【手続補正書】
【提出日】平成29年3月13日(2017.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の標的が、第２の標的の近位にあるかどうかを決定するためにホルマリン固定パラフィン包埋組織試料を分析する方法であって、
該試料を、ビオチンリガーゼ及び第１の標的と結合するための特異的結合部分を含む第１のコンジュゲートプローブと接触させる工程と、
該試料を、ビオチンリガーゼ基質及び第２の標的と結合するための特異的結合部分を含む第２のコンジュゲートプローブと接触させる工程と、
第１の標的が第２の標的の近位にある場合、ビオチンリガーゼがビオチンリガーゼ基質をビオチン化するように、該試料をビオチン及びＡＴＰと接触させる工程と、
第１の標的が第２の標的の近位にある場合、ビオチンを検出する工程と
を含む方法。
【請求項２】
第１の標的と結合するための特異的結合部分が、第１の標的に特異的な第１の一次抗体であり、及び第２の標的と結合するための特異的結合部分が、第２の標的に特異的な第２の一次抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１の一次抗体が第１のハプテンで標識され、且つ試料を第１のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第１のハプテンに特異的な第１の二次抗体と接触させる工程を含み、及び
第２の一次抗体が第２のハプテンで標識され、且つ試料を第２のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第２のハプテンに特異的な第２の二次抗体と接触させる工程を含み、又は
第１の一次抗体が第１の種に由来し、且つ試料を第１のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第１の種に特異的な第１の二次抗種抗体と接触させる工程を含み、及び
第２の一次抗体が第２の種に由来し、且つ試料を第２のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第２の種に特異的な第２の二次抗種抗体と接触させる工程を含む、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
第１の標的及び第２の標的が二量体化タンパク質である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
第１の標的が第１の核酸標的であり、且つ試料を第１のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第１の核酸プローブと接触させる工程を含み、場合によって、
第２の標的が第２の核酸標的であり、且つ試料を第２のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第２の核酸プローブと接触させる工程を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第１の核酸プローブが第３のハプテンで標識され、試料を第１のコンジュゲートプローブと接触させる工程が、試料を第３のハプテンに特異的な第３の二次抗体と接触させる工程を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ビオチンを検出する工程が、試料を、ビオチン結合抗体、アビジン、又は一若しくは複数の酵素にコンジュゲートされたストレプトアビジンを含むコンジュゲートと接触させる工程を含むか、又は
ビオチンを検出する工程が、試料を色素原と接触させる工程を含むか、又は
ビオチンを検出する工程が、試料をチラミドコンジュゲート又はキノンメチド前駆体コンジュゲートから選択される増幅試薬と接触させる工程を含む、
請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
約１００ｎｍ未満、約５０ｎｍ未満、約２０ｎｍ未満離れている、約１０ｎｍ未満、約５ｎｍ未満、又は約２ｎｍ未満離れているならば、第１の標的が第２の標的の近位にある、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
ビオチンリガーゼが、リンカーを介して第１の標的と結合するための特異的結合部分とコンジュゲートされ、及び／又はビオチンリガーゼ基質が、リンカーを介して第２の標的と結合するための特異的結合部分とコンジュゲートされる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
リンカーが約２から約２０ＰＥＧ単位を有し、場合によって、
リンカーが、ＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥＧ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ１４、ＰＥＧ１５、ＰＥＧ１６、ＰＥＧ１７、ＰＥＧ１８、ＰＥＧ１９、ＰＥＧ２０、１，４−ジアミノヘキサン、キシレンジアミン、テレフタル酸、３，６−ジオキサオクタン二酸、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸、１，１’−エチレンビス（５−オキソ−３−ピロリジンカルボン酸）、４，４’−エチレンジピペリジン、スクシンイミジル−６−ヒドラジノ−ニコチンアミド（Ｓ−ＨｙＮｉｃ，ＨｙＮｉｃ−ＮＨＳ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−ホルミルベンゾエート（Ｓ−４ＦＢ，４−ＦＢ−ＮＨＳ）、マレイミドＨｙＮｉｃ（ＭＨＰＨ）、マレイミド４ＦＢ（ＭＴＦＢ）、スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−オクタエチレングリコール］エステル（Ｍａｌ−ＰＥＧ８−ＮＨＳ）、スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（Ｍａｌ−ＰＥＧ４−ＮＨＳ）、４−ＦＢ−ＰＥＧ４−ＰＦＰ、アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリシルアミノ）ブチル］−３’−［２’−ピリジルジチオ］プロピオンアミド）、ビス−スルホスクシンイミジルスべレート、ジメチルアジピミデート、ジスクシンイミジル酒石酸塩、Ｎ−マレイミドブチリルオキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート、Ｎ−スクシンイミジル［４−アジドフェニル］−１，３’−ジチオプロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、グルタルアルデヒド、及びスクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＰＤＰ）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＭＣＣ）から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
極近接にある第１の標的及び第２の標的の存在について、ホルマリン固定パラフィン包埋組織試料を検査する方法に関連した一又は複数工程を行うために、自動染色装置を使用する工程を含む自動方法であって、
第１の標的が第１の特異的結合部分により認識され、第１の標的の近位にビオチンリガーゼのコンジュゲ−ション又は沈殿をもたらすように、試料を試薬の第１セットと接触させる工程と、
第２の標的が第２の特異的結合部分により認識され、第２の標的の近位にビオチンリガーゼ基質のコンジュゲ−ション又は沈殿をもたらすように、試料を試薬の第２セットと接触させる工程と、
第１の標的及び第２の標的が極近接にある場合、ビオチンリガーゼがビオチンリガーゼ基質をビオチン化するように、試料をビオチン及びビオチン化試薬と接触させる工程と、
ビオチンを検出する工程と
を含む方法。
【請求項１２】
以下の構造：
（ＳＢＭ）−（リンカー）ｍ−（ＢＬ／ＢＬＳ）ｎ
（式中、ＳＢＭは特異的結合部分であり、
ＢＬ／ＢＬＳはＢＬ又はＢＬＳのどちらかであり、
ＢＬはビオチンリガーゼであり、
ＢＬＳはビオチンリガーゼ基質であり、
ｍは０、１、２、３、４、又は５であり、ｎは１から１０の整数である）
を有する、少なくとも１つのコンジュゲートを含む、キット。
【請求項１３】
少なくとも１つの特異的結合部分が抗体である、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
ビオチンリガーゼがＢｉｒＡ由来である、請求項１２又は１３に記載のキット。
【請求項１５】
ビオチン及びＡＴＰをさらに含む、請求項１２から１４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１６】
ストレプトアビジン又はストレプトアビジンコンジュゲートをさらに含む、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
以下の第２の構造：
（ＳＢＭ２）−（リンカー２）ｍ２−（ＢＬ／ＢＬＳ２）ｎ２
（式中、ＳＢＭ２は第２の特異的結合部分であり、
ＢＬ／ＢＬＳがＢＬＳである場合、ＢＬ／ＢＬＳ２はＢＬであり、ＢＬ／ＢＬＳがＢＬである場合、ＢＬ／ＢＬＳ２はＢＬＳであり、
ｍ２は０、１、２、３、４、又は５であり、ｎ２は１から１０の整数である）
を有する第２のコンジュゲートをさらに含む、請求項１２から１６のいずれかに記載のキット。