【手続補正書】
【提出日】平成29年8月28日(2017.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロモーターを含む核酸ベクターであって、
ｉ）前記プロモーターはポリリンカー配列に作動可能に連結しているか；
ｉｉ）前記プロモーターは非ユビキチンコード（non-ubiquitin-encoding）導入遺伝子に作動可能に連結しているか、または
ｉｉｉ）前記プロモーターはポリリンカー配列および非ユビキチンコード導入遺伝子を含む配列に作動可能に連結しており、
前記プロモーターは配列番号３５または配列番号３５と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、かつ作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得る、核酸ベクター。
【請求項２】
前記プロモーターが長さ３ｋｂ未満であり、配列番号３５と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１に記載の核酸ベクター。
【請求項３】
前記プロモーターが長さ３ｋｂ未満であり、配列番号３５と少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項１に記載の核酸ベクター。
【請求項４】
前記プロモーターが配列番号３５からなる、請求項１に記載の核酸ベクター。
【請求項５】
選択マーカーをコードする配列をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の核酸ベクター。
【請求項６】
前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項５に記載の核酸ベクター。
【請求項７】
前記導入遺伝子が殺虫剤耐性、除草剤耐性、窒素利用効率、水利用効率または栄養価を付与する選択マーカーまたは遺伝子産物をコードする、請求項６に記載の核酸ベクター。
【請求項８】
配列番号３６または配列番号３６と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、前記３’非翻訳配列が前記ポリリンカーまたは前記導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項１から４または６のいずれかに記載の核酸ベクター。
【請求項９】
配列番号３８または配列番号３８と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む５’非翻訳配列をさらに含み、前記５’非翻訳配列が前記プロモーター配列と前記ポリリンカーまたは導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、請求項１から４または６のいずれかに記載の核酸ベクター。
【請求項１０】
前記５’非翻訳配列の後に挿入されたイントロン配列をさらに含む、請求項９に記載の核酸ベクター。
【請求項１１】
前記イントロン配列が配列番号３７を含む、請求項１０に記載の核酸ベクター。
【請求項１２】
前記プロモーターが配列番号４０または配列番号４０と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列からなり、前記プロモーターが前記ポリリンカーまたは前記コード配列と作動可能に連結しており、前記プロモーターが前記作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得る、請求項１に記載の核酸ベクター。
【請求項１３】
前記プロモーターが配列番号３９または配列番号３９と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列からなり、前記プロモーターが前記ポリリンカーまたは前記コード配列と作動可能に連結しており、前記プロモーターが前記作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得る、請求項１に記載の核酸ベクター。
【請求項１４】
配列番号３６または配列番号３６と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、前記３’非翻訳配列が前記ポリリンカーまたは前記コード配列と作動可能に連結している、請求項１２または１３に記載の核酸ベクター。
【請求項１５】
パニクム（Panicum）プロモーターを含む非パニクム属植物であって、前記パニクムプロモーターが、コード配列と作動可能に連結している配列番号３５または配列番号３５と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、前記パニクムプロモーターが前記作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得る、非パニクム属（Panicum）植物。
【請求項１６】
パニクム（Panicum）プロモーターを含む非パニクム属植物であって、前記パニクムプロモーターが、コード配列と作動可能に連結している配列番号３５または配列番号３５と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、前記パニクムプロモーターが前記作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得る、非パニクム属（Panicum）植物。
【請求項１７】
パニクム（Panicum）プロモーターを含む非パニクム属植物であって、前記パニクムプロモーターが、コード配列と作動可能に連結している配列番号３５または配列番号３５と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含み、前記パニクムプロモーターが前記作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得る、非パニクム属（Panicum）植物。
【請求項１８】
トウモロコシ、コムギ、イネ、ソルガム、エンバク、ライムギ、バナナ、サトウキビ、ダイズ、ワタ、ヒマワリおよびセイヨウアブラナからなる群から選択される、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の植物。
【請求項１９】
トウモロコシ（Zea mays）である、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の植物。
【請求項２０】
前記作動可能に連結しているコード配列が導入遺伝子であり、さらに前記導入遺伝子が前記植物のゲノムに挿入されている、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の植物。
【請求項２１】
配列番号３８または配列番号３８と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む５’非翻訳配列をさらに含み、前記５’非翻訳配列が前記パニクムプロモーターと前記コード配列との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、請求項１７に記載の植物。
【請求項２２】
前記５’非翻訳配列の後に挿入されたイントロン配列をさらに含む、請求項２１に記載の植物。
【請求項２３】
前記イントロン配列が配列番号３７を含む、請求項２２に記載の植物。
【請求項２４】
配列番号３６または配列番号３６と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、前記３’非翻訳配列が前記導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項２１に記載の植物。
【請求項２５】
前記パニクムプロモーターが配列番号４０または配列番号４０と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列からなり、作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得、さらに前記プロモーターが前記コード配列と作動可能に連結している、請求項１５に記載の植物。
【請求項２６】
前記パニクムプロモーターが配列番号３９または配列番号３９と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列からなり、作動可能に連結したコード配列の転写を開始し得、さらに前記プロモーターがコード配列と作動可能に連結している、請求項１５に記載の植物。
【請求項２７】
配列番号３６または配列番号３６と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、前記３’非翻訳配列が前記コード配列と作動可能に連結している、請求項２５または２６に記載の植物。
【請求項２８】
転写ターミネーターを含む核酸ベクターであって、
ｉ）前記ターミネーターがポリリンカー配列に作動可能に連結しているか；
ｉｉ）前記ターミネーターが非ユビキチンコード導入遺伝子に作動可能に連結しているか、または
ｉｉｉ）前記ターミネーターがポリリンカー配列および非ユビキチンコード導入遺伝子を含む配列に作動可能に連結しており、
前記転写ターミネーターは配列番号３６または配列番号３６と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、核酸ベクター。
【請求項２９】
転写ターミネーターを含む核酸ベクターであって、
ｉ）前記ターミネーターがポリリンカー配列に作動可能に連結しているか；
ｉｉ）前記ターミネーターが非ユビキチンコード導入遺伝子に作動可能に連結しているか、または
ｉｉｉ）前記ターミネーターがポリリンカー配列および非ユビキチンコード導入遺伝子を含む配列に作動可能に連結しており、
前記転写ターミネーターは配列番号３６または配列番号３６と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、核酸ベクター。
【請求項３０】
前記転写ターミネーターが長さ１ｋｂ未満である、請求項２８または２９に記載の核酸ベクター。
【請求項３１】
前記転写ターミネーターが配列番号３６からなる、請求項３０に記載の核酸ベクター。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明は以下を提供する。
［１］ｉ）ポリリンカー配列；
ｉｉ）非ユビキチン導入遺伝子または
ｉｉｉ）ｉ）とｉｉ）の組み合わせ
と作動可能に連結しているプロモーターを含む核酸ベクターであって、上記プロモーターは配列番号３５または配列番号３５と９０％の配列同一性を有する配列を含む、核酸ベクター。
［２］上記プロモーターが長さ３ｋｂ未満である、上記［１］に記載の核酸ベクター。
［３］上記プロモーターが配列番号３５または配列番号３５と９０％の配列同一性を有する配列からなる、上記［１］に記載の核酸ベクター。
［４］選択マーカーをコードする配列をさらに含む、上記［１］から［３］のいずれか一項に記載の核酸ベクター。
［５］上記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［４］に記載の核酸ベクター。
［６］上記導入遺伝子が殺虫剤耐性、除草剤耐性、窒素利用効率、水利用効率または栄養価を付与する選択マーカーまたは遺伝子産物をコードする、上記［５］に記載の核酸ベクター。
［７］配列番号３６または配列番号３６と９０％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、上記３’非翻訳配列が上記ポリリンカーまたは上記導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１］から［３］または［５］のいずれかに記載の核酸ベクター。
［８］配列番号３８または配列番号３８と９０％の配列同一性を有する配列を含む５’非翻訳配列をさらに含み、上記５’非翻訳配列が上記プロモーター配列と上記ポリリンカーまたは導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、上記［１］から［３］または［５］のいずれかに記載の核酸ベクター。
［９］上記５’非翻訳配列の後に挿入されたイントロン配列をさらに含む、上記［８］に記載の核酸ベクター。
［１０］上記イントロン配列が配列番号３７を含む、上記［９］に記載の核酸ベクター。
［１１］上記プロモーターが配列番号４０または配列番号４０と９０％の配列同一性を有する配列からなり、上記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１］に記載の核酸ベクター。
［１２］上記プロモーターが配列番号３９または配列番号３９と９０％の配列同一性を有する配列からなり、上記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１］に記載の核酸ベクター。
［１３］配列番号３６または配列番号３６と９０％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、上記３’非翻訳配列が上記導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１１］または［１２］に記載の核酸ベクター。
［１４］導入遺伝子と作動可能に連結している配列番号３５または配列番号３５と９０％の配列同一性を有する配列を含む非パニクム属（Panicum）植物。
［１５］トウモロコシ、コムギ、イネ、ソルガム、エンバク、ライムギ、バナナ、サトウキビ、ダイズ、ワタ、ヒマワリおよびセイヨウアブラナからなる群から選択される、上記［１４］に記載の植物。
［１６］トウモロコシ（Zea mays）である、上記［１４］に記載の植物。
［１７］上記導入遺伝子が上記植物のゲノムに挿入されている、上記［１４］から［１６］のいずれか一項に記載の植物。
［１８］配列番号３８または配列番号３８と９０％の配列同一性を有する配列を含む５’非翻訳配列をさらに含み、上記５’非翻訳配列が上記プロモーターと上記導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、上記［１４］に記載の植物。
［１９］上記５’非翻訳配列の後に挿入されたイントロン配列をさらに含む、上記［１８］に記載の植物。
［２０］上記イントロン配列が配列番号３７を含む、上記［１９］に記載の植物。
［２１］配列番号３６または配列番号３６と９０％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、上記３’非翻訳配列が上記導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１８］に記載の植物。
［２２］上記プロモーターが配列番号４０または配列番号４０と９０％の配列同一性を有する配列からなり、上記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１４］に記載の植物。
［２３］上記プロモーターが配列番号３９または配列番号３９と９０％の配列同一性を有する配列からなり、上記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［１４］に記載の植物。
［２４］配列番号３６または配列番号３６と９０％の配列同一性を有する配列を含む３’非翻訳配列をさらに含み、上記３’非翻訳配列が上記導入遺伝子と作動可能に連結している、上記［２２］または［２３］に記載の植物。
［２５］ｉ）ポリリンカー配列；
ｉｉ）非ユビキチン導入遺伝子または
ｉｉｉ）ｉ）とｉｉ）の組み合わせ
と作動可能に連結している転写ターミネーターを含む核酸ベクターであって、上記転写ターミネーターは配列番号３６または配列番号３６と９０％の配列同一性を有する配列を含む、核酸ベクター。
［２６］上記転写ターミネーターが長さ１ｋｂ未満である、上記［２５］に記載の核酸ベクター。
［２７］上記転写ターミネーターが配列番号３６の３’ＵＴＲ配列からなる、上記［２６］に記載の核酸ベクター。
植物細胞および／または植物組織中で導入遺伝子を発現させるための構築物および方法が本明細書で開示される。一実施形態では、ユビキチン遺伝子の調節エレメントを、パニクム・ヴィルガツム（Panicum virgatum）、ミナトカモジグサ（Brachypodium distachyon）またはアワ（Setaria italica）ゲノムから精製し、前記調節エレメントと自然では連結していない配列と組み換えて、ユビキチン調節配列に生まれつき備わっていない導入遺伝子を植物細胞中で発現させるための発現ベクターを創製する。一実施形態では、ユビキチン遺伝子の調節エレメントがポリリンカー配列と作動可能に連結している発現ベクターが提供される。このような発現ベクターは、ユビキチン遺伝子調節配列と作動可能に連結した状態で遺伝子または遺伝子カセットをベクターに挿入することを容易にする。