【手続補正書】
【提出日】平成29年9月8日(2017.9.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対しアミノ酸の変更を含む、ＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片であって、前記変更は生産的位置１６６におけるものであり、前記変異体は、配列番号３のＢａｃｉｌｌｕｓ＿ｓｐ＿ＬＧ１２ｓｐｒＣ＿ＡＡＣ４３５００；配列番号７のバチルス種（Bacillus sp.）ＷＰ０１０１９２４０３ Ｍ３−１３スブチリシン酵素Ｅ（１）；配列番号１０のバチルス種（Bacillus sp.）ＤＳＭ  ８７１９スブチリシン酵素Ｂｈｏｎ０３３２１；配列番号１３のバチルス・ホリコシィ（Bacillus horikoshii）株ＤＳＭ＿９７１１；配列番号１６のバチルス・ホリコシィ（Bacillus horikoshii）株ＤＳＭ＿９７１２；配列番号１９のバチルス・ホリコシィ（Bacillus horikoshii）株ＤＳＭ＿６９５１；配列番号２４のバチルス種（Bacillus sp.）ＬＧ１２＿ＳｐｒＤ  ＡＡＣ４３５８１．１；配列番号２５のバチルス種（Bacillus sp.）ＷＰ０１０１９２４０５  Ｍ３−１３；配列番号２３のバチルス種（Bacillus sp.）ＫＳＭ−ＬＤ１，ＳＢ  ＢＡＤ１１９８８；および／または配列番号２０のバチルス種（Bacillus sp.）ＫＳＭ−ＬＤ１，ＳＢ（ＢＡＤ２１１２８．１）から選択されたＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素のアミノ酸配列に少なくとも７５％の同一性を有し、前記ＬＧ１２−系統群のスブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号３に示すバチルス種（Bacillus sp.）ＬＧ１２ｓｐｒＣスブチリシンのアミノ酸配列に対応させて付番される、ＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項２】
前記変更が、前記ＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体の生産的位置におけるものであり、前記生産的位置において試験した前記変更のうち少なくとも５０％が次の基準ａ）〜ｃ）のうち少なくとも１つを満たし：
ａ）次の１）〜４）の試験に関し、最小性能指数（ＰＩ）がＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対し０．９以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもＰＩが１．０以上である生産的位置：１）ｐＨ９又はｐＨ１０下でのＰＡＳ−３８布見本小片のクリーニング；及びｐＨ６、ｐＨ８、又はｐＨ１０下でのＥＭＰＡ−１１６布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも１つのクリーニングアッセイ；２）ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡに対する活性；３）タンパク質発現；並びに４）洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも１つの安定性アッセイ；
ｂ）次の１）〜４）の試験に関し、最小性能指数（ＰＩ）がＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対し０．８以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもＰＩが１．２以上である生産的位置：１）ｐＨ９又はｐＨ１０下でのＰＡＳ−３８布見本小片のクリーニング；及びｐＨ６、ｐＨ８、又はｐＨ１０下でのＥＭＰＡ−１１６布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも１つのクリーニングアッセイ；２）ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡに対する活性；３）タンパク質発現；並びに４）洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも１つの安定性アッセイ；
ｃ）次の１）〜４）の試験に関し、最小性能指数（ＰＩ）がＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対し０．５以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもＰＩが１．５以上である生産的位置：１）ｐＨ９又はｐＨ１０下でのＰＡＳ−３８布見本小片のクリーニング；及びｐＨ６、ｐＨ８、又はｐＨ１０下でのＥＭＰＡ−１１６布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも１つのクリーニングアッセイ；２）ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡに対する活性；３）タンパク質発現；並びに４）洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも１つの安定性アッセイ；
ここで、前記生産的位置は、１６６であり、前記ＬＧ１２−系統群のスブチリシン変異体のアミノ酸位置は、配列番号３に示すバチルス種（Bacillus sp.）ＬＧ１２ｓｐｒＣスブチリシンのアミノ酸配列に対応させて付番される、請求項１に記載のＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項３】
前記変更が、前記ＬＧ１２−系統群の酵素変異体の生産的位置におけるものであり、前記生産的位置において試験した前記変更のうち少なくとも６０％が次の基準ａ）〜ｃ）のうち少なくとも１つを満たし：
ａ）次の１）〜４）の試験に関し、最小性能指数（ＰＩ）がＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対し０．９以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもＰＩが１．０以上である生産的位置：１）ｐＨ９又はｐＨ１０下でのＰＡＳ−３８布見本小片のクリーニング；及びｐＨ６、ｐＨ８、又はｐＨ１０下でのＥＭＰＡ−１１６布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも１つのクリーニングアッセイ；２）ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡに対する活性；３）タンパク質発現；並びに４）洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも１つの安定性アッセイ；
ｂ）次の１）〜４）の試験に関し、最小性能指数（ＰＩ）がＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対し０．８以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもＰＩが１．２以上である生産的位置：１）ｐＨ９又はｐＨ１０下でのＰＡＳ−３８布見本小片のクリーニング；及びｐＨ６、ｐＨ８、又はｐＨ１０下でのＥＭＰＡ−１１６布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも１つのクリーニングアッセイ；２）ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡに対する活性；３）タンパク質発現；並びに４）洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも１つの安定性アッセイ；
ｃ）次の１）〜４）の試験に関し、最小性能指数（ＰＩ）がＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素に対し０．５以上であるのに加えて、これらの試験のうちのいずれについてもＰＩが１．５以上である生産的位置：１）ｐＨ９又はｐＨ１０下でのＰＡＳ−３８布見本小片のクリーニング；及びｐＨ６、ｐＨ８、又はｐＨ１０下でのＥＭＰＡ−１１６布見本小片のクリーニングから選択された少なくとも１つのクリーニングアッセイ；２）ｓｕｃ−ＡＡＰＦ−ｐＮＡに対する活性；３）タンパク質発現；並びに４）洗剤安定性アッセイ及び熱安定性アッセイから選択される少なくとも１つの安定性アッセイ；
ここで、前記変更は、残基１６６（Ｇ，Ｋ，Ｗ，Ｃ，Ｆ，Ｉ，Ｌ，Ａ，Ｄ，Ｅ，Ｈ，Ｍ，Ｎ，Ｑ，Ｓ，ＴおよびＹ）におけるものであり、ここで、前記ＬＧ１２変異体のアミノ酸位置は、配列番号３に示すＬＧ１２ｓｐｒＣプロテアーゼのアミノ酸配列に対応させて付番される、請求項１に記載のＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項４】
前記ＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体の汚れ除去が、配列番号３、７、１０、１３、１６、１９、２０、２３、２４および２５から選択された前記ＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素と比較して向上されている、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項５】
前記ＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素が、Ｓｅｒ２２１、Ｈｉｓ６４、及びＡｓｐ３２を含む触媒三残機；位置５５〜５８に由来するＰ、Ｎ／Ｄ、Ａ、Ｌモチーフ；Ｔｈｒ１０３−Ｌｅｕ１０４モチーフ；Ｔｙｒ８６−Ａｓｎ／Ａｓｐ８７モチーフ；Ａｌａ１６−Ｈｉｓ１７モチーフ；Ｖａｌ２１−Ｔｈｒ２２モチーフ；位置２６７〜２７５のＶ、Ｉ、Ｎ／Ｄ、Ｖ／Ｌ、Ｅ、Ｘ、Ａ、Ｌ、Ｑモチーフ；Ｔｙｒ８６−Ａｓｎ／Ａｓｐ８７モチーフ、及びＶａｌ２１−Ｔｈｒ２２モチーフ；および／またはＴｙｒ８６−Ａｓｎ／Ａｓｐ８７モチーフ、Ａｌａ１６−Ｈｉｓ１７モチーフ、Ｖａｌ２１−Ｔｈｒ２２モチーフを含むものであり、ここで、前記アミノ酸位置が、配列番号３に示すＬＧ１２ｓｐｒＣプロテアーゼのアミノ酸配列に対応させて付番される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項６】
前記ＬＧ１２−系統群の親スブチリシン酵素が、配列番号３のＢａｃｉｌｌｕｓ＿ｓｐ＿ＬＧ１２ｓｐｒＣ＿ＡＡＣ４３５００；配列番号７のバチルス種（Bacillus sp.）ＷＯ０１０１９２４０３  Ｍ３−１３スブチリシン酵素Ｅ（１）；配列番号１０のバチルス種（Bacillus sp.）ＤＳＭ  ８７１９スブチリシン酵素Ｂｈｏｎ０３３２１；配列番号１３のバチルス・ホリコシィ（Bacillus horikoshii）株ＤＳＭ＿９７１１；配列番号１６のバチルス・ホリコシィ（Bacillus horikoshii）株ＤＳＭ＿９７１２；配列番号１９のバチルス・ホリコシィ（Bacillus horikoshii）株ＤＳＭ＿６９５１；配列番号２４のバチルス種（Bacillus sp.）ＬＧ１２＿ＳｐｒＤ  ＡＡＣ４３５８１．１；配列番号２５のバチルス種（Bacillus sp.）ＷＰ０１０１９２４０５  Ｍ３−１３；配列番号２３のバチルス種（Bacillus sp.）ＫＳＭ−ＬＤ１，ＳＢ  ＢＡＤ１１９８８；および／または配列番号２０のバチルス種（Bacillus sp.）ＫＳＭ−ＬＤ１，ＳＢ（ＢＡＤ２１１２８．１）である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＬＧ１２−系統群のスブチリシン酵素変異体又はそれらの活性断片。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のスブチリシン酵素を少なくとも１種含む、組成物。
【請求項８】
前記組成物が、顆粒、粉末、固体、棒状物、液体、錠剤、ジェル、単位用量又はペースト組成物である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、クリーニング組成物である、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記クリーニング組成物が、洗剤組成物である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記洗剤組成物が、洗濯洗剤、布地柔軟化洗剤、食器洗浄洗剤、及び硬質表面クリーニング洗剤からなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、界面活性剤を更に含む、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記界面活性剤が、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され、少なくとも１つの安定化剤；前記スブチリシン酵素を約０．００１〜約１０重量％；少なくとも１種の漂白剤；少なくとも１種の補助成分；および／またはアシルトランスフェラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドロラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド−β−１、４−グルカナーゼ、エンド−β−マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ−マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、還元酵素、ラムノガラクツロナーゼ、β−グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチル−エステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、及びキシロシダーゼ、その他のメタロプロテアーゼ酵素、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される１種以上の追加の酵素又は酵素誘導体を更に含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、リン酸塩を含まない、請求項９〜１３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
表面又は物品を、請求項１〜６のいずれか一項に記載のスブチリシン酵素を少なくとも１種含むクリーニング組成物または請求項７〜１４のいずれか一項に記載の組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法。
【請求項１６】
前記表面又は物品をそれぞれ前記組成物と接触させた後に、前記表面又は物品をすすぎ洗いする工程を更に含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記物品が食器または布地である、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のスブチリシン酵素を含む、地加工組成物、動物飼料組成物、皮革加工組成物、羽毛加工組成物、穀物加工組成物、セルロース由来エタノール加工組成物、レンズクリーニング組成物、組織創傷清拭組成物または組織細胞培養用添加剤組成物。