【手続補正書】
【提出日】平成29年7月28日(2017.7.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体可変重鎖ドメイン及び抗体可変軽鎖ドメインを含む、少なくとも1つのEGFRvIII結合部位を備えるEGFRvIII結合タンパク質であって、
ここで、
（ａ）
（ａ１）配列認識番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ２）配列認識番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ３）配列認識番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ４）配列認識番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ５）配列認識番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ６）配列認識番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ７）配列認識番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ８）配列認識番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ９）配列認識番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ１０）配列認識番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ１１）配列認識番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
（ａ１２）アミノ酸配列ＹＤＦＳＳＹＷＩＧを有するＣＤＲ１、配列認識番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変重鎖ドメイン、並びに、配列認識番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列認識番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び、配列認識番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗体可変軽鎖ドメイン、
又は、
（ｂ）抗体可変重鎖領域が、配列認識番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、及び、２５からなるグループから選択される、
又は、
（ｃ）抗体可変軽鎖領域が、配列認識番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び、２６からなるグループから選択される、EGFRvIII結合タンパク質。
【請求項２】
配列識別番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、及び、２５から成るグループから選択される抗体可変重鎖ドメイン、及び、配列識別番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び、２６から成るグループから選択される抗体可変軽鎖ドメインとを含む請求項１に記載のEGFRvIII結合タンパク質。    
【請求項３】
配列認識番号５、７、及び２５からなるグループから選択される抗体可変重鎖ドメイン、又は、配列認識番号６、８、及び、２６からなるグループから選択される抗体可変軽鎖ドメインを含む請求項１又は２に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項４】
37℃で24時間の、結合タンパク質の飽和条件における前記EGFRvIII結合タンパク質に対する細胞の露出後、未処理細胞上のEGFRvIIIレセプタ分子の少なくとも80%がまだ使用可能である請求項１〜３のいずれか一項に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項５】
少なくとも１つの別の機能的ドメインを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項６】
前記少なくとも１つの別の機能的ドメインは、エフェクタドメインである請求項５に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項７】
前記エフェクタドメインは、Ｔ細胞、又は、ＮＫ細胞に対して特異的である請求項６に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項８】
前記エフェクタドメインは、CD3に対する抗原結合部位を形成する、少なくとも1つの抗体可変重鎖ドメインと少なくとも1つの軽鎖可変ドメインとを含むCD3結合部位である請求項６又は７に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項９】
前記CD3結合部位は、配列識別番号２３のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと配列識別番号２４のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む請求項８に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項１０】
多重特異性である請求項１〜９のいずれか一項に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項１１】
三重特異性である請求項１０に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項１２】
二量体タンパク質である請求項１〜１１のいずれか一項に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項１３】
EGFRvIII及びCD3（EGFRvIII/CD3）に対して特異的であるタンデムダイアボディ（tandem diabody）、又は、EGFRvIII及びCD16A（EGFRvIII/ CD16A）に対して特異的であるタンデムダイアボディ（tandem diabody）である請求項１２に記載のEGFRvIII結合タンパク質。
【請求項１４】
タンデムダイアボディ（tandem diabody）であって、各ポリペプチドにおいて、４つの可変鎖ドメインは、ペプチドリンカーL1、L2、及び L3によって以下の順序で互いに融合されている請求項１３に記載の二量体EGFRvIII結合タンパク質。
（i）VL(CD3)-L1-VH(EGFRvIII)-L2-VL(EGFRvIII)-L3-VH(CD3)、又は、
（ii）VH(CD3)-L1-VL(EGFRvIII)-L2-VH(EGFRvIII)-L3-VL(CD3)、又は、
（iii）VL(EGFRvIII)-L1-VH(CD3)-L2-VL(CD3)-L3-VH(EGFRvIII)、又は、
（iv）VH(EGFRvIII)-L1-VL(CD3)-L2-VH(CD3)-L3-VL(EGFRvIII)
【請求項１５】
前記ペプチドリンカーL1、L2及びL3は、約12以下のアミノ酸残基からなる請求項１４に記載のタンデムダイアボディ。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のEGFRvIII結合タンパク質、又は、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載のタンデムダイアボディをコードするポリヌクレオチド。
【請求項１７】
請求項１６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１８】
請求項１７に記載のベクターでトランスフォーム、又はトランスフェクションされた宿主細胞。
【請求項１９】
（i）請求項１〜１２のいずれか一項に記載のEGFRvIII結合タンパク質、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の二重特異性タンデムダイアボディ、請求項１７に記載のベクター、又は、請求項１８に記載の宿主細胞、及び、
（ii） 少なくとも1つの薬用的許容可能キャリア、を含む薬用組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
【表１Ａ】
2016536322.tif 000001
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明の１の態様に依れば、前記結合タンパク質は、表１Ｂに示めされている配列識別番号１、３、５、７、 ９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、及び２５から成るグループから選択される抗体可変重鎖ドメイン、及び／又は、図１Ｂに示めされている配列識別番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２６から成るグループから選択される抗体可変軽鎖ドメインとを有する少なくとも1つのEGFRvIII結合部位を含む。前記三つの可変軽鎖CDRと前記可変重鎖CDRのアミノ酸配列は、表１において太字で下線とともに示されている。これらの結合部位は、特異性の損失無く改善された親和性を示す。これらの抗原結合タンパク質は、野生型EGFR抗原と交叉反応性を有さない。
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１Ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１Ｂ】
2016536322.tif 000002