(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
もち米とグルコースから成る培地を用いてマンネンタケを培養することを特徴とするマンネンタケ菌糸体の製造方法。
【請求項２】
培養後の培養物を５５℃〜６０℃の温水下に繊維素分解酵素を用いて抽出処理する行程を含むことを特徴とする請求項１のマンネンタケ菌糸体の製造方法。
【請求項３】
抽出物を乾燥粉末化する工程を含むことを特徴とする請求項１または請求項２のマンネンタケ菌糸体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、きのこ類の培養技術の分野に属し、特に、マンネンタケを培養して高純度の菌糸体を製造する技術に関する。
【０００２】
【従来の技術とその課題】
きのこ類は、低カロリーの健康食品として注目されている。特にマンネンタケは、中国名で霊芝と呼ばれるように古来不老不死の霊薬とされ、現在も刻んだり、そのまま煎じたりして食されている。さらに、近年は、マンネンタケの菌糸体を加工した粉末、ドリンク、錠剤なども数多く出現している。このため、安価で入手容易な材料、例えば、おがくずと米糠を用いてマンネンタケを培養し、菌糸体（ｍｙｃｅｌｉｕｍ）を増殖することも試みられている。しかしながら、従来の方法は純度の高い菌糸体を得るためには必ずしも満足すべきものではない。例えば、おがくず＋米糠を用いる培養の場合、菌糸体の純度は、せいぜい３０〜４０重量％であることが見出されている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、単純な培地を用いて高純度のマンネンタケ菌糸体が得られることを見出した。すなわち、本発明は、もち米とグルコースから成る培地を用いてマンネンタケを培養することを特徴とするマンネンタケ菌糸体の製造方法を提供するものである。
驚くべきことに、本発明における培地は、本質的にもち米とグルコース（ぶどう糖）のみから成り、その他の成分を含有しなくても、きわめて菌糸体含有量の高い培養物を産生させることができる。本発明に従いもち米とグルコースから成るシンプルな培地を用いることにより高純度のマンネンタケ菌糸体が得られる詳細な理由は未だ判らないが、アミロペクチンを多量に含むもち米の組織がマンネンタケの培養に適しているものと推測される。
【０００４】
【発明の実施の形態】
本発明に従う培地用のもち米（餅米）としては、特に限定されるものではなく、いろいろな品種のものが利用可能であるが、好適な例としては、ヒゴモチ、アサヒモチなどが挙げられ、その他、ヒヨクモチ、ヒメノモチ、ハッサクモチなど各種の水稲もち米および陸稲もち米を用いることができる。グルコースはＤ‐グルコースである。
【０００５】
培地は、もち米を蒸したものにグルコースを混合することによって調製される。通常、重量比でもち米２に対してグルコースを約１の割合で用い、オートクレーブにかけて滅菌し、マンネンタケ（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｉｕｍ）の種菌を植菌して培養を行う。培養は、好気条件下に２５℃の温度において、通常２カ月半〜３カ月間実施する。
【０００６】
本発明に従うこのような培養により、マンネンタケの内部標準物質（苦味成分）として知られたガノデリン酸（ｇａｎｏｄｅｒｉｃ  ａｃｉｄ）を多量に含有する高純度のマンネンタケ菌糸体が得られる。なお、ガノデリン酸は、高血圧降下作用を有することでも知られている。このようにして得られたマンネンタケ菌糸体を食品素材として利用するためには、該菌糸体を培地から抽出することが必要であるが、マンネンタケ菌糸体中のガノデリン酸は、熱には比較的強いが抽出過程で長時間加熱すると壊れてしまう。
【０００７】
本発明者は、マンネンタケ菌糸体中に含有されているガノデリン酸を破壊することなく菌糸体を培地から抽出処理する技術を確立した。かくして、本発明の特に好ましい態様においては、上記の培養後の培養物を５５℃〜６０℃の温度下に繊維素分解酵素（セルラーゼ）を用いて抽出処理する工程が含まれる。セルラーゼは、通常、温水１リットルに対して約６００〜６４０ｇ溶解して使用される。
【０００８】
さらに、このように抽出処理したままの状態の菌糸体は水分を多く含有しており、食品素材として長時間保存する場合、腐敗する可能性が高い。そこで、本発明の好ましい態様に従えば、抽出物を乾燥粉末化する工程が含まれる。乾燥粉末化は、凍結真空乾燥機やスプレードライヤー（噴霧式加熱乾燥機）などを用いて行われる。
【０００９】
上述した本発明の方法によって得られたマンネンタケ菌糸体は、きわめて高純度であり、後に定義するようなマンネンタケ含有率に従えば９５％以上の値を示すことが明らかにされている。したがって、本発明は、別の視点として、上述したような方法によって製造され、９５重量％以上の菌糸体純度を有するマンネンタケ菌糸体を提供する。
【００１０】
本発明によって得られたマンネンタケ菌糸体は、高純度のマンネンタケ成分を含有した優れた健康食品素材として各種の応用が可能である。例えば、マンネンタケ（霊芝）菌糸体粉末にβ−サイクロデキストリンを加え、防湿性を高めたものに酸味料で味付けしたものを顆粒状や打錠した錠剤として利用される。また、マンネンタケ菌糸体粉末にβ−サイクロデキストリンを加え、防湿性を高めたものに、ビタミンＥ（酸化防止）、サフラワー油、乳化剤を加えてエマルジョン化したものをソフトカプセルに充填した形態で使用することもできる。
【００１１】
【実施例】
以下、本発明の特徴をさらに明瞭にするため、実施例に沿って本発明を説明する。
菌糸体の培養
蒸したもち米２に対しグルコース１の割合で調製した培地（もち米：ヒゴモチ）をオートクレーブにかけて滅菌し、これにマンネンタケの種菌を植菌し、２５℃において８０日間好気条件下に培養した。培養後５５℃〜６０℃の温水１リットルに対し、繊維素分解酵素〔セルラーゼ・オノズカＳ、ヤクルト薬品工業（株）製〕を１０ｇの割合で溶解させた溶液を用いて培養物を抽出処理した。その後、抽出された菌糸体含有率を凍結真空乾燥機〔共和真空技術（株）製〕を用い、凍結真空乾燥することによりマンネンタケ（霊芝）菌糸体粉末を得た。この粉末をサンプル１とする。
なお、比較のために、以下のようなサンプルを調製した（培養温度、期間などは、上記の場合と実質的に同じである）。
サンプル２：もみがら＋米糠を用いて培養し、酵素剤で処理、抽出した霊芝菌糸体粉末。
サンプル３：おがくず＋米糠を用いて培養し、子実体（傘の部分）まで成長させ、子実体を削って粉末化したもの。
【００１２】
菌糸体含有率（純度）の測定
［試料及び標準物質の調製］
イ．試料の調製
１．サンプル薬１０ｇを精秤し水１００ｍｌを加えて溶かし（必要に応じて加温する）、これにエチルアルコール１００ｍｌを加えて、よく振り混ぜた後濾過する。残留物を水：エチルアルコール（１：１）２００ｍｌで同様に操作する。
２．濾過物を合わせて減圧下で濃縮し全量を１０ｍｌ以下にする。この濃縮物を水２００ｍｌに分散させ、クロロホルム５０ｍｌで３回抽出する。クロロホルム層を合わせ５％炭酸水素ナトリウム水溶液５０ｍｌで３回抽出する。
３．水層を合わせて２Ｎ塩酸にてｐＨ３に調整し、クロロホルム５０ｍｌで３回抽出する。クロロホルム層を合わせ、重量概知のフラスコに移し、クロロホルムを減圧下で留去し、残留物をシリカゲルを入れたデシケーター中で２４時間乾燥した後その重量を量る。
【００１３】
ロ．標準物質の調製
＜子実体または培養物の水による抽出物を加工した製品の場合＞
１．サンプル１〜３の乾燥物（粉末）約１０ｇを精秤し、水５００ｍｌを加え３０分間ウォーターバス上でかき混ぜながら加熱した後濾過する。
２．残留物を水５００ｍｌずつ２回同様に操作し、全濾液を合わせて減圧下で濃縮し全量を１０ｍｌ以下とする。
３．濃縮物を水２００ｍｌに分散させ、クロロホルム５０ｍｌで３回抽出する。クロロホルム層を合わせ、５％炭酸水素ナトリウム水溶液５０ｍｌで３回抽出する。
４．水層を合わせ２Ｎ塩酸にてｐＨ３に調整し、クロロホルム５０ｍｌで３回抽出する。クロロホルム層を合わせ重量概知のフラスコに移し、クロロホルムを減圧下で留去し、残留物をシリカゲルの入ったデシケーター中で２４時間乾燥後重量を量る。
【００１４】
［確認試験］
酸性クロロホルム抽出により得たサンプル３ｍｇ〜１０ｍｇを正確に量り、内標準溶液１ｍｌを正確に加えて、サンプル溶液とする。別に原料の霊芝（マンネンタケ）乾燥物の酸性クロロホルム抽出により得た標準物質３ｍｇ〜１０ｍｇを正確に量り、内標準溶液１ｍｌを正確に加えて標準溶液とする。
サンプル溶液及び標準溶液１０μｌにつき次の条件で液体クロマトグラフ法により試験を行う時、サンプル溶液及びクロマトグラム及び標準溶液のクロマトグラムに同じ特有なパターンが認められる。
【００１５】
＜培養物を加工した場合＞
内標準溶液：ピレンのエタノール溶液（１０μｇ／ｍｌ）
操作条件
検出器：紫外吸光光度計（測定波長２１０ｎｍ）
カラム：内径４ｍｍ、長さ１５〜２０ｃｍのステンレス管に５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填する。
カラム温度：室温
移動相：ＰＨ６．５のリン酸水素カリウム・リン酸水素二ナトリウム緩衝液：メタノール混液（９：２０）。
流量：ピレンの保持時間が約３０分になるように調整する。
【００１６】
［定量法］
サンプル及び標準物質の調製で得られた酸性クロロホルム可溶物の重量を用い、次式によりマンネンタケ含有率を求める。
マンネンタケ（霊芝）含有率（乾燥物換算）＝［サンプルの酸性クロロホルム可溶分量（ｍｇ）／サンプルの量（ｇ）］／［標準物質の酸性クロロホルム可溶物量（ｍｇ）／標準培養物の乾燥重量（ｇ）］×１００
この式によるマンネンタケ（霊芝）含有率は、従来よりマンネンタケの内部標準物質として知られるガノデリン酸含有率に対応するものと考えられる。
【００１７】
［結果］
0003597648.tif 000002
本発明に従いもち米＋グルコースを用いて培養したマンネンタケ菌糸体粉末はきわめて高い含有率（９７％）を示した。