【手続補正書】
【提出日】平成29年7月12日(2017.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単純ヘルペスウイルス（HSV）ベクターであって、該単純ヘルペスウイルス（HSV）ベクターが、非補完細胞において毒性HSV遺伝子を発現せず、かつ、１以上の導入遺伝子を含むゲノムを含み、前記導入遺伝子がプロモータを含み、前記ベクターが非補完細胞において少なくとも28日間、導入遺伝子を発現することが可能であり、前記非補完細胞が任意に(a)培養されたヒト皮膚線維芽（HDF）細胞又は(b)神経系細胞である、単純ヘルペスウイルス（HSV）ベクター。
【請求項２】
前記ベクターが、培養されたヒト皮膚線維芽（HDF）非補完細胞において感染後少なくとも28日間（dpi）、導入遺伝子を発現することが可能である、請求項１に記載のHSVベクター。
【請求項３】
導入遺伝子が、前記ゲノムの潜伏関連転写（LAT）遺伝子領域内、及び/又は前記ゲノムのICP4遺伝子座内に挿入され、前記ベクターが、前初期遺伝子としてICP0、ICP4、ICP22、ICP27、及び任意にICP47を発現しない、請求項1又は2に記載のHSVベクター。
【請求項４】
導入遺伝子がインシュレーター配列と操作可能に連結して前記ゲノム内に挿入され、前記ベクターが、前初期遺伝子として、ICP0、ICP4、ICP22、ICP27、及び任意にICP47を発現しない、請求項1〜3のいずれかに記載のHSVベクター。
【請求項５】
前記インシュレーター配列がヘテロクロマチン形成から保護する遺伝的エレメントを含み、HSVクロマチン境界（CTRL/CTCF-結合/インシュレーター）エレメントCTRL1及びCTRL2、ニワトリ高感受性部位4インシュレーター（cHS4）、ヒトHNRPA2B1--CBX3ユビキタスクロマチンオープニングエレメント（UCOE）、及びヒトインターフェロンベータ遺伝子（IFNB1）からのスキャッフォールド/マトリックス結合領域（S/MAR）からなるグループから任意に選択され、任意に前記導入遺伝子が、前記ゲノム内の前記インシュレーター配列の約5 kb内に挿入される、請求項4に記載のHSVベクター。
【請求項６】
導入遺伝子が前記ゲノム内においてインシュレーター配列に隣接する、請求項1〜5のいずれかに記載のHSVベクター。
【請求項７】
前記ゲノムがクロマチン境界エレメントCTRL1及びCTRL2を含み、導入遺伝子が前記CTRL1及びCTRL2エレメントの両方の約4 kb内である、請求項1〜6のいずれかに記載のHSVベクター。
【請求項８】
野生型HSVに関連する以下の遺伝的摂動：
（a）ICP0をコードする遺伝子の不活化欠失、
（b）ICP4をコードする遺伝子の不活化欠失、
（c）ジョイントの欠失、
（d）ICP22をコードする遺伝子が、初期プロモータの制御下であること、
（e）ICP27をコードする遺伝子の不活化欠失、
（f）任意にプロモータ及びICP47をコードする遺伝子の開始コドンの欠失、及び
(g) 任意にUL41における不活化欠失
を含む、請求項1〜7のいずれかに記載のベクター。
【請求項９】
前記ゲノムがCTRL1とCTRL2配列とLATP2又はLAP2エンハンサエレメントとを含むLAT遺伝子領域を含み、導入遺伝子が前記CTRL1及びCTRL2配列の間の前記LAT遺伝子領域に挿入される、請求項8に記載のベクター。
【請求項１０】
導入遺伝子が、前記LATP2及びCTRL1エレメントの間の前記LAT遺伝子領域に挿入される、請求項9に記載のベクター。
【請求項１１】
導入遺伝子が、LATP2及びCTRL2エレメントの間の前記LAT遺伝子領域に挿入される、請求項9に記載のベクター。
【請求項１２】
(a)野生型糖タンパク質と比較して感染性を強める変異糖タンパク質、又は非古典的受容体を介する細胞へのHSVの進入を誘導する変異糖タンパク質を含むエンベロープ、又は(b)前記ゲノムが、野生型糖タンパク質と比較して感染性を強める変異糖タンパク質、又は非古典的受容体を介する細胞へのHSVの進入を誘導する変異糖タンパク質をコードする遺伝子を含むこと、又は(c)(a)及び(b)の両者、及び(d)任意に前記糖タンパク質がgB、gC、gD、gH、gK、又はその組み合わせであることを含む、請求項1〜11のいずれかに記載のベクター。
【請求項１３】
１以上の前記導入遺伝子が、(a)microRNAのための1以上の結合部位を含み、及び/又は、(b)Oct4、Klf4、Sox2、c-Myc、L-myc、ドミナントネガティブp53、Nanog、Glis1、Lin28、TFIID、GATA4、Nkx2.5、Tbx5、Mef2C、Myocd、Hand2、SRF、Mesp1、SMARCD3、SERCA2a、Pax3、MyoD、Lhx2、FoxG1、FoxP2、Isl1、Ctip2、Tbr1、Ebf1、Gsx2、Srebp2、第VIII因子、第IX因子、ジストロフィン、CFTR、GlyRα1、エンケファリン、GADアイソフォーム、神経栄養因子、Ascl1、Nurr1、Lmx1A、Brn2、Myt1l、NeuroD1、FoxA2、Hnf4α、Foxa1、Foxa2又はFoxa3、microRNA、miRNAの組み合わせ、あるいは１以上の他のノンコーディングRNA（ncRNA（s））をコードする、請求項1〜12のいずれかに記載のベクター。
【請求項１４】
(a)潜伏関連転写（LAT）遺伝子領域内に挿入された１以上の導入遺伝子発現カセット、又は(b)インシュレーター配列を含む１以上の導入遺伝子発現カセット、又は(c)(a)及び(b)の両者の付加を伴うJΔNI5又はJΔNI8であるHSVベクターであって、(d)ICP4におけるmCherry導入遺伝子が異なるコーディング配列で置き換えられる、HSVベクター。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか1項に記載の前記ベクターの製造のための補完細胞であって、前記補完細胞がU2OS細胞であり、該U2OS細胞が、HSVに感染した場合にトランスに発現されるICP4発現カセットを含み、前記細胞が、前記細胞がHSVに感染した場合に誘導可能にトランスに発現されるICP27発現カセットを任意に含み、前記細胞が、部位特異的リコンビナーゼをコードする遺伝子を任意に発現する、補完細胞。
【請求項１６】
少なくとも107 pfu/mlの、請求項1〜14のいずれかに記載の前記ベクターを含むストック。
【請求項１７】
前記ベクター内の1以上の前記導入遺伝子が前記細胞内に発現するように、非補完細胞を請求項1〜14のいずれか1項に記載のHSVベクター又は請求項16に記載のストックにインビトロに感染させることを含む、導入遺伝子をインビトロに発現させる方法。
【請求項１８】
1以上の前記導入遺伝子が、Oct4、Klf4、Sox2、c-Myc、L-Myc、ドミナントネガティブp53、Nanog、Glis1、Lin28、TFIID、mir-302/367、又は他のmiRNAのうちの1以上をコードし、これによって前記導入遺伝子発現下において、前記細胞が、人工多能性幹（iPS）細胞になり、任意に1以上の前記導入遺伝子が、前記細胞を分化転換するための1以上の因子をコードする、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
請求項1〜14のいずれかに記載のベクター又は請求項16に記載のストック及び医薬的に許容可能な担体を含む、組成物。
【請求項２０】
医薬として使用のための請求項1〜14のいずれかに記載のベクター又は請求項16に記載のストックであって、該医薬は1以上の前記導入遺伝子が被験体の前記細胞内に発現されるように、前記被験体の細胞に感染させるために十分な量及び位置において、前記被験体に投与されるものであり、前記発現された導入遺伝子が1以上の予防的に又は治療的に活性なタンパク質、ポリペプチド又はncRNAをコードする、ベクター又はストック。
【請求項２１】
前記被験体の前記細胞が、肝細胞、肺細胞、上皮細胞、神経系細胞、心臓細胞、筋細胞、幹細胞、又は癌細胞である、請求項20に記載の使用のためのベクター又はストック。