【手続補正書】
【提出日】平成28年12月2日(2016.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２種以上のドナー株由来のバックボーンセグメントを含むリアソータントインフルエンザＡウイルスであって、ここで少なくとも１つのバックボーンセグメントはＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９インフルエンザ株に由来する、リアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項２】
ＨＡセグメントおよびＰＢ１セグメントは、Ｈ１インフルエンザ株に由来する、請求項１に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項３】
前記Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９インフルエンザ株に由来する前記少なくとも１種のバックボーンセグメントは、ＰＢ１セグメントである、請求項１に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項４】
前記ＰＢ１セグメントは、配列番号１６の配列と少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％または１００％の同一性を有する、請求項３に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項５】
ＨＡセグメントは、Ｈ１インフルエンザ株に由来する、請求項１、３または４のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項６】
ＰＢ１セグメントおよびＰＢ２セグメントは、同じドナー株に由来する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項７】
以下：
ａ）配列番号１の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＰＡセグメント、
ｂ）配列番号３の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＰＢ２セグメント、
ｃ）配列番号５の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＭセグメント、
ｄ）配列番号４の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＮＰセグメント、および／または
ｅ）配列番号６の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＮＳセグメント、
からなる群より選択される１種以上のゲノムセグメントをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項８】
前記ウイルスは、
ａ）配列番号１の配列と９５％の同一性を有するＰＡセグメント、配列番号３の配列と９５％の同一性を有するＰＢ２セグメント、配列番号５の配列と９５％の同一性を有するＭセグメント、配列番号４の配列と９５％の同一性を有するＮＰセグメント、および配列番号６の配列と９５％の同一性を有するＮＳセグメント、あるいは
ｂ）配列番号１の配列を有するＰＡセグメント、配列番号３の配列を有するＰＢ２セグメント、配列番号５の配列を有するＭセグメント、配列番号４の配列を有するＮＰセグメントおよび配列番号６の配列を有するＮＳセグメント
を含む、請求項７に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項９】
ａ）２種、３種もしくは４種のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含み、ここで各ドナー株は、１種より多くのバックボーンセグメントを提供するか、
ｂ）２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含み、ここでＰＢ１セグメントは、Ａ／Ｔｅｘａｓ／１／７７インフルエンザ株に由来しないか、または
ｃ）２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含み、ここで少なくともＰＡ、ＮＰ、もしくはＭセグメントは、Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ  Ｒｉｃｏ／８／３４に由来しない、
請求項１〜８のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項１０】
ゲノムセグメントのうちの少なくとも１種は、以下：
ａ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号３と整列させた場合に、配列番号３のアミノ酸３８９に対応する位置にリジンを有するＰＢ２ゲノムセグメント；および／または
ｂ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号３と整列させた場合に、配列番号３のアミノ酸５５９に対応する位置にアスパラギンを有するＰＢ２ゲノムセグメント；および／または
ｃ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、配列番号１のアミノ酸３２７に対応する位置にリジンを有するＰＡゲノムセグメント；および／または
ｄ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、配列番号１のアミノ酸４４４に対応する位置にアスパラギン酸を有するＰＡゲノムセグメント；および／または
ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、配列番号１のアミノ酸６７５に対応する位置にアスパラギン酸を有するＰＡゲノムセグメント；および／または
ｆ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号４と整列させた場合に、配列番号４のアミノ酸２７に対応する位置にスレオニンを有するＮＰゲノムセグメント；および／または
ｇ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号４と整列させた場合に、配列番号４のアミノ酸３７５に対応する位置にアスパラギンを有するＮＰゲノムセグメント
からなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項１１】
ａ）前記ＰＢ２セグメントは、ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号３と整列させた場合に、配列番号３のアミノ酸３８９に対応する位置にリジンを、および配列番号３のアミノ酸５５９に対応する位置にアスパラギンを有する、
ｂ）前記ＰＡゲノムセグメントは、ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、アミノ酸３２７に対応する位置にリジンを；配列番号１のアミノ酸４４４に対応する位置にアスパラギン酸を、およびアミノ酸６７５に対応する位置にアスパラギン酸を有する、
ｃ）前記ＮＰゲノムセグメントは、ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号４と整列させた場合に、配列番号４のアミノ酸２７に対応する位置にスレオニンを、およびアミノ酸３７５に対応する位置にアスパラギンを有する、
請求項１０に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項１２】
前記インフルエンザＡ株は、Ｈ１株である、請求項１０または１１に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
【請求項１３】
リアソータントインフルエンザＡウイルスを調製する方法であって、前記方法は、
（ｉ）培養宿主に、インフルエンザＡウイルスを生成するために必要とされるウイルスセグメントをコードする１種以上の発現構築物を導入する工程であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントをコードし、ＰＢ１バックボーンウイルスセグメントは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９に由来する、工程；ならびに
（ｉｉ）リアソータントウイルスを生成するために、前記培養宿主を培養する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】
ａ）前記発現構築物は、配列番号９および１１〜１４の配列と少なくとも９０％の同一性もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの全てを含む、
ｂ）前記ＨＡセグメントは、Ｈ１インフルエンザウイルスに由来する、
請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
インフルエンザウイルスを生成するための方法であって、前記方法は：
（ａ）培養宿主を請求項１〜１２のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザウイルスに感染させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の宿主を培養して、前記ウイルスを生成する工程；および必要に応じて、
（ｃ）工程（ｂ）で生成したウイルスを精製する工程
を包含する、方法。
【請求項１６】
ワクチンを調製する方法であって、前記方法は：
（ａ）請求項１５に記載の方法によってウイルスを調製する工程、および
（ｂ）前記ウイルスからワクチンを調製する工程、
を包含する、方法。
【請求項１７】
前記培養宿主は、
（ａ）孵化鶏卵である、または
（ｂ）哺乳動物細胞である、
請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞は、ＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞もしくはＰｅｒＣ６細胞である、請求項１７（ｂ）に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）前記細胞は、接着して増殖する、または
（ｂ）前記細胞は、懸濁物中で増殖する、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＭＤＣＫ細胞は、細胞株ＭＤＣＫ  ３３０１６（ＤＳＭ  ＡＣＣ２２１９）である、請求項１９（ｂ）に記載の方法。
【請求項２１】
ａ）工程（ｂ）は、前記ウイルスを不活性化する工程を包含する、かつ／または
ｂ）前記ワクチンは、全ビリオンワクチン、スプリットビリオンワクチン、表面抗原ワクチンまたはビロソームワクチンである、かつ／または
ｃ）前記ワクチンは、１用量あたり、１０ｎｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含む、
請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記インフルエンザ株のうちの少なくとも１種は、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ７もしくはＨ９サブタイプである、請求項１３〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
インフルエンザＡウイルスのセグメントをコードするｖＲＮＡを含む１種以上の発現構築物を含む発現系であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のインフルエンザドナー株に由来するバックボーンウイルスセグメントをコードし、ＰＢ１セグメントは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９に由来する、発現系。
【請求項２４】
ａ）前記発現構築物は、ＰＲ８−Ｘ由来のＰＢ２、ＮＰ、ＮＳ、ＭおよびＰＡセグメントをコードするｖＲＮＡをさらに含み得る、かつ／または
ｂ）前記少なくとも１種の発現構築物は、配列番号２２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有する配列を含む、かつ／または
ｃ）前記発現構築物は、配列番号９および／もしくは１１〜１４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの１以上をさらに含む、
請求項２３に記載の発現系。
【請求項２５】
前記発現構築物は、配列番号９および１１〜１４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの全てを含む、請求項２４（ｃ）に記載の発現系。
【請求項２６】
請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の発現系を含む、宿主細胞。
【請求項２７】
前記宿主細胞は、哺乳動物細胞である、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
前記宿主細胞は、ＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞もしくはＰｅｒＣ６細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６６】
２つの核酸配列の間のパーセンテージ配列同一性への言及は、整列された場合、塩基のパーセンテージが、上記２つの配列を比較することにおいて同じであることを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性もしくは配列同一性は、当該分野で公知のソフトウェアプログラム（例えば、参考文献７１の第７．７．１８節において記載されるもの）を使用して決定され得る。好ましいアラインメントプログラムは、好ましくは、デフォルトパラメーター（これは、以下のとおりである：オープンギャップ＝３；伸長ギャップ＝１）を使用する、ＧＣＧ  Ｇａｐ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｓｕｉｔｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．１）である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
２種以上のドナー株由来のバックボーンセグメントを含むリアソータントインフルエンザＡウイルスであって、ここでＨＡセグメントおよびＰＢ１セグメントは、同じインフルエンザウイルスＨＡサブタイプを有する異なるインフルエンザＡウイルスに由来する、リアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目２）
バックボーンセグメントＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ２、ＮＰ、ＮＳおよびＭを含むリアソータントインフルエンザＡウイルスであって、ここで前記バックボーンセグメントは、２種以上のドナー株に由来し、前記インフルエンザＡウイルスは、ＨＡおよびＮＡセグメントをさらに含み、前記ＨＡおよび前記ＰＢ１セグメントは、同じインフルエンザウイルスＨＡサブタイプを有する異なるインフルエンザＡ株に由来する、リアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目３）
前記ＨＡセグメントおよび前記ＰＢ１セグメントは、Ｈ１インフルエンザ株に由来する、項目１または項目２に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目４）
２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含むリアソータントインフルエンザＡウイルスであって、ここでＨＡセグメントおよびＰＢ１セグメントは、異なるインフルエンザウイルスＨＡサブタイプを有する異なるインフルエンザＡ株に由来し、前記ＰＢ１セグメントは、Ｈ３  ＨＡサブタイプを有するインフルエンザウイルスに由来せず、そして／または前記ＨＡセグメントは、Ｈ１  ＨＡサブタイプもしくはＨ５  ＨＡサブタイプを有するインフルエンザウイルスに由来しない、リアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目５）
前記ＰＢ１セグメントは、Ｈ１ウイルスに由来するか、そして／または前記ＨＡセグメントは、Ｈ３インフルエンザウイルスに由来する、項目４に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目６）
２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含むリアソータントインフルエンザＡウイルスであって、ここで少なくとも１つのバックボーンセグメントは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９インフルエンザ株に由来する、リアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目７）
バックボーンセグメントＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ２、ＮＰ、ＮＳおよびＭを含むリアソータントインフルエンザＡウイルスであって、ここで前記バックボーンセグメントは、２種以上のドナー株に由来し、そして少なくとも１種のバックボーンセグメントは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９インフルエンザ株に由来する、リアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目８）
前記少なくとも１種のバックボーンセグメントは、ＰＢ１セグメントである、項目６または項目７に記載のリアソータントインフルエンザウイルス。
（項目９）
前記ＰＢ１セグメントは、配列番号１６の配列と少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％の同一性を有する、項目８に記載のリアソータントインフルエンザウイルス。
（項目１０）
前記ＰＢ１セグメントは、配列番号１６の配列を有する、項目９に記載のリアソータントインフルエンザウイルス。
（項目１１）
前記ＨＡセグメントは、Ｈ１インフルエンザ株に由来する、項目６〜１０のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザウイルス。
（項目１２）
前記ＰＢ１セグメントおよび前記ＰＢ２セグメントは、同じドナー株に由来する、項目１〜１１のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１３）
以下：
ａ）配列番号１の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＰＡセグメント、
ｂ）配列番号３の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＰＢ２セグメント、
ｃ）配列番号５の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＭセグメント、
ｄ）配列番号４の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＮＰセグメント、および／または
ｅ）配列番号６の配列と少なくとも９５％もしくは９９％の同一性を有するＮＳセグメント、
からなる群より選択される１種以上のゲノムセグメントをさらに含む、項目１〜１２のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１４）
前記ウイルスは、配列番号１の配列と９５％の同一性を有するＰＡセグメント、配列番号３の配列と９５％の同一性を有するＰＢ２セグメント、配列番号５の配列と９５％の同一性を有するＭセグメント、配列番号４の配列と９５％の同一性を有するＮＰセグメント、および配列番号６の配列と９５％の同一性を有するＮＳセグメントを含む、項目１３に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１５）
前記ウイルスは、配列番号１の配列を有するＰＡセグメント、配列番号３の配列を有するＰＢ２セグメント、配列番号５の配列を有するＭセグメント、配列番号４の配列を有するＮＰセグメントおよび配列番号６の配列を有するＮＳセグメントを含む、項目１４に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１６）
２種、３種もしくは４種のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含み、ここで各ドナー株は、１種より多くのバックボーンセグメントを提供する、項目１〜１５のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１７）
２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含み、ここで前記ＰＢ１セグメントは、Ａ／Ｔｅｘａｓ／１／７７インフルエンザ株に由来しない、項目１〜１６のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１８）
２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントを含み、ここで少なくとも前記ＰＡ、ＮＰ、もしくはＭセグメントは、Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ  Ｒｉｃｏ／８／３４に由来しない、項目１〜１７のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目１９）
前記ゲノムセグメントのうちの少なくとも１種は、以下：
ａ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号３と整列させた場合に、配列番号３のアミノ酸３８９に対応する位置にリジンを有するＰＢ２ゲノムセグメント；および／または
ｂ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号３と整列させた場合に、配列番号３のアミノ酸５５９に対応する位置にアスパラギンを有するＰＢ２ゲノムセグメント；および／または
ｃ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、配列番号１のアミノ酸３２７に対応する位置にリジンを有するＰＡゲノムセグメント；および／または
ｄ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、配列番号１のアミノ酸４４４に対応する位置にアスパラギン酸を有するＰＡゲノムセグメント；および／または
ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、配列番号１のアミノ酸６７５に対応する位置にアスパラギン酸を有するＰＡゲノムセグメント；および／または
ｆ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号４と整列させた場合に、配列番号４のアミノ酸２７に対応する位置にスレオニンを有するＮＰゲノムセグメント；および／または
ｇ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号４と整列させた場合に、配列番号４のアミノ酸３７５に対応する位置にアスパラギンを有するＮＰゲノムセグメント
からなる群より選択される、項目１〜１８のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡウイルス。
（項目２０）
ＰＢ２セグメントは、ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号３と整列させた場合に、配列番号３のアミノ酸３８９に対応する位置にリジンを、および配列番号３のアミノ酸５５９に対応する位置にアスパラギンを有する、項目１９に記載のリアソータントインフルエンザＡ株。
（項目２１）
前記ＰＡゲノムセグメントは、ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１と整列させた場合に、アミノ酸３２７に対応する位置にリジンを；配列番号１のアミノ酸４４４に対応する位置にアスパラギン酸を、およびアミノ酸６７５に対応する位置にアスパラギン酸を有する、項目１９に記載のリアソータントインフルエンザＡ株。
（項目２２）
前記ＮＰゲノムセグメントは、ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号４と整列させた場合に、配列番号４のアミノ酸２７に対応する位置にスレオニンを、およびアミノ酸３７５に対応する位置にアスパラギンを有する、項目１９に記載のリアソータントインフルエンザＡ株。
（項目２３）
前記株は、項目２０のＰＢ２ゲノムセグメント、項目２１のＰＡゲノムセグメントおよび項目２２のＮＰゲノムセグメントを含む、項目１〜２２のいずれか１項に記載のリアソータントインフルエンザＡ株。
（項目２４）
前記インフルエンザＡ株は、Ｈ１株である、項目１９〜２３のいずれか１項に記載のインフルエンザＡ株。
（項目２５）
リアソータントインフルエンザＡウイルスを調製する方法であって、前記方法は、
（ｉ）培養宿主に、インフルエンザＡウイルスを生成するために必要とされるウイルスセグメントをコードする１種以上の発現構築物に導入する工程であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントをコードし、ＨＡおよびＰＢ１ゲノムセグメントは、同じインフルエンザＨＡサブタイプを有する異なるインフルエンザ株に由来する、工程；ならびに
（ｉｉ）リアソータントウイルスを生成するために、前記培養宿主を培養する工程
を包含する、方法。
（項目２６）
前記発現構築物は、Ａ／Ｔｅｘａｓ／１／７７インフルエンザ株に由来するＰＢ１セグメントをコードしない、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
リアソータントインフルエンザＡウイルスを調製する方法であって、前記方法は、
（ｉ）培養宿主に、インフルエンザＡウイルスを生成するために必要とされるウイルスセグメントをコードする１種以上の発現構築物を導入する工程であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のドナー株に由来するバックボーンセグメントをコードし、ＰＢ１バックボーンウイルスセグメントは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９に由来する、工程；ならびに
（ｉｉ）リアソータントウイルスを生成するために、前記培養宿主を培養する工程、
を包含する、方法。
（項目２８）
前記少なくとも１種の発現構築物は、配列番号２２の配列と少なくとも９０％もしくは１００％の同一性を有する配列を含む、項目２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記発現構築物は、配列番号９、および／もしくは１１〜１４の配列と少なくとも９０％の同一性もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの１つ以上をさらに含む、項目２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記発現構築物は、配列番号９および１１〜１４の配列と少なくとも９０％の同一性もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの全てを含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記ＨＡセグメントは、Ｈ１インフルエンザウイルスに由来する、項目２６〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られるリアソータントウイルスを精製する工程をさらに包含する、項目２５〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
インフルエンザウイルスを生成するための方法であって、前記方法は：
（ａ）培養宿主を項目１〜２４に記載のリアソータントインフルエンザウイルスに感染させる工程；
（ｂ）工程（ａ）の宿主を培養して、前記ウイルスを生成する工程；および必要に応じて、
（ｃ）工程（ｂ）で生成したウイルスを精製する工程
を包含する、方法。
（項目３４）
ワクチンを調製する方法であって、前記方法は：
（ａ）項目３３に記載の方法によってウイルスを調製する工程、および
（ｂ）前記ウイルスからワクチンを調製する工程、
を包含する、方法。
（項目３５）
前記培養宿主は、孵化鶏卵である、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３６）
前記培養宿主は、哺乳動物細胞である、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３７）
前記細胞は、ＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞もしくはＰｅｒＣ６細胞である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記細胞は、接着して増殖する、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記細胞は、懸濁物中で増殖する、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記ＭＤＣＫ細胞は、細胞株ＭＤＣＫ  ３３０１６（ＤＳＭ  ＡＣＣ２２１９）である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
工程（ｂ）は、前記ウイルスを不活性化する工程を包含する、項目３４〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記ワクチンは、全ビリオンワクチンである、項目３４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記ワクチンは、スプリットビリオンワクチンである、項目３４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記ワクチンは、表面抗原ワクチンである、項目３４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記ワクチンは、ビロソームワクチンである、項目３４〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記ワクチンは、１用量あたり、１０ｎｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含む、項目３４〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記インフルエンザ株のうちの少なくとも１種は、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ７もしくはＨ９サブタイプである、前述の項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
インフルエンザＡウイルスのセグメントをコードするｖＲＮＡを含む１種以上の発現構築物を含む発現系であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のインフルエンザドナー株に由来するバックボーンウイルスセグメントをコードし、ＨＡおよびＰＢ１セグメントは、同じインフルエンザＨＡサブタイプを有する２種の異なるインフルエンザ株に由来する、発現構築物。
（項目４９）
インフルエンザＡウイルスのセグメントをコードするｖＲＮＡを含む１種以上の発現構築物を含む発現系であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のインフルエンザドナー株に由来するバックボーンウイルスセグメントをコードし、ＨＡおよびＰＢ１セグメントは、異なるインフルエンザウイルスＨＡサブタイプを有する２種の異なるインフルエンザ株に由来し、前記発現構築物は、Ｈ３  ＨＡサブタイプを有するインフルエンザウイルスに由来するＰＢ１セグメントをコードせず、そして／または前記発現構築物は、Ｈ１  ＨＡサブタイプもしくはＨ５  ＨＡサブタイプを有するインフルエンザウイルスに由来するＨＡセグメントをコードしない、発現系。  インフルエンザＡウイルスのセグメントをコードするｖＲＮＡを含む１種以上の発現構築物を含む発現系であって、ここで前記発現構築物は、２種以上のインフルエンザドナー株に由来するバックボーンウイルスセグメントをコードし、ＰＢ１セグメントは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９に由来する、発現系。
（項目５０）
前記発現構築物は、ＰＲ８−Ｘ由来のＰＢ２、ＮＰ、ＮＳ、ＭおよびＰＡセグメントをコードするｖＲＮＡをさらに含み得る、項目４８または４９に記載の発現系。
（項目５１）
前記少なくとも１種の発現構築物は、配列番号２２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有する配列を含む、項目４８〜５０のいずれか１項に記載の発現系。
（項目５２）
前記発現構築物は、配列番号９および／もしくは１１〜１４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの１以上をさらに含む、項目４８〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
前記発現構築物は、配列番号９および１１〜１４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有する配列のうちの全てを含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
項目４８〜５３のいずれか１項に記載の発現系を含む、宿主細胞。
（項目５５）
前記宿主細胞は、哺乳動物細胞である、項目５４に記載の宿主細胞。
（項目５６）
前記宿主細胞は、ＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞もしくはＰｅｒＣ６細胞である、項目５５に記載の宿主細胞。