(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を置換度が０．５−１．０未満となるように部分的にカルボキシ化した天然若しくは再生セルロースからなる可溶性創傷治癒セルロース繊維において、
前記セルロース繊維に、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子とからなる３種の凝固蛋白質を塗布し、或いは化学的に結合したものを乾燥した繊維であって、トロンビンとフィブリノーゲンから変換されるフィブリンモノマーの凝集反応を促進すると共に、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の架橋反応によって凝集物を安定化する作用を併せて有することを特徴とする可溶性創傷治癒セルロース繊維。
【請求項２】
天然若しくは再生セルロース繊維を水酸化ナトリウム水溶液で処理した後、モノクロロ酢酸溶液と反応させてセルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を置換度（エーテル化度）が０．５−１．０未満となるようにカルボキシメチル化し、精製したセルロース繊維に、さらに、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子からなる３種の凝固蛋白質を塗布し、或いは化学的に結合したものを乾燥することによって、トロンビンとフィブリノーゲンから変換されるフィブリンモノマーの凝集反応を促進すると共に、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の架橋反応によって凝集物を安定化する作用を併せて付与してなることを特徴とする可溶性創傷治癒セルロース繊維の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本願発明は、細胞接着促進効果を有する凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血材とその製造方法に係り、詳しくは、体内及び体外の創傷患部に施用することにより血液凝固作用及び細胞拡張作用を促す体内吸収性の可溶性創傷被覆止血材料とその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来の創傷止血材としては、酸化セルロース製剤、ゼラチン製剤、及び微繊維性コラーゲンの３種が知られ、医薬品あるいは医療用具として既に使用されている。酸化セルロース製剤は、主構造を構成しているポリ無水グルコン酸がヘモグロビンと著しい親和性をもち、これと塩を形成することによって止血作用をしめす。この凝血促進作用は、血液凝固機序に対する作用より、むしろ物理的効果と考えられている。すなわち、血液の浸潤により本剤が膨張し褐色もしくは黒色のゼラチン状の塊となって凝血物の形成を促進し、局部止血の止血補助剤として効果を発揮し、約２週間で吸収されるものである。また、微繊維性コラーゲンは牛真皮などから抽出した天然コラーゲンを主な構成物としており、血液の接触により血小板凝集の形成を介して止血を行う。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、酸化セルロース製剤は血液凝固機序に直接作用しないため、凝血作用が弱く、さらに体内で完全に吸収されるのに約２週間を要するため、その間患部の炎症、癒着等を引き起こす原因となる。また、ゼラチン製剤は、吸収性は酸化セルロースに比べ遅く、さらに動物由来の材料であるため、狂牛病、クロイツフェルト・ヤコブ病をはじめとする様々な感染症の要因となる可能性が高い。また、微繊維性コラーゲンは完全に吸収されるにの１ヶ月以上を要し、その間患部の炎症、癒着を引き起こす。さらには材料が牛由来のため、狂牛病、未知のウイルスによる感染等の危険性を持っている。
【０００４】
すなわち、上記各止血材を用いた従来の方法による止血は、体内吸収性が悪く、炎症、癒着などを引き起こし易く、さらには未知の感染症に羅患する可能性がある危険性を有するものなのである。
【０００５】
また、特開平１０−７７５７１号公報には、天然もしくは再生セルロース繊維のセルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を部分的にエーテル化度が１．０以上となるようにカルボキシメチル化した、血液と接触した場合に迅速に溶解して血液と共にゼラチン状を呈して創傷面を覆い、止血効果をあげることとなる可溶性セルロース繊維について記載されている。
【０００６】
しかしながら、カルボキシメチル基の置換度（エーテル化度）が１．０以上のものは、血液と接触しても迅速に溶解せず、大量の不要物が残留し、著しい止血効果を示さず、さらに、可溶化したカルボキシメチルセルロース繊維は血液凝固第ＸＩＩ因子を始めとする凝血酵素に何ら作用を示さない。
【０００７】
さらに、特願平１１−５８４１２号には、天然もしくは再生セルロース繊維のセルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を、カルボキシメチル基の置換度（エーテル化度）が０．５−１．０未満となるように部分的にカルボキシメチル化した可溶性創傷治癒止血セルロース繊維について記載されている。
【０００８】
上記可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、血液と接触することにより迅速に溶解し、著しい止血効果を示すが、血液との接触にてのみ止血効果を示すもの、すなわち、血液中の血小板とフィブリンを相互作用して止血効果を示すものであり、出血の少ない、すなわち、血小板やフィブリンの少ない箇所（創部）の止血は効果が低い。
【０００９】
【問題を解決するための手段】
そこで、かかる課題を解決すべく、本願発明者は鋭意検討した結果、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維が、血液等の組織液の吸収性に優れ、血液と接触した場合には迅速に溶解し、凝血カスケードが不活性でも、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に含まれているトロンビンとフィブリノーゲンから変換されるフィブリンモノマーの凝集反応を促進することにより、さらには同可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に含まれている血液凝固第ＸＩＩＩ因子の架橋反応が凝集物を安定化することにより止血効果を示す。すなわち、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固カスケードの酵素の活性化には関係なく、トロンビンによって作成したフィブリモノマーの凝集を促進し、更に、創傷部の血液あるいは体液との接触により速やかに溶解することにより、創傷部への血小板の粘着と凝集を促し、また、接着蛋白であるフィブロネクチンと相互作用し、フィブロネクチンの細胞接着活性を促す作用を有することを見出した。
【００１０】
すなわち、本願発明は、セルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を置換度（エーテル化度）が０．５−１．０未満となるように部分的にカルボキシメチル化した天然もしくは再生セルロース繊維に、凝固蛋白質を付与してなるものであり、天然もしくは再生セルロース繊維を水酸化ナトリウム水溶液で処理した後、モノクロロ酢酸溶液と一定時間、好ましくは４−１８時間反応させて、セルロース分子を構成するグルコース単位中の水酸基を部分的に置換度（エーテル化度）が０．５−１．０未満となるようにカルボキシメチル化し、精製したものに、凝固蛋白質としてフィブリノーゲン、トロンビンおよび血液凝固第ＸＩＩＩ因子を付与し、乾燥することにより凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維としてなるものである。
【００１１】
また、凝固蛋白質の付与は、前記カルボキシメチル化した天然もしくは再生セルロース繊維に塗布することにより、または前記カルボキシメチル化した天然もしくは再生セルロース繊維と化学的に結合すること（すなわち、塗布のような物理的な結合ではない手段）により行うものである。
【００１２】
そして、凝固蛋白質の塗布としては、具体的には、例えば、該凝固蛋白質を含む溶液を前記カルボキシメチル化した天然もしくは再生セルロース繊維に対して噴霧することにより行うとするものである。なお、この際、凝固蛋白質は、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子の３種をまとめて一度に塗布することとするものでも、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子の３種をそれぞれ単独で順次塗布することとするものでも何れでも良い。
【００１３】
一方、凝固蛋白質の化学的結合としては、具体的には、例えば、カルボジイミド試薬で処理した前記カルボキシメチル化した天然もしくは再生セルロース繊維に該凝固蛋白質を含む溶液を加えて反応することにより行うとするものである。なお、この際、凝固蛋白質は、上記塗布の場合と同様に、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子の３種をまとめて一度に化学的結合させることとするものでも、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子の３種をそれぞれ単独で順次化学的結合させることとするものでも何れでも良い。
【００１４】
また、本願発明は、上述のように凝固蛋白質を付与した前記天然もしくは再生セルロース繊維を、該凝固蛋白質の付与後に乾燥してから粉状に成形してなるものでもあり、該紛状体は、上述の通り、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子の３種の凝固蛋白質を、まとめて一度に塗布又は化学的結合することにより付与することとした前記天然もしくは再生セルロース繊維を粉状とすることにより得たものでも、フィブリノーゲンとトロンビンと血液凝固第ＸＩＩＩ因子の３種の凝固蛋白質を、それぞれ別々に単独で塗布又は化学的結合することにより付与することとした前記天然もしくは再生セルロース繊維をそれぞれ粉状とし、これらを混合することにより得たものでも、何れでも良い。
【００１５】
また、本願発明においては、凝固蛋白質を付与させる前記天然もしくは再生セルロース繊維を、数本の甘撚りの単糸からなる引き揃え糸、または数本の甘撚りの単糸からなる引き揃え糸を平織りもしくは綾織りした織地としたものでもあり、その際の引き揃え糸の太さを、２０−１００番手としたものでもある。
【００１６】
また、本願発明は、前記天然もしくは再生セルロース繊維を、凝固蛋白質の付与前もしくは付与後に半毛処理を施して綿状体となるようにしたものでもある。
【００１７】
さらに、本願発明は、これら引き揃え糸状、または織地状、または綿状とした天然もしくは再生セルロース繊維を、該凝固蛋白質の付与後に粉状に成形してなるものでもある。
【００１８】
そして、本願発明は、上述のように製造した凝固蛋白質を含む各種可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を、それぞれ創傷部に施用することにより止血治癒作用を高めてなるようにするものである。
【００１９】
なお、本願発明における好ましい凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、セルロースを構成する構造単位として次の概略的な化学式［化１］または［化２］でもって表されるものと推測される。なお、［化１］は、凝固蛋白質が塗布手段によって付与された状態を示すものであり、また、［化２］は凝固蛋白質が化学的結合手段によって付与された状態を示すものである。
【００２０】
【化１】
0003576063.tif 000002
【化２】
0003576063.tif 000003
【００２１】
【実施例】
以下に本願発明の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の具体的な製造実施例、ならびに創傷治癒効果及び止血効果を実施試験例にて記述する。
可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の製造実施例としては、特願平１１−５８４１２号に記載の可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の製造法、すなわち、２０本の甘撚りの糸を引き揃えて太さを４０番手とした引き揃え糸を１／２斜紋織り（いちにしゃもんおり）の織地に成形した天然もしくは再生セルロース繊維７０ｇを１０００ｍＬの回転式反応容器に入れ、これに４５％水酸化ナトリウム水溶液の３８容量と９５％エタノール６２容量とからなる水酸化ナトリウムのエタノール溶液２５０ｍＬを加え、よく浸潤させて２５℃で２時間攪拌した。次に、この反応液中に、モノクロロ酢酸の４０容量と９５％エタノール６０容量とからなるモノクロロ酢酸反応溶液２１０ｍＬを加え、４〜１８時間程攪拌した。反応終了後、得られた繊維を含む液の水素イオン指数（ｐＨ）を２０％塩酸で７．０に調製し、さらに繊維中の塩化ナトリウムの含有量が１％以下になるまで６０〜９５％エタノール水溶液にて洗浄した。かくして処理されたセルロース繊維を、乾燥、滅菌し、目的物であるエーテル化度（カルボキシメチル基への置換度）が０．５〜１．０未満の可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を得た。なお、以下の各試験例において記述する「可溶性創傷治癒止血セルロース繊維」は、特に言及しない限り上記の手段にて得られる可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を言うものとする。
【００２２】
次に、試験例１として、得られた可溶性創傷治癒止血セルロース繊維のエーテル化度（カルボキシメチル基への置換度）が０．５〜１．０未満であることを確認するために、モノクロロ酢酸反応溶液との攪拌時間に対応するエーテル化度の測定をそれぞれ行った。測定方法は、上記実施例にてモノクロロ酢酸反応溶液との攪拌を２，４，８，１４，１８時間行うことによりそれぞれ製造した各可溶性創傷治癒止血セルロース繊維１ｇを細かく切り、すり合わせ三角フラスコ（５０ｍＬ）中に入れ、硝酸メタノール溶液２５ｍＬ（メタノール１００ｍＬと硝酸１０ｍＬの混合液）を加えて１時間振とうし、水素型の試料とする。次いで、ガラスフィルター（Ｇ３）で吸引ろ過することにより試料をトラップし、８００ｇ／Ｌメタノール溶液（無水メタノール１００ｍＬと水２０ｍＬの混合液）１２０ｍＬ（４０ｍＬ×３回）で試料を洗浄し、最後に無水メタノール２５ｍＬで洗浄後、吸引ろ過し、フィルター上の試料を１０５℃で２時間乾燥する。さらに、水素型となった試料０．２ｇを精密に秤量し、すり合わせ三角フラスコ（１００ｍＬ）に入れ８００ｇ／Ｌメタノール８ｍＬおよび０．１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム標準液２０ｍＬを加え２５℃で３０分振とうし、水素型の試料をナトリウム型にする。そして、余剰の水酸化ナトリウム量を規定度既知の０．０５ｍｏｌ／Ｌの硫酸でフェノールフタレインを指示薬として滴定することにより求め、それよりエーテル化度を求めることにより行った。測定した結果を［表１］に示す。
【００２３】
【表１】
0003576063.tif 000004
【００２４】
上記［表１］に示す結果の通り、モノクロロ酢酸との反応時間が４時間以上で、置換度０．５以上の可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を製造することができる。従って、モノクロロ酢酸との反応時間を制御することによりカルボキシメチル基の置換度を制御できることが分かる。
【００２５】
次に、試験例２として、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の製造法、すなわち、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維とされた天然もしくは再生セルロース繊維への凝固蛋白質の付与方法について説明する。そして、凝固蛋白質の付与方法としては、塗布法と化学的結合法の２種類の方法が考えられるため、以下にそれぞれ説明する。
【００２６】
まず、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は水に対しては可溶であるが、６０％以上のエタノールを含む水溶液の場合、溶解せず繊維状態を保つことが出来るものであるので、塗布法としては、上記実施例にて製造した可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（モノクロロ酢酸との反応時間が１４時間のもの）１５．６ｍｇ（１ｃｍ２  ）に、凝固蛋白質であるフィブリノーゲン５ｍｇ、トロンビン１．５単位、血液凝固第ＸＩＩＩ因子８単位を含む６０％エタノール溶液０．２ｍＬを送風機で乾燥させながら均一に噴霧することにより、塗布させた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を得た。
【００２７】
一方、化学的結合法としては、カルボジイミドを用いる方法によって行い、上記実施例にて製造した可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（モノクロロ酢酸との反応時間が１４時間のもの）１５．６ｍｇを５ｍＬ容ガラス試験管に入れ、６０％エタノール溶液１ｍＬを添加後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド３８ｍｇを加え、３０℃で２時間攪拌した後、反応液を除去し、該カルボジイミド試薬で処理した可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を６０％エタノール溶液３ｍＬで３回洗浄した。次に、凝固蛋白質であるフィブリノーゲン５ｍｇ、トロンビン１．５単位、血液凝固第ＸＩＩＩ因子８単位を含む６０％エタノール溶液１ｍＬを加え、３０℃で２時間反応させた。そして、未反応のカルボキシル基をブロックするため、Ｌ−リシン２９ｍｇを加え、さらに３０℃で１時間反応させた後、反応液を除去し、反応後の可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を６０％エタノール溶液３ｍＬで３回、９５％エタノール溶液３ｍＬで１回洗浄した。そして、これを５０℃で５分間乾燥することにより、化学的に結合させた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を得た。
【００２８】
次に、試験例３として、上記塗布法及び化学的結合法によりそれぞれ得られた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の可溶性を確認するために、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の０．９５％食塩水と純水に対する可溶性を測定した。測定方法は、凝固蛋白質をそれぞれの方法で含む各可溶性創傷治癒止血セルロース繊維０．１ｇを（０．１ｗ／ｖ％になるように）、１００ｍＬの０．９５％食塩水および純水にそれぞれ加え、２５℃で攪拌しながら、目視で不溶物が消失するまでの時間を観察した。その結果を［表２］に示す。
【００２９】
【表２】
0003576063.tif 000005
【００３０】
上記［表２］に示す結果の通り、本願発明の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固蛋白質を付与する方法が塗布法又は化学的結合法の何れの場合であっても共に純水にも食塩水にも確実に、かつ速やかに完全に溶解するものであることが分かる。
【００３１】
次に、試験例４として、同じく塗布法及び化学的結合法によりそれぞれ得られた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維のフィブリンモノマー凝集活性を確認するために、３５０ｎｍでの吸光度の測定を紫外可視分光光度計Ｕ−３２１０（日立製作所製）を用いて行った。吸光度の測定は１ｗ／ｖ％の凝固蛋白質をそれぞれ含む各可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（塗布法により調製したもの及び化学的結合法により調製したもの）の存在下、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（すなわち、凝固蛋白質が付与されていないもの）の存在下、及び可溶性創傷治癒止血セルロース繊維非存在下（コントロール）の０．１５ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム（ＮａＣ１）を含む２０ｍｍｏｌ／Ｌイミダゾール緩衝液（ｐＨ７．４）５００μＬに、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸に溶解したフィブリンモノマー（Ａ２８０ｎｍ＝６）を２０μＬ添加し、フィブリンモノマー添加２０秒後から３０秒毎に２５分間３５０ｎｍの吸光度を測定することにより行った。その測定した結果を［図１］に示す。
【００３２】
［図１］に示す結果より、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固蛋白質を付与する方法が塗布法又は化学的結合法の何れの場合であっても共にフィブリンモノマーの凝集を著しく促進し、さらに、凝固蛋白質が付与されていない可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に比してもフィブリンモノマー凝集促進活性が一層優れたものとなることが分かる。
【００３３】
次に、試験例５として、同じく塗布法及び化学的結合法によりそれぞれ得られた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の血小板凝集促進活性の確認と、該凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の血小板凝集促進活性が可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（すなわち、凝固蛋白質が付与されていないもの）に比して一層優れたものとなることを確認する為に、血小板凝集能の測定を血小板凝集計（メバニクス社製）を用いて行った。血小板凝集能の測定は１ｗ／ｖ％の凝固蛋白質をそれぞれの方法で含む各可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の存在下、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（すなわち、凝固蛋白質が付与されていないもの）の存在下、及び可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の非存在下での各０．１５ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム（ＮａＣ１）を含む２０ｍｍｏｌ／Ｌイミダゾール緩衝液と富血小板血漿を１：１の割合で混合し、血小板凝集剤として種々の濃度のアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を添加し、反応液の濁度変化を測定することにより行った。その測定した結果を［表３］および［図２］に示す。
【００３４】
【表３】
0003576063.tif 000006
【００３５】
［表３］および［図２］に示す結果より、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固蛋白質を付与する方法が塗布法又は化学的結合法の何れの場合であっても共に血小板の凝集を著しく促進し、さらに、凝固蛋白質が付与されていない可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に比して血小板凝集促進活性が一層優れたものとなることが分かる。
【００３６】
次に、試験例６として、同じく塗布法及び化学的結合法によりそれぞれ得られた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の細胞接着促進活性を確認するとともに、細胞接着促進活性が可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（すなわち、凝固蛋白質が付与されていないもの）に比して一層優れたものとなることを明らかにするために、１ｗ／ｖ％の凝固蛋白質をそれぞれの方法で含む各可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の添加の下で接着した細胞数の測定を、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（すなわち、凝固蛋白質が付与されていないもの）の添加の下で接着した細胞数の測定、及び可溶性創傷治癒止血セルロース繊維等未添加の場合に接着した細胞数の測定とともに行った。接着した細胞数の測定は、細胞接着蛋白フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニン、コラーゲン、あるいはフィブリンを種々の濃度で９６ウエルプレートに被覆し、その上に５，０００個のＮＩＨ−３Ｔ３を入れ、６時間後に一定接着した細胞の数を一定視野で測定することにより、細胞接着活性を示さない各接着蛋白の濃度を求め、これに１ｗ／ｖ％の凝固蛋白質をそれぞれの方法で含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維あるいは可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を各々添加することにより、もしくは何ら添加しないことにより、接着した細胞数を一定視野で測定することより行った。測定した結果を［表４］に示す。
【００３７】
【表４】
0003576063.tif 000007
【００３８】
［表４］に示す結果より、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固蛋白質を付与する方法が塗布法又は化学的結合法の何れの場合であっても共に接着細胞数を著しく増加させること、すなわち細胞接着促進活性を有することが分かるとともに、凝固蛋白質が付与されていない可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に比して細胞接着促進活性が一層優れたものとなることが分かる。
【００３９】
次に、試験例７として、創傷患部に、同じく塗布法及び化学的結合法によりそれぞれ得られた凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維をそれぞれ施用した際の止血効果と創傷治癒効果を確認するとともに、止血効果と創傷治癒効果が可溶性創傷治癒止血セルロース繊維（すなわち、凝固蛋白質が付与されていないもの）に比して一層優れたものとなることを明らかにするために、１ｗ／ｖ％の凝固蛋白質をそれぞれの方法で含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を創傷患部に各々施用した際の止血時間の測定及び創傷部の治癒度の確認を、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を創傷患部に施用した際の止血時間の測定及び創傷部の治癒度の確認、及び可溶性創傷治癒止血セルロース繊維非施用の場合の止血時間の測定とともに行った。止血時間の測定は、１０匹のラットの肝臓をそれぞれ１ｃｍ×１ｃｍ四方に切断し、創部に凝固蛋白質を含む各可溶性創傷治癒止血セルロース繊維あるいは可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を貼付し、もしくは何ら（可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は）貼付しないで、止血した時間（秒）を測定することにより行い、その際の止血効果を未処置のもの及び凝固蛋白質非付与のものと比較して確認し、また、治癒度の確認は、それぞれの方法で凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維あるいは可溶性創傷治癒止血セルロース繊維を創部に各々貼付し、止血時間の測定をした後閉腹し、１ヶ月後に開腹して創部の病理切片を調製し顕微鏡にて治癒度を目視確認することにより行った。測定した結果及び確認した結果を［表５］に示す。なお、創傷部の治癒度の確認は、正常と同じであるものを◎印、少し炎症しているものを○印、炎症癒着しているものを×印で示すこととした。
【００４０】
【表５】
0003576063.tif 000008
【００４１】
［表５］に示す結果により、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は著しい止血効果を持ち、かつ、可溶性創傷治癒止血セルロース繊維による処置を施した１０匹のラットは、ほとんど完全に治癒して全く炎症等を生じていないことから、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固蛋白質を付与する方法が塗布法又は化学的結合法の何れの場合であっても共に可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に比べても著しい止血効果と創傷治癒効果を有することが分かる。
【００４２】
以上のように製造された本願発明の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、凝固蛋白質を付与する方法が塗布法又は化学的結合法の何れの場合であっても共に創傷部位に施用すると血液および組織液の水分を吸収し、血液及び組織液の濃度および粘度を増加させ、該凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に含まれるフィブリノーゲン、トロンビン及び血液凝固第ＸＩＩＩ因子の作用により強固なフィブリン凝集物を作成させることにより、血液および組織液の流れる速度を減少させるようにして効果的に止血作用を発揮させるとともに、創部において血小板の粘着と凝集を補助し、止血作用を発揮するものである。
【００４３】
さらに、本願発明の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、フィブロネクチン等の接着蛋白と相互作用し、創傷治癒で重要な役割を示す繊維芽細胞の増延を補助するものでもある。
【００４４】
なお、上記実施試験例は、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維のナトリウム塩について説明したが、本願発明はこれに限らず、凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維のカルシウム塩や、複数の塩が混在しているものであっても何ら制限されるものではない。
【００４５】
また、上記実施試験例はいずれも織地に成形した凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維について説明したが、本願発明はこれに限らず、糸状に成形したものや、糸状もしくは織地状の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に粉砕処理を施すことにより粉状に成形したもの、さらに、糸状もしくは織地状の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維に反毛処理を施すことにより綿状に成形したものであっても、目的とする凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血効果を発揮するものであれば本願発明に含まれてなるものであることは言うまでもない。
【００４６】
【発明の効果】
以上のように本願発明の凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維は、止血作用が非常に速く効果的で、炎症反応をほとんど起こさず体内吸収性が速やかにおこり、創傷治癒効果が高いものである。
【００４７】
また、本願発明の凝固蛋白を含む可溶性創傷治癒止血材は、効率よく患部の止血および細胞接着促進性に基づく創傷治癒効果が可能であるとともに、体内、体外の止血創傷治癒材として非常に有効であり、創傷部位の治癒効果を高める創傷被覆止血材として広い応用分野の可能性があることを見出すことが出来た。
【図面の簡単な説明】
【図１】フィブリモノマーの凝集反応に対する塗布法及び化学的結合法の２種類の方法によって製造した凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維の効果を示す吸光度を測定した吸光度と時間の関係を示す図。
【図２】（Ａ）可溶性創傷治癒止血セルロース繊維非存在下での血小板の凝集状態を測定した凝集率と時間の関係を示す図、（Ｂ）可溶性創傷治癒止血セルロース繊維存在下での血小板の凝集状態を測定した凝集率と時間の関係を示す図、（Ｃ）塗布法で調製した凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維存在下での血小板の凝集状態を測定した凝集率と時間の関係を示す図、（Ｄ）化学的結合法で調製した凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維存在下での血小板の凝集状態を測定した凝集率と時間の関係を示す図。
【図１】
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【図２】
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