【手続補正書】
【提出日】平成29年8月2日(2017.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換え複製コンピテントレトロウイルスであって、
レトロウイルスGAGタンパク質；
レトロウイルスPOLタンパク質；
レトロウイルスエンベロープ；
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復（LTR）配列、レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物の細胞における発現に適しているプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含む前記レトロウイルスポリヌクレオチド；
IRESの分岐領域においてAバルジの6A'sからなる内部リボソーム侵入部位（IRES）を含むカセットであって、前記IRESが異種ポリヌクレオチドに機能可能に連結されており、前記カセットが3'LTRの5'側、及びレトロウイルスエンベロープをコードするenv核酸ドメインの3'側に位置するカセット；並びに
標的細胞における逆転写、パッケージング及び組み込みのために必要なシス作用性配列を含み、
RCRが配列番号21を含むベクター（pACE）と比較して、6回の継代後に高い複製能を維持する、上記組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２】
ウイルスが標的細胞に複数回感染し、5以上の平均コピー数/二倍体ゲノムをもたらす、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３】
レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、マウス白血病ウイルス(MLV)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、ネコ白血病ウイルス(FeLV)、ヒヒ内在性レトロウイルス(BEV)、ブタ内在性ウイルス(PERV)、ネコ由来レトロウイルスRD114、リスザルレトロウイルス、異種指向性マウス白血病関連ウイルス(XMRV)、トリ細網内皮症ウイルス(REV)、及びテナガザル白血病ウイルス(GALV)からなる群より選択されるウイルスに由来する、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項４】
レトロウイルスエンベロープが、広宿主性MLVエンベロープである、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５】
レトロウイルスが、ガンマレトロウイルスである、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６】
標的細胞が、細胞増殖性障害を有する細胞である、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７】
標的細胞が、新生細胞である、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８】
細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳癌、頭頸部癌、膵癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌、関節リウマチ及び他の自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項６に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項９】
プロモーター配列が、成長調節遺伝子に関連する、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１０】
プロモーター配列が、組織特異的プロモーター配列を含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１１】
組織特異的プロモーター配列が、少なくとも一つのアンドロゲン応答エレメント（ARE）を含む、請求項１０に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１２】
プロモーターが、配列番号19、20、22又は42に記載の配列のヌクレオチド1から約ヌクレオチド582を有するCMVプロモーターを含み、転写を誘導し開始させることができる、一以上の核酸塩基の改変を含み得る、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１３】
プロモーターが、CMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１４】
CMV-R-U5ドメインが、MLV R-U5領域に連結したヒトサイトメガロウイルス由来の最初期プロモーターを含む、請求項１３に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１５】
CMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドが、配列番号19、20、22又は42に記載の配列の約ヌクレオチド1から約ヌクレオチド1202、又は配列番号19、20、22又は42に記載の配列と少なくとも95%同一である配列を含み、かつ前記ポリヌクレオチドが、それに対して機能可能に連結した核酸分子の転写を促す、請求項１４に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１６】
gagポリヌクレオチドが、ガンマレトロウイルスに由来する、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１７】
gag核酸ドメインが、配列番号19、20、22又は42の約ヌクレオチド数1203から約ヌクレオチド2819、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%又は99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項１６に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１８】
ポリヌクレオチドのpolドメインが、ガンマレトロウイルスに由来する、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項１９】
polドメインが、配列番号19、20、22又は42の約ヌクレオチド数2820から約ヌクレオチド6358、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%又は99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項１８に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２０】
envドメインが、配列番号19、20、22又は42の約ヌクレオチド数6359から約ヌクレオチド8323、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%又は99.9%の同一性を有する配列を含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２１】
IRESが、配列番号41に記載の配列からなる、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２２】
レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、（i）配列番号42に記載の配列、又は（ii）TがUである配列番号42に記載の配列を含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２３】
異種核酸が、配列番号3、5、11、13、15又は17に記載の配列を有するポリヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２４】
異種核酸が、配列番号4に記載の配列を含むポリペプチドをコードする、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２５】
異種核酸が、ヒトコドン最適化されており、配列番号4に記載のポリペプチドをコードする、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２６】
異種核酸が、配列番号19又は22の約ヌクレオチド数8877から約9353に記載の配列を含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２７】
3'LTRが、ガンマレトロウイルスに由来する、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２８】
3'LTRが、U3-R-U5ドメインを含む、請求項２７に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項２９】
3'LTRが、配列番号19又は22の約ヌクレオチド9405から約9988に記載の配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99.5%同一である配列を含む、請求項２８に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３０】
異種核酸配列が、生物学的応答修飾物質、又は免疫賦活サイトカインをコードする、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３１】
免疫賦活サイトカインが、インターロイキン1〜15、インターフェロン、腫瘍壊死因子（TNF）、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）からなる群より選択される、請求項３０に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３２】
免疫賦活サイトカインが、インターフェロンガンマである、請求項３０に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３３】
異種核酸が、非毒性のプロドラッグを毒性の薬剤に変換するポリペプチドをコードする、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３４】
非毒性のプロドラッグを毒性の薬剤に変換するポリペプチドが、チミジンキナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（PNP）、又はシトシンデアミナーゼである、請求項３３に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３５】
異種核酸配列が、受容体ドメイン、抗体、又は抗体断片をコードする、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３６】
異種核酸配列が、阻害性ポリヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３７】
阻害性ポリヌクレオチドが、miRNA、RNAi、又はsiRNA配列を含む、請求項３６に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項３８】
請求項１に記載のレトロウイルスを生産するための、組換えレトロウイルスポリヌクレオチドゲノム。
【請求項３９】
シトシンデアミナーゼポリヌクレオチドが発現される条件下で請求項３４に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルスを被験者に接触させること、及び5−フルオロシトシンを被験者に接触させることを含む、細胞増殖性障害を治療する方法。
【請求項４０】
細胞増殖性障害が、多形神経膠芽腫である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳癌、頭頸部癌、膵癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌からなる群より選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
J-K分岐領域のAバルジに6個のAを有するECMV IRESから、哺乳動物細胞において異種遺伝子を発現するベクター。
【請求項４３】
ウイルスベクターである、請求項４２に記載のベクター。
【請求項４４】
レトロウイルス複製ベクターである、請求項４２又は４３に記載のベクター。
【請求項４５】
ガンマレトロウイルス由来のレトロウイルス複製ベクターである、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項４６】
ガンマレトロウイルスが、マウス白血病ウイルス、ヒヒ内在性ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルスのいずれか一つに由来する、請求項４５に記載のベクター。
【請求項４７】
異種遺伝子が、哺乳動物における治療活性を有する遺伝子である、請求項４２〜４６のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項４８】
治療活性が、抗癌活性である、請求項４７に記載のベクター。
【請求項４９】
異種遺伝子が、プロドラッグ活性化遺伝子である、請求項４７に記載のベクター。
【請求項５０】
PTB-1タンパク質の非存在下で、ECMV IRESから哺乳動物細胞において異種遺伝子を発現し得る、請求項４２〜４９のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項５１】
請求項４２〜５０のいずれか一項に記載のベクターを投与することによる、癌の治療方法。
【請求項５２】
組換え複製コンピテントレトロウイルスであって、
レトロウイルスGAGタンパク質；
レトロウイルスPOLタンパク質；
レトロウイルスエンベロープ；
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復（LTR）配列、レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物の細胞における発現に適しているプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含む前記レトロウイルスポリヌクレオチド；
（i）異種ポリヌクレオチドに機能可能に連結された最小内部リボソーム侵入部位（IRES）、（ii）miRNAに連結されたpolIIIプロモーター、又は（iii）（ii）に先行するか又は続く異種ポリヌクレオチドに機能可能に連結されたミニプロモーターを含むカセットであって、3'LTRの5'側、及びレトロウイルスエンベロープをコードするenv核酸ドメインの3'側に位置するカセット；及び
標的細胞における逆転写、パッケージング及び組み込みのために必要なシス作用性配列；
を含む、上記組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５３】
最小IRESが、配列番号41の約塩基123から544の配列からなる、請求項５２に記載の複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５４】
最小IRESが、配列番号41の約塩基183から544の配列からなる、請求項５２に記載の複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５５】
IRESがAバルジに6個のAを有する、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５６】
ウイルスが標的細胞に複数回感染し、5以上の平均コピー数/二倍体ゲノムをもたらす、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５７】
レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、マウス白血病ウイルス(MLV)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、ネコ白血病ウイルス(FeLV)、ヒヒ内在性レトロウイルス(BEV)、ブタ内在性ウイルス(PERV)、ネコ由来レトロウイルスRD114、リスザルレトロウイルス、異種指向性マウス白血病関連ウイルス(XMRV)、トリ細網内皮症ウイルス(REV)、又はテナガザル白血病ウイルス(GALV)からなる群より選択されるウイルスに由来する、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５８】
レトロウイルスエンベロープが、広宿主性MLVエンベロープである、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項５９】
レトロウイルスが、ガンマレトロウイルスである、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６０】
標的細胞が、細胞増殖性障害を有する細胞である、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６１】
標的細胞が、新生細胞である、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６２】
細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳癌、頭頸部癌、膵癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌、関節リウマチ及び他の自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項６０に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６３】
プロモーター配列が、成長調節遺伝子に関連する、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６４】
プロモーター配列が、組織特異的プロモーター配列を含む、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６５】
組織特異的プロモーター配列が、少なくとも一つのアンドロゲン応答エレメント（ARE）を含む、請求項６４に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６６】
プロモーターが、配列番号19、20、22又は42に記載の配列のヌクレオチド1から約ヌクレオチド582を有するCMVプロモーターを含み、転写を誘導し開始させることができる、一以上の核酸塩基の改変を含み得る、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６７】
プロモーターが、CMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドを含む、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６８】
CMV-R-U5ドメインが、MLV R-U5領域に連結したヒトサイトメガロウイルス由来の最初期プロモーターを含む、請求項６７に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項６９】
CMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドが、配列番号19、20、22又は42に記載の配列の約ヌクレオチド1から約ヌクレオチド1202、又は配列番号19、20、22又は42に記載の配列と少なくとも95%同一である配列を含み、かつ前記ポリヌクレオチドが、それに対して機能可能に連結した核酸分子の転写を促す、請求項６８に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７０】
gagポリヌクレオチドが、ガンマレトロウイルスに由来する、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７１】
gag核酸ドメインが、配列番号19、20、22又は42の約ヌクレオチド数1203から約ヌクレオチド2819、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%又は99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７２】
ポリヌクレオチドのpolドメインが、ガンマレトロウイルスに由来する、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７３】
polドメインが、配列番号19、20、22又は42の約ヌクレオチド数2820から約ヌクレオチド6358、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%又は99.9%の同一性を有する配列を含む、請求項７２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７４】
envドメインが、配列番号19、20、22又は42の約ヌクレオチド数6359から約ヌクレオチド8323、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%又は99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７５】
異種核酸が、配列番号3、5、11、13、15又は17に記載の配列を有するポリヌクレオチドを含む、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７６】
異種核酸が、配列番号4に記載の配列を含むポリペプチドをコードする、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７７】
異種核酸が、ヒトコドン最適化されており、配列番号4に記載のポリペプチドをコードする、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７８】
異種核酸が、配列番号19又は22の約ヌクレオチド数8877から約9353に記載の配列を含む、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項７９】
3'LTRが、ガンマレトロウイルスに由来する、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８０】
3'LTRが、U3-R-U5ドメインを含む、請求項７９に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８１】
3'LTRが、配列番号19又は22の約ヌクレオチド9405から約9988に記載の配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99.5%同一である配列を含む、請求項７９に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８２】
異種核酸配列が、生物学的応答修飾物質、又は免疫賦活サイトカインをコードする、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８３】
免疫賦活サイトカインが、インターロイキン1〜15、インターフェロン、腫瘍壊死因子（TNF）、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）からなる群より選択される、請求項８２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８４】
免疫賦活サイトカインが、インターフェロンガンマである、請求項８２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８５】
異種核酸が、非毒性のプロドラッグを毒性の薬剤に変換するポリペプチドをコードする、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８６】
非毒性のプロドラッグを毒性の薬剤に変換するポリペプチドが、チミジンキナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（PNP）、又はシトシンデアミナーゼである、請求項８５に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８７】
異種核酸配列が、受容体ドメイン、抗体、又は抗体断片をコードする、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８８】
異種核酸配列が、阻害性ポリヌクレオチドを含む、請求項５２に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項８９】
阻害性ポリヌクレオチドが、miRNA、RNAi、又はsiRNA配列を含む、請求項８８に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルス。
【請求項９０】
請求項５２に記載のレトロウイルスを生産するための、組換えレトロウイルスポリヌクレオチドゲノム。
【請求項９１】
シトシンデアミナーゼポリヌクレオチドが発現される条件下で請求項８６に記載の組換え複製コンピテントレトロウイルスを被験者に接触させること、及び5−フルオロシトシンを被験者に接触させることを含む、細胞増殖性障害を治療する方法。
【請求項９２】
細胞増殖性障害が、多形神経膠芽腫である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳癌、頭頸部癌、膵癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌からなる群より選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
J-K分岐領域のA-バルジに5個のAを有する内部リボソーム侵入部位（IRES）を含む、操作された核酸。
【請求項９５】
IRESが、
（i）配列番号41と95%の同一性を有し、J-K分岐領域に5A'sを有する配列；
（ii）分岐領域に5A'sを含む配列番号41に記載の配列を含み、配列番号41の塩基対1の後から約塩基183の任意の箇所から始まり、544まで続く、トランケートされたIRES
（iii）配列番号41の約123から544又は約183から544に記載の配列を含み、J-K分岐領域のA-バルジに5個のAを有し、分岐領域に7個のAを有する同様のIRESに対して改善された安定性を有するトランケートされたIRES；
（iv）J-K分岐領域のA-バルジに5個のAを有する配列番号41に記載の配列、及び
（v）TがUであり得る上記のいずれか
からなる群から選択される配列を含む、請求項１に記載の操作された核酸。
【請求項９６】
組換え複製コンピテントレトロウイルスであって、
レトロウイルスGAGタンパク質；
レトロウイルスPOLタンパク質；
レトロウイルスエンベロープ；
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復（LTR）配列、レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物の細胞における発現に適しているプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含む前記レトロウイルスポリヌクレオチド；
IRESの分岐領域においてAバルジの5又は6A'sからなる内部リボソーム侵入部位（IRES）を含むカセットであって、前記IRESが異種ポリヌクレオチドに機能可能に連結されており、前記カセットが3'LTRの5'側、及びレトロウイルスエンベロープをコードするenv核酸ドメインの3'側に位置するカセット；並びに
標的細胞における逆転写、パッケージング及び組み込みのために必要なシス作用性配列を含む、
上記組換え複製コンピテントレトロウイルス。