【手続補正書】
【提出日】平成29年7月10日(2017.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
合成ポリヌクレオチドであって、
（ａ）表６に見出されるＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質からなる群から選択されるＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をコードする、結合ヌクレオシドの第１の領域；
（ｂ）表７に見出される５’非翻訳領域（ＵＴＲ）からなる群から選択される結合ヌクレオシドの配列を含む前記第１の領域の５’末端に位置する第１のフランキング領域；
（ｃ）表８に見出される３’非翻訳領域（ＵＴＲ）からなる群から選択される結合ヌクレオシドの配列を含む前記第１の領域の３’末端に位置する第２のフランキング領域
を含む合成ポリヌクレオチド。
【請求項２】
修飾ＲＮＡポリヌクレオチドである、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項３】
配列番号５１〜５６から選択される配列からなる、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記第１の領域が、ヒトコドン最適化ｄＣＡＳ９をコードする配列を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記第１の領域が、配列番号６１の配列をコードする、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記第１の領域が、エフェクタードメインをさらにコードする、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記第１の領域が、ＫＲＡＢ、ＶＰ６４、ｐ６５ＡＤおよびＭｘｉからなる群から選択されるエフェクタードメインをさらにコードする、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記第１の領域が、表６に開示のＫＲＡＢまたはＶＰ６４をさらにコードする、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記第１の領域が、エフェクタードメインをさらにコードし、表６に開示のエフェクタードメインからなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記第１のフランキング領域が、配列番号７１の配列を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記第２のフランキング領域が、配列番号８１の配列を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記第２のフランキング領域が、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位または１つのｍｉＲ結合部位シードを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記第２のフランキング領域が、ｍｉＲ−１２２またはｍｉＲ−１４２またはｍｉＲ−１４６結合部位を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
前記第２のフランキング領域が、配列番号８２のｍＩＲ−１２２結合部位からなるｍｉＲ−１２２結合部位を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１５】
前記第２のフランキング領域が、配列番号８２の配列を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１６】
前記第２のフランキング領域が、結合ヌクレオシドの３’テーリング配列を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記第２のフランキング領域が、ポリＡテールを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１８】
前記第２のフランキング領域が、８０〜１４０ヌクレオチド長のポリＡテールを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記第２のフランキング領域が、１００ヌクレオチドのポリＡテールを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２０】
請求項１に記載の合成ポリヌクレオチドをコードする第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２１】
ＤＮＡポリヌクレオチドである、請求項２０に記載の第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２２】
ベクターをさらに含む、請求項２０に記載の第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２３】
少なくとも１つの５’キャップ構造をさらに含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記結合ヌクレオシドの第１の領域が、少なくとも第１の修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２５】
前記結合ヌクレオシドの第１の領域が、少なくとも１つの１−メチル−シュードウリジンを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２６】
少なくとも２つの修飾を含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２７】
少なくとも１つの１−メチル−シュードウリジンおよび少なくとも１つの５’−メチルシチジンを含む、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２８】
ａ．前記少なくとも２つの修飾が、ヌクレオシドの１つ以上およびヌクレオシド間の骨格結合上の少なくとも一方に位置し；または
ｂ．前記少なくとも２つの修飾が、ヌクレオシドおよび骨格結合上の両方に位置し；または
ｃ．少なくとも１つの修飾が、骨格結合上に位置し；または
ｄ．１つ以上の骨格結合が、１つ以上の酸素原子の置き換えにより修飾されており；または
ｅ．少なくとも１つの修飾が、ホスホロチオエート結合による少なくとも１つの骨格結合の置き換えを含み；または
ｆ．少なくとも１つの修飾が、１つ以上のヌクレオシド上に位置し；または
ｇ．１つ以上の修飾が、１つ以上のヌクレオシドの糖上に存在し；または
ｈ．少なくとも１つの修飾が、シトシン、グアニン、アデニン、チミンおよびウラシルからなる群から選択される１つ以上の核酸塩基上に位置する、
請求項２６に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項２９】
インビトロ転写法を使用して、または化学合成法を使用して産生される、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項３０】
実質的に精製されている、請求項１に記載の合成ポリヌクレオチド。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項に記載の合成ポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項３２】
薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
溶媒、水性溶媒、非水性溶媒、分散媒体、希釈剤、分散液、懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、保存剤、脂質、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、コア−シェルナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、ペプチド、タンパク質、細胞、ヒアルロニダーゼ、およびそれらの混合物からなる群から選択される薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ｒｅＬＮＰ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＡおよびＰＥＧ化脂質ならびにそれらの混合物から選択される脂質をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３５】
脂質ナノ粒子をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３６】
ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を産生させるための組成物であって、
細胞または組織に接触させられる、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３７】
ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を産生させるための組成物であって、
生物に投与される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３８】
１ｐｇ〜１ｍｇの総１日用量で前記合成ポリヌクレオチドが投与される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
単回用量で前記合成ポリヌクレオチドが投与される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
単回用量を超えて前記合成ポリヌクレオチドが投与される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
投与が、出生前投与、新生児投与および出生後投与からなる群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４２】
投与が、経口投与、注射による投与、眼内投与による投与および鼻腔内投与による投与からなる群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４３】
投与が、注射による投与であり、前記注射が、静脈内、動脈内、腹腔内、皮内、皮下および筋肉内注射からなる群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４４】
目的遺伝子を標的化するための合成ｓｇＲＮＡであって、
（ａ）前記目的遺伝子の５’ＵＴＲのいずれかの鎖に対して相補的な２０〜２５結合ヌクレオシドの第１の領域；
（ｂ）配列番号９０に見出されるガイドＲＮＡ足場配列を含む、前記第１の領域の３’末端に位置する第２のフランキング領域
を含む合成ｓｇＲＮＡ。
【請求項４５】
配列番号９１、９２、９３または９４から選択される配列からなる、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項４６】
前記標的遺伝子が、ＶＥＧＦを含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項４７】
前記第１の領域が、配列番号９１、９２、９３または９４に開示の標的配列を含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項４８】
配列番号９０の配列を含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項４９】
請求項４４に記載のｓｇＲＮＡをコードする第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項５０】
ＤＮＡポリヌクレオチドである、請求項４９に記載の第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項５１】
ベクターをさらに含む、請求項４９に記載の第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項５２】
５’ＵＴＲをさらに含む、請求項４９に記載の第２の合成ポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記ポリヌクレオチドが、少なくとも１つの５’キャップ構造をさらに含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項５４】
前記結合ヌクレオシドの第１の領域が、少なくとも第１の修飾ヌクレオシドを含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項５５】
前記ｓｇＲＮＡが、少なくとも２つの修飾を含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項５６】
ａ．前記少なくとも２つの修飾が、ヌクレオシドの１つ以上およびヌクレオシド間の骨格結合上の少なくとも一方に位置し；または
ｂ．前記少なくとも２つの修飾が、ヌクレオシドおよび骨格結合上の両方に位置し；ま
たは
ｃ．少なくとも１つの修飾が、骨格結合上に位置し；または
ｄ．１つ以上の骨格結合が、１つ以上の酸素原子の置き換えにより修飾されており；または
ｅ．少なくとも１つの修飾が、ホスホロチオエート結合による少なくとも１つの骨格結合の置き換えを含み；または
ｆ．少なくとも１つの修飾が、１つ以上のヌクレオシド上に位置し；または
ｇ．１つ以上の修飾が、１つ以上のヌクレオシドの糖上に存在し；または
ｈ．少なくとも１つの修飾が、シトシン、グアニン、アデニン、チミンおよびウラシルからなる群から選択される１つ以上の核酸塩基上に位置する、
請求項５５に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項５７】
血清中の安定化を増加させる少なくとも１つの非翻訳修飾を含む、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項５８】
インビトロ転写法を使用して、または化学合成法を使用して産生される、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項５９】
実質的に精製されている、請求項４４に記載のｓｇＲＮＡ。
【請求項６０】
請求項４４〜５９のいずれか一項に記載のｓｇＲＮＡを含む組成物。
【請求項６１】
薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
溶媒、水性溶媒、非水性溶媒、分散媒体、希釈剤、分散液、懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、保存剤、脂質、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、コア−シェルナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、ペプチド、タンパク質、細胞、ヒアルロニダーゼ、およびそれらの混合物からなる群から選択される薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６３】
ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ｒｅＬＮＰ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＡおよびＰＥＧ化脂質ならびにそれらの混合物から選択される脂質をさらに含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６４】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）をさらに含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６５】
ＬＮＰを含まない、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６６】
細胞中の目的遺伝子の転写をモジュレートするための医薬であって、
請求項１〜３０のいずれか一項に記載のＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をコードする合成ポリヌクレオチド、および請求項４４〜５９のいずれか一項に記載の合成ｓｇＲＮＡを組合せてなり、
前記合成ポリヌクレオチドの第１の領域が、エフェクタードメインをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記ｓｇＲＮＡの第１の領域配列が、前記目的遺伝子に対して相補的であり、
前記目的遺伝子の転写をモジュレートするために十分な条件下で、前記合成ポリヌクレオチドおよび前記合成ｓｇＲＮＡが前記細胞に接触させられる、医薬。
【請求項６７】
前記合成ポリヌクレオチドおよび前記合成ｓｇＲＮＡが、単一ポリヌクレオチドでない
、請求項６６に記載の医薬。
【請求項６８】
前記目的遺伝子が、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、およびＬＤＨＣからなる群から選択される、請求項６６に記載の医薬。
【請求項６９】
前記合成ポリヌクレオチドが、前記細胞に特異的なｍｉＲ配列を含む、請求項６６に記載の医薬。
【請求項７０】
前記目的遺伝子が、ＶＥＧＦであり、前記細胞が、Ｕ−９７ＭＧ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、一次ヒト肝細胞、またはＨｅｐＧ２細胞であり、請求項２に記載の合成ポリヌクレオチドの１つおよび請求項４５に記載のｓｇＲＮＡの１つが、前記ＶＥＧＦ遺伝子の転写をモジュレートするために十分な条件下で前記細胞に接触させられる、請求項６６に記載の医薬。
【請求項７１】
対象中の目的遺伝子の転写をモジュレートするための医薬であって、
第１の投薬量の請求項１〜３０のいずれか一項に記載の合成ポリヌクレオチドおよび第２の投薬量の請求項４４〜５９のいずれか一項に記載の合成ｓｇＲＮＡを組合せてなり、
前記合成ポリヌクレオチドの第１の領域が、エフェクタードメインをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記ｓｇＲＮＡの第１の領域配列が、前記目的遺伝子に対して相補的であり、
前記目的遺伝子の転写をモジュレートするために十分な条件下で前記対象に投与される、医薬。
【請求項７２】
前記対象がヒトである、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７３】
前記合成ポリヌクレオチドおよび前記合成ｓｇＲＮＡの少なくとも一方が、脂質ナノ粒子製剤中で製剤化されている、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７４】
前記合成ポリヌクレオチドが、脂質ナノ粒子製剤中で製剤化されており、前記ｓｇＲＮＡが、脂質ナノ粒子製剤中で製剤化されていない、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７５】
前記目的遺伝子が、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、およびＬＤＨＣからなる群から選択される、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７６】
前記合成ポリヌクレオチドが、前記細胞に特異的なｍｉＲ配列を含む、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７７】
ａ．前記第１の投薬量が、０．０００５／ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの合成ポリヌクレオチドであり；ならびに
ｂ．前記第２の投薬量が、０．０００５／ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇのｓｇＲＮＡであり；ならびに
ｃ．前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡが一緒に投与され、もしくは別個に投与され；ならびに
ｄ．単回用量で、もしくは複数回用量で前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡの少なくとも一方が投与され；ならびに
ｅ．１日１回もしくは１日２回以上、前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡの少なくとも一方が投与され；ならび
ｆ．前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡの少なくとも一方が、出生前、新生児、出生後、経口、眼内、鼻腔内投与、および、静脈内、動脈内、腹腔内、皮内、皮下もしくは筋肉内注射の少なくとも１つにより投与される；
の少なくとも１つの条件を満たす、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７８】
前記目的遺伝子がＴＰＯであり、前記対象がマウスであり、前記マウスに、配列番号５１の配列を含む０．０００５／ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの前記合成ポリヌクレオチドと、前記ＴＰＯ遺伝子の５’ＵＴＲの一方の鎖に対して相補的な配列を含む第１の領域を含む０．０００５／ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇのｓｇＲＮＡとが投与される、請求項７１に記載の医薬。
【請求項７９】
対象の疾患治療用の医薬であって、
第１の投薬量の請求項１〜３０のいずれか一項に記載の合成ポリヌクレオチドおよび第２の投薬量の請求項４４〜５９のいずれか一項に記載の合成ｓｇＲＮＡを組合せてなり、
前記合成ポリヌクレオチドの第１の領域が、エフェクタードメインをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み、前記ｓｇＲＮＡの第１の領域配列が、前記目的遺伝子５’ＵＴＲの一方の鎖に対して相補的であり、
目的遺伝子の転写をモジュレートするために十分な条件下で前記対象に投与され、前記遺伝子の発現が、前記疾患に結び付く、医薬。
【請求項８０】
前記疾患が癌であり、前記遺伝子が、アポトーシスまたは老化遺伝子である、請求項７９に記載の医薬。
【請求項８１】
前記対象が、ヒトである、請求項７９に記載の医薬。
【請求項８２】
前記合成ポリヌクレオチドおよび前記合成ｓｇＲＮＡの少なくとも一方が、脂質ナノ粒子製剤中で製剤化されている、請求項７９に記載の医薬。
【請求項８３】
前記合成ポリヌクレオチドが、脂質ナノ粒子製剤中で製剤化されており、前記ｓｇＲＮＡが、脂質ナノ粒子製剤中で製剤化されていない、請求項７９に記載の医薬。
【請求項８４】
前記目的遺伝子が、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、およびＬＤＨＣからなる群から選択される、請求項７９に記載の医薬。
【請求項８５】
前記合成ポリヌクレオチドが、ｍｉＲ配列を含む、請求項７９に記載の医薬。
【請求項８６】
ａ．前記第１の投薬量が、０．０００５／ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの合成ポリヌクレオチドであり；ならびに
ｂ．前記第２の投薬量が、０．０００５／ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇのｓｇＲＮＡであり；ならびに
ｃ．前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡが一緒に投与され、もしくは別個に投与され；ならびに
ｄ．単回用量で、もしくは複数回用量で前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡの少なくとも一方が投与され；ならびに
ｅ．１日１回もしくは１日２回以上、前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡの少なくとも一方が投与され；ならびに
ｆ．前記合成ポリヌクレオチドおよびｓｇＲＮＡの少なくとも一方が、出生前、新生児、出生後、経口、眼内、鼻腔内投与し、および静脈内、動脈内、腹腔内、皮内、皮下もしくは筋肉内注射の少なくとも１つにより投与される；
の少なくとも１つの条件を満たす、請求項７９に記載の医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６６５】
配列表
表６．ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６８７】
表７．５’ＵＴＲ
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６８９】
表８．３’ＵＴＲ