【手続補正書】
【提出日】平成28年12月13日(2016.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫リガンド／ペイロード複合体の生産方法であって、配列特異的トランスペプチダーゼまたはその触媒ドメインを使って、ペイロードを免疫リガンドに結合させることを包含する、
但し、前記免疫リガンド／ペイロード複合体に含まれる前記免疫リガンドが、抗体、修飾された抗体フォーマット、抗体誘導体または断片、および／または抗体模倣物からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つであり、
前記配列特異的トランスペプチダーゼが、ソルターゼ酵素であり、
前記ペイロードは、分子量が２５００ダルトン以下の毒素である、
生産方法。
【請求項２】
前記免疫リガンドが、
・受容体、
・抗原、
・成長因子、
・サイトカイン、および／または
・ホルモン、
からなる群より選択される実体のうちの少なくとも１つに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記配列特異的トランスペプチダーゼの少なくとも１つの触媒ドメインが、前記免疫リガンドまたは前記ペイロードいずれかのＣ末端に融合されている、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記免疫リガンドが、それぞれがペイロードに結合している少なくとも２つのサブユニットを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも２つのサブユニットを有する前記免疫リガンドが、１つ以上の細胞経路を干渉する２種類の異なるペイロードであり、その少なくとも１つは分子量が２５００ダルトン以下の毒素である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも２つのサブユニットを有する前記免疫リガンドが、前記２つのサブユニットのうちの少なくとも一方のＣ末端に付加されている少なくとも２個のアミノ酸、好ましくは２〜５個のアミノ酸から構成されているペプチドスペーサー配列を含む、請求項４〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
免疫リガンドとペイロードの間の関係を化学量論的に規定することができる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
免疫リガンドとペイロードとの間の前記化学量論的に規定された関係が、部分的に反応したＣ末端に修飾を有する免疫リガンド基質を除去することで達成される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも２つのアフィニティ精製用タグを用いることを含む請求項８に記載の方法であって、
アフィニティ精製用タグは、
少なくとも１つの小分子毒素の複合体の前に、ソルターゼ認識モチーフを介して、抗体、修飾された抗体フォーマット、抗体誘導体または断片、および／または抗体模倣物の少なくとも２つの異なるサイトに結合し、
前記方法は、アフィニティ精製工程を含み、このアフィニティ精製工程は、少なくとも１つの小分子毒素の複合体の抗体、修飾された抗体フォーマット、抗体誘導体または断片、および／または抗体模倣物への複合化の後に、依然としてアフィニティ精製用タグを有し、従って、不完全複合体と評価され、アフィニティ精製により完全複合体から分離される、方法。
【請求項１０】
ペイロードを前記免疫リガンドに部位特異的に結合させることができる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法によって得られた免疫リガンド／ペイロード複合体であって、前記複合体は、抗体、修飾された抗体フォーマット、抗体誘導体または断片、および／または抗体模倣物、並びに分子量が２５００ダルトン以下の毒素を含む、複合体。
【請求項１２】
前記複合体は、ペプチド転移反応に供されたソルターゼ認識モチーフをさらに含む請求項１１に記載の免疫リガンド／ペイロード複合体。
【請求項１３】
前記ソルターゼ認識モチーフは、LPXTG又はNPQTNである請求項１２に記載の免疫リガンド／ペイロード複合体。
【請求項１４】
所与の病態に罹患しているまたは発症する危険性のあるヒトまたは動物対象の治療に用いるための請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の免疫リガンド／ペイロード複合体。
【請求項１５】
前記病態が、
・腫瘍性疾患
・自己免疫疾患
・神経変性疾患、および／または
・感染症、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、請求項１４に記載の複合体の使用。
【請求項１６】
Ｇｌｙｎ修飾で修飾された低分子量ペイロードであって、ここでｎは１より大きく、好ましくは、ｎが３またはｎが５であり、前記ペイロードは、分子量が２５００ダルトン以下の毒素である、低分子量ペイロード。
【請求項１７】
請求項１６の低分子量ペイロードの、それを、抗体、修飾された抗体フォーマット、抗体誘導体または断片、および／または抗体模倣物から成る群から選ばれる免疫リガンドに結合させるための使用。
【請求項１８】
前記免疫リガンド−ペイロード結合を粗細胞培養上清中で行う、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５６】
本発明の態様を以下に示す。
［１］
免疫リガンド／ペイロード複合体の生産方法であって、配列特異的トランスペプチダーゼまたはその触媒ドメインを使って、ペイロードを免疫リガンドに結合させることを包含する、生産方法。
［２］
前記ペイロードおよび／または前記免疫リガンドが、
ａ）主にタンパク質またはペプチドからなる、
ｂ）少なくとも１つのタンパク質もしくはペプチドドメインを含む、または
ｃ）少なくとも１つのペプチド鎖を含む、
のいずれかであって、
さらに、前記タンパク質またはペプチドもしくはドメインが前記配列特異的トランスペプチダーゼまたはその触媒ドメインによって検出可能なアミノ酸配列を含む、［１］に記載の方法。
［３］
前記免疫リガンド／ペイロード複合体に含まれる前記免疫リガンドが、抗体、修飾された抗体フォーマット、抗体誘導体または断片、および／または抗体模倣物からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、［１］または［２］の方法。
［４］
前記免疫リガンドが、
・受容体、
・抗原、
・成長因子、
・サイトカイン、および／または
・ホルモン、
からなる群より選択される実体のうちの少なくとも１つに結合する、［１］〜［３］のいずれか１項に記載の方法。
［５］
前記配列特異的トランスペプチダーゼの少なくとも１つの触媒ドメインが、前記免疫リガンドまたは前記ペイロードいずれかのＮ末端もしくはＣ末端に融合されている、［１］〜［４］のいずれか１項に記載の方法。
［６］
前記配列特異的トランスペプチダーゼが、
・ソルターゼ酵素または１つ以上のその断片もしくは誘導体、
・スプリットインテインまたは１つ以上のその断片もしくは誘導体、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、［１］〜［５］のいずれか１項に記載の方法。
［７］
前記免疫リガンド／ペイロード複合体に含まれる前記ペイロードが、
・マーカー、
・処理用タグ、および／または
・薬物、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、［１］〜［６］のいずれか１項に記載の方法。
［８］
前記マーカーが、
・放射性標識、好ましくは放射性標識で標識したペプチドまたはタンパク質、
・蛍光標識、好ましくは蛍光ペプチドまたはタンパク質、および／または、
・酵素標識、好ましくはペルオキシダーゼ、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、［１］〜［７］のいずれか１項に記載の方法。
［９］
前記薬物が、
・サイトカイン、
・放射性標識、
・抗炎症剤、
・毒素、および／または、
・化学療法剤、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、［１］〜［８］のいずれか１項に記載の方法。
［１０］
前記免疫リガンドが、それぞれがペイロードに結合している少なくとも２つのサブユニットを含む、［１］〜［９］のいずれか１項に記載の方法。
［１１］
少なくとも２つのサブユニットを有する前記免疫リガンドが、１つ以上の細胞経路を干渉する２種類の異なるペイロード、好ましくは毒素ペイロードに結合している、［１０］に記載の方法。
［１２］
少なくとも２つのサブユニットを有する前記免疫リガンドが、結合部位１カ所当たり少なくとも８０％の効率で結合している、［１０］または［１１］に記載の方法。
［１３］
少なくとも２つのサブユニットを有する前記免疫リガンドが、前記２つのサブユニットのうちの少なくとも一方のＣ末端に付加されている少なくとも２個のアミノ酸、好ましくは２〜５個のアミノ酸から構成されているペプチドスペーサー配列を含む、［１０］〜［１２］のいずれか１項に記載の方法。
［１４］
免疫リガンドとペイロードの間の関係を化学量論的に規定することができる、［１］〜［１３］のいずれか１項に記載の方法。
［１５］
免疫リガンドとペイロードとの間の前記化学量論的に規定された関係が、部分的に反応したＣ末端に修飾を有する免疫リガンド基質を除去することで達成される、［１４］に記載の方法。
［１６］
ペイロードを前記免疫リガンドに部位特異的に結合させることができる、［１］〜［１５］のいずれか１項に記載の方法。
［１７］
［１］〜［１６］のいずれか１項に記載の方法によって得られた免疫リガンド／ペイロード複合体。
［１８］
抗体／薬物複合体および／または抗体／マーカー複合体からなる群より選択される、［１７］の免疫リガンド／ペイロード複合体。
［１９］
［１］〜［１８］のいずれか１項による免疫リガンド／ペイロード複合体の、
・所与の病態のインビトロまたはインビボでの診断
・所与の病態に関するインビトロまたはインビボでの予測または予後予測
・所与の病態に罹患しているまたは発症する危険性のあるヒトまたは動物対象の治療、および／または
・研究および／または開発目的、
における使用。
［２０］
前記病態が、
・腫瘍性疾患
・自己免疫疾患
・神経変性疾患、および／または
・感染症、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、［１９］に記載の方法。
［２１］
Ｇｌｙｎ修飾で修飾された低分子量ペイロードであって、ここでｎは１より大きく、好ましくは、ｎが３またはｎが５である、低分子量ペイロード。
［２２］
前記ペイロードが、
・サイトカイン、
・放射性標識、
・毒素、および／または、
・化学療法剤、
からなる群より選択されるもののうちの少なくとも１つである、請求項２１に記載の低分子量ペイロード。
［２３］
［２１］または［２２］の低分子量ペイロードの、それを免疫リガンドに結合させるための使用。
［２４］
前記免疫リガンド−ペイロード結合を粗細胞培養上清中で行う、［１］〜［１６］のいずれか１項に記載の方法。
参考文献
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