(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式  Ｇａｌ−（Ｇａｌ）ｎ−Ｇｌｃ（但し、式中Ｇａｌはガラクトース残基、Ｇｌｃはグルコース残基、ｎ  は１〜４の整数を表す。）で表されるガラクトオリゴ糖を有効成分とする二次胆汁酸低下剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、腸内における二次胆汁酸の生成を抑制する二次胆汁酸低下剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、我が国では大腸ガン患者の発生数が増えており、各種ガンによる死亡者のうち大腸ガンによる死亡者の割合も上昇している。その原因は、食生活の洋風化にともない発癌作用を有する物質が腸内で生成する量が増加したことにあると考えられている。
【０００３】
腸内で生成して発癌に関与すると考えられている物質の一つは、二次胆汁酸である（Ｓ．Ｂ．Ｒｅｄｄｙほか，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．３７，ｐ．３２３８〜３２４２（１９７７））。二次胆汁酸は、一次胆汁酸すなわち肝臓から腸管に分泌された胆汁酸が一部の腸内細菌の作用で変化したものであって、一次胆汁酸中には存在しないデオキシコール酸、リトコール酸、ウルソデオキシコール酸等を含んでいる。したがって、この二次胆汁酸の生成を日常的に経口摂取可能な物質によって抑制することができれば、大腸ガンの予防に大いに有効であると考えられる。しかしながら、そのような物質はまだ知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、安全性が高く日常的に経口摂取可能で腸内における二次胆汁酸の生成抑制に有効な、二次胆汁酸低下剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明が提供することに成功した二次胆汁酸低下剤は、一般式  Ｇａｌ−（Ｇａｌ）ｎ−Ｇｌｃ  （但し、式中Ｇａｌはガラクトース残基、Ｇｌｃはグルコース残基、ｎ  は１〜４の整数を表す。）で表されるガラクトオリゴ糖を有効成分とするものである。
（以下、ガラクトオリゴ糖というときは、上記一般式で表されるオリゴ糖を意味する。）
【０００６】
本発明の二次胆汁酸低下剤を構成するガラクトオリゴ糖は、例えば特開平２−２９９５８２号公報，特公昭５８−２０２６６号公報等により公知のオリゴ糖であって、乳糖をβ−ガラクトシダーゼで処理して転移反応を生じさせることにより得られるものである。
【０００７】
このガラクトオリゴ糖を乳糖から製造する場合、転移反応に用いるβ−ガラクトシダーゼとしてはストレプトコッカス・サーモフィルス、ラクトバチルス・ブルガリクス、クリベロマイセス・フラギリス、クリベロマイセス・ラクチス、アスペルギルス・オリゼ、バチルス・サーキュランス、ブレラ・シンギュラリス、クリプトコッカス・ローレンティ、リポマイセス・リポファ、ステリグマトマイセス・エリビエアエ、ロドトルラ・ミヌタ、シロバシディウム・マグナム等により生産されたβ−ガラクトシダーゼ等を用いることができる。中でもバチルス・サーキュランス由来のβ−ガラクトシダーゼはガラクトオリゴ糖を高収率で与えるという特徴があり、好ましい。β−ガラクトシダーゼは、微生物細胞内にあるものをそのまま利用してもよい。
【０００８】
原料の乳糖としては、食品用に市販されているものをそのまま使用することができる。乳糖のほか、乳糖を含む乳汁、粉乳、チーズホエー等を用いてもよい。
【０００９】
乳糖のβ−ガラクトシダーゼ処理は、望ましくは濃度約４．５〜８０％ｗ／ｖ、温度約５〜８０℃の乳糖溶液に酵素を加えることにより行う。このとき、乳糖からはガラクトオリゴ糖のほかにＧａｌ−β（１−２）−Ｇｌｃ、Ｇａｌ−β（１−３）−Ｇｌｃ  およびＧａｌ−β（１−６）−Ｇｌｃ等の転移二糖類や加水分解によるグルコースおよびガラクトースも生成するが、生成量の経時的変化がそれぞれ異なるので、反応時間を選ぶことにより、主としてガラクトオリゴ糖からなる反応生成物を得ることができる。
【００１０】
反応生成物はそのまま本発明の二次胆汁酸低下剤に使用することができるが、たとえば活性炭カラムクロマトグラフィー、イオン交換樹脂やゲル濾過剤を用いたクロマト分離などにより分別処理して、加水分解により生じた単糖類や未反応乳糖を分離することが望ましい。なお、上記転移二糖類は、ガラクトオリゴ糖ほどではないが二次胆汁酸低下に有効と考えられるので、特に分離することなくガラクトオリゴ糖と共に二次胆汁酸低下剤に含有させるのが有利である。
【００１１】
従来、ガラクトオリゴ糖については腸内におけるビフィドバクテリウム菌の増殖を促進する作用が知られているが、二次胆汁酸の生成抑制に有効なことは知られていなかった。
【００１２】
ガラクトオリゴ糖またはそれを含有する上記転移反応の生成物を、散剤、顆粒剤、シロップ、錠剤等、経口摂取に適当な剤形に常法により製剤化すれば、本発明の二次胆汁酸低下剤が得られる。製剤化には、剤形に応じて、通常使用される賦形剤（たとえばブドウ糖、乳糖）、崩壊剤（たとえば澱粉、アルギン酸ナトリウム）、結合剤（たとえばゼラチン）、色素、希釈剤等を用いることができる。
【００１３】
本発明の二次胆汁酸低下剤は乳糖由来のガラクトオリゴ糖を主成分とするものであり毒性も無いことが既に確認されているから、これを大腸ガン予防の目的で経口投与する場合の投与量に厳格な制限はないが、一般的な好適投与量は、１回につき０．１〜１０ｇ、１日当たりの総投与量として０．１〜２０ｇである。
【００１４】
【実施例】
実施例１
２５ｋｇの乳糖を２０リットルの熱水に溶かし、この溶液にｐＨ７．０の１Ｍリン酸カリウム緩衝液５００ｍｌとβ−ガラクトシダーゼ・ビオラクタ（商品名，大和化成株式会社製品）１５万単位を加えて６０℃で１２時間反応させた。その後、反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭を加えて脱色し、陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＰＫ２１８）と陰イオン交換樹脂（ＰＡ３１６）を混合充填した樹脂塔を通過させたのち濾過し、濃縮して、粘稠な糖混合物を得た。この糖混合物の糖組成は、ガラクトオリゴ糖３８％、転移二糖類２０％、未反応乳糖２０％、単糖類２２％であった。また、ガラクトオリゴ糖の主成分は  Ｇａｌ−β（１−４）−Ｇａｌ−β（１−４）−Ｇｌｃ  であった。
【００１５】
実施例２
ガラクトオリゴ糖の二次胆汁酸低下作用を次の方法で確認した。ガラクトオリゴ糖としては実施例１で製造したガラクトオリゴ糖含有糖混合物をそのまま用いた。
【００１６】
試験方法：健康男子８名（３６．１±９．８歳）からなるＡ群被験者および健康男子９名（３９．７±１０．８歳）からなるＢ群被験者を用意し、Ａ群被験者にはガラクトオリゴ糖１０ｇを、Ｂ群被験者にはガラクトオリゴ糖２．５ｇを、いずれもレモン水１０ｍｌに溶かして３週間、毎朝食後に投与した。全被験者はガラクトオリゴ糖投与開始前の３週間、投与中の３週間、および投与終了後の３週間にわたり観察下におき、１週間ごとに１回、合計９回、糞便サンプルを採取した。なお、その間、乳製品、発酵食品およびオリゴ糖を含む飲食物の摂取、ならびに抗生物質等の服用を禁止した。投与試験はヘルシンキ条約を遵守して行われた。糞便サンプルは１０倍量のリン酸緩衝液（０．０５Ｍ，ｐＨ７）で希釈、均質化し、ガーゼで濾過した後、凍結乾燥した。この乾燥糞便を７０℃のエタノールで２時間抽出後、遠心上清を窒素気流下で乾固し、得られた乾燥物をメタノールに溶解し、日本分光（株）製胆汁酸分析システム（分離カラム：Ｂｉｌｅｐａｋ−１１，固定化酵素カラ：Ｅｎｚｙｍｅｐａｋ−ＨＳＤ）を用いて胆汁酸の定量を行なった。一次胆汁酸としてはコール酸およびケノデオキシコール酸を定量し、二次胆汁酸としてはデオキシコール酸、リトコール酸およびウルソデオキシコール酸を定量した。一次胆汁酸と二次胆汁酸はそれぞれ合計量を求め、それを各期間につき平均した。
【００１７】
結果を図１〜図４に示す。Ａ群およびＢ群のいずれにおいても、ガラクトオリゴ糖の投与により糞便中の二次胆汁酸の濃度が有意に低下した（図１，２）。全試験期間中、一次胆汁酸の濃度については、ガラクトオリゴ糖投与の影響は認められなかった（図３，４）。なお、結果の有意差検定にはノンパラメトリックな多重比較を行い、ｐ＜０．０１で有意差ありとした。
【００１８】
以上の結果より、ガラクトオリゴ糖の投与がヒト糞便中の二次胆汁酸濃度を低下させることがわかった。これは、ガラクトオリゴ糖がヒトの腸内における二次胆汁酸の生成を抑制することによるものと考えられる。
【００１９】
実施例３
健康男子２０名を被験者にして、一夜絶食後に実施例１によるガラクトオリゴ糖含有糖混合物１５ｇを水７０ｍｌに溶かしたものを飲用させる試験を行なった。投与後、８時間にわたり被験者の腹部の状態を観察したところ、腹痛や下痢などの症状は見られなかった。
【００２０】
【発明の効果】
上述のように、本発明の二次胆汁酸低下剤は大腸ガンの発症に深いかかわりを持つ二次胆汁酸の腸管内濃度をきわめて効果的に低下させることができる。本発明の二次胆汁酸低下剤は乳糖から得られるガラクトオリゴ糖を主成分とするので呈味も良好であり、連続投与の弊害もほとんどないと考えられるので、飲食物に混入するなどの方法により日常的に投与して大腸ガンの予防に活用できることも有利な点である。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例２におけるＡ群被験者の糞便の二次胆汁酸定量値を示すグラフである。
【図２】実施例２におけるＢ群被験者の糞便の二次胆汁酸定量値を示すグラフである。
【図３】実施例２におけるＡ群被験者の糞便の一次胆汁酸定量値を示すグラフである。
【図４】実施例２におけるＢ群被験者の糞便の一次胆汁酸定量値を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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