(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
全血を試料とし、血漿中の特定成分を分析するための分析用要素であって、該分析用要素が支持体と、該支持体上に固着した多孔性膜と、その上の試薬層からなり、該試薬層において、
（ｉ）水不溶性の粒子、
（ｉｉ）水不溶性の粒子を結合するためのバインダー、
（ｉｉｉ）ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤
を含むことを特徴とする分析用要素。
【請求項２】
該ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートである請求項１に記載の分析用要素。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、全血を試料とし、血漿中に含まれる特定成分を分析するための分析用要素に関する。
【０００２】
【従来の技術】
患者の医学的な診断を行う上で、血液中のグルコースやコレステロールといった物質の濃度を分析することは重要な意味を持っている。血液中のこれらの物質の濃度を分析する際には、正確な分析操作を行うために、赤血球を測定系から除去しなければならない。
【０００３】
一般的には、遠心分離によって全血から赤血球を除去した血清又は血漿が分析試料として用いられる。
【０００４】
しかしながら、赤血球を除去するためには専用の装置とそれを操作する労力と時間が必要となることから、全血をそのまま測定試料として用いることが望ましい。特に、家庭において患者自らが測定する際に有効となる。
【０００５】
赤血球を除去するための専用の装置を用いず全血から赤血球を除去する方法としては、例えば、特開平１−７２０６５には、繊維含有濾過層に赤血球を吸着させる方法が開示されている。
【０００６】
また、特開昭４９−３３８００には、赤血球が透過できない耐水性の膜を用いて除去する方法が、開示されている。
【０００７】
また、特開平２−１５０７５１には、水不溶性の粒子で形成された膜によって赤血球を除去する方法が開示されている。
【０００８】
これらの方法のうち膜を用いて赤血球を除去する方法の場合には、液体浸透性であり、かつ赤血球不浸透性となる孔を有することが条件と言える。従って、膜の孔径は、赤血球の大きさよりも小さくなくてはならない。
【０００９】
赤血球の大きさは、直径が約８．５μｍ、厚さが約２．４μｍなので、膜の孔径は、１μｍ以下がよい。
【００１０】
一方、水不溶性の粒子で形成された膜によって赤血球を除去する方法では、水不溶性の粒子の粒径が不均一であるために、大きな粒子の間に小さな粒子が入り込み、孔径の小さい緻密な膜が形成されることになる。
【００１１】
しかし、これらの膜の孔径が小さくなると、液体成分が膜を浸透する速度が遅くなる。液体成分が膜を浸透する速度が遅くなると、試薬層の上部と下部で反応開始に不均一さを生じ、いつまでも反応が終了しないといった不都合が生じる。
【００１２】
また、試料として全血を用いると、膜の孔が赤血球によってふさがれ液体成分が浸透する速度がさらに遅くなる現象が生じる。従って、液体の浸透性は、孔径の他に、全血中の赤血球の量によっても、影響される。
【００１３】
ところが、全血中の赤血球の量は、個人またはそのときの生理状態によって異なる。このことは、試料として全血を用いた時に、個人またはそのときの生理状態によっても、液体成分の浸透する量が変化する現象を引き起こす。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
これまで述べたように、分析する血液中の赤血球の量によって、液体成分の浸透する量は変化する。この現象は、正確な分析結果を得ることを妨げることになる。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意研究を重ねた結果、以下のような発明をするに至った。
【００１６】
すなわち、全血を試料とし、血漿中の特定成分を分析するための分析用要素であって、該分析用要素が支持体と、該支持体上に固着した多孔性膜と、その上の試薬層からなり、該試薬層において、
（ｉ）水不溶性の粒子、
（ｉｉ）水不溶性の粒子を結合するためのバインダー、
（ｉｉｉ）ポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤
を含むことを特徴とすることで、意外なことにも、全血中の赤血球の量によって分析結果が変化しないことを発見した。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本発明において使用するポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤には、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイトなどがあるが、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートを用いるのが好ましい。
【００１８】
水不溶性の粒子は、赤血球を通さず液体を透過させる機能を持たせることが可能なものであればよいが、望ましくは光を効率よく反射できるものがよい。例えば、二酸化チタン、硫酸バリウム、酸化亜鉛、酸化マグネシウムなどを用いることができるが、白色度が高い二酸化チタンが好ましい。
【００１９】
水不溶性の粒子を結合するバインダーとしては、ヒドロキシプロピルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリプロピオン酸ビニル共重合体（商品名：プロピオファン（ＢＡＳＦ製））など、又はその組合せを用いることができるが、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピオン酸ビニル共重合体、又はその組合せが好ましい。
【００２０】
膜の形成法は、水不溶性の粒子、水不溶性の粒子を結合するバインダー、溶媒と測定対象中の成分を分析可能な試薬とを適当な量だけ混合することで試薬溶液を作製した後に、この試薬溶液を支持体の上に一般的な方法によって塗工したりすることで作製できる。
【００２１】
ここにおける溶媒は、被分析対象物を測定するための試薬に悪影響を及ぼさないものであればなんでも良い。例えば水、メタノール、エタノールなどを用いることができる。
【００２２】
この形成法に関しては、すでに特開平２−１５０７５１に開示されており、公知と言える。
【００２３】
この時用いる支持体としては、どのようなものでもよいが、望ましくは、寸法安定性がよく、試薬溶液をはじかないもので、乾燥した時に試薬が剥離しないものが良い。
【００２４】
赤血球の色を排除するため下部から測光する場合は、光透過性の材質が望ましいが、反応に酸素が必要な場合、酸素供給層として、多孔性フィルムを用いることも有用である。
【００２５】
例えば、使用可能な材質としては、ポリエチレンテレフタレート、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ニトロセルロース、ポリスチレン、ポリテトラフロロエチレンなどがあげられ、ニュークリポア（ニュークリポア製）、サイクロポア（ワットマン製）、セルガード（ヘキスト製）などの多孔性フィルムを含めて多くのものが商品として販売されている。
【００２６】
【実施例１】
グルコース分析用要素
下記の試薬を秤量し、充分撹拌混合して試薬液を調製した。
この試薬液を、厚さ１０μｍのニュークリポアの上に１００μｍの厚さに塗工し、４０℃で１時間乾燥させ、１ｃｍ×１ｃｍに裁断した。
これを試薬液塗工面を上にして、中央に直径４ｍｍの貫通孔のあいた２ｃｍ×２ｃｍポリエチレンテレフタレートフィルムを下部より張り付けて、分析用要素を得た。
試薬の組成
グルコースオキシダーゼ（東洋紡）                          ２０ＫＵ
パーオキシダーゼ（東洋紡）                                ２０ＫＵ
４−アミノアンチピリン（キシダ化学）                    １００ｍｇ
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）
−３，５−ジメチルアニリン                              ２００ｍｇ
（略名：ＭＡＯＳ（同仁化学研究所））
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート              １００ｍｇ
（商品名：Ｔｗｅｅｎ２０（ナカライテスク））
ヒドロキシプロピルセルロース（信越化学）                １００ｍｇ
二酸化チタン（和光純薬）                                ５００ｍｇ
リン酸緩衝液（０．１ｍｏｌ／ｌ、ｐＨ７．０）              １０ｍｌ
試薬液塗工面を上にした分析用要素に、グルコース濃度が１００ｍｇ／ｄｌの全血を、試薬液塗工面に４０μｌ滴下し、１分後に支持体の貫通孔を通して下部（多孔性フィルム側）から、積分球式反射率計にて、６４０ｎｍにおける反射率を測定した。
得られた反射率を所定の検量線によってグルコースの濃度に換算した。
【００２７】
【実施例２】
実施例１のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートをポリオキシエチレンソルビタンモノオレイト（ナカライテスク）に変更して分析用要素を作製し、分析を行い測定値を得た。
【００２８】
【対照例１】
実施例１のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートをポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル（和光純薬）に変更して分析用要素を作製し、分析を行い測定値を得た。
【００２９】
【対照例２】
実施例１のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートをポリオキシエチレン（２３）ラウロイルエーテル（和光純薬）に変更して分析用要素を作製し、分析を行い測定値を得た。
【００３０】
実施例１、実施例２、対照例１、対照例２の結果を表１に示す。実施例は対象例に比較して明らかに赤血球量の影響を受けなくなっている。特に実施例１において顕著に観察される。
【００３１】
【表１】
0003584255.tif 000002
【００３２】
全血中の赤血球を除去し、その中の特定成分を分析するための分析用要素において、水不溶性の粒子、それを結合するバインダー、およびポリオキシエチレンソルビタン系の界面活性剤を含むことで、分析結果が変化しない。これによって、全血を試料として血液中の特定成分を分析する際に、試料によって異なる赤血球量の影響を受けることなく正しく血液中の特定成分の量、濃度を分析することが可能となった。また、全血中の赤血球の量による測定値の変化の受けにくい、血液中の特定成分の量、濃度を正しく分析できる全血分析用要素を作製することが、可能となった。