【手続補正書】
【提出日】平成29年9月1日(2017.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１３９および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｂ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｃ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｄ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｅ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４３および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｆ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｇ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｈ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、ならびに
（ｉ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４３および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質
からなる群から選択される2つ以上の組換えＦＸａバリアントタンパク質を含む組成物。
【請求項２】
（ａ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１３９および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｂ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｃ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｄ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｅ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３９９からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｆ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３９９からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、ならびに
（ｇ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３９９からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質
からなる群から選択される2つ以上の組換えＦＸａバリアントタンパク質を含む組成物。
【請求項３】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が、β−ヒドロキシＡｓｐ６３およびＯ−結合型ヘキソースを含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が９、１０または１１個のＧｌａ残基を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が、さらに９、１０または１１個のＧｌａ残基を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が９つのＧｌａ残基を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が１０個のＧｌａ残基を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が１１個のＧｌａ残基を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の重鎖が、１つまたは２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項１０】
１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが、一シアル化、または二シアル化されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが、一シアル化されている、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが、二シアル化されている、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが存在する場合に、それぞれが一シアル化されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】
２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが存在する場合に、それぞれが二シアル化されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが存在する場合に、そのうちの１つが一シアル化されており、他の１つが二シアル化されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１に記載の組成物であって、請求項１の（ａ）ないし（ｉ）からなる群から選択される、３、４、５、６、７、８、または９つの組換えＦＸａバリアントタンパク質を含む組成物。
【請求項１７】
請求項２に記載の組成物であって、請求項２の（ａ）ないし（ｇ）からなる群から選択される、３、４、５、６、または７つの組換えＦＸａバリアントタンパク質を含む組成物。
【請求項１８】
（ａ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１３９および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｂ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｃ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｄ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｅ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４３および１４６〜３８６からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｆ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｇ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｈ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｉ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４３および１４６〜３８４からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｊ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１３９および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｋ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｌ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｍ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３９８からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｎ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４０および１４６〜３９９からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
（ｏ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４１および１４６〜３９９からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、および
（ｐ）軽鎖および重鎖のタンパク質配列がそれぞれ、配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸１〜１４２および１４６〜３９９からなる組換えＦＸａバリアントタンパク質、
からなる群から選択される2つ以上の組換えＦＸａバリアントタンパク質を含む組成物。
【請求項１９】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が、β−ヒドロキシＡｓｐ６３およびＯ−結合型ヘキソースを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が９、１０または１１個のＧｌａ残基を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が更に９、１０または１１個のＧｌａ残基を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が、９個のＧｌａ残基を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が、１０個のＧｌａ残基を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の軽鎖が、１１個のＧｌａ残基を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＦＸａバリアントタンパク質の重鎖が、１つまたは２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンを含むアルファ型重鎖を有する、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２６】
１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが、一シアル化、または二シアル化されている、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが一シアル化されている、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが二シアル化されている、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが存在する場合に、それぞれが一シアル化されている、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３０】
２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが存在する場合に、それぞれが二シアル化されている、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３１】
２つのコア１型Ｏ−結合型グリカンが存在する場合に、一つは一シアル化されており、もう一つは二シアル化されている、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３２】
請求項１および２に記載のバリアントタンパク質を含む組成物。
【請求項３３】
請求項１に記載の組成物であって、ＦＸａバリアントタンパク質（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のそれぞれが１０個のＧｌａ残基を含み、それらの相対的な量が、マススペクトルを用いて測定された場合に（ｂ）＞（ｃ）＞（ａ）＞（ｄ）となっている、組成物。
【請求項３４】
請求項２に記載の組成物であって、ＦＸａバリアントタンパク質（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｆ）のそれぞれが１０個のＧｌａ残基および１つのコア１型Ｏ−結合型グリカンを含み、それらの相対的な量が、マススペクトルを用いて測定された場合に（ｂ）＞（ｃ）＞（ｆ）＞（ａ）となっている、組成物。
【請求項３５】
（ａ）請求項１に記載されるバリアントタンパク質、および
（ｂ）請求項２に記載されるバリアントタンパク質
からなる群から選ばれるＦＸａバリアントタンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離された核酸。
【請求項３６】
請求項３５に記載の核酸配列を含む、発現ベクター。
【請求項３７】
請求項３６に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３８】
ＦＸａバリアントタンパク質を生産する方法であって、該方法が、請求項３７に記載の宿主細胞を適切な成長培地で培養するステップ、および該宿主細胞から産生されたＦＸａバリアントタンパク質を培地から単離するステップを含む、方法。
【請求項３９】
第Ｘ因子ａ（ＦＸａ）バリアントタンパク質を精製するための方法であって、
（ｉ）混合モードクロマトグラフィー（ＭＭＣ）媒体を、ＦＸａバリアントタンパク質を含有する、ろ過済み細胞培養培地と接触させるステップと、
（ｉｉ）ＭＭＣクロマトグラフィー媒体に結合しているＦＸａバリアントタンパク質を溶出するステップと、
（ｉｉｉ）アニオン交換クロマトグラフィー媒体を、ステップ（ｉｉ）で溶出したＦＸａバリアントタンパク質と接触させるステップと、
（ｉｖ）アニオン交換クロマトグラフィー媒体に結合しているＦＸａバリアントタンパク質を溶出するステップと、
（ｖ）カチオン交換クロマトグラフィー媒体を、ステップ（ｉｖ）で溶出したＦＸａバリアントタンパク質と接触させるステップと、
（ｖｉ）カチオン交換クロマトグラフィー媒体に結合しているＦＸａバリアントタンパク質を溶出すると
を含む方法。
【請求項４０】
混合モードクロマトグラフィー媒体が、タンパク質と、静電的相互作用、疎水性相互作用、水素結合およびチオフィリックな相互作用を介して相互作用することが可能である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ウイルスを不活性化または除去するための、少なくとも１つの追加のステップをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
混合モードクロマトグラフィー媒体が、Ｃａｐｔｏ  ＭＭＣであり、アニオン交換クロマトグラフィー媒体が、Ｑ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗであり、カチオン交換クロマトグラフィー媒体が、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（登録商標）ＳＯ３−である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
精製ＦＸａバリアントタンパク質を濃縮するための限外ろ過および透析ろ過のステップをさらに含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
請求項１から３４のいずれか一項に記載された組成物を含む、止血を必要とする患者を治療するための医薬組成物。
【請求項４５】
止血を必要とする患者が血友病Ａを有する、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
止血を必要とする患者が血友病Ｂを有する、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
止血を必要とする患者が外傷を有する、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
止血を必要とする患者が制御不能な出血を有している、請求項４４に記載の医薬組成物。