【手続補正書】
【提出日】平成29年3月29日(2017.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本開示の他の方法、組成物、特徴、および利点は、下記の図面および詳細な説明の試験において、当業者にとって明白であるか、または明白になるであろう。このようなすべての更なる組成物、方法、特徴、および利点は、本記載に含まれ、本開示の範囲内であることが意図される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト胎盤からサンプルを得るステップと；
ヒト胎盤サンプルから血液を除去することによって胎盤粗抽出物を調製するステップと；
胎盤粗抽出物をタンパク質可溶化剤と混合することによって、粗抽出物中のタンパク質を可溶化するステップと；
固形物を可溶化タンパク質-胎盤抽出物混合物から分離して除去するステップと；
可溶化タンパク質-胎盤抽出物混合物に対して透析を行うことによってタンパク質可溶化剤を前記混合物から除去するステップと、
透析の後、重合タンパク質を除去してヒト胎盤抽出物を調製するステップ
とを含む、ヒト胎盤抽出物を製造する方法。
【請求項２】
胎盤サンプルから血液を除去するステップが、
ヒト胎盤サンプルをバッファーとともにホモジェナイズするステップと、
ホモジェナイズされたサンプルを遠心分離するステップと、
血液を含有する上清を捨てるステップ
とを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
タンパク質可溶化剤が尿素である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
尿素が、0.5M〜16Mの濃度を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
可溶化タンパク質-胎盤抽出物混合物を遠心分離して固形物を除去するステップを更に含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
透析液がTBSを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
透析液が一定間隔で交換され、胎盤抽出物がタンパク質可溶化剤を実質的に含まなくなるまで透析が繰り返される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
透析後、胎盤抽出物を遠心分離して更なる固形物を除去するステップを更に含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記方法が-86℃〜5℃の温度で行われる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が4℃の温度で行われる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
ヒト胎盤サンプルから得られたヒト胎盤抽出物であって、
血液および固形物が前記抽出物から実質的に除去され、前記抽出物が、前記胎盤サンプル中に存在した、胎盤のサイトカインおよび増殖因子を含有する、
ヒト胎盤抽出物。
【請求項１２】
胎盤抽出物が、少なくとも20の異なるサイトカインを含む、請求項１１に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１３】
胎盤抽出物が、内皮細胞の増殖を促進することができる、請求項１１または１２に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１４】
胎盤抽出物が、血管新生を調節することができる、請求項１１または１２に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１５】
胎盤抽出物が、基底膜マトリックス（BMM）と比較して、様々な細胞株の増殖、分化、または両方に対して区別できる効果を有する、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１６】
胎盤抽出物が、基底膜マトリックス（BMM）と比較して、内皮細胞の増殖の増加を促進する、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１７】
胎盤抽出物が、胎盤抽出物の非存在下で培養された内皮細胞での遺伝子発現と比較して、内皮細胞において１つ以上の遺伝子を上方制御し、
前記遺伝子が、血管新生遺伝子、細胞外マトリックスリモデリング遺伝子、および血管発生遺伝子からなる群より選択される、
請求項１１〜１６のいずれか１項に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１８】
血管新生遺伝子が、ANGPTL4、CXCL3、ヒト成長因子（HGF）、ANGPT2、PGF、TYMP、VEGFA、HIF1A、およびFGF1からなる群より選択される、請求項１７に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項１９】
細胞外マトリックスリモデリング遺伝子が、MMP2、MMP9、COL4A3、およびLAMA5からなる群より選択される、請求項１７に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項２０】
血管発生遺伝子が、CDH2、HAND2、LECT1、およびMDKなどからなる群より選択される、請求項１７に記載のヒト胎盤抽出物。
【請求項２１】
ヒト胎盤サンプルから得られたヒト胎盤抽出物の存在下で、内皮細胞を培養するステップであって、前記サンプルは、血液および固形物を除去するために処理され、タンパク質可溶化剤と混合され、透析されてタンパク質可溶化剤を除去し、透析の後に遠心分離して重合タンパク質を除去したものである、ステップを含み、
前記胎盤抽出物が、胎盤のサイトカインおよび増殖因子を含有する、
細胞培養物において血管新生を誘導する方法。
【請求項２２】
細胞が少なくとも40,000細胞/cm2の密度で播種される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
細胞が少なくとも80,000細胞/cm2の密度で播種される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
生体材料をヒト胎盤抽出物中でインキュベートするステップを含む、in vivoにおいて血管化を誘導するための移植可能な生体材料を製造する方法であって、
前記ヒト胎盤抽出物が、ヒト胎盤サンプルから得られ、
前記胎盤サンプルが、血液および固形物を除去するために処理され、タンパク質可溶化剤と混合され、透析されてタンパク質可溶化剤を除去され、遠心分離して重合タンパク質が除去されたものであり、、
前記胎盤抽出物が、胎盤のサイトカインおよび増殖因子を含有する、方法。
【請求項２５】
生体材料が、ヒト由来の基質材料を含む人工の生物学的足場である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
生物学的足場が脱細胞化されたヒト臍帯静脈足場である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ヒト臍帯静脈足場がヒト内皮細胞を播種される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
足場がヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）を播種される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
ヒト内皮細胞が少なくとも40,000細胞/cm2の密度で播種される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
移植可能な生体材料が、基底膜マトリックス（BMM）中でインキュベートされた生体材料と比較して、in vivoにおいて減少した線維化を生じる、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
移植可能な生体材料が、胎盤抽出物中でインキュベートされていない生体材料と比較して、増加した血管成長を誘導する、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
ヒト胎盤サンプルから得られたヒト胎盤抽出物中でインキュベートされた、ヒト由来の基質材料を含む、人工の生物学的足場を含む、移植可能な人工の生物学的足場であって、
前記サンプルは、血液および固形物を除去するために処理され、タンパク質可溶化剤と混合され、透析されてタンパク質可溶化剤を除去し、遠心分離して重合タンパク質を除去したものであり、
前記胎盤抽出物が、胎盤のサイトカインおよび増殖因子含有する、
移植可能な人工の生物学的足場。
【請求項３３】
ヒト胎盤サンプルから得られたヒト胎盤抽出物の存在下で、ヒト内皮細胞の培養物を培養するステップであって、前記サンプルは、血液および固形物を除去するために処理され、タンパク質可溶化剤と混合され、透析されてタンパク質可溶化剤を除去し、遠心分離して重合タンパク質を除去したものであり、前記胎盤抽出物は胎盤のサイトカインおよび増殖因子含有する、ステップと；
ヒト内皮細胞培養物を試験化合物と接触させるステップと；
培養物における血管新生の量を測定するステップと；
細胞培養物における血管新生の量が、試験化合物の非存在下で培養された培養物の血管新生の量より多いかまたは少ない場合に、試験化合物を血管新生調節因子として同定するステップ
とを含む、血管新生調節因子を同定する方法。
【請求項３４】
試験化合物の非存在下で培養された培養物と比較した血管新生の量の増加が、試験化合物が血管新生を誘導することを示す、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
試験化合物の非存在下で培養された培養物と比較した血管新生の量の減少が、試験化合物が血管新生を阻害することを示す、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
試験化合物がトロンボスポンジン-1（TSP-1）であり、前記化合物が血管新生を阻害する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
ヒト胎盤サンプルから得られたヒト胎盤抽出物の存在下で培養された内皮細胞の培養物を含む、血管新生の調節因子を同定するために試験化合物をスクリーニングするための分析物であって、
前記サンプルは、血液および固形物を除去するために処理され、タンパク質可溶化剤と混合され、透析されてタンパク質可溶化剤を除去し、遠心分離して重合タンパク質を除去したものであり、
前記胎盤抽出物が、胎盤のサイトカインおよび増殖因子を含有する、分析物。