(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉ：
【化１】
0006987840.tif 000027
Ｉ
で示される放射性標識された化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
下記構造：
【化２】
0006987840.tif 000028
で示される請求項１に記載の放射性標識された化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
診断上有効な量の請求項２に記載の放射性標識された化合物および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項４】
癌細胞を検出するために公知のＩＤＯ１発現の哺乳類組織をインビボでイメージングするための、請求項２に記載の放射性標識された化合物を含む組成物であって：
（ａ）前記組成物を対象に投与し；次いで
（ｂ）前記組成物中の前記放射性標識された化合物の分布を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンニングによってインビボでイメージングするように用いられることを特徴とする、組成物。
【請求項５】
哺乳類組織におけるＩＤＯ１酵素の結合部位を占有するその親和性を決定するために、放射性標識されていない化合物をスクリーニングするための方法であって：
（ａ）公知のＩＤＯ１発現の組織を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）によってインビボでイメージングして、対象に投与された請求項２に記載の放射性標識された化合物の基準の取り込みを決定し；
（ｂ）前記放射性標識されていない化合物、および請求項２に記載の放射性標識された化合物の第２の用量をそれぞれ別途投与された前記対象において、ＩＤＯ１酵素を発現する組織における請求項２に記載の放射性標識された化合物の分布をインビボでイメージングし；次いで
（ｃ）ＩＤＯ１を発現する組織内の基準におけるＰＥＴスキャンデータからのシグナルを、ＩＤＯ１酵素を発現する組織内に放射性標識されていない化合物を投与した後に得られたＰＥＴスキャンデータと比較する工程
を含む、方法。
【請求項６】
ＩＤＯ１阻害剤により治療されている癌患者の治療をモニターするための方法であって：
（ａ）請求項２に記載の放射性標識された化合物を投与された、ＩＤＯ１酵素を発現する患者における組織の画像を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）によって取得し；次いで
（ｂ）前記放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤が前記ＩＤＯ１酵素の結合部位を占有する程度を検出する工程
を含む、方法。
【請求項７】
請求項２に記載の放射性標識された化合物を含む、組織イメージング剤であって、ＩＤＯ１酵素を含有する組織を、前記組織イメージング剤と接触させ、次いで前記組織イメージング剤中の前記放射性標識された化合物を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを用いて検出するように用いられることを特徴とする、組織イメージング剤。
【請求項８】
前記化合物が、インビトロで検出される、請求項７に記載の組織イメージング剤。
【請求項９】
前記化合物が、インビボで検出される、請求項７に記載の組織イメージング剤。
【請求項１０】
対象における疾患の存在を診断するための、請求項２に記載の放射性標識された化合物を含む組成物であって、
（ａ）前記組成物を、それを必要とする対象に投与し、ここで、前記組成物中の前記請求項２に記載の放射性標識された化合物は、前記疾患の存在に関連するＩＤＯ１酵素に結合し；次いで
（ｂ）前記対象の少なくとも一部の放射性画像を取得して、前記放射性標識された化合物の存在もしくは非存在を検出し、ここで、バックグラウンド上の前記放射性標識された化合物の存在および局在は、前記疾患の存在もしくは非存在の指標であるように用いられることを特徴とする、組成物。
【請求項１１】
対象における罹患した細胞または組織を定量するための、請求項２に記載の放射性標識された化合物を含む組成物であって、
（ａ）前記組成物を、罹患した細胞または組織を有する対象に投与し、ここで、前記組成物中の前記請求項２に記載の放射性標識された化合物は、罹患した細胞または組織内に局在するIDO１酵素に結合し；次いで
（ｂ）罹患した細胞または組織において、前記放射性標識された化合物の放射線放射を検出し、ここで、前記罹患した細胞または組織における前記放射線放射のレベルおよび分布は、前記罹患した細胞または組織の定量的な測定であるように用いられることを特徴とする、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の参照）
本出願は、出典明示によりその内容全体が本明細書に取り込まれる２０１６年７月１９日出願の米国仮出願番号第６２／３６４，０２０号に対する優先権を請求する。
【０００２】
本発明は、新規な放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤、および哺乳類のＩＤＯ酵素の標識および診断用イメージングにおけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）は、生きている対象の生物学的プロセスについての機能情報を供することができる非侵襲イメージング技術である。分子事象をインビボでイメージングし、モニターする能力は、生きている生物の生化学および生理学的プロセスの理解を得るために大きな価値がある。言い換えれば、これは、疾患の治療、疾患の早期発見、および新規な薬物の設計のための新たなアプローチの開発に必須である。ＰＥＴは、ポジトロン放出同位体で標識された分子の設計と合成によるものである。これらの分子は、放射性トレーサーまたは放射性リガンドとして知られている。ＰＥＴイメージングについて、最も一般的に用いられるポジトロン放出（ＰＥＴ）放射性核種は、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、および１３Ｎであり、これらの全ては、サイクロトロンで生じ、それぞれ、２０、１１０、２、および１０分の半減期を有する。ポジトロン放出放射性核種で放射性標識された後、これらのＰＥＴ放射性リガンドは、典型的に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって哺乳類に投与される。体内に一旦入ると、その放射性リガンドは崩壊するため、電子と結合するまで近距離を巡回する陽電子を放射する。そして、対消滅として知られる事象が起こり、これにより２つの共線光子がそれぞれ５１１ｋｅＶのエネルギーとともに作り出される。放射性リガンドから放出されたガンマ放射線を検出することができるＰＥＴイメージングスキャナーを用いて、平面および断面画像は、時間に応じた放射性トレーサーの分布を示す。ＰＥＴ放射性リガンドは、受容体および酵素についての標的とする関係と用量依存的な結合部位占有に関する有用なインビボ情報を提供する。
【０００４】
インドールアミン ２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ；ＩＤＯ１としても知られている）は、免疫調節で役割を果たすＩＦＮ−γ標的遺伝子である。ＩＤＯ１は、オキシドレダクターゼであり、トリプトファンからＮ−ホルミル−キヌレニンへの変換において最初の律速段階を触媒する２つの酵素のうちの１つである。これは、数種類の細胞集団（免疫細胞、内皮細胞、および線維芽細胞を含む）で見出される４１ｋＤモノマーとして存在する。ＩＤＯ１は、マウスとヒトでアミノ酸レベルにおいて６３％の配列同一性を占め、種間で比較的よく保存されている。その結晶構造および部位特異的変異誘発から得られたデータは、基質の結合と、その基質と鉄結合ジオキシゲナーゼとの関連の両方が活性に必要であることを示す。ＩＤＯ１のホモログ（ＩＤＯ２）が同定されており、ＩＤＯと４４％のアミノ酸配列相同性を占めるがその機能はＩＤＯ１とは大きく異なる（例えば、Serafini, P. et al., Semin. Cancer Biol., 16(1):53-65 (Feb. 2006)およびBall, H.J. et al., Gene, 396(1):203-213 (Jul. 1, 2007)を参照のこと）。
【０００５】
ＩＤＯ１は、免疫調節において主な役割を果たし、その免疫抑制機能はいくつかの過程で示される。重要なことに、ＩＤＯ１は、Ｔ細胞レベルで免疫を調節し、ＩＤＯ１とサイトカイン産生との間に関係がある。さらに、腫瘍は、多くの場合、ＩＤＯ１の上流調節によって免疫機能を調節する。よって、ＩＤＯ１の調節は、多くの疾患、障害、および病気において治療上の影響を与えうる。
【０００６】
ＩＤＯ１と癌との間には、病態生理学的な関連が存在する。免疫ホメオスタシスの乱れは、腫瘍成長および進行に密接に関連し、腫瘍微小環境におけるＩＤＯ１の産生は、腫瘍成長および転移を助けているようである。さらに、高レベルのＩＤＯ１活性は、様々な異なる腫瘍に関連している（Brandacher, G. et al., Clin. Cancer Res., 12(4):1144-1151 (Feb. 15, 2006)）。
【０００７】
癌治療は、一般に、外科切除、続いて化学療法および放射線療法を必須として伴う。この標準治療計画は、原発腫瘍の増殖を再生し、極めて重要なことに、遠隔転移を行うことによって本質的に逃避する腫瘍細胞の能力により、非常に様々な程度の長期的な成功を示す。癌ならびに癌関連疾患、障害、および病気の治療における近年の進歩は、免疫療法を多くの従来の化学療法および放射線療法に取り込む併用療法を用いることを含む。多くの計画下では、免疫療法は、腫瘍細胞を同定し、排除する患者自身の免疫系を利用するため、従来の化学療法より低い毒性を伴うものである。
【０００８】
癌に加えて、ＩＤＯ１は、他の病気、免疫抑制、慢性感染症、および自己免疫疾患もしくは障害（例えば、関節リウマチ）などに関連している。よって、ＩＤＯ１活性の阻害によるトリプトファン分解の抑制は、極めて大きい治療価値を有する。さらに、ＩＤＯ１の阻害剤は、Ｔ細胞が妊娠、悪性、またはウイルス（例えば、ＨＩＶ）によって抑制される場合、Ｔ細胞活性化を高めるために用いることができる。それらの役割はあまりわかっていないが、ＩＤＯ１阻害剤はまた、神経学的もしくは神経精神医学的疾患もしくは障害（例えば、うつ）に罹っている患者の治療における使用が見出されうる。
【０００９】
イメージング技術の補助と組み合わせたＩＤＯ１に対して高い親和性を有する具体的なＰＥＴ放射性リガンドの使用は、肺、腸、および免疫系の樹状細胞などのＩＤＯ１を発現する組織においてＩＤＯ１阻害剤の標的関係および用量／占有関係の両方についての臨床進化のための方法を提供しうる。本明細書に記載の発明は、インビトロとインビボの両方で診査および診断用イメージング応用、ならびに放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤および放射性標識されていないＩＤＯ１阻害剤を用いる競合実験に有用であろう放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤に関する。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の簡単な説明
本開示は、一部、放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤が、哺乳類種の組織におけるＩＤＯ１酵素および／またはＩＤＯ１発現ならびに／あるいはＩＤＯ１酵素の結合部位を占有する化合物の親和性の検出および／または定量ならびに／あるいはイメージングに有用であることの知見に基づくものである。放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、哺乳類に投与されると、ＩＤＯ１酵素の活性部位に蓄積し、当該活性部位を占有し、イメージング技術により検出することができるため、ＩＤＯ１タンパク質の存在、ＩＤＯ１酵素の活性部位を占有する化合物の親和性、ならびにＩＤＯ１阻害剤の臨床評価および用量選択のための価値のある診断用マーカーを提供することが知見された。さらに、本明細書で開示の放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、インビボでの非標識ＩＤＯ１阻害剤とＩＤＯ１酵素との相互作用を、前記酵素に結合する非標識薬物と放射性標識された薬物との競合により研究するための研究用ツールとして使用することができる。これらのタイプの研究は、ＩＤＯ１酵素活性部位占有と非標識ＩＤＯ１阻害剤の用量との相関関係を調べるために、ならびに様々な用量の非標識ＩＤＯ１阻害剤による前記酵素の遮断期間を研究するために有用である。
【００１１】
臨床ツールとして、放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、ＩＤＯ１阻害剤の臨床的に有効な用量の決定を補助するために用いることができる。動物実験において、放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、臨床開発用の選別について可能性のある薬物候補を選択するのに有用な情報を提供するために用いることができる。放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤はまた、生きている組織におけるＩＤＯ１酵素の領域分布と濃度を研究するために用いることができる。それらは、ＩＤＯ１酵素濃度における疾患または薬理学的に関連する変化を研究するために用いることができる。
【００１２】
本発明によれば、下記の式Ｉ：
【化１】
0006987840.tif 000002
Ｉ
で示される化合物（その医薬的に許容される塩および立体異性体、例えば：
【化２】
0006987840.tif 000003
を含む）が提供される。
【００１３】
本発明の１の実施態様によれば、診断上有効な量の放射性標識された式Ｉの化合物およびそのための医薬的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００１４】
本発明はまた、癌細胞を検出するために公知のＩＤＯ１発現の哺乳類組織をインビボでイメージングするための方法であって：
（ａ）本明細書に記載される放射性標識された式Ｉの化合物を対象に投与し；次いで
（ｂ）前記放射性標識された化合物の分布を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンニングによってインビボでイメージングする工程
を含む方法を提供する。
【００１５】
本発明の１の実施態様によれば、哺乳類組織におけるＩＤＯ１酵素の活性部位を占有するその親和性を決定するために放射性標識されていない化合物をスクリーニングするための方法であって：
（ａ）放射性標識された式Ｉの化合物を対象に投与し；
（ｂ）公知のＩＤＯ１発現の組織を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）によってインビボでイメージングして、放射性標識された化合物の基準の取り込み（baseline uptake）を決定し；
（ｃ）前記放射性標識されていない化合物を前記対象に投与し；
（ｄ）前記放射性標識された式Ｉの化合物の第２の用量を前記対象に投与し；
（ｅ）前記ＩＤＯ１酵素を発現する組織における前記放射性標識された式Ｉの化合物の分布をインビボでイメージングし；
（ｆ）前記ＩＤＯ１を発現する組織内の基準におけるＰＥＴスキャンデータからのシグナルを、ＩＤＯ１酵素を発現する組織内に放射性標識されていない化合物を投与した後に得られたＰＥＴスキャンデータと比較する工程
を含む方法を提供する。
【００１６】
本発明の１の実施態様によれば、ＩＤＯ１阻害剤で治療されている癌患者の治療をモニターするための方法であって：
（ａ）放射性標識された式Ｉの化合物を前記患者に投与し、
（ｂ）ＩＤＯ１を発現する患者による組織の画像を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）によって取得し；次いで
（ｃ）前記放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤が前記ＩＤＯ１酵素の活性部位を占有する程度を検出する工程
を含む方法を提供する。
【００１７】
本発明の１の実施態様によれば、組織イメージング方法であって、ＩＤＯ１酵素を含有する組織を、本明細書に記載される放射性標識された式Ｉの化合物と接触させ、次いで前記放射性標識された化合物を、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを用いて検出する工程を含み、前記検出はインビトロまたはインビボで行うことができる方法を提供する。
【００１８】
本発明の１の実施態様によれば、対象における疾患の存在を診断するための方法であって、
（ａ）前記疾患の存在に関連するＩＤＯ１酵素に結合する放射性標識された式Ｉの化合物を対象に投与し；次いで
（ｂ）前記対象の少なくとも一部の放射性画像を取得して、前記放射性標識された化合物の存在もしくは非存在を検出することを含み；
バックグラウンド上の前記放射性標識された化合物の存在および局在が、前記疾患の存在もしくは非存在の指標である方法を提供する。
【００１９】
本発明の１の実施態様によれば、罹患した細胞もしくは組織を定量するための方法であって；
（ａ）罹患した細胞もしくは組織内に局在するＩＤＯ１酵素に結合する前記放射性標識された式Ｉの化合物を、罹患した細胞もしくは組織を有する対象に投与し；次いで
（ｂ）罹患した細胞もしくは組織における前記放射性標識された化合物の放射線放射を検出することを含み、
前記罹患した細胞もしくは組織における放射線放射のレベルおよび分布が、前記罹患した細胞もしくは組織の定量的な測定である方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、Ｓｙｎｔｈｅｒａ合成ユニット及びカスタム精製システムを用いた［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの自動化合成の図式である。
【図２】図２は、下記を示す放射性トレーサー取り込みの棒グラフである：Ａ）ベヒクル（ｎ＝１０）または非放射性（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド；６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１２）、６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１２）、および１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１１）による処理の４〜５日後のＭ１０９腫瘍におけるトレーサー取り込み。（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの投与は、ベヒクルと比較して前記トレーサーの用量依存的置換を生じた。斜線は、筋肉組織における平均トレーサー取り込みを表す。Ｂ）ベヒクル（ｎ＝１０）による処理または非放射性（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド；６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１２）、６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１２）、および１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１１）による処理の４〜５日後の筋肉対照組織におけるトレーサー取り込み。（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの投与は、筋肉組織における取り込みに効果を示さなかった。Ｃ）前記イメージング結果と一致して、ベヒクル（ｎ＝７）または非放射性（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド；６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、および１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）による処理５〜６日では、キヌレニンのトリプトファンに対する比率として測定したキヌレニン経路の用量依存的阻害を生じた。Ｄ）非放射性（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）または１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）のいずれかによる処理５〜６日では、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの血清濃度における用量依存的増加を生じた。
【図３】図３は、ベヒクル（ｎ＝４）または非放射性（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド；６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）、６０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）および１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４）による処理前（ＢＬ、無地の棒）および後（処理、縞模様の棒）のＭ１０９腫瘍におけるトレーサー取り込みを示す放射性トレーサー取り込みの棒グラフである。処理が行われる前（基準線）、トレーサー取り込みは両群の間で差異はなかった。処理後、ベヒクル群におけるトレーサー取り込みに変化はなかったが、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの投与は、前記トレーサーの用量依存的置換を生じた。斜線は、筋肉対照組織における平均トレーサー取り込みを表す。
【図４】図４は、トレーサー取り込みが、ＩＤＯ１発現の低いＣＴ２６腫瘍（ｎ＝１０）と比較してＩＤＯ１発現の高いＭ１０９腫瘍（ｎ＝１０）で増加したことを示す放射性トレーサー取り込みの棒グラフである。
【図５】図５は、１８Ｆ−（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドでイメージングしたカニクイザルのＭＲＩおよびＰＥＴ画像である。合計５枚の連続全身画像を取得して、時間経過によるトレーサー動態および生体分布を評価した。前記トレーサーはクリアランスが予想された臓器（例えば、肝臓および胆嚢）に蓄積したが、残りの体においてバックグラウンドはほぼ見られないか、見られなかった。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
（発明の詳細な説明）
本発明の第１の実施態様において、下記式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩が提供される：
【化３】
0006987840.tif 000004
式Ｉ
【００２２】
式Ｉの立体異性体もまた、本発明の範囲に含まれ、例えば、下記が挙げられる：
【化４】
0006987840.tif 000005
【００２３】
式Ｉの化合物は、ＩＤＯ１酵素への親和性を有するポジトロン放出分子として有用な放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤である。
【００２４】
本発明の１の実施態様によれば、本開示は、放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤および医薬的に許容される担体を含む、ＩＤＯ１酵素のイメージングのための診断用組成物を提供する。さらなる別の実施態様において、本開示は、公知のＩＤＯ１発現の哺乳類組織のオートラジオグラフィーの方法であって、放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤を患者に投与し、組織の画像をポジトロン放出断層撮影によって取得し、次いで前記組織における前記放射性標識された化合物を検出して、前記ＩＤＯ１酵素の活性部位のＩＤＯ１標的指向性および占有性を決定する工程を含む方法を提供する。
【００２５】
放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、適当な放射性核種で標識されると、様々なインビトロおよび／またはインビボでのイメージング応用（診断用イメージング、基礎研究、および放射線療法応用を含む）に有用である可能性がある。可能な診断用イメージングおよび放射線療法上の適用の具体的な例としては、ＩＤＯ１酵素の局在、ＩＤＯ１酵素の相対活性および／またはＩＤＯ１酵素の定量化の測定；ＩＤＯ１阻害剤の放射免疫アッセイ；および患者またはその器官もしくは組織試料におけるＩＤＯ１酵素の分布を決定するためのオートラジオグラフィーが挙げられる。
【００２６】
特に、本発明の放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、生きているヒトおよび実験動物の肺、腸、および免疫系の樹状細胞または他の器官におけるＩＤＯ１酵素のポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに有用である。本発明の放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、非標識ＩＤＯ１阻害剤とＩＤＯ１酵素とのインビボでの相互作用を、前記酵素に結合する非標識薬物と放射性標識された化合物との競合により研究するための研究用ツールとして用いられてもよい。これらのタイプの研究は、ＩＤＯ１酵素の占有と非標識ＩＤＯ１阻害剤の用量との相関関係の決定、ならびに様々な用量の非標識ＩＤＯ１阻害剤による酵素の遮断期間の検討に有用である。臨床ツールとして、前記放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、非標識ＩＤＯ１阻害剤の臨床的に有効な用量を規定する補助に用いられうる。動物実験において、前記放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、臨床開発用の選別のための可能性のある薬物候補を選択するのに有用な情報を提供するために用いることができる。前記ＩＤＯ１阻害剤はまた、生きている実験動物の肺、腸および免疫系の樹状細胞ならびに他のＩＤＯ１発現組織、ならびに組織試料におけるＩＤＯ１の領域分布および濃度を研究するために用いられてもよい。放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤はまた、疾患または薬理学的に関連するＩＤＯ１酵素濃度の変化を研究するために用いられてもよい。
【００２７】
例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）トレーサー（例えば、本発明の放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤）は、現在利用可能なＰＥＴ技術とともに用いて下記情報を取得することができる：候補ＩＤＯ１阻害剤による酵素結合部位占有と患者における臨床的な有効性との間の相関関係；長期臨床試験の開始前のＩＤＯ１阻害剤の臨床試験のための用量選択；構造的に新規なＩＤＯ１阻害剤の能力比較；ＩＤＯ１阻害剤による臨床標的の治療中のインビボ輸送体の親和性および密度におけるＩＤＯ１阻害剤の影響の調査；癌または他のＩＤＯ１介在疾患の有効な治療および有効でない治療中のＩＤＯ１の密度と分布における変化。
【００２８】
本発明の放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤は、ＩＤＯ１発現に関連する様々な障害に関して、ＩＤＯ１酵素のイメージング時もしくは診断用イメージングに有用である。
【００２９】
本発明の化合物の診査用または診断用イメージング剤としての使用について、放射性標識された化合物は、標準的な薬務に従って、単独で、または好ましくは、医薬的に許容される担体もしくは希釈剤と組み合わせて医薬組成物中で、適宜、公知の補助剤（例えば、ミョウバン）とともに医薬組成物中で、哺乳類、好ましくは、ヒトに投与されてもよい。このような組成物は、経口もしくは非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸および局所的な投与経路を含む）で投与することができる。好ましくは、投与は静脈内である。前記阻害剤は、短命なポジトロン放出放射性核種で標識された放射性トレーサーであり、それゆえ、一般に、合成１時間未満内で静脈内注射により投与される。このことは、関連する放射性核種が短い半減期であることから必須である。
【００３０】
標識されていないＩＤＯ１阻害剤の適当な用量レベルは、１ｍｇ〜１５００ｍｇの範囲であり、好ましくは、１日あたり２５ｍｇ〜８００ｍｇである。本発明の放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤がヒト対象に投与される場合、イメージングに必要な量は、通常、放射性核種から放出される量に従って一般に変動する用量として、処方する医師によって決定される。しかしながら、多くの場合、有効な量は、約１−５ｍＣｉの範囲において放出を生じるのに十分な化合物の量である。ある例示的な適用において、投与は、対象の体重に応じて患者に注入される総放射能の０．５−２０ｍＣｉの量で行われる。上限値は、げっ歯類もしくは非ヒト霊長類における放射性標識された分子の線量測定によって設定される。
【００３１】
下記の例示的な手順は、入院患者においてＰＥＴイメージング試験を行う際に用いられうる。患者は、実験日前のいずれかに非標識ＩＤＯ１阻害剤を予め投薬されており、水を適宜摂取しつつ少なくとも１２時間絶食する。２０Ｇの２インチ静脈カテーテルを放射性トレーサー投与のために対側尺骨静脈に挿入する。ＰＥＴトレーサーの投与は、血中ＩＤＯ１阻害剤濃度の最大（Ｔｍａｘ）または最少（Ｔｍｉｎ）の時間にだいたい一致するように調整する。
【００３２】
前記患者は、ＰＥＴカメラ内に置かれ、実施例５Ａなどの放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤のＰＥＴトレーサーのトレーサー用量（＜２０ｍＣｉ）が静脈カテーテルにより投与される。血漿中の代謝されなかったＰＥＴトレーサーの割合を分析し、定量するために、、動脈もしくは静脈の血液試料をＰＥＴスキャンの間適当な時間間隔で採血する。画像は、１２０分までに取得する。放射性トレーサーの注入１０分以内であって、イメージング時間の終了時において、１ｍＬの血液試料を、ＰＥＴトレーサー前に投与されうる非標識ＩＤＯ１阻害剤の血漿濃度を調べるために取得する。
【００３３】
断層撮影画像は画像再構築により取得する。放射性トレーサーの分布を調べるために、以下に限定されないが、肺、腸、および免疫系の樹状細胞、ならびに他のＩＤＯ１発現組織もしくは他の器官を含む対象領域（ＲＯＩ）を再構築した画像上に引く。これらの領域における経時的な放射性トレーサー取り込みは、いずれの治療介入なし、または試験した様々な投薬パラジグムにおける非標識ＩＤＯ１阻害剤の存在下で得られる時間活性曲線（ＴＡＣ）を作成するために用いる。データは、単位体積につき単位時間あたりの放射能として表す（μＣｉ／ｃｃ／ｍＣｉの注入された用量）。ＴＡＣデータは、当該技術分野で周知の様々な方法で処理して、占有されていないＩＤＯ１結合部位の密度に比例する結合能（ＢＰ）または分布体積（ＶＴ）などの定量的パラメータを作成する。次いで、前記ＩＤＯ１酵素の阻害率は、服薬していない状態のＢＰまたはＶＴと比較して様々な投薬パラジグムでＩＤＯ１阻害剤の存在下における均衡分析により、ＢＰまたはＶＴの変化に基づいて算出する。阻害曲線は、上記データをＩＤＯ１阻害剤の用量（濃度）に対してプロットすることにより作成する。次いで、ＩＤＯ１の阻害率は、Ｅｍａｘ、Ｔｍａｘ、またはＴｍｉｎで阻害薬剤によって達成することができるＰＥＴ放射性リガンドのＶＴまたはＢＰの最大減少率、ならびに服薬していない状態のＢＰまたはＶＴと比較して様々な投薬パラジグムでＩＤＯ１阻害剤の存在下における分布非特異的体積（ＶＮＤ）およびＢＰの変化に基づいて算出する。ＩＤ５０値は、線量率／阻害曲線に適合する曲線によって取得する。
【００３４】
本発明は、さらに、放射性標識されたＩＤＯ１阻害剤を医薬担体または賦形剤と合わせる工程を含む、患者におけるＩＤＯ１結合部位の診断用イメージング方法に関する。
【００３５】
定義
特に断りがなければ、本願（明細書および特許請求の範囲を含む）で用いられる下記用語は、下記で付与される定義を有する。本明細書および特許請求の範囲で用いられるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、他で明確に示されていない限り、複数の対象が含まれることに留意すべきである。特に断りがなければ、質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術および薬理学の従来の方法が用いられる。本願において、「または」または「および」の使用は、特に示されていない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含む」ならびに他の形式（例えば、「含む」、「含んでいる」、および「含まれる」など）の使用は、限定するものではない。本明細書で用いられる段落冒頭は、構成上のためだけであって、記載される事項を限定するものと解すべきではない。
【００３６】
製剤、組成物、または成分についての用語「許容できる」は、本明細書で用いられるように、治療される対象の総体的な健康に持続的な有害効果が示されないことを意味する。
【００３７】
用語「阻害剤」は、本明細書で用いられるように、酵素における特異的な結合部位に結合し、細胞における応答の引き金を引く化合物などの分子を意味する。
【００３８】
用語「共投与」などは、本明細書で用いられるように、選択された治療剤の単一患者への投与が含まれるものとされ、薬剤が、同一のまたは異なる投与経路によって、あるいは同時にまたは異なる時に投与される治療計画を含むものとされる。
【００３９】
本明細書で用いられる用語「組成物」は、特定の成分を特定の量で含む生成物、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接もしくは間接に生じるいずれの生成物も含むものとされる。医薬組成物に関するこのような用語は、活性成分および担体を組成する不活性成分を含む生成物、ならびに２つもしくはそれ以上の成分の組み合わせ、錯体形成または凝集から、あるいは１つもしくはそれ以上の成分の解離から、あるいは１つの成分もしくは無成分の他のタイプの反応もしくは相互作用から直接もしくは間接に生じるいずれの生成物も含むものとされる。よって、本発明の医薬組成物には、本発明の化合物および医薬的に許容される担体を混合することによって調製された組成物が含まれる。「医薬的に許容される」は、担体、希釈剤、または賦形剤が、製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに対して有害であってはならないことを意味する。用語「化合物の投与」および／または「化合物を投与する」は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを患者に提供することを意味するものと理解されるべきである。
【００４０】
用語「有効量」または「治療上の有効量」は、本明細書で用いられるように、治療される疾患または病気の症状の１つまたはそれ以上をある程度まで軽減するために投与される薬剤または化合物の十分な量を意味する。その結果は、疾患の兆候、症状、または病因の減少および／または軽減、あるいは生物系の他の望ましい変化でありうる。例えば、治療用途のための「有効量」は、疾患の症状において臨床的な有意な減少を供するために必要とされる本明細書に開示される化合物を含む組成物の量である。各場合における適当な「有効」量は、用量漸増実験などの技術を用いて決定されうる。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「診断上有効な」は、研究者もしくは医師によって見出される対象における組織をイメージングするためのイメージング剤を濃縮する所望効果を達成するのに十分な本発明によるイメージング組成物の量を意味する。診断上有効な量である本発明のイメージング組成物の量は、当該技術分野の通常の知識を有する当業者、当該技術分野で周知の方法、および本開示によって日常的に決定することができる。
【００４２】
用語「対象」または「患者」には、哺乳類が含まれる。哺乳類の例としては、以下に限定されないが、ヒト、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、げっ歯類、ラット、マウス、モルモットなどが挙げられる。１の実施態様において、前記哺乳類は、ヒトである。
【００４３】
用途「治療する」、「治療している」または「治療」には、本明細書で用いられるように、疾患または病気の症状の少なくとも１つを軽減し、減少し、または改善し、さらなる症状を予防し、疾患または病気を抑制し、例えば、疾患または病気の進行を停止し、疾患または病気を緩和し、疾患または病気の退行を生じ、疾患または病気によって引き起こされる状態を緩和し、あるいは前記疾患または病気の症状を予防上および／または治療上停止することが挙げられる。
【００４４】
本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有していてもよい。非対称に置換される原子を含有するこのような化合物は、光学的に活性な形態またはラセミ体で単離されてもよい。光学的に活性な形態の調製方法、例えば、ラセミ体の分割または光学的に活性な出発物質からの合成による方法は、当該技術分野で周知である。オレフィンの多くの幾何異性体、Ｃ＝Ｎ二重結合などはまた、本明細書に記載の化合物に存在し得、全てのこのような安定な異性体が本発明に含まれる。開示される化合物のシス−およびトランス−幾何異性体が記載され、異性体の混合物として、または別々の異性体型として単離されてもよい。具体的な立体化学または異性体型が特に示されていない限り、構造の全てのキラル、ジアステレオマー、ラセミ体、および全ての幾何異性体型が意図される。
【００４５】
用語「医薬的に許容される」は、妥当な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしでヒトおよび動物の組織と接触して使用することに適し、合理的な利益／リスクの割合に相応する化合物、物質、組成物、および／または製剤を意味するために用いられる。
【００４６】
本明細書で用いられるように、「医薬的に許容される塩」は、親化合物がその酸または塩基性塩を生成することによって改変される開示化合物の誘導体を意味する。
【００４７】
医薬的に許容される「塩」および「塩類」なる用語は、無機塩基および有機塩基と一緒に形成される塩基性塩を意味しうる。このような塩としては、アンモニウム塩；アルカリ金属塩、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、およびカリウム塩；アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩）；有機塩基との塩（例えば、アミン様塩（例えば、ジシクロヘキシルアミン塩、ベンザチン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩、およびヒドラバミン塩））；およびアミノ酸（アルギニン、リジンなど）との塩；ならびに双性イオン塩、いわゆる「内部塩」が挙げられる。非毒性の医薬的に許容される塩が好ましいが、他の塩もまた生成物を単離もしくは精製する際に有用である。
【００４８】
医薬的に許容される「塩」および「塩類」なる用語にはまた、酸付加塩が含まれる。これらは、例えば、強無機酸、例えば、鉱酸、例えば、硫酸、リン酸、またはハロゲン化水素酸（例えば、ＨＣｌまたはＨＢｒなど）と形成され、強有機カルボン酸、例えば、ハロゲンによって置換されていないか、もしくは置換されている１〜４個の炭素原子のアルカンカルボン酸、例えば、酢酸、例えば、飽和もしくは不飽和ジカルボン酸、例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、またはテレフタル酸、例えば、ヒドロキシカルボン酸、例えば、アスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、またはクエン酸、例えば、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、またはアルギニン）、または安息香酸と形成され、あるいは有機スルホン酸、例えば、ハロゲンによって置換されていないか、もしくは置換されている（Ｃ１−Ｃ４）アルキルもしくはアリールスルホン酸、例えば、メタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸と形成される。
【００４９】
前記医薬的に許容される塩は、従来の化学方法によって塩基性もしくは酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸もしくは塩基形態を、水もしくは有機溶媒、またはこれら２つの混合物（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい）における化学量論量の適当な塩基または酸と反応させることによって調製することができる。適する塩の記載は、その記載が出典明示により本明細書に取り込まれるRemington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, p. 1418, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985)中に見出される。
【００５０】
本明細書を通して、基およびその置換基は、安定な部分および化合物ならび医薬的に許容できる化合物として有用な化合物ならびに／あるいは医薬的に許容できる化合物の調製に有用な中間体化合物を供するために当業者によって選択されうる。 
【実施例１】
【００５１】
実施例
本発明の化合物の合成が下記の実施例で示される。
ＨＰＬＣ条件：
方法Ａ：下記方法を用いるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＳＤＳ：２％〜９８％ 溶媒Ｂの直線グラジエントで１．６分間；２２０ｎｍでＵＶ視覚化；カラム：ＢＥＨ Ｃ１８ ２．１ｍｍｘ５０ｍｍ；１．７ｕｍ粒子（温度５０℃に加熱）；流速：１ｍｌ／分；移動相Ａ：１００％ 水、０．０５％ ＴＦＡ；移動相Ｂ：１００％ アセトニトリル、０．０５％ ＴＦＡ。
方法Ｂ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、２．１ｘ５０ｍｍ、１．７−μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；温度：５０℃；グラジエント：０−１００％ Ｂで３分間、続いて１００％ Ｂで０．７５分保持；流速：１．００ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでＵＶ。
【００５２】
実施例
［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化５】
0006987840.tif 000006
【００５３】
実施例１Ａ．
（＋／−）−シスおよびトランス−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（４−（６−ヨードキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化６】
0006987840.tif 000007
１
【００５４】
製造１Ａ．エチル ２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イリデン）プロパノエート
【化７】
0006987840.tif 000008
１Ａ
０℃に冷却したＴＨＦ（８ｍＬ）中のＮａＨ（０．３０７ｇ，７．６８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、エチル ２−（ジエトキシホスホリル）プロパノエート（１．８３０ｇ，７．６８ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。３０分後、１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−オン（１ｇ，６．４０ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混合物を０℃で２時間攪拌し、次いで室温に終夜温めた。該混合物を水でクエンチし、ＴＨＦを減圧下で留去した。残渣をＥｔＯＡｃ中に溶解させ、水、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＩＳＣＯにより精製した（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ ０−３０％）。該生成物を含有するフラクションを濃縮して、製造１Ａ（１．２ｇ，収率７８％）を淡黄色の油状物として得た。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ 4.19 (q, J=7.1 Hz, 2H), 4.03 - 3.89 (m, 4H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 2.46 - 2.28 (m, 2H), 1.89 (s, 3H), 1.78 - 1.66 (m, 4H), 1.30 (t, J=7.1 Hz, 3H).
【００５５】
製造１Ｂ．エチル ２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イル）プロパノエート
【化８】
0006987840.tif 000009
１Ｂ
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中の製造１Ａ（５００ｍｇ，２．０８１ｍｍｏｌ）（３０７Ａ）および１０％パラジウム炭素（２５ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）の懸濁液を、Ｐａｒｒ振盪器内で４５ｐｓｉにて６時間水素化した。該触媒を濾過し、該濾液を濃縮して、製造１Ｂ（４５０ｍｇ，収率８９％）を薄い油状物として得た。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ 4.12 (dtt, J=10.7, 7.1, 3.6 Hz, 2H), 3.98 - 3.81 (m, 4H), 2.35 - 2.17 (m, 1H), 1.83 - 1.68 (m, 3H), 1.66 - 1.45 (m, 4H), 1.43 - 1.28 (m, 2H), 1.27 - 1.22 (m, 3H), 1.14 - 1.07 (m, 3H).
【００５６】
製造１Ｃ．エチル ２−（４−オキソシクロヘキシル）プロパノエート
【化９】
0006987840.tif 000010
１Ｃ
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の製造１Ｂ（４５０ｍｇ，１．８５７ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ 塩化水素（水溶液）（０．９２９ｍＬ，３．７１ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を５０℃に６時間加熱した。反応混合液を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ中に溶解させ、水（２Ｘ）、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗製物質をＩＳＣＯ（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ ０−３０％）で精製した。生成物を含有するフラクションを濃縮して、製造１Ｃ（２９０ｍｇ，収率７９％）を清澄な油状物として得た。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ 4.22 - 4.06 (m, 2H), 2.46 - 2.30 (m, 5H), 2.13 - 1.91 (m, 3H), 1.56 - 1.42 (m, 2H), 1.31 - 1.24 (m, 3H), 1.18 (d, J=7.1 Hz, 3H).
【００５７】
製造１Ｄ．エチル ２−（４−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）シクロヘキサ−３−エン−１−イル）プロパノエート
【化１０】
0006987840.tif 000011
１Ｄ
製造１Ｃ（２００ｍｇ，１．０１ｍｍｏｌ）（３０７Ｃ）および２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（２３８ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１０ｍｌ）中に溶解させた。該反応混合物に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．１８６ｍＬ，１．１１ｍｍｏｌ）を滴下して加え、２時間攪拌した。該懸濁液を濾過した。濾液をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（２Ｘ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、製造１Ｄ（３２０ｍｇ，収率９６％）を褐色の油状物として得た。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ 5.73 (t, J=6.1 Hz, 1H), 4.28 - 4.05 (m, 2H), 2.52 - 2.17 (m, 4H), 2.08 - 1.79 (m, 3H), 1.49 (dt, J=11.1, 6.6 Hz, 1H), 1.31 - 1.20 (m, 3H), 1.19 - 1.04 (m, 3H).
【００５８】
製造１Ｅ．エチル ２−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）シクロヘキサ−３−エン−１−イル）プロパノエート
【化１１】
0006987840.tif 000012
１Ｅ
ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の製造１Ｄ（３００ｍｇ，０．９０８ｍｍｏｌ）（３０７Ｄ）の溶液に、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（２３０ｍｇ，０．９０８ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（２６７ｍｇ，２．７２ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物をＮ２で１０分間脱気し、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（１９．９ｍｇ，０．０２７ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を８０℃に終夜加熱した。該混合物をＥｔＯＡｃおよび水の間で分液処理した。有機相を濃縮し、ＩＳＣＯにより精製した。生成物を含有するフラクションを濃縮して、製造１Ｅ（１６８ｍｇ，収率６０％）を褐色の油状物として得た。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ 6.66 - 6.40 (m, 1H), 4.31 - 4.00 (m, 2H), 2.34 - 2.26 (m, 1H), 2.25 - 2.19 (m, 1H), 2.19 - 2.04 (m, 2H), 1.95 - 1.75 (m, 3H), 1.73 - 1.60 (m, 1H), 1.29 - 1.24 (m, 15H), 1.13 (dd, J=11.6, 7.0 Hz, 3H).
【化１２】
0006987840.tif 000013
１Ｆ
【００５９】
製造１Ｆ．エチル ２−（４−（６−ニトロキノリン−４−イル）シクロヘキサ−３−エン−１−イル）プロパノエート
３５０ｍＬの密封管に、ジオキサン（８９ｍＬ）および水（２９．６ｍＬ）中の４−クロロ−６−ニトロキノリン（２ｇ，９．５９ｍｍｏｌ）、製造１Ｅ（３．０４ｇ，９．８８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（４．０６ｇ，３８．４ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（０．５５４ｇ，０．４７９ｍｍｏｌ）の混合物を充填した。該反応物を１００℃で終夜加熱した。該反応物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈した。層を分離した。該水相をＥｔＯＡｃで抽出した（３Ｘ）。該有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、褐色の残渣を得た。該粗物質を、ＩＳＣＯ機器を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して（８０ｇカラム、６０ｍＬ／分、ヘキサン中の０−４５％ ＥｔＯＡｃで１９分間、ｔｒ＝１４分）、製造１Ｆ（２．９５５ｇ，８．３４ｍｍｏｌ，収率８７％）を黄色の残渣として得た。ESI MS (M+H)+ = 355.2.  HPLCピーク tr = 0.98分.  HPLC条件: A.
【化１３】
0006987840.tif 000014
１Ｇ
【００６０】
製造１Ｇ．エチル ２−（４−（６−アミノキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパノエート
ＭｅＯＨ（６．４２ｍｌ）中の製造１Ｆ（０．４５５ｇ，１．２８４ｍｍｏｌ）の溶液に、ギ酸アンモニウム（０．４０５ｇ，６．４２ｍｍｏｌ）、続いてＰｄ／Ｃ（０．０３７ｇ，０．３４７ｍｍｏｌ）を加えた。該反応物を７０℃で１時間加熱した。該反応物をセライトに通して濾過し、該濾過ケーキをＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾液を濃縮した。粗製物質をＥｔＯＡｃ中に入れ、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で洗浄した（２Ｘ）。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、製造１Ｇ（３７９ｍｇ，９０％）を褐色の残渣として得た。ＮＭＲは、１．８：１で純粋な所望生成物を示した。ESI MS (M+H)+ = 327.3.  HPLCピーク tr = 0.71分.  HPLC条件: A.
【化１４】
0006987840.tif 000015
１Ｈ
【００６１】
製造１Ｈ．エチル ２−（４−（６−ヨードキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパノエート
水（２．１ｍＬ）中の製造１Ｇ（０．３７９ｇ，１．１６１ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ溶液（０．５９ｍＬ）の溶液を０℃に冷却し、続いて水（２．１ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（０．０９６ｇ，１．３９３ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。水（２．１ｍＬ）中のヨウ化カリウム（０．２８９ｇ，１．７４２ｍｍｏｌ）の溶液を前記溶液に滴下して加え、該固形物を完全に溶解させた。添加後、該反応物を室温で３０分間攪拌し、次いで７０℃で１時間加熱した。冷まし、該溶液を、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１．８１ｍＬ）の溶液をゆっくり加えて中和させ、次いでＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（２Ｘ）。有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、褐色の残渣を得た。粗製物質を最少量のＣＨ２Ｃｌ２中に溶解させ、クロマトグラフに付した。該粗物質を、ＩＳＣＯ機器を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して（４０ｇカラム、４０ｍＬ／分、ヘキサン中の０−５５％ ＥｔＯＡｃで１５分間、ｔｒ＝１０．５分）、製造１Ｈ（９２．７ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ、収率１８．２６％）を黄色の残渣として得た。ESI MS (M+H)+ = 438.1.  HPLCピーク tr = 0.89分.  HPLC条件: A.
【００６２】
実施例１Ａ．（＋／−）−シスおよびトランス−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（４−（６−ヨードキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
０℃でＴＨＦ（２．８ｍＬ）中の４−クロロアニリン（０．４６４ｇ，３．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化イソプロピルマグネシウム（１．８２０ｍＬ，３．６４ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。生じた溶液を室温に温め、５分間攪拌し、次いでＴＨＦ（４．８ｍＬ）中の製造１Ｈ（０．７９６ｇ，１．８２０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。該反応物を７０℃で２時間加熱し、室温に冷ました。さらなる量の塩化イソプロピルマグネシウム（１．８２０ｍＬ，３．６４ｍｍｏｌ）を加えた。該反応物をさらに２時間加熱した。該反応物をＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈した。層を分離した。該水相をＥｔＯＡｃで抽出した（３Ｘ）。有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、残渣を得た。該粗物質を、ＩＳＣＯ機器を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して（８０ｇカラム、６０ｍＬ／分、ヘキサン中の０−６５％ ＥｔＯＡｃで３５分間、ｔｒ＝２７分）、（＋／−）−シス−実施例１（４５５ｍｇ，０．７０２ｍｍｏｌ，収率３９％）および（＋／−）−トランス−実施例１（１１１ｍｇ，１２％）を得た。トランスジアステレオマーが最初に溶出し、続いてシスジアステレオマーが溶出した。ESI MS (M+H)+ = 519.1.  HPLCピーク tr = 0.92分.  HPLC条件: A.
【００６３】
実施例２
Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（４−（６−ヨードキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化１５】
0006987840.tif 000016
２
約６５．１ｍｇのジアステレオマーおよびラセミ体の実施例１の化合物を分割した。該異性体混合物を下記条件でプレパラティブＳＦＣにより精製した：カラム：ＯＪ−Ｈ、２５ｘ３ｃｍ ＩＤ、５μｍ粒子；移動相Ａ：８０／２０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０ｎｍ；流速：１５０ｍＬ／分。該フラクション（「ピーク−１」 ｔｒ＝４．６４分、「ピーク−２」 ｔｒ＝５．３５分、「ピーク−３」 ｔｒ＝６．４３分）をＭｅＯＨ中で収集した。ピーク１および２の立体異性体純度は、プレパラティブＳＦＣクロマトグラフに基づいて９５％以上であると推定した。ピーク３を下記条件でプレパラティブＳＦＣにより再度精製して、異性体３および４を得た：カラム：Ｌｕｘ−セルロース、２５ｘ３ｃｍ ＩＤ、５μｍ粒子；移動相Ａ：７５／２５ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０ｎｍ；流速：１８０ｍＬ／分。該フラクション（「ピーク−１」 ｔｒ＝７．６３分および「ピーク−２」 ｔｒ＝８．６分）をＭｅＯＨ中で収集した。該フラクションの立体異性体純度は、プレパラティブＳＦＣクロマトグラフに基づいて９５％以上であると推定した。各ジアステレオマーもしくはエナンチオマーをプレパラティブＬＣ／ＭＳによりさらに精製した：
【００６４】
第１の溶出異性体：粗製物質を下記条件でプレパラティブＬＣ／ＭＳにより精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ 粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；グラジエント：５０−１００％ Ｂで２０分間、次いで１００％ Ｂで５分保持；流速：２０ｍＬ／分。所望生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、異性体１（１４．５ｍｇ，１２％）を得た。ESI MS (M+H)+ = 519.2.  HPLCピーク tr = 2.530分.  純度 = 92%.  HPLC条件: B.  絶対立体化学は調べなかった。
【００６５】
第２の溶出異性体：粗製物質を下記条件でプレパラティブＬＣ／ＭＳにより精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；グラジエント：５０−１００％ Ｂで２０分間、次いで１００％ Ｂで５分保持；流速：２０ｍＬ／分。所望生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、異性体２（８．１ｍｇ，７．３％）を得た。ESI MS (M+H)+ = 519.1.  HPLCピーク tr = 2.470分.  純度 = 100%.  HPLC条件: B.  絶対立体化学は調べなかった。
【００６６】
第３の溶出異性体：粗製物質を下記条件でプレパラティブＬＣ／ＭＳにより精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；グラジエント：５０−１００％ Ｂで２０分間、次いで１００％ Ｂで５分保持；流速：２０ｍＬ／分。所望生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、異性体３（１３．７ｍｇ，１２％）を得た。ESI MS (M+H)+ = 519.1.  HPLCピーク tr = 2.481分.  純度 = 97%.  HPLC条件: B.  絶対立体化学は調べなかった。
【００６７】
第４の溶出異性体：粗製物質を下記条件でプレパラティブＬＣ／ＭＳにより精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有）；グラジエント：５０−１００％ Ｂで２０分間、次いで１００％ Ｂで５分保持；流速：２０ｍＬ／分。所望生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、異性体４（７．５ｍｇ，６．７％）を得た。ESI MS (M+H)+ = 518.9.  HPLCピーク tr = 2.361分.  純度 = 99%.  HPLC条件: B.  絶対立体化学は調べなかった。
【００６８】
実施例３
（４−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（（Ｒ）−１−（（４−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ジフェニルスルホニウム トリフルオロメタンスルホネート
【化１６】
0006987840.tif 000017
３
【００６９】
製造３Ａ．（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−（フェニルチオ）キノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化１７】
0006987840.tif 000018
３Ａ
トルエン（１．５ｍＬ）中のトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（７．９ｍｇ，０．００８６ｍｍｏｌ）および（オキシビス（２，１−フェニレン））ビス（ジフェニルホスフィン）（１４ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）の溶液を、周囲温度で攪拌し、該溶液に窒素の低気流で泡立てて５分間脱気した。該溶液に、パートＸ （Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１ｓ，４Ｓ）−４−（６−ヨードキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（９０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を加え、該溶液を窒素でさらに３分間脱気した。チオフェノール（０．２０ｍＬ，０．２１ｍｍｏｌ）およびカリウム ｔｅｒｔ−ブトキシド（２３．４ｍｇ，０．２０８ｍｍｏｌ）を加え、該溶液を１００℃で２時間加熱した。生じた混合物を０．２μｍのナイロン膜ディスクに通して濾過し、ＩＳＣＯ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｆｌａｓｈ ｓｙｓｔｅｍを用いる精製のための４グラムのシリカカートリッジ上に載せた。ＵＶ検出は２５４ｎｍでモニターし、この精製の流速は１５ｍＬ／分であった。使用した順相溶媒は；溶媒Ａ：ヘキサン、溶媒Ｂ：酢酸エチルであった。直線グラジエント：０分−２５分 ０％ Ｂ〜９０％ Ｂを用いて、精製した生成物を１７分〜２４分間溶出した。回収した生成物フラクションを減圧下で蒸発させて、所望生成物（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−（フェニルチオ）キノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを黄色の固形物として得た（中間体２）（８０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）。LCMS m/z (M+H,) 理論値: 501.17, 502.17, 503.17, 504.17 実測値: 501.34, 502.30, 503.32, 504.34.
【００７０】
（４−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（（Ｒ）−１−（（４−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ジフェニルスルホニウム トリフルオロメタンスルホネート
【化１８】
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３
１０ｍＬの反応管内に、クロロベンゼン（１．５ｍＬ）中の製造３Ａからの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−（フェニルチオ）キノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（８０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸（０．０２８ｍＬ，０．３２ｍｍｏｌ）、ジフェニルヨードニウム トリフルオロメタンスルホネート塩（１７２ｍｇ，０．３９９ｍｍｏｌ）、および安息香酸銅（２４．４ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）を加え、該管を密封した。該混合物を攪拌し、１２５℃で１時間加熱した。減圧濃縮し、該生じた残渣をアセトニトリル（２ｍＬ）中に溶解させ、逆相半プレパラティブＨＰＬＣ精製に付した。精製条件は、１８ｍＬ／分の流速でＬＵＮＡ Ｃ１８ ２１．１ｘ２５０ｍｍ ５μ ＬＣカラムにて、溶媒Ａ：水中の０．１％ トリフルオロ酢酸、溶媒Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ トリフルオロ酢酸を使用し、ＵＶ検出は２５４ｎｍでモニターした。前記グラジエント：０分−１２分、１５％ Ｂ〜９５％ Ｂを用いて、精製した生成物を１１．５分間溶出した。回収した生成物フラクションを減圧下で蒸発させ、生じた残渣を塩化メチレン（２０ｍＬ）中に溶解させた。この溶液を１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液、飽和トリフルオロメタンスルホン酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）、および水（１５ｍＬ）で順番に洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。該溶媒を減圧下で留去して、所望生成物（４−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（（Ｒ）−１−（（４−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ジフェニルスルホニウム トリフルオロメタンスルホネートを黄褐色の固形物として得た（７３ｍｇ，０．０９０ｍｍｏｌ）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)  10.09 (br s, 1 H, N-H), 9.13 (d, 1 H, J = 4.7 Hz), 8.69 (d, 1 H, J = 2.0 Hz), 8.35 (d, 1 H, J = 9.1 Hz), 7.99 (dd, 1 H, J = 9.1, 2.0 Hz), 7.89 (m, 6 H), 7.80 (m, 4 H), 7.72 (d, 1 H, J = 4.7 Hz), 7.65 (d, 2 H, J = 8.9 Hz), 7.36 (d, 2 H, J = 8.9 Hz), 2.83 (m, 1 H), 1.98-1.82 (m, 5 H), 1.71-1.49 (m, 5 H), 1.14 (d, 3 H, J = 6.7 Hz); LCMS m/z (M+H,) 理論値: 577.21, 578.21, 579.20, 580.21 実測値: 577.40, 578.40, 579.38, 580.36.
【００７１】
実施例４
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）キノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化１９】
0006987840.tif 000020
４
【００７２】
製造４Ａ．（４−（（１Ｓ，４ｓ）−４−（（Ｒ−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ボロン酸
【化２０】
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４Ａ
実施例２からの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−ヨードキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（５５ｍｇ，０．１０６ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）中に溶解させた。テトラヒドロキシボロン（３８ｍｇ，０．４２４ｍｍｏｌ，４当量）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（２０．２ｍｇ，０．０４２ｍｍｏｌ，０．４当量）、酢酸カリウム（５２ｍｇ，０．５３０，５当量）、およびクロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル））パラジウム（ＩＩ）を加えた。反応混合液を５分間脱気し、密封し、５５℃に２時間加熱した。該混合物を濃縮し、プレパラティブＨＰＬＣのためにアセトニトリル／０．１％ ＴＦＡ中に再度溶解させた。Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラムで精製し（２０〜９０％ アセトニトリル／０．１％ ＴＦＡで溶出）、収集し、純粋なフラクションを回収し、凍結乾燥させて、２２．４ｍｇの（４−（（１Ｓ，４ｓ）−４−（（Ｒ−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ボロン酸（１Ａ）を白色の固形物として得た。LC/ms 理論値(M+ 436, 437, 439) 実測値(M+ 436.5, 437.5, 439.4).
【００７３】
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１ｓ，４Ｓ）−４−（６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）キノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化２１】
0006987840.tif 000022
４
（４−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（（Ｒ−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ボロン酸（４Ａ）（２２．２ｍｇ，０．０５１ｍｍｏｌ）を、７ｍＬの塩化メチレン中に溶解させた。２，３ ジメチルブタン−２，３ ジオール（７．８ｍｇ，１．２５当量）を１２モレキュラ・シーブスとともに加えた。反応液を室温で終夜攪拌した。該反応物を濾過し、濾過物を塩化メチレン（２ｍＬ）で洗浄した。濃縮して、２０．４ｍｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１ｓ，４Ｓ）−４−（６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）キノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを得た。LCMS 理論値 (M+ 518.0, 519.0, 521) 実測値 (M+ 518.5, 519.5, 521.5)  NMR (CDCl3, 400 mHz), 8.9 (d, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.1 (m, 2H), 7.6-7.5 (m, 3H), 7.4-7.3 (m, 2H), 3.5 (m, 1H), 2.7 (m, 1H), 2.2-2.1 (m, 1H), 1.9-1.8 (m, 6H), 1.4 (d, CH3, 12 H), 1.3 (d, CH3, 3H), 1.3-1.2 (m, 2H).
【００７４】
実施例５
［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド
【化２２】
0006987840.tif 000023
５
【００７５】
実施例５Ａ．［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（実施例３による）
【化２３】
0006987840.tif 000024
５Ａ
［１８Ｆ］−フッ素水溶液（２．０ｍＬ，２８．７ＧＢｑ／７７５ｍＣｉ）は、Ｓｉｅｍｅｎｓ’ ＰＥＴＮＥＴ Ｓｏｌｕｔｉｏｎs（ニュージャージー州、ハッケンサック）から購入し、ＱＭＡ Ｓｅｐ−Ｐａｋ［Ｔｈｅ Ｓｅｐ−Ｐａｋ ｌｉｇｈｔ ＱＭＡカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ ｐａｒｔ＃１８６００４５４０）は、ＢＭＳ（コネチカット州、ウォリンフォード）のカスタムリモートコントロール合成ユニット内で、使用前に５ｍｌの８．４％ 炭酸水素ナトリウム溶液、５ｍＬの滅菌水、および５ｍＬのアセトニトリルで順次予め処理した］にそのまま移した。この移行の完了後、該［１８Ｆ］フッ素水溶液は、２２５ｍＬの３０ｍＭ 炭酸水素カリウム（４．５ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）および３０ｍＭ ４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサン（１７．０ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）を含有する水溶液と、１．２７５ｍＬのアセトニトリルとの混合物を加えて、ＱＭＡ Ｓｅｐ−Ｐａｋから放出させた。該溶媒を１００℃および真空で窒素の弱い気流下で蒸発させた。共沸乾燥を１ｍＬ分のアセトニトリルで２回繰り返して、無水Ｋ．２．２．２／Ｋ１８Ｆ錯体を作成した。この工程の完了後、該クリプタンドを高真空下でさらに２０分間乾燥させた。（４−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（（Ｒ）−１−（（４−クロロフェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロヘキシル）キノリン−６−イル）ジフェニルスルホニウム トリフルオロメタンスルホネート（２．１ｍｇ，２．８μｍｏｌ）を無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中に溶解させ、該乾燥させたクリプタンドに加えた。この溶液を１１０℃で１５分間加熱した。その後、該粗反応混合物を７ｍＬの滅菌水および１ｍＬのアセトニトリルで希釈した。全内容物をＳｅｐ−Ｐａｋ ｔＣ１８（４００ｍｇのＣ１８、０．８ｍＬ体積、Ｗａｔｅｒｓ ｐａｒｔ＃ＷＡＴ０３６８１０）に移した。該Ｓｅｐ−Ｐａｋを滅菌水（２ｍＬ）ですすいで、未反応のフッ化物を除去し、続いて該生成物を２ｍＬのアセトニトリルで該Ｓｅｐ−Ｐａｋから溶出した。該アセトニトリルを滅菌水（２ｍＬ）で希釈し、十分に混合した。該溶液をＨＰＬＣ注入ループに移し、逆相ＨＰＬＣにより精製した（ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ−Ｃ１８，２５０ｘ１０ｍｍ，５μｍ．溶媒Ａ：水（０．０５％ ＴＦＡを含有）．溶媒Ｂ：アセトニトリル（０．０５％ ＴＦＡを含有）．条件：６０％ Ａ、０−１５分；６０−０％ Ａ、１５−２５分；０％ Ａ、２５−３０分．流速４ｍＬ／分．ＵＶ２３２ｎｍ．ガンマ線検出器を放射化学的検出のために用いた。）。［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを、クロマトグラフにて１８．１分で約１分間収集した。この生成物を２５ｍＬの滅菌水を含む５０ｍＬのフラスコに収集し、全内容物をＳｅｐ−Ｐａｃｋ ｌｉｇｈｔ Ｃ１８カートリッジ（１３０ｍｇのＣ１８、０．３ｍＬ体積、Ｗａｔｅｒｓ ｐａｒｔ＃ＷＡＴ０２３５０１）に移した。該Ｓｅｐ−Ｐａｋを１ｍＬの滅菌水ですすぎ、該生成物を０．５ｍＬの無水エタノールで遊離させた。［１���Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドのエタノール溶液を逆相ＨＰＬＣにより分析した（カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ−Ｃ１８，２５０ｘ４．６ｍｍ．５μｍ．溶媒Ａ：水（０．０５％ ＴＦＡを含有）．溶媒Ｂ：アセトニトリル（０．０５％ ＴＦＡを含有）．条件：５８％ Ａ、０−１５分；５８−０％ Ａ、１５−２５分；０％ Ａ、２５−３０分．流速１ｍＬ／分．ＵＶ２３２ｎｍ．ガンマ線検出器を放射化学的検出のために用い、保持時間１３．２分、放射化学的純度は１００％であった。）。標識された生成物を（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの正規の標準物で共溶出させた。該キラル純度を逆相ＨＰＬＣにより分析した（カラム：Ｄａｉｃｅｌ ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＤ−ＲＨ，１５０ｘ４．６ｍｍ．５μｍ．溶媒Ａ：水．溶媒Ｂ：アセトニトリル．条件：４０％ Ａ、０−１３分；４０−２０％ Ａ、１３−１４分；２０％ Ａ、１４−１６分；２０−４０％ Ａ、１６−１７分；４０％ Ａ、１７−２０分．流速１ｍＬ／分．ＵＶ２３２ｎｍ．ガンマ線検出器を放射化学的検出のために用い、保持時間７．７分、該キラル放射化学的純度は１００％であった。）。標識された物質は、（Ｒ，Ｓ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの正規の標準物と共注入すると、わずか１つのピークのみを示した。合成終了時に単離された全放射能は４．７８ｍＣｉ（１７６．９ＭＢｑ）であり、比放射能は７．１５ｍＣｉ／ｎｍｏｌであった。
【００７６】
実施例５Ｂ．［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（実施例４による）
【化２４】
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５Ｂ
市販のＳｙｎｔｈｅｒａ合成モジュール（ＩＢＡ）およびカスタムＨＰＬＣシステムを用いて自動化合成を行った。［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの自動化合成は、カセット型ＩＢＡ Ｓｙｎｔｈｅｒａ合成モジュールを、前記反応のための適切に組み立てた集積器流体プロセッサーキットとともに用いて行った。ＨＰＬＣ精製および再製剤化のためのカスタム自動化システムに移した。該集積器流体プロセッサー（ＩＦＰ）キットおよびカスタムシステムをこの合成のための適当な前身に載せ、表１に概略を示し、このシステムの図式を図１に示す。精製は、窒素の一定の気流によって制御される注入ループを充填しながらＶａｒｉａｎ ＨＰＬＣユニットで実施した。 
【００７７】
［１８Ｆ］フッ素水溶液（２．０ｍＬ、５９．２ＧＢｑ／１．６Ｃｉ）を予め条件を整えたＳｅｐ−Ｐａｋ ｌｉｇｈｔ ４６ｍｇ ＱＭＡに移した。移し終えた後、［１８Ｆ］フッ素水溶液を、（「Ｖ１」からの）溶出混合物を加えることによりＱＭＡ Ｓｅｐ−Ｐａｋから前記リアクターに放出した。該溶媒を窒素の弱い気流および真空下で蒸発させた。次いで、（「Ｖ２」からの）前身の溶液を乾燥させたフッ素−１８に加え、１１０℃で３０分間加熱した。これを（「Ｖ４」からの）２．５ｍＬの蒸留水および１．５ｍＬのアセトニトリルで希釈し、続いて中間体バイアル（「Ｐｒｅ−ＨＰＬＣ」）へ移した。
【００７８】
該混合物を５ｍＬの試料注入ループに載せて、半プレパラティブＨＰＬＣカラムに移した。０．１％ トリフルオロ酢酸水溶液中の４０％ アセトニトリルの混合物をカラムに通して流した（１分あたり４．０ｍＬの速度、気圧１８５０ＰＳＩ、ＵＶ２２０ｎｍ）。生成物を２２〜２４分間で３０ｍＬの蒸留水を含む希釈フラスコに単離した。全内容物を予め活性化させたＣ１８固相抽出カートリッジに移し、（「Ｖ５」からの）１ｍＬのエタノールで４ｍＬの生理食塩水の生成物バイアルに遊離させて、注入用の生理食塩水溶液中の２０％ エタノールを調製した。３１．２ｍＣｉ（１．１５ＧＢｑ）の［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド。
【００７９】
この生成物を逆相ＨＰＬＣにより分析し、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの非放射性参考標準物質の共投与、放射化学的純度、化学純度、および比活性による化学的同定により分析した。非放射性参考標準物質で１６分間共溶出した単離した生成物は、９９％の放射化学的純度であり、９５％の化学的純度であり、０．３８ＧＢｑ／ｎｍｏｌ（１０．４７ｍＣｉ／ｎｍｏｌ）の比活性を示した。該生成物をキラルＨＰＬＣにより分析した：非放射性参考標準物質（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（１０分）および（Ｓ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（１１．５分）の共注入によるキラル純度。単離した生成物を非放射性参考標準物質で１０分間共溶出した（ｅｅ：＞９９．５％）。
表１
【表１】
0006987840.tif 000026
【００８０】
実施例６
ＩＤＯ１を発現する異種移植マウスモデルにおける［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドによるインビボＰＥＴイメージング
［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドをＩＤＯ１のＰＥＴ放射性リガンドとしてその特性を確認するために試験した。［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを、Ｍ１０９マウス腫瘍モデルのＰＥＴイメージングを用いて、ＩＤＯ１酵素に対するその特異性および標的指向性について試験した。前記Ｍ１０９腫瘍モデルは、マウス肺癌細胞株から作成し、高レベルのＩＤＯ１を発現する。異種移植腫瘍モデルは、１ｘ１０６個のＭ１０９細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの右肩に皮下に移植することにより作成した。移植後、腫瘍を実験開始前に５日間増殖させた。Ｍ１０９異種移植した４５匹のマウスを４つの群に分けた。群１では、１２匹の動物が、６ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（ｎ＝１２）を受け、群２では、１２匹の動物が、６０ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（ｎ＝１２）を受け、群３では、１１匹の動物が、１５０ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（ｎ＝１１）を受け、そして群４では、１０匹の動物が、ベヒクルの生理食塩水（ｎ＝１０）を受けた。投薬および処理は、公知の薬理学的効果に基づいて確立し、処理は、経口で１日１回を４もしくは５日間投与した。全ての動物は、ＰＥＴイメージングの２時間前に投与した（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドまたはベヒクルの最後の用量による処理後にＰＥＴスキャンを受けた。１５０μＣｉの［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを含む注射用滅菌生理食塩水中のエタノール１０％溶液を、腫瘍におけるトレーサー分布および取り込みを可能とするために、ＰＥＴイメージングの１時間前に静脈内注射した。正確な注射用量は、注射後の前記シリンジにおける残留物の減衰補正活性を、注射前の前記シリンジにおける総測定用量から差し引くことにより算出した。ＰＥＴイメージングのために、該マウスをイソフルランで麻酔にかけ、４匹の動物用の特注の動物ホルダーに置いた。イメージングの間、体温を加熱パッドで保ち、麻酔を１．５％ イソフルランで維持した。ＰＥＴイメージングは、専用のｍｉｃｒｏＰＥＴ（登録商標）Ｆ１２０（登録商標）スキャナーおよびＦ２２０（登録商標）スキャナー（テネシー州、ノックスビルのＳｉｅｍｅｎｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）で行った。１０分の透過スキャンは、最終的なＰＥＴ画像の減衰補正のための５７Ｃｏ供給源を用いて行い、続いて１０分の静的放射スキャンを行った。ＰＥＴ���メージング前もしくは後、ＣＴスキャン（Ｘ−ＳＰＥＣＴ，Ｇａｍｍａ Ｍｅｄｉｃａ）またはＭＲＩスキャン（Ｂｒｕｋｅｒ）は、画像解析中に解剖学的な配向について行った。ＰＥＴ画像は、補正した透過画像を用いて減衰補正により最大事後確率（ＭＡＰ）アルゴリズムを用いて再構築した。画像解析は、画像解析ソフトＡＭＩＤＥを用いて行った。ＰＥＴ画像は、それらの対応するＣＴまたはＭＲＩ画像で共記載し、対象領域（ＲＯＩ）は、ＣＴまたはＭＲＩ画像を解剖学的方針として用いて腫瘍境界と筋肉付近に手動で引いた。評価基準パーセンテージ注射用量／ｇ組織（％ＩＤ／ｇ）は、ＲＯＩ体積から取得し、算出した注射活性を放射スキャンの開始時に対して減衰補正した。（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド処理群からの腫瘍におけるトレーサー取り込みを、ベヒクル群および筋肉組織からのものと比較した。筋肉組織は、組織におけるＩＤＯ１発現が低いため、非特異的な結合を評価するための対照領域として用いた。イメージング前に（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（６−１５０ｍｇ／ｋｇ）で処理した群１−３では、ベヒクル群と比較して、トレーサー取り込みの用量依存的減少を生じた（図２Ａ）。筋肉対照組織では、処理は前記トレーサーについて効果を有しておらず、このことは、これらの組織におけるＩＤＯ１発現の非存在と一致した（図２Ｂ）。動物の一部では（Ｖｅｈ；ｎ＝７、６ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７、６０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８、１５０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝８）、前記腫瘍および血清を、前記血清および腫瘍内の（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド、トリプトファン、およびキヌレニンの薬物レベルの測定のために採取した。これらの実験のために、前記マウスは、イメージングの翌日に（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドまたはベヒクルのさらなる用量を受けた。（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの最後の投薬７時間後、該マウスを安楽死させ、腫瘍および血清を、マーカーのために採取し処理した。図２Ａに示されるように、前記Ｍ１０９腫瘍内のトレーサーシグナルと、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの濃度との間に相関関係があった。（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの血清濃度（図２Ｄ）が投与用量の増加とともに高くなると、前記腫瘍内の％ＩＤ／ｇは用量依存的に減少した。キヌレニン経路の阻害は、腫瘍内のキヌレニンのトリプトファンへの割合（Ｋｙｎ／Ｔｒｐ）によって測定されるように図２Ｃに示される。キヌレニンのトリプトファンへの割合の用量依存的減少が、ベヒクル群と比較して（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドで処理した群内の腫瘍で観察され、ＰＥＴイメージングデータから測定した％ＩＤ／ｇと同一の傾向が観察された。これらの結果は、［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドのインビボによるＩＤＯ１の特異性および標的指向性の証拠を供し、ならびにこの標的のためのＰＥＴ放射性リガンドとしての［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの利用を示す。我々は、ＩＤＯ１を発現するＭ１０９腫瘍における前記トレーサーの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドによる用量依存的な置換を示した。さらに、我々のイメージングは、腫瘍における用量依存的ＰＤ効果と血清中のＰＫとが相関し、［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドのインビボでの特異性および標的指向性の両方を確認した。
【００８１】
実施例７
基準時およびＩＤＯ１阻害剤による処理後におけるＩＤＯ１発現異種移植マウスモデルの［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドによるインビボＰＥＴイメージング
［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを、基準時およびＩＤＯ１阻害剤である（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドによる処理後に、Ｍ１０９マウス腫瘍モデル内で試験した。前記Ｍ１０９腫瘍モデルは、マウス肺癌細胞株から作成し、高レベルのＩＤＯ１を発現する。異種移植腫瘍モデルは、１ｘ１０６個のＭ１０９細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの右肩に皮下に移植することによって作成した。移植後、該腫瘍を実験開始前に５日間増殖させた。Ｍ１０９異種移植した１６匹のマウスを４つの群に分けた。群１において、４匹の動物が、６ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（ｎ＝１２）を受け、群２では、４匹の動物が、６０ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（ｎ＝１２）を受け、群３では、４匹の動物が、１５０ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（ｎ＝１１）を受け、そして群４では、４匹の動物が、ベヒクルの生理食塩水（ｎ＝１０）を受けた。投薬および処理は、公知の薬理学的効果に基づいて確立し、処理は、経口で１日１回４日間もしくは５日間投与した。全てのマウスは、２回の別のＰＥＴスキャンを受けた。１回目は、処理開始前の基準ＰＥＴスキャンであり、２回目は、ＩＤＯ１阻害剤またはベヒクルのいずれかによる処理後スキャンであった。処理は、経口で１日１回５日間投与し、最後の用量は処理後ＰＥＴスキャン２時間前に投与した。１５０μＣｉの［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを含む注射用滅菌生理食塩水中のエタノール１０％溶液を、腫瘍におけるトレーサー分布および取り込みを可能とするために、ＰＥＴイメージングの１時間前に静脈内注射した。正確な注射用量は、注射後の前記シリンジにおける残留物の減衰補正活性を、注射前の前記シリンジにおける総測定用量から差し引くことにより算出した。ＰＥＴイメージング後、該マウスをイソフルランで麻酔にかけ、４匹の動物用の特注の動物ホルダーに置いた。イメージングの間、体温を加熱パッドで保ち、麻酔を１．５％ イソフルランで維持した。ＰＥＴイメージングは、専用のｍｉｃｒｏＰＥＴ（登録商標）Ｆ１２０（登録商標）スキャナーおよびＦ２２０（登録商標）スキャナー（テネシー州、ノックスビルのＳｉｅｍｅｎｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）で行った。１０分の透過スキャンは、最終的なＰＥＴ画像の減衰補正のための５７Ｃｏ供給源を用いて行い、続いて１０分の静的放射スキャンを行った。ＰＥＴイメージング前もしくは後、ＣＴスキャン（Ｘ−ＳＰＥＣＴ，Ｇａｍｍａ Ｍｅｄｉｃａ）またはＭＲＩスキャン（Ｂｒｕｋｅｒ）は、画像解析中に解剖学的な配向について行った。ＰＥＴ画像は、補正した透過画像を用いて減衰補正により最大事後確率（ＭＡＰ）アルゴリズムを用いて再構築した。画像解析は、画像解析ソフトＡＭＩＤＥを用いて行った。ＰＥＴ画像は、それらの対応するＣＴまたはＭＲＩ画像で共記載し、対象領域（ＲＯＩ）は、ＣＴまたはＭＲＩ画像を解剖学的方針として用いて腫瘍境界と筋肉付近に手動で引いた。評価基準パーセンテージ注射用量／ｇ組織（％ＩＤ／ｇ）は、ＲＯＩ体積から取得し、算出した注射活性を放射スキャンの開始時に減衰補正した。（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド処理群からの腫瘍におけるトレーサー取り込みを、ベヒクル群および筋肉組織からのものと比較した。筋肉組織は、組織におけるＩＤＯ１発現が低いため、非特異的な結合を評価するための対照領域として用いた。いずれの群間のＭ１０９腫瘍における基準時のトレーサー取り込みにおいて差異はなかった。図３に示されるように、トレーサー取り込みにおける用量依存的減少が、ベヒクル群と比較して（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミド（６−１５０ｍｇ／ｋｇ）処理群で観察された。該トレーサー取り込みは、ベヒクル群において基準時と処理後イメージングとの間で変化しなかった。筋肉対照組織におけるトレーサー取り込みは処理によって影響を受けず、いずれの群における基準時と処理後との間に差異はなかった。よって、これらの結果は、［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドのインビボによるＩＤＯ１の標的指向性を確認し、ならびに、薬物曝露／治療薬のインビボ標的占有性および有効性の間の相関関係を評価するために臨床的に用いられる基準の治療後実験設計の実現可能性を示す。
【００８２】
実施例８
高および低ＩＤＯ１発現腫瘍モデルにおけるトレーサー取り込みの比較
ＩＤＯ１の発現レベルにおける差異間を区別する能力を比較するために、ＣＴ２６腫瘍を保有するさらなるマウスモデルをイメージングした。このＣＴ２６腫瘍モデルは、マウス結腸直腸癌細胞株から作成し、Ｍ１０９モデルより低いレベルのＩＤＯ１を発現する。異種移植腫瘍モデルは、ＢＡＬＢ／ｃマウスの右肩に１ｘ１０６のＣＴ２６細胞を皮下に移植することにより作成した。移植後、腫瘍を実験開始前に７日間増殖させた。該マウスは、ベヒクル投薬をイメージング前に５日間受け、投薬とイメージングは、実施例６に記載されるとおりに正確に行って、Ｍ１０９およびＣＴ２６実験が比較可能であることを確かなものとした。図４に示されるように、ＣＴ２６マウス異種移植腫瘍中の％ＩＤ／ｇと比較して、Ｍ１０９マウス異種移植腫瘍中の％ＩＤ／ｇにおいて高いことが観察され、これらのモデルのそれぞれのＩＤＯ１発現レベルに一致する。
【００８３】
実施例９
非ヒト霊長類における生体分布
ＰＥＴイメージング実験をカニクイザルで実施することにより、非ヒト霊長類における［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの生体分布およびバックグラウンドシグナルを評価した。雄カニクイザル（３．５ｋｇ）を、０．０２ｍｇ／ｋｇのアトロピン、および５ｍｇ／ｋｇのテラゾール、０．０１ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンのクックテイルで麻酔にかけ、実験期間中、１−２％のイソフルランで維持した。体温を、外部循環水ベッドを用いて〜３７℃に保ってイメージング中の体温低下を防いだ。該サルに挿管し、伏在静脈カテーテルを挿入して、放射性トレーサー注入を可能とした。１．２ｍＣｉの［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドを含む注射用滅菌生理食塩水中のエタノール１０％溶液を、静脈内注射し、該サルを特注の動物ホルダーに入れ、ＭＲＩおよびＰＥＴスキャナー（Ｆ２２０（登録商標）スキャナー，テネシー州、ノックスビルのＳｉｅｍｅｎｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）の両方で比較した。該サルを解剖学的イメージングのためにＭＲＩスキャナーに入れた。高分解能３次元ＭＲＩ体軸画像を、頭から後足までの全身範囲について得た。ＭＲＩ後、該サルをＰＥＴスキャナーに移動させた。該ＰＥＴシステムにおける画像の体軸方向は、７．６ｃｍであった。この限定において、画像は、ベッド間の１．５ｃｍで重複した全身をカバーした７つの異なるベッド位置について取得した。放射イメージング前に、１０分の透過画像は、最終的なＰＥＴ画像の減衰補正のための各ベッド位置について取得した。最後の透過画像の取得直後、該ベッドを位置１に戻し、前記放射性トレーサーを、最初の放射スキャンの開始と同時に伏在静脈カテーテルにより注入した。放射について、各ベッド位置につき５分の放射取得を用いて合計５つの全身スキャンを取得した。画像は、減衰補正でＭＡＰアルゴリズムを用いて再構築した。ベッド位置を、自社で開発したスチッチングソフトウェアツールを用いて全身画像について張り合わせ、ＰＥＴおよびＭＲＩ画像を、ＡＭＩＤＥソフトウェアを用いて共記載した。最終画像を目視で調べて、高いトレーサー蓄積の領域を示し、生体分布およびバックグラウンドシグナルを評価した。該トレーサーは肝臓および胆嚢に蓄積し、予想される排出経路と一致する。図５に示されるように、［１８Ｆ］（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−２−（（１Ｓ，４Ｓ）−４−（６−フルオロキノリン−４−イル）シクロヘキシル）プロパンアミドの新たな蓄積とバックグラウンドシグナルが最少となることを示した領域は他になかった。この結果は、低いバックグラウンドシグナルが非ヒト霊長類で検出されたことから、ヒトイメージングで高いシグナル／ノイズ比（ＩＤＯ１発現が腫瘍微小環境内で高い）を生じうることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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