【手続補正書】
【提出日】平成29年1月17日(2017.1.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の膜電位を約−７０ｍＶ〜約−１１０ｍＶの範囲にある第1の膜電位で保持し、試験化合物が前記細胞におけるＴ型Ｃａ2+チャネル活性を阻害するかを測定すること；および
前記試験化合物が前記細胞中のＴ型Ｃａ2+チャネル活性を阻害するとの決定に基づいて、前記試験化合物が、Ｇ１／Ｓチェックポイントを通る細胞周期進行を阻害すること、細胞増殖性障害における細胞の増殖を阻害すること、および／または細胞増殖性障害の処置において放射線および／または化学療法薬の有効性を増強することに対する有用性を有していると同定すること
を含む、生物学的アッセイ方法。
【請求項２】
前記第１の細胞膜電位が約−８０ｍＶ〜約−１００ｍＶの範囲にある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の細胞膜電位が約−９０ｍＶである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
細胞を前記第１の細胞膜電位で保持する場合に、前記Ｔ型カルシウムチャネル活性を阻害することにおける前記試験化合物のＩＣ50である第１のＩＣ50を測定することをさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記試験化合物が前記有用性を有することの同定が、前記第１のＩＣ50が約１０００μＭ以下であるという決定に基づく、任意の請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記試験化合物が前記有用性を有することの同定が、前記第１のＩＣ50が約１０μＭ以下であるという決定に基づく、任意の請求項４に記載の方法。
【請求項７】
細胞の前記膜電位を約−３０ｍＶ〜約−６０ｍＶの範囲にある第２の細胞膜電位で保持する場合の、前記細胞における前記Ｔ型カルシウムチャネル活性を阻害することにおける前記試験化合物のＩＣ50である、第２のＩＣ50を測定すること、および前記第１のＩＣ50対前記第２のＩＣ50の比を算出することをさらに含む、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記第２の細胞膜電位が、約−３０ｍＶ〜約−５０ｍＶの範囲にある、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第２の細胞膜電位が、約−４０ｍＶである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１のＩＣ50対前記第２のＩＣ50の比が、約２０：１以下、好ましくは約１０：１以下であるという決定に基づいて、前記試験化合物が前記有用性を有することを同定すること、および前記化合物が神経によって媒介される副作用に関する減少した傾向を有することを同定することをさらに含む、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１のＩＣ50対前記第２のＩＣ50の比が、約１：１以下、好ましくは約１：１０以下であるという決定に基づいて、前記試験化合物が前記有用性を有することを同定すること、および前記化合物が神経によって媒介される副作用に関する減少した傾向を有することを同定することをさらに含む、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞膜電位を、パッチクランプ技法を使用して制御する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
試験化合物がＴ型Ｃａ2+チャネル活性を阻害する能力を、前記化合物が前記細胞中への成長因子刺激カルシウム流入を阻害する能力を決定することによって決定する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞中へのカルシウム流入を、カルシウム感受性マーカーを使用して、細胞内カルシウムのレベルの増加を測定することによって決定する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記カルシウム感受性マーカーが、カルシウム感受性蛍光色素である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記試験化合物が、Ｇ１／Ｓチェックポイントを通る細胞周期進行を阻害することに対する有用性を有することを同定することを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記試験化合物が、細胞増殖性障害における細胞の増殖を阻害することに対する有用性を有することを同定することを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞増殖性障害のための処置を必要としている対象の１つ以上の増殖細胞を使用して、前記方法を行う、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記試験化合物が、細胞増殖性障害の処置において放射線および／または化学療法薬の有効性を増強することに対する有用性を有することを同定することを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法を、前記細胞増殖性障害のための処置を必要としている対象の１つ以上の増殖細胞を使用して行う、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化学療法薬が、テモゾロミド、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イリノテカン、トポテカン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン；ビンデシンおよびマイトマイシンＣからなる群から選択される、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記化学療法薬がテモゾロミドである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法薬がカルボプラチンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学療法薬がゲムシタビンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項１〜１５または１７〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記癌が、脳癌、乳癌、結腸癌、神経膠腫、グリア芽細胞腫、メラノーマ、卵巣癌および膵癌からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌が脳癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌が神経膠腫である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が卵巣癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が膵癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
細胞膜電位を約−９０ｍＶで保持する場合に、試験化合物が細胞におけるＴ型Ｃａ2+チャネル活性を阻害するかを測定することを含む生物学的アッセイ方法。
【請求項３２】
パッチクランプ技法によって、前記細胞膜電位を約−９０ｍＶで保持する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記試験化合物が約−９０ｍＶの細胞膜電位で前記細胞におけるＴ型Ｃａ2+チャネル活性を阻害する能力を、前記化合物が前記膜電位で前記細胞中への成長因子刺激カルシウム流入を防ぐかを決定することによって測定する、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞中へのカルシウム流入を、カルシウム感受性マーカーを使用して、細胞内カルシウムのレベルの増加を測定することによって決定する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記カルシウム感受性マーカーが、カルシウム感受性蛍光色素である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
細胞の膜電位を約−７０ｍＶ〜約−１１０ｍＶの範囲にある第1の膜電位で保持する場合の、前記細胞におけるＴ型カルシウムチャネル活性の阻害における試験化合物のＩＣ５０である、第１のＩＣ５０を測定すること、および
細胞の膜電位を約−３０ｍＶ〜約−６０ｍＶの範囲にある第２の膜電位で保持する場合の、前記細胞におけるＴ型カルシウムチャネル活性の阻害における試験化合物のＩＣ５０である、第２のＩＣ５０を測定すること、および
前記第１のＩＣ50対前記第２のＩＣ50の比を算出すること
を含む、アッセイ方法。