【手続補正書】
【提出日】平成29年3月10日(2017.3.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改質されたジフテリア毒素またはそのフラグメントであって、配列番号２、１４８または２００の全長配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、且つ配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１５の改質を含む少なくとも１つの改質されたＴ細胞エピトープコアを含み；並びに任意に、
（ｉ）配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基７〜１５；
（ｉｉ）配列番号２、１４８または２００アミノ酸残基９７〜１０５；
（ｉｉｉ）配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１０７〜１１５；
（ｉｖ）配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１１６〜１２４；
（ｖ）配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１２４〜１３２；
（ｖｉ）配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１４８〜１５６；および
（ｖｉｉ）配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基２９８〜３０６から選択される配列に少なくとも１つのアミノ酸改質を含み、
前記改質されたジフテリア毒素またはそのフラグメントは、細胞毒性であり、改質されていないジフテリア毒素と比較して、低下した免疫原性を示す、改質されたジフテリア毒素またはそのフラグメント。
【請求項２】
改質されたジフテリア毒素は、
（ｉ）Ｍ１５Ｄ、Ｍ１５Ｔ、Ｖ２９Ｓ、Ｖ２９Ｔ、Ｖ２９Ｎ、Ｖ２９Ｄ、Ｄ３０Ｅ、Ｓ３１Ｎ、Ｖ９７Ａ、Ｖ９７Ｄ、Ｖ９７Ｔ、Ｌ１０７Ａ、Ｌ１０７Ｎ、Ｌ１０７Ｔ、Ｔ１１２Ｇ、Ｔ１１２Ｄ、Ｔ１１２Ｅ、Ｅ１１３Ｄ、Ｌ１１５Ｔ、Ｌ１１５Ｎ、Ｌ１１５Ｄ、Ｍ１１６Ａ、Ｍ１１６Ｎ、Ｍ１１６Ｑ、Ｅ１１７Ｄ、Ｔ１２１Ｄ、Ｔ１２１Ｇ、Ｔ１２１Ｎ、Ｔ１２１Ｑ、Ｆ１２４Ｈ、Ｆ１２４Ａ、Ｆ１２４Ｋ、Ｉ１２５Ｈ、Ｒ１２７Ａ、Ｒ１２７Ｔ、Ｖ１４８Ａ、Ｖ１４８Ｔ、Ｉ２９０Ｔ、Ｄ２９１Ｅ、Ｄ２９１Ｋ、Ｓ２９２Ａ、Ｓ２９２Ｔ、Ｌ２９８Ａ、Ｌ２９８ＮおよびＳ３０６Ｇから選択される１つ以上の改質；
（ｉｉ）Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ１０７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ１０７Ｎ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ１０７Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｅ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１３Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ１１５Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ１１５Ｎ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ１１５Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｍ１１６Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｍ１１６Ｎ；Ｍ１５Ｔ  Ｍ１１６Ｑ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１２１Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１２１Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１２１Ｎ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１２１Ｑ；Ｍ１５Ｔ  Ｆ１２４Ｈ；Ｍ１５Ｔ  Ｆ１２４Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｆ１２４Ｋ；Ｍ１５Ｔ  Ｉ１２５Ｈ；Ｍ１５Ｔ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｒ１２７Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ１４８Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ２９８Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｌ２９８Ｎ；およびＭ１５Ｔ  Ｓ３０６Ｇから選択される２つの改質；
（ｉｉｉ）Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；およびＭ１５Ｔ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇから選択される３つの改質；
（ｉｖ）Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；およびＭ１５Ｔ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇから選択される４つの改質；
（ｖ）Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；およびＭ１５Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇから選択される５つの改質；
（ｖｉ）Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇ；Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｓ３０６Ｇ；およびＭ１５Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇから選択される６つの改質；又は
（ｖｉｉ）Ｍ１５Ｔ  Ｖ９７Ｔ  Ｔ１１２Ｄ  Ｅ１１７Ｄ  Ｒ１２７Ａ  Ｖ１４８Ｔ  Ｓ３０６Ｇを含む改質；
を含む、請求項１に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項３】
改質されたジフテリア毒素またはそのフラグメントは、配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１５、配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基９７、配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１１２、配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１１７、配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１２７、配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１４８、または配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基３０６に１つ以上の改質を含む、請求項１または２に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項４】
改質されたジフテリア毒素またはそのフラグメントは、Ｍ１５Ｔ、Ｖ９７Ｔ、Ｔ１１２Ｄ、Ｅ１１７Ｄ、Ｒ１２７Ａ、Ｖ１４８Ｔ、Ｓ３０６Ｇ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の改質を含む、請求項３に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項５】
配列番号２、１４８または２００のアミノ酸残基１５での改質が、Ｍ１５Ｔである、請求項３に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項６】
（ｘ）Ｄ／Ｅ（ｙ）モチーフに１つ以上のアミノ酸改質をさらに含み、改質されたジフテリア毒素は、改質されていないジフテリア毒素に匹敵する細胞毒性を有し、改質されていないジフテリア毒素と比較して、低下した免疫原性と内皮細胞に対する低下した結合性を示し、
任意に、位置（ｘ）での改質が、Ａ、Ｓ、Ｅ、Ｆ、Ｃ、Ｍ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、Ｈ、Ｑ、Ｄ、Ｎ、Ｋ、Ｒ、Ｇ、Ｌおよび表１からの改質されたアミノ酸または異常アミノ酸から選択されるアミノ酸残基による、ＶまたはＩの置換であり、位置Ｄ／Ｅでの改質が、Ａ、Ｓ、Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｆ、Ｃ、Ｍ、Ｇ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、Ｈ、Ｑ、Ｎ、Ｋ、Ｒおよび表１からの改質されたアミノ酸または異常アミノ酸から選択されるアミノ酸残基による、ＤまたはＥの置換であり、位置（ｙ）での改質が、Ｉ、Ｆ、Ｃ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｐ、Ｈ、Ｅ、Ｑ、Ｄ、Ｎ、Ｋ、Ｒ、Ｓ、Ｌ、Ｖおよび表１からの改質されたアミノ酸または異常アミノ酸から選択されるアミノ酸残基によるＳの置換であるか、またはこれらの組み合わせである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項７】
改質されたジフテリア毒素は、Ｖ７Ｔ、Ｖ７Ｎ、Ｖ７Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｓ９Ａ、Ｓ９Ｔ、Ｓ９Ｇ、Ｖ２９Ｓ、Ｖ２９Ｎ、Ｖ２９Ｄ、Ｖ２９Ｔ、Ｄ３０Ｅ、Ｄ３０Ｎ、Ｓ３１Ｇ、Ｓ３１Ｎ、Ｉ２９０Ｎ、Ｉ２９０Ｔ、Ｄ２９１Ｅ、Ｄ２９１Ｋ、Ｓ２９２Ａ、Ｓ２９２ＧおよびＳ２９２Ｔから選択される１つ以上の改質を含む、請求項６に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項８】
非ジフテリア毒素ポリペプチド由来の少なくとも１つの細胞結合リガンドを更に含み、
前記細胞結合リガンドが、（ｉ）モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、遺伝子操作された抗体またはグラフト化抗体；（ｉｉ）Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ’）２、ＳｃＦｖ、ａ（ＳｃＦｖ）２、一本鎖結合ポリペプチド、ＶＨおよびＶＬから選択される抗原結合性フラグメント；（ｉｉｉ）サイトカイン、インターロイキン２（ＩＬ−２）またはインターロイキン３（ＩＬ−３）；（ｉｖ）ポリペプチド；（ｖ）ホルモン；（ｖｉ）成長因子；並びに（ｖｉ）インスリンから選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の改質されたジフテリア毒素。
【請求項９】
（ａ）請求項１〜７のいずれか一項に記載の改質されたジフテリア毒素および（ｂ）血液がん、固形腫瘍または転移の標的細胞に結合するリガンドの少なくとも細胞結合ドメインを含み、
前記細胞結合リガンドが、（ｉ）モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、遺伝子操作された抗体またはグラフト化抗体；（ｉｉ）Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ’）２、ＳｃＦｖ、ａ（ＳｃＦｖ）２、一本鎖結合ポリペプチド、ＶＨおよびＶＬから選択される抗原結合性フラグメント；（ｉｉｉ）サイトカイン、インターロイキン２（ＩＬ−２）またはインターロイキン３（ＩＬ−３）；（ｉｖ）ポリペプチド；（ｖ）ホルモン；（ｖｉ）成長因子；並びに（ｖｉ）インスリンから選択される、融合タンパク質。
【請求項１０】
前記改質されたジフテリア毒素またはそのフラグメントは、ペプチドリンカーを介して前記細胞結合ドメインに融合する、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
（ｉ）請求項１〜８のいずれか一項に記載の改質されたジフテリア毒素または（ｉｉ）請求項９若しくは１０に記載の融合タンパク質と、医薬的に許容され得る賦形剤または担体とを含む、組成物。
【請求項１２】
血液がん、固形腫瘍または転移の治療に用いるための組成物であって、
前記固形腫瘍は、平滑筋腫、脳腫瘍、癌腫、基底細胞がん、奇形腫、網膜芽腫、脈絡膜悪性黒色腫、セミノーマ、肉腫、形質細胞腫、頭頸部腫瘍、肝臓腫瘍、腎臓腫瘍、腎細胞腫瘍、扁平上皮がん、子宮腫瘍、骨腫瘍、前立腺腫瘍、乳房腫瘍、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、子宮内膜腫瘍、扁平上皮がん、胃腫瘍、グリオーマ、結腸直腸腫瘍、精巣腫瘍、結腸腫瘍、直腸腫瘍、卵巣腫瘍、子宮頸管腫瘍、眼腫瘍、中枢神経系腫瘍、甲状腺腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、多発性骨髄腫、皮膚腫瘍、婦人科腫瘍、ホジキン病、小腸のがん、内分泌系のがん、中皮腫、尿道のがん、陰茎のがん、またはゴーリン症候群に関連する腫瘍である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
移植片対宿主疾患または乾癬である非悪性疾患の治療に用いるための、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
抗がん剤の活性を高めるのに用いるための、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
血液がん、固形腫瘍または転移の治療に用いるための、抗がん剤と、治療に有効な量の請求項１１に記載の組成物との組み合わせ。