(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0003605158.tif 000024
（式中、Ｒ1はナフチル、ピリジル、イソキノリル、トリフルオロメチルで置換されていてもよいキノリル；Ｒ2はフッ素で置換された低級アルキル；Ｒ3及びＲ4はそれぞれ水素、ＸはＳを表す）
で示される化合物又はその塩。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化２】
0003605158.tif 000025
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＸは上記の定義に従う）
で示される化合物をｐＨ７〜９で処理することからなる請求項１記載の式Ｉで示される化合物の製造方法。
【請求項３】
式ＩＩ：
【化３】
0003605158.tif 000026
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＸは上記の定義に従う）
で示される化合物又はその塩。
【請求項４】
式中、Ｒ2がトリフルオロメチルである請求項１又は３記載の化合物。
【請求項５】
式中、Ｒ1がイソキノリルである請求項４記載の化合物。
【請求項６】
請求項１記載の化合物を有効量含有する抗ウイルス剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＨＩＶプロテアーゼに対する阻害活性を有し、ＨＩＶ感染症の予防及び治療に有効な新規ノルスタチン誘導体に関する。
【０００２】
【従来技術と発明が解決すべき課題】
従来、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療には、免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）のＲＮＡ逆転写酵素阻害剤や、プロテアーゼ阻害剤を用いることが提案されてきた。これらの内、プロテアーゼ阻害剤の活性成分として、種々のペプチド誘導体が開示されている（例えば、特開平２−１１７６１５号公報、特開平２−２０２８９８号公報、特開平２−２０２８９９号公報、特開平２−２０４４７５号公報、特開平５−７８３１１号公報、特開平５−１７０７２２号公報、特開平５−１７８８２４号公報、特開平６−１００５３３号公報、及びＷＯ９３／３０６６など）。特に、ペプチド中にヒドロキシアミノ酸アイソスターとしてβ−アミノ−α−ヒドロキシカルボン酸基を有する誘導体が注目されている（ＥＰ０４９０６６７Ａ２、特開平５−１７０７２２号公報、特開平５−１７８８２４号公報、及びＷＯ９３／３０６６など）。
しかしながら、経口投与に際する吸収率、代謝的な安定性、リンパ節への移行性、ＨＩＶプロテアーゼとの親和性など、特に経口投与に際する吸収率の点で問題があり、ＡＩＤＳなどのＨＩＶ感染症の治療又は予防を適切に行うためには、さらに多くの化合物を開発し、臨床適用の可否を調べる必要がある。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の問題を解消し得る、ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有する新規な化合物を提供することを目的として、鋭意検討した結果、式Ｉ：
【化４】
0003605158.tif 000002
（式中、Ｒ１は置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロ環基、又は置換されていてもよいヘテロアリールアルキル；Ｒ２はフッ素で置換された低級アルキル又はフッ素で置換されたアルキルチオ、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立して水素又は低級アルキル、Ｘ  はＳ、ＳＯ又はＣＨ２を表す）
で示される化合物又はその塩がこの目的の達成に適することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００４】
本明細書中、フッ素で置換された低級アルキルとは、１個又はそれ以上の水素原子が１個又はそれ以上のフッ素原子で置換されている、直鎖又は分枝状の炭素数１〜８のアルキルを意味する。本発明の目的から、フッ素で置換された直鎖又は分枝状の炭素数１〜６のアルキルが好ましく、具体的にはトリフルオロメチル、トリフルオロエチル等が例示される。
【０００５】
また、フッ素で置換されたアルキルチオとは、炭化水素鎖における炭素原子が硫黄原子で置換され、かつ、１個又はそれ以上の水素原子が１個又はそれ以上のフッ素原子で置換された基を意味し、例えば、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロエチルチオ等を例示することができる。
「低級アルキル」とは、直鎖又は分枝状の炭素数１〜８のアルキルを意味する。例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル等が例示される。
「アリール」とは、炭素原子数６〜１２の芳香環基を意味し例えばフェニル、及びナフチル等が挙げられる。
「置換されていてもよいアリール」における置換基としては、低級アルキル、ハロゲン、ニトロ、アミノ、水酸基、アルコキシ、アラルキルオキシ、トリフルオロメチル、フェニル等が挙げられる。ここに低級アルキル及びハロゲンは上記定義に従うが、中でもメチル、フッ素及び塩素が特に好ましい。例えば、トリル、キシリル、ビフェニル等が例示される。
「ヘテロ環基」とは、酸素原子、硫黄原子又は窒素原子を任意に環内に１個以上含み、炭素環と縮合していてもよい環を意味する。ピリジル、トリアゾリル（例えば１，２，３−トリアゾリル又は１，２，４−トリアゾリル）、チアジアゾリル（例えば１，２，３−チアジアゾリル又は１，２，４−チアジアゾリル）、テトラゾリル、キノリル及びイソキノリルを挙げることができ、キノリル及びキソキノリルが好ましい。
「置換されていてもよいヘテロ環」における置換基としては、メチル、エチル等の低級アルキル、トリフルオロメチルを挙げることができる。
「ヘテロアリールアルキル」とは、キノリルメチル、キノリルエチル、イソキノリルメチル、イソキノリルエチル等が挙げられる。置換基としては、「置換されていてもよいヘテロ環」における置換基と同様である。
【０００６】
式Ｉの化合物の塩は、薬学的に許容し得る塩であって、塩酸、硝酸、りん酸、硫酸、臭化水素酸、沃化水素酸、亜硝酸、亜りん酸等の無機酸から導かれる塩、及び脂肪族モノー及びジカルボン酸、フェニル−置換アルカン酸、ヒドロキシ−アルカン一酸及びアルカン二酸、芳香族酸並びに脂肪族及び芳香族スルホン酸等の無毒な有機酸から導かれる塩が含まれる。このような薬学的に許容し得る酸付加塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、りん酸塩、第２りん酸塩、第１りん酸塩、メタりん酸塩、ピロりん酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩、弗化水素酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩及びその他の塩が含まれる。本発明にとって好ましいのは無機酸の塩であって、塩酸塩及び硝酸塩が特に好ましい。
【０００７】
本発明化合物は、Ｒ２基にフッ素原子を含有するために、従来の対応化合物に比較して、疎水性が増大し、ＨＩＶプロテアーゼとの親和性が高くなっていると共に、生体内でリンパ節に移行し易く、特に経口投与に際する吸収率が高いと予測される。
本発明の化合物Ｉは、後述する実験例に示すように、ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有すると共に、ＨＩＶ（ＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ株）の感染抑制作用を示し、経口投与に際する吸収率が高くＨＩＶ感染症の予防及び治療に有用であると期待される。上記の定義で示される化合物Ｉのすべて上記の本発明の目的に有用であるが、中でも、Ｒ１が５−イソキノリル、Ｒ２がトリフルオロメチル、ＸがＳである化合物がＨＩＶプロテアーゼに対して強い阻害活性を有しており好ましい。
【０００８】
本発明化合物は、当業者既知の方法を用いて製造することができる。
一般的な合成法として、縮合は、液相法により段階的に実施する。例えば、縮合剤として、ＨＯＢｔ／ＤＣＣ或はＨＯＢｔ／ＥＤＣの存在下、溶媒としてＣＨ２Ｃｌ２、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＡｃＯＥｔの何れかを用いて行う。反応温度は−１０℃〜３０℃、好ましくは０℃〜２５℃、反応時間は１〜１６時間、好ましくは３〜５時間である。
中間体の脱保護は４Ｎ−ＨＣｌ／ジオキサン或は６ＮａｑＨＣｌ／ジオキサンを用い、反応温度０〜２５℃、反応時間１〜３時間で実施する。
脱保護されたアミン成分は、塩酸を中和して遊離状態で取り出すか、或は溶媒を減圧留去後、当量の塩基（例えばＴＥＡ又はＮＭＭ）を加え、次の反応に使用してもよい。本発明化合物Ｉは例えば、以下の反応式に従って製造することができる。
【化２１】
0003605158.tif 000003
１）化合物（ａ）の調製：市販品Ｂｏｃアミノ酸とｔ−ブチルアミンの縮合及び脱保護
２）化合物（ｂ）の調製：Ｍ．Ｔ．Ｒｅｅｚｅら、ＴＨＬ  ２９  ３２５９（１９８８）記載３）化合物（ｅ）の調製：Ｔ．Ｔｕｓｈｉｍａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４４（１７）５３７５（１９８８）
４）化合物（ｆ）の調製：Ｒ１−ＯＨとＢｒＣＨ２ＣＯ２Ｒ４より誘導
【０００９】
さらに、本発明化合物は、式ＩＩ：
【化５】
0003605158.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸ  は上記の定義に従う）
で示される新規な化合物をｐＨ７〜９において、２０〜２５℃で処理することにより、製造することができる。
化合物ＩＩから、ＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有する化合物Ｉへの変換は、上記の反応条件及び後述の実施例３の記載から明らかなように、通常の生理的なｐＨ及び温度範囲で起こる。このことは、化合物ＩＩが、それ自身は抗プロテアーゼ活性を持たないが、ヒト等の対象に投与された場合、生体内の条件下で容易に活性な式Ｉの化合物に変換され得ることを示している。即ち、該化合物ＩＩもまた、本発明の目的に適しており、本発明化合物Ｉの前駆物質あるいは分子内プロドラッグとして機能し得るものである。従って、化合物ＩＩは本発明の範囲に含まれるものであり、該化合物Ｉ同様、任意の製剤学的に許容されるその塩もまた本発明の範囲に包含される。
【００１０】
なお、このエステル型化合物ＩＩは、水溶性であり、経口投与した場合は腸内で式Ｉの化合物に変換されて吸収され、また静脈投与した場合は血漿中で直ちに式Ｉの化合物に変換されて薬理効果を発揮するために、経口及び非経口投与のいずれにも有用である。
【００１１】
本発明の化合物Ｉ又は化合物ＩＩ、あるいはその塩を、ＨＩＶ感染症の予防又は治療に用いるためには、経口又は非経口投与に適した製剤の形で投与する。経口投与による場合、本発明化合物は、通常の製剤、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形剤；水剤；油性懸濁剤；又はシロップ剤もしくはエリキシル剤等の液剤のいずれかの剤形としても用いることができる。非経口投与による場合、本発明化合物は、水性又は油性懸濁注射剤として用いることができる。その調製に際しては、慣用の賦形剤、結合剤、滑沢剤、水性溶剤、油性溶剤、乳化剤、懸濁化剤等のいずれをも用いることができ、また他の添加剤、例えば保存剤、安定剤等を含むものであってもよい。
本発明化合物又はその塩の投与量は、投与方法、患者の年齢、体重、状態及び疾患の種類によっても異なるが、通常、経口的には、１日あたり３ｍｇ〜２ｇ、好ましくは、１０ｍｇ〜１ｇであり、これを１〜５回に分割して投与すればよい。
【００１２】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例で使用する略語を以下に説明する。
ＴＥＡ：トリエチルアミン
（Ｂｏｃ）２Ｏ：ジ−ｔ−ブチルカルボナート
Ｈ２Ｎ＋：ｔ−ブチルアミン
ＥＤＣ（ＨＣｌ）：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピルカーボジイミド塩酸塩
ＨＯＢｔ（Ｈ２Ｏ）：Ｎ−ヒドロキシベゾソトリアゾール  水和物
ＦｍｏｃＯＳＵ：９−フルオレニル−Ｎ−スクシンイミジルカーボナート
ＤＩＣ：ジイソプロピルカーボジイミド
【００１３】
製造例１
【化６】
0003605158.tif 000005
化合物１（５．００ｇ、３７．５５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に懸濁し、ＴＥＡ（５．８ｍｌ、４１．３８ｍｍｏｌ）を加え、撹拌下、室温にて（Ｂｏｃ）２Ｏ（９．８０ｇ、４４．９ｍｍｏｌ）を加えて３時間反応する。反応液に水性ＮａＨＣＯ３を加え、酸性部を転溶し、次いで塩基性溶液にクエン酸を加えてｐＨ３とし、酢酸エチル（×３）抽出する。抽出液は合併して飽和ＮａＣｌ（×２）で洗滌後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧留去し、化合物２（７．２ｇ、収率８２．２％）を得た。
化合物２（７．２０ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチルアミン（３．８９ｍｌ、３．７０ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（４．８４ｇ、３．５８ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）に懸濁し、Ｎ２気流中で氷冷撹拌下、ＥＤＣ（７．１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加え、１時間反応した後、室温にて一夜反応する。溶媒を減圧留去し、残渣に６Ｎ−ＨＣｌ（５０ｍｌ）−ジオキサン（２０ｍｌ）を加え、５時間反応する。反応液はＣＨ２Ｃｌ２（×３）で洗滌した後、ＮａＨＣＯ３でアルカリ性とし、ＣＨ２Ｃｌ２（×３）で抽出し、化合物４（５．８０ｇ、収率：定量的）を得た。
【００１４】
製造例２
【化７】
0003605158.tif 000006
化合物１１（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．２７，３２９５−３２９８（１９８８）に準じて製造）（４．７７ｇ、１６．１５ｍｍｏｌ）、化合物４（２．５３ｇ、１３．４４ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（２．１８ｇ、１６．１３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）−ＭｅＣＮ（１０ｍｌ）に溶解し、Ｎ２気流中、氷冷撹拌下、ＥＤＣ（３．１８ｇ、１６．１４ｍｍｏｌ）を加える。１時間後、室温にして１６時間反応する。反応液は水性ＮａＨＣＯ３（×２）、水、１０％クエン酸（×２）及び水で順次、洗滌後、ＭｇＳＯ４にて乾燥し、溶媒を減圧留去して、粗（２Ｓ，３Ｓ）（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル−ブチリル）−Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸  ｔ−ブチルアミド（化合物２３）（７．０ｇ）を得た。
粗化合物２３（７．００ｇ）に４Ｎ−ＨＣｌ／ジオキサン５０ｍｌを加え、撹拌下室温にて２時間反応する。溶媒を減圧留去し、残渣にＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）及び水（１５ｍｌ）を加え、撹拌下、水性ＮａＨＣＯ３にてｐＨ８とし、析出した結晶を濾取し、ｍｐ２１３−２１５℃を示す化合物２４（４．６０ｇ、収率９３．７％）を得た。
【００１５】
製造例３  （２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル  トリフルオロメチル−Ｌ−アラニル）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニル−ブチリル−Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸−ｔ−ブチルアミド（化合物２５ａ）
【化８】
0003605158.tif 000007
化合物２４（２．５０ｇ、６．８４ｍｏｌ）、化合物１８ａ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｖｏｌ．４４，Ｎｏ．１７，５３７５−５３８７（１９８８）に従って製造）（２．００ｇ、７．７８ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（１．０５ｇ、７．７７ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）及びＭｅＣＮ（１０ｍｌ）に懸濁し、Ｎ２気流中、氷冷撹拌下、ＥＤＣ（１．５３ｇ、７．７７ｍｍｏｌ）を加え、１時間（約３０分で清澄液）、次いで室温にて２時間反応する。析出した結晶を濾取し、更にＣＨ２Ｃｌ２で洗滌してｍｐ２１５−２１７℃を示す結晶（３．６２７ｇ、収率：８７．７％）を得る。母液は水性ＮａＨＣＯ３で洗滌後、ＭｇＳＯ４にて乾燥し、溶媒を減圧留去して得た結晶性残渣をＣＨ２Ｃｌ２でトリチュレートし、ｍｐ２１５−２１７℃を示す結晶（０．３５７ｇ、収率：８．６％）を得る。生成物を合計し３．９９４ｇ（収率：９６．６％）を得た。
化合物１８ｂ及び１８ｃを出発物質として用い、上記と同様に処理して対応する化合物２５ａ（収率９０％）及び２５ｂ（収率８８％）を得た。
【化９】
0003605158.tif 000008
【００１６】
製造例４
【化１０】
0003605158.tif 000009
化合物２５ａ（３．９９ｇ、６．６０ｍｍｏｌ）に４Ｎ−ＨＣｌ／ジオキサン４０ｍｌを加え、撹拌下、室温にて２時間反応する。溶媒を減圧留去し、残渣に水を加えて溶解する。ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ×３）にて洗滌後、ＮａＨＣｌＯ３にてアルカリ性とし、５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ（２５ｍｌ×３）で抽出する。ＣＨ２Ｃｌ２溶液はＭｇＳＯ４にて乾燥した後、減圧留去し、残渣３．００ｇ（収率：９０．１％）を得た。
化合物２５ｂ（０．３０４ｇ）及び化合物２５ｃ（０．２６０ｇ）を用い、上記と同様に処理して対応する化合物２６ｂ（０．２４５ｇ、収率９６．１％）及び化合物２６ｃ（０．２００ｇ、収率９１．３％）を得た。
【００１７】
製造例５
【化１１】
0003605158.tif 000010
アミン１８ａ（約０．７００ｇ）を水性Ｎａ２ＣＯ３（８．９ｍｌ；Ｎａ２ＣＯ３５．３０ｇ／水１００ｍｌ）及びＭｅＣＮ（６ｍｌ）に溶解し、氷冷撹拌下、ＦｍｏｃＯＳＵ（１．５２２ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１２ｍｌ）溶液を加える。次いで、室温にて１４時間反応する。反応液に水２０ｍｌを加え、析出している不溶物を濾別した後、Ｎ−ＨＣｌを加えてｐＨ３に調製し、酢酸エチル（３０ｍｌ×３）で抽出する。酢酸エチル溶液は合併して飽和ＮａＣｌ溶液（２０ｍｌ×３）で洗滌後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧留去し、結晶性残渣（１．６２ｇ）を得た。ＣＨ２Ｃｌ２：ヘキサン（１：５）混液から再結晶して、ｍｐ１５９−１６０℃を示す化合物２７ａ（１．４４ｇ、収率８５．２％）を得た。
製造例３に示した化合物１８ｂのアミン（０．７５４ｇ）及びＦｍｏｃＯＳＵ（１．５０２ｇ）を用いてｍｐ１２７−１２８℃を示す無晶形化合物２７ｂ（１．４２ｇ、収率８０％）を得た。
同様に、  製造例３に示した化合物１８ｃのアミン（０．５７６ｇ）及びＦｍｏｃＯＳＵ（１．０４ｇ）を用いて無晶形化合物２７ｃ（０．９６０ｇ、収率７５．５％）を得た。
【００１８】
製造例６
【化１２】
0003605158.tif 000011
化合物２７ａ（０．２９３ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（０．１１５ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）及びＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解し、Ｎ２気流中、氷冷撹拌下ＤＩＣ（０．１４ｍｌ、０．６４４ｍｍｏｌ）を加える。２０分後、化合物２３（０．８００ｇ、０．６４４ｍｍｏｌ）／ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）溶液を加え、３０分後、室温にして更に５時間反応する。溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、７％ＮａＨＣＯ３（×２）及び飽和ＮａＣｌ（×２）で洗滌後、ＭｇＳＯ４にて乾燥する。溶媒を減圧留去して、粗生成物（０．７５ｇ）を得、シリカゲル（２３０−４００メッシュ，１２０ｇ）及び１％ＭｅＯＨ含有ＣＨ２Ｃｌ２を用いてクロマト処理し、化合物２８ａ（無晶形）（０．５０８ｇ、収率９５．３％）を得た。
出発物質として化合物２７ｂ（０．１８０ｇ）、ＨＯＢｔ（０．０６５ｇ）、ＤＩＣ（０．０７６ｍｌ）及び化合物２３（０．７０ｇ）を用い、上記と同様に処理して化合物２８ｂ（無晶形）（０．２３８ｇ、収率７７．５％）を得た。
同様に、化合物２７ｃ（０．２３６ｇ）、ＨＯＢｔ（０．０８３ｇ）、ＤＩＣ（０．０９６ｍｌ）及び化合物２３（０．２００ｇ）を用い、化合物２８ｃ（無晶形）（０．２７８ｇ、収率：７６．８％）を得た。
【００１９】
製造例７
【化１３】
0003605158.tif 000012
化合物２８ａ（０．５００ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）にモルホリン（２ｍｌ）を加え、撹拌下、２．５時間反応する。モルホリンを減圧留去し、残渣をシリカゲル（２３０〜４００メッシュ、１００ｇ）及び濃ＮＨ４ＯＨ水／ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（０．４：４：９５．６）の混液を用いて中圧クロマトし、目的化合物２９ａ（０．２８８ｇ、収率７８．９％）を得た。
化合物２８ｂ（０．２３８ｇ）及びモルホリン（１ｍｌ）を用いて同様に処理して化合物２９ｂ（０．１３０ｇ、収率７４．３％）を得た。
同様に、化合物２８ｃ（０．１９０ｇ）及びモルホリン（１ｍｌ）より、化合物２９ｃ（０．１１８ｇ、収率７７．０％）を得た。
【００２０】
製造例８
【化１４】
0003605158.tif 000013
化合物２９ａ（０．２７６ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、化合物２２（０．１１２ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（０．０７４ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）、ＭｅＣＮ（０．５ｍｌ）及びＥＤＣ（０．１１８ｇ、０．５５ｍｏｌ）を用いて、製造例３と同様に反応し、化合物３０ａ（０．２８０ｇ、収率７８％）を得た。
出発物質として化合物２９ｂ（０．２６８ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、化合物２２（０．１０５ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．０７０ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１０２ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を用い、上記と同様に反応して化合物３０ｂ（０．２４５ｇ、収率７１．４％）を得た。
同様に、化合物２９ｃ（０．２６０ｇ、０．４ｍｍｏｌ）、化合物２２（０．１００ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．０６８ｇ、０．５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９７ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を用い、化合物３０ｃ（０．２５ｇ、収率７７．４％、無晶形）を得た。
【００２１】
実施例１  （２Ｓ）（３Ｓ）−［Ｎ−（５−イソキノリウオキシアセチル）−トリフルオロメチル−Ｌ−アラニル］−３−アミノ２−ヒドロキシ−４フェニル−ブチリル−Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸  ｔ−ブチルアミド（化合物Ｉａ）
【化１５】
0003605158.tif 000014
化合物２２（１．４００ｇ、６．８９ｍｍｏｌ）、化合物２６ａ（３．３０ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（０．４６６ｇ、３．４５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）、ＭｅＣＮ（１０ｍｌ）に懸濁し、Ｎ２気流中、氷冷撹拌下、ＥＤＣ（１．３６ｇ、６．９ｍｌ）を加え、１時間、更に室温にて２時間反応する。反応液は水性ＮａＨＣＯ３、水、１０％クエン酸、水、水性ＮａＨＣＯ３及び水にて洗滌後、シリカゲル（１５ｇ）、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５：５）を用いてフラッシュクロマトし、流出物を集め、酢酸エチルから結晶化し、ｍｐ１４２−１４４℃を示す結晶（３ｇ）を得た。更に、母液はシリカゲル（８０ｇ）及び２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（含０．２％濃アンモニア水）混合溶媒を用いてクロマト処理し、ｍｐ１４３−１４４℃の結晶（０．２０ｇ）を得た。本晶は１／２の酢酸エチルを結晶溶媒として持つため、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、減圧留去（×３）し、残渣にエチルエーテルを加え、撹拌下、０．５時間処理した後、濾取して乾燥し、ｍｐ１４３−１４５℃を示す化合物Ｉａ（３．３０ｇ、収率：７３．２％）を得た。
上記実施例１と同様にして、対応する出発物質から、下記の化合物Ｉｂ〜Ｉｈを合成した。これら化合物Ｉａ〜Ｉｈの構造及び、ＮＭＲ、ＩＲ、［α］Ｄ及び元素分析結果を以下にまとめて示す。
【００２２】
【化１６】
0003605158.tif 000015
【化１７】
0003605158.tif 000016
【００２３】
【表１】
0003605158.tif 000017
ｃ：計算値；ｆ：実測値
【００２４】
実施例２
製造例８で調製した化合物３０ａ（０．２５４ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）に４Ｎ−ＨＣｌ／ジオキサン溶液（２ｍｌ）を加え、撹拌下室温で２時間反応する。反応液は溶媒を減圧乾固した後、結晶性残渣をＥｔ２Ｏ−ＣＨ２Ｃｌ２でトリチュレートして、ｍｐ１６７−１７０℃を示す化合物ＩＩａ（０．２４５ｇ、収率９７．６％）を得た。
上記実施例２と同様にして、対応する出発物質から、下記の化合物ＩＩｂ及びＩＩｃを合成した。これら化合物ＩＩａ〜ＩＩｃの構造、及び融点並びに元素分析結果を以下にまとめて示す。
【００２５】
【化１８】
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【００２６】
【表２】
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【００２７】
実施例３
【化１９】
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実施例２で調製した化合物ＩＩａ（０．１５０ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）に７％水性ＮａＨＣＯ３（４ｍｌ）を加え、室温で１０分間撹拌する。反応液はＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ×３）で抽出する。抽出液は合併し、水洗後、ＭｇＳＯ４にて乾燥し、溶媒を留去し、結晶性残渣（０．１３３ｇ）を得る。これをエチルエーテルで結晶化し、ｍｐ１４３−１４５℃を示す生成物（０．１２６ｇ、収率９４．７％）を得た。
この生成物は実施例１で合成した化合物Ｉａと混融して融点降下を示さず、ＮＭＲ、ＩＲ［α］、ＴＬＣＲｆ値の夫々が一致したことから、化合物（Ｉａ）であることが確認された。
上記と同様に化合物ＩＩｂ又はＩＩｃを処理して、それぞれ、対応する化合物Ｉｂ（収率９５．５％）及び化合物Ｉｃ（９６．５％）を得た。
実施例で得た化合物のＨＩＶプロテアーゼ阻害作用及びＨＩＶ感染抑制作用を以下の方法で調べた。
【００２８】
実験例１  化合物のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害作用の測定
実験は、以下の一般的手法に従って行われた。
材料
予め５倍希釈系列の検体溶液（ＤＭＳＯ）を作成し、そこから５μｌをとってエッペンドルフマイクロチューブに入れる。これに、氷冷しておいた反応液（９５μｌ）を加える。混合後の成分の最終濃度は次のようになるよう設定した。
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注：１）発蛍光基質  ４−（４−ジメチルアミノフェニラゾ）ベンゾイル（ＤＡＢＣＹＬ）−γ−アミノブチリル（ＧＡＢＡ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−５−［（２−アミノエチル）アミノ］ナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）
２）ＨＩＶ−１プロテアーゼが３７℃で１分間に１μＭのＤＧＧｐＥを分解する活性を１ユニットとする。
【００２９】
方法
反応液を３７℃で２時間反応し、２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（１００μｌ）を加えて反応を停止させる。
反応液中の分解産物をＴＳＫ−ｇｅｌ  ＯＤＳ−８０ＴＭカラムを用い、０．１％ＴＦＡ−１７％アセトニトリル、０．８ｍｌ／分の条件でＨＰＬＣで分離し、３６５ｎｍで励起し、４９０ｎｍの蛍光強度を測定した。
化合物によるプロテアーゼの阻害率％は、以下の式に従って計算した。
【数１】
阻害率（％）＝
［１−｛（試料を加えた時のピーク面積）／（試料を加えない時のピーク面積）｝］×１００
５０％阻害濃度（ＩＣ５０ｎｇ／ｍｌ）は化合物の各濃度における阻害率％のセミログプロットより求めた。
【００３０】
実験例２ 化合物の感染抑制作用
実施例で製造した化合物の抗ＨＩＶ活性及び細胞毒性を以下の方法で試験した。
抗ウイルス活性
（１）ＨＩＶ（ＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ株）持続感染ヒトＴ細胞株ＭＯＬＴ−４ｃｌｏｎｅ８を１０％牛胎児血清添加ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養し、上清を濾過してウイルスの力価を測定し、−８０℃で保存する。他方、被検化合物を上記の培養培地で所定の濃度になるように希釈し、９６穴マイクロプレートに１００μｌずつ分注する。次にＭＴ−４細胞浮遊液を５０μｌ（２．５×１０４細胞）ずつを分注し、更に上記ＨＩＶ含有上清を上記の培養培地で希釈したものを５０μｌ（６００ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ））ずつ加える。
【００３１】
（２）炭酸ガス培養器内で３７℃で５日間培養した後、全てのウエルにＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）５ｍｇ／ｍｌ，ＰＢＳ）を３０μｌずつ加え、更に１時間培養する。このとき、生存する細胞はＭＴＴを還元してフォルマザンを析出させる。
全てのウエルから培養上清を１５０μｌずつ取り除き、代わりに１５０μｌの溶解液（１０％トリトンＸ−１００及び０．４％（ｖ／ｖ）ＨＣｌ添加イソプロパノール）を加え、プレートミキサーで振とうしてフォルマザンを溶出する。フォルマザンをＯＤ５４０ｎｍで測定し、結果を被対照と比較する。
ウイルスによる細胞障害を５０％抑制する化合物濃度をＥＤ５０とする。試験結果を表３に示す。
【００３２】
細胞毒性
上記（１）において、ＨＩＶ含有上清（ウイルス液）の代わりに各ウエルに培養培地５０μｌずつ加え、（２）と同様に処理し化合物の細胞毒性を調べる。
化合物による細胞毒性が５０％である化合物濃度をＣＤ５０とする。
以上の試験結果を以下の表３にまとめて示す。
【００３３】
実験例３ ラット経口投与による測定
一夜絶食したラット（雄性Ｊｃｌ−ＳＤ、８−９週令、２４０−３００ｇ）にＨＩＶプロテアーゼ阻害剤（２０ｍｇ／４ｍｌ／ｋｇの０．０１Ｍクエン酸水溶液又は懸濁液）を経口投与後、頸静脈から経時的に採血し、血漿中濃度推移を非麻酔下で追跡した。
【００３４】
ＡＵＣ（血漿中濃度時間曲線下面積）測定
除蛋白処理
血液試料は、血漿（２００μｌ）にＭｅＣＮ（７５０μｌ）を加えた後、ミキサーで撹拌し、冷却遠心機で遠心し、得られた上清（８５０μｌ）を蒸発乾固し、溶離液（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液−ＭｅＣＮ系溶媒）（１５０μｌ）に溶解した後、１００μｌをＨＰＬＣに注入し、以下の条件で定量した。
定量
ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の定量は、ＳＰＤ−Ｍ６Ａ  ＵＶ検出器を備えたＬＣ−６Ａ  ＨＰＬＣ（島津（株）；京都）を用いて行った（カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ５Ｃ１８；溶離液：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液−ＭｅＣＮ系溶媒）。
結果を下記の表３及び図１に示す。
【００３５】
【表３】
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注
１）ＭＴＴアッセイ
２）ＨＩＶプロテアーゼ阻害アッセイ
【化２０】
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【００３６】
【発明の効果】
表３に示した結果から明らかなように、本発明化合物又はその塩はＨＩＶプロテアーゼ阻害活性を有し、ＨＩＶ感染抑制作用を示し、経口投与に際する吸収率は高い。従って、本発明の化合物を用いてエイズ等のＨＩＶウイルス感染症の予防又は治療を行うことが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ラットに対する本発明化合物の経口投与後の、血漿中濃度の推移を示すグラフ。
【図１】
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