(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
原則的には無毛であるが、その体表に経時的にその発毛部位が移動する特徴的な発毛をするヌードマウスに育毛物を投与し、このヌードマウスの体表の発毛部位の状態を特定して、育毛物の毛周期における成長期を延長する効果を検定する育毛検定方法。
【請求項２】
前記ヌードマウスが、ｂａｌｂ ｃ ｎｕ／ｎｕである、請求項１又は２記載の育毛検定方法。
【請求項３】
前記ヌードマウスの体表の発毛部位の状態の特定手段が、発毛部位の面積及び／又は状態の把握である、請求項１又は２に記載の育毛検定方法。
【請求項４】
発毛部位の状態の把握手段が、毛の長短及び／又は発毛密度の把握である、請求項３記載の育毛検定方法。
【請求項５】
前記ヌードマウスの体表の発毛部位の状態の特定手段が、発毛部位の発毛維持日数の把握である、請求項１又は２記載の育毛検定方法。
【請求項６】
発毛部位の発毛維持日数の把握手段が、発毛部位の一定距離における移動期間を把握して発毛部位の移動速度を求めて、この移動速度と発毛部位の平均幅を指標とする方式である、請求項５記載の育毛検定方法。
【請求項７】
発毛部位の発毛維持日数の把握手段が、前記ヌードマウスの背部の一点における発毛維持期間を指標とする方式である、請求項５記載の育毛検定方法。
【請求項８】
前記ヌードマウスの背部の一点が、このヌードマウスの肩のラインからの背中線の一点である、請求項７記載の育毛検定方法。
【請求項９】
前記ヌードマウスの肩のラインからの背中線の一点が、その背中線の中点である、請求項８記載の育毛検定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、育毛物の毛周期における成長期を延長する効果を特定するための育毛検定方法に関する技術分野に属する。より詳細には、その体表に特徴的な発毛をするヌードマウスを用いて、その発毛部位の状態を特定することで育毛物の毛周期における成長期を延長する効果を検定する育毛検定方法に関する技術分野に属する。
【０００２】
【従来の技術】
毛髪の一本一本は、成長期，退行期及び休止期を経る、いわゆる「毛周期」と呼ばれるサイクルに従って成長、脱落を繰り返すものであり、正常の毛周期を営んでいる頭皮では成長期毛と休止期毛の割合が一定以上に保たれている。
これに対して、例えば男性型脱毛症の場合は、様々な原因で成長期が短くなったり、毛包が縮小したりする結果、相対的に休止期毛の割合が多くなって、毛が細くなったり、長く伸びることができなくなったりする結果、見た目の毛髪量が減少し、脱毛等を生じるものである。
高齢化社会、ストレス社会といわれる現代社会では、頭部毛髪が上記脱毛等の危機にさらされる機会がますます多くなっている。
【０００３】
それに対応して、現在までに種々の養毛剤が種々の観点から提供されており、今後もその傾向は続くことは明らかである。
これらの養毛剤の多くは、毛周期における成長期を延長させたり、成長期への誘導を促進させたりするものである。
そして、当然開発されつつある養毛剤は、ヒトへの投与に先立ち動物に対する育毛効果等を検討するのが常であり、現在マウスやウサギの体毛に覆われている部分を毛刈りして、その部分に養毛剤を塗布して、発毛、すなわち成長期の誘導効果を検討することが多く行われている。しかしながら、この方法は成長期の誘導効果を検討することに対しては適しているが、成長期の延長効果を検討することは煩雑であり、また困難である。
また、ヌードマウスの免疫寛容性を利用して植毛試験も行われているが、この方法は、非常に手間がかかる上に、植毛した毛自体の性質（感受性）のばらつきにより、大量の薬剤の評価法としては不適当な点は否めない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明が解決すべき課題は、養毛剤等の養毛物の簡便かつ確実な毛周期における成長期の延長効果のインビボの検定手段を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、この課題の解決に向けて鋭意検討を行った。その結果、その背部に特徴的な発毛をするヌードマウスを用いて、その発毛部位の状態を特定することで養毛剤等の養毛物の毛周期における成長期を延長する効果を検定する育毛検定方法を提供し得ることを見出した。
【０００６】
すなわち、本発明は、「原則的には無毛であるが、その体表に経時的にその発毛部位が移動する特徴的な発毛をするヌードマウス」に育毛物を投与し、このヌードマウスの体表の発毛部位の状態を特定して、育毛物の毛周期における成長期を延長する効果を検定する育毛検定方法を提供する発明である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明は、ヌードマウスを用いた育毛検定方法に関する。
ヌードマウスとは、Ｎ．Ｒ．Ｇｒｉｓｔ  によってアルビノ系のマウス集落で発見された無毛のマウスのことをいい、一般的にはこの無毛と共に胸腺の先天的欠損が報告されているマウスのことをいう。本発明においては、胸腺の先天的欠損の有無に関わらず、先天的に外観上無毛のマウスのことをヌードマウスという。
【０００８】
本発明に適用可能なヌードマウスは、原則的には無毛であるが、その体表に経時的にその発毛部位が移動する特徴的な発毛をするヌードマウスである。
例えば、ヌードマウスｂａｌｂ  ｃ  ｎｕ／ｎｕは、ある期間（毛周期の成長期に伴って）、ごく狭い範囲で帯状の発毛が見られ、発毛した毛は２〜３日程度で順次抜け落ち、その結果、発毛部位は頭から尾の方へ向かって経時的に移動して行く。このヌードマウスにおいて、発毛部位の広さと発毛部位の移動速度を特定，あるいは特定部位での発毛期間を測定することによって、毛周期の成長期の長さを検定することができる。
【０００９】
本発明の育毛検定方法を適用することが可能な育毛物は、特に限定されず、育毛効果が認められた物質を直接用いることも可能であり、市販用又は病院用に処方された育毛剤を用いることも可能である。そして、本発明の育毛検定方法は、毛周期の延長効果を検定する必要性に応じて本発明育毛検定方法を用いることができる。また、企図する育毛物の投与方法に応じて、本発明育毛検定方法におけるヌードマウスへの投与方法を選択することができる。すなわち、上記ヌードマウスに対しては、外皮に対する塗布，散布等の投与方法を採ることは勿論、経口投与，皮内投与，筋注，静注等の投与方法も採ることができる。
【００１０】
以下、上記ヌードマウスｂａｌｂ  ｃ  ｎｕ／ｎｕを用いた本発明育毛検定方法について例示する。
このヌードマウスを用いた本発明育毛検定方法は、例えば発毛部位の面積及び状態並びに発毛維持日数を具体的な指標にすることで、育毛物の毛周期における成長期を延長する効果を検定することを目的とした、ヌードマウスの体表の発毛部位の状態の特定を行うことができる。
【００１１】
（１）発毛部位の面積及び状態の把握について：
試験期間中の発毛部位の面積を把握することにより、育毛物の発毛効果若しくは成長期延長効果を把握することができる。
すなわち、試験期間を通じての発毛部位が大きければ、育毛物の発毛効果若しくは成長期延長効果が大きいことを示し、逆に小さければこれらの効果が小さいことを示す。
【００１２】
この発毛部位の面積は、マウスの背部全体に対する発毛部位の面積の比として把握するのが簡便である。
発毛部位の状態を解析して把握することにより、育毛物の毛の伸長に及ぼす効果の大きさを把握することも可能である。
【００１３】
すなわち、例えば発毛部位の面積を一定としたとき、短い毛が非常に疎にしか生えていない場合には、育毛物の毛の伸長に及ぼす効果が小さく、逆に発毛部位の面積が狭くても、長い毛が密に生えている場合にはこの効果が大きいと判断され得る。
このようにして、把握した発毛部位の面積及び状態を数値化して、例えば両者の数値の積を、例えば発毛評価ポイントとして数値化して、投与した養毛物を総合的に評価することができる。
【００１４】
（２）発毛維持日数の把握について：
発毛維持日数、すなわち背部皮膚表面上に発毛が認められてから休止期に入って脱落するまでの日数を把握することによって、投与する養毛物の毛周期における成長期の延長効果を把握することができる。
この発毛維持日数の把握は、例えば発毛部位の一定距離における移動期間を把握して発毛部位の移動速度を求めて、この移動速度と発毛部位の平均幅とにより行うことができる。
【００１５】
この移動速度が速い程、発毛維持日数が短く、成長期から退行期への移行が早く、逆に遅い程、毛が成長期に止まる期間が長く、成長期が延長していることを示すものである。
また、さらにマウスの肩のラインから背中線を引き、そのある一点〔例えば、その背中線の長さを１としたときの中点（０．５）等〕における発毛維持期間を求めることにより、それを発毛維持日数とすることができる。
このようにして、発毛維持日数を把握して、投与した養毛物による毛の成長期の延長作用を検定することができる。
【００１６】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、この実施例により、本発明の技術的範囲が限定して解釈されるべきものではない。
〔実施例〕  サイクロスポリンＡによる養毛作用の検定
本発明育毛検定方法により、発毛作用が認められているサイクロスポリンＡの養毛作用を検討した。
【００１７】
0003582940.tif 000002
【００１８】
試験方法
上記ヌードマウスの背部に、各投与薬剤０．１ｍｌずつを毎日１回塗布した。２〜３日毎に外観発毛状態を写真撮影により観察した。
【００１９】
（１）発毛面積比と発毛状態の評価による発毛評価
▲１▼発毛面積比の測定
ヌードマウス（以下、単にマウスともいう）の肩のラインから尾までの背中の面積に対する発毛部面積の割合を算出した。
すなわち、サイクロスポリンＡを塗布したマウスの背部において、
式（発毛面積比）＝（発毛部面積）／（背部面積）
により、発毛面積比を算出した。
【００１９】
第１図に各群におけるマウスの個体毎の発毛面積比の経時的変化を示した。
また、第２図に各群におけるマウスの発毛面積比の平均値の変化を示した。
さらに、第３図には、各群におけるマウスの発毛面積比の試験期間中の平均値を示した。
【００２０】
第１図〜第３図を通じて、用量依存的な養毛効果が認められているサイクロスポリンＡの投与量に対して用量依存的に発毛面積比が大きくなっていることは明らかである。
【００２１】
特に、第３図において、試験期間中の発毛面積比の平均がサイクロスポリンＡの用量に依存して増加していたことにより、試験期間中を通じて発毛部位の幅がサイクロスポリンＡの用量に依存して増大し、その結果サイクロスポリンＡの投与により発毛維持期間が延長することが示された。
【００２３】
よって、上記の試験系で発毛面積比を算出することにより、ヌードマウスでの発毛効果、特に毛の成長期が延長したことを示す発毛維持日数の延長をを的確に判定できることが示された。
【００２４】
（２）発毛維持日数の評価による成長期延長の評価
▲１▼発毛部位の位置の測定及び発毛部幅の算出
マウスの背部の中心線上の肩の位置を０及び尾の位置を１として、この座標軸上での発毛部先端（尾側）と後端（首側）との位置を測定し、発毛部幅を（先端の位置）−（後端の位置）より算出した。
【００２５】
▲２▼発毛維持期間の算出（１）
発毛部先端が、座標上の０ポイント及び１ポイントを通過するときの日数（０ポイント：ａ，１ポイント：ｂ）をそれぞれ求め、「発毛部先端が０ポイントから１ポイントへと移動するのに要する期間」である（ｂ−ａ）及び「発毛部の移動速度」である〔１／（ｂ−ａ）〕を算出し、さらに「発毛維持期間」として、（発毛部幅）／〔１／（ｂ−ａ）〕を算出した。その結果を第１表に示す。
【００２６】
【表１】
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【００２７】
第１表より発毛維持期間は、エタノール投与群（ＥｔＯＨ）で約２日，１％サイクロスポリンＡ投与群（１％  ＣｙｓＡ）で約５日という、サイクロスポリンＡの養毛効果を的確に示す結果が得られた。よって、この方法によりヌードマウスでの毛の成長期が延長したことを示す発毛維持期間の延長をを的確に判定できることが示された。
【００２８】
▲３▼発毛維持期間の算出（２）
薬剤投与６０日齢付近（発毛サイクルの２サイクル目に相当する）における発毛部先端及び後端が０．５ポイントを通過するときの日数（ｃ，ｄ）を求め、「０．５ポイントでの発毛維持期間」である（ｄ−ｃ）を算出した。
その結果を第２表に示す。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
第２表より、発毛維持期間は、エタノール投与群（ＥｔＯＨ）では約２日，１％サイクロスポリンＡ投与群（１％  ＣｙｓＡ）で約５日，５％サイクロスポリンＡ投与群（５％  ＣｙｓＡ）で約７日であり、サイクロスポリンＡの濃度に依存して発毛維持期間が延長し、サイクロスポリンＡの養毛効果を的確に示す結果が得られた。また、この結果は上記の発毛維持期間の算出法（１）とほぼ一致していたことから、これらの発毛維持期間の算出法は両者とも信頼性が認められるものであることが示された。
なお、念のために発毛促進効果が既に認められているレチノール（０．１％）についても、この系で発毛維持期間を算出したところ、本来レチノールに備わっている発毛促進効果が確認された。
【００３１】
【発明の効果】
本発明により、養毛剤等の養毛物の簡便かつ確実な毛周期における成長期の延長効果のインビボの検定手段が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】各群におけるマウスの個体毎の発毛面積比の経時的変化を示した図である。
【図２】各群におけるマウスの個体毎の発毛面積比の経時的変化を示した図である。
【図３】各群におけるマウスの発毛面積比の平均値の変化を示した図である。
【図４】各群におけるマウスの発毛面積比の試験期間中の平均値を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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