【手続補正書】
【提出日】平成29年10月2日(2017.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＬＡＳ１の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、前記ｄｓＲＮＡが、センス鎖およびアンチセンス鎖を含んでなり、前記アンチセンス鎖が、ＡＬＡＳ１  ＲＮＡ転写物（例えば、配列番号１）に対する相補性領域を含んでなり、前記アンチセンス鎖が、ＵＡＡＧＡＵＧＡＧＡＣＡＣＵＣＵＵＵＣＵＧＧＵ（配列番号４１５３）またはＵＡＡＧＡＵＧＡＧＡＣＡＣＵＣＴＵＵＣＵＧＧＵ（配列番号４１５４）のアンチセンス配列からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含んでなる、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）。
【請求項２】
ＡＬＡＳ１の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、前記ｄｓＲＮＡが、センス鎖およびアンチセンス鎖を含んでなり、前記アンチセンス鎖がＡＬＡＳ１  ＲＮＡ転写物（例えば、配列番号１）に対する相補性領域を含んでなり、前記アンチセンス鎖が、（ｉ）表２１〜４０のいずれか１つに列挙されるアンチセンス配列、または（ｉｉ）表２１〜４０のいずれか１つに列挙されるアンチセンス配列の未修飾バージョン（配列番号４１７２〜５２３７）からの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを含んでなる、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）。
【請求項３】
前記ｄｓＲＮＡが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含んでなる、請求項２に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項４】
前記二本鎖領域の長さが１７〜２３ヌクレオチド対である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項５】
少なくとも１本の鎖が、少なくとも２つのヌクレオチドの３’オーバーハングを含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項６】
各鎖が２６ヌクレオチド長以下である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項７】
少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、および任意選択的に１つまたは複数の５’−ホスホロチオエート基、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項８】
リガンドをさらに含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡであって、任意選択的に前記リガンドが、前記ｄｓＲＮＡセンス鎖の３’末端にコンジュゲートされている、ｄｓＲＮＡ。
【請求項９】
前記リガンドが炭水化物を含んでなる、請求項８に記載のｄｓＲＮＡであって、任意選択的に前記リガンドがＧａｌＮＡｃリガンドである、ｄｓＲＮＡ。
【請求項１０】
前記リガンドが、
【化１】
2016539623.tif 000001
である、請求項９に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１１】
前記リガンドが、二価または三価の分枝リンカーを介して付着する、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１２】
前記リガンドおよびリンカーが、式ＸＸＩＶ、
【化２】
2016539623.tif 000002
に示されるようである、請求項１１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１３】
前記ｄｓＲＮＡが、
【化３】
2016539623.tif 000003
で示されるように、リンカーを介してリガンドＬ９６にコンジュゲートされている、請求項８に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１４】
前記リガンドが、前記ｄｓＲＮＡを肝実質細胞に標的化する、請求項８〜１３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１５】
前記ｄｓＲＮＡが、表２１〜４０に列挙されるセンス配列から選択されるセンス配列からなるセンス鎖と、表２１〜４０に列挙されるアンチセンス配列から選択されるアンチセンス配列からなるアンチセンス鎖とを含んでなる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１６】
前記ｄｓＲＮＡが、１ｎＭ未満、０．０５ｎＭ未満、０．０２ｎＭ未満、または０．０１ｎＭ未満のＩＣ５０を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１７】
前記ｄｓＲＮＡが、約１０ｍｇ／ｋｇ未満または約５ｍｇ／ｋｇ未満の単回用量ＥＤ５０を有する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１８】
前記ｄｓＲＮＡが、ＡＤ−５８６３２またはＡＤ−６０４８９と比較して改善された活性を示す、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡであって、任意選択的に前記ｄｓＲＮＡが、表２１〜４０に列挙されるｄｓＲＮＡから選択される、ｄｓＲＮＡ。
【請求項１９】
前記センス鎖が、ＣＡＧＡＡＡＧＡＧＵＧＵＣＵＣＡＵＣＵＵＡ（配列番号４１５５）の配列を含んでなり、またはそれからなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項２０】
請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡであって、
（ｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０５１９のアンチセンス配列を含んでなり、前記アンチセンス配列がＡＤ−６０５１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり；
（ｉｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０５１９のアンチセンス配列からなり、前記アンチセンス配列がＡＤ−６０５１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり；
（ｉｉｉ）前記センス鎖がＡＤ−６０５１９のセンス配列を含んでなり、前記センス配列がＡＤ−６０５１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり；
（ｉｖ）前記センス鎖がＡＤ−６０５１９のセンス配列からなり、前記センス配列がＡＤ−６０５１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり；
（ｖ）前記センス鎖がＡＤ−６０５１９のセンス配列を含んでなり、前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０５１９のアンチセンス配列を含んでなり、前記センスおよびアンチセンス配列がＡＤ−６０５１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり、または
（ｖｉ）前記センス鎖がＡＤ−６０５１９のセンス配列からなり、前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０５１９のアンチセンス配列からなり、前記センスおよびアンチセンス配列がＡＤ−６０５１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなる、ｄｓＲＮＡ。
【請求項２１】
請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡであって、
（ｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０４８９のアンチセンス配列を含んでなり、および／または前記センス鎖がＡＤ−６０４８９のセンス配列を含んでなり、前記アンチセンスおよび／またはセンス配列がＡＤ−６０４８９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり、または
（ｉｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０４８９のアンチセンス配列からなり、および／または前記センス鎖がＡＤ−６０４８９のセンス配列からなり、前記アンチセンスおよび／またはセンス配列がＡＤ−６０４８９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなる、ｄｓＲＮＡ。
【請求項２２】
請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡであって、
（ｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６１１９３のアンチセンス配列を含んでなり、および／または前記センス鎖がＡＤ−６１１９３のセンス配列を含んでなり、前記アンチセンスおよび／またはセンス配列がＡＤ−６１１９３の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり、または
（ｉｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６１１９３のアンチセンス配列からなり、および／または前記センス鎖がＡＤ−６１１９３のセンス配列からなり、前記アンチセンスおよび／またはセンス配列がＡＤ−６１１９３の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなる、ｄｓＲＮＡ。
【請求項２３】
請求項２に記載のｄｓＲＮＡであって、
（ｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０８１９のアンチセンス配列を含んでなり、および／または前記センス鎖がＡＤ−６０８１９のセンス配列を含んでなり、前記アンチセンスおよび／またはセンス配列がＡＤ−６０８１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなり、または
（ｉｉ）前記アンチセンス鎖がＡＤ−６０８１９のアンチセンス配列からなり、および／または前記センス鎖がＡＤ−６０８１９のセンス配列からなり、前記アンチセンスおよび／またはセンス配列がＡＤ−６０８１９の全ての修飾ヌクレオチドを含んでなる、ｄｓＲＮＡ。
【請求項２４】
ｄｓＲＮＡが、以下の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６または全てを有する：
（ｉ）化学的に合成される；
（ｉｉ）ｄｓＲＮＡ中の全てのヌクレオチドが修飾される；
（ｉｉｉ）全てのヌクレオチドが、３’−５’リン酸ジエステル結合を介して連結される；
（ｉｖ）センス鎖が、２１個のヌクレオチドを含んでなり、またはそれからなる；
（ｖ）アンチセンスセンス鎖（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｓｅｎｓｅ  ｓｔｒａｎｄ）が、２３個のヌクレオチドを含んでなり、またはそれからなる；
（ｖｉ）センス鎖の３’末端に平滑末端を有する；
（ｖｉｉ）３’オーバーハングを有する；
（ｖｉｉｉ）３つのＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含有するリガンドに、共有結合的に付着する；
（ｉｘ）センス鎖の３’末端が、三分岐ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる；
（ｘ）１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含んでなる、アンチセンス鎖を有する；
（ｘｉ）１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含んでなるセンス鎖を有する；
（ｘｉｉ）センス鎖の２１個のヌクレオチドが、アンチセンス鎖の相補的な２１個のヌクレオチドとハイブリダイズする；
（ｘｉｉｉ）２１個のヌクレオチド塩基対、およびアンチセンス鎖の３’末端の２塩基オーバーハングを形成する；
（ｘｉｖ）ｃｓａｓｇａａａＧｆａＧｆｕＧｆｕＣｆｕＣｆａｕｃｕｕａＬ９６（配列番号４１６０）またはＣＡＧＡＡＡＧＡＧＵＧＵＣＵＣＡＵＣＵＵＡ（配列番号４１６２）の配列を有するセンス鎖およびｕｓＡｆｓＡｆＧｆａＵｆｇＡｆｇＡｆｃＡｆｃＵｆｃＵｆｕＵｆｃＵｆｇｓｇｓｕ（配列番号４１６１）またはＵＡＡＧＡＵＧＡＧＡＣＡＣＵＣＵＵＵＣＵＧＧＵ（配列番号４１６３）の配列を有するアンチセンス鎖を含んでなり、またはそれからなる；
（ｘｖ）ｃｓａｓｇａａａＧｆａＧｆｕＧｆｕＣｆｕＣｆａｕｃｕｕａＬ９６（配列番号４１６０）の配列の修飾の１０、１２、１４、１６、１８、１９、２０個または全てがある、センス鎖を有する；
（ｘｖｉ）ｕｓＡｆｓＡｆＧｆａＵｆｇＡｆｇＡｆｃＡｆｃＵｆｃＵｆｕＵｆｃＵｆｇｓｇｓｕ（配列番号４１６１）の配列の修飾の１０、１２、１４、１６、１８、１９、２０個または全てがある、アンチセンス鎖を有する；または
（ｘｖｉｉ）ｏｆｃｓａｓｇａａａＧｆａＧｆｕＧｆｕＣｆｕＣｆａｕｃｕｕａＬ９６（配列番号４１６０）の配列を有するセンス鎖およびｕｓＡｆｓＡｆＧｆａＵｆｇＡｆｇＡｆｃＡｆｃＵｆｃＵｆｕＵｆｃＵｆｇｓｇｓｕ（配列番号４１６１）の配列を有するアンチセンス鎖を有する、
［式中、ｃ、ａ、ｇ、ｕ＝２’−ＯＭｅリボヌクレオシド；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｕｆ＝２’Ｆリボヌクレオシド；ｓ＝ホスホロチオエート；および
【化４】
2016539623.tif 000004
］、請求項１から２３のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項２５】
ＡＬＡＳ１の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、前記ｄｓＲＮＡが、センス鎖およびアンチセンス鎖を含んでなり、前記アンチセンス鎖が、ＡＬＡＳ１  ＲＮＡ転写物に対する相補性領域を含んでなり、
前記センス鎖がｃｓａｓｇａａａＧｆａＧｆｕＧｆｕＣｆｕＣｆａｕｃｕｕａＬ９６（配列番号４１６０）の配列および修飾の全てを含み、前記アンチセンス鎖がｕｓＡｆｓＡｆＧｆａＵｆｇＡｆｇＡｆｃＡｆｃＵｆｃＵｆｕＵｆｃＵｆｇｓｇｓｕ（配列番号４１６１）の配列および修飾の全てを含み、
［式中、ｃ、ａ、ｇ、ｕ＝２’−ＯＭｅリボヌクレオシド；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｕｆ＝２’Ｆリボヌクレオシド；ｓ＝ホスホロチオエート；および
【化５】
2016539623.tif 000005
］、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）。
【請求項２６】
ＡＬＡＳ１の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、前記ｄｓＲＮＡが、センス鎖およびアンチセンス鎖を含んでなり、前記アンチセンス鎖が、ＡＬＡＳ１  ＲＮＡ転写物に対する相補性領域を含んでなり、
前記センス鎖がｃｓａｓｇａａａＧｆａＧｆｕＧｆｕＣｆｕＣｆａｕｃｕｕａＬ９６（配列番号４１６０）の配列および修飾の全てからなり、前記アンチセンス鎖がｕｓＡｆｓＡｆＧｆａＵｆｇＡｆｇＡｆｃＡｆｃＵｆｃＵｆｕＵｆｃＵｆｇｓｇｓｕ（配列番号４１６１）の配列および修飾の全てからなり、
［式中、ｃ、ａ、ｇ、ｕ＝２’−ＯＭｅリボヌクレオシド；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、Ｕｆ＝２’Ｆリボヌクレオシド；ｓ＝ホスホロチオエート；および
【化６】
2016539623.tif 000006
］、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）。
【請求項２７】
ＡＬＡＳ１の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、前記ｄｓＲＮＡが、センス鎖およびアンチセンス鎖を含んでなり、前記アンチセンス鎖が、ＡＬＡＳ１転写物に対する相補性領域を含んでなり、前記ｄｓＲＮＡが、以下の構造を有するコンジュゲートの形態である：
【化７】
2016539623.tif 000007
、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載の少なくとも１本のｄｓＲＮＡ鎖をコードする、ベクター。
【請求項２９】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡまたは請求項２８に記載のベクターを含んでなる、細胞。
【請求項３０】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡを含んでなる、ＡＬＡＳ１遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。
【請求項３１】
ｄｓＲＮＡが非緩衝生理食塩水または水溶液中で投与される、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記組成物が皮下投与に適する、請求項３０または３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
（ａ）請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡを細胞に導入するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の細胞をＡＬＡＳ１遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間維持し、それによって前記細胞中の前記ＡＬＡＳ１遺伝子の発現を阻害するステップと
を含んでなる、細胞中でＡＬＡＳ１発現を阻害する方法であって、任意選択的に前記ＡＬＡＳ１の発現が、少なくとも２０％または少なくとも３０％阻害され、任意選択的に肝細胞においてＡＬＡＳ１の発現が、１０ｎＭのｄｓＲＮＡで少なくとも８０％阻害される、方法。
【請求項３４】
細胞（例えば、肝実質細胞）を、細胞（例えば、肝実質細胞）内のポルフィリンまたはポルフィリン前駆体（例えば、ＡＬＡまたはＰＢＧ）のレベルを低下させるのに有効な量で、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡに接触させるステップを含んでなる、細胞内のポルフィリンまたはポルフィリン前駆体のレベルを低下させる方法。
【請求項３５】
（ｉ）請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ、または
（ｉｉ）請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の組成物
の治療有効量をこのような治療を必要とする対象に投与して、それによってポルフィリン症を治療するステップを含んでなる、ポルフィリン症を治療する方法。
【請求項３６】
前記対象が、ポルフィリン症の発症リスクがあり、またはポルフィリン症と診断される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ポルフィリン症が、急性間欠性ポルフィリン症またはＡＬＡデヒドラターゼ欠乏ポルフィリン症である、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
（ｉ）前記ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡを含んでなる組成物が、ポルフィリン症の急性発作後に投与され、（ｉｉ）前記ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡを含んでなる組成物が、ポルフィリン症の急性発作中に投与され、または（ｉｉｉ）前記ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡを含んでなる組成物が予防的に投与されて、ポルフィリン症の急性発作が予防される、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ｄｓＲＮＡが、例えば１ｍｇ／ｋｇ〜２．５ｍｇ／ｋｇまたは０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの対象体重の用量などの、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの対象体重の用量で投与される、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法が、
（ｉ）前記対象においてポルフィリンまたはポルフィリン前駆体（例えば、δ−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）またはポルフォビリノーゲン（ｐｏｒｐｈｏｐｉｌｉｎｏｇｅｎ）（ＰＢＧ））レベルを低下させて、任意選択的に前記レベルが少なくとも３０％または４０％低下され、および／または
（ｉｉ）前記対象においてＡＬＡＳ１発現を少なくとも４０％阻害する、方法。
【請求項４１】
請求項３５〜４０のいずれか一項に記載の方法であって、前記方法が、（ｉ）ＡＬＡＳ１関連障害（例えばポルフィリン症）に伴う症状を改善し、（ｉｉ）前記対象においてポルフィリン症に伴う症状の急性発作の頻度を低下させ、および／または（ｉｉｉ）前記対象が、例えば、月経前期などの増悪因子に曝露した際に、前記対象においてポルフィリン症に伴う症状の急性発作の発生率を低下させる、方法。
【請求項４２】
前記ｄｓＲＮＡまたは前記ｄｓＲＮＡを含んでなる組成物が、例えば、毎週、隔週、または毎月などの投与計画に従って投与される、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ｄｓＲＮＡが、例えば、前駆症状中などのポルフィリン症の急性発作前に投与される、請求項３５〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記対象が、高いレベル（例えば、血漿または尿レベル）のＡＬＡおよび／またはＰＢＧを有する、請求項３５〜４３のいずれか一項に記載の方法であって、任意選択的に前記対象が、慢性疼痛を患っている、方法。
【請求項４５】
ＡＬＡおよび／またはＰＢＧレベルの上昇を低下させる、請求項３５〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記方法が、疼痛、神経障害、および／または神経損傷を減少させまたは予防する、請求項３５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記方法が、ポルフィリン症の急性発作を予防する、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｄｓＲＮＡまたは前記ｄｓＲＮＡを含んでなる組成物が、反復投与される、請求項３５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
（ｉ）請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ、または
（ｉｉ）請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の組成物
の治療有効量をこのような治療を必要とする対象に投与するステップを含んでなる、高レベルのＡＬＡおよび／またはＰＢＧがある対象を治療する方法であって、任意選択的に、前記方法が、ＡＬＡおよび／またはＰＢＧレベルを低下させるのに効果的である、方法。
【請求項５０】
ＡＬＡおよび／またはＰＢＧレベルの増大を有する対象を治療する方法であって、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡを毎月、１ｍｇ／ｋｇ〜２．５ｍｇ／ｋｇ、または、少なくとも１０週間にわたり週１回、１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇ投与し、それによって前記対象において、ＡＬＡおよび／またはＰＢＧレベルを低下させるステップを含んでなる、方法。
【請求項５１】
複数の再発性発作を患っているＡＩＰがあるヒト患者を治療する方法であって、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡを少なくとも６ヶ月間にわたり１ｍｇ／ｋｇ〜２．５ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、それによって前記患者を治療するステップを含んでなり、任意選択的に前記方法が、
（ｉ）発作発生頻度を低下させ、
（ｉｉ）ヘマチン使用を低下させ、
（ｉｉｉ）入院を減少させ、および／または
（ｉｖ）生活の質を改善する、方法。
【請求項５２】
対象中の循環細胞外ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡのレベルをアッセイする方法であって、
ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡを含んでなる、前記対象からの生物学的液状サンプル（例えば、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、または尿サンプル）中でＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡのレベルを検出し（例えば、測定し）、
それによって前記対象中の循環細胞外ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡレベルをアッセイするステップを含んでなる、方法。
【請求項５３】
対象中の循環細胞外ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡのレベルをアッセイする方法であって、
（ｉ）ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡを含んでなる、前記対象からの生物学的液状サンプル（例えば、血液サンプル、血漿サンプル、血清サンプル、または尿サンプル）からＲＮＡ（例えば、細胞外ＲＮＡ）を提供するステップと；
（ｉｉ）前記ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡからＡＬＡＳ１  ｃＤＮＡを得るステップと；
（ｉｉｉ）前記ＡＬＡＳ１  ｃＤＮＡを前記ＡＬＡＳ１  ｃＤＮＡまたはその一部に相補的な核酸（例えば、プローブおよび／またはプライマー）に接触させて、それによって反応混合物を生成するステップと；
（ｉｖ）前記反応混合物中の前記ＡＬＡＳ１  ｃＤＮＡレベルを検出し（例えば、測定し）、前記ＡＬＡＳ１  ｃＤＮＡレベルが、前記ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡレベルの指標となるステップと、
を含んでなり、それによって前記対象中の循環細胞外ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡレベルをアッセイする方法において、
任意選択的に、
（ａ）前記方法が、ＰＣＲ、ｑＰＣＲまたは５’−ＲＡＣＥを含んでなり、
（ｂ）前記核酸がプローブまたはプライマーであり、および／または
（ｃ）前記核酸が検出可能部分を含んでなり、前記検出可能部分の量の検出によって、前記ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡレベルが判定される、方法。
【請求項５４】
ポルフィリン症治療の有効性が、前記対象中の循環細胞外ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡレベルと基準値との比較に基づいて評価される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポルフィリン症治療に応答する、前記基準値と比較した、前記対象中の前記循環細胞外ＡＬＡＳ１  ｍＲＮＡレベルの低下が、前記ポルフィリン症治療が有効であることを示唆する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
対象から生体液サンプルを得るステップをさらに含んでなる、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の方法であって、任意選択的に前記生体液サンプルが組織から分離され、前記生体液サンプルがエキソソームを含有する、方法。
【請求項５７】
請求項１〜２７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡと注射用水とを含んでなる、組成物。
【請求項５８】
約２００ｍｇ／ｍＬのｄｓＲＮＡを含んでなる、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
例えば、約７．０などの６．０〜７．５のｐＨを有する、請求項５７または５８に記載の組成物。
【請求項６０】
皮下注射のために調合される、請求項５７〜５９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６１】
ポルフィリン症（例えば、ＡＩＰ）または高レベルのＡＬＡおよび／またはＰＢＧを有する対象を治療する方法であって、請求項５７〜６０のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に皮下投与するステップを含んでなる、方法。
【請求項６２】
前記組成物が、例えば、２．５ｍｇ／ｋｇ以下の用量または１〜２．５ｍｇ／ｋｇの用量などの０〜５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記組成物が、毎月または毎週投与される、請求項６２に記載の方法。