【手続補正書】
【提出日】平成27年10月16日(2015.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物の混合物から、目的の炭水化物エピトープを含む炭水化物陽性微生物を分離するための方法であって、
（ａ）該目的の炭水化物エピトープに対して特異的な炭水化物結合分子を微生物の混合物と接触させる工程、および
（ｂ）該混合物から、該炭水化物結合分子に結合した少なくとも１つの微生物を分離する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、工程（ｂ）の後に、以下の工程：
（ｃ）前記炭水化物結合分子に対する特異的結合について、前記分離された微生物を試験することによって、該分離された微生物が炭水化物陽性微生物であることを試験する工程
をさらに包含する、方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法であって：
（ｄ）前記微生物ならびに／またはその部分および／もしくは溶解物による、前記炭水化物エピトープに対する炭水化物特異的で有効な細胞性免疫応答および／または液性免疫応答の誘導をインビボまたはインビトロにおいて試験する工程であって；
ここで、工程（ｄ）は、人体中では行われない、工程
をさらに包含する、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、工程（ｄ）は、前記炭水化物陽性微生物ならびに／またはその部分および／もしくは溶解物による、前記炭水化物エピトープに対する、有効な炭水化物特異的細胞性免疫応答の誘導を、ＣＤ４陽性Ｔｈ１型Ｔ細胞の活性化および／または細胞傷害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化について試験する工程を包含する、方法。
【請求項５】
請求項３または４に記載の方法であって、工程（ｄ）における前記細胞性免疫応答の試験が、
ｉ．）少なくとも１つの樹状細胞に、工程（ａ）〜（ｃ）において同定された前記炭水化物陽性微生物細胞を負荷する工程；
ｉｉ．）該炭水化物陽性微生物を負荷された適当量の該少なくとも１つの樹状細胞を、樹状細胞によって活性化され得るかまたは抑制され得る適当量の免疫細胞と接触させる工程；
ｉｉｉ．）該免疫細胞と該負荷された樹状細胞との相互作用を可能にするために培養する工程；
ｉｖ．）該炭水化物陽性微生物と同じ炭水化物エピトープを有する適当量の少なくとも１つの第２化合物を負荷された適当量の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を加える工程であって、ここで、該第２化合物は、該第１炭水化物陽性微生物と異なる、工程；
ｖ．）該免疫細胞の再刺激のために培養する工程；
ｖｉ．）該免疫細胞の再刺激が生じたか否かを測定する工程
を包含する、方法。
【請求項６】
適当量の前記第２化合物を負荷された前記ＡＰＣの少なくとも一部を、前記目的の炭水化物エピトープを認識する炭水化物結合分子の存在下において前記免疫細胞と接触させる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
請求項５または６に記載の方法であって、前記細胞性免疫応答試験が、以下の群：
（ｉ）工程（ｄ（ｖｉ））において、前記免疫細胞の再刺激が、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を測定することによって測定される、細胞性免疫応答試験１；
（ｉｉ）前記免疫細胞がリンパ球であり、工程（ｄ（ｖｉ））において、再刺激されたリンパ球の量／程度が、ＩＮＦγおよび／またはＴＮＦαの分泌の量を測定することによって測定される、細胞性免疫応答試験２；
（ｉｉｉ）前記免疫細胞がリンパ球であり、工程（ｄ（ｖｉ））において、再刺激されたリンパ球の量／程度が、増殖および／または増殖誘導を測定することによって測定される、細胞性免疫応答試験３；
（ｉｖ）
ａ）適当量のマーカーで標識された前記目的の炭水化物エピトープを含んでいる細胞株由来の適当量の標的細胞を、該目的の炭水化物エピトープに向けられた前記免疫細胞とともにインキュベートする工程、および
ｂ）該マーカーの放出を測定することによって該標的細胞の溶解を測定する工程であって、該炭水化物エピトープに対して陽性の細胞性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞の溶解のほうが炭水化物エピトープ陰性細胞の溶解よりも有意に高い溶解を示し、そして／または該炭水化物エピトープに対して陽性の細胞性免疫応答は、炭水化物エピトープに向けられた該免疫細胞とともにインキュベートされた、該炭水化物エピトープを含む細胞の溶解のほうが、該炭水化物エピトープに向けられていない対応するコントロール免疫細胞とともにインキュベートされた、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞の溶解よりも有意に高い溶解を示す工程
を包含する、該目的の炭水化物エピトープに対する、細胞性免疫応答試験５
から選択される、方法。
【請求項８】
請求項３または４に記載の方法であって、前記細胞性免疫応答試験が、
（ａ）適当量の前記炭水化物陽性微生物、その溶解物または部分を負荷された適当量の樹状細胞と、適当量の少なくとも１つの炭水化物結合分子とを接触させる工程；および
（ｂ）該樹状細胞に対する、該炭水化物結合分子の結合を試験する工程
を包含する、前記目的の炭水化物エピトープに対する細胞性免疫応答試験４である、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、ここで、
（ｉ）前記炭水化物陽性微生物またはその部分もしくは溶解物を動物に投与する工程；
（ｉｉ）該動物の血清、血漿もしくは便から得られた抗体を分離する工程；および
（ｉｉｉ）以下：
ａ．該抗体と、前記炭水化物エピトープを有する化合物との結合をＥＬＩＳＡにおいて試験する工程であって、該炭水化物エピトープに対して陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを有する化合物と該抗体との結合のほうが、該炭水化物エピトープを有しない該化合物または該炭水化物エピトープを破壊する酵素的もしくは化学的な処理後の化合物と該抗体との結合よりも有意に強い結合を示す工程を包含する、該炭水化物エピトープに対する液性免疫応答試験１；
ｂ．該抗体と、ポリアクリルアミドに結合した炭水化物構造（ＰＡＡ結合体）との結合をＥＬＩＳＡにおいて試験する工程であって、炭水化物エピトープに対して陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる該ＰＡＡ結合体と該抗体の結合のほうが、該炭水化物エピトープを破壊する酵素的もしくは化学的な処理後の同じＰＡＡ結合体との結合よりも有意に高い結合を示し、そして／または該炭水化物エピトープを含んでいるＰＡＡ結合体と該抗体との結合のほうが該炭水化物エピトープを含んでいないＰＡＡ結合体との結合に比べてより高い結合を示す工程を包含する、該炭水化物エピトープに対する液性免疫応答試験２；
ｃ．該抗体の結合を、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞および該炭水化物エピトープを含んでいない細胞との結合について、フローサイトメトリー試験において試験する工程であって、該炭水化物エピトープに対して陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞と該抗体との結合のほうが、該炭水化物エピトープが陰性の細胞と該抗体との結合よりも、有意に高い結合を示す工程を包含する、該炭水化物エピトープに対する液性免疫応答試験３；
ｄ．該抗体の結合を、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞および該炭水化物エピトープが陰性の細胞との結合について、免疫蛍光試験において試験する工程であって、該炭水化物エピトープに対する陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞と該抗体との結合のほうが、該炭水化物エピトープを含んでいない細胞および／または該炭水化物エピトープを破壊する酵素的もしくは化学的な処理後の該炭水化物エピトープを含んでいる細胞との結合よりも有意に高い結合を示す工程を包含する、該炭水化物エピトープに対する液性免疫応答試験４；
ｅ．ｉ）適当量のマーカーで標識された、該炭水化物エピトープを含んでいる適当量の細胞を、適当量の該抗体および適当量の補体とともにインキュベートする工程；
ｉｉ）インキュベートした後に該マーカーの放出を測定することによって該細胞の溶解を測定する工程であって、該炭水化物エピトープに対して陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞の溶解のほうが、該炭水化物エピトープを含んでいない細胞の溶解よりも有意に高い溶解を示し、そして／あるいは該炭水化物エピトープに対して陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞の溶解のほうが、補体のない溶解よりも、および／または該抗体のない溶解よりも、および／または該炭水化物エピトープを含んでいる細胞に結合しないかもしくはあまり結合しない、１つの抗体または複数の抗体を用いる溶解よりも高い溶解を示す工程
を包含する、該炭水化物エピトープに対する液性免疫応答試験５；
ｆ．ｉ）適当量のマーカーで標識された、該炭水化物エピトープを含んでいる適当量の細胞を、適当量の該抗体および適当量の免疫エフェクター細胞もしくは末梢血単核球とともにインキュベートする工程、および
ｉｉ）該インキュベートした後に該マーカーの放出を測定することによって該細胞の溶解を測定する工程であって、該炭水化物エピトープに対して陽性の液性免疫応答は、該炭水化物エピトープを含んでいる細胞の溶解のほうが、炭水化物エピトープ陰性細胞の溶解よりも、該抗体なしの溶解よりも、および／または該炭水化物エピトープを含んでいる細胞に結合しないかもしくは結合がより少ない、１つの抗体または複数の抗体を用いた溶解よりも、有意に高い溶解を示す工程
を包含する、該炭水化物エピトープに対する液性免疫応答試験６
からなる群から選択される液性免疫応答試験
によって、前記炭水化物エピトープに対して有効な炭水化物特異的液性免疫応答の誘導が試験される、方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法であって、
（ｉ）前記炭水化物エピトープは、ＴＦ、Ｃｏｒｅ−１、Ｔｎ、シアリル−Ｔｎ、シアリル−ＴＦ、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、シアリル−Ｌｅｗｉｓ−Ａ、シアリル−Ｌｅｗｉｓ−Ｘ、ポリシアル酸、Ｌｅｗｉｓ−Ｘ、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、９−Ｏ−アセチルＧＤ３、ＧＤ３Ｌ、フコシルＧＭ１、Ｌｅｗｉｓ−Ａ、Ｌｅｗｉｓ−Ｂ、ｓＬａｃ、シアル酸が付いた１型鎖、ＣＡ１９−９抗原、ＣＡ７２−４抗原およびＣＡ−５０抗原を含む群から選択され、そして
（ｉｉ）前記炭水化物結合分子は、ＴＦ、Ｃｏｒｅ−１、Ｔｎ、シアリル−Ｔｎ、シアリル−ＴＦ、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、シアリル−Ｌｅｗｉｓ−Ａ、シアリル−Ｌｅｗｉｓ−Ｘ、ポリシアル酸、Ｌｅｗｉｓ−Ｘ、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、９−Ｏ−アセチルＧＤ３、ＧＤ３Ｌ、フコシルＧＭ１、Ｌｅｗｉｓ−Ａ、Ｌｅｗｉｓ−Ｂ、ｓＬａｃ、シアル酸が付いた１型鎖、ＣＡ１９−９抗原、ＣＡ７２−４抗原もしくはＣＡ−５０抗原に結合するか、またはこれらの炭水化物エピトープのいずれかもしくはその一部を含んでいる炭水化物構造に結合する、レクチン、セレクチン、および／もしくは抗体、ならびに／またはそれに由来する分子を含む群から選択される、
方法。