【手続補正書】
【提出日】平成29年9月28日(2017.9.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法であって、Ｗｎｔポリペプチドを含む試料をリポソームの水溶液に接触させるステップを含み、前記リポソームは、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）であるリン脂質を含み、前記リポソームは、コレステロールを含み、ＤＭＰＣおよびコレステロールの濃度が、７０：３０〜９０：１０の間の比によって規定される、方法。
【請求項２】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置で脂質修飾される、請求項１に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項３】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置で脂質修飾されない、請求項２に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項４】
前記接触させるステップを、１５℃〜３７℃、１８℃〜３３℃、または２０℃〜２８℃の間の温度で行う、請求項１に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項５】
接触させる時間が、６時間〜２４時間の間である、請求項１に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項６】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、リポソーム膜に取り込まれ、前記リポソーム膜から脂質膜の外表面に突出し、前記リポソームの水性コアに組み込まれない、請求項１に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項７】
前記リポソームが、ｐＨ６．５〜８．０、７．０〜７．８、または７．２〜７．６の間で正味の電荷０を有する、請求項１に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項８】
前記脂質修飾が、パルミトイル化である、請求項２に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項９】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、請求項１に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法。
【請求項１０】
ａ）Ｗｎｔ３ａポリペプチドを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む馴化培地から採取するステップと；
ｂ）前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドを、スルホン化多環芳香族化合物を固定化したイオン交換カラムに導入するステップと；
ｃ）段階勾配を利用して、前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドを前記イオン交換カラムから溶出させるステップと；
ｄ）ステップ（ｃ）からの前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドをリポソームの水溶液と接触させるステップと
をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記段階勾配が、第１の勾配および第２の勾配を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の勾配中の塩の濃度が５０ｍＭである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１の勾配が、５０ｍＭの塩化カリウムを含む緩衝溶液を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の勾配中の塩の濃度が、１５０ｍＭ〜１．５Ｍの間である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２の勾配が、１５０ｍＭの塩化カリウム〜１．５Ｍの間の塩化カリウムを含む緩衝溶液を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームを含む水溶液とを含む組成物であって、前記リポソームは、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）であるリン脂質を含み、前記リポソームは、コレステロールを含み、ＤＭＰＣおよびコレステロールの濃度が、７０：３０〜９０：１０の間の比によって規定される、組成物。
【請求項１７】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置で脂質修飾される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記脂質修飾が、パルミトイル化である、請求項１８に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本明細書では、特定の実施形態では、単離された増強哺乳動物骨髄細胞の組成物を含む骨移植片材料を作製するためのキットが開示される。一部の実施形態では、前記単離された増強哺乳動物骨髄細胞の組成物は、３５歳またはこれより老齢のヒト被験体から得られた哺乳動物骨髄細胞の組成物であり、ここで、リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、増強された発現レベルで、Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｒｉｘ、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ、Ｉ型コラーゲン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４からなる群から選択されるバイオマーカーのうちの１または複数を発現する。一部の実施形態では、前記バイオマーカーが、オステオカルシン、オステオポンチン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４から選択される。一部の実施形態では、前記バイオマーカーが、オステオカルシンおよびオステオポンチンから選択される。一部の実施形態では、前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される。一部の実施形態では、前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、約２％〜約２０％または約４％〜約１０％の間である。一部の実施形態では、リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、ＳＯＸ９およびＰＰＡＲγから選択されるバイオマーカーの低下した発現レベルを、さらに有する。一部の実施形態では、前記哺乳動物骨髄細胞内の前記低下した発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される。一部の実施形態では、前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較したアポトーシスレベルの低下をさらに含む。一部の実施形態では、アポトーシスレベルの前記低下が、約５０％である。一部の実施形態では、前記哺乳動物骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して増強された骨形成潜在能を含む。一部の実施形態では、前記増強された骨形成潜在能が、処置された哺乳動物骨髄細胞を移植した後の骨欠損部位における新たな骨成長レベルを含む。一部の実施形態では、前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較される。一部の実施形態では、移植された処置哺乳動物骨髄細胞の前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較して、約１％〜約２０％または約５％〜約１２％の間である。一部の実施形態では、前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む。一部の実施形態では、前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞である。一部の実施形態では、前記付着骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む。一部の実施形態では、前記付着骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む。一部の実施形態では、前記哺乳動物骨髄細胞が、自家骨髄細胞である。一部の実施形態では、前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む。一部の実施形態では、前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞である。一部の実施形態では、前記自家骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む。一部の実施形態では、前記自家骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む。一部の実施形態では、前記哺乳動物骨髄細胞が、同種骨髄細胞である。一部の実施形���では、前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む。一部の実施形態では、前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞である。一部の実施形態では、前記同種骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む。一部の実施形態では、前記同種骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む。一部の実施形態では、リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置後の前記ヒト骨髄細胞が、３５歳より若齢のヒト被験体において観察されるバイオマーカー発現レベルを呈示する。一部の実施形態では、前記リポソームＷｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームの水溶液とを含む。一部の実施形態では、前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する。一部の実施形態では、前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である。一部の実施形態では、前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである。一部の実施形態では、前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む。一部の実施形態では、前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない。一部の実施形態では、前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ５ａポリペプチドまたはＷｎｔ１０ｂポリペプチドである。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドと、リポソームを含む水溶液とを含む組成物であって、前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾を含む、組成物。
（項目２）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目１に記載の安定な組成物。
（項目３）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、リポソーム膜に取り込まれている、項目１または２に記載の組成物。
（項目４）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、リポソーム膜から脂質膜の外表面に突出する、項目１から３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、前記リポソームの水性コアに組み込まれていない、項目１から４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
前記機能的に活性なＷｎｔ３ａポリペプチドの濃度が、約５μｇ／μＬ〜約１５μｇ／μＬ、または約８μｇ／μＬ〜約１２μｇ／μＬの間である、項目１から７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である、項目１から８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃、約１５℃〜約２５℃、または約２０℃〜約２５℃の相転移温度を有する、項目１から９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記リポソームが、ｐＨ約６．５〜約８．０、約７．０〜約７．８、または約７．２〜約７．６の間で正味の電荷０を有する、項目１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
リン脂質が、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である、項目１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
前記リポソームが、コレステロールをさらに含む、項目１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
ＤＭＰＣおよびコレステロールの濃度が、約７０：３０〜約１００：０の間の比により規定される、項目１２または１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、哺乳動物Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、項目１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
前記脂質修飾が、パルミトイル化である、項目１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、さらにグリコシル化されている、項目１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１９）
安定な組成物である、項目１から１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
活性の実質的な喪失を伴わずに、最長約１０６日間安定である、項目１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
約１℃〜約８℃の間の温度で安定である、項目１から２０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２２）
窒素下で安定である、項目１から２１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２３）
機能的に活性な哺乳動物Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームを含む水溶液とを含む組成物であって、前記リポソームを構成するリン脂質が約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する組成物。
（項目２４）
機能的に活性な哺乳動物Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームを含む水溶液とを含む組成物であって、前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが炭素約１２個〜炭素約１４個の間である組成物。
（項目２５）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、リポソーム膜に取り込まれている、項目２３または２４に記載の組成物。
（項目２６）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、リポソーム膜から脂質膜の外表面に突出する、項目２３から２５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２７）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、前記リポソームの水性コアに組み込まれていない、項目２３から２６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２８）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、項目２３から２７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２９）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目２８に記載の組成物。
（項目３１）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目２８から３０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３２）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ５ａポリペプチドまたはＷｎｔ１０ｂポリペプチドである、項目２３から２７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３３）
前記Ｗｎｔポリペプチドの濃度が、約５μｇ／μＬ〜約１５μｇ／μＬ、または約８μｇ／μＬ〜約１２μｇ／μＬの間である、項目２３から３２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３４）
前記リポソームがｐＨ約６．５〜約８．０の間で正味の電荷０を有する、項目２３から３３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３５）
前記リポソームがｐＨ約６．５〜約８．０の間で正味の正電荷または正味の負電荷を有する、項目２３から３４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３６）
前記リン脂質が、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である、項目２３から３４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３７）
前記リポソームが、コレステロールをさらに含む、項目２３から３６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３８）
ＤＭＰＣおよびコレステロールの濃度が、約７０：３０〜約１００：０の間の比により規定される、項目３６または３７に記載の組成物。
（項目３９）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目２３から３８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４０）
脂質修飾が、パルミトイル化である、項目２３から３９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４１）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、さらにグリコシル化されている、項目２３から４０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４２）
安定な組成物である、項目２３から４１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４３）
活性の実質的な喪失を伴わずに、最長約１０６日間安定である、項目２３から４２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４４）
約１℃〜約８℃の間の温度で安定である、項目２３から４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４５）
窒素下で安定である、項目２３から４４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４６）
リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドを調製する方法であって、
ａ）Ｗｎｔ３ａポリペプチドを、哺乳動物細胞を含む馴化培地から採取するステップと；
ｂ）前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドを、スルホン化多環芳香族化合物を固定化したイオン交換カラムに導入するステップと；
ｃ）段階勾配を利用して、前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドを前記イオン交換カラムから溶出させるステップと；
ｄ）ステップ（ｃ）からの前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドをリポソームの水溶液と接触させるステップと
を含む方法。
（項目４７）
前記接触させるステップを、約２１℃〜約２５℃の間の温度で行う、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
接触させる時間が、約３０分間〜約２４時間の間である、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
前記段階勾配が、第１の勾配および第２の勾配を含む、項目４６に記載の方法。
（項目５０）
前記第１の勾配が、５０ｍＭの塩化カリウムを含む緩衝溶液を含み、前記第２の勾配が、約１５０ｍＭの塩化カリウム〜約１．５Ｍの間の塩化カリウムを含む緩衝溶液を含む、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記緩衝溶液が、界面活性剤をさらに含む、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記界面活性剤が、ＣＨＡＰＳまたはＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記馴化培地が、最大１０％のウシ胎仔血清を含む、項目４６に記載の方法。
（項目５４）
前記哺乳動物細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、項目４６に記載の方法。
（項目５５）
ステップ（ｃ）の後の前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドの収率が、約６０％〜約９０％の間である、項目４６に記載の方法。
（項目５６）
前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である、項目４６に記載の方法。
（項目５７）
前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃、約１５℃〜約２５℃、または約２０℃〜約２５℃の相転移温度を有する、項目４６または５６に記載の方法。
（項目５８）
前記リポソームが、ｐＨ約６．５〜約８．０、約７．０〜約７．８、または約７．２〜約７．６の間で正味の電荷０を有する、項目４６、５６または５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
リン脂質が、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である、項目４６または５６から５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記リポソームが、コレステロールをさらに含む、項目４６または５６から５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
ＤＭＰＣおよびコレステロールの濃度が、約７０：３０〜約１００：０の間の比により規定される、項目５９または６０に記載の方法。
（項目６２）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目４６に記載の方法。
（項目６３）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目４６に記載の方法。
（項目６４）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目４６、６２、または６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、哺乳動物Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、項目４６、または６２から６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記馴化培地が、血清または血清代替物を含む、項目４６に記載の方法。
（項目６８）
前記馴化培地が、血清を含む、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記血清が、ウシ胎仔血清である、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
血清濃度が、前記馴化培地中に約０．１％〜約１５％の間である、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記馴化培地が、血清代替物を含む、項目６７に記載の方法。
（項目７２）
前記血清代替物が、脂質ベースの代替物である、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記馴化培地が、無血清培地である、項目４６に記載の方法。
（項目７４）
脂質修飾が、パルミトイル化である、項目４６から６６のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、さらにグリコシル化されている、項目４６から７４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７６）
Ｗｎｔ３ａ生成物を試料混合物から遠心分離により分離する、項目４６から７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７７）
前記遠心分離の時間が、約１℃〜約８℃の間の温度で最長１時間である、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
遠心分離後のＷｎｔ３ａ生成物を、無菌１×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させる、項目４６から７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目７９）
Ｗｎｔ３ａ生成物が、窒素下で安定である、項目４６から７８のいずれか一項に記載の方法。
（項目８０）
Ｗｎｔ３ａ生成物が、約１℃〜約８℃の間の温度で安定である、項目４６から７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目８１）
リポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法であって、Ｗｎｔポリペプチドを含む試料をリポソームの水溶液に接触させるステップを含み、前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する方法。
（項目８２）
リポソームＷｎｔポリペプチドを調製する方法であって、Ｗｎｔポリペプチドを含む試料をリポソームの水溶液に接触させるステップを含み、前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である方法。
（項目８３）
前記接触させるステップを、約２１℃〜約２５℃の間の温度で行う、項目８１または８２に記載の方法。
（項目８４）
接触させる時間が、約６時間〜約２４時間の間である、項目８１または８２に記載の方法。
（項目８５）
前記Ｗｎｔポリペプチドをリポソームの水溶液に接触させるステップの前に、さらなる精製ステップをさらに含む、項目８１または８２に記載の方法。
（項目８６）
前記さらなる精製ステップが、イオン交換精製ステップ、疎水性精製ステップ、またはアフィニティー精製ステップである、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記さらなる精製ステップが、イオン交換精製ステップである、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記イオン交換精製ステップが、前記試料を、スルホン化多環芳香族化合物を固定化したビーズまたはスルホン化多環芳香族化合物を固定化したカラムと接触させることを含む、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記イオン交換精製ステップが、段階勾配を含む、項目８７または８８に記載の方法。
（項目９０）
イオン交換精製緩衝液が、界面活性剤を含む、項目８７から８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記界面活性剤が、ＣＨＡＰＳまたはＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００である、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記さらなる精製ステップが、疎水性精製ステップである、項目８６に記載の方法。
（項目９３）
前記疎水性精製ステップが、プロテインＡを固定化したビーズまたはプロテインＡカラムを含む、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
前記さらなる精製ステップの後の前記Ｗｎｔポリペプチドの収率が、約６０％〜約９９％の間である、項目８５から９３のいずれか一項に記載の方法。
（項目９５）
Ｗｎｔポリペプチドを、発現細胞系に由来する細胞を含む馴化培地から採取するステップをさらに含む、項目８１から９４のいずれか一項に記載の方法。
（項目９６）
前記発現細胞系が、哺乳動物発現細胞系である、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
前記哺乳動物発現細胞系が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系である、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記馴化培地が、血清または血清代替物を含む、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
前記血清が、ウシ胎仔血清である、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
血清濃度が、前記馴化培地中に約０．１％〜約１５％の間である、項目９９に記載の方法。
（項目１０１）
前記馴化培地が、血清代替物を含む、項目９８に記載の方法。
（項目１０２）
前記血清代替物が、脂質ベースの代替物である、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記馴化培地が、無血清培地である、項目９７に記載の方法。
（項目１０４）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、項目８１から９８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０５）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目１０４に記載の方法。
（項目１０６）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目１０４に記載の方法。
（項目１０７）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目１０４から１０６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０８）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ５ａポリペプチドまたはＷｎｔ１０ｂポリペプチドである、項目８１から１０７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０９）
前記リポソームが、ｐＨ約６．５〜約８．０、約７．０〜約７．８、または約７．２〜約７．６の間で正味の電荷０を有する、項目８１から１０８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１０）
リン脂質が、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である、項目８１から１０９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１１）
前記リポソームが、コレステロールをさらに含む、項目８１から１１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１２）
ＤＭＰＣおよびコレステロールの濃度が、約７０：３０〜約１００：０の間の比により規定される、項目１１０または１１１に記載の方法。
（項目１１３）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、哺乳動物Ｗｎｔポリペプチドである、項目８１から１１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１４）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目１１３に記載の方法。
（項目１１５）
脂質修飾が、パルミトイル化である、項目８１から１１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１６）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、さらにグリコシル化されている、項目８１から１１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１７）
Ｗｎｔ  生成物を試料混合物から遠心分離により分離する、項目８１から１１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１８）
前記遠心分離の時間が、約１℃〜約８℃の間の温度で最長１時間である、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
遠心分離後のＷｎｔ生成物を、無菌１×ＰＢＳ中に再懸濁させる、項目８１から１１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２０）
Ｗｎｔ生成物が、窒素下で安定である、項目８１から１１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２１）
Ｗｎｔ生成物が、約１℃〜約８℃の間の温度で安定である、項目８１から１２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２２）
単離された増強哺乳動物骨髄細胞の組成物であって、リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記細胞は、Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｒｉｘ、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ、Ｉ型コラーゲン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４からなる群から選択されるバイオマーカーのうちの１または複数の増強された発現レベルを有する組成物。
（項目１２３）
前記哺乳動物骨髄細胞が、齧歯動物骨髄細胞である、項目１２２に記載の組成物。
（項目１２４）
前記齧歯動物骨髄細胞が、１０カ月齢より老齢の齧歯動物から採取される、項目１２３に記載の組成物。
（項目１２５）
前記哺乳動物骨髄細胞が、ヒト骨髄細胞である、項目１２２に記載の組成物。
（項目１２６）
前記ヒト骨髄細胞が、３５歳またはこれより老齢の被験体から得られる、項目１２５に記載の組成物。
（項目１２７）
３５歳またはこれより老齢のヒト被験体から得られた哺乳動物骨髄細胞の組成物であって、リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、増強された発現レベルで、Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｒｉｘ、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ、Ｉ型コラーゲン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４からなる群から選択されるバイオマーカーのうちの１または複数を発現させる組成物。
（項目１２８）
前記バイオマーカーが、オステオカルシン、オステオポンチン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４から選択される、項目１２２または１２７に記載の組成物。
（項目１２９）
前記バイオマーカーが、オステオカルシンおよびオステオポンチンから選択される、項目１２２または１２７に記載の組成物。
（項目１３０）
前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される、項目１２２から１２９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３１）
前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、約２％〜約２０％または約４％〜約１０％の間である、項目１３０に記載の組成物。
（項目１３２）
リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、ＳＯＸ９およびＰＰＡＲγから選択されるバイオマーカーの低下した発現レベルを、さらに有する、項目１２２から１３１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３３）
前記哺乳動物骨髄細胞内の前記低下した発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される、項目１３２に記載の組成物。
（項目１３４）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較したアポトーシスレベルの低下をさらに含む、項目１２２から１３３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３５）
アポトーシスレベルの前記低下が、約５０％である、項目１３４に記載の組成物。
（項目１３６）
前記哺乳動物骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して増強された骨形成潜在能を含む、項目１２２から１３５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３７）
前記増強された骨形成潜在能が、処置された哺乳動物骨髄細胞を移植した後の骨欠損部位における新たな骨成長レベルを含む、項目１３６に記載の組成物。
（項目１３８）
前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較される、項目１３７に記載の組成物。
（項目１３９）
移植された処置哺乳動物骨髄細胞の前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較して、約１％〜約２０％または約５％〜約１２％の間である、項目１３７または１３８に記載の組成物。
（項目１４０）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目１２２から１３９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４１）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目１４０に記載の組成物。
（項目１４２）
前記付着骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目１４１に記載の組成物。
（項目１４３）
前記付着骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目１４１に記載の組成物。
（項目１４４）
前記哺乳動物骨髄細胞が、自家骨髄細胞である、項目１２２から１４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４５）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目１４４に記載の組成物。
（項目１４６）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目１４５に記載の組成物。
（項目１４７）
前記自家骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目１４６に記載の組成物。
（項目１４８）
前記自家骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目１４６に記載の組成物。
（項目１４９）
前記哺乳動物骨髄細胞が、同種骨髄細胞である、項目１２２から１４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５０）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目１４９に記載の組成物。
（項目１５１）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目１５０に記載の組成物。
（項目１５２）
前記同種骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目１５１に記載の組成物。
（項目１５３）
前記同種骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目１５１に記載の組成物。
（項目１５４）
リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置後の前記ヒト骨髄細胞が、３５歳より若齢のヒト被験体において観察されるバイオマーカー発現レベルを呈示する、項目１２６または１２７に記載の組成物。
（項目１５５）
前記リポソームＷｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームの水溶液とを含む、項目１２２から１５４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５６）
前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する、項目１５５に記載の組成物。
（項目１５７）
前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である、項目１５５または１５６に記載の組成物。
（項目１５８）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、項目１５５に記載の組成物。
（項目１５９）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目１５８に記載の組成物。
（項目１６０）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目１５８に記載の組成物。
（項目１６１）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目１５８から１６０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６２）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ５ａポリペプチドまたはＷｎｔ１０ｂポリペプチドである、項目１５５に記載の組成物。
（項目１６３）
哺乳動物骨髄組成物であって、単離哺乳動物骨髄細胞を、ｅｘ  ｖｉｖｏで、リポソームＷｎｔポリペプチドと接触させるステップを含むプロセスによって作製され、ここで、接触させる時間が約３０分間〜約４時間の間である、哺乳動物骨髄組成物。
（項目１６４）
接触させる温度が、約０℃〜約３７℃、または約２０℃〜約２５℃の間である、項目１６３に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１６５）
前記プロセスが、接触させるステップの後で、遊離リポソームＷｎｔポリペプチドを除去する洗浄ステップをさらに含む、項目１６３または１６４に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１６６）
前記プロセスが、前記リポソームＷｎｔポリペプチドを骨欠損部位に移植するステップをさらに含む、項目１６３から１６５のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１６７）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｒｉｘ、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ、Ｉ型コラーゲン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４からなる群から選択されるバイオマーカーのうちの１または複数の増強された発現レベルを有する、項目１６３から１６６のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１６８）
前記バイオマーカーが、オステオカルシン、オステオポンチン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４から選択される、項目１６３から１６６のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１６９）
前記バイオマーカーが、オステオカルシンおよびオステオポンチンから選択される、項目１６３から１６６のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７０）
前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、約２％〜約２０％または約４％〜約１０％の間である、項目１６７から１６９のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７１）
リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、ＳＯＸ９およびＰＰＡＲγから選択されるバイオマーカーの低下した発現レベルをさらに有する、項目１６３から１７０のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７２）
前記哺乳動物骨髄細胞内の前記低下した発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される、項目１７１に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７３）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較したアポトーシスレベルの低下をさらに含む、項目１６３から１７２のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７４）
アポトーシスレベルの前記低下が、約５０％である、項目１７３に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７５）
前記哺乳動物骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して増強された骨形成潜在能を含む、項目１６３から１７４のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７６）
前記増強された骨形成潜在能が、処置された哺乳動物骨髄細胞を移植した後の骨欠損部位における新たな骨成長レベルを含む、項目１７５に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７７）
前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較される、項目１７６に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７８）
移植された処置哺乳動物骨髄細胞の前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較して、約１％〜約２０％または約５％〜約１２％の間である、項目１７６または１７７に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１７９）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目１６３から１７８のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８０）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目１７９に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８１）
前記付着骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目１８０に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８２）
前記付着骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目１８０に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８３）
前記哺乳動物骨髄細胞が、自家骨髄細胞である、項目１６３から１８２のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８４）
前記自家骨髄細胞が、大腿骨、脛骨、および／または腸骨稜から採取される、項目１８３に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８５）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目１８３または１８４に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８６）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目１８５に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８７）
前記自家骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目１８６に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８８）
前記自家骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目１８６に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１８９）
前記単離哺乳動物骨髄細胞が、同種骨髄細胞である、項目１６３から１８２のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９０）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目１８９に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９１）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目１９０に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９２）
前記同種骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目１９１に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９３）
前記同種骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目１９１に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９４）
前記哺乳動物骨髄細胞が、齧歯動物骨髄細胞である、項目１６３から１９３のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９５）
前記齧歯動物骨髄細胞が、１０カ月齢より老齢の齧歯動物から採取される、項目１９４に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９６）
前記哺乳動物骨髄細胞が、ヒト骨髄細胞である、項目１６３から１９３のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９７）
前記ヒト骨髄細胞が、３５歳またはこれより老齢の被験体から採取される、項目１９６に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９８）
リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置後の前記ヒト骨髄細胞が、３５歳より若齢の被験体において観察されるバイオマーカー発現レベルを呈示する、項目１９６または１９７に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目１９９）
前記リポソームＷｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームの水溶液とを含む、項目１６３から１９８のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２００）
前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する、項目１９９に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０１）
前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である、項目１９９または２００に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０２）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドである、項目１９９に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０３）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目２０２に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０４）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目２０２に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０５）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目２０２から２０４のいずれか一項に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０６）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ５ａポリペプチドまたはＷｎｔ１０ｂポリペプチドである、項目１９９に記載の哺乳動物骨髄組成物。
（項目２０７）
被験体における骨欠損を処置する方法であって、
ａ）哺乳動物骨髄細胞を含む試料を、ｅｘ  ｖｉｖｏで、リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドと接触させるステップと；
ｂ）前記試料を洗浄して、遊離リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドを除去するステップと；
ｃ）前記リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドで処置された骨移植片材料を骨欠損部位に移植するステップと
を含む方法。
（項目２０８）
接触させる温度が、約０℃〜約３７℃、または約２０℃〜約２５℃の間である、項目２０７に記載の方法。
（項目２０９）
接触させる時間が、約３０分間〜約４時間の間である、項目２０７に記載の方法。
（項目２１０）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して増強されたＲｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｒｉｘ、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ、Ｉ型コラーゲン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４からなる群から選択されるバイオマーカーのうちの１または複数の発現レベルを有する、項目２０７に記載の方法。
（項目２１１）
前記バイオマーカーが、オステオカルシン、オステオポンチン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４から選択される、項目２０７に記載の方法。
（項目２１２）
前記バイオマーカーが、オステオカルシンおよびオステオポンチンから選択される、項目２０７に記載の方法。
（項目２１３）
前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、約２％〜約２０％または約４％〜約１０％の間である、項目２０７または２１０から２１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１４）
リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、ＳＯＸ９およびＰＰＡＲγから選択されるバイオマーカーの低下した発現レベルをさらに有する、項目２０７または２１０から２１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１５）
前記哺乳動物骨髄細胞内の前記低下した発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される、項目２１４に記載の方法。
（項目２１６）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較したアポトーシスレベルの低下をさらに含む、項目２０７または２１０から２１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１７）
アポトーシスレベルの前記低下が、約５０％である、項目２１６に記載の方法。
（項目２１８）
前記哺乳動物骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して増強された骨形成潜在能を含む、項目２０７または２１０から２１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１９）
前記増強された骨形成潜在能が、処置された哺乳動物骨髄細胞を移植した後の骨欠損部位における新たな骨成長レベルを含む、項目２１８に記載の方法。
（項目２２０）
前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較される、項目２１９に記載の方法。
（項目２２１）
移植された処置哺乳動物骨髄細胞の前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較して、約１％〜約２０％または約５％〜約１２％の間である、項目２１９または２２０に記載の方法。
（項目２２２）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目２０７から２２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２３）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目２２２に記載の方法。
（項目２２４）
前記付着骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目２２３に記載の方法。
（項目２２５）
前記付着骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目２２３に記載の方法。
（項目２２６）
前記哺乳動物骨髄細胞が、自家骨髄細胞である、項目２０７から２２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２７）
前記自家骨髄細胞が、大腿骨、脛骨、および／または腸骨稜から採取される、項目２２６に記載の方法。
（項目２２８）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目２２６または２２７に記載の方法。
（項目２２９）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目２２８に記載の方法。
（項目２３０）
前記自家骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目２２９に記載の方法。
（項目２３１）
前記自家骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目２２９に記載の方法。
（項目２３２）
前記単離哺乳動物骨髄細胞が、同種骨髄細胞である、項目２０７から２２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３３）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目２３２に記載の方法。
（項目２３４）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目２３３に記載の方法。
（項目２３５）
前記同種骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目２３４に記載の方法。
（項目２３６）
前記同種骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目２３４に記載の方法。
（項目２３７）
前記哺乳動物骨髄細胞が、齧歯動物骨髄細胞である、項目２０７から２３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３８）
前記齧歯動物骨髄細胞が、１０カ月齢より老齢の齧歯動物から採取される、項目２３７に記載の方法。
（項目２３９）
前記哺乳動物骨髄細胞が、ヒト骨髄細胞である、項目２０７から２３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４０）
前記ヒト骨髄細胞が、３５歳またはこれより老齢の被験体から採取される、項目２３９に記載の方法。
（項目２４１）
リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドによる処置後の前記ヒト骨髄細胞が、３５歳より若齢のヒト被験体において観察されるバイオマーカー発現レベルを呈示する、項目２３９または２４０に記載の方法。
（項目２４２）
前記リポソームＷｎｔ３ａポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａポリペプチドと、リポソームの水溶液とを含む、項目２０７から２４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４３）
前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する、項目２４２に記載の方法。
（項目２４４）
前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である、項目２４２または２４３に記載の方法。
（項目２４５）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目２４２に記載の方法。
（項目２４６）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目２４２に記載の方法。
（項目２４７）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目２４２、２４５または２４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４８）
被験体における骨欠損を処置する方法であって、
ａ）哺乳動物骨髄細胞を含む試料を、ｅｘ  ｖｉｖｏで、リポソームＷｎｔポリペプチドと接触させるステップと；
ｂ）前記試料を洗浄して、遊離リポソームＷｎｔポリペプチドを除去するステップと；
ｃ）前記リポソームＷｎｔポリペプチドで処置された骨移植片材料を骨欠損部位に移植するステップと
を含む方法。
（項目２４９）
接触させる温度が、約０℃〜約３７℃、または約２０℃〜約２５℃の間である、項目２４８に記載の方法。
（項目２５０）
接触させる時間が約３０分間〜約４時間の間である、項目２４８に記載の方法。
（項目２５１）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｒｉｘ、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ、Ｉ型コラーゲン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４からなる群から選択されるバイオマーカーのうちの１または複数の増強された発現レベルを有する、項目２４８に記載の方法。
（項目２５２）
前記バイオマーカーが、オステオカルシン、オステオポンチン、Ａｘｉｎ２、Ｌｅｆ１、およびＴｃｆ４から選択される、項目２４８に記載の方法。
（項目２５３）
前記バイオマーカーが、オステオカルシンおよびオステオポンチンから選択される、項目２４８に記載の方法。
（項目２５４）
前記増強された発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して、約２％〜約２０％または約４％〜約１０％の間である、項目２４８または２５１から２５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５５）
リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置の後で、前記哺乳動物骨髄細胞が、ＳＯＸ９およびＰＰＡＲγから選択されるバイオマーカーの低下した発現レベルを、さらに有する、項目２４８または２５１から２５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５６）
前記哺乳動物骨髄細胞内の前記低下した発現レベルが、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較される、項目２５５に記載の方法。
（項目２５７）
前記骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較したアポトーシスレベルの低下をさらに含む、項目２４８または２５１から２５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５８）
アポトーシスレベルの前記低下が、約５０％である、項目２５７に記載の方法。
（項目２５９）
前記哺乳動物骨髄細胞が、非処置哺乳動物骨髄細胞と比較して増強された骨形成潜在能を含む、項目２４８または２５１から２５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６０）
前記増強された骨形成潜在能が、処置された哺乳動物骨髄細胞を移植した後の骨欠損部位における新たな骨成長レベルを含む、項目２５９に記載の方法。
（項目２６１）
前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較される、項目２６０に記載の方法。
（項目２６２）
移植された処置哺乳動物骨髄細胞の前記新たな骨成長レベルが、移植された非処置哺乳動物骨髄細胞の新たな骨成長レベルと比較して、約１％〜約２０％または約５％〜約１２％の間である、項目２６０または２６１に記載の方法。
（項目２６３）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目２４８から２６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６４）
前記哺乳動物骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目２６３に記載の方法。
（項目２６５）
前記付着骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目２６４に記載の方法。
（項目２６６）
前記付着骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目２６４に記載の方法。
（項目２６７）
前記哺乳動物骨髄細胞が、自家骨髄細胞である、項目２４８から２６６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６８）
前記自家骨髄細胞が、大腿骨、脛骨、および／または腸骨稜から採取される、項目２６７に記載の方法。
（項目２６９）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目２６７から２６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７０）
前記自家骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目２６９に記載の方法。
（項目２７１）
前記自家骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目２７０に記載の方法。
（項目２７２）
前記自家骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目２７０に記載の方法。
（項目２７３）
前記単離哺乳動物骨髄細胞が、同種骨髄細胞である、項目２４８から２６６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７４）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞および非付着骨髄細胞を含む、項目２７３に記載の方法。
（項目２７５）
前記同種骨髄細胞が、付着骨髄細胞である、項目２７４に記載の方法。
（項目２７６）
前記同種骨髄細胞が、骨髄幹細胞および骨髄前駆細胞を含む、項目２７５に記載の方法。
（項目２７７）
前記同種骨髄細胞が、骨髄間質細胞を含む、項目２７５に記載の方法。
（項目２７８）
前記哺乳動物骨髄細胞が、齧歯動物骨髄細胞である、項目２４８から２７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７９）
前記齧歯動物骨髄細胞が、１０カ月齢より老齢の齧歯動物から採取される、項目２７８に記載の方法。
（項目２８０）
前記哺乳動物骨髄細胞が、ヒト骨髄細胞である、項目２４８から２７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８１）
前記ヒト骨髄細胞が、３５歳またはこれより老齢の被験体から採取される、項目２８０に記載の方法。
（項目２８２）
リポソームＷｎｔポリペプチドによる処置後の前記ヒト骨髄細胞が、３５歳より若齢の被験体において観察されるバイオマーカー発現レベルを呈示する、項目２８０または２８１に記載の方法。
（項目２８３）
前記リポソームＷｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔポリペプチドと、リポソームの水溶液とを含む、項目２４８から２８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８４）
前記リポソームを構成するリン脂質が、約１０℃〜約２５℃の相転移温度を有する、項目２８３に記載の方法。
（項目２８５）
前記リポソームを構成するリン脂質の尾部炭素の長さが、炭素約１２個〜炭素約１４個の間である、項目２８３または２８４に記載の方法。
（項目２８６）
前記ＷｎｔポリペプチドがＷｎｔ３ａポリペプチドである、項目２８３に記載の方法。
（項目２８７）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対する、少なくとも、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％の配列同一性を含む、項目２８６に記載の方法。
（項目２８８）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、項目２８６に記載の方法。
（項目２８９）
前記Ｗｎｔ３ａポリペプチドが、配列番号１に示されるアミノ酸残基２０９に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されており、配列番号１に示されるアミノ酸残基７７に対応するアミノ酸位置において脂質修飾されていない、項目２８６から２８８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９０）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ５ａポリペプチドまたはＷｎｔ１０ｂポリペプチドである、項目２８３に記載の方法。
（項目２９１）
項目２３から４５に記載のリポソームＷｎｔポリペプチドを含む骨移植片材料を作製するためのキット。
（項目２９２）
項目１から２２に記載のリポソームＷｎｔ３ａポリペプチドを含む骨移植片材料を作製するためのキット。
（項目２９３）
項目１２７から１６２に記載の単離された増強哺乳動物骨髄細胞の組成物を含む骨移植片材料を作製するためのキット。