(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（II）
【化２】
0003578411.tif 000025
〔式中、
Ｒ1は、水素原子、水酸基、メトキシ、アセチルオキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ2は、水素原子、エチル、プロピオニル、アセチルまたはベンゾイルであり、
Ｒ3は、水素原子、メチルまたはフェニルであり、
Ｒ4は、水素原子、エチル、アセチル、ベンゾイルまたはβ−Ｄ−グルコピラノシルであり、
Ｒ5は、水素原子、メチル、ベンジル、アセチルまたはベンゾイルである〕
で表されるベンズアニリド型化学構造を有する化合物を有効成分として含有する発毛・育毛促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、新規なベンズアニリド型化合物及びその化合物を有効成分とする発毛・育毛促進剤に関するものである。すなわち、本発明は、
【０００３】
一般式（ＩＩ）
【化４】
0003578411.tif 000002
【０００４】
〔式中、
Ｒ1は、水素原子、水酸基、メトキシ、アセチルオキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ2は、水素原子、エチル、プロピオニル、アセチルまたはベンゾイルであり、
Ｒ3は、水素原子、メチルまたはフェニルであり、
Ｒ4は、水素原子、エチル、アセチル、ベンゾイルまたはβ−Ｄ−グルコピラノシルであり、
Ｒ5は、水素原子、メチル、ベンジル、アセチルまたはベンゾイルである〕
で表されるベンズアニリド型化学構造を有する化合物を有効成分として含有する発毛・育毛促進剤に関するものである。
【０００５】
【背景技術】
脱毛症の原因としては、栄養摂取のアンバランス、ふけの過剰発生による頭皮の生理機能の低下、末梢血管の血流量の減少による毛乳頭部位への血液供給不足による新陳代謝の低下、皮脂腺及び毛包、毛根部における男性ホルモンの関与による毛包機能の低下、精神的ストレス等が知られており、さまざまな薬剤が脱毛症等の治療に用いられている。例えば、抗アンドロジェン作用を示すエチニルエストラジオール、末梢の血管血流促進作用を示すビタミンＥ、センブリエキス、ニンジンエキス、セファランチン等、局所刺激作用を示すトウガラシチンキ、ハッカ油、１−メントール等が挙げられるが、いまだ満足すべきものがないのが現状である
【０００６】
本発明者は、先に、トリカブトの根より得られる非アコニチン型アルカロイド成分を含有する画分に顕著な発毛・育毛促進作用のあることを見出した（特願平４−１０３４３４号）。その後、さらに、非アコニチン型アルカロイド成分を検索し、種々の検討を重ねた結果、前記の一般式（ＩＩ）で表わされるベンズアニリド型化学構造を有する化合物が発毛・育毛作用の活性本体であることを見い出した。本発明は、かかる知見に基づくものである。前記一般式（ＩＩ）で表される化合物が、発毛・育毛促進作用を有することは知られていない。したがって、本発明は前記一般式（ＩＩ）で表わされる化合物を含有する新規な発毛・育毛促進剤を提供するものである。
【０００７】
【発明の開示】
前記一般式（ＩＩ）で表される化合物は、下記の一般式（ＩＩＩ）で表されるカルボン酸系化合物又はその反応性誘導体と下記の一般式（ＩＶ）で表されるアニリン系化合物とを反応させ、酸アミド結合を形成させることにより製造することができる。この場合、一般式（ＩＶ）で表されるアニリン系化合物を適当な溶媒、例えばベンゼン、トルエン、塩化メチレン、クロロホルム、テトラヒドロフラン等に溶解し、一般式（ＩＩＩ）で表されるカルボン酸系化合物あるいはその反応性誘導体を加え、撹拌することにより行うことができる。反応は、溶媒の凝固点から沸点までの任意の温度で行うことができ、必要に応じて加熱あるいは冷却することができる。
【０００８】
一般式（ＩＩＩ）
【化５】
0003578411.tif 000003
【０００９】
〔式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ、
（ｉ）  水素原子又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しない飽和アルキル又はアラルキル又は
（ｉｉｉ）置換基を有し又は有しない脂肪族又は芳香族のアシル又は、
（ｉｖ）水酸基をアシル化した炭素数５又は６からなる単糖のフラノシル又はピラノシルである〕
【００１０】
一般式（ＩＶ）
【化６】
0003578411.tif 000004
【００１１】
〔式中、Ｒ１は、
（ｉ）  水素原子又は、
（ｉｉ）水酸基又は、
（ｉｉｉ）置換基を有し又は有しないアルキルオキシ又は、
（ｉｖ）置換基を有し又は有しない脂肪族又は芳香族のアシルオキシであり、Ｒ２は、
（ｉ）  水素原子又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しない飽和アルキル又はアラルキル又は、
（ｉｉｉ）置換基を有し又は有しない脂肪族又は芳香族のアシルであり、
Ｒ３は、
（ｉ）  水素原子又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しない飽和アルキル又は、
（ｉｉｉ）置換基を有し又は有しないアリールである〕
【００１２】
使用する一般式（ＩＩＩ）で表されるカルボン酸系化合物あるいはその反応性誘導体としては、対応するカルボン酸、酸ハロゲン化物、酸無水物、カルボン酸エステル類等を掲げることができる。
【００１３】
一般式（ＩＩＩ）で表される化合物は、安息香酸類似化合物、例えば、公知の２，５−ジヒドロキシ−安息香酸を出発物質として、公知文献記載の方法と類似の方法を任意に組み合わせて行うことにより得ることができる。
【００１４】
例えば、一般式（ＩＩＩ）で表される化合物の式中のＲ１又はＲ２がアルキルである化合物は、一般式（ＩＩＩ）の式中のＲ１又はＲ２が水素原子である化合物を出発物質として、このものと通常化学反応で用いられるアルキル化剤、例えば、ジアゾメタン、ジメチル硫酸あるいはハロゲン化アルキル等とを適当な溶媒、例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン、塩化メチレン等に溶解し、有機金属試薬、例えば、水素化ナトリウムの存在下において撹拌し、反応させることにより得ることができる。例えば、２，５−ジヒドロキシ−安息香酸を出発物質とする場合は、このものを適当な溶媒、例えば、テトラヒドロフランに溶解し、有機金属試薬、例えば、水素化ナトリウムの存在下に、ハロゲン化アルキルを加え、室温又は任意の温度で撹拌することにより、２−ヒドロキシ−５−アルコキシ−安息香酸又は２，５−ジアルコキシ−安息香酸を得ることができる。又、通常化学反応で用いられる水酸基の保護試薬である酸塩化物、酸無水物あるいはエーテル系化合物を用いて、２，５−ジヒドロキシ−安息香酸の水酸基を選択的に保護した後、非保護の水酸基を上記のアルキル化反応を用いてアルキル化し、しかる後に、酸又はアルカリにて加水分解し、保護基を除くことによって、選択的に水酸基のアルキル化化合物を得ることができる。
【００１５】
一般式（ＩＩＩ）の式中のＲ１又はＲ２がアシルである化合物は、一般式（ＩＩＩ）の式のＲ１又はＲ２が水素原子である化合物を出発物質として、このものを適当な溶媒、例えば、ピリジンあるいは塩化メチレン等に溶解し、これにアシル化剤、例えば、酸塩化物あるいは酸無水物等を加え、適当な溶媒、例えば、トリエチルアミン、ピリジン等の存在下において撹拌することにより得ることができる。この場合、反応温度を選択することにより、２位及び５位の水酸基を選択的にアシル化することができる。例えば、２，５−ジヒドロキシ−安息香酸を出発物質として用いる場合、室温で前記の反応を行うことにより、５−アシルオキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸を得ることができる。加熱還流下で前記の反応を行うことにより、２，５−ジアシルオキシ−安息香酸を得ることができる。又、前述の水酸基のアルキル化における水酸基の保護基による保護と同様に、水酸基を選択的に保護した後に、前記のアシル化反応を行うことにより、選択的に水酸基をアシル化することができる。
【００１６】
次に、前記一般式（ＩＶ）で表されるアニリン系化合物は、公知の２−ニトロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを出発物質として、ニトロ基のアミノ基への変換反応、アルデヒド基のカルボン酸への変換反応、芳香環のヒドロキシ化反応、水酸基のアルキル化又はアシル化反応、及びカルボン酸のエステル化反応等を任意に組み合わせて行うことにより得ることができる。
【００１７】
この場合のニトロ基のアミノ基への変換反応では、公知文献記載の還元反応、例えば、接触還元反応あるいは、スズと塩酸又は鉄と塩酸等の還元剤を用いる還元反応により行うことができる。例えば、２−ニトロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを適当な溶媒、例えば、メタノールに溶解し、鉄及び濃塩酸を加え、加熱還流することにより、２−アミノ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを得ることができる。
【００１８】
前記のアルデヒド基のカルボン酸への変換反応は、通常化学反応で用いられる酸化剤、例えば、過マンガン酸カリウム、クロム酸等を用いて行うことができる。例えば、２−ニトロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを適当な溶媒、例えば、水に溶解又は懸濁し、過マンガン酸カリウム水溶液を加え、撹拌することにより、２−ニトロ−５−ヒドロキシ−安息香酸を得ることができる。この場合の反応温度は、０℃から溶媒の沸点までの任意の温度で行うことができるが、７０℃から８０℃で行うことが好ましい。
【００１９】
前記の芳香環のヒドロキシル化反応は、芳香環を塩素あるいは臭素等のハロゲン化剤を用いてハロゲン化した後、アルカリ加水分解する方法、あるいは芳香環を適当なスルホン化剤、例えば、三酸化イオウあるいは濃硫酸等でスルホン化した後、アルカリ溶融を用いた加水分解を行う方法等の、公知文献記載の方法を用いることにより行うことができる。例えば、２−ニトロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを適当な溶媒、例えば、クロロホルムに溶解し、適当な触媒、例えば、鉄の存在下で、ハロゲン、例えば、臭素を加えた後、撹拌することにより、４−ブロモ−２−ニトロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを得ることができる。この場合の反応温度は、溶媒の凝固点付近から沸点までの温度を任意に選択することができるが、０℃から溶媒の沸点までの温度で行うことが好ましい。次に、得られた４−ブロモ−２−ニトロ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを適当な溶媒、例えば、水に溶解し、これに適当なアルカリ物質、例えば、水酸化ナトリウムを加え、加熱下撹拌することにより、２−ニトロ−４，５−ジヒドロキシ−ベンズアルデヒドを得ることができる。
【００２０】
前記の水酸基のアルキル化反応及びアシル化反応では、前述のジヒドロキシ−安息香酸の水酸基のアルキル化又はアシル化の方法と同様の方法を用いて行うことができる。
【００２１】
前記のカルボン酸のエステル化反応では、公知文献記載の方法、例えば、該当するカルボン酸とアルコールを触媒の存在下において、脱水縮合する方法、該当するカルボン酸を無機酸の塩化物等と反応させ酸塩化物とした後、アルコールと反応させる方法、あるいは該当するカルボン酸をジアゾスタンと反応させ、メチルエステルとする方法等を用いることができる。例えば、該当するカルボン酸にアルコール、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等を加え、適当な触媒、例えば、硫酸の存在下で脱水縮合反応を行い、カルボン酸のエステル化を行うことができる。又、該当するカルボン酸を適当な溶媒中で、三酸化リン、五酸化リンあるいは無機酸の塩化物、例えば、塩化チオニル等と撹拌し、カルボン酸の酸塩化物とし、これにアルコールを加え、適当な温度で撹拌することにより、カルボン酸のエステル化を行うことができる。
【００２２】
一般式（ＩＩ）で表される化合物の中で、式中Ｒ４が糖基である化合物は、一般式（ＩＩ）の式中Ｒ４が水素である一般式（Ｖ）で表される化合物を出発物質とし、公知文献記載の配糖化の反応を行うことにより、得ることができる。例えば、一般式（Ｖ）で表される化合物を適当な溶媒、例えば、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン等に溶解し、縮合剤、例えば、炭酸銀、銀ドリフラート等の存在下において、該当する糖の１位をハロゲンで置換し、かつ糖の他の水酸基をアシル化した化合物を加え、室温にて撹拌した後、アルカリ加水分解により糖部分のアシル基を除去することによって得ることができる。例えば、５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２’−カルボキシメチル−４’，５’−ジメトキシベンズアニリドを適当な溶媒、例えば、トルエンに溶解し、あらかじめ縮合剤、例えば、炭酸銀の存在下において、該当する糖の１位をハロゲン化し、他の水酸基をアセチル化した化合物、例えば、α−アセトブロモグルコースを加え、室温にて撹拌した後、適当なアルカリ、例えば、水酸化バリウム等を用いて糖のアセチルオキシ基を加水分解することにより、Ｒ４が糖基である化合物を得ることができる。
【００２３】
又、一般式（Ｖ）で表される化合物を、該当する糖の１位をジフェニルホスホリル化し、他の水酸基をベンジル化した化合物と、適当な温度、例えば、−７８℃から−２０℃の温度で縮合させた後、糖部分のベンジル基を除去することにより、一般式（ＩＩ）で表される化合物のＲ４が糖基である化合物を得ることができる。例えば、４’，５−ジベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−２’−カルボキシメチル−５’−メトキシ−ベンズアニリドを適当な溶媒、例えば、プロピオニトリルに溶解し、あらかじめ反応剤、例えば、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルエステルの存在下において、該当する糖の１位をジフェニルホスホリル化し、他の水酸基をベンジル化した化合物、例えば、テトラ−０−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシルジフェニルホスフェートを加え、−７８℃にて撹拌し、得られた化合物を水素添加等の還元反応でベンジル基を除去し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシベンズアニリドを得ることができる。
【００２４】
前記の該当する糖の１位をハロゲンで置換し、かつ他の水酸基をアシル化した化合物は、糖を過塩素酸を触媒として、無水酢酸でアセチル化し、反応混合物に赤リンを加え、臭素を滴下した後、水を加えることにより得ることができる。
【００２５】
前記の該当する糖の１位をジフェニルホスホリル化し、他の水酸基をベンジル化した化合物は、該当する糖を塩化ベンジルを用いてベンジル化した後、塩化スズを触媒としてチオフェノールと撹拌し、１位ベンジル基をチオフェニル基に置換する。このものを酸化銀を触媒として、テトラヒドロフラン中で加水分解し、ｎ−ブチルリチウムと撹拌した後、得られた化合物にジフェニルホスホリルクロリドを加え、撹拌することにより得ることができる。
【００２６】
又、前記一般式（ＩＩ）で表される化合物は、前述の有機合成による手法の他、トリカブト属植物の塊根から分離・精製し、単離することができる。例えば、トリカブトの根又はそれを加熱処理して毒性を減らした製剤の加工ブシ末（三和生薬製）の５０％エタノールエキスを、ポリアミドカラム及びシリカゲルカラムを用いて、分離・精製することにより、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド及び２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリドを得ることができる。さらに、この分離・精製過程の分画エキスは、一般式（ＩＩ）で表される化合物を高濃度で含むものである。このものは、本発明の発毛・育毛促進剤の有効成分として用いることができる。
【００２７】
一般式（Ｖ）
【化７】
0003578411.tif 000005
【００２８】
〔式中、Ｒ１は、
（ｉ）  水素原子又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しないアルキルオキシ又は、
（ｉｉｉ）置換基を有し又は有しない脂肪族又は芳香族のアシルオキシであり、Ｒ２は、
（ｉ）  置換基を有し又は有しない飽和アルキル又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しない脂肪族又は芳香族のアシルであり、
Ｒ３は
（ｉ）  水素原子又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しない飽和アルキル又は、
（ｉｉｉ）置換基を有し又は有しないアリールであり、
Ｒ４は、
（ｉ）  置換基を有し又は有しない飽和アルキル又は、
（ｉｉ）置換基を有し又は有しない脂肪族又は芳香族のアシルである〕
【００２９】
前記の式（ＩＩ）で表されるベンズアニリド型化合物は、本発明に係る発毛・育毛促進剤の有効成分として、原体のまま、あるいは適当な基剤を使用して、その基剤に対し希釈して使用することができる。又、トリカブトの根から得らる画分で、上記式（ＩＩ）の構造を有する化合物を含むものを有効成分として用いることができる。この発毛・育毛促進剤の基剤としては、化粧品、医薬品等の業界で通常用いられる任意所要の担体、乳化剤、懸濁化剤、芳香剤等の添加剤が用いられ、慣用の方法で製剤化する。これらの材料の例としては、オレイン酸、トリエタノールアミン、サラシミツロウ、セチルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ベントナイト、ワセリン、流動パラフィン、アルコール及びそのエステル、例えば、エタノール、プロピレングリコール、セトステアリルアルコール、ソルビタンモノステアレート等があげられ、剤形は、ヘヤートニック、ヘヤークリーム、ヘヤーローション、ヘヤーシャンプー等、その他種々の形で提供することができる。また、軟膏用組成物、あるいは硬膏用組成物の形でも提供することができる。これら各製剤は周知の製剤用担体、例えば、ワセリン、パラフィン、加水ラノリン、プラスチベース、親水ワセリン、マクロゴール類、ロウ、樹脂、精製ラノリン、ゴム等を含有していてもよい。これ等外用剤に含有させる前記の式（ＩＩ）の化合物の含量は約０．００５〜１％、好ましくは０．０１〜０．５％である。
【００３０】
以下に、本発明に用いる前記の式（ＩＩ）の化合物の製造実施例、薬理作用試験、安全性試験及び処方例について述べる。尚、以下の表中の化合物Ｎｏ．とその化合物名の対照表を表１に示す。
【００３１】
【実施例】
〔実施例１〕
（１）２，５−ジヒドロキシ−安息香酸１．５４ｇをメタノール２０ｍｌに溶解する。ｐ−トルエンスルホニル−Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソアミド１５ｇをエーテル２５ｍｌに懸濁し、これに水酸化カリウム２．５ｇ、エタノール２ｍｌ及び水６ｍｌの混液を加える。この反応液を３０〜４０℃に加熱し、ジアゾメタンの発生が認められたら加熱を中止する。発生するジアゾメタンを冷却したエーテル２５ｍｌ中に導く。このジアゾメタンのエーテル溶液２５ｍｌを前記の２，５−ジヒドロキシ−安息香酸のメタノール溶液に徐々に加え、３０分間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（２０ｇ，分離液：クロロホルム）に付し、分離・精製し、２−ヒドロキシ−５−メトキシ−安息香酸メチルエステル１．６ｇを得る。
【００３２】
（２）５−ヒドロキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１６．７ｇをテトラヒドロフラン１００ｍｌに溶解し、氷冷下、これに水素化ナトリウム（６０％油性）２．４ｇを徐々に加え、３０分間撹拌する。この反応液に臭化エチル７．５ｍｌを加え、室温にて２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、エーテルにて抽出し、エーテル層は水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝４：１）に付し、分離・精製、５−エトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１２．３ｇを得る。
【００３３】
（３）実施例１の（２）で得られた５−エトキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１．９５ｇをクロロホルム１０ｍｌに溶解し、三酸化イオウ１．５ｇを加え、５時間加熱還流する。次に、冷後、反応液を１０％炭酸ナトリウム水溶液で水洗した後、減圧下乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝３：２）に付し、分離・精製し、５−エトキシ−２−ニトロ−４−スルホベンズアルデヒド１．４ｇを得る。
【００３４】
（４）実施例１の（３）で得られた５−エトキシ−２−ニトロ−４−スルホベンズアルデヒド１．４２ｇ及び水酸化カリウム１５ｇの混合物を２５０℃にて１時間加熱溶融する。反応液を水に注ぎ、１Ｎ硫酸にて中性とした後、酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−エトキシ−４−ヒドキシ−２−ニトロベンズアルデヒド０．５７ｇを得る。
【００３５】
（５）実施例１の（４）で得られた５−エトキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１．４５ｇを水１５ｍｌに懸濁し、７０〜８０℃に加温する。この溶液に過マンガン酸カリウム水溶液（１．１ｇ／水１５ｍｌ）１５ｍｌを４０〜４５分かけて加え、さらに、１時間撹拌した後、１０％水酸化ナトリウム水溶液を加えてアルカリ性とし、熱時ろ過する。ろ液を冷した後、これに１０％塩酸を加え、酸性とし、酢酸エチルにて抽出し、酢酸エチル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝５：１）に付し、分離・精製し、５−エトキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸０．７７ｇを得る。
【００３６】
（６）実施例１の（５）で得られた５−エトキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸１．０ｇ、硫酸鉄７．８ｇ、水２０ｍｌ及び２８％アンモニア水６ｍｌの混液を９０℃にて２時間撹拌する。冷後、反応液を塩化メチレンにて抽出し、塩化メチレン層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝３：１）に付し、分離・精製し、２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−エトキシ−安息香酸０．６ｇを得る。
【００３７】
（７）実施例１の（１）で得られた２−ヒドロキシ−５−メトキシ−安息香酸メチルエステル０．９ｇ、実施例１の（６）で得られた２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−エトキシ−安息香酸１．０ｇ及びナトリウムメトキシド０．５ｇを乾燥ベンゼン１０ｍｌに溶解し、５時間加熱還流する。冷後、析出物をろ過して除き、ろ液を５％塩酸及び水にて順次洗浄し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１：１）に付し、分離・精製し、２’−カルボキシ−２，５’−ジヒドロキシ−４’−エトキシ−５−メトキシベンズアニリド０．８ｇを得る。
【００３８】
〔実施例２〕
（１）２，５−ジヒドロキシ−安息香酸１．５４ｇ及び水酸化カリウム１．５ｇをジメチルホルムアミド２０ｍｌに溶解し、これに塩化ベンジル１．２ｍｌを加え、６０〜６５℃にて１８時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出し、エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。
残留物をシリカゲルカラムクロマトクラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸１．５ｇを得る。
【００３９】
（２）実施例２の（１）で得られた５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸１．２ｇをテトラヒドロフラン２０ｍｌに溶解し、氷冷下、これに水素化ナトリウム（６０％油性）０．７５ｇを徐々に加え、３０分間撹拌する。この反応液に臭化エチル０．７ｍｌを加え、２時間加熱還流する。反応終了後、反応液を氷水中に注ぎ、エーテルにて抽出し、エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−２−エトキシ−安息香酸０．９ｇを得る。
【００４０】
（３）実施例２の（２）で得られた５−ベンジルオキシ−２−エトキシ・安息香酸１．３６ｇをジオキサン３０ｍｌに溶解し、パラジウム触媒（５％パラジウムカーボン，１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下にて、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の不溶物をろ過して除き、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝５：１）に付し、分離・精製し、２−エトキシ−５−ヒドロキシ−安息香酸０．７ｇを得る。
【００４１】
（４）実施例２の（３）で得られた２−エトキシ−５−ヒドロキシ−安息香酸１．０ｇ、ピリジン５ｍｌ及び無水酢酸１０ｍｌの混液を６０℃にて３時間加熱する。冷後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出し、エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−アセチルオキシ−２−エトキシ−安息香酸１．１ｇを得る。
【００４２】
（５）実施例２の（４）で得られた５−アセチルオキシ−２−エトキシ−安息香酸１．０ｇに塩化チオニル５ｍｌを加え、室温にて一夜撹拌した後、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、５−アセチルオキシ−２−エトキシ−ベンゾイルクロリド０．８ｇを得る。
【００４３】
（６）５−ヒドロキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１．６ｇ及び水酸化カリウム１．５ｇをジメチルホルムアミド２０ｍｌに溶解し、これに塩化ベンジル１．２ｍｌを加え、６０〜６５℃にて１８時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸にて酸性とした後、エーテルにて抽出する。エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝３：２）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１．６ｇを得る。
【００４４】
（７）５−ベンジルオキシ−２−ニトロベンズアルデヒド２．６ｇをクロロホルム１０ｍｌに溶解し、これに三酸化イオウ１．５ｇを加え、５時間加熱還流する。次に、冷後、反応液を１０％炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝３：２）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−２−ニトロ−４−スルホベンズアルデヒド１．８ｇを得る。
【００４５】
（８）５−ベンジルオキシ−２−ニトロ−４−スルホベンズアルデヒド１．７ｇ及び水酸化カリウム１５ｇの混合物を２５０℃で１時間加熱溶融する。次に、反応液を水中に注ぎ、１Ｎ硫酸で中性とした後、酢酸エチルにて抽出する。酢酸エチル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（２０ｇ，分離液；クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−ベンズアルデヒド０．７７ｇを得る。
【００４６】
（９）５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−ベンズアルデヒド１．４ｇを水１５ｍｌに懸濁し、７０〜８０℃に加温する。この溶液に過マンガン酸カリウム水溶液（１．１ｇ／水１５ｍｌ）１５ｍｌを４０〜４５分かけて加え、その後さらに、１時間撹拌した後、、１０％水酸化ナトリウム水溶液を加え、アルカリ性とし、熱時ろ過する。冷後、ろ液に１０％塩酸を加え酸性とした後、酢酸エチルにて抽出する。酢酸エチル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝５：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸１．１ｇを得る。
【００４７】
（１０）５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸１．４５ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、これに塩化アセチル１０ｍｌを加え、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出する。エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、４−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２−ニトロ−安息香酸１．４４ｇを得る。
【００４８】
（１１）４−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２−ニトロ−安息香酸１．４ｇに塩化チオニル１０ｍｌを加え、室温で一夜撹拌した後、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、４−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２−ニトロベンゾイルクロリドを得る。
【００４９】
（１２）４−アセチルオキシ−ベンジルオキシ−２−ニトロベンゾイルクロリド１．７ｇをアセトン２０ｍｌに溶解し、この溶液をフェノールのアセトン溶液（０．５ｇ／１０ｍｌに滴下する。次に、反応液を減圧下濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、４−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２−ニトロ−安息香酸フェニルエステル１．７ｇを得る。
【００５０】
（１３）４−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２−ニトロ−安息香酸フェニルエステル２．０ｇをジオキサン３０ｍｌに溶解し、これにパラジウム触媒（５％パラジウムカーボン，１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下にて、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の不溶物をろ過し、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトログラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝５：１）に付し、分離・精製し、４−アセチルオキシ−２−アミノ−５−ヒドロキシ−安息香酸フェニルエステル０．９６ｇを得る。
【００５１】
（１４）５−アセチルオキシ−２−エトキシ−ベンゾイルクロリド１．０ｇ及び４−アセチルオキシ−２−アミノ−５−ヒドロキシ−安息香酸フェニルエステル１．２ｇをアセトン３０ｍｌに溶解し、炭酸カリウム１．１ｇを加え、室温にて１９時間撹拌する。不溶物をろ過し、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１：１）に付し、分離・精製し、５，５’−ジアセチルオキシ−２’−カルボキシフェニル−２−エトキシ−４’−ヒドロキシベンズアニリド０．８５ｇを得る。
【００５２】
〔実施例３〕
（１）２，５−ジヒドロキシ−安息香酸１．５４ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、この溶液に塩化ベンゾイル０．８ｇを加え、室温にて１時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出し、エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンゾイルオキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸２．２ｇを得る。
【００５３】
（２）５−ベンゾイルオキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸１．２ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、これに塩化アセチル１０ｍｌを加え、７０〜８０℃にて５時間撹拌する。冷後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出する。エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液；クロロホルム・メタノール＝１０；１）に付し、分離・精製し、２−アセチルオキシ−５−ベンゾイルオキシ−安息香酸１．０ｇを得る。
【００５４】
（３）２−アセチルオキシ−５−ベンゾイルオキシ−安息香酸１．０ｇに塩化チオニル１０ｍｌを加え、室温にて一夜撹拌する。撹拌終了後、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、２−アセチルオキシ−５−ベンゾイルオキシ−ベンゾイルクロリドを得る。
【００５５】
（４）５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸１．５ｇに塩化チオニル１０ｍｌを加え、室温にて一夜撹拌した後、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロベンゾイルクロリドを得る。
【００５６】
（５）５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロベンゾイルクロリド１．５ｇをアセトン２０ｍｌに溶解し、この溶液をメタノール中に撹拌しながら徐々に加え、１時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝４：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸メチルエステル１．３ｇを得る。
【００５７】
（６）５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸メチルエステル１．２ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、これに塩化ベンゾイル０．８ｇを加え、室温にて２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出し、エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下留去する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−４−ベンゾイルオキシ−２−ニトロ−安息香酸メチルエステル１．３ｇを得る。
【００５８】
（７）５−ベンジルオキシ−４−ベンゾイルオキシ−２−ニトロ−安息香酸メチルエステル１．０ｇをジオキサン３０ｍｌに溶解し、この溶液にパラジウム触媒（５％パラジウムカーボン，１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下にて、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液をろ過し、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１：１）に付し、分離・精製し、２−アミノ−４−ベンゾイルオキシ−５−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル０．５ｇを得る。
【００５９】
（８）２−アミノ−４−ベンゾイルオキシ−５−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル１．６ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、これに塩化プロピオニル０．５２ｍｌを加え、室温で３時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、エーテルにて抽出する。
エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル：１：１）に付し、分離・精製し、２−アミノ−４−ベンゾイルオキシ−５−プロピオニルオキシ−安息香酸メチルエステル０．３８ｇを得る。
【００６０】
（９）２−アミノ−４−ベンゾイルオキシ−５−プロピオニルオキシ−安息香酸メチルエステル１．７ｇ及び２−アセチルオキシ−５−ベンゾイルオキシ−ベンゾイルクロリド１．６ｇをアセトン２０ｍｌに溶解し、この溶液中にＮ，Ｎ−ジメチルアニリン２．５ｍｌを加え、２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、２−アセチルオキシ−５，５’−ジベンゾイルオキシ−２’−カルボキシメチル−４’−プロピオニルオキシ−ベンズアニリド１．２ｇを得る。
【００６１】
〔実施例４〕
（１）２，５−ジヒドロキシ−安息香酸１．５４ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、この溶液に塩化ベンゾイル１．６ｇを加え、８０℃にて１８時間加熱する。冷後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸で酸性とした後、エーテルにて抽出し、エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝４：１）に付し、分離・精製し、２，５−ジベンゾイルオキシ−安息香酸１．５６ｇを得る。
【００６２】
（２）２，５−ジベンゾイルオキシ−安息香酸１．５ｇを塩化チオニル１０ｍｌに溶解し、室温で一夜撹拌した後、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、２，５−ジベンゾイルオキシ−ベンゾイルクロリドを得る。
【００６３】
（３）５−ヒドロキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１．４ｇをクロロホルム１０ｍｌに溶解し、これに三酸化イオウ１．５ｇを加え、５時間加熱還流する。冷後、反応液を１０％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝３：２）に付し、分離・精製し、５−ヒドロキシ−２−ニトロ−４−スルホ−ベンズアルデド１．１ｇを得る。
【００６４】
（４）５−ヒドロキシ−２−ニトロ−４−スルホ−ベンズアルデヒド１．０ｇ及び水酸化カリウム１．２ｇの混合物を、２５０℃で１時間加熱溶融する。次に、反応液を水に注ぎ、１Ｎ硫酸で中性とした後、酢酸エチルにて抽出する。酢酸エチル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、４，５−ジヒドロキシ−２−ニトロベンズアルデヒド０．３８ｇを得る。
【００６５】
（５）４，５−ジヒドロキシ−２−ニトロベンズアルデヒド１．０ｇを水１５ｍｌに懸濁し、７０〜８０℃に加温する。この溶液に、過マンガン酸カリウム水溶液（１．１ｇ／水１５ｍｌ）１５ｍｌを４０〜４５分かけて徐々に加え、その後さらに１時間撹拌する。次に、この溶液に１０％水酸化ナトリウム水溶液を加えてアルカリ性とし、熱時ろ過する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝５：１）に付し、分離・精製し、４，５−ジヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸０．７６ｇを得る。
【００６６】
（６）４，５−ジヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸１．０ｇをピリジン５ｍｌに溶解し、これに塩化ベンゾイル１．２ｇを加え、８０℃にて１０時間撹拌する。冷後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸にて酸性とした後、エーテルにて抽出する。エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、４，５−ジベンゾイルオキシ−２−ニトロ−安息香酸１．３ｇを得る。
【００６７】
（７）４，５−ジベンゾイルオキシ−２−ニトロ−安息香酸１．２ｇに塩化チオニル１０ｍｌを加え、室温で一夜撹拌する。次に、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、４，５−ジベンゾイルオキシ−２−ニトロ−ベンゾイルクロリドを得る。
【００６８】
（８）４，５−ジベンゾイルオキシ−２−ニトロ−ベンゾイルクロリド１．２ｇをフェノールのアセトン溶液（０．５ｇ／１０ｍｌ）に滴下する。反応液を減圧下乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、４，５−ジベンゾイルオキシ−２−ニトロ−安息香酸フェニルエステル１．３ｇを得る。
【００６９】
（９）４，５−ジベンゾイルオキシ−２−ニトロ−安息香酸フェニルエステル１．２ｇ、硫酸鉄７．８ｇ、水２０ｍｌ及び２８％アンモニア水６ｍｌの混液を９０℃にて２時間撹拌する。冷後、反応液を塩化メチレンにて抽出し、塩化メチレン層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、２−アミノ−４，５−ジベンゾイルオキシ−安息香酸フェニルエステル０．８ｇを得る。
【００７０】
（１０）２，５−ジベンゾイルオキシ−ベンゾイルクロリド１．６ｇ及び２−アミノ−４，５−ジベンゾイルオキシ−安息香酸フェニルエステル１．７ｇをアセトン２０ｍｌに溶解しこの溶液中にＮ，Ｎ−ジメチルアニリン２．５ｍｌを加え、２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、２，５，４’，５’−テトラベンゾイルオキシ−２’−カルボキシフェニルベンズアニリド１．０５ｇを得る。
【００７１】
〔実施例５〕
（１）５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−安息香酸１．２ｇを塩化チオニル１０ｍｌに溶解し、室温で一夜撹拌した後、過剰の塩化チオニルを減圧下留去し、５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルクロリドを得る。
【００７２】
（２）５−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ−２−ニトロ−安息香酸１．４５ｇをエーテル２０ｍｌに溶解し、これにジアゾメタンのエーテル溶液２５ｍｌを加え、室温にて３時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−２−ニトロ−安息香酸メチルエステル１．３ｇを得る。
【００７３】
（３）５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−２−ニトロ−安息香酸メチルエステル１．２ｇをジオキサン３０ｍｌに溶解し、この溶液にパラジウム触媒（５％パラジウムカーボン，１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下にて、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の不溶物をろ過し、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝３：２）に付し、分離・精製し、２−アミノ−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−安息香酸メチルエステル０．８４ｇを得る。
【００７４】
（４）５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルクロリド１．０ｇ及び２−アミノ−５−ヒドロキシ−４−メトキシ−安息香酸メチルエステル１．２ｇをアセトン３０ｍｌに溶解し、これに炭酸カリウム１．１ｇを加え、室温で１９時間撹拌する。不溶物をろ過して除き、ろ液を減圧下乾固する。残留物を酢酸エチルに溶解し、１Ｎ塩酸及び水にて順次洗浄後、芒硝にて乾燥し、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２，４’−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−ベンズアニリド０．８ｇを得る。
【００７５】
（５）５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２，４’−ジヒドロキシ−５’−メトキシベンズアニリド０．８ｇをピリジン３ｍｌに溶解し、これに塩化アセチル５ｍｌを加え、室温にて１．５時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸にて酸性とした後、エーテルにて抽出する。エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２−ヒドロキシ−５’−メトキシ−ベンズアニリド０．８８ｇを得る。
【００７６】
（６）４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２−ヒドロキシ−５’−メトキシ−ベンズアニリド１．０ｇ、硫酸カルシウム２．５ｇ，炭酸銀１．４ｇ及び乾燥トルエン５０ｍｌの混液に、α−アセトブロモグルコース２．０ｇを加え、室温にて５０時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の析出物をろ過し、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し，４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−５’−メトキシ−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．５１ｇを得る。
【００７７】
（７）４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−５’−メトキシ−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．５ｇをジオキサン１０ｍｌに溶解し、パラジウム触媒（５％パラジウムカーボン，５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下にて、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の不溶物をろ過し、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５ｇ，分離液＝ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、４’−アセチルオキシ−２’−カルボキシメチル−５−ヒドロキシ−５’−メトキシ−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．３６ｇを得る。
【００７８】
（８）４’−アセチルオキシ−２’−カルボキシメチル−５−ヒドロキシ−５’−メトキシ−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．３６ｇを水酸化バリウム２．５ｇ、ジオキサン６０ｍｌ及び水６０ｍｌの混液に加え、室温で１７時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下濃縮し、希硫酸でｐＨ４に調整し、ブタノールにて抽出する。ブタノール層を減圧下濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝３：１）に付し、分離・精製し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド０．２ｇを得る。
【００７９】
〔実施例６〕
（１）５−ヒドロキシ−アントラニル酸１．０ｇをエーテル２０ｍｌに溶解し、この溶液にジアゾメタンのエーテル溶液１５ｍｌを加え、室温にて３０分間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝２０：１）に付し、分離・精製し、２−アミノ−５−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル０．７６ｇを得る。
【００８０】
（２）５−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシ−ベンゾイルクロリド０．９ｇ及び２−アミノ−５−ヒドロキシ−安息香酸メチルエステル１．１ｇをアセトン３０ｍｌに溶解し、この溶液に炭酸カリウム１．０ｇを加え、室温にて２０時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の不溶物をろ過して除き、ろ液を減圧下乾固する。残留物を酢酸エチルに溶解し、１Ｎ塩酸及び水にて順次洗浄し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝１０：１）に付し、分離・精製し、５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２，４’−ジヒドロキシベンズアニリド０．７５ｇを得る。
【００８１】
（３）５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２，４’−ジヒドロキシベンズアニリド０．７ｇをピリジン３ｍｌに溶解し、これに塩化アセチル５ｍｌを加え、室温にて１．５時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を氷水中に注ぎ、１０％塩酸にて酸性とした後、エーテルにて抽出する。エーテル層を水洗し、芒硝にて乾燥後、減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し，４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２−ヒドロキシ−ベンズアニリド０．６７ｇを得る。
【００８２】
（４）４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２−ヒドロキシ−ベンズアニリド１．０ｇ、硫酸カルシウム２．５ｇ、炭酸銀１．４ｇ及び乾燥トルエン５０ｍｌの混液に、α−アセトブロモグルコース２．０ｇを加え、室温にて５０時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の析出物をろ過して除き、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：ベンゼン・酢酸エチル＝１０：１）に付し、分離・精製し、４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．５５ｇを得る。
【００８３】
（５）４’−アセチルオキシ−５−ベンジルオキシ−２’−カルボキシメチル−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．５ｇをジオキサン１０ｍｌに溶解し、パラジウム触媒（５％パラジウムカーボン，５０ｍｇ）を加え水素雰囲気下にて、室温で２時間撹拌する。撹拌終了後、反応液中の不溶物をろ過して除き、ろ液を減圧下乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝２０：１）に付し、分離・精製し、４’−アセチルオキシ−２’−カルボキシメチル−５−ヒドロキシ−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．３６ｇを得る。
【００８４】
（６）４’−アセチルオキシ−２’−カルボキシメチル−５−ヒドロキシ−２−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−ベンズアニリド０．３５ｇを水酸化バリウム２．５ｇ、ジオキサン６０ｍｌ及び水６０ｍｌの混液中に加え、１７時間撹拌する。撹拌終了後、反応液を減圧下濃縮し、希硫酸でｐＨ４に調整し、ブタノールにて抽出する。ブタノール層を減圧下濃縮乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０ｇ，分離液：クロロホルム・メタノール＝３：１）に付し、分離・精製し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド０．１８ｇを得る。
【００８５】
〔実施例７〕
加工ブシ末（三和生薬製）１ｋｇにメタノール５リットルを加え、水浴上３０分間加熱還流により抽出し、抽出液を減圧下濃縮乾固し、メタノールエキス約２００ｇを得る。得られたメタノールエキスを水２００ｍｌに懸濁し、ポリアミドカラムクロマトグラフィーに付し、水３リットルで洗浄する。次に、４０％エタノール２リットルにて溶出し、溶出液を濃縮乾固する。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタノール・水（３０：１０：１）混液２リットルにて洗浄後、同混液０．５リットルにて溶出し、画分Ａを得る。続いて同混液２リットルで溶出し、画分Ｂを得る。画分Ａを濃縮乾固し、残留物をＯＤＳカラムクロマトグラフィーに付し、２％メタノールで洗浄後、３５％メタノールで溶出し、溶出液を減圧下濃縮乾固する。残留物を分取用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム・メタノール・水＝３０：１０：１）で精製し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド１３ｍｇを得る。画分Ｂを濃縮乾固し、残留物をＯＤＳカラムクロマトグラフィーに付し、２０％メタノールで洗浄後、３０％メタノールで溶出し、溶出液を濃縮乾固する。残留物を分取用シリカゲル薄層クロマトクラフィー（展開溶媒；クロロホルム・メタノール・水＝３０：１０：１）で分離・精製し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド３２０ｍｇを得る。
【００８６】
〔実施例８〕
実施例７の加工ブシ末の代わりに、生附子を用い、他は実施例７と全く同様に操作し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド及び２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリドを得る。
【００８７】
〔実施例９〕
加工ブシ末（三和生薬製）５００ｇに５０％エタノール５リットルを加え、水浴上１時間加熱還流により抽出し、抽出液をろ過した後、ろ液を減圧下濃縮乾固する。残留物を水に懸濁してポリアミドカラムクロマトグラフィーに付し、水３リットルにて洗浄後、エタノール２リットルで溶出する。溶出液を濃縮乾固した後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタノール（９：１）１リットルにて洗浄し、続いてクロロホルム・メタノール混液（４：１）６００ｍｌにて溶出する。溶出液を濃縮乾固した後、残留物をセライトカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタノール混液（９６：４）２５０ｍｌにて洗浄した後、クロロホルム・メタノール混液（９：１）３００ｍｌにて溶出する。溶出液を濃縮乾固し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド及び２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリドを、単なる抽出エキスに比べ、より高濃度で含むエキスを得る。このエキスについて、下記の条件の確認試験を行うとき、Ｒｆ値約０．２付近に２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリドの青緑色のスポットを認め、Ｒｆ値約０．２５付近に２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリドの青緑色のスポットを認める。
確認試験の条件
薄層板    ： キーゼルゲルＦ２５４           展開距離：１３ｃｍ
展開溶媒  ： クロロホルム・メタノール＝３：１
スポット量： 試料２０ｍｇ／１ｍｌメタノール溶液の２μｌ
発色方法  ： アニスアルデヒド・硫酸混液を噴霧後、加熱し、紫外線（３４０〜３８０ｎｍ）を照射して確認
【００８８】
〔実施例１０〕
実施例９の加工ブシ末の代わりに、生附子を用い、他は実施例９と全く同様に作し、２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ−５’−メトキシ−２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリド及び２’−カルボキシメチル−４’，５−ジヒドロキシ２−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ−ベンズアニリドを含むエキスを得る。
【００８９】
0003578411.tif 000006
【００９０】
【外１】
0003578411.tif 000007
【００９１】
【分析データ】
【化８】
0003578411.tif 000008
【００９２】
【化９】
0003578411.tif 000009
【００９３】
【化１０】
0003578411.tif 000010
【００９４】
0003578411.tif 000011
【００９５】
0003578411.tif 000012
【００９６】
0003578411.tif 000013
【００９７】
0003578411.tif 000014
【００９８】
0003578411.tif 000015
【００９９】
0003578411.tif 000016
【０１００】
〔実験例１〕
この実験においては、Ｓｔｄ：ｄｄｙ系雄性マウス（体重３０〜３５ｇ）を１群７匹として使用した。動物は室温２４〜２５℃，自由な摂水、摂食及び１２時間周期の明暗条件下で飼育した。マウスは実験開始前日に脱毛クリームにて背部を除毛して用いた。被検化合物０．１ｇを、ジメチルスルホキシド１００ｍｌに溶解し、試料溶液とした。試料溶液の約０．１ｍｌを、毎日朝夕の２回、除毛した背部に塗布し、ジメチルスルホキシドのみを試料として用いたものを陰性対照群とした。判定は肉眼的観察により行い、判定基準は下記の基準に従った。

判定基準                                  評価点
陰性対照群と比較して著しい差がある              ３
陰性対照群と比較して明らかに差がある            ２
陰性対照群と比較して差がある                    １
陰性対照群と比較してなんら差がない              ０
結果を表２に示す。表２の結果から見られるように、本発明の発毛・育毛促進剤で用いるベンズアニリド型化学構造を有する化合物は、優れた発毛・育毛促進効果を示すことが認められた。又、実験経過中及び実験終了後において、上記のベンズアニリド型化学構造を有する化合物の試料溶液塗布群には皮膚刺激性、アレルギー性は全く認められなかった。
【０１０１】
0003578411.tif 000017
【０１０２】
〔実験例２〕
この実験においては、Ｓｔｄ：ｄｄｙ系雄性マウス（体重３０〜３５ｇ）を１群７匹として使用した。動物は室温２４〜２５℃，自由な摂水、摂食及び１２時間周期の明暗条件下で飼育した。マウスは実験開始前日に脱毛クリームにて背部を除毛して用いた。被検化合物の試料溶液は実験例１で使用したものと同じものを用いた。陰性対照群では、ジメチルスルホキシドのみを試料として用いた。試料溶液の約０．１ｍｌを毎日朝夕の２回、除毛した箇所に塗布し、塗布後２１日及び２８日に除毛部位から発生した新生毛についてサンプリングを行い、体毛長を測定した。体毛長の測定は実体顕微鏡を用いて行い、サンプリングした任意の２０本の中から最も長いものを５本選び、その平均値を求め、マウスの体毛長とした。群間比較による薬物投与
群の有意差検定は、ステューデントのｔ−検定により行った。結果を表３に示す。表３に見られるように、上記のベンズアニリド型化学構造を有する化合物は、陰性対照群に対して、いずれもＰ＜０．０１の有意な毛成長促進効果を示した。
【０１０３】
0003578411.tif 000018
【０１０４】
〔実験例３〕（急性毒性）
この実験においては、Ｓｔｄ＝ｄｄＹ系雄性マウス（２０〜２５ｇ）を使用した。被検化合物は表１で示したものを用いた。被検化合物は、０．９％生理食塩水を用いて、さらにアラビアゴムを３％の濃度で添加し、１００ｍｇ／１０ｍｌの濃度になるよう懸濁し、試料溶液として調製した。この懸濁液を１００ｍｌ／ｋｇの割合で皮下投与し、投与後７２時間の致死数を求めた。その結果、いずれの化合物においても死亡例は見られず、低毒性であることが認められた。
【０１０５】
〔実験例４〕（安全性）
試験方法は２４時間人体前腕クローズドバッチテストを用いた。被試験者は成人男子３名、成人女子１名である。判定基準は下記の基準に従った。試料は、実施例６で得られた化合物（６）を用い、処方例１に従って調製したものを用いた。
＋＋：強紅斑                  ±  ：微かな紅斑
＋  ：紅斑                    −  ：陰性
結果を表４に示す。表４に見られるように、本発明に係る化合物からなる軟膏では、皮膚刺激性、アレルギー性は全く認められず、皮膚に対する安全性は極めて高いものであった。また、被検者において、試験中、副作用は特に認められなかった。
【０１０６】
0003578411.tif 000019
【０１０７】
以下に本発明に係る発毛・育毛促進剤の処方例を示す。
〔処方例１〕ヘヤートニック
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【０１０８】
〔処方例２〕ヘヤーローション
0003578411.tif 000021
【０１０９】
〔処方例３〕ヘヤークリーム
（Ａ）下記の組成により、油相成分を調製する。
0003578411.tif 000022
（Ｂ）下記の組成により、水相成分を調製する。
0003578411.tif 000023
（Ａ）の油相成分を７５℃に、（Ｂ）の水相成分を７７℃に、加温、撹拌し、撹拌しながら（Ａ）に（Ｂ）を徐々に加えて乳化液とする。
【０１１０】
〔処方例４〕ヘヤーシャンプー
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（Ａ）成分及び（Ｂ）成分をそれぞれ、加温、撹拌した後、撹拌しながら（Ｂ）成分を（Ａ）成分に徐々に加えシャンプー用溶液を調製する。