【手続補正書】
【提出日】平成29年2月17日(2017.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スーパー抗原クロマトグラフィーによって、少なくとも一つの混入物を含む溶液からタンパク質を精製するための方法であって、a）固体支持体に固定化されたスーパー抗原にタンパク質を吸着させるステップ、b）吸着されたタンパク質を含む固定化されたスーパー抗原を、脂肪族カルボキシレートを含む第一の洗浄バッファーと接触させることによって、少なくとも一つの混入物を除去するステップであって、脂肪族カルボキシレートが6〜12の炭素骨格を含む前記ステップ、及びc）固体支持体に固定化されたスーパー抗原からタンパク質を溶出させるステップを含む、前記方法。
【請求項２】
スーパー抗原が、プロテインA、プロテインG、及びプロテインLからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脂肪族カルボキシレートが、カプロエート、ヘプタノエート、カプリレート、デカノエート、及びドデカノエートからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
脂肪族カルボキシレートの供給源が、脂肪族カルボン酸、脂肪族カルボン酸のナトリウム塩、脂肪族カルボン酸のカリウム塩からなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
洗浄バッファーが、ナトリウムカプリレート、ナトリウムデカノエート、又はナトリウムドデカノエートを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
洗浄バッファーが、約10 mM〜約125 mMのナトリウムカプリレート、約1 mM〜約30 mMのナトリウムデカノエート、又は約1 mM〜約30 mMのナトリウムドデカノエートを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
洗浄バッファーが、約100 mMのナトリウムカプリレート、約20 mMのナトリウムデカノエート、又は約20 mMのナトリウムドデカノエートを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
洗浄バッファーが、さらに約100 mM〜約400 mMの酢酸ナトリウムを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
洗浄バッファーが、約300 mMの酢酸ナトリウムを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも一つの混入物が、宿主細胞タンパク質又は宿主細胞DNAである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
宿主細胞が、CHO細胞、NS0細胞、Sp2/0細胞、COS細胞、K562細胞、BHK細胞、PER.C6細胞、及びHEK細胞からなる群より選択される哺乳動物細胞である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
宿主細胞が、E.coli、真菌細胞又は酵母細胞からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
固体支持体が、アガロース、ポリメタクリレート、架橋ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、及びアガロースとデキストランの表面増量剤からなる群より選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
タンパク質が、可溶性受容体、抗体、抗体断片、免疫グロブリン単一可変ドメイン、Fab、F(ab')2、Fv、ジスルフィド結合Fv、scFv、閉鎖コンフォメーションの多重特異性抗体、ジスルフィド結合scFv、又は二重特異性抗体からなる群より選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
溶液が細胞培養濾液である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ステップc）後の宿主細胞タンパク質の相対的低減倍数が、約2〜約10倍である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ステップc）後の宿主細胞タンパク質の相対的低減倍数が、約5倍である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ステップc）後のDNAの相対的低減倍数が、約2倍〜約150倍である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ステップc）後のDNAの相対的低減倍数が、約100倍である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ステップc）後の宿主細胞タンパク質又はDNAの量が、約5000 ppm、4000 ppm、3000 ppm、2,500 ppm、2000 ppm、1500 ppm、1000 ppm、約900 ppm、約800 ppm、約700 ppm、約600 ppm、約500 ppm、約400 ppm、約300 ppm、約200 ppm、約100 ppm、約90 ppm、約80 ppm、約70 ppm、約60 ppm、又は約50 ppm未満である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ステップc）後にタンパク質がいずれかのさらなるアフィニティークロマトグラフィーに供されない、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
洗浄バッファーが、有機酸、アルカリ金属、又は有機酸の共役塩基のアンモニウム塩、及び有機塩基をさらに含み、洗浄バッファーがNaClの添加なしに作られる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
有機酸が、ギ酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイン酸、グリシン、グリシルクリシン（glycylclycine）、コハク酸、TES（2-[[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]アミノ]）エタンスルホン酸）、MOPS（3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸）、PIPES（ピペラジン-N,N'-ビス(2-エタンスルホン酸)）、及びMES（2-(N-モルホリノ) エタンスルホン酸）からなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
有機塩基が、トリス塩基、ビス-トリス、ビス-トリス-プロパン、ビシン（N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシン）、HEPES（4-2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジンエタンスルホン酸）、TAPS（3-[[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]アミノ]プロパンエタンスルホン酸）、及びトリシン（N-トリス(ヒドロキシメチル)メチルグリシン）からなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
有機酸の共役塩基が、有機酸の共役塩基のナトリウム、カリウム、又はアンモニウム塩である、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
有機酸が酢酸である、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
有機塩基がトリス塩基である、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
有機酸が酢酸であり、酢酸の共役塩基がナトリウム塩である、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
プロテインAクロマトグラフィーによって、混入したタンパク質の溶液からタンパク質を精製するための方法であって、
（a）固相に固定化されたプロテインAを、プロテインA平衡化バッファーにより平衡化するステップ、
（b）タンパク質を、混入した溶液から固相に固定化されたプロテインAに吸着させるステップ、
（c）固相を、約50 mM〜約55 mMのトリス塩基、約45 mM〜約55 mMの酢酸、少なくとも一つの脂肪族カルボキシレートを含み、約pH 7.2〜約8.0の第一のプロテインA洗浄バッファーによって洗浄することによって少なくとも一つの混入物を除去するステップであって、脂肪族カルボキシレートが、約100 mMのナトリウムカプリレート、約20 mMのナトリウムデカノエート、及び約20 mMのナトリウムドデカノエートからなる群より選択される前記ステップ、並びに
（d）プロテインA溶出バッファーにより固相からタンパク質を回収するステップ
を含み、全てのバッファーが、NaClの添加なしに作られる、前記方法。
【請求項３０】
平衡化バッファーが、約50 mM〜約55 mMのトリス塩基、約45 mM〜約50 mMの酢酸を含み、約pH 7.2であり、溶出バッファーが1.8mMの酢酸ナトリウム及び約28.2 mM〜約300 mMの酢酸を含み、約pH 2.4〜約pH 3.6である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ステップ（c）の後及びステップ（d）の前に以下のステップ：固相を、約50〜55 mMのトリス塩基、約45〜50 mMの酢酸を含み、約pH 7.2の第二のプロテインA洗浄バッファーによって洗浄することによって混入物を除去するステップであって、第二のプロテインA洗浄バッファーがNaClの添加なしに作られるステップをさらに含む、請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３２】
ステップ（d）の後に以下のステップ：（e）回収されたタンパク質を含む溶液を、30 mMの酢酸、100 mMのHClにより、約pH3.0に用量設定するステップ、（f）ステップ（e）の溶液を約pH3.0に約30〜約60分保つステップ、及び（g）ステップ（ｆ）の溶液のpHを、1Mトリスにより約pH7.5に調整する前記ステップをさらに含む、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ステップ（g）により生産される溶液を濾過するステップをさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
プロテインLクロマトグラフィーによって、混入したタンパク質の溶液からタンパク質を精製するための方法であって、
（a）固相に固定化されたプロテインLを、プロテインL平衡化バッファーにより平衡化するステップ、
（b）タンパク質を、混入した溶液から固相に固定化されたプロテインLに吸着させるステップ、
（c）固相を、約50 mM〜約55 mMのトリス塩基、約45 mM〜約50 mMの酢酸、少なくとも一つの脂肪族カルボキシレートを含み、約pH 7.5の第一のプロテインL洗浄バッファーによって洗浄することによって少なくとも一つの混入物を除去するステップであって、脂肪族カルボキシレートが、約100 mMのナトリウムカプリレート、約20 mMのナトリウムデカノエート、及び約20 mMのナトリウムドデカノエートからなる群より選択される、前記ステップ、並びに
（d）プロテインL溶出バッファーにより固相からタンパク質を回収するステップ
を含み、全てのバッファーが、NaClの添加なしに作られる、前記方法。
【請求項３５】
平衡化バッファーが、約50 mM〜約55 mMのトリス塩基、約45 mM〜約50 mMの酢酸を含み、約pH 7.2であり、溶出バッファーが、約1.8 mMの酢酸ナトリウム、約28.2 mM〜約300 mMの酢酸を含み、約pH 2.4〜約pH 3.6である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ステップ（c）の後及びステップ（d）の前に以下のステップ：固相を、約55 mMのトリス塩基、約45 mMの酢酸を含み、約pH 7.2の第二のプロテインL洗浄バッファーによって洗浄することによって混入物を除去するステップであって、第二のプロテインL洗浄バッファーがNaClの添加なしに作られるステップをさらに含む、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
ステップ（d）の後に以下のステップ：（e）回収されたタンパク質を含む溶液を、30 mMの酢酸、100 mMのHClにより、約pH3.0に用量設定するステップ、（f）ステップ（e）の溶液を約pH3.0に約30〜約60分保つステップ、及び（g）ステップ（ｆ）の溶液のpHを、1Mトリスにより約pH7.5に調整するステップをさらに含む、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ステップ（g）により生産される溶液を濾過するステップをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
プロテインA又はプロテインL洗浄バッファーが、約1 mM〜約500 mMの酢酸ナトリウムをさらに含む、請求項２９又は３４に記載の方法。
【請求項４０】
プロテインA又はプロテインL洗浄バッファーが、約300 mMの酢酸ナトリウムをさらに含む、請求項３９に記載の方法。