(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルシウム非依存性トランスグルタミナーゼを有効成分として含有することを特徴とする創傷治療剤。
【請求項２】
カルシウム非依存性トランスグルタミナーゼを有効成分として含有することを特徴とする瘢痕拘縮防止剤。
【請求項３】
カルシウム非依存性トランスグルタミナーゼを有効成分として含有することを特徴とする創傷被覆剤。
【請求項４】
カルシウム非依存性トランスグルタミナーゼを有効成分として含有することを特徴とする止血剤。
【発明の詳細な説明】
（技術分野）
本発明は、有効成分としてトランスグルタミナーゼを含有することを特徴とする創傷治療剤、瘢痕拘縮防止剤、創傷被覆剤及び止血剤に関する。
（背景技術）
トランスグルタミナーゼの医療関連用途に関しては、次のような事実が知られている。まず、特開昭62−74360号明細書には、蛋白質および／またはペプチドを含有する溶液にトランスグルタミナーゼを添加して得られる膜を成分として含有する人工皮膚が開示され、この人工皮膚は、引張強度、伸度、柔軟性や酸素透過性にすぐれているのみならず、すぐれた水蒸気透過性を有する生体適合性の強いものである。また、特開平２−108631号明細書には、トランスグルタミナーゼを有効成分とする免疫抑制剤が開示されているが、開示されているところはin vitroの実験でしかも免疫学的な考察にとどまっているに過ぎず、in vivoでの実現の創傷治療は示唆さえするものではない。また、このようなトランスグルタミナーゼの用途は、後述するところから理解されるように、本発明のそれとは明らかに異なっている。
ところで、創傷治療に関しては、消毒後一次縫合等の治療法が一般的に施されるが、これには外科手術が必須である。しかしながら、皮膚破損が大きい場合や熱傷等には、外科縫合は難しい。
一方、創傷治療においては、いかにして創傷の後を残さずに治療するかということが器質的、機能的観点からのみならず、美容的観点からも極めて重要である。
このような、瘢痕拘縮防止には植皮、矯正装具の使用、薬物療法、放射線治療などが知られているが、いずれにも難点がある。すなわち、植皮には、外科療法が必要であるのに加えて、重度熱傷のように創傷が広範囲に及ぶ場合は恵皮部に著しい制限があって理想的な植皮は困難である、また植皮により直ちに創収縮が停止せず、植皮片と創面との接着癒合部をはじめ植皮片縁の縫合線などにかなりの期間にわたって創収縮が進行する、といった問題点が指摘される。矯正装具の使用については、それが補助的手段であり、長期使用が必要であるにも拘わらず、実際には長期使用が困難である、といった問題点がある。薬物療法に関しては、ステロイド軟膏剤は明確な効果が期待できず、肥満細胞の脱顆粒を抑制する作用を有するトラニラストは補助的な効果しか期待できない。放射線治療は、創収縮の機転を抑制するが、他方、創の治癒を阻害するという難点がある。
また、創傷被覆剤もいくつか提案され、使用されているが、いずれも難点がある。すなわち、凍結乾燥豚皮は、創傷面で融解するために張りかえの必要があり、また使用前に生理食塩水で再生する必要がある。コラーゲン製人工皮膚は、ときに軽い疼痛や不快感をきたすことがある。人の血液からつくったプラズマ膜やフィブリン膜は、分泌のある創面の場合は分泌液流出が十分でなく、また人血を原料とするため供給に限度がある。また、装着時の疼痛や不快感は、これらの創傷被覆剤に共通してみられる。更に、これらの創傷被覆剤は、患部の乾燥、止血、感染防止、その他の治療過程に必要な作用を十分には有していない。
止血剤としては、ゼラチン、微繊維性コラーゲン、トロンビン、などが知られているが、更により優れた止血剤の開発が望まれている。
（発明の開示）
本出願人は、従来からトランスグルタミナーゼの製造法及びその広汎な用途開発に注力し、その結果につき既に多数の特許出願を行なっているが、本発明の目的は、このような背景下において、かつ前記の従来技術の背景下において、トランスグルタミナーゼに新たな用途を加えることともなる、トランスグルタミナーゼを有効成分とする新規な創傷治療剤を提供することにある。
本発明者は、前記課題を達成すべく鋭意研究の結果、トランスグルタミナーゼが広く創傷治療作用を有すること、この作用には瘢痕拘縮防止作用、さらには疼痛抑制、患部乾燥、止血などの作用を合せ有する創傷被覆作用が含まれることを見出し、このような知見に基いて本発明を完成した。なお、止血作用について若干付言すれば、トランスグルタミナーゼの止血作用は、創傷被覆の作用による場合のみならず、外科的領域や事故などによる創傷の救急処置等においてももちろん有用である。
すなわち、本発明は、トランスグルタミナーゼを有効成分とすることを特徴とする創傷治療剤、瘢痕拘縮防止剤、創傷被覆剤及び止血剤に関する。
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の創傷治療剤の有効成分であるトランスグルタミナーゼには、カルシウム非依存性のものと依存性のものとがある。前者の例としては、微生物由来のもの（例えば、特開昭64−27471参照）を挙げることができ、後者の例としては、モルモット由来のもの（例えば、特公平１−50382参照）、魚由来のもの（例えば、関信夫ら「昭和63年度日本水産学会秋季大会講演要旨集」167頁及び「平成２年度日本水産学会春季大会講演要旨集」219頁参照）及びヒト由来のもの（例えば、血液のXIII因子など）を挙げることができる。これらのうち、カルシウム非依存性のものが好ましく、その製造は、例えば上記特開昭64−27471の方法によることができる。
本発明のトランスグルタミナーゼ創傷治療剤の剤形は、トランスグルタミナーゼそのもの、これを含有する溶液、半液体の賦形剤もしくは補助剤を用いた局所適用に適した投与形態のもの、などを挙げることができるが、溶液、軟膏、トランスグルタミナーゼを含有するガーゼなどの局所保護剤、スプレー、などの形態が投与上好ましい。溶液は、滅菌水、各種緩衝液、などの溶媒にトランスグルタミナーゼを溶解して調製することができる。軟膏は、その基剤には特別の制限はなく、脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、パラフィン、蝋、硬膏剤、樹脂、プラスチック、グリコール類、高級アルコール、グリセリン、水、乳化剤、懸濁化剤など通常の原料から適宜採用して基剤とすることができる。これらの溶液、軟膏、局所保護剤、スプレーなどにおけるトランスグルタミナーゼの含有量にも特別の制限はないが、0.1〜1,000U/g、好ましくは0.5〜500U/g程度とするのが投与に便利である。
本発明の創傷治療剤は、散布、噴霧、塗布、湿布、などの方法により創傷に投与する。
本発明の創傷治療剤を特に瘢痕拘縮防止剤として使用する場合、対象となる創傷は、例えば、熱傷、外科的手術などの外傷などの創傷である。
創傷被覆剤として使用する場合、対象となる創傷は、上記創傷に加えて、例えば、糖尿病アンジオパシー、慢性皮膚潰瘍、血栓症後の潰瘍、褥瘡潰瘍などの創傷である。本発明の創傷被覆剤は、創傷感染防止作用、創傷鎮痛作用、患部乾燥作用、などを有する。因みに、従来知られている感染防止処置中、消毒薬等を使用する創の清浄化は一時的処置に過ぎず、抗菌剤の使用には耐性菌汚染の懸念がある。また、従来の創傷被覆剤などによる創の保護は、接着のための固定が必要であり、また使用時及び着脱等の疼痛、不快感、分泌液の流出などの問題がある。
止血剤として使用する場合は、外科的領域をはじめとした各種の出血の止血に有効である。
本発明の創傷治療剤は、その他の創傷にも広く治療効果を呈する。
本発明の創傷治療剤によれば、瘢痕拘縮防止、創傷被覆及び止血を極めて簡便に行ない得る。
本発明の創傷治療剤は、ヒトの創傷治療に使用されるのみならず、ヒト以外の動物の創傷治療にも使用されることは勿論である。
【図面の簡単な説明】
第１図は実施例２における実験結果（創傷面積の推移）を示す。
（発明を実施するための最良の形態）
以下、実施例により本発明を更に説明する。
実施例１（治療剤の調製）
（ａ）トランスグルタミナーゼ溶液（１）の調製
特開昭64−27471号明細書に記載の実施例１の方法に準じて微生物由来のトランスグルタミナーゼ（BTG）を製造した（比活性3U/mg）。
このトランスグルタミナーゼ5gを50mM HEPESバッファー液（pH7）100mlに溶解して創傷治療剤（微生物由来トランスグルタミナーゼの５％（w/v）水溶液）を調製した。
（ｂ）トランスグルタミナーゼ溶液（２）の調製
前掲特公平１−50382記載の方法に準じて製造したモルモット由来のトランスグルタミナーゼ（GTG）（比活性3U/mg）5gを50mM HEPESバッファー液（pH7）100mlに溶解して創傷治療剤（モルモット由来トランスグルタミナーゼの５％（w/v）水溶液）を調製した。
実施例２（瘢痕拘縮防止効果）
７週令SD系雄ラット10匹からなる群を３群用意した。
これらのラットを麻酔後、背部を刈毛し（約7cm×7cm）、ヒビテン液で消毒後、メスを用いて約5cm四方の大きさに皮膚（表皮＋真皮）を摘出した。創の面積を計測後、一方の群（第Ｉ群）のラットには実施例１（ａ）で調製したトランスグルタミナーゼ溶液（１）をガーゼにしみこませて投与し、もう一方の群（第II群）には実施例１（ｂ）で調製したトランスグルタミナーゼ溶液（２）をガーゼにしみこませて投与し、他方の群（第III群、コントロール群）には50mM HEPESバッファー液（pH7）を同様にガーゼにしみこませて投与し、包帯で固定した。
その後、毎日傷の面積を計測し、新しくトランスグルタミナーゼ溶液及びHEPESバッファー液を前述のように投与し、包帯で固定して、経過を観察した。
本実施における創傷面積比率（観察日における面積対実験開始日における面積）の変化を第１図に示す。この図より、明らかにトランスグルタミナーゼが拘縮防止効果を呈することが理解される。
実施例３（創傷被覆効果）
７週令SD系雄ラット10匹からなる群を２群用意した。
実施例２と同様に、ラットを麻酔後、背部を刈毛し（約7cm×7cm）、ヒビテン液で消毒後、メスを用いて約5cm四方の大きさに皮膚（表皮＋真皮）を摘出した。一方の群（第Ｉ群）のラットには実施例１（ａ）で調製したトランスグルタミナーゼ溶液（１）をガーゼにしみこませて投与し、他方の群（第III群、コントロール群）には50mM HEPESバッファー液（pH7）を同様にガーゼにしみこませて投与し、包帯で固定した。
その後、毎日傷の観察を行い、新しくトランスグルタミナーゼ溶液及びHEPESバッファー液を前述のように投与し、包帯で固定して、経過を観察した。
本実施における経日的な創傷の観察所見を第１表に示す。この表より、トランスグルタミナーゼが臨床的に優れた創傷被覆効果を呈することが理解される。
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実施例４（止血効果）
（ａ）試験動物：
７週令SD系雄性ラット（SPF）５匹からなる群を３群用意した。これら３群を用いて、それぞれ、本発明の止血剤による検査（本発明）、血液凝固XIII因子による検査（比較例）、およびブランク試験（対照例）を行なった。
（ｂ）被験物質とその調製：
実施例１（ａ）におけると同様にして製造したトランスグルタミナーゼ（比活性3U/mg）をHiroyasu Ando et al.の方法（Agric.Biol.Chem.,53,2613（1989））にて精製し、30U/mlのトランスグルタミナーゼ溶液を得た。これｒを50mM  HEPESバッファー液（pH7）にて溶解し濃度3U/mlの試験液を調製した（本発明）。
上記トランスグルタミナーゼの代りに血液凝固XIII因子「ヒブロガミン」（ヘキスト社製）を使用して、同様に濃度3U/mlの試験液を調製した（比較例）。
ブランク試験は、上記HEPESバッファー液をそのまま試験液として行なった（対照例）。
（ｃ）創傷作成方法：
各ラットを麻酔後、背部をバリカンで刈毛（7cm×7cm）し、ヒビテンで消毒後、メスを用いて約5cm四方の大きさに皮膚を摘出した。
（ｄ）投与方法および検査方法：
創傷作成当日、創傷作成後４時間目に第Ｉ〜III群のラットに、それぞれ、トランスグルタミナーゼの試験液、血液凝固XIII因子の試験液およびブランク試験液を投与した。すなわち、各ラットの創傷部位を完全に覆う程度の大きさのガーゼで覆い、１匹あたり1mlをシリンジにて創傷部全体に滴下した。投与は創傷作成当日のみに行い、翌日以降はガーゼの交換のみを行った。
投与の翌日、各ラットについて疼痛の有無および出血の程度を観察した。
投与の翌々日、すなわち、投与後２日目に各群１匹づつのラットを屠殺し、創傷部を採取し、ホルマリン固定後、組織標本を作成し、病理組織学的検査を行なった。
（ｅ）結  果：
疼痛の有無に関する観察結果は、下記第２表に示す通りであった。
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出血の程度に関する観察結果は、下記第３表に示す通りであった。
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病理組織学的検査の結果は下記第４表にまとめた通りであった。
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以上の結果から、トランスグルタミナーゼは、血液凝固XIII因子に比較して、止血剤として、疼痛、出血、病理組織学的等の観点からより優れていることが理解されるが、これは次の理由によるものであろう。すなわち、血液凝固因子の止血作用は血液内において発現し、これを創傷面に塗布などにより投与しても、皮膜様層の形成が認められず、止血作用も発現し難いのに対し、トランスグルタミナーゼの場合、創傷部位における滲出液の蛋白質、組胞表面蛋白質および血液蛋白質を架橋して皮膜様層を形成し、顕著な止血作用が奏されるものと考えられる。
（産業上の利用可能性）
本発明により、創傷治療剤、特に瘢痕拘縮防止、創傷被覆及び止血が簡便に行ない得る優れた創傷治療剤が新たに提供されるところとなった。
【図１】
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