【手続補正書】
【提出日】平成29年9月5日(2017.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）リソソーム蓄積症と関係している酵素についてアッセイする方法であって、
（ａ）サンプルを第１の溶液と接触させて、１種以上のリソソーム酵素を含む溶液を生成することと、
（ｂ）溶液中の前記１種以上のリソソーム酵素を、分析しようとする各リソソーム酵素の酵素基質と接触させ、前記サンプル中に存在する各リソソーム酵素の酵素生成物を含む溶液を生成するのに十分な時間をかけて前記基質を前記酵素と一緒にインキュベートすることと、
ここで各リソソーム酵素の前記酵素基質が、炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化１】
2016529910.tif 000001
［式中、Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ｉ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｉｉ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｉｉｉ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｉｖ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｖ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｖｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｖｉｉ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｌ2は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ3は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ4は、任意であり、存在する場合、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基またはＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、
Ｒ2は、それぞれの出現において、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基、ハロゲン、ニトロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、ＲはＣ1〜Ｃ8アルキル基である）から独立に選択され、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基または置換もしくは無置換のＣ6〜Ｃ10アリール基であり、
ｎは、０、１、２、３または４である］
を有する化合物であり、
（ｃ）１種以上の前記酵素生成物の量を決定することと
を含む、方法；または、
（Ｂ）１種以上のリソソーム酵素の酵素活性をアッセイする方法であって、
（ａ）サンプルを第１の溶液と接触させて、１種以上のリソソーム酵素を含む溶液を生成することと、
（ｂ）溶液中の前記１種以上のリソソーム酵素を、分析しようとする各リソソーム酵素の酵素基質と接触させ、前記サンプル中に存在する各リソソーム酵素の第１の酵素生成物を含む溶液を生成するのに十分な時間をかけて前記基質を前記酵素と一緒にインキュベートすることと、
（ｃ）前記第１の酵素生成物をグリコヒドロラーゼに供して、グリコヒドロラーゼによるさらなる酵素作用を受けやすい各第１の酵素生成物の第２の酵素生成物を生成することと、
（ｄ）１種以上の前記第１の酵素生成物および／または１種以上の前記第２の酵素生成物の量を決定することと
を含む、方法。
【請求項２】
前記１種以上のリソソーム酵素が、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記基質が、炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化２】
2016529910.tif 000002
［式中、
Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｌ2は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ3は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ4は、任意であり、存在する場合、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基またはＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、
Ｒ2は、それぞれの出現において、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基、ハロゲン、ニトロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、ＲはＣ1〜Ｃ8アルキル基である）から独立に選択され、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基または置換もしくは無置換のＣ6〜Ｃ10アリール基であり、
ｎは、０、１、２、３または４である］
を有する、請求項１（Ｂ）に記載の方法。
【請求項４】
（Ａ）炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化３】
2016529910.tif 000003
［式中、
Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｌ2は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ3は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ4は、任意であり、存在する場合、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基またはＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、
Ｒ2は、それぞれの出現において、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基、ハロゲン、ニトロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、ＲはＣ1〜Ｃ8アルキル基である）から独立に選択され、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基または置換もしくは無置換のＣ6〜Ｃ10アリール基であり、
ｎは、０、１、２、３または４である］
を有する、化合物、または；
（Ｂ）炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化４】
2016529910.tif 000004
［式中、
Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｒdは、水素またはメチルであり、および、
Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、およびＸ4は、それぞれの出現において独立に、水素またはハロゲンである、］
を有する、化合物。
【請求項５】
次式：
【化５】
2016529910.tif 000005
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項６】
次式：
【化６】
2016529910.tif 000006
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項７】
次式：
【化７】
2016529910.tif 000007
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項８】
次式：
【化８】
2016529910.tif 000008
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項９】
次式：
【化９】
2016529910.tif 000009
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項１０】
次式：
【化１０】
2016529910.tif 000010
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項１１】
次式：
【化１１】
2016529910.tif 000011
を有する、請求項４（Ａ）に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項４〜１１に記載の化合物の１種以上から選択される基質を含む、リソソーム蓄積症と関係している酵素をアッセイするためのキット。
【請求項１３】
前記酵素が、α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＭＰＳ−Ｉ）、イズロン酸２−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩ）、ヘパランＮ−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＡ）、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＢ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＶＡ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＶＩ）、およびβ−グルクロニダーゼ（ＭＰＳ−ＶＩＩ）のうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
アッセイしようとする前記酵素それぞれの内部標準をさらに含む、請求項１２に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６５７】
独占的な所有権または実施権が主張される本発明の態様は、以下の通りに定義される。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
リソソーム蓄積症と関係している酵素についてアッセイする方法であって、
（ａ）サンプルを第１の溶液と接触させて、１種以上のリソソーム酵素を含む溶液を生成することと、
（ｂ）溶液中の前記１種以上のリソソーム酵素を、分析しようとする各リソソーム酵素の酵素基質と接触させ、前記サンプル中に存在する各リソソーム酵素の酵素生成物を含む溶液を生成するのに十分な時間をかけて前記基質を前記酵素と一緒にインキュベートすることと、
ここで各リソソーム酵素の前記酵素基質が、炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化１３１】
2016529910.tif 000012
［式中、Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ｉ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｉｉ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｉｉｉ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｉｖ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｖ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｖｉ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｖｉｉ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｌ2は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ3は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ4は、任意であり、存在する場合、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基またはＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、
Ｒ2は、それぞれの出現において、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基、ハロゲン、ニトロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、ＲはＣ1〜Ｃ8アルキル基である）から独立に選択され、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基または置換もしくは無置換のＣ6〜Ｃ10アリール基であり、
ｎは、０、１、２、３または４である］
を有する化合物であり、
（ｃ）１種以上の前記酵素生成物の量を決定することと
を含む、方法。
［２］
前記酵素生成物をグリコヒドロラーゼと接触させて、第２の酵素生成物を生成することをさらに含む、［１］に記載の方法。
［３］
（ａ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、および
（ｂ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ
からなる群から選択される１種以上の酵素の基質に作用する内因性グリコヒドロラーゼ酵素活性を遮断するために阻害剤を添加することをさらに含む、［１］に記載の方法。
［４］
１種以上のリソソーム酵素の酵素活性をアッセイする方法であって、
（ａ）サンプルを第１の溶液と接触させて、１種以上のリソソーム酵素を含む溶液を生成することと、
（ｂ）溶液中の前記１種以上のリソソーム酵素を、分析しようとする各リソソーム酵素の酵素基質と接触させ、前記サンプル中に存在する各リソソーム酵素の第１の酵素生成物を含む溶液を生成するのに十分な時間をかけて前記基質を前記酵素と一緒にインキュベートすることと、
（ｃ）前記第１の酵素生成物をグリコヒドロラーゼに供して、グリコヒドロラーゼによるさらなる酵素作用を受けやすい各第１の酵素生成物の第２の酵素生成物を生成することと、
（ｄ）１種以上の前記第１の酵素生成物および／または１種以上の前記第２の酵素生成物の量を決定することとを含む、方法。
［５］
前記グリコヒドロラーゼによるさらなる酵素作用を受けやすい前記第１の酵素生成物が、
（ａ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｂ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｃ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、および
（ｄ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、
からなる群から選択される酵素の作用によって生成される、［４］に記載の方法。
［６］
前記グリコヒドロラーゼによるさらなる酵素作用を受けにくい前記第１の酵素生成物が、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、および
（ｃ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の作用によって生成される、［４］に記載の方法。
［７］
（ａ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、および
（ｂ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ
からなる群から選択される１種以上の酵素の基質に作用する内因性グリコヒドロラーゼ酵素活性を遮断するために阻害剤を添加することをさらに含み、前記阻害剤が、工程（ｃ）の前記グリコヒドロラーゼの作用を有意に阻害しない、［４］に記載の方法。
［８］
前記１種以上のリソソーム酵素が、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素を含む、［１］または［４］に記載の方法。
［９］
前記リソソーム酵素を前記基質と接触させる前、後、または同時に、分析しようとする各リソソーム酵素の内部標準を添加することをさらに含む、［１］または［４］に記載の方法。
［１０］
１種以上の前記酵素生成物の量を決定する前に酵素反応を失活させることをさらに含む、［１］または［４］に記載の方法。
［１１］
前記サンプルが、血液または組織サンプルである、［１］または［４］に記載の方法。
［１２］
前記サンプルが、乾燥血液スポットである、［１］または［４］に記載の方法。
［１３］
前記グリコヒドロラーゼが、ヒトヘキソサミニダーゼＡ、細菌性Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ、細菌性β−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、β−ガラクトシダーゼ（アスペルギルス）、およびα−グルコシダーゼ（酵母）からなる群から選択される、［２］または［４］に記載の方法。
［１４］
前記阻害剤が、（Ｚ）−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシリデン）−アミノＮ−フェニルカルバメート、１−デオキシノジリマイシン、カスタノスペルミン、スウェインソニン、カリステギンＢ2、イソファガミン、タミフル、グルコノヒドロキシモラクトン、グルクロン酸ならびにそのラクトンおよびラクタム、リレンザ、ミグリトール、フェネチル置換グルコ−およびガラクト−イミダゾール、Ｎ−ヒドロキシエチルデヒドロノジリマイシン、ＧａｌＮＡｃチアゾリン、ならびにＧｌｃＮＡｃチアゾリンからなる群から選択される、［３］または［７］に記載の方法。
［１５］
前記酵素生成物の量を決定することが、質量分光分析を含む、［１］または［４］に記載の方法。
［１６］
前記酵素生成物の量を決定することが、質量分光分析によって各生成物とその内部標準との比を決定することを含む、［１］または［４］に記載の方法。
［１７］
前記酵素生成物の量を決定することが、生成物の親イオンおよびこれらの内部標準を生成し、単離し、衝突誘起解離を受けて、生成物断片イオンおよび内部標準断片イオンを生成する、タンデム質量分光分析を含む、［１］または［４］に記載の方法。
［１８］
前記酵素生成物の量を決定することが、生成物断片イオンおよび内部標準断片イオンのピーク強度を比較して生成物の量を計算することを含む、［１］または［４］に記載の方法。
［１９］
前記酵素生成物の量を決定することが、液体クロマトグラフィーまたはフローインジェクションによって生成物を質量分析計に導くことを含む、［１］または［４］に記載の方法。
［２０］
前記酵素生成物の量を決定することが、蛍光分析を含む、［１］または［４］に記載の方法。
［２１］
前記酵素生成物の量を用いて、前記サンプルが、１種以上のリソソーム酵素欠損症と関係している病状を治療するための候補に由来しているかどうかを決定することをさらに含む、［１］または［４］に記載の方法。
［２２］
前記基質が、炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化１３２】
2016529910.tif 000013
［式中、
Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｌ2は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ3は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ4は、任意であり、存在する場合、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基またはＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、
Ｒ2は、それぞれの出現において、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基、ハロゲン、ニトロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、ＲはＣ1〜Ｃ8アルキル基である）から独立に選択され、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基または置換もしくは無置換のＣ6〜Ｃ10アリール基であり、
ｎは、０、１、２、３または４である］
を有する、［４］に記載の方法。
［２３］
前記基質が、次式：
【化１３３】
2016529910.tif 000014
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［２４］
前記基質が、次式：
【化１３４】
2016529910.tif 000015
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［２５］
前記基質が、次式：
【化１３５】
2016529910.tif 000016
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［２６］
前記基質が、次式：
【化１３６】
2016529910.tif 000017
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［２７］
前記基質が、次式：
【化１３７】
2016529910.tif 000018
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［２８］
前記基質が、次式：
【化１３８】
2016529910.tif 000019
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［２９］
前記基質が、次式：
【化１３９】
2016529910.tif 000020
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３０］
前記基質が、次式：
【化１４０】
2016529910.tif 000021
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３１］
前記基質が、次式：
【化１４１】
2016529910.tif 000022
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３２］
前記基質が、次式：
【化１４２】
2016529910.tif 000023
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３３］
前記基質が、次式：
【化１４３】
2016529910.tif 000024
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３４］
前記基質が、次式：
【化１４４】
2016529910.tif 000025
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３５］
前記基質が、次式：
【化１４５】
2016529910.tif 000026
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３６］
前記基質が、次式：
【化１４６】
2016529910.tif 000027
を有する、［１］または［２２］に記載の方法。
［３７］
炭水化物部分およびアグリコン部分を有し、次式：
【化１４７】
2016529910.tif 000028
［式中、Ｓは、アグリコン部分に共有結合するときに、
（ａ）α−Ｌ−イズロニダーゼ、
（ｂ）イズロン酸２−スルファターゼ、
（ｃ）ヘパランＮ−スルファターゼ、
（ｄ）Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ、
（ｅ）Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ、
（ｆ）Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ、および
（ｇ）β−グルクロニダーゼ
からなる群から選択される酵素の基質を与える炭水化物部分であり、
Ｌ2は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ3は、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｌ4は、任意であり、存在する場合、１〜２０個の炭素原子を含み、そのうちの１個以上の炭素原子がＮ、ＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で置きかえられていてもよく、かつ／または１個以上の炭素原子がＣ1〜Ｃ6アルキル基もしくはハロゲンで置換されていてもよいリンカーであり、
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基またはＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、
Ｒ2は、それぞれの出現において、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基、ハロゲン、ニトロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ、または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、ＲはＣ1〜Ｃ8アルキル基である）から独立に選択され、
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基または置換もしくは無置換のＣ6〜Ｃ10アリール基であり、
ｎは、０、１、２、３または４である
を有する、化合物。
［３８］
Ｌ2が、−（ＣＨ2）n−（式中、ｎは１〜６である）である、［３７］に記載の化合物。
［３９］
Ｌ3が、−（ＣＨ2）m−（式中、ｍは１〜１２である）である、［３７］に記載の化合物。
［４０］
Ｌ4が、−（ＣＨ2）n−（式中、ｎは１〜６である）である、［３７］に記載の化合物。
［４１］
Ｌ4が存在しない、［３７］に記載の化合物。
［４２］
Ｒ1が、Ｃ1〜Ｃ5アルキルである、［３７］に記載の化合物。
［４３］
Ｒ2が、Ｃ1〜Ｃ8アルキルである、［３７］に記載の化合物。
［４４］
Ｒ3が、Ｃ1〜Ｃ6アルキルである、［３７］に記載の化合物。
［４５］
Ｒ3がフェニルである、［３７］に記載の化合物。
［４６］
次式：
【化１４８】
2016529910.tif 000029
を有する、［３７］に記載の化合物。
［４７］
次式：
【化１４９】
2016529910.tif 000030
を有する、［３７］に記載の化合物。
［４８］
次式：
【化１５０】
2016529910.tif 000031
を有する、［３７］に記載の化合物。
［４９］
次式：
【化１５１】
2016529910.tif 000032
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５０］
次式：
【化１５２】
2016529910.tif 000033
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５１］
次式：
【化１５３】
2016529910.tif 000034
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５２］
次式：
【化１５４】
2016529910.tif 000035
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５３］
次式：
【化１５５】
2016529910.tif 000036
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５４］
次式：
【化１５６】
2016529910.tif 000037
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５５］
次式：
【化１５７】
2016529910.tif 000038
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５６］
次式：
【化１５８】
2016529910.tif 000039
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５７］
次式：
【化１５９】
2016529910.tif 000040
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５８］
次式：
【化１６０】
2016529910.tif 000041
を有する、［３７］に記載の化合物。
［５９］
次式：
【化１６１】
2016529910.tif 000042
を有する、［３７］に記載の化合物。
［６０］
［３７］〜［５９］に記載の化合物の１種以上から選択される基質を含む、リソソーム蓄積症と関係している酵素をアッセイするためのキット。
［６１］
前記酵素が、α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＭＰＳ−Ｉ）、イズロン酸２−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩ）、ヘパランＮ−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＡ）、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＢ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＶＡ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＶＩ）、およびβ−グルクロニダーゼ（ＭＰＳ−ＶＩＩ）のうちの１つ以上から選択される、［６０］に記載のキット。
［６２］
アッセイしようとする前記酵素それぞれの内部標準をさらに含む、［６０］に記載のキット。
［６３］
サンプルを、［３７］〜［５９］に記載の化合物の１種以上から選択される基質と接触させることを含む、リソソーム蓄積症と関係している酵素についてアッセイする方法。
［６４］
前記酵素が、α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＭＰＳ−Ｉ）、イズロン酸２−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩ）、ヘパランＮ−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＡ）、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＢ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＶＡ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＶＩ）、およびβ−グルクロニダーゼ（ＭＰＳ−ＶＩＩ）のうちの１つ以上から選択される、［６３］に記載の方法。
［６５］
前記サンプルを、アッセイしようとする前記酵素それぞれの内部標準と接触させることをさらに含む、［６３］に記載の方法。
［６６］
サンプルを、［４６］または［４７］に記載の化合物と接触させることを含む、α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＭＰＳ−Ｉ）をアッセイする方法。
［６７］
サンプルを、［４８］または［４９］に記載の化合物と接触させることを含む、イズロン酸２−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩ）をアッセイする方法。
［６８］
サンプルを、［５０］または［５１］に記載の化合物と接触させることを含む、ヘパランＮ−スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＡ）をアッセイする方法。
［６９］
サンプルを、［５２］または［５３］に記載の化合物と接触させることを含む、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＭＰＳ−ＩＩＩＢ）をアッセイする方法。
［７０］
サンプルを、［５４］または［５５］に記載の化合物と接触させることを含む、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＩＶＡ）をアッセイする方法。
［７１］
サンプルを、［５６］または［５７］に記載の化合物と接触させることを含む、Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸スルファターゼ（ＭＰＳ−ＶＩ）をアッセイする方法。
［７２］
サンプルを、［５８］または［５９］に記載の化合物と接触させることを含む、β−グルクロニダーゼ（ＭＰＳ−ＶＩＩ）をアッセイする方法。