【手続補正書】
【提出日】平成28年12月27日(2016.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特異的標的細胞抗原に応答するＴ細胞受容体を同定する方法であって、
複数の標的細胞を有する基体を提供すること；
前記基体上の前記標的細胞をＣＤ８＋Ｔ細胞と接触すること；及び、
標識のない光学イメージングを使用してＴ細胞の質量の増大及び／または標的細胞の質量の減少を同定することを含み、
Ｔ細胞の質量の増大及び／または標的細胞の質量の減少は、前記Ｔ細胞が前記標的細胞上に提示された抗原によって活性化されたＴ細胞受容体を有することを示す、前記方法。
【請求項２】
前記Ｔ細胞の質量の増大が検出され、及び前記Ｔ細胞が前記標的細胞上に提示された抗原によって活性化されたＴ細胞受容体を有することを示す、または、前記標的細胞の質量の減少が、接触しているＴ細胞が前記標的細胞上に提示された抗原によって活性化されるＴ細胞受容体を有することを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
標的細胞の死が、光学顕微鏡法を使用して定性的にモニターされる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
活性化されるＴ細胞を選択すること、及び／もしくは単離すること、ならびに／または、
活性化されるＴ細胞を選択すること、培養すること、もしくは、貯蔵すること、ならびに／または、
選択されるＴ細胞からＴ細胞受容体をクローニングすること、
をさらに含む、請求項１−３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記標的細胞が、マイクロチャネルに配置される、または、
前記標的細胞が、基体上のマイクロウェルに配置される、
請求項１−４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記標的細胞が、基体上のマイクロウェルに配置され、及び、
前記基体は、少なくとも１０のマイクロウェル、または、少なくとも１００のマイクロウェル、または、少なくとも１０００のマイクロウェルを含む、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記マイクロウェルは、平均でマイクロウェル当たり約１つのＴ細胞を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記マイクロウェルが、重合体から製造される、または、
前記マイクロウェルが、ケイ素基体にエッチングされる、
請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記基体が、反射性である、請求項１−８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記標識のない光学イメージングを使用することが、Ｔ細胞質量及び／または標的細胞質量における変化によって生じる前記細胞（群）を通過する光の相変化を検出することを含む、請求項１−９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記標識のない光学イメージングが、定量的相イメージング顕微鏡法を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記標識のない光学イメージングが、生細胞干渉法（ＬＣＩ）、デジタルホログラフィー及び側方シアリング干渉からなる群より選択される方法を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記標識のない光学イメージングが：
試験光線と参照光線との間の微小な相シフトを測定するように適応された干渉顕微鏡の観察チャンバに前記基体を提供すること；
照明波長にて試験光線に細胞を曝露すること；
細胞を通って広がる試験光線と参照光線との間の微小な相シフトを測定すること；及び、
Ｔ細胞の質量の増大及び／または標的細胞の質量の減少の計測として、前記微小な相シフトまたはそこから由来したパラメーターを使用すること、
を含む、生細胞干渉法を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記微小な相シフトが、その質量変化が決定される細胞の実質的に全ての投影された領域間で積分される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ｔ細胞の質量の増大及び／または標的細胞の質量の減少の前記計測が、パラメーターｍとして算出される請求項１３に記載の方法：
【数１】
2016519940.tif 000001
式中、φは、測定された微小な相シフトであり、λは、照明波長であり、及び積分は、全ての細胞領域、Ａ全体で行われる。
【請求項１６】
Ｔ細胞の質量の増大及び／または標的細胞の質量の減少の前記計測は、
【数２】
2016519940.tif 000002
として算出され、式中、ｍは、細胞乾燥質量であり、φλは、測定された相シフトであり、ｋは、５．５６ｐｇ／μｍ３として得られる質量変換因子であり、及びＡは、投影された領域である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
顕微鏡に機能的に接続された検出器；
複数のマイクロウェルを含む基体を含む試料チャンバ（灌流イメージングチャンバ）；及び、
ビームスプリッタ、参照ミラー及び、試料チャンバを介して光路長を補償する参照流体チャンバを含む干渉計
を含む生細胞干渉計システムを使用して行われる、請求項１３−１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記試料チャンバが、チャンバ内の細胞培地を循環させるために適応された少なくとも１つの灌流導管を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生細胞干渉計システムが、１つまたは複数の細胞のイメージを処理する、及び格納するように適応されたプロセッサエレメント及びメモリ貯蔵エレメントを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記標識のない光学イメージングが、透過白色光顕微鏡に取り付けられた四波側方シアリング干渉計を使用する側方シアリング干渉を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項２１】
細胞（群）の質量が、どのように細胞（群）の質量が時間にわたって変化するかを観察するために複数回観察される、請求項１−２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
複数の細胞の質量を定量化するために使用される、請求項１−２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記標的細胞が、癌幹細胞、転移性細胞、病原体に感染した細胞、異種のタンパク質またはペプチドを発現する構築物をトランスフェクトした組換え細胞からなる群から選択される細胞を含む、請求項１−２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記標的細胞は、癌の細胞を含む、請求項２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記標的細胞は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌腫、カポジ肉腫、肛門癌、虫垂癌、星細胞腫、非定型奇形様／横紋筋腫瘍、胆管癌、肝臓外癌、膀胱癌、骨癌、脳幹膠腫、星細胞腫、脊髄腫瘍、中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋腫瘍、中枢神経系胚芽腫、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、類癌腫、心臓腫瘍、子宮頸癌、脊索腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性障害、大腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚ｔ−細胞リンパ腫、胆管癌、肝臓外癌、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、胚芽腫、子宮体癌、上衣細胞腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝臓外胆管癌、眼内メラノーマ、網膜芽細胞腫、骨の線維性組織球腫、悪性及び骨肉腫、胆嚢癌、胃の（胃）癌、胃腸管系類癌腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、卵巣癌、精巣癌、頭蓋外癌、性腺外癌、毛様細胞性白血病、頭頚部癌、心臓癌、肝細胞性（肝臓）癌、組織球症、ランゲルハンス細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内メラノーマ、島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、腎臓癌、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、喉頭癌、白血病、急性リンパ芽球性（ＡＬＬ）、急性骨髄様（ＡＭＬ）、慢性リンパ性（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ）、有毛細胞、唇及び経口腔癌、肝癌（原発性）、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、肺癌、リンパ腫、皮膚Ｔ−細胞癌、ホジキン、非ホジキン、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）、マクログロブリン血症、ワルデンストレーム、雄型乳癌、メラノーマ、メルケル細胞癌腫、中皮腫、転移性頚部扁平上皮癌、正中線路癌腫、口癌、多発性内分泌腺腫、多発性骨髄腫／血漿細胞新生物、菌状息肉腫、脊髄形成異常性症候群、骨髄性白血病、慢性病患者（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、経鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、口腔癌、唇、及び口咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔及び経鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、クロム親和性細胞腫、下垂体腫瘍、血漿細胞新生物、胸膜肺芽細胞腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎臓細胞（腎臓）癌、腎臓骨盤及び輸尿管、移行細胞癌、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、小腸癌、扁平上皮癌、隠れた原発性である頚部扁平上皮癌、胃の（胃）癌、精巣癌、喉頭癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、栄養膜腫瘍、輸尿管及び腎盂癌、尿道癌、子宮癌、子宮体癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症及びウィルムス腫瘍からなる群から選択される癌細胞を含む、請求項２４のいずれか１項に記載の方法。