(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステル（グルコースエステルを除く）を配合して成る、活性酸素種による皮膚の老化を防止ししわ、きめ、はり、肌荒れを改善する皮膚老化防止用外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規な活性酸素種消去剤である３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルを配合して成る、安全性及び安定性に優れる皮膚の老化防止用外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、太陽光の皮膚に対する影響が研究され、太陽光により皮膚内に生じる一重項酸素，ヒドロキシラジカル，スーパーオキシドといった活性酸素種が、表皮ケラチノサイトや真皮の線維芽細胞を攻撃し、これら細胞を死に至らしめ、その結果、皮膚の老化や種々の皮膚疾患を引き起こすことが明らかになってきた。それにつれて、このような活性酸素種を消去する物質のスクリーニングも行われ、ビタミンＥ群化合物やビタミンＣ、動植物由来のスーパーオキシドディスムターゼ様作用物質、さらにはスーパーオキシドディスムターゼ自体を皮膚外用剤に配合する試みがなされている。
【０００３】
しかし、従来用いられていたビタミンＥ，ビタミンＣのような活性酸素種消去剤は、細胞に対する親和性が低く、かなり多量に配合しなければ効果が生じなかった。動植物由来のスーパーオキシドディスムターゼ様作用物質も、天然起源であり、一定した作用を有するものを得るのが難しく、安定性も低く品質管理上の問題があった。さらに、スーパーオキシドディスムターゼ自体の配合も、酵素活性の安定化や皮膚感作性等の面で問題があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、細胞親和性が高く、少量の配合で有効な活性酸素種消去作用を示し、且つ皮膚外用剤中で安定で、しかも安全性の高い活性酸素種消去剤を配合し、活性酸素種に起因する皮膚の老化防止や疾患を防止し得る皮膚外用剤を提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するため、細胞親和性の高い活性酸素種消去剤の検討を行ったところ、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸を糖エステルとすることにより、本発明の目的が達成されることを見い出した。糖としては、エステル化のしやすさや糖エステルの水溶性、感作性の出現等を考慮すると、単糖類又は二糖類〜三糖類くらいのオリゴ糖が好ましい。本発明の目的には、エリスロース，トレオース等のテトロース類、アラビノース，キシロース，リボース等のペントース類、ガラクトース，グルコース，マンノース，プシコース，フルクトース等のヘキソース類、Ｎ−アセチルガラクトサミン，Ｎ−アセチルグルコサミン，マンノサミン等のアミノ糖類、マルトース，ラクトース，ショ糖，セロビオース等の二糖類、セロトリオース等の三糖類などが好適な例として挙げることができる。
【０００６】
３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは、たとえば３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸をエステル化し、これと糖とを水酸化ナトリウム等のアルカリ触媒存在下にて反応させ、エステル交換反応等により合成することができる。なお、副生成物のアルコールを系から除去すると、反応を効率よく進ませることができる。
【０００７】
３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは、エタノール等のアルコールに溶解したり、基剤中に分散したりして皮膚外用剤に配合できる。皮膚外用剤は液剤，乳剤，クリーム，軟膏など種々の形態を採ることができる。また、化粧水や乳液，皮膚用クリーム等、化粧料としても提供することができる。配合量は、皮膚外用剤中の有効濃度を考慮して、０．０１〜１０重量％が適当である。
【０００８】
【作用】
３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルの活性酸素種による細胞傷害防御作用は、ヒト線維芽細胞に活性酸素種を曝露し、その際の細胞生存率を指標として評価できる。培養したヒト線維芽細胞に、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のグルコースエステル，ガラクトースエステル，ラクトースエステルをそれぞれ作用させた後、洗浄し、ヒポキサンチン−キサンチンオキシダーゼ系にて活性酸素種（スーパーオキシド及びヒドロキシラジカル）を曝露した。曝露後の細胞生存率はＭＴＴ還元法により測定した。比較のため、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸で同様に細胞を処理した場合についても測定した。
【０００９】
ＭＴＴ還元法は、細胞のミトコンドリア内に存在する脱水素酵素が基質に作用して生じる還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）により、系に添加したＭＴＴ（２−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−３，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ）のテトラゾリウム環が開環することを利用する測定法である。テトラゾリウム環の開環により、青色のフォルマザンが生成するので、これを５６０ｎｍにおける吸光度により測定して、細胞生存率を求める。
【００１０】
その結果、図１に示すように、良好な細胞親和性を有する３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のグルコースエステル，ガラクトースエステル，ラクトースエステルの各糖エステルで処理した場合には、７０〜８０％の良好な細胞生存率を示した。これに対し、糖エステル化していない３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸自体で処理した場合は、細胞親和性が低いため、細胞生存率は４０％弱と低かった。
【００１１】
従って、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは、細胞膜に対し良好な親和性を示し、細胞膜表面において活性酸素種を効率良く消去することができる。その結果、非常に低濃度で活性酸素種による細胞傷害を防止し、活性酸素種の細胞傷害作用による皮膚の老化症状や疾患を有効に防止することができる。
【００１２】
【実施例】
さらに、本発明について実施例により詳細に説明する。本発明の実施例として、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のブドウ糖エステルを配合した乳液（実施例１）、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のＮ−アセチルグルコサミンエステルを配合した皮膚用クリーム（実施例２）、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のショ糖エステルを配合した乳剤性軟膏（実施例３）の処方を、それぞれ表１，表２，表３に示した。
【００１３】
表１中、（１）〜（５）の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、（８）を（７）に溶解して（６），（１０），（１３）の水相成分とともに７５℃に加熱する。次いで、上記の水相成分に油相成分を添加して予備乳化し、これに（９）を加えた後ホモミキサーにて均一に乳化する。その後冷却し、（１１）を加えてｐＨを調整し、５０℃にて（１２）を添加し、均一に混合する。
【表１】
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【００１４】
表２中、（１）〜（７）の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、（９）を（８）に溶解して（１０），（１２）とともに７５℃に加熱する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて均一に乳化する。その後冷却し、５０℃にて（１１）を添加，混合する。
【表２】
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【００１５】
表３中、（１）〜（４）の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、（８）を（７）に溶解して（５），（６），（９）とともに７５℃に加熱する。次いで上記水相成分を油相成分に添加して乳化し、冷却する。
【表３】
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【００１６】
本発明の実施例について、実際に使用試験を行った。この際、各実施例で用いた３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルの替わりに、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸を用いたものを比較例１，２及び３とした。使用試験は、日常戸外で作業する４０〜６０才代のパネラー２０名を１群とし、実施例及び比較例をブラインドにて各群に５月〜７月の３カ月間使用させ、使用後の皮膚のしわ，きめ，はり、及び肌荒れの改善状況を観察し、評価した。皮膚のしわ，きめ及び肌荒れの改善状況については写真撮影による外観観察により、皮膚のはりについては皮膚弾性の測定により評価し、しわについては「軽減」，「やや軽減」，「変化なし」，「増加」、きめ及びはりについては「良好」，「やや良好」，「変化なし」，「悪化」又は「低下」、肌荒れについては「改善」，「やや改善」，「変化なし」，「悪化」の各４段階で評価した。結果は、各評価を得たパネラー数にて表４に示した。
【表４】
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【００１７】
表４より明らかなように、各実施例使用群ではしわの増加を認めたパネラーはなく、９０％以上のパネラーにおいてしわの軽減を認めた。きめ及びはりについてはいずれも使用開始前より良好となっており、肌荒れの改善も全パネラーにおいて認められた。これに対して比較例使用群では、しわについては２〜３例において軽減傾向が認められたのみで、４０〜５５％のパネラーにおいてはしわの増加が認められた。きめ及びはりについても、使用開始前より良好となったパネラーは少なく、きめについては１５〜２０％、はりについては３０〜３５％のパネラーにおいて悪化又は低下したと評価された。肌荒れについてもほとんどのパネラーにおいて改善が認められなかった。
【００１８】
本使用試験において各パネラーは、紫外線曝露量の多い５月〜７月にほぼ毎日戸外で作業をしており、表４の結果は、本発明の実施例が紫外線曝露により生じる活性酸素種に起因する皮膚の老化や肌荒れを有効に予防，改善し得ることを示唆するものである。
【００１９】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、太陽光により生じる活性酸素種を有効に除去して、これらに起因する皮膚の老化，疾患を良好に防止し得る皮膚外用剤を提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明で活性酸素種消去剤として用いる３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルと、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸の細胞傷害防御作用を示す図である。
【符号の説明】
１  ３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のグルコースエステル
２  ３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のガラクトースエステル
３  ３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸のラクトースエステル
４  ３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸
【図１】
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