(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
0003592742.tif 000004
（式中、Ｒは脂肪族炭化水素基（ただし、エチル基を除く）または芳香族化合物基を、Ｘは水素原子あるいは金属イオンを示す。）で表されるグルタミン酸誘導体を有効成分とする神経成長因子合成促進剤。
【請求項２】
一般式(１)における置換基Ｒが、アルキル基（ただし、エチル基を除く），シクロアルキル基またはベンジル基のいずれかである請求項１記載の神経成長因子合成促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、神経成長因子合成促進剤に関し、詳しくはグルタミン酸誘導体を有効成分とする末梢交感神経細胞、知覚神経細胞、中枢神経系の前脳基底核コリン作動性神経細胞や線条体内在性コリン作動性神経細胞などの分化や生存・機能維持作用を有する神経成長因子（Ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）  合成促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
神経成長因子は、末梢交感神経細胞、知覚神経細胞、中枢神経系の前脳基底核コリン作動性神経細胞や線条体内在性コリン作動性神経細胞などの分化や生存・機能維持作用を有するアミノ酸１１８個の同一ポリペプチド鎖が非共有結合した二量体構造をもつ塩基性タンパク質である。
最近、この神経成長因子が脳内、特に中枢神経系の海馬や大脳皮質に多く存在することが確認され、前脳基底部のコリン作動性ニューロンに作用することや切断されたニューロンの再生や再発芽を顕著に促進することが明らかにされている。脳のコリン作動性ニューロンの変性脱落は、アルツハイマー病の主要な病変の一つであり、神経成長因子はこのニューロンの生存と機能維持に必須の因子であると考えられていることから、神経成長因子をアルツハイマー病の治療に応用することができるのではないかという期待が高まってきている。
【０００３】
また、神経成長因子は末梢神経細胞の損傷に対する修復作用にも関与していることから、神経細胞損傷により引き起こされる疾患に対しても治療あるいは予防的効果を期待することができる。このようなことから、神経成長因子そのものや神経成長因子の合成を促進させる物質の研究が盛んに行われ、酵母によるヒト神経成長因子の分泌生産方法（バイオサイエンスとインダストリー、ｖｏｌ．４９  １９９１）や神経成長因子合成促進剤としてカテコールアミン（エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン）が見出されている（Ｙ．  Ｆｕｒｕｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  ｖｏｌ．２０８  （１９８６）  ２５８）。しかしながら、アルツハイマー病や末梢神経細胞の損傷により引き起こされる疾患の予防あるいは治療など実際の応用面を考えると、神経成長因子は高分子であるため、投与方法に問題があり、またカテコールアミン類は内在性の活性物質であり、もともとホルモンであるため、神経成長因子の合成促進を目的に体内に投与することは生体内での量的バランスを崩し危険を伴う恐れがある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明の目的は他の細胞や器官には影響を与えず選択的に神経成長因子合成促進活性を有する神経成長因子合成促進剤を提供することである。
【０００５】
本発明者らは、すでに茶に豊富に含まれるアミノ酸の一種テアニンが強い神経成長因子合成促進活性を有することを見出している。さらに、本発明者らはテアニンがグルタミン酸誘導体の一種であることに着目し、種々のグルタミン酸誘導体を合成し、神経成長因子合成促進活性を調べたところ、これらのグルタミン酸誘導体にも強い神経成長因子合成促進作用があることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
すなわち本発明は、一般式（１）
【０００７】
【化２】
0003592742.tif 000002
【０００８】
（式中、Ｒは脂肪族炭化水素基（ただし、エチル基を除く）脂肪族炭化水素基または芳香族化合物基を、Ｘは水素原子あるいは金属イオンを示す。）で表されるグルタミン酸誘導体を有効成分とする神経成長因子合成促進剤に関する。
【０００９】
より詳しくは、本発明はグルタミン酸誘導体を有効成分とする末梢交感神経細胞、知覚神経細胞、中枢神経系の前脳基底核コリン作動性神経細胞や線条体内在性コリン作動性神経細胞などの分化や生存・機能維持作用を有する神経成長因子合成促進剤に関する。
【００１０】
上記一般式（１）で示される本発明のグルタミン酸誘導体はＤ型、Ｌ型のいずれの立体構造をもつものであってもよい。また、α位のカルボキシル基は遊離の酸あるいはナトリウム、カリウムなどの金属塩のいずれであってもよく、またα位のアミノ基についても遊離型でも塩酸塩や酢酸塩などの塩のいずれであってもよい。
【００１１】
さらに、一般式中の置換基Ｒが示す脂肪族炭化水素基としては、例えばメチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどのアルキル基、二重結合を含むアルケン、三重結合をもつアルキンやハロゲン、アミノ基、水酸基、カルボキシル基、ベンジル基、フェニル基などで置換されたアルキル基、アルケンおよびアルキン、さらには環状構造をもつシクロアルキル基、シクロアルケンやそれらの置換化合物などを挙げることができる。また、一般式中の置換基Ｒが示す芳香族化合物基では、ベンゼン環をもつ化合物群とベンゼン環がいくつか連なった多核芳香族炭化水素からなる芳香族炭化水素、芳香族炭化水素の一箇所あるいは二箇所以上が個々にニトロ化、水酸化、アシル化、ハロゲン化、ニトロ化、アミノ化、スルホン化などを受けた置換芳香族炭化水素、さらにはピリジン、ピラジン、ピロールに代表される環内に窒素原子を含む化合物群、チオピラン、チオフェン、チオナフテンなどの硫黄原子を含む化合物群、フラン、フラボン、フラバノン、フラボノールなどのような酸素を含む化合物群などを例示することができる。
【００１２】
本発明のグルタミン酸誘導体の合成方法は特に限定されるものではなく、従来から知られている公知の方法を用いることができる。例を挙げれば、グルタミン酸からピロリドンカルボン酸（ｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）を調製し、この化合物とアルキルアミン水溶液とを反応させる方法（Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ，  Ｎ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  Ｖｏｌ．  ６４，  １９４２，  １０２１）、γ−メチルグルタメイト（γ−ｍｅｔｙｌｇｌｕｔａｍａｔｅ）と無水アルキルアミンを二硫化炭素の存在下に反応させる方法（Ｆｕｒｕｙａｍａ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｕｌｌ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｊｐｎ．，  Ｖｏｌ．  ３７，  １９６４，  １０７８）  、Ｎ−カーボベンゾキシ−グルタミン酸γ−エチルエステル（Ｎ−ｃａｒｂｏｂｅｎｚｏｘｙ−ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ  γ−ｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ）  と無水アルキルアミドを反応させる方法やグルタミン酸からＮ−トリチル−グルタミン酸γ−ベンジルエステルを調製し、この化合物とアルキルアミド水溶液とを反応させる方法（ｋａｗａｇｉｓｈｉ，  Ｈ．  ａｎｄ  Ｓｕｇｉｙａｍａ，  Ｋ．，  Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．  ５６，  １９９２，  ６８９）  などがある。
【００１３】
本発明では、簡便かつ大量合成可能な上記方法（ｋａｗａｇｉｓｈｉ，  Ｈ．  ａｎｄ  Ｓｕｇｉｙａｍａ，  Ｋ．，  Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．    Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．  ５６，  １９９２，  ６８９  ）に準じて種々のグルタミン酸誘導体を合成した。すなわち、４０〜８０重量％硫酸中、グルタミン酸に対し１〜３モル当量のベンジルアルコールを加え加熱還流下で３０〜９０分間反応を行い、グルタミン酸γ−ベンジルエステルを得る。このグルタミン酸γ−ベンジルエステルをピリジンに溶解後、グルタミン酸γ−ベンジルエステルに対して１〜２モル当量のトリフェニルクロロメタンを加え、１０〜１００時間反応させＮ−トリチル−グルタミン酸γ−ベンジルエステルを得る。
【００１４】
次いで、このＮ−トリチル−グルタミン酸γ−ベンジルエステルに対して２〜４０モル当量のＲＮＨ2あるいはその水溶液を加え、２０〜８０℃で１〜２００時間反応させ下記一般式（２）で示される化合物を得る。なお、この反応においてＲＮＨ2が溶液でない場合には、テトラハイドロフランやジメチルスルホキシドのような求核性を持たない溶媒に溶解させて用いることもできる。得られた反応液を減圧濃縮あるいはシリカゲルなどを用いたクロマトグラフィーなどにより未反応のＲＮＨ2を除去後、これに１〜３モル濃度の酸溶液を加え、沸騰湯浴中で５〜３０分間加熱してトリチル基を脱離させ、一般式（１）で示される目的化合物を得る。
【００１５】
【化３】
0003592742.tif 000003
【００１６】
このようにして得られたグルタミン酸誘導体は、結晶化や各種のクロマトグラフィーを用いてさらに精製することもできる。以上述べたようにして合成された本発明のグルタミン酸誘導体は、経口および非経口摂取のいずれも使用可能である。経口投与の場合には、例えばハードカプセル、ソフトカプセル、錠剤、顆粒剤、細粒剤や散剤などの形で使用できる。また、非経口で摂取する場合には、注射剤、点滴剤、固形状あるいは懸濁粘稠液状として粘膜吸収ができるように坐薬として使用することができるほか、局所組織内投与、皮内、皮下、筋肉内や静脈内注射、局所への塗布、噴霧、膀胱内注射などの外用的投与法も使用することができる。
【００１７】
さらに、本発明のグルタミン酸誘導体は飲食物に配合して使用することもできる。なお、ここで言う飲食物とは、単に飲料や食品だけでなく酒類、タバコなどの嗜好品類、飼料、餌料類、うがい薬、歯磨きなどの化粧品類、口中香錠、トローチ、内服液などの医薬品など本発明のグルタミン酸誘導体を摂取することのできる全ての物品を意味する。これらの飲食物としては、例えば茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、調味料、菓子類、シロップ類、果実加工品、野菜加工品、漬物類、畜肉製品、魚肉製品、珍味類、缶・ビン詰類、酒類、即席飲食物などの通常の飲食物、家畜や養殖魚などの飼育動物のための飼料、餌料類、トローチ、カプセル、錠剤、内服液、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香錠、うがい薬等各種固形状、ペースト状、液状の嗜好品、化粧品、医薬部外品、医薬品などがある。
【００１８】
【実施例】
以下、本発明を実施例により説明するが、かかる説明によって本発明がなんら制限されるものではない。
実施例１
グルタミン酸誘導体中間体の合成
６００ｇのＬ−グルタミン酸を７０重量％の硫酸５００ｍｌに溶解して、ベンジルアルコール５００ｍｌ（倍当量）中にて７０℃で３時間撹拌反応させた。次に、反応液に３．２モル／リットルの炭酸水素ナトリウム溶液２．５リットルを加えて中和し、生じた沈澱を濾集した。得られた沈澱を熱水から再結晶して、合成中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル６２１ｇを得た（収率６５％）。
【００１９】
実施例２
γ−Ｌ−グルタミルメチルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、４０％メチルアミン水溶液２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のメチルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミルメチルアミド８６５ｍｇ（収率２５％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミルメチルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００２０】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）
２．１３（Ｈ−２，  ｄｔ，  Ｊ＝６．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４１（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．７３（Ｈ−Ｍｅ，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．７６（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝６．１  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    １６１（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  １６０
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミルメチルアミドであることを確認した。
【００２１】
実施例３
γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−プロピルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、ｎ−プロピルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のｎ−プロピルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−プロピルアミド２．３ｇ（収率５８％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−プロピルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００２２】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ：ＣＤ３ＯＤ＝１０：１）
０．８９（Ｈ−３’，  ｔ，  Ｊ＝５．１  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．５１（Ｈ−２’，  ｔｑ，  Ｊ＝５．１，  ４．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．１３（Ｈ−２，  ｄｔ，  Ｊ＝４．７，  ４．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４１（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．１４（Ｈ−１’，  ｔ，  Ｊ＝４．９８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．７５（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝４．２  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    １８９（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  １８８
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−プロピルアミドであることを確認した。
【００２３】
実施例４
γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ブチルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、ｎ−ブチルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のブチルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ブチルアミド２．１ｇ（収率４９％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ブチルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００２４】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ：ＣＤ３ＯＤ＝１０：１）
０．８９（Ｈ−４’，  ｔ，  Ｊ＝４．９  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．３２（Ｈ−３’，  ｔｑ，  Ｊ＝４．０，  ４．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．４７（Ｈ−２’，  ｄｄ，  Ｊ＝４．６，  ４．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．１１（Ｈ−２，  ｄｔ，  Ｊ＝４．７，  ４．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．３９（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．１７（Ｈ−１’，  ｔ，  Ｊ＝４．７  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．７３（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝４．１  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    ２０３（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  ２０２
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ブチルアミドであることを確認した。
【００２５】
実施例５
γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ペンチルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、ｎ−ペンチルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のｎ−ペンチルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ペンチルアミド２．８ｇ（収率６１％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ペンチルアミドを質量分析によって分析した。
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    ２１７（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  ２１６
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ペンチルアミドであることを確認した。
【００２６】
実施例６
γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ヘキシルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、ｎ−ヘキシルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のｎ−ヘキシルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ヘキシルアミド２．５ｇ（収率５２％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ヘキシルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００２７】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）
０．８９（Ｈ−６’，  ｔ，  Ｊ＝７．８  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２９（Ｈ−３’−５’，  ｍ，  ６Ｈ），  １．５１（Ｈ−２’，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．１３（Ｈ−２，  ｄｔ，  Ｊ＝６．０，  ７．８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４１（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．７７（Ｈ−１’，  ｔ，  Ｊ＝５．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．７３（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝４．１  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    ２３１（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  ２３０
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  ｎ−ヘキシルアミドであることを確認した。
【００２８】
実施例７
γ−Ｌ−グルタミル  シクロプロピルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、シクロプロピルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のシクロプロピルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  シクロプロピルアミド１．６ｇ（収率４１％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  シクロプロピルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００２９】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）
０．５２，  ０．７４（Ｈ−２’，３’’，  ｍ，  ４Ｈ），  ２．１１（Ｈ−２，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．５６（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．５９（Ｈ−１’，  ｍ，  １Ｈ），  ３．７５（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝５．９  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    １８７（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  １８７
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  シクロプロピルアミドであることを確認した。
【００３０】
実施例８
γ−Ｌ−グルタミル  シクロヘキシルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、シクロヘキシルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のシクロヘキシルアミンを除去した。
得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  シクロヘキシルアミド２．３ｇ（収率４８％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  シクロヘキシルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００３１】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）
１．２７（Ｈ−３’，  ４’，  ５’  ｍ，  ６Ｈ），  （Ｈ−２’−６’，  ｍ，  ４Ｈ），  ２．１２（Ｈ−２，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．３７（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．５８（Ｈ−１’，  ｍ，  １Ｈ），  ３．７６（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝５．９  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    ２２９（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  ２２８
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  シクロヘキシルアミドであることを確認した。
【００３２】
実施例９
γ−Ｌ−グルタミル  ベンジルアミドの合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル５．０ｇを４５ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン７．０ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去し、ベンジルアミン２５ｍｌを加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して未反応のベンジルアミンを除去した。得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中１５分間加熱して、トリチル基を脱保護した。
得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化し、γ−Ｌ−グルタミル  ベンジルアミド１．５ｇ（収率３０％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  ベンジルアミドを１Ｈ−ＮＭＲ、質量分析によって分析した。
【００３３】
１Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ：ＣＤ３ＯＤ＝４：１）
２．１２（Ｈ−２，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．４５（Ｈ−３，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．７１（Ｈ−１，  ｔ，  Ｊ＝４．０  Ｈｚ，  １Ｈ）
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    ２３７（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  ２３６
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  ベンジルアミドであることを確認した。
【００３４】
実施例１０
γ−Ｌ−グルタミル  ２−３，４−ジハイドロキシフェニル２−ハイドロキシエチルアミド（ノルエピネフリン誘導体）の合成
実施例１で得られた反応中間体Ｌ−グルタミン酸γベンジルエステル１．４ｇを１３ｍｌのピリジンに溶解し、トリフェニルクロロメタン１．８ｇを加え、３０℃で６０時間反応させた。反応液を減圧濃縮してピリジンを除去した後に１０ｍｌのテトラハイドロフランを加えて溶解し、さらに１ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解した１．０ｇの２−３，４−ジハイドロキシフェニル２−ハイドロキシエチルアミン（ノルエピネフリン）を加えて、３０℃で４８時間反応させた。次に、反応液を減圧濃縮して、得られた反応物に５０％酢酸２５ｍｌを加えて沸騰水中で１５分間加熱し、トリチル基を脱保護した。
得られた反応液に冷水２０ｍｌを加えて、析出するトリフェニルカルビノールを濾別した。濾液を濃縮して得られたシロップに９５％エタノール３０ｍｌを加えて加熱溶解後、冷却し、析出した結晶を濾集した。濾集した結晶に９５％エタノールを加えて、沸騰水中で加熱しながら溶解させた後、冷蔵庫に入れて再結晶化した。得られた結晶を逆相系分取ＨＰＬＣ（ＹＭＣ−Ｓ５    ２０×２５０ｍｍ、５％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液−１０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液ステップワイズ法）で精製してγ−Ｌ−グルタミル  ２−３，４−ジハイドロキシフェニル２−ハイドロキシエチルアミド１１５ｍｇ（収率６．５％）を得た。得られたγ−Ｌ−グルタミル  ２−３，４−ジハイドロキシフェニル２−ハイドロキシエチルアミドを質量分析によって分析した。
質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）    ２９９（Ｍ＋Ｈ）＋      分子量  ２９８
以上の結果から、得られた化合物がγ−Ｌ−グルタミル  ２−３，４−ジハイドロキシフェニル２−ハイドロキシエチルアミドであることを確認した。
【００３５】
実施例１１
生後直後のラット脳を摘出し髄膜を取り除いた後、細断した。この脳をトリプシン処理し、牛胎児血清を含む培養液を用いて２〜３日間、３７℃で５％炭酸ガス存在下に培養した。続いて、無血清培地に変え同条件で３日間培養した。さらに、無血清培地を３日に一度取り替えて６日間培養し、静止アストロサイトを調製した。
この静止アストロサイトに上記実施例２〜１０で調製した各種グルタミン酸誘導体を適切な濃度範囲を選んで添加して２４時間培養した。なお、添加濃度は４．１、１２．３、３７．０、１１１、３３３および１０００μｇ／ｍｌから選択した。この培養液の神経成長因子濃度を古川らの開発した酵素免疫測定法（古川ら、ジャーナル  オブ  ニューロケミストリー、４０巻、１９８３、７３４頁）を用いて測定した。なお、上記濃度のエピネフリンを比較の対照として用いた。
結果を図１および２に示した。図から明らかなように、グルタミン酸誘導体はエピネフリンと同等あるいはそれ以上の神経成長因子合成促進活性を示した。
【００３６】
【発明の効果】
本発明のグルタミン酸誘導体は、強い神経成長因子合成促進活性を有することから、アルツハイマー病や末梢神経細胞の損傷により引き起こされる疾患の治療や予防にきわめて有効に活用することができるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】神経成長因子合成に及ぼす本発明のグルタミン酸誘導体の影響を示すグラフである。
【図２】神経成長因子合成に及ぼす本発明のグルタミン酸誘導体の影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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