【手続補正書】
【提出日】平成29年10月19日(2017.10.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍微細環境の試験管内での模倣方法であって、前記方法が：
細胞培養容器に培養培地を加えること；
前記細胞培養容器内の多孔性膜の第１の表面上に少なくとも１つの腫瘍細胞型を播くこと、ここで、前記第１の表面が前記細胞培養容器の底面の近傍にあり、底面に対して離れた関係であるように前記細胞培養容器にて前記多孔性膜を懸濁させ、それによって前記細胞培養容器内で前記少なくとも１つの腫瘍細胞型を含む下容量部と前記多孔性膜の第２の表面を含む上容量部を定義する；および
前記多孔性膜の第２の表面上に剪断応力を適用することによって前記少なくとも１つの腫瘍細胞型に剪断応力を間接的に適用すること、
を含み、前記剪断応力は流動装置によって誘導される前記培養培地の流れから生じ、前記流れは前記腫瘍細胞が前記腫瘍微細環境にて生体内で間接的にさらされる流れを模倣する、模倣方法。
【請求項２】
腫瘍微細環境の試験管内での模倣方法であって、前記方法が：
細胞培養容器に培養培地を加えること；
細胞培養容器内の表面上に少なくとも１つの腫瘍細胞型を播くこと；および
前記少なくとも１つの腫瘍細胞型に剪断応力を間接的に適用すること、
を含み、前記剪断応力は流動装置によって誘導される前記培養培地の流れから生じ、前記流れは前記腫瘍細胞が前記腫瘍微細環境にて生体内で間接的にさらされる流れを模倣し、前記流れは時変性である、模倣方法。
【請求項３】
さらに：
多孔性膜の第１の表面上に少なくとも１つの腫瘍細胞型を播くこと、ここで、前記第１の表面が前記細胞培養容器の底面の近傍にあり、底面に対して離れた関係であるように前記細胞培養容器にて前記多孔性膜を懸濁させ、それによって前記細胞培養容器内で前記少なくとも１つの腫瘍細胞型を含む下容量部と前記多孔性膜の第２の表面を含む上容量部を定義する；および
多孔性膜の第２の表面上に前記剪断応力を適用することによって前記少なくとも１つの腫瘍細胞型に前記剪断応力を間接的に適用すること、
を含む請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞培養容器内の前記表面上に少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を堆積させ、前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分上に前記少なくとも１つの腫瘍細胞型を播くこと；または
少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を含む溶液にて少なくとも１つの腫瘍細胞型を懸濁させて前記少なくとも前記１つの腫瘍細胞型と前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を含む懸濁液を創り出し、前記細胞培養容器内の前記表面上または前記多孔性膜の前記第１の表面上に前記懸濁液を堆積させること；
をさらに含み、
前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分が、任意にコラーゲン、フィブロネクチン、および／またはヒト胎盤などの生物供給源から精製された脱細胞化された細胞外マトリクスを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
さらに、前記多孔性膜の前記第２の表面上に内皮細胞を播くこと、および前記播かれた内皮細胞に前記剪断応力を適用すること、を含み、前記少なくとも１つの腫瘍細胞型が前記多孔性膜の第１の表面上に播かれる請求項１、３、および４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記内皮細胞が：
微小血管内皮細胞（任意に肺微小血管内皮細胞、乳腺微小血管内皮細胞、膵臓微小血管内皮細胞、前立腺微小血管内皮細胞、卵巣微小血管内皮細胞、結腸微小血管内皮細胞、真皮微小血管内皮細胞、またはそれらの組み合わせ）、大血管内皮細胞、内皮前駆細胞、またはそれらの組み合わせ；
腫瘍に由来する内皮細胞；
中に腫瘍が存在する臓器若しくは組織に由来する内皮細胞；
肺、乳房、結腸、直腸、前立腺、膀胱、骨、膵臓、肝臓、胆管、卵巣、精巣、子宮、胎盤、脳、軟骨、平滑筋、横紋筋、体腔の膜表層、線維組織、血管、リンパ管、リンパ節、脂肪組織、脳の神経性結合組織、腎臓、下垂体、副甲状腺、甲状腺、気管支表層、副腎髄質、胃、大腸、小腸、頸動脈小体、化学受容体系、皮膚、胆嚢の腫瘍、またはそれらの組み合わせに由来する内皮細胞；および／または
人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来する細胞、
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
腫瘍に対する効果について薬剤又は化合物を調べる試験管内の方法であって、前記方法が：
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法に従って前記腫瘍の微細環境を模倣すること；
前記培養培地に薬剤または化合物を添加すること；および
前記薬剤または化合物に直接的にまたは間接的に暴露される前記少なくとも１つの腫瘍細胞型に前記剪断応力を間接的に適用すること、
を含み、前記薬剤または化合物の存在下での少なくとも１つの腫瘍細胞型における変化が、前記薬剤または化合物が前記腫瘍に対して効果を有することを示す、方法。
【請求項８】
さらに、前記細胞培養容器内の前記表面上に、前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分上に、または前記多孔性膜の前記第１または第２の表面上に少なくとも１つの間質細胞型を播くこと；または
前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を含む前記溶液に前記腫瘍細胞型と共に少なくとも１つの間質細胞型を懸濁させて、前記少なくとも１つの間質細胞型、前記少なくとも１つの腫瘍細胞型、および前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を含む懸濁液を創り出し、前記細胞培養容器内の前記表面上若しくは前記多孔性膜の前記第１の表面上に前記懸濁液を堆積させること、
を含む請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１つの間質細胞型が：
線維芽細胞（任意にヒト肺線維芽細胞株Ｈｓ８８８Ｌｕ）、免疫細胞（任意にマクロファージ、リンパ球、樹状細胞、またはそれらの組み合わせ）、周皮細胞、炎症性細胞（任意にＢ細胞、Ｔ細胞またはそれらの組み合わせ）、またはそれらの組み合わせ；および／または
人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来する細胞、
を含む請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、前記少なくとも１つの腫瘍細胞型と前記少なくとも１つの間質細胞型を順次播くことを含む請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの間質細胞型を播くこと、次いで、前記播かれた間質細胞型の上に前記少なくとも１つの腫瘍細胞型を播くことを含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記剪断応力の適用の際の、前記少なくとも１つの腫瘍細胞型、前記少なくとも１つの間質細胞型、若しくは前記内皮細胞における前記腫瘍微細環境のマーカーのレベル若しくは局在または前記培養培地における前記腫瘍微細環境のマーカーのレベルの、前記剪断応力の適用の非存在下での前記少なくとも１つの腫瘍細胞型、前記少なくとも１つの間質細胞型若しくは前記内皮細胞における前記腫瘍微細環境のマーカーのレベル若しくは局在または前記培養培地における前記腫瘍微細環境のマーカーのレベルと比べた変化が、前記腫瘍微細環境の模倣を裏付ける請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞培養容器が、容器内または前記上容量部と前記下容量部を定義する前記細胞培養容器の部分内で注入口および排出口を含む；および／または
さらに、前記細胞培養容器の内外に、前記上容量部の内外に、または前記下容量部の内外に培養培地を潅流することを含む、
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの腫瘍細胞型が：
癌腫、肉腫、リンパ腫、腺癌、混合中胚葉性腫瘍、癌肉腫、奇形癌、またはそれらの組み合わせに由来する細胞；
肺、乳房、結腸、直腸、前立腺、膀胱、骨、膵臓、肝臓、胆管、卵巣、精巣、子宮、胎盤、脳、軟骨、平滑筋、横紋筋、体腔の膜表層、線維組織、血管、リンパ管、リンパ節、脂肪組織、脳の神経性結合組織、腎臓、下垂体、副甲状腺、甲状腺、気管支表層、副腎髄質、胃、大腸、小腸、頸動脈小体、化学受容体系、皮膚、胆嚢の腫瘍、またはそれらの組み合わせに由来する細胞；
非小細胞肺腺癌の細胞、乳癌の細胞、膵臓癌の細胞、前立腺癌の細胞、卵巣癌の細胞、結腸癌の細胞、またはそれらの組み合わせを含む不死化細胞株；
生検、腫瘍切除、採血、またはそれらの組み合わせによって対象から得られる初代腫瘍細胞、ここで、前記初代腫瘍細胞は、任意にステージＩの腫瘍、ステージＩＩの腫瘍、ステージＩＩＩの腫瘍またはステージＩＶの腫瘍から得られる；および／または
ヒト対象に由来する腫瘍を担うヒト化マウスに由来する腫瘍細胞、
を含む請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌腫に由来する細胞が、腺癌に由来する細胞、扁平上皮癌に由来する細胞、腺扁平上皮癌に由来する細胞、またはそれらの組み合わせに由来する細胞を含む；
肉腫に由来する細胞が、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、中皮肉腫（中皮腫）、線維肉腫、血管肉腫（任意に、血管内皮腫、リンパ管肉腫、またはそれらの組み合わせ）、脂肪肉腫、神経膠腫、星状細胞腫、粘液肉腫、間葉腫瘍、混合中胚葉性腫瘍、またはそれらの組み合わせに由来する細胞を含む；
リンパ腫に由来する細胞がホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、またはそれらの組み合わせに由来する細胞を含む；
前記不死化細胞株が、ヒト非小細胞肺腺癌の細胞株Ａ５４９、ヒト乳癌の細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ヒト膵臓癌の細胞株ＢｘＰＣ−３、ヒト前立腺癌の細胞株ＤＵ１４５、ヒト前立腺癌の細胞株ＬＮＣａＰ、ヒト卵巣癌の細胞株ＳＫＯＶ−３、ヒト直腸癌の細胞株ＣＯＬＯ−２０５またはそれらの組み合わせを含む；および／または
前記ヒト化マウスが、非肥満糖尿病性重症複合免疫不全（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウス、ＮＯＤ／Ｓｈｉ−ｓｃｉｄ／ＩＬ−２Ｒγヌル（ＮＯＧ）マウスまたはＮＯＤ  ＳＣＩＤ  ＩＬ−２Ｒγノックアウト（ＮＳＧ）マウスを含む、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの腫瘍細胞が、結合組織の腫瘍、内皮または中皮の腫瘍、リンパ組織の腫瘍、筋肉の腫瘍、上皮組織の腫瘍、神経組織の腫瘍、アミン前駆体の取り込み及び脱カルボシキル化（ＡＰＵＤ）の系の腫瘍、神経堤に由来する細胞の腫瘍、生殖腺の腫瘍、またはそれらの組み合わせに由来する請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記結合組織の腫瘍が、成人の線維組織、胚性（粘液腫）の線維組織、脂肪組織、軟骨組織、骨、脊索、線維性組織球腫の腫瘍またはそれらの組み合わせを含む；
前記内皮または中皮の腫瘍が、血管腫瘍、リンパ管腫瘍、中皮腫瘍またはそれらの組み合わせを含む；
前記リンパ組織の腫瘍が、形質細胞腫、ホジキン腫瘍、非ホジキン腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む；
前記筋肉の腫瘍が、平滑筋腫瘍、横紋筋腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む；
前記上皮組織の腫瘍が、重層扁平組織の腫瘍、腺上皮の腫瘍、移行上皮の腫瘍、胎盤腫瘍、精巣腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む；
前記神経組織の腫瘍が、グリア細胞の腫瘍、神経細胞の腫瘍、髄膜の腫瘍、神経鞘の腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む；
前記アミン前駆体の取り込み及び脱カルボシキル化（ＡＰＵＤ）の系の腫瘍が、下垂体腫瘍、副甲状腺腫瘍、甲状腺腫瘍、気管支表層腫瘍、副腎髄質腫瘍、膵臓腫瘍、胃または腸の腫瘍、頸動脈小体の腫瘍、または化学受容体系の腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む；
前記神経堤に由来する細胞の腫瘍が、色素産生細胞の腫瘍、末梢神経系のシュワン細胞の腫瘍、メルケル細胞の腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む；および／または
前記生殖腺の腫瘍が、卵巣の腫瘍、精巣の腫瘍、精上皮腫、未分化胚細胞腫、絨毛腫、胚性癌腫、内胚葉洞腫瘍、奇形癌腫、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、男化腫瘍、顆粒膜／卵胞膜腫瘍、門細胞腫、脂質細胞腫瘍、またはそれらの組み合わせを含む、
請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記成人の線維組織の腫瘍が線維腫または線維肉腫を含む；
前記胚性（粘液腫）の線維組織の腫瘍が粘液腫または粘液肉腫を含む；
前記脂肪組織の腫瘍が脂肪腫または脂肪肉腫を含む；
前記軟骨組織の腫瘍が軟骨腫または軟骨肉腫を含む；
前記骨の腫瘍が骨腫または骨肉腫を含む；
前記脊索の腫瘍が軟骨腫を含む；
前記線維性組織球腫が悪性線維性組織球腫を含む；
前記血管の腫瘍が、血管腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫または血管肉腫を含む；
前記リンパ管腫瘍がリンパ管腫またはリンパ管肉腫を含む；
前記中皮腫瘍が中皮腫を含む；
前記平滑筋の腫瘍が平滑筋種または平滑筋肉腫を含む；
前記横紋筋の腫瘍が横紋筋腫または横紋筋肉腫を含む；
前記重層扁平組織の腫瘍が乳頭腫、脂漏性角化症、皮膚付属器腫瘍、扁平上皮癌または類表皮癌を含む；
前記腺上皮の腫瘍が肝臓の腺上皮の腫瘍（任意に、肝細胞腺腫または肝細胞癌）、腎臓の腺上皮の腫瘍（任意に、尿細管腺腫、腎細胞癌または副腎腫）、または胆管の腺上皮の腫瘍（任意に、胆管腺腫または胆管癌）を含む；
前記移行上皮の腫瘍が移行細胞乳頭腫または移行細胞癌を含む；
前記胎盤腫瘍が胞状奇胎または絨毛腫を含む；
前記精巣腫瘍が精上皮腫または胎児性細胞癌を含む；
前記グリア細胞の腫瘍が神経膠腫または膠芽細胞腫を含む；
前記神経細胞の腫瘍が神経節細胞腫、神経芽細胞腫または髄芽細胞腫を含む；
前記髄膜の腫瘍が髄膜腫を含む；
前記神経鞘の腫瘍がシュワン鞘腫、神経鞘腫、神経線維腫、髄膜腫または神経線維肉腫を含む；
前記下垂体腫瘍が好塩基球腺腫、好酸球腺腫または色素嫌性腺腫を含む；
前記副甲状腺腫瘍が副甲状腺腺腫または副甲状腺癌を含む；
前記甲状腺腫瘍が甲状腺のＣ細胞過形成または髄質癌を含む；
前記気管支表層腫瘍が気管支カルチノイドまたは燕麦細胞癌を含む；
前記副腎髄質腫瘍が褐色細胞腫を含む；
前記膵臓腫瘍が島細胞腺腫、インスリノーマ、ガストリノーマまたは島細胞癌を含む；
前記胃または腸の腫瘍がカルチノイドを含む；
前記頸動脈小体の腫瘍、化学受容体系の腫瘍が化学受容体腫、傍神経節腫またはカルチノイドを含む；
前記色素産生細胞の腫瘍が母斑または黒色腫を含む；
前記末梢神経系のシュワン細胞の腫瘍がシュワン鞘腫または神経鞘腫を含む；および／または
前記メルケル細胞の腫瘍がメルケル細胞腫瘍を含む、
請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法が、外から添加された細胞外マトリクスの実質的な非存在下で前記細胞型を培養することを含む請求項１〜３及び５〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記培養培地が、血清、血液、血液細胞、血液成分、免疫細胞、馴化培養培地、またはそれらの組み合わせを含む請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記血液細胞が血小板、赤血球、またはそれらの組み合わせを含む；
前記血液成分が、凝固因子、リポタンパク質、トリグリセリド、またはそれらの組み合わせを含む；
前記免疫細胞が、Ｂ細胞、樹状細胞、顆粒球、先天性のリンパ系細胞、巨核球、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、胸腺細胞またはそれらの組み合わせを含む；および／または
前記馴化培養培地が、腫瘍細胞を含む培養物、内皮細胞を含む培養物、間質細胞型を含む培養物、またはそれらの組み合わせに由来する馴化培養培地を含む、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記血清、血液、血液細胞、血液成分、または免疫細胞がヒトまたはヒト以外の動物（任意にマウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、鳥類または魚類）、に由来する請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
試験管内での腫瘍転移の模倣方法であって、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法に従って培養された前記少なくとも１つの腫瘍細胞型の細胞を、臓器または組織をモデル化する試験管内の系に導入することを含む、前記模倣方法。
【請求項２４】
前記臓器または組織をモデル化する試験管内の系が、肝臓、膵臓、骨、肺、血管、リンパ系、脳、筋肉、膀胱、腎臓、腸、結腸、胆嚢、皮膚または骨をモデル化する請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記臓器または組織をモデル化する試験管内の系が肝臓をモデル化し、前記肝臓をモデル化する試験管内の系が培養培地と多孔性膜を含む別の細胞培養容器を含み、肝細胞が前記多孔性膜の第１表面上に播かれ、前記第１の表面が前記細胞培養容器の底面の近傍にあり、底面に対して離れた関係であるように前記別の細胞培養容器にて前記多孔性膜を懸濁させ、それによって前記細胞培養容器内で前記肝細胞を含む下容量部と前記多孔性膜の第２の表面を含む上容量部を定義し；剪断応力が前記上容量部における前記多孔性膜の前記第２の表面に適用され、前記剪断応力は前記肝細胞が生体内でさらされる流れを模倣し；前記前記別の細胞培養容器が前記上容量部と前記下容量部を定義する前記細胞培養容器の部分内にて注入口をさらに含む請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
肝臓をモデル化する試験管内の系に前記少なくとも１つの腫瘍細胞型の前記細胞を導入することが、前記肝臓をモデル化する試験管内の系の前記下容量部に少なくとも１つの腫瘍細胞型の細胞を移すことを含むか、または
前記肝臓をモデル化する試験管内の系に前記少なくとも１つの腫瘍細胞型の細胞を導入することが、前記肝臓をモデル化する試験管内の系の前記上容量部に前記少なくとも１つの腫瘍細胞型の細胞を移すことを含み、任意に、前記試験管内の系の前記下容量部への前記少なくとも１つの腫瘍細胞型の細胞の移動を評価することを含む、
請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
薬剤または化合物を腫瘍の転移に対する効果について調べる試験管内の方法であって、前記方法が
請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法に従って腫瘍の転移を試験管内で模倣すること；および
前記培養培地に薬剤または化合物を加えること、を含み、
前記薬剤または化合物の存在下での前記臓器または組織をモデル化する試験管内の系における前記少なくとも１つの腫瘍細胞型の細胞の変化が、前記薬剤または化合物が腫瘍の転移に対する効果を有することを示す、方法。
【請求項２８】
前記培養培地における前記薬剤または化合物の濃度が生体内で効果を達成する前記薬剤または化合物の濃度範囲の範囲内である請求項７〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記培養培地における前記薬剤または化合物の濃度が前記薬剤または化合物についての生体内での治療用Ｃｍａｘの濃度範囲の範囲内である請求項７〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記培養培地における前記薬剤または化合物の濃度が前記薬剤または化合物についての生体内での治療用Ｃｍａｘとほぼ同じである請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記培養培地における前記薬剤または化合物の濃度が、前記薬剤または化合物についての生体内での治療用Ｃｍａｘの濃度範囲よりも約２倍〜約２０倍低い請求項７〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記方法がさらに、前記薬剤または化合物を前記上容量部及び前記下容量部の少なくとも一方に潅流させることを含む請求項７〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
腫瘍を有する対象に投与する化学療法計画の選択方法であって、前記方法が：
請求項７〜２２および２８〜３２のいずれか１項に記載の方法に従って前記腫瘍に対する効果について薬剤または化合物を試験管内で調べること、または請求項２７〜３２のいずれか１項に記載の方法に従って腫瘍の転移に対する効果について薬剤または化合物を試験管内で調べること、ここで、前記少なくとも１つの腫瘍細胞型が前記対象の腫瘍に由来する腫瘍細胞を含む；および
前記試験管内で調べた前記結果に基づいて前記対象に前記薬剤または化合物を投与するかどうかを判定すること、を含み、
任意に、さらに、前記試験管内で調べた前記結果に基づいて前記対象に投与される薬剤または化合物の用量を選択すること、および／または前記試験管内で調べた前記結果に基づいて前記対象に投与される前記薬剤または化合物の投与率を選択すること、
を含む、選択方法。