(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）誘起物質を有効成分として含有するフリーラジカルに起因する臓器障害治療薬。
【請求項２】
フリーラジカルが、臓器の外科的治療又は臓器移植時における虚血再灌流時に発生するものである請求項１記載の臓器障害治療薬。
【請求項３】
さらにヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを有効成分として含有する請求項１又は２記載の臓器障害治療薬。
【請求項４】
ＳＯＤ誘起物質が多糖類である請求項１〜３のいずれか１項記載の臓器障害治療薬。
【請求項５】
多糖類がレンチナン、ピシバニールおよびクレスチンから成る群より選ばれる請求項４記載の臓器障害治療薬。
【請求項６】
多糖類がレンチナンである請求項５記載の臓器障害治療薬。
【請求項７】
ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドが配列表の配列番号１又は２記載のアミノ酸配列を有するものである請求項３〜６のいずれか１項記載の臓器障害治療薬。
【請求項８】
ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドが大腸菌で生産されたものである請求項３〜６のいずれか１項記載の臓器障害治療薬。
【請求項９】
臓器が肝臓である請求項１〜８のいずれか１項記載の臓器障害治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ＳＯＤ誘起物質又はヒト成人Ｔ細胞白血病由来因子（以下ヒトＡＤＦと称する）活性を有するポリペプチド、或は両者を有効成分とする臓器障害治療薬又は肝臓障害治療薬に関する。
【０００２】
【従来技術】
スーパーオキシド、過酸化水素、ヒドロキシルラジカル等のフリーラジカルや活性酸素（フリーラジカルと総称する）は殺菌作用を有し生体防御物質として働くが、過剰に産生されたフリーラジカルは生体に対して障害を引き起こすようになる。例えば、生体が虚血状態に陥ると組織の壊死が進行するが、ここに再び血流が再開（再潅流）し組織が再酸素化を受けると、むしろ重大な組織障害がもたらされる（Ｈｅａｒｓｅ，  Ｄ．  Ｊ．：Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．，  ９，６０５−６１６  （１９７７））  。このような虚血再潅流障害において、フリーラジカルが関与する事が近年明らかになってきた。即ち、虚血後の再潅流により生体局所にフリーラジカルが過剰に発生することが実験的に確かめられ、これらのフリーラジカルが蛋白質の変性、核酸の切断、脂肪の過酸化を引き起こし、生体障害を引き起こすと考えられるに至った。
一方、生体内にはグルタチオンペルオキシダーゼ、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤと称される）、カタラーゼ等のフリーラジカル消去酵素、プロテインジスルフィドイソメラーゼ等の修復酵素あるいはα−トコフェロール、アスコルビン酸、ＣｏＱ  １０等の抗酸化物質が存在し生体を保護しているが、大量のフリーラジカルが発生した場合には、消去、修復が追いつかなくなり、その結果、組織に障害が引き起こされるのである（井上正康（監訳）：活性酸素と疾患，学会出版，東京（１９８７））。この虚血再潅流障害は、近年臨床の間でも問題になっており、最も重要なのは肝、腎、膵等の外科的治療あるいは臓器移植である。臓器の外科的治療においては一旦臓器の血流を停止させる事により臓器に虚血状態がもたらされる。術後、血流を再開（再潅流）した時、組織内に大量にフリーラジカルが発生し臓器障害が引き起こされるのである。
【０００３】
また臓器移植においても、拒絶反応の克服と共に、虚血再潅流性臓器障害の克服が移植の成功を左右する大きな因子であることが近年認識されるようになった。即ち、提供者から臓器を取りだす時、臓器内の血流が停止（虚血）する。そして、患者の体内に摘出臓器を移植したとき血流が再開（再潅流）するが、この時に虚血再潅流に伴うフリーラジカルが発生し、その結果、臓器障害が引き起こされるのである。現在、フリーラジカルに起因する臓器障害を防止する目的で種々の薬剤の開発が進められている。中でも、ＳＯＤはラジカルスカベンジャー活性を有することから虚血再潅流性臓器障害等のフリーラジカルに起因する臓器障害の治療薬として有望視されているが、生体内半減期が短いこと、多量に投与するとかえって効果が減少すること等から臨床応用する上で解決すべき課題が残されている。従って、現在、各種臓器の外科的治療及び臓器移植時の虚血再潅流性障害等において過剰に発生するフリーラジカルから臓器を保護し、治療成績を向上させ得る薬剤は市場に存在しない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、各種臓器の外科的治療あるいは臓器移植時における虚血再潅流などにおいて過剰に発生するフリーラジカルから臓器を保護し、治療成績を大幅に向上させ得る薬剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
本発明者は上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、免疫賦活剤又はヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを有効成分とする薬剤に優れた臓器障害治療作用を見い出し、さらにＳＯＤ誘起物質とヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドの両者を用いるとその作用が飛躍的に向上することを見いだし本発明を完成するに至った。即ち、本発明はＳＯＤ誘起物質及びヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを有効成分として含有する臓器障害の治療薬である。
【０００５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明で用いられるＳＯＤ誘起物質には、レンチナン、シゾフィラン等のような抗腫瘍剤として使用されている薬剤を始めとする多糖類、ＯＫ−４３２（ピシバニールとも呼ばれる）及びＰＳＫ（クレスチンとも呼ばれる）並びにこれらと同様の作用を有する化合物が包含される。中でも、中性多糖に属し直接細胞毒性を持たず、かつ生体防御機構の賦活化能に優れているレンチナンを好ましいものとして挙げる事が出来る。特に、上記で具体的に列挙した免疫賦活剤はそれ自体公知の化合物であり、例えばレンチナンについてはＢｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．４  ，Ｎｏ．６，１１１４〜１１２６ページ（１９７９）に詳細な記載がある。
また、ヒトＡＤＦはＡＴＬ−２細胞の上清に存在するＩＬ−２レセプター誘導因子として１９８５年多賀谷らによって報告され、そのアミノ酸配列及びＤＮＡ配列も既に決定され、更に大腸菌での生産についても報告されている（特開平１−８５０９７号公報）。また、ヒトＡＤＦはその後の解析により、大腸菌からほ乳動物にいたるまで広く存在する酸化還元酵素であるチオレドキシンと類似のアミノ酸配列を持つことが明らかになった。
従って、研究者によっては本物質をチオレドキシンと呼ぶ場合もあるが、本発明に於いては、従来どおりヒトＡＤＦという名称で統一することにする。
尚、ヒトＡＤＦは現在、抗炎症剤、放射線防護剤として利用が検討されている（特開平３−２０４８１８号公報）。
【０００６】
本発明で用いられるヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチド（以下、ヒトＡＤＦＰと略する）としては通常、配列表の配列番号１又は２記載のアミノ酸配列を有するものが用いられるが、これに限定される訳ではない。即ち、ヒトＡＤＦ活性がある限り、Ｎ末端にメチオニン残基が付加されたポリペプチド、化学修飾、塩基置換法によりアミノ酸配列に置換が加わったポリペプチド、アミノ酸配列の一部に欠損があるポリペプチド、アミノ酸残基の挿入があるポリペプチド、あるいは側鎖に糖鎖等が付加されたポリペプチドであってもよい。
しかし、好ましくは配列表の配列番号１に示されているＮ末端バリンから始まる１０４個のアミノ酸からなるポリペプチド及び配列番号２に示されているメチオニンがＮ末端に付加された構造を持つポリペプチドが好ましい。
本発明で使用されるヒトＡＤＦＰは如何なる方法で製造しても良いが、通常は以下に示す方法で製造する。
即ち、（１）ヒト由来細胞株（例えばＡＴＬ−２細胞等）を培養し、その培養液または細胞抽出液から、塩析、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、逆相クロマトグラフィー、疏水性クロマトグラフィーなどの一般に用いられる手法により精製し、目的とするヒトＡＤＦＰを得る方法（特開平１−８５０９７号公報、特開昭６２−１９５３２号公報参照）、（２）遺伝子組換え法により、ヒトＡＤＦのｃＤＮＡまたはゲノム遺伝子を大腸菌、枯草菌、酵母、高等動物細胞、植物細胞などの宿主細胞に導入し、宿主細胞内で組換えヒトＡＤＦＰを発現させ、その後（１）に記したような手法を用いて精製する方法（特開平１−８５０９７号公報参照）、更には（３）ペプチド化学合成法により、配列表の配列番号１又は２記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドを合成する方法である。
【０００７】
本発明のＳＯＤ誘起物質を生体に投与することにより、生体内において臓器を構成する細胞内にラジカルスカベンジャーである内因性のＳＯＤが誘導される。従って、各種臓器の外科的治療時或は臓器移植時に本発明のＳＯＤ誘起物質を投与し目的臓器のＳＯＤ活性を高めておけば、上記治療において避けられない虚血再潅流に伴うフリーラジカルの発生から臓器を保護することが出来る。
また、本発明のヒトＡＤＦＰは、過酸化水素などのフリーラジカルを消去する事が出来、更にはフリーラジカルにより変性失活した蛋白をリフォールディングにより再活性化する事もできる。従って、各種臓器の外科的治療時あるいは臓器移植時に本発明のヒトＡＤＦＰを投与すればフリーラジカルによる臓器障害を防ぐ事が出来る。更にヒトＡＤＦＰはヒト由来の蛋白質であるので、人体に投与しても異物として認識されず毒性は非常に低い。
更に、本発明のＳＯＤ誘起物質とヒトＡＤＦＰとを併用すれば、標的細胞のフリーラジカルに対する抵抗性賦与と細胞外のフリーラジカル濃度減少の２つの点で、より優れた臓器障害防止効果が発揮出来る。
尚、本発明のＳＯＤ誘起物質及びヒトＡＤＦＰの安全性は動物実験により確認済みである。
このようなＳＯＤ誘起物質とヒトＡＤＦＰを有効成分として含有する薬剤とは、それぞれの有効成分を個別に又は同時に含む薬剤であって、本発明の目的とする効能を奏するものであればその剤形ならびに使用する賦形剤、割合および投与経路を問わない。従って、有効成分を個別に含む薬剤にあっては、それぞれ異なる経路及び／又は異なる時間に同一の患者に対して投与された場合であっても所期の効能を示す限り本発明の薬剤の概念に包含される。
【０００８】
本発明におけるＳＯＤ誘起物質およびヒトＡＤＦＰの剤形は、医薬として用いられているものについては現実に使用されている剤形、例えばレンチナンについては凍結乾燥品から成る静注用剤形であることが好ましい。しかしながらその他の一般的な薬剤に適用される非注射用剤形であっても良い。両有効成分はそれらが相互に他の薬剤の効能に悪影響を及ぼさない限りの単一製剤として調製することが出来るが、上述のごとくそれぞれ個別の製剤として用いることも出来る。
これらの製剤は、単一製剤であるか個別の製剤であるかを問わず、一般的に、非経口投与剤、特に注射液、好ましくは等張性水溶液または懸濁液が適するものである。これらは、担体、例えばマンニトールあるいはサイクロデキストリンを含む凍結乾燥製剤から使用前に調製することが出来る。このような製剤は、殺菌されそして／又は補助剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤及び／又は乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調製する塩及び／又は緩衝剤を含むことができる。
【０００９】
本発明の製剤は、場合によりさらに別の効能を有する薬剤を含有することができ、それ自体既知の方法、例えば混合、溶解又は凍結乾燥によって製造される。そして有効成分であるＳＯＤ誘起物質及びヒトＡＤＦＰをそれぞれ約０．１〜９９．９％、好ましくは、約１．０〜９９．０％、また凍結乾燥の場合には１００％まで含む事が出来る。もちろん、上記範囲に限定されるわけではない。
本発明の薬剤の投与は、患者の病態に応じてその最適の投与方法及び単位投与量を専門医が選ぶことが出来るが、一般に、ＳＯＤ誘起物質及びヒトＡＤＦＰの個別に調製した製剤を用いる場合には、体重約５０〜７０ｋｇの人に対する投与単位として前者を約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１〜１０ｍｇ、そして後者を約０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇとなるように選ぶことができる。これらの製剤は術前、術中、術後の何れかの時期に同時に、又は相違する時期に１回から数回、同一又は異なる経路で投与すれば良い。又、両者を併用する場合には、その比率は任意であるが、一般に１：１０〜１０：１が適当であり、その投与単位は、合計で０．１〜１００ｍｇが適当である。
【００１０】
以下、本発明を実施例に基づいて説明する。
【実施例】
（実施例１）レンチナンによる内因性ＳＯＤの誘導
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄、体重２００〜２４０ｇ、静岡実験動物から購入）の腹腔内にレンチナン（味の素（株）製）を投与し、一定期間経過後、肝臓を経門脈的に４℃のリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）にて洗浄し、液体窒素にて凍結、湿重量を測定後、リン酸緩衝液を加え１５秒間ホモジナイズし１５，０００ｒｐｍ  、２０分間遠沈後の上清を検体として、内因性ＳＯＤ活性をＳＯＤ測定キットワコー（和光純薬工業（株）製）を用いたニトロブルーテトラゾリウム還元法にて測定した。
レンチナンの投与は次のように行った。
Ａ群：レンチナン１ｍｇを投与。
Ｂ群：レンチナン１ｍｇを０、２、４、６日目に投与。
Ｃ群：レンチナン２ｍｇを０、７日目に投与。
それぞれ１回投与量を生理食塩水１ｍｌに溶解し、腹腔内に投与した。
結果を表１に示した。
【００１１】
【表１】
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【００１２】
表１に示したように、レンチナン投与によるラット肝臓の内因性ＳＯＤの発現誘導が認められた。Ａ群においては、第３日目に対照の１．５倍、又、Ｃ群においては第２日目に上昇する効果を認め、Ｂ群においては第９日以降漸次増加し第１３日目に対照値の５〜６倍と著明な増加が認められた。
【００１３】
（実施例２）レンチナンによる肝虚血再潅流障害の抑制効果
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄、体重２００〜２４０ｇ、静岡実験動物から購入）をエーテル麻酔下に開腹、肝右葉を門脈系のバイパスとして残し、６０分間虚血後、再潅流直後バイパスに供した右葉を切除し肝虚血再潅流モデルとした。虚血５分前にヘパリン２０ｕ／０．５ｍｌ生理食塩水を経陰茎静脈的に、虚血中に生理食塩水１ｍｌを腹腔内に、虚血後２ｍｌを皮下投与した。
レンチナン投与群はレンチナン１ｍｇを生理食塩水１ｍｌに溶解し、虚血３日前に腹腔内に投与した。また、対照群は生理食塩水のみを投与した。各群における７日生存率を表２に示した。
【００１４】
【表２】
0003569904.tif 000003
【００１５】
表２に示したように、７日生存率は、対照値の８．６％がレンチナン投与により４６％にまで改善した。
【００１６】
（実施例３）ヒトＡＤＦＰによる肝虚血再潅流障害の抑制効果
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄、体重２００〜２４０ｇ、静岡実験動物から購入）をエーテル麻酔下に開腹、肝右葉を門脈系のバイパスとして残し、６０分間虚血後、再潅流直後バイパスに供した右葉を切除し肝虚血再潅流モデルとした。虚血５分前にヘパリン２０ｕ／０．５ｍｌ生理食塩水を経陰茎静脈的に、虚血中に生理食塩水１ｍｌを腹腔内に、虚血後２ｍｌを皮下投与した。
ヒトＡＤＦＰ投与群は、組換えヒトＡＤＦＰ１００μｇ  を生理食塩水０．１ｍｌに溶解し、経陰茎静脈的に虚血５分前と再潅流５分前にそれぞれ１００μｇ  ずつ投与した。また、対照群は生理食塩水のみを投与した。各群における７日生存率を表３に示した。尚、組換えヒトＡＤＦＰは特開平１−８５０９７号公報記載の方法に準じて調製した。
【００１７】
【表３】
0003569904.tif 000004
【００１８】
表３に示したように、７日生存率は、対照値の８．６％が組換えヒトＡＤＦＰ投与により４５％にまで改善した。
【００１９】
（実施例４）レンチナンおよびヒトＡＤＦＰ併用による肝虚血再潅流障害の抑制効果
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄、体重２００〜２４０ｇ、静岡実験動物から購入）をエーテル麻酔下に開腹、肝右葉を門脈系のバイパスとして残し、６０分間虚血後、再潅流直後バイパスに供した右葉を切除し肝虚血再潅流モデルとした。虚血５分前にヘパリン２０ｕ／０．５ｍｌ生理食塩水を経陰茎静脈的に、虚血中に生理食塩水１ｍｌを腹腔内に、虚血後２ｍｌを皮下投与した。
レンチナンおよびヒトＡＤＦＰ投与群は、先ずレンチナン１ｍｇを生理食塩水１ｍｌに溶解し、虚血３日前に腹腔内に投与し、さらに、生理食塩水０．１ｍｌに溶解した組換えヒトＡＤＦＰ１００μｇ  を、経陰茎静脈的に虚血５分前と再潅流５分前にそれぞれ１００μｇ  ずつ投与した。また、対照群は生理食塩水のみを投与した。各群における７日生存率を表４に示した。
【００２０】
【表４】
0003569904.tif 000005
【００２１】
表４に示したように、７日生存率は、対照値の８．６％がレンチナンと組換えヒトＡＤＦＰの併用により６０％にまで改善した。レンチナン又は組換えヒトＡＤＦＰの単独投与時の４６％（実施例２）又は４５％（実施例３）に比較し、両者を併用することにより、より優れた効果が得られることが明らかになった。
【００２２】
（実施例５）レンチナンおよび組換えヒトＡＤＦＰによる虚血再潅流性肝循環血流障害の抑制効果
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄、体重２００〜２４０ｇ、静岡実験動物から購入）をエーテル麻酔下に開腹、肝右葉を門脈系のバイパスとして残し、６０分間虚血後、再潅流直後バイパスに供した右葉を切除し肝虚血再潅流モデルとした。虚血５分前にヘパリン２０ｕ／０．５ｍｌ生理食塩水を経陰茎静脈的に、虚血中に生理食塩水１ｍｌを腹腔内に、虚血後２ｍｌを皮下投与した。
レンチナンおよび組換えヒトＡＤＦＰの投与は次のように行った。
Ａ群：非投与。
Ｂ群：レンチナン１ｍｇを虚血３日前に投与。
Ｃ群：組換えヒトＡＤＦＰを虚血５分前と再潅流５分前にそれぞれ１００μｇずつ投与。
Ｄ群：レンチナン１ｍｇを虚血３日前に投与。さらに組換えヒトＡＤＦＰを虚血５分前と再潅流５分前にそれぞれ１００μｇずつ投与。
レンチナンは１回投与量を生理食塩水１ｍｌに溶解し、腹腔内に投与した。また、組換えヒトＡＤＦＰは１回投与量を生理食塩水０．１ｍｌに溶解し、経陰茎静脈的に投与した。
各群における血流再開６０分後の肝組織血流量を、水素クリアランス式組織血流計（ＰＭＧ−２０３、ユニークメディカル社製）を用いた水素クリアランス法により測定した。結果を表５に示した。
【００２３】
【表５】
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【００２４】
（実施例６）レンチナンおよび組換えヒトＡＤＦＰによる、虚血再潅流にともなう脂質過酸化の抑制効果
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄、体重２００〜２４０ｇ、静岡実験動物から購入）をエーテル麻酔下に開腹、肝右葉を門脈系のバイパスとして残し、６０分間虚血後、再潅流直後バイパスに供した右葉を切除し肝虚血再潅流モデルとした。虚血５分前にヘパリン２０ｕ／０．５ｍｌ生理食塩水を経陰茎静脈的に、虚血中に生理食塩水１ｍｌを腹腔内に、虚血後２ｍｌを皮下投与した。
レンチナンおよび組換えヒトＡＤＦＰの投与は次のように行った。
Ａ群：非投与。
Ｂ群：レンチナン１ｍｇを虚血３日前に投与。
Ｃ群：組換えヒトＡＤＦＰを虚血５分前と再潅流５分前にそれぞれ１００μｇずつ投与。
Ｄ群：レンチナン１ｍｇを虚血３日前に投与。さらに組換えヒトＡＤＦＰを虚血５分前と再潅流５分前にそれぞれ１００μｇずつ投与。
レンチナンは１回投与量を生理食塩水１ｍｌに溶解し、腹腔内に投与した。また、組換えヒトＡＤＦＰは１回投与量を生理食塩水０．１ｍｌに溶解し、経陰茎静脈的に投与した。
各群における血流再開６０分後の組織マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）量は次のように測定した。即ち、肝臓を経門脈的に４℃のリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）にて洗浄し、液体窒素にて凍結、湿重量を測定後、リン酸緩衝液を加え１５秒間ホモジナイズし１５，０００ｒｐｍ  、２０分間遠沈後の上清を検体として、螢光八木法により組織ＭＤＡ量を測定した。組織ＭＤＡ量は、組織中に蓄積した過酸化脂質量を意味する。結果を表６に示した。
【００２５】
【表６】
0003569904.tif 000007
【００２６】
表２、３に示したように、７日生存率はレンチナン又は組換えヒトＡＤＦＰ投与により有意に改善し、更に表４に示したように両者を併用することにより、より優れた効果が認められた。またこの時、表５に示したようにレンチナンまたは組換えヒトＡＤＦＰ、あるいは両者の併用により組織血流量が非投与群に比べ高値に保たれた。これは、レンチナンと組換えヒトＡＤＦＰの投与により、虚血再潅流に伴う肝臓循環血流障害が改善された事を意味する。更に、表６に示したようにレンチナンまたは組換えヒトＡＤＦＰ、あるいは両者の併用により組織ＭＤＡが非投与群に比べ低値に抑えられた。これは、虚血再潅流により発生したフリーラジカルによる脂質の過酸化がレンチナンと組換えヒトＡＤＦＰにより抑制されたことを意味する。
以上示したように、レンチナン又は組換えヒトＡＤＦＰの単独投与、或は両者の併用により、虚血再潅流により悪化した肝臓循環動態の改善あるいは脂質過酸化を抑制することが出来、さらに虚血再潅流による致死的な組織障害から生体を保護できる事が明らかになった。
【００２７】
（実施例７）レンチナンによる肝癌の肝内転移生着の抑制効果
ドンリュウラット（６週齢、雄、体重約２００ｇ）をエーテル麻酔下に開腹、門脈内に１，０００，０００個のラット可移植性肝癌ＡＨ１３０細胞を注入し（０日目）、２１日後に肝転移巣形成個数をカウントした。
レンチナン、ＳＯＤ、カタラーゼ等は次のように投与した。
Ａ群：レンチナン１ｍｇを０日目に経静脈的に投与、更に１、３、５及び７日目にレンチナン０．５ｍｇを腹腔内に投与。
Ｂ群：リポソームＳＯＤ２４，０００単位を０日目に経静脈的に投与。
Ｃ群：カタラーゼ５，０００単位を０日目に経静脈的に投与。
Ｄ群：リポソームＳＯＤ２４，０００単位およびカタラーゼ５，０００単位を０日目に経静脈的に投与。
Ｅ群（対照群）：無投与。
各群における２１日後の肝転移巣形成個数を表７に示した。尚、リポソームＳＯＤはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．製を既知の方法（“Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：  Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ”  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９０参照）によりリポソーム化したものである。また、カタラーゼはＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．製を用いた。
【００２８】
【表７】
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【００２９】
表７に示したように、レンチナン投与群（Ａ群）では肝転移巣形成個数は対照群（Ｅ群）の３分の１と著明な減少が認められた。一方、ＳＯＤまたはカタラーゼ単独投与群（Ｂ、Ｃ群）では、逆に、対照群の５または２．５倍に増加し、更にＳＯＤとカタラーゼの併用群（Ｄ群）では対照群の９．５倍にまで増加が認められた。
本実施例の結果は以下の事を意味する。ＳＯＤ、カタラーゼ、又は両者の併用により肝臓への肝癌の転移生着が増加した。これは、本来マクロファージ等がフリーラジカルを産生することにより、肝実質細胞への腫瘍細胞の浸潤転移生着が抑制されているのであるが、ＳＯＤ、カタラーゼの様な外来性ラジカルスカベンジャーを投与することによりこのような生体防御機構が減弱させられたことが原因と考えられる。一方、レンチナン投与により、逆に肝癌の転移生着が抑制された。実施例１に示したように、レンチナン投与により内因性のＳＯＤが誘導されることが明らかになっているが、レンチナンにより肝実質細胞に内因性防御物質が誘導されたことにより、腫瘍細胞の浸潤転移生着という肝実質細胞の障害が防御された事を意味する。
【００３０】
【発明の効果】
本発明のＳＯＤ誘起物質およびヒトＡＤＦＰは、フリーラジカルに起因する臓器障害に対する優れた防護効果を有することが明らかになった。従って、各種臓器の外科的治療及び臓器移植時の虚血再潅流性組織障害等、フリーラジカルに起因する多岐にわたる臓器障害を保護する薬剤として、臨床応用が期待できる。
【００３１】
【配列表】
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【００３２】
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