【手続補正書】
【提出日】平成29年5月19日(2017.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞におけるSerpina1の発現を阻害する2本鎖RNAi物質であって、
該2本鎖RNAi物質が2本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
該センス鎖が、配列番号1、配列番号2、または配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、または配列番号11のヌクレオチド配列のいずれかと3ヌクレオチド以下が異なる少なくとも15連続ヌクレオチドを含み、該アンチセンス鎖が配列番号15、配列番号16、または配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、または配列番号25のヌクレオチド配列のいずれかと3ヌクレオチド以下が異なる少なくとも15連続ヌクレオチドを含み、
該センス鎖の本質的にすべてのヌクレオチドおよび該アンチセンス鎖の本質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、
該センス鎖が3’末端に結合したリガンドと結合している2本鎖RNAi物質。
【請求項２】
アンチセンス鎖のヌクレオチド配列の3ヌクレオチドの違いの1つがアンチセンス鎖のシード領域のヌクレオチドミスマッチである請求項1記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項３】
アンチセンス鎖がミスマッチヌクレオチドにユニバーサル塩基を含む請求項2記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項４】
該センス鎖のすべてのヌクレオチドおよび該アンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである請求項1記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項５】
該センス鎖および該アンチセンス鎖が、表1、2、5、7、8、および9のいずれかに記載の配列のいずれかと3ヌクレオチド以下が異なる少なくとも15連続ヌクレオチドを含む相補的な領域を含む請求項1記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項６】
該修飾ヌクレオチドの少なくとも1が、3’末端デオキシチミン(dT)ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2’-アミノ-修飾ヌクレオチド、2’-アルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、5’-ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基と結合した末端ヌクレオチドからなる群から選ばれる、請求項1〜5のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項７】
少なくとも1本鎖が少なくとも1のヌクレオチドの3’オーバーハングを含む請求項1記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項８】
細胞におけるSerpina1の発現を阻害することができる2本鎖RNAi物質であって、該2本鎖RNAi物質がアンチセンス鎖と実質的に相補的なセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖がSerpina1をコードするmRNAの部分と実質的に相補的な領域を含み、各鎖が長さ約14〜約30ヌクレオチドであり、式（III)：
センス：5’np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq 3’
アンチセンス：3’np’-Na’-(X’X’X’)k-Nb’-Y’Y’Y’-Nb’-(Z’Z’Z’)l-Na’-nq’5’
(III)
［式中、
i、j、k、およびlはそれぞれ独立して0または1である；
p、p’、q、およびq’がそれぞれ独立して0〜6である；
NaおよびNa’はそれぞれ独立して修飾または非修飾またはそれらの組み合わせである0〜25ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は少なくとも2の異なる修飾ヌクレオチドを含む；
NbおよびNb’はそれぞれ独立して修飾または非修飾またはそれらの組み合わせである0〜10ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す；
それぞれ存在していてもいなくてもよいnp、np’、nq、およびnq’はそれぞれ独立してオーバーハングヌクレオチドを表す；
XXX、YYY、ZZZ、X’X’X’、Y’Y’Y’、およびZ’Z’Z’はそれぞれ独立して3連続ヌクレオチド上の3つの同じ修飾の1モチーフを表す；
Nbの修飾はYの修飾と異なり、Nb’の修飾はY’の修飾と異なる；および
該センス鎖は少なくとも1のリガンドと結合している。］
で示される2本鎖RNAi物質。
【請求項９】
各鎖が15〜30ヌクレオチドを有する請求項1または8記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１０】
該ヌクレオチドの修飾が、LNA、HNA、CeNA、2’-メトキシエチル、2’-O-アルキル、2’-O-アリル、2’-C-アリル、2’-フルオロ、2’-デオキシ、2’-ヒドロキシル、およびそれらの組み合わせからなる群から選ばれる請求項8記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１１】
該ヌクレオチドの修飾が2’-O-メチルまたは2’-フルオロ修飾である請求項10記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１２】
該リガンドが二価または三価の分岐鎖リンカーを介して結合した1またはそれ以上のGalNAc誘導体である請求項1または8記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１３】
該リガンドが、
【化１】
2016520312.tif 000001
である請求項1または8記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１４】
該リガンドが該センス鎖の3’末端に結合している請求項1または8記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１５】
下記式：
【化２】
2016520312.tif 000002
［式中、XはOまたはSである。］
に示すようにリガンドに結合している請求項14記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１６】
さらに少なくとも1のホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間結合を含む請求項1または8記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１７】
該RNAi物質が6〜8ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む請求項16記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１８】
アンチセンス鎖が5’末端に2ホスホロチオエートヌクレオチド間結合、3’末端に2ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、センス鎖が5’末端または3’末端に少なくとも2のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む請求項17記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項１９】
AD-58681、AD-59054、AD-61719、およびAD-61444からなる群から選ばれる請求項1または7記載の2本鎖RNAi物質。
【請求項２０】
細胞におけるSerpina1の発現を阻害する2本鎖RNAi物質であって、該2本鎖RNAi物質が2本鎖領域を形成するセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、
該センス鎖が、配列番号1、配列番号2、または配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、または配列番号11のヌクレオチド配列のいずれかと3ヌクレオチド以下が異なる少なくとも15連続ヌクレオチドを含み、
該アンチセンス鎖が、配列番号15、配列番号16、または配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、または配列番号25のヌクレオチド配列のいずれかと3ヌクレオチド以下が異なる少なくとも15連続ヌクレオチドを含み、
該センス鎖の本質的にすべてのヌクレオチドが2’-O-メチル修飾および2’-フルオロ修飾からなる群から選ばれる修飾を含み、
該センス鎖が5’末端に2つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、
該アンチセンス鎖の本質的にすべてのヌクレオチドが2’-O-メチル修飾および2’-フルオロ修飾からなる群から選ばれる修飾を含み、
該アンチセンス鎖が5’末端に2ホスホロチオエートヌクレオチド間結合、3’末端に2ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、
該センス鎖が3’末端で分岐鎖二価または三価リンカーを介して結合した1またはそれ以上のGalNAc誘導体と結合している2本鎖RNAi物質。
【請求項２１】
請求項1および8のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質を含むベクター。
【請求項２２】
請求項1および8のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質を含む細胞。
【請求項２３】
請求項1および8のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質を含む医薬組成物。
【請求項２４】
該RNAi物質が非緩衝溶液で投与される請求項23記載の医薬組成物。
【請求項２５】
該非緩衝溶液が生理食塩水または水である請求項24記載の医薬組成物。
【請求項２６】
該siRNAが緩衝溶液と共に投与される請求項23記載の医薬組成物。
【請求項２７】
該緩衝溶液が、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、またはリン酸塩、またはそれらのあらゆる組み合わせを含む請求項26記載の医薬組成物。
【請求項２８】
該緩衝溶液がリン酸緩衝生理食塩水(PBS)である請求項27記載の医薬組成物。
【請求項２９】
細胞におけるSerpina1の発現を阻害する方法であって、
(a)細胞を、請求項1および8のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質、請求項21記載のベクター、または請求項23〜28のいずれかに記載の医薬組成物と接触させ；
(b)工程(a)で作製した細胞をSerpina1遺伝子のmRNA転写産物を分解するのに充分な時間維持することにより、細胞におけるSerpina1遺伝子の発現を阻害することを含む方法。
【請求項３０】
Serpina1関連疾患を有する対象を治療するための組成物であって、治療的有効量の請求項1および8のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質、請求項21記載のベクター、または請求項23〜28のいずれかに記載の医薬組成物を含む組成物。
【請求項３１】
該Serpina1関連疾患が肝疾患である請求項30記載の組成物。
【請求項３２】
肝疾患が慢性肝疾患、肝炎、肝硬変、肝線維症、および/または肝細胞癌からなる群から選ばれる請求項31記載の組成物。
【請求項３３】
2本鎖RNAi物質が約0.01mg/kg〜約10mg/kgまたは約0.5mg/kg〜約50mg/kgの用量である請求項30記載の組成物。
【請求項３４】
2本鎖RNAi物質を皮下投与する請求項33記載の組成物。
【請求項３５】
2本鎖RNAi物質を静脈内投与する請求項33記載の組成物。
【請求項３６】
Serpina1欠損変異体を有する対象の肝細胞癌の発生を阻害するための組成物であって、治療的有効量の請求項1および8のいずれかに記載の2本鎖RNAi物質、請求項21記載のベクター、または請求項23〜28のいずれかに記載の医薬組成物を含む組成物。