【手続補正書】
【提出日】平成29年1月25日(2017.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記細胞の調製物が、皮膚細胞、臍帯血、末梢血または骨髄に由来する多能性細胞に由来する、調製物。
【請求項２】
調製物の少なくとも９５％がＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞である細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記オリゴデンドロサイト前駆細胞が、オリゴデンドロサイト以外の分化体細胞の１つまたは複数のエピジェネティックマーカーを保持する、調製物。
【請求項３】
前記調製物の前記オリゴデンドロサイト前駆細胞が、ＳＯＸ１０、ＣＤ９、またはこれらの組み合わせを更に発現する、請求項１または２に記載の調製物。
【請求項４】
前記細胞の調製物が、ＭＡＰ２抗体によって定められるニューロンを含有しない、請求項１または２に記載の調製物。
【請求項５】
１％未満の残留多能性細胞を含有する、請求項１または２に記載の調製物。
【請求項６】
Ａ２Ｂ５＋／ＰＳＡ−ＮＣＡＭ−選別胎児ヒト組織由来オリゴデンドロサイト前駆細胞の調製物のインビボミエリン形成効率を超えるインビボミエリン形成効率を有する、請求項１または２に記載の調製物。
【請求項７】
移植時に、Ａ２Ｂ５＋／ＰＳＡ−ＮＣＡＭ−選別胎児ヒト組織由来オリゴデンドロサイト前駆細胞の調製物で達成可能なインビボミエリン形成密度を超えるインビボミエリン形成密度を達成することができる、請求項１または２に記載の調製物。
【請求項８】
Ａ２Ｂ５＋／ＰＳＡ−ＮＣＡＭ−選別胎児ヒト組織由来オリゴデンドロサイト前駆細胞の調製物で達成可能な生存率と比較して、移植時に、ミエリン形成欠損哺乳動物において改善された生存率を達成することができる、請求項１または２に記載の調製物。
【請求項９】
前記１つまたは複数のエピジェネティックマーカーが、体性皮膚細胞の１つもしくは複数のエピジェネティックマーカーまたは１つもしくは複数のメチル化マーカーを含む、請求項２に記載の調製物。
【請求項１０】
ミエリンの喪失またはオリゴデンドロサイトの喪失によって媒介される状態を有する対象を治療するための、請求項１または２に記載の調製物を含む薬学的組成物。
【請求項１１】
オリゴデンドロサイト前駆細胞の濃縮調製物を生成する方法であって、以下の段階を含む、方法：
前記細胞が胚様体を形成するのに有効な条件下で、誘導多能性幹細胞の集団を培養する段階と、
前記胚様体の細胞の神経上皮細胞への分化、及び神経上皮細胞コロニーの形成を誘導する段階と、
前記神経上皮細胞コロニーを、オリゴデンドロサイト前駆細胞への分化を誘導するのに有効な条件に曝露する段階であって、それによりＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０α／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞の濃縮調製物を形成する、段階。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法によって生成される、調製物。
【請求項１３】
ミエリンの喪失またはオリゴデンドロサイトの喪失によって媒介される状態を有する対象を治療するための、請求項１２に記載の調製物を含む薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本明細書に記載するように、出願人は、皮膚由来ヒトｉＰＳＣからの、ミエリン形成オリゴデンドロサイトの高度濃縮調製物のスケーラブルな生成のための、堅固かつ確実なプロトコルを開発した。本明細書で実証するように、ｉＰＳＣは、インビトロでの神経前駆細胞、グリア前駆細胞、オリゴデンドロサイト、及びアストロサイト分化の連続のステージを通して確実に進行する。不規則な分化が回避されるため、集団のＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα＋細胞は、臨床的使用前にＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαに基づく選別を使用して更に精製及び濃縮され得る、オリゴデンドロサイト前駆細胞である。本発明のｈｉＰＳＣ由来オリゴデンドロサイト前駆細胞のミエリン形成の適格性は、先天性ミエリン形成不全の遺伝子モデルであるシバラーマウスモデルにおいて評価された。これらの細胞は、腫瘍形成または異所性非グリア分化いずれの証拠もなく、ミエリン形成不全のシバラーの脳で効率的かつ堅固にミエリン形成する。移植された動物はそれらの未処置の対応物よりも有意に長く生存し、さもなければ多数の動物は早期の致死率を明らかに免れ、これはｉＰＳＣに基づく計画を介した、致命的な遺伝性障害からの顕著な臨床的救済であった。したがって、正常な条件下で、ヒトｉＰＳＣは、オリゴデンドロサイト前駆細胞の実現可能かつ有効な供給源であり、それらに由来するミエリン形成中枢オリゴデンドロサイトは、中枢ミエリンの障害の治療のための、患者特異的な治療的ベクターとしての使用に適する。
[本発明1001]
ＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記細胞の調製物が、皮膚細胞に由来する多能性細胞に由来する、調製物。
[本発明1002]
ＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記細胞の調製物が、臍帯血に由来する多能性細胞に由来する、調製物。
[本発明1003]
ＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記細胞の調製物が、末梢血に由来する多能性細胞に由来する、調製物。
[本発明1004]
ＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記細胞の調製物が、骨髄に由来する多能性細胞に由来する、調製物。
[本発明1005]
調製物の少なくとも９５％がＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞である細胞の調製物であって、前記調製物が、ＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞を含み、前記オリゴデンドロサイト前駆細胞が、オリゴデンドロサイト以外の分化体細胞の１つまたは複数のエピジェネティックマーカーを保持する、調製物。
[本発明1006]
前記調製物の前記細胞が、ヒト細胞である、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1007]
前記調製物の前記オリゴデンドロサイト前駆細胞が、ＳＯＸ１０、ＣＤ９、またはこれらの組み合わせを更に発現する、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1008]
前記細胞の調製物が、ＭＡＰ２抗体によって定められるニューロンを含有しない、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1009]
１％未満の残留多能性細胞を含有する、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1010]
前記細胞の調製物の１％未満が、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、またはＳＳＥＡ４タンパク質のいずれかを発現する、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1011]
Ａ２Ｂ５＋／ＰＳＡ−ＮＣＡＭ−選別胎児ヒト組織由来オリゴデンドロサイト前駆細胞の調製物のインビボミエリン形成効率を超えるインビボミエリン形成効率を有する、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1012]
移植時に、Ａ２Ｂ５＋／ＰＳＡ−ＮＣＡＭ−選別胎児ヒト組織由来オリゴデンドロサイト前駆細胞の調製物で達成可能なインビボミエリン形成密度を超えるインビボミエリン形成密度を達成することができる、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1013]
Ａ２Ｂ５＋／ＰＳＡ−ＮＣＡＭ−選別胎児ヒト組織由来オリゴデンドロサイト前駆細胞の調製物で達成可能な生存率と比較して、移植時に、ミエリン形成欠損哺乳動物において改善された生存率を達成することができる、本発明1001〜1005のいずれかの調製物。
[本発明1014]
前記調製物の少なくとも９０％が、オリゴデンドロサイト前駆細胞を含む、本発明1005の調製物。
[本発明1015]
前記調製物の少なくとも９５％が、オリゴデンドロサイト前駆細胞を含む、本発明1005の調製物。
[本発明1016]
前記１つまたは複数のエピジェネティックマーカーが、体性皮膚細胞の１つまたは複数のエピジェネティックマーカーを含む、本発明1005の調製物。
[本発明1017]
前記１つまたは複数のエピジェネティックマーカーが、１つまたは複数のメチル化マーカーを含む、本発明1005の調製物。
[本発明1018]
前記調製物の細胞の９５％超が、ＣＤ１４０ａ／ＰＤＧＦＲα陽性細胞である、本発明1005の調製物。
[本発明1019]
ミエリンの喪失またはオリゴデンドロサイトの喪失によって媒介される状態を有する対象を治療する方法であって、
前記状態の治療に有効な条件下で、前記対象に本発明1001〜1005のいずれかの調製物を投与する段階を含む、方法。
[本発明1020]
前記調製物の前記細胞が、ヒト細胞である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記調製物の前記オリゴデンドロサイト前駆細胞が、ＳＯＸ１０、ＣＤ９、またはこれらの組み合わせを更に発現する、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記細胞の調製物が、ＭＡＰ２抗体によって定められるニューロンを含有しない、本発明1019の方法。
[本発明1023]
前記調製物が、１％未満の残留多能性細胞を含有する、本発明1019の方法。
[本発明1024]
前記細胞の調製物の１％未満が、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、またはＳＳＥＡ４タンパク質のいずれかを発現する、本発明1019の方法。
[本発明1025]
前記調製物が、脳、脳幹、脊髄、またはこれらの組み合わせのうちの１つ以上の部位に投与される、本発明1019の方法。
[本発明1026]
前記調製物が、脳室内に、脳梁内に、または実質内に投与される、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記調製物が、前記対象に由来する、本発明1019の方法。
[本発明1028]
前記投与する段階が、前記調製物の前記オリゴデンドロサイト前駆細胞による脳脊髄軸全体への移植を達成するのに有効な条件下で実行される、本発明1019の方法。
[本発明1029]
前記状態が、自己免疫性脱ミエリン化状態である、本発明1019の方法。
[本発明1030]
前記自己免疫性脱ミエリン化状態が、多発性硬化症、視神経脊髄炎、横断性脊髄炎、及び視神経炎からなる群から選択される、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記状態が、血管性白質脳症である、本発明1019の方法。
[本発明1032]
前記血管性白質脳症が、皮質下梗塞、糖尿病性白質脳症、高血圧性白質脳症、加齢に伴う白質疾患、及び脊髄損傷からなる群から選択される、本発明1031の方法。
[本発明1033]
前記状態が、放射線誘導脱ミエリン化状態である、本発明1019の方法。
[本発明1034]
前記状態が、小児白質ジストロフィーである、本発明1019の方法。
[本発明1035]
前記小児白質ジストロフィーが、ペリツェウス・メルツバッハー病、テイ・サックス病、サンドホフ病ガングリオシドーシス、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症、ニーマン・ピックＡ病、副腎白質ジストロフィー、カナバン病、消失白質疾患、及びアレキサンダー病からなる群から選択される、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記状態が、脳室周囲白質軟化症または脳性麻痺である、本発明1019の方法。
[本発明1037]
オリゴデンドロサイト前駆細胞の濃縮調製物を生成する方法であって、以下の段階を含む、方法：
前記細胞が胚様体を形成するのに有効な条件下で、誘導多能性幹細胞の集団を培養する段階と、
前記胚様体の細胞の神経上皮細胞への分化、及び神経上皮細胞コロニーの形成を誘導する段階と、
前記神経上皮細胞コロニーを、オリゴデンドロサイト前駆細胞への分化を誘導するのに有効な条件に曝露する段階であって、それによりＯＬＩＧ２及びＣＤ１４０α／ＰＤＧＦＲαを同時発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞の濃縮調製物を形成する、段階。
[本発明1038]
前記濃縮調製物の前記オリゴデンドロサイト前駆細胞が、ＳＯＸ１０、ＣＤ９、またはこれらの組み合わせを更に発現する、本発明1037の方法。
[本発明1039]
オリゴデンドロサイト前駆細胞の前記濃縮調製物から、ＣＤ１４０α／ＰＤＧＦＲα陽性細胞を分離する段階であって、それによりＣＤ１４０α／ＰＤＧＦＲαを発現するオリゴデンドロサイト前駆細胞の精製調製物を生成する、段階
を更に含む、本発明1037の方法。
[本発明1040]
前記神経上皮細胞が、ＰＡＸ６及びＳＯＸ１を同時発現する、本発明1037の方法。
[本発明1041]
前記誘導多能性幹細胞が、ヒト誘導多能性幹細胞である、本発明1037の方法。
[本発明1042]
非多能性細胞の集団を多能性状態に再プログラミングする段階であって、それにより誘導多能性幹細胞の前記集団を形成する、段階
を更に含む、本発明1037の方法。
[本発明1043]
非多能性細胞の前記集団が、皮膚細胞、臍帯血細胞、末梢血細胞、または骨髄細胞の集団を含む、本発明1042の方法。
[本発明1044]
前記曝露する段階が、
前記神経上皮細胞を、ＯＬＩＧ２＋／ＮＫＸ２．２−であるプレオリゴデンドロサイト前駆細胞に変換することと、
前記ＯＬＩＧ２＋／ＮＫＸ２．２−プレオリゴデンドロサイト前駆細胞を、ＯＬＩＧ２＋／ＮＫＸ２．２＋プレオリゴデンドロサイト前駆細胞に形質転換することと、
前記ＯＬＩＧ２＋／ＮＫＸ２．２＋プレオリゴデンドロサイト前駆細胞からオリゴデンドロサイト前駆細胞の前記濃縮集団を形成することと
を含む、本発明1037の方法。
[本発明1045]
オリゴデンドロサイト前駆細胞の前記濃縮調製物を、オリゴデンドロサイト及び／またはアストロサイトに分化させる段階
を更に含む、本発明1037の方法。
[本発明1046]
本発明1037の方法によって生成される、調製物。
[本発明1047]
本発明1039の方法によって生成される、調製物。
[本発明1048]
本発明1045の方法によって生成される、調製物。
[本発明1049]
ミエリンの喪失またはオリゴデンドロサイトの喪失によって媒介される状態を有する対象を治療する方法であって、
前記状態を治療するのに有効な条件下で、前記対象に、本発明1046または1047の調製物を投与する段階を含む、方法。
[本発明1050]
前記調製物が、脳、脳幹、脊髄、またはこれらの組み合わせのうちの１つ以上の部位に投与される、本発明1049の方法。
[本発明1051]
前記調製物が、脳室内に、脳梁内に、または実質内に投与される、本発明1050の方法。
[本発明1052]
前記調製物が、前記対象に由来する、本発明1049の方法。
[本発明1053]
前記投与する段階が、前記調製物の前記オリゴデンドロサイト前駆細胞による脳脊髄軸全体への移植を達成するのに有効な条件下で実行される、本発明1049の方法。
[本発明1054]
前記状態が、自己免疫性脱ミエリン化状態である、本発明1049の方法。
[本発明1055]
前記自己免疫性脱ミエリン化状態が、多発性硬化症、視神経脊髄炎、横断性脊髄炎、及び視神経炎からなる群から選択される、本発明1054の方法。
[本発明1056]
前記状態が、血管性白質脳症である、本発明1049の方法。
[本発明1057]
前記血管性白質脳症が、皮質下梗塞、糖尿病性白質脳症、高血圧性白質脳症、加齢に伴う白質疾患、及び脊髄損傷からなる群から選択される、本発明1056の方法。
[本発明1058]
前記状態が、放射線誘導脱ミエリン化状態である、本発明1049の方法。
[本発明1059]
前記状態が、小児白質ジストロフィーである、本発明1049の方法。
[本発明1060]
前記小児白質ジストロフィーが、ペリツェウス・メルツバッハー病、テイ・サックス病、サンドホフ病ガングリオシドーシス、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症、ニーマン・ピックＡ病、副腎白質ジストロフィー、カナバン病、消失白質疾患、及びアレキサンダー病からなる群から選択される、本発明1059の方法。
[本発明1061]
前記状態が、脳室周囲白質軟化症または脳性麻痺である、本発明1049の方法。