【手続補正書】
【提出日】平成29年3月10日(2017.3.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2016511316.tif 000001
［式中、各Ｌ１及びＬ２は、
【化２】
2016511316.tif 000002
、Ｏ、Ｓ、ＮＲｘ及び結合からなる群から独立に選ばれ；ここで、Ｒｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ４は、
【化３】
2016511316.tif 000003
からなる群から選ばれ；
Ｌ５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｒ１及びＲ２は、オリゴペプチド及びＲｙから独立に選ばれ；
ここで、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはオリゴペプチドであり；
一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有する；または一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で負に荷電した天然アミノ酸とｐＨ７で正に荷電した天然アミノ酸との混合物を含み；
そして、Ｒｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ；
各Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；そして
ｎは５〜１０，０００の整数である］のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
一つの又は各オリゴペプチドが、リシン及びアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み；または一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で負に荷電した天然アミノ酸とｐＨ７で正に荷電した天然アミノ酸との混合物を含む、請求項１に記載のポリマー。
【請求項３】
一つの又は各オリゴペプチドが、３〜２０個のアミノ酸残基を含む、請求項１または２に記載のポリマー。
【請求項４】
一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有する、請求項１〜３のいずれかに記載のポリマー。
【請求項５】
一つの又は各オリゴペプチドが、リシン、アルギニン及びヒスチジンからなる群から選ばれるアミノ酸残基を含む、請求項１または２に記載のポリマー。
【請求項６】
一つの又は各オリゴペプチドが、式VII：
【化４】
2016511316.tif 000004
［式中、ｐは２〜１９の整数であり、Ｒａは、出現するたびに、Ｈ２ＮＣ（＝ＮＨ）−ＮＨ（ＣＨ２）３−、Ｈ２Ｎ（ＣＨ２）４−又は（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−ＣＨ２−からなる群から選ばれる］の化合物である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
【請求項７】
Ｒ１及びＲ２がともにオリゴペプチドである、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
【請求項８】
Ｒ１及びＲ２が異なるオリゴペプチドである、請求項７に記載のポリマー。
【請求項９】
Ｒ１及びＲ２の一つがオリゴペプチドで、Ｒ１及びＲ２の一つがＲｙである、請求項１〜７のいずれかに記載のポリマー。
【請求項１０】
ｎが１〜２０である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
【請求項１１】
Ｒｙが、水素、−（ＣＨ２）ｍＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍＮＨＭｅ、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍＮＨ２、−（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍＯＨ又は−（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍＣＨ３からなる群から選ばれ、ｍが１〜２０の整数である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
【請求項１２】
各Ｌ３が、−Ｃ１−１０ アルキレン−（Ｓ−Ｓ）ｑ−Ｃ１−１０アルキレン−からなる群から独立に選ばれ、ｑが０又は１である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
【請求項１３】
各Ｒ３が、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルキニル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロゲン、アリール、ヘテロサイクリック、ヘテロアリール、シアノ、−Ｏ２Ｃ−Ｃ１−６アルキル、カルバモイル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルチオエーテル、チオール、又はウレイドから独立に選ばれる、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
【請求項１４】
（ａ）式Ｉ：
【化５】
2016511316.tif 000005
［式中、各Ｌ１及びＬ２は、
【化６】
2016511316.tif 000006
、Ｏ、Ｓ、ＮＲｘ及び結合からなる群から独立に選ばれ；ここで、Ｒｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ４は、
【化７】
2016511316.tif 000007
からなる群から選ばれ；
Ｌ５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｒ１及びＲ２は、オリゴペプチド及びＲｙから独立に選ばれ；
ここで、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはオリゴペプチドであり；
一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有し；
そして、Ｒｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ；
各Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；そして
ｎは５〜１０，０００の整数である］のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩；と
（ｂ）式Ｉ：
【化８】
2016511316.tif 000008
［式中、各Ｌ１及びＬ２は、
【化９】
2016511316.tif 000009
、Ｏ、Ｓ、ＮＲｘ及び結合からなる群から独立に選ばれ；ここで、Ｒｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ４は、
【化１０】
2016511316.tif 000010
からなる群から選ばれ；
Ｌ５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｒ１及びＲ２は、オリゴペプチド及びＲｙから独立に選ばれ；
ここで、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはオリゴペプチドであり；
一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の負電荷を有し；
そして、Ｒｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ；
各Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；そして
ｎは５〜１０，０００の整数である］のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩；とを含む、
ナノ粒子。
【請求項１５】
活性薬剤をさらに含む、請求項１４に記載のナノ粒子。
【請求項１６】
活性薬剤と、請求項１〜１３のいずれかに記載のポリマーとを含む組成物、または請求項１５に記載のナノ粒子を含む組成物。
【請求項１７】
活性薬剤がポリヌクレオチドである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
ポリヌクレオチドがＲＮＡ、ＤＮＡ又はｓｉＲＮＡである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
組成物が、ポリヌクレオチドとポリマーを含有するナノ粒子を含む、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
薬剤を、請求項１〜１３のいずれかに記載のポリマーのマトリックス中にカプセル化してナノ粒子を形成させる方法であって、該方法は、薬剤を準備し；ポリマーを準備し；そして薬剤とポリマーを適切な条件下で接触させてナノ粒子を形成させる工程を含む方法。
【請求項２１】
薬剤が、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びｓｉＲＮＡから選ばれるポリヌクレオチド、小分子又はタンパク質である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
接触工程が、（ａ）薬剤とポリマーの混合物のスプレー乾燥、（ｂ）二重エマルション溶媒蒸発技術(double emulsion solvent evaporation techniques)又は（ｃ）転相技術を含む、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
医薬に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のポリマー、請求項１４または１５に記載のナノ粒子、又は請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９５】
実施例１３：グルタミン酸及びリシン末端修飾ＰＢＡＥｓを用いるウシインスリンのカプセル化
本発明のポリマーのカプセル化効率をウシインスリン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いて評価した。簡潔に述べると、グルタミン酸末端修飾ＰＢＡＥｓ  Ｅ３Ｃ−Ｃ３２−ＣＥ３（６０ｍｇ／ｍＬで１６．７μＬ）をウシインスリンの溶液（ＨＥＰＥＳ緩衝液中０．０１ｍｇ／ｍＬで１ｍＬ、１００ｍＭ及びｐＨ７．２）に加え、次いでリシン末端修飾ＰＢＡＥｓ  Ｋ３Ｃ−Ｃ３２−ＣＫ３（１００ｍｇ／ｍＬで１０μＬ）を加え、最終のポリマー：タンパク質比を２００：１とした。混合物を室温で３０分間インキュベートした。得られたナノ粒子をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ装置（１０ＫＤａカットオフ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いて遠心分離し、インスリン含有ナノ粒子を非カプセル化インスリンから分離した。カプセル化の程度は、ビシンコニンアッセイ（ＢＣＡタンパク質アッセイ試薬、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いて非カプセル化インスリンを測定し、インスリンのオリジナル溶液と比較することによって計算した。結果を図８に示す。図中、ＮＰ１及びＮＰ２は独立した複製である。
本発明の態様
態様１  式Ｉ：
【化２３】
2016511316.tif 000011
［式中、各Ｌ１及びＬ２は、
【化２４】
2016511316.tif 000012
、Ｏ、Ｓ、ＮＲｘ及び結合からなる群から独立に選ばれ；ここで、Ｒｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｌ４は、
【化２５】
2016511316.tif 000013
からなる群から選ばれ；
Ｌ５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ；
Ｒ１及びＲ２は、オリゴペプチド及びＲｙから独立に選ばれ；
ここで、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはオリゴペプチドであり；
そして、Ｒｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ；
各Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ；そして
ｎは５〜１０，０００の整数である］のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩。
態様２  一つの又は各オリゴペプチドが、３〜２０個のアミノ酸残基を含む、態様１に記載のポリマー。
態様３  一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有する、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様４  一つの又は各オリゴペプチドが、リシン、アルギニン及びヒスチジンからなる群から選ばれるアミノ酸残基を含む、態様３に記載のポリマー。
態様５  一つの又は各オリゴペプチドが、式VII：
【化２６】
2016511316.tif 000014
［式中、ｐは２〜１９の整数であり、Ｒａは、出現するたびに、Ｈ２ＮＣ（＝ＮＨ）−ＮＨ（ＣＨ２）３−、Ｈ２Ｎ（ＣＨ２）４−又は（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−ＣＨ２−からなる群から選ばれる］の化合物である、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様６  一つの又は各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の負電荷を有する、態様１に記載のポリマー。
態様７  一つの又は各オリゴペプチドが、式VII：
【化２７】
2016511316.tif 000015
［式中、ｐは２〜１９の整数であり、Ｒａは、出現するたびに、ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２）２−又はＨＯ２Ｃ−ＣＨ２−からなる群から選ばれる］の化合物である、態様６に記載のポリマー。
態様８  Ｒ１及びＲ２がともにオリゴペプチドである、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様９  Ｒ１及びＲ２が異なるオリゴペプチドである、態様８に記載のポリマー。
態様１０  Ｒ１及びＲ２の一つがオリゴペプチドで、Ｒ１及びＲ２の一つがＲｙである、態様１〜７のいずれかに記載のポリマー。
態様１１  ｎが１〜２０である、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様１２  Ｒｙが、水素、−（ＣＨ２）ｍＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍＮＨＭｅ、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍＮＨ２、−（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍＯＨ又は−（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍＣＨ３からなる群から選ばれ、ｍが１〜２０の整数である、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様１３  各Ｌ３が、−Ｃ１−１０ アルキレン−（Ｓ−Ｓ）ｑ−Ｃ１−１０アルキレン−からなる群から独立に選ばれ、ｑが０又は１である、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様１４  各Ｒ３が、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルキニル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロゲン、アリール、ヘテロサイクリック、ヘテロアリール、シアノ、−Ｏ２Ｃ−Ｃ１−６アルキル、カルバモイル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルチオエーテル、チオール、又はウレイドから独立に選ばれる、前記態様のいずれかに記載のポリマー。
態様１５  活性薬剤と、態様１〜１４のいずれか１項に記載のポリマーとを含む組成物。
態様１６  活性薬剤がポリヌクレオチドである、態様１５に記載の組成物。
態様１７  ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡ又はｍｉＲＮＡである、態様１６に記載の組成物。
態様１８  ポリヌクレオチドが、２０〜３０ヌクレオチドの長さである、態様１６に記載の組成物。
態様１９  組成物が、ポリヌクレオチドとポリマーを含有するナノ粒子を含む、態様１６〜１８のいずれかに記載の組成物。
態様２０  ポリマーが、態様３に記載のポリマーと態様６に記載のポリマーを含む、態様１５〜１９のいずれかに記載の組成物。
態様２１  薬剤を、態様１〜１４のいずれかに記載のポリマーのマトリックス中にカプセル化してナノ粒子を形成させる方法であって、該方法は、薬剤を準備し；ポリマーを準備し；そして薬剤とポリマーを適切な条件下で接触させてナノ粒子を形成させる工程を含む方法。
態様２２  薬剤が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡから選ばれるポリヌクレオチド、小分子又はタンパク質である、態様２１に記載の方法。
態様２３  接触工程が、（ａ）薬剤とポリマーの混合物のスプレー乾燥、（ｂ）二重エマルション溶媒蒸発技術(double emulsion solvent evaporation techniques)又は（ｃ）転相技術を含む、態様２１又は２２に記載の方法。
態様２４  医薬に使用するための、態様１〜１４のいずれか１項に記載のポリマー又は態様１５〜２０のいずれか１項に記載の組成物。