【手続補正書】
【提出日】平成29年2月17日(2017.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
内在性ＭＨＣ遺伝子座に、
キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列であって、非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをコードする配列に作動可能に連結しているヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの細胞外ドメインをコードする配列を含む第１のヌクレオチド配列、
キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列であって、非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをコードする配列に作動可能に連結しているヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの細胞外ドメインをコードする配列を含む第２のヌクレオチド配列、および
キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドをコードする第３のヌクレオチド配列であって、非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをコードする配列に作動可能に連結しているヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの細胞外ドメインをコードする配列を含む第３のヌクレオチド配列
を含む非ヒト動物であって、
内在性非ヒトＭＨＣ遺伝子座からキメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉタンパク質およびＭＨＣ  ＩＩタンパク質を発現する非ヒト動物。
【請求項２】
前記内在性非ヒトＭＨＣ遺伝子座から機能的な内在性ＭＨＣ  Ｉ、ＩＩα、および／またはＩＩβポリペプチドを細胞の表面上に発現しない、請求項１に記載の動物。
【請求項３】
前記第１のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉ遺伝子座に位置し、前記第２のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩα遺伝子座に位置し、前記第３のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩβ遺伝子座に位置する、請求項１に記載の動物。
【請求項４】
前記第１のヌクレオチド配列、第２のヌクレオチド配列および／または第３のヌクレオチド配列が内在性非ヒト調節エレメントに作動可能に連結している、請求項１に記載の動物。
【請求項５】
前記ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの前記細胞外ドメインが、前記ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドのα１ドメイン、α２ドメイン、およびα３ドメインを含む、請求項１に記載の動物。
【請求項６】
前記非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドが、内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドである、請求項１に記載の動物。
【請求項７】
前記ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃからなる群から選択される、請求項１に記載の動物。
【請求項８】
内在性非ヒトβ２ミクログロブリン遺伝子座にヒトまたはヒト化β２ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該ヒトまたはヒト化β２ミクログロブリンポリペプチドを発現する、請求項１に記載の動物。
【請求項９】
前記ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの前記細胞外ドメインが、前記ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドのα１およびα２ドメインを含む、請求項１に記載の動物。
【請求項１０】
前記ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの前記細胞外ドメインが、前記ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドのβ１およびβ２ドメインを含む、請求項１に記載の動物。
【請求項１１】
前記第１のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉプロモーターおよび調節エレメントに作動可能に連結しており、前記第２のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩαプロモーターおよび調節エレメントに作動可能に連結しており、前記第３のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩβプロモーターおよび調節エレメントに作動可能に連結している、請求項１に記載の動物。
【請求項１２】
前記非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドが、内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドである、請求項１に記載の動物。
【請求項１３】
前記非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドが、内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドである、請求項１に記載の動物。
【請求項１４】
前記ヒトＭＨＣ  ＩＩαおよびβポリペプチドが、それぞれ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱ、およびＨＬＡ−ＤＰからなる群から選択されるヒトＨＬＡクラスＩＩタンパク質のαポリペプチドおよびβポリペプチドである、請求項１に記載の動物。
【請求項１５】
前記ヒトＭＨＣ  ＩＩタンパク質が、ヒトＨＬＡ−ＤＲタンパク質である、請求項１４に記載の動物。
【請求項１６】
げっ歯類である、請求項１に記載の動物。
【請求項１７】
マウスまたはラットである、請求項１６に記載のげっ歯類。
【請求項１８】
マウスである、請求項１７に記載のげっ歯類。
【請求項１９】
前記非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドが、マウスＨ−２Ｋ、Ｈ−２Ｄ、またはＨ−２Ｌポリペプチドである、請求項１８に記載のマウス。
【請求項２０】
前記非ヒトＭＨＣ  ＩポリペプチドがマウスＨ−２Ｋポリペプチドである、請求項１９に記載のマウス。
【請求項２１】
前記非ヒトＭＨＣ  ＩＩαおよびβポリペプチドが、それぞれ、マウスＨ−２ＥまたはＨ−２Ａのαポリペプチドおよびβポリペプチドである、請求項１８に記載のマウス。
【請求項２２】
前記非ヒトＭＨＣ  ＩＩαおよびβポリペプチドが、それぞれ、マウスＨ−２Ｅのαポリペプチドおよびβポリペプチドである、請求項２１に記載のマウス。
【請求項２３】
内在性ＭＨＣ遺伝子座に、
キメラヒト／マウスＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列であって、マウスＭＨＣ  Ｉポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをコードする配列に作動可能に連結しているヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの細胞外ドメインをコードする配列を含む第１のヌクレオチド配列、
キメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列であって、マウスＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをコードする配列に作動可能に連結しているヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの細胞外ドメインをコードする配列を含む第２のヌクレオチド配列、および
キメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドをコードする第３のヌクレオチド配列であって、マウスＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをコードする配列に作動可能に連結しているヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの細胞外ドメインをコードする配列を含む第３のヌクレオチド配列
を含むマウスであって、
内在性マウスＭＨＣ遺伝子座からキメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩおよびＭＨＣ  ＩＩタンパク質を発現するマウス。
【請求項２４】
前記第１のヌクレオチド配列がキメラＨＬＡ−Ａ／Ｈ−２Ｋポリペプチドをコードし、前記第２のヌクレオチド配列がキメラＨＬＡ−ＤＲ／Ｈ−２Ｅポリペプチドのα鎖をコードし、前記第３のヌクレオチド配列がキメラＨＬＡ−ＤＲ／Ｈ−２Ｅポリペプチドのβ鎖をコードし、前記マウスがＨＬＡ−Ａ／Ｈ−２ＫおよびＨＬＡ−ＤＲ／Ｈ−２Ｅタンパク質を発現する、請求項２３に記載のマウス。
【請求項２５】
内在性β２ミクログロブリン遺伝子座に、ヒトまたはヒト化β２ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２３に記載のマウス。
【請求項２６】
内在性ＭＨＣ遺伝子座から機能的な内在性ＭＨＣポリペプチドを細胞の表面上に発現しない、請求項２３に記載のマウス。
【請求項２７】
遺伝子改変非ヒト動物を作製する方法であって、
第１の非ヒト動物を作製するために、内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩ遺伝子座において、非ヒトＭＨＣ  ＩＩ複合体をコードするヌクレオチド配列をキメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩ複合体をコードするヌクレオチド配列で置き換えるステップ、および
第２の非ヒト動物を作製するために、内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉ遺伝子座において、非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をキメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードするヌクレオチド配列で置き換えるステップ
を含む方法。
【請求項２８】
ヌクレオチド配列を置き換える前記ステップが、非ヒトＥＳ細胞における相同組換えを含み、キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩ複合体をコードするヌクレオチド配列を担持するＥＳ細胞における相同組換えによって第２の非ヒト動物が作製される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ヌクレオチド配列を置き換える前記ステップが、非ヒトＥＳ細胞における相同組換えを含み、キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を担持するＥＳ細胞における相同組換えによって第１の非ヒト動物が作製される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記動物がマウスである、請求項２７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本明細書では、本明細書に記載の非ヒト動物（例えば、げっ歯類、例えばマウスまたはラット）に由来する細胞、例えば、単離された抗原提示細胞も提供される。本明細書に記載の非ヒト動物に由来する組織および胚も提供される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
内在性ＭＨＣ遺伝子座に、
キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列であって、該キメラＭＨＣ  Ｉポリペプチドのヒト部分がヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの細胞外ドメインを含む第１のヌクレオチド配列、
キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列であって、該キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドのヒト部分がヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの細胞外ドメインを含む第２のヌクレオチド配列、および
キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドをコードする第３のヌクレオチド配列であって、該キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドのヒト部分がヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの細胞外ドメインを含む第３のヌクレオチド配列
を含む非ヒト動物であって、
内在性非ヒトＭＨＣ遺伝子座からキメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉタンパク質およびＭＨＣ  ＩＩタンパク質を発現する非ヒト動物。
（項目２）
前記内在性非ヒトＭＨＣ遺伝子座から機能的な内在性ＭＨＣ  Ｉ、ＩＩα、および／またはＩＩβポリペプチドを発現しない、項目１に記載の動物。
（項目３）
前記第１のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉ遺伝子座に位置し、前記第２のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩα遺伝子座に位置し、前記第３のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩβ遺伝子座に位置する、項目１に記載の動物。
（項目４）
前記第１のヌクレオチド配列、第２のヌクレオチド配列および／または第３のヌクレオチド配列が内在性非ヒト調節エレメントに作動可能に連結している、項目１に記載の動物。
（項目５）
前記キメラＭＨＣ  Ｉポリペプチドの前記ヒト部分が、前記ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドのα１ドメイン、α２ドメイン、およびα３ドメインを含む、項目１に記載の動物。
（項目６）
前記キメラＭＨＣ  Ｉポリペプチドの非ヒト部分が、内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む、項目１に記載の動物。
（項目７）
前記ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃからなる群から選択される、項目１に記載の動物。
（項目８）
内在性非ヒトβ２ミクログロブリン遺伝子座にヒトまたはヒト化β２ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該ヒトまたはヒト化β２ミクログロブリンポリペプチドを発現する、項目１に記載の動物。
（項目９）
前記ヒトＭＨＣ  ＩＩα細胞外ドメインが、ヒトＭＨＣ  ＩＩα１およびα２ドメインを含む、項目１に記載の動物。
（項目１０）
前記ヒトＭＨＣ  ＩＩβ細胞外ドメインが、ヒトＭＨＣ  ＩＩβ１およびβ２ドメインを含む、項目１に記載の動物。
（項目１１）
前記第１のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉプロモーターおよび調節エレメントに作動可能に連結しており、前記第２のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩαプロモーターおよび調節エレメントに作動可能に連結しており、前記第３のヌクレオチド配列が内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩβプロモーターおよび調節エレメントに作動可能に連結している、項目１に記載の動物。
（項目１２）
前記キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの非ヒト部分が、内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む、項目１に記載の動物。
（項目１３）
前記キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの非ヒト部分が、内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む、項目１に記載の動物。
（項目１４）
前記キメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩαおよびβポリペプチドの前記ヒト部分が、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱ、およびＨＬＡ−ＤＰからなる群から選択されるヒトＨＬＡクラスＩＩタンパク質に由来する、項目１に記載の動物。
（項目１５）
前記キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩαおよびβポリペプチドの前記ヒト部分が、ヒトＨＬＡ−ＤＲタンパク質に由来する、項目１４に記載の動物。
（項目１６）
げっ歯類である、項目１に記載の動物。
（項目１７）
マウスまたはラットである、項目１６に記載のげっ歯類。
（項目１８）
マウスである、項目１７に記載のげっ歯類。
（項目１９）
前記第１のヌクレオチド配列がキメラヒト／マウスＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードし、該キメラＭＨＣ  Ｉポリペプチドのマウス部分がＨ−２Ｋ、Ｈ−２Ｄ、またはＨ−２Ｌに由来する、項目１８に記載のマウス。
（項目２０）
前記キメラＭＨＣ  Ｉポリペプチドの前記マウス部分がＨ−２Ｋに由来する、項目１９に記載のマウス。
（項目２１）
前記第２のヌクレオチド配列がキメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドをコードし、前記第３のヌクレオチド配列がキメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドをコードし、該キメラＭＨＣ  ＩＩαおよびβポリペプチドのマウス部分がＨ−２ＥまたはＨ−２Ａに由来する、項目１８に記載のマウス。
（項目２２）
前記キメラＭＨＣ  ＩＩポリペプチドの前記マウス部分がＨ−２Ｅに由来する、項目２１に記載のマウス。
（項目２３）
内在性ＭＨＣ遺伝子座に、
キメラヒト／マウスＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列であって、該キメラＭＨＣ  Ｉポリペプチドのヒト部分が、ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドの細胞外ドメインを含む第１のヌクレオチド配列、
キメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列であって、該キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩαポリペプチドのヒト部分が、ヒトＭＨＣ
ＩＩαポリペプチドの細胞外ドメインを含む第２のヌクレオチド配列、および
キメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドをコードする第３のヌクレオチド配列であって、該キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩβポリペプチドのヒト部分が、ヒトＭＨＣ
ＩＩβポリペプチドの細胞外ドメインを含む第３のヌクレオチド配列
を含むマウスであって、
内在性マウスＭＨＣ遺伝子座からキメラヒト／マウスＭＨＣ  ＩおよびＭＨＣ  ＩＩタンパク質を発現するマウス。
（項目２４）
前記第１のヌクレオチド配列がキメラＨＬＡ−Ａ／Ｈ−２Ｋポリペプチドをコードし、前記第２のヌクレオチド配列がキメラＨＬＡ−ＤＲ／Ｈ−２Ｅポリペプチドのα鎖をコードし、前記第３のヌクレオチド配列がキメラＨＬＡ−ＤＲ／Ｈ−２Ｅポリペプチドのβ鎖をコードし、前記マウスがＨＬＡ−Ａ／Ｈ−２ＫおよびＨＬＡ−ＤＲ／Ｈ−２Ｅタンパク質を発現する、項目２４に記載のマウス。
（項目２５）
内在性β２ミクログロブリン遺伝子座に、ヒトまたはヒト化β２ミクログロブリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目２４に記載のマウス。
（項目２６）
内在性ＭＨＣ遺伝子座から機能的な内在性ＭＨＣポリペプチドを発現しない、項目２４に記載のマウス。
（項目２７）
遺伝子改変非ヒト動物を作製する方法であって、
第１の非ヒト動物を作製するために、内在性非ヒトＭＨＣ  ＩＩ遺伝子座において、非ヒトＭＨＣ  ＩＩ複合体をコードするヌクレオチド配列をキメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩ複合体をコードするヌクレオチド配列で置き換えるステップ、および
第２の非ヒト動物を作製するために、内在性非ヒトＭＨＣ  Ｉ遺伝子座において、非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をキメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードするヌクレオチド配列で置き換えるステップ
を含む方法。
（項目２８）
ヌクレオチド配列を置き換える前記ステップが、非ヒトＥＳ細胞における相同組換えを含み、キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  ＩＩ複合体をコードするヌクレオチド配列を担持するＥＳ細胞における相同組換えによって第２の非ヒト動物が作製される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
ヌクレオチド配列を置き換える前記ステップが、非ヒトＥＳ細胞における相同組換えを含み、キメラヒト／非ヒトＭＨＣ  Ｉポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を担持するＥＳ細胞における相同組換えによって第１の非ヒト動物が作製される、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記動物がマウスである、項目２７に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図８】
2016507247.tif 000001