【手続補正書】
【提出日】平成29年3月7日(2017.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
RSV F融合前特異的抗体に特異的に結合する融合前立体構造に組換えRSV Fタンパク質を安定化させる、天然RSV Fタンパク質と比較して少なくとも1個のアミノ酸置換を含む組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメント
を含む単離された免疫原であって、
該免疫原が、該抗体の非存在下で少なくとも24時間生理的pHでリン酸緩衝生理食塩水における20℃でのインキュベーション後に該抗体に特異的に結合し、かつ該抗体が、融合後立体構造の状態にあるRSV Fタンパク質には結合しない、単離された免疫原。
【請求項２】
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントの融合前立体構造が、融合前特異的抗体に特異的に結合する抗原部位φを含み、かつ該抗原部位φが、SEQ ID NO: 1〜184のうちの1つとして明示される天然RSV Fタンパク質配列の残基62〜69および196〜209を含む、請求項1記載の免疫原。
【請求項３】
D25、AM22、5C4、またはMPE8融合前特異的抗体に特異的に結合する、請求項1または請求項2記載の免疫原。
【請求項４】
天然RSV Fタンパク質が、RSV A、B、またはウシRSV Fタンパク質である、請求項1〜3のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項５】
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含み、かつ任意で、pep27ポリペプチドまたはその一部を含まない、請求項1〜4のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項６】
F2およびF1ポリペプチドがそれぞれRSV Fの位置62〜69および196〜209を含み、かつ
該F2ポリペプチドがRSV Fの位置26〜109の8〜84個の残基を含むかまたはそれらからなり、かつ
該F1ポリペプチドがRSV Fの位置137〜529の14〜393個の残基を含むかまたはそれらからなり、
該RSV Fの位置が、SEQ ID NO: 124として明示される参照F0ポリペプチドのアミノ酸配列に対応する、
請求項5記載の免疫原。
【請求項７】
F2ポリペプチドのC末端残基およびF1ポリペプチドのN末端残基が、それぞれRSV Fの位置97および137；97および145；97および150；102および144；102および145；102および146；102および147；103および144；103および145；103および146；103および147；104および144；104および145；104および146；104および147；105および144；105および145；105および146；105および147；または105および150を含む、請求項6記載の免疫原。
【請求項８】
F2およびF1ポリペプチドが、それぞれ26〜109および137〜513；26〜107および137〜513；26〜107および145〜513；26〜105および137〜513；26〜105および145〜513；26〜103および145〜513；26〜109および137〜529；26〜107および137〜529；26〜107および145〜529；26〜105および137〜529；26〜105および145〜529；26〜103および145〜529；46〜103および147〜310；46〜104および146〜310；50〜96および149〜306；51〜103および146〜307；51〜103および139〜307；50〜105および146〜306；または53〜97および148から305〜320の中の1箇所までであるRSV Fの位置を含むかまたはそれらからなる、請求項6記載の免疫原。
【請求項９】
F1およびF2ポリペプチドが、SEQ ID NO: 1〜184のうちのいずれか1つとして明示される天然RSV Fタンパク質配列の対応する配列と少なくとも80％同一である、請求項5〜8のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項１０】
組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜310と少なくとも80％同一なアミノ酸配列、
SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜513と少なくとも80％同一なアミノ酸配列
SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜529と少なくとも80％同一なアミノ酸配列、または
SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜551と少なくとも80％同一なアミノ酸配列
を含むF2ポリペプチドおよびF1ポリペプチドを含むかまたはそれらからなる、請求項5記載の免疫原。
【請求項１１】
組換えRSV Fタンパク質が一本鎖RSV Fタンパク質であり、かつF2およびF1ポリペプチドが異種ペプチドリンカーによって連結しているかまたは直接連結している、請求項5〜10のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項１２】
F2ポリペプチドの位置105が、F1ポリペプチドの位置145にGly-Serリンカーによって連結している；または
F2ポリペプチドの位置103が、F1ポリペプチドの位置145に直接連結している、
請求項11記載の免疫原。
【請求項１３】
異種ペプチドリンカーが、SEQ ID NO: 356〜365もしくは1443〜1453のうちの1つとして明示されるアミノ酸配列を含む、またはG、S、GG、GS、SG、GGG、もしくはGSGリンカーである、請求項11または請求項12記載の免疫原。
【請求項１４】
組換えRSV Fタンパク質が、
（a）システインペア間の非天然ジスルフィド結合；
（b）空洞充填アミノ酸置換；
（c）再パッキングアミノ酸置換；
（d）N結合型グリコシル化部位；または
（e）（a）〜（d）のうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせ
によって、RSV Fタンパク質融合前立体構造に安定化されている、請求項1〜13のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項１５】
システインのペアが第1のシステインおよび第2のシステインを含み、かつ第1のシステインが、RSV Fの位置137〜216の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されており、かつ第2のシステインが、RSV Fの位置271〜460の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されている、請求項14記載の免疫原。
【請求項１６】
システインのペアが、それぞれがCα炭素およびCβ炭素を含む第1のシステインおよび第2のシステインを含み、かつ
（a）第1のシステインが、RSV Fの位置137〜216または461〜513の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されており、かつ第2のシステインが、RSV Fの位置26〜61、77〜97、または271〜460の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されており；かつ
（b）表1に提供される構造座標によって明示される三次元構造において、各Cβ炭素に対する最適な回転異性体を用いた際、第1のシステイン位置のCα炭素が、第2のシステイン位置のCα炭素から2.0〜8.0Åであり、かつ/または第1のシステイン位置のCβ炭素が、第2のシステイン位置のCβ炭素から2.0〜5.5Åである、請求項14記載の免疫原。
【請求項１７】
システインのペアが、それぞれがCα炭素およびCβ炭素を含む第1のシステインおよび第2のシステインを含み、かつ
（a）第1のシステインおよび第2のシステインが、RSV Fの位置137〜216もしくはRSV Fの位置461〜513にアミノ酸置換によって導入されているか；または第1のシステインが、RSV Fの位置137〜216にアミノ酸置換によって導入されており、かつ第2のシステインが、RSV Fの位置461〜513にアミノ酸置換によって導入されており；かつ
（b）表1に提供される構造座標によって明示される三次元構造において、各Cβ炭素に対する最適な回転異性体を用いた際、第1のシステイン位置のCα炭素が、第2のシステイン位置のCα炭素から2.0〜8.0Åであり、かつ/または第1のシステイン位置のCβ炭素が、第2のシステイン位置のCβ炭素から2.0〜5.5Åである、請求項14記載の免疫原。
【請求項１８】
非天然ジスルフィド結合が、RSV Fの位置155と290との間のプロトマー内ジスルフィド結合を含む、請求項14記載の免疫原。
【請求項１９】
組換えRSV Fタンパク質が、S155CおよびS290C置換を含む、請求項18記載の免疫原。
【請求項２０】
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 185の残基26〜109および137〜513、残基26〜103および145〜513、または残基26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、請求項19記載の免疫原。
【請求項２１】
非天然ジスルフィド結合がA149CおよびY458C置換の間のプロトマー内ジスルフィド結合を含むか、
非天然ジスルフィド結合がN183CおよびN428C置換の間のプロトマー内ジスルフィド結合を含み、かつRSV Fタンパク質が位置182/183間のG挿入をさらに含むか、または
非天然ジスルフィド結合がT369CおよびN455C置換の間のプロトマー内ジスルフィド結合を含む、請求項14記載の免疫原。
【請求項２２】
位置190、位置207、または位置190および207におけるF、L、W、Y、H、またはM置換を含む空洞充填アミノ酸置換を含む、請求項14〜21のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項２３】
190F；190L；190W；190Y；190H；190M；190Fおよび207L；190Fおよび207F；190Fおよび207W；190Lおよび207L；190Lおよび207F；190Lおよび207W；190Wおよび207L；190Wおよび207F；190Wおよび207W；190Yおよび207L；190Yおよび207F；190Yおよび207W；190Hおよび207L；190Hおよび207F；190Hおよび207W；190Mおよび207L；または190Mおよび207F；190Mおよび207Wのうちの1つを含む空洞充填アミノ酸置換を含む、請求項22記載の免疫原。
【請求項２４】
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 191の残基26〜109および137〜513、残基26〜103および145〜513、または残基26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、請求項23記載の免疫原。
【請求項２５】
組換えRSV Fタンパク質が、位置155および290におけるシステイン置換間の非天然ジスルフィド結合、ならびに位置190、位置207、または位置190および207におけるF、L、W、Y、H、またはM空洞充填置換を含む、請求項14記載の免疫原。
【請求項２６】
組換えRSV Fタンパク質が、S155C、S290C、およびS190F置換、またはS155C、S290C、S190F、およびV207L置換を含む、請求項25記載の免疫原。
【請求項２７】
RSV Fタンパク質が、
A149CおよびY458C置換の間のプロトマー内ジスルフィド結合、
N183CおよびN428C置換の間のプロトマー内ジスルフィド結合、ならびに位置182/183間のG挿入、または
T369CおよびN455C置換の間のプロトマー内ジスルフィド結合
をさらに含む、請求項26記載の免疫原。
【請求項２８】
組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 185（DS、サブタイプA）、1479（DS、サブタイプB）、371（DS-Cav1、サブタイプA）、372（DSCav1、サブタイプB）、373（DSCav1、ウシ）、374（DS S190F、サブタイプA）、375（DS、S190F、サブタイプB）、または376（DS、S190F、ウシ）のうちの1つにある、それぞれ残基26〜109および137〜513、またはそれぞれ26〜103および145〜513、またはそれぞれ26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列
を含むかまたはそれらからなる、請求項14記載の免疫原。
【請求項２９】
組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 371（DS-Cav1、サブタイプA）の、それぞれ残基26〜109および137〜513、またはそれぞれ26〜103および145〜513、またはそれぞれ26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列
を含むかまたはそれらからなる請求項28記載の免疫原。
【請求項３０】
組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 669（BZGJ9 DS-Cav1）の残基26〜476
SEQ ID NO: 706（BZGJ9-9 DS-Cav1）の残基26〜472
SEQ ID NO: 707（BZGJ9-10 DS-Cav1）の残基26〜474
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含む、請求項14記載の免疫原。
【請求項３１】
F1ポリペプチドが、RSVの位置492から位置510〜529の中の1箇所までを含むRSV α10ヘリックスを含み、かつF1ポリペプチドが、非天然プロトマー間ジスルフィド結合を形成する少なくとも2個のシステイン置換を含む、請求項14〜30のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項３２】
F1ポリペプチドの位置512〜524が、
2016519658.tif 000001
（SEQ ID NO: 844の残基512〜524）もしくは
2016519658.tif 000002
（SEQ ID NO: 849の残基512〜524Y）として明示されるアミノ酸配列を含むか；またはF1ポリペプチドの位置512〜529が、
2016519658.tif 000003
（SEQ ID NO: 853の残基512〜529）として明示されるアミノ酸配列を含む、請求項31記載の免疫原。
【請求項３３】
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、SEQ ID NO: 1〜184のうちのいずれか1つに明示される、以下のRSV F2およびF1位置：
（a）それぞれ56〜97および189〜211；
（b）それぞれ58〜97および192〜242；
（c）それぞれ59〜97および194〜240；
（d）それぞれ60〜75および193〜218；
（e）それぞれ60〜94および192〜229；
（f）それぞれ60〜94および192〜232；
（g）それぞれ60〜94および193〜237；
（h）それぞれ60〜95および192〜240；
（i）それぞれ60〜96および192〜239；
（j）それぞれ60〜97および192〜242；
（k）それぞれ60〜97および194〜239；
（l）それぞれ61〜96および192〜235；
（m）それぞれ61〜96および192〜240；
（n）それぞれ62〜69および196〜209；または
（o）（a）〜（m）のうちのいずれか1つに挙げられたF2およびF1位置の円順列変異（circular permutation）
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなり、該RSV F2およびF1位置が異種リンカーによって接合されている、請求項6記載の免疫原。
【請求項３４】
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、SEQ ID NO: 1〜184のうちのいずれか1つに明示される、以下のRSV F2およびF1位置：
（a）それぞれ46〜103および147〜310；
（b）それぞれ46〜104および146〜310；
（c）それぞれ50〜96および149〜306；
（d）それぞれ51〜103および146〜307；
（e）それぞれ51〜103および139〜307；
（f）それぞれ50〜105および146〜306；
（g）53〜97および148から305〜320の中の1箇所まで；または
（h）（a）〜（g）のうちのいずれか1つに挙げられたF2およびF1位置の円順列変異
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなり、該RSV F2およびF1位置が異種リンカーによって接合されているかまたは直接連結している、請求項6記載の免疫原。
【請求項３５】
組換えRSV Fタンパク質が、位置155および290におけるシステイン置換、ならびに位置190、位置207、または位置190および207におけるF、L、W、Y、H、またはM置換を含む、請求項34記載の免疫原。
【請求項３６】
組換えRSV Fタンパク質が、S155CおよびS290C置換；S155C、S290C、およびS190F置換；またはS155C、S290C、S190F、およびV207L置換を含む、請求項35記載の免疫原。
【請求項３７】
異種リンカーが、SEQ ID NO: 1443〜1455のうちのいずれか1つとして明示されるアミノ酸配列、またはG、S、GG、GS、SG、GGG、もしくはGSGリンカーを含むかまたはそれらからなる、請求項33〜35のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項３８】
組換えRSV Fタンパク質が足場タンパク質に連結している、請求項1〜37のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項３９】
SEQ ID NO: 1040（TZ-13）の残基1〜128；
SEQ ID NO: 1053（JG_2KN0）の残基1〜126；
SEQ ID NO: 1106（TZ-19）の残基1〜187；
SEQ ID NO: 1156（E-CP_RBD51-307_14mutDS-Cav1_THS）の残基27〜247；
SEQ ID NO: 1170（RSVF(+)THS_s_to_hp2_foldon9）の残基26〜282；
SEQ ID NO: 1188（MS_08）の残基21〜283；
SEQ ID NO: 1194（GSJnh4-TWIN）の残基27〜553；または
SEQ ID NO: 1212（GSJnh4Fd-TWIN）の残基26〜580
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含む、請求項33または請求項34記載の免疫原。
【請求項４０】
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントの多量体を含む、請求項1〜39のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項４１】
組換えRSV Fタンパク質もしくはそのフラグメントまたはエピトープ足場タンパク質が、三量体化ドメインに連結している、請求項1〜40のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項４２】
組換えRSV Fタンパク質のF1ポリペプチドのC末端が、三量体化ドメインに連結している、請求項41記載の免疫原。
【請求項４３】
三量体化ドメインがフォルドンドメインである、請求項41または請求項42記載の免疫原。
【請求項４４】
F1ポリペプチドと三量体化ドメインとの間にプロテアーゼ切断部位をさらに含む、請求項41〜43のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項４５】
プロテアーゼ切断部位と三量体化ドメインとの間に膜貫通ドメインをさらに含む、請求項44記載の免疫原。
【請求項４６】
三量体化ドメインに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 185（DS、サブタイプA）、1479（DS、サブタイプB）、371（DS-Cav1、サブタイプA）、372（DSCav1、サブタイプB）、373（DSCav1、ウシ）、374（DS S190F、サブタイプA）、375（DS、S190F、サブタイプB）、または376（DS、S190F、ウシ）のうちの1つにある残基26〜109および137〜544、または26〜103および145〜544と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列
を含むかまたはそれらからなる、請求項41記載の免疫原。
【請求項４７】
三量体化ドメインに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 371(DS-Cav1、サブタイプA)の残基26〜109および137〜544、または26〜103および145〜544と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列
を含むかまたはそれらからなる、請求項46記載の免疫原。
【請求項４８】
三量体化ドメインに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 669（BZGJ9 DSCav1）の残基26〜476
SEQ ID NO: 706（BZGJ9-9 DSCav1）の残基26〜472
SEQ ID NO: 707（BZGJ9-10 DSCav1）の残基26〜474
の残基と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、請求項41記載の免疫原。
【請求項４９】
組換えRSV Fタンパク質のF1ポリペプチドのC末端残基がフォルドン三量体化ドメインに連結しており、
免疫原が組換えRSV Fタンパク質の三量体を含み、かつ
組換えRSV Fタンパク質が水溶液中で可溶性である、
請求項1〜48のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項５０】
組換えRSV Fタンパク質のF1ポリペプチドのC末端残基が膜貫通ドメインに連結しており、かつ
免疫原が組換えRSV Fタンパク質の三量体を含む、
請求項1〜48のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項５１】
組換えRSV Fタンパク質もしくはそのフラグメントまたはエピトープ足場タンパク質が、タンパク質ナノ粒子サブユニットに連結している、請求項1〜50のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項５２】
組換えRSV Fタンパク質もしくはそのフラグメントまたはエピトープ足場タンパク質のC末端が、タンパク質ナノ粒子サブユニットに連結している、請求項1〜51のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項５３】
タンパク質ナノ粒子サブユニットが、フェリチン、エンカプスリン、硫黄オキシゲナーゼレダクターゼ（SOR）、ルマジンシンターゼ、またはピルビン酸デヒドロゲナーゼのナノ粒子サブユニットである、請求項51または請求項52記載の免疫原。
【請求項５４】
フェリチンナノ粒子サブユニットが、SEQ ID NO: 350の残基517〜679と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ任意で、フェリチンポリペプチド内にC31S、C31A、またはC31V置換を含み；
SORサブユニットが、SEQ ID NO: 344またはSEQ ID NO: 345の残基516〜825と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ルマジンシンターゼサブユニットが、SEQ ID NO: 346もしくはSEQ ID NO: 348の残基517〜670、またはSEQ ID NO: 347の残基517〜669と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；または
ピルビン酸デヒドロゲナーゼシンターゼサブユニットが、SEQ ID NO: 349の残基516〜757と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項53記載の免疫原。
【請求項５５】
フェリチンに連結された組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 377〜382（A、B、ウシ-DSCav1、およびDS S190Fフェリチン粒子）のうちのいずれか1つの残基26〜105および137〜679と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなり、フェリチンに連結された組換えRSV Fタンパク質が、融合前特異的抗体に特異的に結合するフェリチンナノ粒子を形成する、請求項53記載の免疫原。
【請求項５６】
フェリチンに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 1429（BZGJ9 DS-Cav1 Longlinkフェリチン）の残基28〜664；
SEQ ID NO: 1430（BZGJ9-9 DS-Cav1 Longlinkフェリチン）の残基28〜663；または
SEQ ID NO: 1431（BZGJ9-10 DS-Cav1 Longlinkフェリチン）の残基28〜665
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、請求項53記載の免疫原。
【請求項５７】
SEQ ID NO: 1220（GSJnh2F）の残基56〜500；
SEQ ID NO: 1263（MP11）の残基48〜429；
SEQ ID NO: 1266（GSJnh2Fd-F）の残基56〜536；
SEQ ID NO: 1268（GSJnh4Fd-F）の残基56〜526；
SEQ ID NO: 1275（m0e-resurf1-フェリチン）の残基53〜256；または
SEQ ID NO: 1281（LS1-E-CP_RBD51-307_11mutDS-Cav1_THS）の残基52〜437
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含む、請求項53記載の免疫原。
【請求項５８】
組換えRSV Fタンパク質が、生理的pHにおいてリン酸緩衝生理食塩水中で三量体を形成する、請求項1〜57のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項５９】
免疫原が、水溶液中でインキュベートされた場合に免疫原の均質集団を形成し、該溶液中でインキュベートされた免疫原の少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、および/または少なくとも95％が、
（a）50℃にて、350mM NaCl pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（b）25℃にて、350mM NaCl pH3.5中で1時間のインキュベーション；
（c）25℃にて、350mM NaCl pH10中で1時間のインキュベーション；
（d）25℃にて、10mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（e）25℃にて、3000mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；もしくは
（f）350mM NaCl pH7.0中で10回の凍結融解サイクル；または
（g）（a）〜（f）のうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせ
の後に融合前特異的抗体に特異的に結合し、該免疫原が融合前特異的抗体の非存在下で該溶液中でインキュベートされる、請求項1〜58のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項６０】
（a）組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、RSV Fの位置481と489との間またはRSV Fの位置509と510との間にジスルフィド結合を含まず；
（b）組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、RSV Fの位置481、489、509、510、またはそれらの組み合わせにおいてシステイン残基を含まず；
（c）（a）および（b）の組み合わせである、
請求項1〜59のいずれか一項記載の免疫原。
【請求項６１】
請求項1〜51のいずれか一項記載の免疫原を含む、ウイルス様粒子。
【請求項６２】
請求項1〜57のいずれか一項記載の免疫原を含む、タンパク質ナノ粒子。
【請求項６３】
タンパク質ナノ粒子が、フェリチンナノ粒子、エンカプスリンナノ粒子、硫黄オキシゲナーゼレダクターゼ（SOR）ナノ粒子、ルマジンシンターゼナノ粒子、またはピルビン酸デヒドロゲナーゼナノ粒子である、請求項62記載のタンパク質ナノ粒子。
【請求項６４】
モノクローナル抗体D25またはAM22のFabが、1μMまたはそれ未満のKdで免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子に特異的に結合する、請求項1〜63のいずれか一項記載の免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子。
【請求項６５】
請求項1〜64のいずれか一項記載の免疫原またはタンパク質ナノ粒子をコードする核酸分子。
【請求項６６】
核酸分子が、免疫原またはタンパク質ナノ粒子の前駆体タンパク質をコードする、請求項65記載の核酸分子。
【請求項６７】
前駆体タンパク質が、N末端からC末端方向に、シグナルペプチド、F2ポリペプチド、Pep27ポリペプチド、およびF1ポリペプチドを含む、請求項66記載の核酸分子。
【請求項６８】
ヒトまたはウシ細胞内での発現にコドン最適化された、請求項65〜67のいずれか一項記載の核酸分子。
【請求項６９】
プロモーターに機能的に連結された、請求項65〜68のいずれか一項記載の核酸分子。
【請求項７０】
請求項69記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項７１】
ウイルスベクターである、請求項70記載のベクター。
【請求項７２】
ウシパラインフルエンザウイルスベクター、ヒトパラインフルエンザウイルスベクター、ニューカッスル病ウイルスベクター、センダイウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター、弱毒化RSVベクター、パラミクソウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アルファウイルスベクター、ベネズエラウマ脳炎ベクター、セムリキ森林ウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、ラブドウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、ピコルナウイルスベクター、またはヘルペスウイルスベクターである、請求項71記載のウイルスベクター。
【請求項７３】
SEQ ID NO: 383、SEQ ID NO: 384、SEQ ID NO: 385、またはSEQ ID NO: 386として明示されるヌクレオチド配列を含む、請求項65〜72のいずれか一項記載の核酸分子またはベクター。
【請求項７４】
請求項70〜71のいずれか一項記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項７５】
請求項1〜73のいずれか一項記載の免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、またはベクターの有効量、および薬学的に許容される担体を含む、免疫原性組成物。
【請求項７６】
アジュバントをさらに含む、請求項75記載の免疫原性組成物。
【請求項７７】
アジュバントが、alum、水中油型組成物、MF59、AS01、AS03、AS04、MPL、QS21、CpGオリゴヌクレオチド、TLR7アゴニスト、TLR4アゴニスト、TLR3アゴニスト、またはそれらのうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせである、請求項76記載の免疫原性組成物。
【請求項７８】
アジュバントがTh1免疫応答を促進する、請求項76記載の免疫原性組成物。
【請求項７９】
組成物中の免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子の少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、および/または少なくとも98％が、生理的pHかつ4℃で少なくとも24時間および/または少なくとも1週間リン酸緩衝生理食塩水中でのインキュベーション後に融合前特異的抗体に特異的に結合する、請求項75〜78のいずれか一項記載の免疫原性組成物。
【請求項８０】
組成物中の免疫原、エピトープ足場タンパク質、またはタンパク質ナノ粒子の少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、または少なくとも95％が、
（a）50℃にて、350mM NaCl pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（b）25℃にて、350mM NaCl pH3.5中で1時間のインキュベーション；
（c）25℃にて、350mM NaCl pH10中で1時間のインキュベーション；
（d）25℃にて、10mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（e）25℃にて、3000mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；もしくは
（f）350mM NaCl pH7.0中で10回の凍結融解サイクル；または
（g）（a）〜（f）のうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせ
の後に融合前特異的抗体に特異的に結合する、請求項75〜79のいずれか一項記載の免疫原性組成物。
【請求項８１】
RSV Fタンパク質サブタイプAおよびBに基づく組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントの混合物を含む、請求項75〜80のいずれか一項記載の免疫原性組成物。
【請求項８２】
免疫原に特異的に結合するRSV F融合前特異的抗体をさらに含む、請求項75〜81のいずれか一項記載の免疫原性組成物。
【請求項８３】
請求項1〜64のいずれか一項記載の免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子の有効量を提供する工程；
組換えRSV Fタンパク質またはタンパク質ナノ粒子とRSV F結合抗体との間で免疫複合体を形成するのに十分な条件下で、対象由来の生物学的サンプルを組換えRSV Fタンパク質またはタンパク質ナノ粒子と接触させる工程；および
免疫複合体を検出し、それによって生物学的サンプル中のRSV F結合抗体を検出するまたは単離する工程
を含む、対象におけるRSV F結合抗体を検出するまたは単離するためのインビトロ方法。
【請求項８４】
請求項1〜82のいずれか一項記載の免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、ベクター、宿主細胞、または免疫原性組成物、およびキットを使用するための指示書を含む、キット。
【請求項８５】
請求項1〜82のいずれか一項記載の免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、ベクター、または免疫原性組成物を含む、対象におけるRSV感染症を阻害するまたは阻止するための医薬。
【請求項８６】
対象がRSV感染症の危険性があるまたはRSV感染症を有し、かつ/または
RSV感染症が、ヒトRSVサブタイプA、ヒトRSVサブタイプB、またはウシRSVの感染症であり、かつ/または
対象がヒトまたは獣医学的対象であり、かつ/または
対象が、1歳未満、65歳を上回る、または妊娠しており、かつ/または
対象が、出産可能な年齢の女性、学齢期の子ども、2〜5歳、生後6〜12ヶ月、または生後6ヶ月未満である、
請求項85記載の医薬。
【請求項８７】
請求項1〜82のいずれか一項記載の免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、ベクター、または免疫原性組成物を含む、対象においてRSV Fタンパク質に対する免疫応答を誘導するための医薬。
【請求項８８】
免疫応答がTh1免疫応答を含み、かつ/または
対象がRSV感染症の危険性があるまたはRSV感染症を有し、かつ/または
RSV感染症が、ヒトRSVサブタイプA、ヒトRSVサブタイプB、またはウシRSVの感染症であり、かつ/または
対象がヒトまたは獣医学的対象であり、かつ/または
対象が、1歳未満、65歳を上回る、または妊娠しており、かつ/または
対象が、出産可能な年齢の女性、学齢期の子ども、2〜5歳、生後6〜12ヶ月、または生後6ヶ月未満である、
請求項87記載の医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
[本発明1001]
天然RSV Fタンパク質と比較して、非天然ジスルフィド結合を形成するS155CおよびS290C置換を含む組換えRSV Fタンパク質を含む免疫原であって、該組換えRSV Fタンパク質が、RSV F融合前特異的抗体に特異的に結合する、免疫原。
[本発明1002]
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜310と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチドおよびF1ポリペプチドを含むかまたはそれらからなる、本発明1001の免疫原。
[本発明1003]
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜513と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチドおよびF1ポリペプチドを含むかまたはそれらからなる、本発明1001の免疫原。
[本発明1004]
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜529と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチドおよびF1ポリペプチドを含むかまたはそれらからなる、本発明1001の免疫原。
[本発明1005]
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 124の、それぞれアミノ酸26〜103および145〜551と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチドおよびF1ポリペプチドを含むかまたはそれらからなる、本発明1001の免疫原。
[本発明1006]
組換えRSV Fタンパク質が、位置190、位置207、または位置190および207において、F、L、W、Y、H、またはM置換をさらに含む、本発明1001〜1005のいずれかの免疫原。
[本発明1007]
組換えRSV Fタンパク質が、S155C、S290C、およびS190F置換、またはS155C、S290C、S190F、およびV207L置換を含む、本発明1006の免疫原。
[本発明1008]
組換えRSV Fタンパク質が、
1つまたは複数の非天然ジスルフィド結合を形成する、位置512および513、位置519および520、または位置526および527のうちの1つまたは複数におけるシステイン置換のペア
をさらに含む、本発明1004〜1007のいずれかの免疫原。
[本発明1009]
組換えRSV Fタンパク質が一本鎖RSV Fタンパク質である、本発明1001〜1008のいずれかの免疫原。
[本発明1010]
D25またはAM22融合前特異的抗体に特異的に結合する、本発明1001〜1009のいずれかの免疫原。
[本発明1011]
F2ポリペプチドおよびF1ポリペプチドが異種ペプチドリンカーによって連結しているかまたは直接連結しており、かつ組換えRSV Fタンパク質がpep27ポリペプチドを含まない、本発明1001〜1010のいずれかの免疫原。
[本発明1012]
組換えRSV Fタンパク質が三量体化ドメインに連結している、本発明1001〜1011のいずれかの免疫原。
[本発明1013]
組換えRSV Fタンパク質がタンパク質ナノ粒子サブユニットに連結している、本発明1001〜1012のいずれかの免疫原。
[本発明1014]
RSV F融合前特異的抗体に特異的に結合する融合前立体構造に組換えRSV Fタンパク質を安定化させる、天然RSV Fタンパク質と比較して少なくとも1個のアミノ酸置換を含む組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメント
を含む単離された免疫原であって、
該免疫原が、該抗体の非存在下で少なくとも24時間生理的pHでリン酸緩衝生理食塩水における20℃でのインキュベーション後に該抗体に特異的に結合し、かつ該抗体が、融合後立体構造の状態にあるRSV Fタンパク質には結合しない、単離された免疫原。
[本発明1015]
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントの融合前立体構造が、融合前特異的抗体に特異的に結合する抗原部位φを含み、かつ該抗原部位φが、SEQ ID NO: 1〜184のうちの1つとして明示される天然RSV Fタンパク質配列の残基62〜69および196〜209を含む、本発明1014の免疫原。
[本発明1016]
D25、AM22、5C4、またはMPE8融合前特異的抗体に特異的に結合する、本発明1014または本発明1015の免疫原。
[本発明1017]
天然RSV Fタンパク質が、RSV A、B、またはウシRSV Fタンパク質である、本発明1014〜1016のいずれかの免疫原。
[本発明1018]
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含み、かつ任意で、pep27ポリペプチドまたはその一部を含まない、本発明1014〜1017のいずれかの免疫原。
[本発明1019]
F2およびF1ポリペプチドがそれぞれRSV Fの位置62〜69および196〜209を含み、かつ
該F2ポリペプチドがRSV Fの位置26〜109の8〜84個の残基を含むかまたはそれらからなり、かつ
該F1ポリペプチドがRSV Fの位置137〜529の14〜393個の残基を含むかまたはそれらからなり、
該RSV Fの位置が、SEQ ID NO: 124として明示される参照F0ポリペプチドのアミノ酸配列に対応する、
本発明1018の免疫原。
[本発明1020]
F2ポリペプチドのC末端残基およびF1ポリペプチドのN末端残基が、それぞれRSV Fの位置97および137；97および145；97および150；102および144；102および145；102および146；102および147；103および144；103および145；103および146；103および147；104および144；104および145；104および146；104および147；105および144；105および145；105および146；105および147；または105および150を含む、本発明1019の免疫原。
[本発明1021]
F2およびF1ポリペプチドが、それぞれ26〜109および137〜513；26〜107および137〜513；26〜107および145〜513；26〜105および137〜513；26〜105および145〜513；26〜103および145〜513；26〜109および137〜529；26〜107および137〜529；26〜107および145〜529；26〜105および137〜529；26〜105および145〜529；26〜103および145〜529；46〜103および147〜310；46〜104および146〜310；50〜96および149〜306；51〜103および146〜307；51〜103および139〜307；50〜105および146〜306；または53〜97および148から305〜320の中の1箇所までであるRSV Fの位置を含むかまたはそれらからなる、本発明1019の免疫原。
[本発明1022]
F1およびF2ポリペプチドが、SEQ ID NO: 1〜184のうちのいずれか1つとして明示される天然RSV Fタンパク質配列の対応する配列と少なくとも80％同一である、本発明1018〜1021のいずれかの免疫原。
[本発明1023]
組換えRSV Fタンパク質が一本鎖RSV Fタンパク質であり、かつF2およびF1ポリペプチドが異種ペプチドリンカーによって連結しているかまたは直接連結している、本発明1018〜1022のいずれかの免疫原。
[本発明1024]
F2ポリペプチドの位置105が、F1ポリペプチドの位置145にGly-Serリンカーによって連結している；または
F2ポリペプチドの位置103が、F1ポリペプチドの位置145に直接連結している、
本発明1023の免疫原。
[本発明1025]
異種ペプチドリンカーが、SEQ ID NO: 356〜365もしくは1443〜1453のうちの1つとして明示されるアミノ酸配列を含む、またはG、S、GG、GS、SG、GGG、もしくはGSGリンカーである、本発明1023または本発明1024の免疫原。
[本発明1026]
組換えRSV Fタンパク質が、
（a）システインペア間の非天然ジスルフィド結合；
（b）空洞充填アミノ酸置換；
（c）再パッキングアミノ酸置換；
（d）N結合型グリコシル化部位；または
（e）（a）〜（d）のうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせ
によって、RSV Fタンパク質融合前立体構造に安定化されている、本発明1014〜1025のいずれかの免疫原。
[本発明1027]
システインのペアが第1のシステインおよび第2のシステインを含み、かつ第1のシステインが、RSV Fの位置137〜216の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されており、かつ第2のシステインが、RSV Fの位置271〜460の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されている、本発明1026の免疫原。
[本発明1028]
システインのペアが、それぞれがCα炭素およびCβ炭素を含む第1のシステインおよび第2のシステインを含み、かつ
（a）第1のシステインが、RSV Fの位置137〜216または461〜513の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されており、かつ第2のシステインが、RSV Fの位置26〜61、77〜97、または271〜460の中の1箇所にアミノ酸置換によって導入されており；かつ
（b）表1に提供される構造座標によって明示される三次元構造において、各Cβ炭素に対する最適な回転異性体を用いた際、第1のシステイン位置のCα炭素が、第2のシステイン位置のCα炭素から2.0〜8.0Åであり、かつ/または第1のシステイン位置のCβ炭素が、第2のシステイン位置のCβ炭素から2.0〜5.5Åである、本発明1026の免疫原。
[本発明1029]
システインのペアが、それぞれがCα炭素およびCβ炭素を含む第1のシステインおよび第2のシステインを含み、かつ
（a）第1のシステインおよび第2のシステインが、RSV Fの位置137〜216もしくはRSV Fの位置461〜513にアミノ酸置換によって導入されているか；または第1のシステインが、RSV Fの位置137〜216にアミノ酸置換によって導入されており、かつ第2のシステインが、RSV Fの位置461〜513にアミノ酸置換によって導入されており；かつ
（b）表1に提供される構造座標によって明示される三次元構造において、各Cβ炭素に対する最適な回転異性体を用いた際、第1のシステイン位置のCα炭素が、第2のシステイン位置のCα炭素から2.0〜8.0Åであり、かつ/または第1のシステイン位置のCβ炭素が、第2のシステイン位置のCβ炭素から2.0〜5.5Åである、本発明1026の免疫原。
[本発明1030]
非天然ジスルフィド結合が、RSV Fの位置155と290との間のプロトマー内ジスルフィド結合を含む、本発明1026の免疫原。
[本発明1031]
組換えRSV Fタンパク質が、S155CおよびS290C置換を含む、本発明1030の免疫原。
[本発明1032]
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 185の残基26〜109および137〜513、残基26〜103および145〜513、または残基26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、本発明1031の免疫原。
[本発明1033]
位置190、位置207、または位置190および207におけるF、L、W、Y、H、またはM置換を含む空洞充填アミノ酸置換を含む、本発明1026〜1032のいずれかの免疫原。
[本発明1034]
190F；190L；190W；190Y；190H；190M；190Fおよび207L；190Fおよび207F；190Fおよび207W；190Lおよび207L；190Lおよび207F；190Lおよび207W；190Wおよび207L；190Wおよび207F；190Wおよび207W；190Yおよび207L；190Yおよび207F；190Yおよび207W；190Hおよび207L；190Hおよび207F；190Hおよび207W；190Mおよび207L；または190Mおよび207F；190Mおよび207Wのうちの1つを含む空洞充填アミノ酸置換を含む、本発明1033の免疫原。
[本発明1035]
組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 191の残基26〜109および137〜513、残基26〜103および145〜513、または残基26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、本発明1034の免疫原。
[本発明1036]
組換えRSV Fタンパク質が、位置155および290におけるシステイン置換間の非天然ジスルフィド結合、ならびに位置190、位置207、または位置190および207におけるF、L、W、Y、H、またはM空洞充填置換を含む、本発明1026の免疫原。
[本発明1037]
組換えRSV Fタンパク質が、S155C、S290C、およびS190F置換、またはS155C、S290C、S190F、およびV207L置換を含む、本発明1036の免疫原。
[本発明1038]
組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 185（DS、サブタイプA）、1479（DS、サブタイプB）、371（DS-Cav1、サブタイプA）、372（DSCav1、サブタイプB）、373（DSCav1、ウシ）、374（DS S190F、サブタイプA）、375（DS、S190F、サブタイプB）、または376（DS、S190F、ウシ）のうちの1つにある、それぞれ残基26〜109および137〜513、またはそれぞれ26〜103および145〜513、またはそれぞれ26〜105および145〜513と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列
を含むかまたはそれらからなる、本発明1026の免疫原。
[本発明1039]
組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 669の残基26〜476（BZGJ9 DS-Cav1）
SEQ ID NO: 706の残基26〜472（BZGJ9-9 DS-Cav1）
SEQ ID NO: 707の残基26〜474（BZGJ9-10 DS-Cav1）
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含む、本発明1026の免疫原。
[本発明1040]
F1ポリペプチドが、RSVの位置492から位置510〜529の中の1箇所までを含むRSV α10ヘリックスを含み、かつF1ポリペプチドが、非天然プロトマー間ジスルフィド結合を形成する少なくとも2個のシステイン置換を含む、本発明1026〜1039のいずれかの免疫原。
[本発明1041]
F1ポリペプチドの位置512〜524が、
2016519658.tif 000004
（SEQ ID NO: 844の残基512〜524）もしくは
2016519658.tif 000005
（SEQ ID NO: 849の残基512〜524Y）として明示されるアミノ酸配列を含むか；またはF1ポリペプチドの位置512〜529が、
2016519658.tif 000006
（SEQ ID NO: 853の残基512〜529）として明示されるアミノ酸配列を含む、本発明1040または本発明1041の免疫原。
[本発明1042]
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、SEQ ID NO: 1〜184のうちのいずれか1つに明示される、以下のRSV F2およびF1位置：
（a）それぞれ56〜97および189〜211；
（b）それぞれ58〜97および192〜242；
（c）それぞれ59〜97および194〜240；
（d）それぞれ60〜75および193〜218；
（e）それぞれ60〜94および192〜229；
（f）それぞれ60〜94および192〜232；
（g）それぞれ60〜94および193〜237；
（h）それぞれ60〜95および192〜240；
（i）それぞれ60〜96および192〜239；
（j）それぞれ60〜97および192〜242；
（k）それぞれ60〜97および194〜239；
（l）それぞれ61〜96および192〜235；
（m）それぞれ61〜96および192〜240；
（n）それぞれ62〜69および196〜209；または
（o）（a）〜（m）のうちのいずれか1つに挙げられたF2およびF1位置の円順列変異（circular permutation）
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなり、該RSV F2およびF1位置が異種リンカーによって接合されている、本発明1019の免疫原。
[本発明1043]
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、SEQ ID NO: 1〜184のうちのいずれか1つに明示される、以下のRSV F2およびF1位置：
（a）それぞれ46〜103および147〜310；
（b）それぞれ46〜104および146〜310；
（c）それぞれ50〜96および149〜306；
（d）それぞれ51〜103および146〜307；
（e）それぞれ51〜103および139〜307；
（f）それぞれ50〜105および146〜306；
（g）53〜97および148から305〜320の中の1箇所まで；または
（h）（a）〜（g）のうちのいずれか1つに挙げられたF2およびF1位置の円順列変異
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなり、該RSV F2およびF1位置が種リンカーによって接合されているかまたは直接連結している、本発明1019の免疫原。
[本発明1044]
組換えRSV Fタンパク質が、位置155および290におけるシステイン置換、ならびに位置190、位置207、または位置190および207におけるF、L、W、Y、H、またはM置換を含む、本発明1043の免疫原。
[本発明1045]
組換えRSV Fタンパク質が、S155CおよびS290C置換；S155C、S290C、およびS190F置換；またはS155C、S290C、S190F、およびV207L置換を含む、本発明1044の免疫原。
[本発明1046]
異種リンカーが、SEQ ID NO: 1443〜1455のうちのいずれか1つとして明示されるアミノ酸配列、またはG、S、GG、GS、SG、GGG、もしくはGSGリンカーを含むかまたはそれらからなる、本発明1042〜1044のいずれかの免疫原。
[本発明1047]
組換えRSV Fタンパク質が足場タンパク質に連結している、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1048]
RSV F融合前エピトープを含むポリペプチドに共有結合で連結された異種足場タンパク質を含むエピトープ-足場タンパク質を含む免疫原であって、RSV F融合前特異的抗体が該エピトープ-足場タンパク質に特異的に結合する、免疫原。
[本発明1049]
RSV Fタンパク質融合前エピトープが、異種ペプチドリンカーによって連結されたRSV Fの位置62〜69および196〜209、またはその円順列変異体（circular permutant）を含むかまたはそれらからなり、該位置が、SEQ ID NO: 124として明示される参照F0ポリペプチドのアミノ酸配列に対応する、本発明1048の免疫原。
[本発明1050]
異種足場タンパク質が、2KNO、2A90、2W59、3U2E、2VJ1、1CHD、1PQZ、または2MOE足場タンパク質のうちの1つである、本発明1048または本発明1049の免疫原。
[本発明1051]
エピトープ足場タンパク質が、RSV Fタンパク質と少なくとも80％同一なアミノ配列、およびSEQ ID NO: 1053のうちのいずれか1つに明示される足場タンパク質配列を含むかまたはそれらからなる、本発明1050の免疫原。
[本発明1052]
SEQ ID NO: 1040の残基1〜128（TZ-13）；
SEQ ID NO: 1053の残基1〜126（JG_2KN0）；
SEQ ID NO: 1106の残基1〜187（TZ-19）；
SEQ ID NO: 1156の残基27〜247（E-CP_RBD51-307_14mutDS-Cav1_THS）；
SEQ ID NO: 1170の残基26〜282（RSVF(+)THS_s_to_hp2_foldon9）；
SEQ ID NO: 1188の残基21〜283（MS_08）；
SEQ ID NO: 1194の残基27〜553（GSJnh4-TWIN）；または
SEQ ID NO: 1212の残基26〜580（GSJnh4Fd-TWIN）
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含む、本発明1042または本発明1043の免疫原。
[本発明1053]
組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントの多量体を含む、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1054]
組換えRSV Fタンパク質もしくはそのフラグメントまたはエピトープ足場タンパク質が、三量体化ドメインに連結している、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1055]
組換えRSV Fタンパク質のF1ポリペプチドのC末端が、三量体化ドメインに連結している、本発明1054の免疫原。
[本発明1056]
三量体化ドメインがフォルドンドメインである、本発明1054または本発明1055の免疫原。
[本発明1057]
F1ポリペプチドと三量体化ドメインとの間にプロテアーゼ切断部位をさらに含む、本発明1054〜1056のいずれかの免疫原。
[本発明1058]
プロテアーゼ切断部位と三量体化ドメインとの間に膜貫通ドメインをさらに含む、本発明1057の免疫原。
[本発明1059]
三量体化ドメインに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 185（DS、サブタイプA）、1479（DS、サブタイプB）、371（DS-Cav1、サブタイプA）、372（DSCav1、サブタイプB）、373（DSCav1、ウシ）、374（DS S190F、サブタイプA）、375（DS、S190F、サブタイプB）、または376（DS、S190F、ウシ）のうちの1つにある残基26〜109および137〜544、または26〜103および145〜544と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列
を含むかまたはそれらからなる、本発明1054の免疫原。
[本発明1060]
三量体化ドメインに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 669の残基26〜476（BZGJ9 DSCav1）
SEQ ID NO: 706の残基26〜472（BZGJ9-9 DSCav1）
SEQ ID NO: 707の残基26〜474（BZGJ9-10 DSCav1）
の残基と少なくとも80％の同一性を含むアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、本発明1054の免疫原。
[本発明1061]
組換えRSV Fタンパク質もしくはそのフラグメントまたはエピトープ足場タンパク質が、タンパク質ナノ粒子サブユニットに連結している、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1062]
組換えRSV Fタンパク質もしくはそのフラグメントまたはエピトープ足場タンパク質のC末端が、タンパク質ナノ粒子サブユニットに連結している、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1063]
タンパク質ナノ粒子サブユニットが、フェリチン、エンカプスリン、硫黄オキシゲナーゼレダクターゼ（SOR）、ルマジンシンターゼ、またはピルビン酸デヒドロゲナーゼのナノ粒子サブユニットである、本発明1061または本発明1062の免疫原。
[本発明1064]
フェリチンナノ粒子サブユニットが、SEQ ID NO: 350の残基517〜679と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ任意で、フェリチンポリペプチド内にC31S、C31A、またはC31V置換を含み；
SORサブユニットが、SEQ ID NO: 344またはSEQ ID NO: 345の残基516〜825と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ルマジンシンターゼサブユニットが、SEQ ID NO: 346もしくはSEQ ID NO: 348の残基517〜670、またはSEQ ID NO: 347の残基517〜669と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；または
ピルビン酸デヒドロゲナーゼシンターゼサブユニットが、SEQ ID NO: 349の残基516〜757と少なくとも80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
本発明1063の免疫原。
[本発明1065]
フェリチンに連結された組換えRSV Fタンパク質が、SEQ ID NO: 377〜382（A、B、ウシ-DSCav1、およびDS S190Fフェリチン粒子）のうちのいずれか1つの残基26〜105および137〜679と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなり、フェリチンに連結された組換えRSV Fタンパク質が、融合前特異的抗体に特異的に結合するフェリチンナノ粒子を形成する、本発明1063の免疫原。
[本発明1066]
フェリチンに連結された組換えRSV Fタンパク質が、
SEQ ID NO: 1429の残基28〜664（BZGJ9 DS-Cav1 Longlinkフェリチン）；
SEQ ID NO: 1430の残基28〜663（BZGJ9-9 DS-Cav1 Longlinkフェリチン）；または
SEQ ID NO: 1431の残基28〜665（BZGJ9-10 DS-Cav1 Longlinkフェリチン）
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる、本発明1063の免疫原。
[本発明1067]
SEQ ID NO: 1220の残基56〜500（GSJnh2F）；
SEQ ID NO: 1263の残基48〜429（MP11）；
SEQ ID NO: 1266の残基56〜536（GSJnh2Fd-F）；
SEQ ID NO: 1268の残基56〜526（GSJnh4Fd-F）；
SEQ ID NO: 1275の残基53〜256（m0e-resurf1-フェリチン）；または
SEQ ID NO: 1281の残基52〜437（LS1-E-CP_RBD51-307_11mutDS-Cav1_THS）
と少なくとも80％同一なアミノ酸配列を含む、本発明1063の免疫原。
[本発明1068]
組換えRSV Fタンパク質が精製タグに連結している、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1069]
組換えRSV Fタンパク質が、生理的pHにおいてリン酸緩衝生理食塩水中で三量体を形成する、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1070]
免疫原が、水溶液中でインキュベートされた場合に免疫原の均質集団を形成し、該溶液中でインキュベートされた免疫原の少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、および/または少なくとも95％が、
（a）50℃にて、350mM NaCl pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（b）25℃にて、350mM NaCl pH3.5中で1時間のインキュベーション；
（c）25℃にて、350mM NaCl pH10中で1時間のインキュベーション；
（d）25℃にて、10mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（e）25℃にて、3000mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；もしくは
（f）350mM NaCl pH7.0中で10回の凍結融解サイクル；または
（g）（a）〜（f）のうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせ
の後に融合前特異的抗体に特異的に結合し、該免疫原が融合前特異的抗体の非存在下で該溶液中でインキュベートされる、前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1071]
（a）組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、RSV Fの位置481と489との間またはRSV Fの位置509と510との間にジスルフィド結合を含まず；
（b）組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントが、RSV Fの位置481、489、509、510、またはそれらの組み合わせにおいてシステイン残基を含まず；
（c）（a）および（b）の組み合わせである、
前記本発明のいずれかの免疫原。
[本発明1072]
本発明1001〜1061のいずれかの免疫原を含む、ウイルス様粒子。
[本発明1073]
本発明1001〜1067のいずれかの免疫原を含む、タンパク質ナノ粒子。
[本発明1074]
タンパク質ナノ粒子が、フェリチンナノ粒子、エンカプスリンナノ粒子、硫黄オキシゲナーゼレダクターゼ（SOR）ナノ粒子、ルマジンシンターゼナノ粒子、またはピルビン酸デヒドロゲナーゼナノ粒子である、本発明1073のタンパク質ナノ粒子。
[本発明1075]
モノクローナル抗体D25またはAM22のFabが、1μMまたはそれ未満のKdで免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子に特異的に結合する、本発明1001〜1074のいずれかの免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子。
[本発明1076]
本発明1001〜1075のいずれかの免疫原またはタンパク質ナノ粒子をコードする核酸分子。
[本発明1077]
核酸分子が、免疫原またはタンパク質ナノ粒子の前駆体タンパク質をコードする、本発明1076の核酸分子。
[本発明1078]
前駆体タンパク質が、N末端からC末端方向に、シグナルペプチド、F2ポリペプチド、Pep27ポリペプチド、およびF1ポリペプチドを含む、本発明1077の核酸分子。
[本発明1079]
ヒトまたはウシ細胞内での発現にコドン最適化された、本発明1076〜1078のいずれかの核酸分子。
[本発明1080]
プロモーターに機能的に連結された、本発明1076〜1079のいずれかの核酸分子。
[本発明1081]
本発明1080の核酸分子を含む、ベクター。
[本発明1082]
ウイルスベクターである、本発明1081のベクター。
[本発明1083]
ウシパラインフルエンザウイルスベクター、ヒトパラインフルエンザウイルスベクター、ニューカッスル病ウイルスベクター、センダイウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター、弱毒化RSVベクター、パラミクソウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アルファウイルスベクター、ベネズエラウマ脳炎ベクター、セムリキ森林ウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、ラブドウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、ピコルナウイルスベクター、またはヘルペスウイルスベクターである、本発明1082のウイルスベクター。
[本発明1084]
SEQ ID NO: 383、SEQ ID NO: 384、SEQ ID NO: 385、またはSEQ ID NO: 386として明示されるヌクレオチド配列を含む、本発明1076〜1083のいずれかの核酸分子またはベクター。
[本発明1085]
本発明1081〜1082のいずれかのベクターを含む、単離された宿主細胞。
[本発明1086]
本発明1001〜1084のいずれかの免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、またはベクターの有効量、および薬学的に許容される担体を含む、免疫原性組成物。
[本発明1087]
アジュバントをさらに含む、本発明1086の免疫原性組成物。
[本発明1088]
アジュバントが、alum、水中油型組成物、MF59、AS01、AS03、AS04、MPL、QS21、CpGオリゴヌクレオチド、TLR7アゴニスト、TLR4アゴニスト、TLR3アゴニスト、またはそれらのうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせである、本発明1087の免疫原性組成物。
[本発明1089]
アジュバントがTh1免疫応答を促進する、本発明1087の免疫原性組成物。
[本発明1090]
組成物中の免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子の少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、および/または少なくとも98％が、生理的pHかつ4℃で少なくとも24時間および/または少なくとも1週間リン酸緩衝生理食塩水中でのインキュベーション後に融合前特異的抗体に特異的に結合する、本発明1086〜1089のいずれかの免疫原性組成物。
[本発明1091]
組成物中の免疫原、エピトープ足場タンパク質、またはタンパク質ナノ粒子の少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、または少なくとも95％が、
（a）50℃にて、350mM NaCl pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（b）25℃にて、350mM NaCl pH3.5中で1時間のインキュベーション；
（c）25℃にて、350mM NaCl pH10中で1時間のインキュベーション；
（d）25℃にて、10mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；
（e）25℃にて、3000mMモル浸透圧濃度、pH7.0中で1時間のインキュベーション；もしくは
（f）350mM NaCl pH7.0中で10回の凍結融解サイクル；または
（g）（a）〜（f）のうちの2つもしくはそれ以上の組み合わせ
の後に融合前特異的抗体に特異的に結合する、本発明1086〜1090のいずれかの免疫原性組成物。
[本発明1092]
RSV Fタンパク質サブタイプAおよびBに基づく組換えRSV Fタンパク質またはそのフラグメントの混合物を含む、本発明1086〜1091のいずれかの免疫原性組成物。
[本発明1093]
免疫原に特異的に結合するRSV F融合前特異的抗体をさらに含む、本発明1086〜1092のいずれかの免疫原性組成物。
[本発明1094]
免疫応答を生じさせるために本発明1086〜1093のいずれかの免疫原性組成物の有効量を対象に投与する工程を含む、対象においてRSV Fに対する免疫応答を生じさせるための方法。
[本発明1095]
免疫応答がTh1免疫応答を含む、本発明1094の方法。
[本発明1096]
本発明1086〜1093のいずれかの免疫原性組成物の治療上有効量を対象に投与し、それによって対象におけるRSV感染症を治療するまたは阻止する工程を含む、対象におけるRSV感染症を治療するまたは阻止するための方法。
[本発明1097]
免疫原性組成物のプライム-ブースト投与を含む、本発明1094〜1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
抗RSV剤の治療上有効量を対象に投与する工程をさらに含む、本発明1094〜1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
本発明1001〜1075のいずれかの免疫原、ウイルス様粒子、またはタンパク質ナノ粒子の有効量を提供する工程；
組換えRSV Fタンパク質またはタンパク質ナノ粒子とRSV F結合抗体との間で免疫複合体を形成するのに十分な条件下で、対象由来の生物学的サンプルを組換えRSV Fタンパク質またはタンパク質ナノ粒子と接触させる工程；および
免疫複合体を検出し、それによって対象におけるRSV F結合抗体を検出するまたは単離する工程
を含む、対象におけるRSV F結合抗体を検出するまたは単離するための方法。
[本発明1100]
対象が、RSV感染症の危険性があるまたはRSV感染症を有する、本発明1094〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
RSV感染症が、ヒトRSVサブタイプA、ヒトRSVサブタイプB、またはウシRSVの感染症である、本発明1100の方法。
[本発明1102]
対象がヒトまたは獣医学的対象である、本発明1094〜1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
対象が、1歳未満、65歳を上回る、または妊娠している、本発明1094〜1101のいずれかの方法。
[本発明1104]
対象が、出産可能な年齢の女性、学齢期の子ども、2〜5歳、生後6〜12ヶ月、または生後6ヶ月未満である、本発明1094〜1101のいずれかの方法。
[本発明1105]
本発明1001〜1093のいずれかの免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、ベクター、宿主細胞、または免疫原性組成物、およびキットを使用するための指示書を含む、キット。
[本発明1106]
対象におけるRSV感染症を阻害するまたは阻止するための、本発明1001〜1093のいずれかの免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、ベクター、または免疫原性組成物の使用。
[本発明1107]
対象においてRSV Fタンパク質に対する免疫応答を誘導するための、本発明1001〜1093のいずれかの免疫原、ウイルス様粒子、タンパク質ナノ粒子、核酸分子、ベクター、または免疫原性組成物の使用。
態様についての前述のおよび他の目的、特長、および利点は、添付の図を参照して進む以下の詳細な説明からより明白になるであろう。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2016519658000001.app