【手続補正書】
【提出日】平成29年3月15日(2017.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の単離集団を産生する方法であって：
（ａ）歯から歯髄（ＤＰ）を摘出し；
（ｂ）ＤＰを無菌容器中に入れ、そして抗生物質を含む無菌溶液でＤＰを洗浄し；
（ｃ）ＤＰを、培地を含有する別の容器内に、機械的にトランスファーするか、または容器内の培地を交換し；および
（ｄ）ＩＤＰＳＣのアウトグロースおよび接着が観察されるまでＤＰを培養して外植片培養物を確立し；
ここで工程（ｃ）および（ｄ）は、ＤＰ内の多数ニッチからＩＤＰＳＣのアウトグロースおよび接着を可能にするように少なくとも５回反復する、前記方法。
【請求項２】
工程（ｃ）および（ｄ）を少なくとも１０回反復する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
以下：
（ｅ）ＩＤＰＳＣを外植片培養物から単離し；
（ｆ）単離されたＩＤＰＳＣを培地中で１週間、細胞の集密に到達することなく培養し；
（ｇ）工程（ｆ）の培養細胞を酵素的消化を用いて採取し、ここで当該採取した工程（ｆ）の培養細胞は分化していない；および
（ｈ）工程（ｇ）の採取細胞を、レチノイン酸の存在下で拡大する、ここで当該拡大した細胞は神経幹細胞および／または分化した神経細胞である；
をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
以下：
（ｅ）ＩＤＰＳＣを外植片培養物から単離し；
（ｆ）単離されたＩＤＰＳＣを培地中で、培養物が半集密に到達するまで培養し；
（ｇ）工程（ｆ）の培養細胞を酵素的消化を用いて採取し；および
（ｈ）工程（ｇ）の採取細胞を拡大する、ここで当該拡大した細胞は神経幹細胞および／または分化した神経細胞である；
をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｄ）が、工程（ｃ）を繰り返す前に、ＤＰを約２日間、約３日間、約４日間、または約５日間の外植片培養物として培養することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｃ）および（ｄ）を少なくとも２５回反復し、そして前記方法はさらに以下：
（ｅ）ＩＤＰＳＣを外植片培養物から単離し；
（ｆ）単離されたＩＤＰＳＣを培養し；および
（ｇ）工程（ｆ）の単離された培養物から接着細胞を継代してＩＤＰＳＣの均質な集団を得る、ここで当該接着細胞は自己再生し、内胚葉、中胚葉または外胚葉系譜の細胞に分化し、そしてＳｏｘ−１、Ｓｏｘ−２および３−ベータ−チューブリンを発現する；
工程を含む、請求項１、２または５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法によるＩＤＰＳＣの単離された集団、またはそれに由来する神経幹細胞、を含む組成物。
【請求項８】
組成物であって、以下：
（ｉ）未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の単離集団、ここで少なくとも５０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は，ｐ７５（ＣＤ２７１）、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＧメンバー２（ＡＢＣＧ２）、ｐ６３、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ＮＴ４、およびＮＴ５、より選択されるマーカーを発現する；
（ｉｉ）ＩＤＰＳＣの単離集団、ここで少なくとも５０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は、ＣＤ９０、ＣＤ１１７、フィブロネクチン、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、テネシン−Ｃ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、シンデカン１（ＳＤＣ１）、ＳＤＣ２、ＳＤＣ３、ＳＤＣ４、ｐ５３、および１型コラーゲン、より選択されるマーカーを発現する；
（ｉｉｉ）ＩＤＰＳＣの単離集団、ここで２〜３０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は、Ｏｃｔ３／４、ＴＲＡ１−６０、およびＴＲＡ１−８１、から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する；
（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）のＩＤＰＳＣの単離集団に由来する神経幹細胞；および
それらのいずれかの組合せ；
からなる群より選択される細胞を含み、ここで当該ＩＤＰＳＣの単離集団または神経幹細胞はＨＬＡ−ＡＢＣおよびＨＬＡ−ＤＲに関して陰性である、前記組成物。
【請求項９】
未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団、またはＩＤＰＳＣに由来する神経幹細胞の、神経変性疾患、脱ミエリン化疾患、脊髄傷害の治療のための、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）死を阻害するための、および／または、視神経変性を阻害するための医薬の製造における使用であって、ＩＤＰＳＣまたはＩＤＰＳＣに由来する神経幹細胞は、以下：
（ｉ）未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の単離集団、ここで少なくとも５０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は，ｐ７５（ＣＤ２７１）、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＧメンバー２（ＡＢＣＧ２）、ｐ６３、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ＮＴ４、およびＮＴ５、より選択されるマーカーを発現する；
（ｉｉ）ＩＤＰＳＣの単離集団、ここで少なくとも５０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は、ＣＤ９０、ＣＤ１１７、フィブロネクチン、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、テネシン−Ｃ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、シンデカン１（ＳＤＣ１）、ＳＤＣ２、ＳＤＣ３、ＳＤＣ４、ｐ５３、および１型コラーゲン、より選択されるマーカーを発現する；
（ｉｉｉ）ＩＤＰＳＣの単離集団、ここで２〜３０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は、Ｏｃｔ３／４、ＴＲＡ１−６０、およびＴＲＡ１−８１、から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する；
（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）のＩＤＰＳＣの単離集団に由来する神経幹細胞；および
それらのいずれかの組合せ；
からなる群より選択され、ここで当該ＩＤＰＳＣの単離集団または神経幹細胞はＨＬＡ−ＡＢＣおよびＨＬＡ−ＤＲに関して陰性である、前記使用。
【請求項１０】
ＩＤＰＳＣに由来する神経幹細胞が、Ｓｏｘ−１およびＳｏｘ−２を共発現する神経冠幹細胞である、請求項７もしくは８に記載の組成物または請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
組成物が、少なくとも１×１０６のＩＤＰＳＣおよび／またはＩＤＰＳＣに由来する神経幹細胞を含む、請求項７〜８もしくは１０のいずれか1項に記載の組成物または使用。
【請求項１２】
さらに薬学的に許容されうるキャリアーを含む、請求項７〜８、１０または１１のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１３】
神経変性疾患、脱ミエリン化疾患、脊髄傷害の治療における使用のための、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）死および／または視神経変性を阻害するための、請求項７〜８、１０または１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
脱ミエリン化疾患が、以下：多発性硬化症、特発性炎症性脱ミエリン化疾患、ビタミンＢ１２不全。橋中央ミエリン溶解、脊髄ろう、横断性脊髄炎、デビック病、進行性多巣性白質脳症、視神経炎、白質ジストロフィー、ギランバレー症候群、慢性炎症性脱ミエリン化ポリニューロパシー、抗ＭＡＧ末梢ニューロパシー、シャルコー−マリー・トゥース病、および銅欠乏からなる群より選択される脱ミエリン化疾患であり；および
神経変性疾患が、以下：アルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、前頭側頭型認知症（ピック病）および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳまたはルー・ゲーリック病）、およびミエリンを攻撃する自己免疫疾患、からなる群より選択される；
請求項１２に記載の使用のための組成物または請求項９に記載の使用。
【請求項１５】
腎不全、禿頭、白髪、皮膚創傷、皮膚美容的特徴、減少した精子形成、心疾患、または癌の治療において使用するための、請求項８、または１０〜１２のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１、２、５および６のいずれか１項に記載の方法によるＩＤＰＳＣの単離集団を含む組成物。
【請求項１６】
未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団、またはＩＤＰＳＣに由来する神経幹細胞の、腎不全、禿頭、白髪、皮膚創傷、皮膚美容的特徴、減少した精子形成、心疾患、または癌の治療のための医薬の製造における使用であって、ＩＤＰＳＣまたはＩＤＰＳＣに由来する神経幹細胞は、以下：
（ｉ）未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の単離集団、ここで少なくとも５０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は，ｐ７５（ＣＤ２７１）、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＧメンバー２（ＡＢＣＧ２）、ｐ６３、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ＮＴ４、およびＮＴ５、より選択されるマーカーを発現する；
（ｉｉ）ＩＤＰＳＣの単離集団、ここで少なくとも５０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は、ＣＤ９０、ＣＤ１１７、フィブロネクチン、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、テネシン−Ｃ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、シンデカン１（ＳＤＣ１）、ＳＤＣ２、ＳＤＣ３、ＳＤＣ４、ｐ５３、および１型コラーゲン、より選択されるマーカーを発現する；
（ｉｉｉ）ＩＤＰＳＣの単離集団、ここで２〜３０％の当該ＩＤＰＳＣの単離集団は、Ｏｃｔ３／４、ＴＲＡ１−６０、およびＴＲＡ１−８１、から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する；
（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）のＩＤＰＳＣの単離集団に由来する神経幹細胞；および
それらのいずれかの組合せ；
からなる群より選択され、ここで当該ＩＤＰＳＣの単離集団または神経幹細胞はＨＬＡ−ＡＢＣおよびＨＬＡ−ＤＲに関して陰性である、前記使用。
【請求項１７】
皮膚創傷が、火傷傷害または糖尿病、虚血もしくはコラーゲン疾患から生じる難治性皮膚潰瘍であり；
心疾患が、心筋梗塞であり；および
癌が、神経芽細胞腫または網膜芽細胞腫である；
請求項１５に記載の組成物または使用のための方法、または請求項１６に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９６】
【化１−３】
2016517405.tif 000001
一態様において、本発明は以下であってよい。
［態様１］
神経変性疾患、脱ミエリン化疾患、または両方を治療する方法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団、ＩＤＰＳＣ由来の神経幹細胞、または両方を含む組成物を、神経変性疾患および／または脱ミエリン化疾患を治療するために十分な量で、投与する工程を含む、前記方法。
［態様２］
脱ミエリン化疾患が、多発性硬化症：特発性炎症性脱ミエリン化疾患；ビタミンＢ１２不全；橋中央ミエリン溶解；脊髄ろう；横断性脊髄炎；デビック病；進行性多巣性白質脳症；視神経炎；白質ジストロフィーからなる群より選択される中枢神経系の脱ミエリン化疾患、または：ギランバレー症候群、慢性炎症性脱ミエリン化ポリニューロパシー；抗ＭＡＧ末梢ニューロパシー；シャルコー−マリー・トゥース病；および銅欠乏からなる群より選択される末梢神経系の脱ミエリン化疾患である、態様１の方法。
［態様３］
神経変性疾患が：アルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、前頭側頭型認知症（ピック病）および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳまたはルー・ゲーリック病）からなる群より選択される、態様１の方法。
［態様４］
神経変性疾患が、である、態様１の方法。
［態様５］
網膜神経節細胞（ＲＧＣ）死、視神経変性、または両方を阻害する方法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団、ＩＤＰＳＣ由来の神経幹細胞、または両方を含む組成物を、ＲＧＣ死、視神経変性、または両方を阻害するのに十分な量で投与する工程を含む、前記方法。
［態様６］
腎不全を治療する方法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団を含む組成物を、腎機能を増加させるか、または腎臓損傷を減少させるのに十分な量で投与する工程を含む、前記方法。
［態様７］
組成物を、ｋｇ体重あたり、およそ０．０１−１ｘ１０６細胞の用量で腎内投与を通じて局所投与する、態様６の方法。
［態様８］
ＩＤＰＳＣを投与する工程を１〜３週間の間隔で、腎機能が回復するまで、続いて反復する、ここで、ＩＤＰＳＣの投与間隔を１〜６ヶ月に増加させる、態様６の方法。
［態様９］
禿頭を治療するかまたは白髪を治療する方法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団を含む組成物を、毛髪増殖を増加させ、そして／または被験体の全体の白髪の割合を減少させるのに十分な量で投与する工程を含む、前記方法。
［態様１０］
組成物を、皮下、局所で、またはシャワー法によって、投与して、毛包幹細胞ニッチを回復させる、態様９の方法。
［態様１１］
組成物が細胞シートを生じる、態様９の方法。
［態様１２］
細胞シートが移植され、そして移植前に予め除去された毛髪皮膚によって覆われている、態様１１の方法。
［態様１３］
他の毛髪回復または白髪減少幹細胞因子または薬剤と組み合わせて組成物を投与する工程をさらに含む、態様９の方法。
［態様１４］
皮膚創傷および／または皮膚美容的特徴を治療するための皮膚治療法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団を含む組成物を、皮膚創傷治癒を増加させそして／または皮膚美容的特徴を改善するのに十分な量で投与する工程を含む、前記治療法。
［態様１５］
皮膚創傷が、糖尿病、虚血およびコラーゲン疾患または火傷傷害から生じる難治性皮膚潰瘍である、態様１４の皮膚治療法。
［態様１６］
組成物を、皮膚の硬さを増加させ、しわを減少させ、皮膚加齢プロセスを遅延させ、新規血管形成を増加させ、免疫学的反応を誘導せずにコラーゲン再生を増加させるのに十分な量で投与する、態様１４の皮膚治療法。
［態様１７］
脊髄傷害を治療する方法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団、ＩＤＰＳＣ由来の神経幹細胞、または両方を含む組成物を、脊髄傷害を治療するのに十分な量で投与する工程を含む、前記方法。
［態様１８］
心臓疾患を治療する方法であって、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団、ＩＤＰＳＣ由来の幹細胞、または両方を含む組成物を、心臓疾患を治療するのに十分な量で投与する工程を含む、前記方法。
［態様１９］
精子形成を増加させる方法であって、、その必要がある被験体に、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の未分化集団を含む組成物を被験体における精子形成を誘導するのに十分な量で投与する工程を含む、前記方法。
［態様２０］
心臓疾患が心筋梗塞である、態様１９の方法。
［態様２１］
治療が、心筋細胞アポトーシスを阻害し、そして／または組成物を動脈注射を通じて投与する、態様１９の方法。
［態様２２］
ＩＤＰＳＣの少なくとも５０％が、ｐ７５神経上皮マーカー、ｐ５３腫瘍抑制因子マーカー、または両方を発現する、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様２３］
組成物が、ＩＤＰＳＣおよび／またはＩＤＰＳＣ由来の幹細胞を、少なくとも１ｘ１０６  ＩＤＰＳＣ、少なくとも１ｘ１０７  ＩＤＰＳＣ、少なくとも１ｘ１０８  ＩＤＰＳＣ、少なくとも１ｘ１０９  ＩＤＰＳＣ、または少なくとも１ｘ１０１０  ＩＤＰＳＣで含む、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様２４］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％が、ｐ７５神経上皮マーカーまたはｐ５３腫瘍抑制因子マーカーを発現する、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様２５］
ＩＤＰＳＣの５０％未満が、ＣＤ１３マーカー、ＣＤ３１マーカー、または両方を発現する、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様２６］
ＩＤＰＳＣの５０％未満が、ＣＤ３４、ＣＤ４３、およびＣＤ４５マーカーに関して陰性である、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様２７］
ＩＤＰＳＣの少なくとも５０％が、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ニューロトロフィン−４（ＮＴ４）、およびニューロトロフィン−５（ＮＴ５）より選択される神経栄養因子を生じる、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様２８］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％が、ＢＤＮＦ、ＧＮＤＦ、ベータ−ＮＧＦ、ＮＴ３、ＮＴ４、およびＮＴ５より選択される神経栄養因子を生じる、態様２７の方法。
［態様２９］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％がネスチンを発現する、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様３０］
ＩＤＰＳＣの少なくとも９５％がネスチンを発現する、態様２９の方法。
［態様３１］
ＩＤＰＳＣの２０％未満がＯｃｔ３／４を発現する、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様３２］
ＩＤＰＳＣが、以下の多機能分子プロファイル：
（ａ）ＩＤＰＳＣの少なくとも８０％が、ネスチン、ｐ７５、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＧメンバー２（ＡＢＣＧ２）、ｐ６３、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ＮＴ４、およびＮＴ５より選択されるマーカーを発現する、神経上皮幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
（ｂ）ＩＤＰＳＣの２０％未満がＳＴＲＯ−１およびＣＤ１４６より選択されるマーカーを発現する、周皮細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
（ｃ）集団の少なくとも８０％が、ＣＤ１０５、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１１７、ビメンチン、フィブロネクチン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、テネシン−Ｃ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、シンデカン１（ＳＤＣ１）、ＳＤＣ２、ＳＤＣ３、ＳＤＣ４、ｐ５３、および１型コラーゲンより選択されるマーカーを発現する、間葉系幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
（ｄ）ＩＤＰＳＣの２％〜３０％が、Ｏｃｔ３／４、ＳＯＸ２、Ｎａｎｏｇ、ＴＲＡ１−６０、ＴＲＡ１−８１、およびＳＳＥＡ４より選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、多能性幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；ならびに
（ｅ）ＩＤＰＳＣがＨＬＡ−ＡＢＣおよびＨＬＡ−ＤＲ主要組織適合性（ＭＨＣ）抗原に関して陰性である、間葉系幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
によって特徴付けられる、単離されたヒト出生後ＩＤＰＳＣの表現型的に均質な多系譜集団を含む、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様３３］
ＩＤＰＳＣの集団が、単離されたヒト出生後ＩＤＰＳＣの表現型的に均質な多系譜集団を含み、ヒト出生後ＩＤＰＳＣの前記集団が、低酸素条件下で少なくとも１０採取サイクルに関して培養されたＤＰのアウトグロース（outgrowth）として得られる、態様１〜２１のいずれか一項の方法。
［態様３４］
低酸素条件が：
（ｉ）約０．５％〜１％の間の最大値、または約０．５％〜１５％酸素（Ｏ２）の間の最大値；
（ｉｉ）約０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％または２％または５％の酸素（Ｏ２）；
（ｉｉｉ）約０．１〜２％酸素（Ｏ２）の間；あるいは
５〜７％ＣＯ２を伴う、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のいずれか
を含むかまたはこれらと同等である培養条件下で細胞を培養する工程を含む、態様３３の方法。
［態様３５］
ヒト出生後ＩＤＰＳＣの前記集団の採取工程が、酵素処理を伴わず、ＤＰを保持し、そしてＩＤＰＳＣの低酸素誘導性多系譜志向を可能にする、機械的トランスファーによって起こる、態様３３の方法。
［態様３６］
ヒト出生後ＩＤＰＳＣ集団が、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニン、ビトロネクチン、ポリリジン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、エンタクチン、またはその組み合わせを含む、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）基質とともに培養される、態様３３の方法。
［態様３７］
ＥＣＭ基質がＭａｔｒｉｇｅｌである、態様３６の方法。
［態様３８］
ヒト出生後ＩＤＰＳＣ集団が、少なくとも２０採取サイクル、少なくとも３０採取サイクル、少なくとも４０採取サイクル、少なくとも５０採取サイクル、または少なくとも６０採取サイクルで培養されるＤＰからのアウトグロースとして単離される、態様３３の方法。
［態様３９］
ＩＤＰＳＣの単離集団を産生する方法であって：
（ａ）歯からＤＰを摘出し；
（ｂ）ＤＰを無菌容器中に入れ、そして抗生物質を含む無菌溶液でＤＰを洗浄し；
（ｃ）場合によって、抗生物質を含む無菌溶液を取り除き、そしてＤＰを基本培地中で細かく刻み；
（ｄ）ＤＰを、培地を含有する別の容器内に、機械的にトランスファーするか、または容器内の培地を交換し；
（ｅ）ＩＤＰＳＣのアウトグロースおよび接着が観察されるまでＤＰを培養し；そして
（ｆ）ＤＰ内の多数ニッチからＩＤＰＳＣのアウトグロースおよび接着を可能にするように、少なくとも５回、工程（ｄ）および（ｅ）を反復する
工程を含む、前記方法。
［態様４０］
ＤＰ培養を少なくとも３日間進める、態様３９の方法。
［態様４１］
ＤＰ培養を少なくとも５日間、少なくとも１０日間または少なくとも１５日間進める、態様４０の方法。
［態様４２］
歯が、乳歯、永久歯、および第三大臼歯より選択される、態様３９の方法。
［態様４３］
工程（ｄ）および（ｅ）が、少なくとも１０回、少なくとも２０回、少なくとも３０回、少なくとも４０回、少なくとも５０回、または少なくとも６０回反復される、態様３９の方法。
［態様４４］
ＤＰ内の多数のニッチの完全性が、ＤＰ外植片の機械的トランスファーによって保持される、態様３９の方法。
［態様４５］
ＤＰ外植片を培地を含む別の容器内に機械的にトランスファーする前に、ＤＰを凍結保存し、そして融解する、態様３９の方法。
［態様４６］
（ｇ）ＩＤＰＳＣを継代培養に継代する
工程をさらに含む、態様３９の方法。
［態様４７］
ＩＤＰＳＣを継代中にプロテアーゼで処理しない、態様４６の方法。
［態様４８］
ＩＤＰＳＣを継代中にプロテアーゼで処理する、態様４６の方法。
［態様４９］
ＩＤＰＳＣの継代培養への継代を最大５回反復する、態様４６の方法。
［態様５０］
ＩＤＰＳＣの継代培養への継代を最大４回、３回、２回、または１回反復する、態様４９の方法。
［態様５１］
ＤＰを約３日間培養すると、少なくとも１ｘ１０５  ＩＤＰＳＣの単離集団を生じる、態様３９の方法。
［態様５２］
ＤＰを約３日間培養すると、少なくとも２ｘ１０５  ＩＤＰＳＣ、少なくとも３ｘ１０５  ＩＤＰＳＣ、少なくとも４ｘ１０５  ＩＤＰＳＣ、少なくとも５ｘ１０５  ＩＤＰＳＣ、少なくとも６ｘ１０５  ＩＤＰＳＣ、少なくとも７ｘ１０５  ＩＤＰＳＣ、または少なくとも８ｘ１０５  ＩＤＰＳＣの単離集団を生じる、態様５１の方法。
［態様５３］
培地がＤＭＥＭ／Ｆ１２培地またはＭＥＭ−アルファ培地である、態様３９の方法。
［態様５４］
培地に、約５％〜約２０％のウシ胎児血清、約１％の非必須アミノ酸、約１％のＬ−グルタミンまたはＬ−グルタミン置換物、および約１％の抗生物質が補充されている、態様５３の方法。
［態様５５］
神経幹細胞および／または分化した神経細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで生じさせる方法であって：
歯髄（ＤＰ）の少なくとも１０サイクルの機械的トランスファーによって維持されたＤＰ外植片培養から、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）を単離し；
細胞の集密に到達することなくＩＤＰＳＣを培養し、ここで、これらの細胞を培地中で１週間、追加培養し、
酵素的消化を用いて、これらの細胞を採取し、そして
レチノイン酸の存在下で、さらなる拡大のため、ペトリ皿上に植え付ける
工程を含む、前記方法。
［態様５６］
集密が、２５ｃｍ２の培地中、２ｘ１０６  ＩＤＰＳＣに等しい、態様５５の方法。
［態様５７］
ＤＰ外植片培養が、少なくとも１５サイクル、少なくとも２０サイクル、少なくとも２５サイクル、または少なくとも３０サイクルのＤＰの機械的トランスファーによって維持される、態様５６の方法。
［態様５８］
サイクルが、ＤＰの機械的トランスファー前の、約２日間、約３日間、約４日間、または約５日間の外植片培養である、態様５５の方法。
［態様５９］
集密前の未分化ＬＰ  ＩＤＰＳＣの前記培養が、この段階で、ニューロスフェアまたは一次スフェアまたはスフェア様構造形成を回避する、態様５５の方法。
［態様６０］
集密前が、ＩＤＰＳＣの基本培地中に維持される、２５ｃｍ２中、２ｘ１０６  ＩＤＰＳＣに等しい、態様５９の方法。
［態様６１］
ＩＤＰＳＣ基本培地の前記置換が、いかなる他の成長因子も含まず、２％のＢ２７を補充した神経基本培地（ＮＢ＋Ｂ２７）への置換である、態様６０の方法。
［態様６２］
ＩＤＰＳＣの前記インキュベーションが、酵素消化または細胞再植え付けを伴わず、１週間の間、ＮＢ＋Ｂ２７中でインキュベーションすることである、態様６１の方法。
［態様６３］
ＮＢ＋Ｂ２７培地の前記交換が、各３〜４日間である、態様６２の方法。
［態様６４］
態様５５記載の方法によって生じる、単離された神経幹細胞。
［態様６５］
前記の１週間後、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡでの２〜３分間の処理後に、細胞を採取し、ＮＢ＋Ｂ２７で中和する、態様６２の方法。
［態様６６］
８００ｇ、５分間の遠心分離後、細胞ペレットを得て、そして上清を廃棄する、態様６２の方法。
［態様６７］
ＩＤＰＳＣペレットをＮＢ＋Ｂ２７中で穏やかに脱凝集し、そして拡大のため、各々、平方９．６ｃｍ２を有する６枚のペトリ皿上に植え付ける、態様６６の方法。
［態様６８］
前記レチノイン酸を、０．１μＭを超えない最終濃度で２４時間で添加しなければならず、そして４８時間後、神経分化細胞を産生するニューロスフェアを得ることが可能である、態様６７の方法。
［態様６９］
ＩＤＰＳＣの前記分化が、同じ培養プレート中、同時に、ニューロンおよびグリア細胞に分化するものである、態様１の方法。
［態様７０］
態様１にしたがった方法によって生じる、脱ミエリン化疾患を治療し、そして治癒させることが可能な、ＩＤＰＳＣ。
［態様７１］
網膜幹細胞および／または分化した網膜細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで生成する方法であって：
歯髄（ＤＰ）の少なくとも１０サイクルの機械的トランスファーによって、維持されたＤＰ外植片培養から、未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）を単離し；
半集密に到達するまで、ＩＤＰＳＣを培養し；
酵素的消化を用いて、これらの細胞を採取し；そして
さらなる拡大のため、ペトリ皿上に植え付ける
工程を含む、前記方法。
［態様７２］
分化した網膜細胞が、桿体細胞、錐体細胞、および／または神経節細胞である、態様７１の方法。
［態様７３］
増加した多系譜潜在力を所持するＬＰ  ＩＤＰＳＣを含む組成物であって、前記ＩＤＰＳＣをロバストな神経上皮マーカーの発現を可能にする条件下で培養し、前記発現が、前記ＬＰ  ＩＤＰＳＣの多機能再生潜在力を生じる、前記組成物。
［態様７４］
ＤＰの長期培養後、遠位ニッチにアクセスさせることを通じて、ＩＤＰＳＣを誘導することによって、そして／または採取したＩＤＰＳＣを低継代数で培養して、核型突然変異を防止し、そしてそれによって腫瘍原性のリスクを防止する低酸素非酵素的採取条件下で、特に、神経外胚葉系譜へのＩＤＰＳＣの潜在力を増加させ、そして腫瘍原性潜在力を減少させる方法。
［態様７５］
未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の単離集団を含む組成物であって、ＩＤＰＳＣの少なくとも５０％がｐ７５神経上皮マーカーを発現する、前記組成物。
［態様７６］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％がｐ７５神経上皮マーカーを発現する、態様７５の組成物。
［態様７７］
ＩＤＰＳＣの少なくとも５０％がｐ５３腫瘍抑制因子マーカーを発現する、ＩＤＰＳＣの単離集団を含む組成物。
［態様７８］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％がｐ５３腫瘍抑制因子マーカーを発現する、態様３の組成物。
［態様７９］
ＩＤＰＳＣの５０％未満がＣＤ１３マーカーを発現する、態様７５〜７８のいずれか一項の組成物。
［態様８０］
ＩＤＰＳＣの５０％未満がＣＤ３１マーカーを発現する、態様７５〜７８のいずれか一項の組成物。
［態様８１］
ＩＤＰＳＣの５０％未満が、ＣＤ１３およびＣＤ３１より選択されるマーカーを発現し、そしてＩＤＰＳＣがＣＤ３４、ＣＤ４３、およびＣＤ４５マーカーに関して陰性である、態様７５〜７８のいずれか一項の組成物。
［態様８２］
ＩＤＰＳＣの少なくとも５０％が、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ニューロトロフィン−４（ＮＴ４）、およびニューロトロフィン−５（ＮＴ５）より選択される神経栄養因子を産生する、態様７５〜７８のいずれか一項の組成物。
［態様８３］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％が、ＢＤＮＦ、ＧＮＤＦ、ベータ−ＮＧＦ、ＮＴ３、ＮＴ４、およびＮＴ５より選択される神経栄養因子を産生する、態様８２の組成物。
［態様８４］
ＩＤＰＳＣの少なくとも７５％がネスチンを発現する、態様７５〜７８のいずれか一項の組成物。
［態様８５］
ＩＤＰＳＣの少なくとも９５％がネスチンを発現する、態様８４の組成物。
［態様８６］
ＩＤＰＳＣの２０％未満がＯｃｔ３／４を発現する、態様７５〜７８のいずれか一項の組成物。
［態様８７］
（ａ）ＩＤＰＳＣの少なくとも８０％が、ネスチン、ｐ７５、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＧメンバー２（ＡＢＣＧ２）、ｐ６３、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＮＤＦ）、神経成長因子−ベータ（ベータ−ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、ＮＴ４、およびＮＴ５より選択されるマーカーを発現する、神経上皮幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
（ｂ）ＩＤＰＳＣの２０％未満がＳＴＲＯ−１およびＣＤ１４６より選択されるマーカーを発現する、周皮細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
（ｃ）集団の少なくとも８０％が、ＣＤ１０５、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１１７、ビメンチン、フィブロネクチン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、テネシン−Ｃ、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、シンデカン１（ＳＤＣ１）、ＳＤＣ２、ＳＤＣ３、ＳＤＣ４、ｐ５３、および１型コラーゲンより選択されるマーカーを発現する、間葉系幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
（ｄ）ＩＤＰＳＣの２％〜３０％が、Ｏｃｔ３／４、ＳＯＸ２、Ｎａｎｏｇ、ＴＲＡ１−６０、ＴＲＡ１−８１、およびＳＳＥＡ４より選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、多能性幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；ならびに
（ｅ）ＩＤＰＳＣがＨＬＡ−ＡＢＣおよびＨＬＡ−ＤＲ主要組織適合性（ＭＨＣ）抗原に関して陰性である、間葉系幹細胞プロファイルＩＤＰＳＣ；
の多機能分子プロファイルによって特徴付けられる、単離されたヒト出生後ＩＤＰＳＣの表現型的に均質な多系譜集団を含む、組成物。
［態様８８］
ヒト出生後ＩＤＰＳＣの集団が、低酸素条件下で少なくとも１０採取サイクルに渡って培養されたＤＰのアウトグロースとして得られる、単離されたヒト出生後ＩＤＰＳＣの表現型的に均質な多系譜集団を含む組成物。
［態様８９］
低酸素条件が：
（ｉ）約０．５％〜１％の間の最大値、または約０．５％〜１５％酸素（Ｏ２）の間の最大値；
（ｉｉ）約０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％または２％または５％の酸素（Ｏ２）；
（ｉｉｉ）約０．１％〜２％酸素（Ｏ２）の間；あるいは
５〜７％ＣＯ２を伴う、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のいずれか
を含むかまたはこれらと同等である培養条件下で細胞を培養する工程を含む、態様８８の組成物。
態様８９
ヒト出生後ＩＤＰＳＣの集団の採取工程が、ＤＰを保持し、そしてＩＤＰＳＣの低酸素誘導性多系譜志向を可能にする、酵素処理を伴わない機械的トランスファーによって起こる、態様８８の組成物。
［態様９０］
ヒト出生後ＩＤＰＳＣ集団が、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニン、ビトロネクチン、ポリリジン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、エンタクチン、またはその組み合わせを含む、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）基質とともに培養される、態様８８の組成物。
［態様９１］
ＥＣＭ基質がＭａｔｒｉｇｅｌである、態様９０の組成物。
［態様９２］
ヒト出生後ＩＤＰＳＣ集団が、少なくとも２０採取サイクル、少なくとも３０採取サイクル、少なくとも４０採取サイクル、少なくとも５０採取サイクル、または少なくとも６０採取サイクルに渡って培養されるＤＰからのアウトグロースとして単離される、態様８８〜９１のいずれか一項の組成物。
［態様９３］
ＩＤＰＳＣが歯由来の歯髄（ＤＰ）から単離される、態様７５〜９２のいずれか一項の組成物。
［態様９４］
歯が、乳歯、永久歯、および第三大臼歯より選択される、態様９３の組成物。
［態様９５］
ＳＯＸ−１およびＳＯＸ−２を同時発現し、そして神経冠幹細胞である、ヒト未成熟歯髄幹細胞（ｈＩＤＰＳＣ）を含む細胞培養組成物。
［態様９６］
長期（ＬＴ）細胞培養から得られ、そして転写因子の濃縮が、ＬＰ培養に向かって増加し、それによって、神経分化への高い潜在能力を保持し、そして正常核型を有する、態様９５の細胞培養組成物。
［態様９７］
ヒト未成熟歯髄幹細胞（ｈＩＤＰＳＣ）の均質な集団を得るための方法であって：
少なくとも２５サイクルの長期（ＬＴ）機械的／非酵素的採取サイクルを通じて、均質な集団を得て；
採取された細胞を培養して細胞培養を形成し、そして
細胞培養からプラスチック接着細胞を継代し、ここでプラスチック接着細胞は、（ｉ）自己再生し、（ｉｉ）内胚葉、中胚葉、または外胚葉系譜の細胞に分化し、（ｉｉｉ）マーカー、Ｓｏｘ−１、Ｓｏｘ−２および３−ベータ−チューブリンを発現する
工程を含む、前記方法。
［態様９８］
最終段階にまだ拘束されていない、Ｓｏｘ−１、Ｓｏｘ−２およびベータ−３−チューブリンなどのマーカーを含む（同時発現する）、有糸分裂的に活性である均質な神経前駆組成物。
［態様９９］
分化前未成熟歯髄幹細胞（ＩＤＰＳＣ）の実質的に均質な集団を得るための方法であって：
非接着性懸濁条件でＩＤＰＳＣを培養し、その後、プラスチックプレートに接着させて神経ロゼットを形成することによって、ＩＤＰＣＳ由来ニューロスフェアを得る、ここで、ロゼット内の細胞は、ＩＤＰＳＣよりわずかにより分化した、Ｓｏｘ−１、Ｓｏｘ−２およびＢｒｄＵおよびベータ−３−チューブリンに関して陽性である神経芽細胞の細胞集団を移行（ｔｒａｎｓｉｔ）増幅させることによって提示され、神経芽細胞は、外部ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ誘導性微小環境に際して、神経前駆体、星状細胞、オリゴデンドロサイト、および神経節細胞を含む、中枢神経系および末梢神経系のニューロン系譜に最終的に分化することが可能である
工程を含む、前記方法。
［態様１００］
態様１１６の方法によって得られる分化前ＩＤＰＳＣ、およびＣＮＳ疾患を治療する細胞療法に適した薬学的に許容されうるキャリアーを含む、薬学的組成物。
［態様１０１］
癌を治療するための、態様１００の薬学的組成物の使用。
［態様１０２］
癌が神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫より選択される、態様１０１の使用。
［態様１０３］
ＩＤＰＳＣの実質的に均質なＬＰが、Ｓｏｘ−１；Ｓｏｘ−２；およびベータ−３−チューブリンを含む群より選択される、少なくとも２つのマーカーを同時発現する、態様９９の方法。