(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
工業技術院微生物工学技術研究所に寄託されている受託番号：BP-4342のシュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０から産生され得、以下の表１に示す物理化学的性状を有するスタロバシンＡ：
【表１】
スタロバシンＡの物理化学的性状
0003542150.tif 000014
＊  カラム：Develosil 5C18、４.６φ×２５０mm；
移動相：ＣＨ３ＣＮ／２mＭ Ｈ３ＰＯ４（５０mＭ−Ｎa２ＳＯ４含有）
＝４３／５７；
流速：１ml／分；
チャートスピード１cm／分
１）ヒドロキシアスパラギン酸
２）ヒドロキシイソロイシン
【請求項２】
工業技術院微生物工学技術研究所に寄託されている受託番号：BP-4342のシュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０を培養し、培養物から請求項１記載の抗生物質スタロバシンＡを分離、回収することからなる抗生物質スタロバシンＡの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規な抗生物質に関し、さらに詳しくは、シュウドモナス(Ｐseudomonas) sp.ＰＢＪ−５,３６０により産生される抗生物質スタロバシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧに関するものである。
【０００２】
【従来技術と発明が解決すべき課題】
抗生物質の抗細菌活性は個々の細菌によって異なる上、しばしば耐性菌が出現して効果が低下することが知られている。今日では、多剤耐性菌の出現が問題となっており、治療を効果的に行うためには新規で有効な抗生物質の開発が望まれている。とりわけブドウ状球菌や溶血性連鎖状球菌などのグラム陽性菌には抗生物質耐性菌が多く、これらグラム陽性菌に対して高い活性を有する新規な抗生物質が必要とされている。
【０００３】
【課題を解決する手段】
本発明は、シュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０が産生する抗生物質スタロバシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧからなる群から選ばれる抗生物質スタロバシンを提供するものである。この抗生物質は、上記シュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０によって産生されるペプチド抗生物質である。スタロバシンＡ〜Ｇ（以下、単にスタロバシンということがある）は、上記シュウドモナスの菌株を培養することにより、極めて近似した同族体の複合体として得られる。その抗菌活性は従来の抗生物質と比較して、極めて強力である。スタロバシンＡ〜Ｇは、以下の表４、表５、表６に示した物理化学的特性を有する。
【０００４】
【表４】
0003542150.tif 000002
0003542150.tif 000003
【０００５】
【表５】
0003542150.tif 000004
【０００６】
【表６】
0003542150.tif 000005
0003542150.tif 000006
【０００７】
上記の物性で表される本発明の抗生物質スタロバシンは、インビトロおよびインビボで優れた抗菌活性を有し、特にグラム陽性菌に対して強力な作用を有することが分かった。
【０００８】
即ち、下記表９に示したように、本発明のスタロバシンは優れた活性を示し、特にグラム陽性菌に高活性を有する。その作用機構は、細胞壁合成阻害作用に基づくと考えられる。
急性毒性としては、マウスへの３００mg／kgおよび５００mg／kg静脈内投与では、毒性死を認めなかった。
【０００９】
本発明の抗生物質スタロバシンは、シュウドモナス属の菌株シュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０を同化可能な炭素源、窒素源および無機塩類を含有する培地中で常法通り好気的に液中培養することにより得られる。なお、この菌は後述の実験例２記載の方法で培養し、その形態学的所見、培養特性、生理学的および生化学的性状等を基に、バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー(Ｂergey's Ｍanual of Ｓystematic Ｂacteriology)、第１巻(１９８４)の記載を参照して総合的に判断し、上記菌株に帰属されたものである。この菌株は、自然発生的に、または人為的に変異する可能性があり、そのような変異体も、本発明のスタロバシンを産生する能力を保持している限り、本発明の範囲内に包含されるものであることは、当業者には明らかである。従って、本発明は、新規な抗生物質スタロバシンを産生する、シュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０および、その抗生物質スタロバシン産生性の変異体を提供するものである。シュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０は、茨城県つくば市東１−１−３の工業技術院微生物工学技術研究所に受託番号微工研菌寄第１０５７８号の下で寄託されている(受託日：平成元年２月２７日)。この寄託は平成５年６月１７日にブダペスト条約に基づく寄託に移管された(受託番号：ＢＰ−４３４２)。
【００１０】
また、本発明はこのような菌株を培養することにより、抗生物質スタロバシンを製造する方法をも提供するものである。
培地組成、培養条件などは抗生物質の生産に一般に用いられているものを用いるとよい。培地は原則として、炭素源、窒素源、無機塩などを含む。必要に応じて、ビタミン類、前駆物質などを加えてもよい。炭素源としては、例えば、グルコース、澱粉、デキストリン、グリセリン、糖蜜、有機酸などが単独でまたは混合物として用いられる。窒素源としては、例えば、大豆粉、コーンスチープリカー、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどが単独または、混合物として用いられる。無機塩としては、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などがあげられ、必要に応じて培地に添加する。本発明のシュウドモナス sp.ＰＢＪ−５,３６０を適当な培地中で、温度２０〜３５℃、好ましくは２５〜２９℃で約１〜７日間培養すると、充分量の抗生物質スタロバシンが培養物中に産生される。次いで、通常の方法で培養物から生成物を分離し、所望により、分離、精製する。そのような方法は、全て当業者にとって周知である。
【００１１】
本発明の抗生物質スタロバシンは、インビトロおよびインビボで著しい活性を示し、種々の感染症、特にグラム陽性の多剤耐性菌による感染症の治療に有用と考えられる。
以下に実施例および実験例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。
【００１２】
実施例１
（a）発酵工程
グルコース１.０％、酵母エキス（ディフコ製）０.５％、水道水よりなる培地８００ml（pＨ７に２Ｎ−ＮaＯＨで調整）を含む２Ｌ容三角フラスコにシュウドモナスsp.ＰＢＪ−５,３６０の種菌（２mlバイアル、−８０℃保存）を接種し、振幅７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、２０時間振盪培養を行う。この培養液８００mlを、グルコース１.０％、酵母エキス（ディフコ製）０.４％、モルトエキス（ディフコ製）１.０％、ポリペプトン（日本製薬）０.１％、水道水よりなる培地２５Ｌ（pＨ７に２Ｎ−ＮaＯＨで調整）を含む５０Ｌ容ジャーファメンターに植菌し、通気量２０Ｌ／分、内圧０.３５kg／cm2、撹拌回転数２００rpmで２８℃、２０時間培養する。
次いでこの培養液１３Ｌをグルコース１.０％、モルトエキス（ディフコ製）１.０％、粉末酵母１.０％、トマトペースト（カゴメ）０.２％、β−シクロデキストリン１.０％、消泡剤Ｐ−２０００（大日本インキ製）０.０００８％、水道水よりなる培地２５０Ｌ（pＨ７に２Ｎ−ＮaＯＨで調整）を含む５００Ｌタンクに植菌し、通気量１２０Ｌ／分、内圧０.３５kg／cm2、撹拌回転数３２０rpmで２８℃、９４時間培養する。
【００１３】
（b）分離工程
上記工程で得られた培養液３７５Ｌに、クロロホルム３.７Ｌを添加し殺菌する。次に２Ｎ−ＮaＯＨでpＨ８.５に調整し、ダイアイオンＨＰ−２０（三菱化成）２７Ｌを加え、４時間撹拌混合し活性物質をバッチ吸着させる。１時間放置し、上液を捨て、ダイアイオンＨＰ−２０を回収する。樹脂を水洗した後、ガラスカラム（内径３０cm）にセットし４０Ｌ、１０mＭ Ｎa2ＨＰＯ4〜４０Ｌ、９０％ＭeＯＨでグラジエント溶出する。
Ｓ.アウレウスＪＣ−１に抗菌活性を有する分画２１Ｌを集め（pＨ７.０に２Ｎ−ＨＣlで調整）減圧濃縮し３Ｌとする。次に酢酸エチル３Ｌで洗浄し脂容系の物質を除く。水層に溶けている酢酸エチルを減圧留去させた後、ＭＣＩ−ＧＥＬ ＣＨＰ２０Ｐ（三菱化成）カラム（５cmＩ.Ｄ.×５１cm）に活性物質を吸着させ、２mＭ Ｎa2ＨＰＯ4〜８０％ＭeＯＨ・２mＭ Ｎa2ＨＰＯ4のステップワイズ溶出を行う。溶出された分画をＨＰＬＣ分析し、スタロバシン群を含む分画を集め（pＨ７.０に２Ｎ−ＨＣlで調整）減圧濃縮・凍結乾燥する。３４９０mg。
【００１４】
（c）精製工程
精製第一工程
上記工程で得られた粗抽出物質を２ロット分を合わせ２３０mlの水に溶解させる（pＨ８）。次にワットマンＤＥ−５２（Ｃl-）イオン交換セルロースカラム（２cmＩ.Ｄ.×５０cm）に吸着させ、水洗した後、６００ml １０mＭ Ｎa2ＨＰＯ4（pＨ７.５）〜６００ml １Ｍ ＮaＣl １０mＭ Ｎa2ＨＰＯ4（pＨ７.５）でグラジエント溶出する。溶出された分画をＨＰＬＣ分析し、スタロバシン群を含む分画３７０mlを集める（pＨ７.０に２Ｎ−ＨＣlで調整）。上記分画３７０mlをＭＣＩ−ＧＥＬ ＣＨＰ２０Ｐ（三菱化成）カラム（２cmＩ.Ｄ.×５０cm）に吸着させ、１０mＭ Ｎa2ＨＰＯ4（pＨ７.５）〜９０％ＭeＯＨ・１０mＭ Ｎa2ＨＰＯ4（pＨ７.５）でグラジエント溶出を行う。溶出された分画をＨＰＬＣ分析し、スタロバシン群を含む分画を集め（pＨ７.０に２Ｎ−ＨＣlで調整）減圧濃縮・凍結乾燥する。
【００１５】
【表７】
0003542150.tif 000007
【００１６】
精製第二工程
上に得たフラクションを、下記の条件で分取高速液体クロマトグラフィーにより精製した後、更に、リサイクル分取高速液体クロマトグラフィーにより精製して、スタロバシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧを得た。
Ｆr.６３〜７５（１４００mg）を４０mlの純水に溶解して、ＹＭＣ ＯＤＳカラム（s−１５／３０μ、５.０×５０cm、溶出液：アセトニトリル−２mＭリン酸（５０mＭ Ｎa2ＳＯ4）４７：５３、流速：１００ml／分、検出：２２０nm）を用いて、分取高速液体クロマトグラフィーを行い、スタロバシンＢを主成分とする分画（１.２Ｌ）、スタロバシンＥを主成分とする分画（２.０Ｌ）を得た。それぞれの分取液は、希苛性ソーダで中和し、アセトニトリルを留去後、pＨ７.４〜７.５に調整し、ＭＩＣ−ＧＥＬ ＣＨＰ−２０Ｐのカラムに吸着させ、カラムを水洗後、６０％含水アセトンで溶出させる。溶出液は、それぞれ減圧下アセトンを留去後、凍結乾燥して、スタロバシンＢ分画９２mg、スタロバシンＥ分画２０mgを得た。
【００１７】
上に得たスタロバシンＢ分画９２mgをＤevelosil５Ｃ18カラム（２.０×２５cm、溶出液：アセトニトリル−２mＭリン酸（５０mＭ Ｎa2ＳＯ4）４７：５３、流速：１０ml／分、検出：２２０nm）を用いて、リサイクル分取高速液体クロマトグラフィー（反復回数２回）を行い、分取液を、アセトニトリルを留去後、希苛性ソーダで中和し、pＨ７.３〜７.５に調整し、ＭＩＣ−ＧＥＬ ＣＨＰ−２０Ｐのカラムに吸着させ、カラムを水洗後、６０％含水アセトンで溶出させる。溶出液は、減圧下アセトンを留去後、凍結乾燥して、純粋なスタロバシンＢ４２mgを得た。また、上に得たスタロバシンＥ分画２０mgを同様にＤevelosil５Ｃ18カラムを用いて、リサイクル分取高速液体クロマトグラフィー（反復回数２回）を行い、純粋なスタロバシンＥ９mgを得た。
精製第一工程で得たフラクションＦr.９１〜１３４（１２５０mg）を、同様に処理して純粋スタロバシンＡ（８３mg）、Ｃ（２mg）、Ｄ（３mg）、Ｆ（１９mg）、Ｇ（１２mg）を得た。
【００１８】
実施例２  ＤＮＰ−スタロバシンＡおよびＢの調製
スタロバシンＡ、Ｂの混合物（２０３mg）を５０％含水メタノール（２０ml）に溶解、重曹（８００mg）、１０％２,４−ジニトロフルオロベンゼン（エタノール中）（４ml）を加えて、室温２時間撹拌する。希塩酸にて、pＨ３.０に調節した後、水層をエーテル、次いで、酢酸エチルで洗浄後、n−ブタノール抽出、有機層を乾燥後（Ｎa2ＳＯ4）減圧下に溶媒を留去する。残分（２４０mg）を高速液体クロマトグラフィーにて分取し、ＤＮＰ−スタロバシンＡ（２,４−ジニトロフルオロベンゼンとスタロバシンＡの反応生成物）６５mg（tR１８分）、ＤＮＰ−スタロバシンＢ２９mg（tR２０.２分）を得る。
0003542150.tif 000008
【００１９】
実施例１および２で得られたスタロバシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＤＮＰ−スタロバシンＡおよびＤＮＰ−スタロバシンＢの物理化学的性状は表４、表５、表６に示した通りである。さらに、スタロバシンＡ〜ＧのＩＲスペクトルをそれぞれ図１〜図７に、ＤＮＰ−スタロバシンＡ、ＤＮＰ−スタロバシンＢ、スタロバシンＥ、スタロバシンＦ、スタロバシンＧのＮＭＲスペクトルをそれぞれ図８〜図１２に示した。さらにＤＮＰ−スタロバシンＡおよびＤＮＰ−スタロバシンＢの推定部分構造を以下に示す。
【００２０】
【化１】
0003542150.tif 000009
【００２１】
【化２】
0003542150.tif 000010
上記化１、化２に於いて、ＨyＡspおよびＨyＩleはそれぞれヒドロキシアスパラギン酸およびヒドロキシイソロイシンを表し（ＨyＡsp）はヒドロキシアスパラギン酸が含まれていることを表す。Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4、Ｘ5は構造未確認部分を表す（Ｘ1〜Ｘ5は、その一部または全てが単結合を表し、分子内のＣ14-15Ｈ24-26Ｎ4Ｏ13（ＨyＡsp）部分に結合している可能性がある）。
【００２２】
スタロバシンＡおよびスタロバシンＢの特異的性状
（１）図１３の（a）に示した様に、スタロバシンＡおよびＢの混合物を高速液体クロマトグラフィーにかけると、Ａおよびその異性体Ａ'並びにＢおよびその異性体Ｂ'の計４本のピークが観察される。しかしこの混合物を２４時間放置して再び高速液体クロマトグラフィーにかけると、Ａ'およびＢ'のピークは消失し、ＡおよびＢの２本のピークだけが観察される様になる。そこでこのＡおよびＢをそれぞれ分取し、再度液体クロマトグラフィーにかけると、ＡからはＡおよびＡ'、ＢからはＢおよびＢ'の２本のピークが観察される様になり（b）、これを１日放置すると再びＡ'およびＢ'が消失してしまう（c）。
（２）スタロバシンＢの分子式はＣ58Ｈ101Ｎ13Ｏ24であり、１７４７cm-1にＩＲ吸収を有するが、希ＮaＯＨで処理すると分子式Ｃ58Ｈ103Ｎ13Ｏ25の化合物に変化し、１７４７cm-1の吸収が消失すると共に抗菌活性が大幅に減少する。
（３）スタロバシンＡを各種pＨの水溶液に溶解した時のＡおよびＡ'の相互変換の様子を以下の表８に示す。
【００２３】
【表８】
0003542150.tif 000011
【００２４】
実験例１  インビトロおよびインビボでの抗菌活性
１）インビトロ活性
実施例１で得た抗生物質スタロバシンＡ〜Ｇのインビトロでの抗菌活性を、寒天希釈法で検討した。結果を表９に示す。
【００２５】
【表９】
0003542150.tif 000012
【００２６】
２）インビボ活性
スタロバシンＡを用い、インビボの抗菌活性を調べた。マウスを感染性の細菌で腹腔内感染させ(チャレンジ)、チャレンジの１時間後に被験物質を皮下投与した。チャレンジから７日後の生存率に基づいて、ＥＤ50値を算出した。ＭＩＣは寒天希釈法によって求めた。結果を下記の表１０に示す。
【００２７】
【表１０】
0003542150.tif 000013
【００２８】
実験例２  ＰＢＪ−５,３６０の菌学的特性
本発明のＰＢＪ−５,３６０の菌学的諸性状は以下の通りである。なお、ＰＢＪ−５,３６０は、京都府下で採取した土壌試料より分離した。
培養は原則として２８℃で実施した。
Ａ．形態
グラム陰性、桿菌であり、大きさは０.３〜０.５(μ)×０.８〜１.３(μ)である。一本以上の極鞭毛により激しく運動する。
【００２９】
Ｂ．培養所見
１）肉汁培地における培養
菌体の生育は殆ど見られなかった。管底に灰白色半透明の沈澱がごくわずかに生成した。
２）肉汁寒天穿刺培養
穿刺線に沿って糸状乃至は小乳頭状の生育を認めた。ガスの発生および色素の生成は見られなかった。表面に赤味がかった薄い菌苔を形成したが、この菌苔は時間の経過と共に、うす茶色半透明となり疣状の突起を所々に認めた。好気性菌である。
３）肉汁寒天斜面培養
菌体の生育は決して早い方ではなく、２８℃においては２日後より開始(目に見える)された。生育は糸状で、菌苔は半透明、淡黄色、隆起は扁平でぶつぶつした外観を呈した。周縁は全縁であった。菌苔の生育はその後良好となり、生育は糸状乃至は疣状で光沢を有し、湿潤したやや赤味を帯びた半透明褐色の菌苔になる。周縁は波状乃至は長波状である。ガスおよび色素の生成は認められなかった。
【００３０】
４）肉汁ゼラチン穿刺培養
培養は室温下(２２〜２５℃)で実施した。ゼラチンを液化した。
５）肉汁寒天平板培地上での培養
菌体の生育は速くない。２８℃、２日後よりコロニーは可視となった。コロニーは最初、小型、点状、褐色半透明であり、周縁は全縁である。隆起については、コロニーが小型過ぎて観察不可能であった。その後、コロニーは生長し、点状乃至は円型を呈し、周縁は全縁、隆起は扁平乃至は凸円状である。コロニーは半透明、茶褐色で光沢を有する。ガスおよび可溶性色素の生成は、一切認められなかった。
６）リトマスミルクにおける培養所見
酸を生成し、ペプトン化を行うが反応の開始は１４日以後となるなど、反応はかなり遅い方である。ガスの発生はなかった。表面に灰赤紫色の薄い菌膜を時として形成する。上層は赤紫色半透明、下層は紫がかったベージュ色で不透明である。沈澱はベージュ色に近い赤紫色であった。
【００３１】
Ｃ．生理学的および生化学的諸性状
１）カタラーゼテスト：陽性
２）オキシダーゼテスト：陽性
３）ＯＦ−テスト：陰性(アルカリ性を呈した)
４）溶血性テスト：陽性(弱い)
５）５℃における生育能：陰性
６）Ｈ2Ｓの生成：陰性
７）硝酸塩の還元能：陽性
８）脱窒反応：陰性、但しＮ2gasを発生しないが、ＮＯ2-は還元する様であった。
９）クエン酸の利用能：陰性(クリステンセン培地、およびシモンズ培地)
10）ＮＡＣ寒天培地上での生育：陰性(生育不可能)
【００３２】
11）インドールの生成：陰性
12）Ｖoges−Ｐroskauer反応(フォーゲス・プロスカウエル・テスト)：陰性
13）メチルレッドテスト：陰性
14）アルギニンの加水分解能：陽性
15）リジンの脱炭酸能：陽性
16）オルニチンの脱炭酸能：陽性
17）エスクリンの加水分解能：陰性
18）ＤＮaseテスト：陰性
19）澱粉の加水分解能：陰性
20）ＯＮＰＧテスト(３７℃で培養)：陰性
【００３３】
21）アシルアミダーゼテスト：陰性
22）フォスファターゼテスト：陽性
23）キチンの加水分解能：陰性
24）シュークロースよりのレバンの生成能：陽性
25）糖類よりの酸およびガスの生成能：以下の１３種の糖類から、酸およびガスを発生しない。糖類としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、キシロース、アラビノース、マルトース、ラクトース、ラムノース、シュークロース、セロビオース、トレハロース、マンニットである。
26）菌体内におけるpoly−β−ヒドロキシブチレートの蓄積：陰性
27）炭素源の資化能：無機塩を含む培地上において、単一の炭素源としてグルコース、および２ケト−グルコン酸カルシウムを資化して、菌体を形成することができる。この場合、生育のための特定のビタミン類は、特に要求する様には思われなかった。一方、Ｄ−(＋)−トレハロース、ＤＬ−アルギニン、ゲラニオール、β−アラニン、Ｌ−バリン、イノシットを資化しなかった。
28）Ｇ＋Ｃ mole ％(ＨＰＬＣ法)：６０.４％(Ａ＋Ｔ mole ％は３９.６％であった)
【００３４】
以上の諸結果より見て、本菌は好気性のグラム陰性の桿菌であり、１本以上の極鞭毛を用いて液体培地中で活発なる運動を行う。カタラーゼ陽性であって、オキシダーゼを有する。ＯＦ−テストは陰性(アルカリ性を示す)であった。これらの結果より見れば、本菌はシュウドモナス科の中のシュードモナス属に帰属されることは明らかである。
【００３５】
シュウドモナス属について、バージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー(Ｂergey's Ｍanual of Ｓystematic Ｂacteriology)、第１巻(１９８４)中に記載の菌体内にpoly−β−ヒドロキシブチレート(ＰＨＢ)を蓄積しない菌複合体について、上述の各性状を対比した所、一致するものおよび近似のものを発見することはできなかった。それ故、本菌はシュウドモナスの一新種とも考えられるが、アルギニンを加水分解し、リジンおよびオルニチンを脱炭素する点で、かなり変わったシュウドモナスの一種といえる。そして、Ｇ＋Ｃmole ％も６０.４％とシュウドモナスの中では、低い方のグループに帰属せられる。以上の諸結果を見て、本菌をシュウドモナス sp．ＰＢＪ−５,３６０と同定した。
【図面の簡単な説明】
【図１】スタロバシンＡのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図２】スタロバシンＢのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図３】スタロバシンＣのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図４】スタロバシンＤのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図５】スタロバシンＥのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図６】スタロバシンＦのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図７】スタロバシンＧのＩＲスペクトルを示すグラフ。
【図８】ＤＮＰ−スタロバシンＡのＮＭＲスペクトルを示すグラフ。
【図９】ＤＮＰ−スタロバシンＢのＮＭＲスペクトルを示すグラフ。
【図１０】スタロバシンＥのＮＭＲスペクトルを示すグラフ。
【図１１】スタロバシンＦのＮＭＲスペクトルを示すグラフ。
【図１２】スタロバシンＧのＮＭＲスペクトルを示すグラフ。
【図１３】スタロバシンＡ、Ａ'およびＢ、Ｂ'それぞれの相互変換を示す高速液体クロマトグラフィーのグラフ。
【図１】
0003542150.tif 000015
【図２】
0003542150.tif 000016
【図３】
0003542150.tif 000017
【図４】
0003542150.tif 000018
【図５】
0003542150.tif 000019
【図６】
0003542150.tif 000020
【図７】
0003542150.tif 000021
【図８】
0003542150.tif 000022
【図９】
0003542150.tif 000023
【図１０】
0003542150.tif 000024
【図１１】
0003542150.tif 000025
【図１２】
0003542150.tif 000026
【図１３】
0003542150.tif 000027