【手続補正書】
【提出日】平成29年1月24日(2017.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞であって、
（i）クロライドチャネルのCLCファミリーの一つをコードする配列を含むか、それから成るか、またはそれから本質的に成り、配列番号1、または配列番号2、または配列番号3、または配列番号4、または配列番号10、または配列番号11に対して少なくとも60%の配列同一性を持つポリヌクレオチド、
（ii）（i）に記載したポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、
（iii）クロライドチャネルの前記CLCファミリーの一つをコードする配列を含むか、それから成るか、またはそれから本質的に成り、配列番号5、または配列番号6、または配列番号7、または配列番号12、または配列番号13、または配列番号14に対して少なくとも60%の配列同一性を持つポリペプチド、または
(iv)（i）に記載した前記単離ポリヌクレオチドを含む構築物、ベクターまたは発現ベクターを含み、
ここでポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現または活性が、対照たばこ植物体細胞を含む対照たばこ植物体と比較して調節され、
また、突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞を含む突然変異体、非天然、または遺伝子組換えの植物体中の硝酸塩レベルが、対照たばこ植物体細胞を含む前記対照たばこ植物体と比較して調節され、ならびに
前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞を含む乾燥処理済みの、突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体中のたばこ特異的ニトロソアミン（TSNA）レベルが、対照たばこ植物体細胞を含む乾燥処理済みの対照たばこ植物体と比較して低減されている、たばこ植物体細胞。
【請求項２】
請求項1に記載の突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞であって、前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞が、前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞を含む、前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体中の硝酸塩のレベルを、前記対照たばこ植物体細胞を含む前記対照たばこ植物体と比較して減少させる一つ以上の突然変異を含み、また適切には前記突然変異が配列番号5の位置G163での置換型突然変異を含むか、または
前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞が、前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞を含む、前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体中の硝酸塩のレベルを、前記対照たばこ植物体細胞を含む前記対照たばこ植物体と比較して増加させる一つ以上の突然変異を含み、また適切には前記突然変異が配列番号13の位置P143での置換型突然変異を含む、突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体細胞。
【請求項３】
請求項1または請求項2に記載のたばこ植物体細胞を含む、突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体またはその構成要素。
【請求項４】
たばこ植物体またはその構成要素の少なくとも硝酸塩の含有量を調節するための方法であって、
（a）以下の発現または活性を調節する工程、すなわち、
（i）クロライドチャネルのCLCファミリーの一つをコードする配列を含むか、それから成るか、またはそれから本質的に成り、少なくとも配列ID番号1、または配列ID番号2、または配列ID番号3、または配列ID番号4、または配列ID番号10、または配列I番号11に対して少なくとも60%の配列同一性を持つポリヌクレオチドか、
（ii）（i）に記載したポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、または
（iii）クロライドチャネルの前記CLCファミリーの一つをコードする配列を含むか、それから成るか、またはそれから本質的に成り、配列番号5、または配列番号6、または配列番号7、または配列番号12、または配列番号13、または配列番号14に対して少なくとも60%の配列同一性を持つポリペプチドかのいずれかの発現または活性を調節する工程と、
（b）任意に行ってもよい、工程（a）で入手した前記突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体の少なくとも一部中の少なくとも前記硝酸塩の含有量を測定する工程と、
（c）（a）に記載した前記ポリヌクレオチドまたは前記ポリペプチドの発現または活性が調節されていない対照たばこ植物体と比較して、それに含まれる少なくとも前記硝酸塩の含有量が変化した、突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体を特定する工程とを含む、方法。
【請求項５】
請求項4に記載の方法であって、4-(メチルニトロソアミノ)-1-(3-ピリジル)-1-ブタノン(NNK)含有量および/またはニコチン含有量が前記たばこ植物体中で調節され、および/または
少なくともN-ニトロソニコチン(NNN)含有量が実質的に前記対照たばこ植物体と等しい、方法。
【請求項６】
前記たばこ植物体の構成要素が葉であり、適切には乾燥処理済みの葉である、請求項4または請求項5に記載の方法。
【請求項７】
請求項3〜6のうちいずれか1項に記載した方法によって入手されるか入手可能な、たばこ植物体またはその構成要素。
【請求項８】
突然変異体、非天然、または遺伝子組換えのたばこ植物体であって、前記NNK含有量が約110 ng/g以下であり、さらに、前記硝酸塩含有量が約7 mg/g以下であってもよい、請求項3〜7のうちいずれか1項に記載のたばこ植物体。
【請求項９】
請求項3、7または8のうちいずれか1項に記載のたばこ植物体に由来するバイオマス、種子、幹または葉を含む、たばこ植物材料。
【請求項１０】
請求項1に記載のたばこ植物体細胞、請求項3、7または8のうちいずれか1項に記載のたばこ植物体の少なくとも一部、または請求項9に記載のたばこ植物材料を含む、たばこ製品。
【請求項１１】
少なくともNNKレベルが減少した、乾燥処理済みたばこ植物材料（好ましくは乾燥処理済みの葉）を製造するための方法であって、その方法が、
（a）請求項3、7または8のいずれか1項に記載のたばこ植物体の少なくとも一部か、または請求項9に記載のたばこ植物材料を提供する工程と、
（b）任意に行ってもよい、前記たばこ植物材料を収穫する工程と、
（c）少なくとも前記NNKレベルが減少するのに十分な時間、前記たばこ植物材料を乾燥処理する工程とを含む、方法。
【請求項１２】
クロライドチャネルのCLCファミリーの一つをコードする配列を含むか、それから成るか、またはそれから本質的に成り、配列番号1に対して少なくとも99.1%の配列同一性、または配列番号2に対して少なくとも97.1%の配列同一性、または配列番号3に対して少なくとも63%の配列同一性、または配列番号4に少なくとも61%の配列同一性、または配列番号10に対して少なくとも60%の配列同一性、または配列番号11に対して少なくとも60%の配列同一性を持つ、単離ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項12に記載のポリヌクレオチドによってコードされる単離ポリペプチド。
【請求項１４】
クロライドチャネルのCLCファミリーの一つをコードする配列を含むか、それから成るか、またはそれから本質的に成り、配列番号5に対して少なくとも99.1%の配列同一性、または配列番号6に対して少なくとも98.1%の配列同一性、または配列番号7に対して少なくとも60%の配列同一性、または配列番号12に対して少なくとも60%の配列同一性、または配列番号13に対して少なくとも60%の配列同一性、または配列番号14に対して少なくとも60%の配列同一性を持つ、単離ポリペプチド。
【請求項１５】
請求項12に記載の単離ポリヌクレオチドを含む、構築物、ベクターまたは発現ベクター。