【手続補正書】
【提出日】平成29年10月11日(2017.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵素であって、前記酵素が、ＧＨ１０キシラナーゼ又はそのキシラナーゼ活性を有するフラグメントであり、前記酵素又はそのフラグメントが、親ＧＨ１０キシラナーゼ酵素と比較して向上した熱安定性を有しており、親ＧＨ１０キシラナーゼが、７、３３、７９、２１７、及び２９８番目のうち、２ヶ所又はそれ以上の位置で改変されており、この番号付けが、ＦｖｅＸｙｎ４（配列番号１）のアミノ酸番号に基づくものである、酵素。
【請求項２】
前記親ＧＨ１０キシラナーゼが、７、３３、７９、２１７及び２９８番目のうち、３ヶ所又はそれ以上の位置で改変されている、請求項１に記載の酵素。
【請求項３】
前記親ＧＨ１０キシラナーゼが、少なくとも、７、３３、７９、２１７及び２９８番目の位置で改変されている、請求項１又は請求項２に記載の酵素。
【請求項４】
前記改変が、好ましくは、
Ｎ７Ｄ；
Ｔ３３Ｖ；
Ｋ７９Ｙ、Ｖ、Ｆ、Ｉ、Ｌ又はＭ（好ましくはＫ７９Ｙ、Ｆ又はＶ、より好ましくはＹ）；
Ａ２１７Ｑ、Ｅ、Ｐ、Ｄ又はＭ（好ましくはＡ２１７Ｑ、Ｅ又はＰ、より好ましくはＱ）；及び
Ｔ２９８Ｙ、Ｆ又はＷ（好ましくはＹ又はＦ、より好ましくはＹ）から選択される、請求項１〜３に記載の酵素。
【請求項５】
前記親ＧＨ１０キシラナーゼが、２５、５７、６２、６４、８９、１０３、１１５、１４７、１８１、１９３、２１９番目のうち、１ヶ所又はそれ以上の位置で更に改変されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の酵素。
【請求項６】
前記改変が、
Ｎ２５Ｐ；
Ｓ５７Ｑ、Ｔ若しくはＶ（好ましくはＱ）；
Ｎ６２Ｔ若しくはＳ（好ましくはＴ）；
Ｇ６４Ｔ若しくはＳ（好ましくはＴ）；
Ｓ８９Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｌ若しくはＭ（好ましくはＧ若しくはＱ、より好ましくはＧ）；
Ｔ１０３Ｍ若しくはＫ（好ましくはＭ）；
Ｖ１１５Ｅ若しくはＬ（好ましくはＬ）；
Ｎ１４７Ｑ；
Ｇ１８１Ｑ、Ａ、Ｄ若しくはＰ（好ましくはＱ）；
Ｓ１９３Ｙ若しくはＮ（好ましくはＹ）、及び／又は
Ｇ２１９Ｄ若しくはＰ（好ましくはＰ）から選択される、請求項５に記載の酵素。
【請求項７】
前記改変が、
ｉ．Ｎ７Ｄ、Ｎ２５Ｐ、Ｔ３３Ｖ、Ｇ６４Ｔ、Ｋ７９Ｙ、Ｓ８９Ｇ、Ａ２１７Ｑ、及びＴ２９８Ｙ；
ｉｉ．Ｎ７Ｄ、Ｎ２５Ｐ、Ｔ３３Ｖ、Ｋ７９Ｙ、Ｓ８９Ｇ、Ａ２１７Ｑ、及びＴ２９８Ｙ、
ｉｉｉ．Ｎ７Ｄ、Ｎ２５Ｐ、Ｔ３３Ｖ、Ｓ５７Ｑ、Ｎ６２Ｔ、Ｇ６４Ｔ、Ｋ７９Ｙ、Ｔ１０３Ｍ、Ｖ１１５Ｌ、Ｎ１４７Ｑ、Ｇ１８１Ｑ、Ｓ１９３Ｙ、Ａ２１７Ｑ、Ｇ２１９Ｐ、及びＴ２９８Ｙ；
ｉｖ．Ｎ７Ｄ、Ｎ２５Ｐ、Ｔ３３Ｖ、Ｓ５７Ｑ、Ｎ６２Ｔ、Ｋ７９Ｙ、Ｓ８９Ｇ、Ｔ１０３Ｍ、Ｖ１１５Ｌ、Ｎ１４７Ｑ、Ｇ１８１Ｑ、Ｓ１９３Ｙ、Ａ２１７Ｑ、Ｇ２１９Ｐ、及びＴ２９８Ｙ；
ｖ．Ｎ７Ｄ、Ｔ３３Ｖ、Ｓ５７Ｑ、Ｎ６２Ｔ、Ｇ６４Ｔ、Ｋ７９Ｙ、Ｓ８９Ｇ、Ａ２１７Ｑ、及びＴ２９８Ｙ；
ｖｉ．Ｋ７９Ｆ＿Ａ２１７Ｑ＿Ｔ２９８Ｆ；
ｖｉｉ．Ｎ７Ｄ＿Ｔ３３Ｖ＿Ａ２１７Ｑ＿Ｔ２９８Ｆ；
ｖｉｉｉ．Ｎ７Ｄ＿Ｋ７９Ｆ＿Ｔ２９８Ｆ；
ｉｘ．Ｔ３３Ｖ＿Ｋ７９Ｆ＿Ａ２１７Ｑ；
ｘ．Ｎ７Ｄ＿Ｔ３３Ｖ＿Ｔ２９８Ｙ；
ｘｉ．Ｔ３３Ｖ＿Ａ２１７Ｑ＿Ｔ２９８Ｙ；
ｘｉｉ．Ｎ７Ｄ＿Ａ２１７Ｑ＿Ｔ２９８Ｆ；
ｘｉｉｉ．Ｎ７Ｄ＿Ｔ３３Ｖ＿Ａ２１７Ｑ；
ｘｉｖ．Ｋ７９Ｆ＿Ｔ２９８Ｆ；
ｘｖ．Ｎ７Ｄ＿Ｋ７９Ｆ；
ｘｖｉ．Ｔ３３Ｖ＿Ｋ７９Ｆ；
ｘｖｉｉ．Ｔ３３Ｖ＿Ｔ２９８Ｙ；
ｘｖｉｉｉ．Ｎ７Ｄ＿Ｔ３３Ｖ；
ｘｉｘ．Ｔ３３Ｖ＿Ａ２１７Ｑから選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の酵素。
【請求項８】
前記親ＧＨ１０キシラナーゼが、
ａ）配列番号１、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３、配列番号２８、配列番号２９、若しくは配列番号５からなる群から選択される、アミノ酸配列を含むキシラナーゼ；又は
ｂ）配列番号１、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３、配列番号２８、配列番号２９、若しくは配列番号５と、少なくとも７０％の同一性（好適には少なくとも８０％、好適には少なくとも９０％、好適には少なくとも９５％、好適には少なくとも９８％、好適には少なくとも９９％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む、キシラナーゼ酵素；又は
ｃ）配列番号２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４、配列番号３０、配列番号３１、配列番号６、配列番号３２、若しくは配列番号３３として本明細書に示されるヌクレオチド配列を含む、ヌクレオチド配列によってコードされるキシラナーゼ酵素；又は
ｄ）配列番号２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４、配列番号３０、配列番号３１、配列番号６、配列番号３２、若しくは配列番号３３と、少なくとも７０％の同一性（好適には少なくとも８０％、好適には少なくとも９０％、好適には少なくとも９５％、好適には少なくとも９８％、好適には少なくとも９９％の同一性）を有するヌクレオチド配列を含む、ヌクレオチド配列によってコードされる、キシラナーゼ酵素；又は
ｅ）高ストリンジェンシー条件下で、配列番号２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４、配列番号３０、配列番号３１、配列番号６、配列番号３２、若しくは配列番号３３にハイブリダイズできるヌクレオチド配列によってコードされる、キシラナーゼ酵素である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の酵素。
【請求項９】
酵素であって、前記酵素が、ＧＨ１０キシラナーゼ又はそのキシラナーゼ活性を有するフラグメントであり、前記酵素が、７Ｄ；３３Ｖ；７９Ｙ、Ｖ、Ｆ、Ｉ、Ｌ又は；Ｍ２１７Ｑ、Ｅ、Ｐ、Ｄ又はＭ；及び２９８Ｙ、Ｆ又はＷで示される位置のうち、２ヶ所又はそれ以上においてこれらのアミノ酸を含み、この番号付けが、ＦｖｅＸｙｎ４（配列番号１）のアミノ酸番号に基づくものである、酵素。
【請求項１０】
前記酵素が、
２５Ｐ；
５７Ｑ、Ｔ若しくはＶ（好ましくはＱ）；
６２Ｔ若しくはＳ（好ましくはＴ）；
６４Ｔ若しくはＳ（好ましくはＴ）；
８９Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｌ若しくはＭ（好ましくはＧ又はＱ、より好ましくはＧ）；
１０３Ｍ若しくはＫ（好ましくはＭ）；
１１５Ｅ若しくはＬ（好ましくはＬ）；
１４７Ｑ；
１８１Ｑ、Ａ、Ｄ若しくはＰ（好ましくはＱ）；
１９３Ｙ若しくはＮ（好ましくはＹ）、及び／又は
２１９Ｄ若しくはＰ（好ましくはＰ）で示される位置において、これらのアミノ酸のうち少なくとも１つを更に含む、請求項９に記載の酵素。
【請求項１１】
前記酵素が、
ｉ．７Ｄ、２５Ｐ、３３Ｖ、６４Ｔ、７９Ｙ、８９Ｇ、２１７Ｑ及び２９８Ｙ；
ｉｉ．７Ｄ、２５Ｐ、３３Ｖ、７９Ｙ、８９Ｇ、２１７Ｑ及び２９８Ｙ、
ｉｉｉ．７Ｄ、２５Ｐ、３３Ｖ、５７Ｑ、６２Ｔ、６４Ｔ、７９Ｙ、１０３Ｍ、１１５Ｌ、１４７Ｑ、１８１Ｑ、１９３Ｙ、２１７Ｑ、２１９Ｐ及び２９８Ｙ；
ｉｖ．７Ｄ、２５Ｐ、３３Ｖ、５７Ｑ、６２Ｔ、７９Ｙ、８９Ｇ、１０３Ｍ、１１５Ｌ、１４７Ｑ、１８１Ｑ、１９３Ｙ、２１７Ｑ、２１９Ｐ及び２９８Ｙ；
ｖ．７Ｄ、３３Ｖ、５７Ｑ、６２Ｔ、６４Ｔ、７９Ｙ、８９Ｇ、２１７Ｑ及び２９８Ｙ；
ｖｉ．７９Ｆ＿２１７Ｑ＿及び２９８Ｆ；
ｖｉｉ．７Ｄ＿３３Ｖ＿２１７Ｑ＿及び２９８Ｆ；
ｖｉｉｉ．７Ｄ＿７９Ｆ＿及び２９８Ｆ；
ｉｘ．３３Ｖ＿７９Ｆ＿及び２１７Ｑ；
ｘ．７Ｄ＿３３Ｖ＿及び２９８Ｙ；
ｘｉ．３３Ｖ＿２１７Ｑ＿及び２９８Ｙ；
ｘｉｉ．７Ｄ＿２１７Ｑ及び＿２９８Ｆ；
ｘｉｉｉ．７Ｄ＿３３Ｖ＿及び２１７Ｑ；
ｘｉｖ．７９Ｆ及び＿２９８Ｆ；
ｘｖ．７Ｄ＿及び７９Ｆ；
ｘｖｉ．３３Ｖ＿及び７９Ｆ；
ｘｖｉｉ．３３Ｖ＿及び２９８Ｙ；
ｘｖｉｉｉ．７Ｄ＿及び３３Ｖ；又は、
ｘｉｘ．３３Ｖ＿及び２１７Ｑで示される位置においてこれらのアミノ酸を含む、請求項９又は１０に記載の酵素。
【請求項１２】
前記酵素が、配列番号１、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３、配列番号２８、配列番号２９、若しくは配列番号５；又は、配列番号２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４、配列番号３０、配列番号３１、配列番号６、配列番号３２、若しくは配列番号３３として本明細書に示されるヌクレオチド配列を含む、ヌクレオチド配列によってコードされるキシラナーゼ酵素に対し；又は、高ストリンジェンシー条件下で、配列番号２、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４、配列番号３０、配列番号３１、配列番号６、配列番号３２、若しくは配列番号３３にハイブリダイズできるヌクレオチド配列によってコードされる、キシラナーゼ酵素に対し、少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の酵素。
【請求項１３】
前記酵素が、ａ）配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、若しくは配列番号２１として本明細書に示されるアミノ酸配列のうち１つを含む、又は、ｂ）７、３３、７９、２１７及び２９８番目の位置のアミノ酸が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、若しくは配列番号２１に示されるものと同一である限りは、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、若しくは配列番号２１として本明細書に示されるアミノ酸配列と、少なくとも９６％、好ましくは少なくとも９８．５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の酵素。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の酵素をコードする、組み換え核酸分子。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組み換え核酸を含む、ベクター、組み換え構築物、又は宿主細胞。
【請求項１６】
前記細胞が、真菌細胞、酵母細胞、糸状菌細胞及び植物細胞からなる群から選択される、請求項１５に記載の宿主細胞。
【請求項１７】
ＧＨ１０キシラナーゼの熱安定性を向上する方法であって、親ＧＨ１０キシラナーゼを、７、３３、７９、２１７及び２９８番目の位置のうち少なくとも２ヶ所で改変することを含み、この番号付けが、ＦｖｅＸｙｎ４（配列番号１）のアミノ酸番号に基づくものである、方法。
【請求項１８】
前記親ＧＨ１０キシラナーゼを、７、３３、７９、２１７及び２９８番目の位置のうち少なくとも３ヶ所において改変することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１３に記載の酵素を含む、酵素組成物又は飼料添加剤組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の改変されたキシラナーゼ酵素、又は、請求項１９に記載の酵素組成物又は飼料添加剤組成物と、少なくとも１種類のビタミン及び／若しくは少なくとも１種類のミネラルと、を含む、プレミックス。
【請求項２１】
プロテアーゼ（例えば、スブチリシン（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．６２）若しくはバシロリシン（Ｅ．Ｃ．３．４．２４．２８）若しくはアルカリセリンプロテアーゼ（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．ｘ）若しくはケラチナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．４．ｘ．ｘ））、並びに／又は、アミラーゼ（α−アミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）、Ｇ４形成アミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．６０）、β−アミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２）及びγ−アミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３）を含む）、並びに／又は、フィターゼ（例えば、６−フィターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．３．２６）若しくは３−フィターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．３８））からなる群から選択される、１種類又はそれ以上の酵素を更に含む、請求項１９に記載の飼料添加剤組成物又は請求項２０に記載のプレミックス。
【請求項２２】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の前記酵素、又は、請求項１９に記載の酵素組成物若しくは飼料添加剤組成物を含む、飼料（又は家畜飼料）。
【請求項２３】
キシラン含有材料中のアラビノキシラン含有材料を分解するための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の前記酵素、又は、請求項１９に記載の酵素組成物若しくは飼料添加剤組成物の使用。
【請求項２４】
前記キシラン含有材料が、飼料又は家畜飼料；飼料成分；グレイン系材料；マッシュ；麦汁；麦芽；大麦麦芽；副原料、大麦マッシュ；及び、穀物粉からなる群のうち、１種類又はそれ以上から選択される、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記キシラナーゼ酵素が、エンドグルカナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．４）；セロビオヒドロラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．９１）、β−グルコシダーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．２１）、セルラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．７４）、リケナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、リパーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．３）、脂質アシルトランスフェラーゼ（一般に、Ｅ．Ｃ．２．３．１．ｘに分類される）、ホスホリパーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．４、Ｅ．Ｃ．３．１．１．３２、又はＥ．Ｃ．３．１．１．５）、フィターゼ（例えば、６−フィターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．３．２６）若しくは３−フィターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．３．８））、アミラーゼ、α−アミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）、他のキシラナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．８、Ｅ．Ｃ．３．２．１．３２、Ｅ．Ｃ．３．２．１．３７、Ｅ．Ｃ．３．１．１．７２、Ｅ．Ｃ．３．１．１．７３）、グルコアミラーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．３）、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ（例えば、スブチリシン（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．６２）若しくはバシロリシン（Ｅ．Ｃ．３．４．２４．２８）若しくはアルカリセリンプロテアーゼ（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．ｘ）若しくはケラチナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．４．ｘ．ｘ））、脱分枝酵素、クチナーゼ、エステラーゼ、及び／又は、マンナナーゼ（例えば、β−マンナナーゼ（Ｅ．Ｃ．３．２．１．７８））から選択される、１種類又はそれ以上の酵素と組み合わせて使用される、請求項２４に記載の使用。