【手続補正書】
【提出日】平成29年7月14日(2017.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｅｘ  ｖｉｖｏでＷｎｔタンパク質を含むリポソームに曝露された高齢骨移植片由来の細胞を含む骨移植片材料。
【請求項２】
前記Ｗｎｔタンパク質がＷｎｔ３ａタンパク質である、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項３】
前記高齢骨移植片が少なくとも５０歳のヒト被験体から得られる、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項４】
前記細胞が、ｅｘ  ｖｉｖｏでＷｎｔタンパク質を含むリポソームに曝露されていない細胞を含む骨移植片材料と比べて、Ａｘｉｎ２の発現の増大を有する、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項５】
前記細胞が、ｅｘ  ｖｉｖｏでＷｎｔタンパク質を含むリポソームに曝露されていない細胞を含む骨移植片材料と比べて、Ｒｕｎｘ２またはオステオカルシンの発現の増大を有する、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項６】
前記細胞が、ｅｘ  ｖｉｖｏでＷｎｔタンパク質を含むリポソームに曝露されていない細胞を含む骨移植片材料と比べて、Ｌｅｆ１の発現の増大を有する、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項７】
前記骨移植片材料が、レシピエントと比べて自家または同種のドナー由来の幹細胞を含む、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項８】
前記骨移植片材料が間葉系幹細胞、骨細胞または骨前駆細胞を含む、請求項１に記載の骨移植片材料。
【請求項９】
請求項１に記載の骨移植片材料をレシピエントへと移植する工程を含む、移植後の骨形成能を回復させるｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１０】
前記骨移植片材料がレシピエントと比べて自家性である幹細胞を含む、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１１】
前記高齢骨移植片が少なくとも５０歳のヒト被験体から得られる、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１２】
インキュベーション温度が３７℃を超えない、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１３】
インキュベーション時間が最長６時間または最長４時間である、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１４】
ｅｘ  ｖｉｖｏでＷｎｔタンパク質を含むリポソームに曝露された後の前記骨移植片材料がプログラム細胞死を減少させる、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１５】
前記レシピエントへの移植後の前記骨移植片材料が細胞生存を促進する、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１６】
前記レシピエントへの移植後の前記骨移植片材料が骨形成の増大を有する、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１７】
前記レシピエントへの移植後の前記骨移植片材料が、Ｗｎｔタンパク質を含むリポソームへの曝露の非存在下で得られた容量と比べて、１．５倍、約２倍、約３倍またはそれを超えて増大した骨容量を有する、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【請求項１８】
前記レシピエントへの移植後の前記骨移植片材料が有糸分裂活性の増大を有する、請求項９に記載のｅｘ  ｖｉｖｏの方法において使用するための骨移植片材料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
全ての態様および実施形態では、Ｗｎｔポリペプチドは、好ましくは、Ｗｎｔ３ａ、より好ましくは、ヒトＷｎｔ３ａ、最も好ましくは、ヒトリポソームＷｎｔ３ａ（Ｌ−Ｗｎｔ３ａ）である。さらなる態様では、本発明の方法は、骨移植片を、ヒト患者などのレシピエント被験体へと導入するステップをさらに含む。多様な実施形態では、骨移植片は、歯科インプラントを支持し、骨折を修復するのに使用することができる。別の実施形態では、骨移植片を使用して、罹患した骨を修復または再構築する。さらに別の実施形態では、骨移植片は、レシピエントの股関節、膝、または脊柱において使用される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
骨移植片内の細胞の生存を増強する方法であって、前記骨移植片を、移植時における前記骨移植片の細胞の生存を増強するのに十分な期間にわたり、有効用量のＷｎｔポリペプチドでのｅｘ  ｖｉｖｏ処置に供するステップを含む、方法。
（項目２）
骨移植片の骨形成潜在能を増強する方法であって、前記骨移植片を、移植時における前記骨移植片の細胞の生存を増強するのに十分な期間にわたり、有効用量のＷｎｔポリペプチドでのｅｘ  ｖｉｖｏ処置に供するステップを含む、方法。
（項目３）
治癒潜在能が低下した被験体に由来する骨移植片を再活性化するための方法であって、前記骨移植片を、移植時における前記骨移植片の細胞の生存を増強するのに十分な期間にわたり、有効用量のＷｎｔポリペプチドでのｅｘ  ｖｉｖｏ処置に供するステップを含む、方法。
（項目４）
前記骨移植片が、自家移植片である、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記骨移植片が、同種移植片である、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記骨移植片が、幹細胞集団を含む、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記骨移植片が、骨髄由来幹細胞集団を含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記骨移植片が、骨髄由来間葉系幹細胞を含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記骨移植片が、ヒト被験体に由来する、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記ヒト被験体が、老齢患者である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ヒト被験体が、少なくとも６０歳である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記ヒト被験体が、少なくとも６５歳である、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記ヒト被験体が、少なくとも７０歳である、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
前記ヒト被験体が、少なくとも７５歳である、項目１０に記載の方法。
（項目１５）
前記ヒト被験体が、少なくとも８０歳である、項目１０に記載の方法。
（項目１６）
前記ヒト被験体が、少なくとも８５歳である、項目１０に記載の方法。
（項目１７）
前記ヒト被験体の治癒潜在能が低下している、項目８に記載の方法。
（項目１８）
前記ヒト被験体が、喫煙者である、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記ヒト被験体が、糖尿病患者である、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記ヒト被験体が、栄養不良である、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ３ａである、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、ヒトＷｎｔ３ａである、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
前記Ｗｎｔポリペプチドが、ヒトリポソームＷｎｔ３ａ（ＬＷｎｔ３ａ）である、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記骨移植片を、レシピエント被験体へと導入するステップをさらに含む、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記レシピエント被験体が、ヒト患者である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記骨移植片が、歯科インプラントを支持するかまたは歯科インプラントの支持を増進するために使用される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記骨移植片が、骨折を修復するのに使用される、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
前記骨移植片が、罹患した骨を修復または再構築するのに使用される、項目２５に記載の方法。
（項目２９）
前記骨移植片が、前記レシピエントの股関節、膝、または脊柱において使用される、項目２７または２８に記載の方法。