【誤訳訂正書】
【提出日】平成29年6月5日(2017.6.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、病理学的状態または生理学的状態を模倣する方法であって、前記方法は：
培養培地および少なくとも１つの因子を、細胞培養容器へと加えること；
少なくとも１つの細胞型を、前記細胞培養容器内の少なくとも１つの面にプレーティングすること；および、
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型に、せん断力を適用すること、を含み、
前記せん断力は、フローデバイスにより生じた前記培養培地の流れから得られたものであり、前記流れは、少なくとも１つの細胞型が、前記病理学的状態または生理学的状態で、ｉｎ  ｖｉｖｏで曝される流れを模倣するものであり、ここで：
前記病理学的状態を模倣するための前記培養培地中の前記因子の濃度は、
（ｉ）前記病理学的状態で見られる前記因子のｉｎ  ｖｉｖｏ濃度範囲内；もしくは、
（ｉｉ）薬物または化合物の投与からｉｎ  ｖｉｖｏで得られる、前記因子の濃度範囲内、のいずれかであり；または、
前記生理学的状態を模倣するための前記培養培地中の前記因子の濃度は、
（ｉ）前記生理学的状態で見られる前記因子のｉｎ  ｖｉｖｏ濃度範囲内；もしくは、
（ｉｉ）薬物または化合物の投与からｉｎ  ｖｉｖｏで得られる、前記因子の濃度範囲内、のいずれかである、方法。
【請求項２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、肝臓の病理学的状態または生理学的状態を模倣する方法であって、前記方法は：
培養培地および少なくとも１つの因子を、細胞培養容器へと加えること；
少なくとも１つの肝臓細胞型を、前記細胞培養容器内の少なくとも１つの面にプレーティングすること；および、
前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型に、せん断力を適用すること、を含み、
前記せん断力は、フローデバイスにより生じた前記培養培地の流れから得られたものであり、前記流れは、少なくとも１つの肝臓細胞型が、前記病理学的状態または生理学的状態で、ｉｎ  ｖｉｖｏで曝される流れを模倣するものであり、ここで：
前記病理学的状態を模倣するための前記培養培地中の前記因子の濃度は、
（ｉ）前記病理学的状態で見られる前記因子のｉｎ  ｖｉｖｏ濃度範囲内；もしくは、
（ｉｉ）薬物または化合物の投与からｉｎ  ｖｉｖｏで得られる、前記因子の濃度範囲内；もしくは、
（ｉｉｉ）前記せん断力の適用下で、一定期間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで前記模倣された病理学的状態を維持することができるものであり、前記因子の同濃度は、前記せん断力の非存在下では、前記期間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで前記模倣された病理学的状態を維持することができないもの、のいずれかであり、
または、
前記生理学的状態を模倣するための前記培養培地中の前記因子の濃度は、
（ｉ）前記生理学的状態で見られる前記因子のｉｎ  ｖｉｖｏ濃度範囲内；もしくは、
（ｉｉ）薬物または化合物の投与からｉｎ  ｖｉｖｏで得られる、前記因子の濃度範囲内；もしくは、
（ｉｉｉ）前記せん断力の適用下で、一定期間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで前記模倣された生理学的状態を維持することができるものであり、前記因子の同濃度は、前記せん断力の非存在下では、前記期間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで前記模倣された生理学的状態を維持することができないもの、のいずれかである、方法。
【請求項３】
病理学的状態または生理学的状態に対する効果について、薬物または化合物をｉｎ  ｖｉｔｒｏで検証する方法であって、前記方法は：
請求項１または２に記載の方法に従い、前記病理学的状態または生理学的状態を模倣すること、
前記培養培地に薬物または化合物を添加すること；および、
前記薬物または前記化合物に曝された、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型に前記せん断力を適用すること、を含み；
ここで、前記薬物または前記化合物の存在下での、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型における変化は、前記薬物または化合物が、前記病理学的状態または生理学的状態に対する効果を有していることを示す、方法。
【請求項４】
前記培養培地が前記少なくとも１つの因子を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記病理学的状態が模倣されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記生理学的状態が模倣されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記培養培地中の前記因子の前記濃度は、前記病理学的状態または前記生理学的状態において見られる前記因子のｉｎ  ｖｉｖｏ濃度の範囲内である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記培養培地中の前記因子の前記濃度が、薬物または化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ投与から得られる前記因子の濃度範囲内である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項９】
前記病理学的状態が模倣され、ならびに、前記培養培地中の前記因子の前記濃度は、前記せん断力下で、一定期間、前記模倣された病理学的状態をｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持することができ、前記因子の同濃度は、前記せん断力が無い状態では、前記一定期間、前記模倣された病理学的状態をｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持することができない、あるいは、
前記生理学的状態が模倣され、ならびに、前記培養培地中の前記因子の前記濃度は、前記せん断力下で、一定期間、前記模倣された生理学的状態をｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持することができ、前記因子の同濃度は、前記せん断力が無い状態では、前記一定期間、前記模倣された生理学的状態をｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持することができない、
請求項２〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記せん断力の適用が無い状態での、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型または前記培養培地における、前記マーカーのレベルと比較した、前記せん断力が適用された状態での、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型または前記培養培地における、前記病理学的状態のマーカーのレベルにおける変化は、前記病理学的状態の模倣を裏付ける、あるいは、
前記せん断力の適用が無い状態での、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型または前記培養培地における、前記マーカーのレベルと比較した、前記せん断力が適用された状態での、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型または前記培養培地における、前記生理学的状態のマーカーのレベルにおける変化は、前記生理学的状態の模倣を裏付ける、
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型は、肝細胞を含有し、および、前記肝細胞中のグルカゴン、インスリンまたはグルコース基質に対する応答性は、前記生理学的状態の模倣を裏付ける、請求項２〜４および６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記グルコース基質は、グリセロール、乳酸塩、ピルビン酸、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記生理学的状態は、健常な肝臓であり、前記因子はインスリンおよびグルコースを含み、前記プレーティングする工程は、前記細胞培養容器内の前記面上に肝細胞をプレーティングすることを含み；ならびに、前記せん断力は、前記プレーティングされた肝細胞に対し間接的に適用される、請求項１〜４および６〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞培養容器内の面に、少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を配置させること、前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分に前記少なくとも１つの肝臓細胞型をプレーティングすること、および、前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分および前記肝細胞にせん断力を間接的に適用することをさらに含む、請求項２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
少なくとも１つの細胞外基質マトリクス成分が、多孔膜の第一の面上に配置され、前記少なくとも１つの肝臓細胞型が、前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分上にプレーティングされ、前記多孔膜は、前記第一の面が前記細胞培養容器の底面に対し近位および空間的な関係となるように、前記細胞培養容器内に吊るされ、それにより、前記細胞培養容器内で、下層には前記少なくとも１つの細胞外マトリクス成分および前記少なくとも１つの肝細胞型が含まれ、上層には多孔膜の第二の面が含まれるよう規定され、ならびに、前記せん断力は、前記容器の前記上層の前記多孔膜の前記第二の面に適用される、請求１４に記載の方法。
【請求項１６】
効果について薬物または化合物をｉｎ  ｖｉｔｒｏで検証する方法であって、当該方法は：
細胞培養容器に培養培地を添加すること；
前記細胞培養容器内の少なくとも１つの面に少なくとも１つの細胞型をプレーティングすること；
前記培養培地に薬物または化合物を添加することであって、
ここで、前記培養培地中の前記薬物または前記化合物の濃度は、ｉｎ  ｖｉｖｏで効果を得られる前記薬物または前記化合物の濃度範囲内であり；および、
前記薬物または前記化合物に曝された前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型に前記せん断力を適用することを含み、
前記せん断力は、フローデバイスにより生じた前記培養培地の流れから得られるものであり、前記流れは、ｉｎ  ｖｉｖｏで前記少なくとも１つの細胞型が曝される流れを模倣するものであり、ここで、前記薬物または前記化合物の存在下で、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型における変化は、前記薬物または前記化合物が効果を有することを示す、方法。
【請求項１７】
前記効果は、
生理学的状態に対する効果；
病理学的状態に対する効果；および／または
毒性効果、防御的効果、病理的効果、疾患促進効果、炎症効果、酸化効果、小胞体ストレス効果、ミトコンドリアストレス効果、アポトーシス効果、ネクローシス効果、組織修復効果、増殖効果、タンパク質活性に対する効果、または遺伝子発現に対する効果
を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記フローデバイスは、前記容器の前記上層の前記培養培地中に位置づけられるために適合されたボディおよび、前記ボディを回転させるために適合されたモーターを含有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ボディは円錐面を有し、前記フローデバイスは、前記ボディの円錐面を、前記容器内に位置づけ、および、前記細胞培養培地と接触して位置づけるために適合される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記培養培地中の前記薬物または前記化合物の濃度は、ｉｎ  ｖｉｖｏで前記効果を得られる前記薬物または前記化合物の濃度範囲内である、請求項３〜１５、１８および１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記培養培地中の前記薬物または前記化合物の濃度は、前記薬物または前記化合物に対するｉｎ  ｖｉｖｏ治療Ｃｍａｘの濃度範囲内である、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記培養培地に少なくとも１つの因子を添加する工程、または、前記培養培地に薬物もしくは化合物を添加する工程には、前記培養培地に対象由来の血清を添加することを含み、ここで、前記血清は、前記因子、前記薬物、または前記化合物を含有する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が、前記病理学的状態を有する対象、または前記生理学的状態を有する対象である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象が、進行性炎症、アテローム性動脈硬化、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、高血圧、高血圧性脳障害、高血圧性網膜症、脂肪性肝疾患、高血圧、心不全、脳卒中、マルファン症候群、頸動脈内膜中膜肥厚、心房細動、腎疾患、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、高脂血症、高コレステロール血症、糖尿病、アテローム性粥腫崩壊、アテローム性粥腫浸食、胸部大動脈瘤、脳動脈瘤、腹部大動脈瘤、脳動脈瘤、肺動脈疾患、肺高血圧症、末梢動脈疾患、動脈血栓症、静脈血栓症、血管再狭窄、血管石灰化、心筋梗塞、肥満、高中性脂肪血症、低αリポ蛋白血症、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、肝線維症、細菌感染、ウイルス感染、肝硬変、肝線維症、およびアルコール誘導性肝疾患を含む、病理学的状態を有している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型が、初代細胞を含有する、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記初代細胞が、幹細胞または幹様細胞由来の細胞系統を含み、幹細胞由来の前記細胞系統は、成体幹細胞、胚幹細胞、人工多分化能性幹細胞、または骨髄由来幹細胞を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
人工多分化能性幹細胞がヒト人工多分化能性幹細胞を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記初代細胞が、幹細胞由来の細胞系統を含有し、ここで、前記幹細胞由来の細胞系統は、内皮細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、肝細胞、神経細胞、内分泌細胞、膵臓β細胞、膵臓α細胞、または骨格筋細胞を含有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記初代細胞が、病理学的状態を有する対象由来の、人工多分化能幹細胞（ｉＰＳＣ）由来細胞を含有する、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
病理学的状態を有する対象由来の前記ｉＰＳＣ由来細胞が、
家族性高コレステロール血症、Ｉ型グリコーゲン蓄積症、ウィルソン症、Ａ１抗トリプシン欠損症、Ｃｒｉｇｌｅｒ−Ｎａｊｊａｒ症候群、進行性家族性遺伝性胆汁うっ滞、または遺伝性１型チロシン血症を有する対象由来のｉＰＳＣ由来肝細胞；または
Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ−Ｇｉｌｆｏｒｄ早老症、Ｗｉｌｌｉａｍｓ−Ｂｅｕｒｅｎ症候群、ファブリー病、スザック症候群、全身性毛細血管漏出症候群、Ｇｌｅｉｃｈ症候群、血管内乳頭内皮肥厚、鎌状赤血球症、または肝静脈閉塞症を有する対象由来のｉＰＳＣ由来血管細胞
を含有する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｉＰＳＣ由来血管細胞が、ｉＰＳＣ由来平滑筋細胞、ｉＰＳＣ由来内皮細胞、またはｉＰＳＣ由来心内膜細胞を含有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型または前記肝細胞が、不死化細胞を含有する、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記初代細胞または前記不死化細胞が、前記病理学的状態または生理学的状態を有する少なくとも１つの対象から単離された細胞、前記病理学的状態に対するリスク因子を有する少なくとも１つの対象から単離された細胞、病理学的状態に関連した一塩基多型を有する少なくとも１つの対象から単離された細胞、薬物毒性に関連した特定の遺伝子型を有する少なくとも１つの対象から単離された細胞、または、薬物毒性に関連した一塩基多型を有する少なくとも１つの対象から単離された細胞、を含有する、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型には、腎細胞、気道の細胞、血液脳関門の細胞、血管細胞、肝細胞、すい臓細胞、心細胞、筋細胞、脾臓細胞、消化管細胞、皮膚細胞、肝臓細胞、免疫細胞または造血細胞が含まれる、請求項１、３〜１０、１４〜３０、３２および３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型には、星細胞、内皮細胞、糸球体有窓性内皮細胞、腎上皮有足細胞、α細胞、β細胞、Δ細胞、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）細胞、ε細胞、グリア細胞、肝細胞、神経細胞、非実質性肝臓細胞、有足細胞、平滑筋細胞、糸球体間質細胞、周皮細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、白血球、単球、筋細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、内皮前駆細胞、幹細胞、循環幹細胞または循環造血細胞が含まれる、請求項１、３〜１０、１４〜３０および３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型が、病理学的状態を有する少なくとも１つの対象から単離された肝細胞を含む、請求項１〜１５および１７〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型が、年齢、性別、人種、エピジェネティクス、疾患、国籍、または１以上の一塩基多型の有無に基づき選択されるヒト由来の細胞を含む、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記せん断力が、前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型、または前記肝細胞に間接的に適用される、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記病理学的状態には、血管の病理学的状態が含まれ、前記因子には、酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、グルコース、組織増殖因子β（ＴＧＦβ）、エラスチン分解産物、エラスターゼ、ビタミンＤ、無機リン酸、レプチン、アディポネクチン、アペリン、アルドステロン、アンギオテンシンＩＩ、トリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、酸化高密度リポタンパク質（ｏｘＨＤＬ）、トリグリセリド富化リポタンパク質、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、インスリン、脂肪酸、またはそれらの組み合わせが含まれ；プレーティングする工程には、内皮細胞、平滑筋細胞、または心内膜細胞を前記細胞培養容器内の面にプレーティングすることが含まれ；および、前記せん断力は、前記プレーティングされた内皮細胞、平滑筋細胞、または心内膜細胞に適用される、請求項１、３〜１０、１４、１５、および１７〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
多孔膜の第一の面に前記平滑筋細胞をプレーティングすることをさらに含み、ここで、前記多孔膜は、前記第一の面が前記細胞培養容器の底面に対し近位および空間的な関係となるように、前記細胞培養容器内に吊るされ、それにより、前記細胞培養容器内で、下層には前記平滑筋細胞が含まれ、上層には前記多孔膜の第二の面が含まれるよう規定され、ならびに、前記せん断力は、前記上層の前記多孔膜の前記第二の面に適用される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記多孔膜の第二の面に前記内皮細胞をプレーティングすることをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記血管の病理学的状態には、アテローム性動脈硬化が含まれ、前記因子には、ＬＤＬ、ｏｘＬＤＬ、ＴＮＦα、ＨＤＬ、トリグリセリド富化リポタンパク質、またはそれらの組み合わせが含まれる、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記血管の病理学的状態には、高血圧が含まれ、前記因子には、ｏｘＬＤＬ、ＴＮＦα、アンギオテンシンＩＩ、アルドステロン、またはそれらの組み合わせが含まれる、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記血管の病理学的状態には、血栓症が含まれ、前記因子には、ＴＮＦα、ｏｘＬＤＬ、グルコース、またはそれらの組み合わせが含まれる、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記病理学的状態には、脂肪性肝疾患が含まれる、請求項１〜５、７〜１２、１４、１５および１７〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記因子には、インスリンおよびグルコースが含まれ、前記プレーティングする工程は、前記細胞培養容器内の前記面上に肝細胞をプレーティングすることを含み、ならびに、前記せん断力は、前記プレーティングされた肝細胞に対し間接的に適用される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型には、肝細胞、非実質性肝臓細胞、またはそれらの組み合わせが含まれる、請求項１３、４５および４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記因子が脂肪酸を含む、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記少なくとも１つのプレーティングされた細胞型、または前記少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型には、肝細胞が含まれる、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法であって、多孔膜の第一の面に肝細胞をプレーティングすることがさらに含まれ、ここで、前記多孔膜は、前記第一の面が前記細胞培養容器の底面に対し近位および空間的な関係となるように、前記細胞培養容器内に吊るされ、それにより、前記細胞培養容器内で、下層には前記肝細胞が含まれ、上層には前記多孔膜の第二の面が含まれるよう規定され、ならびに、前記せん断力は、前記上層の前記多孔膜の第二の面に適用される、方法。
【請求項５０】
前記非実質性肝臓細胞を前記多孔膜の前記第二の面にプレーティングすることがさらに含まれ、ここで、前記せん断力は、前記上層の前記非実質性肝臓細胞に適用される、請求項１５または４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記非実質性肝臓細胞が、類洞内皮細胞、肝臓星細胞、クッパー細胞、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３５、４７、および５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記流れは、前もって測定された血流力学パターンから誘導され、および、電子的指令のセットへとモデル化され、および、前記せん断力は前記電子的指令のセットに基づいている、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記フローデバイスは、前記電子的指令のセットを受け取るための電子的コントローラーを含有し；前記電子的コントローラーにより操作されるモーターを含有し；前記モーターにより駆動されるために前記モーターに操作可能に連結されるせん断力アプリケーターを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記せん断力アプリケーターは、前記モーターに付着されるコーンを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
培養培地を前記細胞容器の中および外へ灌流することをさらに含む、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞培養容器内の面に、前記細胞培養容器内に吊るされた多孔膜が含まれる、請求項１〜１４、１６〜３９、４２〜４８および５１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記細胞培養容器内の面に、前記少なくとも１つの細胞型または前記少なくとも１つの肝臓細胞型をプレーティングすることの工程に、多孔膜の第一の面に、第一の細胞型または第一の肝臓細胞型をプレーティングすること、および、前記多孔膜の第二の面に第二の細胞型をプレーティングすることを含み、ここで、前記多孔膜は、前記第一の面が前記細胞培養容器の底面に対し近位および空間的な関係となるように、前記細胞培養容器内に吊るされ、それにより、前記細胞培養容器内で、下層には前記第一の細胞型が含まれ、上層には前記第二の細胞型が含まれるよう規定され、前記多孔膜は、前記細胞培養培地の液体連結、ならびに、前記第一の細胞型の細胞と前記第二の細胞型の細胞の間の物理的相互作用およびコミュニケーションが可能となるように適合され；ならびに、前記せん断力は、前記上層の前記多孔膜の前記第二の面の前記第二の細胞型に適用される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記せん断力が、０．１ダイン／ｃｍ２〜３．０ダイン／ｃｍ２の比率で適用される、請求項２〜１５、１８〜３８および４５〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
本発明の他の態様は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、肝臓の病理学的状態または生理学的状態を模倣する方法を目的とする。当該方法には、細胞培養容器に培養培地を添加すること、当該細胞培養容器内の面に、少なくとも１つの細胞外マトリクス成分を配置させること、当該少なくとも１つのプレーティングされた細胞外マトリクス成分に肝細胞をプレーティングすること、および、当該少なくとも１つのプレーティングされた細胞外マトリクス成分および当該肝細胞にせん断力を間接的に適用すること、が含まれる。当該せん断力は、フローデバイスにより生じた当該培養培地の流れによって生じる。当該流れは、当該肝細胞が、病理学的状態または生理学的状態でｉｎ  ｖｉｖｏにおいて曝される流れを模倣する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
あるいは、本方法において、当該少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型には、肝細胞が含まれ、および、当該肝細胞におけるグルカゴン、インスリンまたはグルコース基質に対する反応性は、当該生理学的状態の模倣を裏付ける。グルコース基質はたとえば、グリセロール、乳酸塩、ピルビン酸塩、またはそれらの組み合わせ（たとえば、乳酸塩とピルビン酸塩の組み合わせ等）であっても良い。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
あるいは、少なくとも１つのプレーティングされた肝臓細胞型に肝細胞が含まれる場合、グルカゴン、インスリンまたはグルコース基質に対する当該肝細胞における反応性は、当該生理学的状態の模倣を裏付ける。グルコース基質は、たとえば、グリセロール、乳酸塩、ピルビン酸塩、またはそれらの組み合わせ（たとえば、乳酸塩とピルビン酸塩の組み合わせ等）であっても良い。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５８】
以下の実施例４にさらに記述されるように、静的状態の下で培養される肝細胞とは異なり、本発明の生理学的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ肝臓モデルにおいて培養された肝細胞は、グルカゴン、インスリンおよびグルコース基質への反応性を維持している。ゆえに、グルカゴン、インスリンまたは１以上のグルコース基質に対する反応性を用いて、生理学的な肝臓の状態の模倣を評価することもできる（たとえば、糖新生アッセイを用いて）。適切なグルコース基質としては、グリセロール、乳酸塩、ピルビン酸塩、またはそれらの組み合わせ（たとえば、乳酸塩とピルビン酸塩の組み合わせ）が挙げられる。さらに、肝細胞がグルカゴンに対する反応性を維持していることから、本発明の生理学的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ肝臓モデルは、グルカゴン受容体と相互作用する薬物（たとえば、グルカゴン受容体アンタゴニスト）のｉｎ  ｖｉｔｒｏの検証に用いることができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３４５】
糖新生アッセイ：上述のように単離され、プレーティングされた初代ラット肝細胞を、管理された血流力学的状態の下、７日間、コーンアンドプレートデバイス中で培養した。肝細胞をＰＢＳで洗浄し、基質グリセロール（２ｍＭ）または乳酸塩（２０ｍＭ）およびピルビン酸塩（２ｍＭ）を添加したグルコースフリー培地で、制御ホルモンであるインスリン（２ｎＭ）またはグルカゴン（１００ｎＭ）の存在下、または非存在下で、インキュベートした。４時間後、上清を回収し、比色ＡＭＰＬＥＸ  ＲＥＤキット（グルコース／グルコース  オキシダーゼアッセイキット、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、メーカーの説明書に従い、グルコース含量について分析した。グルコース値は、細胞溶解物のタンパク質含量に対して正規化された。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５８】
（ｖ）管理された血流力学的状態の下で培養された初代ラット肝細胞は、インスリンおよびグルコースに対し反応性を示す。
上述のように単離され、プレーティングされた初代ラット肝細胞を、管理された血流力学的状態の下、コーンアンドプレートデバイスで７日間、培養し、その後、ＰＢＳで洗浄し、制御ホルモンであるインスリン（２ｎＭ）またはグルカゴン（１００ｎＭ）の存在下、または非存在下で、基質のグリセロール（２ｍＭ）または乳酸塩（２０ｍＭ）およびピルビン酸塩（２ｍＭ）と共にインキュベートした。ＡＭＰＬＥＸ  ＲＥＤアッセイにより測定された、４時間後の上清中のグルコースレベルから、基質の非存在下では、インスリンはグルコースレベルを２７％まで減少させた一方、グルカゴンは５１％まで上昇させたことが示された。基質のグリセロールの存在下では、肝細胞により産生されたグルコースは、６７％まで増加した。グルカゴンの添加により、グルコースレベルはさらに１５％まで上昇した一方、インスリンはグルコースレベルを３８％まで減少させた。乳酸塩およびピルビン酸塩を基質として使用した場合には、肝細胞から産生されたグルコースは、グルカゴンの存在下で８０％まで増加した一方、インスリンは２５％までグルコースレベルを減少させた。これらのデータを表４にまとめる。
【表４】
2015516154.tif 000001