【手続補正書】
【提出日】平成29年2月28日(2017.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍｉＲ−１４５のシード領域と相補的な配列を含むオリゴヌクレオチドであって、前記シード領域が、５’−ＵＣＣＡＧＵＵＵ−３’（配列番号７）であり、前記配列が、少なくとも３つのロックト核酸（ＬＮＡ）を含み、前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの非ロックトヌクレオチドを含み、同じ配列およびＬＮＡ組成ならびに異なるＬＮＡモチーフを含む第２のオリゴヌクレオチドと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける有効性を増大させるオリゴヌクレオチド。
【請求項２】
５’末端にＬＮＡを含むか、３’末端にＬＮＡを含むか、または５’末端および３’末端の両方にＬＮＡを含む、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
３つ以下の連続ＬＮＡを含む、請求項１から２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチドが、１６マーを含み、前記１６マーが、１６ヌクレオチドかつ少なくとも９つのＬＮＡからなる、請求項１から３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、５、６、９、１０、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、請求項４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、２、６、８、１０、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、請求項４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、５、６、８、１０、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、請求項４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
前記非ロックトヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、２’デオキシ、２’Ｏ−アルキルまたは２’ハロである、請求項１から７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
５’キャップ構造、３’キャップ構造、または５’キャップ構造および３’キャップ構造を有する、請求項１から８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
１または複数のホスホロチオエート結合を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
親油性のペンダント基をさらに含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
約１５〜５０ヌクレオチドの長さである、請求項１から３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
前記１６マーが、ｍｉＲ−１４５のヌクレオチド配列と実質的にまたは完全に相補的である配列を含む、請求項４から１２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
対象における高血圧症を処置または防止する方法における使用のための請求項１から１３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドであって、前期方法は、前記対象へと、前期オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を投与するステップを含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
前記高血圧症が肺高血圧症であり、前記肺高血圧症が、特発性肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、遺伝性ＰＡＨもしくは家族性ＰＡＨ、または続発性肺高血圧症である、請求項１４に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の別の態様は、本明細書で記載されるオリゴヌクレオチドと、投与デバイスとを含むキットである。一実施形態では、キットは、肺動脈高血圧症の処置または防止のためのキットである。投与デバイスは、吸入器、ネブライザー、粉体噴霧器、点滴器、およびエアゾール噴霧器など、肺内送達のためにデザインすることができる。他の実施形態では、投与デバイスは、カテーテルなど、静脈内送達または動脈内送達のためにデザインすることができる。医薬組成物は、任意選択で、製剤化して、投与デバイス内で保管することができる。キットは、ＰＡＨを処置もしくは防止すること、再狭窄もしくは新生内膜形成を阻害または処置すること、または高血圧症を処置もしくは防止することなどのために、医薬組成物を、対象（例えば、ヒト）へと投与するための指示書をさらに含みうる。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ｍｉＲ−１４５のシード領域と相補的な配列を含むオリゴヌクレオチドであって、前記シード領域が、５’−ＵＣＣＡＧＵＵＵ−３’（配列番号７）であり、前記配列が、少なくとも３つのロックト核酸（ＬＮＡ）を含み、前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの非ロックトヌクレオチドを含み、同じ配列およびＬＮＡ組成ならびに異なるＬＮＡモチーフを含む第２のオリゴヌクレオチドと比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける有効性を増大させるオリゴヌクレオチド。
（項目２）
前記第２のオリゴヌクレオチドと比較して、肺における有効性を増大させる、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３）
５’末端にＬＮＡを含む、項目１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目４）
３’末端にＬＮＡを含む、項目１から３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５）
３つ以下の連続ＬＮＡを含む、項目１から４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目６）
前記配列が、少なくとも４つのロックト核酸（ＬＮＡ）を含む、項目１から５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７）
前記配列が、少なくとも５つのロックト核酸（ＬＮＡ）を含む、項目１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目８）
前記配列が、少なくとも６つのロックト核酸（ＬＮＡ）を含む、項目１から７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目９）
前記オリゴヌクレオチドが、１６マーを含み、前記１６マーが、１６ヌクレオチドからなり、前記１６マーが、ｍｉＲ−１４５のシード領域と相補的な前記配列を含む、項目１から８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１０）
前記１６マーが、少なくとも９つのＬＮＡを含む、項目９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１１）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、５、６、９、１０、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１２）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、２、６、８、１０、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１３）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、５、６、８、１０、１１、１３、１４、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１４）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、３、４、５、６、８、１０、１３、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１５）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、３、４、７、８、１０、１２、１４、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１６）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、２、６、７、１０、１１、１２、１４、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１７）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、３、５、７、９、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１８）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、４、５、７、９、１０、１２、１４、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１９）
前記１６マーの５’末端から３’末端へ、前記１６マーの１、５、６、８、１０、１１、１３、１５、および１６位が、ＬＮＡである、項目１０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２０）
前記非ロックトヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、２’デオキシである、項目１から１９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２１）
前記非ロックトヌクレオチドの全てが、２’デオキシである、項目２０に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２２）
少なくとも１つの非ロックトヌクレオチドが、２’Ｏ−アルキルまたは２’ハロである、項目１から１９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２３）
少なくとも１つのＬＮＡが、２’から４’のメチレン架橋を有する、項目１から２２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２４）
５’キャップ構造、３’キャップ構造、または５’キャップ構造および３’キャップ構造を有する、項目１から２３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２５）
１または複数のホスホロチオエート結合を含む、項目１から２４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２６）
完全にホスホロチオエート結合された、項目２５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２７）
１〜３カ所のリン酸結合を有する、項目１から２５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２８）
親油性のペンダント基をさらに含む、項目１から２７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２９）
約１５〜５０ヌクレオチドの長さである、項目１から２８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３０）
ｍｉＲＮＡ阻害剤である、項目１から２９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３１）
前記１６マーが、ｍｉＲ−１４５のヌクレオチド配列と実質的に相補的である、項目９から３０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３２）
前記１６マーが、ｍｉＲ−１４５と完全に相補的である、項目３１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３３）
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの非ロックトヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドが、細胞内のｍｉＲ−１４５標的遺伝子の発現を、生理食塩水対照と比べて増大させ、発現の前記増大のｐ値が、０．０５より小さい、項目１から３２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３４）
前記オリゴヌクレオチドで処置された細胞は、ｍｉＲ−１４５標的遺伝子の発現が、生理食塩水対照と比べて１．０倍超の倍数変化をし、前記倍数変化のｐ値が、０．０５より小さい、項目１から３３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３５）
発現の前記倍数変化が、少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５倍である、項目３３から３４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３６）
前記ｍｉＲ−１４５標的遺伝子が、Ｋｌｆ４、Ｋｌｆ５、Ｌｒｒｃ７１、Ｎｅｄｄ４ｌ、Ｉｇｆ１ｒ、Ｓｅｃ１４１２、Ｍｅｇｆ６、Ｆｍｏｄ、Ａｎｋｒｄ１２、Ｇｏｌｇａ１、Ｇｐｂｐ１、Ｈｉｓｔ３ｈ２ａ、Ｒａｐｇｅｆ２、またはＳｎｅｄ１である、項目３３から３５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３７）
有効量の、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドまたは薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
（項目３８）
前記薬学的に許容される担体が、コロイド分散系、高分子複合体、ナノカプセル、ナノ粒子、マイクロスフェア、ビーズ、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、またはリポソームを含む、項目３７に記載の医薬組成物。
（項目３９）
前記薬学的に許容される担体または希釈剤が、生理食塩水から本質的になる、項目３７に記載の医薬組成物。
（項目４０）
細胞内のｍｉＲ−１４５の活性を低減または阻害する方法であって、前記細胞を、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと接触させるステップを含む方法。
（項目４１）
前記細胞が、哺乳動物細胞である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記細胞が、平滑筋細胞である、項目４０または４１に記載の方法。
（項目４３）
前記細胞が、肺細胞または心臓細胞である、項目４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記細胞が、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおける細胞である、項目４０から４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
平滑筋細胞の増殖を阻害する方法であって、平滑筋細胞を、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと接触させるステップを含む方法。
（項目４６）
前記細胞が、哺乳動物細胞である、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記細胞が、肺細胞または心臓細胞である、項目４５または４６に記載の方法。
（項目４８）
前記細胞が、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおける細胞である、項目４５から４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
対象における肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）を防止または処置する方法であって、前記対象へと、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法。
（項目５０）
前記肺高血圧症が、特発性肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、遺伝性ＰＡＨもしくは家族性ＰＡＨ、または続発性肺高血圧症である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記続発性肺高血圧症が、肺塞栓、気腫、肺線維症、または先天性心疾患に由来する、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記対象が、哺乳動物である、項目４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記ヒトが、骨形成タンパク質２型受容体をコードする遺伝子内に突然変異を有する、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記医薬組成物を、非経口投与または肺組織への直接注射により投与する、項目４９から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記医薬組成物を、前記対象へと、吸入投与経路により投与する、項目４９から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記医薬組成物を、乾燥粉末として製剤化する、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記医薬組成物を、液体エアゾールとして製剤化する、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
対象における再狭窄または新生内膜形成を阻害または処置する方法であって、前記対象へと、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法。
（項目６０）
前記対象が、哺乳動物である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記医薬組成物を、非経口投与または心臓組織への直接注射により投与する、項目５９から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記非経口投与が、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内投与である、項目５５または６２に記載の方法。
（項目６４）
前記医薬組成物を、経口投与、経皮投与、持続放出投与、制御放出投与、遅延放出投与、坐剤投与、カテーテル投与、または舌下投与により投与する、項目４９から５４または５９から６１のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記オリゴヌクレオチドを、２５ｍｇ／ｋｇまたはそれ未満の用量で送達する、項目４９から６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記オリゴヌクレオチドを、生理食塩水中で製剤化し、皮下投与する、項目６３に記載の方法。
（項目６７）
対象における高血圧症を処置または防止する方法であって、前記対象へと、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法。
（項目６８）
前記対象が、哺乳動物である、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記医薬組成物を、非経口投与により投与する、項目６７から６９のいずれか一項に記載の方法。
（項目７１）
前記非経口投与が、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内投与である、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記医薬組成物を、経口投与、経皮投与、持続放出投与、制御放出投与、遅延放出投与、坐剤投与、カテーテル投与、または舌下投与により投与する、項目６７から７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記オリゴヌクレオチドを、２５ｍｇ／ｋｇまたはそれ未満の用量で送達する、項目６７から７２のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
前記オリゴヌクレオチドを、生理食塩水中で製剤化し、皮下投与する、項目６７に記載の方法。
（項目７５）
肺動脈高血圧症の処置または防止のためのキットであって、項目１から３６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと、投与デバイスとを含むキット。
（項目７６）
前記オリゴヌクレオチドが、前記投与デバイス内に含有された粉末として製剤化された、項目７５に記載のキット。
（項目７７）
前記オリゴヌクレオチドが、前記投与デバイス内に含有された液体エアゾールとして製剤化された、項目７５に記載のキット。
（項目７８）
前記投与デバイスが、吸入器である、項目７５から７７のいずれか一項に記載のキット。