【誤訳訂正書】
【提出日】平成29年1月31日(2017.1.31)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
【図１】実施例において使用した組換えCD74タンパク質のアミノ酸配列。CD74v1およびCD74v2、CD74del2-36v1およびCD74del2-36v2ならびにHisCD74v1およびHisCD74v2は、それぞれ、SEQ ID NO: 1〜6に対応する。
【図２】本発明の抗体の重鎖可変（VH)および軽鎖可変（VL）鎖配列のアラインメント。各VH/VL配列のSEQ ID NOは、配列の右側の括弧内に示されている。IMGT命名法に従う相補性決定領域（CDR)は、以下のように強調表示されている：イタリック体の配列はCDR1を表し、下線が付された配列はCDR2を表し、太字の配列はCDR3を表す。
【図３】ELISAによって決定された、バリアント1および2アイソフォームの細胞外ドメインに相当する組換えタンパク質（CD74v1およびCD74v2）に対するCD74特異的抗体の結合。すべてのヒト抗体は、関係する重鎖および軽鎖発現ベクターを一過的にコトランスフェクトしたHEK-293F細胞によって産生された。
【図４】FACSによって決定された、Raji細胞の細胞性CD74に対するCD74特異的抗体の結合。すべてのヒト抗体は、関係する重鎖および軽鎖発現ベクターを一過的にコトランスフェクトしたHEK-293F細胞によって産生された。
【図５】カニクイザルCD74に対するCD74特異的抗体の交差反応性。ヒト扁桃（上パネル）およびカニクイザルリンパ節（下パネル）をCD74特異的抗体で染色した。*：胚中心；Mf：マクロファージ；#：マントル層B細胞。
【図６】抗κ-ETA'プレインキュベートCD74特異的抗体による細胞殺傷の用量依存的誘導。代表的な実験が示されている。示されているデータは、抗κ-ETA'プレインキュベートCD74 HuMab抗体で処置された2つ組のウェルの細胞の平均生存率（%）である。生存率（%）は、実施例14に記載の通りに計算した。
【図７】ELISAによって決定された、CD74v1細胞外ドメインの組換えタンパク質に対する、CD74 HuMab抗体005および006（A）ならびに011（B）ならびに対応するADCの結合。1つの代表的な実験が示されている。
【図８】Daudi細胞におけるFACS分析によって決定された、表面発現CD74に対する、CD74 HuMab抗体005および006（A）ならびに011（B）ならびに対応するADCの結合。示されているデータは、3回の独立した実験から計算した平均蛍光強度（MFI）である。
【図９】CD74特異的ADCによる細胞殺傷の用量依存的誘導。以下の細胞株の各々につき1つの代表的な実験が示されている：Daudi（A）、Raji（B）、M4A4（C）およびNCI-H747（D）細胞。示されているデータは、CD74特異的ADCで処置した2つ組のウェルの細胞の生存率（%）である。
【図１０】SCIDマウス内のDaudi-luc異種移植片の治療的処置におけるCD74特異的ADCのインビボ効果。Daudi-luc腫瘍が形成されたマウスをCD74特異的ADCで処置した。示されているデータは、群ごとの平均生物発光画像化（BLI）シグナル±S.E.M.である（n = 1群につき7匹のマウス）。
【図１１】SCIDマウス内のRaji-luc異種移植片の治療的処置におけるCD74特異的ADCのインビボ効果。Raji-luc腫瘍が形成されたマウスをCD74特異的ADCで処置した。示されているデータは、群ごとの平均BLIシグナル±S.E.M.である（n = 1群につき7匹のマウス）。
【図１２】SCIDマウス内のRaji異種移植片の治療的処置におけるCD74特異的ADCのインビボ効果。Raji腫瘍がs.c.形成されたマウスをCD74特異的ADCで処置した。示されているデータは、群ごとの平均腫瘍体積±S.E.M.である（n = 1群につき6匹のマウス）。
【図１３】SCIDマウス内のM4A4異種移植片の治療的処置における抗CD74 ADCのインビボ効果。M4A4腫瘍が形成されたマウスを抗CD74 ADCで処置した。示されているデータは、群ごとの平均腫瘍体積±S.E.M.である（n = 1群につき7匹のマウス）。
【図１４】CD74特異的HuMab抗体のオフレート（off-rate）の決定。1つの代表的な実験が示されている。示されているデータは、示されている期間、Alexa Fluor 488（登録商標）Dye標識CD74 HuMab抗体と共にインキュベートし、その後に未標識CD74 HuMab抗体と共にインキュベートした3つ組のウェルの細胞の平均蛍光強度（MFI）である。
【図１５】抗CD74 HuMab抗体の時間依存的なインターナリゼーションおよび蓄積。各細胞株につき1つの代表的な実験が示されている。示されているデータは、Alexa 488標識抗CD74 HuMab抗体と共にインキュベートされた2つ組のウェルの細胞の平均蛍光強度（MFI）である。Daudi細胞は、4℃（A）または37℃（B）でAlexa 488標識抗CD74 HuMab抗体と共にインキュベートした。Raji細胞（C）およびM4A4細胞（D）は、37℃でインキュベートした。
【図１６】SCIDマウス内のDaudi luc異種移植片の予防的処置における抗CD74 HuMab抗体のインビボ効果。マウスを、Daudi luc腫瘍の静脈内接種後1時間以内に抗CD74 HuMab抗体で処置した。示されているデータは、群ごとの平均BLIシグナル±S.E.M.である（n = 1群につき7匹のマウス）。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
発明の詳細な説明
定義
「CD74」および「CD74抗原」という用語は、本明細書において言い換え可能に使用される。そうでないことが示されない限り、これらの用語には、自然界で細胞によって発現されるまたはCD74遺伝子をトランスフェクトした細胞において発現されるヒトCD74の任意のバリアント、アイソフォームおよび種ホモログが含まれる。少なくとも4つのヒトアイソフォーム、p43、p41、p35およびpp33が存在することが公知となっている（Borghese F et al., Expert Opin Ther Targets 2011; 15(3): 237-251）。これらは選択的転写物スプライシングおよび2つの翻訳開始部位に起因するものである。p43（CD74アイソフォーム1、アイソフォームaまたは「長鎖（long）」としても公知である；UniProtエントリーP04233-1およびNCBI参照配列NP 001020330を参照のこと）は、296アミノ酸を含み、残基73〜296がその細胞外部分を形成する。アイソフォーム1の細胞外部分を有するCD74のタンパク質構築物は、本明細書において「バリアント1」または「CD74v1」と称される。p35（CD74アイソフォーム2、アイソフォームbまたは「短鎖（short）」としても公知である；UniProtエントリーP04233-2およびNCBI参照配列NP 004346を参照のこと）は、選択的スプライシングにより細胞外ドメインから残基209〜272が欠失したものである。アイソフォーム2の細胞外部分を有するCD74のタンパク質構築物は、本明細書において「バリアント2」または「CD74v2」と称される。p41およびp33は、選択的翻訳開始部位から生じたものであり（48bp下流；16アミノ酸短いタンパク質）、そのためこれらの16アミノ酸内に存在する小胞体（ER）保留シグナルを欠失しているが、それぞれp43およびp35と同一の細胞外部分を有するバリアントとなっている。残基148〜160が置き換えられかつ残基161〜296が欠失している別のアイソフォーム（アイソフォーム3またはアイソフォームcとして公知である）の配列が、NP 001020329として提供されている。カニクイザルCD74ホモログの配列は、例えば、NCBI参照配列: XP_001099491.2およびNCBI参照配列: XP_002804624.1として提供されている。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
好ましい態様において、本発明の抗体は、単離される。「単離されたAb」は、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を表すことが意図されている（例えば、CD74に特異的に結合する単離された抗体は、CD74以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ヒトCD74のエピトープ、アイソフォームまたはバリアントに特異的に結合する単離された抗体は、他の関連抗原、例えば他の種の関連抗原（例えば、CD74の種ホモログ）に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まないものであり得る。本発明の1つの態様において、異なる抗原結合特異性を有する2つまたはそれ以上の「単離された」モノクローナル抗体は、十分に定義された組成物中で組み合わされる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
本明細書において2つまたはそれ以上の抗体との関係で使用される場合、「競合する」、「交差競合する」という用語は、2つまたはそれ以上の抗体が、CD74に対する、例えばCD74バリアント1、2またはその両方に対する結合に関して競合することを示す。例えば、実施例1に記載される構築物をそのようなアッセイにおいて使用することができる。1つの例示的なタイプのアッセイにおいて、CD74は、プレート上にコーティングされそして第1の抗体と結合され、その後に第2の標識された抗体が添加される。第1の抗体の存在が第2の抗体の結合を減少させる場合、これらの抗体は競合している。「競合する」という用語は、本明細書で使用される場合、1つの抗体が別の抗体の結合を減少させるが、その逆の順でこれらの抗体が添加された場合には競合が観察されない抗体の組み合わせを網羅することも意図されている。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
この抗体はさらに、1つもしくは複数のヒトCD74バリアントに高い親和性で結合し、CD74に対するMIFの結合を阻害するという1つもしくは複数の機能的特性、または上記の特性の任意の組み合わせによって特徴づけることができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
1つの局面において、本発明の抗体は、高い親和性でヒトCD74バリアント1および／もしくは2にまたは生来的にCD74を発現するヒト細胞に結合する。例えば、1つの態様において、この抗体は、実施例11に記載の通りに決定される場合、（a）約500 ng/mL未満、約400 ng/mL未満、約350 ng/mL未満もしくは約330 ng/mL未満のEC50（見かけ上の親和性）でCD74バリアント1の細胞外ドメインに結合するか；b）約400 ng/mL未満、約300 ng/mL未満、約250 ng/mL未満もしくは約220 ng/mL未満のEC50でCD74バリアント2の細胞外ドメインに結合するか；または（c）（a）および（b）の両方である。また、またはあるいは、この抗体は、実施例12に記載の通りに決定される場合、約400 ng/mL未満、約300 ng/mL未満、約250 ng/mL未満または約200 ng/mL未満のEC50でRaji細胞上のCD74に結合し得る。また、またはあるいは、この抗体は、約10-8 Mもしくはそれ未満、例えば約10-9 Mもしくはそれ未満、または約10-10 Mもしくはそれ未満ものKDでCD74バリアント1、2または両方に結合し得る。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
同様にまたは代わりに、本発明の抗体は、ヒトCD74バリアント1、バリアント2もしくはバリアント1および2の両方に対する参照抗体と交差競合することまたはそれらと同一エピトープに結合することによって特徴づけられる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
本抗体と参照抗体の競合的結合を試験するアッセイは、例えば、CD74バリアントの細胞外ドメイン（例えば、実施例1に記載される構築物）、CD74発現細胞および／またはCD74発現細胞から調製された細胞膜を利用することができる。例示的なアッセイにおいて、CD74発現細胞は、1〜100μg/mLの範囲の異なる濃度の試験抗体と共にプレインキュベートされ、その後に10μg/mLの濃度のフルオロフォア標識参照抗体と共にインキュベートされる。参照抗体の結合は、FACS分析を用いて決定される。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
1つの局面において、本抗体は、ヒトCD74のバリアント1および2に対する結合に関して、
（a）SEQ ID NO:7の配列を含むVH領域とSEQ ID NO:23の配列を含むVL領域とを含む抗体［005］；
（b）SEQ ID NO:11の配列を含むVH領域とSEQ ID NO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体［006］；
（c）SEQ ID NO:15の配列を含むVH領域とSEQ ID NO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体［008］；および
（d）SEQ ID NO:19の配列を含むVH領域とSEQ ID NO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体［011］
から選択される少なくとも1つの参照抗体と競合する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
1つの態様において、本抗体は、ヒトCD74内の、（a）、（b）、（c）および（d）で定義される参照抗体の少なくとも1つと同一のエピトープに結合する。これは、公知のエピトープ決定技術、例えば異なる点変異を有するCD74バリアントに対する抗体結合の試験またはファージディスプレイ技術を用いて決定することができる（例えば、Binder et al., Cancer Res 2007; 67: 3518-3523; Carter JM et al., Curr Protocols Immunol 2004; Ch 9: Unit 9.4; Hjelm B et al., N Biotechnol 2010; 27: 129-137; Rockberg J et al., Curr Protocols Immunol 2010; Ch 9: Unit 9.9; Benjamin DC et al., Methods 1996; 9: 508-515を参照のこと）。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９０】
実施例1
CD74v1およびCD74v2、His-CD74v1およびHis-CD74v2ならびにCD74del2-36v1およびCD74del2-36v2発現ベクターの構築
ヒトCD74バリアント1（CD74v1）（Genbank配列NP_001020330と同じ）およびヒトCD74バリアント2（CD74v2）（Genbank配列AAV383110330と同じ）のコード配列を合成により作製し、十分にコドン最適化を行った（GeneArt, Regensburg, Germany）。この構築物を哺乳動物発現ベクターpEE13.4（Lonza Biologics, Slough, UK）にクローニングした。これらの構築物をpEE13.4CD74v1およびpEE13.4CD74v2と命名した。細胞表面上でのCD74の発現レベルを増強するため、細胞質ER保留シグナル（aa2〜36）を、記載されているようにして取り除いた（Khalil H et al., J Cell Sci 2005; 118: 4679-4687）。この目的で、pEE13.4CD74v1およびpEE13.4CD74v2からCD74コード領域を増幅し、その過程でaa2〜36コード領域を取り除くことによって新たな構築物を作製した。これらのPCR断片をpEE13.4に再クローニングし、全体を配列決定してこの新しい構築物の正確性を確認した。これらの発現ベクターをpEE13.4CD74v1del2-36およびpEE13.4CD74v2del2-36と命名した。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９２】
CD74バリアントのタンパク質配列は、図1に示されている。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３】
2014507138.tif 000001