【手続補正書】
【提出日】平成29年8月25日(2017.8.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離ポリペプチドであって、
ｉ）ＤＨＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号３０）、
（Ｘ１は任意のアミノ酸、任意選択でＬ、Ｈ、Ｒ、Ｑであり、
Ｘ２はＳまたはＬであり、
Ｘ３はＤ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ４はＮまたはＤであり、
Ｘ５はＹまたはＳであり、かつ／あるいは
Ｘ６はＴまたはＹである）
ｉｉ）ｉ）の保存的変異型、
ｉｉｉ）ｉ）またはｉｉ）の断片、から選択されるペプチドを含み、
前記保存的変異型及び／または断片が、生物学的活性を保持し、前記ペプチドが１５個以下のアミノ酸である、単離ポリペプチド。
【請求項２】
前記ペプチドが、ＤＨＸ１ＳＤＮＹＴ（配列番号１）（Ｘ１はＬまたはＨである）、または生物学的活性を保持するその保存的変異型からなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
ＤＨＬＳＤＮＹＴ（配列番号２）からなるペプチド配列、または生物学的活性を保持するその保存的変異型を含む、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】
ＤＨＨＳＤＮＹＴ（配列番号３）からなるペプチド配列、または生物学的活性を保持するその保存的変異型を含む、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
前記ペプチドが、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６】
ｉ）ＤＨＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２，Ｘ１３（配列番号６）またはＤＨＸ１ＳＤＮＹＴＸ２ＤＨＤＲＸ３Ｉ（配列番号４）、
（Ｘ１は任意のアミノ酸、任意選択でＬ、Ｈ、Ｒ、Ｑであり、
Ｘ２はＳまたはＬであり、
Ｘ３はＤ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ４はＮまたはＤであり、
Ｘ５はＹまたはＳであり、
Ｘ６はＴまたはＹであり、
Ｘ７はＬ、Ｖ、またはＴであり、
Ｘ８は任意のアミノ酸、任意選択でＤ、Ｇ、Ｎ、またはＰであり、
Ｘ９はＨ、Ｙ、またはＰであり、
Ｘ１０はＲまたはＱであり、
Ｘ１１はＡ、Ｖ、またはＤであり、
Ｘ１２はＩまたはＲであり、かつ／あるいは
Ｘ１３はＨまたはＶであり、任意選択でＸ１はＬまたはＨであり、Ｘ２はＬまたはＶであり、かつＸ３はＡまたはＶである）
ｉｉ）ｉ）の保存的変異型、及び
ｉｉｉ）ｉ）またはｉｉ）の断片、から選択されるペプチドを含み、
前記保存的変異型及び／または断片が、生物学的活性を保持する、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
前記配列が、ＤＨＬＳＤＮＹＴＬＤＨＤＲＡＩ（配列番号９）、または生物学的活性を保持するかもしくは配列番号９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、それらの保存的変異型及び／もしくは断片であり、かつ任意選択で前記単離ポリペプチドが非グリコシル化であるかまたはヒトインビボ発現ポリペプチドとは異なるようにグリコシル化される、請求項６に記載の単離ポリペプチド。
【請求項８】
前記配列が、ＤＨＨＳＤＮＹＴＶＤＨＤＲＶＩ（配列番号１０）、生物学的活性を保持するかまたは配列番号１０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、その保存的変異型及び／または断片であり、かつ任意選択で前記単離ポリペプチドが非グリコシル化であるかまたはウシインビボ発現ポリペプチドとは異なるようにグリコシル化される、請求項６に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
前記ペプチドが、安定化部分及び／または担体から選択される活性部分に結合される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１０】
単離核酸であって、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド、またはストリンジェント条件下で前記単離核酸にハイブリダイズする前記ポリペプチドをコードする、単離核酸。
【請求項１１】
請求項１０に記載の単離核酸を含む、ベクター。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現し、かつ／または請求項１０に記載の単離核酸もしくは請求項１１に記載のベクターを含む、組換え細胞。
【請求項１３】
前記細胞が、コンドロサイト系譜細胞、幹細胞、または椎間板細胞であり、任意選択で前記幹細胞が間葉系幹細胞である、請求項１２に記載の組換え細胞。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１２もしくは１３に記載の組換え細胞、または前記ポリペプチド及び／もしくは組換え細胞を含む組成物で処理された、単離誘導軟骨または椎間板細胞。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドと、任意選択で、担体もしくは希釈剤、請求項１２もしくは１３に記載の組換え細胞、及び／または請求項１４に記載の誘導細胞とを含む、組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド、組換え細胞、誘導細胞、及び／または組成物を含む生体適合性材料で形成されたスキャフォールドを含み、任意選択で前記スキャフォールドがアルギン酸塩スキャフォールドまたはハイドロゲルスキャフォールドであり、かつ前記組換え細胞または誘導細胞が前記スキャフォールド上またはその中に配置される、請求項１５または１６に記載の組成物。
【請求項１８】
軟骨及び／もしくは椎間板細胞内、または軟骨及び／もしくは椎間板細胞を含む組織内において、マトリックス合成、任意選択でプロテオグリカン合成、及び／またはＩＩ型コラーゲン合成を誘導する方法であって、前記方法が、前記軟骨及び／または椎間板細胞を、有効量の、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド、請求項１２もしくは１３に記載の組換え細胞、及び／または請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物とともに、プロテオグリカン合成を誘導するような条件下でインキュベート／培養し、増加したマトリックス合成を伴う誘導軟骨及び／または椎間板細胞を産生することを含む、方法。
【請求項１９】
対象に移植するための軟骨及び／または椎間板組織を産生する方法であって、前記方法が、前記軟骨及び／または椎間板細胞を、有効量の、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド、請求項１２もしくは１３に記載の組換え細胞、及び／または請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物とともに、プロテオグリカン合成を誘導する条件下でインキュベート／培養し、増加したマトリックス合成を伴う誘導軟骨及び／または椎間板細胞を産生することと、誘導軟骨及び／または椎間板細胞の実質的に純粋な集団を単離することと、を含む、方法。
【請求項２０】
前記細胞及び／または組織を、任意選択で軟骨移植における使用のための、軟骨を産生するような条件下で接触させる、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
対象の症状を緩和し、かつ／または軟骨障害及び／もしくは椎間板障害を治療するための薬学的組成物であって、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド、請求項１２もしくは１３に記載の組換え細胞、及び／または請求項１４に記載の誘導細胞を有効成分として含有する、薬学的組成物。
【請求項２２】
軟骨及び／または椎間板組織の病理が、椎間円板変性症である、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記椎間円板変性症が、早期段階である、請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
軟骨及び／または椎間板組織の病理が、関節炎、望ましくない骨形成、及び／または石灰化から選択される、炎症性または変性性関節疾患である、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記関節炎が、骨関節炎である、請求項２４に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記関節炎が、関節リウマチである、請求項２４に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
前記対象が、任意選択でヒト、ウマ、またはイヌから選択される哺乳動物である、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
前記対象が、ヒトである、請求項２７に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
前記対象に対してスキャフォールドで投与される、請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
併用療法で投与される、請求項２１〜２９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
前記組換え細胞が、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチドを発現する、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、軟骨細胞、または椎間板細胞である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記組換え細胞または誘導細胞が、コンドロサイト、任意選択で自家コンドロサイトである、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
モザイクプラスティが使用される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象が、移植を受けたことがある、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
前記方法が、前記軟骨及び／または椎間板細胞もしくは組織を、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド、請求項１２もしくは１３に記載の組換え細胞、請求項１４に記載の誘導細胞、及び／または請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物と組み合わせて、ＭＳＣと接触させることを含む、請求項１８〜２０及び３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象が、減少した細胞密度及び／または代謝活性を有し、任意選択で前記減少した細胞密度及び／または代謝活性が年齢に起因するものである、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
炎症性環境で投与される、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。