【手続補正書】
【提出日】平成29年7月19日(2017.7.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマー−フラボノイド接合体であって、前記ポリマーが、チオールリンカーを介して前記フラボノイドに接合しており、前記ポリマーが、多糖類、ポリヌクレオチド、合成ポリマーおよびそれらの混合物からなる群の中から選択されたものであるポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項２】
前記多糖類が、ヒアルロン酸、デキストラン、セルロース、アミロース、デンプン、ゼラチン、アルギナート、キトサン、カラギーナン、シクロデキストリン、硫酸デキストラン、フィコール、ジェランガム、グアーガム、ペクチン、ポリスクロース、プルラン、スクレログルカン、キサンタンおよびキシログルカンからなる群の中から選ばれたものである請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項３】
前記ポリヌクレオチドが、アプタマー、ＤＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）および小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）からなる群の中から選ばれたものである請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項４】
前記合成ポリマーが、アルケン、エーテル、カルボン酸、イミン、アミド、アミン、酸無水物、カーボネート、エステル、オルトエステル、およびウレタンからなる群の中から選ばれたモノマーを含む請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項５】
前記合成ポリマーが、ポリアクリル酸、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アリルアミン）、ポリ酸無水物、ポリ（β−アミノエステル）、ポリ（ブチレンスクシナート）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリジオキサノン、ポリエチレンイミン、ポリ（グリセロール）、ポリグリコール酸、ポリ（３−ヒドロキシプロピオン酸）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（２−オキサゾリン）、ポリ（セバシン酸）、ポリ（テレフタレート−ｃｏ−ホスフェート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、およびこれらの組み合わせからなる群の中から選ばれたものである請求項４に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項６】
前記ポリマーが、ポリアクリル酸及びヒアルロン酸から選ばれたものである請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項７】
前記フラボノイドが、フラボン、イソフラボン、フラバン、プロアントシアニジンおよびアントシアニジン、並びにそれらの混合物からなる群の中から選択されたものである請求項１から請求項６までのいずれか１項に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項８】
前記フラバンが、（−）−エピカテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−カテキン、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキンガレート、（＋）−エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、フィセチニドール（fisetinidol）、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、メスキトール（mesquitol）およびロビネチニドール（robinetinidol）、エラジタンニン、ガロタンニン、ウーロンテアニン（oolongtheanin）、フロロタンニン、タンニン、テアシトリン、テアジベンゾトロポロン、テアフラビン、テアナフトキノン、テアルビジン、テアシネンシン（theasinensin）およびそれらの混合物からなる群の中から選ばれたものである請求項７に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項９】
前記チオールリンカーが、さらに、前記ポリマーに結合したチオール部分から誘導されたものであり、前記チオール部分が、アミド、アミン、アルキル、アルケニル、アリール、エステル、カーボネート、エーテル、アミド、アミドエステル、カルバメート、およびアセタール基からなる群の中から選択されたものである請求項１から請求項８までのいずれか１項に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１０】
前記アミド、アミン又はアルキル基が、１〜１０個の炭素原子を有する請求項９に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１１】
前記アルケニル基が、２〜１０個の炭素原子を有する請求項９に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１２】
前記アリール基が、６〜１０個の炭素原子を有する請求項９に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１３】
前記ポリマー又はフラボノイドが、さらに、治療剤に結合又は接合されているか、治療剤を含んでいる請求項１から請求項１２までのいずれか１項に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１４】
前記治療剤が、小分子薬物およびナノ医薬からなる群の中から選択されたものである請求項１３に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１５】
前記ナノ医薬が、ポリマーミセル、リポソーム及びデンドリマーからなる群の中から選択されたものである請求項１３に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１６】
前記ポリマー−フラボノイド接合体が、
【化１】
2016534136.tif 000001
式（Ｉ）、及び
【化２】
2016534136.tif 000002
式（ＩＩ）
（式中、
各ｎは、独立に、０から１５０００までの整数であり、各ｍは、１から１５０００までの整数である）からなる群の中から選ばれるヒアルロン酸−ＥＧＣＧ接合体である請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１７】
前記ポリマー−フラボノイド接合体が、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表され、０．０１から１００％までの接合度を有する請求項１６に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
【請求項１８】
請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体を生成するための方法であって、前記フラボノイドを塩基性条件下での求核付加により前記ポリマーと接合させる工程を含み、前記ポリマーは、遊離チオール基で修飾されている前記方法。
【請求項１９】
（ａ）チオール又はジスルフィドを含有する化合物を、還元剤の存在下に、前記ポリマーに結合させる工程、及び
（ｂ）前記ジスルフィド含有化合物をジスルフィド結合において開裂させ、それにより末端チオール基を有する前記ポリマーを生成する工程
をさらに含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム及び水素化アルミニウムリチウムからなる群の中から選ばれたものである請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記接合工程を、１〜２４時間の反応時間で行う請求項１８から請求項２０までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
チオール又はジスルフィドを含有する化合物を、カップリング剤の存在下に、前記ポリマーにカップリングさせる工程をさらに含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記カップリング剤が、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）、塩酸塩１−エチル−３−（３−ジメチルジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、カルボニルジイミダゾール、アジプイミド酸ジメチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、クロロギ酸ｐ−ニトロフェニル及び１−（ｐ−トルエンスルホニル）イミダゾールからなる群の中から選ばれたものである請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記カップリング剤が、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ）及び４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）から選ばれたものである請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記求核付加において消去剤を添加する工程をさらに含む請求項１８から請求項２４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記消去剤が、ピルビン酸ナトリウム及びスーパーオキシドジスムターゼからなる群の中から選ばれたものである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記求核付加における前記塩基性条件が、約７．０〜１０．０のｐＨ範囲内にある請求項１８から請求項２６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１に記載のポリマー−フラボノイド接合体から得られるヒドロゲル。
【請求項２９】
前記ポリマー−フラボノイド接合体が、式（ＩＩ）
【化３】
2016534136.tif 000003
で表され、０．０１〜１００％の接合度を有する請求項２８に記載のヒドロゲル。
【請求項３０】
請求項１から請求項１７までのいずれか１項に記載のポリマー−フラボノイド接合体を、塩基性条件下に、自動酸化により架橋する工程を含む、ヒドロゲルの生成方法。
【請求項３１】
前記架橋工程が、酸化剤の存在下に酵素を添加する工程をさらに含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記酵素が、ペルオキシダーゼである請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ペルオキシダーゼが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ヒトミエロペルオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、好酸球ペルオキシダーゼ、甲状腺ペルオキシダーゼ、プロスタグランジンＨシンターゼ、大豆ペルオキシダーゼ、ヘミン、ヘマチン及びマイクロペルオキシダーゼ−１１からなる群の中から選ばれたものである請求項３３に記載の方法。
【請求項３４】
前記酸化剤が、過酸化物である請求項３０から請求項３３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記過酸化物が、過酸化水素である請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記架橋工程を、約２分間〜４５時間の反応時間で行う請求項３０から請求項３５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記架橋協定を、約３５℃〜３９℃の範囲から選ばれた温度で行う請求項３０から請求項３６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
請求項２８又は２９に記載のヒドロゲルの、バイオメディカル製品を作るための使用。
【請求項３９】
前記バイオメディカル製品が、関節内補充薬、癒着防止フィルム又は皮膚充填剤である請求項３８に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
本発明の種々の他の修飾及び適合化は、上記開示を読んだ後なら、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、明らかであろうし、すべてのそのような修飾及び適合化は添付の特許請求の範囲の範囲内のものであることが意図されている。
以下に、本願出願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
ポリマー−フラボノイド接合体であって、前記ポリマーが、チオールリンカーを介して前記フラボノイドに接合しているポリマー−フラボノイド接合体。
［２］
前記ポリマーが、多糖類、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、合成ポリマーおよびそれらの混合物からなる群の中から選択されたものである［１］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［３］
前記多糖類が、ヒアルロン酸、デキストラン、セルロース、アミロース、デンプン、ゼラチン、アルギナート、キトサン、カラギーナン、シクロデキストリン、硫酸デキストラン、フィコール、ジェランガム、グアーガム、ペクチン、ポリスクロース、プルラン、スクレログルカン、キサンタンおよびキシログルカンからなる群の中から選ばれたものである［２］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［４］
前記ポリヌクレオチドが、アプタマー、ＤＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）および小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）からなる群の中から選ばれたものである［２］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［５］
前記ポリペプチドが、タンパク質、抗体、抗体フラグメント、アプチド（aptide）、ペプチドおよびポリ（アミノ酸）からなる群の中から選ばれたものである［２］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［６］
前記合成ポリマーが、アルケン、エーテル、カルボン酸、イミン、アミド、アミン、酸無水物、カーボネート、エステル、オルトエステル、およびウレタンからなる群の中から選ばれたモノマーを含む［２］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［７］
前記合成ポリマーが、ポリアクリル酸、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アリルアミン）、ポリ酸無水物、ポリ（β−アミノエステル）、ポリ（ブチレンスクシナート）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリジオキサノン、ポリエチレンイミン、ポリ（グリセロール）、ポリグリコール酸、ポリ（３−ヒドロキシプロピオン酸）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（２−オキサゾリン）、ポリ（セバシン酸）、ポリ（テレフタレート−ｃｏ−ホスフェート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、およびこれらの組み合わせからなる群の中から選ばれたものである［６］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［８］
前記ポリマーが、ポリアクリル酸及びヒアルロン酸から選ばれたものである［２］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［９］
前記フラボノイドが、フラボン、イソフラボン、フラバン、プロアントシアニジンおよびアントシアニジン、並びにそれらの混合物からなる群の中から選択されたものである［１］から［８］までのいずれか１つに記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１０］
前記フラバンが、（−）−エピカテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−カテキン、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキンガレート、（＋）−エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、フィセチニドール（fisetinidol）、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、メスキトール（mesquitol）およびロビネチニドール（robinetinidol）、エラジタンニン、ガロタンニン、ウーロンテアニン（oolongtheanin）、フロロタンニン、タンニン、テアシトリン、テアジベンゾトロポロン、テアフラビン、テアナフトキノン、テアルビジン、テアシネンシン（theasinensin）およびそれらの混合物からなる群の中から選ばれたものである［９］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１１］
前記チオールリンカーが、さらに、前記ポリマーに結合したチオール部分から誘導されたものであり、前記チオール部分が、アミド、アミン、アルキル、アルケニル、アリール、エステル、カーボネート、エーテル、アミド、アミドエステル、カルバメート、およびアセタール基からなる群の中から選択されたものである［１］から［１０］までのいずれか１つに記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１２］
前記アミド、アミン又はアルキル基が、１〜１０個の炭素原子を有する［１１］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１３］
前記アルケニル基が、２〜１０個の炭素原子を有する［１１］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１４］
前記アリール基が、６〜１０個の炭素原子を有する［１１］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１５］
前記ポリマー又はフラボノイドが、さらに、治療剤に結合又は接合されているか、治療剤を含んでいる［１］から［１４］までのいずれか１つに記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１６］
前記治療剤が、小分子薬物およびナノ医薬からなる群の中から選択されたものである［１５］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１７］
前記ナノ医薬が、ポリマーミセル、リポソーム及びデンドリマーからなる群の中から選択されたものである［１５］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１８］
前記ポリマー−フラボノイド接合体が、
【化３】
2016534136.tif 000004
式（Ｉ）、及び
【化４】
2016534136.tif 000005
式（ＩＩ）
（式中、
各ｎは、独立に、０から１５０００までの整数であり、各ｍは、１から１５０００までの整数である）からなる群の中から選ばれるヒアルロン酸−ＥＧＣＧ接合体である［１］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［１９］
前記ポリマー−フラボノイド接合体が、式（Ｉ）又は式（ＩＩ）で表され、０．０１から１００％までの接合度を有する［１８］に記載のポリマー−フラボノイド接合体。
［２０］
ポリマー−フラボノイド接合体を生成するための方法であって、前記フラボノイドを塩基性条件下での求核付加により前記ポリマーと接合させる工程を含み、前記ポリマーは、遊離チオール基で修飾されている前記方法。
［２１］
（ａ）チオール又はジスルフィドを含有する化合物を、還元剤の存在下に、前記ポリマーに結合させる工程、及び
（ｂ）前記ジスルフィド含有化合物をジスルフィド結合において開裂させ、それにより末端チオール基を有する前記ポリマーを生成する工程
をさらに含む［２０］に記載の方法。
［２２］
前記還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム及び水素化アルミニウムリチウムからなる群の中から選ばれたものである［２１］に記載の方法。
［２３］
前記接合工程を、１〜２４時間の反応時間で行う［２０］から［２２］までのいずれか１つに記載の方法。
［２４］
チオール又はジスルフィドを含有する化合物を、カップリング剤の存在下に、前記ポリマーにカップリングさせる工程をさらに含む［２０］に記載の方法。
［２５］
前記カップリング剤が、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）、塩酸塩１−エチル−３−（３−ジメチルジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、カルボニルジイミダゾール、アジプイミド酸ジメチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、クロロギ酸ｐ−ニトロフェニル及び１−（ｐ−トルエンスルホニル）イミダゾールからなる群の中から選ばれたものである［２４］に記載の方法。
［２６］
前記カップリング剤が、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ）及び４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）から選ばれたものである［２４］に記載の方法。
［２７］
前記求核付加において消去剤を添加する工程をさらに含む［２０］から［２６］までのいずれか１つに記載の方法。
［２８］
前記消去剤が、ピルビン酸ナトリウム及びスーパーオキシドジスムターゼからなる群の中から選ばれたものである［２７］に記載の方法。
［２９］
前記求核付加における前記塩基性条件が、約７．０〜１０．０のｐＨ範囲内にある［２０］から［２８］までのいずれか１つに記載の方法。
［３０］
ポリマー−フラボノイド接合体から得られ、前記ポリマーがチオールリンカーを介して前記フラボノイドに接合されているヒドロゲル。
［３１］
前記ポリマー−フラボノイド接合体が、式（ＩＩ）で表され、０．０１〜１００％の接合度を有する［３０］に記載のヒドロゲル。
［３２］
［１］から［１９］までのいずれか１つに記載のポリマー−フラボノイド接合体を、塩基性条件下に、自動酸化により架橋する工程を含む、ヒドロゲルの生成方法。
［３３］
前記架橋工程が、酸化剤の存在下に酵素を添加する工程をさらに含む［３２］に記載の方法。
［３４］
前記酵素が、ペルオキシダーゼである［３２］に記載の方法。
［３５］
前記ペルオキシダーゼが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ヒトミエロペルオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、好酸球ペルオキシダーゼ、甲状腺ペルオキシダーゼ、プロスタグランジンＨシンターゼ、大豆ペルオキシダーゼ、ヘミン、ヘマチン及びマイクロペルオキシダーゼ−１１からなる群の中から選ばれたものである［３４］に記載の方法。
［３６］
前記酸化剤が、過酸化物である［３２］から［３５］までのいずれか１つに記載の方法。
［３７］
前記過酸化物が、過酸化水素である［３６］に記載の方法。
［３８］
前記架橋工程を、約２分間〜４５時間の反応時間で行う［３２］から［３７］までのいずれか１つに記載の方法。
［３９］
前記架橋協定を、約３５℃〜３９℃の範囲から選ばれた温度で行う［３２］から［３８］までのいずれか１つに記載の方法。
［４０］
［３０又は３１］に記載のヒドロゲルの、バイオメディカル製品を作るための使用。
［４１］
前記バイオメディカル製品が、関節内補充薬、癒着防止フィルム又は皮膚充填剤である［４０］に記載の使用。