【手続補正書】
【提出日】平成29年3月15日(2017.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（ｉ）〜（ｉｉｉ）のうちのいずれかのポリオキシアルキレンオキシド（ＰＡＯ）ヘモグロビン接合体：
（ｉ）３７℃且つｐＨ７．４で測定したときに約２〜約３０ｍｍＨｇに亘るＰ５０を有する、ＰＡＯヘモグロビン接合体であって、該ＰＡＯは、ヘモグロビン分子上のアミノ酸側鎖のアミノ反応性部分を介して共有結合されており、該アミノ反応性部分は、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−によってＰＡＯに連結され、ここでのｐは１〜約２０の整数であり、該ヘモグロビンは、任意に分子内架橋される前記ＰＡＯヘモグロビン接合体；
（ｉｉ）下記の構造を有するＰＡＯヘモグロビン接合体：
【化１】
2016521258.tif 000001
［ここで、
Ｈｂはヘモグロビンであり、
Ｎはヘモグロビンのアミノ基であり、
Ｌはリンカーの−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−であり、
Ｘは末端基であり、
ｍはヘモグロビンに接合された活性化型ＰＥＧポリマーの平均数であり、
ｎは約２，０００〜２０，０００ダルトンの平均分子量を有するＰＥＧにおけるオキシエチレン単位の平均数であり、
ｐは１〜２０の整数である］；あるいは
（ｉｉｉ）ヘモグロビンを少なくとも一つのＰＡＯポリマーと反応させることを含んでなる方法により調製された、ＰＡＯヘモグロビン接合体であって、該ＰＡＯポリマーは次の構造を有する前記接合体：
【化２】
2016521258.tif 000002
［ここで、Ｒは前記アミノ反応性部分であり、Ｌはリンカーの−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−であり、Ｘは末端基であり、ｎは約２，０００〜約２０，０００ダルトンの平均分子量を有するＰＥＧにおけるオキシエチレン単位の平均数であり、ｐは１〜２０の整数である］。
【請求項２】
下記のうちのいずれかの請求項１に記載のヘモグロビン接合体；
前記接合体のＰ５０が、約２〜２０ｍｍＨｇ、約２〜１５ｍｍＨｇ、約２〜１０ｍｍＨｇ、または約７ｍｍＨｇである前記接合体；
前記アミノ反応性部分が、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−によって前記ＰＡＯに連結されているものであって、ここでのｐが１〜１２、１〜８、２〜６、または４の整数である前記接合体；
前記方法によって調製されたものであって、Ｒがスクシンイミジルまたはｐ−ニトロフェニルである前記接合体；
Ｘが、ヒドロキシ、アリールオキシ、またはＣ１〜Ｃ２０アルコキシである前記接合体；
ｍが、四量体当たり平均約６〜約１０のＰＡＯ分子であるか、または四量体当たり平均約８〜約９のＰＡＯ分子である前記接合体；
前記ポリアルキレンオキシドが、前記アミン反応性部分を介して前記ヘモグロビン分子上の前記アミノ酸側鎖のアミノ基に共有結合されており、前記ヘモグロビンは酸素付加状態にある前記接合体；
前記ポリアルキレンオキシドが、アミン反応性部分を介して前記ヘモグロビン分子上のアミノ酸側鎖のアミノ基に共有結合されており、前記ヘモグロビンは脱酸素状態にある前記接合体；または
前記コロイド浸透圧が少なくとも５０ｍｍＨｇである前記接合体。
【請求項３】
前記ヘモグロビンが、β，β−分子内架橋されている、請求項１または２に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項４】
フマル酸ビス（２，５−ジブロモサリチル）が、前記ヘモグロビン分子の二つのβ８２リジン残基において架橋されている、請求項３に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項５】
前記ヘモグロビンがα，α−分子内架橋され、前記Ｐ５０が約２０〜３０ｍｍＨｇである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項６】
酸素、一酸化炭素、または一酸化窒素にリガンド結合される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項７】
脱酸素化されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項８】
下記のうちのいずれかの請求項１に記載のヘモグロビン接合体：
前記アミノ反応性部分が、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−によって前記ＰＡＯに連結されているものであって、ここでのｐが、２〜６の整数であり、ｍが、四量体当たり平均約６〜約１０のＰＡＯ分子であり、前記Ｐ５０が、約２〜１０ｍｍＨｇであり、前記ＰＡＯが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり、前記ＰＥＧが、約４，０００〜約６，０００ダルトンの平均分子量を有する、前記接合体；または
前記アミノ反応性部分が、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−によって前記ＰＡＯに連結されているものであって、ここでのｐが、４であり、Ｒが、スクシンイミジルであり、Ｘが、メトキシであり、ｍが、四量体当たり平均約８〜約９のＰＡＯ分子であり、前記Ｐ５０が、約７ｍｍＨｇであり、前記ヘモグロビンが、組み換え体であり、前記ＰＡＯが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり、前記ＰＥＧが、約５，０００ダルトンの平均分子量を有する、前記接合体。
【請求項９】
前記ＰＡＯがポリエチレングリコールである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体であって、下記のうちのいずれかの接合体：
前記ＰＥＧが、メトキシＰＥＧ−スクシンイミジル吉草酸（ｍＰＥＧ−ＳＶＡ）である前記接合体；
前記ＰＥＧのアミノ反応性部分が、前記ヘモグロビンのリジン残基のε−アミノ部分、前記ヘモグロビンの末端バリン残基のα−アミノ部分、またはこれらの組合せから選択される前記ヘモグロビンのアミノ部分に接合されている前記接合体；
前記ＰＥＧのアミノ反応性部分が、ヘモグロビンα−サブユニットまたはβ−サブユニットにおける末端バリン残基のα−アミノ部分に接合されている前記接合体；
前記ＰＥＧのアミノ反応性部分が、ヘモグロビンα−サブユニットまたはβ−サブユニットのリジン残基のε−アミノ部分に接合されている前記接合体；あるいは
前記ＰＥＧのアミノ反応性部分が、ヘモグロビンα−サブユニットまたはβ−サブユニットのリジン残基のε−アミノ部分に接合されており、前記リジン残基が、リジン−７、リジン−１１、リジン−１６、リジン−４０、リジン−５６、リジン−６０、リジン−６１、リジン−９０、リジン−９９、リジン−１２７、リジン−１３９及びこれらの組合せからなる群から選択されるヒトヘモグロビンα−サブユニットのリジン残基のいずれかであるか、または前記リジン残基が、リジン−８、リジン−１７、リジン−５９、リジン−６１、リジン−６５、リジン−６６、リジン−８２、リジン−９５、リジン−１２０、リジン−１３２、リジン−１４４及びこれらの組合せからなる群から選択されるヒトヘモグロビンβ−サブユニットのリジン残基である前記接合体。
【請求項１０】
Ｎ−エチルマレイミドが、前記ヘモグロビンのβ９３システイン残基に接合されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項１１】
前記ヘモグロビン接合体が、前記ＰＡＯポリマーが、前記ヘモグロビンのチオール基またはβ９３システイン残基を介して接合され且つ下記の構造を有する以外は同一であるヘモグロビン接合体と比較して、−２０℃で３６月または周囲温度で少なくとも１８月保存したときにより大きな安定性を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体：
【化３】
2016521258.tif 000003
。
【請求項１２】
前記ヘモグロビンが組換え体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のヘモグロビン接合体及び医薬的に許容可能な担体を含有してなる医薬組成物。
【請求項１４】
下記のうちのいずれかの請求項１３に記載の医薬組成物：
血液と同張性（normo-oncotic）である医薬組成物；
血液と比較して高張性（hyperoncotic）である医薬組成物；
急性肝不全、β地中海貧血症、火傷、慢性重症四肢虚血（chronic critical limb ischemia）、二酸化炭素またはシアン化物中毒、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、鬱血性心不全、低酸素症、マラリア、臓器虚血、抹消血管疾患、ポルフィリン症、妊娠における子癇前症、敗血症、鎌形赤血球病、網膜症、眼内症状、精巣捻転症、外傷、ショック、外傷性脳障害、潰瘍、血管痙攣、またはこれらの組合せの治療において使用するための医薬組成物；
前記臓器虚血が、急性腸管虚血（腸軸捻症）、急性腸管虚血（塞栓症）、心原性ショック、急性血管性臓器虚血、発作、心筋梗塞、または重篤な心臓虚血を含んでなる前記医薬組成物；
非外傷性出血性ショック、病院到着前の外傷、外傷性出血性ショック、急性肺損傷、成人呼吸困難症候群、外傷性脳損傷、発作、固形腫瘍癌、臓器退廃（ex-vivo）、臓器退廃（レシピエントにおいて）、重篤な敗血症、敗血症ショック、心筋梗塞、心虚血、心原性ショック、急性心不全、肺塞栓症、またはこれらの組合せの治療において使用するための前記医薬組成物；
血管形成術に対する補助療法として、形成外科のための補助療法として、または補助人工心臓を移植する際の補助療法として；血液代用剤、心保護剤、冷凍保存剤、血液透析補助剤、腫瘍治療剤、臓器保存剤、性能強化剤、手術補助剤、または創傷治癒剤として；撮像において；肺機能を改善するため；またはそれらの組合せにおいて使用するためのものである前記医薬組成物；あるいは
血液喪失の獣医学的治療のための医薬組成物であって、前記血液喪失が、傷害、溶血性貧血、感染性貧血、細菌感染、第ＩＶ因子断片化、脾機能亢進及び脾腫大、家禽における出血性症候群、再生不良性貧血、形成不全性貧血、突発性免疫性溶血症状、鉄欠乏症、同種免疫溶血性貧血、微小血管性溶血性貧血、寄生、もしくは外科麻酔に誘導された脳損傷によるものである前記医薬組成物。
【請求項１５】
下記のうちのいずれかの請求項１３または１４に記載の医薬組成物：
急性肝不全、β地中海貧血症、火傷、慢性重症四肢虚血（chronic critical limb ischemia）、二酸化炭素またはシアン化物中毒、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、鬱血性心不全、低酸素症、マラリア、臓器虚血、抹消血管疾患、ポルフィリン症、妊娠における子癇前症、敗血症、鎌形赤血球病、網膜症、眼内症状、精巣捻転症、外傷、ショック、外傷性脳障害、潰瘍、血管痙攣、またはこれらの組合せの治療における使用のための医薬組成物；
臓器虚血の治療における使用のための医薬組成物であって、前記臓器虚血が、急性腸管虚血（腸軸捻症）、急性腸管虚血（塞栓症）、心原性ショック、急性血管性臓器虚血、発作、心筋梗塞、または重篤な心臓虚血を含んでなる、医薬組成物；
非外傷性出血性ショック、病院到着前の外傷、外傷性週血性ショック、急性肺損傷、成人呼吸困難症候群、外傷性脳損傷、発作、固形腫瘍癌、臓器退廃（ex-vivo）、臓器退廃（レシピエントにおいて）、重篤な敗血症、敗血症ショック、心筋梗塞、心虚血、心原性ショック、急性心不全、肺塞栓症、またはこれらの組合せの治療における使用のための医薬組成物；
血管形成術に対する補助療法として、形成外科のための補助療法として、または補助人工心臓を移植する際の補助療法として；血液代用剤、心保護剤、冷凍保存剤、血液透析補助剤、腫瘍治療剤、臓器保存剤、性能強化剤、手術補助剤、または創傷治癒剤として；撮像において；肺機能を改善するため；またはそれらの組合せに使用するための医薬組成物；
血管形成術に対する補助療法として、胸部大動脈修復に対する補助療法として、心肺バイパス術に対する補助療法として、または心肺バイパスのためのプライミング溶液として使用するための医薬組成物；あるいは
傷害、溶血性貧血、感染性貧血、細菌感染、第ＩＶ因子断片化、脾機能亢進及び脾腫大、家禽における出血性症候群、再生不良性貧血、形成不全性貧血、突発性免疫性溶血症状、鉄欠乏症、同種免疫溶血性貧血、微小血管性溶血性貧血、寄生、もしくは外科麻酔に誘導された脳損傷による血液喪失の獣医学的治療における使用のための医薬組成物。
【請求項１６】
酸素、一酸化窒素、一酸化炭素またはそれらの混合物を組織へと送達し、微小血管系中で亜硝酸塩を一酸化窒素（ＮＯ）へと還元するための請求項１３または１４に記載の医薬組成物であって、投与後、前記ヘモグロビンが、脱リガンドされ、前記微小血管系において亜硝酸塩を一酸化窒素に変換するものである、医薬組成物。