【手続補正書】
【提出日】平成29年11月20日(2017.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンジュゲートした抗体を生成する方法であって、
（ａ）精製スキームの精製ステップを少なくとも１つ実施して、抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を、前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の培養物から得るステップと、
（ｂ）前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、ステップ（ａ）と（ｂ）を、異なる精製ステップを用いて繰り返すステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されるレベルのＣＨＯ細胞酸化酵素が存在するかまたは存在しないことが検出された場合に、同じ培養物または前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の第２の培養物に対して、検出されるＣＨＯ細胞酸化酵素が許容されるレベルになるまたはＣＨＯ細胞酸化酵素が検出されなくなる精製ステップを少なくとも１つ実施して、抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を得るステップと
を含む、方法。
【請求項２】
前記少なくとも部分的に精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップ（ｅ）をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＣＨＯ細胞酸化酵素がＱＳＯＸ１である、および／または
ステップ（ｄ）の前記第２の培養物がステップ（ａ）の前記培養物よりも体積が大きい培養物であり、特に、ステップ（ｄ）の前記第２の培養物の体積が、ステップ（ａ）の培養物よりも少なくとも１０００倍大きい、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（ｄ）および（ｅ）を、前記抗体の異なる培養物に対して少なくとも１年の期間にわたって複数回実施する、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
検出される酵素が許容されるレベルになるまたは酵素が検出されなくなる前記精製スキームが、１５０〜５００ｍＭのＮａＣｌの濃度での塩洗浄を用いてプロテインＡカラムを洗浄するステップ、深層濾過を使用するステップ、第四級アンモニウムイオンカラムを用いた陰イオン交換を使用するステップ、またはフェニルメンブレン濾過を使用するステップの少なくとも１つを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記試験するステップが、ゲル上の６５ｋＤａ〜７５ｋＤａのバンドを同定するステップを含み、特に、前記バンドがウェスタンブロットまたは銀染色によって同定されるか、または、
前記試験するステップが、ＱＳＯＸ１活性についての機能試験を含み、特に、前記機能試験により、前記活性の指標として過酸化水素が生成され、特に、前記活性が亜鉛イオンによって阻害され、その阻害がＥＤＴＡによって逆転される、
請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体がブレンツキシマブではない、および／または
前記薬物が、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、化学療法感作物質およびピロロベンゾジアゼピン二量体から選択される、
請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＣＨＯ細胞培養物から抗体を精製するための方法を決定する方法であって、
（ａ）精製方法を実施して、抗体を発現するＣＨＯ細胞の培養物から前記抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を得るステップと、
（ｂ）前記調製物をＣＨＯ酵素ＱＳＯＸ１の存在について試験するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、ステップ（ａ）と（ｂ）を、異なる精製方法を用いて繰り返すステップと
を含む、方法。
【請求項９】
コンジュゲートした抗体を生成する方法であって、
プロテインＡカラムを２５〜１００ｍＭのＮａＣｌの濃度で洗浄するステップ、深層濾過を使用するステップ、第四級アンモニウムイオンカラムを用いた陰イオン交換を使用するステップ、またはフェニルメンブレン濾過を使用するステップの少なくとも１つを含む精製方法によってＣＨＯ細胞の培養物から抗体を精製するステップであって、前記抗体は、前記培養物中のＱＳＯＸ１酵素から分離される、ステップと、
前記精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して細胞傷害性薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップと
を含むか、あるいは
（ａ）精製スキームの精製ステップを少なくとも１つ実施して、抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を、前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の培養物から得るステップと、
（ｂ）前記少なくとも部分的に精製された抗体を、前記コンジュゲートした抗体を生成する条件下で、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して細胞傷害性薬物とコンジュゲートするステップであって、ここで許容されない低レベルのコンジュゲートした抗体が生成される、ステップと、
（ｃ）ステップ（ａ）の前記精製された調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）において許容されないレベルの前記ＣＨＯ細胞酸化酵素が存在することが検出された場合に、ステップ（ｃ）において前記ＣＨＯ細胞酸化酵素が存在しなくなるまでまたは許容されるレベルになるまで、ステップ（ａ）および（ｃ）を、異なる精製ステップを用いて実施するステップと、
（ｅ）前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の第２の培養物に対して、検出されるＱＳＯＸ１酵素が許容されるレベルになるまたはＱＳＯＸ１酵素が検出されなくなる少なくとも１つの前記精製ステップを実施して、精製された抗体を得るステップと、
（ｆ）前記精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して細胞傷害性薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップと
を含むか、あるいは
（ａ）抗体の調製物を得るステップと、
（ｂ）前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、精製ステップを実施して、前記ＣＨＯ細胞酸化酵素を許容されるレベルまで除去するステップと、
（ｄ）少なくとも部分的に精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップとを含む、方法。
【請求項１０】
抗体調製物の、医薬品コンジュゲーションとして使用するための適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
前記抗体調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、前記調製物を、医薬品コンジュゲーションに適さず、さらなる精製を必要とするものとして同定するステップと、
前記抗体調製物中に酵素が許容されるレベルで存在するかまたは存在しないことが検出された場合に、前記調製物を医薬品コンジュゲーションに適するものとして同定するステップとを含む、方法。
【請求項１１】
抗体調製物の薬物とのコンジュゲーションに対する適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
前記抗体調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、前記調製物を、前記薬物とのコンジュゲーションに適さず、さらなる精製を必要とするものとして同定するステップと、
前記抗体調製物中に酵素が許容されるレベルで存在するかまたは存在しないことが検出された場合に、前記調製物を前記薬物とのコンジュゲーションに適するものとして同定するステップとを含む、方法。
【請求項１２】
抗体調製物の、医薬品コンジュゲーションとして使用するための適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップ
を含む、方法。
【請求項１３】
抗体調製物の薬物とのコンジュゲーションに対する適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップ
を含む、方法。
【請求項１４】
前記抗体がＣＨＯ細胞において産生された抗体である、および／または
前記抗体調製物が、すでに少なくとも１つの精製ステップに供されており、特に、前記精製ステップがクロマトグラフィー精製ステップである、
請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
抗体がコンジュゲーション前にＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験された、抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１６】
前記試験するステップが、ゲル上の６５ｋＤａ〜７５ｋＤａのバンドを同定するステップを含み、特に、前記バンドがウェスタンブロットまたは銀染色によって同定されるか、または、
前記試験するステップが、ＱＳＯＸ１活性についての機能試験を含み、特に、前記機能試験により、前記活性の指標として過酸化水素が生成され、特に、前記活性が亜鉛イオンによって阻害され、その阻害はＥＤＴＡによって逆転される、
請求項８から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記試験するステップが、対照試料中の遊離のチオール基とＤＴＮＢの間の反応および試験試料中の遊離のチオール基とＤＴＮＢの間の反応をモニタリングするステップと、その２つを比較するステップを伴う、請求項１から５、または請求項８から１５のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
文脈からそうでないことが明らかでない限り、「約」という用語は、明示された値の標準偏差の範囲内の値を包含する。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
コンジュゲートした抗体を生成する方法であって、
（ａ）精製スキームの精製ステップを少なくとも１つ実施して、抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を、前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の培養物から得るステップと、
（ｂ）前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、ステップ（ａ）と（ｂ）を、異なる精製ステップを用いて繰り返すステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されるレベルのＣＨＯ細胞酸化酵素が存在するかまたは存在しないことが検出された場合に、同じ培養物または前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の第２の培養物に対して、検出されるＣＨＯ細胞酸化酵素が許容されるレベルになるまたはＣＨＯ細胞酸化酵素が検出されなくなる精製ステップを少なくとも１つ実施して、抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を得るステップと
を含む、方法。
（項目２）
前記少なくとも部分的に精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップ（ｅ）をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＣＨＯ細胞酸化酵素がＱＳＯＸ１である、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
ステップ（ｄ）の前記第２の培養物がステップ（ａ）の前記培養物よりも体積が大きい培養物である、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
ステップ（ｄ）の前記第２の培養物の体積が、ステップ（ａ）の培養物よりも少なくとも１０００倍大きい、項目４に記載の方法。
（項目６）
ステップ（ｄ）および（ｅ）を、前記抗体の異なる培養物に対して少なくとも１年の期間にわたって複数回実施する、項目２に記載の方法。
（項目７）
検出される酵素が許容されるレベルになるまたは酵素が検出されなくなる前記精製スキームが、１５０〜５００ｍＭのＮａＣｌの濃度での塩洗浄を用いてプロテインＡカラムを洗浄するステップ、深層濾過を使用するステップ、第四級アンモニウムイオンカラムを用いた陰イオン交換を使用するステップ、またはフェニルメンブレン濾過を使用するステップの少なくとも１つを含む、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記試験するステップが、ゲル上の６５ｋＤａ〜７５ｋＤａのバンドを同定するステップを含む、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記バンドをウェスタンブロットまたは銀染色によって同定する、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記試験するステップが、ＱＳＯＸ１活性についての機能試験を含む、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記機能試験により、前記活性の指標として過酸化水素が生成される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記活性が亜鉛イオンによって阻害され、その阻害がＥＤＴＡによって逆転される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記抗体がブレンツキシマブではない、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
細胞傷害性薬物が、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、化学療法感作物質およびピロロベンゾジアゼピン二量体から選択される、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
ＣＨＯ細胞培養物から抗体を精製するための方法を決定する方法であって、
（ａ）精製方法を実施して、抗体を発現するＣＨＯ細胞の培養物から前記抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を得るステップと、
（ｂ）前記調製物をＣＨＯ酵素ＱＳＯＸ１の存在について試験するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、ステップ（ａ）と（ｂ）を、異なる精製方法を用いて繰り返すステップと
を含む、方法。
（項目１６）
コンジュゲートした抗体を生成する方法であって、
プロテインＡカラムを２５〜１００ｍＭのＮａＣｌの濃度で洗浄するステップ、深層濾過を使用するステップ、第四級アンモニウムイオンカラムを用いた陰イオン交換を使用するステップ、またはフェニルメンブレン濾過を使用するステップの少なくとも１つを含む精製方法によってＣＨＯ細胞の培養物から抗体を精製するステップであって、前記抗体は、前記培養物中のＱＳＯＸ１酵素から分離される、ステップと、
前記精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して細胞傷害性薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップと
を含む、方法。
（項目１７）
コンジュゲートした抗体を生成する方法であって、
（ａ）精製スキームの精製ステップを少なくとも１つ実施して、抗体の少なくとも部分的に精製された調製物を、前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の培養物から得るステップと、
（ｂ）前記少なくとも部分的に精製された抗体を、前記コンジュゲートした抗体を生成する条件下で、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して細胞傷害性薬物とコンジュゲートするステップであって、ここで許容されない低レベルのコンジュゲートした抗体が生成される、ステップと、
（ｃ）ステップ（ａ）の前記精製された調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
（ｄ）ステップ（ｃ）において許容されないレベルの前記ＣＨＯ細胞酸化酵素が存在することが検出された場合に、ステップ（ｃ）において前記ＣＨＯ細胞酸化酵素が存在しなくなるまでまたは許容されるレベルになるまで、ステップ（ａ）および（ｃ）を、異なる精製ステップを用いて実施するステップと、
（ｅ）前記抗体を発現するＣＨＯ細胞の第２の培養物に対して、検出されるＱＳＯＸ１酵素が許容されるレベルになるまたはＱＳＯＸ１酵素が検出されなくなる少なくとも１つの前記精製ステップを実施して、精製された抗体を得るステップと、
（ｆ）前記精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して細胞傷害性薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップと
を含む、方法。
（項目１８）
コンジュゲートした抗体を生成する方法であって、
（ａ）抗体の調製物を得るステップと、
（ｂ）前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、精製ステップを実施して、前記ＣＨＯ細胞酸化酵素を許容されるレベルまで除去するステップと、
（ｄ）少なくとも部分的に精製された抗体を、１つまたは複数のスルフヒドリル基を介して薬物とコンジュゲートして、前記コンジュゲートした抗体を生成するステップと
を含む、方法。
（項目１９）
抗体調製物の、医薬品として使用するための適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
前記抗体調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、前記調製物を、コンジュゲーションに適さないものとして同定し、さらなる精製を必要とするステップと、
前記抗体調製物中に酵素が許容されるレベルで存在するかまたは存在しないことが検出された場合に、前記調製物をコンジュゲーションに適するものとして同定するステップとを含む、方法。
（項目２０）
抗体調製物の薬物とのコンジュゲーションに対する適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップと、
前記抗体調製物中に許容されないレベルの前記酵素が存在することが検出された場合に、前記調製物を、コンジュゲーションに適さないものとして同定し、さらなる精製を必要とするステップと、
前記抗体調製物中に酵素が許容されるレベルで存在するかまたは存在しないことが検出された場合に、前記調製物をコンジュゲーションに適するものとして同定するステップとを含む、方法。
（項目２１）
抗体調製物の、医薬品として使用するための適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップ
を含む、方法。
（項目２２）
抗体調製物の薬剤（例えば、薬物）とのコンジュゲーションに対する適合性を決定する方法であって、
前記調製物をＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験するステップ
を含む、方法。
（項目２３）
前記抗体がＣＨＯ細胞において産生された抗体である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記抗体調製物が、すでに少なくとも１つの精製ステップに供されている、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記精製ステップがクロマトグラフィー精製ステップである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
抗体がコンジュゲーション前にＣＨＯ細胞酸化酵素の存在について試験された、抗体薬物コンジュゲート。
（項目２７）
前記試験するステップが、ゲル上の６５ｋＤａ〜７５ｋＤａのバンドを同定するステップを含む、項目１５または項目１７から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記バンドがウェスタンブロットまたは銀染色によって同定される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記試験するステップが、ＱＳＯＸ１活性についての機能試験を含む、項目１５または項目１７から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記機能試験により、前記活性の指標として過酸化水素が生成される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記活性が亜鉛イオンによって阻害され、その阻害はＥＤＴＡによって逆転される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記試験するステップが、対照試料中の遊離のチオール基とＤＴＮＢの間の反応および試験試料中の遊離のチオール基とＤＴＮＢの間の反応をモニタリングするステップと、その２つを比較するステップを伴う、項目１から７、項目１５または項目１７から２６のいずれか一項に記載の方法。