【手続補正書】
【提出日】平成28年12月21日(2016.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ ＩＤＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片であって、前記変異体又は断片の配列が、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とし、前記変異体又は断片がｅＮＯＳの活性及び／又はＮＯの産生を増大させる活性を有する、前記変異体又は断片を含む医薬組成物であって、（ｉ）動脈性高血圧（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、炎症性疾患、及び静脈不全から選択される病状の予防、リスクの低減、改善若しくは処置における；又は（ｉｉ）筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善のための、若しくは血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤としての、使用のための前記医薬組成物。
【請求項２】
ＳＥＱ ＩＤＮＯ： １のアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片を特定の臓器又は組織を標的とさせるのに有用な配列と連結した、請求項１又は２に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片のアミノ酸配列から成る配列を有するタンパク質を含む、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片であって、前記変異体又は断片の配列が、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とし、前記変異体又は断片がｅＮＯＳの活性及び／又はＮＯの産生を増大させる活性を有する、前記変異体又は断片のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む医薬組成物であって、（ｉ）動脈性高血圧（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、炎症性疾患、及び静脈不全から選択される病状の予防、リスクの低減、改善若しくは処置における；又は（ｉｉ）筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善のための、若しくは血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤としての、使用のための前記医薬組成物。
【請求項５】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片であって、前記変異体又は断片の配列が、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とし、前記変異体又は断片がｅＮＯＳの活性及び／又はＮＯの産生を増大させる活性を有する、前記変異体又は断片のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドであって、機能可能なように発現制御配列に連結された前記ポリヌクレオチドを含むベクターを含む医薬組成物。
【請求項６】
ＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列を有する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片が、ＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片を特定の臓器又は組織を標的とさせるのに有用な配列と連結した、請求項５又は６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ベクターが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のバリン２２９、トレオニン２８１、フェニルアラニン４８８及びトレオニン４９４をコードするヌクレオチドを含むＳＥＱＩＤ ＮＯ： ２のヌクレオチド配列又はその断片を含むポリヌクレオチドを含む、請求項５〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ベクターが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ベクターがウイルスベクターである、請求項５〜９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ベクターがアデノウイルスベクターである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ベクターがＡＡＶ血清型１−９ベクターから選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
請求項５〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、（ｉ）動脈性高血圧（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、炎症性疾患、及び静脈不全から選択される病状の予防、リスクの低減、改善又は処置における；又は（ｉｉ）筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善のための、若しくは血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤としての、使用のための前記医薬組成物。
【請求項１４】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片の使用であって、前記変異体又は断片の配列が、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とし、そして前記変異体又は断片がｅＮＯＳの活性及び／又はＮＯの産生を増大させる活性を有する、（ｉ）動脈性高血圧（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、炎症性疾患、及び静脈不全から選択される病状の予防、リスクの低減、改善若しくは処置；又は（ｉｉ）筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善、若しくは血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤として、のための医薬品の製造における、前記タンパク質変異体又はその断片の使用。
【請求項１５】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片をコードするポリヌクレオチドの使用であって、前記変異体又は断片の配列が、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とし、そして前記変異体又は断片がｅＮＯＳの活性及び／又はＮＯの産生を増大させる活性を有する、（ｉ）動脈性高血圧（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、炎症性疾患、及び静脈不全から選択される病状の予防、リスクの低減、改善若しくは処置；又は（ｉｉ）筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善、若しくは血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤として、のための医薬品の製造における、前記タンパク質変異体又はその断片をコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項１６】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターの使用であって、前記変異体又は断片の配列が、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とし、そして前記変異体又は断片がｅＮＯＳの活性及び／又はＮＯの産生を増大させる活性を有する、（ｉ）動脈性高血圧（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、炎症性疾患、及び静脈不全から選択される病状の予防、リスクの低減、改善若しくは処置；又は（ｉｉ）筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善、若しくは血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤として、のための医薬品の製造における、前記タンパク質変異体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターの使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
図９、パネルｂ及びｃに示されるように、ＩＮＦＴ ｈＢＰＩＦＢ４を過剰発現している細胞と比較して、ＶＴＦＴ ｈＢＰＩＦＢ４を発現しているＨＥＫ２９３Ｔ細胞において、Ｈ２Ｏ２への曝露の直後にｅＮＯＳがより活性化された状態となった。この結果は、生体外での血管の灌流でｅＮＯＳの活性化について得られた結果を補強した。
本明細書は以下の発明の開示を包含する：
［１］ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性のあるアミノ酸配列を有するＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体であって、前記配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置のバリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置のトレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置のトレオニン、を含むことを特徴とする、前記変異体。
［２］ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸配列を有する、［１］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体。
［３］本発明のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体を同定するために、又は、本発明のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体を特定の臓器若しくは組織を標的とさせるのに有用な配列と連結した、ＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体のアミノ酸配列から成る配列を有する、［１］又は［２］に記載のタンパク質。
［４］キメラタンパク質である、［３］に記載のタンパク質。
［５］［１］又は［２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体の断片であって、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １の２２９の位置に相当する位置の前記バリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２８１の位置に相当する位置の前記トレオニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の４８８の位置に相当する位置のフェニルアラニン及びＳＥＱ ＩＤＮＯ： １の４９４の位置に相当する位置の前記トレオニンを含む配列を有する、前記断片。
［６］［１］若しくは［２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、［３］若しくは［４］に記載のタンパク質、又は［５］に記載の断片のアミノ酸配列、をコードするポリヌクレオチド。
［７］［６］に記載のポリヌクレオチドであって、ＳＥＱＩＤ ＮＯ： １のバリン２２９、トレオニン２８１、フェニルアラニン４８８及びトレオニン４９４をコードするヌクレオチドを含む、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２のヌクレオチド配列又はその断片を含む、前記ポリヌクレオチド。
［８］ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド。
［９］発現制御配列に機能可能なように連結された［６］〜［８］に記載のポリヌクレオチドを包含するベクター。
［１０］ウイルスベクターである、［９］に記載のベクター。
［１１］治療における使用のための、［１］若しくは［２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、［３］若しくは［４］に記載のタンパク質、［５］に記載の断片、［６］〜［８］に記載のポリヌクレオチド又は［９］若しくは［１０］に記載のベクター。
［１２］内皮細胞からの生理学的レベルより低いＮＯの放出若しくはｅＮＯＳの活性の減少が原因の内皮機能不全の処置における、又はｅＮＯＳの活性の増大を得ることが有益である臨床的症状における、使用のための、［１１］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、タンパク質、断片、ポリヌクレオチド又はベクター。
［１３］動脈性高血圧（症）、アテローム性動脈硬化（症）、（真正）糖尿病、脂質異常症、腎不全、メタボリック・シンドローム、脳卒中、心筋梗塞（症）、勃起機能不全、神経変性病、多発性硬化（症）、認知障害、網膜変性、ぶどう膜網膜炎、血管性網膜症、白内障、緑内障、冠攣縮性狭心症、血栓症、肺高血圧症、子癇前症、脈管炎、癌、炎症性疾患、静脈不全、ｅＮＯＳの活性及びＮＯの産生が減少する遺伝病、ＭＴＨＦＲ遺伝子の変異から選択される病状の予防、リスクの低減、改善又は処置における使用のための、［１１］又は［１２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、タンパク質、断片、ポリヌクレオチド又はベクター。
［１４］筋ジストロフィーにおける運動後の疲労の改善のための、及び血管閉塞のための一つ以上のステントの移植における補助剤としての、使用のための、［１１］又は［１２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、タンパク質、断片、ポリヌクレオチド又はベクター。
［１５］［９］又は［１０］に記載のベクターでトランスフェクトされた宿主細胞。
［１６］変異体のＢＰＩＦＢ４タンパク質、タンパク質又は断片の発現をさせる条件下、［１５］の宿主細胞を培養し、前記ＢＰＩＦＢ４タンパク質、タンパク質又は断片を回収することを含む、［１］、［２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、［３］若しくは［４］に記載のタンパク質又は［５］に記載の断片、を組み換え技術によって製造する方法。
［１７］医薬的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と混合された、［１］若しくは［２］に記載のＢＰＩＦＢ４タンパク質変異体、［３］若しくは［４］に記載のタンパク質、［５］に記載の断片又は［９］若しくは［１０］に記載のベクター、を含む医薬組成物。