【手続補正書】
【提出日】平成29年1月16日(2017.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血漿プロテアーゼＣ１インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）を含有する検体を捕捉試薬と接触させることと、
前記捕捉試薬（任意選択で基材に固定化されている）に結合した前記検体中のＣ１−ＩＮＨのレベルを測定することと、
を含む方法であって、
前記捕捉試薬は、
ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、
ｉｉ）活性型血漿カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、または
ｉｉｉ）ｉ）およびｉｉ）の組み合わせ
を含む、
方法。
【請求項２】
前記捕捉薬に結合したＣ１−ＩＮＨのレベルが、Ｃ１−ＩＮＨに結合する検出薬を用いて測定され、任意選択で前記検出薬は、Ｃ１−ＩＮＨに結合する抗体、活性型第ＸＩＩ因子、活性型血漿カリクレイン、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記捕捉薬に結合したＣ１−ＩＮＨのレベルが、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）により測定される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｃ１−ＩＮＨを含有する検体は対象から得られ、任意選択で前記検体は血液検体または血漿検体であり、任意選択で前記対象はｐＫａｌ関連疾病の症状を有し、好ましくは、前記症状は、浮腫；腫脹の再発発作；全てまたは大部分が末梢にある腫脹；蕁麻疹；感染症の確証がない発赤、痛みおよび腫脹；および非ヒスタミン関連浮腫からなる群より選択され、または任意選択で、前記対象は、前記検体を採取した際にはｐＫａｌ関連疾病の症状を有さないか、ｐＫａｌ関連疾病の症状の病歴を有さないか、またはｐＫａｌ関連疾病の病歴を有さない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記検体中の前記捕捉試薬に結合するＣ１−ＩＮＨのレベルが基準値と比較して減少した場合に前記対象を、ｐＫａｌ関連疾病のおそれがあるかまたはｐＫａｌ関連疾病に罹患していると同定することをさらに含む、請求項４に記載の方法であって、
好ましくは、前記ｐＫａｌ関連疾病は、非ヒスタミン依存性突発血管性浮腫、関節リウマチ、クローン病、狼瘡、アルツハイマー病、敗血症性ショック、熱傷、脳虚血／再灌流傷害、脳浮腫、糖尿病網膜症、糖尿病腎症、黄斑浮腫、血管炎、動脈または静脈の血栓症、補助人工心臓またはステントに関連する血栓症；血栓症、血栓塞栓症、および、不安定狭心症を伴う冠動脈疾患、を伴うヘパリン起因性血小板減少症；浮腫、眼疾患、痛風、炎症性腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症変性脊椎疾患、術後腸閉塞、大動脈瘤、変形性関節症、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、静脈血栓症、脳卒中、頭部外傷または腫瘍周辺脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血（脳卒中）、再狭窄、全身性エリテマトーデス腎炎、自己免疫疾患、炎症性疾患、心血管疾患、神経疾患、タンパク質のミスフォールディングに関連する疾患、血管新生に関連する疾患、高血圧性腎症および糖尿病腎症、アレルギー性呼吸器疾患、ならびに組織損傷からなる群から選択される、
方法。
【請求項６】
前記対象は、抗ヒスタミン療法、コルチコステロイド療法、またはその両方に耐性を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ｐＫａｌ関連疾病に罹患している対象の治療に使用するための治療薬であって、
前記治療薬は、カリクレイン結合薬、ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬、またはＣ１−ＩＮＨ置換薬であり、好ましくはＤＸ−８８、ＤＸ−２９３０、またはＥＰＩＫＡＬ−２であり、
前記対象において、捕捉試薬と結合可能なＣ１−ＩＮＨのレベルが基準値よりも低下しており、好ましくは、前記対象はヒトＨＡＥ患者であり、
前記捕捉試薬は、
ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、
ｉｉ）活性型カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、または
ｉｉｉ）ｉ）およびｉｉ）の組み合わせ
を含む、
治療薬。
【請求項８】
捕捉試薬に結合可能な血漿プロテアーゼＣ１インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）を検出するためのキットであって、
ａ）任意選択で基材に固定化されている、捕捉試薬であって、
ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、
ｉｉ）活性型カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、または
ｉｉｉ）ｉ）およびｉｉ）の組み合わせ
を含む捕捉試薬、
ｂ）Ｃ１−ＩＮＨに結合する検出試薬、および任意選択で
ｃ）Ｃ１−ＩＮＨ、
を含むキット。
【請求項９】
前記検出試薬は抗Ｃ１−ＩＮＨ抗体である、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
対象のｐＫａｌ関連疾病の治療を評価するための方法であって、
前記治療の前後または前記治療中に前記対象から収集された検体中の、血漿カリクレイン、第ＸＩＩ因子、またはその両方を抑制可能な血漿プロテアーゼＣ１インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）のレベルを測定することであって、前記検体は好ましくは血液検体または血漿検体である、測定することと、
前記Ｃ１−ＩＮＨのレベルに基づき、前記治療の有効性を評価することと、
を含み、前記治療後の、または治療期間にわたる、Ｃ１−ＩＮＨレベルの増加は、前記対象において前記治療が有効であることを示し、好ましくは、前記対象はヒトＨＡＥ患者である、方法。
【請求項１１】
前記治療は、カリクレイン結合薬、ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬、またはＣ１−ＩＮＨ置換薬を含み、好ましくは、前記治療は、ＤＸ−８８、ＤＸ−２９３０、またはＥＰＩＫＡＬ−２を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象から収集された前記検体を捕捉試薬（任意選択で基材に固定化されている）と接触させることと、
前記捕捉試薬に結合した検体中の前記Ｃ１−ＩＮＨのレベルを測定することと、
を含む過程によって前記Ｃ１−ＩＮＨのレベルが測定され、
前記捕捉試薬は、
ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、
ｉｉ）活性型血漿カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、または
ｉｉｉ）ｉ）およびｉｉ）の組み合わせ
を含む、
請求項１０または１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｃ１−ＩＮＨのレベルは、Ｃ１−ＩＮＨに結合する検出薬を用いて測定され、任意選択で前記検出薬は、Ｃ１−ＩＮＨに結合する抗体、活性型第ＸＩＩ因子、活性型血漿カリクレイン、またはそれらの組み合わせである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｃ１−ＩＮＨのレベルは、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）により測定される、請求項１２または１３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
よって、本開示の一態様は、（ａ）血漿プロテアーゼＣ１インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）を含有する検体を捕捉試薬と接触させることと、（ｂ）捕捉試薬と結合した検体中のＣ１−ＩＮＨレベルを測定することとを含む方法を特徴とする。捕捉試薬は、ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、ｉｉ）活性型血漿カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、またはｉｉｉ）ｉ）およびｉｉ）の組み合わせを含む。例えば、捕捉試薬は、活性型第ＸＩＩ因子、活性型血漿カリクレイン、またはその組み合わせであってよい。本明細書に記載のアッセイで使用される捕捉試薬のうちいずれかは、基材に固定化され得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
一部の実施形態において、ＦＸＩＩａ、活性型ＰＫａｌ、またはその組み合わせであってよい捕捉試薬が基材に固定化されている。一部の実施形態において、検出試薬は、抗Ｃ１−ＩＮＨ抗体である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
一部の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨレベルは、本明細書に記載のアッセイ法により測定することができる。例えば、Ｃ１−ＩＮＨレベルは、（ａ）対象から収集された検体を（例えば、基材に固定化された）捕捉試薬と接触させることと、（ｂ）ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、ｉｉ）活性型血漿カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、またはｉｉｉ）ｉ）およびｉｉ）の組み合わせを含んでよい捕捉試薬に結合した検体中のＣ１−ＩＮＨレベルを測定することとを含む過程により測定することができる。一部の例において、捕捉試薬は、活性型第ＸＩＩ因子、活性型血漿カリクレイン、またはその組み合わせを含む。本明細書に記載のアッセイのうちいくつかにおいて、Ｃ１−ＩＮＨレベルは、Ｃ１−ＩＮＨに結合する検出薬、例えば、Ｃ１−ＩＮＨに結合する抗体を使用して測定することができる。一部の例において、Ｃ１−ＩＮＨレベルは、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着法）により測定される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
一部の実施形態において、上記１種以上の捕捉試薬は、基材に配置される。特定の実施形態において、基材は、不溶性基材である。一部の実施形態において、上記１種以上の捕捉試薬は、活性型第ＸＩＩ因子、またはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む。特定の実施形態において、上記１種以上の捕捉試薬は、活性型カリクレイン、またはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む。特定の実施形態において、上記１種以上の捕捉試薬は、活性型第ＸＩＩ因子またはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片および活性型カリクレインまたはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
一部の実施形態において、上記１種以上の捕捉試薬は、その基材に配置された第２の特異的結合成分と共に複合体を形成する第１の特異的結合成分を含む。特定の実施形態において、上記第１および第２の結合成分は、ビオチンおよびアビジンから選択される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
一部の実施形態において、捕捉試薬は、その複合体を基材と結合する成分をさらに含む。特定の実施形態において、上記成分は、第１および第２の結合パートナーを含み、一方は、上記捕捉試薬に結合され、他方は、上記基材に結合される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
更に別の態様において、本発明は、本明細書に記載の１つ以上の捕捉薬、例えば、ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む成分、またはｉｉ）活性型カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む成分の一方または両方、を含む基材を提供する。一部の実施形態において、上記基材は、個別に位置を特定可能な領域に配置される、成分ｉおよびｉｉを含む。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
また別の態様において、本発明は、本明細書に開示される捕捉試薬の少なくとも１つおよび実施形態によっては両方を配置する基材を含む装置を提供する。実施形態において、第１の捕捉試薬は、第１の領域に配置され、第２の捕捉試薬は、上記基材の第２の領域、例えば、異なるウェルに配置される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
別の態様において、本発明は、任意に基材に配置される、本明細書に記載の捕捉試薬の一方または両方、検出試薬、例えば、抗Ｃ１−ＩＮＨ抗体、および標準物質、例えばＣ１−ＩＮＨのうち１つ以上を含むキットを提供する。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
Ｂ．捕捉試薬
本明細書に記載のアッセイ法で使用される捕捉試薬は、キニン形成カスケードを抑制する機能、例えば、ＰＫａｌ、ＦＸＩＩ、またはその両方を抑制する機能のあるＣ１−ＩＮで補体を形成することができる。一部の実施形態において、捕捉試薬は、活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む成分、または活性型カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片を含む成分のうち一方または両方を含んでもよい。一部の実施形態において、本発明の捕捉試薬は、天然資源から単離および／または精製される。一部の実施形態において、本発明の捕捉試薬は、組み換えまたは合成により生成される。一部の実施形態において、捕捉試薬は、基材、例えば、不溶性基材に配置（例えば、それらと結合）される。捕捉試薬は、共有結合または非共有結合により基材と結合してもよい。捕捉試薬は、基材と直接結合してもよいし、基材と間接的に、例えばリンカーを介して結合してもよい。リンカーの例としては、限定するものではないが、炭素含有鎖、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、核酸、単糖単位、ビオチン−アビジンおよびペプチドを含む。一部の実施形態において、基材は、１つ以上のウェルを含む容器、例えばマイクロタイタープレートである。活性型第ＸＩＩ因子またはカリクレインのＣ１−ＩＮＨ結合断片は、完全長の捕捉試薬の断片を生成し、断片がＣ１−ＩＮＨと結合するかどうかと決定することにより作製することができる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
一部の実施形態において、捕捉試薬は、第１の特異的結合成分、例えばビオチンまたはアビジンを含み、基材、例えば、不溶性基材に配置（例えば、それと結合）される第２の結合成分、例えば、ビオチンまたはアビジンと複合体を形成する。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２７】
一部の実施形態において、試験は、基材、例えば反応容器に、例えば、捕捉薬が基材と結合するような条件下で、例えばＥＬＩＳＡを使用して、捕捉薬を添加することにより行われる。検体、例えば対象からの組織検体、例えば、血液、血漿または涙は、捕捉薬を含む基材（例えば反応容器）に添加されてもよい。任意に存在する捕捉薬結合分子は、固定化捕捉薬分子と結合してもよい。抗体または抗体−検出薬抱合体は、反応混合物に添加されてもよい。抱合体の抗体部分は、予め結合した任意の抗原分子（例えば、Ｃ１−ＩＮＨ）と結合し、抗体−抗原−抗体の「サンドウィッチ」を生じる。未結合の抱合体を洗い流した後、検出を助けるために基質溶液が添加されてもよい。例えば、設定された間隔後、反応を停止してもよく（例えば、１Ｎ  ＮａＯＨを添加することにより）、形成され、染色された生成物の濃度を分光光度計で測定してもよい。色素の強度は、結合した抗原の濃度に比例する。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４２】
Ｄ．キット
本開示は、ＰＫａｌおよび／またはＦＸＩＩを阻害する機能のあるＣ１−ＩＮＨを評価するために使用するキットも提供する。そのようなキットは、（ａ）本明細書に記載の捕捉試薬、および（ｂ）こちらも本明細書に記載の、Ｃ１−ＩＮＨと結合する検出試薬、例えば、抗Ｃ１−ＩＮＨ抗体、ならびに、場合によっては（ｃ）Ｃ１−ＩＮＨを含んでよい。一部の実施形態において、捕捉試薬は、（ｉ）活性型第ＸＩＩ因子もしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、（ｉｉ）活性型カリクレインもしくはそのＣ１−ＩＮＨ結合断片、または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の組み合わせを含む。一部の実施形態において、捕捉試薬は、マイクロプレート等の基材に固定化される。