【手続補正書】
【提出日】平成29年11月8日(2017.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイブリッド生体適合性担体（ハイブリドソーム）を製造する方法であって、前記方法が、
（ａ）膜を含む第一の小胞を提供する工程であって、前記小胞はインビトロで生産され、前記小胞は、膜の分裂または膜と脂質二重膜との間の脂質混合を可能にするまたは向上する少なくとも一つの膜融合性部分を含み、前記脂質二重膜は、
ｉ．イオン化可能なカチオン性脂質、
ｉｉ．ｐＨ応答性ポリマー、および
ｉｉｉ．ｐＨ応答型膜透過性ペプチド
から選択される、工程と、
（ｂ）インビボで生産されて、細胞外環境中に放出される、脂質二重膜を含む自然に分泌される第二の小胞を提供する工程と、
（ｃ）前記第一の小胞を前記第二の小胞と、７．４より低いｐＨおよび０℃〜６０℃の間の温度で接触させて、それにより前記第一の小胞を前記第二の小胞と統合させて、前記ハイブリドソームを生産する工程と
を含む、方法。
【請求項２】
工程（ｃ）が、
（ａ）ｐＨ４〜６のバッファー中で、および／または
（ｂ）約３７℃の反応温度で
実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第二の小胞がエキソソーム、エクトソーム、微小胞、およびアポトーシス小体からなる群より選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記第一の小胞が、脂質系ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム、ポリマー安定化ＬＮＰ、セラソーム、スフィンゴソーム、ポリマーソーム、合成ナノ粒子安定化ＬＮＰ、天然膜由来ＬＮＰ、および天然膜でコーティングされたＬＮＰからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記イオン化可能なカチオン性脂質が、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、ジオクタデシル−ジメチルアンモニウム（ＤＯＤＭＡ）、ジステアリルジメチルアンモニウム（ＤＳＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−塩化アンモニウム（ＤＯＤＡＣ）；Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−塩化アンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（４−カルボキシベンジル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロパン−１−アミニウム（ＤＯＢＡＱ）、ＹＳＫ０５、４−（（（２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロピル）−（メチル）アミノ）メチル）安息香酸（ＤＯＢＡＴ）、Ｎ−（４−カルボキシベンジル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロパン−１−アミニウム（ＤＯＢＡＱ）、３−（（２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロピル）（メチル）アミノ）プロパン酸（ＤＯＰＡＴ）、Ｎ−（２−カルボキシプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス−（オレオイルオキシ）−プロパン−１−アミニウム（ＤＯＭＰＡＱ）、Ｎ−カルボキシメチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（オレオイルオキシ）プロパン−１−アミニウム（ＤＯＡＡＱ）、アルニー（Ａｌｎｙ）−１００、３−（ジメチルアミノ）−プロピル（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル］−ヘニコサ−１２，１５−ジエノエート（ＤＭＡＰ−ＢＬＰ）、および、イオン化可能なアミノ脂質の誘導体からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ｐＨ応答性ポリマーが、アルキルアクリル酸のホモポリマー、エチルアクリル酸のコポリマー、アルキルアミンのポリマー、およびメチルビニルエーテルまたはスチレンを有する無水マレイン酸コポリマーのアルキルアルコール誘導体からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記第一の小胞が、標的化部分を含み、前記標的化部分が、抗体またはその断片、抗体様分子、ペプチド、タンパク質、アプタマー、オリゴヌクレオチド、およびポリサッカライドからなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記第一の小胞が、特に、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ポリエチレングリコールジパルミトイルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＰＧ）、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール（メトキシポリエチレングリコール）−ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ−ｓ−ＤＭＧ）、ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、Ｒ−３−［（ω−メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリストイルオキシプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）、およびＮ−アセチルガラクトサミン−（（Ｒ）−２，３−ビス（オクタデシルオキシ）プロピル−１−（メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）プロピルカルバメート））（ＧａｌＮＡｃ−ＰＥＧ−ＤＳＧ）からなる群より選択される、ＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記第二の小胞が、
（ａ）がんもしくは前がん患者の腫瘍細胞に由来するか、または、腫瘍もしくはがん細胞株に由来するか、
（ｂ）グリオブラストーマ細胞またはマントル細胞リンパ腫細胞に由来するか、
（ｃ）Ｂ細胞、抗原提示細胞、リンパ球、血小板、好中球、活性化多形核好中球および白血球からなる群から選択される細胞に由来するか、
（ｄ）細菌病原体、アメーバ病原体、寄生虫病原体または真菌病原体に由来するか、あるいは
（ｅ）病原体感染細胞に由来する、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第一の小胞が、
（ａ）薬物または医薬的に許容可能なその塩もしくは誘導体、
（ｂ）抗体に基づいた治療薬、
（ｃ）ペプチド、タンパク質、および核酸

から選択される一又は複数の治療薬を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第一の小胞が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、スモールまたはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔ）ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、トランス活性化ＣＲＩＳＰＲＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、プラスミド、アンチセンス核酸、およびリボザイムからなる群より選択される核酸を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）前記第一の小胞が、少なくとも一つの抗原をコードする修飾核酸分子および／もしくはｍＲＮＡを含み、ならびに／または
（ｂ）前記第二の小胞が、腫瘍関連抗原および病原体関連抗原から選択される疾患関連抗原を含む、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第一の小胞が、
（ａ）２２５Ａｃ、７２Ａｓ、２１１Ａｔ、１１Ｂ、１２８Ｂａ、２１２Ｂｉ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１４Ｃ、１０９Ｃｄ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８Ｆ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、３Ｈ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１３Ｎ、１５Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、２１２Ｐｂ、１０３Ｐｄ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、４７Ｓｃ、１５３Ｓｍ、８９Ｓｒ、９９ｍＴｃ、８８Ｙ、および９０Ｙからなる群より選択される放射性同位元素、
（ｂ）量子ドット、ならびに金、銀、鉄および酸化鉄ナノ粒子から選択される金属ナノ粒子
から選択される一又は複数の因子を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法によって得られた、または得ることができるハイブリッド生体適合性担体（ハイブリドソーム）。
【請求項１５】
治療薬または診断薬を細胞内に送達する方法であって、前記細胞を請求項１４に記載のハイブリドソームと接触させることを含む、方法。