(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１２７へ特異的に結合する抗体又はその抗原−結合断片であって：
配列番号：９；配列番号：１０；配列番号：１１；及び配列番号：１２からなる群から選択される配列を含む抗体軽鎖又は該配列からなる抗体軽鎖可変ドメイン；及び
配列番号：７に示した配列からなる抗体重鎖可変ドメイン：を含む、前記抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項２】
前記ＣＤ１２７がヒトＣＤ１２７である、請求項１記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項３】
前記抗体が、ヒト化されたモノクローナル抗体であり、ここで抗体軽鎖定常ドメインが、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインに由来し、かつここで抗体重鎖定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４重鎖定常ドメインに由来する、請求項１又は２記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項４】
前記軽鎖定常ドメインが配列番号：２７又は２８の配列からなる、請求項３記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項５】
前記抗体重鎖定常ドメインが、配列番号：２６の配列からなる、請求項３又は４記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項６】
前記抗体軽鎖が、配列番号：１２の配列を含むか、又は前記抗体軽鎖可変ドメインが、該配列からなる、請求項１〜５のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項７】
ＩＬ−７により誘導されたＩＬ−７Ｒシグナル伝達のアンタゴニストであり、かつホスファチジルイノシトール３−キナーゼ及び／又はＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を誘導しない、請求項１〜６のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項８】
ＣＤ１２７の２ｂ部位から得られた配列を含むエピトープを認識し、及び／又はＣＤ１２７のサイトカイン受容体のγｃ共通鎖への結合を破壊する、請求項１〜７のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項９】
少なくとも前記ＣＤ１２７の２ｂ部位の第三のベータシートを認識する、請求項１〜８のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項１０】
ＣＤ１２７の内在化を誘導しないか、及び／又はＣＤ１２７のＩＬ７−誘導性の内在化を阻害する、請求項１〜９のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項１１】
ＴＳＬＰにより誘導された樹状細胞の成熟を増大しない、請求項１〜１０のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項１２】
持続性の作用及び／又は迅速作用を有する、請求項１〜１１のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項１３】
前記迅速作用を有する、請求項１２記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項１４】
バイオセンサー分析により測定することができる、５Ｅ−９  Ｍよりも低い親和定数ＫＤで、ヒトＣＤ１２７へ特異的に結合する、請求項１〜１３のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片をコードしている単離された核酸分子；及び、配列番号：１３の配列を含むか又は該配列からなる第二の単離された核酸分子の組合せ。
【請求項１６】
前記単離された核酸分子が、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７及び配列番号：１８からなる群から選択された配列を含むか又は該配列からなる、請求項１５記載の核酸分子の組合せ。
【請求項１７】
メモリーＴ細胞反応による影響を受けた病理又は病的状態の治療に用いるための、請求項１〜１４のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、及び／又は請求項１５又は１６記載の単離された核酸分子の組合せを含む、医薬組成物。
【請求項１８】
局所投与に適している、請求項１７記載の医薬組成物。
【請求項１９】
局所的皮下、腸内又は経口投与に適している、請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２０】
結腸への送達に適している、請求項１７記載の医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１７〜２０記載の医薬組成物、及び局所投与に適した送達装置を含む、キット。
【請求項２２】
前記局所投与に適した送達装置が、皮下、腸内又は経口の送達装置である、請求項２１記載のキット。
【請求項２３】
前記局所投与に適した送達装置が、予め充填されたシリンジもしくは無針装置である、請求項２１記載のキット。
【請求項２４】
医薬品として使用するための、請求項１〜１４のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、又は請求項１５又は１６記載の単離された核酸分子の組合せ、又は請求項１７〜２０のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項２５】
臓器もしくは組織移植片拒絶反応、又は自己免疫疾患又は炎症性疾患から選択される疾患の予防又は治療に用いるための、請求項１〜１４のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、及び/又は請求項１５又は１６記載の単離された核酸分子の組合せ又は、請求項１７〜２０のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性硬化症、多発性硬化症、１型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、全身性紅斑性狼瘡、又は原発性シェーングレン症候群である、請求項２５記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、単離された核酸分子の組合せ又は、医薬組成物。
【請求項２７】
前記炎症性疾患が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である、請求項２５記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、単離された核酸分子の組合せ又は、医薬組成物。
【請求項２８】
前記炎症性疾患が、クローン病、潰瘍性大腸炎、及び脳脊髄炎からなる群から選択される疾患である、請求項２５記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、単離された核酸分子の組合せ又は、医薬組成物。
【請求項２９】
アレルギー性疾患、及び癌疾患及び移植に関連した疾患及び呼吸器疾患からなる群から選択される疾患の予防又は治療に用いるための、請求項１〜１４のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、及び/又は請求項１５又は１６記載の単離された核酸分子の組合せ又は、請求項１７〜２０のいずれか一項記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ７受容体のアルファ鎖であるＣＤ１２７を標的化する治療及び診断の用途に有用なポリペプチド又は抗体の分野であり、且つ特にＣＤ１２７に対する、特にヒトＣＤ１２７に対するヒト化モノクローナル抗体、その治療上の使用、並びに診断用途を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の簡単な説明）
インターロイキン７（ＩＬ−７）の受容体のアルファ鎖（又はサブユニット）は、ＣＤ１２７又はｐ９０  ＩＬ−７Ｒ又はＩＬ−７Ｒアルファ又はＩＬ−７Ｒαと称される（時にはＩＬ−７Ｒａとも記される）。特定の態様において、本明細書に提供される抗体、特にモノクローナル抗体は、ヒト細胞上に発現されたヒトＩＬ−７に関する受容体のアルファ鎖に対し方向付けられる。特定の態様において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−７−ＩＬ−７Ｒ相互作用に関するアンタゴニスト特性を有し、ＣＤ１２７陽性細胞に対する細胞傷害性活性を提示することができるが、ＴＳＬＰにより誘導された樹状細胞（ＤＣ）の成熟は増大しない。特に本明細書に提供される抗体は、ＣＤ１２７の２ｂ部位由来の配列を含むヒトＣＤ１２７エピトープ、特にドメインＤ１の及びＣＤ１２７の２ｂ部位のヒトＣＤ１２７配列を含むエピトープを認識し、特にこのエピトープは、Ｄ１由来の少なくとも一つの配列、及び２ｂ部位由来の、好ましくはＣＤ１２７の２ｂ部位の第三のベータシート由来の少なくとも一つの配列を含む。あるいは又は加えて、特定の態様において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ１２７の内在化を誘導せず、及び／又はＣＤ１２７のＩＬ７−誘導性の内在化を阻害する。特定の態様において、本明細書に提供される抗体は、ヒト化されており、且つヒト残基の少なくとも８０％、及び好ましくは少なくとも８４％、又は少なくとも８５％を含む。特定の態様において、本明細書に提供される抗体は、エフェクターメモリーＴ細胞に対する迅速作用、エフェクターメモリーＴ細胞に対する持続作用、又は好ましくはエフェクターメモリーＴ細胞に対する迅速且つ持続作用を有する。特定の態様において、本明細書に提供される抗体は、効率的産生が可能である。特定の態様において、ＣＤ１２７、ＩＬ−７及び／又はＴＳＬＰの発現レベルは、特に本明細書に提供される抗−ＣＤ１２７抗体を使用し、反応の見込みを評価するために、測定することができる。本明細書に提供される抗体に加え、特に抗体の産生及び／又は該抗体に類似した使用のためのツールとして、そのような抗体及びポリヌクレオチド由来のポリペプチド、特に抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖、抗原−結合断片及び抗体模倣分子がある。
【発明の概要】
【０００３】
本発明者らは、ＷＯ２０１５／１８９３０２に開示されたＮ１３Ｂ２−ｈ１、Ｎ１３Ｂ２−ｈ２及びＮ１３Ｂ２−ｈ３抗体と比べた場合に、改善されたヒト化された抗体を得ようとした。バーニャ（Ｖｅｒｎｉｅｒ）ゾーンの残基、カノニカル残基、ＶＨ／ＶＬ境界の残基などを含む、可変ドメインフレームワーク配列中の一部の残基は、抗体の構造に重要であり、且つ抗体の生化学活性及び生物活性を保持するために変異されてはならないことは分かっているが、驚くべきことに本発明者らは、そのような決定的な残基の一部を含む、Ｎ１３Ｂ２の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列内の一部の変異は、ヒト残基含量の増加（Ｎ１３Ｂ２−ｈ３よりも多く、最大８６．３％まで）、及び改善された産生（Ｎ１３Ｂ２−ｈ３よりも最大４倍多く）を可能にする一方で、機能特徴を全て保持することを発見した。
【０００４】
これらの変異は、Ｎ１３Ｂ２の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列内の、１６のアミノ酸置換、並びにとりわけ追加して４８位のバリン残基のロイシン残基による置換（Ｖ４８Ｌ）及び／又は８７位のフェニルアラニン残基のチロシン残基による置換（Ｆ８７Ｙ）からなる。本明細書に提供される抗体鎖による、これらの位置、及び任意のアミノ酸位置は、別途明記されない限り、Ｋａｂａｔ番号付けを用いて提供される。下記の配列からなる改善された抗体軽鎖可変ドメインが、本明細書に提供される：
−配列番号：９（該１６のアミノ酸置換を含む−該抗体軽鎖可変ドメインは以後Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ３と称す）；
−配列番号：１０（該１６のアミノ酸置換及び追加して変異Ｖ４８Ｌを含む−該抗体軽鎖可変ドメインは以後Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ４と称す）；
−配列番号：１１（該１６のアミノ酸置換及び追加して変異Ｆ８７Ｙを含む−該抗体軽鎖可変ドメインは以後Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ５と称す）；並びに
−配列番号：１２（該１６のアミノ酸置換及び追加して変異Ｖ４８Ｌ及びＦ８７Ｙの両方を含む−該抗体軽鎖可変ドメインは以後Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６と称す）。
【０００５】
従って、本明細書においてＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ３と称される抗体軽鎖可変ドメインは、ヒトフレームワーク配列内に、Ｎ１３Ｂ２−ｈ３のＣＤＲ、該１６のアミノ酸置換、並びに重要な４８位及び８７位にＮ１３Ｂ２の当初の残基（すなわち、各々、Ｖ及びＦ）を含み、且つ配列番号：９の配列を有する。加えて変異Ｖ４８Ｌ及びＦ８７Ｙの両方を含む、Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６と称される、本明細書に提供される好ましい改善された抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号：１２で示される配列からなる。
【０００６】
当業者は、該変異は、特に軽鎖可変ドメインのフレームワーク中のそのような位置で、この抗体の影響を受けないＣＤ１２７との親和性を残すことを予想せず：Ｖ４８はカノニカル残基であり、且つＦ８７はＶＨ／ＶＬ境界に配置され；そのような残基の変異は、当業者に公知であり且つ例えばＣｌａｒｋの文献（２０１４）において考察されたように、この抗体の親和性及び／又は安定性に影響を及ぼすと予想される。本明細書において使用される用語「カノニカル」残基とは、Ｃｈｏｔｈｉａらの文献、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９０７  （１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａらの文献、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：７９９  （１９９２）により定義されたように、特定のカノニカルＣＤＲ構造を規定する、ＣＤＲ又はフレームワーク中の残基を指す。Ｃｈｏｔｈｉａらによると、多くの抗体のＣＤＲの決定的な部分は、アミノ酸配列レベルでは大きい多様性があるにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格の高次構造を有する。各カノニカル構造は、ループを形成するアミノ酸残基の近接セグメントについてペプチド骨格のねじれ角のセットを主に特定する。両方の位置で明らかにされた変異の導入は、改善された産生をもたらすが、他方依然これらの抗体の結合特徴及び有利なことに他の機能特徴を保持することは予測できなかった。
【０００７】
従って、特にそのような抗体の作製、特に配列番号：９；配列番号：１０；又は、配列番号：１１；又は、配列番号：１２に示した配列を含む又はこれらからなる特に最大２５０個のアミノ酸の配列からなる、抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖の、あるいは以下に規定したようなその抗原−結合断片又は抗体模倣分子の作製に有用なポリペプチドが、本明細書に提供される。特定の態様において、本発明は、ＣＤ１２７へ、特にヒトＣＤ１２７へ特異的に結合する、本明細書に提供される抗体又はその抗原−結合断片、特にヒト化されたモノクローナル抗体に関し、これは以下を含む：
−配列番号：９；配列番号：１０；配列番号：１１；配列番号：１２；特に、配列番号：１２からなる群から選択される配列を含む抗体軽鎖、又はこれらからなる抗体軽鎖可変ドメイン；並びに
−配列番号：１、配列番号：２、及び配列番号：３に示した配列からなる３つのＣＤＲを含む、抗体重鎖可変ドメイン、特に配列番号：７に示した配列からなる抗体重鎖可変ドメイン。
好ましい実施態様において、本発明は、ＣＤ１２７へ、特にヒトＣＤ１２７へ特異的に結合する、本明細書に提供される抗体又はその抗原−結合断片、特にヒト化されたモノクローナル抗体に関し、これは以下を含む：
−配列番号：９；配列番号：１０；配列番号：１１；配列番号：１２；特に、配列番号：１２からなる群から選択される配列からなる、軽鎖可変ドメイン；並びに
−配列番号：１、配列番号：２、及び配列番号：３に示した配列からなる３つのＣＤＲを含む、重鎖可変ドメイン、特に配列番号：７に示した配列からなる重鎖可変ドメイン。
【０００８】
特定の態様において、本明細書に提供される抗体は、前述のような可変ドメイン、並びに配列番号：２７又は２８、好ましくは配列番号：２７で選択された配列からなる定常ドメインを持つ軽鎖、並びに前述のような可変ドメイン、並びに配列番号：２６に示した配列からなる定常ドメインを持つ重鎖を含む。
【０００９】
同じく、最大２５０のアミノ酸、特に最大２１７、最大２１４、最大２１１、より特定すると、最大２００、最大１７５、最大１５０、最大１３５、最大１２０、最大１０７、並びに更により特定すると、最大１００、最大９０、最大８０、最大７４、最大７０、最大６０のアミノ酸の配列からなる単離されたポリペプチドも、本明細書に提供され、ここで該配列は、以下からなる群から選択される配列を含むか又はこれらからなる：
−配列番号：９（ヒトフレームワーク配列内のＮ１３Ｂ２−ｈ３のＣＤＲ）；
−配列番号：１０（Ｖ４８Ｌ変異を含む、ヒトフレームワーク配列内のＮ１３Ｂ２−ｈ３のＣＤＲ）；
−配列番号：１１（Ｆ８７Ｙ変異を含む、ヒトフレームワーク配列内のＮ１３Ｂ２−ｈ３のＣＤＲ）；
−配列番号：１２（Ｖ４８Ｌ及びＦ８７Ｙの両方の変異を含む、ヒトフレームワーク配列内のＮ１３Ｂ２−ｈ３のＣＤＲ）；並びに
−その抗原−結合断片、特に配列番号：４、配列番号：５及び配列番号：６に示した配列からなる３つのＣＤＲを含む該断片、より特定すると、配列番号：１２のアミノ酸２４−９７からなる少なくとも７４のアミノ酸を含む断片。
【００１０】
同じく、本明細書に提供されるポリペプチドをコードしている、特に本発明の抗体又はその抗原−結合断片をコードしているポリヌクレオチドも、本明細書に提供される。そのようなポリヌクレオチドは、特に配列番号：９から１２からなる群で選択される配列を含む又はそれからなるポリペプチドをコードし、且つ同じく配列番号：１から３、特に配列番号：７の中で選択された配列を含む又はそれからなるポリペプチドもコードし、且つ配列番号：２６から２８からなる群から選択される配列を含む又はこれからなるポリペプチドもコードすることができる。特に、該ポリヌクレオチドは、少なくとも２つの単離された核酸配列（分子）の組合せを含むか又はこれからなり、第一の単離された核酸分子は、配列番号：１５から１８；特に配列番号：１８からなる群から選択される配列を含むか又はこれからなり；該組合せはまた、配列番号：１３及び配列番号：２９から３１、特に配列番号：１３からなる群から選択される配列を含むか又はこれからなる第二の単離された核酸分子を含むか又はこれからなる。
【００１１】
特に、本発明のポリペプチドは、抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖を含み、該ポリペプチドは、ヒト残基の少なくとも８４％、及びより特定すると少なくとも８５％を含む。該ポリペプチドは、本明細書に開示された抗体由来の抗原−結合断片及び／又は抗体−模倣分子であることができる。
【００１２】
同じく、該ポリペプチド、特に抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖、抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子を含有する組成物、該抗体、該ポリペプチド及び抗体をコードしている核酸分子を得る方法、並びに該ポリペプチド、抗体及び組成物の使用も、本明細書に提供される。
【００１３】
従って、本明細書に提供されるポリペプチド、抗体軽鎖可変ドメイン、抗体軽鎖、抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子及び組成物は、ＩＬ−７シグナル伝達経路がリンパ球産生に関連した病理への寄与を提供する場合に、特に樹状細胞の成熟の増加、より正確には共刺激分子の上方制御が望ましくない場合に、該病理から生じるヒト患者において診断された状態を治療するための使用が意図されるか及び／又はその使用に適している。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（発明の詳細な説明）
（生化学）
ＣＤ１２７は、ＩＬ−７受容体（ＩＬ−７Ｒ）とＴＳＬＰ受容体（ＴＳＬＰＲ）に共通している。ＩＬ−７Ｒは、ＣＤ１２７とインターロイキン受容体の共通ガンマ鎖（γｃ）のヘテロ二量体から構成される。共通ガンマ鎖γｃは、本明細書において及び文献において、ＣＤ１３２と呼ばれることもある。ＩＬ−７Ｒは、インターロイキン７によって結合される。ＴＳＬＰ受容体は、ＣＤ１２７とサイトカイン受容体様因子２（ＣＲＬＦ２）のヘテロ二量体である。ＴＳＬＰ受容体は、ＴＳＬＰによって結合される。文献では、ＴＳＬＰＲを用いて、この受容体のＣＲＬＦ２鎖とＣＤ１２７／ＣＲＬＦ２複合体の両方を表すこともある。混乱を避けるために、以下において、ＴＳＬＰＲは、通常この複合体を表す。
【００１５】
ＣＤ１２７（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ寄託番号Ｐ１６８７１）は４つのアイソフォームで存在し得る。Ｈ２０とも呼ばれるカノニカルアイソフォーム（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ１６８７１．１）は、１回膜貫通タンパク質であり、Ｎ−末端からＣ−末端にかけて、２０アミノ酸のシグナルペプチド、２１９アミノ酸の細胞外ドメイン、２５アミノ酸の膜貫通ドメイン、及び１９５アミノ酸の細胞内ドメインからなる４５９個のアミノ酸を有する。他のアイソフォームは、Ｈ２０の細胞外ドメインの全て（又は大部分）の配列を共有し、様々に異なるＣ−末端配列を示す。アイソフォーム２及び４（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ１６８７１−４及びＰ１６８７１−３）は分泌され、一方、アイソフォーム３（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  Ｐ１６８７１−２）も膜貫通タンパク質である。ＣＤ１２７は、配列番号：２１の配列を有すると報告され、且つその細胞外ドメインは、シグナルペプチドが取り除かれた場合、配列番号：２２の配列を有する。別途明記されない限り、ＣＤ１２７のアミノ酸に対して本明細書で使用される付番は、配列番号：２２からの付番である。
【００１６】
ＣＤ１２７は、サイトカイン受容体相同性クラスＩ（ＣＲＨ  Ｉ）受容体である。当技術分野で周知の通り、これらの受容体の細胞外ドメインは、Ｄ１及びＤ２と呼ばれる２つのフィブロネクチン３ドメインからなる。ＣＤ１２７の正確な結晶構造は、例えば、ＭｃＥｌｒｏｙらの文献、２００９；ＭｃＥｌｒｏｙらの文献、２０１２、及びＷａｌｓｈの文献、２０１２で発表され、考察されており、特に、タンパク質構造データとして、構造バイオインフォマティクス研究共同体データバンク（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｆｏｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ）（ＲＣＳＢ  ＰＤＢ）のデータベースに、３ＵＰ１という寄託番号で開示されている。Ｄ１は、ＩＬ−７との結合に関与すると一般に考えられるが、Ｄ２は、γｃ鎖との（更には、ＩＬ−７との）結合に関与する。重要なことに、ドメインＤ２の部位２ｂは、以下の配列を含む、３つのベータシートを含む：
【化１】
0006986559.tif 000002
。従ってドメインＤ２の部位２ｂは、配列番号：２２のアミノ酸１０９と１８０の間に含まれる（Ｗａｌｓｈの文献、２０１２；Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ，  Ｋ．らの文献、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍ  ２０１７参照）。ドメインＤ２の部位２ｂはまた、配列番号：２２のアミノ酸１０９と１７３の間に含まれるとも規定され得る。ドメインＤ２の部位２ｂはまた、配列番号：２２のアミノ酸１１３と１８０の間に含まれるとも規定され得る。ドメイン２ｂの部位２ｂはまた、配列番号：２２のアミノ酸１１３と１７３の間に含まれるとも規定される。特に、ドメインＤ２の部位２ｂは、最初の２つのベータシートが局在化される配列番号：２２のアミノ酸１０９−１３３、特に１０９−１２７；並びに、第三のベータシートが局在化される配列番号：２２のアミノ酸１６６−１８０を含み、特に本質的にこれらからなる。より特定すると、２ｂ部位は、配列番号：２２のアミノ酸１１３−１３３、特に１１３−１２７、並びに配列番号：２２のアミノ酸１６６−１８０から本質的になる。より特定すると、２ｂ部位は、配列番号：２２のアミノ酸１０９−１３３、特に１０９−１２７、並びに配列番号：２２のアミノ酸１６６−１７３から本質的になる。より特定すると、２ｂ部位は、配列番号：２２のアミノ酸１１３−１３３、特に１１３−１２７、並びに配列番号：２２のアミノ酸１６６−１７３から本質的になる。ドメインＤ２の部位２ｂは、ＣＤ１２７−γｃ相互作用に重要であり、特にＩＬ−７の存在下でのＣＤ１２７のγｃとの結合を可能にするか又は増大する。特に重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）に罹患している患者で同定されているＰ１１２及びＬ１１５における変異は、おそらくその病原性特徴をもたらすＤ２ドメインの疎水性コアを不安定にすると考えられる。前述のように、この２ｂ部位は、配列番号：２２のアミノ酸１０９−１８０から本質的になるか、あるいは配列番号：２２のアミノ酸１０９−１７３から本質的になるか、あるいは配列番号：２２のアミノ酸１１３−１８０から本質的になるか、あるいは配列番号：２２のアミノ酸１１３−１７３から本質的になる。当業者であれば、そのようなドメインの両端を１塩基の確度で必ずしも明確には規定し得ないということ、及びこの２ｂ部位を、言及された配列のどちらか又は両方の末端で、１つ、２つ、もしくは３つ多い又は１つ、２つ、もしくは３つ少ないアミノ酸を含むものであると理解し得るということを認識しているであろう。従って、ＣＤ１２７の２ｂ部位について本明細書において言及する場合、これは、配列番号：２２の位置１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２又は１１３で始まり、且つ位置１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９又は１８０で終わるＣＤ１２７の配列；特にＩＬ−７の存在下で、ＩＬ７−Ｒのγｃ鎖と必須の結合部位を構成すると考えられるか又は示されたそのような配列を言及すると理解されるべきである。より特定すると、ＣＤ１２７の２ｂ部位について本明細書において言及する場合、これは、配列番号：２２の位置１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２又は１１３で始まり、且つ位置１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２又は１３３で終わるＣＤ１２７の配列に言及するが、配列番号：２２の位置１６２、１６３、１６４、１６５又は１６６で始まり、且つ位置１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９又は１８０で終わるＣＤ１２７の配列にも言及すると理解されるべきである。本明細書に規定された３つのベータシートは、本発明の抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物に特異的なエピトープ配列を含み得ることも留意されるべきである。本発明の抗体、抗原−結合断片及び抗原−結合模倣物は、配列番号：３２、配列番号：３３及び／又は配列番号：３４へ特異的に結合することができる。更に、少なくとも１つのベータシートの一部を含むアミノ酸配列及び任意のベータシートの一端に局在化されたいくつかの近接アミノ酸もまた、本発明の抗体に特異的なエピトープ配列であることができる。例として、
【化２】
0006986559.tif 000003
の配列は、第三のベータシートの最後の５個のアミノ酸、及び第三のベータシートの外側に局在化された１０個の追加のアミノ酸を含む。別の例として、
【化３】
0006986559.tif 000004
は、第三のベータシート内に局在化した１個のアミノ酸及び第三のベータシートの外側に局在化した７個の追加のアミノ酸を含む。特に、本発明の抗体又はその抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：２２のＲ１７３へ特異的に結合し得る。特に、本発明の抗体又はその抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３２；配列番号：３３；配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６からなる群から選択される少なくとも１つの配列へ特異的に結合し得る。特に、本発明の抗体又はその抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、
【化４】
0006986559.tif 000005
からなる群から選択される少なくとも１つの配列へ特異的に結合し得る。代替的又は相補的に、本発明の抗体又はその抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、
【化５】
0006986559.tif 000006
からなる群から選択される少なくとも１つの配列へ特異的に結合し得る。配列番号：３６から配列番号：４１までは、ＣＤ１２７のドメインＤ１内に局在化され、且つ本発明の抗体又はその抗原−結合断片又は抗体模倣分子により認識されたエピトープ配列である。本発明の代替的又は相補的実施態様において、本発明の抗体又はその抗原−結合断片又は抗体模倣分子は、
【化６】
0006986559.tif 000007
からなる群から選択される少なくとも１つの配列へ特異的に結合し得る。これら２つの配列は、ＣＤ１２７のドメインＤ１内に局在化されたエピトープ配列である。特定の本発明の実施態様において、本発明の抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３２；配列番号：３３；配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６からなる群から選択される、特に配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６からなる群から選択される、少なくとも１つの配列；並びに配列番号：３６；配列番号：３７；配列番号：３８；配列番号：３９；配列番号：４０；配列番号：４１；配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される、特に配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される、少なくとも１つの配列に特異的に結合し得る。本発明の好ましい実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３４、並びに配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される少なくとも１つの配列、特に配列番号：４２及び配列番号：４３へ、特異的に結合し得る。本発明の好ましい実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３５、並びに配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される少なくとも１つの配列、特に配列番号：４２及び配列番号：４３へ、特異的に結合し得る。本発明の好ましい実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：９６、並びに配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される少なくとも１つの配列、特に配列番号：４２及び配列番号：４３へ、特異的に結合し得る。本発明の好ましい実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３５及び配列番号：９６の両方の配列に特異的に結合し得る。本発明の好ましい実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：４２及び配列番号：４３の両方の配列に、特異的に結合し得る。特定の本発明の実施態様において、本発明の抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、ＣＤ１２７のドメインＤ２の部位２ｂの少なくとも第三のベータシートを、特異的に認識し得る。この第三のベータシートは、配列番号：３４に対応する、配列番号：２２のアミノ酸１６６と１７３の間に局在化されると、優先的に規定され、且つより特定すると、第三のベータは、配列番号：３４に対応する。本発明のより特定の実施態様において、本発明の抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、ドメインＤ２の部位２ｂ内に局在化された少なくとも２つのベータシートを特異的に認識し、且つより特定すると、本発明の抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、先に規定したようにドメインＤ２の部位２ｂ内に局在化された３つのベータシートを特異的に認識し得る。より特定の本発明の実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、ドメインＤ２の部位２ｂ内に局在化された少なくとも１つのベータシート、特に配列番号：３４に対応する第三のベータシートを特異的に認識し、且つ配列番号：３６；配列番号：３７；配列番号：３８；配列番号：３９；配列番号：４０；配列番号：４１；配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される少なくとも１つの配列へ結合する。好ましい本発明の実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、少なくとも配列番号：３４に対応する第三のベータシート、並びに配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択される少なくとも１つの配列を、特に配列番号：４２及び配列番号：４３を特異的に認識し得る。より特定の本発明の実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３５のアミノ酸からなる、線状ペプチド又は線状エピトープを特異的に認識し得る。代替的又は相補的に、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：９６のアミノ酸からなる、高次構造的ペプチド又は高次構造的エピトープを特異的に認識し得る。より特定の実施態様において、抗体又は抗原−結合断片又は抗原−結合模倣物は、配列番号：３５のアミノ酸配列の線状エピトープ又は線状ペプチド、並びに配列番号：９６の高次構造的エピトープ又は高次構造的ペプチドを、特異的に認識し得る。
【００１７】
ＩＬ−７Ｒシグナル伝達。ＩＬ−７のＩＬ−７Ｒへの結合は、Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）−１及び−３、シグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）、及びホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−ｋ）を含む、いくつかのシグナル伝達経路の活性化を誘発する。ＳＴＡＴ１及びＳＴＡＴ３経路が活性化されることが報告されているが、それらは主要な経路ではないように思われる。ＳＴＡＴ５経路の活性化は、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２の誘導及びアポトーシス促進性タンパク質Ｂａｘのミトコンドリアへの侵入の防止に必要とされ、従って、胸腺で発生するＴ細胞前駆細胞の生存に必要とされる。ＰＩ３−ｋ経路の活性化は、アポトーシス促進性タンパク質Ｂａｄのリン酸化及び細胞質保持をもたらす。
【００１８】
ＴＳＬＰＲシグナル伝達。胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）は、リンパ球産生に活性があり、特に、免疫系の細胞の発生の調節に関与する上皮細胞サイトカインであり、該調節は、特に、該細胞の成熟に影響を及ぼす。ヒトＴＳＬＰ（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ３３８７３２）は、樹状細胞の分極化を働かせ、Ｔ細胞及びＢ細胞の増殖及び分化を促進する因子である。ＴＳＬＰはまた、Ｔｒｅｇ細胞の発生を抑制する（Ｌｅｉらの文献、２０１１）。
【００１９】
ＴＳＬＰ−誘導性シグナル伝達経路は、分子レベルで、ＩＬ−７誘導性経路とは異なることが示されている。特に、その受容体へのＴＳＬＰの結合はＪａｋ−１も活性化させるが、それは、Ｊａｋ−３を活性化させることはなく、しかし、Ｊａｋ−２を活性化させる。これらの違いは、Ｊａｋ−１が両方の受容体によって共有されるＣＤ１２７と関連し、一方、Ｊａｋ−２がＣＲＬＦ２と関連し、Ｊａｋ−３がγｃと関連するという観察と一致している（Ｒｏｃｈｍａｎらの文献、２０１０）。ＳＴＡＴ５経路の活性化も、ＴＳＬＰ−誘導性シグナル伝達について報告されている（Ｚｈｏｎｇらの文献、２０１４）。ＴＳＬＰの１つの主要な作用は、樹状細胞の活性化をもたらし、ＣＤ８０などの共刺激分子の過剰発現を誘導し、それにより、ＴＨ−２媒介性炎症応答を促進することである（Ｒｅｃｈｅらの文献、２００１）。
【００２０】
（細胞生物学）
「ＣＤ１２７−陽性細胞」は、その細胞表面でＣＤ１２７を発現する細胞を表す。ほとんどの場合、ＣＤ１２７−陽性細胞は、ＩＬ−７Ｒを形成する複合体中に（ＩＬ−７Ｒ−陽性細胞）及び／又はＴＳＬＰＲを形成する複合体中に（ＴＳＬＰＲ−陽性細胞）、ＣＤ１２７を発現する。ＣＤ１２７は、様々な細胞によって発現され、これには、メモリーＴ細胞とナイーブＴ細胞によるものが含まれる。ＣＤ１２７は、特に、休止Ｔ細胞及びメモリーＴ細胞を含むエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）によって、並びに未成熟Ｂ細胞によって発現されるが、とりわけ、休止ナチュラル制御性Ｔ細胞（ナチュラルＴｒｅｇ）によっては発現されない。ＣＤ１２７は、胸腺細胞の分化及びリンパ球のクローン性増殖の促進に不可欠である。
【００２１】
ナイーブＴ細胞の恒常性にとってのＩＬ７−ＣＤ１２７経路の重要性は、従来型ＣＤ４＋  Ｔ細胞上での膜結合型ＣＤ１２７の発現レベルが、健常個体及びＨＩＶ−感染患者並びにＭＳ患者における胸腺移出Ｔ細胞（ＲＴＥ）−ＣＤ４＋  Ｔ細胞の頻度と相関することを示すいくつかの最近の研究によって強調されている（Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅらの文献、２００７）（Ｂｒｏｕｘらの文献、２０１０）。ＣＤ１２７は、ＴＳＬＰ受容体の構成要素でもある。胸腺髄質の上皮細胞から構成される構造であるハッサル小体によるＴＳＬＰの分泌は、胸腺細胞からＴｒｅｇへの分化を誘導するように、ＣＤ１１ｃ＋骨髄樹状細胞（ＭＤＣ）を条件付けることが示されている（Ｗａｔａｎａｂｅらの文献、２００５ａ）。従って、ＣＤ１２７ノックアウトマウスで示されたように、ＩＬ−７受容体からのシグナルは、Ｔｒｅｇ発生に必要とされる（Ｍａｚｚｕｃｃｈｅｌｌｉらの文献、２００８）。Ｈａａｓらの文献（２０１１）において、著者らは、明確な遺伝的影響を伴わない、従来型Ｔ細胞上でのＣＤ１２７発現の低下及びＩＬ−７血漿レベルの上方制御を、ＭＳにおける胸腺移出Ｔ細胞−Ｔｒｅｇの頻度及びＴｒｅｇの機能の低下とともに示した（Ｈａａｓらの文献、２０１１）。
【００２２】
ＩＬ−７がその同族受容体の膜トラフィッキングをどのようにして調節するのかということの詳細な解析は、リンパ球機能におけるＩＬ−７／ＩＬ−７Ｒの役割の深い理解にとって極めて重要である。以前の研究により、Ｔ細胞のＩＬ−７刺激が、おそらくは受容体内在化が理由で、３０分以内にＣＤ１２７の表面下方制御をもたらすことが示唆された。より後の時点（２〜６時間）で、ＩＬ−７は、ＣＤ１２７の転写下方制御を誘導することが示された。しかしながら、ＩＬ−７によるＣＤ１２７の内在化及びトラフィッキング機構の調節の実際の動力学は、まだ解明されていない（Ｈｅｎｒｉｑｕｅｓらの文献、２０１０）。ＩＬ−７−誘導性シグナル伝達がＣＤ１２７内在化に依存するということ及びその後の受容体分解がＪＡＫ３活性に依存し、かつプロテアソームとリソソームの両方によって媒介されるということも示唆された。
【００２３】
（生理病理学）
樹状細胞は、成熟後に、Ｔ細胞媒介性免疫応答を促進する高レベルの共刺激分子、例えば、ＣＤ８０を発現する。それらは、Ｔ細胞で走化性を誘導する、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）というサイトカインを産生する。従って成熟樹状細胞は、例えば、喘息、関節リウマチ、大腸炎、多発性硬化症、及びブドウ膜炎で見られるような、Ｔ細胞応答が効果を現すいくつかの免疫媒介疾患の生理病理学に寄与する。成熟樹状細胞は、細胞、組織、又は臓器同種移植片の拒絶過程においても重要な役割を果たす。それゆえ、多くの治療戦略は、樹状細胞成熟を妨げることを目的としている。
【００２４】
樹状細胞などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）上での共刺激分子の有無は、免疫応答の定性的及び定量的性質に顕著な影響を及ぼす。樹状細胞によるＣＤ８０の過剰発現は、ＤＣ成熟を引き起こし、メモリーＴ細胞活性化を増大させる（Ｂｏｕｒ−Ｊｏｒｄａｎらの文献、２０１１）。機構的には、ＣＤ２８とＣＤ８０との相互作用は、免疫シナプスの中心クラスターを占め、結合したＴＣＲと共局在し、それにより、免疫シナプスを安定化する（Ｄｕｓｔｉｎ及びＳｈａｗの文献、１９９９）（Ｇｒａｋｏｕｉらの文献、１９９９）。ＣＤ２８とＣＤ８０の間の相互作用は、実際、ＴＣＲがＨＬＡ分子と効率的に相互作用するための適切な間隔を生じさせる（Ｓｈａｗ及びＤｕｓｔｉｎの文献、１９９７）。
【００２５】
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性脱髄性疾患である。ＭＳ患者のＣＮＳにおける脱髄パッチの出現は、主にマクロファージとＴリンパ球から構成される免疫浸潤物と関連している。機構的なレベルでは、ＭＳは、自己免疫疾患と考えられる。ＭＳは、通常、主としてＣＤ４＋  Ｔ細胞によって媒介される疾患と考えられる。ＣＤ４＋の特定のサブセット：Ｔｈ１及び最近ではＴｈ１７がこの疾患の病態生理学に関係があるとされた。現在のところ、特定の役割を各亜集団のＴｈ１及びＴｈ１７に割り当てるのは依然として難しい。更に、アルファ４（α４）−インテグリンの拮抗作用による白血球トラフィッキングの阻害は、現在、ＭＳ及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの炎症性疾患の治療のための及び同様にアテローム性動脈硬化症の治療のための治療的アプローチとして検証されている（Ｚｈｉらの文献、２０１４）。α４β７は、活性化マクロファージ、リンパ球のサブセット、ＮＫ細胞、マスト細胞、及び好酸球を含む、より限られた白血球セットで発現されている。
【００２６】
ヒトＩＬ−７は、ヒトＴリンパ球上でのインビトロでのα４及びβ７インテグリンの強い発現を誘導し、α４、β７、及びα４／β７インテグリンを発現するヒトＴリンパ球の頻度を劇的に増大させ、これらのインテグリンは、腸、脳、及び皮膚などの非リンパ系組織におけるＴリンパ球のホーミング及び保持に必要とされる（Ｄｅｎｕｃｃｉらの文献、２００９；Ｇｏｒｆｕらの文献、２００９）。
【００２７】
ナイーブＴ細胞は、移植された臓器及び組織の急性拒絶反応の部分的な原因である。これらの細胞は、現在の免疫抑制薬（カルシニューリン阻害剤）によって、及び共刺激を遮断するモノクローナル抗体（抗接着、ＣＤ８０／８６阻害剤）によって制御することができる。メモリーＴ細胞も移植片拒絶反応の原因である。メモリーＴ細胞は、獲得免疫歴、主にウイルスに対するかつての反応が原因でヒトに蓄積する。メモリーＴ細胞は、ヒトの抗ウイルス防御と同種抗原との交差反応である「異種免疫」の結果として同種抗原によって再活性化され得ることが示されている（Ａｄａｍｓらの文献、２００３）。ナイーブＴ細胞とは対照的に、メモリーＴ細胞は、共刺激シグナルの必要性が低下して、素早く活性化するようにプログラムされているので、異種免疫は、寛容誘導に対する強力な障壁となる。メモリーＴ細胞は、慢性拒絶反応にも関与し得る。臓器移植及び組織移植における役割の他に、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞は、多くの自己免疫疾患の共通の原因でもある。これは、潰瘍性大腸炎（Ｓｈｉｎｏｈａｒａらの文献、２０１１）、関節リウマチ、乾癬、又は移植片対宿主病の場合である。
【００２８】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病（ＣＤ）などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、慢性小腸炎症、腸管微生物に対する制御できない免疫応答及び上皮障壁の機能障害により特徴付けられる慢性の再発性の消化器疾患である（Ｋｈｏｒらの文献、２０１１；Ａｂｒａｈａｍ及びＣｈｏの文献、２００９）。ＩＢＤの発症率及び有病率は、世界規模で増加しており、これらの疾患は、著しい罹患率に関連しており、且つ生活の質及び作業能力に対し大きい影響を有する（Ｄａｎｅｓｅ及びＦｉｏｃｃｈｉの文献、２０１１；Ｂａｕｍｇａｒｔ及びＳａｎｄｂｏｍの文献、２０１２）。現在の通常治療は、抗炎症薬、免疫抑制薬及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）などの炎症性サイトカインを標的化する生物製剤の段階的使用による炎症の緩和を目標としている。ＩＢＤの重要な特徴はまた、炎症部位での白血球の迅速な動員及び延長された残留でもあり、これは、細胞接着及び遊走を可能にする内皮細胞により発現される同族受容体とのインテグリン相互作用により可能になる（Ａｄａｍｓ及びＥｋｓｔｅｅｎの文献、２００６；Ａｇａｃｅの文献、２００６）。新たに出現した療法は、抗接着分子による腸管へのこの侵入ドアを標的とし、特に腸管−特異的α４β７インテグリン経路を標的としている（Ｆｅａｇａｎらの文献、２０１３；Ｓａｎｄｂｏｍらの文献、２０１３）７，８。しかし、これらの療法は、患者の半分以上では寛解を維持せず、高い割合の一次反応者の中で紅斑発生を再発する。日和見感染症も、全身の免疫抑制の結果として発生する。従って一つの主要な目的は、ＩＢＤの新規治療法を提供し、且つＩＢＤの慢性化、反応及び再発を決定するマーカーを確定することである。
【００２９】
更に、いくつかの悪性細胞は、ＩＬ−７Ｒを提示することが示されている。これは、セザリー皮膚リンパ腫（そのうちの６０％）、又は小児急性リンパ芽球性白血病の場合であり、小児急性リンパ芽球性白血病では、その症例の約１５％がＣＤ１２７の機能獲得型変異を発現し、これらの腫瘍を部分的にＩＬ−７依存性の状態にする（Ｓｈｏｃｈａｔらの文献、２０１１）。
【００３０】
Ｔリンパ球の枯渇は、同種移植片拒絶反応に対抗し又は自己免疫と争うための明白な免疫抑制アプローチとなっている。しかしながら、全体的なＴ細胞枯渇は、免疫寛容の誘導に有利ではない場合がある。Ｔ細胞の亜集団又は選択的に活性化されたＴ細胞の標的化は、Ｔｒｅｇ細胞を調節しなければ、免疫寛容促進アプローチとなり得る（Ｈａｕｄｅｂｏｕｒｇらの文献、２００９）。それゆえ、ＣＤ１２７は、免疫応答を調節することを目的としたモノクローナル抗体（Ｍａｂ）の魅力的な潜在的治療標的と考えることができる。なぜなら、そのようなモノクローナル抗体ならば、エフェクターリンパ球を枯渇させる可能性を有し得るが、制御性リンパ球を枯渇させる可能性を有し得ないからである。従って、該モノクローナル抗体は、ＩＬ−７−Ｒに対するＩＬ−７の接近に拮抗し、それにより、Ｔ細胞及びＢ細胞の機能及び成長を制限することによって、移植、自己免疫（Ｍｉｃｈｅｌらの文献、２００８）、及び悪性腫瘍において効力を示す可能性があると考えられる。
【００３１】
ＩＬ−７経路を妨害するＣＤ１２７＋細胞に対するモノクローナル抗体による治療ならば、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞を除去／中和すること、並びに／もしくはＴｒｅｇ細胞を維持しながら、その数を減少させることによるか、又はＣＤ１２７−陽性悪性細胞を除去しもしくはその数を減少させることによって、その目的を果たすことができる。しかしながら、ＣＤ１２７＋細胞に対するモノクローナル抗体による治療は、それが樹状細胞の活性化をもたらす場合、諸刃の剣として働く可能性がある。実際、ＣＤ１２７は、ＣＲＬＦ２と関連して、樹状細胞によっても発現され、ＴＳＬＰ受容体を形成する。ＴＳＬＰの存在下で、樹状細胞は活性化され、Ｔ細胞媒介性免疫応答を促進する。ＣＤ１２７に対するいくつかのモノクローナル抗体は、おそらくはＴＳＬＰがＴＳＬＰ受容体と相互作用する様式を改変することにより、ＴＳＬＰによって誘導される樹状細胞の成熟を増大させる性質を有する。結果として、ＴＳＬＰによって誘導される樹状細胞の成熟を増大させないＣＤ１２７に対するモノクローナル抗体による治療ならば、治療的利点を示すであろう。それならば、ＴＳＬＰを含む炎症環境で樹状細胞を活性化させるという欠点を伴うことなく、ＩＬ７Ｒ遮断の利益を示すであろう。
【００３２】
刊行物（Ｒａｃａｐｅらの文献、２００９）において、著者らは、移植における潜在的治療標的としてのＩＬ−７受容体アルファ（ＩＬ７Ｒα）の利益を解析した。様々なＴ細胞及びＩＬ−７応答性細胞上でのＩＬ−７Ｒαの発現を再検討して、著者らは、ＩＬ−７Ｒαを発現するメモリーＴ細胞を標的とすることにより、マウスにおける同種移植生存が延長され得るかどうかを決定し、ＩＬ−７又はＩＬ−７Ｒαを標的とすることにより、Ｔｒｅｇ細胞が有利に存続すると結論付けている。将来の展望の中で、著者らは、治療的処置においてＩＬ−７又はＩＬ−７Ｒαのいずれかを標的とすることにより、ＣＤ１２７を発現する細胞の生存に対して異なる結果がもたらされる可能性があり、異なるタイプのリンパ球減少が誘発される可能性があることを指摘した。ＩＬ−７Ｒαに対する抗体の作用は、それらがブロッキング抗体であるのか又は中和抗体であるのか又は細胞傷害性抗体であるのかによるという問題も概念的な観点から提起された。それにもかかわらず、著者らは、そのような抗体を取得し、アッセイしたことを示すのではなく、むしろ、仮説の妥当性を評価するためのさらなる研究の必要性を表明した。
【００３３】
免疫関連疾患及びＩＬ−７／ＩＬ−７Ｒαが関与する他の疾患、例えば、一部の乳癌を含む様々なタイプの癌における利用可能な治療アプローチの欠点を考慮すると、さらなる薬物候補、とりわけ、ヒト患者の免疫活性化を制御する、例えば、調節することを目的とした、より選択的な標的に対して活性のある候補が依然として必要とされている。
【００３４】
この文脈で、ＩＬ−７Ｒαに対するアンタゴニスト特性を有するＩＬ−７Ｒαに対するモノクローナル抗体がＷＯ２０１０／０１７４６８号に開示されており、多発性硬化症のような自己免疫疾患を治療する目的で、そのヒト化バージョンがＷＯ２０１１／０９４２５９号に開示されている。記載されている抗体は、ＩＬ−７のその受容体への結合に対するアンタゴニストであり、かつＩＬ−７のそのＣＤ１２７受容体との相互作用を必要とすると言われていたＴＨ１７細胞及びＴＨ１細胞の増殖及び生存に対して活性があると言われている。免疫細胞の成熟、特に、樹状細胞の成熟に対するこれらの抗体の作用は検討されていない。加えて、これらの抗体は、ＴＳＬＰ誘導性のＴＡＲＣ産生を阻害しないと言われている（ＷＯ２０１１／０９４２５９号の１０７頁）。同様に、糖尿病、狼瘡、関節リウマチ、及び他の自己免疫疾患の治療での使用が企図されている、ＷＯ２０１１／１０４６８７号又はＷＯ２０１３／０５６９８４号に報告された抗−ＣＤ１２７抗体は、樹状細胞の成熟に対するその考えられる作用に関して論じられておらず、ＴＳＬＰ誘導性シグナル伝達とのその相互作用は報告されていない。更に、Ｋｅｒｎらによって発表されているように（Ｋｅｒｎらの文献、２０１３；Ｋｅｒｎらの文献、２０１５）及び本明細書に示されているように、従来技術の抗−ＣＤ１２７抗体は、この受容体の内在化を誘導する。ＣＤ１２７の内在化も誘導するアンタゴニスト抗−ＣＤ１２７抗体が皮膚のＩＶ型過敏症を制御しないのに対し、内在化を誘導しないアンタゴニスト抗−ＣＤ１２７抗体はそれを制御するので、内在化プロセスがシグナル伝達経路を活性化し、抗体のアンタゴニスト作用を緩和する可能性がある。最後に、従来技術の抗体は、ＣＤ１２７の２ｂ部位に由来する（すなわち、特に配列番号：２２のアミノ酸１０９−１８０に由来するか、又は特に配列番号：２２のアミノ酸１０９−１７３に由来するか、又は特に配列番号：２２のアミノ酸１１３−１８０に由来するか、又は特に配列番号：２２のアミノ酸１１３−１７３に由来する）配列を１つも含まないエピトープを認識し；かつＣＤ１２７とＩＬ−７Ｒのγｃ鎖との結合を妨害することが示されていない。
【００３５】
ＣＤ１２７抗体の開発に対する最近の関心にもかかわらず、このように、ＩＬ７−誘導性ＩＬ−７Ｒシグナル伝達の阻害に努力が集中している。それでもやはり、ＴＳＬＰ及びＴＳＬＰＲが、いくつかの病理に関連付けられている。ＴＳＬＰは、皮膚及び肺の疾患において役割を果たし（Ｈｅ及びＧｅｈａの文献、２０１０）、かつヒト及びマウスの気道炎症疾患及びアトピー性皮膚炎を含む様々な病理と関連することが示されている（Ｙｉｎｇらの文献、２００８）（Ｊａｒｉｗａｌａらの文献、２０１１）。更に、ＴＳＬＰは、腸の免疫及び炎症の調節と関連することが示されている（Ｔａｙｌｏｒらの文献、２００９）。ＴＳＬＰ及びＴＳＬＰＲが関与する他の病理としては、小児Ｂ細胞白血病（ｖａｎ  Ｂｏｄｅｇｏｍらの文献、２０１２）、肺及び皮膚特異的アレルギー性疾患、自己免疫関連疾患（Ｒｏａｎらの文献、２０１２）、並びに乳癌を含む癌（Ｏｌｋｈａｎｕｄらの文献、２０１１）が挙げられる。
【００３６】
樹状細胞の成熟の増大の作用を示さない抗体及び／又はＣＤ１２７の内在化を誘導しない抗体及び／又はＩＬ７−誘導性内在化を阻害する抗体が、ＷＯ２０１５／１８９３０２号に開示されている。該抗体は、本明細書において以後Ｎ１３Ｂ２（キメラ抗体）、Ｎ１３Ｂ２−ｈ１、Ｎ１３Ｂ２−ｈ２及びＮ１３Ｂ２−ｈ３（ヒト化Ｎ１３Ｂ２）と称され、これらは高い効率を、特にインビボにおいて有し、且つ以下に規定されるように特にエフェクターメモリーＴ細胞に対する迅速作用を有することが示された。しかし、該抗体は、制限された程度にヒト化され、且つそれらの産生効率も限定される。更に、該抗体のエフェクターメモリーＴ細胞に対する長期持続性の作用は報告されていない。
【００３７】
本発明は、ＩＬ−７シグナル伝達経路に関与した疾患を有するか又は疾患のリスクのある患者への投与のための、治療的候補として適した新規抗体の設計のためのツールに関する。本明細書に提供される様々なアプローチに従い、そのようなツールは、ヒト宿主への投与が意図された抗体の調製を改善する。そのようなツールは、Ｎ１３Ｂ２−ｈ３のＣＤＲ配列を全て含む、特にヒト化された抗体、特にモノクローナル抗体を含む。
【００３８】
そのようなポリペプチド（又はそのようなポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド）は、特にＣＤ１２７へ特異的に結合する、抗体（又はその抗原−結合断片）の作製のために、及び／又は抗体（又はその抗原−結合断片）として、特に提供され；該抗体、特にモノクローナル抗体は、配列番号：１に示されたＶＨＣＤＲ１、配列番号：２に示されたＶＨＣＤＲ２、及び配列番号：３に示されたＶＨＣＤＲ３の３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。特に該重鎖可変ドメインは、配列番号：７に示された配列からなるか、又は追加の変異、特に４個の残基、好ましくは３又は２個の残基、更により好ましくは１個の残基の置換、欠失又は挿入を伴う該配列を有し、好ましくはここで該変異は、ＣＤＲ配列にも、フレームワーク配列のカノニカル位置又はバーニャ位置にも存在しない。
【００３９】
本明細書に提供される抗体は、好ましくはモノクローナル抗体であり、これはこれらの抗体の組成物は、抗原−結合特異性に関して、従って可変領域組成に関して、均質であり、特に同一であることを意味する。
【００４０】
本発明は、Ｎ１３Ｂ２−ｈ３抗体のＣＤＲを共有するが、異なる軽鎖可変ドメインフレームワークを有する抗体を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、Ｎ１３Ｂ２−ｈ３の軽鎖可変ドメインの同じＣＤＲ、すなわち配列番号：４及び５及び６のＣＤＲを含むが、異なる軽鎖可変ドメイン配列、すなわち配列番号：９の；配列番号：１０の；配列番号：１１の又は配列番号：１２の配列を含み；他方で、広範にヒト化されている抗体は、Ｎ１３Ｂ２−ｈ３と比べより高度に作製される（最大４倍より高い）が、機能特徴を全て保持していることを示した。
【００４１】
本発明は、特にＩＬ−７Ｒαに対する特異的モノクローナル抗体を含む、この状況に適した手段を提供する。特定の実施態様において、該抗体は、ＴＳＬＰ経路と負にのみ干渉する。従って好ましい実施態様において、該抗体は、ＴＳＬＰ−誘導性の樹状細胞成熟を増大させない。更に又は代わりに特定の実施態様において、該抗体は、ＣＤ１２７の内在化を誘導しない、及び／又はＩＬ７−誘導性のＣＤ１２７内在化を阻害する。特定の実施態様において、該抗体は、これらのＤＣ成熟及び／又は内在化関連特性を、ＩＬ−７／ＩＬ−７−Ｒシグナル伝達に対するアンタゴニスト活性と組み合わせる。特定の実施態様において、該抗体は、Ｔ細胞における、特に、インビボでの、α４、β７、及びα４／β７インテグリンのＩＬ７−誘導性発現を阻害する。特定の実施態様において、該抗体は、それらの数を物理的に減少する標的ＣＤ１２７＋細胞に対する細胞傷害作用（亜集団の縮小）を発揮する。更に又は代わりに、特定の実施態様において、該抗体は、以下に規定したように、ヒト残基を少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８４％、又は８４％よりも多く、更により好ましくは少なくとも８５％含む。更に又は代わりに、特定の実施態様において、該抗体は、以下に規定したように、少なくともＮ１３Ｂ２−ｈ３と同じ効率で、好ましくは少なくとも２倍の効率で、作製される。更に又は代わりに、特定の実施態様において、該抗体は、エフェクターメモリーＴ細胞に対し、迅速及び／又は長期持続性の作用を有する。
【００４２】
特に、本明細書に提供される抗体は、以下のアミノ酸配列を含む可変重（ＶＨ）鎖を含む：
ＶＨＣＤＲ１配列番号：１；
ＶＨＣＤＲ２配列番号：２；
ＶＨＣＤＲ３配列番号：３。
本明細書に提供される抗体は、好ましくは配列番号：７：
【化７】
0006986559.tif 000008
に示した配列からなるＶＨ鎖を含む。該可変重鎖は、特に、配列番号：２６の配列からなる定常重鎖に連結され、完全抗体重鎖を構成する。
【００４３】
特に、本明細書に提供される抗体は、配列番号：９、配列番号：１０の配列、配列番号：１１の配列、及び配列番号：１２の配列、特に配列番号：１２の配列からなる群から選択される配列からなるＶＬ鎖を含む：
【化８】
0006986559.tif 000009
。
該可変軽鎖は、特に配列番号：２７及び配列番号：２８、特に配列番号：２７から選択された配列からなる定常軽鎖に連結され、完全抗体軽鎖を形成する。
特に、本発明の抗体又はその抗原−結合断片は、ＣＤ１２７に、特にヒトＣＤ１２７に特異的に結合し、且つ以下を含む：
−配列番号：９；配列番号：１０；配列番号：１１；配列番号：１２；特に配列番号：１２からなる群から選択される配列を含む抗体軽鎖又はこれらからなる抗体軽鎖可変ドメイン；並びに
−配列番号：１、配列番号：２、及び配列番号：３に示した配列からなる３つのＣＤＲを含む抗体重鎖可変ドメイン、特に配列番号：７に示した配列からなる抗体重鎖可変ドメイン。
より特定の本発明の実施態様において、抗体又はその抗原−結合断片は、ＣＤ１２７に、特にヒトＣＤ１２７に特異的に結合し、且つ以下を含む：
−特に配列番号：９、配列番号：１０；配列番号：１１及び配列番号：１２、特に配列番号：１２からなる群から選択される配列からなる、本発明の抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖；並びに
−配列番号：１、配列番号：２、及び配列番号：３に示した配列からなる３つのＣＤＲを含む抗体重鎖可変ドメイン、特に配列番号：７に示した配列からなる抗体重鎖可変ドメイン。
【００４４】
（ＣＤ１２７の結合）
本発明によれば、ＩＬ−７Ｒαタンパク質への「結合」は、抗原−抗体型相互作用を指し、かつ抗体又はその抗原結合性断片の「特異的結合」特性を包含し、この特異的結合は、該抗体又は抗原結合性断片がＩＬ−７Ｒαタンパク質に結合する一方で、それらが他のタンパク質（例えば、共通のサイトカイン受容体γ鎖）に結合しないか又はそれに顕著により弱い親和性で結合することを意味する。特異的結合は、とりわけ、試験溶液のｐＨ及び塩含有量に関して生理的条件下で定義及び／又は決定されることが好ましい。結合及び結合特異性は、実施例に開示される試験に従ってアッセイすることができ、特に、バイオセンサー、Ｂｌｉｔｚ、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、又はウェスタンブロット分析によってアッセイすることができる。
【００４５】
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ−７−Ｒアルファ鎖がＴＳＬＰ−受容体（ＣＣＲＦ２を含む；Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ３３８７３３；Ｒｅｃｈｅらの文献、２００１）中で複合体を形成した場合、それを標的とし、かつそれに結合する。特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、バイオセンサー解析により、特にＢｌｉｔｚ法により決定されるように、５Ｅ−９  Ｍと等しいか又はこれよりも低い親和定数（ＫＤ）で、単離されたタンパク質としてのＣＤ１２７に結合する。特定の実施態様において、これらの抗体の結合特性は、ｅｐ１（配列番号：１９）及び／又はｅｐ２（配列番号：２０）の配列を含むヒトＣＤ１２７の抗原を使用し、決定又は定義される。特定の実施態様において、該抗原は、ｅｐ１とｅｐ２の両方を含むヒトＣＤ１２７の断片を含む（すなわち、該抗原は、ヒトＣＤ１２７のｅｐ１及びｅｐ２の配列並びに挿入配列を含む）。特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ＷＯ２０１５／１８９３０２に開示されたＮ１３Ｂ２−ｈ３抗体と、及び／又は本明細書に開示されたＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６抗体（配列番号：７の配列を有するＶＨ及び配列番号：１２の配列を有するＶＬを有する）と、及び／又は配列番号：７の配列を有するＶＨ及び配列番号：１０の配列を有するかもしくは配列番号：１１の配列を有するＶＬを有する抗体と、少なくとも同じ該抗原への親和性を有する。
【００４６】
特にＢｌｉｔｚ法を含む、抗体の、それらの標的への、完全長ＣＤ１２７、単離されたもののいずれか又はＴＳＬＰＲもしくはＩＬ７Ｒ、又は前述のような抗原への結合を試験する方法は、当業者に公知であり、且つ特に本明細書の図３、実施例３及び実施例４において、並びにＷＯ２０１５／１８９３０２の１４頁、図３、４及び６及び各凡例において、及び実施例１、２、６、７において例示されている。
【００４７】
（ＴＳＬＰ−誘導性の樹状細胞成熟の増大の欠如）
本明細書に提供される抗体は、ＴＳＬＰ受容体中のＣＤ１２７に結合することができる（すなわち、ＣＤ１２７がＣＲＬＦ２との複合体中にあってＴＳＬＰ受容体を形成しているとき、ＣＤ１２７に結合することができる）。それゆえ、本明細書に提供される抗体は、ＴＳＬＰ−誘導性及び／又はＴＳＬＰ受容体媒介性シグナル伝達を妨害することができる。好ましくは、本明細書に提供される抗体は、免疫細胞、特に樹状細胞の成熟に関して、ＴＳＬＰと相乗しない。別の言い方では、本発明の抗体は、ＴＳＬＰにより誘導された免疫細胞の成熟を増大しない。
【００４８】
この作用は特に、樹状細胞の成熟において望ましい。そのような作用を測定する手段は、当業者に公知であり、且つ特にＷＯ２０１５／１８９３０２の１６−１７頁及びその実施例９において開示されている。特に、本明細書に提供される抗体は、ＴＳＬＰ単独による刺激（抗体によらない）と比べた場合、ＣＤ４０の発現を５０％より多くは増大しない。好ましくは、ＣＤ４０の発現は、２５％を超えて、好ましくは１０％を超えて及び更により好ましくは５％を超えては増大しない。特に好ましい実施態様において、ＣＤ４０の発現は、ＴＳＬＰにより及び該抗体により刺激された細胞において、ＴＳＬＰ単独で刺激された細胞と比べて、増加も減少もしない。
【００４９】
（α４、β７、及びα４／β７インテグリンのＩＬ７−誘導性発現の阻害）
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、インビトロでのα４、β７、及びα４／β７インテグリンのＩＬ７−誘導性発現を阻害する。α４、β７、及びα４／β７インテグリンのＩＬ７−誘導性発現は、本明細書で使用される場合、α４インテグリン及びβ７インテグリンのどちらか又は両方の発現のレベルの増大、並びにα４、β７、及び／又はα４／β７インテグリンを発現するＴリンパ球の数又は比率の増大を表す。阻害は部分的であり得る、すなわち、ＩＬ７の存在下でのα４、β７、及びα４／β７インテグリンの発現のレベルは、抗体の存在下では、ベースラインレベル（すなわち、抗体もＩＬ７もない場合のレベル）よりも増大するが、抗体の非存在下では、より少なくなり；又は阻害は完全であり得る、すなわち、ＩＬ７の存在下及び抗体の存在下でのα４、β７、及びα４／β７インテグリンの発現のレベルは、ベースラインレベルほどの大きさである。
【００５０】
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、インビトロでのα４、β７、及び／又はα４／β７インテグリンの発現を阻害する、すなわち、α４、β７、及び／又はα４／β７インテグリンの発現のレベルは、未処理の（すなわち、抗体もＩＬ７も用いない）細胞よりも、抗体で（かつＩＬ７を用いて及び／又はＩＬ７を用いないで）処理した細胞で低い。阻害の度合いは、用量依存的であり得る。発現の阻害は、ＷＯ２０１５／１８９３０２の１８頁、特に段落［５８］、及び実施例１６に、より具体的に規定され、試験され及び／又は測定される。
【００５１】
（ＣＤ１２７内在化の阻害剤）
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ７−誘導性のＣＤ１２７内在化を阻害する。従って、該抗体とともにインキュベートした場合、ＩＬ７の存在は、ＣＤ１２７の細胞表面発現の減少を全く誘導しないか、又は抗体なしでインキュベートした細胞よりもあまり強くないＣＤ１２７の細胞表面発現の減少を誘導する。特定の実施態様において、該抗体とともにインキュベートした場合、細胞を５ｎｇ／ｍＬのＩＬ７とともに３７℃で１５分間インキュベートしたときのＣＤ１２７細胞表面発現のレベルは、ＩＬ７なしでインキュベートした細胞における細胞表面発現レベルの少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％である。インビトロにおいて、この細胞表面発現は、上で示されたような限られた時間の後で測定されることが好ましい。加えて、ほとんどの細胞内在化プロセスは低い温度で阻害され、その作用は、通常、生理的温度、特に、３７℃で最も良好に観察される。しかしながら、細胞を、低い温度、特に、４℃でインキュベートすることも企図される。
【００５２】
好ましい実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ１２７の内在化を誘導しない。従って、該抗体の存在下でインキュベートされた細胞におけるＣＤ１２７の細胞表面発現は、それ以外は同一の条件であるが、抗体の非存在下でインキュベートされた細胞中の細胞表面発現と比べ、減少されないか、又は顕著に減少されない。特定の実施態様において、抗体５０ｎｇ／ｍＬの存在下、３７℃で３０〜４５分間インキュベートする場合、ＣＤ１２７細胞表面発現のレベルは、抗体の非存在下でインキュベートした細胞におけるそのレベルの少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％である。この作用は、ＩＬ７の非存在下（抗体−処理した及び−未処理の細胞の両方で）、ＩＬ７の存在下、及び／又は両方において、観察される。
【００５３】
上記の２つのＣＤ１２７内在化関連特徴（すなわち、ＩＬ７−誘導性内在化の阻害又は内在化の非誘導）は、更にＷＯ２０１５／１８９３０２に示された、特に１９−２０頁の段落［５９］−［６３］及び図１６及び実施例５に示されたように、規定され及び／又は試験される。
【００５４】
（ＣＤ１２７−γｃ鎖相互作用の破壊）
特定の実施態様に従い、本明細書に提供される抗体は、ＩＬ７−Ｒのγｃ鎖へのＣＤ１２７の結合を破壊し得る。これは、ＣＤ１２７とγｃ鎖が、抗体の非存在下で及び特にＩＬ７の存在下で一緒に結合する条件（特に、化学的及び物理的条件）の下で、該抗体の存在が該結合を顕著に低下させるということを意味する。特定の実施態様において、抗体の存在下及びＩＬ７の存在下で、ＣＤ１２７は、γｃに結合しない。特に、抗体の存在下及びＩＬ７の存在下で、ＣＤ１２７と関連している（又は結合している）ことが見出されるγｃ鎖の量は、抗体の非存在下（又は別の抗ＣＤ−１２７抗体、例えばＭＤ７０７−１３の存在下）、それ以外は同一の条件で、特に、ＩＬ７の存在下で結合する量の８０％未満、好ましくは５０％未満、更により好ましくは２５％又は１０％未満である。抗体のそのような特徴は、特に、タンパク質の相互作用を試験するために当業者によく知られており、かつ例えばＷＯ２０１５／１８９３０２において実施例２１に例示されている共免疫沈降法によって評価することができる。特に、細胞を被験抗体の存在下又は非存在下でインキュベートし、その後、タンパク質複合体の維持を可能にする条件で可溶化することができ、得られた溶解物を抗−ＣＤ１２７免疫沈降に供し、ＣＤ１２７−含有免疫沈降複合体中のγｃの存在を、抗γｃ抗体を用いるウェスタンブロットによって評価することができる（逆に、免疫沈降を、抗γｃ抗体を用いて実施し、ＣＤ１２７の存在を、抗−ＣＤ１２７抗体を用いて評価することができる）。
【００５５】
（ＩＬ７−ＩＬ７−Ｒ相互作用に対するアンタゴニスト）
特定の実施態様によれば、本発明の巨大分子、特に、抗体又はその抗原結合性断片は更に、インターロイキン７（ＩＬ７）に対するアンタゴニスト特性を有し、それにより、ＣＤ１２７陽性細胞上のＣＤ１２７へのＩＬ７の接近、すなわち、結合に拮抗する。
【００５６】
「ＩＬ７−ＩＬ７−Ｒ相互作用に対するアンタゴニスト特性」とは、ＩＬ７−Ｒアルファを標的とする本発明の抗体又はその抗原結合性断片が、ＣＤ１２７細胞、とりわけヒトエフェクターＴ細胞、特にヒトメモリーＴ細胞上に発現されたＩＬ７受容体の、その結合パートナーであるＩＬ７、とりわけ、ヒトＩＬ７への接近可能性を妨げる作用を有することを意味する。ＩＬ７の結合に拮抗する結果として、本発明の抗体又はその機能的断片は、ＩＬ７−依存的な胸腺Ｔ細胞の発生を妨げることにより、リンパ球減少をもたらす。
【００５７】
これらのアンタゴニスト特性は、特に、ＩＬ７によって誘導されるＩＬ７−Ｒシグナル伝達に対する拮抗作用であり得る。ＩＬ７によって誘導されるＩＬ７−Ｒシグナル伝達のアンタゴニストは、実施例に記載の通りにＳＴＡＴ５リン酸化の阻害を測定することによって同定することができる。ＩＬ７−誘導性のＳＴＡＴ５リン酸化は、ＩＬ７−Ｒ活性化のマーカーであり、ＩＬ７−ＩＬ７−Ｒ相互作用に拮抗する抗体は、ＩＬ７−誘導性のＳＴＡＴ５リン酸化を減少させると期待される。
【００５８】
特定の実施態様において、本発明の巨大分子は、ＩＬ７によって誘導されるＩＬ７−Ｒシグナル伝達のアンタゴニストである。特定の実施態様において、本発明の巨大分子は、ＩＬ７−誘導性のＳＴＡＴ５リン酸化を阻害する。好ましい実施態様において、ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害は、わずか５５ｎｇ／ｍｌの抗体濃度で５０％よりも大きく、及び／又はＳＴＡＴ５リン酸化の阻害は、わずか１００ｎｇ／ｍｌの抗体濃度で８０％よりも大きい。ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害は、当業者に公知の方法によって、及び特に、実施例の節（特に、実施例５）に記載の方法、及び／又はＷＯ２０１５／１８９３０２の２１頁の段落［６９］及び［７０］及び実施例３に記載の方法によって評価することができる。
【００５９】
本発明の巨大分子（特に、抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子）は、ＰＩ３−ｋ及び／又はＥＲＫ（細胞外シグナル−調節キナーゼ）のシグナル伝達経路の活性化を阻害し、及び／又は活性化しないかもしくは活性化を増大せず、且つ特にＰＩ３−ｋ及び／又はＥＲＫ１及び／又はＥＲＫ２のリン酸化を阻害し、並びに／又はリン酸化を誘導も増大もしないことも、望ましい。特に、本明細書に提供される抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子、並びに特にＩＬ−７−ＩＬ−７Ｒ相互作用に対するアンタゴニストであるそのような抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子は、ＰＩ３−ｋ経路及び／又はＥＲＫ経路の（好ましくはＰＩ３−ｋ及びＥＲＫ経路の）活性化を誘導せず、特にＰＩ３−ｋの並びに／又はＥＲＫ１及び／又はＥＲＫ２のリン酸化を誘導せず、より特定すると、ＰＩ３−ｋの並びにＥＲＫ１及びＥＲＫ２のリン酸化を誘導しない。特に、本明細書に提供される抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子、並びに特にＩＬ−７−ＩＬ−７Ｒ相互作用に対するアンタゴニストであるそのような抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子は、ＰＩ３−ｋ及び／又はＥＲＫ経路の活性化を阻害し、特にＰＩ３−ｋの並びに／又はＥＲＫ１及び／もしくはＥＲＫ２のリン酸化を阻害し、より特定すると、ＰＩ３−ｋの及びＥＲＫ１の及びＥＲＫ２のリン酸化を阻害する。これらの経路の活性化及び／又は該タンパク質のリン酸化は、当業者に公知の方法により、特に図７及び実施例８に例示したようなウェスタンブロットにより試験することができる。
【００６０】
（ＴＳＬＰの結合のアンタゴニスト）
本明細書に提供される抗体はＩＬ７−Ｒ中のＣＤ１２７に結合するので、それは、ＴＳＬＰＲ中のＣＤ１２７にも結合することができ、特に立体障害によって及び／又は共通の結合部位での競合によって、それは、ＴＳＬＰＲへのＴＳＬＰの結合を阻害することができる。言い換えると、本明細書に提供される抗体は、ＴＳＬＰの結合に対するアンタゴニスト活性を示し得る。
【００６１】
（ＴＳＬＰ−誘導性のＴＡＲＣ産生の阻害剤）
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ＣＤ１２７−陽性細胞のＴＳＬＰ−誘導性のＴＡＲＣ産生を阻害することができる。上述のように、ＴＳＬＰ−刺激された樹状細胞は、ＴＡＲＣのレベルの上昇をもたらす。これは、ＴＳＬＰＲに対するその結合及びＴＳＬＰ結合のアンタゴニストとしてのその潜在的な作用によって生じ得る。特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、樹状細胞の成熟を増大しない（成熟は、例えば、ＣＤ４０及び／又はＣＤ８０細胞表面マーカーの発現の増大によって決定される）。
【００６２】
ＴＳＬＰ−誘導性のＴＡＲＣ産生のレベルは、ＴＳＬＰのみで処理した細胞よりも、ＴＳＬＰと本明細書に記載の抗−ＣＤ１２７抗体とを併せて処理した細胞で低くなり得る。言い換えると、本明細書に提供される抗体は、ＴＳＬＰ−誘導性のＴＡＲＣ産生の阻害剤であり得る。本発明の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ＴＡＲＣ産生のレベルを減少させる。特定の実施態様において、ＴＳＬＰ及び本明細書に提供される抗体で処理した細胞におけるＴＡＲＣ産生のレベルは、ＴＳＬＰのみで処理した細胞におけるレベルと比較して、わずか１μｇ／ｍｌの抗体濃度で、１０％よりも大きく、好ましくは２０％よりも大きく低下する。ＴＡＲＣ産生の測定は、当業者に公知であり、例えばＷＯ２０１５／１８９３０２における実施例９に例示されている、任意の標準的な方法を用いて、血液試料由来のＣＤ１２７−陽性免疫細胞、特に、樹状細胞に対して実施することができる。
【００６３】
（細胞傷害活性）
特定の実施態様において、本明細書に提供される抗体は、ヒト細胞、とりわけ、ＣＤ１２７を発現するヒトＴ細胞に対して細胞傷害性である。該抗体の標的である、ＩＬ７受容体の鎖としてＣＤ１２７を発現するヒト細胞は、主にＴリンパ球であり、より正確には、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞を含む、エフェクターＴリンパ球の亜集団であるが、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）ではなく、とりわけ、休止ナチュラルＴｒｅｇではない。メモリーＴ細胞は、抗原プライミングの結果として発生し、二次エフェクター細胞及びメモリー細胞への再活性化及び分化の際にリコール増殖（ｒｅｃａｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を経る能力を含む、その機能的特性によって主に定義される。同様に、（ＩＬ−７−Ｒアルファ鎖を含む複合体としての）標的ＴＳＬＰ受容体は、Ｔヘルパーリンパ球、Ｂ細胞、及び樹状細胞の分化を調節する。
【００６４】
特に、「Ｔ細胞に対する細胞傷害活性」又は細胞傷害特性を有する本明細書に提供される抗体（細胞傷害性抗体）は、これらの細胞を死滅させることによってエフェクターＴ細胞集団の枯渇を生じさせ、従って、投与したとき、これらの細胞の数を減少させる。これとは反対に、該抗体は、制御性Ｔ細胞の亜集団を改変しないか、又はそれを相当な程度にまでは改変せず、Ｔｒｅｇ細胞がその機能を果たすのを可能にする。この文脈で、特定の実施態様において、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞に対する制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の比率は、該抗体の投与後に上昇する。特に、本明細書に提供される抗体は、該比率を約１０％以上上げることが可能になる。特に、Ｔｅｆｆに対するＴｒｅｇの比率の上昇は約２０％である。
【００６５】
特に、細胞傷害性抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す。あるいは、本明細書に提供される抗体は、ＡＤＣＣ特性を有さない。抗体のＡＤＣＣ能は、特異的細胞傷害性が例えば１０％を上回ったときに陽性と見なした。ＡＤＣＣ特性は、ＡＤＣＣアッセイ、例えばＷＯ２０１５／１８９３０２の実施例１０に記載されている試験で評価することができる。抗体がラット抗体である場合、ＡＤＣＣアッセイで使用されるエフェクター細胞は、ラットのＬＡＫ（リンホカイン活性化キラー）細胞である。抗体がヒト化されている場合、ＡＤＣＣアッセイは、特にヒトＮＫ細胞に対して実施することができる。
【００６６】
ＣＤ１２７陽性細胞に対する細胞傷害特性とアンタゴニスト特性の両方を有する本発明の抗体により、エフェクターＴ細胞の枯渇、とりわけ、メモリーＴ細胞の枯渇に対するこれらの特性の累積的作用が可能になり、それにより、より強い枯渇（ＣＤ１２７＋細胞のプールの消尽）及び対応する標的Ｔ細胞の数の低下が可能になる。
【００６７】
上記の段落及び実施例には、本明細書に提供される抗体の関連する望ましい機能特性について試験する方法が記載されている。以下の節では、該抗体の様々な構造特性及び可能な修飾が詳述されている。これらの指針に照らして、当業者は、特に所望の機能特性を有するＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６抗体から始まる、所望の機能特性と共に以下の構造特性を有する抗体を得ることができるであろう。
【００６８】
ヒト対象への投与が意図される場合、当業者により知られているように、抗体は、ヒト抗体と可能な限り強力な相同性を示すことが望ましい。ヒト抗体との同一性の程度は、抗体配列中の、特に抗体軽鎖又は重鎖可変ドメインのフレームワーク中の、ヒト残基の％として、すなわち抗体配列中、特に抗体軽鎖又は重鎖可変ドメインのフレームワーク中の残基の％として、測定され、これは最も相同な公知のヒト抗体中の、特に最も相同な公知のヒト抗体軽鎖又は重鎖可変ドメインのフレームワーク中の残基と、同じ機能性位置で同一である。この特徴は、一般に本明細書において、文献において、「抗体Ａ（又はその可変ドメインのフレームワーク配列）は、ｘｘ％ヒト残基を有する」と表現され、これは、抗体Ａ（又はその可変ドメインのフレームワーク配列）は、最も相同な公知のヒト抗体（又はその可変ドメインのフレームワーク配列）の残基と同じ機能的位置で同一である残基をｘｘ％有することを意味する。そのような同一性の程度は、当業者に公知の手段により、及び特にＷＨＯ  ＩＮＮ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｇｒｏｕｐのオープンセッション期間（２０１５年４月）に明確にされた国際免疫遺伝学情報システム（ＩＭＧＴ）ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎツールで、測定することができる。好ましくは、本明細書に提供される抗体は、特にＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎツールを使用し決定した場合に、ヒト抗体と、８０％より多く、更により好ましくは少なくとも８４％、８４％より多く及び更により好ましくは少なくとも８５％の同一性を有する。該同一性の程度は、各鎖を最も相同な対応するヒト抗体鎖と比較し、累積された同一性の割合を報告することにより、軽鎖可変ドメインのみについて、又は軽鎖のみについて（ヒト抗体軽鎖可変ドメイン又は軽鎖との比較により）、又は軽鎖と重鎖を一緒にしたものについて、決定されてよい。特定すると、本発明の抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖は、ヒト残基の少なくとも８０％、より特定すると８４％及び更により特定すると少なくとも８５％を有する。本明細書に提供される特定の抗体軽鎖可変ドメインは、それぞれ、８４．２％（配列番号：９）；８５．３％（配列番号：１０及び配列番号：１１）並びに８６．３％（配列番号：１２）ヒト残基を有する。好ましい本明細書に提供される抗体重鎖可変ドメイン（配列番号：７）は、９０．８％ヒト残基を有する。
【００６９】
本明細書に提供される抗体軽鎖可変ドメインは、最大１３５個のアミノ酸、好ましくは最大１２０個のアミノ酸、及び更により好ましくは最大１１０又は１０７個のアミノ酸を含んでよい。本明細書に提供される抗体軽鎖可変ドメインは、少なくとも８０個、好ましくは少なくとも９０個、及び更により好ましくは少なくとも１００又は１０６個のアミノ酸を含んでよい。本明細書に提供される抗体軽鎖可変ドメインは、８０〜１３５個、好ましくは９０〜１２０個、及び更により好ましくは１０５〜１１０個のアミノ酸を含んでよい。
【００７０】
本明細書に提供される抗体軽鎖は、最大２５０個のアミノ酸、好ましくは最大２３０個のアミノ酸、及び更により好ましくは最大２１４又は２１１個のアミノ酸を含んでよい。本明細書に提供される抗体軽鎖は、少なくとも１５０個、好ましくは少なくとも１９０個、及び更により好ましくは少なくとも２００又は２１０個のアミノ酸を含んでよい。本明細書に提供される抗体軽鎖は、１５０〜２５０個、好ましくは１９０〜２３０個、及び更により好ましくは２１０〜２２０個のアミノ酸を含んでよい。
【００７１】
（ｉ）本明細書に提供される抗体の抗原−結合断片、特に本明細書に提供される抗体軽鎖又は抗体軽鎖可変領域、本明細書に提供される抗体重鎖可変ドメインの断片からなるか又はこれを含む抗原−結合断片、並びに／又は（ｉｉ）本明細書に提供される抗体の抗体模倣分子：であるポリペプチドも、本明細書に提供される。
【００７２】
抗原−結合断片は、関連節（段落［４４］から［４７］）において先に規定したＣＤ１２７タンパク質へ特異的に結合し、且つ少なくともＮ１３Ｂ２−ｈ３の３つのＣＤＲ（配列番号：４〜６の配列からなる）を含む、ポリペプチドであり、好ましくは該ＣＤＲ配列を含む本明細書に提供される軽鎖可変ドメインの断片（配列番号：９〜１２）である。抗原−結合断片は、少なくとも４０個、好ましくは少なくとも５０個、及び更により好ましくは少なくとも７０又は７４個のアミノ酸を含む。抗体−結合断片は、多くても１００個、好ましくは多くても９０個、及び更により好ましくは多くても８０又は７４個のアミノ酸を含んでよい。抗原−結合断片は、４０〜１００個、５０〜９０個、及び好ましくは６０〜１００個、及び更により好ましくは５０〜７０個又は６０〜８０個のアミノ酸を含んでよい。本明細書に提供される抗原−結合断片は、特に本明細書に提供される抗体に関して明らかにされた好適な機能特徴のいずれか、特に段落［４７］から［６２］に明らかにされた特徴を有してよい。
【００７３】
従って、本明細書に提供される単離されたポリペプチドは、最大２５０個、特に最大２１７個、最大２１４個、最大２１１個のアミノ酸、より特定すると、最大２００個、最大１７５個、最大１５０個、最大１３５個、最大１２０個、最大１０７個の、及び更により特定すると、最大１００個、最大９０個、最大８０個、最大７４個、最大７０個、最大６０個のアミノ酸の配列からなってよい。
【００７４】
抗体模倣分子は、抗体に類似した特性、特にＣＤ１２７との類似した結合特性を持つポリペプチドである。抗体模倣物は、例えば、アフィボディ分子、アフィリン、アフィマー（ａｆｆｉｍｅｒ）、アンチカリン、モノボディなどであってよい。本明細書に提供される抗体模倣分子は、特に本明細書に提供される抗体に関して明らかにされた好適な機能特徴のいずれか、特に段落［４７］から［６２］に明らかにされた特徴を有してよい。
【００７５】
特に、本発明の抗体は、ヒト定常ドメイン由来の定常ドメインを含む、ヒト化された抗体である。特に、抗体軽鎖定常ドメインは、ヒトカッパ軽鎖定常ドメイン由来であり、及び／又は抗体重鎖定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４重鎖定常領域由来、特にヒトＩｇＧ４重鎖定常領域由来である。「に由来」とは、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）又はＩｇＧ１（Ｅ３３３Ａ）などのアミノ酸置換による、いくつかの点（ｐｕｎｃｔｕａｌ）変異を意味する。これらの変異は、当業者に周知であり、一般にいくつかの親鎖特性を修飾する。例えば、これらは、親の抗体と比べ少ない免疫原性につながるか、又はＦｃγ受容体結合を無効にするか、又はモノマー抗体の二量体化を回避するか、又は二量体化を安定化し、抗体をヒト治療用途により良いものとする。親の重鎖及び軽鎖定常ドメインに由来する本発明の抗体は、配列番号：２６、配列番号：２７又は配列番号：２８に示した配列、又はそれらの各々の断片を含むか又はこれらからなる。より特定すると、この抗体軽鎖定常ドメインは、配列番号：２７に示した配列からなる。特に、抗体重鎖定常ドメインは、配列番号：２６に示した配列又はその断片を含むか又はこれらからなる。より特定すると、抗体重鎖定常ドメインは、配列番号：２６に示した配列からなる。
【００７６】
本発明のポリペプチド、又は本明細書に提供される抗体もしくはその抗原−結合断片をコードしている単離された核酸分子も、本明細書に提供される。特に、該核酸分子は、本明細書に提供される任意の定義に従い、本明細書に提供される抗体の重鎖をコードしている単離された核酸分子と組合せて、本明細書に提供される抗体の軽鎖可変ドメイン又は軽鎖をコードしている。特に、配列番号：９；配列番号：１０；配列番号：１１；配列番号：１２からなる群から選択される配列を含むか又はこれらからなるポリペプチドをコードしている単離された核酸分子が、本明細書に提供される。特に、本発明の単離された核酸分子は、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７又は配列番号：１８からなる群から選択される配列を含むか又はこれらからなる。特に、該単離された核酸分子は、配列番号：１、配列番号：２、及び配列番号：３に示した配列からなる３つのＣＤＲを含む重鎖をコードしている、特に配列番号：７に示した配列からなる重鎖可変ドメインをコードしている単離された核酸分子、より特定すると、配列番号：１３に示した配列からなる単離された核酸分子と組合せて提供される。好ましい実施態様において、抗体又はその抗原−結合断片をコードしている単離された核酸分子の組合せが提供され、該組合せは、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７及び配列番号：１８からなる群から選択される配列を含むか又はこれらからなる第一の単離された核酸分子；並びに、配列番号：１３の配列を含むか又はこれからなる第二の単離された核酸分子を含むか又はこれらからなる。別の好ましい実施態様において、抗体又はその抗原−結合断片をコードしている単離された核酸分子の組合せが提供され、該組合せは、配列番号：１８の配列を含むか又はこれらからなる第一の単離された核酸分子；並びに、配列番号：１３の配列を含むか又はこれらからなる第二の単離された核酸分子を含むか又はこれらからなる。
【００７７】
可変ドメイン及び定常ドメインの両方を含む、完全軽鎖のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチド、すなわち、特に配列番号：９〜１２の配列及び配列番号：２７又は２８の配列の一つをコードしているポリヌクレオチド、特に配列番号：３０又は配列番号：３１と連結された配列番号：１５〜１８の配列の一つを含むか又はこれからなるポリヌクレオチドも、本明細書に提供される。このようなポリヌクレオチドは、特に、可変ドメイン及び定常ドメインの両方を含む、完全重鎖のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチド、すなわち、特に配列番号：７及び配列番号：２６の配列をコードしているポリヌクレオチド、特に配列番号：２９に連結された配列番号：１３を含むか又はこれからなるポリヌクレオチドと組合せて提供される。
【００７８】
特に、本明細書に提供される単離された核酸分子は、有利なことに、本明細書に提供される抗体の軽鎖及び任意に重鎖をコードしている配列に加え、該抗体鎖をコードしている配列の上流、産生細胞において発現された場合に該鎖の分泌を可能にするシグナルペプチドをコードしている配列を含んでよい。これらはまた、該鎖を検出するか及び／又は該鎖の精製を促進するために１以上のマーカーペプチド（複数可）をコードしている１以上の配列（複数可）も含んでよい。
【００７９】
本明細書に提供される核酸分子のクローニング及び／又は発現のためのベクターも、本明細書に提供される。特に、該提供されたベクターは、哺乳動物細胞のクローニング及び／又は発現に適したプラスミドであり、これは転写及び発現のための調節配列を含む。従って、先に明らかにされたポリヌクレオチド、特に段落［７６］から［７８］に明らかにされたポリヌクレオチドを含むベクターが、本明細書に提供される。
【００８０】
更に、前述のような核酸分子、特にベクターで組換えられた細胞又は細胞株、特に図２に詳述されるような、特に哺乳動物又は鳥類の細胞又は細胞株が、本明細書に提供される。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞は、全体のフコシル化を減少するように、遺伝子修飾されている。実際、コアフコシル化を欠いている抗体は、有意に増強された抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す（ｖｏｎ  Ｈｏｒｓｔｅｎらの文献、２０１０）。別の例は、天然に低いフコシル化特性を有するＥＢ６６細胞株である（Ｏｌｉｖｉｅｒらの文献、２０１０）。抗体はまた、特に実施例２に詳述したような、前述のような核酸分子、特にベクター、特にＣＯＳ細胞により一過性にトランスフェクションされた細胞において産生されてもよい。
【００８１】
本明細書に提供されるポリペプチドの、特に抗体軽鎖及び／又はモノクローナル抗体の産生の方法も、本明細書に提供され、該方法は、該ポリペプチドを回収することができる条件で、該ポリペプチド、抗体軽鎖又はモノクローナル抗体（又はモノクローナル抗体の軽鎖及び任意に重鎖）を、該ポリペプチドをコードしている核酸分子を含む細胞において発現する工程、並びに該ポリペプチドを回収する工程を含む。特に、抗体又はそれらの断片は、ＥＢ６６トリ細胞などの、低フコシル化特性が存在する細胞において調製される。
【００８２】
ポリペプチド（特に抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖）及び／又は抗体もしくはその抗原−結合断片又は抗体模倣分子、並びに／又は先に規定した単離された核酸分子、並びに医薬ビヒクルを含有する医薬組成物も、本明細書に提供される。該医薬組成物は、異なる活性成分を任意に更に含むことができる。該組成物は、特に全身投与のための、又は局所投与のための製剤中で、提供される。とりわけ、局所投与に、特に筋肉内注射又は皮下注射に、自動注入装置（又は注入ペン）などの装置を使用する注入に、特に経皮貼付剤を使用する経皮投与に、経粘膜的投与に、特に鼻腔内又は直腸投与に適した組成物が、本明細書に提供される。とりわけ、特にクローン病又はＵＣなどの腸疾患の治療のために、特に経口投与を通じて、消化（ＧＩ）管への局所投与に適した組成物、特に結腸への送達に適した組成物が、本明細書に提供される。とりわけ、全身投与に、特に非経口投与又は腸内投与に、特に静脈内注射又は経口投与に適した組成物が、本明細書に提供される。当業者に公知であるように、腸内投与は、ＧＩ管への局所投与であるか、又は全身投与のいずれかであることができる。このような医薬組成物又はそれらの使用が本明細書に提供されるかどうかに係わらず、投与ビヒクル及びそれらの使用はまた、例えば、注射可能な医薬組成物が明白に提供される場合に提供され得ることは理解されなければならず、従って組成物は、加えて該組成物の投与及び／又は注入を可能にする装置（「送達装置」）中で又はこれと組合せて、提供されることは理解されなければならない。送達装置の例は、自動注入装置、特にマルチチャンバーシリンジ、及び経皮貼付剤を含むが、これらに限定されるものではない。従って、医薬組成物に関連して以下に提供されるような、送達装置、特に自動注入装置、ポンプ、又は該組成物を含む経皮貼付剤、並びにそれらの使用が、本明細書に提供される。同じく、医薬組成物と局所送達装置、特に該組成物を含む及び／又は該組成物の投与に適した皮下、腸内又は経口の送達装置、特に予め充填されたシリンジ又は無針装置を含むキット、並びに医薬組成物に関連して以下に提供されるようなそれらの使用が、本明細書に提供される。医薬組成物は、溶液、特に滅菌水溶液として、懸濁液として、固形物、特に凍結乾燥された固形物として、特に貼付剤上の吸着（又は上に吸着された）のため、並びに／又は遅延放出又は持続放出される、特に再懸濁のため、並びに特に液剤、丸剤、錠剤又は経口投与に適した他の固形形状としての再懸濁及び投与のため、例えば、表面上に吸着されたポリペプチドを伴うナノ粒子を含む組成物、又は該ナノ粒子内などのナノ粒子を含む、投与に適した任意の形状で提供される。この医薬組成物の形状及び任意に送達装置の性質は、本明細書に提供される活性成分の全身性又は局所性の送達に適しており、すなわち、活性成分が活性状態で、標的化された細胞、組織、臓器に到達するのに適している。特別に、この医薬組成物の形状及び任意に送達装置の性質は、ＧＩ管、特に結腸への送達に適している。この医薬組成物は、医薬として許容し得る担体を含むと称されるが；しかし、医薬組成物はまた、そのような担体が医薬用途のために不要である場合、例えば製品が純粋な凍結乾燥された固形物として投与される場合、同様の使用及び目的のための担体を伴わずに提供される。特に、この投与は、腸内放出のため、特に腸内遅延放出のために本明細書に説明されたような任意の適した手段に従い実行される。
【００８３】
ヒト患者へ投与した場合に、ヒトＣＤ１２７陽性細胞の生存又は増殖の制御に、とりわけヒトＣＤ１２７陽性エフェクター細胞の、特にＣＤ１２７＋メモリーＴ細胞の生存又は増殖、特別にＣＤ１２７＋及びＣＤ８＋の両方の細胞であるか、又はＣＤ１２７＋及びＣＤ４＋の両方の細胞であるメモリーＴ細胞の生存又は増殖の制御に適した製剤中の活性成分として、先に規定したようなポリペプチド（特に抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖）及び／又は抗体（特にモノクローナル抗体）、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子を含有する組成物、又は先に規定した医薬組成物も、本明細書に提供される。特に、活性成分として抗体（又は前述のような他の物質）を含有する該組成物は、製剤中で患者へ投与した場合に、樹状細胞の分化及び／又は成熟の制御に適している。
【００８４】
本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に提供される抗体の単回注入は、持続作用が可能であり、且つ提供された抗体の単回注入により治療される動物において、該単回注入後、１４ヶ月もの間、更には１８ヶ月もの期間、炎症反応は依然有意に軽減されることを示している。ポリペプチド、特に抗体軽鎖、及びより特定すると本明細書に提供される抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子の投与、好ましくは単回投与は、エフェクターメモリーＴ細胞に対し、好ましくは迅速な及び／又は持続性の作用を有する。迅速作用は、該ポリペプチド、抗体鎖又は抗体の投与の好ましくは１週間以内に、より好ましくは４８時間以内に、更により好ましくは１日以内に認められる。持続性作用は、該ポリペプチド、抗体鎖又は抗体の最も近い（及び好ましくは単回）投与後、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも１４ヶ月間認められる。そのような作用は、特に可逆性である（特にＴ細胞反応は新規ワクチン接種により回復され得る）。そのような作用は、好ましくは抗原及び／又は反応−特異性であり、且つ好ましくは測定可能なリンパ球枯渇には関連しない（すなわち、通常の方法で計測したリンパ球の全体数は、対象において減少しない）。そのような作用は、そうでなければ、メモリーＴ細胞のクローン性欠失として、又は免疫Ｔメモリーの可逆性の抗原特異的欠失として、定義されてよい。そのような投与のエフェクターメモリーＴ細胞に対する作用は、本明細書に提供されるポリペプチド、抗体鎖又はモノクローナル抗体により後で処置されるワクチン接種した対象（特にヒヒにおいて）、及び未処置のワクチン接種した対象において、抗原、例えばツベルクリンに対する反応におけるＩＦＮ−γ分泌細胞のレベル（例えばＥＬＩＳＰＯＴにより測定）を比較することにより、評価されてよく：作用は、処置後関連のある時点での、抗原−特異的Ｔ細胞の測定されたレベルが、治療した対象において、有意に低い（好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも４０％より低い）場合に、認められる。そのような作用はまた、そうでなければ所定の抗原に対する炎症反応、例えば局所的に投与された抗原に対し反応する、局所的炎症反応、特に皮膚の炎症反応を評価することにより測定されてもよい。あるいは、ＭＨＣ四量体アッセイが使用されてよい。そのような作用を試験する方法は、当業者に公知であり、且つ特に実施例６において本明細書において例示されている。
【００８５】
加えて、本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に提供される抗体は、特に炎症組織において、特にＴ細胞活性化に対し、特にＴ細胞によるサイトカインの放出に対し、迅速作用を有することを示した。そのような作用は、特に抗体の投与の１週間以内に、好ましくは４８時間以内に、更により好ましくは２４時間以内に認められ、且つ特にＩＦＮγ産生（又は放出）の減少として認められる。そのような作用は、特に局所的に、すなわち抗体の投与部位、又は送達部位で認められる。とりわけ、本明細書に提供される抗体は、特にＴ細胞によるサイトカインの放出に対する、迅速作用、特に迅速局所作用を有し、特に投与の２４時間以内に認められる作用を有する。抗体が局所送達により、しかし意図された送達の部位へ直接ではなく投与される場合、抗体は、投与からよりもむしろ送達から同じ時間以内に、送達部位での前述のような迅速作用を有することができ、このことは、当業者が認めるように、投与から遅延されてもされなくてもよい。
【００８６】
本明細書に提供される組成物は、特にアレルギー又は自己免疫に関与した細胞に対し、治療的免疫調節性作用を有する追加の化合物を更に含んでよい。例証を目的として、関心対象の免疫調節物質の例は、抗−ＣＤ３抗体、抗−ＩＣＯＳ抗体もしくは抗−ＣＤ２８抗体などのＴ細胞を標的化する他のモノクローナル抗体、又は組換えタンパク質又は例えばＣＴＬＡ４Ｉｇもしくは抗−ＣＤ４０抗体などの、アクセサリー細胞を標的化する抗体である。
【００８７】
本明細書に提供されるポリペプチド、抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子、単離された核酸分子、細胞及び／又は組成物は、特に同時、個別又は連続投与が意図される、追加成分、特に前述のような治療的免疫調節性作用を持つ物質を含有する組合せ製品で提供されてよい。先に規定されたポリペプチド（特に抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖）及び／又は抗体、その抗原−結合断片もしくは抗体模倣分子、及び／又は単離された核酸分子、ベクター、細胞もしくは細胞株、及び／又は医薬組成物を含み、並びに任意に更に以下を含む組合せ製品が、本明細書に提供される：
−特に例えば本明細書に提供される抗体との併用投与が意図された、治療的免疫調節性作用を持つ物質であって、特にここで該投与は、同時又は個別の時点のいずれかであるか、及び／又は該投与は、同じ又は異なる経路によるもの；並びに／又は
−この製品の投与のための装置。
【００８８】
先に規定したポリペプチド、特に抗体軽鎖及び／又は抗体、特にモノクローナル抗体及び／もしくは抗原−結合断片又は抗体模倣分子、並びに／又は核酸、ベクター、細胞もしくは細胞株並びに／又は医薬組成物もしくは組成物は、とりわけ免疫応答、特にメモリーＴ細胞反応による影響を受けた病理又は病的状態、病態を治療するためのヒト患者における使用のために提供される。そのような状態又は病理は、これらの病理が、特に樹状細胞の成熟の増加を避けなければならないような、ＣＤ１２７陽性細胞並びにＩＬ−７シグナル伝達経路に関連している場合、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、呼吸器疾患、慢性ウイルス感染症、慢性炎症性疾患、特に慢性の腸の炎症疾患、リンパ腫、白血病又は固形癌から生じるものを含む他の癌疾患により誘導されるものを含む。従って、本発明者らは、該物質の使用は、特定のアレルギー性皮膚障害、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特にクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、又は原発性シェーグレン症候群、又は全身性紅斑性狼瘡、又は全身性硬化症もしくは多発性硬化症、又は１型糖尿病又は急性リンパ芽球性白血病（例えばＴ−ＡＬＬ）もしくはホジキンリンパ腫、又はＣＤ１２７＋細胞に関連した乳癌、腎臓癌、膀胱癌、肺癌、膵臓癌の治療、あるいはセザリーリンパ腫などのＴ細胞皮膚リンパ腫の治療、あるいはＩＬ−７−Ｒ／ＴＳＬＰ経路の機能獲得型の変異を伴う急性リンパ芽球性白血病の治療、あるいは移植片拒絶反応及び／又は移植の必要な及び／もしくは移植を受ける予定の及び／もしくは移植を受けている患者の治療のために意図され得ることを示している。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特にクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、又は原発性シェーグレン症候群、又は全身性紅斑性狼瘡、又は全身性硬化症もしくは多発性硬化症、又は１型糖尿病が、好ましい実施態様において意図される。とりわけ、本発明は、好ましくは局所投与により、医薬品として使用するための、より特定すると、臓器もしくは組織移植片拒絶反応の予防又は治療において、あるいは自己免疫疾患、特に関節リウマチ、全身性硬化症、多発性硬化症、１型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、全身性紅斑性狼瘡、原発性シェーグレン症候群、及び炎症疾患、特に炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、より特定すると、クローン病及び潰瘍性大腸炎及び脳脊髄炎並びにアレルギー性疾患並びに癌疾患並びに移植に関連した疾患、及び呼吸器疾患からなる群から選択される選択された疾患の予防又は治療において使用するための、本発明のポリペプチド、又は抗体又はその抗原−結合断片もしくは抗体模倣分子、又は単離された核酸分子、又は医薬組成物に関する。
【００８９】
優勢な寛容原性状態、又はそれとは反対に、免疫応答のレベルの制御及び悪性ＣＤ１２７−陽性細胞の破壊が必要とされる場合の寛容の欠如をもたらす、ヒト患者における免疫応答の変化を含む病的状態の治療におけるポリペプチド、抗体軽鎖又は抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子の使用が、本明細書に提供される。
【００９０】
「治療」又は「治療的処置」とは、実施される投与工程が、ＩＬ−７経路と関連する、すなわち、ＣＤ１２７陽性細胞の活性化又は増殖と関連する障害（複数可）に罹患している、それを必要としている動物又はヒト患者の臨床状態の改善をもたらすことを意味する。そのような治療は、ＩＬ−７経路に関連する、すなわち、ＣＤ１２７陽性細胞の活性化又は増殖に関連する障害（複数可）と関連する症状を消失させ又は緩和することによって、動物又はヒト患者の臨床状態を改善することを目的とする。好ましくは、本明細書に提供される治療は、健康の回復を可能にする。好ましくは、該治療は、免疫細胞、特に樹状細胞の成熟の増大による望まない負の作用を有しない。
【００９１】
特定の患者の治療の態様において、ＣＤ１２７−陰性細胞を保持しながらのＣＤ１２７−陽性細胞の枯渇のための使用が意図され、及び／又はこれに適した、ポリペプチド、抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、ポリヌクレオチド、細胞もしくは細胞株、又は組成物が、提供される。
【００９２】
特定の患者の治療の態様において、ポリペプチド、抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、ポリヌクレオチド、細胞もしくは細胞株、又は組成物の使用は、ＣＤ１２７−陰性細胞への直接作用はほとんどないか又はない一方で、ＣＤ１２７−陽性細胞の分化及び／又は増殖及び／又は成熟の防止、特にＩＬ−７及び／又はＴＳＬＰにより誘導された分化、増殖又は成熟の防止のための使用のために提供され、意図され及び／又はこれに適している。
【００９３】
特定の患者の治療の態様において、ポリペプチド、抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、ポリヌクレオチド、細胞もしくは細胞株、又は組成物の使用は、Ｔｒｅｇ細胞を保持する一方で、ＩＬ−７−誘導性シグナル伝達との干渉により、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞の消失／中和のための使用のために提供され、意図され及び／又はこれに適している。
【００９４】
特定の患者の治療の態様において、恐らくしかし専らではなくＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害性）を介して及び任意にＣＤＣ（補体依存性細胞傷害性）を介しての、抗体の細胞傷害作用の結果として、リンパ球の亜集団、もしくはＣＤ１２７を発現している他の細胞集団（正常もしくは病的Ｔリンパ球及びＢリンパ球、ＮＫ細胞、樹状細胞及び上皮細胞を含む他の細胞型を含む）の枯渇のための使用が意図され及び／又はこれに適した、ポリペプチド、抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、ポリヌクレオチド、細胞もしくは細胞株、又は組成物の使用が、提供される。
【００９５】
同じくそれを必要とする患者における併用又はアドオン治療レジメンにおける活性成分の使用のための、先に規定されたようなポリペプチド、特に抗体軽鎖及び／もしくは抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、ポリヌクレオチド、細胞もしくは細胞株、又は組成物も、本明細書に提供される。同じく、それを必要とする患者における併用又はアドオン治療レジメンにおける治療的活性成分としての、先に規定されたようなポリペプチド、特に抗体軽鎖及び／又は抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、ポリヌクレオチド、細胞もしくは細胞株、又は組成物の使用も提供される。
【００９６】
前記態様において、意図された使用はまた、先に本明細書に提供された核酸、ベクター、細胞、細胞株、組成物及び医薬組成物にも適用可能である。
【００９７】
これらの病理が、特に樹状細胞の成熟の増加を避けなければならないような、ＣＤ１２７陽性細胞並びにＩＬ−７シグナル伝達経路に関連している場合、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、呼吸器疾患、慢性ウイルス感染症、慢性炎症性疾患、特に慢性の腸の炎症疾患、リンパ腫、白血病又は固形癌から生じるものを含む他の癌疾患により誘導されるものなどの病理における使用が意図され及び／又はこれに適した前記手段及び製品が、本明細書に提供される。従って、該手段及び製品は、特に特定のアレルギー性皮膚障害、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特にクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、又は急性リンパ芽球性白血病（例えばＴ−ＡＬＬ）もしくはホジキンリンパ腫、又はＣＤ１２７＋細胞に関連した乳癌、腎臓癌、膀胱癌、肺癌、膵臓癌の治療、あるいはセザリーリンパ腫などのＴ細胞皮膚リンパ腫の治療、あるいはＩＬ−７−Ｒ／ＴＳＬＰ経路の機能獲得型の変異を伴う急性リンパ芽球性白血病の治療、あるいは移植片拒絶反応並びに／又は移植の必要な及び／もしくは移植を受ける予定の及び／もしくは移植を受けている患者の治療が意図され及び／又はこれに適している。
【００９８】
特に、これらの病理が、特に樹状細胞の成熟の増加を避けなければならないような、ＣＤ１２７陽性細胞並びにＩＬ−７シグナル伝達経路に関連している場合、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、呼吸器疾患、慢性ウイルス感染症、慢性炎症性疾患、特に慢性の腸の炎症疾患、リンパ腫、白血病又は固形癌から生じるものを含む他の癌疾患により誘導される状態及び／又は病理の治療のための、ヒト患者におけるポリペプチド、特に抗体軽鎖及び／又は抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、核酸、細胞、細胞株又は組成物の使用が、本明細書に提供される。従って、該製品は、特に特定のアレルギー性皮膚障害、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特にクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、又は急性リンパ芽球性白血病（例えば、Ｔ−ＡＬＬ）もしくはホジキンリンパ腫、又はＣＤ１２７＋細胞に関連した乳癌、腎臓癌、膀胱癌、肺癌、膵臓癌の治療のため、あるいはセザリーリンパ腫などのＴ細胞皮膚リンパ腫の治療のため、あるいはＩＬ７−Ｒ／ＴＳＬＰ経路の機能獲得型変異を伴う急性リンパ芽球性白血病の治療のため、あるいは移植片拒絶反応並びに／又は移植の必要な及び／もしくは移植を受ける予定の及び／もしくは移植を受けている、自己免疫疾患又はアレルギー性疾患の患者の治療のため、あるいは急性リンパ芽球性白血病などの白血病の治療のため、あるいはリンパ腫の治療のため、あるいは癌疾患の治療のため、あるいは、慢性ウイルス感染症の治療のため、あるいは炎症疾患、特にＩＢＤ、特別にＣＤ又はＵＣの治療のため、あるいは呼吸器疾患の治療のため、あるいは移植に関連した症状の予防及び／又は治療のためである。
【００９９】
特に、これらの病理が、特に樹状細胞の成熟の増加を避けなければならないような、ＣＤ１２７陽性細胞並びにＩＬ−７シグナル伝達経路に関連している場合、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、呼吸器疾患、慢性ウイルス感染症、慢性炎症性疾患、特に慢性の腸の炎症疾患、リンパ腫、白血病又は固形癌から生じるものを含む他の癌疾患により誘導される状態及び／又は病理の治療のために、ヒト患者において、先に規定したようなポリペプチド（特に抗体軽鎖可変ドメイン又は抗体軽鎖）及び／又は抗体、抗原−結合断片、抗体模倣分子、又は単離された核酸分子、細胞及び／もしくは細胞株又は組成物及び／もしくは医薬組成物を投与することを含む治療方法が、本明細書に提供される。従って、該方法は、特に、特定のアレルギー性皮膚障害、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特にクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、又は急性リンパ芽球性白血病（例えば、Ｔ−ＡＬＬ）もしくはホジキンリンパ腫、又はＣＤ１２７＋細胞に関連した乳癌、腎臓癌、膀胱癌、肺癌、膵臓癌の治療のため、あるいはセザリーリンパ腫などのＴ細胞皮膚リンパ腫の治療のため、あるいはＩＬ７−Ｒ／ＴＳＬＰ経路の機能獲得型変異を伴う急性リンパ芽球性白血病の治療のため、あるいは移植片拒絶反応並びに／又は移植の必要な及び／もしくは移植を受ける予定の及び／もしくは移植を受けている、自己免疫疾患又はアレルギー性疾患の患者の治療のため、あるいは急性リンパ芽球性白血病などの白血病の治療のため、あるいはリンパ腫の治療のため、あるいは癌疾患の治療のため、あるいは慢性ウイルス感染症の治療のため、あるいは炎症疾患、特にＩＢＤ、特別にＣＤ又はＵＣの治療のため、あるいは呼吸器疾患の治療のため、あるいは移植に関連した症状の予防及び／又は治療のためである
【０１００】
本発明者らは更に、ＵＣの患者において、ＩＬ７、ＣＤ１２７及び／又はＴＳＬＰＲ  ｍＲＮＡのレベルは、従来の免疫抑制療法に対する反応を予測することを可能にし：反応者（すなわち、治療に反応して顕著な症状軽減を示す患者）は、非反応者よりも、ＩＬ−７及びＣＤ１２７のより低いレベル及びＴＬＳＰＲのより高いレベルを有することを示している。従って、該患者から得られた試料中のＩＬ７、ＣＤ１２７及び／又はＴＬＳＰＲ  ｍＲＮＡ又はタンパク質のレベルを測定すること、並びにＩＬ７及び／又はＣＤ１２７の測定されたレベルが、該群の平均レベルよりも低い場合、及び／又はＴＳＬＰＲの測定されたレベルが、該群の平均レベルよりも高い場合に、反応の見込みは、参照群と比べ増大されると結論することを含む、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する患者、特にヒト患者における、免疫抑制療法に対する、反応の見込みを評価するための、インビボにおける方法が、本明細書に提供される。必要な測定を行う方法は、当業者に公知であり、且つ特にＣＤ１２７のタンパク質発現レベルの測定に関して、ＣＤ１２７に対する抗体の使用に関与している。先に本明細書に提供されるポリペプチド、特に抗体軽鎖及び／又はモノクローナル抗体は、特にそのような方法における使用のために提供され、且つそのような方法は、特にそのようなポリペプチド、抗体軽鎖及び／又はモノクローナル抗体の使用で提供される。
【０１０１】
特に、抗体、その抗原−結合断片及び抗体模倣分子からなる群から化合物を選択する方法が、本明細書に提供され、この方法は、以下の工程の少なくとも１つを含む：
ｉ．  本化合物の、ＣＤ１２７への、特にヒトＣＤ１２７への、特にＣＤ１２７のドメインＤ１由来及び／又はドメインＤ２の部位２ｂ由来のエピトープ配列への結合を試験する工程。ドメインＤ１由来の及び／又はドメインＤ２の部位２ｂ由来のエピトープ配列は、本明細書記載のエピトープ配列のいずれか１つ、特に段落［０１６］に記載された、特に配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６又は配列番号：９６、並びにより特定すると、配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６からなる群から選択されるエピトープ配列であってよい。本発明の特定の実施態様において、結合試験は、本化合物の、配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６からなる群から選択されるエピトープ配列への結合を試験すること、並びに本化合物の、配列番号：４２及び配列番号：４３からなる群から選択されるエピトープ配列への結合を試験することを包含してよい。本化合物の結合能は、当該技術分野において公知の方法のいずれか１つ、特に当業者に公知であり且つ特に本明細書の図３、実施例３及び実施例４において、並びにＷＯ２０１５／１８９３０２の１４頁の図３、４及び６並びに各凡例、並びに実施例１、２、６、７においてに例示されたＢｌｉｔｚ法により、並びに／又は本明細書に開示された実施例１０の方法により試験されてよい；並びに／又は
ｉｉ．  本化合物の存在下での、ＩＬ−７により誘導されたＩＬ７−Ｒシグナル伝達、特にＳＴＡＴ５リン酸化の阻害を試験する工程。本化合物の存在下で、ＩＬ７により誘導された阻害は、本明細書の実施例８及び／又は実施例１１に開示された方法により試験されてよい；並びに／又は
ｉｉｉ．  本化合物の存在下で、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼの活性化を試験する工程。本化合物の存在下でのホスファチジルイノシトール３−キナーゼの活性化は、本明細書の実施例８及び／又は実施例１１に開示された方法により試験されてよい；並びに／又は
ｉｖ．  本化合物の存在下で、ＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を試験する工程。本化合物の存在下でのＥＲＫシグナル伝達経路の活性化は、本明細書の実施例８及び／又は実施例１１に開示された方法により試験されてよい；並びに／又は
ｖ．  本化合物の、配列番号：３４の核酸として規定された、ＣＤ１２７のドメインＤ２の部位２ｂの少なくとも１つのベータシートへの、特に少なくとも部位２ｂの第三のベータシートへの、及び／又は配列番号：３５及び配列番号：９６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列への結合能を試験する工程。本化合物の結合能は、当該技術分野において公知の方法のいずれか１つ、特に当業者に公知であり且つ特に本明細書の図３、実施例３及び実施例４において、並びにＷＯ２０１５／１８９３０２の１４頁の図３、４及び６並びに各凡例、並びに実施例１、２、６、７に例示されたＢｌｉｔｚ法により、並びに／又は本明細書に開示された実施例１０の方法により試験されてよい。
この方法は、更に、以下の任意の工程のいずれか１つ、あるいは以下の任意の工程の少なくとも１つを含んでよい：
ｖｉ．  本化合物の存在下での、ＣＤ１２７、特にヒトＣＤ１２７の、サイトカイン受容体のγｃ共通鎖への結合を試験する工程。本化合物の存在下での、ＣＤ１２７のサイトカイン受容体のγｃ共通鎖への結合は、特にタンパク質の相互作用の試験に関して当業者に周知であり、且つ例えばＷＯ２０１５／１８９３０２の実施例２１において例示されている共免疫沈降法により評価されてよい。特に、細胞は、被験化合物の存在下又は非存在下でインキュベーションされ、次にタンパク質複合体の保存を可能にする条件で可溶化され、得られる溶解液は、抗−ＣＤ１２７免疫沈降に供され、ＣＤ１２７−含有免疫沈降した複合体中のγｃの存在は、抗−γｃ抗体を使用するウェスタンブロットにより評価される（反対に、免疫沈降は、抗−γｃ抗体を使用し実行され、且つＣＤ１２７の存在は、抗−ＣＤ１２７抗体を使用し評価されてもよい）；並びに／又は
ｖｉｉ．  本化合物の存在下での、ＣＤ１２７、特にヒトＣＤ１２７の内在化、及び／又はＣＤ１２７のＩＬ７−誘導性内在化を試験する工程。本明細書において段落［５１］から［５３］において規定されたＣＤ１２７の内在化は、更にＷＯ２０１５／１８９３０２において、特に１９−２０頁の段落［５９］−［６３］及び図１６及び実施例５において示されたように、規定され及び／又は試験される；並びに／又は
ｖｉｉｉ．  本化合物の存在下で、ＴＳＬＰにより誘導された樹状細胞の成熟を試験する工程。ＴＳＬＰにより誘導された樹状細胞の成熟は、本明細書の段落［４７］及び［４８］において規定される。そのような作用を測定する手段は、当業者に公知であり、且つ特にＷＯ２０１５／１８９３０２の１６−１７頁及びその実施例９において明らかにされている。特に、そのような作用を測定する手段は、本化合物で刺激された細胞とＴＳＬＰ単独（本化合物なし）で刺激された細胞の間のＣＤ４０の発現の測定を含む。
この方法の特定の実施態様において、ＩＬ７により誘導されたＩＬ７−Ｒシグナル伝達のアンタゴニストであり、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ及び／又はＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を誘導しない、ＣＤ１２７、特にヒトＣＤ１２７へ特異的に結合する化合物が、選択される。この方法のより特定の実施態様において、ＩＬ７により誘導されるＩＬ７−Ｒシグナル伝達のアンタゴニストであり、且つホスファチジルイノシトール３−キナーゼの活性化を誘導せず、並びにＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を誘導しない、ＣＤ１２７、特にヒトＣＤ１２７に特異的に結合する化合物が、選択される。
【０１０２】
特に、ＣＤ１２７に対して生じる、Ｌｏｕｖａｉｎ大学（ベルギー）で入手可能なＬＯＵ／Ｃ  Ｉｇｋ１ａ系統のラットなど、非ヒト動物の免疫化から生じ得る、本発明の抗体又はその抗原−結合断片を産生する方法が、本明細書に提供される。免疫化は、免疫原として、配列番号：２２のアミノ酸配列の断片、並びに特に本明細書において規定したエピトープ配列を含む配列番号：２２の断片、及び特に配列番号：３５及び／又は配列番号：９６を用いて実行することができる。ハイブリドーマは、脾臓単核細胞のＬＯＵラット免疫細胞腫ＩＲ９８３Ｆとの融合により得ることができる。ハイブリドーマは、分泌されたモノクローナル抗体の、配列番号：２２、配列番号：３５及び配列番号：９６、特に配列番号：３５及び／又は配列番号：９６からなる群から選択されるアミノ酸配列へ結合する能力に従い、スクリーニングされてよい。従って、本発明はまた、免疫原化合物を包含しており、該免疫原化合物は、配列番号：２２のアミノ酸配列の断片であり、特に配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６、特に配列番号：３４、配列番号：３５及び配列番号：９６の群、より特定すると配列番号：９６から選択された少なくとも１つのアミノ酸配列を含む断片である。本発明の特定の実施態様において、免疫原化合物は、線状ペプチド、特に配列番号：９６のアミノ酸配列を含む線状ペプチド、より特定すると、配列番号：３５のアミノ酸配列を含むか又はこれからなる、好ましくはこれからなる線状ペプチドである。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
（図面の簡単な説明）
【図１】本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列  パネルＡ．  重鎖（ＶＨ）の配列。ＣＤＲは、太字である。  パネルＢ．  Ｎ１３Ｂ２由来のヒト化された軽鎖（ＬＨ）の配列。ＣＤＲは、太字である。Ｎ１３Ｂ２−ＶＬ３は、４８位及び８７位にＮ１３Ｂ２−ｈ３の当初のフレームワーク残基（下線付き）を含み；Ｎ１３Ｂ２−ＶＬ４−Ｖ４８Ｌ及びＮ１３Ｂ２−ＶＬ５−Ｆ８７Ｙは、対応するヒト化されたフレームワーク残基を含み、Ｎ１３Ｂ２−ＶＬ６−Ｖ４８Ｌ−Ｆ８７Ｙは、両方のヒト化されたフレームワーク残基を含む。
【０１０４】
【図２】抗体の作製−安定したトランスフェクション  ３種の異なる製造バッチを、言及した抗体の各々について、一般的方法に従いＣＨＯ−Ｍ細胞において、市販の血清−非含有培地を用い、実行し、ＥＬＩＳＡアッセイにより測定した、典型的実験において得られた力価を、ここで報告している。水平軸は、培養時間を表し、垂直軸は、得られた抗体力価をμｇ／ｍＬで表す。
【０１０５】
【図３】ＣＤ１２７への結合  指定された抗体の、組換えＣＤ１２７への結合を、実施例３に詳述した方法に従うＥＬＩＳＡによりアッセイした。水平軸は、抗体濃度をｎｇ／ｍＬで表し、垂直軸は、４５０ｎｍでの光学濃度を任意の単位で表す。
【０１０６】
【図４】ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害  指定された抗体によるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害を、実施例５に詳述した方法に従う細胞蛍光光度法によりアッセイした。ｐＳＴＡＴ５抗体により染色されたＣＤ３＋細胞の割合を、パネルＡに報告し（水平軸：ｎｇ／ｍＬの抗体濃度）、ＣＤ３＋細胞に関するｐＳＴＡＴ５シグナルの平均蛍光強度（任意の単位）を、パネルＢに報告している。
【０１０７】
【図５】メモリーＴ細胞に対する作用  パネルＡ．  Ｎ１３Ｂ２注入後のヒヒにおけるＤＴＨ反応（紅斑曲線の曲線下面積）  ツベルクリンチャレンジに対し反応する遅延型過敏症を、ワクチン接種したヒヒにおいて、Ｎ１３Ｂ２（ｎ＝７頭のヒヒ）又は賦形剤（ｎ＝４頭のヒヒ）の投与後、実施例６に詳述した方法に従い皮膚反応を測定することにより、アッセイした。垂直軸は、任意の単位での紅斑曲線下面積を表す。値は、所定の時点で実行された皮内反応を報告し、Ｎ１３Ｂ２又は賦形剤の投与（０日目に投与される）の前後の、水平軸上の日数で示している。「ポスト−ＢＣＧ」は、ＢＣＧによる新規ワクチン接種後の皮膚反応結果に対応している（ｎｄ＝未測定）。  賦形剤対照は、１５０及び１８０日目及び「ポスト−ＢＣＧ」には測定しなかった（ｎｄ）。  パネルＢ．  ヒト化Ｎ１３Ｂ２注入後のヒヒにおけるＤＴＨ反応（紅斑曲線の曲線下面積）  ツベルクリンチャレンジに対し反応する遅延型過敏症を、ワクチン接種したヒヒにおいて、ヒト化Ｎ１３Ｂ２（ＡＡ８９２ＢＢ、３２２５７、Ｖ９１５ＧＱ、３３８７４）又は緩衝液の投与後、実施例６に詳述した方法に従い皮膚反応を測定することにより、アッセイした。垂直軸は、任意の単位での紅斑曲線下面積を表す。値は、ヒト化Ｎ１３Ｂ２又は緩衝液の投与前（「ＩＤＲ１」、各ヒヒについて一番左のバー）、ヒト化Ｎ１３Ｂ２又は緩衝液の投与後４時間（「ＩＤＲ２」、左から２番目のバー）、ヒト化Ｎ１３Ｂ２又は緩衝液の投与後１、２、３ヶ月（「ＩＤＲ３−５」、左から３番目から５番目のバー）及び４ヶ月（「ＩＤＲ６」、Ｖ９１５ＧＡのみについて、左から６番目のバー）、及びＢＣＧによる新規ワクチン接種後（「ＩＤＲ７」、最も左のバー）で実行された皮内反応を報告している。  パネルＣ．  ツベルクリンでチャレンジされ且つヒト化Ｎ１３Ｂ２で処置されたＢＣＧ−ワクチン接種したヒヒにおける血液ＰＢＭＣ上で実行されたＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴ  ツベルクリンチャレンジ後のＡＧ−特異的Ｔ細胞頻度を、ワクチン接種したヒヒにおいて、ヒト化Ｎ１３Ｂ２（ＡＡ８９２ＢＢ、３２２５７、Ｖ９１５ＧＱ、３３８７４）又は緩衝液の投与後、実施例６に詳述した方法に従うＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより、アッセイした。垂直軸は、１００.０００個細胞についてのスポット頻度を表す。値は、抗原を伴わない（Ｗ／ｏＡｇ、左側バー）、又はツベルクリン抗原を伴う（右側バー）で、ヒト化Ｎ１３Ｂ２又は緩衝液の投与前に実行した（各バー群の最も左のバー）、ヒト化Ｎ１３Ｂ２又は緩衝液の投与後４日目（「ＩＤＲ２」）、ヒト化Ｎ１３Ｂ２又は緩衝液の投与後１、２、３ヶ月（「ＩＤＲ３−５」）及び４ヶ月（「ＩＤＲ６」、Ｖ９１５ＧＡのみ）、及びＢＣＧによる新規ワクチン接種後（最も左のバー、破線）で実行されたＥｌｉｓｐｏｔを報告している。
【０１０８】
【図６】ＩＢＤ患者におけるＩＬ−７、ＣＤ１２７及びＴＳＬＰの発現  ＩＬ−７、ＣＤ１２７（ＩＬ−７Ｒαの可溶型）及びＴＳＬＰ（完全長）のｍＲＮＡ発現レベルを、健常対照対象（非ＩＢＤ対照）由来の組織試料、抗炎症薬治療に反応しなかった（又は最早反応しない）活動性潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を伴う患者由来の健常及び罹患した（炎症を起こした）結腸生検試料、並びに休眠疾患を伴うＵＣ患者−すなわち、試料採取時に治癒しているか又は寛解している患者（反応者）由来の試料中で、実施例７に詳述した方法に従い、測定した。垂直軸は、相対蛍光単位を表す。値は、所定の群の各試料について、プロットし、水平バーは、群の平均値を表し、且つエラーバーは、標準偏差を表す。「＊」は、ｐ−値＜０．０５を意味し；「＊＊」は、ｐ−値＜０．０１を意味し；「＊＊＊＊」は、ｐ−値＜０．０００１を意味する。
【０１０９】
【図７】ＣＤ１２７シグナル伝達経路の阻害  様々な抗−ヒトＣＤ１２７抗体の、シグナル伝達経路の活性化に対する作用は、実施例８において詳述したようなウェスタンブロットにより評価した。この図は、６名の異なるドナーからの代表的結果を表す。「ＩＬ−７なし」は、ＩＬ−７により刺激されなかった試料に対応している。「Ｃ」は、抗−ＣＤ１２７抗体の非存在下でＩＬ−７により刺激された対照試料に対応している。ブロットの水平ラインは、指定された分子量マーカーの移動を表す。ブロットの右側の矢印は、チロシン−リン酸化されたＳＴＡＴ５、チロシン１９９−リン酸化されたＰＩ３−ｋ  ｐ５５、リン酸化されたＡｋｔ、リン酸化されたＥＲＫ  １／２、及び負荷参照としてのＧＡＰＤＨの移動を示す。
【０１１０】
【図８】ＵＣ生検試料からのＴ細胞サイトカイン放出の抑制（Ｓｍｏｔｈｅｒｉｎｇ）  パネルＡ．  エクスビボで成長されたＵＣ生検試料によるＩＦＮγ産生。パネルＢ．  エクスビボで成長されたＣＤ生検試料によるＩＦＮγ産生。  両方のパネルにおいて、試料は、実施例９に詳述したように入手し且つ処理した。各記号は、ＩｇＧと共に培養した（「Ｃｔｒｌ  Ａｂ」）又は抗−ＣＤ１２７抗体と共に培養した（「ａＩＬ−７Ｒα」）患者由来の１つの試料を表す。結んだ記号は、同じ患者からの試料の対である。＊＊は、ウイルコックソンのマッチした対応のある検定により、ｐ＜０．０１である。ＩＦＮγ産生は、抗−ＩＬ７Ｒα  ｍＡｂにより有意に阻害された。同様の結果が、ＣＤ生検試料について得られた。
【０１１１】
【図９】抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂ及びアゴニストシグナル  様々な抗−ヒトＣＤ１２７抗体の、ＳＴＡＴ５、ＰＩ３Ｋ及びＥＲＫシグナル伝達経路の活性化に対する作用を、実施例１１に詳述したように、ウェスタンブロットにより評価した。図９Ａは、外因的な組換えヒトＩＬ７の非存在下での、７つの異なるドナー細胞の中の１つを示している。  パネルＡ．  「培地」は、いずれの抗−ヒトＣＤ１２７抗体も伴わない試料に対応している。「ＩＬ７なし」は、４種の試料が、ＩＬ−７により刺激されなかったことを意味する。３種の試料は、１種の抗ＩＬ−７ＲαｍＡｂ（Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６又はＭＤ７０７−１３−Ｇ４又は１Ａ１１−Ｇ１）の１０μｇ／ｍＬにより前処理した。  パネルＢ．  ｐＩ３Ｋ及びｐＥＲＫの定量は、ＧＡＰＤＨ発現に対し補正し、且つ培地対照条件に対し規準化した（ｎ＝７の異なるドナー）。垂直軸は、対照に対し規準化した発現を表す。値は、単独の群中の各試料をプロットし、水平バーは、各群の平均値を表し、且つエラーバーは、標準偏差を表す。
【０１１２】
【図１０】抗−ヒトＩＬ７−ＲαｍＡｂのＩＬ７経路活性化に対する作用  ホスホ−ＳＴＡＴ５シグナルの定量は、ＧＡＤＰＨ発現に対し補正し、且つ培地対照条件に対して規準化した。ＰＢＭＣは、１つの抗−ＩＬ７−Ｒα  ｍＡｂ（Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６又はＭＤ７０７−１３−Ｇ４又は１Ａ１１）の１０μｇ／ｍＬにより前処理し、その後５ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ７と共に３７℃で１０分間インキュベーションした。ホスホ−ＳＴＡＴ５シグナルの定量は、ＧＡＰＤＨ発現に対して補正した（ｎ＝７の異なるドナー）。点線は、処置をしない培地単独の条件を表す。値は、単独の群中の各試料をプロットし、水平バーは、各群の平均値を表し、且つエラーバーは、標準偏差を表す。「＊」は、指定された群間のｐ−値＜０．０５を意味する。
【０１１３】
【図１１】転写修飾を誘導するデュアルアゴニスト／アンタゴニスト抗−ＩＬ７−Ｒα  ｍＡｂ  ヒトＰＢＭＣ（ｎ＝７）のＲＮＡ配列解析は、（１）５ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ７含有、（２）ＩＬ７非含有、（３、４、５）５ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ７及び異なる抗−ヒトＩＬ７−Ｒα  ｍＡｂ含有（（３）：１０μｇ／ｍＬ  Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６；（４）１０μｇ／ｍＬ  ＭＤ７０７−１３−Ｉｇ４：（５）１０μｇ／ｍＬ  １Ａ１１）と共に、３．５時間インキュベーションした。  パネルＡ．  ＩＬ７刺激と対照条件の間の、９３種の最も差次的に発現された遺伝子の発現のヒートマップ（偽発見率（ＦＤＲ）５％、倍率変化（ＦＤ）＞２）。  パネルＢ．  ＩＬ７刺激、対照、並びにＩＬ７及び抗−ヒトＩＬ７−ＲαｍＡｂ条件の、３種のＩＬ７誘導したクラスターの中央値プロファイルの定量。  パネルＣ．  異なる抗−ヒトＩＬ−７Ｒα  ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬのＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６、１０μｇ／ｍＬのＭＤ７０７−１３−Ｉｇ４＃１、又は１０μｇ／ｍＬの１Ａ１１）と共に、ＩＬ−７を含まずに３．５時間インキュベーションしたヒトＰＢＭＣ（ｎ＝７）のＲＮＡ配列解析のベン図。４８１の差次的に発現された遺伝子（ＦＤＲ５％、ＦＣ＞１．５）のベン図は、抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂ及び培地対照条件を比較した。円のサイズは、各カテゴリーの遺伝子数に比例している。
【実施例】
【０１１４】
（実施例）
（実施例１．  軽鎖のヒト化）
以下の重鎖を、別に提供されない限りは、本明細書に報告される全ての実験に使用した：
Ｎ１３Ｂ２ヒト化＿ＶＨ、ヌクレオチド配列（配列番号：１３）：
【化９】
0006986559.tif 000010
Ｎ１３Ｂ２ヒト化＿ＶＨ、アミノ酸配列（配列番号：７）：図１Ａ参照。
【０１１５】
以下の最適化されたヌクレオチド配列を、抗体軽鎖の作製に使用した（そのアミノ酸配列は、図１Ｂに提供している）：
【化１０】
0006986559.tif 000011
。
【０１１６】
各ＶＬ配列は、遺伝子合成、ＢｓｉＷＩ  ５’及び３’末端を持つクローニングベクター（ｐＵＣ５７）中への挿入、並びにＡＴＧの前へのコザック配列
【化１１】
0006986559.tif 000012
の追加により得た。発現ベクターとして、ヒトＩｇＧ１のＣＬカッパ定常ドメインを含む、ｐＦｕｓｅＣＬＩｇ−ｈｋ発現プラスミド（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用した。
【０１１７】
各クローニングプラスミド（ＶＬ−ｐＵＣ５７−Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を、ＢｓｉＷＩ制限酵素により消化し、ＶＬ挿入断片（４００ｂｐ）を抽出した。精製した挿入断片を、ＢｓｉＷＩ消化により線状化し、且つ脱リン酸化した、発現プラスミドｐＦｕｓｅＣＬＩｇ−ｈｋへライゲーションした。ヒト定常ドメインの前に右側向きで挿入されたＶＬ断片を有する陽性クローンを、増幅し、且つトランスフェクション工程のために、Ｍｉｄｉｐｒｅｐ−エンドトキシンフリー（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）により精製した。この重鎖を、配列番号：２６からなる定常ドメインと、同様にクローニングした。
【０１１８】
（実施例２．  ヒト化された軽鎖の作製）
試験されたヒト化された抗−ＣＤ１２７抗体に関して、安定したクローンのトランスフェクション及び選択を、従来の方法に従い行った。重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）の異なるトランスフェクション比に対応する各抗体についての３つの上清を調製し、且つ試験した：ＨＣ：ＬＣは、２：１、１：１．３、及び１：２。得られた力価を、図２に報告し、これは３００，０００個細胞／ｍＬで播種したＣＨＯ細胞中で以下の産生を得た；従来方法に従い、抗生物質なし：力価は、対応する抗体の固定した抗−ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）上のＥＬＩＳＡによりアッセイし、且つ顕色（ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ）は、マウス抗−ヒトカッパｍＡｂ＋ペルオキシダーゼ−標識したロバ抗−マウス抗体により行い、ＴＭＢ基質を使用する４５０ｎｍでの比色分析により明らかにした。
【０１１９】
Ｎ１３Ｂ２−ｈ３及びＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６の産生も、一過性トランスフェクション実験において試験した。トランスフェクションの１日前に、ＣＯＳ細胞を、完全培地（ＤＭＥＭ  ＳＶＦ１０％  （Ｈｙｃｌｏｎｅ）＋ＰＳ  １％＋Ｇｌｕ  １％）の入ったＰ１２プレート中に１０００００個細胞／ウェルで播種し、且つ３７℃、５％ＣＯ２でインキュベーションした。トランスフェクション日は、ＣＯＳ細胞を、集密度５０〜９０％で使用した。これらを、ＰＢＳにより洗浄し、完全培地中に５００μｌで維持した。０．６μｇ  ＶＨ変種＋０．４μｇ  ＶＬ変種を、２００μｌのＯｐｔｉＭＥＭ培地中で混合し、且つ１μｌのＰｌｕｓ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加した（インキュベーションは室温で１５分間）。３．５μｌリポフェクタミンＬＴＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）＋１００μｌを、この混合物に添加し、室温で２５分間インキュベーションした。全混合物を、ＣＯＳ細胞上に液滴で沈着させ、且つ３７％で、５％ＣＯ２中、４８時間インキュベーションした。４８時間後、上清を収集し、遠心分離した（１５００ｒｐｍで、４℃で、１０分間）。上清を、ＥＬＩＳＡ  ｎ°ＴＨ−ＭＯ−４３により定量した。活性アッセイを、ＥＬＩＳＡ  ＴＨ−ＭＯ−４４により行った。
【０１２０】
（実施例３．  ＣＤ１２７への結合−ＥＬＩＳＡ）
サンドイッチＥＬＩＳＡのために、ロバ抗−ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体を、１．２μｇ／ｍｌで、Ｐ９６−プレート上にコーティングし、精製した抗体を添加し、標準範囲の関数として濃度を測定した。インキュベーション及び洗浄後、カッパ特異的マウス抗−ヒト軽鎖（Ｅｆｆｉｍｕｎｅ、クローンＮａＭ７６−５Ｆ３）＋ペルオキシダーゼ−標識したロバ抗−マウス抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、参照番号７１５−０３６−１５１）を添加し、従来の方法により明らかにした。
【０１２１】
活性ＥＬＩＳＡアッセイのために、組換えｈＣＤ１２７（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、北京、中国；照合番号１０９７５−Ｈ０８Ｈ）を、１μｇ／ｍｌでプラスチックの上に固定し、且つ抗−ＣＤ１２７抗体の希釈物を添加し、結合を測定した。インキュベーション及び洗浄後、マウス抗−ヒト軽鎖（カッパ特異的）＋ペルオキシダーゼ−標識したロバ抗−マウス抗体を添加し、従来の方法により、ＴＭＢ基質を用い、４５０ｎｍでの比色分析により明らかにした。
【０１２２】
以下のＥＤ５０値（最大シグナルの５０％を達成するために必要な濃度）を得た：
【表１】
0006986559.tif 000013
表１．  抗体のＣＤ１２７への結合に関するＥＤ５０値（ｎｇ／ｍｌ）
【０１２３】
抗体の安定性は、抗体を、４℃、２５℃及び４２℃で、７、１４、又は３０日間インキュベーションすることにより、試験した。抗体のＣＤ１２７への結合は、３０日間インキュベーションした後であっても、依然優れていた。３０日間インキュベーションした後にＥＬＩＳＡにより決定したＥＤ５０の値を、表２に報告している。
【表２】
0006986559.tif 000014
表２．  指定された温度で３０日間インキュベーションした後の抗体のＣＤ１２７への結合のＥＤ５０値（ｎｇ／ｍｌ）
【０１２４】
（実施例４．  ＣＤ１２７への結合−Ｂｌｉｔｚ）
この方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ、Ｃ２２−２  Ｎｏ  ６１０１０−１）により実行した。
組換えｈＣＤ１２７（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、北京、中国；照合番号１０９７５−Ｈ０８Ｈ）／組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号：１１６１２−Ｈ０８Ｈ）を、Ｆｃ断片により、抗−ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ＡＨＣ）バイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ、１８−５０６３）へ、５０μｇ／ｍｌで３０秒間固定した。次に、抗−ＣＤ１２７抗体を、１２０秒間の会合期間にわたり、２０μｇ／ｍＬ（飽和濃度）で添加し、引き続き速度論的緩衝液中で抗−ＣＤ１２７抗体の解離期間１２０秒間とした。データ解析は、Ｂｌｉｔｚ  ｐｒｏ１．２ソフトウェアで行い、これは会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）を計算し、且つ親和定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定した。結果を、表３に報告している。
【表３】
0006986559.tif 000015
表３．  ヒトＣＤ１２７組換えタンパク質に対する抗−ＣＤ１２７抗体のＢｌｉｔｚによる親和性解析
【０１２５】
（実施例５．  ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害）
機能アッセイにおいてＩＬ７Ｒの阻害を試験するために、抗体を、ヒトＰＢＭＣと共に３７℃で３０分間インキュベーションし、その後ＩＬ７（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、照合番号ＰＨＰ０４６）の０．１ｎｇ／ｍｌにより３７℃で１５分間刺激した。反応を４℃で停止し、Ｐｅｒｍ洗浄緩衝液により洗浄し、その後Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、照合番号５５４７２２）により４℃で１５分間固定した。細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ−標識した抗−ＣＤ３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、照合番号５５７６９４）により、４℃で３０分間染色した。次に、細胞を、Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、照合番号５５８０５０）中で４℃で３０分間インキュベーションし、透過性を高めた。ＰＢＳ、ＢＳＡ１％、アジド０．１％による洗浄後、細胞を、Ａｌｅｘａ−６４７標識した抗−ｐＳｔａｔ５抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、照合番号６１２５９９）により室温で３０分間染色した。試料を、ＢＤ  ＣａｎｔｏＩＩ細胞蛍光光度計上で分析した。ＩＬ７を伴うｈＰＢＭＣ−ＣＤ３＋は、ｐＳｔａｔ５のリン酸化を誘導したのに対し、ＩＬ７なしでは、リン酸化を有さなかった。結果を、図４及び下記表に報告し、ＥＤ５０、すなわちこのアッセイにおいてシグナルの５０％に達する指定された抗体の濃度を示している。
【表４】
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表４．  抗−ＣＤ１２７抗体によるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害
【０１２６】
この実験は、ヒト化されたアミノ酸による生殖細胞系列の修飾及び構造残基の修飾は、抗−ＣＤ１２７抗体の生物活性を変化しなかったことを確認した。全ての試験した変種（Ｎ１３Ｂ２−ｈ３、Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ３、Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ４、Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ５、Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６）は、先に作製されたＮ１３Ｂ２の参照バッチのように、ｈＰＢＭＣに対するＩＬ７刺激後に、Ｓｔａｔ５リン酸化を阻害することができる。Ｎ１３Ｂ２−ｈＶＬ６（最もヒト化され且つ最も最適化された）に注目すると、本発明者らは、これは、Ｓｔａｔ５リン酸化の阻害におけるその生物活性は、参照Ｎ１３Ｂ２−ｈ３と同じ程度まで、維持することができることに注目した。更にこの変種は、４２℃、２５℃又は４℃での１４日間のインキュベーション後、非常に安定しており、これは凝集体の形成を誘導せず、且つその結合活性を維持した。
【０１２７】
（実施例６．  メモリーＴ細胞への作用）
（ツベルクリン−誘導性遅延型過敏症モデル）
ヒヒを、カルメット・ゲラン菌ワクチン（０．１ｍｌ；２−８  １０５  ＣＦＵ；Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ＭＳＤ、リヨン、仏国）により、足の上側領域に、２回皮内免疫化した。４及び２週間後、遅延型過敏症（ＤＴＨ）皮膚試験を行った。皮内反応（ＩＤＲ）を、ツベルクリン精製したタンパク質誘導体（ＰＰＤ；Ｓｙｍｂｉｏｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、サンディエゴ、ＣＡ）の２０００又は１０００ＵＩの皮内注入により行った。生理食塩水（０．１ｍｌ）を、陰性対照として使用した。注入部位での皮膚反応を、少なくとも２名の観察者がノギスを用いて測定し、且つ直径＞４ｍｍの場合に、陽性とみなした。第二のＩＤＲを、３週間のウォッシュアウト期間後に行い、動物は、Ｎ１３Ｂ２の１０ｍｇ／Ｋｇ（ｎ＝７）又はヒト化Ｎ１３Ｂ２の１０ｍｇ／ｋｇ（Ｖ９１５ＧＡ、ＡＡ８９２ＢＢ、３２２５７、３３８７４）（ｎ＝４）又は等容積の賦形剤（ｎ＝４）の１回の静脈内注射を受け取った。追加のＩＤＲを、注入後毎月行った。ウォッシュ期間後、数匹のヒヒ（先にＮ１３Ｂ２で処置した）は、再度ＢＣＧにより２回皮内免疫化し、引き続き新たにＩＤＲした。測定値の平均を記録し、各時点でプロットした。複数の実験条件を比較するために、紅斑反応を、計算のためにＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用い、曲線下面積（ＡＵＣ）として定量化した（図５Ａ及びＢ）。
【０１２８】
（Ｅｌｉｓｐｏｔ）
Ａｇ−特異的Ｔ細胞頻度を、ツベルクリンで再刺激した新たに単離されたＰＢＭＣについて、ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（非ヒト霊長類ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴキット；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネアポリス、ＭＮ）により、製造業者の指示に従い追跡した。
【０１２９】
簡単に述べると、捕獲抗体（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＳＥＬ９６１）を、Ｅｌｉｓｐｏｔ  ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＨＴＳフィルタープレート（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の各ウェルに添加し、且つ４℃で一晩インキュベーションした。３回洗浄後、ブロッキング緩衝液を添加し、プレートを外界温度で、２時間インキュベーションした。ヒヒＰＢＭＣを、フィコール勾配遠心分離（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、パリ、仏国）により、新たにヒヒ血液から抽出した。その後赤血球細胞を溶解し、細胞を洗浄し、その後ツベルクリン精製したタンパク質誘導体を含む又は含まない培養培地（ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＴｅｘＭａｃｓ培地）中、好適な濃度で再構成した。プレートを、３７℃及び５％ＣＯ２下で、１８〜２４時間インキュベーションした。洗浄緩衝液により３回洗浄した後、検出抗体（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＳＥＬ９６１）を添加し、４℃で２４時間インキュベーションした。３回洗浄した後、ストレプトアビジン−ＡＰ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＳＥＬ００２）を添加し、２時間かけて、外界温度で２時間インキュベーションした。３回の洗浄を行った。ＢＣＩＰ／ＮＢＴ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＳＥＬ００２）を添加し、暗所に３０分間放置した。洗浄緩衝液による数回の及び脱イオン水による１回の洗浄が必要であった（図５Ｃ）。
【０１３０】
（動物）
ヒヒ（パピオ・アヌビス；７〜１４ｋｇ）を、Ｃｅｎｔｒｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｄｅ  Ｐｒｉｍａｔｏｌｏｇｉｅ（ルセ、仏国）から得た。動物は、ＩＮＳＥＲＭユニット１０６４の大型動物施設で飼育した。動物試験は、フランス国立倫理委員会（French National Ethics Committee）により承認された。
【０１３１】
（結果）
第一の実験において、ツベルクリンによる第一のＩＤＲは、その時点では処置を受け取らなかったＢＣＧ−ワクチン接種したヒヒにおいて行った（−３０日目）。１ヶ月のウォッシュ期間後、第二のＩＤＲを、１０ｍｇ／ＫｇのＮ１３Ｂ２の静脈内注入後、４時間及び毎月行った（白色バー）。最後のＩＤＲを、ＢＣＧによる新たなワクチン接種後に行った（抗体注入後１４ヶ月）。対照動物（黒色バー）は、同様の容積の賦形剤を静脈内に受け取り、同じプロトコールでチャレンジした。結果は、抗−ＩＬ７Ｒαキメラ抗体は、単回投与後、非常に長期の防御を誘導した（最大１４ヶ月）ことを示した。反応は、新たなワクチン接種後のみ回復した。
【０１３２】
別の実験において、ツベルクリンによる第一のＩＤＲは、ＢＣＧ−ワクチン接種したヒヒにおいて行った（破線付きバー−例えば、Ｖ９１５ＧＡについてのＩＤＲ１）。１ヶ月のウォッシュ期間後、第二のＩＤＲを、１０ｍｇ／Ｋｇのヒト化Ｎ１３Ｂ２の静脈内注入後、４時間及び毎月行った（塗りつぶしバー−例えば、Ｖ９１５ＧＡについてのＩＤＲ２−６）。最後のＩＤＲを、ＢＣＧ及びツベルクリンによる新たなワクチン接種後行った（ドット付きバー−例えばＶ９１５ＧＡについてのＩＤＲ７）。対照動物（黒色バー）は、同様の容積の賦形剤を静脈内に受け取り、同じプロトコールでチャレンジした。結果は、４匹の評価したヒヒ中３匹において、ヒト化Ｎ１３Ｂ２も、単回投与後、長期の防御を誘導したことを示した。「３３８７４」動物は、最初、抗体注入後直ちに反応したが、反応は、１ヶ月後自然に回復した。
【０１３３】
血液ＰＢＭＣは、ツベルクリンにより、エクスビボにおいて再刺激した。ツベルクリンを含む又は含まない第一のＩＦＮγｅｌｉｓｐｏｔを、ＢＣＧ−ワクチン接種したヒヒにおいて行った（破線付きバー）。第二のＩＦＮγｅｌｉｓｐｏｔは、１０ｍｇ／Ｋｇのヒト化Ｎ１３Ｂ２の注入後、４日で行った（塗りつぶしバー）。その後新規のＥＬＩＳＰＯＴを、インビボにおいて、ツベルクリンを含む各新規ＩＤＲで毎月実行した。最後のＩＦＮγｅｌｉｓｐｏｔを、ＢＣＧによる新規ワクチン接種後行った（ドット付きバー）。結果は、ヒト化Ｎ１３Ｂ２の投与は、長期反応動物において、抗原−特異的メモリーＴ細胞欠失を誘導したことを示している。「３３８７４」ヒヒは、ＤＴＨモデルにおける長期防御なしと平行して、ツベルクリン−特異的メモリーＴ細胞の有意な減少を示さなかった。ＢＣＧによる新たなワクチン接種後、長期反応動物は、抗原−特異的メモリーＴ細胞の増加した頻度を示し、これは基本レベル（ｍＡｂ注入前）に回復し、及びこれはインビボにおけるＤＴＨ反応の回復に関連している。まとめると、これらの結果は、ヒト化Ｎ１３Ｂ２により誘導された長期防御は、抗原−特異的メモリーＴ細胞欠失に関連し、これは薬物の長期作用を説明することを明らかにしている。
【０１３４】
（実施例７．  ＩＢＤ患者におけるＩＬ−７、ＣＤ１２７及びＴＳＬＰの発現）
Ｐｌａｎｅｌｌらの文献（Ｇｕｔ  ２０１３）において詳述されたように得られた生のｍＲＮＡ発現データを、図６の凡例に詳述したように分析した。
【０１３５】
（実施例８．  抗−ＣＤ１２７抗体＋ＩＬ７で刺激されたヒトＰＢＭＣのシグナル伝達経路）
ＩＬ７シグナル伝達経路を、可溶性抗−ヒトＣＤ１２７抗体１０μｇ／ｍｌと共に、３７℃で３０分間インキュベーションし、且つＩＬ７（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、照合番号ＰＨＰ０４６）５ｎｇ／ｍｌにより３７℃で１０分間刺激した、ヒトＰＢＭＣの溶解液から試験した。ウェスタンブロットを、７．５％ポリアクリルアミドゲルにおいて、細胞溶解液のタンパク質２０μｇにより、還元条件下で行い、ニトロセルロースメンブレン（ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にブロットした。ブロットを、５％ＢＳＡ−トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）により飽和させ、ホスホ−Ｓｔａｔ５、ホスホ−ＰＩ３−キナーゼｐ８５、ホスホ−Ａｋｔ及びホスホ−ＥＲＫ１／２抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のいずれかにより、１％ＢＳＡ−ＴＢＳ中１／１０００で（４℃で一晩）、引き続きポリクローナルヤギ抗−ウサギ標識したホースラディッシュペルオキシダーゼ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の１／２０００で、室温で１時間により明らかにするか、又は１％ＢＳＡ−ＴＢＳ中ＧＡＰＤＨ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）の１／１０００で（４℃で一晩）、引き続きポリクローナルヤギ抗−マウス標識したホースラディッシュペルオキシダーゼ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）の１／２０００で、室温で１時間により明らかにした。メンブレンは、ＬＡＳ−３０００造影システム（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を使用する化学発光により明らかにした。従って以下の抗−ヒトＣＤ１２７抗体を、アッセイした：Ｎ１３Ｂ２−ｈ３及びＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６（両方とも本明細書に明らかにされた抗−部位１／２ｂ抗体）；ＭＤ７０７−１３−Ｇ４（国際特許出願ＷＯ２０１３／０５６９８４において開示された「抗−部位１抗体」）及び１Ａ１１（ＧＳＫ特許ＷＯ２０１１／０９４２５９において開示された）。
【０１３６】
（実施例９．  ＩＢＤ組織におけるＴ細胞サイトカイン放出に対する作用）
ＩＢＤ患者からの生検試料を、エクスビボにおける疾患の炎症モデルとして使用することができ、且つ培養の２４時間後に、高レベルの前炎症性サイトカインを自発的に放出することがここで示されている（ＵＣ：ＩＦＮγ、１３０±１９  ｐｇ／ｍｌ；ＩＬ−６、４０４２±５２９ｐｇ／ｍｌ；ＩＬ−８、２５６２６±１６４０ｐｇ／ｍｌ−ＣＤ：ＩＦＮγ、１８０±３８ｐｇ／ｍｌ；ＩＬ−６、３６５３±７３４ｐｇ／ｍｌ；ＩＬ−８、１５５４０±２４５２ｐｇ／ｍｌ［ＵＣ及びＣＤに関して、それぞれ、平均±ｓｅｍ］）。
【０１３７】
２０名のＩＢＤ患者（１０名はクローン病及び１０名は潰瘍性大腸炎）の炎症を起こした結腸粘膜から採取した外科標本を用い、この臓器培養アッセイにおいて、抗−ＣＤ１２７ｍＡｂを１０μｇ／ｍｌで適用し、且つ培養は、ＩｇＧ対照ｍＡｂ又はブロッキング抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂの１０μｇ／ｍｌを含む培地中で、３７℃で２４時間行った（試料採取及び培養条件の詳細は以下参照）。各患者由来の対をなす対照標本を、試料採取し、同じ条件で培養し、抗−ＣＤ１２７抗体の代わりにＩｇＧ対照とした。サイトカイン濃度を、エクスビボにおいて培養した試料の上清中で、ＥＬＩＳＡ（以下に詳述したような）により測定した。
【０１３８】
エクスビボにおいて成長させたＵＣ生検試料によるＩＦＮγ産生は、抗−ＩＬ７ＲαｍＡｂにより有意に阻害された。同様の結果が、高量のＩＦＮγを選択する、一部のＣＤ生検試料について認められた。
【０１３９】
（エクスビボ臓器試料採取及び培養）
粘膜切除組織を使用する場合、小型の生検−サイズの断片を、鋏を用いて切断した。次に、生検試料又は生検−サイズの断片を、Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び５０μｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充した３００μＬ血清−非含有ＨＬ−１培地（Ｌｏｎｚａ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ、英国）中に、配置した。粘膜外植物を、３７℃及び５％ＣＯ２で２４時間インキュベーションした。１０μｇ／ｍＬで使用した各被験抗体（Ｎ１３Ｂ２）又はＩｇＧ対照を、インキュベーション時間の開始時に、培地に添加した。最後に、上清及び生検材料を、瞬間凍結し、今後の分析のために−７０℃で貯蔵した。
【０１４０】
（酵素−結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）アッセイ）
生検上清中のサイトカイン産生を、酵素−結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定した。ＩｍｍｕｎｏＴｏｏｌｓからのヒト組換えＩＦＮ−γ（＃３１６７３５３９、フリーゾイテ、独国）を、製造業者の指示に従い使用した。
【０１４１】
（実施例１０．  それらのエピトープ特徴に関連した抗−ヒトＩＬ７−Ｒα抗体の比較）
（質量分析：ペプチドマイクロアレイを使用する抗体プロファイリング）
ペプチドＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ'  ＰｅｐＳｔａｒ（商標）ペプチドマイクロアレイは、ガラス表面上に化学選択的に及び共有的に固定されている、抗原又は他の給源に由来する精製した合成ペプチドを含む。立体障害により引き起こされる偽陽性を避けるために、最適化された親水性リンカー部分を、ガラス表面と抗原−由来のペプチド配列の間に挿入した。技術的理由で、全てのペプチドは、Ｃ−末端グリシンを含む。試料のプロファイリング実験は、５２種のペプチドからなるペプチドライブラリー上で行った。ペプチドの完全リストを、以下に示す：
【表５】
0006986559.tif 000017
表５．  ペプチドマイクロアレイアッセイにおいて使用したペプチドリスト
【０１４２】
合計４種の試料は、マルチウェル−フォーマットを用い、マイクロアレイスライド上でインキュベーションした。Ｎ１３Ｂ２−ｈ３ＶＬ６抗体及び他の試料（ＭＤ７０７−１３、ＨＡＬ及び１Ａ１１）に関して、６種の異なる濃度を適用した（１０μｇ／ｍｌ；２μｇ／ｍｌ；１μｇ／ｍｌ；０．１μｇ／ｍｌ；０．０１μｇ／ｍｌ；０．００１μｇ／ｍｌ）。一連の試料希釈物を、２１の個別のミニ−アレイを含む（１つの試料希釈物につき１つのミニ−アレイ）、マルチ−ウェルマイクロアレイスライド上で、３０℃で１時間インキュベーションした。試料のインキュベーションに続き、二次抗ヒトＩｇＧ抗体の１μｇ／ｍｌを添加し、１時間反応するように放置した。二次抗体のみを適用する追加の対照インキュベーションを、同じマイクロアレイスライド上で、並行して実行し、それらのペプチドへの偽陽性結合を評価した。洗浄及び乾燥後、スライドを、高解像度レーザースキャナーにより、６３５ｎｍで走査し、蛍光強度プロファイルを得た。得られる画像を定量化し、各ペプチドに関して平均画素値を得た。これらの画像を定量化し、各ペプチドに関して平均画素値を得た。二次抗−ヒトＩｇＧ抗体は、Ｃｙ５により１μｇ／ｍｌで標識した。
【０１４３】
（緩衝液及び溶液）
使用した緩衝液は、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＪＰＴ）を含有するＴＢＳ−緩衝液、及びアッセイ緩衝液Ｔ２０（Ｐｉｅｒｃｅ、ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ  ＴＢＳ  Ｔ２０、＃３７５３６）であった。取得及び分析は、ペプチドマイクロアレイ（ＪＰＴ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＧｍｂＨ、ベルリン、独国；バッチ＃２６６８）、マルチウェルインキュベーションチャンバー、Ａｘｏｎ  Ｇｅｎｅｐｉｘスキャナー４２００ＡＬを用いて行った。マイクロアレイは、高解像度蛍光スキャナーを用いて、走査した。レーザー設定及び適用された解像度は、実行した測定の全てにおいて同一であった。得られた画像は、スポット−認識ソフトウェアＧｅｎｅＰｉｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて解析及び定量化した。各スポットに関して、平均シグナル強度を引き出した（０〜６５５３５の任意の単位）。
【０１４４】
更なるデータ評価のために、いわゆるＭＭＣ２値を決定した。ＭＭＣ２は、平均値により除算した標準偏差である変動係数（ＣＶ）が、０．５よりも大きい場合を除いて、マイクロアレイ上の３つ全ての事例の平均値と等しい。この場合、２つの最も近い値（ＭＣ２）の平均は、ＭＭＣ２に割り当てられる。
【０１４５】
（ジュウテリウム分析）
ＨＤＸ−２システム（Ｗａｔｅｒｓ  Ｓ．Ａ．／Ｎ．Ｖ．；ゼリック、ベルギー）を使用し、組換えヒトＣＤ１２７及び０又は１モル当量のｍＡｂを混合し、且つ９９．９％Ｄ２Ｏ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．８中に、最終Ｄ２Ｏ含量９０％及びＣＤ１２７もしくはＣＤ１２７／ｍＡｂ複合体の濃度２７．５μＭとなるよう、希釈した。水素−ジュウテリウム交換は、２０．０℃で３０分間実行した。この交換は、１．０℃での試料の１００ｍＭリン酸ナトリウム、４Ｍグアニジン・ＨＣｌ、０．４Ｍ  ＴＣＥＰ、ｐＨ２．３による１：１（ｖ／ｖ）希釈によりクエンチし、最終ｐＨ２．５を生じた。２分後、クエンチした試料を、２０．０℃でのオンラインペプシン消化（Ｅｎｚｙｍａｔｅ  ＢＥＨ  ペプシン、２．１×３０ｍｍ；５μｍ）のために、ＨＤＸマネージャー（ｍａｎａｇｅｒ）上に負荷し、引き続き脱塩し（Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  Ｖａｎｇｕａｒｄ  ２．１ｍｍ×５ｍｍ；１．７μｍ）、且つアセトニトリル（ｐＨ２．５）中０．２％ギ酸の５％〜４０％の勾配を用い、０．０℃、流量４０μｌ／分で１０分間かけて、逆相分離（Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．０ｍｍ×１００ｍｍ；１．７μＭ）した。質量分析を、ロックスプレー（ｌｏｃｋｓｐｒａｙ）補正を伴う、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｇ２−ＸＳ  ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ質量分析計上で、陽イオンモードで行った。逆交換（ｂａｃｋ−ｅｘｃｈａｎｇｅ）を最小化しつつ、適切な脱溶媒を確実にするために、穏やかなイオン源条件（温度：９０℃、キャピラリー電圧：２．５ｋＶ、サンプリングコーン：３０Ｖ、脱溶媒ガス流：８００Ｌ／ｈ、脱溶媒温度：２５０℃）を使用した（７３）。ペプチド同定は、ＰＬＧＳ  ３．０．２及びＵＮＩＦＩ  １．８を用い、ＭＳＥモードで収集した衝突誘起解離により補助した。ジュウテリウム取込みは、ＤｙｎａｍＸ  ３．０において決定した。構造図は、ＰＤＢ  ＩＤ  ３ＤＩ３からのＰｙＭＯＬ  １．８．２．３（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ  ＬＬＣ、ケンブリッジ、ＭＡ、米国）を用いて調製した（１９）。一塩基性及び二塩基性のリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩酸グアニジン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）、５０％水酸化ナトリウム、及びギ酸は、入手可能な最高純度で、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（シュネドルフ、独国）から購入した。ＬＣ−ＭＳ等級溶媒を、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ  Ｃｈｉｍｉｅ（デューズ、仏国）から、酸化ジュウテリウム（９９．９％Ｄ）及び酸化ジュウテリウム（９９．９６％Ｄ）中の２０％塩化ジュウテリウムは、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（アンドーバー、ＭＡ、米国）から、３７％塩酸はＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（フォントネ・ス・ボア、仏国）から、並びにウシシトクロムＣ消化物は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ゲメリング、独国）から供給された。Ａｍｉｃｏｎ超遠心フィルター（０．５ｍＬ；カットオフ値１０ｋＤａ）は、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（モルスアイム、仏国）から入手した。
【０１４６】
（結果）
異なる抗−ＩＬ７Ｒａ  ｍＡｂの線状ペプチドアレイによるエピトープ特徴は、２つの型のアンタゴニストｍＡｂを同定した：（１）先に２つの他のグループ（ＷＯ／２０１１／０９４２５９に記載のクローン１Ａ１１及びＷＯ／２０１１／１０４６８７に記載のクローンＨＡＬ）により説明され且つＭＤ７０７−１３を含む、ＩＬ−７との相互作用の領域（部位−１）に結合するｍＡｂ、並びに（２）部位−１及びＩＬ−７Ｒαとγ−鎖サブユニットの間のヘテロ二量体化の予測されるドメインの重複するエピトープ（部位−２ｂ）の両方に結合するｍＡｂ、すなわち、本発明のＮ１３Ｂ２−ｈ３ＶＬ６（Ｗａｌｓｈ  ２０１２）。
【０１４７】
高く且つ類似の親和性を持つＮ１３Ｂ２−ｈ３ＶＬ６及びＭＤ７０７−１３（ＫＤが２×１０−１０Ｍの部位−１／２ｂへのバインダー及び同様にＫＤが５×１０−１０Ｍの部位−１へのバインダー）は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃアイソタイプ（Ｆａｂ−アーム交換を防ぐために、Ｓ２２８Ｐヒンジ変異を含む）により、組換えにより発現され、並びにＷＯ／２０１１／０９４２５９に記載され且つそのクリニックにおいて開発されたヒトＩｇＧ１  Ｆｃアイソタイプ（ＮＣＴ０２２９３１６１）と組換え的に発現された、類似の親和性を持つ先に説明された他の部位−１  ｍＡｂであるクローン１Ａ１１（ＫＤが６×１０−１０Ｍ）と比較した。質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）による水素−ジュウテリウム交換を使用する高次構造的エピトープの分析は、先の知見を確認し、且つ本発明の抗体、すなわちＮ１３Ｂ２−ｈ３ＶＬ６（部位−１／２ｂ  ｍＡｂ）は、部位−１のいくつかのペプチドにおいて、しかし同じく部位−２ｂを重複するペプチドにおいても、ジュウテリウム取込みから保護するが、他方で２つの他のｍＡｂ（ＭＤ７０７−１３及び１Ａ１１）は、部位−１からのペプチドにおいてのみ、ジュウテリウム取込みを有意に防止することを明らかにした（データは示さず）。
【０１４８】
本発明の抗体は、ドメイン１からの部位１上に局在化された高次構造的エピトープ及びヒトＣＤ１２７の部位２ｂ上に局在化された高次構造的エピトープを認識する唯一のものであった。
【０１４９】
（実施例１１．  ＩＬ−７経路のアゴニスト及び／又はアンタゴニストであるそれらの能力に関する抗−ヒトＩＬ−７Ｒα抗体の比較）
（ウェスタンブロット）
新たに単離したヒトＰＢＭＣを、１０μｇ／ｍｌの抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂと共に、３７℃で、３０分間インキュベーションし、その後単独で又は５ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−７（ＡｂＤＳｅｒｏｔｅｃ）と一緒に、３７℃で１０分間培養した。氷上で反応を停止した後、細胞溶解液を、ＲＩＰＡ緩衝液（プロテアーゼインヒビターカクテルを含む）により調製した。タンパク質（１５μｇ）を、７．５％ポリアクリルアミドゲル上で還元条件下で分解し、ニトロセルロースメンブレン（ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に、標準方法を用い固定した。ブロットを、５％ＢＳＡ−トリス緩衝生理食塩水により洗浄し、１％ＢＳＡ−ＴＢＳ中で、ホスホ−ＳＴＡＴ５、ホスホ−ＰＩ３Ｋ  ｐ５５又はホスホ−ＥＲＫに特異的な抗体と共にインキュベーションし（４℃で一晩）、その後ポリクローナルヤギ抗−ウサギホースラディッシュペルオキシダーゼ−標識した抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と共に室温で１時間インキュベーションした。あるいは、ブロットを、１％ＢＳＡ−ＴＢＳ中のＧＡＰＤＨ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）を用いて染色し（４℃で一晩）、引き続きポリクローナルヤギ抗−マウスホースラディッシュペルオキシダーゼ標識した抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）により室温で１時間染色した。メンブレンは、ＬＡＳ−３０００造影システム（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を使用し、化学発光により明らかにした。
【０１５０】
（ＲＮＡ配列決定）
新たに単離したヒトＰＢＭＣを、１０μｇ／ｍｌの抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂｓと共にインキュベーションし（３７℃で３０分間）、その後単独で又は５ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−７（ＡｂＤＳｅｒｏｔｅｃ）と共に、３７℃で３時間インキュベーションした。反応を氷上で停止し、細胞ペレットを、ＲＮａｓｅ／ＤＮａｓｅ非含有水中に１％βメルカプトエタノールを含有するＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）中で再懸濁させ、−８０℃で貯蔵した。ＲＮＡを、ＲＮＡミニ抽出キットを用いて、製造業者（Ｑｉａｇｅｎ）の指示に従い抽出した。ＲＮＡの質及び量を、赤外分光分析（Ｎａｎｏｄｒｏｐ）及びＡｇｉｌｅｎｔバイオアナライザー（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＲＮＡ  ６０００  Ｐｉｃｏ  Ｋｉｔ）により評価した。Ｓｍａｒｔ−Ｓｅｑ２ライブラリーを、Ｂｒｏａｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｓにより調製し、ＳｍａｒｔＳｅｑ２プロトコールに従い、若干の修正を加え、Ｂｒｏａｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍにより配列決定した。簡単に述べると、全ＲＮＡを、ＲＮＡ−ＳＰＲＩビーズを用いて精製し、ポリＡ＋  ｍＲＮＡを、ｃＤＮＡへ逆転写し、増幅したｃＤＮＡを、トランスポゾン−ベースの断片化に供し、これは各試料に特異的なバーコードの組合せと共に、各々変換された転写産物の各断片をバーコード化するためのデュアル−インデックスを使用した。配列決定は、各インデックスに関して追加の８サイクルにより、対のある−末端（ｐａｉｒｅｄ−ｅｎｄ）２×２５ｂｐとして実行した。データは、バーコードにより分離し、且つＴｏｐｈａｔバージョン２．０．１０をデフォルトの設定で使用しアラインした。転写産物を、Ｂｒｏａｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｓのコンピュータによるパイプラインにより、Ｃｕｆｆｑｕａｎｔバージョン２．２．１を使用し、定量化した。簡単に述べると、データは、測定値の５０％がアラインされる場合、及び１試料につき少なくとも１００，０００対がアラインされる場合に、ＣｕｆｆＮｏｒｍにより処理した。規準化は、「ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ」規準化を含む、デフォルト設定を使用し、並びにｌｏｇ２−変換したＦＰＫＭ値（断片／転写産物のキロベース／百万個のマッピングした断片）としての発現レベル情報を、その後の解析に使用した。差次的遺伝子の同定に関して、経験的ベイズ統計手法による平均分散相関（ｌｉｍｍａ−トレンド）の推定を伴う線形モデル化を、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ・Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法のＲ．Ｇｅｎｅｓのｌｉｍｍａパッケージを用いて行い、調節したｐ−値＜５％及び倍率変化（ＦＣ）＞１．５を、差次的に発現されたとみなした。遺伝子発現の説明に関して、重要な成分解析（ＰＣＡ）及びクラスター化は、Ｒ  ｖ３．３．２において、各々、ａｄｅ４／ａｄｅｇｒａｐｈｉｃｓ及びｐｈｅａｔｍａｐパッケージを用いて行った。選択された遺伝子の生物学的意義は、Ｒクラスタープロファイラーパッケージを用いて評価した。遺伝子オントロジー（ＧＯ）のカテゴリーは、偽発見率（ＦＤＲ）＜５％でエンリッチされ、及び少なくとも５種の代表された遺伝子が選択された。ＲＮＡ−ｓｅｑデータには、ＧＥＯ寄託番号ＧＳＥ下でアクセスすることができる。
【０１５１】
（結果）
（ＳＴＡＴ５、ＰＩＫ３及びＥＲＫシグナル伝達経路）
次に抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂ（Ｎ１３Ｂ２−ｈ３ＶＬ６、ＭＤ７０７−１３、１Ａ１１及びＨＡＬ）を、先にＩＬ−７Ｒシグナル伝達に関連されたＳＴＡＴ５、ＰＩ３Ｋ及びＥＲＫシグナル伝達経路を活性化又はブロックするそれらの能力について比較した（図９及び１０）。先に例示したように（例えば、図７参照）、ＩＬ−７は、ヒトＰＢＭＣにおいて強力なＳＴＡＴ５リン酸化を誘導し、且つ全ての試験したｍＡｂは、このＳＴＡＴ５リン酸化の強力なインヒビターである（図７参照）。対照的に、且つ図９及び１０において例示したように、本発明者らは、ＩＬ−７は、可変性のＰＩ３Ｋリン酸化を誘導し、且つＥＲＫリン酸化を誘導しないのに対し、先行技術の抗体（すなわち、ＭＤ７０７−１３、１Ａ１１及びＨＡＬ）は、本発明の抗体とは対照的に、外因的なＩＬ−７の非存在下であっても、ＥＲＫリン酸化を有意に誘導し、且つより少ない程度にＰＩ３Ｋシグナルを誘導することを発見した。これらの知見は、先行技術の抗−ヒトＩＬ−７Ｒα抗体は、部分的アゴニスト特性を有し、従ってヒトＩＬ−７Ｒについてデュアルアゴニスト／アンタゴニストｍＡｂとみなされることを示している。対照的に、本発明の抗体、特にＮ１３Ｂ２−ｈ３ＶＬ６は、ヒトＩＬ−７Ｒについて、アンタゴニスト特性のみを有する。
【０１５２】
本発明者らは、アゴニスト／アンタゴニスト特性を持つ抗体は、ヒトＴ細胞を調節することが可能である有効なアゴニストシグナルを送達することができるかどうかを評価した。外因的なヒトＩＬ−７を伴わず、ヒトＩＬ−７を伴い、並びにＩＬ−７及び抗体（ＭＤ７０７−１３、１Ａ１１  部位−１（各々、ＩｇＧ４  ＃１又はＩｇＧ１  ＃２）、又はＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６部位−１／２ｂ（ＩｇＧ４））と共に３．５時間インキュベーションしたヒトＰＢＭＣのトランスクリプトームを、ＲＮＡ−ベースの−次世代配列決定（ＲＮＡ−ＳＥＱ）により解析している。合計４８１遺伝子が、抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂとインキュベーションしたヒトＰＢＭＣにおいて、対照条件と比較して差次的に発現された一方で、合計３３４遺伝子が、ヒトＩＬ−７刺激のみで、対照条件と比較して差次的に発現された。
【０１５３】
【表６】
0006986559.tif 000018
0006986559.tif 000019
0006986559.tif 000020
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表６．  非刺激細胞と比較した、ヒトＰＢＭＣ（ｎ＝７）の抗−ＩＬ７ＲαｍＡｂとのインキュベーション後に有意（ＦＤＲ５％）かつ差次的に（倍率変化＞１．５）発現された遺伝子のリスト
【０１５４】
ベン図（図１１Ｃ）解析は、任意の特定のＧｏＭｉｎｅｒ遺伝子オントロジーエンリッチメントを伴わない、３種のｍＡｂによる６１の共通する差次的に発現された遺伝子を同定した。６１の共通の遺伝子にもかかわらず、本発明の抗体は、遺伝子オントロジーエンリッチメントを伴わない、わずか３１の有意な遺伝子調節を誘導する。対照的に、先行技術の２種の抗体は、部位−１  ＩｇＧ４  ＃１  ｍＡｂにより誘導された２４５の差次的に発現された遺伝子及び部位−１  ＩｇＧ１  ＃２  ｍＡｂにより誘導された２３７の差次的に発現された遺伝子により、ヒトＰＢＭＣトランスクリプトームの重要な転写調節を誘導する。７８の差次的に発現された遺伝子は、これら２つの部位−１  ｍＡｂの間で共通であったが、これらの遺伝子は、ＰＢＭＣがＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６により刺激された場合に、差次的に発現されなかった。
【０１５５】
ＩＬ−７署名の主要成分分析（ＰＣＡ）は、先行技術の抗体により誘導された差次的に発現された遺伝子は、ＩＬ−７により誘導された差次的に発現された遺伝子とは強力に異なることを示している。ＧｏＭｉｎｅｒ遺伝子オントロジーエンリッチメントは、先行技術の両方の抗体は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路に関連した白血球活性化、増殖、遊走、走化性、サイトカイン分泌及び炎症反応などの、生物学的ＰＢＭＣ機能を調節することを示唆している。
【０１５６】
対照条件と比較してＩＬ７により差次的に発現された３３４の遺伝子の中で、９３遺伝子は、高い倍率−変化（＞２）で差次的に発現され、且つヒートマップ解析により３つの異なるクラスターに分類された（図１１Ａ）。遺伝子オントロジーエンリッチメントにより評価された下方制御された遺伝子の第一のクラスターは、白血球分化及びアポトーシスに主に関与し、高度に上方制御された遺伝子の第二のクラスターは、白血球接着、分化及び活性化に関係し、且つ上方制御された遺伝子の第三のクラスターは、混合型遺伝子オントロジーを有した。興味深いことに、全ての試験したｍＡｂ（部位−１又は部位−１／２ｂの両方）は、クラスター３への影響を伴わずに、クラスター１及びクラスター２の調節を防止することにより、類似した作用を発揮した（図１１Ｂ）。
【０１５７】
まとめると、転写解析は、部位−１及び部位−１／２ｂ抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂは、類似のアンタゴニスト特性を共有するにもかかわらず、当該技術分野の記述において説明された２つの部位−１  ｍＡｂは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路により誘導されたＴ細胞活性化及び炎症反応と両立する、ヒトＰＢＭＣの有意な転写調節を誘導したことを確認した。
【０１５８】
本発明の部位−１／２ｂ抗−ヒトＩＬ−７ＲαｍＡｂ、すなわちＮ１３Ｂ２−ｈＶＬ６は、当該技術分野の記述において説明された２つの部位−１  ｍＡｂと比べ、ヒトＰＢＭＣのより少ない転写調節を誘導した。
【０１５９】
より大きい種に関する特異的及び「アンタゴニスト性のみ」の抗−ＩＬ−７ＲαｍＡｂの欠如は、霊長類又はヒトにおけるこの作用の検証を妨害した。本発明者らは、部位−１  ＩＬ−７相互作用ドメインに結合する当該技術分野の記述の抗体は、アゴニスト／アンタゴニスト特性の両方を有するようにみえるのに対し、ＩＬ−７Ｒα／γｃ（部位２ｂ）の二量体化ドメインに結合する本発明の抗体は、厳密なアンタゴニスト活性を示すので、抗−ＩＬ−７ＲαｍＡｂのアゴニスト／アンタゴニスト特性は、標的化される特異的エピトープに左右されることを発見した。本発明者らは、本発明の抗体は、受容体内在化及びシグナル伝達に必要なＩＬ−７Ｒα／γｃ二量体化を混乱させることができることを示唆している。ＩＬ−７Ｒに対する「アンタゴニスト性のみ」の抗体は、慢性的抗原刺激後であっても、霊長類において、リンパ球減少症又はポリクローナルＴ細胞機能もしくは代謝欠損症を誘導することなく、長期のメモリーＴ細胞−媒介性皮膚炎症を防止する。
【０１６０】
ＩＬ−７は、主にＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を活性化することにより、ＩＬ−７Ｒシグナル伝達により増殖性シグナル及び抗−アポトーシス性シグナルを誘導することが示されている。ＩＬ−７Ｒシグナル伝達はまた、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路に関与すると考えられているが、これは形質転換された不死化された細胞株又は初代胸腺細胞において認められ、且つこれらのシグナルは、末梢ナイーブ又はメモリーヒトＴリンパ球においては検出不能である（Ｗａｔａｎａｂｅの文献、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ、１９９８）。いくつかの報告はまた、ＩＬ−７Ｒシグナル伝達は、Ｔリンパ球又はプロ−Ｂ細胞サブセットのいずれかにおいて、ＥＲＫリン酸化を増幅することができることも示唆している（Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ  Ｐ．  Ｉ．の文献、Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２０１３；Ｆｌｅｍｉｎｇ  ＨＥ及びＰａｉｇｅ  ＣＪの文献、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  ２００１）。成熟及びヒトＴ細胞におけるＩＬ−７Ｒシグナル伝達でのこれらの経路の役割は、あまり明らかではない。健常志願者由来の初代の新鮮な単離されたヒトＰＢＭＣ（ほとんどＴリンパ球及びＢリンパ球、単球及びＮＫ細胞で構成される）を、高濃度の組換えヒトＩＬ−７（５０００ｐｇ／ｍｌ、非リンパ球減少性状態の血清中濃度は〜５ｐｇ／ｍｌである、Ｗｏｎｇ  Ｈ−Ｌの文献、Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ，  ２００８））により刺激し、本発明者らは、ＩＬ−７は、再現可能なＳＴＡＴ５リン酸化を誘導することを確認した。ＰＩ３Ｋシグナル活性化は、より可変性であり、且つこれらは、いかなるＥＲＫリン酸化も認めなかった。本試験において使用した全ての抗−ＩＬ７ＲαｍＡｂは、ＩＬ−７−誘導性ｐＳＴＡＴ５の強力なインヒビターであり、且つ類似の転写アンタゴニスト特性を示したが、本発明者らは、当該技術分野の記述の２つの部位−１  ｍＡｂは、ＰＩ３Ｋ／ＥＲＫアゴニストシグナルを誘導し、且つＴ細胞活性化及び炎症反応に関与した重要な転写調節は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路により誘導されたことを発見した。いくつかのｍＡｂのこれらの対立するデュアルアゴニスト／アンタゴニスト特性は、ＩＬ−４、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１５、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ４０、又はＨＥＲ２などの他の標的が、受容体エンドサイトーシス／内在化後に類似の活性を示すので、独自のものではない。
【０１６１】
この部位２ｂのＴＳＬＰＲによるヘテロ二量体化もまた最近確認され、且つＩＬ−７Ｒα及びγ−鎖について既に予想されたように、受容体シグナル伝達を支える（ｐｏｉｓｅｄ  ｆｏｒ）ことが明らかにされた（Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅ  Ｋ．の文献、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，  ２０１７）。興味深いことに、ＩＬ−７Ｒα／γ−鎖とＩＬ−７Ｒα／ＴＳＬＰＲの間の予想されるヘテロ二量体化部位は、重複しており、このことは両方の受容体間で共有されたヘテロ二量体化−媒介したシグナル伝達機構を示唆している。
【０１６２】
本発明者らは、インビトロにおけるｐＳＴＡＴ５阻害アッセイは、インビボにおける抗−ＩＬ−７Ｒ抗体の有効性を予測しないことを発見した。先の報告において、別の抗−ＩＬ７ＲαｍＡｂは、霊長類におけるＩＬ−７−誘導性ｐＳＴＡＴ５をインビトロ及びエクスビボにおいて妨害したが、実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）のマーモセットモデルにおいては、脳炎症から保護しなかった（Ｄｕｎｈａｍ  Ｊ．の文献、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  ２０１６）。
【０１６３】
ＩＬ−７は、マウスにおいて末梢のナイーブＴリンパ球及びメモリーＴリンパ球のプールを維持することにおいて、良く説明されている。しかし霊長類において、末梢Ｔ細胞恒常性を維持することにおけるＩＬ−７の重要性は、従って余り明瞭ではなく、及び／又は余剰の機構が、種間での異なりを説明することができる。
【０１６４】
これらのデータは、抗−ＩＬ−７ＲαｍＡｂのアンタゴニスト特性及びインビボ有効性は、ＩＬ−７結合及びｐＳＴＡＴ５阻害の妨害のみに関係するものではないことを示した。これらのデータは、本発明の抗体はまた、受容体のヘテロ二量体化部位（部位２ｂ）を標的化し、「アンタゴニスト性のみ」であり、且つインビボにおいてより高い有効性の阻害性Ｔ細胞反応をもたらすことを示した。
【０１６５】
「アンタゴニスト性のみ」の抗体によるＩＬ７Ｒの標的化は、抗原−特異的メモリーＴ細胞の生存及び蓄積を調節する能力を有し、従って自己免疫疾患及び炎症疾患の長期にわたる再発の防止を促進し得る。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
ＣＤ１２７へ、特にヒトＣＤ１２７へ特異的に結合する抗体又はその抗原−結合断片であって：
−配列番号：９；配列番号：１０；配列番号：１１；配列番号：１２からなる群から選択される配列；特に配列番号：１２を含む抗体軽鎖又はこれからなる抗体軽鎖可変ドメイン；
−配列番号：１、配列番号：２、及び配列番号：３に示された配列からなる３つのＣＤＲを含む抗体重鎖可変ドメイン、特に配列番号：７に示した配列からなる抗体重鎖可変ドメイン：を含む、抗体又はその抗原−結合断片。
（態様２）
前記抗体が、ヒト化されたモノクローナル抗体であり、特にここでこの抗体軽鎖定常ドメインが、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインに由来し、特にここでこの軽鎖定常ドメインが、配列番号：２７又は２８の配列からなり、且つここでこの抗体重鎖定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４重鎖定常ドメインに、特にヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインに由来し、特にここでこの抗体重鎖定常ドメインが、配列番号：２６を持つ配列からなる、態様１記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様３）
前記抗体軽鎖が、配列番号：１２を含むか、又は抗体軽鎖可変ドメインが、これからなり、且つここでこの抗体重鎖可変ドメインが、配列番号：７からなる、態様１又は２記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様４）
ＩＬ−７により誘導されたＩＬ−７Ｒシグナル伝達のアンタゴニストであり、且つホスファチジルイノシトール３−キナーゼ及び／又はＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を誘導しない、態様１〜３のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様５）
ＣＤ１２７の２ｂ部位から得られた配列を含むエピトープを認識し、及び／又はＣＤ１２７のサイトカイン受容体のγｃ共通鎖への結合を破壊し、特にこれが、少なくともＣＤ１２７の部位２ｂの第三のベータシートを認識した、態様１〜４のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様６）
ＣＤ１２７の内在化を誘導しないか、及び／又はＣＤ１２７のＩＬ７−誘導性の内在化を阻害する、態様１〜５のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様７）
ＴＳＬＰにより誘導された樹状細胞の成熟を増大しない、態様１〜６のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様８）
持続性の作用及び／又は迅速作用を有する、特に迅速局所作用を有する、態様１〜７のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様９）
バイオセンサー分析により測定することができる、５Ｅ−９  Ｍよりも低い親和定数ＫＤで、ヒトＣＤ１２７へ特異的に結合する、態様１〜８のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片。
（態様１０）
態様１〜９のいずれか一項記載の抗体又はその抗原−結合断片をコードしている単離された核酸分子、特に配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７及び配列番号：１８からなる群から選択された配列を含むか又はこれからなる第一の単離された核酸分子；並びに、配列番号：１３の配列を含むか又はこれからなる第二の単離された核酸分子の組合せ。
（態様１１）
態様１〜９のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、及び／又は態様１０記載の単離された核酸分子の組合せ、並びに医薬ビヒクルを含有する、医薬組成物。
（態様１２）
局所投与に、特に局所的皮下、腸内又は経口投与に、より特定すると結腸への送達に適している、態様１１記載の医薬組成物。
（態様１３）
態様１１又は１２記載の医薬組成物、並びに局所投与に適した送達装置、特に皮下、腸内又は経口の送達装置、より特定すると予め充填されたシリンジもしくは無針装置を備える該装置を含む、キット。
（態様１４）
医薬品として使用するための、態様１〜９のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、又は態様１０記載の単離された核酸分子の組合せ、又は態様１１もしくは１２記載の医薬組成物、又は態様１３記載のキット。
（態様１５）
臓器もしくは組織移植片拒絶反応、又は自己免疫疾患、特に関節リウマチ、全身性硬化症、多発性硬化症、１型糖尿病、自己免疫甲状腺炎、全身性紅斑性狼瘡、原発性シェーグレン症候群、並びに炎症性疾患、特に炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、より特定するとクローン病及び潰瘍性大腸炎、及び脳脊髄炎、並びにアレルギー性疾患、及び癌疾患及び移植に関連した疾患及び呼吸器疾患からなる群から選択される疾患の予防又は治療における、態様１４記載の使用のための、態様１〜９のいずれか一項記載の抗体もしくはその抗原−結合断片、又は態様１０記載の単離された核酸分子の組合せ、又は態様１１もしくは１２記載の医薬組成物、又は態様１３記載のキット。
（態様１６）
抗体、その抗原−結合断片又は抗体模倣分子からなる群から化合物を選択する方法であって：
ｉ．  該化合物のＣＤ１２７への、特にヒトＣＤ１２７への、特にヒトＣＤ１２７のドメインＤ１由来及び／又はドメインＤ２の２ｂ部位由来のエピトープ配列への、結合能を試験する工程；
ｉｉ．  該化合物の存在下で、ＩＬ７により誘導されたＩＬ７−Ｒシグナル伝達、特にＳＴＡＴ−５リン酸化の阻害を試験する工程；
ｉｉｉ．  該化合物の存在下で、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼの活性化を試験する工程；
ｉｖ．  該化合物の存在下で、ＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を試験する工程；
ｖ．  該化合物の、少なくともＣＤ１２７の、特にヒトＣＤ１２７の、２ｂ部位の第三のベータシートへの結合能を試験する工程：の少なくとも一つを含む又はこれらからなり、並びに任意に更に：
ｖｉ．  該化合物の存在下で、ＣＤ１２７の、サイトカイン受容体のγｃ共通鎖への結合を試験する工程；
ｖｉｉ．  該化合物の存在下で、ＣＤ１２７の内在化、及び／又はＣＤ１２７のＩＬ７−誘導性の内在化を試験する工程；
ｖｉｉｉ．  該化合物の存在下で、ＴＳＬＰにより誘導された樹状細胞の成熟を試験する工程：の少なくとも一つを含み、
特にここで、ＣＤ１２７へ特異的に結合する化合物が、ＩＬ−７により誘導されたＩＬ−７Ｒシグナル伝達のアンタゴニストであり、且つホスファチジルイノシトール３−キナーゼ及び／又はＥＲＫシグナル伝達経路の活性化を誘導しない化合物が選択される、方法。
【０１６６】
（参考文献）
【化１２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−０１】
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【図５−０２】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１１−１】
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【配列表】
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