(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0003575629.tif 000019
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｅは１又は２の整数を示し、且つａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅ＝６である）で表されるペプチド。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規な血清カルシウム低下作用を有するペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、血清カルシウム低下作用を有する種々のペプチドが知られており、例えば、ヒトカルシトニンを始めとして、ウナギカルシトニン、サケカルシトニン、ブタカルシトニン、ニワトリカルシトニン等の天然型及びその誘導体が知られている。
【０００３】
ヒトカルシトニン等のカルシトニンは、骨粗しょう症、高カルシウム血症、ページェット病等の治療に用いられるが、人体に使用する医薬としては、本来の生体成分であるヒトカルシトニンが抗原性等の面から好ましいと思われるが、カルシウム低下作用が弱く投与量を増加させる必要があるので、使い続けたときに効きが悪くなる可能性も否定できず、さらに新しい血清カルシウム低下作用を有するペプチドの開発が求められている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上述の如く、新規な血清カルシウム低下作用を有するペプチドの提供を目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記問題点を鑑み、新規な多数のペプチドを合成し、その生理活性を調べ検討した結果、血清カルシウム低下作用を有する多くの新規ペプチドを知り、本発明を完成するに至った。
即ち本発明は、式（１）
【０００６】
【化２】
0003575629.tif 000002
【０００７】
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｅは１又は２の整数を示し、且つａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅ＝６である）で表されるペプチドである。
本発明のペプチドは、以下の通り、公知のペプチド合成の常法手段によって合成できる。
（１）液相法によって製造する場合
例えば、Ｃ末端のプロリン基のカルボキシル基をアミド基に転化し、式（１）で示されるアミノ酸順序に個々の保護されていないか、又は好ましくは保護されたアミノ酸および（または）低級ペプチドを縮合し、任意の過程で環化反応に付し、縮合反応し、保護基がある場合は、例えば、最終段階で活性基の保護基を酸分解により脱離することにより得られる。
【０００８】
縮合反応及び環化反応自体はペプチド合成の常法手段に従って、保護基の脱着、縮合反応を繰り返すことにより行なわれる。即ち、本化合物の製造において使用される各種の保護基はペプチド合成において既知なもの、例えば加水分解、酸分解、還元、アミノリシス、ヒドラジノリシスなどのような既知手段によって容易に脱離することができる保護基が用いられる。このような保護基はペプチド合成化学の分野の文献ならびに参考書に記載されている。本発明においては、例えばα−アミノ基の保護にｔ−ブチルオキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基を用い、側鎖のアミノ基、即ちリジンのε−アミノ基の保護にベンジルオキシカルボニル基、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基を用い、α−カルボキシル基の保護にメチルエステル基、ベンジルエステル基を用い、側鎖のカルボキシル基、即ちアスパラギン酸またはグルタミン酸の側鎖のカルボキシル基の保護にベンジルエステル基、シクロヘキシルエステル基を用い、α−アミノスベリン酸の側鎖のカルボキシル基の保護にｔ−ブチルエステル基を用い、セリンおよびスレオニンの水酸基の保護にベンジル基を用い、チロシンの水酸基の保護に２、６−ジクロルベンジル基を用い、アルギニンのグアニジノ基の保護にメシチレン−２−スルホニル基またはトシル基を用いるのが好ましい。
【０００９】
本化合物の合成においては個々のアミノ酸および（または）低級ペプチドの縮合は例えば、保護されたα−アミノ基および活性化末端α−カルボキシル基をもつアミノ酸または低級ペプチドと遊離のα−アミノ基および保護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸または低級ペプチドとを反応させるか、あるいは活性化α−アミノ基および保護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸または低級ペプチドと遊離の末端カルボキシル基をもつアミノ酸または低級ペプチドとを反応させることにより実施することができる。
【００１０】
この場合、カルボキシル基は、例えば、酸アジド、酸無水物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、例えばシアノメチルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルなどに変換することによって活性化させることができる。また、カルボジイミド、例えばＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−３−ジメチルアミノプロピル−カルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−カルボニル−ジイミダゾールなどの縮合剤を使用して反応させることによって活性化することができる。
【００１１】
本発明において好ましい縮合方法及び環化反応は、アジド法、活性エステル法、混合酸無水物法およびカルボジイミド法である。縮合の各段階ではラセミ化が起こらない方法またはラセミ化が最小になる方法を用いるのが望ましく、好ましくはアジド法、活性エステル法、Ｗｕｎｓｃｈ法［Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．，２１ｂ，４２６（１９６６）］またはＧｅｉｇｅｒ法（Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１０．，７８８（１９７０）］などが挙げられる。
【００１２】
なお、環化反応は上述の縮合反応と同じ方法が可能である。
縮合順序および環化位置は式で示されるアミノ酸順序であれば、如何なる順序如何なる位置でも合成し得るが、Ｃ末端側から順次アミノ酸および（または）低級ペプチドを連結させること、およびアミノスベリン酸のωカルボキシル末端と所定のＮ末端アミノ酸との結合を環化位置とすることが好ましい。
【００１３】
こうして保護されたε−アミノ基、側鎖カルボキシル基、グアニジノ基および水酸基を有するペプチドが得られる、これらの保護基は好ましくは、酸分解、例えばトリフルオロメタンスルホン酸、無水弗化水素などによる方法によって一段階で脱離され、目的の化合物が得られる。
（２）固相法によって製造する場合
本発明においては、上記の液相法によるペプチド合成法の他に、固相法によるペプチド合成法を一部または全部に利用して本化合物を合成することができる。
【００１４】
たとえば、Ｃ末端ペプチドフラグメントを固相法により合成し、Ｎ−末端部のα−アミノスベリン酸を含む環状ペプチドフラグメントを液相法により合成し、引続き上記２つのペプチドフラグメントを固相法により縮合して得られた保護されたペプチド樹脂が得られる。これらの保護基および樹脂は、公知の方法、例えばトリフルオロメタンスルホン酸、無水弗化水素などによる方法によって一段階で脱離され、目的の化合物が得られる。
【００１５】
上記の固相法で用いられる樹脂としては、固相法で通常用いられる樹脂、例えばベンズヒドリルアミン樹脂、ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂などが挙げられる。この樹脂は、官能基当量や架橋度の違いによって所望の性状を有する樹脂が入手可能であり、市販品を購入することもできる。
上記の固相法においては、樹脂に式で示されるアミノ酸順序にＣ−末端のアミノ酸から順次一つずつ縮合させて行なう。該アミノ酸の官能基は公知の方法により保護基で保護される。上記の保護基の例としては、上記で述べた通りである。
【００１６】
上記の固相反応に際しては、樹脂を反応器に入れ、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ベンゼン等の樹脂を膨潤させる溶媒を樹脂１ｇに対し、溶媒２〜２０ｍｌの割合で添加する。これに、予め別の反応器で樹脂中のアミノ基１当量に対し１〜６当量のＢｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ酸とＤＣＣを反応させ、得られた対称無水物を副生したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）より分離して、上記樹脂の入った反応器に加える。縮合剤（ＤＣＣ）の使用量はＢｏｃ−アミノ酸１当量に対し、０．５から３当量を用いる。反応は通常５〜６０分行なわれる。
【００１７】
各工程で得られたＢｏｃ−アミノ酸−樹脂またはＢｏｃ−ペプチド−樹脂の一部を採取し、常法に従い反応したＢｏｃ−アミノ酸量を求めればよい。
次に、α−アミノ基の保護基であるＢｏｃをトリフルオロ酢酸のような酸で脱離して、順次縮合反応を遂行すればよい。上記の固相法によるペプチド合成は自動固相合成機を用いるが、手動法で遂行してもよい。これらの操作はすべて窒素ガス気流下で行なうのが望ましい。
【００１８】
このようにしてペプチドが結合した樹脂が得られる。このようにして得られた保護ペプチド結合樹脂は上記で述べた通り、無水弗化水素などにより、一段階で保護基と樹脂が脱離される。
（３）分離精製その他
このようにして得られた化合物はペプチドまたは蛋白質を精製する公知の手段によって分離精製することができる。例えば、セファデックスＧ−２５，セファデックスＧ−５０、セファデックスＬＨ−２０などのゲル濾過剤を用いるゲル濾過法、カルボキシメチルセルロース、その他のイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー、逆相系合成高分子樹脂または化学修飾シリカゲル担体を用いたカラムクロマトグラフィ及び高速液体クロマトグラフィーなどにより行なうことができる。
【００１９】
本発明の新規化合物はその方法の条件により塩基またはその塩の形で得られる。たとえば、酢酸などの公知の有機酸との塩を形成することができる。
尚、本明細書に記載の略記号は次の意味を有する。
Ａｓｕ：Ｌ−α−アミノスベリン酸
Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギン
Ａｓｐ：Ｌ−アスパラギン酸
Ａｌａ：Ｌ−アラニン
Ｔｈｒ：Ｌ−スレオニン
Ｖａｌ：Ｌ−バリン
Ｈｉｓ：Ｌ−ヒスチジン
Ａｒｇ：Ｌ−アルギニン
Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン
Ｔｙｒ：Ｌ−チロシン
Ｓｅｒ：Ｌ−セリン
Ｇｌｙ：グリシン
Ｌｙｓ：Ｌ−リジン
Ｐｒｏ：Ｌ−プロリン
Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸
Ｇｌｎ：Ｌ−グルタミン
Ｄ−Ｓｅｒ：Ｄ−セリン
Ｄ−Ｌｅｕ：Ｄ−ロイシン
Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）：Ｌ−１−メチルヒスチジン
Ｂｏｃ−：ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｚ−：カルボベンゾキシ
Ｆｍｏｃ−：フルオレニルメチル
Ｃｌ−Ｚ：ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル
Ｃｌ２  Ｂｚｌ：２，６−ジクロロベンジル
Ａｃ：アセチル
Ｂｚｌ：ベンジル
ＯＢｚｌ：ベンジルエステル
ＯＭｅ：メチルエステル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
エーテル：ジエチルエーテル
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド
ＭｅＯＨ：メタノール
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭＢＨＡ樹脂：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂
ＯＳｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル
ＯｔＢｕ：ｔ−ブチルエステル
Ｔｏｓ：トシル
ＷＳＣＤ・ＨＣｌ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩
【００２０】
【実施例】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限られるものではない。なお、各実施例におけるアミノ酸分析は、被検体に６Ｎ塩酸を加え１１０゜Ｃで２４時間加水分解させ、これを減圧乾固した後、アミノ酸分析計により分析した。また、物性値で示した高速液体クロマトグラフィーの保持時間を測定した条件は、以下の通りである。
0003575629.tif 000003
【００２１】
【実施例１】
【００２２】
【化３】
0003575629.tif 000004
【００２３】
で表される化合物（Ｆ０４  化合物と略すことがある）の製造
（１）
【００２４】
【化４】
0003575629.tif 000005
【００２５】
（フラグメント（１）と略すことがある）の製造
フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報の実施例２（１）〜（１４）の方法で製造した。
（２）
【００２６】
【化５】
0003575629.tif 000006
【００２７】
の製造
固相合成装置としてＡｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍＳ社製４３０−Ａペプチドシンセサイザーを用いて固相合成を行った。
ＭＢＨＡ樹脂（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、アミノ基０．６１ｍモル／ｇ）０．８ｇをペプチド固相合成用反応容器に入れ、ＤＣＭ８ｍｌ（４回、各１分）、６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液８ｍｌ（２０分）、ＤＣＭ４ｍｌ（３回、各１５秒）、ＤＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液３ｍｌ（２回、各１分）、ＤＭＦ８ｍｌ（６回、各４０秒）の順に窒素ガス気流中攪拌下処理し、各々の処理後濾過した。
【００２８】
一方、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ  ２ｍモルをＤＣＭ５ｍｌに溶かし、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（０．５Ｍ−ＤＣＭ溶液）２ｍｌを加え、５分間反応させた。反応液を濾過して濃縮容器に移し、これにＤＭＦ３ｍｌを加え、窒素ガス気流下ＤＣＭを留去した。これにＤＭＦ３ｍｌを加え、前記の反応容器に移して２５分反応させた。次いで、ＤＣＭ８ｍｌ（６回、各２０秒）で洗浄、濾過してＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂を得た。
【００２９】
次に、前記のＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂を反応容器中ＤＣＭ８ｍｌ（４回、各１分で洗浄し、濾過した。これに６０％ＴＦＡ含有ＤＣＭ溶液８ｍｌを加え、２０分間攪拌し、Ｂｏｃを脱離した。得られた樹脂をＤＣＭ４ｍｌ（３回、各１５秒）、ＤＩＥＡ１ｍｌ含有ＤＭＦ溶液３ｍｌ（２回、各１分）、ＤＭＦ８ｍｌ（６回、各４０秒）で順次洗浄し、濾過した。
【００３０】
さらに、ＢｏｃＴｈｒ（Ｂｚｌ）  ２ｍモルをＤＣＭ５ｍｌに溶解し、アミノ酸活性化容器中でＤＣＣ（０．５Ｍ−ＤＣＭ溶液）２ｍｌを加え、５分間反応させた。次いで、Ｂｏｃ−Ｐｒｏの場合と同様に処理し、ＤＭＦを加えて窒素ガス気流下で濃縮した後、反応容器に移して２０分間反応させた。次いで、ＤＣＭ８ｍｌ（６回、各２０秒）で洗浄、濾過してＢｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ樹脂を得た。
【００３１】
以下、Ｃ末端からＮ末端への順で上記目的物の配列に従い、順次対応する保護アミノ酸をカップリングして最後の保護アミノ酸を結合後、Ｎ末端Ｂｏｃ基を脱保護するため、    ＴＦＡ処理とその後の洗浄を行い、上記化合物２．２ｇを得た。
上記固相合成において、Ａｒｇ，Ｇｌｎを結合する場合は、２ｍモルの対応する保護アミノ酸をＤＭＦ−ＤＣＭ（３：１）混合溶媒４ｍｌ中、ＤＣＣ溶液２ｍｌ、ＨＯＢｔ溶液（０．５Ｍ−ＤＭＦ溶液）２ｍｌを加え、１分間反応させた後、他のアミノ酸同様に処理し、反応容器に移してカップリング反応させ、ＤＣＭ洗浄、濾過後、もう一度２ｍモル保護アミノ酸をＤＭＦ−ＤＣＭ（３：１）混合溶媒４ｍｌ中ＤＣＣ溶液２ｍｌ、ＨＯＢｔ溶液（０．５Ｍ−ＤＭＦ）２ｍｌを加え、２５分間反応させたものを反応容器に移してカップリングさせる、いわゆるダブルカップリング法で行なった。
固相法で使用したアミノ酸は次の通りである。
【００３２】
【化６】
0003575629.tif 000007
【００３３】
（３）
【００３４】
【化７】
0003575629.tif 000008
【００３５】
の製造
上記（１）で得られた化合物  ７００ｍｇをＤＭＦ４ｍｌとＮメチルピロリドン２ｍｌの混合溶媒に溶解し、これに、上記（２）で得られた化合物１．６ｇを加えＨＯＢｔ０．１３５ｇを加え、−１５゜Ｃに冷却下、ＷＳＣＤ・ＨＣｌ    ０．１９２ｇを加え、一晩攪拌した。反応終了後、吸引濾過し、ＤＭＦ５ｍｌとＮメチルピロリドン５ｍｌの混合溶媒１０ｍｌ、ＤＭＦ１０ｍｌ、ＤＣＭ１０ｍｌの順に洗浄し、減圧乾燥して、上記目的物１．９ｇを得た。
（４）
【００３６】
【化８】
0003575629.tif 000009
【００３７】
の製造
上記（３）で得られた化合物１．０ｇをＨＦ反応装置（（株）ペプチド研究所製）に移し、アニソール２ｍｌを加え、これに無水フッ化水素２０ｍｌを加え、０゜Ｃで１時間攪拌した。反応後、無水フッ化水素を減圧下留去後、残渣をエーテルで洗浄し、これに０．１Ｍ酢酸２０ｍｌを加え、ペプチドを抽出した。抽出液をＤｏｗｅｘ    １Ｘ２のカラム（２．６×１５ｃｍ）に通し、０．１Ｍ酢酸６０ｍｌで溶出して凍結乾燥した。これを逆相系高速液体クロマトグラフィーにより精製し、セファデックスＧー２５樹脂でゲル濾過して４．５ｍｇを得た。
物性値
アミノ酸分析値
Ａｓｐ  １．９７（２），Ｔｈｒ  ３．８７（４），Ｓｅｒ  ２．８３（３），Ｇｌｕ  ３．１３（３），Ｐｒｏ  ２．２０（２），Ｇｌｙ  ３．９５（４），Ａｌａ  １．００（１），Ｖａｌ  １．９１（２），Ｌｅｕ  ６．３２（６），Ｔｙｒ  ０．９７（１），Ｌｙｓ  ２．１８（２），Ｈｉｓ  １．１５（１），Ａｒｇ  １．１２（１），Ａｓｕ  １．１８（１）
高速液体クロマトグラフィー    保持時間２５．５分
【００３８】
【実施例２】
【００３９】
【化９】
0003575629.tif 000010
【００４０】
の化合物（Ｆ０８  化合物と略することがある）の製造
（１）フラグメント（１）の製造
フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報の実施例２（１）〜（１４）の方法で製造した。
（２）
【００４１】
【化１０】
0003575629.tif 000011
【００４２】
の製造
実施例１．（２）と同様にＭＢＨＡ樹脂にＢｏｃ−Ｐｒｏを反応し、結合させ、同様に処理した後、以下、Ｃ末端からＮ末端への順で上記目的物の配列に従い、順次対応する保護アミノ酸をカップリングして最後の保護アミノ酸を結合後、Ｎ末端Ｂｏｃ基を脱保護するため、ＴＦＡ処理とその後の洗浄を行い、上記化合物２．３ｇを得た。
（３）上記（１）で得られた化合物と上記（２）で得られた化合物の結合
上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で得られた化合物１．２ｇを使用して実施例１．（３）と同様に実施して上記目的物１．４ｇを得た。
（４）Ｆ０８  化合物の製造
上記（３）で得られた化合物１．０ｇを実施例１．（４）と同様に処理して逆相系高速液体クロマトグラフィーにより精製し、セファデックスＧー２５樹脂でゲル濾過して上記目的物８．５ｍｇを得た。
物性値
アミノ酸分析値
Ａｓｐ  １．９３（２），Ｔｈｒ  ３．８８（４），Ｓｅｒ  ３．６１（４），Ｇｌｕ  ５．００（５），Ｐｒｏ  ２．０２（２），Ｇｌｙ  ３．０２（３），Ａｌａ  １．００（１），Ｖａｌ  １．９３（２），Ｌｅｕ  ６．７４（７），Ｔｙｒ  １．０１（１），Ｌｙｓ  ３．３３（３），Ｈｉｓ  １．０３（１），Ａｒｇ  １．１４（１），Ａｓｕ  １．０７（１）
高速液体クロマトグラフィー    保持時間    ２３．３分
【００４３】
【実施例３】
【００４４】
【化１１】
0003575629.tif 000012
【００４５】
で表される化合物（Ｆ２６  化合物と略すことがある）の製造
（１）フラグメント（１）の製造
フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報の実施例２（１）〜（１４）の方法で製造した。
（２）
【００４６】
【化１２】
0003575629.tif 000013
【００４７】
の製造
実施例１．（２）と同様にＭＢＨＡ樹脂にＢｏｃ−Ｐｒｏを反応し、結合させ、同様に処理した後、    以下、Ｃ末端からＮ末端への順で上記目的物の配列に従い、順次対応する保護アミノ酸をカップリングして最後の保護アミノ酸を結合後、Ｎ末端Ｂｏｃ基を脱保護するため、    ＴＦＡ処理とその後の洗浄を行い、上記化合物２．４ｇを得た。
（３）上記（１）で得られた化合物と上記（２）で得られた化合物の結合
上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で得られた化合物１．３ｇを使用して実施例１．（３）と同様に実施して上記目的物１．６ｇを得た。
（４）Ｆ２６  化合物の製造
上記（３）で得られた化合物１．０ｇを実施例１．（４）と同様に処理して逆相系高速液体クロマトグラフィーにより精製し、セファデックスＧー２５樹脂でゲル濾過して上記目的物９．１ｍｇを得た。
物性値
アミノ酸分析値
Ａｓｐ  ２．２０（２），Ｔｈｒ  ４．９４（５），Ｓｅｒ  ２．９３（３），Ｇｌｕ  ４．４１（４），Ｐｒｏ  ２．４２（２），Ｇｌｙ  ３．０５（３），Ａｌａ  １．００（１），Ｖａｌ  ２．０６（２），Ｌｅｕ  ６．１９（６），Ｔｙｒ  １．６６（２），Ｌｙｓ  ３．２０（３），Ｈｉｓ  ２．０５（２），Ａｒｇ  ０．９８（１），Ａｓｕ  １．１５（１）
高速液体クロマトグラフィー    保持時間    ２４．５分
【００４８】
【実施例４】
【００４９】
【化１３】
0003575629.tif 000014
【００５０】
で表される化合物（Ｆ３２  化合物と略すことがある）の製造
（１）フラグメント（１）の製造
フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報の実施例２（１）〜（１４）の方法で製造した。
（２）
【００５１】
【化１４】
0003575629.tif 000015
【００５２】
の製造
実施例１．（２）と同様にＭＢＨＡ樹脂にＢｏｃ−Ｐｒｏを反応し、結合させ、同様に処理した後、以下、Ｃ末端からＮ末端への順で上記目的物の配列に従い、順次対応する保護アミノ酸をカップリングして最後の保護アミノ酸を結合後、Ｎ末端Ｂｏｃ基を脱保護するため、ＴＦＡ処理とその後の洗浄を行い、上記化合物２．５ｇを得た。
（３）上記（１）で得られた化合物と上記（２）で得られた化合物の結合
上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で得られた化合物１．１ｇを使用して実施例１．（３）と同様に実施して上記目的物１．４ｇを得た。
（４）Ｆ３２  化合物の製造
上記（３）で得られた化合物１．０ｇを実施例１．（４）と同様に処理して逆相系高速液体クロマトグラフィーにより精製し、セファデックスＧー２５樹脂でゲル濾過して上記目的物１１．７ｍｇを得た。
物性値
アミノ酸分析値
Ａｓｐ  ２．０４（２），Ｔｈｒ  ４．６２（５），Ｓｅｒ  ３．４２（４），Ｇｌｕ  ６．０３（６），Ｐｒｏ  ３．０５（３），Ｇｌｙ  ２．９９（３），Ａｌａ  １．００（１），Ｖａｌ  ２．１４（２），Ｌｅｕ  ７．７１（８），Ｔｙｒ  １．６１（２），Ｌｙｓ  ３．８２（４），Ｈｉｓ  １．８７（２），Ａｒｇ  １．１６（１），Ａｓｕ  ０．９７（１）
高速液体クロマトグラフィー    保持時間    ２５．５分
【００５３】
【実施例５】
【００５４】
【化１５】
0003575629.tif 000016
【００５５】
で表される化合物（Ｆ０２  化合物と略すことがある）の製造
（１）フラグメント（１）の製造
フラグメント（１）は、特公昭５３−４１６７７公報の実施例２（１）〜（１４）の方法で製造した。
（２）
【００５６】
【化１６】
0003575629.tif 000017
【００５７】
の製造
実施例１．（２）と同様にＭＢＨＡ樹脂にＢｏｃ−Ｐｒｏを反応し、結合させ、同様に処理した後、    以下、Ｃ末端からＮ末端への順で上記目的物の配列に従い、順次対応する保護アミノ酸をカップリングして最後の保護アミノ酸を結合後、Ｎ末端Ｂｏｃ基を脱保護するため、    ＴＦＡ処理とその後の洗浄を行い、上記化合物２．５ｇを得た。
（３）上記（１）で得られた化合物と上記（２）で得られた化合物の結合
上記（１）で得られた化合物５００ｍｇと上記（２）で得られた化合物１．２ｇを使用して実施例１．（３）と同様に実施して上記目的物１．５ｇを得た。
（４）Ｆ０２  化合物の製造
上記（３）で得られた化合物１．０ｇを実施例１．（４）と同様に処理して逆相系高速液体クロマトグラフィーにより精製し、セファデックスＧー２５樹脂でゲル濾過して上記目的物１３ｍｇを得た。
物性値
アミノ酸分析値
Ａｓｐ  ２．８８（３），Ｔｈｒ  ４．５２（５），Ｓｅｒ  ２．９０（３），Ｇｌｕ  ３．０４（３），Ｐｒｏ  １．８７（２），Ｇｌｙ  ３．８０（４），Ａｌａ  １．００（１），Ｖａｌ  ２．９５（３），Ｌｅｕ  ４．８８（５），Ｔｙｒ  ０．７０（１），Ｌｙｓ  １．９９（２），Ｈｉｓ  ０．９１（１），Ａｒｇ  １．９６（２），Ａｓｕ  １．０３（１）
高速液体クロマトグラフィー    保持時間    ２４．５分
【００５８】
【試験例】
活性測定
下記の方法で被験物質として実施例で製造した各物質の、活性比を測定した。
体重９０〜１１０ｇの健康なＳ．Ｄ．系雄性ラットを用いた。ラットを４群に分け各群１０匹とし、次に示すようにエルカトニン標準品及び被験物質を静脈内に投与した。
【００５９】
第１群    標準品高用量                        第３群    被験物質高用量
第２群    標準品低用量                        第４群    被験物質低用量
投与１時間後に、エ−テル麻酔下に各試験動物より、血清を採血し、血清を分離した。血清に除たんぱく操作を加え、原子吸光度法により血清カルシウム濃度を測定した。
【００６０】
各群の血清カルシウム濃度を用いて、平行線検定法により標準品に対する被験物質の相対力価を求めた。その力価を、ヒトカルシトニンの力価で割って活性比を求め、下記表にまとめた。
いずれの化合物も対象に比較して血清カルシウム低下作用が優れていた。
【００６１】
【表１】
0003575629.tif 000018
【００６２】
【発明の効果】
新規かつ有用な血清カルシウム低下作用を有するペプチドを提供し得る。