【手続補正書】
【提出日】平成29年11月20日(2017.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチドを、式［ＰＰ］−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｓ−［ＰＰ］の基（式中、各Ｓは前記ジスルフィド結合に由来する硫黄であり、［ＰＰ］は前記基の末端が前記ポリペプチドに結合している場所を示す）を含むケトンで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチド、水性緩衝液、および１，３−ジハロアセトンの混合物を形成し、次いで前記ジスルフィド結合を還元できる還元剤を添加することと、ケトンで修飾されたポリペプチドをアミン系促進剤の存在下で式Ｒ−Ｏ−ＮＨ２の基と接触させることを含み、式Ｒ−Ｏ−ＮＨ２の基が、式Ｈ２Ｎ−Ｏ−Ｌ−ＰＬの化合物（式中、Ｌはリンカーを表し、ＰＬはペイロード基を表す）である、前記方法。
【請求項２】
前記１，３−ジハロアセトンが、１，３−ジクロロアセトンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記還元剤が、水溶性のホスフィンまたはホスフィン塩である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、抗体または抗体フラグメントである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
ケトンで修飾されたポリペプチドをオキシムで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、前記ケトンで修飾されたポリペプチドをアミン系促進剤の存在下で式Ｒ−Ｏ−ＮＨ２の基と少なくとも約１ｍｇ／ｍＬのポリペプチド濃度で接触させることを含み、式Ｒ−Ｏ−ＮＨ２の基が、式Ｈ２Ｎ−Ｏ−Ｌ−ＰＬの化合物（式中、Ｌはリンカーを表し、ＰＬはペイロード基を表す）であり、前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法で調製される、前記方法。
【請求項６】
前記アミン系促進剤が、カルボキシ置換アニリンまたはアシルヒドラジンである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、式：
【化１】
2016539190.tif 000001
（式中、円は前記ポリペプチドを表し、各硫黄原子は、前記ポリペプチドのシステイン残基のスルフヒドリルである）のものである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、式：
【化２】
2016539190.tif 000002
（式中、ＸはＯであり、Ｌはリンカーを表し、ｚは１〜１０の整数であり、ＰＬ、ＰＬ１およびＰＬ２は、出現する毎に独立に、ペイロード基を表す）のものである、請求項５から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ポリペプチドが抗体である、請求項５から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリペプチドがワクチン担体である、請求項５から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ペイロードが、治療薬を含む、請求項５から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ペイロードが、検出可能な標識または結合基を含む、請求項５から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｌが、開裂可能な連結部分を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｌが、
（ａ）結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）Ｈ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；
（ｂ）（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン、−Ｚ−（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン−Ｚ−（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン［式中、Ｚは、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、フェニレン、ヘテロアリーレン、またはヘテロシクレンであり、前記（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、前記（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、および前記（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン部分は、それぞれ独立に、前記部分内に散在する１〜１０個の酸素原子を任意選択で含んでいてもよい］；
（ｃ）（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン−Ｙ−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、−Ｙ−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、フェニレン、−Ｙ−フェニレン、フェニレン−Ｙ−フェニレン、ヘテロアリーレン、Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロアリーレン−Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロシクレン、−Ｙ−ヘテロシクレン、またはヘテロシクレン−Ｙ−ヘテロシクレン［式中、Ｙは、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり、前記（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、前記フェニレン、前記ヘテロアリーレン、および前記ヘテロシクレン部分は、それぞれ独立に、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、またはハロ置換（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１〜３個の置換基で、任意選択で置換されていてもよい］；
（ｄ）−［ＯＣＨ２ＣＨ２］ｖ−または−Ｊ−｛ＣＨ２［ＯＣＨ２ＣＨ２］ｖ｝ｗ−（式中、ｖは１〜２，０００であり、ｗは１〜４であり、ＪはＣＨ２またはＮＨである）；
（ｅ）１〜１００個のアミノ酸を含むペプチド；および
（ｆ）デンドリマー、デンドロン、および超分岐ポリマーを含む樹状高分子から選択される少なくとも１つのスペーサーを含む、請求項５から１３のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
【表４】
2016539190.tif 000003
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチドを、式［ＰＰ］−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｓ−［ＰＰ］の基（式中、各Ｓは前記ジスルフィド結合に由来する硫黄であり、［ＰＰ］は連結基の末端が前記ポリペプチドに結合している場所を示す）を含むケトンで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、
還元可能なジスルフィド結合を含むポリペプチド、水性緩衝液、および１，３−ジハロアセトンの混合物を形成し、次いで前記ジスルフィド結合を還元できる還元剤を添加することを含む、前記方法。
［２］
前記１，３−ジハロアセトンが、１，３−ジクロロアセトンである、［１］に記載の方法。
［３］
前記還元剤が、水溶性のホスフィンまたはホスフィン塩である、［１］または［２］に記載の方法。
［４］
前記ポリペプチドが、抗体または抗体フラグメントである、［１］から［３］のいずれか一項に記載の方法。
［５］
ケトンで修飾されたポリペプチドをオキシムで修飾されたポリペプチドに変換する方法であって、前記ケトンで修飾されたポリペプチドをアミン系促進剤の存在下で式Ｒ−Ｏ−ＮＨ２の基と少なくとも約１ｍｇ／ｍＬのポリペプチド濃度で接触させることを含む、前記方法。
［６］
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、［１］から［４］のいずれか一項に記載の方法で調製される、［５に記載の方法。
［７］
前記アミン系促進剤が、カルボキシ置換アニリンまたはアシルヒドラジンである、［６］に記載の方法。
［８］
式Ｒ−Ｏ−ＮＨ２の基が、式Ｈ２Ｎ−Ｏ−Ｌ−ＰＬの化合物（式中、Ｌはリンカーを表し、ＰＬはペイロード基を表す）である、［５］から［７］のいずれか一項に記載の方法。
［９］
前記ケトンで修飾されたポリペプチドが、式：
【化５７】
2016539190.tif 000004
（式中、円は前記ポリペプチドを表し、各硫黄原子は、前記ポリペプチドのシステイン残基のスルフヒドリルである）のものである、［５］に記載の方法。
［１０］
前記タンパク質−ペイロード複合体が、式：
【化５８】
2016539190.tif 000005
（式中、ＸはＯであり、Ｌはリンカーを表し、ｚは１〜１０の整数であり、ＰＬ、ＰＬ１およびＰＬ２は、出現する毎に独立に、ペイロード基を表す）のものである、［５］から［９］のいずれか一項に記載の方法。
［１１］
前記ポリペプチドが抗体である、［５］から［１０］のいずれか一項に記載の方法。
［１２］
前記ポリペプチドがワクチン担体である、［５］から［１０］のいずれか一項に記載の方法。
［１３］
前記ペイロードが、治療薬を含む、［５］から［１２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４］
前記ペイロードが、検出可能な標識または結合基を含む、［５］から［１３］のいずれか一項に記載の方法。
［１５］
Ｌが、開裂可能な連結部分を含む、［１４］に記載の方法。
［１６］
Ｌが、
（ａ）結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）Ｈ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；
（ｂ）（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン、−Ｚ−（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン−Ｚ−（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン−Ｚ−（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン［式中、Ｚは、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、フェニレン、ヘテロアリーレン、またはヘテロシクレンであり、前記（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、前記（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、および前記（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン部分は、それぞれ独立に、前記部分内に散在する１〜１０個の酸素原子を任意選択で含んでいてもよい］；
（ｃ）（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン−Ｙ−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、−Ｙ−（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、フェニレン、−Ｙ−フェニレン、フェニレン−Ｙ−フェニレン、ヘテロアリーレン、Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロアリーレン−Ｙ−ヘテロアリーレン、ヘテロシクレン、−Ｙ−ヘテロシクレン、またはヘテロシクレン−Ｙ−ヘテロシクレン［式中、Ｙは、（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルケニレン、（Ｃ２〜Ｃ２０）アルキニレン、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、または−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であり、前記（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキレン、前記フェニレン、前記ヘテロアリーレン、および前記ヘテロシクレン部分は、それぞれ独立に、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、またはハロ置換（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される１〜３個の置換基で、任意選択で置換されていてもよい］；
（ｄ）−［ＯＣＨ２ＣＨ２］ｖ−または−Ｊ−｛ＣＨ２［ＯＣＨ２ＣＨ２］ｖ｝ｗ−（式中、ｖは１〜２，０００であり、ｗは１〜４であり、ＪはＣＨ２またはＮＨである）；
（ｅ）１〜１００個のアミノ酸を含むペプチド；および
（ｆ）デンドリマー、デンドロン、および超分岐ポリマーを含む樹状高分子から選択される少なくとも１つのスペーサーを含む、［５］から［１５］のいずれか一項に記載の方法。