(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
桑枝（Ｒａｍｕｌｕｓ  Ｍｏｒｉ）抽出物を含有する美白化粧料。
【請求項２】
上記桑枝は、桑属植物の柔らかな枝であることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【請求項３】
上記桑枝抽出物は、桑枝を水、炭素数１〜４個の無水あるいは含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテート、ブチルアセテート、クロロホルムあるいは１，３−ブチレングリコールを溶媒として、冷却コンデンサーを備えた抽出器を用いて４０〜１００℃で、３〜２０時間にわたって加熱する方法により得られることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【請求項４】
上記桑枝抽出物は、桑枝を水、炭素数１〜４個の無水あるいは含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテート、ブチルアセテート、クロロホルムあるいは１，３−ブチレングリコールを溶媒として、４〜４０℃で、１〜１５日間にわたって沈積させて抽出する方法により得られることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【請求項５】
上記桑枝抽出物が、化粧料の乾燥重量に対して０．００００１〜５重量％の量で配合されていることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【請求項６】
上記桑枝抽出物は、化粧料の乾燥重量に対して０．００１〜１重量％の量で配合されていることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【請求項７】
柔軟化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エセンス、パックの剤形を有することを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、桑属植物の柔らかな枝である桑枝より抽出された桑枝抽出物を含有する美白化粧料に関するものである。
一般に、ヒトの皮膚が黒く変化することには色々の原因があるが、主な要因としては、紫外線に皮膚が露出されると、皮膚細胞の一種であるメラノサイト内でメラニンが合成、放出されて皮膚が黒くなることが挙げられる。メラノサイト内でメラニンが合成される過程は、細胞内のチロシンを基質としてチロシナーゼという酵素が作用してドーパキノンを生成し、このドーパキノンより非酵素的反応または酵素的反応を通じて共重合体黒色色素であるメラニンが生成される。したがって、皮膚が黒くなることを防ぐために、メラニンの生成過程中の一部の反応を阻害してメラニン生成を低減させる方法が最も容易であり一般的である。
【０００２】
そのため、従来にはアスコルビン酸、コウジ酸、アルブチン（Ａｒｕｂｕｔｉｎ）、ヒドロキノンおよび桑白皮抽出物など、各種の植物抽出物が使用されている。
ところで前記物質の中、コウジ酸は、チロシナーゼの活性部位に存在する銅イオンをキレートさせて酵素活動を阻害する作用を有するが、化粧品を配合する時、優れる性能と比べて安定性の問題点の方が大きく台頭しているので、不適合である。アスコルビン酸は、チロシナーゼ活性を阻害する効果が比較的低い上に、分子自体の安定性が低いので、美白原料として不適合である。ヒドロキノンは、皮膚に対する刺激性が高い上に安定性の問題があり、現在化粧料としては使用していない。大部分の植物は、高濃度である場合のみで比較的高いチロシナーゼ活性を阻害する効果を示し、低濃度ではその阻害効果をほぼ示さない。
【０００３】
本発明者は、そのような現実を鑑み、従来に知られている美白物質が持っている問題点を克服し、より優れる美白原料を探すために、長いあいだ漢方あるいは民間療法に使用して安全性が立証されている天然植物を対象に、美白効能を有する有効物質を検索した結果、桑属植物の柔らかな枝である桑枝抽出物が特に優れるチロシナーゼ活性を阻害する効果を示すことを発見した。
【０００４】
桑属植物としては、桑（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ、Ｌｉｎｎｅ）、垂れる桑（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ  ｆｏｒ．  Ｐｅｌｄｕｌｌｓ  ＤＩＰＰＥＬ）、山桑（Ｍｏｒｕｓ  ｂｏｍｂｙｃｉｓ，  Ｋｏｉｄｚｕｍｉ）、尾桑（Ｍｏｒｕｓ  ｂｏｍｂｙｃｉｓｖａｒ．  Ｃａｕｄａｔｉｆｏｌｉａ）、島桑（Ｍｏｒｕｓ  ｂｏｍｂｙｃｉｓ  ｖａｒ．  ｍａｒｉｔｉｍａ  ＫＯＩＤＺ）、カセ桑（Ｍｏｒｕｓ  ｂｏｍｂｙｃｉｓ  ｆｏｒ．  Ｋａｓｅ  ＶＹＫＥＩ）、モンゴル桑、王桑、石桑（Ｍｏｒｕｓ  ｔｉｌｉａｅｆｏｌｉａ，  Ｍａｋｉｎｏ）が挙げられる。これらは落葉闊葉性の蕎木で、韓国の大部分地域にわたって標高５００〜１４００ｍに水平的に分布し、山奥村の付近や山の麓に自生する。
【０００５】
桑枝（Ｒａｍｕｌｕｓ  Ｍｏｒｉ）は桑属植物の柔らかな枝を乾かしたもので、様子は長い円柱形で、稀に分枝があり、大きさが一定せず、直径は０．５〜１．５ｃｍである。表面は灰黄色あるいは黄褐色で、多数の黄褐色の点状皮孔と微細な縦紋があり、灰白色を帯びた半円形葉の痕跡と黄褐色の腋芽とがある。切片の厚さは０．２〜０．５ｃｍであり、外皮部位は比較的に薄い。木質部位は黄白色であって斜線は放射状であり、樹部は白色あるいは黄白色である。桑枝の採取時期は春の遅い時期と夏の初めの時期であり、葉を除去した後の新鮮な間に３０〜６０ｃｍの大きさに切って日光に乾かす。桑枝はやや苦味があり、消炎、利尿、強壮、発汗、およびカゼの治癒などの効能を有するため、古くから漢薬剤として使用されている。
【０００６】
本発明は、桑枝抽出物を含有する美白化粧料を提供することにその目的がある。
本発明をもっと詳細に説明すれば次のとおりである。
【０００７】
本発明は、桑枝抽出物を含有する美白化粧料に関するもので、より詳細には桑属植物の柔らかな枝である桑枝に水、炭素数１〜４個の無水あるいは含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテート、ブチルアセテート、クロロホルムあるいは１，３−ブチレングリコールを加えて得た抽出物を、通常的な基礎化粧料に添加して優れる美白効果を持たせた美白化粧料に関するものである。
【０００８】
本発明の美白化粧料に含まれる桑枝抽出物の製造方法は、次のとおりである。桑枝を精製水で洗浄、乾燥して少ない切れに破砕した後、これに乾燥重量の１〜１０倍の水、炭素数１〜４個の無水あるいは含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテート、ブチルアセテート、クロロホルムあるいは１，３−ブチレングリコールなどを加える。その後、装着した冷却コンデンサーにより、有効成分が蒸発することを防ぐ状態で、４０〜１００℃で３〜２０時間にわたって加熱して抽出し、あるいは４〜４０℃で１〜１５日間にわたって抽出して、例えば回転減圧蒸発機を用いて完全に乾燥させて製造する。
【０００９】
製造された桑枝抽出物は、通常的な基礎化粧料、たとえば、柔軟化粧水（スキン）、栄養化粧水（ミルクローション）、栄養クリーム、マッサージクリーム、エセンス、パックなどに添加されて使用されるが、添加量はその乾燥重量に対して０．００００１〜５重量％、望ましくは０．００１〜１重量％を化粧料に添加する。
【００１０】
【実施例】
以下の実施例および実験例により本発明の内容をより詳しく説明するが、本発明の内容がこれにより限定されることではない。
【００１１】
【実施例１】
精製水で洗浄、乾燥した１ｋｇの桑枝を５Ｌの水に入れ、冷却コンデンサーを備えた抽出器で７０〜９０℃で、５時間にわたって加熱して抽出した。これを３００メッシュの濾過布で濾過し、５〜１０℃で、７〜１０日間放置して熟成させてから、ワットマン５番濾過紙で濾過した。この濾液を６５℃でロータリーエバポレータで乾燥して４０．４ｇの乾燥重量を得た。
【００１２】
【実施例２】
精製水で洗浄、乾燥した１ｋｇの桑枝を５Ｌの水に入れ、１５〜３５℃で、５日間にわたって抽出した。これを３００メッシュの濾過布で濾過し、ワットマン５番濾過紙で濾過してから、ロータリーエバポレータで２倍濃縮した。これに２．５Ｌの１００％エタノールを加え、５〜１０℃で、７〜１０日間放置して熟成させてから、ワットマン５番濾過紙で濾過した。この濾液を６５℃でロータリーエバポレータで乾燥して３２．５ｇの乾燥重量を得た。
【００１３】
【実施例３】
精製水で洗浄、乾燥した１ｋｇの桑枝を５Ｌの水に入れ、４〜４０℃で、５日間にわたって抽出した。これを３００メッシュの濾過布で濾過し、５〜１０℃で、７〜１０日間放置して熟成させてから、ワットマン５番濾過紙で濾過した。この濾液を６５℃でロータリーエバポレータで乾燥して３３．６ｇの乾燥重量を得た。
【００１４】
【実施例４〜２２】
実施例３と同様の方法で抽出してその結果を表１に示す。
【００１５】
【表１】
0003549717.tif 000002
【００１６】
【実施例２３】
精製水で洗浄、乾燥した１ｋｇの桑枝を５Ｌの１０％エタノールに入れ、冷却コンデンサーを備えた抽出器で５時間にわたって加熱して抽出した。これを３００メッシュの濾過布で濾過し、５〜１０℃で、７〜１０日間放置して熟成させてから、ワットマン５番濾過紙で濾過した。この濾液を６５℃でロータリーエバポレータで乾燥して５９．４０ｇの乾燥重量を得た。
【００１７】
【実施例２４〜３２】
実施例２３と同様の方法で抽出してその結果を表２に示す。
【００１８】
【表２】
0003549717.tif 000003
【００１９】
【実験例１】
実施例１〜３２により製造された桑枝抽出物に対してチロシナーゼ活性を阻害する効果を評価した。
【００２０】
チロシナーゼは、茸より分離および精製されたもので、Ｓｉｇｍａ社から購入して使用した。基質であるチロシンは、０．０５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ６．８）に溶かし、０．１ｍｇ／ｍｌの溶液として使用した。
【００２１】
実施例１〜３２による抽出物を１，３−ブチレングリコールに高濃度で溶解させ、再び緩衝溶液に希釈して適当な濃度で調節し、抽出物試料液として使用した。
０．５ｍｌのチロシン溶液を試験管に入れ、これに０．５ｍｌの抽出物試料液を加えて３７℃の恒温器で１０分間放置した。これに０．５ｍｌのチロシナーゼ（２００Ｕ／ｍｌ）を入れ、３７℃で１０分間反応させた。この際にリファレンスとして、各抽出物の代わりに０．５ｍｌの緩衝溶液を入れたものを用いた。この反応液の入れてある試験管を氷の上に置いて急冷させて反応を中止し、分光光度計で波長４７５ｎｍでの吸光度を測定した。
【００２２】
各抽出物によるチロシナーゼ活性を阻害する効果を、次の式により求めた。
チロシナーゼ活性の阻害率（％）＝１００−（１００×各抽出物の吸光度／リファレンスの吸光度）
前記実験の結果を次の表３に示す。
【００２３】
【表３】
0003549717.tif 000004
【００２４】
【比較例１−５】
精製水で洗浄、乾燥した桑白皮（比較例１）、甘草（比較例２）、五倍子（比較例３）、ケヤマシュクヤク（比較例４）及びエンジャ花（比較例５）各々を、実施例８と同様の方法で抽出して乾燥物を得た。
【００２５】
【実験例２】
［実験例２：桑枝抽出物と桑白皮などのような各種の天然抽出物とのチロシナーゼ活性を阻害する効果の比較］
桑枝抽出物は、前記実施例８により製造したものを使用した。
【００２６】
桑枝抽出物と前記比較例１〜５により製造した抽出物の濃度によるチロシナーゼ活性を阻害する効果を実験例１と同様の方法で測定した。
桑枝抽出物によるチロシナーゼ活性を阻害する効果を、既存の美白物質に開発された桑白皮、甘草、五倍子、ケヤマシャクヤク及びエンジャ花の抽出物によるチロシナーゼ活性を阻害する効果と比較した。
【００２７】
前記実験の結果を次の表４に示す。
【００２８】
【表４】
0003549717.tif 000005
【００２９】
桑枝抽出物は、濃度によるチロシナーゼ活性を阻害する効果とＩＣ５０において、桑白皮などの天然抽出物に比べて優れた美白効能を示した。
【００３０】
【実験例３】
［実験例３：桑枝抽出物と桑白皮抽出物とによるチロシナーゼ活性を阻害する効果の持続性比較］
桑枝抽出物と桑白皮抽出物とが安定的に持続的な美白効能を発揮することを観察するために、実験例１の方法により抽出した抽出物を添加した反応液を、３７℃で反応時間帯別にチロシナーゼ活性を阻害する効果を評価した。
【００３１】
桑枝抽出物は、前記実施例８により製造されたものを使用し、桑白皮抽出物は、前記比較例１により製造したものを使用した。
前記実験の結果を第１図に示す。
【００３２】
桑枝抽出物によるチロシナーゼ活性を阻害する効果の持続性は、桑白皮抽出物に比べて相当に優れた。具体的には、桑白皮抽出物は、桑枝抽出物に比べて１０倍以上の濃度でしか、同等のチロシナーゼ活性を阻害する効果の持続性を示さなかった。
【００３３】
【実験例４】
［実験例４：メラノサイトでメラニンの生成に対する桑枝抽出物と桑白皮抽出物との比較］
メラノサイトは、マウス由来のＢ−１６黒色腫（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ６３２３）細胞株を購入して使用した。
【００３４】
黒色腫細胞株を、４．５ｇ／Ｌのぶどう糖、１０％血清、１％抗生剤含有のＤＭＥＭ培地に接種し、５０ｍｌのＴ−フラスコに３７℃で培養した。５％ＣＯ２の条件下で、２４時間培養した後、０．０２％  ＥＤＴＡ含有の０．０５％  トリプシンで処理して細胞を分離し、５０ｍｌのＴ−フラスコに接種して４８時間培養した。この際、細胞数は４．５７×１０６細胞／フラスコである。これに適当な濃度の桑枝抽出物をＤＭＥＭ培地に希釈し、培養された黒色腫細胞を処理して３７℃で５日間培養した。培養の後、培地を全て除去し、０．０２％  ＥＤＴＡと０．０５％  トリプシンとを含有した１ｍＬの燐酸塩緩衝溶液（ＰＢＳ）で処理して細胞を分離した後、５分間遠心分離して細胞だけを採取した。５％三塩化酢酸塩（ＴＣＡ）で処理して攪拌し、遠心分離して沈殿したメラニンを燐酸塩緩衝溶液で洗浄した。沈殿したメラニンを１Ｎ  ＮａＯＨで処理して溶解させた後、４７５ｎｍで吸光度を測定した。メラニンの濃度は、合成のメラニン（Ｓｉｇｍａ）の標準濃度曲線より決定した。
【００３５】
前記実験の結果を次の表５に示す。
【００３６】
【表５】
0003549717.tif 000006
【００３７】
前記実験の結果によると、桑枝抽出物は桑白皮抽出物に比べて相当に強力な美白効果を示した。
【００３８】
【実験例５】
［実験例５：桑枝抽出物と桑白皮抽出物との成分比較］
桑枝と桑白皮とは同一の桑からの天然物であり、前記２つの天然物が同時にチロシナーゼ活性を阻害する効果を示すので、前記２つの天然物に対する成分を薄層クロマトグラフィーで分析した。
【００３９】
前記実施例８と比較例１により製造された２μｌの抽出物を、シリカゲル薄層プレート（シリカゲル  ６０  Ｆ  ２５４，  Ｍｅｒｃｋ社）に点滴した後、薄膜クロマトグラフィーを展開した。この際に使用した溶離液は、ｎ−ブタノール：３Ｎ−アンモニア水：エタノール（５：２：１）の混合液であった。
【００４０】
各抽出物の成分構成は次の式により求めた。
Ｒｆ値＝試料の移動距離／溶媒の移動距離
【００４１】
【表６】
0003549717.tif 000007
【００４２】
桑枝抽出物の成分と桑白皮抽出物の成分とには相当な差があることが分かる。
【００４３】
【処方例１】
桑枝抽出物を含有した化粧料の中、柔軟化粧水（スキン）の処方例は次のようである。ここで、桑枝抽出物は実施例１０のものである。
【００４４】
【表７】
0003549717.tif 000008
【００４５】
【処方例２】
桑枝抽出物を含有した化粧料の中、ミルクローションの処方例は次のようである。ここで、桑枝抽出物は実施例１０のものである。
【００４６】
【表８】
0003549717.tif 000009
【００４７】
【処方例３】
桑枝抽出物を含有した化粧料の中、栄養クリームの処方例は次のようである。ここで、桑枝抽出物は実施例１０のものである。
【００４８】
【表９】
0003549717.tif 000010
【００４９】
【処方例４】
桑枝抽出物を含有した化粧料の中、マッサージクリームの処方例は次のようである。ここで、桑枝抽出物は実施例１０のものである。
【００５０】
【表１０】
0003549717.tif 000011
【００５１】
【処方例５】
桑枝抽出物を含有した化粧料の中、パックの処方例は次のようである。ここで、桑枝抽出物は実施例１０のものである。
【００５２】
【表１１】
0003549717.tif 000012
【００５３】
【実験例６】
［実験例６：本発明による化粧料の美白効果評価］
本発明による化粧料の美白効果を、実際に使用テストを通じて評価した。処方例３による０．１％桑枝抽出物を含有する栄養クリームと、処方例３により桑枝抽出物の代わりに精製水を用いたクリームを使用した。８０人の３０〜４０歳の女性を無作為に２個群に分け、毎日に朝と夜の２回ずつ顔を洗った後、それぞれ処方例３または比較例のクリームの適当量を顔面に２カ月にわたって連続的に塗らせた。美白効果は、実際の使用試験の終了後、顔面の改善効果を観察して評価した。前記実験の結果を次の表７に示す。
【００５４】
【表１２】
0003549717.tif 000013
【００５５】
実験結果によると、桑枝抽出物を含有した本発明品は、比較例に比べて著しい美白効果を示したことを証明した。また、本発明品を塗布した部位で皮膚刺激などの副作用が全然観察されなかった。
【００５６】
本発明による桑枝抽出物の美白効果を、既存の美白物質として開発された桑白皮、甘草、五倍子、ケヤマシャクヤク及びエンジャ花抽出物と比較した結果、本発明による桑枝抽出物は、一番優れたチロシナーゼ活性を阻害する効果を発揮したので、優れる美白物質であることが証明された。
【００５７】
また、桑枝と桑白皮は同一の桑から由来する天然物であり、前記２つの抽出物は全部チロシナーゼ活性を阻害する効果を示すが、前記２つの抽出物成分を分析した結果、抽出物成分に大きな差があった。また、チロシナーゼ活性を阻害する効果に対する実験およびメラノサイトからメラニンの生成に対する比較実験によると、桑枝抽出物は桑白皮抽出物に比べて美白効果もずっと優れた。とくに、桑枝抽出物は、チロシナーゼ活性を阻害する効果の持続性が優れて桑白皮抽出物とは差別化された。具体的には、桑枝抽出物は桑白皮抽出物に比べて１／１０の濃度でも桑白皮抽出物と類似な程度のチロシナーゼ活性を阻害する効果の持続性を示した。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、桑枝抽出物または桑白皮抽出物によるチロシナーゼ活性を阻害する効果の持続性を示すグラフである。
【図１】
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