【手続補正書】
【提出日】平成29年6月20日(2017.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1) 糖基質を提供する段階、
(2) この糖基質を所望の又は所定の長さの糖に伸長する段階、
(3) エピマー化反応を行う段階、及び
(4) 一又はそれ以上の硫酸化反応を行い、その結果ヘパリン化合物が合成される段階、
から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項２】
前記伸長段階において、グリコシルトランスフェラーゼが用いられる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記グリコシルトランスフェラーゼが、大腸菌K5のN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（KfiA）及び／又はパスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）由来のヘパロサンシンターゼ-2（pmHS2）からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記伸長段階が、グルクロン酸（GlcA）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）からなる群から選択される一又はそれ以上の単糖を用いる段階を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
更に、(3)エピマー化反応段階の前に、(5) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて、この伸長された糖上のN-スルホトランスフェラーゼ基質残基をN-スルホグルコサミン（GlcNS）残基に変換する段階を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
一又はそれ以上の変換反応において、更に、塩基を用いる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記エピマー化反応が、C5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記硫酸化反応が、2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記硫酸化反応が、6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記硫酸化反応が、3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）を用いることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、30％以上の収率を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
(1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) 該六糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(7) 該六糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項１３】
前記単糖基質が、1-O-（パラニトロフェニル）グルクロニド（GlcA-pnp）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
(1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) 該八糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(13) 該八糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項１５】
(1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(16) 該十糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(17) 該十糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項１６】
(1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項１７】
(1) 単糖基質を提供する段階、
(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、
(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、及び
(21) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OS）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項１８】
下式で表される、可逆的抗凝固活性を有する合成材料である低分子量ヘパリン化合物。
【化３１】
2016523535.tif 000001
（式中、Ｒ１はそれぞれ独立して水素原子又は−ＳＯ３Ｈを表し、Ｒ２は水素原子又は検知可能なタグを表し、Ｒ３は−ＮＨＳＯ３Ｈ又は−ＮＨＣＯＣＨ３を表し、ｎは０〜３の整数を表す。）
【請求項１９】
下記構造
【化１９】
2016523535.tif 000002
（式中、Ｒ２は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には検知可能なタグを含む。）を有し、抗凝固活性がプロタミンによって可逆的である、可逆的抗凝固活性を有するヘパリン化合物。
【請求項２０】
腎障害の患者への投与に適した、請求項１９に記載のヘパリン化合物。
【請求項２１】
(1) 下記構造
【化２０】
2016523535.tif 000003
（式中、Ｒ２は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には検知可能なタグを含む。）を有する六糖を提供する段階、
(2) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(3) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(4) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(8) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(9) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(10) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(11) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(12) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(13) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(14) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び
(15) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項２２】
(1) 下記構造
【化２２】
2016523535.tif 000004
（式中、Ｒ２は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には検知可能なタグを含む。）を有する六糖を提供する段階、
(2) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、
(3) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、
(4) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(5) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(7) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、
(8) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(9) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(10) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、
(11) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、
(12) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、
(13) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(14) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、
(15) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、及び
(16) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、
から成るヘパリン化合物を合成する方法。
【請求項２３】
前記ヘパリン化合物の抗凝固活性がプロタミンによって可逆的であり、その抗凝固活性が１μｇ／ｍｌのプロタミンの存在下で５０％以上逆転される、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項１８又は１９に記載の化合物を含む、患者を治療するための医薬品。
【請求項２５】
腎障害患者を治療するための請求項２４に記載の医薬品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
いくつかの実施形態において、ヘパリン化合物を合成する方法が提供される。このような方法は、いくつかの実施形態において、(1) 糖基質を提供する段階、(2) この糖基質を所望の又は所定の長さの糖に伸長する段階、(3) エピマー化反応を行う段階、及び(4) 一又はそれ以上の硫酸化反応を行い、その結果ヘパリン化合物が合成される段階から成る。いくつかの実施形態において、この伸長段階では、グリコシルトランスフェラーゼを用いることができる。いくつかの実施形態において、このグリコシルトランスフェラーゼは、大腸菌K5のN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（KfiA）及び／又はパスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）由来のヘパロサンシンターゼ-2（pmHS2）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、この伸長段階は、グルクロン酸（GlcA）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）からなる群から選択される一以上の単糖を用いることから成ることができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
いくつかの実施形態において、(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) 該六糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び(7) 該六糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。いくつかの実施形態において、この単糖基質は、1-O-（パラニトロフェニル）グルクロニド（GlcA-pnp）である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) 該八糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(13) 該八糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(16) 該十糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び(17) 該十糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、及び(20) 該十二糖を3-O-スルホトランス���ェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
(1) 単糖基質を提供する段階、(2) 酵素としてN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及びヘパロサンシンターゼ-2、基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この単糖基質を六糖に伸長する段階、(3) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(4) 該六糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(5) 該六糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(6) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この六糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(7) ヘパロサンシンターゼ-2及び基質グルクロン酸（GlcA）を用いて、この六糖基質を七糖に伸長する段階、(8) N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ及び基質N-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この七糖基質を八糖に伸長する段階、(9) 該八糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(10) 該八糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(11) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この八糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(12) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この八糖基質を十糖に伸長する段階、(13) 該十糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(14) 該十糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(15) N-スルホトランスフェラーゼ（NST）、3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）及び塩基、任意に水酸化リチウム、を用いて、この十糖上のN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）残基（複数可）を、N-スルホグルコサミン（GlcNS）残基（複数可）に変換する段階、(16) ヘパロサンシンターゼ-2及びN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、並びに基質としてグルクロン酸（GlcA）及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）を用いて、この十糖基質を十二糖に伸長する段階、(17) 該十二糖をC5-エピメラーゼ（C5-epi）を用いてエピマー化する段階、(18) 該十二糖を2-O-スルホトランスフェラーゼ（2-OST）と3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(19) 該十二糖を6-O-スルホトランスフェラーゼ（6-OST）、任意に6-O-スルホトランスフェラーゼ1及び/又は3（6-OST-1及び/又は6-OST-3）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化する段階、(20) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェ���ーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-1）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、及び(21) 該十二糖を3-O-スルホトランスフェラーゼ（3-OST）、任意に3-O-スルホトランスフェラーゼ1（3-OST-5）、及び3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸（PAPS）を用いて硫酸化し、ヘパリン化合物を合成する段階、から成るヘパリン化合物を合成する方法が提供される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
ヘパラン硫酸（HS）の生合成酵素の様々なアイソフォームの発現レベルは、特定の組織中の特定の糖配列の合成に寄与する。ヘパラン硫酸（HS）のN-デアセチラーゼ/Nスルホトランスフェラーゼ、3-O-スルホトランスフェラーゼ、6-O-スルホトランスフェラーゼは、複数のアイソフォームで存在する。各アイソフォームは、特定の硫酸化糖配列を生成するために、修飾部位の周囲の糖配列を認識すると考えられている(Liu, J., et al., (1999) J. Biol. Chem. 274:5185-5192; Aikawa, J.-I., et al., (2001) J. Biol. Chem. 276:5876-5882; Habuchi, H., et al., (2000) J. Biol. Chem. 275:2859-2868)。例えば、ヘパラン硫酸（HS）のD-グルコサミニル3-Oスルホトランスフェラーゼ（3-OST）アイソフォームは、異なる硫酸化イズロン酸残基に連結している3-O-硫酸化グルコサミン残基を生成する。3-OSTアイソフォーム1（3-OST-1）は、グルクロン酸の残基の非還元末端に結合するN硫酸化グルコサミン残基の3-OH位(GlcA-GlcNS±6S)に硫酸基を転送する。しかし、3-OSTアイソフォーム3（3-OST-3）は、2-O硫酸化イズロン酸の非還元末端に連結しているN-非置換グルコサミン残基の3-OH位(IdoUA2S-GlcNH2±6S)に硫酸を転送する(Liu, J., et al., (1999) J. Biol. Chem. 274:38155-38162)。これらの3-OSTの基質特異性の違いは、異なる生物学的機能をもたらす。例えば、3-OST-1によって修飾されたヘパラン硫酸（HS）は、アンチトロンビン（AT）に結合し、抗凝固活性を有する(Liu, J., et al., (1996) J. Biol. Chem. 271:27072-27082)。しかし、3-OST-3（3-OST-3A及び3-OST-3B）によって修飾されたヘパラン硫酸（HS）は、単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）の糖タンパク質D（GD）に結合し、ウイルスの侵入を仲介する(Shukla, D., et al., (1999) Cell 99:13-22)。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
ヘパラン硫酸（HS）で調節される抗凝固メカニズムは広く研究されている。現時点で、ヘパリンを含むHSは、セリンプロテアーゼ阻害剤であるアンチトロンビン（AT）と相互作用して、血液凝固カスケードにおいてトロンビンと第Xa因子の活性を阻害することが知られている(Rosenberg, R. D., et al., (1997) J. Clin. Invest. 99:2062-2070)。抗凝固活性のHS（HSact）とヘパリンは、多糖鎖ごとに一つ又はそれ以上のAT結合部位を有する。この結合部位は、−GlcNS(又はAc)6S−GlcA−GlcNS3S(±6S)−IdoUA2S−GlcNS6S−の構造の特定の五糖配列を有する。GlcNS3S(±6S)残基を生成するためのグルコサミンの3-O-硫酸化は、3-OST-1によって行われ、HSactの合成過程で役割を果たしている(Liu, J., et al., (1996) J. Biol. Chem. 271:27072-27082; Shworak, N. W. , et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:28008-28019)。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
いくつかの実施形態において、この伸長段階は、グリコシルトランスフェラーゼを用いることを含んでもよい。例えば、限定するものではないが、このグリコシルトランスフェラーゼは、大腸菌K5のN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（KfiA）又はパスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）由来のヘパロサンシンターゼ-2（pmHS2）であってもよい。いくつかの実施形態において、この伸長段階は、一又はそれ以上の単糖を用いる段階を含んでもよく、この単糖は、例えば、グルクロン酸（GlcA）、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）、及びN-トリフルオロアセチルグルコサミン（GlcNTFA）から成ってもよい。