(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
菱実の親水性有機溶媒による溶媒抽出物を有効成分とし、かつ、ヒアルロニダーゼ活性阻害及び活性酸素抑制を有することを特徴とする頭皮を除く皮膚の抗酸化兼用の美白化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は美白作用が高く、ヒアルロニダーゼの活性を阻害し、且つ肌荒れなどに有効な化粧品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
菱実は双子葉植物網、離弁花亜網、てんにんか目ひし科ヒシ属の学名をトラパナタンス  エル（Ｔｒａｐａ  ｎａｔａｎｓ  Ｌ．）と称し、通常ひしと呼ばれる植物の果実を乾燥したものである。
ひしは日本、台湾、朝鮮、中国の温帯から亜熱帯に分布し、池や沼にはえる１年草で実は食用になる。
用途としては滋養強壮、解熱剤として用いる。
【０００３】
一方、化粧料の原料として使用できる美白作用のある物質としては種々の物質が知られているが、合成品は、長期間人間の肌に適用した場合の安全性の保証がなく、使用が制限されつつある。一方、天然物では美白作用が弱いものが多い。
しかし人の肌に対する安全性の面から天然物で、多年、人が食したりして、安全性の面で保証されており、しかも美白作用が強く、更に皮膚に対する他の効果も合わせもつ物質が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、皮膚に適用して安全であると共に、美白作用が大きく且つヒアルロニナーゼの活性を阻害し、更に肌荒れなどに有効な成分を含んだ化粧料を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記の課題を解決するため、すでに多年にわたって食用に供され、人体に対する安全性が確認されている植物をスクリーニングして調べ、化粧品として利用価値のあるものを検討した。
その結果、菱実が化粧品原料として、或いは医薬部外品して非常に有効性を有することを見出した。
確認された結果として美白作用、ヒアルロニナーゼの活性阻害、活性酸素抑制、抗酸化性が確認された。
【０００６】
すなわち、本発明は、菱実の親水性有機溶媒による溶媒抽出物を有効成分とし、かつ、ヒアルロニダーゼ活性阻害及び活性酸素抑制を有することを特徴とする頭皮を除く皮膚の抗酸化兼用の美白化粧料である。
【０００７】
菱実の利用方法としては、親水性有機溶媒、例えば、エタノール、メタノール、アセトン等で抽出する。しかしながら、化粧品原料の抽出であるから、エタノール或いは水との混合溶媒での抽出が好ましいのは当然である。
また、場合によっては、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール又は多価アルコールと水の混液も抽出に利用できる。
またさらに、凍結乾燥として粉体として利用することも利用方法によっては有効である。
【０００８】
この物質を他の化粧品原料例えばスクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、１，３ブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等を添加してさまざまな剤形の化粧料を調製することができる。例えばローション、クリーム、乳液、パック等で目的に応じて利用形態を考えればよい。
【０００９】
本発明の抽出物としての効果は、前記した如く、第１に肌の美白作用である。第２にヒアルロニダーゼの活性抑制作用である。ヒアルロニダーゼは、生体中に広く分布し、皮膚にも存在する酵素で、その名の通りヒアルロン酸を分解する。ヒアルロン酸はβ‐Ｄ‐Ｎ‐アセチルグルコサミンとβ‐Ｄ‐グルクロン酸が交互に結合した直鎖状の高分子多糖で、コンドロイチン硫酸などとともに哺乳動物の結合組織に広く存在するグリコサミノグルカンの一種である。
結合組織内でのヒアルロン酸の機能として、細胞間隙に水を保持し、また組織内にジェリー状のマトリックスを形成して細胞を保持したり、皮膚の潤滑性と柔軟性を保ち、外力（機械的障害）および細菌感染を防止していると考えられている。皮膚のヒアルロン酸は齢をとるにつれて減少し、その結果小ジワやかさつきなどの老化をもたらすといわれている。
従って、これを分解するヒアルロニダーゼの活性を抑制することは、製剤に使用されているヒアルロン酸の安定性や、皮膚に塗布した後の製剤のヒアルロン酸及び皮膚に存在していたヒアルロン酸の安定に寄与すると考えられる。
【００１０】
第３に活性酸素抑制作用である。空気中には酸素があり、これがないと生物（嫌気性のものを除く）は存在しえない。しかし酸素は紫外線や酵素等の影響を受けて活性酸素になる。活性酸素は脂肪酸を酸化し過酸化物を生成させる。生体の生体膜のリン脂質も酸化させ、障害を与える。
その上、生成した過酸化物と活性酸素はＤＮＡに損傷を与え、老化を促進するといわれている。この活性酸素は、チロシンからメラニンを作る機構にも影響を与え皮膚の黒化にも関与している。この活性酸素を抑制することは皮膚にとって重要な、言い換えれば化粧料に求められる重要な要素である。
本発明の菱実は又この活性酸素抑制作用、抗酸化性も有している。
【００１１】
【実施例】
以下に実際の利用方法である実施例を記載するが、本発明はこの実施例によって何ら限定されるものではない。
本発明で使用した菱実の抽出物の製造例を次に示す。
【００１２】
（製造例１）
菱実（乾燥品）を１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後凍結乾燥した。
【００１３】
（製造例２）
菱実（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後凍結乾燥した。
【００１４】
（製造例３、参考用）
菱実（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを放冷した後濾過後凍結乾燥した。
【００１５】
（実施例１）ローション
オリーブ油                                                    ０．５
製造例１の菱実のエタノール抽出物                              ０．５
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタンモノステアレート          ２．０
ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油                        ２．０
エタノール                                                  １０．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                          ５．０
精製水                                                      ８０．０
【００１６】
（実施例２）クリーム
Ａ  スクワラン                                                ２０．０
オリーブ油                                                  ２．０
ミンク油                                                    １．０
ホホバ油                                                    ５．０
ミツロウ                                                    ５．０
セトステアリルアルコール                                    ２．０
グリセリンモノステアレート                                  １．０
ソルビタンモノステアレート                                  ２．０
製造例２の菱実の５０％エタノール抽出物                      １．０
Ｂ  精製水                                                    ４７．９
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタンモノステアレート        ２．０
ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油                      １．０
グリセリン                                                  ５．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                        ５．０
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
ＡとＢをそれぞれ計量し、７０℃まで加温し、ＢにＡを撹拌しつつ徐々に加えたのち、ゆっくり撹拌しつつ３０℃まで冷却した。
【００１７】
（参考例）
参考例は実施例２の製造例２の抽出物を製造例３（参考用）の抽出物に代え調製したクリーム。
【００１８】
（チロシナーゼ活性阻害）
（試験方法）
マツクルバルン（Ｍｃｌｌｖａｌｎ）緩衝液０．９ｍｌ、１．６６ｍＭチロシン（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ）溶液１．０ｍｌ、前記製造例（凍結乾燥品）の０．１ｗｔ／ｖ％水溶液（溶解しにくい場合はエタノールを加えて溶解したのち精製水を加えて、エバポレートし、エタノールを除去したのち、０．１ｗｔ／ｖ％になるように調製した）１．０ｍｌをスクリューバイアルにとり、３７℃恒温水槽中で５分以上加温した。
チロシナーゼ溶液（Ｓｉｇｍａ  社製、マッシュルーム由来、９１４ユニット／ｍｌ）０．１ｍｌを加え、３７℃恒温水槽中で保温し、１０分後に４７５ｎｍで吸光度を測定した。
対照として、上記試料液のかわりに純水を加え同様に測定した。
この試験では試料の終濃度は０．０３３％となる。
（計算式）
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛Ｂ−（Ａ−Ｐ）｝／Ｂ×１００
但し                Ａ：試料検体の吸光度
Ｂ：対照の吸光度
Ｐ：試料検体の着色による吸光度（３倍希釈）
【００１９】
【表１】
0003558349.tif 000002
【００２０】
（ヒアルロニダーゼ活性抑制試験）
（試験方法）
０．４％ヒアルロン酸ナトリウム０．１Ｍ（ｐＨ６．０）リン酸緩衝溶液を６ｇはかりとり、３７℃の恒温水槽で５分間放置後、前記製造例（凍結乾燥品）の０．１ｗｔ／ｖ％水溶液（溶解しにくい場合はエタノールを加えて溶解したのち精製水を加えて、エバポレートし、エタノールを除去したのち、０．１ｗｔ／ｖ％になるように調製した）１．０ｍｌを加え撹拌し、０．０１％ヒアルロニダーゼ（シグマ社製牛睾丸製、タイプＩ−Ｓ）０．１Ｍ（ｐＨ６．０）リン酸緩衝溶液を１ｍｌ加えて直ちに撹拌し、６ｍｌを３７℃の恒温水槽に入れたオストワルド粘度形に入れた。これを１分後、５分後、１０分後、２０分後、４０分後に粘度を測定した。
対照として、上記試料液のかわりに純水を加え同様に測定した。
この試験では試料の終濃度は０．０１２５％となる。
１分後の粘度を１００として、結果を指数で表２〜３に示す。
【００２１】
【表２】
0003558349.tif 000003
【００２２】
【表３】
0003558349.tif 000004
【００２３】
（活性酸素抑制試験効果）
活性酸素を抑制する効果を測定する方法は各種あるが、今回以下の方法を利用した。
0003558349.tif 000005
上記の試薬の混合物を２．４ｍｌ、検体を０．３ｍｌ加えて、キサンチンオキシナーゼ（予め検体を水とし、実験するとき、吸光度が１分当り０．０２前後上昇するように上記のリン酸カリウム緩衝液で調整しておく）液を０．３ｍｌ加えて直ちに吸光度（５６０ｎｍ）を測定する。（測定は２分位し、直線性を確認する）
計算式      阻害率＝（（Ａ−Ｂ）／Ａ）×１００
Ａ：検体を水としたときの１分当りの吸光度の変化
Ｂ：検体の１分当りの吸光度の変化
濃度段階を数段階行い、５０％活性酸素生成阻害濃度を探した。検体の作成方法は前記製造例（凍結乾燥品）を適当な濃度の水溶液（溶解しにくい場合はエタノールを加えて溶解したのち精製水を加えて、エバポレートし、エタノールを除去したのち適当な濃度％となるように調製した）とした。
【００２４】
【表４】
0003558349.tif 000006
【００２５】
（抗酸化試験）
以下の試験液をネジキャップ付５０ｍｌ試験管に作成した。
検体                                                            ５ｍｇ
２％リノール酸エタノール溶液                                  １０ｍｌ
０．１Ｍ，ｐＨ７．０リン酸緩衝液                              １０ｍｌ
精製水                                                          ５ｍｌ
これを５０℃の恒温槽に遮光して放置する。
これを恒温槽に入れる前、３日後、６日後、８日後に以下の測定をした。
試験液０．１２５ｍｌ、７５％エタノール１２．１２５ｍｌ、３０％チオシアン酸アンモニウム０．１２５ｍｌを加えて撹拌し３分間放置後、０．０２Ｎ塩化第一鉄３．５％ＨＣｌ水溶液０．１２５ｍｌを加えて撹拌し３分間放置後波長５００ｎｍで吸光度を測定した。セル長１０ｍｍ、対照セルは試験液を水に置き換えたもの。
【００２６】
【表５】
0003558349.tif 000007
【００２７】
（使用テスト）
女性６名づつの顔面を左右に分け、一方を実施例（参考例含む）、もう一方を比較例として毎日、１回以上使用してもらって、３月後、アンケートした。なお、比較例は実施例より製造例の各種の菱実に抽出物を水に代えたものである（比較例１，２）。
【表５】
0003558349.tif 000008
判定基準は、以下の各々の基準で行い、アンケートの結果をまとめたのが以下の表６である。
実施例の方が非常によい      ３
実施例の方がかなりよい      ２
実施例の方がややよい        １
差がない                    ０
比較例の方がややよい      −１
比較例の方がかなりよい    −２
比較例の方が非常によい    −３
【００２８】
【表６】
0003558349.tif 000009
【００２９】
【発明の効果】
皮膚に適用して安全であると共に、美白作用が大きく、且つヒアルロニダーゼの活性を阻害するので、ヒアルロン酸が安定となり、皮膚の潤滑性と柔軟性を保ち、老化を防ぐ、また活性酸素抑制作用があり、抗酸化作用があるので、脂肪酸の酸化を防ぎ、過酸化物の生成をおさえ、皮膚の老化をおさえ、皮膚の黒化を防止する。
従って、肌荒れを防ぎ、肌のつややはりを良好に保つ。