【誤訳訂正書】
【提出日】平成29年5月15日(2017.5.15)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界ＣＯ２を用いた抽出、および「短経路」分子蒸留からなる群から選択される精製ステップを含むことを特徴とする、微生物の発酵により産生される高スクアレン含量を有する組成物を調製する方法であって、
前記微生物が、スラウストキトリアレス科（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ  ｓｐ．）に属する微細藻類であり、
前記スラウストキトリアレス科（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ  ｓｐ．）に属する微細藻類が、スキゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）、オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）およびスラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）の微細藻類であり、
下記のステップ：
１）スラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）科に属する微細藻類のバイオマスを調製するステップ、
２）少なくとも１０重量％のスクアレンを含有する粗製油を得るために、前記バイオマスを処理するステップ、
３）７０〜７５％のスクアレン含量を有する抽出物、およびラフィネートを製造するために、このようにして得られる前記粗製油を、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界圧の流体と接触させることにより分画するステップ、
４）９５〜９９重量％のスクアレン含量を得るために、このようにして得られる前記抽出物を、ステップ３）におけるものと同様の、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界圧の流体と接触させるステップ、
５）このようにして得られる前記スクアレン組成物を回収するステップ、
を含むことを特徴とする、微生物の発酵により産生される高スクアレン含量を有する組成物を調製する方法。
【請求項２】
前記向流で動作する多段式分留塔が、構造化パッキングを備えた塔であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ３）で使用される前記超臨界圧の流体を、圧力１０〜５０ＭＰａ、および温度
４０〜８０℃に上昇させることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ステップ４）で使用される前記超臨界圧の流体を、圧力１０〜３０ＭＰａ、および温度４０〜８０℃に上昇させることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記超臨界圧の流体が純二酸化炭素であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界ＣＯ２を用いた抽出、および「短経路」分子蒸留からなる群から選択される精製ステップを含むことを特徴とする、微生物の発酵により産生される高スクアレン含量を有する組成物を調製する方法であって、
前記微生物が、スラウストキトリアレス科（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ  ｓｐ．）に属する微細藻類であり、
前記スラウストキトリアレス科（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ  ｓｐ．）に属する微細藻類が、スキゾキトリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）、オーランチオキトリウム種（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）およびスラウストキトリウム種（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）の微細藻類であり、
下記のステップ：
１）スラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）科に属する微細藻類のバイオマスを調製するステップ、
２）少なくとも１０重量％のスクワレンを含有する粗製油を得るために、前記バイオマスを処理するステップ、
３）このようにして得られる前記粗製油を、脱ガム、脱酸、脱色および脱臭という一連のステップによって、任意選択的に精製するステップ、
４）６０重量％超のスクアレン含量を有する軽質画分を得るために、０．１ｍｂａｒ未満の値の高真空で、かつ、蒸発器の温度を、１５０〜２５０℃の範囲内で調節して行う「短経路」分子蒸留によって前記スクアレンを抽出するステップ、
５）スクアレン含量９５〜１００％を有するラフィネートを得るために、鹸化、２相分離、洗浄、脱色および脱臭という一連のステップによってこの軽質画分を精製するステップ、
６）このようにして得られる前記スクアレン組成物を回収するステップ、
を含むことを特徴とする、微生物の発酵により産生される高スクアレン含量を有する組成物を調製する方法。
【請求項７】
「短経路」が１分未満の期間、接触することを意味することを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ステップ４）の分子蒸留を、蒸発チャンバ内の圧力を、１０−２〜１０−４ｍｂａｒの範囲内で調節して行うことを特徴とする、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
ステップ２）のバイオマスを処理するステップは、
−バイオマスを脱塩水で、乾燥物含量６〜１２％に調整するステップ、
−前記微細藻類の細胞壁を破壊するために、このようにして得られるバイオマスを、アルカラーゼタイプの酵素を使用して処理するステップ、
−５％（ｖ／ｖ）超のエタノールを反応混合物に加えるステップ、
−水相から油を分離するために、このようにして得られる反応混合物を遠心分離するステップ、
−スクアレンが濃縮された油性の上相を回収するステップ、
を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項により得られるスクアレン組成物の、化粧品分野、製薬分野および医学分野における使用。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法を実施することによって得られる前記高純度スクアレン組成物の水素化により、スクアランを多く含む組成物を調製する方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載のスクアラン組成物の、化粧品分野における使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
本発明はしたがって、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界ＣＯ２を用いた抽出、およびいわゆる「短経路」分子蒸留からなる群から選択される精製ステップを含むことを特徴とする、微生物の発酵により産生される高スクアレン含量を有する組成物を調製する方法に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
超臨界ＣＯ２を用いた抽出の２つの連続ステップの実行
本発明による方法の第１の好ましい実施形態において、下記のステップ：
１）スラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）科に属する微細藻類のバイオマスを調製するステップ、
２）少なくとも１０重量％のスクアレン、好ましくは少なくとも１５重量％のスクアレンを含有する粗製油を得るために、バイオマスを処理するステップ、
３）７０〜７５％のスクアレン含量を有する抽出物および１．５％未満のスクアレンを有するラフィネートを製造するために、このようにして得られる粗製油を、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界圧の流体と接触させることにより分画するステップ、
４）９５〜９９重量％のスクアレン含量を得るために、このようにして得られる抽出物を、ステップ３）におけるものと同様の、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界圧の流体と接触させるステップ、
５）このようにして得られるスクアレン組成物を回収するステップを含むことを特徴とする、方法が実施される。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
スラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）科に属する微細藻類として、たとえば、下記の市販の株が入手可能である：
−  スキゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）参照（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｄ）ＡＴＣＣ  ２０８８８、
−  オーランチオキトリウム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）参照ＡＴ
ＣＣ  ＰＲＡ  ２７６。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
この第１の好ましい実施形態の第３ステップは、７０〜７５％のスクアレン含量を有する抽出物および１．５％未満のスクアレンを有するラフィネートを製造するために、このようにして得られる粗製油を、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で、超臨界圧の流体と接触させることにより分画することから成る。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８８】
出願人の知る限り、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔を使用する、この独特の形のスクアレン抽出が、一般に微生物の発酵により産生されるスクアレンに、特にスラウストキトリアレス（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ）科に属する微細藻類タイプの微生物に、利用されたことはない。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
このために、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔（構造化パッキングを備えている塔）を使用することにより、予想外に、出発油と比較して優れた収率で高純度のスクアレンを獲得できることを、出願人は発見した。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９８】
超臨界圧の流体を、ポンプによって高圧でポンプ圧送し、一定に維持されて質量流量計に表示される流量で塔の底部に注入する前に、熱交換器内で所望の温度まで上昇させる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９９】
フィードは、塔の底から数えて、セクション１と２の間、または２と３の間、または３と４の間で、構造化パッキングが付いた塔中程の高圧ポンプにより、一定に保たれて質量流量計に表示される流量で、注入される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１００】
抽出物の多い流体は、塔の最上部で出て行き、その後、流体は６ＭＰａまで幾分か減圧され、特に直列に搭載されたサイクロンセパレータ（そのボディはジャケット内で水の循環によって加熱される）を含む、幾つかの分離ステージに送られる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０２】
ラフィネートは、レベルセンサによって制御される膨張弁を通してカラム底で回収され、このようにして塔下部の油−流体界面を維持する；塔内での分画に有害な負圧を避けるために、このラフィネートは、直列の２つの沈降槽で回収され、第１の槽の圧力は、塔内の一般的な圧力より約１〜４ＭＰａ未満だけ低い値に維持されている。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０３】
これらの槽ではこのように、ラフィネートに溶解した流体の最小限の損失で、スムーズに、ラフィネートを回収することができる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０５】
さらに、抽出物の還流は、分画操作の総括的選択性の改善に特に貢献する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
抽出物の還流はここで発生し、後者の直径が壁への良好な熱伝達を可能にするとき、一方ではフィードと接触している流体と、他方ではこの勾配を利用できるように幾つかの独立した区域に分けられたジャケット内を循環している熱水との間で、塔に沿って熱勾配を確立することによって慎重に制御される。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
事実、臨界圧（すなわち７．４ＭＰａ）から３０ＭＰａまでの範囲の帯域で固定された、超臨界圧の二酸化炭素中でのほとんどの有機化合物の溶解度は、温度が上昇するとき低下する；このように、油と向流で流体が塔内で上昇するとき、加熱することができ、した
がって抽出物の一部と、油と混合されたその還流との脱混合を引き起こす。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０８】
２００ｍｍより大きい直径を有する塔が使用されるのであれば、壁への熱伝達が不十分になるので、抽出物の外部の還流（塔を出る流体の部分的減圧によって抽出物の一部が塔の最上部で分離され、液体抽出物のこの画分は次にはポンプによって再加圧されて、塔の最上部で注入される）を使用することが好ましい。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１０】
この第１の好ましい実施形態の第４ステップは、９５〜９９重量％のスクアレン含量を得るために、このようにして得られる抽出物を、ステップ３）におけるものと同様の、抽出物の還流を伴う向流で動作する多段式分留塔で超臨界圧の流体と接触させることから成る。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８０】
２０リットル反応装置での生産
本来の培養を、下記の通りに２０リットル反応装置で実施した。
−  培地の滅菌（沈殿の形成を避けるために、一部は反応装置内で、残りは別途）、
−  培地の０．５％ｖ／ｖの比率で、第２の前培養の終わりに産生されたバイオマスを用いて実施される播種、
−  ３０℃に維持される培養。
−  ３５〜４０ｍｍｏｌ／ｌ／時間に固定された酸素の移動率、
−  ０．２〜０．３ＶＶＭの通気、
−  初期ｐＨ＞５．５、
−  一度のグルコースの供給（グルコース濃度を１５〜７０ｇ／ｌに維持するために、濃度は＞２０％である）。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３０】
この油は、より詳細には主として脂肪酸：
−  Ｃ１４、Ｃ１６短鎖、２７％まで
−  Ｃ２０および特にＣ２２長鎖、４３％まで、および
加えて、本質的にスクアレンから成る（〜１５．５％）、この大量の不鹸化物、
と共に、トリグリセリド類を含む。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３４】
２つの分画ステップは、内部抽出物の還流を伴う向流で動作する充填分留塔で実施される。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３５】
使用する分画ユニットは、内径１２５ｍｍ、および２ｍの４区域で温度勾配を確立できる高さ８ｍを有する、向流分留塔を備えている。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３６】
この塔は、高性能充填物（Ｓｕｌｚｅｒ  ＢＸタイプ）で満たされている。このユニットは完全に自動化されており、連続動作を提供する。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３７】
ステップ１：スクアレンを抽出するための粗製油の処理
塔の底から数えて、区域３と４の間で、塔に油を給送する。プロセスパラメータを、下表Ｖに提示する。