【手続補正書】
【提出日】平成29年10月23日(2017.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）の治療のための組成物であって、前記組成物は、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含み、治療を必要とする被験体に、ＰＫＵの少なくとも１つの症状または特徴が、強度、重篤度、もしくは頻度において減少するか、または発症が遅延されるような有効用量及び投与間隔で投与されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項２】
前記ｍＲＮＡが、リポソーム内に封入される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２−２００、ＭＣ３、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、及びＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、以下のｃＫＫ−Ｅ１２を含む、請求項４に記載の組成物。
【化１０】
2016535729.tif 000001
【請求項６】
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチジルコリン）  ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））から選択される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロールまたはＰＥＧ化コレステロールである、請求項３〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、長さがＣ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合される、長さが最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、請求項３〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記カチオン性脂質が、モル比で前記リポソームの約３０〜６０％を構成する、請求項３〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記カチオン性脂質が、モル比で前記リポソームの約３０％、４０％、５０％、または６０％を構成する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ４０：３０：２０：１０である、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ４０：３０：２５：５である、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ４０：３２：２５：３である、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ５０：２５：２０：５である、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記リポソームが、約１００ｎｍ未満の大きさを有する、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ｍＲＮＡが、約０．１〜３．０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の有効用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ｍＲＮＡが、約０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の有効用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、静脈内投与されることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、週に１回投与されることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、２週間に１回投与されることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、月に２回投与されることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が、月に１回投与されることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物の前記投与が、肝臓、腎臓、脾臓、筋肉、及び血清において検出可能なＰＡＨタンパク質の発現をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物の前記投与が、約１００ｎｇ／ｍｇ（前記肝臓中総タンパク質）以上のＰＡＨタンパク質レベルの発現をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物の前記投与が、血清ＰＡＨタンパク質レベルの増加をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物の前記投与が、前記治療前の基準フェニルアラニンレベルと比較して、前記血清中のフェニルアラニンレベルの減少をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物の前記投与が、前記血清中約１０００μｍｏｌ／Ｌ以下までフェニルアラニンレベルの減少をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物の前記投与が、前記血清中約５００μｍｏｌ／Ｌ以下までフェニルアラニンレベルの減少をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物の前記投与が、前記血清中約１２０μｍｏｌ／Ｌ以下までフェニルアラニンレベルの減少をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ｍＲＮＡがコドン最適化される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記コドン最適化ｍＲＮＡが、配列番号３、配列番号７、または配列番号８を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記コドン最適化ｍＲＮＡが、配列番号３を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ｍＲＮＡが、配列番号４の５’ＵＴＲ配列を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ｍＲＮＡが、配列番号５または配列番号６の３’ＵＴＲ配列を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記１つ以上の修飾ヌクレオチドが、プソイドウリジン、Ｎ−１−メチル−プソイドウリジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び／または２−チオシチジンを含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ｍＲＮＡが、未修飾である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための組成物であって、リポソーム内に封入された有効用量のフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含む、前記組成物。
【請求項４０】
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、及びＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、以下のｃＫＫ−Ｅ１２を含む、請求項４０または４１に記載の組成物。
【化１１】
2016535729.tif 000002
【請求項４３】
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチジルコリン）  ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、及びＤＯＰＧ（，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））から選択される、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロールである、請求項４０〜４３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４５】
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、長さがＣ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合される、長さが最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４６】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ４０：３０：２０：１０である、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ４０：３０：２５：５である、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４８】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ４０：３２：２５：３である、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４９】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ５０：２５：２０：５である、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、請求項３９〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
前記リポソームが、約１００ｎｍ未満の大きさを有する、請求項３９〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５２】
前記組成物が、静脈内投与用に製剤化される、請求項３９〜５１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５３】
前記ｍＲＮＡが、配列番号３、配列番号７、または配列番号８を含む、請求項３９〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５４】
前記ｍＲＮＡが、配列番号３を含む、請求項３９〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５５】
前記ｍＲＮＡが、配列番号４の５’ＵＴＲ配列を含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記ｍＲＮＡが、配列番号５または配列番号６の３’ＵＴＲ配列を含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５７】
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための組成物であって、リポソーム内に封入された有効用量のフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡが、配列番号３を含み、
さらに、前記リポソームが、カチオン性または非カチオン性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含む、前記組成物。
【請求項５８】
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための組成物であって、リポソーム内に封入された有効用量のフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡが、配列番号７または配列番号８を含み、
さらに、前記リポソームが、カチオン性または非カチオン性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含む、前記組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
本発明の他の特徴、目的、及び利点は、以下の発明を実施するための形態、図面、及び
特許請求の範囲において明らかである。しかしながら、発明を実施するための形態、図面
、及び特許請求の範囲は、本発明の実施形態を示すが、単に例示のためであり、制限する
ものではないことを理解するべきである。本発明の範囲内の様々な変更及び修正は、当業
者には明らかとなろう。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）の治療方法であって、治療を必要とする被験体に、ＰＫＵの少なくとも１つの症状または特徴が、強度、重篤度、もしくは頻度において減少するか、または発症が遅延されるような有効用量及び投与間隔でフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含む組成物を投与することを含む、前記方法。
（項目２）
前記ｍＲＮＡが、リポソーム内に封入される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２−２００、ＭＣ３、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、及びＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、以下のｃＫＫ−Ｅ１２を含む、項目４に記載の方法。
【化１０】
2016535729.tif 000003
（項目６）
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチジルコリン）  ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））から選択される、項目３〜５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロールまたはＰＥＧ化コレステロールである、項目３〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、長さがＣ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合される、長さが最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、項目３〜７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記カチオン性脂質が、モル比で前記リポソームの約３０〜６０％を構成する、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記カチオン性脂質が、モル比で前記リポソームの約３０％、４０％、５０％、または６０％を構成する、項目９に記載の方法。
（項目１１）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ４０：３０：２０：１０である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ４０：３０：２５：５である、項目１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ４０：３２：２５：３である、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール脂質：ＰＥＧ化脂質の比率が、モル比でおよそ５０：２５：２０：５である、項目１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、項目１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記リポソームが、約１００ｎｍ未満の大きさを有する、項目２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記ｍＲＮＡが、約０．１〜３．０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の有効用量で投与される、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記ｍＲＮＡが、約０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の有効用量で投与される、項目１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記組成物が、静脈内投与される、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記組成物が、週に１回投与される、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記組成物が、２週間に１回投与される、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記組成物が、月に２回投与される、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記組成物が、月に１回投与される、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記組成物の前記投与が、肝臓、腎臓、脾臓、筋肉、及び血清において検出可能なＰＡＨタンパク質の発現をもたらす、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記組成物の前記投与が、約１００ｎｇ／ｍｇ（前記肝臓中総タンパク質）以上のＰＡＨタンパク質レベルの発現をもたらす、項目１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記組成物の前記投与が、血清ＰＡＨタンパク質レベルの増加をもたらす、項目１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記組成物の前記投与が、前記治療前の基準フェニルアラニンレベルと比較して、前記血清中のフェニルアラニンレベルの減少をもたらす、項目１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記組成物の前記投与が、前記血清中約１０００μｍｏｌ／Ｌ以下までフェニルアラニンレベルの減少をもたらす、項目１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記組成物の前記投与が、前記血清中約５００μｍｏｌ／Ｌ以下までフェニルアラニンレベルの減少をもたらす、項目１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記組成物の前記投与が、前記血清中約１２０μｍｏｌ／Ｌ以下までフェニルアラニンレベルの減少をもたらす、項目１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記ｍＲＮＡがコドン最適化される、項目１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記コドン最適化ｍＲＮＡが、配列番号３、配列番号７、または配列番号８を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記コドン最適化ｍＲＮＡが、配列番号３を含む、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記ｍＲＮＡが、配列番号４の５’ＵＴＲ配列を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記ｍＲＮＡが、配列番号５または配列番号６の３’ＵＴＲ配列を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、項目１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記１つ以上の修飾ヌクレオチドが、プソイドウリジン、Ｎ−１−メチル−プソイドウリジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び／または２−チオシチジンを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記ｍＲＮＡが、未修飾である、項目１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための組成物であって、リポソーム内に封入された有効用量のフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含む、前記組成物。
（項目４０）
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４１）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、及びＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＸＴＣ２−ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目４０に記載の組成物。
（項目４２）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、以下のｃＫＫ−Ｅ１２を含む、項目４０または４１に記載の組成物。
【化１１】
2016535729.tif 000004
（項目４３）
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチジルコリン）  ＤＰＰＥ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）、及びＤＯＰＧ（，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−（１’−ｒａｃ−グリセロール））から選択される、項目３９〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４４）
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロールである、項目３９〜４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４５）
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、長さがＣ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合される、長さが最大５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、項目３９〜４４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４６）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ４０：３０：２０：１０である、項目３９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ４０：３０：２５：５である、項目３９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ４０：３２：２５：３である、項目３９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール系脂質：ＰＥＧ修飾脂質の比率が、およそ５０：２５：２０：５である、項目３９〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記リポソームが、ｃＫＫ−Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール、及びＤＭＧ−ＰＥＧ２Ｋを含む、項目３９〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５１）
前記リポソームが、約１００ｎｍ未満の大きさを有する、項目３９〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５２）
前記組成物が、静脈内投与用に製剤化される、項目３９〜５１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５３）
前記ｍＲＮＡが、配列番号３、配列番号７、または配列番号８を含む、項目３９〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５４）
前記ｍＲＮＡが、配列番号３を含む、項目３９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記ｍＲＮＡが、配列番号４の５’ＵＴＲ配列を含む、項目５４に記載の組成物。
（項目５６）
前記ｍＲＮＡが、配列番号５または配列番号６の３’ＵＴＲ配列を含む、項目５４に記載の組成物。
（項目５７）
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための組成物であって、リポソーム内に封入された有効用量のフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡが、配列番号３を含み、
さらに、前記リポソームが、カチオン性または非カチオン性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含む、前記組成物。
（項目５８）
フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するための組成物であって、リポソーム内に封入された有効用量のフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡが、配列番号７または配列番号８を含み、
さらに、前記リポソームが、カチオン性または非カチオン性脂質、コレステロール系脂質、及びＰＥＧ修飾脂質を含む、前記組成物。