【手続補正書】
【提出日】平成28年12月12日(2016.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
目的ゲノム遺伝子座における標的配列の操作により生物または非ヒト生物を改変する方法において、
Ａ）−Ｉ．ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系キメラＲＮＡ（ｃｈｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド配列であって、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列、および
（ｃ）ｔｒａｃｒ配列、
を含むポリヌクレオチド配列、および
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードするポリヌクレオチド配列であって、場合により少なくとも１つ以上の核局在化配列を含む配列
［（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、５’から３’配向で配置されており、
転写されると前記ｔｒａｃｒメイト配列が前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、かつ前記ガイド配列が前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、および
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、かつ前記ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードするポリヌクレオチド配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡである］、
または
（Ｂ）Ｉ．ポリヌクレオチドであって、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、および
（ｂ）少なくとも１つ以上のｔｒａｃｒメイト配列
を含むポリヌクレオチド、
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードするポリヌクレオチド配列、および
ＩＩＩ．ｔｒａｃｒ配列を含むポリヌクレオチド配列
［転写されると前記ｔｒａｃｒメイト配列が前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、かつ前記ガイド配列が前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、および
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、かつ前記ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードするポリヌクレオチド配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡである］
を含む天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物を送達することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードするポリヌクレオチド配列、ガイド配列、ｔｒａｃｒメイト配列またはｔｒａｃｒ配列の一部または全部がＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする配列、前記ガイド配列、ｔｒａｃｒメイト配列またはｔｒａｃｒ配列をコードするポリヌクレオチドがＲＮＡであり、かつリポソーム、ナノ粒子、エキソソーム、微小胞、または遺伝子銃によって送達される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリヌクレオチドが、１つ以上のベクターを含むベクター系内に含まれる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
目的ゲノム遺伝子座における標的配列の操作により生物または非ヒト生物を改変する方法であって、
組成物を発現させるため組成物を作動可能にコードする１つ以上のウイルスベクターを含むウイルスベクター系を含む天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物を送達することを含み、前記組成物が、
（Ａ）天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物であって
Ｉ．ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系キメラＲＮＡ（ｃｈｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド配列に作動可能に結合している第１の調節エレメントであって、前記ポリヌクレオチド配列が、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列、および
（ｃ）ｔｒａｃｒ配列、
を含む、第１の調節エレメント、および
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメントであって、場合により少なくとも１つ以上の核局在化配列を含む第２の調節エレメント
［（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、５’から３’配向で配置されており、
成分ＩおよびＩＩは、前記系の前記同じまたは異なるベクター上にあり、
転写されると前記ｔｒａｃｒメイト配列が前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、かつ前記ガイド配列が前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、および
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む］
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含む組成物、
または
（Ｂ）天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物であって
Ｉ．第１の調節エレメントであって、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、および
（ｂ）少なくとも１つ以上のｔｒａｃｒメイト配列
に作動可能に結合している第１の調節エレメント、
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント、および
ＩＩＩ．ｔｒａｃｒ配列に作動可能に結合している第３の調節エレメント
［成分Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩは前記系の前記同じまたは異なるベクター上にあり、
転写されると前記ｔｒａｃｒメイト配列が前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、かつ前記ガイド配列が前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、および
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む］
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含む組成物
を含む、方法。
【請求項６】
前記ウイルスベクターの１つ以上が、リポソーム、ナノ粒子、エキソソーム、微小胞、または遺伝子銃によって送達される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
目的ゲノム遺伝子座中の標的配列の異常により引き起こされる病態の治療または阻害が必要とされる対象または非ヒト対象における目的ゲノム遺伝子座中の標的配列の異常により引き起こされる病態を治療または阻害する方法であって、前記標的配列の操作により前記対象または非ヒト対象を改変することを含み、前記病態は、
組成物を発現させるためその組成物を作動可能にコードする１つ以上のＡＡＶまたはレンチウイルスベクターを含むＡＡＶまたはレンチウイルスベクター系を含む天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物を送達すること
を含む治療を提供することを含む前記標的配列の操作による治療または阻害に感受性があり、前記標的配列は発現時の前記組成物により操作され、前記組成物が、
（Ａ）天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物であって、
Ｉ．ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系キメラＲＮＡ（ｃｈｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド配列に作動可能に結合している第１の調節エレメントであって、前記ポリヌクレオチド配列が、
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、
（ｂ）ｔｒａｃｒメイト配列、および
（ｃ）ｔｒａｃｒ配列
を含む、第１の調節エレメント、および
ＩＩ．少なくとも１つ以上の核局在化配列を含むＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント
［（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、５’から３’配向で配置されており、
成分ＩおよびＩＩは、前記系の前記同じまたは異なるベクター上にあり、
転写されると前記ｔｒａｃｒメイト配列が前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、かつ前記ガイド配列がＣＲＩＳＰＲ複合体と前記標的配列との配列特異的結合を指向し、および
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む］
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含む組成物、
または
（Ｂ）天然に存在しないまたはエンジニアリングされた組成物であって、
Ｉ．第１の調節エレメントであって
（ａ）真核細胞中の標的配列にハイブリダイズし得るガイド配列、および
（ｂ）少なくとも１つ以上のｔｒａｃｒメイト配列
に作動可能に結合している第１の調節エレメント、
ＩＩ．ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に結合している第２の調節エレメント、および
ＩＩＩ．ｔｒａｃｒ配列に作動可能に結合している第３の調節エレメント
［成分Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩは前記系の前記同じまたは異なるベクター上にあり、
転写されると前記ｔｒａｃｒメイト配列が前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズし、かつ前記ガイド配列が前記標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指向し、および
前記ＣＲＩＳＰＲ複合体は、（１）前記標的配列にハイブリダイズされる前記ガイド配列、および（２）前記ｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズされる前記ｔｒａｃｒメイト配列と複合体形成している前記ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む］
を含む１つ以上のベクターを含むベクター系を含む組成物
を含む、方法。
【請求項８】
インビトロ、および／またはエキソビボで実行される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
発現を誘導することを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物または対象が真核生物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記生物または対象が非ヒト真核生物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記生物または対象が哺乳動物または非ヒト哺乳動物である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ウイルスベクターがＡＡＶまたはレンチウイルスベクターである、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＲＩＳＰＲ酵素がＣａｓ９である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ガイド配列の発現が前記Ｔ７プロモーターの制御下にあり、Ｔ７ポリメラーゼの前記発現によってドライブされる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。