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　特願２００２−５５３１２４「プロテインＳ機能的アッセイ」拒絶査定不服審判事件〔平成１４年　７月　４日国際公開、ＷＯ０２／５２２７６、平成１６年　９月１６日国内公表、特表２００４−５２８５３４〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯・本願発明
　本願は、２００１年１２月１９日（パリ条約による優先権主張外国庁受理２０００年１２月１９日、アメリカ合衆国）を国際出願日とする出願であって、平成１９年７月６日付けで拒絶査定がされ、これに対し、平成１９年１０月５日に拒絶査定不服審判の請求がなされたものである。
　そして、本願の請求項１〜２１に係る発明は、平成１８年４月２８日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１〜２１に記載される事項により特定されるとおりのものと認められ、その請求項１に係る発明は以下のとおりである。
「血漿サンプル中のプロテインＳ活性を測定するための方法であって、以下の工程：
　（ａ）試験血漿のサンプルを、プロテインＳ欠乏血漿、組換え組織因子（ＴＦ）、合成リン脂質（ＰＬ）、カルシウムおよび活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）と混合し、そして該サンプルの凝固時間を測定する工程；ならびに
　（ｂ）既知のプロテインＳ活性範囲を有する血漿サンプルの凝固時間から得られる標準曲線と（ａ）における測定値とを比較する工程、
を包含する方法。」（以下、「本願発明」という。）
　
　
第２　引用刊行物記載の発明
（１）原査定の拒絶の理由に引用され、本願の優先権主張の日前に頒布された刊行物である特開平４−３５０５６０号公報（以下、「引用例１」という。）には、下記の記載がある。
（ア）「【特許請求の範囲】
【請求項１】　　アクチベーターの添加量を血餅形成時間が正常血餅形成時間よりも延長されるように調整することより成る生物学的検体中で血餅形成時間を測定することによるプロテインＳの測定方法。
【請求項２】　　過剰のプロテインＳ−欠乏血漿を検体に添加し、そして血餅形成アクチベーター、カルシウムイオン、燐脂質、活性化プロテインＣ、ヘパリンの阻害剤、および適切な場合には、トロンビンの色素原性ペプチド基質より成る試薬を混合した後、遊離発色団の至適吸収において所定の吸光度増加が得られるまでまたは血餅形成が起こるまでの時間を測定する請求項１記載の方法。
【請求項３】　　検体をまず過剰のプロテインＳ−欠乏血漿と共に導入し、そして血餅形成アクチベーター、カルシウムイオン、燐脂質、ヘパリンの阻害剤およびトロンビンの色素原性ペプチド基質より成る試薬を添加することにより活性化プロテインＣを別個に添加した後、遊離発色団の至適吸収において所定の吸光度増加が得られるまでまたは血餅形成が起こるまでの時間を測定する請求項１記載の方法。
【請求項４】　　未希釈検体をその４〜１０倍容のプロテインＳ−欠乏血漿と混合し、活性化プロテインＣ（１〜５０ｐｍｏｌ／ｍｌ）、血餅形成系のアクチベーター、好ましくはトロンボプラスチンまたは蛇毒プロテアーゼ、燐脂質（５〜３００ｐｐｍ（ｗ／ｖ））、例えばセファリン、カルシウムイオン（２〜１０ｍｍｏｌ／ｌ）、好ましくはＣａＣｌ２、ヘパリン中和物質例えばＰｏｌｙｂｒｅｎ（０．１〜１０μｇ／ｍｌ）および色素原性トロンビン基質、例えばＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＮＢＡ−ＩＰＡ、より成る（検体容量の５〜１０倍容の）試薬を混合することにより血餅形成反応を開始し、そして試薬を添加してから、遊離発色団の至適吸収（例えば４０５ｎｍ）において所定の吸光度が得られるまでの時間を測定する請求項１記載の方法。
　　　　　　　　　　　　　　　　・・・　
【請求項８】　　プロテインＳが存在しない場合の血餅形成時間が少なくとも５０秒である、生物学的検体中で血餅形成時間を測定することによるプロテインＳの機能的測定用試薬。
　　　　　　　　　　　　　　　　・・・　
【請求項１１】　　トロンボプラスチンをアクチベーターとして用いる請求項８記載の試薬。」
（イ）「【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は液体中、特に血漿中の、プロテインＳの機能的測定方法およびこれに適した試薬に関する。」
（ウ）「【００２３】本発明による方法の好ましい一態様においては、過剰のプロテインＳ−欠乏血漿を未希釈検体に添加し、次いで活性化プロテインＣ、外生または内生的血餅形成経路のアクチベーター、燐脂質、Ｃａ＋＋、トロンビンの色素原性基質およびヘパリン中和物質より成る試薬を混合することにより血餅形成時間を測定する。前記活性化プロテインＣは、残りの試薬を添加する少し前に別個に検体に添加することもできる。
【００２４】本発明による方法の特に好ましい一態様では、未希釈検体を４〜１０倍容のプロテインＳ−欠乏血漿と混合する。血餅形成反応は、プロテインＣ（１〜５０ｐｍｏｌ／ｍｌ）、血餅形成系のアクチベーター、好ましくはトロンボプラスチンまたは蛇毒プロテアーゼ、燐脂質（５〜３００ｐｐｍ（ｗ／ｖ））、例えばセファリン、カルシウムイオン（２〜１０ｍｍｏｌ／ｌ）、好ましくはＣａＣｌ２、ヘパリン中和物質、例えばＰｏｌｙｂｒｅｎ（０．１〜１０μｇ／ｍｌ）および色素原性トロンビン基質例えばＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＮＢＡ−ＩＰＡ、より成る（検体容量の５〜１０倍容の）試薬を混合することにより開始される。試薬添加から遊離された色素団（Ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）の至適吸収（例えば４０５ｎｍ）においてある吸光度（例えば０．１）に達するまでの時間を測定する。」
（エ）「【００３１】プロテインＣは報告されている（例えばＢａｊａｊ　Ｓ．　Ｐ．ｅｔ　ａｌ．　（１９８３）　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１３（３）　１９１〜２１４）様々な方法により血漿から精製することができ、あるいは生物工学的方法により調製することができる。精製されたプロテインＣは支持体材料、例えばＳｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｒ）などに結合されたトロンビンまたはＰＲＯＴＡＣ（Ｒ）により活性化することができ、あるいは遺伝子工学的方法により直接得られる活性化されたプロテインＣ（Ｅｈｒｌｉｃｈ　Ｈ．　Ｊ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．２６４（２４）　１４２９８〜１４３０９）を用いることができる。この測定方法における活性化プロテインＣの濃度は１〜５０ｐｍｏｌ／ｍｌとするのが有利である。」
（オ）「【００４８】試薬を添加した時点で、時計をスタートさせ、そして一定の値（例えば０．１）だけ吸収が増加するまで４０５ｎｍにおける吸光度をモニターする。０％プロテインＳについての値を超える血餅形成時間の延長は検体中のプロテインＳの濃度に比例する（図１）。」
（カ）「【００５２】試薬添加時に時計をスタートさせ、そして吸収が一定の値（例えば０．１）だけ増加するまで４０５ｎｍにおける吸光度をモニターするか、または血餅形成の発生を測定する。０％プロテインＳについての値を超える血餅形成時間の延長は検体中のプロテインＳの濃度に比例する（図２）。」
（キ）図１には血漿中のプロテインＳ含有率を測定するための検量線が、図２には活性化プロテインＣを別個に添加した場合の検量線が、それぞれ記載されている。
　上記（ア）〜（ウ）の記載によれば、引用例１には、
「過剰のプロテインＳ−欠乏血漿を検体に添加し、そして血餅形成アクチベーターであるトロンボプラスチン、カルシウムイオン、燐脂質、活性化プロテインＣ、ヘパリンの阻害剤を混合した後、血餅形成が起こるまでの時間を測定する、アクチベーターであるトロンボプラスチンの添加量を血餅形成時間が正常血餅形成時間よりも延長されるように調整することより成る生物学的検体中で血餅形成時間を測定することによるプロテインＳの機能的測定方法。」の発明（以下、「引用例１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
（２）原査定の拒絶の理由に引用され、本願の優先権主張の日前に頒布された刊行物である特表平１１−１６０３２０号公報（以下、「引用例２」という。）には、下記の記載がある。
（ア）「【特許請求の範囲】
【請求項１】    実質的に組織トロンボプラスチンに血液凝固第Ｖ因子及びフィブリノゲンを含有させて調製する複合因子測定試薬において、組織トロンボプラスチンの代わりに、ウサギ組織因子又はウシ組織因子のアミノ酸配列を実質的に有する組換え蛋白質とリン脂質で再構成させた再脂質化組織因子組成物を用いることを特徴とする複合因子測定試薬。」
（イ）「【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、臨床検査の分野、とりわけ血液凝固能検査に用いられる検査用試薬に関するものであり、より具体的には、外因系凝固検査の複合因子測定用の試薬組成物に関するものである。」
（ウ）「【０００４】さらに、天然の組織トロンボプラスチンでは、組織トロンボプラスチン自身の濁度が大きいため、試薬の濁りが大きく、光学的変化を検出手段に用いている凝固測定機器では、検体により正確な凝固時間が測定できない等の問題があった。この問題に対応するため、従来より、光学変化を検出するために用いている光源の波長に近い吸収スペクトルを有する色素を添加して、検出光量を減ずる工夫等がなされていたが、組織トロンボプラスチン自体の濁度のため完全ではなかった。すなわち、照射する光量の増減により、シグナルが変化するため、機器ごとに光量を厳密に調整しなければならない等の問題を解決するには至らなかった。
【０００５】ところで、天然の組織トロンボプラスチンに代わるものとして、最近、遺伝子組換え技術により生産された組換え組織因子が入手できるようになり、それを利用したプロトロンビン時間測定試薬も既に知られている（特表平６−５０２６４９号公報）。また、ヒトの遺伝子組換え組織因子を利用した複合因子測定の報告例もある（機器・試薬
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（エ）「【０００８】なお、本発明で使用される組換えウサギ組織因子又はウシ組織因子は、ウサギ組織因子又はウシ組織因子のアミノ酸配列を実質的に有し、当該組織因子活性を有するものであれば特に限定されるものではない。例えば、上記の遺伝子工学的手法において、ウサギ組織因子又はウシ組織因子をコードする遺伝子としては、ウサギ組織因子又はウシ組織因子のアミノ酸配列をコードする遺伝子；ウサギ組織因子又はウシ組織因子のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ当該組織因子活性を有するタンパク質をコードする遺伝子などが例示できる。上記のアミノ酸配列の置換、欠失及び／又は付加は、既に周知の技術である部位特異的突然変異誘発法等により実施することができ、例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 
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【０００９】本発明において、組換え組織因子の再脂質化に使用されるリン脂質は、一般に１２〜２２の炭素原子を有する脂肪酸を含有するリン脂質であり、当該脂肪酸は飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸の何れであってもよい。好ましいリン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリンなどが例示される。これらのリン脂質は、天然物、合成品の何れであってもよく、また異なる脂肪酸を有するリン脂質であってもよい。これらのリン脂質は、所望する性状、特性などに応じて２種以上を混合して使用してもよく、好ましい組成の一例として、ホスファチジルコリン：ホスファチジルセリン＝７：３の組成からなる混合物が挙げられる。」
　
　
第３　対比
　本願発明と引用例１発明とを対比する。
　引用例１発明の「プロテインＳの機能的測定方法」は、本願発明の「プロテインＳ活性を測定するための方法」に相当する。また、引用例１発明の「検体」、「プロテインＳ−欠乏血漿」、「カルシウムイオン」、「活性化プロテインＣ」は、それぞれ本願発明の「試験血漿のサンプル」、「プロテインＳ欠乏血漿」、「カルシウム」、「活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）」に相当する。さらに、引用例１発明の「血餅形成アクチベーターであるトロンボプラスチン」と、本願発明の「組換え組織因子（ＴＦ）」とは、本願明細書の段落【００３０】に、組織因子がトロンボプラスチンとも呼ばれることが記載されていることから、トロンボプラスチンである点で共通する。そして、引用例１発明の「過剰のプロテインＳ−欠乏血漿を検体に添加し、そして血餅形成アクチベーターであるトロンボプラスチン、カルシウムイオン、燐脂質、活性化プロテインＣ、ヘパリンの阻害剤を混合」することと、本願発明の「試験血漿のサンプルを、プロテインＳ欠乏血漿、組換え組織因子（ＴＦ）、合成リン脂質（ＰＬ）、カルシウムおよび活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）と混合」することとは、「試験血漿のサンプルを、プロテインＳ欠乏血漿、トロンボプラスチン、リン脂質（ＰＬ）、カルシウムおよび活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）と混合」する点で共通する。また、引用例１発明の「血餅形成が起こるまでの時間を測定する」は、本願発明の「サンプルの凝固時間を測定する」に相当する。
　したがって、両者は、
「血漿サンプル中のプロテインＳ活性を測定するための方法であって、以下の工程：
　（ａ）試験血漿のサンプルを、プロテインＳ欠乏血漿、トロンボプラスチン、リン脂質（ＰＬ）、カルシウムおよび活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）と混合し、そして該サンプルの凝固時間を測定する工程を包含する方法。」である点で一致し、下記の点で相違している。
［相違点１］トロンボプラスチンが、本願発明では組織因子と同義であることから、組織トロンボプラスチンであるのに対し、引用例１発明では内因系の血漿トロンボプラスチンと外因系の組織トロンボプラスチンのいずれであるかが不明である点。
［相違点２］トロンボプラスチンおよびリン脂質が、本願発明ではそれぞれ組換えおよび合成により得られるものであるのに対し、引用例１発明ではどのようにして得られたものであるのかについて限定がない点。
［相違点３］本願発明は、既知のプロテインＳ活性範囲を有する血漿サンプルの凝固時間から得られる標準曲線と測定値とを比較する工程を包含するのに対し、引用例１発明は、既知のプロテインＳ活性範囲を有する血漿サンプルの凝固時間から得られる標準曲線と測定値とを比較する工程を包含していない点。
　
　
第４　当審の判断
（１）［相違点１］について
　引用例２の（ア）および（イ）に記載されるように、血液凝固能の検査に用いる試薬として、組織トロンボプラスチンを用いることは、当該分野において従来より知られていることである。
　したがって、引用例１発明においても、トロンボプラスチンとして、組織トロンボプラスチン、つまり組織因子を採用することは、当業者が適宜選択しうることである。
　
（２）［相違点２］について
　引用例２の（ア）および（イ）に、血液凝固能の検査に用いる試薬として、ウサギ組織因子又はウシ組織因子のアミノ酸配列を実質的に有する組換え蛋白質とリン脂質で再構成させた再脂質化組織因子組成物を用いることが記載されており、再脂質化に使用されるリン脂質として引用例２の（エ）に、天然物、合成品の何れであってもよいことが記載され、ホスファチジルコリン：ホスファチジルセリン＝７：３の組成からなる混合物が挙げられているように、組換え組織因子および合成リン脂質を用いることが当該分野において知られている。
　したがって、引用例１の（エ）に、血餅形成が起こるまでの時間の測定に用いる試薬の１つである活性化プロテインＣについて、遺伝子工学的方法により直接得られる活性化されたプロテインＣを用いることができることが示唆されていることからみても、引用例１発明に用いられるトロンボプラスチンおよびリン脂質も組換えおよび合成に得られるものとすることは、当業者であれば容易に想到しうる事項に過ぎない。
　
（３）［相違点３］について
　引用例１の（オ）〜（キ）には、血餅形成時間の延長がプロテインＳの濃度に比例することおよびその検量線が記載されている。このように、観測値から測定値を得るために検量線のような標準曲線を用いて比較することは、定量分析を行う際の慣用手段である。
　したがって、引用例１発明において、既知のプロテインＳ活性範囲を有する血漿サンプルの凝固時間から得られる標準曲線と測定値とを比較する工程を包含させることは、当業者ならば適宜なし得ることである。
　
（４）効果について
　本願発明は、再現性のある、感度が高くかつ安定であるという効果を奏するものであるが、引用例２の（ウ）に記載されるように、遺伝子組換え組織因子等を用いることにより、従来の複合因子測定試薬に比べて感度、再現性、安定性に優れた複合因子試薬が調製できるという効果も知られている。また、不純物の少ない試薬を用いることにより、感度が高くかつ安定となることは、当業者にとって自明である。したがって、本願発明の効果は、引用例１および引用例２に記載された発明から当業者が予測できる範囲のものであって、格別なものであるとはいえない。
　
（５）請求人の意見について
　請求人は審判請求書の請求の理由において「引用文献２に開示されるアッセイは、この試薬が第Ｖを含むので、プロテインＳアッセイには完全に不適切です。」および「引用文献２の試薬は、プロテインＳを特異的に測定するには不適切であり、かつ引用文献２に示される結果は、血液凝固時間を測定した結果ではあるものの、複合因子（第ＩＩ、ＶＩＩおよび／またはＸ因子のいずれか）を測定した結果であって、プロテインＳの機能的活性を決定した結果ではありません。」と主張しているので、この点について検討する。
　まず、プロテインＳの機能的測定方法は引用例１発明に記載されているのであり、拒絶の理由はプロテインＳの機能的測定方法として引用例２の記載を引用するものではなく、血餅形成時間を測定する方法に用いる組換え及び合成の試薬を引用するものであるから、請求人の主張は採用できない。
　また、第Ｖ因子以外の機能を測定する場合には、プロテインＳを測定する場合であっても、第ＩＩ因子等を測定する場合であっても、一定量の第Ｖ因子は、カスケード反応を進行させ、血餅形成を生じさせるために必要不可欠の構成である。このため、引用例２に記載された試薬が第Ｖ因子と共に用いられている試薬であるということは、引用例１発明に適用するに際し、阻害要因とはならない。
　
　
第５　むすび
　以上のとおり、本願発明は、引用例１および引用例２に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により、特許を受けることができない。
　したがって、その他の請求項に係る発明に言及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。