(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0003576174.tif 000021
［式中、R1はエチル基を表す；
R2、R3及びR4は、各々、Ｈ、ハロ、低級ハロアルキル、低級アルキル、低級アルケニル、シアノ、低級シアノアルキル、ニトロ、低級ニトロアルキル、アミド、低級アミドアルキル、ヒドラジノ、低級ヒドラジノアルキル、アジド、低級アジドアルキル、（CH2）mNR6R7、（CH2）mOR6、（CH2）mSR6、（CH2）mCO2R6、（CH2）mNR6C（Ｏ）R8、（CH2）mC（Ｏ）R8、（CH2）mOC（Ｏ）R8、Ｏ（CH2）mNR6R7、OC（Ｏ）NR6R7、OC（Ｏ）（CH2）mCO2R6又は、置換又は非置換の（CH2）ｎ［Ｎ＝Ｘ］、OC（Ｏ）［Ｎ＝Ｘ］、（CH2）mOC（Ｏ）［Ｎ＝Ｘ］（ここで、［Ｎ＝Ｘ］は、複素環基の一員である窒素原子Ｎと共に４〜７員の複素環基を表し、ＸはＯ、Ｓ、CH2、CH、Ｎ、NR9及びCOR10によって構成される群から選ばれた、複素環基を完成するのに必要な残りの員を表す）若しくはアリール又は低級アリールアルキルを表す（置換されている場合、アリール基又はヘテロサイクリル上に１〜４個の置換基を有する）；上記の置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである；或いは、R3とR4は一緒に３又は４員の分子鎖を形成しておりそして上記分子鎖の構成員はCH、CH2、Ｏ、Ｓ、Ｎ又はNR9からなる群から選ばれる；
R5はＨ、（CH2）mNR6R7、又は低級アルキル若しくは低級アルキルによって置換されているか又は置換されていない（CH2）ｎ［Ｎ＝Ｘ］を表す（置換されている場合、ヘテロサイクリル上に１〜４個の置換基を有する）；
R6及びR7は、各々、Ｈ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルキル低級アミノアルキル、低級アミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ低級アルキル、低級ハロアルキル又は置換又は非置換アリール又は低級アルキルアリールを表す（置換されている場合、アリール基上に１〜４個の置換基を有する）；上記の置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである；
R8はＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキル、アミノ、低級アルキルアミノ、低級アルキル低級アミノアルキル、低級アミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ、低級アルコキシ低級アルキル、低級ハロアルキル又は置換又は非置換アリール又は低級アリールアルキルを表す（置換されている場合、アリール基上に１〜４個の置換基を有する）；上記の置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである；
R9はＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、アリール又は下記の基：低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルから選ばれた１個又はそれ以上の基によって置換されているアリールを表す；
R10はＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、アリール又は下記の基：低級アルキル、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル及び低級アルコキシ低級アルキルから選ばれた１個又はそれ以上の基によって置換されている（即ち、アリール基上に１〜４個の置換基を有する）アリールを表す；
R18及びR19は、各々、Ｈ、ハロ、低級アルキル、低級アルコキシ又はヒドロキシを表す；
R20はＨ又はハロを表す；
RpはＨを表すか又は式Ｃ（Ｏ）−Ａ−Ｎ−R22R23で表される基から選ばれた易開裂性基を表す；上記の式中、Ａは線状又は分岐鎖状アルキレン基であって、場合により、遊離の、エステル化された又は塩化されたヒドロキシ、ハロゲン、遊離の、エステル化された又は塩化されたカルボキシ、アミノ又はモノ−又はジアルキルアミノ基から選ばれた基によって置換されているものを表し、一方、R22及びR23は、各々、Ｈ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルキル低級アミノアルキル、低級アミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ低級アルキル、低級ハロアルキル、又は、置換（即ち、アリール基が１〜４個の置換基を有する）又は非置換アリール又は低級アルキルアリールを表す（ここで、置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである）；或いは、R22とR23は一緒に、場合により置換された５、６又は７員の環であって、場合により、Ｏ、Ｎ、Ｓから選ばれた他のヘテロ原子を含有するものを表す；
ｍは０〜６の整数である；
ｎは１又は２である；
ｑは０〜２の整数である；そして
［Ｎ＝Ｘ］は４〜７員の複素環基を表し、Ｘは上記複素環基を完成するのに必要なかつＯ、Ｓ、CH2、CH、Ｎ、NR9及びCOR10からなる群から選ばれた分子鎖を表す；但し、Rpが水素原子である場合には、R3とR4が一緒に３又は４員の分子鎖を形成していることを理解すべきである］で表される、かつ、ラセミ体又は鏡像体の形又はこれらの任意の組合せの形である化合物又はその製剤学的に許容される塩。
【請求項２】
R3とR4が、場合により置換されているオキサジン環を形成している、請求項１に記載の化合物又はその製剤学的に許容される塩。
【請求項３】
Rpが容易に開裂し得る基である、請求項１に記載の化合物又はその製剤学的に許容される塩。
【請求項４】
RpがＣ（Ｏ）−（Al）−Ｎ−R22R23基（式中、AlはCH2m又は分岐鎖低級アルキレン基を表し、ｍは０〜６の整数を表す）を表す、請求項１に記載の化合物又はその製剤学的に許容される塩。
【請求項５】
下記の名称の化合物から選ばれる、請求項２に記載の化合物又はその製剤学的に許容される塩：
1,8−ジエチル−8,9−ジヒドロ−８−ヒドロキシ−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［3',4':6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
８−エチル−8,9−ジヒドロ−８−ヒドロキシ−１−メチル−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［3',4':6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
８−エチル−8,9−ジヒドロ−８−ヒドロキシ−１−ベンジル−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［3',4':6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
８−エチル−8,9−ジヒドロ−４−フルオロ−８−ヒドロキシ−１−ベンジル−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［3',4':6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン。
【請求項６】
下記の名称の化合物から選ばれる、請求項３に記載の化合物又はその製剤学的に許容される塩：
５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−（２−アミノ−１−オキソエトキシ）−1H−オキセピノ［3',4':6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−（２−アミノ−１−オキソプロポキシ）−1H−オキセピノ［3',4':6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン。
【請求項７】
医薬としての、請求項１〜６のいずれか一つに記載の化合物又はその製剤学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一つに記載の化合物の少なくとも１つを活性成分として含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか一つに記載の化合物の、抗腫瘍医薬の調製のための使用。
【請求項１０】
一般式D:
【化２】
0003576174.tif 000022
（式中、R3はヒドロキシル基であり、R4はＨであり、R1、R2、R18、R19及び20は請求項１に記載の意義を有する）で表されるβ−ヒドロキシラクトン化合物を、マンニッヒ条件下、第一アミンで処理して、一般式I a:
【化３】
0003576174.tif 000023
（式中、R1、R2、R9、R18、R19及び20は請求項１記載の意義を有する）で表されるβ−ヒドロキシラクトン化合物を得ることを特徴とする、R3とR4が一緒に請求項１、２又は５のいずれかに記載のオキサジン環を形成している式Ｉの化合物に相当する式I aの化合物の製造方法。
【請求項１１】
一般式D:
【化４】
0003576174.tif 000024
又は一般式I a:
【化５】
0003576174.tif 000025
の化合物を、請求項１に記載のＣ（Ｏ）−Ａ−Ｎ−R22R23基の誘導体でアシル化して、Ｈと異なるRpを有する一般式Ｉのβ−ヒドロキシラクトン化合物を得ることを特徴とする、請求項１、３、４又は６のいずれかに記載の、Rpが水素原子ではない場合の一般式（Ｉ）の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
カンプトテシンは、最初、カンプトテカアクミナタ（camptotheca acuminata）と呼ばれる中国産の植物の葉及び樹皮から単離された天然化合物である（Wall等、J.Amer.Chem.Soc.88:3888（1966）参照）。カンプトテシンは６員のα−ヒドロキシラクトン（環Ｅ）と融合したインドリジノ［1,2−ｂ］キノリン部分（環Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ）から構成される５環化合物である。α−ヒドロキシ基を担持している20位の炭素は非対称であり、分子に回転力を付与している。天然の形のカンプトテシンは20位の炭素に関して絶対“S"配置（absolute“S"configuration）を有しており、下記の式に対応する：
0003576174.tif 000002
カンプトテシンとその同族体はヒトの結腸、肺及び乳房の腫瘍の細胞系を包含する種々の癌細胞系において増殖抑制活性を示す（Suffness,M等:The Alkaloids Chemistry and Pharmacology,Bross,A編、Vol.25,p.73（Academic Press,1985）参照）。カンプトテシンの増殖抑制活性は、そのDNAトポイソメラーゼＩの抑制活性に関係していることが示唆されている。
更に、カンプトテシンとそのある種の同族体は水溶性（hydrosoluble）ではなく、このことが、これらを非経口的に投与することを困難にしている。環Ａ及びＢが塩化可能な（salifyable）置換基を担持している場合にはカンプトテシンの水溶性同族体が得られている（例えばUS 4,981,968,US 5,049,668及びEP 540,099参照）。しかしながら、これらの製品は非水溶性誘導体と比較して低い抗腫瘍活性を示す。20位のヒドロキシル基がグリシンのごとき塩化し得る基を担持している酸でエステル化されている、カンプトテシンの他の水溶性同族体も調製されている（US 4,943,579及びPCT NO.WO 96/02546参照）。これらの誘導体は、それ自体では生物学的活性を示さず、一旦、患者に投与された後の、最初の代謝工程の後にだけ生物学的活性を示すので、当業者により“プロドラッグ型”と呼ばれている。カンプトテシンのα−ヒドロキシラクトン同族体のプロドラッグ型は動物において臨床的に良好な抗腫瘍効果を示すが、甚だしい下痢の発生のごとき人命に影響する副作用を伴い、これが患者の生命を失わせることがあり得る。従って、より効果的でかつ耐性の良好なカンプトテシンの水溶性同族体を開発することが必要とされている。
更に、α−ヒドロキシラクトンはカンプトテシンの生体内及び生体外活性の両者について絶対的に必要であることが示されている（Camptothecins:New Anticancer Agents,Putmesil,M,等編,p 27（CRC Press.1995）;Wall,M,等、Cancer Res.55:753（1995）;Hertzberg等,J.Med.Chem.32:715（1982）及びCrow等,J.Med.Chem.35:160（1992）参照）。しかしながら、本出願人は７員のβ−ヒドロキシラクトンがα−ヒドロキシラクトンと同等か又はよりより大きい生物学的活性を有することを発見した（未公開PCT出願No.FR96/00980参照）。本発明はカンプトテシンの天然のα−ヒドロキシラクトンが、７員のβ−ヒドロキシラクトンで置換されている、この種のカンプトテシン同族体の新規な誘導体に関する。β−ヒドロキシラクトンという用語は、α−ヒドロキシラクトン中のカルボキシル基の炭素と、ヒドロキシル基を担持しているα−炭素との間に追加の炭素を含有するラクトンを意味する。
カンプトテシン同族体の水溶性を増大させるために、２つの方法が選択された：第１の方法は分子のＡ環上にオキサジンをグラフトすることからなり、第２の方法はβ−ヒドロキシラクトンのヒドロキシ官能基をアセチル化することによりプロドラッグ型を形成させることからなる。
特に、この新規な種類のカンプトテシン同族体として、本発明の化合物は炭素10及び11上にオキサジン環を結合することにより変性した同族体であるか、又は、β−ヒドロキシラクトンによりカンプトテシンの天然のα−ヒドロキシラクトンが置換されているプロドラッグ型である。従って、本発明の化合物は、オキサジン環又は水溶性プロドラッグがグラフトされている、カンプトテシンのβ−ヒドロキシラクトン同族体であり、従来の技術状態からは予期し得なかった強力な生物学的活性を示す。
本発明の特定の主題は、式（Ｉ）
0003576174.tif 000003
［式中、R1はエチル基を表す；
R2、R3及びR4は、各々、Ｈ、ハロ、低級ハロアルキル、低級アルキル、低級アルケニル、シアノ、低級シアノアルキル、ニトロ、低級ニトロアルキル、アミド、低級アミドアルキル、ヒドラジノ、低級ヒドラジノアルキル、アジド、低級アジドアルキル、（CH2）mNR6R7、（CH2）mOR6、（CH2）mSR6、（CH2）mCO2R6、（CH2）mNR6C（Ｏ）R8、（CH2）mC（Ｏ）R8、（CH2）mOC（Ｏ）R8、Ｏ（CH2）mNR6R7、OC（Ｏ）NR6R7、OC（Ｏ）（CH2）mCO2R6又は（CH2）ｎ［Ｎ＝Ｘ］、OC（Ｏ）［Ｎ＝Ｘ］、（CH2）mOC（Ｏ）［Ｎ＝Ｘ］（ここで、［Ｎ＝Ｘ］は、複素環基の一員である窒素原子Ｎと共に４〜７員の複素環基を表し、ＸはＯ、Ｓ、CH2、CH、Ｎ、NR9及びCOR10によって構成される群から選ばれた、複素環基を完成するのに必要な残りの員を表す）、置換又は非置換アリール又は低級アリールアルキルを表す（置換されている場合、アリール基又はヘテロサイクリル上に１〜４個の置換基を有する）；上記の置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである；或いは、R3とR4は一緒に３又は４員の分子鎖の形成しておりそして上記分子鎖の構成員はCH、CH2、Ｏ、Ｓ、Ｎ又はNR9からなる群から選ばれる；
R5はＨ、低級アルキル又は低級アルキルによって置換されているか又は置換されていない（CH2）mNR6R7又は（CH2）ｎ［Ｎ＝Ｘ］を表す；
R6及びR7は、各々、Ｈ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルキル低級アミノアルキル、低級アミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ低級アルキル、低級ハロアルキル又は置換又は非置換アリール又は低級アルキルアリールを表す（置換されている場合、アリール基上に１〜４個の置換基を有する）；上記の置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである；
R8はＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキル、アミノ、低級アルキルアミノ、低級アルキル低級アミノアルキル、低級アミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ、低級アルコキシ低級アルキル、低級ハロアルキル又は置換又は非置換アリール又は低級アリールアルキルを表す（置換されている場合、アリール基上に１〜４個の置換基を有する）；上記の置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである；
R9はＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、アリール又は下記の基：低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ及び低級アルコキシ低級アルキルから選ばれた１個又はそれ以上の基によって置換されているアリールを表す；
R10はＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、低級アルコキシ、アリール又は下記の基：低級アルキル、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル及び低級アルコキシ低級アルキルから選ばれた１個又はそれ以上の基によって置換されている（即ち、アリール基上に１〜４個の置換基を有する）アリールを表す；
R18及びR19は、各々、Ｈ、ハロ、低級アルキル、低級アルコキシ又はヒドロキシを表す；
R20はＨ又はハロを表す；
RpはＨを表すか又は式Ｃ（Ｏ）−Ａ−Ｎ−R22R23で表される基から選ばれた易開裂性基を表す；上記の式中、Ａは線状又は分岐鎖状アルキレン基であって、場合により、遊離の、エステル化された又は塩化されたヒドロキシ、ハロゲン、遊離の、エステル化された又は塩化されたカルボキシ、アミノ又はモノ−又はジアルキルアミノ基から選ばれた基によって置換されているものを表し、一方、R22及びR23は、各々、Ｈ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルキル低級アミノアルキル、低級アミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ低級アルキル、低級ハロアルキル、又は、置換（即ち、アリール基が１〜４個の置換基を有する）又は非置換アリール又は低級アルキルアリールを表す（ここで、置換基は低級アルキル、ハロ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ又は低級アルコキシ低級アルキルである）；或いは、R22とR23は一緒に、場合により置換された５、６又は７員の環であって、場合により、Ｏ、Ｎ、Ｓから選ばれた他のヘテロ原子を含有するものを表す；
ｍは０〜６の整数である；
ｎは１又は２である；
ｑは０〜２の整数である；そして
［Ｎ＝Ｘ］は４〜７員の複素環基を表し、Ｘは上記複素環基を完成するのに必要なかつＯ、Ｓ、CH2、CH、Ｎ、NR9及びCOR10からなる群から選ばれた分子鎖を表す；但し、Rpが水素原子である場合には、R3とR4が一緒に３又は４員の分子鎖を形成していることを理解すべきである］で表される、かつ、ラセミ体又は鏡像体の形又はこれらの任意の組合せの形である化合物又はその製剤学的に許容される塩である。
本明細書において、アルキル、アルキルチオ及びアルコキシ基に関して使用される低級という用語は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、メチルチオ、エチルチオ、メトキシ及びエトキシのごとき、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖飽和脂肪族炭化水素を意味する。アルケニル又はアルキニル基に関しては、低級という用語は、２〜６個の炭素原子を含有するかつ１個又はそれ以上の二重又は三重結合を有する基、例えば、ビニル、アリル、イソプロペニル、ペンテニル、ヘキサニル、プロペニル、エチニル、プロピニル及びブチニル基を意味する。シクロアルキルという用語は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシル基のごとき、３〜７個の炭素原子を含有する環を意味する。アリールという用語は、少なくとも１個の芳香族環を有するかつ各々の環が最大で７個の構成員を有する単環、二環又は三環式炭化水素基、例えば、フェニル、ナフチル、アントラシル、ビフェニル又はインデニル基を意味する。ハロという用語はクロロ、ブロモ、ヨード又はフルオロを意味する。低級ハロアルキル、低級シアノアルキル、低級ニトロアルキル、低級アミドアルキル、低級ヒドラジノアルキル、低級アジドアルキル、低級アリールアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ低級アルキル、低級アルキルチオ低級アルキル及び低級アルキルスルホニル低級アルキルに相当する基は、それぞれ、１〜３個のハロ、シアノ、ニトロ、アミド、ヒドラジノ、アジド、アリール、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルキルチオ又は低級アルキルスルホニルによって置換されている。低級アルキルアミノ基は１個又は２個の低級アルキル基を含有することができ、例えば、NHCH3、NHCH2CH3、Ｎ（CH3）２又はＮ（CH3）（CH2CH3）を表す。遊離の、エステル化された又は塩化されたヒドロキシという用語はOH、OCOR26又はOR27基及びアルコレート塩を意味する。
本発明の化合物は２個の可能な鏡像的配置、即ち、“R"及び“S"配置を有する。本発明は２つの鏡像的配置及び“RS"ラセミ混合物を包含するこれらの配置の全ての組合せを包含する。説明を単純化するために、構造式中に特定の配置が示されていないときは、これらの２つの鏡像的形及びその混合物が表されていると理解すべきである。
本発明のプロドラッグ型（Rpが水素原子でないもの）に関しては、一般式Ｉの化合物が好ましい。
出発化合物として使用される置換カンプトテシンの例は米国特許第4,473,692号、4,604,463号、4,894956号、5,162,532号、5,395,939号、5,315,007号、5,264,579号、5,258,516号、5,254,690号、5,212,317号及び5,341,745号、PCT特許出願第US91/08028号、US94/06451号、US90/05172号、US92/04611号、US93/10987号、US91/05958号、EP94/03058号及びEP95/00393号及び欧州特許出願第325,247号、495,432号、321,122号及び540,099号に記載されている。
−  一般式D:
0003576174.tif 000004
（式中、R3はヒドロキシル基であり、R4はＨであり、R1、R2、R5、R18、R19及びR20は前記の意義を有する）で表されるβ−ヒドロキシラクトン化合物を、マンニッヒ条件下、第一アミンで処理して、一般式I a:
0003576174.tif 000005
（式中、R1、R2、R5、R9、R18、R19及びR20は前記の意義を有する）で表されるβ−ヒドロキシラクトン化合物を得る。
この方法は原料化合物を、ベンジルアミンのごとき第一アミンとホルムアルデヒドの存在下、酢酸又はプロピオン酸のごとき酸性溶剤中で、30℃〜80℃の温度で0.5〜５時間加熱することからなる。別の方法は、原料化合物と酢酸とからなる懸濁物を、ヘキサヒドロ−1,3,5−トリメチルトリアジン、1,3,5−トリエチルヘキサヒドロトリアジン又は1,3,5−トリベンジルヘキサヒドロトリアジンのごときトリ−Ｎ−置換ヘキサヒドロトリアジンと共に30℃〜80℃の温度で0.5〜５時間加熱することからなる。
−  一般式I aのラクトンを、場合により塩基性媒体中で、開環することにより、中和後、式II a:
0003576174.tif 000006
（式中、R1、R2、R5、R9、R17、R18、R19及びR20は前記の意義を有し、R16はOR21（R21はＨ又は低級アルキルを表す）を表し、R17はOR6又はNHR6を表し、R6はＨ、低級アルキル、シクロアルキル、シクロアルキル低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキル低級アルコキシ、アリール又は低級アルキルアリールを表す）が得られる。
−  前記一般式Ｄ又はI aの化合物を、場合により、好ましくは前記したごときＣ（Ｏ）−Ａ−Ｎ−R22R23基の誘導体を使用してアシル化することにより、一般式I bのβ−ヒドロキシラクトン化合物、即ち、RpがＨと異なる場合の式Ｉの化合物（本発明のプロドラッグ型）が得られる。
−  ラクトンI aと同様の方法でラクトンI bを開環することにより、ヒドロキシ酸II bが得ることができる。
上記の方法において、R2、R3、R4及びR5基は、必要ならば、標準的な保護方法（Greene,T.,Protective Groups in Organic Synthesis 10−86（John Wiley ＆ Sons 1981））に従って保護し得る。R22又はR23基の少なくとも一方がＨである場合、又は、アシル化法に化学的に適合しない少なくとも１個の官能基、例えば、第一又は第二アミンを含有している場合には、アシル化条件に耐え得る保護基を使用することが必要である。アミンについて一般的に使用される保護基はtert−ブチルオキシカルボニル（BOC）である。ついでアシル化反応を前記したごとく行いついで保護基を、例えばBOCの場合にはトリフルオロ酢酸を使用して処理することにより除去して、一般式（Ｉ）又は（II）の化合物を製造する。保護基の使用は当業者に既知である（他の例としては、Greene,T.,Protective Groups in Organic Synthesis John Wiley ＆ Sons 1981を参照できる）。
式Ｄの化合物は下記のごとくして調製し得る：
−  一般式M:
0003576174.tif 000007
（式中、R1、R18及びR19は前記の意義を有し、R20は水素又はハロゲン原子を表す）の化合物と、一般式N:
0003576174.tif 000008
（式中、R2、R3、R4及びR5は前記の意義を有し、Ｘはハロゲン原子を表す）の２−ハロ−３−キノリン−メタノールをカップルして、一般式O:
0003576174.tif 000009
（式中、R1、R2、R3、R4、R5、R18、R19及びR20は前記の意義を有し、Ｘは前記の意義を有する）の化合物を製造し、ついで
−  一般式Ｏの化合物を環化して、前記一般式Ｄの化合物を得る。
上記の方法において、R2、R3、R4及びR5基は、必要ならば、標準的な保護方法（Greene,T.,Protective Groups in Organic Synthesis 10−86（John Wiley ＆ Sons 1981））に従って保護し得る。一般式Ｍ及びＮの化合物からの化合物Ｏの形成は光延（Mitsunobu）反応の名称で当業者に知られている処理（Mitsunobu,O.他、Synthesis,p.1（1981）参照）を使用して行われる。化合物Ｎのヒドロキシ官能基は、例えばテトラヒドロフラン又はN,N−ジメチルホルムアミドのごとき非プロトン性溶剤中で、ホスフィン例えばトリフェニルホスフィン及びアゾジカルボキシレート誘導体例えばジエチルアゾジカルボキシレートで処理することにより、化合物Ｍ又はその脱プロトン（deprotonated）誘導体のごとき求核物質（nucleophile）によって置換される。化合物Ｏの環化は、パラジウム触媒（例えばパラジウムジアセテート）の存在下、塩基性条件下（場合により相間移動試薬、例えばテトラブチルアンモニウムブロマイドと組合せた酢酸アルカリによって提供される）、アセトニトリル又はN,N−ジメチルホルムアミドのごとき非プロトン性溶剤中で、50℃〜120℃の温度で行われることが好ましい（R.Grigg等、Tetrahedron,46,page 4003（1990）参照）。
一般式Ｍの化合物は、下記のプロセスにより調製し得る：
−  一般式：
0003576174.tif 000010
（式中、R1及びR20は前記の意義を有し、R24はハロゲン原子又は低級アルコキシを表す）のビリジンのカルボニルをアセタール官能基で保護して、一般式F:
0003576174.tif 000011
（式中、R1、R20及びR24は前記の意義を有し、Ｚ及びＺ′基は、各々、低級アルキルを表すか又は一緒に、２〜４員の飽和炭化水素鎖を形成している）の化合物を製造し；
−  一般式Ｆの化合物にヒドロキシメチル官能基を導入して、一般式G:
0003576174.tif 000012
（式中、R1、R20、R24、Ｚ及びＺ′は前記の意義を有する）の化合物をを製造し；
−  一般式Ｇの化合物のアルコール官能基を保護して、一般式H:
0003576174.tif 000013
（式中、R1、R20、R24、Ｚ及びＺ′は前記の意義を有し、R25はアルコール官能基の保護基を表す）の化合物を製造し；
−  一般式Ｈの化合物のアセタールを脱保護して、一般式Ｉ′：
0003576174.tif 000014
（式中、R1、R20、R24及びR25は前記の意義を有する）の化合物を製造し；
−  一般式Ｉ′の化合物を官能化アルキル化剤で処理して、一般式J:
0003576174.tif 000015
（式中、R1、R20、R24及びR25は前記の意義を有し、R17、R18及びR19は一般式IIについて定義したものと同一である）のβ−ヒドロキシエステルを製造し；
−  一般式Ｊの化合物の保護基R25を脱離させて、一般式K:
0003576174.tif 000016
（式中、R1、R18、R19、R20及びR24は前記の意義を有し、R17はOR6又はNHR6を表し、R6はＨ、低級アルキル、シクロアルキル、低級アルキルシクロアルキル、低級アルケニル、低級アルキル低級アルコキシ、アリール又は低級アルキルアリールを表す）の化合物を製造し；
−  一般式Ｋの化合物を環化して、一般式L:
0003576174.tif 000017
（式中、R1、R18、R19、R20及びR24は前記の意義を有する）の化合物を製造し；最後に、
−  化合物ＬのR24基をカルボニルに転化して、一般式M:
0003576174.tif 000018
（式中、R1、R18、R19及びR20は前記の意義を有する）の化合物を得る。
４−アシル−２−ハロピリジン（例えばLammattina J.L.J.Heterocyclic Chem.,20,p553（1983）に従って得られる）のカルボニル官能基は、当業者の既知の標準的な条件（Greene,T.,Protective Groups in Organic Synthesis 10−86（John Wiley ＆ Sons 1981））に従って、アセタール官能基、好ましくは、環式アセタールにより保護することが好ましい。かく得られた中間体を非プロトン性溶剤（例えばアセトニトリル）中又はアルコール（これからアルコレートが誘導される）中で、０〜100℃の温度でナトリウム又はカリウムアルコレートで処理して一般式Ｆの化合物を製造する。一般式Ｆの化合物をテトラヒドロフランのごときエーテル型溶剤中、−100℃〜０℃の温度で、アリール又はアルキルリチウム（例えば、メシチル−リチウム）で処理することにより、３位をリチウム化し得る。かく得られたリチウム化中間体にN,N−ジメチルホルムアミドのごときホルミル化求核試薬（formylating electrophile）を添加し、かく得られたアルデヒドを、加水分解した後、水素化ホウ素ナトリウムのごとき還元剤で処理して一般式Ｇの化合物を製造する。化合物Ｇのアルコール官能基の保護を当業者の既知の標準的な条件に従って行って一般式Ｈの化合物を得る。アルコール官能基の保護基の例としてはエーテルを形成するもの（即ち、メチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、２−メトキシエトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブチル及びベンジル（置換又は非置換））及びエステルを形成するもの（即ち、ホルメート、アセテート及びイソブチレート）が挙げられる。第一ヒドロキシル基（primary hydroxyl）の保護基の他の例については、Greene,T.,Protective Groups inOrganic Synthesis 10−86（John Wiley ＆ Sons 1981）を参照せよ。一般式Ｉ′の化合物を製造するための、一般式Ｈの化合物の脱保護は、R25基の一体性を保持する選択的な条件下で、例えば、酸性条件下での処理（例えば、トリフルオロ酢酸による処理）により行われる。官能基の保護及び脱保護についての選択的条件は当業者に既知である（Greene,T.,Protective Groups in Organic Synthesis 10−86（John Wiley ＆ Sons 1981））。一般式Ｊのβ−ヒドロキシエステルを製造するための、官能基アルキル化剤による化合物Ｉ′の処理は、無水非プロトン性溶剤、例えばテトラヒドロフラン中で、リチウムエノラート又はカルボン酸エステルの亜鉛誘導体を使用して行い得る。一般式Ｊの化合物の保護基R25を当業者に既知の脱保護条件下で脱離させて、一般式Ｋの化合物を製造する。例えば、R25がベンジル基である場合には、一般式Ｊの化合物のアルコール溶液と、これに添加されたパラジウム触媒を、0.5〜10バールの圧力下、水素雰囲気に暴露し得る。かく得られた一般式Ｋの化合物の環化を酸性条件下で（例えば、トリフルオロ酢酸による処理又はジクロルメタン又はジオキサンのごとき無水溶剤に溶解させた塩酸ガスによる処理により）行って、一般式Ｌの化合物におけるごとき７員のβ−ヒドロキシラクトン環を形成させ得る。一般式Ｌの化合物を、例えば、温塩酸で処理するか又はトリメチルシリルヨーダイドで処理することにより、一般式Ｍのピリドンに転化し得る。
一般式Ｎの２−ハロ３−キノリンメタノールは、一般式P:
0003576174.tif 000019
（式中、R2、R3及びR4は化合物Ｉ及びIIの一般式について定義した意義を有する）のアセトアニライドから出発して取得し得る。下記の方法においては、R2、R3及びR4基は、必要ならば、標準的な保護方法（Greene,T.,Protective Groups in Organic Synthesis 10−86（John Wiley ＆ Sons 1981））に従って保護し得る。
従って、一般式Ｎの化合物は下記の方法によって得られ得る：前記式Ｐのアニリンを例えば無水酢酸のごときアセチル化剤で処理することによりＮ−アセチル化する。かく得られたアセトアニライドを50℃〜100℃、好ましくは75℃の温度で、ビルスマイヤー試薬（Vilsmeyer's agent）の名称で当業者に知られている試薬（オキシ塩化ホスホリルを０℃〜10℃の温度でN,N−ジメチルホルムアミドに作用させることにより得られる）で処理することにより、対応する２−クロロ−３−キノリンカルボアルデヒドを製造する（例えばMeth−Cohn等、J.Chem.Soc.,Perkin Trans.I p 1520（1981）;Meth−Cohn等、J.Chem.Soc.,Perkin Trans.I p 2509（1981）：及びNakasimhan等、J.Am.Chem.Soc.112 p 4431（1990）参照）。２−クロロ−３−キノリンカルボアルデヒドの２位の塩素を、劾化合物を沃素塩又は臭素塩（例えば沃化ナトリウム又はテトラブチルアンモニウムブロマイド）の存在下、アセトニトリルのごとき溶剤中で加熱することにより、沃素又は臭素で置換し得る。この転化を触媒するために、痕跡の酸、例えば濃塩酸が必要であり得る。２−ハロ−３−キノリンカルボアルデヒドはアルコール溶剤（例えばメタノール）中、０℃〜40℃の温度での水素化ホウ素ナトリウムによる処理のごとき当業者に既知の標準的条件下で、容易に対応する一般式Ｎの２−ハロ−３−キノリンメタノールに還元される。
一般式Ｎの化合物は下記の方法によっても得られ得る：前記一般式Ｐのアニリンを三塩化ホウ素及び三塩化アルミニウム、四塩化チタン又は塩化ジエチルアルミニウムのごとき他のルイス酸の存在下、非プロトン性溶剤又は非プロトン性溶剤の混合物中でニトリル（例えばクロロアセトニトリル又はプロピオニトリル）と反応させることによりアセチル化し、ついで加水分解する（Sugawara T.等、J.Am.Chem.Soc.100 p 4842（1978）参照）。ついで、かく得られた中間体をアセトニトリルのごとき非プロトン性溶剤中で、トリエチルアミンのごとき塩基の存在下、塩化エチルマロニルで処理し、ついで、アルカリ性アルコール、例えばメタノール中のナトリウムメチラートで処理して、４位が置換された２−ヒドロキシ−３−キノリンカルボン酸エチルを製造する。これをオキシ塩化ホスホリルで処理することにより２−クロロ−３−キノリンカルボン酸エチルに転化する。キノリンの４位がクロロメチル基を担持している場合には、例えばジメチルアミン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン又はピペリジンのごとき第２アミンで処理することにより、求核置換（nucleophile substitution）を行い得る。ついで、２−クロロ−３−キノリンカルボン酸エチルをジクロルメタンのごとき非プロトン性溶剤中でジイソブチルアルミニウムハイドライドで還元して、一般式Ｎの２−クロロ−３−キノリンメタノールを製造する。中間体化合物（Ｎ）の同族体は文献、特に、PCT出願95/05247号に記載されている。
本発明の化合物のあるものは、通常の方法に従って製剤学的に許容され得る塩の形で調製し得る。許容され得る塩としては、例えば、無機酸との塩、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩及び硝酸塩、及び有機酸との塩、例えば、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモエート（pamoate）、サリチル酸塩、シュウ酸塩及びステアリン酸塩が挙げられる。水酸化ナトリウム又はカリウムのごとき塩基から形成された塩も、これが使用可能である場合には、本発明の適用分野の一部を形成する。製剤学的に許容され得る塩の他の例については、“Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Soc.66:1（1977）参照。
本発明の化合物は有用な薬理学的性質を有する。即ち、本発明の化合物はトポイソメラーゼＩ型及び／又はII型に対する抑制効果及び抗腫瘍活性を有する。この分野の技術状態から本発明の化合物は抗寄生虫活性及び／又は抗ウイルス活性を有することが示唆される。本発明の化合物は種々の治療的な用途にも使用し得る。
後記の実験の部には本発明の化合物の薬理学的性質が例示されている。
本発明の化合物は、治療に有効な量の式（Ｉ）又は（II）の化合物を患者、例えばヒトのごとき哺乳動物に投与することにより、この患者における、例えばＩ型及び／又はII型のトポイソメラーゼを抑制し得る。
本発明の化合物は抗腫瘍活性も有する。この化合物は治療に有効な量の式（Ｉ）又は（II）の化合物を患者に投与することにより、この患者における腫瘍、例えばトポイソメラーゼを発現する腫瘍を処置するのに使用し得る。腫瘍又は癌の例としては、食道、胃、腸管、直腸、口腔、咽頭、喉頭、肺、結腸、乳房、子宮頚管、子宮内膜体、卵巣、前立腺、精巣、膀胱、腎臓、肝臓、膵臓、骨、結合組織、皮膚、眼、脳及び中枢神経系の癌、並びに、甲状腺癌、白血病、ホジキン病、ホジキン病に関連する以外のリンパ腫、多発性骨髄腫等が挙げられる。
本発明の化合物は住血性鞭毛虫類を抑制することにより（例えばトリパノソーマ又はリューシュマニアの感染の抑制）又はプラスモジウム属原虫（例えばマラリア原虫）を抑制することにより寄生虫の感染の処置に使用することができ、また、ウイルスの感染及びウイルスによる病気の処置に使用し得る。
これらの性質は式（Ｉ）又は（II）の化合物を医薬の用途に使用するのに適するものにしている。本発明は医薬としての、前記式（Ｉ）又は（II）の化合物、並びに、前記式（Ｉ）又は（II）の化合物と製剤学的に許容される無機酸又は有機酸との付加塩、並びに、活性成分として上記医薬の少なくとも１種を含有する医薬組成物もその目的とする。
従って、本発明は本発明の化合物又は本発明の化合物と製剤学的に許容される酸との付加塩を、選択された投与方法（例えば、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、径皮又は皮下投与）に応じた製剤学的に許容される担体と組合せてなる医薬組成物に関する。医薬組成物（例えば治療用）は固体、液体、リポソーム（liposome）又は脂質ミセル（lipidic micella）の形であり得る。
医薬組成物は固体の形、例えば、粉末、ピル、顆粒、錠剤、リポソーム、ゼラチンカプセル又は座薬の形であり得る。ピル、錠剤又はゼラチンカプセルは医薬組成物を消化されない形で服用者の小腸に通送するのに十分な時間、該医薬組成物を服用者の胃内の胃液又は酵素から保護することのできる物質で被覆し得る。本発明の化合物は、例えば腫瘍と同一の場所に局部的に投与し得る。本発明の化合物は長期間放出法に従って投与し得る（例えば長期間放出性組成物又は注入ポンプを使用）。適当な固体担体は例えば燐酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、ナトリウム  カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン及びワックスである。本発明の化合物を含有する医薬組成物は液体の形、例えば溶液、エマルジョン、懸濁液又は長期間放出製剤の形でも提供され得る。適当な液体担体は例えば水、グルセロール又はグリコール、例えばポリエチレングリコールのごとき有機溶剤並びにこれらと種々の割合の水との混合物であり得る。
本発明は、更に、トポイソメラーゼ、特に、Ｉ及び／又はII型のトポイソメラーゼを抑制するための医薬、腫瘍の処置のための医薬、寄生虫の感染を処置するための医薬並びにウイルスによる病気を処置するための医薬の調整における、式（Ｉ）又は式（II）化合物の使用を目的とする。
前記した病気又は疾患の処置を目的とする場合の本発明の化合物の投与量は、投与方法、患者の年齢及び体重並びに患者の病状に従って変動し、処置を行っている医師又は獣医によって正確に決定されるであろう。医師又は獣医によって決定される量は“治療に有効な量”と呼ばれる。
本明細書で使用されている全ての技術的及び科学的用語は、別の方法で定義されていなかぎり、本発明が属する分野における通常の専門家によって現在理解されているものと同一の意義を有する。同様に、全ての刊行物、特許出願、全ての特許及び他の参考文献は、参照して本明細書に包含される。
下記の説明は上記した方法を例示するものであり、本発明を限定するものと理解されるべきでない。
実験の部
調製例１:5−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
1.a.  ４−エチル−3,4−ジヒドロキシ−1H−ピラノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−14（4H,12H）−オン
種々の商業的供給業者、例えばAldrich Chemical Co.（米国ウィスコンシン州ミルウォーキー所在）から入手し得る（Ｓ）−（＋）−カンプトテシン（14g、40ミリモル）をメタノール（750ml）に懸濁した懸濁液に水素化ホウ素ナトリウム（14g、370ミリモル）を少量ずつ添加し、得られた混合物を徐々に55℃に加熱して透明溶液を得、次いでこれを周囲温度で16時間攪拌した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を水（250ml）に溶解し、酢酸（21ml）を加えて中和し、４℃で２時間放置した。得られた懸濁液を濾過し、冷水、アセトン及びジエチルエーテルで連続的に洗浄し、減圧乾燥した後に、目的化合物を融点280℃の白色固体の形状で得た。
1.b.  ８−ホルミルオキシメチル−７−プロピオニルインドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−９（11H）−オン
４−エチル−3,4−ジヒドロキシ−1H−ピラノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−14（4H,12H）−オン（13.4g、38ミリモル）を氷酢酸（720ml）に懸濁した懸濁液に、メタ過沃素酸ナトリウム（14g、65ミリモル）を水（140ml）に溶解した溶液を滴加し、得られた溶液を周囲温度で0.5時間攪拌した。次いで、反応混合物を氷／水混合物（650ml）に注入し、得られた懸濁物を半時間攪拌し、次いで濾過し、水、イソプロピルアルコール及びジエチルエーテルで連続的に洗浄し、減圧乾燥した後に目的化合物（11.5g）を融点＞200℃（分解）の淡黄色固体の形状で得た。
1.c.  β−エチル−β−ヒドロキシ−β−（８−ヒドロキシメチル−９−オキソ（11H）−インドリジノ−［1,2−ｂ］キノリン−７−イル）−プロピオン酸tert−ブチル
アルゴン雰囲気下で電磁攪拌装置を用いて攪拌した無水エチルエーテル（50ml）中の亜鉛懸濁物（6.5g、100ミリモル）を、クロロトリメチルシラン（0.75ml、5.7ミリモル）を滴加することにより活性化させた。周囲温度でさらに15分間攪拌し次いで反応混合物を加熱還流させた。次いで、加熱浴を取り除き、ブロモ酢酸tert−ブチル（15ml、100ミリモル）を、還流が維持される速度で滴下した。前記の外部加熱を元に戻して加熱を更に１時間続けた。かく得られたレフォルマトスキー（Reformatsky）試薬のエーテル溶液を周囲温度まで自然冷却し、次いで８−ホルミルオキシメチル−７−プロピオニルインドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−９（11H）−オン（1.6g、4.7ミリモル）を無水テトラヒドロフラン（40ml）に懸濁した懸濁液にアルゴン雰囲気下でカニューレ（cannula）を用いて移した。反応混合物を還流温度で１時間攪拌し、次いで周囲温度まで自然冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液（100ml）を加えることによって反応を停止させ、次いでクロロホルム（100ml×３回）で抽出した。クロロホルム抽出液を一緒にして硫酸ナトリムを用いて乾燥し、クロロホルムを蒸発させ、次いで残留物をシリカゲルを用いてゲルクロマトグラフィー（溶出液:12％MeOH/CH2Cl2）により精製し、これにより目的化合物を融点146〜149℃淡黄色固体の形で0.64g（収率31％）得た。
NMR−1H（CDCl3）:0.93（t,3H）;1.37（s,9H）;1.99（m,2H）;2.97（dd,2H）;3.5（se,1H）;5.10（s,2H）;5.24（s,2H）;7.40（s,1H）;7.59（t,1H）;7.83（t,1H）;7.90（d,1H）;8.20（d,1H）;8.34（s,1H）．
NMR−C13（CDCl3）:8.18;27.90;34.59;45.34;49.91;58.55;77.39;82.42;100.52;127.67;127.97;128.10;128.64;129.44;129.79;130.42;130.99;142.86;148.69;152.75;155.16;162.38;172.24.
IR（KBr）:764;1016;1157;1580;1651;1726.
1.d.  ５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジン［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
β−エチル−β−ヒドロキシ−β−（８−ヒドロキシメチル−９−オキソ（11H）−インドリジノ−［1,2−ｂ］キノリン−７−イル）−プロピオン酸tert−ブチル（1.45g,3.32ミリモル）を無水ジクロルメタン（25ml）に溶解し、ジクロルメタン（100ml）中の塩化水素の飽和溶液で処理した。得られた混合物を−20℃で16時間保持した。沈殿を濾過し、メタノールで洗浄し、減圧下で乾燥して、目的化合物662mg（収率55％）を融点＞300℃の黄体固体の形で得た。
NMR−1H（DMSO）:0.90（t,3H）;1.20（q,2H）;3.27（dd,2H）;5.29（s,2H）;5.49（dd,2H）;7.42（s,1H）;7.73（t,1H）;7.90（t,1H）;8.16（t,2H）;8.71（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.45;36.48;42.54;50.68;61.44;73.34;99.78;122.71;127.83;128.15;128.75;129.08;130.07;130.61;131.81;144.66;148.04;152.80;155.91;159.26;172.08.
IR（KBr）:761;1127;1204;1285;1580;1653;1757.
調製例２  ５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオンの分割
β−エチル−β−ヒドロキシ−（８−ヒドロキシメチルインドリジノ−［1,2−ｂ］キノリン−９−（11H−オン−７−イル）プロピオン酸（19.5g,51ミリモル）とＬ−（−）−α−メチルベンジルアミン（12.12g,100ミリモル）の無水エタノール（1l）中の混合物を沸点まで加熱しついで保温濾過しついで68時間放置した。沈殿を濾別し、エタノール及びエーテルで洗浄して、9.8gの白色固体を製造した。キラル固定相（chiral stationary phase）上での高圧液体クロマトグラフィー［キラル−AGP（Chiral−AGP）カラム（100×4mm）（スエーデン、ストックホルム、Chromtech）上での“キラルHPLC"（“ChiralHPLC"）；溶離剤10mMリン酸塩緩衝液,pH6.9中の２％アセトニトリル;4.5及び7.4分で溶出するピーク］による分析では、それぞれ、２つのピークの合計面積の24％と76％に積分される２つのピークが生じた。上記固体を93％エタノール（350ml）に還流下で溶解しついで48時間放置した。沈殿を濾別しついでエタノール及びエーテルで洗浄して4.8gの白色固体を得た；この固体はキラルHPLCを使用する分析で、それぞれ、２つのピークの合計面積の９％と91％に積分される２つのピークを生じた。この固体を50％エタノール（48ml）に還流下で溶解しついで48時間放置した。沈殿を濾別しついでエタノール及びエーテルで洗浄して2.7gの白色固体を得た；この固体はキラルHPLCを使用する分析で、それぞれ、２つのピークの全面積の３％と97％に積分される２つのピークを生じた。この固体を50％エタノール（22ml）に還流下で溶解しついで48時間放置した。沈殿を濾別しついでエタノール及びエーテルで洗浄して1.6gの白色固体を得た；この固体はキラルHPLCを使用する分析で、それぞれ、２つのピークの合計面積の１％と99％に積分される２つのピークを生じた。かく得られたジアステレオマーを富化された塩を蒸留水（20ml）に溶解しついで酢酸（0.35ml,6.4ミリモル）で15分間処理した。得られた沈殿を濾別し、水、アセトン及びエーテルで洗浄しついで減圧下、80℃で乾燥して1.1gの白色固体を得た。この固体を濃塩酸（11.5N,11ml）を添加した無水エタノール（55ml）に溶解して黄色溶液を得、これを周囲温度で68時間撹拌した。かく得られた沈殿を濾別し、水、エタノール及びエーテルで洗浄しついで減圧下、80℃で乾燥して、ジアステレオマーを富化された５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジン［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン770mgを得た。キラルHPLCによる分析（キラル−AGPカラム;10mMのリン酸塩緩衝液、pH6.9の２〜５％の濃度勾配のアセトニトリルで溶離；ピークは15及び20分で溶出）は鏡像体の98％の過剰を示した。Ｌ−（−）−α−メチルベンジルアミンの代わりにＤ−（＋）−α−メチルベンジルアミンを使用して上記と同様の方法を行った。この場合、５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジン,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオンの他の鏡像体が得られた。
調製例３  5,12−ジエチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は、工程.1.a.において７−エチルカンプトテシン（Sawada等、Chem.Pharm.Bull.39:2574（1991））を使用したこと以外、調製例１と同様の方法で調製した。目的化合物は融点が＞270℃の鮮明な黄色固体の形で得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.92（t,3H）;1.39（t,3H）;1.93（q,2H）;3.08（d,2H）;3.25（q,2H）;3.51（d,2H）;5.32（s,2H）;5.52（dd,2H）;7.42（s,1H）;7.76（t,1H）;7.89（t,1H）;8.18（d,1H）;8.32（d,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.46;14.15;22.42;36.50;42.54;49.95;61.45;73.35;99.68;122.61;124.27;126.76;127.70;128.27;129.92;130.18;145.17;145.82;148.57;152.15;155.89;159.26;172.08.
調製例４  ５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
4.a.  ２−エチル−２−（２−メトキシ−４−ピリジル）−1.3−ジオキソラン
Lamattina.J.L.によりJ.HeterocyclicChem.20,p553（1983）に記載される方法で得られた２−クロロ−４−プロピオニルピリジン（10g,59ミリモル）、エチレングリコール（20ml）及びｐ−トルエンスルホン酸（250mg）のとトルエン（150ml）中の混合物から、デイーンスターク装置を使用して、水を共沸蒸留した（一夜）。ついで、溶剤を減圧下で除去し、酸を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）で中和しついで生成物をエーテルで抽出した。エーテル抽出物を一緒にし、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥しついで蒸発させて、カルボニル基で保護された粗生成物13.3g（96％）を取得し、これをアセトニトリル中で３当量のナトリウムメトキシドと共に、反応が終了するまで加熱、還流させた（反応の終了は薄層クロマトグラフィーで調べた:SiO2、tert−ブチルメチルオキシド／ヘキサン（TBMO/HX）50/50）。ついでアセトニトリル溶液を濾過し、蒸発させた。残留物をエーテルに溶解させ、水及び塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥しついで蒸発させて褐色油状物を生成させ、これを蒸留して（70−75℃,0.04ミリバール）、10.7g（全体収率81％）の生成物（Ｆ）を透明な油状物の形で得た。
4.b.  ２−エチル−２−（３−ヒドロキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−1,3−ジオキソラン
無水テトラヒドロフラン（300ml）中のブロモメシチレン（13ml,85ミリモル）の溶液に、アルゴン雰囲気下、−78℃でtert−ブチルリチウム（ペンタン中1.7M,100ml,170ミリモル）滴下した。得られた白色沈殿を−78℃で１時間撹拌し、２−エチル−２−（２−メトキシ−４−ピリジル）−1,3−ジオキソラン（10g,44.8ミリモル）を添加しついで反応混合物を−78℃で15分間、０℃で１時間そして周囲温度で１時間撹拌した。再び−78℃に冷却した後、無水N,N−ジメチルホルムアミド（100ミリモル）を添加しついで反応混合物を周囲温度まで昇温させついで16時間撹拌した；その後、薄層クロマトグラフィー分析（SiO2,TBMO/HX:50/50）は原料化合物が完全に消費されたことを示した。飽和塩化アンモニウムにより反応を停止させ、反応混合物をジエチルエーテル（200ml,50ml,50ml）で抽出した。抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウム上で乾燥しついで蒸発させて黄色油状物を生成させ、これをカラムクロマトグラフィー（SiO2,TBMO/HX:メシチレン誘導体を溶離するために0/100〜5/95ついで生成物を溶離するために20/80〜50/50）により精製して中間体アルデヒド（7g）を得た。このアルデヒドをメタノール（100ml）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（5g,132ミリモル）で処理しついで得られた混合物を、薄層クロマトグラフィー分析により制御しながら中間体アルデヒドが完全に消費されるまで（約１時間）撹拌した。ついで溶剤を蒸発させ、残留物をエーテルに溶解し、水及び塩水で洗浄しついで溶剤を蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィー（SiO2,TBMO/HX:10/90〜50/50）にかけて生成物（Ｇ）7g（全体収率62％）を黄色油状物の形で得た。
4.c.  ２−（３−ベンジルオキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−２−エチル−1,3−ジオキソラン
２−エチル−２−（３−ヒドロキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−1,3−ジオキソラン（7g,30ミリモル）と塩化ベンジル（5ml,45ミリモル）の無水テトラヒドロフラン（50ml）中の溶液を、水素化ナトリウム（鉱油中,80％,1.85g,61ミリモル）の無水テトラヒドロフラン（100ml）中の懸濁液に滴下し、反応混合物を16時間還流させた。ついで反応混合物を周囲温度まで冷却し、水（50ml）で反応を停止させついで反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をジエチルエーテル（150ml）に溶解させ、水及び塩水で洗浄し、乾燥しついで蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（SiO2,TBMO/HX:5/95〜20/80）により精製して、ベンジルで保護された生成物（Ｈ）9g（収率87％）を透明油状物の形で得た。
4.d.  １−（３−ベンジルオキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−プロパン−１−オン
２−（３−ベンジルオキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−２−エチル−1,3−ジオキソラン（9g,27ミリモル）を120℃の浴温で３時間、トリフルオロ酢酸（10ml）及び水（5ml）で処理した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留する痕跡の酸を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液を添加して中和した。エーテルを使用して抽出を行いついでカラムクロマトグラフィー（SiO2,TBMO/HX:10/90）により精製して、生成物（Ｉ）5.5g（収率70％）を得た。
4.e.  β−エチル−β−ヒドロキシ−β−（３−ベンジルオキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−プロピオン酸tert−ブチル
ブロモ酢酸tert−ブチル（13ml,80ミリモル）を無水テトラヒドロフラン（60ml）中の亜鉛懸濁液（5.3g,80ミリモル,6NHClで10秒間活性化しついでpHが中性になるまで水で洗浄し、ついでアセトン及びジエチルエーテルで洗浄）に還流下で滴下した。添加終了後、反応媒体を更に10分間還流させた。ついで無水テトラヒドロフラン（20ml）中の１−（３−ベンジルオキシメチル−２−メトキシ４−ピリジル）−プロパン−１−オン（5.8g,20ミリモル）の溶液を添加し、反応混合物を還流下で更に１時間撹拌した。反応を０℃で塩化アンモニウム飽和水溶液（100ml）で停止させついで反応混合物をジエチルエーテルで抽出した。抽出物を一緒にし、硫酸ナトリウム上で乾燥しついで蒸発させて黄色油状物を生成させ、これをカラムクロマトグラフィー（SiO2,TBMO/HX:5/95〜10/90）により精製して、tert−ブチルエステル（Ｊ）（7g,収率95％）を透明油状物の形で得た。
4.f.  β−エチル−β−ヒドロキシ−β−（３−ヒドロキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−プロピオン酸tert−ブチル
５％のパラジウムを担持させた炭素（50mg）を触媒として使用し、また、無水エタノール（10ml）を溶剤として使用して、β−エチル−β−ヒドロキシ−β−（３−ベンジルオキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−プロピオン酸tert−ブチル（1g,2.5ミリモル）を大気圧下で水素添加分解した。反応が終了した後（６時間）、触媒を濾過により分離し、溶剤を蒸発させて、次の工程で使用するのに十分な純度の生成物（Ｋ）0.7g（収率90％）を得た。
4.g.  ５−エチル−1,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−９−メトキシ−オキセピノ［3,4−ｃ］ピリジン−３（4H）−オン
β−エチル−β−ヒドロキシ−β−（３−ヒドロキシメチル−２−メトキシ−４−ピリジル）−プロピオン酸tert−ブチル（8.8g,28ミリモル）を周囲温度で３時間、トリフルオロ酢酸（30ml）で処理した。揮発成分を蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（SiO2,CH2Cl2/MeOH:100/0〜98/2）により精製して透明油状物を生成させ、これをトルエンで処理して、生成物（Ｌ）5.9g（収率89％）を融点97−98℃の白色結晶の形で得た。
4.h.  ５−エチル−1,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−オキセピノ［3,4−ｃ］ピリジン−3,9（4H,8H）−ジオン
５−エチル−1,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−９−メトキシ−オキセピノ［3,4−ｃ］ピリジン−３（4H）−オン（0.5g,2.1ミリモル）を1N塩酸（20ml）中で９時間、還流下で加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、トルエンの添加と蒸発を２回行うことにより再度、乾燥させついで五酸化リンの存在下、減圧下で一夜放置した。得られた油状物を無水アセトニトリル（5ml）に溶解し、アルゴン雰囲気下で24時間撹拌した。沈殿を濾過し、乾燥して、融点118−119℃の白色固体（Ｍ）0.23g（49％）を得た。
4.i.  ２−クロロ−6,7−ジフルオロ−３−キノリン−メタノール
Meth−Cohnとその共同研究者によりJ.Chem.Soc.Perkin Trans.I,p 1520（1981）;Meth−CohnによりJ.Chem.Soc.Perkin Trans.I,p 2509（1981）に記載の方法を使用した。オキシ塩化ホスホリル（103ml,1.1ミリモル）を無水ジメチルホルムアミド（34ml,44ミリモル）に滴下することにより得られるビルスマイヤー試薬に3,4−ジフルオロアセトアニライド（38ml,22ミリモル）を添加し、水／氷浴を使用して冷却しついでアルゴン雰囲気下で0.5時間撹拌した。得られた混合物を70℃で16時間加熱した。周囲温度に冷却した後、反応混合物を氷−水混合物（400ml）に添加し、これを２時間撹拌し、ついで濾過し、水、エタノール及びエーテルで順次洗浄して、9gの２−クロロ−6,7−ジフルオロキノリン−３−カルボアルデヒドを融点222−224℃の黄色固体の形で得た。この中間体をメタノール（400ml）中、周囲温度で0.5時間、水素化ホウ素ナトリウム（2g,52ミリモル）で処理しついで酢酸（2ml）を添加することにより過剰の反応剤を分解した。溶剤を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解しついで希薄な炭酸水素ナトリウム溶液、水及び飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた個体を1,2−ジクロルエタンから結晶化させて8gの２−クロロ−6,7−ジフルオロキノリン−メタノールをベージュ色固体の形で得た。
4.j.  ５−エチル−８−（２−クロロ−6,7−ジフルオロ−３−キノリンメチル）−1,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−オキセピノ［3,4−ｃ］ピリジン−3,9−（4H,8H）−ジオン
ジエチルアゾジカルボキシレート（570ml,3.6ミリモル）を、５−エチル−1,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−オキセピノ［3,4−ｃ］ピリジン−3,9（4H,8H）−ジオン（400mg,1,79ミリモル）、前記工程4.i.で得られた化合物（770mg,2.23ミリモル）及びトリフェニルホスフィン（934mg,3.58ミリモル）をN,N−ジメチルホルムアミド（45ml）に溶解させた溶液に５分間で滴下し、得られた混合物をアルゴン雰囲気下、周囲温度で16時間撹拌した。ついで反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物をエーテル（100ml）に溶解させた。得られた溶液を塩水（4x50ml）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥しついで蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィー（SiO2,CH2Cl2/MeOH:99/1〜98/2）により精製して、650mg（66％）の生成物（Ｏ）を融点165−167℃の白色結晶の形で得た。
4.k.  ５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
５−エチル−８−（２−クロロ−6,7−ジフルオロ−３−キノリンメチル）−1,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−オキセピノ［3,4−ｃ］ピリジン−3,9（4H,8H）−ジオン（600mg,1.1ミリモル）、テトラブチルアンモニウムブロマイド（352mg,1.1ミリモル）、酢酸ナトリウム（359mg,4.4ミリモル）及びパラジウムIIアセテート（98mg,0.43ミリモル）を無水アセトニトリル（40ml）に溶解し、アルゴン雰囲気下、90℃で16時間撹拌した。周囲温度に冷却した後、白色沈殿を赤色溶液から分離した。沈殿を濾過し、減圧下で乾燥させた。粗生成物を水に懸濁させ、濾過しついで減圧下、五酸化リン上でで乾燥して250mgの目的化合物を融点＞250℃のベージュ色固体の形で得た。
NMR−1H（DMSO）:0.91（t,3H）;1.87（m,2H）;3.08（d,1H）;3.51（d,1H）;4.45（s,4H）;5.19（s,2H）;5.47（dd,2H）;6.02（se,1H）;7.33（s,1H）;7.54（s,1H）;7.55（s,1H）;8.43（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.43;36.47;42.54;50.52;61.43;64.43（2C）;73.31:99.07;112.27;113.14;122.00;124.24;128.18;129.74;144.59;145.01;145.33;147.63;150.88;155.88;159.23;172.07.
調製例５:5−エチル−4,5−ジヒドロ−5,10−ジヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
10−ベンジルオキシ−５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン（370mg,0.79ミリモル）を、炭素上に担持された10％のパラジウム（60mg）を触媒として使用し、また、トリフルオロ酢酸（15ml）を溶剤として使用して、大気圧下、周囲温度で水素で処理した。反応終了後（16時間）、反応混合物にジクロルメタン（50ml）とメタノール（50ml）を添加し、触媒を濾別しついで揮発成分を減圧下で蒸発させて、痕跡のトリフルオロ酢酸を含有する粗目的化合物を得た。この痕跡のトリフルオロ酢酸を1,4−ジオキサンとの共沸蒸留により除去した。生成物は融点150℃（分解）のオレンジ色固体の形で、後の合成工程で使用するのに十分な純度で得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.89（t,3H）;1.85（q,2H）;3.02（d,1H）;3.45（d,1H）;5.19（s,2H）;5.37（d,1H）;5.50（d,1H）;5.98（se,1H）;7.26（s 1H）;7.31（s,1H）;7.40（d,1H）;8.00（d,1H）;8.42（s,1H）;10.32（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.47;36.50;42.61;50.57;61.46;73.35;98.84;109.02;121.83;123.18;129.50;129.85;130.12;130.80;143.39;145.10;149.69;155.97;156.82;159.30;172.11.
調製例６:5−エチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メトキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、３−フルオロ−４−メトキシアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.89（t,3H）;1.85（q,2H）;3.08（d,1H）;3.49（d,1H）;4.00（s,3H）;5.25（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.00（s,1H）;7.32（s,1H）;7.72（d,1H）;7.91（d,1H）;8.58（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.43;36.48;42.51;50.68;56.60;61.42;73.29;99.25;108.68;113.52;122.23;126.66;129.99;130.30;143.79;144.70;148.42;151.18;153.19;155.81;159.20;172.06.
IR（KBr）:1259;1503;1602;1737.
調製例７:9−クロロ−５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メチル−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、３−クロロ−４−メトキシアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;2.55（s,3H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;5.25（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.05（s,1H）;7.39（s,1H）;8.10（s,1H）;8.20（s,1H）;8.60（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.43;20.20;36.47;42.49;50.67;61.41;73.28;99.87;122.82;126.98;127.99;129.60;130.53;131.08;135.64;136.56;144.39;147.11;153.10;155.85;159.18;172.03.
IR（KBr）:1208;1479;1606;1656;1724.
調製例8:8−エチル−2,3,8,9−テトラヒドロ−８−ヒドロキシ−10H,12H−［1,4］ジオキシノ［2,3−ｇ］オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、3,4−エチレンジオキシアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.47（d,1H）;5.25（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.05（s,1H）;7.39（s,1H）;8.15（q,1H）;8.25（q,1H）;8.68（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.41;36.45;42.48;50.68;61.40;73.25;99.92;114.44;115.42;115.58;122.96;125.52;130.56;131.46;144.21;145.25;142.36;153.41;155.85;159.15;172.00.
IR（KBr）:1266;1512;1581;1618;1751.
調製例9:7−エチル−7,8−ジヒドロ−７−ヒドロキシ−9H,11H−［1,3］ジオキソロ［4,5−ｇ］オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−9,12（14H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、3,4−メチレンジオキシアニリンから製造した。クリーム固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;5.20（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.00（s,1H）;6.30（s,2H）;7.30（s,1H）；
NMR−C13（DMSO）:8.43;36.49;42.56;50.58;61.42;73.31;98.87;102.75;103.33;104.92;121.76;125.74;128.59;130.33;145.08;146.69;148.78;150.19;151.49;155.90;159.24;172.08.
IR（KBr）:1248;1459;1606;1731.
調製例10:9−クロロ−５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メトキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、３−クロロ−４−メトキシアニリンから製造した。白色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;4.01（s,3H）;5.22（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.02（s,1H）;7.31（s,1H）;7.68（s,1H）;8.20（s,1H）;8.55（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.22;36.27;42.30;50.48;56.69;61.23;73.08;99.16;107.44;122.16;127.12;128.12;129.25;130.02;130.53;143.29;144.37;151.12;153.29;155.71;158.98;171.84.
IR（KBr）:1056;1256;1483;1592;1657;1747.
調製例11:5−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メトキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、４−メトキシアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;3.95（s,3H）;5.28（s,2H）;5.40（d,1H）;5.51（d,1H）;6.00（s,1H）;7.38（s,1H）;7.51（d,2H）;8.07（d,1H）;8.55（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.45;36.48;42.51;50.64;55.92;61.42;73.33;99.01;106.49;122.02;123.19;129.59;130.20;130.43;144.17;144.94;150.40;155.92;158.31;159.26;172.07.
IR（KBr）:1251;1604;1655;1735.
調製例12:9,11−ジクロロ−５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、3,5−ジクロロアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;5.30（s,2H）;5.41（d,1H）;5.55（d,1H）;6.08（s,1H）;7.41（s,1H）;8.05（s,1H）;8.21（s,1H）;8.91（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.39;36.45;42.51;51.03;61.39;73.25;100.62;123.55;124.63;127.60;128.08;128.56;132.06;132.19;134.53;143.77;148.80;154.88;155.82;159.13;171.98.
IR（KBr）:1064;1275;1586;1651;1743.
調製例13:5−エチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メチル−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、３−フルオロ−４−メチルアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.89（t,3H）;1.85（q,2H）;2.49（s,3H）;3.08（d,1H）;3.49（d,1H）;5.21（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.05（s,1H）;7.39（s,1H）;7.78（d,1H）;8.05（d,1H）;8.61（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.40;15.14;36.45;42.52;50.60;61.41;73.28;99.71;112.00;122.66;125.38;127.66;129.59;130.28;144.49;147.88;152.88;155.85;159.18;162.25;172.02.
IR（KBr）:1054;1580;1651;1760.
調製例14:5−エチル−10−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、４−フルオロアニリンから製造した。白色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;5.29（s,2H）;5.39（d,1H）;5.55（d,1H）;6.30（s,1H）;7.39（s,1H）;7.80（q,1H）;7.99（q,1H）;8.23（q,1H）;8.68（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.40;36.46;42.48;50.66;61.41;73.31;99.68;111.83;122.75;128.93;130.93;131.22;131.93;144.46;145.27;152.60;155.89;159.21;172.04.
IR（KBr）:1209;1589;1659;1739.
調製例15:10−クロロ−５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、４−クロロアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.47（d,1H）;5.25（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.05（s,1H）;7.39（s,1H）;7.89（d,1H）;8.19（d,1H）;8.29（s,1H）;8.67（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.40;36.46;42.47;50.70;61.42;73.31;100.00;122.96;127.31;127.42;128.87;131.11;132.12;144.34;146.53;153.38;155.88;159.20;172.04.
IR（KBr）:1069;1483;1606;1741.
調製例16:9−クロロ−５−エチル−10−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
この化合物は調製例４の工程4i,4j及び4kに例示される方法に従って、４−クロロ−３−フルオロアニリンから製造した。黄色固体、融点＞250℃。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.07（d,1H）;3.45（d,1H）;5.25（s,2H）;5.39（d,1H）;5.51（d,1H）;6.05（s,1H）;7.40（s,1H）;8.20（d,1H）;8.40（d,1H）;8.68（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.38;36.47;42.58;50.71;61.40;73.26;99.99;113.59;123.09;124.28;127.74;130.64;131.31;144.13;145.08;153.57;154.13;155.84;156.61;159.14;172.00.
調製例17:5,12−ジエチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メトキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
17.a.  ５−フルオロ−４−メトキシ−２−プロピオニルアニリン
（この化合物はSugawaraT;ToyodaT;AdachiM;SasakuraK,J.Am.Chem,Soc.,100（1978）,p4842−4852に従って得られる）。三塩化ホウ素（ヘプタン中,1M,156ml,156ミリモル）を、３−フルオロ−４−メトキシアニリン（20g,142ミリモル）の無水ジクロルメタン（300ml）中の溶液にアルゴン雰囲気下、０℃で滴下した。かく得られたピンク色の懸濁液を５分間撹拌し、ついでプロピオニトリル（33ml,420ミリモル）を滴下しついで三塩化アルミニウム（20.8g,156ミリモル）を少量づつ添加した。反応媒体を３時間還流下で過熱し、０℃に冷却し、2N塩酸（100ml）を慎重に添加することにより加水分解しついで45分間還流下で加熱した。０℃に冷却した後、沈殿が得られ、これを濾別し、ジクロルメタンで洗浄しついで水（300ml）に溶解させた。水性相をアルカリ性pHまで塩基性化し、ジクロルメタン及びついで酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥し（MgSO4）ついで蒸発させて粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィー（SiO2,AcOEt/Hpt:1/99〜20/80）により精製した。15.3gの黄色固体が得られた。
NMR−1H（CDCl3）:1.20（t,3H）;2.92（q,2H）;3.83（s,3H）;6.2（s,2H）;6.40（d,2H）;7.32（d,2H）．
IR（KBr）:857;1148;1240;1561;1583;1662.
17.b  ４−エチル−７−フルオロ−２−ヒドロキシ−６−メトキシ−３−キノリンカルボン酸エチル
無水アセトニトリル（30ml）中の塩化エチルマロニル（12.9ml,100ミリモル）の溶液を、無水アセトニトリル（110ml）中の５−フルオロ−４−メトキシ−２−プロピオニルアニリン（15.3g,77.5ミリモル）とトリエチルアミン（13.9ml,100ミリモル）の溶液にアルゴン雰囲気下、０℃で滴下した。反応媒体を周囲温度に戻し、ナトリウムエチラート溶液（1.8g,78ミリモルのナトリウムを80mlのエタノールに溶解して得られる）をカニューレを使用してアルゴン雰囲気下で滴下しついで反応媒体を周囲温度で12時間撹拌した。反応混合物を氷−冷水（100ml）に注入し、２時間撹拌し、沈殿を濾別しついで水、エタノール及びエーテルで洗浄した。19.4gの白色固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:1.25（m,6H）;2.78（q,2H）;3.92（s,3H）;4.30（q,2H）;7.15（d,2H）;7.40（d,2H）;11.93（s,1H）．
IR（KBr）:786;1083;1410;1521;1644;1725.
17.c.  ２−クロロ−４−エチル−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボン酸エチル
塩化ホスホリル（243ml）中の４−エチル−７−フルオロ−２−ヒドロキシ−６−メトキシ−３−キノリンカルボン酸エチル（19.4g,0.066モル）の溶液を６時間還流下で加熱した。塩化ホスホリルを留去した。反応混合物を氷冷水中に傾写しついでジクロルメタンに溶解させた。有機相を水及びついで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶剤を留去した。残留物をエーテルに懸濁させ、非転化原料化合物（4g）を濾別した。濾液を蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（SiO2,AcOEt/Hpt:5/95〜20/80）により精製した。10.9gの白色固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:1.30（t,3H）;1.39（t,3H）;3.08（q,2H）;4.09（s,3H）;4.49（q,2H）;7.64（d,2H）;7.86（d,2H）．
IR（KBr）:865;1016;1082;1190;1224;1253;1272;1508;1571;1732.
17.d.  ２−クロロ−４−エチル−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンメタノール
無水ジクロルメタン（200ml）中の２−クロロ−４−エチル−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボン酸エチル（10.8g,35ミリモル）の溶液に、不活性雰囲気下、周囲温度で水素化ジイソブチルアルミニウム（ジクロルメタン中の1M溶液、65ml,65ミリモル）を滴下しついで40℃で４時間加熱した。０℃に冷却した後、ロシェル塩の20％水溶液（105ml）とジクロルメタン（200ml）を慎重に添加しついで反応混合物を１時間撹拌し、傾写しついで水で３回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶剤を留去した。残留物をカラムクロマトグラフィー（SiO2,AcOEt/Hpt:5/95〜50/50）により精製した。6gの白色固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:1.28（t,3H）;3.25（q,2H）;4.04（s,3H）;4.77（d,2H）;5.27（t,1H）;7.55（d,2H）;7.73（d,2H）．
IR（KBr）:840;864;1023;1232;1267;1317;1444;1511;1569.
17.e.  5,12−ジエチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−10−メトキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
２−クロロ−４−エチル−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンメタノールを調製例４の工程4.j.に述べたと同様にして化合物（Ｍ）とカップルした。得られたカップル生成物を工程4.kに述べたと同様にして環化した。融点＞275℃の黄色固体が得られた。
NMR−1H（CF3COOD）:1.07（m,3H）;1.62（m,3H）;2.27（m,2H）;3.44（d,1H）;3.54（m,2H）;3.91（d,1H）;4.25（s,3H）;5.60（d,1H）;5.74（s,2H）;5.98（d,1H）;7.85（m,1H）;8.16（m,1H）;8.31（s,1H）．
NMR−C13（CF3COOD）:9.03;14.20;26.68;38.77;43.98;53.79;58.27;64.73;77.93;106.85;109.24;110.15;128.99;129.20;131.61;137.32;141.23;144.13;154.79;158.32;160.25;160.81;179.30.
IR（KBr）:1013;1068;1265;1466;1514;1601;1655;1748.
調製例18  ５−エチル−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−12−メチル−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
調製例17、17.b、17.c及び17.d.に記載の方法を２−アセチルアニリンに適用して２−クロロ−４−メチル−３−キノリンメタノールを製造した。後者の化合物を調製例４の工程4.j.に述べたと同様にして化合物（Ｍ）とカップルした。得られたカップル生成物を工程4.kに述べたと同様にして環化した。融点＞260℃の黄色固体が得られた。
NMR 1H（DMSO）:0.87（t,3H）;1.87（q,2H）;2.78（s,3H）;2.80（d,1H）;3.55（d,1H）;5.27（s,2H）;5.42（d,1H）;5.52（d,1H）;6.04（s,1H）;7.39（s,1H）;7.75（t,1H）;7.88（t,1H）;8.13（d,1H）;8.25（d,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.23;36.26;42.36;62.00;73.11;78.65;79.13;79.25;99.52;122.36;124.30;127.67;129.54;129.55;129.56;140.11;145.06;148.07;152.00;155.79;159.09;171.89.
IR（KBr）:1649;1751;3404.
調製例19  10−ベンジルオキシ−５−エチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
工程4.i.で例示した方法を３−フルオロ−４−メトキシアニライドに適用して２−クロロ−７−フルオロ−６−メトキシキノリン−３−カルボアルデヒドを製造し、これを周囲温度で24時間、ジクロルメタン中の過剰の三臭化ホウ素で処理した。２−クロロ−７−フルオロ−６−ヒドロキシキノリン−３−カルボアルデヒドが得られ、これを臭化ベンジルと炭酸カリウムの存在下、ジメチルホルミアミド中で０−ベンジル化して６−ベンジルオキシ−２−クロロ−７−フルオロキノリン−３−カルボアルデヒドを製造し、これをメタノール中で水素化ホウ素ナトリウムで還元して対応するキノリンメタノールを製造した。後者の化合物を調製例４の工程4.j.に述べたと同様にして化合物（Ｍ）とカップルした。得られたカップル生成物を工程4.kに述べたと同様にして環化した。融点＞275℃の黄色固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.86（t,3H）;1.85（q,2H）;3.05（d,1H）;5.25（s,2H）;5.37（s,2H）;5.45（dd,2H）;6.05（s,1H）;7.4−7.6（m,5H）;7.88（d,1H）;7.95（d,1H）;8.56（s,1H）．
調製例20  ５−エチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−5,10−ジヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
調製例19の化合物（0.79ミリモル）をトリフルオロ酢酸（15ml）に溶解し、炭素上の10％パラジウム（60mg）を使用して水素で処理した。融点＞275℃の黄色固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.86（t,3H）;1.85（q,2H）;3.05（d,1H）;5.25（s,2H）;5.37（s,2H）;5.45（dd,2H）;6.05（s,1H）,7.8（d,1H）;7.90（d,1H）;8.56（s,1H）．
上記の調製例は、以下に示す実施例により本発明を説明するための基礎となるものである。
実施例１：
５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−（２−アミノ−１−オキソエトキシ）−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
a.  ５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−（２−ｔ−ブチルオコシカルボニルアミノ）−１−オキソエトキシ）−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン，塩酸塩
５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン（200mg,0.526ミリモル、調製例４に従って調製）、Ｎ−Boc−グリシン（185mg1.051ミリモル）及び触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（20mg）の、無水ピリジン（10ml）中の混合物を、アルゴン雰囲気下、０℃でジシクロヘキシルカルボジイミド（239mg,1.16ミリモル）で処理しついで周囲温度で48時間撹拌した。揮発成分を真空下で除去し、残留物をクロマトグラフィー（SiO2,クロロホルム中にメタノール１％）にかけて、所望の中間体（40mg,14％）を黄色固体として得た。
NMR−1H（CDCl3）:1.20（t,3H）;1.38（s,9H）;1.40−1.70（m,2H）;3.10（d,1H）;4.00（d,2H）;4.30（d,1H）;5.00（t,1H）;5.20（s,2H）;5.30−5.90（dd,2H）;7.20（s,1H）;7.50−8.10（m,2H）;8.30（s,1H）．
b.  ５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−（２−アミノ−１−オキソエトキシ）−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン，塩酸塩
上記で得られた中間体（40mg,0.072ミリモル）のジクロルメタン（10ml）中の溶液を０℃に保持し、塩化水素を飽和させたジオキサン（8ml）を滴下した。かく得られた黄色懸濁液を２時間撹拌しついで揮発成分を真空下で除去した。残留物を水（5ml）に溶解し、ジクロルメタンで洗浄した（3x30ml）。水性相を凍結乾燥して、標題化合物の吸湿性黄色固体（20mg,50％）を得た。
NMR−1H（CDCl3）:1.00（t,3H）;2.15（m,1H）;2.30（m,1H）;3.60（d,1H）;3.90（d,1H）;4.15（s,2H）;5.10（s,2H）;5.40（d,1H）;5.70（d,2H）;7.40（s,1H）;7.80（m,2H）;8.50（s,1H）．
実施例２
５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−（２−アミノ−１−オキソプロポキシ）−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン
Ｎ−Boc−グリシンの代わりにＮ−Boc−ｂ−アラニンを使用して、実施例１の方法を５−エチル−9,10−ジフルオロ−4,5−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］−インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオンに適用し、ついでかく得られた中間体のBoc保護基を、ジクロルメタン中でトリフルオロ酢酸で処理することにより脱離させた。揮発成分を真空下で蒸発させ残留物をジクロルメタンに溶解させた。得られた溶液を希炭酸水素塩溶液で洗浄し、乾燥しついで蒸発させた。黄色固体が得られた。
実施例１及び２の方法を他の化合物に適用することにより、同様の結果が得られた。この方法により、全種類のカンプトテシン同族体を“プロドラッグ”型として得ることができる。
実施例３
1,8−ジエチル−8,9−ジヒドロ−８−ヒドロキシ−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
５−エチル−4,5−ジヒドロ−5,10−ジヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン（84mg,調製例５に従って得られる）の酢酸（2.5ml）中の懸濁液を1,3,5−トリエチルヘキサヒドロトリアジン（0.5ml）で処理した。反応混合物を70℃で30分間撹拌しついで真空下で蒸発させた。残留物をエタノールに溶解させ、濾過しついでエーテルで洗浄した。融点＞275℃の固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.87（t,3H）;1.50（t,3H）;1.85（q,2H）;2.77（q,2H）;3.05（d,1H）;3.47（d,1H）;4.37（s,2H）;5.00（s,2H）;5.22（s,2H）;5.45（dd,2H）;6.00（s,1H）;7.34（s,1H）;7.36（d,1H）;7.93（d,1H）;8.53（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.46;13.48;36.46;42.49;45.49;46.44;50.75;61.43;73.33;82.06;99.02;112.90;122.00;122.98;125.42;127.04;129.04;130.20;144.09;144.97;149.87;152.92;155.98;172.07.
IR（KBr）:1045;1215;1502;1604;1657;1722.
実施例４
８−エチル−8,9−ジヒドロ−８−ヒドロキシ−１−メチル−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
５−エチル−4,5−ジヒドロ−5,10−ジヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン（200mg,調製例５に従って得られる）の酢酸（5ml）中の懸濁液を1,3,5−トリメチルヘキサヒドロトリアジン（110mg）で処理した。反応混合物を70℃で30分間撹拌しついで真空下で蒸発させた。残留物をエタノールに溶解させ、濾過しついでエーテルで洗浄した。融点＞275℃の固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.87（t,3H）;1.85（q,2H）;3.04（d,1H）;3.48（d,1H）;4.33（s,2H）;4.93（s,2H）;5.28（s,2H）;5.45（dd,2H）;6.01（s,1H）;7.35（s,1H）;7.38（d,1H）;7.94（d,1H）;8.49（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.46;36.43;37.85;42.55;48.68;50.79;61.43;73.35;83.82;99.04;112.49;122.04;123.00;125.46;127.14;129.07;130.27;144.99;149.95;152.46;155.99;172.09
IR（KBr）:1047;1058;1219;1246;1295;1439;1504;1604;1655;1735.
実施例５
８−エチル−8,9−ジヒドロ−８−ヒドロキシ−１−ベンジル−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
５−エチル−4,5−ジヒドロ−5,10−ジヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン（200mg,調製例５に従って得られる）の酢酸（5ml）中の懸濁液を1,3,5−トリベンジルヘキサヒドロトリアジン（285mg）で処理した。反応混合物を70℃で30分間撹拌しついで真空下で蒸発させた。残留物をエタノールに溶解させ、濾過しついでエーテルで洗浄した。融点＞275℃の固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.05（d,1H）;3.47（d,1H）;3.96（s,2H）;4.33（s,2H）;5.04（s,2H）;5.17（s,2H）;5.44（dd,2H）;6.01（s,1H）;7.38（m,6H）;7.42（d,1H）;7.97（d,1H）;8.42（s,1H）．
NMR−C13（DMSO）:8.42;19.96;36.45;42.51;46.36;50.78;55.38;61.39;73.31;99.00;112.55;122.01;123.08;125.38;127.09;127.47;128.70;129.14;130.35;128.40;139.19;144.18;149.99;152.84;155.92;159.24;172.05.
IR（KBr）:1056;1205;1225;1248;1504;1535;1599;1655;1726.
実施例６
８−エチル−8,9−ジヒドロ−４−フルオロ−８−ヒドロキシ−１−ベンジル−2H,10H,12H−［1,3］オキサジノ［5,6−ｆ］オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−10,13（15H）−ジオン
５−エチル−９−フルオロ−4,5−ジヒドロ−5,10−ジヒドロキシ−1H−オキセピノ［３′,4′:6,7］インドリジノ［1,2−ｂ］キノリン−3,15（4H,13H）−ジオン（200mg,調製例20に従って得られる）の酢酸（5ml）中の懸濁液を1,3,5−トリベンジルヘキサヒドロトリアジン（285mg）で処理した。反応混合物を70℃で30分間撹拌しついで真空下で蒸発させた。残留物をエタノールに溶解させ、濾過しついでエーテルで洗浄した。融点＞250℃の固体が得られた。
NMR−1H（DMSO）:0.85（t,3H）;1.85（q,2H）;3.05（d,1H）;3.48（d,1H）;3.95（s,2H）;4.45（s,2H）;5.20（s,4H）;5.45（dd,2H）;6.05（s,1H）;7.40（s,7H）;7.90（d,1H）;8.45（s,1H）．
IR（KBr）:1248;1451;15001;1598;1657;1727.
本発明の化合物の薬理学的検討
トポイソメラーゼ１で誘発させたDNAの緩和活性の研究
反応は全て、50mMのトリス−HCl（pH7.5）、50mMのKCl、0.5mMのジチオトレイトール、10mMのMgCl2、0.1mMのエチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ウシ血清アルブミン30μg/ml及びスーパーコイルド（supercoiled）pUC19〔PharmaciaBiotech社（フランス国オルセー所在）製〕300ngからなる反応用緩衝液20μｌ中で、所定の濃度の供試化合物を使用して又は使用せずに行った。試験すべき化合物は全て最初にジメチルスルホキシド（DMSO）に50mMに溶解し、但し、水溶性化合物は水に溶解しそして他の希釈液は蒸留水を用いて調製した。DMSO中の最終濃度は１％（容量／容量）を越えない。反応は精製した子ウシ胸腺DNAのトポイソメラーゼＩ〔Technologies/GibcoBRL社（英国Paisley所在）製〕を１単位添加することによって開始させ、37℃で15分間行った。反応は１％のドデシル硫酸ナトリウム、20mMのEDTA及びプロテイナーゼＫ〔BoehringerMannheim社（フランス国Melan所在）製〕500μg/mlからなる混合物３μｌ加えることによって停止させた。37℃でさらに30分間インキュベーションを行った後に、10mMのNa2HPO4、0.3％のブロモフェノールブルー及び16％のフィコール（Ficoll）からなる添加用緩衝液（lodgingbuffer）２μｌを試料に加え、試料をpH7.8の36mMのトリス−HCl、30mMのNa2HPO4、1mMのEDTA及びクロロキン（chloroquin）２μg/mlからなる緩衝液中で1.2％寒天ゲル中で1V/cmで電気泳動に20時間供した。得られたゲルを臭化エチジウム２μg/mlを用いて染色し、電荷結合素子（charge−coupleddevice）（ddc）カメラを用いて312nmのUV線下で写真を撮り、次いでbioProfil画像解析装置〔VilberLourmat社（フランス国リヨン所在）製〕で蛍光の強さを測定し、緩和したDNAの百分率を測定した。
それぞれの実験において、スーパーコイルドプラスミドDNAを単独で又はトポイソメラーゼ１と共にインキュベートした。反応は15分以内に完結した。試験すべき各々の化合物又は対照（ビヒクル単独を対照と称する）について、スーパーコイルドプラスミドDNAを、試験すべき化合物又は酵素を使用しない対照についての試驗について選ばれた最大濃度の存在下で、又は１μＭ〜200μＭの濃度の試験すべき化合物の存在下で又は酵素の存在下での対照の存在下ででインキュベートした。表１に示すように、実施例３〜６は濃度に応じてトポイソメラーゼ１によって促進される緩和活性を阻害する。
0003576174.tif 000020