【事件の表示】
　特許第５７５３９６３号発明「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法および低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。
【結　論】
　特許第５７５３９６３号の明細書及び特許請求の範囲を訂正請求書に添付された訂正明細書及び特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１ないし２３〕、２４について訂正することを認める。
　特許第５７５３９６３号の請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４に係る特許を維持する。
　特許第５７５３９６３号の請求項４、６、２１に係る特許についての特許異議の申立てを却下する。
【理　由】
第１　手続の経緯等 
  
１　本件特許異議の申立てに係る特許
  
　本件特許異議の申立てに係る特許第５７５３９６３号は、特許権者であるキユーピー株式会社より、２０１４年９月２６日（優先権主張　平成２５年９月２６日　日本国）、ＰＣＴ／ＪＰ２０１４／０７５６５２（特願２０１５−５０４６６１号）として国際出願されたものであって、平成２７年５月２９日、発明の名称を「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法および低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」、請求項の数を「２４」として特許権の設定登録を受けたものである。 
２　手続の経緯  
　これに対して、平成２８年１月２０日、特許異議申立人である日本水産株式会社（以下、「異議申立人」という）より特許異議の申立てがなされ、同年６月３０日付けで取消理由が通知され、同年９月５日付けで特許権者より意見書及び訂正請求書が提出され、これに対し、同年１０月２０日付けで異議申立人より意見書が提出され、同年１２月２２日付けで再度、取消理由が通知され、平成２９年３月１３日付けで特許権者より意見書及び訂正請求書が提出され、これに対し、同年５月８日付けで異議申立人より意見書が提出されたものである。 
第２　訂正の適否  
１　訂正事項
　上記平成２９年３月１３日付けの訂正請求書による訂正（以下、「本件訂正」という。）は、本件特許請求の範囲及び明細書を、上記訂正請求書に添付した訂正特許請求の範囲及び明細書のとおり、一群の請求項を構成する〔請求項１ないし２３〕、及び一群の請求項となる関係を有する請求項のない請求項２４ごとに、それぞれについて訂正することを求めるものであって、その具体的訂正事項は次のとおりである。
　なお、平成２８年９月５日になされた訂正の請求は、特許法第１２０条の５第７項の規定により、取り下げられたものとみなす。
（１）請求項１ないし２３からなる一群の請求項についての訂正
ア　訂正事項１
　特許請求の範囲の請求項１に「リパーゼ」とあるのを、「
１，３位特異
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
イ　訂正事項２
　特許請求の範囲の請求項１に「
前記原料油脂が魚油であり、
ウ　訂正事項３
　特許請求の範囲の請求項１に「水分含量が０．４質量％以上であり」とあるのを、「
添加された
０．５
エ　訂正事項４
　特許請求の範囲の請求項１に「前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を・・・質量％以下含み」とあるのを、「前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して・・・
オ　訂正事項５
　特許請求の範囲の請求項１に「低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み」とあるのを、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を・・・
５０
カ　訂正事項６
　特許請求の範囲の請求項４を削除する。
キ　訂正事項７
　特許請求の範囲の請求項５に「請求項１ないし４のいずれか１項において」とあるのを、「請求項１ないし
３
ク　訂正事項８
　特許請求の範囲の請求項６を削除する。
ケ　訂正事項９
　特許請求の範囲の請求項７に「請求項１ないし６のいずれか１項において」とあるのを、「請求項１ないし
３および５
コ　訂正事項１０
　特許請求の範囲の請求項９に「前記混合物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を９０質量％以上含み」とあるのを、「前記混合物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
サ　訂正事項１１
　特許請求の範囲の請求項１２に「請求項７ないし１１のいずれか１項において」とあるのを、「請求項７ないし
９
シ　訂正事項１２
　特許請求の範囲の請求項２１を削除する。
ス　訂正事項１３
　特許請求の範囲の請求項２２に「請求項７ないし１２および１８ないし２０のいずれか１項に記載の製造方法」とあるのを、「請求項７ないし１２
、
、および１９
７に
セ　訂正事項１４
　特許請求の範囲の請求項２３に「請求項７ないし１２および１８ないし２０のいずれか１項に記載の製造方法」とあるのを、「請求項７ないし１２
、
、および１９
７に
ソ　訂正事項１５
　特許請求の範囲の請求項１３に「
ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
タ　訂正事項１６
　特許請求の範囲の請求項１３に「低級アルコール脂肪酸エステル化物を・・・質量％以下含み」とあるのを、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
チ　訂正事項１７
　特許請求の範囲の請求項１３に「低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み」とあるのを、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を・・・
５０
ツ　訂正事項１８
　特許請求の範囲の請求項１３に「酸価」とあるのを、「
前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の
テ　訂正事項１９
　特許請求の範囲の請求項１５に「
ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理し、さらに蒸留して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
ト　訂正事項２０
　特許請求の範囲の請求項１５に「低級アルコール脂肪酸エステル化物を９０質量％以上含み」とあるのを、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
ナ　訂正事項２１
　特許請求の範囲の請求項１５に「酸価」とあるのを、「
前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の
（２）請求項２４についての訂正
ア　訂正事項２２
　特許請求の範囲の請求項２４に「リパーゼ」とあるのを、「
１，３位特異
イ　訂正事項２３
　特許請求の範囲の請求項２４に「
前記原料油脂が魚油であり、
ウ　訂正事項２４
　特許請求の範囲の請求項２４に「水分含量が０．４質量％以上であり」とあるのを、「
添加された
０．５
エ　訂正事項２５
　特許請求の範囲の請求項２４に「前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を・・・質量％以下含み」とあるのを、「前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して・・・
オ　訂正事項２６
　特許請求の範囲の請求項２４に「低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み」とあるのを、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を・・・
５０
（３）明細書についての訂正
ア　訂正事項２７
　明細書の段落【００７２】に「公益社団法人日本油化学会制定の基準油脂分析試験法（日本油化学会規格試験法委員会編、基準油脂分析試験法・・・：日本油化学会制定、２０１３年版、１．５　抽出油の酸価）」とあるのを、「公益社団法人日本油化学会制定の基準油脂分析試験法（日本油化学会規格試験法委員会編、基準油脂分析試験法・・・：日本油化学会制定、２０１３年版、
１．６
２　訂正の目的の適否、新規事項の有無及び特許請求の範囲の拡張・変更の存否 
（１）請求項１ないし２３からなる一群の請求項についての訂正
ア　訂正事項１について
（ア）上記訂正事項１は、訂正前の請求項１において、「リパーゼ」に関し、何らの特定がなされていなかったものを、「１，３位特異リパーゼ」でありかつ「固定化された固定化酵素」であるものに限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項１は、訂正前の請求項１の「リパーゼ」を下位概念に限定するものであるから、カテゴリーや対象、目的を変更するものには、該当しない。
（ウ）上記訂正事項１に係る「リパーゼ」が、「１，３位特異リパーゼ」でありかつ「固定化された固定化酵素」であることは、願書に添付した特許請求の範囲の請求項４及び６の記載に基づくものであるから、上記訂正事項１は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
イ　訂正事項２について
（ア）上記訂正事項２は、訂正前の請求項１において、「原料油脂」に関し、その種類が特定されていなかったものを、「魚油」に限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項２は、訂正前の請求項１の「原料油脂」を下位概念に限定するものであるから、カテゴリーや対象、目的を変更するものには、該当しない。
（ウ）上記訂正事項２に係る「原料油脂」が、「魚油」であることは、願書に添付した明細書（以下、「特許明細書」ということがある。）の段落【００４９】の「原料油脂としては、例えば、魚油・・・が挙げられる」等の記載に基づくものであるから、上記訂正事項２は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
ウ　訂正事項３について
（ア）上記訂正事項３は、訂正前の請求項１において、「反応液中における水分」に関し、その水分の由来を「添加された水分」に限定すると共に、その水分量の数値範囲を、水分量の下限である「０．４質量％」を「０．５質量％」としてより狭い範囲に限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項３は、訂正前の請求項１の反応液中における「水分」を「添加された水分」に限定するものであると共に、その水分量の範囲をより狭い範囲に限定するものであるから、カテゴリーや対象、目的を変更するものには、該当しない。
（ウ）上記訂正事項３に係る「反応液中における水分」の「水分」が、「添加された水分」であることは、特許明細書の段落【００６２】の「なお、水は、反応液中に逐次的に添加してもよいし、連続して添加してもよいし、または一括して添加してもよい。」等の記載に基づくものであり、水分量の数値範囲の下限が「０．５質量％」であることは、同段落【００６１】の「前記酵素処理の反応液中における水分含量は、０．５質量％以上であることが好ましく・・・であることができる。」等の記載に基づくものであるから、上記訂正事項３は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
エ　訂正事項４について
（ア）上記訂正事項４は、訂正前の請求項１での「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量（４０質量％以上９０質量％以下）が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることを明確するものであるから、明瞭でない記載の釈明を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項４は、訂正前の請求項１で特定されていた「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の基準を明確にするものであって、次の（ウ）で述べるように、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることは、特許明細書の記載及び技術的な常識を考慮すれば、特許明細書に記載されているに等しい事項であるといえるから、この訂正は、発明の内容を実質的に変更するものには該当しない。
（ウ）上記訂正事項４が、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であるか否かにつて、検討するに、特許明細書の段落【００８４】及び【００８５】には、酵素処理（リパーゼを用いた処理）で得られた「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に関して、以下の記載がある。
「【００８４】
＜分子蒸留＞
　次に、本実施形態に係る製造方法では、酵素処理（リパーゼを用いた処理）（図１のステップＳ１）で得られた、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留する工程（いわゆる、分子蒸留（一次蒸留）、図１のステップＳ２）をさらに含むことができる。
【００８５】
　分子蒸留（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）は、高真空度下で行われる蒸留である。分子蒸留工程により、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物と、該混合物以外の成分（低級アルコール脂肪酸エステル化物以外の脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリドおよび脂肪酸トリグリセリド）とを分離することができる。なお、前記混合物以外の脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリドおよび脂肪酸トリグリセリドを利用して、低級アルコールの存在下で再度エステル化することにより、低級アルコールＤＨＡエステル化物を得ることもできる。」
　これらの記載によれば、訂正前の請求項１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」についての記載である同段落【００８４】の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、蒸留して分離されるべき成分を含み、同段落【００８５】の記載によれば、その成分は、「低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物」以外の成分であって、脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリドおよび脂肪酸トリグリセリド（グリセリド）を主に含むものであることが理解できるから、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、エステル化物としては、「低級アルコール脂肪酸エステル化物」と「グリセリド」とからなるものであり、これらを主成分とするものであることが理解できる。
　ここで、この「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、原料油脂である魚油に水や低級アルコールを添加し酵素処理したものであるから、上記の主要な成分以外に、組成物中には、反応により生じた遊離脂肪酸、グリセリン、添加した水や低級アルコール、及び不純物等が含まれ得ることになる。
　そして、訂正前の請求項１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる低級アルコール脂肪酸エステル化物の「４０質量％以上９０質量％以下」という含有量に関し、この含有量が、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれるどの成分を基準としているかであるが、上述のとおり、該組成物中に含まれるエステル化物は、「低級アルコール脂肪酸エステル化物」と「グリセリド」とであることは明らかである。
　一方、上記のその他の成分であるが、任意に添加量を変えることができる「水」や「低級アルコール」、及び不純物等までを「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の基準に加えるとすれば、その含有量の範囲は一義的なものではなくなり、技術的な合理性を欠くものとなる。
　さらに、特許異議申立書で提出された甲第２号証（特許第４２３６１２８号公報）の第１０頁左欄第１３行〜第３６行に記載されるように、「魚油」を特定のリパーゼにより処理したものは、ＨＰＬＣ装置で、第１０頁の表Ｉに示されるようにＥＥ（（脂肪酸の）エチルエステル）、ＴＧ（トリグリセリド）／ＭＧ（モノグリセリド）／ＤＧ（ジグリセリド）の画分として、それぞれ分離、量の同定が可能であることは技術的な常識であるといえる。
　そして、上記の第１０頁の表Ｉの記載によれば、各リパーゼによる反応において、訂正前の請求項１の低級アルコール脂肪酸エステル化物に対応する「ＥＥ」の含有量を、それぞれ量が同定された「ＥＥ」と「ＭＧ／ＤＧ／ＴＧ」の合計を１００重量％として表すことも、技術的な常識であるといえる。
　これらの事項を踏まえると、訂正前の請求項１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量（４０質量％以上９０質量％以下）が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることは、特許明細書に記載されていたに等しい事項であるといえる。
　そうすると、上記訂正事項４は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
オ　訂正事項５について
（ア）上記訂正事項５は、訂正前の請求項１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の範囲を、下限である「４０質量％」を「５０質量％」としてより狭い範囲に限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項５は、訂正前の請求項１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の範囲をより狭い範囲に限定するものであるから、カテゴリーや対象、目的を変更するものには、該当しない。
（ウ）上記訂正事項５に係る「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の範囲の下限が「５０質量％」であることは、特許明細書の段落【００８３】の「より具体的には、酵素処理で得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下（より具体的には、５０質量％以上８０質量％以下）含み・・・のモル比率で含むことができる。」等の記載に基づくものであるから、上記訂正事項５は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
カ　訂正事項６について
　上記訂正事項６は、請求項４を削除するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
キ　訂正事項７について
　上記訂正事項７は、請求項４の削除に伴い、請求項５が引用する請求項を、「請求項１ないし４」から「請求項１ないし３」とするものであり、請求項４が引用する請求項数を減少させるものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
ク　訂正事項８について
　上記訂正事項８は、請求項６を削除するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
ケ　訂正事項９について
　上記訂正事項９は、請求項４及び６の削除に伴い、請求項７が引用する請求項を、「請求項１ないし６」から「請求項１ないし３および５」とするものであり、請求項７が引用する請求項数を減少させるものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
コ　訂正事項１０について
（ア）上記訂正事項１０は、訂正前の請求項９での「混合物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量（９０質量％以上）が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることを明確するものであるから、明瞭でない記載の釈明を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項１０は、訂正前の請求項９で特定されていた「混合物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の基準を明確にするものであって、次の（ウ）で述べるように、「混合物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることは、特許明細書の記載及び技術的な常識を考慮すれば、特許明細書に記載されているに等しい事項であるといえるから、これを明らかにする訂正は、発明の内容を実質的に変更するものには該当しない。
（ウ）訂正前の請求項９は、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の製造方法であるところ、この請求項９で製造されているものは「混合物」であるから、請求項９の「混合物」とは、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に相当するものである。
　そうすると、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」における「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることは、上記「エ　訂正事項４について」で述べたように、特許明細書に記載されているに等しい事項であるといえるから、上記訂正事項１０は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
サ　訂正事項１１について
　上記訂正事項１１は、請求項１２が引用する請求項を、「請求項７ないし１１」から「請求項７ないし９」とするものであり、請求項１２が引用する請求項数を減少させるものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
シ　訂正事項１２について
　上記訂正事項１２は、請求項２１を削除するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
ス　訂正事項１３について
　上記訂正事項１３は、請求項２２が引用する請求項を、「請求項７ないし１２および１８ないし２０」及び「請求項１３ないし１７および２１」から、それぞれ、「請求項７ないし１２、１８、および１９」及び「請求項１３ないし１７」とするものであり、請求項２２が引用する請求項数を減少させるものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
セ　訂正事項１４について
　上記訂正事項１４は、請求項２３が引用する請求項を、「請求項７ないし１２および１８ないし２０」及び「請求項１３ないし１７および２１」から、それぞれ、「請求項７ないし１２、１８、および１９」及び「請求項１３ないし１７」とするものであり、請求項２３が引用する請求項数を減少させるものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえるとともに、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないことは明らかである。
ソ　訂正事項１５について
（ア）上記訂正事項１５は、訂正前の請求項１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に対して、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であ」るものとの特定を付すものである。
　上記の製造方法により製造された「物」に特定されることにより、訂正前の請求項１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、主要な成分であり訂正前の請求項１３にて特定されていた「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」及び「低級アルコールＤＨＡエステル化物」に加え、多様な成分及び不純物を含む天然由来原料である魚油を酵素分解処理することにより生じる他の生成物、未反応物及び不純物等多様な成分が含まれるものに限定されることになるから、上記訂正事項１５は、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。
（イ）上記（ア）で述べたように、上記訂正事項１５は、訂正前の請求項１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」をさらに限定するものであるあるから、カテゴリーや対象、目的を変更するものには、該当しない。
（ウ）訂正前の請求項１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」が、訂正事項１５に係る製造方法により製造されたものであることは、訂正前の特許請求の範囲の請求項１、４及び６の記載から導き出せる事項であるから、上記訂正事項１５は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正である。
タ　訂正事項１６について
　上記訂正事項１６は、訂正前の請求項１３での「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることを明確するものであるから、上記「エ　訂正事項４について」で述べたのと同様に、上記訂正事項１６は、明瞭でない記載の釈明を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
チ　訂正事項１７について
　上記訂正事項１７は、訂正前の請求項１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量の範囲を、下限の「４０質量％」を「５０質量％」とするものであるから、上記「オ　訂正事項５について」で述べたのと同様に、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
ツ　訂正事項１８について
　上記訂正事項１８は、訂正前の請求項１３の２以上１２以下という「酸価」が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の「酸価」であることを明らかにするものであるから、明瞭でない記載の釈明を目的とするものである。
　また、訂正前の請求項１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み、
　酸価が２以上１２以下であり、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。」との記載によれば、この２以上１２以下という「酸価」が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の酸価を意味していることは明らかであるから、上記訂正事項１８は、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
テ　訂正事項１９について
（ア）上記訂正事項１９は、訂正前の請求項１５の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に対して、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理し、さらに蒸留して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であ」るものとの特定を付すものである。
　この訂正は、上記「ソ　訂正事項１５」で付された特定に、さらに「蒸留して得られた」との特定を加えたものであるが、「蒸留して得られた」ものであっても、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、主要な成分であり訂正前の請求項１５にて特定されていた「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」及び「低級アルコールＤＨＡエステル化物」に加え、酵素分解処理することにより生じる他の生成物、未反応物及び不純物等多様な成分が含まれるものに限定されることになるから、上記訂正事項１９は、上記「ソ　訂正事項１５」で述べたのと同様に、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
ト　訂正事項２０について
　上記訂正事項２０は、訂正前の請求項１５での「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量」に対するものであることを明確するものであるから、上記「エ　訂正事項４について」で述べたのと同様に、上記訂正事項２０は、明瞭でない記載の釈明を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
ナ　訂正事項２１について
　上記訂正事項２１は、訂正前の請求項１５の「酸価」が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の「酸価」であることを明らかにするものであるから、上記「ツ　訂正事項１８について」で述べたのと同様に、上記訂正事項２１は、明瞭でない記載の釈明を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
（２）請求項２４についての訂正
ア　訂正事項２２について
　上記訂正事項２２は、訂正前の請求項２４の「リパーゼ」を、「１，３位特異リパーゼ」に限定するものであるから、上記「ア　訂正事項１について」で述べたのと同様に、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
イ　訂正事項２３、２４、２６について
　上記訂正事項２３、２４、２６は、それぞれ上記訂正事項２、３及び５と同じであるから、上記「イ　訂正事項２について」、上記「ウ　訂正事項３について」及び上記「オ　訂正事項５について」で述べたのと同様に、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
ウ　訂正事項２５について
　上記訂正事項２５は、上記訂正事項４と同じであるから、上記「エ　訂正事項４について」で述べたのと同様に、明瞭でない記載の釈明を目的とするものであるといえると共に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではない。
（３）請求項〔１ないし２３〕、２４についての訂正のまとめ
　よって、上記訂正事項１ないし３、５ないし９、１１ないし１５、１７、１９、２２ないし２４、２６は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に掲げる特許請求の範囲の減縮を目的とするものであるといえるとともに、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないから、同法同条第９項において準用する同法第１２６条５項及び第６項の規定に適合するものといえる。
　また、上記訂正事項４、１０、１６、１８、２０、２１、２５は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第３号に掲げる明瞭でない記載の釈明を目的とするものであるといえるとともに、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないから、同法同条第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合するものといえる。
（４）明細書についての訂正
ア　訂正事項２７について
　訂正前の明細書の段落【００７２】の「公益社団法人日本油化学会制定の基準油脂分析試験法（日本油化学会規格試験法委員会編、基準油脂分析試験法・・・：日本油化学会
制定、２０１３年版、１．５　抽出油の酸価）」の「１．５」との記載は、異議申立人より甲第５号証として提出された「公益社団法人日本油化学会制定の基準油脂分析試験法（日本油化学会規格試験法委員会編、基準油脂分析試験法）」の第１頁の表題に「１．６−２０１３　抽出油の酸価」と記載されているように、「１．６」の誤記であることは明らかであるから、上記訂正事項２７は、誤記の訂正を目的とするものである。
　そうすると、上記訂正事項２７は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第２号に掲げる誤記の訂正を目的とするものであるといえるとともに、願書に最初に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、かつ実質上特許請求の範囲を拡張し又は変更するものではないから、同法同条第９項において準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合するものといえる。
３　小括  
　上記「２」のとおり、本件訂正は、特許法第１２０条の５第３項及び第４項並びに同条第９項において準用する同法第１２６条第４項の規定に従い、一群の請求項を構成する請求項〔１ないし２３〕、及び一群の請求項となる関係を有する請求項のない請求項２４ごとに、それぞれについて訂正することを求めるものであり、それらの訂正事項はいずれも、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号ないし第３号に掲げる事項を目的とするものに該当し、かつ、同条第９項において準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合するので、訂正後の請求項〔１ないし２３〕、２４について訂正することを認める。
第３　本件発明 
  
　上記「第２」のとおり、本件訂正は認容し得るものであるから、本件訂正後の請求項１ないし２４に係る発明（以下、請求項１に係る発明を項番に対応して「本件発明１」、「本件発明１」に係る特許を「本件特許１」などといい、併せて「本件発明」、「本件特許」ということがある。）は、次のとおりである。
「【請求項１】
　ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を、
１，３位特異
　
前記原料油脂が魚油であり、
　前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　前記処理の反応液中における
添加された
０．５
　前記反応液の酸価が２以上１２以下であり、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下である、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項２】
　請求項１において、
　前記処理の反応液は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上２．５質量部以下の低級アルコールをさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項３】
　請求項２において、
　前記処理において、前記処理の反応液に前記低級アルコールを連続的にまたは段階的に添加する、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
　請求項１ないし
３
　前記処理において、前記固定化酵素は粒子状である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
　請求項１ないし
３および５
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物および前記低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物と、該混合物以外の成分とを分離する工程をさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項８】
　請求項７において、
　前記混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項９】
　請求項７または８において、
　前記混合物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
【請求項１０】
　請求項７ないし９のいずれか１項において、
　前記混合物を銀塩の水溶液と接触させる工程を含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項１１】
　請求項１０において、
　前記銀塩の水溶液と接触させた後の前記混合物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程をさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項１２】
　請求項７ないし
９
　前記混合物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程をさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項１３】
　
ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、
　
前記原料油脂が魚油であり、
　
前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０
　
前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
【請求項１４】
　請求項１３において、
　ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．１５以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
【請求項１５】
　
ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理し、さらに蒸留して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、
　
前記原料油脂が魚油であり、
　
前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
　
前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
【請求項１６】
　請求項１５において、
　ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
【請求項１７】
　請求項１３ないし１６のいずれか１項において、
　酸価が２以上５未満である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
【請求項１８】
　請求項１３または１４に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、請求項１５または１６に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物と、前記組成物以外の成分とを分離する工程を含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項１９】
　請求項１５又は１６に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有物を銀塩の水溶液で接触させる工程を含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項２０】
　請求項１５ないし１７のいずれか１項に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程を含む、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
【請求項２１】
（削除）
【請求項２２】
　請求項７ないし１２
、
、および１９
７に
【請求項２３】
　請求項７ないし１２
、
、および１９
７に
【請求項２４】
　ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、
１，３位特異
　
前記原料油脂が魚油であり、
　前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　前記処理の反応液中における
添加された
０．５
　前記反応液の酸価が２以上１２以下であり、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下であり、
　前記処理後の固定化酵素を繰り返し使用する方法。」
第４　平成２８年１２月２２日付けで通知した取消理由、及びこの取消理由通知において採用しなかった特許異議の申立理由（以下、「申立理由」という。）の概要
  
１　取消理由の概要
　請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４（請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４に係る特許）（当審注：取り下げられたものと見なされた平成２８年９月５日付け訂正請求書に添付された特許請求の範囲に記載された請求項。以下、「第２」と区別して「先の請求項」という。）に対して平成２８年１２月２２日付けで特許権者に通知した取消理由の要旨は、次のとおりである。
（１）特許法第３６条第６項第１号
　先の請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４に係る発明が、発明の詳細な説明に記載したものでなく、先の請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４に係る特許は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである（以下、「取消理由１」という。）。
（２）特許法第３６条第６項第２号
　先の請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４に係る発明が、明確でなく、先の請求項１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４に係る特許は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである（以下、「取消理由２」という。）。
（３）特許法第２９条第２項
　先の請求項１３ないし２０、２２、２３に係る発明は、下記刊行物１（甲第２号証）に記載された発明及び刊行物２ないし４に記載される周知の技術的事項に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、先の請求項１３ないし２０、２２、２３に係る特許は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであるから、同法第１１３条第２号に該当し、取り消すべきものである（以下、「取消理由３」という。）。
　　　　　　　　　　　　　　　　　記
　刊行物１：特許第４２３６１２８号公報（特許異議申立で提出された甲第２号証）
　刊行物２：特開平４−１５９３９８号公報
　刊行物３：特開平４−２４３８４９号公報
　刊行物４：特開２０１０−６４９７４号公報
２　平成２８年１２月２２日付けで通知した取消理由に採用しなかった申立理由の概要
  
（１）特許法第３６条第６項第２号（特許異議申立書第７頁第２６行〜第９頁第６行参照。）
　特許された請求項１ないし２４に係る発明が、明確でなく、請求項１ないし２４に係る特許は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである（以下、「申立理由１」という。）。
（２）特許法第３６条第４項第１号及び第６項第２号（特許異議申立書第９頁第７行〜第２１頁第１９行参照。） 
  
　本件特許明細書の発明の詳細な説明の記載には不備があり、請求項１ないし１２、１８ないし２０、２２ないし２４（方法の発明）に係る特許は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであると共に、特許された請求項１ないし１２、１８ないし２０、２２ないし２４に係る発明が、発明の詳細な説明に記載したものでなく、請求項１ないし１２、１８ないし２０、２２ないし２４に係る特許は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである（以下、「申立理由２」という。）。
（３）特許異議申立てで提出された証拠
　甲第１号証：Enzyme Microb.Technol.,1993,vol.15,July p601-606（部分訳文が添付されている。）
　甲第２号証：特許第４２３６１２８号公報
　甲第３号証：特許第５２０４７７６号公報  
　甲第４号証：水産ハンドブック、２０１２年６月１０日発行、第４５０、４５１頁
　甲第５号証：基準油脂分析試験法、２０１３年版、１．６
　甲第６号証：第１６改正日本薬局方、平成２３年４月１日、第３９４、３９５頁
　甲第７号証：Enzyme and Microbial Technology 26(2000)p516〜p529
　甲第８号証：Ecology of Food and Nutrition,44(2005)p23〜p35
第５　当審の判断
１　取消理由１（特許法第３６条第６項第１号）について
（１）先の請求項１ないし３、５、７ないし１２、２２ないし２４に係る発明に対して通知した取消理由１について
　先の請求項１ないし３、５、７ないし１２、２２ないし２４に係る発明に対して、通知した取消理由１は、要するに以下のものである。
　『本件発明は、本件明細書の段落【０００６】の記載によれば、「簡便な方法にて、純度が高い低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を効率良く得ることができる低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法および低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を提供する」ことを発明の課題とするものである。 
　ここで、本件発明１は、「製造方法」の発明であるところ、本件発明１での製造方法としての具体的手段は、「固定化された固定化酵素である１，３位特異リパーゼを用いる」ということだけであるが、リパーゼを用いた処理で、本件発明１で特定されている処理後の反応液や低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に関する条件を満たすことが、実際、確認されているのは「サーモマイセス・ラヌギノーゼ（Thermomyces lanuginose）」（段落【０１５３】）及び「リパーゼＦＡＰ−１５」（Rhizopus sp.）（段落【０１７９】）のみである。
　そして、単に１，３位特異リパーゼといっても、反応性や、反応特異性が異なることは、技術的な常識であり、単に１，３位特異リパーゼであるだけで、本件発明１で特定されている処理後の反応液や低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に関する規定を満たすことができるとはいえないし、リパーゼによる反応の条件によっても、処理後の反応液や低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の組成は変化するといえるから、本件発明は、１，３位特異リパーゼ及び本件発明１に特定される反応条件「以外」の反応条件に関し、上記の発明の課題を解決するための特定がなされていないと言わざるを得ない。 
　そうすると、「１，３位特異リパーゼ」及び「リパーゼによる反応の条件」に関し、本件発明１等は、本件の発明の詳細な説明に記載される発明の課題を解決できることを当業者が認識できるように記載された範囲を超えるものである。』 
　まず、１，３位特異リパーゼに関し検討するに、この理由に対し、本件訂正で、本件発明１等で、原料油脂が「魚油」であることが特定された。ここで、「１，３位特異リパーゼ」とは、本件明細書の段落【００５８】の記載によれば、グリセリドの１，３位に特異的に作用するリパーゼであるといえるところ、「魚油」は、同段落【００４７】の記載によれば、ＥＰＡ及びＤＨＡ等の脂肪酸を構成脂肪酸とするグリセリン脂肪酸エステルを含むものであって、特許権者が、提出した乙第１号証の段落【０００３】の「EPAやDHAを含有する油としては海産動物油、特にマグロ、カツオ、イワシ、サバ、サンマ、アジ、イカ、タラ、アザラシ等に含まれる油が挙げられる。マグロ油を例にとってトリアシルグリセロール（トリグリセリドと言う場合もある）の分子種分布を調べると、EPAはトリアシルグリセロールの1,2,3位にほぼ均等に存在しているのに対し、DHAは2位に多く存在する。」の記載によれば、海産動物油（魚油）では、ＥＰＡがトリアシルグリセロールの１，２，３位にほぼ均等に存在しているのに対し、ＤＨＡは２位に多く存在するものである。これにより、この魚油を、その種類に限定されることなく１，３位特異リパーゼを用いて低級アルコールでのエステル化を行えば、低級アルコールＤＨＡエステル化物に対し低級アルコールＥＰＡエステル化物を相対的に多く得ることができることが理解できる。
　また、本件発明は、本件発明１に「反応液中における添加された水分含量が０．５質量％以上」と特定されるように酵素処理の反応液に積極的に「水」を添加することにより、同段落【００３６】の記載によれば、酵素の安定性が高められる結果、酵素の繰り返し使用が可能になり、かつ、酵素反応により生じるグリセリンを水中に誘導させることで、グリセリンが油中で固まるのを防止し、酵素反応を円滑に進行させることができること、また、同段落【００７６】の記載によれば、原料油脂が加水分解されて遊離脂肪酸が生成する結果、該反応液中の遊離脂肪酸の濃度が高くなる（該反応液の酸価が高くなる）ため、酵素安定性が高められるが、この作用機序は、特に、１，３位特異リパーゼの種類に限定されるものではないことが理解できる。
　そして、同段落【０１５３】〜【０１７０】【表１】に記載される水分含量を０．５質量％〜５０質量％まで変化させた条件で１，３位特異リパーゼである「サーモマイセス・ラヌギノーゼ（Thermomyces lanuginose）」（段落【０１５３】）を用いて酵素反応を行った実施例１〜８で、本件発明１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量、「低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率」が本件発明１の範囲を満足すること、実施例１では、酸価が本件発明１の範囲を満足することが示されているところ、特許権者が、提出した乙第３号証には、本件発明の実施例で用いられている１，３位特異リパーゼ以外の１，３位特異リパーゼである「Rhizomucor Miehei」等を用いても、本件発明１で特定されている処理後の反応液や低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に関する条件を満たす低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物が得られることが示されている。
　そうすると、本件発明１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量、「低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率」及び「反応液の酸価」の範囲を満たす低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る上で、「１，３位特異リパーゼ」が、本件明細書の実施例に記載される特定の１，３位特異リパーゼである必要があるとまではいえない。
　次に、リパーゼによる反応の条件について検討するに、本件明細書の実施例を見ても、反応は、「３０℃にて２４時間」反応させる（段落【０１５４】）というもので特別な反応条件を採用しているものではないから、本件発明１に「リパーゼによる反応の条件」の詳細が特定されていないからといって、本件発明１の上記の各範囲を満たす低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得ることができない（本件発明の発明の課題を解決することができない）とまではいえない。
　よって、本件発明１、本件発明を引用する２、３、５、７ないし１２、２２、２３、及び本件発明１と同様の特定がなされている本件発明２４が、本件明細書の発明の詳細な説明に記載される発明の課題を解決することを当業者が認識できるように記載された範囲を超えるものであるとはいえない。
（２）先の請求項１３〜２０、２２、２３に係る発明に対して通知した取消理由１について
　先の請求項１３〜２０、２２、２３に係る発明に対して、通知した取消理由１は、要するに以下のアないしウの３点である。
ア　『本件発明１３は、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を５０質量％以上９０質量％以下含み、 
　酸価が２以上１２以下であり、 
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。 
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０」との特定がなされているところ、この特定では、この低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物が、原料油脂をリパーゼを用いて処理することで得られたものであるのか明らかでなく、また低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物中の低級アルコール脂肪酸エステル化物「以外」の物質や、低級アルコール脂肪酸エステル化物中の低級アルコールＥＰＡエステル化物、低級アルコールＤＨＡエステル化物「以外」の物質が任意のものを含むことになるが、本件の発明の詳細な説明に記載されるのは、あくまで、原料油脂をリパーゼを用いて処理することで得られたものであるから、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物中の低級アルコール脂肪酸エステル化物「以外」の物質や、低級アルコール脂肪酸エステル化物中の低級アルコールＥＰＡエステル化物、低級アルコールＤＨＡエステル化物「以外」の物質は、原料油脂をリパーゼを用いて処理する際の「特定」の物質であるはずである。 
　そうすると、本件発明１３は、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」及び「低級アルコールＤＨＡエステル化物」以外の物質に関し、本件の発明の詳細な説明の記載に対応しないものである。
　また、本件発明１５についても、発明の詳細な説明の記載には、原料油脂をリパーゼを用いて処理することで得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を、さらに、蒸留して得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であることしか記載されていないから、本件発明１５も、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」及び「低級アルコールＤＨＡエステル化物」以外の物質に関し、本件の発明の詳細な説明の記載に対応しないものである。』
イ　『本件発明１３及び１５では、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる酸に関し、「酸価が２以上１２以下であり」と特定されるのみであり、この酸価が、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂」から生成した「遊離脂肪酸」であることが明らかでない。そして、「遊離脂肪酸」に限定されない単なる「酸」を意味するだけでは、本件の発明の詳細な説明に記載されるようにこの酸によりリパーゼが安定化することができるとはいえない。 
　そうすると、本件発明１３及び１５は、「酸価」で表される酸に関し、本件の発明の詳細な説明の記載に対応しないものである。』
ウ　『「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に係る本件発明１３は、酸価が２〜１２であることが特定されている。 
　一方、本件明細書には、原料油脂をリパーゼを用いて処理することで得られた「反応液」に関しては、酸価が２〜１２であることは記載されている（段落【００７０】、【００７１】）。ここで、上記「反応液」が、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」と異なるものである場合には、本件明細書には、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の酸価は、「５．９５」、「６．１７」（段落【０１５５】）の記載しかないこととなり、酸価が「２〜１２」であることは記載されていないこととなる。 
　また、酸価に関し同じ特定のある本件発明１５についても、明細書には、酸価が「１０．１」（段落【０１７２】）の記載しかなく、酸価が「２〜１２」であることは記載されていない。 
　そうすると、本件発明１３及び１５の「酸価２〜１２である」ことは、本件の発明の詳細な説明に記載された事項ではない。』
エ　上記「ア」、「イ」について
　上記「ア」、「イ」の取消理由に対し、本件訂正により、本件発明１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であ」るものに特定され、
　本件発明１５の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」は、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理し、さらに蒸留して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であ」るものに特定された。
　そして、この訂正により、本件発明１３及び１５の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物が、魚油を、固定化された１，３位特異リパーゼを用いて処理したものであることが明らかになり、本件発明１３、１５及び本件発明１３又は１５を引用する本件発明１４、１６ないし２０、２２、２３は、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」及び「低級アルコールＤＨＡエステル化物」以外の物質に関し、本件の発明の詳細な説明の記載に対応しないものであるということはいえない。
　また、本件発明１３及び１５で、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の「酸価」を発生する酸に関しても、魚油を固定化された１，３位特異リパーゼを用いて処理した際に生成する「遊離脂肪酸」であることが明らかとなったから、本件発明１３、１５及び本件発明１３又は１５を引用する本件発明１４、１６ないし２０、２２、２３は、「酸価」に関し、本件の発明の詳細な説明の記載に対応しないものであるということはいえない。
　本件発明１３及び１５の上記の訂正に係る事項は、製造に関して技術的な特徴や条件が付されたものであるから、本件発明１３及び１５には、その物の製造方法が記載されているといえる。
　ここで、物の発明に係る特許請求の範囲にその物の製造方法が記載されている場合において、当該特許請求の範囲の記載が特許法第３６条第６項第２号にいう「発明が明確であること」という要件に適合するといえるのは、出願時において当該物をその構造又は特性により直接特定することが不可能であるか、又はおよそ実際的でないという事情（以下「不可能・非実際的事情」という）が存在するときに限られると解するのが相当である（最高裁第二小法廷平成２７年６月５日　平成２４年（受）第１２０４号、平成２４年（受）第２６５８号）とされている。
　そこで、本件発明１３及び１５が明確であるか否かについて検討するに、本件発明１３及び１５は、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物が、魚油を固定化された１，３位特異リパーゼを用いて処理したものであることを特定するものである。
　ここで、魚油である原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、グリセリドの他に多様な成分さらには不純物を含む魚油を、酵素処理して得られるものであるから、主要な成分である「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」及び「低級アルコールＤＨＡエステル化物」の他に、酵素処理で生じる他の生成物や未反応物、さらには不純物等多種多様な成分が含まれるものである。
　そして、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の多種多様な成分を解析して特定することは、本件優先日当時における成分分析の技術をしても可能であったとはいうことができないし、仮にそれが可能であったとしても、多くの試行錯誤を重ねて多種多様な成分を分析してそれを請求項に特定することは、およそ実際的ではないといえる。
　そうすると、本件発明１３及び１５には、不可能・非実際的事情が存在するといえるから、本件発明１３及び１５に、その物の製造方法が記載されているとしても、発明が明確でないということにはならない。
オ　上記「ウ」について
　本件明細書の段落【０１３５】の「＜第１組成物＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（以下、「第１組成物」ともいう。）は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下（より具体的には、５０質量％以上８０質量％以下）含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む。第１組成物は、例えば、上述の酵素処理又は上述の酵素処理とそれに続く銀処理により得ることができる。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０」との記載によれば、第１組成物とされる低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物が、酵素処理（又は上述の酵素処理とそれに続く銀処理）により得るものであることが理解でき、この酵素処理により得られるものは、「反応液」であるといえる。
　そうすると、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価は、反応液の酸価と同じになるから、本件発明１３、１５及び本件発明１３又は１５を引用する本件発明１４、１６〜２０、２２、２３の「酸価２〜１２である」ことは、本件の発明の詳細な説明に記載された事項ではないとはいえない。
（３）取消理由１のまとめ
　上記（１）、（２）で述べたように、本件発明１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、発明の詳細な説明に記載したものではないとはいえないから、本件特許１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものであるとすることはできない。
２　取消理由２（特許法第３６条第６項第２号）について
（１）先の請求項１ないし３、５、７ないし１２、２２ないし２４に係る発明に対して通知した取消理由２について
　先の請求項１ないし３、５、７ないし１２、２２ないし２４に係る発明に対して、通知した取消理由２は、要するに以下のものである。
『本件発明で「本件発明１の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の意味が明らかでない。また、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」とリパーゼ反応後の「反応液」との関係が明かでない。』
　上記「１（２）オ」で述べたように、本件明細書の段落【０１３５】の記載によれば、本件発明では、酵素処理により得られた「反応液」が、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物とされているし、また、酵素処理とそれに続く銀処理がなされたものも、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物とされている。さらには、同段落【０１４１】及び【０１４２】の記載によれば、同段落【１３５】に記載される第１組成物とされる低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を分子蒸留処理又は分子蒸留処理とこれに続く銀処理により得られた第２組成物も、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物とされている。
　これを踏まえると、本件において、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物とは、低級アルコールＥＰＡエステル化物、低級アルコールＤＨＡエステル化物等を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物、原料及び原料からの反応物であるグリセリドを主として含み、他に水や低級アルコール、遊離脂肪酸なども含み得るものを統括的に低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物としていることが理解できる。
　そうすると、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の意味が明らかでないとはいえないし、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」とリパーゼ反応後の「反応液」との関係が明かでないともいえない。
（２）先の請求項１３ないし２０、２２、２３に係る発明に対して通知した取消理由２について
　先の請求項１３ないし２０、２２、２３に係る発明に対して、通知した取消理由２は、要するに以下のものである。
　『本件発明１３の特定では、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が１００質量％に達していないが、残部が何からなるものであるのか明らかでないから、本件発明１３の記載は、明確でない。　本件発明１５についても、「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の含有量が１００質量％に達しない場合、残部が何からなるものであるのか明らかでないから、本件発明１５の記載は、明確でない。』 
　本件訂正により、本件発明１３及び１５において、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」が、ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られたものであるか、又はそれを蒸留して得られたものであると特定されることにより、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に含まれる「低級アルコール脂肪酸エステル化物」の残部が、グリセリドや酵素分解処理で生じる生成物、未反応物及び不純物等多種多様な成分であることが明らかになったから、本件発明１３、１５及び本件発明１３又は１５を引用する本件発明１４、１６〜２０、２２、２３は、明確でないとはいえない。
（３）先の請求項２２、２３に係る発明に対して通知した取消理由２について
　先の請求項２２、２３に係る発明に対して、通知した取消理由２は、要するに以下のものである。
　『本件発明２２及び２３は、「・・・及び請求項１３ないし１７および２１に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」と特定されているが、「請求項２１」は、存在しないから、「請求項２１」を引用する本件発明２２及び２３は、明確でない。』
　本件訂正により、本件発明２２及び２３は、「・・・及び請求項１３ないし１７に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」と訂正されることにより、本件発明２２及び２３は、「請求項２１」を引用しないものとなったから、本件発明２２及び２３は、明確でないとはいえない。
（４）取消理由２のまとめ
　上記（１）ないし（３）で述べたように、本件発明１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、明確でないとはいえないから、本件特許１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものであるとすることはできない。
３　取消理由３（特許法第２９条第２項）について
（１）刊行物に記載の事項
ア　刊行物１（特許第４２３６１２８号公報）の記載事項
（ア−１）第２頁左欄第３５行〜右欄第６行
「【請求項１２】
実質的に純粋なＥＰＡならびに実質的に純粋なＤＨＡを得るための、請求項７〜９のいずれか１つに記載の方法であって、さらに次の工程：
（ｉ）１％未満の水含量の条件下、かつＥＰＡのエステル交換を優先的に触媒するに活性なリパーゼの存在下に、Ｃ１〜Ｃ６アルコールにより前記グリセリド画分をエステル交換する工程；
（ｉｉ）得られたＥＰＡに富むＣ１〜Ｃ６アルコールエステル画分と残余のＤＨＡに富むグリセリド混合物とを分離する工程；
（ｉｉｉ）上記ＥＰＡ−Ｃ１〜Ｃ６アルコールエステル画分を処理し、そして該ＥＰＡ画分を実質的に１００％の純度にまで濃縮する工程；
（ｉｖ）ＤＨＡのエステル交換を触媒するに活性なリパーゼの存在下に、Ｃ１〜Ｃ６アルコールにより上記ＤＨＡに富むグリセリド混合物をエステル交換する工程；および
（ｖ）得られたＤＨＡ−Ｃ１〜Ｃ６アルコールエステル画分を処理し、そして該ＤＨＡ画分を実質的に１００％純正なＤＨＡにまで濃縮する工程；
を含む、方法。」
（ア−２）第３頁左欄第２９行〜右欄第９行
「本発明は、より高い濃度の多不飽和脂肪酸を有する精製された生成物を得るために、グリセリドの形態で飽和および不飽和脂肪酸を含有する油組成物を処理する新規な方法に関する。本発明は、特に好ましい態様において、魚油組成物中のＥＰＡおよびＤＨＡの濃度を上昇させる方法を提供する。
・・・（略）・・・
広く知られているように、ＥＰＡおよびＤＨＡは特に医薬産業および食品添加物産業においてその価値が上昇している。」　
（ア−３）第６頁右欄第３〜２８行
「本発明の方法の重要な特徴は、リパーゼで触媒されるエステル交換が実質的に無水の反応条件下に実施されなければならないことである。好ましくは、反応系内の総水量は、海産油とリパーゼを含む全ての供給源からのものを合わせて１％（w/w）未満でなければならず、好ましくは０．５（w/w）未満であり、そして最も望ましくは０．０１〜０．２５％（w/w）の間である。（典型的な場合において、海産油出発材料は０．１〜０．２％（w/w）の水を含有し、アルコール試薬として使用される無水エタノールは０．２〜０．５％（w/w）の水を含有し、そしてリパーゼ調製物は２〜２．５％（w/w）の水を含有している。）
しかし、少量の水、一般的にはリパーゼの重量に基づいて約１〜２重量％が、活性を成立させるためには酵素系内に常に必要とされるので、完全な無水反応条件を採用することは不可能である。必要とする水の量は使用する酵素に非常に大きく依存する（例えばカンジダ・シリンドラセア（Candida cylindracea）のリパーゼは本発明の方法において最大の活性を発揮するために約１０重量％の水の添加を必要とする）。後記実施例に示すとおり、これらの極少量の水は有意な加水分解を全く引き起こさず、そしてエステル交換された生成物中の遊離脂肪酸の濃度を３重量％未満に維持すること、即ち既述のズイとワードの報告の約１０％だけの加水分解率を維持することが可能である。」
（ア−４）第８頁左欄第６〜４９行
「例えば、高度に濃縮されたＥＰＡおよびＤＨＡを含有するエチルエステル組成物を得ることが所望であれば、分子蒸留後に得られるグリセリド画分は、例えば、触媒量のナトリウムエトキシドまたはカリウムエトキシド等の存在下に無水エタノールを用いた化学的エステル交換によりエステル化されることができる。この方法は、次の反応式により模式的に説明される。
（単純化のために、１，２−および２，３−ジグリセリドおよび２−モノグリセリドだけが上記式中に示されている。）
次いで、製造されたグリセロールが公知の技法を用いて除去され得る。典型的には、これは、従来法に比べて非常に良好な多不飽和脂肪酸の回収による、約４５〜５０重量％のＥＰＡ＋ＤＨＡ含量をもたらす。
より具体的には、本発明による高濃度ＥＰＡ＋ＤＨＡ組成物を得るための統合方法は、さらに次の工程：
（ｃ）ナトリウムエトキシドまたはカリウムエトキシド等の塩基をエステル交換を触媒するに充分な量だけ含有するアルカリ性環境のような化学的触媒作用か、または実質的に無水である条件下でカンジダ・アンタラクチカ（Candida antarctica）のリパーゼを用いるような酵素的触媒作用を用いて、グリセリド画分を低級アルコールによりエステル交換する工程；
（ｄ）得られたアルキルエステル生成物をアルカノール中で過剰の尿素と共に５５〜９９℃の温度に加熱する工程；
（ｅ）工程（ｄ）の生成物を、例えば０〜２５℃に冷却して尿素脂肪酸アルキルエステル付加物を沈殿し、その後、該付加物を分離除去してｎ−３脂肪酸エステルを主に含有する溶液を残す工程；
（ｆ）工程（ｅ）で残した溶液からｎ−３脂肪酸アルキルエステルを分離する工程；および
（ｇ）工程（ｆ）で得られた混合物から全ての溶媒を除去する工程；
を含む。
本発明の統合方法の特に好ましい態様において、工程（ｇ）で得られた濃縮物が、例えば９工程の分子蒸留のような１種類またはそれ以上の手段によりさらに濃縮されて、その中に含まれるＥＰＡ＋ＤＨＡ濃度が８５重量％またはそれ以上に上昇させられる。」
（ア−５）第９頁左欄第４５行〜右欄第２８行
「実施例　１
本研究の目的は、多不飽和脂肪酸、特にＥＰＡおよびＤＨＡを、魚油組成物中の飽和および単不飽和脂肪酸から分離するための方法における種々のリパーゼの使用を試験することであった。
下記のリパーゼを試験した：
１つの試験において、上記リパーゼのそれぞれを３７℃で試験し、その結果を表Ｉに示した。別の試験においては、２種類のシュードモナス属（Pseudomonas）のリパーゼであるＰＦＬとＰＳＬを２０℃で試験し、その結果を表IIおよびIIIに示した。
試験に使用した手順は次の通りである：
魚油のトリグリセリドをプロノバ・バイオケア社（Pronova Biocare a.s., Norway）から調達したが、それは１４．９％のＥＰＡと９．８％のＤＨＡを含有していた。これらは、さらなる処理をすることなく調達したままで直接使用した。全ての溶媒は分析品質のものをメルク社（Merck AG in Germany）から購入した。特に断らない限り、化学量論量、即ちトリグリセリドに基づいて３モル当量の（無水）エタノールを使用した。カンジダ・シリンドラセア（Candida cylindracea）のリパーゼを用いた場合以外は、反応系に水は全く添加しなかった。魚油出発材料およびリパーゼから生じる水の含量を約０．３〜０．４重量％と計算した。カンジダ・シリンドラセア（Candida cylindracea）のリパーゼを用いた場合には、リパーゼの重量に基づき１０重量％の量で水を添加し、結果として総量で約０．８重量％の水を含有する反応系とし、この場合でさえも実質的に無水である条件を維持した。」
（ア−６）第１０頁左欄第１３行〜第３６行
「典型的な手順において、リパーゼ（０．５ｇ）を、魚油［５．０ｇ、約５．６７ミリモル（分子量約８８２ｇ/モル）］と無水エタノール（０．８０ｇ、１７．４ミリモル）の混合物に添加した。得られた酵素懸濁液を窒素雰囲気下に室温（表Ｉの研究においては３７℃）で穏やかに攪拌した。適当な時間をおいた後、クロロホルムの添加および濾過による酵素の分離により反応を止めた。有機溶媒を真空下（回転蒸留器および高真空ポンプ処理）に除去して定量的収量で粗生成物混合物を得た。生成物を等量のクロロホルムに溶解し、上記の通りＨＰＬＣ装置に注入した。それぞれの画分を収集して溶媒を真空下に蒸留し、計量し、そして最後にガスクロマトグラフィーにて分析した。
分取ＨＰＬＣの代わりに分取ＴＬＣを用いた場合には、適当なときにパスツールピペットを用いて少量（１００〜２００ｍｇ）の試料を反応系から取り出した。試料を第２のパスツールピペット内に設置した綿羊毛栓に通すことにより、酵素粒子を分離した。次いで、ＴＬＣプレートに導入する前に、それぞれの試料をクロロホルムに希釈した（２５０ｍｇ/ｍＬ）。
結果を、下記表Ｉ〜IIIに示す：
最初の表である表Ｉは、試験したリパーゼ全てを用いて３７℃で（３モル当量のエタノールを用いて）実施された研究の結果を要約している。」
（ア−７）第１０頁左欄「表１」「ＣＡＬ」
「
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　」
（ア−８）第１１頁右欄第３５行〜第４０行
「上記表Ｉ〜IIIにおいて、下記略号を使用している：
ＭＧ    モノグリセリド
ＤＧ    ジグリセリド
ＴＧ    トリグリセリド
ＦＦＡ    遊離脂肪酸
ＥＥ    エチルエステル」
（ア−９）第１６頁【図１】
「
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　」
（ア−１０）第１６頁【図２】
「
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　」
イ　刊行物２（特開平４−１５９３９８号公報）の記載事項
（イ−１）第１頁左下欄第４行〜１５行
「２．特許請求の範囲
１．高度不飽和脂肪酸又はその誘導体を、銀塩を含有する水性媒体に接触せしめて吸収溶解し、不溶物を除去した後、水性媒体と分離可能な有機溶媒を用いて抽出する事を特徴とする高度不飽和脂肪酸又はその誘導体の取得方法。
３．発明の詳細な説明
〔産業上の利用分野〕
　本発明は、サバ、イワシ等の魚油に含まれているエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等の高度不飽和脂肪酸又はその誘導体の抽出分離、精製する方法に関する。」
ウ　刊行物３（特開平４−２４３８４９号公報）の記載事項
（ウ−１）【特許請求の範囲】
「【請求項１】　高度不飽和脂肪酸類の含有物に銀塩を含む水性媒体溶液を混合し、次いで混合物から水性媒体相を分離し、この水性媒体相を混合していた場合の温度より高い温度にまで加温して油脂相と水性媒体相とを形成し、この水性媒体相部分を除去することを特徴とする高度不飽和脂肪酸類の精製方法。
【請求項２】　請求項１の方法において加熱の際に脂溶性疎水溶媒を系に共存させることを特徴とする方法。」
（ウ−２）【０００１】
「【産業上の利用分野】本発明は、純度の高い高度不飽和脂肪酸又はそのエステル、酸アミド更には高度不飽和アルコール等の高度不飽和脂肪族化合物（本明細書に於いて単に高度不飽和脂肪酸類と呼ぶ）を得る方法であり、サバ、イワシ等の魚油に含まれているエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等の高度不飽和脂肪酸またはその誘導体、ブタ等の動物油に含まれているアラキドン酸等の高度不飽和脂肪酸またはその誘導体、植物油に含まれているα−リノレン酸、γ−リノレン酸等の高度不飽和脂肪酸またはその誘導体、更に藻類や微生物由来の高度不飽和脂肪酸またはその誘導体等の抽出分離、精製する方法に利用することができる。」
エ　刊行物４（特開２０１０−６４９７４号公報）の記載事項
（エ−１）【特許請求の範囲】
「【請求項１】
高度不飽和脂肪酸誘導体を含有する脂肪酸の誘導体の混合物を銀塩の水溶液と接触せしめ、高度不飽和脂肪酸の誘導体を取得する方法において、上記銀塩水溶液を繰り返し使用するにあたり、上記銀塩水溶液中の遊離脂肪酸含量を、銀１ｇ当り０．２ｍｅｑ以下とすることを特徴とする、高度不飽和脂肪酸誘導体の取得方法。
【請求項２】
銀塩水溶液を、吸着剤に接触せしめることにより遊離脂肪酸含量を銀１ｇ当り０．２ｍｅｑ以下とする、請求項１に記載の高度不飽和脂肪酸の取得方法。
【請求項３】
上記銀塩水溶液に接触せしめる前の上記脂肪酸の誘導体の混合物の酸価が５以下である、請求項１又は２記載の高度不飽和脂肪酸誘導体の取得方法。
【請求項４】
銀塩水溶液に接触せしめる前の上記脂肪酸の誘導体の混合物を、吸着剤に接触せしめることにより酸価を５以下とする、請求項１乃至３のいずれかに記載の高度不飽和脂肪酸誘導体の取得方法。」
（２）刊行物１に記載の発明
　上記（ア−５）の記載によれば、刊行物１の「実施例１」には、ＥＰＡとＤＨＡを含有する魚油のトリグリセリドを、種々のリパーゼによりエタノール存在下、反応系での水の含量が約０．３〜０．４重量％のもとで反応させた試験例が記載されているところ、リパーゼの「ＣＡＬ」（上記（ア−５）の記載によれば、カンジダ・アンタラクチカ）について、上記（ア−６）の実験条件のもとで反応を行い、上記（ア−７）に示される結果によれば、「ＥＥ」（上記（ア−８）の記載によれば、エチルエステルである）が４７．３重量％、このエチルエステル中、「ＥＰＡ」が１８．５１重量％、「ＤＨＣ」が４．３３重量％含む、「エチルエステル含有組成物」が得られることが記載されている。 
　そうすると、刊行物１には、
「ＥＰＡとＤＨＡを含有する魚油のトリグリセリドを、ＣＡＬ（カンジダ・アンタラクチカ）によりエタノール存在下、反応液での水の含量が約０．３〜０．４重量％のもとで反応させて得られた、エチルエステル（ＥＥ）が４７．３重量％、エチルエステル中、ＥＰＡのエチルエステルが１８．５１重量％、ＤＨＡのエチルエステルが４．３３重量％含む、エチルエステル含有組成物。」（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されているといえる。
（３）対比・判断
ア　本件発明１３について
　本件発明１３と刊行物１発明を対比すると、エチルエステルを形成するエチルアルコールが、「低級アルコール」であることは、技術的な常識であるから、刊行物１発明の「エチルエステル（ＥＥ）」、「ＥＰＡのエチルエステル」、「ＤＨＡのエチルエステル」、及び「エチルエステル含有組成物」は、それぞれ、本件発明１３の「低級アルコール脂肪酸エステル化物」、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」、「低級アルコールＤＨＡエステル化物」、及び「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」に相当する。
　そして、刊行物１発明の「魚油」は、本件発明１３の「魚油」である「原料油脂」に相当し、刊行物１発明の「ＥＰＡとＤＨＡを含有する魚油のトリグリセリド」は、本件発明１３の「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂」に相当し、刊行物１発明の「ＣＡＬ（カンジダ・アンタラクチカ）」は、本件発明１３の「１，３位特異リパーゼ」と、「リパーゼ」である点で共通するから、刊行物１発明で、「ＥＰＡとＤＨＡを含有する魚油のトリグリセリドを、ＣＡＬ（カンジダ・アンタラクチカ）によりエタノール存在下、反応液での水の含量が約０．３〜０．４重量％のもとで反応させて得られた・・・エチルエステル含有組成物」は、本件発明１３と、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂をリパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であ」る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であるという点で共通する。
　また、刊行物１発明の「エチルエステル（ＥＥ）」の含有量に関し、上記（ア−７）の記載によれば、エチルエステル（ＥＥ）の重量％と、モノグリセリド／ジグリセリド／トリグリセリド（ＭＧ／ＤＧ／ＴＧ）の重量％の合計が１００重量％となることから、刊行物１発明の「エチルエステル（ＥＥ）」の４７．３重量％は、「エチルエステル（ＥＥ）」と、本件発明１３の「グリセリド」に相当する「モノグリセリド／ジグリセリド／トリグリセリド（ＭＧ／ＤＧ／ＴＧ）」の総量に対するものであると共に、「エチルエステル（ＥＥ）」を、「エチルエステル（ＥＥ）」と「モノグリセリド／ジグリセリド／トリグリセリド（ＭＧ／ＤＧ／ＴＧ）」の総量に対して、「所定量」含むという点で、本件発明１３に共通するといえる。
　さらに、刊行物１発明の「エチルエステル中、ＥＰＡのエチルエステルが１８．５１重量％、ＤＨＡのエチルエステルが４．３３重量％含む」点に関し、
　ＥＰＡのエチルエステルの分子量が約３１８、ＤＨＡのエチルエステルの分子量が約３４４であるから、低級アルコール脂肪酸エステル化物における、低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）は、換算すると、約「４．６２」（換算式：（１８．５１／３１８）／（４．３３／３４４））となり、本件発明１３の「３．０以上３０以下」の範囲に含まれるものである。
 　そうすると、本件発明１３と刊行物１発明は、
 「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂をリパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、
　前記原料油脂が魚油であり、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物を低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して所定量含み、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０」の点で一致し、以下の点で相違しているといえる。
（相違点１）
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に関し、本件発明１３では、酸価が２以上１２以下であるのに対し、刊行物１発明では、酸価が明らかでない点。 
（相違点２）
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物が、本件発明１３では、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、前記原料油脂が魚油であり、前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、前記リパーゼが固定化された固定化酵素である低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」であるのに対し、刊行物１発明では、「ＥＰＡとＤＨＡを含有する魚油のトリグリセリドを、ＣＡＬ（カンジダ・アンタラクチカ）によりエタノール存在下、反応液での水の含量が約０．３〜０．４重量％のもとで反応させて得られたエチルエステル含有組成物」である点。
（相違点３） 
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる低級アルコール脂肪酸エステル化物の低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対する含有量に関し、本件発明１３では、５０質量％以上９０質量％以下であるのに対し、刊行物１発明では、４７．３質量％である点。
　上記（相違点１）について以下検討する。
　刊行物１発明は、ＥＰＡとＤＨＡを含有する魚油のトリグリセリドを、ＣＡＬ（カンジダ・アンタラクチカ）によりエタノール存在下で、反応液での水の含量が約０．３〜０．４重量％のもとで反応させて得られたエチルエステル含有組成物である。そして、この水分量は、上記（ア−３）の「本発明の方法の重要な特徴は、リパーゼで触媒されるエステル交換が実質的に無水の反応条件下に実施されなければならないことである。・・・しかし、少量の水、一般的にはリパーゼの重量に基づいて約１〜２重量％が、活性を成立させるためには酵素系内に常に必要とされるので、完全な無水反応条件を採用することは不可能である。・・・後記実施例に示すとおり、これらの極少量の水は有意な加水分解を全く引き起こさず、そしてエステル交換された生成物中の遊離脂肪酸の濃度を３重量％未満に維持すること、即ち既述のズイとワードの報告の約１０％だけの加水分解率を維持することが可能である。」との記載によれば、刊行物１発明の反応液での水の含量が約０．３〜０．４重量％とは、本来無水の反応条件下に実施されなければならないが、酵素の活性を成立させるため必要な最低限度の水分量であるといえる。
　そして、上記（ア−３）には、さらに、この極少量の水（約０．３〜０．４重量％）は有意な加水分解を全く引き起こさないとされているから、同記載に「エステル交換された生成物中の遊離脂肪酸の濃度を３重量％未満に維持する」と記載されているとしても、加水分解により生じる実際の「遊離脂肪酸」の濃度は、３重量％近くまで上昇することはないといえるし、異議申立人の主張（異議申立書第１６頁第１、２行）によれば、酸価が２となる１重量％（概算では、酸価の数値は、％で表した遊離脂肪酸の含有量の約２倍になる）にも、「遊離脂肪酸」の濃度が上昇するとはいえない。
　さらに、刊行物１発明は、有意な加水分解を全く引き起こさない、すなわち、「遊離脂肪酸」を発生させないことを志向するものであるから、「遊離脂肪酸」の濃度を上昇させて、刊行物１発明の「酸価」を、本件発明１３の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価である２以上１２以下の範囲に重複するものとすることは、たとえ当業者であったとしても、容易に想到し得るとはいえない。
　また、刊行物２ないし４にも、刊行物１発明の「酸価」を、本件発明１３の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価である２以上１２以下の範囲に重複するものとすることを示唆する記載は見当たらない。
　一方、本件発明１３は、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価が２以上１２以下」との特定に対応して、本件明細書の段落【００７６】及び【００７７】の記載によれば、本件発明１３は、反応液中の水分量をむしろ高めるものであり、これにより、反応液中の遊離脂肪酸の濃度を高くし、この遊離脂肪酸とリパーゼとの相互作用により、反応液中の反応基質以外の物質がリパーゼに直接接触することにより引き起こされるリパーゼの失活を防ぐことができ、リパーゼの安定性を高めることができるという格別の効果を奏するものであるといえる。
　そうすると、上記（相違点１）により、本件発明１３は、同段落【００７６】及び【００７７】に記載される「リパーゼの安定性が高められる」という格別の効果を奏するものである。
　よって、上記（相違点２）及び（相違点３）を検討するまでもなく、上記（相違点１）が、当業者が容易に想到し得るものであるとはいえないから、本件発明１３は、刊行物１発明及び刊行物２ないし４に記載される周知の技術的事項に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるとはいえず、本件特許１３は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであるとすることはできない。
イ　本件発明１５について
　本件発明１５は、本件発明１３が、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」であるのに対し、「ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理し、さらに蒸留して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」である点、及び、本件発明１３が「低級アルコール脂肪酸エステル化物を低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０質量％以上９０質量％以下含」むのに対し、「低級アルコール脂肪酸エステル化物を低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して９０質量％以上含」む点のみで本件発明１３と相違している。
　そして、本件発明１５と刊行物１発明との間には、上記「ア　本件発明１３について」で述べた（相違点１）と同じ相違点があるから、その相違点についての判断も、本件発明１３と同じとなり、本件発明１５は、刊行物１発明及び刊行物２ないし４に記載される周知の技術的事項に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるとはいえず、本件特許１５は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであるとすることはできない。
ウ　本件発明１４、１６ないし２０、２２、２３について
　本件発明１４、１６、１７は、本件発明１３又は１５の発明特定事項をさらに限定したものであるし、本件発明１８ないし２０、２２、２３は、その発明の中に本件発明１３又は１５の内容を含むものであるから、本件発明１３又は１５と同様に、本件発明１４、１６ないし２０、２２、２３は、いずれも刊行物１発明及び刊行物２ないし４に記載される周知の技術的事項に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるとはいえず、本件特許１４、１６ないし２０、２２、２３は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであるとすることはできない。
（４）取消理由３に関するまとめ 
  
　上記（３）で述べたように、本件発明１３ないし２０、２２、２３は、刊行物１に記載された発明及び刊行物２ないし４に記載される周知の技術的事項に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるとはいえないから、本件特許１３ないし２０、２２、２３は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものであるとすることはできない。
４　申立理由１（特許法第３６条第６項第２号）について
（１）特許された請求項１ないし２４に係る発明に対して申し立てられた申立理由１について
　特許された請求項１ないし２４に係る発明に対して申し立てられた申立理由１は、要するに以下のものである。
『明細書の段落【００７２】には、酸価を「公益社団法人日本油化学会制定の基準油脂分析試験法（日本油化学会規格試験法委員会編、基準油脂分析試験法（Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆａｔｓ，ｏｉｌｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ）：日本油化学会制定、２０１３年版、１．６　抽出油の酸価）（甲第５号証）により測定することが記載されているが、この基準油脂分析試験法では、酸価とは試料から抽出した油分に含まれる遊離脂肪酸の量を酸価として測定するものと定義されている。
　ところが、同段落【００７３】の記載によれば、酸価を測定する試料は「反応終了後の反応液」であるところ、「反応終了後の反応液」とは、「グリセリド、低級アルコールエステル、遊離脂肪酸、グリセリン、未反応の水、低級アルコール、リパーゼ」等を含む組成物であるから、本件発明１の酸価は、上記「油分に含まれる遊離脂肪酸の量を酸価として測定するもの」との定義と異なるものである。
　そうすると、請求項１、２４の「酸価」とは、油分に含まれる遊離脂肪酸の酸価であるのか、本件明細書に記載される意味での酸価であるのか明らかでない。
　請求項１３及び１５の「酸価」も、水等を含む組成物全体を試料として測定した酸価であるのか、油分に含まれる遊離脂肪酸の酸価であるのか明らかでない。』
　本件発明１、２４では、「反応液の酸価」と特定されると共に、本件発明１３及び１５では、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価」と特定されているように、本件発明１、２４の酸価とは、「反応液」の酸価、本件発明１３及び１５の酸価とは、「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の酸価を意味していることは明らかである。
　そして、本件明細書段落【００７２】及び【００７３】の記載は、本件発明１の「反応液」、本件発明１３及び１５の「低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物」の「酸価」の測定を、上記の「基準油脂分析試験法」に基づいて行うことを意味していると理解すべきであるといえる。
　そうすると、上記の点で、本件発明１、２４、１３、１５及びそれらの発明を引用する本件発明２、３、５、７ないし１２、１４、１６ないし２０、２２、２３は、明確でないとはいえない。
（２）特許された請求項２１に対して申し立てられた申立理由１について
　特許された請求項２１に対して申し立てられた申立理由１は、要するに以下のものである。
　『請求項２１は、物の発明にその物の製造方法が記載されており、物の発明として不明確である。』
　本件訂正により、請求項２１は、削除されたから、上記の理由はないものとなった。
（３）申立理由１に関するまとめ
　上記（１）及び（２）で述べたように、本件発明１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、明確でないとはいえないから、本件特許１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものであるとすることはできない。
５　申立理由２（特許法第３６条第４項第１号及び第６項第２号）について
（１）特許された請求項１ないし２４に係る発明に対して申し立てられた申立理由２について
　特許された請求項１ないし２４に係る発明に対して申し立てられた申立理由２は、要するに以下のものである。
『訂正前の請求項１の特定を、「（Ａ）ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理して、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る工程を含み、
（Ｂ）前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
（Ｃ）前記処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上であり、
（Ｄ）前記反応液の酸価が２以上１２以下であり、
（Ｅ）前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み、
（Ｆ）前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率
（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。」のように（Ａ）〜（Ｆ）に分節した場合、（Ａ）〜（Ｃ）は方法の構成要件であるが、（Ｄ）〜（Ｆ）は目的物を限定する要件であるから、上記の（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の特定を満たせば、（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）を備えた目的物が得られることになる。
　ここで、甲第１号証、甲第２号証及び甲第３号証には、いずれも、上記の（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の各特定に合致する事項が記載されていながら、（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）を備えた目的物が得られていない。
　リパーゼ反応では、水とアルコールいずれもがリパーゼ反応の基質となるために、水が存在すれば遊離脂肪酸が生成してしまうところ、前記（Ｄ）は、目的物中の遊離脂肪酸量を規定することに対応し、前記（Ｅ）は、目的物中の低級アルコール脂肪酸エステル量を規定する。そして、これらは、油脂がリパーゼ反応により、加水分解された生成物とアルコール分解された生成物であるから、前記（Ｄ）及び前記（Ｅ）を同時に満たす目的物を、どのようにすれば得られるのか、請求項１には、何の開示もない。
　実施例のみが、その根拠であるが、前記（Ｄ）及び前記（Ｅ）を同時に満たす組成物が得られるのが、用いたリパーゼ特有の効果によるものであるのか、他の反応条件などによるものであるのか明らかでない。
　請求項１は、方法の発明でありながら、目的物が記載されているだけで、それを得る方法が開示されていないため、その権利範囲について、当業者が実施することができない。あるいは、請求項１は明細書記載がない範囲を含んでおり、サポート要件を欠く発明である。』
　まず、本件訂正により、請求項１は訂正されたところ、上記の申し立てを踏まえ本件発明１を分節すると、「（Ａ）ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を、１，３位特異リパーゼを用いて処理して、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る工程を含み、
（Ｂ）前記原料油脂が魚油であり、
（Ｃ）前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
（Ｄ）前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
（Ｅ）前記処理の反応液中における添加された水分含量が０．５質量％以上であり、
（Ｆ）前記反応液の酸価が２以上１２以下であり、
（Ｇ）前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０質量％以上９０質量％以下含み、
（Ｈ）前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下である、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。」となるが、
　まず、発明が方法の発明だからといって、方法の特定である（Ａ）ないし（Ｅ）の特定あれば、必ず（Ｆ）ないし（Ｈ）を満足する目的物が得られなければならないということはないし、（Ｆ）ないし（Ｈ）を満足する目的物の「具体的な」製造方法が（Ａ）ないし（Ｅ）で開示されなければならないということもなく、（Ａ）ないし（Ｈ）の特定全てがそれぞれ、本件発明１を特定し、全体として本件発明１の技術的範囲を特定していると見るべきである。
　一方、実施可能要件としての発明の開示は、発明の詳細な説明の記載でなされれば良いところ、本件明細書の段落【０１５２】〜【０１９８】に記載される「実施例」で、実際、（Ｆ）ないし（Ｈ）を満足する目的物（「酸価」及び「低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量」が本件発明１の範囲を共に満足している）が、得られることが客観的な根拠をもって開示され、また、その目的物を製造する具体的な製造例が開示されているのであるから、（Ｆ）ないし（Ｈ）を満足する目的物どのように製造するのかにつき、本件特許明細書における発明の詳細な説明は、当業者が実施することができる程度に明確かつ十分に記載されたものとはいえないということはできない。
　さらに、本件発明１が、本件明細書に記載される範囲を超えるものではないことは、上記「１　取消理由１について」「（１）」で述べたとおりである。
　よって、本件特許明細書の発明の詳細な説明の記載に不備があるとはいえないから、本件特許１ないし３、５、７ないし１２、１８ないし２０、２２ないし２４は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるとはいえない。
　また、本件発明１ないし３、５、７ないし１２、１８ないし２０、２２ないし２４は、は、発明の詳細な説明に記載したものでないとはいえないから、本件特許１ないし３、５、７ないし１２、１８ないし２０、２２ないし２４は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるとはいえない。
第６　むすび  
　上記「第５」で検討したとおり、本件特許１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４は、特許法第２９条の規定に違反してされたものであるということはできないし、同法第３６条第４項第１号又は第６項に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるということはできず、同法第１１３条第２号又は第４号に該当するものではないから、上記取消理由１ないし３、並びに、上記申立理由１及び２によっては、本件特許１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４を取り消すことはできない。 
　また、他に本件特許１ないし３、５、７ないし２０、２２ないし２４を取り消すべき理由を発見しない。 
　そして、本件特許４、６、２１は、本件訂正請求により削除されたので、本件特許４、６、２１に対する特許異議の申立てを却下する。 
　よって、結論のとおり決定する。 
【異議決定日】
平成２９年６月５日（２０１７．６．５）
【訂正の要旨】
審決（決定）の【理由】欄参照。
（５４）【発明の名称】
低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法および低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物
　【技術分野】
　【０００１】
　本発明は、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法および低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に関する。
　【背景技術】
　【０００２】
　多価不飽和脂肪酸およびその誘導体は、血中脂肪の低減等の多くの生理活性を有し、古くから医薬品、化粧品、食品等の原料として使用されてきた。そこで、高純度かつ良好な品位の多価不飽和脂肪酸およびその誘導体の精製方法が検討されている。
　【０００３】
　例えば、特許文献１（特開昭５９−１１３０９９号公報）には、脂肪酸グリセリドを含む油脂を、アルカリ性条件下で処理して、低級アルコール脂肪酸エステル化物を得る方法が記載されている。
　【０００４】
　しかしながら、油脂をアルカリ性条件下で処理した場合、低級アルコール脂肪酸エステル化物の不飽和結合が異性化された異性化物が生じることがある。この異性化物は、異性化していない低級アルコール脂肪酸エステル化物との分離が困難である場合が多い。このため、異性化物の含有量が少ない低級アルコール脂肪酸エステル化物を効率良く得る方法が求められている。
　【先行技術文献】
　【特許文献】
　【０００５】
　【特許文献１】特開昭５９−１１３０９９号公報
　【発明の概要】
　【発明が解決しようとする課題】
　【０００６】
　本発明は、簡便な方法にて、純度が高い低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を効率良く得ることができる低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法および低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を提供する。
　【課題を解決するための手段】
　【０００７】
　本願発明者は、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理することで、低級アルコールＥＰＡエステル化物を選択的に得る方法により、アルカリ性条件下での処理を経ずに、純度の高い低級アルコールＥＰＡエステル化物が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。より具体的には、本発明に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法によれば、アルカリ性条件下での処理を経ずに、異性化物が少ない、純度の高い低級アルコールＥＰＡエステル化物を得ることができる。
　【０００８】
　１．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法は、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る工程を含み、前記処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上である。
　【０００９】
　２．上記１に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記処理の反応液は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上２．５質量部以下の低級アルコールをさらに含むことができる。
　【００１０】
　３．上記２に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記処理において、前記処理の反応液に前記低級アルコールを連続的にまたは段階的に添加することができる。
　【００１１】
　４．上記１ないし３のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法では、前記処理において、前記リパーゼが固定化された固定化酵素を用いることができる。
　【００１２】
　５．上記１ないし４のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法では、前記処理において、前記固定化酵素は粒子状であることができる。
　【００１３】
　６．上記１ないし５のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記リパーゼが１，３位特異リパーゼであることができる。
　【００１４】
　７．上記１ないし６のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記反応液の酸価が２以上であることができる。
　【００１５】
　８．上記１ないし７のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記原料油脂は、ＤＨＡ含有グリセリドをさらに含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコールＤＨＡエステル化物をさらに含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率Ａ（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）は、前記原料油脂に含まれる脂肪酸グリセリドを構成する脂肪酸における、ＤＨＡに対するＥＰＡのモル比率Ｂ（ＥＰＡ／ＤＨＡ）より多いことができる。
　【００１６】
　９．上記８に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記モル比率Ａおよび前記モル比率Ｂが以下の式（１）で示される関係を有することができる。
　１．５≦Ａ／Ｂ　・・・・・（１）
　【００１７】
　１０．上記８または９に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下であることができる。
　【００１８】
　１１．上記７ないし１０のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコールＤＨＡエステル化物をさらに含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物および前記低級アルコールＤＨＡエステル化物の混合物と、該混合物以外の成分とを分離する工程をさらに含むことができる。
　【００１９】
　１２．上記１１に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下であることができる。
　【００２０】
　１３．上記１１または１２に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記混合物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を９０質量％以上含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含むことができる。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【００２１】
　１４．上記１１ないし１３のいずれかの低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記混合物を銀塩の水溶液と接触させる工程をさらに含むことができる。
　【００２２】
　１５．上記１４に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記銀塩の水溶液と接触させた後の前記混合物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程をさらに含むことができる。
　【００２３】
　１６．上記１１ないし１３のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法において、前記混合物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程をさらに含むことができる。
　【００２４】
　１７．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【００２５】
　１８．上記１７に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物において、ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．１５以下であることができる。
　【００２６】
　１９．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を９０質量％以上含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【００２７】
　２０．上記１９に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物において、ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下であることができる。
　【００２８】
　２１．上記１７ないし２０のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物において、酸価が５未満であることができる。
　【００２９】
　２２．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法は、上記１７に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、上記２０に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物と、前記組成物以外の成分とを分離する工程を含む。
　【００３０】
　２３．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法は、上記１９又は２０に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有物を銀塩の水溶液で接触させる工程を含む。
　【００３１】
　２４．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法は、上記１９ないし２１のいずれかに記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程を含む。
　【００３２】
　２５．本発明の一態様に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物を９６．５質量％以上含み、かつ、ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０８５以下である。
　【００３３】
　２６．本発明の一態様に係る食品組成物の製造方法は、上記１１ないし１６および２２ないし２４のいずれかに記載の製造方法により得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物及び上記２５に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物から選ばれる少なくとも１種を使用して食品組成物を得る工程を含む。
　【００３４】
　２７．本発明の一態様に係るカプセル剤の製造方法は、上記１１ないし１６および２２ないし２４のいずれか１項に記載の製造方法により得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物及び上記２５に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物から選ばれる少なくとも１種を使用してカプセル剤を得る工程を含む。
　【発明の効果】
　【００３５】
　上記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法によれば、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る工程を含み、前記処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上であることにより、純度が高い低級アルコールＥＰＡエステル化物を効率良く得ることができ、かつ、酵素（リパーゼ）の安定性を高めることができる。
　【００３６】
　より具体的には、酵素の安定性が高められる結果、酵素の繰り返し使用が可能になるため、製造コストの低減および省資源化を図ることができる。また、アルカリ性条件下での処理を経ずに低級アルコールＥＰＡエステル化物が得られるため、異性化物の発生を低減することができる。さらに、前記リパーゼを用いた処理により、複数の脂肪酸グリセリドの中から、ＥＰＡ含有グリセリドを低級アルコールＥＰＡエステル化物へと選択的に変換させることができる。
　【図面の簡単な説明】
　【００３７】
　【図１】図１は、本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法のフローチャートを示す。
　【発明を実施するための形態】
　【００３８】
　以下、図面を参照しつつ、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、格別に断らない限り、「部」は「質量部」を意味し、「％」は「質量％」を意味する。ただし、グリセリドにおける各種構成脂肪酸の「比率」および「％」、ならびに低級アルコール脂肪酸エステル化物における各種脂肪酸エステル化物の「比率」および「％」は、それぞれ構成する脂肪酸の「モル比率」および「モル％」を意味する。
　【００３９】
　＜低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法（以下、単に「製造方法」ともいう。）は、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸、Ｃ２０：５）グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（以下、「本実施形態に係る組成物」ともいう。）を得る工程を含み、前記処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上である。
　【００４０】
　＜低級アルコール：定義＞
　本発明において、「低級アルコール」とは、炭素原子数が１、２または３のアルコール（メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール）をいう。
　【００４１】
　＜低級アルコール脂肪酸エステル化物：定義＞
　また、本発明において、「低級アルコール脂肪酸エステル化物」とは、脂肪酸を構成するカルボキシル基（−ＣＯ２Ｈ）が低級アルコールにてエステル化された化合物をいう。
　【００４２】
　＜低級アルコールＥＰＡエステル化物＞
　また、本発明において、「低級アルコールＥＰＡエステル化物」とは、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）を構成するカルボキシル基（−ＣＯ２Ｈ）が低級アルコールにてエステル化された化合物をいう。加えて、本発明において、「低級アルコールＤＨＡエステル化物」とは、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）を構成するカルボキシル基が低級アルコールにてエステル化された化合物をいう。
　【００４３】
　＜グリセリドの定義＞
　また、本発明において、「グリセリド」とは、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステルの概念である。
　【００４４】
　＜ＥＰＡ含有グリセリドの定義＞
　さらに、本発明において「ＥＰＡ含有グリセリド」とは、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステル化物を構成する脂肪酸残基の一部または全部がＥＰＡである化合物をいい、ＥＰＡモノグリセリド、ＥＰＡジグリセリドおよびＥＰＡトリグリセリドを含む概念である。本発明において「ＤＨＡ含有グリセリド」とは、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドを含むグリセリン脂肪酸エステル化物を構成する脂肪酸残基の一部または全部がＤＨＡである化合物をいい、ＤＨＡモノグリセリド、ＤＨＡジグリセリドおよびＤＨＡトリグリセリドを含む概念である。
　【００４５】
　＜図１の説明＞
　図１は、本実施形態に係る製造方法のフローチャートを示す。本実施形態に係る製造方法では、まず、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理して（図１のステップＳ１）、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む本実施形態に係る組成物を得る。
　【００４６】
　＜酵素処理（リパーゼを用いた処理）＞
　本実施形態に係る製造方法では、ＥＰＡ含有グリセリドを含む原料油脂を酵素（リパーゼ）で処理する。より具体的には、ＥＰＡ含有グリセリドを含む原料油脂をリパーゼ及び低級アルコールと接触させて、該ＥＰＡ含有グリセリドにリパーゼを作用させることにより、該ＥＰＡ含有グリセリドを選択的に低級アルコールＥＰＡエステル化物へと変換させる。
　【００４７】
　＜原料油脂＞
　本実施形態に係る製造方法で使用する原料油脂は、ＥＰＡを構成脂肪酸として含むグリセリン脂肪酸エステル（ＥＰＡ含有グリセリド）を含む油脂であればよく、脂肪酸組成中のＥＰＡの含有量が１２質量％以上（通常、２０質量％以下）である油脂が好ましい。なお、原料油脂には、ＤＨＡ（Ｃ２２：６）等、ＥＰＡ以外の脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリドを含んでいてもよい。原料油脂が、ＤＨＡを構成脂肪酸として含有するグリセリドを含む場合、脂肪酸組成中のＤＨＡの含有量が１５質量％以下である油脂が好ましい。また、原料油脂に含まれる、ＥＰＡ以外の脂肪酸トリグリセリドは、多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドであってもよい。多価不飽和脂肪酸とは、炭素数１６以上でかつ分子内に二重結合を２個以上有する不飽和脂肪酸をいい、上述のＥＰＡやＤＨＡのほか、アラキドン酸（Ｃ２０：４）、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５）、ステアリドン酸（Ｃ１８：４）、リノレン酸（Ｃ１８：３）、リノール酸（Ｃ１８：２）が挙げられる。
　【００４８】
　＜油脂＞
　「油脂」とは、通常、トリグリセリドを意味するが、本発明では、油脂は、ジグリセリド、モノグリセリド等、酵素（リパーゼ）が作用するその他のグリセリドも含んでいてもよい。
　【００４９】
　＜原料油脂＞
　原料油脂としては、例えば、魚油、魚油以外の動物油、植物油、藻類、微生物が生産する油、これらの混合油脂、またはこれらの廃油が挙げられる。
　【００５０】
　魚油としては、イワシ油（ＥＰＡ８モル％以上２０モル％以下）、マグロ油（ＥＰＡ３モル％以上１０モル％以下）、カツオ油（ＥＰＡ５モル％以上１０モル％以下）、タラ肝油（ＥＰＡ５モル％以上１５モル％以下）、サケ油（ＥＰＡ５モル％以上１５モル％以下）、イカ油（ＥＰＡ１０モル％以上１８モル％以下）、メンヘーデン油（ＥＰＡ５モル％以上モル１５％以下）が挙げられる。
　【００５１】
　ここで、各魚油におけるＥＰＡの含有量は、該魚油においてグリセリドを構成する脂肪酸としてＥＰＡを含む割合をいう。植物油は通常ＥＰＡやＤＨＡを含有しないが、例えば、遺伝子組み換え技術によりＥＰＡやＤＨＡを含有する、大豆油、菜種油、パーム油、オリーブ油等を原料油脂として用いることができる。藻類、微生物由来油としては、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｌｐｉｎｅ、Ｅｕｇｌｅｎａ　ｇｒａｃｉｌｉｓ等によるアラキドン酸含有油、クロメ、アラメ、ワカメ、ヒジキ、ハバノリ、ヒバマタの一種によるＥＰＡ含有油、Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ　ｃｏｈｎｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ　ｍａｒｉｎｕｓ、Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ　ａｕｒｅｕｍ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ属細菌等によるＤＨＡ含有油等、魚油以外の動物油としては、例えば、鯨油、羊脂、牛脂、豚脂、乳脂肪、卵黄油等が挙げられる。また、原料油脂の酸価は通常、０以上２．５以下であり、０以上２以下であることができる。
　【００５２】
　なお、原料油脂は水分を含むものであってもよい。また、本発明において、「廃油」とは、使用済みの魚油、植物性油脂、または動物性油脂であり、水分が含まれていてもよい。原料油脂がＥＰＡおよびＤＨＡの両方を含む場合、得られる低級アルコールＥＰＡエステル化物の割合をより高めることができる点で、原料油脂に含まれる脂肪酸グリセリドを構成する脂肪酸におけるＥＰＡとＤＨＡのモル比率は、ＥＰＡ／ＤＨＡ＝０．５以上６以下であることが好ましく、１以上３以下であることがより好ましい。
　【００５３】
　＜酵素＞
　本実施形態に係る製造方法で使用する酵素の性状は、粗精製、部分精製、精製のいずれでもよい。また遊離型でもよいし、固定化されていてもよいが、再利用可能である点、酵素処理後の後処理が簡便である点で、前記リパーゼが固定化された固定化酵素であることが好ましい。
　【００５４】
　固定化酵素は、酵素を担体に固定化されたものであってもよい。前記酵素処理の反応液の水分含量が０．４質量％以上であることにより、酵素の安定性が高められる結果、酵素の繰り返し使用が可能になるため、リパーゼが固定化された固定化酵素を使用する場合、固定化酵素を反応液中から取り出して、必要に応じて水等で洗浄後、再度使用することができる。このため、再利用性、取扱性、および経済性に優れている。
　【００５５】
　＜担体＞
　担体としては、イオン交換樹脂、多孔性樹脂、セラミックス、炭酸カルシウム、セライト、ガラスビーズ、活性炭等の有機担体、無機担体、有機無機複合担体が挙げられる。耐久性、リパーゼとの親和性などを考慮すると、担体は、イオン交換樹脂、多孔性樹脂、セラミックスからなることが好ましい。固定化の方法としては、包括法、架橋法、物理的吸着法、イオン吸着法、共有結合法、疎水結合法等が挙げられるが、結合強度が高い点で、包括法、架橋法、または共有結合法が好ましい。原料油脂との接触面積が大きく、かつ、原料油脂中で均一に分散できる点で、固定化酵素は粒子状であることが好ましい。あるいは、固定化酵素は、フィルムや膜に固定化したものであってもよい。
　【００５６】
　固定化酵素が粒子状である場合、粒子状の担体に酵素が固定化されているものであることができる。この場合、担体の粒子径が０．０１ｍｍ以上３ｍｍ以下であることが好ましく、０．０５ｍｍ以上１．５ｍｍ以下であることがより好ましい。また、原料油脂、低級アルコールおよび水との分散性に優れている点で比重は０．２以上２．５以下であることが好ましい。
　【００５７】
　＜リパーゼ＞
　エステル交換を触媒する作用を有する点で、酵素は、例えば、リパーゼであることが好ましい。リパーゼは「リパーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．３）」と国際酵素分類を示すことで、科学的に特定される。
　【００５８】
　＜リパーゼの種類＞
　本実施形態に製造方法で使用するリパーゼは、１，３位−特異的であっても、非特異的であってもよい。本実施形態に係る組成物において低級アルコールＥＰＡエステルのモル比率を高くすることができる点で、リパーゼは、１，３位特異リパーゼ、すなわち、トリアシルグリセロールの１，３位にのみ特異的作用する酵素または２位よりも１，３位に優先的に作用する酵素であることが好ましい。
　【００５９】
　＜リパーゼの具体例＞
　リパーゼとしては、例えば、リゾムコール属（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ　Ｍｉｅｈｅｉ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ　ｍｉｅｈｅｉ，Ｍｕｃｏｒ　ｊａｖａ　ｎｉｃｕｓ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｓｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ，Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、サーモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ　ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅ）等に属する糸状菌、キャンディダ属（Ｃａｎｄｉｄａ　Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ，Ｃａｎｄｉｄａ　Ｒｕｇｏｓａ，Ｃａｎｄｉｄａ　Ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、ピヒア（Ｐｉｃｈｉａ）等に属する酵母、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．）、アクロモバクター属（Ａｃｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ．）、ブルクホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ　ｓｐ．）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｓｐ．）、シュードザイマ属（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ　ｓｐ．）等に属する細菌、豚膵臓等の動物に由来するリパーゼが挙げられる。市販のリパーゼも用いられる。例えば、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　Ｄｅｌｅｍａｒのリパーゼ（タリパーゼ：田辺製薬社製）、Ｃａｎｄｉｄａ　Ｃｙｌｉｎｄａｃｅａ（リパーゼＯＦ：名糖産業社製）およびＰｓｅｎｄｏｍａｎｓ属のリパーゼ（リパーゼＰＳ、リパーゼＡＫ：天野製薬社製）が挙げられ、固定化酵素としては、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ　Ｍｉｅｈｅｉのリパーゼ（リポザイムＩＭ６０：ノボノルディスク社製、リポザイムＲＭＩＭ：ノボノルディスク社製）、Ｃａｎｄｉｄａ　Ａｎｔａｒｃｔｉｃａのリパーゼ（ノボザイム４３５：ノボノルディスク社製）が挙げられる。
　【００６０】
　＜酵素の使用量＞
　反応に使用する酵素の量は、反応温度や時間等により決定されるため特に規定されないが、遊離型の酵素の場合、一般的には反応液１ｇ当たり１単位（Ｕ）以上１０，０００Ｕ、好ましくは５Ｕ以上１，０００Ｕ添加すればよく、適宜設定することができる。ここでの酵素活性の１Ｕとは、リパーゼの場合はオリーブ油の加水分解において１分間に１μｍｏｌの脂肪酸を遊離する酵素量である。固定化酵素を用いる場合は、反応液の質量に対して固定化した酵素が０．１質量％以上２００質量％以下、好ましくは１質量％以上２０質量％以下（担体の質量を含む質量）になるように添加すればよい。
　【００６１】
　＜反応条件＞
　本実施形態に係る製造方法において、前記酵素処理の反応液は、原料油脂および酵素（固定化酵素を使用する場合は固定化酵素）を含む。前記酵素処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上であることにより、酵素の安定性が高められる結果、酵素の繰り返し使用が可能になり、かつ、酵素反応により生じるグリセリンを水中に誘導させることで、グリセリンが油中で固まるのを防止し、酵素反応を円滑に進行させることができる。前記酵素処理の反応液中における水分含量は、０．５質量％以上であることが好ましく、１質量％以上であることがより好ましく、２質量％以上であるのがさらに好ましく、また、８０質量％以下であることが好ましく、５０質量％以下であることがより好ましく、例えば０．４質量％以上１０質量％以下であることができる。
　【００６２】
　＜水分含量＞
　前記酵素処理の反応液中における水分含量が０．４質量％未満であると、反応により生じるグリセリン等によって、酵素の触媒作用が阻害されることがあり、また、酵素の安定性が低下することがあり、一方、８０質量％を超えると、ＥＰＡ含有トリグリセリドと酵素との接触が少なくなり、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物中の、得られる低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量が少なくなることがある。なお、水は、反応液中に逐次的に添加してもよいし、連続して添加してもよいし、または一括して添加してもよい。
　【００６３】
　＜低級アルコール＞
　脂肪酸をエステル化してエステル化物を得、かつ、水および油脂の双方と混和することにより酵素反応を円滑に進行させることができる観点から、前記酵素処理の反応液は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上２．５質量部以下の低級アルコールをさらに含むことができる。
　【００６４】
　本実施形態に係る製造方法における原料油脂の酵素処理において、低級アルコール（炭素原子数１、２または３のアルコール）は、低級アルコールＥＰＡエステル化物のエステル部位として利用されることができる。
　【００６５】
　低級アルコールＥＰＡエステル化物の収率を高めることができる点で、前記酵素処理の反応液における前記低級アルコールの含有量は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上（好ましくは、０．３質量部以上）であることが好ましい。一方、前記酵素処理の反応液における前記低級アルコールの含有量が増えると酵素が失活しやすくなることから、酵素活性を維持できる点で、前記酵素処理の反応液における前記低級アルコールの含有量は、前記原料油脂９．５質量部に対して２．５質量部以下（好ましくは、２質量部以下）であることが好ましい。
　【００６６】
　なお、前記低級アルコールは、前記酵素処理において、前記酵素処理の反応液に前記低級アルコールを連続的に添加してもよいし、段階的に添加してもよいし、または一括して添加してもよい。本発明において、「低級アルコールを連続的に添加する」とは、低級アルコールを継続して添加することをいい、「低級アルコールを段階的に添加する」とは、継続的ではないが、低級アルコールを複数回添加することをいう。
　【００６７】
　また、前記低級アルコールを反応液に段階的に添加する場合、１回に添加する前記低級アルコールの量は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上であることが好ましく（０．３質量部以上であることがより好ましい）、一方、２．５質量部以下であることが好ましい（１質量部以下であることがより好ましい）。前記低級アルコールを反応液に段階的にまたは連続的に添加する場合、添加する前記低級アルコールの総量は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上であることが好ましく（０．３質量部以上であることがより好ましい）、一方、２．５質量部以下であることが好ましい（２質量部以下であることがより好ましい）。
　【００６８】
　＜低級アルコールの具体例＞
　低級アルコールとしては、水との混和性に優れている点で、メタノールおよび／またはエタノールであることが好ましく、エタノールであることがより好ましい。
　【００６９】
　＜反応温度および反応時間＞
　酵素処理は、反応液の温度を、通常２５℃超８０℃以下（好ましくは２８℃以上、より好ましくは３０℃以上、一方、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４５℃以下）にて行うことができる。酵素処理における反応液の温度は、用いる酵素の種類により決定すればよい。また、反応時間は、通常２時間以上４８時間以下、好ましくは４時間以上３６時間以下である。
　【００７０】
　＜酸価＞
　前記酵素処理では、酵素の安定性をより高めることができる観点で、該酵素処理の反応液の酸価が２以上であることが好ましく、２．２以上１２以下であることがより好ましい。
　【００７１】
　本発明において、反応液の酸価は、以下の方法により測定及び算出された値である。前記酵素処理の反応液の酸価が２以上（好ましくは２．２以上１２以下）であることは、該反応液中の遊離脂肪酸の濃度が高いことを意味する。すなわち、該反応液中の遊離脂肪酸の濃度を高くすることにより、後述する＜反応経路＞の欄で説明するように、該反応液中で遊離脂肪酸とリパーゼとが結合する割合が高くなるため、リパーゼ（酵素）の安定性を高めることができる。なお、本発明において、「遊離脂肪酸」とは、脂肪酸エステル化物として存在していない脂肪酸（非エステル結合型脂肪酸）をいう。
　【００７２】
　＜酸価の測定方法＞
　酸価の値は、公益社団法人日本油化学会制定の基準油脂分析試験法（日本油化学会規格試験法委員会編、基準油脂分析試験法（Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆａｔｓ，ｏｉｌｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ）：日本油化学会制定、２０１３年版、
１．６
　【００７３】
　具体的には、まず、試料（反応終了後の反応液）をその推定酸価に対応する採取量に準じて三角フラスコに正しく測り取り、エタノール／ジエチルエーテル＝１／１（ｗ／ｗ）の混合溶媒１００ｍＬを加え、試料を完全に溶解させた。次いで、０．１ｍｏｌ／Ｌのエタノール性水酸化カリウムで滴定し、指示薬として加えたフェノールフタレイン溶液の変色が３０秒間以上続いた点を終点とする。酸価は以下の式（３）により算出された。
酸価＝５．６１１×Ａ×Ｆ／Ｂ　・・・・（３）
　（式中、Ａは、０．１ｍｏｌ／Ｌのエタノール性水酸化カリウムの使用量（ｍＬ）であり、Ｂは、試料採取量（ｇ）であり、Ｆは、エタノール性水酸化カリウムのファクターである。）
　【００７４】
　＜反応経路＞
　アルコールと脂肪酸エステル化物とのエステル交換反応は通常、水の含有量が少ない条件下（例えば、特許文献１の実施例に記載される、水分含量０．１％）でアルコールと脂肪酸エステル化物とを反応させる。その理由として、脂肪酸エステル化物のエステル結合が水によって加水分解されるのを防ぐためであることが挙げられる。
　【００７５】
　これに対して、本実施形態に係る製造方法では、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を酵素処理（リパーゼを用いた処理）して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る工程において、前記酵素処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上であることにより、酵素安定性を高めることができる。
　【００７６】
　より具体的には、前記酵素処理の反応液中における水分含量が０．４質量％以上であることにより、反応液中に含まれる水分により、原料油脂が加水分解されて遊離脂肪酸が生成する結果、該反応液中の遊離脂肪酸の濃度が高くなる（該反応液の酸価が高くなる）ため、酵素安定性が高められる。
　【００７７】
　反応液中の遊離脂肪酸の濃度が高くなると（すなわち、該反応液の酸価が高くなると）、酵素安定性が高まるのは、以下の機構によるものと推察される。遊離脂肪酸は一般に、タンパク質と結合しやすい。なぜなら、遊離脂肪酸のアルキル鎖部分の疎水性とカルボキシル基部分の親水性部位が、タンパク質分子内の疎水性部位、親水性部位と相互作用しやすいからである。このため、反応液中に遊離脂肪酸が存在することで、タンパク質であるリパーゼに遊離脂肪酸が結合することにより、反応液中の反応基質以外の物質（例えば、反応液中の低級アルコール）がリパーゼに直接接触することにより引き起こされるリパーゼの失活を防ぐことができ、これにより、リパーゼ（酵素）の安定性を高めることができると推察される。
　【００７８】
　一方、前記酵素処理の反応液中における水分含量が０．４質量％未満である場合、リパーゼ（酵素）の安定性を維持することが困難である。その理由としては、反応液中における水分含量が０．４質量％未満と少ないため、原料油脂の加水分解が進行しにくく、その結果、遊離脂肪酸が生じにくいことが挙げられる。よって、遊離脂肪酸とタンパク質との結合が生じ難いため、上述した遊離脂肪酸によるタンパク質（リパーゼ）の失活を防止されず、リパーゼの安定性を高めることが困難であると推察される。
　【００７９】
　＜反応生成物＞
　本実施形態に係る製造方法では、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理することにより、低級アルコール脂肪酸エステル化物を含有する組成物を得ることができ、なかでも、低級アルコールＥＰＡエステル化物を効率的に得ることができる。すなわち、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、リパーゼを用いて処理することにより、ＥＰＡ含有グリセリドを低級アルコールＥＰＡエステル化物へと効率的に変換することができる。なお、得られる低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む多価不飽和脂肪酸のエステル化物であることができる。
　【００８０】
　例えば、原料油脂がＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡ含有グリセリドの両方を含むものである場合、上述のリパーゼを用いた処理によって、最終的に得られる本実施形態に係る組成物に含まれる低級アルコール脂肪酸エステル化物において、低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率Ａ（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）を、原料油脂に含まれる脂肪酸グリセリドを構成する脂肪酸における、ＤＨＡに対するＥＰＡのモル比率Ｂ（ＥＰＡ／ＤＨＡ）より多くさせることができる。
　【００８１】
　この場合、前記モル比率Ａおよび前記モル比率Ｂが以下の式（１）で示される関係を有することが好ましく、式（２）で示される関係を有することがより好ましい。
　１．５≦Ａ／Ｂ　・・・・・（１）
　２．０≦Ａ／Ｂ≦２５　・・・・・（２）
　【００８２】
　＜低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量、および、低級アルコールＥＰＡエステル化物：低級アルコールＤＨＡエステル化物＞
　また、最終的に得られる低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下含み、該低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる低級アルコール脂肪酸エステル化物において、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物：低級アルコールＤＨＡエステル化物）は３．０以上３０以下であることができ、より具体的には、３．０以上２０以下であることが好ましく、３．０以上１５以下であることがより好ましい。
　【００８３】
　より具体的には、酵素処理で得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下（より具体的には、５０質量％以上８０質量％以下）含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０のモル比率で含む（好ましくは、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦２０、より好ましくは、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦１５）のモル比率で含むことができる。
　【００８４】
　＜分子蒸留＞
　次に、本実施形態に係る製造方法では、酵素処理（リパーゼを用いた処理）（図１のステップＳ１）で得られた、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留する工程（いわゆる、分子蒸留（一次蒸留）、図１のステップＳ２）をさらに含むことができる。
　【００８５】
　分子蒸留（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）は、高真空度下で行われる蒸留である。分子蒸留工程により、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物と、該混合物以外の成分（低級アルコール脂肪酸エステル化物以外の脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリドおよび脂肪酸トリグリセリド）とを分離することができる。なお、前記混合物以外の脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリドおよび脂肪酸トリグリセリドを利用して、低級アルコールの存在下で再度エステル化することにより、低級アルコールＤＨＡエステル化物を得ることもできる。
　【００８６】
　分子蒸留は通常、後述する精密蒸留における真空度よりも高い真空度で行なうことができる。
　【００８７】
　例えば、分子蒸留における温度は、８０℃以上２００℃以下（好ましくは１５０℃以上２００℃以下）であり、真空度は０．００１Ｔｏｒｒ以上５Ｔｏｒｒ以下（好ましくは０．０１Ｔｏｒｒ以上１Ｔｏｒｒ以下）であり、より具体的には、温度１４０℃以上１６０℃以下でかつ真空度０．０１Ｔｏｒｒ以上０．１Ｔｏｒｒ以下である。
　【００８８】
　分子蒸留は、通常、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物および前記低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物と、該混合物以外の成分とを分離することができる装置を用いて行われ、より具体的には、一般的に市販の分子蒸留装置を使用して行うことができ、例えば、遠心式分子蒸留機、ショートパス蒸留機、流下膜式蒸留機等を用いることができる。特に、ショートパス蒸留機が好ましい。分子蒸留装置では、蒸発管を通して被処理物を揮発させた後、冷却器内に通すことで、液化する低分子成分と、液化しない高分子成分とに分けることができる。
　【００８９】
　また、分子蒸留は、後述する精密蒸留の前に行うことが好ましく、さらには、分子蒸留を行った後で、後述する銀処理を行うことが好ましい。
　【００９０】
　＜ピーク強度比＞
　この混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下であることが好ましく、０．０７以下であることがより好ましい。
　【００９１】
　＜ピーク強度比の意義＞　前記混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークは、低級アルコール脂肪酸エステル化物に含まれるエステル結合を示す。また、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークは、低級アルコール脂肪酸エステル化物に含まれる低級アルコール脂肪酸エステル化物の異性化物（トランス二重結合を含む異性化物）を示す（ＦＴＩＲによるトランス脂肪酸の定量、ＳＨＩＭＡＺＵ　ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ　ＮＥＷＳ　Ｎｏ．４３０Ａ，株式会社島津製作所）。
　【００９２】
　よって、この混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度が大きいほど、異性化物（脂肪酸に含まれるシス二重結合が異性化して生じたトランス二重結合を含む）が低級アルコール脂肪酸エステル化物に多く含まれていることを示している。したがって、該混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下であることは、該混合物に含まれる異性化物が少ないことを示している。
　【００９３】
　＜異性化物の定義＞
　なお、本発明において、ある化合物の「異性化物」とは、ある化合物と分子式は等しいが、該化合物と分子構造の異なる化合物のこと（異性体）をいい、ある化合物をその異性体に変えることを異性化という。
　【００９４】
　例えば、天然油脂を構成するＥＰＡ、ＤＨＡなどの脂肪酸は、その二重結合が全てシス配位であり、かつ、該二重結合が非共役の構造を有する。脂肪酸の異性化としては、例えば、脂肪酸の二重結合の少なくとも一部がトランス配位に変化することや、該二重結合が共役となる位置に移動すること等が挙げられる。
　【００９５】
　＜混合物の組成＞
　また、後述する精密蒸留で得られる低級アルコールＥＰＡエステル化物の純度をより高めることができる観点で、前記混合物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を９０質量％以上含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含むことがより好ましい。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０。
　【００９６】
　より好ましくは、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦２０である。
　【００９７】
　本実施形態に係る製造方法によれば、上記酵素処理によって、ＥＰＡ含有グリセリドを低級アルコール脂肪酸エステル化物へと選択的に変換させることができるため、上記分子蒸留工程によって、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物および前記低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物と、他の成分（低級アルコール脂肪酸エステル化物以外の脂肪酸グリセリド、グリセリン）とを、一般的な分離処理にて比較的容易に分離することができる。これにより、後述する精密蒸留工程によって、純度の高い低級アルコールＥＰＡエステル化物を簡便な方法にて効率良く得ることができる。
　【００９８】
　＜精密蒸留＞
　次に、本実施形態に係る製造方法では、分子蒸留（図１のステップＳ２）で得られた、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む混合物を蒸留して（精密蒸留、図１のステップＳ３）、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、低級アルコールＥＰＡエステル化物（好ましくは純度９６．５質量％以上、より好ましくは９８質量％以上約１００質量％以下）を得る工程をさらに含むことができる。
　【００９９】
　精密蒸留（ｒｅｃｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）は上記の分子蒸留と比べて低真空度下で行われる蒸留であって、具体的には、塔内で液と蒸気を向流接触させると共に、適当な還流を行い、液の蒸発と蒸気の凝縮を繰り返すことによって分離の度合いを高める連続蒸留操作であり、液体混合物の分離精製に最も多く用いられる蒸留である。精密蒸留工程により、複数種類の脂肪酸のエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物から、任意の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することができる。したがって、本実施形態に係る精密蒸留工程では、前記分子蒸留工程により得られた、複数種類の低級アルコール脂肪酸エステル化物の中から、低級アルコールＥＰＡエステル化物を選択的に得ることができる。
　【０１００】
　精密蒸留は通常、上記の分子蒸留における真空度よりも低い真空度で行うことができる。
　【０１０１】
　例えば、精密蒸留における温度は、１５０℃以上２５０℃以下（好ましくは１６０℃以上２３０℃以下）であり、真空度は０．０１Ｔｏｒｒ以上１０Ｔｏｒｒ以下（好ましくは０．１Ｔｏｒｒ以上５Ｔｏｒｒ以下）であり、より具体的には、温度１７０℃以上２２０℃以下でかつ真空度０．５Ｔｏｒｒ以上３Ｔｏｒｒ以下である。
　【０１０２】
　精密蒸留は、通常、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を前記低級アルコールＥＰＡエステル化物と分離することができる装置を用いて行われ、より具体的には、精留塔を有する蒸留装置又は流下膜式の蒸留装置を使用して行うことができ、精留塔としては、例えば、棚段式、充填式、又はスプリング式等を用いることができ、特に、棚段構造を有する棚段式又は充填式の蒸留装置を使用することが好ましい。棚段構造を有する蒸留装置では、揮発した物質が上昇するが、物質の種類によって滞留する棚段が異なるため、排出口が付いている棚段まで目的物質が上昇するように棚段が設定されている。また、加熱方式としては、比較的加熱履歴の少ない流下型薄膜式が好ましい。また、精密蒸留の蒸留法としては、バッチ式または連続式のいずれでもよいが、連続式が好ましい。なお、精留塔の理論段数は適宜設定できるが、２段以上、好ましくは５段以上（通常２段以上１０以下）が好ましい。
　【０１０３】
　また、精密蒸留の回数および順序は限定されない。すなわち、精密蒸留を２回以上（通常２回以上４回以下）行ってもよいし、また、精密蒸留の後に銀処理を行ってもよいし、あるいは、銀処理を行った後に精密蒸留を行ってもよい。さらには、精密蒸留および銀処理を行った後に、精密蒸留を再度行ってもよい。
　【０１０４】
　＜銀処理＞
　本実施形態に係る製造方法は、銀処理（本実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を銀塩水溶液と接触させる処理）をさらに含むことができる。
　【０１０５】
　本実施形態に係る製造方法において、本願発明者らは、前記酵素処理の反応液が水分を含む場合（例えば、前記酵素処理の前記反応液中の水分含量が０．４質量％以上である場合）、該酵素処理において遊離脂肪酸が生じる傾向があることを見出した。
　【０１０６】
　本実施形態に係る製造方法によれば、前記酵素処理を行った後に銀処理工程を行うことにより、本実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物中の遊離脂肪酸の含有量を低減することができる。
　【０１０７】
　すなわち、該銀処理によって遊離脂肪酸の含有量を低減することができるため、例えば、本実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価を５未満（好ましくは４未満）にすることができる。
　【０１０８】
　本実施形態に係る製造方法において、酵素処理で生じた遊離脂肪酸を低減することができる点で、銀処理は、酵素処理後に行うことが好ましく、例えば、酵素処理で得られた前記混合物（例えば第１組成物）について銀処理を行ってもよいし、あるいは、分子蒸留の後に得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（例えば第２組成物）について銀処理を行ってもよいし、あるいは、精密蒸留の後に得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（例えば第２組成物）について銀処理を行ってもよい。
　【０１０９】
　（銀の濃度）
　銀処理で使用する銀塩は、不飽和脂肪酸中の不飽和結合と錯体を形成しうる銀塩であればいずれも使用することができ、例えば、硝酸銀、過塩素酸銀、酢酸銀、トリクロロ酢酸銀、トリフルオロ酢酸銀等が挙げられる。これらの銀塩を、好ましくは１５質量％以上、より好ましくは２０質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上の濃度となるように水に溶解して銀塩水溶液とする。また、銀塩水溶液中の銀塩濃度は、飽和濃度を上限とすればよい。
　【０１１０】
　また、銀処理において、銀塩水溶液を回収し、再利用する前に、吸着剤と接触してもよい。上記吸着剤としては、例えば、活性炭、活性アルミナ、活性白土、酸性白土、シリカゲル、ケイソウ土、酸化アルミニウム、酸化マグネシウム等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を使用することができる。
　【０１１１】
　上記銀塩水溶液と上記吸着剤との接触方法は、特に限定されるものではないが、例えば、上記銀塩水溶液中に上記吸着剤を投入し、撹拌する方法や、上記吸着剤を充填したカラムに上記銀塩水溶液を通液する方法等が挙げられる。また、銀塩水溶液を回収し、再利用する前に、希釈・濃度調整することによって、あるいは、有機溶媒で抽出してもよい。回収した銀塩水溶液の濃度調整は、減圧・加熱による水の蒸発により、あるいは比重を測定しながら適宜銀塩や水を加えることにより行なうことができる。
　【０１１２】
　また、銀処理において、銀処理対象物（例えば、上記酵素処理で得られた混合物（例えば第１組成物）、または、上記分子蒸留で得られた組成物（例えば第２組成物））に銀塩の水溶液を加え、好ましくは５分以上４時間以下の時間、より好ましくは１０分以上２時間以下の時間撹拌することにより、水溶性の銀塩−遊離脂肪酸の錯体を形成させ、該錯体を選択的に銀塩水溶液に溶かすことができる。該銀塩水溶液を除去することにより、遊離脂肪酸を除去することができる。これにより、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸価を５未満（好ましくは４未満）にすることができる。
　【０１１３】
　また、銀処理対象物と銀塩水溶液との反応温度は、下限は銀塩水溶液が液体でありさえすればよく、上限は１００℃までで行われるが、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸化安定性、銀塩の水への溶解性、錯体の生成速度などへの配慮から、１０℃以上３０℃以下の反応温度が好ましい。
　【０１１４】
　銀処理対象物と銀塩水溶液との接触時には、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の酸化安定性、銀塩の安定性を考慮し、不活性ガス、例えば窒素雰囲気下で、遮光して行うのが好ましい。
　【０１１５】
　また、銀処理対象物と接触後の銀塩水溶液には、水に難混和性の有機溶媒を添加することができる。有機溶媒添加後、有機相を回収することにより、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を回収することができる。この場合、水に難混和性の有機溶媒は、銀塩の水溶液１００質量％に対して１０質量％以上２００質量％以下であるのが好ましく、３０質量％以上であり、また１５０質量％以下であることがより好ましい。
　【０１１６】
　水に難混和性の有機溶媒としては、例えば、直鎖状脂肪族炭化水素（例えば、ｎ−ペンタン，ｎ−ヘキサン，ｎ−ヘプタン，ｎ−ヘキセン，ｎ−オクタン，イソオクタン等の炭素数５以上１０以下の直鎖状脂肪族炭化水素）、環状脂肪族炭化水素（シクロヘキサン，シクロヘキセン，メチルシクロヘキセン等の炭素数５以上１０以下の環状脂肪族炭化水素）、芳香族炭化水素（例えば、トルエン，ベンゼン，エチルベンゼン，キシレン，スチレン等の炭素数５以上１０以下の芳香族炭化水素）等の炭化水素類、または石油エーテルが挙げられる。なお、前記回収工程は、複数回繰り返し実施することができる。
　【０１１７】
　＜低級アルコールＥＰＡエステル化物の具体例＞
　低級アルコールＥＰＡエステル化物は、医薬品、化粧品、食品等の原料として使用することができる。低級アルコールＥＰＡエステル化物としては、例えば、ＥＰＡメチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、ＥＰＡｎ−プロピルエステル、ＥＰＡイソプロピルエステルが挙げられ、このうち、ＥＰＡエチルエステル（本明細書において、「ＥＰＡＥＥ」ともいう。）は、例えば高脂血症、閉塞性動脈硬化等の循環器系疾患治療薬として用いられている。したがって、低級アルコールＥＰＡエステル化物はＥＰＡＥＥであってもよく、低級アルコールＤＨＡエステル化物はＤＨＡエチルエステル（本明細書において、「ＤＨＡＥＥ」ともいう。）であってもよい。
　【０１１８】
　＜低級アルコールＥＰＡエステル化物の用途＞
　また、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物は、サプリメント等の食品組成物およびカプセル剤の原料として使用することができる。
　【０１１９】
　＜作用効果−公知の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法＞
　本実施形態に係る製造方法の作用効果を説明するにあたり、まず、公知の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法について説明する。
　【０１２０】
　＜公知の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法＞
　公知の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法（特許文献１に記載）では、まず、複数の脂肪酸を低級アルコール脂肪酸エステル部位に有する脂肪酸グリセリドを含む原料油脂を、アルカリ性条件下でアルコールと処理することで、脂肪酸グリセリドとアルコールとのエステル交換反応によって、低級アルコール脂肪酸エステル化物を得る。この方法では、複数種類の低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物が得られる。
　【０１２１】
　＜公知の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法−課題＞
　複数種類の低級アルコール脂肪酸エステルの混合物から所望の低級アルコール脂肪酸エステルを分離するためには、例えば、条件（例えば、真空度、加熱温度、加熱方法、加熱時間）を非常に厳密に制御した蒸留を行う必要がある。このように、条件の厳しい蒸留を行うことは、製造プロセス上、負担が大きい。
　【０１２２】
　例えば、ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡ含有グリセリドを含む油脂をアルカリ性条件下でエステル交換反応を行う場合、ＥＰＡとＤＨＡとは炭素数や二重結合数が近似するため、得られる低級アルコールＥＰＡエステル化物と低級アルコールＤＨＡエステル化物と（例えば、ＥＰＡＥＥとＤＨＡＥＥ）を分離するためには、非常に精密に制御された条件下で蒸留することが必要とされ、製造プロセス上、非常に負担が大きい。また、通常、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物の一方のみを単離することが困難であるため、蒸留時にロスが生じる傾向がある。
　【０１２３】
　また、蒸留は一般に、大規模な装置を必要とすることが多く、製造コストが増大する傾向がある。さらに、アルカリ性条件下で処理を行う場合、使用するアルカリ性液が廃液として生じるため、該廃液を処理する必要が生じるという問題がある。
　【０１２４】
　さらに、上記エステル交換反応では、アルカリ性条件下において、低級アルコール脂肪酸エステル化物に含まれる二重結合に異性化（トランス二重結合の生成など）が生じることがある。異性化は、通常、アルカリ処理や加熱によって生じやすい。
　【０１２５】
　低級アルコール脂肪酸エステル化物の異性化物は一般に、通常の不純物除去処理（例えば、蒸留、クロマトグラフィー）では、低級アルコール脂肪酸エステル化物との分離が困難である。したがって、上述したようなアルカリ条件下での処理（以下、単に「アルカリ処理」ともいう。）や加熱処理によって、低級アルコール脂肪酸エステル化物の異性化物（トランス二重結合を有する）が一旦生成すると、低級アルコール脂肪酸エステル化物中からの該異性化物の除去は一般に困難である。すなわち、この異性化物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物の純度を低下させる一原因物質である。
　【０１２６】
　＜本実施形態に係る製造方法の作用効果＞
　（ｉ）これに対して、本実施形態に係る製造方法によれば、第１に、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を酵素処理（リパーゼを用いた処理）して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得る工程を含むことにより、純度が高い低級アルコールＥＰＡエステル化物を効率良く得ることができる。
　【０１２７】
　より具体的には、本実施形態に係る製造方法によれば、アルカリ処理を経なくても低級アルコールＥＰＡエステル化物が得られるため、異性化物の発生を抑えることができる。よって、純度が高い低級アルコールＥＰＡエステル化物を効率良く得ることができる。また、上記本実施形態に係る製造方法では、アルカリを用いる場合のような廃液処理の問題が生じないため、環境に与える影響が少ない。
　【０１２８】
　（ｉｉ）第２に、前記酵素処理を行うことにより、低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率を高めることができる（具体的には、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０、好ましくは、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦２０）。
　【０１２９】
　より具体的には、前記酵素処理を行うことにより、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を、３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０（より好ましくは３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦２０）のモル比率で含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得ることができ、低級アルコールＤＨＡエステル化物に変換されなかったＤＨＡは、ＤＨＡ含有グリセリドとして残存することになる。
　【０１３０】
　低級アルコールＥＰＡエステル化物と、他の成分（主に、ＤＨＡ含有グリセリド、グリセリン、遊離脂肪酸）およびＥＰＡよりも炭素数が小さい低級アルコール脂肪酸エステルとは、蒸留やクロマトグラフィー等の一般的な不純物除去処理によって比較的容易に分離できる傾向がある。
　【０１３１】
　したがって、低級アルコールＥＰＡエステル化物と、低級アルコール脂肪酸エステル化物ではない他の成分およびＥＰＡよりも炭素数が小さい低級アルコール脂肪酸エステルとを分離する際には、上述のアルカリ処理の後に通常行われる、低級アルコールＥＰＡエステル化物と他の低級アルコール脂肪酸エステル化物とを分離するための精密に制御された蒸留を行う必要がないうえに、蒸留時のロスを少なくすることができる。このことから、本実施形態に係る製造方法によれば、低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率を高めることにより、純度が高い低級アルコールＥＰＡエステル化物を簡便な方法にて効率良く得ることができる。
　【０１３２】
　原料油脂をリパーゼによって処理する工程においては、ＥＰＡを脂肪酸エステル部位として有する脂肪酸グリセリドが、ＤＨＡを脂肪酸エステル部位として含有する脂肪酸グリセリドよりも優先的にエチルエステル化されると推測される。このため、後の工程において、低級アルコールＥＰＡエステル化物と低級アルコールＤＨＡエステル化物とのモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）を高めることができる。
　【０１３３】
　したがって、本実施形態に係る製造方法は、ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂をまず酵素処理して、低級アルコールＥＰＡエステル化物の含有割合が高められた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得てから、蒸留処理を行なうことにより、異性化物が低減された低級アルコールＥＰＡエステル化物を容易に、かつ、より多く単離することができる点で有用である。
　【０１３４】
　（ｉｉｉ）第３に、前記酵素処理における水分含量が０．４質量％以上であることにより、反応液中に含まれる該水分により、酵素反応により生じるグリセリンを水中に誘導させることで、グリセリンが油中で固まるのを防止し、酵素反応を円滑に進行させることができる。また、原料油脂が加水分解されて遊離脂肪酸が生成する結果、該反応液中の遊離脂肪酸の濃度が高くなる（該反応液の酸価が高くなる）ため、酵素安定性が高められる。その結果、酵素の繰り返し使用が可能になるため、製造コストの低減および省資源化を図ることができる。したがって、前記酵素処理は、再利用性、取扱性および経済性に優れていることから、小規模スケールでの処理のみならず、大規模スケールでの処理に好適である。
　【０１３５】
　＜第１組成物＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（以下、「第１組成物」ともいう。）は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を４０質量％以上９０質量％以下（より具体的には、５０質量％以上８０質量％以下）含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む。第１組成物は、例えば、上述の酵素処理又は上述の酵素処理とそれに続く銀処理により得ることができる。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【０１３６】
　上記モル比率は、以下のモル比率であることが好ましい。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦２０
　【０１３７】
　上記モル比率は、以下のモル比率であることがより好ましい。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦１５
　【０１３８】
　第１組成物は、ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．１５以下（好ましくは０．１３以下）であることができる。したがって、第１組成物では、異性化物が低減されている。この第１組成物を上述の分子蒸留に供することにより、異性化物が少ない、第２組成物（低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物の混合物）を得ることができる。また、第１組成物は、上述の銀処理によって、遊離脂肪酸の含有量が低減されており、酸価が５未満（好ましくは４未満）であることができる。
　【０１３９】
　＜第１組成物を用いた分子蒸留＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法は、上記第１組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物および前記低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物と、該混合物以外の成分とを分離することにより、後述する第２組成物を得る工程を含む。
　【０１４０】
　本実施形態に係る製造方法において、第１組成物を蒸留して、後述する第２組成物を得る工程は、上述の分子蒸留工程に相当する。
　【０１４１】
　本実施形態に係る製造方法によれば、第１組成物を蒸留して、後述する第２組成物を得る工程を含むことにより、上述の精密蒸留において低級アルコールＥＰＡエステル化物を選択的に得ることができる。
　【０１４２】
　＜第２組成物＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（以下、「第２組成物」ともいう。）は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を９０質量％以上（より具体的には、９５質量％以上１００質量％以下）含み、前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む。第２組成物は、上述の分子蒸留処理又は上述の分子蒸留処理とこれに続く銀処理にて得ることができる。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【０１４３】
　上記モル比率は、以下のモル比率であることがより好ましい。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦２０
　【０１４４】
　上記モル比率は、以下のモル比率であることがさらに好ましい。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦１５
　【０１４５】
　第２組成物は、ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下（好ましくは０．０７０以下）であることができる。したがって、第２組成物では、異性化物が低減されている。この第２組成物を上述の精密（２次）蒸留に供することにより、異性化物が少ない、低級アルコールＥＰＡエステル化物を得ることができる。
　【０１４６】
　また、第２組成物は、遊離脂肪酸の含有量が低減されており、酸価が５未満（好ましくは４未満）であることができる。遊離脂肪酸の含量量の低減は例えば、上述の銀処理によって行うことができる。第２組成物は例えば、サプリメント等の食品組成物およびカプセル剤の原料として使用することができる。
　【０１４７】
　＜第２組成物を用いた精密蒸留＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法は、上記第２組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、低級アルコールＥＰＡエステル化物（後述する第３組成物）を得る工程を含む。
　【０１４８】
　本実施形態に係る製造方法において、第２組成物を蒸留して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程は、上述の精密蒸留工程に相当する。
　【０１４９】
　本実施形態に係る製造方法によれば、第２組成物を蒸留して、低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程を含むことにより、低級アルコールＥＰＡエステル化物を選択的に得ることができる。純度の高い低級アルコールＥＰＡエステル化物は例えば、サプリメント等の食品組成物およびカプセル剤の原料として使用することができる。
　【０１５０】
　＜第３組成物＞
　本発明の一実施形態に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物　（以下、「第３組成物」ともいう。）は、低級アルコールＥＰＡエステル化物を９６．５質量％以上（より好ましくは９８質量％以上約１００質量％以下）含み、かつ、ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０８５以下である。
　【０１５１】
　第３組成物は、上述の精密蒸留工程を経て得ることができる。第３組成物は、異性化物の含量がきわめて少ないため、例えば、サプリメント等の食品組成物およびカプセル剤の原料として好適に使用することができる。
　【実施例】
　【０１５２】
　以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。
　【０１５３】
　［調製例１（固定化酵素の調製）］
　サーモマイセス・ラヌギノーゼ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ　ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅ）の４００ｇの溶液（９４０ＫＬＵ／ｍＬ）を、大川原製作所製流動層造粒装置を用いて１ｋｇのセライト５４５（ジョンマンビル社、粒径０．０２−０．１ｍｍ）上に噴霧した。前記リパーゼ溶液はペリスタポンプ（東京理化器械株式会社製）を経由して供給した。１００ｍ３／時の空気流により吸い込み口の空気の温度は５７℃であり、そして固定化産物の温度は約４０℃であった。固定化終了後、流動層中で更に５分間乾燥して、粒子状の固定化酵素（平均粒子径６００μｍ、比重２）を得た。
　【０１５４】
　［実施例１（酵素処理）］
　精製魚油（イワシ油、酸価０）１ｋｇをセパラブルフラスコ（容量３Ｌ）に入れ、エタノール５２．５ｇを添加した。フラスコを混ぜ、エタノールを魚油中に均一に分散させた。次に、水２１ｇ（反応液中の水分含量：２質量％）を入れ、撹拌し、水を魚油−エタノール混合物中に分散させて、反応液を調製した。次いで、実施例１で調製した固定化酵素１０５ｇを添加し、サンプル瓶中の大気を窒素で置換してから、撹拌機を使用し、サンプルを１５０ｒｐｍ、３０℃にて２４時間反応させて、ＥＰＡＥＥおよびＤＨＡＥＥを含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（第１組成物）を得た。反応開始から０時間、２時間、４時間、６時間、および２４時間の時点でそれぞれ、反応液２００μｌ採取し、成分分析（低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物中の低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量（質量％）、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＥＰＡＥＥの含有量（モル％）、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＤＨＡＥＥの含有量（モル％）、ＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ（モル比率））を行った。また、反応開始から２時間、４時間、６時間の時点でエタノール５２．５ｇを反応液に追加し、かつ、サンプル瓶中で窒素置換を行った。また、２４時間の反応を１サイクルとし、該反応を３サイクル繰り返して行った。各サイクルの終了後に、反応液から吸引ろ過にて油と固定化酵素とを分別し、分別した固定化酵素を反応容器に移し、その後、必要量の油を加えて、次サイクルの反応に繰り返し使用した。さらに、反応開始から０時間、２時間、４時間、６時間、８時間、２４時間（反応終了時）の時点で反応液を微量採取して、成分分析を行った。
　【０１５５】
　上述した実施形態に記載された方法により測定および算出された、実施例１（１サイクル目の２４時間反応）の反応液の酸価は５．９５であり、実施例１（３サイクル目の８時間反応）の反応液の酸価は６．１７あった。
　【０１５６】
　また、実施例１（１サイクル目の２４時間反応）の反応液のＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比は０．１２であった。
　【０１５７】
　（実施例２〜８（酵素処理））
　使用する水の量を５．２５ｇ（反応液中の水分含量：０．５質量％）、１０．５ｇ（反応液中の水分含量：１質量％）、５２．５ｇ（反応液中の水分含量：５質量％）、１０５ｇ（反応液中の水分含量：９質量％）、２１０ｇ（反応液中の水分含量：１７質量％）、５２５ｇ（反応液中の水分含量：３３質量％）、１０５０ｇ（反応液中の水分含量：５０質量％）とした以外は、実施例１と同様の処理を行ない、ＥＰＡＥＥ及びＤＨＡＥＥを含む、実施例２ないし８の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（第１組成物）を得た。
　【０１５８】
　なお、実施例３ないし５においては、実施例１と同様に、２４時間の反応を１サイクルとし、該反応を３サイクル繰り返して行い、各サイクルの終了後に、反応液から吸引ろ過にて油と固定化酵素とを分別し、分別した固定化酵素を反応容器に移し、その後、必要量の油を加えて、次サイクルの反応に繰り返し使用した。
　【０１５９】
　上述した実施形態に記載された方法により測定および算出された、実施例２ないし８の反応液の酸価はそれぞれ２．２以上１２以下の範囲内であった。
　【０１６０】
　また、実施例２ないし８の反応液のＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比はいずれも０．１５以下であった。
　【０１６１】
　（比較例１（酵素処理））
　使用する水の量を０ｇ（反応液中の水分含量：０％）とした以外は、実施例１と同様の処理を行ない、ＥＰＡＥＥ及びＤＨＡＥＥを含む、比較例１の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得た。
　【０１６２】
　（比較例２（酵素処理））
　使用する水の量を３．１５ｇ（反応液中の水分含量：０．３質量％）とした以外は、実施例１と同様の処理を行ない、ＥＰＡＥＥ及びＤＨＡＥＥを含む、比較例２の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得た。
　【０１６３】
　上述した実施形態に記載された方法により測定および算出された、比較例１の反応液の酸価は１．０であり、比較例２の反応液の酸価は１．５であった。
　【０１６４】
　実施例１ないし８および比較例１および２の各低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物中の低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量（質量％）、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＥＰＡＥＥの含有量（モル％）、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＤＨＡＥＥの含有量（モル％）、およびＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ（モル比率）を表１に示す。
　【０１６５】
　【表１】
　【０１６６】
　表１によれば、実施例１ないし８において、反応開始から２時間で、低級アルコール脂肪酸エステル化物中におけるＥＰＡＥＥの含有量は急激に増加し、反応時間の増加に伴い、反応液中の低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量が増加するともに、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＥＰＡＥＥの含有量およびＤＨＡＥＥの含有量が増加する傾向があり、結果として、反応前の原料油脂に含まれる脂肪酸グリセリドを構成するＥＰＡ／ＤＨＡの値と比較して、反応液におけるＥＰＡＥＥの含有量／ＤＨＡＥＥ含有量の値を高めることができたことが理解できる。
　【０１６７】
　また、実施例１ないし８によれば、前記酵素処理の反応液の水分含量が０．４質量％以上であることにより、酵素の安定性が高められる結果、酵素の繰り返し使用が可能になるため、固定化酵素を反応液中から取り出して再度使用できることが理解できる。
　【０１６８】
　さらに、実施例１ないし８によれば、リパーゼを用いた処理において、反応液の水分含量を０．４質量％以上としたことにより、低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量が４０質量％以上９０質量％以下であり、かつ、ＤＨＡＥＥに対する前記ＥＰＡＥＥのモル比率（ＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ）が３．０以上３０以下である低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得ることができた。
　【０１６９】
　なお、反応前の原料油脂に含まれる脂肪酸グリセリドを構成する脂肪酸における、ＥＰＡの含有量およびＤＨＡの含有量はそれぞれ、１８モル％、１２モル％（ＥＰＡ／ＤＨＡ＝３／２）である。このことから、上記処理により、ＥＰＡ含有グリセリドを含む原料油脂からＥＰＡＥＥを選択的に得ることができることが理解できる。
　【０１７０】
　これに対して、比較例１および２によれば、リパーゼを用いた処理において、反応液の水分含量が０．４質量％未満である場合、酵素の安定性が低く、反応液における低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量が実施例１ないし８で得られた反応液よりも少なかった。
　【０１７１】
　［実施例９（分子蒸留処理）］
　実施例１で得られた第１組成物を、ショートパス蒸留機（株式会社神鋼環境ソリューション製）を使用して、真空度０．１Ｔｏｒｒ以下で８０℃以上２００℃以下の温度にて蒸留し（分子蒸留（一次蒸留））、低級アルコールＥＰＡエステル化物（ＥＰＡＥＥ）および低級アルコールＤＨＡエステル化物（ＤＨＡＥＥ）を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（第２組成物）を得た。
　【０１７２】
　実施例９で得られた第２組成物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比は０．０６９であり、該該第２組成物に含まれる低級アルコール脂肪酸エチルエステルの含有量はほぼ１００質量％であり、第２組成物の酸価は１０．１であり、ならびに、第２組成物におけるＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ（モル比率）は６．０であった。
　【０１７３】
　［実施例１０（精密蒸留処理）］
　実施例９で得られた第２組成物を、流下型薄膜式の精密蒸留機（株式会社旭製作所製）を使用して、真空度３Ｔｏｒｒ以下、１５０℃以上２５０℃以下の温度、理論段数５段にて蒸留（精密蒸留（二次蒸留））して、ＥＰＡＥＥ（第３組成物、純度：ほぼ１００質量％）を得た。
　【０１７４】
　実施例１０のＥＰＡＥＥのＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比は０．０８１であり、該第３組成物に含まれる脂肪酸エチルエステル（ＥＰＡＥＥ）の含有量はほぼ１００質量％であり、該第３組成物の酸価はほぼ０であった。
　【０１７５】
　［比較例３（アルカリ処理による低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の調製およびＥＰＡＥＥおよびＤＨＡＥＥの混合物の調製）］
　２Ｌの共栓付き三角フラスコ（アルミホイルにて遮光）に、実施例１で使用したものと同じ精製魚油８００ｇ（カールフィッシャー法で測定された水分測定値０．０４質量％）を添加した。別のビーカーにエタノール２４０ｍＬを入れ、水酸化ナトリウム４．８ｇを添加して、２％（ｗ／ｗ）水酸化ナトリウムエタノール溶液を調製した。この２％（ｗ／ｗ）水酸化ナトリウムエタノール溶液を前記三角フラスコに添加した後、該三角フラスコ内を窒素置換した。次いで、該三角フラスコを３０℃恒温水槽に浸して、スターラー目盛り８にて室温（２５℃）にて１８時間撹拌を行った。その後、反応液を分液漏斗に移し、純水５０ｇを添加して水洗し、約２０分間静置した後、下相（水相）を廃棄する洗浄操作を行った。次いで、純水５０ｇを添加して同様の洗浄操作を行った後、同様の洗浄操作をさらに４回（添加する純水の量、１回目：５０ｇ、２回目：２４０ｇ、３回目：２４０ｇ、４回目：２４０ｇ）を行った。続いて、油相が中性であることを確認した後、無水硫酸ナトリウムを添加して一晩静置し、４℃で保管することにより、比較例３の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得た。
　【０１７６】
　この比較例３の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物について、実施例９と同様の蒸留処理を行うことにより、ＥＰＡＥＥおよびＤＨＡＥＥの混合物を得た。
　【０１７７】
　比較例３の反応液のＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比は０．０９５であり、該反応液に含まれる脂肪酸エチルエステルの含有量はほぼ１００質量％であった。
　【０１７８】
　このことから、本発明に係る低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法（実施例９）によれば、アルカリ処理を行う方法（比較例３）と比較して、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物に含まれる異性化物の量を低減できた。
　【０１７９】
　［調製例２（固定化酵素の調製）］
　ジビニルベンゼン（ＤＶＢ）７０質量％とメタクリル酸グリシジル１５質量％とＤＥＡＥメタクレート１５質量％を通常の方法で共重合し、粒子状の樹脂担体を得た。この樹脂担体の平均細孔径は１１．５ｎｍで細孔容積は０．５ｃｍ３／ｇ、平均粒子径は０．５ｍｍ、比重０．２であった。得られた樹脂担体１ｋｇにＲｈｉｚｏｐｕｓ　ｓｐ．由来のリパーゼＦＡＰ−１５（天野エンザイム（株）製１５５，０００ｕ／ｇ）の２質量％水溶液１０Ｌを加え、３時間２５℃で攪拌しながら固定化を行った。濾過、洗浄後、真空乾燥器で２時間乾燥し、固定化酵素を得た。
　【０１８０】
　［実施例１１、１２、１３、１４（酵素処理）］
　実施例１の酵素処理において、使用する固定化酵素を、調製例２で得られた固定化酵素に置き換え、表２に記載の酵素量、エタノール量、水分含量に置き換えた以外は、実施例１と同様の方法で１サイクル反応させ、成分分析を行った。なお、実施例１３では、反応開始時および反応開始から４時間の時点でそれぞれ、エタノールを１０５ｇ添加した。実施例１４では、反応開始時にエタノールを２１０ｇ添加した。
　【０１８１】
　上述した実施形態に記載された方法により測定および算出された、実施例１１の反応液（反応開始から２４時間の時点）の酸価は４．６であった。
　【０１８２】
　【表２】
　【０１８３】
　表２によれば、実施例１１ないし１４において、反応開始から２時間で、低級アルコール脂肪酸エステル化物中におけるＥＰＡＥＥの含有量は急激に増加し、反応時間の増加に伴い、反応液中の低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量が増加するともに、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＥＰＡＥＥの含有量およびＤＨＡＥＥの含有量が増加する傾向があり、結果として、反応前の原料油脂に含まれる脂肪酸グリセリドを構成するＥＰＡ／ＤＨＡの値と比較して、反応液におけるＥＰＡＥＥの含有量／ＤＨＡＥＥ含有量の値を高めることができたことが理解できる。
　【０１８４】
　また、実施例１１ないし１４によれば、リパーゼを用いた処理において、反応液の水分含量を０．４質量％以上としたことにより、低級アルコール脂肪酸エステル化物の含有量が４０質量％以上９０質量％以下であり、かつ、ＤＨＡＥＥに対する前記ＥＰＡＥＥのモル比率（ＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ）が３．０以上１５．０以下である低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を得ることができた。
　【０１８５】
　また、実施例１１ないし１４の反応液のＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比はいずれも０．１５以下であった。
　【０１８６】
　［実施例１５（銀処理）］
　実施例９で得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（第２組成物）１０ｇを銀塩水溶液（硝酸銀の濃度：５０質量％）４０ｇと窒素雰囲気下遮光下で、２０℃、２０分間混合することにより、該組成物と該銀塩水溶液とを接触させた（表３の試験番号１）。また、上記銀塩水溶液の使用量を変えて同様の処理を行った（表３の試験番号２、３）。
　接触後に分離した有機相を廃棄し、残りの当該銀塩水溶液にトルエン４０ｇを添加した後、６０℃で１時間撹拌し、ＥＰＡＥＥおよびＤＨＡＥＥを含むトルエン層を回収した後トルエンを除去して、ＥＰＡＥＥおよびＤＨＡＥＥの混合物を得た。
　【０１８７】
　銀処理前後における酸価およびＥＰＡＥＥの含有量／ＤＨＡＥＥ含有量の値（モル比率）を表３に示す。
　【０１８８】
　【表３】
　【０１８９】
　表３によれば、本実施例の銀処理によって、ＥＰＡエチルエステル／ＤＨＡエチルエステルの比率を保持したまま、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物（第２組成物）の酸価を５未満に低減できたことが理解できる。なお、実施例１０で得られたＥＰＡＥＥについても、本実施例と同様の銀処理を行うことにより、微量含まれる遊離脂肪酸を除去することができた。
　【０１９０】
　［実施例１６（精密蒸留処理）］
　実施例１５で得られた、銀処理後の第２組成物を、精密蒸留機（株式会社旭製作所製）を使用して、真空度３Ｔｏｒｒ以下、１５０℃以上２００℃以下の温度、理論段数５段にて蒸留（精密蒸留）して、ＥＰＡＥＥ（第３組成物、純度：ほぼ１００質量モル％、酸価：ほぼ０）を得た。
　【０１９１】
　実施例１６のＥＰＡＥＥのＦＴ−ＩＲスペクトル解析（測定装置：１回反射型全反射測定装置ＭＩＲａｃｌｅＡ（ＺｎＳｅプリズム））において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比は０．０７８であり、該該第３組成物に含まれる脂肪酸エチルエステルの含有量はほぼ１００質量％であった。
　【０１９２】
　［実施例１７（酵素処理、分子蒸留処理及び精密蒸留処理）］
　実施例１の酵素処理、実施例９の分子蒸留処理及び実施例１０の精密蒸留処理をそれぞれ、１，０００倍、２，０００倍及び２，０００倍のスケールで行った。その結果、本実施例の酵素処理で得られた第１組成物の成分（低級アルコール脂肪酸エステル化物中の低級アルコール脂肪酸エステルの含有量（質量％）、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＥＰＡＥＥの含有量（モル％）、低級アルコール脂肪酸エステル化物中のＤＨＡＥＥの含有量（モル％）、ＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ（モル比率））、前記反応液（混合物）のＦＴ−ＩＲスペクトル解析における、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比、ならびに酸価は、実施例１で得られた第１組成物と同様であった。
　【０１９３】
　また、本実施例の分子蒸留処理で得られた第２組成物に含まれる低級アルコール脂肪酸エチルエステルの含有量ならびにＥＰＡＥＥ／ＤＨＡＥＥ（モル比率）は、実施例９で得られた第２組成物と同様であった。さらに、本実施例の分子蒸留処理で得られた第２組成物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析における、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比、ならびに酸価は、実施例９で得られた第２組成物と同様であった。
　【０１９４】
　さらに、本実施例の精密蒸留処理で得られた第３組成物に含まれるＥＰＡＥＥの割合は、実施例１０で得られた第３組成物と同様であった。さらに、本実施例で得られた精密蒸留処理で得られた第３組成物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析における、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比、ならびに酸価は、実施例１０で得られた第３組成物と同様であった。
　【０１９５】
　［実施例１８（食品組成物：クッキー）］
　下記配合にてクッキーを調製した。ショートニングおよび実施例９で得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を攪拌機（Ｋｉｔｃｈｅｎ　Ａｉｄ社製Ｋｉｔｃｈｅｎ　Ａｉｄ　Ｋ５ＳＳ）に投入し速度調節レバー６で１分間混ぜ合わせてクリーム状にし、粉末全卵、砂糖を加えミキシングを行った。次に、除々に清水を加え比重を０．８ｇ／ｍｌに調整し、予め混合してから篩った小麦粉とベーキングパウダーを加えてから３０秒間攪拌を続けて生地を調製した。得られた生地を冷蔵庫で２時間ねかせた後、厚さ３〜５ｍｍ程度に延ばし、型を抜き、１８０℃のオーブンで１３〜１５分間焼成し、クッキーを得た。
　【０１９６】
　【０１９７】
　［実施例１９（ソフトカプセル）］
　実施例１０で得られた低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を使用して、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。
　【０１９８】
（５７）【特許請求の範囲】
　【請求項１】
　ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を、
１，３位特異
　
前記原料油脂が魚油であり、
　前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　前記処理の反応液中における
添加された
０．５
　前記反応液の酸価が２以上１２以下であり、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下である、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項２】
　請求項１において、
　前記処理の反応液は、前記原料油脂９．５質量部に対して０．１質量部以上２．５質量部以下の低級アルコールをさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項３】
　請求項２において、
　前記処理において、前記処理の反応液に前記低級アルコールを連続的にまたは段階的に添加する、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項４】
（削除）
　【請求項５】
　請求項１ないし
３
　前記処理において、前記固定化酵素は粒子状である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項６】
（削除）
　【請求項７】
　請求項１ないし
３および５
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物および前記低級アルコールＤＨＡエステル化物を含む低級アルコール脂肪酸エステル化物の混合物と、該混合物以外の成分とを分離する工程をさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項８】
　請求項７において、
　前記混合物のＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項９】
　請求項７または８において、
　前記混合物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【請求項１０】
　請求項７ないし９のいずれか１項において、
　前記混合物を銀塩の水溶液と接触させる工程を含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項１１】
　請求項１０において、
　前記銀塩の水溶液と接触させた後の前記混合物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程をさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項１２】
　請求項７ないし
９
　前記混合物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程をさらに含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項１３】
　
ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、
　
前記原料油脂が魚油であり、
　
前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０
　
前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【請求項１４】
　請求項１３において、
　ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．１５以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　【請求項１５】
　
ＥＰＡ含有グリセリドおよびＤＨＡグリセリドを含有する原料油脂を１，３位特異リパーゼを用いて処理し、さらに蒸留して得られた、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物であって、
　
前記原料油脂が魚油であり、
　
前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　
前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して
　
前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物は、低級アルコールＥＰＡエステル化物および低級アルコールＤＨＡエステル化物を以下のモル比率で含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　３．０≦（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）≦３０
　【請求項１６】
　請求項１５において、
　ＦＴ−ＩＲスペクトル解析において、１７３６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度に対する、９６６ｃｍ−１付近に現れるピークの強度の比が０．０７５以下である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　【請求項１７】
　請求項１３ないし１６のいずれか１項において、
　酸価が２以上５未満である、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物。
　【請求項１８】
　請求項１３または１４に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、請求項１５または１６に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物と、前記組成物以外の成分とを分離する工程を含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項１９】
　請求項１５又は１６に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有物を銀塩の水溶液で接触させる工程を含む、低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項２０】
　請求項１５ないし１７のいずれか１項に記載の低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物を蒸留して、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物以外の低級アルコール脂肪酸エステル化物を分離することにより、前記低級アルコールＥＰＡエステル化物を得る工程を含む、
　低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物の製造方法。
　【請求項２１】
（削除）
　【請求項２２】
　請求項７ないし１２
、
、および１９
７に
　【請求項２３】
　請求項７ないし１２
、
、および１９
７に
　【請求項２４】
　ＥＰＡ含有グリセリドを含有する原料油脂を、
１，３位特異
　
前記原料油脂が魚油であり、
　前記原料油脂の酸価が０以上２．５以下であり、
　前記リパーゼが固定化された固定化酵素であり、
　前記処理の反応液中における
添加された
０．５
　前記反応液の酸価が２以上１２以下であり、
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物含有組成物は、低級アルコール脂肪酸エステル化物を
低級アルコール脂肪酸エステル化物およびグリセリドの総量に対して５０
　前記低級アルコール脂肪酸エステル化物における、前記低級アルコールＤＨＡエステル化物に対する前記低級アルコールＥＰＡエステル化物のモル比率（低級アルコールＥＰＡエステル化物／低級アルコールＤＨＡエステル化物）が３．０以上３０以下であり、
　前記処理後の固定化酵素を繰り返し使用する方法。