【手続補正書】
【提出日】平成29年9月5日(2017.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞であって、第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを該細胞表面で共発現し、各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン
（ｉｉ）スペーサー
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン、および
（ｉｖ）エンドドメイン
を含み、該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲの該抗原結合ドメインが異なる抗原に結合し、該第１のＣＡＲまたは該第２のＣＡＲの一方が活性化エンドドメインを含む活性化ＣＡＲであり、他方のＣＡＲがライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲのいずれかである、Ｔ細胞。
【請求項２】
請求項１に記載のＴ細胞であって、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの前記スペーサーが、交差対合を防止するために十分に異なるが、該Ｔ細胞膜で該ＣＡＲを共局在させるほどに十分に類似したものである、Ｔ細胞。
【請求項３】
前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの前記スペーサーがオーソロガスである、請求項２に記載のＴ細胞。
【請求項４】
第１の前記スペーサーおよび第２の前記スペーサーが、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの交差対合を防止するために十分に異なるが、ライゲーション後に該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲの共局在をもたらすほどに十分類似している、請求項１に記載のＴ細胞。
【請求項５】
前記第１のＣＡＲまたは前記第２のＣＡＲの一方が、活性化エンドドメインを含む活性化ＣＡＲであり、他方のＣＡＲが、ライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲであり、その阻害性ＣＡＲが、阻害性ＣＡＲライゲーションの非存在下では該活性化ＣＡＲによるＴ細胞活性化を有意に阻害しないが、該阻害性ＣＡＲがライゲーションされたときには、該活性化ＣＡＲによるＴ細胞活性化を阻害する、請求項４に記載のＴ細胞。
【請求項６】
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインが、ホスファターゼの少なくとも一部を含む、請求項５に記載のＴ細胞。
【請求項７】
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインが、ＰＴＰＮ６の全部または一部を含む、請求項６に記載のＴ細胞。
【請求項８】
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインが、少なくとも１つのＩＴＩＭドメインを含む、請求項５に記載のＴ細胞。
【請求項９】
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインの活性が、ＰＴＰＮ６−ＣＤ４５融合タンパク質またはＰＴＰＮ６−ＣＤ１４８融合タンパク質の共発現により高められる、請求項８に記載のＴ細胞。
【請求項１０】
前記活性化エンドドメインを含む前記活性化ＣＡＲが、ＣＤ３３と結合する抗原結合ドメインを含み、前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む前記ＣＡＲが、ＣＤ３４と結合する抗原結合ドメインを含む、請求項５〜９のいずれかに記載のＴ細胞。
【請求項１１】
２つより多くの抗原の区別可能なパターンを担持する、Ｔ細胞などの細胞により特異的に刺激されるような、先行する請求項に記載のＣＡＲを２つより多く含むＴ細胞。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の両方をコードする核酸配列。
【請求項１３】
次の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−エンド１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−エンド２
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、該第１のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、該第１のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド１は、該第１のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｅｘｐｒは、両ＣＡＲの共発現を可能にする核酸配列であり；
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、該第２のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、該第２のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド２は、該第２のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有し、Ｔ細胞で発現されるときに、該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲが該Ｔ細胞表面で共発現されるような、切断部位で切断されるポリペプチドをコードする、請求項１２に記載の核酸配列。
【請求項１４】
ｃｏｅｘｐｒが、自己切断性ペプチドを含む配列をコードする、請求項１３に記載の核酸配列。
【請求項１５】
相同組換えを回避するため、代替的コドンが、同じかまたは類似したアミノ酸配列をコードする配列の領域で使用される、請求項１３または１４に記載の核酸配列。
【請求項１６】
（ｉ）請求項１〜１１のいずれかに記載の前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列であって、以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−エンド１
（ここで、
ＡｇＢ１は、該第１のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、該第１のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、該第１のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド１は、該第１のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する核酸配列；および
（ｉｉ）請求項１〜１１のいずれかに記載の前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の核酸配列であって、以下の構造：
ＡｇＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−エンド２
（ＡｇＢ２は、該第２のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、該第２のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、該第２のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド２は、該第２のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する核酸配列
を含む、キット。
【請求項１７】
請求項１６に記載の前記第１の核酸配列を含む第１のベクターおよび請求項１６に記載の該第１の核酸配列を含む第２のベクターを含む、キット。
【請求項１８】
前記ベクターが組込み型ウイルスベクターまたはトランスポゾンである、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
請求項１２〜１５のいずれかに記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項２０】
請求項１９によるレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
【請求項２１】
請求項１２〜１５のいずれかに記載の核酸配列；請求項１６に記載の第１の核酸配列および第２の核酸配列；および／または請求項１７に記載の第１のベクターおよび第２のベクターまたは請求項１９または２０に記載のベクターを、Ｔ細胞に導入する工程を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載のＴ細胞を製造する方法。
【請求項２２】
前記Ｔ細胞が被験体から単離された試料に由来する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の複数のＴ細胞を含む医薬組成物。
【請求項２４】
疾患を処置および／または予防するための請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の医薬組成物であって、
前記Ｔ細胞が、被験体から単離されたＴ細胞含有試料由来の細胞であり、
該Ｔ細胞含有試料由来の該Ｔ細胞は、（ｉｉ）請求項１２〜１５のいずれかに記載の核酸配列；請求項１６に記載の第１の核酸配列および第２の核酸配列；請求項１７または１８に記載の第１のベクターおよび第２のベクターまたは請求項１９または２０に記載のベクターで形質導入またはトランスフェクションされていることを特徴とし、
形質導入またはトランスフェクションされたＴ細胞が、該被験体に投与されることを特徴とする、
医薬組成物。
【請求項２６】
前記疾患ががんである、請求項２４または２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
疾患を処置および／または予防するための医薬の製造における請求項１〜１１のいずれかに記載のＴ細胞の使用。
【請求項２８】
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを細胞表面で共発現するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であって、各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン；および
（ｉｖ）エンドドメイン
を含み、該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲの該抗原結合ドメインが異なる抗原に結合し、該第１のＣＡＲまたは該第２のＣＡＲの一方が、活性化エンドドメインを含む活性化ＣＡＲであり、他方のＣＡＲが、ライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲである、ナチュラルキラー細胞。
【請求項２９】
前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲをコードする核酸により血液試料を生体外で形質導入することにより作製される、請求項１に記載のＣＡＲ発現Ｔ細胞および／または請求項２８に記載のＣＡＲ発現ＮＫ細胞を含む細胞組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
したがって、選択性がさらに高く、ｏｎ−ｔａｒｇｅｔ，ｏｆｆ−ｔｕｍｏｕｒ毒性が低減された代替的なＣＡＲに基づくＴ細胞手法が要望されている。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
Ｔ細胞であって、第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを該細胞表面で共発現し、各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン
（ｉｉ）スペーサー
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン、および
（ｉｖ）エンドドメイン
を含み、該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲの該抗原結合ドメインが異なる抗原に結合し、該第１のＣＡＲまたは該第２のＣＡＲの一方が活性化エンドドメインを含む活性化ＣＡＲであり、他方のＣＡＲがライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲのいずれかである、Ｔ細胞。
（項目２）
項目１に記載のＴ細胞であって、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの前記スペーサーが、交差対合を防止するために十分に異なるが、該Ｔ細胞膜で該ＣＡＲを共局在させるほどに十分に類似したものである、Ｔ細胞。
（項目３）
前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの前記スペーサーがオーソロガスである、項目２に記載のＴ細胞。
（項目４）
第１の前記スペーサーおよび第２の前記スペーサーが、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲの交差対合を防止するために十分に異なるが、ライゲーション後に該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲの共局在をもたらすほどに十分類似している、項目１に記載のＴ細胞。
（項目５）
前記第１のＣＡＲまたは前記第２のＣＡＲの一方が、活性化エンドドメインを含む活性化ＣＡＲであり、他方のＣＡＲが、ライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲであり、その阻害性ＣＡＲが、阻害性ＣＡＲライゲーションの非存在下では該活性化ＣＡＲによるＴ細胞活性化を有意に阻害しないが、該阻害性ＣＡＲがライゲーションされたときには、該活性化ＣＡＲによるＴ細胞活性化を阻害する、項目４に記載のＴ細胞。
（項目６）
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインが、ホスファターゼの少なくとも一部を含む、項目５に記載のＴ細胞。
（項目７）
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインが、ＰＴＰＮ６の全部または一部を含む、項目６に記載のＴ細胞。
（項目８）
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインが、少なくとも１つのＩＴＩＭドメインを含む、項目５に記載のＴ細胞。
（項目９）
前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインの活性が、ＰＴＰＮ６−ＣＤ４５融合タンパク質またはＰＴＰＮ６−ＣＤ１４８融合タンパク質の共発現により高められる、項目８に記載のＴ細胞。
（項目１０）
前記活性化エンドドメインを含む前記活性化ＣＡＲが、ＣＤ３３と結合する抗原結合ドメインを含み、前記ライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む前記ＣＡＲが、ＣＤ３４と結合する抗原結合ドメインを含む、項目５〜９のいずれかに記載のＴ細胞。
（項目１１）
２つより多くの抗原の区別可能なパターンを担持する、Ｔ細胞などの細胞により特異的に刺激されるような、先行する項目に記載のＣＡＲを２つより多く含むＴ細胞。
（項目１２）
項目１〜１１のいずれかに記載の前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の両方をコードする核酸配列。
（項目１３）
次の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−エンド１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−エンド２
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、該第１のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、該第１のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド１は、該第１のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｅｘｐｒは、両ＣＡＲの共発現を可能にする核酸配列であり；
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、該第２のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、該第２のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド２は、該第２のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有し、Ｔ細胞で発現されるときに、該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲが該Ｔ細胞表面で共発現されるような、切断部位で切断されるポリペプチドをコードする、項目１２に記載の核酸配列。
（項目１４）
ｃｏｅｘｐｒが、自己切断性ペプチドを含む配列をコードする、項目１３に記載の核酸配列。
（項目１５）
相同組換えを回避するため、代替的コドンが、同じかまたは類似したアミノ酸配列をコードする配列の領域で使用される、項目１３または１４に記載の核酸配列。
（項目１６）
（ｉ）項目１〜１１のいずれかに記載の前記第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列であって、以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−エンド１
（ここで、
ＡｇＢ１は、該第１のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、該第１のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、該第１のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド１は、該第１のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する核酸配列；および
（ｉｉ）項目１〜１１のいずれかに記載の前記第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の核酸配列であって、以下の構造：
ＡｇＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−エンド２
（ＡｇＢ２は、該第２のＣＡＲの前記抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、該第２のＣＡＲの前記スペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、該第２のＣＡＲの前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド２は、該第２のＣＡＲの前記エンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する核酸配列
を含む、キット。
（項目１７）
項目１６に記載の前記第１の核酸配列を含む第１のベクターおよび項目１６に記載の該第１の核酸配列を含む第２のベクターを含む、キット。
（項目１８）
前記ベクターが組込み型ウイルスベクターまたはトランスポゾンである、項目１７に記載のキット。
（項目１９）
項目１２〜１５のいずれかに記載の核酸配列を含むベクター。
（項目２０）
項目１９によるレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
（項目２１）
項目１２〜１５のいずれかに記載の核酸配列；項目１６に記載の第１の核酸配列および第２の核酸配列；および／または項目１７に記載の第１のベクターおよび第２のベクターまたは項目１９または２０に記載のベクターを、Ｔ細胞に導入する工程を含む、項目１〜１１のいずれかに記載のＴ細胞を製造する方法。
（項目２２）
前記Ｔ細胞が被験体から単離された試料に由来する、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
項目１〜１１のいずれかに記載の複数のＴ細胞を含む医薬組成物。
（項目２４）
項目２３に記載の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、疾患を処置および／または予防する方法。
（項目２５）
次の工程：
（ｉ）被験体からのＴ細胞含有試料の単離；
（ｉｉ）項目１２〜１５のいずれかに記載の核酸配列；項目１６に記載の第１の核酸配列および第２の核酸配列；項目１７または１８に記載の第１のベクターおよび第２のベクターまたは項目１９または２０に記載のベクターでの該Ｔ細胞の形質導入またはトランスフェクション；ならびに
（ｉｉｉ）該被験体に（ｉｉ）からの該Ｔ細胞を投与すること
を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記疾患ががんである、項目２４または２５に記載の方法。
（項目２７）
疾患の処置および／または予防で使用するための項目２３に記載の医薬組成物。
（項目２８）
疾患を処置および／または予防するための医薬の製造における項目１〜１１のいずれかに記載のＴ細胞の使用。
（項目２９）
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを細胞表面で共発現するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であって、各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン；および
（ｉｖ）エンドドメイン
を含み、該第１のＣＡＲおよび該第２のＣＡＲの該抗原結合ドメインが異なる抗原に結合し、該第１のＣＡＲまたは該第２のＣＡＲの一方が、活性化エンドドメインを含む活性化ＣＡＲであり、他方のＣＡＲが、ライゲーション・オン阻害性エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲである、ナチュラルキラー細胞。
（項目３０）
前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲをコードする核酸により血液試料を生体外で形質導入することにより作製される、項目１に記載のＣＡＲ発現Ｔ細胞および／または項目２９に記載のＣＡＲ発現ＮＫ細胞を含む細胞組成物。