【手続補正書】
【提出日】平成29年6月5日(2017.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的核酸を含むＤＮＡに相補的である１種類以上のＲＮＡをコードする第１外来核酸を細胞に導入すること、
前記ＤＮＡに結合し且つ前記１種類以上のＲＮＡによってガイドされるヌクレアーゼ欠損（ｎｕｃｌｅａｓｅ−ｎｕｌｌ）Ｃａｓ９タンパク質をコードする第２外来核酸を前記細胞に導入すること、
転写制御因子タンパク質またはドメインをコードする第３外来核酸を前記細胞に導入することを含み、
前記１種類以上のＲＮＡ、前記ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質および前記転写制御因子タンパク質またはドメインが発現し、前記１種類以上のＲＮＡ、前記ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質および前記転写制御因子タンパク質またはドメインが前記ＤＮＡに共局在し、前記転写制御因子タンパク質またはドメインが前記標的核酸の発現を制御する、
細胞において標的核酸の発現を制御する方法。
【請求項２】
ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質をコードする前記第２外来核酸が、前記ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質に融合した前記転写制御因子タンパク質またはドメインをさらにコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１種類以上のＲＮＡをコードする前記第１外来核酸が、ＲＮＡ結合ドメインの標的をさらにコードし、
前記転写制御因子タンパク質またはドメインをコードする前記第３外来核酸が、前記転写制御因子タンパク質またはドメインに融合したＲＮＡ結合ドメインをさらにコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞が真核細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が酵母細胞、植物細胞、または動物細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記１種類以上のＲＮＡが１０ヌクレオチド〜５００ヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記１種類以上のＲＮＡが２０ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記転写制御因子タンパク質またはドメインが転写活性化因子である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記転写制御因子タンパク質またはドメインが前記標的核酸の発現を上方制御する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記転写制御因子タンパク質またはドメインが、疾患または有害な健康状態を治療するために前記標的核酸の発現を上方制御する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記標的核酸が疾患または有害な健康状態と関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記１種類以上のＲＮＡがガイドＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記１種類以上のＲＮＡがｔｒａｃｒＲＮＡ‐ｃｒＲＮＡ融合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＤＮＡがゲノムＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、または外来性ＤＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
それぞれがＤＮＡ標的核酸中の隣り合う部位に相補的である２種類以上のＲＮＡをコードする第１外来核酸を細胞に導入すること、
１つの不活性型ヌクレアーゼドメインを有し且つ前記２種類以上のＲＮＡによってガイドされる少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼをコードする第２外来核酸を前記細胞に導入することを含み、
前記２種類以上のＲＮＡおよび前記少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼが発現し、前記少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼが前記２種類以上のＲＮＡと共に前記ＤＮＡ標的核酸に共局在し、前記ＤＮＡ標的核酸にニックを入れて２つ以上の隣接するニックを生じさせる、
細胞内でＤＮＡ標的核酸を改変させる方法。
【請求項１６】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの同じストランド上に存在する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの同じストランド上に存在して相同組換えを引き起こす、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在して二本鎖切断を生じさせる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在し、二本鎖切断を生じさせて非相同末端結合を引き起こす、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在し、且つ、その位置が互いにずれている、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在し、且つ、その位置が互いにずれており、且つ、二本鎖切断を生じさせる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在し、且つ、その位置が互いにずれており、且つ、二本鎖切断を生じさせて非相同末端結合を引き起こす、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
ドナー核酸配列をコードする第３外来核酸を前記細胞に導入することをさらに含み、前記２つ以上の隣接するニックにより前記標的核酸の前記ドナー核酸配列との相同組換えが引き起こされる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
標的核酸を含むＤＮＡに相補的である１種類以上のＲＮＡをコードする第１外来核酸、
ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質をコードする第２外来核酸、および
転写制御因子タンパク質またはドメインをコードする第３外来核酸を含み、
前記１種類以上のＲＮＡ、前記ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質、および前記転写制御因子タンパク質またはドメインが、前記標的核酸に対する共局在複合体の構成要素である、細胞。
【請求項２６】
前記ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質をコードする前記第２外来核酸が、前記ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９タンパク質に融合した前記転写制御因子タンパク質またはドメインをさらにコードする、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２７】
前記１種類以上のＲＮＡをコードする前記第１外来核酸がＲＮＡ結合ドメインの標的をさらにコードし、
前記転写制御因子タンパク質またはドメインをコードする前記第３外来核酸が、前記転写制御因子タンパク質またはドメインに融合したＲＮＡ結合ドメインをさらにコードする、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２８】
前記細胞が真核細胞である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２９】
前記転写制御因子タンパク質またはドメインが転写活性化因子である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項３０】
前記転写制御因子タンパク質またはドメインが、疾患または有害な健康状態を治療するために前記標的核酸の発現を上方制御する、請求項２５に記載の細胞。
【請求項３１】
前記１種類以上のＲＮＡがガイドＲＮＡである、請求項２５に記載の細胞。
【請求項３２】
前記１種類以上のＲＮＡがｔｒａｃｒＲＮＡ‐ｃｒＲＮＡ融合体である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項３３】
前記ＤＮＡがゲノムＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、または外来性ＤＮＡである、請求項２５に記載の細胞。
【請求項３４】
それぞれがＤＮＡ標的核酸中の隣り合う部位に相補的である２種類以上のＲＮＡをコードする第１外来核酸、および
１つの不活性型ヌクレアーゼドメインを有する少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼをコードする第２外来核酸を含み、
前記２種類以上のＲＮＡおよび前記少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼが、前記ＤＮＡ標的核酸に対する共局在複合体の構成要素である、細胞。
【請求項３５】
前記細胞が真核細胞である、請求項３４に記載の細胞。
【請求項３６】
前記２種類以上のＲＮＡがガイドＲＮＡである、請求項３４に記載の細胞。
【請求項３７】
前記２種類以上のＲＮＡがｔｒａｃｒＲＮＡ‐ｃｒＲＮＡ融合体である、請求項３４に記載の細胞。
【請求項３８】
前記ＤＮＡ標的核酸がゲノムＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、または外来性ＤＮＡである、請求項３４に記載の細胞。
【請求項３９】
それぞれがＤＮＡ標的核酸中の隣り合う部位に相補的である２種類以上のＲＮＡをコードする第１外来核酸を細胞に導入すること、
１つの不活性型ヌクレアーゼドメインを有し且つ前記２種類以上のＲＮＡによってガイドされる少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼをコードする第２外来核酸を前記細胞に導入することを含み、
前記２種類以上のＲＮＡおよび前記少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼが発現し、前記少なくとも１種類のＣａｓ９タンパク質ニッカーゼが前記２種類以上のＲＮＡと共に前記ＤＮＡ標的核酸に共局在し、前記ＤＮＡ標的核酸にニックを入れて２つ以上の隣接するニックを生じさせ、
前記２つ以上の隣接するニックが二本鎖ＤＮＡの異なるストランド上に存在し、二本鎖切断を生じさせて前記標的核酸の断片化を引き起こすことによって前記標的核酸の発現を妨げる、細胞内でＤＮＡ標的核酸を改変させる方法。