【手続補正書】
【提出日】平成29年2月21日(2017.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルシフェラーゼ、Ｌ−ルシフェリン及びＤ−ルシフェリンを含む組成物であって、本質的にＡＴＰを含まず、Ｄ−ルシフェリン対Ｌ−ルシフェリンの比率が４未満：１である、組成物。
【請求項２】
前記比率が、少なくとも０．２５：１〜４未満：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｌ−５’フルオロルシフェリン及びＤ−５’フルオロルシフェリンを含む組成物であって、
（ａ）ルシフェラーゼを更に含み、ＡＴＰを含まないか、又は
（ｂ）ＡＴＰを更に含み、ルシフェラーゼを含まない
のいずれかである、組成物。
【請求項４】
Ｄ−ルシフェリン、Ｌ−ルシフェリン及びＡＴＰを含む組成物であって、本質的にルシフェラーゼを含まず、Ｌ−ルシフェリンの濃度がＤ−ルシフェリンの濃度を超える、組成物。
【請求項５】
少なくとも５〜９未満のｐＨを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記Ｄ−ルシフェリンが、Ｄ−５’フルオロルシフェリンであり、前記Ｌ−ルシフェリンが、Ｌ−５’フルオロルシフェリンである、請求項１、２及び４〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
バッファー、タンパク質安定化剤、マグネシウムイオン、金属キレート化剤、洗剤、消泡剤、無機ホスフェート、ピロホスフェート、ＡＭＰ、補酵素Ａ、還元剤若しくはこれらの組み合わせから選択される少なくとも１つの追加の成分を更に含むか、又は硫酸マグネシウム及びトランス−１，２−シクロヘキサンジアミンテトラ酢酸（ＣＤＴＡ）を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸、１，２−ジアミノシクロヘキサン四酢酸、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ洗剤、Ｍａｚｕ消泡剤、硫酸マグネシウム、ＡＴＰ、補酵素Ａ、ピロホスフェート、ＤＴＴ、スルファイト、チオサルフェート、フッ化ナトリウム、ドデシルトリメチルアンモニウム、ヒドロキシポリエトキシドデカン、消泡剤、リン酸カリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びＡＭＰから選択される少なくとも１つの追加の成分を更に含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記追加の成分のうちの少なくとも２つ、又は前記追加の成分のうちの少なくとも３つ若しくは少なくとも４つ若しくは少なくとも５つを含む、請求項８又は９に記載の組成物。
【請求項１１】
マグネシウムイオン、クエン酸バッファー、ドデシルトリメチルアンモニウム、ヒドロキシポリエトキシドデカン、消泡剤、リン酸カリウム及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、並びに、（ｉ）ＭＥＳバッファー、フッ化ナトリウム及びピロホスフェート又は（ｉｉ）ＨＥＰＥＳバッファー及びＡＭＰのいずれかを更に含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
実質的にＬ−ルシフェリンを有さない組成物と比較して、０℃〜３５℃の温度で貯蔵したとき、増大した貯蔵寿命及び／又は安定性を有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの容器に封入された請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物を含むか、又は第１の容器に封入された請求項１〜５若しくは１２のいずれか１項に記載の組成物と、第２の容器に封入された、クエン酸バッファー、ＭＥＳバッファー、フッ化ナトリウム、ドデシルトリメチルアンモニウム、ヒドロキシポリエトキシドデカン、消泡剤、ピロホスフェート、リン酸カリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びＡＭＰから選択される少なくとも１つの成分とを含む、キット。
【請求項１４】
サンプル中のＡＴＰの存在又は量を決定する方法であって、請求項１又は５〜１１のいずれか１項に記載の組成物をサンプルと接触させる工程、及び生成された発光を検出することによって前記サンプル中のＡＴＰの存在又は量を決定する工程を含む、方法。
【請求項１５】
前記サンプルが、無傷の細胞及び／又はＡＴＰを生成若しくは使用する精製された酵素を含むか、又は前記サンプルが、未精製細胞溶解物若しくは清澄化した細胞溶解物を含むか、又は更に前記細胞が、原核細胞若しくは真核細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ルシフェラーゼを発現する細胞においてルシフェラーゼ活性を検出する方法であって、細胞内でルシフェラーゼを発現させる工程、前記ルシフェラーゼ、前記細胞又はこれらの組み合わせを混合物と接触させる工程であって、前記混合物が、少なくとも約５：９５〜約７５：２５のＬ−ルシフェリン対Ｄ−ルシフェリンの比率で、Ｌ−ルシフェリン及びＤ−ルシフェリンを含む、工程、並びに発光を検出する工程を含み、前記細胞が、真核細胞である、方法。
【請求項１７】
前記細胞を溶解し、ルシフェラーゼを含む前記溶解した細胞を前記混合物と接触させるか、又は前記溶解した細胞を清澄化してルシフェラーゼを含む清澄化した細胞抽出物を作製し、前記清澄化した細胞抽出物を前記混合物と接触させるか、又は前記細胞が、真核細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記混合物が、前記発光シグナルの半減期を増大させる、請求項１６又は１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞が、ルシフェラーゼコード配列で一時的にトランスフェクトされる、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記混合物が、少なくとも６．５〜７．８未満のｐＨ、又は少なくとも６．６〜少なくとも６．８のｐＨを有する、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｄ−ルシフェリンが、Ｄ−５’フルオロルシフェリンであり、前記Ｌ−ルシフェリンが、Ｌ−５’フルオロルシフェリンである、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物が、実質的にＬ−ルシフェリンを有さない組成物と比較して、約０℃〜約３５℃の温度で貯蔵したとき、増大した貯蔵寿命及び／又は安定性を有する、請求項１６〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
発光シグナルの半減期を増大させる方法であって、
（ａ）ルシフェラーゼを含むサンプルを、Ｄ−ルシフェリン、Ｌ−ルシフェリン及びＡＴＰを含む混合物と接触させて反応アッセイを作製する工程であって、Ｌ−ルシフェリンの濃度がＤ−ルシフェリンの濃度を超える、工程、並びに
（ｂ）発光を検出する工程であって、Ｄ−ルシフェリンを含み、Ｌ−ルシフェリンを実質的に含まない相当する反応アッセイと比較して、前記発光シグナルの半減期が増大されている、工程
を含む、方法。
【請求項２４】
前記発光シグナルの半減期が、少なくとも２５％又は少なくとも約５倍増大されている、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
（ｉ）前記サンプルが、ルシフェラーゼを発現する細胞を含むか、若しくは前記細胞が溶解され、前記サンプルが前記ルシフェラーゼを含む前記溶解した細胞を含む、又は
（ｉｉ）前記サンプルが、ルシフェラーゼを含む清澄化した細胞抽出物を含み、
前記細胞が、原核細胞又は真核細胞である、請求項２３又は２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記Ｄ−ルシフェリンが、Ｄ−５’フルオロルシフェリンであり、前記Ｌ−ルシフェリンが、Ｌ−５’フルオロルシフェリンであり、前記相当する反応アッセイが、Ｄ−５’フルオロルシフェリンを含み且つＬ−５’フルオロルシフェリンを実質的に含まない、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｌ−ルシフェリン対Ｄ−ルシフェリンの比率が、（ｉ）少なくとも約５：９５〜約５０：５０、（ｉｉ）約５：９５〜約２５：７５、又は（ｉｉｉ）少なくとも約５：９５〜約２０：８０である、請求項１６に記載の方法。