【手続補正書】
【提出日】平成29年4月6日(2017.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を調製する方法であって、以下を含む方法：
操作された微生物細胞をタンパク質産生に適した条件下で培養する工程であって、該操作された微生物細胞がオピオイドを産生する操作された微生物細胞であり、該操作された微生物細胞が該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を産生する経路における複数種の酵素をコードする複数の異種コード配列を含み、該複数の異種コード配列のうち少なくとも1つの異種コード配列がテバインを該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物に変換する経路における酵素をコードし、該操作された微生物細胞が細菌細胞又は酵母細胞である、工程；
出発化合物を細胞培養物に添加する工程；および
細胞培養物から該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を回収する工程であって、該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物がネオピノン、ネオピン、ネオモルヒネ、コデイノン、コデイン、モルヒネ、オリパビン、モルフィノン、ヒドロコドン、14-ヒドロキシコデイノン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、14-ヒドロキシコデイン、ヒドロモルホン、およびジヒドロモルヒネからなる群より選択される、工程。
【請求項２】
操作された微生物細胞が、テバイン6-O-デメチラーゼ、コデイノンレダクターゼ、コデインO-デメチラーゼ、モルヒネデヒドロゲナーゼ、およびモルヒネレダクターゼからなる群より選択される1種または複数種の酵素をコードする1つまたは複数の異種コード配列を含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物がコデイン、モルヒネ、オリパビン、ヒドロコドン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、およびヒドロモルホンからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項４】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物が、N-メチル化、アセタール化、ヒドロキシル化、酸化、還元、環化、脱水、O-アルキル化、脱メチル化、および異性化のうちの1つまたは複数を用いて産生される、請求項1記載の方法。
【請求項５】
操作された微生物細胞が、テバインをベンジルイソキノリンアルカロイド産物に変換する経路に関与する2種以上の酵素をコードする異種コード配列を含み、該2種以上の酵素の各々がテバイン6-O-デメチラーゼ、コデイノンレダクターゼ、コデインO-デメチラーゼ、モルヒネデヒドロゲナーゼ、およびモルヒネレダクターゼからなる群より選択され、該2種以上の酵素が、テバインをベンジルイソキノリンアルカロイド産物に変換する経路に沿って動作可能に接続されている、請求項1記載の方法。
【請求項６】
操作された微生物細胞が、ノルコクラウリン6-O-メチルトランスフェラーゼ、コクラウリンN-メチルトランスフェラーゼ、4'-O-メチルトランスフェラーゼおよびチトクロムP450 80B1、サルタリジンシンターゼ、チトクロムP450 2D6、チトクロムP450 2D2、サルタリジンレダクターゼ、およびサルタリジノール7-O-アセチルトランスフェラーゼからなる群より選択される酵素をコードする、前記複数の異種コード配列のうちの少なくとも1つの異種コード配列を含む、請求項1記載の方法。
【請求項７】
操作された微生物細胞が細菌細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項８】
操作された微生物細胞が酵母細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項９】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を産生する操作された微生物細胞であって、該操作された微生物細胞が、該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を産生する経路における複数の酵素をコードする複数の異種コード配列を含み、該複数の異種コード配列のうち少なくとも1つの異種コード配列がテバインを該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物に変換する経路における酵素をコードし、該操作された微生物細胞が細菌細胞又は酵母細胞であり、該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物がネオピノン、ネオピン、ネオモルヒネ、コデイノン、コデイン、モルヒネ、オリパビン、モルフィノン、ヒドロコドン、14-ヒドロキシコデイノン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、14-ヒドロキシコデイン、ヒドロモルホン、およびジヒドロモルヒネからなる群より選択される、操作された微生物細胞。
【請求項１０】
テバイン6-O-デメチラーゼ、コデイノンレダクターゼ、コデインO-デメチラーゼ、モルヒネデヒドロゲナーゼ、およびモルヒネレダクターゼからなる群より選択される1種または複数種の酵素をコードする1つまたは複数の異種コード配列を含む、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１１】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物がコデイン、モルヒネ、オリパビン、ヒドロコドン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、およびヒドロモルホンからなる群より選択される、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１２】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物が、N-メチル化、アセタール化、ヒドロキシル化、酸化、還元、環化、脱水、O-アルキル化、脱メチル化、および異性化のうちの1つまたは複数を用いて産生される、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１３】
テバインをベンジルイソキノリンアルカロイド産物に変換する経路に関与する2種以上の酵素をコードする異種コード配列を含み、該2種以上の酵素の各々がテバイン6-O-デメチラーゼ、コデイノンレダクターゼ、コデインO-デメチラーゼ、モルヒネデヒドロゲナーゼ、およびモルヒネレダクターゼからなる群より選択され、該2種以上の酵素がテバインをベンジルイソキノリンアルカロイド産物に変換する経路に沿って動作可能に接続されている、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１４】
ノルコクラウリン6-O-メチルトランスフェラーゼ、コクラウリンN-メチルトランスフェラーゼ、4'-O-メチルトランスフェラーゼおよびチトクロムP450 80B1、サルタリジンシンターゼ、チトクロムP450 2D6、チトクロムP450 2D2、サルタリジンレダクターゼ、およびサルタリジノール7-O-アセチルトランスフェラーゼからなる群より選択される酵素をコードする、前記複数の異種コード配列のうちの少なくとも1つの異種コード配列を含む、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１５】
細菌細胞である、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１６】
酵母細胞である、請求項9記載の操作された微生物細胞。
【請求項１７】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を調製する方法であって、以下を含む方法：
操作された微生物細胞をタンパク質産生に適した条件下で培養する工程であって、該操作された微生物細胞がオピオイドを産生する操作された微生物細胞であり、該操作された微生物細胞が該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を産生する経路における第1、第2、および第3の酵素をコードする少なくとも3つの異種コード配列を含み、該第1、第2、および第3の酵素が該経路に沿って動作可能に接続されており、該第1、第2、および第3の酵素のうちの1つの酵素がサルタリジンシンターゼであり、該操作された微生物細胞が細菌細胞又は酵母細胞である、工程；
出発化合物を細胞培養物に添加する工程；および
細胞培養物から該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を回収する工程であって、該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物がサルタリジン、サルタリジノール、7-O-アセチルサルタリジノール、テバイン、ネオピノン、ネオピン、ネオモルヒネ、コデイノン、コデイン、モルヒネ、オリパビン、モルフィノン、ヒドロコドン、14-ヒドロキシコデイノン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、14-ヒドロキシコデイン、ヒドロモルホン、およびジヒドロモルヒネからなる群より選択される、工程。
【請求項１８】
ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を産生する操作された微生物細胞であって、該操作された微生物細胞が該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物を産生する経路における第1、第2、および第3の酵素をコードする少なくとも3つの異種コード配列を含み、該第1、第2、および第3の酵素が該経路に沿って動作可能に接続されており、該第1、第2、および第3の酵素のうちの1つの酵素がサルタリジンシンターゼであり、該操作された微生物細胞が細菌細胞又は酵母細胞であり、該ベンジルイソキノリンアルカロイド産物がサルタリジン、サルタリジノール、7-O-アセチルサルタリジノール、テバイン、ネオピノン、ネオピン、ネオモルヒネ、コデイノン、コデイン、モルヒネ、オリパビン、モルフィノン、ヒドロコドン、14-ヒドロキシコデイノン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、14-ヒドロキシコデイン、ヒドロモルホン、およびジヒドロモルヒネからなる群より選択される、操作された微生物細胞。