(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
δ−トコフェロールを有効成分とする細胞分化誘導剤。
【請求項２】
造血器腫瘍治療剤である請求項１記載の細胞分化誘導剤。
【請求項３】
急性白血病、慢性白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症からなる群より選ばれる疾患の治療・改善剤である請求項２記載の細胞分化誘導剤。
【請求項４】
固形腫瘍治療剤である請求項１記載の細胞分化誘導剤。
【請求項５】
脳腫瘍、頭頸部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、胆嚢・胆管癌、膵癌、膵島細胞癌、腎細胞癌、副腎皮質癌、膀胱癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、卵巣癌、子宮癌、絨毛癌、甲状腺癌、悪性カルチノイド腫瘍、皮膚癌、悪性黒色腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、胎児性横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫からなる群より選ばれる疾患の治療・改善剤である請求項４記載の細胞分化誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、細胞分化誘導（以下、分化誘導）作用に基づく造血器腫瘍・固形腫瘍などの疾患の治療・改善剤に関する。
【０００２】
【発明の背景】
わが国における死亡原因の第一位を癌が占めるようになって久しく、しかも患者数は年々増加してきており、有効性および安全性の高い薬剤や治療法の開発が、今や国民・研究者・行政の最大関心事となっている。
【０００３】
癌（腫瘍）は発現部位・病理像・症状等により多岐に分類されるが、造血器腫瘍の代表的疾患である白血病は血液細胞（白血球）の腫瘍であり、未分化の各種幼若型白血球細胞の増殖が特徴である。またそれらの中でも、増加している腫瘍細胞が未成熟な芽球であるものを急性白血病、成熟細胞であるものを慢性白血病と分類しており、多岐にわたる臨床症状を呈するが、その多くは、正常造血の抑制に基づく症状と、他臓器への浸潤・圧迫に基づく症状に大別することができる。具体的には、正常血球細胞の減少は赤血球減少による貧血・顆粒球減少による感染症や発熱・血小板の減少による出血傾向として現れ、正常造血の抑制は骨髄不全を招く。癌が予後不良な疾患であることは一般よく知られるところであり、これまでにも種々の薬剤や治療方法が検討されてきた。
【０００４】
それらの中でも薬物治療法の基礎となる考え方は、腫瘍細胞である白血病細胞をすべて死滅させることにより治療効果を得るというものであり、従ってよりよい治療成績を上げるために、増殖能が異常に高い腫瘍に対し、細胞毒性による殺細胞作用をより強力に示す薬剤の開発や、併用療法、高濃度・多量投与療法などが試みられてきた。しかしこれらの薬剤や治療法は、腫瘍細胞だけに特異的に作用するのではなく、正常細胞に対しても毒性を示すため、心臓・心筋障害、骨髄機能抑制、悪心・嘔吐、神経障害、脱毛等の重篤な副作用が発現し、治療効果にも限界があった。
【０００５】
一方、従来の制癌剤と比較して安全性のより高い各種分化誘導剤が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて腫瘍細胞を成熟細胞へ分化誘導する事実は知られており、分化誘導療法への期待が集まっていたが、残念ながら従来の分化誘導剤では臨床での有用性が認められていなかった。しかし１９８８年にヒュン（Ｈｕａｎｇ）  らが、オールトランス−レチノイン酸（以下、ＡＴＲＡ）が急性前骨髄性白血病（以下、ＡＰＬ）患者に対し１００％に近い完全寛解をもたらした臨床成績を報告して以来［ブラッド（Ｂｌｏｏｄ），  ７２，５６７−５７２，１９８８．］、世界各国においてその効果が再確認され、造血器腫瘍のみならず固形腫瘍を含めた広い範囲の癌に対する分化誘導療法に期待が高まりつつある。
【０００６】
【従来技術】
前述のように、ＡＴＲＡが臨床において  ＡＰＬに有効であることは、ヒュン（Ｈｕａｎｇ）  ら［ブラッド（Ｂｌｏｏｄ），  ７２，５６７−５７２，１９８８．］を始め、キャステン（Ｃａｓｔａｉｇｎｅ）ら［ブラッド（Ｂｌｏｏｄ），  ７６，１７０４−１７０９，１９９０．］、ワーレル（Ｗａｒｒｅｌｌ）  ら［ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディスン（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．），３２４，１３８５−１３９３，１９９１．］など、多く研究者が報告している。
【０００７】
またオルソン（Ｏｌｓｓｏｎ）らは、ビタミンＤ３  の生理活性型代謝物である  １α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール（以下、活性Ｖ．Ｄ３）が、ヒト・リンパ腫培養細胞系（Ｕ９３７）  において分化誘導作用を有することを報告している［キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．），４３（１２Ｐｔ１），５８６２−５８６７，１９８３．］。これより分化誘導作用を有する活性Ｖ．Ｄ３誘導体の開発も盛んに行われるようになり、例えば特開昭６１−３３１６５号公報には２４−アルキルーデヒドロビタミンＤ３  誘導体が抗腫瘍作用を有することが、また特開昭  ６１−１４０５６０号公報には２０−オキサ−２１−ノル−ビタミンＤ３  誘導体が分化誘導作用を有することが、それぞれ開示されている。
【０００８】
ツァン（Ｚｈａｎｇ）  らは、ブファリン（Ｂｕｆａｌｉｎ）がヒト白血病細胞の培養細胞系であるＨＬ６０、Ｕ９３７および  ＭＬ１において分化誘導作用を示したことを報告している［バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．），１７８（２），６８６−６９３，１９９１．およびキャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．），５２（１７），４６３４−４６４１，１９９２．］  。
【０００９】
また上記以外にも分化誘導作用を有する化合物として、バカラーニ（Ｂａｃｃａｒａｎｉ）らはシトシン・アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）を［ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．），４２，４８５−４８７，１９７９．］、モーリン（Ｍｏｒｉｎ）  らはアクラシノマイシンＡを［キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．），４４，２８０７−２８１２，１９８４．］  、森屋らはインターフェロン−αを［臨床血液，３２，１７０−１７２，１９９１．］に報告している。
【００１０】
石倉らは、マウス骨髄球性白血病の培養細胞系を用いて、ゲラニル・ファルネソール（３，７，１１，１５，１９−ペンタメチル−２、６、１０、１４、１８−エイコサペンタエン−１−オール）が分化誘導作用を有することを報告している［ロイケミア・リサーチ（Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．），８（５），８４３−８５２，１９８４．］  。
【００１１】
【本発明が解決しようとする問題点】
ＡＴＲＡおよびその誘導体は、皮膚癌や難治性皮膚角化疾患である乾癬の治療に利用されているが、脂溶性が極めて高いため、長期間投与すると肝臓の肥大・神経異常・食欲不振・嘔吐・脱毛・そう痒感等のビタミンＡ過剰症状を発現しやすいことが広く知られており、かつ投与を中止しても肝臓や組織に長期間残留するため、副作用が一度発現すると長期間消失しない重大な欠点がある。またＡＴＲＡが  ＡＰＬに有効であることは前述の通りであるが、  ＡＰＬが全白血病患者中に占める割合は約５％と非常に少なく、他の多くのタイプの急性白血病患者にはほとんど無効であった。さらに寛解後も投与を中止すると再発しやすい問題もあった。
【００１２】
ビタミンＤ３  誘導体は骨粗鬆症などの治療に利用されているが、腸管でのカルシウム吸収および腎臓におけるカルシウム再吸収を促進するので、投与量が過剰になると高カルシウム血症を引き起こし、石灰沈着に起因する腎臓障害や消化器障害をもたらすことが知られている。このため投与期間中は定期的に血清カルシウム値を検査しなければならず、臨床では非常に使いにくい問題点がある。さらにビタミンＤ３  誘導体の分化誘導作用は、ヒト前骨髄球性白血病の培養細胞系であるＨＬ６０には有効であるが、他のタイプのモデルにおいては有効性が認められていない。
【００１３】
ブファリンは臨床には応用されていないため、その安全性に関して全く不明であり、ヒトでの有用性を予測することはできなかった。
【００１４】
さらにシトシン・アラビノシドやアクラシノマイシンＡも安全性上の問題から国内では薬剤として許可されておらず、インターフェロン−αの抗腫瘍作用も期待されたほどではなかった。
【００１５】
ゲラニル・ファルネソールの分化誘導作用に関する評価結果はマウス白血病細胞培養細胞系におけるものである。その後ヒト白血病細胞培養細胞系での評価結果は全く報告されていないので、種の異なる細胞間での薬剤感受性の差を考慮すると、ヒトでの有効性は一切不明であった。
【００１６】
このように、各種癌に対して優れた有効性と安全性を兼ね備えた薬剤はないのが現状であり、臨床で広範囲の癌に対し有用性の高い医薬品の開発が強く望まれていた。
【００１７】
【課題を解決するための手段】
本発明にかかる、δ−トコフェロールは抗酸化作用および抗ビタミンＥ欠乏症作用を有する化合物として公知であり、医薬、化粧品、食品添加物、安定化剤、工業原料などとして、すでに一般に広く用いられている。またδ−トコフェロールにはビタミンＡに見られるような過剰症などの副作用はなく、極めて安全性の高い化合物でもある。本発明者らは、δ−トコフェロールが、優れた生理活性とヒトや動物への安全性が高いという要件を兼ね備えていることに着目し、永年他の疾患への有効性も検討してきた。その結果、意外にもδ−トコフェロールが分化誘導作用も有しており、造血器腫瘍・固形腫瘍などの各種癌に対する治療・改善剤として所期の目的を達成できることを見い出し本発明を完成した。δ−トコフェロールは下記化学構造式で表される。
【００１８】
【化１】
0003593350.tif 000002
【００１９】
δ−トコフェロールは分子内に３個の不斉炭素原子を有し、計８種類の光学異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれの異性体でもよい。さらに本発明においてはこれらの光学異性体のうち一種類のみを用いてもよいし、２種類以上の混合物を用いてもよく限定されない。またδ−トコフェロールには、天然抽出物と合成品とがあるが、由来も限定されない。なおδ−トコフェロールは、医薬品、化粧品、食品、工業原料などとして広く販売されており、容易に入手することができる。
【００２０】
従って本発明の目的は、分化誘導作用を有する臨床的有用性の高い、各種癌に対する治療・改善剤を提供することにある。具体的にはδ−トコフェロールを有効成分とする、造血器腫瘍・固形腫瘍等の各種癌・悪性腫瘍の治療・改善剤、および本化合物の分化誘導作用が有効な疾患の治療・改善剤に関する。ここで造血器腫瘍の具体的疾患名の一例としては、例えば急性白血病、慢性白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、マクログロブリン血症などを挙げることができ、また固形腫瘍としては、例えば脳腫瘍、頭頸部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、胆嚢・胆管癌、膵癌、膵島細胞癌、腎細胞癌、副腎皮質癌、膀胱癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、卵巣癌、子宮癌、絨毛癌、甲状腺癌、悪性カルチノイド腫瘍、皮膚癌、悪性黒色腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、胎児性横紋筋肉腫、網膜芽細胞種などを挙げることができるが、本発明の対象疾患がこれらに限定されないことは言うまでもない。
【００２１】
また本発明においては上記治療・改善剤としての有効性に加え、長期間投与しても極めて高い安全性が期待できることから、長期間治療を続けることが可能となり、癌患者のクオリティー・オブ・ライフの改善に大きく貢献する発明であると言える。
【００２２】
なおδ−トコフェロールは、急性毒性試験を行っても明らかな変化は認められずＬＤ５０値は報告されていないが、すでに医薬品、化粧品、食品などとして広く利用されており、安全性は確認されている。
【００２３】
投与剤型としては、例えば散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤などの経口製剤および注射製剤が挙げられる。製剤化の際には、通常の製剤担体を用いて常法により製造することができる。
【００２４】
すなわち経口製剤を製造するには、δ−トコフェロールと賦形剤、さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤等とする。
【００２５】
賦形剤としては、例えば乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素などが、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリプロピレングリコール・ポリオキシエチレン・ブロックポリマー、メグルミンなどが、崩壊剤としては、例えば澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、カルボキシメチルセルロース・カルシウム等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等が用いられる。これらの錠剤・顆粒剤には糖衣、その他必要により適宜コーティングすることはもちろん差支えない。
【００２６】
また注射用製剤を製造する際には、δ−トコフェロールにｐＨ調整剤、溶解剤、等張化剤などと、必要に応じて溶解補助剤、安定化剤などを加えて、常法により製剤化する。
【００２７】
外用剤を製造する際の方法は限定されず、常法により製造することができる。すなわち製剤化にあたり使用する基剤原料としては、医薬品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される各種原料を用いることが可能である。
【００２８】
使用する基剤原料として具体的には、例えば動植物油、鉱物油、エステル油、ワックス類、高級アルコール類、脂肪酸類、シリコン油、界面活性剤、リン脂質類、アルコール類、多価アルコール類、水溶性高分子類、粘土鉱物類、精製水などの原料が挙げられ、さらに必要に応じ、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、キレート剤、防腐防黴剤、着色料、香料などを添加することができるが、本発明にかかる外用剤の基剤原料はこれらに限定されない。また必要に応じて他の分化誘導作用を有する成分、血流促進剤、殺菌剤、消炎剤、細胞賦活剤、ビタミン類、アミノ酸、保湿剤、角質溶解剤等の成分を配合することもできる。なお上記基剤原料の添加量は、通常外用剤の製造にあたり設定される濃度になる量である。
【００２９】
本発明におけるδ−トコフェロールの臨床投与量は、症状、重症度、年齢、合併症などによって異なり限定されず、また化合物の種類・投与経路などによっても異なるが、通常成人１日あたり  ０．１ｍｇ〜１０ｇ  であり、好ましくは  １ｍｇ〜５ｇであり、さらに好ましくは  １０ｍｇ  〜１ｇであり、これを経口、静脈内または経皮投与する。
【００３０】
次に本発明を具体的に説明するため以下に実施例を掲げるが、本発明がこれらのみに限定されないことは言うまでもない。
【００３１】
【実施例】
実施例１ 顆粒剤
【００３２】
【表１】
0003593350.tif 000003
【００３３】
実施例２ 錠剤
【００３４】
【表２】
0003593350.tif 000004
【００３５】
実施例３ 注射剤
【００３６】
【表３】
0003593350.tif 000005
【００３７】
実施例４ 外用剤
【００３８】
【表４】
0003593350.tif 000006
【００３９】
【発明の効果】
次に本発明化合物の分化誘導剤としての有用性を示すため、各種ヒト白血病細胞培養系に対する効果実験例を挙げる。なお実験に用いた細胞系は以下の通りである。
（１）  Ｕ９３７；ヒト単芽球様白血病細胞
（２）  ＭＬ１  ；ヒト骨髄芽球様白血病細胞
（３）  Ｋ５６２；ヒト骨髄赤芽球白血病細胞
（４）  ＨＬ６０；ヒト前骨髄性白血病細胞
【００４０】
（方法）
本発明にかかる分化誘導作用の評価は、文献に記載されている方法［中谷ら、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．），４８，４２０１−４２０５，１９８８．］  に従って行い、下記分化誘導マーカーについて測定・評価した。
（１）  正常細胞への分化誘導マーカーであるニトロブルーテトラゾリウム（以下、  ＮＢＴ）還元能は、細胞を  ＮＢＴ試薬と３７℃で４０分間インキュベートし、還元されて生じたフォルマザンを顕微鏡で観察して評価した。
（２）  細胞の  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ（死細胞の割合）はトリパンブルー試薬で染色された細胞を死細胞とし、全体の細胞数に対する百分率を算出した。
【００４１】
（結果）
実験１ ヒト単芽球様白血病細胞  Ｕ９３７  に対する分化誘導作用
ヒト単芽球様白血病細胞  Ｕ９３７  に対する、δ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用の関係を図１に示す。
【００４２】
【図１】
【００４３】
図１から明らかなように、δ−トコフェロールの濃度の増加と共に分化誘導能は増加し、１００  μＭ  のδ−トコフェロール処理では約  ５０％の細胞に分化が認められた。また細胞の増殖阻害もδ−トコフェロール濃度の増加と共に認められ、２０μＭ  のδ−トコフェロールで約  ５０％の増殖が阻害された。従って、δ−トコフェロールはＵ９３７細胞の分化を誘導することが明らかである。
【００４４】
実験２ ヒト骨髄芽球様白血病細胞  ＭＬ１に対する分化誘導作用
ヒト骨髄芽球様白血病細胞  ＭＬ１に対する、δ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用の関係を図２に示す。
【００４５】
【図２】
【００４６】
図２から明らかなように、δ−トコフェロールの濃度の増加と共に分化誘導能は増加し、１００  μＭ  のδ−トコフェロール処理では約  ６０％の細胞に分化が認められた。一方細胞の増殖阻害は認められなかった。従って、δ−トコフェロールは
ＭＬ１細胞の分化を誘導することが明らかである。
【００４７】
実験３ ヒト骨髄赤芽球白血病細胞  Ｋ５６２  に対する分化誘導作用
ヒト骨髄赤芽球白血病細胞  Ｋ５６２  に対する、δ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用の関係を図３に示す。
【００４８】
【図３】
【００４９】
図３から明らかなように、δ−トコフェロールの濃度の増加と共に分化誘導能は明らかに増加し、１００  μＭ  のδ−トコフェロール処理では１００％の細胞に分化が認められた。一方細胞の増殖阻害も１００  μＭ  のδ−トコフェロール処理で約９５％  に認められた。この結果より、δ−トコフェロールはより特徴的にヒト骨髄赤芽球白血病細胞Ｋ５６２細胞の分化を誘導することが明らかである。
【００５０】
実験４ ヒト前骨髄性白血病細胞  ＨＬ６０  に対する分化誘導作用
次にヒト骨髄芽球様白血病細胞  ＨＬ６０  に対する、δ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用の関係を図４に示す。
【００５１】
【図４】
【００５２】
図４から明らかなように、δ−トコフェロールの濃度の増加と共に分化誘導能は増加し、１００  μＭ  のδ−トコフェロール処理では約  ５５％の細胞に分化が認められた。一方細胞の増殖阻害も１００  μＭ  のδ−トコフェロール処理で約８２％  に認められた。従って、δ−トコフェロールはＨＬ６０細胞の分化を誘導することが明らかである。
【００５３】
上記実験例の結果から、δ−トコフェロールは１０−５Ｍ  台の濃度で発生段階の異なる各種ヒト白血病細胞の分化を誘導すること、しかもヒト骨髄赤芽球白血病細胞に対してその効果はより顕著であることが明らかである。この結果は、これまでに報告されている分化誘導の至適濃度（  ＲＡ  ；１０−６Ｍ、活性Ｖ．Ｄ３；１０−８Ｍ）と比較すると若干弱いが、δ−トコフェロールの優れた安全性も考慮すれば、臨床上の有用性は、逆にδ−トコフェロールの方がより高いことは明らかである
【００５４】
さらに本発明者らは、δ−トコフェロールが造血器腫瘍のみならず固形腫瘍にも有効であることを確認するために、δ−トコフェロールのマウス由来  Ｂ１６メラノーマ細胞に対する分化誘導作用についても検討した。
【００５５】
実験５ マウス由来  Ｂ１６メラノーマ細胞に対するトコフェロール同族体の分化誘導作用
マウス由来  Ｂ１６メラノーマ細胞に対するδ−トコフェロール同族体の分化誘導作用を、メラニン生成能を指標として評価した。すなわちＢ１６メラノーマ細胞を継代培養後、  ２×１０４  セル／ｍｌ  になるよう  １０％ＦＣＳ  ＭＥＭ＊に加え培養用シャーレ（φ＝１０ｃｍ）にて２４時間培養した。培養後、各試料が毒性を示さなかった濃度（７．５  ×１０−６  Ｍ）に調製した  １０％ＦＣＳ  ＭＥＭ  で培地交換を行った後、同条件で  ５日間培養した。培養後、等張緩衝塩類溶液［日水製薬製、商品名；Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ＰＢＳ（−）  ］で洗浄し、０．２５％  トリプシン／エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）溶液を用いて細胞を集め、さらに上記等張緩衝塩類溶液で再び洗浄した後、遠心分離（１００Ｇ）して細胞を得た。（  １０％ＦＣＳ  ＭＥＭ＊；標準培地に  １０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンおよび炭酸水素ナトリウムを添加した培地）
【００５６】
得られた細胞に１ｍＭ−フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）  １ｍｌを添加したリン酸緩衝液を加えた後、及川らの方法（エール・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・メディスン［Ｙａｌｅ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．］，  ４６、５００−５０７，１９７３．）にしたがって総メラニン量を吸光度（λ＝４００ｎｍ  ）で測定し評価した。
【００５７】
表５に、マウス由来Ｂ１６メラノーマ細胞に対するトコフェロール同族体の分化誘導作用を示す。
【００５８】
【表５】
0003593350.tif 000007
【００５９】
表５から明らかなように、７．５  ×１０−６Ｍ  のδ−トコフェロールにて５日間培養した処理した  Ｂ１６メラノーマ細胞の蛋白量あたりの総メラニン量（ユーメラニンおよびフェオメラニン）は、コントロール培養細胞に比べ約  ４５％低下しており、特にユーメラニン量は約  ５０％低下した。この時の細胞内チロシナーゼ量は、δ−トコフェロール処理により明らかに減少したことが  ＳＤＳ電気泳動法により確認された。また５日間培養後の細胞数は、コントロールと比較してδ−トコフェロール処理により約  ４０％に減少し、分化誘導に伴う生育阻害を受けた。  Ｂ１６メラノーマ細胞に対するδ−トコフェロールの  ＩＣ５０（細胞の増殖を  ５０％阻害する濃度）は  ９．７×１０−４Ｍ  であり、メラニン生成を阻害する機構が細胞毒性によるものではないことは明確である。
【００６０】
上記の結果はδ−トコフェロールの固形腫瘍に対する有効性をも示すものであり、δ−トコフェロールの造血器腫瘍の分化誘導のみに止まらない幅広い適応性を示唆するものである。
【００６１】
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒト単芽球様  Ｕ９３７  細胞に対するδ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用との関係を示した図である。（各群とも  ｎ＝３、平均±標準誤差で示す）
【図２】ヒト骨髄芽球様白血病細胞  ＭＬ１に対する、δ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用の関係を示した図である。（各群とも  ｎ＝３、平均±標準誤差で示す）
【図３】ヒト骨髄赤芽球白血病細胞  Ｋ５６２  に対するδ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用との関係を示した図である。（各群とも  ｎ＝３、平均±標準誤差で示す）
【図４】前骨髄性白血病細胞  ＨＬ６０  に対するδ−トコフェロールの濃度と分化誘導作用との関係を示した図である。（各群とも  ｎ＝３、平均±標準誤差で示す）
【図１】
0003593350.tif 000008
【図２】
0003593350.tif 000009
【図３】
0003593350.tif 000010
【図４】
0003593350.tif 000011