(57)【要約】  飼料のコストの低減及び安定供給が可能であり、かつ消費者に好まれる卵黄色を呈する卵を得る方法を提供する。具体的には、本発明は、トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する家禽用配合飼料、及び前記配合飼料を用いて所望の卵黄色を呈する卵を取得する方法を提供する。本発明により、季節及び気候に左右されることなく低価格で安定供給が可能な配合飼料の提供が可能となると共に、消費者の嗜好に合った卵黄色を呈する家禽卵をより低価格で提供することができる。
2016194789.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する家禽用配合飼料。
【請求項２】
前記細菌がパラコッカス（Paracoccus）属細菌である、請求項１記載の配合飼料。
【請求項３】
コメ、コムギ、オオムギ、ダイズ、マイロ、及び／又はこれらに由来する原料を10％以上含有する、請求項１又は２記載の配合飼料。
【請求項４】
トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する配合飼料を用いて家禽類を飼育し、
カラーファン値が9〜15の卵黄色を呈する卵を取得する方法。
【請求項５】
上記配合飼料を2週間以上にわたって給餌することを含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記細菌がパラコッカス（Paracoccus）属細菌である、請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する配合飼料を用いて家禽類を飼育して取得される、カラーファン値が9〜15の卵黄色を呈する家禽卵。
【請求項８】
前記細菌がパラコッカス（Paracoccus）属細菌である、請求項７記載の家禽卵。
【請求項９】
卵黄中のアスタキサンチン濃度が12 ppm以下である、請求項７又は８記載の家禽卵。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、家禽類のための配合飼料に関し、より具体的には、アスタキサンチンを添加した家禽用配合飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニワトリ等の家禽類の卵は栄養価が高く、それ自体が食品として、また種々の菓子及び食品の材料として広く利用されている。【０００３】
家禽類の飼料として、種々の組成の配合飼料が知られているが、ほとんどの場合、トウモロコシを主体とする飼料が用いられている。卵の商品価値を決める重要な要素の一つは卵黄色であるが、これは飼料に含まれるカロテノイド等の色素、特にトウモロコシに含まれる色素であるルテイン及びゼアキサンチンが産卵鶏によって吸収され、卵へと移行・蓄積するために黄色味を帯びるようになったものであることは良く知られている。【０００４】
一方、近年では、卵黄色がより濃い、あるいはより赤みを増した卵が消費者に好まれるようになってきている。産卵鶏に給餌する配合飼料には一般的にトウモロコシが50〜60％程度配合されているが、トウモロコシ等の穀類だけでは消費者の嗜好に合う色にならないため、現在、ほとんどの飼料にカロテノイドを主成分とする色揚げ剤が添加されている。色揚げ剤としては、例えばパプリカ由来の色素やアスタキサンチンが利用されている（例えば特許文献１〜３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平７−１４３８６４号公報
【特許文献２】特開平７−１１５９１５号公報
【特許文献３】特開平８−２４２７７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
トウモロコシは家禽類だけでなく種々の飼料に利用されているために需要が多く、また、干ばつ等の異常気象による不作の影響等でも供給不足となることがある。このため価格変動が大きく、結果的には価格が高騰する可能性も考えられる。このような場合に備えてトウモロコシ含量の低い飼料の使用も検討されつつあるが、産卵鶏用の配合飼料においては、消費者に好まれる卵黄色を呈する卵を提供するためにトウモロコシが必須の配合成分とされてきた。【０００７】
また、色揚げ剤に使用されるパプリカは植物であるため、その供給状況も季節及び気候によって変動することが知られており、従ってその価格も季節によって変動し得る。【０００８】
従って、コストの低減と価格変動幅の縮小及び安定供給が可能な飼料の使用、かつ消費者に好まれる卵黄色を呈する卵の提供が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等のグループは、細菌によるアスタキサンチンの産生技術を確立しており、この技術を利用することで、アスタキサンチンを１年中安定的に供給することが可能である。アスタキサンチンはビタミンＥと比較して一重項酸素の消去活性で約500倍、脂質過酸化抑制活性で約1000倍の酸化防止効果を有することが報告されており、色揚げ剤としての効果に加えて、酸化防止効果を期待して飼料に配合することができる。【００１０】
上記課題に鑑み、本発明者等は、トウモロコシ濃度を標準的な濃度である50〜60％よりも低減させた飼料を家禽用配合飼料として用い得る可能性について種々検討を重ねてきた。その結果、驚くべきことに、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを色揚げ剤として使用すると、トウモロコシ含量の低い飼料において、従来のトウモロコシ含量の高い飼料に添加する場合と比較して、より少ない添加量で目的とする色調が得られ、従って色揚げ剤の添加量を低減することができることを見出した。【００１１】
この効果はアスタキサンチンのみで見られ、パプリカ由来の色素であるトランスカプサンチン(t-cap)では見られないことが確認された。従って、飼料中のトウモロコシ含量を減らし、かつ色揚げ剤をアスタキサンチンとしてその添加量を減らすことにより、配合飼料のコストを低減させると共に、所望の卵黄色が得られることが判明した。【００１２】
すなわち本発明は、以下の［１］〜［９］を包含する。
［１］トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する家禽用配合飼料。
［２］前記細菌がパラコッカス（Paracoccus）属細菌である、［１］記載の配合飼料。
［３］コメ、コムギ、オオムギ、ダイズ、マイロ、及び／又はこれらに由来する原料を10％以上含有する、［１］又は［２］記載の配合飼料。
［４］トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する配合飼料を用いて家禽類を飼育し、
カラーファン値が9〜15の卵黄色を呈する卵を取得する方法。
［５］上記配合飼料を2週間以上にわたって給餌することを含む、［４］記載の方法。
［６］前記細菌がパラコッカス（Paracoccus）属細菌である、［４］又は［５］記載の方法。
［７］トウモロコシを50％以下、細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で含有する配合飼料を用いて家禽類を飼育して取得される、カラーファン値が9〜15の卵黄色を呈する家禽卵。
［８］前記細菌がパラコッカス（Paracoccus）属細菌である、［７］記載の家禽卵。
［９］卵黄中のアスタキサンチン濃度が12 ppm以下である、［７］又は［８］記載の家禽卵。【００１３】
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2015-110258号の開示内容を包含する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、家禽用配合飼料におけるトウモロコシの配合量を低減すると共に色揚げ剤の添加量も抑制し、コストが低減され、同時に季節及び気候に左右されることなく安定供給が可能な配合飼料の提供が可能となる。その結果、消費者の嗜好に合った卵黄色を呈する家禽卵をより低価格で提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】飼料中にアスタキサンチンを1〜8 ppm添加した場合の、各飼料中の実測値のアスタキサンチン濃度と卵黄のカラーファン値（CF値）との関係を示す。◆：標準トウモロコシ含量飼料、■：低トウモロコシ含量飼料。
【図２】飼料中にt-カプサンチンを1〜8 ppm添加した場合の、各飼料中の実測値のt-カプサンチン濃度と卵黄のCF値との関係を示す。◆：標準トウモロコシ含量飼料、■：低トウモロコシ含量飼料。
【図３】アスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ2ppm又は4ppm添加した飼料を給餌した鶏より採卵した卵の卵黄中カロテノイド濃度及びその組成を示す。
【図４】アスタキサンチンを添加濃度1〜8 ppmで飼料に添加した場合の卵黄中のアスタキサンチン濃度を標準トウモロコシ含量飼料及び低トウモロコシ含量飼料で比較した結果を示す。□：標準トウモロコシ含量飼料、■：低トウモロコシ含量飼料。
【図５】t-カプサンチンを添加濃度1〜8 ppmで飼料に添加した場合の卵黄中のt-カプサンチン濃度を標準トウモロコシ含量飼料及び低トウモロコシ含量飼料で比較した結果を示す。□：標準トウモロコシ含量飼料、■：低トウモロコシ含量飼料。
【図６】飼料中にアスタキサンチンを添加した場合の卵黄中のアスタキサンチン濃度とCF値の関係を示す。◆：標準トウモロコシ含量飼料、■：低トウモロコシ含量飼料。
【図７】飼料中にt-カプサンチンを添加した場合の卵黄中のt-カプサンチン濃度とCF値の関係を示す。◆：標準トウモロコシ含量飼料、■：低トウモロコシ含量飼料。
【図８ａ】トウモロコシ含量30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ1〜16ppm添加した場合の、各飼料中の実測値のアスタキサンチンもしくはt-カプサンチン濃度と卵黄のカラーファン値との関係を示す。近似式CF=b×(1-EXP(-1×a×飼料中色素濃度))+切片を用い、最小二乗法によりカーブフィッティングを実施した。◆：アスタキサンチン、■：t-カプサンチン。
【図８ｂ】トウモロコシ含量50％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ1〜16ppm添加した場合の、各飼料中の実測値のアスタキサンチンもしくはt-カプサンチン濃度と卵黄のカラーファン値との関係を示す。近似式CF=b×(1-EXP(-1×a×飼料中色素濃度))+切片を用い、最小二乗法によりカーブフィッティングを実施した。◆：アスタキサンチン、■：t-カプサンチン。
【図９ａ】トウモロコシ含量30〜50％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンを1〜16ppm添加した場合に得られた卵の卵黄色を色差計で測定したL＊値をそれぞれ示す。
【図９ｂ】トウモロコシ含量30〜50％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンを1〜16ppm添加した場合に得られた卵の卵黄色を色差計で測定したa＊値をそれぞれ示す。
【図９ｃ】トウモロコシ含量30〜50％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンを1〜16ppm添加した場合に得られた卵の卵黄色を色差計で測定したb＊値をそれぞれ示す。
【図１０】トウモロコシ含量30〜50％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ1〜16ppm添加した配合飼料を給餌した鶏より採卵した卵の卵黄中カロテノイド濃度及びその組成を示す。
【図１１】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ2ppm又は4ppm添加した配合飼料を給餌した鶏より採卵した卵の卵黄のカラーファン値をそれぞれ示す。
【図１２ａ】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ2ppm添加した場合のトウモロコシ含量（％）と卵黄のカラーファン値との関係を示す。◆：アスタキサンチン、■：t-カプサンチン。
【図１２ｂ】トウモロコシ含量30〜50％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ2ppm添加した場合のトウモロコシ含量（％）と卵黄のカラーファン値との関係を示す。◆：アスタキサンチン、■：t-カプサンチン。
【図１２ｃ】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ4ppm添加した場合のトウモロコシ含量（％）と卵黄のカラーファン値との関係を示す。◆：アスタキサンチン、■：t-カプサンチン。
【図１３】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ2ppm又は4ppm添加した配合飼料を給餌した鶏より採卵した卵の卵黄中カロテノイド濃度及びその組成を示す。
【図１４ａ】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンを2ppm又は4ppm添加した場合に得られた卵の卵黄色を色差計で測定したL＊値をそれぞれ示す。
【図１４ｂ】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンを2ppm又は4ppm添加した場合に得られた卵の卵黄色を色差計で測定したa＊値をそれぞれ示す。
【図１４ｃ】トウモロコシ含量0〜30％飼料中にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンを2ppm又は4ppm添加した場合に得られた卵の卵黄色を色差計で測定したb＊値をそれぞれ示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
現在、鶏卵等の卵黄色の測定は、JA全農たまご社の全農卵黄カラーチャート(Zen-Noh Yolk Colour Chart:CF)やロッシュ社のヨークカラーファン（Roche Yolk Color Fan: RYCF）を用いることが常法となっており、当分野において最も一般的な卵黄色の評価方法となっている。カラーファンの値（CF値）は、1〜15の範囲である。現在では、電子的に色調を判定する機器（例えばエッグマルチテスターEMT-7300(JA全農たまご社)等）による自動的測定によってカラーファン値を測定することも行われている。
【００１７】
また、卵黄色は色差計によって測定されることもあり、例えばCF値10の卵黄のa*値は8、CF値12の卵黄は12、CF値14は15程度であるが、これは飼料成分やニワトリの品種、色差計の測定方法等によって値が変わることがあるため、色差計による測定値とCF値との明確な対応付けは未だなされていない。従って、当業者にとって、CF値が最も共通に理解される客観的測定値である。
【００１８】
本明細書において「家禽」又は「家禽類」とは、例えば鶏、鶉、七面鳥、ホロホロ鳥、鳩、アヒル、ガチョウ等をいい、「家禽卵」とはこれらの卵をいう。特に日本を始め多くの国では鶏卵の消費量が最も多いため、主として鶏及び鶏卵を使用して本発明の検討を行っており、また本発明は鶏において好適に実施できるが、本発明は鶏及び鶏卵に限定されるものではなく、「産卵鶏」及び「卵」等の用語も上記の「家禽類」全般に適用されるものとする。
【００１９】
本明細書において、配合量及び添加量を表す「％」及び「ppm」の値は、重量比を意味するものとする。
【００２０】
トウモロコシを50〜60％含有する配合飼料を色揚げ剤を使用せずに用いた場合、得られる卵のカラーファン値は約6〜9である。卵黄色に対する嗜好は個人によって異なり、また国によっても異なるものであるが、近年では、よりカラーファン値の高い、例えばカラーファン値が12〜14、場合によってはカラーファン値が15の卵黄色を呈する卵が好まれる場合がある。従って、消費者の嗜好に沿った卵を提供する場合、トウモロコシの色素のみによって得られる卵黄色よりも濃い（カラーファン値の高い）卵を得るためには、色素の添加が必須である。
【００２１】
例えば、配合飼料中のトウモロコシの含有量を10％以下に下げた場合には、黄色色素であるルテイン及びゼアキサンチンの量が低下するため、得られる卵のカラーファン値は約1〜6の範囲である（6は近似曲線からの外挿値）。
【００２２】
本発明は、トウモロコシ含量が50％以下の飼料に対して細菌乾燥粉末由来のアスタキサンチンを1〜8 ppmの範囲で添加したことを特徴とする家禽用配合飼料を提供する。本発明の配合飼料中のトウモロコシ含量は、50％以下、40％以下、30％以下、20％以下、10％以下、8％以下、5％以下、3％以下であって良く、全く配合しない場合（すなわち0％）であっても良い。しかしながら、目的のカラーファン値等に応じて、トウモロコシ含量は1％以上、2％以上、3％以上、10％以上、20％以上、30％以上等としても良く、適宜調整すれば良い。アスタキサンチンの色揚げ向上効果はトウモロコシ含量が50％以下の飼料において認められるが、本発明の色揚げ向上効果はトウモロコシ含量の低減に依存して認められる。
【００２３】
本発明に用いることができる細菌としては、アスタキサンチンを産生し得る細菌であれば良く、限定されるものではないが、例えばパラコッカス(Paracoccus)属細菌、スフィンゴモナス(Sphingomonas)属細菌、ブレブンディモナス(Brevundimonas)属細菌、エリスロバクター(Erythrobacter)属細菌等を用いることができ、好ましくはパラコッカス属に属する細菌が用いられる。パラコッカス属細菌としては、例えばパラコッカス・カロティニファシエンス(Paracoccus carotinifaciens)、パラコッカス・マークシイ(Paracoccus marcusii)、パラコッカス・ヘウンデンシス(Paracoccus haeundaensis)、パラコッカス・ゼアキサンチニファシエンス(Paracoccus zeaxanthinifaciens)、パラコッカス・デニトリフィカンス(Paracoccus denitrificans)、パラコッカス・アミノヴォランス(Paracoccus aminovorans)、パラコッカス・アミノフィルス(Paracoccus aminophilus)、パラコッカス・コウリイ(Paracoccus kourii)、パラコッカス・ハロデニトリフィカンス(Paracoccus halodenitrificans)およびパラコッカス・アルカリフィルス(Paracoccus alcaliphilus)が挙げられ、特に好適にはパラコッカス・カロティニファシエンスを用いることができる。パラコッカス・カロティニファシエンスの株としては例えばパラコッカス・カロティニファシエンス E-396株（FERM BP-4283）が挙げられる。
【００２４】
また、本発明において、アスタキサンチン産生能の改変された変異株も使用可能である。変異株としては、アスタキサンチン産生能の高い菌株（特開2001-95500）が挙げられるがこれに限らない。
【００２５】
アスタキサンチン産生細菌を培養する方法としては、特に限定するものではないが、例えば、培地として、例えば細菌の生育に必要な炭素源、窒素源、無機塩および場合により特殊な要求栄養物質(例えば、ビタミン、アミノ酸、核酸等)を含むものを使用する、下記のような方法が挙げられる。
【００２６】
炭素源としては、グルコース、シュークロース、フルクトース、トレハロース、マンノース、マンニトール、マルトース等の糖類；酢酸、フマル酸、クエン酸、プロピオン酸、リンゴ酸、マロン酸等の有機酸；エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、イソブタノール等のアルコール類、およびこれらの組合せが挙げられる。添加割合は、炭素源の種類によるが、一般に培地1L当たり1〜100g、例えば2〜50gとすることができる。
【００２７】
窒素源としては、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素、およびこれらの組合せが挙げられる。添加割合は、窒素源の種類によるが、一般に、培地1Lに対し0.1〜20g、例えば1〜10gとすることができる。
【００２８】
無機塩としては、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸水素二ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸鉄、塩化鉄、硫酸マンガン、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、硫酸銅、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、およびこれらの組合せ等が挙げられる。添加割合は、無機塩の種類によるが、一般に、培地1Lに対し0.1mg〜10gとすることができる。
【００２９】
特殊な要求物質としては、ビタミン類、核酸類、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、麦芽エキス、コーンスティープリカー、乾燥酵母、大豆粕、大豆油、オリーブ油、トウモロコシ油、アマニ油、およびこれらの組合せが挙げられる。添加割合は、特殊な要求物質の種類によるが、一般に、培地1Lに対し0.01mg〜100gとすることができる。
【００３０】
培地のpHは、例えばpH2〜12、例えばpH6〜9に調整する。
【００３１】
培養は、例えば10〜70℃、例えば20〜35℃の温度にて、通常、1日〜20日間、例えば2〜9日間、振とう培養または通気撹拌培養により行うことができる。このような条件下でアスタキサンチン産生細菌を培養する。培養すると細菌は、菌体内外にアスタキサンチンを著量産生する。
【００３２】
以上の培養方法により得られた培養液は適宜濃縮することができる。濃縮方法としては、膜濃縮、遠心分離法等が挙げられる。
【００３３】
次に、培地成分を除去する。遠心分離の際には、濃縮を行ったのであれば濃縮液に加水し、培地成分を除去する。膜分離を用いる場合、ダイアフィルトレーションを行い、培地成分を除去する。加水量は、濃縮液の色素含有量等の状態によるが、例えば1〜5倍程度とすることができる。
【００３４】
さらに、培養液または濃縮液から乾燥粉末を得るために乾燥を行う。すなわち本発明では、培養液または菌体スラリーとして得られるアスタキサンチン含有細菌の菌体を乾燥させて粉末としたものを使用することができる。
【００３５】
乾燥方法としては特に制限はなく、例えば噴霧乾燥、噴霧造粒乾燥、ドラム乾燥、凍結乾燥流動床乾燥等の公知の乾燥方法を用いることができる。このようにして、アスタキサンチンを含有する乾燥粉末を製造することができる。また、得られた乾燥粉末をさらに粉砕により粒径を細かくしたもの、例えば粒径が1μm〜30μm、1μm〜20μm、5μm〜20μm、7μm〜20μmのものを用いることができる。
【００３６】
ある実施形態において、本発明における使用に適した乾燥粉末は、アスタキサンチンを産生し得る細菌の菌体を、100℃を超える温度の伝熱部と接触させて伝熱受熱乾燥する工程を含む製造方法によって得られる乾燥菌体であって、例えば体積粒子径D50が7〜12μmのときにエタノール抽出により抽出されるアスタキサンチンの拡散係数Dの25℃と35℃との温度変化比（b25／b35）が0.807±0.05のものである。
【００３７】
本発明において使用することができるアスタキサンチンは、例えばパナファード-P（PANAFERD-P、JXエネルギー株式会社）として販売されているものを入手することができる。
【００３８】
本発明の家禽用配合飼料の調製のために、上記の乾燥粉末を、トウモロコシ含量50％以下の飼料に添加する。本明細書において、「トウモロコシ含量」との記載における「トウモロコシ」とは、主としてトウモロコシの実を乾燥及び破砕したもの、並びにトウモロコシ由来の加工品、例えばコーングルテンフィード、コーングルテンミール、DDGS（Dried Distiller's Grains with Solubles、トウモロコシ蒸留かす）等も含めることとする。
【００３９】
本発明の家禽用配合飼料を用いれば、トウモロコシ含量が高い飼料に上記アスタキサンチン乾燥粉末を添加して給餌した家禽から得られる卵黄中のカロテノイド濃度と比較して、卵黄中のカロテノイド濃度が低いにもかかわらず、所望のカラーファン値を有する卵を得ることができる。
【００４０】
本方法では、トウモロコシ含量が50％以下である飼料中に、上記で得られる乾燥粉末を添加した配合飼料を、家禽に給餌し、家禽を生育させ、採卵することでアスタキサンチン含有家禽卵を得る。
【００４１】
アスタキサンチン含有細菌乾燥粉末は、細菌の種類、培養方法等の条件によって変動し得るが、粉末1g中に1〜30mgのアスタキサンチンを含有し得る。例えば、パラコッカス属に属するある菌株の乾燥粉末1g中には、2.1mg〜2.5mg（2,100〜2,500ppm）程度のアスタキサンチンが含まれ得る。また、パラコッカス属に属する別の菌株の乾燥粉末1g中には、20mg〜25mg（20,000〜25,000ppm）程度のアスタキサンチンが含まれ得る。本発明では、最終の配合飼料中にアスタキサンチンが1〜8 ppm（飼料100gあたり0.1〜0.8mg）、例えば1 ppm、2 ppm、3 ppm、4 ppm、5 ppm、6 ppm、7 ppm、8 ppm、1〜4 ppm、又は2〜4 ppm含まれていれば良く、従って、上記のようにして得られたアスタキサンチン含有細菌乾燥粉末を、100gの飼料に対して約3〜800mg（30〜8,000 ppm）、例えば4〜400 mg（40〜4,000 ppm）、又は4〜40 mg（40〜400 ppm）の範囲で添加すれば良い。
【００４２】
アスタキサンチン含有細菌乾燥粉末は、ビタミン類等と共にプレミックス中に事前に混合しておくこともできる。
【００４３】
アスタキサンチン含有細菌乾燥粉末を添加した配合飼料による給餌期間は、産卵開始前2週間以上、3週間以上、又は4週間以上であれば良い。
【００４４】
アスタキサンチン含有細菌乾燥粉末を含有する本発明の家禽用配合飼料を給餌して得られる卵における卵黄中アスタキサンチン濃度は、例えば12ppm以下、10ppm以下、9ppm以下、8ppm以下、7ppm以下であれば良く、また、0.1ppm以上、0.3ppm以上、0.5ppm以上、0.8ppm以上、1ppm以上であれば良い。
【００４５】
本発明の方法により、飼料中へのアスタキサンチンの添加量が1 ppm〜8 ppmの範囲において、カラーファン値が9〜15の卵黄色を呈する卵を得ることができる。また、4 ppm以下の濃度のアスタキサンチンの配合によって、カラーファン値が14までの卵黄色を呈する卵を得ることができる。消費者の嗜好や卵の用途等に応じて目的とするカラーファン値は異なるため、目的とするカラーファン値、例えばカラーファン値が9、10、11、12、13、14又は15の卵を得るために、配合飼料中に添加すべきアスタキサンチンの量（濃度）を調整することができる。
【００４６】
本発明の配合飼料を給餌した家禽は、トウモロコシ含量が低い飼料を用いた場合には、卵黄中に移行するカロテノイド含量も低く、またアスタキサンチン濃度が10 ppm以下（100g当たり1mg以下）であるにもかかわらず、カラーファン値が9〜15の卵黄色の家禽卵を産卵する。通常、トウモロコシ含量の高い配合飼料を使用した場合には、得られる卵黄は10〜30ppm程度のカロテノイド含量を有する。従って、本発明の配合飼料の組成で目的のカラーファン値が得られたことは驚くべきことである。
【００４７】
本発明の予想外の効果については、いかなる理論にも拘束されるものではないが、トウモロコシ中の黄色系カロテノイドであるゼアキサンチン、ルテインがアスタキサンチンの吸収及び卵黄への蓄積を競合的に阻害しているため、これらの色素量の低下によって、アスタキサンチンの吸収・卵黄への蓄積が増加することが考えられる。アスタキサンチンの化学構造はゼアキサンチン及びルテインの化学構造と非常に類似している。吸収・蓄積されるゼアキサンチン、ルテインの量の低下によると考えられるこの効果は、パプリカ由来の色素であるt-カプサンチンでは見られないものであった。
【００４８】
実際に、同量のアスタキサンチンをトウモロコシ含量の高い飼料（トウモロコシ含量50％超）及び含量の低い飼料（トウモロコシ含量10％以下）に添加して卵黄中のカロテノイド組成を比較した結果、トウモロコシ含量の低い飼料の場合で、総カロテノイド量は少ないにも関わらず、アスタキサンチン濃度が高く、カラーファン値も高くなっていることが判明した（図３、図４及び表４）。これに対してt-カプサンチンを添加した場合には、トウモロコシ含量の高い飼料を与えた場合の方がt-カプサンチン濃度が高くなっていた（図５）。また、カロテノイド中のt-カプサンチン濃度が相対的に上昇しているにもかかわらず、カラーファン値の上昇は見られなかった（表４）。
【００４９】
アスタキサンチンを産生する細菌乾燥粉末には、アスタキサンチンのみではなく、他に数種のカロテノイドが含まれている。例えばあるパラコッカス菌株の細菌乾燥粉末中には約3％のカロテノイドが含まれており、そのうちの約60％、すなわち細菌乾燥粉末全量に基づいて約2％がアスタキサンチンである。従って、上記の結果は、アスタキサンチンをはじめとするカロテノイド全体（例えばアスタキサンチンの代謝産物やアスタキサンチンの前駆物質も含む）、更に細菌乾燥粉末に含まれる更なる成分も併せた複合的効果が生じている可能性も示唆するものと考えられる。
【００５０】
飼料中のトウモロコシの配合量を低減する場合、トウモロコシから得られていた色素以外の栄養を他の材料により補う必要がある。トウモロコシの代替として使用可能な材料は、炭水化物として黄色系カロテノイド含有量が低いコメ、コムギ、オオムギ、ダイズ、マイロ、及び／又はこれらに由来する原料を例えば10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、又は50％以上含有させることができる。コメとしては、例えば玄米、白米、米ぬか等を利用することができる。また、必要に応じて、アミノ酸、ビタミン、ミネラル等の添加量を適宜調整することができる。当業者であれば、トウモロコシ含量を下げた配合飼料であっても、産卵数等に影響させることなく、適切な組成のものを調製することができる。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明する。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５２】
［実施例１］  鶏卵色揚げ試験１
評価用色素剤として、パラコッカス菌乾燥菌体製剤（アスタキサンチン2%含有）とパプリカ色素製剤（t-カプサンチン 0.25%含有）を用いた。【００５３】
パラコッカス菌乾燥菌体製剤は、カロテノイド類を産生するパラコッカス菌体として、パラコッカス・カロティニファシエンス(Paracoccus carotinifaciens) E-396株（FERM BP-4283）からのニトロソグアニジン変異株を使用した。これをシード用フラスコ培地でまず培養し、次いで本培養用培地で、菌体濃度が最大になるまで、28℃で好気条件で培養した。次いでこれを遠心分離機で集菌し、回収した。【００５４】
回収したパラコッカス菌体を、ドラム回転数3.5rpm、ドラム温度140℃の条件でダブルドラムドライヤーで乾燥した。得られた粉末の平均粒径（体積粒子径D50）はおよそ100〜125μmであった。これをさらにジェットミル（株式会社セイシン企業社製）を用いて平均粒径(D50)が9μmとなるように微粉化（粉砕）し、パラコッカス菌乾燥菌体製剤として用いた。【００５５】
パプリカ色素製剤はカラーアップ（コーキン化学社、総キサントフィル濃度5 g/kg品）を用いた。【００５６】
表１に示す低トウモロコシ含量飼料および標準トウモロコシ含量飼料に、上記の製剤を、アスタキサンチン、t-カプサンチン含量がそれぞれ最終濃度で1、2、4、又は8 ppmとなるように添加した配合飼料を調製した。尚、実際に製造された配合飼料中のアスタキサンチン、t-カプサンチン含量の実測濃度を表２に示す。【００５７】
【表１】
2016194789.tif 000003
【００５８】
【表２】
2016194789.tif 000004
【００５９】
試験には、ジュリアライトを用い、各区に10羽ずつ供試した。2週間の馴致期間を設け、カラーファン値の安定する2週目以降の卵を評価に用いた。【００６０】
各試験区から採卵し、エッグマルチテスターEMT-7300(JA全農たまご社)を用いて各試験区ごとに鶏卵10個のカラーファン値を測定した。また、卵黄中のカロテノイド濃度は各試験区ごとに3個を測定した。【００６１】
卵黄中、飼料中のカロテノイド類の定量は高速液体クロマトグラフィー(HPLC)にて以下のように行った。【００６２】
カラムはInertsil SIL-100A, 5μm(φ4.6×250mm)(GLサイエンス製)を2本連結して使用した。溶出は、移動相であるn-ヘキサン/テトラヒドロフラン/メタノール混合液(40:20:1)を室温付近一定の温度にて毎分1.0mL流すことで行った。測定においては、サンプルをテトラヒドロフランで溶解し、移動相にて適当に希釈した液20μLを注入量とし、カラム溶離液の検出は波長470nmで行った。【００６３】
双方の飼料中のアスタキサンチン及びt-カプサンチンの濃度と得られた卵の卵黄色のカラーファン値の関係を図１及び２に示す。【００６４】
その結果、驚くべきことに、色素剤としてアスタキサンチンを用いた場合、低トウモロコシ含量飼料では、標準トウモロコシ含量飼料中のアスタキサンチン濃度に対して約50〜70％のアスタキサンチン濃度で同等のカラーファン値を得ることができた（図１）。一方、t-カプサンチンを用いた場合、アスタキサンチンのような色素剤の必要量の低下は観察されなかった（図２）。また、標準トウモロコシ含量飼料で比較すると、アスタキサンチンとt-カプサンチンとで色揚げに必要な量は同等であった。【００６５】
図１及び２の結果から、目的とするカラーファン値10〜15を得るために低トウモロコシ含量飼料中に添加すべきアスタキサンチン及びt-カプサンチンの濃度を算出した（表３）。例えば、カラーファン値13を達成するためには、低トウモロコシ含量飼料中にアスタキサンチンを最終濃度2.2 ppmとなるように添加すれば良いのに対して、t-カプサンチンでは最終濃度4.3 ppmとなるように添加する必要があり、アスタキサンチンはt-カプサンチンと比較して約51％の量で同様のカラーファン値が得られることが判明した。【００６６】
【表３】
2016194789.tif 000005
【００６７】
この結果より、アスタキサンチンと低トウモロコシ含量飼料の組み合わせを選択することにより、色揚げに必要な色素剤の量を低減させることができることが明らかになった。尚、本実施例において、産卵数に有意な差異は見られず、卵の生産性は落ちないことも確認された。【００６８】
［実施例２］  卵黄中のカロテノイド含量及び組成の比較１
実施例１で得られた卵の卵黄中のカロテノイド濃度を実施例１に記載の方法により各試験区の卵黄について3個ずつ測定した。図３に、色素を2 ppm又は4 ppm添加した飼料を4〜6週間給餌した鶏より採卵した卵の卵黄中カロテノイド組成を示す。【００６９】
図から明らかなように、標準トウモロコシ含量飼料では、卵黄中の総カロテノイド濃度が20〜30 ppmであるのに対して、低トウモロコシ含量飼料では、総カロテノイド濃度がいずれも10 ppm以下であり、トウモロコシ由来の色素量が低減していることが確認された。【００７０】
アスタキサンチンを給餌した区では、2 ppm又は4 ppmのいずれの場合も、標準トウモロコシ含量飼料に添加した場合よりも低トウモロコシ含量飼料を添加した場合に卵黄中アスタキサンチン濃度の増加が観察された。一方、t-カプサンチンを給餌した区ではアスタキサンチンのような濃度の増加は観察されなかった。【００７１】
上記の結果から、飼料中のトウモロコシ含量の低下と関連して、アスタキサンチンの吸収及び／又は卵黄中への蓄積量が上昇することが示唆された。【００７２】
表４に、色素を4ppm添加した場合に得られる卵黄中の総カロテノイド濃度及びカラーファン値を示す。【００７３】
【表４】
2016194789.tif 000006
【００７４】
表４の結果から明らかな通り、アスタキサンチンを添加した飼料では、卵黄中の総カロテノイド濃度が10 ppm以下に大きく低下しているにもかかわらず、カラーファン値は上昇し、カラーファン値約14を得ることができた。これに対してt-カプサンチンを添加した場合にはカラーファン値の上昇は見られなかった。【００７５】
［実施例３］  卵黄中色素濃度の比較
実施例１と同じ色素剤を添加濃度1〜8 ppmで飼料に添加した場合の卵黄中の色素濃度を、標準トウモロコシ含量飼料及び低トウモロコシ含量飼料で比較した。結果を図４及び５に示す。【００７６】
図４に示すように、アスタキサンチンを添加した場合、全ての添加濃度において、標準トウモロコシ含量飼料よりも低トウモロコシ含量飼料を給餌した鶏から得た卵の卵黄中アスタキサンチン濃度が高く、トウモロコシ含量の低い方が卵黄中により多くアスタキサンチンが蓄積されることが示された。これに対して、t-カプサンチンを添加した場合（図５）、トウモロコシ含量の高い方が蓄積されるt-カプサンチン濃度が高く、アスタキサンチンとは逆の結果を示すことが確認された。【００７７】
［実施例４］  卵黄中の色素濃度とカラーファン値の相関性
実施例１で得られた卵の卵黄中におけるアスタキサンチン及びt-カプサンチン濃度（飼料中への添加濃度はいずれも1、2、4、8 ppm）と卵黄のカラーファン値の関係を図６及び７に示す。【００７８】
図６及び７の結果から、標準トウモロコシ含量飼料及び低トウモロコシ含量飼料のいずれの場合も、卵黄中のアスタキサンチン濃度又はt-カプサンチン濃度が増加するにつれ、カラーファン値の上昇が確認された。【００７９】
また、図中に矢印で示すように、同じ添加濃度であっても、アスタキサンチンでは低トウモロコシ含量飼料とすることで、カラーファン値が高まるのに対し、t-カプサンチンでは逆にカラーファン値が低くなる傾向がみられた。【００８０】
［実施例５］  鶏卵色揚げ試験２
トウモロコシ含量30〜50％の飼料を用い、実施例１と同様にして本発明の効果を確認した。【００８１】
表５に示す組成の飼料に、アスタキサンチン、t-カプサンチン含量がそれぞれ最終濃度で1〜16 ppmとなるように添加した配合飼料を調製した。本実施例では、トウモロコシ含量と、その低減に伴って添加する玄米の含量以外の組成は同一の飼料とし、トウモロコシに由来するコーングルテンミールは配合しなかった。【００８２】
【表５】
2016194789.tif 000007
【００８３】
図８ａ及び８ｂに、トウモロコシ含量30％及び50％飼料中のアスタキサンチン及びt-カプサンチンの濃度と得られた卵の卵黄色のカラーファン値の関係をそれぞれ示す。【００８４】
その結果、いずれの飼料においても、色素剤として1〜8ppmアスタキサンチンを用いた場合、t-カプサンチンを用いた場合よりも高いカラーファン値が得られた。色素剤を16 ppm添加した場合には有意な差は見られなかった。【００８５】
図８ａ及び８ｂの結果から、目的とするカラーファン値10〜15を得るために飼料中に添加すべきアスタキサンチン及びt-カプサンチンの濃度を、トウモロコシ含量30％及び50％飼料について算出した（表６）。表６に示すように、アスタキサンチンはt-カプサンチンと比較して約60〜80％の量で同様のカラーファン値が得られることが判明した。【００８６】
【表６】
2016194789.tif 000008
【００８７】
この結果より、トウモロコシ含量30〜50％の飼料においても、色素剤としてアスタキサンチンを選択することにより、色揚げに必要な色素剤の量を低減させることができることが明らかになった。尚、本実施例において、飼料組成の相違による産卵数に有意な差異は見られず、卵の生産性も落ちないことが確認された。【００８８】
［実施例６］  色差計を用いた卵黄色の測定１
実施例５で得られた卵、並びに上記表５に示すトウモロコシ含量40％飼料にアスタキサンチンもしくはt-カプサンチンをそれぞれ最終濃度で2ppmとなるように添加した配合飼料を用いて得られた卵の卵黄色を、色差計（CM-700dコニカミノルタ社）を用いて測定した。測定されたL*値、a*値、b*値の結果を図９ａ〜９ｃにそれぞれ示す。【００８９】
カラーファン値は、赤味に対応するa*値と相関することが知られている。図９ｂに示す結果は、飼料中へのアスタキサンチン及びt-カプサンチンの添加量に応じてa*値（赤味）が上昇しており、また色素剤の添加量が8 ppm以下において、アスタキサンチンを添加した場合の方がa*値が高いことを示す。一方、L*値（図９ａ）及びb*値（図９ｃ）では有意な差は見られなかった。【００９０】
［実施例７］  卵黄中のカロテノイド含量及び組成の比較２
実施例５及び６で得られた卵の卵黄中のカロテノイド濃度を、実施例１と同様の方法により各試験区の卵黄について5個ずつ測定した。図１０に、トウモロコシ含量30〜50％飼料に色素を1〜16 ppm添加した配合飼料を2〜4週間給餌した鶏より採卵した卵の卵黄中カロテノイド組成を示す。【００９１】
図から明らかなように、アスタキサンチン及びt-カプサンチンの添加濃度に依存して卵黄中のカロテノイド濃度が上昇していた。【００９２】
また、トウモロコシ含量が低いほど卵黄中のアスタキサンチン蓄積量が増加する傾向が確認された。一方、t-カプサンチンについてはこのような傾向は確認されなかった。【００９３】
［実施例８］  鶏卵色揚げ試験３
トウモロコシ含量0〜30％の飼料を用い、実施例１と同様にして本発明の効果を確認した。【００９４】
表７に示す組成の飼料に、アスタキサンチン、t-カプサンチン含量がそれぞれ最終濃度で2 ppm又は4 ppmとなるように添加した配合飼料を調製した。本実施例では、トウモロコシ含量と、その低減に伴って添加する玄米の含量以外の組成は同一の飼料とし、トウモロコシに由来するコーングルテンミールは配合しなかった。【００９５】
【表７】
2016194789.tif 000009
【００９６】
図１１に、トウモロコシ含量0〜30％飼料にアスタキサンチン及びt-カプサンチンを添加した場合に得られた卵の卵黄色のカラーファン値を示す。【００９７】
その結果、いずれの飼料においても、色素剤としてアスタキサンチンを用いた場合にt-カプサンチンを用いた場合よりも高いカラーファン値が得られた。【００９８】
上記の結果、並びに実施例５で得られた結果（図８ａ及び８ｂ）から、トウモロコシ含量0〜30％飼料及び30〜50％飼料に色素剤を2 ppm又は4 ppm添加した配合飼料を用いて得られる卵の卵黄色におけるカラーファン値との関係を図１２ａ〜１２ｃに示す。図から明らかな通り、色素剤を2 ppmもしくは4 ppm添加した配合飼料を用いて、本発明の配合飼料がt-カプサンチンを添加した場合よりも有意に高いカラーファン値を有する卵を得ることができることが示された。【００９９】
［実施例９］  卵黄中のカロテノイド含量及び組成の比較３
実施例８で得られた卵の卵黄中のカロテノイド濃度を、実施例１と同様の方法により各試験区の卵黄について5個ずつ測定した。図１３に、トウモロコシ含量0〜30％飼料に色素を2 ppm又は4 ppm添加した配合飼料を2〜4週間給餌した鶏より採卵した卵の卵黄中カロテノイド組成を示す。【０１００】
図から明らかなように、トウモロコシ含量に依存してカロテノイド濃度が上昇し、またアスタキサンチン及びt-カプサンチンの添加濃度に依存しても卵黄中のカロテノイド濃度が上昇していたが、いずれの条件においてもt-カプサンチンと比較してアスタキサンチンの方が高濃度に卵黄中に移行していることが示された。【０１０１】
［実施例１０］  色差計を用いた卵黄色の測定２
実施例８で得られた卵の卵黄色を、色差計（CM-700dコニカミノルタ社）を用いて測定した。測定されたL*値、a*値、b*値の結果を図１４ａ〜１４ｃにそれぞれ示す。【０１０２】
図１４ｂに示す結果は、飼料中へのアスタキサンチン及びt-カプサンチンの添加量（2 ppm又は4 ppm）に応じてa*値（赤味）が上昇することを示す。また、t-カプサンチンではトウモロコシ含量が多い程a*値が高くなったが、アスタキサンチン添加の場合はトウモロコシ含量の変動によるa*値の変動はあまり観察されなかった。一方、明るさに対応するL*値（図１４ａ）では有意な差は見られなかったが、黄色味に対応するb*値（図１４ｃ）ではトウモロコシ含量に応じて上昇し、これはトウモロコシに由来する黄色系色素による変動と考えられた。
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
卵の価格は数十年間大きな変動がなく、低価格で推移している。このため、養鶏業者にとっては競争が激しい中で低価格を維持しながら付加価値の高い卵を提供することが望まれている。そのためには、飼料コストの削減ができれば非常に意義があり、また、コストの削減は、最終的には市場における卵の価格にも反映させることができる。【０１０４】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。
【図１】
2016194789.tif 000010
【図２】
2016194789.tif 000011
【図３】
2016194789.tif 000012
【図４】
2016194789.tif 000013
【図５】
2016194789.tif 000014
【図６】
2016194789.tif 000015
【図７】
2016194789.tif 000016
【図８ａ】
2016194789.tif 000017
【図８ｂ】
2016194789.tif 000018
【図９ａ】
2016194789.tif 000019
【図９ｂ】
2016194789.tif 000020
【図９ｃ】
2016194789.tif 000021
【図１０】
2016194789.tif 000022
【図１１】
2016194789.tif 000023
【図１２ａ】
2016194789.tif 000024
【図１２ｂ】
2016194789.tif 000025
【図１２ｃ】
2016194789.tif 000026
【図１３】
2016194789.tif 000027
【図１４ａ】
2016194789.tif 000028
【図１４ｂ】
2016194789.tif 000029
【図１４ｃ】
2016194789.tif 000030
【国際調査報告】
2016194789.tif 000031
2016194789.tif 000032
2016194789.tif 000033
2016194789.tif 000034