【手続補正書】
【提出日】平成29年3月13日(2017.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
病原体又は毒素を特異的に標的とする複数の免疫反応性ポリペプチドをエピソームにより発現する免疫防御初代間葉幹細胞（IP-MSC）であって、前記IP-MSCは、前記病原体又は毒素を特異的に標的とする複数の発現可能免疫反応性ポリペプチドをコードする1つ以上のエピソームベクターをトランスフェクトされており、各免疫反応性ポリペプチドは、前記病原体によって産生される抗原に特異的な若しくは前記毒素に特異的な中和抗体の抗原結合領域由来のアミノ酸配列、又はそのアミノ酸配列中に1つ以上の置換を含みかつ前記抗原結合領域配列と少なくとも約50％の配列同一性を共有する前記抗原結合領域配列のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記抗原結合領域配列又はそのバリアントは、前記病原体又は毒素と特異的に結合しこれを中和するように配置されており、さらに前記エピソームベクターは場合によって誘導性アポトーシス遺伝子を含んでもよい、前記免疫防御初代間葉幹細胞。
【請求項２】
2〜約100の免疫反応性ポリペプチドをエピソームにより発現する、請求項1に記載のIP-MSC。
【請求項３】
1つ以上の他の免疫調節因子を更に発現する、請求項1又は2に記載のIP-MSC。
【請求項４】
前記1つ以上の免疫調節因子が、インターロイキン及びインターフェロンから選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項５】
前記1つ以上の免疫調節因子が、L-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-9、 IL-12、IFNα、IFNβ及びIFNωから選択される、請求項3に記載のIP-MSC。
【請求項６】
各免疫反応性ポリペプチドが、完全長抗体、抗体単一鎖可変抗体フラグメント（ScFV）、一価抗体抗原結合フラグメント（Fab）、二価抗体抗原結合フラグメント（F(ab’)2）、ジアボディ及びトリボディから選択される、請求項1〜5のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項７】
前記免疫反応性ポリペプチドの1つ以上が、前記抗原結合領域のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記バリアントのアミノ酸配列置換が保存的置換を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項８】
前記免疫反応性ポリペプチドの1つ以上が、前記抗原結合領域のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記バリアントのアミノ酸配列が前記抗原結合領域の配列と少なくとも約80％の配列同一性を共有する、請求項1〜7のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項９】
前記病原体が、ウイルス病原体、細菌病原体、単細胞寄生生物病原体又は多細胞寄生生物病原体である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項１０】
前記病原体が、アデノウイルス、パピローマウイルス、へパドナウイルス、パルボウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン-バーウイルス、サイトメガロウイルス（CMV）、単純ヘルペスウイルス、ロゼオロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、オルトミクソウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、ヒトエンテロウイルス、A型肝炎ウイルス、ヒトライノウイルス、ポリオウイルス、レトロウイルス、ロタウイルス、フラビウイルス、ヘパシウイルス及び風疹ウイルスから成る群から選択されるウイルス病原体である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項１１】
前記病原体が、バシルス属、ボルデテラ属、ボレリア属、ブルセラ属、ブルコールデリア属、カンピロバクター属、クラミジア属、クラミドフィラ属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、腸球菌属、エスケリキア属、フランシセラ属、ヘモフィルス属、ヘリコバクター属、レジオネラ属、レプトスピラ属、リステリア属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ属、ナイセリア属、シュードモナス属、リケッチア属、サルモネラ属、赤痢菌属、ブドウ球菌属、連鎖球菌属、トレポネーマ属、ビブリオ属及びエルシニア属から成る群から選択される属由来の細菌病原体である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項１２】
前記病原体が、アカントアメーバー、アニサキス、アスカリス・ルンブリコイデス、バランチジウム・コリ、多節条虫亜綱（サナダムシ）、ツツガムシ、コクリオミイヤ・ホミニボラクス、エントアメーバー・ヒストリチカ、ファシオラ・ヘパチカ、ギアルジア・ランブリア、鉤虫、リーシュマニア、リングアツラ・セルラータ、肝蛭、ロア糸状虫、肺吸虫（肺蛭）、ギョウチュウ、熱帯熱マラリア原虫、住血吸虫、ストロンギロイデス・ステルコラリス、サナダムシ、トキソプラズマ・ゴンジイ、トリパノソーマ、鞭虫及びウケレリア・バンクロフティから成る群から選択される寄生生物病原体である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項１３】
前記抗原性ポリペプチドが以下から成る群から選択される、請求項1〜12のいずれか1項に記載のIP-MSC：インフルエンザヘマグルチニン1（HA1）；インフルエンザヘマグルチニン2（HA2）；インフルエンザノイラミニダーゼ（NA）；ラッサウイルス（LASV）糖タンパク質1（gp1）；LASV糖タンパク質2（gp2）；LASVヌクレオキャプシド関連タンパク質（NP）；LASV Lタンパク質；LASV Zタンパク質；SARSウイルスSタンパク質；エボラウイルスGP2；麻疹ウイルス融合1（F1）タンパク質；HIV-1トランスメンブレン（TM）タンパク質；HIV-1糖タンパク質41（gp41）；HIV-1糖タンパク質120（gp120）；C型肝炎ウイルス（HCV）エンベロープ糖タンパク質1（E1）；HCVエンベロープ糖タンパク質2（E2）；HCVヌクレオキャプシドタンパク質（p22）；西ナイルウイルス（WNV）エンベロープ糖タンパク質（E）；日本脳炎ウイルス（JEV）エンベロープ糖タンパク質（E）；黄熱ウイルス（YFV）エンベロープ糖タンパク質（E）；ダニ媒介脳炎ウイルス（TBEV）エンベロープ糖タンパク質（E）；G型肝炎ウイルス（HGV）エンベロープ糖タンパク質1（E1）；呼吸系シンクチバルウイルス（RSV）融合（F）タンパク質；単純ヘルペスウイルス1（HSV-1）gDタンパク質；HSV-1 gGタンパク質；HSV-2 gDタンパク質；HSV-2 gGタンパク質；B型肝炎ウイルス（HBV）コアタンパク質；エプスタイン-バーウイルス（EBV）糖タンパク質125（gp125）；細菌外膜タンパク質アッセンブリー因子BamA；細菌転移アッセンブリーモジュールタンパク質TamA；細菌ポリペプチド輸送関連タンパク質ドメインタンパク質；細菌表面抗原D15；炭疽防御タンパク質；炭疽致死因子；炭疽浮腫因子；腸チフス菌S1Da；腸チフス菌S1Db；コレラ毒素；コレラ熱ショックタンパク質；ボツリヌス菌抗原S；ボツリヌス毒素；エルシニア・ペスチスF1；エルシニア・ペスチスV抗原；エルシニア・ペスチスYopH；エルシニア・ペスチスYopM；エルシニア・ペスチスYopD；エルシニア・ペスチスプラスミノーゲンアクチベーター因子（Pla）；プラスモジウムサーカムスポロゾイトタンパク質（CSP）；プラスモジウムスポロゾイト表面タンパク質（SSP2/TRAP）；プラスモジウム肝病期抗原1（LSA1）；プラスモジウム輸出タンパク質1（EXP1）；プラスモジウム赤血球結合抗原175（EBA-175）；プラスモジウムシステインリッチ防御抗原（cyRPA）；プラスモジウム熱ショックタンパク質70（hsp70）；住血吸虫Sm29；及び住血吸虫シグナルトランスダクションタンパク質14-3-3。
【請求項１４】
骨髄由来間葉幹細胞又は脂肪由来間葉幹細胞から調製される、請求項1〜13のいずれか1項に記載のIP-MSC。
【請求項１５】
病原体によって引き起こされる感染症又は毒素への曝露による毒性を治療又は予防するための医薬組成物であって、医薬的に許容できる担体中に請求項1〜14のいずれか1項に記載のIP-MSCを含む、前記医薬組成物。
【請求項１６】
免疫防御ポリペプチドの発現可能なアミノ酸配列をコードするエピソームベクターであって、各免疫反応性ポリペプチドが、前記病原体によって産生される抗原に特異的な若しくは前記毒素に特異的な中和抗体の抗原結合領域由来のアミノ酸配列、又はそのアミノ酸配列中に1つ以上の置換を含み、かつ前記抗原結合領域の配列と少なくとも約50％の配列同一性を共有する前記抗原結合領域配列のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記抗原結合領域配列又はそのバリアントが、前記病原体又は毒素と特異的に結合しこれを中和するように配置されており、さらにエピソームベクターが場合によって誘導性アポトーシス遺伝子を含んでもよい、前記エピソームベクター。
【請求項１７】
病原体によって引き起こされる感染症又は毒素への曝露による毒性の治療又は予防のための薬剤の製造における、請求項1〜14のいずれか1項に記載のIP-MSCの使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
参考文献
2016518819.tif 000001
2016518819.tif 000002
本発明の好ましい態様は、下記の通りである。
〔１〕病原体又は毒素を特異的に標的とする複数の免疫反応性ポリペプチドをエピソームにより発現する免疫防御初代間葉幹細胞（IP-MSC）であって、前記IP-MSCは、前記病原体又は毒素を特異的に標的とする複数の発現可能免疫反応性ポリペプチドをコードする1つ以上のエピソームベクターをトランスフェクトされており、各免疫反応性ポリペプチドは、前記病原体によって産生される抗原に特異的な若しくは前記毒素に特異的な中和抗体の抗原結合領域由来のアミノ酸配列、又はそのアミノ酸配列中に1つ以上の置換を含みかつ前記抗原結合領域配列と少なくとも約50％の配列同一性を共有する前記抗原結合領域配列のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記抗原結合領域配列又はそのバリアントは、前記病原体又は毒素と特異的に結合しこれを中和するように配置されており、さらに前記エピソームベクターは場合によって誘導性アポトーシス遺伝子を含む、前記免疫防御初代間葉幹細胞。
〔２〕2〜約100の免疫反応性ポリペプチドをエピソームにより発現する、前記〔1〕に記載のIP-MSC。
〔３〕1つ以上の他の免疫調節因子を更に発現する、前記〔1〕又は〔2〕に記載のIP-MSC。
〔４〕前記1つ以上の免疫調節因子が、インターロイキン及びインターフェロンから選択される、前記〔1〕〜〔3〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔５〕前記1つ以上の免疫調節因子が、L-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-9、 IL-12、IFNα、IFNβ及びIFNωから選択される、前記〔3〕に記載のIP-MSC。
〔６〕各免疫反応性ポリペプチドが、完全長抗体、抗体単一鎖可変抗体フラグメント（ScFV）、一価抗体抗原結合フラグメント（Fab）、二価抗体抗原結合フラグメント（F(ab’)2）、ジアボディ及びトリボディから選択される、前記〔1〕〜〔5〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔７〕前記免疫反応性ポリペプチドの1つ以上が、前記抗原結合領域のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記バリアントのアミノ酸配列置換が保存的置換を含む、前記〔1〕〜〔6〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔８〕前記免疫反応性ポリペプチドの1つ以上が、前記抗原結合領域のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記バリアントのアミノ酸配列が前記抗原結合領域の配列と少なくとも約80％の配列同一性を共有する、前記〔1〕〜〔7〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔９〕前記病原体が、ウイルス病原体、細菌病原体、単細胞寄生生物病原体又は多細胞寄生生物病原体である、前記〔1〕〜〔8〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔１０〕前記病原体が、アデノウイルス、パピローマウイルス、へパドナウイルス、パルボウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン-バーウイルス、サイトメガロウイルス（CMV）、単純ヘルペスウイルス、ロゼオロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、オルトミクソウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス、コロナウイルス、ヒトエンテロウイルス、A型肝炎ウイルス、ヒトライノウイルス、ポリオウイルス、レトロウイルス、ロタウイルス、フラビウイルス、ヘパシウイルス及び風疹ウイルスから成る群から選択されるウイルス病原体である、前記〔1〕〜〔8〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔１１〕前記病原体が、バシルス属、ボルデテラ属、ボレリア属、ブルセラ属、ブルコールデリア属、カンピロバクター属、クラミジア属、クラミドフィラ属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、腸球菌属、エスケリキア属、フランシセラ属、ヘモフィルス属、ヘリコバクター属、レジオネラ属、レプトスピラ属、リステリア属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ属、ナイセリア属、シュードモナス属、リケッチア属、サルモネラ属、赤痢菌属、ブドウ球菌属、連鎖球菌属、トレポネーマ属、ビブリオ属及びエルシニア属から成る群から選択される属由来の細菌病原体である、前記〔1〕〜〔8〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔１２〕前記病原体が、アカントアメーバー、アニサキス、アスカリス・ルンブリコイデス、バランチジウム・コリ、多節条虫亜綱（サナダムシ）、ツツガムシ、コクリオミイヤ・ホミニボラクス、エントアメーバー・ヒストリチカ、ファシオラ・ヘパチカ、ギアルジア・ランブリア、鉤虫、リーシュマニア、リングアツラ・セルラータ、肝蛭、ロア糸状虫、肺吸虫（肺蛭）、ギョウチュウ、熱帯熱マラリア原虫、住血吸虫、ストロンギロイデス・ステルコラリス、サナダムシ、トキソプラズマ・ゴンジイ、トリパノソーマ、鞭虫及びウケレリア・バンクロフティから成る群から選択される寄生生物病原体である、前記〔1〕〜〔8〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔１３〕前記抗原性ポリペプチドが以下から成る群から選択される、前記〔1〕〜〔12〕のいずれか1項に記載のIP-MSC：インフルエンザヘマグルチニン1（HA1）；インフルエンザヘマグルチニン2（HA2）；インフルエンザノイラミニダーゼ（NA）；ラッサウイルス（LASV）糖タンパク質1（gp1）；LASV糖タンパク質2（gp2）；LASVヌクレオキャプシド関連タンパク質（NP）；LASV Lタンパク質；LASV Zタンパク質；SARSウイルスSタンパク質；エボラウイルスGP2；麻疹ウイルス融合1（F1）タンパク質；HIV-1トランスメンブレン（TM）タンパク質；HIV-1糖タンパク質41（gp41）；HIV-1糖タンパク質120（gp120）；C型肝炎ウイルス（HCV）エンベロープ糖タンパク質1（E1）；HCVエンベロープ糖タンパク質2（E2）；HCVヌクレオキャプシドタンパク質（p22）；西ナイルウイルス（WNV）エンベロープ糖タンパク質（E）；日本脳炎ウイルス（JEV）エンベロープ糖タンパク質（E）；黄熱ウイルス（YFV）エンベロープ糖タンパク質（E）；ダニ媒介脳炎ウイルス（TBEV）エンベロープ糖タンパク質（E）；G型肝炎ウイルス（HGV）エンベロープ糖タンパク質1（E1）；呼吸系シンクチバルウイルス（RSV）融合（F）タンパク質；単純ヘルペスウイルス1（HSV-1）gDタンパク質；HSV-1 gGタンパク質；HSV-2 gDタンパク質；HSV-2 gGタンパク質；B型肝炎ウイルス（HBV）コアタンパク質；エプスタイン-バーウイルス（EBV）糖タンパク質125（gp125）；細菌外膜タンパク質アッセンブリー因子BamA；細菌転移アッセンブリーモジュールタンパク質TamA；細菌ポリペプチド輸送関連タンパク質ドメインタンパク質；細菌表面抗原D15；炭疽防御タンパク質；炭疽致死因子；炭疽浮腫因子；腸チフス菌S1Da；腸チフス菌S1Db；コレラ毒素；コレラ熱ショックタンパク質；ボツリヌス菌抗原S；ボツリヌス毒素；エルシニア・ペスチスF1；エルシニア・ペスチスV抗原；エルシニア・ペスチスYopH；エルシニア・ペスチスYopM；エルシニア・ペスチスYopD；エルシニア・ペスチスプラスミノーゲンアクチベーター因子（Pla）；プラスモジウムサーカムスポロゾイトタンパク質（CSP）；プラスモジウムスポロゾイト表面タンパク質（SSP2/TRAP）；プラスモジウム肝病期抗原1（LSA1）；プラスモジウム輸出タンパク質1（EXP1）；プラスモジウム赤血球結合抗原175（EBA-175）；プラスモジウムシステインリッチ防御抗原（cyRPA）；プラスモジウム熱ショックタンパク質70（hsp70）；住血吸虫Sm29；及び住血吸虫シグナルトランスダクションタンパク質14-3-3。
〔１４〕骨髄由来間葉幹細胞又は脂肪由来間葉幹細胞から調製される、前記〔1〕〜〔13〕のいずれか1項に記載のIP-MSC。
〔１５〕病原体によって引き起こされる感染症又は毒素への曝露による毒性を治療又は予防するための医薬組成物であって、医薬的に許容できる担体中に前記〔1〕〜〔14〕のいずれか1項に記載のIP-MSCを含む、前記医薬組成物。
〔１６〕病原体によって引き起こされる感染症又は毒素への曝露による毒性を治療又は予防する方法であって、有効な投薬量の前記〔1〕〜〔14〕のいずれか1項に記載のIP-MSCを対象に投与する工程を含む、前記方法。
〔１７〕病原体によって引き起こされる疾患の流行を治療若しくは予防するか又は毒素への曝露を緩和する方法であって、前記病原体又は毒素に曝露されているか若しくは暴露されるリスクを有する対象に免疫防御初代間葉幹細胞（IP-MSC）を投与する工程を含み、前記IP-MSCが、前記病原体又は毒素を特異的に標的とする少なくとも2つの免疫反応性ポリペプチドをコードする1つ以上のエピソームベクターをトランスフェクトされており、各免疫反応性ポリペプチドが、前記病原体又は毒素に特異的な中和抗体の抗原結合領域を含むか又は前記抗原結合領域のバリアントをコードし、前記バリアントが前記抗原結合領域のアミノ酸配列に1つ以上の置換を含み、かつ前記中和抗体の抗原結合領域と少なくとも50％の配列同一性を共有する、前記方法。
〔１８〕少なくとも2つの免疫反応性ポリペプチドをコードする1つ以上のエピソームベクターを初代間葉幹細胞にトランスフェクトする追加の工程を含む、前記〔17〕に記載の方法。
〔１９〕前記初代MSCにトランスフェクトする前に、前記病原体の疾患又は毒素曝露の1人以上の生存者から入手した1つ以上の血液サンプルから前記病原体又は毒素に対する中和抗体を同定する追加の工程を含む、前記〔18〕に記載の方法。
〔２０〕前記初代MSCにトランスフェクトする前に、前記少なくとも2つ以上の免疫反応性ポリペプチドの発現可能なアミノ酸配列をコードする1つ以上のエピソームベクターを調製する追加の工程を含む、前記〔17〕に記載の方法。
〔２１〕病原体によって引き起こされる疾患の流行を治療若しくは予防するか又は毒素への曝露を緩和するための予防用若しくは治療用間葉幹細胞を調製する方法であって、少なくとも2つの免疫反応性ポリペプチドをコードする1つ以上のエピソームベクターを初代間葉幹細胞にトランスフェクトして前記免疫反応性ポリペプチドを発現する免疫防御初代間葉幹細胞（IP-MSC）を作製する工程を含み、前記免疫反応性ポリペプチドが、前記病原体若しくは毒素に特異的な中和抗体の抗原結合領域由来のアミノ酸を含むか又は前記抗原結合領域配列のバリアントをコードし、前記バリアントが前記抗原結合領域由来のアミノ酸配列に1つ以上の置換を含み、かつ前記中和抗体の抗原結合領域配列と少なくとも50％の配列同一性を共有する、前記方法。
〔２２〕前記初代MSCにトランスフェクトする前に、前記病原体の疾患又は毒素曝露の1人以上の生存者から入手した血液サンプルから前記病原体又は毒素に対する中和抗体を同定する追加の工程を含む、前記〔21〕に記載の方法。
〔２３〕前記初代MSCにトランスフェクトする前に、前記少なくとも2つ以上の免疫反応性ポリペプチドの発現可能なアミノ酸配列をコードする1つ以上のエピソームベクターを調製する追加の工程を含む、前記〔21〕に記載の方法。
〔２４〕免疫防御ポリペプチドの発現可能なアミノ酸配列をコードするエピソームベクターであって、各免疫反応性ポリペプチドが、前記病原体によって産生される抗原に特異的な若しくは前記毒素に特異的な中和抗体の抗原結合領域由来のアミノ酸配列、又はそのアミノ酸配列中に1つ以上の置換を含み、かつ前記抗原結合領域の配列と少なくとも約50％の配列同一性を共有する前記抗原結合領域配列のバリアントのアミノ酸配列を含み、前記抗原結合領域配列又はそのバリアントが、前記病原体又は毒素と特異的に結合しこれを中和するように配置されており、さらにエピソームベクターが場合によって誘導性アポトーシス遺伝子を含む、前記エピソームベクター。
〔２５〕病原体によって引き起こされる感染症又は毒素への曝露による毒性の治療又は予防のための、前記〔1〕〜〔14〕のいずれか1項に記載のIP-MSCの使用。