(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする甘味料である旨の表示を付した食品。
【請求項２】
（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする糖尿病患者用である旨の表示を付した食品。
【請求項３】
（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする痩身用である旨の表示を付した食品。
【請求項４】
（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする糖尿病疾患動物用である旨の表示を付した飼料。
【請求項５】
（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする痩身用である旨の表示を付した飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、α−グルコシダーゼを緩慢に阻害し、デンプン、デンプン由来のオリゴ糖類及びシュークロースの消化を遅延させ、その結果、血糖値の急激な上昇を抑え、インスリン分泌を低く抑える作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤、それを含む糖を主体とする組成物、甘味料、食品及び飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、植物繊維の多い炭水化物を増やした食事を摂取すると、腸からの栄養素の吸収が穏やかになり、食後の血糖値の上昇を抑制し、インスリン分泌を低く抑えることができ、肥満・糖尿病等の成人病の予防になることが報告されている〔Ｄｒ．Ｄｅｎｉｓ  Ｂｕｒｋｉｔｔ著「Ｄｏｎ’ｔ  ｆｏｒｇｅｔ  ｆｉｂｒｅ  ｉｎ  ｙｏｕｒ  ｄｉｅｔ  （日本語訳；昭和５８年５月２５日中央公論社発行の“食物繊維で現代病は予防できる”１２５−１３７頁）」、昭和５７年５月１５日第一出版株式会社発行の著書「食物繊維」２７１−２８６頁参照〕。しかしながら、前記食物繊維は広範な食品に自由に添加混合できる糖とは異なり、種々の食品に対する利用に制約があった。例えば、食物繊維自体は甘味がなく、コーヒーやジュース等の飲料やケーキやお菓子類に用いる甘味料又は甘味素材として用いることはできない。
【０００３】
また近年、α−グルコシダーゼ阻害剤を投与すると、α−グルコシダーゼ阻害剤が小腸の微絨毛に局在するα−グルコシダーゼを阻害し、食後の血糖値の急上昇及びそれに続くインスリン値の急上昇を抑制することが知られている（例えば、特開昭５２−１２２３４２号公報、ＤＩＡＢＥＴＩＣ  ＭＥＤＣＩＮＥ，  １９９３；１０：６８８−６９３，１３４−１３８，  Ａｍ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．１９９２；５５：３１８Ｓ−９Ｓ  、  特開昭５７−２００３３５号公報、Ａ  ｍ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．１９９２；５５：３１４Ｓ−７Ｓ  、  特開昭５７−５９８１３号公報参照）。このようなα−グルコシダーゼ阻害剤のうち、アカルボースはインスリン非依存型糖尿病（略語：ＮＩＤＤＭ）用の経口糖尿病治療薬として用いられている。しかしながら、これらの物質は本来生体に対して異物であって、安全性については懸念が残されており、使用量について厳しい規定が定められている。
【０００４】
また、難消化性或いは低消化性のオリゴ糖として、フラクトオリゴ糖やガラクトオリゴ糖等、或いはデンプン加水分解物や他のオリゴ糖の糖アルコール類（例えば、マルチトールやマルトオリゴ糖の糖アルコール類、イソマルトースとそのオリゴ糖の糖アルコール類、還元パラチノースやラクチトール）は、それ自体が難消化性、低消化性のため血糖値の上昇が少ない甘味料として従来使用されている。しかし、これら血糖値の上昇が少ない甘味料として使用されていた難消化性或いは低消化性のオリゴ糖は、使用量を誤ると下痢を誘発しやすい等の欠点があった。
【０００５】
また、糖質の吸収抑制作用を有するインド産ギムネマシルベスタを原料とする血糖値上昇抑制を目的とする飲食物が、特開昭６１−５０２３号公報、特開昭６３−２０８５３２号公報に提案されている。これらギムネマシルベスタやギムネマイノドラムの抽出物の作用は、糖類の吸収作用を抑制することによるものであり、摂取量を誤ると副作用として血糖値が下がりすぎたり、吸収されない糖類が大腸に達し、下痢等の障害をおこす恐れがあった。
【０００６】
また、特開平６−６５０８０号公報には、自然界に存在するＬ−アラビノースを中心とした糖類が、安全なα−グルコシダーゼ阻害剤として使用できるとしている。しかし、アラビノース等は５炭糖であることから、加熱することによる褐変が避けられず、炭水化物に添加しての利用に際して大きな制約を受けることになる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上記したように従来のα−グルコシダーゼ阻害剤は種々の問題点があるため、通常摂取する食物中に含まれる物質であって、加工特性に優れ、消化管からは吸収され、体内で有効に使用することの可能な、つまり生体にとって安全性が高く有益なα−グルコシダーゼ阻害剤の出現が望まれていた。
【０００８】
そこで本発明は、小腸の微絨毛に局在するα−グルコシダーゼを阻害する物質を検索し、食品素材・甘味料・飼料に用いることができ、肥満・糖尿病等の成人病の予防が可能で、またそれらの患者用に適したα−グルコシダーゼ阻害剤、そのα−グルコシダーゼ阻害剤を含む糖を主体とする組成物、食品、甘味料、飼料を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、生命の根源であり遺伝情報の伝達や発現に密接に係わり、しかも食品素材として知られている核酸関連物質に着目し、広範な核酸関連物質にα−グルコシダーゼ阻害作用があるかどうかについて検討した。その結果、ある特定核酸関連物質のみがα−グルコシダーゼに対して緩慢な阻害作用を有することを発見し、更にこのような阻害作用を有する核酸関連物質と食用の炭水化物、糖類と併用した際における、摂取直後の急激な血糖値上昇の抑制、インスリン分泌を低く抑える作用があることを見いだした。このような知見を基礎にして次のような発明を完成した。
【００１０】
即ち、本発明は、（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする食品であり、甘味料である旨の表示を付した食品、糖尿病患者用である旨の表示を付した食品、或いは、痩身用である旨の表示を付した食品である。
また、本発明は、（１）イノシン、アデノシン、シトシン、イノシン酸塩、アデニル酸塩、及びグアニル酸塩から選択された１種又は２種以上の物質を有効成分とするα−グルコシダーゼに対する緩慢な阻害作用を有するα−グルコシダーゼ阻害剤と、
（２）シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類、
から構成される組成物であって、
（３）前記消化性糖１００重量部に対して前記α−グルコシダーゼ阻害剤が０．５〜３０重量部配合されてなる、糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物を有効成分とすることを特徴とする飼料であり、糖尿病疾患動物用である旨の表示を付した飼料、或いは、痩身用である旨の表示を付した飼料である。
【００１１】
本発明において「緩慢な阻害作用」とは、そのα−グルコシダーゼ阻害剤が炭水化物とともに摂取される場合に、摂取される全炭水化物量（全糖質量）に対して０．５〜３０重量％のα−グルコシダーゼ阻害剤が配合される量の範囲において、小腸の消化酵素α−グルコシダーゼの働きを適度に阻害する作用を言う。本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤の使用適量は、従来のα−グルコシダーゼ阻害剤の投与量と比較して多量であることから本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は「緩慢な阻害作用」と言える。
【００１２】
本発明に用いられるα−グルコシダーゼ阻害剤の有効成分としてのヌクレオチド成分には、アデニル酸塩、グアニル酸塩、イノシン酸塩が挙げられる。ヌクレオチドは核酸からヌクレアーゼ等の酵素により酵素的加水分解により得られる他、椎茸やアスパラの中にうま味成分として存在している。
【００１３】
本発明に用いられるα−グルコシダーゼ阻害剤の有効成分としてのヌクレオシド成分には、アデノシン、イノシンが挙げられる。
【００１４】
本発明に用いられるα−グルコシダーゼ阻害剤の有効成分である核酸の塩基には、シトシンが挙げられる。
【００１５】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、有効成分として、上記のヌクレオチド、ヌクレオシド及び／又は核酸の構成成分である塩基が必須成分として含まれていればよく、α−グルコシダーゼ阻害剤中に、上記成分以外の核酸物質、種々の分解段階の核酸分解物質等が混在していてもよい。
【００１６】
本発明の糖の緩慢な消化作用を有し、且つインスリン分泌を低く抑える作用を有する糖を主体とする組成物は、上記したα−グルコシダーゼ阻害剤と、シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類とを必須成分としている。本発明の糖を主体とする組成物において、前記α−グルコシダーゼ阻害剤が、糖質成分に対して０．５〜３０重量％となるように配合されている。この糖を主体とする組成物中において、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤が０．５重量％未満であると、前記α−グルコシダーゼに対する阻害作用が充分でなく、急激な血糖値の上昇に対する抑制効果や、インスリン分泌を低く抑える効果がない。また糖を主体とする組成物中において、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤が３０重量％以上であると核酸特有の味が優勢となりすぎるものがある（例えば、核酸系調味料等の呈味過多によるくどさが出現する。）。
【００１７】
さらにα−グルコシダーゼ阻害剤の具体的な化合物について言えば、α−グルコシダーゼ阻害剤が、アデノシン、イノシン、シトシン、アデニル酸Ｎａ、グアニル酸Ｎａ、イノシン酸類を有効成分とする場合には、糖質成分１００重量部に対して０．５〜３０重量部配合される。
【００１８】
単回経口投与毒性試験：
６週齢のＣｒｊ：ＣＤ（ＳＤ）ラットを１群雌雄各５匹を用い、アデノシン及びイノシンを２．５ｇ／ｋｇ又は５．０ｇ／ｋｇ群に対照区を加えた５群で単回経口投与した。２週間経過観察を行ったが死亡動物もなく、一般状態、体重推移及び内臓所見において特記すべき変化も認められなかった。この結果より、アデノシン及びイノシンの最小致死量は５ｇ／ｋｇ以上と推定され、両物質とも低毒性であることが示唆される。
【００１９】
【実施例】
〔実施例１〕
本実施例１はイノシンが豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する実施例である。
【００２０】
基質として２０ｍＭのシュークロース（Ｓｕｃ）、２％可溶性デンプン（Ｓ−Ｓｔａｒｃｈ）溶液を用意した。これらをそれぞれ０．５ｍｌ試験管に取り、これに０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で希釈した２０ｍＭのイノシン溶液を０〜０．４ｍｌ加え、さらに０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を０．４〜０ｍｌ加えた。即ち、イノシン溶液と緩衝溶液の合計量が０．４ｍｌになるように緩衝溶液を加えた。これに豚小腸の粗酵素液（２倍希釈）を０．１ｍｌ加え、３７℃、３０分間反応させた後、２Ｍ−Ｔｒｉｓ塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）２ｍｌを加え反応を停止した。酵素反応で生じたグルコースの量をグルコースオキシダーゼを用いた酵素法で定量した。
【００２１】
なお、上記酵素阻害反応に用いた酵素液は次のようにして調製した酵素液を用いた。即ち、屠殺直後の豚の小腸の内壁の粘膜を採取し、これに５ｍＭ  ＥＤＴＡ液を含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）の中でホモジナイズし、遠心分離で沈澱物を回収した。この沈澱物を少量の同緩衝液に懸濁し、これに１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む同緩衝液を５倍量加え、０℃、６０分間撹拌し酵素を抽出し、遠心分離で沈澱物を除去後、０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）の中で透析を行い粗酵素液を得た。
【００２２】
その結果を図１にグラフとして示す。図１では、反応液中のイノシン濃度を横軸に、酵素活性を縦軸にグラフとして示したが、酵素活性は基質のみと酵素による反応を１００％として表示した。図１のグラフに示すようにイノシンは、シュークロース（Ｓｕｃ）及び可溶性デンプン（Ｓ−Ｓｔａｒｃｈ）を基質としたときイノシンの濃度を増加させるに従い（最大濃度８ｍＭｏｌ／ｌ）、酵素活性は低下する結果となった。即ち、イノシンは消化酵素α−グルコシダーゼ（マルターゼやスクラーゼ等）の反応を阻害することがわかる。
【００２３】
〔実施例２〕
本実施例２はヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン）が豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する実施例である。
【００２４】
基質及びα−グルコシダーゼは前記実施例１と同じものを用い、ＲＮＡ（リボ核酸）を構成するヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン）の小腸酵素に対する阻害試験を前記実施例１と同様の方法で実施した。その結果を図２にグラフとして示す。図２によればヌクレオシドは、シュークロース（Ｓｕｃ）及び可溶性デンプン（Ｓ−Ｓｔａｒｃｈ）を基質としたときヌクレオシドの濃度を増加させるに従い（最大濃度８ｍＭｏｌ／ｌ）酵素活性は低下する結果となった。即ちプリン塩基を有するヌクレオシド（アデノシン、グアノシン）は消化酵素α−グルコシダーゼ（マルターゼやスクラーゼ等）の反応を強く阻害することがわかる。また、ピリミジン塩基を有するヌクレオシド（シチジン、ウリジン）は消化酵素α−グルコシダーゼ（マルターゼやスクラーゼ等）の反応をプリン塩基を有するヌクレオシドより弱く阻害することがわかる。
【００２５】
〔実施例３〕
本実施例３はピリミジン塩基（シトシン）及びプリン塩基（アデニン塩酸塩）が豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する実施例である。
【００２６】
基質及びα−グルコシダーゼは前記実施例１と同じものを用い、プリン塩基（アデニン塩酸塩）はＫＯＨ溶液で中和した後、それぞれの塩基の小腸酵素に対する阻害試験を前記実施例１と同様の方法で実施した。
【００２７】
その結果を図３にグラフとして示す。図３によればシュークロース及び可溶性デンプン（Ｓ−Ｓｔａｒｃｈ）を基質としたときピリミジン塩基（シトシン）の濃度を増加させるに従い（最大濃度２０ｍＭｏｌ／ｌ）酵素活性は低下する結果となり、プリン塩基（アデニン塩酸塩）はシュークロースを基質としたとき、同様に酵素活性は低下する結果となった。即ち、核酸を構成する塩基は消化酵素α−グルコシダーゼの反応を阻害することがわかる。
【００２８】
〔実施例４〕
本実施例４はヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン）が豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する実施例である。
【００２９】
基質及びα−グルコシダーゼは前記実施例１と同じものを用い、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を構成するヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン）の小腸酵素に対する阻害試験を前記実施例１と同様の方法で実施した。その結果を図４にグラフとして示す。図４によればヌクレオシドは、シュークロース（Ｓｕｃ）を基質とし、ヌクレオシドの濃度を増加させるに従い（最大濃度８ｍＭｏｌ／ｌ）酵素活性は低下する結果となった。即ち、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を構成するヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン）は消化酵素α−グルコシダーゼの反応を阻害することがわかる。
【００３０】
〔比較例１〕
比較例１は、ヌクレオシド（チミジン、デオキシシチジン）の豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼに対する作用を調べたものである。
【００３１】
基質及びα−グルコシダーゼは前記実施例１と同じものを用い、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を構成するヌクレオシド（チミジン、デオキシシチジン）の小腸酵素に対する阻害作用があるかどうかを前記実施例１と同様の方法で実験し調べた。その結果を下記の表１に示す。なお、上記の各ヌクレオシド類の無添加の時の酵素活性を１００％とし、これに対する比活性（％）値を各種ヌクレオシドの添加濃度毎に示した。
【００３２】
【表１】
0003580900.tif 000002
表１によれば、ピリミジン塩基を有するＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を構成するヌクレオシド（チミジン、デオキシシチジン）には、添加量が増えても（最大濃度８ｍＭｏｌ／ｌ）比活性が１００％前後で推移しており、これらヌクレオシドにはα−グルコシダーゼ阻害効果は認められないことがわかる。
【００３３】
〔比較例２〕
比較例２は、各種ヌクレオチド〔５′ウリジル酸Ｎａ、２′ウリジル酸Ｎａ、５′グアニル酸Ｎａ、２′グアニル酸Ｎａ、５′シチジル酸Ｎａ、２′シチジル酸Ｎａ、５′アデニル酸Ｎａ（ＡＭＰ−Ｎａ）、アデノシン二リン酸Ｎａ（ＡＤＰ−Ｎａ）〕の豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼに対する阻害作用を調べたものである。
【００３４】
基質及びα−グルコシダーゼは前記実施例１と同じものを用い、小腸酵素に対する阻害作用があるかどうかを前記比較例１と同様の方法で実験し調べた。その結果を下記の表２に示す。なお、上記の各種ヌクレオチド類の無添加の時の酵素活性を１００％とし、これに対する比活性（％）値を各種ヌクレオチドの添加濃度毎に示した。
【００３５】
【表２】
0003580900.tif 000003
表２によれば、各種ヌクレオチド〔５′ウリジル酸Ｎａ、２′ウリジル酸Ｎａ、５′グアニル酸Ｎａ、２′グアニル酸Ｎａ、５′シチジル酸Ｎａ、２′シチジル酸Ｎａ、５′アデニル酸Ｎａ（ＡＭＰ−Ｎａ）、アデノシン二リン酸Ｎａ（ＡＤＰ−Ｎａ）〕は、添加量が増えても（最大濃度４０ｍＭｏｌ／ｌ）比活性が１００％前後で推移しており、これらヌクレオチドには明確なα−グルコシダーゼ阻害効果は認められないことがわかる。
【００３６】
〔比較例３〕
比較例３は、核酸系調味料である各種イノシン酸（５′イノシン酸Ｎａ、２′イノシン酸Ｎａ、５′イノシン酸Ｋ）の豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼに対する阻害作用を調べたものである。
【００３７】
基質及びα−グルコシダーゼは前記実施例１と同じものを用い、小腸酵素に対する阻害作用があるかどうかを前記比較例１と同様の方法で実験し調べた。その結果を下記の表３に示す。なお、上記の各核酸系調味料の無添加の時の酵素活性を１００％とし、これに対する比活性（％）値を各種ヌクレオチドの添加濃度毎に示した。
【００３８】
【表３】
0003580900.tif 000004
表３によれば、各種核酸系調味料である各種イノシン酸（５′イノシン酸Ｎａ、２′イノシン酸Ｎａ、５′イノシン酸Ｋ）の添加量が増えても（最大濃度４０ｍＭｏｌ／ｌ）、比活性が１００〜８０％で推移しており、これらイノシン酸類には明確なα−グルコシダーゼ阻害効果は認められないことがわかる。
【００３９】
〔実施例５〕
本実施例５は、糖質負荷後の血糖値上昇抑制作用とインスリン分泌抑制作用を調べた実施例である。
【００４０】
体重１５０ｇのＳｕｇａｇｕｅ−ｄａｗｌｅｙ系雄ラットを下記の表４に示した成分組成の基準食で７〜８日間予備飼育した。飼育は、１匹ずつアパートメント形式のゲージで、飼料及び飲料水は自由摂取させた。飼育室内温度は２２±１℃、飼育期間中の明期を７：００〜１９：００、暗期を１９：００〜７：００までの１２時間毎の明暗２サイクルとした。
【００４１】
実施前に体重測定をし、体重に極端な差のある個体を排除し、１群６〜７匹の群分けをした。実施前一晩絶食させた。
【００４２】
各群のラットに糖質及び阻害剤（下記糖液組成等）を胃ゾンデを用い経口投与し、０分・１５分・３０分・６０分・１２０分・１８０分後に動脈血を摂取し、血糖濃度（血清グルコース量）と血清インスリン濃度を酵素法により測定した。
【００４３】
糖液組成
Ａ．２０％シュークロース（対照）
Ｂ．２０％シュークロース＋０．２％イノシン
Ｃ．２０％シュークロース＋０．２％アデノシン
Ｄ．生理食塩水
投与量は、ラットの体重１００ｇあたり糖質（シュークロース又はデンプン）が２５０ｍｇとなる割合で投与し、生理食塩水は２ｍｌを投与した。投与後の血糖値の経時変化を示すグラフを図５に、血清インスリン量の経時変化を示すグラフを図６に示した。これらのグラフより明らかなように、対照区の血糖値及びインスリン値は投与後１５分後に最大値をとり、その後徐々に低下する。これは今まで報告されている種々の文献報告と一致している。図５のグラフにおいて１５分後は、糖質（シュークロース等）が小腸内で消化酵素α−グルコシダーゼにより最終的にグルコースまで分解され、且つ強制的にグルコースが血管内に取り込まれ急速な血糖値の上昇を招いたことを示している。急速な血糖値の上昇は強くインスリン分泌を促し、そのインスリンの働きにより血糖値は１５分後以降、徐々に低くなり、やがて平常値となる。
【００４４】
イノシン又はアデノシンを混合したシュークロース液ではシュークロースのみの対照区と比較して１５分後の最大血糖値が明らかに低く、１５分後の血糖値は有意水準１％で統計的に有意な差が認められる。また、図６のグラフで示すようにイノシン又はアデノシンを混合したシュークロース液でのインスリン濃度は急激な上昇がおきず、１５分後のインスリン値を対照区と比較すると低い値を取り有意水準１％で統計的に有意な差が認められる。
【００４５】
【表４】
0003580900.tif 000005
〔実施例６〕
本実施例６はα−グルコシダーゼ阻害剤として塩基（シトシン）を使用して糖質負荷後の血糖値上昇抑制作用とインスリン分泌抑制作用を調べた実施例である。
【００４６】
前記実施例５と同様な方法でシュークロースにシトシンを混合した糖液について血糖値上昇抑制作用とインスリン分泌抑制作用を投与後１５分で調べた。その結果を下記の表５に示す。
【００４７】
【表５】
0003580900.tif 000006
表５で明らかなようにシトシンは、シュークロースと混合して経口投与したとき、対照区と比較すると１５分後の血糖値上昇及びインスリン分泌を統計学上有意（１％）に抑制することがわかる。つまりシトシンは強くα−グルコシダーゼの作用を阻害するものと推定される。
【００４８】
〔実施例７〕
本実施例７はヌクレオチド、核酸系調味料（イノシン酸Ｋ、アデニル酸Ｎａ、グアニル酸Ｎａ）を使用して糖質負荷後の血糖値上昇抑制作用とインスリン分泌抑制作用を前記実施例５と同様な方法で調べた実施例である。
【００４９】
その結果を下記の表６に示す。
【００５０】
【表６】
0003580900.tif 000007
表６で明らかなようにイノシン酸Ｋ、アデニル酸Ｎａ、グアニル酸Ｎａをシュークロースと混合して経口投与したとき、１５分後の血糖値上昇及びインスリン分泌を統計学上有意に抑制することがわかる。
【００５１】
豚小腸より得たα−グルコシダーゼ粗酵素の阻害作用に関する前記比較例２、３において、ヌクレオチド類（又はイノシン酸類）はほとんど阻害作用を示さなかった（前記表２、表３参照）。このことからイノシン酸類の投与が１５分後の血糖値上昇及びインスリン分泌を抑制しないことが想定されたが、本実施例７はこれと相反する結果となった。これは園田らの報告〔Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  ５２１．５５−６６，（１９７８）〕にあるように摂取したヌクレオチド類（又はイノシン酸類）が小腸に至るあいだに酵素分解を受け、ヌクレオチドから相当するヌクレオシドに分解され（一部は更に塩基まで分解される）消化吸収されることが知られており、この時分解生成したヌクレオシド類が、図５及び図６で示したように、強くα−グルコシダーゼの作用を阻害し、これが血糖値上昇及びインスリン分泌を抑制することになると推定される。
【００５２】
〔実施例８〕
本実施例８は糖質としてデンプンを使用して各α−グルコシダーゼ阻害剤（アデノシン、シトシン、イノシン）を混合したときの、糖質負荷後の血糖値上昇抑制作用とインスリン分泌抑制作用を調べた実施例である。
【００５３】
前記実施例５と同様な方法でデンプンに、各α−グルコシダーゼ阻害剤（アデノシン、シトシン、イノシン）混合した糖液について血糖値上昇抑制作用とインスリン分泌抑制作用を投与後１５分で調べた。その結果を下記の表７に示す。
【００５４】
【表７】
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表７で明らかなようにアデノシン、シトシン、イノシンは、デンプンと混合して経口投与したとき、対照区と比較すると１５分後の血糖値上昇及びインスリン分泌ともに抑制することがわかる。
【００５５】
〔実施例９〕
マウスの体重増加抑制作用試験
４週齢のＳｕｇａｇｕｅ−ｄａｗｌｅｙ系雄ラットを下記の表８に示した成分組成の基準食で３日間予備飼育し、体重に差のないように１群６匹、５群に分けた。飼育は、１匹ずつアパートメント形式のゲージで、飼料及び飲料水は自由摂取させた。飼育室内温度は２２±１℃、飼育期間中の明期を７：００〜１９：００、暗期を１９：００〜７：００までの１２時間毎の明暗２サイクルとした。
【００５６】
各ラットに与えた飼料は下記の表８の成分組成であり、Ａ群は糖質としてシュークロースを使用した基準食、Ｂ及びＣ群はそれぞれシュークロースの１％又は５％をアデノシンに置き換えた試験飼料食、Ｄ及びＥ群はそれぞれシュークロースの１％又は５％をイノシンに置き換えた試験飼料食とした。体重測定は開始時より週毎に５回実施し、試験終了時に採血、解剖を行った。
【００５７】
試験群
Ａ群：シュークロース（基準食）
Ｂ群：１％アデノシン添加区
Ｃ群：５％アデノシン添加区
Ｄ群：１％イノシン添加区
Ｅ群：５％イノシン添加区
【００５８】
【表８】
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実験開始時に５％イノシン・５％アデノシン添加区に軽微な軟便傾向が見られたが、実験動物の一般的健康状態及び行動に異常は見られず、死亡例も皆無であった。また試験終了時に行った解剖において内臓に異常は認められなかった。
【００５９】
実験動物の体重変化を示すグラフを図７に示し、またその体重増加量を下記の表９に示す。
【００６０】
【表９】
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表９及び図７に示すように、５週間飼育後のアデノシン又はイノシン添加飼料群の体重を基準食群と比較すると、体重増加が少なく、その効果はアデノシン又はイノシンの添加量が増えると大きくなった。５％アデノシン添加（Ｃ）群は有意水準５％で、５％イノシン添加（Ｅ）群は有意水準１％で基準食群と統計的に有意な差が認められた。
【００６１】
〔実施例１０〕
ヒトに対する実施例
過去に消化器疾患（腸管切除など）がなく、糖尿病の疾患がなく、＋２ＳＤ以下の肥満者でない健康な成人男性２名を、ケースＩとケースＩＩに分けた。ケースＩでは対照液としてシュークロース５０ｇ、被検液としてシュークロース５０ｇにアデノシン２．５ｇを混合した糖液を、ケースＩＩでは対照液としてシュークロース５０ｇ、被検液としてシュークロース５０ｇにアデノシン１ｇを混合した糖液を被験者に飲ませ、それぞれ０分、３０分、６０分、９０分、１２０分後に静脈から血液を採取し、そのグルコース濃度とインスリン濃度を測定した。なお、糖液量は３００ｍｌとし、被験者と試験施行者には溶液の内容を知らせない二重盲検法で実施した。また、対照液と被験液の検査は、３日間の間隔をあけて実施した。また同様に、アデノシンをイノシンに置き換えて、ケースＩＩＩ  、ケースＩＶの試験を実施した。
【００６２】
その結果を図８〜図１５にグラフとして示した。アデノシンを混合した場合、ケースＩの血糖値の変化を図８に及びそのインスリン変化については図９に、ケースＩＩの血糖値の変化を図１０に、及びそのインスリン変化を図１１にそれぞれ示した。イノシンを混合した場合、同様にケースＩＩＩ  の血糖値の変化を図１２に及びそのインスリン変化については図１３に、ケースＩＶの血糖値の変化を図１４に及びそのインスリン変化を図１５に示した。図８〜図１５によれば、いずれのケースについても投与後最大となる３０分後の血糖値について、対照液と被験液とを比較したところ被験液は明らかに低く、また、インスリン濃度が上昇していないことがわかる。実施期間中、被験者は腹痛、下痢及び腹部膨満感の症状はなかった。
【００６３】
〔実施例１１〕
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤をコーヒーに対して甘味料として使用した場合の実施例
以上の実施例で示した、α−グルコシダーゼ阻害効果の認められる量的範囲でシュークロース１００重量部に対し、アデノシン、イノシンを各１重量部及び５重量部混合した甘味料を作った。シュークロースのみを１０％溶解したサンプルを対照とし、上記甘味料を同量溶解したサンプルを試験区とした。
【００６４】
それぞれのコーヒー溶液を熟練された１０名のパネラーに飲ませ、その味質についての官能テストを行った。その結果、１０名の内２名が、５％アデノシン添加コーヒーの方に、軽い苦みと渋みを感じ、１名が後味の悪さを感じた。１０名の内１名が、５％イノシン・１％アデノシンに軽い苦みを感じ、１０名の内３名が、１％イノシン・１％アデノシンに好ましい渋みを感じ、他はサンプル間に差がないと答えた。この結果から、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、飲料に甘味料として使用できることがわかる。
【００６５】
〔実施例１２〕
本発明の甘味料を甘味素材として用い、バターロールを製造した実施例
前記実施例１１と同じ甘味料を用い、バターロールを作り官能試験を実施した。対照の甘味料としてシュークロースを用い、同様にバターロールを作った。対照のシュークロースを使用したバターロールの材料組成は、強力粉５００ｇ、食塩５ｇ、牛乳３００ｍｌ、卵黄２０ｇ、シュークロース４０ｇ、生イースト２５ｇで常法により製造した。この時一次発酵の状態は対照区より容量比約１０％増であった。
【００６６】
被験甘味料は、対照のデンプンとシュークロースに対し、イノシン又はアデノシンが６ｇすなわち炭水化物１００重量部に対して約１０重量部となるように調整し用いた。これを対照のシュークロースと置換した以外は、バターロールの材料組成を上記と同じにした。その結果、１０名の内３名が、硬く歯ごたえが好ましいと答えたが、味については差があると答えたものはいなかった。
【００６７】
〔実施例１３〕
本発明の甘味料を甘味素材として用い、スイートチョコレートを製造した実施例
前記実施例１１と同じ甘味料を用い、スイートチョコレートを作り官能試験を実施した。対照の甘味料としてシュークロースのみを用い同様にスイートチョコレートを作った。ビターチョコレートブロック１００ｇを粉末化し、甘味料あるいはシュークロースを加え溶解後固形化した。製造されたスイートチョコレートについては官能試験を前記実施例１１、１２と同じ方法で実施したが、味については特に苦みに差は見られなかった。
【００６８】
〔実施例１４〕
本発明の甘味料を甘味素材として用い、ハードキャンディーを製造した実施例
ショ糖２２０ｇに蒸留水８７ｇを加え３０分間で１７７℃まで加熱した。その後１００℃に保ち、イノシン又はアデノシン５ｇを３回に分け加え、よく撹拌した。その後あらかじめ用意した型に流し込み放冷した。対照として、イノシン又はアデノシンを添加しない以外は上記と同じ方法でハードキャンディーを製造した。その結果約２％のイノシン入又はアデノシン入のハードキャンディー２４９ｇを各々得ることができた。味・香りについてはイノシン又はアデノシンを含まない以外は全く同じ製造方法で製造したハードキャンディーと変わらなかった。
【００６９】
【発明の効果】
本発明に用いるα−グルコシダーゼ阻害剤を構成するヌクレオチド、ヌクレオシド又は核酸の構成成分である塩基は、シュークロース、デンプン及びデンプン由来のオリゴ糖から選ばれた１種又は２種以上の消化性糖類と併用して使用するとき、小腸の消化酵素であるα−グルコーダーゼの作用を緩慢に阻害し、急激な血糖値の上昇を抑制し、インスリンの分泌を低く抑える効果がある。
【００７０】
本発明に用いるα−グルコシダーゼ阻害剤はその阻害作用が緩慢であり、摂取される全炭水化物量（全糖質量）１００重量部に対して０．５〜３０重量部の大量のα−グルコシダーゼ阻害剤を配合させて使用することができるので、食品に添加混合できる食品素材あるいは甘味料として使用することができる。
【００７１】
本発明に用いるα−グルコシダーゼ阻害剤を含有する食品、甘味料は、健康な人には、肥満、糖尿病を含む成人病の予防に役立つことができ、また、肥満者や糖尿病患者には、従来のシュークロース、デンプン、及びデンプン由来のオリゴ糖等の糖類摂取の制限を緩和することが可能な、食事療法に適した幅広い食品、甘味料の提供が可能となる。
【００７２】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有する食品は、α−グルコシダーゼの作用を緩慢に阻害し、急激な血糖値の上昇を抑制し、インスリンの分泌を低く抑えるので、長期の摂取によって痩身効果が認められる。
【００７３】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有する飼料は、肥満傾向を緩和するので、ペットの肥満防止用或いは糖尿病予防用飼料として、また、脂肪付の少ない肉質の獣肉用動物の飼料として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】イノシンが豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する作用を示すグラフである。
【図２】アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジンが豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する作用を示すグラフである。
【図３】シトシン、アデニンが豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する作用を示すグラフである。
【図４】デオキシアデノシン、デオキシグアノシンが豚小腸の消化酵素α−グルコシダーゼを阻害する作用を示すグラフである。
【図５】シュークロース（Ｓｕｃ）にアデノシン（Ａｄｏ）又はイノシン（Ｉｎｏ）を混合したものを糖質としてラットに負荷した後の血糖値上昇抑制の経時変化を示すグラフ。
【図６】シュークロース（Ｓｕｃ）にアデノシン（Ａｄｏ）又はイノシン（Ｉｎｏ）を混合したものを糖質としてラットに負荷した後のインスリン濃度抑制作用の経時変化を示すグラフ。
【図７】シュークロースにアデノシン又はイノシンを混合したものを糖質としてラットに負荷した後のラットの平均体重の経時変化を示すグラフ。
【図８】シュークロース５０ｇとアデノシン２．５ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合の血糖値の経時変化を示すグラフ。
【図９】シュークロース５０ｇとアデノシン２．５ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合のインスリン濃度の経時変化を示すグラフ。
【図１０】シュークロース５０ｇとアデノシン１．０ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合の血糖値の経時変化を示すグラフ。
【図１１】シュークロース５０ｇとアデノシン１．０ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合のインスリン濃度の経時変化を示すグラフ。
【図１２】シュークロース５０ｇとイノシン２．５ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合の血糖値の経時変化を示すグラフ。
【図１３】シュークロース５０ｇとイノシン２．５ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合のインスリン濃度の経時変化を示すグラフ。
【図１４】シュークロース５０ｇとイノシン１．０ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合の血糖値の経時変化を示すグラフ。
【図１５】シュークロース５０ｇとイノシン１．０ｇを含む糖液をヒトに飲ませた場合のインスリン濃度の経時変化を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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