【手続補正書】
【提出日】平成29年9月5日(2017.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃａｓ９蛋白質およびカチオン性脂質を含む組成物であって、Ｃａｓ９蛋白質がガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と結びつき、組成物が細胞にＣａｓ９蛋白質を送達することができる、前記組成物。
【請求項２】
カチオン性脂質が、Lipofectamine（登録商標）2000、Lipofectamine（登録商標）3000、Lipofectamine（登録商標）RNAiMAX、およびLipofectamine（登録商標）LTXからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｃａｓ９蛋白質が、野生型Ｃａｓ９蛋白質もしくはそのバリアント、Ｃａｓ９ニッカーゼ、またはヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）もしくはそのバリアントを含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
Ｃａｓ９蛋白質が、野生型Ｃａｓ９蛋白質を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
Ｃａｓ９蛋白質が、Ｃａｓ９ニッカーゼ、またはヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
ｄＣａｓ９が転写活性化因子または転写抑制因子に融合し、任意で転写活性化因子がＶＰ１６、ＶＰ６４、およびｐ６５からなる群から選択されるか、または転写抑制因子がＫＲＡＢ蛋白質もしくはＳＩＤ蛋白質である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
ｄＣａｓ９がヌクレアーゼドメインに融合し、任意でヌクレアーゼドメインがＦｏｋＩヌクレアーゼドメインを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
ｄＣａｓ９がリコンビナーゼ触媒ドメインに融し、任意でリコンビナーゼ触媒ドメインがＨｉｎリコンビナーゼ触媒ドメイン、Ｇｉｎリコンビナーゼ触媒ドメイン、またはＴｎ３リコンビナーゼ触媒ドメインを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
Ｃａｓ９ニッカーゼまたはｄＣａｓ９がデアミナーゼに融合し、任意でデアミナーゼが、ＡＰＯＢＥＣ１、ＡＩＤ、およびＡＣＦ１／ＡＳＥデアミナーゼからなる群から選択されるシチジンデアミナーゼを含むか、または、デアミナーゼが、ＡＤＡＴファミリーデアミナーゼを任意で含むアデノシンデアミナーゼを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
ｄＣａｓ９がエピジェネティック修飾因子に融合し、任意でエピジェネティック修飾因子が、ヒストン脱メチル化酵素、ヒストンメチルトランスフェラーゼ、ヒドロキシラーゼ、ヒストン脱アセチル化酵素、およびヒストンアセチルトランスフェラーゼからなる群から選択され、任意でエピジェネティック修飾因子が、ＬＳＤ１ヒストン脱メチル化酵素またはＴＥＴ１ヒドロキシラーゼを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｃａｓ９蛋白質が、超負荷電蛋白質と結びつき、結びつけられたＣａｓ９蛋白質および超負荷電蛋白質は負電荷を有し、任意で結びつきは共有結合的な結びつきである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
超負荷電蛋白質が蛍光蛋白質であり、任意で超負荷電蛋白質が超負荷電ＧＦＰである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
細胞にＣａｓ９蛋白質を導入する方法であって、Ｃａｓ９蛋白質が細胞に入るための好適な条件下で請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物と細胞を接触させることを含み、それによって細胞にＣａｓ９蛋白質を導入する、前記方法。
【請求項１４】
エフェクター蛋白質およびカチオン性脂質、カチオン性ポリマー、またはカチオン性脂質およびカチオン性ポリマーの両方を含む組成物であって、エフェクター蛋白質が超負荷電蛋白質と結びつき、結びつけられたエフェクター蛋白質および超負荷電蛋白質が正味の負電荷を有し、組成物が細胞にエフェクター蛋白質を送達することができる、前記組成物。
【請求項１５】
カチオン性脂質が、Lipofectamine（登録商標）2000、Lipofectamine（登録商標）3000、Lipofectamine（登録商標）RNAiMAX、およびLipofectamine（登録商標）LTXからなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
超負荷電蛋白質が蛍光蛋白質であり、任意で蛍光蛋白質が超負荷電ＧＦＰである、請求項１４または１５に記載の組成物。
【請求項１７】
エフェクター蛋白質が、ヌクレアーゼ、リコンビナーゼまたはＴＡＬＥ蛋白質であり、任意でヌクレアーゼが、ＲＮＡによってプログラミング可能なヌクレアーゼであり、リコンビナーゼがＣｒｅリコンビナーゼであり、またはＴＡＬＥ蛋白質がＶＰ６４転写活性化因子を含み、任意でヌクレアーゼが、Ｃａｓ９ヌクレアーゼである、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
組成物が医薬組成物であり、任意で医薬組成物が、薬学的に許容し得る担体をさらに含む、請求項１〜１２および１４〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
組成物が、細胞の集団に投与されたときに低い毒性を示し、任意で細胞の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％が、組成物の投与後に生存可能である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
機能的なエフェクター蛋白質と結びついた超負荷電蛋白質を含む組成物であって、超負荷電蛋白質が、その対応する未改変蛋白質よりも小さくかつ充分量である負の総電荷を有し、細胞への透過のために処方される、前記組成物。
【請求項２１】
機能的なエフェクター蛋白質がヌクレアーゼである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
ヌクレアーゼが、ＲＮＡによってプログラミング可能なヌクレアーゼである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
ヌクレアーゼがＴＡＬＥヌクレアーゼ、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
ヌクレアーゼが核酸配列に特異的に結合して切断し、任意で核酸配列が、疾患または障害と結びついた遺伝子またはアレル内に含まれる、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
組成物が、ヌクレアーゼによって結合および切断される核酸配列と同一のまたは相同な配列を含む核酸分子をさらに含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
核酸配列が、治療ターゲットである遺伝子内に含まれる配列であり、任意で遺伝子が、細胞運命をコントロールする遺伝子であり、任意で遺伝子が、褐色脂肪細胞の細胞運命に向かう細胞プログラミングを誘導または阻害する遺伝子であり、任意で遺伝子がＰＲＤＭ１６またはＰＰＡＲγである、請求項２４または２５に記載の組成物。
【請求項２７】
機能的なエフェクター蛋白質が転写因子であり、任意で機能的なエフェクター蛋白質がＴＡＬＥ転写活性化因子または抑制因子であり、任意で転写因子、転写活性化因子、または転写抑制因子が遺伝子に特異的に結合して活性化または抑制し、任意で遺伝子が治療ターゲットである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
超負荷電蛋白質が共有結合を介して機能的なエフェクター蛋白質と結びつき、それゆえに融合蛋白質を形成し、任意で超負荷電蛋白質がリンカーを介して機能的なエフェクター蛋白質と結びつき、任意でリンカーが、切断可能なリンカーであり、任意でリンカーが、ＵＶによって切断可能なリンカーまたはリソソーム酵素によって切断されるリンカーである、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
超負荷電蛋白質が非共有結合的な相互作用を介して機能的なエフェクター蛋白質と結びつき、それゆえに複合体を形成する、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
超負荷電蛋白質が蛍光蛋白質であり、任意で超負荷電蛋白質が超負荷緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）である、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
組成物が医薬組成物であり、任意で組成物が薬学的に許容し得る賦形剤を含む、請求項２０〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
組成物が対象への投与のために処方され、対象の少なくとも１つの細胞への送達に有効な量で超負荷電蛋白質および機能的なエフェクター蛋白質を含み、任意で組成物が、対象への投与後に測定可能な治療効果を誘導することに有効な量で超負荷電蛋白質および機能的なエフェクター蛋白質を含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
機能的なエフェクター蛋白質が細胞に入るための好適な条件で、請求項２０〜３０のいずれか一項に記載の組成物または請求項３１または３２に記載の医薬組成物と細胞を接触させることを含み、それによって細胞に機能的なエフェクター蛋白質を導入する、細胞に機能的なエフェクター蛋白質を導入するインビトロ方法。
【請求項３４】
細胞が体細胞である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
細胞が、望まれる細胞運命への細胞のプログラミングを誘導するために充分な量、時間、および条件で組成物または医薬組成物と接触させられる、請求項３３または３４に記載の方法。