使用されていた安定化溶液の１種であるＡＣＤ（クエン酸−クエン酸ナトリウム−デキストロース）中に集め、１４日または２１日間保存後に輸血すると、輸血後２４時間の赤血球のインビボにおける生存率は、それぞれ９０および８０％であり、輸血２４時間循環後残留する赤血球細胞は、新鮮血の生存率と等しい生存率を有することは周知である。
【００１１】
赤血球は、保存中、球状赤血球およびウニ状赤血球の形成による変化を受けている。赤血球は膨張し、カリウムおよびヘモグロビンが損失し、ついでヘモグロビンが血漿中に増加する。同時に、２，３−ＤＰＧ（２，３−ジホスホグリセラート）が減少し、酸素に対するヘモグロビンの親和性が増加し、ヘモグロビンが少量組織中に放出される。
【００１２】
ＡＣＤ中で保存された赤血球の変化は、安定化溶液にリン酸塩を添加することにより、少なくともある程度は改善される。すなわち、ＣＰＤ（クエン酸塩−リン酸塩−デキストロース）溶液が、血液保存のために使用されるようになり、現在最も一般的に用いられている。リン酸塩の添加は、２，３−ＤＰＧのより高濃度、およびすなわち、酸素に対するヘモグロビンのより低い親和性の維持を生ぜしめる。しかしながら、ＣＰＤ中に保存された赤血球のインビボの生存は、ＡＣＤ中に保存された赤血球のインビボ生存と全く一致しないとしてもほんの少し良いだけである。
【００１３】
輸血用血液保存のための通常の安定化溶液に対するＬ−カルニチンまたは薬学的に許容される塩の１種の添加は、赤血球のインビボにおける生存を劇的に改善し、球状赤血球およびウニ状赤血球の形成および血漿中のヘモグロビン損失を減少させる効果を有していることが判明した。これらの有益な効果の結果として、輸血目的のための血液の良好な保存期間が従来の溶液と比較して２倍以上である。
【００１４】
すなわち、ここに記載の発明は、輸血用血液の保存のための安定化溶液を製造するためのＬ−カルニチンおよび薬学的に許容される塩の使用に関するものである。
【００１５】
異なる角度から見ると、本発明はまた、Ｌ−カルニチンまたは薬学的に許容される塩の１種を含有することを特徴とする輸血用血液の保存のための安定化溶液に関する。
【００１６】
Ｌ−カルニチン分子内塩は別として、Ｌ−カルニチンの薬学的に許容される塩とは、望ましくない副作用を生じさせない酸とのＬ−カルニチン塩をいう。これらの酸は、薬学者および薬学における専門家に周知である。
【００１７】
このような塩の例は、塩化物、臭化物、オロチン酸塩、アスパラギン酸塩、酸性クエン酸塩、酸性リン酸塩、フマル酸塩および酸性フマル酸塩、マレイン酸塩および酸性マレイン酸塩、酸性シュウ酸塩、酸性硫酸塩、グルコースリン酸塩、酒石酸塩および酸性酒石酸塩であるが、これらに限定されるものではない。
【００１８】
これらの溶液は、０．５−１０．０ｍＭ／Ｌおよび好ましくは４−６ｍＭ／ＬのＬ−カルニチン、または等量の薬学的に許容されるその塩の１種を含むことを特徴とする。
【００１９】
本発明の安定化溶液の１例は、
グルコース                  ８０−１２０  ｍＭ／Ｌ
マンニトール                ４０−６０  ｍＭ／Ｌ
Ｋ２ＨＰＯ４                  ２４−２８  ｍＭ／Ｌ
ＫＨ２ＰＯ４                  １２−１６  ｍＭ／Ｌ
クエン酸カリウム            １５−２０  ｍＭ／Ｌ
Ｌ−カルニチン分子内塩      ４−６  ｍＭ／Ｌ
から構成される。
【００２０】
本発明に記載の使用におけるＬ−カルニチンの効果は、多数の研究により実証され、その一つを、添付の図と関連させて以下に述べる。
【００２１】
図１は、赤血球の浸透ぜい弱性を保存期間の関数として示すグラフである（週で示す）；
図２は、保存媒体中のヘモグロビン濃度（ｍｇ／ｄＬ）を保存期間の関数として示すグラフである（週で示す）；
図３は、保存媒体中のウニ状赤血球のパーセントを保存期間の関数として示すグラフである（週で示す）。
【００２２】
この研究を承認した志願者は定期的に採血され、血液試料採取時には完全に健康であった。血液試料を、５℃にて、血液保存のために一般に用いられる等張液であるＣＰＤＡ−１（ＣＰＤＡ−１組成：グルコース  １１０ｍＭ、マンニトール  ５５ｍＭ、Ｋ２ＨＰＯ４  ２５．８ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４  １４．７ｍＭ、クエン酸カリウム  １７．９ｍＭ）を含む血液保存のために通常用いられる特殊な四重の容器（バクスター、フェンワル・ディビジョン、ラ・シャトル、フランス（Ｂａｘｔｅｒ，  Ｆｅｎｗａｌ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，  Ｌａ  Ｃｈａｔｒｅ，  Ｆｒａｎｃｅ））に集めた。赤血球から血液の固形成分を生成、分離させる遠心分離機によって血液を上記容器に注入した。上記ＣＰＤＡ−１に加えて、数個の容器はＬ−カルニチンを含有し、最大滅菌の条件下で添加した。赤血球の容量に対する保存液の容量の割合は１：１に近い。ついで、容器を５℃の一定温度で冷凍機へ入れた。
【００２３】
保存中、赤血球の一部を、多数の顕微鏡的および生化学的実験を行うために１週毎に採取した。赤血球懸濁液は、ただちに位相差顕微鏡下で、ウニ状赤血球含有パーセントを測定した。ウニ状赤血球は星型形状を有する病的赤血球である。ついで、赤血球懸濁液を遠心分離し、軟膜を、ヘモグロビンからシアノメタヘモグロビンへの誘導体化を含む方法によりヘモグロビン含有量を測定した（血液学における基準のための国際委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅ  ｆｏｒ  Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ）、Ｓ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈｏｌ．、第３１巻第１３９−１４５頁（１９７８年））。測定されたヘモグロビン含有量は、赤血球が容器に保存中に受けた溶血反応の度合いを示すものである。最後に、赤血球の浸透ぜい弱性を、ダシィおよびルイス（ダシィ・ジェイ・ヴィー（Ｄａｃｉｅ  Ｊ．Ｖ．）およびルイス・エス・エム（Ｌｅｗｉｓ  Ｓ．Ｍ．）、実験血液学（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ）、ニューヨーク，チャーチル，リビングストーン、第１５２−６頁（１９８４年））の方法により測定した。浸透ぜい弱性を５０％溶血を生じさせるに必要な塩化ナトリウム量（ｍＭ／Ｌ）として計算した。
【図面の簡単な説明】
【図１】赤血球の浸透ぜい弱性を保存期間の関数として示すグラフである。
【図２】保存媒体中のヘモグロビン濃度を保存期間の関数として示すグラフである。
【図３】保存媒体中のウニ状赤血球のパーセントを保存期間の関数として示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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