(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミドを有効成分とする糖尿病性角膜症治療剤。
【請求項２】
経口剤又は点眼剤の形態を有し、糖尿病性角膜上皮症、糖尿病性角膜知覚低下症又は糖尿病性角膜内皮症に使用される、請求項１に記載の糖尿病性角膜症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミドを有効成分とする糖尿病性角膜症治療剤に係り、殊に点眼剤形態を有し、糖尿病性角膜上皮症、糖尿病性角膜知覚低下、糖尿病性角膜内皮症に使用される組成物に係る。
【０００２】
【従来の技術】
（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミドは本出願人会社によって発見された化合物であり、糖尿病性神経障害に対する作用、抗潰瘍作用、循環器官用薬剤が認められ、長期間にわたる使用安全性が高い事から現在経口用医薬品としての臨床試験中にある。［ＥＰ−Ｂ−２６４５８６  、Ｕ．Ｓ．４，９８５，５７３（特公平  ３−７２２２７号）、Ｕ．Ｓ．５，１５５，１２５（特開平  ３−２１５４３５  号）  、Ｕ．Ｓ．５，１６４，３９１（特開平  ３−１０６８８５  号）  等
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
糖尿病角膜症は角膜上皮、知覚（シュワン細胞）および内皮細胞に種々の異常が認められる疾患である。角膜の崩壊が重篤な場合，水泡性角膜症が発生し視機能を著しく障害する等、しばしば難治性である。しかしながら、その発生機序は未だ明らかではなく有効な治療薬も見い出されていない。
【０００４】
ところで、角膜内皮細胞は重要な機能を有するにもかかわらず再生能力はないか、あってもきわめて乏しい。しかし、糖尿病患者では発症から１０年余りで単純糖尿病網膜症を発症し、やがて増殖網膜症、網膜剥離、失明に至ることがある。その進展を防止するため光凝固術、硝子体手術等の適用、あるいは白内障に対する眼内レンズ置換術などの強いストレスにより容易に角膜内皮細胞に影響を与え、角膜症を引き起こすとされている。
【０００５】
糖尿病患者の角膜における脆弱性は、角膜症に至らないまでも糖尿病患者の内皮細胞をｓｐｅｃｕｌａｔｉｖｅ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅによって観察すると、大小不同，変形などの形態異常を認め，糖尿病性角膜内皮障害の存在が既に示唆されている。
【０００６】
糖尿病角膜症の患者数は明確な報告はないが、北里大眼科清水らは網膜症患者の角膜損傷率は５６％  、正常者１７％  と圧倒的に高く、角膜組織は正常者に比し脆弱性を有すると報告している。糖尿病患者は今や潜在的に  ６００万人を数え、今後も益々増加すると予測されており、本疾患に対する医療費の増大やＱＯＬを損なう等、深刻な問題を引き起こすことから、有効な薬剤の登場が強く望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段及び方法】
本発明は、（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミドが、有効な治療法がない糖尿病性角膜症を改善させるのに有効であることを見出だしたものであり、患者の医療費、福祉、ＱＯＬ（ＱＯＵＬＩＴＹ  ＯＦ  ＬＩＦＥ）の面で非常に有用な薬剤を提供する。
【０００８】
本発明の糖尿病性角膜症に対する治療剤の製剤形は、通常の製剤技術を用いて、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の経口製剤として、あるいは点眼剤、注射剤、坐剤等の非経口製剤として使用できる。投与量は、症状、年齢、投与法、剤型等により異なるが、通常は点眼剤の場合０．０１％  〜１％点眼剤を１回または数回に分けて点眼することにより、また経口の場合、成人に対して、一日当たり  ０．１２５〜１００ｍｇ  の範囲内、好ましくは０．５  〜２ｍｇを１回または数回に分けて投与することにより目的を達成することができる。以下には、実施例をあげ本発明を更に詳細に説明する。
【０００９】
【実施例】
薬効薬理試験例１
試験方法：実験は赤木らの方法（日本眼科紀要３７，８０９，１９８６）に準じ実施した。
体重５０ｇ（生後３週齢）のＳｐｒａｕｇｅ  Ｄａｗｌｅｙ系ラット（１群１５匹）を使用し、以下の３群に分けた。（１）  対照群には研究用通常食餌飼育群（正常対照薬）、（２）  ５０％ガラクトース含有食餌飼育群（ガラクトース単独群）、（３）  ５０％ガラクトース含有食餌に（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミド（以下化合物Ａと略す）を３ｍｇ／ｋｇ  強制経口投与した群（化合物Ａ  ガラクトース群）。各群のラットを約６週間飼育した。角膜内皮細胞の凍結破壊は各群の角膜中央部にあらかじめアセトン・ドライアイスで−７０℃に冷却した先端部直径  １．５ｍｍのステンレス棒を２０秒間あて経角膜的に内皮細胞を凍結破壊した。凍結破壊後経時的にネンブタール致死麻酔にて角膜を摘出し以下の方法で観察した。
【００１０】
光顕的観察：角膜を１％パラホルムアルデヒド・１％グルタルアルデヒドを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）  固定と１％四酸化オスミウムによる再固定後、アルコール脱水し，所定の方法にてエポン樹脂に包埋した。光顕切片はトルイジン青紫色染色後観察した。
【００１１】
伸展標本観察：角膜を未固定のまま６０ｍＭ・２Ｎａ  ＥＤＴＡ緩衝液に浸漬し，メタノール固定後内皮細胞層のみをデスメ膜から剥離しスライドガラスに添附した。試料はトルイジン青に染色し光顕にて観察した。
【００１２】
結果：
凍結破壊後５日：正常対照群では凍結部位に２〜３層の丘状重層領域がみられ、内皮細胞は光顕的に修復されていた。一方，ガラクトース単独群では，凍結部位に一致して大型の円形膨隆の構造物が複数みられた。膨隆内部には変性細胞群が存在した。化合物Ａガラクトース群でも膨隆構造物は時々見られたが、その大きさは小さかった。また、伸展標本でも角膜中央部に無数の核が密集している部位が見られた。
【００１３】
凍結破壊後７日：正常対照群、化合物Ａガラクトース群でこの時期に重層化した部位が見られることはなく，完全に偏平化し正常化していた。ガラクトース単独群はこの時期でも半数以上の例で膨隆構造物は残存していた。５日目に見られた像に比べると重層の高さは減じ，内皮細胞も円形というより細長い細胞質のもので構成されていた。伸展標本像でも広範囲にわたり核の密集・重層部位が見られた。
【００１４】
薬効薬理試験例２
薬効薬理試験例１の結果に基づき、本発明の明確な有用性を観察した。
実験の方法は、実施例１に準じて実施し、（１）正常対照群、（２）ガラクトース単独群、（３）化合物Ａガラクトース群の凍結破壊後５日の角膜を摘出した。ラットの左目の角膜を所定の方法でパラフィン包埋し、薄切後、ヘマトキシリン・エオジン染色を施し、光顕観察を行った。
【００１５】
結果：
光顕観察
凍結部位の角膜内皮細胞の重層部位および隆起構造物は角膜内皮細胞障害の修復過程とされ、凍結破壊後５日の正常対照群では２５％の眼球に認められた。一方、ガラクトース単独群では１００％の全ての眼球に認められ、その差は統計学的に有意（Ｐ＜０．０５）であり、角膜内皮細胞障害の修復が遅延していた。これに対し化合物Ａガラクトース群では、角膜内皮細胞の重層部位および隆起構造物は２２％の眼球に認められ、ガラクトース単独群に比べて統計学的に有意（Ｐ＜０．０１）に正常化していた。化合物Ａの投与は、本モデルの角膜内皮細胞障害修復遅延を改善せしめることが統計学的にも明かになった。
【００１６】
試験例２の結果（表１）
ガラクトース血症ラットの凍結破壊角膜内皮細胞の修復遅延に対する効果
［凍結破壊後５日の観察結果］
【００１７】
【表１】
0003603129.tif 000002
【００１８】
以上のように糖尿病の最も簡便な動物モデルであるガラクトース血症ラット
の角膜内皮細胞障害修復遅延に対し化合物Ａ投与は改善せしめ、臨床的にも糖
尿病性角膜症を治療することが強く示唆された。
【００１９】
製剤例等
化合物Ａ；（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミド
【００２０】
製剤例１
処方Ａ
１００ｍｌ中
化合物Ａ                    ０．１０ｇ
リン酸一水素ナトリウム      ０．７６ｇ
リン酸二水素ナトリウム      ０．１６ｇ
塩化ナトリウム              ０．４２ｇ
塩化ベンザルコニウム        ０．０１ｇ
滅菌精製水                    適  量
【００２１】
製法
滅菌精製水８０ｍｌにリン酸二水素ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、塩化ベンザルコニウムを加えて溶解した後、化合物Ａを加える。
化合物Ａを溶解させた後、滅菌精製水を加えて全量を１００ｍｌ  とし、点眼剤に供する。
【００２２】
処方Ｂ
１００ｍｌ中
化合物Ａ                    ０．１０ｇ
リン酸一水素ナトリウム      ０．７６ｇ
リン酸二水素ナトリウム      ０．１６ｇ
塩化ナトリウム              ０．４０ｇ
塩化ベンザルコニウム        ０．０１ｇ
ショ糖                      ０．０５ｇ
滅菌精製水                    適  量
【００２３】
製法
処方Ａと同様の方法で、点眼剤を製した。
【００２４】
製剤例２
下記の表２に示される電荷調整剤０．４ｇと、精製卵黄レシチン１．６  ｇ  と、下記の表３に示される油性成分８．０ｇとをクロロホルム／メタノール（５／１，Ｖ／Ｖ  ）混液５０ｍｌ中で混合溶解した後、化合物Ａを０．１  〜１．０ｇを加え、溶媒を完全に除去する。これに滅菌精製水９０ｇ  を添加し、マイクロフルイタイザーにより高圧（１５００Ｋｇ／ｃｍ  ２  ）乳化し、１０％（Ｗ／Ｗ）脂肪乳剤とする。
【００２５】
処方
１００ｍｌ中
脂肪乳剤                    ５０．０ｇ
リン酸一水素ナトリウム        ０．７６ｇ
リン酸二水素ナトリウム        ０．１６ｇ
塩化ナトリウム                ０．４０ｇ
塩化ベンザルコニウム          ０．０１ｇ
ショ糖                        ０．０５ｇ
滅菌精製水                      適  量
【００２６】
製法
処方Ａと同様の方法で、点眼剤を製した。
【００２７】
【表２】
0003603129.tif 000003
【００２８】
【表３】
0003603129.tif 000004
【００２９】
0003603129.tif 000005
【００３０】
製法
化合物Ａとショ糖をエタノール／水（１／１，Ｗ／Ｗ）で練合し、乾燥後、結晶セルロース、乳糖を添加し、通常製剤に供される滑沢剤を加え、常法により錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口製剤とする。
【００３１】
0003603129.tif 000006
【００３２】
製法
製剤例３と同様の方法で経口製剤を製した。
【００３３】
【発明の効果】
糖尿病角膜症はその発生機序は未だ明らかではなく有効な治療薬も見出だされていないが、角膜上皮、知覚（シュワン細胞）および内皮細胞に種々の異常が認められる疾患であり、角膜の崩壊が重篤な場合，水泡性角膜症が発生し視機能を著しく障害する等しばしば難治性である。本発明は（２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−  ジオキソスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリン］−２−  カルボキサミドを有効成分とする糖尿病性角膜症治療剤であり、殊に経口、点眼剤形態を有し、糖尿病性角膜上皮症、糖尿病性角膜知覚低下、糖尿病性角膜内皮症に効果を有する。