【手続補正書】
【提出日】平成29年10月23日(2017.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基質を切断できる酵素の切断活性の試験検体中における存在を検出するための酵素検出デバイスであって、
(i) 試験検体に加えるための指示薬分子であって、
(a) 該酵素切断活性が存在する場合に該酵素により切断され得る少なくとも1つの切断部位を含む切断領域；および
(b) 指示薬分子の切断後完全なままである捕捉部位；
を含む指示薬分子であり、少なくとも1つの切断部位の切断が、新しい結合部位を生じる、指示薬分子；
(ii) 試験検体を受け取る捕捉ゾーンであって、新しい結合部位を含む指示薬分子を固定するために、指示薬分子が切断されたかまたは切断されていないかにかかわらず、指示薬分子の捕捉部位に結合できる捕捉分子を含む捕捉ゾーン；ならびに
(iii) 新しい結合部位に結合できる結合分子であって、切断が生じるまで指示薬分子に結合できない結合分子
を含む、デバイス。
【請求項２】
少なくとも1つの切断部位の切断が、少なくとも1つの部分が捕捉部位につながったままである切断領域の2つの部分を生じ、結合分子が、捕捉部位とつながった切断領域の少なくとも1つの部分を含む指示薬分子の該部分に結合できる、請求項1に記載の酵素検出デバイス。
【請求項３】
(i) 少なくとも1つの切断部位の切断が、指示薬分子の2つの別々の部分を生じる；または
(ii) 少なくとも1つの切断部位の切断が互いにつながったままである指示薬分子の切断領域の2つの部分を生じるように、指示薬分子が構造上拘束される、
請求項1または2に記載の酵素検出デバイス。
【請求項４】
結合分子が、切断後に切断領域に結合する、請求項1〜3のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項５】
結合分子が、切断後に指示薬分子の切断領域の両部分に結合する、請求項4に記載の酵素検出デバイス。
【請求項６】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、2個のアミノ酸残基間に位置するペプチド結合を含む；および／または
(ii) 基質を切断できる酵素が、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、リパーゼ、ヌクレアーゼ、カルボヒドラーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼ、ノイラミニダーゼ、エステラーゼ、DNA分解酵素およびRNA分解酵素より選択される、
請求項1〜5のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項７】
(i)において、プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼである、請求項6に記載の酵素検出デバイス。
【請求項８】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、特定のプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(ii) 少なくとも1つの切断部位が、特定のマトリックスメタロプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(iii) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13および／またはMMP-9による切断にバイアスがかけられる；および／または
(iv) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、12および8による切断にバイアスがかけられる、
請求項1〜7のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項９】
(iv)において、少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、12および8による切断にこの優先順でバイアスがかけられる、請求項8に記載の酵素検出デバイス。
【請求項１０】
(i) 切断部位が、切断後にアミノ酸配列GPQGを含む部分およびアミノ酸配列IFGQを含む部分を生じるアミノ酸配列GPQGIFGQ（配列番号1）内にある；および／または
(ii) 結合分子が抗体を含む；および／または
(iii) 捕捉部位がビオチン分子を含み、捕捉ゾーンがストレプトアビジン分子を含む；および／または
(iv) デバイスが、捕捉分子が結合して捕捉ゾーンを形成する固体支持体を含む、
請求項1〜9のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項１１】
(iv)において、
(i) 固体支持体が、さらに、検体が適用される検体適用ゾーンを含む；および／または
(ii) 固体支持体が、さらに、検体適用ゾーンから見て捕捉ゾーンの下流に、該デバイスを用いるアッセイが正常に完了したことを示すための、結合分子に結合する更なる結合分子を含むコントロールゾーンを含む；および／または
(iii) 固体支持体がクロマトグラフ媒体を含む、
請求項10のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項１２】
基質を切断できる酵素の切断活性の試験検体中における有無を検出するための方法であって、
(i) 指示薬分子を試験検体と接触させること（ここで、該指示薬分子は、
(a) 該酵素切断活性が存在する場合に該酵素により切断され得る少なくとも1つの切断部位を含む切断領域；および
(b) 指示薬分子の切断後完全なままである捕捉部位；
を含む指示薬分子であり、ここで少なくとも1つの切断部位の切断は、新しい結合部位を生じる）；
(ii) 試験検体に新しい結合部位に結合できる結合分子を加えること（ここで、該結合分子は、切断が生じるまで指示薬分子に結合できない）；
(iii) 捕捉部位への捕捉ゾーン中の捕捉分子の結合によって捕捉ゾーンにおいて新しい結合部位を含む指示薬分子の該部分を捕捉すること（ここで、該捕捉分子は、指示薬分子が切断されたかまたは切断されていないかにかかわらず捕捉部位に結合できる）；ならびに
(iv) 捕捉ゾーンにおいて捕捉された指示薬分子の新しい結合部位への結合分子の結合を測定することにより少なくとも1つの切断部位の切断を検出すること
を含む、方法。
【請求項１３】
少なくとも1つの切断部位の切断が、少なくとも1つの部分が捕捉部位につながったままである切断領域の2つの部分を生じ、結合分子が、捕捉部位とつながった切断領域の少なくとも1つの部分を含む指示薬分子の該部分に結合できる、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
(i) 少なくとも1つの切断部位の切断が、指示薬分子の2つの別々の部分を生じる；または
(ii) 少なくとも1つの切断部位の切断が互いにつながったままである指示薬分子の切断領域の2つの部分を生じるように、指示薬分子が構造上拘束される、
請求項12または13に記載の方法。
【請求項１５】
結合分子が、切断後に切断領域に結合する、請求項12〜14のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
結合分子が、切断後に指示薬分子の切断領域の両部分に結合する、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、2個のアミノ酸残基間に位置するペプチド結合を含む；および／または
(ii) 基質を切断できる酵素が、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、リパーゼ、ヌクレアーゼ、カルボヒドラーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼ、ノイラミニダーゼ、エステラーゼ、DNA分解酵素およびRNA分解酵素より選択される、
請求項12〜16のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
(ii)において、プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼである、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、特定のプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(ii) 少なくとも1つの切断部位が、特定のマトリックスメタロプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(iii) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13および／またはMMP-9による切断にバイアスがかけられる；および／または
(iv) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、8および12による切断にバイアスがかけられる、
請求項12〜18のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
(iv)において、少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、12および8による切断にこの優先順でバイアスがかけられる、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
(i) 切断部位が、切断後にアミノ酸配列GPQGを含む部分およびアミノ酸配列IFGQを含む部分を生じるアミノ酸配列GPQGIFGQ（配列番号1）内にある；および／または
(ii) 結合分子が抗体を含む；および／または
(iii) 捕捉部位がビオチン分子を含み、捕捉ゾーンがストレプトアビジン分子を含む；および／または、
(iv) デバイスが、捕捉分子が結合して捕捉ゾーンを形成する固体支持体を含む、
請求項12〜20のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
(iv)において、
(i) 固体支持体が、さらに、検体が適用される検体適用ゾーンを含む；および／または
(ii) 固体支持体が、さらに、検体適用ゾーンから見て捕捉ゾーンの下流に、該デバイスを用いるアッセイが正常に完了したことを示すための、結合分子に結合する更なる結合分子を含むコントロールゾーンを含む；および／または
(iii) 固体支持体がクロマトグラフ媒体を含む；および／または
(iv) 試験検体を固体支持体に加える前に試験検体と指示薬分子を混合する、
請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
アミノ酸配列GPQGに結合するがアミノ酸配列GPQGIFGQ（配列番号1）には結合しない抗体。
【請求項２４】
アミノ酸配列IFGQに結合するがアミノ酸配列GPQGIFGQ（配列番号1）には結合しない抗体。
【請求項２５】
基質を切断できる酵素の切断活性の試験検体中における存在を検出するための酵素検出キットであって、
(i) 試験検体に加えるための指示薬分子であって、
(a) 該酵素切断活性が存在する場合に該酵素により切断され得る少なくとも1つの切断部位を含む切断領域；および
(b) 指示薬分子の切断後完全なままである捕捉部位；
を含む指示薬分子であり、少なくとも1つの切断部位の切断が、新しい結合部位を生じる、指示薬分子；
(ii) 指示薬分子が切断されたかまたは切断されていないかにかかわらず、指示薬分子の捕捉部位に結合できる捕捉分子；
(iii) 試験検体を受け取る捕捉ゾーンを形成するために捕捉分子が結合し得る（すなわち結合することができるかまたは結合している）固体支持体；ならびに
(iv) 新しい結合部位に結合できる結合分子であって、切断が生じるまで指示薬分子に結合できない結合分子
を含む、酵素検出キット。
【請求項２６】
少なくとも1つの切断部位の切断が、少なくとも1つの部分が捕捉部位につながったままである切断領域の2つの部分を生じ、結合分子が、捕捉部位とつながった切断領域の少なくとも1つの部分を含む指示薬分子の該部分に結合できる、請求項25に記載の酵素検出キット。
【請求項２７】
(i) 少なくとも1つの切断部位の切断が、指示薬分子の2つの別々の部分を生じる；または
(ii) 少なくとも1つの切断部位の切断が互いにつながったままである指示薬分子の切断領域の2つの部分を生じるように、指示薬分子が構造上拘束される、
請求項25または26に記載の酵素検出キット。
【請求項２８】
結合分子が、切断後に切断領域に結合する、請求項25〜27のいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項２９】
結合分子が、切断後に指示薬分子の切断領域の両部分に結合する、請求項28に記載の酵素検出キット。
【請求項３０】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、2個のアミノ酸間に位置するペプチド結合を含む；および／または
(ii) 基質を切断できる酵素が、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、リパーゼ、ヌクレアーゼ、カルボヒドラーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼ、ノイラミニダーゼ、エステラーゼ、DNA分解酵素およびRNA分解酵素より選択される、
請求項25〜29のいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項３１】
(ii)において、プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼである、請求項30に記載の酵素検出キット。
【請求項３２】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、特定のプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(ii) 少なくとも1つの切断部位が、特定のマトリックスメタロプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(iii) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13および／またはMMP-9による切断にバイアスがかけられる；および／または
(iv) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、8および12による切断にバイアスがかけられる、
請求項25〜31のいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項３３】
(iv)において、少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、12および8による切断にこの優先順でバイアスがかけられる、請求項32に記載の酵素検出キット。
【請求項３４】
(i) 切断部位が、切断後にアミノ酸配列GPQGを含む部分およびアミノ酸配列IFGQを含む部分を生じるアミノ酸配列GPQGIFGQ（配列番号1）内にある；および／または
(ii) 結合分子が抗体を含む；および／または
(iii) 捕捉部位がビオチン分子を含む；および／または
(iv) 捕捉分子がストレプトアビジン分子を含む；および／または
(v) キットが、捕捉分子が結合して捕捉ゾーンを形成する固体支持体を含む、
請求項25〜33のいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項３５】
(v)において、固体支持体が、さらに、検体が適用される検体適用ゾーンを含む、請求項34に記載の酵素検出キット。
【請求項３６】
キットが、さらに、結合分子に結合できる更なる結合分子を含む、請求項25〜35のいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項３７】
固体支持体が、さらに、検体適用ゾーンから見て捕捉ゾーンの下流に、更なる結合分子が結合し得るコントロールゾーンを含む、請求項36に記載の酵素検出キット。
【請求項３８】
固体支持体がクロマトグラフ媒体を含む、請求項25〜37のいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項３９】
試験検体における呼吸器病態を診断するための、請求項1〜11のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項４０】
呼吸器病態が、慢性閉塞性肺疾患、または嚢胞性線維症が原因の気道の炎症である、請求項39に記載の酵素検出デバイス。
【請求項４１】
試験検体における呼吸器病態を診断するための、請求項12〜22のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
呼吸器病態が、慢性閉塞性肺疾患、または嚢胞性線維症が原因の気道の炎症である、請求項41に記載の方法。
【請求項４３】
試験検体における呼吸器病態を診断するための、請求項25〜34にいずれかに記載の酵素検出キット。
【請求項４４】
呼吸器病態が、慢性閉塞性肺疾患、または嚢胞性線維症が原因の気道の炎症である、請求項43に記載の酵素検出キット。
【請求項４５】
基質を切断できる酵素の切断活性の試験検体中における存在を検出するのに用いるための指示薬分子であって、
(a) 該酵素切断活性が存在する場合に該酵素により切断され得る少なくとも1つの切断部位を含む切断領域；
(b) 指示薬分子の切断後完全なままである捕捉部位；および
(c) 少なくとも1つの切断部位の外側にあり、切断領域の外側であってもよい指示薬分子の少なくとも2つの部分をつなげるために作用する足場分子
を含む指示薬分子であり、該足場が、さらに、少なくとも1つの切断部位の切断が結合分子と結合する新しい結合部位を生じるように構造上指示薬分子を拘束するために作用し、該結合分子が、切断が生じるまで指示薬分子に結合できない、指示薬分子。
【請求項４６】
(i) 新しい結合部位が指示薬分子の新しい構造的配座を示す；および／または
(ii) 新しい結合部位が少なくとも切断領域の一部を含む；および／または
(iii) 新しい結合部位が少なくとも足場分子の一部を含む；および／または
(iv) 新しい結合部位が、切断により生じる指示薬分子の少なくとも2つの部分の両方の一部を含む；および／または
(v) 新しい結合部位が切断部位を含む；および／または
(vi) 切断部位がプロテアーゼ、ペプチダーゼ、リパーゼ、ヌクレアーゼ、カルボヒドラーゼ、ホスファターゼ、スルファターゼ、ノイラミニダーゼ、エステラーゼ、DNA分解酵素およびRNA分解酵素より選択される酵素による切断に対して特異的である、
請求項45のいずれかに記載の指示薬分子。
【請求項４７】
(vi)において、プロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼである、請求項46に記載の指示薬分子。
【請求項４８】
(i) 少なくとも1つの切断部位が、特定のプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(ii) 少なくとも1つの切断部位が、特定のマトリックスメタロプロテアーゼによる切断にバイアスがかけられる；および／または
(iii) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13および／またはMMP-9による切断にバイアスがかけられる；および／または
(iv) 少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、12および8による切断にバイアスがかけられる、
請求項45〜47のいずれかに記載の指示薬分子。
【請求項４９】
(iv)において、少なくとも1つの切断部位が、MMP-13、9、2、12および8による切断にこの優先順でバイアスがかけられる、請求項48に記載の指示薬分子。
【請求項５０】
(i) 切断部位が、アミノ酸配列GPQGを含む部分およびアミノ酸配列IFQGを含む部分を生じるアミノ酸配列GPQGIFGQ（配列番号1）内にある；および／または
(ii) 
【化１】
2016535282.tif 000001
【化２】
2016535282.tif 000002
より選択される足場分子を含む；および／または
(iii) 結合分子が抗体を含む；および／または
(iv) 捕捉部位がビオチン分子を含む；および／または
(v) 足場分子が（ヘテロ）芳香族分子を含む、
請求項45〜49のいずれかに記載の指示薬分子。
【請求項５１】
(v)において、（ヘテロ）芳香族分子が少なくとも2個のハロゲン化ベンジル置換基を含む、請求項50に記載の指示薬分子。
【請求項５２】
該足場がハロメチルアレーンである、請求項45〜51のいずれかに記載の指示薬分子。
【請求項５３】
該ハロメチルアレーンが、ビス(ブロモメチル)ベンゼン、トリス(ブロモメチル)ベンゼンおよびテトラ(ブロモメチル)ベンゼンからなる群より選択されるか、あるいはそれらの誘導体である、請求項52に記載の指示薬分子。
【請求項５４】
該足場が、オルト、メタおよびパラ-ビス(ブロモメチル)ベンゼンからなる群より選択されるか、1,2-ビス(ブロモメチル)ベンゼン、1,3-ビス(ブロモメチル)ベンゼンおよび1,4-ビス(ブロモメチル)ベンゼンより選択されてもよく、1,3,5-トリス(ブロモメチル)ベンゼン、1,2,4,5-テトラキス(ブロモメチル)ベンゼンおよび1,2,3,4,5,6-ヘキサキス(ブロモメチル)ベンゼンなどのさらに置換されたハロメチルアレーンより選択されるか、2,7-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、1,4-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、1,8-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、1,3-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、1,2-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、2,3-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、2,6-ビス(ブロモメチル)-ナフタレン、1,2,3,4-テトラキス(ブロモメチル)-ナフタレン、9,10-ビス(ブロモメチル)-フェナントレン、5,10-ビス(ブロモメチル)-アントラセンおよび1-(ブロモメチル)-3-[3-(ブロモメチル)ベンジル]ベンゼンなどの多環式ハロメチルアレーンより選択されるか、1,3-ビス(ブロモメチル)-5-メチルベンゼン、2,5-ビス(ブロモメチル)-1,3-ジメチルベンゼン、2,5-ビス(ブロモメチル)-1,4-ジメチルベンゼン、2,4-ビス(ブロモメチル)-1,3,5-トリメチルベンゼンおよび3,6-ビス(ブロモメチル)デュレンなどのメチル置換ハロメチルアレーンより選択されるか、3,4-ビス(ブロモメチル)-ニトロベンゼンおよび2,3-ビス(ブロモメチル)-ニトロベンゼンなどのニトロ置換ハロメチルアレーンより選択されるか、1,3-ビス(ブロモメチル)-5-ヒドロキシベンゼンなどのヒドロキシ置換ハロメチルアレーンより選択されるか、2,6-ビス(ブロモメチル)-ベンゾニトリルなどのシアノ置換ハロメチルアレーンより選択されるか、あるいは1,3-ビス(ブロモメチル)-5-メトキシベンゼン、1,3-ビス(ブロモメチル)-2-メトキシ-5-メチルベンゼン、1,3-ビス(ブロモメチル)-5-ヒドロキシベンゼン、2,3-ビス(ブロモメチル)-1,4-ジメトキシベンゼンおよび2,5-ビス(ブロモメチル)-1,4-ジメトキシベンゼンなどのメトキシ置換ハロメチルアレーンより選択される、請求項45〜53のいずれかに記載の指示薬分子。
【請求項５５】
請求項45〜54のいずれかに記載の指示薬分子を組み込んでいる、請求項1〜11のいずれかに記載の酵素検出デバイス。
【請求項５６】
請求項45〜54のいずれかに記載の指示薬分子を組み込んでいる、請求項12〜22のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
請求項45〜54のいずれかに記載の指示薬分子を組み込んでいる、請求項25〜38のいずれかに記載の酵素検出キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2016535282.tif 000003
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１４−３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１４−３】
2016535282.tif 000004