(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬的に許容できる賦形剤中に、 薬理学的に活性な量の下記のペプチド
H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH、配列番号（SEQ ID NO）：１
H-D-Arg-Arg-Pro-Pro-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH、配列番号：２
H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH、配列番号：３
H-(４−ベンゾイル)ベンゾイル−Lys-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH、配列番号：４
H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH、配列番号：５
H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-D-HypE(トランスプロピル)-Oic-Arg-OH、配列番号：６
または生理学的に許容できるそれらの塩を含有する、急性膵炎治療に使用する医薬組成物。
【請求項２】
H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH、配列番号（SEQ ID NO）：１または生理学的に許容できるその塩が用いられる、請求項１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ブラジキニン拮抗剤または生理学的に許容できるそれらの塩の急性膵炎治療のための使用、それらを含有する医薬製剤および適切な医薬組成物の製造のためのそれらの使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ブラジキニンは、これまで長い間、急性膵炎に関与すると考えられてきた。しかし１９８９年、Ｂｅｒｇらはこの仮説を打ち破った。Ｂｅｒｇらは、ラットの急性膵炎の進行によって引き起こされる低血圧は、Ｄ−Ａｒｇ０−Ｈｙｐ３−Ｔｈｉ５．８−Ｄ−Ｐｈｅ７−ＢＫ（Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｔｈｉ−Ａｒｇ）によって影響されないことを示した（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  Ｖｏｌ．２５１，  Ｎｏ．２  （１９８９）７３１〜７３４ページ）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題および課題解決の手段】
驚くべきことに、我々は、急性膵炎治療に適したペプチドは下記式Ｉのペプチド、およびそれらの生理学的に許容できる塩であることを見いだした：
Ｒ１−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｊ−Ｋ−Ｒ２      （Ｉ）
式中、
Ｒ１は水素を表わすかまたはメルカプト、ヒドロキシフェニルもしくは（４−ベンゾイル）フェノキシにより置換され得るＣ１〜Ｃ４−アルカノイルを表すか、または（４−ベンゾイル）ベンゾイル−Ｌｙｓを表し；
ＡはＤ−ＡｒｇもしくはＤ−Ｌｙｓを表すか、または直接結合を示し；
ＢはＮＯ２もしくはトルオール−４−スルホニルにより置換され得るＡｒｇを表すか、またはトルオール−４−スルホニルもしくはＣＯ−ＮＨ−Ｃ６Ｈ５により置換され得るＬｙｓを表すか、または直接結合を示し；
ＣはＨｙｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ、デヒドロＰｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙを表し；
ＥはＴｈｉ、Ｐｈｅ、ＬｅｕまたはＣｈａを表し；
ＦはＳｅｒまたはＣｙｓを表し；
ＧはＤ−Ｔｉｃ、Ｄ−ＰｈｅまたはＣ１〜Ｃ４−アルコキシにより置換されたＤ−Ｈｙｐを表し；
ＪはＴｉｃ、ＡｏｃまたはＯｉｃを表し；
ＫはＡｒｇまたはＡｈｘを表すか、または直接結合を示し；
Ｒ２はヒドロキシまたはアミノである。
【０００４】
別段の規定がない場合には、異性体記述子をもたないアミノ酸基またはイミノ酸基の略語は、Ｌ型の基を示す。例えば下記の通りである；
Ａｈｘは＊−アミノヘキサノイル、
Ａｏｃはシス，エンド−２−アザビシクロ〔３，３，０〕オクタン−３−Ｓ−カルボノイル、
Ａｒｇはアルギニン、
Ｃｈａはシクロヘキシルアラニン、
Ｃｙｓはシステイン、
Ｇｌｙはグリシン、
Ｈｙｐはヒドロキシプロリン、
ＨｙｐＥ（トランスメチル）は４−ヒドロキシプロリン−トランス−メチルエーテル、
ＨｙｐＥ（トランスプロピル）は４−ヒドロキシプロリン−トランス−プロピルエーテル、
Ｌｅｕはロイシン、
Ｌｙｓはリジン、
Ｏｉｃはシス，エンドオクタヒドロインドール−カルボニル、
Ｐｈｅはフェニルアラニン、
Ｐｒｏはプロリン、
Ｔｈｉは２−チエニルアラニン、
Ｔｉｃは１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−イル−カルボニル、
Ｔｙｒはタイロシンである。
上記のアミノ酸基またはイミノ酸基のあるものは、欧州特許公開公報第３７０４５３号（ＥＰ−Ａ３７０４５３）（ＨＯＥ  ８８／Ｆ  ３２８Ｋ）に記載されている。
【０００５】
好ましい具体例は、下記のような式（Ｉ）のペプチドおよびそれらの生理学的に許容できる塩を使用することから成る：すなわち
Ｒ１は水素を表わすか、メルカプトもしくは（４−ベンゾイル）フェノキシにより置換され得るアセチルを表すか、または（４−ベンゾイル）ベンゾイル−Ｌｙｓを表し；
ＡはＤ−Ａｒｇを表すか、または直接結合を示し；
Ｂはトルオール−４−スルホニルにより置換され得るＡｒｇを表すか、または直接結合を示し；
ＣはＰｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＧｌｙまたはデヒドロＰｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙを表し；
ＥはＴｈｉ、ＰｈｅまたはＬｅｕを表し；
ＦはＳｅｒまたはＣｙｓを表し；
ＧはＤ−Ｔｉｃ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−ＨｙｐＥ（トランスメチル）またはＤ−ＨｙｐＥ（トランスプロピル）を表し；
ＪはＴｉｃ、ＡｏｃまたはＯｉｃを表し；
ＫはＡｒｇを表し；
Ｒ２はヒドロキシである。
【０００６】
特に好ましい具体例は、下記のような式（Ｉ）のペプチドおよびそれらの生理学的に許容できる塩を使用することから成る：すなわち
Ｒ１は水素または（４−ベンゾイル）ベンゾイル−Ｌｙｓを表し；
ＡはＤ−Ａｒｇを表し；
ＢはＡｒｇを表し；
ＣはＰｒｏ−Ｈｙｐ−ＧｌｙまたはＰｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙを表し；
ＥはＴｈｉ、ＰｈｅまたはＬｅｕを表し；
ＦはＳｅｒを表し；
ＧはＤ−ＴｉｃまたはＤ−ＨｙｐＥ（トランスプロピル）を表し；
ＪはＯｉｃを表し；
ＫはＡｒｇを表し；
Ｒ２はヒドロキシである。
【０００７】
極めて好ましいものには、下記の式（Ｉ）のペプチドおよびそれらの生理学的に許容できる塩の使用がある：すなわち、
Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ）：１
Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、配列番号：２
Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、配列番号：３
Ｈ−（４−ベンゾイル）ベンゾイル−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、配列番号：４
Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、配列番号：５
Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｄ−ＨｙｐＥ（トランスプロピル）−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ、配列番号：６。
【０００８】
式（Ｉ）のペプチドは、例えば下記のようにして製造することができる：
ａ）  Ｃ−末端に遊離のカルボキシル基を有するフラグメントまたはその活性化誘導体とＮ−末端に遊離のアミノ基を有する適切なフラグメントとを反応させるか、または
ｂ）  段階的にペプチドを合成し、
場合によっては、ａ）またはｂ）に従って得られた化合物中の他の官能基の保護のために一時的に導入された、一つまたは二つ以上の保護基を除去し、さらに場合によって、このようにして得られた式（Ｉ）の化合物を生理学的に許容できる塩に変換するか、
または、欧州特許公開公報第３７０４５３号（ＨＯＥ  ８８／Ｆ  ３２８Ｋ）、同第４１３２７７号（ＨＯＥ  ８９／Ｆ  ２６１）もしくは同第４５５１３３号（ＨＯＥ  ９０／Ｆ  １３１）またはＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９１，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．８，２６４９〜２６５３ページ）に記載されたように調製する。
【０００９】
式（Ｉ）のペプチドは、アルカリ金属、アルカリ土類金属、生理学的に許容できるアミンおよび無機または有機酸、例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸および酢酸を用いて、対応する塩に容易に変換できる。この塩は、本発明に従って用いることができる。
【００１０】
式（Ｉ）のペプチドは、腺および腹膜後腔組織の広範囲の浮腫、蛋白分解酵素による間質活性化、血清アミラーゼおよびリパーゼ濃度の増加、血量減少症（ｈｙｐｏｖｏｌａｅｍｉａ）、低アルブミン血症、肺水腫および激痛を特色とする急性膵炎の治療に有効である。
【００１１】
さらに本発明は、哺乳類、例えばヒトなどの急性膵炎の治療に用いられる医薬の製造のために本発明のペプチドを使用することも包含するものである。
該医薬は、それ自体既知の方法であって、また当業者に慣用されている方法で製造することができる。医薬としては、本発明の薬理学的に活性な化合物（＝活性物質）は、そのまま、または好ましくは適切な医薬補助剤と組み合わせ、活性物質の濃度がおよそ９５％までの、好ましくは１０から７５％の濃度の溶液として用いられる。
【００１２】
所望の医薬組成物に適した補助剤は、当業者の専門的知識に基づいて慣用されるものである。溶媒および活性物質賦形剤の他に、例えば抗酸化剤、分散剤、保存剤または溶解剤を用いることもできる。
【００１３】
該活性物質は非経口的、すなわち皮下、筋肉内もしくは静脈注射または輸液として投与できる。活性物質の投与量は、哺乳類の種、体重、年齢および投与法により異なる。
【００１４】
本発明の医薬調製物は、それ自体既知の方法を用いて溶液として製造される。静注、皮下注または筋注用には、該活性化合物または生理学的に許容できるそれらの塩は、必要な場合には調剤上慣用されている補助剤、例えば等張化剤、ｐＨ調製剤、溶解剤、乳化剤または他の補助剤とともに溶液化される。
全身投与用剤形における適切な投与量範囲は、いずれの場合でも０．０１〜１ｍｇ／ｋｇである。
【００１５】
【実施例】
試験方法：
材料：式（Ｉ）のＡペプチド、セルレイン（ｃａｅｒｕｌｅｉｎ，ＣＲＬ，シグマ、米国）およびブラジキニン（Ｂａｃｈｅｍ，スイス）を、１ｍＭの濃度で生理的食塩水に溶かした。ブタ膵臓カリクレイン（シグマ、米国）を５０％（ｖ／ｖ）エタノールに溶かし、１５４ｍＭのＮａＣｌ溶液で希釈した。ペントバルビトンナトリウム（（Ｒ）Ｎｅｍｂｕｔａｌ）はＳａｎｏｆｉ（フランス）から購入した。フェノバルビトンナトリウムはＡｐｏｋａ（オーストリア）から購入し、１５４ｍＭの塩化ナトリウム溶液に８０ｍｇ／ｍｌの濃度に毎日新しく溶かした。カプトプリルはＳｑｕｉｂｂ  ｖｏｎ  Ｈｅｙｄｅｎ  ＧｍｂＨ（オーストリア）から購入し、エバンス青は、シグマ（米国）から購入した。
【００１６】
式（Ｉ）のペプチド（表１〜３）：
Ａ：Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−ＯＨ
統計分析：ウサギにおける式（Ｉ）のペプチドの投与前後のブラジキニンおよびカリクレインの降圧効果をクエードテスト（Ｑｕａｄｅ  ｔｅｓｔ）（Ｗ．Ｊ．Ｃｏｎｏｖｅｒ：“Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｓｔａｔｉｃｓ”，第二版、ニューヨーク、Ｗｉｌｅｙ  １９８０，２９５〜２９９）により比較した。ラットの４処置群の間で、ノンパラメトリック多重比較により比べた（Ｊ．Ｈ．Ｚａｒ：“Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ”，第二版、Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ  Ｃｌｉｆｆｓ，  Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，１９８４）。
【００１７】
１．ブラジキニンの体内産生抑制の証明：
方法：雌雄いずれかのウサギ（３．５〜５．０ｋｇ）をペントバルビトンナトリウム（３５ｍｇ／ｋｇ、静注）で麻酔した。ステータム（Ｓｔａｔｈａｍ）圧力変換器で頚動脈の血圧をモニターした。ブラジキニン（１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇ）またはカリクレイン（１〜１０Ｕ／ｋｇ）を１０分間隔で静注した。式（Ｉ）のペプチド（３ｎｍｏｌ／ｋｇ）を静注し、さらにその後ブラジキニンまたはカリクレインの静注を繰り返した。
結果：ブラジキニンおよびカリクレインによる血圧低下（ブラジキニン１０ｎｍｏｌ／ｋｇ、カリクレイン１０Ｕ／ｋｇで惹起）は、ペプチドＡによる処置で完全に阻止された。この結果により、投与ブラジキニンだけでなく、カリクレインによってキニノゲンからはずれたブラジキニンもまた、式（Ｉ）のペプチド（ペプチドＡ）により完全に抑制されることが明らかとなった。
【００１８】
２．ラットの実験的膵炎の治療：
一般方法：動物に実験的に膵炎を誘発するために、膵管結紮、膵管への胆汁酸塩注入、オレイン酸輸液または両生類コレシストキニン類似体であるセルレインの輸液を含むいろいろな方法が用いられてきた。後者の方法は、膵臓の外分泌機能に対して過刺激となり、その結果、ヒトの急性膵炎においても認められる、多くの共通した特色をもつ形態的変化をもたらす（Ｓ．Ｗｉｌｌｅｍｅｒ，Ｒ．Ｂｉａｌｅｋ，Ｈ．ＫｏｅｈｌｅｒおよびＧ．Ａｄｌｅｒ“セルレイン誘発ラット急性膵炎：腺房細胞基底膜の糖蛋白組成における変化”（Ｃａｅｒｕｌｅｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ：ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  ａｃｉｎａｒ  ｃｅｌｌｓ），Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９０；９５；８７〜９６）。以下の実験では、セルレイン誘発ラット膵炎を用いた。
【００１９】
ラットの血圧に対する影響：
方法：スプラーグ−ドーリー種の雌のラット（２６０±３０ｇ）をペントバルビトンナトリウム（４０ｍｇ／ｋｇ，腹腔内注射）およびフェノバルビトンナトリウム（１６０ｍｇ／ｋｇ，腹腔内注射）で麻酔した。カプトプリル（５０ｍｇ／ｋｇ，腹腔内注射）を同時に投与し、キニナーゼＩＩを抑制することによって、種々の組織ではたらく遊離キニンの作用を増大させた（Ｆ．Ｌｅｍｂｅｃｋ，Ｔ．ＧｒｉｅｓｂａｃｈｅｒおよびＭ．Ｅｃｋｈａｒｄｔ，“アンギオテンシン変換酵素の無傷組織調製物における肺臓外活性”（Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｔｒａｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎ  ｉｎｔａｃｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）；Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９０，１００，４９〜５４）。１０分後に、ラットに式（Ｉ）のペプチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）または同容量（０．５ｍｌ／ｋｇ）の１５４ｍＭの塩化ナトリウム溶液を皮下注射した。ステータム圧変換器により頚動脈で全身動脈圧をモニターした。  頚静脈にカニューレを挿入して、  セルレイン（４ｎｍｏｌ／ｋｇ／ｈ）または生理的食塩水（０．０３４ｍｌ／ｍｉｎ）を輸液した。輸液は、式（Ｉ）のペプチドまたは生理的食塩水の注射後３０分に開始し、２時間継続した。実験の最後にラットを断頭して殺処分し、血清アミラーゼおよびリパーゼ値を求めるために血液を採集した。
結果：セルレインの静脈内輸液により血圧が低下した。式（Ｉ）のペプチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ  セルレイン輸液開始３０分前に皮下注射）で処理した動物から得られた数値およびコントロール群の数値は表１に示した。
【００２０】
【表１】
0003588472.tif 000002
平均値±ＳＥＭ。括弧でくくったグループ間の有意差：＊はＰ＜０．０２；＊＊はＰ＜０．０１；ｎ．ｓ．は有意差なし；ｎ＝各グループ１０匹
この結果により、ＣＲＬ誘発血圧降下はペプチドＡによる処置で、コントロール値のレベルまで減少することが示された。ＣＲＬの輸液を行わないペプチドＡ処理では、コントロールのＮａＣｌ輸液と異ならなかった。
【００２１】
膵浮腫に対する影響：
方法：膵浮腫の定量化は、膵臓の乾燥重量および膵臓に蓄積した血漿蛋白を測定することにより行った。輸液終了時に（血圧実験の項参照）、血清中の酵素を測定するために血液を採集した。膵臓を取り出し、重量を測定した。組織を乾燥させた後、湿重量と乾燥重量との差異を該組織の水分含有量として用いた。血清アルブミンと定量的に結合するエバンス青の５ｍｇ／ｋｇを、セルレインまたは生理的食塩水の静脈輸液開始の直前に静注した（Ｒａｗｓｏｎ  ＲＡ：“Ｔ−１８２４および構造的に関連を有するジアゾ色素と血漿蛋白との結合”（Ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｔ−１８２４  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕａｌｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｉａｚｏ  ｄｙｅｓ  ｂｙ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ），Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９４３，１３８，７０８〜７１７）。その後、光度測定でエバンス青濃度を求めるために膵組織を利用した（Ｒ．Ｇａｍｓｅ，Ｐ．Ｈｏｌｚｅｒ，Ｆ．Ｌｅｍｂｅｃｋ：“一次性輸入神経単位におけるサブスタンスＰの減少と神経由来血漿浸出のカプサイシンによる阻害”（Ｄｅｃｒｅａｓｅ  ｏｆ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｆｆｅｒｅｎｔ  ｎｅｕｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  ｐｌａｓｍａ  ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃａｐｓａｉｃｉｎ），Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８０，６８，２０７〜２１３；Ａ．Ｓａｒｉａ，Ｊ．Ｍ．Ｌｕｎｄｂｅｒｇ：“エバンス青による蛍光：動物組織の血管透過性における定量的、形態学的評価”（Ｅｖａｎｓ  ｂｌｕｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ：ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ），Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．１９８３，８，４１〜４９）。コントロールの動物は式（Ｉ）のペプチドまたはセルレインの代わりに同量の食塩水で処置した。血漿浸出は、膵臓の水分およびエバンス青の含有量として定量した。
【００２２】
結果：表２
【表２】
0003588472.tif 000003
平均値±ＳＥＭ。括弧でくくったグループ間の有意差：＊はＰ＜０．０５；＊＊はＰ＜０．０１；＊＊＊はＰ＜０．００１；ｎ＝各グループ１０匹
ペプチドＡによる処置で、ＣＲＬ誘発膵臓浮腫は完全に抑制された。
【００２３】
血清中膵酵素の濃度に対する影響：
方法：２−クロロ−４−ニトロフェニル−Ｄ−マルトヘプトシド（Ａｍｙｌａｓｅ  ｔｅｓｔ  ｋｉｔ，Ｒｏｃｈｅ．Ｆ．Ｒ．Ｇ．）によるキネティックカラーテストで、血清アミラーゼを求めた。血清リパーゼは、トリオレインのモノグリセリドとオレイン酸への分解による濁り減少によって測定した（Ｍｏｎｏｔｅｓｔ  Ｌｉｐａｓｅ，  Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｆ．Ｒ．Ｇ．）。アミラーゼおよびリパーゼの検出限界は、それぞれ１１Ｕ／ｌおよび１６Ｕ／ｌである。コントロールの動物は、式（Ｉ）のペプチドの代わりに同量の食塩水で処置した。
【００２４】
結果：表３
【表３】
0003588472.tif 000004
平均値±ＳＥＭ。括弧でくくったグループ間の有意差：＊はＰ＜０．０５；
ｎ＝各グループ６匹。ｎｎ＝検出不能
ペプチドＡで処置することにより、ＣＲＬ誘発血中アミラーゼおよびリパーゼ活性増加は大きく増強された。
【００２５】
要約すれば、ＣＲＬ誘発実験的膵炎においてブラジキニンが遊離されることが分かった。ブラジキニンは低血圧および膵臓浮腫を誘発する。またＣＲＬは血中膵酵素の増加を引き起こす。式（Ｉ）のペプチドは、このブラジキニン誘発浮腫を抑制し、その結果、膵の酵素に膵組織を障害させないようにし、その後に続く病理学的変化を減少させる。従って、式（Ｉ）のペプチドは、急性膵炎の治療に有効であることが分かった。
【００２６】
さらに、Ｂｅｒｇらにより記載されたＤ−Ａｒｇ０−Ｈｙｐ３−Ｔｈｉ５．８Ｄ−Ｐｈｅ７−ＢＫ（第５ページ参照）とペプチドＡとの比較試験を行った。セルレインの輸液を開始してから１０分後に、二つの拮抗物質を同一条件下で二群のラットに与えた。ペプチドＡは膵臓の水分およびエバンス青含有量の増加を完全に抑制したが、一方Ｂｅｒｇらによって記載された拮抗物質は、ペプチドＡの１０倍の投与量で与えたとき全く効果を示さなかった。
【００２７】
【実施例】
0003588472.tif 000005
【００２８】
【配列表】
0003588472.tif 000006
【００２９】
0003588472.tif 000007
【００３０】
0003588472.tif 000008
【００３１】
0003588472.tif 000009
【００３２】
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【００３３】
0003588472.tif 000011