(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚肉をサーモリシン酵素で分解して得られるペプチド含有組成物であり、かつ分子量が５０００以上のポリペプチド成分の含有量を０．１〜５重量％としたことを特徴とするアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項２】
ペプチド含有組成物が下記のオリゴペプチドの少なくとも１種を含むことを特徴とする請求項１記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、
Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、
Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、
Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、
Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ、
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ、
Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ、
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ａｌａ、
Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ、
Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、
Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ
【請求項３】
魚肉が魚節である請求項１あるいは２記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項４】
魚肉が魚節の熱水抽出残渣である請求項１あるいは２記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項５】
魚節がかつお節である請求項３あるいは４記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬品、食品、健康食品、特定保健用食品などに使用することができる魚肉をサーモリシン酵素で分解して得られるペプチド含有組成物よりなるアンギオテンシン変換酵素阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アンギオテンシン変換酵素は、主として肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテンシンＩ（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用して、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素である。また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与している。従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治療に有効であると考えられている。
【０００３】
最近ではプロリン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害物質の合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試みられているところである。
天然物由来のアンギオテンシン変換酵素阻害剤は食品あるいは食品原料から得られるので低毒性で安全性の高い降圧剤となることが期待されるからである。
本出願人も先に、特開平４−６９３９７号公報でＬｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ骨格をもつ新規ペプチドを開示した。また、特開平４−１４４６９６号公報で蛋白質をサーモライシン（サーモリシン）で加水分解するアンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成物の製造方法を開示し、更に特開平５−２４４９７９号公報では、肉類を５０℃以上の水中で加熱処理し、水不溶性蛋白質を抽出除去して得られる水不溶性の蛋白質を主体とする残渣をプロテアーゼで加水分解するアンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成物の製造方法を開示した。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記特開平４−６９３９７号公報に開示の新規ペプチドの阻害活性は非常に強いものではあるが、実用的に該ペプチドのみを単離するには非常に労力を要し、コストアップとなる。また、特開平４−１４４６９６号公報や特開平５−２４４９７９号公報に開示の製造方法では、ある程度阻害活性の強い組成物が得られるものの、該組成物を摂取して効果を得るための摂取量がやや多く、毎日手軽に摂取するためには更に摂取量を低減することが望まれ、更に上記組成物は蛋白質としてかつお節を用いた場合、ペプチド特有の苦みは少ないものの、後味の点で更に改良の余地があった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、かかる課題を解決すべく鋭意検討した結果、魚肉をサーモリシン酵素で分解して得られるペプチド含有組成物であり、かつ分子量が５０００以上のポリペプチド成分の含有量を０．１〜５重量％としたアンギオテンシン変換酵素阻害剤（以下阻害剤と称する）が強い阻害活性を示し、色相もよく、苦みが全くなく、後味がさっぱりして、摂取し易いことを見いだし本発明を完成した。
【０００６】
以下に本発明を詳細に述べる。
本発明におけるペプチド含有組成物は、魚肉をサーモリシン酵素で分解して得られるもので、かかる魚肉としては、かつお、さば、いわし、たら、さけ、さんま、はまち、あじ等の生身、及びこれらの乾燥物、これらを熱水抽出した残渣、これらの魚節（熱水抽出残渣を乾燥し必要に応じて黴付けしたもの）、更にはかかる魚節の熱水抽出残渣等が挙げられ、好ましくは魚節の熱水抽出残渣が用いられる。また、該魚節の中では、かつお節が好ましい。
また、分解酵素として用いられるサーモリシン酵素は精製品でも、多少の他の酵素が混合されている粗酵素液でもよく、市販品の『サモアーゼ』（大和化成社製）を用いてもよい。
【０００７】
魚肉をサーモリシン酵素で分解するに当っては、魚肉に水とサーモリシン酵素を加えて、加水分解を実施する。該加水分解を行うにあたっては、魚肉の性状により前処理をおこなってもよく、その場合魚肉に水あるいは熱水を加えて混合し強力な撹拌でホモジナイズする。加水分解を行う際のサーモリシン酵素の添加量は、魚肉と水の合計量に対して、０．０５〜５．０重量％が好ましく、更には０．１〜１．０重量％である。添加量が０．０５重量％未満では、加水分解が十分進行せず、また、５．０重量％を越えても、サーモリシン酵素を浪費するだけで好ましくない。
【０００８】
加水分解時の反応温度は１０〜８５℃が好ましく、更には４０〜８０℃である。反応温度が１０℃未満では、加水分解が十分進行せず、８５℃を越えると、サーモリシン酵素の失活が激しくなり好ましくない。
加水分解時のｐＨは６〜８が好ましい。ｐＨが６未満あるいは８を越えると、加水分解率が低くなり好ましくない。加水分解反応開始前の液は通常ｐＨが４〜５．５であるので、アルカリ水溶液（例えば水酸化ナトリウム水溶液）でｐＨを６〜８程度に調整するのが好ましい。
反応時間は１０分〜３０時間が好ましく、更には３〜２０時間である。反応時間が１０分未満では、分解物の収率が悪く、３０時間を越えると生産効率が悪くなり好ましくない。
【０００９】
加水分解率は特に制限はされないが、最終の加水分解率が１０〜６０％となるように調整するのが好ましく、更には２０〜５０％である。該分解率が１０％未満のときは、得られるペプチドが少なく生産効率が悪く、６０％を越えるためには、長時間の加水分解が必要で、更にサーモリシン酵素が多量に必要になるので好ましくない。なお該分解率は、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２４巻、第６号、第１０９０〜１０９３頁（１９７６）に基づいて測定することができる。
【００１０】
本発明では上記酵素で分解して得られたペプチド含有組成物中に含まれる分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量を、該組成物の固形分に対して０．１〜５重量％にすることを最大の特徴とし、具体的には分子量５０００以上のポリペプチド成分を１５〜３０重量％程度含む上記分解物から、分子量５０００以上のポリペプチド成分を０．１〜５重量％になるまで取り除く。分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量が５重量％を超えると、色相が黄色〜褐色となり、苦みが少し残存し、味がさっぱりとせず、味の薄いものに添加すると後味がいつまでも残存するという欠点があり、更に阻害活性の向上も見られず不適当である。
【００１１】
なお、本発明での分子量は試料をゲル濾過クロマトグラフィーにより測定する。具体的には分子量既知のペプチド、蛋白質〔Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ（分子量５６３）、ニューロテンシン（分子量１６３７）、リボヌクレアーゼ（分子量１３７００）〕を標準物質として、以下の条件で抽出物を溶出させて、溶出時間を測定し、対数グラフの縦軸に分子量、横軸に溶出時間をプロットした検量線に基づいて分子量を求める。また、本発明では、分子量５０００以上のポリペプチド成分の重量％は得られた溶出チャートの分子量５０００の位置でピークを分割し、５０００以上のポリペプチド成分に相当するピーク面積の面積％で求めることとする。
【００１２】
（分画条件）
カラム    ：Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐａｋ６０（Ｗａｔｅｒｓ社製）５×２５０ｍｍ
移動相    ：０．１容量％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）含有５０容量％アセトニトリル水溶液
流速      ：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
検出器    ：ＲＩ
サンプル量：１ｍｇ
【００１３】
0003592593.tif 000002
上記条件では分子量５０００の物質は２９分に溶出されるので、本発明では２９分以前に溶出する物質を分子量５０００以上のポリペプチド成分とする。
【００１４】
分子量５０００以上のポリペプチド成分を取り除く方法としては、▲１▼ゲル濾過クロマトグラフィーにより、分子量５０００以上の画分を取除く方法、▲２▼膜処理により、分子量５０００以上の画分を除く方法、▲３▼該抽出物をメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼンなどの極性有機溶媒を用いた溶媒分画法で高分子画分を取除く方法等を単独あるいは適宜組合わせて実施する。
かかる▲１▼〜▲３▼の方法について簡単に説明する。
【００１５】
▲１▼の方法は前記分子量の分析法として述べた方法を工業的なスケールで実施する方法である。
▲２▼の方法は、分解液を分画分子量が５０００程度の膜（ＵＦ膜）、例えばミリポア社製ＵＦ膜「ＰＬＣＣ（分画分子量５０００）」、アドバンスドメンブランテクノロジー社製ＵＦ膜「ＡＥＳ−５（分画分子量５０００）」、アブコ社製ＵＦ膜「ＨＦＫ−１３１（分画分子量５０００」、旭化成社製ＵＦ膜「ＳＥＰ１０１３（分画分子量３０００）」を通過させて、通過画分を分取して実施する方法である。
▲３▼の方法は、分解液を析出物が出ない程度に濃縮して、そこに５〜１００倍程度の有機溶剤を添加して、系内の有機溶剤の濃度を６０〜９９容量％とすることにより、高分子物質を沈殿させる方法である。
【００１６】
かくして得られた阻害剤は、各種のオリゴペプチドや若干の核酸、部分分解した蛋白質等の混合物であり、該オリゴペプチドとして、具体的には下記のペプチドの少なくとも１種が含まれる。
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、
Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、
Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、
Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、
Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、
Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ、
Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ、
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ａｌａ、
Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ、
Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、
Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ
【００１７】
上記でいうＬｅｕはロイシン、Ｌｙｓはリジン、Ｐｒｏはプロリン、Ａｓｎはアスパラギン、Ｍｅｔはメチオニン、Ｉｌｅはイソロイシン、Ｔｒｐはトリプトファン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｇｌｎはグルタミン、Ｔｙｒはチロシン、Ｇｌｙはグリシン、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｔｈｒはスレオニン、Ａｌａはアラニン、Ｖａｌはバリン、Ａｒｇはアルギニン、Ａｓｐはアスパラギン酸を意味し、かかるアミノ酸はいずれもＬ−体である。
【００１８】
本発明の阻害剤は加水分解して得られた分解液を上記のような組成に調整した水溶液や水を取り除いて粉末としたものである。水を取り除く際の脱水手段としては、濃縮乾固、フリーズドライ、スプレードライ、真空乾燥等の方法が用いられる。本発明の阻害剤は製剤にして、医薬品、健康食品（健康補助食品）として用いられたり、そのまま食品に添加して用いられる。
【００１９】
製剤して医薬品として用いられる場合、阻害剤は単独あるいは製剤用担体と混合して調製した製剤の形で使用される。製剤用担体としては、製剤分野において常用され、かつ本発明の阻害剤と反応しない物質が用いられる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げられる。
【００２０】
剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。
上記で製剤された医薬品や健康食品は、血圧降下、心筋肥大防止、脳卒中防止の目的で用いられる。
【００２１】
また、本発明の阻害剤は苦みがなく後味もよいので農水産加工品、乳製品、菓子、調味料、飲料、フリーズドライ食品、レトルト食品等の食品や健康食品や健康補助食品、食品添加物用途に使用される。食品としては、特に制限はされないが、具体的に対象となる食品としては、以下のものが挙げられる。
（１）農水産加工品
はるさめ、こしあん、こんにゃく、パン、麺類（即席めん、パスタ、生めん、乾めん）、餅、シリアル食品、大豆加工品（豆腐、豆乳、納豆、凍豆腐）、水産加工品〔練り製品、（かに風味）蒲鉾、（魚肉）ハム、（魚肉）ソーセージ、（魚肉）ウィンナー、ふりかけ、お茶づけのり〕、缶詰（  シーチキン、オイルサーディン、焼鳥）、レトルト食品（カレー、シ  チュー、スパゲティー）
【００２２】
（２）乳製品
牛乳、加工乳、乳酸菌飲料、バター、チーズ、練乳、粉乳
（３）菓子
ケーキ、ムース、（粉末）デザート、アイスクリーム、飴、チョコレート、グミ、キャンディー、クッキー、ウエハース、ゼリー
（４）調味料
味噌、醤油、うま味（風味）調味料、（粉末）天然調味料、ソース、ドレッシング、焼き肉のたれ、みりん、カレー、シチュー、香辛料、スパイス、ヨーグルト
（５）飲料
清涼飲料（炭酸飲料、果実飲料、スポーツドリンク、栄養飲料）、嗜好飲料（コーヒー、ココア、麦汁）、みそ汁、スープ
【００２３】
（６）健康食品
イ）サポニン含有食品（オタネニンジン根含有食品、エゾウコギ含有食品）
ロ）糖含有食品〔オリゴ糖（フラクトオリゴ糖含有食品、イソマルトオリゴ糖含有食品、ガラクトオリゴ糖含有食品）、多糖類（シイタケ含有食品、ムコ多糖、蛋白含有食品、コンドロイチン硫酸含有食品、マンネンタケ（霊芝）含有食品、キチン、キトサン含有食品
ハ）ミネラル含有食品（カルシウム含有食品、アルファルファ含有食品、プルーンエキス食品、β−カロチン含有食品
ニ）油脂含有食品
ビタミンＥ含有油脂〔麦（小麦、鳩麦）胚芽油、大豆胚芽油、米胚芽油〕エイコサペンタエン酸含有食品、大豆レシチン含有食品、γ−リノレン酸含有食品（月見草油、ボラージ油）、ドコサヘキサエン酸含有食品ホ）蛋白質含有食品
大豆蛋白含有食品、カゼイン、ホエー蛋白、鯉加工食品
ヘ）タウリン
牡加工食品、シジミ加工食品、緑イ貝加工食品
（７）その他
スッポン加工食品、アミノ酸代謝異常用食品、流動食（病食）
【００２４】
本発明の阻害剤の投与量（摂取量）は、投与方法、患者の症状、年令等により異なるが、通常１回０．００１〜３０００ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇを１日当たり１〜３回である。これらの製剤あるいは食品は、本発明の阻害剤を０．０１重量％以上、好ましくは０．５〜８０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤あるいは食品は、治療上価値ある他の成分を含有していてもよい。
【００２５】
【実施例】
以下本発明について具体的に説明する。尚、以下の記述で「部」、「％」とあるのはそれぞれ「重量部」、「重量％」を意味する。
実施例１
かつお節１２０部に水１０００部を加えて、９０℃で１時間熱水抽出した後、ざるで濾過して得られた残渣５００部（固形分２０％）に、サーモリシン酵素５部、水９００部を加えて、１％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを７．５とし、６０℃で１５時間、分解率４０％まで加水分解し、濾過後、濃縮液１００部（Ｅ−１）〔固形分４０％〕を得た。
該濃縮液を下記の条件で膜処理して、膜濃縮画分（Ｅ−２）５０部〔固形分  ４０％〕を取除いて、膜通過画分（Ｅ−３）５０部〔固形分４０％〕を得た。
【００２６】
（膜処理条件）
装置    ：クロスフローＵＦ膜試験機（ミリポア社製）
膜      ：ＳＥＰ１０１３（分画分子量３０００、旭化成社製）
加圧条件：窒素ガスにより１．５ｋｇ／ｃｍ２に加圧
線速度  ：１ｍ／ｓｅｃ
【００２７】
上記膜通過画分（Ｅ−３）には、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ、Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏなるオリゴペプチドがいずれも確認された。確認法としては、まず上記オリゴペプチドを少量ペプチド合成し、標品とした。次にＨＰＬＣで、逆相カラムにより、その標品と同じ保持時間の画分を分取した。この操作を３回繰り返して最後に同じ保持時間のピークをプロティンシークエンサーによりペプチド配列を決定した。
本発明の方法で分子量５０００以上のポリペプチド成分を測定したところ含有量は３％であった。
【００２８】
それぞれの画分（Ｅ−１、Ｅ−２、Ｅ−３）のアンギオテンシン変換酵素阻害活性を以下のように測定した。
（アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定）
アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、ＣｈｅｕｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０，１６３７（１９７１）〕に準じて以下の方法で行った。
酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した溶液）
酵  素  ；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した後、遠心分離した上澄液）
【００２９】
上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を１２μｌ及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を２５０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を行った。
反応は１Ｎ−ＨＣｌ  ２５０μｌを用いて終了させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。
酢酸エチル層から１．０ｍｌを取り出して、酢酸エチルを留去し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ２２８）を測定した。
阻害率は阻害剤なしで反応したときのＯＤ２２８を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ２２８を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤の濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍｌ）で表示した。
【００３０】
更に得られた阻害剤について以下の濃縮乾固時の色相、１％水溶液の苦みと風味の評価を以下のように行った。
（色相）
◎・・・純白色である。
○・・・ほどんど白色である。
△・・・やや黄色である。
×・・・黄色である。
（苦み）
◎・・・苦みがまったくしない。
○・・・苦みが少しする。
△・・・苦みがする。
×・・・苦みをかなり感じる。
【００３１】
（風味）
◎・・・後味が全く無く、さっぱりとした味である。
○・・・後味がほとんど残らない。
△・・・後味が残るもののそれほど違和感はない。
×・・・違和感のある後味が残る。
【００３２】
【表１】
0003592593.tif 000003
＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対する値とした。
尚Ｅ−１中の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は２０％であった。
【００３３】
実施例２
実施例１で得られた濃縮液（Ｅ−１）１００部〔固形分４０％〕に、エタノールを９５容量％となるように添加して室温で一晩放置して、析出した画分（Ｅ−４）８５部〔固形分４０％〕を濾過して取除き、濾液からエタノールを減圧留去して、画分（Ｅ−５）１５部〔固形分４０％〕を得た。該画分（Ｅ−５）中には実施例１で確認されたオリゴペプチドを全て含んでいた。該画分（Ｅ−５）の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は５％であった。
実施例１と同様に阻害活性を測定し、色相、苦み、風味を評価し表２に示した。
【００３４】
【表２】
0003592593.tif 000004
＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対する値とした。
【００３５】
実施例３
実施例１において、かつお節１２０部に水１０００部を加えて、ホモジナイズしたものにサーモリシン酵素５部を加えて実施例１と同様に加水分解を行い、濃縮液（Ｅ−６）１００部〔固形分４５％〕を得た。
該濃縮液を実施例１と同じ条件で膜処理して、膜濃縮画分（Ｅ−７）５０部〔固形分４５％〕を取除いて、膜通過画分（Ｅ−８）５０部〔固形分４５％〕を得た。
該画分（Ｅ−８）中には実施例１で確認されたオリゴペプチドを全て含んでいた。該画分（Ｅ−８）の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は４％であった。
実施例１と同様に阻害活性を測定し、色相、苦み、風味を評価し表３に示した。
【００３６】
【表３】
0003592593.tif 000005
＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対する値とした。
尚Ｅ−６中の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は２５％であった。
【００３７】
実施例４
実施例３において得られた濃縮液（Ｅ−６）１００部〔固形分４５％〕にエタノールを９５容量％となるように添加して室温で一晩放置して、析出した画分（Ｅ−９）８０部〔固形分４５％〕を濾過して取除き、濾液からエタノールを減圧留去して、画分（Ｅ−１０）２０部〔固形分４５％〕部を得た。該画分（Ｅ−１０）中には実施例１で確認されたオリゴペプチドを全て含んでいた。該画分（Ｅ−１０）の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は２％であった。
実施例１と同様に阻害活性を測定し、色相、苦み、風味を評価し表４に示した。
【００３８】
【表４】
0003592593.tif 000006
＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対する値とした。
【００３９】
【発明の効果】
本発明の阻害剤は、魚肉をサーモリシン酵素で分解して得られるペプチド含有組成物であり、かつ分子量が５０００以上のポリペプチド成分の含有量を０．１〜５重量％としたので、強い阻害活性を示し、尚かつ色相が良く、苦みがなく後味もよいので摂取しやすい。