(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジァトバ（ＪＡＴＯＢＡ）（学名Ｈｙｍｅｎａｅａ  ｃｏｕｂａｒｉｌ）、ジェキティバ（ＪＥＱＵＩＴＩＢＡ）（学名Ｃａｒｉｎｉａｎａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ又はＣｏｕｒａｔａｒｉ  ｌｅｇａｌｉｓ又はＰｙｘｉｄａｒｉａ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）、プサ（ＰＵＣＡ）（学名Ｃｉｓｓｕｓ  ａｎｔｉｐａｒａｌｉｔｉｃｕｓ）、ベロニカ（ＶＥＲＯＮＩＣＡ）（学名Ｖｅｒｏｎｉｃａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、カスカ−ドーチェ（ＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥ）（学名Ｐｒａｄｏｓｉａ  ｌａｃｔｅｓｃｅｎｓ又はＬｕｃｕｍａ  ｇｌｙｃｉｐｈｌｏｅａ又はＣｈｒｙｓｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｂｕｒａｎｈｅｍ）の植物体よりなる群より選んだ少なくとも１種の溶媒抽出物を有効成分として含有する（但し、ヒスタミン遊離抑制、ヒアルロニダーゼ阻害活性、テストステロン−５α−レダクターゼ阻害活性及び乾癬用を除く）ことを特徴とする美白化粧料。
【請求項２】
ジァトバ（ＪＡＴＯＢＡ）の実、樹皮、ジェキティバ（ＪＥＱＵＩＴＩＢＡ）の樹皮、プサ（ＰＵＣＡ）の実、ベロニカ（ＶＥＲＯＮＩＣＡ）の樹皮、カスカ−ドーチェ（ＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥ）の樹皮よりなる群より選んだ少なくとも１種の溶媒抽出物を有効成分として含有する（但し、ヒスタミン遊離抑制、ヒアルロニダーゼ阻害活性、テストステロン−５α−レダクターゼ阻害活性及び乾癬用を除く）ことを特徴とする美白化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、美白作用が高く、且つ肌荒れなどに有効な皮膚の美白化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
化粧料の原料として使用できる美白作用のある物質としては種々の物質が知られているが、合成品は、長期間人間の肌に適用した場合の安全性の保証がなく、使用が制限されつつある。一方、天然物では美白作用が弱いものが多い。
【０００３】
しかし人の肌に対する安全性の面から天然物で、多年人が食したりして、安全性の面で保証されており、しかも美白作用が強く更に皮膚に対する潤滑性や柔軟性保持や、老化防止などの他の効果も合わせてもつ物質が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、皮膚に適用して安全であると共に、美白作用が大きく、更に肌荒れなどに有効な成分を含んだ皮膚の美白化粧料を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記の課題を解決するために、すでに多年にわたって食用に供され、人体に対する安全性が確認されている植物をスクリーニングして調べ、化粧品として利用価値のあるものを検討した。
その結果、ジァトバ（ＪＡＴＯＢＡ）、ジェキティバ（ＪＥＱＵＩＴＩＢＡ）、プサ（ＰＵＣＡ）、ベロニカ（ＶＥＲＯＮＩＣＡ）、カスカ−ドーチェ（ＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥ）が非常に化粧品原料として、或いは医薬部外品として有効性を有することを見出して、本発明を完成した。確認された効果として美白作用、活性酸素抑制、抗酸化性、プラスミン活性阻害性、コラゲナーゼ活性阻害性が確認された。
【０００６】
すなわち本発明は、ジァトバ（ＪＡＴＯＢＡ）（学名Ｈｙｍｅｎａｅａ  ｃｏｕｂａｒｉｌ）、ジェキティバ（ＪＥＱＵＩＴＩＢＡ）（学名Ｃａｒｉｎｉａｎａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ又はＣｏｕｒａｔａｒｉ  ｌｅｇａｌｉｓ又はＰｙｘｉｄａｒｉａ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）、プサ（ＰＵＣＡ）（学名Ｃｉｓｓｕｓ  ａｎｔｉｐａｒａｌｉｔｉｃｕｓ）、ベロニカ（ＶＥＲＯＮＩＣＡ）（学名Ｖｅｒｏｎｉｃａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、カスカ−ドーチェ（ＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥ）（学名Ｐｒａｄｏｓｉａ  ｌａｃｔｅｓｃｅｎｓ又はＬｕｃｕｍａ  ｇｌｙｃｉｐｈｌｏｅａ又はＣｈｒｙｓｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｂｕｒａｎｈｅｍ）の植物体よりなる群より選んだ少なくとも１種の溶媒抽出物を有効成分として含有する（但し、ヒスタミン遊離抑制、ヒアルロニダーゼ阻害活性、テストステロン−５α−レダクターゼ阻害活性及び乾癬用を除く）ことを特徴とする美白化粧料。
ジァトバの植物体としては、実、樹皮、ジェキティバの植物体としては樹皮、プサの植物体としては実、ベロニカ、カスカ−ドーチェの植物体としては樹皮が特に効果が大きかった。
【０００７】
ジァトバ、ジェキティバ、プサ、ベロニカ、カスカ−ドーチェの利用方法としては、水或いは親水性有機溶媒、例えば、エタノール、メタノール、アセトン等で抽出する。しかしながら化粧品原料の抽出であるから、水或いはエタノール或いはこれらの混合溶媒での抽出が好ましいのは当然である。
また、場合によっては、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール又は多価アルコールと水との混液も抽出に利用できる。
またさらに凍結乾燥して粉体として利用することも利用方法によっては有効である。
【０００８】
この物質を他の化粧品原料、例えば、スクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、１，３−ブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等を添加してさまざまな剤形の化粧料を調製することができる。例えばローション、クリーム、乳液、パック等で目的に応じて利用形態を考えればよい。
【０００９】
本発明の抽出物としての効果は、前記した如く、第１に肌の美白作用である。
【００１０】
第２に活性酸素抑制作用である。空気中には酸素があり、これがないと生物（嫌気性のものを除く）は存在しえない。しかし酸素は紫外線や酵素等の影響を受けて活性酸素になる。活性酸素は脂肪酸を酸化し過酸化物を生成させる。生体の生体膜のリン脂質も酸化させ、障害を与える。
その上、生成した過酸化物と活性酸素はＤＮＡに損傷を与え、老化を促進するといわれている。この活性酸素は、チロシンからメラニンを作る機構にも影響を与え皮膚の黒化にも関与している。この活性酸素を抑制することは皮膚にとって重要な、言い換えれば化粧料に求められる重要な要素である。
本発明のジャトバ等の植物体の溶媒抽出物は、この活性酸素抑制作用、抗酸化性も有している。
【００１１】
【実施例】
以下に実際の利用方法である実施例を記載するが、本発明はこの実施例によって何ら限定されるものではない。
本発明で使用したジァトバ（ＪＡＴＯＢＡ）、ジェキティバ（ＪＥＱＵＩＴＩＢＡ）、プサ（ＰＵＣＡ）、ベロニカ（ＶＥＲＯＮＩＣＡ）、カスカ−ドーチェ（ＣＡＳＣＡ‐ＤＯＣＥ）の植物体の溶媒抽出物の製造例を次に示す。
【００１２】
（製造例１）
ジャトバＪＡＴＯＢＡの実（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１３】
（製造例２）
ジャトバＪＡＴＯＢＡの実（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１４】
（製造例３）
ジャトバＪＡＴＯＢＡの実（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００１５】
（製造例４）
ジャトバＪＡＴＯＢＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１６】
（製造例５）
ジャトバＪＡＴＯＢＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１７】
（製造例６）
ジャトバＪＡＴＯＢＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００１８】
（製造例７）
ジェキティバＪＥＱＵＩＴＩＢＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１９】
（製造例８）
ジェキティバＪＥＱＵＩＴＩＢＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２０】
（製造例９）
ジェキティバＪＥＱＵＩＴＩＢＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００２１】
（製造例１０）
プサＰＵＣＡの実（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２２】
（製造例１１）
プサＰＵＣＡの実（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２３】
（製造例１２）
プサＰＵＣＡの実（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００２４】
（製造例１３）
ベロニカＶＥＲＯＮＩＣＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２５】
（製造例１４）
ベロニカＶＥＲＯＮＩＣＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２６】
（製造例１５）
ベロニカＶＥＲＯＮＩＣＡの樹皮（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００２７】
（製造例１６）
カスカ−ドーチェＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥの樹皮（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後、エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２８】
（製造例１７）
カスカ−ドーチェＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥの樹皮（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後エバポレートした後、凍結乾燥した。
【００２９】
（製造例１８）
カスカ−ドーチェＣＡＳＣＡ−ＤＯＣＥの樹皮（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００３０】
（実施例１）ローション
オリーブ油                                                  ０．５
製造例１のエタノール抽出物                                  ０．５
ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタンモノステアレート        ２．０
ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油                      ２．０
エタノール                                                １０．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                        ５．０
精製水                                                    ８０．０
【００３１】
（実施例２）クリーム
Ａ  スクワラン                                              ２０．０
オリーブ油                                                ２．０
ミンク油                                                  １．０
ホホバ油                                                  ５．０
ミツロウ                                                  ５．０
セトステアリルアルコール                                  ２．０
グリセリンモノステアレート                                １．０
ソルビタンモノステアレート                                ２．０
製造例２の５０％エタノール抽出物                          １．０
Ｂ  精製水                                                  ４７．９
ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタンモノステアレート      ２．０
ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油                    １．０
グリセリン                                                ５．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                      ５．０
パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．１
ＡとＢをそれぞれ計量し、７０℃まで加温し、ＢにＡを撹拌しつつ徐々に加えたのち、ゆっくり撹拌しつつ３０℃まで冷却した。
【００３２】
（実施例３）
実施例３は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例３の抽出物に変え作成したローション。
【００３３】
（実施例４）
実施例４は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例４の抽出物に変え作成したクリーム。
【００３４】
（実施例５）
実施例５は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例５の抽出物に変え作成したローション。
【００３５】
（実施例６）
実施例６は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例６の抽出物に変え作成したクリーム。
【００３６】
（実施例７）
実施例７は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例７の抽出物に変え作成したローション。
【００３７】
（実施例８）
実施例８は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例８の抽出物に変え作成したクリーム。
【００３８】
（実施例９）
実施例９は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例９の抽出物に変え作成したローション。
【００３９】
（実施例１０）
実施例１０は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例１０の抽出物に変え作成したクリーム。
【００４０】
（実施例１１）
実施例１１は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例１１の抽出物に変え作成したローション。
【００４１】
（実施例１２）
実施例１２は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例１２の抽出物に変え作成したクリーム。
【００４２】
（実施例１３）
実施例１３は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例１３の抽出物に変え作成したローション。
【００４３】
（実施例１４）
実施例１４は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例１４の抽出物に変え作成したクリーム。
【００４４】
（実施例１５）
実施例１５は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例１５の抽出物に変え作成したローション。
【００４５】
（実施例１６）
実施例１６は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例１６の抽出物に変え作成したクリーム。
【００４６】
（実施例１７）
実施例１７は、実施例１の製造例１の抽出物を製造例１７の抽出物に変え作成したローション。
【００４７】
（実施例１８）
実施例１８は、実施例２の製造例２の抽出物を製造例１８の抽出物に変え作成したクリーム。
【００４８】
（チロシナーゼ活性阻害試験）
（試験方法）
リン酸緩衝液（ＰＨ６.８、３０ｍＭ）０．９ｍｌ、１．６６ｍＭチロシン（Ｔyｒｏｓｉｎｅ）溶液１．０ｍｌ、前記製造例（凍結乾燥品）の０．１ｗｔ／ｖ％水溶液（溶解しにくい場合はエタノールを加えて溶解したのち精製水を加えて、エバポレートし、エタノールを除去したのち、０．１ｗｔ／ｖ％になるよう調製した）１．０ｍｌをスクリューバイアルにとり、３７℃恒温水槽中で５分以上加温した。
チロシナーゼ溶液（Ｓｉｇｍａ社製、マッシュルーム由来、９１４ユニット／ｍｌ）０．１ｍｌを加え、３７℃恒温水槽中で保温し、１０分後に４７５ｎｍで吸光度を測定した。
対照として、上記試料液のかわりに純水を加え同様に測定した。
この試験では試料の終濃度は０．０３３％となる。
（計算式）
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛Ｂ−（Ａ−Ｐ）｝／Ｂ×１００
但し                    Ａ：試料検体の吸光度
Ｂ：対照の吸光度
Ｐ：試料検体の着色による吸光度（３倍希釈）
【００４９】
【表１】
0003581436.tif 000002
【００５０】
（活性酸素抑制試験）
活性酸素を抑制する効果を測定する方法は各種あるが、今回以下の方法を利用した。
0003581436.tif 000003
上の試薬の混合物を２．４ｍｌ、検体を０．３ｍｌ加えて、キサンチンオキシナーゼ（予め検体を水とし、実験するとき、吸光度が１分当たり０．０２前後上昇するように上記のリン酸カリウム緩衝液で調整しておく）液を０．１ｍｌ加えて直ちに吸光度（５６０ｎｍ）を測定する。（測定は２分位し、直線性を確認する）
計算式    阻害率＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００
Ａ：検体を水としたときの１分当たりの吸光度の変化
Ｂ：検体の１分当たりの吸光度の変化
濃度段階を数段階行い、５０％活性酸素生成阻害濃度を探した。検体の作成方法は前記製造例（凍結乾燥品）を適当な濃度の水溶液（溶解しにくい場合はエタノールを加えて溶解したのち精製水を加えて、エバポレートし、エタノールを除去したのち適当な濃度％になるように調製した）とした。
製造例２〜１８の抽出物の凍結乾燥物についての結果を下記表２に示す。
【００５１】
【表２】
0003581436.tif 000004
【００５２】
抗酸化試験
以下の試験液をネジキャップ付５０ml試験管に作成した。
検体                                                        ５mg
２％リノール酸エタノール溶液                              １０ml
０．１Ｍ，ｐＨ７．０リン酸緩衝液                          １０ml
精製水                                                      ５ml
これを５０℃の恒温槽に遮光して放置する。
これを恒温槽に入れる前、４日後、７日後、１０日後に以下の測定をした。
試験液０．１２５ml、７５％エタノール１２．１２５ml、３０％チオシアン酸アンモニウム０．１２５mlを加えて撹拌し３分間放置後、０．０２Ｎ塩化第一鉄３．５％ＨＣｌ水溶液０．１２５mlを加えて撹拌し３分間放置後波長５００nmで吸光度を測定した。セル長１０mm、対照セルは試験液を水に置き換えたもの。
その結果を下記表３に示す。
【００５３】
【表３】
0003581436.tif 000005
【００５４】
プラスミンは、血中に存在する蛋白分解酵素の１つである。血中にある前駆体のプラスミノーゲンがプラスミノーゲンアクチベータという酵素によって切断されてプラスミンになる。プラスミンの重要な生理作用は血栓溶解である。血栓の成分であるフィブリンに対して、血中のプラスミノーゲンアクチベータは親和性があり、フィブリン塊中（血栓）のプラスミノーゲンに作用してプラスミンへと活性化する。その結果フィブリン塊中にできたプラスミンが塊の内部から血栓を溶解する。
【００５５】
このプラスミンは、血液凝固過程で形成されたフィブリン（繊維素）を溶解する作用を有する。このプラスミンの作用に拮抗する因子がプラスミン・インヒビターであり、出血をとめるトラネキサム酸やε−アミノカプロン酸が化学合成されたプラスミン・インヒビターとして知られており、出血防止剤として使用されている。プラスミンは、自身の持つクリングル構造のリジン結合部位（Ｌｙｓｉｎｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ：ＬＢＳ）で血栓に結合して、効率的にフィブリンを分解する。この作用をトラネキサム酸やα−アミノカプロン酸がＬＢＳに結合して立体障害を起こし、プラスミンのフィブリン分解を阻害する。
ヒトの血中にはα2プラスミン・インヒビターという天然のプラスミン・インヒビターが存在し、生成されたプラスミンに働き、急速に失活させ、その作用を抑えて、血液の流出を防いでいる。α2プラスミン・インヒビターはＬＢＳに結合すると共に、プラスミン活性中心に対する阻害作用を持つ。この天然のインヒビターと同様の機作を持つ化合物の研究開発が活発に行われている。本発明の天然物より抽出した物質も、このプラスミンの活性を阻止する作用をもっている。
【００５６】
（抗プラスミン試験）
試験方法
９ｃｍシャーレにプラスミノーゲン除去フィブリノーゲンタイプ２−０．６％水溶液４ｍｌを入れ、ｐＨ７．４の０．１Ｍリン酸緩衝液４ｍｌを加えて撹拌し、トロンビン（１０単位／ｍｌ）０．１ｍｌ滴下し、ゆっくりと混和し、３０分放置した。
トロンビンを加えることによってフィブリノーゲンがフィブリンに変化し、ゲルを形成する。
検体０．１ｍｌとプラスミン溶液(１０単位／ｍｌ)０．１ｍｌ混合した液を３０μｌをシャーレのゲル上に乗せた後、３７℃で２時間放置した。検体は０．２ｍｇ／ｍｌ水溶液を用いた。
そしてフィブリンゲルの溶解した面積を測定した。
検体の替わりに３３％ジメチルスルホキシド水溶液を用いて同様な実験を行い、次のような式１でプラスミン活性の阻害率を求めた。
その結果を下記表４に示す。
【００５７】
【数１】
0003581436.tif 000006
【００５８】
陽性対照としてトラネキサム酸、ε−アミノカプロン酸を試験したところ、５０％阻害濃度はトラネキサム酸が３０ｍｇ／ｍｌ、ε−アミノカプロン酸４０ｍｇ／ｍｌであった。
【００５９】
【表４】
0003581436.tif 000007
【００６０】
コラーゲンは、動物の結合組織、すなわち皮膚、血管、腱、骨、歯などの主要タンパク質であり、哺乳動物の場合、全タンパク質の約３０％がコラーゲンである。
コラーゲンは分子量３０万、長さ３，０００オングストローム、直径１５オングストロームの棒状分子で、分子量１０万の３本のα鎖から成り、コラーゲン特有のらせん構造を形成している。
コラーゲン分解の阻害蛋白の解明も進んでいる。コラーゲンを分解する酵素（コラゲナーゼ）の活性を阻害する阻害蛋白としてメタロプロテアーゼもヒト組織から単離されている。
本発明の天然物より抽出した物質も、このコラゲナーゼ活性阻害作用を有している。
【００６１】
（コラゲナーゼ阻害試験）
試験方法
Ｉ型コラーゲナーゼ活性測定キッド ＹＵ−１６００１ コスモ・バイオを用いて実験した。すなわち、マイクロチューブに蛍光標識Ｉ型コラーゲン（５０μｇ／５０μｌ／tube）を入れ、以下の表のように試薬、検体を入れた。
中和液とは０．１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５（含０．４Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１Ｍ  ＣａＣｌ2、ＮａＮ3）緩衝液で、酵素反応停止剤とはｏ−フェナントロン（含エタノール）溶液である。また、コラーゲナーゼ溶液とは、コラーゲナーゼ（アマノ製１０００ｕｎｉｔ／ｍｇ）の１ｕｎｉｔ／ｍｌ  ２倍希釈の中和液溶液である。
【００６２】
【表５】
0003581436.tif 000008
【００６３】
上記表５に示した手順で、検体、検体ブランク、ブランク１、ブランク２の値を求め、次の式２によって、コラーゲナーゼ活性阻害率を計算した。
その結果を下記表６に示す。
【００６４】
【数２】
0003581436.tif 000009
【００６５】
【表６】
0003581436.tif 000010
【００６６】
（Ｂ−１６メラノーマ細胞試験）
製造例２の検体を所定の濃度になるように、ＥａｇｌｅｓＭＥＭ培地に加え、除菌フィルターでろ過後、牛胎児血清が１０％になるように加え、ｐＨを７.６±０.１になるように炭酸水素ナトリウムで調整し、シャーレに６ml分注し、Ｂ−１６メラノーマ細胞浮遊液（１×１０６ｃｅｌｌ／ｍｌ）を０．０５ｍｌ加え、  ５％ＣＯ2、９５％ａｉｒの条件下で３７℃で３日間培養した。
さらに、培地交換（上記の検体が入った１０％牛胎児血清含有ＥａｇｌｅｓＭＥＭ培地）を行い、３日間培養した（このとき、細胞増殖を判定する）。
細胞を剥離し、遠心分離して、細胞を集め、肉眼で白色度の判定を行った。この結果を下記表７に示す。
白色度
ブランクと同程度      ±
わずかに白色化傾向    ＋
明らかに白色化傾向    ＋＋
強い白色化傾向        ＋＋＋
細胞増殖
ブランクの８０％以上      Ａ
ブランクの６０〜８０％    Ｂ
ブランクの３０〜６０％    Ｃ
ブランクの３０％以下      Ｄ
【００６７】
【表７】
0003581436.tif 000011
【００６８】
（使用テスト）
女性４名づつの顔面を左右に分け、一方を実施例、もう一方を比較例として毎日、１回以上使用してもらって、３月後、アンケートした。なお、比較例は実施例１，２より製造例の各種の抽出物を水にかえたものである。（比較例１，２）なお、３６名を９班にわけ、下記表８の試料を使って実験した。
判定基準は以下の通りで、この評点の合計値をまとめたのが、以下の表１８である。
実施例の方が非常によい        ３
実施例の方がかなりよい        ２
実施例の方がややよい          １
差がない                      ０
比較例の方がややよい        −１
比較例の方がかなりよい      −２
比較例の方が非常によい      −３
【００６９】
【表８】
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【００７０】
【表９】
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【００７１】
上記表１〜表９の結果を総合すると、チロシナーゼ活性阻害試験で明らかなように、本発明の植物体の溶媒抽出物はチロシナーゼの活性を阻害して美白作用が強く、活性酸素を抑制し、抗酸化作用が大きいので、肌荒れや老化を防ぎ、抗プラスミン効果が大きいので出血を抑制し、コラゲナーゼを阻害する効果によって、皮膚のコラーゲン分解を抑制する効果が大きいことが判った。
【００７２】
【発明の効果】
本発明によれば、抗酸化作用を有し、チロシナーゼの活性及び活性酸素を抑制し、美白、肌の荒れ防止、肌のつや、肌のはりに有効な安全性の高い美白化粧料が提供される。