【手続補正書】
【提出日】平成29年9月27日(2017.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を培養するための方法であって、
（ａ）細胞を、第１の細胞培養において培養する工程
（ｂ）ラクテート消費への代謝シフトが該第１の細胞培養において起こったことを決定する工程、および
（ｃ）該細胞におけるラクテート消費への該代謝シフトが起こった後に、該細胞を、第２の細胞培養に移す工程、
を包含し、ここで該第２の細胞培養におけるラクテート濃度は、正味のラクテート消費を示す、方法。
【請求項２】
前記細胞は、第１の細胞培養において細胞を培養する前に、目的のポリペプチドをコードするＤＮＡでトランスフェクトされ、前記方法は、前記第２の細胞培養を、該目的のポリペプチドの発現を可能にする条件下で維持する工程、および該目的のポリペプチドを該第２の細胞培養から採取する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ラクテート消費への前記代謝シフトは、前記第１の細胞培養におけるｐＨ、ラクテートもしくは塩基の測定によって検出される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ラクテート消費への前記代謝シフトは、塩基の添加なしの前記第１の細胞培養培地におけるｐＨ増大後に検出される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記代謝シフトは、細胞が前記第１の細胞培養において対数期から抜け出したときに起こるか、または静止期に達したときに起こる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記代謝シフトは、ラクテートレベルが前記第１の細胞培養においてプラトーに達したときに起こる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記代謝シフトは、前記第１の細胞培養における細胞増殖３日間でまたはそれより後に、該第１の細胞培養において起こる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記移された細胞は、前記第２の細胞培養において、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約３．０×１０６細胞／ｍＬの間の接種細胞密度を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記代謝シフトを決定する工程は、
（ａ）前記第１の細胞培養においてｐＨを測定する工程
（ｂ）塩基を添加して、ｐＨを所定の下限より高く維持する工程、
（ｃ）該ｐＨが該所定の下限より高いことを、間隔をあけて引き続いて決定する工程、および
（ｄ）該塩基の添加を中止する工程、
を包含し、それによって、ラクテート消費への該代謝シフトは、該第１の細胞培養において起こったことを決定する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の細胞培養は、シードトレイン培養である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第２の細胞培養は、生産培養である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
細胞を第２の細胞培養に移す工程は、細胞を生産用バイオリアクターに移す工程を包含する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記目的のポリペプチドは、抗体、抗原結合タンパク質、および融合タンパク質からなる群より選択される、請求項２〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
１種またはそれより多くの核酸配列は、前記細胞の細胞ゲノムの中に安定して組み込まれ、ここで該核酸配列は目的のポリペプチドをコードする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞は、目的のポリペプチドをコードする１種またはそれより多くの発現ベクターを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記目的のポリペプチドは、抗体、抗原結合タンパク質、および融合タンパク質からなる群より選択される、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞は、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、網膜細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＶ１細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３  ＥＢＮＡ細胞、ＭＳＲ  ２９３細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＨａＫ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、ＷＩ３８細胞、ＭＲＣ  ５細胞、Ｃｏｌｏ２５細胞、ＨＢ  ８０６５細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｄａｕｄｉ細胞、Ａ４３１細胞、ＣＶ−１細胞、Ｕ９３７細胞、３Ｔ３細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ−０細胞、ＭＭＴ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ネズミリンパ系細胞、およびネズミハイブリドーマ細胞からなる群より選択される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態において、上記細胞は、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、網膜細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＶ１細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３  ＥＢＮＡ細胞、ＭＳＲ  ２９３細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＨａＫ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、ＷＩ３８細胞、ＭＲＣ  ５細胞、Ｃｏｌｏ２５細胞、ＨＢ  ８０６５細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｄａｕｄｉ細胞、Ａ４３１細胞、ＣＶ−１細胞、Ｕ９３７細胞、３Ｔ３細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ−０細胞、ＭＭＴ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ネズミリンパ系細胞、およびネズミハイブリドーマ細胞からなる群より選択される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
細胞を培養するための方法であって、
（ａ）細胞を、第１の細胞培養において培養する工程
（ｂ）ラクテート消費への代謝シフトが該第１の細胞培養において起こったことを決定する工程、および
（ｃ）該細胞におけるラクテート消費への該代謝シフトが起こった後に、該細胞を、第２の細胞培養に移す工程、
を包含し、ここで該第２の細胞培養におけるラクテート濃度は、正味のラクテート消費を示す、方法。
（項目２）
前記細胞は、第１の細胞培養において細胞を培養する前に、目的のポリペプチドをコードするＤＮＡでトランスフェクトされ、前記方法は、前記第２の細胞培養を、該目的のポリペプチドの発現を可能にする条件下で維持する工程、および該目的のポリペプチドを該第２の細胞培養から採取する工程を包含する、項目１に記載の方法。
（項目３）
ラクテート消費への前記代謝シフトは、前記第１の細胞培養におけるｐＨ、ラクテートもしくは塩基の測定によって検出される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
ラクテート消費への前記代謝シフトは、塩基の添加なしの前記第１の細胞培養培地におけるｐＨ増大後に検出される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記代謝シフトは、細胞が前記第１の細胞培養において対数期から抜け出したときに起こるか、または静止期に達したときに起こる、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記代謝シフトは、ラクテートレベルが前記第１の細胞培養においてプラトーに達したときに起こる、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記代謝シフトは、前記第１の細胞培養における細胞増殖３日間でまたはそれより後に、該第１の細胞培養において起こる、項目１〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記移された細胞は、前記第２の細胞培養において、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約３．０×１０６細胞／ｍＬの間の接種細胞密度を有する、項目１〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記代謝シフトを決定する工程は、
ａ．前記第１の細胞培養においてｐＨを測定する工程
ｂ．塩基を添加して、ｐＨを所定の下限より高く維持する工程、
ｃ．該ｐＨが該所定の下限より高いことを、間隔をあけて引き続いて決定する工程、および
ｄ．該塩基の添加を中止する工程、
を包含し、それによって、ラクテート消費への該代謝シフトは、該第１の細胞培養において起こったことを決定する、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の細胞培養は、シードトレイン培養である、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の細胞培養は、生産培養である、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
細胞を第２の細胞培養に移す工程は、細胞を生産用バイオリアクターに移す工程を包含する、項目１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記目的のタンパク質は、抗体、抗原結合タンパク質、および融合タンパク質からなる群より選択される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法によって生産される、代謝がシフトした宿主細胞。
（項目１５）
細胞ゲノムの中に安定して組み込まれた１種またはそれより多くの核酸配列を含み、ここで該核酸配列は目的のタンパク質をコードする、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法によって生産される、代謝がシフトした宿主細胞。
（項目１６）
目的のタンパク質をコードする１種またはそれより多くの発現ベクターを含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法によって生産される、代謝がシフトした宿主細胞。
（項目１７）
前記目的のタンパク質は、抗体、抗原結合タンパク質、および融合タンパク質からなる群より選択される、項目１５または項目１６に記載の宿主細胞。
（項目１８）
前記細胞は、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、網膜細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＶ１細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３  ＥＢＮＡ細胞、ＭＳＲ  ２９３細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＨａＫ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、ＷＩ３８細胞、ＭＲＣ  ５細胞、Ｃｏｌｏ２５細胞、ＨＢ  ８０６５細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｄａｕｄｉ細胞、Ａ４３１細胞、ＣＶ−１細胞、Ｕ９３７細胞、３Ｔ３細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ−０細胞、ＭＭＴ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ネズミリンパ系細胞、およびネズミハイブリドーマ細胞からなる群より選択される、項目１４〜１７のいずれか１項に記載の宿主細胞。