【誤訳訂正書】
【提出日】平成29年6月16日(2017.6.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト皮膚腫瘍中の発癌の一般的及び特異的な特性に関するフーリエ変換赤外顕微分光法の使用方法であって、
（ｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸並びに特異的及び非特異的なタンパク質で発現された平均値を比較評価すること、
（ｉｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害のＦＴＩＲスペクトル中の、核酸について割り当てられた全てのピーク対約１２４５ｃｍ−１のピークの強度比を比較算出すること、
（ｉｉｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、特異的及び非特異的なタンパク質のために割り当てられた全てのピーク対約１６５０ｃｍ−１のアミドＩピークの強度比を比較算出すること、
（ｉｖ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸について発現された平均値の比較評価に基づいて、健康な上皮で決定されたパターンと比較することにより、一般的及び／又は特異的なパターンを決定すること、
（ｖ）良性、前癌性及び悪性の障害から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸及びタンパク質についての強度比の比較計算に基づいて、健康な上皮で決定されたパターンと比較することにより、良性、前癌性及び悪性の皮膚腫瘍の一般的なパターンを決定すること、
（ｖｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸及びタンパク質についての強度比の比較計算に基づいて、健康な上皮で決定されたパターンと比較することにより、各病状に特異的なパターンを決定すること、
を含む、方法。
【請求項２】
請求項１記載の工程を含む、良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の任意の種類に罹患した個々の患者及び患者間のための比較分析法。
【請求項３】
請求項１に記載の工程を含む、任意に分析された良性、前癌性及び悪性の皮膚障害に関する、病理の１種のための比較分析方法。
【請求項４】
請求項１に記載の工程を含む、異なる種類の表皮性皮膚癌のための比較分析方法。
【請求項５】
以下の工程を含む、計測された皮膚腫瘍の腫瘍性細胞中の活性のグレードを提示するための、請求項１〜４に記載の方法：
●以下の比率：Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均）／Ｉ（１２４５）によって、ＤＮＡ−ＲＮＡ対ＤＮＡ−タンパク質の相互作用の活性レベルを計算すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、それぞれ割り当てられた核酸のピークの平均値を計算すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、それぞれ割り当てられたタンパク質（特異的及び非特異的）のピークの平均値を計算すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、以下の強度ピーク比：Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）、Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）、Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク間の最大ピーク）／Ｉ（１２４５）を算出することによって、９００〜１３００ｃｍ−１領域における全ての決定された核酸ピークの強度を、約１２４５ｃｍ−１でのピークの強度と比較すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、以下のピーク比：Ｉ（１３１０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１３９０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１４５０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１５４０）／Ｉ（１６５０）を算出することによって、１３００〜１７００ｃｍ−１領域における特異的及び非特異的タンパク質に関する全ての決定されたピークの強度を、約１６５０ｃｍ−１でのアミドＩピークの強度と比較すること、
●多重項（約１０５５ｃｍ−１でのＤＮＡ／ＲＮＡ）の活性レベルを、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク（約１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１での）の活性レベルと比較すること。
【請求項６】
請求項５に記載の工程を含む、良性、前癌性及び悪性の皮膚組織細胞間における活性のグレードの全身性進行を分析比較する方法。
【請求項７】
請求項５に記載の工程を含む、異なる種類の病態における悪性の皮膚組織細胞の活性のグレードの全身性進行を分析比較する方法。
【請求項８】
請求項５に記載の工程を含む、ある種類の病態における悪性の皮膚組織細胞の活性のグレードの全身性進行を分析比較する方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】ＦＴＩＲ顕微分光法による皮膚の発癌の一般的及び特異的特性決定のための分析法
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）顕微分光法に基づき、皮膚癌組織における癌発生を非破壊的に特徴付けるための光学的方法を提供することに関する。より詳細には、本発明は、各種病変のＩＲスペクトル中で一般的及び特異的に発現される核酸及びタンパク質に関する分子内及び分子間相互作用の同時観察及び更なる特性決定のための分析法を提供し、また、ヒト皮膚癌組織の細胞における腫瘍活性グレードを示すための使用を見出す。
【背景技術】
【０００２】
本明細書中で言及される刊行物及び他の参考資料（本明細書で引用される参考文献を含む）は、参照によりその全体を本明細書に援用され、以下の文章では文献番号を示し、請求項の直前に添付の参考文献一覧にそれぞれ記載する。
【０００３】
多くの国において、皮膚癌に罹患する人は、他の全て癌の組み合わせよりも多い［１］が、皮膚癌の臨床的診断、監視及び治療に影響を及ぼす、皮膚癌発生中に生じる分子、細胞及び組織変化については、未だ十分に理解されていない。
【０００４】
何年もの間、マウス皮膚モデルが多段階の癌発生機序を研究する可能性をもたらしてきた［２］が、ヒト皮膚癌に対するこのモデルシステムの直接的な関連性はなかった。
【０００５】
最新の文献には、皮膚癌の発症が部分的に遺伝子制御下にあり、また、配列特異的ＤＮＡ結合タンパク質であると共に、転写活性化又は退行（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を制御し、そのため、細胞増殖を制御する転写因子（ＴＦ）が、この過程において重要であることが記載されている［３］。
【０００６】
しかしながら、既存の方法では、直接的にヒトに関する癌発生機序を研究することができず、現在のところ、既存の疑問は全て未解のままである。
【０００７】
皮膚癌の発症に関与する分子及び細胞機序をよりよく理解するために、過形成から浸潤癌まで、ある種類の癌から別の種類の癌まで、１人の患者から同じ病変を有する複数の患者まで、癌発生を直接的に特徴付けるための方法に対する必要性がある。
【０００８】
皮膚組織ＩＲ顕微分光技術は、皮膚生検の無染色組織を分光評価するためのツールであり、組織における細胞の健康な状態又は病変状態に関するインジケータとして組織の化学組成を使用する、皮膚組織切片を分析するための客観的方法である。ＩＲスペクトル情報は、皮膚細胞及び組織の化学組成変動を客観的且つ定量的に決定し、更に医学的知識へと「変換」することができる。単離された生体分子を単独で及び相互作用的に研究するための高感度ツールである。
【０００９】
最も一般的な皮膚前癌状態及び癌のスペクトル特性決定のためにＩＲ顕微分光法を適用することの実現可能性は、既に９００〜１７００ｃｍ−１領域に導入されており、タンパク質構造及び核酸塩基に関連する最も明白な変化（一般に、その領域における悪性への進行を伴う改変及び増強を示す）を明らかにしている［４］。
【００１０】
皮膚表皮癌からのＩＲスペクトルのスペクトル変動を伴う核酸及びタンパク質についてのピークの詳細なアラインメントは、約９６５ｃｍ−１でのＤＮＡピーク；約１０５５ｃｍ−１での多重項（ＤＮＡ／ＲＮＡ）；約１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１でのＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク；約１２４５ｃｍ−１でのＤＮＡ及びアミドＩＩＩの組み合わせ；約１３１０、１３９０及び１４５０ｃｍ−１での多数の非特異的（ありきたりの）タンパク質；約１５４０ｃｍ−１でのアミドＩＩ振動；及び約１６５０ｃｍ−１でのアミドＩ振動の出現を示した［５］。それにもかかわらず、ＦＴＩＲ顕微分光法によるヒト皮膚腫瘍における癌発生の一般的及び特異的特性決定に対する問題は、未だ対処されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１４５（２００９），９２６
【非特許文献２】Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，５４（１），（１９９２），６３−１２８
【非特許文献３】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１３１，（２０１１），１００２
【非特許文献４】Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ，Ｖｏｌ．１１，（２００５），１９１−２２６
【非特許文献５】Ｐｒｏｃ  ＳＰＩＥ，７９９９，（２０１１），７９９９０９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、本発明の別の目的は、皮膚癌の発生中に生じる分子、細胞及び組織変化の理解に向けて、皮膚表皮癌の赤外線（ＩＲ）スペクトルにおいて発現される核酸及びタンパク質に関する分子内及び分子間相互作用を客観的に評価するための光学分析法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
第１態様において、本発明は、ヒト生検癌組織試料における一般的及び特異的癌発生を特徴付けるために、ＦＴＩＲ顕微分光法を使用する方法を提供する。当該試料は、組織試料上の通常、良性、前癌性又は癌性細胞から構成され得る。本発明の方法は、健康な、即ち、通常の／変化していない皮膚組織からのＩＲスペクトルと比較した、良性、前癌性及び悪性皮膚癌の赤外線（ＩＲ）スペクトルにおける、核酸及びタンパク質の発現された相互作用活性レベルを用いた、それら核酸及びタンパク質に関する分子内及び分子間相互作用の同時特性決定に基づく。より詳細には、提供された方法により、各種類の癌に関する及び異なる種類の癌の間での皮膚癌発生の一般的及び特異的特性を示し、各患者における及び患者間での腫瘍細胞の活性をＦＴＩＲ顕微分光法により評価することができる。
【００１４】
皮膚表皮癌の発生は多段階過程であり、少なくとも３つの機序的に別個の過程、即ち、開始、促進及び進行を包含する。皮膚癌は一般に表皮で発症する。最も一般的な悪性皮膚癌は、基底細胞癌（ＢＣＣ）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）及び悪性黒色腫（ＭＭ）であり、これらは本発明の用途（ｕｓｅｒ）例として用いられている。本発明の工程により当該用途を更に提供するために、非浸潤表皮内癌として周知の前癌性皮膚病変例として、ボーエン病が選択されている。本発明における良性皮膚腫瘍の一般例として、良性複合母斑が選択されている。
【００１５】
本方法は、手動で行うことができ、以下の工程を含む：
ｉ．試料上の多数の病変部位からＦＴＩＲスペクトルを得ることにより、各試料に関する多数の測定値を得る工程；
ｉｉ．各測定されたＩＲスペクトルにおける、核酸に関する特定の波数領域９００〜１３００ｃｍ−１及びタンパク質に関する特定の波数領域１３００〜１７００ｃｍ−１を決定する工程；
ｉｉｉ．ＩＲスペクトルの各々をアミドＩピークに対して正規化する工程；
ｉｖ．表皮測定値を平均して試料に関する平均スペクトルを得る工程。
【００１６】
上記方法において、以下の工程により、ＦＴＩＲ顕微分光法を用いることによる測定のための生検組織試料を調製する：
ｉ．６μｍの厚さを有する厳密に連続する２つの試料カット；
ｉｉ．組織病理学的評価を行うために、１つの試料カットをヘマトキシリン及びエオシンで染色する工程；
ｉｉｉ．ＦＴＩＲスペクトルを収集するために、１つの試料カットをＣａＦ２スライドガラス上で風乾する工程。
【００１７】
本記載の全体にわたり、代表的な組織として皮膚組織が用いられているが、当業者にとって明らかであるように、本発明の方法は表皮皮膚組織の測定に限定されず、他の組織と共に利用可能であることを理解すべきである。
【００１８】
本発明の上記特性及び他の特性並びに利点を全て更に説明する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
ここで、好ましい実施形態の記載を通じて本発明を更に説明する。
【００２０】
ＦＴＩＲ顕微鏡測定は全てＪＥＯＬ社（日本、東京）のＦＴ−ＩＲ分光器「モデルＩＲ−ＭＡＵ２００」を用いて行った。各測定の前に、製造業者による機器を用いて準備した試料を使用して較正を行い、ＦＴＩＲ顕微分光器の適切な操作条件を確認した。
【００２１】
以下の例で使用されるデータは、徳島大学（日本、徳島）医学部皮膚科学科の生検アーカイブからの組織試料及び徳島大学（日本、徳島）医学部整形外科学科のイケハラ博士の厚意により得られたものである。
【００２２】
ＦＴ−ＩＲ顕微分光法のために用いられる組織試料は乾燥状態であったが、組織構造を同定するために、光学顕微鏡により観察される対応するスライドをヘマトキシリン及びエオシンで染色した。測定に使用される開口サイズは２５μｍ以上（２５  ｏｖｅｒ  ２５  ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒｓ）であった。
【００２３】
最初に、バックグラウンドスペクトルを収集した。可視光を用いて測定部位を選択した後、顕微鏡をＩＲモードに変更した。共添加スキャン数を１２７に上げ、高い信号対雑音比を達成した。測定したスペクトルは、４ｃｍ−１の分解能で、８００〜４０００ｃｍ−１の波数範囲に及んだ。
【００２４】
病変表皮及び非病変表皮の両方の表皮において測定された合計１９８スペクトルを含むデータベースが、悪性腫瘍患者１３名：基底細胞癌（ＢＣＣ）（６名）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）（４名）、悪性黒色腫（ＭＭ）（３名）から；良性腫瘍患者４名：良性複合母斑（４名）から；前癌状態患者３名：ボーエン病（３名）から；及び健康な被検体４名から作成された。
【００２５】
本発明の方法は、健康な被検体からのＩＲスペクトルと比較して、ＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭ、ボーエン病及び良性複合母斑のＩＲスペクトルにおける核酸及びタンパク質に関する活性レベルを決定するための以下の工程を包含していた：
●各決定された核酸ピークの平均値を算出する工程；
●各決定されたタンパク質（特異的および非特異的）のピークの平均値を算出する工程；
●以下の強度ピーク比：Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）、Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）、Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク間の最大ピーク）／Ｉ（１２４５）を算出することによって、９００〜１３００ｃｍ−１領域における全ての決定された核酸ピークの強度を、約１２４５ｃｍ−１でのピークの強度と比較する工程；
●以下のピーク比：Ｉ（１３１０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１３９０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１４５０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１５４０）／Ｉ（１６５０）を算出することによって、１３００〜１７００ｃｍ−１領域における特異的及び非特異的タンパク質に関する全ての決定されたピークの強度を、約１６５０ｃｍ−１でのアミドＩピークの強度と比較する工程；
●以下の比：Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均）／Ｉ（１２４５）によってＤＮＡ−ＲＮＡ対ＤＮＡ−タンパク質相互作用の活性レベルを算出する工程；
●多重項（ＤＮＡ／ＲＮＡ）の活性レベルを、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおけるピークの活性レベルと比較する工程。
【００２６】
実施例で提供されたＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭ、ボーエン病、良性複合母斑患者及び健康な被検体から得られたデータの概要を以下に示す。
【実施例】
【００２７】
核酸に関する分子内及び分子間相互作用
【００２８】
実施例１
ＢＣＣ
核酸ピーク平均値（９６５ｃｍ−１、１０５５ｃｍ−１、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピーク）、強度比及び比率（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）に関する、ＢＣＣ患者６名の表皮で測定されたスペクトルデータ。
【００２９】
発現された平均値対比率に基づく、患者６名における２つのＢＣＣパターン：
●９６５平均＜１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク平均
●９６５平均＜１０５５平均＞ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク平均
１）０．３５＜０．４４＜０．４５  ｖｓ．  ［１：１］
２）０．３１＜０．４３＜０．４８  ｖｓ．  ［１：１］
３）０．３５＜０．４２＞０．４０  ｖｓ．  ［１：１］
４）０．１１＜０．１９＞０．１８  ｖｓ．  ［０．８：１］
５）０．０８＜０．１４＜０．１６  ｖｓ．  ［０．８：１］
６）０．０９＝０．０９＜０．２３  ｖｓ．  ［０．８：１］
【００３０】
算出された強度比対比率に基づく、患者６名における１つのＢＣＣパターン：
●Ｉ（９６５）／Ｉ（ｌ２４５）＜Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）（活性グレードに依存していない）
１）０．７５＜０．９４＜０．９６  ｖｓ．  ［１：１］
２）０．７１＜０．９８＜１．０９  ｖｓ．  ［１：１］
３）０．８８＜１．０５＜１．００  ｖｓ．  ［１：１］
４）０．５０＜０．８７＜０．８２  ｖｓ．  ［０．８：１］
５）０．３８＜０．６７＜０．７６  ｖｓ．  ［０．８：１］
６）０．４５＜０．４５＜１．１５  ｖｓ．  ［０．８：１］
【００３１】
実施例２
ＳＣＣ
核酸ピーク平均値（９６５ｃｍ−１、１０５５ｃｍ−１、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピーク）、強度比及び比率（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）に関する、ＳＣＣ患者４名の表皮で測定されたスペクトルデータ。
【００３２】
発現された平均値対比率に基づく、患者４名における３つのＳＣＣパターン：
９６５平均＜１０５５平均＞ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク平均  ｖｓ．  ［１：１］
９６５平均＜１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク平均  ｖｓ．  ［０．９：１］
９６５平均＞１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク平均  ｖｓ．  ［０．７：１］
１）０．６０＜０．６６＞０．６５  ｖｓ．  ［１：１］
２）０．２６＜０．３０＜０．３５  ｖｓ．  ［０．９：１］
３）０．１９＞０．１３＜０．１６  ｖｓ．  ［０．７：１］
４）０．０７＞（−）＜０．１２  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００３３】
算出された強度比対比率に基づく、患者４名における２つのＳＣＣパターン：
●Ｉ（９６５）／Ｉ（ｌ２４５）＜Ｉ（１０５５）／Ｉ（ｌ２４５）＞Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）（約１０５５ｃｍ−１でのピークの高い活性レベルに関する）
●Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）＞Ｉ（１０５５）／Ｉ（ｌ２４５）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）（約１０５５ｃｍ−１でのピークの低い活性レベルに関する）
１）０．９１＜１．００＞０．９９  ｖｓ．  ［１：１］
２）０．７０＜０．８１＞０．７８  ｖｓ．  ［０．９：１］
３）０．４１＜０．７７＞０．７１  ｖｓ．  ［０．７：１］
４）０．９１＞（−）＜０．７６  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００３４】
実施例３
ＭＭ
核酸ピーク平均値（９６５ｃｍ−１、１０５５ｃｍ−１、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピーク）、強度比及び比率（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）に関する、ＭＭ患者３名の表皮で測定されたスペクトルデータ。
【００３５】
発現された平均値対比率に基づく、患者３名における２つのＭＭパターン：
●９６５平均＞１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク
●９６５平均＜１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク
１）０．１９＞０．１４＜０．２７  ｖｓ．  ［０．８：１］
２）０．２５＞（−）＜０．３５  ｖｓ．  ［０．７：１］
３）０．２３＜０．２６＜０．３０  ｖｓ．  ［０．８：１］
【００３６】
算出された強度比対比率に基づく、患者３名における２つのＭＭパターン：
●Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）
●Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）＞Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）
１）０．６１＜０．６９＜０．７９  ｖｓ．  ［０．８：１］
２）０．６３＞０．４７＜０．９０  ｖｓ．  ［０．８：１］
３）０．５２＞（−）＜０．７３  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００３７】
実施例４
ボーエン病（ＢＤ）
核酸ピーク平均値（９６５ｃｍ−１、１０５５ｃｍ−１、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピーク）、強度比及び比率（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）に関する、ＢＣＮ患者４名の表皮で測定されたスペクトルデータ。
【００３８】
平均値に基づく、患者３名における１つのＢＤパターン：
●９６５平均＜１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク平均（活性グレードに依存していない）
１）（−）（−）０．０７  ｖｓ．  ［０．７：１］
２）０．０９＜０．１５＜０．１８  ｖｓ．  ［０．８：１］
３）０．２３＜０．２６＜０．２９  ｖｓ．  ［０．９：１］
【００３９】
強度比に基づく、患者３名における１つのＢＤパターン：Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）（活性グレードに依存していない）
１）（−）（−）０．６４  ｖｓ．  ［０．７：１］
２）０．４１＜０．６８＜０．８２  ｖｓ．  ［０．８：１］
３）０．７０＜０．７９＜０．８８  ｖｓ．  ［０．９：１］
【００４０】
実施例５
良性複合母斑（ＢＣＮ）
核酸ピーク平均値（９６５ｃｍ−１、１０５５ｃｍ−１、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピーク）、強度比及び比率（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）に関する、ＢＣＮ患者４名の表皮で測定されたスペクトルデータ。
【００４１】
発現された平均値対比率に基づく、患者４名における１つのＢＣＮパターン：
●９６５平均＜１０５５平均＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク
１）０．１５＜０．２２＜０．２３  ｖｓ．  ［０．８：１］
２）０．１５＜０．１９＜０．２２  ｖｓ．  ［０．７：１］
３）０．１８＜０．２４＜０．２７  ｖｓ．  ［０．９：１］
４）０．１２＜０．１７＜０．１９  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００４２】
算出された強度比対比率に基づく、患者４名における１つのＢＣＮパターン：
●Ｉ（９６５）／Ｉ（ｌ２４５）＜Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）（活性グレードに依存していない）
１）０．４８＜０．７１＜０．７８  ｖｓ．  ［０．８：１］
２）０．４７＜０．５９＜０．７２  ｖｓ．  ［０．７：１］
３）０．５６＜０．７５＜０．８４  ｖｓ．  ［０．９：１］
４）０．４８＜０．６８＜０．７６  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００４３】
実施例６
健康な皮膚（ＨＳ）
発現された平均値対比率に基づくＨＳパターン：
●９６５平均＞（ピーク発現なし）＜ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク
１）０．１５＞（−）＜０．２７  ｖｓ．  ［０．５：１］
２）０．２４＞（−）＜０．４７  ｖｓ．  ［０．５：１］
３）０．１７＞（−）＜０．２２  ｖｓ．  ［０．７：１］
４）０．２２＞（−）＜０．３０  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００４４】
算出された強度比対比率に基づくＨＳパターン：
●Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）＞（ピーク発現なし）＜Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの最大ピーク）／Ｉ（１２４５）
１）０．４１＞（−）＜０．７５  ｖｓ．  ［０．５：１］
２）０．５１＞（−）＜１．００  ｖｓ．  ［０．５：１］
３）０．３８＞（−）＜０．４９  ｖｓ．  ［０．７：１］
４）０．５１＞（−）＜０．７０  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００４５】
結果
提示された実施例１〜５に基づいて、約１０５５ｃｍ−１での多重項の活性レベルは、ＢＣＣ患者６名のうち５名において、ＳＣＣ患者４名のうち３名において、ＭＭ患者３名のうちの１名のみにおいて、並びにＢＣＮ及びＢＤ患者全員において、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド（１０７１、１０８４、１０９５ｃｍ−１）において発現された最も顕著なピークの活性レベルと強く相関していた。しかしながら、算出された比率は、悪性と良性／前癌性との間の強度比及び平均値で異なっており、悪性皮膚腫瘍においてより高いものであった。
【００４６】
Ｉ９６５＜Ｉ１０５５＜ＩＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの最大レベルとしてのＤＮＡ−ＲＮＡ及びＤＮＡ−ＤＮＡ相互作用に関するパターン認識は、ＢＣＣ患者６名全員において最も明瞭に観察され、全核酸ピークの発現された活性レベルに依存していなかった。ＤＮＡ−ＲＮＡ及びＤＮＡ−ＤＮＡ相互作用に関する同じパターン認識がボーエン病及び良性複合母斑患者全員において認められ、これもまた全核酸ピークによって発現された活性レベルに依存していなかった。
【００４７】
Ｉ９６５＜Ｉ１０５５＜ＩＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの最大レベルとしてのＤＮＡ−ＲＮＡ及びＤＮＡ−ＤＮＡ相互作用に関するパターン認識は、約１０５５ｃｍ−１での多重項の活性レベルが最も高いＳＣＣ患者３名において明瞭に認められた。
【００４８】
２名のＭＭ患者において、Ｉ９６５＞Ｉ１０５５＜ＩＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの最大レベルとしてのＤＮＡ−ＲＮＡ及びＤＮＡ−ＤＮＡ相互作用に関するパターン認識は独特であり、その他の病変では認められず、三重項の活性レベルは最低であった。
【００４９】
４名の健康な被検体において、Ｉ９６５＞（ピーク発現なし）＜ＩＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの最大レベルとしてのＤＮＡ−ＲＮＡ及びＤＮＡ−ＤＮＡ相互作用に関するパターン認識は、上記全ての測定された病変とは異なり、表皮における約１０５５ｃｍ−１での多重項の発現はなかった。
【００５０】
タンパク質に関する分子内及び分子間相互作用
実施例１
ＢＣＣ
１）ＢＣＣ：０．５＞０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
２）ＢＣＣ：０．５＞０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
３）ＢＣＣ：０．４＝０．４＜０．５＝０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
４）ＢＣＣ：０．２＝０．２＜０．３＝０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．８：１］
５）ＢＣＣ：０．２＝０．２＜０．３＝０．３＜０．８＜１．０  ｖｓ．［０．８：１］
６）ＢＣＣ：０．２＝０．２＜０．３＜０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．８：１］
【００５１】
実施例２
ＳＣＣ
１）ＳＣＣ：０．７＞０．６＜０．７＝０．７＜０．９＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
２）ＳＣＣ：０．４＝０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．９：１］
３）ＳＣＣ：０．２＝０．２＜０．３＝０．３＜０．６＜１．０  ｖｓ．［０．７：１］
４）ＳＣＣ：０．２＝０．２＝０．２＝０．２＜０．６＜１．０  ｖｓ．［０．７：１］
【００５２】
実施例３
ＭＭ
１）ＭＭ：０．４＝０．４＜０．５＝０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
２）ＭＭ：０．３＝０．３＜０．４＝０．４＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
３）ＭＭ：０．５＞０．４＜０．５＝０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００５３】
実施例４
ＳＣＣ対ボーエン病（ＢＤ）
１）ＳＣＣ：０．７＞０．６＜０．７＝０．７＜０．９＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
２）ＳＣＣ：０．４＝０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．９：１］
３）ＢＤ：０．３＜０．３＜０．４＝０．４＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．９：１］
４）ＢＤ：０．２＝０．２＜０．３＝０．３＜０．６＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
５）ＳＣＣ：０．２＝０．２＜０．３＝０．３＜０．６＜１．０  ｖｓ．［０．７：１］
６）ＳＣＣ：０．２＝０．２＝０．２＝０．２＜０．６＜１．０  ｖｓ．［０．７：１］
７）ＢＤ：０．１＝０．１＜０．２＝０．２＜０．６＜１．０  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００５４】
実施例５
ＭＭ対良性複合母斑（ＢＣＮ）
１）ＢＣＮ：０．３＞０．２＜０．３＜０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．９：１］
２）ＢＣＮ：０．３＞０．２＜０．３＜０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．９：１］
３）ＢＣＮ：０．３＞０．２＜０．３＝０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．８：１］
４）ＢＣＮ：０．３＞０．２＜０．３＝０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．７：１］
５）ＢＣＮ：０．３＝０．３＜０．４＝０．４＜０．８＜１．０  ｖｓ．［０．７：１］
１）ＭＭ：０．４＝０．４＜０．５＝０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
２）ＭＭ：０．３＝０．３＜０．４＝０．４＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
３）ＭＭ：０．５＞０．４＜０．５＜０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．７：１］
【００５５】
全ての測定された病態
１）ＢＣＣ：０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
２）ＢＣＣ：０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
３）ＢＣＣ：０．４＜０．５＝０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
４）ＳＣＣ：０．６＜０．７＝０．７＜０．９＜１．０  ｖｓ．  ［１：１］
５）ＳＣＣ：０．４＝０．４＝０．４＜０．７＜１．０  ｖｓ．［０．９：１］
６）ＭＭ：０．４＜０．５＝０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
７）ＭＭ：０．３＜０．４＝０．４＜０．８＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
８）ＢＣＣ：０．２＜０．３＝０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
９）ＢＣＣ：０．２＜０．３＝０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
１０）ＢＣＣ：０．２＜０．３＝０．３＜０．７＜１．０  ｖｓ．  ［０．８：１］
１１）ＳＣＣ：０．２＜０．３＝０．３＜０．６＜１．０  ｖｓ．  ［０．７：１］
１２）ＳＣＣ：０．２＝０．２＝０．２＜０．６＜１．０  ｖｓ．  ［０．７：１］
１３）ＭＭ：０．４＜０．５＜０．５＜０．８＜１．０  ｖｓ．    ［０．７：１］
【００５６】
結果
ＤＮＡ−タンパク質相互作用に関する提示されたデータは、１３１０、１３９０及び１４５０ｃｍ−１でのＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークと非描写的タンパク質との強度の間で概ね発現し、ＢＣＣとＳＣＣとの間では一致していたが、ＭＭでは一致していなかった。
【００５７】
タンパク質−タンパク質相互作用は患者間で同様であり、組織の細胞における活性グレードを示した。
【００５８】
ＢＣＣ患者及びＳＣＣ患者の間で、非描写的タンパク質のレベルは一般に０．２〜０．７の間で様々であった。３名のＢＣＣ患者において、Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均）／Ｉ（１２４５）は［１：１］であり、それらの非描写的タンパク質レベルは０．４〜０．５のレベルで安定していた。３名のＭＭ患者において、そのＩ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均）／Ｉ（１２４５）が［０．７：１］及び［０．８：１］である場合に同様のレベルが観察された。ＳＣＣ患者全員において、非描写的タンパク質レベルは最も高感度であり、Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均）／Ｉ（１２４５）の活性を明瞭に示した。タンパク質−タンパク質相互作用は、Ｉ（アミドＩＩ）／Ｉ（アミドＩ）と約１３１０、１３９０及び１４５０ｃｍ−１でのピークの平均値との間の相関によって観察された。タンパク質−タンパク質相互作用は皮膚がんの間で同様であり、一般には組織の細胞において低、中及び高活性を示した。
【００５９】
参考文献；
1. Federman, D.G., Concato, J., irsner, R.S., "Screening for skin cancer: absence of evidence", Arch. Dermatol., 145, (2009), 926.
2. DiGiovanni, J., "Multistage carcinogenesis in mouse skin", Pharmacol. Ther., 54 (1), (1992), 63-128.
3. Chimento, S.M., Kirsner, R.S., "Understanding the role of c-Jun and Jun B transcription factors in skin cancer development", J. Invest. Dermatol., 131, (2011), 1002. 
4. Eikje, N.S., Aizawa, K., Ozaki, Y., "Vibrational spectroscopy for molecular characterization and diagnosis of benign, premalignant and malignant skin tumours", Biotechnology Annual Review, Vol. 11, (2005), 191-226.
5. Eikje, N.S., "Numerical modeling and analytical treatment of ER spectra in the diagnosis of skin cancers", In: SFM 2010: Optical Technologies in Biophysics and Medicine XII (Eds. Tuchin, V. V., Genina, E.A.), Proc SPIE, 7999, (2011), 799909.
【００６０】
クレーム
１．ヒト皮膚腫瘍中の発癌の一般的及び特異的な特性に関するフーリエ変換赤外顕微分光法の使用方法であって、
（ｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸並びに特異的及び非特異的なタンパク質で発現された平均値を比較評価すること、
（ｉｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害のＦＴＩＲスペクトル中の、核酸について割り当てられた全てのピーク対約１２４５ｃｍ−１のピークの強度比を比較算出すること、
（ｉｉｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、特異的及び非特異的なタンパク質のために割り当てられた全てのピーク対約１６５０ｃｍ−１のアミドＩピークの強度比を比較算出すること、
（ｉｖ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸について発現された平均値の比較評価に基づいて、健康な上皮で決定されたパターンと比較することにより、一般的及び／又は特異的なパターンを決定すること、
（ｖ）良性、前癌性及び悪性の障害から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸及びタンパク質についての強度比の比較計算に基づいて、健康な上皮で決定されたパターンと比較することにより、良性、前癌性及び悪性の皮膚腫瘍の一般的なパターンを決定すること、
（ｖｉ）良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の上皮から得られたＦＴＩＲスペクトル中の、核酸及びタンパク質についての強度比の比較計算に基づいて、健康な上皮で決定されたパターンと比較することにより、各病状に特異的なパターンを決定すること、
を含む、方法。
２．請求項１記載の工程を含む、良性、前癌性及び悪性の皮膚障害の任意の種類に罹患した個々の患者及び患者間のための比較分析法。
３．請求項１に記載の工程を含む、任意に分析された良性、前癌性及び悪性の皮膚障害に関する、病理の１種のための比較分析方法。
４．請求項１に記載の工程を含む、異なる種類の表皮性皮膚癌のための比較分析方法。
５．以下の工程を含む、計測された皮膚腫瘍の腫瘍性細胞中の活性のグレードを提示するための、請求項１〜４に記載の方法：
●以下の比率：Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均）／Ｉ（１２４５）によって、ＤＮＡ−ＲＮＡ対ＤＮＡ−タンパク質の相互作用の活性レベルを計算すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、それぞれ割り当てられた核酸のピークの平均値を計算すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、それぞれ割り当てられたタンパク質（特異的及び非特異的）のピークの平均値を計算すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、以下の強度ピーク比：Ｉ（９６５）／Ｉ（１２４５）、Ｉ（１０５５）／Ｉ（１２４５）、Ｉ（ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク間の最大ピーク）／Ｉ（１２４５）を算出することによって、９００〜１３００ｃｍ−１領域における全ての決定された核酸ピークの強度を、約１２４５ｃｍ−１でのピークの強度と比較すること、
●比率、即ち、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの合計平均対１２４５ｃｍ−１）との比較により、以下のピーク比：Ｉ（１３１０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１３９０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１４５０）／Ｉ（１６５０）、Ｉ（１５４０）／Ｉ（１６５０）を算出することによって、１３００〜１７００ｃｍ−１領域における特異的及び非特異的タンパク質に関する全ての決定されたピークの強度を、約１６５０ｃｍ−１でのアミドＩピークの強度と比較すること、
●多重項（約１０５５ｃｍ−１でのＤＮＡ／ＲＮＡ）の活性レベルを、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク（約１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１での）の活性レベルと比較すること。
６．請求項５に記載の工程を含む、良性、前癌性及び悪性の皮膚組織細胞間における活性のグレードの全身性進行を分析比較する方法。
７．請求項５に記載の工程を含む、異なる種類の病理における悪性の皮膚組織細胞の活性のグレードの全身性進行を分析比較する方法。
８．請求項５に記載の工程を含む、１種類の病理における悪性の皮膚組織細胞の活性のグレードの全身性進行を分析比較する方法。