【手続補正書】
【提出日】平成29年6月20日(2017.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、
ｉ）プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または
ｉｉ）リン脂質二重層を分解する酵素
と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップと
を含む方法。
【請求項２】
ステップａ）が、さらに、あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意することを含み、
ステップｂ）が、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させることを含み、さらに、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させることを含み、
ステップｃ）が、さらに、人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通すことを含み、
ステップｄ）が、さらに、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した前記光の透過率を測定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、
請求項２または３に記載の方法であって、
任意選択で、前記方法は、
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含むか、あるいは
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、
方法。
【請求項５】
前記プラスミノーゲンおよび前記プラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップが、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼと接触させることを含み、ここで、前記プラスミノーゲン活性化因子が、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記プラスミンと接触させるステップが、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させること、および前記試料を前記産生させたプラスミンと接触させることを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップと
を含む方法。
【請求項８】
前記光が、７７５〜７９５ｎｍの間および／または６８０〜７００ｎｍの間の波長である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記光が、第１の波長および第２の波長である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法であって、前記第１の波長が７７５〜７９５ｎｍの間、好ましくは７８５ｎｍであり、前記第２の波長が６８０〜７００ｎｍの間、好ましくは６９０ｎｍである、方法。
【請求項１０】
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、請求項２に従属する場合の請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、請求項２に従属する場合の請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記光が偏光である、かつ／または前記光を、光ダイオードパワーセンサー、好ましくは、２つの光ダイオードセンサーを使用して測定し、前記光を、前記２つの光ダイオードパワーセンサーに到達する前に、分岐型ケーブルシステムに通す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記人工光源が、レーザーである、請求項１、７、８、９または１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記リン脂質二重層を分解する酵素が、ホスホリパーゼＡ２である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の試料を、水と接触させる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
下記では、本発明のこれらの態様および他の態様について記載する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した前記光の透過率を測定するステップと
を含む方法。
（項目２）
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記光が、７７５〜７９５ｎｍの間の波長である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記光が、６８０〜７００ｎｍの間の波長である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記光が、第１の波長および第２の波長である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記第１の波長が７７５〜７９５ｎｍの間であり、前記第２の波長が６８０〜７００ｎｍの間である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記第１の波長が７８５ｎｍであり、前記第２の波長が６９０ｎｍである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、項目７から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目１３）
前記光が、偏光である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記人工光源が、レーザーである、項目９から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記光を、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記光を、２つの光ダイオードパワーセンサーを使用して測定し、前記光を、前記２つの光ダイオードパワーセンサーに到達する前に、分岐型ケーブルシステムに通す、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記リン脂質二重層を分解する酵素が、ホスホリパーゼＡ２である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記プラスミノーゲン活性化因子が、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記プラスミノーゲンおよび前記プラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップが、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼと接触させることを含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記プラスミンと接触させるステップが、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させ、前記試料を、前記産生させたプラスミンと接触させることを含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記第１の試料を、水と接触させる、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、
ｉ）プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または
ｉｉ）リン脂質二重層を分解する酵素
と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップと
を含む方法。
（項目２３）
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップと
を含む方法。
（項目２４）
前記光が、７７５〜７９５ｎｍの間の波長である、項目２２または２３に記載の方法。
（項目２５）
前記光が、６８０〜７００ｎｍの間の波長である、項目２２から２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記光が、第１の波長および第２の波長である、項目２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記第１の波長が７７５〜７９５ｎｍの間であり、前記第２の波長が６８０〜７００ｎｍの間である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記光が、偏光である、項目２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記人工光源が、レーザーである、項目２２から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記光を、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する、項目２２から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記リン脂質二重層を分解する酵素が、ホスホリパーゼＡ２である、項目２２から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記プラスミノーゲン活性化因子が、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである、項目２２から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記プラスミノーゲンおよび前記プラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップが、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼと接触させることを含む、項目２２から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記プラスミンと接触させるステップが、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させ、前記試料を、前記産生させたプラスミンと接触させることを含む、項目２２から３２のいずれか一項に記載の方法。