【手続補正書】
【提出日】平成29年1月31日(2017.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
Ｎ−Ｙ−Ｊ−Ｚ−Ｃ（Ｉ）
のポリペプチドを含むプラスミン阻害ポリペプチドであって、式中、
（ａ）Ｎは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのアミノ末端であり、天然および非天然アミノ酸から独立して選択される０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５〜３０、３１〜４０、４１〜５０または５１〜６０アミノ酸からなり、
（ｂ）Ｙは、存在しないか、またはメチオニンもしくはＮ−ホルミルメチオニンであり、
（ｃ）Ｊは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する５７アミノ酸のクニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）ポリペプチドであり、
（ｄ）Ｚは、
（ｉ）一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｉ）一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）［配列番号２］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｉｉ）一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｖ）一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｖ）一般式（ＶＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｘ６（ＶＩ）［配列番号３０］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ６は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、Ｘ３は、ＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ６は、いずれかの天然または非天然アミノ酸である、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、ならびに
（ｖｉ）一般式（ＶＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｘ６−Ｘ７（ＶＩＩ）［配列番号３１］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３、Ｘ６およびＸ７は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、Ｘ３は、ＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ６は、いずれかの天然または非天然アミノ酸であり、Ｘ７は、いずれかの天然または非天然アミノ酸である、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド
から選択されるＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、
（ｅ）Ｃは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのカルボキシ末端であり、０アミノ酸からなり、
（ｆ）前記プラスミン阻害ポリペプチドは、プラスミン活性を阻害し、
任意選択で、前記プラスミン阻害ポリペプチドは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する野生型ヒト組織因子経路阻害剤−２（ＴＦＰＩ−２）ポリペプチドの第１のクニッツ型プロテイナーゼ阻害剤ドメイン（ＫＤ１）と比較して、減少した抗凝固活性を有する、
プラスミン阻害ポリペプチド。
【請求項２】
（ａ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で、配列ＩＥＫを有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｂ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫを有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｃ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫＶＰ［配列番号２０］を有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｄ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫＶ［Ｘ３がＥである配列番号２１］を有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｅ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫＶＰＫ［Ｘ３がＥであり、Ｘ４がＰである配列番号２］を有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｆ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫＶＰＫ［Ｘ３がＥであり、Ｘ４がＰである配列番号２］を有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｇ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、そしてＸ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫＶＰ［Ｘ３がＥであり、Ｘ５がＰである配列番号２０］を有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド、ならびに
（ｈ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、任意選択で配列ＩＥＫＶ［Ｘ３がＥである配列番号２１］を有する、前記プラスミン阻害ポリペプチド
から選択される、請求項１に記載のプラスミン阻害ポリペプチド。
【請求項３】
プラスミン活性を阻害する、配列番号３〜１８、２２〜２９および３２〜３５のうちいずれか１種に記載のアミノ酸配列を含むプラスミン阻害ポリペプチドであって、
任意選択で、前記プラスミン阻害ポリペプチドは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する野生型ヒト組織因子経路阻害剤−２（ＴＦＰＩ−２）ポリペプチドの第１のクニッツ型プロテイナーゼ阻害剤ドメイン（ＫＤ１）と比較して、減少した抗凝固活性を有する、
２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８９、８８、８７、８６、８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、６４または６３アミノ酸以下のプラスミン阻害ポリペプチド。
【請求項４】
一般式（Ｉ）：
Ｎ−Ｙ−Ｊ−Ｚ−Ｃ（Ｉ）
のプラスミン阻害ポリペプチドのアミノ酸配列に対し少なくとも９６、９７、９８または９９％同一のアミノ酸配列を有する、６０または６１アミノ酸のプラスミン阻害ポリペプチドであって、式中、
（ａ）Ｎは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのアミノ末端であり、
（ｂ）Ｙは、存在しないか、またはメチオニンもしくはＮ−ホルミルメチオニンであり、
（ｃ）Ｊは、配列番号１の１１位におけるアミノ酸Ｘ１が、Ｄ、ＮまたはＳであり、配列番号１の１７位におけるアミノ酸Ｘ２が、Ｒであり、システイン残基が、配列番号１のアミノ酸の１４位および３８位のそれぞれに存在する、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する５７アミノ酸のクニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）ポリペプチドであり、
（ｄ）Ｚは、一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、
（ｅ）Ｃは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのカルボキシ末端であり、かつ０アミノ酸からなり、そして
（ｆ）前記プラスミン阻害ポリペプチドは、プラスミン活性を阻害し、
任意選択で、前記プラスミン阻害ポリペプチドは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する野生型ヒト組織因子経路阻害剤−２（ＴＦＰＩ−２）ポリペプチドの第１のクニッツ型プロテイナーゼ阻害剤ドメイン（ＫＤ１）と比較して、減少した抗凝固活性を有する、
プラスミン阻害ポリペプチド。
【請求項５】
融合ポリペプチドドメインに融合された請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを含む、融合タンパク質。
【請求項６】
ＰＡＧ化ポリペプチドを形成するためにポリアルキレングリコールが付着している、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを含み、任意選択で、ポリアルキレングリコールが、ポリエチレングリコールであり、前記ＰＡＧ化ポリペプチドが、ＰＥＧ化ポリペプチドである、組成物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチド、および前記ポリヌクレオチドを含む発現ベクターから選択されるポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７に記載の発現ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを産生する方法であって、
ａ）前記プラスミン阻害ポリペプチドの発現を可能にするのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたり、請求項８に記載の宿主細胞を培養するステップと、
ｂ）培養された前記宿主細胞から前記プラスミン阻害ポリペプチドを単離するステップと
を含み、
任意選択で、前記宿主細胞によって発現された前記プラスミン阻害ポリペプチドが、Ｎ末端メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンを含み、かつ前記宿主細胞は、メチオニンアミノペプチダーゼ（ＭＡＰ）が前記プラスミン阻害ポリペプチドから前記Ｎ末端メチオニンまたは前記Ｎ−ホルミルメチオニンを除去するのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたり、前記ＭＡＰを発現する、方法。
【請求項１０】
ａ）請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドまたは請求項５に記載の融合タンパク質と、
ｂ）生理学的に許容される担体と
を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
プラスミン活性を阻害するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法であって、
（ｉ）プラスミンを（ｉｉ）請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドと、前記プラスミン阻害ポリペプチドが前記プラスミンに結合するのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたりｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させて、これにより、プラスミン活性を阻害するステップ
を含む、方法。
【請求項１２】
医薬における使用のための、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドまたは請求項７に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記被験体が、プラスミン活性の阻害を必要とするか、またはがん、血友病、関節リウマチもしくは全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を有する、もしくはそのリスクが疑われるか、または前記被験体が、血管新生、骨リモデリングもしくは冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）を必要とする、もしくはそれを受けており、
任意選択で、前記被験体が、外科手術を受けているところか、または外科手術を最近受けており、
任意選択で、前記外科手術が、心血管外科手術、腫瘍学的外科手術、尿生殖器外科手術、整形外科手術、胸部外科手術、形成外科手術、外傷外科手術、腹部外科手術、移植外科手術、神経学的外科手術または耳鼻科学的外科手術である、請求項１２に記載の使用のためのプラスミン阻害ポリペプチド。
【請求項１４】
クニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）を含むプラスミン阻害ポリペプチドを単離するための方法であって、前記方法は：
（ａ）（ｉ）不活性化されたプラスミンが固定化された固相を、（ｉｉ）クニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）を含むプラスミン阻害ポリペプチドおよび不純物を含む試料と、前記不活性化プラスミンへの前記ＫＤ１の結合に十分な条件下でかつ十分な時間にわたり接触させるステップと、
（ｂ）ＫＤ１−プラスミン結合を破壊しない条件下で前記固相を洗浄して、不純物を除去するステップと、
（ｃ）前記固相から前記ＫＤ１を溶出させて、これにより、前記ＫＤ１を含む前記ポリペプチドを単離するステップと
を含み、
任意選択で、前記プラスミン阻害ポリペプチドが、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドである、方法。
【請求項１５】
単離されたタンパク質または単離された生体試料中のタンパク質をタンパク質分解から保護するための方法であって、
前記単離されたタンパク質または前記単離された生体試料を、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドと接触させるステップ
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
本発明の上述および他の態様は、次の詳細な説明および添付の図面を参照することにより明らかになるものと予想される。本明細書で述べられた、および／または出願データシートに収載されたあらゆる米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は、これらのそれぞれが個々に組み込まれているかのように、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる。様々な特許、出願および刊行物の概念を採用して本発明のさらに別の実施形態を提供するために、本発明の態様は必要に応じて修正することができる。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
一般式（Ｉ）：
Ｎ−Ｙ−Ｊ−Ｚ−Ｃ（Ｉ）
のポリペプチドを含むプラスミン阻害ポリペプチドであって、式中、
（ａ）Ｎは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのアミノ末端であり、天然および非天然アミノ酸から独立して選択される０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５〜３０、３１〜４０、４１〜５０または５１〜６０アミノ酸からなり、
（ｂ）Ｙは、存在しないか、またはメチオニンもしくはＮ−ホルミルメチオニンであり、
（ｃ）Ｊは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する５７アミノ酸のクニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）ポリペプチドであり、
（ｄ）Ｚは、
（ｉ）一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）［配列番号２］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｉ）一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｉｉ）一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｖ）一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｖ）一般式（ＶＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｘ６（ＶＩ）［配列番号３０］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ６は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、Ｘ３は、ＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ６は、いずれかの天然または非天然アミノ酸である、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、ならびに
（ｖｉ）一般式（ＶＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｘ６−Ｘ７（ＶＩＩ）［配列番号３１］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３、Ｘ６およびＸ７は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、Ｘ３は、ＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ６は、いずれかの天然または非天然アミノ酸であり、Ｘ７は、いずれかの天然または非天然アミノ酸である、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド
から選択されるＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、
（ｅ）Ｃは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのカルボキシ末端であり、天然および非天然アミノ酸から独立して選択される０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５〜３０、３１〜４０、４１〜５０または５１〜６０アミノ酸からなり、
（ｆ）前記プラスミン阻害ポリペプチドは、プラスミン活性を阻害する、
プラスミン阻害ポリペプチド。
（項目２）
（ａ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｂ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｃ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｄ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｅ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｆ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｇ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、そしてＸ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド、ならびに
（ｈ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、そしてＺが、一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、前記プラスミン阻害ポリペプチド
から選択される、項目１に記載のプラスミン阻害ポリペプチド。
（項目３）
（ａ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫＶＰＫ［Ｘ３がＥであり、Ｘ４がＰである配列番号２］を有する式（ＩＩ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｂ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫを有する式（ＩＩＩ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｃ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫＶＰ［配列番号２０］を有する式（ＩＶ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｄ）Ｎ、ＹおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫＶ［配列番号２１］を有する式（Ｖ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｅ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫＶＰＫ［Ｘ３がＥであり、Ｘ４がＰである配列番号２］を有する式（ＩＩ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｆ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫを有する式（ＩＩＩ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、
（ｇ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫＶＰ［配列番号２０］を有する式（ＩＶ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド、ならびに
（ｈ）ＮおよびＣがそれぞれ存在せず、Ｙが、メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンであり、Ｊが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する前記ＫＤ１ポリペプチドであり、Ｚが、配列ＩＥＫＶ［配列番号２１］を有する式（Ｖ）の前記ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドである、前記プラスミン阻害ポリペプチド
から選択される、項目１に記載のプラスミン阻害ポリペプチド。
（項目４）
プラスミン活性を阻害する、配列番号３〜１８、２２〜２９および３２〜３５のうちいずれか１種に記載のアミノ酸配列を含む、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８９、８８、８７、８６、８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、６４または６３アミノ酸以下のプラスミン阻害ポリペプチド。
（項目５）
一般式（Ｉ）：
Ｎ−Ｙ−Ｊ−Ｚ−Ｃ（Ｉ）
のプラスミン阻害ポリペプチドのアミノ酸配列に対し少なくとも９６、９７、９８または９９％同一のアミノ酸配列を有する、６０または６１アミノ酸のプラスミン阻害ポリペプチドであって、式中、
（ａ）Ｎは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのアミノ末端であり、
（ｂ）Ｙは、存在しないか、またはメチオニンもしくはＮ−ホルミルメチオニンであり、
（ｃ）Ｊは、配列番号１の１１位におけるアミノ酸Ｘ１が、Ｄ、ＮまたはＳであり、配列番号１の１７位におけるアミノ酸Ｘ２が、Ｒであり、システイン残基が、配列番号１のアミノ酸の１４位および３８位のそれぞれに存在する、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する５７アミノ酸のクニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）ポリペプチドであり、
（ｄ）Ｚは、一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、
（ｅ）Ｃは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのカルボキシ末端であり、そして
（ｆ）前記プラスミン阻害ポリペプチドは、プラスミン活性を阻害する、
プラスミン阻害ポリペプチド。
（項目６）
一般式（Ｉ）：
Ｎ−Ｙ−Ｊ−Ｚ−Ｃ（Ｉ）
のプラスミン阻害ポリペプチドのアミノ酸配列に対し少なくとも９４、９５、９６、９７、９８または９９％同一のアミノ酸配列を有する、６３または６４アミノ酸のプラスミン阻害ポリペプチドであって、式中、
（ａ）Ｎは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのアミノ末端であり、
（ｂ）Ｙは、存在しないか、またはメチオニンもしくはＮ−ホルミルメチオニンであり、
（ｃ）Ｊは、配列番号１の１１位におけるアミノ酸Ｘ１が、Ｄ、ＮまたはＳであり、配列番号１の１７位におけるアミノ酸Ｘ２が、Ｒであり、システイン残基が、配列番号１のアミノ酸の１４位および３８位のそれぞれに存在する、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する５７アミノ酸のクニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）ポリペプチドであり、
（ｄ）Ｚは、一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）［配列番号２］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、
（ｅ）Ｃは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのカルボキシ末端であり、そして
（ｆ）前記プラスミン阻害ポリペプチドは、プラスミン活性を阻害する、
プラスミン阻害ポリペプチド。
（項目７）
一般式（Ｉ）：
Ｎ−Ｙ−Ｊ−Ｚ−Ｃ（Ｉ）
のプラスミン阻害ポリペプチドのアミノ酸配列に対し少なくとも９４、９５、９６、９７、９８または９９％同一のアミノ酸配列を有する、６１、６２、６３または６４アミノ酸のプラスミン阻害ポリペプチドであって、式中、
（ａ）Ｎは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのアミノ末端であり、
（ｂ）Ｙは、存在しないか、またはメチオニンもしくはＮ−ホルミルメチオニンであり、
（ｃ）Ｊは、配列番号１の１１位におけるアミノ酸Ｘ１が、Ｄ、ＮまたはＳであり、配列番号１の１７位におけるアミノ酸Ｘ２が、Ｒであり、システイン残基が、配列番号１のアミノ酸の１４位および３８位のそれぞれに存在する、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する５７アミノ酸のクニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）ポリペプチドであり、
（ｄ）Ｚは、以下：
（ｉ）一般式（ＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ４−Ｋ（ＩＩ）［配列番号２］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ４は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｉ）一般式（ＩＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ（ＩＩＩ）
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｉｉ）一般式（ＩＶ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ−Ｘ５（ＩＶ）［配列番号２０］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ５は、独立しており、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ５は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｉｖ）一般式（Ｖ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｖ（Ｖ）［配列番号２１］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３は、天然および非天然アミノ酸から選択されるアミノ酸であり、かつＣでもＦでもＲでもＷでもない、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、
（ｖ）一般式（ＶＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｘ６（ＶＩ）［配列番号３０］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３およびＸ６は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、Ｘ３は、ＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ６は、いずれかの天然または非天然アミノ酸である、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド、ならびに
（ｖｉ）一般式（ＶＩＩ）：
Ｉ−Ｘ３−Ｋ−Ｘ６−Ｘ７（ＶＩＩ）［配列番号３１］
のＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであって、式中、Ｘ３、Ｘ６およびＸ７は、天然および非天然アミノ酸から独立して選択されるアミノ酸であり、Ｘ３は、ＣでもＦでもＲでもＷでもなく、Ｘ６は、いずれかの天然または非天然アミノ酸であり、Ｘ７は、いずれかの天然または非天然アミノ酸である、ＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチド
から選択されるＫＤ１カルボキシ領域ポリペプチドであり、
（ｅ）Ｃは、前記プラスミン阻害ポリペプチドのカルボキシ末端であり、
（ｆ）前記プラスミン阻害ポリペプチドは、プラスミン活性を阻害する、
プラスミン阻害ポリペプチド。
（項目８）
配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する野生型ヒト組織因子経路阻害剤−２（ＴＦＰＩ−２）ポリペプチドの第１のクニッツ型プロテイナーゼ阻害剤ドメイン（ＫＤ１）と比較して、減少した抗凝固活性を有する、項目１、４、５、６および７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチド。
（項目９）
融合ポリペプチドドメインに融合された項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを含む、融合タンパク質。
（項目１０）
項目９に記載の融合タンパク質と、生理学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目１１）
ＰＡＧ化ポリペプチドを形成するためにポリアルキレン（ｐｏｌｙａｋｙｌｅｎｅ）グリコールが付着している、項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを含む、組成物。
（項目１２）
前記ポリアルキレン（ｐｏｌｙａｋｙｌｅｎｅ）グリコールが、ポリエチレングリコールであり、前記ＰＡＧ化ポリペプチドが、ＰＥＧ化ポリペプチドである、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
項目１に記載のプラスミン阻害ポリペプチドをコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
（項目１４）
項目１３に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（項目１５）
項目１４に記載の発現ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。
（項目１６）
項目１に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを産生する方法であって、
ａ）前記プラスミン阻害ポリペプチドの発現を可能にするのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたり、項目１５に記載の宿主細胞を培養するステップと、
ｂ）培養された前記宿主細胞から前記プラスミン阻害ポリペプチドを単離するステップと
を含む、方法。
（項目１７）
前記宿主細胞によって発現された前記プラスミン阻害ポリペプチドが、Ｎ末端メチオニンまたはＮ−ホルミルメチオニンを含み、かつ前記宿主細胞は、メチオニンアミノペプチダーゼ（ＭＡＰ）が前記プラスミン阻害ポリペプチドから前記Ｎ末端メチオニンまたは前記Ｎ−ホルミルメチオニンを除去するのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたり、前記ＭＡＰを発現する、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
ａ）項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドと、
ｂ）生理学的に許容される担体と
を含む、医薬組成物。
（項目１９）
プラスミン活性を阻害するための方法であって、
（ｉ）プラスミンを（ｉｉ）項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドと、前記プラスミン阻害ポリペプチドが前記プラスミンに結合するのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたり接触させて、これにより、プラスミン活性を阻害するステップ
を含む、方法。
（項目２０）
前記接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
プラスミン活性の阻害を必要とする被験体を処置するための方法であって、前記被験体に、有効量の項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドまたは項目１３に記載の単離されたポリヌクレオチドを投与するステップを含む、方法。
（項目２２）
前記被験体が、がん、血友病、関節リウマチもしくは全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を有する、もしくはそのリスクが疑われるか、または前記被験体が、血管新生、骨リモデリングもしくは冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）を必要とする、もしくはそれを受けた、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記被験体が、外科手術を受けているか、または外科手術を最近受けた、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記外科手術が、心血管外科手術、腫瘍学的外科手術、尿生殖器外科手術、整形外科手術、胸部外科手術、形成外科手術、外傷外科手術、腹部外科手術、移植外科手術、神経学的外科手術または耳鼻科学的外科手術である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
クニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）を含むプラスミン阻害ポリペプチドを単離するための方法であって、前記方法は：
（ａ）（ｉ）不活性化されたプラスミンが固定化された固相を、（ｉｉ）クニッツ型プロテイナーゼの第１の阻害剤ドメイン（ＫＤ１）を含むプラスミン阻害ポリペプチドおよび不純物を含む試料と、前記不活性化プラスミンへの前記ＫＤ１の結合に十分な条件下でかつ十分な時間にわたり接触させるステップと、
（ｂ）ＫＤ１−プラスミン結合を破壊しない条件下で前記固相を洗浄して、不純物を除去するステップと、
（ｃ）前記固相から前記ＫＤ１を溶出させて、これにより、前記ＫＤ１を含む前記ポリペプチドを単離するステップと
を含む、方法。
（項目２６）
前記試料が、項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドを含有する、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
単離されたタンパク質または単離された生体試料中のタンパク質をタンパク質分解から保護するための方法であって、
前記単離されたタンパク質または前記単離された生体試料を、項目１〜７のいずれか一項に記載のプラスミン阻害ポリペプチドと接触させるステップ
を含む、方法。