(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リオニレシノールおよびプラティフィロノール、ならびにそれらの配糖体から選ばれる一種または二種以上を配合することを特徴とする老化防止用化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アンチアロール（Ａｎｔｉａｒｏｌ）、リオニレシノール（Ｌｙｏｎｉｒｅｓｉｎｏｌ）、ロドデンドロール（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｌ）およびプラティフィロノール（Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｏｎｏｌ）、ならびにそれらの配糖体の一種または二種以上を配合することにより、優れた美肌、皮膚老化症状を改善する化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
シワの発生や肌荒れは代表的な皮膚の老徴である。その原因はいまだ完全に解明されてはいないが、おそらく老化に伴う表皮基底細胞や真皮繊維芽細胞の分裂能の低下、そしてそれに伴う皮膚全体の萎縮、さらには表皮細胞自身が作り出す天然保湿成分量の減少などが最終的に皮膚の柔軟性や弾力性を低下させ、結果として肌荒れやシワを発生させるものと考えられる。
さらに、これらの内的な要因に加えて外的な要因として、紫外線に被曝することによって生じる皮膚表面あるいは皮内の過酸化脂質が表皮細胞にダメージを与え、皮膚の柔軟性や弾力性の低下をさらに加速させる。
そこで、これらの症状を改善する目的で、種々の素材が化粧品に配合され、検討されてきたが、シワの発生や肌荒れを十分に抑える事はできなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、特定の植物成分を含有し、優れた美肌効果および皮膚老化症状改善効果を有する化粧料を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の問題点を解決すべく鋭意検討した結果、アンチアロール、リオニレシノール、ロドデンドロール、およびプラティフィロノール、ならびにそれらの配糖体から選択される一種または二種以上が、シワの発生や肌荒れを効果的に改善し得る事を見い出し、本発明を完成させるに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、アンチアロール、リオニレシノール、ロドデンドロールおよびプラティフィロノール、ならびにそれらの配糖体から選ばれる一種または二種以上を配合することを特徴とする老化防止用化粧料を提供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明に用いるアンチアロール（Ａｎｔｉａｒｏｌ）およびその配糖体は、主に、カバノキ科、ニガキ科、マメ科、アカネ科などの植物に見い出され、その配糖体としてはグルコース配糖体、またはグルコース−アピオース配糖体である。
本発明に用いるリオニレシノール（Ｌｙｏｎｉｒｅｓｉｎｏｌ）およびその配糖体は、例えば、ミカン科、ブナ科、クスノキ科、ツツジ科、カバノキ科、ニレ科、キツネノゴマ科、マメ科などの植物に見い出され、その配糖体としてはキシロース配糖体、グルコース配糖体、ラムノース配糖体である。
本発明に用いるロドデンドロール（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｌ）およびその配糖体は、例えば、ツツジ科、ゴマ科、カバノキ科などの植物に見い出され、その配糖体としてはグルコース配糖体、グルコース−アピオース配糖体、グルコース−アラビノース配糖体である。
本発明に用いるプラティフィロノール（Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｏｎｏｌ）およびその配糖体は、例えば、カバノキ科植物に見出され、その配糖体はグルコース配糖体、およびグルコース−アピオース配糖体である。
【０００７】
これら成分は、いずれもこれらの植物から水、低級アルコール等の溶媒の単独もしくはそれらの任意の混合溶液によって抽出し、常法によりシリカゲルカラム等を用いて分離精製して、製造する。
また、これらの成分は、公知の化学合成法により合成して得たものであってもよく、あるいは、細胞培養または組換え遺伝子技術などの生物化学的手法によって産生させて得たものでもよい。
【０００８】
本発明では、これらの成分を１種または２種以上組み合わせて配合することができ、その配合量は化粧料全体に対して０．００１〜１０重量％であり、好ましくは０．０１〜５重量％である。
【０００９】
また、本発明の化粧料の形態は、特に限定されるものでなく、例えば、水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、ゲル系、軟膏系等に調製できる。
本発明の化粧料では、上記の有効成分に加え、必要に応じ、例えばビタミンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ群や感光素、プラセンタエキス等の細胞賦活剤、スフィンゴ脂質、セラミド、糖セラミド、ヒアルロン酸等の保湿成分と配合することで、さらに効果を高めることができる。
【００１０】
また、本発明の効果を損なわない範囲で公知の成分、例えば、グリセリン、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール、またパラアミノ安息香酸系、サリチル酸系、メトキシ桂皮酸系、ベンゾフェノン系化合物等の紫外線吸収剤や酸化チタン、酸化亜鉛等の紫外線散乱剤、また、油剤、増粘剤、防腐剤、界面活性剤、酸化防止剤、香料、色剤等を配合する事ができる。
【００１１】
【実施例】
以下に実施例をあげて本発明を更に詳細に説明するが、下記実施例は本発明を制限するものではない。
＜参考例１＞
カバノキ科の植物シラカンバの樹皮細片１．５ｋｇを３ｌの５０％メタノールで３回、各３時間加熱抽出した。得られた抽出液についてメタノールのみを留去し、その際析出する不溶物を濾過する。得られた濾液について減圧下溶媒留去を行ない、シラカンバ樹皮のエキス１１９．２ｇを得た。このエキスをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２．１ｋｇ：φ１２０×４３０ｍｍ）に付し、クロロホルム−メタノール（４：１）〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親水性シリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０Ｆ２５４）でクロロホルム：メタノール：水＝６５：３５：１０の下層を展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．２１〜０．６４の粗画分を得た。
【００１２】
参考例１の粗画分を減圧下溶媒留去し、ＯＤＳクロマトレックス（富士シリシア化学製、ＤＭ１０２０Ｔ）のクロマトグラフィー（３００ｇ、φ８０×１４０ｍｍ）に付し、２０％メタノール〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親油性アルキルシリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  ＲＰ−１８  ＷＦ２５４Ｓ）で３０％メタノールを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．５１付近の画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０ｇ、φ３０×１００ｍｍ）に付し、クロロホルム：メタノール：水＝１０：３：１の下層〜クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１の直線グラジエントを用いて溶出し、同じシリカゲルプレートでクロロホルム：メタノール：水＝６５：３５：１０の下層を展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．３７の画分を集め、減圧下溶媒留去し、アンチアロール配糖体（アンチアロールアピオグルコサイド）２３．８ｍｇを得た。（化合物ａ）
【００１３】
参考例１の画分を減圧下溶媒留去し、ＯＤＳクロマトレックス（富士シリシア化学製、ＤＭ１０２０Ｔ）のクロマトグラフィー（３００ｇ、φ８０×１４０ｍｍ）に付し、２０％メタノール〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親油性アルキルシリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  ＲＰ−１８  ＷＦ２５４Ｓ）で３０％メタノールを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．２２〜０．４４の画分を得た。この画分について移動相を２０％アセトニトリルとした逆相高速液体クロマトグラフィー（ＹＭＣ社製、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．）により分画し、同じアルキルシリカゲルプレートで２５％アセトニトリルを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．３８の画分を得た。各々の画分を減圧下溶媒留去し、リオニレシノール配糖体（リオニレシノール−３−Ｏ−グルコサイド）２６．２ｍｇを得た。（化合物ｂ）
【００１４】
参考例１の粗画分を減圧下溶媒留去し、ＯＤＳクロマトレックス（富士シリシア化学製、ＤＭ１０２０Ｔ）のクロマトグラフィー（３００ｇ、φ８０×１４０ｍｍ）に付し、２０％メタノール〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親油性アルキルシリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  ＲＰ−１８  ＷＦ２５４Ｓ）で３０％メタノールを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．２２〜０．４４の画分を得た。この画分について移動相を２０％アセトニトリルとした逆相高速液体クロマトグラフィー（ＹＭＣ社製、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  ２５０×２０ｍｍＩ．Ｄ．）により分画し、同じアルキルシリカゲルプレートで２５％アセトニトリルを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．４２の画分を得た。各々の画分を減圧下溶媒留去し、ロドデンドロール配糖体（ロドデンドロール−２−Ｏ−グルコサイド）１４３ｍｇを得た。（化合物ｃ）
【００１５】
また、参考例１の粗画分を減圧下溶媒留去し、ＯＤＳクロマトレックス（富士シリシア化学製、ＤＭ１０２０Ｔ）のクロマトグラフィー（３００ｇ、φ８０×１４０ｍｍ）に付し、２０％メタノール〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親油性アルキルシリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  ＲＰ−１８  ＷＦ２５４Ｓ）で３０％メタノールを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．０９付近の画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６０ｇ、φ５０×７０ｍｍ）に付し、クロロホルム：メタノール：水＝７：３：１の下層〜クロロホルム：メタノール：水＝６：４：１の直線グラジエントを用いて溶出し、同じシリカゲルプレートでクロロホルム：メタノール：水＝６５：３５：１０の下層を展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０．３５の画分を集め、減圧下溶媒留去し、プラティフィロノール配糖体（プラティフィロサイド）１１．１ｍｇを得た。（化合物ｄ）
つぎに、これら化合物を用い、表皮細胞増殖促進作用および抗酸化作用を評価した。ついで、表１に示す化粧料を常法によって調製し、評価した。評価方法を示す。
【００１６】
【表１】
0003550475.tif 000002
【００１７】
評価方法
（１）表皮細胞増殖促進作用
培養細胞：表皮細胞は培養細胞として確立されているＳＶ４０トランスフォームヒトケラチノサイトを用いた。
試験方法：クリーンベンチ内において、ＳＶ４０トランスフォームヒトケラチノサイトを、ＦＢＳ  ３％、抗生物質  １％を含むＨＥＰＥＳ含有ＭＣＤＢ１５３培地を用いて９６穴プレートに１ｗｅｌｌあたり２０００個播種し、３７℃、ＣＯ２インキュベーター（５％  ＣＯ２−ａｉｒ）中で培養した。２４時間後に培養液を除去し、リノール酸  ０．０００２％、１Ｍ  塩化カリウム溶液  ０．１％、抗生物質  １％、脂肪酸フリー牛血清アルブミン  ０．０１％を含む  ＨＥＰＥＳ含有ＭＣＤＢ１５３培地：ダルベッコ変性イーグルＭＥＭ培地（１：１）調整培地に交換し、最終濃度が０．０１、０．１、１．０μｇ／ｍｌになるように薬物を添加し、１週間培養した。その後、培養液を除去し、ホルムアルデヒドで固定後細胞をクリスタルバイオレットにより染色し、その後メタノールで色素を抽出した後イムノリーダーで５９０ｎｍの吸光度を測定した。
【００１８】
式（１）：
【数１】
0003550475.tif 000003
により増殖比率を算出した。その結果を表２に示す。
【００１９】
【表２】
0003550475.tif 000004
【００２０】
表２に示すように、参考例１から得られた化合物において細胞増殖促進作用が認められた。
【００２１】
（２）抗酸化作用（ロダン鉄法）
リノール酸溶液  ４．１０４ｍｌ、０．０５Ｍ  りん酸緩衝液（ｐＨ７．０）  ８．０ｍｌ、エタノール  ４．０ｍｌ、蒸留水  ３．８９６ｍｌに各濃度の検体を加えて３７℃でインキュベートし、試料とする。経日的に試料を０．０５ｍｌとり、７５％エタノール４．８５ｍｌ、３０％  ロダン鉄アンモニウム液  ０．０５ｍｌに２×１０−２Ｍ  塩化第一鉄  ３．５％塩酸溶液  ０．０５ｍｌを加えよく撹拌する。正確に３分後の５００ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を図１に示す。
【００２２】
図１から明らかなように、参考例１の化合物は、α−トコフェロール、ＢＨＴを配合した比較例に比べて、同等もしくはそれ以上の過酸化脂質生成抑制作用を有していた。
【００２３】
（３）抗酸化作用（ＴＢＡ法）
チオバルビツール酸  １．０ｍｌ、２０％  トリクロロ酢酸  ２．０ｍｌ、（２）の試料  ２．０ｍｌを加え、沸騰水浴で１０分間加熱する。流水で冷却後遠心分離（３０００ｒｐｍ×２０分間）した後、目的層をとり、５３２ｎｍにおける吸光度を測定する。この操作をインキュベート初日と３３日目に行い、これらの吸光度差を用いて式（２）：
【数２】
0003550475.tif 000005
により過酸化脂質生成抑制率（％）を算出した。その結果を表３に示す。
【００２４】
【表３】
0003550475.tif 000006
【００２５】
表３に示すように、参考例１の化合物には、既知の抗酸化剤α−トコフェロールおよびＢＨＴを配合した場合と同等もしくはそれ以上の過酸化脂質生成抑制作用が認められた。
【００２６】
（４）美肌、シワ改善作用（化粧料での評価）
荒れ肌、小ジワ、乾燥肌等を訴える女子被験者（３０〜５０代）２０人にクリーム（処方例３）およびプラセボを１日２回連続３ヵ月塗布して３ヶ月後の効果を評価した。試験結果は皮膚の湿潤性、柔軟性、および弾力性の各項目に対して５段階で回答された人数で示した。その結果を表４に示す。
【００２７】
【表４】
0003550475.tif 000007
【００２８】
表４に示すように、本発明の化合物を配合する処方例３の化粧料は、プラセボと比較して明らかに優れた美肌、シワ改善作用を有していると認められた。
【００２９】
【発明の効果】
本発明によれば、表皮細胞増殖促進作用、抗酸化作用および美肌、シワ改善作用が認められ、皮膚の改善に有効である化粧料が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の植物抽出化合物および既知の抗酸化剤の経日的な抗酸化作用を示す折れ線グラフである。
【図１】
0003550475.tif 000008