(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を遠心分離して得られる液体分を合成吸着剤アンバーライトＸＡＤ−１６（登録商標）を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、次いで該吸着画分を水酸化ナトリウム水溶液を用いて溶出することにより得られる脱着画分を強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（登録商標）を用いるイオン交換樹脂処理に付した後、乾燥することにより得られる粉末であって、下記の成分組成を有し、オロチン酸を含有する飼料に加えてラットに経口投与した場合、オロチン酸誘発性脂肪肝の発症を完全に抑制する作用を呈する大麦焼酎蒸留残液由来の粉末。
［成分組成（乾燥物重量）］
粗タンパク４０乃至６０重量％、ポリフェノール７乃至１２重量％、多糖類５乃至１０重量％（糖組成：グルコース０乃至２重量％、キシロース３乃至５重量％、及びアラビノース２乃至５重量％）、有機酸４乃至１０重量％  （リンゴ酸１乃至３重量％、クエン酸２乃至４重量％、コハク酸０乃至１重量％、乳酸０乃至６重量％、及び酢酸０乃至１重量％）、及び遊離糖類０乃至２重量％（マルトース０乃至１重量％、キシロース０乃至１重量％、アラビノース０乃至１重量％、及びグルコース０乃至１重量％）
【請求項２】
食品として使用する請求項１に記載の粉末。
【請求項３】
医薬品として使用する請求項１に記載の粉末。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより得られる脱着画分からなる肝障害（オロチン酸誘発性脂肪肝及び／又はＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎）の発症を抑制する作用を有する精製濃縮物及びその製造方法に関する。以下の本発明に係わる記載において肝障害と云う場合、該肝障害は、オロチン酸誘発性脂肪肝及び／又はＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎を意味する。
【０００２】
【従来の技術】
肝障害の一つとして知られる肝炎の中では、ウイルスを原因とするウイルス性肝炎が最も多く、該ウイルス性肝炎は肝臓に肝炎ウイルスが住み着くことによって引き起こされる。特にＢ型肝炎とＣ型肝炎は、肝硬変や肝臓がんへの移行率が極めて高いことが知られている。これとは別に、脂肪肝と称される疾患も肝障害の一つであり、該脂肪肝は、エネルギーの過剰摂取や運動不足等によって、肝臓の肝細胞中に過剰の中性脂肪が蓄積した状態をいい、心筋梗塞や動脈硬化などの生活習慣病を引き起こす原因となることが知られている。
【０００３】
ところで、日本栄養・食糧学会総会講演要旨集、Ｖｏｌ．５３，  ５３（１９９９）には、大麦焼酎を製造する際に副成される大麦焼酎蒸留残液がオロチン酸投与によるラットの肝臓への脂質の蓄積、即ち、脂肪肝の発症を抑制する作用を有することが報告されている。また日本醸造協会誌、Ｖｏｌ．９４，  Ｎｏ．９，  ７６８（１９９９）には、大麦焼酎蒸留残液が有するこうしたオロチン酸誘発性脂肪肝の発症抑制作用は、ワイン粕やビール粕に比べて強く、該作用はいも焼酎蒸留残液には全く認められず、米焼酎蒸留残液では極めて小さいことから、大麦焼酎蒸留残液のみに特有のものであることが報告されている。更に、日本醸造協会誌、Ｖｏｌ．９５，  Ｎｏ．９，  ７０６（２０００）には、該大麦焼酎蒸留残液が、ウイルス性肝障害と同様の症状を呈することが知られているＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制効作用があり、該作用は大麦焼酎蒸留残液を遠心分離に付すことにより得られる液体分に認められることが報告されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、該大麦焼酎蒸留残液に含まれる上述した肝障害の発症抑制作用に寄与する成分は見極められてはいない。またそうした成分を分取して精製濃縮した精製濃縮物は全く知られていない。こうしたことから、該大麦焼酎蒸留残液を前記肝障害の発症抑制に使用する場合には、該大麦焼酎蒸留残液をそのまま摂取する以外他に方法は無い。その場合、該大麦焼酎蒸留残液による所望の肝障害発症抑制作用を得るためには、該大麦焼酎蒸留残液を凍結乾燥して凍結乾燥物にしたところで、該凍結乾燥物を多量に摂取する必要がある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記問題を解決すべく本発明者らが、実験を介して鋭意検討を行ったところ、驚くべきことに、大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより得られる脱着画分が肝障害（オロチン酸誘発性脂肪肝及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎）の発症を極めて強力に抑制する作用を有することを見出した。本発明は、この発見に基づいて完成に至ったものである。即ち本発明は、従来、肝障害の発症を抑制する作用を有する食品或いは医薬品を得る目的で積極的に使用されることのなかった発酵残渣の一種である大麦焼酎蒸留残液から肝障害（オロチン酸誘発性脂肪肝及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎）の発症を極めて強力に抑制する作用を有する精製濃縮物及びその製造方法を提供するものである。
【０００６】
本発明者らは、上述した従来技術に鑑みて実験を介して鋭意検討を行った。即ち、本発明者らは、後に述べる実験（実験１−Ａ）を介して、大麦焼酎蒸留残液を遠心分離に付して液体分（ａ）と固体分（ｂ）とを分取し、該液体分と該個体分をそれぞれ別々に凍結乾燥に付して該液体分の凍結乾燥粉末（ａ−ｉ）及び該固体分の凍結乾燥粉末（ｂ−ｉ）を得、該凍結乾燥粉末（ａ−ｉ）及び該凍結乾燥粉末（ｂ−ｉ）のそれぞれに、オロチン酸を混和させてラットに投与して実験を行った。その結果、肝臓重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度は、前記固体分の凍結乾燥粉末（ｂ−ｉ）にオロチン酸を混和させたもので顕著に増加したが、前記液体分の凍結乾燥粉末（ａ−ｉ）にオロチン酸を混和させたものでは基本食の正常値に近似した値を示した。一方、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度は、前記固体分の凍結乾燥粉末（ｂ−ｉ）にオロチン酸を混和させたものでは明らかに低下したが、前記液体分の凍結乾燥粉末（ａ−ｉ）にオロチン酸を混和させたものでは基本食の正常値に近似した値を示した。すなわち、前記固体分の凍結乾燥粉末（ｂ−ｉ）は肝障害の抑制に全く寄与しないが、前記液体分の凍結乾燥粉末（ａ−ｉ）は肝障害の発生を抑制することが判った。
【０００７】
そこで、本発明者らは、後に述べる実験（実験２−Ａ）を介して、大麦焼酎蒸留残液から得られた上述の液体分に含まれるどのような成分がオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用を示すかを明らかにするために以下の実験を行った。即ち、上記大麦焼酎蒸留残液の液体分（ａ）  を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリを用いて溶出することにより得られる脱着画分を凍結乾燥して得られた粉末にオロチン酸を混和させてラットに投与して実験を行った。その結果、該ラットの肝臓重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度は基本食の正常値と実質的に同等の値を示し、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度も基本食の正常値と実質的に同等の値を示し、脂肪肝の発症がほとんど完全に抑制されることが判明した。すなわち、上記大麦焼酎蒸留残液の液体分（ａ）  を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリを用いて溶出することにより得られる脱着画分の凍結乾燥粉末はオロチン酸誘発性脂肪肝の発症をほとんど完全に抑制することが判った。
一方、上記大麦焼酎蒸留残液の液体分（ａ）  を合成吸着剤を用いる吸着処理に付した際の非吸着画分を分画し、該非吸着画分を凍結乾燥して得られた粉末にオロチン酸を混和させてラットに投与して実験を行った。その結果、該ラットの肝臓重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度は基本食の正常値とは実質的に異なる値を示し、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度も基本食の正常値とは実質的に異なる値を示し、オロチン酸誘発性脂肪肝の発症を全く抑制しないことが判明した。
以上の実験結果から、大麦焼酎蒸留残液が有するオロチン酸誘発性脂肪肝の発症抑制に寄与する成分は、前記大麦焼酎蒸留残液を固液分離して得られた液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付すことにより得られる吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより得られる脱着画分に存在することが判明した。
【０００８】
更に、本発明者らは、後に述べる実験（実験２−Ｂ）を介して、大麦焼酎蒸留残液を固液分離して得られた液体分に含まれるどのような成分がＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症抑制作用を示すかを明らかにするために以下の実験を行った。即ち、大麦焼酎蒸留残液を固液分離して得られた液体分（ａ）を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリを用いて溶出することにより得られる脱着画分を凍結乾燥することにより得られた粉末を飼料に２重量％混和させて一定期間ラットに自由摂取させた後、該ラットの腹腔内にＤ−ガラクトサミンを投与し、所定時間経過後に、血清中のＧＯＴ及びＧＰＴを測定した。その結果、該脱着画分を２重量％含む飼料を摂取したラットは、該脱着画分を含まない対照食からなる飼料を摂取したラットに比べて有意に低いＧＯＴ及びＧＰＴの値を示した。このことから該脱着画分はＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する顕著な発症抑制作用を有することが判明した。
一方、上記合成吸着剤による吸着処理の際に得られた非吸着画分を凍結乾燥して得られた粉末を飼料に２重量％混和させて一定期間ラットに自由摂取させた後、該ラットの腹腔内にＤ−ガラクトサミンを投与し、所定時間経過後に、血清中のＧＯＴ及びＧＰＴを測定した。その結果、該非吸着画分を２重量％含む飼料を摂取したラットは、該非吸着画分を含まない対照食からなる飼料を摂取したラットと比べてわずかに低いＧＯＴ及びＧＰＴの値を示した。このことから該非吸着画分はＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用が極めて小さいことが判明した。
以上の実験結果から、大麦焼酎蒸留残液が有するＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症抑制に寄与する成分は、該大麦焼酎蒸留残液固液分離して得られた液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付すことにより得られる吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより得られる脱着画分に極めて濃縮された状態で存在することが判明した。
【０００９】
上述したように本発明者らは、大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより得られる精製濃縮物が、未処理の大麦焼酎蒸留残液よりも極めて強力な肝障害発症抑制作用、即ち、オロチン酸誘発性脂肪肝の発症を強力に抑制する作用及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症を強力に抑制する作用を有することを見出した。大麦焼酎蒸留残液についてのこの発見は、今までに全く例のない新事実であり、大麦焼酎蒸留残液を肝障害の罹患予防目的で食品或いは医薬として使用できるという大麦焼酎蒸留残液の新規な用途を創出するものである。
本発明は、食品或いは医薬として有効に使用することができる前記精製濃縮物及びその製造方法を提供することを目的とする。
【００１０】
上述したように、本発明により提供される肝障害（オロチン酸誘発性脂肪肝及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎）の発症を抑制する作用を有する精製濃縮物は、大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより分取した脱着画分からなるものである。そして本発明により提供される該精製濃縮物は、食品或いは医薬として有効に使用することが出来るものである。
【００１１】
本発明において使用する大麦焼酎蒸留残液は、代表的には、大麦又は精白大麦を原料として大麦麹及び蒸麦を製造し、得られた大麦麹及び蒸麦中に含まれるでんぷんを該大麦麹の麹により糖化し、それらを酵母によるアルコール発酵に付して焼酎熟成もろみを得、得られた焼酎熟成もろみを減圧蒸留又は常圧蒸留等の単式蒸留装置を用いて蒸留する際に蒸留残渣として副成するもの、即ち、大麦焼酎の蒸留残液を意味する。
【００１２】
本発明において、大麦焼酎蒸留残液を得るに際して、大麦焼酎の製造に用いる大麦麹は、通常の大麦焼酎製造において行われている製麹条件で製造すればよく、用いる麹菌株としては、一般的に大麦焼酎製造で使用する白麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉ）が好ましい。或いは泡盛製造で使用する黒麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉｉ）及び清酒製造等で使用する黄麹（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）などのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の菌株を用いることもできる。また大麦焼酎の製造に用いる酵母は、一般的に焼酎製造の際に使用する各種の焼酎醸造用酵母を使用することができる。
【００１３】
本発明において、大麦焼酎の製造における蒸留工程で得られた大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得る第１の工程は、大麦焼酎蒸留残液から原料大麦、あるいは大麦麹由来の水不溶性の発酵残渣等のＳＳ分を除去し、清澄液を得ることを目的として行うものである。この第１の工程における当該固液分離は、スクリュープレス方式やローラープレス方式の固液分離方法により行うことができる。この他、ろ過圧搾式の固液分離機を用いて予備分離を行い、次いで遠心分離機、ケイソウ土ろ過装置、セラミックろ過装置、或いはろ過圧搾機等を用いた方法により本固液分離処理を行ってもよい。第１の工程で得られた前記液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得る第２の工程は、該液体分に含まれる肝障害発症抑制作用を有する成分を該合成吸着剤を用いて吸着分取することを目的として行うものである。第２の工程で使用する合成吸着剤としては、芳香族系、芳香族系修飾型、或いはメタクリル系の合成吸着剤を用いることができる。そうした、合成吸着剤の好適な具体例としては、オルガノ社製のアンバーライトＸＡＤ−１６、三菱化学社製のセパビーズＳＰ８５０、及び同三菱化学社製のダイヤイオンＨＰ２０等を挙げることができる。
【００１４】
また、第３の工程においては、第２の工程で得られる吸着画分をエタノール又はアルカリを用いて溶出することにより、肝障害発症抑制作用を有する画分を得る。特に、アルカリを用いて溶出を行う場合には、該アルカリの好適な具体例として，水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウム等を挙げることができる。
こうしたアルカリを用いて合成吸着剤から溶出した吸着画分はナトリウムイオンやカリウムイオンなどの陽イオンを含むことから、さらにイオン交換処理に付すことができる。このようなイオン交換処理は、陽イオン交換樹脂等を用いて行うことができる。陽イオン交換樹脂として好適な具体例としては、オルガノ社製の強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ１２０や弱酸性陽イオン交換樹脂ＩＲＣ５０及びＩＲＣ７６、さらに三菱化学社製の強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ１Ｂ、ＳＫ１０４、ＰＫ２０８や弱酸性陽イオン交換樹脂ＷＫ１０、ＷＫ４０等を挙げることができる。また、上記アルカリを用いて合成吸着剤から溶出した吸着画分は、塩酸、酢酸、クエン酸などの無機酸又は有機酸等を用いて中和処理に付すこともでき、更に前記中和処理に付した後の吸着画分を前記陽イオン交換樹脂を用いて脱塩処理に付すこともできる。以下に本発明を完成するにあたり、本発明者らが行った実験について詳述する。
【００１５】
本発明者らは、上述した報告に鑑みて、大麦焼酎蒸留残液がオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用を有することから、該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離に付して上清の液体分と沈殿の固体分とを分取し、該液体分と該固体分をそれぞれ別々に凍結乾燥に付して液体分の凍結乾燥粉末及び固体分の凍結乾燥粉末を得、得られた液体分の凍結乾燥粉末及び固体分の凍結乾燥粉末が、オロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用を有するか否かを明らかにするために以下の実験１−Ａを行った。
【００１６】
以下の実験に供する目的で大麦焼酎の製造を行った。原料としては、大麦（７０％精白）を用いた。
【麹の製造】
大麦を４０％（ｗ／ｗ）吸水させ、４０分間蒸した後、４０℃まで放冷し、大麦トンあたり１ｋｇの種麹（白麹菌）を接種し、３８℃、ＲＨ９５％で２４時間、３２℃、ＲＨ９２％で２０時間保持することにより、大麦麹を製造した。
【蒸麦の製造】
大麦を４０％（ｗ／ｗ）吸水させ、４０分間蒸した後、４０℃まで放冷することにより、蒸麦を製造した。
【００１７】
【大麦焼酎及び大麦焼酎蒸留残液の製造】
１次仕込みでは前述の方法で製造した大麦麹（大麦として３トン）に、水３．６キロリットル及び酵母として焼酎酵母の培養菌体１ｋｇ（湿重量）を加えて１次もろみを得、得られた１次もろみを５日間の発酵（１段目の発酵）に付した。次いで、２次仕込みでは、上記１段目の発酵を終えた１次もろみに、水１１．４キロリットル、前述の方法で製造した蒸麦（大麦として７トン）を加えて１１日間の発酵（２段目の発酵）に付した。発酵温度は１次仕込み、２次仕込みとも２５℃とした。上記２段目の発酵を終えた２次もろみを常法により単式蒸留に付し、大麦焼酎１０キロリットルと大麦焼酎蒸留残液１５キロリットルを得た。
【００１８】
【実験１−Ａ】
４週齢Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（日本ＳＬＣ）を１群６匹として、一般的に栄養学的実験を行う際の標準食として使用する基本食を摂取させる基本食群、該基本食に脂肪肝を人為的に発現させる際に一般的に用いられる１％オロチン酸を混合した対照食を与える対照食群、該対照食に前記大麦焼酎蒸留残液の凍結乾燥物１０％を混合した試験食Ａを摂取させる試験食Ａ群、該対照食に該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離して得られる液体分の凍結乾燥物を７．３％含む試験食Ｂを摂取させる試験食Ｂ群、及び該対照食に該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離して得られる固体分の凍結乾燥物を２．７％含む試験食Ｃを摂取させる試験食Ｃ群、の５群に分け、それぞれの群に表１に示す組成の飼料を水道水と共に１４日間自由摂取させて飼育した。なお、上記試験食Ｂ群及び試験食Ｃ群において、該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離して得た液体分及び固体分のそれぞれの凍結乾燥物の各試料中における含量は、試験食Ａ群において飼料に混合した大麦焼酎蒸留残液の凍結乾燥物１０％中のそれぞれの含量に相当する量とした。飼育期間終了後、１４日間飼育後の体重増加量、１４日間の飼料摂取量を測定し、ラットを解剖後、心臓から血液を採取し、肝臓を摘出した。採取した血液は遠心分離して血清を得、得られた血清について、常法に従って、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度を測定し、摘出した肝臓については、その重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、肝臓トリグリセリド濃度、及び肝臓リン脂質濃度を測定した。
【００１９】
血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、血清リン脂質濃度肝臓重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、肝臓トリグリセリド濃度、肝臓リン脂質濃度、及び肝臓重量の測定結果を表２に示す。表２に示す結果から以下の事実が判明した。即ち、肝臓重量は対照食群と試験食Ｃ群で増加し、試験食Ａ群及び試験食Ｂ群では基本食群の示す正常値に近似した値を示した。肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度は、対照食群と試験食Ｃ群では顕著に増加したが、試験食Ａ群及び試験食Ｂ群では基本食群の示す正常値に近似した値を示した。一方、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度は、対照食群と試験食Ｃ群では低下したのに対して、試験食Ａ群及び試験食Ｂ群は基本食群の示す正常値に近似した値を示した。即ち、脂肪肝を人為的に発症させるオロチン酸を含む対照食に大麦焼酎蒸留残液の凍結乾燥物を混合した試験食Ａ群と該対照食に該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離して得た液体分の凍結乾燥物を混合した試験食Ｂ群においてはオロチン酸誘発性脂肪肝の発症が顕著に抑制された。一方、該対照食に該大麦焼酎蒸留残液を遠心分離して得た固体分の凍結乾燥物を混合した試験食Ｃ群においては脂肪肝の発症が全く抑制されることなく、該オロチン酸誘発性脂肪肝が顕著に発症することが明らかとなった。以上の実験結果から、大麦焼酎蒸留残液が有するオロチン酸誘発性脂肪肝の発症抑制に寄与する成分は、その液体分中に含まれていることが判明した。
【００２０】
そこで、大麦焼酎蒸留残液を固液分離して得られた液体分に含まれるオロチン酸誘発性脂肪肝の発症抑制及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症抑制に寄与する成分を分取する目的で、以下の実験２−Ａ、及び実験２−Ｂを行った。
即ち、大麦焼酎蒸留残液から得られた前記液体分を合成吸着剤に付すことにより吸着画分と非吸着画分に分画し、それぞれの画分のオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用を検討した。
【００２１】
【大麦焼酎蒸留残液液体分からの合成吸着剤吸着画分の取得】
以下の実験２−Ａ及び実験２−Ｂに供する目的で、前記大麦焼酎蒸留残液から得た液体分を次に示す方法に従って合成吸着剤吸着画分と合成吸着剤非吸着画分に分画した。
即ち、大麦焼酎蒸留残液を８０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分２５Ｌと脱イオン水１０Ｌをこの順番にオルガノ社製の合成吸着剤アンバーライトＸＡＤ−１６を充填したカラム（樹脂容量１０Ｌ）に接触させることにより、該カラムに対して非吸着性を示す非吸着画分からなる溶出液（ａ）を得た。該非吸着画分からなる溶出液（ａ）を凍結乾燥に付し、非吸着画分の凍結乾燥物（ａ’）２４００ｇを得、該凍結乾燥物（ａ’）を以下の実験２−Ａ及び実験２−Ｂに用いた。さらに該カラムに１（ｗｔ／ｖｏｌ）％の  水酸化ナトリウム溶液１０Ｌと脱イオン水１０Ｌをこの順番に接触させることにより該カラムに対して吸着性を示す吸着画分を含有する溶出液（ｂ）２０Ｌを得た。さらに該溶出液（ｂ）２０Ｌをオルガノ社製強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂを充填したカラム（樹脂容量１０Ｌ）に接触させた後に凍結乾燥に付すことにより、ナトリウムイオンを除去した吸着画分の凍結乾燥物（ｂ’）２７０ｇを得、該凍結乾燥物（ｂ’）を以下の実験２−Ａ及び実験２−Ｂに用いた。
【００２２】
【実験２−Ａ】
本実験は、上記吸着画分（ｂ）の凍結乾燥物（ｂ’）及び上記非吸着画分（ａ）の凍結乾燥物（ａ’）を用いて、それぞれのオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用を調べる目的で行った。
即ち、４週齢Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（日本ＳＬＣ）を１群６匹として、一般的に栄養学的実験を行う際の標準食として使用する基本食を摂取させる基本食群、該基本食に脂肪肝を人為的に発現させる際に一般的に用いられる１％オロチン酸を混合した対照食を与える対照食群、該対照食に前記吸着画分の凍結乾燥物（ｂ’）を１０重量％含む試験食Ａを摂取させる試験食Ａ群、及び該対照食に前記非吸着画分の凍結乾燥物（ａ’）１０重量％を混合した試験食Ｂを摂取させる試験食Ｂ群の４群に分け、それぞれの群に表３に示す組成の飼料を水道水と共に１４日間自由摂取させて飼育した。飼育期間終了後、１４日間飼育後の体重増加量、１４日間の飼料摂取量を測定し、ラットを解剖後、心臓から血液を採取し、肝臓を摘出した。採取した血液は遠心分離して血清を得、得られた血清について、常法に従って、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度を測定し、摘出した肝臓については、その重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、肝臓トリグリセリド濃度、及び肝臓リン脂質濃度を測定した。
【００２３】
血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、血清リン脂質濃度肝臓重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、肝臓トリグリセリド濃度、肝臓リン脂質濃度、及び肝臓重量の測定結果を表４に示す。表４に示す結果から以下の事実が判明した。肝臓重量は対照食群及び試験食Ｂ群で増加し、試験食Ａ群では基本食の正常値と実質的に同等の値を示した。肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度は、対照食群及び試験食Ｂ群では顕著に増加したが、試験食Ａ群では基本食の正常値と実質的に同等の値，又は該正常値よりも低い値を示した。一方、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度は、対照食群及び試験食Ｂ群が低下したのに対して、試験食Ａ群は基本食の正常値と実質的に同等の値を示した。即ち、脂肪肝を人為的に発現させるオロチン酸を含む対照食に前記非吸着画分の凍結乾燥物（ａ’）を混合した試験食Ｂ群においてはオロチン酸誘発性脂肪肝の発症が全く抑制されなかった。一方、脂肪肝を人為的に発症させるオロチン酸を含む対照食に該前記吸着画分の凍結乾燥物（ｂ’）を混合した試験食Ａ群においてはオロチン酸誘発性脂肪肝の発症が完全に抑制された。
以上の実験結果から、大麦焼酎蒸留残液を固液分離することにより得られた液体分に含まれるオロチン酸誘発性脂肪肝の発症抑制に寄与する成分は、合成吸着剤に対する吸着画分（ｂ）に含まれていることが判明した。
【００２４】
上記吸着画分の凍結乾燥物（ｂ’）及び上記非吸着画分の凍結乾燥物（ａ’）を用いて、それぞれのＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用を調べる目的で、以下の実験２−Ｂを行った。
【００２５】
【実験２−Ｂ】
５週令のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットを１群９匹として、対照食を摂取させる対照食群、該対照食に含まれる成分の一部を前記吸着画分の凍結乾燥物（ｂ’）２重量％で代替した試験食Ａを摂取させる試験食Ａ群、該対照食に含まれる成分の一部を前記非吸着画分の凍結乾燥物（ａ’）２重量％で代替した試験食Ｂを摂取させる試験食Ｂ群、及び該対照食に含まれる成分の一部を上記大麦焼酎蒸留残液の液体分の凍結乾燥物２重量％で代替した試験食Ｃを摂取させる試験食Ｃ群、の４群に分け、それぞれの群に表５に示す組成の飼料を水道水と共に１５日間自由摂取させて飼育した。実験食投与１４日目にＤ−ガラクトサミンを３５０ｍｇ／ｋｇ体重となるようにラットの腹腔内に投与し、２２時間後にラットを屠殺後、血液を採取し、これを遠心分離して血清を得、得られた血清について、血清中のＧＯＴ及びＧＰＴを測定するとともに、肝臓の病理組織学的検索を行った。
【００２６】
血清中のＧＯＴ及びＧＰＴの測定結果を表６に示す。表６に示す結果から以下の事実が判明した。ＧＯＴ及びＧＰＴの値は、試験食Ａ群が、対照食群に比べて極めて顕著に低下した。一方、試験食Ｂ群および試験食Ｃ群においては、ＧＯＴ及びＧＰＴの値は、対照食群に比べて低下したものの、その低下の程度は前記試験食Ａ群と比べて明らかに小さいものであった。肝臓の病理組織学的検索では、対照食群の肝小葉中心体に強くみられた肝細胞の変成・壊死が試験食Ａ群ではほとんど認められなかった。
即ち、上記吸着画分の凍結乾燥物（ｂ’）を混合した試験食Ａ群においては、Ｄ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症が顕著に抑制された。
この結果から、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤に付すことにより得られる吸着画分（ｂ）は、大麦焼酎蒸留残液の液体分に比べてＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症抑制作用が極めて強力であることが判明した。
【００２７】
以上の実験結果から、大麦焼酎蒸留残液の液体分に含まれる肝障害発症抑制作用、即ち、オロチン酸誘発性脂肪肝及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎のそれぞれに対する発症抑制作用に寄与する成分は、大麦焼酎蒸留残液の液体分を合成吸着剤に付すことにより得られる吸着画分に濃縮されて含まれていることが判明した。
【００２８】
そこで肝障害発症抑制作用、即ち、オロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用を有することが判明した大麦焼酎蒸留残液の液体分の合成吸着剤吸着画分の成分組成を下記の方法により測定した。
【合成吸着剤吸着画分の成分組成の分析】
前記合成吸着剤吸着画分の成分組成の分析を行った。即ち、【００１７】に記載した「大麦焼酎及び大麦焼酎蒸留残液の製造」の方法を複数回行って、ロットを異にする複数の大麦焼酎蒸留残液を用意した。それぞれの大麦焼酎蒸留残液を、【００２１】に記載した「大麦焼酎蒸留残液液体分からの合成吸着剤吸着画分の取得」で採用したのと同様にして遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分２５Ｌと脱イオン水１０Ｌをこの順番にオルガノ社製の合成吸着剤アンバーライトＸＡＤ−１６を充填したカラム（樹脂容量１０Ｌ）に接触させ、該カラムに吸着した吸着画分を溶出することにより合成吸着剤吸着画分からなる分析用試料を得た。この様にして、複数種の分析用試料を作製した。夫々の合成吸着剤吸着画分からなる分析用試料のタンパク質、糖組成、ポリフェノール及び有機酸組成を測定した。タンパク質はケルダール法により、糖組成は塩酸加水分解によるＨＰＬＣ法により、ポリフェノールはＦｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ  法により、有機酸組成はＨＰＬＣ法によりそれぞれ測定した。前記合成吸着剤吸着画分の成分組成（乾燥重量に基づく）の分析結果を表７に示す。表７に示した結果から明らかなように、前記合成吸着剤吸着画分は、粗タンパク４０乃至６０重量％、ポリフェノール７乃至１２重量％、多糖類５乃至１０重量％（糖組成：グルコース０乃至２重量％、キシロース３乃至５重量％、及びアラビノース２乃至５重量％）、有機酸４乃至１０重量％    （リンゴ酸１乃至３重量％、クエン酸２乃至４重量％、コハク酸０乃至１重量％、乳酸０乃至６重量％、及び酢酸０乃至１重量％）、及び遊離糖類０乃至２重量％（マルトース０乃至１重量％、キシロース０乃至１重量％、アラビノース０乃至１重量％、及びグルコース０乃至１重量％、）を含有することが明らかとなった。
尚、上記分析用試料の作製の手法を上記合成吸着剤アンバーライトＸＡＤ−１６以外の合成吸着剤用いて行い、上記複数種の大麦焼酎蒸留残液の液体分の夫々について合成吸着剤吸着画分からなる分析用試料を得、得られた分析用試料について上述したのと同様にして分析を行ったところ、表７に示すのと実質的に同等の結果が得られた。
【００２９】
以上のことから、本発明において大麦焼酎蒸留残液の液体分、即ち大麦焼酎蒸留残液を固液分離して得られた液体分を吸着剤処理に付すことにより得られる吸着画分からなる肝障害発症抑制作用、即ち、オロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用を有する精製濃縮物は、粗タンパク含量が高く、さらにポリフェノール、多糖類、有機酸、及び遊離糖類を含有することが判明した。
【発明の実施の形態】
【００３０】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが，本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【００３１】
以下の実施例に供する目的で大麦焼酎の製造を行った。原料としては、大麦（７０％精白）を用いた。
【麹の製造】
大麦を４０％（ｗ／ｗ）吸水させ、４０分間蒸した後、４０℃まで放冷し、大麦トンあたり１ｋｇの種麹（白麹菌）を接種し、３８℃、ＲＨ９５％で２４時間、３２℃、ＲＨ９２％で２０時間保持することにより、大麦麹を製造した。
【蒸麦の製造】
大麦を４０％（ｗ／ｗ）吸水させ、４０分間蒸した後、４０℃まで放冷することにより、蒸麦を製造した。
【００３２】
【大麦焼酎及び大麦焼酎蒸留残液の製造】
１次仕込みでは前述の方法で製造した大麦麹（大麦として３トン）に、水３．６キロリットル及び酵母として焼酎酵母の培養菌体１ｋｇ（湿重量）を加えて１次もろみを得、得られた１次もろみを５日間の発酵（１段目の発酵）に付した。次いで、２次仕込みでは、上記１段目の発酵を終えた１次もろみに、水１１．４キロリットル、前述の方法で製造した蒸麦（大麦として７トン）を加えて１１日間の発酵（２段目の発酵）に付した。発酵温度は１次仕込み、２次仕込みとも２５℃とした。上記２段目の発酵を終えた２次もろみを常法により単式蒸留に付し、大麦焼酎１０キロリットルと大麦焼酎蒸留残液１５キロリットルを得た。該大麦焼酎蒸留残液を以下の実施例に用いた。
【００３３】
【実施例１】
大麦焼酎製造の蒸留工程で得られた前記大麦焼酎蒸留残液を８０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分２５Ｌをオルガノ社製の合成吸着剤アンバーライトＸＡＤ−１６を充填したカラム（樹脂容量１０Ｌ）に接触させ、当該カラムに吸着する吸着画分を得、さらに前記吸着画分を吸着した該カラムに脱イオン水１０Ｌを接触させて得られた溶出液を除去後、該カラムに１（ｗｔ／ｖｏｌ）％の  水酸化ナトリウム溶液１０Ｌと脱イオン水１０Ｌをこの順番に接触させることにより吸着画分からなる溶出液２０Ｌを分取した。該溶出液２０Ｌをオルガノ社製強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂを充填したカラム（樹脂容量１０Ｌ）に接触させた後に凍結乾燥に付し、得られた凍結乾燥物２７０ｇを粉砕したところ、褐色を呈する精製濃縮物が得られた。
【００３４】
【比較例１】
大麦焼酎製造の蒸留工程で得られた前記大麦焼酎蒸留残液を８０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎの条件で遠心分離して大麦焼酎蒸留残液の液体分を得、得られた液体分２５Ｌを真空凍結乾燥機を用いて凍結乾燥に付し、得られた凍結乾燥物１５００ｇを粉砕したところ、淡褐色を呈する粉末が得られた。
【００３５】
実施例１で得られた精製濃縮物（実１）、および比較例１で得られた大麦焼酎蒸留残液の液体分の凍結乾燥物（比１）を以下の試験例１に供し、それぞれのオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用を評価した。
【００３６】
【試験例１】
即ち、４週齢Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラット（日本ＳＬＣ）を１群６匹として、一般的に栄養学的実験を行う際の標準食として使用する基本食を摂取させる基本食群、該基本食に脂肪肝を人為的に発現させる際に一般的に用いられる１％オロチン酸を混合した対照食を与える対照食群、該対照食に精製濃縮物（実１）１％を混合した試験食Ａを摂取させる試験食Ａ群、及び該対照食に凍結乾燥物（比１）１％を混合した試験食Ｂを摂取させる試験食Ｂ群、の４群に分け、それぞれの群に表８に示す組成の飼料を水道水と共に１４日間自由摂取させて飼育した。飼育期間終了後、１４日間飼育後の体重増加量、１４日間の飼料摂取量を測定し、ラットを解剖後、心臓から血液を採取し、肝臓を摘出した。採取した血液は遠心分離して血清を得、得られた血清について、常法に従って、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度を測定し、摘出した肝臓については、その重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、肝臓トリグリセリド濃度、及び肝臓リン脂質濃度を測定した。
【００３７】
【評価１】
血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、血清リン脂質濃度肝臓重量、肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、肝臓トリグリセリド濃度、肝臓リン脂質濃度、及び肝臓重量の測定結果を表９に示す。表９に示す結果から以下の事実が判明した。肝臓重量は対照食群で顕著に増加し、試験食Ｂ群でもやや増加したが、試験食Ａ群では基本食の正常値と実質的に同等の値を示した。肝臓総脂質濃度、肝臓コレステロール濃度、及び肝臓トリグリセリド濃度は、対照食群では顕著に増加し、試験食Ｂ群でもやや増加したが、試験食Ａ群では基本食の正常値と実質的に同等の値，又は該正常値よりも低い値を示した。一方、血清総コレステロール濃度、血清ＨＤＬ−コレステロール濃度、血清トリグリセリド濃度、及び血清リン脂質濃度は、対照食群が顕著に低下し、試験食Ｂ群も低下したのに対して、試験食Ａ群は基本食の正常値と実質的に同等の値を示した。即ち、脂肪肝を人為的に発現させるオロチン酸を含む対照食に凍結乾燥物（比１）を１％混合した試験食Ｂ群においてはオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用が極めて小さかったのに対して、精製濃縮物（実１）を１％混合した試験食Ａ群においてはオロチン酸誘発性脂肪肝の発症が完全に抑制された。
この結果から、本発明の精製濃縮物のオロチン酸誘発性脂肪肝に対する発症抑制作用は、大麦焼酎蒸留残液の液体分のそれを卓越するものであることが判った。
【００３８】
実施例１で得られた精製濃縮物（実１）、および比較例１で得られた大麦焼酎蒸留残液の液体分の凍結乾燥物（比１）を以下の試験例２に供し、それぞれのＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用を評価した。
【００３９】
【試験例２】
５週令のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットを１群９匹として、対照食を摂取させる対照食群、該対照食に含まれる成分の一部を精製濃縮物（実１）２重量％で代替した試験食Ａを摂取させる試験食Ａ群、および該対照食に含まれる成分の一部を凍結乾燥物（比１）    ２重量％で代替した試験食Ｂを摂取させる試験食Ｂ群、の３群に分け、それぞれの群に表１０に示す組成の飼料を水道水と共に１５日間自由摂取させて飼育した。実験食投与１４日目にＤ−ガラクトサミンを３５０ｍｇ／ｋｇ体重となるようにラットの腹腔内に投与し、２２時間後にラットを屠殺後、血液を採取し、これを遠心分離して血清を得、得られた血清について、血清中のＧＯＴ及びＧＰＴを測定するとともに、肝臓の病理組織学的検索を行った。
【００４０】
【評価１】
血清中のＧＯＴ及びＧＰＴの測定結果を表１１に示す。表１１に示す結果から以下の事実が判明した。ＧＯＴ及びＧＰＴの値は、試験食Ａ群及び試験食Ｂ群が対照食群に比べて低下したが、特に試験食Ａ群の低下が極めて顕著であった。肝臓の病理組織学的検索では、対照食群の肝小葉中心体に強くみられた肝細胞の変成・壊死が試験食Ａ群ではほとんど認められなかった。
即ち、大麦焼酎蒸留残液の液体分から得た本発明の精製濃縮物を混合した試験食Ａ群においては、Ｄ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症が顕著に抑制された。
この結果から、本発明の精製濃縮物のＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎に対する発症抑制作用は、大麦焼酎蒸留残液の液体分のそれを卓越するものであることが判った。
【００４１】
以上、試験例１及び試験例２の結果から明らかなように、本発明の大麦焼酎蒸留残液から得られる精製濃縮物は、大麦焼酎蒸留残液液体分に比べて極めて強力な肝障害発症抑制作用、即ち、オロチン酸誘発性脂肪肝の発症を強力に抑制する作用及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症を強力に抑制する作用を有し、大麦焼酎蒸留残液の液体分に比べて極少量の摂取でオロチン酸誘発性脂肪肝及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎の発症に対する有効な抑制作用を発揮するものであることが判明した。
【００４２】
【表１】
0003600819.tif 000002
【００４３】
【表２】
0003600819.tif 000003
【００４４】
【表３】
0003600819.tif 000004
【００４５】
【表４】
0003600819.tif 000005
【００４６】
【表５】
0003600819.tif 000006
【００４７】
【表６】
0003600819.tif 000007
【００４８】
【表７】
0003600819.tif 000008
【００４９】
【表８】
0003600819.tif 000009
【００５０】
【表９】
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【００５１】
【表１０】
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【００５２】
【表１１】
0003600819.tif 000012
【００５３】
【発明の効果】
以上、詳述したように本発明によれば、大麦を原料とする焼酎製造において副成する大麦焼酎蒸留残液を固液分離して液体分を得、該液体分を合成吸着剤を用いる吸着処理に付して吸着画分を得、該吸着画分をアルカリ又はエタノールを用いて溶出することにより、肝障害（オロチン酸誘発性脂肪肝及びＤ−ガラクトサミン誘発性肝炎）の発症を強力に抑制する作用を有する精製濃縮物を得ることが出来る。