【手続補正書】
【提出日】平成29年3月6日(2017.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
結果的に、本開示は、酸化ストレスを受けている腎臓患者における、副甲状腺ホルモン濃度の調節に干渉する薬物療法の必要性をインビトロでモニターおよび評価するための方法であって、酸化ヒトＰＴＨペプチドのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元エピトープを認識および特異的に結合するが、非酸化ヒトＰＴＨ（１−８４）およびこの断片には結合しない抗体と、前記サンプルとを接触させることによって、メチオニン８もしくは１８のいずれかまたはこの両方またはトリプトファン２３において酸化されたヒトＰＴＨペプチドから、前記腎臓患者由来の血漿または血清のサンプルを精製する工程；ヒトＰＴＨ配列のアミノ酸３から３４の間に位置して受容体への結合およびｃＡＭＰ−シクラーゼの活性化を担うドメインを少なくとも含有する、ヒトＰＴＨ（１−８４）およびこの断片に対する抗体に基づくイムノアッセイによって、前記サンプルにおける免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドの量を測定する工程；ならびに、血液循環中に副甲状腺の細胞によって分泌される免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドの割合および前記患者が患っている酸化ストレスによって免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドが酸化される割合を含む、前記腎臓患者についてのＰＴＨの状態値（ｎ−ｏｘＰＴＨ値）を得る工程；ならびに、前記ＰＴＨの状態値（ｎ−ｏｘＰＴＨ）を、罹患率および総死亡率が低い基準値と比較して、ＰＴＨの状態値の調節に関する薬物療法の必要性、またはヒト副甲状腺ホルモンもしくはこの活性断片またはこの両方を前記患者へ補充する必要性を決定する工程；を含む方法に関する。前記方法は、血液透析治療を必要とする腎臓患者由来のサンプルに特に使用することができる。他の場合には、サンプルは、慢性腎疾患（ＣＫＤ）または尿毒症または副甲状腺機能亢進症に罹患している腎臓患者由来のものであってもよい。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
開示される方法は、ヒト副甲状腺ホルモンの酸化された抗原決定基に結合する抗体と前記サンプルとを接触させることによって、酸化ストレスを受けやすく、メチオニン８もしくは１８のいずれかまたはこの両方またはトリプトファン２３において酸化されたＰＴＨペプチド鎖から、患者由来の血漿または血清のサンプルを精製することを一般に含む。ＰＴＨの酸化およびその後の不活性化は、血液透析治療を受けているＣＫＤ患者が、従来のＰＴＨ測定に干渉する酸化ストレスを受けているため、問題点となる。前記方法は、さらに、血液循環中に副甲状腺の細胞によって分泌されるＰＴＨペプチドの割合と、血液透析治療による酸化ストレスによって酸化されて血液循環からクリアランスされるＰＴＨペプチドの平衡に相当するＰＴＨの状態（以下「ｎ−ｏｘＰＴＨ」状態）を得るために、受容体への結合およびｃＡＭＰ−シクラーゼの活性化を担うドメインを少なくとも含有する、ヒト副甲状腺ホルモンのペプチドの濃度を測定するイムノアッセイによる、前記精製サンプル中の分泌副甲状腺ホルモンの状態の決定を含む。次いで、開示される方法は、分泌副甲状腺ホルモンの調節に関する薬物療法の必要性、または副甲状腺ホルモンの直接的な補充の必要性を決定するために、血液透析患者総死亡率が低いｎ−ｏｘＰＴＨの状態と、測定されたｎ−ｏｘＰＴＨの状態とを比較する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
好ましい実施形態では、免疫反応性があるＰＴＨペプチドを精製するための抗体が、８および／もしくは１８におけるいずれかのメチオニンでのまたは２３位のトリプトファンでの天然の副甲状腺ホルモンの酸化に続く、ペプチド立体構造の変化によって形成される、ヒト副甲状腺ホルモンのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元抗原決定基を認識する。利用可能なＮＭＲデータはないが、ＰＴＨペプチド立体構造の同様の変化が、一番端のアミノ末端のアミノ酸セリンおよびバリンのタンパク分解性の除去によってもたらされ、そのため立体構造抗体が、ミスフォールドされたペプチドをも除去することも、当業者は十分に理解しているであろう。立体構造の変化が、酸化ストレスに続くペプチドの酸化を相乗的に導くかどうかはまだ解明されていない。しかしながら、酸化および立体構造の変化は、血漿からのＰＴＨのクリアランスの割合を暗示する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
ＰＴＨの生物活性は、ＰＴＨペプチド鎖の正確なフォールディングならびに８位および／もしくは１８位の１つ以上のメチオニンのまたはトリプトファン２３での酸化が存在しないことによって影響を受けるので、上記に定義される免疫反応性「インタクトＰＴＨ」は「生物活性ＰＴＨ」と同義ではない。多数の研究にもかかわらず、副甲状腺ホルモンの生物活性およびこの非活性化についての経路は、不明瞭なままであり、「有効な生物活性」を含むと言われるＰＴＨペプチドの実体とほとんど相関させることができない。患者におけるＰＴＨ生物活性および血漿免疫活性の消失の不一致は、動的なＰＴＨの平衡を示唆し、そのため、ＰＴＨの薬物療法には、刻一刻の「インタクトＰＴＨ」活性の分泌の割合および刻一刻の「ｏｘＰＴＨペプチド」のクリアランスの割合の測定が必要とされ、そのため、開示されるｎ−ｏｘＰＴＨの状態の測定は、両方のＰＴＨの割合を考慮し、患者によって必要とされる、適したＰＴＨの薬物療法のための方向を示すことができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化ストレスを受けている腎臓患者における副甲状腺ホルモン濃度の調節に干渉する薬物療法の必要性をインビトロでモニターおよび評価するための方法であって、
前記腎臓患者由来の血漿または血清サンプルと、酸化ヒトＰＴＨペプチドのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元エピトープを認識および特異的に結合するが、非酸化ヒトＰＴＨ（１−８４）およびこの断片には結合しない抗体とを接触させることによって、メチオニン８もしくは１８のいずれかもしくはこの両方またはトリプトファン２３において酸化されたヒトＰＴＨペプチドから、前記腎臓患者由来の血漿または血清サンプルを精製する工程であって、前記サンプルは血液透析治療を受けている腎臓患者由来のものであり、
ヒトＰＴＨ配列のアミノ酸３から３４の間に位置して受容体への結合およびｃＡＭＰ−シクラーゼの活性化を担うドメインを少なくとも含有する、ヒトＰＴＨ（１−８４）およびこの断片に対する抗体に基づくイムノアッセイによって、前記サンプルにおける免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドの量を測定する工程ならびに
血液循環中に副甲状腺の細胞によって分泌される免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドの割合および前記腎臓患者が患っている前記酸化ストレスによって免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドが酸化される割合を含む、前記腎臓患者についてのＰＴＨの状態値（ｎ−ｏｘＰＴＨ値）を得る工程ならびに
前記ＰＴＨの状態値（ｎ−ｏｘＰＴＨ）を、罹患率および総死亡率が低い基準値と比較して、ＰＴＨの状態値の調節に関する薬物療法の必要性、またはヒト副甲状腺ホルモンもしくはこの活性断片もしくはこの両方を前記患者へ補充する必要性を決定する工程を含む方法。
【請求項２】
前記サンプルが、慢性腎疾患（ＣＫＤ）または尿毒症または副甲状腺機能亢進症に罹患している腎臓患者由来のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
酸化ヒトＰＴＨペプチドのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元エピトープを認識および特異的に結合するが、非酸化ヒトＰＴＨ（１−８４）およびこの断片には結合しない抗体が結合した固相と、血漿または血清の前記サンプルとを接触させる工程を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
酸化ヒトＰＴＨペプチドのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元エピトープを認識および特異的に結合する前記抗体によって結合された前記ペプチドを、定量的に測定することをさらに含む、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドの測定が、２−サイトイムノアッセイの使用を含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法であって、一方の抗体が、ＰＴＨ受容体１および２へのＰＴＨペプチドの結合に関与するドメインに結合するモノクローナル抗体である、方法。
【請求項６】
免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）ペプチドの測定が、２−サイトイムノアッセイの使用を含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法であって、一方の抗体が、ヒトＰＴＨの一番端のアミノ末端のアミノ酸バリンおよびセリンを含む抗原決定基に結合し、他方の抗体が、ヒトＰＴＨ配列のアミノ酸１４から３４の間の領域に結合する、方法。
【請求項７】
免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）の測定が、２−サイトイムノアッセイの使用を含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法であって、一方の抗体が、ヒトＰＴＨ配列のアミノ酸１から１３を含む抗原決定基に結合する、方法。
【請求項８】
酸化ヒトＰＴＨペプチドに対して特異的な前記抗体が、８位および／または１８位において酸化メチオニンを含まない、ヒトＰＴＨ配列のアミノ酸３から３４の間の三次元エピトープに結合する、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
免疫反応性ヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）の割合および酸化ヒトＰＴＨペプチドのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元エピトープを認識および選択的に結合する前記抗体によって結合されたＰＴＨペプチドの量の測定をさらに含む、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法に使用するためのキットであって、
酸化ヒトＰＴＨペプチドのアミノ酸３から３４の間に位置する三次元エピトープを認識および選択的に結合する抗体を有する固相と、
ＰＴＨ受容体１および２へのＰＴＨペプチドの結合に関与するドメインに結合するモノクローナル抗体を含む、血漿または血清における免疫反応性インタクトヒトＰＴＨ（ｉＰＴＨ）を測定するための抗体を組み合わせたもの、
とを含む、キット。