(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養液中で菌を培養する培養槽と、
前記培養液の濃縮、バッファー液の交換、及びデブリスの除去をして、ベクター粗精製液を得る第１のＴＦＦ濾過膜と、
前記ベクター粗精製液からの不要物の除去、及び／又は前記ベクター粗精製液の濃縮をする第２のＴＦＦ濾過膜とを備えることを特徴とする閉鎖系ベクター精製装置。
【請求項２】
さらに、粗精製ベクターを精製するイオン交換カラムを備え、
前記第２のＴＦＦ濾過膜が、前記ベクター粗精製液をカラム用バッファー液に交換することを特徴とする請求項１に記載の閉鎖系ベクター精製装置。
【請求項３】
前記第１のＴＦＦ濾過膜の孔径が２μｍ以下であり、前記第２のＴＦＦ濾過膜の孔径が１０ｎｍ〜４ｎｍであることを特徴とする請求項１又は２に記載の閉鎖系ベクター精製装置。
【請求項４】
さらに、
ポリオキシエチレン（８）オクチルフェニルエーテルを供給する界面活性剤供給部と、
エンドトキシンを含むベクター粗精製液を収容し、前記ポリオキシエチレン（８）オクチルフェニルエーテルと混合させて、主にベクターＤＮＡを含む水層と、エンドトキシンを含む界面活性剤層とに分離させる混合容器と、
前記界面活性剤層を排出する排出部とを備えるエンドトキシン除去装置を備えることを特徴とする請求項１〜３にいずれか一項に記載の閉鎖系ベクター精製装置。
【請求項５】
培養槽の培養液中で菌を培養し、
第１のＴＦＦ濾過膜により、前記培養液を濃縮し、バッファー液を交換し、及びデブリスを除去して、ベクター粗精製液を得、
第２のＴＦＦ濾過膜により、前記ベクター粗精製液から不要物を除去し、及び／又は前記ベクター粗精製液を濃縮をする工程を含むことを特徴とする閉鎖系ベクター精製方法。
【請求項６】
さらに、前記第２のＴＦＦ濾過膜が、前記ベクター粗精製液をカラム用バッファー液に交換し、
イオン交換カラムにより、前記カラム用バッファー液に交換された粗精製ベクターを精製する工程を含むことを特徴とする請求項５に記載のベクター精製方法。
【請求項７】
前記第１のＴＦＦ濾過膜の孔径が２μｍ以下であり、前記第２のＴＦＦ濾過膜の孔径が１０ｎｍ〜４ｎｍであることを特徴とする請求項５又は６に記載の閉鎖系ベクター精製方法。
【請求項８】
さらに、ポリオキシエチレン（８）オクチルフェニルエーテルと、エンドトキシンを含むベクター粗精製液とを混合し、主にベクターＤＮＡを含む水層と、エンドトキシンを含む界面活性剤層とに分離させ、
前記界面活性剤層を排出して、エンドトキシンを除去する工程を含むことを特徴とする請求項５〜７にいずれか一項に記載の閉鎖系ベクター精製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ベクターの精製に用いる装置及び方法に関し、特に、宿主及び／又はベクターを含む液の濃縮、交換及び不要物除去する装置及び方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年の遺伝子工学業界の急速な発展に伴い、高純度なベクターを大規模で操作する必要性が増加している。しかし、高純度で大量のベクターを得るためには、複雑な装置を使用して精製するため、時間がかかった。また、操作が繁雑で、技術的な熟練が要求された。
【０００３】
特に、従来、ベクターの精製過程で、ベクターを含む宿主を培養した液を濃縮するのに遠心分離機を用いていた。このため、この培養液を閉鎖系で濃縮できず、また、濃縮のスケールアップが困難である等の問題があった。例えば、「実験医学別冊、遺伝子工学ハンドブック」（羊土社出版、１９９１年３月２０日発行）の２１頁〜２３頁には「ベクターＤＮＡの大量調製」について記載されていて、遠心分離を繰り返して実施することが記載されている。さらに、従来は、ベクターＤＮＡに含まれる、小タンパク質、小ＤＮＡ等の不要物を除去するためにも、遠心分離機を用いていたため、同様の問題があった。また、エンドトキシンは遠心分離機やイオン交換カラムでは除去できず、疎水性カラム等の特別のカラムを用いて処理しなければならなかった。
【０００４】
従って、閉鎖系で、宿主及び／又はベクターを含む液を濃縮、交換及び不要物除去できる装置又は方法が求められていた。また、効果的にエンドトキシンを除去できる装置又は方法が求められていた。さらに、閉鎖系で、容易に、高純度のベクターを大量に得られる装置又は方法が求められていた。
【０００５】
一方、濾過膜の一種としてＴＦＦ（Ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）濾過膜が知られていた。しかし、ＴＦＦ濾過膜を、遺伝子工学の分野において、宿主及び／又はベクターを含む液の濃縮又は不要物の除去等に用いることは知られていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、閉鎖系で、宿主及び／又はベクターを含む液を濃縮、交換及び不要物除去できる装置又は方法を提供することである。
【０００７】
また、本発明の他の目的は、効果的にエンドトキシンを除去できる装置又は方法を提供することである。
【０００８】
さらに、本発明の他の目的は、閉鎖系で、容易に、高純度のベクターを大量に得られる装置又は方法を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者らは鋭意検討した結果、ＴＦＦ濾過膜又は界面活性剤を、宿主及び／又はベクターを含む液の濃縮、交換又は不要物の除去に用いれば、これらの操作を容易にできることを見出し、本発明を完成させた。しかも、本発明を用いたベクターの精製においては、得られるベクターが高純度であることを見出した。特に、本発明は、従来遺伝子操作に使用されたことの無かったＴＦＦ濾過膜を初めて遺伝子操作に効果的に使用するものである。
【００１０】
本発明の第１の態様によれば、宿主及び／又はベクターを含む液を濾過して、液を濃縮するＴＦＦ濾過膜を備えることを特徴とする濃縮装置が提供される。
【００１１】
本発明の第２の態様によれば、第２の液を供給しながら、宿主及び／又はベクターを含む第１の液と第２の液の混合液を濾過することにより、第１の液を第２の液に交換するＴＦＦ濾過膜を備えることを特徴とする交換装置が提供される。
【００１２】
本発明の第３の態様によれば、宿主及び／又はベクターを含む液から、不要物を除去するＴＦＦ濾過膜を備えることを特徴とする不要物除去装置が提供される。
【００１３】
本発明の第４の態様によれば、界面活性剤を供給する界面活性剤供給部と、エンドトキシンを含むベクター粗精製液を収容し、界面活性剤と混合させて、主にベクターＤＮＡを含む水層と、エンドトキシンを含む界面活性剤層とに分離させる混合容器と、界面活性剤層を排出する排出部とを備えることを特徴とするエンドトキシン除去装置が提供される。
【００１４】
本発明の第５の態様によれば、ＴＦＦ濾過膜を用いて、宿主及び／又はベクターを含む液を濾過して、液を濃縮することを特徴とする濃縮方法が提供される。
【００１５】
本発明の第６の態様によれば、ＴＦＦ濾過膜を用いて、第２の液を供給しながら、宿主及び／又はベクターを含む第１の液と第２の液の混合液を濾過して、第１の液を第２の液に交換することを特徴とする交換方法が提供される。
【００１６】
本発明の第７の態様によれば、ＴＦＦ濾過膜を用いて、宿主及び／又はベクターを含む液から不要物を除去することを特徴とする不要物除去方法が提供される。
【００１７】
本発明の第８の態様によれば、界面活性剤と、エンドトキシンを含むベクター粗精製液とを混合し、主にベクターＤＮＡを含む水層と、エンドトキシンを含む界面活性剤層とに分離させ、界面活性剤層を排出する工程を含むことを特徴とするエンドトキシン除去方法が提供される。
【００１８】
本発明に使用するＴＦＦ濾過膜は、濾過膜の一種で、膜に多数の孔を有する。この膜を用いるＴＦＦ濾過は、クロスフロー濾過ともいわれる。その作用機構を図３に示す。図３に示すように、膜面に平行（図中の左から右へ矢印Ａに示す方向）に液を流しながら、一部の液又は特定物質を含む液を孔から透過させる（濾過させる）（図中の下へ矢印Ｂに示す方向）。孔径により、透過する物質又は透過しない物質の大きさが決まる。本発明において、孔径は使用目的に応じて適宜決めることができる。通常は、液を流す方向と、物質を孔から透過させる方向は垂直であるが、本発明の場合、特にこの角度に限定されない。
また、本発明に使用する宿主は、特に限定されないが、その例として、遺伝子工学に一般に良く使用される大腸菌、枯草等の菌、酵母を挙げられる。
さらに、本発明に使用するベクターは、特に限定されないが、その例として、遺伝子工学に一般に良く使用されるプラスミド、ファージ、コスミドを挙げられる。
【００１９】
本発明による濃縮装置及び方法は、例えば、ベクターを有する宿主を含む培養液、ベクター精製過程における様々な処理液等の濃縮に使用できる。また、宿主体中に目的とする内在物を有する宿主を含む液の濃縮に使用できる。
【００２０】
さらに、本発明の交換装置及び方法では、第１の液を所望の第２の液と交換できる。即ち、第１の液に第２の液を供給しながらＴＦＦ濾過膜で濾過すると、第１の液が第２の液と置き換わる。この交換装置及び方法は、例えば、バッファー交換に使用できる。この交換操作は、上記の濃縮操作と連続して又は同時に実施できる。
ベクターの精製の場合、宿主が培養液中に存在するままでは、その後のベクター抽出処理に支障をきたすので、培養液を通常中性域にあるバッファー液に変える必要がある。従って、本発明の濃縮及び交換装置及び方法を使用すれば、培養液を濃縮した後連続してバッファー液と交換できる。
【００２１】
本発明による不要物除去装置及び方法は、例えば、デブリス、宿主由来のタンパク質、ＲＮＡ、クロモソームＤＮＡ断片等の小タンパク質又は小ＤＮＡ、エンドトキシン等の不要物の除去に使用できる。この不要物除去操作は、上記の交換又は濃縮操作と連続して又は同時に実施できる。
【００２２】
ベクターを精製するとき、従来は、遠心分離機及びイオン交換カラムを用いてもエンドトキシンを除去することはできず、疎水性カラム等の特別のカラムで処理しなければならなかった。しかし、ＴＦＦ濾過膜を用いれば、特別のカラムを使用しなくても、ベクター粗精製物からエンドトキシンを除去できる。このとき、エンドトキシンをベクターから解離させるために、ベクター粗精製物を非イオン性界面活性剤等の界面活性剤で処理できる。
【００２３】
本発明によるエンドトキシン除去装置及び方法に使用する界面活性剤は、ベクター粗精製液と混ざって、水層と界面活性剤層の二層に分離する界面活性剤である。主に、ベクターＤＮＡは水層に含まれ、エンドトキシンは界面活性剤層に含まれる。界面活性剤層を除くことにより、エンドトキシンを除くことができる。
例えば、本発明に使用する界面活性剤は、低温では、ベクター粗精製液と混ざって一層になり、高温では、水層と界面活性剤層の二層に分離する界面活性剤である。
このような界面活性剤の例として、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４（ポリオキシエチレン（８）オクチルフェニルエーテル）等の温度制御により二層化する非イオン性界面活性剤が挙げられる。ＴｒｉｔｏｎＸ１１４の場合、約４℃で粗精製液と混ざって一層になり、約６０℃で二層化する。
【００２４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の一形態を説明するが、本発明の範囲はこの実施の形態に限定されるものではない。
実施の形態１
図１は、本発明によるプラスミド精製装置を示す図である。この図において、１は菌体からプラスミドを精製して得るプラスミド精製装置、１０は培養液を含んでその培養液中で菌を培養する培養槽、１２は培養液（第１の液）を濃縮し、バッファー液（第２の液）に交換し、又は不要物を除去する第１のＴＦＦ濾過膜（濃縮装置、交換装置、不要物除去装置）、１１，１４，２２，２５，３０は流路の開閉を行うバルブ、１６はバッファー液を供給する第１のバッファー槽、１８はアルカリ液を供給するアルカリ槽、２０は中和液を供給する中和槽、２４はプラスミド粗精製液を収容するタンク、２６はカラム用バッファー液を供給する第２のバッファー槽、２８は粗精製液（第１の液）から不要物を除去し、カラム用バッファー液（第２の液）に交換し、又は濃縮する第２のＴＦＦ濾過膜（濃縮装置、交換装置、不要物除去装置）、２９は界面活性剤を供給する界面活性剤槽、３２は粗精製プラスミドを精製するイオン交換カラム、３４は精製プラスミドを滅菌する滅菌フィルター、３６はプラスミドを収容するボトルである。
【００２５】
ここで、培養槽は、宿主を生育させるために様々な条件を作り出すための装備を備えた容器である。また、使用するバッファー液は、操作の目的を果たすものであれば、特に限定されない。
【００２６】
第１のＴＦＦ濾過膜１２の孔径は、限定はされないが、好ましくは約２μｍ以下であり、より好ましくは約０．１μｍである。第１のＴＦＦ濾過膜１２は、限定はされないが、好ましくは、親水性であり、タンパク吸着が少なく、ｐＨ域が２〜１４である。
また、第２のＴＦＦ濾過膜２８の孔径は、限定はされないが、好ましくは約１０ｎｍ〜約４ｎｍであり、より好ましくは約５ｎｍである。第２のＴＦＦ濾過膜２８は、限定はされないが、好ましくは、親水性であり、タンパク吸着が少なく、ＤＮＡ非吸着である。
【００２７】
次に、動作について図２に示すフローチャートを用いて説明する。
まず、大腸菌を培養槽１０で大量培養する（ステップ１）。次に、バルブ１１を開いて大腸菌の菌体を含む培養液を第１のＴＦＦ濾過膜１２に通す。図３はＴＦＦ濾過膜の作用機構を模式的に示す。図３において、培養液は、左から右へ矢印Ａの方向へ流れる。培養液中の菌体はＴＦＦ濾過膜１２を透過しないで、一部の培養液だけが下へ矢印Ｂの方向へ透過する。透過した培養液はバルブ１４を開いて廃棄する。このようにして、培養液はＴＦＦ濾過膜１２を通ることにより濃縮される（ステップ２）。
【００２８】
上記の濃縮工程により、培養液が濃縮されたら、第１のバッファー槽１６からバッファー液が培養槽１０に供給される。次に、バッファー液と濃縮培養液の混合液を、第１のＴＦＦ濾過膜１２に通す。再度図３を参照すると、混合液が矢印Ａの方向へ流れる間に、一部の混合液がＴＦＦ濾過膜１２を矢印Ｂの方向へ透過する。バッファー液を供給しながら、ＴＦＦ濾過膜１２に通すことにより、培養液からバッファー液に交換できる（ステップ３）。さらに、バッファー液を第１のＴＦＦ濾過膜１２を用いて濃縮する（ステップ４）。
【００２９】
次に、アルカリ槽１８からアルカリ液を培養槽１０に供給して、培養槽１０内にある大腸菌体を溶菌する（ステップ５）。溶菌剤として、アルカリ液の他にリポゾーム等を使用できる。アルカリ液は、ＳＤＳ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４、Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ４０を含むことができる。
【００３０】
次に、中和槽２０から酸性液を培養槽１０に供給して、対象溶液を中和する（ステップ６）。さらに、ＴＦＦ濾過膜１２に通してデブリスを除き、プラスミドの粗精製液を得る。
【００３１】
次に、バルブ２２を開いて、粗精製液をタンク２４に流す。タンク２４から、粗精製液を、第２のＴＦＦ濾過膜２８に通過させる。再度図３を参照すると、粗精製液が矢印Ａの方向へ流れる間に、菌体由来タンパク質等の小タンパクや小サイズのＤＮＡ等の不要物が第２のＴＦＦ濾過膜２８を矢印Ｂの方向へ透過する。この不要物を含む濾液は廃棄する。その結果、不要物が除去された、粗精製液が得られる（ステップ７）。
さらに、この粗精製液を第２のＴＦＦ濾過膜２８を用いて濃縮する（ステップ８）。
【００３２】
次に、温度制御機（図示せず）を用いてタンク２４内を約４℃に保ちながら、界面活性剤槽２９から非イオン性界面活性剤を、タンク２４内に供給して、粗精製液と混合撹拌する。次に、温度制御機を用いてタンク２４内の温度を約６０℃に上昇させて、上層のプラスミドＤＮＡを含む水層と、下層のエンドトキシンを含む下層に分離させる。バルブ２５を開いて、下層の界面活性剤層をタンク２４の下から排出してエンドトキシンを除去する（ステップ９）。このとき、水層と界面活性剤層の透過率が異なるため、バルブ２５に透過率を検知するセンサーを付ければ、廃液の透過率の変化により、バルブを自動的に開閉できる。
【００３３】
次に、タンク２４内に第２のバッファー槽２６からカラムワーク用バッファー液を供給して、バッファー液と粗精製液の混合液を、第２のＴＦＦ濾過膜２８に通す。再度図３を参照すると、混合液が矢印Ａの方向へ流れる間に、一部の混合液がＴＦＦ濾過膜２８を矢印Ｂの方向へ透過する。カラムワーク用バッファー液を供給しながら、ＴＦＦ濾過膜２８を通すことにより、粗精製液を、カラムワーク用バッファー液に交換する（ステップ１０）。さらに、必要に応じて濃縮する。
【００３４】
次に、バルブ３０を開けて、粗精製液をイオン交換カラム３２に流して、プラスミドＤＮＡを精製する（ステップ１１）。
最後に、プラスミドＤＮＡを滅菌フィルター３４に通して、ボトル３６に収容する。
【００３５】
このプラスミド精製装置１では、ＴＦＦ濾過膜１２，２８を用いることにより、培養液の濃縮、バッファー液の交換及びプラスミドＤＮＡの精製を、閉鎖系で連続して短時間で実施できる。また、プラスミド精製規模を容易に拡大することも縮小することもできる。さらに、ＴＦＦ濾過膜１２，２８は、遠心分離機等に比べるとコンパクトで安価であるので、装置全体の小型化又はコストダウンが可能となる。
また、１つのＴＦＦ濾過膜で、培養液又は粗精製液の、濃縮、バッファー交換又は不要物処理の複数の操作を実施できるので、一層、装置の小型化又はコストダウンが可能となる。
また、培養液の濃縮等に従来使用していた遠心分離機を使用しないので、一連の操作を連続して完全閉鎖系で実施できる。
【００３６】
【実施例】
次に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
まず、プラスミド（ベータギャルプラスミドベクター）を含む大腸菌を、１０ＬのＬＢ培地を含む培養槽で一晩（１４時間）培養した。次に、この大腸菌の菌体を含む培養液をＴＦＦ濾過膜（プロスタック、デュラポアＰＶＤＦ０．１μｍ、ミリポア社）に通して、１Ｌに濃縮した。
【００３７】
次に、濃縮した培養液に１０Ｌのバッファー液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ２５ｍＭ、ｐｈ８．０、ＥＤＴＡ１０ｍＭ）（以下、ＴＥという）を供給しながら、ＴＦＦ濾過膜を通して、培養液からバッファー液に交換した。さらに、このバッファー液を上記のＴＦＦ濾過膜（プロスタック）を用いて１Ｌまで濃縮した。
【００３８】
次に、１Ｌの２００ｍＭＮａＯＨ溶液（１％ＳＤＳ含有）を大腸菌体に添加して、大腸菌体を溶菌した。その後、１Ｌの３．０Ｍ酢酸カリウム（ｐＨ５．５）を添加して中和した。
【００３９】
中和した液を上記のＴＦＦ濾過膜（プロスタック）に通して、デブリスを除き、３Ｌの濾過透過液を回収した。
回収した濾過透過液を、ＴＦＦ濾過膜（ペリコン２ＰＬＣＨＫ（１００ＫＤ再生セルロース）、ミリポア社）に通して、低分子タンパク質等を除去し、０．５Ｌまで濃縮した。
【００４０】
次に、この濃縮液に、５％非イオン界面活性剤（ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４）を含むＴＥ１０Ｌを供給して、約４℃で撹拌し、その後、約６０℃まで温度を上昇させ３０分以上静置して二層に分離した。下層のエンドトキシンを含む界面活性剤層を廃棄してエンドトキシンを除去した。
さらに、１０ＬのＴＥを供給しながら、上記のＴＦＦ濾過膜（ペリコン２）に通してバッファー交換し、その後、０．５Ｌまで濃縮した。
【００４１】
次に、この粗精製液をイオン交換カラムに流し、さらに、滅菌フィルターに通した。
【００４２】
実施例２
図１における第１のＴＦＦ濾過膜１２の孔のサイズについて検討した。
大腸菌の菌体培養液を用いて、ＴＦＦ濾過膜の０．４μｍ，０．２２μｍ，０．１μｍの３サイズについて検討した。濃縮及びバッファー交換操作において３サイズ間で膜圧、濾過効率等に顕著な差は認められず、３サイズ全てで菌体を濃縮することができた。
溶菌後のデブリスを除く処理では、ＴＦＦ濾過膜の３サイズ間で膜圧、濾過効率等に顕著な差は認められなかったが、０．１μｍサイズ濾過膜では、残留タンパクが他の２サイズに比較して少なかった。
【００４３】
実施例３
図１における第２のＴＦＦ濾過膜２８の孔のサイズについて検討した。
１０００ＫＤａｌ，３００ＫＤａｌ，１００ＫＤａｌ，５０ＫＤａｌ，１０ＫＤａｌの５サイズについて検討した。０．１μｍサイズの第１のＴＦＦ濾過膜で粗精製した溶液を、上記の５サイズの膜について比較した。
その結果、１０００ＫＤａｌ，３００ＫＤａｌの膜による濃縮では、濾過透過液中にプラスミドＤＮＡが認められ、１００ＫＤａｌ以下の膜ではプラスミドＤＮＡが認められなかった。従って、１００ＫＤａｌ以下の膜の濃縮効率がより優れていることが確認された。
【００４４】
実施例４
大腸菌培養液量を２Ｌ又は１８Ｌにしてスケールを変えた以外は、実施例１と同様に精製を実施した。その結果、実施例１と同様な効率でプラスミドＤＮＡを精製できた。従って、異なるスケールでも、効率的に精製できることが確認できた。
【００４５】
試験例１
検定モデルとして、ベータギャルプラスミドベクターを使用して、実施例１と同様に、プラスミドＤＮＡを精製した。このプラスミドＤＮＡをキャピラリーオートシークエンサーを用いてダイレクトシークエンス法にて元となるプラスミドＤＮＡと塩基配列に違いがないことを確認した。
【００４６】
試験例２
検定モデルとして、ベータギャルプラスミドベクターを使用して、実施例１と同様に、プラスミドＤＮＡを精製した。このプラスミドＤＮＡ中のエンドトキシン濃度をＬＡＬ比色定量キット（エンドポイント法）を使用して吸光度測定し濃度測定した。エンドトキシン濃度は、ＤＮＡ１ｍｇ中に１０数ＥＵ単位であった。
【００４７】
試験例３
検定モデルとして、ベータギャルプラスミドベクターを使用して、実施例１と同様に、プラスミドＤＮＡを精製した。このプラスミドＤＮＡを哺乳動物細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）へリポフェクチンにより遺伝子導入して発現の効率を測定した。比較として、塩化セシウム超遠心法にて精製したプラスミドＤＮＡを用いたが、本発明により精製したプラスミドＤＮＡが遺伝子導入効率が約５０％程度高いことが確認された。
【００４８】
【発明の効果】
本発明の濃縮、交換及び不要物除去装置及び方法によれば、宿主及び／又はベクターを含む液を閉鎖系で容易に濃縮、交換及び不要物除去できる。また、スケール変更が容易である。
【００４９】
本発明のエンドトキシン除去装置及び方法によれば、効果的にエンドトキシンを除去できる。
【００５０】
本発明の上記の装置及び方法を組み合わせてベクターを精製すれば、閉鎖系で連続操作により、高純度のベクターを大量に得られる。また、スケール変更が容易である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施形態によるプラスミド精製用装置を示す図である。
【図２】本発明の一実施形態によるプラスミド精製用方法を示すフローチャートである。
【図３】本発明に使用するＴＦＦ濾過膜の作用機構を模式的に示す図である。
【符号の説明】
１  プラスミド精製装置
１０  培養槽
１２  第１のＴＦＦ濾過膜（濃縮装置、交換装置、不要物除去装置）
２９  界面活性剤槽（界面活性剤供給部）
２５  バルブ（排出部）
２８  第２のＴＦＦ濾過膜（濃縮装置、交換装置、不要物除去装置）
２９  タンク（混合容器）
【図１】
0003547715.tif 000002
【図２】
0003547715.tif 000003
【図３】
0003547715.tif 000004