【手続補正書】
【提出日】平成29年3月9日(2017.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において異常タンパク質凝集と関連する疾患を発現する増大したリスクを対象が有するかを決定するインビトロ方法であって、
対象からの1種又は複数の非血漿血液成分を、病原性タンパク質凝集体と結合する立体構造感受性蛍光プローブと接触させる工程と、
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルを発生させる工程であって、前記プローブが病原性タンパク質凝集体と結合した際に、立体構造感受性蛍光プローブの蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルが変化する工程と、
前記蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルを、異常タンパク質凝集と関連する疾患を有する対象に由来する参照非血漿血液成分と接触したプローブの一つ以上の参照蛍光発光スペクトル又は参照吸光スペクトルと比較する工程と
を含む、前記蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルと一つ以上の参照蛍光発光スペクトル又は参照吸光スペクトルとの対応が、対象が異常タンパク質凝集と関連する疾患を発現する増大したリスクを有することを示す、方法。
【請求項２】
1種又は複数の非血漿血液成分が、赤血球、白血球及び血小板から選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
非血漿血液成分が白血球である、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
プローブが、K114、コンゴレッド、コンゴレッド誘導体、X34、BSB、FSB、IMSB、クリサミン-G、メトキシ-X34、メトキシ-X04、チオフラビン-T、チオフラビン-S、ピッツバーグ化合物B、チアジンレッドR、オーラミン-O、p-FTAA又はp-FTAAに関連する発光性共役ポリチオフェン(LCP)若しくは発光性共役オリゴチオフェン(LCO)である、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
プローブの蛍光を検出する工程が、場合により1つ又は複数の励起波長での一光子又は多光子励起を使用して誘発された、2つ以上の波長での蛍光発光シグナルの強度を検出する工程を含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
a.蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルを発生させる工程と、
b.スペクトルアンミキシングを実施して、蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルに寄与する個々の基準スペクトルの重み付けを決定する工程と、
c.重み付けを使用して、対象が異常タンパク質凝集と関連する疾患を有する確率を決定する工程と
を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
個々の基準スペクトルが、(a)異常タンパク質凝集と関連する疾患を有することが知られている対象の試料、(b)健常対照対象の試料、及び/又は(c)プローブと接触していない試料から決定される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
スペクトルアンミキシングが、場合によってLevenberg-Marquardtアルゴリズムを使用する、線形代数的方法または非線形代数的方法を使用して実施される、請求項6又は7に記載の方法。
【請求項９】
蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルを1つ又は複数の参照蛍光発光スペクトル又は参照吸収スペクトルと比較する工程が、機械学習、遺伝的アルゴリズム又は主成分分析を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
異常タンパク質凝集と関連する疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、軽度認知障害、脳アミロイド血管症、ミオパチー、ニューロパチー、脳外傷、外傷性脳損傷、前頭側頭型認知症、ピック病、多発性硬化症、プリオン病、ダウン症候群及び筋萎縮性側索硬化症(ALS)からなる群から選択される、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
病原性タンパク質凝集体が、アミロイドタンパク質、場合によりβ-アミロイド、α-シヌクレイン、ハンチンチン、タウタンパク質、過剰リン酸化タウタンパク質(pTau)、プリオンタンパク質、αB-クリスタリン(CRYAB)、デスミン、セレン含有タンパク質、アクチン、ミオシン及び/又はスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
病原性タンパク質凝集体がβ-アミロイドを含み、疾患がアルツハイマー病である、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
対象からの白血球を病原性タンパク質凝集体と結合するプローブと接触させる工程が、アルカリ性pHで実施され、場合によりpHが8超である、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
対象からの白血球を病原性タンパク質凝集体と結合するプローブと接触させる工程が、酸性pHで実施され、場合によりpHが6未満である、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
pHが10超、場合により約10.5である、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
2つ以上の励起波長で2つ以上の蛍光発光スペクトルを発生させる工程を含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
励起波長の少なくとも1つが、近紫外にあり、場合により約200nm〜約400nmである、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
励起波長の少なくとも1つが、約300nm〜約500nm、場合により約375nm又は約445nmである、請求項16に記載の方法。
【請求項１９】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光を検出する工程が、約200nm〜約2000nmの1つ又は複数の波長における蛍光発光の強度を測定する工程を含む、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの吸光度を検出する工程が、約200nm〜約2000nmの1つ又は複数の波長の光の吸光度を測定する工程を含む、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光又は吸光度が、細胞数に対して正規化される、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブを検出する工程が、白血球、赤血球及び/または血小板の試料を含む二次元場の全て又は一部において、病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光又は吸光度を測定する工程を含む、請求項1から21のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
異常タンパク質凝集と関連する疾患を検出するための、白血球の分析用キットであって、
a)白血球中における病原性タンパク質凝集体の存在を検出するプローブと、
b)使用説明書と
を含む、キット。
【請求項２４】
プローブが、蛍光プローブ、場合によりK114、コンゴレッド、コンゴレッド誘導体、X34、BSB、FSB、IMSB、クリサミン-G、メトキシ-X34、メトキシ-X04、チオフラビン-T、チオフラビン-S、ピッツバーグ化合物B、チアジンレッドR、オーラミン-O若しくはp-FTAA又はp-FTAAに関連する発光性共役ポリチオフェン(LCP)若しくは発光性共役オリゴチオフェン(LCO)である、請求項23に記載のキット。
【請求項２５】
異常タンパク質凝集と関連する疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、軽度認知障害、脳アミロイド血管症、ミオパチー、ニューロパチー、脳外傷、外傷性脳損傷、前頭側頭型認知症、ピック病、多発性硬化症、プリオン病、ダウン症候群及び筋萎縮性側索硬化症(ALS)からなる群から選択される、請求項23又は24に記載のキット。
【請求項２６】
病原性タンパク質凝集体が、アミロイドタンパク質、場合によりβ-アミロイド、α-シヌクレイン、ハンチンチン、タウタンパク質、過剰リン酸化タウタンパク質(pTau)、プリオンタンパク質、αB-クリスタリン(CRYAB)、デスミン、セレン含有タンパク質、アクチン、ミオシン及び/又はスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)を含む、請求項23から25のいずれか一項に記載のキット。
【請求項２７】
対象からの血液試料中の病原性タンパク質凝集体を検出するためのインビトロ方法であって、
血液試料からの非血漿血液成分を、病原性タンパク質凝集体と結合する立体構造感受性蛍光プローブと接触させる工程と、
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブを検出する工程と
を含む、方法。
【請求項２８】
1種又は複数の非血漿血液成分が、赤血球、白血球及び血小板から選択される、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
非血漿血液成分が白血球である、請求項27または28に記載の方法。
【請求項３０】
プローブが、K114、コンゴレッド、コンゴレッド誘導体、X34、BSB、FSB、IMSB、クリサミン-G、メトキシ-X34、メトキシ-X04、チオフラビン-T、チオフラビン-S、ピッツバーグ化合物B、チアジンレッドR、オーラミン-O、p-FTAA又はp-FTAAに関連する発光性共役ポリチオフェン(LCP)若しくは発光性共役オリゴチオフェン(LCO)である、請求項27から29のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
非血漿血液成分と接触したプローブの蛍光又は吸光度を、非血漿血液成分の参照試料と接触したプローブの蛍光又は吸光度と比較する工程を更に含む、請求項27から30のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
参照非血漿血液成分が、病原性タンパク質凝集体と関連する試料に由来し、非血漿血液成分の蛍光と参照非血漿血液成分の蛍光との対応が、試料中の病原性タンパク質凝集体の存在を示す、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
プローブの蛍光又は吸光度を検出する工程が、蛍光発光スペクトルを発生させる工程又は吸収スペクトルを発生させる工程を含む、請求項27から32のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルを、1つ又は複数の参照蛍光発光スペクトル又は参照吸収スペクトルと比較する工程を更に含む、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
少なくとも1つの参照発光スペクトル又は参照吸収スペクトルが、病原性タンパク質凝集体と関連する参照非血漿血液成分を代表する蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルであり、蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルと少なくとも1つの参照蛍光発光スペクトル又は参照吸収スペクトルとの対応が、試料が病原性タンパク質凝集体を有することを示す、請求項34に記載の方法。
【請求項３６】
a.蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルを発生させる工程と、
b.スペクトルアンミキシングを実施して、蛍光発光スペクトル又は吸収スペクトルに寄与する個々の基準スペクトルの重み付けを決定する工程と、
c.重み付けを使用して、対象が異常タンパク質凝集と関連する疾患を有する確率を決定する工程と
を含む、請求項33から35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
病原性タンパク質凝集体が、アミロイドタンパク質、場合によりβ-アミロイド、α-シヌクレイン、ハンチンチン、タウタンパク質、過剰リン酸化タウタンパク質(pTau)、プリオンタンパク質、αB-クリスタリン(CRYAB)、デスミン、セレン含有タンパク質、アクチン、ミオシン及び/又はスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)を含む、請求項27から36のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
病原性タンパク質凝集体がβ-アミロイドを含む、請求項27から37のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
対象からの白血球を病原性タンパク質凝集体と結合するプローブと接触させる工程が、アルカリ性pHで実施され、場合によりpHが8超である、請求項27から38のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
pHが10超、場合により約10.5である、請求項39に記載の方法。
【請求項４１】
2つ以上の励起波長で2つ以上の蛍光発光スペクトルを発生させる工程を含む、請求項27から40ののいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光を検出する工程が、約200nm〜約2000nm、場合により約400nm〜約700nmの1つ又は複数の波長における蛍光発光の強度を測定する工程を含む、請求項27から41のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの吸光度を検出する工程が、約200nm〜約2000nm、場合により約400nm〜約700nmの1つ又は複数の波長の光の吸光度を測定する工程を含む、請求項27から41のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光又は吸光度が、細胞数に対して正規化される、請求項27から43のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
病原性タンパク質凝集体と結合したプローブを検出する工程が、非血漿血液成分の試料を含む二次元場の全て又は一部において、病原性タンパク質凝集体と結合したプローブの蛍光又は吸光度を測定する工程を含む、請求項27から44のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
非血漿血液成分が白血球、赤血球及び/または血小板である、請求項27から45のいずれか一項に記載の方法。