【手続補正書】
【提出日】平成29年2月6日(2017.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、以下の部位における１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含む、イムノコンジュゲート：
ａ．前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の定常領域上の、１２１、１２４、１５２、１７１、１７４、２５８、２９２、３３３、３３４、３６０、３７５及び３９２位から選択される部位であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位、
ｂ．前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の定常領域上の、１０７、１０８、１４２、１４５、１５９、１６１及び１６５位から選択される部位であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、部位、
ｃ．前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の定常領域上の、１４３、１４７、１５９、１６３及び１６８位から選択される部位であり、前記位置が、Ｋａｂａｔシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、部位、
ｄ．前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の定常領域上の、１１７、１１９、１２１、１２４、１３９、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６９、１７１、１７４、１８９、２０５、２０７、２４６、２５８、２６９、２７４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９３、３２０、３２２、３２６、３３３、３３４、３３５、３３７、３４４、３５５、３６０、３７５、３８２、３９０、３９２、３９８、４００及び４２２位から選択される部位であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位、
ｅ．前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の定常領域上の、１０７、１０８、１０９、１１４、１２９、１４２、１４３、１４５、１５２、１５４、１５６、１５９、１６１、１６５、１６８、１６９、１７０、１８２、１８３、１９７、１９９及び２０３位から選択される部位であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、部位、または
ｆ．前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の定常領域上の、１４３、１４５、１４７、１５６、１５９、１６３、１６８位から選択される部位であり、前記位置が、Ｋａｂａｔシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、部位。
【請求項２】
前記抗体又は抗体フラグメントが、
ａ．配列番号４、５、１０、１７、１８、２９、３５、４２、４３、４８、５０、５４、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４及び２９５からなる群、
ｂ．配列番号６１、６２、６９、７１、７５、７６及び７７からなる群、または
ｃ．配列番号９２、９４、９６、９７及び９８からなる群
から選択される配列を含む、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項３】
前記抗体又は抗体フラグメントが、配列番号１０の配列を含む、請求項１または２に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項４】
前記抗体又は抗体フラグメントが、配列番号５０の配列を含む、請求項１または２に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５】
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、以下の部位における２つ以上のアミノ酸のシステインによる置換の組み合わせを含む、請求項１または２に記載のイムノコンジュゲート：
ａ．重鎖の定常領域上の１５２及び３７５位であり、前記位置がＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位、
ｂ．重鎖の定常領域上の３２７及び３７５位であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位、
ｃ．定常領域上の、軽鎖の１０７位及び重鎖の３６０位であり、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位、
ｄ．定常領域上の、重鎖の３７５位及び軽鎖の１６５位であり、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位、または
ｅ．定常領域上の、重鎖の３３４位、軽鎖の１６５位における置換を含み、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、部位。
【請求項６】
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の３つ以上のアミノ酸のシステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、
ａ．抗体重鎖の３７５及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位、
ｂ．抗体重鎖の３３４及び３７５位並びに抗体軽鎖の１６５位、
ｃ．抗体重鎖の３３４及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位、
ｄ．抗体重鎖の１５２、３７５及び３９２位、
ｅ．抗体重鎖の１５２、３３４及び３７５位、並びに
ｆ．抗体重鎖の１５２、３３４及び３９２位
から選択される置換を含み、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、請求項１から５のいずれか一項のイムノコンジュゲート。
【請求項７】
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の４つ以上のアミノ酸のシステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、
ａ．抗体重鎖の３３４、３７５及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位、
ｂ．抗体重鎖の３３３、３７５及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位、
ｃ．抗体重鎖の１５２、３３４、３７５及び３９２位、又は
ｄ．抗体重鎖の１５２、３３３、３７５及び３９２位
における置換を含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、請求項１から６のいずれか一項のイムノコンジュゲート。
【請求項８】
薬剤抗体比が、約４，約６又は約８である、請求項１から７のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項９】
さらに、薬剤部分を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１０】
薬剤部分が、前記システインの硫黄及び任意のリンカーを介して、前記修飾抗体又は抗体フラグメントに付着している、請求項９に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１１】
前記薬剤部分が、開裂性又は非開裂性のリンカーを介して、前記システインの前記硫黄に結合している、請求項１０に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１２】
前記イムノコンジュゲートが、チオール−マレイミド結合、−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−結合又はジスルフィド結合を含む、請求項１０または１１に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１３】
前記薬剤部分が、細胞傷害剤である、請求項９から１２のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１４】
前記薬剤部分が、タキサン、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、ＣＣ−１０６５類似体）、アントラサイクリン、チューブリシン類似体、デュオカルマイシン類似体、オーリスタチン類及びメイタンシノイドからなる群から選択される、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１５】
前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体又は多重特異性抗体である、請求項１から１４のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１６】
前記抗体又は抗体フラグメントが、腫瘍に特有の細胞表面マーカーに特異的に結合する、請求項１から１５のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１７】
前記細胞表面マーカーがＨｅｒ２である、請求項１から１６のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項１８】
請求項１から１７のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲートを含む医薬組成物。
【請求項１９】
以下より選択される、その定常領域上における１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含む、修飾抗体又はその抗体フラグメント：
ａ．前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の、１１７、１１９、１２１、１２４、１３９、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６９、１７１、１７４、１８９、２０５、２０７、２４６、２５８、２６９、２７４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９３、３２０、３２２、３２６、３３３、３３４、３３５、３３７、３４４、３５５、３６０、３７５、３８２、３９０、３９２、３９８、４００及び４２２位から選択される位置であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、位置、
ｂ．前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１０７、１０８、１０９、１１４、１２９、１４２、１４３、１４５、１５２、１５４、１５６、１５９、１６１、１６５、１６８、１６９、１７０、１８２、１８３、１９７、１９９及び２０３位から選択される位置であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、位置、または
ｃ．前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖のその定常領域上の、１４３、１４５、１４７、１５６、１５９、１６３、１６８位から選択される位置であり、前記位置が、Ｋａｂａｔシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、位置。
【請求項２０】
前記置換が、
ａ．重鎖の１５２位、
ｂ．重鎖の３７５位、
ｃ．重鎖の１５２位および３７５位、
ｄ．重鎖の３２７位および３７５位、
ｅ．軽鎖の１０７位および重鎖の３６０位、
ｆ．重鎖の３７５位および軽鎖の１６５位、
ｇ．重鎖の３３４位および軽鎖の１６５位、
ｈ．重鎖の３７５位および３９２位、並びに軽鎖の１６５位、
ｉ．重鎖の３３４位および３７５位、並びに軽鎖の１６５位、
ｊ．重鎖の３３４位および３９２位、並びに軽鎖の１６５位、
ｋ．重鎖の１５２位、３７５位および３９２位、
ｌ．重鎖の１５２位、３３４位および３７５位、
ｍ．重鎖の１５２位、３３４位および３９２位、
ｎ．重鎖の３３４位、３７５位および３９２位、並びに軽鎖の１６５位、
ｏ．重鎖の３３３位、３７５位および３９２位、並びに軽鎖の１６５位、
ｐ．重鎖の１５２位、３３４位、３７５位および３９２位、または
ｑ．重鎖の１５２位、３３３位、３７５位および３９２位
から選択される位置にあり、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、請求項１９に記載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の修飾抗体又は抗体フラグメントをコードする核酸。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項２３】
修飾抗体又は抗体フラグメントを製造する方法であって、
請求項２２に記載の宿主細胞を、前記抗体又は抗体フラグメントを発現させるのに適した条件下でインキュベートすること、及び、前記抗体又は抗体フラグメントを単離することを含む、方法。 
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４９】
実施例１２．トラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験
ｉｎ  ｖｉｖｏ異種移植片腫瘍モデルは、関連する十分特徴付けられたヒト原発性腫瘍又は腫瘍細胞株を、免疫不全ヌードマウスに移植することにより観察される生物学的活性をシミュレートする。抗ガン剤による腫瘍異種移植マウスの処置試験は、試験した試薬のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性に関する有益な情報を提供している（Sausville and Burger, 2006）。ＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６細胞が抗原依存的な方法でトラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣに感受性であったため（図１５）、前記細胞株をｉｎ  ｖｉｖｏモデルとして選択し、前記トラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣを評価した。全ての動物試験を、実験動物の管理と使用に関する指標（NIH publication；National Academy Press, 8th edition, 2001）に基づいて行った。ＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６細胞を、ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に移植した（Morton and Houghton, 2007）。腫瘍サイズが約２００ｍｍ３に達した後に、トラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣを、３ｍｇ／ｋｇの単回投与でのＩＶ注射により、前記マウスに投与した。前記腫瘍の成長を、ＡＤＣ注射後に毎週測定した。各処置群には、９匹のマウスが含まれていた。３つのトラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣによるｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験の例を、図２２に示す。３ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣによるマウスの処置により、試験した３つのＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣ全てについて、腫瘍退縮が引き起こされた（図２２）。前記ＡＤＣ処置に関連する体重減少は観察されなかった。前記結果から、３ｍｇ／ｋｇでの単回投与処置により、トラスツズマブＣｙｓ−ＭＭＡＦ  ＡＤＣは、ＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６腫瘍の退縮を効果的に引き起こしたことが確認された。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の、１２
１、１２４、１５２、１７１、１７４、２５８、２９２、３３３、３３４、３６０、３７
５及び３９２位から選択される部位において、その定常領域上の１つ以上のアミノ酸のシ
ステインによる置換を含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、
イムノコンジュゲート。
［２］
前記１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換が、１２１、１２４、１５２、２５８
、３３４、３６０及び３９２位から選択される、請求項１に記載のイムノコンジュゲート
。
［３］
前記抗体又は抗体フラグメントが、配列番号４、５、１０、１７、１８、２９、３５、
４２、４３、４８、５０、５４、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４及び２９５か
らなる群から選択される配列を含む、請求項１又は２に記載のイムノコンジュゲート。
［４］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１０
７、１０８、１４２、１４５、１５９、１６１及び１６５位から選択される部位において
、その定常領域上の１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、前記位置が、Ｅ
Ｕシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、イムノ
コンジュゲート。
［５］
前記１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換が、１４５又は１６５位から選択され
る、請求項４に記載のイムノコンジュゲート。
［６］
前記抗体又は抗体フラグメントが、配列番号６１、６２、６９、７１、７５、７６及び
７７からなる群から選択される配列を含む、請求項４に記載のイムノコンジュゲート。
［７］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１４
３、１４７、１５９、１６３及び１６８位から選択される部位において、その定常領域上
の１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、前記位置が、Ｋａｂａｔシステム
に基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、イムノコンジュゲ
ート。
［８］
前記抗体又は抗体フラグメントが、配列番号９２、９４、９６、９７及び９８からなる
群から選択される配列を含む、請求項７に記載のイムノコンジュゲート。
［９］
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１０
７、１０８、１４２、１４５、１５９、１６１及び１６５位から選択される部位において
、その定常領域上の１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換をさらに含み、前記位置
が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、
請求項１、２又は３に記載のイムノコンジュゲート。
［１０］
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１４
３、１４７、１５９、１６３及び１６８位から選択されるその定常領域上の１つ以上のア
ミノ酸のシステインによる置換をさらに含み、前記軽鎖位置が、Ｋａｂａｔシステムに基
づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、請求項１、２又は３に
記載のイムノコンジュゲート。
［１１］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、１５２及び３７５位又は３２７及び３７５位に
おいて、重鎖の定常領域上の２つ以上のアミノ酸のシステインによる置換の組み合わせを
含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、イムノコンジュゲート
。
［１２］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、軽鎖の１０７位及び重鎖の３６０位を含むその
定常領域上の２つ以上のアミノ酸のシステインによる置換の組み合わせを含み、前記軽鎖
が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、イムノ
コンジュゲート。
［１３］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の、１１
７、１１９、１２１、１２４、１３９、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６
９、１７１、１７４、１８９、２０５、２０７、２４６、２５８、２６９、２７４、２８
６、２８８、２９０、２９２、２９３、３２０、３２２、３２６、３３３、３３４、３３
５、３３７、３４４、３５５、３６０、３７５、３８２、３９０、３９２、３９８、４０
０及び４２２位から選択されるその定常領域上の１つ以上のアミノ酸のシステインによる
置換を含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、イムノコンジュ
ゲート。
［１４］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１０
７、１０８、１０９、１１４、１２９、１４２、１４３、１４５、１５２、１５４、１５
６、１５９、１６１、１６５、１６８、１６９、１７０、１８２、１８３、１９７、１９
９及び２０３位から選択されるその定常領域上の１つ以上のアミノ酸のシステインによる
置換を含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒ
トカッパ軽鎖である、イムノコンジュゲート。
［１５］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又は抗体フラグメントが、前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖のその定
常領域上の、１４３、１４５、１４７、１５６、１５９、１６３、１６８位から選択され
る１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、前記位置が、Ｋａｂａｔシステム
に基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、イムノコンジュゲ
ート。
［１６］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の２つ以上のアミノ酸のシ
ステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、抗体重鎖の３７５位及び抗
体軽鎖の１６５位、又は、抗体重鎖の３３４位、抗体軽鎖の１６５位における置換を含み
、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされてい
る、イムノコンジュゲート。
［１７］
薬剤抗体比が、約４である、請求項１１、１２及び１６のいずれか一項に記載のイムノ
コンジュゲート。
［１８］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の３つ以上のアミノ酸のシ
ステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、
ａ．抗体重鎖の３７５及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位、
ｂ．抗体重鎖の３３４及び３７５位並びに抗体軽鎖の１６５位、並びに
ｃ．抗体重鎖の３３４及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位
から選択される置換を含み、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置が、ＥＵシステムに
基づいて番号付けされている、イムノコンジュゲート。
［１９］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の３つ以上のアミノ酸のシ
ステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、
ａ．抗体重鎖の１５２、３７５及び３９２位、
ｂ．抗体重鎖の１５２、３３４及び３７５位、並びに
ｃ．抗体重鎖の１５２、３３４及び３９２位
から選択される置換を含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、
イムノコンジュゲート。
［２０］
薬剤抗体比が、約６である、請求項１８又は１９に記載のイムノコンジュゲート。
［２１］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の４つ以上のアミノ酸のシ
ステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、抗体重鎖の３３４、３７５
及び３９２位並びに抗体軽鎖の１６５位、又は、抗体重鎖の３３３、３７５及び３９２位
並びに抗体軽鎖の１６５位における置換を含み、前記軽鎖が、カッパ鎖であり、前記位置
が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、イムノコンジュゲート。
［２２］
修飾抗体又はその抗体フラグメントを含むイムノコンジュゲートであって、
前記修飾抗体又はその抗体フラグメントが、その定常領域上の４つ以上のアミノ酸のシ
ステインによる置換の組み合わせを含み、前記組み合わせが、抗体重鎖の１５２、３３４
、３７５及び３９２位、又は、抗体重鎖の１５２、３３３、３７５及び３９２位における
置換を含み、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、イムノコンジュ
ゲート。
［２３］
薬剤抗体比が、約８である、請求項２１又は２２に記載のイムノコンジュゲート。
［２４］
さらに、薬剤部分を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲ
ート。
［２５］
薬剤部分が、前記システインの硫黄及び任意のリンカーを介して、前記修飾抗体又は抗
体フラグメントに付着している、請求項２４に記載のイムノコンジュゲート。
［２６］
前記薬剤部分が、開裂性又は非開裂性のリンカーを介して、前記システインの前記硫黄
に結合している、請求項２５に記載のイムノコンジュゲート。
［２７］
前記薬剤部分が、非開裂性のリンカーを介して、前記システインの前記硫黄に結合して
いる、請求項２５に記載のイムノコンジュゲート。
［２８］
前記イムノコンジュゲートが、チオール−マレイミド結合を含む、請求項２５に記載の
イムノコンジュゲート。
［２９］
前記イムノコンジュゲートが、−Ｓ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−結合又はジスルフィド結合
を含む、請求項２５に記載のイムノコンジュゲート。
［３０］
前記薬剤部分が、細胞傷害剤である、請求項２５から２９のいずれか一項に記載のイム
ノコンジュゲート。
［３１］
前記薬剤部分が、タキサン、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、ＣＣ−１０６５類似体）、
アントラサイクリン、チューブリシン類似体、デュオカルマイシン類似体、オーリスタチ
ンＥ、オーリスタチンＦ及びメイタンシノイドからなる群から選択される、請求項３０に
記載のイムノコンジュゲート。
［３２］
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から３１のいずれか一項に記載のイ
ムノコンジュゲート。
［３３］
前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１から３１のいずれか一項に記載のイムノコン
ジュゲート。
［３４］
前記抗体が、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体である、請求項３１に記載のイムノコンジュ
ゲート。
［３５］
前記抗体が、二重特異性抗体又は多重特異性抗体である、請求項３１に記載のイムノコ
ンジュゲート。
［３６］
前記抗体又は抗体フラグメントが、腫瘍に特有の細胞表面マーカーに特異的に結合する
、請求項１から３２のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
［３７］
請求項１から３６のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲートを含む医薬組成物。
［３８］
修飾抗体又はその抗体フラグメントであって、
前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の、１１７、１１９、１２１、１２４、１３９、
１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６９、１７１、１７４、１８９、２０５、
２０７、２４６、２５８、２６９、２７４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９３、
３２０、３２２、３２６、３３３、３３４、３３５、３３７、３４４、３５５、３６０、
３７５、３８２、３９０、３９２、３９８、４００及び４２２位から選択されるその定常
領域上の１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、前記位置が、ＥＵシステム
に基づいて番号付けされている、修飾抗体又はその抗体フラグメント。
［３９］
修飾抗体又はその抗体フラグメントであって、
前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖の、１０７、１０８、１０９、１１４、１２９、
１４２、１４３、１４５、１５２、１５４、１５６、１５９、１６１、１６５、１６８、
１６９、１７０、１８２、１８３、１９７、１９９及び２０３位から選択されるその定常
領域上の１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、前記位置が、ＥＵシステム
に基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、修飾抗体又はその
抗体フラグメント。
［４０］
修飾抗体又はその抗体フラグメントであって、
前記抗体又は抗体フラグメントの軽鎖のその定常領域上の、１４３、１４５、１４７、
１５６、１５９、１６３、１６８位から選択されるその定常領域上の１つ以上のアミノ酸
のシステインによる置換を含み、前記位置が、Ｋａｂａｔシステムに基づいて番号付けさ
れており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、修飾抗体又はその抗体フラグメント。
［４１］
前記置換が、前記重鎖の１２１、１２４、１５２、１７１、１７４、２５８、２９２、
３３３、３６０及び３７５位から選択される少なくとも１つのシステインであり、前記位
置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、請求項３８に記載の修飾抗体又は抗
体フラグメント。
［４２］
前記置換が、２〜６個のシステインであり、前記システインが、重鎖の１２１、１２４
、１５２、１７１、１７４、２５８、２９２、３３３、３６０及び３７５から選択される
位置にあり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付けされている、請求項３８に記
載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
［４３］
前記置換が、軽鎖の１０７、１０８、１４２、１４５、１５９、１６１及び１６５位か
ら選択される少なくとも１つのシステインであり、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて
番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、請求項３９に記載の修飾抗体
又は抗体フラグメント。
［４４］
前記置換が、２〜６個のシステインであり、前記システインが、軽鎖の１０７、１０８
、１４２、１４５、１５９、１６１及び１６５位から選択される位置にあり、前記位置が
、ＥＵシステムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖である、請
求項３９に記載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
［４５］
前記置換が、軽鎖の１４３、１４７、１５９、１６３及び１６８位から選択される少な
くとも１つのシステインであり、前記位置が、Ｋａｂａｔシステムに基づいて番号付けさ
れており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、請求項４０に記載の修飾抗体又は抗体フ
ラグメント。
［４６］
前記置換が、２〜６個のシステインであり、前記システインが、軽鎖の１４３、１４７
、１５９、１６３及び１６８位から選択される位置にあり、前記位置が、Ｋａｂａｔシス
テムに基づいて番号付けされており、前記軽鎖が、ヒトラムダ軽鎖である、請求項３８に
記載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
［４７］
さらに、薬剤部分に付着し、前記薬剤部分が、前記システインの硫黄及び任意のリンカ
ーを介して、前記修飾抗体又は抗体フラグメントに付着している、請求項１１、１２、１
４から２２、３８から４７のいずれか一項に記載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
［４８］
前記薬剤部分が、リンカーユニットを介して、前記システインの硫黄に付着している、
請求項４７に記載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
［４９］
少なくとも１つのＰｃｌ若しくは非天然アミノ酸置換若しくは酵素媒介性コンジュゲー
ト化用のペプチドタグ及び／又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項３８から４８
のいずれか一項に記載の修飾抗体又は抗体フラグメント。
［５０］
請求項３８から４９のいずれか一項に記載の修飾抗体又は抗体フラグメントをコードす
る核酸。
［５１］
請求項５０に記載の核酸を含む宿主細胞。
［５２］
修飾抗体又は抗体フラグメントを製造する方法であって、
請求項４９に記載の宿主細胞を、前記抗体又は抗体フラグメントを発現させるのに適し
た条件下でインキュベートすること、及び、前記抗体又は抗体フラグメントを単離するこ
とを含む、方法。
［５３］
システインによる置換に適した抗体のアミノ酸を選択して、コンジュゲート化に適した
部位を提供する方法であって、
（１）適切な表面露出を有する前記抗体の定常領域中のアミノ酸を特定して、初期候補
部位のセットを提供することと、
（２）各初期候補部位について、その部位における天然アミノ酸がシステインにより置
換されている抗体を発現させることと、
（３）発現した各抗体について、発現したタンパク質が、還元及び再酸化後に実質的に
均一であるかどうかを決定して、前記初期候補部位に遊離システインを有する機能的な抗
体を提供することと、
（４）実質的に均一で、機能的な発現した各タンパク質について、前記初期候補部位に
おけるシステインをマレイミド部分とコンジュゲートさせて、チオール−マレイミド結合
がその部位において不安定化されているかどうかを決定することと、
（５）前記発現した抗体が実質的に均一でなく、機能的でない初期候補部位、及び、前
記チオール−マレイミド結合が不安定化されている初期候補部位を、前記初期候補部位の
セットから除去して、システイン置換に有益な部位のセットを提供することと、
を含む、方法。
［５４］
各有益なシステイン置換部位のコンジュゲートについての融解温度を測定し、システイ
ン置換及びコンジュゲート化によって前記融解温度が親抗体の融解温度と５℃以上異なっ
ている部位を前記セットから除去する工程をさらに含む、請求項５３に記載の方法。
［５５］
特定された置換部位の１つ以上にシステインを含む抗体又は抗体フラグメントを製造す
ることをさらに含む、請求項５３又は５４に記載の方法。
［５６］
イムノコンジュゲートを製造するための方法であって、
リンカーユニット（ＬＵ）又はリンカーユニット−ペイロードの組み合わせ（−ＬＵ−
Ｘ）を、抗体又は抗体フラグメント中のシステイン残基に付着させることを含み、前記シ
ステインが、前記抗体又は抗体フラグメントの重鎖の、１２１、１２４、１５２、１７１
、１７４、２５８、２９２、３３３、３６０及び３７５位、並びに、前記抗体又は抗体フ
ラグメントの軽鎖の、１０７、１０８、１４２、１４５、１５９、１６１及び１６５位か
ら選択されるシステイン置換部位に位置し、前記位置が、ＥＵシステムに基づいて番号付
けされている、方法。
［５７］
前記イムノコンジュゲートが、式（Ｉ）：
【化５３】
2016511637.tif 000001
で表されるものであり、
式中、Ａｂは、本願明細書に記載された好ましいシステイン置換部位の１つに、少なく
とも１つのシステイン残基を含む抗体又は抗体フラグメントを表し、
ＬＵは、本願明細書に記載されたリンカーユニットであり、
Ｘは、ペイロード又は薬剤部分であり、
ｎは、１〜１６の整数である、請求項５６に記載の方法。