(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化粧品又は皮膚病用組成物において使用され、ざ瘡の処置のための、オクトオキシグリセロールからなる薬剤であって、プロピオン酸菌属の微生物に対して抗微生物活性を示す薬剤。
【請求項２】
過脂漏症又は皮膚および／または頭皮の脂漏症を有する人のための化粧品において使用され、オクトオキシグリセロールからなる薬剤であって、プロピオン酸菌属の微生物に対して抗微生物活性を示す薬剤。
【請求項３】
化粧品的および／または皮膚科学的に許容可能な媒体に、請求項１に記載の薬剤を含有してなることを特徴とする化粧品又は皮膚病用の組成物。
【請求項４】
化粧品的に許容可能な媒体に、請求項２に記載の薬剤を含有してなることを特徴とする化粧品組成物。
【請求項５】
オクトオキシグリセロールが、組成物の重量に対して、0.05〜10％の範囲内の量で存在することを特徴とする請求項３又は４に記載の組成物。
【請求項６】
オクトオキシグリセロールが、組成物の重量に対して、0.1〜2.5％の範囲内の量で存在することを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
水性、油性または水／アルコール溶液、エマルション、マイクロエマルション、水性、油性または無水のゲル、漿液、ペースト状または固体の無水製品または小胞体の分散液であることを特徴とする請求項３ないし６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
クリーム、ローション、ゲルまたはスティックの形態で提供されることを特徴とする請求項３ないし７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
脂肪物質、有機溶媒、可溶化剤、ゲル化剤、起泡剤、乳化剤、フィラー、遮蔽剤、顔料、親水性または親油性の活性剤、または脂質小胞体から選択される少なくとも１つのアジュバント含有することを特徴とする請求項３ないし８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
α−ヒドロキシ酸、β−ヒドロキシ酸および二価または三価の金属塩から選択される少なくとも１つの薬剤を含有することを特徴とする請求項３ないし９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
α−ヒドロキシ酸またはβ−ヒドロキシ酸が、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸およびマンデル酸、サリチル酸およびその誘導体、および２−ヒドロキシアルカン酸およびそれらの誘導体から選択されることを特徴とする請求項10に記載の組成物。
【請求項１２】
抗炎症剤、防腐剤、遮蔽剤、角質溶解剤および他の抗脂漏剤から選択される少なくとも１つの活性剤をさらに含有することを特徴とする請求項３ないし11の何れか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明の主題は、化粧品用および／または皮膚病用組成物における、脂漏症およびその関連の皮膚疾患、特にざ瘡および／または過脂漏症（hyperseborrhoea）の治療に対してのオクトオキシグリセロール（octoxyglycerol）もしくはオクトオキシグリセリンの使用にある。
皮脂の分泌は正常な現象であり、皮膚と髪にとっては有用なことである。しかしながら、脂漏症として知られる皮脂の過剰な分泌は不愉快なものであり、場合によっては、皮膚症、特に脂性肌になったり、ざ瘡ができたり、頭皮が脂漏状態になったりする原因となる。脂肪の過剰分泌および毛包脂腺（pilo−sebaceous follicle）の角質化障害の結果、毛包脂腺がブロックされて、停留障害または面皰が形成される。
これらの病気、特にざ瘡および／または過脂漏症は、プロピオン酸菌（Propionibacterium）属の微生物、例えばざ瘡プロピオンバクテリウム（Propionibacterium acnes）、顆粒膜プロピオンバクテリウム（Propionibacterium granulosum）またはアビダムプロピオンバクテリウム（Propionibacterium avidum）による皮膚または髪の濾胞へのコロニー形成に特に関連している。
これらの好ましくない微生物は、これらの病気中に出現する炎症の原因である刺激性脂肪酸を放出すると共に、皮脂トリグリセリドを代謝する。
これらの病原体に抗するために、活性剤、例えばトリクロサン（triclosan）、ヘキサミジン（hexamidine）、ヘキセチジン（hexetidine）および塩化ベンザルコニウムが一般的に使用されている。しかしながら、これらの活性剤の使用には、副作用がないわけではない。例えば、トリクロサンは、局所経路の場合でさえ、わずかとはいえない毒性を示す。さらに、特にその活性が界面活性剤により抑制されるある種のビヒクル中においては十分な効果を得られないことが証明されている。塩の形態のへキサミジンおよびヘキセチジンはアレルギーを引き起こすおそれのある敏感化物質である。さらに、塩化ベンザルコニウムは、通常の投与量で刺激性があることが証明されている。またさらに、アニオン性界面活性剤を含有する組成物を不安定化させる。
よって、公知の化合物の欠点を示すことなく、従来の化合物と少なくとも同等の作用を有し、プロピオン酸菌属の微生物に関連した病気に有効な局所用活性剤が必要とされている。
本発明の主題は、特には、このような効果を得ることができる特定の化合物の使用にある。
本出願人は、オクトオキシグリセロールがざ瘡プロピオンバクテリウムおよび顆粒膜プロピオンバクテリウムに対する高い活性を示し、よって、抗−脂漏症および抗−ざ瘡用の活性剤として化粧品用および／または皮膚病用組成物に使用することが可能であることを見出した。
独国特許公開第4140474号公報には、確かに、皮膚の手入れおよび洗浄用の組成物にグリセロールのモノアルキルエーテル類を使用することが記載されている。しかしながら、これらの化合物は、アルコールベースの防腐用および殺菌消毒用組成物中において皮膚の乾燥を防止する超脂性化添加物として使用されており、グリセロールのモノアルキルエーテル類は皮膚の乾燥を防止しつつアルコールの防腐作用を補強するものである。ざ瘡プロピオンバクテリウムおよび顆粒膜プロピオンバクテリウムに関連した病気に抗して作用させるため、特に脂漏症およびざ瘡を治療するために、グリセロールのモノアルキルエーテル類、なかでもオクトオキシグリセロールを使用することは何ら記載されていない。
国際特許公開第93/25208号には、細胞致死性、抗菌性および殺精性のある組成物へのグリセロールのモノアルキルエーテル類の使用が記載されている。この公報には、プロピオン酸菌属の微生物に対するモノアルキルエーテル類の活性については記載されておらず、ざ瘡プロピオンバクテリウムおよび顆粒膜プロピオンバクテリウムに関連した病気、特に脂漏症およびざ瘡を低減させることについてはなおさら記載されていない。さらにオクトオキシグリセロールは、この公報では引用されていない。
よって、本発明の主題は、皮膚および／または頭皮の脂漏症および／または脂漏症に関連した皮膚疾患の治療のための、化粧品用組成物におけるオクトオキシグリセロールの使用にある。
本発明の他の主題は、皮膚および／または頭皮の脂漏症および／または脂漏症に関連した皮膚疾患の治療を意図した薬剤の製造におけるオクトオキシグリセロールの使用にある。
脂漏症に関連した皮膚疾患とは、特にざ瘡および／またはざ瘡になる傾向にある脂性肌および／または過脂漏症のことであり得る。
したがって、本発明のさらなる主題は、ざ瘡および／またはざ瘡になる傾向にある脂性肌および／または過脂漏症の治療のための、化粧品用組成物におけるオクトオキシグリセロールの使用にある。
またさらに本発明の主題は、ざ瘡および／またはざ瘡になる傾向にある脂性肌および／または過脂漏症の治療を意図した薬剤の製造におけるオクトオキシグリセロールの使用にある。
また本発明の主題は、プロピオン酸菌の微生物に抗して作用する化粧品用組成物へのオクトオキシグリセロールの使用にある。
さらに本発明の主題は、プロピオン酸菌の微生物に抗して作用させることを意図した薬剤の製造におけるオクトオキシグリセロールの使用にある。
本発明の他の主題は、脂漏症のある皮膚および／または頭皮に、少なくともオクトオキシグリセロールを含有する組成物を適用することからなる、脂漏症および／または脂漏症に関連した疾患の美容処理方法にある。
本発明の他の主題は、少なくともオクトオキシグリセロールを含有する組成物を、ざ瘡のある皮膚に適用することからなる、ざ瘡の美容処理方法にある。
本発明の最後の主題は、化粧品的および／または皮膚科学的に許容可能な媒体中に、抗ざ瘡活性剤として少なくとも有効量のオクトオキシグリセロールを含有せしめてなることを特徴とする抗ざ瘡化粧品用および／または皮膚病用組成物にある。
オクトオキシグリセロール（２−エチルヘキシル−１−グリセリルエーテル）は、次の式（Ｉ）：
Ｒ−Ｏ−CH2−CHOH−CH2OH                  （Ｉ）
に相当するもので、上式（Ｉ）中、Ｒは２−エチルヘキシル基を表す。
本発明において、オクトオキシグリセロールは、組成物の全重量に対して、好ましくは0.05〜10％、より好ましくは0.1〜５％、さらにより好ましくは0.1〜2.5％の範囲内の量で使用される。
本発明の組成物は、化粧品的および／または皮膚科学的に許容可能な媒体、すなわち、皮膚、粘膜、髪および頭皮と融和性のあるものを含有する。それらは全て、局所適用に適した製薬用投与形態、水性、水／アルコールまたは油性溶液、水性、水／アルコールまたは油性ゲル、固体またはペースト状の無水製品、水相への油相の分散（O/W）または逆（W/O）の分散によって得られるエマルション、懸濁液、マイクロエマルション、マイクロカプセル、微小（マイクロ）粒子、またはイオン性（リポソーム類）および／または非イオン性の小胞分散液の形態で提供されうる。こららの組成物は、考慮される分野において通常の方法で調製される。
また、本発明の組成物は、加圧された噴霧剤をさらに含有するエアゾール組成物の形態、または泡の形態で使用することもできる。
本発明の組成物の種々の成分の量は、考慮される分野において従来より使用されている量である。
これらの組成物は、特に皮膚用製品、例えばクレンジングまたはトリートメント用ゲルまたはクリーム、清浄用（purifying）ローションまたはミルク、棒状コンシーラ、抗脂漏用シャンプーまたは髪用ローション、または頭皮用の抜毛防止用組成物を構成する。
本発明の組成物は、考慮される分野で従来より使用されているアジュバント、例えば、脂肪物質、有機溶媒、可溶化剤、増粘剤およびゲル化剤、柔軟剤、酸化防止剤、不透明化材、安定化剤、起泡剤、香料、イオン性または非イオン性の乳化剤、フィラー、金属イオン封鎖およびキレート剤、防腐剤、遮蔽剤、精油、染料、顔料、親水性または親油性の活性剤、脂質小胞体、または化粧品において一般的に使用されている任意の他の成分を含有してもよい。これらのアジュバントは、化粧品または皮膚科学の分野で一般的に使用されている量、例えば組成物の全重量に対して０〜20％で導入される。
本発明の組成物がエマルションである場合、脂肪相の割合は、組成物の全重量に対して５〜80％、好ましくは５〜50％の範囲とされ得る。エマルションの形態の組成物に使用される油、乳化剤および共乳化剤（coemulsifiers）は、化粧品または皮膚科学の分野で従来より使用されているものから選択される。乳化剤と任意の共乳化剤は、組成物の全重量に対して0.3〜30重量％、好ましくは0.5〜20重量％の範囲内の割合で組成物中に存在する。エマルションは、さらに、脂質小胞体を含有してもよい。
本発明で使用可能な油としては、鉱物性油類（イソパラフィン）、植物性油類（アプリコット核油）、動物性油類、合成油類、シリコーン油類（シクロペンタジメチルシロキサン）およびフッ化油類を挙げることができる。また、脂肪物質として、脂肪アルコール、脂肪酸（ステアリン酸）またはロウ類（カルナウバロウ、オゾケライト）を使用することもできる。
本発明で使用可能な乳化剤としては、例えば、エチレングリコールモノステアレート、トリステアリン酸ソルビタン、ガッテフォセ（Gattefosse）社から「テフォース（Tefose）63」の名称で販売されているグリコール−パルミテート−ステアレート／ポリエチレングリコール（6EO）−ステアレート／ポリエチレングリコール（32EO）−ステアレートの混合物、および水素化レシチンを挙げることができる。
ゲル化剤または増粘剤としては、天然ガム類（キサンタンガム）、多糖類（ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロース）、カルボキシビニルポリマー類（カーボマー:carbomer）、アクリルコポリマー類、ポリアクリルアミド類、特に、セピック（Seppic）社からセピゲル（Sepigel）305の名称で販売されているラウレス（Laureth）−７およびC13−C14のイソパラフィン、ポリアクリルアミドの混合物、またはオキシエチレン化された糖類誘導体、例えばオキシエチレン化メチルグルコースを挙げることができる。
起泡剤としては、例えばＮ−カルボキシエトキシエチル−Ｎ−（ココイルアミドエチル）アミノ酢酸二ナトリウム、硫酸エーテルラウリルナトリウム、サルコシン酸ラウロイルナトリウム、トリエタノールアミンラウリルスルファートおよびココナッツ脂肪酸とイセチオン酸ココイルナトリウムの混合物を挙げることができる。
フィラーとしては、特に、アクリルコポリマー類、例えば、ダウ・コーニング（Dow Cornig）社からポリトラップ（Polytrap）の名称で販売されているエチレングリコールジメタクリレート／ラウリルメタクリレートのコポリマーを挙げることができる。
親水性または親油性の活性剤としては、特に、脂漏症および関連した皮膚病、特にざ瘡の治療において、グリセロールのアルキルエーテルの効果を補足可能な薬剤を挙げることができる。例えば、抗炎症剤、例えば過酸化ベンゾイル、抗生物質、防腐剤、例えばオクトピロックス（octopirox）、角質溶解剤、例えば、フリー、エーテル化またはエステル化された形態のβ−ヒドロキシ酸またはα−ヒドロキシ酸、レチノイン酸およびその誘導体またはレチノールおよびその誘導体、例えばレチノールパルミテート、アセテートまたはプロピオネート、または抗脂漏剤、例えば二価−もしくは三価の金属塩類、例えばアルカリ土類金属およびランタニドの塩類、特にストロンチウム塩およびネオジム塩に関連している。本発明の好ましい実施態様によれば、この薬剤は角質溶解剤、特にα−ヒドロキシ酸またはβ−ヒドロキシ酸である。
薬剤の量は、例えば組成物の全重量に対して０〜20％、好ましくは0.05〜５％の範囲内とされ得る。
α−ヒドロキシ酸としては、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸およびマンデル酸を挙げることができる。β−ヒドロキシ酸としては、サリチル酸およびその誘導体または２−ヒドロキシアルカン酸およびそれらの誘導体、例えば２−ヒドロキシ−３−メチル安息香酸および２−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸を挙げることができる。
さらに、親水性の活性剤として、例えば、タンパク質またはタンパク質の加水分解物、アミノ酸、多価アルコール（グリセロールまたはプロピレングリコール）、尿素、アラントイン、糖類および糖類誘導体、ビタミン類、デンプン、または細菌もしくは植物抽出物類を挙げることができる。
ざ瘡または脂漏症に関連した皮膚疾患になった皮膚が太陽光線にさらされる場合、アルキルエーテルを含有する組成物は、太陽光線の有害な影響から皮膚を保護しつつ、本発明の活性剤の効力を保持させるために、さらに少なくとも１つの遮蔽剤を適宜含有する。遮蔽剤としては、微小粒子（ナノピグメント）の形態であっても、そうでなくてもよい顔料または有機遮蔽剤を挙げることができる。有機遮蔽剤の例としては、ベンゾフェノンのスルホンまたはスルホン酸誘導体、ベンジリデンショウノウのスルホン酸またはスルホン酸誘導体、およびアクリレート類、例えばオクトクリレン（octocrylene）がある。遮蔽剤の量は、所望する太陽からの保護度に依存する。例えば、組成物の全重量に対して０〜10％、好ましくは0.1〜５％の範囲内とされ得る。
次に実施例によって本発明を例証するが、これらはその範囲を何ら限定するものではない。パーセンテージは重量で示す。
実施例1:脂性脂漏症の皮膚用の起泡ゲル
−オキシエチレン化（60EO）された水素化獣脂アルコール／ミリスチルグリコールのコポリマー（可溶化剤）［アクゾ（Akzo）社から販売されているエルファコス（Elfacos）GT282S］                          0.9％
−オクトオキシグリセロール                   0.1％
−グリセロール                               3  ％
−グリコール酸                               1  ％
−水中に38％のＮ−カルボキシエトキシエチル−Ｎ−（ココイルアミドエチル）アミノ酢酸二ナトリウム 5  ％
−酢酸エーテルラウリルナトリウム            14.3％
−ココナッツ脂肪酸のジエタノールアミド（柔軟剤）0.7％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
エルファコスGT282Sを80℃の脱塩水に分散させ、ついで分散液を50℃まで冷却する。さらに、起泡剤、柔軟剤およびグリセロールを、ゆっくりと攪拌しながら、50℃で脱塩水に分散させ、ついでこの調製物をゆっくりと攪拌しつつ、エルファコスGT282Sの分散液中に徐々に注ぎ込む。続いて、そこに、40℃でオクトオキシグリセロールを添加する。
得られたゲルは、顔に１日２回適用され、脂漏性皮膚炎の治療に適切なものである。
実施例2:ざ瘡のある皮膚用の起泡クレンジングクリーム
−エチレングリコールモノステアレート        2   ％
−オクトオキシグリセロール                  2.5 ％
−ケイ酸アルミニウムマグネシウム水和物（安定化剤）1.7 ％
−ヒドロキシプロピルメチルセルロース        0.8 ％
−ココナッツ脂肪酸とイセチオン酸ココイルナトリウムの混合物［アクゾ社のエルファン（Elfan）AT84G］15   ％
−ステアリン酸                              1.25％
−水中で30％のサルコシン酸ラウロイルナトリウム10   ％
−香料                                      0.3 ％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
エルファンAT84Gを80℃の脱塩水に分散させる。完全に溶解させた後、ケイ酸アルミニウムマグネシウム水和物塩を添加する。混合物を60℃まで冷却し、ついでサルコシン酸ラウロイルナトリウムとヒドロキシプロピルメチルセルロースゲルを添加する。続いて、ウオーターバスで予め暖めておいたエチレングリコールモノステアレートとステアリン酸を添加する。この混合物にオクトオキシグリセロールと香料を添加する。
得られたクリームは、顔に１日２回適用され、ざ瘡のある皮膚の治療に適切なものである。
実施例3:ざ瘡用のトリートメントクリーム
−トリステアリン酸ソルビタン                 1  ％
−オクトオキシグリセロール                   0.5％
−カーボマー                                 0.4％
−キサンタンガム                             0.5％
−ポリトラップ（ダウ・コーニング社）         1  ％
−シクロペンタジメチルシロキサン（揮発性油） 6  ％
−グリセロール                               3  ％
−テフォース63（ガッテフォセ社）（乳化剤）   4  ％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
トリステアリン酸ソルビタン、乳化剤およびシクロペンタジメチルシロキサンを含有する混合物Ａを60℃で調製する。さらに、グリセロールとカーボマーの混合物、続いてキサンタンガムを70℃の脱塩水中で膨張させることにより混合物Ｂを調製する。攪拌しつつ、混合物Ｂに混合物Ａを注ぎ込むことによって、65℃でエマルションを調製する。組み合わされた混合物を50℃まで冷却し、ポリトラップ、続いてオクトオキシグリセロールを添加する。
得られたクリームは、背中および顔に１日１回適用され、皮膚の治療に適切なものでる。
実施例4:脂漏症の皮膚用のトリートメントゲル
−オクトオキシグリセロール                   5  ％
−キサンタンガム                             1  ％
−グリセロール                               2  ％
−香料                                       0.2％
−エチルアルコール（溶媒）                  30  ％
−オキシエチレン化（26EO）−オキシプロピレン化（26PO）ブチルアルコール／オキシエチレン化（40EO）硬化ヒマシ油の水中混合物［ワッカー（Wacker）社から販売されているソルビリサント（Solubilisant）LRI］（共−溶媒）                                     1  ％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
キサンタンガムを70℃でグリセロールを含有する脱塩水中で膨張させる。30℃まで冷却した後、オクトオキシグリセロールと共に、共−溶媒、エチルアルコール、グリコール酸および香料を添加する。
得られたゲルは、顔に１日２回適用され、脂漏症の皮膚の治療に適切なものである。
実施例5:リボソームを含有する、ざ瘡のある皮膚用の着色したトリートメントクリーム
−オキシエチレン化（5EO）された大豆ステロール 1.6 ％
−水素化レシチン                            2.4 ％
−オクトオキシグリセロール                  2   ％
−アプリコット核油                          6   ％
−黄酸化鉄（顔料）                          0.45％
−褐酸化鉄（顔料）                          0.4 ％
−鉄黒（顔料）                              0.07％
−酸化チタン（顔料）                        5   ％
−ポリトラップ（ダウ・コーニング社）        1   ％
−ポリアクリルアミド/C13−C14のイソパラフィン／ラウレス−７（セピゲル305）                   4   ％
−シクロペンタジメチルシロキサン（揮発性油）6   ％
−グリセロール                              6   ％
−プロピレングリコール                      6   ％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
リポソームを調製するため、オキシエチレン化（5EO）された大豆ステロールと水素化レシチンの混合物を80℃の脱塩水中で２時間水和させ、この調製物を高圧ホモジナイザーに２回通過させる。リポソーム調製物を35℃まで冷却した後、アプリコット核油とシクロペンタジメチルシロキサンをそこに添加する。混合物を高圧ホモジナイザーに通して、30℃まで冷却する。さらに、フィラーとプロピレングリコールとグリセロールとの分散液を調製する。この分散液を上記で得られた混合物に分散させる。続いて、セピゲル305とオクトオキシグリセロールを添加する。
得られたクリームはベージュ色をしており、顔に１日２回適用され、皮膚の治療に適切なものである。
実施例6:脂性肌用の棒状コンシーラ
−オクトオキシグリセロール                   1  ％
−カルナウバロウ                             8  ％
−オゾケライト                               6  ％
−黄酸化鉄（顔料）                           2.5％
−褐酸化鉄（顔料）                           1  ％
−鉄黒（顔料）                               0.5％
−酸化チタン（顔料）                        20  ％
−ポリジメチルシロキサン／シリカ水和物（型抜剤:mould−release agent）                          0.1％
−イソパラフィン               全体を100％にする量
手順：
酸化物類と型抜剤をロウと油の混合物中に、100℃で２時間分散させる。成型する前にすばやく、オクトオキシグリセロールをそこに添加する。
得られた棒状体は、１日数回、顔に適用することができる。
実施例7:ざ瘡のある皮膚用の清浄用ローション
−オクトオキシグリセロール                    ２％
−グリセロール                                ２％
−エチルアルコール（溶媒）                    30％
−オキシエチレン化（26EO）−オキシプロピレン化（26EO）ブチルアルコール／オキシエチレン化（40EO）硬化ヒマシ油の水中混合物（ワッカー社から販売されているソルビリサントLRI）（共−溶媒）               １％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
グリセロール、エチルアルコール、共−溶媒およびオクトオキシグリセロールを脱塩水中で混合する。
得られたローションは、顔に１日２回適用され、皮膚のクレンジングに適切なものである。
実施例8:抗脂漏症用シャンプー
−オクトオキシグリセロール                   2  ％
−水中で40％の硫酸ラウリルトリエタノールアミン37  ％
−ココナッツ脂肪酸のジエタノールアミド（髪用コンディショニング剤）                             2  ％
−カルボキシメチルセルロース                 0.5％
−オキシエチレン化メチルグルコース           2.5％
−脱塩水                       全体を100％にする量
手順：
カルボキシメチルセルロースを脱塩水に分解させ、コンディショニング剤、硫酸ラウリルトリエタノールアミンとオキシエチレン化メチルグルコースを添加する。40℃まで冷却した後、オクトオキシグリセロールを添加する。
得られたシャンプーは髪を洗浄するのに適しており、頭皮の状態を著しく改善することができる。
テスト：
以下に記載するテストは、ざ瘡プロピオンバクテリウムおよび顆粒膜プロピオンバクテリウムに対するオクトオキシグリセロールの活性を実証するものである。
このテストを行う段階は次の通りである：
１）微生物の培養：ざ瘡プロピオンバクテリウムと顆粒膜プロピオンバクテリウムを傾斜したトリプシン大豆ブイヨン寒天で培養する。
２）接種物の調製：テストを開始する48時間前に、株を継代培養し、嫌気的条件下で、35℃で48時間インキュベートする。得られた懸濁液を108微生物/mlで検定する。
３）サンプルの調製:32gのトリプシン大豆ブイヨンを、ピルボトルとして知られるガラスボトルに入れ、35℃で24時間インキュベートする。ついで、4gの試験組成物を添加し、ホモジナイズする。併行して、微生物が、試験期間中、好ましい生育環境下にあることを確認するために、対照体を調製する。
４）接種:4mlの接種物をピルボトルに入れ、ピルボトルをインキュベータに置く。
５）除去および計測：各々の接触時間（２、４、６および24）後、ピルボトルの中身をホモジナイズし、そこから1mlを取り除く。計測可能にするために、適切に希釈した後、この希釈液を寒天含有ペトリ皿［ユーゴン（Eugon）LT100培地］の表面に広げ、ついでペトリ皿を嫌気的条件下で35℃のオーブン中で７日間インキュベートする。
ついで20を越え200未満のコロニーを含有する皿において、コロニーをカウントする。
テストした組成物は次の通りである：
0003553615.tif 000002
得られた結果を次の表に示す。結果は調製物1g中の微生物の数として表されている。
0003553615.tif 000003
接触２時間から、本発明品である調製物Ａの方に、より多くの汚染除去が見られる。微生物の数は、インキュベートレベル（T0）より、ざ瘡プロピオンバクテリウムで1000倍未満、顆粒膜プロピオンバクテリウムで10000倍未満であるのに対し、調製物Ｂでは変化はない。
活性化可能な微生物の数は、調製物Ａでの方法では検出閾値以下であるのに対し、調製物Ｂの場合は、インキュベートレベル（T0）より約10倍多くなっており、この結果は接触24時間で強調され、確認される。