【手続補正書】
【提出日】平成29年7月21日(2017.7.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の組成物を分析するために最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を同定するための方法であって、各組成物がポリペプチド及び一以上の混入物を含み、該方法が、
ａ）二以上の組成物のポリペプチドのアミノ酸組成に基づいて、選択された温度での正味電荷対ｐＨの曲線をプロットすること、及び
ｂ）工程ａ）のプロットの二次導関数を決定することにより中性ｐＨで又はその近傍での正味電荷対ｐＨの曲線の変曲点を決定することを含み、
最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件が、一以上の組成物のポリペプチドについてほぼ共通の変曲点でのｐＨである、方法。
【請求項２】
ポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するために最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件を同定するための方法であって、該方法は、
ａ）ポリペプチドのアミノ酸組成に基づいて、選択された温度での正味電荷対ｐＨの曲線をプロットすること、及び
ｂ）工程ａ）のプロットの二次導関数を決定することにより中性ｐＨで又はその近傍での正味電荷対ｐＨの曲線の変曲点を決定することを含み、
最適なイオン交換クロマトグラフィーの分離条件が、ポリペプチドについてほぼ変曲点でのｐＨである、方法。
【請求項３】
変曲点での正味電荷が正である場合、陽イオン交換材料がイオン交換クロマトグラフィーのために使用される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
陽イオン交換クロマトグラフィー材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
変曲点での正味電荷が負である場合、陰イオン交換材料がイオン交換クロマトグラフィーのために使用される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
陰イオン交換クロマトグラフィー材料が、第四級アミンのクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
混合モードクロマトグラフィー材料が、クロマトグラフィーのために使用される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
混合モードイオン交換材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料及び第四級アミンのクロマトグラフィー材料又は第三級アミンクロマトグラフィー材料を順次充填した混合物である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ｃ）二以上の組成物のポリペプチドについて温度変化による正味電荷対ｐＨ曲線の変曲点のｐＨの変化（ｄＩＰ／ｄＴ）を決定すること、
ｄ）温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化（ｄｐＫａ／ｄＴ）がポリペプチドのｄＩＰ／ｄＴと本質的に同じである、クロマトグラフィーに使用のためのバッファーを選択することを更に含む、請求項１及び３から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ｃ）ポリペプチドについて温度変化による正味電荷対ｐＨ曲線の変曲点のｐＨの変化（ｄＩＰ／ｄＴ）を決定すること、
ｄ）温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化（ｄｐＫａ／ｄＴ）がポリペプチドのｄＩＰ／ｄＴと本質的に同じである、クロマトグラフィーに使用のためのバッファーを選択することを更に含む、請求項２から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
バッファーが、変曲点のｐＨで効果的な緩衝能を提供する、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
一以上の組成物のポリペプチドのｄＩＰ／ｄＴが、約−０．０２ｐＨ単位である、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
温度変化が、ａ）約２０℃から約７０℃であるか、及び／又はｂ）約２０℃から約５０℃である、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ｄｐＫａ／ｄＴ＝ｄＩＰ／ｄＴ±５０％である、請求項９から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
工程ｄ）で選択されたバッファー中のポリペプチドの正味電荷が、３０℃を超えて０．５未満変化する、請求項９から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
工程ｄ）で選択されたバッファーが、約５ｍＭから約２５０ｍＭの範囲の濃度でクロマトグラフィーに使用される、請求項９から１５の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
バッファー組成物が更に塩を含む、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
塩が、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４、又はＮａ２ＳＯ４である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
塩の濃度が、約１ｍＭから約１Ｍの範囲である、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
組成物がポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、ここで、該方法は混入物からポリペプチドを効果的に分離し、該方法が、
ａ）請求項１の方法に従って、各組成物が標的ポリペプチド及び一以上の混入物を含有する複数の組成物についての最適ｐＨ及び温度のイオン交換分離条件を決定すること、
ｂ）ローディングバッファーが請求項９から１６の何れか一項に記載の方法によって同定されるバッファーを含むローディングバッファーを用いて、イオン交換クロマトグラフィー材料へ組成物からのポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること；
ｃ）溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、塩の濃度が経時的に勾配で増加し、ポリペプチド及び一以上の混入物がその勾配によって分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること；及び
ｄ）ポリペプチド及び一以上の混入物を検出すること含む、方法。
【請求項２１】
ポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、該方法は混入物からポリペプチドを効果的に分離し、該方法が、
ａ）ローディングバッファーがバッファーを含み、クロマトグラフィーのｐＨ及び温度が、ｉ）曲線が二以上の標的ポリペプチドのポリペプチドのアミノ酸組成に基づいている、選択された温度での正味電荷対ｐＨの曲線をプロットし、ｉｉ）工程ｉ）のプロットの二次導関数を決定することによって正味電荷対ｐＨの曲線の変曲点を決定すること（ここで最適なイオン交換クロマトグラフィーの条件は、二以上の標的ポリペプチドについての共通の変曲点でのｐＨである）によって、複数の標的ポリペプチドに対して最適化される、ローディングバッファーを使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること；
ｂ）溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、ポリペプチド及び一以上の混入物が勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること；及び
ｃ）ポリペプチド及び一以上の混入物を検出することを含む、方法。
【請求項２２】
選択される温度が大気温度である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
バッファーが、
ａ）二以上の標的ポリペプチドについて温度変化による正味電荷対ｐＨ曲線の変曲点のｐＨの変化（ｄＩＰ／ｄＴ）を決定すること、
ｂ）温度変化によるバッファーの酸解離定数の変化（ｄｐＫａ／ｄＴ）が共通の変曲点を有する二以上の標的ポリペプチドのｄＩＰ／ｄＴと本質的に同じであるバッファーを選択することによって同定される、請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
バッファーが、変曲点のｐＨで効果的な緩衝能を提供する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ポリペプチド及び一以上の混入物を含む組成物を分析するための方法であって、該方法は混入物からポリペプチドを効果的に分離し、該方法が、
ａ）ローディングバッファーがバッファーを含み、かつクロマトグラフィーのｐＨ及び温度が複数の標的ポリペプチドに対して最適化されている、ローディングバッファーを使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の混入物を結合させること；
ｂ）溶出バッファーがバッファー及び塩を含み、ポリペプチド及び一以上の混入物勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び一以上の混入物を溶出させること；及び
ｃ）ポリペプチド及び一以上の混入物を検出することを含む、方法。
【請求項２６】
バッファーが、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）又は４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
バッファーの濃度が、約５ｍＭから約２０ｍＭの範囲である、請求項２０から２６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
バッファーのｐＨが、ａ）約２０℃から約７０℃の温度範囲で約６．５から約８．５の範囲であるか、及び／又はｂ）約２０℃から約５０℃の温度範囲で約６．５から約８．５の範囲である、請求項２０から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
変曲点でのバッファー及びポリペプチドのｐＨが、約２２℃で約７．８、約３７℃で約７．５、約５０℃で約７．２である、請求項２０から２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
塩勾配が、直線勾配である、請求項２０から２９の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
塩勾配が、段階勾配である、請求項２０から２９の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
塩勾配が、ＮａＣｌ勾配、ＫＣｌ勾配、（ＮＨ４）２ＳＯ４勾配又はＮａ２ＳＯ４勾配である、請求項２０から３１の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
塩濃度が、ａ）約０ｍＭから約１Ｍまでの勾配で増加するか、又はｂ）約１００分で約０ｍＭから約１００ｍＭまでの勾配で増加するか、又はｃ）約４０分で約０ｍＭから約８０ｍＭまでの勾配で増加する、請求項２０から３２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
ポリペプチドが、抗体若しくはイムノアドヘシン又はその断片である、請求項１から３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドが、モノクローナル抗体又はその断片である、請求項１から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
抗体が、ヒト抗体であるか、ヒト化抗体であるか、又はキメラ抗体である、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】
抗体が、抗体断片である、請求項３４から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
混入物が、a)ポリペプチドの変異体であるか、及び／又はｂ）ポリペプチドの分解生成物であるか、及び／又はｃ）ポリペプチドの電荷変異体である、請求項１から３７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
クロマトグラフィー材料が、陽イオン交換クロマトグラフィー材料である、請求項２０から３８の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
陽イオン交換クロマトグラフィー材料が、スルホン化クロマトグラフィー材料又はカルボキシル化クロマトグラフィー材料である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
複数のポリペプチド組成物を分析するための方法であって、各ポリペプチド組成物がポリペプチド及びポリペプチドの一以上の電荷変異体を含み、該方法はポリペプチドをその電荷変異体から効果的に分離し；
各ポリペプチド組成物に対して、
ａ）ローディングバッファーが約４０℃でｐＨが約７．６で１０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファーを含み、ローディングバッファーを約１ｍＬ／分の流速で使用してイオン交換クロマトグラフィー材料にポリペプチド及び一以上の荷電変異体を結合させること；
ｂ）溶出バッファーがｐＨが約７．６で約１０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー及びＮａＣｌを含み、ＮａＣｌの濃度が約４０分で約０ｍＭから約８０ｍＭまで勾配で増加し、ポリペプチド及びその荷電変異体が勾配により分離される溶出バッファーの勾配を用いてイオン交換クロマトグラフィー材料からポリペプチド及び荷電変異体混入物を溶出させること；及び
ｃ）ポリペプチド及び一以上の荷電変異体を検出することを含む、方法。
【請求項４２】
複数のポリペプチド組成物が異なるポリペプチドを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
複数のポリペプチド組成物が異なるｐＩを有するポリペプチドを含む、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４４】
ポリペプチド組成物が抗体組成物である、請求項４１から４３の何れか一項に記載の方法。