【手続補正書】
【提出日】平成29年7月27日(2017.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−１０の産生を誘導する能力を有するペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）生細胞１０４から１０１２ｃｆｕ／ｇを含む細菌性組成物であって、
ペディオコッカス  ペントサセウス生細胞の存在下でのＴＨＰ−１マクロファージによる、正規化された増加として表されるインターロイキン−１０の産生が、陰性コントロールである、ペディオコッカス  ペントサセウス生細胞の非存在下でのＴＨＰ−１マクロファージによるインターロイキン−１０の産生よりも高く、
前記正規化された増加が
（ａ）Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｎｇｌａｎｄの細胞収集物、カタログ番号８８０８１２０１から得たＴＨＰ−１単球細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び最終濃度０．１６μＭのホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）を含むロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ）１６４０培地において増殖させることによってＴＨＰ−１単球をマクロファージに分化させる工程、
（ｂ）２４ウエルＥＬＩＳＡプレートにおいて１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地中で、ＴＨＰ−１マクロファージを、最終濃度マクロファージ１０６個／ウエルまで増殖させる工程、
（ｃ）最終濃度１０ｎｇ／ｍｌのリポ多糖類（ＬＰＳ）と共にＴＨＰ−１マクロファージを２．５時間インキュベートし、ＴＨＰ−１マクロファージをダルベッコリン酸緩衝生理食塩水培地（Ｄ−ＰＢＳ）で洗浄する工程、
（ｄ）Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）培地中、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気中で一晩増殖させることによってペディオコッカス  ペントサセウス生細胞の培養物を用意する工程、
（ｅ）各ＥＬＩＳＡウエルに１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０培地５００μｌ及び最終比２５：１、すなわち、ペディオコッカス  ペントサセウス（ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）生細胞２．５×１０７ｃｆｕ：ＴＨＰ−１マクロファージ１０６個を得るために適切な量のペディオコッカス  ペントサセウス生細胞の希釈物を加える工程、
（ｆ）ＴＨＰ−１マクロファージを、ペディオコッカス  ペントサセウス生細胞と共に２．５時間、３７℃で、又は陰性コントロールとして同じ条件下でペディオコッカス  ペントサセウス生細胞を含まずに、インキュベートする工程、
（ｇ）ＴＨＰ−１マクロファージをＤ−ＰＢＳ培地で洗浄してペディオコッカス  ペントサセウス生細胞を除去し、続いて５０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、１０μｇ／ｍｌアンピシリン及び１２μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを補充した１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地をＴＨＰ−１マクロファージに加え、３７℃、５−７％ＣＯ２でインキュベートし、５及び２４時間でアリコートを取る工程、
（ｈ）アリコートを遠心分離し、フローサイトメトリーによるインターロイキン−１０定量化のために上清をアッセイする工程、並びに
（ｉ）インターロイキン−１０濃度の正規化された増加を式（ＩＬ１０２４ｈ−ＩＬ１０５ｈ）／ＩＬ１０５ｈで算出する工程であって、ＩＬ１０５ｈ及びＩＬ１０２４ｈがそれぞれｐｇ／ｍｌでのインターロイキン−１０の５及び２４時間での濃度である、工程
によって決定される、細菌性組成物。
【請求項２】
正規化された増加が請求項１に記載の工程（ａ）〜（ｉ）によって決定される場合に、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）生細胞の存在下でのＴＨＰ−１マクロファージによる、正規化された増加として表されるインターロイキン−１０の産生が、ペディオコッカス  ペントサセウス生細胞の非存在下でのＴＨＰ−１マクロファージによるインターロイキン−１０の産生よりも少なくとも２倍高い、請求項１に記載の細菌性組成物。
【請求項３】
ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）生細胞がグラム陽性及びグラム陰性腸内細菌に拮抗する能力を有する、請求項１又は２に記載の細菌性組成物。
【請求項４】
グラム陽性細菌がクロストリジウム  ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）及びフェカリス菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）からなる群から選択される細菌を含む、請求項３に記載の細菌性組成物。
【請求項５】
グラム陰性細菌が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エンテロバクター  エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ  オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）及びバクテロイデス  ブルガータス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）からなる群から選択される細菌を含む、請求項３に記載の細菌性組成物。
【請求項６】
ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）生細胞が、クロストリジウム  ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、フェカリス菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エンテロバクター  エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ  オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）及びバクテロイデス  ブルガータス（あらＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ）に拮抗する能力を有し、拮抗する能力が、
（ｉ）オキソイド培地を含有するプレートに病原体株を均一に塗布し、各病原体の増殖のために適切な温度及び％ＣＯ２でＣＯ２インキュベーターにおいてコンフルエンスまで増殖させる工程、
（ｉｉ）ペディオコッカス  ペントサセウス生細胞を均一に播種したコンフルエントな寒天板の６ｍｍ直径の円柱切片２個を、病原体を播種したプレートに接触させて配置して、（ａ）一方の円柱切片の増殖側を病原体を播種したプレートに向けて、且つ（ｂ）他方の円柱切片の非増殖側を病原体を播種したプレートに向け、一晩３７℃でインキュベートする工程、
（ｉｉｉ）寒天板を平らな定規上に置くことによって阻害領域を翌日測定する工程、並びに
（ｉｖ）式ＧＩ＝（ＩＺＤ−ＣＤ）／２に従って、センチメートルで測定した阻害領域直径（ＩＺＤ）から円柱直径（ＣＤ）を減算し、この差を２で割ることによって増殖阻害活性を算出する工程
によって決定される、請求項３に記載の細菌性組成物。
【請求項７】
ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）がスペインタイプカルチャーコレクションに寄託番号ＣＥＣＴ  ８３３０で寄託されたペディオコッカス  ペントサセウスである、請求項１から６の何れか一項に記載の細菌性組成物。
【請求項８】
ビフィドバクテリウム  ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）ＣＥＣＴ  ７８９４の細胞１０４から１０１２ｃｆｕ／ｇをさらに含む、請求項１から７の何れか一項に記載の細菌性組成物。
【請求項９】
乳児における過剰な泣きの改善における使用のための、請求項１から８の何れか一項に記載の細菌性組成物。
【請求項１０】
乳児疝痛に関連する過剰な泣きの改善における使用のための、請求項９に記載の細菌性組成物。
【請求項１１】
乳児が週齢３週から月齢１２ヵ月である、請求項９に記載の細菌性組成物。
【請求項１２】
栄養補助食品、医薬、調製粉乳、食用製品及び食料品からなる群から選択される形態である、請求項１から８の何れか一項に記載の細菌性組成物。
【請求項１３】
油性懸濁物の形態である乳児栄養補助食品の形態である、請求項１２に記載の細菌性組成物。
【請求項１４】
新規ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）生細胞をスクリーニング及び単離するための方法であって、
（ｉ）請求項１に記載の工程に従って、ペディオコッカス  ペントサセウス生細胞のプール由来の新たなペディオコッカス  ペントサセウス生細胞を、インターロイキン−１０の産生を誘導する能力についてアッセイする工程、及び
（ｉｉ）正規化された増加が請求項１の工程に従って決定される場合に、陰性コントロールによるインターロイキン−１０の産生よりも高い、正規化された増加として表されるインターロイキン−１０の産生を誘導するプールから新たなペディオコッカス  ペントサセウス生細胞を選択及び単離する工程
を含む方法。