(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（a）及び（b）の特徴を有するヒトAILIMに結合するヒトモノクローナル抗体：
（a）重鎖可変領域が、下記の（i）若しくは（ii）を含む：
（i）配列番号28に記載されるアミノ酸番号20乃至117番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号28に記載されるアミノ酸番号20乃至117番目のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；及び、
（b）軽鎖可変領域が、下記の（i）若しくは（ii）を含む：
（i）配列番号30に記載されるアミノ酸番号23乃至116番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号30に記載されるアミノ酸番号23乃至116番目のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列、
但し、該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域が上記（a）の（ii）であるかまたは軽鎖可変領域が上記（b）の（ii）である場合には、該ヒトモノクローナル抗体は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（c）乃至（e）のいずれかの特徴を有する：
（c）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（d）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（e）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項２】
下記（a）及び（b）の特徴を有するヒトAILIMに結合するヒトモノクローナル抗体：
（a）重鎖ポリペプチドが、下記の（i）若しくは（ii）を有する：
（i）配列番号28に記載されるアミノ酸番号20乃至470番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号28に記載されるアミノ酸番号20乃至470番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；及び
（b）軽鎖ポリペプチドが、下記の（i）若しくは（ii）を有する：
（i）配列番号30に記載されるアミノ酸番号23乃至236番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号30に記載されるアミノ酸番号23乃至236番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列、
但し、該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域が上記（a）の（ii）であるかまたは軽鎖可変領域が上記（b）の（ii）である場合には、該ヒトモノクローナル抗体は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（c）乃至（e）のいずれかの特徴を有する：
（c）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（d）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（e）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項３】
下記（a）及び（b）の特徴を有するヒトAILIMに結合するヒトモノクローナル抗体：
（a）重鎖可変領域が、下記の（i）若しくは（ii）を含む：
（i）配列番号32に記載されるアミノ酸番号20乃至116番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号32に記載されるアミノ酸番号20乃至116番目のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；及び、
（b）軽鎖可変領域が、下記の（i）若しくは（ii）を含む：
（i）配列番号34に記載されるアミノ酸番号21乃至116番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号34に記載されるアミノ酸番号21乃至116番目のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列、
但し、該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域が上記（a）の（ii）であるかまたは軽鎖可変領域が上記（b）の（ii）である場合には、該ヒトモノクローナル抗体は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（c）乃至（e）のいずれかの特徴を有する：
（c）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（d）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（e）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項４】
下記（a）及び（b）の特徴を有するヒトAILIMに結合するヒトモノクローナル抗体：
（a）重鎖ポリペプチドが、下記の（i）若しくは（ii）を有する：
（i）配列番号32に記載されるアミノ酸番号20乃至470番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号32に記載されるアミノ酸番号20乃至470番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；及び
（b）軽鎖ポリペプチドが、下記の（i）若しくは（ii）を有する：
（i）配列番号34に記載されるアミノ酸番号21乃至236番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号34に記載されるアミノ酸番号21乃至236番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列、
但し、該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域が上記（a）の（ii）であるかまたは軽鎖可変領域が上記（b）の（ii）である場合には、該ヒトモノクローナル抗体は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（c）乃至（e）のいずれかの特徴を有する：
（c）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（d）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（e）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項５】
下記（a）及び（b）の特徴を有するヒトAILIMに結合するヒトモノクローナル抗体：
（a）重鎖可変領域が、下記の（i）若しくは（ii）を含む：
（i）配列番号36に記載されるアミノ酸番号20乃至116番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号36に記載されるアミノ酸番号20乃至116番目のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；及び、
（b）軽鎖可変領域が、下記の（i）若しくは（ii）を含む：
（i）配列番号38に記載されるアミノ酸番号21乃至116番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号38に記載されるアミノ酸番号21乃至116番目のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列、
但し、該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域が上記（a）の（ii）であるかまたは軽鎖可変領域が上記（b）の（ii）である場合には、該ヒトモノクローナル抗体は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（c）乃至（e）のいずれかの特徴を有する：
（c）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（d）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（e）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項６】
下記（a）及び（b）の特徴を有するヒトAILIMに結合するヒトモノクローナル抗体：
（a）重鎖ポリペプチドが、下記の（i）若しくは（ii）を有する：
（i）配列番号36に記載されるアミノ酸番号20乃至470番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号36に記載されるアミノ酸番号20乃至470番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；及び
（b）軽鎖ポリペプチドが、下記の（i）若しくは（ii）を有する：
（i）配列番号38に記載されるアミノ酸番号21乃至236番目のアミノ酸配列；若しくは
（ii）配列番号38に記載されるアミノ酸番号21乃至236番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列、
但し、該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域が上記（a）の（ii）であるかまたは軽鎖可変領域が上記（b）の（ii）である場合には、該ヒトモノクローナル抗体は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（c）乃至（e）のいずれかの特徴を有する：
（c）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（d）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（e）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体の一部、但し、該一部は、AILIMとの解離定数（Kd）が1.0×10-9(M)以下の数値であり、さらに以下の（a）乃至（c）のいずれかの特徴を有する：
（a）混合リンパ球反応を抑制する活性を有する；
（b）Ｔ細胞にコスティミュレイトリーシグナルを伝達し、該Ｔ細胞の増殖若しくは該Ｔ細胞からのインターフェロンγの産生を誘導する活性を有する；または
（c）AILIMを発現する細胞に対する細胞障害を誘導する活性を有する。
【請求項８】
請求項１乃至６のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体を産生する細胞。
【請求項９】
該細胞が、該ヒトモノクローナル抗体を産生する能力を有する哺乳動物由来のＢ細胞と哺乳動物由来のミエローマ細胞とを融合して得られる融合細胞であることを特徴とする請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
請求項１乃至６のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体若しくは請求項７に記載のヒトモノクローナル抗体の一部、及び薬学的に許容され得る担体とを含んでなる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＡＩＬＩＭ（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ；ＩＣＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）とも称される。）に結合するヒト抗体；  ヒトモノクローナル抗体若しくはその一部、該ヒトモノクローナル抗体若しくはその一部をコードするＤＮＡ若しくはその一部；  該ヒトモノクローナル抗体若しくはその一部を産生する細胞（遺伝子組換え細胞を含む）；  該遺伝子組換え細胞が産生するヒトモノクローナル抗体若しくはその一部；  該ヒトモノクローナル抗体若しくはその一部を含んでなる医薬組成物；  ＡＩＬＩＭに対する抗体を含んでなる遅延型アレルギー関連疾患を治療するための医薬組成物；  ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定、定量若しくはアッセイする方法；
及び当該方法に用いられるキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
哺乳動物の生体は、体内に侵入した病原微生物（ウイルス、細菌、寄生虫など）や外来異物など（以下、併せて「抗原」と呼ぶ。）を排除しようとする免疫応答システムを有する。その１つは、自然免疫応答システムと呼ばれ、他の１つは獲得免疫応答システムと呼ばれるものである。前者は、食細胞（多形核白血球、単球、マクロファージなど）による貪食、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による攻撃、及び補体による抗原のオプソニン化などのような非特異的な認識による排除機構である。後者の獲得免疫応答システムは、該抗原に対する特異性を獲得（活性化）したリンパ球（主にＴ細胞、Ｂ細胞）による排除機構である。
【０００３】
抗原特異性を獲得したＢ細胞は、該抗原に特異的な抗体を産生することにより細胞外に存在する該抗原を攻撃する。抗原特異性を獲得（活性化）したＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞と細胞傷害性Ｔ細胞（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ；  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ；  ＣＴＬ）に分類され、前者はＢ細胞の分化や抗体の産生を調節するとともに食細胞と協同して該抗原を破壊する。後者は、自らウイルス感染細胞などを攻撃する（実験医学（別冊）・「Ｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ用語ライブラリー［免疫］」、羊土社、ｐ．１４−１７、１９９５）。
【０００４】
このＴ細胞による抗原特異性の獲得（活性化）は、Ｔ細胞が、マクロファージ、Ｂ細胞あるいは樹状細胞などの抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ：  ＡＰＣ）により提示される抗原を認識することにより開始される。抗原提示細胞は、取り込んだ抗原をプロセッシング（加工）し、この加工された抗原を主要組織適合性抗原複合体（ＭＨＣ）に結合させて抗原提示する。Ｔ細胞は、抗原提示細胞により提示された該加工抗原を、その細胞膜表面に有するＴ細胞受容体（ＴｃＲ）とＣＤ３抗原との複合体（ＴｃＲ／ＣＤ３複合体）を通じて認識することで細胞の活性化  （特異性の獲得）のための第１のシグナルを受ける。
【０００５】
しかしながら、このＴｃＲ／ＣＤ３複合体を介した第１シグナルだけでは、Ｔ細胞の十分な活性化が起こらないだけでなく、その後に受ける如何なる刺激に対しても反応しなくなる不応答状態（ｕｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）またはクローン麻痺（ｃｌｏｎａｌ  ａｎｅｒｇｙ）と呼ばれる状態に陥る。Ｔ細胞が活性化され抗原特異的なＴ細胞クローンに分化、増殖するためにはインターロイキン−２（ＩＬ−２）の自己分泌（オートクリン；ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）が必要であるが、クローン麻痺の状態ではＩＬ−２などが産生されず細胞分裂が起こらないため、Ｔ細胞が不活性化された状態となる。即ち、ＩＬ−２などのサイトカインの産生を伴うＴ細胞の活性化には、ＴｃＲ／ＣＤ３複合体を介した第１シグナルに引き続く第２のシグナルを必要とする。この第２のシグナルはコスティミュレイトリーシグナル（副刺激シグナル；ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌ）と呼ばれる。
【０００６】
Ｔ細胞は、Ｔ細胞表面上のＴｃＲ／ＣＤ３複合体とは別の分子を介して抗原提示細胞上のＭＨＣとは別の分子と相互作用（細胞間接着）することによりこの第２のシグナルを受けとり細胞内に伝達する。この第２のシグナルにより細胞のアナジー（クローン麻痺）が回避されるとともに細胞が活性化される。
【０００７】
抗原提示細胞とＴ細胞等のリンパ球の間の第２のシグナルの伝達のメカニズムについては未だ詳細に解明されていない部分はあるものの、これまでの研究から、この第２のシグナル伝達には、主にＴ細胞及び胸腺細胞で発現する細胞表面分子であるＣＤ２８（別名：Ｔｐ４４、Ｔ４４、又は９．３抗原）と抗原提示細胞（マクロファージ、単球、樹状細胞など）で発現する細胞表面分子であるＣＤ８０（別名：Ｂ７−１、Ｂ７、ＢＢ１、またはＢ７／ＢＢ１）及び同じく抗原提示細胞状の細胞表面分子であるＣＤ８６（別名：Ｂ７−２またはＢ７０）との間の相互作用（即ち、それらの分子間の結合を介した細胞間接着）が極めて重要であることが明らかにされている。
【０００８】
さらにこの第２のシグナルによるＴ細胞の活性化の制御には、該第２のシグナルに依存してその発現が増強されると考えられているＣＴＬＡ−４（Ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ４）と該ＣＤ８０（Ｂ７−１）及びＣＤ８６（Ｂ７−２）との間の相互作用（即ち、それらの分子間の結合を介した細胞間接着）も重要な役割を担っていることが実験的に明らかにされてきている。即ち、この第２のシグナルの伝達によるＴ細胞の活性化の制御には、少なくともＣＤ２８とＣＤ８０／ＣＤ８６との間の相互作用、該相互作用に依存すると考えられるＣＴＬＡ−４の発現の増強、並びにＣＴＬＡ−４とＣＤ８０／ＣＤ８６との間の相互作用が包含されることが明らかにされてきている。
【０００９】
ＣＤ２８は、このＴ細胞の活性化とアナジーの回避に必要な第２のシグナル（コスティミュレイトリー・シグナル）を伝達するコスティミュレイター分子であることが明らかにされている。この分子が抗原提示細胞上のコスティミュレイター分子であるＣＤ８０（Ｂ７−１）及びＣＤ８６（Ｂ７−２）と結合すること（換言すれば、それらの分子間の結合を介した細胞間接着）により伝達される第２のシグナルは、Ｔｈ１型サイトカインのｍＲＮＡを安定化させ、その結果Ｔ細胞からのＩＬ−２、ＩＦＮγ及びＴＮＦαなどのＴｈ１型サイトカインを大量の産生を促す。一方、ＣＴＬＡ−４は、ＴｃＲ／ＣＤ３を通じて入る第１シグナルにより発現が誘導されるとともに、ＣＤ２８とＣＤ８０との結合により入る該第２のシグナルによってもその発現が増強されることが知られている。ＣＴＬＡ−４は、それらのシグナルを受けて、ＣＤ２８より入る第２ののシグナルによるＴ細胞の活性化とは反対にＴ細胞機能に対して抑制的に働くことが明らかになってきている。
【００１０】
ヒトのＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４は、各々４４ｋＤ及び４１乃至４３ｋＤの分子量を有するＩ型糖蛋白質である。ともに免疫グロブリン様ドメイン１個を有し、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、細胞間接着分子としての機能と細胞内へのシグナル伝達分子としての両方の機能を併せ持った分子である。
【００１１】
ヒトＣＤ２８はジズルフィド結合によりホモ二量体を形成し、一方、ＣＴＬＡ−４は単量体で存在することが示されている。ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４の遺伝子の染色体上に位置は、ヒトにおいてはいずれも「２ｑ３３」、またマウスにおいては「１Ｃ」であり、いずれも４つのエクソンからなる。ヒトのＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４は、リーダー配列を含め各々２２０及び２２３個のアミノ酸から構成され、両者のアミノ酸相同性は２０乃至３０％程度である。
【００１２】
ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４のリガンドは、ヒト及びマウスにおいてＣＤ８０（Ｂ７−１）及びＣＤ８６（Ｂ７−２）であることが解明されている。ＣＴＬＡ−４は、いずれのリガンドに対してもＣＤ２８より親和性が高く、その差は約２０倍である。ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４のＣＤ８０（Ｂ７−１）への結合には、動物種を超えて保存されているアミノ酸配列構造である「ＭＹＰＰＰＹ（Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ）」が重要であることが明らかにされている。また、ＣＤ２８が刺激を受けると、その細胞内の部分配列「ＹＭＮＭ（Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ）」内のリン酸化されたチロシン残基へＰＩ３キナ−ゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ３  ｋｉｎａｓｅ，  ＰＩ３Ｋ）が会合することが示され、ＣＤ２８はこの「ＹｘｘＭ」構造を介して細胞内シグナル伝達において重要な働きをしていることが示されてきている。また、ＣＴＬＡ４の細胞内領域にも「ＹｘｘＭ」で表わされる配列、即ち「ＹＶＫＭ（Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ）」を有しており、刺激を受けた後、この配列にＳＹＰが会合することが示されている。
【００１３】
ＣＤ２８は、胸腺細胞及び末梢血Ｔ細胞に限局して発現し、一方ＣＴＬＡ−４は活性化Ｔ細胞に特異的に発現することがわかってきている（細胞工学・別冊「接着分子ハンドブック」、秀潤社発行、第９３−１０２頁、１９９４年；  同誌、第１２０−１３６頁；  実  験医学・別冊「ＢＩＯ  ＳＣＩＥＮＣＥ  用語ライブラリー・免疫」、羊土社発行、第９４−９８  頁、１９９５年；  実験医学・別冊「ＢＩＯ  ＳＣＩＥＮＣＥ  用語ライブラリー・細胞内シグナル伝達」、羊土社発行、第５８−５９頁、１９９７年；  日本臨床、第５５巻、第６号、第２１５−２２０頁、１９９７年）。
【００１４】
このようにしてＴ細胞機能の制御（Ｔ細胞の活性化及び機能抑制）におけるコスティミュレイター分子（ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７−１）及びＣＤ８６（Ｂ７−２）など）並び連動するＣＴＬＡ−４などの複数の分子の間の相互作用の重要性が提唱されるようになり、それらの分子と疾患との関係の解明、並びにそれらの分子の機能を制御することによる疾患の治療の試みが注目されるようになってきている。
【００１５】
前述のように、生体は、生体（自己）にとって異物である抗原に対しては獲得免疫応答システムを作動させるが、自己の生体成分（自己抗原）に対しては免疫応答を示さない免疫寛容を有している。しかしながら、何らかの原因で免疫寛容の破綻が起こると、自己抗原に対する免疫応答が起こり前述と同様のメカニズムにより自己抗原反応性Ｔ細胞が誘導され免疫異常状態に陥り、種々の自己免疫疾患が惹起される。
【００１６】
即ち、生体の免疫システムが正常な状態では、正常組織の無刺激の抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ；  ＡＰＣ）はコスティミュレイトリー分子を発現しないため、例え自己抗原に反応する自己抗原反応性Ｔ細胞が存在していても、Ｔ細胞が不応答状態に陥っているため自己寛容が維持されているが、免疫異常状態においては過剰または継続的なコスティミュレイトリー分子の発現以上により自己抗原反応性Ｔ細胞が活性化され自己免疫疾患が惹起されるという可能性が提示されている。
このような観点から近年、コスティミュレイトリーシグナルの伝達、例えば前述のＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４−ＣＤ８０／ＣＤ８６の間のシグナル伝達を調節することにより種々の自己免疫性疾患の治療の試みが多数なされてきている。
しかしながら、そのような治療の試みがなされる一方で、コスティミュレイター分子及び関連する分子との間の相互作用によるＴ細胞の活性化のメカニズムの詳細な解明は未だなされておらず、またこのメカニズムには未だ同定されていない他の分子が関与する可能性も残っていた。
【００１７】
最近、前記「ＣＤ２８」や「ＣＴＬＡ−４」と同様に、Ｔ細胞等のリンパ球の活性化に必須な第２のシグナル（コスティミュレイトリーシグナル）の伝達、並びに該シグナルに連動して活性化Ｔ細胞等の活性化リンパ球の機能制御を行うと考えられる新たなコスティミュレイトリー分子（副刺激伝達分子）が同定された。この分子は、ＡＩＬＩＭ（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）と呼ばれ（ヒト、マウス及びラット；Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  Ｖｏｌ．１２，  Ｎｏ．１，  ｐ．５１−５５，  ２０００）、別称としてＩＣＯＳ（Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）とも呼ばれている（ヒト；Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．３９７，  Ｎｏ．６７１６，  ｐ．２６３−２６６，  １９９９）。
【００１８】
一方、極最近になって、この副刺激伝達分子ＡＩＬＩＭ（ＩＣＯＳ）と相互作用するリガンド（ＡＩＬＩＭリガンド）であるＢ７ｈ、Ｂ７ＲＰ−１、ＧＬ５０あるいはＬＩＣＯＳと称される新規分子も同定されている（Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．４０２，  Ｎｏ．６７６３，  ｐ．８２７−８３２，  １９９９；  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｖｏｌ．５，  Ｎｏ．１２，  ｐ．１３６５−１３６９，  １９９９；Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．１６４，  ｐ．１６５３−１６５７，  ２０００；  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．１０，  Ｎｏ．６，  ｐ．３３３−３３６，  ２０００）。
【００１９】
これら２種類の新規な分子、即ち、ＡＩＬＩＭ（ＩＣＯＳ）とＢ７ＲＰ−１（Ｂ７ｈ／ＧＬ５０／ＬＩＣＯＳ）の同定により、上述したＴ細胞等のリンパ球の活性化及び活性化Ｔ細胞の機能制御に必須であるコスティミュレイトリーシグナルの伝達経路には、これまで知られていたＣＤ２８とＣＤ８０（Ｂ７−１）／ＣＤ８６（Ｂ７−２）との間のシグナル伝達経路、及びＣＴＬＡ４とＣＤ８０（Ｂ７−１）／ＣＤ８６（Ｂ７−２）との間のシグナル伝達経路である第一及び第二の経路の他にＡＩＬＩＭ（ＩＣＯＳ）とＢ７ＲＰ−１（Ｂ７ｈ）との相互作用による新しい第三の経路があることが判明することとなった。
この新しい２つの分子の各々の生物学的機能、該分子による第三のコスティミュレイトリーシグナル伝達によるＴ細胞等のリンパ球の機能制御、並びに該新規なシグナル伝達と疾患との関連性については、目下精力的に研究が進めれらているところである（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６６（１），  ｐ．１，  ２００１；  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６５（９），  ｐ．５０３５，  ２０００；  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．，  ２７６（１），  ｐ．３３５，  ２０００；  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １３（１），  ｐ．９５，  ２０００；  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９２（１），  ｐ．５３，  ２０００；  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ３０（４），  ｐ．１０４０，  ２０００；  国際特許出願公開ＷＯ  ０１／１５７３２）。
【００２０】
【発明が解決しようとする課題】
即ち、本発明は、前記「ＣＤ２８」や「ＣＴＬＡ−４」と同様に、Ｔ細胞等のリンパ球の活性化に必須な第２のシグナル（コスティミュレイトリーシグナル）の伝達、並びに該シグナルに連動して活性化Ｔ細胞等の活性化リンパ球の機能制御を行う分子であると考えられる新規分子ＡＩＬＩＭの生物学的機能並びにＡＩＬＩＭの発現と疾患との関わりを明らかにするとともに、該ＡＩＬＩＭの生物学的機能を医学及び薬学的手法（例えば、モノクローナル抗体や低分子化合物等の薬剤）により制御することによりＡＩＬＩＭの発現の状態に依存する種々の疾患の発症を抑制し、または該疾患を治療する方法及び薬剤を提供することを目的とする。
【００２１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上述の目的を達成するために、哺乳動物のＡＩＬＩＭ（特にはヒトＡＩＬＩＭ）に対するヒト抗体（特には、ヒトモノクローナル抗体）に関して鋭意研究した結果、遺伝子組換え技術を用いてヒトの抗体を産生するように作製したトランスジェニックマウスをヒトＡＩＬＩＭ（具体的には、ヒトＡＩＬＩＭ発現細胞の細胞膜フラクション）で免疫することによって、ヒトＡＩＬＩＭに結合する種々のヒトモノクローナル抗体、特にはヒトＡＩＬＩＭに結合し、ヒトＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達を調節する種々のモノクローナル抗体を作製することに世界に先駆けて初めて成功した。
【００２２】
本発明の抗体（特には、モノクローナル抗体）は、ヒトに由来する抗体であることから、マウス由来の抗体等の非ヒト哺乳動物由来の抗体からなる抗体医薬品の治療上の大きな問題点（副作用）であったヒトに対する抗原性、即ちＨＡＭＡ（Ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ）に起因する宿主の重篤な免疫拒絶反応を全く惹起しないことから、抗体の医薬品としての価値を劇的に増大させるものである。
【００２３】
従って、本発明の哺乳動物ＡＩＬＩＭ（特には、ヒトＡＩＬＩＭ）に結合するヒト抗体（特には、ヒトモノクローナル抗体）及び該ヒト抗体（特には、ヒトモノクローナル抗体）からなる医薬組成物は、ＨＡＭＡに起因する宿主の免疫拒絶反応を惹起することなく、ＡＩＬＩＭを発現する細胞へのＡＩＬＩＭを介するコスティミュレイトリーシグナル（副刺激シグナル）の伝達が関与する種々の生体反応（例えば、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の細胞増殖、ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の免疫細胞溶解（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ）若しくは細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）、及びＡＩＬＩＭを発現する細胞に対する抗体依存性細胞障害を誘導する活性など）を制御するための医薬品として、及び／または該ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達が関与する種々の疾患の発症及び／または進行を抑制、阻止し、該疾患を治療または予防するための医薬品として有用である。
【００２４】
具体的には、本発明の医薬組成物は、ＡＩＬＩＭ発現細胞の増殖の制御（抑制または促進）またはＡＩＬＩＭ発現細胞によるサイトカイン（例えば、インターフェロンγまたはインターロイキン４など）の産生を制御（抑制または促進）することが可能であり、ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達が関与する様々な生理現象により惹起される種々の病的状態の抑制、及び種々の疾患の治療または予防を可能にする。本発明の医薬組成物を用いることにより、例えば、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患（特には、細胞性免疫により惹起される自己免疫疾患や遅延型アレルギー）に分類される種々の疾患（例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性皮膚疾患である扁平苔癬、全身性エリテマトーデス、インスリン依存性糖尿病及び乾癬など）；  関節症（例えば、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；  ＲＡ）、変形性関節症（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ；  ＯＡ））、炎症（例えば、肝炎）；  移植片対宿主反応（ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｒｅａｃｔｉｏｎ；  ＧＶＨ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）；  移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ；  ＧＶＨＤ）；  組織（皮膚、角膜、骨などの組織）若しくは臓器（肝臓、心臓、肺、腎臓、膵臓など）の移植（同種移植または異種移植）に伴う免疫拒絶反応；  外来抗原若しくは自己抗原により惹起される免疫反応（例えば、該抗原に対する抗体の産生、細胞増殖、サイトカインの産生など）；  及び腸管免疫の異常に起因する可能性を有する疾患（具体的には、炎症性腸疾患（特には、クローン病及び潰瘍性大腸炎）や食餌性アレルギー）を抑制、予防及び／または治療することが可能である。
さらには、上記の組織や臓器の移植に伴う免疫拒絶反応の抑制／治療分野においては、本発明の医薬組成物を、そのような移植治療での免疫拒絶反応の抑制のために施されている既存の免疫抑制剤と併用することにより当該既存薬単独での移植片拒絶反応の抑制の効果を増大させることが可能である。
【００２５】
また、本発明の医薬組成物は、抗炎症薬としての種々のステロイド剤が適用されているような任意の炎症の治療または予防に適用することが可能である。
本発明の医薬組成物の適用が可能な炎症性疾患としては、例えば、種々の関節炎（関節リウマチ、変形性関節症など）に伴う炎症、肺炎、肝炎（ウイルス性の肝炎を含む）、感染症に伴う炎症、炎症性腸疾患、腸炎、腎炎（糸球体腎炎、腎線維症に伴う炎症）、胃炎、血管炎、膵炎、腹膜炎、気管支炎、心筋炎、脳炎、虚血後再潅流障害（心筋虚血再潅流障害など）における炎症、組織や臓器の移植後免疫拒絶に起因する炎症、火傷、種々の皮膚の炎症（乾癬、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性皮膚疾患である扁平苔癬など）、多発性臓器障害における炎症、ＰＴＣＡやＰＴＣＲの術後における炎症、及び動脈硬化症に伴う炎症、自己免疫性甲状腺炎などが挙げられる。
また、本発明の１つであるＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定する方法を用いれば、ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合して、両者の相互作用によるシグナル伝達を調節することにより上述のような種々の疾患を治療し得る潜在的な活性を有する医薬（化学合成化合物や抗体）をスクリーニングして選択することが可能となる。
【００２６】
即ち、本発明の下記（１）乃至（１０８）に記載されるとおりの発明である。
（１）  ＡＩＬＩＭに結合するヒト抗体。
（２）  該ＡＩＬＩＭが、ヒト由来であることを特徴とする前記（１）に記載のヒト抗体。
（３）  ＡＩＬＩＭに結合するヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（４）  該ＡＩＬＩＭが、ヒト由来であることを特徴とする前記（３）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（５）  該ヒトモノクローナル抗体が、ＡＩＬＩＭを介する細胞内へのシグナル伝達を阻害する活性を有するものであることを特徴とする前記（３）または前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（６）  該シグナル伝達の阻害活性が、下記（ａ）または（ｂ）：
（ａ）ＡＩＬＩＭを発現する細胞の増殖を抑制する活性；または、
（ｂ）ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生を抑制する活性、
であることを特徴とする前記（５）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（７）  該サイトカインが、Ｔｈ１タイプのＴ細胞またはＴｈ２タイプのＴ細胞が産生するサイトカインであることを特徴とする前記（６）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（８）  該サイトカインが、インターフェロンγまたはインターロイキン４であることを特徴とする前記（７）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（９）  該ヒトモノクローナル抗体が、混合リンパ球反応を抑制する活性を有するものであることを特徴とする前記（５）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１０）  該ヒトモノクローナル抗体が、ＡＩＬＩＭを介する細胞内へのシグナル伝達を誘導する活性を有するものであることを特徴とする前記（３）または前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１１）  該シグナル伝達の誘導活性が、下記（ａ）または（ｂ）：
（ａ）ＡＩＬＩＭを発現する細胞の増殖を誘導する活性；または、
（ｂ）ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生を誘導する活性、
であることを特徴とする前記（１０）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１２）  該サイトカインが、Ｔｈ１タイプのＴ細胞またはＴｈ２タイプのＴ細胞が産生するサイトカインであることを特徴とする前記（１１）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１３）  該サイトカインが、インターフェロンγまたはインターロイキン４であることを特徴とする前記（１２）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１４）  該ヒトモノクローナル抗体が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞に対する抗体依存性細胞障害を誘導する活性、及び／またはＡＩＬＩＭを発現する細胞の免疫細胞溶解若しくは細胞死を誘導する活性を有するものであることを特徴とする前記（３）または前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１５）  該ヒトモノクローナル抗体とＡＩＬＩＭとの結合速度定数（ｋａ）が、１．０×１０３（１／Ｍ．Ｓｅｃ）以上の数値であることを特徴とする前記（３）または前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１６）  該結合速度定数（ｋａ）が、１．０×１０４（１／Ｍ．Ｓｅｃ）以上の数値であることを特徴とする前記（１５）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１７）  該結合速度定数（ｋａ）が、１．０×１０５（１／Ｍ．Ｓｅｃ）以上の数値であることを特徴とする前記（１６）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１８）  該ヒトモノクローナル抗体とＡＩＬＩＭとの解離速度定数（ｋｄ）が、１．０×１０−３（１／Ｓｅｃ）以下の数値であることを特徴とする前記（３）または前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（１９）  該解離速度定数（ｋｄ）が、１．０×１０−４（１／Ｓｅｃ）以下の数値であることを特徴とする前記（１８）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２０）  該解離速度定数（ｋｄ）が、１．０×１０−５（１／Ｓｅｃ）以下の数値であることを特徴とする前記（１９）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２１）  該ヒトモノクローナル抗体とＡＩＬＩＭとの解離定数（Ｋｄ）が、１．０×１０−６（Ｍ）以下の数値であることを特徴とする前記（３）または前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２２）  該解離定数（Ｋｄ）が、１．０×１０−７（Ｍ）以下の数値であることを特徴とする前記（２１）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２３）  該解離定数（Ｋｄ）が、１．０×１０−８（Ｍ）以下の数値であることを特徴とする前記（２２）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２４）  該解離定数（Ｋｄ）が、１．０×１０−９（Ｍ）以下の数値であることを特徴とする前記（２３）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２５）  該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、１−０２または３−１３のいずれかのヒト免疫グロブリン重鎖Ｖ遺伝子セグメントに由来することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２６）  該ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、Ｌ５またはＡ２７のいずれかのヒト免疫グロブリン軽鎖Ｖ遺伝子セグメントに由来することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２７）  該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、１−０２または３−１３のいずれかのヒト免疫グロブリン重鎖Ｖ遺伝子セグメントに由来し、且つ該ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、Ｌ５またはＡ２７のいずれかのヒト免疫グロブリン軽鎖Ｖ遺伝子セグメントに由来することを特徴とする前記（２５）または前記（２６）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２８）  該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、ヒト免疫グロブリン重鎖Ｖ遺伝子セグメント１−０２に由来し、且つ該ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、ヒト免疫グロブリン軽鎖Ｖ遺伝子セグメントＬ５に由来することを特徴とする前記（２７）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（２９）  該ヒトモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、ヒト免疫グロブリン重鎖Ｖ遺伝子セグメント３−１３に由来し、且つ該ヒトモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするＶ領域のＤＮＡが、ヒト免疫グロブリン軽鎖Ｖ遺伝子セグメントＡ２７に由来することを特徴とする前記（２７）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（３０）  該ヒトモノクローナルの重鎖可変領域が、下記（ａ）乃至（ｆ）のいずれかのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１７番目のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１７番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列；または、
（ｆ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列。
（３１）  該ヒトモノクローナルの重鎖ポリペプチドが、下記（ａ）乃至（ｆ）のいずれかのアミノ酸配列を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列；または、
（ｆ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列。
（３２）  該ヒトモノクローナルの軽鎖可変領域が、下記（ａ）乃至（ｆ）のいずれかのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至１１６番目のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至１１６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列；または、
（ｆ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列。
（３３）  該ヒトモノクローナルの軽鎖ポリペプチドが、下記（ａ）乃至（ｆ）のいずれかのアミノ酸配列を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至２３６番目のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至２３６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列；または、
（ｆ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列。
（３４）  該ヒトモノクローナル抗体が、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１７番目のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する；及び、
（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する。
（３５）  該ヒトモノクローナル抗体が、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）重鎖ポリペプチドが、配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を有する；及び、
（ｂ）軽鎖ポリペプチドが、配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至２３６番目のアミノ酸配列を有する。
（３６）  該ヒトモノクローナル抗体が、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する；及び、
（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する。
（３７）  該ヒトモノクローナル抗体が、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）重鎖ポリペプチドが、配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を有する；及び、
（ｂ）軽鎖ポリペプチドが、配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列を有する。
（３８）  該ヒトモノクローナル抗体が、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する；及び、
（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する。
（３９）  該ヒトモノクローナル抗体が、下記（ａ）及び（ｂ）の特徴を有することを特徴とする前記（４）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部：
（ａ）重鎖ポリペプチドが、配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を有する；及び、
（ｂ）軽鎖ポリペプチドが、配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列を有する。
（４０）  該ヒトモノクローナル抗体が、ヒト抗体を産生する能力を有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物に由来するモノクローナル抗体であることを特徴とする前記（３）乃至前記（２９）のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（４１）  該ヒトモノクローナル抗体が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞、該細胞に由来する膜画分、ＡＩＬＩＭを構成する分子の全部若しくは一部、またはＡＩＬＩＭをコードする遺伝子またはその一部を、ヒト抗体を産生する能力を有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物に免疫することにより得られるモノクローナル抗体であることを特徴とする前記（４０）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（４２）  該トランスジェニック非ヒト哺乳動物が、トランスジェニックマウスであることを特徴とする前記（４０）または前記（４１）に記載のヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（４３）  下記（ａ）乃至（ｆ）からなる群から選ばれるポリペプチドをコードするＤＮＡまたはその一部：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１７番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｂ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；及び、
（ｆ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
（４４）  下記（ａ）乃至（ｆ）からなる群から選ばれるポリペプチドをコードするＤＮＡまたはその一部：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｂ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至２３６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｄ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｅ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド；及び、
（ｆ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
（４５）  下記（ａ）乃至（ｆ）からなる群から選ばれるＤＮＡまたはその一部：（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号１２６乃至４１９番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｂ）配列番号２９に記載される塩基番号１０５乃至３８６番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｃ）配列番号３１に記載される塩基番号１５１乃至４４１番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｄ）配列番号３３に記載される塩基番号８８乃至３７５番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｅ）配列番号３５に記載される塩基番号１５３乃至４４３番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び、
（ｆ）配列番号３７に記載される塩基番号９３乃至３８０番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（４６）  下記（ａ）乃至（ｆ）からなる群から選ばれるＤＮＡまたはその一部：（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号６９乃至１４８１番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｂ）配列番号２９に記載される塩基番号３９乃至７４９番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｃ）配列番号３１に記載される塩基番号９４乃至１５０６番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｄ）配列番号３３に記載される塩基番号２８乃至７３８番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｅ）配列番号３５に記載される塩基番号９６乃至１５０８番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び、
（ｆ）配列番号３７に記載される塩基番号３３乃至７４３番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（４７）  前記（４３）乃至前記（４６）のいずれかに記載されるＤＮＡを含むベクター。  （４８）  下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号１２６乃至４１９番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３１に記載される塩基番号１５１乃至４４１番目の塩基配列を含むＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３５に記載される塩基番号１５３乃至４４３番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（４９）  下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号６９乃至１４８１番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３１に記載される塩基番号９４乃至１５０６番目の塩基配列を有するＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３５に記載される塩基番号９６乃至１５０８番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（５０）  下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号２９に記載される塩基番号１０５乃至３８６番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号８８乃至３７５番目の塩基配列を含むＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３７に記載される塩基番号９３乃至３８０番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（５１）  下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号２９に記載される塩基番号３９乃至７４９番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号２８乃至７３８番目の塩基配列を有するＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３７に記載される塩基番号３３乃至７４３番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（５２）  下記（ａ）及び（ｂ）のＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号１２６乃至４１９番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び
（ｂ）配列番号２９に記載される塩基番号１０５乃至３８６番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（５３）  下記（ａ）及び（ｂ）のＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号６９乃至１４８１番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び
（ｂ）配列番号２９に記載される塩基番号３９乃至７４９番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（５４）  下記（ａ）及び（ｂ）のＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号３１に記載される塩基番号１５１乃至４４１番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号８８乃至３７５番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（５５）  下記（ａ）及び（ｂ）のＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号３１に記載される塩基番号９４乃至１５０６番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号２８乃至７３８番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（５６）  下記（ａ）及び（ｂ）のＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号３５に記載される塩基番号１５３乃至４４３番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び
（ｂ）配列番号３７に記載される塩基番号９３乃至３８０番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（５７）  下記（ａ）及び（ｂ）のＤＮＡを含む前記（４７）に記載のベクター：
（ａ）配列番号３５に記載される塩基番号９６乃至１５０８番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び
（ｂ）配列番号３７に記載される塩基番号３３乃至７４３番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（５８）  前記（３）乃至前記（４２）のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体を産生する細胞。
（５９）  該細胞が、該ヒトモノクローナル抗体を産生する能力を哺乳動物由来のＢ細胞と哺乳動物由来のミエローマ細胞とを融合して得られる融合細胞であることを特徴とする前記（５８）に記載の細胞。
（６０）  下記（ａ）のＤＮＡ若しくは該ＤＮＡを含むベクター、下記（ｂ）のＤＮＡ若しくは該ＤＮＡを含むベクター、または下記（ａ）及び（ｂ）の両方のＤＮＡ若しくは該両方のＤＮＡを含むベクターが宿主内に導入されることにより形質転換された遺伝子組換え宿主：
（ａ）ヒトＡＩＬＩＭに結合するモノクローナル抗体の重鎖ポリペプチドまたはその一部をコードするＤＮＡ；及び、
（ｂ）ヒトＡＩＬＩＭに結合するモノクローナル抗体の軽鎖ポリペプチドまたはその一部をコードするＤＮＡ。
（６１）  該モノクローナル抗体が、ヒトモノクローナル抗体であることを特徴とする前記（６０）に記載の遺伝子組換え宿主。
（６２）  該宿主が哺乳動物の細胞であることを特徴とする前記（６０）または前記（６１）に記載の遺伝子組換え宿主。
（６３）  該宿主が哺乳動物の受精卵であることを特徴とする前記（６０）または前記（６１）に記載の遺伝子組換え宿主。
（６４）  該重鎖ポリペプチドが、下記（ａ）乃至（ｃ）からなる群から選ばれる重鎖ポリペプチドであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１７番目のアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｂ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；及び，
（ｃ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド。
（６５）  該重鎖ポリペプチドが、下記（ａ）乃至（ｃ）からなる群から選ばれる重鎖ポリペプチドであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド；
（ｂ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド；及び，
（ｃ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチド。
（６６）  該軽鎖ポリペプチドが、下記（ａ）乃至（ｃ）からなる群から選ばれる軽鎖ポリペプチドであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至１１６番目のアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド；
（ｂ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド；及び、
（ｃ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド。
（６７）  該軽鎖ポリペプチドが、下記（ａ）乃至（ｃ）からなる群から選ばれる軽鎖ポリペプチドであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至２３６番目のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチド；
（ｂ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチド；及び、
（ｃ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチド。
（６８）  該重鎖ポリペプチド及び該軽鎖ポリペプチドが各々下記（ａ）及び（ｂ）であることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１７番目のアミノ酸を含む重鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至１１６番目のアミノ酸を含む軽鎖ポリペプチド。
（６９）  該重鎖ポリペプチド及び該軽鎖ポリペプチドが各々下記（ａ）及び（ｂ）であることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２８に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸を有する重鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号３０に記載されるアミノ酸番号２３乃至２３６番目のアミノ酸を有する軽鎖ポリペプチド。
（７０）  該重鎖ポリペプチド及び該軽鎖ポリペプチドが各々下記（ａ）及び（ｂ）であることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸を含む重鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸を含む軽鎖ポリペプチド。
（７１）  該重鎖ポリペプチド及び該軽鎖ポリペプチドが各々下記（ａ）及び（ｂ）であることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３２に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸を有する重鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号３４に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸を有する軽鎖ポリペプチド。
（７２）  該重鎖ポリペプチド及び該軽鎖ポリペプチドが各々下記（ａ）及び（ｂ）であることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至１１６番目のアミノ酸を含む重鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至１１６番目のアミノ酸を含む軽鎖ポリペプチド。
（７３）  該重鎖ポリペプチド及び該軽鎖ポリペプチドが各々下記（ａ）及び（ｂ）であることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３６に記載されるアミノ酸番号２０乃至４７０番目のアミノ酸を有する重鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）配列番号３８に記載されるアミノ酸番号２１乃至２３６番目のアミノ酸を有する軽鎖ポリペプチド。
（７４）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが、下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号１２６乃至４１９番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３１に記載される塩基番号１５１乃至４４１番目の塩基配列を含むＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３５に記載される塩基番号１５３乃至４４３番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（７５）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが、下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号６９乃至１４８１番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３１に記載される塩基番号９４乃至１５０６番目の塩基配列を有するＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３５に記載される塩基番号９６乃至１５０８番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（７６）  該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが、下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２９に記載される塩基番号１０５乃至３８６番目の塩基配列を含むＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号８８乃至３７５番目の塩基配列を含むＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３７に記載される塩基番号９３乃至３８０番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（７７）  該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが、下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれかのＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２９に記載される塩基番号３９乃至７４９番目の塩基配列を有するＤＮＡ；
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号２８乃至７３８番目の塩基配列を有するＤＮＡ；または、
（ｃ）配列番号３７に記載される塩基番号３３乃至７４３番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（７８）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ａ）のＤＮＡであり、且つ該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ｂ）のＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号１２６乃至４１９番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び、
（ｂ）配列番号２９に記載される塩基番号１０５乃至３８６番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（７９）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ａ）のＤＮＡであり、且つ該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ｂ）のＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号２７に記載される塩基番号６９乃至１４８１番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び、
（ｂ）配列番号２９に記載される塩基番号３９乃至７４９番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（８０）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ａ）のＤＮＡであり、且つ該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ｂ）のＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３１に記載される塩基番号１５１乃至４４１番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び、
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号８８乃至３７５番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（８１）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ａ）のＤＮＡであり、且つ該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ｂ）のＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３１に記載される塩基番号９４乃至１５０６番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び、
（ｂ）配列番号３３に記載される塩基番号２８乃至７３８番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（８２）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ａ）のＤＮＡであり、且つ該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ｂ）のＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３５に記載される塩基番号１５３乃至４４３番目の塩基配列を含むＤＮＡ；及び、
（ｂ）配列番号３７に記載される塩基番号９３乃至３８０番目の塩基配列を含むＤＮＡ。
（８３）  該重鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ａ）のＤＮＡであり、且つ該軽鎖ポリペプチドをコードするＤＮＡが下記（ｂ）のＤＮＡであることを特徴とする前記（６０）乃至前記（６３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主：
（ａ）配列番号３５に記載される塩基番号９６乃至１５０８番目の塩基配列を有するＤＮＡ；及び、
（ｂ）配列番号３７に記載される塩基番号３３乃至７４３番目の塩基配列を有するＤＮＡ。
（８４）  前記（６０）乃至前記（６２）のいずれかまたは前記（６４）乃至前記（８３）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主（但し、該宿主が受精卵である場合を除く）が産生するヒトモノクローナル抗体またはその一部。
（８５）  前記（１）または前記（２）に記載のヒト抗体、及び薬学的に許容されうる担体とを含んでなる医薬組成物。
（８６）  前記（３）乃至前記（４２）のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体若しくはその一部、及び薬学的に許容され得る担体とを含んでなる医薬組成物。
（８７）  前記（８４）に記載のヒトモノクローナル抗体若しくはその一部、及び薬学的に許容され得る担体とを含んでなる医薬組成物。
（８８）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを介する細胞内へのシグナル伝達を阻害するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（８９）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の増殖を抑制するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９０）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生を抑制するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９１）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを介する細胞内へのシグナル伝達を誘導するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９２）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の増殖を誘導するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９３）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生を誘導するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９４）  該医薬組成物が、ＡＩＬＩＭを発現する細胞に対する抗体依存性細胞障害を誘導するため、及び／またはＡＩＬＩＭを発現する細胞の免疫細胞溶解若しくは細胞死を誘導するために用いられることを特徴とする前記（８５）乃至前記（８７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９５）  ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達を制御する活性を有する物質及び薬学的に許容され得る担体を含んでなり、遅延型アレルギーを抑制、治療または予防するための医薬組成物。
（９６）  該物質が、蛋白性物質であることを特徴とする前記（９５）に記載の医薬組成物。
（９７）  該蛋白性物質が、下記群から選ばれるいずれかであることを特徴とする前記（９６）に記載の医薬組成物：
ａ）ＡＩＬＩＭに結合する抗体またはその一部；
ｂ）ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチド；
ｃ）ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部と免疫グロブリンの重鎖の定常領域の全部または一部とからなる融合ポリペプチド；及び
ｄ）ＡＩＬＩＭに結合するポリペプチド。
（９８）  該ＡＩＬＩＭに結合する抗体が、前記（１）または前記（２）に記載のヒト抗体であることを特徴とする前記（９７）に記載の医薬組成物。
（９９）  該ＡＩＬＩＭに結合する抗体が、前記（３）乃至前記（４２）のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体であることを特徴とする前記（９７）に記載の医薬組成物。
（１００）  該ＡＩＬＩＭに対する抗体が、前記（８４）に記載のヒトモノクローナル抗体であることを特徴とする前記（９７）に記載の医薬組成物。
（１０１）  該物質が、非蛋白性物質であることを特徴とする前記（９５）に記載の医薬組成物。
（１０２）  該非蛋白性物質が、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは化学的に合成された化合物であることを特徴とする前記（１０１）に記載の医薬組成物。
（１０３）  ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定する方法であって、下記工程を含むことを特徴とする方法：
（ａ）ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドを固定化した不溶性担体を調製する工程；
（ｂ）検出可能なシグナルをもたらし得る標識物質で標識したＡＩＬＩＭリガンドの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドを調製する工程；
（ｃ）工程（ａ）の不溶性担体及び工程（ｂ）のポリペプチドを反応させる工程；
（ｄ）工程（ａ）の不溶性担体、工程（ｂ）のポリペプチド及び該物質を任意の順序で反応させる工程；
（ｅ）工程（ｃ）の反応により生成される複合体に含まれる該標識物質が発するシグナル、及び工程（ｄ）の反応により生成される複合体に含まれる該標識物質が発するシグナルの各々を検出する工程；及び
（ｆ）工程（ｅ）で検出したシグナルの大きさの各々を比較する工程。
（１０４）  ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定する方法であって、下記工程を含むことを特徴とする方法：
（ａ）ＡＩＬＩＭリガンドの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドを固定化した不溶性担体を調製する工程；
（ｂ）検出可能なシグナルをもたらし得る標識物質で標識したＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドを調製する工程；
（ｃ）工程（ａ）の不溶性担体及び工程（ｂ）のポリペプチドを反応させる工程；
（ｄ）工程（ａ）の不溶性担体、工程（ｂ）のポリペプチド及び該物質を任意の順序で反応させる工程；
（ｅ）工程（ｃ）の反応により生成される複合体に含まれる該標識物質が発するシグナル、及び工程（ｄ）の反応により生成される複合体に含まれる該標識物質が発するシグナルの各々を検出する工程；及び
（ｆ）工程（ｅ）で検出したシグナルの大きさの各々を比較する工程。
（１０５）  該ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドが、ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドと免疫グロブリンの重鎖の定常領域の全部または一部とからなる融合ポリペプチドであることを特徴とする前記（１０３）または前記（１０４）に記載の方法。
（１０６）  該ＡＩＬＩＭリガンドの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドが、ＡＩＬＩＭリガンドの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチドと免疫グロブリンの重鎖の定常領域の全部または一部とからなる融合ポリペプチドであることを特徴とする前記（１０３）または前記（１０４）に記載の方法。
（１０７）  該ＡＩＬＩＭが、ヒトＡＩＬＩＭであることを特徴とする前記（１０３）乃至前記
（１０６）のいずれかに記載の方法。
（１０８）  該ＡＩＬＩＭリガンドが、ヒトＡＩＬＩＭリガンドであることを特徴とする前記（１０３）乃至前記（１０７）のいずれかに記載の方法。
【００２７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明で用いる語句の意味を明らかにすることにより、本発明を詳細に説明する。
本発明における「哺乳動物」とは、ヒト、ウシ、ヤギ、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、及びモルモット等を意味し、好ましくは、ヒト、ウサギ、ラット、ハムスターまたはマウスであり、特に好ましくは、ヒト、ラット、ハムスターまたはマウスである。
本発明で用いられる「ヒト以外の哺乳動物」及び「非ヒト哺乳動物」なる用語は各々同義であり、前述に定義した哺乳動物におけるヒト以外のあらゆる哺乳動物を意味する。
【００２８】
本発明において用いられる「アミノ酸」とは、自然界に存在するあらゆるアミノ酸を意味し、好ましくは、アミノ酸を表記するために用いられるアルファベットの三文字表記法または一文字表記法に従って各々下記のように表されるアミノ酸を意味する。
グリシン（Ｇｌｙ／Ｇ）、アラニン（Ａｌａ／Ａ）、バリン（Ｖａｌ／Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ／Ｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ／Ｉ）、セリン（Ｓｅｒ／Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ／Ｔ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ／Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ／Ｅ）、アスパラギン（Ａｓｎ／Ｎ）、グルタミン（Ｇｌｕ／Ｑ）、リジン（Ｌｙｓ／Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ／Ｒ）、システイン（Ｃｙｓ／Ｃ）、メチオニン（Ｍｅｔ／Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ／Ｆ）、チロシン（Ｔｙｒ／Ｙ）、トリプトファン（Ｔｒｐ／Ｗ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ／Ｈ）、プロリン（Ｐｒｏ／Ｐ）。
【００２９】
本発明でいう「ＡＩＬＩＭ」とは、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅの略称であり前述に記載したとおりの既報に報告される構造及び機能を有する哺乳動物の細胞表面分子を意味し、特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭを意味する（例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．１２，  Ｎｏ．１，  ｐ．５１−５５；  ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：  ＢＡＡ８２１２９（ヒト）；ＢＡＡ８２１２８（ラット）；ＢＡＡ８２１２７（ラット変異体）；ＢＡＡ８２１２６（マウス））。
なお、このＡＩＬＩＭは、ＩＣＯＳ（Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．３９７，  Ｎｏ．６７１６，  ｐ．２６３−２６６，  １９９９）またはＪＴＴ−１抗原／ＪＴＴ−２抗原（日本国特許出願公開平１１−２９５９９号公報；  国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号公報）とも別称されるが、それらの分子は互いに同一の分子を意味する。
本発明における「ＡＩＬＩＭリガンド」とは、上記副刺激伝達分子ＡＩＬＩＭ（ＩＣＯＳ）と相互作用する細胞表面分子であるＢ７ｈ、Ｂ７ＲＰ−１、ＧＬ５０あるいはＬＩＣＯＳと称される分子を意味する（Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．４０２，  Ｎｏ．６７６３，  ｐ．８２７−８３２，  １９９９；  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｖｏｌ．５，  Ｎｏ．１２，  ｐ．１３６５−１３６９，  １９９９；Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．１６４，  ｐ．１６５３−１６５７，  ２０００；  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．１０，  Ｎｏ．６，  ｐ．３３３−３３６，  ２０００）。
【００３０】
また、本発明で言う「ＡＩＬＩＭ」には、該既報の文献中に記載された各々の哺乳動物のＡＩＬＩＭのアミノ酸配列、特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭのアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドも包含される。さらにまた、既に同定されているラット由来のＡＩＬＩＭ変異体（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：  ＢＡＡ８２１２７）と同様のヒトＡＩＬＩＭ変異体も本発明における「ＡＩＬＩＭ」に包含される。
また、本発明における「ＡＩＬＩＭリガンド」も上記と同様の意味を以って定義される。
【００３１】
ここで「実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド」とは下記のような変異ポリペプチドを意味する。
即ち、天然型のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）と実質的に同等の生物学的性質を有する限り、該アミノ酸配列中の複数個のアミノ酸、好ましくは１乃至１０個のアミノ酸、特に好ましくは１乃至５個のアミノ酸が置換、欠失及び／または修飾されているアミノ酸配列を有する変異ポリペプチド、並びに該天然型のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）のアミノ酸配列中に、複数個のアミノ酸、好ましくは１乃至１０個のアミノ酸、特に好ましくは１乃至５個のアミノ酸が付加されたアミノ酸配列を有する変異ポリペプチド。
さらに、そのような置換、欠失、修飾及び付加の複数を有する変異ポリペプチドであってもよい。
また、本発明における「ＡＩＬＩＭリガンド」も上記と同様の意味を以って定義される。
本発明におけるＡＩＬＩＭ（特にはヒトのＡＩＬＩＭ）及びＡＩＬＩＭリガンド（特には、ヒトのＡＩＬＩＭリガンド）は、遺伝子組換え技術のほか、化学的合成法、細胞培養方法等のような当該技術的分野において知られる公知の方法あるいはその修飾方法を適宜用いることにより製造することができる。
そのようなアミノ酸の置換、欠失、または挿入は常法に従って行うことができる（実験医学別冊・「遺伝子工学ハンドブック」（１９９２）など）。
【００３２】
また、上述のような変異ポリペプチドの製造方法としては、例えば、合成オリゴヌクレオチド指定突然変異導入法（ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ）法、亜硝酸あるいは亜硫酸処理によってランダムに点突然変異を導入する方法、Ｂａ１３１酵素等により欠失変異体を作製する方法、カセット変異法、リンカースキャニング法、ミスインコーポレーション法、ミスマッチプライマー法、ＤＮＡセグメント合成法などを挙げることができる。
【００３３】
合成オリゴヌクレオチド指定突然変異導入（ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ）法は、例えば下記のように行うことができる。アンバー変異をもつＭ１３ファージベクターに変異誘起を希望する領域をクローニングし、一本鎖ファージＤＮＡを調製する。アンバー変異をもたないＭ１３ベクターのＲＦＩＤＮＡを制限酵素処理により線状とし、上記の一本鎖ファージＤＮＡと混合して変性後、アニールさせ、「ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ  ＤＮＡ」を形成させる。これに変異を導入した合成オリゴヌクレオチドをハイブリダイズさせ、ＤＮＡポリメラーゼとＤＮＡリガーゼの反応により閉環状２本鎖ＤＮＡとする。このＤＮＡをミスマッチ修飾能が欠損している大腸菌ｍｕｔＳ株にトランスフェクションし、増殖したファージをサプレッサー機能のない大腸菌に感染させ、アンバー変異を持たないファージだけを選択する。
【００３４】
また、亜硝酸による点突然変異を導入する方法は、例えば下記のような原理を利用する。ＤＮＡを亜硝酸処理すると塩基が脱アミノ化されて、アデニンはヒポキ  サンチンに、シトシンはウラシルに、グアニンはキサンチンになる。脱アミノ化されたＤＮＡを細胞に導入すると、ＤＮＡ複製時にヒポキサンチンはシトシンと、ウラシルはアデニンとキサンチンはチミンと塩基対を形成するため、「Ａ：Ｔ」が「Ｇ：Ｃ」へ、「Ｇ：Ｃ」が「Ａ：Ｔ」へと置換する。実際には亜硝酸処理した一本鎖ＤＮＡ断片を「ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ  ＤＮＡ」にハイブリダイズさせ、以下、合成オリゴヌクレオチド指定突然変異導入（ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ）法と同様に操作して変異株を分離すればよい。
【００３５】
また、本発明における「ＡＩＬＩＭ」には、該ＡＩＬＩＭの「一部」も包含される。ここで「一部」とは、前記に定義したＡＩＬＩＭのアミノ酸配列中の任意の部分配列を含むポリペプチドを意味する。
好ましくは、前記に定義したＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）の細胞外領域若しくはその任意の一部を意味する。
また、本発明における「ＡＩＬＩＭリガンド」についても、上記と同様の意味を以って定義される。
該ＡＩＬＩＭの「一部」（好ましくはＡＩＬＩＭの細胞外領域若しくはその任意の一部）は、後述する当該技術的分野において知られる公知の方法あるいはその修飾方法に従って、遺伝子組換え技術または化学的合成法により製造することもできるし、また細胞培養方法により単離したＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）をタンパク分解酵素等を用いて適切に切断することにより製造することができる。
また、本発明における「ＡＩＬＩＭリガンドの一部」も上記と同様の方法で製造することができる。
【００３６】
本発明の「ヒト抗体」とは、前記に定義したＡＩＬＩＭまたはその一部（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ若しくはその一部）に結合するヒト抗体である。具体的には、ヒト由来のポリクローナル抗体（ヒトポリクローナル抗体、ヒト抗血清）またはヒト由来のモノクローナル抗体（ヒトモノクローナル抗体）を意味する。本発明の「ヒトモノクローナル抗体」とは、前記に定義したＡＩＬＩＭまたはその一部（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ若しくはその一部）に結合するヒトモノクローナル抗体である。
さらに詳細には、イムノグロブリンを構成する重鎖（Ｈ鎖）の可変領域（Ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）及びＨ鎖の定常領域（Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎ）並びに軽鎖（Ｌ鎖）の可変領域及びＬ鎖の定常領域を含む全ての領域がヒトイムノグロブリンをコードする遺伝子に由来するヒトイムノグロブリンである。Ｌ鎖としては、ヒトκ鎖またはヒトλ鎖が挙げられる。
【００３７】
本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）またはその一部に結合するヒトモノクローナル抗体は、前記のとおりの本発明の（５）乃至（４２）または（８４）のいずれかに記載される特徴を有するヒトモノクローナル抗体である。
さらに具体的には、後述の実施例並びに図面に記載されるような様々な特性及び産業上の有用性を有する各種のヒトモノクローナル抗体である。
本発明のヒトモノクローナル抗体における好ましい態様としては、前記本発明の（５）乃至（４２）若しくは（８４）のいずれかに記載のＡＩＬＩＭ若しくはその一部に結合するヒトモノクローナル抗体である。
特に好ましい態様としては、前記本発明の（３０）または（３９）に記載のヒトＡＩＬＩＭに結合するヒトモノクローナル抗体である。
【００３８】
本発明の「ヒトモノクローナル抗体」は、下記のいずれかの免疫原（抗原）を以下に述べるヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物に免疫することにより作製することができる。
（イ）  前記に定義したＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）を細胞表面に発現する天然の細胞または人工的に樹立した細胞株；
（ロ）  前記に定義したＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）を細胞表面に発現するように遺伝子組換え技術を用いて作製された遺伝子組換え細胞；
（ハ）  前記（イ）または（ロ）の細胞を可溶化して得た細胞可溶化物（ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅ）、または該ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅから精製したＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）のポリペプチド断片；
（ニ）  前記に定義したＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）の一部（特に好ましくは、その細胞外領域若しくはその任意のペプチド）を可溶性ポリペプチドとして発現するように遺伝子組換え技術を用いて作製された遺伝子組換え細胞；
（ホ）  前記（ニ）の遺伝子組換え細胞を培養して得た培養上清若しくは該培養上清から精製されたＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）の細胞外領域ポリペプチド（可溶性ＡＩＬＩＭ）；または
（ヘ）  化学的に合成されたＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒト由来のＡＩＬＩＭ）の一部（特に好ましくは、その細胞外領域若しくはその任意のペプチド）。
【００３９】
さらには、本発明のヒトモノクローナル抗体は、遺伝子組換え技術を用いて、そのような本発明のヒトモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の各々をコードするｃＤＮＡ（好ましくは該ｃＤＮＡを含むベクター）により宿主を形質転換して得られる遺伝子組換え宿主であって、遺伝子組換えヒトモノクローナル抗体を産生する本発明の「遺伝子組換え宿主」（ここで、該宿主は、受精卵以外の真核細胞（好ましくはＣＨＯ、リンパ球やミエローマなどの哺乳動物細胞）である。）を培養することにより培養上清中から得ることもできる。
具体的には、前述した本発明の（６０）乃至（６２）または（６４）乃至（８０）のいずれかに記載の遺伝子組換え宿主（ここで、該宿主は、受精卵以外の真核細胞（好ましくはＣＨＯ、リンパ球やミエローマなどの哺乳動物細胞）である。）を培養することにより得ることができる。
【００４０】
また、本発明ヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤまたはＩｇＥのいずれのアイソタイプを有するヒトモノクローナル抗体であってもよい。好ましくは、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であり、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。
【００４１】
本発明のヒトモノクローナル抗体は、後述するヒト抗体産生トランスジェニックマウスのようなヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物に前述の（イ）乃至（ヘ）のいずれかの免疫原（抗原）を免疫し、モノクローナル抗体の既存の一般的な製造方法に従って製造することができる。
即ち、例えば、該抗原を、必要に応じてフロイントアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）とともに、該ヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物に免疫する。ポリクローナル抗体は、該免疫感作動物から得た血清から取得することができる。またモノクローナル抗体は、該免疫感作動物から得た該抗体産生細胞と自己抗体産生能のない骨髄腫系細胞（ミエローマ細胞）から融合細胞（ハイブリドーマ）を調製し、該ハイブリドーマをクローン化し、哺乳動物の免疫に用いた抗原に対して特異的親和性を示すモノクローナル抗体を産生するクローンを選択することによって製造される。
【００４２】
さらに具体的には下記のようにして製造することができる。即ち、前述の（イ）乃至（ハ）のいずれかの免疫原を、必要に応じてフロイントアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）とともに、該ヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物（特に好ましくは後述の「ヒト抗体産生トランスジェニックマウス」）の皮下内、筋肉内、静脈内、フッドパッド内あるいは腹腔内に１乃至数回注射するかあるいは移植することにより免疫感作を施す。通常、初回免疫から約１乃至１４日毎に１乃至４回免疫を行って、最終免疫より約１乃至５日後に免疫感作された該哺乳動物から抗体産生細胞が取得される。免疫を施す回数及び時間的インターバルは、使用する免疫原の性質などにより、適宜変更することができる。
【００４３】
ヒトモノクローナル抗体を分泌する融合細胞（ハイブリドーマ）の調製は、ケーラー及びミルシュタインらの方法（Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．２５６，  ｐ．４９５−４９７，  １９７５）及びそれに準じる修飾方法に従って行うことができる。即ち、前述の如く免疫感作されたヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物から取得される脾臓、リンパ節、骨髄あるいは扁桃等、好ましくは脾臓に含まれる抗体産生細胞と、好ましくはマウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギまたはヒト等の哺乳動物、より好ましくはマウス、ラットまたはヒト由来の自己抗体産生能のないミエローマ細胞との細胞融合させることにより調製される。
【００４４】
細胞融合に用いられるミエローマ細胞としては、例えばマウス由来ミエローマＰ３／Ｘ６３−ＡＧ８．６５３（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．  ＣＲＬ−１５８０）、Ｐ３／ＮＳＩ／１−Ａｇ４−１（ＮＳ−１）、Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）、ＳＰ２／０−Ａｇ１４（Ｓｐ２／Ｏ，Ｓｐ２）、ＮＳ０、ＰＡＩ、Ｆ０あるいはＢＷ５１４７、ラット由来ミエローマ２１０ＲＣＹ３−Ａｇ．２．３．、ヒト由来ミエローマＵ−２６６ＡＲ１、ＧＭ１５００−６ＴＧ−Ａ１−２、ＵＣ７２９−６、ＣＥＭ−ＡＧＲ、Ｄ１Ｒ１１あるいはＣＥＭ−Ｔ１５を使用することができる。
モノクローナル抗体を産生する細胞（例えば、ハイブリドーマ）のスクリーニングは、該細胞を、例えばマイクロタイタープレート中で培養し、増殖の見られたウェルの培養上清の前述の免疫感作で用いた免疫抗原に対する反応性を、例えばＲＩＡ（ｒａｄｉｏ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）やＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏ−ｓｏｌｖｅｎｔ  ａｓｓａｙ）等の酵素免疫測定法によって測定することにより行なうことができる。
ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の製造は、ハイブリドーマをインビトロ、またはマウス、ラット、モルモット、ハムスターまたはウサギ等、好ましくはマウスまたはラット、より好ましくはマウスの腹水中等でのインビボで行い、得られた培養上清、または哺乳動物の腹水から単離することにより行うことができる。
【００４５】
また、本発明のモノクローナル抗体は、下記のような方法により大量に製造することができる。
（１）該ハイブリドーマから該モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の各々をコードする遺伝子（ｃＤＮＡなど）クローニングする。
（２）クローニングされた重鎖及び軽鎖の各々をコードする遺伝子を、各々別々または単一のベクターに挿入することにより発現ベクターを調製する。
（３）該ベクターを所望の非ヒト哺乳動物（ヤギなど）の受精卵に導入する。
（４）遺伝子導入した受精卵を仮親（Ｆｏｓｔｅｒ  ｍｏｔｈｅｒ）の子宮に移植し、キメラ非ヒト動物を得る。
（５）該キメラヤギを別の非ヒト哺乳動物とさらに交配することにより該重鎖及び軽鎖の各々をコードする遺伝子が内在性遺伝子に組み込まれたトランスジェニックな非ヒト哺乳動物（ウシ、ヤギ、ヒツジまたはブタなど）を作製する。
（６）該トランスジェニック非ヒト哺乳動物のミルク中から当該ヒトモノクローナル抗体遺伝子に由来するモノクローナル抗体を大量に取得する（日系サイエンス、１９９７年４月号、第７８頁乃至８４頁）。
この方法により作製されるヒトモノクローナル抗体も本願発明に包含される。
該モノクローナル抗体産生細胞をインビトロで培養する場合には、培養する細胞種の特性、試験研究の目的及び培養方法等の種々条件に合わせて、ハイブリドーマを増殖、維持及び保存させ、培養上清中にモノクローナル抗体を産生させるために用いられるような既知栄養培地あるいは既知の基本培地から誘導調製されるあらゆる栄養培地を用いて実施することが可能である。
【００４６】
基本培地としては、例えば、Ｈａｍ’Ｆ１２培地、ＭＣＤＢ１５３培地あるいは低カルシウムＭＥＭ培地等の低カルシウム培地及びＭＣＤＢ１０４培地、ＭＥＭ培地、Ｄ−ＭＥＭ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＡＳＦ１０４培地あるいはＲＤ培地等の高カルシウム培地等が挙げられ、該基本培地は、目的に応じて、例えば血清、ホルモン、サイトカイン及び／または種々無機あるいは有機物質等を含有することができる。
モノクローナル抗体の単離、精製は、上述の培養上清あるいは腹水を、飽和硫酸アンモニウム、ユーグロブリン沈澱法、カプロイン酸法、カプリル酸法、イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたはＤＥ５２等）、抗イムノグロブリンカラムあるいはプロテインＡカラム等のアフィニティカラムクロマトグラフィーに供すること等により行うことができる。
【００４７】
本発明のヒトモノクローナル抗体には、該抗体を構成する重鎖及び／または軽鎖の各々のアミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有する重鎖及び／または軽鎖からなるヒトモノクローナル抗体も包含される。
【００４８】
ここで、「数個のアミノ酸」とは、複数個のアミノ酸を意味し、具体的には１乃至１０個のアミノ酸であり、好ましくは１乃至５個のアミノ酸である。
本発明のヒトモノクローナル抗体のアミノ酸配列中に、前記のようなアミノ酸の部分的改変（欠失、置換、挿入、付加）は、該アミノ酸配列をコードする塩基配列を部分的に改変することにより導入することができる。この塩基配列の部分的改変は、既知の部位特異的変異導入法（Ｓｉｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ）を用いて常法により導入することができる（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃｓｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  Ｖｏｌ．８１，  ｐ．５６６２−５６６６，  １９８４）。
【００４９】
本発明における「トランスジェニックヒト抗体産生非ヒト哺乳動物」、特に好ましい態様であるヒト抗体産生トランスジェニックマウスは、既報に従って作製することができる（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｖｏｌ．７，  ｐ．１３−２１，  １９９４；Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｖｏｌ．１５，  ｐ．１４６−１５６，  １９９７；特表平４−５０４３６５号公報；特表平７−５０９１３７号公報；日経サイエンス、６月号、第４０〜第５０頁、１９９５年；国際出願公開ＷＯ９４／２５５８５号公報；Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．３６８，  ｐ．８５６−８５９，  １９９４；及び特表平６−５００２３３号公報など）。
該ヒト抗体産生トランスジェニックマウスは、具体的には、例えば下記の工程からなる手法を用いることにより作製できる。他のヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物も同様にして製造することができる。
【００５０】
（１）マウス内在性イムノグロブリン重鎖遺伝子座の少なくとも一部を相同組換えにより薬剤耐性マーカー遺伝子（ネオマイシン耐性遺伝子など）で置換することにより該マウス内在性イムノグロブリン重鎖遺伝子が機能的に不活性化されたノックアウトマウスを作製する工程。
（２）マウス内在性イムノグロブリン軽鎖遺伝子座の少なくとも一部を相同組換えにより薬剤耐性マーカー遺伝子（ネオマイシン耐性遺伝子など）で置換することにより該マウス内在性イムノグロブリン軽鎖遺伝子（特にκ鎖遺伝子）が機能的に不活性化されたノックアウトマウスを作製する工程。
（３）酵母人工染色体（Ｙｅａｓｔ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，  ＹＡＣ）ベクター等に代表されるような巨大遺伝子を運搬可能なベクターを用いて、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座の所望の領域がマウス染色体中に組み込まれたトランスジェニックマウスを作製する工程。
（４）ＹＡＣ等に代表されるような巨大遺伝子を運搬可能なベクターを用いて、ヒト免疫グロブリン軽鎖（特にκ鎖）遺伝子座の所望の領域がマウス染色体中に組み込まれたトランスジェニックマウスを作製する工程。
（５）前記（１）乃至（４）のノックアウトマウス及びトランスジェニックマウスを任意の順序で交配することにより、マウス内在性免疫グロブリン重鎖遺伝子座及びマウス内在性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座がともに機能的に不活性化され、且つヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座の所望の領域及ヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座の所望の領域がともにマウス染色体上に組み込まれたトランスジェニックマウスを作製する工程。
【００５１】
前記ノックアウトマウスは、マウス内在性イムノグロブリン遺伝子座の適当な領域を外来性マーカー遺伝子（ネオマイシン耐性遺伝子など）で相同組換えにより置換することにより該遺伝子座が再構成（リアレンジメント）できないように不活性化することにより作製できる。該相同組換えを用いた不活性化には、例えば、ポジティブ・ネガティブ・セレクション（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ；  ＰＮＳ）と呼称される方法を用いることができる（日経サイエンス，  ５月号，  ｐ．５２−６２，  １９９４）。
イムノグロブリン重鎖遺伝子座の機能的不活性化には、例えば、Ｊ領域またはＣ領域（例えばＣμ領域）の一部に障害を導入することにより達成できる。またイムノグロブリン軽鎖（例えばκ鎖）に機能的不活性化は、例えば、Ｊ領域若しくはＣ領域の一部、またはＪ領域及びＣ領域にまたがる領域を含む領域に障害を導入することにより達成可能である。
【００５２】
トランスジェニックマウスは、トランスジェニック動物の製造において通常使用されるような常法（例えば、最新動物細胞実験マニュアル、エル・アイ・シー発行、第７章、第３６１〜第４０８頁、１９９０年を参照）に従って作製することが可能である。具体的には、例えば、正常マウス胚盤胞（ｂｌａｓｔｃｙｓｔ）に由来するＨＰＲＴ陰性（ヒポキサンチングアニン・フォスフォリボシルトランスフェラーゼ遺伝子を欠いている）ＥＳ細胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）を、該ヒトイムノグロブリン重鎖遺伝子座または軽鎖遺伝子座をコードする遺伝子またはその一部並びにＨＰＲＴ遺伝子が挿入されたＹＡＣベクターを含む酵母とスフェロプラスト融合法により融合する。該外来性遺伝子がマウス内在性遺伝子上にインテグレートされたＥＳ細胞をＨＡＴセレクション法により選別する。次いで、選別したＥＳ細胞を、別の正常マウスから取得した受精卵（胚盤胞）にマイクロインジェクションする（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  Ｖｏｌ．７７，  Ｎｏ．１２，  ｐｐ．７３８０−７３８４，  １９８０；米国特許第４，８７３，１９１号公報）。該胚盤胞を仮親としての別の正常マウスの子宮に移植する。そうして該仮親マウスから、キメラトランスジェニックマウスが生まれる。該キメラトランスジェニックマウスを正常マウスと交配させることによりヘテロトランスジェニックマウスを得る。該ヘテロ（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｃ）トランスジェニックマウス同士を交配することにより、メンデルの法則に従って、ホモ（ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｃ）トランスジェニックマウスが得られる。
【００５３】
本発明における「モノクローナル抗体の一部」とは、前述の本発明のヒトモノクローナル抗体の一部分の領域を意味し、具体的にはＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ（ｄｉｓｕｌｐｈｉｄｅ  ｓｔａｂｉｌｉｓｅｄ  Ｆｖ）あるいはｄＡｂ（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）等が挙げられる（エキスパート・オピニオン・オン・テラピューティック・パテンツ（Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｐａｔｅｎｔｓ），第６巻，第５号，第４４１〜４５６頁，１９９６年）。
【００５４】
ここで、「Ｆ（ａｂ’）２」及び「Ｆａｂ’」とは、イムノグロブリン（モノクローナル抗体）を、蛋白分解酵素であるペプシンあるいはパパイン等で処理することにより製造され、ヒンジ領域中の２本のＨ鎖間に存在するジスルフィド結合の前後で消化されて生成される抗体フラグメントを意味する。例えば、ＩｇＧをパパインで処理すると、ヒンジ領域中の２本のＨ鎖間に存在するジスルフィド結合の上流で切断されてＶＬ（Ｌ鎖可変領域）とＣＬ（Ｌ鎖定常領域）からなるＬ鎖、及びＶＨ（Ｈ鎖可変領域）とＣＨγ１（Ｈ鎖定常領域中のγ１領域）とからなるＨ鎖フラグメントがＣ末端領域でジスルフィド結合により結合した相同な２つの抗体フラグメントを製造することができる。これら２つの相同な抗体フラグメントを各々Ｆａｂ’という。またＩｇＧをペプシンで処理すると、ヒンジ領域中の２本のＨ鎖間に存在するジスルフィド結合の下流で切断されて前記２つのＦａｂ’がヒンジ領域でつながったものよりやや大きい抗体フラグメントを製造することができる。この抗体フラグメントをＦ（ａｂ’）２という。
【００５５】
本発明における「結合速度定数（ｋａ）」とは、抗原抗体反応速度論に基づき算出される該モノクローナル抗体の標的抗原への結合の強さ（程度）を示す値を意味する。「解離速度定数（ｋｄ）」とは、抗原抗体反応速度論に基づき算出される該モノクローナル抗体の標的抗原からの解離の強さ（程度）を示す値を意味する。「解離定数（Ｋｄ）」とは、該「解離速度定数（ｋｄ）」値を該「結合速度定数（ｋａ）」値で除して求められる値である。これらの定数は、該モノクローナル抗体の抗原に対する親和性及び抗原の中和活性を表す指標として用いられる。
【００５６】
当該定数は、種々の方法に従って解析することができるが、市販の測定キットであるＢｉａｃｏｒｅＸ（アマシャムファルマシア社製）または類似のキットを用い、  当該キットに添付の取扱い説明書及び実験操作方法に従って容易に解析することができる。当該キットを用いて求められるｋａ値、ｋｄ値及びＫｄ値は各々、１／Ｍ．Ｓｅｃ、１／Ｓｅｃ及びＭ（モル）なる単位を以て表される。試験されたモノクローナル抗体は、ｋａ値が大きいほど強い抗原結合活性を有していることを示し、Ｋｄ値が小さいほど強い中和活性を有していることを示す。
【００５７】
本発明のヒトモノクローナル抗体には、下記（１）乃至（３）に示されるようなｋａ値、ｋｄ値またはＫｄ値を有するヒトモノクローナル抗体が含まれる。
（１）ヒトＡＩＬＩＭとの結合速度定数（ｋａ）が、１．０×１０４（１／Ｍ．Ｓｅｃ）以上の数値、好ましくは１．０×１０５（１／Ｍ．Ｓｅｃ）以上の数値であるヒトＡＩＬＩＭまたは一部に結合するヒトモノクローナル抗体。
（２）ヒトＡＩＬＩＭとの解離速度定数（ｋｄ）が、１．０×１０−４（１／Ｓｅｃ）以下、好ましくは１．０×１０−５（１／Ｓｅｃ）以下の数値であるヒトＡＩＬＩＭまたはその一部に結合するヒトモノクローナル抗体。
（３）ヒトＡＩＬＩＭとの解離定数（Ｋｄ）が、１．０×１０−７（１／Ｓｅｃ）以下、好ましくは１．０×１０−８（Ｍ）以下、より好ましくは１．０×１０−９（Ｍ）以下の数値であるヒトＡＩＬＩＭまたはその一部に反応性を有するヒトモノクローナル抗体。
なお、上述のｋａ、ｋｄ及びＫｄの各々の値は、測定時の諸条件に依存して多少の変動は誤差範囲として起こり得ることが予測されるが、指数についてはほとんど変動しないのが一般的である。
【００５８】
本発明の「モノクローナル抗体を産生する細胞」あるいは遺伝子組換えヒトモノクローナル抗体を産生する本発明の「遺伝子組換え宿主」（ここで、該宿主は、受精卵以外の細胞である。）とは、前述した本発明のヒトモノクローナル抗体を産生する任意の細胞を意味する。
具体的には、例えば、下記（１）乃至（３）のいずれかに記載される細胞を挙げることができるがこの限りではない。
（１）前記で定義した免疫原（抗原）を前述のヒト抗体産生トランスジェニック非ヒト哺乳動物に免疫することにより得られ、該被免疫動物から採取され得るヒトモノクローナル抗体産生Ｂ細胞。
（２）そのようにして得られたヒトモノクローナル抗体産生Ｂ細胞を哺乳動物由来のミエローマ細胞と細胞融合して得られる前述の融合細胞（ハイブリドーマ）。
（３）該ヒトモノクローナル抗体産生Ｂ細胞またはヒトモノクローナル抗体産生融合細胞（ハイブリドーマ）から単離される該ヒトモノクローナル抗体をコードする遺伝子（重鎖をコードする遺伝子若しくは軽鎖をコードする遺伝子のいずれか一方、または両方の遺伝子）で、該Ｂ細胞及びハイブリドーマ以外の細胞（例えば、ＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｏｖａｒｉａｎ）細胞、ＢＨＫ（Ｂａｂｙ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｋｙｄｎｅｙ）細胞、ミエローマなどのリンパ球など）を形質転換して得られる遺伝子組換えヒトモノクローナル抗体を産生する遺伝子組換え細胞。
【００５９】
ここで、前記（３）に記載の遺伝子組換えヒトモノクローナル抗体を産生する遺伝子組換え細胞は、即ち、前記（１）のＢ細胞または（２）のハイブリドーマが産生するヒトモノクローナル抗体の遺伝子組換え体を産生する遺伝子組換え細胞を意味する。
また、本発明の「遺伝子組換え宿主」における「宿主」には、上記のような種々の哺乳動物由来の細胞だけでなく、任意の非ヒト哺乳動物（ヤギ、ブタ、ヒツジ、ウシなど）の受精卵も包含される。この受精卵に、本発明のヒトＡＩＬＩＭに対する任意のモノクローナル抗体（好ましくは、ヒトモノクローナル抗体）をコードする遺伝子（重鎖をコードする遺伝子若しくは軽鎖をコードする遺伝子のいずれか一方、または両方の遺伝子）を発現ベクター等を用いて導入することにより本発明の遺伝子組換え受精卵が得られる。この遺伝子組換え受精卵は、上述した所望の蛋白質をミルクから大量調製するためにトランスジェニック動物の製造に用いられる（日系サイエンス、１９９７年４月号、第７８頁乃至８４頁）。
【００６０】
本発明を構成する「物質」、具体的には「ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達を制御する活性を有する物質」、さらに具体的には「ＡＩＬＩＭ発現細胞の増殖を抑制するか、またはＡＩＬＩＭ発現細胞によるサイトカインの産生を抑制する活性を有する物質」には、自然界に存在する天然の物質あるいは人工的に調製される任意の物質を意味する。
また、本発明における「ＡＩＬＩＭに結合する物質」及び「ＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質」に係る「物質」も、自然界に存在する天然の物質あるいは人工的に調製される任意の物質を意味する。
ここで、「ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達」とは、ＡＩＬＩＭを発現する細胞に任意の表現型の変化（細胞増殖、細胞の活性化、細胞の不活性化、細胞死、及び／またはＡＩＬＩＭ発現細胞からの任意のサイトカインの産生能の変化）をもたらすようなＡＩＬＩＭを通じたシグナル伝達を意味する。
【００６１】
該「物質」は、「蛋白性物質」と「非蛋白性物質」に大別することができる。
該「蛋白性物質」としては、後述するポリペプチド、抗体（ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体または該モノクローナル抗体の一部。特に好ましくは前述のヒト抗体）が挙げられる。
該物質が抗体である場合には、好ましくはモノクローナル抗体である。該物質がモノクローナル抗体である場合には、非ヒト哺乳動物由来のモノクローナル抗体だけでなく、組換えキメラモノクローナル抗体、組換えヒト型モノクローナル抗体及び上述のヒトモノクローナル抗体が包含される。
【００６２】
ここで「組換えキメラモノクローナル抗体」とは、遺伝子工学的に作製されるモノクローナル抗体であって、具体的には、その可変領域が、非ヒト哺乳動物（マウス、ラット、ハムスターなど）のイムノグロブリン由来の可変領域であり、かつその定常領域がヒトイムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴とするマウス／ヒトキメラモノクローナル抗体等のキメラモノクローナル抗体を意味する。
【００６３】
また、「ヒト型モノクローナル抗体（ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｅｄ抗体）」とは、遺伝子工学的に作製されるモノクローナル抗体であって、具体的には、その超可変領域の相補性決定領域の一部または全部が非ヒト哺乳動物（マウス、ラット、ハムスターなど）のモノクローナル抗体に由来する超可変領域の相補性決定領域であり、その可変領域の枠組領域がヒトイムノグロブリン由来の可変領域の枠組領域であり、かつその定常領域がヒトイムノグロブリン由来の定常領域であることを特徴とするヒト型モノクローナル抗体を意味する。
【００６４】
ここで、超可変領域の相補性決定領域とは、抗体の可変領域中の超可変領域に存在し、抗原と相補的に直接結合する部位である３つの領域（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｓｉｄｕｅ；ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）を指し、また可変領域  の枠組領域とは、該３つ相補性決定領域の前後に介在する比較的保存された４つの領域（Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｒｅｇｉｏｎ；ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４）を指す。
換言すれば、非ヒト哺乳動物由来のモノクローナル抗体の超可変領域の相補性決定領域の一部または全部以外の全ての領域が、ヒトイムノグロブリンの対応領域と置き代わったモノクローナル抗体を意味する。
【００６５】
ヒトイムノグロブリン由来の定常領域は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１，  ＩｇＧ２，  ＩｇＧ３，  ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ等のアイソタイプにより各々固有のアミノ酸配列を有するが、本発明においては、該ヒト型モノクローナル抗体の定常領域はいずれのアイソタイプに属するヒトイムノグログリンの定常領域であってもよい。好ましくは、ヒトＩｇＧの定常領域である。また、ヒトイムノグロブリン由来の可変領域の枠組領域についても限定されるものではない。
【００６６】
本発明の「物質」が、ポリペプチドである場合には、後述するポリペプチド、該ポリペプチドの断片（オリゴペプチド）、融合ポリペプチド、及びそれらいずれかの化学修飾体が包含される。オリゴペプチドとしては、５乃至３０個のアミノ酸、好ましくは５乃至２０個のアミノ酸からなるペプチドを挙げることができる。該化学修飾は、生体に投与された場合の血中半減期の増大あるいは経口投与時における消化管での分解に対する耐性若しくは吸収性の増大の目的等の種々の目的に応じて設計することができる。
該ポリペプチドの具体例としては、後述する下記が挙げられる。
（１）ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチド；
（２）ＡＩＬＩＭの細胞外領域の全部またはは一部と免疫グロブリンの重鎖の定常領域の全部または一部とからなる融合ポリペプチド；または、
（３）ＡＩＬＩＭに結合するポリペプチド。
【００６７】
該「非蛋白性物質」としては、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び化学的に合成された化合物が挙げられる。
ここで、「ＤＮＡ」とは、前述のＡＩＬＩＭ（好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）をコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡ及びゲノミックＤＮＡを含む）の塩基配列を基に設計されるアンチセンスＤＮＡ医薬として有用な「該ＤＮＡの部分塩基配列を含むＤＮＡあるいはそれらを化学修飾した化学修飾ＤＮＡ」を意味する。即ち、該アンチセンスＤＮＡは、ＡＩＬＩＭをコードするＤＮＡまたはＲＮＡにハイブリダイズすることにより、該ＡＩＬＩＭをコードするＤＮＡのｍＲＮＡへの転写あるいは該ｍＲＮＡの蛋白への翻訳を阻害することができる。
【００６８】
ここで、「部分塩基配列」とは、任意の部位における任意の数の塩基からなる部分塩基配列を意味する。該部分塩基配列としては、連続した５乃至１００塩基の部分塩基配列が挙げられ、好ましくは、連続した５乃至７０塩基の部分塩基配列、さらに好ましくは連続した５乃至５０塩基の部分塩基配列、より好ましくは連続した５乃至３０塩基の部分塩基配列が挙げられる。
【００６９】
また、該ＤＮＡをアンチセンス医薬として用いる場合には、該ＤＮＡが患者の体内に投与された場合の血中半減期の増大（安定性）、細胞内膜の透過性の増大、あるいは経口投与の場合の消化器官での分解耐性の増大若しくは吸収の増大などの目的のために、該ＤＮＡの塩基配列の一部に化学修飾を施すことが可能である。化学修飾としては、例えば、オリゴヌクレオチドの構造中のリン酸結合、リボース、核酸塩基、糖部位、３’及び／または５’末端等の化学修飾が挙げられる。
リン酸結合の修飾としては、１以上の該結合を、ホスホジエステル結合（Ｄ−オリゴ）、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合（Ｓ−オリゴ）、メチルホスホネート結合（ＭＰ−オリゴ）、ホスホロアミデート結合、非リン酸結合及びメチルホスホノチオエート結合のいずれかまたはそれらの組み合わせへの変更を挙げることができる。リボースの修飾としては、２’−フルオロリボースあるいは２’−Ｏ−メチルリボースへなどへの変更を挙げることができる。核酸塩基の修飾としては、５−プロピニルウラシルまたは２−アミノアデニンなどへの変更が挙げられる。
【００７０】
ここで、「ＲＮＡ」とは、前述のＡＩＬＩＭ（好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）をコードするＲＮＡの塩基配列を基に設計されるアンチセンスＲＮＡ医薬として有用な「該ＲＮＡの部分塩基配列を含むＲＮＡあるいはそれらを化学修飾した化学修飾ＲＮＡ」を意味する。該アンチセンスＲＮＡは、ＡＩＬＩＭをコードするＤＮＡにハイブリダイズすることにより、該ＡＩＬＩＭをコードするＤＮＡまたはＲＮＡにハイブリダイズすることにより、該ＡＩＬＩＭをコードするＤＮＡのｍＲＮＡへの転写あるいは該ｍＲＮＡの蛋白への翻訳を阻害することができる。
【００７１】
ここで、「部分塩基配列」とは、任意の部位における任意の数の塩基からなる部分塩基配列を意味する。該部分塩基配列としては、連続した５乃至１００塩基の部分塩基配列が挙げられ、好ましくは、連続した５乃至７０塩基の部分塩基配列、さらに好ましくは連続した５乃至５０塩基の部分塩基配列、より好ましくは連続した５乃至３０塩基の部分塩基配列が挙げられる。
該アンチセンスＲＮＡは、該ＲＮＡが患者の体内に投与された場合の血中半減期の増大、細胞内膜の透過性の増大、あるいは経口投与の場合の消化器官での分解耐性の増大若しくは吸収の増大などの目的のために、該ＲＮＡの塩基配列の一部に化学修飾を施すことが可能である。化学修飾としては、例えば、前述のアンチセンスＤＮＡに適用されるような化学修飾を挙げることができる。
【００７２】
「化学的に合成された化合物」とは、上述のＤＮＡ、ＲＮＡ及び蛋白性物質を除く任意の化合物であって、分子量約１００乃至約１０００以下の化合物、好ましくは分子量約１００乃至約８００の化合物であり、より好ましくは分子量約１００乃至約６００の化合物を挙げることができる。
【００７３】
前記「物質」の定義に包含される「ポリペプチド」とは、ＡＩＬＩＭ（好ましくはヒトのＡＩＬＩＭ）を構成するポリペプチド鎖の一部（断片）を意味し、好ましくはＡＩＬＩＭを構成するポリペプチドの細胞外領域の全部またはその一部を意味する（該領域は所望応じそのＮ末端及び／またはＣ末端に１乃至５のアミノ酸が付加されていてもよい。）。
本発明で係るＡＩＬＩＭは、１または２のポリペプチド鎖により構成される細胞膜を貫通する細胞膜貫通分子である。
【００７４】
ここで「細胞膜貫通蛋白」とは、多くの受容体あるいは細胞膜表面分子に見られるように、膜の脂質二重層を１回または数回貫通する疎水性ペプチド領域により膜と連結し、全体として細胞外領域（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｇｉｏｎ）、膜貫通領域（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｇｉｏｎ）及び細胞質領域（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｇｉｏｎ）の３つの主領域から構成される構造をとる蛋白を指す。さらにそのような膜貫通性蛋白は、モノマ−（ｍｏｎｏｍｅｒ）として、または、同一のアミノ酸配列を有するもう１本の鎖あるいは異なるアミノ酸配列を有する鎖とともにそれぞれホモダイマ−（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）  、ヘテロダイマ−（ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ）あるいはオリゴマ−（ｏｒｉｇｏｍｅｒ）を形成して存在することにより、各々の受容体や細胞表面分子を構成する。
【００７５】
ここで「細胞外領域」とは、前述のような細胞膜膜貫通蛋白の全体構造のうち、該膜蛋白が連結している膜の外界側に存在する部分構造（部分領域）の全部または一部を意味し、換言すれば、膜内に取り込まれている領域（膜貫通領域）及び該膜内の領域に引き続いて細胞質内に存在する領域（細胞内領域）以外の領域の全部または一部を意味する。
【００７６】
前述の「蛋白性物質」に包含される「融合ポリペプチド」とは、ＡＩＬＩＭ（好ましくはヒトのＡＩＬＩＭ）を構成するポリペプチドの細胞外領域の全部または一部と「免疫グロブリン（Ｉｇ、好ましくはヒトのＩｇ）の重鎖の定常領域の全部または一部」とからなる融合ポリペプチドである。好ましくはＡＩＬＩＭの細胞外領域とヒトＩｇＧの重鎖の定常領域の一部との融合ポリペプチドであり、特に好ましくはＡＩＬＩＭの細胞外領域とヒトＩｇＧの重鎖のヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインからなる領域（Ｆｃ）との融合ポリペプチドである。なお、ＩｇＧとしては、ＩｇＧ１が好ましい。また、ＡＩＬＩＭとしては、ヒト、マウスまたはラット（好ましくはヒト）のＡＩＬＩＭが好ましい。
【００７７】
ここで「免疫グロブリン（Ｉｇ）の重鎖の定常領域の全部または一部」とは、好ましくはヒト由来の免疫グロブリンの重鎖（Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎ，Ｈ鎖）の定常領域（Ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｒｅｇｉｏｎ）、Ｆｃ領域またはそれらの一部を意味する。該免疫グロブリンは、どのようなクラス及びサブクラスに属する免疫グロブリンであってもよく、具体的には、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、ＩｇＤ及びＩｇＥを挙げることができる。好ましくは、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４）、またはＩｇＭである。本発明における特に好ましい例としては、ヒト由来のＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４）に属する免疫グロブリンである。
【００７８】
免疫グロブリンは、２つの相同な軽鎖（Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎ，Ｌ鎖）と２つの相同な重鎖（Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎ，Ｈ鎖）の４つの鎖が、ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）で結合したＹ字形の構造単位を有する。軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。
【００７９】
重鎖定常領域は、クラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ）並びにサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）毎に各々固有のアミノ酸配列を有するいくつかのドメインから構成される。
【００８０】
ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインから構成される。
【００８１】
同様にＩｇＧ１の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃγ１１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ１２ドメイン及びＣγ１３ドメインから構成される。ＩｇＧ２の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃγ２１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ２２ドメイン及びＣγ２３ドメインから構成される。ＩｇＧ３の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃγ３１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ３２ドメイン及びＣγ３３ドメインから構成され  る。ＩｇＧ４の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃγ４１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃγ４２ドメイン及びＣγ４３ドメインから構成される。
【００８２】
ＩｇＡの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃα１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃα２ドメイン及びＣα３ドメインから構成される。
【００８３】
同様にＩｇＡ１の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃα１１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃα１２ドメイン及びＣα１３ドメインから構成される。ＩｇＡ２の重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃα２１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃα２２ドメイン及びＣα２３ドメインから構成される。
【００８４】
ＩｇＤの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃδ１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃδ２ドメイン及びＣδ３ドメインから構成される。
【００８５】
ＩｇＭの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃμ１ドメイン、Ｃμ２ドメイン、  Ｃμ３ドメイン及びＣμ４ドメインから構成され、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤに見られるようなヒンジ領域を有しない。
【００８６】
ＩｇＥの重鎖は、Ｎ末端から順に、ＶＨ、Ｃε１ドメイン、Ｃε２ドメイン、Ｃε３ドメイン及びＣε４ドメインから構成され、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤに見られるようなヒンジ領域を有しない。
【００８７】
さらに、ＩｇＧを例に挙げるならば、ＩｇＧをパパインで処理すると、２つの重鎖を連結させているヒンジ領域中に存在するジスルフィド結合のややＮ末端側で切断されて、ＶＨ及びＣＨ１からなる重鎖断片と１つの軽鎖がジスルフィド結合で連結した２つの相同なＦａｂ、並びにヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインからなる２つの相同な重鎖断片がジスルフィド結合で連結した１つのＦｃを生ずる（以上、「免疫学イラストレイテッド」、原書第２版、第６５〜７５頁、１９９２年、南江堂発行、及び「最新医科学の焦点「免疫系の認識機構」」、第４〜７頁、１９９１年、南江堂発行など参照）。
【００８８】
即ち、上述の「免疫グロブリンの重鎖の定常領域の一部」とは、上述のような構造的特徴を有する免疫グロブリンの重鎖の定常領域一部を意味し、好ましくは、Ｃ１ドメインを欠く定常領域またはＦｃ領域である。具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＤの場合には、各々のヒンジ領域、Ｃ２ドメイン及びＣ３ドメインからなる領域が挙げられ、ＩｇＭまたはＩｇＥの場合には、各々のＣ２ドメイン、Ｃ３ドメイン及びＣ４ドメインからなる領域が挙げられる。とりわけ好ましい例としては、ヒト由来のＩｇＧ１のＦｃ領域を挙げることができる。
【００８９】
上述の融合ポリペプチドは、前述のようなＩｇＧ等の免疫グロリンの定常領域の一部（例えば、Ｆｃ）を融合パートナーとして有することから、該免疫グロブリン断片に特異的に結合するというプロテインＡの性質を用いたアフィニティーカラムクロマトグラフィーを用いることにより該融合ポリペプチドを極めて容易に精製することが可能であるという点で利点を有する。さらに、種々の免疫グロブリンのＦｃに対する種々の抗体が提供されていることから、該Ｆｃに対する抗体を用いて、該融合ポリペプチドのイムノアッセイを簡便に行うことができる。
【００９０】
前記「物質」の定義に包含される「ポリペプチド」には、また「ＡＩＬＩＭに結合するポリペプチド」が包含される。
「ＡＩＬＩＭに結合するポリペプチド」としては、前記で定義した「ＡＩＬＩＭリガンド」であるＢ７ｈ、Ｂ７ＲＰ−１、ＧＬ５０あるいはＬＩＣＯＳと称される分子（Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．４０２，  Ｎｏ．６７６３，  ｐ．８２７−８３２，  １９９９；  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｖｏｌ．５，  Ｎｏ．１２，  ｐ．１３６５−１３６９，  １９９９；Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．１６４，  ｐ．１６５３−１６５７，  ２０００；  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．１０，  Ｎｏ．６，  ｐ．３３３−３３６，  ２０００）を構成するポリペプチドの全部または一部を含むポリペプチドが挙げられる。
好ましくは、上記リガンド（Ｂ７ｈ、Ｂ７ＲＰ−１、ＧＬ５０、ＬＩＣＯＳ）の細胞外領域の全部または一部を含むポリペプチド、または該ポリペプチドと免疫グロブリン（好ましくはヒト免疫グロブリン）の重鎖の定常領域の全部または一部とからなる融合ポリペプチドである。ここで、「細胞外領域」及び「免疫グロブリンの重鎖の定常領域」なる用語については、上述と同様の意味を有する。
【００９１】
上述したポリペプチド、該ポリペプチドの一部（断片）及び融合ポリペプチドは、後述するような遺伝子組換え技術のほか、化学的合成法、細胞培養方法等のような当該技術的分野において知られる公知の方法あるいはその修飾方法を適宜用いることにより製造することができる。
本発明における「抗体」とは、前記で定義した哺乳動物のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）に対するポリクローナル抗体（抗血清）あるいはモノクローナル抗体を意味し、好ましくはモノクローナル抗体である。
具体的には、ＡＩＬＩＭに結合しＡＩＬＩＭ発現細胞の増殖を抑制するか、またはＡＩＬＩＭに結合しＡＩＬＩＭ発現細胞によるインターフェロンγ若しくはインターロイキン４の産生を抑制する活性を有する抗体である。
【００９２】
本発明における「遅延型アレルギー」とは、細胞性免疫（特にはＴｈ１タイプＴ細胞により仲介される）、即ち、抗原により感作されたＴ細胞（抗原を記憶したメモリーＴ細胞）により仲介されるアレルギーであり、抗原に感作された生体は同抗原と再接触した際に起こる当該メモリーＴ細胞による炎症を伴うアレルギー反応の発現に概ね２４乃至４８時間を要するような任意のアレルギーを意味する。
この遅延型アレルギーとしては、結核菌由来ツベルクリンアレルギーのような感染病原体抗原に対するアレルギー、微量の蛋白質などに対して一過性に出現するジョーンズ・モート型遅延型アレルギー、塩化ピクリルなどの薬物や漆などの植物毒に対する接触性アレルギー、あるいは同種移植片の移植で見られる移植拒絶に関与するアレルギーなどが挙げられる。
【００９３】
本発明における「医薬組成物」は、有効成分としての本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその一部に結合する抗体（好ましくはヒト抗体）またはモノクローナル抗体（好ましくはヒトモノクローナル抗体）若しくはその一部と「薬学的に許容され得る担体」とからなる医薬品として有用な組成物を意味する。
ここで「薬学的に許容され得る担体」とは、賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等が挙げられる。
そのような担体の一つ以上を用いることにより、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、注射剤、液剤、カプセル剤、トロー剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤あるいはシロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。
これらの医薬組成物は、経口あるいは非経口的に投与することができる。非経口投与のためのその他の形態としては、一つまたはそれ以上の活性物質を含み、常法により処方される外用液剤、腸溶内投与のための坐剤およびペッサリーなどが含まれる。
【００９４】
投与量は、患者の年齢、性別、体重及び症状、治療効果、投与方法、処理時間、あるいは該医薬組成物に含有される活性成分（前記タンパクや抗体など）の種類などにより異なるが、通常成人一人当たり、一回につき１０μｇから１０００ｍｇ（あるいは１０μｇから５００ｍｇ）の範囲で投与することができる。しかしながら、投与量は種々の条件により変動するため、上記投与量より少ない量で十分な場合もあり、また上記の範囲を越える投与量が必要な場合もある。
とりわけ注射剤の場合には、例えば生理食塩水あるいは市販の注射用蒸留水等の非毒性の薬学的に許容され得る担体中に０．１μｇ抗体／ｍｌ担体〜１０ｍｇ抗体／ｍｌ担体の濃度となるように溶解または懸濁することにより製造することができる。
【００９５】
このようにして製造された注射剤は、処置を必要とするヒト患者に対し、１回の投与において１ｋｇ体重あたり、１μｇ〜１００ｍｇの割合で、好ましくは５０μｇ〜５０ｍｇの割合で、１日あたり１回〜数回投与することができる。投与の形態としては、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射あるいは腹腔内注射のような医療上適当な投与形態が例示できる。好ましくは静脈内注射である。
また、注射剤は、場合により、非水性の希釈剤（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類など）、懸濁剤あるいは乳濁剤として調製することもできる。
そのような注射剤の無菌化は、バクテリア保留フィルターを通す濾過滅菌、殺菌剤の配合または照射により行うことができる。注射剤は、用時調製の形態として製造することができる。即ち、凍結乾燥法などによって無菌の固体組成物とし、使用前に無菌の注射用蒸留水または他の溶媒に溶解して使用することができる。
【００９６】
本発明のヒト抗体を含んでなる医薬組成物は、ＨＡＭＡ（ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）に起因する宿主の免疫拒絶反応を惹起することなく、ＡＩＬＩＭを発現する細胞へのＡＩＬＩＭを介するコスティミュレイトリーシグナル（副刺激シグナル）の伝達が関与する種々の生体反応（例えば、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の細胞増殖、ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生、及びＡＩＬＩＭを発現する細胞の免疫細胞溶解（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ）若しくは細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）など）を制御するための医薬品として、及び／または該ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達が関与する種々の疾患の発症及び／または進行を抑制、阻止し、該疾患を治療または予防するための医薬品として有用である。
【００９７】
本発明における「免疫細胞溶解（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ）」とは下記のような生物学的現象を意味する。
細胞の溶解現象（ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ）は、キラー細胞との結合によって生じる場合の他に、抗体（特に細胞溶解性抗体）を介しても起こる。この細胞溶解抗体とは、細胞障害抗体の中でも特に免疫細胞、組織細胞あるは精子などの細胞の溶解反応に働く抗体であり、該抗体が細胞表面抗原と結合した場合に補体成分（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）の存在下にその細胞に障害を与えるかまたは細胞溶解を誘導する抗体である。
この免疫細胞溶解は、抗体が細胞の表面抗原と特異的に結合に加えて、補体成分の作用が加わることにより誘導される。表面抗原に結合した抗体により補体第１成分（Ｃ１）が活性化され、引き続いて起こる補体第２乃至第９成分（Ｃ２乃至Ｃ９）までの一連の補体反応の結果細胞障害部位が形成され、細胞の内容物が放出され細胞溶解に到る。
【００９８】
本発明における「抗体依存性細胞性障害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）」とは、ＡＤＣＣとも略称される生物現象であり、リンパ球、マクロファージあるいは多形核白血球のような効果細胞（ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ）により引き起こされる標的細胞（ｔａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌ）の細胞障害作用において、該効果細胞と該標的細胞に加えて、その細胞障害が誘導されるために抗体を必要とする細胞障害作用である。
【００９９】
本発明における「混合リンパ球反応（ｍｉｘｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）」とは、ＭＬＲと略称される生物現象である。また、混合白血球反応（ｍｉｘｅｄ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）とも呼ばれる。
同種動物（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ）からの異なる２つの個体の各々に由来する白血球またはリンパ球を混合して数日間培養を行うことにより、それらの細胞が芽球化し細胞内でのＤＮＡ合成（即ち細胞増殖）が促進される。この反応をＭＬＲ（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ  ＭＬＲ）と称する。
該ＤＮＡの合成（細胞増殖）の程度は、一方のリンパ球を放射線照射やマイトマイシンにより処理することにより停止させ、他方のリンパ球でのＤＮＡ合成の程度を測定することにより解析することができる。
該ＤＮＡの合成の程度は、トリチウムなどの放射性物質で標識したチミジンの細胞核内への取込み量を測定することにより解析できる。
【０１００】
本発明において用いられるＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）をコードするＤＮＡは、常法に従って、該ＡＩＬＩＭをコードするｍＲＮＡからｃＤＮＡをクローン化する方法、ゲノムＤＮＡを単離してスプライシング処理する方法、該ｃＤＮＡ配列若しくはｍＲＮＡ配列を鋳型としてＰＣＲにより調製する方法、または化学合成する方法等により取得することができる。
また、本発明におけるＡＩＬＩＭリガンドをコードするＤＮＡも上記と同様にして取得することができる。
本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）をコードするＤＮＡは、そのようにして調製した該ＡＩＬＩＭをコードする各々のＤＮＡを含むＤＮＡを適切な制限酵素による切断（消化）し、得られたＤＮＡ断片を、必要に応じてリンカーＤＮＡあるいはタグ（Ｔａｇ）と共に、適切なＤＮＡポリメラーゼ等を用いて連結することにより調製することができる。ＡＩＬＩＭリガンドをコードするＤＮＡについても同様である。
【０１０１】
該ＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ。以下、目的蛋白という）をコードするｃＤＮＡをｍＲＮＡからクローン化する方法としては、以下の方法が例示される。
ＡＩＬＩＭリガンドをコードするＤＮＡについても同様である。
まず、目的蛋白を発現・産生する組織あるいは細胞から目的蛋白をコードするｍＲＮＡを調製する。ｍＲＮＡの調製は、例えばグアニジンチオシアネート法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．１８，  ｐ．５２９４，  １９７９）、熱フェノール法もしくはＡＧＰＣ法等の公知の方法を用いて調製した全ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）セルロースやポリＵ−セファロース等によるアフィニティクロマトグラフィーにかけることによって行うことができる。
【０１０２】
次いで得られたｍＲＮＡを鋳型として、例えば逆転写酵素を用いる等の公知の方法、例えばオカヤマらの方法（Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．２，  ｐ．１６１，  １９８２及び同誌  Ｖｏｌ．３，  ｐ．２８０，  １９８３）やホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎ）らの方法（Ｇｅｎｅ，  Ｖｏｌ．２５，  ｐ．２６３，  １９８３）等によりｃＤＮＡ鎖を合成し、ｃＤＮＡの二本鎖ｃＤＮＡへの変換を行う。このｃＤＮＡをプラスミドベクター、ファージベクターまたはコスミドベクターに組み込み、大腸菌を形質転換して、あるいはインビトロパッケージング後、大腸菌に形質移入（トランスフェクト）することによりｃＤＮＡライブラリーを作製する。
【０１０３】
ここで用いられるプラスミドベクターとしては、宿主内で複製保持されるものであれば特に制限されず、また用いられるファージベクターとしても宿主内で増殖できるものであれば良い。常法的に用いられるクローニング用ベクターとしてｐＵＣ１９、λｇｔ１０、λｇｔ１１等が例示される。ただし、後述の免疫学的スクリーニングに供する場合は、宿主内で目的蛋白をコードする遺伝子を発現させうるプロモーターを有したベクターであることが好ましい。
【０１０４】
プラスミドにｃＤＮＡを組み込む方法としては、例えばマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）らの方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  ｐ．１．５３，  １９８９）に記載の方法などが挙げられる。また、ファージベクターにｃＤＮＡを組み込む方法としては、ヒュン（Ｈｙｕｎｈ）らの方法（ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｖｏｌ．１，  ｐ．４９，  １９８５）などが挙げられる。簡便には、市販のクローニングキット（例えば、宝酒造社製等）を用いることもできる。このようにして得られる組換えプラスミドやファージベクターは、原核細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ：ＨＢ１０１，  ＤＨ５α，  Ｙ１０９０，  ＤＨ１０ＢまたはＭＣ１０６１／Ｐ３等）等の適当な宿主に導入する。
【０１０５】
プラスミドを宿主に導入する方法としては、（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  ｐ．１．７４，  １９８９）に記載の塩化カルシウム法または塩化カルシウム／塩化ルビジウム法、エレクトロポレーション法等が挙げられる。また、ファージベクターを宿主に導入する方法としてはファージＤＮＡをインビトロパッケージングした後、増殖させた宿主に導入する方法等が例示される。インビトロパッケージングは、市販のインビトロパッケージングキット（例えば、ストラタジーン社製、アマシャム社製等）を用いることによって簡便に行うことができる。
上記の方法によって作製されたｃＤＮＡライブラリーから、目的蛋白をコードするｃＤＮＡを単離する方法は、一般的なｃＤＮＡスクリーニング法を組み合わせることによって行うことができる。
【０１０６】
例えば、別個に目的蛋白のアミノ酸配列に対応すると考えられるオリゴヌクレオチドを化学合成したのち、これを３２Ｐでラベルしてプローブとなし、公知のコロニーハイブリダイゼーション法（クランシュタイン（Ｃｒｕｎｓｔｅｉｎ）ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃｉｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  Ｖｏｌ．７２，  ｐ．３９６１，  １９７５）またはプラークハイブリダイゼーション法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ｐ．２．１０８，  １９８９）により、目的のｃＤＮＡを含有するクローンをスクリーニングする方法、ＰＣＲプライマーを作製し目的蛋白の特定領域をＰＣＲ法により増幅し、該領域をコードするＤＮＡ断片を有するクローンを選択する方法等が挙げられる。
【０１０７】
また、ｃＤＮＡを発現しうるベクター（例えば、λｇｔ１１等のファージベクター）を用いて作製したｃＤＮＡライブラリーを用いる場合には、目的蛋白に反応性を有する抗体を用いる抗原抗体反応を利用して、目的のクローンを選択することができる。大量にクローンを処理する場合には、ＰＣＲ法を利用したスクリーニング法を用いることが好ましい。
この様にして得られたＤＮＡの塩基配列はマキサム・ギルバート法（マキサム（Ｍａｘａｍ）ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  Ｖｏｌ７４，  ｐ．５６０，  １９７７）あるいはファージＭ１３を用いたジデオキシヌクレオチド合成鎖停止の方法（サンガー（Ｓａｎｇｅｒ）ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  Ｖｏｌ．７４，  ｐ．５４６３−５４６７，  １９７７）によって決定することができる。目的蛋白をコードする遺伝子は、その全部または一部を上記のようにして得られるクローンから制限酵素等により切り出すことにより取得できる。
【０１０８】
また、前述のような目的蛋白を発現する細胞に由来するゲノムＤＮＡから目的蛋白をコードするＤＮＡを単離することによる調製方法としては、例えば以下の方法が例示される。
該細胞を好ましくはＳＤＳまたはプロテナーゼＫ等を用いて溶解し、フェノールによる抽出を反復してＤＮＡの脱蛋白質を行う。ＲＮＡを好ましくはリボヌクレアーゼにより消化する。得られるＤＮＡを適当な制限酵素により部分消化し、得られるＤＮＡ断片を適当なファージまたはコスミドで増幅しライブラリーを作成する。そして目的の配列を有するクローンを、例えば放射性標識されたＤＮＡプローブを用いる方法等により検出し、該クローンから目的蛋白をコードする遺伝子の全部または一部を制限酵素等により切り出し取得する。
【０１０９】
目的蛋白をコードするＤＮＡのＰＣＲによる調製は、該目的蛋白の既知のｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ等を鋳型として常法により調製することができる（「遺伝子増幅ＰＣＲ法・基礎と新しい展開」、共立出版株式会社発行、１９９２年など）。
また、化学的合成による目的蛋白をコードするＤＮＡの製造は、目的蛋白の塩基配列をもとにして、常法に従って行うことができる。
【０１１０】
本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその一部（好ましくは細胞外領域）は、上述に例示した方法を用いて調製したＡＩＬＩＭをコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡあるいはイントロンを含むゲノミックＤＮＡ）を、各々適切な制限酵素で切断することにより、該ＡＩＬＩＭコードするＤＮＡ断片を得、それらの断片を、必要に応じてリンカーＤＮＡあるいはタグ（Ｔａｇ）と共に、適切なＤＮＡポリメラーゼ等を用いて連結させて得たＤＮＡを用いて、慣用される遺伝子組換え技術を用いて、常法により組換え蛋白として調製することができる。
ＡＩＬＩＭリガンド（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭリガンド）またはその一部（好ましくは細胞外領域）についても同様である。
具体的には下記の例示されるとおりである。即ち、上述のようにして調製したＤＮＡを、下記に詳述するようなベクターに挿入して発現ベクターを作成し、該発現ベクターで後述するような宿主細胞を形質転換して形質転換体を得る。該形質転換体を培養することにより、培養上清中に該目的蛋白を産生させる。培養上清中の該目的蛋白は、カラムクロマトグラフィー等を用いて容易に精製することができる。
【０１１１】
組換えＡＩＬＩＭ（またはその細胞外領域）を製造するために用いられる発現ベクター、原核細胞及び／または真核細胞の各種の宿主内で複製保持または自己増殖できるものであれば特に制限されず、プラスミドベクターおよびファージベクターが包含される（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  エルスビュ−社、ニューヨーク、１９８５年）。
当該発現ベクターは、簡便には当業界において入手可能な組換え用ベクター（プラスミドＤＮＡおよびバクテリアファージＤＮＡ）にＡＩＬＩＭ（またはその細胞外領域）をコードするＤＮＡを常法により連結することによって調製することができる。用いられる組換え用ベクターとして具体的には、大腸菌由来のプラスミドとして例えばｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１２、ｐＵＣ１３、ｐＵＣ１９など、酵母由来プラスミドとして例えばｐＳＨ１９、ｐＳＨ１５など、枯草菌由来プラスミドとして例えばｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５、ｐＣ１９４などが例示される。また、ファージとしては、λファージなどのバクテリオファージが、さらにレトロウイルス、ワクシニヤウイルス、核多角体ウイルスなどの動物や昆虫のウイルス（ｐＶＬ１３９３、インビトロゲン社製）が例示される。
【０１１２】
本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその可溶性細胞外領域をコードするＤＮＡを発現させＡＩＬＩＭを宿主細胞表面に発現させ、またはＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）の可溶性細胞外領域を生産させる目的においては、プラスミドベクターが有用である。プラスミドベクターとしては、原核細胞および／または真核細胞の各種の宿主細胞中で該ＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその可溶性細胞外領域をコードする遺伝子を発現し、これらのポリペプチドを生産する機能を有するものであれば特に制限されない。例えば、ｐＭＡＬ  Ｃ２、ｐｃＤＮＡ３．１（−）、ｐＥＦ−ＢＯＳ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｖｏｌ．１８，  ｐ．５３２２，  １９９０など）あるいはｐＭＥ１８Ｓ（実験医学別冊「遺伝子工学ハンドブック」、１９９２年等）等を挙げることができる。
【０１１３】
宿主細胞として細菌、特に大腸菌を用いる場合、一般に発現ベクターは少なくともプロモーター−オペレーター領域、開始コドン、本発明のタンパクをコードするＤＮＡ、終止コドン、ターミネーター領域および複製可能単位から構成される。
宿主として酵母、動物細胞または昆虫細胞を用いる場合、発現ベクターは少なくともプロモーター、開始コドン、本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその細胞外領域コードするＤＮＡ、終止コドンを含んでいることが好ましい。またシグナルペプチドをコードするＤＮＡ、エンハンサー配列、本発明のＡＩＬＩＭをコードする遺伝子の５’側および３’側の非翻訳領域、スプライシング接合部、ポリアデニレーション部位、選択マーカー領域または複製可能単位などを含んでいてもよい。また、目的に応じて通常用いられる遺伝子増幅遺伝子（マーカー）を含んでいてもよい。
【０１１４】
細菌中で本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその細胞外領域を発現させるためのプロモーター−オペレータ−領域は、プロモーター、オペレーターおよびＳｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ（ＳＤ）配列（例えば、ＡＡＧＧなど）を含むものである。例えば宿主がエシェリキア属菌の場合、好適にはＴｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰＬプロモーター、ｌｐｐプロモーター、ｔａｃプロモーターなどを含むものが例示される。
酵母中で本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）またはその細胞外領域を発現させるためのプロモーターとしては、ＰＨ０５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターが挙げられ、宿主がバチルス属菌の場合は、ＳＬ０１プロモーター、ＳＰ０２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなどが挙げられる。また、宿主が哺乳動物細胞等の真核細胞である場合、例えばＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモーター、ヒートショックプロモーターなどが挙げられる。しかし、特にこれらに限定されるものではない。また、発現にはエンハンサーの利用も効果的な方法である。
【０１１５】
好適な開始コドンとしては、メチオニンコドン（ＡＴＧ）が例示される。
終止コドンとしては、常用の終止コドン（例えば、ＴＡＧ，ＴＡＡ，ＴＧＡ）が例示される。
ターミネーター領域としては、通常用いられる天然または合成のターミネーターを用いることができる。
複製可能単位とは、宿主細胞中でその全ＤＮＡ配列を複製することができる能力をもつＤＮＡを言い、天然のプラスミド、人工的に修飾されたプラスミド（天然のプラスミドから調製されたＤＮＡフラグメント）および合成プラスミド等が含まれる。好適なプラスミドとしては、Ｅ．ｃｏｌｉではプラスミドｐＢＲ３２２、もしくはその人工的修飾物（ｐＢＲ３２２を適当な制限酵素で処理して得られるＤＮＡフラグメント）が、酵母では酵母２μプラスミド、もしくは酵母染色体ＤＮＡが、また哺乳動物細胞ではプラスミドｐＲＳＶｎｅｏ  ＡＴＣＣ  ３７１９８、プラスミドｐＳＶ２ｄｈｆｒ  ＡＴＣＣ  ３７１４５、プラスミドｐｄＢＰＶ−ＭＭＴｎｅｏ  ＡＴＣＣ  ３７２２４、プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏ  ＡＴＣＣ  ３７１４９、プラスミドｐＳＶ２ｂｓｒ等があげられる。
エンハンサー配列、ポリアデニレーション部位およびスプライシング接合部位については、例えばそれぞれＳＶ４０に由来するもの等、当業者において通常使用されるものを用いることができる。
【０１１６】
選択マーカーとしては、通常使用されるものを常法により用いることができる。例えばテトラサイクリン、アンピシリン、またはカナマイシン等の抗生物質耐性遺伝子等が例示される。
遺伝子増幅遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、グルタミン酸合成酵素遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子、オルニチンデカルボキシラーゼ遺伝子、ヒグロマイシン−Ｂ−ホスホトランスフェラーゼ遺伝子、アスパルラートトランスカルバミラーゼ遺伝子等を例示することができる。
【０１１７】
本発明の発現ベクターは、少なくとも、上述のプロモーター、開始コドン、本発明のタンパクをコードするＤＮＡ、終止コドンおよびターミネーター領域を連続的かつ環状に適当な複製可能単位に連結することによって調製することができる。またこの際、所望により制限酵素での消化やＴ４ＤＮＡリガーゼを用いるライゲーション等の常法により適当なＤＮＡフラグメント（例えば、リンカー、他の制限酵素部位など）を用いることができる。
本発明の形質転換細胞は、上述の発現ベクターを宿主細胞に導入することにより調製することができる。
【０１１８】
本発明で用いられる宿主細胞としては、前記の発現ベクターに適合し、形質転換されうるものであれば特に限定されず、本発明の技術分野において通常使用される天然細胞あるいは人工的に樹立された組換え細胞など種々の細胞（例えば、細菌（エシェリキア属菌、バチルス属菌）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属など）、動物細胞または昆虫細胞など）が例示される。
好ましくは大腸菌あるいは動物細胞であり、具体的には大腸菌（ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂ、ＴＢ１、ＨＢ１０１、ＸＬ−２Ｂｌｕｅ等）、マウス由来細胞（ＣＯＰ、Ｌ、Ｃ１２７、Ｓｐ２／０、ＮＳ−１またはＮＩＨ３Ｔ３等）、ラット由来細胞、ハムスター由来細胞（ＢＨＫおよびＣＨＯ等）、サル由来細胞（ＣＯＳ１、ＣＯＳ３、ＣＯＳ７、ＣＶ１及びＶｅｌｏ等）およびヒト由来細胞（Ｈｅｌａ、２倍体線維芽細胞に由来する細胞、ミエローマ細胞およびＮａｍａｌｗａ等）などが例示される。
発現ベクターの宿主細胞への導入（形質転換（形質移入））は従来公知の方法を用いて行うことができる。
【０１１９】
例えば、細菌（Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ等）の場合は、例えばＣｏｈｅｎらの方法（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  Ｖｏｌ．６９，  ｐ．２１１０，  １９７２）、プロトプラスト法（Ｍｏｌ．  Ｇｅｎ．  Ｇｅｎｅｔ．，  Ｖｏｌ．１６８，  ｐ．１１１，  １９７９）やコンピテント法（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．５６，  ｐ．２０９，  １９７１）によって、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの場合は、例えばハイネン（Ｈｉｎｎｅｎ）らの方法（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  Ｖｏｌ．７５，  ｐ．１９２７，  １９７８）やリチウム法（Ｊ．  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．１５３，  ｐ．１６３，  １９８３）によって、動物細胞の場合は、例えばグラハム（Ｇｒａｈａｍ）の方法（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．５２，  ｐ．４５６，  １９７３）、昆虫細胞の場合は、例えばサマーズ（Ｓｕｍｍｅｒｓ）らの方法（Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．３，  ｐ．２１５６−２１６５，  １９８３）によってそれぞれ形質転換することができる。
【０１２０】
本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）の細胞外領域（可溶性ＡＩＬＩＭ）は、上記の如く調製される発現ベクターを含む形質転換細胞（以下、形質移入体を包含する意味で使用する。）を栄養培地で培養することによって製造することができる。ＡＩＬＩＭリガンドについても同様である。
栄養培地は、宿主細胞（形質転換体）の生育に必要な炭素源、無機窒素源もしくは有機窒素源を含でいることが好ましい。炭素源としては、例えばグルコース、デキストラン、可溶性デンプン、ショ糖などが、無機窒素源もしくは有機窒素源としては、例えばアンモニウム塩類、硝酸塩類、アミノ酸、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などが例示される。また所望により他の栄養素（例えば、無機塩（例えば塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウム）、ビタミン類、抗生物質（例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、アンピシリン、カナマイシン等）など）を含んでいてもよい。
培養は当業界において知られている方法により行われる。培養条件、例えば温度、培地のｐＨおよび培養時間は、本発明のタンパクが大量に生産されるように適宜選択される。
【０１２１】
なお、下記に宿主細胞に応じて用いられる具体的な培地および培養条件を例示するが、何らこれらに限定されるものではない。
宿主が細菌、放線菌、酵母、糸状菌である場合、例えば上記栄養源を含有する液体培地が適当である。好ましくは、ｐＨが５〜８である培地である。
宿主がＥ．ｃｏｌｉの場合、好ましい培地としてＬＢ培地、Ｍ９培地（ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）ら、Ｅｘｐ．  Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  ｐ．４３１，  １９７２）、ＹＴ培地等が例示される。かかる場合、培養は、必要により通気、撹拌しながら、通常１４〜４３℃、約３〜２４時間行うことができる。
【０１２２】
宿主がＢａｃｉｌｌｕｓ属菌の場合、必要により通気、撹拌をしながら、通常３０〜４０℃、約１６〜９６時間行うことができる。
宿主が酵母である場合、培地として、例えばＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒ最小培（ボスチアン（Ｂｏｓｔｉａｎ）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  Ｖｏｌ．７７，  ｐ．４５０５，  １９８０）が挙げられ、ｐＨは５〜８であることが望ましい。培養は通常約２０〜３５℃で約１４〜１４４時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。
宿主が動物細胞の場合、培地として例えば約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地（Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｖｏｌ．１２２，  ｐ．５０１，  １９５２）、ＤＭＥＭ培地（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．８，  ｐ．３９６，  １９５９）、ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｊ．  Ａｍ．  Ｍｅｄ．  Ａｓｓｏｃ．，  Ｖｏｌ．１９９，  ｐ．５１９，  １９６７）、１９９培地（Ｐｒｏｃ．  Ｓｏｃ．  Ｅｘｐ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．，  Ｖｏｌ．７３，  ｐ．１，  １９５０）、ＨａｍＦ１２培地等を用いることができる。培地のｐＨは約６〜８であるのが好ましく、培養は通常約３０〜４０℃で約１５〜７２時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。
【０１２３】
宿主が昆虫細胞の場合、例えば胎児牛血清を含むＧｒａｃｅ’ｓ培地（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  Ｖｏｌ．８２，  ｐ．８４０４，  １９８５）等が挙げられ、そのｐＨは約５〜８であるのが好ましい。培養は通常約２０〜４０℃で１５〜１００時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。
本発明のＡＩＬＩＭ（特に好ましくはヒトＡＩＬＩＭ）の細胞該領域（可溶性ＡＩＬＩＭ）は、上述のような形質転換細胞（特に動物細胞または大腸菌）を培養することにより、培養上清中に分泌させることにより製造することができる。即ち、得られた培養物を濾過または遠心分離等の方法で培養濾液（上清）を得、該培養濾液から天然または合成蛋白質を精製並びに単離するために一般に用いられる常法に従って目的蛋白を精製、単離する。
【０１２４】
単離、精製方法としては、例えばアフィニティーカラムクロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動など分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーやヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーなどの荷電を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。
【０１２５】
一方、目的蛋白が培養された形質転換体のペリプラズムまたは細胞質内に存在する場合は、培養物を濾過または遠心分離などの常法に付して菌体あるいは細胞を集め、適当な緩衝液に懸濁し、例えば超音波やリゾチーム及び凍結融解などの方法で細胞等の細胞壁および／または細胞膜を破壊した後、遠心分離やろ過などの方法で目的蛋白を含有する膜画分を得る。該膜画分をトライトン−Ｘ１００等の界面活性剤を用いて可溶化して粗溶液を得る。そして、当該粗溶液を先に例示したような常法を用いることにより、単離、精製することができる。
【０１２６】
本発明における「不溶性担体」とは、ポリペプチドを物理学的吸着あるいは化学的結合等によって坦持させるための支持体を意味する。例えば、（１）ポリスチレン樹脂、ポリカーボネート樹脂、シリコン樹脂あるいはナイロン樹脂等からなるプラスチックや、ガラス等に代表されるような水に不溶性の物質からなるプレート、試験管若しくはチューブ等の内容積を有するもの、ビーズ、ボール、フィルター、あるいはメンブレン等、並びに（２）セルロース系担体、アガロース系担体、ポリアクリルアミド系担体、デキストラン系担体、ポリスチレン系担体、ポリビニルアルコール系担体、ポリアミノ酸系担体あるいは多孔性シリカ系担体等のようなアフィニティークロマトグラフィーに用いられる不溶性担体を挙げることができる。
【０１２７】
本発明における「検出可能なシグナルをもたらし得る標識物質」としては、例えば、酵素、蛍光物質、化学発光物質、ビオチン、アビジンあるいは放射性同位体等であり、さらに具体的には、ペルオキシダーゼ（例えば、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）、アルカリフォスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコ−ス−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、アルコール脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、ペニシリナーゼ、カタラーゼ、アポグルコースオキシダーゼ、ウレアーゼ、ルシフェラーゼ若しくはアセチルコリンエステラーゼ等の酵素、フルオレスセインイソチオシアネート、フィコビリタンパク、希土類金属キレート、ダンシルクロライド若しくはテトラメチルローダミンイソチオシアネート等の蛍光物質、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ若しくは１３１Ｉ等の放射性同位体、ビオチン、アビジン、または化学発光物質が挙げられる。
【０１２８】
ここで、放射性同位体及び蛍光物質は、単独で検出可能なシグナルをもたらすことができる。一方、酵素、化学発光物質、ビオチン及びアビジンは、単独では検出可能なシグナルをもたらすことができないため、さらに１種以上の他の物質と反応することにより検出可能なシグナルをもたらす。例えば、酵素の場合には少なくとも基質が必要であり、酵素活性を測定する方法（比色法、蛍光法、生物発光法あるいは化学発光法等）に依存して種々の基質が用いられる。例えば、ペルオキシダーゼの場合には、基質として過酸化水素を用いる。また、ビオチンの場合には少なくともアビジンあるいは酵素修飾アビジンを反応させるのが一般的であるが、この限りではない。必要に応じてさらに該基質に依存する種々の発色物質が用いられる。
本発明においては、上記のいずれの標識物質をも使用可能であるが、検出感度あるいは定量感度の高さ及び操作の利便性の点を考慮すると、ペルオキシダーゼ等の酵素あるいはビオチンで標識するのが好ましい。
【０１２９】
本発明の「ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定する方法」は、イムノアッセイを原理とするものである。
具体的には、酵素免疫測定法（第３版、石川榮治ら編集、医学書院発行、１９８７年）に記載されているような種々方法の原理を応用することができる。
応用できる原理としては、例えば、一抗体固相法、二抗体液相法、二抗体固相法、サンドイッチ法、及び特公平２−３９７４７号公報に記載されているようなワンポット法を好適な例として挙げることができる。また、抗原抗体反応を利用したアッセイとしては、ＥＭＩＴ法（Ｅｎｚｙｍｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｄ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、エンザイムチャネリングアッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｃｈａｎｎｅｌｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）、酵素活性修飾物質標識イムノアッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＥＭＭＩＡ）、酵素阻害物質標識イムノアッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）、イムノエンザイムメトリックアッセイ（Ｉｍｍｕｎｏｅｎｚｙｍｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ）、酵素活性増強イムノアッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）及びプロ  キシマールリンケージイムノアッセイ（Ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｌｉｎｋａｇｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）等も知られている。
【０１３０】
本発明においては、このようなイムノアッセイのいずれかの原理を、目的に応じて適宜選択して用いることができるが、操作上の簡便性及び／または経済的な利便性、とりわけ臨床上での汎用性の点を考慮すると、サンドイッチ法、ワンポット法、または一抗体固相法の原理を用いるのが好ましく、より好ましくは、サンドイッチ法またはワンポット法の原理である。特に好ましくは、９６穴マイクロプレートに代表されるような多数のウェルを有するマルチウェルマイクロタイタープレートを用いるサンドイッチ法、あるいはポリペプチドをその表面上に固定化したビーズと、ペルオキシダーゼ等の酵素あるいはビオチンにより標識された標識カウンターパートとを用いるワンポット法である。
【０１３１】
【実施例】
以下、実施例を以て本発明をさらに詳細に説明するが、本発明が該実施例に記載される態様のみに限定されるものではないことは言うまでもない。
【０１３２】
実施例１  免疫原の調製
＜１−１＞  ヒトＡＩＬＩＭを発現する組換え細胞の調製
本発明者の一人である手塚の他の先の出願（日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号公報）並びに既報（Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．１２，  Ｎｏ．１，  ｐ．５１−５５，  ２０００）と同様の方法に従って、ヒトＡＩＬＩＭを高発現する２種類の組換え細胞（ＣＨＯ細胞及びＨＰＢ−ＡＬＬ細胞）を調製した。具体的には下記のとおりである。
ヒトＡＩＬＩＭの全長ＯＲＦを含むｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：  ＡＢ０２３１３５（ｃＤＮＡ）；ＢＡＡ８２１２９（アミノ酸））を、ベクターｐＥＦ−ｎｅｏに挿入した後、該組換え発現ベクターを、Ｇｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ（ＢｉｏＲａｄ製）を用いて常法に従ってエレクトロポレーション（９６０μＦ、３２０ボルト）によりチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）及びヒト胸腺腫細胞株ＨＰＢ−ＡＬＬの各々に導入した。各々の細胞を、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（０．８ｍｇ／ｍｌ；  Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ製）及び１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で培養することにより薬剤耐性形質転換細胞を選択した。
【０１３３】
＜１−２＞  ヒトＡＩＬＩＭを高発現する組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞の選別
前記＜１−１＞で選択した薬剤耐性ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を遠心分離して回収した沈殿物に、以前本発明者らが作成し報告した「ＳＡ１２」と命名したマウス抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体（マウス抗ヒトＪＴＴ−１抗原モノクローナル抗体）（日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１２）及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号（実施例１２））（濃度：ＥＤＴＡ−ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈した１０μｇ／ｍｌを１００μｌ／１０５ｃｅｌｌｓ）を加え、４℃で３０分間反応させた。細胞を、上記ＥＤＴＡ−ＢＳＡ／ＰＢＳ（２００μｌ）で２回洗浄した後、ピコエリスリン標識ストレプトアビジン（ＳＡ−ＰＥ；５００倍希釈を１００μｌ）添加し、４℃で３０分間反応させた。反応後、細胞をＥＤＴＡ−ＢＳＡ／ＰＢＳで３回洗浄し、細胞分散液を調製した。
該細胞分散液に含まれる各々の細胞におけるヒトＡＩＬＩＭの発現状態を、フローサイトメーターＦＡＣＳｏｒｔ（Ｂｅｃｋｔｏｎ−Ｄｉｃｈｉｎｓｏｎ製）を用いて解析し、ヒトＡＩＬＩＭを高発現している組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を選別した。選別した細胞を、１０％ＦＣＳ及びＧ４１８（１ｍｇ／ｍｌ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中でｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した。
【０１３４】
＜１−３＞  ヒトＡＩＬＩＭを高発現する組換えＣＨＯ細胞の選別
前記＜１−１＞で選択した薬剤耐性ＣＨＯ細胞を遠心分離して回収した沈殿物に、ＦＩＴＣで標識した上記マウス抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体ＳＡ１２（ＥＤＴＡ−ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈した１００μｇ／ｍｌ）を加え、４℃で３０分間反応させた。細胞を、上記ＥＤＴＡ−ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄した後、ＥＤＴＡ−ＢＳＡ／ＰＢＳ（５００μｌ）を加え細胞分散液を調製した。
該細胞分散液に含まれる各々の細胞におけるヒトＡＩＬＩＭの発現状態を、フローサイトメーターＦＡＣＳｏｒｔ（Ｂｅｃｋｔｏｎ−Ｄｉｃｈｉｎｓｏｎ製）を用いて解析し、ヒトＡＩＬＩＭを高発現している組換えＣＨＯ細胞を選別した。選別した細胞を、１０％ＦＣＳ及びＧ４１８（１ｍｇ／ｍｌ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中でｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した。
【０１３５】
＜１−４＞  ヒトＡＩＬＩＭ高発現ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞からの免疫原の調製
前記＜１−２＞で取得したヒトＡＩＬＩＭ高発現ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を遠心分離した。回収した沈殿物をリン酸緩衝液（ＰＢＳ；日研生物研究所製）で４回洗浄した後、プロテアーゼ阻害剤含有緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ＭのＳｕｃｒｏｓｅ、及びプロテアーゼ阻害剤（１０Ｕ／ｍｌのＡｐｒｏｔｉｎｉｎｅ、２μｇ／ｍｌのＰｅｐｓｔａｔｉｎ、５０μｇ／ｍｌのＬｅｕｐｅｐｔｉｎ、及び０．３５ｍｇ／ｍｌのＰＭＳＦ））中に懸濁した。該細胞懸濁液を、ポッター式ホモジナイザーで破砕し、低速遠心（１，５００ｒｐｍ、１０分、４℃）した。次いで、上清を回収し、超遠心（１００，０００ｇ、１時間、４℃）し、沈殿した膜画分を回収しリン酸緩衝液を加えて懸濁し（ＰＢＳ１ｍｌあたり１×１０７細胞由来の膜画分の濃度に調整）マイナス８０℃で保存した。この細胞膜画分の懸濁液を後述する本発明のヒト抗体の作製における抗原（免疫原）として用いた。
【０１３６】
＜１−５＞  ヒトＡＩＬＩＭ高発現ＣＨＯ細胞からの免疫原の調製
前記＜１−３＞で取得したヒトＡＩＬＩＭ高発現ＣＨＯ細胞をセルスクレイパーで分散した後、遠心分離した。回収した沈殿物をリン酸緩衝液（ＰＢＳ；日研生物研究所製）で４回洗浄した後、プロテアーゼ阻害剤含有緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ＭのＳｕｃｒｏｓｅ、及びプロテアーゼ阻害剤（１０Ｕ／ｍｌのＡｐｒｏｔｉｎｉｎｅ、２μｇ／ｍｌのＰｅｐｓｔａｔｉｎ、５０μｇ／ｍｌのＬｅｕｐｅｐｔｉｎ、及び０．３５ｍｇ／ｍｌのＰＭＳＦ））中に懸濁した。該細胞懸濁液を、ポッター式ホモジナイザーで破砕し、低速遠心（１，５００ｒｐｍ、１０分、４℃）した。次いで、上清を回収し、超遠心（１００，０００ｇ、１時間、４℃）し、沈殿した膜画分を回収しリン酸緩衝液を加えて懸濁し（ＰＢＳ１ｍｌあたり１×１０７細胞由来の膜画分の濃度に調整）マイナス８０℃で保存した。この細胞膜画分の懸濁液を後述する本発明のヒト抗体の作製における抗原（免疫原）として用いた。
【０１３７】
実施例２  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの調製
本実施例におけるモノクローナル抗体の作製は、実験医学（別冊）細胞工学ハンドブック（黒木登志夫ら編集、羊土社発行、第６６〜第７４頁、１９９２年）及び単クローン抗体実験操作入門（安東民衛ら著作、講談社発行、１９９１年）等に記載されるような一般的方法に従って調製した。
【０１３８】
免疫原としてのヒトＡＩＬＩＭは、実施例１で調製したヒトＡＩＬＩＭ高発現組換え細胞から調製した細胞膜画分を用いた。
被免疫動物としては、前述の方法を用いて製造したヒト抗体産生トランスジェニックマウスを用いた（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｖｏｌ．７，  ｐ．１３−２１，  １９９４；Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｖｏｌ．１５，  ｐ．１４６−１５６，  １９９７；特表平４−５０４３６５号公報；特表平７−５０９１３７号公報；日経サイエンス、６月号、第４０〜第５０頁、１９９５年等）。
細胞培養操作は、マルチウェルマイクロプレートを用いて行った。
【０１３９】
＜２−１＞  免疫及びハイブリドーマの調製
前記のヒト抗体産生トランスジェニックマウスに、前記＜１−４＞（ＨＰＢ−ＡＬＬ由来）及び＜１−５＞（ＣＨＯ由来）で調製した免疫原（１００μｌ／マウス／１回投与）のいずれかを、完全フロインドアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ、ＩＣＮ／ＣＡＰＰＥＬ社製）と共にフッドパッド内注射することにより初回（０日）免疫した。
初回免疫から１週間毎に同２種類の免疫原のいずれかを、フッドパッド内注射により２回または３回追加免疫し、さらに以下に述べるリンパ球の取得の前々日にも同免疫原を同様にして最終免疫した。
【０１４０】
最終免疫後から２日後に、各々の被免疫トランスジェニックマウスから摘出したリンパ節（鼠径及び膝下）及び脾臓からリンパ球を取得した。該リンパ球とマウスミエローマ細胞Ｐ３／Ｘ６３−ＡＧ８．６５３（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．：  ＣＲＬ−１５８０）とを５：１で混合し、融合剤としてポリエチレングリコール１５００（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ製）を添加した後、１０倍量の無血清の基本培地ＥＸ−ＣＥＬＬ３０１（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）を加えて希釈した。次いで、該混合細胞を該基本培地で洗浄した後、ＨＡＴ培地（該基本培地１Ｌにつき、ヒポキサンチン１３．６１ｍｇ、アミノプテリン１７６μｇ、及びチミジン３．８８ｍｇを含む）中に懸濁し、９６穴マイクロプレートに蒔き１０乃至１４日間培養して細胞融合させた。この細胞融合により、多数のハイブリドーマを得た。
【０１４１】
＜２−２＞  ヒトモノクローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニング
前記＜２−１＞で調製した多数のハイブリドーマを、下記の細胞ＥＬＩＳＡ（ｃｅｌｌ  ＥＬＩＳＡ）によりスクリーニングしてヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを選別した。
前記で作製したヒトＡＩＬＩＭを高発現する組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞及び組換えＣＨＯ細胞の各々（１×１０５細胞／ウェル）を、ＥＬＩＳＡ用９６穴マイクロプレートの各ウェルに蒔き、３７℃で２日間培養した。
次いで、上清を捨て、各ウェルに、各々のハイブリドーマの培養上清サンプル（５０μｌ／ウェル）を加え、１時間反応させた。反応後、サンプルを捨て、各ウェルを、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ製）含有ＰＢＳで３回洗浄した。
次いで、該ハイブリドーマ上清に含まれるヒトイムノグロブリン（ヒトモノクローナル抗体）の重鎖の検出のために、各ウェルにペルオキシダーゼ標識したヤギ抗ヒトイムノグロブリン（Ｆｃ）抗体（１／２０００希釈を５０μｌ／ｗｅｌｌ；Ａｍｅｉｒｃａｎ  Ｃｏｒｅｘ製；１％ＢＳＡ／ＰＢＳ）を加え、室温下で１時間インキュベートした。
一方、該ハイブリドーマ上清に含まれるヒトイムノグロブリン（ヒトモノクローナル抗体）の軽鎖の検出のためには、各ウェルにペルオキシダーゼ標識したヤギ抗ヒトイムノグロブリンκ鎖抗体（１／２０００希釈を５０μｌ）を加え、室温下で１５分インキュベートした。
【０１４２】
マイクロプレートの各ウェルから、該抗ヒトＩｇＦｃ抗体または抗ヒトＩｇκ抗体を除去した後、プレートを１％ＢＳＡ含有ＰＢＳで３回洗浄後、テトラメチルベンジジン（３，３’，５，５’，−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ  （ＴＭＢ）、１００μｌ／ｗｅｌｌ、ＢＩＯ−ＲＡＤ製）を各ウェルに加え、室温下１５分間インキュベートした。
次いで、１ＮのＨ２ＳＯ４（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を各ウェルに加え、反応を止めた。波長４５０ｎｍでの吸光度をバイオラッド、モデル３５５０マイクロプレートリーダー（Ｍｏｄｅｌ  ３５５０  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ、ＢＩＯ−ＲＡＤ製）で測定した。
なお、対照試験として、下記の各々を用いて上記と同様にしてＥＬＩＳＡを行った。
（１）ヒトＡＩＬＩＭ発現組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞の代わりに野生型ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞。
（２）ヒトＡＩＬＩＭ発現組換えＣＨＯ細胞の代わりに野生型ＣＨＯ細胞。
（３）ハイブリドーマ上清の代わりにヒトＡＩＬＩＭに対するマウスモノクローナル抗体（ＳＡ１２またはＳＧ４３０；日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１２）及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号（実施例１２））。
（４）ハイブリドーマ上清の代わりに、ＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、ピアース（ＰＩＥＲＣＥ）社製）に対するヒトモノクローナル抗体。
該抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体は、前記＜２−１＞と同様の方法に従って、前述したヒト抗体産生トランスジェニックマウスに、ＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、ピアース（ＰＩＥＲＣＥ）社製）を免疫することにより作製した。
この結果、ヒトＡＩＬＩＭに結合性を有するヒトモノクローナル抗体を産生する多数のハイブリドーマが選別された。
【０１４３】
＜２−３＞  ハイブリドーマの一次クローニング
下記の試験操作により、前記＜２−２＞で選別しヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体を産生する多数ハイブリドーマ（親株）から、多数種類の各々単一なハイブリドーマをクローニングした。
前記＜２−２＞で選別したハイブリドーマの各々を、２４穴（ウェル）マイクロプレートに蒔き、ピペッティング操作により各ウェルのハイブリドーマの細胞数を計測した。次いで、４．０ｍＭのＬ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ及び脂質を含有するＥＸ−ＣＥＬＬ３０１培地（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）に１０％胎児牛血清（ＦＣＳ；Ｔｒａｃｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＰＴＹ製）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ製）、１％ＨＴ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ製）及び２．５％Ｔ−ＳＴＩＭ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ製）を添加して調製した修飾培地で、各ウェルのハイブリドーマを１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌに希釈し細胞を懸濁させた。
該修飾培地（１５０ｍｌまたは３００ｍｌ）に各ウェルの細胞懸濁液（３００μｌまたは６００μｌ）を加え十分に混和した後、細胞懸濁液を２００μｌ／ｗｅｌｌの濃度で複数の９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに加え４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとした。残りの細胞懸濁液に前記修飾培地（５０ｍｌまたは１００ｍｌ）を新たに加えて混和した後、得られた細胞懸濁液を別の複数の９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに加え２ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとした。
１乃至２週間の培養後、多数のウェルで単一のハイブリドーマのコロニーの形成を確認した。
該コロニーの形成が確認された各ウェルの培養上清に、ヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体が産生されていることを、前記＜２−２＞で述べた細胞ＥＬＩＳＡ（ｃｅｌｌ  ＥＬＩＳＡ）によって確認した。
【０１４４】
＜２−４＞  ハイブリドーマの２次クローニング
前記＜２−３＞と同様の方法に従って、前記＜２−３＞でクローニングした多数のハイブリドーマクローンの各々をサブクローニング（２次クローニング）した。
なお、本試験においては、９６ウェルマイクロプレートの各ウェルの細胞数は、１ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌに調整した。
この結果、ヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体を産生する多数の単一ののハイブリドーマクローンを得た。その一部のクローンは下記のとおりである。
（クローン名）
ＡＩＦ３４（ＪＭａｂ１２４），  ＡＩＦ１８２（ＪＭａｂ−１２６），  ＡＩＦ３４８（ＪＭａｂ−１２７），
ＡＩＦ６２０（ＪＭａｂ−１２８），  ＡＩＦ１０５２（ＪＭａｂ−１３５），  ＡＩＨ５Ｄ３（ＪＭａｂ−１３６），
ＡＩＨ３８６（ＪＭａｂ−１３７），  ＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８），  ＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９），
ＡＩＩ４８８（ＪＭａｂ−１４０），  ＡＩＪ４０（ＪＭａｂ−１４１），
なお、本実施例を含め以下のいずれの実施例中、並びに当該実施例における試験結果として示した図面または表中においては、上記の名称を使用する。
【０１４５】
実施例３  モノクローナル抗体の性状解析
＜３−１＞  重鎖（ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ）及び軽鎖（ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ）の解析
前記＜２−４＞でクローニングした各々のハイブリドーマクローンが産生するヒトＡＩＬＩＭに対するモノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体であることを、下記ＥＬＩＳＡ及びフローサイトメトリーにより確認した。
実施例１で作製したヒトＡＩＬＩＭを高発現する組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞（３×１０４細胞／ウェル）を、Ｖ底マイクロプレートの各ウェルに蒔き、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で３７℃で培養した。
培養後、プレートを遠心（１，８００回転、２分）し、細胞を沈殿させた。次いで、上澄を捨て、各ウェルに、前記＜２−４＞でクローニングした各々のハイブリドーマの培養上清サンプル（５０μｌ／ウェル）または対照としてのマウス抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体ＳＡ１２（２μｇ／５０μｌ）若しくは抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、３０分間冷蔵庫にて反応させた。反応後、サンプルを捨て、各ウェルを、リン酸緩衝液（５ｍＭのＥＤＴＡを含む０．５％ＢＳＡ−ＰＢＳ）で洗浄した。
【０１４６】
次いで、各ウェルに下記いずれかの２次抗体（上記リン酸緩衝液で１０００倍に希釈したものを５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、細胞を分散させ、冷蔵庫内で３０分間反応させた。
（２次抗体）
ビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｚｙｍｅｄ製）；
ビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｐｒｏｔｏｓ製）；
ビオチン標識抗ヒトＩｇＦｃ抗体（ＥＹ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）；または
ビオチン標識抗ヒトＩｇκ抗体（Ｖｅｃｔｏｒ製）。
反応後、２次抗体を捨て、プレートの各ウェルを前記リン酸緩衝液で洗浄した。次いで、各ウェルに、ピコエリスリン標識ストレプトアビジン（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＰＥ；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製；前記リン酸緩衝液で５００倍に希釈したものを５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、冷蔵庫内で３０分間反応させた。反応後、各ウェルを前記リン酸緩衝液で洗浄した。次いで、各ウェルに前記リン酸緩衝液（２００μｌ／ｗｅｌｌ）を加えて細胞を分散させた。
各ウェルのヒトＡＩＬＩＭ高発現ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞に対する各々のハイブリドーマクローンの培養上清中に含まれるヒトＡＩＬＩＭに対するモノクローナル抗体のへの結合性（反応性）を解析した。
【０１４７】
なお、対照試験として、下記の各々を用いて上記と同様にして試験及び解析を行った。
（１）ヒトＡＩＬＩＭ発現組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞の代わりに野生型ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞。
（２）ハイブリドーマ上清の代わりに、ＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、ピアース（ＰＩＥＲＣＥ）社製）に対するヒトモノクローナル抗体。
該抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体は、前記＜２−１＞と同様の方法に従って、前述したヒト抗体産生トランスジェニックマウスに、ＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、ピアース（ＰＩＥＲＣＥ）社製）を免疫することにより作製した。
この結果、前記＜２−４＞でクローニングしたハイブリドーマのいずれもが、ヒト由来重鎖とヒト由来κ軽鎖とから構成されるヒトモノクローナル抗体であることが確認された。
該結果の一例として、ハイブリドーマクローンＡＩＨ５Ｄ３（ＪＭａｂ−１３６）、ＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）、及びＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９）の各々についての試験結果を、図１に示す。
【０１４８】
＜３−２＞  ヒトモノクローナル抗体のアイソタイプの決定
前記＜２−４＞でクローニングし、前記＜３−１＞で解析した各々のハイブリドーマクローンが産生するヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体のアイソタイプを、ヒトモノクロ−ナル抗体アイソタイプ決定用キット（アメリカン・コーレックス社製）を用い、該キットに添付の実験操作プロトコールに従って操作を行い決定した。
いずれの抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体もＩｇＧ２／κであることが確認された。
【０１４９】
実施例４  ヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体（抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体）の大量調製及び精製
＜４−１＞  方法１
前記＜２−４＞で調製した抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を産生する各々のハイブリドーマクローンを、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｌａｓｋ（５０ｍｌ、ＦＡＬＣＯＮ製）に加え、超低濃度ウシイムノグロブリン含有ＦＢＳ（Ｕｌｔｒａ  Ｌｏｗ  Ｂｏｖｉｎｅ  ＩｇＧ  ＦＢＳ、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ社製）を１０％含有するＡＳＦ１０４培地（味の素社製）中で、５％ＣＯ２下３７℃でｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した。
次いで、培養液の全量をＴｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｌａｓｋ（７５０ｍｌ、ＦＡＬＣＯＮ製）に移し、超低濃度ウシイムノグロブリン含有ＦＢＳ（Ｕｌｔｒａ  Ｌｏｗ  Ｂｏｖｉｎｅ  ＩｇＧ  ＦＢＳ、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ社製）を１０％含有するＡＳＦ１０４培地（味の素社製）中で、５％ＣＯ２下３７℃でｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した。
１０乃至２０日の培養後、各々のハイブリドーマの培養上清を回収し、５０ｍｌ  Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  Ｃｏｎｉｃａｌ  Ｔｕｂｅ（ＦＡＬＣＯＮ製）に移し、遠心した（５００ｘｇ、５分）。次いで、遠心上澄をＳｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（ＮＡＬＧＥＮ製）で濾過し、濾液を回収した。
【０１５０】
該濾液を、リン酸緩衝液（３０ｍｌ）で平衡化したハイトラッププロテインＧカラム（ＨｉＴｒａｐ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｏｌｕｍｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ、アマシャムファルマシア社製）に３ｍｌ／ｍｉｎで添加した。
次いで、リン酸緩衝液（２０ｍｌ）でカラムを洗浄後、カラムに１００ｍＭのクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）を約１ｍｌ／ｍｉｎで加え抗体を溶出させた。次いで、溶出液に７５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌからなる溶液（ｐＨ９．０）を加え中和した後、フィルター（ミリポア社製）で濾過し、白沈を除いた。得られた濾液をリン酸緩衝液で透析（一晩）した後、フィルター（ミリポア社製）で濾過して各々のハイブリドーマから精製抗ＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を得た。
なお、分光光度計を用いてＡ２８０での値を求め、蛋白濃度を算出した（１Ａ２８０＝１．４１ｍｇ／ｍｌ）。
【０１５１】
＜４−２＞  方法２
１０％のＵｌｔｒａ  Ｌｏｗ  Ｂｏｖｉｎｅ  ＩｇＧ  ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ社製）を含有するＡＳＦ１０４培地（味の素社製）に馴化した前記＜２−４＞で調製した各々のハイブリドーマクローン（各々１〜２×１０６個／ｍｌ）を、インテグラセルライン１０００（ＩＮＴＥＧＲＡ  ＣＬ１０００、インテグラバイオサイエンス社製）に播種し培養を行った。７乃至１０日間の培養後、培養細胞数が約１×１０８個／ｍｌに達した時点で、各々のハイブリドーマの培養上清を回収した。
該各々の培養上澄を、リン酸緩衝液（３０ｍｌ）で平衡化したハイトラッププロテインＧカラム（ＨｉＴｒａｐ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｏｌｕｍｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ、アマシャムファルマシア社製）に３ｍｌ／ｍｉｎで添加した。
次いで、リン酸緩衝液（２０ｍｌ）でカラムを洗浄後、カラムに１００ｍＭのクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）を約１ｍｌ／ｍｉｎで加え抗体を溶出させた。次いで、溶出液に７５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌからなる溶液（ｐＨ９．０）を加え中和した後、フィルター（ミリポア社製）で濾過し、白沈を除いた。得られた濾液をリン酸緩衝液で透析（一晩）した後、フィルター（ミリポア社製）で濾過して各々のハイブリドーマから精製抗ＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を得た。
【０１５２】
実施例５  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭに対する反応性、並びにマウスＡＩＬＩＭ及びラットＡＩＬＩＭに対する交叉反応性
前記で精製した種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭに対する反応性、並びにマウスＡＩＬＩＭ及びラットＡＩＬＩＭに対する交叉反応性を細胞ＥＬＩＳＡにより解析した。
【０１５３】
＜５−１＞  ＩｇＧ抗体の濃度測定のためのＥＬＩＳＡ系の確率及び検量線の作成
前記で精製したいずれの抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体もＩｇＧ（ＩｇＧ２）抗体であることから、ＩｇＧ抗体の濃度を測定するＥＬＩＳＡを確率した。
ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体（１．２μｇ／ｍｌ  ｉｎ  ＰＢＳ；１００μｌ／ウェル；Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製）を、ＥＬＩＳＡ用９６穴マイクロプレート（Ｎｕｎｃ製）の各ウェルに加え、室温で２時間インキュベートし、該抗ＩｇＧ（Ｆｃ）抗体をマイクロプレートに吸着させた。次いで、上清を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で３回洗浄後、各ウェルにブロッキング試薬（２００μｌ／ｗｅｌｌ、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）を加え室温で２時間インキュベートし、該抗ＩｇＧ（Ｆｃ）抗体が結合していない部位をブロックした。次いで、ブロッキング試薬を捨て、各ウェルを、ＰＢＳで２回洗浄した。
【０１５４】
プレートの各ウェルに、標準抗体としての各種濃度（０乃至１００ｎｇ／ｍｌ）のヒト由来ＩｇＧ２抗体（５０μｌ／ｗｅｌｌ；Ｔｈｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅ製）を加え、室温下で２時間反応させた。余剰の該標準抗体を除き、各ウェルを、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するリン酸緩衝液で３回洗浄した。
次いで、各ウェルに、パーオキシダーゼ（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）で標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ／κ抗体（４，０００倍希釈、１００μｌ／ｗｅｌｌ、Ｐｒｏｔｏｓ製）を加え、室温下で１時間インキュベートした。
上清を捨て、マイクロプレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するリン酸緩衝液で３回洗浄後、基質緩衝液（１００μｌ／ウェル。＜組成＞：オルトフェニレンジアミン（Ｏ−Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ，  ＯＰＤ；２０ｍｇ）／クエン酸・リン酸緩衝液（ｐＨ５．０，  ５０ｍｌ）／３０％過酸化水素水（１５μｌ））を各ウェルに加え、室温下で約７分間インキュベートした。
次いで、２Ｍ硫酸（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を各ウェルに加え、反応を止めた。波長４９０ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダーで測定して得た値を基に検量線を作成した（図２）。
なお、対照として、培養液のみ、またはＢＳＡ溶液のみを被験物質として用い、上述と同様にしてアッセイを行った。
【０１５５】
＜５−２＞  各種の精製抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭに対する反応性、並びにマウスＡＩＬＩＭ及びラットＡＩＬＩＭに対する交叉反応性の解析
＜５−２−１＞  試薬の調製
本細胞ＥＬＩＳＡに用いる試薬を下記のようにして調製した。
＜５−２−１−１＞  マウスＡＩＬＩＭを高発現する組換えＣＨＯ細胞の作製
前記＜１−１＞及び＜１−３＞と同様にしてマウスＡＩＬＩＭを高発現する組換えＣＨＯ細胞を作製、取得した。
マウスＡＩＬＩＭの全長ＯＲＦを含むｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：  ＡＢ０２３１３２（ｃＤＮＡ）；ＢＡＡ８２１２６（アミノ酸））を、ベクターｐＥＦ−ｎｅｏに挿入した後、該組換え発現ベクターを、Ｇｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ（ＢｉｏＲａｄ製）を用いて常法に従ってエレクトロポレーション（９６０μＦ、３２０ボルト）によりチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）の各々に導入した。各々の細胞を、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（０．８ｍｇ／ｍｌ；  Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ製）及び１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で培養することにより薬剤耐性形質転換細胞を選択し、マウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞を取得した。
【０１５６】
＜５−２−１−２＞  ラットＡＩＬＩＭを高発現する組換えＣＨＯ細胞の作製
前記＜１−１＞及び＜１−３＞と同様にしてラットＡＩＬＩＭを高発現する組換えＣＨＯ細胞を作製、取得した。
ラットＡＩＬＩＭの全長ＯＲＦを含むｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ：  ＡＢ０２３１３４（ｃＤＮＡ）；ＢＡＡ８２１２８（アミノ酸））を、ベクターｐＥＦ−ｎｅｏに挿入した後、該組換え発現ベクターを、Ｇｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ（ＢｉｏＲａｄ製）を用いて常法に従ってエレクトロポレーション（９６０μＦ、３２０ボルト）によりチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）の各々に導入した。各々の細胞を、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（０．８ｍｇ／ｍｌ；  Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ製）及び１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で培養することにより薬剤耐性形質転換細胞を選択し、ラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞を取得した。
【０１５７】
＜５−２−１−３＞  マウスＡＩＬＩＭに対するモノクローナル抗体の調製
前記＜５−２−１−１＞で調製したマウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞をホモジナイズし、超遠心分離（１００，０００×ｇ）して、細胞膜画分を含む遠心残さを回収し、ＰＢＳに懸濁させた。得られた細胞膜画分を、完全フロインドアジュバントとともにＷｉｓｔａｒラットのフッドパッド内に注射することにより初回免疫（０日）した。さらに該細胞膜画分抗原を７日目、１４日目および２８日目という間隔でフットパッド内に投与した。最後の免疫から２日後にリンパ節細胞を採取した。
該リンパ節細胞とマウスミエローマ細胞ＰＡＩ（ＪＣＲ  Ｎｏ．Ｂ０１１３；  Ｒｅｓ．  Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ，  Ｖｏｌ．２１７，  ｐ．１５５，  １９８２）とを５：１で混合し、融合剤としてポリエチレングリコール４０００（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ製）を用いて細胞融合させることによりモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマの選択は、１０％ウシ胎児血清とアミノプテリンを含有するＨＡＴ含有ＡＳＦ１０４培地（味の素製）中で培養することにより行った。
【０１５８】
各々のハイブリドーマの培養上清中に生成されたラットモノクローナル抗体のマウスＡＩＬＩＭに対する反応性を、各々の培養上清を、前記マウスＡＩＬＩＭ発現ＣＨＯ細胞に反応させた後、ＦＩＴＣ標識抗ラットＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ製）と反応させることにより染色された細胞の蛍光強度をＥＰＩＣＳ−ＥＬＩＴＥフローサトメーターで測定することにより確認した。この結果、マウスＡＩＬＩＭに反応性を有するモノクローナル抗体を産生する複数のハイブリドーマを得た。
それらのハイブリドーマの内の１つを「Ｂ１０．５」と命名した。このハイブリドーマ（１０６乃至１０７個／０．５ｍｌ／マウス）を、ＩＣＲ  ｎｕ／ｎｕマウス（雌、７乃至８週齢）の腹腔内に注射した。１０乃至２０日後、マウスを麻酔下で開腹し、常法に従って採取した腹水からラット抗マウスＡＩＬＩＭモノクローナル抗体Ｂ１０．５（ＩｇＧ１）を大量調製した。
【０１５９】
＜５−２−２＞  ヒト、マウス及びラット各々のＡＩＬＩＭに対する反応性
以下のＥＬＩＳＡで用いる抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体及び対照抗体の濃度は、前記＜５−１＞のＥＬＩＳＡ及び検量線を基に決定した。
実施例１で作製したヒトＡＩＬＩＭを高発現する組換えＣＨＯ細胞、前記＜５−２−１−１＞で作製したマウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞、及び前記＜５−２−１−２＞で作製したラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞の各々（７×１０３細胞／ウェル）を、ＥＬＩＳＡ用９６穴マイクロプレートの各ウェルに蒔き、３７℃でｃｏｎｆｌｕｅｎｅｔになるまで培養した。
次いで、上清を捨て、各ウェルに、前記で調製した各種の精製抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体または対照抗体（濃度：該抗体２００μｇ／ｍｌを１％ＢＳＡ含有ＰＢＳで各々３倍、３２倍、３３倍、３４倍、３５倍、３６倍、３７倍、３８倍、３９倍、３１０倍、３１１倍、及び３１２倍に希釈したもの。）を５０μｌ／ｗｅｌｌ加え、室温下で２時間反応させた。余剰の該モノクローナル抗体を捨て、各ウェルを、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ製）を含有するリン酸緩衝液で３回洗浄した。
次いで、各ウェルに、西洋ワサビパーオキシダーゼ（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）で標識した抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体（１，０００倍希釈、５０μｌ／ｗｅｌｌ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｑｕａｒｅｘ製）を加え、室温下で１時間インキュベートした。
余剰の該標識抗体をを捨て、マイクロプレートを、１％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝液で３回洗浄後、基質緩衝液（５０μｌ／ウェル。＜組成＞：オルトフェニレンジアミン（Ｏ−Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ，  ＯＰＤ；２０ｍｇ）／クエン酸・リン酸緩衝液（ｐＨ５．０，  ５０ｍｌ）／３０％過酸化水素水（１５μｌ））を各ウェルに加え、室温下で約７分間インキュベートした。
次いで、２Ｍ硫酸（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を各ウェルに加え、反応を止めた。波長４９０ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）で測定した。
【０１６０】
なお、前記の対照抗体として下記の各々を用いて上記と同様にしてＥＬＩＳＡを行った。
（１）ヒトＡＩＬＩＭに対するマウスモノクローナル抗体ＳＡ１２または同ＳＧ４３０（日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１２）及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号（実施例１２））。
（２）マウスＡＩＬＩＭに対するラットモノクローナル抗体Ｂ１０．５（前記＜５−２−１−３＞）。
（３）ラットＡＩＬＩＭに対するマウスモノクローナル抗体ＪＴＴ２（国際寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−５７０８を以って１９９６年１０月１１日付でブダペスト条約の下で認定された国際寄託機関である日本国通産省工業技術院生命工学工業技術研究所に国際寄託されているハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体。日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１及び２）及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号（実施例１及び２））。
（４）ハイブリドーマ上清の代わりに、前記で調製したＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、ピアース（ＰＩＥＲＣＥ）社製）に対するヒトモノクローナル抗体。
なお、対照試験として、ＡＩＬＩＭ発現組換えＣＨＯ細胞の代わりに野生型ＣＨＯ細胞下記の各々を用いて上記と同様にしてＥＬＩＳＡを行った。
結果を図３乃至図１４に示した。
【０１６１】
得られたデータを基に、各々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭ（ヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞）、マウスＡＩＬＩＭ（マウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞）、及びラットＡＩＬＩＭ（ラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞）の各々への反応性の程度としての５０％有効濃度（ＥＤ５０：ｎｇ／ｍｌ）を下記のとおり算出した。
（Ａ）ヒトＡＩＬＩＭ高発現ＣＨＯに対するＥＤ５０
ＡＩＦ  ３４  （ＪＭａｂ−１２４）  ：  ５．３ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ１８２  （ＪＭａｂ−１２６）  ：  ３．６ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ３４８  （ＪＭａｂ−１２７）  ：  ９．１ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ６２０  （ＪＭａｂ−１２８）  ：  １０．１ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ１０５２（ＪＭａｂ−１３５）  ：  ２．０ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＨ５Ｄ３  （ＪＭａｂ−１３６）  ：  ７．５ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＨ３８６  （ＪＭａｂ−１３７）  ：  ９．６ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ２８９  （ＪＭａｂ−１３８）  ：  １０．５ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ３９４  （ＪＭａｂ−１３９）  ：  １０．６ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ４８８  （ＪＭａｂ−１４０）  ：  １１．０ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＪ  ４０  （ＪＭａｂ−１４１）  ：  ３．７ｎｇ／ｍｌ
ＳＡ  １２              ：  １．８ｎｇ／ｍｌ
ＳＧ４３０              ：  １．２ｎｇ／ｍｌ
（Ｂ）マウスＡＩＬＩＭ高発現ＣＨＯに対するＥＤ５０
ＡＩＦ  ３４（ＪＭａｂ−１２４）  ：  ４２ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ３４８（ＪＭａｂ−１２７）  ：  ８１ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ６２０（ＪＭａｂ−１２８）  ：  １００ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）  ：  ５３ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９）  ：  ６０ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ４８８（ＪＭａｂ−１４０）  ：  ７０ｎｇ／ｍｌ
（Ｃ）ラットＡＩＬＩＭ高発現ＣＨＯに対するＥＤ５０
ＡＩＦ  ３４（ＪＭａｂ−１２４）  ：  ４５ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ３４８（ＪＭａｂ−１２７）  ：  ６２ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＦ６２０（ＪＭａｂ−１２８）  ：  ９７ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）  ：  ５７ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９）  ：  ９０ｎｇ／ｍｌ
ＡＩＩ４８８（ＪＭａｂ−１４０）  ：  ９０ｎｇ／ｍｌ
【０１６２】
この結果、本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体が、ヒトＡＩＬＩＭに対して有意な特異性を有することが明らかとなった。
さらに、６つの抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（上記（Ｂ）及び（Ｃ））が、マウスＡＩＬＩＭ及びラットＡＩＬＩＭのいずれにも反応性（結合性、交叉反応性）を有することを示すことが明らかとなった。
【０１６３】
実施例６  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の抗原（ヒトＡＩＬＩＭ）に対する親和性及び中和活性の測定
前記で作製した各種の精製抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭとの結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）及び解離定数（Ｋｄ）を、市販の測定キットＢｉａｃｏｒｅ  Ｘ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を用いて測定した。
【０１６４】
＜６−１＞  センサーチップ固定用抗原の調製
該キットのセンサーチップに固定する抗原として、ヒトＡＩＬＩＭの細胞外領域とヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）とからなる組換えキメラ抗原（以下、「ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ」という。）を調製した。
該ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃは、本発明者の一人である手塚の他の先の出願（日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１６（２））及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号公報（実施例１６（２））の方法により調製したものをさらに精製することにより調製した。
該ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃを産生する組換え細胞の培養上清を、リン酸緩衝液（３０ｍｌ）で平衡化したハイトラッププロテインＧカラム（ＨｉＴｒａｐ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｏｌｕｍｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ、アマシャムファルマシア社製）に３ｍｌ／ｍｉｎで添加し、該培養上清中に含まれるヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃをカラムに吸着させた。
【０１６５】
次いで、リン酸緩衝液（２０ｍｌ）でカラムを洗浄後、カラムに１００ｍＭのクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）を約１ｍｌ／ｍｉｎで加えヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃを溶出させた。次いで、溶出液に７５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌからなる溶液（ｐＨ９．０）を加え中和した後、リン酸緩衝液で透析（一晩）した。次いで、透析後の溶液を、フィルター（ミリポア社製）で濾過して精製抗ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃを得た。
なお、分光光度計を用いてＡ２８０での値を求め、蛋白濃度を算出した（１Ａ２８０＝１ｍｇ／ｍｌ）。その結果、０．２８ｍｇ／ｍｌのヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃを得た。
また、ラットＡＩＬＩＭの細胞外領域とヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）とからなるキメラ蛋白（ラットＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ；日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１６（２））及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号公報（実施例１６（２））の精製品も、上記と同様にして調製した。その結果、０．４５ｍｇ／ｍｌのラットＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃを得た。
【０１６６】
＜６−２＞  親和性及び中和活性の測定
下記に述べる抗原（ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ）のセンサーチップへの固定化以外の操作は、市販の測定キットＢｉａｃｏｒｅ  Ｘ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）に添付の取扱い説明書及び実験操作法に従って行った。
キットに付随のフローセル１（Ｆｌｏｗ  Ｃｅｌｌ−１）に、ＨＢＳ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ及び０．００５％の界面活性剤Ｐ２０を含有。ｐＨ７．０）を５μｌ／分で流し、次いで、０．００５Ｍ  ＮＨＳ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）と０．２Ｍ  ＥＤＣ（Ｎ−Ｅｔｈｙｌ−Ｎ’−（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）とからなる溶液（１５μｌ）を添加し、センサーチップ表面に被覆されているＣＭのカルボキシル基を活性化させた。
次いで、２３μｌのヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ（１０μｇ／ｍｌ；１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解させた。）を添加し、該ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃをセンサーチップに固定化した。次いで、未反応の活性化されたカルボキシル基は、３５μｌの１Ｍ  Ｅｔｈａｎｏｌ  ａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅを添加することによりブロックした。２回の固定化操作において、固定化されたヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃの量は、各々２，４４４ＲＵ（ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｕｎｉｔ）及び２，２１３ＲＵであった。なお、ＲＵは、面積当たりの質量を示し、１ＲＵ＝１ｐｇ／ｍｍ２である。
【０１６７】
リファレンスとしてのフローセル２（Ｆｌｏｗ  Ｃｅｌｌ−２）は、ヒトＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃを加えないで上記と同様にして処理することによりキャッピングした。
フローセル（センサーチップ）に、リン酸緩衝液を２０μｌ／分の流速で流し、前記実施例で作製した各々の精製抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（１０〜５０μｇ／ｍｌ、６０μｌ）を添加した。
測定は、結合相３分間及び解離相１０分間を標準条件として行った。抗原に対する抗体の結合量並びに該抗原からの抗体の解離量を経時的に測定しセンサーグラムを得た。抗原に結合した抗体の解離は、ＰＢＳを２０μｌ／ｍｉｎの流速でセンサーチップに流すことにより行った。
得られたセンサーグラムのデータに基づき、キットに付随の解析ソフト（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．０）を用いて、結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）及び解離定数（Ｋｄ；Ｋｄ＝ｋｄ／ｋａ）を算出した。
なお、前記実施例で調製したヒトＡＩＬＩＭに対するマウスモノクローナル抗体ＳＡ１２及びＳＧ４３０の抗原親和性及び中和活性についても上記と同様にして解析した。
各々の値を下記に示す。
【０１６８】
0003597140.tif 000002
この結果からいずれの抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体及び抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体も、ヒトＡＩＬＩＭに対して極めて高い結合親和性及び中和活性を有していることが明らかとなった。
【０１６９】
実施例７  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＴ細胞に対するコスティミュレイトリーシグナル伝達活性
本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体が、ヒトＴ細胞反応（ＩＦＮ−γやＩＬ−４などのサイトカインの産生、及び細胞増殖など）を制御（促進及び／または抑制）する能力を有するか否か、即ちＡＩＬＩＭを介したコスティミュレイトリーシグナル（ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌ）の細胞内への伝達の制御能を有するか否かを、ヒトＴ細胞からのサイトカイン（ＩＦＮ−γ及びＩＬ−４）の産生量、並びに該ヒトＴ細胞の増殖の程度を指標に解析した。
【０１７０】
＜７−１＞  抗体の希釈
抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８００１）を、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で最終濃度８μｇ／ｍｌとなるように希釈した。
前記で調製した各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の各々を、ＰＢＳで最終濃度が４０μｇ／ｍｌとなるように希釈した後、ＰＢＳでさらに各種濃度に希釈した（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００４９μｇ／ｍｌ）。
【０１７１】
＜７−２＞  抗体によりマイクロプレートのコーティング
９６ウェルマイクロプレート（複数枚）の各ウェルに、（１）抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３（８μｇ／ｍｌを２５μｌ／ｗｅｌｌ）及び各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のいずれか（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００４９μｇ／ｍｌを２５μｌ）、または（２）抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３（８μｇ／ｍｌを２５μｌ／ｗｅｌｌ）のみを加え、３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、抗体を捨て、各ウェルをＰＢＳで３回洗浄した。洗浄後、各ウェルに、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（１００μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、３７℃で１時間インキュベーションして、上記（１）または（２）の抗体でプレートの各ウェルをコーティングした。
なお、対照抗体として、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに、下記の各々のモノクローナル抗体を用いて、上記と同様にしてプレートのコーティングを行った。
（１）ヒトＡＩＬＩＭに対するマウスモノクローナル抗体ＳＡ１２または同ＳＧ４３０（日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１２）及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号（実施例１２））。
（２）マウス抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体ＪＨＣ１（ＪＭａｂ１０９とも別称する。日本特許出願公開第９−２０８００号公報）。
（３）抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ２３とも別称する。前記実施例）。
これらの抗体コーティングマイクロプレートを以下の試験で用いた。
【０１７２】
＜７−３＞  ヒトＴ細胞懸濁液の調製
健常人（５人；ドナーＡ，  Ｂ，  Ｃ，  Ｄ及びＥ）の各々の末梢血を採取し、ＬｙｍｐｈｏＰｒｅｐ（Ｎｙｃｏｍｅｄ製）を用いた密度勾配遠心により単核球を分画した。実験操作マニュアルに従い、Ｐａｎ−Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）及びマグネティックソーターを用いて、該ヒト単核球からヒトＴ細胞を分離取得した。該Ｔ細胞の細胞数を、血球計算盤により計数した。該ヒトＴ細胞を、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中に懸濁しヒトＴ細胞懸濁液（１×１０６細胞／ｍｌ）を調製した。
【０１７３】
＜７−４＞  細胞培養
（１）抗ヒトＣＤ３抗体と抗ヒトＡＩＬＩＭ抗体をコートしたマイクロプレートでの培養前記の抗体コーティングマイクロプレートの各ウェルに、ヒトＴ細胞懸濁液（ドナーＡ，  Ｂ，  Ｃ，  Ｄ及びＥ；１００μｌ／ｗｅｌｌ；１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で３日間培養した。
培養後、後述の試験（ＩＦＮγの定量）での使用の目的で、培養上清（５０μｌ）を分取しマイナス２０℃で保存した。該培養上清のサンプリング後の各々のマイクロプレートを以下の試験に用いた。
（２）抗ヒトＣＤ３抗体のみをコートしたマイクロプレートでの培養
前記の抗体コーティングマイクロプレートの各ウェルに、ヒトＴ細胞懸濁液（ドナーＤ；１００μｌ／ｗｅｌｌ；１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を加えた後、各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のいずれか（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００４９μｇ／ｍｌを２５μｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で３日間培養した。
【０１７４】
＜７−５＞  Ｔ細胞増殖活性の測定
前記の培養後の各プレートの各ウェルに、ｍｅｔｈｙｌ［３Ｈ］ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（０．５μＣｉ／ｗｅｌｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で６時間インキュベーションした。培養後、セルハーベスターを用いて、細胞をＧＦ／Ｃフィルター（Ｐａｃｋａｒｄ製）上にトラップした。次いで、フィルターを、４０℃で３時間以上乾燥させた後、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔｉ  ０（２０μｌ／ｗｅｌｌ；Ｐａｃｋａｒｄ製）を加えた。βカウンター（ＴＯＰ  ＣＯＵＮＴ）を用いて、フィルター上にトラップされた細胞に取込まれている３Ｈの放射活性を測定し、培養後のＴ細胞の増殖の程度を解析した。
結果を図１５乃至図３９に示す。
本試験の結果、抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体（ヒトモノクローナル抗体またはマウスモノクローナル抗体）を抗ヒトＣＤ３抗体とともにコートしたマイクロプレートを用いた場合には、ヒトＴ細胞の濃度依存的な有意な増殖が認められた。また、該細胞増殖の程度は、ドナー間でいくらかの差が見られた。
一方、抗ヒトＣＤ３抗体のみをコートしたプレートを用いて、抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体（ヒトモノクローナル抗体またはマウスモノクローナル抗体）を溶液の状態（液相）で細胞培養系に加えて培養した場合には、ヒトＴ細胞の有意な増殖は認められなかった。
【０１７５】
＜７−６＞  Ｔ細胞の培養上清中のＩＦＮγの量の測定
前記＜７−４＞の（１）の各々のＴ細胞の培養系（ドナーＢ及びにＣ）ついて、培養上清に含まれるＩＦＮγの量を、市販のｈｕｍａｎ  ＩＦＮγ  ＥＬＩＳＡ  ＫＩＴ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製；Ｅｎｄｏｇｅｎ製）を用いて測定した。
結果を図４０乃至図４７に示す。
本試験の結果、抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体（ヒトモノクローナル抗体またはマウスモノクローナル抗体）の濃度に依存した有意なＩＦＮγの産生増加が認められた。
【０１７６】
実施例８  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の制御活性
本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体が、Ｔ細胞反応（ＩＦＮ−γやＩＬ−４などのサイトカインの産生、及び細胞増殖など）を制御（促進及び／または抑制）する能力を有するか否か、即ちＡＩＬＩＭを介したコスティミュレイトリーシグナル（ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌ）の細胞内への伝達の制御能を有するか否かを、アロジェニック混合リンパ球反応（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ  ｍｉｘｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ；  ａｌｌｏｇｅｎｉｃ  ＭＬＲ）におけるＴ細胞の増殖（即ち、細胞内でのＤＮＡ合成）を制御する活性の有無を指標に解析した。
【０１７７】
＜８−１＞  ヒトＰＢＭＣ及びＴ細胞の調製
健常人（７人；ドナーＡ，  Ｂ，  Ｃ，  Ｄ，  Ｅ，  Ｆ及びＧ）の各々から採取した各々の末梢血（２００ｍｌ）を、マイクロチューブ（５０ｍｌ；Ｆａｌｃｏｎ製）に分注したＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（１５ｍｌ；Ｎｙｃｏｍｅｄ製）に重層した。次いで、遠心分離（１６００回転、１０分）の後、中間層を回収した。回収した細胞を、リン酸緩衝液で２倍以上に希釈した後、遠心分離（１，８００回転、１０分）して、ＰＢＭＣ（末梢血単核球細胞；２×１０８〜５×１０８細胞）を調製した。血球計数板を用いて細胞数を計数し、ＭＬＲ試験に必要な細胞数（１．０８×１０８細胞／９マイクロプレート）を分取し、氷上に保存した。残りの細胞は、以下のＴ細胞の分離に用いた。
ＰＢＭＣからのＴ細胞の分離には、ＰａｎＴ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ製）を用いた。該キットの添付の実験操作マニュアルに従って、該残りのＰＢＭＣを、該キットに付属の溶液に添加し、反応させた。次いで、細胞を５ｍＭのＥＤＴＡ及び０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳで洗浄した後、該ＰＢＳ中に再懸濁した。次いで、該細胞懸濁液を、該ＰＢＳで膨潤させたＰｏｓｉｔｉｖｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＶＳ＋（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ製）に添加し、非吸着画分を回収した。また、該カラムに該ＰＢＳを添加して、洗浄液を回収した。同様の操作を再度行った。回収液を併せて、Ｔ細胞画分とした。該Ｔ細胞画分を、遠心した後、該ＰＢＳ中に再懸濁した。得られたＴ細胞の細胞数を、血球計数板を用いて計数し、以下の試験に用いた。
【０１７８】
＜８−２＞  混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
先に述べたとおり、Ｔ細胞等のリンパ球の活性化に必要なコスティミュレイトリーシグナルの伝達経路には、既に比較的十分な解析がなされているＣＤ２８とＣＤ８０（Ｂ７−１）／ＣＤ８６（Ｂ７−２）との間のシグナル伝達経路、及びＣＴＬＡ４とＣＤ８０（Ｂ７−１）／ＣＤ８６（Ｂ７−２）との間のシグナル伝達経路の２つの経路が知られている。
即ち、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるＴ細胞の増殖は、該既知の２つの経路を介するシグナル伝達によっても誘導される。
従って、本試験では、下記の被験物質を用いて、（１）ＣＴＬＡ４を介するシグナル伝達経路の遮断によるＭＬＲの抑制、（２）ＣＤ８０（Ｂ７−１）／ＣＤ８６（Ｂ７−２）を介するシグナル伝達経路の遮断によるＭＬＲの抑制、（３）ＣＴＬＡ４を介する経路及びＣＤ８０（Ｂ７−１）／ＣＤ８６（Ｂ７−２）を介するシグナル伝達経路の両方の遮断によるＭＬＲの抑制、（４）ＡＩＬＩＭが担う第３のシグナル伝達経路の遮断によるＭＬＲの抑制、及び（５）ＣＴＬＡ４を介する経路及びＡＩＬＩＭを介する経路の両方の遮断によるＭＬＲの抑制の各々について解析した。
【０１７９】
下記を、被験物質として用いた。
（１）抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（前記実施例で調製）。
（２）抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体ＳＡ１２（前記実施例に同じ）。
（３）抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（陰性対照；前記実施例に同じ）。
（４）マウスＩｇＧ抗体（抗ヒトＣＤ３４；陰性対照；Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ製）。
（５）抗ヒトＣＤ８０モノクローナル抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）と抗ヒトＣＤ８６モノクローナル抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）との混合物。
（６）ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子（Ａｎｃｅｌｌ製）。
【０１８０】
前記＜８−１＞で得た各ドナーから調製したＰＢＭＣ及びＴ細胞を用いて、下記の６通りの組み合わせによる混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を行った。
（ｉ）  Ｔ細胞（ドナーＡ）／ＰＢＭＣ（ドナーＤ）
（ｉｉ）  Ｔ細胞（ドナーＤ）／ＰＢＭＣ（ドナーＢ）
（ｉｉｉ）Ｔ細胞（ドナーＣ）／ＰＢＭＣ（ドナーＡ）
（ｉｖ）  Ｔ細胞（ドナーＥ）／ＰＢＭＣ（ドナーＧ）
（ｖ）  Ｔ細胞（ドナーＦ）／ＰＢＭＣ（ドナーＥ）
（ｖｉ）  Ｔ細胞（ドナーＧ）／ＰＢＭＣ（ドナーＦ）
試験に用いるＰＢＭＣ及びＴ細胞は、下記の濃度に調整した。
ＰＢＭＣをＰＢＳ中に分散した後、培養皿（６０ｍｍ）移し、放射線照射装置（日立メディコ製）でＸ線照射（５０Ｇｙ）した。細胞を回収して遠心した後、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地に加え、細胞数を、２×１０５細胞／５０μｌに調整した。
また、上記で得た各々のドナーからのＴ細胞を、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地に加え、細胞数を、１×１０５細胞／５０μｌに調整した。
【０１８１】
＜８−２−１＞  ＭＬＲに対する抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体によるＭＬＲの抑制
９６穴Ｕ底マイクロプレートのの各ウェルに１０％ＦＣＳ含有ＰＲＭＩ１６４０培地を加えた後、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で各種濃度に希釈した抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体または抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体ＳＡ１２の溶液を加えた（最終濃度：０、０．３１、１．２５、５及び２０μｇ／ｍｌ）。次いで、Ｔ細胞（５０μｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター（ＮＡＰＣＯ製）内で、３７℃で１時間培養した。反応終了後、別のドナー由来のＰＢＭＣ（５０μｌ）を加え、ＭＬＲを開始させた。
なお、被験物質として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体以外（上記（３）乃至（６））を用いた場合のＭＬＲは、ＰＢＭＣと該被験物質との培養の後に、別のドナー由来のＴ細胞を加えて反応を行った。
培養の５日目に、各ウェルに、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で希釈したトリチウム標識チミジン（３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ；２０μｌ；１μＣｉ／ｗｅｌｌ）を添加した後さらに１日培養して。培養後、Ｃｅｌｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ製）を用いて細胞を回収し、βカウンター（ＴＯＰ  ＣＯＵＮＴ；Ｐａｃｋａｒｄ製）を用いて、細胞に取込まれている３Ｈの放射活性を測定し、培養後のＴ細胞の増殖の程度を解析した。
結果を図４８乃至図５９に示した。
【０１８２】
＜８−２−２＞  予めＣＴＬＡ４を介するシグナル伝達を遮断した系でのＭＬＲに対する抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体によるＭＬＲの抑制
９６穴Ｕ底マイクロプレートの各ウェルに１０％ＦＣＳ含有ＰＲＭＩ１６４０培地を加えた後、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で各種濃度に希釈した抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体または抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体ＳＡ１２の溶液を加えた（最終濃度：０、０．３１、１．２５、５及び２０μｇ／ｍｌ）。次いで、Ｔ細胞（５０μｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター（ＮＡＰＣＯ製）内で、３７℃で１時間培養した。
該Ｔ細胞の培養とは別に、別のドナー由来のＰＢＭＣ（１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中）にヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃを加え、ＣＯ２インキュベーター（ＮＡＰＣＯ製）内で、３７℃で１時間培養した。なお、該ＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃの濃度は、ＭＬＲの開始の時点で２０μｇ／ｍｌとなるように調整した。
次いで、上記Ｔ細胞の培養系に、該ＰＢＭＣ（５０μｌ）を加え、ＭＬＲを開始させた。
なお、被験物質として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体以外（上記（３）乃至（５））を用いた場合のＭＬＲは、上記と同様にしてＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃとともに培養して得たＰＢＭＣと該被験物質との培養の後に、別のドナー由来のＴ細胞を加えて反応を行った。
培養の５日目に、各ウェルに、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で希釈したトリチウム標識チミジン（３Ｈ−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ；２０μｌ；１μＣｉ／ｗｅｌｌ）を添加した後さらに１日培養して。培養後、Ｃｅｌｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ製）を用いて細胞を回収し、βカウンター（ＴＯＰ  ＣＯＵＮＴ；Ｐａｃｋａｒｄ製）を用いて、細胞に取込まれている３Ｈの放射活性を測定し、培養後のＴ細胞の増殖の程度を解析した。
結果を図６０乃至図６９に示した。
【０１８３】
上記２つの試験の結果、下記が明らかとなった。
（１）ＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃは、ＣＴＬＡ−４を介するシグナル伝達を遮断することによりアロジェニックＭＬＲによるＴ細胞の増殖が抑制する。
（２）抗ＣＤ８０抗体及び抗ＣＤ８６抗体は、ＣＴＬＡ４及びＣＤ２８のリガンドであるＣＤ８０／ＣＤ８６を介するシグナル伝達を阻害することによりアロジェニックＭＬＲによるＴ細胞の増殖を抑制される。
（３）ＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃ、抗ＣＤ８０抗体及び抗ＣＤ８６抗体と同様に、ヒトＡＩＬＩＭに対するモノクローナル抗体が抗体濃度依存的に、ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達によるアロジェニックＭＬＲでのＴ細胞の増殖を有意に抑制する。
この結果は、即ち、Ｔ細胞の活性化に必要なコスティミュレイトリーシグナルの伝達経路には、既知のＣＴＬＡ４／ＣＤ８０／ＣＤ８６を介する経路及びＣＤ２８／ＣＤ８０／ＣＤ８６を介する経路の他に、ＡＩＬＩＭとそのリガンドを介する第３の経路が存在すること、並びに該ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達経路が、ＡＩＬＩＭに対する抗体により阻害されることを示すものである。
さらに、該シグナル伝達におけるＡＩＬＩＭを介する経路の貢献度は、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０／ＣＤ８６を介する経路及びＣＤ２８／ＣＤ８０／ＣＤ８６を介する経路のそれと同程度である可能性が示された。
【０１８４】
実施例９  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の抗体依存性細胞性障害（ＡＤＣＣ）の誘導活性
抗体が引き起こす生物活性の一つに、抗体依存性細胞性障害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ＡＤＣＣ）の誘導がある。ＡＤＣＣとは、リンパ球、マクロファージあるいは多形核白血球のような効果細胞（ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ）により引き起こされる標的細胞（ｔａｒｇｅｔ  ｃｅｌｌ）の細胞障害作用において、該効果細胞と該標的細胞に加えて、その細胞障害が誘導されるために抗体を必要とする細胞障害作用である。
本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体のＡＤＣＣ誘導活性の有無を下記のようにして解析した。
【０１８５】
前記実施例で調製したヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＨＰＢ−ＡＬＬ細胞の培養系に、５１Ｃｒ（０．１ｍＣｉ／１０６細胞；Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を添加し、３７℃で２時間インキュベートした後、ＲＰＭＩ１６４０培地で８回洗浄して得た放射性標識細胞を、標的細胞（Ｔａｒｇｅｔ  Ｃｅｌｌ）として用いた。
なお、対照試験での使用のために、野生型ヒトＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を上記と同様にして放射性標識した。
健常人から採取した末梢血から、Ｌｙｍｐｈｏｓｅｐａｒ  Ｉ（ＩＢＬ製）を用いて、ＰＢＭＣ画分を分離した。得られたヒトＰＢＭＣを効果細胞（Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌ）として用いた。
９６穴Ｕ底マイクロプレート（Ｎｕｎｃ製）に、該標的細胞（１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；２５μｌ／ｗｅｌｌ）を蒔いた。次いで、各ウェルに、５％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で希釈した各種濃度の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（０．０００１〜１．０μｇ／ｍｌ；２５μｌ／ｗｅｌｌ）、該培地のみ（２５μｌ／ｗｅｌｌ）または１％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０（２５μｌ／ｗｅｌｌ；細胞膜溶解活性を有する界面活性剤）を加え、室温で２０分間培養した。
なお、陽性対照として、抗ヒトＡＩＬＩＭ抗体の代わりに抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８００１）を用いて上記と同様にして培養した。
【０１８６】
次いで、各ウェルに効果細胞（Ｅ／Ｔ  ｒａｔｉｏ＝５０；１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ；５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で１６時間培養した。
培養の後、遠心分離（１，５００ｒｐｍ；４℃；１０分）して、遠心上澄を回収した。該遠心上澄中の放射活性をガンマカウンターを用いて測定した。該放射活性は、ＡＤＣＣによる細胞膜の傷害により培養上清中に放出された５１Ｃｒの量を示す。
培地のみでのアッセイでの放射活性を細胞膜障害率ゼロ（０）とし、またＮｏｎｉｄｅｔ添加でのアッセイでの方社活性を細胞膜障害率１００％とし、抗ＡＩＬＩＭ抗体または抗ＣＤ３抗体により誘導されるＡＤＣＣによる細胞膜障害率（細胞溶解率）（％）を算出した。
結果を図７０及び図７１に示す。
本試験の結果、本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体は、濃度依存的なＡＤＣＣ誘導活性を有していた。
【０１８７】
実施例１０  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の遺伝子配列及びアミノ酸配列の決定及び解析
前記実施例で作製された種々のヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体を構成する重鎖（Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎ）コードするｃＤＮＡ配列、並びに軽鎖（Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎ）をコードするｃＤＮＡ配列を下記のようにして決定するとともに、該遺伝子の構造的特徴を解析した。
前記実施例で作製したヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ（クローン：ＡＩＨ５Ｄ３（ＪＭａｂ−１３６），  ＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）及びＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９））の各々から、Ｑｕｉｃｋ  Ｐｒｅｐ  ｍＲＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を用いてＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡの抽出、精製した。
該ハイブリドーマを、細胞溶解緩衝液（Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ）に溶解し、シリンジにより細胞を破壊し、可溶化させた。該可溶化物にＯｌｉｇｏ（ｄＴ）  ｒｅｓｉｎを加え緩やかに振盪した。次いで、Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）  ｒｅｓｉｎを洗浄後、ＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡをＥｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒで溶出させた。溶出したＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡをエタノール沈殿させ、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液に溶解した。得られたＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡの濃度を、２６０ｎｍの波長での吸光度を測定することにより決定した。
【０１８８】
得られたＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡを鋳型とし、市販のｃＤＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  キット（ＧＩＢＣＯＢＲＬ製）および合成オリゴＤＮＡ  ＮｏｔＩ−Ｔ（配列番号１）をプライマーとして用いたＭ−ＭＬＶ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ法により二本鎖ｃＤＮＡを合成した。
即ち、ハイブリドーマから精製したＰｏｌｙＡ＋ＲＮＡ（約５μｇ）を鋳型として、該プライマー（約４００ｐｍｏｌｅ）及びＭ−ＭＬＶ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅを加えた溶液中（約５０μｌ）で３７℃で１時間反応させ一本鎖ｃＤＮＡを合成した。次いで、反応溶液（４μｌ）に、ｄＮＴＰ、ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉ、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮＡ  ｌｉｇａｓｅ、緩衝液及び蒸留水を加えて１６℃で２時間反応させ二本鎖ｃＤＮＡを合成した。得られた二本鎖ｃＤＮＡを、フェノール／クロロホルムで抽出した後、エタノール沈殿させた。
次いで、ＴＥ緩衝液に溶解した該二本鎖ｃＤＮＡ（約５０μｌ）に、ＥｃｏＲＩリンカーＤＮＡ（約３００ｐｍｏｌｅ）及びＤＮＡリガーゼ（Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｈｉｇｈ；３３μｌ；ＴＯＹＯＢＯ製）を加え、１６℃で約８０分反応させて、該ｃＤＮＡにリンカーＤＮＡを連結した。なお、該リンカーＤＮＡは、５’末端をリン酸化したオリゴＤＮＡ（２０ａｄｐ；配列番号２）とオリゴＤＮＡ（２４ａｄｐ；配列番号３）を常法に従ってハイブリダイズさせて調製した二本鎖ＤＮＡを用いた。
【０１８９】
得られた反応物をフェノール／クロロホルムを用いて抽出した後、エタノール沈殿させた。次いで、該ＤＮＡ反応物を、市販の制限酵素ＮｏｔＩ（ＴＯＹＯＢＯ製）を用いて消化した後、市販のＡＴＰ溶液（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ製）とＴ４キナーゼ（ＴＯＹＯＢＯ製）と反応させ（３７℃で３０分）その５’末端をリン酸化した。
得られたＤＮＡ反応物エタノール沈殿した後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分画し約５００ｂｐから２０００ｂｐのＤＮＡを含むゲルを切り出した。該ゲルの切り出しは、エチジウムブロマイド染色及び紫外線照射下での写真撮影により行った。
切り出したゲルを、粉砕した後ＴＥ緩衝液に懸濁させ、遠心分離して遠心上澄を回収した。
回収した該ＤＮＡと市販のラムダファージベクターλＥＸｃｅｌｌ（０．２５μｇ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を、市販のＤＮＡ  Ｌｉｇａｓｅ（Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｈｉｇｈ；ＴＯＹＯＢＯ製）の存在下で反応させ（１６℃、３０分）連結させた。次に該ＤＮＡ反応物を市販のラムダファージパッケージングキットＧｉｇａｐａｃｋ  ＩＩＩ  Ｇｏｌｄ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ製）を用いてラムダファージとし、大腸菌ＮＭ５２２を宿主としてｃＤＮＡライブラリーを作製した。なお、全ての操作は、該キットに添付の実験操作説明書に従って行った。
【０１９０】
次いで、プラークハイブリダイゼーション法（マニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｌａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に従い、該ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングを下記のようにして行った。
該ｃＤＮＡライブラリー（１×１０４個プラーク）を寒天プレートに蒔き、ハイボンド−Ｎ  ナイロンメンブラン（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ  ｎｙｌｏｎ  ｍｅｎｂｒａｎｅ、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を用いてレプリカを作製した。このレプリカを、γ３２Ｐ−ＡＴＰで標識したプローブを用いて、ハイブリダイゼーション緩衝液中でのプラークハイブリダイゼーションによりスクリーニングした。抗体軽鎖については、プローブＨＩＧＬＣ（配列番号４）を、また抗体重鎖については、プローブＮＨＣｃ２（配列番号５）を用いた。１次スクリーニング及び２次スクリーニングにより同定した陽性クローンの各々をシングルプラークで単離した。
【０１９１】
各々の陽性クローンのファージ溶液を鋳型ＤＮＡとし、一つのＰＣＲ用プライマー及びＴａｑ  ＰＣＲキット（ＴＡＫＡＲＡ製）を用いたＰＣＲにより抗体重鎖及び抗体軽鎖の各々を増幅した。抗体軽鎖のプライマーには、ＥｘｃｅｌｌＥ（配列番号６）及びｃｋ１１７（配列番号７）を、抗体重鎖のプライマーにはＥｘｃｅｌｌＥ（配列番号６）及びＮＨＣｃ２（配列番号５）を用いた。ＰＣＲ産物は常法によりアガロースゲル電気泳動にて分画し重鎖及び軽鎖ともに約６００ｂｐの大きさのＤＮＡを含むゲルを切り出した。該ゲルから精製したＤＮＡの塩基配列を、ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ（３７３Ａ；ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）及びＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  Ａｕｔｏ  Ａｓｓｅｍｂｌｅｒ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を用いて解析し、各々の陽性クローンが十分な塩基長のＤＮＡを有することを確認した。
【０１９２】
各々の陽性クローンのプラークのλファージを、大腸菌ＮＰ６６に感染させ、プラスミドＤＮＡを放出させた後、アンピシリンを含有するプレート上に蒔きコロニーを形成させた。次いで、該コロニーから常法に従って回収した精製プラスミドＤＮＡで大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した。次いで、形質転換細胞をアンピシリンを含む栄養培地に蒔きコロニーを形成させた。
次いで、アンピシリンを含むＬＢ培地中に懸濁させた各々のコロニーの懸濁液を、液体栄養培地中で３７℃で２４時間培養した。培養液から菌体を集め、プラスミド精製キット（Ｑｕｉａｇｅｎ製）を用いてプラスミドＤＮＡを精製した。各々の精製プラスミドＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩで消化し、ベクターＤＮＡと挿入ＤＮＡ（重鎖ｃＤＮＡまたは軽鎖ｃＤＮＡ）の存在を確認した。
各々の精製プラスミドに挿入されている抗体重鎖または抗体軽鎖の各々をコードするｃＤＮＡの塩基配列を、常法に従って、ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ（３７７Ａ；ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）及びＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  Ａｕｔｏ  Ａｓｓｅｍｂｌｅｒ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を用いて決定した。
なお、本配列決定においては、下記のプライマーを使用した。
【０１９３】
＜重鎖ｃＤＮＡの配列解析に用いたプライマー＞
Ｍ１３Ｒプライマー（配列番号８；ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ製）、ＥｘｃｅｌｌＥ（配列番号６）、１３６Ｈ（配列番号９）、１３８／９Ｈ（配列番号１０）、ＡＩＬＩＭＨＣ１（配列番号１１）、ＨＣｃ１（配列番号１２）、ＮＨＣｃ２（配列番号５）、ＨＣｃ７（配列番号１３）、ＨＣｃ８（配列番号１４）、ＨＣｃ３（配列番号１５）、ＨＣｃ４（配列番号１６）、ＨＣｃ６（配列番号１７）、ＨＩＧＨＣ（配列番号１８）、ＨＣｃ９（配列番号１９）、ＨＣｃ５（配列番号２０）及びｐｏｌｙＡ（配列番号２１）。
＜軽鎖ｃＤＮＡの配列解析に用いたプライマー＞
Ｍ１３Ｒプライマー（配列番号８；ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ製）、ＥｘｃｅｌｌＥ（配列番号６）、ＡＩＬＩＭＬＣ１（配列番号２２）、ＡＩＬＩＭＬＣ２（配列番号２３）、ＬＣｃ１（配列番号２４）、ｃｋ１１７（配列番号７）、ＨＩＧＬＣ（配列番号４）、ＬＣｃ２（配列番号２５）、ＨＩＫ（配列番号２６）、及びｐｏｌｙＡ（配列番号２１）。
前記の各々のハイブリドーマが産生するヒトＡＩＬＩＭに対するヒトモノクローナル抗体の重鎖をコードするｃＤＮＡ配列、軽鎖（Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎ）をコードするｃＤＮＡ配列、並びに該各々のｃＤＮＡ配列から演繹されるアミノ酸配列を下記のとおり配列表に示した。
【０１９４】
クローンＡＩＨ５Ｄ３（ＪＭａｂ−１３６）
＜重鎖＞
ＤＮＡ配列  ：配列番号２７（シグナル配列：塩基番号６９乃至１２５、Ｖ領域：塩基番号１２６乃至４１９）
アミノ酸配列：配列番号２８（シグナル配列：アミノ酸番号１乃至１９、可変領域：アミノ酸番号２０乃至１１８を含む。）
＜軽鎖＞
ＤＮＡ配列  ：配列番号２９（シグナル配列：塩基番号３９乃至１０４、Ｖ領域：塩基番号１０５乃至３８６）
アミノ酸配列：配列番号３０（シグナル配列：アミノ酸番号１乃至２２、可変領域：アミノ酸番号２３乃至１１６を含む）
【０１９５】
クローンＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）
＜重鎖＞
ＤＮＡ配列  ：配列番号３１（シグナル配列：塩基番号９４乃至１５０、Ｖ領域：塩基番号１５１乃至４４１を含む。）
アミノ酸配列：配列番号３２（シグナル配列：アミノ酸番号１乃至１９、可変領域：アミノ酸番号２０乃至１１６を含む。）
＜軽鎖＞
ＤＮＡ配列  ：配列番号３３（シグナル配列：塩基番号２８乃至８７、Ｖ領域：塩基番号８８乃至３７５を含む。）
アミノ酸配列：配列番号３４（シグナル配列：アミノ酸番号１乃至２０、可変領域：アミノ酸番号２１乃至１１６を含む）
【０１９６】
クローンＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９）
＜重鎖＞
ＤＮＡ配列  ：配列番号３５（シグナル配列：塩基番号９６乃至１５２、Ｖ領域：塩基番号１５３乃至４４３）
アミノ酸配列：配列番号３６（シグナル配列：アミノ酸番号１乃至１９、可変領域：アミノ酸番号２０乃至１１６を含む。）
＜軽鎖＞
ＤＮＡ配列  ：配列番号３７（シグナル配列：塩基番号３３乃至９２、Ｖ領域：塩基番号９３乃至３８０）
アミノ酸配列：配列番号３８（シグナル配列：アミノ酸番号１乃至２０、可変領域：アミノ酸番号２１乃至１１６を含む。）
【０１９７】
決定された各々のＤＮＡ配列を基に、遺伝子配列解析ソフトウェアーを用いて、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎらにより作成されたヒトイムノグロブリンの可変領域遺伝子のライブラリーＶ  ＢＡＳＥ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ，  Ｖｏｌ．１６，  Ｎｏ．５，  ｐ．２３７−２４２，  １９９５）を検索した。
その結果、上記ヒトモノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の各々のＶ領域遺伝子は、各々下記のセグメントから構成されていた。
【０１９８】
＜重鎖Ｖ領域遺伝子＞
クローンＡＩＨ５Ｄ３（ＪＭａｂ−１３６）：    １−０２
クローンＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）：    ３−１３
クローンＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９）：    ３−１３
＜軽鎖Ｖ領域遺伝子＞
クローンＡＩＨ５Ｄ３（ＪＭａｂ−１３６）：    Ｌ５
クローンＡＩＩ２８９（ＪＭａｂ−１３８）：    Ａ２７
クローンＡＩＩ３９４（ＪＭａｂ−１３９）：    Ａ２７
【０１９９】
実施例１１  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の遅延型過敏症（ｄｅｌａｙｅｄ−ｔｙｐｅ
ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ；ＤＴＨ）の抑制効果
生体にとって有害な抗原（ウイルス、細菌及び寄生虫などの病原微生物や外来異物など）を排除しようとする生体の免疫応答システムは、自然免疫応答と獲得免疫応答（後天性免疫）に大別される。
前者は、食細胞（多形核白血球、単球、マクロファージなど）による貪食、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による攻撃、及び補体による抗原のオプソニン化などのような非特異的な認識による排除機構である。
後者の獲得免疫応答は、該抗原に対する特異性を獲得（活性化）したリンパ球（主にＴ細胞、Ｂ細胞）による排除機構である。
獲得免疫応答は、細胞性免疫と体液性免疫にさらに大別される。
細胞性免疫は、抗体依存性の体液性免疫とは異なり、主としてＴ細胞が直接標的である抗原に作用して発現される免疫反応である。細胞性免疫は、ウイルスや腫瘍に対する免疫反応、組織や臓器の移植後に惹起される免疫反応、ある種の薬物アレルギー、及び一部の自己免疫疾患などに関与していることが分かっている。
【０２００】
この細胞性免疫の最も代表的な現象として、ツベルクリンアレルギー（ツベルクリン過敏症とほぼ同義）がよく知られている。ツベルクリンアレルギーは、結核菌の感染にともなって成立する遅延型アレルギーであり、結核菌の培養液中に生成されるツベルクリン蛋白質を生体の皮内に注射して免疫反応を惹起することにより誘導される。
遅延型アレルギーは、抗原により感作されたＴ細胞（抗原を記憶したメモリーＴ細胞）により仲介されるアレルギーであり、抗原に感作された生体は同抗原と再接触した際に起こる当該メモリーＴ細胞による炎症を伴うアレルギー反応に発現に２４乃至４８時間を要することから遅延型と呼ばれている。
遅延型アレルギーの代表例であるツベルクリンアレルギーの現象は、動物が結核菌による感作が成立しているか否かの有無の診断のための「ツベルクリンテスト」に普遍的に応用されている。即ち、結核菌の培養液から精製したツベルクリン蛋白質である精製ツベルクリン（ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ；  ＰＰＤ；一般診断においては、０．０５μｇ／０．１ｍｌ（２．５ＴＵ）を０．１ｍｌ））を動物の皮内に投与し、投与後４８時間に投与部位の皮膚の発赤の長径を測定してその長径により結核菌の感染の有無を診断する方法である。発赤の長径が４ｍｍまでを陰性、４〜９ｍｍを疑陽性、及び１０ｍｍ以上を陽性としている。
【０２０１】
細胞性免疫により惹起される遅延型アレルギーとしては、上記の結核菌由来ツベルクリンアレルギーのような感染病原体抗原に対するアレルギーの他に、微量の蛋白質などに対して一過性に出現するジョーンズ・モート型遅延型アレルギー、塩化ピクリルなどの薬物や漆などの植物毒に対する接触性アレルギー、あるいは同種移植片の移植で見られる移植拒絶に関与するアレルギーなどが挙げられる。
【０２０２】
本試験においては、上述のツベルクリンテストを応用して、抗ＡＩＬＩＭ抗体の遅延型過敏症（遅延型アレルギー）の抑制効果を評価した。試験は下記のようにして行った。
ウシ型結核菌の弱毒生菌であるＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ  ｄｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ  ｅｔ  Ｇｕｅｒｉｎ）の免疫感作が成立しているのカニクイザル（雄、体重：６．０乃至８．５ｋｇ、環境バイリス研究所製）の各々（各群３匹）を塩酸ケタミン（１０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内投与）で麻酔した後、下記のいずれかの試験試料を、０．１ｍｌ／１投与部位（６投与部位／匹）の濃度で胸部表皮内に投与した。なお、試料を投与する各部位の間隔を３ｃｍ以上離した。
【０２０３】
（１）抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ−１３６；０．２ｍｇ；１０μｇ／１投与部位）とツベルクリン（４μｇ／生理食塩水１ｍｌ）の１：１の混合溶液。
（２）抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ−１３６；２ｍｇ；１００μｇ／１投与部位）とツベルクリン（４μｇ／生理食塩水１ｍｌ）の１：１の混合溶液。
（３）対照としてのリン酸緩衝液（ＰＢＳ（−））。
（４）陽性対照としての市販のステロイド抗炎症剤プレドニゾロン（Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ；０．２ｍｇ；１０μｇ／１投与部位）とツベルクリン（４μｇ／生理食塩水１ｍｌ）の１：１の混合溶液。
（５）陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（実施例＜２−２＞；０．２ｍｇ；１０μｇ／１投与部位）とツベルクリン（４μｇ／生理食塩水１ｍｌ）の１：１の混合溶液。。
各試料の投与から２４時間後に各投与部位の発赤の長径及び短径を測定し発赤の面積を算出した。
結果を図７２に示した。
この結果、抗ＡＩＬＩＭ抗体を投与したいずれの群においても、対照及び陰性対照に比べ、遅延型アレルギーによる発赤が有意に抑制された。また、その抑制効果は、陽性対照であるステロイド性抗炎症剤と同程度であった。
【０２０４】
実施例１２  移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）患者の各組織でのＡＩＬＩＭの発現の解析
ドナーから同種移植を受けた後に臨床的に急性または慢性の移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ；ＧＶＨＤ）と診断されたレシピエントである患者から採取した種々の生検組織でのＡＩＬＩＭの発現の有無を、常法に従って前記実施例で作製した抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ−３６）を用いたＨＥ染色法により組織染色することにより分析した。
急性ＧＶＨＤ患者（２８例）の種々組織から採取した３３検体並びに慢性ＧＶＨＤ患者（５例）より５検体について解析した。
その結果、急性ＧＶＨＤ患者については、皮膚組織では２９検体中の１５検体がＡＩＬＩＭ陽性、胃組織では３検体中１検体がＡＩＬＩＭ陽性、また結腸組織では１検体中１検体がＡＩＬＩＭ陽性であった。慢性ＧＶＨＤ患者においては、皮膚組織では３検体中１検体がＡＩＬＩＭ陽性であり、また結腸組織では２検体中２検体がＡＩＬＩＭ陽性であった。さらに、リンパ球細胞の浸潤が著明な検体では、１３検体中１０検体がＡＩＬＩＭ陽性であった。
【０２０５】
実施例１３  抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のサルＴ細胞に対するコスティミュレイトリーシグナル伝達活性
実施例７では、本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体が、ヒトＴ細胞反応の制御能、具体的にはＡＩＬＩＭを介したコスティミュレイトリーシグナルの細胞内への伝達を制御することによるヒトＴ細胞を増殖促進させることを実証した。そこで、、本試験においては該ヒトモノクローナル抗体のサルのＴ細胞に対する細胞増殖促進能の有無を実施例７と同様にして解析した。
【０２０６】
＜１３−１＞  抗体の希釈
抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＳＰ３４（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）を、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で最終濃度１μｇ／ｍｌとなるように希釈した。
前記で調製した抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭＡｂ１３６を、ＰＢＳで最終濃度が４０μｇ／ｍｌとなるように希釈した後、ＰＢＳでさらに各種濃度に希釈した（４０μｇ／ｍｌ乃至０．０６４μｇ／ｍｌ）。
【０２０７】
＜１３−２＞  抗体によりマイクロプレートのコーティング
９６ウェルマイクロプレート（複数枚）の各ウェルに、抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＳＰ３４（１μｇ／ｍｌを２５μｌ／ｗｅｌｌ）及び抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭＡｂ１３６（４０μｇ／ｍｌ乃至０．０６４μｇ／ｍｌを２５μｌ）、３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、抗体を捨て、各ウェルをＰＢＳで３回洗浄した。洗浄後、各ウェルに、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（１００μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、３７℃で１時間インキュベーションして、上記抗体でプレートの各ウェルをコーティングした。
なお、対照抗体として、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに、抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ２３とも別称する。前記実施例）を用いて、上記と同様にしてプレートのコーティングを行った。
これらの抗体コーティングマイクロプレートを以下の試験で用いた。
【０２０８】
＜１３−３＞  サルＴ細胞懸濁液の調製
カニクイザルの末梢血を採取し、ＮｙｃｏＰｒｅｐ１．０７７Ａ（Ｎｙｃｏｍｅｄ製）を用いた密度勾配遠心により単核球を分画した。実験操作マニュアルに従い、抗ヒトＣＤ４抗体Ｍ−Ｔ４７７（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）、抗ヒトＣＤ８抗体ＲＰＡ−Ｔ８（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）、抗マウスＩｇＧマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）及びマグネティックソーターを用いて、該カニクイサル単核球からサルＴ細胞を分離取得した。該Ｔ細胞の細胞数を、血球計算盤により計数した。該サルＴ細胞を、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中に懸濁しサルＴ細胞懸濁液（１×１０６細胞／ｍｌ）を調製した。
【０２０９】
＜１３−４＞  細胞培養
（１）抗ヒトＣＤ３抗体と抗ヒトＡＩＬＩＭ抗体をコートしたマイクロプレートでの培養前記の抗体コーティングマイクロプレートの各ウェルに、サルＴ細胞懸濁液（１００μｌ／ｗｅｌｌ；１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で２日間培養した。
培養後、各々のマイクロプレートを以下の試験に用いた。
【０２１０】
＜１３−５＞  Ｔ細胞増殖活性の測定
前記の培養後の各プレートの各ウェルに、ｍｅｔｈｙｌ［３Ｈ］ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（０．５μＣｉ／ｗｅｌｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で６時間インキュベーションした。培養後、セルハーベスターを用いて、細胞をＧＦ／Ｃフィルター（Ｐａｃｋａｒｄ製）上にトラップした。次いで、フィルターを、４０℃で３時間以上乾燥させた後、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔｉ  ０（２０μｌ／ｗｅｌｌ；Ｐａｃｋａｒｄ製）を加えた。βカウンター（ＴＯＰ  ＣＯＵＮＴ）を用いて、フィルター上にトラップされた細胞に取込まれている３Ｈの放射活性を測定し、培養後のＴ細胞の増殖の程度を解析した。
結果を図７３に示す。
本試験の結果、抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体（ヒトモノクローナル抗体またはマウスモノクローナル抗体）を抗ヒトＣＤ３抗体とともにコートしたマイクロプレートを用いた場合には、サルＴ細胞の濃度依存的な有意な増殖が認められた。
この結果は、また本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体が、サルのＡＩＬＩＭにも結合しサルのＡＩＬＩＭの機能を制御する活性を有することを示すものである。
【０２１１】
実施例１４  ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定、定量する方法の
構築
ＡＩＬＩＭ（ＩＣＯＳ）に結合する物質あるいはＡＩＬＩＭリガンド（Ｂ７ｈ／Ｂ７ＲＰ１／ＧＬ５０／ＬＩＣＯＳ）を同定または定量可能なＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ａｓｓａｙ）を構築した。
下記に一例として詳述する方法は、当該物質が可溶性ヒトＡＩＬＩＭ（ｈＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ）と可溶性ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）の結合を阻害する程度をＥＬＩＳＡにより評価することを原理とする。
【０２１２】
＜１４−１＞  試料
以下の試料を用いた。
（１）Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．製）。
（２）可溶性ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ヒトＢ７ｈの細胞外領域とヒトＩｇＧ１の定常領域とからなる融合タンパク）
次項＜１４−２＞のようにして作製した。
（３）ビオチン標識可溶性ＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ
本発明者の一人である手塚の他の先の出願（日本国特許出願公開１１−２９５９９号公報（実施例１６（２））及び国際特許出願公開ＷＯ９８／３８２１６号公報（実施例１６（２））の方法により調製したものをさらに精製することにより調製した。
（４）抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ−１３６；上記）。
（５）抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（陰性対照抗体；ＪＭａｂ−２３；上記）。
（６）リン酸緩衝液（ＰＢＳ（−）；日研生物製）。
（７）ＰＲＭＩ１６４０培地（日研生物製）。
（８）牛胎児血清（ＦＣＳ；ＪＲＨ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）。
（９）３０％牛血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ製）。
（１０）Ｔｗｅｅｎ２０（ＢｉｏＲａｄ製）。
（１１）ＴＭＢ＋  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ  （Ｄａｋｏ製）。
【０２１３】
＜１４−２＞  可溶性ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ヒトＢ７ｈの細胞外領域とヒトＩｇＧ１の定常領域
との融合蛋白（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ））の調製
前述の実施例と同様にしてヒト末梢血由来の単核球からｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調製した。
調製したｔｏｔａｌ  ＲＮＡ（５μｇ）を鋳型とし、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｐｒｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｔｈｅｓｉｓ  （ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ製）を用いてｃＤＮＡを合成した。次いで、ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ）の細胞外領域をコードするｃＤＮＡをＰＣＲで増幅するために、末端にＸｈｏＩ切断部位を有する５’プライマー（５’−ＧＡＧＧＴＣＴＣＣＧＣＣＣＴＣＧＡＧＡＴＧＣＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＴＣＣ−３’、配列番号３９）及びＢａｍＨＩ切断部位を有する３’プライマー（５’−ＣＡＣＡＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＧＧＣＣＧＣＧ−３’、配列番号４０）を設計、合成した。得られたｃＤＮＡを鋳型として該プライマーを用いてＰＣＲを行い、両端にＸｈｏＩ及びＢａｍＨＩ切断部位を各々有するヒトＢ７ｈの細胞外領域をコードするｃＤＮＡを含むｃＤＮＡを調製した。得られたＰＣＲ産物をＸｈｏＩ及びＢａｍＨＩで消化し、アガロースゲル電気泳動し、目的の細胞外領域をコードするｃＤＮＡ断片と予測される約７２０ｂｐのサイズのバンドを単離した。単離されたｃＤＮＡ断片を、ＸｈｏＩ及びＢａｍＨＩで切断したプラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ製）中にサブクローニングした。自動蛍光ＤＮＡシークエンサー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）による配列解析により、該ｃＤＮＡ断片がヒトＢ７ｈの細胞外領域をコードする領域を含むことを確認した。
【０２１４】
一方、融合パートナーとしてのヒトＩｇＧ１のＦｃをコードするＤＮＡは、プラスミ  ド（Ｃｅｌｌ，  Ｖｏｌ．６１，  ｐ．１３０３−１３１３，  １９９０参照。マサチューセッツ・ゼネラル・ホ  スピタルのシード博士（Ｂ．  Ｓｅｅｄ）らにより作製）を、ＢａｍＨＩ及びＸｂａＩで消化することによりＢａｍＨＩ−ＸｂａＩＤＮＡ断片（約１．３ｋｂ）として切り出した。この断片には、ヒトＩｇＧ１のヒンジ領域、Ｃγ１２、及びＣγ１３の各々コードするエクソンが含まれる。
前記のようにして作製したヒトＢ７ｈ（ｈＢ７ｈ）の細胞外領域をコードするＸｈｏＩ−ＢａｍＨＩ断片、及びヒトＩｇＧ１のＦｃ（「ＩｇＦｃ」と略記する）をコードするエクソンを含むＢａｍＨＩ−ＸｂａＩ断片を、ＸｈｏＩ及びＸｂａＩで切断したプラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ製）中にサブクローニングした。
次いで、該プラスミドをＸｈｏＩ及びＸｂａＩで消化し、ヒトＢ７ｈの細胞外領域とヒトＩｇＦｃとからなる融合ＤＮＡを含む約１．８ｋｂのＤＮＡ断片を切りだした。この融合ＤＮＡ断片を、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼを用いて、発現ベクターｐＭＥ１８Ｓ（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．２０，  Ｎｏ．１，  ｐ．２７−３２，  １９９０、及び実験医学（別冊）：「遺伝子工学ハンドブック」、羊土社、第１０１−１０７頁、１９９２年）のＸｈｏＩ及びＸｂａＩ部位に挿入し、プラスミドｐｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃを構築した。
【０２１５】
エレクトロポレーション法により、１０％ウシ胎児血清及びアンピシリンを含むＤＭＥＭ培地中でサブコンフルエントに単層培養したＣＯＳ７細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５１）を、プラスミドｐｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃで形質転換し、形質転換細胞を取得した。
形質転換細胞を、無血清ＡＳＦ１０４培地中で７２時間培養することによりｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃを発現させた。
ＨＢ７ｈ−ＩｇＦｃは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅアフィニティ−カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）  を用いて次のように精製した。
前記培養上清を遠心分離して得た遠心上清を、予め結合緩衝液（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ）で平衡化したＰｒｏｔｅｉｎ  Ｇ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅアフィニティーカラムに加えた。次いで、カラムを結合緩衝液で洗浄した後、溶出緩衝液（ｅｌｕｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）で溶出させた。溶出液を回収し、リン酸緩衝液で２回以上外液交換することにより透析し、精製ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃを得た。
【０２１６】
＜１４−３＞  抗体及び可溶性ヒトＡＩＬＩＭ（ｈＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ）の希釈及び、それらの反応抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体（ＪＭａｂ−１３６）及び陰性対照抗体である抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体（ＪＭａｂ−２３）は各々、２０μｇ／ｍｌの溶液を１１段階に希釈した後、各サンプル２００μｌに１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２００μｌ）を加えて混和し、種々濃度の溶液を調製した。調製した種々濃度の溶液の各々に、ビオチン標識ｈＡＩＬＩＭ−ＩｇＦＣ（２μｌ／ｔｕｂｅ；終濃度１μｇ／ｍｌ）を添加、混和した後、室温で３０分間インキュベートした。
【０２１７】
＜１４−４＞  抗ＡＩＬＩＭモノクローナル抗体によるｈＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃとｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃの結合の阻
害活性の測定
９６ウェルマイクロプレートにｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ（５０μｌ／ｗｅｌｌ（８００ｎｇ／ｗｅｌｌ））を加え、プレートをシールした後、３７℃で１時間インキュベートした。各ウェルから溶液を除去し、ＰＢＳ（１２０μｌ）で３回洗浄した。次いで、各ウェルに０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（１００μｌ／ｗｅｌｌ）を加え未反応部分をブロックし、プレートをシールした後、３７℃で１時間インキュベートした。反応後、溶液を除去し、ＰＢＳ（１２０μｌ）で３回洗浄した。次いで、＜１４−３＞で調製した各試料（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、プレートをシールした後３７℃で１時間インキュベートした。各ウェルから溶液を除去し、３７℃に温めた１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（１２０μｌ）で３回洗浄した。次いで、各ウェルに３．７％ホルマリン含有ＰＢＳ（１００μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、氷上で５分間インキュベートした。各ウェルから溶液を除去した後、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（１２０μｌ）で３回洗浄した。次いで、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、プレートをシール後室温で３０分間インキュベートした。各ウェルから溶液を除去し、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（１２０μｌ）で３回洗浄した。次いで、ＴＭＢ＋ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、室温で２０分間インキュベートした。次いで、２Ｎ硫酸（５０μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、反応を停止させ、ＴＨＥＲＭＯ  ｍａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ製）を用いて、４５０ｎｍでの吸光度を測定した。
結果を図７４乃至図７６に示す。
この結果、ｈＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃとｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃの結合の抗ＡＩＬＩＭ抗体による用量依存的な阻害活性が測定された。
従って、本方法に例示されるようなアッセイ系を用いれば、ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質（例えば、抗体または合成低分子化合物）をスクリーニングし、同定することができることが示された。
【０２１８】
実施例１５  ＡＩＬＩＭ−ＡＩＬＩＭリガンドを介するコスティミュレイトリーシグナル伝達によるヒトＴ細胞の増殖に対する抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の抑制活性
本発明の抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体が、ヒトＴ細胞上のＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達を制御する能力を有するか否かを、ヒトＴ細胞をＡＩＬＩＭリガンド（Ｂ７ｈ／Ｂ７ＲＰ１／ＧＬ５０／ＬＩＣＯＳ）と接触させて誘導される細胞増殖の該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による阻害効果を測定することにより解析した。
【０２１９】
＜１５−１＞  抗体等の希釈
抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８００１）を、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で最終濃度８μｇ／ｍｌとなるように希釈した。
前記で調製した可溶性ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）を、ＰＢＳで最終濃度が４０μｇ／ｍｌとなるように希釈した後、ＰＢＳでさらに各種濃度に希釈した（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００６４μｇ／ｍｌ）。
【０２２０】
＜１５−２＞  抗体によるマイクロプレートのコーティング
９６ウェルマイクロプレート（複数枚）の各ウェルに、（１）抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３（８μｇ／ｍｌを２５μｌ／ｗｅｌｌ）及びｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００６４μｇ／ｍｌを２５μｌ）を加え、３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、抗体を捨て、各ウェルをＰＢＳで３回洗浄した。洗浄後、各ウェルに、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（１００μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、３７℃で１時間インキュベーションして、プレートの各ウェルをコーティングした。
【０２２１】
＜１５−３＞  ヒトＴ細胞懸濁液の調製
健常人の末梢血を採取し、ＬｙｍｐｈｏＰｒｅｐ（Ｎｙｃｏｍｅｄ製）を用いた密度勾配遠心により単核球を分画した。実験操作マニュアルに従い、Ｐａｎ−Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）及びマグネティックソーターを用いて、該ヒト単核球からヒトＴ細胞を分離取得した。該Ｔ細胞の細胞数を、血球計算盤により計数した。該ヒトＴ細胞を、抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３６（２０μｇ／ｍｌ）を加えた１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中に懸濁しヒトＴ細胞懸濁液（１×１０６細胞／ｍｌ）を調製し、室温で３０分間インキュベートした。
なお、陰性対照抗体には、抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体ＪＭＡｂ２３（２０μｇ／ｍｌ）を用いた。
【０２２２】
＜１５−４＞  細胞培養
前記のとおりにして抗ヒトＣＤ３抗体とｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃでコートしたマイクロプレート各ウェルに、ヒトＴ細胞懸濁液（１００μｌ／ｗｅｌｌ；１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で３日間培養した。
【０２２３】
＜１５−５＞  Ｔ細胞増殖活性の測定
前記の培養後の各プレートの各ウェルに、ｍｅｔｈｙｌ［３Ｈ］ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（０．５μＣｉ／ｗｅｌｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で６時間インキュベーションした。培養後、セルハーベスターを用いて、細胞をＧＦ／Ｃフィルター（Ｐａｃｋａｒｄ製）上にトラップした。次いで、フィルターを、４０℃で３時間以上乾燥させた後、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔｉ  ０（２０μｌ／ｗｅｌｌ；Ｐａｃｋａｒｄ製）を加えた。βカウンター（ＴＯＰ  ＣＯＵＮＴ）を用いて、フィルター上にトラップされた細胞に取込まれている３Ｈの放射活性を測定し、培養後のヒトＴ細胞の増殖の程度を解析した。
結果を図７７に示す。
本試験の結果、ヒトＢ７ｈ−ＩｇＦｃ濃度依存的なヒトＴ細胞の有意な増殖が観察された（陰性対照抗体を用いた試験）。さらに、当該ヒトＴ細胞の増殖が、抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体により有意に抑制された。
【０２２４】
実施例１６  ＡＩＬＩＭ−ＡＩＬＩＭリガンドを介するコスティミュレイトリーシグナル伝達によるサルＴ細胞の増殖に対する抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の抑制活性
前記実施例１５の試験をヒトＴ細胞の代わりにサルのＴ細胞を用いて同様にして行った。
【０２２５】
＜１６−１＞  抗体等の希釈
抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＳＰ３４（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）を、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で最終濃度１μｇ／ｍｌとなるように希釈した。
前記で調製したヒトＢ７ｈ−ＩｇＦｃを、ＰＢＳで最終濃度が４０μｇ／ｍｌとなるように希釈した後、ＰＢＳでさらに各種濃度に希釈した（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００６４μｇ／ｍｌ）。
【０２２６】
＜１６−２＞  抗体によりマイクロプレートのコーティング
９６ウェルマイクロプレート（複数枚）の各ウェルに、（１）抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体ＳＰ３４（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）（１μｇ／ｍｌを２５μｌ／ｗｅｌｌ）及びヒトＢ７ｈ−ＩｇＦｃ（４０μｇ／ｍｌ乃至０．００６４μｇ／ｍｌを２５μｌ）を加え、３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、抗体を捨て、各ウェルをＰＢＳで３回洗浄した。洗浄後、各ウェルに、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（１００μｌ／ｗｅｌｌ）を加え、３７℃で１時間インキュベーションして、プレートの各ウェルをコーティングした。
【０２２７】
＜１６−３＞  サルＴ細胞懸濁液の調製
カニクイザルの末梢血を採取し、ＮｙｃｏＰｒｅｐ１．０７７Ａ（Ｎｙｃｏｍｅｄ製）を用いた密度勾配遠心により単核球を分画した。実験操作マニュアルに従い、抗ヒトＣＤ４抗体Ｍ−Ｔ４７７（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）、抗ヒトＣＤ８抗体ＲＰＡ−Ｔ８（ＢＤ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）、抗マウスＩｇＧマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）及びマグネティックソーターを用いて、該カニクイサル単核球からサルＴ細胞を分離取得した。該Ｔ細胞の細胞数を、血球計算盤により計数した。該サルＴ細胞を、抗ヒトＡＩｌＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６（２０μｇ／ｍｌ）を加えた１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中に懸濁しサルＴ細胞懸濁液（１×１０６細胞／ｍｌ）を調製し、室温で３０分間インキュベートした。
なお、陰性対照抗体として抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−２３（２０μｇ／ｍｌ）を用いた。
【０２２８】
＜１６−４＞  細胞培養
前記のとおりにして抗ヒトＣＤ３抗体とｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃでコートしたマイクロプレート各ウェルに、サルＴ細胞懸濁液（１００μｌ／ｗｅｌｌ；１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で３日間培養した。
【０２２９】
＜１６−５＞  Ｔ細胞増殖活性の測定
前記の培養後の各プレートの各ウェルに、ｍｅｔｈｙｌ［３Ｈ］ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（０．５μＣｉ／ｗｅｌｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を加え、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で６時間インキュベーションした。培養後、セルハーベスターを用いて、細胞をＧＦ／Ｃフィルター（Ｐａｃｋａｒｄ製）上にトラップした。次いで、フィルターを、４０℃で３時間以上乾燥させた後、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔｉ  ０（２０μｌ／ｗｅｌｌ；Ｐａｃｋａｒｄ製）を加えた。βカウンター（ＴＯＰ  ＣＯＵＮＴ）を用いて、フィルター上にトラップされた細胞に取込まれている３Ｈの放射活性を測定し、培養後のＴ細胞の増殖の程度を解析した。
結果を図７８に示す。
本試験の結果、ヒトＢ７ｈ−ＩｇＦｃ濃度依存的なサルＴ細胞の有意な増殖が観察された（陰性対照抗体を用いた試験）。さらに、当該サルＴ細胞の増殖が、抗ヒトＡＩＬＩＭモノクローナル抗体により有意に抑制された。
【０２３０】
【発明の効果】
本発明のヒトＡＩＬＩＭに結合するヒトモノクローナル抗体は、ヒトに由来する抗体であることから、マウス由来の抗体等の非ヒト哺乳動物由来の抗体からなる抗体医薬品の治療上の大きな問題点（副作用）であったヒトに対する抗原性、即ちＨＡＭＡ（Ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ）に起因する宿主の重篤な免疫拒絶反応を全く惹起しないことから、抗体の医薬品としての価値を劇的に増大させるものである。
【０２３１】
従って、本発明のＡＩＬＩＭ（特に、ヒトＡＩＬＩＭ）に対するヒトモノクローナル抗体及び該ヒトモノクローナル抗体からなる医薬組成物は、ＨＡＭＡに起因する宿主の免疫拒絶反応を惹起することなく、ＡＩＬＩＭを発現する細胞へのＡＩＬＩＭを介するコスティミュレイトリーシグナル（副刺激シグナル）の伝達が関与する種々の生体反応（例えば、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の細胞増殖、ＡＩＬＩＭを発現する細胞によるサイトカインの産生、ＡＩＬＩＭを発現する細胞の免疫細胞溶解（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ）若しくは細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）、及びＡＩＬＩＭを発現する細胞に対する抗体依存性細胞障害を誘導する活性など）を制御するための医薬品として、及び／または該ＡＩＬＩＭを介するシグナル伝達が関与する種々の疾患の発症及び／または進行を抑制、阻止し、該疾患を治療または予防することが可能である。
【０２３２】
具体的には、本発明の抗ＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体若しくはその一部を活性生物とする医薬品を提供することにより、例えば、自己免疫疾患またはアレルギー性疾患（特には、細胞性免疫により惹起される自己免疫疾患や遅延型アレルギー）に分類される種々の疾患（例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性皮膚疾患である扁平苔癬、全身性エリテマトーデス、インスリン依存性糖尿病及び乾癬など）；  関節症（例えば、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；  ＲＡ）、変形性関節症（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ；  ＯＡ））、炎症（例えば、肝炎）；  移植片対宿主反応（ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｒｅａｃｔｉｏｎ；  ＧＶＨ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）；  移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ；  ＧＶＨＤ）；  組織（皮膚、角膜、骨などの組織）若しくは臓器（肝臓、心臓、肺、腎臓、膵臓など）の移植（同種移植または異種移植）に伴う免疫拒絶反応；  外来抗原若しくは自己抗原により惹起される免疫反応（例えば、該抗原に対する抗体の産生、細胞増殖、サイトカインの産生など）；  及び腸管免疫の異常に起因する可能性を有する疾患（具体的には、炎症性腸疾患（特には、クローン病及び潰瘍性大腸炎）や食餌性アレルギー）などの抑制、または治療及び予防が可能となる。
【０２３３】
本発明の医薬組成物はまた、抗炎症薬としての種々のステロイド剤が適用されているような任意の炎症、例えば、種々の関節炎（関節リウマチ、変形性関節症など）に伴う炎症、肺炎、肝炎（ウイルス性の肝炎を含む）、感染症に伴う炎症、炎症性腸疾患、腸炎、腎炎（糸球体腎炎、腎線維症に伴う炎症）、胃炎、血管炎、膵炎、腹膜炎、気管支炎、心筋炎、脳炎、虚血後再潅流障害（心筋虚血再潅流障害など）における炎症、組織や臓器の移植後免疫拒絶に起因する炎症、火傷、種々の皮膚の炎症（乾癬、アレルギー性接触性皮膚炎、慢性炎症性皮膚疾患である扁平苔癬など）、多発性臓器障害における炎症、ＰＴＣＡやＰＴＣＲの術後における炎症、及び動脈硬化症に伴う炎症、自己免疫性甲状腺炎などの治療または予防を可能とする。
さらには、上記の組織や臓器の移植に伴う免疫拒絶反応の抑制／治療分野においては、本発明の医薬組成物を、そのような移植治療での免疫拒絶反応の抑制のために施されている既存の免疫抑制剤と併用することにより当該既存薬単独での移植片拒絶反応の抑制の効果を増大させることが可能である。
また、本発明の１つであるＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合する物質を同定する方法を用いれば、ＡＩＬＩＭまたはＡＩＬＩＭリガンドに結合して、両者の相互作用によるシグナル伝達を調節することにより上述のような種々の疾患を治療し得る潜在的な活性を有する医薬（化学合成化合物や抗体）をスクリーニングして選択することが可能となる。
【０２３４】
【配列表】
0003597140.tif 000003
0003597140.tif 000004
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【０２３５】「配列表フリーテキスト」
配列番号：１
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＮｏｔＩ−Ｔ。
配列番号：２
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したリンカー配列２０ａｄｐ。
配列番号：３
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したリンカー配列２４ａｄｐ。
配列番号：４
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＩＧＬＣ。
配列番号：５
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＮＨＣｃ２。
配列番号：６
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＥＸｃｅｌｌＥ。
配列番号：７
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ｃｋ１１７。
配列番号：８
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列Ｍ１３Ｒ。
配列番号：９
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列１３６Ｈ。
配列番号：１０
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列１３８／９Ｈ。
配列番号：１１
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＡＩＬＩＭＨＣ１。
配列番号：１２
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ１。
配列番号：１３
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ７。
配列番号：１４
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ８。
配列番号：１５
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ３。
配列番号：１６
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ４。
配列番号：１７
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ６。
配列番号：１８
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＩＧＨＣ。
配列番号：１９
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ９。
配列番号：２０
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＣｃ５。
配列番号：２１
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ｐｏｌｙＡ。
配列番号：２２
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＡＩＬＩＭＬＣ１。
配列番号：２３
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＡＩＬＩＭＬＣ２。
配列番号：２４
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＬＣｃ１。
配列番号：２５
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＬＣｃ２。
配列番号：２６
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列ＨＩＫ。
配列番号：３９
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列。
配列番号：４０
他の情報：人工配列についての記載：人工的に合成したプライマー配列。
【０２３６】
【図面の簡単な説明】
【図１】細胞ＥＬＩＳＡの結果をフローサイトメーターを用いて解析した抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体に対する抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇκ抗体及び抗ヒトＩｇＦｃ抗体の各々の反応性を示す図。
分図（ａ）乃至（ｌ）は各々下記の試験結果を示す。
分図（ａ）：野生型ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を蒔いたマイクロプレートに一次抗体を未添加で二次抗体としてのビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体を加えた場合の試験結果。
分図（ｂ）：野生型ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を蒔いたマイクロプレートに一次抗体を未添加で二次抗体としてのビオチン標識抗ヒトＩｇκ抗体を加えた場合の試験結果。
分図（ｃ）：  野生型ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を蒔いたマイクロプレートに一次抗体を未添加で二次抗体としてのビオチン標識抗ヒトＩｇＦｃ抗体を加えた場合の試験結果。
分図（ｄ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｅ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇκ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｆ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇＦｃ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｇ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｈ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇκ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｉ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇＦｃ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｊ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｋ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇκ抗体を用いた場合の試験結果。
分図（ｌ）：一次抗体として抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９を用い、二次抗体としてビオチン標識抗ヒトＩｇＦｃ抗体を用いた場合の試験結果。
なお、各々の分図中の白抜きカーブは対照抗体である抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図２】
抗ヒトＩｇＧ抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより定量したヒトＩｇＧモノクローナル抗体（標準物質）の検量線を示す図。
縦軸は蛍光強度を示し、横軸は該標準物質の濃度を示す。
【図３】
各種の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｈｕｍａｎ」なる用語は、該ヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図４】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体または陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｈｕｍａｎ」なる用語は、該ヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図５】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｈｕｍａｎ」なる用語は、該ヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図６】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｈｕｍａｎ」なる用語は、該ヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図７】抗マウスＡＩＬＩＭラットモノクローナル抗体のマウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｍｏｕｓｅ」なる用語は、該マウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図８】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体または陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体のマウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｍｏｕｓｅ」なる用語は、該マウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図９】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のマウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｍｏｕｓｅ」なる用語は、該マウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図１０】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のマウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｍｏｕｓｅ」なる用語は、該マウスＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図１１】抗ラットＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｒａｔ」なる用語は、該ラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図１２】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体または陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体のラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｒａｔ」なる用語は、該ラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図１３】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｒａｔ」なる用語は、該ラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図１４】各種の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞または野生型ＣＨＯ細胞への結合活性を示す図。
縦軸は組換え該結合活性の指標となる蛍光強度を示し、横軸は加えた抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＣＨＯ」なる用語は、該野生型ＣＨＯ細胞への結合試験であることを示し、また「ｒａｔ」なる用語は、該ラットＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞への結合試験であることを示す。
【図１５】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＡ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
【図１６】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＡ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
【図１７】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＢ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図１８】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＢ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図１９】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＢ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図２０】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図２１】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２７。
【図２２】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３６。
【図２３】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３７。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３９。
【図２４】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４１。
【図２５】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図２６】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２７。
【図２７】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３６。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３７。
【図２８】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３７。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３９。
【図２９】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４１。
【図３０】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＥ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図３１】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＥ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２７。
【図３２】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＥ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３６。
【図３３】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＥ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３７。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３９。
【図３４】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＥ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４１。
【図３５】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体のみをコーティングしたマイクロプレートを用い、且つ抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体を溶液の状態（液相）で加えた場合の種々の抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図３６】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体のみをコーティングしたマイクロプレートを用い、且つ抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を溶液の状態（液相）で加えた場合の種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２７。
【図３７】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体のみをコーティングしたマイクロプレートを用い、且つ抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を溶液の状態（液相）で加えた場合の種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３６。
【図３８】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体のみをコーティングしたマイクロプレートを用い、且つ抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を溶液の状態（液相）で加えた場合の種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３７。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３９。
【図３９】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体のみをコーティングしたマイクロプレートを用い、且つ抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体を溶液の状態（液相）で加えた場合の種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、健常人「ドナーＤ」由来のＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４１。
【図４０】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＢ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図４１】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＢ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図４２】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＢ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図４３】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ＪＨＣ１」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ヒトＣＥＴＰモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図４４】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２７。
【図４５】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３６。
【図４６】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３７。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１３９。
【図４７】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレート中で培養した健常人「ドナーＣ」由来のＴ細胞の培養上清中に産生されたＩＦＮ−γの量を示す図。
縦軸はＩＦＮ−γの濃度を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
また、各種表記は下記を意味する。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ１４１。
【図４８】健常人「ドナーＡ」のＴ細胞を健常人「ドナーＤ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ＣＤ８０＋８６」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ｍＩｇＧ１」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」：ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図４９】健常人「ドナーＡ」のＴ細胞を健常人「ドナーＤ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２７。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３７。
【図５０】健常人「ドナーＤ」のＴ細胞を健常人「ドナーＢ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ＣＤ８０＋８６」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ｍＩｇＧ１」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」：ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図５１】健常人「ドナーＤ」のＴ細胞を健常人「ドナーＢ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２７。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３７。
【図５２】健常人「ドナーＣ」のＴ細胞を健常人「ドナーＡ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ＣＤ８０＋８６」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ｍＩｇＧ１」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」：ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図５３】健常人「ドナーＣ」のＴ細胞を健常人「ドナーＡ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２７。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３７。
【図５４】健常人「ドナーＥ」のＴ細胞を健常人「ドナーＧ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍＩｇＧ」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＤ８０＋８６  Ａｂ」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」：ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子。
【図５５】健常人「ドナーＥ」のＴ細胞を健常人「ドナーＧ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４１。
【図５６】健常人「ドナーＦ」のＴ細胞を健常人「ドナーＥ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍＩｇＧ」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＤ８０＋８６  Ａｂ」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」：ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子。
【図５７】健常人「ドナーＦ」のＴ細胞を健常人「ドナーＥ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４１。
【図５８】健常人「ドナーＧ」のＴ細胞を健常人「ドナーＦ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍＩｇＧ」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＤ８０＋８６  Ａｂ」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
「ＣＴＬＡ４−Ｉｇ」：ヒトＣＴＬＡ４−ＩｇＦｃキメラ分子。
【図５９】健常人「ドナーＧ」のＴ細胞を健常人「ドナーＦ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４１。
【図６０】健常人「ドナーＡ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＤ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ＣＤ８０＋８６」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ｍＩｇＧ１」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図６１】健常人「ドナーＡ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＤ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２７。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３７。
【図６２】健常人「ドナーＤ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＢ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ＣＤ８０＋８６」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ｍＩｇＧ１」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図６３】健常人「ドナーＤ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＢ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２７。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３７。
【図６４】健常人「ドナーＣ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＡ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ＣＤ８０＋８６」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ｍＩｇＧ１」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図６５】健常人「ドナーＣ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＡ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１２４」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２４。
「１２６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２６。
「１２７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２７。
「１２８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１２８。
「１３５」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３５。
「１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３７」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３７。
【図６６】健常人「ドナーＥ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＧ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍＩｇＧ」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＤ８０＋８６  Ａｂ」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図６７】健常人「ドナーＥ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＧ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４１。
【図６８】健常人「ドナーＧ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＦ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の対照被験物質による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍＩｇＧ」：抗ヒトＣＤ３４／ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体。
「ＣＤ８０＋８６  Ａｂ」：抗ＣＤ８０抗体と抗ＣＤ８６抗体との混合物。
「ＳＡ１２」：抗ヒトＡＩＬＩＭマウスモノクローナル抗体。
【図６９】健常人「ドナーＧ」のＴ細胞を、予めヒトＣＴＬＡ４−Ｉｇキメラ分子の存在下で前培養した健常人「ドナーＦ」のＰＢＭＣと培養した場合の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）での該Ｔ細胞の増殖試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体による該Ｔ細胞の増殖の抑制効果を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該被験物質の濃度を示す。
なお、図中の各種表記は下記を意味する。
「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」：陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体。
「ＪＭａｂ−１３６」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３６。
「１３８」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３８。
「１３９」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１３９。
「１４０」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４０。
「１４１」：抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体ＪＭａｂ−１４１。
【図７０】野生型ＣＨＯ細胞を標的細胞として用いた場合の、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体及び対照抗体の各々のＡＤＣＣ誘導活性を示す図。
縦軸は、該抗体によるＡＤＣＣ誘導活性により起こる細胞障害率を示し、横軸は該抗体の濃度を示す。
【図７１】ヒトＡＩＬＩＭ高発現組換えＣＨＯ細胞を標的細胞として用いた場合の、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体及び対照抗体の各々のＡＤＣＣ誘導活性を示す図。
縦軸は、該抗体によるＡＤＣＣ誘導活性により起こる細胞障害率を示し、横軸は該抗体の濃度を示す。
【図７２】抗ＡＩＬＩＭ抗体による遅延型アレルギーの抑制効果を示す図。
縦軸は、遅延型アレルギー発症の指標である発赤の面積を示し、横軸は被験動物に投与した試料の種類を示す。
【図７３】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体をコーティングしたマイクロプレートを用いた種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体のコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、サルＴ細胞の増殖活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の濃度を示す。
なお、図中の「ａｎｔｉ−ＫＬＨ」は、該抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体の代わりに陰性対照としての抗ＫＬＨヒトモノクローナル抗体を用いた場合の試験結果を示す。
【図７４】種々濃度の可溶性ＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）と可溶性ＡＩＬＩＭ（ＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ）との結合の陰性対照抗体による阻害活性を示す図。
縦軸は阻害活性の指標である吸光度を示し、横軸は可溶性ＡＩＬＩＭの濃度を示す。
【図７５】種々濃度の可溶性ＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）と可溶性ＡＩＬＩＭ（ＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ）との結合の抗ＡＩＬＩＭ抗体による阻害活性を示す図。
縦軸は阻害活性の指標である吸光度を示し、横軸は可溶性ＡＩＬＩＭの濃度を示す。
【図７６】可溶性ＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）と可溶性ＡＩＬＩＭ（ＡＩＬＩＭ−ＩｇＦｃ）との結合の種々濃度の抗ＡＩＬＩＭ抗体による阻害活性を示す図。
縦軸は阻害活性の指標である吸光度を示し、横軸は抗ＡＩＬＩＭ抗体の濃度を示す。
【図７７】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに可溶性ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）をコーティングしたマイクロプレートを用いたコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体によるヒトＴ細胞の増殖阻害活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は抗体濃度を示す。
【図７８】抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体とともに可溶性ヒトＡＩＬＩＭリガンド（ｈＢ７ｈ−ＩｇＦｃ）をコーティングしたマイクロプレートを用いたコスティミュレイトリーシグナル伝達活性測定試験における、種々の抗ヒトＡＩＬＩＭヒトモノクローナル抗体によるサルＴ細胞の増殖阻害活性を示す図。
縦軸は細胞増殖の程度の指標としての［３Ｈ］チミジンの細胞内への取込み量を示し、横軸は抗体濃度を示す。
【図１】
0003597140.tif 000044
【図２】
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【図３】
0003597140.tif 000046
【図４】
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【図５】
0003597140.tif 000048
【図６】
0003597140.tif 000049
【図７】
0003597140.tif 000050
【図８】
0003597140.tif 000051
【図９】
0003597140.tif 000052
【図１０】
0003597140.tif 000053
【図１１】
0003597140.tif 000054
【図１２】
0003597140.tif 000055
【図１３】
0003597140.tif 000056
【図１４】
0003597140.tif 000057
【図１５】
0003597140.tif 000058
【図１６】
0003597140.tif 000059
【図１７】
0003597140.tif 000060
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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