(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
高苦味化培地で栽培して得られる子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、０．０００００８Ｍ  硫酸キニーネよりも苦くなく、かつ下記の菌株、又はこれらの変異株から選択されるリオフィラム  ウルマリウム新菌株であることを特徴とするリオフィラム  ウルマリウム新菌株。
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５７０）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５６９）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８０）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８１）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８２）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８３）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８４）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８５）
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、担子菌の新菌株に関し、更に詳しくはリオフィラム  ウルマリウム（ Lyophyllum ulmarium )の新菌株に関する。
【０００２】
【従来の技術】
リオフィラム  ウルマリウムは、自然界においては秋期に種々の広葉樹の枯れ木に叢生あるいは離生しており、従来より形や歯切れの良い肉質のため、極めて美味なきのことして採食されてきた。また、近年ではオガクズに米糠やその他の栄養源を配合した培養基を用いて、ビン又は箱で栽培を行う菌床人工栽培法が確立され、季節に関係なく一年を通じて安定してきのこを収穫できるようになってきた。
ここでリオフィラム  ウルマリウムの菌床人工栽培を簡略に説明すれば、ビン又は箱に培養基を詰め蒸気滅菌したものに、予め同様の培養基に菌糸を繁殖させておいた種菌を接種し、所定の日数培養した後発生操作を行い、子実体を得て収穫して１サイクルが終了する。栽培に使用する菌株として数種の菌株が市販あるいは技術提携により供与されているが、使用する菌株により様々な形態や栽培特性がある（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】
特開昭６３−２７３４６７号明細書
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、現在使用されているリオフィラム  ウルマリウム菌株のすべては収穫時の子実体中に苦味成分を含有しており、子実体収量を増加させる高苦味化培地では食用に適さないほどの苦味をもつ。また、この苦味成分は培地の種類により変動を示し、苦味の強さに大きく差が生じる。一般にきのこは素材の味を重視する蔬菜的使用方法が主流なため、苦味成分が多く含有されることは著しく商品価値を低下させる結果となる。このために、たとえ子実体の収穫量を著しく増加させる培地基材であっても、同時に苦味成分を増加させる培地、すなわち高苦味化培地は使用できないのが現状である。
本発明の目的は、上記現状にかんがみ、これら高苦味化培地で栽培しても収穫時の子実体中の苦味成分が食用に供した場合苦味をほとんど感じない程度以下の新菌株を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、高苦味化培地で栽培して得られる子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、０．０００００８Ｍ  硫酸キニーネよりも苦くなく、かつ下記の菌株、又はこれらの変異株から選択されるリオフィラム  ウルマリウム新菌株であることを特徴とするリオフィラム  ウルマリウム新菌株に関する。リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５７０）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５６９）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８０）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８１）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８２）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８３）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８４）、
リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８５）
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明者らはリオフィラム  ウルマリウム子実体の官能検査を行い、子実体の苦味と栽培培地との関係を明らかにし、子実体の苦味を増加させる培地、すなわち高苦味化培地を用い人工栽培を行っても、得られる子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、苦味をほとんど感じない程度以下であるリオフィラム  ウルマリウム新菌株を育種することに成功し、本発明を完成させた。
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
リオフィラム  ウルマリウム菌株として、特開昭６３−２７３４６７号公報に記載のリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５８４）、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−８（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１４１６）、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１４１７）、リオフィラム  ウルマリウム  Ｍ−８１７１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１４１５）を使用し、該公報に記載の方法により、各菌株の人工栽培を行い、収穫適期の子実体を収穫し、子実体の官能検査を行った。人工栽培の培地としては、該公報に記載の針葉樹オガクズ５０ｇ、広葉樹オガクズ５０ｇ、米糠９０ｇをよく混合し、水道水にて水分含有率６５％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向い直径１cmの穴をあけた後、キャップで打栓したオガクズ固型培養基を１２０℃、６０分間高圧蒸気滅菌したものをＡ培地とした。また該培地調製方法に準じ、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して同様に作成したものをＢ培地、針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して同様に作成したものをＣ培地、針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して同様に作成したものをＤ培地とし、それぞれ用いた。
各使用培地で得られた子実体の収量（ｇ／ビン）、官能検査の結果を表１に示す。
【０００８】
【表１】
0003539953.tif 000002
【０００９】
官能検査は、リオフィラム  ウルマリウム子実体を油炒めし、硫酸キニーネを、苦味の標準物質として、パネラーが判定する。油炒めは次の様に行う。すなわち、得られたリオフィラム  ウルマリウムの子実体の柄の基部を除去し、１本ずつにわけ、軽く水洗いして、よく水をきる。次いで、フライパンにサラダ油５ｍｌを加え、全体にのばし、中火で油を充分に熱する。前述リオフィラム  ウルマリウム子実体１００ｇ（湿重）を加え、箸でかきまぜながら、２分間以上、全体に火を通し、フライパンに水気が無くなれば、火を止める。該子実体を常温になるまで冷まし、パネラーに苦くない、苦い、かなり苦い、著しく苦いの四段階で評価させる。なお、以下、各表中の−は苦くない、＋は苦い、＋＋はかなり苦い、＋＋＋は著しく苦いを意味する。この＋、−の中間がリオフィラム  ウルマリウム子実体の苦味の硫酸キニーネを標準物質とした苦味の閾値、すなわち、ほとんど苦味を感じない苦味であり、標準物質の硫酸キニーネの閾値、０．０００００８Ｍ（太田静行著、「食品調味の知識」第２版第１刷、昭和６０年１０月１日、幸書房発行、第３８頁）の苦味に相当する。
前述の供試菌株中、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２が最も低苦味菌株であるが、Ｂ、Ｃ、Ｄ培地を用いた場合は、収量は増加するものの得られる子実体は苦味のあるものとなる。
【００１０】
本発明において高苦味化培地とは、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２の人工栽培を行った際に得られる子実体の苦味が官能検査により＋以上の培地を意味し、上記Ｂ、Ｃ、Ｄ培地である。また本発明の新菌株とは、該菌株を高苦味化培地で栽培して得られる子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、苦味をほとんど感じない程度以下の菌株をいう。
【００１１】
次に、本発明の新菌株の育種について述べる。
１．選抜育種
自然界に発生しているリオフィラム  ウルマリウム１１２個の子実体より組織分離を行い、純粋分離した菌糸体９０菌株を得た。次にこの９０菌株を前記Ｂ培地を用い栽培試験を行った。栽培試験により、子実体を形成した菌株４８株の子実体を官能検査に供した。子実体の形状に優れ、収量も多く、苦味の低い菌株１０株を選抜した。更にこの１０株をＢ、Ｃ、Ｄ培地で栽培試験し、工業的栽培に適し、最も低苦味な菌株として、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３を選抜した。
【００１２】
以下、このリオフィラム  ウルマリウムについて説明する。
リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３株は、福島県裏磐梯にて枯れ木に叢生していた子実体より本発明者らが組織分離したもので子実体及び胞子の特徴は次のようである。子実体は叢生、カサは径５〜１．５cm、円形又は不正形で丸山形、表面は平滑、湿潤、白色〜帯褐クリーム色を呈しており、往々やや濃色の斑紋を現し、老時中央にき裂を生じることがある。肉は白色、幅広く柄に上生する。柄は偏心性で湾曲し、３〜７×１〜２cm、カサとほぼ同色、頂部は白色で綿毛状ないし粉状である。胞子はほぼ球形、平滑、無色、４．５〜５．５×３．５〜４．５μｍ、紋は白色であった。
以上の特徴を伊藤誠哉著「日本菌類誌」第二巻第五号（１９５９年、養賢堂出版）の記載と比較すると、本菌はリオフィラム  ウルマリウムであることが明りょうである。
【００１３】
次にリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
７日目：旺盛な生育。コロニー径は４０mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。１７日目：表面全体に密な気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
７日目：旺盛な生育。コロニー径は３６mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。１７日目：表面全体に密な気菌糸を生じる。コロニー中央部は薄い黄色、他は白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
７日目：小程度の生育。コロニー径は２６mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。１７日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。菌糸は樹状で希薄、白色。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
７日目：旺盛な生育。コロニー径は４２mm。白色で綿状の密な菌糸、気菌糸やや多い。１０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を極めて多量に生じ、菌糸は綿状で白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
７日目：旺盛な生育。コロニー径は３６mm。菌糸はよく分枝して伸び、気菌糸は少ない。１０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状の気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
７日目：小程度の生育。コロニー径は２１mm。菌糸は白色で直線的に伸長し、放射状のコロニーを形成する。１７日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
７日目：旺盛な生育。コロニー径は４０mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。マット状。１０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色だが、培地は黄色に変化する。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
７日目：小程度の生育。コロニー径は１８mm。菌糸は白色で短くマット状に生育、気菌糸は少ない。培地は褐変、褐変半径は４０mm。１７日目：中程度の生育。コロニー径は３７mm。褐変半径は４２mm。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。
（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは７〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００１４】
次に、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３株と他のリオフィラム
ウルマリウムとの異同判定として、両菌糸が持つ性因子が異なっていれば、その菌糸は互いに異なる菌糸であるという菌類分類学的事実に基づき、性因子の異同を寒天培地上における対峙培養によって調べた。
供試したリオフィラム  ウルマリウムとしてはリオフィラム  ウルマリウム
ＩＦＯ  ９６３７、リオフィラム  ウルマリウム  ＩＦＯ  ３０５２５、リオフィラム  ウルマリウム  ＩＦＯ  ３０７７５、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−８、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｍ−８１７１、リオフィラム  ウルマリウム  ＳＡである。なおリオフィラム  ウルマリウム  ＳＡは、市販のリオフィラム  ウルマリウム子実体よりの分離株である。
上記それぞれのリオフィラム  ウルマリウムの二核菌糸を保存スラントより３×３×３mmのブロックとして切り出し、それぞれをＰＧＹ寒天培地の中央部に、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３の二核菌糸と対峙して植菌し（２cm間隔）、２５℃、１４日間培養後、両菌株のコロニー間に帯線が生じるか否かを判定した。結果を表２に示す。（帯線を生じた場合＋、生じなかった場合−）。
【００１５】
【表２】
0003539953.tif 000003
【００１６】
表２よりわかるように、前記各菌株は、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ
１−１３との対峙培養ですべて帯線を生じ、このことからリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３は新しい菌株であることは明白である。
以上説明したように本発明の選抜育種による新菌株として、例えばリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３が挙げられるが、前記菌株と同様に高苦味化培地で栽培して得られる子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、苦味をほとんど感じない程度以下であるという特性を示す菌株は、すべて本発明に属するものである。
【００１７】
２．交配育種
本発明の新菌株を交配育種により得た。
特開昭６３−２７３４６７号公報に記載のように、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−８とリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１７の交配により、収量、生育速度、子実体形態に優れたリオフィラム  ウルマリウム  Ｍ−８１７１が得られている。栽培特性に優れ、かつ子実体の苦味が低減された菌株を交配育種するために、このリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−８、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１７の両菌株を親株として用いた。
リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−８とリオフィラム  ウルマリウム
Ｌｕ  １−１７をＡ培地にそれぞれ生育させ、通常の操作により子実体を発生させた。該子実体よりそれぞれ胞子を回収し、発芽させた一核菌糸を単離して、５７株ずつを総当り交配して１６５３株を得た。この１６５３株をＢ培地を用いて栽培試験を行い、官能検査により低苦味な菌株８０株を選択し、次にＢ、Ｃ、Ｄ培地で栽培試験を行い、栽培特性に優れ、苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、苦味をほとんど感じない程度以下である８菌株を選抜し、それぞれリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６とそれぞれ命名した。
【００１８】
次にこのリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
５日目：コロニー径は１８mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１０日目：コロニー径は４７mm。２０日目：コロニー径は８３mm。放射状に生育して表面全体に密な気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は４０mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：コロニー径は５５mm。２０日目：コロニー径は６６mm。表面全体に密な気菌糸を生じる。綿状のコロニーで、菌糸は白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は２８mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。２０日目：コロニー径は５２mm。菌糸は樹状で希薄、白色。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は５０mm。白色で綿状の密な菌糸、気菌糸やや多い。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。放射状に生育して表面全体に気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は５１mm。綿状のコロニーで、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで、気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は２７mm。菌糸は白色で、樹枝状のコロニーを形成する。２０日目：コロニー径は４８mm。気菌糸を生じる。樹枝状のコロニーで、菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は４９mm。綿状のコロニーで白色な菌糸、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
５日目：小程度の生育。コロニー径は１８mm。菌糸は白色で気菌糸を多量に生じる。培地は褐変して、褐変半径は３４mm。１５日目：旺盛な生育。コロニー径は６４mm。培地全面が褐変。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。
（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは７〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００１９】
次にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６１mm。白色で放射状のコロニー、気菌糸を少量生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸は少ない。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は５３mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。コロニーは綿状で白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
７日目：旺盛な生育。コロニー径は５１mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。１５日目：コロニー径は７５mm。菌糸は樹状で希薄、白色。
２０日目：コロニー径は７７mm。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：とても旺盛な生育。コロニー径は５８mm。白色で放射状の密な菌糸、気菌糸やや多い。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を生じ、菌糸は放射状で白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は６６mm。コロニーは綿状で、気菌糸を生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は３３mm。菌糸は白色でやや薄く、樹枝状に伸長し、気菌糸を伴う。２０日目：コロニー径は７４mm。コロニーは希薄で樹枝状、菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は６５mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６３mm。菌糸は白色で、気菌糸を多量に生じる。培地は褐変、褐変半径は６５mm。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を多量に生じ、培地全面が褐変する。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。
（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは７〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２０】
次にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６０mm。白色で放射状のコロニー、気菌糸を少量生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸は少ない。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は５９mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。コロニーは綿状で白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
５日目：旺盛な生育。コロニー径は１６mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。１５日目：コロニー径は６２mm。菌糸は樹状で希薄、白色。
２０日目：コロニー径は７７mm。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：とても旺盛な生育。コロニー径は６６mm。白色で放射状の密な菌糸、気菌糸やや多い。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を生じ、菌糸は放射状で白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は６８mm。コロニーは綿状で、気菌糸を生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は３３mm。菌糸は白色でやや薄く、樹枝状に伸長し、気菌糸を伴う。２０日目：コロニー径は６２mm。コロニーは希薄で樹枝状、菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は６８mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６１mm。菌糸は白色で、気菌糸を多量に生じる。培地は褐変。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を多量に生じ、培地全面が褐変する。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは７〜８．５であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２１】
次にこのリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
５日目：コロニー径は２４mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量生じる。１０日目：コロニー径は６４mm。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。放射状に生育して表面全体に密な気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は６１mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：コロニー径は８５mm。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。綿状のコロニーで、菌糸は白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は４８mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。２０日目：コロニー径は７５mm。菌糸は樹状で希薄、白色。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６５mm。白色で綿状の密な菌糸、気菌糸やや多い。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。放射状に生育して表面全体に気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６７mm。綿状のコロニーで、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで、気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は３９mm。菌糸は白色で、樹枝状のコロニーを形成する。２０日目：コロニー径は６６mm。気菌糸を生じる。樹枝状のコロニーで、菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６３mm。綿状のコロニーで白色な菌糸、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
５日目：小程度の生育。コロニー径は２９mm。菌糸は白色で気菌糸を多量に生じる。培地は褐変。１５日目：旺盛な生育。コロニー径は８８mm。培地全面が褐変。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。
（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは６〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２２】
次にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６４mm。白色で放射状のコロニー、気菌糸を少量生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸は少ない。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６４mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。コロニーは綿状で白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
５日目：旺盛な生育。コロニー径は１４mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。１５日目：コロニー径は６０mm。菌糸は樹状で希薄、白色。２０日目：コロニー径は７５mm。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：とても旺盛な生育。コロニー径は８３mm。白色で放射状の密な菌糸、気菌糸やや多い。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を生じ、菌糸は放射状で白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は８１mm。コロニーは綿状で、多量の気菌糸を生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は２３mm。菌糸は白色でやや薄く、樹枝状に伸張し、気菌糸を伴う。２０日目：コロニー径は４５mm。コロニーは希薄で樹枝状。菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は８０mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６８mm。菌糸は白色で、気菌糸を多量に生じる。培地は褐変。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を多量に生じ、培地全面が褐変する。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは６〜７であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２３】
次にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７１mm。白色で放射状のコロニー、気菌糸を少量生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸は少ない。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６６mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。コロニーは綿状で白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
５日目：旺盛な生育。コロニー径は２６mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。１５日目：コロニー径は７１mm。菌糸は樹状で希薄、白色。２０日目：コロニー径は８１mm。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：とても旺盛な生育。コロニー径は７９mm。白色で放射状の密な菌糸、気菌糸やや多い。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を生じ、菌糸は放射状で白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は７９mm。コロニーは綿状で、多量の気菌糸を生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は３７mm。菌糸は白色でやや薄く、樹枝状に伸長し、気菌糸を伴う。２０日目：コロニー径は６８mm。コロニーは希薄で樹枝状。菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：極めて旺盛な生育。コロニー径は６４mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７０mm。菌糸は白色で、気菌糸を多量に生じる。培地は褐変。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。気菌糸を多量に生じ、培地全面が褐変する。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは６〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２４】
次にこのリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
５日目：コロニー径は２５mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１０日目：コロニー径は６１mm。１５日目：コロニー径は８３mm。放射状に生育して表面全体に密な気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は６１mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：コロニー径は８６mm。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。綿状のコロニーで、菌糸は白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は４９mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。２０日目：コロニー径は７６mm。菌糸は樹状で希薄、白色。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７０mm。白色で綿状の密な菌糸、気菌糸やや多い。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。放射状に生育して表面全体に気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７４mm。綿状のコロニーで、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで、気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は２９mm。菌糸は白色で、樹枝状のコロニーを形成する。２０日目：コロニー径は５３mm。気菌糸を生じる。樹枝状のコロニーで、菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７２mm。綿状のコロニーで白色な菌糸、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
５日目：小程度の生育。コロニー径は２８mm。菌糸は白色で気菌糸を多量に生じる。培地は褐変。１５日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。培地全面が褐変。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。
（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは６〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２５】
次にこのリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６株の菌学的諸性質を示す。
（１）麦芽エキス寒天培地（２５℃培養）
５日目：コロニー径は１９mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量生じる。１０日目：コロニー径は５９mm。１５日目：コロニー径は８１mm。放射状に生育して表面全体に密な気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（２）バレイショ・ブドウ糖寒天培地（２５℃培養）
１０日目：中程度の生育。コロニー径は５５mm。白色で密な菌糸、気菌糸を多量に生じる。１５日目：コロニー径は８０mm。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。表面全体に密な気菌糸を生じる。綿状のコロニーで、菌糸は白色。
（３）ツァペック・ドックス寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は３８mm。樹状に伸長し極めて希薄な菌糸、気菌糸は少ない。２０日目：コロニー径は６６mm。菌糸は樹状で希薄、白色。
（４）サブロー寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は６６mm。白色で綿状の密な菌糸、気菌糸やや多い。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。放射状に生育し表面全体に気菌糸を生じる。菌糸は白色。
（５）オートミール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７１mm。綿状のコロニーで、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。綿状のコロニーで、気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（６）合成ムコール寒天培地（２５℃培養）
１０日目：小程度の生育。コロニー径は３１mm。菌糸は白色で、樹枝状のコロニーを形成する。２０日目：コロニー径は６１mm。気菌糸を生じる。樹枝状のコロニーで、菌糸は白色。
（７）ＹｐＳｓ寒天培地（２５℃培養）
１０日目：旺盛な生育。コロニー径は７０mm。綿状のコロニーで白色な菌糸、気菌糸を生じる。２０日目：シャーレ全体に菌糸が生育する。密な気菌糸を多量に生じる。菌糸は白色。
（８）フェノールオキシダーゼ検定用培地（２５℃培養）
５日目：小程度の生育。コロニー径は２８mm。菌糸は白色で気菌糸を多量に生じる。培地は褐変。１５日目：旺盛な生育。コロニー径は８６mm。培地全面が褐変。種菌の新旧により著しく生育速度に差が生じる。
（９）最適生育温度
ＰＧＹ寒天培地に直径５mmの円盤状種菌を接種し、各温度で１２日間培養した後、コロニー径を測定した。その結果、最適な成育温度は２５℃付近であった。また、５℃、３５℃ではほとんど生育しなかった。
(10)  最適生育ｐＨ
ＰＧＹ液体培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）６０mlずつを１００ml容三角フラスコに分注して殺菌し、酸又はアルカリで各ｐＨに調整後に種菌を接種して、２５℃、１５日間静置培養した後、菌体の乾燥重量を測定した。その結果、最適生育ｐＨは６〜８であった。また、生育可能なｐＨ範囲は、ｐＨ３．５〜１０であった。
【００２６】
次に、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４株及びリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６株と他のリオフィラム  ウルマリウムとの異同判定として、両菌糸が持つ性因子が異なっていれば、その菌糸は互いに異なる菌糸であるという菌類分類学的事実に基づき、性因子の異同を寒天培地上における対峙培養によって調べた。
供試したリオフィラム  ウルマリウムとしてはリオフィラム  ウルマリウム
ＩＦＯ  ９６３７、リオフィラム  ウルマリウム  ＩＦＯ  ３０５２５、リオフィラム  ウルマリウム  ＩＦＯ  ３０７７５、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−８、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｍ−８１７１、リオフィラム  ウルマリウム  ＳＡ、リオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３である。
【００２７】
上記それぞれのリオフィラム  ウルマリウムの二核菌糸を保存スラントより３×３×３mmのブロックとして切り出し、それぞれをＰＧＹ寒天培地の中央部に、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９株、リオフィラム  ウルマリウム
Ｋ−０２０７株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２株、リオフィラムウルマリウム  Ｋ−０２５９株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７株、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４株、又はリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６株の二核菌糸と対峙して植菌し（２cm間隔）、２５℃、１４日間培養後、両菌株のコロニー間に帯線が生じるか否かを判定した。結果を表３、表４に示す。（帯線を生じた場合＋、生じなかった場合−）。
【００２８】
【表３】
0003539953.tif 000004
【００２９】
【表４】
0003539953.tif 000005
【００３０】
表３、表４よりわかるようにリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４、及びリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６はそれぞれ他の菌株との対峙培養ですべて帯線を生じ、このことから両菌株は新しい菌株であることは明白である。
【００３１】
以上説明したように本発明の交配により育種した新菌株として、例えばリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４、リオフィラムウルマリウム  Ｋ−１２５７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６等が挙げられるが、前記菌株と同様に高苦味化培地で栽培して得られる子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、苦味をほとんど感じない程度以下であるという特性を示す菌株はすべて本発明に属するものである。
【００３２】
本発明による新菌株は、前述のとおり人工栽培時において高苦味化培地で栽培しても子実体の苦味が、少なくとも一種の高苦味化培地について、苦味をほとんど感じない程度以下であるという特性をもち、培地の種類に影響されず安定して子実体の苦味が少ない。本発明の新菌株のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ培地を用い人工栽培を行い得た収穫適期の子実体の苦味、及び収量を表５、表６に示す。なお、前出リオフィラム  ウルマリウム  ＳＡの結果も合せ表６中に示す。
【００３３】
【表５】
0003539953.tif 000006
【００３４】
【表６】
0003539953.tif 000007
【００３５】
表５、表６に示すようにリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６の各菌株は、従来の人工栽培可能な菌株において、収穫適期の子実体が苦味を呈する培地を使用しても苦味を示さず、子実体収量を増加させるが苦味も増加させるので従来使用することが困難であった高苦味化培地を用いても、苦味の無い子実体を高収率で安定して得ることができる。
【００３６】
また、上記菌株を培地に接種して生成する菌糸体も苦味を呈さず、該菌糸体を食品に使用するにも好適である。なお、リオフィラム  ウルマリウム菌糸体は食物繊維も多く、制ガン作用も知られており、該菌糸体を利用した食品は、健康維持のために特に有用である。
【００３７】
本発明において育種した新菌株のリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９、リオフィラム  ウルマリウムＫ−０２０７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６はそれぞれ Lyophyllum ulmarium  Ｌｕ  １−１３、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−０４２９、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−０２０７、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−０２０２、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−０２５９、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−１００４、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−１２５７、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−６８０４、 Lyophyllum ulmarium  Ｋ−６８０６と表示され、工業技術院微生物工業技術研究所にそれぞれ微工研菌寄第１２５７１号（ＦＥＲＭＰ−１２５７１）、微工研菌寄第１２５７０号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５７０）、微工研菌寄第１２５６９号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２５６９）、微工研菌寄第１２９８０号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８０）、微工研菌寄第１２９８１号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８１）、微工研菌寄第１２９８２号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８２）、微工研菌寄第１２９８３号（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２９８３）、微工研菌寄第１２９８４号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８４）、微工研菌寄第１２９８５号（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８５）として寄託されている。
【００３８】
なお、リオフィラム  ウルマリウム子実体中の苦味成分は次のように定量することもできる。
リオフィラム  ウルマリウム子実体中の可食部分（カサ部、柄部）を凍結乾燥し、これを粉砕して子実体凍乾粉末を得る。この凍乾粉末０．５ｇ（乾重）を３５mlの酢酸エチルで２５℃、２４時間振とう抽出し、ろ過、減圧濃縮後１mlのメタノールに加温しながら溶解し、抽出サンプルとする。
前述のサンプル２００μｌより、ＦＰＬＣ〔ファルマシア  ファイン  ケミカルス（ Pharmacia Fine Chemicals ) 製〕を用いて、次の様に苦味成分画分を分取する。カラムは、Lober ＲＰ−８〔メルク（ Merck )製、φ１．０×２４cm〕を使用して、溶媒８５％メタノール（関東化学；液クロ用）、１．０ml／分、常温、検出波長２１０nmの条件下で、溶出時間１０〜４５分の画分を分取する。
分取画分は再び減圧濃縮し、メタノール：エタノール：水＝３：４：４の溶媒１．０mlに溶解して、その５０μｌをＨＰＬＣ〔（株）島津製作所製ＬＣ−６Ａシステム〕にて苦味成分画分を分取する。カラムは、μ Bondapak Ｃ18〔ウォータース（ Waters ) 製、φ０．３９×３０cm〕を使用して、メタノール：エタノール：水＝３：４：４の溶媒（関東化学；液クロ用メタノール、ナカライテスク；特級エタノール）、０．７ml／分、温度４０℃、検出波長ＵＶ２１０nmの条件下で、溶出時間３２．５〜４４．０分の画分の乾燥重量を測定する。この画分に溶出する成分（以下画分Ａと略す）は、官能検査において強い苦味を呈し、リオフィラム  ウルマリウム子実体の苦味は、この画分Ａに起因する。
【００３９】
また、本発明で培地に使用した綿実殻は、安価に入手でき、しかもきのこの収量を著しく増加させる、きのこの人工栽培に有用な基材として、本発明者らが見出したものである。この綿実殻を培地に使用する際は、他の培地基材と混合して使用しても良いし、単独で使用しても良い。綿実殻は培地の乾燥重量に対して１５〜６０％で使用した場合が最も増収効果が良いが、使用量はこれに限定されるものではない。この綿実殻を培地に使用し、収量よく栽培できるきのことしては、例えば本発明のリオフィラム  ウルマリウムの他、シイタケ、ヒラタケ、エノキタケ、マイタケ等があり、例えばこれらのきのこの菌株を使用し、通常の人工栽培を行えば良い。
【００４０】
【実施例】
以下に本発明によるリオフィラム  ウルマリウム新菌株の人工栽培実施例を示すが、本発明は以下の実施例の範囲にのみ限定されるものではない。
なお、下記の実施例１〜実施例３は、本発明の参考例として挙示した例である。
【００４１】
実施例１
液体ＰＧＹ培地（寒天を含まないＰＧＹ寒天培地）１００mlに、リオフィラムウルマリウム  Ｌｕ  １−１３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５７１）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３５日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６８ｇで、官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４２】
なお、子実体の官能検査は、次の様に行った。上記ビン栽培で得られた子実体の柄の基部を除去し、１本ずつに分け、軽く水洗いして、よく水を切った。一方、フライパンにサラダ油５mlを加え、全体にのばし、中火で油を充分に熱した後、子実体１００ｇ（湿重）を加え、箸でかきまぜながら２分間以上、全体に火を通し、フライパンに水気が無くなるまで炒め、火を止めた。油炒めした子実体は常温になるまで冷まし、硫酸キニーネを標準物質とし、１０名のパネラーで苦味を判定した。
【００４３】
実施例２
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１４３ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４４】
実施例３
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−１３の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３７日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１５７ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４５】
実施例４
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５７０）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３２日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４３日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１８４ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４６】
実施例５
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を２８日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３７日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１５７ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４７】
実施例６
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０４２９の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を２８日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３７日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６４ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４８】
実施例７
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２５６９）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を４０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１０日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１４日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１８８ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００４９】
実施例８
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３４日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３１日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１４日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６１ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５０】
実施例９
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０７の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３３日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３２日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１１日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１７８ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５１】
実施例１０
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８０）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を４５日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で８日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１８７ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５２】
実施例１１
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を４０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で８日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１２日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１５４ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５３】
実施例１２
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２０２の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３６日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４４日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で８日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６２ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５４】
実施例１３
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８１）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を４５日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で８日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１２日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１９２ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５５】
実施例１４
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３５日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で８日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６２ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５６】
実施例１５
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−０２５９の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３７日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４３日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で８日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６５ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５７】
実施例１６
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８２）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１１日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１５日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１８８ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５８】
実施例１７
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３２日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４８日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１０日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１５日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１５８ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００５９】
実施例１８
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１００４の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を２８日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５２日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１１日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１６日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６１ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６０】
実施例１９
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８３）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１１日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１５日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１８６ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６１】
実施例２０
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３２日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４８日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１６日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６０ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６２】
実施例２１
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−１２５７の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を２８日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５２日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１０日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１４日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１５７ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６３】
実施例２２
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８４）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１０日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１６日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１９５ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６４】
実施例２３
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を２８日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３２日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１０日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１５日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６３ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６５】
実施例２４
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０４の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を２８日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３２日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１６日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１７１ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６６】
実施例２５
液体ＰＧＹ培地１００mlに、リオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６（ＦＥＲＭ  Ｐ−１２９８５）を接種し、２５℃で１０日間培養して液体種菌を得た。一方、コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後に前記液体種菌２０mlを接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３２日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３８日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１５日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１９１ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６７】
実施例２６
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で４０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１５日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６２ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６８】
実施例２７
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｋ−６８０６の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３１日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で３９日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１４日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１６５ｇで、子実体の官能検査において苦味は感じられなかった。
【００６９】
対照例１
コーンコブミール１３０ｇ、マメカワ６０ｇ、フスマ３０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６２％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３５日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５０日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１７８ｇで、子実体の官能検査において苦味が感じられた。
【００７０】
対照例２
針葉樹オガクズ５０ｇ、綿実殻粉砕物５０ｇ、米糠１００ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で９日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１４日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１４０ｇで、子実体の官能検査において苦味が感じられた。
【００７１】
対照例３
針葉樹オガクズ１００ｇ、マメカワ７０ｇをよく混合して水道水により水分含有率を６３％に調製したものを、ポリプロピレン製８５０ml容広口ビンに圧詰めして、ビン口部中央より下方に向かい直径１cmの穴を開けた後、該培養基を１２０℃で６０分間高圧蒸気滅菌して、常温まで冷却後にリオフィラム  ウルマリウム  Ｌｕ  １−２の固体種菌を接種した。
暗所、２５℃、湿度５０〜６０％の条件下で該培養基を３０日間培養すると、ビン全体に菌糸がまん延した。更に、同条件下で５５日間培養を続けて子実体発生基を得た。該子実体発生基の上部菌糸層１cmを除去し、水道水２０mlを加え充分に給水させた後に余剰の水道水を捨て、１５℃、湿度９０〜９５％、照度２０ルックスの条件下で１０日間培養を続けて子実体原基を得て、更に照度を２００ルックスに上げて１３日間培養を続けて子実体を得た。
得られた子実体の収量は１５３ｇで、子実体の官能検査において苦味が感じられた。
【００７２】
【発明の効果】
以上説明した様に、本発明によれば、従来使用することができなかった高苦味化培地を用い栽培しても、子実体の苦味が低減したリオフィラム  ウルマリウム子実体を得ることが可能となり、工業的に高収量で良質なリオフィラム  ウルマリウム子実体及び菌糸体を提供することができる。