(57)【要約】  本発明は、有機合成によるプロドラッグ化によらずに水溶性薬剤の経皮吸収性を簡便に高めるための方法を提供することを目的とする。  本発明は、水溶性有効成分とアルデヒド基を有する脂溶性化合物とにより、水中で解離し得る相互作用を介して形成された、複合体；前記複合体、経皮吸収制御剤、及び脂溶性媒体を含む、経皮吸収組成物；ならびに前記複合体からの前記水溶性有効成分の皮膚中での放出を制御する方法に関する。
2017131214.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性有効成分とアルデヒド基を有する脂溶性化合物とにより、水中で解離し得る相互作用を介して形成された、複合体。
【請求項２】
前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物が、アルデヒド基を有するテルペン、アルデヒド基を有するリグノイド、及びアルデヒド基を有するバニロイドからなる群より一つ以上選ばれる、請求項１記載の複合体。
【請求項３】
前記アルデヒド基を有するテルペンがシトラール又はシトロネラールである、請求項２記載の複合体。
【請求項４】
前記アルデヒド基を有するリグノイドがシンナムアルデヒドである、請求項２記載の複合体。
【請求項５】
前記アルデヒド基を有するバニロイドがバニリンである、請求項２記載の複合体。
【請求項６】
前記水溶性有効成分が、アミノ基、ヒドロキシル基、又はチオール基を有する化合物である、請求項１〜５のいずれか一つ記載の複合体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一つ記載の複合体、経皮吸収制御剤、及び脂溶性媒体を含む、経皮吸収組成物。
【請求項８】
前記複合体が前記脂溶性媒体に溶解していることを特徴とする、請求項７記載の経皮吸収組成物。
【請求項９】
前記脂溶性媒体が経皮吸収促進性脂溶性媒体である、請求項７又は８記載の組成物。
【請求項１０】
前記経皮吸収促進性脂溶性媒体が、ミリスチン酸イソプロピル、スクワラン、スクワレン、シリコンオイル、ホホバオイル、アーモンドオイル、オリーブオイル、馬油、及びミネラルオイルからなる群より一つ以上選ばれる、請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
水溶性有効成分、アルデヒド基を有する脂溶性化合物、及び経皮吸収制御剤を含む、組成物。
【請求項１２】
さらに脂溶性媒体を含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
前記経皮吸収制御剤がアルコールである、請求項７〜１２記載の組成物。
【請求項１４】
前記アルコールがメタノール、エタノール、ゲラニオール、イソプロピルアルコール、及びグリセロールからなる群より一つ以上選ばれる、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか一つ記載の複合体を、経皮吸収制御剤に溶解させる工程を含む、前記複合体からの前記水溶性有効成分の皮膚中での放出を制御する方法。
【請求項１６】
請求項１〜６のいずれか一つ記載の複合体を、経皮吸収制御剤に溶解させる工程を含む、前記複合体からの前記水溶性有効成分を皮膚中で放出させる方法。
【請求項１７】
水溶性有効成分、アルデヒド基を有する脂溶性化合物、及び経皮吸収制御剤を含む組成物から、水溶性有効成分を皮膚中で放出させる方法。
【請求項１８】
水溶性有効成分の粉末とアルデヒド基を有する脂溶性化合物とを混合する工程を含む、前記水溶性有効成分と前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物とにより水中で解離し得る相互作用を介して形成された複合体の製造方法。
【請求項１９】
水溶性有効成分の粉末とアルデヒド基を有する脂溶性化合物と経皮吸収制御剤とを混合する工程を含む、前記水溶性有効成分、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物、及び前記経皮吸収制御剤を含む組成物の製造方法。
【請求項２０】
精油中に、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物を含む、請求項１記載の複合体。
【請求項２１】
前記精油が、レモングラス又はシトロネラである、請求項２０記載の複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水溶性有効成分の皮膚中での放出が制御された経皮吸収組成物、及び水溶性有効成分の皮膚中での制御方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、皮膚から活性成分を吸収させて皮膚に直接的に作用するように誘導する経皮吸収技術に関する研究が進んでいる。
特に、水溶性薬剤については、脂溶性が高い角質層に浸透しにくいのが問題で、その経皮吸収性を高めるための方法の一つとして、水溶性薬剤の脂溶化（油溶化）が挙げられている。例えば、水溶性薬剤に対して脂溶化部位を有機合成により導入し（プロドラッグ化）、油脂性基材に溶解・分散させ皮膚に塗布する。角質層透過後、皮膚内部で酵素等により水溶性薬剤と脂溶性部位の結合が切断され、水溶性薬剤が放出される。あるいは、水溶性薬剤の水溶液をリポソーム内に封入し、油脂性基材に溶解・分散させ皮膚に塗布する。角質層透過後、皮膚内部で酵素等によりリポソームの界面が崩壊し、水溶性薬剤が放出される。【０００３】
最近は、薬物の経皮吸収性を高めるため、テルペンや高級アルコールなどの透過性増強剤（経皮吸収促進剤）を使用することも報告されている（特許文献１〜５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−２４１４５９号公報
【特許文献２】国際公開番号ＷＯ２０１２／０４３７０１号公報
【特許文献３】特開２０１０−１００６５０号公報
【特許文献４】特許第５６８０１９７号公報
【特許文献５】特開２０１０−６７７１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
プロドラッグ化は水溶性薬剤に親油性を付与し経皮吸収性を高める優れた方法であるが、有機合成の製造プロセスや、医薬品・医薬部外品の製造販売承認を得るための煩雑な手続きが必要となる。【０００６】
一方、プロドラッグ化又はリポソームに内包させる薬剤として、例えば、人工アミノ酸であるトラネキサム酸は、表皮中において、タンパク質分解酵素であるプラスミンに結合して活性化を阻害することにより、メラニンの産生を抑制することが知られている。この作用を利用して、近年、美白効果が謳われるようになり、化粧料の原料として注目を集めている。しかしながら、トラネキサム酸の皮膚浸透性は低いという問題があった。【０００７】
本発明は、有機合成によるプロドラッグ化によらずに水溶性薬剤の経皮吸収性を簡便に高めるための方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究の結果、水溶性有効成分が、水中で解離し得る可逆的な相互作用を介して、アルデヒド基を有する脂溶性化合物と複合体を形成することで、簡便に、当該水溶性有効成分に脂溶性を付与してその経皮吸収性が高められる一方、皮膚中では容易に水溶性有効成分が放出され得ることを見出し、本発明を完成させた。【０００９】
すなわち、本発明は、
(1)  水溶性有効成分とアルデヒド基を有する脂溶性化合物とにより、水中で解離し得る相互作用を介して形成された、複合体。
(2)  前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物が、アルデヒド基を有するテルペン、アルデヒド基を有するリグノイド、及びアルデヒド基を有するバニロイドからなる群より一つ以上選ばれる、前記(1)記載の複合体；
(3)  前記アルデヒド基を有するテルペンがシトラール又はシトロネラールである、前記(2)記載の複合体；
(4)  前記アルデヒド基を有するリグノイドがシンナムアルデヒドである、前記(2)記載の複合体；
(5)  前記アルデヒド基を有するバニロイドがバニリンである、前記(2)記載の複合体；
(6)  前記水溶性有効成分が、アミノ基、ヒドロキシル基、又はチオール基を有する化合物である、前記(1)〜(5)のいずれか一つ記載の複合体；
(7)  前記(1)〜(6)のいずれか一つ記載の複合体、経皮吸収制御剤、及び脂溶性媒体を含む、経皮吸収組成物；
(8)  前記複合体が前記脂溶性媒体に溶解していることを特徴とする、前記(7)記載の経皮吸収組成物；
(9)  前記脂溶性媒体が経皮吸収促進性脂溶性媒体である、前記(7)又は(8)記載の組成物；
(10)  前記経皮吸収促進性脂溶性媒体が、ミリスチン酸イソプロピル、スクワラン、スクワレン、シリコンオイル、ホホバオイル、アーモンドオイル、オリーブオイル、馬油、及びミネラルオイルからなる群より一つ以上選ばれる、前記(9)記載の組成物；
(11)  水溶性有効成分、アルデヒド基を有する脂溶性化合物、及び経皮吸収制御剤を含む、組成物；
(12)  さらに脂溶性媒体を含む、前記(11)記載の組成物；
(13)  前記経皮吸収制御剤がアルコールである、前記(7)〜(12)のいずれか一つ記載の組成物；
(14)  前記アルコールがメタノール、エタノール、ゲラニオール、イソプロピルアルコール、及びグリセロールからなる群より一つ以上選ばれる、前記(13)記載の組成物；
(15)  前記(1)〜(6)のいずれか一つ記載の複合体を、経皮吸収制御剤に溶解させる工程を含む、前記複合体からの前記水溶性有効成分の皮膚中での放出を制御する方法；
(16)  前記(1)〜(6)のいずれか一つ記載の複合体を、経皮吸収制御剤に溶解させる工程を含む、前記複合体からの前記水溶性有効成分を皮膚中で放出させる方法；
(17)  水溶性有効成分、アルデヒド基を有する脂溶性化合物、及び経皮吸収制御剤を含む組成物から、水溶性有効成分を皮膚中で放出させる方法；
(18)  水溶性有効成分の粉末とアルデヒド基を有する脂溶性化合物とを混合する工程を含む、前記水溶性有効成分と前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物とにより水中で解離し得る相互作用を介して形成された複合体の製造方法；
(19)  水溶性有効成分の粉末とアルデヒド基を有する脂溶性化合物と経皮吸収制御剤とを混合する工程を含む、前記水溶性有効成分、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物、前記経皮吸収制御剤を含む組成物の製造方法；
(20)  精油中に、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物を含む、前記(1)記載の複合体；
(21)  前記精油が、レモングラス又はシトロネラである、前記(20)記載の複合体；
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の複合体は、水溶性有効成分と、アルデヒド基を有する脂溶性化合物とが、水中で解離し得る相互作用を介して複合化しているので、脂溶性媒体に均一に溶解（脂溶化、もしくは油溶化）することができ、その結果、当該水溶性有効成分の経皮吸収性を向上させることができ、また、角質層透過後、皮膚内部の水により水溶性有効成分を放出して薬効を奏することもできる。
また、本発明では、経皮吸収制御剤を適宜使用することにより、皮膚中での上記複合体からの水溶性有効成分の放出を制御することもできる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】比較例１〜４及び実施例２の経皮吸収組成物の外観を示す写真である。
【図２】比較例５（図中Ａ）、実施例７（図中Ｂ）、及び実施例８（図中Ｃ）の経皮吸収組成物の外観を示す写真である。
【図３】比較例６（図中Ａ）、実施例１３（図中Ｂ）、及び実施例１４（図中Ｃ）の経皮吸収組成物の外観を示す写真である。
【図４】トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のエタノール溶液（図中Ａ）、酢酸エチル溶液（図中Ｂ）、及びヘキサン溶液（図中Ｃ）の外観を示す写真である。
【図５】トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のエタノール溶液のＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳスペクトルを示す図である。
【図６】トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体の酢酸エチル溶液のＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳスペクトルを示す図である。
【図７】トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のヘキサン溶液のＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の複合体では、水溶性有効成分と、アルデヒド基を有する脂溶性化合物とが、水中で解離し得る相互作用を介して複合化している。そのため、本発明の複合体は、水溶性有効成分及び該アルデヒド基を有する脂溶性化合物と化学平衡の関係にあることができ、その結果、脂溶性媒体中では、溶媒和やクラスター生成などにより脂溶化して安定に存在し得る一方、皮膚内部では、そこに含まれる水分で容易に解離して水溶性有効成分を放出するので薬効を発揮させ得る。
したがって、本発明の水溶性有効成分は、アルデヒド基を有する脂溶性化合物と、水中で解離し得る相互作用を介して複合体を形成し得る、水溶性の医薬又は化粧品などの有効成分であれば特に制限されず、任意の水溶性の医薬又は化粧品の有効成分、例えば、アミノ酸、親水性ビタミン、糖、ペプチドその他の親水性薬剤などを使用することができる。
このような本発明の水溶性有効成分として、例えば、アミノ基、ヒドロキシル基、又はチオール基を有するものが挙げられる。これらの基は、それぞれ、アルデヒド基を有する脂溶性化合物の当該アルデヒド基と、水中で解離し得る相互作用、例えば、イオン結合、水素結合、双極子相互作用、ファンデルワールス力、電荷移動相互作用、π−π相互作用、疎水相互作用や溶媒和、可逆的な化学結合などを形成し得る。
【００１３】
前記アミノ酸として、例えば、トラネキサム酸などの人工アミノ酸；ならびにアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンなどの天然アミノ酸などが挙げられる。
【００１４】
前記親水性ビタミンとして、例えば、アスコルビン酸、リン酸アスコルビルナトリウム、リン酸アスコルビルマグネシウム、アスコルビルグルコシド、エチルアスコルビン酸、ならびにビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ４，Ｂ５、Ｂ６、Ｂ７、及びＢ１２などが挙げられる。
【００１５】
前記糖として、例えば、グルコース、トレハロース、デキストラン、プルラン、シクロデキストリン、マンニトール、グルコサミン、ガラクトサミン、ラフィノース、マンナン、及びペクチンなどが挙げられる。
【００１６】
前記ペプチドとしては、公知のペプチドの他、特定の効能（例えば、人のＴ細胞に認識されるため、花粉症治療効果が期待される等）を有するペプチドが挙げられる。具体例としては、ペプチドＡ（アミノ酸配列：ＱＦＡＫＬＴＧＦＴＬＭＧ）、及びペプチドＢ（アミノ酸配列：ＳＭＫＶＴＶＡＦＮＱＦＧＰ）である。
【００１７】
前記親水性薬剤として、例えば、ミノキシジル、ザナミビル（リレンザ）、アシクロビル、シタラビンオクホスファート、及びリン酸フルダラビンなどが挙げられる。
【００１８】
本発明では、前記の水溶性有効成分を、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１９】
本発明のアルデヒド基を有する脂溶性化合物は、アルデヒド基を少なくとも１個含む脂溶性の化合物であれば、特に制限されず、脂肪族アルデヒドや芳香族アルデヒドを含む任意の化合物が使用することができる。中でも、天然由来かつ安全性の観点から、アルデヒド基を有するテルペン、アルデヒド基を有するリグノイド、及びアルデヒド基を有するバニロイドなどが好ましい。
【００２０】
前記アルデヒド基を有するテルペンとして、例えば、シトラール、シトロネラール、シクロシトラール、サフラナール、フェランドラール、ペリルアルデヒド、タゲトン、及びレチナールなどが挙げられ、水溶性有効成分を良好に脂溶化させる点から、シトラール及びシトロネラールが好ましく、また、上記化合物を含む精油（エッセンシャルオイル）等の天然物を使用してもよい。好ましくは、水溶性有効成分を良好に脂溶化させる点から、レモングラス又はシトロネラである。
精油とは、植物が産出する揮発性の有機物の総称であり、一般的に多くの化合物の混合物である。特に限定されるわけではなく、本発明のアルデヒド基を有するテルペンが含まれていれば実施可能である。
レモングラスは、一例としては、シトラール(50〜80％)が主な成分であり、ゲラニオール(3〜10％)、ファルネソール、ネロール、シトロネロール及びミルセン等の混合物である。
シトロネラは、一例としては、ゲラニオールが主な成分（10〜60％）であり、シトロネロール(3〜10%)、シトロネラール(1〜30%) 等の混合物である。
【００２１】
前記アルデヒド基を有するリグノイドとして、水溶性有効成分を良好に脂溶化させる点から、シンナムアルデヒドが好ましい。
【００２２】
前記アルデヒド基を有するバニロイドとして、水溶性有効成分を良好に脂溶化させる点から、バニリンが好ましい。
【００２３】
前記脂肪族アルデヒドや芳香族アルデヒドとしては、水溶性有効成分を良好に脂溶化させる点から、ドデカナール又は４−ブトキシベンズアルデヒドも好ましい。
【００２４】
本発明では、前記のアルデヒド基を有する脂溶性化合物を、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
本発明のアルデヒド基を有する脂溶性化合物は、水溶性有効成分を良好に脂溶化させる点から、とりわけシトラール及びシトロネラールが好ましい。
【００２５】
本発明の経皮吸収制御剤は、医薬や化粧品、特に皮膚外用剤の分野で、水溶性医薬又は化粧品の活性成分の経皮吸収の制御に慣用されるものであれば、特に制限されない。本発明の複合体を脂溶性媒体中で良好に安定化し得る点から、ヒドロキシル基を有する経皮吸収制御剤が好ましく、特に１価又は多価アルコールが好ましく使用される。
本発明の複合体は、水溶性有効成分と、アルデヒド基を有する脂溶性化合物に加え、さらに経皮吸収制御剤とが、水中で解離し得る相互作用を介して複合化していてもよい。そのような複合体では、皮膚中での水溶性有効成分の放出がより良好に制御される。
【００２６】
前記の１価のアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、及び２−プロパノールなどの低級アルコール；高級アルコール；ならびにゲラニオール、メントール、ボルネオール、イソボルネオール、ネロール、シトロネロール、フェンチルアルコール、カルベオール、及びネオメントールなどのヒドロキシル基を有するテルペンなどが挙げられ、好ましくはメタノール、エタノール、及びゲラニオールが挙げられる。
【００２７】
前記の高級アルコールとして、例えば、オクタノール、ノナノール、デカノール、ウンデシルアルコール、ラウリルアルコール、トリデシルアルコール、ミリスチルアルコール、ペンタデシルアルコール、セチルアルコール、ヘプタデシルアルコール、及びステアリルアルコールなどの炭素数８〜１８の飽和アルコール；ならびにオレイルアルコール、リノレイルアルコール、及びリノレニルアルコールなどの炭素数８〜１８の不飽和アルコールなどが挙げられる。好ましくは、オクタノール、デカノール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、及びオレイルアルコールが挙げられ、より好ましくは、オレイルアルコールが挙げられる。
【００２８】
前記の多価アルコールとして、例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２，３−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、グリセリン、ジプロピレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、及びポリエチレングリコール４００などが挙げられ、好ましくは、プロピレングリコールが挙げられる。
【００２９】
本発明の複合体は、前記水溶性有効成分と、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物とを混合させ、必要に応じて一定時間加熱し冷却することで、簡便に調製することができる。複合体が良好に得られる点で、本発明の経皮吸収制御剤、特に液状の経皮吸収制御剤も加えて混合させるのが好ましい。また、得られた複合体が安定に溶解し得る点でも本発明の経皮吸収制御剤は液状であることが好ましい。この場合、得られた複合体が溶解した経皮吸収制御剤の溶液は、本発明の経皮吸収組成物の調製に供することができる。
水溶性有効成分が固体（好ましくはアミノ酸の結晶）の場合、本発明の複合体を良好に得るために、粉末にて混合することが好ましい。粉末にする方法としては、乾式粉砕による方法が挙げられる。乾式粉砕の条件としては、水溶性有効成分を小片に粉砕できる条件であれば特に制限されないが、乳鉢、ボールミル、ホモジナイザー、カッターミル、ハンマーミルなどの粉砕機を用いることが望ましい。また、粉砕時間や処理圧などは、粉砕される水溶性有効成分の硬さに応じて、適宜調整される。
上記方法にて得られた粉末は、粒径を均一にするためにさらにふるいにかけることが望ましい。ふるいとしては５００μｍ以下が好ましく、２００μｍ以下がより好ましく、１００μｍ以下が特に好ましい。
前記水溶性有効成分と前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物との混合比は、使用するこれら物質の種類に応じて異なるが、１：１〜１００、好ましくは１：１０〜５０である。
前記経皮吸収制御剤も混合する場合は、前記水溶性有効成分、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物、前記経皮吸収制御剤の混合比は、使用するこれら物質の種類に応じて異なるが、１：１〜１００：１〜１００、好ましくは１：１〜１００：１０〜５０、より好ましくは１：１０〜５０：１０〜５０である。
本発明の複合体を構成する、前記水溶性有効成分及び前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物の構成比（モル比）は、１〜１００：１００〜１であり、より好ましくは１〜１０：１０〜１である。
【００３０】
本発明では、前述の経皮吸収制御剤、特に１価又は多価アルコールを適宜使用することで、例えば、これら経皮吸収制御剤の種類や使用量によって、経皮吸収後の皮膚中での本発明の複合体からの水溶性有効成分の放出を制御することができる。例えば、経皮吸収制御剤の脂溶性を上昇させることにより（例えば、炭素数を増加させることにより）、本発明の水溶性有効成分の放出を遅延させることでき、経皮吸収制御剤の脂溶性を低下させることにより（例えば、炭素数を減少させることにより）、本発明の水溶性有効成分の放出を促進させることできる。本発明は、本発明の複合体を、経皮吸収制御剤に溶解させる工程を含む、当該複合体からの水溶性有効成分の皮膚中での放出を制御する方法にも関する。本発明は、また、本発明の複合体からの水溶性有効成分の皮膚中での放出を制御するための経皮吸収制御剤の使用にも関する。
【００３１】
本発明では、前記の経皮吸収制御剤を、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３２】
本発明の脂溶性媒体は、医薬や化粧品、特に皮膚外用剤の分野で基材などとして慣用される脂溶性の媒体であれば、特に制限されず、好ましくは経皮吸収促進性脂溶性媒体を使用することができる。
前記の経皮吸収促進性脂溶性媒体は、医薬や化粧品、特に皮膚外用剤の分野で、水溶性医薬又は化粧品の活性成分の経皮吸収の促進に慣用されるものであれば、特に制限されず、例えば、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）、スクワラン、スクワレン、シリコンオイル、ホホバオイル、アーモンドオイル、オリーブオイル、馬油、及びミネラルオイルなどを使用することができ、好ましくはミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）を使用することができる。
本発明では、前記の脂溶性媒体を、単独で使用してもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３３】
本発明の経皮吸収組成物は、前記で得られた複合体が溶解した経皮吸収制御剤の溶液と、前記脂溶性媒体とを混合することで調製することができる。
本発明の経皮吸収組成物は、医薬又は化粧品として使用する場合には、それ自体使用してもよいが、慣用の医薬製剤、特に皮膚外用剤、又は化粧品として使用してもよい。当該医薬製剤又は化粧品は、本発明の効果を損なわない限り、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、乳化剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤等の医薬品や化粧品の分野で許容される添加剤を含んでもよい。
本発明の皮膚外用剤は、本発明の効果を損なわない限り、皮膚外用剤に通常配合され得る成分を含有することができる。そのような成分としては、グリセリン、プロピレングリコールなどの多価アルコール、流動パラフィン、スクワラン、高級脂肪酸、高級アルコールなどの油分、クエン酸、乳酸などの有機酸類、苛性ソーダ、トリエタノールアミンなどのアルカリ類、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、粉末、顔料、染料、防腐防黴剤、樹脂、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、増粘剤、保湿剤、アルコール、水、香料などが例示される。
本発明は、本発明の経皮吸収組成物を皮膚に適用することを含む、前記水溶性有効成分を経皮投与するための方法にも関する。また、本発明は、前記水溶性有効成分を経皮投与するための本発明の経皮吸収組成物の使用にも関する。
【００３４】
また、本発明の組成物は、前記水溶性有効成分、前記アルデヒド基を有する脂溶性化合物、及び前記経皮吸収制御剤を含む、組成物であってもよく、好ましくは経皮吸収組成物である。
本発明の組成物は、さらに前記脂溶性媒体を含んでもよい。
本発明は、本発明の組成物を皮膚に適用することを含む、前記水溶性有効成分を経皮投与するための方法にも関する。また、本発明は、前記水溶性有効成分を経皮投与するための本発明の組成物の使用にも関する。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００３６】
１．試薬及び装置
実施例で使用した試薬を以下に示す。
シトロネロール（一級）、ゲラン酸（異性体混合物）、エタノール（特級）、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）（特級）、グリシン、Ｌ−システイン（特級）、Ｌ−セリン（特級）、Ｌ（−）−トレオニン（特級）、Ｌ−トリプトファン（特級）、Ｌ（−）−プロリン（特級）、Ｌ−グルタミン酸（特級）、Ｌ（＋）−グルタミン（特級）、Ｌ−バリン（特級）、Ｌ（＋）−イソロイシン（特級）、Ｌ−チロシン（特級）、１０×Ｄ−ＰＢＳ（−）（細胞接着用）、トリエチルアミン（特級）、１−ドデカナール、シンナムアルデヒド（特級）、ドデシル硫酸ナトリウム（一級）、及びリン酸（特級）は和光純薬工業（株）より入手した。ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（トラネキサム酸）、（−）−シトロネラール、シトラール（ｃｉｓ−ａｎｄ  ｔｒａｎｓ−ｍｉｘｔｕｒｅ）、ゲラニオール、Ｌ−アラニン、Ｌ−アスコルビン酸、４-ブトキシベンズアルデヒド、バニリン、Ｌ−（＋）リシン、Ｌ−ヒスチジン、及びミノキシジルは東京化成工業（株）より入手した。メタノール（特級）及び無水リン酸二水素ナトリウム（特級）は和光純薬（株）より入手した。ペプチドＡ（アミノ酸配列：ＱＦＡＫＬＴＧＦＴＬＭＧ）、及びペプチドＢ（アミノ酸配列：ＳＭＫＶＴＶＡＦＮＱＦＧＰ）は医学生物学研究所（株）より入手した。レモングラス及びシトロネラは株式会社ハーベストシーズン（輸入元：クインエッセンス社）より入手した。ヘキサン（特級）、酢酸エチル（特級）、アセトニトリル（高速液体クロマトグラフィー用）は関東化学（株）より入手した。
分析に用いた装置を以下に示す。
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
装置：１２００シリーズ、アジレント・テクノロジー（株）製
質量分析計（ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ）
装置：ＪＭＳ−Ｔ１００ＣＳ  コールドスプレーイオン源搭載ＴＯＦＭＳシステム、日本電子製
マイクロプレートリーダー
装置：インフィニット２００ＰＲＯシリーズ、ＴＥＫＡＮ社製【００３７】
２．テルペンにより油溶化したトラネキサム酸を含む経皮吸収組成物の調製例
４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸１０ｍｇ、表１に示す各種テルペン１００ｍｇ、及びエタノール０．５ｍＬを加え、８０℃で１時間加熱させた。加熱後、室温下で５分間放冷し、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）を３ｍＬ加え、比較例１〜４ならびに実施例１及び２の経皮吸収組成物を調製した。
これら実施例及び比較例の分散状態を観察して油溶化の有無を確認した。結果を表１及び図１に示す。【００３８】
【表１】
2017131214.tif 000003
【００３９】
これらの結果より、テルペンの中で、アルデヒド基を有するシトラール又はシトロネラールを添加することにより、トラネキサム酸をＩＰＭ中に均一に油溶化させることができることがわかった。【００４０】
さらに、室温下での調製を行なった。
４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸２０ｍｇ、シトロネラール２００ｍｇ、及びエタノール１ｍＬを加え、室温下で３日間撹拌させた。３日後、ＩＰＭを１ｍＬ加えた。結果として、８０℃加熱時と同様に薄黄色均一溶液を得た。【００４１】
３．テルペン以外の添加剤により油溶化したトラネキサム酸を含む経皮吸収組成物の調製例
４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸１０ｍｇ、表２に示す添加剤２００ｍｇ、及びエタノール１ｍＬを加え、均一溶液になるまで８０℃で加熱させた。加熱後、室温下で５分間放冷し、ＩＰＭを１ｍＬ加え、実施例３から６の経皮吸収組成物を調製した。
これら実施例及び比較例の分散状態を観察して油溶化の有無を確認した。結果を表２に示す。【００４２】
【表２】
2017131214.tif 000004
【００４３】
これらの結果より、テルペン以外の食品添加物等で利用されている、アルデヒド基を有するシンナムアルデヒド、バニリン、ドデカナール、及び４−ブトキシベンズアルデヒドを添加することにより、トラネキサム酸をＩＰＭ中に均一に油溶化させることができることがわかった。【００４４】
４．エッセンシャルオイルにより油溶化したトラネキサム酸を含む経皮吸収組成物の調製例
エッセンシャルオイルとして知られているレモングラスをトラネキサム酸の油溶化添加剤として用いた調製例を以下に示す。
４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸２０ｍｇ、レモングラス２１４ｍｇ、及びエタノール０．５ｍＬを加え、室温下で２日間撹拌させ、エタノール溶液を調製した。２日後、別途用意した４ｍＬのねじ口サンプル管に、上記調製したエタノール溶液０.１ｍＬ、及びＩＰＭを０．９ｍＬ加えた。結果として、赤褐色均一溶液を得た。
次にエッセンシャルオイルとして知られているシトロネラをトラネキサム酸の油溶化添加剤として用いた調製例を以下に示す。
４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸２０ｍｇ、シトロネラ２００ｍｇ、及びエタノール０．５ｍＬを加え、室温下で１日間撹拌させた。１日おきに、さらにシトロネラ２００ｍｇ加え、室温下で３日間撹拌させた。３日後、さらにシトロネラ２００ｍｇ、及びエタノール０．５ｍＬを加え、室温下で１日間撹拌させ、エタノール溶液を調製した。１日後、別途用意した４ｍＬのねじ口サンプル管に、上記調製したエタノール溶液０.２ｍＬ、及びＩＰＭを０．８ｍＬ加えた。結果として、薄黄色均一溶液を得た。
これらの結果より、レモングラスやシトロネラなどシトラールやシトロネラールが含有されているエッセンシャルオイルを用いることでもトラネキサム酸を油溶化することができることがわかった。【００４５】
５．テルペンにより油溶化したＬ−アスコルビン酸を含む経皮吸収組成物の調製例
４ｍＬのねじ口サンプル管に、Ｌ−アスコルビン酸１０ｍｇ、シトラールもしくは（−）−シトロネラール１００ｍｇ、及びエタノール０．５ｍＬを加え、８０℃で１時間加熱させた。加熱後室温下で５分間放冷し、ＩＰＭを０．５ｍＬ加えて、無色均一溶液の実施例７及び８の経皮吸収組成物を調製した。シトラールを添加した経皮吸収組成物（実施例７）及び（−）−シトロネラールを添加した経皮吸収組成物（実施例８）は、室温下、１６時間後でも無色均一溶液であった（図２のＢ（実施例７）およびＣ（実施例８））。一方、これら（シトラールもしくは（−）−シトロネラール）を添加せずに同様に調製した溶液（比較例５）は、時間経過とともに沈殿物が見られた（図２のＡ）。
これらの結果より、Ｌ−アスコルビン酸がシトラール又は（−）−シトロネラールと複合体を形成してＩＰＭ中で均一に油溶化されていることがわかった。【００４６】
さらに、室温下での調製を行なった。
９ｍＬのねじ口サンプル管に、Ｌ−アスコルビン酸４０ｍｇ、シトラール４００ｍｇ、及びエタノール２ｍＬを加え、室温下で１２時間撹拌させた。１２時間後、ＩＰＭを２ｍＬ加えることにより、加熱調製時と同様、無色均一溶液を得た。【００４７】
６．テルペン以外の添加剤により油溶化したＬ−アスコルビン酸を含む経皮吸収組成物の調製例
４ｍＬのねじ口サンプル管に、Ｌ−アスコルビン酸４０ｍｇ、表３に示す添加剤２００ｍｇ、及びエタノール１ｍＬを加え、８０℃で２時間加熱させた。加熱後、室温下で５分間放冷し、ＩＰＭを１ｍＬ加え、実施例９から１２の経皮吸収組成物を調製した。
これら実施例及び比較例の分散状態を観察して油溶化の有無を確認した。結果を表３に示す。【００４８】
【表３】
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【００４９】
これらの結果より、テルペン以外の食品添加物等で利用されている、アルデヒド基を有するシンナムアルデヒド、バニリン、ドデカナール、及び４−ブトキシベンズアルデヒドを添加することにより、Ｌ−アスコルビン酸をＩＰＭ中に均一に油溶化させることができることがわかった。【００５０】
７．アミノ酸・シトロネラール又はシトラール複合体のエタノールへの可溶化試験
アミノ酸を結晶のままで、そのシトロネラール又はシトラールとの複合体のエタノールへの可溶化を検討した。アミノ酸は、その種類により、市販での結晶状態が異なるため、結果にばらつきが生じる恐れがあった。そこで、結晶による差異を小さくすると同時に、できる限り表面積を大きくし、液体と接触する面を大きくするための操作を加えた。具体的には、本試験で使用したアミノ酸は、結晶を乳鉢ですりつぶした後、１００μｍのふるいにかけた粉末を使用した。
４ｍＬのねじ口サンプル管に、上記の方法で粉末にした表４及び５に示すアミノ酸２０ｍｇ、及びシトロネラール又はシトラールを７００ｍｇから９００ｍｇまで５０ｍｇきざみで加えてサンプルを調製した。調製されたそれぞれのサンプルにエタノール１ｍＬを加え、８０℃で最長２４時間加熱して、アミノ酸・シトロネラール又はシトラール複合体のエタノール溶液を得た。得られた複合体がエタノールに可溶化するために必要なシトロネラール又はシトラールの量及び加熱時間、ならびに得られた複合体のエタノール中での分散状態を確認した。結果を表４及び表５に示す。【００５１】
【表４】
2017131214.tif 000006
【００５２】
【表５】
2017131214.tif 000007
【００５３】
これらの結果より、シトラール又はシトロネラールを用いることで、多種のアミノ酸をエタノールに均一溶解させることができることがわかった。なお、上記の条件にて各種アミノ酸を溶解したエタノール溶液はＩＰＭに溶解する。【００５４】
８．ミノキシジルを含む経皮吸収組成物の調製例
４ｍＬのねじ口サンプル管に、ミノキシジル１０ｍｇ、シトラールもしくは（−）−シトロネラール２００ｍｇ、及びエタノール０．５ｍＬを加え、８０℃で１時間加熱させた。加熱後室温下で５分間放冷し、ＩＰＭを０．５ｍＬ加えることで、経皮吸収組成物を得た。添加剤がシトラールのときは黄色均一溶液（実施例１３）を、添加剤が（−）−シトロネラールのときは無色均一溶液（実施例１４）を得た。実施例１３は、室温下、１２時間後でもＩＰＭ中で黄色均一溶液であった（図３のＢ）。同様に、実施例１４は、室温下、１２時間後でもＩＰＭ中で無色均一溶液であった（図３のＣ）。一方、これら（シトラール又は（−）−シトロネラール）を添加せずに同様に調製した溶液（比較例６）は、時間経過とともに沈殿物が見られた（図３のＡ）。
これらの結果より、ミノキシジルがシトラール又は（−）−シトロネラールと複合体を形成してＩＰＭ中で均一に油溶化されていることがわかった。【００５５】
９．ペプチドを含む経皮吸収組成物の調製例
ペプチドＡ及びペプチドＢは、花粉症治療効果のあるペプチドである。このペプチドＡもしくはＢに対してシトラールを用いることによる油溶化検討を行った。
ペプチドＡの油溶化実験は次のとおりである。１ｍＬのねじ口サンプル管に、ペプチドＡを２ｍｇ、シトラール０．１ｍＬ、及びエタノール０．１ｍＬを加え、８０℃で３時間加熱させた。加熱後室温下で５分間放冷し、エタノール溶液を調製した。別途用意した１ｍＬのねじ口サンプル管に、上記調製したエタノール溶液を５０μＬ加え、さらにＩＰＭを１５０μＬ加えることで、薄黄色のペプチドＩＰＭ溶液を得た。
また、ペプチドＢの油溶化実験は８０℃加熱下、及び室温下での調製を検討した。
８０℃加熱下における調製条件は次のとおりである。１ｍＬのねじ口サンプル管に、ペプチドＢを２ｍｇ、シトラール０．１ｍＬ、及びエタノール０．１ｍＬを加え、８０℃で４時間加熱させた。加熱後室温下で５分間放冷した。別途用意した１ｍＬのねじ口サンプル管に、調製したエタノール溶液を５０μＬ加え、さらにＩＰＭを１５０μＬ加えることで、薄黄色のペプチドＩＰＭ溶液を得た。
室温撹拌における調製条件は次のとおりである。１ｍＬのねじ口サンプル管に、ペプチドＢを２ｍｇ、シトラール０．１ｍＬ、及びエタノール０．１ｍＬを加え、室温下で２２時間撹拌させ、エタノール溶液を得た。撹拌後のエタノール溶液は黄色のゲル状物質となった。
これらの結果より、ペプチドＡ及びＢに対してシトラールを添加することにより、油溶化が達成されることがわかった。【００５６】
１０．ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳによる溶液内の複合体構造解明
トラネキサム酸複合体の溶液内の構造についてＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳを用い、同定を行った。４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸４０ｍｇ、（−）−シトロネラール４００ｍｇ、及びエタノール２ｍＬを加え、８０℃で１時間加熱させた。加熱後室温下で５分間放冷し、ポアサイズが０．４５μｍのフィルターに通し、ろ液をトラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のエタノール溶液として得、これを測定に使用した。さらに、別の４ｍＬのねじ口サンプル管に、上記調製したろ液２００μＬ、酢酸エチル１．８ｍＬもしくはヘキサン１．８ｍＬを加え、それぞれ、トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体の酢酸エチル溶液およびヘキサン溶液とした。
トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のエタノール溶液は黄薄色溶液であった（図４のＡ）。また、トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体の酢酸エチル溶液およびヘキサン溶液は、いずれも無色透明であった（図４のＢおよびＣ）。【００５７】
ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳの条件は、次のとおりである。測定条件：イオン化モード（ＥＳＩ＋）、ピーク間電圧（２０００Ｖ）、オリフィス電圧（８０Ｖ）、脱溶媒温度（２００℃もしくは３４℃）、オリフィス１温度（８０℃もしくは３２℃）。先に調製したトラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のエタノール溶液をＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳを用いて測定すると、質量電荷比（ｍ／ｚ）５６４．４４がメインピークとして観測された。同位体シミュレーションより、トラネキサム酸１分子、シトロネラール１分子、エタノール５分子からなる複合体と帰属した（図５）。さらに、先に調製したトラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体の酢酸エチル溶液およびヘキサン溶液のＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳを測定すると、トラネキサム酸・（−）−シトロネラール複合体のエタノール溶液と同じイオンピークが確認されたことから、これらの溶液中でも複合体が安定に存在していることが明らかとなった（図６および７）。【００５８】
１１．油溶化トラネキサム酸の水への放出能実験
トラネキサム酸とシトロネラールとの複合体が水中でトラネキサム酸を放出することを確認するため、トラネキサム酸とシトロネラールとの複合体（以下、「トラネキサム酸・シトロネラール複合体」ともいう）のアルコール溶液をＰＢＳ水溶液に加え、室温攪拌下、ＨＰＬＣによりＰＢＳ水溶液中のトラネキサム酸量を定量した。
ＨＰＬＣの操作条件は、移動相として、リン酸緩衝液（無水リン酸二水素ナトリウム１１．０ｇを水５００ｍＬに溶かし、トリエチルアミン５ｍＬ及びドデシル硫酸ナトリウム１．４ｇを加える。リン酸を加えてｐＨを２．５に調整した後、純水で６００ｍＬまでメスアップ）とメタノールを６０／４０（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を用い、２５℃に設定したカラム（ＧＬサイエンス社製、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３）内を流速０．７ｍＬ／ｍｉｎで流し、検出波長２２０ｎｍでトラネキサム酸のピークを検出した。検量線を０．１ｍｇ／ｍＬから１０ｍｇ／ｍＬの範囲で作成し、放出能実験におけるトラネキサム酸量を定量した。
放出能試験は次のように行った。なお、本実験で使用したＰＢＳ水溶液は、１０×Ｄ−ＰＢＳ（−）を純水で１０倍希釈したものを用いた。４ｍＬのねじ口サンプル管に、トラネキサム酸１０ｍｇ、シトロネラール１００ｍｇ、及び表６に示したアルコール０．５ｍＬを加え、８０℃で１時間加熱させた。加熱後、室温まで放冷して、トラネキサム酸・シトロネラール複合体のアルコール溶液を得た。このアルコール溶液を５ｍＬのＰＢＳ水溶液中に２００μＬ滴下し、室温下攪拌した。３０分後と１日後のＰＢＳ水溶液をサンプリングし、ＨＰＬＣによりＰＢＳ水溶液中のトラネキサム酸量を定量した。結果を表６に示す。【００５９】
【表６】
2017131214.tif 000008
【００６０】
これらの結果より、アルコールの炭素鎖長が短いほど、トラネキサム酸・シトロネラール複合体からＰＢＳ水溶液中に、より多くのトラネキサム酸が放出されることが分かった。また、３０分後以降、１日後においても、少しずつトラネキサム酸を放出していることも分かった。このことは、経皮吸収制御剤を適切に選択することにより、放出速度を制御できる可能性があることを示唆している。【００６１】
１２．油溶化アスコルビン酸の水への放出能実験
Ｌ−アスコルビン酸とシトラールとの複合体が水中でＬ−アスコルビン酸を放出することを確認するため、Ｌ−アスコルビン酸とシトラールとの複合体（以下、「アスコルビン酸・シトラール複合体」ともいう）のアルコール溶液をＰＢＳ水溶液に加え、室温攪拌下、ＦキットＬ−アスコルビン酸（Roche/R-Biopharm社製）を用いることによりＰＢＳ水溶液中のＬ−アスコルビン酸量を定量した。
放出能試験は次のように行った。なお、本実験で使用したＰＢＳ水溶液は、１０×Ｄ−ＰＢＳ（−）を純水で１０倍希釈したものを用いた。８ｍＬのねじ口サンプル管に、Ｌ−アスコルビン酸４０ｍｇ、シトラール４００ｍｇ、エタノール２ｍＬを加え、室温下で１２時間撹拌させた。１２時間後、ＩＰＭを２ｍＬ加え、アスコルビン酸・シトラール複合体のＩＰＭ溶液を得た。このＩＰＭ溶液を５ｍＬのＰＢＳ水溶液中に２００μＬ滴下し、室温下攪拌した。２４時間後のＰＢＳ水溶液をサンプリングし、ＦキットＬ−アスコルビン酸によりＰＢＳ水溶液中のＬ−アスコルビン酸量を定量した。吸光度はマイクロプレートリーダーにより測定した。結果として、Ｌ−アスコルビン酸が８３％放出されていることがわかった。【００６２】
１３．油溶化トラネキサム酸の経皮吸収試験
角質層は疎水的であり、深部に行くに従い親水的になる。すなわち、角質層のバリアを突破するために、油溶化は有効な手段となる。前記項目１１の試験において、トラネキサム酸・シトロネラール複合体アルコール溶液が、ＰＢＳ水溶液中では、トラネキサム酸を放出することを明らかにした。そこで、トラネキサム酸・シトロネラール複合体エタノール溶液を用いて、皮膚バリアを突破した後、ＰＢＳ水溶液中でトラネキサム酸を放出するか否かの経皮吸収試験を行った。
経皮吸収試験は次のとおりに行った。なお、本実験で使用したＰＢＳ水溶液は、１０×Ｄ−ＰＢＳ（−）を純水で１０倍希釈したものを用いた。フランツセルのレシーバー相に攪拌子とＰＢＳ水溶液を５ｍＬ加え、経皮吸収試験用膜（Ｓｔｒａｔ−Ｍ  メンブレン（メルクミリポア製））をＰＢＳ水溶液上部に挟み、フランツセルのウォータージャケット部に３２℃の水を流した。トラネキサム酸水溶液又はトラネキサム酸・シトロネラール複合体エタノール溶液２００μＬを経皮吸収試験用膜の上に載せ、レシーバー相を攪拌した。２４時間後にＰＢＳ水溶液をサンプリングし、ＨＰＬＣによりトラネキサム酸量を定量した。
結果として、トラネキサム酸水溶液のときには、レシーバー相のＰＢＳ水溶液中にトラネキサム酸のピークは０．３％であった。一方、トラネキサム酸・シトロネラール複合体エタノール溶液では、レシーバー相のＰＢＳ水溶液中にトラネキサム酸が５７％放出していることが確認された。
さらに、トラネキサム酸・シトロネラール複合体ＩＰＭ溶液も同様に実験を行うと、８０℃加熱調製溶液では７％、室温調製溶液では９％の経皮吸収性が確認された。
これらの結果から、トラネキサム酸・シトロネラール複合体は、経皮吸収性を有し、経皮薬物送達システム（ＤＤＳ）材料として有望であることが示された。【００６３】
１４．油溶化Ｌ−アスコルビン酸の経皮吸収試験
トラネキサム酸のときと同様に、前記項目１２の試験において、アスコルビン酸・シトラール複合体のＩＰＭ溶液が、ＰＢＳ水溶液中では、Ｌ−アスコルビン酸を放出することを明らかにした。そこで、アスコルビン酸・シトラール複合体ＩＰＭ溶液を用いて、皮膚バリアを突破した後、ＰＢＳ水溶液中でＬ−アスコルビン酸を放出するか否かの経皮吸収試験を行った。
経皮吸収試験としては豚皮膚（Yucatan Micro Pig（日本チャールスリバー社製））を用いた。なお、本実験で使用したＰＢＳ水溶液は、１０×Ｄ−ＰＢＳ（−）を純水で１０倍希釈したものを用いた。フランツセルのレシーバー相に攪拌子とＰＢＳ水溶液を５ｍＬ加え、脂肪を除去した豚皮膚をＰＢＳ水溶液上部に挟み、フランツセルのウォータージャケット部に３２℃の水を流した。Ｌ−アスコルビン酸水溶液又はアスコルビン酸・シトラール複合体ＩＰＭ溶液２００μＬを豚皮膚の上に載せ、レシーバー相を攪拌した。２４時間後に豚皮膚は次のように処理した。豚皮膚をＰＢＳ水溶液／メタノール／アセトニトリル（２／１／１（vol/vol/vol））１mLで表面を４回洗浄後、レシーバー層に接触していた箇所を８等分に切断し、１．５mLのマイクロチューブに入れてＰＢＳ水溶液／メタノール／アセトニトリル（２／１／１（vol/vol/vol））５００μLを加え、１時間ボルテックスミキサーにより振とうさせ、マイクロチューブ中のＰＢＳ水溶液／メタノール／アセトニトリル抽出液１００μＬをＬ−アスコルビン酸の定量液として用いた。レシーバー層は４ｍＬを採取し、1日凍結乾燥を行い、濃縮した。濃縮後の残渣にＰＢＳ水溶液を５００μL加え、残渣を溶解させた後、２００μLを定量液として用いた。Ｌ−アスコルビン酸の定量はＦキットＬ−アスコルビン酸を用い、吸光度はマイクロプレートリーダーにより測定した。
結果として、Ｌ−アスコルビン酸水溶液のときには、豚皮膚中、及びレシーバー層中とも検出限界以下だったのに対して、アスコルビン酸・シトラール複合体ＩＰＭ溶液では、豚皮膚中には８４．５μg／ｃｍ２、レシーバー層には１５．２μg／ｃｍ２の透過量が確認された。
これらの結果から、アスコルビン酸・シトラール複合体は、経皮吸収性を有し、経皮薬物送達システム（ＤＤＳ）材料として有望であることが示された。【００６４】
１５．シトラール以外の添加剤を用いた油溶化Ｌ−アスコルビン酸の経皮吸収試験
Ｌ−アスコルビン酸を油溶化させるための添加剤として、シトラール以外の添加剤を用いた際の経皮吸収試験を行った。
経皮吸収試験としては豚皮膚（Yucatan Micro Pig（日本チャールスリバー社製））を用いた。なお、本実験で使用したＰＢＳ水溶液は、１０×Ｄ−ＰＢＳ（−）を純水で１０倍希釈したものを用いた。フランツセルのレシーバー相に攪拌子とＰＢＳ水溶液を５ｍＬ加え、脂肪を除去した豚皮膚をＰＢＳ水溶液上部に挟み、フランツセルのウォータージャケット部に３２℃の水を流した。Ｌ−アスコルビン酸水溶液又は油溶化Ｌ−アスコルビン酸ＩＰＭ溶液２００μＬを豚皮膚の上に載せ、レシーバー相を攪拌した。２４時間後に豚皮膚は次のように処理した。豚皮膚をＰＢＳ水溶液／メタノール／アセトニトリル（２／１／１（vol/vol/vol））１mLで表面を４回洗浄後、レシーバー層に接触していた箇所を８等分に切断し、１．５mLのマイクロチューブに入れてＰＢＳ水溶液／メタノール／アセトニトリル（２／１／１（vol/vol/vol））５００μLを加え、１時間ボルテックスミキサーにより振とうさせ、マイクロチューブ中のＰＢＳ水溶液／メタノール／アセトニトリル抽出液１００μＬをＬ−アスコルビン酸の定量液として用いた。レシーバー層は４ｍＬを採取し、1日凍結乾燥を行い、濃縮した。濃縮後の残渣にＰＢＳ水溶液を５００μL加え、残渣を溶解させた後、２００μLを定量液として用いた。Ｌ−アスコルビン酸の定量はＦキットＬ−アスコルビン酸を用い、吸光度はマイクロプレートリーダーにより測定した。結果を表７に示した。
【表７】
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【００６５】
これらの結果より、シトラール以外の添加剤を用いた油溶化Ｌ−アスコルビン酸ＩＰＭ溶液でも、経皮吸収性を有し、経皮薬物送達システム（ＤＤＳ）材料として有望であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
本発明の複合体は、水溶性有効成分の経皮吸収性を向上させて、皮膚中の含量を増大させ、また、皮膚内部の水及び酸性条件により水溶性有効成分を放出して、薬効を奏することができるので、このような複合体を含む本発明の経皮吸収組成物は、皮膚外用剤、例えば、皮膚外用療法に使用される医薬品や化粧品などに利用することができる。
また、経皮吸収制御剤を適宜使用することで、皮膚内部での本発明の複合体からの水溶性有効成分の放出が制御されるので、薬物送達システムに利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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