【手続補正書】
【提出日】平成27年2月17日(2015.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１又は２以上の第１可変ドメインと、１又は２以上の第２可変ドメインとを含む二重特異的ポリペプチドであって、
前記第１可変ドメインが第１エピトープに結合し、前記第２可変ドメインが前記第１エピトープとは異なる第２エピトープに結合し、
前記第１可変ドメインと第２可変ドメインとが共に、前記第１エピトープ又は前記第２エピトープのいずれかに結合し、かつ
前記第１可変ドメイン及び／又は前記第２可変ドメインが、所望の安定性を示し、以下の（１）又は（２）の方法によって得られるウサギ可変ドメインである、二重特異的ポリペプチド。
（１）ａ）ファージ発現ライブラリーから、前記第１エピトープ又は第２エピトープと免疫特異的に結合する可変ドメインをコードする一組のＤＮＡ配列を選択するステップであって、前記ファージ発現ライブラリーが、免疫グロブリンを発現する細胞を含有するウサギの生体試料から取得された、可変ドメインをコードするＤＮＡ又はｃＤＮＡ配列から調製されるステップと、
ｂ）前記一組のＤＮＡ配列又はそのサブセットをＣＡＴとの融合タンパク質として細菌内で発現させ、ＣＡＴ発現によるクロラムフェニコール耐性を有する細菌を選択し、前記選択された細菌からウサギ可変ドメインに対応するアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を取得するステップとを含む第１の方法であって、前記ＣＡＴ−融合によって付与された細菌のクロラムフェニコール耐性が、ＣＡＴに融合させた前記アミノ酸配列の安定性と相関し、前記選択が、所望の安定性を選択するのに十分なクロラムフェニコール濃度で行われる、第１の方法；
（２）ａ）可変ドメインをコードするＤＮＡ又はｃＤＮＡ配列をＣＡＴとの融合タンパク質として細菌内で発現させるステップであって、前記ＤＮＡ又はｃＤＮＡ配列が、免疫グロブリンを発現する細胞を含有するウサギの生体試料から取得されたステップと、
ｂ）ＣＡＴ発現によるクロラムフェニコール耐性を有する細菌を選択し、前記選択された細菌からウサギ可変ドメインに対応するアミノ酸配列をコードする一組のＤＮＡ配列を取得し、前記ＣＡＴ−融合によって付与された細菌のクロラムフェニコール耐性が、ＣＡＴに融合させた前記アミノ酸配列の安定性と相関し、前記選択が、前記所望の安定性を選択するのに十分なクロラムフェニコール濃度で行われる、ステップと、
ｃ）ファージ発現ライブラリーから、前記エピトープと免疫特異的に結合する可変ドメインをコードするＤＮＡ配列を選択するステップであって、前記ライブラリーが前記一組のＤＮＡ配列又はそのサブセットから調製される、ステップとを含む第２の方法
【請求項２】
第１可変ドメインがＶＨドメインであり、第２可変ドメインがＶＬドメインである、請求項１に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項３】
第１可変ドメイン及び第２可変ドメインのそれぞれがＶＨドメインである、請求項１に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項４】
第１可変ドメイン及び第２可変ドメインのそれぞれがＶＬドメインである、請求項１に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項５】
第１可変ドメイン及び第２可変ドメインのそれぞれがＩｇＧ可変ドメインである、請求項１〜４のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項６】
第１可変ドメインの１若しくは２以上、及び／又は第２可変ドメインの１若しくは２以上がヒト化可変ドメインである、請求項１又は２に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項７】
ヒト化可変ドメインが、１又は２以上のウサギ相補性決定領域（ＣＤＲ）及び１又は２以上のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、請求項６に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項８】
第１可変ドメイン及び第２可変ドメインの少なくとも１つがヒト可変ドメインである、請求項１又は２に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項９】
第１可変ドメイン及び／又は第２可変ドメインが、第１の方法又は第２の方法により取得され、前記第１の方法又は前記第２の方法が、前記第１の方法又は前記第２の方法により取得された可変ドメインをＩｇＧ定常ドメインと会合させ、完全なＩｇＧ四量体を形成するステップをさらに含む、請求項１〜８のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１０】
１又は２以上の第１可変ドメインと、１又は２以上の第２可変ドメインとを含む二重特異的ポリペプチドであって、
前記第１可変ドメインが第１エピトープに結合し、前記第２可変ドメインが前記第１エピトープとは異なる第２エピトープに結合し、
前記第１可変ドメイン及び第２可変ドメインが、前記第１エピトープ又は前記第２エピトープのいずれかに結合する抗原結合部位を形成し、かつ
前記第１可変ドメイン及び／又は前記第２可変ドメインが、
（ａ）アミノ酸配列QEQLMETESGGGAEGGLVKPGASLTLTCTAS（配列番号５７）を有するＶＨ ＦＲ１ドメイン；
（ｂ）アミノ酸配列YATWVNGRFTLSRDIDQSTGCLQLNSLTAADTATYYCAR（配列番号９５）を有するＶＨ ＦＲ３ドメイン；
（ｃ）アミノ酸配列ELVLTQTPPSLSASVGETVRIRC（配列番号１５０）を有するＶＬ ＦＲ１ドメイン；
（ｄ）アミノ酸配列GVSSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCADAATYYC（配列番号２０５）を有するＶＬ ＦＲ３ドメイン；及び
（ｅ）アミノ酸配列FAFGGGTELEIL（配列番号２１０）を有するＶＬ ＦＲ４ドメイン
からなる群から選択される配列を含む、二重特異的ポリペプチド。
【請求項１１】
（ｆ）アミノ酸配列WVRQAPGKGLEWIG（配列番号６９）を有するＶＨ ＦＲ２ドメイン；
（ｇ）アミノ酸配列WGQGTLVTVSS（配列番号１３９）を有するＶＨ ＦＲ４ドメイン；
（ｈ）アミノ酸配列ELVLTQTPSSVSAAVGGTVTINC（配列番号１５５）を有するＶＬ ＦＲ１ドメイン；
（ｉ）アミノ酸配列WYQQKPEKPPTLLIS（配列番号１７４）又はWYQQKPGQRPKLLIY（配列番号１８１）を有するＶＬ ＦＲ２ドメイン；
（ｊ）アミノ酸配列GVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDVATYYC（配列番号１８３）を有するＶＬ ＦＲ３ドメイン；及び
（ｋ）アミノ酸配列FGAGTNVEIK（配列番号２０６）を有するＶＬ ＦＲ４ドメイン
の少なくとも１つをさらに含む、請求項１０に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１２】
第１可変ドメイン及び／又は第２可変ドメインが、
（ａ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの４６位フェニルアラニン；
（ｂ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５３位グルタミン酸；
（ｃ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５４位アルギニン；
（ｄ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５６位グリシン；
（ｅ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５８位アラニン；
（ｆ）ＶＨ ＣＤＲ１ドメインの４４位システイン；
（ｇ）ＶＨ ＣＤＲ２ドメインの５９位システイン；
（ｈ）ＶＨ ＦＲ４ドメインの１２６位アルギニン；
（ｉ）ＶＬ ＦＲ２ドメインの３９位フェニルアラニン又はチロシン；
（ｊ）ＶＬ ＦＲ２ドメインの４５位リジン；及び
（ｋ）ＶＬ ＦＲ３ドメインの９１位システイン
の少なくとも１つをさらに含み、
前記（ａ）〜（ｈ）位置が、１〜３１位のＦＲ１ドメイン、３２〜４４位のＣＤＲ１ドメイン、４５〜５８位のＦＲ２ドメイン、５９〜６９位のＣＤＲ２ドメイン、７０〜１１０位のＦＲ３ドメイン、１１１〜１２５位のＣＤＲ３ドメイン、及び１２６〜１３６位のＦＲ４ドメインに対応するＶＨドメイン配列アラインメントの位置に一致し、かつ
前記（ｉ）〜（ｋ）位置が、１〜２３位のＦＲ１ドメイン、２４〜３７位のＣＤＲ１ドメイン、３８〜５２位のＦＲ２ドメイン、５３〜５９位のＣＤＲ２ドメイン、６０〜９１位のＦＲ３ドメイン、９２〜１０５位のＦＲ４ドメイン、及び１０６〜１１６Ｂ位のＦＲ４ドメインに対応するＶＬドメイン配列アラインメントの位置に一致する、
請求項１０又は１１に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１３】
１又は２以上の第１可変ドメインと、１又は２以上の第２可変ドメインとを含む二重特異的ポリペプチドであって、
前記第１可変ドメインが第１エピトープに結合し、前記第２可変ドメインが前記第１エピトープとは異なる第２エピトープに結合し、
前記第１可変ドメイン及び第２可変ドメインが、前記第１エピトープ又は前記第２エピトープのいずれかに結合する抗原結合部位を形成し、かつ
前記第１可変ドメイン及び／又は前記第２可変ドメインが、
（Ｆ）アミノ酸配列WVRQAPGKGLEWIG（配列番号６９）を有するＶＨ ＦＲ２ドメイン；
（Ｇ）アミノ酸配列WGQGTLVTVSS（配列番号１３９）を有するＶＨ ＦＲ４ドメイン；
（Ｈ）アミノ酸配列ELVLTQTPSSVSAAVGGTVTINC（配列番号１５５）を有するＶＬ ＦＲ１ドメイン；
（Ｉ）アミノ酸配列WYQQKPEKPPTLLIS（配列番号１７４）又はWYQQKPGQRPKLLIY（配列番号１８１）を有するＶＬ ＦＲ２ドメイン；
（Ｊ）アミノ酸配列GVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDVATYYC（配列番号１８３）を有するＶＬ ＦＲ３ドメイン；及び
（Ｋ）アミノ酸配列FGAGTNVEIK（配列番号２０６）を有するＶＬ ＦＲ４ドメイン
からなる群から選択される配列を含み、かつ、
前記ポリペプチドが、
（ａ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの４６位フェニルアラニン；
（ｂ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５３位グルタミン酸；
（ｃ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５４位アルギニン；
（ｄ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５６位グリシン；
（ｅ）ＶＨ ＦＲ２ドメインの５８位アラニン；
（ｆ）ＶＨ ＣＤＲ１ドメインの４４位システイン；
（ｇ）ＶＨ ＣＤＲ２ドメインの５９位システイン；
（ｈ）ＶＨ ＦＲ４ドメインの１２６位アルギニン；
（ｉ）ＶＬ ＦＲ２ドメインの３９位フェニルアラニン又はチロシン；
（ｊ）ＶＬ ＦＲ２ドメインの４５位リジン；及び
（ｋ）ＶＬ ＦＲ３ドメインの９１位システイン
の少なくとも１つをさらに含み、
前記（ａ）〜（ｈ）位置が、１〜３１位のＦＲ１ドメイン、３２〜４４位のＣＤＲ１ドメイン、４５〜５８位のＦＲ２ドメイン、５９〜６９位のＣＤＲ２ドメイン、７０〜１１０位のＦＲ３ドメイン、１１１〜１２５位のＣＤＲ３ドメイン、及び１２６〜１３６位のＦＲ４ドメインに対応するＶＨドメイン配列アラインメントの位置に一致し、かつ
前記（ｉ）〜（ｋ）位置が、１〜２３位のＦＲ１ドメイン、２４〜３７位のＣＤＲ１ドメイン、３８〜５２位のＦＲ２ドメイン、５３〜５９位のＣＤＲ２ドメイン、６０〜９１位のＦＲ３ドメイン、９２〜１０５位のＦＲ４ドメイン、及び１０６〜１１６Ｂ位のＦＲ４ドメインに対応するＶＬドメイン配列アラインメントの位置に一致する、二重特異的ポリペプチド。
【請求項１４】
軽鎖定常領域又は重鎖定常領域における１又は２以上の免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記ドメインが、ＣＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインからなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１５】
免疫グロブリン定常ドメインが、ヒトＩｇＧ定常領域のドメインである、請求項１４に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１６】
第１可変ドメイン及び／又は第２可変ドメインが、
Ｖｉｆ、ＨＩＶ ＧＰ４１、ＨＩＶインテグラーゼ、ＴＮＦ−アルファ、ｖＷＦ、Ｄｅｌｔａ４、アブリン、リシンＡ、ＰＥ−４０、ジフテリア毒素、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＮＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＰＡ、ＴＮＦ−ベータ、ＡＩＭ Ｉ、ＡＩＭ II、Ｆａｓリガンド、ＶＥＧＩ、アンギオスタチン、エンドスタチン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＨ、プロテアーゼ、及びリボヌクレアーゼ
からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１７】
第１可変ドメイン及び／又は第２可変ドメインが、ＴＮＦ−アルファ及びＤｅｌｔａ４からなる群から選択される抗原のエピトープに結合する、請求項１６に記載の二重特異的ポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチドと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１９】
それを必要とする対象において疾患又は障害を治療及び／又は予防するための薬剤の調製のための、請求項１〜１７のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチドの有効量の使用。
【請求項２０】
疾患又は障害が、ＴＮＦ−アルファ又はＤｅｌｔａ４に関する状態である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれかに記載の二重特異的ポリペプチドを作製する方法であって、
１又は２以上の第１可変ドメインを提供するステップと、
１又は２以上の第２可変ドメインを提供するステップと、
前記第１可変ドメインと、前記第２可変ドメインとを会合させて前記二重特異的ポリペプチドを作製するステップと
を含む方法。