【手続補正書】
【提出日】平成29年3月17日(2017.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）神経変性疾患に関連する遺伝子型を有するヒトニューロンまたはグリア細胞と、前記疾患に関連する神経変性関連タンパク質の毒性を前記神経変性関連タンパク質を発現する酵母細胞内で低下させ、またはヒト機能喪失型神経変性疾患遺伝子の酵母ホモログの機能喪失に関連する表現型のレベルを低下させる、薬剤とを接触させるステップと；（ｂ）前記疾患に関連する前記表現型のレベルを前記ニューロンまたはグリア細胞内で測定するステップと；（ｃ）前記表現型のレベルが前記薬剤不在下の前記表現型のレベルと比較して低下する場合、前記薬剤を、前記神経変性疾患を治療するための候補治療薬として同定するステップとを含んでなる、神経変性疾患を治療するための候補治療薬を同定する方法。
【請求項２】
前記神経変性関連タンパク質が、α−シヌクレインタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、ＦＵＳタンパク質、Ａ−βタンパク質、またはポリグルタミン伸長タンパク質を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記神経変性疾患が、シヌクレイン病、ＴＤＰ−４３タンパク質症、ＦＵＳ疾患、アルツハイマー病、またはポリグルタミン伸長疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質をコードする遺伝子の追加的コピーを有するように操作されておらず、前記表現型を増強する薬剤存在下で誘導または培養されていない、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記表現型が、前記薬剤不在下において、前記酵母細胞内で検出可能である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記表現型が、前記疾患を有するヒト対象に由来するｉＰＳ細胞に由来するニューロンまたはグリア細胞内で検出可能であり、前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質をコードする遺伝子の追加的コピーを有するように操作されておらず、前記表現型を増強する薬剤存在下で誘導または培養されていない、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記神経変性関連タンパク質が、α−シヌクレインタンパク質を含んでなり、前記表現型が、ニトロソ化ストレス、ミトコンドリア機能不全、欠陥小胞体関連分解（ＥＲＡＤ）、またはＥＲゴルジ体間輸送障害を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性疾患を有するヒト対象に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質をコードする遺伝子に変異を有しまたはその少なくとも１つの追加的コピーを有しまたは前記機能喪失型神経変性疾患遺伝子の機能喪失を有する対象に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性疾患を有するヒト対象に由来するｉＰＳ細胞に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質をコードする遺伝子に変異を有しまたはその少なくとも１つの追加的コピーを有しまたは前記機能喪失型神経変性疾患遺伝子の機能喪失を有するヒト対象に由来するｉＰＳ細胞に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来し、前記神経変性疾患関連タンパク質をコードする遺伝子に変異を有するように、またはその少なくとも１つの追加的コピーを有するように遺伝子操作され、または前記機能喪失型神経変性疾患遺伝子の機能喪失を有するように遺伝子操作されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質をコードする遺伝子中に疾患関連変異を有し、または前記ニューロンもしくはグリア細胞が、機能喪失型神経変性疾患遺伝子の機能喪失を有して、前記表現型が同質遺伝子変異修正ニューロン内で検出不能である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ニューロンまたはグリア細胞と、前記薬剤とを接触させるステップが、前記ニューロンを含んでなる中枢神経系（ＣＮＳ）細胞培養物と、前記薬剤とを接触させるステップを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ニューロンが、皮質ニューロンまたはドーパミン作動性ニューロンであり、または前記グリア細胞が、乏突起膠細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ステップ（ｂ）が、前記ニューロンまたはグリア細胞内で、前記疾患に関連する少なくとも２つの表現型のレベルを測定するステップを含んでなり、ステップ（ｃ）が、前記薬剤が前記表現型の少なくとも２つを阻害することを判定するステップを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
（ｄ）ステップ（ｃ）で同定された候補治療薬のアナログを作成するステップと；（ｅ）前記アナログが、前記神経変性関連タンパク質によって誘発される毒性を酵母細胞内で低下させ、またはヒト機能喪失型神経変性疾患遺伝子の酵母ホモログの機能喪失に関連する表現型のレベルを低下させる能力を試験するステップ、または前記アナログが、前記疾患に関連する遺伝子型を有するニューロンまたはグリア細胞内で、前記表現型を阻害する能力を試験するステップとをさらに含んでなり、前記アナログが、前記酵母細胞内で前記神経変性関連タンパク質によって誘発される毒性を低下させ、または前記機能喪失に関連する前記表現型のレベルを低下させ、または前記ニューロンもしくはグリア細胞内で前記表現型を阻害する場合、前記アナログが、前記疾患を治療するための候補治療薬として同定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
小分子ライブラリーをスクリーニングして、前記神経変性関連タンパク質によって誘発される毒性を酵母細胞内で低下させ、またはヒト機能喪失型神経変性疾患遺伝子の酵母ホモログの機能喪失に関連する表現型のレベルを低下させる、小分子を同定することで、前記薬剤を同定するステップを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記ニューロンまたはグリア細胞を非神経細胞から誘導するステップをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記疾患の治療を必要とするヒト対象に由来し、ステップ（ｃ）が、前記表現型のレベルが前記薬剤不在下における前記表現型のレベルと比較して低下する場合、前記薬剤を、前記対象を治療するための候補治療薬として同定するステップを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）シヌクレイン病に関連する遺伝子型を有するヒトニューロンまたはグリア細胞と、薬剤とを接触させるステップと；（ｂ）前記ニューロンまたはグリア細胞内で、ニトロソ化ストレス、ミトコンドリア機能不全、欠陥小胞体関連分解（ＥＲＡＤ）、またはＥＲゴルジ体間輸送障害を含んでなる、表現型のレベルを測定するステップと；（ｃ）前記薬剤が前記表現型のレベルを低下させることを判定し、それによってシヌクレイン病を治療するための候補治療薬を同定するステップとを含んでなる、シヌクレイン病を治療するための候補治療薬を同定する方法。
【請求項２３】
前記表現型が、前記細胞内で毒性を誘発するのに十分なレベルでα−シヌクレインタンパク質を発現する酵母細胞内で、検出可能である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記薬剤が、前記薬剤不在下において前記細胞内で毒性を誘発するのに十分なレベルで前記タンパク質を発現する酵母細胞内で、α−シヌクレインタンパク質によって誘発される毒性を低下させる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質α−シヌクレインをコードする遺伝子に変異を有しまたはその少なくとも１つの追加的コピーを有する対象に由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性疾患を有するヒト対象に由来するｉＰＳ細胞に由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性関連タンパク質α−シヌクレインをコードする遺伝子に変異を有しまたはその少なくとも１つの追加的コピーを有するヒト対象に由来するｉＰＳ細胞に由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来し、前記神経変性関連タンパク質α−シヌクレインをコードする遺伝子に変異を有するように、またはその少なくとも１つの追加的コピーを有するように遺伝子操作されている、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記ニューロンが、皮質ニューロンまたはドーパミン作動性ニューロンであり、または前記グリア細胞が、乏突起膠細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、α−シヌクレインをコードする遺伝子の追加的コピーを有するように操作されておらず、前記表現型を増強する薬剤存在下で誘導または培養されていない、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、常染色体優性パーキンソン病に関連する変異を有する対象に由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、α−シヌクレインをコードする前記遺伝子の少なくとも１つのコピーに変異を有する対象に由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項３４】
（ｉ）神経変性関連タンパク質をコードする遺伝子の神経変性疾患関連変異もしくは多様性、または神経変性関連タンパク質をコードする、もしくは機能喪失型神経変性疾患遺伝子の機能喪失を有する遺伝子の少なくとも１つの追加的コピー、；および（ｉｉ）酵母中の前記神経変性関連タンパク質に関連する毒性の遺伝的修飾因子である、または前記機能喪失型神経変性疾患遺伝子の酵母ホモログの機能喪失に関連する表現型の遺伝的修飾因子である、酵母遺伝子のヒトホモログの機能活性を増大または低下させる遺伝子変化を有する、ヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項３５】
前記酵母遺伝子が、酵母中の前記神経変性関連タンパク質に関連する毒性のサプレッサーであり、または前記酵母ホモログの機能喪失のサプレッサーであり、前記遺伝子変化が、前記ヒトホモログの前記機能活性を低下させる、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項３６】
前記酵母遺伝子が、酵母中の前記神経変性関連タンパク質に関連する毒性のエンハンサーであり、または前記酵母ホモログの機能喪失のエンハンサーであり、前記遺伝子変化が、前記ヒトホモログの前記機能活性を増大させる、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項３７】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性疾患を有するヒト対象に由来する、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項３８】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、ｉＰＳ細胞またはＥＳ細胞に由来する、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項３９】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性疾患を有するヒト対象に由来するｉＰＳ細胞に由来する、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項４０】
前記ニューロンまたはグリア細胞が、前記神経変性疾患関連タンパク質をコードする遺伝子、前記ヒトホモログ、またはその双方に変異を有し、またはその少なくとも１つの追加的コピーを有するように操作されている、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項４１】
前記ニューロンが、皮質ニューロンまたはドーパミン作動性ニューロンであり、または前記グリア細胞が、乏突起膠細胞である、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項４２】
前記神経変性関連タンパク質が、α−シヌクレインタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、ＦＵＳタンパク質、Ａ−βタンパク質、またはポリグルタミン伸長タンパク質を含んでなる、請求項３４に記載のヒトニューロンまたはグリア細胞。
【請求項４３】
変異または遺伝的多様性を含有し、または過剰発現される神経変性疾患遺伝子を保有する、誘導ヒト神経系細胞であって、前記神経変性疾患遺伝子が、神経変性疾患に関連し、前記細胞が、（ｉ）前記神経変性疾患遺伝子の遺伝的修飾因子である遺伝子中に変異または遺伝的多様性を有し、または前記遺伝子を過剰発現して、前記遺伝的修飾因子が酵母ホモログを有し、または（ｉｉ）酵母遺伝子のヒトホモログ中に変異または遺伝的多様性を有し、またはそれを過剰発現して、それが前記神経変性疾患のモデルの役割を果たす酵母の生存度または疾患関連表現型を変化させる、誘導ヒト神経系細胞。
【請求項４４】
前記神経変性疾患遺伝子、遺伝的修飾因子、またはヒトホモログ中の前記変異または遺伝的多様性が、前記遺伝子の遺伝子産物の量または活性を正常レベルに増大または低下させる、請求項４３に記載の誘導ヒト神経系細胞。
【請求項４５】
前記変異、遺伝的多様性、または過剰発現が、前記神経変性疾患の発症リスクを引き起こしまたは増大させる、請求項４３または４４に記載の誘導ヒト神経系細胞。
【請求項４６】
前記疾患が、シヌクレイン病、アルツハイマー病、ＴＤＰ−４３タンパク質症、ＦＵＳ疾患、ヌクレオチド伸長障害、タウオパチー、パーキンソン症障害、運動失調、運動ニューロン障害、末梢神経障害、または白質疾患である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の誘導ヒト神経系細胞。
【請求項４７】
（ｉ）前記神経変性疾患遺伝子の前記変異、遺伝的多様性、または過剰発現が遺伝子操作され；（ｉｉ）前記遺伝的修飾因子またはヒトホモログの前記変異、遺伝的多様性、または過剰発現が遺伝子操作され；または（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の双方である、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の誘導ヒト神経系細胞。
【請求項４８】
前記細胞が、前記神経変性疾患がある患者に由来する、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の誘導ヒト神経系細胞。
【請求項４９】
前記細胞が、ＥＳ細胞またはｉＰＳ細胞に由来する、請求項４３〜４８のいずれか一項に記載の誘導ヒト神経系細胞。
【請求項５０】
前記細胞が、誘導ヒトニューロンまたはグリア細胞である、請求項４３〜４９のいずれか一項に記載の誘導ヒト神経系細胞。