(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
あらかじめ選択した分析対象物の測定のための血清非含有コントロール試薬処方物であって、４級塩ポリマーのポリ（ジアリルジメチルアンモニウム）クロリドおよび所定量の分析対象物の水溶液を含むことを特徴とするコントロール試薬。
【請求項２】
４級塩ポリマーが、コントロール処方物に基づき０．５〜５．０重量％の濃度で存在する請求項１記載のコントロール試薬。
【請求項３】
４級塩ポリマーが、０．２〜２．０重量％の濃度で存在する請求項１記載のコントロール試薬。
【請求項４】
分析対象物が、グルコース、ＢＵＮ、ナトリウム、蛋白質または尿酸である請求項１記載のコントロール試薬。
【請求項５】
分析対象物がグルコースであり、正常範囲である８０〜１２０mg/dL または病理学的範囲である２５０〜５００mg/dL の範囲で存在する請求項１記載のコントロール試薬。
【請求項６】
処方物中に保存料が含まれている請求項１記載のコントロール試薬。
【請求項７】
保存料が、シス−１−（３−クロロアルキル）−３，５，７−トリアザ−１−アゾニアダマンタンクロリドである請求項６記載のコントロール試薬。
【請求項８】
試薬をpH約７．５に緩衝可能な緩衝剤を含む請求項１記載のコントロール試薬。
【請求項９】
緩衝剤が、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸である請求項８記載のコントロール試薬。
【請求項１０】
グルコースの測定のための血清非含有コントロール試薬処方物であって、所定量のグルコース、試薬処方物に基づき０．５〜５．０重量％の重合度８００〜２３００であるポリ（ジアリルジメチルアンモニウム）クロリド、処方物のpHを約７．５に緩衝するための４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸および保存料として０．１〜０．５重量％のシス−１−（３−クロロアルキル）−３，５，７−トリアザ−１−アゾニアダマンタンクロリドを含むことを特徴とするコントロール試薬。
【請求項１１】
重合度が１１００〜１９００である請求項１０記載のコントロール試薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、臨床化学分析に使用されるコントロール試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
臨床化学の分野は、体液中の各種物質の検出および定量に関連している。測定可能な物質としては、コレステロール、グルコース、尿素、そして尿および血液などの各種体液中に認められるカルシウムおよびカリウムなどのカチオンが挙げられる。
【０００３】
臨床化学において最も頻繁に使用される分析装置の一つは、試験片（試験ストリップ）であり、この試験片と試験を行う体液とを接触させる。試験片に含まれる各種試薬は、体液中に含まれる測定すべき分析対象物と反応して、検出可能なシグナルを発するが、このシグナルは代表的には色の変化である。このような色の変化を、視覚的にまたは、より高い精度が必要であれば、分光光度測定により測定する。検出されたシグナルを標準物質と相関させて、それにより試料中の分析対象物の量に関する値を得る。
【０００４】
上述した種類の臨床分析は、有効な測定結果を得るためには、自動システムを使用する場合には特に、非常に正確である必要がある。コントロール試薬を使用して装置が正確な応答を示しているかどうかを調べることによって、その精度が証明される。
【０００５】
コントロール試薬とは、品質管理を目的としてのみ分析される標本または溶液であり、検量のためには使用されない。好適なコントロール試薬は、長期間にわたって定期的に分析することができるよう、安定であり、小分けした状態（アリコートで）またはバイアルに入った状態で入手可能でなければならない。繰り返し測定した場合に観察される差が、分析法のみに起因するとすることができるよう、小分け分またはバイアル間にほとんどまたはまったくバラつきがあってはならない。
【０００６】
当業界において「コントロール血清」として知られている改変ヒト血清は、一種のコントロール物質である。コントロール物質の要件の一つは安定性である。しかし、血清に基づくコントロール物質は、それに含まれる各種成分のため、本質的に不安定である。更に血清には、その供給源によりバラつきがあるため、異なるロットのコントロール血清を使用して得られる結果の再現性を予測することはできない。本発明が関するものであるコントロール試薬は、いかなる種類の血清にも基づかず、いかなる種類の血清も含まないコントロール物質である。
【０００７】
米国特許第３，９２０，５８０号には、グルコース／水の溶液中に抗拡散剤を配合することによって、いかなる血清またはその成分をも使用せずに、グルコース測定用コントロール試薬を調製しうることが開示されている。本特許において開示されている抗拡散剤としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、デキストランおよびウシ血清アルブミンがある。
【０００８】
米国特許第５，０２８，５４２号には、所定量のグルコース、水およびスルホン酸ポリスチレンまたはその可溶性塩を含むグルコースコントロール試薬が開示されている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
このような従来技術のコントロール試薬は、その安定性、ある種の試験片に用いられるテトラゾリウム塩指示薬との適合性、および表面張力のいずれもが、血清のそれよりも低いという点で多少限られている。我々は、テトラゾリウム塩指示薬の溶解性を高め、それによってコントロール試薬の性能を向上させる、これらのコントロール試薬に使用可能な特定の種類のポリマーを見出した。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、あらかじめ選択した分析対象物の測定のための血清非含有コントロール試薬であって、式：
【００１１】
【化２】
0003564186.tif 000002
【００１２】
で示されることを特徴とするジ−若しくはモノ−アリル、ジ−若しくはトリ−アルキルアンモニウムの４級塩ポリマーまたはそのコポリマーおよび分析対象物の水溶液を含むことを特徴とするコントロール試薬に関する。上記の式においては、Ｒは炭素数１〜４の直鎖または分枝アルキルであり、ｎは重合度を示す少なくとも９の数であり、そしてθは対アニオンを示す。
【００１３】
本処方物には、場合によっては緩衝剤、着色料および保存料も含まれる。
【００１４】
カチオン性４級アンモニウムポリマーおよび水の塩基性処方物は、グルコース、ＢＵＮ、ナトリウム、蛋白質および尿酸などの分析対象物を加えて、診断試験システム用水性コントロールを調製するベースとして使用される。
【００１５】
本処方物は、既知の正確に固定された濃度の測定すべき分析対象物を含むコントロール試薬を用いた、自動分析機による測定法の正確さおよび精密さのコントロールに適している。
【００１６】
多くの水性コントロールは、ポリビニルアルコール、およびポリビニルピロリドンなどのポリマーをその処方物に含む。本発明は、水性診断用コントロールに使用するための安定化緩衝システムにおける、上述した種類の合成水溶性ポリマーの使用に関する。このコントロールシステムは、酸化還元指示薬、特にテトラゾリウム塩と、再水和されるとあらかじめ選択した分析対象物との接触に際し指示薬から検出可能な応答を引き出す試薬システムとが、マトリックス材に均一に分散している乾燥試薬片法と組み合わせると、特に有用である。カチオン性ポリマーは、反応層における試薬の移行（クロマトグラフィーによる）を抑えることによって、反応した試薬パッドにおいてより均一な色をもたらし、反応（拡散）速度により測定の動力学をコントロールするための増粘剤として有用である。ぬれ速度が最終結果に影響するからである。本発明の４級アンモニウムポリマー化合物、例えばポリ（ジアリルジメチルアンモニウム）クロリド（ＰＤＤＡ）およびその類似体の表面活性特性は、本発明のポリマーは乾燥試薬パッドのぬれを助け、それによって他の界面活性剤を本処方物に加える必要を制限しているという点で、ＰＶＰおよびＰＶＡと区別することができる。スルホン酸ポリスチレンは、表面活性特性を有することが知られているが、本発明のシステムで用いられるポリマーとは、スルホン酸ポリスチレンは負に荷電するがＰＤＤＡおよびその類似物は正に荷電するという点で異なる。
【００１７】
本発明の試薬システムを調製するには、ポリマーを水（好ましくは蒸留水）に溶解して、所望の粘度およびぬれ特性を有する濃度の溶液とする。代表的には、選択した特定の４級アンモニウムポリマー化合物およびポリマーの分子量に応じて、０．５〜５．０重量％（好ましくは０．２〜２．０％）の濃度が挙げられる。これらのポリマーは、アリル基によって占められていない窒素の原子価結合が、炭素数１〜４の直鎖または分枝アルキル基によって占められているアリルまたはジアリル４級アンモニウム塩を重合することによって調製される。これらの塩およびその重合によって得られるポリマーは、対アニオンとして代表的にはハロゲン化物、例えば塩化物または臭化物を有しているが、酢酸塩またはスルホン酸塩など他の対アニオンと結合していてもよい。ポリ（ジアリルジメチルアンモニウム）クロリドつまりＰＤＤＡは、本発明における使用のために選択することのできるポリマーであり、ポリサイエンス社（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．）より入手可能である。これらのポリマーの重合度、つまり上記式中のｎの値は、代表的には約８００〜２３００であり、重合度は約１１００〜１９００であるのが好ましい。
【００１８】
この他の必須成分が、関心のある分析対象物であるのは勿論である。他の分析対象物にも同様に適用可能であると理解して、グルコースを関心のある分析対象物とした考察を以下に述べる。
【００１９】
グルコースとしては、正確な量がコントロール溶液に含まれるよう、代表的には高グレードのＤ−グルコースを使用する。Ｄ−グルコースおよびデキストロースは本発明において使用するには同等の物質であるとみなされ、相互に置き換えても構わない。溶液中のグルコースの量は、その溶解性の限界以内では重要ではないが、コントロール溶液は代表的には約１〜１，０００ｍｇ／ｄＬ（ｍｇ／  １００ｍｌ溶液）のグルコースを含む。この範囲内で、正常範囲（８０〜１２０ｍｇ／ｄＬ）および病理学的範囲（２５０〜５００ｍｇ／ｄＬ  ）のグルコースを含むコントロール試薬を調製することができる。
【００２０】
微生物の成長を防ぐために、コントロール試薬中に保存料を含有させるのも有益である。好適な保存料としては、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、ソルビン酸、リン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。有効成分が〔シス−１−（３−クロロアルキル）−３，５，７−トリアザ−１−アゾニアダマンタンクロリド〕（９５％）であり、残留出発物質として塩酸ヘキサメチレンテトラミン（５％）（重量／容積）を含有するダウイシル（Ｄｏｗｉｃｉｌ  ）２００が、ｐＨ７．５では有効な保存料ではない安息香酸塩とは反対に中性ｐＨで抗微生物活性を保持しているため、保存料として好ましい。本処方物中の保存料の濃度は、代表的には０．１〜０．５重量％である。
【００２１】
コントロール試薬は、好ましくはｐＨ約７．５に緩衝化する。このｐＨは血液の生理学的ｐＨに近いからである。検討中のこの種の試薬パッドは、血液での使用のために提案されたものであるため、コントロール溶液は、ｐＨを含めた生理学的特性に関し、できるだけ血液に近いものでなければならない。好適な緩衝剤としては、ＨＥＰＰＳ（Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸）；ＭＯＰＳ〔３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸〕およびＨＥＰＥＳ〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸〕が挙げられる。ＨＥＰＥＳは、溶液をｐＨ７．５に緩衝することができるため、特に好適である。
【００２２】
特定の色または物理的外観を付与するために、更に補助薬をコントロール溶液に加えてもよい。ユーザーが本コントロール溶液を試薬片の正しい箇所に適用するのを助けるために、この種の処方物においては赤い血の色が望ましいが、この色は、処方物に赤色の水不溶性染料を配合することによって得てもよい。赤色染料＃４０は、本目的に好適である。溶液が無色である場合、コントロール溶液の水滴が適用箇所に正しく適用されているかどうかを確認するのは困難であるため、この意義は大きい。
【００２３】
【実施例】
本発明を、以下に述べる実施例により更に説明する。
実施例
以下の処方の水性グルコースコントロール試薬を調製した。
３７．４ｇ／Ｌ  （０．１５Ｍ）ＨＥＰＥＳ  ０．５ナトリウム塩
０．４ｇ／Ｌ  ＦＤ＆Ｃ赤色染料＃４０
３０、１００、３００、４５０および６００ｍｇ／ｄＬ  グルコース。
【００２４】
一方の試薬には、６０ｇ／Ｌ  ポリ（ジアリルジメチルアンモニウム）クロリドを含有させ、他方の試薬にはポリマーを含有させなかった。対照としてヒト血漿を用い、表示濃度のグルコースを含有する血漿およびコントロール試薬の適用６０秒後に（Ｋ／Ｓ値に関する）反応性を測定することによって、技術には依存しない乾燥試薬グルコースフォーマットによりそれぞれのコントロール試薬の試験を行った。
【００２５】
ポリマーを含まないコントロール試薬を用いたこの実験の結果は図１に、又、ＰＤＤＡ含有コントロール試薬を用いて得た結果は図２に図示した。これらの図から、本発明のポリマーを含むコントロール試薬の反応性は、ポリマーを含まないコントロール試薬のそれよりもはるかに血漿のそれと近いことが明らかである。
【図面の簡単な説明】
【図１】ポリマーを含まないコントロール試薬を用いた場合の反応性を表す図。
【図２】ポリマーを含むコントロール試薬を用いた場合の反応性を表す図。
【図１】
0003564186.tif 000003
【図２】
0003564186.tif 000004