【手続補正書】
【提出日】平成28年12月12日(2016.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物であって、
Ｉ．ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系キメラＲＮＡ（ｃｈｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド配列に作動可能に結合している第１の調節エレメントであって、前記ポリヌクレオチド配列は、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列、および
（ｃ）ｔｒａｃｒ配列
を含む、第１の調節エレメント、および
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素の末端に近接する少なくとも１つ以上の核局在化配列（ＮＬＳ）を含むＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含み、
（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、５’から３’配向で配置されており、
成分ＩおよびＩＩは、前記系の同一または異なるベクター上にあり、
前記ｔｒａｃｒメイト配列は、転写された場合、前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、前記ガイド配列は、前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、
前記キメラＲＮＡポリヌクレオチド配列は、２つ以上のヘアピンを含む
天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物。
【請求項２】
複数のｃｈｉＲＮＡポリヌクレオチド配列が使用されて多重化系が提供される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
多重化ＣＲＩＳＰＲ酵素系であって、
Ｉ．ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系キメラＲＮＡ（ｃｈｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド配列に作動可能に結合している第１の調節エレメントであって、前記ポリヌクレオチド配列は、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列、および
（ｃ）ｔｒａｃｒ配列
を含む、第１の調節エレメント、および
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素の末端に近接する少なくとも１つ以上の核局在化配列（ＮＬＳ）を含むＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含み、
（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、５’から３’配向で配置されており、
成分ＩおよびＩＩは、前記系の同一または異なるベクター上にあり、
前記ｔｒａｃｒメイト配列は、転写された場合、前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、前記ガイド配列は、前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、
前記ｃｈｉＲＮＡポリヌクレオチド配列は、２つ以上のヘアピンを含み、
前記多重化系において複数のｃｈｉＲＮＡポリヌクレオチド配列が使用される
多重化ＣＲＩＳＰＲ酵素系。
【請求項４】
前記第１の調節エレメントが、ポリメラーゼＩＩＩプロモーターである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項５】
前記第２の調節エレメントが、ポリメラーゼＩＩプロモーターである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項６】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素が、真核細胞の核中の検出可能な量の前記ＣＲＩＳＰＲ酵素の蓄積をドライブするために十分な強度の１つ以上のＮＬＳを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項７】
前記ｔｒａｃｒ配列が、最適にアラインされた場合に前記ｔｒａｃｒメイト配列の長さに沿って少なくとも５０％の配列相補性を示す、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項８】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素が、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系酵素である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項９】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素が、Ｃａｓ９酵素である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項１０】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素が、真核細胞中の発現のためにコドン最適化されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項１１】
前記ガイド配列が、少なくとも１５ヌクレオチド長である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項１２】
前記キメラＲＮＡポリヌクレオチド配列が、２、３、４または５つのヘアピンを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物または系。
【請求項１３】
天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物であって、
Ｉ．第１の調節エレメントであって、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、および
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列
に作動可能に結合している第１の調節エレメント、
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素の末端に近接する少なくとも１つ以上の核局在化配列（ＮＬＳ）を含むＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント、ならびに
ＩＩＩ．ｔｒａｃｒ配列に作動可能に結合している第３の調節エレメント
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含み、
成分Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩは、前記系の同一または異なるベクター上にあり、
前記ｔｒａｃｒメイト配列は、転写された場合、前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、前記ガイド配列は、前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む
天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物。
【請求項１４】
複数のガイド配列および単一ｔｒａｃｒ配列が使用されて多重化系が提供される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
多重化ＣＲＩＳＰＲ酵素系であって、
Ｉ．第１の調節エレメントであって、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、および
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列
に作動可能に結合している第１の調節エレメント、
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素の末端に近接する少なくとも１つ以上の核局在化配列（ＮＬＳ）を含むＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント、ならびに
ＩＩＩ．ｔｒａｃｒ配列に作動可能に結合している第３の調節エレメント
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含み、
成分Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩは、前記系の同一または異なるベクター上にあり、
前記ｔｒａｃｒメイト配列は、転写された場合、前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、前記ガイド配列は、前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、
前記多重化系において複数のガイド配列および単一ｔｒａｃｒ配列が使用される
多重化ＣＲＩＳＰＲ酵素系。
【請求項１６】
前記第１の調節エレメントが、ポリメラーゼＩＩＩプロモーターである、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組成物または系。