(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0003594483.tif 000041
〔式中、Ｒ1がＯＨかつＲ3がＨであり、Ｒ2が−（ＣＨ＝ＣＨ）3−ＣＯＣＨ2ＣＨ3である場合に、次式のいずれか：
【化２】
0003594483.tif 000042
または
【化３】
0003594483.tif 000043
で表される脂肪酸又はその塩。
【請求項２】
低級脂肪族アルコールに可溶性であり、モロヘイヤから抽出、単離し得る、請求項１に記載の脂肪酸又はその塩を少なくとも１種含有することからなる脂肪酸抽出物。
【請求項３】
モロヘイヤを低級脂肪族アルコールで抽出処理し、抽出液を濃縮するかせずして酢酸エチル−水で分配処理し、得られる酢酸エチル層から請求項１に記載の脂肪酸又はその塩を少なくとも１種含有する脂肪酸抽出物を単離することからなる単離法。
【請求項４】
脂肪酸抽出物からさらに、請求項１に記載の式（Ｉ）の脂肪酸又はその塩を個々に単離することからなる請求項３に記載の単離法。
【請求項５】
有効成分として請求項１に記載の脂肪酸又はその塩、又は請求項２に記載の脂肪酸抽出物の少なくとも１種と、医薬的に受容な賦形剤とからなる医薬組成物。
【請求項６】
ＮＯ産生抑制活性剤として使用される請求項５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脂肪酸又はその塩、脂肪酸抽出物、その単離法及び用途に関し、より詳細には、コーコリ脂肪酸Ａ〜Ｆと命名された新規な脂肪酸又はその塩、脂肪酸抽出物、その単離法及び該脂肪酸を有効成分として含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
モロヘイヤ（Ｃｏｒｃｈｏｒｕｓ  ｏｌｉｔｏｌｉｕｓ  Ｌ．）は、主にアフリカ東北部や中東など地中海東部地域で栽培され、わずか半年で２ｍに生長するシナノキ科の一年生植物である。
ユナニー医学やアーユルベーダ医学では、モロヘイヤは強壮剤と考えられており、特に生葉や茎で、カリウムカルシウム等のミネラル、βカロチン及びビタミン類の含有量が他の野菜に比べて非常に豊富であり、また同時に中性脂肪の低下作用や血糖低下作用を有する多量の粘性多糖類が含有されていることから、近年では、機能性野菜や健康食品としての利用が増している。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、モロヘイヤに含まれる種々の有効成分について研究を行った結果、モロヘイヤに脂肪酸及びグリコシドが含有されていることを見いだし、さらに新規の脂肪酸が含有されていることを見いだした。また、これら脂肪酸について種々の研究を行うことにより、意外にも、モロヘイヤに含まれるこれら脂肪酸類が、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制活性を有するという知見を得、本発明を完成するに至った。
【０００４】
すなわち、本発明によれば、式（Ｉ）
【０００５】
【化６】
0003594483.tif 000002
【０００６】
〔式中、Ｒ1がＯＨかつＲ3がＨであり、Ｒ2が−（ＣＨ＝ＣＨ）3−ＣＯＣＨ2ＣＨ3である場合に、次式のいずれか：
【化２２】
0003594483.tif 000003
または
【化２３】
0003594483.tif 000004
で表される脂肪酸又はその塩が提供される。
【０００７】
また、低級脂肪族アルコールに可溶性であり、モロヘイヤから抽出、単離し得る、上記脂肪酸又はその塩を少なくとも１種含有することからなる脂肪酸抽出物が提供される。
さらに、モロヘイヤを低級脂肪族アルコールで抽出処理し、抽出液を濃縮するかせずして酢酸エチル−水で分配処理し、得られる酢酸エチル層から上記脂肪酸又はその塩を少なくとも１種含有する脂肪酸抽出物を単離し、さらに該脂肪酸抽出物から、上記脂肪酸又はその塩を個々に単離することからなる単離法が提供される。
【０００８】
また、有効成分として上記脂肪酸又はその塩、又は脂肪酸抽出物の少なくとも１種と、医薬的に受容な賦形剤とからなる医薬組成物が提供される。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明においては、モロヘイヤから抽出される成分は、上記式（Ｉ）に示されたとおりの新規の脂肪酸、及びその他に既知化合物であるアゼライン酸（ａｚｅｌａｉｃ  ａｃｉｄ）、トランス−３−ドデセンジ酸（ｔｒａｎｓ−３−ｄｏｄｅｃｅｎｅｄｉｏｉｃ  ａｃｉｄ）、イソケルシトリン（ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ）、アストラガリン（ａｓｔｒａｇａｌｉｎ）ならびにコルコイオノシド（ｃｏｒｃｈｏｉｏｎｏｓｉｄｅ）Ａ等を含む。本発明者は、これら６種の新規の脂肪酸についてそれぞれコーコリ脂肪酸Ａ〜Ｆと命名した。コーコリ脂肪酸Ａ〜Ｆは、具体的には以下の構造式を有するものである。
【００１０】
【化７】
0003594483.tif 000005
【００１１】
0003594483.tif 000006
【００１２】
【化８】
0003594483.tif 000007
【００１３】
0003594483.tif 000008
【００１４】
【化９】
0003594483.tif 000009
【００１５】
0003594483.tif 000010
【００１６】
【化１０】
0003594483.tif 000011
【００１７】
0003594483.tif 000012
【００１８】
【化１１】
0003594483.tif 000013
【００１９】
0003594483.tif 000014
【００２０】
【化１２】
0003594483.tif 000015
【００２１】
0003594483.tif 000016
上記式から明らかなように、コーコリ脂肪酸Ｃ及びＤは、それぞれＡ及びＢの１２位、１３位がシス型の構造となっている立体異性体である。
本発明においては、上記式で示される脂肪酸は、脂肪酸を分離、精製する際に使用される溶媒との間で形成し得る溶媒和物又は水和物を含む。また、これら脂肪酸は塩基により形成された医薬的に受容な塩であってもよく、該塩基としては例えばナトリウム、カリウムのようなアルカリ金属、カルシウム、マグネシウムのようなアルカリ土類金属及びこれらの水酸化物、アンモニア等の無機塩基、又はピリジン、キノリン、ピペリジン、コリジン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、イミダゾール、モルホリン等の有機塩基等が挙げられる。
【００２２】
本発明の脂肪酸は、モロヘイヤを低級脂肪族アルコールで抽出処理し、抽出液を濃縮するかせずして酢酸エチル−水で分配処理し、酢酸エチル層を得ることからなる。
原料となるモロヘイヤは、種類又は産地等により、成分の種類及び量等に若干の差があると考えられる。また、茎等を含んでいてもよいが、主に葉を用いることが好ましい。葉は、そのままでも、乾燥させて用いてもよい。
【００２３】
モロヘイヤは、低級脂肪族アルコールで抽出処理する。低級脂肪族アルコールとしては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等を使用することができる。好ましくは、メタノールである。この抽出処理は、常温で行ってもよいが、使用する低級脂肪族アルコールが煮沸する程度に加熱して行うことが好ましい。この抽出処理は、数回繰り返すことが好ましく、１回の低級脂肪族アルコールの使用量は、モロヘイヤの２〜６倍（重量）程度が好ましい。
【００２４】
次いで、この抽出液を任意に濃縮する。この際の濃縮は減圧下で行うことが好ましい。なお、得られた濃縮物を、先に使用した同様の低級脂肪族アルコールを用いてろ別し、ろ液をさらに濃縮してもよい。
得られた抽出液（濃縮物）を、酢酸エチル−水で分配処理する。この分配処理は、▲１▼抽出液（濃縮物）を水と酢酸エチルの混液と振盪するか、▲２▼抽出液（濃縮物）を水に懸濁し、酢酸エチルとともに振盪する等のいずれの方法で行ってもよい。目的とする成分は、このように処理することにより主に酢酸エチル層に移行される。なお、この分配処理は、常温で行うことが好ましい。▲１▼において、混液中の水と酢酸エチルとの割合は、１：０．５〜１：５（重量比）程度が好ましく、１：１程度がより好ましい。▲２▼においては、抽出液（濃縮物）をほぼ同量の水に懸濁し、これに２〜５倍（重量）程度の酢酸エチルを加えて振盪し、この処理を２〜３回程度繰り返すことにより、目的とする成分が酢酸エチル層に移行する。
【００２５】
このようにして得られる酢酸エチル層を、好ましくは減圧下で濃縮する。この濃縮は乾固するまで行ってもよい。
得られた濃縮物は、精製処理に付すことが好ましい。精製処理方法としては、例えば、順相シリカゲルクロマトグラフィー、逆相シリカゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、遠心液体クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等のいずれか、又はそれらを組み合わせて使用する方法がある。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、用いる溶媒等により適宜調節することができる。また、以下の別の精製処理と組み合わせて使用してもよい。
【００２６】
また、別の精製処理方法としては、得られた濃縮物を、約３０％以下の低級脂肪族アルコール含有水に溶解させ、この溶液を吸着性樹脂に接触させて吸着させた後、低級脂肪族アルコール又は約３０％以上の低級脂肪族アルコール含有水で溶離する方法が挙げられる。この際に使用される低級脂肪族アルコールは、上述したとおりであり、なかでもメタノールが好ましい。吸着性樹脂としては、通常当該分野の精製処理に使用されるものであれば特に限定されるものではなく、例えば巨大網状構造で多孔性の架橋されたポリスチレン系樹脂が挙げられる。
【００２７】
溶離する際に用いられるものとしては、約３０％以上、好ましくは３５〜９９％の低級脂肪族アルコール含有水が挙げられる。低級脂肪族アルコールは上記と同様のものを用いることができ、なかでもメタノールが好ましい。
このようにして得られた脂肪酸は、そのまま本発明の医薬組成物の有効成分として使用することができる。つまり、モロヘイヤに含有される脂肪酸類について、ＮＯ産生抑制作用を検討したところ、上記式（Ｉ）に示す脂肪酸に強い阻害作用が認められた。
【００２８】
ＮＯは、循環系、免疫系及び神経系で重要な役割を果たしており、生体内で３種の合成酵素（ＮＯＳ）により生産される。このうち、各種サイトカインやＬＰＳ（リポポリサッカライド）により合成されるＮＯＳ−２は、他の合成酵素と比較して約１００倍の量のＮＯを生産するため、ＮＯＳ−２により生産されるＮＯは、その過剰な量から生理的作用よりむしろ病理的作用が問題となっている。
【００２９】
これに対し、式（Ｉ）に示す本発明の脂肪酸はＮＯ産生抑制作用を有することから、多量のＮＯが病因となっている敗血症性疾患（エンドトキシンショック）、低血圧症、炎症性組織障害、虚血性疾患、アレルギー性疾患、抗菌作用や抗腫瘍作用の低下といった自己免疫疾患等の予防及び治療に対し、単一物、抽出物あるいは混合物の形態で、医薬組成物としての使用が可能であると考えられる。
したがって、この発明の脂肪酸又はその塩、又は脂肪酸抽出物は、医薬的に受容な賦形剤とからなる医薬組成物として使用することができる。
【００３０】
本発明の脂肪酸は、上述の塩基を用いて、常法により適切な医薬的に受容な塩を形成することができる。また、脂肪酸抽出物は、以下の実施例に詳細に示すとおり、低級脂肪族アルコールで適宜得ることができる。
【００３１】
組成物は、経口用又は非経口用のいずれであってもよく、常法又はその他の適切な方法で製造することができる。経口用組成物としては、通常散剤、錠剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、舌下錠、液剤（チンキ剤、流エキス剤、舌下エアゾール、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤、シロップ剤等）等が挙げられる。また、非経口用組成物としては、軟膏剤、硬膏剤、液剤（注射剤、チンキ剤、ローション剤、酒精剤、噴霧剤、エアゾール等）、湿布剤（パップ剤、パスタ剤、貼付剤、貼付錠等）、塗布剤、散布剤、リニメント剤、クリーム剤、乳剤等が挙げられる。なお、これら組成物は、徐放性処理が施されていてもよい。
【００３２】
また、この発明の組成物は、所望により緩衝剤、安定化剤、希釈剤、甘味剤、粘滑剤、防腐剤ならびに着香剤及び着色剤等のような通常の添加剤を含んでいてもよい。
上記で使用される賦形剤としては、当該分野で公知の固体又は液体の賦形剤を使用することができる。例えば、散剤、その他の経口粉末剤における賦形剤としては、乳糖、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成及び天然のケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母等が挙げられる。外用散剤の場合は、酸化亜鉛、タルク、澱粉、カオリン、硼酸末、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、次没子酸ビスマス、硫酸アルミニウムカリウム末等が挙げられる。液剤における賦形剤としては、水、グリセリン、プロピレングリコール、単シロップ、エタノール、脂肪油、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール等が挙げられる。軟膏剤における賦形剤としては、脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、グリセリン、ミツロウ、パラフィン、流動パラフィン、樹脂、高級アルコール、グリコール類、界面活性剤等を挙げることができる。
【００３３】
これら組成物の服用量は、経口用製剤の場合、式（Ｉ）の脂肪酸又はその塩、又は脂肪酸抽出物を成人１日当たり０．１〜１．５ｍｇ程度、好ましくは０．３〜０．８ｍｇ程度を数回に分けて投与することによって効力を発揮することができる。非経口用製剤の場合、例えば式（Ｉ）の脂肪酸又はその塩、又は脂肪酸抽出物を０．０１〜１０％濃度で配合した製剤として使用することができる。
【００３４】
しかし、服用量は、用いられる脂肪酸の活性、患者の年齢、体重、通常の健康状態、投与時間、投与方法及び薬剤の組合せを含む様々な因子により変化すると解される。
【００３５】
【実施例】
実施例１．モロヘイヤ成分の抽出及び単離
モロヘイヤ（ベトナム産）の葉  ６．５ｋｇをメタノール（１２リットル）で３時間熱抽出を３回繰り返した後、減圧下条件でメタノールを留去し、メタノール抽出エキス（７００．０ｇ）を得た。
【００３６】
得られたメタノール抽出エキス（７００．０ｇ）を１：１の酢酸エチル−水で分配し、酢酸エチル移行部エキス（２２７．７ｇ、  ３．９％（固形物重量、以下同じ））および水移行部エキス（４６２．３ｇ、  ８．０％）を得た。
酢酸エチル移行部エキス２２７．７ｇを順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔３．０ｋｇ、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ  （５０：１→２０：１→１０：１→５：１→１：１）→ＭｅＯＨ〕で分画して、１０個のフラクション〔フラクション１  （１６．２ｇ）、フラクション２  （１１．３ｇ）、フラクション３  （１１０．９ｇ）、フラクション４（７．２ｇ）、フラクション５（３．８ｇ）、フラクション６  （１１．２ｇ）、フラクション７  （１０．６ｇ）、フラクション８  （１０．８ｇ）、フラクション９  （７５．６ｇ）、フラクション１０（２．２ｇ）〕に分画した。
【００３７】
フラクション３  （１１０．９ｇ）を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔２．０ｋｇ  、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ  （１００：１→１０：１）→ＭｅＯＨ〕で分画して、フラクション  ３−１（１．８ｇ）、フラクション  ３−２  （４１．０ｇ）、フラクション  ３−３（８．４ｇ）、フラクション  ３−４（２６．７ｇ）  、フラクション  ３−５  （１１．９ｇ）、フラクション  ３−６（７．１ｇ）、フラクション  ３−７（２．２ｇ）、フラクション  ３−８  （１１．１ｇ）、フラクション  ３−９（１．１ｇ）を得た。
【００３８】
さらに、フラクション  ３−８  （１１．１ｇ）は逆相シリカゲルクロマトグラフィー〔１６７．０ｇ、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  （６０：４０→８０：２０）→ＭｅＯＨ→ＣＨＣｌ３〕で分画して、フラクション  ３−８−１（１．４ｇ）、フラクション  ３−８−２  （６４１．１ｍｇ）、フラクション  ３−８−３（１．１ｇ）、フラクション  ３−８−４（７１２．８ｍｇ）  、フラクション  ３−８−５（３８５．５ｍｇ）  、フラクション  ３−８−６  （２８１．９ｍｇ）、フラクション  ３−８−７（９．３ｇ）とした。
【００３９】
次に、フラクション  ３−８−２（２８９．１ｍｇ）  を逆相  ＨＰＬＣ  （カラム：ＹＭＣ−ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−Ａ，  ２５０ｍｍ×内径２０、溶媒：６０％メタノール、流速：  ９．０ｍｌ／分）で分離精製し、アゼライン酸（７、１７．８ｍｇ）  、トランス−３−ドデセンジ酸（８、３５．８ｍｇ）およびコーコリ脂肪酸Ｅ（５、１５．３ｍｇ）を単離した。
フラクション  ３−８−３（１．１ｇ）は順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔５３．０ｇ  、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ  （３０：１→５：１）→ＭｅＯＨ〕で分画して、フラクション  ３−８−３−１（５８８．１ｍｇ）  、フラクション  ３−８−３−２（５２．４ｍｇ）、フラクション  ３−８−３−３  （２７６．５ｍｇ  ）、フラクション  ３−８−３−４（３３．２ｍｇ）とし、フラクション  ３−８−３−１（２２２．３ｍｇ）  を逆相  ＨＰＬＣ  （カラム：ＹＭＣ−ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−Ａ，  ２５０ｍｍ×内径２０、溶媒：６０％メタノール、流速：  ９．０ｍｌ／分）で分離精製し、コーコリ脂肪酸Ａ（１、１７．２ｍｇ）  、Ｂ（２、４０．４ｍｇ）  、Ｃ（３、１１．３ｍｇ）およびＤ（４、１０．０ｍｇ）を単離した。
【００４０】
また、フラクション８  （１０．８ｇ）も逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔３２０ｇ、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  （５０：５０→８０：２０→９０：１０）→ＭｅＯＨ→ＣＨＣｌ３〕で同様に分画して、フラクション  ８−１（９６９．３ｍｇ）  、フラクション  ８−２（１．２ｇ）、フラクション  ８−３  （９６１．１ｍｇ）、フラクション  ８−４  （６５４．３ｍｇ）、フラクション  ８−５（１．２ｇ）、フラクション  ８−６  （８９４．９ｍｇ）、フラクション  ８−７  （２６２．４ｍｇ）、フラクション  ８−８（３．７ｇ）、フラクション  ８−９（１．５ｇ）を得た。フラクション  ８−２（１．２ｇ）は順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔５３．５ｇ、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ  （１０：１→５：１）→ＭｅＯＨ〕で分画して、フラクション  ８−２−１  （４５０．３ｍｇ）、フラクション  ８−２−２  （５１０．８ｍｇ）、フラクション  ８−２−３（７１．９ｍｇ）とした。
【００４１】
次に、フラクション  ８−２−２（４１１．８ｍｇ）  をゲル濾過クロマトグラフィー〔２１．０ｇ、ＭｅＯＨ〕で分画し、フラクション  ８−２−２−１（１４７．１ｍｇ）  を得るとともに、フラボノール配糖体イソケルシトリン（９、  ２５２．２ｍｇ）を単離した。
フラクション  ８−２−２−１  （１４７．０ｍｇ）は逆相  ＨＰＬＣ  （カラム：ＹＭＣ−ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−Ａ、２５０ｍｍ  ×内径２０、溶媒：６０％メタノール、流速：  ９．０ｍｌ／分）で分離精製し、ヨノン配糖体    コルコイオノシドＡ  （１０、  ９．０ｍｇ）を単離した。    また、フラクション  ８−３  （２２２．７ｍｇ）を逆相  ＨＰＬＣ  （カラム：ＹＭＣ−ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−Ａ、２５０ｍｍ×内径２０、溶媒：６０％メタノール、流速：  ９．０ｍｌ／分）で分離精製し、フラボノール配糖体アストラガリン  （１１、  ９．８ｍｇ）を単離した。
【００４２】
さらに、フラクション６から、同様にしてコーコリ脂肪酸Ｆ（６）  を単離した。
【００４３】
【化１３】
0003594483.tif 000017
【００４４】
0003594483.tif 000018
【００４５】
【化１４】
0003594483.tif 000019
【００４６】
0003594483.tif 000020
【００４７】
【化１５】
0003594483.tif 000021
【００４８】
0003594483.tif 000022
実施例２．モロヘイヤ抽出物コーコリ脂肪酸Ａ〜Ｆの構造解明
（ａ）コーコリ脂肪酸Ａ（１）
白色粉末、
〔α〕Ｄ２６＋１３．０°（ｃ＝０．４，  ａｃｅｔｏｎｅ）
0003594483.tif 000023
ＵＶλｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３１０（４．６）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ  −１）：３４３１，  ２９２６，  ２８５３，  １７３６，  １６５５，  １６０５，  １００１、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，δ）：１．１２  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２６−１．３９  （８Ｈ，  ｍ，  ４，５，６，７−Ｈ２），  １．５６  （２Ｈ，  ｄｔ−ｌｉｋｅ，  ８−Ｈ２），  １．６３  （２Ｈ，  ｔｔ−ｌｉｋｅ，  ３−Ｈ２），  ２．３４  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ２．５８  （２Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １７−Ｈ２），  ４．２１  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．１，  ６．１Ｈｚ，  ９−Ｈ），  ５．９２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．１，  １５．０Ｈｚ，  １０−Ｈ），  ６．１８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．３１（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．０Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ６．３３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．０Ｈｚ，  １１−Ｈ），  ６．５９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．０Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ７．１９（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．５Ｈｚ，  １４−Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）：表１に記載
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３０８（Ｍ＋），  ２９０（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ），  ２６１，  ２３３（Ｍ  ＋−Ｈ２Ｏ−Ｃ３Ｈ５Ｏ），  １７１，  １６５，  １３７  （１００）
【００４９】
コーコリ脂肪酸Ａは、ＥＩ−ＭＳ  において分子イオンピークがｍ／ｚ  ３０８  （Ｍ＋）にフラグメントイオンピークがｍ／ｚ  ２９０  （Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）、２３３  （Ｍ＋−Ｈ２Ｏ−Ｃ３Ｈ５Ｏ）に認められ、高分解能  ＥＩ−ＭＳ測定により分子式  Ｃ１８Ｈ２８Ｏ４  を有する化合物であることが明らかとなった。また  ＩＲ  スペクトルにおいて、水酸基（３４３１  ｃｍ−１）、カルボニル基（１７３６  ｃｍ−１）、共役二重結合（１６５５，  １６０５  ｃｍ−１）に由来する吸収が認められ、更に、ＵＶスペクトルにおいて、３１０  ｎｍ  （ｌｏｇ  ε  ４．６）に極大吸収が認められたことから、トリエノン構造を有することが示唆された。
【００５０】
１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲ（表１に記載）スペクトルデータの解析により、末端メチル基〔δ１．１２  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ），δｃ８．３〕、水酸基〔δ４．２１  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．１，  ６．１Ｈｚ），δｃ７２．３〕、トランス型オレフィン〔δ５．９２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．１，  １５．０Ｈｚ），  δｃ１４１．０  ；  δ６．３３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．０Ｈｚ），δｃ１２９．４  ；  δ６．５９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．０Ｈｚ），δｃ１４０．５  ；  δ６．３１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．０Ｈｚ），δｃ１３０．６  ；  δ７．１９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １５．５Ｈｚ），δｃ１４１．９  ：  δ６．１８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ），  δｃ１２９．２〕、カルボニル基〔δｃ２０１．１〕、カルボン酸〔δｃ１７８．６〕、８個のメチレン基〔δｃ２４．６，  ２５．２，  ２８．９，  ２９．１，  ２９．３，  ３３．８，  ３３．９，  ３７．２〕の存在が明らかになった。
【００５１】
さらに、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルより下式の太線部分で示す部分構造が判明し、  ＨＭＢＣ  スペクトルにおいて下式に示すプロトンとカーボン間に相関が認められたことから９位水酸基および１６位カルボニル基の位置が確認された。１３Ｃ−１Ｈ  ＣＯＳＹ  スペクトルデータの考察と考え合わせ、各シグナルが完全に帰属され、平面構造が決定された。
【００５２】
また、カルボン酸の数を確認するために、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソ−ｐ−トルエン−スルホンアミドから調製した  ＣＨ２Ｎ２エーテル溶液（約１．０ｍｌ）をコーコリ脂肪酸Ａ  （３．０ｍｇ）のメタノール（０．５ｍｌ）溶液に加えて室温で１０分間撹拌後、反応液を減圧下溶媒留去し、得られた粗生成物を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー〔１．０ｇ，  ｎ−ｈｅｘａｎｅ  ：  ａｃｅｔｏｎ  （２０：１）〕で精製しモノメチルエステル体１ａ（３．１ｍｇ）を得た。その物理データの解析からもその構造が確認された（下式）。
【００５３】
【化１６】
0003594483.tif 000024
【００５４】
１ａ：白色粉末、
0003594483.tif 000025
ＵＶ  λｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３１０（４．６）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：３４５３，  ２９３２，  ２８５５，  １７３４，  １７１８，  １６０１，  １５８１，  １０３０、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，  δ）：１．１２  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２８−１  ．３３  （８Ｈ，  ｍ，  ４，５，６，７−Ｈ２），  １．５６  （２Ｈ，  ｄｔ−ｌｉｋｅ，  ８−Ｈ２），  １．６１  （２Ｈ，  ｔｔ−ｌｉｋｅ，  ３−Ｈ２），  ２．３０  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ２．５９  （２Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １７−Ｈ２），  ３．６６  （３Ｈ，  ｓ，  ＯＭｅ），  ４．２１  （１Ｈ，  ｄｔ−ｌｉｋｅ，  ９−Ｈ），  ５．９３（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．３，  １５．１Ｈｚ，  １０−Ｈ），  ６．１９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．４Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．３２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １４．８Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ６．３４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  １５．１Ｈｚ，  １１−Ｈ），  ６．５９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  １４．８Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ７．１９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．４Ｈｚ，  １４−Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）：表１に記載
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３２２（Ｍ＋），  ３０４（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ），  ２３３，  １３７  （１００），  １８５，  １６５
【００５５】
【表１】
0003594483.tif 000026
【００５６】
（ｂ）コーコリ脂肪酸Ｂ（２）
白色粉末、
〔α〕Ｄ２８＋１７．３°（ｃ＝０．２，  ａｃｅｔｏｎｅ）、
0003594483.tif 000027
ＵＶ  λｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３０９（４．３）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：３４３０，  ２９３２，  ２８５７，  １７１９，  １６５５，  １６０５，    １００７  、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，  δ）：０．９４  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２４−１．３６  （６Ｈ，  ｍ，  ４，５，６−Ｈ２），  １．５２−１．６４  （６Ｈ，  ｍ，  ３，７，１７−Ｈ２），  ２．３１  （２Ｈ，  ｔ−ｌｉｋｅ，  ２−Ｈ２），  ２．５２  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ，  ８−Ｈ２），  ４．１５  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．１，６．７Ｈｚ，  １６−Ｈ），  ５．９３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．１，  １５．１Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．１７（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ，  １０−Ｈ），  ６．３１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．４Ｈｚ，１２−Ｈ），  ６．３２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  １５．１Ｈｚ，  １４−Ｈ），  ６．６０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  １５．４Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ７．１８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．５Ｈｚ，１１−Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）  ：表１に記載
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３０８（Ｍ＋），  ２９０（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ），  ２３３  （１００），  ２２３，  １７１，  １６５，  １３７，  ７９
【００５７】
コーコリ脂肪酸Ｂは、ＥＩ−ＭＳ  において分子イオンピークがｍ／ｚ  ３０８  （Ｍ＋）に認められ、その高分解能  ＥＩ−ＭＳ測定により分子式  Ｃ１８Ｈ２８Ｏ４  を有する化合物であることが明らかとなった。また  ＩＲ  スペクトルにおいて、水酸基（３４３０  ｃｍ−１）、カルボニル基（１７１９，  １７１０  ｃｍ−１）、共役二重結合（１６５５，  １６０５  ｃｍ−１）に由来する吸収が認められ、更に、ＵＶスペクトルにおいて、３０９  ｎｍ  （ｌｏｇ  ε  ４．３）に極大吸収が認められたことから、トリエノン構造を有することが示唆された。
【００５８】
１Ｈ−ＮＭＲ及び  １３Ｃ−ＮＭＲ（表１に記載）スペクトルデータの解析により、末端メチル基〔δ０．９４  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ），δｃ８．３〕、水酸基〔δ４．１５  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．１，  ６．７Ｈｚ），δｃ７３．５〕、トランス型オレフィン〔δ５．９３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．１，  １５．１Ｈｚ），  δｃ１４０．９  ；  δ６．３２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  １５．１Ｈｚ），δｃ１２９．４  ；  δ６．６０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  １５．４Ｈｚ），δｃ１４０．７  ；  δ６．３１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．４Ｈｚ），δｃ１３０．５  ；  δ７．１８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．５Ｈｚ），δｃ１４２．３  ：  δ６．１７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．５Ｈｚ），  δｃ１２９．３〕、カルボニル基〔δｃ２００．３〕、カルボン酸〔δｃ１７８．７〕、８個のメチレン基〔δｃ２４．３，  ２４．８，  ２８．８，  ２８．９，  ２９．２，  ３０．１，  ３３．９，  ４０．７〕の存在が明らかになった。
【００５９】
更に、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルの解析より下式の太線部分で示す部分構造が判明し、  ＨＭＢＣ  スペクトルにおいて下式に示すプロトンとカーボン間に相関が認められたことから１６位水酸基および９位カルボニル基の位置が確認された。更に１３Ｃ−１Ｈ  ＣＯＳＹ  スペクトルデータの考察と合わせ、各シグナルが完全に帰属され、平面構造が決定された。
【００６０】
また、コーコリ脂肪酸Ａと同様に、ＣＨ２Ｎ２によりコーコリ脂肪酸Ｂ（３．０ｍｇ、０．００９７ｍｍｏｌ）  からモノメチルエステル体２ａ（３．１ｍｇ）を得（下式）、２ａは種々の物理データの解析の結果、海洋植物アクロシフォニア  コアリタ（Ａｃｒｏｓｉｐｈｏｎｉａ  ｃｏａｌｉｔａ）から単離されているメチル（１６Ｓ）−ヒドロキシ−９−オキソ−（１０Ｅ，  １２Ｅ，  １４Ｅ）−オクタデカトリエネートと同定した。以上の結果からコーコリ脂肪酸Ｂの構造を決定した。
【００６１】
【化１７】
0003594483.tif 000028
【００６２】
２ａ：白色粉末
0003594483.tif 000029
ＵＶλｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３１０（４．６）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ  −１）：３４５３，  ２９３０，  ２８５７，  １７４３，  １６５０，  １５９８，  １１２５、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，δ）：  ０．９５  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２６−１．３８  （６Ｈ，  ｍ，  ４，５，６−Ｈ２），  １．５０−１．６３  （６Ｈ，  ｍ，  ３，７，１７−Ｈ２），  ２．３０  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ２．５４  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  ８−Ｈ），  ３．６６  （３Ｈ，  ｓ，  ＯＭｅ），  ４．１６  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．４，  ６．４Ｈｚ，  １６−Ｈ），  ５．９３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．４，  １５．４Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．１７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．４Ｈｚ，  １０−Ｈ），  ６．３１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．４Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ６．３４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．９，  １５．４Ｈｚ，  １４−Ｈ），  ６．６０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１０．９，  １５．４Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ７．１８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．１，  １５．４Ｈｚ，  １１−Ｈ）  、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）：表１に記載、
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３２２（Ｍ  ＋），  ３０４（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）
【００６３】
（ｃ）コーコリ脂肪酸Ｃ（３）
白色粉末、
〔α〕Ｄ２３＋３３．１°（ｃ＝０．２，  ａｃｅｔｏｎｅ）、
0003594483.tif 000030
ＵＶ  λｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３１１（４．４）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：３４３２，  ２９３０，  ２８５５，  １７１７，  １６５３，  １５９７，  １００９、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，  δ）：  １．１３  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２５−１．３８  （８Ｈ，  ｍ，  ４，５，６，７−Ｈ２），  １．５５  （２Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．４，  ７．０Ｈｚ，  ８−Ｈ２），  １．６１  （２Ｈ，  ｔｔ，  Ｊ＝７．０，  ７．３Ｈｚ，  ３−Ｈ２），  ２．３５  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ２．６０  （２Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １７−Ｈ２），  ４．２６  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．３，  ６．４Ｈｚ，  ９−Ｈ），  ５．９２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．３，  １４．９Ｈｚ，  １０−Ｈ），  ６．１０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １１．６Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ６．２１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．０Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．３６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １１．３Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ６．８３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １４．９Ｈｚ，  １１−Ｈ），  ７．６６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．６，  １５．０Ｈｚ，  １４−Ｈ）  、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）：表１に記載
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３０８（Ｍ  ＋），  ２９０（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ），  ２６１，  ２３３（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ−Ｃ３Ｈ５Ｏ），  １７１，  １３７  （１００）
【００６４】
コーコリ脂肪酸Ｃは、ＥＩ−ＭＳ  において分子イオンピークがｍ／ｚ  ３０８  （Ｍ＋）にフラグメントイオンピークがｍ／ｚ  ２９０  （Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）に認められ、高分解能  ＥＩ−ＭＳ  測定により分子式  Ｃ１８Ｈ２８Ｏ４  を有する化合物であることが明らかとなった。また  ＩＲ  スペクトルにおいて、水酸基（３４３２  ｃｍ−１）、カルボニル基（１７１７  ｃｍ−１）、共役二重結合（１６５３，  １５９７  ｃｍ−１）に由来する吸収が認められた。さらに、ＵＶスペクトルにおいて、３１１  ｎｍ  （ｌｏｇ  ε  ４．４）に極大吸収が認められたことから、トリエノン構造を有することが示唆された。
【００６５】
コーコリ脂肪酸Ｃの  ＮＭＲデータをＡと比較すると、１１位から１４位を除いて殆ど類似しており、また、コーコリ脂肪酸Ｃの  １Ｈ−ＮＭＲ  のデータにおいてシスオレフィン〔δ６．３６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １１．３Ｈｚ，  １２−Ｈ），δ６．１０（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １１．６Ｈｚ，  １３−Ｈ）〕が確認されたことから、コーコリ脂肪酸ＣはＡの１２位、１３位がシス型の構造であることが明らかとなった。
【００６６】
また、ＣＨ２Ｎ２エーテル溶液を用いてコーコリ脂肪酸Ｃ（３．０ｍｇ、０．００９７ｍｍｏｌ）  からモノメチルエステル体３ａ（３．１ｍｇ）が得られその物理データの比較考察からその構造を確認した（下式）。以上の結果を考え合わせることによりコーコリ脂肪酸Ｃの構造を決定した。
【００６７】
【化１８】
0003594483.tif 000031
【００６８】
３ａ：白色粉末、
0003594483.tif 000032
ＵＶ  λｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３１０（４．４）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：３４５３，  ２９３０，  ２８５５，  １７４３，  １６５５，  １５９８，  １０１０、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，  δ）：１．１３  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２５−１．３６  （８Ｈ，  ｍ，  ４，５，６，７−Ｈ２），  １．５５  （２Ｈ，  ｄｔ−ｌｉｋｅ，  ８−Ｈ２），  １．６１  （２Ｈ，  ｔｔ−ｌｉｋｅ，  ３−Ｈ２），  ２．３１  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ２．６１  （２Ｈ，  ｑ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  １７−Ｈ），  ３．６７  （３Ｈ，  ｓ，  ＯＭｅ），  ４．２５  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．４，  ６．４Ｈｚ，  ９−Ｈ），  ５．９２（１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．４，  １５．３Ｈｚ，  １０−Ｈ），  ６．１２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １１．９Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ６．２０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．４Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．３５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １１．９Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ６．８２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．９，  １５．３Ｈｚ，  １１−Ｈ），  ７．６５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．９，  １５．４Ｈｚ，  １４−Ｈ）  、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）：表１に記載、
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３２２（Ｍ＋），  ３０４（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ），  ２６１，  ２３３，  １８５，  １６５，  １３７（１００）
【００６９】
（ｄ）コーコリ脂肪酸Ｄ（４）
白色粉末、
〔α〕Ｄ２６＋１９．７°（ｃ＝０．４，  ａｃｅｔｏｎｅ）
0003594483.tif 000033
ＵＶ  λｍａｘＭｅＯＨｎｍ  （ｌｏｇ  ε）：３１１（４．３）、
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：３４３１，  ２９３２，  ２８５７，  １７２６，  １６５５，  １５９７，  １１１５、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００ＭＨｚ，  δ）：０．９６  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２８−１．３９  （６Ｈ，  ｍ，  ４，５，６−Ｈ２），  １．５７−１．６６  （６Ｈ，  ｍ，  ３，７，１７−Ｈ２），  ２．３４  （２Ｈ，  ｔ−ｌｉｋｅ，  ２−Ｈ２），  ２．５７  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．１Ｈｚ，  ８−Ｈ２），  ４．２２  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝５，８，６．１Ｈｚ，  １６−Ｈ），  ５．９３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝６．１，  １５．３Ｈｚ，  １５−Ｈ），  ６．１０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．０，  １１．３Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ６．１９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．３Ｈｚ），  １０−Ｈ），  ６．３６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １１．３ＨＺ，  １３−Ｈ），  ６．８５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １５．３Ｈｚ，  １４−Ｈ），  ７．６４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１１．３，  １５．３Ｈｚ，  １１−Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）  ：表１に記載、
ＥＩ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３０８  （Ｍ）＋，  ２９０  （Ｍ＋−Ｈ２Ｏ），  ２６１，  ２３３（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ−Ｃ３Ｈ５Ｏ），  ２２３，  １７１，  １３７，  ４１  （１００）
【００７０】
コーコリ脂肪酸Ｄは、ＥＩ−ＭＳ  において分子イオンピークがｍ／ｚ  ３０８  （Ｍ＋）のほかにフラグメントイオンピークがｍ／ｚ  ２９０  （Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）に認められ、その高分解能  ＥＩ−ＭＳ測定により分子式  Ｃ１８Ｈ２８Ｏ４  を有することが明らかとなった。また  ＩＲ  スペクトルにおいて、水酸基（３４３１  ｃｍ−１）、カルボニル基（１７２６  ｃｍ−１）、共役二重結合（１６５５，  １５９７  ｃｍ−１）に由来する吸収が認められた。さらに、ＵＶスペクトルにおいて、３１１  ｎｍ  （ｌｏｇ  ε  ４．３）に極大吸収が認められたことから、トリエノン構造を有することが示唆された。
【００７１】
コーコリ脂肪酸Ｄの  ＮＭＲデータをＣと比較すると、水酸基とカルボニル基の位置が異なっていることが示唆され、また、コーコリ脂肪酸ＤとＢを比較すると１１位から１４位のシグナルを除いて非常に類似していた。
また、各種二次元  ＮＭＲの解析の結果  １Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ  スペクトルにおいて下式の太線部分で示すトランス−シス−トランス型トリエノン部分を含む部分構造が判明した。ＨＭＢＣスペクトルにおいて下式に示すプロトンとカーボン間に相関が認められたことから、コーコリ脂肪酸ＤはＢの１２位、１３位シス体であることが明らかとなり、コーコリ脂肪酸Ｄの化学構造を下式に示すように決定した。
【００７２】
【化１９】
0003594483.tif 000034
【００７３】
（ｅ）コーコリ脂肪酸Ｅ（５）
無色油状物、
〔α〕Ｄ２４＋１４．２°（ｃ＝０．７，  ＣＨＣｌ３）
0003594483.tif 000035
ＩＲ  （ｆｉｌｍ，  ｃｍ−１）：３４１０，  ２９３０，  ２８５６，  １７０９，  ９９１  、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ２７０ＭＨｚ，  δ）：１．２０−１．４２  （８Ｈ，  ｍ，  ４，５，６，７−Ｈ２），  １．５１  （２Ｈ，  ｍ，  ８−Ｈ２），  １．６２  （２Ｈ，  ｍ，  ３−Ｈ２），  ２．３３  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．３Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ４．１０  （１Ｈ，  ｄｔ，    Ｊ＝６．３，  ６．３Ｈｚ，  ９−Ｈ），  ５．１０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１０．６Ｈｚ），  ５．２１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１７．５Ｈｚ），  （１１−Ｈ２），  ５．８６  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ＝１０．６，  １７．５Ｈｚ，  １０−Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ６８ＭＨｚ，  δｃ）  ：表１に記載、
Ｐｏｓ．  ＦＡＢ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ２０１  （Ｍ＋Ｈ）＋
【００７４】
コーコリ脂肪酸Ｅは、  ＦＡＢ−ＭＳ  において分子イオンピークがｍ／ｚ  ２０１  （Ｍ＋Ｈ）＋に認められ、その高分解能  ＦＡＢ−ＭＳ  測定により分子式  Ｃ１１Ｈ２１Ｏ３  を有することが明らかとなった。また  ＩＲ  スペクトルにおいて、水酸基（３４１０  ｃｍ−１）、カルボニル基（１７０９  ｃｍ−１）に由来する吸収が認められた。
【００７５】
１Ｈ−ＮＭＲおよび  １３Ｃ−ＮＭＲ（表１に記載）スペクトルデータの解析により、末端オレフィン〔δ５．１０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１０．６Ｈｚ），  ５．２１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１７．５Ｈｚ），  δｃ１１４．７  ；  δ５．８６  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ＝６．３，  １０．６，  １７．５Ｈｚ），δｃ１４１．２〕、水酸基〔δ４．１０  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．３，  ６．３Ｈｚ），δｃ７３．３〕、カルボン酸〔δｃ１７９．４〕、７個のメチレン基〔δｃ２４．７，  ２５．２，  ２８．９，  ２９．１，  ２９．３，  ３４．１，  ３７．０〕の存在が明らかになった。さらに、  １Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ  スペクトルより下式の太線部分で示す部分構造が判明した。
【００７６】
また  ＣＨ２Ｎ２エーテル溶液を用いてコーコリ脂肪酸Ｅ（３．０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）からモノメチルエステル体５ａ（３．０ｍｇ）が得られその物理データの比較考察からその構造を確認した（下式）。以上の結果を考え合わせることによりコーコリ脂肪酸Ｅ（５）の構造を決定した。
【００７７】
【化２０】
0003594483.tif 000036
【００７８】
５ａ：無色油状物、
0003594483.tif 000037
ＩＲ  （ｆｉｌｍ，  ｃｍ−１）：３４１０，  ２９３０，  ２８５６，  １７０９、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ２７０ＭＨｚ，  δ）：１．２０−１．４０  （１０Ｈ，  ｍ，  ３，４，５，６，７−Ｈ２），  １．５１  （２Ｈ，  ｍ，  ８−Ｈ２），  １．６２  （２Ｈ，  ｍ，  ３−Ｈ２），  ２．３０  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．４Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ３．６６（３Ｈ，  ｓ，  ＯＭｅ），  ４．０９  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ＝６．３，  ６．３Ｈｚ，  ９−Ｈ），  ５．１０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．３，  １０．６Ｈｚ），  ５．２１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１．３，  １７．２Ｈｚ）（１１−Ｈ２），  ５．８７  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ＝６．３，  １０．６，  １７．２Ｈｚ，  １０−Ｈ）  、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ６８ＭＨｚ，δｃ）：表１に記載、
Ｐｏｓ．  ＦＡＢ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）：２３７（Ｍ＋Ｎａ）＋，  ２１５  （Ｍ＋Ｈ）＋
【００７９】
（ｆ）コーコリ脂肪酸Ｆ（６）
白色粉末、
〔α〕Ｄ２４−１０．５°（ｃ＝０．７，  ＭｅＯＨ）  、
0003594483.tif 000038
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）：３３６８，  ２９２６，  ２８４９，  １７０５，  １０７２  、
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ５００ＭＨｚ，δ）：０．９６  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ，  １８−Ｈ３），  １．２４−１．４２  （８Ｈ，  ｍ，  ４，５，６，７−Ｈ２），  １．５４  （２Ｈ，  ｍ，  ８−Ｈ２），  １．６１  （２Ｈ，  ｍ，  ３−Ｈ２），  ２．０６  （２Ｈ，  ｄｑ−ｌｉｋｅ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ，  １７−Ｈ２），  ２．１３，  ２．３４  （１Ｈ  ｅａｃｈ，  ｂｏｔｈ  ｍ，  １４−Ｈ２），  ２．２７  （２Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ，  ２−Ｈ２），  ３．４５  （１Ｈ，  ｄｄｄ，    Ｊ＝４．３，  ５．５，  ８．３Ｈｚ，  １３−Ｈ），  ３．９５  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝５．２，  ５．５Ｈｚ，  １２−Ｈ），  ４．０５  （１Ｈ，  ｄｔ−ｌｉｋｅ，  ９−Ｈ），  ５．４５  （２Ｈ，  ｍ，  １５，  １６−Ｈ），    ５．７１  （２Ｈ，  ｍ，  １０，  １１−Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  １２５ＭＨｚ，  δｃ）：表１に記載
Ｐｏｓ．  ＦＡＢ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３５１  （Ｍ  ＋Ｎａ）＋，  ３２９  （Ｍ＋Ｈ）＋、
Ｎｅｇ．  ＦＡＢ−ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ：  ３２７  （Ｍ−Ｈ）−
【００８０】
コーコリ脂肪酸Ｆは、  ＦＡＢ−ＭＳ  において擬似分子イオンピークがｍ／ｚ  ３５１  （Ｍ＋Ｎａ）＋，  ３２９  （Ｍ＋Ｈ）＋に認められ、その高分解能  ＦＡＢ−ＭＳ  測定により分子式  Ｃ１８Ｈ３２Ｏ５  を有する化合物であることが明らかとなった。また  ＩＲ  スペクトルにおいて、水酸基（３３６８  ｃｍ−１）、カルボニル基（１７０５  ｃｍ−１）に由来する吸収が認められた。
【００８１】
１Ｈ−ＮＭＲ  及び  １３Ｃ−ＮＭＲ  （表１に記載）スペクトルデータの解析により、末端メチル基〔δ０．９６  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．６Ｈｚ），δｃ１４．６〕、水酸基〔δ４．０５  （１Ｈ，  ｄｔ−ｌｉｋｅ），δｃ７３．３〕、カルボン酸〔δｃ１７９．４〕、７個のメチレン基〔δｃ２５．２，  ２４．７，  ２５．２，  ２９．１，  ２９．３，  ３４．１，  ３７．０〕の存在が明らかになった。さらに、  １Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ  スペクトルより下式の太線部分で示す部分構造が判明し、  ＨＭＢＣ  スペクトルにおいて下式に示すプロトンとカーボン間に相関が認められたことから水酸基及びカルボニル基の位置などが明らかとなり、コーコリ脂肪酸Ｆの平面構造を決定した。
【００８２】
更に  ＣＨ２Ｎ２エーテル溶液を用いて既知化合物であるモノメチルエステル６ａ（３．１ｍｇ）を誘導することにより、立体配置を含めた構造を決定した（下式）。
【００８３】
【化２１】
0003594483.tif 000039
【００８４】
実施例３．モロヘイヤ脂肪酸のＮＯ産生抑制活性
ＬＰＳ誘発マウス腹腔内マクロファージ活性化に対する、モロヘイヤの葉から得られた既知および新規脂肪酸のＮＯ産生抑制活性について検討した。
その結果、コーコリ脂肪酸Ｂ（２）、Ｃ（３）は濃度依存的な抑制作用を示し、コーコリ脂肪酸Ｂは低濃度においても抑制作用が認められ、１００μＭの濃度においてはコーコリ脂肪酸Ａ（１）、Ｂ、Ｃのいずれにも同等の抑制作用が認められた。また、１００μＭの濃度においてアゼライン酸（７）にも抑制活性が認められたが、その抑制作用はコーコリ脂肪酸Ａ、Ｂ、Ｃに比べて弱いものであった。
【００８５】
【表２】
0003594483.tif 000040
【００８６】
更に、細胞毒性についても検討したが、いずれの濃度においても毒性は認められなかった。活性が認められた脂肪酸についてその構造を比較すると次のようなことが明らかとなった。
１）９位にケトン構造を有するものは９位に水酸基を有するものより強い活性が認められた。
【００８７】
２）トリエノン構造を有するものにより強い活性が認められた。
３）１２位、１３位間のオレフィンはシス配置の方がトランス配置よりも強い活性が認められた。
以上の結果を総合すると、今回活性試験を行うことができなかったコーコリ脂肪Ｄ（４）は、コーコリ脂肪酸Ａ、Ｂ、Ｃに比べてより強い活性が認められると推察された。
【００８８】
（試験方法）
ｄｄｙ系雄性マウスを頚部脱臼致死下、腹腔内を約６〜７ｍｌの冷  ＰＢＳにて洗浄し、腹腔内滲出細胞を回収した。得られた細胞を１０％  ＦＣＳ含有  ＲＰＭＩ１６４０  培地に懸濁した。細胞を平底９６穴マイクロプレートに播種した（１ウェルに  ５  ｘ  １０５細胞／１００μｌ  ）。
【００８９】
５％ＣＯ２  存在下、１時間３７℃にてインキュベートした後、ウェル内を  ＰＢＳにて洗浄し非付着性の細胞を取り除いた。その後、培地をＬＰＳ（サルモネラ  エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）由来、シグマ社製）及び被験薬物を含む  ＲＰＭＩ１６４０  培地（１０％  ＦＣＳ含有）に交換し、５％ＣＯ２  存在下、２０時間３７℃にてインキュベートした。培養上清  １００μｌ  をとり、グリエス（Ｇｒｉｅｓｓ）試薬を用いて培養上清中のＮＯを測定した。尚、標準溶液には  ＮａＮＯ２溶液を用いた。
【００９０】
数値は平均値±標準誤差で表し、対照群と被験薬物投与群の平均値の差の検定には、ダネット  （Ｄｕｎｎｅｔｔ）の方法を用いた。
被験薬物の細胞毒性の検出には、ＭＴＴ〔３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド〕アッセイを用いた。即ち、培養上清  １００μｌ  を取り除いた後に各ウェルに１０μｌ  のＭＴＴ（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍｌ）溶液を添加し、５％ＣＯ２  存在下で４時間３７℃にてインキュベートした。培地を取り除いた後、イソプロパノール  （０．０４Ｎ  ＨＣｌ  含有）  １００μｌ  を添加し生成したホルマザンを溶解した。マイクロプレートリーダーにて吸光度を測定した（測定波長  ５７０ｎｍ、参照波長６５５ｎｍ）。