【事件の表示】
　特願２００５−１５２６６４「抗ＨＣＶ抗体検出方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１７年１０月　６日出願公開、特開２００５−２７４５８４〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯・本願発明
　本願は、平成８年５月７日に出願した特願平８−１１２４４２号の一部を平成１７年５月２５に新たな特許出願としたものであって、平成１９年７月６日付けで拒絶査定がされ、これに対し同年８月９日に拒絶査定不服審判の請求がされるとともに、同日付けで手続補正がなされたものである。その後、当審において、平成２１年４月１日付けで拒絶理由が通知され、その応答期間中の同年６月５日付けで手続補正がなされた。
　そして、本願の請求項１〜７に係る発明は、平成２１年６月５日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１〜７に記載された事項により特定されるとおりのものと認められ、その請求項１に係る発明は、以下のとおりである。（下線部は補正箇所を示す。）
「　　【請求項１】
合成ペプチドＨＣＶ抗原および遺伝子組み換えＨＣＶ抗原を
担持した固相を
検体試料中の
　抗
可能な
とキ
抗原、抗
可能な
および、
可能な
とキ
２
抗原を担持した
を用いて検体試料中の
　
　
第２　当審の拒絶理由
　一方、当審において、平成２１年４月１日付けで通知した拒絶の理由の概要は、以下のとおりである。
　
　この出願の下記の請求項に係る発明は、その出願前に日本国内又は外国において頒布された下記の刊行物に記載された発明に基いて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　
　　　　　　　　　　　　　　　　　記
　
引用刊行物１．特開平　７−１９８７２３号公報
引用刊行物２．特開平　４−　５４１９７号公報
引用刊行物３．特開平　５−３０７０４０号公報
引用刊行物４．特開平　３−１９０８９８号公報
引用刊行物５．特表平　５−５０８２１９号公報
　
　
第３　引用刊行物記載の発明
（１）本願の原出願の出願前に頒布された刊行物である特開平７−１９８７２３号公報（以下、「引用例１」という。）には、下記の記載がある。
［１ａ］「【特許請求の範囲】
【請求項１】  Ｃ型肝炎ウイルスの抗原タンパク質とキャリアタンパク質とを連結した融合タンパク質を親水性粒子に結合して成ることを特徴とするＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。
【請求項２】  さらにＣ型肝炎ウイルスの抗原タンパク質がキャリアタンパク質を介さずに結合している請求項１記載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。」
［１ｂ］「【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、かかる従来技術のもとでより感度の高いＨＣＶ診断用凝集試薬を得るべく鋭意検討した結果、ＨＣＶの抗原タンパク質とキャリアタンパク質とを連結した融合タンパク質を親水性粒子に結合すると、高感度にＨＣＶ感染症患者血清中の抗体を検出できることを見いだし、本発明を完成するに至った。」
［１ｃ］「【０００５】本発明で用いる抗原タンパク質は、公知のＨＣＶの構造タンパク質や非構造タンパク質である。構造タンパク質としては、エンベロープタンパク質、コアタンパク質など、非構造タンパク質としては、ＮＳ１タンパク質、ＮＳ２タンパク質、ＮＳ３タンパク質、ＮＳ４タンパク質、ＮＳ５タンパク質やこれらのタンパク質などのほか、またこれらのタンパク質の少なくともひとつのエピトープを含む８以上、好ましくは４０以上のアミノ酸からなるポリペプチド（以下、単にエピトープという）なども例示される。このようなタンパク質やエピトープの具体的な例は、ＷＯ９０／１１０６９号、ＷＯ９０／１４４３６号、特開平４−００４８８０号、特公平５−８１６００号、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
１７
１８
［１ｄ］「【０００７】本発明で使用する融合タンパク質は、上述の抗原タンパク質のＮ末端側に、更にキャリアタンパク質を連結させたものである。キャリアタンパク質は、親水性ポリペプチドものであれば特に限定されるものではないが、好ましくは分子量２，０００〜５００，０００、より好ましくは１０，０００〜１２０，０００のものであり、このようなタンパク質の具体例としては、マルトース結合タンパク質（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、
２５９
６７
［１ｅ］「【０００８】本発明で使用される融合タンパク質は、如何なる方法により得られたものであってもよいが、例えば以下に述べるような遺伝子工学的手法による常法により得ることができる。ＨＣＶ由来の抗原タンパク質およびキャリアタンパク質が連結している融合タンパク質を得るためには、融合タンパク質をコードするＤＮＡ（以下、融合タンパク質ＤＮＡという）を有するプラスミドで大腸菌などを形質転換し、常法に従って培養し、目的とするタンパク質を発現させ、単離すればよい。」
［１ｆ］「【００１３】粒子に結合させるタンパク質は、上述の融合タンパク質のみである必要はなく、ＨＣＶの構造タンパク質や非構造タンパク質と併用してもよい。ここで用いられる構造タンパク質や非構造タンパク質（以下、ＨＣＶタンパク質という）としては、先に例示したものが挙げられ、これらはキャリアタンパク質と連結している必要はない。これらのタンパク質は単独のタンパク質として用いるほか、複数のＨＣＶタンパク質を連結したＨＣＶ複合抗原タンパク質として用いてもよい。また、ＨＣＶタンパク質は、融合タンパク質を構成している抗原タンパク質と同じ種類のタンパク質であっても、異なる種類のタンパク質であってもよい。粒子に結合させる融合タンパク質とＨＣＶタンパク質の混合比は、１／１００〜１００／１、好ましくは１／１０〜１０／１である。あるタンパク質のみが多量にある状態では、非特異的反応が起こり、診断薬としての検出感度が低下するので好ましくない。」
［１ｇ］「【００２３】（参考例３）コアタンパク質の製造
特開平５−７８３９５号公報実施例１に記載されたＮＡＮＢＶ抗原タンパク質をコードする遺伝子を有するプラスミドｐＩＫ４ＣＥを制限酵素ＮｄｅＩとＣｌａＩとで切断後、クレノウフラグメントで平滑末端とし、０．３７ＫｂｐのＤＮＡ断片をアガロースゲルから回収した。このＤＮＡ断片は、ＨＣＶのコアタンパク質のＮ末端側１２３アミノ酸分をコードするものであり、特開平５−７８３９５号公報の配列番号１に記載された配列の第１番目から１２３番目のアミノ酸配列に相当する塩基配列である。プラスミドｐＫＫ２２３−３（ファルマシア社製）を制限酵素ＥｃｏＲＩで切断後、クレノウフラグメントで平滑末端とし、先に回収した０．３７ｋｂｐのＤＮＡ断片をＤＮＡライゲースを用いて連結し、得られたプラスミドで大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換し、出現したアンピシリン耐性の形質転換菌から、０．３７ＫｂｐのＤＮＡ断片が正方向に挿入されているプラスミドｐＫＫＣｌａを有するコロニーを選択した。プラスミドｐＫＫＣｌａは、制限酵素ＫｐｎＩとＨｉｎｄＩＩＩとで切断したとき、約０．３ＫｂｐのＤＮＡ断片が出現するプラスミドである。
【００２４】ついで５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬＢ培地８ｌに、プラスミドｐＫＫＣｌａで形質転換した大腸菌ＪＭ１０９’を６６０ｎｍでの濁度が０．１５となるように植菌した。これを３７℃で２時間振とう培養した後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ（−）−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７℃で２時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分離によって２０ｇの湿菌体を得た。これを６０ｍｌのＰＢＳ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、０．８５％塩化ナトリウム）に懸濁後、フレンチプレスで破砕し、１５０００×ｇ、２０分間遠心分離し、沈殿を集めた。次にこの沈殿を６０ｍｌの可溶化緩衝液（７Ｍ尿素、２０ｍＭジスレイトール、１％トリトンＸ−１００、５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０））に懸濁し、超音波破砕機で分散後、室温で一晩振とうさせ、可溶画分として粗タンパク質液を得た。この粗タンパク質液をＣＭ−トーヨーパル（東ソー社製）のカラム（直径２ｃｍ×高さ１６ｃｍ）に吸着させ、６Ｍ尿素存在下で、０．２Ｍ−０．８Ｍ塩化ナトリウム水溶液の濃度勾配（４００ｍｌ）で溶出を行い、純度が９９％以上のＨＣＶのコアタンパク質を約１０ｍｇ得た。これをＰＢＳで透析した後、コアタンパク質の濃度をローリー法で測定したところ、１．５ｍｇ／ｍｌであった。この液を抗原原液とした。」
［１ｈ］「【００２５】（参考例４）ＭＢＰとＮＳ３タンパク質とが連結した融合タンパク質の製造
参考例１で得たプラスミドｐＩＢ（４９８９ｂｐ）をテンプレートとしてプライマー（５）5' GTTGCGGAATTCGTGGACTTCとプライマー（６）5' GCGAAGCTTTTAGGACTGTCTGAとを用いて常法によりＰＣＲ法を行い、８３４ｂｐのＤＮＡ断片を得た。参考例２と同様にｐＭＡＬ−ｃＲＩを制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩとで消化して、ＭＢＰ  ＤＮＡを含む６１０１ｂｐの断片を得た。先に得られた８３４ｂｐのＤＮＡの断片を制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、ＭＢＰ  ＤＮＡを含む６１０１ｂｐのＤＮＡ断片とＤＮＡライゲースにより連結し、得られたプラスミドをｐＩＢ３と命名し、このプラスミドｐＩＢ３で大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。ついで５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬＢ培地８ｌに、この形質転換菌を６６０ｎｍでの濁度が０．１５となるように植菌した。これを３７℃で２時間振とう培養した後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ（−）−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７℃で２時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分離によって２５ｇの湿菌体を得た。これを７５ｍｌのＰＢＳ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、０．８５％塩化ナトリウム）に懸濁後、フレンチプレスで破砕し、２００００×ｇ、３０分間遠心分離し、上清を得た。この上清をＤＥＡＥ−トヨパール（東ソー社製）のカラム（２．５ｃｍ×３６ｃｍ）に吸着させ、０−０．６Ｍ塩化ナトリウム水溶液の濃度勾配（６００ｍｌ）で溶出を行い、目的とするタンパク質ＭＡＬ−ＩＢ３（ＭＢＰのＣ末端側にＮＳ３タンパク質が連結している融合タンパク質）を得た。更に、アミロースレジン（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社製）のカラム（直径２．５ｃｍ×高さ１５ｃｍ）に吸着させ、１０ｍＭのマルトース（ＰＢＳ溶液）で溶出を行い、純度が９９％以上のタンパク質ＭＡＬ−ＩＢ３（７５ｍｇ）を得た。タンパク質溶液の濃度をローリー法で測定したところ、２．５ｍｇ／ｍｌであった。この液を抗原原液とした。
【００２６】（参考例５）ＮＳ３タンパク質の製造
参考例４で得られた抗原原液３０ｍｌ（ＭＡＬ−ＩＢ３融合タンパク質量は７５ｍｇ）をファクターＸａ溶液（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社製）を２５０μｌと１Ｍの塩化カルシウム水溶液１２０μｌを加え、室温で一晩静置した。その後、これに塩化ナトリウムを溶解させて塩化ナトリウムの濃度が２Ｍとなるように調製した。これをフェニル−トヨパール（東ソー社製）のカラム（直径１．５ｃｍ×高さ１０ｃｍ）に吸着させた。２Ｍ−０Ｍ塩化ナトリウムの濃度勾配（１００ｍｌ）で溶出を行い、純度９９％以上のタンパク質ＩＢ３を得た。このタンパク質溶液をローリー法で測定したところ、１．８ｍｌ／ｍｌであった。この液を抗原原液とした。」
［１ｉ］「【００２７】（参考例６）ＭＢＰとＮＳ４タンパク質とが連結した融合タンパク質の製造
参考例１で得たプラスミドｐＩＢ（４９８９ｂｐ）をテンプレートとしてプライマー（７）5' CTCACTGAATTCGATGCCCACとプライマー（８）5' ACGCGCCGAAGCTTAGTCGCTとを用いて常法によりＰＣＲ法を行い、１１３７ｂｐのＤＮＡ断片を得た。参考例２と同様にｐＭＡＬ−ｃＲＩを制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩとで消化して、ＭＢＰ  ＤＮＡを含む６１０１ｂｐの断片を得た。先に得られた１１３７ｂｐのＤＮＡの断片を制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、ＭＢＰ  ＤＮＡを含む６１０１ｂｐのＤＮＡ断片とＤＮＡライゲースにより連結し、得られたプラスミドをｐＩＢ４と命名し、このプラスミドｐＩＢ４で大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。ついで５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬＢ培地７．５ｌに、この形質転換菌を６６０ｎｍでの濁度が０．１５となるように植菌した。これを３７℃で２時間振とう培養した後、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ（−）−チオガラクトピラノシドで誘導し、さらに３７℃で２時間振とう培養した。１５，０００×ｇの遠心分離によって２０ｇの湿菌体を得た。これを６０ｍｌのＰＢＳ（１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、０．８５％塩化ナトリウム）に懸濁後、フレンチプレスで破砕し、２５０００×ｇ、６０分間遠心分離し、沈殿を集めた。この沈殿を４０ｍｌの可溶化緩衝液（７Ｍ尿素、２０ｍＭジスレイトール、１％トリトンＸ−１００、５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０））に懸濁し、超音波破砕機で分散後、室温で一晩振とうさせ、可溶画分として粗タンパク質液を得た。この粗タンパク質液から透析で尿素を除去した後、アミロースレジン（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社製）のカラム（直径２．５ｃｍ×高さ１５ｃｍ）に吸着させ、１０ｍＭのマルトース（ＰＢＳ溶液）で溶出を行い、純度が９９％以上のタンパク質ＭＡＬ−ＩＢ４（７０ｍｇ）を得た。タンパク質溶液の濃度をローリー法で測定したところ、１．５ｍｇ／ｍｌであった。この液を抗原原液とした。」
［１ｊ］「【００２８】（参考例７）アミノ酸ポリマー粒子の製造
等電点（ｐＩ）が８．８のゼラチンを水に懸濁させ、加温して溶解させた。この液を水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ８．５に調整し、水を添加して５％のゼラチン溶液を得た。また、アラビアゴムを水に溶解させ、濾過することにより４％のアラビアゴム水溶液を得た。得られた２つの水溶液を４０℃に加温して、それぞれ１０ｍｌづつ混合し、４０℃に加温した４０％メタノール水溶液６０ｍｌに注ぎ入れてよく攪拌した。続いて酢酸を滴下して、ｐＨを約４にまで下げて粒子を形成させた。得られた粒子分散液を氷冷し、０．５ｇのグルタルアルデヒドを加えて、よく攪拌した。１昼夜、４℃で静置した後、９００×ｇで１０分間遠心して、粒子を回収した。回収した粒子は、遠心操作で充分水で洗浄した後、４％ホルムアルデヒド水溶液に分散し、４℃で５日間静置した。これを９００×ｇで遠心して、粒子を回収し、遠心操作で水で洗浄した。このようにして得られた粒子の数平均粒子径は約４μｍであった。」
［１ｋ］「【００２９】（実施例１）抗原感作粒子Ａの調製
参考例７で得た粒子（以下、担体粒子という）に、水を加えて１０％分散液を調整し、参考例２で得た抗原原液に、リン酸緩衝液を加えて５０μｇ／ｍｌに希釈した希釈液を調整した。１０％担体粒子分散液０．５ｍｌに抗原の５０μｇ／ｍｌ希釈液１ｍｌと５０ｍｇ／ｍｌに調整した１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミド水溶液０．０５ｍｌを加えた。これを３７℃で１．５時間振盪した後、先に調製した粒子懸濁用液（０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）・１％正常ウサギ血清・０．０５％ＮａＮ3）２ｍｌで３回洗浄し、最後に４ｍｌの粒子懸濁用液に懸濁して１．２５％の抗原感作粒子Ａを得た。」
［１ｌ］「【００３２】（実施例４）抗原感作粒子Ｄの調製
参考例３、５および６で得た抗原原液をそれぞれ２０、５、１０μｇ／ｍｌつづ用いる以外は実施例１と同様の方法により１．２５％の抗原感作粒子Ｄを得た。」
［１ｍ］「【００３３】（試験例）マイクロタイター法によるＨＣＶ感染患者血清との反応性の検討
診断薬粒子として実施例１で得た感作粒子Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤとオーソ・ダイアグノスティック・システムズ社製の商品名「オーソ  ＨＣＶ  Ａｂ  ＰＡテストＩＩ」の粒子（コアタンパク質、ＮＳ３タンパク質、ＮＳ４タンパク質の一部から成るＨＣＶ抗原タンパク質をゼラチン粒子に結合させているもの；以下、表を含めて「市販品」という）を用い、オーソ・ダイアグノスティック・システムズ社製のオーソ  ＨＣＶ  Ａｂ  ＰＡテストＩＩの定量法マニュアルに従って、それぞれの粒子を用いた場合のマイクロタイター法による試験を行った。表中＋は凝集が観察されたもの、−は凝集が観察されなかったものである。  結果は表１に示す。」
　上記［１ａ］〜［１ｄ］、［１ｇ］〜［１ｍ］の記載によれば、引用例１には、
「担体粒子と、形質転換した大腸菌から得られるコアタンパク質、形質転換した大腸菌から得られる融合タンパク質をファクターＸａ溶液で処理して得られるＮＳ３タンパク質および、形質転換した大腸菌から得られるキャリアタンパク質ＭＢＰとＮＳ４タンパク質とが連結した融合タンパク質を用いて抗原感作粒子Ｄを得て、ＨＣＶ感染症患者血清中の抗体を検出し、コアタンパク質が構造タンパク質であり、ＮＳ３タンパク質およびＮＳ４タンパク質が非構造タンパク質である、ＨＣＶ感染患者血清との反応性の試験方法。」の発明（以下、「引用例１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
（２）本願の原出願の出願前に頒布された刊行物である特開平４−５４１９７号公報（以下、「引用例２」という。）には、下記の記載がある。
［２ａ］「
産業上の利用分野
　本発明はＡ型肝炎でもＢ型肝炎でもない血清肝炎、特にＣ型肝炎の原因ウィルス（ＨＣＶ）に関連する合成ペプチド抗原、及びＨＣＶに対する抗体の検出用診断試薬に関する。」（第２頁右上欄第５〜９行）
［２ｂ］「
発明の目的
　本発明は、ＨＣＶ感染検出診断において非常に優れた特異・選択性でかつ高感度で使用できる、抗原性ＨＣＶタンパクに対応するいくつかの新規合成ペプチドを提供すること、また、該新規合成ペプチドあるいはその一部を直接使用する抗ＨＣＶ抗体検出方法を提供することを目的とする。」（第３頁左下欄第７〜１３行）
［２ｃ］「　なお、上述の実施態様は主として、化学的に合成したペプチドのみを使用した場合について記したが、これに限定されるものではなく、当該合成ペプチドと遺伝子組換え技術によって調製された抗原ペプチドを適宜組み合わせることによっても、さらに当該ペプチドの任意の一部を用いた場合でも好適な抗ＨＣＶ抗体検出系を構築することが可能である。」（第５頁左下欄第１行〜同頁右下欄第４行）
［２ｄ］「実施例２　
　C825Ｉ遺伝子をλgtl1へ挿入したファージ、λgtl1−C825（特願平　１−２３８８４８）をEcoRIで切断してC825遺伝子を取り出し、これをベータガラクトシダーゼ融合蛋白発現用プラスミド　puEX ２（アマシャム社製）に組み込み、ベータガラクトシダーゼC825（βgal C825）融合蛋白発現用プラスミドを作製した。
　これを大腸菌、ｐｋｋ322へ感染させて形質転換し、培養を行なった。遠心法により、菌体を回収し、卵白リゾチームを200μｇ／ｍｌになるように加え、４℃で１６時間反応させ、菌体を消化した。遠心により、上清を除きペレットを回収した。このペレットを　0.05％Triton-X100　ＰＢＳ溶液で混濁し、遠心してペレットを洗浄した。この洗浄操作を３回繰り返した。最後に、ＰＢＳで洗浄し、ペレットを回収した。
　ペレット１ｇを８Ｍ　尿素，２０ｍＭ　Tris−HCl，300ｍＭ　NaCl，２ｍＭ　ＤＴＴ溶液１００ｍｌに溶解し、遠心してSephacrylS-300（５cmφ　ｘ　89.8　cm h）カラムへ通液した。流出各分を分画し、各画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによってチェックした。β　galC825の精製画分をプールし、ＰＢＳへ透析して12.6mgの精製βgalC825を回収した。
　精製βgalC825　１μｇ／ｍｌ、合成ペプチド　C100J-29mer １μｇ／ｍｌ　ＰＢＳ溶液を調整し、実施例１と同様に固相化し、（βgal825.C100J-29mer）ＥＬＩＳＡ系を作製した。このＥＬＩＳＡ系で正常人344例、肝炎患者検体286例を実施例１と同様に測定した。正常人検体測定の結果カットオフ値を0.528と算定した。肝炎患者検体の測定結果を第４表に示す。」（第７頁右上欄第１行〜同頁右下欄第３行）
　
（３）本願の原出願の出願前に頒布された刊行物である特開平５−３０７０４０号公報（以下、「引用例３」という。）には、下記の記載がある。
［３ａ］「【０００９】本発明は、このような従来技術の実状に鑑み、ペプチドのアミノ酸数及びペプチドの種類が少ないにもかかわらず、特異性を犠牲にすることなく、ＨＣＶ抗体検出率を向上させ得る実用性の高い検査用試薬及び検査法を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】かかる目的は、次の手段により達成させる。即ち、本発明は、
配列１：Arg Xaa Gly Pro Arg Leu Gly Arg Arg Pro
（Xaaは任意のアミノ酸を示す。）を含むペプチドの１種あるいは複数種、または、更に次の配列２および／または３のペプチドを加えた複数のペプチド、を含むＣ型肝炎検査用試薬である。」
［３ｂ］「【００１７】本発明におけるペプチドは、ペプチド分子をそのまま抗原抗体反応に利用しても良いが、予めスペーサ分子や担体蛋白を結合させておくことによって、より反応性に優れるものとすることが可能である。例えば、スルフォサクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート（Sulfosuccinimidyl-4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate、以下Sulfo-SMCCと略す）、スルフォサクシンイミジル-6-[3-(2-ピリジルジチオ)プロピオンアミド]ヘキサノエート（Sulufosuccinimidyl-6-[3-(2-pyridyldithio)propionamido]hexanoate、以下Sulfo-LC-SPDPと略す）、N-(ε-マレイミドカプロイロキシ)サクシンイミド（N-(ε-maleimidocaproiloxy)succinimido、以下EMCSと略す）等のスペーサーをペプチドのＮ末端に共有結合させれば、抗体との反応性は向上する。また、このスペーサーを介してヒト血清アルブミン（以下ＨＳＡと略す）やウシ血清アルブミン（以下ＢＳＡと略す）等の不活性な担体蛋白を結合させると、更に良い結果が得られる。担体蛋白を結合させるときには、ペプチド側のスペーサーとは別に、担体蛋白側にもスペーサーを導入しておいても良い。担体蛋白として用いる蛋白は、非特異的な反応をできるだけ小さくするために、実際に試料とする動物に由来する蛋白を用いると良い。つまり、ヒトの血清を試料とするときは、ＨＳＡを用いるようにするのである。」
［３ｃ］「【００３１】
【表２】（略）
（４）試薬の調製２
（１）で合成したペプチドに各種架橋剤を導入したものを抗原として試薬を調製した。
１　各種架橋剤の合成ペプチドへの導入
(A)Sulfo-SMCCの合成ペプチドへの導入
Sulfo-SMCC（ＰＩＥＲＣＥ製）０．１３２mgと合成ペプチド（配列１ａ７または２）０．５mgを１００mMリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解後に混合し、液量を０．１mlに調整した後、２５℃で２時間反応させ１Mグリシン１０μlを加えて反応を停止した。
(B)EMCSの合成ペプチドへの導入
EMCS（同仁化学製）０．１mgをジメチルホルムアミド１０μlに溶解し、合成ペプチド（配列１ａ７または２）０．５mgととともに１００mMリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解後に混合し、液量を０．１mlに調整した後、２５℃で２時間反応させ１Mグリシン１０μlを加えて反応を停止した。
(C)Sulfo-LC-SPDPの合成ペプチドへの導入
Sulfo-LC-SPDP（ＰＩＥＲＣＥ製）０．１５mgと合成ペプチド（配列１ａ７または２）０．５mgを１００mMリン酸緩衝液ｐＨ７．５に溶解後に混合して、液量を０．１mlに調整した後、２５℃で２時間反応させ１Mグリシン１０μlを加えて反応を停止した。
(D)DSSの合成ペプチドへの導入
DSS（ＰＩＥＲＣＲ製）０．２mgをジメチルホルムアミド５０μlに溶解し、合成ペプチド（配列１ａ７または２）０．５mgとともに１００mMリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．１５mlに添加して、４℃で８時間かくはんして反応させ１Mグリシン１０μlを加えて反応を停止した。
２　固相化抗原の作成
（２）の方法に準じて前記(A)〜(D)の架橋剤を導入した各抗原の固相化プレートを作成した。」
［３ｄ］「【００３５】
【表５】（略）
（６）試薬の調製３
（４）で各種架橋剤を導入したペプチドに、更に担体蛋白を結合させたものを抗原として試薬を調製した。
１　Sulfo-SMCC架橋剤導入ペプチド抗原の担体蛋白への結合
ＢＳＡ（ＳＩＧＭＡ製）またはＨＳＡ（ＳＩＧＭＡ製）１０mgを６m尿素を含む１００mMＥＤＴＡ溶液２mlに溶解した。n-ブタノール０．２mlとNaBH4２０mgを加え、２５℃で３０分間かくはんした後に１００mMNaH2PO4１mlとアセトン０．４mlを滴下して還元ＢＳＡ溶液、あるいは還元ＨＳＡ溶液とした。この溶液０．３mlに（４）におけるグリシンで反応停止する前の反応液（Sulfo-SMCC架橋剤導入ペプチド抗原：（４）１（Ａ）参照）（０．１ml）を加え、４℃で８時間かくはんして反応させた後５０mMのN-エチルマレイミド５０μlを添加して反応を停止させた。更にＳＥＰＨＡＤＥＸ  Ｇ−５０（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ製）で精製して、担体蛋白に結合したSlufo-SMCC架橋剤導入合成ペプチド（以下ＢＳＡ結合ペプチド、ＨＳＡ結合ペプチドと略す）を得た。
２　固相化抗原の作成
（２）の方法に準じてＢＳＡ結合ペプチド、およびＨＳＡ結合ペプチドの固相化プレートを作成した。
【００３６】（７）ＨＣＶ抗体の検出３
（６）で作成した固相化プレートを用い、（２）の方法に準じてＢ−１による抗体測定が陽性となったＨＣＶ患者血清（５４例）中の抗体を測定した。結果は表６に示す。表６に示すとおり、ＢＳＡ結合ペプチド、ＨＳＡ結合ペプチドとも同じ成績であった。」
［３ｅ］「【００５９】
【発明の効果】実施例の結果からも明らかなように、本発明によるＨＣＶ抗体の検出試薬は、検出率と特異性に優れる。また本発明による配列１で示されるペプチドは、構成アミノ酸が少ないため化学合成によって得られ、遺伝子組み換えによって製造されたペプチド抗原に多い非特異反応を除くことができる。しかも１〜２種類程度の少ないペプチドで十分な検出率を実現できるので経済的にも有利である。更に本発明によるペプチドは、Slufo-SMCCに代表される架橋剤を導入することで、もとのペプチドに比べてＨＣＶコア抗体に対する反応性が向上する。また導入した架橋剤を介してＨＳＡのような血清蛋白を担体蛋白として結合させれば、良好な反応性が得られるとともに非特異反応を抑制することが可能となる。以上のように、本発明によればＨＣＶ感染を早期に、しかも正確に検査することが可能となる。」
　
（４）本願の原出願の出願前に頒布された刊行物である特開平　３−１９０８９８号公報（以下、「引用例４」という。）には、下記の記載がある。
［４ａ］「〔産業上の利用分野〕
　本発明は、非Ａ非Ｂ型肝炎の起因ウィルスとして知られているＣ型肝炎ウィルス（以下ＨＣＶとする）と共通の抗原決定基を有する合成ポリペプチド及びそれを用いたＨＣＶ抗体測定試薬に関するものである。」（第２頁左上欄第１６行〜同頁右上欄第１行）
［４ｂ］「　本発明は、ＨＣＶ由来の抗原と共通する抗原決定基を有するポリペプチドをペプチド合成により得られるようにして安価に大量生産可能とし、しかも優れたＨＣＶ抗原特異性を付与することにより高感度なＨＣＶ抗体測定系を確立することを目的とする。」（第２頁右下欄第２０行〜第３頁左上欄第５行）
［４ｃ］「感作方法としては、前述と同様に物理的吸着法、或はグルタルアルデヒド、水溶性カルボジイミド、タンニン酸等を用いる化学的結合法がある。又、感作する場合、ヘキサメチレンジアミン等の２官能性スペーサを介して結合してもよく、前記合成ポリペプチドを牛血清アルブミン等の蛋白質に結合したものを前記固層に固定してもよい。」（第３頁右下欄第１４行〜第４頁左上欄第１行）
［４ｄ］「実施例１
　製造例１て合成したポリペプチドの溶液（５０μｇ／ｍｌ）をマイクロタイター用反応プレートのウエルに各々１００μｌ注入し、４℃で一夜静置した後0.05％（Ｖ／Ｖ）ツイーン２０−ＰＢＳ（食塩加リン酸緩衝液pH6.4）にて洗浄する。各ウェルに２％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ−ＰＢＳ（pH6.4）を各々加え４℃で保存する。
　前記プレートを0.05％ツイーン２０−ＰＢＳ（pH6.4）で１回洗浄し、被験血清を100倍希釈した検体を各ウエルに５０μｌ注入し、室温で１時間静置し、被験血清中の抗ＨＣＶ抗体を固定化された合成ポリペプチドと反応させる。
　0.05％ツイーン２０−ＰＢＳ（pH6.4）で２回洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体又は西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgM抗体を各ウエルに50μｌ加え、室温で１時間静置して前記固定化合成ポリペプチドに結合したＨＣＶ抗体と反応させる。
　0.05％ツイーン２０−ＰＢＳ（pH6.4）で３回洗浄し、基質溶液（オルトフェニレンジアミン、Ｈ２Ｏ２）を各ウエルに４０μｌ加え、室温で１０分間静置後、１Ｎ硫酸溶液を200μｌ加え反応を停止した後490nmにおける吸光度を測定する。
　ＨＣＶ抗体陰性の血清検体の吸光度は0.01〜0.05と著しく低く、通常見られるプレートへのIgG、IgM又は標識抗体の非特異的吸着に基づくバックグラウンドの吸光度の上昇は生じなかった。
　ＨＣＶ抗体陽性の血清検体の吸光度はその抗体価に応じて鋭敏に変化し、バックグラウンドの吸光度が低いことからカットオフレベルが明瞭であり、ＨＣＶ抗体弱陽性例の検出が可能である。
　ＨＣＶ抗体抗体性陽性例は吸光度も高く、測定レンジが広い。」（第５頁右上欄第１行〜同頁左下欄第１８行）
［４ｅ］「〔発明の効果〕
　以上述べたように、本発明の合成ポリペプチド及びそれを用いたＨＣＶ抗体測定試薬によれは、下記の如き種々の優れた効果が得られる。
１　ＨＣＶと共通の抗原決定基を有するポリペプチドがペプチド合成により得られるので、従来ＨＣＶ由来の抗原を遺伝子及び細胞工学的に産生し、多大な設備と労力をかけて精製していたのに対し、高純度なポリペプチドを大量にしかも安価に製造することができる。」（第７頁左下欄第１７行〜同頁右下欄第７行）
　
　
第４　対比
　本願発明と引用例１発明とを対比する。
（ア）引用例１発明の「ＨＣＶ感染患者血清との反応性の試験方法」は、「ＨＣＶ感染症患者血清中の抗体を検出」するものであるから、本願発明の「検体試料中の抗ＨＣＶ抗体を検出する抗ＨＣＶ抗体検出方法」に相当する。
（イ）引用例１発明の「形質転換した大腸菌から得られるコアタンパク質」と本願発明の「抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な第１の合成ペプチドＨＣＶ抗原とキャリアータンパク質とからなる第１の複合抗原」とは、「抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な第１のペプチドＨＣＶ抗原からなる第１の抗原」である点で共通する。
（ウ）引用例１発明の「形質転換した大腸菌から得られる融合タンパク質をファクターＸａ溶液で処理して得られるＮＳ３タンパク質」は本願発明の「抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な遺伝子組み換えＨＣＶ抗原」に相当する。
（エ）引用例１発明の「形質転換した大腸菌から得られるキャリアタンパク質ＭＢＰとＮＳ４タンパク質とが連結した融合タンパク質」と本願発明の「抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な第２の合成ペプチドＨＣＶ抗原とキャリアータンパク質とからなる第２の複合抗原」とは、「抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な第２のペプチドＨＣＶ抗原とキャリアータンパク質とからなる第２の抗原」である点で共通する。
（オ）引用例１発明の「抗原感作粒子Ｄ」は、本願発明の「担持した固相」に相当する。
（カ）引用例１発明の「ＨＣＶ感染症患者血清中の抗体を検出し」は、本願発明の「検体試料中の抗ＨＣＶ抗体の検出を行い」に相当する。
（キ）引用例１発明の「コアタンパク質が構造タンパク質であり、ＮＳ３タンパク質およびＮＳ４タンパク質が非構造タンパク質である」と本願発明の「前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原がＨＣＶの非構造領域タンパク質であり、前記第１合成ペプチドＨＣＶ抗原がＨＣＶの構造領域タンパク質であり、前記第２合成ペプチドＨＣＶ抗原が前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原とは異なるＨＣＶの非構造領域タンパク質である」とは、「前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原がＨＣＶの非構造領域タンパク質であり、前記第１ペプチドＨＣＶ抗原がＨＣＶの構造領域タンパク質であり、前記第２ペプチドＨＣＶ抗原が前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原とは異なるＨＣＶの非構造領域タンパク質である」点で共通する。
　したがって、両者は、
「遺伝子組み換えＨＣＶ抗原を担持した固相を用いて、検体試料中の抗ＨＣＶ抗体を検出する抗ＨＣＶ抗体検出方法であって、抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な第１のペプチドＨＣＶ抗原からなる第１の抗原、抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な遺伝子組み換えＨＣＶ抗原、および、抗ＨＣＶ抗体が抗原抗体反応により結合可能な第２のペプチドＨＣＶ抗原とキャリアータンパク質とからなる第２の抗原を担持した固相を用いて検体試料中の抗ＨＣＶ抗体の検出を行い、前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原がＨＣＶの非構造領域タンパク質であり、前記第１ペプチドＨＣＶ抗原がＨＣＶの構造領域タンパク質であり、前記第２ペプチドＨＣＶ抗原が前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原とは異なるＨＣＶの非構造領域タンパク質である抗ＨＣＶ抗体検出方法。」である点で一致し、以下の点で相違している。
［相違点１］「第１のペプチドＨＣＶ抗原」が、本願発明では合成ペプチドＨＣＶ抗原でありキャリアータンパク質とからなる複合抗原であるのに対し、引用例１発明では遺伝子組み換えＨＣＶ抗原である点。
［相違点２］「第２のペプチドＨＣＶ抗原」が、本願発明では合成ペプチドＨＣＶ抗原であり複合抗原であるのに対し、引用例１発明では遺伝子組み換えＨＣＶ抗原であり融合タンパク質である点。
　
　
第５　当審の判断
　上記相違点について検討する。
［相違点１］について
　Ｃ型肝炎の検出において、合成抗原を用いることは周知である。例えば、引用例２の［２ｄ］には、遺伝子組み換えにより得られたβgalC825と合成ペプチドC100J-29merとを組み合わせて肝炎患者検体を測定したことが記載されている。また、引用例３の［３ｃ］および［３ｄ］には、合成ペプチド抗原を担体蛋白へ結合させ、ＨＣＶ患者血清中の抗体を測定したことが記載されており、［３ｅ］には、構成アミノ酸が少ないため化学合成によって得られ、遺伝子組み換えによって製造されたペプチド抗原に多い非特異反応を除くことができることも記載されている。さらに、引用例４の［４ｄ］には、合成したポリペプチドを用いて被験血清中の抗ＨＣＶ抗体を測定することが記載され、［４ｅ］には、ペプチド合成により得られるので、大量にしかも安価に製造することができることも記載されている。そして、引用例２の［２ｃ］には、「合成ペプチドと遺伝子組換え技術によって調製された抗原ペプチドを適宜組み合わせることによっても、さらに当該ペプチドの任意の一部を用いた場合でも好適な抗ＨＣＶ抗体検出系を構築することが可能である」と記載されている。以上のとおり、合成抗原および遺伝子組み換え抗原を適宜選択して用いることは周知技術であるといえる。
　また、Ｃ型肝炎の検出において、抗原をキャリアータンパク質との複合抗原として使用すること、および、キャリアータンパク質にはスペーサー効果を高めることにより反応性を高める効果があることも周知である。例えば、引用例３の［３ｄ］には、ペプチド抗原とＢＳＡまたはＨＳＡを結合させたＢＳＡ結合ペプチドおよびＨＳＡ結合ペプチドを抗体測定に用いたことが記載されており、［３ｅ］に良好な反応性が得られるとともに非特異反応を抑制することが可能となることも記載されている。また、引用例４の［４ｃ］には、ＨＣＶ抗体測定試薬に関し、合成ペプチドを牛血清アルブミン等のタンパク質に結合したものを固相に固定してもよいことが記載されている。そして、引用例１の［１ｄ］には、キャリアタンパク質を抗原タンパク質に結合させることにより、「キャリアタンパク質のスペーサー効果により抗原が粒子表面に呈示し易くなり抗体との反応性を高めることができる」と記載されており、［１ｆ］には、粒子に結合させるタンパク質は、融合タンパク質のみである必要はなく、ＨＣＶの構造タンパク質や非構造タンパク質と併用してもよく、これらはキャリアタンパク質と結合している必要はないことが記載されている。また、引用例３の［３ｂ］にも、ペプチド分子をそのまま抗原抗体反応に利用しても良いが、予めスペーサ分子や担体蛋白を結合させておくことによって、より反応性に優れるものとすることが可能であることが記載されている。以上のとおり、反応性を考慮して、抗原をキャリアータンパク質との複合抗原として用いることも周知であるといえる。
　したがって、引用例１発明において、合成ペプチドと遺伝子組み換えペプチドを組み合わせることが可能という示唆に基づいて、コアタンパク質を非特異反応が少なく安価に大量生産可能な合成ペプチドとし、反応性を高めるためにキャリアータンパク質との複合抗原として用いることは、当業者が容易に想到しうることである。
　
［相違点２］について
　Ｃ型肝炎の検出において、合成抗原および遺伝子組み換え抗原を適宜選択して用いることは、上記［相違点１］において検討したように周知であり、また、Ｃ型肝炎の検出において、抗原をキャリアータンパク質との複合抗原として使用することも、上記［相違点１］において検討したように周知である。
　したがって、引用例１発明において、ＮＳ４タンパク質を合成ペプチドとし、融合タンパク質として用いる代わりに複合抗原として用いることは、当業者が容易に想到しうることである。
　
　そして、本願発明は、段落【０００４】に記載されているように、抗原として合成ペプチドを用いた場合には一般に検出感度が低くなるという課題を解決しようとするものであるが、引用例１の［１ｄ］および引用例３の［３ｂ］に記載されているように、合成ペプチドに限らず、抗原をキャリアタンパク質に結合させることにより反応性を高めることができるという効果はすでに知られたものである。また、本願の明細書には、ＨＣＶの構造領域タンパク質である第１の合成ペプチドＨＣＶ抗原とキャリアータンパク質とからなる第１の複合抗原、ＨＣＶの非構造領域タンパク質である遺伝子組み換えＨＣＶ抗原、および、前記遺伝子組換えＨＣＶ抗原とは異なるＨＣＶの非構造領域タンパク質である第２の合成ペプチドＨＣＶ抗原とキャリアータンパク質とからなる第２の複合抗原の組み合わせを用いることによる効果も記載されていない。
　したがって、本願発明の効果は、引用例１〜４に記載された発明から当業者が容易に予測できる範囲のものであって、格別なものであるとはいえない。
　
　
第６　付言
　請求人は、平成２１年６月５日付けの意見書において意見を述べているので、これについて検討する。
（１）組み合わせる動機付けがないとする点について
　引用例１および引用例２〜４は、何れもＨＣＶ感染症を診断する技術に関するものであり、試料中の抗体の存在を抗原抗体反応を利用して検出するものであるから、同じ技術分野に属するものである。そして、引用例１の［１ｂ］、引用例２の［２ｂ］、引用例３の［３ｅ］、引用例４の［４ｂ］に記載されるように、何れも高感度または良好な反応性が得られる測定を行うことを目的とするものでもある。そして、すでに［相違点１］〜［相違点３］についての検討において述べたように、引用例１発明に組み合わせるのは、何れも当該分野において周知の技術であり、大量にしかも安価に製造できることや,反応性を高めることの技術的意義も知られているものであるから、これらの技術を組み合わせることは当業者であれば当然考慮することであり、組み合わせる動機付けがないとはいえない。
　
（２）阻害要因が存在するとする点について
　請求人は、「引用刊行物１の発明においては、遺伝子組み換え抗原とキャリアタンパク質からなる融合タンパク質を使用することは、必須の構成であり、この融合タンパク質を使用しないようにすれば、引用刊行物１記載の発明の技術的課題を解決できなくなることは明白であります。」と主張している。
　しかし、引用例１に記載された発明において用いられる「融合タンパク質」は、［１ｂ］に記載されるようにＨＣＶの抗原タンパク質とキャリアタンパク質とを連結したものであればよいものであり、［１ｅ］には「如何なる方法により得られたものであってもよい」と記載されている。よって、引用例１に記載された発明において、遺伝子組み換え抗原とキャリアタンパク質とからなる融合タンパク質を使用することは必須ではなく、遺伝子組み換え以外の公知の手法で得られた抗原であっても最終的にキャリアタンパク質と連結させたものであれば引用例１の「融合タンパク質」として採用できることは自明である。
　そして、すでに［相違点１］〜［相違点３］についての検討において述べたように、抗原をキャリアータンパク質との複合体として使用することも周知であるから、引用例１発明に、これらの技術を組み合わせることに阻害要因があるとはいえない。
　
　
第７　むすび
　以上のとおり、本願発明は、引用例１〜４に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、その他の請求項に係る発明について言及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。