(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）
【化１】
0003589413.tif 000007
（式中、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ水素原子または水酸基の保護基を表し、Ｒ4 およびＲ5 は一方が水素原子で他方がメチル基を表し、Ｒ6 およびＲ7 はそれぞれ低級アルキル基を表し、ＸおよびＹは共に水素原子を表すか、一方が水素原子で他方が水酸基または保護された水酸基を表すか、あるいはＸとＹが一緒になってオキソ基を表し、Ｚは水酸基または保護された水酸基を表し、ｎは０または１を表す）で示される２２−メチルビタミンＤ誘導体またはその２０位エピマー。
【請求項２】
下記の一般式（II）
【化２】
0003589413.tif 000008
（式中、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ水素原子または水酸基の保護基を表し、Ｒ4 およびＲ5 は一方が水素原子で他方がメチル基を表し、Ｒ6 およびＲ7 はそれぞれ低級アルキル基を表し、ＸおよびＹは共に水素原子を表すか、一方が水素原子で他方が水酸基または保護された水酸基を表すか、あるいはＸとＹが一緒になってオキソ基を表し、Ｚは水酸基または保護された水酸基を表し、ｎは０または１を表す）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体、その２０位エピマー、またはそれらのＮ−フェニルトリアゾリンジオンまたはジヒドロフタラジン−１，４−ジオンのジエン付加物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は新規な２２−メチルビタミンＤ誘導体またはその２０位エピマーに関する。本発明の２２−メチルビタミンＤ誘導体またはその２０位エピマーは、慢性腎不全、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症などのカルシウム代謝の欠陥症、乾癬などの皮膚疾患および骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍などの細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である。
【０００２】
【従来の技術】
近年、ビタミンＤ研究の進展に伴い、各種の１α−ヒドロキシビタミンＤ誘導体が医薬品として開発されてきており、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ３  や１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  がすでに臨床的に骨粗鬆症治療薬として用いられている。しかしながら、これらの化合物は血中カルシウムの上昇作用などの副作用を有することから、かかる副作用の少ないビタミンＤ誘導体の開発が最近活発に行われてきている。例えば、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  、２４−エピビタミンＤ２  などが骨粗鬆症治療薬として開発が試みられており、また、２２−オキサ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  などが副甲状腺機能亢進症治療薬として検討されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
このように副作用が少ないビタミンＤ誘導体がいくつか検討されてはいるものの、疾患を治療する立場からは、より高活性でかつ安全性の高いビタミンＤ誘導体の開発が望まれているのが実状である。
しかして、本発明の目的は、かかる作用特性を有する新規なビタミンＤ誘導体、その合成中間体として有用な新規なプロビタミンＤ誘導体及び該ビタミンＤ誘導体を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは前記課題を解決するために鋭意検討した結果、本発明に至った。すなわち、本発明の要旨は、
（１）下記の一般式（Ｉ）
【０００５】
【化３】
0003589413.tif 000002
【０００６】
（式中、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ水素原子または水酸基の保護基を表し、Ｒ4 およびＲ5 は一方が水素原子で他方がメチル基を表し、Ｒ6 およびＲ7 はそれぞれ低級アルキル基を表し、ＸおよびＹは共に水素原子を表すか、一方が水素原子で他方が水酸基または保護された水酸基を表すか、あるいはＸとＹが一緒になってオキソ基を表し、Ｚは水酸基または保護された水酸基を表し、ｎは０または１を表す）で示される２２−メチルビタミンＤ誘導体またはその２０位エピマー、
（２）下記の一般式（II）
【０００７】
【化４】
0003589413.tif 000003
【０００８】
（式中、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ水素原子または水酸基の保護基を表し、Ｒ4 およびＲ5 は一方が水素原子で他方がメチル基を表し、Ｒ6 およびＲ7 はそれぞれ低級アルキル基を表し、ＸおよびＹは共に水素原子を表すか、一方が水素原子で他方が水酸基または保護された水酸基を表すか、あるいはＸとＹが一緒になってオキソ基を表し、Ｚは水酸基または保護された水酸基を表し、ｎは０または１を表す）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体、その２０位エピマー、またはそれらのＮ−フェニルトリアゾリンジオンまたはジヒドロフタラジン−１，４−ジオンのジエン付加物、並びに
（３）前記（１）記載の化合物を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤に関する。
【０００９】
上記一般式においてＲ１  およびＲ２  がそれぞれ表す水酸基の保護基、Ｘ、ＹまたはＺが保護された水酸基を表す場合の該水酸基の保護基としては、水酸基の保護の役割を果たす基であればどのようなものであってもよく、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基、カプロイル基、ベンゾイル基、トリフルオロアセチル基などのアシル基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基などのアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル基などのアラルキルオキシカルボニル基；トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基などの三置換シリル基；メトキシメチル基、メトキシエトキシメチル基、１−（エトキシ）エチル基、メトキシイソプロピル基などの１−（アルコキシ）アルキル基；テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロピラニル基などの２−オキサシクロアルキル基などを挙げることができる。
Ｒ６  、Ｒ７  で表される低級アルキル基としては、炭素数１〜６のアルキル基が挙げられ、Ｒ６  およびＲ７  が一緒になって環を形成する場合、形成する環としてはシクロプロパン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環等のシクロアルカン環が挙げられる。
【００１０】
本発明の２２−メチルビタミンＤ誘導体およびその２０位エピマーは新規化合物であり、それぞれ公知化合物である一般式（ＩＩＩ  ）で示される２０−ホルミルプレグナ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール誘導体、その２０位エピマーあるいはそれらのジエン付加物を出発原料として、以下に示すスキーム１に準じて合成することができる。
【００１１】
【化５】
0003589413.tif 000004
【００１２】
上記式中、Ｒ１  、Ｒ２  、Ｒ４  、Ｒ５  、Ｒ６  、Ｒ７  、Ｘ、Ｙ、Ｚおよびｎは、前記定義のとおりであり、Ｒ３  は低級アルキル基、アリールオキシ基またはアルキルチオ基を表す。
【００１３】
上記スキーム１に従って得られる中間体である一般式（ＩＩ）で示される本発明の２２−メチルプロビタミンＤ誘導体、即ち、一般式（ＩＩ−１）、一般式（ＩＩ−２）または一般式（ＩＩ−３）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体はそれぞれ新規化合物であり、また、これらの２０位エピマーおよびそのジエン付加物も新規化合物である。
【００１４】
ジエン付加物を形成するジエノフィルとしてはビタミンＤ類の合成分野で用いられているものであれば何でもよいが、Ｎ−フェニルトリアゾリンジオン、ジヒドロフタラジン−１，４−ジオンなどが好ましい。
【００１５】
上記スキーム１の各工程について以下に詳しく説明する。
一般式（ＩＩＩ  ）で示される２０−ホルミルプレグナ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール誘導体またはそのジエン付加物は、例えば国際公開ＷＯ８８／０７５４５号公報等に記載されている方法に従って合成することができる。
【００１６】
上記の２０−ホルミルプレグナ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール誘導体とメチルケトン誘導体の水酸基保護体とを塩基の存在下に反応させて一般式（ＩＶ）で示されるアルドール付加物を得、次いで該アルドール付加物を脱水し、必要に応じ水酸基を保護することにより、一般式（Ｖ）で示される不飽和ケトン誘導体を得る。
【００１７】
一般式（Ｖ）で示される不飽和ケトン誘導体の２２位の二重結合を必要に応じて異性化したのち、メチル銅試薬を作用させ、必要に応じ水酸基を保護することにより、２２位にメチル基の導入された一般式（ＩＩ−１）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体を得る。
【００１８】
上記の反応は立体特異的に進行する。即ち、一般式（Ｖ）における２２位の二重結合がＥの立体配置である不飽和ケトン誘導体を出発原料として用いる場合には、２２位の立体配置がＲまたはＳである２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の２つの異性体のうちのどちらか一方の異性体のみが得られる。一方、２２位の二重結合がＺの立体配置である不飽和ケトン誘導体を出発原料として用いる場合には、前記で得られる２２−メチルプロビタミンＤ誘導体とは２２位の立体配置が逆の２２−メチルプロビタミンＤ誘導体を得ることができる。
【００１９】
このように、出発原料である不飽和ケトン誘導体の２２位の二重結合の立体配置が異なるものを用いることにより、２２位の立体配置がＲまたはＳである２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の２つの異性体を選択的に合成することができる。
【００２０】
一般式（ＩＩ−１）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の２４位のカルボニル基を水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化トリイソブチルホウ素リチウムなどの還元剤を用いて還元し、必要に応じて水酸基を保護することにより、一般式（ＩＩ−２）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体を得る。
【００２１】
一般式（ＩＩ−２）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の水酸基を還元的に除去する常法により、例えば一般式（ＶＩ）で示されるジチオ炭酸エステルまたはチオ炭酸エステル誘導体に変換し、次いで該誘導体を水素化トリブチルスズなどでラジカル的に還元することにより、一般式（ＩＩ−３）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体を得る。
【００２２】
上記の一般式（ＩＩ−１）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体、一般式（ＩＩ−２）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体または一般式（ＩＩ−３）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体をそれぞれ光異性化し、熱異性化したのち、必要に応じて脱保護することにより、一般式（Ｉ）で示される本発明の２２−メチルビタミンＤ誘導体を得ることができる。
【００２３】
このようにして得られる一般式（Ｉ）で示される２２−メチルビタミンＤ誘導体、一般式（ＩＩ）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の反応混合物からの単離・精製は、一般に有機化合物を反応混合物から単離・精製するに際して用いられている方法と同様の方法により行われる。例えば、反応混合物を氷水にあけ、ジエチルエーテル、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出し、抽出液を冷希塩酸、重曹水、食塩水などで順次洗浄し、乾燥後、濃縮して粗生成物を得、該粗生成物を必要に応じて再結晶、クロマトグラフィーなどにより精製し、一般式（Ｉ）で示される２２−メチルビタミンＤ誘導体、一般式（ＩＩ）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体を得ることができる。
【００２４】
また、一般式（Ｉ）で示される２２−メチルビタミンＤ誘導体の２０位エピマーは、一般式（ＩＩＩ  ）で示される２０−ホルミルプレグナ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール誘導体の２０位エピマーを出発原料として、上記スキーム１に従って同様に合成することができる。また、一般式（ＩＩ）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の２０位エピマーは、一般式（ＩＩＩ  ）で示される２０−ホルミルプレグナ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール誘導体の２０位エピマーを出発原料として上記スキーム１に従って同様に合成することができる。また、一般式（ＩＩ）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体のジエン付加物、一般式（ＩＩ）で示される２２−メチルプロビタミンＤ誘導体の２０位エピマーのジエン付加物は、一般式（ＩＩＩ  ）で示される２０−ホルミルプレグナ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール誘導体あるいはその２０位エピマーのジエン付加物を出発原料として上記スキーム１に従って同様に合成することができる。なお、上記スキーム１の工程の途中でジエノフィル部分が脱離した場合は、改めて常法に従いジエノフィルと反応させることによりジエン付加物とすることができる。さらに、ジエン付加物は常法に従い水素化リチウムアルミニウムやアルカリで処理することにより、対応する２２−メチルプロビタミンＤ誘導体に変換することができる。
【００２５】
本発明の２２−メチルビタミンＤ誘導体およびその２０位エピマーは、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合活性を示し、かつ骨髄性白血病細胞の分化誘導作用を有していることから、乾癬などの皮膚疾患、骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍などの細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である。また、低カルシウム、低ビタミンＤ食ラットに対する投与においても血中カルシウムの上昇作用は弱く、急性毒性試験においても低毒性であったことから、副作用の少ない、骨粗鬆症、副甲状腺機能亢進症、慢性腎不全、骨軟化症などのカルシウム代謝の欠陥症の治療薬（カルシウム代謝改善剤）としても有用である。
【００２６】
一般式（Ｉ）で示される２２−メチルビタミンＤ誘導体を有効成分とする本発明のカルシウム代謝改善剤は、適当な剤型の医薬組成物として経口、または非経口的に投与することができる。投与量は年令、症状、投与ルートなどによっても異なるが、例えば成人のカルシウム代謝の欠陥症の予防、治療のために投与する場合、通常成人１日あたり０．１μｇから１ｍｇを、好ましくは０．５μｇから１００μｇを１ないし３回に分けて投与するのが好都合であるが、医者の診断に応じて上記範囲を超えて投与することももちろん可能である。
【００２７】
本発明のカルシウム代謝改善剤は、有効成分である本発明の化合物の有効量と薬理学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む組成物であってもよい。このような組成物は経口または非経口投与に適する剤型として提供される。
【００２８】
即ち、経口投与のための組成物としては、固体もしくは液体の剤型、具体的には錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などである。このような組成物は公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられる担体もしくは賦形剤を含有するものである。例えば錠剤用の担体、賦形剤としては乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどである。
【００２９】
非経口投与のための組成物としては、例えば注射剤であれば、公知の方法に従い、通常注射剤に用いられる無菌の水性ないしは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製される。注射用の水性液としては生理食塩水、ブドウ糖などやその他の補助液を含む等張液などがあり、これらは適当な溶解補助剤などと併用してもよい。
【００３０】
このような本発明のカルシウム代謝改善剤は、本発明の化合物との配合により好ましくない相互作用を生じないかぎり、他の活性成分を含んでいてもよい。
【００３１】
【実施例】
以下、実施例、参考例および試験例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によりなんら限定されるものではない。
【００３２】
参考例１
（（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−テトラヒドロピラン−２−イルオキシコレスタ−５，７−ジエン−２２−オールの合成）
窒素雰囲気下、ジイソプロピルアミン１．８４ｍＬ（１３．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン６ｍＬ溶液に−７８℃でｎ−ブチルリチウムの１．６Ｍヘキサン溶液６．５４ｍＬ（１０．５ｍｍｏｌ）を滴下し、２０分間撹拌した。得られたリチウムジイソプロピルアミドの溶液に３−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブタノン  ３−（テトラヒドロピラン−２−イル）エーテル２．４２ｇ（１３．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン３ｍＬに溶解した溶液を滴下し、１５分間撹拌した。得られた反応液を、（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）プレグナ−５，７−ジエン−２０−メチル−２１−アール３．０ｇ（６．５２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン６ｍＬに溶解した溶液に−７８℃で滴下し、９０分間撹拌した。得られた反応液に塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２２−オールを４．０１ｇ得た（収率９５．２％）。
【００３３】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−アセタール）、４．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４１０（０．６）、３９２（０．８）、３８４（３）、３４３（１）、３０８（２５）、１４１（２２）、８５（１００）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４９６、２９６２、１７４８、１４４４、１２８６、１１５１、１１２９、１０７７、１０２３、９８４
【００３４】
参考例２
（（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オールの合成）
（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２２−オール４．０ｇ（６．２ｍｍｏｌ）をトルエン／クロロホルム（３：１）混液８０ｍＬに溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水塩１１５ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）と硫酸マグネシウム２．６ｇ（２１．６ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１時間撹拌した。反応液を室温まで冷却し、酢酸エチルを加えて重曹水、水で洗浄し、乾燥後濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オールを２．８６ｇ得た（収率８５％）。
融点１８３−１８５℃（酢酸エチル−ベンゼンより再結晶）
【００３５】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、１．０２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．３８（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、３．９８（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）、６．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，Ｈ−２３）、７．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，８．９Ｈｚ，Ｈ−２２）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４６８（６）、３９２（１７）、３４９（１７）、３３４（９）、５９（１００）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４４０、２９６２、１７４４、１６９８、１６２６、１４４４、１２８２、１０６７、９９４、７９１
【００３６】
参考例３
（（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンの合成）
（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オール２．２４ｇ（４．１２ｍｍｏｌ）を塩化メチレン１０ｍＬに溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミン２１．５ｍＬ（１２３ｍｍｏｌ）とクロロメチルメチルエーテル６．２５ｍＬ（８２．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を５％重曹水、水で順次洗浄し、乾燥後濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンを２．１８ｇ得た（収率９０％）。
【００３７】
融点１５２−１５５℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、１．０２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．１２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．３８（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．６６（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）、６．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，Ｈ−２３）、６．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，８．９Ｈｚ，Ｈ−２２）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
５７２（１）、５２８（１）、４９６（２）、４８３（３）、４５２（５）、４２０（４）、４０７（４）、３９４（７）、１４１（２４）、１０３（１００）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
２９６２、１７４６、１７１７、１４４４、１３７７、１２８６、１１４９、１０３５、９９２、９６３、９３６、８６８、７９１
【００３８】
参考例４
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２２−オールの合成）
参考例１において、（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）プレグナ−５，７−ジエン−２０−メチル−２１−アールの代わりに（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）プレグナ−５，７−ジエン−２０−メチル−２１−アールを用いた以外は参考例１と同様に反応および分離精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２２−オールを３．７５ｇ得た（収率８９％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６４６
【００３９】
参考例５
（（２０Ｓ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オールの合成）
参考例２において、（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２２−オールの代わりに（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２２−オールを用いた以外は参考例２と同様に反応および分離精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オールを２．９３ｇ得た（収率８７％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ５４４
【００４０】
参考例６
（（２０Ｓ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンの合成）
参考例３において、（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オールの代わりに（２０Ｓ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−オキソコレスタ−５，７，２２−トリエン−２５−オールを用いた以外は参考例３と同様に反応および分離精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンを２．２３ｇ得た（収率９２％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ５８８
【００４１】
参考例７
（（２０Ｒ）−（２２Ｚ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンの合成）
（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン１８０ｍｇ（０．３０６ｍｍｏｌ）とナフタレン１００ｍｇ（０．７８１ｍｍｏｌ）をベンゼン３３ｍＬに溶解し、パイレックス容器中でアルゴンガスを１５分間吹き込んだのち、１００Ｗ高圧水銀ランプを用いて室温で原料の約半量が消失するまで紫外線を照射した。反応液を濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−（２２Ｚ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンを６１ｍｇ得た（収率３４％）。
【００４２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６８（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、１．０２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．３７（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６及びＨ−２７）、３．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．６７（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３６，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７及びＨ−６）、６．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１０．９Ｈｚ，Ｈ−２２）、６．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｈ−２３）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
５１２（６）、４３６（８）、３７８（６）、１５５（２０）、１０３（１００）、８１（２３）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４３６、２９５８、１７４８、１６９４、１６２０、１４４４、１２８８、１２５７、１１４７、１０３８
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ  ２３５、２６１、２７１、２８１．５、２９３．５
λｍｉｎ  ２５５．５、２６４、２７６、２８９
【００４３】
実施例１
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンの合成）
沃化第一銅３８９ｍｇ（２．０４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン０．６ｍＬに懸濁させ、０℃でメチルリチウムの１．４Ｍエチルエーテル溶液２．２ｍＬ（３．０８ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。参考例３で得られた（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン３００ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１．８ｍＬに溶解した溶液を０℃にて加え、２５分間撹拌した。得られた反応液に塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンを２６８ｍｇ得た（収率８７％）。
【００４４】
融点  １６２〜１６５℃（酢酸エチル−ヘキサンより再結晶）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８５３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２−Ｍｅ）、０．８５５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２−Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３３，１．３６（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．３９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ２  ）、４．７２（ｓＨ，ｓ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７，Ｈ−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
５７２（１）、５２８（１）、４９６（２）、４８３（３）、４５２（５）、４２０（４）、４０７（４）、３９４（７）、１４１（２４）、１０３（１００）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
２９６２、１７４６、１７１７、１４４４、１３７７、１２８６、１１４９、１０３５、９９２、９６３、９３６、８６８、７９１
【００４５】
実施例２
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールの合成）
実施例１で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン２１３ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン２ｍＬに溶解し、メタノール１ｍＬと水素化ホウ素ナトリウム２７ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）を室温で加え、７０分間撹拌した。反応液に塩化メチレンと水を加え、塩化メチレンで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールを２１０ｍｇ得た（収率９８％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６０６
【００４６】
実施例３
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンの合成）
実施例２で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オール１００ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）とイミダゾール０．２ｍｇをテトラヒドロフラン１．５ｍＬに溶解し、室温で除々に水素化ナトリウム１２ｍｇ（５０％油分散、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２０分間撹拌したのち、二硫化炭素３０μＬ（０．３２ｍｍｏｌ）を一度に加えた。３０分間撹拌したのち、沃化メチル２０μＬ（０．３２ｍｍｏｌ）を一度に加え、さらに３０分間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネートを１０２ｍｇ得た（収率８９％）。
【００４７】
上記により得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネート１４０ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）をトルエン２．５ｍＬに溶解し、アゾビスイソブチロニトリル８ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）と水素化トリブチルスズ１６１μＬ（０．６０ｍｍｏｌ）を加え、１５分間加熱還流した。反応液を冷却後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンを１０１ｍｇ得た（収率８５％）。
【００４８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６および−２７）、３．３７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７７，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ２  ）、４．７０（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３７，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７および−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４５２（１４）、４３８（７）、３７６（１００）、３６１（１２）、３２５（１４）、２７７（２５）、２４９（２５）、２０９（５５）、１９７（２７）、１５５（３９）、１４１（４１）、１０３（４３）、６９（５０）、５５（５７）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４５２、２９５８、１７４４、１４４４、１２５５、１１４７、１０４４、９５５、８６８、７９３
【００４９】
実施例４
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールの合成）
実施例３で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン１０１ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸一水塩９０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）を９５％エタノール４ｍＬに溶解し、１０分間加熱還流した。冷却後、濃縮して得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、水洗した。乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールを８６ｍｇ得た（収率９２％）。
【００５０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１０，１．２１６（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７および−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４７０（８）、３９４（８１）、３７９（１７）、３７６（１９）、３６１（６）、２５１（１８）、２２４（２６）、２０９（６７）、１９７（３９）、１５５（４９）、１４１（５８）、６９（６９）、５９（１００）、５５（７５）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３５５２、２９６６、１７４４、１７３１、１４４６、１３４４、１２９２、１２６５、１０９８、１０２５、７９７
【００５１】
実施例５
（（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールの合成）
実施例４で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オール８０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン１ｍＬに溶解し、５％水酸化カリウム−メタノール溶液３．５ｍＬに加えて４０℃で４５分間撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、クロロホルムで希釈して水洗した。乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールを６０ｍｇ得た（収率９５％）。
【００５２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、０．９５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１６，１．２２３（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６および−２７）、３．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．０７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．７３（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７および−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４３０（１８）、４１２（１８）、３９４（１９）、２５１（２０）、２２７（３２）、１９７（２６），１７１（３５）、６９（８８）、５９（９４）、５５（１００）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４２６、２９３４、１４６０、１３８３、１２６３、１０３１、９０９、８０１
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ    ２７２、２８２．５、２９４．５
λｍｉｎ    ２３５、２７７、２９０
【００５３】
実施例６
（（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の合成）実施例５で得られた（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオール２０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）をベンゼン−エタノール（１５０：２０）１７０ｍＬに溶解し、アルゴンガスを１５分間吹き込んだのち、予め５分間安定化させた１００Ｗ高圧水銀ランプを用い、０℃で１５分間バイコールフィルターを通して大部分の原料が消失するまで紫外線を照射した。得られた反応液を濃縮し、カラムとしてセファデックスＬＨ−２０（登録商標）（ファルマシア社製）を用い、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（７０：３０：１）を展開溶媒として分離することにより、プレビタミンを１０．２ｍｇ得た（収率５１％）。
得られたプレビタミンを９５％エタノールに溶解し、アルゴン雰囲気下、室温暗所にて２週間放置した。反応液を濃縮し、カラムとしてセファデックスＬＨ−２０（登録商標）を用い、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（７０：３０：１）を展開溶媒として分離することにより、下記の物性を有する、（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  を８．１ｍｇ得た（収率７９％）。
【００５４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．５４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８２，０．８８（各３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１および−２２Ｍｅ）、１．２１８，１．２２５（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、４．２３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、４．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、５．０１，５．３３（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９）、６．０２，６．３８（各１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｈ−７および−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４３０（３）、４１２（７）、３９４（６）、３７９（３）、１５２（２６）、１３４（１００）、６９（６９）、５９（７１）、５５（８６）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３３９８、２９５２、２８７８、１６５７、１５４３、１４６０、１３８１、１２６１、１０６０、９５９、９１１、８０１
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ    ２６４
λｍｉｎ    ２２８
【００５５】
実施例７
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンの合成）
沃化第一銅２１４ｍｇ（１．１２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン２５０μＬに懸濁し、０℃にてメチルリチウムの１．４Ｍエチルエーテル溶液１．３４ｍＬ（１．８７ｍｍｏｌ）を滴下して１５分間撹拌した。反応液を−７８℃に冷却し、塩化トリメチルシリル１１９μＬ（０．９３ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルホスホリックトリアミド１６２μＬ（０．９３ｍｍｏｌ）、参考例７で得られた（２０Ｒ）−（２２Ｚ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン１１０ｍｇ（０．１８７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン２５０μＬ溶液を順次加えて、同温度で４０分間撹拌した。反応液にトリエチルアミン２ｍＬを加え、酢酸エチルで希釈して水洗した。乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチル−２４−トリメチルシリルオキシコレスタ−５，７，２３−トリエンを８５ｍｇ得た（収率６７％）。
【００５６】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．２０（９Ｈ，ｓ，ＴＭＳ）、０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．８６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３５（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．３６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．６３，４．６６（各１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，Ｈ−２３）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）
【００５７】
（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチル−２４−トリメチルシリルオキシコレスタ−５，７，２３−トリエン１６０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１ｍＬに溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウムの１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液２８４μＬ（０．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する、実施例１で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンとは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンを１３１ｍｇ得た（収率９２％）。
【００５８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３４（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．３９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．７１（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）
【００５９】
実施例８
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールの合成）
実施例７で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン９１ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン０．７ｍＬに溶解し、メタノール０．７ｍＬと水素化ホウ素ナトリウム１１ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）を室温で加え、３５分間撹拌した。反応液に塩化メチレンと水を加え、塩化メチレンで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する、実施例２で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールとは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールを８４ｍｇ得た（収率９２％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６０６
【００６０】
実施例９
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンの合成）
実施例８で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オール２６ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）とイミダゾール０．２ｍｇをテトラヒドロフラン０．３ｍＬに溶解し、室温で除々に水素化ナトリウム５．２ｍｇ（６０％油分散、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２０分間撹拌したのち、二硫化炭素１６μＬ（０．２６ｍｍｏｌ）を一度に加えた。３０分間撹拌したのち、沃化メチル１１μＬ（０．１７ｍｍｏｌ）を一度に加え、さらに３０分間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する、実施例３で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネートとは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル
メチルジチオカーボネートを１８ｍｇ得た（収率６０％）。
【００６１】
上記により得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネート３４ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）をトルエン０．７ｍＬに溶解し、アゾビスイソブチロニトリル１ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ）と水素化トリブチルスズ４０μＬ（０．１５ｍｍｏｌ）を加え、２０分間加熱還流した。反応液を冷却後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する、実施例３で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンとは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンを２６ｍｇ得た（収率９０％）。
【００６２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．３７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ２  ）、４．７１（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４５２（１１）、４３８（８）、３７６（１００）、３６１（１６）、２７７（２８）、２５１（３２）、２４９（２９）、２２４（３１）、２０９（７８）、１９７（４９）、１５５（５１）、１４１（５９）、１０３（４２）、６９（８１）、５５（７９）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４６０、２９６２、１７４４、１４４４、１２８４、１１４７、１０４２、９５５、８６６、７９３
【００６３】
実施例１０
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールの合成）
実施例９で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン１１ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸一水塩１０ｍｇ（０．０５３ｍｍｏｌ）を９５％エタノール１ｍＬに溶解し、１０分間加熱還流した。冷却後、濃縮して得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、水洗した。乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する、実施例４で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールとは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールを８ｍｇ得た（収率８０％）。
【００６４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）
【００６５】
実施例１１
（（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールの合成）
実施例１０で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オール１９ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）を塩化メチレン０．５ｍＬに溶解し、５％水酸化カリウム−メタノール溶液１．５ｍＬを加えて４０℃で５５分間撹拌した。反応液を減圧下に濃縮し、クロロホルムで希釈して水洗した。乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する、実施例５で得られた（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールとは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールを１４ｍｇ得た（収率９３％）。
【００６６】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、０．９５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．０７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．７４（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−７およびＨ−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４３０（１８）、４１２（１２）、３９４（１７）、２５１（１９）、２２７（３１）、１９７（２６）、１７１（３５）、６９（８２）、５９（１００）、５５（８９）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４０８、２９６６、１４６０、１３８１、１１５４、１０５４、９０９、７６０
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ    ２７２、２８２．５、２９４．５
λｍｉｎ    ２３３、２７７、２９０
【００６７】
実施例１２
（（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の合成）
実施例１１で得られた（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオール１０．９ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）をベンゼン−エタノール（１３０：１０）１４０ｍＬに溶解し、アルゴンガスを１５分間吹き込んだのち、予め５分間安定化させた１００Ｗ高圧水銀ランプを用い、０℃で１５分間バイコールフィルターを通して大部分の原料が消失するまで紫外線を照射した。得られた反応液を濃縮し、カラムとしてセファデックスＬＨ−２０（登録商標）（ファルマシア社製）を用い、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（７０：３０：１）を展開溶媒として分離することにより、プレビタミンを４．１ｍｇ得た（収率３８％）。
【００６８】
得られたプレビタミンを９５％エタノール３ｍＬに溶解し、アルゴン雰囲気下、室温暗所にて２週間放置した。反応液を濃縮し、カラムとしてセファデックスＬＨ−２０（登録商標）を用い、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（７０：３０：１）を展開溶媒として分離することにより、下記の物性を有する、実施例６で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  とは２２位の立体配置が逆である（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  を２．９ｍｇ得た（収率７１％）。
【００６９】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．５５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１または−２２Ｍｅ）、０．７８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２２Ｍｅまたは−２１）、１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、４．２３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、４．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、５．０１，５．３３（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９）、６．０２，６．３８（各１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｈ−７およびＨ−６）
質量スペクトル（ＥＩ）  ｍ／ｚ（相対強度）
４３０（３）、４１２（６）、３９４（５）、３７９（３）、１５２（２４）、１３４（１００）、６９（６０）、５９（６７），５５（７１）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）  ｃｍ−１
３４００、２９４０、１６３８、１３８１、１１５６、１０５８、９０９
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ    ２６５
λｍｉｎ    ２２８
【００７０】
実施例１３
（（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンの合成）
実施例１において、（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン３００ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の代わりに（２０Ｓ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン３００ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例１と同様に反応および分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オンを２６２ｍｇ得た（収率８５％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６０４
【００７１】
実施例１４
（（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールの合成）
実施例２において、（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン２１３ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の代わりに実施例１３で得られた（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オン２１３ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例２と同様に反応および分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オールを２０８ｍｇ得た（収率９７％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６０６
【００７２】
実施例１５
（（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンの合成）
実施例３において（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オール１００ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の代わりに実施例１４で得られた（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−オール１００ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例３と同様に反応および分離精製を行うことにより、（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネートを１０３ｍｇ得た（収率９０％）。
【００７３】
実施例３において（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネート１４０ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）の代わりに上記の（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２４−イル  メチルジチオカーボネート１４０ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例３と同様に反応および分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエンを９７ｍｇ得た（収率８２％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ５９０
【００７４】
実施例１６
（（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールの合成）
実施例４において、（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン１０１ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）の代わりに実施例１５で得られた（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン１０１ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例４と同様に反応および分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オールを８４ｍｇ得た（収率９０％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ５４６
【００７５】
実施例１７
（（２０Ｓ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールの合成）
実施例５において、（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オール８０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）の代わりに実施例１６で得られた（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−２５−オール８０ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例５と同様に反応および分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｓ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオールを５９ｍｇ得た（収率９３％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ４３０
【００７６】
実施例１８
（（２０Ｓ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の合成）実施例６において、（２０Ｒ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオール２０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）の代わりに実施例１７で得られた（２０Ｓ）−２２−メチルコレスタ−５，７−ジエン−１α，３β，２５−トリオール２０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例６と同様に反応および分離精製を行うことにより、下記の物性を有する、（２０Ｓ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  を４．７ｍｇ得た（収率４６％）。
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ    ２６４
λｍｉｎ    ２２８
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ４３０
【００７７】
参考例８
（１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ヒドロキシ−２５−テトラヒドロピラン−２−イルオキシ−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−２４−オンの合成）
ジイソプロピルアミン３．０４ｍＬ（２１．８ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン１０ｍｌに溶解した溶液に、−７８℃でｎ−ブチルリチウムの１．６Ｍヘキサン溶液１０．９ｍＬ（１７．４ｍｍｏｌ）を滴下し、得られた溶液を同温度で撹拌した。２０分後に、このリチウムジイソプロピルアミド溶液に４−ヒドロキシ−４−メチル−２−ペンタノン  テトラヒドロピラン−２−イルエーテル４．３６ｇ（２１．８ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン５ｍＬに溶解した溶液を−７８℃で滴下し、得られた混合物を１５分間撹拌した。次いで、得られたエノレートの溶液を乾燥テトラヒドロフラン２０ｍＬに溶解した１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）プレグナ−５，７−ジエン−２０−メチル−２１−アール５．００ｇ（１０．９ｍｍｏｌ）に−７８℃で滴下し、得られた混合物を同温度で９０分間撹拌した。塩化アンモニウム水溶液で反応を止め、酢酸エチルで抽出した。有機層を水洗し、乾燥後濃縮して得られた残渣をシリカゲル（１００ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、２０％酢酸エチル／ベンゼンで溶出し、カップリング生成物である１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ヒドロキシ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−２４−オンの下記の物性を有する２２−エピマー混合物７．０９ｇを得た（収率定量的）。
【００７８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．８０（１Ｈ，ｍ，アセタールＨ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
【００７９】
参考例９
（１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メシロキシ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−２４−オンの合成）
参考例８で得られた１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−ヒドロキシ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−２４−オン４．１２ｇ（６．２４ｍｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン２５ｍｌに溶解した溶液に、トリエチルアミン１．３０ｍＬ（９．３６ｍｍｏｌ）およびメシルクロリド５３１μＬ（６．８６ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、この溶液を同温度で撹拌した。４５分後に、混合物を塩化メチレンで希釈し、氷水中に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。この有機層を水洗し、乾燥後濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（１００ｇ）のカラムクロマトグラフィーにかけ、２０％酢酸エチル／ベンゼンで溶出して、下記の物性を有する１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メシロキシ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−２４−オン３．６４ｇを２２−エピマーの混合物として得た（収率７９％）。
【００８０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．７８（１Ｈ，ｍ，アセタールＨ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．４０，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
４８２（１）、４６４（３）、４０６（４）、３８８（１４）、３０８（３３）、１５５（３５）、１４１（６３）、８３（１００）、５５（４７）。
【００８１】
参考例１０
（（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７，２２−コレスタトリエン−２４−オンの合成）
参考例９で得られた１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−メシロキシ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−２４−オン７．８７ｇ（１０．７ｍｍｏｌ）をベンゼン９０ｍＬに溶解した溶液に１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１．９２ｍＬ（１２．８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、４０分間撹拌した。ついで水を添加し、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。この有機抽出液を５％塩酸、５％重炭酸ナトリウム水および水で洗浄し、乾燥した後濃縮して得られた残渣をシリカゲル（１２０ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、７％酢酸エチル／ベンゼンで溶出し、下記の物性を有する（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７，２２−コレスタトリエン−２４−オンの５．９７ｇを得た（収率８７％）。
【００８２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１）、１．３１，１．３５（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．８０（１Ｈ，ｍ，アセタールＨ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６７（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）、６．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，Ｈ−２３）、６．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．３および８．９Ｈｚ，Ｈ−２２）。
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
４９０（１）、４２４（９）、４０６（８）、３４８（７４）、２５１（２８）２３５（４２）、１５５（６５）、１４１（９２）、８５（６２）、５５（１００）。
【００８３】
参考例１１
（（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物の合成）
原料として、（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシメトキシ）プレグナ−５，７−ジエン−２０−メチル−２１−アール  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物を用い、参考例１、参考例２および参考例３の方法に従い反応及び分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物を得た（収率３５％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ７３５
【００８４】
参考例１２
（（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２６，２７−ジメチル−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンの合成）
原料として、（２０Ｓ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）プレグナ−５，７−ジエン−２０−メチル−２１−アール及び３−ヒドロキシ−３−エチル−２−ペンタノン  ３−（テトラヒドロピラン−２−イル）エーテルを用い、参考例１、参考例２及び参考例３の方法に従い反応及び分離精製を行うことにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２６，２７−ジメチル−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンを得た（収率４２％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６１６
【００８５】
実施例１９
（（２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−ホモ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２２−メチル−５，７−コレスタジエン−２４−オンの合成）
メチルリチウムの１Ｍエーテル溶液２９ｍＬ（２９ｍｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン５ｍｌ中のヨウ化銅２．７２ｇ（１４．３ｍｍｏｌ）の懸濁液に０℃で添加し、１５分間撹拌した。得られたジメチル銅リチウムの溶液に、参考例１０で得られた（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２４−ホモ−５，７，２２−コレスタトリエン−２４−オン３．０５ｇ（４．７５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１５ｍＬに溶かして添加し、この混合物を０℃で３０分間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液で反応を止め、酢酸エチルで抽出した。有機抽出液を水洗し、乾燥した後濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（４０ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、７％酢酸エチル／ベンゼンで溶出し、下記の物性を有する（２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−ホモ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２２−メチル−５，７−コレスタジエン−２４−オン１．９７ｇを得た（収率６３％）。
【００８６】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−ＣＨ３  ）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２２−ＣＨ３  またはＨ−２１）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．３１，１．３４（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７７，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．７９（１Ｈ，ｍ，アセタールＨ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
４９８（２）、４８０（３）、４４０（４）、４２２（１１）、４０４（１０）３６４（３３）、８５（８１）、５５（１００）。
【００８７】
実施例２０
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２５−テトラヒドロピラン−２−イル  エーテルの合成）
実施例１９で得られた（２２Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２４−ホモ−２５−（テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−２２−メチル−５，７−コレスタジエン−２４−オンの１５５４ｍｇ（２．３６ｍｍｏｌ）をメタノール−塩化メチレン（７：３）混液１０ｍＬに溶解した溶液に水素化ホウ素ナトリウム２６８ｍｇ（７．０８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、３０分撹拌した。この溶液を酢酸エチルおよび水で希釈したのち酢酸エチルで抽出した。この有機層を水洗し、乾燥した後濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（１５０ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、１−２％アセトン／塩化メチレンで溶出して、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２５−テトラヒドロピラン−２−イル  エーテルの２４位炭素におけるエピマー混合物１４４５ｍｇを得た（収率９３％）。
【００８８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
３．７８，３．８０（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、５．３９，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
５００（３）、４８２（６）、４２４（１２）、４０６（１９）、３５０（４１）、２７７（２０）、２４９（４４）、８５（８８）、５５（１００）。
【００８９】
実施例２１
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）の合成）実施例２０で得られた（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２５−テトラヒドロピラン−２−イル  エーテル３３７ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）とピリジニウムｐ−トルエンスルホネート３２０ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）を９５％エタノール５ｍＬに溶解した混合物を３０分間加熱還流した。この混合物を濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（１５ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、１５％酢酸エチル／ベンゼンで溶出し、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）２０５ｍｇを得た（収率７０％）。
【００９０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ、Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２６，１．３２（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７７，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３７，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
質量スペクトル（ｍ／ｅ）
５００（７）、４２４（２５）、４０６（１９）、３５０（４４）、２７７（２９）、２４９（５６）、２０９（１００）、５９（８４）。
【００９１】
実施例２２
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２４−フェノキシチオカルボキシレートの合成）
実施例２１で得られた（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）１２６ｍｇ（０．２１９ｍｍｏｌ）とフェノキシチオカルボニルクロリド６０μＬ（０．４３ｍｍｏｌ）をピリジン１．２ｍＬと塩化メチレン１．２ｍＬに溶解して得られる混合物を室温で撹拌した。１２０分後に水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗し、乾燥した後濃縮した。得られた残渣をシリカゲル（７ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、７％酢酸エチル／ベンゼンで溶出し、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２４−フェノキシチオカルボキシレート５１ｍｇを得た（収率３３％）。
【００９２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、１．３２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８，３．８０（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３９，５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
【００９３】
実施例２３
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２４−フェノキシチオカルボキシレート  ２５−メトキシメチル  エーテルの合成）
実施例２２で得られた（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２４−フェノキシチオカルボキシレート２６ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン１９３μｌ（１．１ｍｍｏｌ）およびメトキシメチルクロリド５６μＬ（０．７４ｍｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン０．２ｍＬに溶解した混合液を０℃で撹拌した。１８０分後にこの混合物を酢酸エチルと水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。抽出液を５％重炭酸ナトリウム水および水で洗浄し、乾燥した後濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（３ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、４％酢酸エチル／ベンゼンで溶出して、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２４−フェノキシチオカルボキシレート  ２５−メトキシメチル  エーテル２２ｍｇを得た（収率８０％）。
【００９４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、１．０２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、１．３０，１．３２（各３Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８，３．８０（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ）、４．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３９，５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
【００９５】
実施例２４
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２５−メトキシメチル  エーテルの合成）
実施例２３で得られた（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２４，２５−テトラオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２４−フェノキシチオカルボキシレート  ２５−メトキシメチルエーテル２２ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）を乾燥トルエン１ｍＬに溶解した溶液にアゾビスイソブチロニトリル１ｍｇと水素化トリ−ｎ−ブチルスズ２３μＬ（０．０８６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２０分間加熱還流した。この反応混合物を直接シリカゲル（３ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、５％酢酸エチル／ベンゼンで溶出し、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２５−メトキシメチル  エーテル７ｍｇを得た（収率４０％）。
【００９６】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６とＨ−２７）、３．３７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＨ２  ）、３．７８，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  ＯＣＯ２  ）、４．７１（２Ｈ，ｓ，Ｏ−ＣＨ２  −Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６９（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
【００９７】
実施例２５
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）の合成）
実施例２４で得られた（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）  ２５−メトキシメチル  エーテル７ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸モノヒドレート７ｍｇを９６％エタノール１ｍＬに溶解した溶液を２５分間加熱還流した。溶媒を濃縮し、残渣を酢酸エチルで希釈し、水洗乾燥した後、濃縮し、得られた残渣をシリカゲル（２ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、１０％酢酸エチル／ベンゼンで溶出して、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール  １，３−ビス（メチルカーボネート）５ｍｇを得た（収率７７％）。
【００９８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２１（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７７，３．７９（各３Ｈ，ｓ，ＣＨ３  Ｏ）、４．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．９１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．６８（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
４８４（６）、４６６（７）、４０８（３６）、３９０（５９）、２７７（２０）、２５１（２５）、２３５（２３）、２２４（２８）、２０９（７２）、１９７（４６）、６９（８２）、５９（１００）、５５（８６）。
【００９９】
実施例２６
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオールの合成）
実施例２５で得られた（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール  １，３−ビス（メチルカルボネート）２６ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）を塩化メチレン１ｍＬに溶解した溶液に５％水酸化カリウム／メタノール２ｍＬを加え、得られた混合物を５０℃で３５分間撹拌した。この混合物を水で希釈し、クロロホルムで抽出した。抽出液を水で洗い、乾燥した後濃縮した。得られた残渣をシリカゲル（２ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、７％エタノール／クロロホルムで溶出して、下記の物性を有するプロビタミンＤ（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−５，７−コレスタジエン−１α，３β，２５−トリオール）２０ｍｇを得た（収率定量的）。
【０１００】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．６３（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．８１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、０．９５（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、３．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、４．０７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、５．３８，５．７４（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−６およびＨ−７）。
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ  ２７２、２８２、２９４
λｍｉｎ  ２２８、２７７、２９０
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
４４４（Ｍ＋  ，５）、４２６（１４）、４０８（１３）、３９３（６）、２５１（１５）、２２７（２２）、１９７（２１）、１７１（２６）、１５７（３３）、６９（７３）、５９（６９）、５５（１００）。
【０１０１】
実施例２７
（（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の合成）
実施例２６で得られたプロビタミンＤ３ｍｇをベンゼン−エタノール（１３０：２０）１５０ｍＬに溶解した溶液に１５分間アルゴンガスを吹き込んだ後、０℃でアルゴン気流下、バイコールフィルターを通し、１００Ｗ高圧水銀ランプ（Ｓｈｉｇｅｍｉ  Ｓｔａｎｄａｒｄ，Ｔｏｋｙｏ）を用い、プロビタミンＤが消費されるまで照射した（反応はＨＰＬＣでモニターした）。溶媒を留去し、得られた残渣をセファデックスＬＨ−２０（１７ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム／ヘキサン／メタノール（７０：３０：１）で溶出して、プレビタミンＤ１．０３ｍｇ（収率３４％）を得た。このプレビタミンＤを９５％エタノール４ｍＬに溶解し、アルゴンガス下、室温で暗所に２週間静置した。ついで溶媒を留去し、得られた残渣をセファテックスＬＨ−２０（１７ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、上記と同じ溶媒系で溶出して、下記の物性を有する（２２Ｒ）−２２−メチル−２４−ホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミン  Ｄ３  ０．７４ｍｇを無色ガラス状で得た（収率７２％）
【０１０２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル  δ
０．５４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１８）、０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１またはＨ−２２−メチル）、０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２２またはＨ−２１−メチル）、１．２２（６Ｈ，ｓ，Ｈ−２６およびＨ−２７）、４．２３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−３）、４．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１）、５．０１，５．３３（各１Ｈ，ｍ，Ｈ−１９）、６．０２，６．３８（各１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，Ｈ−７およびＨ−６）。
ＵＶスペクトル（９５％エタノール）  ｎｍ
λｍａｘ  ２６５
λｍｉｎ  ２２８
質量スペクトル  ｍ／ｚ（相対強度）
４４４（Ｍ＋  ，３）、４２６（９）、４０８（７）、３９３（３）、１５２（２５）、１３４（１００）、６９（７０）、５９（７５）、５５（９５）。
【０１０３】
実施例２８
（（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オン  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物の合成）
参考例１１で得られた（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物を原料として、実施例１と同様の方法により反応及び分離精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オン  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物を得た（収率６２％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ７５１
【０１０４】
実施例２９
（（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オールの合成）
実施例２８で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オン  ４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物０．７５１ｇをテトラヒドロフラン１０ｍｌに溶解して、水素化リチウムアルミニウム０．１０ｇのテトラヒドロフラン５ｍｌ懸濁液に滴下した。１０分間加熱還流したのち、冷却し、ジエチルエーテルを加え、飽和硫酸ナトリウム水溶液を激しく撹拌しながら滴下した。生成した白色沈澱を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、濾液と洗液を合わせて食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，３β，２５−トリス（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オールを０．５１ｇ得た。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ５７８
【０１０５】
実施例３０
（（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２，２６，２７−トリメチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オンの合成）
参考例１２で得られた（２０Ｒ）−（２２Ｅ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２６，２７−ジメチル−２５−メトキシメトキシコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オンを原料として、実施例１と同様の方法により反応及び分離精製することにより、下記の物性を有する（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２，２６，２７−トリメチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オンを得た（収率６６％）。
質量スペクトル（ＦＤ）  ［Ｍ］＋    ６３２
【０１０６】
実施例３１
（１α，２５−ジヒドロキシ−２２，２６，２７−トリメチルビタミンＤ３  の合成）
実施例３０で得られた（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２，２６，２７−トリメチル−２５−（メトキシメトキシ）コレスタ−５，７−ジエン−２４−オンを原料として、実施例２〜６と同様の一連の方法により反応及び分離精製することにより、下記の物性を有する１α，２５−ジヒドロキシ−２２，２６，２７−トリメチルビタミンＤ３  を得た（収率４．５％）。
ＵＶ吸収スペクトル  λｍａｘ  （９５％エタノール）  ｎｍ
２６５
【０１０７】
試験例１
（ニワトリ小腸１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合性試験）実施例６で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （化合物Ｉ−Ａ）および実施例１２で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （化合物Ｉ−Ｂ）のニワトリ小腸１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合能を測定した。即ち、化合物Ｉ−Ａおよび化合物Ｉ−Ｂの段階的希釈溶液（８，１６，３２，６３，１２５，２５０，５００，５０００ｐｇ／５０μＬエタノール溶液）の各々に、トリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （約５０００ｃｐｍ）を加え、次いでニワトリ小腸１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体（株式会社ヤマサ製）溶液（０．１２５ｍｇ／５００μＬリン酸緩衝液）を添加し、撹拌した。４℃で一夜放置した後、ＤＣＣ（デキストランコーテッドチャコール）懸濁液（株式会社ヤマサ製）を加え、撹拌し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体に結合していない試料（遊離型）を吸着させた。反応混合物を遠心分離（３０００ｒｐｍ）することにより、ＤＣＣを分離し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体と結合している試料（結合型）を遊離型から分離（ＢＦ分離）した。上清５００μＬをとり、シンチレーションカウンターにて放射活性を測定し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体に結合しているラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の割合を求めた。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体と結合しているラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  の５０％が被験化合物と交換する被験化合物の濃度（ＥＤ５０値）を表１に示す。なお、対照として１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  を用いた。
【０１０８】
【表１】
0003589413.tif 000005
【０１０９】
試験例２
（ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合性試験）
試験例１において、ニワトリ小腸１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体に代えて、ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体を用いた以外は、試験例１と同様の操作を行ない、実施例６で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （化合物Ｉ−Ａ）および実施例１２で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （化合物Ｉ−Ｂ）のウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合能を測定した。その結果を表２に示す。
【０１１０】
【表２】
0003589413.tif 000006
【０１１１】
これらの試験結果より、実施例６および１２で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  はニワトリ小腸１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体およびウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合活性を有することが示された。なお、実施例１２で得られた（２０Ｒ）−２２−メチル−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （化合物Ｉ−Ｂ）はウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  受容体との結合能において、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３  （対照）にほぼ匹敵するものであった。
【０１１２】
【発明の効果】
本発明により提供される２２−メチルビタミンＤ誘導体およびその２０位エピマーは、慢性腎不全、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症などのカルシウム代謝の欠陥症、乾癬などの皮膚疾患および骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍などの細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療に有用である。