(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子量１００，０００以下のペプチド系生理活性物質をその中に溶解または分散させたポリエチレングリコールの微粒子またはプロピレングリコールの微粒滴を、非イオン界面活性剤及びステアリン酸アルミニウムが添加された、薬学的に許容されうる植物油中に、分散させてなる持続性注射剤。
【請求項２】
分子量１００，０００以下のペプチド系生理活性物質がヒト成長ホルモンである請求項１記載の注射剤。
【請求項３】
ポリエチレングリコールの平均分子量が４００−２０，０００である請求項１記載の注射剤。
【請求項４】
ポリエチレングリコールまたはプロピレングリコールの使用量が植物油に対して１−１０（ｗ／ｖ）％である請求項１記載の注射剤。
【請求項５】
ステアリン酸アルミニウムが植物油に対して５（ｗ／ｖ）％以下添加された請求項１記載の注射剤。
【請求項６】
非イオン界面活性剤が植物油に対して０．５−１０（ｗ／ｖ）％添加された請求項１記載の注射剤。
【請求項７】
分子量１００，０００以下のペプチド系生理活性物質、非イオン界面活性剤、分子量４００−２０，０００のポリエチレングリコール又はプロピレングリコール、及びステアリン酸アルミニウム含有植物油を高速ホモジナイザーで撹拌処理することを特徴とする持続性注射剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は生理活性物質を含有し、その体内における有効濃度を長時間保つことができる注射剤に関する。
【０００２】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】
生理活性物質、例えば、ヒト成長ホルモン、インターフェロン、インスリン、インスリン様成長因子などは、ほとんどが注射剤としてのみ用いられている。しかも、これら生理活性物質の多くは、血中半減期が短いために、治療上頻回の投与を余儀なくされ、その結果、苦痛、通院の必要性などにより患者に大きな負担を強いているのが現状である。そこで、これらの生理活性物質を持続性注射剤とすることにより、投与回数を減少させ、注射による患者の負担を軽減し、治療効果を高めることが要望される。
【０００３】
生理活性物質の多くは、その安定性、吸収性の低さから注射による投与に頼ってきたが、近年注射に替わる投与方法の検討が行われている。例えば、点眼投与＜糖尿病学会抄録集２３７（１９６４）＞、直腸内投与＜Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏ．，３３，  ３３４（１９８１）＞、イオントフォレーシスによる経皮投与、鼻腔内投与＜Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，５７，  ４９−５４（１９８９）＞、経肺投与＜Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８３（６），８６３−８６７（１９９４）＞などがあげられる。しかし、これらの投与方法は、いずれも吸収が悪い、吸収が変動しやすい、注射に比べて高投与量が必要、あるいは、安全性に問題があることなどの難点があるために、実用化は難しい状況にある。しかし、持続性注射剤には、乳酸／グリコール酸共重合体マイクロスフェアー中にＬＨ−ＲＨを含有させた特開平４−３２１６２２、特開平５−１１２４６８にある徐放性マイクロカプセルがすでに実用化されている。また、コラーゲン、フィブリン、キトサン、アルブミンなどの高分子中インスリン、インターフェロンなどの生理活性物質を含有させた持続性注射剤が検討されている。こういった高分子マイクロカプセル以外では、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，５（２），９５−９９（１９９０）に見られる、疎水性シクロデキストリン（ｈｅｐｔａｋｉｓ（２，６−ｄｉ−Ｏ−ｅｔｈｙｌ）−β−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）と酢酸ブセレリンの複合体を植物油（落花生油）中に分散させた持続性注射剤がある。
【０００４】
乳酸／グリコール酸共重合体をカプセル原料とする場合、モノマーである乳酸とグリコール酸の重合割合そしてその重合度を変えることで目的とする薬物溶出を示す共重合体を合成する。そしてその高分子を用いて乳化法により、油中水（Ｗ／Ｏ）型エマルジョンを作り、その後、油中水中油（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型エマルジョンを形成させ、水中乾燥法によりマイクロカプセルを形成させる。できたマイクロカプセルを回収し、洗浄後に凍結乾燥を行う。このように、製品として生産する場合に、作業行程が多く、それぞれの行程での細かな条件設定が必要となり、その管理に時間と労力を要する。そしてこの様な乳化法によりマイクロカプセルを調製する場合、有機溶剤を用いることが多くなる。製造工程での有機溶剤の使用は、最終製剤中への溶剤の残留、作業環境、除去有機溶剤の回収など、多くの問題が生ずる。さらにこの製法では、水を必ず使用するために、水溶液での安定性の低い生理活性物質を主薬として用いる場合には適さない。
疎水性シクロデキストリンのように特殊な化合物を用いると、安定した品質の化合物を長期にわたり、大量に入手することが難しく、コストもかかる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記問題点を解決するため鋭意研究を行った結果、ポリエチレングリコール（マクロゴール）微粒子またはプロピレングリコール微粒子中に、水溶性の生理活性物質を溶解または分散させ、植物油中に分散させることで、製剤からの生理活性物質の溶出を抑制することが可能であることを見いだし、この発見に基いて本発明を確立した。
【０００６】
すなわち、本発明は、生理活性物質をその中に溶解または分散させたポリエチレングリコールの微粒子またはプロピレングリコールの微粒滴を薬学的に許容されうる植物油中に分散させてなる持続性注射剤に関する。
【０００７】
本発明で用いられる生理活性物質としては、通常分子量１００，０００までのものが好ましい。該生理活性物質は一般にペプチド系であり、その具体例としては、たとえばヒト成長ホルモン、ソマトスタチン、ソマトスタチン誘導体（米国特許第４，０８７，３９０号、同第４，０９３，５７４号、同第４，２５３，９９８号参照）、インターフェロン（α型、β型、γ型）、インターロイキン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ  、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ  ）、インスリン、ＳＯＤ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、腫瘍壊死因子、コロニー形成刺激因子、カリクレイン、リゾチームおよび各種細胞増殖・分化因子〔たとえば、インスリン様増殖因子、上皮増殖因子、繊維芽細胞増殖因子、血小板由来増殖因子、神経成長因子、肝細胞増殖因子、血管新生因子、血管新生阻害因子、フィブロネクチンなど〕などがあげられる。
【０００８】
本発明で用いるポリエチレングリコール（マクロゴールとも呼ばれる）の平均分子量は、４００−２００００のものがよく、平均分子量４０００が好ましい。ポリエチレングリコールまたはプロピレングリコールの量は、１−１０％（ｗ／ｖ）が望ましく、多く加えると含有させた生理活性物質の溶出は早くなる。
【０００９】
本発明の注射剤を調製する段階において、ポリエチレングリコール粒子またはプロピレングリコール粒滴が植物油中で凝集するのを防ぎ安定性を高めるために非イオン界面活性剤を添加するのが望ましい。非イオン界面活性剤としては、たとえば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））、ポリオキシエチレンひまし油誘導体（ＨＣＯ−６０（商標））、セスキオレイン酸ソルビタン（Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ（商標））、リン脂質類などが用いられる。これらは単一物でも混合物でもよい。非イオン界面活性剤は植物油中に約０．５−１０％（ｗ／ｖ）添加するのが好ましい。
【００１０】
さらに、保存状態におけるポリエチレングリコール粒子またはプロピレングリコール粒滴の沈降および凝集を防ぎ、かつ注射後生体中において製剤からの生理活性物質の溶出速度を抑制するために植物油にステアリン酸アルミニウムを加えるのがよい。ステアリン酸アルミニウムはステアリン酸モノ（ジ、またはトリ）ステアリン酸アルミニウムの形で用いられる。ステアリン酸アルミニウムの添加量を増加すれば薬物の溶出速度を逆に減少させることができる。ステアリン酸アルミニウムの好ましい添加量は一般に５％（ｗ／ｖ）以下である。
【００１１】
これらの原料と主薬である生理活性物質を攪拌容器中に秤取し高速ホモジナイザーにて、高回転数で２−４分間攪拌する。この時に発生する熱を利用し、ポリエチレングリコール（マクロゴール）を溶融させ、溶融したポリエチレングリコール中へ生理活性物質を溶解または分散させることができる。
【００１２】
この時、プロピレングリコールまたは、平均分子量が４００であるポリエチレングリコール４００（マクロゴール４００）などの常温で溶液状態のものを用いた場合には、攪拌容器を冷却しながら行うのがよい。この段階で製剤となる。平均分子量１０００以上のポリエチレングリコールを用いた場合、続いて高速ホモジナイザーの回転数をおとし、容器を冷却しながら攪拌すれば、この操作でポリエチレングリコールの凝固点以下まで温度を下げることができ生理活性物質を含有するポリエチレングリコール微粒子を植物油中に形成させることができる。
したがって、短い製造工程かつ簡便な操作で本発明の注射剤を製造することができる。
【００１３】
【実施例】
以下に比較例、参考例および実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明する。
【００１４】
比較例１
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇを容器に秤取し、モノステアリン酸アルミニウム無添加の落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで２分間処理し注射剤を得た。この注射剤について、イン  ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での注射剤からのヒト成長ホルモンの溶出試験を行った。５０ｍｌのガラス製ビーカーに水層である０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を１０．０ｍｌを入れ、その上に油層である注射剤を重層し、両層とも１５０ｒｐｍで攪拌しながら、３７℃での水層中へのヒト成長ホルモンの溶出を調べた。なお水層中へ溶出したヒト成長ホルモン量は、ＨＰＬＣ法にて測定し結果を図１に示した。溶出試験開始８時間後において、３８％しかヒト成長ホルモンが製剤中に残留していなかった。
また本製剤をラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ）をエーテル麻酔下、腹側部皮下に、ラット体重１ｋｇあたり１．２５ｍｌ投与した。投与０．５、１、２、４、６、１０、２４時間後に頸静脈より採血し、血清を得た。血清中のヒト成長ホルモン濃度をＥＬＩＳＡ法により測定し結果を図２に示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、３．２９±１．７２時間、最高血中濃度は、４９５．３１±７１．６６μｇ／ｍｌ、血中濃度曲線下面積は、２５１０．９８±９２０．５５ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【００１５】
比較例２
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇを容器に秤取し、２％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで２分間処理し注射剤を得た。この注射剤について、比較例１と同様の溶出試験を行い、結果を図１に示した。溶出試験開始８時間後において、７１％のヒト成長ホルモンが製剤中に残留していた。
【００１６】
実施例１
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）０．５ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇ、２％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌ、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。この注射剤について、比較例１と同様の溶出試験を行い、結果を図１に示した。溶出試験開始８時間後においても、８８％のヒト成長ホルモンが製剤中に残留していた。
また本製剤を比較例１と同様にラットに皮下投与した結果を図３に示す。最高血中濃度は、４１．８４±１３．１６μｇ／ｍｌであった。
【００１７】
実施例２
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、プロピレングリコール０．５ｇ、ＡｒｌａｃｅｌＣ  ０．１ｇを容器に秤取し、０．５％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで２分間処理することにより注射剤を得た。この注射剤について、比較例１と同様の試験を行い、結果を図１に示した。溶出試験開始８時間後においても、９４％のヒト成長ホルモンが製剤中に残留していた。
【００１８】
また本製剤を比較例１と同様にラットに皮下投与した結果を図３に示す。最高血中濃度は、９１．９８±７．１６μｇ／ｍｌであった。
【００１９】
【図１】
【００２０】
比較例３
ヒト成長ホルモン１６ｍｇを０．９％塩化ナトリウム溶液１０．０ｍｌに溶解させ、ヒト成長ホルモン溶液を得た。これをラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ）にエーテル麻酔下、腹側部皮下に、ラット体重１ｋｇあたり１．２５ｍｌ投与した。投与０．５、１、２、４、６、１０、２４時間後に頸静脈より採血し、血清を得た。血清中のヒト成長ホルモン濃度をＥＬＩＳＡ法により測定し結果を図２、３に示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、１．７５±０．９８時間、最高血中濃度は、５５２．２８±４２．３７μｇ／ｍｌ、血中濃度曲線下面積は、１７１１．３８±２４５．２３ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【００２１】
実施例３
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）０．５ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇを容器に秤取し、モノステアリン酸アルミニウムを含有しない落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。これを比較例３と同様にラット皮下に投与した結果を図２に示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、４．２７±１．６３時間、最高血中濃度は、３５０．１２±１１１．３５μｇ／ｍｌ、血中濃度曲線下面積は、２０５４．２９±６４１．９４ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【００２２】
実施例４
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）０．５ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇを容器に秤取し、０．１％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。これを比較例３と同様にラット皮下に投与した結果を図２に示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、７．４７±５．１２時間、最高血中濃度は、２６０．１９±５８．３６μｇ／ｍｌ、血中濃度曲線下面積は、２１７４．９２±７３６．０３ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【００２３】
実施例５
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）０．５ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇを容器に秤取し、０．２％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。これを比較例３と同様にラット皮下に投与した結果を図２に示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、５．１７±１．１０時間、最高血中濃度は、２２８．５１±２０．６５μｇ／ｍｌ、血中濃度曲線下面積は、２０５４．９５±５７６．５１ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【００２４】
実施例６
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）０．５ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ０．２ｇを容器に秤取し、０．５％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。これを比較例３と同様にラット皮下に投与した結果を図２に示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、６．２２±２．８１時間、最高血中濃度は、９７．８７±３３．１７μｇ／ｍｌ、血中濃度曲線下面積は、７７０．３８±３８２．６５ｎｇ・ｈ／ｍｌであった。
【００２５】
【図２】
【００２６】
実施例７
ヒト成長ホルモン１６ｍｇ、プロピレングリコール０．５ｇ、ＡｒｌａｃｅｌＣ  ０．１ｇを容器に秤取し、１％（Ｗ／Ｗ）モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１０ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで２分間処理することにより注射剤を得た。これを比較例３と同様にラット皮下に投与した結果を図３に示す。最高血中濃度は、１３．７３±１．１２μｇ／ｍｌであった。
【００２７】
【図３】
【００２８】
参考例１（正常ラット群）
無処置ラットで、試験期間中は、餌、水を自由に摂取させた。頸骨骨端軟骨の幅は、２３３．７±１７．４μｍであった。結果のまとめを表１に示す。
【００２９】
比較例４（連続投与群）
３週令のラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ）の下垂体を摘出し、術後１２日での体重増加が１５ｇ以下の健康なラットを用いた。ヒト成長ホルモン５．１ｍｇを７％炭酸水素ナトリウム溶液に溶かし、２０ｍｌの溶液とし、それをさらに、７％炭酸水素ナトリウム溶液で６０倍希釈して１０ｍＩＵ／ｍｌ溶液を得た。これを０．５ｍｌ（ｈＧＨ：５ｍＩＵ）を１日１回６日間連続投与した。その結果、頸骨骨端軟骨の幅は、２２８．４±１６．２μｍであった。結果のまとめを表１に示す。
【００３０】
参考例２（連続投与コントロール群）
３週令のラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ）の下垂体を摘出し、術後１２日での体重増加が１５ｇ以下の健康なラットを用いた。７％炭酸水素ナトリウム溶液０．５ｍｌを１日１回６日間連続投与した。その結果、頸骨骨端軟骨の幅は、１８４．７±１５．９μｍであった。結果のまとめを表１に示す。
【００３１】
実施例８（週２回投与群）
３週令のラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ）の下垂体を摘出し、術後１２日での体重増加が１５ｇ以下の健康なラットを用いた。ヒト成長ホルモン１．２７５ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）５．０ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ２．０ｇを容器に秤取し、０．５％モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１００ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。この製剤０．５ｍｌ（ｈＧＨ：１５ｍＩＵ）を、試験開始第１日目と４日目に投与した。その結果、頸骨骨端軟骨の幅は、２１６．３±２０．２μｍであった。結果のまとめを表１に示す。
【００３２】
実施例９（週２回投与群）
ヒト成長ホルモン１．２７５ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００（マクロゴール４０００）５．０ｇ、Ａｒｌａｃｅｌ  Ｃ  ２．０ｇを容器に秤取し、０．２％モノステアリン酸アルミニウム含有落花生油１００ｍｌを加え、高速ホモジナイザー（ヒスコトロン、日音医理科器械製作所）にて、２０，０００ｒｐｍで３分間処理し、続いて容器を氷冷しながら１５，０００ｒｐｍで４分間処理することにより注射剤を得た。この製剤０．５ｍｌ（ｈＧＨ：１５ｍＩＵ）を、試験開始第１日目と４日目に投与した。その結果、頸骨骨端軟骨の幅は、２１２．７±１３．５μｍであった。結果のまとめを表１に示す。
【００３３】
比較例５（週２回投与コントロール群）
３週令のラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ）の下垂体を摘出し、術後１２日での体重増加が１５ｇ以下の健康なラットを用いた。ヒト成長ホルモン５．１ｍｇを７％炭酸水素ナトリウム溶液に溶かし、２０ｍｌの溶液とし、それをさらに、７％炭酸水素ナトリウム溶液で２０倍希釈して３０ｍＩＵ／ｍｌ溶液を得た。この製剤０．５ｍｌ（ｈＧＨ：１５ｍＩＵ）を、試験開始第１日目と４日目に投与した。その結果、頸骨骨端軟骨の幅は、１７６．３±１３．４μｍであった。結果のまとめを表１に示す。
【００３４】
【表１】
0003604782.tif 000002
【００３５】
【発明の効果】
本発明の注射液は皮下または筋肉内に投与することにより、含有する生理活性物質を体内で持続的に溶出させる機能を持つ。そして短い工程と簡便な操作で、短時間に製造でき品質も安定している。また製造に有機溶媒を必要としないので有機溶剤が最終製品に残留する問題を避けることができ、かつ水を用いずに製造できるから水を含有しない最終製剤が得られるので、水溶液の状態で不安定な生理活性物質を含有する場合には特に適している。さらに本発明の注射剤の主薬以外の製剤原料は医薬添加剤として汎用されているので、品質の保証された物を容易に入手することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】比較例１、２および実施例１、２における注射剤からのヒト成長ホルモンの溶出試験の結果を示すグラフである。
【図２】比較例１、３および実施例１、３、４において注射剤を皮下投与した後のヒト成長ホルモンの血中濃度の推移を示すグラフである。
【図３】比較例３および実施例２、５において注射剤を皮下投与した後のヒト成長ホルモンの血中濃度の推移を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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