(57)【要約】  腎機能の低下を早期ステージであっても検査できる検査方法を提供することを課題とする。  腎機能の検査方法であって、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量を指標として使用する検査方法により、課題を解決できる。
2016194708.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腎機能の検査方法であって、
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量を指標として使用する検査方法。
【請求項２】
前記ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量が少なくなるに従い、腎機能の低下が進んでいると判定する、請求項１に記載の検査方法。
【請求項３】
前記測定した含有量を基準値と比較し、腎機能のステージを判定する請求項１又は２に記載の検査方法。
【請求項４】
前記測定した含有量が、尿中クレアチニン成分の測定結果を用いて補正された値である、請求項１〜３の何れか一項に記載の検査方法。
【請求項５】
予め測定した尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量と腎機能のステージに基づき設定した基準値を格納した記憶手段、
検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量を入力する入力手段、
前記入力手段により入力した前記測定した含有量を前記記憶手段に記憶された基準値と比較することで腎機能のステージを判定する演算手段、
を少なくとも含む腎機能の検査装置。
【請求項６】
前記記憶手段には予め測定した尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量と腎機能のステージに関する情報が少なくとも記憶され、該記憶された情報に基づき基準値を設定及び／又は変更できる請求項５に記載の腎機能の検査装置。
【請求項７】
コンピュータを、請求項５又は６に記載の腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム。
【請求項８】
請求項７に記載のプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腎機能の検査方法及び検査装置、腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム及び記録媒体に関し、特に、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−Ａ１６５ｂ）の含有量を測定し、測定した含有量を指標とすることで、腎機能の低下を早期に検査できる検査方法及び検査装置、並びにコンピュータを腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム及び記録媒体に関する。
【背景技術】
【０００２】
今や国民病の一つである慢性腎臓病（Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｋｉｄｎｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＫＤ）は、進行すると末期腎不全に至り莫大な医療費を要する透析療法が必要となる。我が国においては、成人約８人に１人は慢性腎臓病と推計されており、透析が必要な患者は約４４０人に１人と言われている。【０００３】
また、血液透析患者約３万例を対象とした国際的前向き観察研究ＤＯＰＰＳ（ｔｈｅ  Ｄｉａｌｙｓｉｓ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  Ｓｔｕｄｙ）の報告では、透析患者の２５．３％に末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＤ：Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ）が認められている。近年、腎障害は動脈硬化性疾患の重要な危険因子であることが明らかになっているが、動脈硬化を発症基盤とする末梢動脈閉塞性疾患にとっても腎障害は重要な危険因子であり、末梢動脈閉塞性疾患が高率に腎障害に合併することも知られている。【０００４】
慢性腎臓病の重症度（進行度）は、原因、腎機能、尿蛋白をあわせたステージで評価されており、ステージに応じた適切な治療が必要となる。腎機能は、推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）によってＧ１、Ｇ２、Ｇ３ａ、Ｇ３ｂ、Ｇ４、Ｇ５の６つに分類されており、ｅＧＦＲが低下するほど重症となる。初期の分類であるＧ１、Ｇ２の段階ではほとんど自覚症状が無い。【０００５】
一方、Ｇ３ａ以降の分類では、自覚症状が現れ始めるが、Ｇ３ａ以降は専門的な治療が必要となってくる。Ｇ３ａ、Ｇ３ｂの段階では適度な運動、禁煙、節酒、塩分を抑えた食事療法等の日常生活の改善、また、アンジオテンシン受容体拮抗薬（ＡＲＢ）やカルシウム拮抗薬（ＣＣＢ）等の血圧降下薬の処方による血圧の抑制等により回復が見込まれる。しかし、Ｇ４まで進行すると透析療法導入前病態となり、Ｇ５まで進行すると透析療法が必要となり、最終的には腎臓移植等が必要となり、現状では腎機能を正常な状態に回復することは困難である。また、慢性腎臓病における透析療法導入後の生命予後はきわめて不良である。そのため、慢性腎臓病の治療には、早期の発見が非常に重要となっている。【０００６】
慢性腎臓病の検査方法としては、非侵襲的な採取方法で得られる生体サンプルである尿中のβ２ミクログロブリン、腎臓の糸球体と呼ばれる部位で再吸収されずに尿中に排出された微量な血清アルブミン（以下、「微量アルブミン」と記載することがある。）をバイオマーカーとして検査する方法が知られている（非特許文献１〜３参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｊ．  Ｇｌａｓｓｏｃｋ．，“Ｉｓ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎｕｒｉａ  ａ  Ｒｅｌｅｖａｎｔ  Ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ？”，  Ｃｕｒｒ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ  Ｒｅｐ．  ２０１０，１２（５）：３６４−３６８
【非特許文献２】Ｙｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｔｏ  ｄｅｔｅｃｔ  ａｃｕｔｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ  ｃｅｎｔｅｒ．”，  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｎｅｐｈｒｏｌ（２０１１）２６：２６７−２７４
【非特許文献３】Ｊｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｕｒｉｎａｒｙ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｊｕｒｙ：  ａｎ  ｉｎ−ｄｅｐｔｈ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ．”，  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  （２０１２）０：１−２０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記のとおり、慢性腎臓病は早期に発見することが重要である。しかしながら、β２ミクログロブリンは尿細管障害にとっては鋭敏なマーカーではあるが、酸性尿中では特に不安定となる。そのため、臨床現場では随意尿を複数回評価して最も高い値を採用する等の工夫が必要であり、検査方法が煩雑であるという問題がある。更に、悪性腫瘍などによるβ２ミクログロブリン産生によっても尿中濃度が増加するという問題がある。一方、尿中の微量アルブミンは、腎臓の中にある濾過膜の機能が悪くなると、濾過し切れなくなった蛋白質が僅かずつ漏れ出す。そのため、尿蛋白に占めるアルブミンをごく微量の内に測定することで腎機能の異常を評価できるが、感度に問題がある。以上のとおり、β２ミクログロブリン、微量アルブミンをバイオマーカーとした場合、腎機能がある程度悪くなった状態になるまで評価をし難いという問題がある。そのため、非侵襲的な生体サンプルである尿を用いて、早期の慢性腎臓病を感度よく検出できる検出方法が望まれているが、現状では感度よく検出できるバイオマーカーは知られていない。【０００９】
本発明は、上記従来の問題を解決するためになされた発明であり、鋭意研究を行ったところ、（１）尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂはｅＧＦＲと相関すること、（２）尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂとｅＧＦＲが相関することから、腎機能の低下を早期の段階で検査できるバイオマーカーとなり得ること、（３）尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量が少なくなるに従い、腎機能が低下していること、（４）ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を基準値と比較することで腎機能のステージを判定できること、（５）腎機能の低下を早期のステージで検査できることから慢性腎臓病の進行が早期の段階で検査できること、を新たに見出し、本発明を完成した。【００１０】
すなわち、本発明の目的は、尿中ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを指標とした腎機能の検査方法及び検査装置、腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム及び記録媒体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、以下に示す、尿中ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを指標とした腎機能の検査方法及び検査装置、腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム及び記録媒体に関する。【００１２】
（１）腎機能の検査方法であって、
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量を指標として使用する検査方法。
（２）前記ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量が少なくなるに従い、腎機能の低下が進んでいると判定する、上記（１）に記載の検査方法。
（３）前記測定した含有量を基準値と比較し、腎機能のステージを判定する上記（１）又は（２）に記載の検査方法。
（４）前記測定した含有量が、尿中クレアチニン成分の測定結果を用いて補正された値である、上記（１）〜（３）の何れか一に記載の検査方法。
（５）予め測定した尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量と腎機能のステージに基づき設定した基準値を格納した記憶手段、
検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量を入力する入力手段、
前記入力手段により入力した前記測定した含有量を前記記憶手段に記憶された基準値と比較することで腎機能のステージを判定する演算手段、
を少なくとも含む腎機能の検査装置。
（６）前記記憶手段には予め測定した尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量と腎機能のステージに関する情報が少なくとも記憶され、該記憶された情報に基づき基準値を設定及び／又は変更できる上記（５）に記載の腎機能の検査装置。
（７）コンピュータを、上記（５）又は（６）に記載の腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム。
（８）上記（７）に記載のプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、非侵襲的な生体サンプルである尿に含まれるＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂをバイオマーカーとすることで、従来のバイオマーカーと比較して腎機能の低下を早期に検査できる。したがって、腎機能の検査が簡単で、且つ、早期ステージの慢性腎臓病患者を発見できるので、適切な治療方法を選択できる。
また、早期ステージの慢性腎臓病患者を発見することで、高額な治療費を要する透析導入患者を減少することができ、医療費を削減することができる。
更に、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量に基づき設定した基準値を格納した記憶手段と、検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を記憶手段に記憶された基準値と比較することで腎機能のステージを判定する演算手段を含む検査装置、コンピュータを腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム及び記録媒体を提供することで、進行が早期の段階の腎機能の検査を自動化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、検査装置の概略を示す図である。
【図２】図２は、本発明の検査装置１を用いて、腎機能のステージ判定を行うための工程を示す図である。
【図３】図３は、実施例１で得られたＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値とｅＧＦＲ値の関係を示す図、及び各ステージに分類された検体数、各ステージの検体のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの平均値、標準偏差、及び標準誤差を表す表である。
【図４】図４は、実施例１で算出した結果に基づき作成したＲＯＣ曲線を表す。
【図５】図５は、比較例１で得られたβ２ミクログロブリン値とｅＧＦＲ値の関係を示す図及び表である。
【図６】図６は、比較例１で算出した結果に基づき作成したＲＯＣ曲線を表す。
【図７】図７は、比較例２で得られた微量アルブミン値とｅＧＦＲ値の関係を示す図及び表である。
【図８】図８は、比較例２で算出した結果に基づき作成したＲＯＣ曲線を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下に、本発明の尿中ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを指標とした腎機能の検査方法及び検査装置、腎機能の検査装置として機能させるためのプログラム及び記録媒体について詳しく説明する。
【００１６】
本発明の腎機能の検査方法は、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を指標としている。ＶＥＧＦ−Ａ（血管内皮細胞増殖因子）は、脈管形成及び血管新生に関与する一群の糖蛋白質として知られている。ＶＥＧＦ−Ａは主に血管内皮細胞表面にある血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）にリガンドとして結合し、細胞分裂や遊走、分化を刺激したり、微小血管の血管透過性を亢進させたりする働きをもつが、その他単球・マクロファージの活性化にも関与することが知られている。また、正常な体の血管新生に関わる他、腫瘍の血管形成や転移など、悪性化の過程にも関与していることが知られている。
【００１７】
一方、ＶＥＧＦ−ＡファミリーであるＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂは、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子の構成要素である８番目のエクソンの末端における特異的なスプライスによって生成された配列が一部異なるアイソフォームとして２００２年に同定されている（Ｄａｖｉｄ  Ｏ．Ｂ.  ｅｔ．ａｌ．，“ＶＥＧＦ１６５ｂ，  ａｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｓｐｌｉｃｅ  Ｖａｒｉａｎｔ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ，  Ｉｓ  Ｄｏｗｎ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ．”，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００２  Ｊｕｌ  １５；６２（１４）：４１２３−３１．参照）。そして、ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂは、ＶＥＧＦ−Ａによって誘発される血管内膜増殖、上皮移動、血管拡張、生体内血管新生、腫瘍成長を抑制する作用があることが知られている。
【００１８】
また、本発明者らは、ＰＡＤ患者では新しい血管を作らせるＶＥＧＦ−Ａ血中濃度が健常人と比較して優位に上昇しているにもかかわらず、下肢組織の虚血が改善されていない問題について、血管新生促進型のＶＥＧＦ−Ａ１６５ａと抑制型のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを区別して測定することで、ＰＡＤ患者においてＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂが上昇しており、このことが血管形成不全を起こしている一因であることを明らかにしている（Ｒ．  Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ．  Ａｌ．，“Ａｎ  ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ｏｆ  ＶＥＧＦ−Ａ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ”，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０，  Ｐ．１４６４−１４７１、（２０１４））。しかしながら、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを腎機能の検査用のバイオマーカーとして使用することは知られていない。
【００１９】
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量は、公知の蛋白質の定量方法により定量すればよい。例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ抗体を用いて、ＥＬＩＳＡ法（酵素免疫測定法）、ウェスタンブロット（ＷＢ）、免疫沈降−ウェスタンブロット（ＩＰ−ＷＢ）法等で定量すればよい。また、ＬＣ−ＭＳ等で定量してもよい。
【００２０】
ｅＧＦＲは、
ｅＧＦＲ（ｍｌ／分／１．７３ｍ2）＝１９４×Ｃｒ-1.094×年齢-0.287（女性は×０．７３９）、
の式で算出することができる。上記式中のＣｒは血清クレアチニンを表し、市販キット等を用いて測定すればよい。
【００２１】
測定した結果の感度・特異度は、ＲＯＣ曲線（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ  ｃｕｒｖｅ）により確認することができる。ＲＯＣ曲線とは、スクリーニング検査等の精度の評価や従来の検査と新しい検査の比較を行う際に用いられ、どの範囲でカットオフポイント（ｃｕｔ−ｏｆｆ  ｐｏｉｎｔ）を取るかを示す手法である。カットオフポイントをどこに取るかで、ある状態（疾患）にある者とない者を区別する検査の能力を視覚的に示すことが可能となる。ＲＯＣ曲線は、縦軸を真の陽性率（特異度）、横軸を偽陽性率（１−特異度）としてプロットする。描いた曲線から、どのカットオフポイントを採用するかは、疾患の重症度や検査の位置づけ、その他種々の条件より決定される。しかし、カットオフポイントを偽陽性率の低い点にとると、正常者で陽性となる者は減るが、有疾病者を多く除いてしまい、逆に感度を高めると偽陽性率が高くなる。異なる検査の優劣を判定する場合は、この曲線がより左上方に位置するほど優れていると判断できる。例えば、従来法検査のＲＯＣ曲線に比べて新しい検査法の曲線が左上方にあれば、新しい検査はより精度が高く優れていると判断され得る。ＲＯＣ曲線は、測定結果を公知のソフトを用いて解析すればよい。
【００２２】
本発明においては、測定した尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を基準値と比較することで、腎機能の低下（ステージ）を判定することができる。ところで、「ＣＫＤ診療ガイド２０１２年版」において、慢性腎臓病は、腎機能の一つの評価基準であるＧ１〜Ｇ５の内Ｇ３ａ以降のステージと定義されている。つまり、本発明の腎機能の検査方法及び検査装置を用いて腎機能を検査した結果、Ｇ３ａ以降のステージと判定された場合は慢性腎臓病と判定することができる。そのため、本発明の腎機能の検査方法及び検査装置は、特段の変更なく慢性腎臓病の検査方法及び検査装置としても用いることができる。したがって、本発明において「腎機能の検査方法及び検査装置」とは、「慢性腎臓病の検査方法及び検査装置」をも意味するものである。なお、「ＣＫＤ診療ガイド２０１２年版」において、Ｇ１〜Ｇ５及び慢性腎臓病は上記に示した式で計算されるｅＧＦＲ値により、以下の６つのステージに分類されている。
【００２３】
１．Ｇ１（９０≦ｅＧＦＲ）
腎機能は正常または高値と推定され、慢性腎臓病ではない。
２．Ｇ２（６０≦ｅＧＦＲ＜９０）
腎機能は正常または軽度に低下していると推定されるが、慢性腎臓病ではない。
３．Ｇ３ａ（４５≦ｅＧＦＲ＜６０）
腎機能は軽度〜中等度に低下していると推定され、慢性腎臓病が疑われる。
４．Ｇ３ｂ（３０≦ｅＧＦＲ＜４５）
腎機能は中等度〜高度に低下していると推定され、慢性腎臓病が強く疑われる。
５．Ｇ４（１５≦ｅＧＦＲ＜３０）
腎機能は高度に低下していると推定され、慢性腎臓病であり、腎機能低下によって生じる様々な異常（貧血、ミネラル異常、骨の異常など）を合併している可能性が高い。
６．Ｇ５（ｅＧＦＲ＜１５）
末期腎不全と推定される。透析治療などを要する直前の状態を示す。
【００２４】
測定したＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量は、測定した値をそのまま用いてもよいが、尿中クレアチニン成分の測定結果を用いて補正した値であってもよい。一般的に尿中成分濃度は食事や水分摂取、発汗などの影響を受け、そのときの尿量によって大きく変動する。すなわち尿の濃さによって成分濃度が異なる可能性がある。一方、尿中クレアチニンはクレアチニンの産生が筋肉の量に依存することから、一個体において疾患にかかわらずほぼ一定であると考えられている。そのため、尿中排泄物質の検査においては誤差を回避するため、クレアチニン１ｇ当りの量により目的とする尿中排泄物質の量を補正する手法が一般的に用いられており、これによりクレアチニン単位グラム当たりの尿中排泄物質を比較することが可能になる。
【００２５】
本発明においては、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量とｅＧＦＲ値とが相関することから、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を指標として使用することで腎機能（慢性腎臓病）を検査できることを新たに見出している。そのため、同一の検査対象者の場合、定期的に尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量の低下の有無により腎機能の低下（慢性腎臓病の進行）が進んでいるか否か判定することができる。
【００２６】
また、（１）予め多くの慢性腎臓病患者及び健常者の尿を集めて尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定し、測定した含有量と腎機能のステージに基づき設定した基準値を記憶手段に格納しておき、検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を基準値と比較することで、腎機能（慢性腎臓病）のステージの判定を行う腎機能（慢性腎臓病）の検査装置（以下、単に「検査装置」と記載することがある。）を提供することもできる。
【００２７】
図１は、検査装置の概略を示す図である。検査装置１は、入力手段２、基準値を格納した記憶手段３、入力手段２により入力した検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を記憶手段３に記憶された基準値と比較することで腎機能のステージを判定する演算手段４、制御部５及びプログラムメモリ６を少なくとも含んでいる。また、図示しない表示手段及び／又はプリンター等、判定結果をアウトプットするためのデバイスを含んでいてもよい。
【００２８】
入力手段２は、検査装置１に検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量の情報を入力できれば特に制限はなく、キーボード、ＵＳＢ等が挙げられる。また、入力手段２はインターネット回線を使用しても良い。例えば、インターネット回線を用いて遠隔地の病院で取得した測定結果の情報を検査装置１に送信・入力し、インターネット回線を通じて判定結果を送付することで遠隔地の病院の患者に対しても適切な腎機能（慢性腎臓病）のステージ判定を実施することができる。また、尿サンプル中の成分を分析できる自動分析装置と検査装置１を接続し、自動分析装置による分析結果を検査装置１に自動的に入力してステージ判定することで、尿サンプルの分析と判定を自動化してもよい。
【００２９】
記憶手段３には、上記のとおり、基準値が記憶されていれば特に制限は無い。なお、基準値は疾患の重症度や検査の位置づけ、その他種々の条件より変更可能な値である。したがって、記憶手段３には、多くの慢性腎臓病患者及び健常者の尿から得られたＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ、ｅＧＦＲ及び血清クレアチニンの含有量、腎機能のステージ等の情報も格納しておき、必要に応じてそれら情報に基づき基準値を適宜設定及び／又は変更できるようにしてもよい。なお、基準値は腎機能（慢性腎臓病）が判定できれば特に制限は無い。例えば、単一の基準値を設定し、検査対象者のステージがＧ３ａ以上であるか否か、Ｇ４以上であるか否か等の判定をしてもよい。また、基準値を複数設け、検査対象者がＧ３ａ、Ｇ５等、どのステージに該当するのか判定してもよい。
【００３０】
演算手段４は、入力手段２により入力された含有量の情報を記憶手段３に記憶されている基準値と比較することで、腎機能（慢性腎臓病）のステージを判定することができる。プログラムメモリ６には、例えば、コンピュータを図１に示す検査装置１として機能させるためのプログラムが格納されている。このプログラムが制御部５により読み出され実行されることで、入力手段２、記憶手段３及び演算手段４の動作制御が行われる。プログラムは、予めコンピュータに記憶しておいても良いし、記録媒体に基準値及び／又は多くの患者及び健常者の尿から得られたＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ、ｅＧＦＲ及び血清クレアチニンの含有量、腎機能のステージ等の情報と共に記録され、インストール手段を用いてプログラムメモリ６に格納されるようにしてもよい。
【００３１】
図２は、本発明の検査装置１を用いて、腎機能（慢性腎臓病）のステージ判定を行うための工程を示す図である。プログラムメモリ６に格納されたプログラムが制御部５に読み出されて実行し、先ず、入力手段２により、検査対象者の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量の情報を入力する（Ｓ１００）。なお、上記のとおり、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量は必要に応じて尿中クレアチニンで補正した値でもよい。次に、入力手段２により入力されたＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量の情報を、記憶手段３に記憶されている基準値と比較する（Ｓ１１０）。そして、判定した腎機能のステージを表示する（Ｓ１２０）。なお、判定は腎機能のステージとして判定してもよいし、慢性腎臓病のステージとして判定（Ｇ１、Ｇ２の場合は慢性腎臓病ではないと判定）してもよい。表示方法は、コンピュータの表示手段に表示してもよいし、紙等にプリントアウトしてもよい。
【００３２】
以下に実施例を掲げ、本発明を具体的に説明するが、この実施例は単に本発明の説明のため、その具体的な態様の参考のために提供されているものである。これらの例示は本発明の特定の具体的な態様を説明するためのものであるが、本願で開示する発明の範囲を限定したり、あるいは制限することを表すものではない。
【実施例】
【００３３】
実施例及び比較例で用いた検体、尿中成分の測定、測定結果の解析方法は以下のとおりである。
＜臨床検体＞
名古屋大学医学部附属病院生命倫理委員会承認（承認番号：１０３８）のもと、当院臨床検査部門で保管している残尿検体を使用した。本実施例では、残尿６２検体を用いた。【００３４】
＜尿中ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量の測定＞
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量は、Ｈｕｍａｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−Ａ１６５ｂ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ社：ＭＢＳ７２０１３２）を用いて測定した。【００３５】
＜血清クレアチニン、尿クレアチニン、尿中微量アルブミンおよび尿中β２ミクログロブリン測定＞
血清クレアチニン、尿クレアチニンは、血液・尿検査用クレアチニンキット（シグナスオート  ＣＲＥ：（株）シノテスト)、
尿中微量アルブミンは、尿中アルブミン測定用「セロテック」ＴＩＡ−ＡＬＢＧ（（株）セロテック）、
尿中β２ミクログロブリンは、ベータ２−マイクログロブリンキット  ＢＭＧ−ラテックスＸ１「生研」（（株）デンカ生研）、
を使用し、日立自動分析装置ＬＡＢＯＳＰＥＣＴ００８（（株）日立ハイテクフィールディング）を用いて含有量を測定した。【００３６】
＜測定結果の尿クレアチニン補正＞
測定した尿中の成分は、同じ尿中の尿クレアチニンの測定結果を用い、以下の補正を行った。
・ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値
尿クレアチニン１ｇ当たりのＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量（ｎｇ）とした。
・微量アルブミン値
尿クレアチニン１ｇ当たりの微量アルブミンの含有量（ｍｇ）とした。
・β２ミクログロブリン値
尿クレアチニン１ｇ当たりのβ２ミクログロブリンの含有量（μｇ）とした。【００３７】
＜ＲＯＣ曲線による感度・特異度検定＞
ＲＯＣ曲線は、統計解析用ソフトＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を用いて作成した。統計学的手法は、独立２群間の差を検定するためにマン・ホイットニー検定を用いた。ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとした。【００３８】
＜ｅＧＦＲの算出＞
ｅＧＦＲは、血清クレアチニンの測定値を用い
ｅＧＦＲ（ｍｌ／分／１．７３ｍ2）＝１９４×Ｃｒ-1.094×年齢-0.287（女性は×０．７３９）、
の式で算出した。【００３９】
＜腎機能の評価＞
算出したｅＧＦＲの値に基づき、腎機能を、Ｇ１（９０≦ｅＧＦＲ）、Ｇ２（６０≦ｅＧＦＲ＜９０）、Ｇ３ａ（４５≦ｅＧＦＲ＜６０）、Ｇ３ｂ（３０≦ｅＧＦＲ＜４５）、Ｇ４（１５≦ｅＧＦＲ＜３０）、Ｇ５（ｅＧＦＲ＜１５）の６つのステージに分類した。【００４０】
＜実施例１＞
上記の方法により、残尿６２検体中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値及びｅＧＦＲ値を算出した。次いで、ｅＧＦＲ値に基づき６２検体をＧ１、Ｇ２、Ｇ３ａ、Ｇ３ｂ、Ｇ４、Ｇ５に分類するとともに、ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値をプロットした。図３は、実施例１で得られたＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値とｅＧＦＲ値の関係を示す図である。各ステージの横棒は、上から順に上位四位点、中央値、下位四分位点を表す。また、Ｇ２〜Ｇ５に記載されているｐ値は、それぞれ、Ｇ１と比較した値である。図３のプロットの下の表は、Ｇ１〜Ｇ５の各ステージ分類された検体数、各ステージの検体のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの平均値、標準偏差、及び標準誤差を示している。また、図４は実施例１で算出した結果に基づき作成したＲＯＣ曲線を表す。【００４１】
＜比較例１＞
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値に代え、β２ミクログロブリン値を用いた以外は実施例１と同様の手順でプロットし、図５に示すβ２ミクログロブリン値とｅＧＦＲ値の関係を示す図及び表を作成した。また、図６は比較例１で算出した結果に基づき作成したＲＯＣ曲線を表す。【００４２】
＜比較例２＞
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂ値に代え、微量アルブミン値を用いた以外は実施例１と同様の手順でプロットし、図７に示す微量アルブミン値とｅＧＦＲ値の関係を示す図及び表を作成した。また、図８は比較例２で算出した結果に基づき作成したＲＯＣ曲線を表す。【００４３】
図３に示すように、実施例１の尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量と腎機能（慢性腎臓病）のステージを分類する際の指標であるｅＧＦＲは相関関係があることが明らかとなった。そして、腎機能が低下するほど、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量が減少することも明らかとなった。【００４４】
また、図４のＲＯＣ曲線が示すようにＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを指標とした場合、Ｇ１ｖｓＧ２のｐ値は０．３５５９で有意差は認められなかった。一方、Ｇ１ｖｓＧ３ａではＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量のカットオフ値を＜１８６．１ｎｇ／ｇＣｒとした際のｐ値は０．００１で統計学的に有意であった。また、Ｇ１ｖｓＧ３ｂではＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量のカットオフ値を＜１８７．９ｎｇ／ｇＣｒとした際のｐ値は０．０１０１で統計学的に有意であった。更に、検査で陽性になった時、その結果がどれだけ尤もらしいかを表す指標である尤度比（感度／（１−特異度））は、Ｇ１ｖｓＧ３ａ及びＧ１ｖｓＧ３ｂの何れも７．５であった。臨床検査の分野において、この値は有用性が高いと判断できる数値である。以上の結果より、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を指標とすることで、腎機能がＧ３ａ以上の患者（早期の慢性腎臓病の患者）を高い感度及び特異性で検査できることが明らかとなった。【００４５】
一方、β２ミクログロブリン値を指標とした比較例１では、図５及び図６に示すように、慢性腎臓病が進行している腎機能がＧ４又はＧ５ステージの場合は、ＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂよりむしろ感度及び特異性は高かったが、Ｇ３ａやＧ３ｂステージの場合は検出ができなかった。また、微量アルブミン値を指標とした比較例２では、図７及び図８に示すように、Ｇ４又はＧ５段階でも感度及び特異性は低く、Ｇ３ａやＧ３ｂステージの場合は検出ができなかった。更に、図４、図６、図８に示すＲＯＣ曲線の比較から明らかなように、図４に示すＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂを指標として用いた際のＧ３ａ、Ｇ３ｂのＲＯＣ曲線は、β２ミクログロブリン又は微量アルブミンを指標として用いたＧ３ａ、Ｇ３ｂのＲＯＣ曲線より、左上方に位置していた。【００４６】
以上の結果より、尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂは、従来から使用されてきた慢性腎臓病のバイオマーカーであるβ２ミクログロブリンや微量アルブミンと比較して、腎機能がＧ３ａのステージ、つまり、慢性腎臓病の進行が早期の段階で検出するためのバイオマーカーとしてより精度が高く、優れているということがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
尿中のＶＥＧＦ−Ａ１６５ｂの含有量を測定することで、腎機能がＧ３ａのステージ、つまり、慢性腎臓病の進行が早期の段階で、感度及び特異性よく検査できる。したがって、慢性腎臓病患者の適切な治療ができることから医療産業にとって有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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