(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属の菌を用いることを特徴とする酢酸セルロースの分解方法。
【請求項２】
リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属の菌を用いることを特徴とする置換度  ０．８〜３．０  の酢酸セルロースの分解方法。
【請求項３】
リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属の菌がリゾビウム・メリロッティ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ）である請求項１又は２記載の酢酸セルロースの分解方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はリゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属の菌を用いる酢酸セルロースの分解方法を提供するものである。
【０００２】
【従来の技術】
酢酸セルロースは、たばこのフィルターや写真フィルムの原料として用いられる。この酢酸セルロースは自然界では、難分解性の物質である。
【０００３】
現在の処理方法としては廃棄、焼却などが行なわれているが、これらの方法は自然環境を悪化させ、資源の再利用の点からも、好ましくはない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
これまで、コンポストなどの混合系では酢酸セルロースを分解する例はあるが単一菌ではＮｅｌｓｏｎらがシュードモナス・パウシモビリス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓ）（１９９２）、酒井らがナイセリア・シッカ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｉｃｃａ）（１９９４）を単離してその分解性を報告しているのみである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、難分解性である酢酸セルロースを分解する単一菌のスクリーリングを自然界から行なった結果、酢酸セルロース分解能を持つ菌をを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
即ち、本発明は、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属の菌を用いることを特徴とする酢酸セルロースの分解方法に関する。
【０００７】
詳しくは、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属の菌の中で、リゾビウム・メリロッティ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ）が好ましい。
【０００８】
また、分解する酢酸セルロースは、置換度  ０．８〜３．０  の酢酸セルロースが好ましく、さらに好ましくは置換度  ０．８〜２．８  の酢酸セルロースである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明者等は、川の水に酢酸セルロースの中空糸を漬けておくと１〜３ケ月でぼろぼろになる現象を見い出した。そこでこの川の水に酢酸セルロース分解菌がいると考え、この川の水を分離源とすることにした。
【００１０】
スクリーニング用培地として、次に示す培地を用いた。
【００１１】
0003605444.tif 000002
上記組成の液体培地１０ｍｌを２１ｍｍφ試験管に入れ滅菌した。川の水に漬けて劣化した酢酸セルロースの中空糸（ジアセテート、トリアセテート）をこの試験管培地に入れ、２７℃、２６０ｒｐｍの条件で振とう培養した。７日間培養後、培地が濁って菌の生育が見られた培養液について、同じ組成の新しい培地に植え継いだ。この操作を４〜５回繰り返して、最後まで菌の生育が見られた培養液について、同組成のプレートにまいた。出てきたコロニーを別のプレートにスポットし、保存プレートした。この保存プレートから異なるコロニーを分解菌としてスラントに植菌し、保存し、酢酸セルロース分解菌の評価を試みたが、強い活性を持った菌は得られなかった。
【００１２】
そこで、スクリーニング用の培地を次の物に変更した。
0003605444.tif 000003
培地２のプレートを作り、その上に滅菌した置換度  １．７の酢酸セルロースメンブランフィルターを乗せたプレートと置換度  ２．５の酢酸セルロースを乗せたプレートをそれぞれ別個に用意した。さらにその上に川の水で劣化した酢酸セルロース中空糸（ジアセテート、およびトリアセテート）をのせ３０℃で培養した。培養後２ケ月ほどでメンブランの一部が溶けてくるプレートが出てきた。この溶けた部分に酢酸セルロース分解菌がいると考えられる。そこでこの溶けた部分をサンプリングし、滅菌水に懸濁した。この懸濁液を、適当な濃度に希釈して培地１のプレートにまいた。出てきたコロニーを選別し、新たなプレートにスポットした。プレート上のコロニーをスラントに植菌し、それぞれの菌を分解の評価にかけたところ、酢酸セルロース分解菌を得ることができた。
【００１３】
酢酸セルロース分解菌の評価は次のように行った。
１．培地１での菌の生育（ＯＤ６６０  ）→吸光度６６０ｎｍ  での培養液の濁り具合い（値が大きいほど培地中の酢酸セルロース粉末を栄養源にしている）
２．置換度１．７  の酢酸セルロース（ダイセル化学工業（株））をジメチルスルホオキサイド（ＤＭＳＯ）に溶かしメンブランフィルターを作り、培養液に入れ培養開始時と培養終了時の重量減少率を測定した。
【００１４】
３．置換度  ２．５の酢酸セルロース（ダイセル化学工業（株））をジメチルスルホオキサイド（ＤＭＳＯ）に溶かしメンブランフィルターを作り、培養液に入れ培養開始時と培養終了時の重量減少率を測定した。
【００１５】
４．アドバンテック東洋（株）の酢酸セルロースメンブランフィルター（市販品、置換度  ２．５〜２．８  ）の崩壊
取得した分解菌の同定結果は以下の通りである。
・菌の形態的特徴
細胞の形：桿菌
細胞の大きさ：幅  ０．６〜０．８  μｍ  ×長さ  １．５〜３．０  μｍ
運動性：あり
グラム染色：陰性
・生理的試験
３％ＫＯＨ  による溶解    ：陽性
アミノペプチダーゼ反応：陽性
胞子                  ：なし
オキシダーゼ試験      ：陽性
カタラーゼ試験        ：陽性
４０℃での生育          ：生育しない
ＯＮＰＧ反応              ：陽性
ＡＤＨ  反応              ：陰性
硝酸塩の還元性        ：陽性
ウレアーゼ反応        ：陽性
ゼラチンの加水分解    ：陰性
エスクリンの加水分解  ：陽性
〔炭素源の利用性〕
利用できるもの  ：Ｌ−乳酸、Ｌ−アラビノース、グルコース、マルトース
利用できないもの：アジピン酸、酒石酸、カプロン酸、クエン酸。
【００１６】
以上の結果より、バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（ＢＥＲＧＥＹ’Ｓ  ＭＡＮＵＡＬ  ＯＦ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）（第１巻１９８４年、第２巻１９８６年、第３巻１９８９年、第４巻１９８９年）よりリゾビウム・メリロッティ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ）と同定され、工業技術院生命工学工業技術研究所菌株寄託Ｎｏ．  ＦＥＲＭ  Ｐ−１５０６１として登録された。
【００１７】
【実施例】
実施例１
培地１の培地組成において酢酸セルロースを置換度  ２．５の粉末にした物を調製する。これを  ５００ｍｌ坂口フラスコに  １００ｍｌ分注した。次に置換度  １．７、２．５  の酢酸セルロースメンブランを用意し、重量測定し培養中、壊れないようにネットに包み坂口フラスコに入れ、滅菌した物を培養培地とした。
【００１８】
リゾビウム・メリロッティ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ）をこの培地に植菌したところ、置換度  １．７の酢酸セルロースメンブランでは７日目、置換度  ２．５の酢酸セルロースメンブランでは１４日目から重量減少がみられた。培養２１日目で置換度  １．７の酢酸セルロースメンブランで２６．８％、置換度  ２．５の酢酸セルロースメンブランで１２．１％の重量減少を示した。培養２８日目では置換度  １．７の酢酸セルロースメンブランで５０．５％、置換度  ２．５の酢酸セルロースメンブランで２７．５％とさらに分解が進むことが確認された。これに対して菌を植えていない培地のみのコントロールは置換度１．７  、２．５  の酢酸セルロースメンブランで２８日間振とうしても重量減少はみられなかった。
【００１９】
実施例２
リゾビウム・メリロッティ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ）を植菌した培養液中でアドバンテック東洋（株）の酢酸セルロースメンブラン（置換度  ２．５〜２．８）培養２８日目で粉々になった。培地１のみの場合のコントロールの酢酸セルロースメンブランは全く変化がなかった。
【００２０】
【発明の効果】
本発明によって、自然環境を悪化させることなく難分解性物質の酢酸セルロースの分解が比較的容易に行なえるようになった。