(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）
【化１】
0003598168.tif 000014
（式中のＲ1は水素原子、メチル基、または１−ヒドロキシエチル基であり、Ｒ2およびＲ3は、水素原子またはヒドロキシル基である）
で表されるフラノナフトキノン誘導体を有効活性成分として含有することを特徴とする抗ウイルス剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
この発明は、抗ウイルス剤に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、優れた活性を有するフラノナフトキノン誘導体を有効成分とする新規な抗ウイルス剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術とその課題】
ＲＮＡウイルスの感染によって起こる疾患には、日本脳炎、デング熱、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、インフルエンザ、Ａ型肝炎、Ｃ型肝炎、黄熱病、出血熱、髄膜炎、小児性下痢症、狂犬病、エボラ出血熱、ラッサ熱、ポリオ、セントルイス脳炎、成人Ｔ細胞白血病、エイズ等があり、さらにＲＮＡウイルス感染が原因と推定されている難治性疾患としては、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、亜急性硬化性全脳炎、アルツハイマー病、潰瘍性大腸炎、クローン病、川崎病、糖尿病等があることが知られている。しかしながら、現状においては、ＲＮＡウイルス感染病に対して有効な化学治療薬はほとんど見出されていない。
実際にも、たとえば日本脳炎、インフルエンザ、麻疹、風疹、流行性耳下腺炎、ポリオ等の関連ウイルスが特定されているものについては、不活化ワクチンや生ワクチンを用いる予防治療がなされるのみであり（狂犬病は血清療法）、発症した場合の治療効果は低いのが実情である。また、非特異的な生体内抵抗物質であるインターフェロン（ＩＦＮ）が現在最も有効な抗ウイルス剤として知られているが、このものは宿主細胞に対する毒性があり、発熱、全身倦怠感、頭痛、食欲不振、白血球血小板減少、中枢神経障害等の副作用が大きいという問題がある。
さらに、抗ＲＮＡウイルス化学療法剤としてはリバビリン、アマンタジンが知られているが、その効果は低く、細胞毒性に伴う不眠、神経過敏等の副作用が強い。このため、ＲＮＡウイルス感染病に対して優れた抗ウイルス活性を有し、しかも、細胞、生体組織に対する副作用の少ない有効な治療薬の出現が待たれている状況にある。
【課題を解決するための手段】
この発明は、上記のとおりの課題を解決するものとして、次式（Ｉ）
【０００７】
【化２】
0003598168.tif 000002
（式中のＲ1は水素原子、メチル基、または１−ヒドロキシエチル基であり、Ｒ2およびＲ3は、水素原子またはヒドロキシル基である）で表されるフラノナフトキノン誘導体を有効活性成分として含有することを特徴とする抗ウイルス剤を提供する。
【発明の実施の形態】
上記のとおりのフラノナフトキノン誘導体を有効活性成分とするこの発明の抗ウイルス剤および抗菌剤については、広範囲のフラノナフトキノン誘導体が用いられることになる。
これらを例示すると、たとえば、２−メチルナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、２−アセチルナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、２−（１−ヒドロキシエチル）ナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、ナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、５（または８）−ヒドロキシ−２−（１−ヒドロキシエチル）ナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、５（または８）−ヒドロキシナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、２−メチル−５（または８）−ヒドロキシ−２−メチルナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、１，３−ジメチルイソフラノナフトキノン、２−（アセチルエチレンアセタール）ナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、８−ヒドロキシ−７−メトキシナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、３−アセチル−５，８−ジメトキシ−２−メチルナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン等々が挙げられる。もちろん、これら例示に何ら限定されることなく、前記の式により表わされる様々な態様がこの発明には可能である。そして、前記式におけるアルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシアルキル基については、活性を阻害しない限り、他の任意の置換基、たとえばアルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、ハロゲン原子、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、チオール基、チオエーテル基、カルボキシル基、エステル基、アミド基、スルホニル基、ハロホルミル基、複素環基等々が結合されていてもよい。
これらの各種の化合物は、これまで公知の様々な化学的合成の手法、あるいは天然物としての樹皮等からのフラノナフトキノン類の抽出等によって製造することができる。
そして、この発明の抗ウイルス剤は、たとえば、ＲＮＡウイルス全般を対象とすることができ、たとえば、適用し得る疾患としては、日本脳炎、デング熱、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、インフルエンザ、Ａ型肝炎、Ｃ型肝炎、黄熱病、出血熱、髄膜炎、小児性下痢症、狂犬病、エボラ出血熱、ラッサ熱、ポリオ、セントルイス脳炎、成人Ｔ細胞白血病、エイズ等のＲＮＡウイルスが原因となる疾患及びＲＮＡウイルス感染が原因と推定されている慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、亜急性硬化性全脳炎、アルツハイマー病、潰瘍性大腸炎、クローン病、川崎病、糖尿病等の難治性疾患等が例示される。
このようなこの発明の抗ウイルス剤は、液剤、固形剤等の様々な剤形において、経口、皮下、静脈、外用等の各種の方法によって処方することができる。当然、その際には、従来公知の配合成分を添加し、塩、エステル等の保護剤をはじめ各種の態様として薬剤組成を構成することができる。
そこで、以下、実施例を示し、この実施例に沿ってさらに詳しくこの発明について説明する。
【実施例】
実施例１
（２−（１−ヒドロキシエチル）ナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオンの製造）
ｓｅｃ−ＢｕＬｉを用いたメタレーション反応により合成した。すなわち、Ｎ，Ｎ−ジエチルベンズアミドに、エーテル中（又はＴＨＦ中）、−７８℃でｓｅｃ−ＢｕＬｉ（１ｅｑ．）とＴＭＥＤＡ（１ｅｑ．）を１時間反応させる。次に−７８℃で５−（１−ヒドロキシエチル）−３−フルアルデヒド誘導体（１ｅｑ．）を滴下し、さらにｓｅｃ−ＢｕＬｉ（４ｅｑ．）を加え徐々に室温にもどし、１晩攪拌を続ける。水を加えクロロホルム抽出し、クロロホルム層を飽和ＮａＣｌ水で洗った後、乾燥留去する。残渣をＰＴＬＣ（クロロホルム：アセトン＝１００：１）により分離精製し、保護基を除去し、次式の化合物の黄色結晶を得た。
【化３】
0003598168.tif 000003
実施例２
（２−メチルナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオンの製造）
２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンとプロピオンアルデヒドから合成した２−ヒドロキシ−３−（２−プロペニル）−１，４−ナフトキノン（１５０ｍｇ）とＤＤＱ（２００ｍｇ）をベンゼン（２０ｍｌ）中攪拌、還流する。２〜３時間後、冷却し、濾過して濾液を留去する。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル３０ｇ、ベンゼン）にかけ、最初の黄色分画より目的の次式化合物を黄色結晶として得た（３５％）。
【化４】
0003598168.tif 000004
【表１】
0003598168.tif 000005
実施例３
（Ａ）８−ヒドロキシナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオン、および（Ｂ）８−ヒドロキシ−２−メチルナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオンの製造）
塩化アルミニウム（２．５ｇ）と無水３−ヒドロキシフタル酸（１ｇ）をニトロベンゼン（５ｍｌ）に加え、アセチルフラン（０．７ｇ）または２−アセチル−５−メチルフランを滴下し１００℃で一晩加熱する。その後、クロロホルム抽出しニトロベンゼンを減圧留去した後カラムクロマトグラフィー（シリカゲル５０ｇ、ベンゼン）にかけ、精製し、次式化合物の黄色結晶を得た（〜５％）。
【化５】
0003598168.tif 000006
【表２】
0003598168.tif 000007
【化６】
0003598168.tif 000008
【表３】
0003598168.tif 000009
実施例４
（５−ヒドロキシ−２−（１−ヒドロキシエチル）ナフト〔２，３−ｂ〕フラン−４，９−ジオンの製造）
Tecomaipe 乾燥樹皮（ブラジル産）１０ｋｇを純メタノール１０ｌ宛で３０分３回加温還流下に抽出し、溶媒を減圧留去した。抽出物（１．４５ｋｇ）をクロロホルム４ｌ宛で３回冷浸し、クロロホルム層を水洗後、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去して抽出物１０ｇを得た。これをトルエン・酢酸エチルエステル（４：１）を展開溶媒としてシリカゲル６０Ｆ254 を用いて分離薄層クロマトグラフィーを反復して行い、Ｒｆ＝０．２４のスポットを抽出、クロロホルム−メタノール（９：１）で抽出し計８ｍｇの次式化合物を得た（融点１８１℃）。
【化７】
0003598168.tif 000010
実施例５
（抗ウイルス剤）
＜Ａ＞試験材料
ウイルス：日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）ＪａＧＡｒ−０１株を用いた。
細胞：ウイルス感染用細胞として、サル腎臓細胞株Ｖｅｒｏ細胞を用い、５％牛胎仔血清を含むＤＭＥＭ培地で３７℃、５％ＣＯ2 存在下に培養した。
＜Ｂ＞試験方法
ウイルス感染とフラノナフトキノン誘導体による阻害：単層培養のＶｅｒｏ細胞にＪＥＶを１０ｍ．ｏ．ｊ．のウイルス量で感染させ、培養した。フラノナフトキノン誘導体はウイルス感染直後に添加し、ウイルス増殖を示す培養液中への放出ウイルス量に対する影響を調べた。
ウイルス量の測定：増殖したウイルス力価はＢＨＫ細胞を用いたプラーク法にて測定し、プラーク形成単位（ＰＦＵ）で表わした。
細胞変性効果：ウイルスに感染した細胞が特異な円形顆粒状を呈することを利用して、ウイルス感染性を示す細胞変性効果（ＣＰＥ）を測定した。
＜Ｃ＞試験結果
培養液中に放出されたＪＥＶを感染２４時間後に採取し、その力価を測定することによって、ウイルス増殖の阻害を調べた。前記実施例２の化合物による各種濃度での結果を示したものが表４である。
この表４のとおり、ＪＥＶ増殖は濃度依存性に阻害され、５０％増殖を阻害する濃度（ＩＣ50）は０．０４μｇ／ｍｌであった。３．３μｇ／ｍｌでＪＥＶの増殖は約９０％阻害され、１０μｇ／ｍｌで９８％阻害された。このような高い濃度でも宿主のＶｅｒｏ細胞に対する細胞毒性は観察されず、また、ウイルス感染によって生じるＣＰＥも認められなかった。
【表４】
0003598168.tif 000011
実施例１、２、および３の化合物を用いた場合の３．３μｇ／ｍｌ濃度付近での結果を示したものが表５である。７５％〜９４％のＪＥＶ増殖阻害効果を示した。さらに実施例１および２の化合物については薬剤による細胞毒性が観察されなかった。
【表５】
0003598168.tif 000012
なお、参考のためにインターフェロン（ＩＦＮ）をポジティブコントロールとして用いた場合の結果を示したものが表６である。ＩＦＮは濃度依存性にＪＥＶの増殖を阻害した。
また、抗菌剤ＯＦＬＸの抗ウイルス活性をＪＥＶ増殖系でネガティブコントロールとして調査したが、宿主細胞に対する細胞毒性が生じる高濃度（１００μｇ／ｍｌ）においても、顕著なＪＥＶ増殖阻害活性は認められなかった。
【表６】
0003598168.tif 000013
ＪＥＶはフラビウイルス科に属するＲＮＡウイルスであり、現在不活化ワクチンを用いた予防法のみがある。しかし近縁ウイルスだけに限ってみても、依然として猛威をふるっているデングウイルスには有効なワクチンはなく、Ｃ型肝炎ウイルスの場合はその世界的な広がりからみてさらに深刻である。
このような状況において、たとえば実施例２の化合物をはじめとするこの発明のフラノナフトキノン誘導体は、以上の結果からも、宿主細胞に対する細胞毒性なしにＪＥＶに強い抗ウイルス活性を示し、ＲＮＡウイルスに対する有効な抗ウイルス剤であることが確認された。
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明により、抗ウイルス活性に優れ、しかも副作用の少ないフラノナフトキノン誘導体からなる抗ウイルス剤が提供される。