【手続補正書】
【提出日】平成29年9月1日(2017.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチドをコードするキメラポリヌクレオチドであって、式Ｉ、
【化１】
2016530294.tif 000001
（式中：
Ａ及びＢの各々は、独立に、連結ヌクレオシド領域を含み；
Ｃは、任意選択の連結ヌクレオシド領域であり；
領域Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つは位置的に修飾されており、前記位置的に修飾された領域は、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ前記同じタイプのヌクレオシドの前記化学修飾の少なくとも２つは異なる化学修飾であり；
ｎ、ｏ及びｐは、独立に、１５〜１０００の整数であり；
ｘ及びｙは、独立に、１〜２０であり；
ｚは、０〜５であり；
Ｌ１及びＬ２は、独立に、任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかであり；及び
Ｌ３は、任意選択のコンジュゲート又は任意選択のリンカー部分であり、前記リンカー部分は核酸ベースか又は非核酸ベースかのいずれかである）
を含む配列を有するキメラポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記ポリヌクレオチドが２つの領域にわたってコードされている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３】
領域Ｂ又は領域Ｃが位置的に修飾されており、前記ポリペプチドが領域Ａ内で完全にコードされている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４】
領域Ａ又は領域Ｃが位置的に修飾されており、前記ポリペプチドが領域Ｂ内で完全にコ
ードされている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記同じヌクレオチドタイプがウリジンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のウリジン修飾からなる群から選択される、請求項５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記同じヌクレオチドタイプがアデノシンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のアデノシン修飾からなる群から選択される、請求項７に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記同じヌクレオチドタイプがチミジンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のチミジン修飾からなる群から選択される、請求項９に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記同じヌクレオチドタイプがシチジンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のシチジン修飾からなる群から選択される、請求項１１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１３】
前記同じヌクレオチドタイプがグアノシンである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１４】
前記少なくとも２つの異なる化学修飾が、表２のグアノシン修飾からなる群から選択される、請求項１３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１５】
２つ以上の前記同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１６】
２つの前記同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記２つの前記同じヌクレオシドタイプが、ウリジン及びシチジンからなる群から選択される、請求項１６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１８】
３つ以上の前記同じヌクレオシドタイプ少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項１９】
４つの前記同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２０】
領域Ａ、Ｂ、又はＣのうちの少なくとも１つが、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも３つの化学修飾ヌクレオシドを含む、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが、生物学的製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質又はペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、原形質膜タンパク質、細胞質又は細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、標的化部分及びヒトゲノムによってコードされる任意のタンパク質からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２２】
第２のタンパク質をさらにコードする、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２３】
前記第２のタンパク質が抗体である、請求項２２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記異なる化学修飾が全て天然に存在するものである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２５】
前記異なる化学修飾が全て天然に存在しないものである、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記領域Ａ、Ｂ、又はＣの少なくとも１つがヒト細胞での発現にコドン最適化されている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記コドン最適化領域の総Ｇ：Ｃ含量が、コドン最適化前のＧ：Ｃ含量以下である、請求項２６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２８】
環状である、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項２９】
プリン類のみが位置的に修飾されている、請求項１に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３０】
キメラポリヌクレオチドを含む組成物の作製方法であって、
（ａ）２０〜１０００個の連結ヌクレオシドの第１の領域をインビトロ転写によって酵素的に合成するステップと；
（ｂ）最大１３０個の連結ヌクレオシドの第２の領域を化学的に合成するステップであって、前記第２の領域が、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ前記同じタイプのヌクレオシドの前記化学修飾の少なくとも２つが異なる化学修飾である、ステップと；
（ｃ）前記第１の領域と前記第２の領域とをライゲートするステップと
を含む方法。
【請求項３１】
位置的に修飾されたポリヌクレオチドを含む組成物の作製方法であって、
（ａ）第１のポリヌクレオチドを化学的に合成するステップであって、前記ポリヌクレオチドが位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、又はウリジンの１つ以上の同じヌクレオシドタイプの少なくとも２つの化学修飾ヌクレオシドを含み、且つ前記同じタイプのヌクレオシドの前記化学修飾の少なくとも２つが異なる化学修飾である、ステップと；
（ｂ）前記第１のポリヌクレオチドを第２のポリヌクレオチドにライゲートするステップと
を含む方法。
【請求項３２】
位置的に修飾されたポリヌクレオチドの作製方法において、
（ａ）連結ヌクレオシドの複数の領域を化学的に合成するステップであって、各領域が
２〜１００ヌクレオシド長であり、前記複数の領域の少なくとも１つが位置的に修飾されている、ステップと；
（ｂ）前記複数の領域をライゲートして単一のポリヌクレオチドを形成するステップとを含む方法。
【請求項３３】
（ａ）第１の連結ヌクレオシド領域であって、ヌクレオシドタイプの各ヌクレオシドが化学的に修飾され；前記ヌクレオシドタイプが、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、及びウリジンからなる群から選択される、第１の連結ヌクレオシド領域と；
（ｂ）ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第２の領域であって、前記第２の領域が位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、第２の領域と
を含むキメラポリヌクレオチド。
【請求項３４】
５’キャップ部分及びポリＡテイルを含む、請求項３３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３５】
前記第１の連結ヌクレオシド領域が目的ポリペプチドをコードする、請求項３４に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３６】
第３の連結ヌクレオシド領域であって、前記第１の領域の５’末端に位置する第３の領域をさらに含む、請求項３５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３７】
前記第３の領域がｎ個の連結ヌクレオシドを含み、且つ位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、請求項３６に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３８】
ｎ個の連結ヌクレオシドを有する前記第２の領域が目的ポリペプチドをコードする、請求項３４に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項３９】
前記目的ポリペプチドが、生物学的製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質又はペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、原形質膜タンパク質、細胞質又は細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、標的化部分及びヒトゲノムによってコードされる任意のタンパク質からなる群から選択される、請求項３５又は３８に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４０】
第３の連結ヌクレオシド領域であって、前記第２の領域の３’末端に位置する第３の領域をさらに含む、請求項３８に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４１】
前記第３の領域がｎ個の連結ヌクレオシドを含み、且つ位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、請求項４０に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４２】
ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第３の領域をさらに含む、請求項３３に記載のキメラポリヌクレオチドであって、前記第３の領域が位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、キメラポリヌクレオチド。
【請求項４３】
前記第３の領域が前記第１の領域の５’末端又は前記第２の領域の３’末端のいずれかに位置する、請求項４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４４】
ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ｍｉＲＮＡシード、ロング非コードＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｓｎｏＲＮＡの１つ以上からなる群から選択される非コードＲＮＡを含む、請求項４３に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４５】
位置的に修飾されている領域における前記異なる化学修飾が、各々、天然に存在しない修飾である、請求項３３又は４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４６】
位置的に修飾されている領域における前記化学修飾の５パーセント未満が、天然に存在しない修飾である、請求項３３又は４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４７】
位置的に修飾されている領域における前記化学修飾の１０〜２０パーセントが、天然に存在しない修飾である、請求項３３又は４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４８】
位置的に修飾されている領域における前記化学修飾の５０パーセント超が、天然に存在しない修飾である、請求項３３又は４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記天然に存在しない修飾が、表２に掲載されるものからなる群から選択される、請求項４５に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５０】
プリン類（アデニン及びグアニン）のみが化学的に修飾される、請求項４９に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５１】
ピリミジン類（ウラシル、チミジン及びシチジン）のみが化学的に修飾される、請求項４９に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５２】
前記第１、第２又は第３の領域の少なくとも１つがヒト細胞での発現にコドン最適化される、請求項３３又は４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記コドン最適化ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｔｉｄｅ）の総Ｇ：Ｃ含量がコドン最適化前のＧ：Ｃ含量以下である、請求項５２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５４】
環状である、請求項３３又は４２に記載のキメラポリヌクレオチド。
【請求項５５】
（ａ）ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第１の領域と；
（ｂ）ｎ個の連結ヌクレオシドを有する第２の領域であって、前記第１の領域にライゲートされている第２の領域と；
（ｃ）任意選択で、前記第１の領域又は前記第２の領域のいずれかにライゲートされた、且つｎ個の連結ヌクレオシドを有する第３の領域と、を含み、
前記第１及び前記第２の領域、及び存在する場合に前記第３の領域の各々が位置的に修飾されており、前記１つ又は複数の位置修飾が２乃至ｎ−１個の異なる化学修飾（式中、ｎは１０〜１００の整数である）を含む、キメラポリヌクレオチド。