(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物発酵の副産物として形成されるガスを低減させる方法であって、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地の存在下で、ガス産生微生物をプロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＭＴＣＣ  ５８５６と同時培養して、ガス形成の低減をもたらす工程を含む、方法。
【請求項２】
プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６そのものは、炭水化物源およびプレバイオティック繊維と共に培養する場合に、実質的なガス／腸内ガスを産生しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６が、胞子および／または栄養細胞の形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ガス産生微生物が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アシネトバクター・カルコアセティクス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ルボフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｌｗｏｆｆｉｉ）、アシネトバクター・ジョンソニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、メタノブレビバクター・スミシイ（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ  ｓｍｉｔｈｉｉ）、ビロフィラ・ワーズワーシア（Ｂｉｌｏｐｈｉｌａ  ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉａ）、およびクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）からなるリストから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記炭水化物源およびプレバイオティック繊維が、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクトース、ジャガイモデンプン、イヌリン、ポリデキストロースおよびデキストロースからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ガス産生微生物の増殖を阻害する方法であって、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地の存在下で、ガス産生微生物をプロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６と同時培養して、ガス産生微生物の生存コロニーの低減をもたらす工程を含む、方法。
【請求項７】
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６が、胞子および／または栄養細胞の形態である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ガス産生微生物が、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記炭水化物源およびプレバイオティック繊維が、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクトース、ジャガイモデンプン、イヌリン、ポリデキストロースおよびデキストロースからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳動物の消化管において腸内ガス（腸のガス）を引き起こす細菌の数を低減させるための、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６を含有する組成物であって、前記組成物の有効量を投与すると、哺乳動物の消化管において腸内ガスを引き起こす細菌の生存コロニーの低減の効果がもたらされる、組成物。
【請求項１１】
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６が、胞子および／または栄養細胞の形態である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
腸内ガスを引き起こす細菌の低減が、前記哺乳動物において膨満、腹部不快感および膨張、過剰なガス圧およびおくび、下痢、セリアック病、胃腸炎の低減をもたらす、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
腸内ガスを引き起こす細菌が、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６の有効量が、１×１０6〜１×１０14ｃｆｕである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６の有効量が、２×１０9ｃｆｕである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ、および食用品の形態で投与される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１７】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１８】
哺乳動物の消化管において腸内ガス（腸のガス）を引き起こす細菌の数を低減させるための組成物の製造におけるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６の使用であって、前記組成物の有効量を投与すると、哺乳動物の消化管において腸内ガスを引き起こす細菌の生存コロニーの低減の効果がもたらされる、使用。
【請求項１９】
非ヒト哺乳動物の消化管において腸内ガス（腸のガス）を引き起こす細菌の数を低減させる方法であって、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６を含有する組成物の有効量を投与して、非ヒト哺乳動物の消化管において腸内ガスを引き起こす細菌の生存コロニーの低減の効果をもたらす工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年６月９日に提出された米国特許仮出願第６２５１７３１４号の優先権を主張する。
本発明は一般的に、鼓腸の低減に関する。より具体的には、本発明は、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）を含有する組成物、ならびに腸のガスを低減させるおよびガス産生微生物を阻害するためのその方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸のガスまたは鼓腸は、飲食の際に過剰な空気を飲み込んだ結果として過剰量のガスが消化管に集まる生物プロセスである。ガスはまた、食料品の発酵による通常の消化プロセスの結果としても蓄積する。体は、放屁（鼓腸）またはげっぷ（おくび）によって過剰なガスを取り除く。時に、過度の鼓腸は、基礎となる健康状態、例えば過敏性腸症候群、消化不良、便秘、痙攣、膨満、下痢、セリアック病、乳糖不耐性、胃腸炎、および微生物によって引き起こされる消化管の感染症であるジアルジア症を示す。
腸における病原性微生物の存在もまた、鼓腸の頻度を増加させる。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、アシネトバクター・カルコアセティクス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ジョンソニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、メタノブレビバクター・スミシイ（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ  ｓｍｉｔｈｉｉ）、およびビロフィラ・ワーズワーシア（Ｂｉｌｏｐｈｉｌａ  ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉａ）等を含むがこれらに限定されない腸の微生物は、消化されない食料品を発酵させることによって腸のガスを増加させる。
【０００３】
アシネトバクター・カルコアセティクスは、アシネトバクター属の細菌種である非運動性のグラム陰性腸内細菌である。これは、カタラーゼ陽性およびオキシダーゼ陰性であり、好気性条件下で増殖し、ヒトの正常な腸内細菌叢の一部であると考えられている。しかし、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アシネトバクター・カルコアセティクス、およびアシネトバクター・ルボフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｌｗｏｆｆｉｉ）を含む全てのアシネトバクター種は、健康なヒト腸ではまれである。さらに、最近の研究から、腸におけるアシネトバクター・カルコアセティクスの数の増加が、多発性硬化症の発病に関連しうると結論された（Egle Cekanaviciute et al. 2017, Gut bacteria from multiple sclerosis patients modulate human T cells and exacerbate symptoms in mouse models. Proc Natl Acad Sci U S A; 114(40): 10713-10718.; Hughes LE, et al. 2003, Cross-reactivity between related sequences found in Acinetobacter sp., Pseudomonas aeruginosa, myelin basic protein and myelin oligodendrocyte glycoprotein in multiple sclerosis. J Neuroimmunol 144:105-115）。
アシネトバクター・ジョンソニイは、通常、環境および動物において見出される。これは時にヒトの皮膚に定着して、カテーテル関連血流感染症または腹腔透析に関連する腹膜炎などの臨床感染症を引き起こしうる（Sabrina Montana et al. 2016, The Genetic Analysis of an Acinetobacter johnsonii Clinical Strain Evidenced the Presence of Horizontal Genetic Transfer. PLoS One. 2016; 11(8): e0161528）。
【０００４】
メタン産生細菌種であるメタノブレビバクター・スミシイは、健康なヒトの腸に一般的に見出され、結腸における全ての嫌気性菌（酸素を嫌う細菌）の１０％を構成する古細菌ドメインの単細胞微生物である。これは、特に複合炭水化物を分解することによって消化を助ける重要な腸の微生物であると考えられている。これは、栄養からのエネルギーの抽出を支えながら、水素を二酸化炭素と化合させてメタンを産生することによって消化を促進する。研究により、腸管通過の遅れとメタンの産生との間に強い関連が示されている。実験データから、メタンが、結腸および回腸の平滑筋に直接阻害活性を及ぼすこと、およびガス状伝達物質としてのメタンの可能性がある役割が示唆されている。このため、一般的に、より高レベルのメタン生成菌が便秘に関連しうる（Gottlieb, K et al. 2015, Review article: inhibition of methanogenic archaea by statins as a targeted management strategy for constipation and related disorders. Aliment Pharmacol Ther. 2016 Jan; 43(2): 197-212）。Ｍ．スミシイもまた、他の微生物からの水素を集めて、これを使用してメタンを産生する。この相互作用は、隣接する水素産生細菌が増殖して、食物から栄養をより効率的に抽出するのを助けうる。このように、これは体重増加に寄与しうる。その上、ヒトの試験では、呼気試験でのメタンおよび水素の両方の存在が、ヒトにおけるＢＭＩおよびパーセント体脂肪の増加に関連した。したがって、プレバイオティック繊維を含む様々な炭素源を発酵させながら、Ｍ．スミシイの増殖／数およびガス（メタンおよび水素）の産生を阻害することは、Ｍ．スミシイの腸内定着に関連する便秘および体重増加を制御および予防するための標的でありうる。
【０００５】
ビロフィラ・ワーズワーシアは、穿孔性虫垂炎および壊死性虫垂炎を有する患者から得た臨床材料から回収される３番目に最も一般的な嫌気性菌である。しかし、ビロフィラ・ワーズワーシアは、正常なヒト腸内細菌叢の０．０１％未満に寄与するに過ぎないが、多数の疾患状態において、この生物の数の増加が観察された。炎症性腸疾患に類似の免疫媒介疾患を発症させる乳脂肪をマウスに与えた場合、ビロフィラ・ワーズワーシアの数の増加（ゼロから６パーセント）が観察された。細菌は、腸の内層を刺激する物質を産生し、腸をより多孔性にして炎症を誘発する免疫細胞を侵入させる（Suzanne Devkota et al. 2012, Dietary-fat-induced taurocholic acid promotes pathobiont expansion and colitis in Il10-/- mice. Nature, 487, 104-108）。Ｂ．ワーズワーシアは、敗血症、肝膿瘍、胆嚢炎、フルニエ壊疽、軟部組織膿瘍、肺気腫、骨髄炎、バルトリン腺炎、および化膿性感染炎を含む多様な感染症に関連する臨床標本から回収されている。加えて、これは、無症候性の成人の唾液および膣液において、ならびにさらにイヌの歯周ポケットにおいても見出されている（Baron EJ 1997, Bilophila wadsworthia: a unique Gram-negative anaerobic rod. Anaerobe. 1997 Apr-Jun;3(2-3):83-6）。
【０００６】
クロストリジウム・ディフィシルは、しばしば、Ｃ．ディフィシルまたはＣ．ディフとも呼ばれる嫌気性、運動性、遍在性のグラム陽性胞子形成細菌であり、水様便、発熱、悪心、および腹痛などの症候性の感染症を引き起こす。これは、抗生物質関連の下痢の症例の約２０％を構成する。合併症には、偽膜性腸炎、中毒性巨大結腸症、結腸穿孔、膨満、または血便および敗血症が挙げられうる（Nelson RL et al. 2017, Antibiotic treatment for Clostridium difficile-associated diarrhoea in adults. Cochrane Database Syst Rev. 2017 Mar 3;3: CD004610）。
【０００７】
上記の微生物は全て、腸のガスの産生を増加させ、それによって膨満、腹部不快感および膨張、過剰なガス圧およびおくび、過敏性腸症候群、下痢、セリアック病、胃腸炎等が起こる（Jay Marks, Intestinal Gas (Belching, Bloating, Flatulence), https://www.medicinenet.com/intestinal_gas_belching_bloating_flatulence/article.htm#intestinal_gas_definition_and_facts, accessed 4 April 2018; Davis and Cunha, Flatulence (Gas), https://www.emedicinehealth.com/flatulence_gas/article_em.htm, accessed 3 April 2018）。
【０００８】
プロバイオティクスは、健康上の恩典の増加を得るために腸内細菌叢を修飾するその能力により、栄養補助食品としてますます重要である。報告により、プロバイオティクスの投与は、鼓腸の増加を促進する病原性微生物の増殖の阻害に対して正の効果を有することが示されている。このことは、以下の先行技術文献から明白である：
１．  Tuohy et al., Using probiotics and prebiotics to improve gut health, Volume 8, Issue 15, 2003, Pages 692-700；
２．  Bailey et al., Effective management of flatulence, American family physician, Journal of the American academy of family physicians, https://mospace.umsystem.edu/xmlui/bitstream/handle/10355/3874/EffectiveManagementFlatulence.pdf?sequence=1&isAllowed=y, accessed 27th March 2018)
３．  Lawrence et al., Probiotics for recurrent Clostridium difficile disease, 01 September 2005, Journal of Medical Microbiology 54: 905-906.
４．  Quigley. Probiotics in the management of colonic disorders, Current Gastroenterology Reports, October 2007, Volume 9, Issue 5, pp 434-440。
しかし、腸における病原性微生物のほとんどに対して有効であるプロバイオティクスに対する工業的なアンメットニーズがなおも存在する。同様に、プロバイオティクスまたはその産物の生物作用は種特異的であり、属、種、および株において全般化することができないことも科学技術分野において周知である（Probiotics: In Depth/NCCIH, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health）。したがって、腸におけるガス産生を増加させる病原性微生物に対してより有効で生存可能であるプロバイオティック株を発見する必要がある。本発明は、生存可能で腸のガスの制御において有効であるプロバイオティック株を開示することによって、上記の技術的問題を解決する。
【０００９】
本発明の主な目的は、バチルス・コアグランスを含む組成物を使用して腸のガスを低減させる方法を開示することである。
本発明の別の目的は、バチルス・コアグランスを含む組成物を使用して腸のガスの産生を促進する微生物の増殖を阻害する方法を開示することである。
本発明のなお別の目的は、炭水化物源またはプレバイオティック繊維を発酵する際に腸のガス／鼓腸を実質的により少なく産生するか、または産生しないバチルス・コアグランスを含有する組成物を開示することである。
本発明は、前述の目的を満たし、さらなる関連する利点を提供する。
【００１０】
生物材料の寄託
本出願において言及した受託番号ＭＴＣＣ  ５８５６を有する生物材料バチルス・コアグランスＳＢＣ３７−０１は、２０１３年９月１９日にＭｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＆  Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  （ＭＴＣＣ），ＣＳＩＲ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｔｏｒ  ３９−Ａ，Ｃｈａｎｄｉｇａｒｈ−１６００３６，Ｉｎｄｉａに寄託された。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、腸のガス／鼓腸を低減させるための方法および組成物を開示する。具体的には、本発明は、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６を含有する組成物を使用して鼓腸を低減させる方法を開示する。より具体的には、本発明は、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６を含有する組成物を使用して、腸のガスの産生を促進する微生物の増殖を阻害する方法を開示する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６による病原体のガス産生の阻害を評価するための実験手順の例示的な描写を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
主な実施形態では、本発明は、微生物発酵の副産物として形成されたガスを低減させる方法であって、ガス形成の低減をもたらすために、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地の存在下で、ガス産生微生物を、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスと同時培養するステップを含む方法を開示する。関連する実施形態では、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスそのものは、炭水化物源およびプレバイオティック繊維と共に培養しても、実質的なガス／腸内ガスを産生しない。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスは、胞子および／または栄養細胞の形態である。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、ガス産生微生物は、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される。別の関連する実施形態では、炭水化物源およびプレバイオティック繊維は、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクトース、ジャガイモデンプン、イヌリン、ポリデキストロースおよびデキストロースからなる群から選択される。
【００１４】
別の好ましい実施形態では、本発明は、ガス産生微生物の増殖を阻害する方法であって、ガス産生微生物の生存コロニーの低減をもたらすために、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地の存在下で、ガス産生微生物を、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスと同時培養するステップを含む方法を開示する。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスは、胞子および／または栄養細胞の形態である。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、ガス産生微生物は、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される。別の関連する実施形態では、炭水化物源およびプレバイオティック繊維は、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクトース、ジャガイモデンプン、イヌリン、ポリデキストロースおよびデキストロースからなる群から選択される。
【００１５】
なお別の好ましい実施形態では、本発明は、哺乳動物消化管における細菌発酵の副産物として形成された腸内ガス（腸のガス）を低減させる方法であって、形成される腸内ガスの体積を低減させる効果をもたらすために、バチルス・コアグランスを含有する組成物の有効量を投与するステップを含む方法を開示する。関連する実施形態では、プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスそのものは、炭水化物源およびプレバイオティック繊維と個別にまたは組み合わせて投与しても、実質的な腸内ガスを産生しない。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスは、胞子および／または栄養細胞の形態である。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される。別の関連する実施形態では、腸内ガス形成の低減は、前記哺乳動物において膨満および／またはそれが始まる前の膨満、腹部不快感および膨張、過剰なガス圧およびおくび、下痢、セリアック病、胃腸炎の低減をもたらす。別の好ましい実施形態では、腸内ガス産生細菌は、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される。別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効量は、１×１０6〜１×１０14ｃｆｕである。別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効量は、好ましくは２×１０9ｃｆｕである。関連する実施形態では、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ、および食用品の形態で投与される。関連する実施形態では、哺乳動物は好ましくはヒトである。
【００１６】
別の好ましい実施形態では、本発明は、哺乳動物の消化管における腸内ガス（腸のガス）を引き起こす細菌の数を低減させる方法であって、哺乳動物の消化管において腸内ガスを引き起こす細菌の生存コロニーの低減の効果をもたらすために、バチルス・コアグランスを含有する組成物の有効量を投与するステップを含む方法を開示する。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスは、胞子および／または栄養細胞の形態である。関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの株は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される。別の関連する実施形態では、腸内ガス形成細菌の低減は、前記哺乳動物において膨満および／またはそれが始まる前の膨満、腹部不快感および膨張、過剰なガス圧およびおくび、下痢、セリアック病、胃腸炎の低減をもたらす。別の好ましい実施形態では、腸内ガス産生微生物は、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される。別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効量は、１×１０6〜１×１０14ｃｆｕである。別の関連する実施形態では、バチルス・コアグランスの有効量は、好ましくは２×１０9ｃｆｕである。関連する実施形態では、組成物は、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ、および食用品の形態で投与される。関連する実施形態では、哺乳動物は好ましくはヒトである。
【００１７】
本発明の技術的特色および技術的効果を組み入れる上記の最も好ましい実施形態を、本明細書において以下の例示的な実施例を通して説明する。
【実施例】
【００１８】
（例１）
材料および方法
Ｄｅ  Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ、およびＳｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）培地を使用して、プロバイオティック株であるバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６による病原体のガス産生および阻害を評価した。プレバイオティック繊維と共に異なる炭素源を使用してガス産生を試験するために、異なる組の実験において、ＭＲＳ培地においてガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ラクトース、可溶性ジャガイモデンプン、イヌリンおよびポリデキストロースを補充することによって、デキストロースを交換した。培地１０ｍＬの試験管に、発酵の際に生成する気泡のトラップとして役立ちうる小さい倒立管であるダーラム管を入れた。大腸菌、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、クロストリジウム・ディフィシル、ビロフィラ・ワーズワーシアを含む微生物を、プロバイオティック株であるＢ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６と共に同時培養モデルにおいて試験した。大腸菌、アシネトバクター・カルコアセティクス、およびアシネトバクター・ジョンソニイをトリプチカーゼ大豆ブロス中で増殖させ、大腸菌およびアシネトバクター・カルコアセティクスおよびアシネトバクター・ジョンソニイを、エオジンメチレンブルー寒天およびトリプチカーゼ大豆寒天中でそれぞれ計数した。メタノブレビバクター・スミシイ、クロストリジウム・ディフィシル、ビロフィラ・ワーズワーシアを、５％ウシ胎児血清を補充したＷｉｌｋｉｎｓ  Ｃｈａｌｇｒｅｎブロス中で増殖させた。Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６の一晩増殖培養物を、ダーラム管と共に培地（プレバイオティック繊維と共に異なる炭素源を補充した）１０ｍｌを含有する試験管の異なる組に接種した。さらに、各々の組に異なる病原体を接種し、嫌気性ワークステーション（Ｉｍｓｅｔ，Ｉｎｄｉａ）を使用して嫌気性環境中、３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、試験管を目に見えるガス産生に関して観察した。各々の炭素源および各々の病原体に関して、１つの試験管にはＢ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６のみを接種し、１つの試験管には病原性微生物のみを接種するそれぞれの対照を作製した。第３の試験管には、Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６および病原体の両方を接種した。類似の組の実験において、プレート計数法を使用して、病原体の生存数をそれぞれの選択寒天培地において推定した。
【００１９】
（例２）
Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６によるガス産生の低減
表１〜６は、ＧＯＳ、ＦＯＳ、ラクトース、デンプンを基質として使用した、病原性微生物である大腸菌ＡＴＣＣ  ８７３９、アシネトバクター・カルコアセティクスＡＴＣＣ  ２３０５５、アシネトバクター・ジョンソニイＮＣＩＭＢ９８７１、メタノブレビバクター・スミシイＤＳＭ−８６１、クロストリジウム・ディフィシルＡＴＣＣ  ９６８９、ビロフィラ・ワーズワーシアＡＴＣＣ  ４９２６０の存在により形成されたＢ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６によるガスの低減の結果を示す。
【００２０】
【表１】
0006987888.tif 000002
【００２１】
【表２】
0006987888.tif 000003
【００２２】
【表３】
0006987888.tif 000004
【００２３】
【表４】
0006987888.tif 000005
【００２４】
【表５】
0006987888.tif 000006
【００２５】
【表６】
0006987888.tif 000007
【００２６】
結果は、ＧＯＳ、ＦＯＳ、ラクトースを基質として使用して同時発酵させた場合、Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６が、病原性微生物である大腸菌ＡＴＣＣ  ８７３９、アシネトバクター・カルコアセティクスＡＴＣＣ  ２３０５５、アシネトバクター・ジョンソニイＮＣＩＭＢ９８７１、メタノブレビバクター・スミシイＤＳＭ−８６１、クロストリジウム・ディフィシルＡＴＣＣ  ９６８９、ビロフィラ・ワーズワーシアＡＴＣＣ  ４９２６０によって産生されたガスを有意に低減させることを示した。結果はまた、Ｂ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６単独では、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地中で培養しても、いかなるガスも産生しないことも示した。
【００２７】
（例３）
ガス産生微生物の生存数に及ぼすＢ．コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６の効果
表７〜１２は、腸内ガス産生微生物である大腸菌ＡＴＣＣ  ８７３９、アシネトバクター・カルコアセティクスＡＴＣＣ  ２３０５５、アシネトバクター・ジョンソニイＮＣＩＭＢ９８７１、メタノブレビバクター・スミシイＤＳＭ−８６１、クロストリジウム・ディフィシルＡＴＣＣ  ９６８９、ビロフィラ・ワーズワーシアＡＴＣＣ  ４９２６０の増殖および生存数に及ぼすバチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６の効果を表す。
【００２８】
【表７】
0006987888.tif 000008
【００２９】
【表８】
0006987888.tif 000009
【００３０】
【表９】
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【００３１】
【表１０】
0006987888.tif 000011
【００３２】
【表１１】
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【００３３】
【表１２】
0006987888.tif 000013
結果は、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６が、腸内ガス産生微生物である大腸菌ＡＴＣＣ  ８７３９、アシネトバクター・カルコアセティクスＡＴＣＣ  ２３０５５、アシネトバクター・ジョンソニイＮＣＩＭＢ９８７１、メタノブレビバクター・スミシイＤＳＭ−８６１、クロストリジウム・ディフィシルＡＴＣＣ  ９６８９、ビロフィラ・ワーズワーシアＡＴＣＣ  ４９２６０の生存コロニーを有意に低減させ、それによって上記の微生物の増殖を阻害することを示した。
【００３４】
（例４）
腸内ガスを低減させるためのバチルス・コアグランスを含有する組成物／製剤
表１３〜１７は、バチルス・コアグランスを含有する製剤の例示的な例を提供する。
【００３５】
【表１３】
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【００３６】
【表１４】
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【００３７】
【表１５】
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【００３８】
【表１６】
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【００３９】
【表１７】
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上記の製剤は単なる例示的な例であり、前記目的に関して意図される上記の活性成分を含有する任意の製剤が等価であると考えられる。
【００４０】
本発明に対する他の修飾および変更は、前述の開示および教示から当業者には明らかであろう。このため、本発明のある特定の実施形態のみを本明細書において具体的に記載してきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく多数の修飾を行ってもよいことは明らかである。
本発明の好ましい態様は、下記の通りである。
〔１〕微生物発酵の副産物として形成されるガスを低減させる方法であって、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地の存在下で、ガス産生微生物をプロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）と同時培養して、ガス形成の低減をもたらす工程を含む、方法。
〔２〕プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスそのものは、炭水化物源およびプレバイオティック繊維と共に培養する場合に、実質的なガス／腸内ガスを産生しない、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕バチルス・コアグランスが、胞子および／または栄養細胞の形態である、前記〔１〕に記載の方法。
〔４〕バチルス・コアグランスの株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔５〕前記ガス産生微生物が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アシネトバクター・カルコアセティクス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ルボフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｌｗｏｆｆｉｉ）、アシネトバクター・ジョンソニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、メタノブレビバクター・スミシイ（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ  ｓｍｉｔｈｉｉ）、ビロフィラ・ワーズワーシア（Ｂｉｌｏｐｈｉｌａ  ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉａ）、およびクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）からなるリストから選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔６〕前記炭水化物源およびプレバイオティック繊維が、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクトース、ジャガイモデンプン、イヌリン、ポリデキストロースおよびデキストロースからなる群から選択される、前記〔１〕に記載の方法。
〔７〕ガス産生微生物の増殖を阻害する方法であって、炭水化物源およびプレバイオティック繊維を含有する培地の存在下で、ガス産生微生物をプロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスと同時培養して、ガス産生微生物の生存コロニーの低減をもたらす工程を含む、方法。
〔８〕バチルス・コアグランスが、胞子および／または栄養細胞の形態である、前記〔７〕に記載の方法。
〔９〕バチルス・コアグランスの株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１０〕前記ガス産生微生物が、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１１〕前記炭水化物源およびプレバイオティック繊維が、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクト−オリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクトース、ジャガイモデンプン、イヌリン、ポリデキストロースおよびデキストロースからなる群から選択される、前記〔７〕に記載の方法。
〔１２〕哺乳動物の消化管における細菌発酵の副産物として形成される腸内ガス（腸のガス）を低減させる方法であって、バチルス・コアグランスを含有する組成物の有効量を投与して、形成される腸内ガスの体積を低減させる効果をもたらす工程を含む、方法。
〔１３〕プロバイオティック細菌であるバチルス・コアグランスそのものは、個別にまたは炭水化物源およびプレバイオティック繊維と組み合わせて投与する場合に、実質的な腸内ガスを産生しない、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１４〕バチルス・コアグランスが、胞子および／または栄養細胞の形態である、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１５〕バチルス・コアグランスの株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１６〕腸内ガスの低減が、前記哺乳動物において膨満および／またはそれが始まる前の膨満、腹部不快感および膨張、過剰なガス圧およびおくび、下痢、セリアック病、胃腸炎の低減をもたらす、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１７〕腸内ガス産生細菌が、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１８〕バチルス・コアグランスの有効量が、１×１０6〜１×１０14ｃｆｕである、前記〔１２〕に記載の方法。
〔１９〕バチルス・コアグランスの有効量が、好ましくは２×１０9ｃｆｕである、前記〔１２〕に記載の方法。
〔２０〕前記組成物が、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ、および食用品の形態で投与される、前記〔１２〕に記載の方法。
〔２１〕前記哺乳動物が、好ましくはヒトである、前記〔１２〕に記載の方法。
〔２２〕哺乳動物の消化管において腸内ガス（腸のガス）を引き起こす細菌の数を低減させる方法であって、バチルス・コアグランスを含有する組成物の有効量を投与して、哺乳動物の消化管において腸内ガスを引き起こす細菌の生存コロニーの低減の効果をもたらす工程を含む、方法。
〔２３〕バチルス・コアグランスが、胞子および／または栄養細胞の形態である、前記〔２２〕に記載の方法。
〔２４〕バチルス・コアグランスの株が、バチルス・コアグランスＭＴＣＣ  ５８５６、バチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ３１２８４、およびバチルス・コアグランスＡＴＣＣ  ７０５０からなる群から選択される、前記〔２２〕に記載の方法。
〔２５〕腸内ガス形成細菌の低減が、前記哺乳動物において膨満および／またはそれが始まる前の膨満、腹部不快感および膨張、過剰なガス圧およびおくび、下痢、セリアック病、胃腸炎の低減をもたらす、前記〔２２〕に記載の方法。
〔２６〕腸内ガス産生微生物が、大腸菌、アシネトバクター・バウマンニイ、アシネトバクター・カルコアセティクス、アシネトバクター・ルボフィイ、アシネトバクター・ジョンソニイ、メタノブレビバクター・スミシイ、ビロフィラ・ワーズワーシア、およびクロストリジウム・ディフィシルからなるリストから選択される、前記〔２２〕に記載の方法。
〔２７〕バチルス・コアグランスの有効量が、１×１０6〜１×１０14ｃｆｕである、前記〔２２〕に記載の方法。
〔２８〕バチルス・コアグランスの有効量が、好ましくは２×１０9ｃｆｕである、前記〔２２〕に記載の方法。
〔２９〕前記組成物が、薬学的／栄養補助的に許容される賦形剤、アジュバント、希釈剤、または担体と共に製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、キャンディ、および食用品の形態で投与される、前記〔２２〕に記載の方法。
〔３０〕前記哺乳動物が、好ましくはヒトである、前記〔２２〕に記載の方法。
【図１】
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