(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
0003596919.tif 000008
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される化合物を、
ファエオクレオプシス属に属し不斉還元能を有する微生物の菌体、培養液または微生物菌体処理物で処理することを特徴とする、式（２）
【化２】
0003596919.tif 000009
（式中、Ｒおよびｎの定義は前記の定義に等しい。）
で示される化合物の製造法
【請求項２】
式（１）の化合物が、Ｒがベンジル基でありｎが２である化合物であるところの請求項１に記載の製法
【請求項３】
式（１）の化合物が、Ｒがベンジル基でありｎが３である化合物であるところの請求項１に記載の製法
【請求項４】
式（１）
【化３】
0003596919.tif 000010
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される化合物を、ファエオクレオプシス属に属し不斉還元能を有する微生物の菌体、培養液または微生物菌体処理物で処理し、式（２）
【化４】
0003596919.tif 000011
（式中、Ｒおよびｎの定義は前記の定義に等しい。）
で示される化合物を得、この式（２）で示される化合物にジフェニルホスホリルアジドを作用させ、式（３）
【化５】
0003596919.tif 000012
（式中、Ｒおよびｎの定義は前記の定義に等しい。）
で示される化合物を得、この式（３）で示される化合物を還元することを特徴とする式（４）
【化６】
0003596919.tif 000013
（式中、Ｒおよびｎの定義は前記の定義に等しい。）
で示される化合物の製造法
【請求項５】
式（３）で示される化合物の還元が、金属水素化アルミニウム化合物あるいはジボランによる還元である請求項４に記載の製法
【請求項６】
式（１）の化合物が、Ｒがベンジル基でありｎが２である化合物であるところの請求項４または５に記載の製法
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、化７
【０００２】
【化７】
0003596919.tif 000002
で表される優れたキノロン誘導体（特開平２−２３１４７５号）の製造原料として有用な、式（４）
【０００３】
【化８】
0003596919.tif 000003
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される光学活性なアミン化合物の製造法に関する。
【０００４】
【従来の技術】
従来、式（４）で表される立体配位のアミン化合物を立体異性体的に純粋に製造する方法は特開平４−１４９１７４号に記載の如く光学活性な酒石酸との塩として得る方法（ラセミ体の分割）が知られている。しかしこの方法は塩による光学分割であり、完全な分割が可能となっても不要な立体のアミン化合物が残存することを免れ得ない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、キノロン誘導体の製造原料として有用な式（４）で表される化合物（以下、化合物（４）という。他の番号の式の化合物についても同様に省略する。）について、微生物を用いた不斉還元反応によって所望の立体異性体のみを製造する方法を提供することにある。
【０００６】
すなわち本発明は、式（１）
【０００７】
【化９】
0003596919.tif 000004
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される化合物を、
ファエオクレオプシス属に属し不斉還元能を有する微生物の菌体、培養液または微生物菌体処理物で処理することを特徴とする、式（２）
【０００８】
【化１０】
0003596919.tif 000005
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される化合物の製法に関する。
【０００９】
さらに本発明は、式（１）の化合物が、Ｒがベンジル基でありｎが２もしくは３である化合物であるところの上記の製法に関する。
【００１０】
また本発明は、式（１）で示される化合物を、
ファエオクレオプシス属に属し不斉還元能を有する微生物の菌体、培養液または微生物菌体処理物で処理し、
式（２）で示される化合物を得、この式（２）で示される化合物にジフェニルホスホリルアジドを作用させ、式（３）
【００１１】
【化１１】
0003596919.tif 000006
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される化合物を得、この式（３）で示される化合物を還元することを特徴とする式（４）
【００１２】
【化１２】
0003596919.tif 000007
（式中、Ｒはベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここで置換基Ｒがベンゼン環を有する置換基の場合、そのベンゼン環は置換基を有していてもよい。ｎは２または３を表す。）
で示される化合物の製造法に関する。
【００１３】
そして本発明は、式（３）で示される化合物の還元が、金属水素化アルミニウム化合物あるいはジボランによる還元である上記の製法に関する。
【００１４】
さらに本発明は、式（１）の化合物が、Ｒがベンジル基でありｎが２である化合物であるところ上記の製法に関する。
【００１５】
本発明について以下に詳細に説明する。
すなわち本発明は、化合物（１）に対してファエオクレオプシス属に属する微生物から選ばれるところの不斉還元能を有する微生物を作用させ、光学活性な化合物（２）を得、更にこれをアミン化合物である化合物（４）に変換する方法に関するものである。
【００１６】
本発明に使用される式（１）で示される化合物において置換基Ｒは、ベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基または低級アルキル基を意味する。ここでＲが部分構造としてベンゼン環を有するベンジル基、トリチル基、ベンズヒドリル基であるとき、そのベンゼン環はさらに置換基を有していてもよい。ベンゼン環が複数ある場合、１以上のベンゼン環が置換されていてもよい。またベンゼン環１に対して置換基は１種以上が１以上置換していてもよい。このようなベンゼン環上の置換基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基またはヘキシル基等のアルキル基類、メトキシル基、エトキシル基、プロポキシル基、ブトキシル基、ペントキシル基、ヘキシルオキシ基等のアルコキシル基類、ハロゲン原子類、およびニトロ基からなる群から選ばれる置換基でよい。式（１）で示される化合物は既知の方法によって調製することができる（特開平３−９５１７６号公報、特開平５−２８６９３３号公報参照）。
【００１７】
本発明の方法によって化合物（１）から化合物（２）を製造するには、市販のファエオクレオプシス属（Ｐｈａｅｏｃｒｅｏｐｓｉｓ ｓｐ．）に属する微生物であって、不斉還元能を有する微生物を使用して製造すればよい。この方法にはファエオクレオプシス属に属する微生物の菌体、培養液または微生物菌体処理物が使用できる。
【００１８】
微生物の菌体とは、培養液から遠心分離、濾過等により集菌された生菌体、あるいは、真空乾燥菌体、凍結乾燥菌体および有機溶媒による乾燥菌体等の乾燥菌体などである。また、菌体を公知の方法によって水不溶の担体（例えば、アクリルアミドゲル）などに固定化したものを使用してもよい。
【００１９】
微生物の培養液とは、当該微生物を適当な培地で培養したもので、増殖した微生物菌体およびその代謝物を含むものである。
【００２０】
微生物菌体処理物は、微生物菌体の抽出物や微生物菌体の磨砕物、微生物菌体を超音波処理ものや、さらには、それらをクロマトグラフィー、濾過等の公知の方法により分画し、本発明の不斉還元の処理に必要な成分を分離したものである。なお、この分画物に含まれる処理に必要な成分は完全に純粋な状態でなくともよく、反応に障害とならないのであれば他の成分を含んでいてもよい。
【００２１】
本発明の方法によって式（２）で表される化合物を製造する方法について述べる。すなわち、まず式（１）で表される化合物を適当な緩衝液に懸濁し、次いでファエオクレオプシス属する微生物の菌体、培養物または処理物を加え、撹拌して処理することによって行えばよい。
【００２２】
この処理に際して、処理温度は通常５℃から６０℃の範囲であればよいが、好ましくは２０℃から４０℃の範囲である。処理液のｐＨは４から９の範囲であればよく、好ましくはｐＨ５から７の範囲である。処理時間は、通常、１日から３日間であり、処理液を撹拌して行えばよい。
【００２３】
処理液中で使用されるところの式（１）で表される化合物の濃度は、０．１％から５％の間であればよいが、０．１％から０．５％の範囲が特に好ましい。微生物の培養液、微生物菌体または微生物菌体処理物の使用量は特に限定されないが、乾燥菌体重量に換算して、化合物（１）に対し重量比で  ０．２倍から２倍が適当である。
【００２４】
上記の処理の終了後、処理液を濾過して菌体を除去した後、濾液から抽出、減圧濃縮等の通常の操作を用いることによって目的の化合物（２）を単離することができる。
【００２５】
化合物（２）をアジド化合物である化合物（３）に変換するにはジフェニルホスホリルアジドを反応させる方法によるのが簡便である。本発明ではこの試薬で通常使用される反応条件を用いて実施すればよい。
【００２６】
この化合物（３）を化合物（４）に変換するための還元は、リチウム  アルミニウム  ハイドライド、ナトリウム  ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムハイドライド等の金属水素化アルミニウム化合物あるいはジボラン等の水素化ホウ素化合物を使用して行い、化合物（３）のアミド部分とアジド部分とを同時に還元すればよい。
【００２７】
【実施例】
以下に、本発明を実施例あるいは参考例によって具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２８】
［参考例１］
ブドウ糖４％、ペプトン１％、リン酸水素二カリウム０．１％、リン酸二水素カリウム０．１％からなる液体培地（ｐＨ  ６．０）、  １００  ｍｌ  を坂口フラスコに分注し、オートクレーブにて加熱滅菌した。フラスコの培地にファエオクレオプシス属の種菌（ＪＣＭ  １８８０）を接種し、３０℃で２晩振とう培養して菌体培養液を得た。
【００２９】
［実施例１］  （Ｒ）−５−ベンジル−７−  ヒドロキシ−４−  オキソ−５−  アザスピロ［２．４］ ヘプタンの製造
５−ベンジル−４，７−  ジオキソ−５−  アザスピロ［２．４］  ヘプタン  ３００  ｍｇ  を上記参考例で得た培養液  ３００  ｍｌ  に懸濁し、３日間撹拌した。反応液に酢酸エチル  １００  ｍｌ  を加えセライト濾過により菌体を除いた。水層を更に酢酸エチル  １００  ｍｌ  で２回抽出し有機層を乾燥後、溶媒を溜去した。残査をシリカゲルクロマトグラフィ−に供することにより目的物  １９５  ｍｇ  （光学純度  ９９％ｅｅ）を得た。尚、光学異性体の分析はＨＰＬＣを用いて行った。
【００３０】
・使用カラム：キラルセルＯＪ（ダイセル化学工業株式会社製）
・移動相：ｎ−ヘキサン：イソプロパノ−ル＝１０：１
・流速：０．８  ｍｌ  ／  ｍｉｎ、波長：２３０  ｎｍ
【００３１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ：
０．８８  −  １．１８（４Ｈ，  ｍ），  ３．１２  −  ３．６３（３Ｈ，  ｍ），  ３．９３  −  ４．０６（１Ｈ，  ｍ），      ４．４５（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２  Ｈｚ），  ７．１９  −  ７．３５（５Ｈ，  ｍ）．
【００３２】
［実施例２］  （Ｒ）−６−ベンジル−８−  ヒドロキシ−５−  オキソ−６−  アザスピロ［３．４］  オクタンの製造
６−ベンジル−５，８−  ジオキソ−６−  アザスピロ［３．４］  オクタン  １００  ｍｇ  を上記参考例で得た培養液  １００  ｍｌ  に懸濁し、２４時間撹拌した。反応液に酢酸エチル  ５０  ｍｌを加えセライト濾過により菌体を除いた。水層を更に酢酸エチル  ５０  ｍｌで２回抽出し有機層を乾燥後、溶媒を溜去した。残査をシリカゲルクロマトグラフィ−に供することにより目的物  ８０  ｍｇ（光学純度  ９９％ｅｅ）を得た。尚、光学異性体の分析は実施例１と同様ＨＰＬＣを用いて行った。
【００３３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ：
１．８２  −  １．６１（６Ｈ，  ｍ），  ３．２４  −  ３．６９（３Ｈ，  ｍ），  ３．９６  −  ４．１１（１Ｈ，  ｍ），      ４．５９（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２  Ｈｚ），  ７．１５  −  ７．４０（５Ｈ，  ｍ）．
【００３４】
［実施例３］  （Ｓ）−７−アジド−５−  ベンジル−４−  オキソ−５−  アザスピロ［２．４］  ヘプタンの製造
アゾジカルボン酸ジエチル  ２３０  ｍｇ  とトリフェニルホスフィン  ３４０  ｍｇ  を無水テトラヒドロフラン  ５  ｍｌ  に溶解し、氷冷下３０分間撹拌した。次いで、（Ｒ）−５−ベンジル−７−  ヒドロキシ−４−  オキソ−５−  アザスピロ［２．４］  ヘプタン  ２２０  ｍｇ  とジフェニルホスホリルアジド  ３６０  ｍｇ  を無水テトラヒドロフランに溶解した溶液を滴下し一晩撹拌した。溶媒を溜去して残査をシリカゲルクロマトグラフィ−に供することにより標記の化合物  １５０  ｍｇ  を油状化合物として得た。
【００３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ：
０．８５  −  １．５１（４Ｈ，  ｍ），  ３．２３  −  ３．８３（３Ｈ，  ｍ），  ４．６０（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ３  Ｈｚ），    ７．２６  −  ７．３０（５Ｈ，  ｍ）．
ＩＲ（ＫＢｒ）：  ２１００  ｃｍ−１（Ｎ３）
【００３６】
［実施例４］  （Ｓ）−７−アミノ−５−  ベンジル−５−  アザスピロ［２．４］  ヘプタンの製造リチウムアルミニウムハイドライド  テトラヒドロフラン溶液（１．０  Ｍ  ／  Ｌ  ）３  ｍｌに氷冷撹拌下（Ｓ）−７−アジド−５−  ベンジル−４−  オキソ−５−  アザスピロ［２．４］  ヘプタン  １４０  ｍｇ  を無水テトラヒドロフラン  ５  ｍｌ  に溶解して滴下し、加熱還流下で１時間撹拌した。反応液を氷冷し水  ０．２  ｍｌ、  １０％水酸化ナトリウム水溶液  ０．２  ｍｌ  を滴下し室温で３０分間撹拌した。不溶物を濾過により除き、濾液を濃縮後残査をシリカゲルクロマトグラフィ−に供することにより標記の化合物  ９２  ｍｇ（光学純度  ９８％ｅｅ）を得た。尚、光学異性体の分析は、アミンをジニトロベンゾイル体に誘導後ＨＰＬＣを用いて行った。
【００３７】
・使用カラム：スミキラル  ＯＡ−４６００（住友化学工業株式会社製）
・移動相：ｎ−ヘキサン：エチレンジクロリド：エタノ−ル：トリフルオロ酢酸＝  ８０  ：  ２０  ：  ５  ：  ０．２
・流速：１．２  ｍｌ  ／  ｍｉｎ，  波長：２５４  ｎｍ
【００３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ：
０．２６  −  ０．９６（４Ｈ，  ｍ），  ２．２０  −  ３．１６（５Ｈ，  ｍ），  ３．６１（２Ｈ，  ｓ），  ７．３３（５Ｈ，  ｂｓ）
【００３９】
【発明の効果】
本発明の方法は、緩和な条件下で反応を行わせることができ、しかも反応時に副反応がほとんど生じないため高純度の光学活性な化合物（２）を得ることができる。さらに、得られた化合物（２）は化合物（３）を経由して化合物（４）に容易に誘導することができる。