【手続補正書】
【提出日】平成29年4月12日(2017.4.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マウスであって、マウスの生殖系列ゲノム中に、
免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結した２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび２つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントであって、ここで、該２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントが、ヒトＶκ１−３９およびヒトＶκ３−２０であり、該２つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１、ヒトＪκ２、ヒトＪκ３、ヒトＪκ４、およびヒトＪκ５からなる群から選択される、２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび２つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメント；ならびに
非ヒト免疫グロブリン定常領域配列に作動可能に連結した１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＤＨ遺伝子セグメント、および１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪＨ遺伝子セグメント
を含み、
該ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントが、再構成することが可能であって、抗体のヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードしており、さらに、該マウスが、免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が形成されるように再構成することが可能な内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントを含まない、マウス。
【請求項２】
前記２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび２つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、マウスまたはラット免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結される、請求項１に記載のマウス
【請求項３】
前記免疫グロブリン軽鎖定常領域配列がラットＣκ領域である、請求項２に記載のマウス。
【請求項４】
前記免疫グロブリン軽鎖定常領域配列がマウスＣκ領域である、請求項２に記載のマウス。
【請求項５】
５つのヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項６】
前記５つのヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１、ヒトＪκ２、ヒトＪκ３、ヒトＪκ４およびヒトＪκ５である、請求項５に記載のマウス。
【請求項７】
前記２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび２つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に存在する、請求項１から６のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項８】
前記１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＤＨ遺伝子セグメント、および１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪＨ遺伝子セグメントが、マウス定常領域に作動可能に連結している、請求項１から７のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項９】
機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項１０】
非機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項１１】
前記２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび２つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、マウスまたはラット免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結され、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメント、ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメント、ヒトＪκ１、ヒトＪκ２、ヒトＪκ３、ヒトＪκ４およびヒトＪκ５を順番に含む遺伝子座に存在する、請求項１から１０のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項１２】
ＤＬＣ−５Ｊ遺伝子座を含むマウスであって、該ＤＬＣ−５Ｊ遺伝子座が、配列番号３８〜４９から選択されるｈＶκ／ｈＪκ／ｍＣκ接合部配列を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスの単離された細胞。
【請求項１４】
胚性幹（ＥＳ）細胞である、請求項１３に記載の単離された細胞。
【請求項１５】
請求項１４に記載のＥＳ細胞を含むマウス胚。
【請求項１６】
Ｂ細胞である、請求項１３に記載の単離された細胞。
【請求項１７】
請求項１６に記載のＢ細胞を用いて作製されたハイブリドーマ。
【請求項１８】
抗体を生成するため、またはヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする核酸配列を同定するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスの使用。
【請求項１９】
単一細胞において、
（ａ）免疫された請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスの第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む第１の免疫グロブリン重鎖をコードする第１の核酸配列であって、該ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列と融合している第１の核酸配列；および
（ｂ）ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域配列を含む免疫グロブリン軽鎖をコードする第２の核酸配列であって、該ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域配列は、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列と融合している、第２の核酸配列
を発現させるステップ、
該細胞を、完全ヒト抗体を発現するのに十分な条件下で維持するステップ；ならびに
該抗体を該細胞から単離するステップ
を含む、抗体を作製するための方法。
【請求項２０】
前記細胞が、免疫された請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスの第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む第２の免疫グロブリン重鎖をコードする第３の核酸配列を含み、該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列がヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列と融合しており、前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第１のエピトープを認識する第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードし、該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第２のエピトープを認識する第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードし、該第１のエピトープおよび該第２のエピトープが同一ではなく、該第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインが前記第２の核酸配列によりコードされるヒト免疫グロブリン軽鎖と相互作用する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ヒト二重特異性抗体の作製における、請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスの使用。
【請求項２２】
ヒト二重特異性抗体を作製するための方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスを免疫するステップ、および該マウス由来のＢ細胞のヒト可変領域遺伝子配列を使用して該二重特異性抗体を作製するステップを含む方法。
【請求項２３】
（ａ）請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスのクローン選択されたリンパ球を同定するステップであって、該マウスが免疫され、目的の抗原に対する免疫応答を生じるようにされており、該リンパ球が該目的の抗原に特異的に結合する抗体を発現し、該抗体がヒトＶκ１−３９またはヒトＶκ３−２０由来の軽鎖可変ドメインを含むステップ；
（ｂ）該リンパ球または該抗体から、該目的の抗原に特異的に結合するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を得るステップ；および
（ｃ）（ｂ）のヌクレオチド配列を二重特異性抗体の作製に使用するステップ
を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
１回目に第１の抗体から第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を生成するために目的の第１の抗原に対してステップ（ａ）および（ｂ）を実施し、２回目に第２の抗体から第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を生成するために目的の第２の抗原に対してステップ（ａ）および（ｂ）を実施し、ここで、該第１の抗体および該第２の抗体の各々が、同一のＶκ遺伝子セグメント由来の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第１のヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列と融合して発現して、第１のヒト免疫グロブリン重鎖を形成し、前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第２のヒト免疫グロブリン重鎖定常領域とともに発現して、第２のヒト免疫グロブリン重鎖を形成し、該第１のヒト重鎖および該第２のヒト重鎖がヒトＶκ１−３９またはヒトＶκ３−２０由来の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む単一のヒト免疫グロブリン軽鎖の存在下で発現する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
（ａ）
（ｉ）第１の免疫原を用いて免疫された請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウス；および
（ｉｉ）第２の免疫原を用いて免疫された同じマウス、または遺伝学的には同じである異なるマウス
由来のＢ細胞からヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列をクローニングするステップ、
（ｂ）細胞において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列および同じ免疫グロブリン軽鎖とともに（ａ）のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を発現させて二重特異性抗体を作製するステップ
を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖が、前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖のプロテインＡに対する親和性を消失させるまたは実質的に低下させる改変を含み、前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖がプロテインＡに結合する能力を保持し、該第１のヒト免疫グロブリン重鎖のプロテインＡに対する親和性を消失させるまたは実質的に低下させる改変が、９５Ｒ（ＥＵ４３５Ｒ）、９６Ｆ（ＥＵ４３６Ｆ）、およびこれらの組合せから選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントを選択するために使用するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項２９】
免疫されている、請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウス。
【請求項３０】
抗体を産生する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスを、抗原を用いて免疫するステップ、および結果として生ずる、該マウスにより該抗原に対して産生された抗体からヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を得るステップ、および該ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードする核酸配列を抗体の作製に利用するステップを含む方法。
【請求項３１】
（ａ）前記マウスを免疫した前記抗原の異なるエピトープに対する２種の異なる抗体から前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を同定するステップ；または
（ｂ）請求項１から１２のいずれか一項に記載のマウスと同じマウス、またはさらなるマウスを、異なる抗原を用いて免疫し、次いで、該異なる抗原に特異的である、該マウスによって産生された抗体からヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を同定するステップを含み、
該２種の異なるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を使用して二重特異性抗体を生成するステップをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体または２つの抗体からヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列も同定するステップをさらに含む、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、該方法によって産生された抗体において同定されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインアミノ酸配列もしくはコードするヌクレオチド配列および／またはヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列もしくはコードするヌクレオチド配列も使用し、二重特異性抗体を生成することを含む、方法。