(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
飲食品の液状試料を第四級アミン型イオン交換樹脂と接触させ、次いで酸により溶出させて抗酸化成分を分離することを特徴とする飲食品の抗酸化成分の分離方法。
【請求項２】
液状試料は、液体状の飲食品または固体状飲食品からの抽出液、もしくは固体状飲食品の摩砕物溶液ないしは分散液である請求項１の分離方法。
【請求項３】
請求項１の方法により得られた溶出液をＨＰＬＣにより単離することを特徴とする飲食品の抗酸化成分の分離方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この出願の発明は、飲食品含の抗酸化成分の分離方法に関するものである。さらに詳しくは、この出願の発明は、加工飲食品の安全性の判定や飲食品の成分評価等に有用な、低含有量の抗酸化成分の効率的な濃縮分離方法に関するのである。
【０００２】
【従来の技術と発明の課題】
従来より、反応性に富む活性酸素は、食細胞における病原体の殺菌作用に関与するなど、生体防御の上で重要な役割を担っていることが知られている。またその一方で、活性酸素は、生体を構成する様々な分子に対し、酸化的損傷を与える有害性が強く懸念されている。
【０００３】
このような活性酸素について、この出願の発明者らは、活性酸素種（Ｘ）、活性酸素消去物質（Ｙ）およびメディエーター成分（Ｚ）のＸＹＺ３種混合素により微弱発光が生じ、またこの素が活性酸素消去機構を構成していることを明かにしてきた。
【０００４】
このＸＹＺ微弱発光素における活性酸素消去物質（Ｙ）は抗酸化成分と呼ぶことのできる物質であって、これまでに、これらＹ成分物質としては、カテキン類、没食子酸、フラボノイド、アントシアン等が知られている。
【０００５】
しかしながら、飲食品に含まれる抗酸化成分を分析同定し、その作用を確認するには充分な量でこれら成分を分離することが必要になるが、従来では、溶媒抽出等による極めて面倒で負担の大きな方法が採用されており、しかも分離される量も少ないという問題があった。このため、飲食品に含まれる抗酸化成分が生体硬組織に及ぼす作用を評価することや食生活改善のための試験を存分に行うことができなかった。
【０００６】
そこで、この出願の発明は、上記のような従来の問題点を解消し、効率的に飲食品の抗酸化成分を分離することのできる新しい方法を提供することを課題としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
この出願の発明は、上記の課題を解決するものとして、第１には、飲食品の液状試料を第四級アミン型イオン交換樹脂と接触させ、次いで酸により溶出させて抗酸化成分を分離することを特徴とする飲食品の抗酸化成分の分離方法を提供する。
【０００８】
また、この出願の発明は、第２には、液状試料は、液体状の飲食品または固体状飲食品からの抽出液、もしくは固体状飲食品の摩砕物溶液ないしは分散液である分離方法を提供する。
【０００９】
さらには、この出願の発明は、第３には、上記方法により得られた溶出液をＨＰＬＣにより単離することを特徴とする飲食品の抗酸化成分の分離方法を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
この出願の発明は、上記のとおりの特徴を有するものであるが、以下にその実施の形態について説明する。
【００１１】
この出願の発明が対象とする飲食品についてはその種類に特に限定はなく、液状の飲食品、あるいは固体状（半固体状を含む）の飲食品の様々な形状のものであってよい。
【００１２】
これら各種の飲食品は、液状の試料としてこの発明の方法に供されることになる。液体状飲食品はそのまま試料とされてもよい。固体状（半固体状のものを含む）の飲食品の場合には、水、熱水、あるいは有機溶媒による抽出液でもよいし、あるいは摩砕物の溶液や分散液であってもよい。
【００１３】
液状試料の溶媒は、水もしくは水性媒体であることが好ましい。有機溶媒を使用する場合には極性溶媒であることが望ましい。
【００１４】
液状の試料は、この発明の方法では、まず、第四級アミン型イオン交換樹脂に接触させる。この接触により、飲食品に含有されている抗酸化成分、つまり前記のＹ成分が主として吸着される。そして、同時に、活性酸素成分（Ｘ）やメディエーター成分（Ｚ）の一方あるいは両方とも吸着される。活性酸素成分（Ｘ）やメディエーター成分（Ｚ）とともにその吸着については、第四級アミン型イオン交換樹脂のイオン交換種の構成によって選択性が相違することになる。しかしながら、抗酸化成分（Ｙ）はいずれの場合にも吸着される。
【００１５】
たとえばイオン交換種を四級アミン・Ｃｌ型とする場合には、Ｘ，Ｙ成分を強く吸着し、四級アミン・ＯＨ型とする場合には、Ｙ，Ｚ成分を、四級アミン・ＣＨ３  ＣＯＯＨ型や四級アミン・ＨＣＯＯＨ型とする場合には、Ｘ，Ｙ成分を強く吸着する傾向がある。また、典型的なＺ成分としての没食子酸による四級アミン・没食子酸型とする場合には、Ｙ，Ｚ成分を強く吸着する傾向にある。
【００１６】
四級アミン型イオン交換樹脂としては、四級アンモニウム基を有するポリマー、たとえばスチレン・ジビニルベンゼンコポリマーもしくはその部分架橋したもの等の強塩基アニオン交換樹脂などを用いることができ、四級アミン型のフォームを、Ｃｌ型、ＯＨ型、ＨＣＯＯＨ型、ＣＨ３  ＣＯＯＨ型、ＮＯ３  型等として実際に使用することができる。
【００１７】
四級アミン型イオン交換樹脂と接触させた後に、この発明の方法においては、酸を接触させて、抗酸化成分を溶出させる。
【００１８】
この場合の酸としては、有機酸、無機酸のうちの各種のものでよいが、蟻酸、トリフルオロ酢酸、スルホン酸等の有機酸を用いるのが好ましい。特に蟻酸は、抗酸化成分の溶出を効果的なものとする。溶出に使用する酸の濃度は適宜に広範囲なものとしてもよいが、たとえば蟻酸水溶液の場合には、５〜１５Ｎ、さらには８〜１２Ｎの範囲が良好である。
【００１９】
この発明においては、酸溶出により、選択的に抗酸化成分を取得することができる。そして、このような抗酸化成分の取得については、前記のＸＹＺ系の微弱発光の検出法によって確認することができる。
【００２０】
このような選択的に抗酸化成分の取得が可能とされることによって、飲食品に含有する抗酸化成分の固定や、その作用を評価するための必要量が効率的に、確実に確保されることになる。
【００２１】
さらにまた、必要に応じて、溶出された抗酸化成分は、この出願の発明において、溶出液のＣＬ−ＨＰＬＣにより単離することができる。この場合、ＣＬ溶媒としては、前記のＸおよびＺ成分の水溶液を、またＨＰＬＣ溶媒としては、メタノール等のアルコールと水との混合溶媒をたとえば用いることができる。
【００２２】
そこで以下に実施例を示し、さらに詳しく実施の形態について説明する。もちろん、この出願の発明は以下の例によって何ら限定されることはない。
【００２３】
【実施例】
＜実施例１＞
第四級アミン型イオン交換樹脂ＡＧ１×８（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  ２０００  Ａｌｆｒｅｄ  Ｎｏｂｅｌ  Ｄｒｉｖｅ，  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  ＣＡ  ９４５４７，  ＵＳＡ）を用いて、ビールから抗酸化成分の分離を行った。
【００２４】
また、微弱発光の検出確認のために、ＸＹＺ系微弱発光の標準成分として、Ｘ：１９６ｍＭ  Ｈ２  Ｏ２  （過酸化水素）水溶液、Ｙ：飽和没食子酸水溶液、Ｚ：３５６ｍＭ  アセトアルデヒド水溶液にＫＨＣＯ３  を飽和させた溶液、を用意し、次の四種の組合わせを調整した。
【００２５】
ＹＺ，ＸＺ，ＸＹ，Ｘ
これらの四種の調整液のいずれについてもＣＣＤカメラにより観察したが発光現象は全く確認されなかった。
（１）まず、対象試料としての液状飲食品としてのビールに、前記の第四級アミン型イオン交換樹脂を接触させた。
【００２６】
このビールに接触させた第四級アミン型樹脂を、前記の四種の調整液に浸してＣＣＤカメラにより観察したところ、いずれの場合にも微弱発光が検出確認された。この微弱発光は、図１に例示した。
【００２７】
この結果から、ビールに接触させた後の第四級アミン型イオン交換樹脂には、ＹＺ調整液での発光によって、ビール由来のＸ成分が吸着されていることがわかる。また、ＸＺ調整液での発光によって、ビール由来のＹ成分が吸着されていることがわかり、ＸＹ調整液での発光によってビール由来のＺ成分が吸着されていることがわかり、さらに、Ｘ液での発光によってビール由来のＹＺ成分が吸着されていることがわかる。
【００２８】
つまり、第四級アミン型イオン交換樹脂をビールに接触させることによって、微弱発光を生起させるビール由来のＸＹＺの三成分が吸着されたことが理解される。
【００２９】
なお、前記の第四級アミン型イオン交換樹脂そのもの（ビールと接触前の）には微弱発光は全く認められないことは言うまでもない。
（２）次いで、ビールとの接触によって、ビールに含有されている微弱発光を可能とするＸＹＺの成分を吸着した第四級アミン型イオン交換樹脂を、蟻酸の１０Ｎ水溶液を用いて溶出処理した。
【００３０】
得られた蟻酸溶出液を、前記のとおりの四種の調整液、ＹＺ，ＸＺ，ＸＹおよびＸの各々に滴下してＣＣＤカメラにより観察したところ、図２に例示したとおり、ＸＺ調整液の場合についてのみ微弱発光が検出確認された。他の調整液の場合には微弱発光は全く確認されなかった。
【００３１】
この結果から、蟻酸溶出処理によって、ビール由来のＹ成分、すなわち抗酸化成分のみが溶出分離され、ＸＺ調整液との混合によってＸＹＺ系微弱発光を生じさせていることがわかる。
【００３２】
このようにして、ビール由来の抗酸化成分（Ｙ）が、この発明の方法によって選択的に分離されることが確認された。
＜実施例２＞
第四級アミン型イオン交換樹脂のＡＧ１×４（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  ２０００  Ａｌｆｒｅｄ  Ｎｏｂｅｌ  Ｄｒｉｖｅ，  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  ＣＡ  ９４５４７，  ＵＳＡ）において、第四級アミン型を、Ｃｌ型、ＯＨ型、ＣＨ３  ＣＯＯＨ型、ＨＣＯＯＨ型並びにＧＡ（没食子酸）型として実施例１と同様のビールとの接触を行った。
【００３３】
ＣＣＤカメラにより観察したところ、図３のような微弱発光が検出された。この結果から、Ｃｌ型、ＣＨ３  ＣＯＯＨ型、ＨＣＯＯＨ型の場合には、ビール由来のＸおよびＹ成分が強く吸着されること、一方、ＯＨ型およびＧＡ型の場合には、ビール由来のＹおよびＺ成分が強く吸着されることが確認された。
【００３４】
そして、いずれの場合においても、蟻酸の接触による溶出処理によって、ビール由来の抗酸化成分（Ｙ）が選択的に分離されることが確認された。
【００３５】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この出願の発明によって、効率的に、かつ選択的に飲食品に含有される抗酸化成分を分離することが可能になる。これによって、新しい抗酸化成分の固定とその作用評価が容易となり、新しい生体防御系の構成についての展望が拓かれることになる。
【図面の簡単な説明】
【図１】第四級アミン型イオン交換樹脂への吸着にともなう微弱発光を例示した図である。
【図２】蟻酸溶出液の場合の微弱発光を例示した図である。
【図３】第四級アミン型イオン交換樹脂の種々のフォーム（型）の吸着性の差異を微弱発光の状態として例示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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