(57)【要約】  本発明は、ラパマイシン又はその誘導体の酸化や分解に伴う有効成分含量の低減を抑制し、長期安定性が確保でき、且つ安全性が高い医薬組成物を提供することを課題とする。本発明においては、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤において、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を用いることでラパマイシン又はその誘導体の酸化又は分解が抑制できることを見出し、発明を完成させるに至った。該ラパマイシン又はその誘導体と、Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩は、これらを含有する溶液を調製した後、溶媒を除去することにより調製される固体混合物であることがより好ましい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する医薬組成物。
【請求項２】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去することにより調製される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１である請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を０．００１〜２０．０質量部含む、請求項１〜３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
セルロース誘導体及び／又は糖類を含む請求項１〜４の何れか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか一項に記載の医薬組成物を含有する医薬製剤。
【請求項７】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物の製造方法。
【請求項８】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、前記溶液とセルロース誘導体及び／又は糖類を混合して、溶媒を除去する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の製造方法。
【請求項９】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去することによりラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物を得る工程、並びに前記医薬組成物にセルロース誘導体及び／又は糖類を添加する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラパマイシン又はその誘導体の安定性を向上させた医薬製剤組成物に関する。ラパマイシン又はその誘導体は、酸素、光及び水分に対して非常に不安定であり、保存安定性に課題がある。本発明は、そのような化合物に対する保存安定性を、生体内投与を考慮した安全性に優れた安定化剤によって向上させた医薬製剤組成物に関する技術である。
【背景技術】
【０００２】
ラパマイシン（シロリムス）は、放線菌の代謝産物から見出されたマクロライド系抗生物質であり、免疫抑制作用を有することが知られている。ラパマイシンは細胞の分裂や増殖、生存などを調節する哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ；ｍＴＯＲ）の阻害作用を有する。このｍＴＯＲは、増殖因子や栄養素などによる刺激により蛋白質の合成を調節する主要なセリン・スレオニンキナーゼであり、細胞の成長、増殖、生存及び血管新生を調節することが知られている。そこで、ラパマイシンのｍＴＯＲ阻害作用に着目して、その誘導体合成が試みられ、エベロリムスとテムシロリムスが抗腫瘍剤として見出されている。【０００３】
ラパマイシン又はその誘導体を含む医薬品を提供するための医薬製剤が報告されている。特許文献１は、ラパマイシン類、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び乳糖等の混合物を含む溶液を調製し、溶媒溜去することで得られる固体分散体を製剤化することを記載している。また、特許文献２には、ラパマイシン類であるエベロリムス、崩壊剤であるクロスポビドン、コロイド状二酸化ケイ素及び乳糖を含有する錠剤が記載されている。【０００４】
ラパマイシン又はその誘導体は、酸化に対して非常に不安定な物性であることが知られている。そこで、ラパマイシン類を有効成分とする医薬品製剤には、抗酸化剤が添加されている。例えば、ラパマイシン製剤（登録商標  ラパリムス）及びテムシロリムス製剤（登録商標  トーリセル）ではトコフェロールが添加されている。また、エベロリムス製剤（登録商標  アフィニト−ル及びサーティカン）には、合成抗酸化剤であるジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）が使用されている。【０００５】
ラパマイシン誘導体の抗酸化剤を用いた安定化方法について、特許文献３では、エベロリムスと抗酸化剤であるＢＨＴを含む混合溶液を調製し、その後溶媒を除去することで、安定化されたエベロリムス固体が得られることが報告されている。なお、この特許文献３では、抗酸化剤としてＢＨＴ、トコフェロール及びアスコルビン酸を挙げている。
しかしながら、抗酸化剤であるＢＨＴは癌原性や生殖毒性が発現するとの報告があり、使用量が制限される化学物質である、一方、トコフェロールやアスコルビン酸は、安全性はＢＨＴよりも高いものの、その抗酸化力は合成抗酸化剤のＢＨＴより劣るため、その抗酸化作用に基づくラパマイシン類の安定性確保には限度がある。【０００６】
その他の医薬品用添加剤における抗酸化剤として、アスコルビン酸の脂溶性誘導体であるアスコルビン酸パルミチン酸エステル、アスコルビン酸ステアリン酸エステル等が知られている。また、キレート剤であるクエン酸やエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を適用させることが知られている。しかしながら、これらをラパマイシン又はその誘導体製剤に適用した場合、ラパマイシン又はその誘導体の分解抑制効果が十分ではなく、場合によっては分解を促進することがある。【０００７】
特許文献４は、エベロリムスのエタノール溶液をヒプロメロース等の水溶性高分子に添加し造粒することで固体分散体を調製して、抗酸化剤を用いずに安定なエベロリムス組成物が得られることを報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表平１１−５０９２２３号公報
【特許文献２】特表２００５−５０７８９７号公報
【特許文献３】特表２００２−５３１５２７号公報
【特許文献４】国際公開ＷＯ２０１３／０２２２０１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤に用いる、ラパマイシン又はその誘導体の酸化や分解に伴う有効成分含量の低減を抑制し、長期安定性が確保でき、且つ安全性が高い医薬組成物及び医薬製剤を提供することである。本発明の別の目的は、長期安定性が確保でき、且つ安全性が高いラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物及び医薬製剤の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤において、処方する抗酸化剤化合物を至適なｐＨ範囲に設定して用いることで、ラパマイシン又はその誘導体の分解を長期に亘り安定化できることを見出した。すなわち、抗酸化剤化合物としてアスコルビン酸及び／又はキレート剤の適当な塩を調製して適用することで、ラパマイシン又はその誘導体の安定化効果を長期間持続させることを達成した。すなわち、本願は以下［１］〜［９］の発明を要旨とする。
［１］  （Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する医薬組成物。
本発明では、ラパマイシン又はその誘導体に対して、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有させた医薬組成物とすることでラパマイシン又はその誘導体の安定性が向上した組成物を調製することができる。
［２］  （Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去することにより調製される前記［１］に記載の医薬組成物。
ラパマイシン又はその誘導体と、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の混合態様としては、前記（Ａ）及び（Ｂ）を含有する溶液を調製した後、そこから得られる固体混合物とすることが好ましい。このような固体混合物は、ラパマイシン又はその誘導体とアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩とが分子レベルで会合した混合物であり、化学構造体や特性等で表すことが困難である。そこで、本発明に係る（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する医薬組成物のより詳細な態様を、前記［２］で示される製造方法により特定されるラパマイシン又はその誘導体、とアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する固体混合物として表すことが適当であり、発明の明確性の要件を充足しているものと考える。
［３］  （Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１である前記［１］又は［２］に記載の医薬組成物。
［４］  更に、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を０．０００１〜２０．０質量部含む、前記［１］〜［３］の何れか一項に記載の医薬組成物。
［５］  セルロース誘導体及び／又は糖類を含む前記［１］〜［４］の何れか一項に記載の医薬組成物。
［６］  前記［１］〜［５］の何れか一項に記載の医薬組成物を含有する医薬製剤。【００１１】
また、本願はラパマイシン又はその誘導体とアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する医薬組成物の製造方法も発明の要旨に含まれる。
［７］  （Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物の製造方法。
上記製造方法により、ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が分子レベルで会合した固体混合物を調製することができる。更に（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩以外の抗酸化剤を用いる場合は、溶液調製時に添加しても良く、該固体混合物に対して添加しても良い。
［８］  （Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、前記溶液とセルロース誘導体及び／又は糖類を混合して、溶媒を除去する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の製造方法。
［９］  （Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去することによりラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物を得る工程、並びに前記医薬組成物にセルロース誘導体及び／又は糖類を添加する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の製造方法。
上記［８］又は［９］の製造方法のように、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の調製において、医薬添加剤として用いるセルロース誘導体及び／又は糖類は、ラパマイシン又はその誘導体とアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩とが分子レベルで会合した固体混合物調製段階で添加しても良く、該固体混合物を調製した後に添加しても、そのどちらでも良い。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、ラパマイシン又はその誘導体の酸化や分解に伴う有効成分含量の低減を抑制し、長期安定性が確保でき、且つ安全性が高いラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物を提供することができる。すなわち、アスコルビン酸若しくはその誘導体、又はクエン酸やＥＤＴＡ等のキレート剤のような酸性抗酸化剤を至適ｐＨ範囲に設定した適当な塩を調製してこれを抗酸化剤として用いることで、ラパマイシン又はその誘導体の安定化効果を長期間持続させることを達成できる。更に本発明の医薬組成物及び医薬製剤は、安全性が保証された添加剤を用いた製剤処方であり、癌原性や生殖毒性が懸念されるＢＨＴの使用を回避しており、安定性と安全性を確保したラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の医薬組成物は、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を用いることを特徴とする。以下にその詳細を説明する。
【００１４】
本発明は、有効成分として（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体を含有する。
ラパマイシン（一般名  シロリムス）は、イースター島の土壌から分離された放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  Ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓの代謝産物から単離されたマクロライド骨格を有する化合物である。
【００１５】
ラパマイシン誘導体とは、ラパマイシンを母格として化学修飾を施したものを指す。ラパマイシン誘導体としては、例えば、１６−Ｏ−置換ラパマイシン（例えばＷＯ９４／０２２１３６を参照）、４０−Ｏ−置換ラパマイシン（例えばＵＳ５２５８３８９、ＷＯ９４／０９０１０を参照）、カルボン酸エステル置換ラパマイシン（例えばＷＯ９２／０５１７９を参照）、アミド置換ラパマイシン（例えばＵＳ５１１８６７７を参照）、フッ素置換ラパマイシン（例えばＵＳ５１００８８３を参照）、アセタール置換ラパマイシン（例えばＵＳ５１５１４１３を参照）等が挙げられる。本発明のラパマイシン又はその誘導体は、これらの化合物に限定されるものではないが、適用する好ましい化合物として挙げることができる。
ラパマイシン誘導体としては、ラパマイシンのシクロヘキシル基の４０位ヒドロキシル基がヒドロキシアルキル基、ヒドロキシアルコキシアルキル基、アシルアミノアルキル基及びアミノアルキル基、ヒロドキシ置換アシル基で置換されている４０−Ｏ−置換ラパマイシン誘導体が好ましい。より好ましいラパマイシンとしては、４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)ラパマイシン（エベロリムス）であり、４０−Ｏ−［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチル］プロパノエート］ラパマイシン（テムシロリムス）である。
【００１６】
本発明の（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体としては、ラパマイシン（シロリムス）、エベロリムス、テムシロリムスを用いることが好ましい。
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体は、医薬品として用いることができる品質レベルの化合物を用いることが好ましい。
【００１７】
本発明に使用する（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩におけるアスコルビン酸とは、ビタミンＣとしても知られレモンやグレープフルーツ、キウイフルーツ、イチゴ等のフルーツやホウレンソウやジャガイモ等の野菜等、自然界に広く普遍的に存在する、化学名として（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フラン−２（５Ｈ）オンで表される化合物である。
アスコルビン酸誘導体としては、アスコルビン酸の立体異性体であるエリソルビン酸又はアスコルビン酸に脂肪酸をエステル結合させたアスコルビン酸脂肪酸エステルが挙げられる。アスコルビン酸脂肪酸エステルとしては、アスコルビン酸に脂肪酸をエステル結合を介して導入した構造を有するものであれば特に限定することなく用いることができる。
アスコルビン酸にエステル結合させる脂肪酸としては、炭素数（Ｃ２〜Ｃ３０）のモノカルボン酸が挙げられる。該脂肪酸は飽和脂肪酸であっても良く、１以上の二重結合を含む不飽和脂肪酸であってもよい。該飽和脂肪酸としては、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、エイコサン酸、ドコサン酸等が挙げられる。
また前記不飽和脂肪酸としては、クロトン酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等が挙げられる。
アスコルビン酸脂肪酸エステルとしては、医薬品添加物や食品添加物として用いられているものが好ましく、例えばアスコルビン酸ステアリン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル等が挙げられる。
本発明において、（Ｂ）に係るアスコルビン酸又はその誘導体は、それぞれを単独で用いても良く、併用して用いても良い。
【００１８】
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等の無機塩や、アンモニア、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン等のアミン塩が挙げられる。
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩は、アスコルビン酸又はその誘導体に対して、その塩の共役塩基成分を共存させて本発明に係る医薬組成物中において塩を調製する態様で用いても良い。前記共役塩基としては、水溶液とした場合にアルカリ性を呈する化合物であれば特に限定されるものではなく、無機塩を調製する場合は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸塩等、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の酢酸塩、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等のリン酸塩等を添加すれば良い。また、アミン塩を調製する場合は、アンモニア、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン等のアミン化合物を用いることが挙げられる。
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩及び／又はアンモニウム塩、メグルミン塩等のアミン塩が好ましい。これらの塩は、前述の通り、アスコルビン酸若しくはその誘導体とアルカリ金属水酸化物や炭酸塩又はアミンといった、その共役塩基成分を含む化合物をアスコルビン酸若しくはその誘導体と共存させた態様であっても良い。
【００１９】
本発明は（Ｂ）成分としてキレート剤の塩を用いても良い。該キレート剤としては、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、グルコン酸等のカルボン酸誘導体である酸性キレート剤が挙げられる。キレート剤は、金属イオンを補足することで金属が触媒する酸化反応を抑制する抗酸化作用を有することが知られている。本発明において、キレート剤としては、クエン酸又はＥＤＴＡを用いることが好ましい。より好ましくはクエン酸である。
【００２０】
キレート剤の塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等の無機塩や、アンモニア、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン等のアミン塩が挙げられる。
（Ｂ）キレート剤の塩は、該キレート剤に対して、その塩の共役塩基成分を添加して本発明に係る医薬組成物中において塩を調製する態様で用いても良い。前記共役塩基としては、水溶液とした場合にアルカリ性を呈する化合物であれば特に限定されるものではなく、無機塩を調製する場合は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸塩等、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の酢酸塩、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等のリン酸塩等を添加すれば良い。また、アミン塩を調製する場合は、アンモニア、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン等のアミン化合物を用いることが挙げられる。
（Ｂ）キレート剤の塩としては、クエン酸のナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩及び／又はアンモニウム塩、メグルミン塩等のアミン塩が好ましい。これらの塩は、前述の通り、アスコルビン酸若しくはその誘導体とアルカリ金属水酸化物や炭酸塩又はアミンといった、その共役塩基成分を含む化合物をキレート剤と共存させた態様であっても良い。
【００２１】
本発明における（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩は、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１の範囲にある該塩を用いることが好ましい。すなわち、ラパマイシン又はその誘導体の分解を抑制して長期間に亘り安定性を確保するためには、抗酸化作用を有するアスコルビン酸類やキレート剤を至適ｐＨ範囲に設定して用いることが望ましい。好ましくは、上記測定条件におけるｐＨ範囲が５〜１０である。
（Ｂ）成分のｐＨ測定方法は、該（Ｂ）成分５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を調製し、市販のｐＨメーターを使用して測定すればよく、例えばＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）を用いて測定できる。
【００２２】
当該（Ｂ）成分として、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１の範囲にあるアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩とするためには、酸性を呈するアスコルビン酸若しくはその誘導体又はキレート剤に、塩基性成分を添加して当該ｐＨに調整すれば良い。したがって、ｐＨ４〜１１好ましくはｐＨ５〜１０の該塩をするためには、塩基性成分の塩基性度を調整する方法及び／又は該塩基性成分の添加量を調整する方法により設定することができる。すなわち、（Ｂ）成分としてアスコルビン酸ナトリウム塩を用いる場合、アスコルビン酸ナトリウム又はアスコルビン酸とアスコルビン酸ナトリウムが共存した態様で用いることが好ましい。また、（Ｂ）成分としてクエン酸ナトリウム塩を用いる場合、クエン酸１ナトリウム塩、クエン酸２ナトリウム塩及びクエン酸３ナトリウムからなる塩の１種又はその混合物を用いることが好ましい。
【００２３】
本発明における（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の添加量は、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、好ましくは０．００１質量部以上を用いればよく、より好ましくは０．００５質量部以上を用いればよく、更に好ましくは０．０１質量部以上の使用である。本発明において、アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩はラパマイシン又はその誘導体の安定性を損なう物性はないことから、その使用量の上限は特になく、医薬品として実用可能な使用量において設定されるべきである。
ラパマイシン又はその誘導体の安定性確保と、医薬品添加剤の現実的な使用量を考慮すると、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はクエン酸塩は０．００１〜２０質量部で用いることが好ましい。より好ましくは０．００１〜１０質量部であり、更に好ましくは０．００５〜１．０質量部である。
本発明において、（Ｂ）成分は、アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩又はキレート剤の塩のそれぞれを単独で使用しても良い。アスコルビン酸類とキレート剤は抗酸化作用の機作が異なることから、これらの２種類以上の（Ｂ）成分を併用して用いても良い。２種類以上を併用する場合は、ラパマイシン又はその誘導体の安定性が確保させるように適宜、混合比率を設定して用いることができる。
【００２４】
本発明の医薬組成物は（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の少なくとも２成分が含まれており、両者が混合して存在する態様であれば、特に限定されることなく本発明に含まれる。両者の混合方法としては、固体状態の（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を混合し、任意に混合機等を用いて機械的に混合する方法が挙げられる。その際、適当な溶剤を添加して両者の分散を促進しても良い。該（Ａ）、（Ｂ）を固体状態で混合する場合は、平均粒子径として０．１〜１ｍｍの小さい粒径の粉体又は顆粒状の各成分を用いることが分散性向上の点で有利である。
【００２５】
本発明の医薬組成物において、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の各成分が混合して存在する態様としては、各成分を含有する溶液を調製し、この溶液から溶剤を除去することにより得られる（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する固体混合物であることが好ましい。このような固体混合物は、ラパマイシン又はその誘導体とアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が分子レベルで会合した混合物となっていると考えられ、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩のラパマイシン又はその誘導体に対する安定化効果が最も発揮される混合形態である。
【００２６】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製するために、用いられる溶媒としては、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が共に溶解するものであれば限定されずに用いることができる。例えば、水、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール、３−メチル−１−ブタノール、１−ペンタノール、エチレングリコール、グリセリン、ギ酸、酢酸、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、アニソール、酢酸メチル、酢酸エチル、ギ酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸イソブチル、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジイソプロピルエーテル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、クロロホルム等が挙げられる。また、これらの溶媒は単独で用いても良く、２種類以上の溶媒を用いた混合溶媒でもよい。これらの溶媒に限定されるものではないが、適用する好ましい溶媒として挙げることができる。
該溶媒は後に除去することを考慮すると、温和な条件で溜去することが可能である沸点が１２０℃以下の溶媒を用いることが好ましく、水、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、酢酸ブチル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ペンタン、へプタン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテルが好ましい。
【００２７】
該溶媒の使用量は、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が完全に溶解すれば良く、適宜、使用量を調整することができる。
また、溶液調製において、適宜加温をして（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の溶解を促しても良い。溶液調製時の溶液温度は、特に限定されるものではないが、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体の安定性を考慮して０〜８０℃で溶液を調製することが好ましい。
【００２８】
本発明におけるラパマイシン又はその誘導体、並びにアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液の調製方法としては、ラパマイシン又はその誘導体とアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が共に溶解する方法であれば特に限定されない。例えば、ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩をあらかじめ混合させておき、そこに該成分が溶解する溶媒を添加し溶解させる方法、ラパマイシン又はその誘導体に溶媒を加えて溶解させた溶液と、アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩に溶媒を加えて溶解させた溶液を混合する方法が挙げられる。これらの調製法に限定されるものではないが、適用する好ましい調製法として挙げることができる。
【００２９】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体と（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液から、溶媒を除去する方法としては、溶媒を溜去する方法が挙げられる。溶媒を溜去する方法としては、前記溶液を加熱することで溶媒除去することができるが、その際、減圧条件とすることで温和な温度条件で溶媒を除去することができることから好ましい。また、噴霧乾燥法を用いて溶媒を除去して、固体混合物を得ることができる。
【００３０】
また、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液から、（Ａ）及び（Ｂ）を含有する固体混合物を析出させた後、濾過法により溶媒を除去する方法を採用しても良い。該固体混合物を析出させる方法としては、冷却して晶析を促す、いわゆる再結晶方法や、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の溶液に混和可能であり、且つ（Ａ）及び（Ｂ）が不溶性又は難溶性の晶析用溶媒を添加して晶析する、いわゆる沈殿析出方法が挙げられる。
前記晶析用溶媒としては、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の溶液に対して混和可能で、且つ（Ａ）及び（Ｂ）が不溶性又は難溶性溶媒であれば特に限定することなく適用することができる。該晶析用溶媒としては、水、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ヘキサン、ヘプタン、トルエン等を挙げることができる。晶析用溶媒の種類や使用量は、溶液調製溶媒の種類や量に応じて、適宜、設定して良い。
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含む溶液に、晶析用溶媒を添加し、（Ａ）及び（Ｂ）を含む固体混合物を晶析させ、任意に冷却することにより晶析を促し懸濁液を調製し、濾過法により溶媒を除去することで固体混合物を得ることができる。
【００３１】
本発明の医薬組成物には、ラパマイシン又はその誘導体の安定性を確保する安定化補助剤として、任意にアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩以外の他の抗酸化剤を本発明に係る（Ｂ）成分と組み合わせて用いることができる。
前記他の抗酸化剤としては、ラパマイシン及びその誘導体の安定化効果を示す公知の抗酸化剤を用いることができる。例えば、トコフェロール、亜硝酸、亜硫酸、アルファチオグリセリン、塩酸システイン、ジクロルイソシアヌール酸、ジブチルヒドロキシトルエン、レシチン、チオグリコール酸、チオリンゴ酸、ピロ亜硫酸、ブチルヒドロキシアニソール、１，３−ブチレングリコール、ペンタエリトリトールテトラキス［３−（３，５−ジ−ｔ−ブチル４−ヒドロキシフェニル）プロピオナート］ベンゾトリアゾール、没食子酸イソプロピル、２−メルカプトベンズイミダゾール等が挙げられる。これらの化合物に限定されるものではないが、適用する好ましい化合物として挙げることができる。
前記他の抗酸化剤は、ラパマイシン又はその誘導体の安定性を損なわない程度の量で適宜用いることができる。他の酸化剤を用いる場合の添加量としては、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、他の抗酸化剤は０．０００１〜１０質量部で用いることが好ましい。より好ましくは０．００１〜１．０質量部であり、更に好ましくは０．００５〜１．０質量部である。
【００３２】
前記他の抗酸化剤は、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩の混合物に対して、別途添加して用いられる。また、該（Ａ）と（Ｂ）の溶液から調製される固体混合物に対して該他の抗酸化剤を添加して用いても良い。若しくは、該（Ａ）と（Ｂ）及び該他の抗酸化剤を含有する溶液を調製して、溶媒を除去することにより（Ａ）と（Ｂ）及び他の抗酸化剤を含む固体混合物として用いても良い。
本発明の医薬組成物において抗酸化剤を用いる場合、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体及び（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩、並びに他の抗酸化剤を含有する溶液を調製して、溶媒を除去することにより（Ａ）、（Ｂ）及び他の抗酸化剤を含む固体混合物として用いることが好ましい。該固体混合物を得る方法において、溶媒を除去する方法としては、前述した方法と同様に、溶媒を溜去する方法、晶析して濾過する方法が挙げられる。溶媒を溜去する方法として、噴霧乾燥方法を用いても良い。
【００３３】
本発明の医薬組成物は、セルロース誘導体及び／又は糖類を添加しても良い。これらは、医薬品の製剤を調製するための製剤用添加剤として用いる。
セルロース誘導体としては、医薬品製剤調製において通常用いられている添加剤であれば特に限定されることなく用いることができる。例えば、結晶セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等を挙げることができる。結晶セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いることが好ましい。
【００３４】
また糖類としては、医薬品製剤調製において通常用いられている添加剤であれば特に限定されることなく用いることができる。例えば、アラビノース、イソマルトース、イノシトール、エリスリトール、ガラクトサミン、ガラクトース、キシリトール、キシロース、グルコサミン、グルコース、ゲンチオビオース、コージビオース、ショ糖、セロビオース、ソホロース、ソルビトール、チオグルコース、ツラノース、デオキシリボース、ニゲロース、パラチノース、フコース、フルクトース、マンニトール、マルトース、マンノース、メリビオース、ラクトース、ラムノース、ラミナリビオース、トレハロース等が挙げられる。ラクトース、マンニトール、マルトース、エリスリトール、ソルビトール、フコース、キシリトール、フルクトース、イノシトール、トレハロースを用いることが好ましい。
前記セルロース誘導体及び／又は糖類は、単独で用いても良くこれらを数種類で併用して用いても良い。
【００３５】
セルロース誘導体及び／又は糖類は、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩、及び任意の他の抗酸化剤を含有する医薬組成物に添加して用いられる。
すなわち、セルロース誘導体及び／又は糖類は、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩、及び任意の他の抗酸化剤に対して添加して混合物を調製して用いられる（添加方法１）。また、（Ａ）、（Ｂ）並びに任意の他の抗酸化剤を含む溶液から調製される固体混合物に対して、該セルロース誘導体及び／又は糖類を添加して混合物を調製しても良い（添加方法２）。
これら、セルロース誘導体及び／又は糖類と、（Ａ）、（Ｂ）及び任意の他の抗酸化剤を固体同士で混合する場合、混合機等を用いて機械的に混合処理を施して十分に分散させることが好ましい。
【００３６】
また、別法として、（Ａ）、（Ｂ）及び任意の他の抗酸化剤を含有する溶液と、該セルロース誘導体及び／又は糖類を混合し、この混合物から溶媒を除去することにより（Ａ）、（Ｂ）及び任意の他の抗酸化剤を含む固体混合物とセルロース誘導体及び／又は糖類の混合物として用いても良い（添加方法３）。
前記添加方法３は、（Ａ）、（Ｂ）及び任意の他の抗酸化剤を含む溶液に、セルロース誘導体及び／又は糖類を添加する方法であるが、この場合、該溶液にセルロース誘導体及び／又は糖類が溶解する必要はなく、懸濁液状態であっても良い。この混合体から、溶媒を除去して、（Ａ）、（Ｂ）及び任意の他の抗酸化剤を含む固体混合物とセルロース誘導体及び／又は糖類の混合物を調製することができる。溶媒の除去方法としては、溶媒を溜去する方法が挙げられる。減圧下で溶媒を溜去することが好ましい。また、噴霧乾燥法を用いて溶媒除去する方法を採用しても良い。
前記晶析用溶媒を添加して懸濁液を調製し、濾過により溶媒を除去することにより、（Ａ）、（Ｂ）及び任意の他の抗酸化剤を含む固体混合物とセルロース誘導体及び／又は糖類の混合物を調製することができる。
【００３７】
本発明の医薬組成物は、前述したアスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩、他の抗酸化剤、セルロース誘導体及び糖類の他に本発明の効果を妨げない範囲で、医薬品製剤を調製するために通常の用いられる他の添加剤を含んでいても良い。例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、ｐＨ調整剤、無機塩類、溶剤等を適用しても良い。
賦形剤としては、ラクトース、マルトース、マンニトール、エリスリトール、ソルビトール、フコース、キシリトール、フルクトース、イノシトール、デンプン等を挙げることができる。
崩壊剤としては、カルメロース、クロスポビドン、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、カルメロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム等を挙げることができる。
結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ピプロメロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等を挙げることができる。
滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、タルク、ショ糖脂肪酸エステル等を挙げることができる。
ｐＨ調整剤としては、例えば塩酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、メシル酸、トシル酸、ベシル酸等を挙げることができる。これらの酸性添加剤を主成分として、これにアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩を含んだ緩衝剤を用いても良い。
無機塩類としては塩化カルシウム、塩化ナトリウム、酸化カルシウム、硫酸マグネシウム等が挙げられる。
溶剤としては、通常、水、生理食塩水、５％ブドウ糖又はマンニトール水溶液、水溶性有機溶媒（例えば、グリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモフォア等の単一溶媒又はこれらの混合溶媒）、ポリエチレングリコール類（例えば、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール６００、ポリエチレングリコール４０００等）が挙げられる。
これらの添加剤は、医薬品製剤用途で許容される純度であれば特に制限されることなく用いることができる。これらの添加剤は１種のみを用いても良く、これらの混合物として用いても良い。当該医薬組成物又は医薬製剤を調製する際に、任意に使用される。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、該医薬組成物を含む医薬品として製造することができる。
この医薬品としての製剤形は、錠剤、分散錠、チュアブル錠、発泡錠、トローチ剤、ドロップ剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、ドライシロップ剤、浸剤・煎剤、舐剤、シロップ剤、ドリンク剤、懸濁剤、口腔内崩壊錠、ゼリー剤、等の内用剤、坐剤、パップ剤、プラスター剤、軟膏剤、クリーム剤、ムース剤液、液剤、点眼剤、エアゾール剤、噴霧剤等の外用剤を挙げることができる。これらの製剤形に限定されるものではないが、適用する好ましい製剤形として挙げることができる。
また、本発明の医薬組成物を注射剤として用いる場合、水性注射剤、非水性注射剤、懸濁性注射剤、乳濁性注射剤、用時溶解又は懸濁して用いる製剤形として、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、中心静脈内注射、動脈内注射、脊髄腔内注射等が挙げられる。これらに限定されるものではないが、適用する好ましい製剤形、投与経路として挙げることができる。
【００３９】
本発明の医薬組成物を用いた医薬品は、疾患の治療に適用することができる。適用できる疾患としては、例えば、心臓、肺、複合心肺、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚、角膜等の移植における拒絶反応の抑制、例えば、関節炎、リウマチ疾患、全身性エリテマトーデス、多軟骨炎、硬皮症、ウェゲナー肉芽腫、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブン− ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫炎症性大腸炎、内分泌性眼病、グレーブス病、結節炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝炎、若年性糖尿病(Ｉ 型糖尿病)、ブドウ膜炎、乾燥性角結膜炎、春季角結膜炎、間質性肺線維症、乾癬性関節炎、糸球体腎炎、若年性皮膚筋炎等の自己免疫疾患及び炎症性疾患、喘息、例えば乳癌、腎癌、神経内分泌腫瘍、リンパ増殖性疾患、Ｂ細胞リンパ腺癌、結節性硬化症、増殖性皮膚疾患等の癌や過増殖性疾患等が挙げられる。これらの疾患に限定されるものではないが、適用する好ましい疾患として挙げることができる。
【００４０】
本発明の医薬組成物を用いた医薬品の投与量は、患者の性別、年齢、生理的状態、病態等により当然変更されうるが、例えば成人１日当たり、ラパマイシン又はその誘導体として０．０１〜１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）を投与する。この投与量に限定されるものではないが、適用する好ましい投与量として挙げることができる。
【実施例】
【００４１】
以下、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
なお、本試験例における液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた分析においては、以下の条件にて測定した。
測定カラム：Zorbax Eclipse XDB-C18, Rapid resolution HT, 100mm × 4.6mm, 1.8 μm
検出器：紫外吸光光度計（測定波長278nm）
カラム温度：４５℃
移動相Ａ：０．１％ギ酸，移動相Ｂ：メタノール／アセトニトリル  ＝  ５０／５０
移動相の濃度勾配：【００４２】
【表１】
2017038925.tif 000002
【００４３】
流量：１．５ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ【００４４】
［実施例１］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、無水エタノール  ２００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この溶液にアスコルビン酸ナトリウム塩（扶桑化学工業社製）水溶液（１４０ｍｇ／ｍＬ）１０μＬ加えた。この混合溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、実施例１のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
実施例１の安定化剤として用いたアスコルビン酸ナトリウムの濃度５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ８．４であった。【００４５】
［実施例２］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、無水エタノール  ２００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この溶液にクエン酸水素二ナトリウム（和光純薬工業社製）水溶液（１４０ｍｇ／ｍＬ）１０μＬ加えた。この混合溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、実施例２のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
実施例２の安定化剤として用いたクエン酸水素二ナトリウムの濃度５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ６．３であった。【００４６】
［比較例１］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、ジヒドロキシブチルトルエン（ＢＨＴ、ＭＥＲＣＫ社製）無水エタノール  溶液（１４ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液に無水エタノール  １００μＬを加え希釈後、無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例１のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。 
比較例１の安定化剤として用いたＢＨＴの濃度２．５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：３混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ８．６であった。【００４７】
［比較例２］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、アスコルビン酸（扶桑化学工業社製）無水エタノール  溶液（１４ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液に無水エタノール  １００μＬを加え希釈後、無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例２のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
比較例２の安定化剤として用いたアスコルビン酸の濃度５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ３．６であった。【００４８】
［比較例３］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、クエン酸（純正化学社製）無水エタノール  溶液（１４ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液に無水エタノール  １００μＬを加え希釈後、無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例３のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
比較例３の安定化剤として用いたクエン酸の濃度５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ３．５であった。【００４９】
［比較例４］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、ＤＬ−α−トコフェロール（理研Ｅオイル１０００、理研ビタミン社製）無水エタノール  溶液（１４ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液に無水エタノール  １００μＬを加え希釈後、無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例４のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
比較例１の安定化剤として用いたＤＬ−α−トコフェロールの濃度２．５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：３混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ８．２であった。【００５０】
［比較例５］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、パルミチン酸アスコルビル（和光純薬工業社製）無水エタノール  溶液（１４ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液に無水エタノール  １００μＬを加え希釈後、無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例５のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
比較例５の安定化剤として用いたアスコルビン酸の濃度５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ３．４であった。【００５１】
［比較例６］
試験管にエベロリムス  ７０ｍｇを秤量し、無水エタノール  ２００μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）６３０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）７０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例６のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。【００５２】
[試験例１]
実施例１〜２及び比較例１〜６の方法で得られた医薬組成物約５００ｍｇを褐色サンプル瓶に採取し蓋をしないで、遮光下６０℃／飽和塩化コバルト水溶液にて調湿したデシケータ内に保存した。
保存７日後及び１４日後のエベロリムスの残存量を液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて測定し、各時点におけるエベロリムスの残存率を算出した。なお残存率は以下の式に従い算出した。結果を表２にまとめた
エベロリムス残存率（％）＝（各時点におけるＨＰＬＣ測定エベロリムスピーク面積／粉体秤量値）／（保存前（イニシャル）におけるＨＰＬＣ測定エベロリムスピーク面積／粉体秤量値）×１００【００５３】
【表２】
2017038925.tif 000003
【００５４】
エベロリムスを含有する医薬組成物は、６０℃の加湿条件で、酸化等の分解反応が進み、エベロリムス含量が低下していく。試験例１において、抗酸化剤を含まない製剤である比較例６は、急速にエベロリムス含量が低下していくことが認められた。また、アスコルビン酸等の医薬品の抗酸化剤として汎用される添加剤を用いた製剤である比較例１〜５は、３日後まではエベロリムスに対して安定化効果を示すものもあるが、１４日後にはエベロリムスの含量が急激に低下した。これに対し、本発明のアスコルビン酸ナトリウム又はクエン酸水素二ナトリウムを添加した実施例１および実施例２に係る医薬組成物は、保存試験１４日後においてもエベロリムス含量が高く、安定化効果の持続性が大幅に向上することが明らかとなった。
アスコルビン酸又はクエン酸は抗酸化剤として良く知られているものの、この処方製剤である比較例２又は３は、エベロリムスの保存安定化効果を示さなかった。したがってアスコルビン酸及びクエン酸を抗酸化剤として用いる場合には、ナトリウム塩として用いる必要があることが示された。すなわち、エベロリムスの安定化剤としてアスコルビン酸又はクエン酸を用いるためには、至適なｐＨに設定した該塩として用いることが必要であると考えられる。
現在流通しているエベロリムス製剤（登録商標  アフィニトール及びサーティカン）は、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を処方した製剤である。したがって、ＢＨＴ処方製剤である比較例１の安定性結果が実用安定性の基準に相当する。本発明に係る実施例１及び２は、比較例１と同等以上の安定化効果が認められており、アスコルビン酸ナトリウムを用いた実施例１は驚くべき顕著な安定化効果を奏することが明らかとなった。比較例１で安定化剤として用いているＢＨＴは癌原生や生殖毒性を有するとの報告がなされており、使用量が厳格に制限されて用いられている添加剤である。これに対し、アスコルビン酸塩やクエン酸塩は医薬品や食品用の添加剤として汎用されており、毒性の懸念は低く、使用量の制限も緩やかで安全性が高い添加剤である。したがって、実施例１及び２に係る医薬組成物は、エベロリムスの高い安定化とともに、添加剤に起因する安全性も保証されるものである。【００５５】
［実施例３］
試験管にエベロリムス  ３０ｍｇを秤量し、アスコルビン酸ステアリン酸エステル（東京化成社製）無水エタノール  溶液（５ｍｇ／ｍＬ）１２０μＬおよびメグルミン（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）無水エタノール  溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）６０μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）  ２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）２７０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）３０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、実施例３のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
実施例３の安定化剤として用いたアスコルビン酸ステアリン酸エステル４００ｍｇとメグルミン１００ｍｇを水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液１００ｍＬに溶解したときのｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ５．７であった。【００５６】
［実施例４］
試験管にエベロリムス  ３０ｍｇを秤量し、アスコルビン酸ステアリン酸エステル（東京化成社製）無水エタノール  溶液（５ｍｇ／ｍＬ）１２０μＬおよびメグルミン（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）無水エタノール  溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）１２０μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）  ２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）２７０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）３０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、実施例４のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
実施例４の安定化剤として用いたアスコルビン酸ステアリン酸エステル３３３．３ｍｇとメグルミン１６６．７ｍｇを水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液１００ｍＬに溶解したときのｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ８．５であった。【００５７】
［実施例５］
試験管にエベロリムス  ３０ｍｇを秤量し、アスコルビン酸ステアリン酸エステル（東京化成社製）無水エタノール  溶液（５ｍｇ／ｍＬ）１２０μＬおよびメグルミン（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）無水エタノール  溶液（２．５ｍｇ／ｍＬ）２４０μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）  ２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）２７０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）３０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、実施例５のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。
実施例４の安定化剤として用いたアスコルビン酸ステアリン酸エステル２５０ｍｇとメグルミン２５０ｍｇを水：ＥｔＯＨ＝１：１混合溶液１００ｍＬに溶解したときのｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ９．５であった。【００５８】
［比較例７］
試験管にエベロリムス  ３０ｍｇを秤量し、ジヒドロキシブチルトルエン（ＢＨＴ、ＭＥＲＣＫ社製）無水エタノール  溶液（５ｍｇ／ｍＬ）１２０μＬを加え超音波を１０分間照射し、エベロリムスの溶解を確認した。この混合溶液を無水乳糖（Ｓｕｐｅｒ  Ｔａｂ（登録商標）２１  ＡＮ、  ＤＦＥ  Ｐｈａｒｍａ社製）２７０ｍｇとヒプロメロース（ＴＣ−５  Ｅ  Ｔｙｐｅ、信越化学社製）３０ｍｇを乳鉢に秤量し乳棒で撹拌し混合したところへ、パスツールピペットにて滴下し、乳棒を用いて撹拌した。この粉体をナスフラスコに移し、エバポレーターにて３時間減圧乾燥して、比較例７のエベロリムスを含有する医薬組成物を調製した。 
比較例７の安定化剤として用いたＢＨＴの濃度２．５ｍｇ／ｍＬ（水：ＥｔＯＨ＝１：３混合溶液）におけるｐＨをＭＭ−６０Ｒ（東亜ディーディーケー社製）測定したところ８．６であった。【００５９】
[試験例２]
実施例３〜５及び比較例７の方法で得られた医薬組成物約３００ｍｇを褐色サンプル瓶に採取し蓋をしないで、遮光下６０℃／飽和塩化コバルト水溶液にて調湿したデシケータ内に保存した。
保存１０日後及び１４日後のエベロリムスの残存量を液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて測定し、各時点におけるエベロリムスの残存率を算出した。なお残存率は以下の式に従い算出した。結果を表３にまとめた
エベロリムス残存率（％）＝（各時点におけるＨＰＬＣ測定エベロリムスピーク面積／粉体秤量値）／（保存前（イニシャル）におけるＨＰＬＣ測定エベロリムスピーク面積／粉体秤量値）×１００【００６０】
【表３】
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【００６１】
この結果、実施例３〜５はエベロリムスの分解が抑制されて安定化されており、その安定化効果は継続し、１４日目において比較例７よりも強力であることが認められた。アスコルビン酸ステアリン酸エステルは酸性化合物であるが、アミノ糖であるメグルミンを共存させてｐＨを５〜１０に設定させることにより、ＢＨＴと比較してより安定化効果が高い医薬組成物を提供することができた。
アスコルビン酸ステアリン酸エステル及びメグルミンは医薬品や食品用の添加剤として汎用されており、毒性の懸念は低く、使用量の制限も緩やかで安全性が高い添加剤である。したがって、実施例３〜５に係る医薬組成物は、エベロリムスの高い安定化とともに、添加剤に起因する安全性も保証されるものである。
【手続補正書】
【提出日】平成28年12月9日(2016.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去することにより調製される、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する医薬組成物。
【請求項２】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を、固体混合物の晶析物として含有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１である請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を０．００１〜２０．０質量部含む、請求項１〜３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
セルロース誘導体及び／又は糖類を含む請求項１〜４の何れか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか一項に記載の医薬組成物を含有する医薬製剤。
【請求項７】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物の製造方法。
【請求項８】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、前記溶液とセルロース誘導体及び／又は糖類を混合して、溶媒を除去する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の製造方法。
【請求項９】
（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体、並びに（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を含有する溶液を調製し、溶媒を除去することによりラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬組成物を得る工程、並びに前記医薬組成物にセルロース誘導体及び／又は糖類を添加する工程を含む、ラパマイシン又はその誘導体を含有する医薬製剤の製造方法。
【請求項１０】
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１である、請求項７に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１１】
（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩が、５ｍｇ／ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液におけるｐＨが４〜１１である、請求項８又は９に記載の医薬製剤の製造方法。
【請求項１２】
前記医薬組成物が、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を０．００１〜２０．０質量部含む、請求項７に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１３】
前記医薬組成物が、（Ａ）ラパマイシン又はその誘導体１質量部に対し、（Ｂ）アスコルビン酸若しくはその誘導体の塩及び／又はキレート剤の塩を０．００１〜２０．０質量部含む、請求項８又は９に記載の医薬製剤の製造方法。
【国際調査報告】
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