【手続補正書】
【提出日】平成29年3月6日(2017.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤であって、
ここで、前記融合タンパク質の各々が、Ｎ末端からＣ末端に向けて、
（ｉ）腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、
（ｉｉ）免疫エフェクター細胞上に存在する抗原に結合する第２の抗体コンポーネントと、
（ｉｉｉ）ヒト肝細胞核内因子−１アルファ（ＨＮＦ−１α）エレメントを含む二量体化コンポーネントとを含み、
ここで、前記融合タンパク質は、前記二量体化コンポーネントを通して二量体化して、ホモ二量体を形成することができる、
二重特異性結合剤。
【請求項２】
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、請求項１に記載の結合剤。
【請求項３】
前記免疫エフェクター細胞上に存在する抗原がＣＤ３である、請求項１に記載の結合剤。
【請求項４】
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結合剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項６】
Ｎ末端からＣ末端に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上に存在する抗原に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒト肝細胞核内因子−１アルファ（ＨＮＦ−１α）エレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む融合タンパク質。
【請求項７】
前記ＨＮＦ−１αエレメントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
前記第１の抗体コンポーネント及び前記第２の抗体コンポーネントがｓｃＦｖである、請求項６または７に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
前記第１のｓｃＦＶが腫瘍抗原に結合し前記第２のｓｃＦｖがＴ細胞上に存在する抗原に結合する、請求項８に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
前記Ｔ細胞上に存在する抗原がＣＤ３である、請求項９または１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
請求項１１に記載の融合タンパク質２つから構成される二量体型二重特異性結合剤。
【請求項１３】
請求項１２に記載の二量体型二重特異性結合剤と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項６〜１１のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする核酸配列。
【請求項１５】
請求項１４に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項１６】
請求項１５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１７】
細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞から成る群より選択される、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞、Ｓｆ９細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ細胞から成る群より選択される、請求項１７に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
二量体型二重特異性結合剤の生産方法であって、前記二量体型二重特異性結合剤の発現に好適な条件下で請求項１８に記載の宿主細胞を培養することと、前記二量体型二重特異性結合剤を回収することとを含む方法。
【請求項２０】
第１の抗体コンポーネント及び第２の抗体コンポーネントを含む二重特異性抗体薬を含む高親和性二重特異性抗体組成物を提供する方法であって、前記方法は、抗体コンポーネント−二量体化コンポーネント融合物がホモ二量体を形成できるように、そのような第１の抗体コンポーネント及び第２の抗体コンポーネントのうちの少なくとも１つをヒトＨＮＦ−１α二量体化エレメントから構成される二量体化コンポーネントを有する融合物として提供することを含む、方法。
【請求項２１】
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
腫瘍細胞を死滅させるための組成物であって、二重特異性結合剤が二量体化してホモ二量体を形成できるように、それぞれがＮ末端からＣ末端に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αエレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤を含み、前記二重特異性結合剤は前記ホモ二量体が結合したＴ細胞が腫瘍細胞の死滅を媒介するのに十分な条件下及び時間で前記腫瘍細胞と接触させられることを特徴とする、組成物。
【請求項２３】
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記第１の抗体コンポーネント及び前記第２の抗体コンポーネントがｓｃＦｖである、請求項２２または２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
腫瘍の増殖を阻害するための組成物であって、二重特異性抗体が二量体化してホモ二量体を形成できるように、それぞれがＮ末端からＣ末端に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αエレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤を含み、前記二重特異性結合剤は前記ホモ二量体が結合したＴ細胞が腫瘍の増殖を阻害するのに十分な条件下及び時間で腫瘍と接触させられることを特徴とする、組成物。
【請求項２７】
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記第１の抗体フラグメント及び前記第２の抗体フラグメントがｓｃＦｖである、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
融合タンパク質が二量体化してホモ二量体の二重特異性結合剤を形成できるように、それぞれがＮ末端からＣ末端に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αエレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤であって、
前記ホモ二量体の二重特異性結合剤は前記二量体化コンポーネントを含まないこと以外は同等の二重特異性結合剤と比較して半減期がより長いことを特徴とする、二重特異性結合剤。
【請求項３１】
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、請求項３０に記載の二重特異性結合剤。
【請求項３２】
前記第１の抗体コンポーネント及び前記第２の抗体コンポーネントがｓｃＦｖである、請求項３０または３１に記載の二重特異性結合剤。
【請求項３３】
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤。
【請求項３４】
前記二重特異性結合剤が、前記二量体化コンポーネントを含まないこと以外は同等の二重特異性結合剤と比較して亢進された腫瘍抗原結合活性を有する、請求項１に記載の二重特異性結合剤。
【請求項３５】
前記二重特異性結合剤が、前記二量体化コンポーネントを含まないこと以外は同等の二重特異性結合剤と比較して免疫エフェクター細胞への結合活性が顕著に異ならない、請求項３４に記載の二重特異性結合剤。
【請求項３６】
前記二重特異性結合剤が、前記二量体化コンポーネントを含まないこと以外は同等の二重特異性結合剤と比較して亢進された腫瘍抗原結合活性を有する、請求項３０に記載の二重特異性結合剤。
【請求項３７】
前記二重特異性結合剤が、前記二量体化コンポーネントを含まないこと以外は同等の二重特異性結合剤と比較してＴ細胞への結合活性が顕著に異ならない、請求項３６に記載の二重特異性結合剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
一部の実施形態において、二重特異性結合剤がホモ二量体を形成するために二量体化できるように、それぞれが５’から３’に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αのエレメントを含む二量体化コンポーネントと、を含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤が提供され、ここで、上記ホモ二量体は、二量体化コンポーネントを含まないこと以外は、同等の二重特異性結合剤と比較して、より長い半減期を特徴とする。一部の実施形態において、本発明の二量体化コンポーネントは、ヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む。一部の実施形態において、本発明の二重特異性結合剤の第１の抗体コンポーネント及び第２の抗体コンポーネントは単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態において、本発明の腫瘍抗原はＧＤ２である。一部の実施形態において、本発明の腫瘍抗原はＧＤ３である。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤であって、
各融合タンパク質が、第１の抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、第２の抗原に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒト肝細胞核内因子−１アルファ（ＨＮＦ−１α）エレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む、
二重特異性結合剤。
（項目２）
前記第１の抗原及び前記第２の抗原が同一ではない、項目１に記載の結合剤。
（項目３）
前記第１の抗原が腫瘍抗原である、項目１または２に記載の結合剤。
（項目４）
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、項目１〜３のいずれか１項に記載の結合剤。
（項目５）
前記第２の抗原がＴ細胞上に存在する、項目１〜４のいずれか１項に記載の結合剤。
（項目６）
前記第２の抗原がＣＤ３である、項目５に記載の結合剤。
（項目７）
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、項目１〜６のいずれか１項に記載の結合剤。
（項目８）
項目１〜７のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目９）
５’から３’に向けて、第１の抗体コンポーネントと、第２の抗体コンポーネントと、ヒト肝細胞核内因子−１アルファ（ＨＮＦ−１α）エレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む融合タンパク質。
（項目１０）
前記ＨＮＦ−１αエレメントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、項目９に記載の融合タンパク質。
（項目１１）
前記第１の抗体コンポーネント及び前記第２の抗体コンポーネントがｓｃＦｖである、項目９または１０に記載の融合タンパク質。
（項目１２）
前記第１のｓｃＦＶが腫瘍抗原に結合し前記第２のｓｃＦｖがＴ細胞上に存在する抗原に結合する、項目１１に記載の融合タンパク質。
（項目１３）
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、項目１２に記載の融合タンパク質。
（項目１４）
前記Ｔ細胞上に存在する抗原がＣＤ３である、項目１２または１３に記載の融合タンパク質。
（項目１５）
項目１４に記載の融合タンパク質２つから構成される二量体型二重特異性結合剤。
（項目１６）
項目１５に記載の二量体型二重特異性結合剤と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目１７）
項目９〜１４のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする核酸配列。
（項目１８）
項目１７に記載の核酸配列を含むベクター。
（項目１９）
項目１８に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目２０）
細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞から成る群より選択される、項目１９に記載の宿主細胞。
（項目２１）
Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞、Ｓｆ９細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ細胞から成る群より選択される、項目２０に記載の宿主細胞。
（項目２２）
二量体型二重特異性結合剤の生産方法であって、前記二量体型二重特異性結合剤の発現に好適な条件下で項目２１に記載の宿主細胞を培養することと、前記二量体型二重特異性結合剤を回収することとを含む方法。
（項目２３）
第１の抗体コンポーネント及び第２の抗体コンポーネントを含む二重特異性抗体薬を含む高親和性二重特異性抗体組成物を提供する方法であって、前記改善は、抗体コンポーネント−二量体化コンポーネント融合物がホモ二量体を形成できるように、そのような第１の抗体コンポーネント及び第２の抗体コンポーネントのうちの少なくとも１つをヒトＨＮＦ−１α二量体化エレメントから構成される二量体化コンポーネントを有する融合物として提供することを含む、方法。
（項目２４）
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
腫瘍細胞を死滅させる方法であって、二重特異性結合剤が二量体化してホモ二量体を形成できるように、それぞれが５’から３’に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αエレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤に、前記腫瘍細胞を接触させるステップを含み、前記接触は前記ホモ二量体が結合したＴ細胞が腫瘍細胞の死滅を媒介するのに十分な条件下及び時間でおこなわれる、方法。。
（項目２６）
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記第１の抗体コンポーネント及び前記第２の抗体コンポーネントがｓｃＦｖである、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、項目２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
腫瘍の増殖を阻害する方法であって、二重特異性抗体が二量体化してホモ二量体を形成できるように、それぞれが５’から３’に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αエレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤に、腫瘍を接触させるステップを含み、前記接触は前記ホモ二量体が結合したＴ細胞が腫瘍の増殖を阻害するのに十分な条件下及び時間でおこなわれる、方法。
（項目３０）
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記第１の抗体フラグメント及び前記第２の抗体フラグメントがｓｃＦｖである、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、項目２９〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
二重特異性結合剤が二量体化してホモ二量体を形成できるように、それぞれが５’から３’に向けて、腫瘍抗原に結合する第１の抗体コンポーネントと、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体コンポーネントと、ヒトＨＮＦ−１αエレメントを含む二量体化コンポーネントとを含む２つの融合タンパク質から構成される二重特異性結合剤であって、
前記ホモ二量体は前記二量体化コンポーネントを含まないこと以外は同等の二重特異性結合剤と比較して半減期がより長いことを特徴とする、二重特異性結合剤。
（項目３４）
前記二量体化コンポーネントがヒトＨＮＦ−１αの１〜３２番目のアミノ酸残基を含む、項目３３に記載の二重特異性結合剤。
（項目３５）
前記第１の抗体コンポーネント及び前記第２の抗体コンポーネントがｓｃＦｖである、項目３３または３４に記載の二重特異性結合剤。
（項目３６）
前記腫瘍抗原がＧＤ２である、項目３３〜３５のいずれか１項に記載の二重特異性結合剤。