(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(VII)：ＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＡＴＧＧＧＧＧＴＣＧ
からなる、表１中の番号03、05または06の改変されたオリゴヌクレオチド。
【請求項２】
化学合成による請求項１記載のオリゴヌクレオチドの製造方法。
【請求項３】
請求項１記載のオリゴヌクレオチド少なくとも１種類を生理学的に許容される賦形剤と混合することからなるＨＳＶ−１感染症の診断または治療のための医薬の製造方法。
【請求項４】
請求項１記載のオリゴヌクレオチドを含有するＨＳＶ−１感染症の診断または治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、少なくとも１個の非末端ピリミジンヌクレオシドが改変されている新規な安定化されたオリゴヌクレオチドおよびそれらのウイルス感染症、癌またはインテグリンもしくは細胞−細胞受容体が活性な疾患の診断または治療薬としての使用に関する。
【０００２】
アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯ）およびトリプル−ヘリックス−形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）は、インビトロおよびインビボの両者において多数の系で特異的な遺伝子発現インヒビタ−であることが証明されている［Ｕｈｌｍａｎｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９０，９０，５４３；Ｍｉｌｌｉｇａｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９３，３６，１９２３；Ｓｔｅｉｎ  ＆  Ｃｈｅｎｇ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９３，２６１，１００４］。
【０００３】
天然に存在するホスホジエステル（ＰＯ）オリゴヌクレオチドを用いる場合の大きな問題のひとつは細胞中および細胞培養培地中の両者における核酸加水分解活性の範囲で急速に分解することである。ある範囲の化学的改変がオリゴヌクレオチドの安定化に使用されてきた。先行技術の総説にはたとえば、Ｍｉｌｌｉｇａｎら（前出）およびＵｈｌｍａｎｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ（前出）がある。核酸加水分解による分解に対する安定化は、ホスフェート橋部、糖単位、核酸塩基の改変もしくは置換、またはオリゴヌクレオチドの糖−ホスフェート骨格の置換によって行うことができる。ホスフェート橋（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｒｉｄｇｅ）は核酸加水分解の攻撃の中心であることから、とくに多数のヌクレオシド間橋部（ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｂｒｉｄｇｅ）の改変が報告されている。最も頻繁に用いられるヌクレアーゼ抵抗性ヌクレオシド間橋部は、ホスホロチオエート（ＰＳ）、メチルホスホネート（ＭｅＰ）およびホスホロジチオネ−ト（ＰＡ）橋部である。
【０００４】
改変の導入は，ヌクレアーゼに対する安定性のみでなく、同時にアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはトリプル−ヘリックス−形成オリゴヌクレオチドの多くの特性、たとえばそれらの細胞への侵入能力、ＲＮアーゼＨの活性化およびそれらがＲＮＡ（ＡＯの場合）もしくはＤＮＡ（ＴＦＯの場合）とハイブリダイズする能力等も変化させることに留意すべきである。さらに、ヌクレアーゼに対する安定性の基準としてよく用いられる血清の安定性は必ずしも細胞内の活性を反映しないとの指摘がある［Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ  ｉｎ“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ｃｒｏｏｋｅ  ＆  Ｌｅｂｌｅｕ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９３，第９章，１４９頁以下］。これは、ヌクレアーゼに対する抵抗性のほかに、何故アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはトリプル−ヘリックス−形成オリゴヌクレオチドの生物活性が、このような改変の質についての情報を与えるかの理由である。
【０００５】
このような改変を行うのに理想的なオリゴヌクレオチドの位置の問題に関しては以下の戦略が開発されている［Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ（前出），Ｕｈｌｍａｎｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ（前出），Ｍｉｌｌｉｇａｎら（前出）］。
【０００６】
Ｉ）  すべてのヌクレオシド間橋部の交換、たとえば全−ＰＳオリゴヌクレオチドの製造
この交換はヌクレアーゼに極めて安定なオリゴヌクレオチドを与える。たとえば、全−ＰＳオリゴヌクレオチドのエンドヌクレアーゼ（Ｓ１ヌクレアーゼ）およびエンド／エキソヌクレアーゼＰ１による分解はＰＯオリゴヌクレアーゼに比べてファクター２〜４５までの低下によって示されている［Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９８８，１６，１７６３］。全−ＰＳオリゴヌクレオチドは無傷細胞においても抵抗性を示す。アフリカツメガエル卵母細胞または胚では、マイクロインジェクションしたＰＯオリゴヌクレオチドの分解は半減期３０分で進行するが。全−ＰＳオリゴヌクレオチドは同じ条件下で、３時間を越える半減期を有する［Ｗｏｏｌｆら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９０，１８，１７６３］。全−ＭｅＰオリゴヌクレオチドもヌクレアーゼに対して極めて強い抵抗性を示す。
【０００７】
全−ＰＳまたは全−ＭｅＰオリゴヌクレオチドの欠点は、ＰＯオリゴヌクレオチドに比べて、標的ＲＮＡと安定なハイブリッドを形成する能力が低下していることである。全−ＰＳオリゴヌクレオチドの他の欠点は非特異的（「非アンチセンス」）作用であり、これはこの種類の化合物にしばしば認められる［Ｍｉｌｌｉｇａｎら（前出）、Ｓｔｅｉｎ  ＆  Ｃｈｅｎｇ（前出）］。
【０００８】
他の均一に改変された誘導体、たとえば全−２′−Ｏ−メチル誘導体または全−α−２′−デオキシリボ誘導体もまた一般的にＲＮアーゼＨを活性化する能力を欠くという特徴がある。
【０００９】
ＩＩ）  改変および非改変ホスホジエステル橋部のコポリマー
Ｇｈｏｓｈら［Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １９９３，８，１５］は、様々なパーセンテージのＰＳ橋部を含むホスホロチオエート−ホスホジエステルオリゴヌクレオチドを記載している。それらの構造はたとえば以下のパターン［ＰＳ−ＰＯ−ＰＯ−ＰＯ］ｎ、［ＰＯ−ＰＯ−ＰＳ］ｎ、［ＰＳ−ＰＯ］ｎ、［（ＰＯ）２−（ＰＳ）２］ｎ、［ＰＯ−ＰＳ−ＰＳ］ｎに従う。彼らは、選択的翻訳阻害のためには少なくとも５０％のＰＳ橋部含量が必要であること、およびこの含量がもっと低い場合には活性は劇的に低下することを教示している。本発明は、これらの結果は正しくなく、改変が正しく（下記参照）配置されれば、ＰＳ結合の含量は５０％よりはるかに少なくても選択的阻害に十分であることを明らかにしたのである。Ｇｈｏｓｈらはさらに、以下のＩＩＩに記載するエンドキャッピング／ギャップ法を用いると良好な結果が達成されることを教示している。
【００１０】
ヌクレオシド間の橋部をひとつ置きに交互にたとえばＭｅＰ橋部で交換しても（Ｆｕｒｄａｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９８９，１７，９１９３）、均一に改変したＭｅＰオリゴヌクレオチドに比べて利点はない。たとえば、交互にＭｅＰ改変したオリゴヌクレオチドは同様にＲＮアーゼを活性化しない。比較により、交互にホスフェート−Ｏ−エチルまたはホスフェート−Ｏ−イソプロピルエステルを有するオリゴヌクレオチドおよび交互のＭｅＰオリゴヌクレオチドもまた、全−ＭｅＰあるいは全−ＰＳオリゴヌクレオチドよりも活性が低い［Ｍａｒｃｕｓ−Ｓｅｃｕｒａら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９８７，１５，５７４９］。
【００１１】
ＩＩＩ）  オリゴヌクレオチドの５′または３′末端における１、２または３ヌクレオシド間橋部の交換（エンドキャッピング）およびオリゴヌクレオチドの５′および３′末端における１、２または３ヌクレオシド間橋部の交換（ギャップ法）
エンドキャッピングの効果に関しては、結果は場合によって一致しない。とくにＰＳ、ＰＡまたはＭｅＰ橋部による３′エンドキャッピングは、ヌクレアーゼに対する保護として記載されている［Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ（前出）、Ｍｉｌｌｉｇａｎら（前出）］。３′エンドキャッピングによる保護は一連の他の改変によっても達成される。３′−３′エンドキャッピングは、核酸加水分解に対する保護として様々な著者により記載されている［Ｓｈａｗら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９１，１９，７４７；Ｓｅｌｉｇｅｒら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １９９１，１０，４６９］、３′エンドキャッピングの他の変形には、３′末端への接合分子、たとえば３′−ドデカノールもしくは３′−アクリジン［Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ，全出］、または３−アミノ−２，３−プロパンジオール［ＷＯ９２／２０６９７］の導入があり、これもヌクレアーゼに対する安定性を増大させる。ギャップ法、すなわちオリゴヌクレオチドの５′および３′末端における１、２または３ヌクレオシド間橋部の交換は、ＰＳオリゴヌクレオチドとは異なり、大部分の均一な改変はＲＮアーゼＨを活性化する能力の喪失、したがって活性の著しい喪失を伴うことから、とくに有利なことが明らかにされている。この場合も、広範囲の誘導体、改変ホスホジエステル橋部、改変された糖、改変された塩基たとえばＭｅＰ−、ＰＳ−、ＰＡ−、２′−Ｏ−アルキル−または２′−Ｆ−誘導化オリゴヌクレオチドが安定化の目的に使用された。これらの結果は、Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ（前出）に一致する。ギャップ内では、２〜４のＰＤ結合の配列がＲＮアーゼＨの活性化に十分であることになる。
【００１２】
Ｇｉｌｅｓら［Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １９９３，８，３３］は、非改変ＰＯ橋部のギャップを８から２橋部に連続的に低下させたキメラのメチルホスホネート−ホスホジエステルを記載している。ギャップが低下すると細胞への取り込みは改善する傾向が見出されたが、オリゴヌクレオチドのアンチセンス活性は検討されなかった。
【００１３】
様々な戦略の間の興味ある比較を、Ｈｏｋｅら［Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９１，１９，５７４３］に見ることができる。著者らは細胞培養中のＨＳＶ−１に対するある範囲のＰＳ−改変アンチセンスオリゴヌクレオチドの活性を比較している。彼らの所見は３′、または３′＋５′をエンドキャップしたオリゴヌクレオチド（最初の３つのヌクレオシド橋部は各場合とも改変されている）は血清中、全−ＰＳオリゴヌクレオチドと同様に、ヌクレアーゼによる分解に対して十分保護されていることを確認するものである。これに反し、内部改変（３ＰＳ橋部）オリゴヌクレオチド、および５′末端のみがキャップされたオリゴヌクレオチド（この場合も、最初の３つのヌクレオシド橋部が改変されている）は迅速に分解される。これに反し、著者らは、５′もしくは３′エンドキャッピングまたはそれらの両者も、細胞内での活性には十分ではないことを見出し、彼らは細胞中におけるヌクレア−ゼに対する十分な安定性を達成するには、均一な改変（全−ＰＳ）が必要であると結論した。
【００１４】
驚くべきことに、ヌクレアーゼに抵抗性になると、ピリミジンヌクレオシドがオリゴヌクレオチドにおける弱点であることが見出されたのである。これらの部位がヌクレアーゼに対する抵抗性を増大させる改変によって保護されると、これは一方では、安定性および活性に顕著な改善を生じる。
【００１５】
したがって、本発明は、式
0003558230.tif 000002
0003558230.tif 000003
（式中，少なくとも１個の非末端ピリミジンヌクレオシドは改変されている）のオリゴヌクレオチドに関する。
【００１６】
好ましいオリゴヌクレオチドは、２〜１０、とくに３〜６の非末端ピリミジンヌクレオシドが改変され、とくに８以下の以後のヌクレオチドが改変されているオリゴヌクレオチドである。とくに好ましいオリゴヌクレオチドは、さらに５′および／または３′末端が改変された、とくに最初の１〜５、とくに１〜３、とくに２〜３のヌクレオチドが５′および／または３′末端に、好ましくはホスホロチオエート橋部、ホスホロジチオエート橋部および／またはメチルホスホネート橋部によって連結しているオリゴヌクレオチドである。とくに好ましいものは、互いに連結している少なくとも１〜４、とくに３〜４の非改変ヌクレオチドの１または２以上のグループを含有する改変オリゴヌクレオチドである。
【００１７】
たとえば、表１にＨＳＶ−１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド０１を示す。これは５′および３′末端上がＰＳで二重にキャップされ、２７μＭの濃度で活性である。５′および３′末端への３つのＰＳ橋部の導入は、活性を９μＭに上昇させ、また、シトシン基Ｃの３′へのさらに１個のＰＳ橋部の導入でも同じ効果が達成される（アンチセンスオリゴヌクレオチド０３）。ＴおよびＣの５′または３′への２個のＰＳ橋部の導入（アンチセンスオリゴヌクレオチド０５）、またはＴおよびＣへの５′もしくは３′への４個のＰＳ橋部の導入（アンチセンスオリゴヌクレオチド０６）はさらにＭＩＣ値（最小阻止濃度）それぞれ３および１μＭの活性への上昇をもたらす。相当する全−ＰＳ誘導体のＭＩＣ値も１μＭである。これは、ピリミジンヌクレオシドの保護によって、全−改変オリゴヌクレオチドに匹敵する安定性および活性の増大が、しかもこのような激烈な変化による上述の欠点を回避して、達成できたことを意味する。
【００１８】
ピリミジン位置ならびに５′および／または３′末端における安定化は、互いに独立に、以下のように行うことができる。
ａ）  ３′および／または５′ホスホジエステル橋部の、たとえばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホロアミデート、ボラノホスフェ−ト、ホスフェート−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、ホスフェート−［（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル、２，２，２−トリクロロジメチルエチルホスホネート、（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルホスホネート、または（Ｃ６〜Ｃ１２）−アリールホスホネート橋部による置換。
ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホロアミデート、ホスフェート−Ｏ−メチルエステル、ホスフェート−Ｏ−エチルエステル、ホスフェート−Ｏ−イソプロピルエステル、メチルホスホネートまたはフェニルホスホネート橋部による置換が好ましい。ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートまたはメチルホスホネート橋部による置換がとくに好ましい。ホスホロチオエート橋部による置換が最も好ましい。
【００１９】
Ｒ１およびＲ２は互いに独立に水素、Ｃ１〜Ｃ１８−アルキル、Ｃ６〜Ｃ２０−アリール、（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルまたは−（ＣＨ２）ｃ−［ＮＨ（ＣＨ２）ｃ］ｄ−ＮＲ３Ｒ３（式中、ｃは２〜６の整数であり、ｄは０〜６の整数であり、Ｒ３は互いに独立に水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキルまたはＣ１〜Ｃ４−アルコキシ−Ｃ１〜Ｃ６−アルキルである）であり、Ｒ１およびＲ２は好ましくは水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキルもしくはメトキシエチルであり、とくに好ましくは水素、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルもしくはメトキシエチルである。Ｒ１およびＲ２はそれらが結合した窒素原子とともに、さらにＯ、ＳおよびＮからなる系よりのヘテロ原子を含有していてもよい５〜６員のヘテロ環を形成することもできる。
【００２０】
ｂ）  ３′または５′ホスホジエステル橋部の、デホスホノ橋部による置換［たとえば  Ｕｈｌｍａｎｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ  ｉｎ“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，２０巻：“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ”，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ  １９９３，１６章、３５５頁以下参照］、たとえばホルムアセタール、３′−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチルヒドラゾ、ジメチレンスルホンまたはシリル基による置換。
ホルムアセタールおよび３′−チオホルムアセタールによる置換が好ましい。
【００２１】
ｃ）  糖−ホスフェート骨格の、たとえばモルホリノヌクレオシドオリゴマーによる置換［Ｅ．Ｐ．Ｓｔｉｒｃｈａｋら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７（１９８９），６１２９］。
【００２２】
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボースの、たとえばα−Ｄ−２′−デオキシリボース、Ｌ−２′−デオキシリボース、２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボース、２′−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルリボース、２′−ＮＨ２−２′−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロフラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノースおよび炭素環［たとえばＦｒｏｅｈｌｅｒ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９２，１１４，８３２０］および開環した鎖状糖類縁体［たとえばＶａｎｄｅｎ−ｄｒｉｅｓｓｃｈｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｒｒｏｎ  １９９３，４９，７２２３］もしくは二環糖類縁体［たとえば，Ｍ．Ｔａｒｋｏｖら、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  １９９３，７６，４８１］による置換。
２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボース、２′−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルリボース、または２′−ＮＨ２−２′−デオキシリボースによる置換が好ましい。
２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル−リボース、もしくは２′−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ４）アルケニル−リボース、または２′−ＮＨ２−２′−デオキシリボースによる置換がとくに好ましい。
とくに、２′−Ｏ−メチル−、２′−Ｏ−アリル−、または２′−Ｏ−ブチルリボースによる置換が最も好ましい。
【００２３】
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基の、たとえば、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−アミノウラシル、プソイドウラシル、ジヒドロウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシルまたは５−ブロモシトシンによる置換。
５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシルまたは５−ブロモシトシンによる置換が好ましい。
５−（Ｃ３〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシンまたは５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシンによる置換がとくに好ましい。
とくに、５−ペンチニルシトシン、５−ヘキシニルウラシルまたは５−ヘキシニルシトシンによる置換が最も好ましい。
【００２４】
上述の改変中、好ましい改変は群ａ）、ｂ）、ｃ）およびｄ）の改変であり、とくに好ましい改変は群ａ）およびｄ）の改変であり、最も好ましい改変は群ａ）の改変である。
【００２５】
さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは、たとえば３′および／または５′末端において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはトリプル−ヘリックス−形成オリゴヌクレオチドの特性（たとえば、細胞透過性、ヌクレアーゼによる分解、標的ＲＮＡ／ＤＮＡへの親和性、ファーマコキネティクス）に増強作用を有する分子と連結（接合）させることができる。たとえば、ポリリジン、挿入剤たとえばピレン、アクリジン、フェナジン、フェナンスリジン、蛍光化合物たとえばフルオレセイン、架橋剤たとえばプソラレン、アジドプロフラビン、ならびに親油性分子たとえばＣ１２〜Ｃ２０−アルキルもしくはそれらの誘導体、たとえばヘキサメチレンテトラミン、テルペンたとえばファルネゾールもしくはフィトール、脂質たとえば１，２−ジヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロール、ステロイドたとえば胆汁酸、コレステロールもしくはテストステロン、ビタミンたとえばビタミンＥ、ポリ−もしくはオリゴエチレングリコール、（Ｃ１２〜Ｃ１８）−アルキルホスフェート−ジエステルまたは−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｏ−（Ｃ１２〜Ｃ１８）−アルキルとの接合体を挙げることができる。親油性分子たとえばＣ１２〜Ｃ２０−アルキル、ステロイドたとえばコレステロールもしくはテストステロン、ポリ−もしくはオリゴエチレングリコール、ビタミンＥ、挿入剤たとえばピレン、（Ｃ１４〜Ｃ１８）−アルキルホスフェート−ジエステル、または−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｏ−（Ｃ１２〜Ｃ１６）−アルキルとの接合体が好ましい。
【００２６】
このようなオリゴヌクレオチド接合体の製造は、本技術分野の熟練者には既知である（たとえば、Ｕｈｌｍａｎｎ  ＆  Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９０，９０，５４３；Ｍ．Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｏｏｋｅ  ＆  Ｌｅｂｌｅｕ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９３，１７章，３０３頁以下；ＥＰ０５５２７６６Ａ２参照）。
【００２７】
さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは３′および／または５′末端に３′−３′および５′−５′逆位をもつことができる［たとえば、Ｋｏｇａら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５６（１９９１），３７５７の記載］。
【００２８】
本発明はさらに、本発明の化合物の本技術分野の熟練者に既知の方法とくに化学合成による製造方法、本発明の化合物の医薬の製造のための使用、本発明のオリゴヌクレオチドを生理学的に許容される賦形剤および必要に応じて適当な添加剤および／または補助剤と混合することからなる医薬の製造法に関する。
【００２９】
本発明はまた、全く一般的に少なくとも１個の非末端ピリミジンヌクレオシドが改変された治療的に活性なオリゴヌクレオチドの医薬の製造のための使用を包含する。治療的に活性なオリゴヌクレオチドとは、一般的にアンチセンスオリゴヌクレオチド、トリプル−ヘリックス−形成オリゴヌクレオチド、アプタマー（特異的標的分子たとえば蛋白質または受容体に結合できるＲＮＡまたはＤＮＡ分子；たとえば、Ｌ．Ｃ．Ｂｏｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９２，３５５，５６４）またはリボザイム（触媒性ＲＮＡ、たとえば、Ｃａｓｔａｎｅｔｔｏら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．Ｅｕｋａｒ．Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．１９９２，２，３３１参照）、とくにアンチセンスオリゴヌクレオチドを意味するものと理解すべきである。
【００３０】
さらに本発明は、少なくとも１個の非末端、改変ピリミジンヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドの診断薬としての、たとえば生物学的サンプル中の特定の二本鎖または一本鎖核酸分子の存在もしくは不存在または量を検知するための使用に関する。
【００３１】
本発明のこれらの使用のためには、オリゴヌクレオチドは長さ約６〜１００、好ましくは約１０〜４０、とくに約１２〜２５ヌクレオチドを有する。この場合も上述の好ましい範囲、改変および接合は同様に適用される。
【００３２】
本発明の医薬はたとえばウイルスによって起こる疾患たとえばＨＩＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、インフルエンザ、ＶＳＶ、Ｂ型肝炎またはパピローマウイルスによって起こる疾患の処置に使用することができる。
【００３３】
このような標的に対して活性な本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの例を以下に掲げる。
ａ）ＨＩＶに対してたとえば
【化１】
0003558230.tif 000004
【化２】
0003558230.tif 000005
ｂ）ＨＳＶ−１に対して、たとえば
【化３】
0003558230.tif 000006
【００３４】
本発明の医薬はまた、たとえば癌の処置に適当である。たとえば、癌の形成または増殖に関係する標的に向けられたオリゴヌクレオチド配列を使用できる。このような標的の例は以下の通りである。
１）  核癌蛋白質、たとえばｃ−ｍｙｃ、Ｎ−ｍｙｃ、ｃ−ｍｙｂ、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｆｏｓ／ｊｕｎ、ＰＣＮＡ、ｐ１２０。
２）  細胞質／膜−関連癌蛋白質、たとえばＥＪ−ｒａｓ、ｃ−Ｈａ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ｒｒｇ、ｂｃｌ−２、ｃｄｃ−２、ｃ−ｒａｆ−１、ｃ−ｍｏｓ、ｃ−ｓｒｃ、ｃ−ａｂｌ。
３）  細胞受容体、たとえばＥＧＦ受容体、ｃ−ｅｒｂＡ、レチノイド受容体、プロテイン−キナーゼ−調節サブユニット、ｃ−ｆｍｓ。
４）  サイトカイン、成長因子、細胞外マトリックス、たとえばＣＳＦ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、  ＩＬ−２、ＩＬ−４、ｂＦＧＦ、ミエロブラスチン、フィブロネクチン。
【００３５】
このような標的に対して活性な本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの例を以下に掲げる。
ａ）  ｃ−Ｈａ−ｒａｓに対して、たとえば
【化４】
0003558230.tif 000007
ｃ）  ｃ−ｍｙｃ、たとえば
【化５】
0003558230.tif 000008
ｄ）  ｃ−ｍｙｂ、たとえば
【化６】
0003558230.tif 000009
ｅ）  ｃ−ｆｏｓ、たとえば
【化７】
0003558230.tif 000010
ｆ）  ｐ１２０、たとえば
【化８】
0003558230.tif 000011
ｇ）  ＥＧＦ受容体、たとえば
【化９】
0003558230.tif 000012
ｈ）  ｐ５３腫瘍サプレッサー、たとえば
【化１０】
0003558230.tif 000013
ｊ）  ｃｄｃキナーゼに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
【化１１】
0003558230.tif 000014
ｋ）  ＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
【化１２】
0003558230.tif 000015
ｌ）  ＩＧＦ−１に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
【化１３】
0003558230.tif 000016
ｍ）  ｂＦＧＦ翻訳開始部位に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
【化１４】
0003558230.tif 000017
ｎ）  ｂＦＧＦコドン５８ｆｆに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
【化１５】
0003558230.tif 000018
ｏ）  ＦＧＦ受容体に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
【化１６】
0003558230.tif 000019
【００３６】
本発明の医薬はさらに、たとえばインテグリンまたは細胞−細胞接着受容体、たとえばＶＬＡ−４、ＶＬＡ−２、ＩＣＡＭもしくはＥＬＡＭによって影響される疾患の処置に適当である。
【００３７】
このような標的に対して活性な本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの例を以下に掲げる。
【化１７】
0003558230.tif 000020
【００３８】
医薬は、たとえば経口的に投与できる薬物製剤の形態で、たとえば錠剤、コ−ト錠、硬質もしくは軟質カプセル剤、溶液、乳化液または懸濁液の形態で使用することができる。医薬はまた、経直腸的にたとえば坐剤の形態で、または非経口的にたとえば注射用溶液の形態で投与することもできる。薬物製剤の製造には、これらの化合物は，治療的に不活性な有機および無機賦形剤中に導入することができる。錠剤、コ−ト錠および硬質ゼラチンカプセル剤用のこのような賦形剤の例には、乳糖、ト−モロコシデンプンもしくはその誘導体、獣脂およびステアリン酸もしくはその塩がある。溶液製剤に適当な賦形剤は水、ポリオール、スクロース、転化糖およびグルコースがある。注射用溶液に適当な賦形剤は水、アルコール、ポリオール、グリセロールおよび植物油がある。坐剤用に適当な賦形剤は、植物油および硬化油、ワックス、脂肪および半液体ポリオールである。薬物製剤にはまた防腐剤、溶媒、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、フレ−バー、浸透圧調節用の塩、緩衝剤、コーティング剤、抗酸化剤および必要に応じて、他の治療活性物質を添加することができる。
【００３９】
好ましい投与形態は注射である。この目的には、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、液体溶液中に、好ましくは生理的に許容される緩衝液たとえばハンクス液またはリンゲル液中に製剤化される。しかしながら、アンチセンスオリゴヌクレオチドは固体の形態に製剤化して、使用前に溶解または懸濁することもできる。全身投与に好ましい用量は体重１ｋｇあたり１日に約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇである。
【００４０】
以下の実施例は、本発明をさらに詳細に例示するものである。
実施例１
オリゴヌクレオチドの合成
非改変オリゴヌクレオチドは自動ＤＮＡシンセサイザー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，３８０Ｂまたは３９４型）を用い、標準ホスホラミダイト化学およびヨ−素酸化によって合成した。混合ホスホロチオエートおよびホスホジエステルオリゴヌクレオチドにおけるホスホロチオエート橋部の導入には、酸化はヨー素に代えてＴＥＴＤ（テトラエチルチウラムジスルフィド）を用いて実施した（Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＵｓｅｒ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ６５）。オリゴヌクレオチドを固体支持体（ＣＰＧまたはテンタゲル）から分離したのち、保護基を濃ＮＨ３を用いて５５℃で１８時間処理して除去し、オリゴヌクレオチドを最初にブタノ−ルで沈殿させて精製した［Ｓａｗａｄｏｇｏ，Ｖａｎ  Ｄｙｋｅ，  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９（１９９１）６７４］。ついで０．５Ｍ−ＮａＣｌ溶液から、２．５容量部のエタノ−ルを用いて沈殿させるとナトリウム塩が得られた。
【００４１】
［４−（１−ピレニル）ブタニル］ホスホジエステルはＪ．Ｓ．Ｍａｎｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．３（１９９２）５５４の記載のようにして、５′末端に導入した。
【００４２】
オリゴヌクレオチドは以下のようにして分析した。
ａ）  ２０％アクリルアミド、８Ｍ尿素中分析ゲル電気泳動および／または
ｂ）  ＨＰＬＣ分析：Ｗａｔｅｒｓ  ＧｅｎＰａｃｋ  ＦＡＸ，ＣＨ３ＣＮ（４００ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（１．６Ｌ）、ＮａＨ２ＰＯ４（３．１ｇ）、ＮａＣｌ（１１．７ｇ）、ｐＨ６．８（０．１Ｍ−ＮａＣｌ）から、ＣＨ３ＣＮ（４００ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（１．６Ｌ）、ＮａＨ２ＰＯ４（３．１ｇ）、ＮａＣｌ（１７５．３ｇ）、ｐＨ６．８（１．５Ｍ−ＮａＣｌ）への勾配および／または
ｃ）  毛細管ゲル電気泳動ＢｅｃｋｍａｎｎキャピラリーｅＣＡＰＴＭ、Ｕ  １００Ｐゲルカラム、長さ６５ｃｍ、１００ｍｍ  Ｉ．Ｄ，，ウインドウ一端から１５ｃｍ、緩衝液１４０μＭトリス、３６０ｍＭホウ酸、７Ｍ尿素、および／または
ｄ）  電気スプレ−質量分析
オリゴヌクレオチドの分析により、それらの純度はいずれの場合も９０％を越えることが明らかにされた。
【００４３】
合成されたオリゴヌクレオチドの構造は表１に示す。
【００４４】
実施例２
試験物質のヘルペスウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の試験
ヒトに病原性を示す範囲のヘルペスウイルスに対する試験物質の抗ウイルス活性を細胞−培養試験系において試験した。
試験には、サル腎臓細胞（Ｖｅｒｏ、２×１５５／ｍｌ）を９６−ウエルのマイクロタイタープレート中血清含有ダルベッコＭＥＭ（５％ウシ胎児血清ＦＣＳ）中に接種し５％ＣＯ２下３７℃で２４時間インキュベ−トする。ついで血清含有培地を吸引して除去し、細胞を血清を含まないダルベッコＭＥＭ（−ＦＣＳ）を用いて２回洗浄する。
【００４５】
試験物質は予めＨ２Ｏで６００μＭの濃度に希釈し、−１８℃で保存する。試験を実施するためには、ダルベッコの最小必須培地（ＭＥＭ）中にさらに前希釈工程を行う。各試験物質希釈液１００μｌを無血清ダルベッコＭＥＭ（−ＦＣＳ）１００μｌとともに洗浄細胞に加える。
【００４６】
５％ＣＯ２下３７℃で３時間インキュベ−トしたのち、細胞に単純ヘルペスウイルス１型（ＡＴＣＣ  ＶＲ７３３、ＨＳＶ−１Ｆ株）または単純ヘルペスウイルス２型（ＡＴＣＣ  ＶＲ７３４、ＨＳＶ−２Ｇ株）を３日以内に細胞シートを完全に破壊する濃度で用いて感染させる。ＨＳＶ−１の場合には感染密度はウエルあたり５００プラーク形成単位（ＰＦＵ）、ＨＳＶ−２の場合は３５０ＰＦＵ／ウエルとする。ついで試験バッチに１００Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＭＥＭ中８０μＭ〜０．０４μＭ濃度の試験物質をを加える。各試験とも二重に実施し、ただし対照については各プレートごとに８回反復して行う。
【００４７】
バッチを５％ＣＯ２下３７℃で１７時間インキュベートしする。総インキュベーション時間２０時間ののちに、細胞培養液を顕微鏡下に観察して、試験物質の細胞毒性を測定する。最大耐容用量（ＤＴＭ）とは、上述の試験条件下、顕微鏡下に観察できる細胞傷害を生じないそのプレパレーションの最高濃度を指示して用いられる。
【００４８】
ついで、ＦＣＳを最終濃度が４％になるように加え，つづいて５％ＣＯ２下３７℃でさらに５５時間インキュベートする。この時点で、非処置感染対照には完全な細胞変性効果（ＣＰＥ）が観察される。培養細胞を顕微鏡下に観察したのち，Ｆｉｎｔｅｒ（１９６６）によって記載された生存染色法に従って、ニュートラルレッドで染色する。試験物質の抗ウイルス活性は、ウイルスによって引き起こされる細胞変性効果に対して細胞の３０〜６０％を保護するのに必要な最小阻止濃度（ＭＩＣ）として定義する。
【００４９】
【表１】
0003558230.tif 000021
【００５０】
実施例３
平滑筋細胞における試験物質の抗増殖活性の試験
以下に掲げるオリゴヌクレオチドについて、平滑筋細胞の増殖の阻害能力を試験した。試験は、Ｓ．Ｂｉｒｏら［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０（１９９３）６５４］の記載に従って実施した。すべてのオリゴヌクレオチドが、５〜２０μＭの範囲で活性を示した。ホスホロチオエート橋部（Ｐ＝Ｓ）によって置換されたホスホジエステル結合には配列中に＊で標識した。
【化１８】
0003558230.tif 000022
【００５１】
【配列表】
配列番号：１
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＩＶ
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
配列
ＡＣＡＣＣＣＡＡＴＴ  ＣＴＧＡＡＡＡＴＧＧ                                              ２０
【００５２】
配列番号：２
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＩＶ
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
配列
ＡＧＧＴＣＣＣＴＧＴ  ＴＣＧＧＧＣＧＣＣＡ                                              ２０
【００５３】
配列番号：３
配列の長さ：２８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＩＶ
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２８
配列
ＧＴＣＧＡＣＡＣＣＣ  ＡＡＴＴＣＴＧＡＡＡ  ＡＴＧＧＡＴＡＡ            ２８
【００５４】
配列番号：４
配列の長さ：２５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＩＶ
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２５
配列
ＧＣＴＡＴＧＴＣＧＡ  ＣＡＣＣＣＡＡＴＴＣ  ＴＧＡＡＡ                        ２５
【００５５】
配列番号：５
配列の長さ：３１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＩＶ
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．３１
配列
ＴＣＧＴＣＧＣＴＧＴ  ＣＴＣＣＧＣＴＴＣＴ  ＴＣＴＴＣＣＴＧＣＣ  Ａ  ３１
【００５６】
配列番号：６
配列の長さ：３１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＩＶ
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．３１
配列
ＣＴＧＴＣＴＣＣＧＣ  ＴＴＣＴＴＣＴＴＣＣ  ＴＧＣＣＡＴＡＧＧＡ  Ｇ  ３１
【００５７】
配列番号：７
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ＨＳＶ−１
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
配列
ＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣ  ＡＴＧＧＧＧＧＴＣＧ                                              ２０
【００５８】
配列番号：８
配列の長さ：１５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１５
他の情報：注＝“ｃ−Ｈａ−ｒａｓ”
配列
ＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣ  ＣＣＡＧＣ                                                                  １５
【００５９】
配列番号：９
配列の長さ：２１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２１
他の情報：注＝“ｃ−ｍｙｃ”
配列
ＧＧＣＴＧＣＴＧＧＡ  ＧＣＧＧＧＧＣＡＣＡ  Ｃ                                        ２１
【００６０】
配列番号：１０
配列の長さ：１５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１５
他の情報：注＝“ｃ−ｍｙｃ”
配列
ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧ  ＧＧＣＡＴ                                                                  １５
【００６１】
配列番号：１１
配列の長さ：１５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１５
他の情報：注＝“ｃ−ｍｙｂ”
配列
ＣＡＣＧＴＴＧＡＧＧ  ＧＧＣＡＴ                                                                  １５
【００６２】
配列番号：１２
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１８
他の情報：注＝“ｃ−ｍｙｂ”
配列
ＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴ  ＣＴＴＣＧＧＧＣ                                                      １８
【００６３】
配列番号：１３
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１８
他の情報：注＝“ｃ−ｍｙｂ”
配列
ＧＴＧＴＣＧＧＧＧＴ  ＣＴＣＣＧＧＧＣ                                                      １８
【００６４】
配列番号：１４
配列の長さ：２１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２１
他の情報：注＝“ｃ−ｆｏｓ”
配列
ＧＧＡＧＡＡＣＡＴＣ  ＡＴＧＧＴＣＧＡＡＡ  Ｇ                                        ２１
【００６５】
配列番号：１５
配列の長さ：２２
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２２
他の情報：注＝“ｃ−ｆｏｓ”
配列
ＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡ  ＴＣＡＴＧＧＴＣＧＡ  ＡＧ                                    ２２
【００６６】
配列番号：１６
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
他の情報：注＝“ｃ−ｆｏｓ”
配列
ＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣ  ＣＧＧＣＡＡＧＧＧＧ                                              ２０
【００６７】
配列番号：１７
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
他の情報：注＝“ｐ−１２０”
配列
ＣＡＣＣＣＧＣＣＴＴ  ＧＧＣＣＴＣＣＣＡＣ                                              ２０
【００６８】
配列番号：１８
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１８
他の情報：注＝“ＥＧＦ−受容体”
配列
ＧＧＧＡＣＴＣＣＧＧ  ＣＧＣＡＧＣＧＣ                                                      １８
【００６９】
配列番号：１９
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
他の情報：注＝“ＥＧＦ−受容体”
配列
ＧＧＣＡＡＡＣＴＴＴ  ＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣ                                              ２０
【００７０】
配列番号：２０
配列の長さ：１９
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１９
他の情報：注＝“ｐ５３腫瘍サプレッサー”
配列
ＧＧＧＡＡＧＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＴＧＡＧＧ                                                  １９
【００７１】
配列番号：２１
配列の長さ：２１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２１
他の情報：注＝“ｐ５３腫瘍サプレッサー”
配列
ＧＧＣＡＧＴＣＡＴＣ  ＣＡＧＣＴＴＣＧＧＡ  Ｇ                                        ２１
【００７２】
配列番号：２２
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１８
他の情報：注＝“ｃｄｃ２−キナーゼ”
配列
ＧＴＣＴＴＣＣＡＴＡ  ＧＴＴＡＣＴＣＡ                                                      １８
【００７３】
配列番号：２３
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１８
他の情報：注＝“ＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）”
配列
ＧＡＴＣＡＧＧＣＧＴ  ＧＣＣＴＣＡＡＡ                                                      １８
【００７４】
配列番号：２４
配列の長さ：２１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２１
他の情報：注＝“ＩＧＦ−１”
配列
ＴＧＡＡＧＡＣＧＡＣ  ＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴ  Ｇ                                        ２１
【００７５】
配列番号：２５
配列の長さ：１５
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１５
他の情報：注＝“ｂＦＧＦ翻訳部位”
配列
ＧＧＣＴＧＣＣＡＴＧ  ＧＴＣＣＣ                                                                      １５
【００７６】
配列番号：２６
配列の長さ：１９
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１９
他の情報：注＝“ｂＦＧＦコドン５８ｆｆ”
配列
ＣＴＧＴＡＧＴＴＴＧ  ＡＣＧＴＧＴＧＧＧ                                                  １９
【００７７】
配列番号：２７
配列の長さ：２２
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２２
他の情報：注＝“ＦＧＦ−受容体”
配列
ＧＧＣＣＣＣＴＣＣＡ  ＧＣＣＣＣＡＣＡＴＣ  ＣＣ                                    ２２
【００７８】
配列番号：２８
配列の長さ：１８
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１８
他の情報：注＝“ＶＬＡ−４”
配列
ＧＣＡＧＴＡＡＧＣＡ  ＴＣＣＡＴＡＴＣ                                                      １８
【００７９】
配列番号：２９
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
他の情報：注＝“ＩＣＡＭ”
配列
ＣＣＣＣＣＡＣＣＡＣ  ＴＴＣＣＣＣＴＣＴＣ                                              ２０
【００８０】
配列番号：３０
配列の長さ：２０
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２０
他の情報：注＝“ＩＣＡＭ”
配列
ＣＴＣＣＣＣＣＡＣＣ  ＡＣＴＴＣＣＣＣＴＣ                                              ２０
【００８１】
配列番号：３１
配列の長さ：１９
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．１９
他の情報：注＝“ＩＣＡＭ”
配列
ＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣ  ＡＴＡＧＣＧＡＧＧ                                                  １９
【００８２】
配列番号：３２
配列の長さ：２１
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２１
他の情報：注＝“ＥＬＡＭ−１”
配列
ＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴ  ＣＴＴＧＴＣＴＣＡＧ  Ｇ                                            ２１
【００８３】
配列番号：３３
配列の長さ：２２
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
ハイポセティカル：Ｎｏ
アンチセンス：Ｙｅｓ
起源：
生物名：ヒト
配列の特徴
特徴を表す記号：ｅｘｏｎ
存在位置：１．．２２
他の情報：注＝“ＥＬＡＭ−１”
配列
ＣＡＡＴＣＡＡＴＧＡ  ＣＴＴＣＡＡＧＡＧＴ  ＴＣ                        ２２