【手続補正書】
【提出日】平成29年3月13日(2017.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）インフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップであって、該発現構築物が、第一のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＨＡセグメントならびにＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株である第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＮＰセグメントおよび／またはＰＢ２セグメントをコードする、ステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
【請求項２】
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）インフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップであって、該発現構築物が、第一のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＨＡセグメントならびにＢ／Ｌｅｅ／４０またはＢ／Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ／１／６６またはＢ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０ではない第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＮＰセグメントをコードする、ステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
【請求項３】
（ａ）前記ＮＰセグメントおよびＰＢ２セグメントが前記第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来であり、ならびに／あるいは
（ｂ）前記第二のインフルエンザＢ型ウイルスがＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株である、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
（ａ）ＰＡセグメント、ＰＢ１セグメント、ＰＢ２セグメント、ＮＰセグメント、ＮＳセグメントおよびＭセグメントが前記第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来であり、ならびに／あるいは
（ｂ）前記再集合体インフルエンザＢ型ウイルスが２またはそれより多くのインフルエンザＢ型株由来の骨格セグメントを含む
請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも１つの骨格セグメントがＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来である、請求項４（ｂ）に記載の方法。
【請求項６】
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のＨＡセグメントおよびＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来の少なくとも１つの骨格セグメントを含むインフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
【請求項７】
（ａ）２、３、４、５または６個の骨格セグメントが前記Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来であり、あるいは
（ｂ）前記Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来のセグメントと前記Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のセグメントとの比が７：１、６：２、４：４、３：５または１：７である
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株およびＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のウイルスセグメントを含むインフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップであって、該Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来のセグメントと該Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のセグメントとの比が１：７、２：６、３：５、４：４、５：３、６：２または７：１である、ステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
【請求項９】
前記比が７：１、６：２、４：４、３：５または１：７である、請求項７（ｂ）または８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株がＢ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／０８である、請求項１または請求項３（ｂ）から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株がＢ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０である、請求項５から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）前記ＮＰセグメントが、配列番号４の配列に少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するタンパク質をコードし、ならびに／あるいは
（ｂ）前記ＰＢ２セグメントが、配列番号３の配列に少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するタンパク質をコードし、ならびに／あるいは
（ｃ）前記ＮＳセグメントが、配列番号３５の配列と少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有するタンパク質をコードする、および／または前記Ｍ１セグメントが、配列番号３４の配列と少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有するタンパク質をコードする
請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記再集合体インフルエンザＢ型ウイルスが、
ａ）配列番号１の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＰＡタンパク質；および／または
ｂ）配列番号２の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＰＢ１タンパク質；および／または
ｃ）配列番号５の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＭ１タンパク質；および／または
ｄ）配列番号６の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＭ２タンパク質；および／または
ｅ）配列番号７の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＮＳ１タンパク質；および／または
ｆ）配列番号８の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＮＳ２タンパク質
を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）ａ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号１６のＮＳセグメントおよび配列番号１５のＭセグメント；または
ｂ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｃ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号３２のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号１６のＮＳセグメントおよび配列番号１５のＭセグメント；または
ｄ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号１６のＮＳセグメントおよび配列番号１５のＭセグメント；または
ｅ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｆ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号３３のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｇ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号３２のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｈ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号３３のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｉ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号３２のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｊ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｋ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント
を含むインフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
【請求項１５】
ステップ（ｉｉ）で得た前記再集合体ウイルスを精製するステップ（ｉｉｉ）をさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる再集合体インフルエンザＢ型ウイルス。
【請求項１７】
前記培養宿主が（ａ）発育鶏卵または（ｂ）細胞である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞が、哺乳動物細胞または鳥類細胞である、請求項１７（ｂ）に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞がＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞またはＰｅｒＣ６細胞であり、ならびに／あるいは前記細胞が（ａ）接着して増殖するか、または（ｂ）懸濁状態で増殖する、請求項１７（ｂ）または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＭＤＣＫ細胞が細胞株ＭＤＣＫ  ３３０１６（ＤＳＭ  ＡＣＣ２２１９）である、請求項１９（ｂ）に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によってウイルスを調製するステップおよび（ｂ）該ウイルスからワクチンを調製するステップを含む、ワクチンを調製する方法。
【請求項２２】
請求項１６に記載のウイルスからワクチンを調製するステップを含む、ワクチンを調製する方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）が前記ウイルスを不活化することを含み、および／または前記ワクチンが、
（ａ）全ビリオンワクチン；
（ｂ）スプリットビリオンワクチン；
（ｃ）表面抗原ワクチン；または
（ｄ）ビロソームワクチン
であり、ならびに／あるいは
前記ワクチンが用量当たり１０ｎｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含み、および／またはインフルエンザＡ型株由来の抗原を含む、
請求項２１または２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記インフルエンザＡ型株が、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９サブタイプの株である、請求項２３（ｉｉ）に記載の方法。
【請求項２５】
請求項２１から２４のいずれか一項に記載の方法によって得ることができるワクチン。
【請求項２６】
請求項１６に記載のインフルエンザＢ型ウイルスのセグメントをコードするｖＲＮＡを含む１つまたはそれより多くの発現構築物を含む発現系。
【請求項２７】
請求項２６に記載の発現系を含む宿主細胞。
【請求項２８】
前記宿主細胞が哺乳動物細胞または鳥類細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
前記宿主細胞がＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞またはＰｅｒＣ６細胞である、請求項２８に記載の宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
２つの核酸配列の間の配列同一性パーセントへの言及は、整列させた場合、２つの配列を比較して塩基のそのパーセンテージが同じであることを意味する。このアラインメントおよび相同性パーセントまたは配列同一性パーセントは、当分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば参考文献７７の第７．７．１８章に記載されているものを用いて決定することができる。好ましいアラインメントプログラムは、好ましくはデフォルトパラメータを使用する、ＧＣＧ  Ｇａｐ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｓｕｉｔｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．１）であり、デフォルトパラメータは、オープンギャップ＝３；伸長ギャップ＝１である。
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）インフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップであって、該発現構築物が、第一のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＨＡセグメントならびにＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株である第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＮＰセグメントおよび／またはＰＢ２セグメントをコードする、ステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
（項目２）
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）インフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップであって、該発現構築物が、第一のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＨＡセグメントならびにＢ／Ｌｅｅ／４０またはＢ／Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ／１／６６またはＢ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０ではない第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来のＮＰセグメントをコードする、ステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
（項目３）
前記ＮＰセグメントおよびＰＢ２セグメントが前記第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記第二のインフルエンザＢ型ウイルスがＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株である、項目２または３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
ＰＡセグメント、ＰＢ１セグメント、ＰＢ２セグメント、ＮＰセグメント、ＮＳセグメントおよびＭセグメントが前記第二のインフルエンザＢ型ウイルス由来である、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記再集合体インフルエンザＢ型ウイルスが２またはそれより多くのインフルエンザＢ型株由来の骨格セグメントを含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
少なくとも１つの骨格セグメントがＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来である、項目６に記載の方法。
（項目８）
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のＨＡセグメントおよびＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来の少なくとも１つの骨格セグメントを含むインフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
（項目９）
２、３、４、５または６個の骨格セグメントが前記Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来のセグメントと前記Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のセグメントとの比が７：１、６：２、４：４、３：５または１：７である、項目８に記載の方法。
（項目１１）
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株およびＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のウイルスセグメントを含むインフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップであって、該Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株由来のセグメントと該Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株由来のセグメントとの比が１：７、２：６、３：５、４：４、５：３、６：２または７：１である、ステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
（項目１２）
前記比が７：１、６：２、４：４、３：５または１：７である、項目１０または１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７様株がＢ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／０８である、項目１または項目４から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８様株がＢ／Ｐａｎａｍａ／４５／９０である、項目７から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記ＮＰセグメントが、配列番号４の配列に少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するタンパク質をコードする、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
前記ＰＢ２セグメントが、配列番号３の配列に少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有するタンパク質をコードする、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１７）
前記ＮＳセグメントが、配列番号３５の配列と少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有するタンパク質をコードする、および／または前記Ｍ１セグメントが、配列番号３４の配列と少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％の同一性を有するタンパク質をコードする、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
前記再集合体インフルエンザＢ型ウイルスが、
ａ）配列番号１の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＰＡタンパク質；および／または
ｂ）配列番号２の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＰＢ１タンパク質；および／または
ｃ）配列番号５の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＭ１タンパク質；および／または
ｄ）配列番号６の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＭ２タンパク質；および／または
ｅ）配列番号７の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＮＳ１タンパク質；および／または
ｆ）配列番号８の配列に少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性または１００％の同一性を有するＮＳ２タンパク質
を含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを調製する方法であって、
（ｉ）ａ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号１６のＮＳセグメントおよび配列番号１５のＭセグメント；または
ｂ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｃ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号３２のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号１６のＮＳセグメントおよび配列番号１５のＭセグメント；または
ｄ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号１６のＮＳセグメントおよび配列番号１５のＭセグメント；または
ｅ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｆ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号３３のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｇ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号３２のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｈ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号３３のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｉ）配列番号１１のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号３２のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｊ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号１２のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント；または
ｋ）配列番号３０のＰＡセグメント、配列番号３１のＰＢ１セグメント、配列番号１３のＰＢ２セグメント、配列番号１４のＮＰセグメント、配列番号３５のＮＳセグメントおよび配列番号３４のＭセグメント
を含むインフルエンザＢ型ウイルスを生成するのに必要なウイルスセグメントをコードする１つまたはそれより多くの発現構築物を培養宿主に導入するステップ；ならびに
（ｉｉ）再集合体インフルエンザＢ型ウイルスを産生させるために該培養宿主を培養するステップ
を含む方法。
（項目２０）
ステップ（ｉｉ）で得た前記再集合体ウイルスを精製するステップ（ｉｉｉ）をさらに含む、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
項目１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる再集合体インフルエンザＢ型ウイルス。
（項目２２）
前記培養宿主が発育鶏卵である、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記培養宿主が細胞である、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記細胞がＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞またはＰｅｒＣ６細胞である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記細胞が接着して増殖する、項目２３または２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記細胞が懸濁状態で増殖する、項目２３または２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記ＭＤＣＫ細胞が細胞株ＭＤＣＫ  ３３０１６（ＤＳＭ  ＡＣＣ２２１９）である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
（ａ）項目１から２７のいずれか一項に記載の方法によってウイルスを調製するステップおよび（ｂ）該ウイルスからワクチンを調製するステップを含む、ワクチンを調製する方法。
（項目２９）
項目２１に記載のウイルスからワクチンを調製するステップを含む、ワクチンを調製する方法。
（項目３０）
ステップ（ｂ）が前記ウイルスを不活化することを含む、項目２８または２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記ワクチンが全ビリオンワクチンである、項目２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記ワクチンがスプリットビリオンワクチンである、項目２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記ワクチンが表面抗原ワクチンである、項目２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記ワクチンがビロソームワクチンである、項目２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記ワクチンが用量当たり１０ｎｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含む、項目２８から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記ワクチンがインフルエンザＡ型株由来の抗原を含む、項目２８から３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記インフルエンザＡ型株が、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９サブタイプの株である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
項目２８から３７のいずれか一項に記載の方法によって得ることができるワクチン。
（項目３９）
項目２１に記載のインフルエンザＢ型ウイルスのセグメントをコードするｖＲＮＡを含む１つまたはそれより多くの発現構築物を含む発現系。
（項目４０）
項目３９に記載の発現系を含む宿主細胞。
（項目４１）
前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、項目４０に記載の宿主細胞。
（項目４２）
前記宿主細胞がＭＤＣＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞またはＰｅｒＣ６細胞である、項目４１に記載の宿主細胞。