(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オトギリソウ由来のモノアミンオキシダーゼ阻害物質を含む、節煙促進剤であって、このときモノアミンオキシダーゼ阻害物質が、マウス脳由来モノアミンオキシダーゼを非競争的に阻害しうるものである、前記節煙促進剤。
【請求項２】
分子量250〜2,500のモノアミンオキシダーゼ阻害物質を含む、請求項1記載の節煙促進剤。
【請求項３】
セントジョーンズワート、フユボダイジュ及びカバからなる群より選択される１種以上の植物由来のモノアミンオキシダーゼ阻害物質をさらに含む、請求項１記載の節煙促進剤。
【請求項４】
モノアミンオキシダーゼ阻害物質を一日3.25〜6,500,000unitで投与するための、請求項１〜３のいずれか１項記載の節煙促進剤。
【請求項５】
食品又は医薬組成物の形態である、請求項１〜４のいずれか１項記載の節煙促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、種々の植物から得られるモノアミンオキシダーゼ阻害物質を含む、節煙を促進させるための剤に関する。この節煙促進剤は、食品、医薬組成物その他種々の形態とすることができる。
【０００２】
【従来の技術】
喫煙者は世界中に約１０億人いると推定されており、毎年３００万人がタバコ関連の疾患で死亡していると推計されている（Ｆｏｗｌｅｒ  ＪＳ．，  Ｂｒａｉｎ    ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ    Ａ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ    ｓｍｏｒｋｅｒｓ．  Ｐｒｏｃ．    Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．    Ｓｃｉ．    ＵＳＡ，    ９３，  １４０６５−１４０６９，  １９９６）。タバコの危険性に関する認知度が上昇すると共に禁煙を試みる喫煙者が増加しているが、完全に禁煙するのは困難であるといわれる。これは当初、喫煙者はニコチン依存性に陥っているからであると考えられていた。
【０００３】
最近、タバコの煙にはニコチンの他に、抗鬱作用のあるモノアミンオキシダーゼＡ阻害物質が含まれていることが知られ（Ｍｅｎｄｅｚ−Ａｌｖａｒｅｚ  Ｅ．，    Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ    ｏｆ    ｂｒａｉｎ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ    ｏｘｉｄａｓｅ  ｂｙ  ａｄｄｕｃｔｓ    ｏｆ    １，２，３，４−Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ    ｗｉｔｈ    ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ    ｏｆ    ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｅ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，    ６０，  １７１９−１７２２，  １９９７）、禁煙補助医薬品であるニコチンパッチやニコチン含有ガムではあまり改善されなかった気分の低下（鬱的傾向）の理由が解明され始めた。事実、タバコの煙や喫煙者の唾液によりモノアミンオキシダーゼＡ及び／又はＢ活性が抑制されることが認められ、喫煙中は脳内モノアミンオキシダーゼＡ活性が低下していることが知られている。つまり、禁煙中の気分低下は、抗鬱作用のあるモノアミンオキシダーゼＡ阻害物質がタバコから得られないことにより生じると考えられるようになってきた。
【０００４】
Ｂｅｒｌｉｎらは４４名の喫煙者ボランティアに対し、モノアミンオキシダーゼＡ阻害物質を４００ｍｇ／ｄａｙ、２ヶ月間と２００ｍｇ／ｄａｙ、３ヶ月間投与し、禁煙状態を調べた。モノアミンオキシダーゼＡ阻害物質の投与はプラセボに比して禁煙を促す効果が有意に認められたが、禁煙できるまでに至らなかった。これは喫煙者の大部分がニコチン依存性に陥っているからであると考えられた。従って、ニコチンとモノアミンオキシダーゼＡ阻害物質を併用すれば、禁煙できるであろうと報告している（Ｂｅｒｌｉｎ  Ｉ．，    Ａ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ    ｏｘｉｄａｓｅ  Ａ    ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ｍｏｃｌｏｂｅｍｉｄｅ）    ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｓｍｏｒｋｉｎｇ  ｃｅｓｓａｔｉｏｎ    ａｎｄ  ａｂｓｔｉｎｅｎｃｅ  ｉｎ  ｈｅａｖｙ，  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ    ｓｍｏｒｋｅｒｓ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ    Ｔｈｅｒ．，    ５８，  ４４４−４５２，  １９９５）。
【０００５】
一方、ヨーロッパ等で古くから利用されてきたハーブ類にもモノアミンオキシダーゼ阻害活性を示すものが知られている。例えば、フユボダイジュにはモノアミンオキシダーゼ阻害作用があることが明らかにされており、フユボダイジュの花部からの抽出物が健康食品として利用されつつある。またセントジョーンズワートにもモノアミンオキシダーゼ阻害作用があることが知られている。セントジョーンズワート抽出物の有効成分は、ヒペリシン及びその誘導体と考えられている。ヒペリシン（Ｃ３０Ｈ１６Ｏ８、分子量５０４．４３）は、１９４２年にＢｒｏｃｋｍａｎｎらによってセントジョーンズワートから見出された物質である。
【０００６】
セントジョンズワートの抽出物はまずアメリカ合衆国にて注目を浴び、最近になってわが国でも抗ストレス・リラックス型食品として利用されつつある。これを禁煙中のストレスを抑えるために用いうるとする考えもあった。
【０００７】
しかしながら、現在まで、モノアミンオキシダーゼ阻害物質についてもハーブ抽出物についても、ニコチンその他の禁煙手段を用いて禁煙する際、いらいらやストレスを防止するために補助的に用いることが検討されてきたに過ぎなかった。単独で用いた場合に、喫煙に対しどのような効果を与えるかについて、具体的に明らかにした報告は存在しない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、喫煙を控えるための新たな方法を見出すことである。また、植物抽出物の薬理作用をさらに詳しく解明し、植物抽出物が喫煙をひかえるために実際的に用いうるものであるか否かを検討し、そして植物抽出物を用いた喫煙抑制方法を確立することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、種々の植物抽出物のモノアミンオキシダーゼ阻害作用について検討を行った。その結果、オトギリソウ、セントジョーンズワート、フユボダイジュ又はカバからの抽出物にモノアミンオキシダーゼ阻害活性があることを見出した。さらに本発明者らは、喫煙に対しこれらの抽出物がいかなる影響を与えるかについて鋭意検討し、そして本発明を完成した。即ち、本発明は、植物由来のモノアミンオキシダーゼ阻害物質を含む、節煙促進剤を提供する。
【００１０】
本明細書でいうモノアミンオキシダーゼは、生理活性をもつアミン類の酸化的脱アミノ化を触媒する酵素の総称である。モノアミンオキシダーゼは、皮膚，血管など結合織に存在する結合織モノアミンオキシダーゼ、血液中に存在する血中モノアミンオキシダーゼ、及び脳や血小板に存在するフラビン系酵素であるミトコンドリアモノアミンオキシダーゼを含む。ミトコンドリアモノアミンオキシダーゼは、ノルエピネフィリンやセロトニンを基質とするモノアミンオキシダーゼＡ、及びドパミンを基質とするモノアミンオキシダーゼＢを含む。本発明に係る阻害物質は、これらのモノアミンオキシダーゼのうちモノアミンオキシダーゼＡ及び／又はモノアミンオキシダーゼＢに対する阻害作用を有するものである。
【００１１】
また、本発明でいう節煙とは、禁煙すること、禁煙するまでには至らないが一日当たりの喫煙量を減じること、禁煙すべき状況において喫煙を控えることをいう。節煙は、例えば常習的な喫煙者が一日当たりの平均喫煙量を約５０％まで減じること、喫煙者が禁煙すべき場所で喫煙を控えること、喫煙者が会議等の際に喫煙を控えること、及び一日に平均約１０本喫煙する者がほとんど又は全く喫煙しなくなることを含む。また、本明細書でいう節煙促進は、無理なく節煙させることをいい、例えば他のライフスタイルを不都合に変化させることなく節煙させること、喫煙量を控えるための他の手段を併用させることなく節煙させること及び集中力を損なわせることなく節煙させることを含む。
【００１２】
本発明の節煙促進剤は、植物を原料とする。モノアミンオキシダーゼ阻害作用を有する物質を含有する植物であれば、いずれでも本発明のために用いうるが、好ましくは、オトギリソウ（学名：Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ    ｅｒｅｃｔｕｍ）、セントジョーンズワート（学名：Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ    ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ、和名：セイヨウオトギリソウ）、フユボダイジュ（学名：Ｔｉｌｌａ    ｃｏｒｄａｔａ）又はカバ（学名：Ｐｉｐｅｒ    ｍｅｔｈｙｓｔｉｃｕｍ）と同一の属の植物の１種以上を原料とする。より好ましくは、オトギリソウ、セントジョーンズワート、フユボダイジュ又はカバを原料とする。
【００１３】
原料植物は、１種でもよく、数種の組み合わせでもよい。即ち、本発明はまた、オトギリソウ、セントジョーンズワート、フユボダイジュ及びカバからなる群より選択される２種以上から得られるモノアミンオキシダーゼ阻害物質を含む、節煙促進剤をも提供する。組み合わせは特に限定されないが、オトギリソウと、セントジョーンズワート、フユボダイジュ及びカバからなる群より選択される１種以上とであることが好ましい。植物数種を合わせたものを本発明の原料として用いてもよいし、それぞれの植物を原料として別個にモノアミンオキシダーゼ阻害物質を調製し、最終的に組み合わせてもよい。
【００１４】
原料からのモノアミンオキシダーゼ阻害物質の調製は、この阻害物質を分解又は不可逆的に変化させることがなければ特に制限されず、当業者によく知られた方法で行うことができる。採取した植物の部分（例えば、葉、根、茎、花、雄蕊、雌蘂）をそのまま抽出工程に供し、モノアミンオキシダーゼ阻害物質を調製することができる。抽出効率を高めるためには、原料植物を細切・粉砕するとよい。抽出溶媒としては、水；酸、塩基、無機塩若しくは有機塩類の水溶液；アルコール類（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール）エーテル類、アセトン、酢酸エチル若しくはヘキサン等の有機溶媒又はこれらの混合物を用いることができる。好ましい抽出溶媒は、水及びエタノールの混合液並びに重炭酸ナトリウム水溶液である。抽出は加熱下で行うことができる。抽出温度は約５〜約３００℃、より好ましくは約２５〜約２５０℃、さらに好ましくは約５０〜約２００℃である。抽出は還流下で行うこともできる。抽出装置（例えば、ソックスレー抽出器）を用いてもよい。
【００１５】
こうして得られた抽出物はさらなる精製工程に供することができる。精製は、当業者によく知られた方法によって行うことができる。例えば、クロマトグラフィ、再結晶等の操作により精製されうる。
【００１６】
原料植物からの抽出物が市販されている場合は、それらを利用するのも簡便である。この場合、市販の抽出物には活性成分以外の添加剤が含まれていることがあるので、市販の抽出物を、上記のような活性成分の抽出工程に供するのがよい。
【００１７】
各工程、又は最終段階で得られた抽出物中のモノアミンオキシダーゼ阻害作用は、公知の方法によって確認することができる。例えば、ＡｍｐｌｅｘＴＭ  Ｒｅｄ    Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  Ｏｘｉｄａｓｅ    Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ    Ｐｒｏｂｅｓ社製）を利用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで確認することができる。
【００１８】
本発明に係る植物由来の有効成分は、経口投与された場合は血液−脳関門を通過して脳へ移行し、脳内のモノアミンオキシダーゼに阻害的に作用することとなる。得られた抽出物のｉｎ  ｖｉｖｏ（脳中）でのモノアミンオキシダーゼ阻害活性は、例えば、マウス等の実験動物に植物抽出物を投与し、投与後（例えば、１時間、２時間又は３時間経過後）の脳を摘出し、脳ホモジネートの有するモノアミンオキシダーゼ阻害活性を測定することにより確認することができる。
【００１９】
得られた抽出物は、モノアミンオキシダーゼ阻害作用を発揮しうるものであれば、そのまま節煙促進剤として使用することができる。また、必要に応じ当業者によく知られた反応を行うことによって、抽出物中の化合物から誘導体を製造し、モノアミンオキシダーゼ阻害作用を発揮しうるものとすることができる。
【００２０】
本発明の節煙促進剤は、モノアミンオキシダーゼ阻害物質を含有するものであるから、摂取すればモノアミンオキシダーゼ阻害物質が供給される。本発明の剤を摂取することにより喫煙によりモノアミンオキシダーゼ阻害物質を得る必要がなくなるから、無理なく節煙することができると考えられる。
【００２１】
本発明の節煙促進剤に含まれるモノアミンオキシダーゼ阻害物質は、ヒペリシン以外の化合物でありうる。なぜなら、本発明者らの検討によると、市販のヒペリシン（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．社製）にはマウス脳由来モノアミンオキシダーゼ阻害活性が認められず、またオトギリソウ抽出物をさらに分画して各々の画分について検討したところ、高いマウス脳由来モノアミンオキシダーゼ阻害活性を有するけれどもヒペリシンを含まないと推定される画分が存在したからである（実施例１１参照）。従って、本発明は、植物由来の、ヒペリシンとは異なるモノアミンオキシダーゼ阻害物質、及びそのような物質を含む節煙促進剤をも提供しうる。このヒペリシンとは異なる物質は、例えば、ゲルろ過法で測定した分子量が約１００〜約５，０００（好ましくは約２５０〜約２，５００）であり、かつマウス脳由来モノアミンオキシダーゼを非競争的に阻害しうる物質である。なお、非競争阻害（ｎｏｎ−ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ    ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）とは、酵素の基質結合部位とは異なる部位に阻害剤が結合して、酵素−阻害剤複合体（ＥＩ）及び／又は酵素−阻害剤−基質複合体（ＥＳＩ）が形成され、酵素反応生成物（Ｐ）ができなくなることによる阻害をいう。
【００２２】
【好ましい実施の形態】
本発明の節煙促進剤は、医薬組成物、食品の形態とすることができる。
本明細書でいう「食品」には、菓子（例えば、チューインガム、キャンディーゼリー、ビスケット、チョコレート、アイスクリーム、ヨーグルト、米菓）、健康食品（例えば、カプセル、タブレット、粉末）、飲料（例えば、清涼飲料、乳飲料、野菜・果汁飲料、茶）及びドリンク剤が含まれる。本発明の節煙促進剤を種々の食品の形態とする場合、意図した効果を発揮することができ、かつ安全に摂取することができれば、食品の形態は特に制限されない。チューインガム、キャンディーの形態とすることは、携帯するのに都合がよく、必要なときに直ちに摂取することができる等の観点から特に好ましい。
【００２３】
食品の形態である本発明の節煙促進剤は、当業者にはよく知られた工程により製造することができる。製造工程は、モノアミンオキシダーゼ阻害物質を分解又は不可逆的に変化させることがなければ特に制限されない。例えば、チューインガムを製造するためには、一般には、加熱したガムベースに糖類、香料等を加えてよく混合し、混合物をシート状に成型し、そしてシートを裁断する工程を経るが、本発明に係る植物抽出物をガムベースに混合させたり、裁断されたものに植物抽出物粉末を吸着させることにより、チューインガムの形態である本発明の節煙促進剤を製造することができる。
【００２４】
食品への配合量は、一回の摂取当たり（食品１個、又は複数個当たり）粗製の植物抽出物（例えば、本明細書実施例１〜５に記載された方法で得られたもの）量では、約０．０５〜約１００，０００ｍｇ、好ましくは約０．５〜約１０，０００ｍｇ、より好ましくは約５〜約１，０００ｍｇ摂取することができる量とする。モノアミンオキシダーゼ阻害活性では、一回の摂取当たり約３．２５〜約６，５００，０００ｕｎｉｔ、好ましくは約３２．５〜約６５０，０００ｕｎｉｔ、より好ましくは約３２５〜約６５，０００ｕｎｉｔで摂取することができる量とする。なお、本明細書ではモノアミンオキシダーゼ阻害活性単位を次のように定義する。即ち、実施例６に記載した方法でモノアミンオキシダーゼ作用による蛍光強度（Ｅｘ／Ｅｍ（５６０ｎｍ／５９０ｎｍ））を測定した場合に、その蛍光強度の上昇を１分間に１０抑制する力価を１単位（ｕｎｉｔ）とする。
【００２５】
食品への植物抽出物の配合例を以下に示す。なお、表中の「％」は重量に基づく。
【００２６】
【表１】
0003568857.tif 000002
【００２７】
【表２】
0003568857.tif 000003
【００２８】
【表３】
0003568857.tif 000004
【００２９】
【表４】
0003568857.tif 000005
【００３０】
【表５】
0003568857.tif 000006
【００３１】
本発明の節煙食品の摂取は、摂取の目的に応じたものとすることができる。例えば、禁煙又は一日当たりの喫煙量を減じるためには、一定期間・連続的に（例えば毎日１回・１ヶ月間）摂取することができるし、一時的に喫煙を控えるためには、喫煙を控えなければならないときの前又は喫煙を控えなければならないときに一時的に（例えば、会議の直前に１回）摂取することができる。
【００３２】
本発明の節煙促進剤を医薬組成物の形態とする場合、投与経路は意図した効果を発揮することができ、かつ安全に投与することができれば特に制限されない。経口的又は非経口的に、全身的又は局所的に投与することができる。例えば、経口投与、舌下投与、鼻内投与、吸入投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与することができる。簡便であり、自己投与が容易であるという観点からは、経口投与が好ましい。
【００３３】
本発明の喫煙促進剤は種々の剤形とすることができる。意図した効果を発揮することができ、かつ安全に投与することができれば剤形は特に制限されず、投与経路等に応じたものとすることができる。例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができるが、これらに限定されない。また、これらの製剤には薬剤的に許容できる種々の担体を加えることができる。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、コーティング剤を添加することができるが、これらに限定されない。本発明の喫煙促進剤を持続性、徐放性のものとしてもよい。このような種々の製剤は、当業者にはよく知られた工程により製造することができる。
【００３４】
本発明の医薬組成物の投与量は、粗製の植物抽出物（例えば、本明細書実施例５に記載された方法（２）で得られたもの）量では、約０．０５〜約１００，０００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは約０．５〜約１０，０００ｍｇ／ｄａｙ、より好ましくは約５〜約１，０００ｍｇ／ｄａｙである。モノアミンオキシダーゼ阻害活性では、約３．２５〜約６，５００，０００ｕｎｉｔ／ｄａｙ、好ましくは約３２．５〜約６５０，０００ｕｎｉｔ／ｄａｙ、より好ましくは約３２５〜約６５，０００ｕｎｉｔ／ｄａｙで投与する。もちろん個別的に、投与の目的（一時的に節煙するか、長期的に節煙するか等）、患者の性別、体重、年齢、剤型、投与経路、投与回数、投与経過等に応じて適宜決定することもできる。１日あたりの量を数回に分けて投与することもできる。また、単独で投与してもよく、他の喫煙を控えるための剤と組み合わせて投与することもできる。
【００３５】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明の範囲は実施例により制限されない。
【００３６】
【実施例】
実施例１（フユボダイジュ抽出物の製造）
１００ｇのボダイジュエキスパウダーＭＦ（丸善製薬（株）社製）に５０％（（ｖ／ｖ）。以下、エタノールについての％表示において同じ。）エタノールを加え５０℃、３０分間抽出を行った後、抽出液をろ別し、乾燥した。１００ｇのフユボダイジュから約４７ｇの乾燥物を黄褐色の固体として得た。
【００３７】
実施例２（セイヨウオトギリソウ抽出物の製造）
１００ｇのセイヨウオトギリソウパウダー（丸善製薬（株）社製）に４０％エタノールを加え５０℃、３０分間抽出を行った後、抽出液をろ別し、乾燥した。１００ｇのセイヨウオトギリソウから約５２ｇの乾燥物を赤褐色の固体として得た。
【００３８】
実施例３（セントジョンズワート抽出物の製造）
セントジョンズワート（（株）常磐植物化学研究所社製）に２５％エタノール溶液を加え３０分間撹拌して抽出した後、ろ別した。１００ｇの乾燥セントジョンズワートから約４６．５ｇの乾燥物を赤褐色の固体として得た。
【００３９】
実施例４（カバ抽出物の製造）
トンガ産カバ（ＮＡＮＯ  Ｍｅｒｃｈａｎｄｉｓｅ    Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社製、トンガ）をミルにてさらに粉末化したものをカバ原末とした。これに１５％エタノールを加え室温にて１時間撹拌し、不溶物をろ別した後、乾燥物を得た。１００ｇのカバより４１．５ｇの乾燥物を黄褐色の固体として得た。
【００４０】
実施例５（オトギリソウ抽出物の製造）
方法（１）：１ｋｇのオトギリソウ（内田和漢薬社製）に９９．５％、５０％、及び１５％エタノールを加え４０℃、１時間加熱撹拌抽出を行い、抽出液をろ別して得た。１ｋｇの乾燥オトギリソウから約４８６ｇ、５０７ｇ、５５８ｇの乾燥物をそれぞれ赤褐色の固体として得た。
【００４１】
方法（２）：１ｋｇの乾燥オトギリソウを３Ｌの０．５％重炭酸ナトリウム溶液に浸漬し、８０℃以上、１５〜３０分間加熱した。１６〜２４時間室温に放置した後、抽出液をろ別して得た。１ｋｇの乾燥オトギリソウから約６３５ｇの乾燥物を赤褐色の固体として得た。
【００４２】
実施例６
実施例１〜５に記した方法で調製した各抽出物のモノアミンオキシダーゼ阻害活性を次の２つの方法で測定した。
【００４３】
（１）モノアミンオキシダーゼ阻害活性測定法（ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ法）：ＡｍｐｌｅｘＴＭ  Ｒｅｄ    Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  Ｏｘｉｄａｓｅ    Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ    Ｐｒｏｂｅｓ社製）を用い、一部変更して測定した。モノアミンオキシダーゼはマウス脳ホモジネート（５０ｍＭ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ    ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，    ｐＨ７．４）を酵素液として用いた。７０μｌのマウス脳ホモジネートに、５０ｍＭ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ    ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，    ｐＨ７．４を用いて各種植物抽出物が２ｍｇ／ｍｌ  の濃度になるように調製された溶液を３０μｌ加え、室温で３０分間プレインキュベートした。これに１００μｌのＡｃＦｍｉｘを加え、３０分間室温でインキュベートし、蛍光強度をＥｘ．５６０ｎｍ、Ｅｍ．５９０ｎｍで測定した。測定系のブランクには１００℃、１０分間加熱して失活させたマウス脳ホモジネートを用いた。
【００４４】
（２）モノアミンオキシダーゼ阻害活性測定法（ｉｎ  ｖｉｖｏバイオアッセイ法）：脱イオン水に溶解した各種植物抽出物をマウス（ＩＣＲ、５週令、雄）に体重（ｋｇ）当たり１ｍｇ（阻害活性では、６５ｕｎｉｔ）になるように胃ゾンデで強制経口投与し、３時間までの脳中のモノアミンオキシダーゼ活性を測定した。脳は等量の５０ｍＭ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ    ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐＨ７．４）でホモジネートし、この脳ホモジネートを１００倍に希釈し、ＡｍｐｌｅｘＴＭ  Ｒｅｄ    Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  Ｏｘｉｄａｓｅ    Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ    Ｐｒｏｂｅｓ社製）を用いて、モノアミンオキシダーゼ阻害活性を測定した。
【００４５】
実施例１〜５に記した方法で調製した各植物抽出物のモノアミンオキシダーゼ阻害活性を表６にまとめて記す。
【００４６】
【表６】
0003568857.tif 000007
【００４７】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて各種植物抽出物はモノアミンオキシダーゼを１０％〜３０％阻害した。また、バイオアッセイにおいて各種植物抽出物中のモノアミンオキシダーゼ阻害物質は経口投与にて吸収されており、投与後１時間で既に脳のモノアミンオキシダーゼ活性が抑制されていた。この活性抑制は３時間後でも持続していた。このことから、各種植物抽出物中のモノアミンオキシダーゼ阻害物質は血液脳関門を通過して脳内に達し、脳内モノアミンオキシダーゼ活性を阻害していた。
【００４８】
実施例７
１）オトギリソウ抽出物（０．５％重曹水抽出物；実施例５の方法（２）で得られたもの。以下同じ。）とフユボダイジュ抽出物（実施例１）、２）オトギリソウ抽出物（０．５％重曹水抽出物）とセイヨウオトギリソウ抽出物（実施例２）、３）オトギリソウ抽出物（０．５％重曹水抽出物）とセントジョンズワート抽出物（実施例３）、４）オトギリソウ抽出物（０．５％重曹水抽出物）とカバ抽出物（実施例４）の組み合わせで、バイオアッセイ法及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ法を用いてモノアミンオキシダーゼ活性阻害率を測定した。結果を表７に示す。
【００４９】
【表７】
0003568857.tif 000008
【００５０】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法において上記の組み合わせによるモノアミンオキシダーゼ活性阻害率は２６％〜４５％であった。また、バイオアッセイにおいてもこれらの組み合わせにより単独のときよりも阻害率が上昇した。
【００５１】
実施例８（食品の製造）
砂糖、ガムベース、水飴、ブドウ糖、パラチノース、香料、軟化剤、パラチノースオリゴ糖、クチナシ色素、ウーロン茶抽出物を原材料とする、クールミントガム（商品名）（（株）ロッテ社製）に、１枚当たり５０ｍｇのオトギリソウ抽出物（実施例５の０．５％重曹水抽出物）を担持させ、節煙促進用ガムを製造した。モノアミンオキシダーゼ阻害活性では、ガム１枚当たり約３３００ｕｎｉｔに相当しうる。
【００５２】
実施例９
ボランティアは喫煙歴１０年以上で、１日に２０〜４０本（平均２８．０±６．５）のタバコを消費する研究所勤務の男性６名である。消費しているタバコのニコチンとタール含量はそれぞれ１本当たり０．１〜１．３ｍｇ（平均０．８ｍｇ／本）、１〜１５ｍｇ（平均９．３ｍｇ／本）であり、各ボランティアの消費しているタバコの銘柄その他の制限を特に加えていない。タバコの消費量は労働内容や質等の諸条件及びアフターワークの過ごし方等によって変動が激しいことから、実験実施期間を１ヶ月間に設定した。その間の食事や飲酒を含むライフスタイルに一切の制限を加えていない。なお、被験者には摂取するガムが節煙促進的に作用しうることを知らせた。
【００５３】
実施例８で製造したガムを平日では朝９時と昼食後に摂取させ、休日は午前中と午後の任意の時間にそれぞれ摂取させた。喫煙量と摂取感は各自の申告にて聞き取り調査した。結果を表８に示す。
【００５４】
【表８】
0003568857.tif 000009
【００５５】
オトギリソウ抽出物摂取前の１日当たりの平均タバコ消費本数は２８であったが、摂取後のそれは１６本になり、約４３％も減少した。その減少率は一様でなく、１７〜６５％までその変動はかなり大きかったが、いずれのボランティアにおいてもタバコ消費量は減少していた。オトギリソウ抽出物を摂取している間の感想については特に普段と変わらなかったが、タバコを美味しいと感じなくなったとのコメントが多かった。
【００５６】
１ヶ月間オトギリソウ抽出物を摂取した後においても、なお節煙促進効果が得られたことは、本実験の節煙促進効果が偽薬効果によって得られたものではないことを示す。
【００５７】
実施例１０
１日に約１０本のタバコ又はそれ以下のタバコを消費する男性５名について、実施例９と同様の試験を行った。結果を表９に示す。
【００５８】
【表９】
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【００５９】
オトギリソウ抽出物を２週間継続して摂取した後は、全員が喫煙しなくなった。
【００６０】
実施例１１
実施例５の方法（２）で得られたオトギリソウ抽出物を、次のように簡単に部分精製した。オトギリソウ抽出物を３０％エタノールに溶解し、溶解物と不溶物とに分けた。溶解物を３０％エタノールに平衡化したコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮ（ナカライテスク社製）に負荷し、非吸着物を３０％エタノールで洗い出し、次いで、５０％エタノールで溶出した。５０％エタノール溶出物をさらに酢酸エチル可溶物と不溶物とに分画した。
市販のヒペリシン（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐ．社製）、及び上述のそれぞれの画分について薄層クロマトグラフィによる展開操作を行い、Ｒｆ値を求め、展開後スポットの蛍光色を観察した。展開条件等はＭｕｌｉｎａｃｃｉらの方法（Ｍｕｌｉｎａｃｃｉ，Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＨＰＬＣ−ＤＡＤ  ａｎｄ    ＴＣＬ−Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｙ    ｆｏｒ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ    ｉｎ    Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ  Ｌ．  Ｅｘｔｒａｃｔｓ，Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ，４９，１９７−２０１，１９９９）に準じた。また、それぞれの画分について、マウス法由来モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）阻害活性を実施例６の（１）の方法に従って測定した。結果を表１０に示す。
【００６１】
【表１０】
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【００６２】
ヒペリシンにはマウス脳由来モノアミンオキシダーゼ阻害活性は認められず、マウス脳由来モノアミンオキシダーゼの活性を３０％促進した。また、高い比活性を有する＃１画分及び＃２画分はヒペリシンを含有しなかった。
【００６３】
なお、＃２画分について検討したところ、モノアミンオキシダーゼを非競争的に阻害することが分かった。
また、＃２画分について、スーパーデックスペプタイドＨＲ１０−３０カラム（ファルマシア社製）を用いて測定したところ、含まれる物質の分子量は２５００以下であった。