【手続補正書】
【提出日】平成29年2月13日(2017.2.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘテロ二量体の条件付活性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ａ）第１のポリペプチドであって、
ｉ）特異的結合対の第１のメンバーと、
ｉｉ）第１の調節ドメインと、
ｉｉｉ）二量体化対の第１のメンバーと、
ｉｖ）特異的結合対の前記第１のメンバーと前記第１の調節ドメインとの間に介在する膜貫通ドメインと
を含む、第１のポリペプチド；及び
ｂ）第２のポリペプチドであって、
ｉ）膜貫通ドメインと、
ｉｉ）第２の調節ドメインと、
ｉｉｉ）前記二量体化対の第２のメンバーと、
ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含む、前記第２のポリペプチド
を含むか、または
ａ）第１のポリペプチドであって、
ｉ）特異的結合対の第１のメンバーと、
ｉｉ）調節ドメインと、
ｉｉｉ）二量体化対の第１のメンバーと、
ｉｖ）特異的結合対の前記第１のメンバーと前記調節ドメインとの間に介在する膜貫通ドメインと
を含む、第１のポリペプチド；及び
ｂ）第２のポリペプチドであって、
ｉ）前記二量体化対の第２のメンバーと、
ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含む、第２のポリペプチド
を含む、前記ヘテロ二量体の条件付活性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２】
前記第１のポリペプチドが、前記特異的結合対の前記第１のメンバーと前記膜貫通ドメインとの間に介在するヒンジ領域を含む、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項３】
前記特異的結合対の前記第１のメンバーが、抗体もしくは抗体断片、リガンド、または受容体である、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項４】
前記ヒンジ領域が免疫グロブリンＩｇＧヒンジ領域またはＣＤ８由来のヒンジである、請求項２に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項５】
前記第１及び第２の調節ドメインが、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＯＸ−４０、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、及びＣＤ２８から選択される、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項６】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＺＡＰ７０及びＣＤ３−ゼータから選択される、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項７】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項８】
前記二量体化対の前記第１及び第２のメンバーが、小分子二量体化剤の存在下でホモ二量体を形成する、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項９】
前記二量体化対の前記第１及び第２のメンバーが、小分子二量体化剤の存在下でヘテロ二量体を形成する、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項１０】
前記二量体化対の前記第１及び第２のメンバーが、
ａ）ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）及びＦＫＢＰ、
ｂ）ＦＫＢＰ及びカルシニューリン触媒サブユニットＡ（ＣｎＡ）、
ｃ）ＦＫＢＰ及びシクロフィリン、
ｄ）ＦＫＢＰ及びＦＫＢＰ−ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＢ）、
ｅ）ジャイレースＢ（ＧｙｒＢ）及びＧｒｙＢ、
ｆ）ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）及びＤＨＦＲ、
ｇ）ＤｍｒＢ及びＤｍｒＢ、
ｈ）ＰＹＬ及びＡＢＩ、
ｉ）Ｃｒｙ２及びＣＩＰ、
ｊ）ＧＡＩ及びＧＩＤ１
から選択される、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項１１】
ｉ）前記第１及び第２の調節ドメインが４−１ＢＢに由来し、
ｉｉ）前記二量体化対の前記第１及び第２のメンバーがＦＫＢＰ及びＦＲＢであり、かつ
ｉｉ）前記シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭを含む、
請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項１２】
前記特異的結合対の前記第１のメンバーが、一本鎖Ｆｖである、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項１３】
前記特異的結合対の前記第１のメンバーが、細胞上、固体表面上、または脂質二重層に存在するエピトープに結合する、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項１４】
前記細胞が癌細胞である、請求項１３に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
【請求項１５】
請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲを生成するように遺伝子改変された、哺乳類細胞。
【請求項１６】
幹細胞、前駆細胞、または幹細胞もしくは前駆細胞から誘導された細胞である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
Ｔリンパ球またはＮＫ細胞である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１８】
請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
【請求項１９】
前記ヌクレオチド配列が、Ｔリンパ球特異的プロモーターまたはＮＫ細胞特異的プロモーターに機能的に連結される、請求項１８に記載の核酸。
【請求項２０】
インビトロ転写ＲＮＡである、請求項１８に記載の核酸。
【請求項２１】
請求項１８に記載の核酸を含む、組み換え発現ベクター。
【請求項２２】
Ｔリンパ球を二量体化剤及び特異的結合対の第２のメンバーと接触させる工程を含む、Ｔリンパ球をインビトロまたはエクスビボで活性化する方法であって、前記Ｔリンパ球が、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲを生成するように遺伝子改変され、前記二量体化剤及び特異的結合対の前記第２のメンバーの存在下で、前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲが二量体化して、前記Ｔリンパ球を活性化し、それにより活性化されたＴリンパ球を生成する、前記方法。
【請求項２３】
特異的結合対の前記第２のメンバーが抗原である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記活性化されたＴリンパ球が標的細胞の死滅を媒介する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記活性化されたＴリンパ球が、ＩＬ−２及び／またはＩＦＮ−γを生成する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記標的細胞が癌細胞である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲの前記特異的結合対の前記第１のメンバーが、癌細胞上のエピトープに対して特異的な抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１５に記載の細胞を作製する方法であって、哺乳類細胞を、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターで遺伝子改変する工程、または哺乳類細胞を、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含むＲＮＡで遺伝子改変する工程を含む、前記方法。
【請求項２９】
前記遺伝子改変がエクスビボで実行される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞が、Ｔリンパ球、幹細胞、ＮＫ細胞、前駆細胞、幹細胞由来の細胞、または前駆細胞由来の細胞である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターで遺伝子改変されたＴリンパ球を含み、二量体化剤と組み合わせて使用される、個体における癌を治療するための医薬組成物であって、
前記Ｔリンパ球が前記個体に由来し、
前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲの抗原結合ドメインが、前記個体における癌細胞上のエピトープに対して特異的であり、
前記二量体化剤が前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲの二量体化を誘導し、前記二量体化が前記遺伝子改変されたＴリンパ球の活性化及び前記癌細胞の死滅を提供する、
前記医薬組成物。
【請求項３２】
前記二量体化剤がラパログである、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
宿主細胞を二量体化剤及び特異的結合対の第２のメンバーとインビトロまたはエクスビボで接触させる工程を含む、宿主細胞の活性を調節する方法であって、Ｔリンパ球が、請求項１に記載のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲを生成するように遺伝子改変され、かつ前記二量体化剤及び特異的結合対の前記第２のメンバーの存在下で、前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲが二量体化して、宿主細胞の少なくとも１つの活性を調節する、前記方法。
【請求項３４】
前記活性が、増殖、細胞生存、アポトーシス、遺伝子発現、または免疫活性化である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
特異的結合対の前記第２のメンバーが抗原である、請求項３３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
本開示は、ヘテロ二量体の条件付活性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、及び該ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本開示は、該ＣＡＲを生成するように遺伝子改変された細胞を提供する。本開示のＣＡＲは、様々な方法において使用され得、これらも開示される。
[本発明1001]
ヘテロ二量体の条件付活性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ａ）第1のポリペプチドであって、
ｉ）特異的結合対の第1のメンバーと、
ｉｉ）第1の調節ドメインと、
ｉｉｉ）二量体化対の第1のメンバーと、
ｉｖ）特異的結合対の前記第1のメンバーと前記第1の調節ドメインとの間に介在する膜貫通ドメインと
を含む、第1のポリペプチド；及び
ｂ）第2のポリペプチドであって、
ｉ）膜貫通ドメインと、
ｉｉ）第2の調節ドメインと、
ｉｉｉ）前記二量体化対の第2のメンバーと、
ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含む、前記第2のポリペプチド
を含むか、または
ａ）第1のポリペプチドであって、
ｉ）特異的結合対の第1のメンバーと、
ｉｉ）調節ドメインと、
ｉｉｉ）二量体化対の第1のメンバーと、
ｉｖ）特異的結合対の前記第1のメンバーと前記調節ドメインとの間に介在する膜貫通ドメインと
を含む、第1のポリペプチド；及び
ｂ）第2のポリペプチドであって、
ｉ）前記二量体化対の第2のメンバーと、
ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインと
を含む、第2のポリペプチド
を含む、前記ヘテロ二量体の条件付活性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
[本発明1002]
前記第1のポリペプチドが、前記特異的結合対の前記第1のメンバーと前記膜貫通ドメインとの間に介在するヒンジ領域を含む、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1003]
前記特異的結合対の前記第1のメンバーが、抗体もしくは抗体断片、リガンド、または受容体である、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1004]
前記ヒンジ領域が免疫グロブリンＩｇＧヒンジ領域またはＣＤ8由来のヒンジである、本発明1002のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1005]
前記第1及び第2の調節ドメインが、4−1ＢＢ（ＣＤ137）、ＣＤ28、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＯＸ−40、ＣＤ27、ＣＤ30、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＤＡＰ10、ＤＡＰ12、及びＣＤ28から選択される、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1006]
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＺＡＰ70及びＣＤ3−ゼータから選択される、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1007]
前記細胞内シグナル伝達ドメインが免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1008]
前記二量体化対の前記第1及び第2のメンバーが、小分子二量体化剤の存在下でホモ二量体を形成する、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1009]
前記二量体化対の前記第1及び第2のメンバーが、小分子二量体化剤の存在下でヘテロ二量体を形成する、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1010]
前記二量体化対の前記第1及び第2のメンバーが、
ａ）ＦＫ506結合タンパク質（ＦＫＢＰ）及びＦＫＢＰ、
ｂ）ＦＫＢＰ及びカルシニューリン触媒サブユニットＡ（ＣｎＡ）、
ｃ）ＦＫＢＰ及びシクロフィリン、
ｄ）ＦＫＢＰ及びＦＫＢＰ−ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＢ）、
ｅ）ジャイレースＢ（ＧｙｒＢ）及びＧｒｙＢ、
ｆ）ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）及びＤＨＦＲ、
ｇ）ＤｍｒＢ及びＤｍｒＢ、
ｈ）ＰＹＬ及びＡＢＩ、
ｉ）Ｃｒｙ2及びＣＩＰ、
ｊ）ＧＡＩ及びＧＩＤ1
から選択される、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1011]
ｉ）前記第1及び第2の調節ドメインが4−1ＢＢに由来し、
ｉｉ）前記二量体化対の前記第1及び第2のメンバーがＦＫＢＰ及びＦＲＢであり、かつ
ｉｉ）前記シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭを含む、
本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1012]
前記特異的結合対の前記第1のメンバーが、一本鎖Ｆｖである、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1013]
前記特異的結合対の前記第1のメンバーが、細胞上、固体表面上、または脂質二重層に存在するエピトープに結合する、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1014]
前記細胞が癌細胞である、本発明1013のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲ。
[本発明1015]
本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲを生成するように遺伝子改変された、哺乳類細胞。
[本発明1016]
幹細胞、前駆細胞、または幹細胞もしくは前駆細胞から誘導された細胞である、本発明1015の細胞。
[本発明1017]
Ｔリンパ球またはＮＫ細胞である、本発明1015の細胞。
[本発明1018]
本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
[本発明1019]
前記ヌクレオチド配列が、Ｔリンパ球特異的プロモーターまたはＮＫ細胞特異的プロモーターに機能的に連結される、本発明1018の核酸。
[本発明1020]
インビトロ転写ＲＮＡである、本発明1018の核酸。
[本発明1021]
本発明1018の核酸を含む、組み換え発現ベクター。
[本発明1022]
Ｔリンパ球を二量体化剤及び特異的結合対の第2のメンバーと接触させる工程を含む、Ｔリンパ球を活性化する方法であって、前記Ｔリンパ球が、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲを生成するように遺伝子改変され、前記二量体化剤及び特異的結合対の前記第2のメンバーの存在下で、前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲが二量体化して、前記Ｔリンパ球を活性化し、それにより活性化されたＴリンパ球を生成する、前記方法。
[本発明1023]
特異的結合対の前記第2のメンバーが抗原である、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記接触がインビボで生じる、本発明1022の方法。
[本発明1025]
前記活性化されたＴリンパ球が標的細胞の死滅を媒介する、本発明1022の方法。
[本発明1026]
前記活性化されたＴリンパ球が、ＩＬ−2及び／またはＩＦＮ−γを生成する、本発明1022の方法。
[本発明1027]
前記標的細胞が癌細胞である、本発明1025の方法。
[本発明1028]
前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲの前記特異的結合対の前記第1のメンバーが、癌細胞上のエピトープに対して特異的な抗体である、本発明1022の方法。
[本発明1029]
本発明1015の細胞を作製する方法であって、哺乳類細胞を、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターで遺伝子改変する工程、または哺乳類細胞を、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含むＲＮＡで遺伝子改変する工程を含む、前記方法。
[本発明1030]
前記遺伝子改変がエクスビボで実行される、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記細胞が、Ｔリンパ球、幹細胞、ＮＫ細胞、前駆細胞、幹細胞由来の細胞、または前駆細胞由来の細胞である、本発明1029の方法。
[本発明1032]
個体における癌を治療する方法であって、
ｉ）前記個体から得られたＴリンパ球を、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターで遺伝子改変する工程であって、前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲの抗原結合ドメインが、前記個体における癌細胞上のエピトープに対して特異的であり、かつ前記遺伝子改変がエクスビボで実行される、工程；
ｉｉ）前記遺伝子改変されたＴリンパ球を前記個体に導入する工程；ならびに
ｉｉｉ）前記個体に、有効量の二量体化剤を投与する工程であって、前記二量体化剤が前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲの二量体化を誘導し、前記二量体化が前記遺伝子改変されたＴリンパ球の活性化及び前記癌細胞の死滅を提供し、それにより前記癌を治療する工程
を含む、前記方法。
[本発明1033]
前記二量体化剤がラパログである、本発明1032の方法。
[本発明1034]
宿主細胞を二量体化剤及び特異的結合対の第2のメンバーと接触させる工程を含む、宿主細胞の活性を調節する方法であって、Ｔリンパ球が、本発明1001のヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲを生成するように遺伝子改変され、かつ前記二量体化剤及び特異的結合対の前記第2のメンバーの存在下で、前記ヘテロ二量体の条件付活性ＣＡＲが二量体化して、宿主細胞の少なくとも1つの活性を調節する、前記方法。
[本発明1035]
前記活性が、増殖、細胞生存、アポトーシス、遺伝子発現、または免疫活性化である、本発明1034の方法。
[本発明1036]
特異的結合対の前記第2のメンバーが抗原である、本発明1034の方法。