【手続補正書】
【提出日】平成29年3月10日(2017.3.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4のうちの2つは免疫グロブリン重鎖可変（VH）領域であり、その他の2つは免疫グロブリン軽鎖可変（VL）領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖；または
（b）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4のうちの2つはVH領域であり、その他の2つはVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、該エフェクター細胞を標的にするポリペプチド鎖が、SEQ ID NO:48のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、SEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、SEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を含み、ならびに
Bi-Fcが単量体である、
Bi-Fc。
【請求項２】
（a）または（b）のFcポリペプチド鎖が、以下の改変：K392D、K392E、N392D、N392E、R409D、R409E、K409D、K409E、D399K、D399R、E356R、E356K、D356R、D356K、Y349T、L351T、L368T、L398T、F405T、Y407T、およびY407Rの1つまたは複数を含む、請求項1に記載のBi-Fc。
【請求項３】
（a）または（b）のFcポリペプチド鎖が、IgG1 Fcポリペプチド鎖、IgG2 Fcポリペプチド鎖、またはIgG4 Fcポリペプチド鎖であり、改変K392D、K409D、およびY349Tを含む、請求項2に記載のBi-Fc。
【請求項４】
ヒトCD33、ヒトHER2、またはヒトFOLR1を発現している細胞に結合する、請求項1〜3のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項５】
Bi-FcのFcポリペプチド鎖が、位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、これらの位置番号が、EUナンバリング方式に従って割り当てられる、請求項1〜4のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項６】
（a）L2が存在し、L2が約12アミノ酸長以下である、
（b）L1およびL3が、それぞれ少なくとも約14アミノ酸長である、ならびに／または
（c）L1およびL3が、それぞれ少なくとも約15アミノ酸長である、
請求項1〜5のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項７】
V1がVH領域でありかつV2がVL領域であるか、またはその逆であり、
V3がVH領域でありかつV4がVL領域であるか、またはその逆である、
請求項1〜6のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項８】
（a）（i）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含む第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4はそれぞれ免疫グロブリン可変領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖；または
（b）（i）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有する第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4はそれぞれ免疫グロブリン可変領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
L1およびL3が、少なくとも15アミノ酸長であり、
L2が、存在するならば、12アミノ酸長未満であり、
V1がVH領域でありかつV2がVL領域であるか、またはその逆であり、
V3がVH領域でありかつV4がVL領域であるか、またはその逆であり、
Bi-Fcが、ヒトCD3εに結合し、
Bi-Fcが、それぞれSEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVL領域を含む、
Bi-Fc。
【請求項９】
ヒトCD33またはヒトFOLR1を発現している細胞に結合する、請求項8に記載のBi-Fc。
【請求項１０】
（a）SEQ ID NO:72のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:73のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:74のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:75のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:76のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:77のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、
（b）SEQ ID NO:60のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:62のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、または
（c）SEQ ID NO:66のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:67のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:68のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:69のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:70のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:71のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、
を含む、請求項9に記載のBi-Fc。
【請求項１１】
第1のポリペプチド鎖中のFcポリペプチド鎖が、ヘテロ二量体化改変を含み、第2のポリペプチド鎖中のFcポリペプチド鎖が、別のヘテロ二量体化改変を含む、請求項8〜10のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項１２】
第1のポリペプチド鎖中のヘテロ二量体化改変が電荷対置換（charge pair substitution）であり、第2のポリペプチド鎖中のヘテロ二量体化改変が電荷対置換である、請求項11に記載のBi-Fc。
【請求項１３】
第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換R409D、R409E、K409D、もしくはK409Eと、N392D、N392E、K392D、もしくはK392Eとを含み、かつ第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、E356K、E356E、D356K、もしくはD356Rとを含むか；または
第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換R409D、R409E、K409D、もしくはK409Eと、N392D、N392E、K392D、もしくはK392Eとを含み、かつ第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、E356K、E356E、D356K、もしくはD356Rとを含む、
請求項12に記載のBi-Fc。
【請求項１４】
第1および第2のポリペプチド鎖のFcポリペプチド鎖が、L234A、L235A、およびN297における任意の置換からなる群より選択される、FcγRの結合を阻害する1つまたは複数の改変を含む、請求項8〜13のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項１５】
Fcポリペプチド鎖が、各Fcポリペプチド鎖の位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、位置384および385が、EUナンバリング方式に従って割り当てられた位置である、請求項8〜14のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項１６】
（i）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有する第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり、V1、V2、V3、およびV4は、それぞれ、異なるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン可変領域であり、L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり、かつ、L2および／またはL4は存在してもよいし、または存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
L1およびL3が、少なくとも15アミノ酸長であり、L2が、存在するならば、12アミノ酸長未満であり、
V1およびV3がVH領域であり、V2およびV4がVL領域であり、
第1および第2のポリペプチド鎖のそれぞれのFcポリペプチド鎖が、ヘテロ二量体化改変を含有し、
Bi-Fcが、それぞれSEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2およびCDR3を含むVL領域を含み、
第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換K409D、K409E、R409D、もしくはR409Eと、K392D、K392E、N392D、もしくはN392Eとを含み、かつ第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、D356K、D356R、E356K、もしくはE356Rとを含むか；または第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換K409D、K409E、R409D、もしくはR409Eと、K392D、K392E、N392D、もしくはN392Eとを含み、かつ第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、D356K、D356R、E356K、もしくはE356Rとを含む、
Bi-Fc。
【請求項１７】
（a）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1およびV3はVH領域であり、V2およびV4はVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖；または
（b）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1およびV3はVH領域であり、V2およびV4はVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
V1およびV2が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらががん細胞抗原に結合し、
V3およびV4が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらがヒトCD3εに結合することができ、かつV3およびV4が、SEQ ID NO:48のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、SEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、SEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を含み、
V3が、SEQ ID NO:7または29と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長であり、
V4が、SEQ ID NO:8または31と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長であり、
Bi-Fcが単量体である、
Bi-Fc。
【請求項１８】
V3が、SEQ ID NO:7または29のアミノ酸配列を含み、V4が、SEQ ID NO:8または31のアミノ酸配列を含む、請求項16または17に記載のBi-Fc。
【請求項１９】
標的細胞ががん細胞である、請求項1〜18のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項２０】
標的細胞が、病原体に感染している細胞または疾患を媒介する細胞である、請求項1〜3、8および16〜18のいずれか一項に記載のBi-Fc。
【請求項２１】
（a）病原体が、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、もしくはサイトメガロウイルスを含むウイルス、またはリステリア（Listeria）属、ミコバクテリウム（Mycobacterium）属、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属、もしくはストレプトコッカス（Streptococcus）属の細菌である、または
（b）疾患を媒介する細胞が、線維性疾患を媒介する線維細胞である、
請求項20に記載のBi-Fc。
【請求項２２】
請求項1〜21のいずれか一項に記載のBi-Fcおよび生理学的に許容される賦形剤を含む、薬学的製剤。
【請求項２３】
請求項1〜21のいずれか一項に記載のBi-Fcをコードする、1種または複数種の核酸。
【請求項２４】
請求項23に記載の核酸を含む、1種または複数種のベクター。
【請求項２５】
請求項23に記載の核酸および／または請求項24に記載のベクターを含有する、宿主細胞。
【請求項２６】
核酸が発現されるような条件下で請求項25に記載の宿主細胞を培養する段階、および
細胞集団または培地からBi-Fcを回収する段階
を含む、Bi-Fcを作製する方法。
【請求項２７】
請求項1〜19のいずれか一項に記載のBi-Fcを含む、がん、感染症、自己免疫疾患または炎症性疾患または線維性疾患の処置のための薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本明細書において、本明細書記載の任意のBi-Fc分子に加えて生理学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物も提供される。そのような組成物は、がん、感染症、自己免疫疾患もしくは炎症性疾患、または線維性疾患の処置のためのものであり得る。
[本発明1001]
（a）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4のうちの2つは免疫グロブリン重鎖可変（VH）領域であり、その他の2つは免疫グロブリン軽鎖可変（VL）領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖；または
（b）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4のうちの2つはVH領域であり、その他の2つはVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、ならびに
単量体である、
Bi-Fc。
[本発明1002]
（a）または（b）のFcポリペプチド鎖が、以下の改変：K392D、K392E、N392D、N392E、R409D、R409E、K409D、K409E、D399K、D399R、E356R、E356K、D356R、D356K、Y349T、L351T、L368T、L398T、F405T、Y407T、およびY407Rの1つまたは複数を含む、本発明1001のBi-Fc。
[本発明1003]
（a）または（b）のFcポリペプチド鎖が、IgG1 Fcポリペプチド鎖、IgG2 Fcポリペプチド鎖、またはIgG4 Fcポリペプチド鎖であり、改変K392D、K409D、およびY349Tを含む、本発明1002のBi-Fc。
[本発明1004]
（a）または（b）のポリペプチド鎖のFcポリペプチド鎖が、改変L234Aおよび／またはL235Aを含む、本発明1001、1002または1003のBi-Fc。
[本発明1005]
本発明1001（a）のBi-Fcである、本発明1001〜1004のいずれかのBi-Fc。
[本発明1006]
本発明1001（b）のBi-Fcである、本発明1001〜1004のいずれかのBi-Fc。
[本発明1007]
免疫エフェクター細胞が、ヒトT細胞および／またはカニクイザルT細胞である、本発明1001〜1006のいずれかのBi-Fc。
[本発明1008]
エフェクター細胞タンパク質が、ヒトおよび／またはカニクイザルT細胞受容体（TCR）-CD3複合体の一部である、本発明1007のBi-Fc。
[本発明1009]
エフェクター細胞タンパク質が、ヒトおよび／またはカニクイザルTCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3β、CD3γ、CD3δ、CD3ε、またはCD3ζである、本発明1007または1008のBi-Fc。
[本発明1010]
エフェクター細胞タンパク質がヒトまたはカニクイザルCD3εである、本発明1009のBi-Fc。
[本発明1011]
アラニンスキャニングによって測定されたとき、ヒトまたはカニクイザルCD3εの最初の27個のアミノ酸内のアミノ酸配列に結合する、本発明1010のBi-Fc。
[本発明1012]
アラニンスキャニングによって測定されたとき、Bi-Fcが結合するアミノ酸配列が、Gln-Asp-Gly-Asn-Glu（SEQ ID NO:24）を含む、本発明1011のBi-Fc。
[本発明1013]
SEQ ID NO:48のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、本発明1010のBi-Fc。
[本発明1014]
SEQ ID NO:54のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:55のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:58のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、本発明1010のBi-Fc。
[本発明1015]
SEQ ID NO:7と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:8と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、Bi-Fcであって、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長である、本発明1010または1013のBi-Fc。
[本発明1016]
SEQ ID NO:7およびSEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、本発明1015のBi-Fc。
[本発明1017]
SEQ ID NO:29と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:31と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、Bi-Fcであって、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長である、本発明1010または1014のBi-Fc。
[本発明1018]
SEQ ID NO:29およびSEQ ID NO:31のアミノ酸配列を含む、本発明1017のBi-Fc。
[本発明1019]
ヒトHER2を発現している細胞に結合する、本発明1001〜1018のいずれかのBi-Fc。
[本発明1020]
SEQ ID NO:60のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:62のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、本発明1019のBi-Fc。
[本発明1021]
SEQ ID NO:5と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:6と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、Bi-Fcであって、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長である、本発明1019または1020のBi-Fc。
[本発明1022]
SEQ ID NO:5およびSEQ ID NO:6のアミノ酸配列を含む、本発明1021のBi-Fc。
[本発明1023]
ヒトFOLR1を発現している細胞に結合する、本発明1001〜1018のいずれかのBi-Fc。
[本発明1024]
SEQ ID NO:66のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:67のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:68のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:69のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:70のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:71のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、本発明1023のBi-Fc。
[本発明1025]
SEQ ID NO:15のアミノ酸1〜118と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:15のアミノ酸134〜244と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、Bi-Fcであって、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長である、本発明1023または1024のBi-Fc。
[本発明1026]
SEQ ID NO:15のアミノ酸1〜118および134〜244のアミノ酸配列を含む、本発明1025のBi-Fc。
[本発明1027]
ヒトCD33を発現している細胞に結合する、本発明1001〜1018のいずれかのBi-Fc。
[本発明1028]
SEQ ID NO:72のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1；
SEQ ID NO:73のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2；
SEQ ID NO:74のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3；
SEQ ID NO:75のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1；
SEQ ID NO:76のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2；および
SEQ ID NO:77のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、本発明1027のBi-Fc。
[本発明1029]
SEQ ID NO:34のアミノ酸1〜121または1〜122と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:34のアミノ酸138〜251と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、Bi-Fcであって、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長である、本発明1027または1028のBi-Fc。
[本発明1030]
SEQ ID NO:34のアミノ酸1〜121および138〜251のアミノ酸配列を含む、本発明1029のBi-Fc。
[本発明1031]
Bi-FcのFcポリペプチド鎖が、位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、これらの位置番号が、EUナンバリング方式に従って割り当てられる、本発明1001〜1030のいずれかのBi-Fc。
[本発明1032]
L2が存在し、L2が約12アミノ酸長以下である、本発明1001〜1031のいずれかのBi-Fc。
[本発明1033]
L1およびL3が、それぞれ少なくとも約14アミノ酸長である、本発明1001〜1032のいずれかのBi-Fc。
[本発明1034]
L1およびL3が、それぞれ少なくとも約15アミノ酸長である、本発明1033のBi-Fc。
[本発明1035]
V1がVH領域でありかつV2がVL領域であるか、またはその逆であり、
V3がVH領域でありかつV4がVL領域であるか、またはその逆である、
本発明1001〜1034のいずれかのBi-Fc。
[本発明1036]
（a）（i）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含む第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4はそれぞれ免疫グロブリン可変領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖；または
（b）（i）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有する第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1、V2、V3、およびV4はそれぞれ免疫グロブリン可変領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
L1およびL3が、少なくとも15アミノ酸長であり、
L2が、存在するならば、12アミノ酸長未満であり、
V1がVH領域でありかつV2がVL領域であるか、またはその逆であり、
V3がVH領域でありかつV4がVL領域であるか、またはその逆であり、
Bi-Fcが、ヒトCD3εに結合し、
Bi-Fcが、（1）それぞれSEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVL領域、または（2）それぞれSEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、およびSEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、およびSEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVL領域を含む、
Bi-Fc。
[本発明1037]
SEQ ID NO:7またはSEQ ID NO:29と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:8またはSEQ ID NO:31と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、本発明1036のBi-Fc。
[本発明1038]
SEQ ID NO:7またはSEQ ID NO:29のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:8またはSEQ ID NO:31のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、本発明1037のBi-Fc。
[本発明1039]
ヒトCD33、ヒトFOLR1、またはヒトHER2を発現している細胞に結合する、本発明1036〜1038のいずれかのBi-Fc。
[本発明1040]
（a）SEQ ID NO:60のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:62のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:65のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3；
（b）SEQ ID NO:66のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:67のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:68のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:69のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:70のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:71のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3；または
（c）SEQ ID NO:72のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、
SEQ ID NO:73のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、
SEQ ID NO:74のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、
SEQ ID NO:75のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、
SEQ ID NO:76のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および
SEQ ID NO:77のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3
を含む、本発明1039のBi-Fc。
[本発明1041]
SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:15のアミノ酸1〜118、またはSEQ ID NO:34のアミノ酸1〜121と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:6、SEQ ID NO:15のアミノ酸134〜244、またはSEQ ID NO:34のアミノ酸138〜251と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むVL領域を含む、Bi-Fcであって、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長である、本発明1039または1040のBi-Fc。
[本発明1042]
以下のアミノ酸配列の対:SEQ ID NO:5および6；SEQ ID NO:15のアミノ酸1〜118および134〜244；またはSEQ ID NO:34のアミノ酸1〜121および138〜251のうちの1つを含む、本発明1041のBi-Fc。
[本発明1043]
第1のポリペプチド鎖中のFcポリペプチド鎖が、ヘテロ二量体化改変を含み、第2のポリペプチド鎖中のFcポリペプチド鎖が、別のヘテロ二量体化改変を含む、本発明1036〜1042のいずれかのBi-Fc。
[本発明1044]
第1のポリペプチド鎖中のヘテロ二量体化改変が電荷対置換（charge pair substitution）であり、第2のポリペプチド鎖中のヘテロ二量体化改変が電荷対置換である、本発明1043のBi-Fc。
[本発明1045]
第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換R409D、R409E、K409D、もしくはK409Eと、N392D、N392E、K392D、もしくはK392Eとを含み、かつ第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、E356K、E356E、D356K、もしくはD356Rとを含むか；または
第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換R409D、R409E、K409D、もしくはK409Eと、N392D、N392E、K392D、もしくはK392Eとを含み、かつ第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、E356K、E356E、D356K、もしくはD356Rとを含む、
本発明1044のBi-Fc。
[本発明1046]
第1および第2のポリペプチド鎖のFcポリペプチド鎖が、L234A、L235A、およびN297における任意の置換からなる群より選択される、FcγRの結合を阻害する1つまたは複数の改変を含む、本発明1036〜1045のいずれかのBi-Fc。
[本発明1047]
Fcポリペプチド鎖が、各Fcポリペプチド鎖の位置384と385との間にSEQ ID NO:36〜47のいずれかのアミノ酸配列の挿入を含み、位置384および385が、EUナンバリング方式に従って割り当てられた位置である、本発明1036〜1046のいずれかのBi-Fc。
[本発明1048]
本発明1031（a）のBi-Fcである、本発明1036〜1047のいずれかのBi-Fc。
[本発明1049]
本発明1031（b）のBi-Fcである、本発明1036〜1047のいずれかのBi-Fc。
[本発明1050]
V1およびV2が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらが標的細胞に結合し、V3およびV4が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらが免疫エフェクター細胞に結合する、本発明1001〜1049のいずれかのBi-Fc。
[本発明1051]
V1およびV2が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらが免疫エフェクター細胞に結合し、V3およびV4が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらが標的細胞に結合する、本発明1001〜1049のいずれかのBi-Fc。
[本発明1052]
Fcポリペプチド鎖が、ヒトIgG1 Fcポリペプチド鎖である、本発明1001〜1051のいずれかのBi-Fc。
[本発明1053]
Fcポリペプチド鎖が、ヒトIgG2 Fcポリペプチド鎖である、本発明1001〜1051のいずれかのBi-Fc。
[本発明1054]
Fcポリペプチド鎖が、ヒトIgG4 Fcポリペプチド鎖である、本発明1001〜1051のいずれかのBi-Fc。
[本発明1055]
（i）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有する第1のポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり、V1、V2、V3、およびV4は、それぞれ、異なるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン可変領域であり、L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり、かつ、L2および／またはL4は存在してもよいし、または存在しなくてもよい、第1のポリペプチド鎖；ならびに
（ii）ヒトIgG Fcポリペプチド鎖を含む第2のポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
L1およびL3が、少なくとも15アミノ酸長であり、L2が、存在するならば、12アミノ酸長未満であり、
V1およびV3がVH領域であり、V2およびV4がVL領域であり、
第1および第2のポリペプチド鎖のそれぞれのFcポリペプチド鎖が、ヘテロ二量体化改変を含有し、
Bi-Fcが、（1）それぞれSEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、およびSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、およびSEQ ID NO:53のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2およびCDR3を含むVL領域、または（2）それぞれSEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、およびSEQ ID NO:56のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、およびSEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含むCDR1、CDR2、およびCDR3を含むVL領域を含み、
第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換K409D、K409E、R409D、もしくはR409Eと、K392D、K392E、N392D、もしくはN392Eとを含み、かつ第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、D356K、D356R、E356K、もしくはE356Rとを含むか；または第2のポリペプチド鎖が、電荷対置換K409D、K409E、R409D、もしくはR409Eと、K392D、K392E、N392D、もしくはN392Eとを含み、かつ第1のポリペプチド鎖が、電荷対置換D399KもしくはD399Rと、D356K、D356R、E356K、もしくはE356Rとを含む、
Bi-Fc。
[本発明1056]
（a）次式：V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4-L4-Fcを有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1およびV3はVH領域であり、V2およびV4はVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖；または
（b）次式：Fc-L4-V1-L1-V2-L2-V3-L3-V4を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖であって、式中、FcはヒトIgG Fcポリペプチド鎖であり；V1およびV3はVH領域であり、V2およびV4はVL領域であり；L1、L2、L3、およびL4はリンカーであり；かつ、L2および／もしくはL4は存在してもよいし、もしくは存在しなくてもよい、ポリペプチド鎖
を含む、Bi-Fcであって、
Bi-Fcが、標的細胞および免疫エフェクター細胞に結合し、かつ／または免疫エフェクター細胞による標的細胞の細胞溶解を媒介し、
V1およびV2が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらががん細胞抗原に結合し、
V3およびV4が、IgGおよび／またはscFv抗体の一部である場合に、それらがヒトCD3εに結合することができ、
V3が、SEQ ID NO:7または29と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長であり、
V4が、SEQ ID NO:8または31と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、同一性領域が少なくとも80アミノ酸長であり、
Bi-Fcが単量体である、
Bi-Fc。
[本発明1057]
V3が、SEQ ID NO:7または29のアミノ酸配列を含み、V4が、SEQ ID NO:8または31のアミノ酸配列を含む、本発明1055または1056のBi-Fc。
[本発明1058]
標的細胞ががん細胞である、本発明1001〜1057のいずれかのBi-Fc。
[本発明1059]
がん細胞が、血液悪性腫瘍または固形悪性腫瘍由来である、本発明1058のBi-Fc。
[本発明1060]
標的細胞が、病原体に感染している細胞である、本発明1001〜1018、1036〜1038および1055〜1057のいずれかのBi-Fc。
[本発明1061]
病原体が、ヒト免疫不全ウイルス、肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、もしくはサイトメガロウイルスを含むウイルス、またはリステリア（Listeria）属、ミコバクテリウム（Mycobacterium）属、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属、もしくはストレプトコッカス（Streptococcus）属の細菌である、本発明1060のBi-Fc。
[本発明1062]
標的細胞が、疾患を媒介する細胞である、本発明1001〜1018、1036〜1038および1055〜1057のいずれかのBi-Fc。
[本発明1063]
標的細胞が、線維性疾患を媒介する線維細胞である、本発明1062のBi-Fc。
[本発明1064]
本発明1001〜1063のいずれかのBi-Fcおよび生理学的に許容される賦形剤を含む、薬学的製剤。
[本発明1065]
本発明1001〜1063のいずれかのBi-Fcをコードする、1種または複数種の核酸。
[本発明1066]
本発明1065の核酸を含む、1種または複数種のベクター。
[本発明1067]
本発明1065の核酸および／または本発明1066のベクターを含有する、宿主細胞。
[本発明1068]
核酸が発現されるような条件下で本発明1067の宿主細胞を培養する段階、および
細胞集団または培地からBi-Fcを回収する段階
を含む、Bi-Fcを作製する方法。
[本発明1069]
がん患者に本発明1001〜1059のいずれかのBi-Fcの治療有効用量を投与する段階を含む、該患者を処置するための方法。
[本発明1070]
Bi-Fcの投与の前、投与の後、または投与と同時に、放射線、化学療法剤、または非化学療法的抗腫瘍剤を投与する段階をさらに含む、本発明1069の方法。
[本発明1071]
患者が血液悪性腫瘍または固形悪性腫瘍を有する、本発明1069または1070の方法。
[本発明1072]
線維性疾患を有する患者に本発明1063のBi-Fcの治療有効用量を投与する段階を含む、該患者を処置するための方法。
[本発明1073]
線維性疾患が、アテローム動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、肝硬変、強皮症、腎臓移植線維症、腎臓同種移植腎症、または特発性肺線維症を含む肺線維症である、本発明1072の方法。
[本発明1074]
病原体によって媒介される疾患を有する患者に本発明1060のBi-Fcの治療有効用量を投与する段階を含む、該患者を処置するための方法。
[本発明1075]
病原体が、ウイルス、細菌、または原生動物である、本発明1074の方法。
[本発明1076]
本発明1001〜1059のいずれかのBi-Fcを含む、がんの処置のための薬学的組成物。
[本発明1077]
本発明1060のBi-Fcを含む、感染症の処置のための薬学的組成物。
[本発明1078]
本発明1001〜1018、1036〜1038、および1055〜1057のいずれかのBi-Fcを含む、自己免疫疾患または炎症性疾患の処置のための薬学的組成物。
[本発明1079]
本発明1063のBi-Fcを含む、線維性疾患の処置のための薬学的組成物。