(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
0003584050.tif 000009
〔式中、X は＝Oを示し、R は-O-CO-R1または-CHR2-R3を示す（R1は直鎖または分枝したアルキル基、直鎖または分枝したアルケニル基、直鎖または分枝したアラルキル基、あるいは置換または非置換フェニル基であり、R2は水素原子、あるいは直鎖または分枝した低級アルキル基であり、R3は直鎖または分枝したアルキル基、直鎖または分枝したアルケニル基、直鎖または分枝したアルコキシ基、直鎖または分枝したアルケニルオキシ基、直鎖または分枝したアラルキル基、あるいは置換または非置換フェニル基である）〕で示される化合物を有効成分として含む発がんプロモーター阻害剤。
【請求項２】
発がんプロモーターがホルボールエステル類およびテレオシジン類からなる群から選ばれる請求項１記載の阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、発がんプロモーター阻害剤に関する。さらに詳しくは、レセプター蛋白に対する発がんプロモーターの結合を阻害することができ、発がん抑制剤として有用な発がんプロモーター阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
発がんプロモーターは、それ自身ではがんを引き起こさないが、発がん性物質により惹起された生物学的変化を増幅・修飾して、最終的な発がん状態に至らしめる物質である。その代表的な物質として、１２−Ｏ−テトラデカノイル−ホルボール  １３−アセテート（ＴＰＡ）等のホルボールエステル（ジテルペン化合物）やテレオシジン（インドールアルカロイド）を挙げることができる。
これらの発がんプロモーターが結合する細胞内レセプターの一つとして、カルシウム依存性蛋白質リン酸化酵素（ＰＫＣ）が知られている。しかしながら、蛋白質リン酸化酵素の基質特異性は低いこと、ならびに蛋白質リン酸化酵素活性化の情報が核内に伝達される機構は明らかではなく蛋白質リン酸化酵素の阻害剤は必ずしも発がんを抑制しないことから、これらの発がんプロモーターの細胞内レセプターとして、蛋白質リン酸化酵素以外のレセプターの存在が強く示唆されていた。
【０００３】
本発明者は、これらの発がんプロモーターが結合する細胞内レセプターを検索するうち、蛋白質リン酸化酵素とは異なる複数の細胞内レセプター（発がんプロモーター結合蛋白：Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  （ＴＢＰｓ），  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍ．  １６６，  １１２６−１１３２，  １９９０）を発見し、さらに、それらの細胞内レセプターのうちの一つが、リガンド依存的に細胞質内から核内へと移行する性質を有する発がんプロモーター特異的結合蛋白であることを見出し、ＣＮ−ＴＰＢＰ（Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）と命名した（Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ８２，  ６６５−６７５，  １９９１  ）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記の発がんプロモーター特異的結合蛋白ＣＮ−ＴＰＢＰ  に対する発がんプロモータの結合を拮抗的に阻害し、発がんプロモーターの作用を抑制する物質を提供することを目的としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記の課題を解決すべく、種々の化合物について発がんプロモーター特異的結合蛋白ＣＮ−ＴＰＢＰ  に対する親和性を検索したところ、特定のステロイド化合物類が、発がんプロモーター特異的結合蛋白ＣＮ−ＴＰＢＰ  に対して強い親和性を示し、ＣＮ−ＴＰＢＰ  に対するＴＰＡ等の発がんプロモータの結合を拮抗的に阻害することを見出した。本発明は、上記の知見に基づいて完成されたものである。本発明の発がんプロモーター阻害剤は、ホルボールエステルやテレオシジンのような蛋白質リン酸化酵素活性化作用を有しないので、発がんプロモーターの作用を抑制することができ、発がん抑制に有用である。
本発明の阻害剤に有効成分として含有される化合物はステロイド系化合物であり、以下の式（Ｉ）：
【０００６】
【化３】
0003584050.tif 000002
で示される３β、５α−ジヒドロキシアンドロスタン−６−オン誘導体である。式中、Ｘ  は＝Ｏ  または  −ＯＨを示し、Ｒ  は−Ｏ−ＣＯ−Ｒ１または−ＣＨＲ２−Ｒ３を示す（Ｒ１は直鎖または分枝したアルキル基、直鎖または分枝したアルケニル基、直鎖または分枝したアラルキル基、あるいは置換または非置換フェニル基であり、Ｒ２は水素原子、あるいは直鎖または分枝した低級アルキル基であり、Ｒ３は直鎖または分枝したアルキル基、直鎖または分枝したアルケニル基、直鎖または分枝したアルコキシ基、直鎖または分枝したアルケニルオキシ基、直鎖または分枝したアラルキル基、あるいは置換または非置換フェニル基である）。上記の一般式（Ｉ）中、ステロイド骨格の３位および５位の水酸基はそれぞれβ配置およびα配置であり、Ｘ  が  −ＯＨを示す場合には、６位の水酸基はβ配置をとることが好ましい。Ｒ  はβ配置でステロイド骨格に置換することが好ましい。
【０００７】
式（Ｉ）で示される化合物として、例えば以下の表１に示す化合物を挙げることができるが、本発明の阻害剤に含まれる化合物はこれらの化合物に限定されることはない。
【０００８】
【表１】
0003584050.tif 000003
0003584050.tif 000004
0003584050.tif 000005
これらのうち、特に好ましい化合物としては、Ｘ  が＝Ｏ  でありＲ  が−ＣＨ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）３ＣＨ（ＣＨ３）２  である化合物、Ｘ  が＝Ｏ  でありＲ  が−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＨ３）２  である化合物、およびＸ  が＝Ｏ  でありＲ  が−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ２）８ＣＨ３  である化合物を挙げることができる。
【０００９】
これらの化合物の一部は新規化合物である。これらは、上記の式中、Ｘ  が＝Ｏ  を示し、Ｒ  が−Ｏ−ＣＯ−Ｒ１または−ＣＨＲ２−Ｒ３を示す化合物である。Ｒ１は直鎖または分枝したアルキル基、直鎖または分枝したアルケニル基、直鎖または分枝したアラルキル基、あるいは置換または非置換フェニル基であり、Ｒ２は水素原子、あるいは直鎖または分枝した低級アルキル基であり、Ｒ３は直鎖または分枝したアルキル基、直鎖または分枝したアルケニル基、直鎖または分枝したアルコキシ基、直鎖または分枝したアルケニルオキシ基、直鎖または分枝したアラルキル基、あるいは置換または非置換フェニル基である。ただし、Ｒ  は−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３ＣＨ（ＣＨ３）２であることはない。これらの化合物は、例えば、本明細書の実施例に記載された方法により製造することができる。
【００１０】
公知の化合物は、公知文献に記載された方法により当業者に容易に製造される。例えば３β，５α−ジヒドロキシコレスタン−６−オン  （ＹＳ−６４）等は、フィーザーらの方法（Ｆｉｅｓｅｒ，  Ｌ．Ｆ．，  Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ，  Ｓ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １９４９，  ７１，  ３９３８−３９４１）  により製造することができる。
本発明の阻害剤は、リガンド依存的に細胞質内から核内へと移行する性質を有する発がんプロモーター結合蛋白ＣＮ−ＴＰＢＰ（Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）に対して強い親和性を示し、ＴＰＡ  等の発がんプロモータのＣＮ−ＴＰＢＰ  に対する結合を拮抗的に阻害する。加えて、本発明の阻害剤は、ホルボールエステルやテレオシジンのような蛋白質リン酸化酵素活性化作用を有しないので、発がんプロモーターの作用を抑制することができ、発がんプロモーターの作用抑制剤あるいは発がん抑制剤として有用である。発がんプロモーターの作用機序の研究用試薬または発がんプロモーターのスクリーニング用試薬等の生化学用試薬として、あるいは臨床検査用試薬として有用である。
【００１１】
本発明の阻害剤を、ヒト等の哺乳類に対して発がん抑制剤として用いる場合には、式（Ｉ）で示される上記の化合物を有効成分として含む医薬組成物として投与すればよい。このような医薬用組成物は、経口的あるいは非経口的に患者に投与すればよく、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、及びシロップ剤等等の経口投与用医薬組成物、あるいは注射剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、軟膏剤、及び貼付剤等の非経口投与用医薬組成物として投与すればよい。これらの医薬組成物は、薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物を加えて製造してもよい。薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物の例として、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を挙げることができ、これらは目的に応じて適宜当業者により選択される。
【００１２】
例えば、経口投与、あるいは経皮又は経粘膜投与に適する医薬用組成物には、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤；フロン，ジエチルエーテル、又は圧縮ガス等の噴射剤；ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ポリイソブチレン、ポリブテン等の粘着剤；木綿布又はプラスチックシート等の基布等の製剤用添加物を添加することができる。注射用に適する医薬用組成物には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤等の製剤用添加物を添加してもよい。発がんの予防を目的として上記の医薬用組成物を投与する場合の投与量は、目的に応じて適宜選択すればよいが、例えば、成人一日あたり有効成分として０．１  〜１０  ｍｇ  を投与すればよい。
【００１３】
【実施例】
以下に本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されることはない。
例１：３β，５α−ジヒドロキシ−２３，２４−ビスノルコラン−６−オン（ＹＳ−１４９）
スチグマステリルアセテートをメタクロル過安息香酸で選択的に酸化した後、触媒量の過塩素酸の存在下に加水分解して３β−アセトキシ−スチグマスト−２２−エン−５α，６β−ジオールを得た。アルミニウムオキサイドの存在下にこの化合物をピリジニウムクロロクロメートで酸化し、さらに６位ケトンをエチレンジオキシ基で保護して３β−アセトキシ−６，６−エチレンジオキシスチグマスト−２２−エン−５α−オールを得た。この化合物をメタノール−ジクロロメタン−ピリジン中でオゾン分解して、ビスノルコラン−２２−アールを得た。
【００１４】
ビスノルコラン−２２−アールをエチレングリコール中でヒドラジン水和物と水酸化カリウムにより処理して６位ケトンの脱保護を行い、３β，５α−ジヒドロキシ−２３，２４−ビスノルコラン−６−オンを得た。
ＹＳ−１４９：無色針状晶  ｍ．ｐ．  １４９−１５０  ℃（エタノール／ｎ−ヘキサン）
Ａｎａｌ．  （Ｃ２２Ｈ３６Ｏ３：  Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）    ０．６４（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８１（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  ０．８４（ｄ，３Ｈ，  Ｊ＝６．６Ｈｚ，  ２２−ＣＨ３），  ０．９２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ２．０１（ｂｄ，１Ｈ），  ２．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８  ＆  ４．８Ｈｚ，７−ｂｅｔａ−Ｈ），  ２．７０  （ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，７−ａｌｐｈａ−Ｈ），  ３．９７（ｍ，１Ｈ，３−ａｌｐｈａ−Ｈ）
【００１５】
例２：３β，５α−ジヒドロキシ−２３，２４−ビスノルコラン−６−オン（ＹＳ−１４９）の側鎖伸長体
ビスノルコラン−２２−アールをテトラヒドロフラン中で適当なホスホニウムイリドにより処理してシス体およびトランス体の混合物として２２−不飽和化合物を得た。例１に記載された方法により６位ケトンの脱保護を行い、さらに２２位の二重結合を接触還元して３β，５α−ジヒドロキシ−２３，２４−ビスノルコラン−６−オン（ＹＳ−１４９）の側鎖伸長体を得た。
0003584050.tif 000006
【００１６】
例３：３ｂ，５ａ−ジヒドロキシコレスト−２２Ｅ−エン−６−オン（ＹＳ−１２６）
ビスノルコラン−２２−アールをテトラヒドロフラン中でイソアミルトリフェニルホスホニウムイリドで処理し、トランス−２２−エン体を得た。６−ケト基と３ベータ水酸基の脱保護を行い、目的化合物を得た。
ＹＳ−１２６：  ｍ．ｐ．  ２３５−２３８  ℃（酢酸エチル）
Ａｎａｌ．  （Ｃ２７Ｈ４４Ｏ３：  Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）    ０．６８（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８１（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  ０．８８，  ０．８９（ｄ，２×３Ｈ，  Ｊ＝６．６Ｈｚ，  ２６−，２７−ＣＨ３），  ０．９５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ２．０１（ｂｄ，１Ｈ），  ２．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．７  ＆  ４．７Ｈｚ，７−ｂｅｔａ−Ｈ），  ２．４１（ｍ，１Ｈ，２０−Ｈ），  ２．７１  （ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，７−ａｌｐｈａ−Ｈ），  ３．９７（ｍ，１Ｈ，３−ａｌｐｈａ−Ｈ），  ５．１８（ｍ，２Ｈ，２２−，２３Ｈ）
【００１７】
例４
５．００ｇのプレグネノロンをジメチルホルムアミド１５ｍｌとテトラヒドロフラン１５ｍｌの混合物に溶解し、イミダゾール４．３９５ｇ（３当量）を加えた。氷冷下に、３．６８５ｇのターシャリーブチルジメチルシリルクロライド（約１．５当量）を加えて１０時間攪拌した。３０ｍｌの水を加えて溶媒を留去し、ジクロルメタンで抽出して、水洗、脱水後に溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝１０：１）により精製し、６．５７ｇの３位水酸基のシリル化保護体を得た（収率９６．５％）。酢酸エチルより再結晶して無色柱状晶を得た（ｍ．ｐ．  １６４．５−１６５℃）  。
【００１８】
上記のシリル体３．３５ｇをエタノール５０ｍｌとテトラヒドロフラン５０ｍｌの混合物に溶解し、ナトリウムボロハイドライド０．９０ｇを氷冷下に加え、室温で５時間攪拌した。５％酢酸を溶液に加えて溶媒を留去し、水を加えてジクロルメタンにより抽出した。水洗、脱水後に溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝７：１）により精製し、２０位カルボニル基が水酸基に還元された化合物２．４４ｇを得た（収率７２．４％）。メタノールより再結晶して無色針状晶を得た（ｍ．ｐ．  １５１℃）  。
ナトリウムハイドライド  １３８．８  ｍｇ  をｎ−ヘキサン（１ｍｌ×３）で洗浄してキシレン１ｍｌに懸濁し、上記の化合物  ６０６．７  ｍｇ  をキシレン４ｍｌに溶解して加え、イソペンチルクロライド０．８７ｍｌを加えて１７時間還流した。１０％クエン酸と水を加えてジクロルメタンにより抽出し、水洗、脱水した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：ジクロルメタン＝３：１）により精製して、２０位にイソペンチルオキシ基が導入された化合物  ４９０．８  ｍｇ  を得た（収率６９．７％）。メタノールより再結晶して無色針状晶を得た（ｍ．ｐ．  ８２  ℃）  。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．０５（ｓ，６Ｈ，ＴＢＤＭＳ  Ｍｅ），  ０．６９（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８８（ｓ，９Ｈ，ＴＢＤＭＳ  ｔ−Ｂｕ），  ０．９０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．００（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  １．０６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ３．２２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ３．２５（ｍ，１Ｈ，２０−Ｈ），  ３．４７  （ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），  ３．５７（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ５．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，６−Ｈ）
上記の化合物  ５４７．０  ｍｇ  をアセトン２３ｍｇに溶解し、過塩素酸０．０５ｍｌ、水０．０５ｍｌ、およびアセトン２ｍｌの混合物を氷冷下で加えた。室温で３時間攪拌した後、飽和重曹水６ｍｌを加えてアセトンを留去し、水を加えてジクロルメタン（３０ｍｌ×３）で抽出した。水洗、脱水後に溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により精製して、３位水酸基の脱保護化合物  ３９８．５  ｍｇ  を得た（収率９４．１％）。ｎ−ヘキサン：酢酸エチルより再結晶して無色針状晶を得た（  ｍ．ｐ．  １５５  ℃）  。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６９（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．９０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．０２（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  １．０６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ３．２１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ３．２３（ｍ，１Ｈ，２０−Ｈ），  ３．５０−３．５８（ｍ，２Ｈ，３−Ｈ，１’−Ｈ），  ５．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，６−Ｈ）
上記の脱保護体  ３７１．２  ｍｇ  をジクロルメタン２ｍｌに溶解してピリジン０．４ｍｌを加えた後、無水酢酸０．５５ｍｌを滴下して室温で１日攪拌した。ジクロルメタン５０ｍｌを加え、２Ｎ塩酸（３０ｍｌ×２）、飽和重曹水（３０ｍｌ×２）および水５０ｍｌで洗浄し、脱水後に溶媒を留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）で精製し、３位アセトキシ体  ３８７．０  ｍｇ  を得た（収率９４．１％）。メタノールより再結晶して無色針状晶を得た（ｍ．ｐ．  ７５．５−７６℃）  。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６９（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．９０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．０２（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  １．０６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ２．０３（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），  ２．３２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４−Ｈ），  ３．２１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ３．２４（ｍ，１Ｈ，２０−Ｈ），  ３．５７（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ４．６０（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），  ５．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，６−Ｈ）
【００１９】
上記アセトキシ体３６８．７ｍｇをジクロルメタン２ｍｌに溶解し、メタクロル過安息香酸２１６．７ｍｇをジクロルメタン４ｍｌに溶解して氷冷下に加え、室温で８０分間攪拌した。ジクロルメタン４０ｍｌを加えて、１０％  ＮａＨＳＯ３  （３０  ｍｌ×２）、飽和重曹水（３０  ｍｌ×２）、水５０ｍｌで洗浄し、脱水した後に溶媒を留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）により精製して、エポキシ体  ２８３．５  ｍｇ  を無色油状物として得た（収率７４．１％）。
主生成物：
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８８（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．０４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  １．０８（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  ２．０１（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），  ２．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，６−Ｈ），  ３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ，  ２０−Ｈ），  ３．５５（ｍ，１Ｈ，１’−Ｈ），  ４．９５（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），
副生成物：
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６５（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８８（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．０１（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  １．０４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ２．０３（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），  ３．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，６−Ｈ），  ３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ，  ２０−Ｈ），  ３．５５（ｍ，１Ｈ，１’−Ｈ），  ４．７６（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ），
上記のエポキシ体２７３．８ｍｇをアセトン８ｍｌに溶解し、過塩素酸０．０５ｍｌ、水０．０５ｍｌ、およびアセトン２ｍｌの混合物を氷冷下に加えて、室温で７時間攪拌した。飽和重曹水２ｍｌを加えてアセトンを留去し、水を加えて酢酸エチルで抽出（３０  ｍｌ×２）した。飽和食塩水で洗浄し、脱水して溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）により精製してエポキシが開環したジオール体  ２６２．８  ｍｇ  を無色固体として得た（収率９２．５％）。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６９（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８９（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．０５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  １．１９（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  ２．０２（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），  ３．１９（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ３．２４（ｍ，１Ｈ，２０−Ｈ），  ３．５３−３．５６（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ，６Ｈ），  ５．１５（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ）
ピリジニウムクロロクロメート０．３４ｇ、Ａｌ２Ｏ３  １．１４ｇにジクロルメタン３ｍｌを加えてアルゴン置換し、激しく攪拌しつつ上記のジオール体２４２．８ｍｇをジクロルメタン３ｍｌに溶解して氷冷下に加えた。室温で２．５時間攪拌し、後処理することなくシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製して、６位ケトン体  ２２５．３  ｍｇ  を得た（収率９３．１％）。ｎ−ヘキサンより再結晶して無色針状晶を得た（ｍ．ｐ．  １７７℃）  。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６５（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８３（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  ０．８９（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４’−ＣＨ３），  １．０６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２１−ＣＨ３），  ２．０２（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），  ２．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，７−ｂｅｔａ−Ｈ），  ２．７５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３Ｈｚ，７−ａｌｐｈ−Ｈ），  ３．１６−３．２７（ｍ，１Ｈ，１’−Ｈ，２０−Ｈ），  ３．５８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１’−Ｈ），  ５．０３（ｍ，１Ｈ，３−Ｈ）
上記の６位ケトン体  ２００．５  ｍｇ  をメタノールに溶解し、氷冷下で２Ｎ水酸化カリウム１．０８ｍｌをゆっくり滴下した。室温で１日攪拌した後、５％酢酸５ｍｌにより中和してメタノールを留去した。水を加えて酢酸エチル抽出し（３０ｍｌ×３）、食塩水で洗浄した後、脱水して溶媒を留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製して、１７１．０ｍｇの目的物を得た（収率９３．９％）。
ＹＳ−３３０：  ｍ．ｐ．  ２３２  ℃（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）
Ａｎａｌ．  （Ｃ２６Ｈ４４Ｏ４：  Ｘ＝０，  Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．６６（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），  ０．８２（ｓ，３Ｈ，１９−ＣＨ３），  ０．８８（ｔ，６Ｈ，２４−ＣＨ３），  １．０６（ｄ，３Ｈ，２１−ＣＨ３），  ２．１１−２．１６（ｍ），  ２．７２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３Ｈｚ），  ３．１６−３．２５（ｍ，２Ｈ），  ３．５７（ｄｔ，１Ｈ），  ３．９７（ｍ，１Ｈ）
【００２０】
例５
（ＹＳ−５１０）
３−ハイドロキシ−デヒドロエピアンドロテロン３．１２ｇをジクロルメタン５０ｍｌに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン７．２８ｇ、続いて２−クロロメトキシエチルトリメチルシラン５．５４ｇを室温で加えた。この混合物を室温で９０分放置した後に飽和重曹水を加えて反応を停止し、水１５０ｍｌおよびジクロルメタン１００ｍｌを加えてジクロルメタン層を分離した。水層をジクロルメタン（２００ｍｌ×２）で抽出し、有機層をあわせて乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：０．３）により精製して３位水酸基の保護体５．２４ｇを得た。エタノール／水から再結晶して白色結晶を得た（ｍ．ｐ．  ７７．５−７９℃）  。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．０１（ｓ，９Ｈ），  ０．９３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），  ０．８８（ｓ，３Ｈ），  １．０２（ｓ，３Ｈ），  ２．０８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１９Ｈｚ，８．０Ｈｚ），  １．０６−２．４８（ｍ，２３Ｈ），  ２．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１９Ｈｚ，８．０Ｈｚ），  ３．４３（ｍ，１Ｈ），  ３．６２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ４．７２（ｓ，２Ｈ），  ５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）
上記の３位水酸基保護体５．２０ｇのジクロルメタン溶液２５ｍｌに、ジクロルメタン４０ｍｌに溶解した７０％メタクロル過安息香酸３．２２ｇを加えて室温で３０分間放置した。この混合物を１０％  ＮａＨＳＯ３  （１００ｍｌ×２）、続いてＮａＨＣＯ３（１５０ｍｌ×２）で洗浄し、有機層を乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により精製してエポキシ体４．３７ｇを白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．０１（ｓ，９Ｈ），  ０．８１（ｓ，３Ｈ），  ２．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），  ３．１１（ｄ，１Ｈ，β−エポキシ体），  ３．５９（ｍ，１Ｈ），  ３．７８（ｍ，１Ｈ，α−エポキシ体）
上記エポキシ体４．３７ｇをアセトン１５０ｍｌおよび水１２ｍｌの混合物に溶解して過塩素酸（７０％）１．４ｍｌを滴下した。この溶液を室温で３時間放置した後、飽和重曹水を加えて反応を停止した。この混合物を濃縮して残渣をジクロルメタンおよび水に分配し、有機層を乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製してエポキシが開裂したジオール体３．４３ｇを得た（収率７８％）。ｎ−ヘキサン／酢酸エチルから再結晶して白色結晶を得た（ｍ．ｐ．  １５５−１５７℃）  。
【００２１】
上記のジオール体３．３７ｇをエタノール１２０ｍｌに溶解し、ナトリウムボロハイドライド４３９ｍｇを０℃で加えた。室温で１時間攪拌した後、この混合物を濃縮し残渣をジクロルメタンおよび水に分配した。水層をジクロルメタン（２×２００ｍｌ）で抽出し、有機層を合わせて乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：３）により精製して１７位ハイドロキシ体３．３６ｇを得た。ｎ−ヘキサン／酢酸エチルから再結晶すして白色結晶を得た（ｍ．ｐ．  １２２−１２３℃）  。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．０２５（ｓ，９Ｈ），  ０．７５（ｓ，３Ｈ），  ０．９３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８，５Ｈｚ），  １．１８（ｓ，３Ｈ），  １．０５−２．１４（ｍ，２２Ｈ），  ３．５２（ｂｒｓ，１Ｈ），  ３．６３（ｍ，３Ｈ），  ３．９８（ｍ，１Ｈ），  ４．７２（ｓ，２Ｈ）
【００２２】
ジクロルメタン０．３ｍｌにピリジン０．０５を溶解し、５０ｍｇの上記１７位ハイドロキシ体を加え、続いてブチリルクロライド０．０２１ｇ（１．５当量）のジクロルメタン溶液（０．３ｍｌ）を加えた。さらに１５分毎に原料が消失するまで０．５当量ずつのブチリルクロライドを加えた。ジクロルメタン２０ｍｌ加えて水洗し（２０ｍｌ×２）、乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）により精製して１７位ブチリルオキシ体５０．３ｇを無色油状物として得た（収率７８．６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．０２（ｓ，９Ｈ），  ０．８０（ｓ，３Ｈ），  ０．９１−２．２９（ｍ，３３Ｈ），  ３．５３（ｂｒｓ，１Ｈ），  ３．６２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），  ３．９８（ｍ，１Ｈ），  ４．６１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），  ４．７２（ｓ，２Ｈ）
ピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）０．３５ｇおよびＡｌ２Ｏ３  １．１３ｇをジクロルメタン８ｍｌに懸濁し、アルゴン雰囲気中で激しく攪拌しつつ、上記の１７位ブチリルオキシ体をジクロルメタン８ｍｌに溶解して氷冷下に加えた。室温で２時間攪拌し、後処理することなくシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製して、６位ケトン体  ２２３  ｍｇ  を白色結晶として得た（収率７９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．０２（ｓ，９Ｈ），  ０．８１（ｓ，３Ｈ），  ０．９２−２．１４（ｍ，２６Ｈ），  ２．２６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），  ２．７４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１３Ｈｚ），  ３．５３（ｂｒｓ，１Ｈ），  ３．６２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），  ３．８７（ｍ，１Ｈ），  ４．６６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），  ４．７２（ｓ，２Ｈ）
上記の化合物５８．５ｍｇをジクロルメタン１ｍｌに溶解し、トリフルオロ酢酸２ｍｌを０℃で加えた。混合物を０℃で３０分間放置した後、水３０ｍｌを加えて反応を停止し、ジクロルメタン（３０ｍｌ×２）で抽出した。飽和重曹水（３０ｍｌ×２）で洗浄し、乾燥して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：４）により精製して目的物３７．７ｍｇを白色結晶として得た。
ＹＳ−５１０：  ｍ．ｐ．  ２２７−２２８  ℃（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）
Ａｎａｌ．  （Ｃ２３Ｈ３６Ｏ５：  Ｘ＝Ｏ，  Ｒ＝−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）
１Ｈ−ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ／ＣＤＣｌ３）  ０．７７（ｓ，３Ｈ），  ０．８１（ｓ，３Ｈ），  ０．９４（ｔ，３Ｈ，７−Ｈ），  １．１８−２．２９（ｍ，１５Ｈ），  １．６９−１．６０  （ｈｅｘ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），  ２．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，４．５Ｈｚ），  ２．２２（ｓ，１Ｈ），  ２，２７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），  ２．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），  ３．９６（ｍ，１Ｈ），  ４．６４（２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）
【００２３】
例４および例５と同様にして以下の化合物を製造した。
0003584050.tif 000007
【００２４】
試験例
ＣＮ−ＴＰＢＰ（Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）を含むフラクション、およびＰＫＣ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｃ）  を含むフラクションを、以下のようにして調製した。凍結保存（−８０℃）された懸濁培養ヒーラ細胞を０．６Ｍ  ＫＣｌ−２０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  （ｐＨ  ８．０）  中でホモジナイズした後に超遠心し、得られた上清をＱＡＥ−セファロースカラムクロマトグラフィーに付した。各フラクションを、ラベル化  １２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール  １３−アセテート（［３Ｈ］ＴＰＡ，  ＮＥＮ）  を用いたＴＰＡ−特異的結合活性、ＰＫＣ  アッセイキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いたＰＫＣ  活性、ならびにＰＫＣｓに対する抗血清及び／又は抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いたウエスタンブロットによりモニターして、目的のフラクションを得た。上記の化合物について、ＣＮ−ＴＰＢＰ  に対する結合親和性を、［３Ｈ］ＴＰＡ  をプローブとして用いたデキストラン被覆活性炭（ｄｅｘｔｒａｎ−ｃｏａｔｅｄ  ｃｈａｒｃｏａｌ）  法によりリガンド競合アッセイを行った。結果を表２に示す。
【００２５】
【表２】
0003584050.tif 000008
【００２６】
【発明の効果】
発がんプロモーター結合蛋白ＣＮ−ＴＰＢＰ（Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）に対して強い親和性を示し、ＴＰＡ  等の発がんプロモータのＣＮ−ＴＰＢＰ  に対する結合を拮抗的に阻害する。加えて、本発明の阻害剤は、ホルボールエステルやテレオシジンのような蛋白質リン酸化酵素活性化作用を有しないので、発がんプロモーターの作用を抑制することができ、発がんプロモーターの作用抑制剤あるいは発がん抑制剤として有用である。