【手続補正書】
【提出日】平成28年11月30日(2016.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３８】
図６は、ＳＣＤを添加して３３℃で１９．５および２３時間インキュベーションした後に接種されたＭＲＭ３Ｇ６培地中では、エタノール生成の完全な阻害がもたらされた一方で、未添加対照は、２０時間目に３０ｇ／Ｌ以上を含有したことを示す。
図７Ａは、４７℃では、Ｙ０１８トウモロコシ茎葉加水分解物中で、ＳＣＤを添加して８時間のインキュベーション後の接種が、未添加対照中、および接種に先だつより長いインキュベーション時間のサンプル中の生成レベルと同様のエタノール生成レベルを可能にしたことを示し、培地がＺ．モビリス（Ｚ．ｍｏｂｉｌｉｓ）発酵に許容されるようにするのに、４７℃で８時間が十分な遅延時間であったことが示唆される。ＭＲＭ３Ｇ６培地を使用する場合、ＳＣＤを添加して４７℃で１６時間のインキュベーション後の接種が、エタノール生成レベルを未添加対照中および接種に先だつより長いインキュベーション時間のサンプル中の生成レベルと同様にするのに十分であった（図７Ｂ）。８時間および０時間（即時投入）のインキュベーション後に接種したサンプルは、いかなるエタノールも含有しなかった。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
以上、本発明を要約すると以下のとおりである、
１．ａ）細菌種によって汚染されている可能性を有する増殖培地を提供するステップと；
ｂ）安定化二酸化塩素の有効量を（ａ）の増殖培地に添加して、温度が約３３℃を超える安定化二酸化塩素混合物を形成するステップと；
ｃ）ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞が接種ブロスを産生するのに適した温度で、ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞をｂ）の混合物に接種するステップと；
ｄ）前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞の増殖に適した条件下で、前記接種ブロスを発酵させるステップと
を含んでなり、発酵中に細菌汚染が制御される、
ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）生体触媒を含んでなる発酵工程において細菌汚染
を制御するための発酵方法。
２．前記増殖培地が、セルロース性バイオマス加水分解物を含んでなる、上記１に記載の方法。
３．前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞が、エタノール産生菌である、上記１に記載の方法。
４．ステップｂ）における第１の安定化二酸化塩素の有効量の添加から、ステップｃ）におけるザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞接種までの時間が、少なくとも６時間である、上記１に記載の方法。
５．ステップｂ）における第１の安定化二酸化塩素の有効量の添加から、ステップｃ）におけるザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞接種までの時間が、少なくとも８時間である、上記２に記載の方法。
６．ステップｂ）における第１の安定化二酸化塩素の有効量の添加から、ステップｃ）におけるザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞接種までの時間が、少なくとも１６時間である、上記２に記載の方法。
７．前記増殖培地が、少なくとも１種のセルラーゼを含んでなる糖化反応スラリーである、上記２に記載の方法。
８．前記増殖培地がセルロース性バイオマス加水分解物を欠いて、ｉ）規定培地、ｉｉ）非セルロース系生体材料糖原料を含有する培地、およびｉｉｉ）清澄化セルロース性バイオマス加水分解物からなる群から選択される、上記１に記載の方法。
９．前記接種ブロスの温度が、約４０℃未満である、上記１に記載の方法。
１０．（ｂ）の混合物のｐＨが、約７未満である、上記１に記載の方法。
１１．前記加水分解物が、トウモロコシ穂軸、トウモロコシ苞葉、トウモロコシ茎葉、牧草、小麦、麦藁、大麦藁、乾草、稲藁、スイッチグラス、古紙、サトウキビバガス、ソルガム、および木本セルロース成分からなる群から選択される、セルロース性バイオマスに由来する、上記２に記載の方法。
１２．ステップｄ）の接種ブロスが、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞の増殖期間中に、約５ｇ／Ｌ未満の乳酸を含有する、上記１に記載の方法。
１３．前記細菌汚染の原因が、乳酸産生菌である、上記１に記載の方法。
１４．ステップｂ）の増殖培地中の安定化二酸化塩素濃度が、最初に少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇである、上記１に記載の方法。
１５．ａ）ｉ）規定培地、ｉｉ）非セルロース系生体材料糖原料を含有する培地、およびｉｉｉ）清澄化セルロース性バイオマス加水分解物からなる群から選択される、セルロース性バイオマス加水分解物を欠く種培地を提供するステップと；
ｂ）ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）エタノール産生菌細胞をａ）の種培地に接種して、種培養を形成するステップと；
ｃ）前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞をｂ）の種培養中で培養するステップと；
ｄ）ｃ）の種培養を発酵培地に接種して、接種発酵培地を生成するステップと；
ｅ）糖化反応スラリーを提供するステップと；
ｆ）前記接種発酵培地を前記糖化反応スラリーに混合して、発酵ビールを形成するステップと； 
ｇ）エタノールが生成する条件下で、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）エタノール産生菌細胞を前記発酵ビール中で培養するステップと
を含んでなり、
前記発酵ビールおよび前記糖化反応スラリーのいずれか１つが、セルロース性バイオマス加水分解物を含有し；
安定化二酸化塩素が、ｉ）ステップａ）の種培地、ｉｉ）ステップｅ）の糖化反応スラリー、またはｉｉｉ）ステップｄ）の発酵培地の少なくとも１つに添加され、
前記安定化二酸化塩素がステップａ）の種培地に添加される場合、前記種培地が、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）エタノール産生菌の接種前に、少なくとも約６時
間にわたり少なくとも約３３℃の温度に維持され；
前記安定化二酸化塩素がステップｅ）の糖化反応スラリーに添加される場合、前記糖化反応スラリーが、前記接種発酵培地との混合前に、少なくとも約８時間にわたり少なくとも約３３℃の温度に維持され；
前記安定化二酸化塩素がステップｄ）の発酵培地に添加される場合、前記発酵培地が、前記糖化反応スラリーとの混合前に、少なくとも約８時間にわたり少なくとも約３３℃の温度に維持され；
ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞を含んでなる前記種培養、前記接種発酵培地または前記発酵ビールのいずれか１つが、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞の増殖期間中に、約５ｇ／Ｌ未満の乳酸を含有する、
ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）生体触媒を含んでなる発酵工程において細菌汚染を制御するための発酵方法。
１６．前記種培養、前記接種発酵培地、および前記発酵ビールが、約４０℃未満の温度に維持される、上記１５に記載の方法。
１７．前記糖化反応スラリーが、少なくとも１種のセルラーゼを含んでなる、上記１５に記載の方法。
１８．前記細菌汚染の原因が、乳酸産生菌である、上記１５に記載の方法。
１９．前記セルロース性バイオマスが、トウモロコシ穂軸、トウモロコシ苞葉、トウモロコシ茎葉、草本、小麦、麦藁、大麦藁、乾草、稲藁、スイッチグラス、古紙、サトウキビバガス、ソルガム、および木本セルロース成分からなる群から選択される、上記１５に記載の方法。
２０．ステップａ）の種培地、ステップｄ）の糖化反応スラリー、またはステップｅ）の発酵培地中の安定化二酸化塩素の濃度が、最初に少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇである、上記１５に記載の方法。
２１．前記安定化二酸化塩素を含んでなる、ステップｄ）の糖化反応スラリーまたはステップｅ）の発酵培地が、バイオマス乾燥重量を基準にして、混合物総重量に対して少なくとも約２０％固形分の固形分を含有する、上記１５に記載の方法。
２２．ａ）セルロース性バイオマス加水分解物を含んでなる発酵培地組成物；および
ｂ）安定化二酸化塩素
を含んでなる、発酵培地組成物。
２３．ａ）セルロース性バイオマス；
ｂ）少なくとも１種のセルラーゼ酵素；および
ｃ）安定化二酸化塩素
を含んでなる、糖化反応スラリー組成物。
２４．安定化二酸化塩素の濃度が、最初に少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇであり、安定化二酸化塩素の量が、酸による安定化二酸化塩素の完全な活性化に際して放出され得る、二酸化塩素の量に関して示される、上記２２または２３に記載の組成物。
２５．前記組成物が、バイオマス乾燥重量を基準にして、組成物総重量に対して少なくとも約２０％固形分の固形分を含有する、上記２２または２３に記載の組成物。
２６．前記セルロース性バイオマスが、トウモロコシ穂軸、トウモロコシ苞葉、トウモロコシ茎葉、草本、小麦、麦藁、大麦藁、乾草、稲藁、スイッチグラス、古紙、サトウキビバガス、ソルガム、および木本セルロース成分からなる群から選択される、上記２２または２３に記載の組成物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）細菌種によって汚染されている可能性を有する増殖培地を提供するステップと；
ｂ）安定化二酸化塩素の有効量を（ａ）の増殖培地に添加して、温度が約３３℃を超える安定化二酸化塩素混合物を形成するステップと；
ｃ）ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞が接種ブロスを産生するのに適した温度で、ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞をｂ）の混合物に接種するステップと；
ｄ）前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞の増殖に適した条件下で、前記接種ブロスを発酵させるステップと
を含んでなり、発酵中に細菌汚染が制御される、
ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）生体触媒を含んでなる発酵工程において細菌汚染を制御するための発酵方法。
【請求項２】
ａ）ｉ）規定培地、ｉｉ）非セルロース系生体材料糖原料を含有する培地、およびｉｉｉ）清澄化セルロース性バイオマス加水分解物からなる群から選択される、セルロース性バイオマス加水分解物を欠く種培地を提供するステップと；
ｂ）ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）エタノール産生菌細胞をａ）の種培地に接種して、種培養を形成するステップと；
ｃ）前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞をｂ）の種培養中で培養するステップと；
ｄ）ｃ）の種培養を発酵培地に接種して、接種発酵培地を生成するステップと；
ｅ）糖化反応スラリーを提供するステップと；
ｆ）前記接種発酵培地を前記糖化反応スラリーに混合して、発酵ビールを形成するステップと； 
ｇ）エタノールが生成する条件下で、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）エタノール産生菌細胞を前記発酵ビール中で培養するステップと
を含んでなり、
前記発酵ビールおよび前記糖化反応スラリーのいずれか１つが、セルロース性バイオマス加水分解物を含有し；
安定化二酸化塩素が、ｉ）ステップａ）の種培地、ｉｉ）ステップｅ）の糖化反応スラリー、またはｉｉｉ）ステップｄ）の発酵培地の少なくとも１つに添加され、
前記安定化二酸化塩素がステップａ）の種培地に添加される場合、前記種培地が、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）エタノール産生菌の接種前に、少なくとも約６時間にわたり少なくとも約３３℃の温度に維持され；
前記安定化二酸化塩素がステップｅ）の糖化反応スラリーに添加される場合、前記糖化反応スラリーが、前記接種発酵培地との混合前に、少なくとも約８時間にわたり少なくとも約３３℃の温度に維持され；
前記安定化二酸化塩素がステップｄ）の発酵培地に添加される場合、前記発酵培地が、前記糖化反応スラリーとの混合前に、少なくとも約８時間にわたり少なくとも約３３℃の温度に維持され；
ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞を含んでなる前記種培養、前記接種発酵培地または前記発酵ビールのいずれか１つが、前記ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）細胞の増殖期間中に、約５ｇ／Ｌ未満の乳酸を含有する、
ザイモモナス属（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）生体触媒を含んでなる発酵工程において細菌汚染を制御するための発酵方法。
【請求項３】
ａ）セルロース性バイオマス加水分解物を含んでなる発酵培地組成物；および
ｂ）安定化二酸化塩素
を含んでなる、発酵培地組成物。
【請求項４】
ａ）セルロース性バイオマス；
ｂ）少なくとも１種のセルラーゼ酵素；および
ｃ）安定化二酸化塩素
を含んでなる、糖化反応スラリー組成物。