(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カリンまたはマルメロの果実から抽出して得られる、αーアミラーゼインヒビター活性又はチロシナーゼインヒビター活性を有する酵素阻害剤。
【請求項２】
請求項１のαーアミラーゼインヒビター活性を有する酵素阻害剤を含有するダイエット食品。
【請求項３】
カリンまたはマルメロの果実から抽出して得られる、チロシナーゼインヒビター活性を有する化粧料。
【請求項４】
生カリンの皮および芯を除去して得られたカリン素材にエタノールなどの溶剤を加え、ミキサーなどによりよく粉砕した後、室温にて約１週間放置して抽出を行い、次いでガーゼなどにより濾過後、その濾液を減圧下に濃縮、乾固して得られたシラップをエタノールなどにより複数回加熱抽出し、その抽出液を合併し、減圧濃縮して得られたシラップをさらにエタノールなどにより加温溶解し、乳糖を加えよく混和し、次いで温風にて乾燥、粉砕してなることを特徴とする、αーアミラーゼインヒビター活性又はチロシナーゼインヒビター活性を有する酵素阻害剤の製造方法。
【請求項５】
マルメロを剥皮し、さらに果実部分を果芯ならびに種子部分から分離した後、メタノールなどの溶剤と水よりなる溶液を加え、ミキサーなどにより粉砕した後、室温にて約２昼夜放置して抽出を行い、次いで濾材により濾過後、その濾液を更に減圧濾過を行い、得られた濾液を減圧下に濃縮して得ることを特徴とする、αーアミラーゼインヒビター活性又はチロシナーゼインヒビター活性を有する酵素阻害剤の製造方法。
【請求項６】
カリン抽出エキスに、ステアリルアルコール、ステアリン酸、水添ラノリン、オクチルドデシルアルコール、ポリオキシエチレン（２０モル）モノセチル、アルコールエーテル、グリセリンモノステアリン酸エステル、プロビレングリコール、精製水、香料、防腐剤の内１種以上の成分を加えてなることを特徴とする、美白クリームの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、バラ科植物の果実から抽出して得られる酵素阻害剤に関し、さら詳しくは、チロシナ−ゼインヒビタ−ならびにα−アミラ−ゼインヒビタ−活性を有する、バラ科植物の果実由来の酵素阻害剤に関する。
【０００２】
【従来技術および発明が解決しようとする課題】
メラニンは、メラノサイト中のチロシナ−ゼによりＬ−チロシンが酸化され、幾つかの中間体を経て形成される褐色ないし黒色の色素である。美容上の観点のみならず皮膚がんの発現等、医学的な観点からも、メラニン形成の抑制が好ましいとされ、様々な日焼け防止剤が提供されている。しかし、安全かつ有効な日焼け防止剤の有効成分の開発は依然として求められている。また、肥満は、糖尿病等の成人病との関連性が高く、その防止または解消の必要性が指摘されている。現在、ダイエット食品を始め、様々なダイエット法が提案されているが、ここでも安全かつ有効なダイエット食品のための有効成分の開発が求められている。
【０００３】
上記のメラニン形成や肥満の防止の１つの手段として、それらに至る生体内の反応に関与する酵素の活性を阻害する物質が採用される。メラニンは、Ｌ−チロシンのチロシナ−ゼによる酸化を含む酵素反応で生成され、他方、肥満は、例えば、澱粉のα−アミラ−ゼによる消化を発端としている。従って、これらの酵素の活性を阻害するチロシナ−ゼインヒビタ−およびα−アミラ−ゼインヒビタ−を用いることにより、上記の目的が達成できると考えられる。具体的には、前者の例として、コウジ酸やアルプチンなどの物質が化粧品添加物として使用されており（機能性化粧品、２１３頁〜２２３頁、日本化粧品化学研究会編、シ−エムシ−出版社）、後者の例として、小麦からの抽出物が抗肥満用ダイエット食品として示されている（白石、化学と生物、２７巻  ４９１頁１９８９年）。しかしながら、より一層有効かつ安全な酵素阻害剤の開発が待たれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、有効かつ安全なチロシナ−ゼインヒビタ−およびα−アミラ−ゼインヒビタ−を得ることを目的として鋭意研究を重ねた結果、バラ科植物の果実の抽出液から芳香性成分を留去した残渣に、これらチロシナ−ゼインヒビタ−およびα−アミラ−ゼインヒビタ−活性が存在することを初めて見い出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、バラ科植物の果実から抽出して得られる酵素阻害剤を提供するものである。
【０００５】
具体的には、本発明の酵素阻害剤は、バラ科植物の果実から抽出した酵素含有シラップである。本発明の目的から、本発明の酵素阻害剤には、酵素阻害活性を含有するあらゆるバラ科植物の果実からの抽出物が含まれる。そのようなバラ科植物の例としてマルメロおよびカリンが好ましい。秋には黄色く熟したカリンやマルメロの果実は独特の芳香を有し、古くより乾燥した果実片をきざみ煎じて、鎭咳剤などとして使われてきた。また、最近ではこれらに含まれる精油が口臭除去効果を有することが知られている（吉岡ら、特開昭第６３−１３５１７６号公報）。一方、マルメロの種子に含まれる粘質物質がすぐれた保湿効果を持つことからキンケア化粧品用添加物としての有用性も指摘されている（駒崎ら、特開昭第５９−１６３３１２号公報）。しかしながら、酵素阻害活性成分、とりわけチロシナ−ゼインヒビタ−およびα−アミラ−ゼインヒビタ−が含有されていることは、本発明以前にはまったく知られていなかった。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明の酵素阻害剤を得るには、カリン、マルメロ等のバラ科植物の果実そのままで、または果皮、果芯、種子を除いた果肉を用いる。いずれも小片に刻み適当な溶剤で抽出する。本発明の目的には、乾燥果実もしくは収穫後の生の果実のいずれも使用できる。また、抽出効率を良くするため、材料をミキサ−などを用いて粉砕しても良い。抽出溶剤としては、メタノ−ル、エタノ−ル、プロピルアルコ−ル、イソプロピルアルコ−ルなどのアルコ−ル類が挙げられるが、抽出効率や人体への安全性を考慮してエタノ−ルが好ましい。また、これら相互の混合物、あるいはこれらと水との混合溶剤も用いることができる。
【０００７】
アルコール類の含水度は材料の含水率によって異なり、例えば乾燥品を用いた場合、５０〜８０％程度のアルコールで抽出できるが、収穫直後の水分含量の高い果実が原料である場合は無水アルコールで抽出するのが好ましい。材料に対する抽出溶剤の割合は材料１００ｇに対して抽出溶剤３００ｍｌ〜１０００ｍｌ程度である。抽出温度、時間には特に制限はなく、通常、室温から抽出溶媒の沸騰温度の間である。抽出に要する期間も、原料、抽出温度、溶剤の種類、使用量および溶剤に含まれる水の量等により変化するが、室温の場合、通常１〜３０日程度、溶剤の沸騰温度の場合、数十分ないし数時間、通常１時間程度で十分である。このようにして抽出した溶液を、ガーゼなどで荒く濾過した後、さらに濾紙、ガラスフィルターなどを使用して濾過し、次いで、減圧にて溶媒を留去すれば、カリンやマルメロ特有の芳香の無い、目的の黄色もしくは黄褐色の酵素阻害剤としてのシラップが得られる。通常、カリンあるいはマルメロ１個（平均約１００〜５００ｇ）から２０〜６０ｇ程度のシラップが得られ  る。本シラップはそのままもしくは乳糖や糖アルコール類（例えばソルビトールなど）などと配合して食品や化粧品等に製品化することができるが、必要に応じてクロマトグラフィーなどの手段で精製することもできる。
【０００８】
本発明のバラ科果実から得られたシラップを、食品例えば菓子類に添加すると、そのα−アミラ−ゼインヒビタ−活性によるダイエット食品が得られ、化粧用クリ−ム、乳液、ロ−ションなどに添加すると、そのチロシナ−ゼインヒビタ−活性による美白用化粧品が得られる。
【０００９】
【実施例】
実施例１
収穫直後のカリン（新潟県津南町産）１個（３６０ｇ）をエタノ−ル３００ｍｌと水１００ｍｌよりなる溶液に浸漬し、軽くミキサ−にかけて果肉部分を粉砕した後、果芯ならびに種子部分を除き、室温にて１昼夜放置して抽出を行う。次にガーゼで濾過後、その濾液を少量のセライトを敷いたエナグラスにて減圧濾過を行い、得られた濾液を減圧下に濃縮して黄色溶液５０ｍｌを得る。
【００１０】
実施例２
収穫後のマルメロ１０個（２６３０ｇ  新潟県津南町産）を剥皮し、さらに果実部分を果芯ならびに種子部分から分離して後、メタノール３Ｌ、水１Ｌの混液を加え、ミキサーにて粉砕する。粉砕後、室温にて２日間放置して抽出を行い、以下実施例１と同様に処理すればマルメロエキス５０ｍｌが得られた。
【００１１】
上記実施例で調整した抽出液のチロシナーゼインヒビター活性ならびにαアミラーゼインヒビター活性を試験した。
試験例１  カリン抽出液のチロシナーゼインヒビター活性
Ｌーチロシン水溶液（３０ｍｇ／２００ｍｌ）          １０ｍｌ
緩衝液（ｐＨ  ６．８マッキルべイン緩衝液）          １０ｍｌ
蒸留水                                              ２０ｍｌ
実施例１で得られたカリン溶液                          ０．９ｍｌ
上記組成の溶液を３７℃で１０分間加温した後、チロシナーゼ水溶液（１ｍｇ／ｍｌ、マッシュルーム由来、和光純薬）０．１ｍｌを加え、３０分間酵素反応を行う。対照としてカリン溶液の代わりに蒸留水を同量用いて酵素反応を行う。チロシナーゼによって生成するドーパクローム（メラニンが生成する場合の前段階の物質）の量を６５０ｎｍの吸光度測定によって求め、これに基づいて次の試算式によりカリン溶液の示すチロシナーゼインヒビター活性を算出した。
インヒビター活性＝［（Ａ−Ｂ）／Ａ］１００
Ａ：対照溶液の吸光度（０．４７０）
Ｂ：カリン抽出液含有試料の吸光度（０．００２）
計算の結果、実施例１で得たカリン抽出液のインヒビター活性は９９．６％であった。実施例２で調整したマルメロ抽出液についても、上記と同様に試験したところ、以下の結果を得た。
Ａ：０．５１０；  Ｂ０．００５
チロシナーゼインヒビター活性＝９９．０％
【００１２】
試験例２  抽出液のαーアミラーゼインヒビター活性（１）
９本の試験管に水１ｍｌずつを入れ、この最初の試験管に１ｍｌのαーアミラーゼ（０．５％水溶液、細菌由来、和光純薬）を加えてよく混合する。そのうち１ｍｌを２番目の試験管に入れて混合し、その１ｍｌをさらに３番目の試験管に加え混合する。この操作を順次繰り返し、９本目の試験管までの希釈系列を作る。なお９本目の液の１ｍｌは捨てる。水を加えず、アミラーゼ溶液１ｍｌのみの試験管も用意して０本目とする。以上を氷水中に冷却しておく。次に各試験管に１％可溶性澱粉液５ｍｌずつを加え、全部加え終わった後一斉に４０℃の恒温槽に置き、１時間酵素反応を行う。次に試験管を氷水中に入れて冷却する。冷却後、試験管の高さの８０％程度まで水を加え、この上に０．１Ｎヨード液１滴を加えてヨード澱粉反応による呈色（青紫色〜赤色）を見る。実施例１で得られたカリン溶液１ｍｌ＋９ｍｌの溶液を上記水１ｍｌの代わりに各試験管に入れ、同様に酵素反応を行い、ヨード澱粉反応による呈色を見る。その結果は次の表１の通りであった。尚、●はヨード澱粉反応陽性、○は陰性を表す。
【００１３】
0003590908.tif 000002
以上に見られるようにカリン抽出溶液にはαアミラーゼインヒビター活性が認められた。実施例２で調整したマルメロ抽出液についても上記と同様に試験した結果、試験管Ｎｏ．０〜２を除いて、すべてヨード澱粉反応陽性であった。
【００１４】
実施例３
生カリン（１９９４年新潟県中魚沼郡津南町にて収穫）４ｋｇの皮および芯を除去して得られたカリン素材３ｋｇにエタノール４．５ｌを加え、ミキサーでよく粉砕し、のち室温にて一週間放置する。この濾液（約６．５ｌ）を減圧下に濃縮、乾固すれば黄褐色のシラップ２８３ｇが得られる。このシラップを一回あたり４００ｍｌのエタノールで３回加熱抽出し、その抽出液を合併し減圧濃縮すれば黄褐色のシラップが４３ｇ得られる。本シラップをエタノール１００ｍｌに加温溶解し乳糖４００ｇを加えよく混和し、のち温風にて乾燥、粉砕すればαーアミラーゼインヒビター活性の強いサンプル４４０ｇが得られる。
本サンプルのαーアミラーゼインヒビター活性は試験例３に示した方法で測定すると次のようであった。
0003590908.tif 000003
【００１５】
試験例３  サンプルのαーアミラーゼインヒビター活性（２）
αーアミラーゼの阻害反応
０．１％サンプル水溶液１ｍｌに０．５％パンクレアチン（日本薬局方）水溶液および精製水３ｍｌを加えよく混和後、３７℃、１０分間阻害反応を行う。対照としてサンプルに代わり精製水を用い同様に反応を行う。
糖化反応
１％可溶性澱粉液３ｍｌに上記阻害反応液１ｍｌを加え、よく混ぜた後３７℃、１５分間糖化反応を行う。反応終了後、この液２ｍｌをとりソモギーの変法（食品分析ハンドブック：建帛社）にて生成ぶどう糖の分析を行う。
阻害率の算出
対照区の生成ぶどう糖量・・・・・Ａｍｇ
実験区の生成ぶどう糖量・・・・・Ｂｍｇ
阻害率（％）＝１００ー【Ｂ／Ａ】ｘ１００
【００１６】
実施例４
美白クリームの調整
実施例１で得られたエキス５ｍｌをとり、減圧下に溶媒を留去してのち、次の処方で美白クリームを調整した。
カリン抽出エキスる                    ５ｍｌ相当分
ステアリルアルコール                  ６．０ｍｌ
ステアリン酸                          １．０
水添ラノリン                          ５．０
オクチルドデシルアルコール          １０．０
ポリオキシエチレン（２０モル）
モノセチルアルコールエーテル          ４．０
グリセリンモノステアリン酸エステル    ２．０
プロピレングリコール                  ５．０
精製水                              ６６．０
香料                                  適量
防腐剤                                適量
【００１７】
実施例５
ダイエット用クッキーの調整
ショートニング３００ｇ，牛乳２０ｇ，砂糖５０，アスパラテーム５ｇを泡立て器でよく混合する。これに卵６０ｇを少しずつ加えてさらによく混ぜ合わせる。別に小麦粉３００ｇ，ベーキングパウダー１ｇおよび実施例２で得られたマルメロエキス５０ｍｌ相当分の溶媒を減圧下完全に溜去したものをよく練り合わせる。これを先の混ぜ合わせたものとよく混合したのち、冷蔵庫で３０分放置する。次にこれを適当な型に成型し、約１７０℃で２０分間焼成して、目的のクッキー約１，０００ｇを得る。
【００１８】
【発明の効果】
本発明のカリンおよびマルメロの抽出エキスは優れたチロシナーゼインヒビターならびにαーアミラーゼインヒビター活性を有し、化粧品あるいはダイエット食品用などの添加物として有用である。