【手続補正書】
【提出日】平成29年2月3日(2017.2.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物において活性な調節領域および植物において活性な発現エンハンサーを含む核酸であって、前記調節領域および前記発現エンハンサーは、改変タンパク質分解性ループを含む改変インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結している、核酸。
【請求項２】
前記発現エンハンサーが、ＣＰＭＶＸ、ＣＰＭＶＸ＋、ＣＰＭＶ−ＨＴ＋ＣＰＭＶ  ＨＴ＋［ＷＴ１１５］およびＣＰＭＶ  ＨＴ＋［５１１］からなる群から選択される、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
前記発現エンハンサーがＣＰＭＶ  ＨＴではない、請求項１に記載の核酸。
【請求項４】
マメ黄化萎縮ウイルスの長い遺伝子間領域（ＢｅＹＤＶ  ＬＩＲ）およびＢｅＹＤＶの短い遺伝子間領域（ＢｅＹＤＶ  ＳＩＲ）を含まない、請求項１に記載の核酸。
【請求項５】
前記改変タンパク質分解性ループが、ネイティブＨＡの１つまたは複数の切断部位の切断と比較した場合にプロテアーゼによる切断の低減または消滅を示す１つまたは複数のプロテアーゼ切断部位を含む、請求項１に記載の核酸。
【請求項６】
前記プロテアーゼが、Ｃｌａｒａ様、Ｆｕｒｉｎ様またはトリプシンである、請求項５に記載の核酸。
【請求項７】
前記改変タンパク質分解性ループがリンカー配列を含む、請求項１に記載の核酸。
【請求項８】
前記リンカー配列が、アミノ酸配列ＧＧ、ＴＥＴＱまたはＴＥＴＲを有する、請求項７に記載の核酸。
【請求項９】
前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記ＨＡが、インフルエンザＢ型、Ｃ型、Ａ型ならびにサブタイプＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５およびＨ１６由来のＨＡからなる群から選択される、請求項１に記載の核酸。
【請求項１０】
前記インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が、配列番号１７、１８、２０、２１、４１、５８、７７、８１、８５、９２、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１３４、１４３、１４７、１５４、１６１、１６８、１９４および１９９からなる群から選択される配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する、請求項１に記載の核酸。
【請求項１１】
前記ＨＡがＨＡ０である、請求項１に記載の核酸。
【請求項１２】
前記改変ＨＡが、ネイティブまたは非ネイティブのシグナルペプチドを含む、請求項１に記載の核酸。
【請求項１３】
前記改変ＨＡをコードする前記ヌクレオチド配列が、順番に、改変タンパク質分解性ループを含む改変ＨＡ外部ドメイン、インフルエンザ膜貫通ドメインおよび細胞質テールをコードするキメラヌクレオチド配列を含み、前記改変ＨＡ外部ドメインが、第１のインフルエンザ株由来であり、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞質テールが、第２のインフルエンザ株由来である、請求項１に記載の核酸。
【請求項１４】
植物においてインフルエンザウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法であって、
ａ）請求項１に記載の核酸を、前記植物または前記植物の一部分に導入するステップ、
ｂ）前記核酸の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって前記ＶＬＰを生成するステップ
を含む、方法。
【請求項１５】
ステップａ）において、第２の核酸が、前記植物または前記植物の一部分に導入され、前記第２の核酸が、第２の調節領域を含み、前記第２の調節領域が、前記植物において活性であり、プロトンチャネルタンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記プロトンチャネルタンパク質が、インフルエンザＭ２またはＢＭ２から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
植物においてインフルエンザウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法であって、
ａ）請求項１に記載の核酸を含む植物または植物の一部分を準備するステップ、および
ｂ）前記核酸の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって前記ＶＬＰを生成するステップ
を含む、方法。
【請求項１８】
ｃ）前記植物を収穫するステップ、および
ｄ）前記ＶＬＰを精製するステップであって、前記ＶＬＰが、８０〜３００ｎｍのサイズ範囲である、ステップ
をさらに含む、請求項１４または１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１４から１８のいずれか１項に記載の方法によって生成されたＶＬＰ。
【請求項２０】
植物から誘導された１つまたは１つより多い脂質をさらに含む、請求項１９に記載のＶＬＰ。
【請求項２１】
前記改変ＨＡタンパク質が、植物特異的Ｎ−グリカンまたは改変Ｎ−グリカンを含む、請求項２０に記載のＶＬＰ。
【請求項２２】
植物において切断の低減または消滅を示す１つまたは複数のプロテアーゼ切断部位を含む改変タンパク質分解性ループを含む改変ＨＡタンパク質を生成する方法であって、
ａ）請求項１に記載の核酸を前記植物に導入するステップ、
ｂ）前記ＨＡタンパク質の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって前記改変ＨＡタンパク質を生成するステップ、
ｃ）前記植物を収穫し、前記改変ＨＡタンパク質を精製するステップ
を含む、方法。
【請求項２３】
赤血球凝集素（ＨＡ）活性を有する、請求項２２に記載の方法によって生成されたＨＡタンパク質。
【請求項２４】
請求項１に記載の核酸によってコードされるＨＡ。
【請求項２５】
導入する前記ステップ（ステップａ）において、前記核酸が、一過的な様式で前記植物に導入されるか、または前記核酸が、前記核酸が安定であるように前記植物に導入される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の核酸を含む植物。
【請求項２７】
免疫応答を誘発するための有効用量の請求項１９に記載のＶＬＰと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項２８】
免疫応答を誘発するための有効用量の請求項１９に記載のＶＬＰを含むワクチン。
【請求項２９】
被験体においてインフルエンザウイルス感染に対する免疫を誘発するための組成物であって、請求項１９に記載のＶＬＰを含む組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、経口、皮内、鼻腔内、筋内、腹腔内、静脈内または皮下で被験体に投与されることを特徴とする、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
植物において発現されるＨＡタンパク質の生成物品質を増加させる方法であって、
ａ）請求項１に記載の核酸を前記植物に導入するステップ、
ｂ）前記ＨＡタンパク質の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって改変ＨＡタンパク質を生成するステップ、
ｃ）前記植物を収穫し、前記改変ＨＡタンパク質を精製するステップであって、前記改変ＨＡタンパク質が、ネイティブＨＡと比較した場合に生成物品質が増加している、ステップ
を含む、方法。
【請求項３２】
前記品質が、増加した生成物収量、前記生成物の安定性、前記生成物の一貫性またはそれらの組合せを含む、請求項３１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
本発明の概要は、本発明の全ての特徴を必ずしも記載しているわけではない。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
植物において活性な調節領域および植物において活性な発現エンハンサーを含む核酸であって、前記調節領域および前記発現エンハンサーは、改変タンパク質分解性ループを含む改変インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結している、核酸。
（項目２）
前記発現エンハンサーが、ＣＰＭＶＸ、ＣＰＭＶＸ＋、ＣＰＭＶ−ＨＴ＋ＣＰＭＶ  ＨＴ＋［ＷＴ１１５］およびＣＰＭＶ  ＨＴ＋［５１１］からなる群から選択される、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目３）
前記発現エンハンサーがＣＰＭＶ  ＨＴではない、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目４）
マメ黄化萎縮ウイルスの長い遺伝子間領域（ＢｅＹＤＶ  ＬＩＲ）およびＢｅＹＤＶの短い遺伝子間領域（ＢｅＹＤＶ  ＳＩＲ）を含まない、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目５）
前記改変タンパク質分解性ループが、ネイティブＨＡの１つまたは複数の切断部位の切断と比較した場合にプロテアーゼによる切断の低減または消滅を示す１つまたは複数のプロテアーゼ切断部位を含む、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目６）
前記プロテアーゼが、Ｃｌａｒａ様、Ｆｕｒｉｎ様またはトリプシンである、項目５に記載のヌクレオチド酸。
（項目７）
前記改変タンパク質分解性ループがリンカー配列を含む、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目８）
前記リンカー配列が、アミノ酸配列ＧＧ、ＴＥＴＱまたはＴＥＴＲを有する、項目７に記載のヌクレオチド酸。
（項目９）
前記ヌクレオチド配列によってコードされる前記ＨＡが、インフルエンザＢ型、Ｃ型、Ａ型ならびにサブタイプＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５およびＨ１６由来のＨＡからなる群から選択される、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目１０）
前記インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が、配列番号１７、１８、２０、２１、４１、５８、７７、８１、８５、９２、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１３４、１４３、１４７、１５４、１６１、１６８、１９４および１９９からなる群から選択される配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目１１）
前記ＨＡがＨＡ０である、項目１に記載のヌクレオチド酸。
（項目１２）
前記改変ＨＡが、ネイティブまたは非ネイティブのシグナルペプチドを含む、項目１に記載の核酸。
（項目１３）
前記改変ＨＡをコードする前記ヌクレオチド配列が、順番に、改変タンパク質分解性ループを含む改変ＨＡ外部ドメイン、インフルエンザ膜貫通ドメインおよび細胞質テールをコードするキメラヌクレオチド配列を含み、前記改変ＨＡ外部ドメインが、第１のインフ
ルエンザ株由来であり、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞質テールが、第２のインフルエンザ株由来である、項目１に記載の核酸。
（項目１４）
植物においてインフルエンザウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法であって、
ａ）項目１に記載のヌクレオチド酸を、前記植物または前記植物の一部分に導入するステップ、
ｂ）前記核酸の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって前記ＶＬＰを生成するステップ
を含む、方法。
（項目１５）
ステップａ）において、第２のヌクレオチド酸が、前記植物または前記植物の一部分に導入され、前記第２のヌクレオチド酸が、第２の調節領域を含み、前記第２の調節領域が、前記植物において活性であり、プロトンチャネルタンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結している、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記プロトンチャネルタンパク質が、インフルエンザＭ２またはＢＭ２から選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
植物においてインフルエンザウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法であって、
ａ）項目１に記載の核酸を含む植物または植物の一部分を準備するステップ、および
ｂ）前記核酸の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって前記ＶＬＰを生成するステップ
を含む、方法。
（項目１８）
ｃ）前記植物を収穫するステップ、および
ｄ）前記ＶＬＰを精製するステップであって、前記ＶＬＰが、８０〜３００ｎｍのサイズ範囲である、ステップ
をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目１９）
項目１４のいずれか１項に記載の方法によって生成されたＶＬＰ。
（項目２０）
植物から誘導された１つまたは１つより多い脂質をさらに含む、項目１９に記載のＶＬＰ。
（項目２１）
前記改変ＨＡタンパク質が、植物特異的Ｎ−グリカンまたは改変Ｎ−グリカンを含む、項目２０に記載のＶＬＰ。
（項目２２）
植物において切断の低減または消滅を示す１つまたは複数のプロテアーゼ切断部位を含む改変タンパク質分解性ループを含む改変ＨＡタンパク質を生成する方法であって、
ａ）項目１に記載のヌクレオチド酸を前記植物に導入するステップ、
ｂ）前記ＨＡタンパク質の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって前記改変ＨＡタンパク質を生成するステップ、
ｃ）前記植物を収穫し、前記改変ＨＡタンパク質を精製するステップ
を含む、方法。
（項目２３）
赤血球凝集素（ＨＡ）活性を有する、項目２２に記載の方法によって生成されたＨＡタンパク質。
（項目２４）
項目１に記載の核酸によってコードされるＨＡ。
（項目２５）
導入する前記ステップ（ステップａ）において、前記核酸が、一過的な様式で前記植物に導入されるか、または前記核酸が、前記核酸が安定であるように前記植物に導入される、項目１４に記載の方法。
（項目２６）
項目１に記載の核酸を含む植物。
（項目２８）
免疫応答を誘発するための有効用量の項目１９に記載のＶＬＰと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
（項目２９）
免疫応答を誘発するための有効用量の項目１９に記載のＶＬＰを含むワクチン。
（項目３０）
項目１９に記載のＶＬＰを投与するステップを含む、被験体においてインフルエンザウイルス感染に対する免疫を誘発する方法。
（項目３１）
前記ＶＬＰが、経口、皮内、鼻腔内、筋内、腹腔内、静脈内または皮下で被験体に投与される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
植物において発現されるＨＡタンパク質の生成物品質を増加させる方法であって、
ａ）項目１に記載のヌクレオチド酸を前記植物に導入するステップ、
ｂ）前記ＨＡタンパク質の発現を可能にする条件下で前記植物または前記植物の一部分をインキュベートすることによって改変ＨＡタンパク質を生成するステップ、
ｃ）前記植物を収穫し、前記改変ＨＡタンパク質を精製するステップであって、前記改変ＨＡタンパク質が、ネイティブＨＡと比較した場合に生成物品質が増加している、ステップ
を含む、方法。
（項目３３）
前記品質が、増加した生成物収量、前記生成物の安定性、前記生成物の一貫性またはそれらの組合せを含む、項目３２に記載の方法。