(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−９レセプタータンパク質をコードする単離核酸分子であって、
ここで、前記単離核酸分子は、下記（ａ）または（ｂ）によって表される単離核酸分子である。
（ａ）SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4,およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子、または、
（ｂ）SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4,およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択されるヌクレオチド配列の１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、若しくは、付加されたヌクレオチド配列を含み、かつ、前記インターロキン−９レセプタータンパク質をコードする単離核酸分子である、インターロイキン−９レセプタータンパク質をコードする単離核酸分子。
【請求項２】
前記分子がcDNAである、請求項１の単離核酸分子。
【請求項３】
前記分子がヒトインターロイキン−９レセプターをコードする、請求項１の単離核酸分子。
【請求項４】
前記分子がマウスインターロキン−９レセプターをコードする、請求項１の単離核酸分子。
【請求項５】
SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4,およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択される、請求項１の単離核酸分子。
【請求項６】
プロモーターに操作可能にリンクした、請求項１の単離核酸分子を有するベクター。
【請求項７】
更に、マーカー配列を有する、請求項６のベクター。
【請求項８】
前記マーカー配列が抵抗性（resistance）マーカーである。請求項７のベクター、
【請求項９】
前記ベクターがプラスミドである、請求項６のベクター。
【請求項１０】
請求項１の核酸分子でトランスフェクションされた微生物。
【請求項１１】
前記微生物が大腸菌（Escherichia  coli）である、請求項10の微生物。
【請求項１２】
請求項１の核酸分子でトランスフェクションされた細胞系。
【請求項１３】
前記細胞系が真核生物細胞系である、請求項12の細胞系。
【請求項１４】
前記真核生物細胞系がCHO細胞系である、請求項13の細胞系。
【請求項１５】
前記真核生物細胞系がCOS細胞系である、請求項13の細胞系。
【請求項１６】
前記真核生物細胞系が酵母細胞系である、請求項13の細胞系。
【請求項１７】
前記細胞系が昆虫細胞系である、請求項13の細胞系。
【請求項１８】
前記細胞系がスポドプテラ・フルジペルダ（Spodoptera  frugiperda）である、請求項17の細胞系。
【請求項１９】
前記核酸分子が発現ベクターに組み込まれている、請求項17の細胞系。
【請求項２０】
前記発現ベクターがバキュロウイルスベクターである、請求項19の細胞系。
【請求項２１】
インターロイキン−９レセプターに特異的に結合する抗体を産生する方法であって、請求項13の細胞系で、ヒト以外の対象動物を、特異的にインターロイキン−９レセプターに結合する抗体の産生に好適な（favoring）条件のもとで免疫する工程と、前記抗体を前記動物から単離する工程とを有する方法。
【請求項２２】
請求項21の方法で産生された精製抗体。
【請求項２３】
インターロイキン−９レセプターに結合する物質を判定する方法であって、請求項13の細胞系を、検査対象物質に接触させ、その前記細胞系への結合の有無を調べる工程を有する方法。
【請求項２４】
インターロイキン−９レセプター作用物質（アゴニスト）を判定する方法であって、請求項13の細胞系を、検査対象物質に接触させ、それに対する影響を調べる工程を有し、インターロイキン−９に特徴的な影響が、インターロイキン−９レセプター作用物質を示すものである、インターロキン−９レセプター作用物質（アゴニスト）を判定する方法。
【請求項２５】
インターロイキン−９拮抗物質（アンタゴニスト）を判定する方法であって、請求項13の細胞系を、インターロキン−９と検査対象物質とに接触させ、前記物質がインターロイキン−９の前記細胞系に対する影響に干渉した（interfere）か否かを判断する工程を有し、前記干渉（interference）がインターロイキン−９のための拮抗物質を示すものである、インターロイキン−９拮抗物質（アンタゴニスト）を判定する方法。
【請求項２６】
インターロイキン−９レセプターに特異的に結合する抗体を産生するための方法であって、ヒト以外の動物を、インターロイキン−９レセプターに対して特異的な抗体を産生するのに十分な量の免疫原として（immunogenically）有効な形態のインターロイキン−９レセプターで免疫し、前記抗体を精製する工程を有し、ここで、前記インターロイキン−９レセプターは、下記（ａ）または（ｂ）によって表されるインターロイキン−９結合能力を有するタンパク質である。
（ａ）SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質
（ｂ）SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択されるアミノ酸配列の１又は数個のアミノ酸の欠失、置換、若しくは、付加によって形成され、かつ、インターロイキン−９結合能力を有するタンパク質
【請求項２７】
インターロイキン−９レセプターに特異的に結合するモノクローナル抗体であって、ここで、前記インターロイキン−９レセプターは、下記（ａ）または（ｂ）によって表されるIL−９結合能力を有するタンパク質である。
（ａ）SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4,およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択されるアミノ酸配列からなるタンパク質
（ｂ）SEQ  ID  NO:1,SEQ  ID  NO:2,SEQ  ID  NO:4およびSEQ  ID  NO:6から成るグループから選択されるアミノ酸配列の１又は数個のアミノ酸の欠失、置換、若しくは、付加によって形成され、かつ、インターロイキン−９結合能力を有するタンパク質
【請求項２８】
ヒトインターロイキン−９レセプターに特異的に結合する、請求項27のモノクローナル抗体。
【請求項２９】
請求項27のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系。
【請求項３０】
請求項28のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、インターロイキン９として知られているサイトカインの、そのレセプタを介しての、細胞による受容に関し、詳しくは、インターロイキン９レセプタ分子（以下、"IL−9"）をコードする核酸分子の単離に関する。これらの配列は、例えば、IL−９レセプタ源として、更に、サイトカインに反応する細胞用のプローブとして使用可能である。前記相補配列は、発現の抑制用に、更に、コード配列のプローブ用に利用可能である。
【０００２】
背景及び従来技術
ここ十年、免疫システムに関する知識とその制御において多大な進展があった。その内、特に注目を浴びている分野は、免疫システムを制御するタンパク質と糖タンパク質（glycoproteins）とに関する研究である。一般に増殖因子、”サイトカイン","ロイコトリエン","リンフォカイン”等と称されているこれらの分子の内、最もよく知られているものは、恐らく、インターロイキン−２（"IL−2"）であろう。例えば、マーテルスマン等の米国特許第4,778,879号、スターンの米国特許第4,490,289号、マーク等の米国特許第4,518,584号、及びミヤジ（Miyaji）等の米国特許第4,851,512号参照。更に、上記以外の特許として、インターロイキン１−（"IL−1"）に関する、例えば、コスマンの米国特許第4,808,611号等が発行されている。これらの特許すべての開示内容が、参考文献としてここに添付されている。
【０００３】
IL−２やIL−１等の分子がその効果を細胞に及ぼす為には、これらの分子が、細胞膜上に位置する、レセプタと称される分子と相互作用しなければならないことが広く知られている。インターロイキンレセプタを開示した特許としては、例えば、ホンジョウ（Honjo）等の米国特許第4,816,565号、ウルダール等の米国特許第4,578,335号があり、これらの開示内容が参考文献としてここに添付されている。最近、ファンスロー等のScience  248:739−41（1990年５月11日）が、IL−１の生体内（in  vivo）の効果を、その溶性状態のレセプタの投与によって制御可能であるというデータを提示した。そして、その開示内容を参考文献として添付したこのファンスロー論文の最後の段落には、溶性IL−１レセプタ（"IL−1R"）の投与が奏すると期待される種々の治療的効果が記載されている。
【０００４】
以前"P40"と称されていたリンフォカインIL−９は、もともと、T4細胞系の永久的抗原独立増殖を維持する因子として同定されたＴ細胞由来分子である。例えば、ここにその開示内容を参考文献として添付する、ウイッテンホブ等のProc.Natl.Acad.Sci.85:6934（1988）、ヴァン・スニック等のJ.Exp.Med.169:363（1989）や、シンプソン等のEur.J.Biochem.183:715（1989）参照。
【０００５】
IL−９の活性は、先ず、限定されたT4細胞系に作用するが、CTL又は新たに単離されたＴ細胞には作用しないことが観察された。例えば、前記ウイッテンホブ等、及び、シュミット等のEur.J.Immunol.19:2167（1989）参照。そして、この活性の範囲は、実験によってIL−９とＴ細胞増殖因子III（"TCGF  III）とが同一であることが示された時に、拡大した。ここにその開示内容を参考文献として添付する、ヒュルトナー（Hueltner）等のEur.J.Immunol.20:1413−1416（1990）と米国特許第5,164,317とに記載されているように、IL−９は、骨髄由来のマスト細胞の"IL−3"に対する増殖効果を高める。又、ヒトのIL−９が、巨核芽球性（megakaryoblastic）の白血病の増殖を刺激することも判った。ヤング等のBlood  74:1880（1989）参照。IL9に関する最近の研究によって、IL9が、赤血球コロニーの形成を支持すること（ドナヒュー等のBlood  75（12）:2271−2275（６−15−90））や、骨髄赤血球バーストの形成の増殖を促進すること（ウィリアムズ等のBlood76:306−311（９−１−90））や、更に、成人及び胎児起源のBFU.Eのクローン成熟を支持すること（ホルブルック等のBlood  77（10）:2129−2134（5/15/91））が示された。IL9の発現が、又、ホジキン病や大細胞退生（未分化）リンパ腫（large  cell  anaplastic  lymphoma）においても関係していた（メルツ等のBlood  78（８）:1311−1317（９−１−90））。
【０００６】
インターロイキンファミリの様々なメンバー用のレセプタのクローニングが従来技術に教示されている。モズレー等のCell  59:335−348（1989）は、IL−４レセプタをコードするcDNAの単離と、これらの分子のためのゲノムDNAとRNAとの分析について教示している。これを行うために、モズレー等は、一細胞当り百万までのレセプタ分子を示す細胞と、IL−４レセプタのＮ末端アミノ酸配列を研究した。又、ホルムズ等のScience  253:1278−1280（1991）と、マーフィー等のScience  253:1280−1282（1991）とは、IL−８レセプタのcDNAについて記載している。マーフィー等は、ラビットのIL−8Rアミノ酸配列に基づくオリゴヌクレオチドプローブを使用してそのヒトの対応物を単離するという、ハイブリダイゼーション研究を通じて作業した。ホルムズ等は、ヒトの好中球（neutrophil）cDNAライブラリ（libraries）を使用し、その後、コス（COS）細胞にトランスフェクションさせた。
【０００７】
ギリスの"T細胞由来リンフォカイン"Paul,ed.,Fundamental  Immunology,第２版（ニューヨーク,1989）の第632頁以下には、インターロイキンレセプタの概観が提供されている。この参考文献には、IL1レセプタと、IL2レセプタと、IL−６レセプタのcDNAとが記載されている。
【０００８】
これらの研究は、インターロイキンレセプタをコードする核酸配列を同定及び単離する試みにおいて、いくつかの要因が重要であることを示唆している。理想的には、ヒトは、レセプタ用のアミノ酸配列と、レセプタ分子を高レベルに発現するタイプの細胞との両方を持っている。
【０００９】
インターロイキン９レセプタの場合には、既にドルーズ（Druez）等のJ.Immunol.145:2494−2499（1990）によって同定され、このレセプタは、そのタンパク質部分が、SDS−PAGEによって54キロダルトンの分子量を有する、分子量64キロダルトンの糖タンパク質として特徴づけられてはいるものの、この分子のアミノ酸配列は未だに不明である。更に、IL9−Ｒを発現する細胞のタイプについては極めて僅かな種類しか知られておらず（前記ドルーズ）、又、これらの発現するタイプについても、その発現レベルは極めて低いものに過ぎない。従って、いま、インターロイキン９レセプタをコードする核酸分子を単離し、同定することが可能になったことは驚くべきことであり、以下の開示内容から理解されるように、これが本発明の重要特徴である。
【００１０】
図面の簡単な説明
図１はコス細胞のトランスフェクション後のマウスIL9レセプタの発現のスキャッチャード（Scatchard）分析を示し、
図２は推定ヒトとマウスのIL−9Rアミノ酸配列を整列させたものを示し、
図３はTS1細胞の、ヒトIL−9RをコードするDNAでのトランスフェクション前と後との反応の比較を示す。
【００１１】
好適な実施例の詳細説明
例  １
その開示内容をここに参考資料として添付するウイッテンホブ等のProc.Natl.Acad.Sci.85:6934−6938（1988）に記載のマウスＴ細胞クローンTS1は、約200の高い新和結合サイトを発現する。即ち、これはIL−９レセプタ分子を発現する。ドルーズ等のJ.Immunol.145:2494−2499（1990）参照。この細胞系は、ほとんどレセプタ分子を提供しないものの、IL9Rの密度に関してはテストされたすべての細胞の内で最高であり、従って、cDNAライブラリを構成するmRNA源として選択された。
【００１２】
ポリ（Ａ）＋mRNAをTS1細胞から抽出し、次に、その開示内容を参考文献として添付するグラブラー等のGene  25:263−269（1983）に従って、ランダム  ヘクサヌクレオチドプライマーを使用して、二重螺旋cDNAに変換した。
【００１３】
その後、EcoR Iアダプタを取り付け、アルフォ等のProc.Natl.Acad.Sci.84:8573−8577（1987）に従い、1.5キロベース以上のcDNAを、５−20％の酢酸カリウム塩のグラディエント上の分画によって単離した。
【００１４】
次に、このサイズ選択したcDNAを、タケベ等のMol.Cell  Biol.8:466−472（1988）によって教示された発現ベクターpCDSRαのECORIサイトに挿入した。次にこれを、標準式形質転換手続き（Maniatis）を使用して大腸菌株（E.Coli  strain）XL1−blueにトランスフェクションした。IL−9R発現のクローンをスクリーニングするため、前記cDNAライブラリの、コス細胞への発現によってIL−９結合活性を発現する能力についてテストを行った。基本的には、前記cDNAライブラリを、それぞれが約500のクローンの100のプールに細分画し、次に、このDNAを、上記アルフォ等のDEAE−デキストラン−クロロキン法を使用して、ガラス製の顕微鏡スライド上に蒔かれた1.5x105のコス細胞にトランスフェクションした。そして、これら細胞を２−３日間増殖させ、次に、125I標識の精製リコンビナント・マウスIL9で、IL−9Rの発現をテストした。この標識化した物質は、ボルトン等のBiochem.J.133:529−539（1973）に従って調製された。前記細胞を、0.2nMのこの物質とともに、20℃で３時間かけて培養し、簡単に洗浄し、固定し、その後、液体感光エマルジョンに漬けた。そして、それらのスライドを10日間露出し、次に現像して、オートラジオグラフ・グレインを顕微鏡によって調べた。
【００１５】
このスクリーニングの結果、100の内から２つの陽性プール（positive  pools）が得られた。これらの内の一つの陽性プールは、一つの陽性細胞を示し、第２のものは33の陽性細胞を示した。この後者のプールを、更にテストするために選択し、先ず、夫々15のクローンを有する100のプールに分割し、その後、一つの陽性プールを選択して、100の単数クローンに分割した。
【００１６】
例  ２
上記例１の最後に記載した単離及び再培養（replating）の後、前述のスクリーニング法を再培養細胞に適用して、p9RA1と呼ばれるプラスミドを含有するクローンが同定された。”ソース”プラスミドpCDSRαは既に知られ、特徴づけられているので、標準式の方法を使用して、前記インサートを1900長の塩基対（base  pairs）として同定することが可能であった。
【００１７】
例  ３
前記p9RA1  1900塩基対セグメントをプローブとして使用して、追加のスクリーニングを行って、更なるマウスIL9RレセプタcDNAクローンを同定した。その後の方法は、マニアテイス等のMolecular  Cloning,a  Laboratory  Manual（Cold  Spring  Harbor  Laboratory、ニューヨーク  1982）に記載されたものであり、前記p9RA1を、オリゴＴまたはランダムプライマーを使用して、ベクターpCDM8（前記アルフォ等）のBst XIサイトに発生された更に二つのcDNAライブラリにハイブリダイゼーションさせ、その後、高ストリンジェント洗浄した。
【００１８】
この方法によって、更に６つのクローンが同定された。これらの内の二つは、オリゴ−dT  primed  cDNAであり、p9RB1とp9RB3と称され、４つのランダムprimedクローンは、p9RC2,p9RC3,p9RC4とpRC9である。これらのクローンの大きさは以下の通りである。
p9RB1    1600  bp
p9RB3     900  bp
p9RC2    2000  bp
p9RC3    1000  bp
p9RC4    3000  bp
p9RC9    2100  bp
【００１９】
例  ４
クローンp9RA1とそれに続くすべてのクローンとが実際にIL9Rを発現したことを確かめるために、グッドウィン等のCell  60:941−951（1990）に従って、トランスフェクションされたコス細胞のスキャッチヤード分析を行った。この分析によって、図１に示すように、p9RA1が使用された時に、194pMのKdを有する一つのクラスの結合サイトが同定された。これは、以前に、TS1細胞において、即ち、67pMで測定された解離定数よりも僅かに高いものである。
【００２０】
最も大きなcDNA（即ち、C4クローン）がテストされた時、126  pMのKdを有する高親和性結合サイトも又、同定された。
【００２１】
例  ５
マウスクローンの単離の後、類似ヒト物質を単離するテストも行った。そのために、巨核芽球細胞系、即ち、Mo7EをmRNA源として使用して、前記例１のような、二重螺旋cDNAをつくった。このcDNAを受けるのに前記プラスミドpRC/RSVを使用した。このcDNAライブラリを、p9RA1をプローブとして使用して、スクリーニングし、洗浄をより低いストリンジェンシー（stringency）で行う以外は前述と同じ条件（2xSSC,0.1％  SDS,55℃）を使用して、ハイブリダイゼーションを行った。６つのクローン、即ち、ph9RA2,3,4,5,6及び９、が分離され、配列された。前記クローンph9RA3は、1566塩基対オープンリーディングフレームを有し、これはマウスp9RC4と66％の同一性を示した。推定マウス及びヒトタンパク質配列が、図２に示され、522以上のアミノ酸において53％の同一性が示されている。
【００２２】
例  ６
クローンph9RA3が実際にヒトIL9レセプタをコードしたか否かを調べるために、前記クローンをダブルパルスエレクトロポレーションを使用して、マウス細胞系TS1にトランスフェクションした。簡単に説明すると、5x106の細胞を、10％の胎児ウシ血清と、50mM  ２−メルカプトエタノールを、0.55mM  Ｌ−アルギニンと、0.24mM  Ｌ−アスパラギンと、1.25mM  Ｌ−グルタミンとを補充した、0.38mlのダルベッコ（Delbecco）改変イーグル（Eagle）培地中において37℃で再懸濁させた。エレクトロポレーションの直前に、0.4cmのキュベット内で、前記細胞にプラスミドDNA（50ug）を添加した。ダブル電気パルス（750V,7452Ω,40μＦ、及び100V、74Ω、2100μＦ）後、すぐに、細胞を、マウスIL9を添加した新たな培地中で希釈した。24時間後、細胞を洗浄し、G418とマウスIL9の存在下において培養した。これらの条件により、約1/10,000の頻度でトランスフェクションが起こった。G418での選択後、トランスフェクションした細胞を、ヒトIL9中において維持し、ウイッテンホブ等のProc.Natl.,Acad.Sci.USA  85:6934−6938（1988）の方法を使用して増殖分析を行った。もしもcDNAがhIL9Rを発現するのであれば、細胞が増殖するはずであり、一方、それらを含有しない細胞は増殖しないはずである。
【００２３】
図３は、100ユニット/mlのヒトIL9に対して無反応であった元のTS1細胞が、前記ヒトIL9R  cDNAとのトランスフェクション後、反応するようになって、増殖したことを示している。
【００２４】
例  ７
SEQ  ID  NO:1として示したクローンp9RC4の配列は、468アミノ酸タンパク質のコードDNAをコードするオープンリーディングフレームを示している。前記推定アミノ酸配列は、二つの疎水性領域の存在を予測させるものであり、その内の一つは、アミノ酸15−40に及び、恐らく単一のペプチドを表すものである。von  Heyne,Nucl,Acids  Res.14:4683−4690（1989）の確率加重マトリクスによれば、前記単一ペプチドの位置37と39との間に切断サイトが存在することが予測される。第２の疎水性ドメインは、アミノ酸271−291に及ぶものである。これは、膜貫通ドメインを構成するものと推測される。
【００２５】
前記推定細胞外ドメインは、233のアミノ酸を含有し、そのなかには、６つのシステム残基と、位置116と155との２つの潜在的Ｎ−リンク糖タンパク化サイトとが含まれている。"WSEWS"モチーフ、即ち、イドゼルダ等のJ.Exp.Med.171:861−873（1990）に記載された造血（hematopoietin）レセプタ・スーパーファミリに典型的な"Trp−Ser−Glu−Trp−Ser"は、位置244−248に見られた。
【００２６】
前記分子の細胞質部分は、高い比率のセリン（13％）と、プロリン（12.4％）、更に、位置294,416及び465における三つの潜在的プロテインキナーゼＣ燐酸化サイトによって特徴づけられる。
【００２７】
様々なクローンの比較によって、p9RA1とp9RB3とが、p9RC4と異なり、位置192と193との間に更に別のグルタミンを含有しているが、但しフレームシフトは無いということが示されている。この残基は前記細胞外ドメインに存在するが、しかし、前記例４に示したように、リガンドに対する親和性には影響しないように思われる。p9RC2のこの位置には22ヌクレオチドの欠失がある。これらの特徴と、p9RC9における潜在的イントロン配列は、交互スプライシングを示唆するものである。
【００２８】
p9RB3の分析は、溶性状態のIL9Rの存在を暗示している。このクローンのcDNAは、大量の細胞外ドメインを含有しているが、前記Ｎ末端ドメインと、前記膜貫通及び細胞質ドメインをコードするヌクレオチド651−1719は欠如している。
【００２９】
クローンp9RA1は、アラニン（378）の後にストップ・コドンが有り、その後に配列されたその他のcDNAのものに無関係な736塩基対配列があることにおいて、その他すべてのクローンと異なっている。
【００３０】
この例に記載の前記マウスcDNAの配列は以下の通りである。
p9RC4  （SEQ  ID  NO:1）
p9RA1  （SEQ  ID  NO:2）
p9RB3  （SEQ  ID  NO:3）
【００３１】
例  ８
ヒトIL9−ＲのcDNAも分析された。上述したように、クローンph9RA3は、マウスp9RC4との66％の同一性と、前記アミノ酸配列レベルにおいて53％の相同性を示した。推定切断サイトは、アミノ酸39と40との間に位置している。このサイトは、例７にすべて記載した。前記膜貫通ドメインや、前記二つの潜在的Ｎ−糖タンパク化サイト、そして造血スーパーファミリのコンセンサス配列と同様に、種族間において保存される。
【００３２】
前記タンパク質の細胞質部分の保存は比較的少ないようであったが、マウスの対応物（177の残基）よりははるかに多く保存されていた（231のアミノ酸）。位置431−439において９つのセリンが連続していることによって、前記分子におけるセリンの割合は高い（11.2％）。
【００３３】
クローンph9RA2,4,6及び９は、ph9RA3から派生した配列を確認した。しかしながら、クローンph9RA5は、位置1063−1147に85ヌクレオチド欠失を有し、これは裁頭タンパク質を示唆している。この推定裁頭タンパク質（putative  truncated  protein）は、アミノ酸長が307であり、IL9−Ｒの完全な細胞外および膜貫通領域と、細胞質ドメインの５つのアミノ酸と、更に11の無関係な残基とを含有していることが予測される。
【００３４】
ph9RA6と呼称されるクローンは、前記DNAの初めに短い介在配列を有し、これは通常の開始コドンにはめ込まれた（in  frame  with）ストップコドンへと続いている。このクローンは、又、前記コード配列の下流部分にはめ込まれて新たなATGトリプレットを産生する。前記IL9R分子において、これはユニークなＮ−末端配列を備えた転写物を生産し、この配列の残りはph9RA3と同じである。ph9RA6とph9RA3との比較は、両方のクローンに共通の開始メチオニンであるpH9RA6が、22のアミノ酸のインサートを有していることを示している。これらの後には、ph9RA3の位置10で始まる配列である配列"GWTLESE...."が続いている。
【００３５】
pH9RA3,pH9RA5,pH9RA6の核酸配列は、夫々、SEQ  ID  NO:4,SEQ  ID  NO:5,及びSEQ  ID  NO:6によって表される。
【００３６】
以上の記載は、インターロイキン−９レセプタをコードする核酸分子の単離を教示するものである。それらの間に見られるマウスと相同性（53％、前記細胞外領域においては最高67％）は、他の種からのIL9−Ｒをコードする核酸分子も、同定することが可能であることを示している。
【００３７】
以下のデータは、cDNAに関するものであるが、cDNAの配列によってmRNAを所有することになることが理解されるであろう。というのは、後者を、配列の構造に関する周知の規則に基づき、前者から派生させることが可能であるからである。cDNA情報が与えられれば、cDNAのゲノム類似体（genomic  analogs）を得ることが出来るものと推測される。
【００３８】
ここに提供された情報は、更に、プラスミド等の関連する核酸配列、即ち、ほ乳類のIL9Rをコードするもの、を含むベクター構造も教示するものである。このようなベクターには、前記コード配列に加えて、このコード配列に操作的にリンクされたプロモータや、チミジンキナーゼ、あるいは"TK"遺伝子を含む、抗生物質耐性や選択のための遺伝子等の”マーカ（markers）”や、更に、当業者に知られたその他の構成要素を含ませることができる。前記核酸配列及びベクターは、既に示したように、”コス（COS）”、"CHO"、スポドプテラ・フルジペルダ（Spodoptera  frugiperda）、あるいはその他の昆虫細胞系等の様々な細胞のトランスフェクションに利用可能である。前記配列は、単体もしくは適当なベクターで、原核生物および真核生物細胞のおおい（panoply）のトランスフェクションに利用可能である。
【００３９】
IL9レセプタをコードする核酸配列の分離によって、研究者は、従来、これら無しでは不可能、あるいは非常に困難であったいくつかの種類の研究を行うことが可能になる。例えば、前述したように、IL−9Rを最もよく発現する細胞においても、その発現レベルは低かった。前記遺伝子の単離によって、受容細胞をトランスフェクションし、その後、例えば、過剰発現（overexpression）や増幅を行うことが可能になる。これによって、細胞表面における発現を十分なものとし、これらの細胞で免疫化したり、抗体の産生を含めて、IL−9Rに対する免疫遺伝的反応を起こすことが可能になる。抗体産生細胞を単離し、その後、アイブリドーマ生物学の標準的技術を利用することによって、IL−9R特定のモノクローナル抗体が製造される。
【００４０】
このように製造された抗体は、それがポリクローナルなものであれ、あるいはモノクローナルなものであれ、IL−９がIL−9R分氏に結合することを阻止する治療法に利用可能である。IL−９の細胞表面への結合がいくつかの病理状態に関係しているので、これは重要な治療上の目的である。
【００４１】
更に、IL−9R特定抗体は、公知の免疫測定プロトコルに従って、細胞におけるIL−9Rの定性測定と定量測定との両方に利用可能である。
【００４２】
以上の例は、溶性IL−9Rの存在を示すものである。他の溶性インターロイキンレセプタ分子と同様に（前記ファンスロー等参照）、この分子は、IL−９が細胞結合レセプタへ結合することを阻止するのに利用可能であり、従って、例えば副次集団等の細胞タイプに対するIL−９の影響（affect）に干渉することができる。従って、溶性IL−9RはIL−９に対する拮抗物質（アンタゴニスト）であるということができる。
【００４３】
最近の研究によって、一つの溶性インターロイキンレセプタ、即ち、IL−6Rが、作用物質（アゴニスト）として作用することが示された。タガ（Taga）等のCell  58:573−591（８−11−89）参照。溶性IL−9Rも類似の作用を有するかもしれない。IL−9R分子に加えて、この分子の溶性状態のもの、あるいは溶解されたものは、IL−9R特定抗体の産生のための免疫原として利用可能である。前記レセプタ分子全体、あるいはその免疫原部分を、マウス、ラビット、モルモット等の適当な動物に使用して、抗体形成を含む免疫反応を発生させるのに利用することができる。そして、次に、これらの抗体を標準的な技術を使用して精製することが可能である。これに代えて、抗体産生Ｂ細胞を分離して、ハイブリドーマ産生の標準的方法に使用して、IL−9R特定モノクローナル抗体を産生させることも出来る。
【００４４】
分析は前記例６に記載の通りであって、IL−9R  cDNA発現がトランスフェクションされた細胞系のIL9に対する反応性を測定することによって分析される。この分析方法は、様々な作用物質（アゴニスト）および拮抗物質（アンタゴニスト）をスクリーニングするための手段を提供するものである。簡単に説明すると、IL9Rをコードする配列を含むトランスフェクション細胞のサンプルを、対象の化合物に接触させる。もしもこの化合物が作用物質（アゴニスト）である場合には、それは細胞表面上にてIL−9R分子に結合し、その後、IL−9/IL−9R結合に通常関連している一連の現象が起こるであろう。同じ目的の為に、IL−９を有する前記対象化合物を前記細胞サンプルと結合させ、IL−９の影響が減ったか、あるいはその影響が無かったか否かを判定することによって拮抗物質（アンタゴニスト）の分析も行うことが可能である。作用物質（アゴニスト）／拮抗物質（アンタゴニスト）の分析は、本発明の広い範囲の一部と見なすことが可能であり、ここでは、IL−9Rへの結合において競合する種々の分子を分析することができる。
【００４５】
ここに記載したコード配列に加えて、本発明は、更に、これらのコード配列に対して相補的な配列をも含むものである。これらの相補配列は、前記コード配列自身から派生可能であり、例えば、プローブとして、あるいは、IL9Rコード配列の発現を抑制する”アンチセンス（anti−sense）”インヒビタとして利用可能である。本発明のその他の態様は、当業者にとって明らかであり、ここでは詳細説明を必要としない。
【００４６】
使用した用語及び表現は記載のための用語であって限定のための用語ではなく、これらの用語および表現を使用するにおいて図示、記載された特徴の均等物およびそれらの部分を除外する意図は無く、本発明の範囲内において様々な変更が可能であることが理解されるべきである。
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】コス細胞のトランスフェクション後のマウスIL9レセプタの発現のスキャッチャード（Scatchard）分析を示す図。
【図２】推定ヒトとマウスのIL−9Rアミノ酸配列を整列させたものを示す図。
【図３】TS1細胞の、ヒトIL−9RをコードするDNAでのトランスフェクション前と後との反応の比較を示す図。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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