【手続補正書】
【提出日】平成28年12月5日(2016.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩＧＦ−１タンパク質を含むポリペプチドであって、前記ＩＧＦ−１タンパク質の４２位におけるアミノ酸グリシンが欠失し又はセリンに変異しており、前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質のアミノ酸の番号付けが配列番号１に対応する、ポリペプチド。
【請求項２】
ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質を含むポリペプチドであって、前記ＩＧＦ−１タンパク質の４２位におけるアミノ酸グリシンが欠失し又は変異しており、アミノ酸の番号付けが配列番号５に対応する、ポリペプチド。
【請求項３】
前記ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質がヒトＩｇＧの免疫グロブリンＦｃ領域に融合している、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記４２位におけるアミノ酸グリシンがセリンに変異している、請求項２又は３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質が、Ｅａペプチド、及び、Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｒ３６、Ｒ３７、Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１、Ｓ７２、Ｒ７４、Ｒ７７、Ｇ９６、Ｓ９７、Ａ９８、Ｇ９９、Ｎ１００、Ｋ１０１、Ｎ１０２、Ｙ１０３、Ｑ１０４及びＭ１０５からなる群から選択されるアミノ酸のさらなる欠失又は変異を含む、請求項２〜４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質が、
ａ．アミノ酸Ｅ３が欠失し、
ｂ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異し、かつ、
ｃ．アミノ酸Ｒ３７がアラニンに変異している
改変を含み、前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質のアミノ酸の番号付けが配列番号１に対応する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、Ｅ−ペプチドを含み、
ａ．アミノ酸Ｅ３、Ｒ７１及びＳ７２が欠失しており、
ｂ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異しており、かつ、
ｃ．アミノ酸Ｒ３７がアラニンに変異しており、
前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質のアミノ酸の番号付けが配列番号５に対応する、請求項１〜６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸分子を含むポリヌクレオチド。
【請求項９】
治療に使用するための、請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項１０】
必要とする患者における筋障害を治療するための、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記筋障害が筋萎縮である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記４２位におけるアミノ酸グリシンが欠失している、請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６４】
ＩＧＦ−１Ｒエクソン３における野生型切断部位配列に結合するＰＣＲプライマーを設計し、変異クローンの効果的なスクリーニングを可能にした。ＩＧＦ−１Ｒについてのフォワードシークエンシングプライマーと一緒にＰＣＲを実施し、クローンがＰＣＲ陰性であった場合、ＰＣＲが常に作用していると仮定し、野生型配列は存在せず、又はクローンは十分に成長しなかった（ごくわずかのＤＮＡを抽出したので、少しの細胞が成長した）。このようにスクリーニングした３８９個の成長したクローンから、５８個は陰性であり、配列決定した。これらのクローンの３０個において、野生型配列は検出されず、２２個のクローンについて変異はフレームシフトであった（クローンΔ２２／Δ７／野生型由来の２つの配列Δ２２／Δ７を有する１３個のクローン）。５０ｍｇ／ｌのＩＧＦ−１を有する及び有さないこれらの成長を評価し、ＩＧＦ−１を有する最適な成長クローン（また、そのうちＩＧＦ−１を有さない最適な成長クローン）、配列Δ２２／Δ７（ＴＯＰＯクローニングによって検証した）を有する最適な成長クローンを、配列番号８〜１４のタンパク質をコードするＤＮＡ構築物でのトランスフェクションのために選択した。
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
ヒトＩＧＦ−１タンパク質を含むポリペプチドであって、４２位におけるアミノ酸グリシンが欠失し又は変異しており、前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質のアミノ酸の番号付けが配列番号１に対応する、ポリペプチド。
［２］
ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質を含むポリペプチドであって、４２位におけるアミノ酸グリシンが欠失し又は変異しており、アミノ酸の番号付けが配列番号５に対応する、ポリペプチド。
［３］
前記ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質がヒトＩｇＧの免疫グロブリンＦｃ領域に融合している、上記［２］に記載のポリペプチド。
［４］
前記４２位におけるアミノ酸グリシンがセリンに変異している、上記［１］〜［３］のいずれかに記載のポリペプチド。
［５］
前記ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質が、Ｅａペプチド、及び、Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｒ３６、Ｒ３７、Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１、Ｓ７２、Ｒ７４、Ｒ７７、Ｇ９６、Ｓ９７、Ａ９８、Ｇ９９、Ｎ１００、Ｋ１０１、Ｎ１０２、Ｙ１０３、Ｑ１０４及びＭ１０５からなる群から選択されるアミノ酸のさらなる欠失又は変異を含む、上記［２］〜［４］のいずれかに記載のポリペプチド。
［６］
前記ＩＧＦ−１前駆タンパク質及びＦｃ領域がペプチドヒンジ領域によって分離している、上記［３］〜［５］のいずれかに記載のポリペプチド。
［７］
前記ペプチドヒンジ領域が、ペプチドヒンジ１（配列番号２２）、ヒンジ２（配列番号２３）及びヒンジ３（配列番号２４）からなる群から選択される、上記［６］に記載のポリペプチド。
［８］
前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質が、
ａ．アミノ酸Ｅ３が欠失し、
ｂ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異し、かつ、
ｃ．アミノ酸Ｒ３７がアラニンに変異している
改変を含み、前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質のアミノ酸の番号付けが配列番号１に対応する、上記［１］に記載のポリペプチド。
［９］
前記ポリペプチドが、Ｅ−ペプチドを含み、
ａ．アミノ酸Ｅ３、Ｒ７１及びＳ７２が欠失しており、
ｂ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異しており、かつ、
ｃ．アミノ酸Ｒ３７がアラニンに変異しており、
前記ヒトＩＧＦ−１タンパク質のアミノ酸の番号付けが配列番号５に対応する、上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［１０］
前記ポリペプチドが、Ｅａペプチドを含み、
ａ．アミノ酸Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１及びＳ７２が欠失しており、
ｂ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異しており、かつ、
ｃ．アミノ酸Ｒ３６、Ｒ７４、Ｒ７７及びＲ１０４がグルタミンに変異しており、
ｄ．アミノ酸Ｒ３７がアラニンに変異している、
上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［１１］
前記ポリペプチドが、Ｅａペプチドを含み、
ａ．アミノ酸Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１及びＳ７２が欠失しており、
ｂ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異しており、
ｃ．アミノ酸Ｒ７４、Ｒ７７及びＲ１０４がグルタミンに変異しており、かつ、
ｄ．アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸に変異している、
上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［１２］
前記ポリペプチドが、Ｅａペプチドを含み、
ｅ．アミノ酸Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１、Ｓ７２、Ｇ９６、Ｓ９７、Ａ９８、Ｇ９９、Ｎ１００、Ｋ１０１、Ｎ１０２、Ｙ１０３、Ｑ１０４及び／又はＭ１０５が欠失しており、
ｆ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異しており、かつ、
ｇ．アミノ酸Ｒ３６、Ｒ７４及びＲ７７がグルタミンに変異しており、かつ、
ｈ．アミノ酸Ｒ３７がアラニンに変異している、
上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［１３］
前記ポリペプチドが、Ｅａペプチドを含み、
ｅ．アミノ酸Ｇ１、Ｐ２、Ｅ３、Ｋ６８、Ｓ６９、Ａ７０、Ｒ７１、Ｓ７２、Ｇ９６、Ｓ９７、Ａ９８、Ｇ９９、Ｎ１００、Ｋ１０１、Ｎ１０２、Ｙ１０３、Ｑ１０４及び／又はＭ１０５が欠失しており、
ｆ．アミノ酸Ｇ４２がセリンに変異しており、
ｇ．アミノ酸Ｒ７４及びＲ７７がグルタミンに変異しており、かつ、
ｈ．アミノ酸Ｒ３７がグルタミン酸に変異している、
上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［１４］
前記ＩＧＦ−１前駆タンパク質及び前記Ｆｃ領域がヒンジ１ペプチド（配列番号２２）によって分離している、上記［１０］に記載のポリペプチド。
［１５］
前記ＩＧＦ−１前駆タンパク質及び前記Ｆｃ領域がヒンジ３ペプチド（配列番号２４）によって分離している、上記［１１］に記載のポリペプチド。
［１６］
前記Ｆｃ領域がＦｃ受容体へのその結合を調節するように改変されている、上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［１７］
前記Ｆｃ領域が、
ＩＶ．Ｆｃ受容体に対するその親和性を低下させ、
Ｖ．ＡＤＣＣ活性を低下させ、又は
ＶＩ．ＡＤＣＣ活性を阻止する
ように改変されている、上記［１６］に記載のポリペプチド。
［１８］
配列番号８を含む、上記［１０］に記載のポリペプチド。
［１９］
配列番号９を含む、上記［１０］に記載のポリペプチド。
［２０］
配列番号１０を含む、上記［１２］に記載のポリペプチド。
［２１］
配列番号１１を含む、上記［１２］に記載のポリペプチド。
［２２］
配列番号１２を含む、上記［１１］に記載のポリペプチド。
［２３］
配列番号１３を含む、上記［１１］に記載のポリペプチド。
［２４］
配列番号１４を含む、上記［１３］に記載のポリペプチド。
［２５］
配列番号１１８を含む、上記［９］に記載のポリペプチド。
［２６］
前記ポリペプチドがグリコシル化されている、上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［２７］
上記［１］〜［２５］のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸分子を含むポリヌクレオチド。
［２８］
配列番号１５に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［２９］
配列番号１６に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［３０］
配列番号１７に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［３１］
配列番号１８に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［３２］
配列番号１９に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［３３］
配列番号２０に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［３４］
配列番号２１に示されている核酸分子を含む、上記［２７］に記載のポリヌクレオチド。
［３５］
治療に使用するための、上記［１］〜［２５］のいずれかに記載のポリペプチドを含む医薬組成物。
［３６］
必要とする患者における筋障害を治療するための、上記［３５］に記載の医薬組成物。
［３７］
除脂肪体重の喪失及び／又は筋肉疲労を患っている熱傷患者を治療するための、上記［３５］に記載の医薬組成物。
［３８］
ＣＯＰＤ患者を治療するための、上記［３５］に記載の医薬組成物。
［３９］
球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ又はケネディ病）患者を治療するための、上記［３５］に記載の医薬組成物。
［４０］
慢性腎疾患患者を治療するための、上記［３５］に記載の医薬組成物。
［４１］
前記筋障害が筋萎縮である、上記［３６］に記載の医薬組成物。
［４２］
前記筋萎縮が、肥満関連サルコペニア、サルコペニア及び糖尿病関連筋萎縮からなる群から選択される、上記［４１］に記載の医薬組成物。
［４３］
必要とする患者における筋障害を治療する方法であって、治療有効量の上記項目のいずれかに記載のポリペプチドを対象に投与する工程を含む、方法。
［４４］
除脂肪体重の喪失及び／又は筋肉疲労を患っている熱傷患者を治療する方法であって、治療有効量の上記項目のいずれかに記載のポリペプチドを対象に投与する工程を含む、方法。
［４５］
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者を治療する方法であって、治療有効量の上記項目のいずれかに記載のポリペプチドを対象に投与する工程を含む、方法。
［４６］
球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ又はケネディ病）患者を治療する方法であって、治療有効量の上記項目のいずれかに記載のポリペプチドを対象に投与する工程を含む、方法。
［４７］
慢性腎疾患患者を治療する方法であって、治療有効量の上記項目のいずれかに記載のポリペプチドを対象に投与する工程を含む、方法。
［４８］
前記筋障害が、肥満関連サルコペニア、サルコペニア及び糖尿病関連筋萎縮からなる群から選択される筋萎縮である、上記［４３］に記載の方法。
［４９］
前記４２位におけるアミノ酸グリシンが欠失している、上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
［５０］
前記ヒトＩＧＦ−１前駆タンパク質がペグ化されている、上記項目のいずれかに記載のポリペプチド。