【手続補正書】
【提出日】平成29年4月26日(2017.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）複数の核酸を含む細胞を、オリゴヌクレオチドのそれぞれが核酸を標的とし、検出可能な部分により標識されている、第１の複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドと接触させることを含む第１の接触ステップを実施するステップであって、
前記第１の複数のオリゴヌクレオチドが少なくとも
（ｉ）第１の核酸を標的とし、第１の検出可能な部分により標識されている第１のオリゴヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の核酸を標的とし、第２の検出可能な部分により標識されている第２のオリゴヌクレオチドと
を含む、ステップと、
（ｂ）第１の複数のオリゴヌクレオチドによるそれらの標的との相互作用が検出されるように第１の接触ステップの後に細胞をイメージングするステップと、
（ｃ）細胞を、第１の複数のオリゴヌクレオチドにより標的とされる重複核酸を標的とするオリゴヌクレオチドを含む、第２の複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドと接触させることを含む第２の接触ステップを実施するステップであって、
第２の複数のオリゴヌクレオチドが少なくとも
（ｉ）第１の核酸を標的とし、第１のオリゴヌクレオチドと配列が場合によって同じである、第３のオリゴヌクレオチド、及び
（ｉｉ）第２の核酸を標的とし、第２のオリゴヌクレオチドと配列が場合によって同じである、第４のオリゴヌクレオチド
を含み、
第２の複数のオリゴヌクレオチドに存在するオリゴヌクレオチドの少なくとも１つが第１の複数のオリゴヌクレオチドにおける同じ核酸を標的とする対応するオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されているという点で、第２の複数のオリゴヌクレオチドが第１の複数のオリゴヌクレオチドと異なり、また第２の複数のオリゴヌクレオチドにおいて、
（ｉｉｉ）第３のオリゴヌクレオチドが、第１の検出可能な部分、第２の検出可能な部分又は第３の検出可能な部分により標識されており、
（ｉｖ）第４のオリゴヌクレオチドが、第１の検出可能な部分、第２の検出可能な部分、第３の検出可能な部分又は第４の検出可能な部分により標識されており、
第３のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されているか、又は第４のオリゴヌクレオチドが第２のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されているか、又は両方である、ステップと、
（ｄ）第２の複数のオリゴヌクレオチドによるそれらの標的との相互作用が検出されるように第２の接触ステップの後に細胞をイメージングするステップと、
（ｅ）第１及び第２の複数のオリゴヌクレオチドにより標的にされる重複核酸を標的とするオリゴヌクレオチドを含む新たな複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドを毎回用いて、接触及びイメージングステップを場合によって反復するステップであって、同じ核酸を標的とするオリゴヌクレオチドの検出可能な部分の標識の少なくとも１つの差のため、それぞれの用いられる複数のオリゴヌクレオチドが他の用いられる複数のオリゴヌクレオチドのそれぞれと異なるステップ、と
を含む、方法。
【請求項２】
（ａ）複数の転写物及びＤＮＡ遺伝子座を含む細胞を、それぞれが転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とし、検出可能な部分により標識されている、第１の複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドと接触させることを含む第１の接触ステップを実施するステップであって、
前記第１の複数のオリゴヌクレオチドが少なくとも
（ｉ）第１の転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とし、第１の検出可能な部分により標識されている第１のオリゴヌクレオチド、及び
（ｉｉ）第２の転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とし、第２の検出可能な部分により標識されている第２のオリゴヌクレオチド
を含む、ステップと、
（ｂ）第１の複数のオリゴヌクレオチドによるそれらの標的とのハイブリダイゼーションが検出されるように第１の接触ステップの後に細胞をイメージングするステップと、
（ｃ）細胞を、第１の複数のオリゴヌクレオチドにより標的とされる重複転写物及び／又はＤＮＡ遺伝子座を標的とするオリゴヌクレオチドを含む、第２の複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドと接触させることを含む第２の接触ステップを実施するステップであって、
第２の複数のオリゴヌクレオチドが少なくとも
（ｉ）第１の転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とし、第１のオリゴヌクレオチドと配列が場合によって同じである、第３のオリゴヌクレオチド、及び
（ｉｉ）第２の転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とし、第２のオリゴヌクレオチドと配列が場合によって同じである、第４のオリゴヌクレオチド
を含み、
第２の複数のオリゴヌクレオチドに存在するオリゴヌクレオチドの少なくとも１つが第１の複数のオリゴヌクレオチドにおける同じ転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とする対応するオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されているという点で第２の複数のオリゴヌクレオチドが第１の複数のオリゴヌクレオチドと異なり、また第２の複数のオリゴヌクレオチドにおいて、
（ｉｉｉ）第３のオリゴヌクレオチドが第１の検出可能な部分、第２の検出可能な部分又は第３の検出可能な部分により標識されており、
（ｉｖ）第４のオリゴヌクレオチドが、第１の検出可能な部分、第２の検出可能な部分、第３の検出可能な部分又は第４の検出可能な部分により標識されており、
第３のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されているか、又は第４のオリゴヌクレオチドが第２のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されているか、又は両方である、ステップと、
（ｄ）第２の複数のオリゴヌクレオチドによるそれらの標的とのハイブリダイゼーションが検出されるように第２の接触ステップの後に細胞をイメージングするステップと、
（ｅ）第１及び第２の複数のオリゴヌクレオチドにより標的にされる重複転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とするオリゴヌクレオチドを含む新たな複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドを毎回用いて、接触及びイメージングステップを場合によって反復するステップであって、同じ転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とするオリゴヌクレオチドの検出可能な部分の標識の少なくとも１つの差のため、それぞれの用いられる複数のオリゴヌクレオチドが他の用いられる複数のオリゴヌクレオチドとそれぞれと異なる、ステップと、
を含む、方法。
【請求項３】
それぞれの複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドが、Ｆ個の検出可能な部分を含み、Ｆが少なくとも２である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｎ回の接触ステップを含み、Ｎが少なくとも２である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
２回の接触ステップが同じである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
それぞれの複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドが、（Ｆ）Ｎの転写物及び／又はＤＮＡ遺伝子座を標的とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
それぞれの複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドが、（Ｆ）Ｎ未満の転写物及び／又はＤＮＡ遺伝子座を標的とする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
それぞれの複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドが、同じ転写物及び／又はＤＮＡ遺伝子座を標的とする、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
それぞれのイメージングステップの後に、複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドを除去するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
除去するステップが、複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドを、検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドを消化する酵素と接触させることを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
除去するステップが、複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドをＤＮアーゼと接触させること、複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドをＲＮアーゼと接触させることを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つの検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドがＨＣＲにより標識されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
複数の核酸中の核酸が、中間オリゴヌクレオチドであり、細胞中の標的にハイブリダイズする第１の配列と、ＨＣＲにより標識された検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドとハイブリダイズする第２の配列とを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
複数のオリゴヌクレオチドのそれぞれが、同じ転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とする２つ以上の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
同じ転写物又はＤＮＡ遺伝子座を標的とする全ての検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドが、同じ色をもたらすフルオロフォアにより標識されている、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドのそれぞれが、異なる核酸を標的とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
複数の検出可能に標識されたオリゴヌクレオチドのそれぞれが、異なる核酸を標的とするオリゴヌクレオチドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
第３のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されており、第４のオリゴヌクレオチドが第２のオリゴヌクレオチドと同じ検出可能な部分により標識されているか、又は第３のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドと同じ検出可能な部分により標識されており、第４のオリゴヌクレオチドが第２のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
第３のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されており、第４のオリゴヌクレオチドが第２のオリゴヌクレオチドと異なる検出可能な部分により標識されている、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
検出可能に標識された複数のオリゴヌクレオチドによるそれらの標的へのハイブリダイズが定量化されるように、イメージングステップが接触ステップ後の細胞をイメージングすることを含む、請求項１に記載の方法。