(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
0003587933.tif 000004
（式中、Ｒ1aは水素原子、ｐ−ヒドロキシベンゾイル基又はｐ−メトキシベンゾイル基を示す。）
で表わされるステロイド配糖体。
【請求項２】
請求項１記載のステロイド配糖体を有効成分とする医薬。
【請求項３】
抗癌剤である請求項２記載の医薬。
【請求項４】
免疫抑制剤である請求項２記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ステロイド配糖体及びこれを有効成分とする医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
現代において各種の医薬品の発明は、古来より人類の脅威であった種々の感染症を駆逐した。しかしこれに代わって、循環器疾患や癌が人類の大きな脅威になっている。このうち癌は、現在に至っても尚完全な治療法は存在せず、死亡原因でもトップの座を保っており、人類にとって解決すべき最優先課題となっている。
【０００３】
従来、癌の治療は大きく分けて、外科的手術、抗癌剤による化学療法、放射線による放射線療法の３つに分けられる。このうち、外科的手術は初期の癌には有効であるが、転移を伴った癌に対しては効力が限られたものになってしまうことが多い。また、放射線療法は浅部の癌には有効であるが、深部の癌には効力は今一つである。更に、放射線による正常な部位への障害は無視できず、放射線によって癌が誘起されることがあり、無条件に癌治療に用いることは出来ない。一方、抗癌剤による癌治療は抗癌剤の毒性が強いことが原因で、極めて限られたものになっている。また、癌の抗癌剤に対する耐性も無視の出来ない大きな課題である。この様な状況から新規の抗癌剤の登場が期待されている。
【０００４】
また、現代において臓器移植は医薬品で治療できない疾患例えば、肝臓の不全、腎臓の不全、心臓の不全、白血病等の治療のための切り札的存在である。特に近年になって臓器移植が盛んに行われるようになってきた要因の一つに免疫抑制剤の使用により、移植直後の被移植者の生体拒絶反応のコントロールが可能になってきたことが挙げられる。しかしながら、これまでに用いられているサイクロスポリンやシクロホスファミド等の免疫抑制剤は、いずれも安全で、かつ十分な効果を発現するものではなく、その使用には危険が伴い、ただでさえ体力の落ちた臓器の不全を呈している患者に投与するのには困難が伴う。そこで、新規の免疫抑制剤の登場が期待されている。
【０００５】
従って、本発明は、安全性に優れ、強い抗癌作用及び高い免疫抑制作用を示す新規の化合物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
かかる実情において、本発明者らは鋭意検討を行った結果、ユリ科又はその近縁の植物体を溶剤抽出及び精製すると新規のステロイド配糖体が得られ、当該新規化合物は安全で、強い抗癌作用及び高い免疫抑制作用を示し医薬として有用であることを見出し本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【０００８】
【化２】
0003587933.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒ1aは水素原子、ｐ−ヒドロキシベンゾイル基又はｐ−メトキシベンゾイル基を示す。）で表されるステロイド配糖体及びこれを有効成分とする医薬を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の一般式（１）のステロイド配糖体は新規化合物である。
【００１５】
【化３】
0003587933.tif 000003
【００１７】
（式中、Ｒ１ａは水素原子、ｐ−ヒドロキシベンゾイル基又はｐ−メトキシベンゾイル基を示す。）
【００１８】
このうち、特にＯ−６−デオキシ−４−Ｏ−（４−メトキシベンゾイル）−α−Ｌ−マンノシル（１ｆｗｄａｒｗ２）−β−Ｄ−グルコピラノシル−３β，１６β，１８Ｒ，２２Ｒ，２３Ｒ−１６，２３：１８，２０−ジエポキシ−２３−ヒドロキシ−１８−メトキシ−２２−（２−メチル−１−プロペニル）−２４−ノルコール−５−エン−３−イル（化合物Ａ）が好ましい。本発明の新規ステロイド配糖体は、例えばユリ科又はその近縁植物の植物体から溶媒抽出、精製工程を経て得ることができる。
【００１９】
ユリ科植物としては、特に制限されないが、例えば、オルニトガラム・サンデルシアエ（Ｏｎｉｔｙｈｏｇａｌｕｍ  ｓａｕｎｄｅｒｓｉａｅ）等が挙げられる。また、ユリ科の近縁植物としては、例えば、ドラカエナ属等のリュウゼツラン科、アヤメ科又はカヤツリグサ科等の植物が挙げられる。これらは、市販のものを用いることができる。抽出に用いる植物体の部位も特に制限されないが、ステロイド配糖体が高い濃度で存在する鱗茎部が好ましい。
【００２０】
ユリ科又はその近縁の植物体から溶媒抽出する方法も特に制限されないが、植物体をそのまま又は乾燥あるいは細断、粉砕等抽出に好適な形状に加工した後極性溶媒で液液抽出等行えばよい。
抽出溶媒としては、極性溶媒が好ましく、例えば、水；メタノールやエタノールなどのアルコール類；ジエチルエーテルやテトラヒドロフラン等のエーテル類；酢酸エチルや酢酸メチル等のエステル類；クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類；アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類；アセトニトリル等のニトリル類が挙げられ、これらを単独もしくは二種以上を混合して用いればよい。このうち好ましい溶媒として、抽出効率、安全性、経済性の点でアルコール類を挙げることが出来る。抽出は、室温でも溶媒の沸点付近の温度まで加熱して行ってもよい。これは、本発明のステロイド配糖体が温度に対して安定であるためである。抽出は、室温ならば数日、加熱下であれば数時間溶媒に浸漬して行えばよく、更に攪拌を加えてもよい。
【００２１】
ユリ科又はその近縁の植物体から溶媒抽出された抽出物は、公知の方法により精製、単離できる。例えば、水−ブタノールで液液抽出し大まかに夾雑物を取り除いた後、シリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂等を担体としたカラムクロマトグラフィーで精製すればよい。
【００２２】
本発明のステロイド配糖体は、優れた抗癌作用を有し、抗癌剤として有用である。本発明抗癌剤の対象となる癌としては、通常の癌であれば特に制限されないが、特に白血病が好ましい。また、本発明のステロイド配糖体は、高い免疫抑制作用を有し、免疫抑制剤として有用である。斯かる免疫抑制剤は従来の免疫抑制剤が用いられる場合と同様に用いることが出来る。例えば、臓器移植に先立って、本発明の免疫抑制剤を投与し、拒絶反応を抑制し移植臓器の定着率を上げるために用いたり、白血病患者に骨髄移植に先立って投与し、病原細胞を除去するために用いたりする事が出来る。また、本発明医薬には有効成分として前記ステロイド配糖体が配合されるが、当該ステロイド配糖体は有効量含まれていればよく、前記ユリ科又はその近縁の植物体の抽出物を用いてもよい。
【００２３】
本発明の医薬を患者に投与する場合、好ましい投与量は、患者の年齢、体型、体調、癌の種類とステージ、性別等により異なるが、通常、成人一人一日当たり、有効成分として１〜１０００ｍｇ、特に２〜１００ｍｇを１〜数回に分けて投与するのが好ましい。投与経路としては、特段の限定はなく、例えば、経口投与、経直腸投与、注射による投与などが挙げられる。このうち、注射による投与では、例えば、静脈注射、動脈注射、門脈注射、皮下注射、皮内注射、腹腔内注射、病巣内直接注射等が例示できる。注射は、通常の注射でも輸液などに混合して点滴で行ってもよい。
【００２４】
本発明の医薬は、上記ステロイド配糖体を有効成分として含有するが、それ以外に通常の医薬組成物で用いられている剤形化のための任意成分を任意の配合量で含有することができる。この様な任意成分としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、乳化・可溶化・分散剤、滑沢剤、コーティング剤、徐放性被膜形成剤、矯味矯臭剤、着色剤、安定剤、等張剤、油脂類、溶媒、リポソーム形成剤等が例示できる。本発明の医薬はこれら任意成分と共に常法に従って製剤化される。
【００２５】
上記剤形化のための任意成分以外にも、本発明の抗癌剤の場合は、通常癌治療に用いられる医薬品類を更に含有させることもできる。この様な医薬品としては、アドリアマイシン、マイトマイシン、ネオカルチノスタチン、ビンクリスチン、タキソール、５ＦＵ等の抗癌剤、モルヒネ等の痛み止め成分、ステロイド剤、リピオドール等の血管栓塞剤等が挙げられる。
【００２６】
また、上記剤形化の任意成分以外にも、本発明の免疫抑制剤の場合は、通常免疫抑制剤を用いる治療に用いられる医薬品類を含有させることもできる。このような医薬品としては、メチシリン、テトラサイクリン、セファロスポリン、セファロスポロール等の抗生物質、シクロフォスファミドやメルカプトプリン等の従来の免疫抑制剤、ステロイド剤等が挙げられる。
【００２７】
【発明の効果】
本発明のステロイド配糖体は、優れた抗癌作用及び高い免疫抑制作用を有する。更に、ユリ科の多くの植物の鱗茎が広く食用に供されていることから安全性が高い。
【００２８】
【実施例】
次に本発明を実施例を挙げて更に具体的に説明するが、これらは、単に例示であって本発明を制限するものではない。
【００２９】
実施例１
製造例
園芸店より購入したオルニトガラム・サンデルシアエ（Ｏｎｉｔｙｈｏｇａｌｕｍ ｓａｕｎｄｅｒｓｉａｅ）の新鮮鱗茎１０kgを細かく切り刻んだ後、１０ｌのメタノールで２回、３時間温浸し、濾過により不溶物を取り除いた後に溶媒を除去し、３ ｌのブタノールと３ ｌの水で液液抽出を行い、ブタノール層を得た。溶媒除去し残渣をダイヤイオンＨＰ−２０を用いたイオン交換カラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；水：メタノール＝１００：０→０：１００、エタノール、酢酸エチル）、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール：水＝１９：１：０→７：４：１）、ＯＤＳカラムを装着した高速液体クロマトグラフィー（溶出溶媒；水：メタノール＝３０：７０→５：９５、水：アセトニトリル＝３０：７０）で順次精製し、精製物１を得た。
【００３０】
（精製物１：収量１３ｍｇ）
この精製物は、以下の方法で分析を行ったところ、前記化合物Ａであることがわかった。
【００３１】
【表１】
性状：白色粉末［α］Ｄ２６−６２度
ＦＡＢ−ＭＡＳＳ：［Ｍ−Ｈ］−；８９９
ＩＲ（ＫＢｒ錠剤）ｃｍ−１：３４００、２９２０、２８５０、１７００
１Ｈ−ＮＭＲ（重ピリジン）ｐｐｍ：８．２８（２Ｈ，ｄ），  ７．００（２Ｈ，ｄ），  ６．４７（１Ｈ，ｄｄ），        ６．１５（１Ｈ，ｄｄ），  ５．７３（１Ｈ，ｄ），  ５．１１（１Ｈ，ｄ），  ４．６３（１Ｈ，ｓ），  ４．０２（１Ｈ，ｍ），        ３．７２（３Ｈ，ｓ），  ３．４２（３Ｈ，ｓ），  ２．９３（１Ｈ，ｄｄ），  ２．７７（１Ｈ，ｄｄ），  ２．７１（１Ｈ，ｄｄ），        ２．５０（１Ｈ，ｄｄ），  ２．０５（１Ｈ，ｄ），  １．８３（３Ｈ，ｓ），  １．８０（３Ｈ，ｓ），  １．６０（３Ｈ，ｄ），            １．４６（３Ｈ，ｓ），  ０．９８（３Ｈ，ｓ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（重ピリジン）ｐｐｍ：３７．３，  ３０．３，  ７８．４，  ３９．２，  １４１．２，  １２１．７，          ３２．４，  ３２．５，  ４９．９，  ３７．２，  ２２．８，  ３４．５，  ５７．５，  ５１．０，  ２９．６，  ７７．１，  ５３．１，          １０８．６，  １９．６，  ８５．８，  ２７．７，  ５０．８，  ９０．９，  １２２．８，  １３４．５，  ２６．５，  １９．０，            ５５．４，  １００．４，  ７９．７，  ７７．５，  ７１．８，  ７７．８，  ６２．７，  １０１．７，  ７２．６，  ７０．５，  ７６．７，          ６７．０，  １８．１，  １２３．６，  １３２．３，  １１４．１，  １６３．８，  １６６．４，  ５５．４
【００３４】
実施例２
急性毒性
化合物Ａの急性毒性を１群５匹のＩＣＲ雄性マウスを用いて調べた。即ち、両化合物を２mg／匹腹腔内投与し、１４日後に生死を判定した。その後動物を屠殺し、解剖し各臓器の異常の有無を調べた。結果は１４日目に於ける死亡例はなく、剖検結果も異常を認めなかった。これより本発明のステロイド配糖体は、安全性に優れることが判る。
【００３５】
実施例３
抗癌作用
白血病細胞ＨＬ−６０を用いて抗癌作用を検討した。即ち、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭで前培養したＨＬ−６０細胞を１０6 個培養皿に入れ、これに各種濃度で薬物を含有するように調整した１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭを加え、２時間５％炭酸ガス混合ガス気流下、３７℃で２時間インキュベートした。その後、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭで２回洗浄した後７日間この培地で混合ガス気流下培養し、生きている細胞を染色し、５０％の細胞が死滅する濃度（ＩＣ50値）を求めた。結果は、化合物Ａが０．００９２μＭ、陽性対照のエトポシドが０．２５μＭであった。本発明のステロイド配糖体は優れた抗癌作用を有していることが判る。
【００３６】
実施例４
免疫抑制作用
ＣＤ４レセプターを有するＴ細胞由来の培養細胞ＭＯＬＴ−４細胞を用いて免疫抑制作用を検討した。即ち、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭで前培養したＭＯＬＴ−４細胞を１０6 個培養皿に入れ、これに各種濃度で薬物を含有するように調整した１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭを加え、２時間５％炭酸ガス混合ガス気流下３７℃で２時間インキュベートした。その後、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭで２回洗浄した後７日間この培地で混合ガス気流下培養し、生きている細胞を染色し、５０％の細胞が死滅する濃度（ＩＣ50値）を求めた。結果は、化合物Ａが０．０００３２μＭ、ポジティブコントロールに用いたメトトレキセートが０．０５４μＭであった。本発明のステロイド配糖体は優れた免疫抑制作用を有していることが判る。
【００３７】
実施例５
免疫抑制作用
ヒト末梢血リンパ球を用いて免疫抑制作用を検討した。即ち、ヒトから採血した末梢血にＥＤＴＡを添加した後、モノポリ分離液に重層させ遠心分離しリンパ球を得た。このリンパ球を１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭで前培養した後、１０6個培養皿に入れ、これに各種濃度で薬物を含有するように調整した１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭを加え、２時間５％炭酸ガス混合ガス気流下、３７℃で２時間インキュベートした。その後、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭで２回洗浄した後７日間この培地で混合ガス気流下培養し、生きている細胞を染色し、５０％の細胞が死滅する濃度（ＩＣ50値）を求めた。尚、ポジティブコントロールにはサイクロスポリンを用いた。結果は、サイクロスポリンが０．００２５μＭに対して、化合物Ａが０．００２４μＭであった。本発明のステロイド配糖体は優れた免疫抑制作用を有していることが判る。