(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
0003600252.tif 000005
（式中Ｒ3 はＤ−ＰａｌまたはＤ−Ｔｒｐである）で表される医薬ペプチド物質を持続的に制御して放出するための粒剤において、
前式（Ｉ）で表されるペプチドの水不溶性塩を５〜２０重量％含む生分解性高分子物質の微小球の形態を有し、
ａ．式（Ｉ）で表される水溶性塩を水不溶性塩に変換する工程と；
ｂ．この水不溶性塩を、溶解状態で生分解性高分子物質を含有する有機媒体に懸濁する工程と；
ｃ．有機懸濁液を水性媒体に分散させて連続相のエマルジョンを形成する工程と；
ｄ．エマルジョンを過剰の水性媒体に移し、最後に得られた微小球を液相より分離する工程とからなる方法で製造される粒剤。
【請求項２】
前式（Ｉ）で表されるペプチドの水不溶性塩がパモエート、タンニン酸塩、ステアリン酸塩またはパルミチン酸塩である請求項１に記載の粒剤。
【請求項３】
生分解性高分子物質がポリラクチド、ポリグリコリド、または乳酸とグリコール酸の共重合体である請求項１または２に記載の粒剤。
【請求項４】
乳酸とグリコール酸の共重合体が、乳酸単位４５〜９０％（モル）を含有するＬ−またはＤ，Ｌ−乳酸と、グリコール酸単位５５〜１０％（モル）との共重合体である請求項３に記載の粒剤。
【請求項５】
前式（Ｉ）で表されるペプチドのパモエート塩を少なくとも５重量％を含む、乳酸グリコール酸７５：２５（モル％）共重合体の微小球の形態の請求項１〜４の何れか１項に記載の粒剤。
【請求項６】
水中油形エマルジョンを過剰の水性媒体に移す前に油相を形成する有機溶媒の部分的蒸発を行なう請求項１〜５の何れか１項に記載の粒剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は医薬ペプチド物質を配合した生分解性の高分子物質の微小球の形態で得られる医薬ペプチド物質を持続的に制御して放出できる組成物とその製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
生分解性インプラントやマイクロカプセルまたは生分解性の多孔性マトリックス、例えば種々の大きさの微小球または微小粒子等を利用して、医薬物質の持続性のある制御された放出が可能な組成物を製造するための様々な方法がこれまでに提案されている。この点に関し、水溶性薬剤の相分離によるマイクロカプセル化を開示している欧州特許出願００５２５１０号、ポリラクチドまたはコポリラクチド−グリコライドを主成分とする生分解性のインプラントまたは多孔性マトリックスの製造方法を開示している欧州特許出願００５８４８１号および米国特許出願３９７６０７１号を挙げることができる。これらの技術はまず支持体として使用する生分解性の重合体または共重合体を有機溶媒に溶解し、所望により医薬物質そのものも溶解するという方法を用いている。
【０００３】
マイクロカプセルまたは微小球を製造することのできるその他の方法は、乳化方法を用いており、この方法の最重要段階は、高分子物質の有機溶液およびペプチドの水溶液から水中油形のエマルジョンを得ることである。この点については米国特許出願４３８４９７５号、３８９１５７０号、４３８９３３０号、３７３７３３７号、４６５２４４１号およびＷＯ９０／１３３６１号を参照されたい。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
何れの場合においても、従来の技術は、水溶性の大きい活性ペプチドの損失を可能な限り低減するために、例えば二重乳化のような複雑で制御が困難な方法を用いることを余儀なくされていた。
【０００５】
水中油形型エマルジョンを形成し、その後水性媒体に移すという本発明の方法では、意外にも、今日まで知られている方法の欠点を克服できる。
【０００６】
本発明は、まず式（Ｉ）の水溶性ペプチド塩を水不溶性ペプチド塩に変換することにより、用いる成分、特に用いる溶媒および「非溶媒」の相対的溶解度を利用した極めて新しい手段を当業者に提供することを目的としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するために、本発明においては、（式中Ｒ３  はＤ−ＰａｌまたはＤ−Ｔｒｐである）のペプチドの水不溶性の塩を含む生分解性の高分子物質の微小球の形態の式Ｉの医薬ペプチド物質を持続的に制御して放出できる組成物を提供する。
【０００８】
本発明はまた、
より具体的には、本発明の目的は、下記の特徴を有する方法を提供することである。
【０００９】
ａ．式（Ｉ）の水溶性ペプチド塩を不溶性のペプチド塩にそれぞれ変換し；
ｂ．水不溶性ペプチド塩を、溶解状態で生分解性高分子物質を含有する有機媒体に懸濁し；
ｃ．有機懸濁液を水性媒体に分散させて連続相のエマルジョンを形成し；
ｄ．エマルジョンを過剰の水性媒体に移し、最後に得られた微小球を液相より分離することを特徴とする上記組成物の製造方法に関する。
【００１０】
【作用】
式（Ｉ）のペプチドはＬＨＲＨ類縁体であり、これらはホルモン依存性の疾患の治療に有効である。特段の記載が無い限り、式（Ｉ）のアミノ酸はＬ型である。Ｄ−ＮａｌはＤ−３−（２−ナフチル）−アラニンを指し、Ｄ−ＰａｌはＤ−３−（３−ピリジル）−アラニンを指す。
【００１１】
本発明の組成物は式（Ｉ）のペプチドの水不溶性の塩を含む生分解性の高分子物質の微小球の形態である。例えば水不溶性の塩５重量％を含むこの組成物は、人間または動物に非経腸的に投与した後、数日間に渡り、ペプチドを持続的に放出できる。
【００１２】
この方法の第１段階では、従来の方法により、水溶性ペプチド塩を水不溶性ペプチド塩に変換する。「水溶性」という用語は、２５℃で０．１ｍｇ／ｍｌ以上の水溶性、好ましくは１．０ｍｇ／ｍｌ以上の水溶性を有するペプチド塩を指す。
【００１３】
「水不溶性」とは、２５℃で０．１ｍｇ／ｍｌ以下の水溶性を有するペプチド塩を指す。パモエート（ｐａｍｏａｔｅ）、タンニン酸塩、ステアリン酸塩またはパルミチン酸塩のようなペプチド塩がこの定義を満たす。
【００１４】
生分解性高分子物質としては、ポリラクチド、ポリグコライド、または乳酸とグリコール酸の共重合体のような重合体が最も一般的に使用されている。
【００１５】
好ましい重合体物質としては、乳酸とグリコール酸の共重合体（ＰＬＧＡ）、特に、乳酸単位４５〜９０％（モル）を含有するＬ−またはＤ，Ｌ−乳酸とグリコール酸単位５５〜１０％（モル）との共重合体を挙げることができる。
【００１６】
高分子物質の溶媒としては、例えば塩化メチレンのような有機溶媒を使用できるが、何れの場合においても、溶媒は選択されたペプチドまたはペプチド塩に対して「非溶媒」でなければならない。
【００１７】
本発明によれば、ペプチドまたはペプチド塩を高分子物質有機溶液に懸濁した後、この溶液を所定量の水性媒体、最も一般的には適切な界面活性剤を添加した水と混合する。その目的は水中油形型の均質なエマルジョンを急速に形成するためであり、水性媒体は連続相を形成するためのものである。このようなエマルジョンを調製する際には、この方法によって得られる微小球の大きさや構造に影響する種々の要因を考慮しなければならない。考慮すべき要因は水性媒体への有機溶液の添加率、温度、攪拌速度、即ち分散エネルギー（超音波処理）などであり、最後のパラメーターは最終微小球の大きさに特に影響する。意図する目的を達成するのに適する乳化の方法および条件は当業者が選択できる。
【００１８】
エマルジョンの調製においては、接触する相の体積比を調節すること、特に、水相に対する有機相の相対体積を低下させることが好都合であることが解っている。ある場合には、使用する有機溶媒、例えば塩化メチレンの揮発性のために、攪拌中に自然に起こる蒸発だけで上記目的は十分達成でき、別の場合には減圧下で蒸発させることによりこの望ましい現象を加速してよい。
【００１９】
有機性水性エマルジョンが安定した後、これを過剰量の水性媒体、最も一般的には水に移す。この操作の目的は、微小球内になお残存する有機溶媒を抽出することにより、エマルジョン中に形成した初期の微小球の硬化を促進することである。この操作の別の目的は、最終硬化段階で重合体本体内に残存する微量の界面活性剤を同時に除去することである。水は例えばＰＬＧＡのような生分解性高分子および微小球内に閉じ込められているペプチド塩の両方に対して「非溶媒」である。この状況は、例えば塩化メチレンのような残存重合体溶媒の不可欠な抽出のために特に好ましい。
【００２０】
エマルジョンを過剰量の水性媒体に移した後、硬化した微小球を従来の方法、例えば遠心分離、濾過または重力による沈降等で回収する。洗浄、精製および乾燥の操作も従来の方法を用いることができる。
【００２１】
【実施例】
本発明を以下の実施例により説明する。これらの実施例で使用する物質および操作条件は本発明をいかなる点でも限定するものではない。
【００２２】
［実施例１］
【００２３】
【化２】
0003600252.tif 000002
【００２４】
のＬＨＲＨ類縁体の酢酸塩３ｇを従来の方法により相当するパモエートに変換し、次に平均約１０ミクロンの粒子が得られるように処理を行った。
【００２５】
上記パモエート０．３１７ｇを塩化メチレン２０ｍｌに懸濁し、この懸濁液を、Ｄ，Ｌ−乳酸およびグリコール酸（の７５：２５共重合体（ＰＬＧＡ）（モル％／ＨＦＩＰの固有粘度０．８２）１．６８３ｇを溶解した塩化メチレン２０ｍｌに添加した。混合物は室温で攪拌下に調製し、完全に均質な懸濁液を得た。
【００２６】
得られた懸濁液を、０．０７５％溶解メトキシセルロースを含有する水５００ｍｌに一回で注ぎ込み、混合物の攪拌を室温で約９０分継続した（攪拌速度９００ｒｐｍ）。試料採取し、得られた微小球を顕微鏡で観察することにより、エマルジョンの形成を平均３０分おきの一定時間間隔で観測した。
【００２７】
攪拌終了後（微小球の縮少の安定化）、エマルジョンを約１０℃に維持されている水２ｌに一回で移し、均質になるまで混合物を攪拌した。
【００２８】
ＰＬＧＡの微小球を反応混合物から単離し、遠心分離と水洗浄を交互に継続して行うことにより精製し、最後に濾過して減圧下で乾燥した。ＰＬＧＡ微小球１．６１ｇを以上のようにして回収し（収率８０％）、これには直径１００ミクロン未満の粒子が９４％を超える量含有されていた（最大５５〜８５ミクロン）。
【００２９】
分析（固体ＰＬＧＡの解離、抽出およびＨＰＬＣによるペプチドの測定）の結果、微小球のパモエート含有量は９．０５重量％であった（理論値：１０％）。
【００３０】
このようにして得られた微小球を次にガンマ線滅菌し、適切な滅菌溶媒中に懸濁した。生体内試験（雄ラットにおける血中テストステロン濃度の測定）の結果、活性物質が一定して放出されていることが確認された。
【００３１】
［実施例２］
ＰＬＧＡ７５：２５１．３６６ｇに対し、ＬＨＲＨ類縁体のパモエート０．６３４ｇを用いて、実施例１と同様の方法を行なった。
【００３２】
ＰＬＧＡ微小球：１．７０ｇ（収率：８５％）
添加量：１８．３％（理論値：２０％）
このようにして得られた微小球をガンマ線滅菌し、適切な滅菌溶媒中に懸濁した。生体内試験（雄ラットにおける類縁体の血清中濃度の測定）によれば、少なくとも２４時間に渡り、活性物質が生物学的に有意義な量で一定して放出されていることが確認された。
【００３３】
【表１】
0003600252.tif 000003
【００３４】
これらの結果は更に３０日目に屠殺した試験対象で実施した分析でも確認され、精巣の重量現象は少なくとも８０％であり、精のうの重量現象は少なくとも９０％であった。
【００３５】
［実施例３］
【００３６】
【化３】
0003600252.tif 000004
【００３７】
のペプチドを用いたほかは実施例１と同様にして実施した。
【００３８】
酢酸塩を相当するパモエートに変換し、後者を同様の処理に付し、同様の結果を得た。
【００３９】
【発明の効果】
本発明の方法の利点の１つは微小球の大きさを正確に調節できる点であり、この調節は主にエマルジョンの調製中に（例えば攪拌速度）を調節して行なう。別の利点は条件に応じて５、１０または２０重量％またはこれより多い大量のペプチドを添加できる点である。更にペプチドまたはペプチド塩の配合の収率は極めて高く、これは主に選択されたペプチドを予め水溶性の誘導体から水不溶性の塩に変換することによるものである。
【００４０】
上記した成分から本発明の方法に従って得た微小球は、適切に滅菌した後、例えば筋肉内または皮下注射により、非経腸的投与で使用する懸濁液の調製のために用いる。