【手続補正書】
【提出日】平成29年3月7日(2017.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍＲＮＡキャップ形成効率の定量化方法であって、
キャップされたｍＲＮＡを含むｍＲＮＡサンプルを提供することと、
キャップ特異的結合物質と前記キャップされたｍＲＮＡとの間の複合体の形成を可能にする条件下で、前記キャップ特異的結合物質を提供することと、
対照と比較した前記複合体の量を定量的に判定し、それによって、ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することと、を含む方法。
【請求項２】
前記キャップが、式Ｉの構造を有し、
【化９】
2016515216.tif 000001
式中、
Ｂは、核酸塩基であり、
Ｒ１は、ハロゲン、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ３は、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、または欠失し、
Ｒ４は、ＮＨ２であり、
Ｒ５は、ＯＨ、ＯＣＨ３、及びハロゲンから選択され、
ｎは、１、２、または３であり、
Ｍは、前記ｍＲＮＡのヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記核酸塩基がグアニンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記キャップが式ＩＩの構造を持つｍ７Ｇキャップであり、
【化１０】
2016515216.tif 000002
式中、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｒ４は、ＮＨ２であり、
Ｒ５は、ＯＨまたはＯＣＨ３であり、
Ｒ６は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｍは、前記ｍＲＮＡのヌクレオチドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記キャップ特異的結合物質が、真核生物開始因子４Ｅ（ｅＩＦ−４Ｅ）、核キャップ結合タンパク質亜単位１、核キャップ結合タンパク質亜単位２、及び核キャップ結合複合体からなる群から選択されるキャップ特異的結合タンパク質である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記キャップ特異的結合物質が、キャップ特異的抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記キャップ特異的結合物質が、抗ｍ７Ｇ抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記複合体の量を定量的に判定する前記ステップが、ＥＬＩＳＡアッセイを実施することを含む、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記複合体の量を定量的に判定する前記ステップが、前記複合体と関連する検出可能なシグナルを測定することを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記検出可能なシグナルが、前記キャップ特異的結合物質と直接関連している、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記検出可能なシグナルが、前記キャップ特異的結合物質と結合する二次薬剤を介して、前記キャップ特異的結合物質と間接的に関連している、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記二次薬剤が二次抗体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記検出可能なシグナルが、蛍光シグナル、比色シグナル、または放射シグナルである、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記蛍光シグナルが、前記キャップ特異的結合物質と直接または間接的に関連する酵素により、酵素基質を発色、化学蛍光（ｃｈｅｍｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）、または化学発光産物へと転換することによって産生される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記酵素基質が、ｐ−ピトロフェニルリン酸ニナトリウム塩（ＰＮＰＰ）、２，２´−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）、ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）、及び３，３´，５，５´−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記酵素が、アルカリホスファターゼまたは西洋ワサビペルオキシダーゼである、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対照が、既定量のキャップされたｍＲＮＡを含むｍＲＮＡサンプルを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記対照が、既定量の合成されたキャップを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することが、前記ｍＲＮＡサンプル中のキャップされたｍＲＮＡの絶対量を定量化することを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することが、前記ｍＲＮＡサンプル中のキャップされたｍＲＮＡの割合を定量化することを含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、基質上に前記ｍＲＮＡを捕捉するステップをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｍＲＮＡが、前記ｍＲＮＡのポリＡ尾部に結合するポリＴオリゴによって捕捉される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ｍＲＮＡが、ポリＡ結合タンパク質または抗体によって捕捉される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記基質が、マイクロプレート、磁気ビーズ、粒子、ポリマービーズ、クロマトグラフィー樹脂、濾紙、ニトロセルロース、ジアゾセルロース、ガラス、ラテックス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、プロピレン、ポリエチレン、デキストラン、セファロース、寒天、デンプン、ナイロン、シリカゲル、またはヒドロゲルである、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記基質が、アビジンまたはストレプトアビジンでコーティングされている、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリＴオリゴが、ビオチン化される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記ｍＲＮＡサンプルが、インビトロで合成される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化するためのキットであって、
キャップ特異的結合物質と、
前記キャップ特異的結合物質とキャップされたｍＲＮＡとの間の複合体を検出するための１つ以上の試薬と、
キャップされたｍＲＮＡを定量化するための対照と、を含むキット。
【請求項２９】
前記キャップ特異的結合物質が、キャップ特異的抗体である、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記キャップ特異的抗体が、抗ｍ７Ｇ抗体である、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
前記キットが、ＲＮＡを捕捉するための基質をさらに含む、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３２】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法に従って、ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化するステップを含む、ｍＲＮＡの製造方法。
【請求項３３】
前記方法が、ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することからの結果に基づいた製造条
件を調節するステップを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記定量化ステップが、ｍＲＮＡロットを解放する前に実行される、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたｍＲＮＡ。
【請求項３６】
前記ポリＡ結合タンパク質もしくは抗体が、ビオチン化される、請求項２３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
他の特徴、目的、及び本発明の利点は、以下の詳細な記載において明らかである。しかしながら、本発明の実施形態を示しながら、詳細な記載が、限定ではなく、例示としてのみ、与えられることを理解するべきである。本発明の範囲内での様々な変更及び修正は、詳細な記載から当業者に明らかになるであろう。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ｍＲＮＡキャップ形成効率の定量化方法であって、
キャップされたｍＲＮＡを含むｍＲＮＡサンプルを提供することと、
キャップ特異的結合物質と前記キャップされたｍＲＮＡとの間の複合体の形成を可能にする条件下で、前記キャップ特異的結合物質を提供することと、
対照と比較した前記複合体の量を定量的に判定し、それによって、ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することと、を含む方法。
（項目２）
前記キャップが、式Ｉの構造を有し、
【化９】
2016515216.tif 000003
式中、
Ｂは、核酸塩基であり、
Ｒ１は、ハロゲン、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、及びＯＣＨ３から選択され、
Ｒ３は、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、または欠失し、
Ｒ４は、ＮＨ２であり、
Ｒ５は、ＯＨ、ＯＣＨ３、及びハロゲンから選択され、
ｎは、１、２、または３であり、
Ｍは、前記ｍＲＮＡのヌクレオチドである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記核酸塩基がグアニンである、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記キャップが式ＩＩの構造を持つｍ７Ｇキャップであり、
【化１０】
2016515216.tif 000004
式中、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｒ４は、ＮＨ２であり、
Ｒ５は、ＯＨまたはＯＣＨ３であり、
Ｒ６は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｍは、前記ｍＲＮＡのヌクレオチドである、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記キャップ特異的結合物質が、真核生物開始因子４Ｅ（ｅＩＦ−４Ｅ）、核キャップ結合タンパク質亜単位１、核キャップ結合タンパク質亜単位２、及び核キャップ結合複合体からなる群から選択されるキャップ特異的結合タンパク質である、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記キャップ特異的結合物質が、キャップ特異的抗体である、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記キャップ特異的結合物質が、抗ｍ７Ｇ抗体である、項目７に記載の方法。
（項目８）
前記複合体の量を定量的に判定する前記ステップが、ＥＬＩＳＡアッセイを実施することを含む、項目６または７に記載の方法。
（項目９）
前記複合体の量を定量的に判定する前記ステップが、前記複合体と関連する検出可能なシグナルを測定することを含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記検出可能なシグナルが、前記キャップ特異的結合物質と直接関連している、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記検出可能なシグナルが、前記キャップ特異的結合物質と結合する二次薬剤を介して、前記キャップ特異的結合物質と間接的に関連している、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記二次薬剤が二次抗体である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記検出可能なシグナルが、蛍光シグナル、比色シグナル、または放射シグナルである、項目９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記蛍光シグナルが、前記キャップ特異的結合物質と直接または間接的に関連する酵素により、酵素基質を発色、化学蛍光（ｃｈｅｍｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）、または化学発光産物へと転換することによって産生される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記酵素基質が、ｐ−ピトロフェニルリン酸ニナトリウム塩（ＰＮＰＰ）、２，２´−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）、ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）、及び３，３´，５，５´−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）からなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記酵素が、アルカリホスファターゼまたは西洋ワサビペルオキシダーゼである、項目１４または１５に記載の方法。
（項目１７）
前記対照が、既定量のキャップされたｍＲＮＡを含むｍＲＮＡサンプルを含む、項目１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記対照が、既定量の合成されたキャップを含む、項目１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することが、前記ｍＲＮＡサンプル中のキャップされたｍＲＮＡの絶対量を定量化することを含む、項目１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することが、前記ｍＲＮＡサンプル中のキャップされたｍＲＮＡの割合を定量化することを含む、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記方法が、基質上に前記ｍＲＮＡを捕捉するステップをさらに含む、項目１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記ｍＲＮＡが、前記ｍＲＮＡのポリＡ尾部に結合するポリＴオリゴによって捕捉される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ｍＲＮＡが、ポリＡ結合タンパク質または抗体によって捕捉される、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記基質が、マイクロプレート、磁気ビーズ、粒子、ポリマービーズ、クロマトグラフィー樹脂、濾紙、ニトロセルロース、ジアゾセルロース、ガラス、ラテックス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、プロピレン、ポリエチレン、デキストラン、セファロース、寒天、デンプン、ナイロン、シリカゲル、またはヒドロゲルである、項目２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記基質が、アビジンまたはストレプトアビジンでコーティングされている、項目２１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記ポリＴオリゴまたは前記ポリＡ結合タンパク質もしくは抗体が、ビオチン化される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記ｍＲＮＡサンプルが、インビトロで合成される、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化するためのキットであって、
キャップ特異的結合物質と、
前記キャップ特異的結合物質とキャップされたｍＲＮＡとの間の複合体を検出するための１つ以上の試薬と、
キャップされたｍＲＮＡを定量化するための対照と、を含むキット。
（項目２９）
前記キャップ特異的結合物質が、キャップ特異的抗体である、項目２８に記載のキット。
（項目３０）
前記キャップ特異的抗体が、抗ｍ７Ｇ抗体である、項目２９に記載のキット。
（項目３１）
前記キットが、ＲＮＡを捕捉するための基質をさらに含む、項目２８〜３０のいずれか１項に記載のキット。
（項目３２）
項目１〜２７のいずれか１項に記載の方法に従って、ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化するステップを含む、ｍＲＮＡの製造方法。
（項目３３）
前記方法が、ｍＲＮＡキャップ形成効率を定量化することからの結果に基づいた製造条
件を調節するステップを含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記定量化ステップが、ｍＲＮＡロットを解放する前に実行される、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
項目３２〜３４のいずれか１項に記載の方法に従って製造されたｍＲＮＡ。