【手続補正書】
【提出日】平成29年3月1日(2017.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
形質移入試薬組成物であって、
（ａ）１つ以上の陽イオン性脂質またはその薬学的に許容される塩、
（ｂ）１つ以上の中性脂質、
（ｃ）１つ以上のステロール、および
（ｄ）１つ以上の界面活性剤
を含む組成物。
【請求項２】
前記陽イオン性脂質が、アミノ脂質またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記陽イオン性脂質が、ＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＤＡＢ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＡＰ・Ｃｌ、ＤＣ−コレステロール、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＰＥ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記陽イオン性脂質が、下記式またはその薬学的に許容される塩を有する
【化１】
2016515815.tif 000001
（式中、
Ｒ1およびＲ2は、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して、任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アルキル、任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アルケニル、任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アルキニル、または任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アシルであり、
Ｒ3およびＲ4は、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して、任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキル、任意に置換されていてもよいＣ2〜Ｃ6アルケニル、または任意に置換されていてもよいＣ2〜Ｃ6アルキニルであり、またはＲ3およびＲ4は、一緒になって、４〜６つの炭素原子ならびに窒素および酸素から選択される１つまたは２つのヘテロ原子の、任意に置換されていてもよい複素環を形成してもよく、
Ｒ5は、存在しいていないまたは存在しているのいずれかであり、存在する場合は、水素またはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、
ｍ、ｎ、およびｐは、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して０または１のいずれかであり、ただし、ｍ、ｎ、およびｐは、同時に０ではなく、
ｑは、０、１、２、３、または４であり、
ＹおよびＺは、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＨである）、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記陽イオン性脂質が、下記式またはその薬学的に許容される塩を有する
【化２】
2016515815.tif 000002
（式中、
Ｒ1およびＲ2は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、およびヘテロシクリルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、およびヘテロシクリルの各々は、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；オキソ；ハロ、ヒドロキシ、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルにより任意に置換されていてもよく、
または、Ｒ1およびＲ2は、それらが両方とも結合するＮ原子と一緒になり、３〜８員環へテロアリールまたはヘテロシクリルを形成し、
ここで、へテロアリールおよびヘテロシクリルの各々は、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；オキソ；ニトロ；ハロ、ヒドロキシ、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルにより任意に置換されていてもよく、
Ｒ3は、非存在、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
Ｒ4およびＲ5は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、およびヘテロシクリルの各々は、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；オキソ；ハロ、ヒドロキシ、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルにより任意に置換されていてもよく、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲ4−、−S−Ｓ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ4−、または−ＣＲ4Ｒ5−であり、
ＹおよびＺは、独立して、式Ｌ1−（ＣＲ6Ｒ7）α−［Ｌ2−（ＣＲ6Ｒ7）β］γ−Ｌ3
−Ｒ8を有するＣ10〜Ｃ30基であり、式中、
Ｌ1は、結合、−（ＣＲ6Ｒ7）−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ8−、−Ｓ−、またはそれらの組み合わせであり、
各Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｈ；ハロ；ヒドロキシル；シアノ；ハロ、ヒドロキシル、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルであり、
Ｌ2は、結合、−（ＣＲ6Ｒ7）−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ8−、−Ｓ−、
【化３】
2016515815.tif 000003
またはそれらの組み合わせであるか、または下記式を有し、
【化４】
2016515815.tif 000004
式中、ｂ、ｃ、およびｄは、各々独立して、０、１、２、または３であり、ただし、ｂ、ｃ、およびｄの合計は、少なくとも１および８以下であり、Ｒ9およびＲ10は、各々独立してＲ7であるか、または隣接したＲ9およびＲ10は、一緒になって、任意に結合であってもよく、
Ｌ3は、結合、−（ＣＲ6Ｒ7）−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ8−、−Ｓ−、
【化５】
2016515815.tif 000005
またはそれらの組み合わせであり、
Ｒ8は、独立して、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；アルコキシ；アリール；へテロアリール；またはハロ、ヒドロキシ、もしくはヘテロシクリルにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルであるか、またはＲ8は、下記式を有し、
【化６】
2016515815.tif 000006
ａは、０、１、２、３、または４であり、
αは、０〜６であり、
各βは、独立して、０〜６であり、
γは、０〜６である）、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記陽イオン性脂質が、１，１７−ビス（２−オクチルシクロプロピル）ヘプタデカン−９−イル−４−（ジメチルアミノ）ブタノエートまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記中性脂質が、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、ケファリン、およびセレブロシドからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記中性脂質が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ステロールがコレステロールである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ジブロックポリオキシエチレンエーテルコポリマー、トリブロックポリオキシエチレンアルキルエーテルコポリマー、および両親媒性分枝ポリマーからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（４０）ステアレート、ポリ（プロピレングリコール）11−ブロック−ポリ（エチレングリコール）16−ブロック−ポリ（プロピレングリコール）11、ポリ（プロピレングリコール）12−ブロック−ポリ（エチレングリコール）28−ブロック−ポリ（プロピレングリコール）12からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルまたはポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（４０）ステアレートである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
（ａ）前記陽イオン性脂質が、アミノ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、
（ｂ）前記中性脂質が、リン脂質であり、
（ｃ）前記ステロールが、コレステロールであり、かつ
（ｄ）前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルキルエーテルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
（ａ）前記陽イオン性脂質が、アミノ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、
（ｂ）前記中性脂質が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）であり、
（ｃ）前記ステロールが、コレステロールであり、かつ
（ｄ）前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルキルエーテルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
約２０から約９５モルパーセントまでの陽イオン性脂質を含む、請求項１〜５、１５、または１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
約０．１から約２０モルパーセントまでの界面活性剤を含む、請求項１〜５、１５、または１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物、および陰イオン性巨大分子を含む脂質ナノ粒子。
【請求項１９】
前記ナノ粒子が中実コアを有する、請求項１８に記載の粒子。
【請求項２０】
前記陰イオン性巨大分子が、核酸、陰イオン性タンパク質、および陰イオン性ペプチドからなる群から選択される、請求項１８に記載の粒子。
【請求項２１】
前記陰イオン性巨大分子が核酸である、請求項１８に記載の粒子。
【請求項２２】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物、および核酸を含む脂質ナノ粒子。
【請求項２３】
前記ナノ粒子が中実コアを有する、請求項２２に記載の粒子。
【請求項２４】
前記核酸が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ロックド核酸、核酸類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡを発現可能なプラスミドである、請求項２２または２３に記載の粒子。
【請求項２５】
前記核酸が、ｓｓＤＮＡまたはｄｓＤＮＡである、請求項２２または２３に記載の粒子。
【請求項２６】
前記核酸が、ｓｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、またはｍＲＮＡである、請求項２２または２３に記載の粒子。
【請求項２７】
前記核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項２２または２３に記載の粒子。
【請求項２８】
前記核酸が、ハイブリダイゼーションプローブである、請求項２２または２３に記載の粒子。
【請求項２９】
前記ハイブリダイゼーションプローブが、分子ビーコンである、請求項２８に記載の粒子。
【請求項３０】
対象に核酸を投与する方法であって、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項３１】
対象中でポリペプチドが過剰発現されることを特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含み、前記核酸が、前記ポリペプチドの発現をサイレンシングまたは減少させることが可能である方法。
【請求項３２】
対象中でポリペプチドが過少発現されることを特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含み、前記核酸が、前記ポリペプチドを発現または前記ポリペプチドの発現を増加させることが可能である方法。
【請求項３３】
核酸を細胞に導入する方法であって、細胞を、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子と接触させることを含む方法。
【請求項３４】
標的ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現を調節する方法であって、細胞を、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子と接触させることを含み、前記核酸が、標的ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現を調節することが可能である方法。
【請求項３５】
核酸を含有する脂質ナノ粒子を作製する方法であって、
（ａ）第１の溶媒中の核酸を含む第１のストリームをデバイスに導入することであって、前記デバイスは、導入される１つ以上のストリームを前記デバイスに流すように構成された第１の領域、および前記１つ以上のストリームの内容物をミキサで混合するための第２の領域を有すること、
（ｂ）第２の溶媒中の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物を含む第２のストリームを前記デバイスに導入して、第１および第２のストリームを提供することであって、前記形質移入試薬組成物は陽イオン性脂質を含み、前記第１および第２の溶媒が同じではないこと、
（ｃ）前記１つ以上の第１のストリームおよび前記１つ以上の第２のストリームを、前記デバイスの前記第１の領域から前記デバイスの前記第２の領域に流すことであって、前記第１のストリームと前記第２のストリームとの容積比が、１．０を超えること、および
（ｄ）前記１つ以上の第１のストリームおよび前記１つ以上の第２のストリームを、前記デバイスの前記第２の領域で、約１００μｓから約１０ｍｓまでの期間混合することであって、封入された核酸を有する脂質ナノ粒子を含む第３のストリームを提供することを含む方法。
【請求項３６】
前記１つ以上の第１のストリームおよび前記１つ以上の第２のストリームが、約１ｍＬ／分から約４０ｍＬ／分まで流量で流される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記形質移入試薬組成物の濃度が、約１０ｍＭから約５０ｍＭまでである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記封入された核酸を有する脂質ナノ粒子が、約１５ｎｍから約３００ｎｍまでの直径を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記核酸が、前記脂質ナノ粒子に、約８０から約１００％までの効率で封入される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記ミキサが、約１０００μｍ未満のサイズの特徴を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記ミキサが、マイクロ流体ミキサである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の形質移入試薬組成物を含む脂質ナノ粒子を調製するためのキット。
【請求項４３】
陰イオン性巨大分子を更に含む、請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
前記陰イオン性巨大分子が核酸である、請求項４２に記載のキット。
【請求項４５】
（ａ）第１の溶媒を含む第１の溶液を受容するための第１のウェル、
（ｂ）第１のウェルと流体連通する第１のチャネル、
（ｃ）第２の溶媒を含む第２の溶液を受容するための第２のウェル、
（ｄ）第２のウェルと流体連通する第２のチャネル、
（ｅ）それぞれ、第１および第２のウェルから第１および２のチャネルへと流れる第１および第２のストリームを受容するための第３のチャネルであり、導入される第１および第２のストリームをチャネルに流すように構成された第１の領域、ならびに第１および第２のストリームの内容物を混合して、粒子を含む第３のストリームを提供するように構成された第２の領域を有する第３のチャネル、および
（ｆ）粒子を含む第３のストリームを受容するための第３のウェル、
を含む脂質粒子を作製するためのデバイスを更に含む、請求項４２に記載のキット。
【請求項４６】
請求項４２〜４５のいずれか一項に記載のキットを使用して、請求項１８〜２９のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子を調製する方法。
【請求項４７】
（ａ）第１の溶媒を含む第１の溶液を受容するための第１のウェル、
（ｂ）第１のウェルと流体連通する第１のチャネル、
（ｃ）第２の溶媒を含む第２の溶液を受容するための第２のウェル、
（ｄ）第２のウェルと流体連通する第２のチャネル、
（ｅ）それぞれ、第１および第２のウェルから第１および２のチャネルへと流れる第１および第２のストリームを受容するための第３のチャネルであり、導入される第１および第２のストリームをチャネルに流すように構成された第１の領域、ならびに第１および第２のストリームの内容物を混合して、粒子を含む第３のストリームを提供するように構成された第２の領域を有する第３のチャネル、および
（ｆ）粒子を含む第３のストリームを受容するための第３のウェル、
を含む粒子を作製するためのデバイス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８５】
排他的な所有または特権が請求されている本発明の態様は、以下のように定義される。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
形質移入試薬組成物であって、
（ａ）１つ以上の陽イオン性脂質またはその薬学的に許容される塩、
（ｂ）１つ以上の中性脂質、
（ｃ）１つ以上のステロール、および
（ｄ）１つ以上の界面活性剤
を含む組成物。
［２］
前記陽イオン性脂質が、アミノ脂質またはその薬学的に許容される塩である、［１］に記載の組成物。
［３］
前記陽イオン性脂質が、ＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＤＡＢ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＡＰ・Ｃｌ、ＤＣ−コレステロール、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＰＥ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、およびそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、［１］または［２］に記載の組成物。
［４］
前記陽イオン性脂質が、下記式またはその薬学的に許容される塩を有する
【化１２】
2016515815.tif 000007
（式中、
Ｒ1およびＲ2は、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して、任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アルキル、任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アルケニル、任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アルキニル、または任意に置換されていてもよいＣ10〜Ｃ24アシルであり、
Ｒ3およびＲ4は、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して、任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキル、任意に置換されていてもよいＣ2〜Ｃ6アルケニル、または任意に置換されていてもよいＣ2〜Ｃ6アルキニルであり、またはＲ3およびＲ4は、一緒になって、４〜６つの炭素原子ならびに窒素および酸素から選択される１つまたは２つのヘテロ原子の、任意に置換されていてもよい複素環を形成してもよく、
Ｒ5は、存在しいていないまたは存在しているのいずれかであり、存在する場合は、水素またはＣ1〜Ｃ6アルキルであり、
ｍ、ｎ、およびｐは、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して０または１のいずれかであり、ただし、ｍ、ｎ、およびｐは、同時に０ではなく、
ｑは、０、１、２、３、または４であり、
ＹおよびＺは、同じまたは異なっているのいずれかであり、独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＨである）、［１］〜［３］のいずれか一に記載の組成物。
［５］
前記陽イオン性脂質が、下記式またはその薬学的に許容される塩を有する
【化１３】
2016515815.tif 000008
（式中、
Ｒ1およびＲ2は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、およびヘテロシクリルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、およびヘテロシクリルの各々は、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；オキソ；ハロ、ヒドロキシ、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルにより任意に置換されていてもよく、
または、Ｒ1およびＲ2は、それらが両方とも結合するＮ原子と一緒になり、３〜８員環へテロアリールまたはヘテロシクリルを形成し、
ここで、へテロアリールおよびヘテロシクリルの各々は、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；オキソ；ニトロ；ハロ、ヒドロキシ、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルにより任意に置換されていてもよく、
Ｒ3は、非存在、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
Ｒ4およびＲ5は、各々独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、へテロアリール、およびヘテロシクリルの各々は、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；オキソ；ハロ、ヒドロキシ、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルにより任意に置換されていてもよく、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲ4−、−S−Ｓ−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ4−、−ＮＲ4Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ4−、または−ＣＲ4Ｒ5−であり、
ＹおよびＺは、独立して、式Ｌ1−（ＣＲ6Ｒ7）α−［Ｌ2−（ＣＲ6Ｒ7）β］γ−Ｌ3
−Ｒ8を有するＣ10〜Ｃ30基であり、式中、
Ｌ1は、結合、−（ＣＲ6Ｒ7）−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ8−、−Ｓ−、またはそれらの組み合わせであり、
各Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｈ；ハロ；ヒドロキシル；シアノ；ハロ、ヒドロキシル、またはアルコキシにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルであり、
Ｌ2は、結合、−（ＣＲ6Ｒ7）−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ8−、−Ｓ−、
【化１４】
2016515815.tif 000009
またはそれらの組み合わせであるか、または下記式を有し、
【化１５】
2016515815.tif 000010
式中、ｂ、ｃ、およびｄは、各々独立して、０、１、２、または３であり、ただし、ｂ、ｃ、およびｄの合計は、少なくとも１および８以下であり、Ｒ9およびＲ10は、各々独立してＲ7であるか、または隣接したＲ9およびＲ10は、一緒になって、任意に結合であってもよく、
Ｌ3は、結合、−（ＣＲ6Ｒ7）−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＲ8−、−Ｓ−、
【化１６】
2016515815.tif 000011
またはそれらの組み合わせであり、
Ｒ8は、独立して、Ｈ；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；アルコキシ；アリール；へテロアリール；またはハロ、ヒドロキシ、もしくはヘテロシクリルにより任意に置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6アルキルであるか、またはＲ8は、下記式を有し、
【化１７】
2016515815.tif 000012
ａは、０、１、２、３、または４であり、
αは、０〜６であり、
各βは、独立して、０〜６であり、
γは、０〜６である）、［１］〜［３］のいずれか一に記載の組成物。
［６］
前記陽イオン性脂質が、１，１７−ビス（２−オクチルシクロプロピル）ヘプタデカン−９−イル−４−（ジメチルアミノ）ブタノエートまたはその薬学的に許容される塩である、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［７］
前記中性脂質が、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、ケファリン、およびセレブロシドからなる群から選択される、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［８］
前記中性脂質が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［９］
前記ステロールがコレステロールである、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［１０］
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ジブロックポリオキシエチレンエーテルコポリマー、トリブロックポリオキシエチレンアルキルエーテルコポリマー、および両親媒性分枝ポリマーからなる群から選択される、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［１１］
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（４０）ステアレート、ポリ（プロピレングリコール）11−ブロック−ポリ（エチレングリコール）16−ブロック−ポリ（プロピレングリコール）11、ポリ（プロピレングリコール）12−ブロック−ポリ（エチレングリコール）28−ブロック−ポリ（プロピレングリコール）12からなる群から選択される、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［１２］
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルまたはポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテルである、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［１３］
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（４０）ステアレートである、［１］〜［５］のいずれか一に記載の組成物。
［１４］
（ａ）前記陽イオン性脂質が、アミノ脂質またはその薬学的に許容される塩であり、
（ｂ）前記中性脂質が、リン脂質であり、
（ｃ）前記ステロールが、コレステロールであり、かつ
（ｄ）前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、またはポリオキシエチレン（４０）ステアレートから選択される、［１］に記載の組成物。
［１５］
（ａ）前記陽イオン性脂質が、１，１７−ビス（２−オクチルシクロプロピル）ヘプタデカン−９−イル−４−（ジメチルアミノ）ブタノエートまたはその薬学的に許容される塩であり、
（ｂ）前記中性脂質が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）であり、
（ｃ）前記ステロールが、コレステロールであり、かつ
（ｄ）前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、またはポリオキシエチレン（４０）ステアレートから選択される、［１］に記載の組成物。
［１６］
約２０から約９５モルパーセントまでの陽イオン性脂質を含む、［１］〜［５］、［１５］、または［１６］のいずれか一に記載の組成物。
［１７］
約０．１から約２０モルパーセントまでの界面活性剤を含む、［１］〜［５］、［１５］、または［１６］のいずれか一に記載の組成物。
［１８］
［１］〜［１７］のいずれか一に記載の組成物、および陰イオン性巨大分子を含む脂質ナノ粒子。
［１９］
前記ナノ粒子が中実コアを有する、［１８］に記載の粒子。
［２０］
前記陰イオン性巨大分子が、核酸、陰イオン性タンパク質、および陰イオン性ペプチドからなる群から選択される、［１８］に記載の粒子。
［２１］
前記陰イオン性巨大分子が核酸である、［１８］に記載の粒子。
［２２］
［１］〜［１７］のいずれか一に記載の組成物、および核酸を含む脂質ナノ粒子。
［２３］
前記ナノ粒子が中実コアを有する、［２２］に記載の粒子。
［２４］
前記核酸が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ロックド核酸、核酸類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡを発現可能なプラスミドである、［２２］または［２３］に記載の粒子。
［２５］
前記核酸が、ｓｓＤＮＡまたはｄｓＤＮＡである、［２２］または［２３］に記載の粒子。
［２６］
前記核酸が、ｓｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、またはｍＲＮＡである、［２２］または［２３］に記載の粒子。
［２７］
前記核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、［２２］または［２３］に記載の粒子。
［２８］
前記核酸が、ハイブリダイゼーションプローブである、［２２］または［２３］に記載の粒子。
［２９］
前記ハイブリダイゼーションプローブが、分子ビーコンである、［２８］に記載の粒子。
［３０］
対象に核酸を投与する方法であって、［２２］〜［２７］のいずれか一に記載の脂質ナノ粒子を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
［３１］
対象中でポリペプチドが過剰発現されることを特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、［２２］〜［２７］のいずれか一に記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含み、前記核酸が、前記ポリペプチドの発現をサイレンシングまたは減少させることが可能である方法。
［３２］
対象中でポリペプチドが過少発現されることを特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、［２２］〜［２７］のいずれか一に記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含み、前記核酸が、前記ポリペプチドを発現または前記ポリペプチドの発現を増加させることが可能である方法。
［３３］
核酸を細胞に導入する方法であって、細胞を、［２２］〜［２７］のいずれか一に記載の脂質ナノ粒子と接触させることを含む方法。
［３４］
標的ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現を調節する方法であって、細胞を、［２２］〜［２７］のいずれか一に記載の脂質ナノ粒子と接触させることを含み、前記核酸が、標的ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの発現を調節することが可能である方法。
［３５］
核酸を含有する脂質ナノ粒子を作製する方法であって、
（ａ）第１の溶媒中の核酸を含む第１のストリームをデバイスに導入することであって、前記デバイスは、導入される１つ以上のストリームを前記デバイスに流すように構成された第１の領域、および前記１つ以上のストリームの内容物をミキサで混合するための第２の領域を有すること、
（ｂ）第２の溶媒中の［１］〜［１７］のいずれか一に記載の組成物を含む第２のストリームを前記デバイスに導入して、第１および第２のストリームを提供することであって、前記形質移入試薬組成物は陽イオン性脂質を含み、前記第１および第２の溶媒が同じではないこと、
（ｃ）前記１つ以上の第１のストリームおよび前記１つ以上の第２のストリームを、前記デバイスの前記第１の領域から前記デバイスの前記第２の領域に流すことであって、前記第１のストリームと前記第２のストリームとの容積比が、１．０を超えること、および
（ｄ）前記１つ以上の第１のストリームおよび前記１つ以上の第２のストリームを、前記デバイスの前記第２の領域で、約１００μｓから約１０ｍｓまでの期間混合することであって、封入された核酸を有する脂質ナノ粒子を含む第３のストリームを提供することを含む方法。
［３６］
前記１つ以上の第１のストリームおよび前記１つ以上の第２のストリームが、約１ｍＬ／分から約４０ｍＬ／分まで流量で流される、［３５］に記載の方法。
［３７］
前記形質移入試薬組成物の濃度が、約１０ｍＭから約５０ｍＭまでである、［３５］に記載の方法。
［３８］
前記封入された核酸を有する脂質ナノ粒子が、約１５ｎｍから約３００ｎｍまでの直径を有する、［３５］に記載の方法。
［３９］
前記核酸が、前記脂質ナノ粒子に、約８０から約１００％までの効率で封入される、［３５］に記載の方法。
［４０］
前記ミキサが、約１０００μｍ未満のサイズの特徴を有する、［３５］に記載の方法。
［４１］
前記ミキサが、マイクロ流体ミキサである、［３５］に記載の方法。
［４２］
［１］〜［１７］のいずれか一に記載の形質移入試薬組成物を含む脂質ナノ粒子を調製するためのキット。
［４３］
陰イオン性巨大分子を更に含む、［４２］に記載のキット。
［４４］
前記陰イオン性巨大分子が核酸である、［４２］に記載のキット。
［４５］
マイクロ流体ミキサを更に含む、［４２］〜［４４］のいずれか一に記載のキット。
［４６］
［４２］〜［４５］のいずれか一に記載のキットを使用して、［１８］〜［２９］のいずれか一に記載の脂質ナノ粒子を調製する方法。