(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
球形炭を有効成分とする、エリスロポエチン抗貧血作用の増強剤。
【請求項２】
球形炭が球形活性炭である請求項１に記載の増強剤。
【請求項３】
球形炭が球形吸着炭である請求項１に記載の増強剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、球形炭を有効成分とする、エリスロポエチン、特にリコンビナント・エリスロポエチン（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＥＰＯ：以下、ｒＨｕＥＰＯと称することがある）による抗貧血作用の増強剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
遺伝子工学の発展により、貧血治療にｒＨｕＥＰＯ製剤が使われるようになった。エリスロポエチンは生体内に存在する造血促進因子の一つであり、貧血の一因としてエリスロポエチンの欠乏がある。ｒＨｕＥＰＯは、化学的、免疫学的及び生物学的にヒトのエリスロポエチンと同一であることが確認されている。
ｒＨｕＥＰＯは、１６５個のアミノ酸残基よりなる分子量約３万の糖タンパク質で、２か所（７−１６１及び２９−３３）にジスルフィド結合をもち、３本のＮ−グルコシド型糖鎖と１本のＯ−グルコシド型糖鎖が、２４番目、３８番目及び８３番目のアスパラギンと１２６番目のセリンにそれぞれ結合している。糖鎖構造の違いにより、各種のｒＨｕＥＰＯがある。ｒＨｕＥＰＯの例としては、現在商品化されているエポジン（商品名）やエスポー（商品名）などがある（岩川精吾，医学のあゆみ，Ｖｏｌ．１５５，Ｎｏ．１０，６３１−６３３，１９９０参照）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
通常、貧血がひどくなると血中のエリスロポエチン濃度は高くなる。ところが、腎性貧血患者の場合には、腎機能が正常の貧血患者に比べると、血中エリスロポエチン濃度が低い場合が多いだけでなく、造血抑制因子が存在するので、期待どおりにヘマトクリット値を上昇させるためには大量のｒＨｕＥＰＯを必要とする場合が多い。
しかしながら、ｒＨｕＥＰＯは、副作用として、血圧上昇、頭痛、高血圧性脳症、血栓形成による脳梗塞や心筋梗塞、網膜静脈閉塞、シャント閉塞、又は透析効率の低下などを起こす。また、ｒＨｕＥＰＯによるアレルギーあるいはアナフィラキシー様の症状としては、血圧低下、関節痛、そう痒感、浮腫、レッドアイ、胸部圧迫感、出血斑などが見られるといわれている。更に、発熱、発疹又は肝障害などが、一過性で軽度に見られることがある。副作用による高血圧は、抹消血管の収縮と血液粘度の上昇による抹消血管抵抗の増大によると考えられている。
本発明者は、ｒＨｕＥＰＯ投与による副作用を抑制する方法を鋭意研究した結果、球形炭を併用することにより、ｒＨｕＥＰＯの抗貧血作用を維持しながら、ｒＨｕＥＰＯの投与量を大幅に減少させ、前記の副作用を回避ないし軽減することができることを見出した。すなわち、ｒＨｕＥＰＯの抗貧血作用を球形炭が増強することを見出した。本発明は、こうした知見に基づくものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
従って、本発明は、球形炭を有効成分とする、エリスロポエチン抗貧血作用の増強剤に関する。すなわち、本発明は、抗貧血作用を有するエリスロポエチンに球形炭を併用して、エリスロポエチンによる抗貧血作用を増強する医薬製剤に関する。
【０００５】
以下、本発明を詳述する。
本発明の増強剤の有効成分として用いる球形炭は、医療に用いることのできる球形状の活性炭であれば特に限定されない。従来、解毒剤として医療に用いられている粉末状活性炭は副作用として便秘を引き起こし易く、病態時の便秘は特に危険であることから、この点が大きな欠点であった。
本発明で用いる球形炭は、粒径範囲として直径０．０５〜２ｍｍである。０．０５ｍｍ未満では、便秘などの副作用の除去に充分な効果がなく、２ｍｍを越えると服用し難いだけでなく、目的とする薬理効果も迅速に発現しない。球形炭の形状は、本発明の効果を得るために重要な因子の１つであり、実質的に球状であることが必要である。
【０００６】
球形炭の製造には、原料として、任意の活性炭原料、例えば、オガ屑、石炭、ヤシ殻、石油系若しくは石炭系の各種ピッチ類、又は有機合成高分子を用いることができ、石油系炭化水素を用いるのが好ましい。球形炭として球形活性炭及び／又は球形吸着炭を用いるのが好ましい。
【０００７】
本発明で用いることのできる球形活性炭は、直径０．０５〜２ｍｍの活性炭である。球形活性炭を製造する基本的な方法は、原料を炭化した後で活性化するものである。活性化の方法としては、水蒸気賦活、薬品賦活、空気賦活又は炭酸ガス賦活などの種々の公知の方法を用いることができる。球形活性炭は、例えば、以下の３種の方法で調製することができる。まず第１の方法は、粉末原料をピッチ等のバインダーで小粒球形に造粒し、次いで不活性雰囲気中で６００〜１０００℃に加熱焼成して炭化し、続いて、水蒸気雰囲気中で８５０〜１０００℃で賦活する。第２の方法は、例えば特公昭５１−７６号公報に記載されているように、ピッチ類を溶融状態で小粒球形状にし、次いで酸素により不融化した後、上記の第１の方法と同様の条件で炭化賦活するものである。第３の方法は、例えば特公昭５９−１０９３０号公報に記載されているように、ピッチ類を溶融状態で紐状ピッチとし、これを破砕した後で熱水中に投入して球状化し、次いで酸素により不融化した後、上記の第１の方法と同様の条件で炭化賦活する。
【０００８】
本発明で用いることのできる球形吸着炭は、直径が０．０５〜２ｍｍ、細孔半径８０オングストローム以下の空隙量が０．２〜１．０ｍｌ／ｇ、全酸性基（Ａ）が０．３０〜１．２０ｍｅｑ／ｇ、全塩基性基（Ｂ）が０．２０〜０．７０ｍｅｑ／ｇ、そして全酸性基（Ａ）／全塩基性基（Ｂ）が０．４０〜２．５の活性炭であることが好ましい。このような球形吸着炭の一例として、特公昭６２−１１６１１号公報（米国特許第４６８１７６４号明細書）に記載の球形炭素質吸着剤を挙げることができる。
【０００９】
球形吸着炭は、直径０．０５〜２ｍｍ、及び細孔半径８０オングストローム以下の空隙量０．２〜１．０ｍｌ／ｇの球形活性炭を、更に、高温で酸化処理及び還元処理して調製することができる。高温での酸化及び還元処理により、得られる球形吸着炭の酸性基及び塩基性基を、全酸性基（Ａ）０．３０〜１．２０ｍｅｑ／ｇ、全塩基性基（Ｂ）０．２０〜０．７０ｍｅｑ／ｇ、及び全酸性基（Ａ）／全塩基性基（Ｂ）０．４０〜２．５の範囲に調整するのが好ましい。ここで、全酸性基（Ａ）及び全塩基性基（Ｂ）とは、常法によって以下のように定量される物性である。
（イ）全酸性基（Ａ）
０．０５規定のＮａＯＨ溶液５０ｍｌ中に、２００メッシュ以下に粉砕した球形吸着炭１ｇを添加し、４８時間振盪した後、球形吸着炭を濾別し、中和滴定により求められるＮａＯＨの消費量。
（ロ）全塩基性基（Ｂ）
０．０５規定のＨＣｌ溶液５０ｍｌ中に、２００メッシュ以下に粉砕した球形吸着炭１ｇを添加し、２４時間振盪した後、球形吸着炭を濾別し、中和滴定により求められるＨＣｌの消費量。
【００１０】
高温での酸化処理とは、酸化雰囲気で高温熱処理をすることである。酸素源としては純粋な酸素、酸化窒素又は空気等を用いることができる。また、高温での還元処理とは、炭素に対して不活性な雰囲気で高温熱処理をすることである。炭素に対して不活性な雰囲気としては、窒素、アルゴン若しくはヘリウムなど、又はそれらの混合系を用いることができる。酸化熱処理は、好ましくは酸素含有量０．５〜２５容量％、より好ましくは酸素含有量３〜１０容量％の雰囲気中で、好ましくは３００〜７００℃、より好ましくは４００〜６００℃の温度で行われる。還元処理は、好ましくは７００〜１１００℃、より好ましくは８００〜１０００℃の温度で窒素雰囲気中で行われる。
【００１１】
本発明の増強剤は、抗貧血作用を有する任意のエリスロポエチン、特にはｒＨｕＥＰＯと併用する。ｒＨｕＥＰＯとしては、例えば遺伝子工学の手法を用いて、ヒトエリスロポエチンの少なくとも活性部位をコードする遺伝子を含むベクターで形質転換された各種の哺乳動物細胞宿主から産生される各種ｒＨｕＥＰＯを用いることができる。
【００１２】
本発明者は、貧血ラットにｒＨｕＥＰＯの有効量のみを皮下投与した場合と比較しながら、球形吸着炭の経口投与とｒＨｕＥＰＯの皮下投与との併用効果を調べたところ、驚くべきことに、球形炭との併用の場合にはｒＨｕＥＰＯ投与量を半量にしても、ｒＨｕＥＰＯ有効量のみを皮下投与したのと同じ効果があることを見出した。すなわち、球形炭は、ｒＨｕＥＰＯの抗貧血作用を増強し、ｒＨｕＥＰＯ抗貧血作用の増強剤として有用であることが分かった。なお、本発明の増強剤を正常ラットに投与した場合には、何ら異常を引き起こさなかった。
【００１３】
本発明の抗貧血作用増強剤は、経口的に投与されるが、その投与量は、対象（動物又はヒト）、年齢、個人差、病状などに依存する。例えば、ヒトの場合の経口投与量は、通常１日当たり、球形炭０．２〜２０ｇであり、１回又は２〜４回に分けて服用してもよい。症状により、投与量を適宜増減してもよい。球形炭製剤は、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、スティック剤、分包包装体又は懸濁剤などの任意の投与形態で与えることができる。カプセル剤として服用する場合は、通常のゼラチンカプセル、又は、必要に応じ、腸溶性のカプセルを用いることもできる。顆粒、錠剤又は糖衣錠として用いる場合は、体内でもとの微小粒体に解錠されることが必要である。
【００１４】
エリスロポエチンの投与は通常の方法でよく、一般には注射剤として、静脈内、皮下又は腹腔内などに投与される。通常のｒＨｕＥＰＯのみを投与する場合の投与法の一例は、以下のとおりである。
すなわち、成人に対して１回に３０００単位で週３回、できるだけ緩徐に静脈内投与する。そして、貧血の改善効果が認められたら、維持量として、成人に対して１回に１５００単位で週に２回若しくは３回、又は１回に３０００単位で週２回投与する。貧血改善の目標値としては、ヘマトクリット値で３０％前後である。ヘマトクリット値が１週間以内に１％以上上昇しないことが副作用を防止するために重要である。
【００１５】
本発明の増強剤を併用する場合のエリスロポエチン（ｒＨｕＥＰＯ）の投与量は、ｒＨｕＥＰＯのみを抗貧血剤として用いる場合の前記の投与量の５〜９０％、好ましくは３０〜９０％の量で用いることができる。
本発明の球形炭増強剤の投与時期とエリスロポエチン抗貧血剤の投与時期とは、自由に選択して組み合わせることができる。例えば、相前後してもよいし、重複してもよい。また、一部分の時期のみ重複してもよい。更に、このような投与スケジュールを適当に組み合わせたり、繰り返したりすることもできる。
【００１６】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
製造例１：球形吸着炭の調製
偏向顕微鏡下の異方性領域が偏在しないピッチ（水素原子／炭素原子比＝０．５５；流動点＝２２０℃）３００ｇ及びナフタレン１００ｇを攪拌機付きオートクレーブに仕込み、１８０℃で溶解混合し、ポリビニルアルコール（ゴーセノールＧＨ−１７）の０．５％水溶液１２００ｇを加え、次いで１４０℃で３０分間激しく攪拌した後、攪拌下で室温まで冷却して球形粒子を得た。大部分の水を濾別した後、得られた球形粒子を抽出器に入れ、ヘキサンを通液してナフタレンを抽出除去し、通風乾燥した。次いで、流動床を用いて、加熱空気を流通して２５℃／Ｈｒで３００℃まで昇温し、更に３００℃に２時間保持して不融化した。続いて、水蒸気中で９００℃まで昇温し、９００℃で２時間保持して炭化賦活を行い、多孔質の球形活性炭を得た。得られた球形活性炭の直径は０．０５〜１．０ｍｍであり、細孔半径８０オングストローム以下の空隙量は０．７５５ｍｌ／ｇであった（自動吸着量測定装置を用いたメタノール吸着法による）。
こうして得られた炭素質球状体を、流動床を用いて、６００℃で酸素濃度３％の雰囲気下で３時間処理した後、窒素雰囲気下で９５０℃まで昇温し、９５０℃で３０分間保持して、球形吸着炭（以下、試料１と称す）を得た。この球形吸着炭の直径は０．０５〜１ｍｍであり、細孔半径８０オングストローム以下の空隙量は０．７５１ｍｌ／ｇ（自動吸着量測定装置を用いたメタノール吸着法による）、全酸性基（Ａ）は０．５４２ｍｅｑ／ｇ、全塩基性基（Ｂ）は０．５２５ｍｅｑ／ｇ、そして全酸性基（Ａ）／全塩基性基（Ｂ）は１．０３であった。
なお、ラット（Ｃｐｂ：ＷＵ：ウイスターランダム）への経口投与による急性毒性試験では、毒性試験法ガイドライン（薬審第１１８号）による最大投与量（雌雄ラット５０００ｍｇ／ｋｇ）においても異常は観察されなかった。
【００１７】
実施例１：貧血ラットに対する抗貧血作用増強作用
抗貧血作用増強剤の有効成分である球形吸着炭として前記製造例１で得た試料１を用いた。
ｒＨｕＥＰＯとしては、エポエチンアルファ（遺伝子組換え）〔麒麟麦酒（株）のエスポー（商品名）〕を用いた。エポエチンアルファは、ヒト肝細胞に由来するエリスロポエチンゲノムＤＮＡの発現により、チャイニーズハムスター卵巣細胞で産生される１６５個のアミノ酸残基（Ｃ８０９  Ｈ１３０１Ｎ２２９  Ｏ２４０  Ｓ５  ；分子量：１８，２３５．９６  ）からなる糖たん白質（分子量；約３０，０００）である。
ウイスター雄ラット（体重２６０ｇ前後）を使用し、腎動脈分枝部分結紮法により、腎性貧血を発症させた。手術後９日目に、ヘマトクリット値を測定し、群間に偏りのないように選択して、対照群（Ｃ群）、球形吸着炭投与群（Ａ群）、ｒＨｕＥＰＯ単独投与群（Ｅ群）、ｒＨｕＥＰＯ半量投与群（Ｅ１／２群）、球形吸着炭とｒＨｕＥＰＯ半量との併用投与群（ＡＥ１／２群）、及び球形吸着炭とｒＨｕＥＰＯ１／３量との併用投与群（ＡＥ１／３群）の６群に分けた。
試験期間は３週間とした。各群に、ラット飼料を自由に摂取させた。各群に対する薬物投与は、具体的には以下のように実施した。
Ｃ群：生理食塩水０．４ｍｌ／ｋｇ（ラット体重）を週２回の割合で皮下投与した。
Ａ群：ラット飼料に球形吸着炭を５％混合し、自由に摂取させた。
Ｅ群：ｒＨｕＥＰＯの生理食塩水溶液〔６０ｕｎｉｔ／ｋｇ（ラット体重）〕を週２回の割合で皮下投与した。
Ｅ１／２群：ｒＨｕＥＰＯの生理食塩水溶液〔３０ｕｎｉｔ／ｋｇ（ラット体重）〕を週２回の割合で皮下投与した。
ＡＥ１／２群：ラット飼料に球形吸着炭を５％混合して自由に摂取させると共に、ｒＨｕＥＰＯの生理食塩水溶液〔３０ｕｎｉｔ／ｋｇ（ラット体重）〕を週２回の割合で皮下投与した。
ＡＥ１／３群：ラット飼料に球形吸着炭を５％混合して自由に摂取させると共に、ｒＨｕＥＰＯの生理食塩水溶液〔２０ｕｎｉｔ／ｋｇ（ラット体重）〕を週２回の割合で皮下投与した。
３週間の試験期間終了後に、頸静脈より採血してヘマトクリット値を測定した。結果を表１に示す。
【００１８】
【表１】
0003585514.tif 000002
【００１９】
Ｃ群では試験開始時に比べてヘマトクリット値の低下があり、貧血の進行が観察されたのに対し、Ａ群ではヘマトクリット値の低下が若干抑制された。Ｅ群では試験開始時よりもヘマトクリット値が増加し、貧血が抑制された。これに対し、Ｅ１／２群では試験開始時よりもヘマトクリット値が少し低下した。ところが、本発明によるＡＥ１／２群では、試験開始時よりもヘマトクリット値が増加し、その値はＥ１／２群と比較して高値となり、Ｅ群と同程度に貧血が抑制された。Ｅ群とＡＥ１／２群との間には有意差はなかった。Ｅ群とＡＥ１／３群との間にも有意差はなかった。すなわち、球形吸着炭と併用することによりｒＨｕＥＰＯは半量投与でも、また、１／３量投与でも、ｒＨｕＥＰＯのみの投与と同程度の効果があることを示した。なお、正常ラットのヘマトクリット値は、４３〜４９％である。また、摂餌量から計算した抗貧血作用増強剤（球形吸着炭）の投与量は、約１８．８ｇ／ｋｇ（ラット体重）／週であった。
【００２０】
製剤調製例１：カプセル剤の調製
前記製造例１で得た球形吸着炭２００ｍｇをゼラチンカプセルに封入してカプセル剤を調製した。
【００２１】
製剤調製例２：スティック剤の調製
前記製造例１で得た球形吸着炭２ｇを積層フィルム（構成＝グラシン／ポリエチレン／アルミニウム箔／ポリエチレン／ポリ塩化ビニリデン；厚さ＝７４±８μｍ）製スティックに充填した後、ヒートシールしてスティック剤とした。
【００２２】
【発明の効果】
ｒＨｕＥＰＯ抗貧血剤を用いる場合に、球形炭からなる本発明の増強剤を併用することにより、ｒＨｕＥＰＯの抗貧血作用は著しく増強されて、ｒＨｕＥＰＯの投与量を著しく少なくすることができる。従って、ｒＨｕＥＰＯによる副作用は、著しく軽減される。