【手続補正書】
【提出日】平成28年11月29日(2016.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内でのプロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（ＰＣＳＫ９）の発現を阻害することが可能な二本鎖ＲＮＡｉ剤であって、
（ａ）前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、アンチセンス鎖に相補的なセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの一部に相補的な領域を含み、各鎖が、約１４〜約３０ヌクレオチド長であり、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、式（ＩＩＩ）：
センス：５’ｎｐ−Ｎａ−（ＸＸＸ）ｉ−Ｎｂ−ＹＹＹ−Ｎｂ−（ＺＺＺ）ｊ−Ｎａ−ｎｑ３’
アンチセンス：３’ｎｐ’−Ｎａ’−（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）ｋ−Ｎｂ’−Ｙ’Ｙ’Ｙ’−Ｎｂ’−（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）ｌ−Ｎａ’−ｎｑ’５’（ＩＩＩ）
（式中：
ｉ、ｊ、ｋ、及びｌがそれぞれ、独立して、０又は１であり；
ｐ、ｐ’、ｑ、及びｑ’がそれぞれ、独立して、０〜６であり；
各Ｎａ及びＮａ’が、独立して、修飾又は非修飾のいずれかの０〜２５のヌクレオチド又はそれらの組合せを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列が、少なくとも２つの異なる修飾のヌクレオチドを含み；
各Ｎｂ及びＮｂ’が、独立して、修飾又は非修飾のいずれかの０〜１０のヌクレオチド又はそれらの組合せを含むオリゴヌクレオチド配列を表し；
それぞれ存在していても又は存在していなくてもよい各ｎｐ、ｎｐ’、ｎｑ、及びｎｑ’が、独立して、オーバーハングヌクレオチドを表し；
ＸＸＸ、ＹＹＹ、ＺＺＺ、Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’、及びＺ’Ｚ’Ｚ’がそれぞれ、独立して、３連続ヌクレオチド上に３つの同一の修飾の１つのモチーフを表し；
Ｎｂ上の修飾が、Ｙ上の前記修飾と異なり、Ｎｂ’上の修飾が、Ｙ’上の前記修飾と異なり；
前記センス鎖が、少なくとも１つのリガンドにコンジュゲートされている）
によって表される、または
（ｂ）前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、ヌクレオチド配列ａｓＣｆｓａＡｆＡｆＡｆｇＣｆａＡｆａＡｆｃＡｆｇＧｆｕＣｆｕａｇｓａｓａを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列ｃｓｕｓａｇａｃＣｆｕＧｆｕｄＴｕｕｇｃｕｕｕｕｇｕを含むセンス鎖（式中：ａ、ｇ、ｃおよびｕがそれぞれ２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）修飾Ａ、Ｇ、ＣおよびＵヌクレオチドであり：Ａｆ、Ｇｆ、ＣｆおよびＵｆがそれぞれ２’フルオロＡ、Ｇ、ＣおよびＵ修飾ヌクレオチドであり；ｄＴがデオキシチミンヌクレオチドであり、ｓがホスホロチオエート結合である）を含む、
二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２】
前記ＹＹＹモチーフが、前記センス鎖の切断部位又はその近傍に存在する、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項３】
前記Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフが、前記５’末端の前記アンチセンス鎖の１１位、１２位及び１３位に存在する、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項４】
前記二本鎖領域が、１５〜３０ヌクレオチド対長である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項５】
各鎖が、１５〜３０のヌクレオチドを有する、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項６】
前記ヌクレオチド上の修飾が、ＬＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−デオキシ、２’−ヒドロキシル、及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項７】
前記ヌクレオチド上の修飾が、２’−Ｏ−メチル又は２’−フルオロ修飾である、請求項６に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項８】
前記リガンドが、二価又は三価の分枝鎖状リンカーを介して結合された１つ又は複数のＧａｌＮＡｃ誘導体である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項９】
前記リガンドが、
【化１】
2016506240.tif 000001
である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１０】
前記リガンドが、前記センス鎖の３’末端に結合される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１１】
以下の概略図
【化２】
2016506240.tif 000002
（式中、Ｘが、Ｏ又はＳである）に示される前記リガンドにコンジュゲートされている、請求項１０に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１２】
少なくとも１つのホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合を更に含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１３】
前記ホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合が、１つの鎖の５’末端及び３’末端の両方にある、請求項１２に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１４】
表１、表２、表９、表１０、表１２、及び図１２Ａに列挙されるＲＮＡｉ剤の群から選択される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１５】
ＡＤ−５３８１５、ＡＤ−５６６６３、ＡＤ−５６６５８、ＡＤ−５６６７６、ＡＤ−５６６６６、及びＡＤ−５７９２８からなる群から選択される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤を含有する細胞。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
ＲＮＡｉ剤が、非緩衝液中で投与される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記非緩衝液が、生理食塩水又は水である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記ｓｉＲＮＡが、緩衝液とともに投与される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、プロラミン緩衝液、炭酸緩衝液、若しくはリン酸緩衝液又はそれらの任意の組合せを含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記緩衝液が、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
インビトロでの細胞内でのＰＣＳＫ９発現の阻害方法であって、
（ａ）前記細胞を、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤又は請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させる工程と；
（ｂ）工程（ａ）で生成された前記細胞を、ＰＣＳＫ９遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間にわたって維持し、それにより、前記細胞内での前記ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する工程とを含む方法。
【請求項２４】
前記ＰＣＳＫ９発現が、少なくとも約３０％阻害される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＰＣＳＫ９発現によって媒介される障害に罹患している対象の処置方法であって、治療有効量の請求項１〜１５のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤又は請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置する工程を含む方法。
【請求項２６】
前記対象がヒトである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ヒトが、高コレステロール血症に罹患している、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ又は約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、皮下投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、静脈内投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
対象における高コレステロール血症の処置方法であって、治療有効量の請求項１〜１５のいずれか一項に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤又は請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与し、それにより、前記対象を処置する工程を含む方法。
【請求項３３】
前記対象が、霊長類又はげっ歯類である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象がヒトである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ又は約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、皮下投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、静脈内投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象のＬＤＬＲ遺伝子型又は表現型を決定する工程を更に含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
投与により、前記対象における血清コレステロールが低下される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象における前記血清コレステロールレベルを決定する工程を更に含む、請求項３２に記載の方法。