【手続補正書】
【提出日】平成29年3月3日(2017.3.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
定義
「インターロイキン−３３」、「ＩＬ−３３」、など、本明細書中で使用する場合、例えば、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ＃３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦから入手されるヒトＩＬ−３３タンパク質をいう。本明細書でタンパク質、ポリペプチド及びタンパク質断片という場合はいずれも、ヒト種でないことが明確に指示されていない限り（例えば、「マウスＩＬ−３３」、「サルＩＬ−３３」など）、それぞれヒトのタンパク質、ポリペプチド又はタンパク質断片を指すことを意図する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
実施例３.
表面プラズモン共鳴で測定した抗体のヒトＩＬ−３３への結合性
精製抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体に結合するＩＬ−３３の平衡解離定数（ＫD値）
を、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用しリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーで測定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、抗マウスのウサギ・ポリクローナル抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３８）又は抗ヒトＦｃマウス・モノクローナル抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）いずれかとのアミンカップリングにより最初に誘導体化し、それぞれ、マウス又はヒトＩｇＧ４定常領域に発現した抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体を捕捉した。Ｂｉａｃｏｒｅ結合試験はすべて、０.０１Ｍ  ＡＤＡ  ｐ
Ｈ７.４、０.１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、及び０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔ
ｗｅｅｎ−２０（ＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液）で実施した。ＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液（１００ｎＭ〜３.７ｎＭの範囲で、３倍希釈）に調製した、各種濃度のヒトＩＬ
−３３（ｈＩＬ−３３；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）又はＣ末端ヘキサヒスチジンタグとともに発現されるカニクイザルＩＬ−３３（ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ；配列番号３０５番）を、抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体捕捉表面上に流量３０μＬ／分で注入した。ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓと捕捉モノク
ローナル抗体との会合を４分間監視し、ＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液内での解離について１０分間監視した。ｐＨを低くしたことによる各抗ＩＬ−３３抗体とｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓとの結合への影響を、インラインｐＨ追跡（ｉｎ−ライン  ｐＨ  ｃｈａｓｅ）試験フォーマットを用い、０.０１Ｍ  ＡＤＡ  ｐＨ６.０、０.１５Ｍ
ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、及び０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０（ＡＢＳ−ＥＴ  ｐＨ６緩衝液）で試験した。これを達成するため、ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓのいずれかと捕捉モノクローナル抗体との会合をＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液内で４分間監視した。ｈＩＬ−３３又はＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓのいずれかをＡＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中で３０秒解離させた後、ＡＢＳ−ＥＴ  ｐＨ６緩衝液を３分間注入し、低ｐＨ条件下でのアナライトの解離を測定した。結合動態実験を２５℃及び３７℃の両温度で実施した。動態の会合（ｋa）及び解離（ｋd）定数は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２.０ｃ  ｃｕｒｖｅ  ｆｉｔｔｉｎｇソフトウェアを使用し、リアルタイム・センサーグラムを１：１結合モデルに当てはめて測定した。結合解離平衡定数（ＫD）及び解離半減期（ｔ1/2）を以下の動態速度定数としての計算した：
ＫD（Ｍ）＝ｋd／ｋa及びｔ1/2（分）＝ｌｎ（２）／（６０*ｋd）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
本発明の２つの異なる例示的抗ＩＬ−３３抗体（Ｈ４Ｈ９６７５Ｐ及びＨ４Ｈ９６５９Ｐ）又はアイソタイプ・コントロール抗体の系列希釈（１：３）を１０ｎＭ〜４.６ｐＭ
の範囲で作製し、この他に抗体を含まない対照を用意した。各溶液を、固定濃度１００ｐＭ（最終濃度）のヒトＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃３６２５−ＩＬ／ＣＦ）又はＩＬ−３３未含の陰性対照と混合し、それからＰＢＭＣに添加した。全条件を２連で試験した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７０】
実施例１０.
バイオレイヤー干渉法を使用したサルＩＬ−３３交差競合
パネルの種々の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体間の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ａ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｐａｌｌ
Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してリアルタイム、非標識バイオレイヤー干渉法で測定した。実験は、０.０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７.４、０.１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍ
Ｍ  ＥＤＴＡ、０.０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、及び０.１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ（ＨＢＳ−ＥＴ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｂｕｆｆｅｒ）緩衝液を使用し、プレートを速度１０００ｒｐｍで撹拌しながら２５℃にて実施した。Ｃ末端ヘキサヒスチジンタグとともに発現させた組換えサルＩＬ−３３（ＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓ；ＳＥＱ  ＩＤ：３０５）への結合について２抗体が互いに競合することができたかどうかを評価するために、２μｇ／ｍＬのＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓを含有するウェルにバイオセンサーを８５秒間浸すことにより、抗ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ抗体でコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ、＃１８−５０７９）上に、およそ０.１５ｎｍ結合単位のＭｆＩＬ−３３−６Ｈｉｓを最初に捕捉した。その後、抗原捕捉バイオセンサーを、ｍＡｂ−１の５０μｇ／ｍＬ溶液含有ウェルに５分間浸漬させ、第１の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ−１と呼ぶ）で飽和させた。その後、バイオセンサーを、第
２の抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体（以後、ｍＡｂ−２と呼ぶ）の５０μｇ／ｍＬ溶液含有ウェルに４分間浸した。バイオセンサーを、実験の各ステップごとにＨＢＳ−ＥＴ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。リアルタイム結合応答を実験の間監視し、各結合ステップの最大結合応答を記録した。予めｍＡｂ−１と作製した複合体ＭｆＩＬ−３３−６ＨｉｓへのｍＡｂ−２の結合応答を測定し、各種抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体のそれぞれに対する競合的／非競合的挙動を検討した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトインターロイキン３３（ＩＬ−３３）に結合する単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片であって、ＩＬ−３３媒介性シグナル伝達を抑制する又は減弱させる、前記単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項２】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を遮断し、必要に応じ、前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用をＩＣ50値約１０ｎＭ未満で遮断する、又は２５℃でのインビトロ受容体／リガンド結合アッセイで測定したＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を約５０％を超えて遮断する、請求項１に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
【請求項３】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３及びＳＴ２の相互作用を遮断しない、又は一部のみ遮断する、請求項１に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離された抗体又は抗原結合性断片であって：
（ａ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に結合平衡解離定数（ＫD）約１ｎＭ未満でヒトＩＬ−３３に結合する；及び／又は
（ｂ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合に約８分を超える解離半減期（ｔ1/2）でヒトＩＬ−３３に結合する；及び／又は
（ｃ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＩＬ−３３媒介性のヒト好塩基球脱顆粒を抑制し、必要に応じ、インビトロ好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）で測定した場合にＩＣ50約６００ｐＭ未満でＩＬ−３３媒介性のヒト好塩基球脱顆粒を抑制する；及び／又は
（ｄ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制し、必要に応じ、インビトロでのＰＢＭＣ  ＩＦＮ−γ産生アッセイで測定した場合にＩＣ50約２５ｎＭ未満、約３ｎＭ未満又は約０.５ｎＭ未満でヒトＰＢＭＣのＩＬ−３３媒介性ＩＦＮ−γ産生を抑制する；及び／又は
（ｅ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合に肺におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞、好酸球及びＩＬＣ２細胞の頻度を低下させる；及び／又は
（ｆ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合に肺におけるＩＬ−４及びＩＬ−５のレベルを低下させ、必要に応じ、前記抗体又はその抗原結合性断片が、アレルゲン誘導性肺炎症の動物モデルに投与した場合、アイソタイプ・コントロール抗体を投与したアレルゲン誘発動物の場合に比して、ＩＬ−４レベルの少なくとも４倍低下、及び／又はＩＬ−５レベルの少なくとも５倍低下をもたらす；及び／又は
（ｇ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４
２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの配列対を含む基準抗体と、ＩＬ−３３への結合について競合する；及び／又は
（ｈ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの配列対を含む基準抗体とＩＬ−３３上の同一のエピトープに結合する；
前記単離された抗体又は抗原結合性断片。
【請求項５】
ヒトのインターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に特異的に結合する単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片であって、前記抗体又は抗原結合性断片が（ａ）配列番号：２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、及び３０８番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｂ）配列番号：１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、及び３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲ、を含む、前記単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項６】
請求項５に記載の抗体又は抗原結合性断片であって：
（ａ）前記抗体又は抗原結合性断片が、配列番号：２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列対のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲの重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む；又は
（ｂ）前記抗体又は抗原結合性断片が、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含み、それぞれの配列番号が４−６−８−１２−１４−１６；２０−２２−２４−２８−３０−３２；３６−３８−４０−４４−４６−４８；５２−５４−５６−６０−６２−６４；６８−７０−７２−７６−７８−８０；８４−８６−８８−９２−９４−９６；１００−１０２−１０４−１０８−１１０−１１２；１１６−１１８−１２０−１２４−１２６−１２８；１３２−１３４−１３６−１４０−１４２−１４４；１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０；１６４−１６６−１６８−１７２−１７４−１７６；１８０−１８２−１８４−１８８−１９０−１９２；１９６−１９８−２００−２０４−２０６−２０８；２１２−２１４−２１６−２２０−２２２−２２４；２２８−２３０−２３２−２３６−２３８−２４０；２４４−２４６−２４８−２５２−２５４−２５６；２６０−２６２−２６４−２６８−２７０−２７２；２７６−２７８−２８０−２８４−２８６−２８８；２９２−２９４−２９６−３００−３０２−３０４；並びに３１０−３１２−３１４−３１８−３２０−３２２番からなる群から選択される；
前記単離された抗体又は抗原結合性断片。
【請求項７】
ヒトのインターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に特異的に結合する単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片であって、前記抗体又は抗原結合性断片が（ａ）配列番号：２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６
２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、及び３０８番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；並びに（ｂ）配列番号：１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、及び３１６番からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、を含み、必要に応じて、前記抗体又は抗原結合性断片が、配列番号：２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、及び３０８／３１６番からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、前記単離されたヒトのモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片をコードする、単離された核酸分子。
【請求項９】
請求項８に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合性断片、及び薬理学的に許容される担体又は希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
炎症性の疾患もしくは障害又は炎症性の疾患もしくは障害に関連する少なくとも１つの症状を治療する方法において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、又は請求項１１に記載の医薬組成物であって、前記方法は、前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、そして、前記抗体、その抗原結合性断片又は前記医薬組成物の投与後に、前記炎症性の疾患もしくは障害又は炎症性の疾患もしくは障害に関連する少なくとも１つの症状が、回復し、又は発症の重症度、持続時間もしくは頻度を低減する、前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物。
【請求項１３】
前記炎症性の疾患又は障害が、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、多発性硬化症、関節炎、アレルギー性鼻炎、好酸球性食道炎、及び乾癬からなる群から選択される、請求項１２に記載の抗体、抗原結合性断片又は医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の抗体、抗原結合性断片又は医薬組成物であって、前記炎症性の疾患又は障害が喘息であり、必要に応じて：
（ａ）前記喘息が好酸球性又は非好酸球性喘息である；及び／又は
（ｂ）前記喘息がステロイド抵抗性又はステロイド感受性喘息である；
前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の抗体、抗原結合性断片又は医薬組成物であって：
（ａ）前記炎症性の疾患又は障害がアトピー性皮膚炎である；又は
（ｂ）前記炎症性の疾患又は障害が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）であり、必要に応じて、前記慢性閉塞性肺疾患が喫煙の結果である、又は原因の一部である；
前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物。
【請求項１６】
アレルゲンに対する感受性を示す患者を治療する方法において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片、又は請求項１１に記載の医
薬組成物であって、該方法は、有効量の前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物をそれを必要とする患者に投与することを含み、そして、前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物の投与後に、患者がアレルゲンに対する感受性低下もしくはアレルギー反応減退を示す、又はアレルゲンに対するいかなる感受性もしくはアレルギー反応、又はアナフィラキシー反応を経験しない、前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の抗体、抗原結合性断片又は医薬組成物であって、前記方法は、前記炎症性の疾患もしくは障害、又は前記炎症性の疾患もしくは障害の少なくとも１つの症状を緩和する、又はアレルゲンに対するアレルギー応答を減退させるために有用である、有効量の第２の治療剤を投与することをさらに含み、必要に応じて、
前記第２の治療剤が、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、副腎皮質ホルモン、気管支拡張剤、抗ヒスタミン薬、エピネフリン、うっ血除去薬、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）拮抗薬、ＩＬ−１３拮抗薬、ＩＬ−４拮抗薬、ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重拮抗薬、ＩＬ−５拮抗薬、ＩＬ−６拮抗薬、ＩＬ−１２／２３拮抗薬、ＩＬ−２２拮抗薬、ＩＬ−２５拮抗薬、ＩＬ−１７拮抗薬、ＩＬ−３１拮抗薬、経口ＰＤＥ４阻害剤及び別のＩＬ−３３拮抗薬又はＩＬ−３３に対する異なる抗体からなる群から選択される、前記抗体、抗原結合性断片又は前記医薬組成物。