(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも１種類のシクロスポリンと、
（ｂ）過酸化物を含まない少なくとも１種類の天然油と、
（ｃ）３−ｓｎ−ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを含む卵黄レシチン、３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを含む大豆レシチン、およびこれらの少なくとも部分的に水素添加された形態とからなる群から選択される少なくとも１つと、
（ｄ）薬理学的に投与可能な遊離脂肪酸のアルカリ塩と、
（ｅ）水と
を含む静脈内投与のための製剤であって、
（ｂ）に溶解している（ａ）が、脂肪粒子の内部に含まれており、該脂肪粒子において（ｂ）は（ｃ）の外被によって取り囲まれ、該脂肪粒子は水中に乳化しており、
ポリオキシエチレン−４０−キャスターオイルを含まない製剤。
【請求項２】
更に薬理学的に投与可能な遊離脂肪酸を含有することを特徴とする請求項１に記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項３】
シクロスポリンが、天然および／または合成シクロスポリンおよび／またはシクロスポリン誘導体で、望ましくはシクロスポリンＡおよび／またはシクロスポリンＧおよび／またはシクロスポリン誘導体ＳＤＺ ＩＭＭ １２５であることを特徴とする請求項１または２に記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項４】
３−ｓｎ−ホスファチジルコリン含有物質の形で、上記３−ｓｎ−ホスファチジルコリンが存在することを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項５】
上記製剤中の３−ｓｎ−ホスファチジルコリン含有量が、０．３〜４重量％、望ましくは０．６〜２．４重量％であることを特徴とする請求項１ないし４のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項６】
天然油として、大豆油および／またはサフラワー油および／または中鎖トリグリセリド（例えばココナツ油）および／またはコーン油および／または小麦胚芽油および／またはヒマワリ油および／またはオリーブ油および／または魚油を使用していることを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項７】
天然油として、中鎖トリグリセリドを使用することを特徴とする請求項６に記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項８】
天然油が、対寒冷処理および／または濃縮されていることを特徴とする請求項６に記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項９】
油中のシクロスポリン濃度が０．２〜７．０重量％、望ましくは１〜５重量％であることを特徴とする請求項１ないし８のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項１０】
上記製剤中、天然油が５〜４０重量％、望ましくは１０〜３０重量％存在することを特徴とする請求項１ないし９のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項１１】
遊離脂肪酸および／またはそのアルカリ塩の含有量が、０．０１〜０．１５重量％、望ましくは０．０２〜０．０６重量％であることを特徴とする請求項１ないし１０のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項１２】
上記製剤中の水分含有量が６０〜９５重量％、望ましくは７０〜９０重量％であることを特徴とする請求項１ないし１１のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項１３】
上記製剤を等張にするのに適した量のグリセリンを製剤が更に含んでいることを特徴とする請求項１ないし１２のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項１４】
天然油の中に溶解しているシクロスポリンが、天然油からなる脂肪粒子の内部に含まれており、該脂肪粒子が３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび／またはホスファチジルエタノールアミンの外被によって取り囲まれ、水中に乳化していることを特徴とする請求項１ないし１３のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤。
【請求項１５】
公知の方法で、シクロスポリンを天然油に溶解し、続いて３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび／またはホスファチジルエタノールアミンと水を用いて乳化することを特徴とする、請求項１ないし１４のいずれかに記載のシクロスポリン含有製剤の製造方法。
【請求項１６】
乳化前にシクロスポリンを完全に天然油に溶解させ、続いて３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび／または遊離脂肪酸および／またはそのアルカリ塩水溶液を用いて水中で乳化して粗エマルジョンを製造し、続いて混合物をエマルジョンにホモジナイズして、望ましくは粒子サイズが４ミクロン以下、特に１．５ミクロン以下のエマルジョンを製造することを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
シクロスポリン、天然油、３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび水の混合物が既に０．０１〜０．１５重量％の遊離天然脂肪酸および／またはそのアルカリ塩を含んでおり、乳化前にアルカリ液により、この混合物のｐＨ値が５〜１０、望ましくは７〜９に調整されていることを特徴とする、請求項１５または１６記載の方法。
【請求項１８】
上記製剤の滅菌処理が、回転式オートクレーブ内で加熱滅菌により行われることを特徴とする、請求項１５ないし１７のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）を含む新製剤、本製剤の製造方法、本製剤の静脈内投与による使用方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
シクロスポリンは、下等真菌から産生される環式オリゴペプチドで、バーゼルのサンドスＡＧの科学者によって発見された。特にシクロスポリンＡまたはシクロスポリンＢは、臓器移植において、免疫抑制剤として使用されている。更に、シクロスポリン誘導体「ＳＤＥ  ＩＭＭ  １２５」、Ｄ−セリン−８−シクロスポリンのヒドロキシエチル誘導体が、好まれて使用されている。他の疾患への適用例として、糖尿病、乾癬等があり、それ以外にも多くの自己免疫疾患（例えば、慢性関節リウマチ、内因性ブドウ膜炎、その他）が報告されている。
最も有名なシクロスポリンは、シクロスポリンＡ（化学式：Ｃ６２Ｈ１１１Ｎ１１０１２）である。
【０００３】
シクロスポリンＡは、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって真菌から白色無定型粉末として得られ、アセトンから１４８℃〜１５１℃の融点の白色針状の結晶を形成する。シクロスポリンＡ以外に、シクロスポリンＡからシクロスポリンＺまでの多くの他のシクロスポリンが知られている（Ｒｏｍｐｐｓ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｌｅｘｉｋｏｎ、第９版、８４１ページ〜８４３ページ）。
【０００４】
シクロスポリンの半合成誘導体が知られており、本発明により用いられる。これらは、化学的に互いに非常に近似している物質で、一部メチル化された１１のアミノ酸の環式ポリペプチドでできている。シクロスポリンは、アルコール、エーテル、アセトン、塩素化炭化水素、天然油（脂肪酸のトリグリセリド）に可溶である。
【０００５】
シクロスポリンＡは、経口投与用溶液として記載、市販されており、植物油とアルコールの混合物に溶解されている（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ、第２９版、米国薬局方ＸＸＩＩ、６１９）。
【０００６】
経口投与の他に、特に、臓器移植直後には、経口投与が不可能なため、シクロスポリンＡの静脈内投与も特に重要である。シクロスポリンは水性媒質には溶けないので、アルコールとポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルの混合物に溶解されており、投与前に食塩水またはブドウ糖溶液で希釈され、ゆっくりと静脈内に注入される。
【０００７】
注射用シクロスポリン濃縮液は、米国薬局方ＸＸＩＩ、６１９に記載されており、適当な植物油とアルコールの混合物に溶解された滅菌シクロスポリン溶液でなくてはならない。この供給形態は、注射に不適当であるばかりでなく、致命的となる事もある。もしもある油がこの形態で注射されると、重篤な塞栓症がただちに起こる事があるからである。
【０００８】
従って、静脈内投与可能なシクロスポリンＡは、サンディミュン（Ｒ）（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ（Ｒ））注入用濃縮液として市販されている前述のアルコールとポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルの濃縮液の形態だけが市販されている。シクロスポリンＡを溶解するために使用されている補助薬のアルコールとポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルは理想的でないばかりでなく、危険でもある。アルコールを含有しているため、肝臓病、アルコール中毒、癲癇、脳損傷の患者、妊婦、小児に対し、特に危険である。注射および注入液中のポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルは、特にアレルギー疾患に罹りやすい人、またはポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルを含む薬剤を少し前に既に注射または注入によって投与されていた人に、過敏症を引き起こす事がある。ポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルの投与によって、血圧低下、口唇および爪甲が青くなる循環障害、呼吸困難、一時的な皮膚の発赤を伴う潮紅等の徴候が現れる事がある。これらの反応は、時間および程度に差があり、致命的な状態を引き起こす事もある。更に、リポ蛋白分画パターンの病的状態への移行を伴う血中脂質の増加、血液の流動性の障害、赤血球の凝集能の障害が長期投与の場合には発生する事がある（Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ（Ｒ）、注射および注入液中のポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルを使用する場合の注意、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ａｐｏｔｈｅｋｅｒｚｅｉｔｕｎｇ  １２５、７６９（１９８５）、Ｐｈａｒｍａｋｏｐｏｅｉａ  Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ、第２９版（１９８９）、６１４−６１９）。ポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイル（例、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（Ｒ）ＥＬ）は、３５モルのエチレンオキシドと１モルのキャスターオイルを反応させて生成される非イオン性乳化剤である。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬは、天然油によって覆われておらず、逆に、水溶性である。
【０００９】
従って、アルコールもポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルも含まず、なお治療効果を十分に発揮できる量を含み、かつ投与が十分可能で、上述の副作用を伴わずに投与できるシクロスポリン含有注射液または注入液が利用できるようにする事は非常に重要である。
【００１０】
これらの問題は１０年以上も前から知られていたが、多大な努力にもかかわらず、これまで適当な静脈内投与用シクロスポリン含有注射液または注入液の利用に成功した者はない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、アルコールもポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルも含まず、静脈内投与に適したシクロスポリン含有製剤を供給する事に関するものである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明に従って、１種類ないし数種類のシクロスポリン、１種類以上の天然油、３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび／またはホスファチジルエタノールアミン、水を含むシクロスポリン含有製剤を供給する事によって、本目的が達成される。
【００１３】
従って、本発明によるシクロスポリン含有注射液または注入液の製造により、上述の問題は驚くべき解決を見るのである。この製剤は、天然トリグリセリドと水と３−ｓｎ−ホスファチジルコリンの静脈内投与可能な混合物中に、治療効果が十分な濃度のシクロスポリンが含まれている。更に非常に驚くべき利点として、投与に耐えられない補助剤のアルコールとポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルが含まれていない上に、本発明による製剤によって、治療効果も増大している点である。従って、シクロスポリンの投与量を減少させる事が可能となり、副作用の頻度と重篤度も低下する事になるのである。この事は、本発明による供給形態において、脂肪粒子の微小球中にシクロスポリンが溶解され、その中に取り入れられたシクロスポリンを含む脂肪粒子が、シクロスポリンの奏効部位、リンパ球に、不可欠な程度まで直接到達するという事によって、説明する事ができる。その部位に限り、その瞬間まで完全な状態を保っていた脂肪粒子の微小球は分解するのであろう。そこで、シクロスポリンは、その奏効部位に向かって直接、完全に遊離されるが、一方、これとは反対に、以前の通例の供給形態では全身に非特異的に分布される。シクロスポリンは、糖尿病、慢性関節リウマチ、乾癬、その他の自己免疫疾患等の多くの可能な適用範囲で効果を発揮するであろう。しかし、投与量依存性の副作用により、その適用には限界がある。本発明によるシクロスポリン含有製剤を、直接、そして目標を定めた形態で、実際の「奏効部位」、つまり免疫系まで運ぶ事ができるため、その適用の可能性は著しく増大する。
【００１４】
本発明による静脈内投与用製剤は、治療投与量の１種類または数種類のシクロスポリン、薬理学的に投与可能な油、３−ｓｎ−ホスファチジルコリンと、場合によっては遊離脂肪酸のアルカリ塩と、混合物を等張にするための物質、例えばグリセリン、および／またはソルビトールおよび／またはキシリトールを含んでいる。
【００１５】
非経口栄養用の静脈内投与可能な脂肪乳化剤とその製造法は、過去に報告されている（例えば、ＤＥ−ＰＳ  １  ２４９  ４５４、ＧＢ−ＰＳ  ２  ４０６
６２１、ＤＥ−ＯＳ  ３  ７２１  １３７、ＥＰ  ０７１  ９９５、ＤＥ−ＯＳ３０３２  ３００）。天然油と、乳化剤としてホスファチジルコリンを用いる脂肪乳化剤の製造法は、これらの報告に説明されている。
【００１６】
これらの脂肪乳化剤は水中油滴型乳化剤で、個々の脂肪小滴の大きさが４ミクロン以下であるため、塞栓症の危険性を伴わずにこれらの乳化剤を注入する事ができる。
【００１７】
油として、大豆油および／またはサフラワー油および／またはＭＴＣ油（中鎖トリグリセリド含有−ココナツ油）が使用され、ホスファチジルコリンは、大豆レシチンまたは好ましくは卵黄レシチンの形で使用される。油は、水溶液中に乳化され、その後、混合物を、粒子サイズ４ミクロン以下の乳化剤にホモジナイズする（ＤＥ−ＰＳ  １  ３４９  ４５４）。
【００１８】
シクロスポリンは天然油に溶けるため、その様な脂肪乳化剤（商品名：Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｒ），Ｌｉｐｏｖｅｎ｛ｓ（Ｒ），Ｌｏｐｏｓｙｎ（Ｒ））に結晶シクロスポリンを加えて単に溶解する事が当然と考えられた。しかし、十分攪拌しても、シクロスポリンの殆ど大部分は不溶性の結晶の形で存在するので、これは成功しなかった。これは、シクロスポリンが脂質の膜を通過できないという事実に疑いもなく起因するものである。すなわち、脂肪乳化剤の脂肪小滴に「シクロスポリンを附加する」事は不可能である。従って、治療には不十分な濃度の全く不完全な濃度のシクロスポリンと溶液中の固体の粒子が得られてしまい、これは患者に静脈内投与されると致命的な可能性もある。シクロスポリン含有濃縮液中に含まれる補助剤のアルコールとポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルが有害である事は以前から知られているが、これまでのところその問題の解決に成功した者はない。
【００１９】
今、本発明により、アルコールとポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルを含まない静脈内投与可能なシクロスポリンを、天然の薬理学的に投与可能な油、３−ｓｎ−ホスファチジルコリン、水の混合液中に乳化したシクロスポリン乳化剤の形で、生産する事が驚くべき事に可能となった。決定的な事は、第一に、シクロスポリンが使用した油に完全に溶解し、それから、望ましくは卵黄レシチンの形で３−ｓｎ−ホスファチジルコリンによって乳化され、得られた混合物が平均４ミクロン以下の粒子、望ましくは平均０．２〜０．７μｍの粒子サイズの乳化剤にホモジナイズされる事である。
【００２０】
それに続く滅菌処理後に、治療に適用できる濃度のシクロスポリンを含む安定した注射液または注入液が得られる。
【００２１】
天然および合成シクロスポリン、例えば、公知のシクロスポリンＡからＺを、シクロスポリンとして使用する事ができるが、シクロスポリンＡとシクロスポリンＧおよびシクロスポリン誘導体ＳＤＺ  ＩＭＭ  １２５が望ましい。
【００２２】
大豆油、サフラワー油（サフラワー種子油）、ココナツ油（ＭＴＣ油）、魚油、コーン油、オリーブ油等を天然油として使用することができる。大豆油が望ましい。使用する油は、できるだけ過酸化物を含んではならない。以前の報告より公知のポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルは、合成誘導体で、本発明に使用する事はできない。
【００２３】
使用されるシクロスポリン、例えばシクロスポリンＡが、最初に油、例えば大豆油に溶解される。油中のシクロスポリン濃度は一般に０．２〜７．０重量％であり、１〜５重量％が望ましい。溶解はシクロスポリンを油中に混合、撹拌する公知の方法で行われる。酸化を防止するため、酸素が存在しないように注意しなくてはならない。
【００２４】
酸素を含まない水が、シクロスポリンを含む油性溶液に加えられ、３−ｓｎ−ホスファチジルコリンが、望ましくは卵黄レシチンおよび／または大豆レシチンの形で、乳化剤として加えられる。一般に、油１００重量部に対し、４〜２０重量部の３−ｓｎ−ホスファチジルコリンが加えられる。
【００２５】
６０〜８５重量％の３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを含む卵黄レシチンが特に望ましい。３−ｓｎ−ホスファチジルコリンは、一部水素添加されていてもよい。
【００２６】
部分的に水素添加された３−ｓｎ−ホスファチジルコリンまたは水素添加された３−ｓｎ−ホスファチジルコリンの３−ｓｎ−ホスファチジルコリン供給源として、卵黄レシチンおよび／または大豆レシチンが望ましく、特に卵黄レシチンが望ましい。３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび／または部分的に水素添加された３−ｓｎ−ホスファチジルコリンおよび／または水素添加された３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを６０重量％以上含有するレシチンが特に適している。
【００２７】
必要な場合には、ｐＨ値を５〜９に調製し、乳化とその後のホモジナイゼーションを促進するために、６〜２６個の炭素原子を有する遊離脂肪酸のアルカリ塩も加える事ができる。パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノレイン酸、リノレン酸のナトリウム塩またはカリウム塩が特に望ましい。
【００２８】
シクロスポリン、天然油、３−ｓｎ−ホスファチジルコリン、水、場合によっては遊離脂肪酸のアルカリ塩を含む混合物が、油の含有量が総重量の５〜４０％になるまで、水で希釈される。
【００２９】
激しく攪拌する事によって、望ましくはＵｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを用いて、粗エマルジョンが生成される。
【００３０】
溶液を確実に等張にするために、対応する量のグリセリンおよび／またはソルビトールおよび／またはキシリトールを加える事ができる。
【００３１】
この粗エマルジョンを、全ての粒子サイズが４ミクロン以下、望ましくは全粒子の９８％について１．５ミクロン以下のエマルジョンが得られるまで、１００〜５００バールの高圧ホモジナイザー内で数回ホモジナイズする。
【００３２】
その後、水を加え、エマルジョンを目的の濃度に希釈する。それから、エマルジョンを瓶またはアンプル等の適当な容器に充填し、加熱滅菌する。
【００３３】
静脈内投与可能な形態の製剤に含まれるシクロスポリンは、完全に溶解した形で、供給される事が通例であり、望ましい。油の中に溶解しているシクロスポリンは、脂肪粒子の内部に含まれており、油は実質上リン脂質（３−ｓｎ−ホスファチジルコリン）から成る外被によって取り囲まれている。製造過程のシクロスポリンは非常に濃度が高いため、シクロスポリンの一部だけが溶解した形態で存在するが、一部は脂肪粒子の内側に固体として存在する。しかし、この様なシクロスポリンも使用する事は可能である。固体のシクロスポリンは、脂肪粒子を取り囲んでいる外被を通過する事ができないため、固体のシクロスポリンも注入が可能となる。
【００３４】
図１に、シクロスポリンを含む本発明による脂肪粒子の構造が図示されている。
【００３５】
このような形態の薬剤が、次のような本発明の方法により製造される。すなわち、本発明により使用される油を、約５０〜７０℃に加熱し、次にこの高い温度で溶液が殆ど飽和状態になるまで、シクロスポリンを加える。そして、このような本発明の製造方法により、静脈内投与用製剤が製造される。
【００３６】
最初に使用されるシクロスポリンの一部は、室温または低温で長期間保存すると、沈澱する事がある。しかし、この沈澱した微小結晶のシクロスポリンは、脂肪粒子の中にとどまり、固体結晶として、水相の中に入る事はない。従って、本発明による高濃度の薬品製剤を製造する事ができ、これは特に、使用前に希釈して用いる濃縮液として適している。
【００３７】
以下の具体例の実施例は、本発明による混合物とその製造方法を詳細に記述したものである。しかし、本発明はこれに限定されない。
【００３８】
【実施例】
（実施例１）
１０．０ｋｇの対寒冷処理を行った大豆油（中性のｐＨ値、過酸化物を含まない）に窒素ガスを通し、攪拌しながら約５０℃に加熱し、更に窒素ガスを通す。対寒冷処理を行った大豆油とは、使用前に−１０℃以下に冷却し、不溶性部分を冷却した状態で沈澱させ、それを濾過して取り除いたものである。
ここで、この大豆油に、４００ｇのシクロスポリンＡを加え、攪拌して溶解する。
２．５ｋｇのグリセリンと１０  Ｌの水を第二の容器に入れる。混合物の酸素含有量が０．５ｍｇ／Ｌ以下になるまで、窒素ガスを通す。
【００３９】
約８０％の３−ｓｎ−ホスファチジルコリンと約１２％のホスファチジルエタノールアミン（セファリン）を含む１．２ｋｇの卵黄レシチン（ヨウ素数６０〜７０）と４０ｇのオレイン酸ナトリウムを加える。
約５０℃でＵｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを用いて激しく攪拌し、粗エマルジョンを製造する。
ここで、シクロスポリンＡを溶解した大豆油を、孔サイズが約５０ミクロンの耐脂質性で防菌性のフィルターを通して第二の容器に移し、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを用いて約５０℃で更に１０分間激しく攪拌する。ｐＨ値をチェックする。ｐＨ値は５〜９でなくてはならず、７．０〜８．５である事が望ましい。そうでない場合は、少量のオレイン酸ナトリウムを更に加える事ができる。
得られた粗エマルジョンを特殊鋼フィルター（孔のサイズが５〜５０ミクロン）を通して濾過し、続いて３つのピストンを装着した２段階の高圧ホモジナイザーでホモジナイズする（第１段階は１００バール、第２段階は４００バール）。必要なホモジナイゼーション圧は、油滴の汚染と沈着を避けるために粗エマルジョンではなく、注射用水で上げる。
【００４０】
目的の粒子サイズが得られるまで、ホモジナイゼーション過程を繰り返す。４ミクロン以上の粒子が存在してはならない。粒子の直径は平均０．２〜０．６ミクロンである。
十分に使用可能な粒子サイズにするために、一般にホモジナイゼーション過程を４回繰り返す必要がある。各ホモジナイゼーション過程の後に、エマルジョンを３０℃〜５０℃に冷却しなくてはならない。
エマルジョンを５７Ｌの酸素を含まない注射用水に加える。酸素含有量が０．５ｍｇ／Ｌ以下になるまで、再度窒素ガスを通す。
【００４１】
４００バールで、追加用水として１８．５Ｌの注射用水をホモジナイザーに通してから、前述の総容量に加える。酸素含有量が０．５ｍｇ／Ｌ以下になるまで、バッチ全体に続けて窒素ガスを通す。ガラス瓶に充填する前に、平均孔サイズが５ミクロンの特殊鋼フィルターを通して濾過を行う。濾過圧は、エマルジョンが破壊するのを防ぐため、０．２バールを超えてはならない。
粒子サイズと粒子の分布は、顕微鏡下またはＣｏｕｌｔｅｒカウンターで決定される。
【００４２】
【表１】
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【００４３】
エマルジョンを１００ｍＬのガラス瓶に充填する。充填前に、瓶に窒素ガスを通す。使用する窒素をマイナス２０℃〜３０℃に冷却すると、窒素ガスが瓶の底まで下がり易くなるため有利である。エマルジョンを瓶に充填している間も、続けて瓶にガスを通さなくてはならない。
得られたエマルジョンを１２１℃で２０分間加熱滅菌する。所謂ローテーション式オートクレーブを使用するのが有利である。ローテーション式オートクレーブの中で、瓶は滅菌中に高い所をゆっくりと回転する。これによって、充填と冷却に必要な時間が削減され、粒子サイズの変化を予防できる。１００ｍＬ当たり４００ｍｇのシクロスポリンＡを含む滅菌済の静脈注射可能なエマルジョンが得られる。滅菌後の粒子の分布は以下の通りである。
【００４４】
【表２】
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【００４５】
この方法で得られる滅菌エマルジョンは、２〜６時間の間にゆっくりと患者に注入する事が可能で、合計４００ｍｇのシクロスポリンＡが治療に最適な最大投与量として注入される。
注入液は１００ｍＬ当たり以下を含有する。
【００４６】
【表３】
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【００４７】
（実施例２）
大豆油の代わりに１８％のエイコサペンタノン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）と１２％のドコサヘキサン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ  ａｓｉｄ）を含む魚油濃縮液を用いて実施例１の過程を繰り返す。１００ｍＬ当たり以下の組成の静脈内投与用製剤が得られる。
【００４８】
【表４】
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【００４９】
【表５】
0003569534.tif 000006
【００５０】
（実施例３）
実施例１に準じた過程を繰り返すが、２５０ｇのシクロスポリンＡを１０ｋｇの大豆油に量り入れる。
１００ｍＬ当たり以下の組成の静脈内投与用製剤は、注射用水を加えて１００ｍＬとする。
【００５１】
【表６】
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【００５２】
【表７】
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【００５３】
（実施例４）
実施例１において使用される卵黄レシチンの代わりに、３−ｓｎ−ホスファチジルコリン含有量が約７０％、セファリン含有量が約２０％の卵黄レシチンを用いて、実施例１を繰り返す。４０ｍｇのオレイン酸ナトリウムの代わりに、５０ｍｇのオレイン酸ナトリウムを使用する。１００ｍＬ当たり以下の組成の静脈内投与用製剤が得られる。
【００５４】
【表８】
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【００５５】
【表９】
0003569534.tif 000011
【００５６】
（実施例５）
卵黄レシチンの代わりに、ヨウ素数３５の（実施例１におけるヨウ素数は６０〜７０）約８０％の部分的に水素添加された３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを含む部分的に水素添加された卵黄レシチンと５０ｇのオレイン酸ナトリウムを用いて、実施例１を繰り返す。１００ｍＬ当たり以下の組成の静脈内投与用製剤が得られる。
【００５７】
【表１０】
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【００５８】
【表１１】
0003569534.tif 000013
0003569534.tif 000014
【００５９】
（実施例６）
卵黄レシチンの代わりに、約７５％の３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを含む大豆レシチンを用いて、実施例１を繰り返す。
【００６０】
（実施例７）
１０．０ｋｇの対寒冷処理を行った大豆油に窒素ガスを通し、攪拌しながら約５０℃〜６０℃に加熱する。大豆油中の遊離脂肪酸の定量によって、遊離脂肪酸含有量は２．５ｍｅｑ／Ｌであった。ｐＨ値は約３．５〜４．５である。
【００６１】
５００ｇのシクロスポリンＡを加え、攪拌しながら溶解する。１０Ｌの注射用水と２．５ｋｇのグリセリン、約７５％の３−ｓｎ−ホスファチジルコリンを含む１．０ｋｇの卵黄レシチンを約５０℃の温度で加える。激しく攪拌して、粗エマルジョンを生成する。攪拌は、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを用いるのが望ましい。１０％水酸化ナトリウム溶液を加えて、ｐＨ値を７．５〜８．５に調節する。
【００６２】
得られた粗エマルジョンを孔サイズ約３０ミクロンの特殊鋼のフィルターを通して濾過する。
続いて、３つのピストンを装着した２段階の高圧ホモジナイザーでホモジナイズする（第１段階は１００バール、第２段階は４５０バール）。必要なホモジナイゼーション圧は、注射用水を用いて上げる。
３０℃〜６０℃で、ホモジナイゼーション過程を全部で４回繰り返す。
【００６３】
１０Ｌの注射用水をエマルジョンに加え、酸素含有量が０．５ｍｇ／Ｌ以下になるまで、撹拌しながら窒素ガスを通す。この時点で、４５０バールで、追加用水として６．５Ｌの注射用水をホモジナイザーに通し、総容量に加える。酸素含有量が０．５ｍｇ／Ｌ以下になるまで、窒素ガスを通す。
平均孔サイズが５ミクロンの特殊鋼フィルターを通して濾過を行う。濾過圧が、０．２バールを超えない様に注意しなくてはならない。
【００６４】
エマルジョンを２０ｍＬのアンプルに充填し、１２０℃で２０分間滅菌する。
粒子サイズの検査によって、以下の分布が示された。
【００６５】
【表１２】
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【００６６】
得られた静脈内投与用製剤は、アンプル（２０ｍＬ）当たり２５０ｍｇのシクロスポリンＡを含有している。投与前に、アンプルの中身を市販の１０％脂肪エマルジョンに、１：５〜１：１０の比率で加えて希釈してから、それをゆっくりと注入する。
【００６７】
（実施例８）
５００ｇのシクロスポリンＡに代わり、２５０ｇのシクロスポリンＡと２５０ｇのシクロスポリンＧを用いて、実施例７を繰り返す。
そこでは、２０ｍＬのアンプルは、１２５ｍｇのシクロスポリンＡと１２５ｍｇのシクロスポリンＧを含有する。
【００６８】
（実施例９）
シクロスポリン含有製剤は、シクロスポリンＡに代わり、１５０ｇのＳＤＺ
ＩＭＭ  １２５、Ｄ−セリン−８−シクロスポリンのヒドロキシエチル誘導体を用いて、実施例１に記載されているように製造する。ＳＤＺ  ＩＭＭ  １２５の生産法と構造は、Ｇ．Ｂａｕｍａｎｎ等、Ｔｒａｎｓｏｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．４、補遺２（１９９２）、４３−４８ページおよびＰ．Ｃ．Ｈｉｅｓｔａｎｄ等、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．４、補遺２、３１−３８ページ（１９９２）に述べられている。１００ｍＬのエマルジョン当たり既述のシクロスポリン誘導体１５０ｍｇを含む静脈内投与が可能な滅菌エマルジョンが得られる。
【００６９】
【発明の効果】
本発明により、アルコールもポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルも含まず、静脈内投与に適したシクロスポリン含有製剤を供給することが可能となった。アルコールを含まないため、肝臓病患者等への危険性がなく、ポリ（オキシエチレン）−４０−キャスターオイルを含まないため、過敏症等を引き起こすおそれもない。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明によるシクロスポリンを含む脂肪粒子の概略図である。
【符号の説明】
１  外被（ホスフォリピッド＝３−ｓｎ−ホスファチジルコリン）
２  シクロスポリン微小結晶
３  油の中に溶解しているシクロスポリン
【図１】
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