【手続補正書】
【提出日】平成29年10月3日(2017.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド。
【請求項２】
(a)該アミノ酸配列が配列番号6に対して少なくとも90%の同一性を有する、
(b)該アミノ酸配列が配列番号6に対して少なくとも95%同一である、または
(c)該アミノ酸配列が配列番号6からなる、
請求項1記載の組換えポリペプチド。
【請求項３】
(a)請求項1もしくは2に記載の組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸、または
(b)請求項1もしくは2に記載の組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸であって、該ヌクレオチド配列が配列番号7に対して少なくとも80%の同一性を有する、単離された核酸。
【請求項４】
請求項3に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項５】
(a)請求項4に記載のベクターを含む宿主細胞、または
(b)宿主細胞が、細菌、酵母、糸状菌、ラン藻類および植物細胞からなる群から選択される、請求項4に記載のベクターを含む宿主細胞、または
(c)宿主細胞が、エシェリキア（Escherichia）、サルモネラ（Salmonella）、バシラス（Bacillus）、アシネトバクター（Acinetobacter）、ストレプトマイセス（Streptomyces）、コリネバクテリウム（Corynebacterium）、メチロシヌス（Methylosinus）、メチロモナス（Methylomonas）、ロドコッカス（Rhodococcus）、シュードモナス（Pseudomonas）、ロドバクター（Rhodobacter）、シネコシスチス（Synechocystis）、サッカロミセス（Saccharomyces）、ジゴサッカロミセス（Zygosaccharomyces）、クライベロマイセス（Kluyveromyces）、カンジダ（Candida）、ハンゼヌラ（Hansenula）、デバリオマイセス（Debaryomyces）、ムコール（Mucor）、ピチア（Pichia）、トルロプシス（Torulopsis）、アスペルギルス（Aspergillus）、アルトロボトリス（Arthrobotrys）、ブレビバクテリア（Brevibacteria）、ミクロバクテリウム（Microbacterium）、アルスロバクター（Arthrobacter）、シトロバクター（Citrobacter）、エシェリキア（Escherichia）、クレブシエラ（Klebsiella）、パンテア（Pantoea）、サルモネラ（Salmonella）コリネバクテリウム（Corynebacterium）、クロストリジウム（Clostridium）およびクロストリジウム・アセトブチリクム（Clostridium acetobutylicum）からなる群から選択される、請求項4に記載のベクターを含む宿主細胞、または
(d)宿主細胞が植物細胞であり、該宿主細胞が、ダイズ、ナタネ、ヒマワリ、ワタ、トウモロコシ、タバコ、アルファルファ、コムギ、オオムギ、エンバク、モロコシ、イネ、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ、パースニップ、メロン、ニンジン、セロリ、パセリ、トマト、ジャガイモ、イチゴ、ピーナッツ、ブドウ、草種（grass seed）作物、テンサイ、サトウキビ、豆、エンドウ、ライムギ、アマ、広葉樹、針葉樹、飼料草、アラビドプシス・サリアナ（Arabidopsis thaliana；シロイヌナズナ）、オリザ・サチバ（Oryza sativa；イネ）、ホルデウム・ブルガレ（Hordeum vulgare；オオムギ）、スイッチグラス（Panicum vigratum）、ブラキポジウム属種（Brachypodium spp）、アブラナ属種（Brassica spp.）およびクランベ・アビッシニカ（Crambe abyssinica）からなる群から選択される植物から単離された細胞である、請求項4に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６】
(a)配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、ステビオール配糖体組成物の製造方法、または
(b)配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、ステビオール配糖体組成物の製造方法であって、該基質が、ステビオシド、レバウジオシドA、レバウジオシドEおよびそれらの組合せからなる群から選択される、前記製造方法。
【請求項７】
(a)請求項6に記載の製造方法により製造されるステビオール配糖体組成物、または
(b)レバウジオシドD、レバウジオシドE、レバウジオシドZおよびそれらの組合せから選択されるステビオール配糖体化合物を含む、請求項6に記載の製造方法により製造されるステビオール配糖体組成物。
【請求項８】
請求項7に記載のステビオール配糖体組成物を含む甘味料。
【請求項９】
(a)配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、レバウジオシドZの製造方法、または
(b)配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含み、基質が、ルブソシド、ステビオシドおよびそれらの組合せからなる群から選択される、レバウジオシドZの製造方法。
【請求項１０】
(a)該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含む、請求項6または9に記載の製造方法、または
(b)該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含み、該組換えスクロースシンターゼが、配列番号9に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項6または9に記載の製造方法、または
(c)該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含み、該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含む請求項6または9に記載の製造方法、または
(d) 該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含み、該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含み、
該組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼが、配列番号11に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項6または9に記載の製造方法。
【請求項１１】
(a)請求項9に記載の製造方法により製造されるレバウジオシドZ化合物、または
(b)該レバウジオシドZ化合物がレバウジオシドZ1（Reb Z1）とレバウジオシドZ2（Reb Z2）との混合物を含む、請求項9に記載の製造方法により製造されるレバウジオシドZ化合物。
【請求項１２】
レバウジオシドEからレバウジオシドZを合成するための方法であって、
レバウジオシドE、スクロース、ウリジンジホスファート（UDP）およびウリジンジホスファート-グルコース（UDP-グルコース）からなる群から選択される基質ならびにHV1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドZを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドZを産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-13-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ1を産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-19-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ2を産生する、方法。
【請求項１３】
レバウジオシドEからレバウジオシドDを合成するための方法であって、
レバウジオシドE、スクロース、ウリジンジホスファート（UDP）およびウリジンジホスファート-グルコース（UDP-グルコース）からなる群から選択される基質ならびにUGT76G1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドDを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドDを産生する、方法。
【請求項１４】
(a)スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含む、請求項12または13に記載の方法、または
(b)スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含み、該スクロースシンターゼが、アラビドプシス（Arabidopsis）スクロースシンターゼ1、アラビドプシス（Arabidopsis）スクロースシンターゼ3およびビグナ・ラディアテ（Vigna radiate）スクロースシンターゼからなる群から選択される、請求項12または13に記載の方法、または
(c) スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含み、該スクロースシンターゼがアラビドプシス・サリアナ（Arabidopsis thaliana）スクロースシンターゼ1である、請求項12または13に記載の方法。
【請求項１５】
レバウジオシドZ化合物であって
(a)構造：
【化１】
2017500056.tif 000001
を含むレバウジオシドZ1化合物であるか、または
(b)構造：
【化２】
2017500056.tif 000002
を含むレバウジオシドZ2化合物である、前記レバウジオシドZ化合物。
【請求項１６】
(a)化学構造：
【化３】
2017500056.tif 000003
もしくは化学構造：
【化４】
2017500056.tif 000004
を有する化合物を含む甘味料、または
(b)化学構造：
【化５】
2017500056.tif 000005
もしくは化学構造：
【化６】
2017500056.tif 000006
を有する化合物を含む甘味料であって、充填剤、増量剤および固化防止剤の少なくとも1つを更に含む、前記甘味料。
【請求項１７】
(a)甘味量の、請求項16に記載の甘味料を含む、消費可能な製品、または
(b) 甘味量の、請求項16に記載の甘味料を含む、消費可能な製品であって、飲料、菓子類、ベーカリー製品、クッキーおよびチューインガムからなる群から選択される、前記消費可能な製品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５１】
したがって、該組換えHV1ポリペプチドの1,2-19-O-グルコースグリコシル化活性が、それが第2の糖部分をステビオシドの19-O-グルコースのC-2'に転移させてレバウジオシドEを産生しうることにより確認された。該HV1組換えポリペプチドは、第3のグルコースをレバウジオシドEの13-O-グルコースのC-2'または19-O-グルコースのC-2'に転移させてReb Z1またはReb Z2を産生させる活性をも有する。 
[１]  配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド。   
[２]  該アミノ酸配列が配列番号6に対して少なくとも90%の同一性を有する、1記載の組換えポリペプチド。   
[３]  該アミノ酸配列が配列番号6に対して少なくとも95%同一である、1記載の組換えポリペプチド。   
[４]  該アミノ酸配列が配列番号6からなる、1記載の組換えポリペプチド。   
[５]  1記載の組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸。   
[６]  該ヌクレオチド配列が配列番号7に対して少なくとも80%の同一性を有する、5記載の単離された核酸。   
[７]  5記載の単離された核酸を含むベクター。   
[８]  7記載のベクターを含む宿主細胞。   
[９]  該宿主細胞が、細菌、酵母、糸状菌、ラン藻類および植物細胞からなる群から選択される、8記載の宿主細胞。   
[１０]  該宿主細胞が、エシェリキア（Escherichia）、サルモネラ（Salmonella）、バシラス（Bacillus）、アシネトバクター（Acinetobacter）、ストレプトマイセス（Streptomyces）、コリネバクテリウム（Corynebacterium）、メチロシヌス（Methylosinus）、メチロモナス（Methylomonas）、ロドコッカス（Rhodococcus）、シュードモナス（Pseudomonas）、ロドバクター（Rhodobacter）、シネコシスチス（Synechocystis）、サッカロミセス（Saccharomyces）、ジゴサッカロミセス（Zygosaccharomyces）、クライベロマイセス（Kluyveromyces）、カンジダ（Candida）、ハンゼヌラ（Hansenula）、デバリオマイセス（Debaryomyces）、ムコール（Mucor）、ピチア（Pichia）、トルロプシス（Torulopsis）、アスペルギルス（Aspergillus）、アルトロボトリス（Arthrobotrys）、ブレビバクテリア（Brevibacteria）、ミクロバクテリウム（Microbacterium）、アルスロバクター（Arthrobacter）、シトロバクター（Citrobacter）、エシェリキア（Escherichia）、クレブシエラ（Klebsiella）、パンテア（Pantoea）、サルモネラ（Salmonella）コリネバクテリウム（Corynebacterium）、クロストリジウム（Clostridium）およびクロストリジウム・アセトブチリクム（Clostridium acetobutylicum）からなる群から選択される、9記載の宿主細胞。   
[１１]  該宿主細胞が、ダイズ、ナタネ、ヒマワリ、ワタ、トウモロコシ、タバコ、アルファルファ、コムギ、オオムギ、エンバク、モロコシ、イネ、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ、パースニップ、メロン、ニンジン、セロリ、パセリ、トマト、ジャガイモ、イチゴ、ピーナッツ、ブドウ、草種（grass seed）作物、テンサイ、サトウキビ、豆、エンドウ、ライムギ、アマ、広葉樹、針葉樹、飼料草、アラビドプシス・サリアナ（Arabidopsis thaliana；シロイヌナズナ）、オリザ・サチバ（Oryza sativa；イネ）、ホルデウム・ブルガレ（Hordeum vulgare；オオムギ）、スイッチグラス（Panicum vigratum）、ブラキポジウム属種（Brachypodium spp）、アブラナ属種（Brassica spp.）およびクランベ・アビッシニカ（Crambe abyssinica）からなる群から選択される植物から単離された細胞である、9記載の宿主細胞。   
[１２]  配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、ステビオール配糖体組成物の製造方法。   
[１３]  該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含む、12記載の製造方法。   
[１４]  該組換えスクロースシンターゼが、配列番号9に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、13記載の製造方法。   
[１５]  該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含む、13記載の製造方法。   
[１６]  該組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼが、配列番号11に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、15記載の製造方法。   
[１７]  該基質が、ステビオシド、レバウジオシドA、レバウジオシドEおよびそれらの組合せからなる群から選択される、12記載の製造方法。   
[１８]  12記載の製造方法により製造されるステビオール配糖体組成物。   
[１９]  レバウジオシドD、レバウジオシドE、レバウジオシドZおよびそれらの組合せから選択されるステビオール配糖体化合物を含む、18記載のステビオール配糖体組成物。   
[２０]  18記載のステビオール配糖体組成物を含む甘味料。   
[２１]  配列番号6に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドと共に基質をインキュベートすることを含む、レバウジオシドZの製造方法。   
[２２]  該基質が、ルブソシド、ステビオシドおよびそれらの組合せからなる群から選択される、21記載の製造方法。   
[２３]  該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えスクロースシンターゼをインキュベートすることを更に含む、21記載の製造方法。   
[２４]  該組換えスクロースシンターゼが、配列番号9に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、23記載の製造方法。   
[２５]  該スクロースシンターゼ、該基質および該組換えポリペプチドと共に組換えUDP-グリコシルトランスフェラーゼをインキュベートすることを更に含む、23記載の製造方法。   
[２６]  21記載の製造方法により製造されるレバウジオシドZ化合物。   
[２７]  該レバウジオシドZ化合物がレバウジオシドZ1（Reb Z1）とレバウジオシドZ2（Reb Z2）との混合物を含む、26記載のレバウジオシドZ化合物。   
[２８]  レバウジオシドEからレバウジオシドZを合成するための方法であって、
レバウジオシドE、スクロース、ウリジンジホスファート（UDP）およびウリジンジホスファート-グルコース（UDP-グルコース）からなる群から選択される基質ならびにHV1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドZを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドZを産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-13-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ1を産生し、グルコースがレバウジオシドEのC2'-19-O-グルコースに共有結合してレバウジオシドZ2を産生する、方法。   
[２９]  スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含む、28記載の方法。   
[３０]  該スクロースシンターゼが、アラビドプシス（Arabidopsis）スクロースシンターゼ1、アラビドプシス（Arabidopsis）スクロースシンターゼ3およびビグナ・ラディアテ（Vigna radiate）スクロースシンターゼからなる群から選択される、29記載の方法。   
[３１]  該スクロースシンターゼがアラビドプシス・サリアナ（Arabidopsis thaliana）スクロースシンターゼ1である、30記載の方法。   
[３２]  レバウジオシドEからレバウジオシドDを合成するための方法であって、
レバウジオシドE、スクロース、ウリジンジホスファート（UDP）およびウリジンジホスファート-グルコース（UDP-グルコース）からなる群から選択される基質ならびにUGT76G1を含む反応混合物を調製し、
レバウジオシドDを産生するのに十分な時間にわたって該反応混合物をインキュベートすることを含み、ここで、グルコースがレバウジオシドEに共有結合してレバウジオシドDを産生する、方法。   
[３３]  スクロースシンターゼを該反応混合物に加えることを更に含む、32記載の方法。   
[３４]  該スクロースシンターゼが、アラビドプシス（Arabidopsis）スクロースシンターゼ1、アラビドプシス（Arabidopsis）スクロースシンターゼ3およびビグナ・ラディアテ（Vigna radiate）スクロースシンターゼからなる群から選択される、33記載の方法。   
[３５]  該スクロースシンターゼがアラビドプシス・サリアナ（Arabidopsis thaliana）スクロースシンターゼ1である、34記載の方法。   
[３６]  構造：
2017500056.tif 000007
を含むレバウジオシドZ1化合物。   
[３７]  構造：
2017500056.tif 000008
を含むレバウジオシドZ2化合物。   
[３８]  化学構造：
2017500056.tif 000009
を有する化合物を含む甘味料。   
[３９]  充填剤、増量剤および固化防止剤の少なくとも1つを更に含む、38記載の甘味料。   
[４０]  甘味量の、38記載の甘味料を含む、消耗品。   
[４１]  飲料、菓子類、ベーカリー製品、クッキーおよびチューインガムからなる群から選択される、40記載の消耗品。   
[４２]  化学構造：
2017500056.tif 000010
を有する化合物を含む甘味料。   
[４３]  充填剤、増量剤および固化防止剤の少なくとも1つを更に含む、42記載の甘味料。   
[４４]  甘味量の、42記載の甘味料を含む、消耗品（消費可能な製品）。   
[４５]  飲料、菓子類、ベーカリー製品、クッキーおよびチューインガムからなる群から選択される、44記載の消耗品（消費可能な製品）。