(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ヒトにおいて単位用量当たり約５０マイクログラム未満のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；
（ｂ）ヒトにおいて単位用量当たり約５０マイクログラム未満の脂質系アジュバント；
（ｃ）両親媒性化合物；及び
（ｄ）疎水性担体
を含むアジュバント系であって、
前記脂質系アジュバントが、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）であり、
前記両親媒性化合物が、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ＤＯＰＣを含むリン脂質の混合物、レシチン、又はレシチンを含むリン脂質の混合物であり、
前記担体が、植物油、ナッツ油、及び鉱油から選択される油又は油の混合物であるか、又は前記担体が、鉱油溶液中のマンニドオレエートである、アジュバント系。
【請求項２】
請求項１のアジュバント系及び抗原を含む、水を含まないか又は水を実質的に含まない組成物。
【請求項３】
ヒトにおいて単位用量当たり約１０マイクログラム未満のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、及びヒトにおいて単位用量当たり約１０マイクログラム未満の脂質系アジュバントを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ヒトにおいて単位用量当たり約５マイクログラム未満のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、及びヒトにおいて単位用量当たり約５マイクログラム未満の脂質系アジュバントを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
水を実質的に含まない組成物が、前記担体の合計重量に基づき重量／重量で約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％又は０．０１％未満の水を含む、請求項２〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、
ｉ）ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの組合せを含み；
ｉｉ）二重らせんであり、各ストランドがイノシン若しくはシチジル残基のホモポリマーであるか、又は二重らせんであり、各ストランドがイノシン及びシチジル残基の両方を含むヘテロポリマーであり、及び／又は
ｉｉｉ）ホモポリマー状のポリＩ：Ｃポリヌクレオチド及びヘテロポリマー状のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの両方を含む混合物である、請求項２〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記脂質が抗原の周りに閉じた小胞構造を形成し、前記閉じた小胞構造が単一層の小胞構造又は二重層の小胞構造である、請求項２〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記脂質系アジュバントが、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）であり、前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、変化するストランド長さのポリＩとポリＣの混合物であり、前記混合物が約９８９，４８６ダルトンの分子量を含み；及び前記担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧである、請求項２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記抗原が、ポリペプチド；ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；炭水化物；微生物若しくはそれらの一部；又は毒素である、請求項２〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗原が、ウイルスから誘導され、細菌から誘導され、原生動物から誘導され、又は膜表面に結合した癌抗原から誘導されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗原が、
ｉ）前記サバイビンタンパク質（配列番号６９）若しくは改変されたそれらの変形体からのアミノ酸配列を含むペプチド抗原；又は前記ペプチド抗原をコードする核酸分子；
ｉｉ）ＦＥＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７０）；ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７１）；ＬＴＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７２）；ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７３）；ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦ（配列番号７４）；ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号７５）；ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号７６）；又はＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号７７）、又は任意のそれらの組合せから選択されるアミノ酸配列を含むペプチド抗原；又は前記ペプチド抗原をコードする核酸分子；又は
ｉｉｉ）アミノ酸配列：ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７１）；ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７３）；ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号７５）；ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号７６）；及びＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号７７）を含む５種のペプチド抗原の混合物
である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗原が、少なくとも１つのＢ細胞エピトープ、少なくとも１つのＣＴＬエピトープ又はそれらの組合せを含む、請求項２〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
Ｔヘルパーエピトープをさらに含む、請求項２〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記Ｔヘルパーエピトープが、アミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号７９）を含むＰＡＤＲＥ；アミノ酸配列ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号８０）を含む破傷風トキソイドペプチドＦ２１Ｅ；又はアミノ酸配列ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号７８）を含む改変された破傷風毒素ペプチドＡ１６Ｌであり、前記Ｔヘルパーエピトープは任意選択で前記抗原とのコンジュゲート又は融合体である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニストであり、前記脂質系アジュバントが、ＴＬＲ１／２ヘテロダイマーのアゴニストである、請求項２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
抗体免疫応答及び／又は細胞媒介免疫応答を、単回用量で誘発することができる、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
抗体免疫応答及び／又は細胞媒介免疫応答により緩和される疾患又は障害の治療又は予防に使用するための；細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、アレルゲン、又は前記抗原を発現する腫瘍細胞により惹起される疾患の治療又は予防に使用するための；及び／又は毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを、前記抗原に対して産生された抗体で中和するための、請求項２〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
抗原に対する抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答を誘発するための医薬の製造における、請求項２〜１７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１９】
細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、アレルゲン、又は前記抗原を発現する腫瘍細胞により惹起される疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造における、請求項２〜１７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２０】
前記疾患が、インフルエンザ；ヒトＲＳウイルス、百日咳、炭疽、マラリア、又は癌により惹起された気道感染である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
抗原の発現と関連する神経変性疾患の治療及び／又は予防のための医薬の製造における、請求項２〜１７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２２】
毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを抗体で中和するための医薬の製造における、請求項２〜１７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２３】
１つ又は複数の別の容器に、ヒトにおいて単位用量当たり約５０マイクログラム未満のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、ヒトにおいて単位用量当たり約５０マイクログラム未満の脂質系アジュバント、両親媒性化合物、及び疎水性担体を含むキットであって：
前記脂質系アジュバントが、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）であり、
前記両親媒性化合物が、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ＤＯＰＣを含むリン脂質の混合物、レシチン、又はレシチンを含むリン脂質の混合物であり、
前記担体が、植物油、ナッツ油、及び鉱油から選択される油又は油の混合物であるか、又は前記担体が、鉱油溶液中のマンニドオレエートであり、
ｉ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、前記脂質系アジュバント、前記両親媒性化合物、及び前記疎水性担体が、各々別の容器中にあるか；
ｉｉ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、前記脂質系アジュバント、及び前記両親媒性化合物が、一緒に第１の容器中にあり、前記疎水性担体が第２の容器中にあるか；
ｉｉｉ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び前記脂質系アジュバントが、一緒に第１の容器中にあり、前記両親媒性化合物が第２の容器中にあり、及び前記疎水性担体が第３の容器中にあるか；
ｉｖ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び前記脂質系アジュバントが、一緒に第１の容器中にあり、前記両親媒性化合物及び前記疎水性担体が、一緒に第２の容器中にあるか；又は
ｖ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが第１の容器中にあり、前記脂質系アジュバントが第２の容器中にあり、前記両親媒性化合物及び前記疎水性担体が、一緒に第３の容器にある、キット。
【請求項２４】
ｉ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、前記脂質系アジュバント、前記両親媒性化合物、前記疎水性担体、及び／又はそれらの任意の混合物のうちの任意の１つ又は複数と一緒に前記容器中にある抗原、又は別の容器中にある抗原；
ｉｉ）前記ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、前記脂質系アジュバント、前記両親媒性化合物、前記疎水性担体、前記抗原のうちの任意の１つ若しくは複数及び／又はそれらの任意の混合物と一緒に前記容器中にあるＴヘルパーエピトープ；又は別の容器中にあるＴヘルパーエピトープであって、任意選択で前記抗原とのコンジュゲート若しくは融合物であり、そうである場合、前記抗原と同じ容器中にある、Ｔヘルパーエピトープ；及び／又は
ｉｉｉ）医薬組成物の調製で使用するための説明書及び／又は対象において抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答の誘発で使用するための説明書
をさらに含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
水を含まないか又は水を実質的に含まない組成物の調製で使用するためのものであり、水を実質的に含まない組成物が、担体の合計重量に基づき重量／重量で約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％又は０．０１％未満の水を含む、請求項２３又は２４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
[0001]本出願は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる２０１５年１１月１８日出願の米国特許仮出願第６２／２５６，８７５号の利益及び優先権を主張する。
【分野】
【０００２】
[0002]本開示は、一般に、免疫される対象において、抗原特異的な液性及び細胞媒介免疫応答を誘発及び／又は強化することにおける効力を増強したアジュバント系及びワクチン組成物に関する。
【背景】
【０００３】
[0003]既知のタンパク質又はペプチドの抗原を含有するワクチンは、急速で長期にわたる免疫を生じさせるほど十分な免疫原性を有さない。これは、抗原に対する免疫応答を高めるアジュバントの使用により克服され得る場合もある（Ｓｃｈｉｊｎｓ及びＬａｖｅｌｌｅ、２０１１年）。アジュバントには、一般的に２つの広いカテゴリー：送達系及び免疫刺激剤がある（Ｄｕｂｅｎｓｋｙ及びＲｅｅｄ、２０１０年；Ｓｃｈｉｊｎｓ及びＬａｖｅｌｌｅ、２０１１年；Ｈａｆｎｅｒ、Ｃｏｒｔｈｅｓｙら、２０１３年）。ワクチンの送達系は、抗原の安定性及び免疫系との長期にわたる相互作用を提供することによりアジュバントとして作用することができる（Ａｌｖｉｎｇ、Ｐｅａｃｈｍａｎら、２０１２年）。ワクチンには、免疫系の細胞を直接活性化することによりワクチンの免疫原性をさらに増強する目的で、免疫を刺激する活性を有する分子化合物をアジュバントとして組み込むこともできる。
【０００４】
[0004]免疫刺激性アジュバントは、特殊化された受容体を通して免疫系により認識される限定された分子からなるアゴニストであり、例えばポリＩ：ＣはＴｏｌｌ様受容体３を刺激し、Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）はＴｏｌｌ様受容体１／２を刺激する（Ｄｕｔｈｉｅ、Ｗｉｎｄｉｓｈら、２０１１年；Ｏｇａｗａ、Ｌｉｕら、２０１１年）。免疫刺激剤は、免疫系及びワクチン抗原に対して生じた免疫応答のタイプも直接活性化することができる。例えば、多くのワクチンの有効性は、抗体の発生と相関するが、しかしながら、他のタイプのワクチンについては、主としてＣＤ８＋Ｔ細胞により媒介される強い細胞傷害性免疫応答が望まれる。ワクチン抗原に対して発生される免疫応答のタイプは、サイトカイン及びケモカインの発生を通してこれらの応答を開始させることができる免疫細胞に見出される特定の受容体を活性化する免疫刺激剤を含むことにより操作され得る。
【０００５】
[0005]アルミニウム系アジュバント（アラムと総称される）は、現在認可されているヒト及び獣医学的ワクチンで最も一般的なものである（Ｇｕｐｔａ、１９９８年；Ｗｉｌｓｏｎ−Ｗｅｌｄｅｒ、Ｔｏｒｒｅｓら、２００９年）。アラムワクチンは、抗原を水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩と混合することにより調製される（Ｇｕｐｔａ、１９９８年；Ｓｔｉｌｌｓ、２００５年）。注射されると、アラムは、抗原に対して短寿命のデポー製剤を形成して（Ｇｕｐｔａ、Ｃｈａｎｇら、１９９６年）、マクロファージによるワクチンの食作用を促進する（Ｈｅｉｍｌｉｃｈ、Ｒｅｇｎｉｅｒら、１９９９年；Ｒｉｍａｎｉｏｌ、Ｇｒａｓら、２００４年）。アラムアジュバントは、それらが、生来の免疫細胞により発現されるＮＬＲＰ３インフラマソームを活性化することが示されているので（Ｋａｎｇ及びＬｏｃｋｓｌｅｙ、２００９年；Ｈｅ、Ｚｏｕら、２０１５年）、免疫刺激物質として作用することもできる。アラムは、免疫の箇所で壊死を惹起することにより種々の危険を感知する受容体を間接的に活性化して、免疫細胞の動員により炎症性応答も強化する（Ｋｏｏｌ、Ｓｏｕｌｌｉｅら、２００８年）。アラムアジュバントは、ＩＬ−４の産生、ＩｇＧ１及びＩｇＥ抗体並びに好酸球の活性化により特徴づけられるタイプ２の免疫応答を誘発する傾向がある（Ｗｉｌｓｏｎ−Ｗｅｌｄｅｒ、Ｔｏｒｒｅｓら、２００９年）。
【０００６】
[0006]エマルション製剤のワクチンは、アルミニウム系ワクチンに対する代替である。これらの製剤は、水性緩衝液に溶解された抗原をフロイントの不完全アジュバント（ＩＦＡ）又はモンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）（商標）ＩＳＡ５１  ＶＧなどの油で乳化することにより調製される。エマルション製剤は、短寿命のデポー製剤も形成し、生来の免疫細胞によるワクチンの食作用を容易にして、タイプ２の免疫応答も生じさせる（Ｌｅｅｎａａｒｓ、Ｋｏｅｄａｍら、１９９８年）。エマルションで使用される油は、独特の免疫刺激を与えることができ、アラムをアジュバントとするワクチンよりも強い免疫応答を生ずることが示された（ＤｅＧｒｅｇｏｒｉｏ、Ｃａｐｒｏｎｉら、２０１３年）。しかしながら、エマルション製剤は、免疫系に対する抗原の効果的でない提示の結果として、Ｔ細胞寛容を生じ得る（Ａｉｃｈｅｌｅ、Ｂｒｄｕｓｃｈａ−Ｒｉｅｍら、１９９５年；Ｈａｉｌｅｍｉｃｈａｅｌ、Ｄａｉら、２０１３年）。エマルション製剤は、調製が煩雑になりがちで、２〜８℃で貯蔵しなければならず、貯蔵寿命が限られるなどの実用的考慮によっても制限される（Ｋｏｈ、Ｈｉｇｇｉｎｓら、２００６年；Ｋｕｍｒｕ、Ｊｏｓｈｉら、２０１４年）。さらに、エマルション製剤は、ヒトに使用するためのそれらの認可を阻む毒性及び反応原性と関連する（Ｇｒａｈａｍ、ＭｃＥｌｒａｔｈら、２０１０年）。
【０００７】
[0007]最適のアジュバント系を見出すことは困難であり、その理由は、送達系タイプのアジュバント及び／又は免疫刺激剤タイプのアジュバントの間及びその中の相互作用又は関連は予測不可能な効果がある可能性があり、相乗効果よりむしろ拮抗作用又は不応答がしばしば起こり得るからである。
【０００８】
[0008]種々の抗原に対して強い液性及び細胞媒介免疫応答を発生させるアジュバント系及びワクチン組成物の開発に対する必要性が依然として存在する。本開示において、本発明者らは、抗原特異的免疫原性を増強するための新規なアジュバント系及びワクチン組成物を記載する。
【概要】
【０００９】
[0009]一実施形態において、本開示は、（ａ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、（ｂ）脂質系アジュバント、（ｃ）両親媒性化合物、及び（ｄ）疎水性担体を含むアジュバント系に関する。
【００１０】
[0010]別の実施形態において、本開示は、（ａ）抗原、（ｂ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、（ｃ）脂質系アジュバント、（ｄ）両親媒性化合物、及び（ｅ）疎水性担体を含む組成物に関する。本明細書で記載されるように、該組成物は、水を含まないか又は水を実質的に含まない。
【００１１】
[0011]本明細書に記載されたアジュバント系及び組成物の幾つかの実施形態において、脂質系アジュバントは、例えば、本明細書に記載されているパルミチン酸アジュバントなどの少なくとも１つのパルミチン酸部分を含む。特定の実施形態において、脂質系アジュバントは、Ｐａｍ−３−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（Ｐａｍ３ＣＳＫ４；配列番号１）である。
【００１２】
[0012]本明細書に記載されたアジュバント系及び組成物の幾つかの実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントは、およその分子量が９８９，４８６ダルトンのポリＩ：Ｃの伝統的形態であり、ポリＩ及びポリＣの変化するストランド長さの混合物を含有する（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）。
【００１３】
[0013]本明細書に記載されたアジュバント系及び組成物の幾つかの実施形態において、両親媒性化合物はリン脂質、例えばＤＯＰＣ又はＳ１００レシチンなどであり、それらは、実施形態では、コレステロールと一緒に使用される。
【００１４】
[0014]本明細書に記載されたアジュバント系及び組成物の幾つかの実施形態において、疎水性担体は、例えば鉱油系担体（例えば、モンタニド（登録商標）ＩＳＡ  ５１）などの油である。
【００１５】
[0015]別の実施形態において、本開示は、前記対象において前記抗原に対する抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答を誘発するために、本明細書に記載されている組成物を、それらを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００１６】
[0016]別の実施形態において、本開示は、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、アレルゲン、又は抗原を発現する腫瘍細胞により惹起される疾患の治療及び／又は予防のための方法に関し、前記方法は、本発明に記載された組成物を対象に投与することを含む。
【００１７】
[0017]別の実施形態において、本開示は、神経変性疾患の治療及び／又は予防のための方法に関し、ここで、神経変性疾患は抗原の発現に関連して、前記方法は、本発明に記載された組成物を対象に投与することを含む。
【００１８】
[0018]別の実施形態において、本開示は、毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを抗体で中和するための方法に関し、前記方法は、本発明に記載された組成物を対象に投与することを含む。
【００１９】
[0019]別の実施形態において、本開示は、１個又は複数の別の容器に、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体を含むキットに関する。
【００２０】
[0020]本開示の他の態様、実施形態及び特徴は、添付の特許請求の範囲及び図面と併せて以下の記載を精査すれば、当業者には明らかになると予想される。
【００２１】
[0021]本発明の実施形態を例示する例のために過ぎない図において：
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】アジュバントなしで、ポリＩ：Ｃ、Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）又はポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）の組合せを含有する油系の水を含まないワクチンによるワクチン接種に対する応答における抗体力価及び機能活性を例示する図である。ＣＤ−１マウス（ｎ＝１０）を、アジュバントなし（群１）、ポリＩ：Ｃ単独（群２）、Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）単独（群３）又はポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）の組合せ（群４）を含有する油系の水を含まないワクチンで製剤化された組換えＰＡ炭疽抗原でワクチン接種した。図１ａ：抗体力価を、ＥＬＩＳＡを使用して経時的に血清で測定し、ボンフェローニの事後検定を用いる２元分散分析による統計分析で群１と比較した。図１ｂ：血清の炭疽毒素中和酸性度を第８週に測定し、チューキー事後検定を用いる１元分散分析により統計分析した。
【図２】免疫後１２週間で測定した血清抗体応答を例示する図である。マウス（ＣＤ−１）を、アラムをアジュバントとするワクチンで製剤化された組換えＨＡ抗原（群１）、各１マイクログラムのポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントを有する油系の水を含まないワクチン（群２）、各２０マイクログラムのポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントを有する油系の水を含まない製剤（群３）、各１マイクログラムのポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントを有するエマルション（群４）、又は各２０マイクログラムのポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントを有するエマルション（群５）でワクチン接種した。統計分析を、スチューデントのｔ検定により実施し、上で示された群を比較した。
【図３】ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントの組合せの種々の用量でワクチン接種されたマウスのＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴ応答を例示する図である。Ｃ５７ＢＬ６マウス（ｎ＝４）を、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントの組合せを含有する油系の水を含まないワクチン製剤中のＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥ抗原を用いて以下の用量でワクチン接種した：０．２マイクログラム（群１）、１．０マイクログラム（群２）、５．０マイクログラム（群３）、１０．０マイクログラム（群４）。ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴを、ワクチン接種後８日のマウスから単離された脾臓細胞を使用して実施し、１匹の抗原に未だ曝されていない、ワクチン接種されていないマウスを、陰性対照として利用した。応答は平均±ＳＥＭとして示す。統計をチューキーの事後検定を用いる１元分散分析により実施した、＊ｐ＜０．０５。
【詳細な説明】
【００２３】
[0025]タンパク質又はペプチドなどの高度に精製された抗原及び合成抗原は、免疫原性が弱く、したがって、しっかりした免疫応答を助長するためにアジュバントなどの免疫刺激剤が必要になる。アジュバントには、一般的に２つの広いカテゴリー：送達系及び免疫刺激剤がある（Ｄｕｂｅｎｓｋｙ及びＲｅｅｄ、２０１０年；Ｓｃｈｉｊｎｓ及びＬａｖｅｌｌｅ、２０１１年；Ｈａｆｎｅｒ、Ｃｏｒｔｈｅｓｙら、２０１３年）。
【００２４】
[0026]アラムアジュバントは、現在認可されているヒト及び獣医学的ワクチンで最も一般的である（Ｇｕｐｔａ、１９９８年；Ｗｉｌｓｏｎ−Ｗｅｌｄｅｒ、Ｔｏｒｒｅｓら、２００９年）。アラムアジュバントは、ＩＬ−４産生、ＩｇＧ１及びＩｇＥ抗体及び好酸球活性化により特徴づけられるタイプ２の免疫応答を誘発する傾向がある（Ｗｉｌｓｏｎ−Ｗｅｌｄｅｒ、Ｔｏｒｒｅｓら、２００９年）。
【００２５】
[0027]エマルション製剤のワクチンは、アルミニウム系ワクチンの代替である。エマルション製剤は、短寿命のデポー製剤を形成して生来の免疫細胞によるワクチンの食作用を助長し、タイプ２の免疫応答を誘発する傾向もある（Ｌｅｅｎａａｒｓ、Ｋｏｅｄａｍら、１９９８年）。エマルションは、アラムをアジュバントとするワクチンより強い免疫応答を生ずることが示されているが（Ｄｅ  Ｇｒｅｇｏｒｉｏ、Ｃａｐｒｏｎｉら、２０１３年）、これらの製剤は、ヒトにおける使用のためのそれらの認可を阻んできた重大な限界を有する（例えば、Ｔ細胞寛容、毒性及び反応原性）（Ｇｒａｈａｍ、ＭｃＥｌｒａｔｈら、２０１０年）。
【００２６】
[0028]免疫刺激物質アジュバントは、ワクチンの免疫原性を増大させて、タイプ１の免疫応答の発生を促進する狙いで、アラム又はエマルションワクチンに組み込むことができる。タイプ１の免疫応答は、細胞傷害性Ｔリンパ球の活性により特徴づけられ、ある種のワクチンの表示のために望ましい（Ｈａｎｓｅｎ、Ｍｅｔら、２０１２年；Ｇａｌｌｏ、２０１５年）。例として、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストは、この目的のために使用され得る（Ｄｕｔｈｉｅ、Ｗｉｎｄｉｓｈら、２０１１年）。
【００２７】
[0029]ＴＬＲは、病原体に関連する分子のパターン（ＰＡＭＰ）のためのセンサーとして機能する受容体の群である。ＴＬＲは、主として生来の免疫細胞に見出され、ＴＬＲは、生来の免疫細胞の活性化のシグナルを送って、ＰＡＭＰを発現するタイプの病原体のために特注された独特の免疫応答を生じさせる（Ｄｕｔｈｉｅ、Ｗｉｎｄｉｓｈら、２０１１年）。ヒトで発現される１０種のＴＬＲタンパク質がある（Ｃｈａｎｇ、２０１０年）。各ＴＬＲは、ある特定のタイプのＰＡＭＰを検出するために特殊化されており；ＰＡＭＰアゴニストは、二本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡ、フラゲリン、細菌リポペプチド、及びリポ多糖などの分子を含む。これらの受容体は、構造相同性を有し、ロイシンに富む反復の馬蹄形の細胞外ドメイン、単一のらせん状の膜貫通ドメイン、及び細胞内Ｔｏｌｌ−インターロイキン１受容体シグナル伝達ドメイン（ＴＩＲ）モチーフを共有する（Ｗａｔｔｅｒｓ、Ｋｅｎｎｙら、２００７年；Ｓｏｎｇ及びＬｅｅ、２０１２年）。大部分のＴＬＲは、細胞表面膜に見出されるが、一組の細胞内のＴＬＲ−３、７、８、及び９は、膜の内部、例えばエンドソームで発現されて、核酸の種々の形態を認識する（Ｃｈａｎｇ、２０１０年）。
【００２８】
[0030]ＴＬＲは、それぞれのリガンドが連結すると、集合してホモダイマーとなり、それは、下流のシグナル伝達カスケードを開始させる（Ｓｏｎｇ及びＬｅｅ、２０１２年）。ＴＬＲ２は、それがＴＬＲ１又はＴＬＲ６と、ヒトではおそらくＴＬＲ１０とヘテロダイマーを形成するので例外である（Ｇｏｖｉｎｄａｒａｊ、Ｍａｎａｖａｌａｎら、２０１０年）。各ＴＬＲ２ヘテロダイマーは、異なるリガンド特異性を有する（Ｔａｋｅｕｃｈｉ、Ｓａｔｏら、２００２年）。ＴＬＲは、免疫を刺激するアジュバントのための標的として最も徹底的に研究されたクラスの受容体であり、その理由は、それらのリガンドの多くが知られており、合成的に製造することができるからである（Ｄｕｔｈｉｅ、Ｗｉｎｄｉｓｈら、２０１１年）。しかしながら、他のクラスの受容体も、新規な免疫を刺激するアジュバントのための重要な標的であり得る（Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ及びＡｈｍｅｄ、２００６年；Ｉｓｈｉｉ及びＡｋｉｒａ、２００７年）。
【００２９】
[0031]ＴＬＲアゴニストは、合成的に作製することができ、特定のタイプの免疫細胞の刺激を通して特定のタイプの免疫応答を刺激する狙いで、ワクチン製剤に含まれる。幾つかのＴＬＲアゴニストは、組み合わされたときに相乗的活性を示した。最も強い組合せの幾つかは、ポリＩ：Ｃ（ＴＬＲ３アゴニスト）又はＬＰＳ（ＴＬＲ４アゴニスト）との組合せであり、その理由は、おそらく、ＴＬＲ３及びＴＬＲ４のシグナルは、ＴＲＩＦアダプタータンパク質を使用するが、残りの他のＴＬＲは、主として、ＭｙＤ８８アダプタータンパク質によるからである（Ｎａｐｏｌｉｔａｎｉ、Ｒｉｎａｌｄｉら、２００５年；Ｇｈｏｓｈ、Ｍｉｃｋｅｌｓｏｎら、２００７年；Ｗｅｌｌｓ、Ｃｏｗｌｅｄら、２００８年；Ｚｈｕ、Ｅｇｅｌｓｔｏｎら、２００８年；Ｓｕｅｔ  Ｔｉｎｇ  Ｔａｎ、Ｌｉｎら、２０１３年）。しかしながら、１種のＴＬＲアゴニストに前に曝されていると他のアゴニストに寛容を生じ得るので、タイミングが非常に重要である（Ｓａｔｏ、Ｎｏｍｕｒａら、２０００年；Ｂａｇｃｈｉ、Ｈｅｒｒｕｐら、２００７年）。
【００３０】
[0032]ポリＩ：ＣはＴＬＲ３を活性化する合成二本鎖ＲＮＡ分子である。ポリＩ：Ｃは、ＲＩＧ−Ｉ及びＭＤＡ５という核酸を感知する非ＴＬＲ細胞内受容体も刺激することもでき、抗ウイルス免疫に関与する（Ｋａｔｏ、Ｔａｋｅｕｃｈｉら、２００６年）。これらの３種の受容体を通して、ポリＩ：Ｃは、タイプ１のインターフェロンの産生を生じさせて、タイプ１の免疫応答を導く（Ｈａｆｎｅｒ、Ｃｏｒｔｈｅｓｙら、２０１３年）。インビボで、ポリＩ：Ｃをアジュバントとするワクチンは、強い細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を誘発することができる（Ｚｈｕ、Ｆａｌｌｅｒｔ−Ｊｕｎｅｃｋｏら、２０１０年、Ｔｓｕｊｉ、Ｓａｂｂａｔｉｎｉら、２０１３年）。しかしながら、これらの受容体は広範囲の細胞で発現するので、アジュバントとしてのポリＩ：Ｃの使用は、生じ得る全身的毒性のために限定される（Ａｎｄｅｒｓ、Ｚｅｃｈｅｒら、２００５年；Ｆａｒｉｎａ、Ｙｏｒｋら、２０１０年）。
【００３１】
[0033]Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）は、ＴＬＲ１／２ヘテロダイマーを活性化する合成細菌トリ−アシルリポペプチドである。Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）は、Ｂ細胞の強い活性化因子であり、インビトロで、クラスを切り替えて抗体の産生を刺激することができる（Ａｇｒａｗａｌ及びＧｕｐｔａ、２０１１年；Ｐｏｎｅ、Ｚｈａｎｇら、２０１２年；Ｐｏｎｅ、Ｌｏｕら、２０１５年）。インビボで、Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）をアジュバントとして含有するワクチンは、強い抗体媒介免疫を誘発することができる（Ｓｔｅｇｍａｎｎ、Ｋａｍｐｈｕｉｓら、２０１０年；Ｃａｐｒｏｎｉ、Ｔｒｉｔｔｏら、２０１２年）。
【００３２】
[0034]免疫系の異なる態様のそれらの望ましい増強に基づいて、ポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）との組合せは、効果的なアジュバント系である可能性を有する。この関係で、ポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）との組合せによる刺激は、インビトロで、マクロファージ（Ｂａｇｃｈｉ、Ｈｅｒｒｕｐら、２００７年）及び樹状細胞（Ｖａｎｈｏｕｔｔｅ、Ｐａｇｅｔら、２００８年）において相乗的活性を有すると報告されている。ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）により活性化されて、抗原を有する樹状細胞は、腫瘍担持マウスに移植されて養子化された場合に、腫瘍成長からの保護を、インビトロで、効果的に提供することができた（Ｌｉｍ、Ｋｕｈｎら、２０１２年）。米国特許第８，２１６，５９５号（Ｍｏｏｎら、２０１２年）で、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）は、エマルションワクチンでアジュバント系として、各々２０マイクログラムの用量で使用された。該ワクチンは、開示されていない用量体積で、筋肉内に投与された。しかしながら、マウスにおけるこのタイプを注射するための現在の指針に基づいて、用量の体積は５０マイクロリットルであったと推定されている（Ｄｉｅｈｌ、Ｈｕｌｌら、２００１年）。
【００３３】
[0035]本開示は、（ａ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；（ｂ）脂質系アジュバント；（ｃ）両親媒性化合物；及び（ｄ）疎水性担体を含む新規アジュバント系に関する。本明細書で開示されるワクチン組成物は、それに加えて少なくとも１種の抗原を含む。
【００３４】
[0036]本明細書で示すように、今や驚くべきことに及び予想外なことに、本明細書で開示されるアジュバント系を含む水を含まないワクチン組成物は、より低い用量のポリＩ：Ｃ及び脂質系アジュバントで、有意により高い抗体力価及びより強い細胞媒介免疫応答を生じさせることができることが見出された。
【００３５】
[0037]本明細書において使用する、用語「用量」及び「単位用量当たり」は、互換的に使用してもよい。該用語は、投与の各々の場合に対象に与えられるワクチン成分（例えば、抗原、アジュバントなど）の合計量（amount）又は分量（quantity）を指すことが意図される。
【００３６】
[0038]本明細書（実施例１）で開示される組成物の成分を使用する唯１回の免疫で、堅牢な及び長く続く抗原特異的な抗体免疫応答を生じさせる能力は、広範囲の医学的用途、例えば本明細書に記載されているものなどにおける、アジュバント系及び組成物の特定の有用性を例示する。水を含まないワクチン組成物では、本明細書で開示されたアジュバント系は、唯１種のみアジュバントを含む組成物と比較して、長引いた期間有意により高い抗体力価を生じさせることができる（図１）。その上、本明細書で開示されたアジュバント系を使用して発生された抗体は、増大した機能能力を有する（図２）。
【００３７】
[0039]本明細書の実施例２及び実施例３に記載されたデータを下の表１及び表２にまとめる。
【００３８】
[0040]
【表１】
0006989134.tif 000002
【００３９】
[0041]上の表（表１）から、本明細書で開示されたワクチン組成物は、２０分の１の用量のアジュバントでも、有意に増強された抗体免疫応答を生じさせ得ることがわかると予想される。本明細書で開示された水を含まない油系組成物（群２）中の１マイクログラムのポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントで生じさせた抗体の免疫応答は、油エマルション組成物（群４）中の等価用量よりも７倍大きく、２０倍多くの（即ち２０マイクログラム）ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバント（群５）を含む油エマルション組成物よりも約２倍大きかった。さらに、本明細書で開示された水を含まない組成物により生じた抗体免疫応答は、２０分の１の用量のアジュバントが使用された場合に、約６．５倍大きかった（群２と群３を比較されたい）。これらの結果は驚異的であり、予想外である。
【００４０】
[0042]
【表２】
0006989134.tif 000003
【００４１】
[0043]上の表（表２）から、本明細書で開示された水を含まないワクチン組成物は、強い細胞媒介免疫応答を刺激し得ることがわかると予想される。驚くべきことに、該組成物は、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントのより低い用量で使用されたときに、最も効果的である。ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントの１マイクログラム（群２）及び５マイクログラム（群３）で投薬されたワクチン組成物は、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバント（群４）の１０マイクログラムで投薬されたワクチン組成物よりも殆ど２倍効果的であった。用量を、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバント（群１）の０．２マイクログラムにさらに減少させてさえ、１及び５マイクログラム用量で得られた応答の約１．５倍、及び１０マイクログラム用量で得られた応答の約２．８倍大きいより効果的な細胞媒介免疫応答が生じた。これらの結果は驚異的で予想外である。
【００４２】
[0044]本明細書に記載された実施例から、本明細書で開示されたアジュバント系及びワクチン組成物は、めったにないほど強い抗体及び細胞媒介免疫応答を誘発することがきること、及び驚くべきことに、アジュバントの用量が増大するにつれて、血清抗体又はＩＦＮ−ガンマＥＬＩＳＰＯＴ応答により測定された免疫応答が減少したことが明らかである。
【００４３】
[0045]アジュバント系
【００４４】
[0046]一実施形態では、ワクチン組成物又は他の医薬組成物で使用するためのアジュバント系がここで開示される。該アジュバント系は、（ａ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；（ｂ）脂質系アジュバント；（ｃ）両親媒性化合物；及び（ｄ）疎水性担体を含む。
【００４５】
[0047]幾つかの実施形態において、アジュバント系は、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体を含む、水を含まないか又は水を実質的に含まない製剤であってもよい。幾つかの実施形態において、アジュバント系は、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体を含む製剤であってもよく、それは、当技術分野で公知の方法（例えばフリーズドライ、凍結乾燥、回転蒸発、減圧蒸発など）により乾燥されて水を含まないか又は水を実質的に含まない製剤を形成することにより任意選択で乾燥され得る。
【００４６】
[0048]本明細書において使用する、用語「アジュバント系」とは、ワクチン組成物中の１つ又は複数の抗原に対する抗原特異的免疫応答、例えば、抗体の免疫応答及び／又は細胞媒介の免疫応答を誘発又は強化するためのワクチン組成物の効力を一緒に増大させることができる成分の組合せを指す。本明細書に記載された特定の実施形態において、アジュバント系は、水を含まないか又は水を実質的に含まないワクチン組成物の調製に使用される。
【００４７】
[0049]ワクチン組成物の「効力を増大させる」により、本明細書で開示されたアジュバント系が、ワクチン組成物中で使用される場合に、増強され免疫原性、例えば増強され抗体の及び／又は細胞媒介の免疫応答を誘発することができることが意味される。増強された免疫応答は、例えば、（ｉ）本明細書で開示されたアジュバント系の成分の全てを含むことはない組成物；（ｉｉ）水を含まないか又は水を実質的に含まない組成物（例えばエマルション）；及び／又は（ｉｉｉ）単位用量当たりのより高い量のポリＩ：Ｃ及び／又は脂質系アジュバントを含有する組成物と比較することもできる。
【００４８】
[0050]別の実施形態において、ワクチン組成物の「効力を増大させる」とは、本明細書で開示されたアジュバント系が、ワクチン組成物中で使用される場合に、単位用量当たりのより低い量で投与されることができ、それでもなお、効果的な抗体の及び／又は細胞媒介の免疫応答を提供することを意味する。一実施形態では、単位用量当たりのより低い量のアジュバント（本明細書で開示されたワクチン組成物中で）を使用することにより発生した免疫応答は、単位用量当たりのより高い量で生じさせた免疫応答と少なくとも等価である。他の実施形態では、単位用量当たりのより低い量のアジュバント（本明細書で開示されたワクチン組成物中で）を使用することにより発生した免疫応答は、単位用量当たりのより高い量で発生させた免疫応答より強い。
【００４９】
[0051]本明細書において使用する、「増強された免疫原性」又は「増強された免疫応答」により、免疫応答が対象の利益のために高められ、改善され又は強化されることが意味される。増強は、例えば、対象の以前の免疫応答状態（例えば、本明細書で開示された組成物の適用より前）に対してか又は別の組成物により提供された免疫応答と比較してであってもよい。
【００５０】
[0052]ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント
【００５１】
[0053]ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、イノシン酸残基（Ｉ）及びシチジル酸残基（Ｃ）を含有するポリヌクレオチド分子（ＲＮＡ又はＤＮＡ又はＤＮＡとＲＮＡの組合せのいずれか）であり、それらはインターフェロンなどの炎症性サイトカインの産生を誘発する。幾つかの実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは二重らせんである。そのような実施形態では、それらは、典型的には、シトシン含有ヌクレオチドのみからなる一本鎖とイノシン含有ヌクレオチドのみからなる一本鎖とで構成されるが、他の構成も可能である。例えば、各ストランドは、シトシン含有及びイノシン含有ヌクレオチドの両方を含有することもできる。幾つかの場合に、いずれか又は両方のストランドが、追加的に、１つ又は複数の非シトシン又は非イノシンヌクレオチドを含有することもできる。
【００５２】
[0054]別の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、イノシン酸残基（Ｉ）及びシチジル酸残基（Ｃ）を含有する一本鎖の分子であることもできる。例として、一本鎖のポリＩ：Ｃは、ｄＩｄＣを反復する配列であることもできるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、一本鎖のポリＩ：Ｃの配列は、（ＩＣ）１３個の２６量体配列、即ちＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣＩＣ（配列番号３）であってもよい。当業者であれば認識していると予想されるように、それらの性質（例えば相補性）に基づいて、ｄＩｄＣを反復するこれらの一本鎖の分子は、ホモダイマーを自然に形成して、それ故、それらはポリＩ／ポリＣダイマーと概念的に同様であると予想される。
【００５３】
[0055]ポリＩ：Ｃは、１６残基毎にセグメント化することができて、インターフェロンを活性化するその潜在能力には影響がないと報告されている（Ｂｏｂｓｔ、１９８１年）。さらに、シチジル酸残基を１２回反復する毎にウリジン残基を導入することによりミスマッチしたポリＩ：Ｃ分子のインターフェロンを誘発する潜在能力は（Ｈｅｎｄｒｉｘ、１９９３年）、１２残基の最小の二本鎖ポリＩ：Ｃ分子でインターフェロン産生を助長するために十分であることを示唆する。他の研究者も、二本鎖ポリヌクレオチドらせんの０．５〜１回転に対応する６〜１２残基の小さい領域が、導入プロセスを開始させることができることを示唆した（Ｇｒｅｅｎｅ、１９７８年）。合成的に作製された場合、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、典型的には約２０個以上の残基の長さである（一般的に２２、２４、２６、２８又は３０残基の長さ）。半合成的に作製された場合（例えば、酵素を使用して）、ストランドの長さは５００、１０００個以上の残基であってもよい。
【００５４】
[0056]ポリＩ：Ｃは、ウイルスゲノムの模倣体として作用し、免疫系をインビボで調整するために特に有用である。合成ポリＩ：ポリＣホモポリマーは、例えば、インビボで静脈内又は筋肉注射により全身的に送達された場合に、インターフェロンγを非特異的に誘発することにより生来の免疫を強化すると報告されている（Ｋｒｏｗｎ、１９８５年；Ｚｈｕ、２００７年）。ポリイノシン酸及びシチジル酸ポリマーの数通りの変形体が、数年にわたって記載され（ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ、１９７８年；Ｂｏｂｓｔ、１９８１年；ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ、１９７５年；Ｇｕｓｃｈｌｂａｕｅｒ、１９７７年；Ｆｕｋｕｉ、１９７７年；Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、１９７５年；米国特許第３，９０６，０９２号、Ｋａｍａｔｈ、２００８年；Ｉｃｈｉｎｏｈｅ、２００７年）、それらのうち幾つかは、共有結合で改変された残基の使用、リボ及びデオキシリボイノシン及びシチジル残基の使用、ホモポリマー及びイノシン酸及びシチジル酸残基を含有する交互コポリマーの使用、及びミスマッチのあるポリマーを創る特定の残基の導入を含むものであった。
【００５５】
[0057]イノシン酸及びシチジル酸を含有する二本鎖ポリヌクレオチドの使用は、多くのウイルス性疾患（Ｋｅｎｄｅ、１９８７年；Ｐｏａｓｔ、２００２年；米国特許第６，４６８，５５８号、Ｓａｒｍａ、１９６９年；Ｓｔｅｐｈｅｎ、１９７７年；Ｌｅｖｙ、１９７８年）、癌（Ｄｕｒｉｅ、１９８５年；Ｓａｌａｚａｒ、１９９６年；Ｔｈｅｒｉａｕｌｔ、１９８６年；Ｎａｋａｍｕｒａ、１９８２年；Ｔａｌｍａｄｇｅ、１９８５年；Ｄｒｏｌｌｅｒ、１９８７年）、多発性硬化症のよう自己免疫疾患（Ｂｅｖｅｒ、１９８６年）、及びマラリアなどの他の感染性疾患（Ａｗａｓｔｈｉ、１９９７年；Ｐｕｒｉ、１９９６年）の治療のために報告されている。ポリＩ：Ｃ分子の効力は、幾つかの場合、上記分子を正に荷電したポリリシン及びカルボキシメチルセルロースと複合化することによりさらに増強され（Ｓｔｅｐｈｅｎ、１９７７年；Ｌｅｖｙ、１９８５年）、又はポリＩ：Ｃを正に荷電する合成ペプチドと複合化することにより（Ｓｃｈｅｌｌａｃｋ、２００６年）ポリヌクレオチドを、インビボにおけるヌクレアーゼ分解から効果的に保護した。
【００５６】
[0058]生来の免疫の非特異的エンハンサーとしてのその使用に加えて、ポリＩ：Ｃは、ワクチン組成物中のアジュバントとしても有用である。生来の免疫の増強は、おそらく、少なくとも部分的に、ＮＫ細胞、マクロファージ及び／又は樹状細胞を含む機構を通して、増強された抗原特異的な適応性のある免疫をもたらし得る（Ｃｈｉｒｉｇｏｓ、１９８５年；Ｓａｌｅｍ、２００６年；Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕ、２００１年；Ｔｒｕｍｐｆｈｅｌｌｅｒ、２００８年）。この関係において、ポリＩ：Ｃ分子の使用についての証拠は、感染性疾患を制御するため（Ｈｏｕｓｔｏｎ、１９７６年；Ｓｔｅｐｈｅｎ、１９７７年；Ｉｃｈｉｎｏｈｅ、２００７年；Ｓｌｏａｔ、２００８年；Ａｇｇｅｒ、２００６年；Ｐａｄａｌｋｏ、２００４年）及び種々のワクチンの様相により癌を予防又は治療するための（Ｚｈｕ、２００７年；Ｃｕｉ、２００６年；Ｓａｌｅｍ、２００５年；Ｆｕｊｉｍｕｒａ、２００６年；Ｌｌｏｐｉｚ、２００８年）種々のワクチンの研究から生じている。これらの研究は、ポリＩ：Ｃが、特定の感染性疾患の抗原に対して増強された抗体応答から明らかなように、液性の応答を増強することを示す。ポリＩ：Ｃは、抗原特異的な細胞の応答の増強剤でもある（Ｚｈｕ、２００７年；Ｚａｋｓ、２００６年；Ｃｕｉ、２００６年；Ｒｉｅｄｌ、２００８年）。ポリＩ：Ｃ分子のアジュバント効果は、少なくとも部分的に、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８及びＴＬＲ９などと、特に大部分のポリＩ：Ｃ分子と関連するＴＬＲ３とそれらとの相互作用を通してインターフェロン−γを誘発することにより起こると考えられる（Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕ、２００１年；Ｔｒｕｍｐｆｈｅｌｌｅｒ、２００８年；Ｓｃｈｅｌｌａｃｋ、２００６年；Ｒｉｅｄｌ、２００８年）。証拠も、ポリＩ：Ｃ分子が、少なくとも部分的に、ＴＬＲ以外の受容体、例えばＲＮＡヘリカーゼ、レチノイン酸が誘発したタンパク質Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）／メラノーマ分化と関連する遺伝子５（ＭＤＡ５）などと相互作用することにより、それらの効果を発揮することができることを示唆する（Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕ、２００１年；Ｙｏｎｅｙａｍａ、２００４年；Ｇｏｗｅｎ、２００７年；Ｄｏｎｇ、２００８年）。ポリＩ：Ｃ分子の作用機構は、未だ完全に理解されてはいない。
【００５７】
[0059]したがって、本明細書において使用する、「ポリＩ：Ｃ」、「ポリＩ：Ｃポリヌクレオチド」又は「ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント」は、二本鎖−又は一本鎖のポリヌクレオチド分子（ＲＮＡ又はＤＮＡ又はＤＮＡとＲＮＡの組合せ）であり、それらの各ストランドは、少なくとも６個の近接するイノシン酸又はシチジル酸残基、又はイノシン酸及びシチジル酸から任意の順序で選択された６個の近接する残基（例えばＩＩＣＩＩＣ（配列番号４）又はＩＣＩＣＩＣ（配列番号５））を含有し、それは、哺乳動物の対象において、少なくとも１種の炎症性サイトカイン、例えばインターフェロンの産生を誘発又は増強することができる。ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、典型的には、約８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２５、２６、２８、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、５００、又は１０００個以上の残基長さを有すると予想される。好ましいポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、約６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、又は３０個のヌクレオチドの最小長さ及び約、１０００；５００、３００、２００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４５又は４０個のヌクレオチドの最大長さを有することができる。
【００５８】
[0060]二重らせんポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの各ストランドは、イノシン酸又はシチジル酸残基のホモポリマーであることもあり、又は各ストランドは、イノシン酸及びシチジル酸残基の両方を含有するヘテロポリマーであってもよい。いずれの場合も、ポリマーは、１個又は複数の非イノシン酸又は非シチジル酸残基（例えばウリジン）により中断されていてもよく、但し、上で記載された６個のＩ、６個のＣ又は６個のＩ／Ｃ残基の少なくとも１つの隣接領域がある。典型的には、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの各ストランドは、６個のＩ／Ｃ残基当たり１個以下の非Ｉ／Ｃ残基を、より好ましくは、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８又は３０個のＩ／Ｃ個の残基毎に１個以下の非Ｉ／Ｃ残基を含有すると予想される。
【００５９】
[0061]ポリＩ：Ｃポリヌクレオチド中のイノシン酸又はシチジル酸（又は他の）残基は、当技術分野で公知のように誘導体化されていても又は改変されていてもよいが、但し、インターフェロンなどの炎症性サイトカインの産生を助長するポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの能力が保持されることが条件である。誘導体又は改変の例として、例えば、アジド改変、フルオロ改変、又はインビボにおける安定性を強化するために天然のホスホジエステル連結の代わりにチオエステル（又は同様な）連結を使用することが含まれるが、これらに限定されない。ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、例えば、インビボにおける分解に対するその耐性を、例えば、上記分子を正に荷電したポリリシン及びカルボキシメチルセルロースと又は正に荷電した合成ペプチドと複合体化することにより強化するために、改変されてもよい。
【００６０】
[0062]幾つかの実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントは、約９８９，４８６ダルトンの分子量を含み、数百塩基対のポリＩ及びポリＣの変化するストランド長さの混合物を含有する（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；米国）伝統的形態のポリＩ：Ｃである。
【００６１】
[0063]ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの単位用量当たりの適当な量の決定は、特に本明細書で提供された開示に照らして、十分当業者の能力内である。幾つかの実施形態において、単位用量当たりの量は、従来のものと比較して低い用量のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントであると予想される。本明細書で開示されたように、本発明のアジュバント系は、単位用量当たり低い量のアジュバントで強い免疫応答を生じさせることができる。一実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントの低い用量は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された単位用量当たりの等価な量として、組成物の単位用量当たり１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０．５マイクログラム未満である。特定の実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントの低い用量は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された単位用量当たりの等価な量として、単位用量当たり約０．２、０．３、０．４、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５又は５マイクログラムである。マウスにおける典型的な用量体積は、例えば、５０マイクロリットルである。ヒトにおける典型的な用量体積は、５０〜５００マイクロリットルの間であってもよいが、これに限定されない。したがって、幾つかの実施形態において、ヒトにおける換算された低い用量は、単位用量当たり２〜５０マイクログラムの間、例えば約２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４０又は５０マイクログラムであると予想される。
【００６２】
[0064]脂質系アジュバント
【００６３】
[0065]本明細書において使用する、脂質系アジュバントとは、少なくとも１種の脂質部分又は脂質成分を含むアジュバントである。
【００６４】
[0066]「脂質部分」又は「脂質成分」という表現は、任意の脂肪酸（例えば脂肪族アシル）又は、例えばトリグリセリド、ジグリセリド、及びモノグリセリドを含むそれらの誘導体を指す。典型的脂肪酸として、パルミトイル、ミリストイル、ステアロイル及びデカノイル基又は任意のＣ２〜Ｃ３０の飽和又は不飽和脂肪族アシル基、好ましくは、任意のＣ１４〜Ｃ２２の飽和又は不飽和脂肪族アシル基、より好ましくはＣ１６の飽和又は不飽和脂肪族アシル基が含まれるが、これらに限定されない。したがって、ここで言及されたように、「脂質系アジュバント」という表現は、脂肪族アシル基又はそれらの誘導体を含むアジュバントを包含する。
【００６５】
[0067]脂質系アジュバントは、アミノ酸、オリゴペプチド又は他の分子（例えば、炭水化物、グリカン、多糖、ビオチン、ローダミンなど）とカップルできる最小で少なくとも１種の脂質部分、又は合成／半合成脂質部分のアナログを含有する。したがって、脂質系アジュバントは、例えば、リポアミノ酸、リポペプチド、リポグリカン、リポ多糖又はリポテイコ酸であってもよいが、これらに限定されない。その上、脂質部分又は脂質部分を含有する構造は、共有結合で又は非共有結合で抗原とカップルすることができ、アジュバントの性質が組み込まれた抗原性化合物を創る。例えば、脂質系部分は、カチオン（例えばニッケル）を含むこともできるが、これらに限定されず、非共有結合カップリングのための正電荷を提供する。幾つかの実施形態において、脂質部分又は脂質部分を含有する構造は、リポソーム、ＰＧＬＡナノ粒子、デンドリマー又は任意の他の適当な粒子を含むが、これらに限定されない粒子中に、脂質部分を抗原に密に近接にもたらし又は保たせ、その結果それらが効率的に共送達され得る目的で、抗原と共カプセル化させることもできる。
【００６６】
[0068]幾つかの実施形態において、脂質部分又は脂質成分は、天然に存在する、例えば、グラム陽性菌又はグラム陰性菌、ロドシュードモナス・ビリディス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｖｉｒｉｄｉｓ）、又はマイコプラズマからの細胞壁成分（例えばリポタンパク質）であってもよい。他の実施形態では、脂質部分又は脂質成分は、合成又は半合成であってもよい。
【００６７】
[0069]脂質系アジュバントは、アジュバントの脂質部分又は成分の少なくとも１つとしてパルミチン酸（ＰＡＭ）を含むこともできる。そのような脂質系アジュバントは、本明細書では「パルミチン酸アジュバント」と称する。パルミチン酸は、大腸菌の免疫学的に反応性のＢｒａｕｎのリポタンパク質中で見出される低分子量の脂質である。パルミチン酸についての他の一般的化学名は、例えば、ヘキサデカン酸（ＩＵＰＡＣ命名法）及び１−ペンタデカンカルボン酸を含む。パルミチン酸の分子式は、ＣＨ３（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈである。当業者には理解されるように、パルミチン酸の脂質鎖は変化させることが可能である。パルミチン酸アジュバントとして本願で使用され得る典型的化合物、及びそれらを合成する方法は、例えば、その開示が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００８／０２３３１４３号；米国特許出願公開第２０１０／０１２９３８５号；及び米国特許出願公開第２０１１／０２０，０６３２号に記載されている。
【００６８】
[0070]脂質部分として上で一般的に記載されたように、パルミチン酸アジュバントは、最小で少なくとも１つのパルミチン酸部分を含有し、それは、アミノ酸、オリゴペプチド又は他の分子とカップルすることができる。パルミチン酸部分又はパルミチン酸を含有する構造は、共有結合で又は非共有結合で抗原とカップルすることができ、アジュバントの性質が組み込まれた抗原性化合物を創る。パルミチン酸部分又はパルミチン酸を含有する化学構造は、システインペプチド（Ｃｙｓ）とコンジュゲート化でき、アジュバントの直鎖状及び分岐構造を含む種々の構造的配置を可能にする。システイン残基は、セリン（Ｓｅｒ）及び／又はリシン（Ｌｙｓ）などの極性残基によりＣ末端で一般的に延長されて溶解度が改善されたアジュバント化合物を創る。パルミチン酸を含有するアジュバント化合物は、抗原と混合されて、非共有結合の相互作用により抗原と関連するか、又はその代わりに抗原と共有結合で連結されるか、直接又はリンカー／スペーサーの使用のいずれかで、増強された免疫応答を生じさせることができた。最も一般的には、２つのパルミチン酸部分が、グリセリル骨格及びシステイン残基に取り付けられて、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（ＰＡＭ２Ｃｙｓ）又はトリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（ＰＡＭ３Ｃｙｓ）を創り、それらも上で記載された複数の原子配置で使用され得る。
【００６９】
[0071]パルミチン酸アジュバントは、Ｂ細胞を活性化して、抗体の急速な増殖及び産生を惹起することが公知である。ワクチン製剤中でアジュバントと共送達された抗原を親和性成熟により認識するＢ細胞は、抗原に対する増大した特異性を以て増殖すると予想される。活性化されたＢ細胞は、可溶性の標的、例えば、血液中に存在する細菌に結合することができる大量の可溶性のイムノグロブリン抗体を分泌することが公知である。抗体のエフェクター機能は、ｉ）オプソニン化；ｉｉ）抗体依存性の細胞に媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；ｉｉｉ）補体の活性化；ｉｖ）中和である。大部分のＢ細胞は、成熟して抗体を分泌するプラズマ細胞になると予想されるが、一部は、免疫応答が感染を制御した後で存続する記憶Ｂ細胞に分化することになる。これは、病原体に対するその後の曝露の長期の免疫を提供する。理想的には、予防的ワクチンは、強い記憶Ｂ細胞の集団を誘発すべきである。
【００７０】
[0072]それ故、一実施形態では、脂質系アジュバントは、パルミチン酸部分又は成分を含む任意のタイプのアジュバントである。一実施形態において、脂質系アジュバントは、１個又は複数のパルミチン酸部分を含むリポペプチドである。該パルミチン酸部分は、インビトロ又はインビボにおけるその安定性を改善し、受容体（例えば下で記載されるＴｏｌｌ様受容体など）に対するその結合を強化するために又はその生物学的活性を強化するために、改変されていても又は操作されていてもよい。
【００７１】
[0073]特定の実施形態において、パルミチン酸アジュバントは、ＰＡＭ２Ｃｙｓを含むこともできる。
【００７２】
[0074]別の特定の実施形態では、パルミチン酸アジュバントは、ＰＡＭ３Ｃｙｓを含むことができる。
【００７３】
[0075]別の特定の実施形態では、パルミチン酸アジュバントは、Ｐａｍ２−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）又はＰａｍ−３−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）であってもよい。そのようなパルミチン酸アジュバントは、例えば、ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ  ＧｍｂＨ（ドイツ）及びＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（サンディエゴ、カリフォルニア州、米国）から研究試薬として入手できる。
【００７４】
[0076]標識されたアナログを含むＰａｍ２−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）及びＰａｍ−３−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）の種々のアナログも、ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓから入手できる。これらのアナログは、本発明に含まれ、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（配列番号１）（β−線放射性）、Ｒ−ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（配列番号１）、Ｓ−ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（配列番号１）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ビオチン−Ａｃａ−Ａｃａ）（配列番号１）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（フルオレセイン−Ａｃａ−Ａｃａ）（配列番号１）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ローダミン−Ａｃａ−Ａｃａ）（配列番号１）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ−ＦＬＡＧ−タグ（配列番号１）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＮＡＫＩＤＱＬＳＳＤＶＱＴ（配列番号６）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＮＫＳＴＴＧＳＧＥＴＴＴＡ（配列番号７）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＴＫＰＶＳＱＤＴＳＰＫＰＡ（配列番号８）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＧＳＫＰＳＧＧＰＬＰＤＡＫ（配列番号９）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＧＮＫＳＡＰＳＳＳＡＳＳＳ配列番号１０）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＧＳＨＱＭＫＳＥＧＨＡＮＭＱＬ（配列番号１１）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＳＮＮＤＡＡＧＮＧＡＡＱＴ（配列番号１２）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＫＱＮＶＳＳＬＤＥＫＮＳＶＳＶ（配列番号１３）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＮＮＳＧＫＤＧＮＴＳＡＮＳＡＤ配列番号１４）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＮＮＧＧＰＥＬＫＳＤＥＶＡＫＳ（配列番号１５）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＱＥＰＡＡＰＡＡＥＡＴＰＡＧ（配列番号１６）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＳＳＳＫＳＳＤＳＳＡＰＫＡＹＧ（配列番号１７）、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−ＡＱＥＫＥＡＫＳＥＬＤＹＤＱＴ（配列番号１８）、Ｐａｍ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ＲＲ及びＲＳ立体異性体の混合物）（配列番号１）、Ｒ−Ｐａｍ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ＲＲ立体異性体）（配列番号１）、Ｓ−ＰＡＭ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ＲＳ立体異性体）（配列番号１）、ＰａｍＣｙｓ（Ｐａｍ）−ＳＫＫＫＫ（配列番号１９）、ＰＡＭ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ビオチン−Ａｃａ−Ａｃａ）−ＮＨ２（配列番号１）、ＰＡＭ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（フルオレセイン−Ａｃａ−Ａｃａ）−ＮＨ２（配列番号１）、ＰＡＭ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ（ローダミン−Ａｃａ−Ａｃａ）−ＮＨ２（配列番号１）、及びＰＡＭ２Ｃｙｓ−ＳＫＫＫＫ−ＦＬＡＧ−タグ（配列番号１）を含むが、これらに限定されない。必要に応じて、パルミチン酸アジュバント又はそれらのアナログは、立体化学的に規定された化合物又は立体異性体の混合物として使用することができる。
【００７５】
[0077]特定の実施形態において、本明細書で開示されたアジュバント系及び組成物の脂質系アジュバントは、Ｐａｍ−３−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）である。
【化１】
0006989134.tif 000004
【００７６】
[0078]幾つかの実施形態において、脂質系アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を活性化するか又は活性を増大させる、好ましくは、ＴＬＲ２を活性化するか又は活性を増大させるものである。本明細書において使用される、ＴＬＲ２を活性化するか又は活性を増大させることは、任意のモノマー、ホモダイマー又はヘテロダイマーの形態におけるその活性化、及び下でさらに詳細に記載されるように、特にＴＬＲ２のＴＬＲ１又はＴＬＲ６とのヘテロダイマーとしての（即ちＴＬＲ１／２又はＴＬＲ２／６）活性化を包含することができる。
【００７７】
[0079]ＴＬＲは、主として樹状細胞（ＤＣ）及びマクロファージ、専門的抗原提示細胞などの白血球上で見出される膜貫通タイプの受容体の保存されたファミリーである。ＴＬＲは、特に進化して、病原体と関連する分子のパターン、例えば細菌リポタンパク質など及びリポペプチド及びウイルスの二本鎖ＲＮＡなどを認識してそれに対する免疫応答を誘発する。１０種を超える性質が異なるＴＬＲが、マウス及びヒトで同定されているが、リガンド及びシグナル伝達経路は一部について未知である（下の表３を参照されたい）。ヒトで１３種の同定されたＴＬＲがあり、１から１３まで番号を付けられている。
【００７８】
[0080]
【表３】
0006989134.tif 000005
【００７９】
[0081]ＴＬＲは、典型的にはホモダイマーを形成するが、ＴＬＲ２は例外であり、それはＴＬＲ１又はＴＬＲ６とヘテロダイマーを形成して、異なるリガンド特異性を生ずる。ＴＬＲ２は、下流のシグナル伝達を媒介し、それ故、これらのヘテロダイマーは、しばしばＴＬＲ２と総称される（Ｔａｋｅｕｃｈｉ、２０１０年）。ＤＣに対するＴＬＲの刺激は、ＭＨＣ及び共刺激性分子の上方制御を生じ、それは、これらの細胞の抗原提示機能、並びにＴｈ１−タイプのサイトカインの産生及び交差提示の助長を強化する（Ｌａｈｉｒｉ、２００８年；Ｗｅｌｔｅｒｓ、２００７年；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ、２００８年；Ｂｌａｎｄｅｒ、２００８年）。ＴＬＲを通す刺激は、免疫応答を高める直接的効果を有するので、ＴＬＲアゴニストは、可能性のあるアジュバントとして研究されてきた（Ｂａｒｃｈｅｔ、２００８年）。
【００８０】
[0082]ＴＬＲは、Ｔｏｌｌ−インターロイキン１受容体（ＴＩＲ）と命名された保存された細胞質のドメインを有し、それは、下流のシグナル伝達経路を助長して細胞の活性化を生じさせるアダプター分子と関連する。ＴＬＲは、それらが関連するアダプタータンパク質、ＭｙＤ８８又はＴＲＩＦにより広く分類され得る。ＴＬＲ４は単独で、両方の経路を通してシグナルを伝達することができる。両方のシグナル伝達経路は転写因子ＮＦ−ＫＢの活性化に収斂する（Ｏｕｙａｎｇ、２００７年）。数通りの研究が、異なるＴＬＲが幾つかの下流のシグナル伝達分子を共有するが、各受容体は、炎症誘発性メディエーターの独自のプロファイルを生ずることを示した（Ｗｅｌｔｅｒｓ、２００７年；Ｓｅｙａ、２００６年；Ｇｈｏｓｈ、２００６年；Ｒｅ、２００４年；Ａｖｒｉｌ、２００９年）。ＴＬＲ受容体についての完全な下流経路の解明は、完全ではないが、活性化における差は、リガンドの強度、受容体の細胞レベル下の位置、細胞のタイプ及びインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）の存在の結果であり得る。
【００８１】
[0083]パルミチン酸アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）を通してシグナルを伝達すると報告されている。例えば、ＰＡＭ２Ｃｙｓは、ヘテロダイマーＴＬＲ２及びＴＬＲ６により認識される。やはり例として、ヘテロダイマーＴＬＲ１及びＴＬＲ２により認識されるＰＡＭ３Ｃｙｓは、液性の活性により典型的に表される抗細菌応答を開始させる。対照的に、ウイルスからの二本鎖ＲＮＡは、ＴＬＲ３により認識されて抗ウイルスの応答を誘発し、それはインターフェロン放出及びＴ細胞の活性により通常特徴づけられる。細胞応答の媒介はＴＬＲ２と関連していた。
【００８２】
[0084]ＰＡＭ３Ｃｙｓは、種々の動物モデル及びヒトにおける第Ｉ相臨床試験で試験され、副作用は報告されていない（Ｍｏｙｌｅ、２００８；Ｗｉｅｄｅｍａｎｎ、１９９１年）。マウスのＤＣにおけるＴＬＲアゴニストのスクリーニングで、インビトロにおけるＰＡＭ３Ｃｙｓによる刺激は、高レベルの炎症誘発性サイトカインＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−６及びＴＮＦαを産生させ、それは、他のＴＬＲアゴニスト試験と比較して少量にすぎないアジュバントで達成された（Ｗｅｌｔｅｒｓ、２００７年）。
【００８３】
[0085]幾つかの実施形態において、本明細書で開示されたアジュバント系の脂質系アジュバントは、ＴＬＲを活性化するか若しくは活性を増大させるか、又はＴＬＲに対するアゴニストとして作用する。特定の実施形態において、脂質系アジュバントは、ＴＬＲ２を活性化するか又は活性を増大させる。そのような脂質系アジュバントは、例えば、ＰＡＭ２Ｃｙｓ又はＰＡＭ３Ｃｙｓ（例えばＰａｍ２−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）又はＰａｍ−３−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１））を含み、ＴＬＲを活性化するか又は活性を増大させるパルミチン酸アジュバントであってもよいが、これらに限定されない。
【００８４】
[0086]ＴＬＲアゴニストとして作用する他の合成パルミチン酸系リポタンパク質は、本明細書で開示されたアジュバント系でも使用することができ、パルミチン酸アジュバント及び上で記載されたアナログ及びＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（サンディエゴ、カリフォルニア州、米国）及びＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ  ＧｍｂＨ（ドイツ）から入手できる合成ジアセチル化されたリポタンパク質ＦＳＬ−１を含むが、これらに限定されない。ＦＳＬ−１（Ｐａｍ２ＣＧＤＰＫＨＰＫＳＦ；配列番号２０）は、マイコプラズマ・サリバリウム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｍ）の４４ｋＤａのリポタンパク質ＬＰ４４のＮ末端部分を表す合成リポタンパク質である。ＦＳＬ−１は、ＰＡＭ２Ｃｙｓを含み、マクロファージを活性化するリポペプチド−２（ＭＡＬＰ−２）、マイコプラズマ・ファーメンタンス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）から誘導されたリポペプチドと同様なフレームワーク構造を有する。脂質化されたＮ末端のジアセチル化されたシステイン残基を含有するＦＳＬ−１及びＭＡＬＰ−２は、ダイマーＴＬＲ２及びＴＬＲ６  ９ＴＬＲ２／６）により認識されると仮定される。合成ＭＡＬＰ−２は、Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ファーミングデール、ニューヨーク州、米国）から入手できる。
【００８５】
[0087]一実施形態において、脂質系アジュバントは、ＦＳＬ−１若しくはＭＡＬＰ−２を含むか、又はＦＳＬ−１若しくはＭＡＬＰ−２である。必要に応じて、ＦＳＬ−１又はＭＡＬＰ−２は、立体化学的に規定された化合物として又は立体異性体の混合物として使用され得る。ＦＳＬ−１又はＭＡＬＰ−２は、標識されていてもよい（例えばビオチン、フルオレセイン、ローダミンなど）。ＦＳＬ−１は、９種の異なるＦＳＬ−１−Ａｌａ化合物を含むＦＳＬ−１  Ａｌａ−ｓｃａｎ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ）としても入手できる。これらのＦＳＬ１−Ａｌａ分子の各々は、本発明で個別に又は組合せで包含される。
【００８６】
[0088]パルミチン酸を含む脂質系アジュバントのさらなる実施形態は、モノアシル化リポペプチドなどのＴＬＲ２リガンドの下部構造を含むこともある。これらは、例えば、Ｐａｍ−Ｄｈｃ−ＳＫＫＫＫ（配列番号１９）、Ｐａｍ−ＣＳＫＫＫＫ（配列番号１）、Ｐａｍ−Ｄｈｃ−ＧＤＰＫＨＰＫＳＦ（配列番号２１）又はＰａｍ−ＣＧＤＰＫＨＰＫＳＦ（配列番号２０；ＥＭＣＭｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ）を含むことができるが、これらに限定されない。
【００８７】
[0089]脂質系アジュバントの単位用量当たりの適当な量の決定は、特に本明細書で提供された開示に照らして、十分当業者の能力の内である。幾つかの実施形態において、単位用量当たりの量は、脂質系アジュバントの従来のものと比較して低い用量であると予想される。本明細書で開示されたように、本発明のアジュバント系は、低い用量のアジュバントで強い免疫応答を生じさせることができる。一実施形態において、脂質系アジュバントの低い用量は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された単位用量当たりの等価な量として、組成物の単位用量当たり１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０．５マイクログラム未満である。特定の実施形態において、脂質系アジュバントの低い用量は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された単位用量当たりの等価な量として約０．２、０．３、０．４、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５又は５マイクログラムである。マウスにおける典型的な用量体積は、例えば、５０マイクロリットルである。ヒトにおける典型的な用量体積は、５０〜５００マイクロリットルの間であることもできるが、これらに限定されない。したがって、幾つかの実施形態において、ヒトにおける換算された低い用量は、単位用量当たり２〜５０マイクログラムの間、例えば約２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４０又は５０マイクログラムであると予想される。
【００８８】
[0090]両親媒性化合物
【００８９】
[0091]「両親媒性化合物」とは、親水性及び疎水性（親油性）の部分又は特性を両方とも有する化合物である。用語「両親媒性化合物」は、「両親媒性物質」又は「両親媒性」と互換的に使用されてもよい。幾つかの実施形態において、適当な両親媒性化合物は、乳化剤、例えばこれらの本明細書に下で記載されるものを含むこともできる。本明細書で用語「両親媒性化合物」により包含される乳化剤の典型的実施形態には、ポリソルベート（例えばソルビタンモノオレエート）、マンニドオレエート（アラセル（Ａｒｌａｃｅｌ）（商標）Ａ）、レシチン、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（商標）８０、及びスパン（Ｓｐａｎｓ）（商標）２０、８０、８３及び８５が含まれるが、これらに限定されない。両親媒性化合物は、水の不在下で油などの疎水性担体中に親水性親和性のワクチン成分を組み込むことを容易にすることができる。該ワクチン成分は、抗原及び／又はアジュバント及び／又は免疫応答が生ずることを容易にし得る他の含有成分（例えばＴヘルパーエピトープ）を含むことができるが、これらに限定されない。
【００９０】
[0092]両親媒性の化合物の疎水性部分は、典型的には大きい炭化水素部分、例えば長鎖の形態のＣＨ３（ＣＨ２）ｎ（ｎ＞４）であるが、これらに限定されない。両親媒性の化合物の親水性部分は、荷電基又は極性の非荷電基のいずれかである。荷電基は、アニオン性及びカチオン性の基を含む。アニオン性荷電基の例は、以下の（ここで、分子の疎水性部分は「Ｒ」により表される）：カルボン酸イオン：ＲＣＯ２−；硫酸イオン：ＲＳＯ４−；スルホン酸イオン：ＲＳＯ３−；及びリン酸イオン（リン脂質中の荷電機能性）を含む。カチオン性荷電基は、例えば、アミン：ＲＮＨ３＋（「Ｒ」は分子の疎水性部分を再び表す）を含む。非荷電の極性基は、例えばジアセチルグリセロール（ＤＡＧ）などの大きいＲ基を有するアルコールを含む。両親媒性化合物は、数個の疎水性部分、数個の親水性部分、又は数個の両方を有することもできる。タンパク質及び一部のブロックコポリマーが例である。ステロイド、コレステロール、脂肪酸、胆汁酸、及びサポニンも両親媒性物質である。
【００９１】
[0093]使用することができる多数の両親媒性化合物があり、本明細書で開示されたアジュバント系及びワクチン組成物は、単一のタイプの両親媒性化合物又は異なるタイプの両親媒性の化合物の混合物を含有することもできる。
【００９２】
[0094]一実施形態において、両親媒性化合物は脂質である。任意の両親媒性脂質が使用されてもよいが、特に適当な脂質は、少なくとも４個の炭素、典型的には約４〜２８個の炭素を含有する長さの少なくとも１個の脂肪酸鎖を有するものを含むことができる。脂肪酸鎖は、任意の数の飽和及び／又は不飽和結合を含有することができる。脂質は、天然脂質であっても又は合成脂質であってもよい。両親媒性脂質の例には、リン脂質、スフィンゴ脂質、スフィンゴミエリン、セレブロシド、ガングリオシド、エーテル脂質、ステロール、カルジオリピン、カチオン性脂質及びポリ（エチレングリコール）及び他のポリマーで改変された脂質が含まれ得るが、これらに限定されない。合成脂質は、以下の脂肪酸構成要素：ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、アラキドイル、オレオイル、リノレオイル、エルコイル、又はこれらの脂肪酸の組合せを含むことができるが、これらに限定されない。
【００９３】
[0095]一実施形態において、両親媒性化合物は、リン脂質又はリン脂質の混合物である。広く定義される「リン脂質」は、加水分解されて、リン酸、アルコール、脂肪酸、及び窒素を含む塩基を生ずる脂質化合物の群のメンバーである。
【００９４】
[0096]使用することができるリン脂質には、例えば、ホスホグリセロール、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、ホスホコリン（例えばＤＯＰＣ；１，２ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）及びホスホイノシトールからなる群から選択される少なくとも１つの頭基を有するものが含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、ＤＯＰＣとエステル化されていないコレステロールの混合物が使用されてもよい。他の実施形態では、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００レシチンとエステル化されていないコレステロールの混合物が使用され得る。エステル化されていないコレステロールが使用される場合に、コレステロールは、リン脂質の重量の約１０％に相当する量で（例えば、１０：１ｗ／ｗのＤＯＰＣ：コレステロール比又は１０：１ｗ／ｗのＳ１００レシチン：コレステロール比で）使用することができる。コレステロールは、リン脂質小胞の形成を安定化するために使用される。コレステロール以外の化合物が使用される場合には、当業者は、必要な量を容易に決定することができる。
【００９５】
[0097]別の一般的なリン脂質は、スフィンゴミエリンである。スフィンゴミエリンは、スフィンゴシン、長い不飽和炭化水素鎖を有するアミノアルコールを含有する。脂肪族アシル側鎖はスフィンゴシンのアミノ基にアミド結合により連結されて、セラミドを形成する。スフィンゴシンのヒドロキシル基はエステ化されてホスホコリンになる。ホスホグリセリドのように、スフィンゴミエリンは両親媒性である。
【００９６】
[0098]やはり使用することができるレシチンは、典型的には、鶏卵又は羊毛から誘導されるリン脂質の天然混合物である。
【００９７】
[0099]全てのこれらの及び他のリン脂質は、本発明の実施において使用することができる。リン脂質は、例えば、Ａｖａｎｔｉ  ｌｉｐｉｄｓ（アラバスター、アラバマ州、米国）、及びＬｉｐｏｉｄＬＬＣ（ニューアーク、ニュージャージー州、米国）から購入することができる。
【００９８】
[00100]一実施形態において、両親媒性化合物は、疎水性担体中に実質的に均等に分散されることができて、その場合、両親媒性の化合物単独の存在は、親水親和性のワクチン成分（例えば抗原）の疎水性担体中への組み込みを容易にするために十分である。
【００９９】
[00101]別の実施形態において、両親媒性化合物は、抗原を疎水性担体に混和性にするために、抗原と密接に関係することができる。「密接に関係する」により、両親媒性化合物が、抗原が疎水性担体中で混和性の形態で存在するように抗原と非常に近接していることが意味される。密接な関係には、抗原と両親媒性物質の間の物理的相互作用の関与があってもなくてもよい。典型的には、両親媒性の化合物の親水性部分が抗原における親水性部分に向かって配向している。両親媒性化合物は、互いに実質的に分離したままであってもよく又はそれらが、種々の異なるタイプの構造、集成体又はアレイを形成していてもよい。
【０１００】
[00102]両親媒性化合物が形成し得る構造、集成体又はアレイのタイプの典型的実施形態は、単一層のシート、二重層シート、多層シート、単一層の小胞構造（例えばミセル）、二重層の小胞構造（例えば単ラメラの又は多ラメラ状の小胞）、又は種々のそれらの組合せを含むことができるが、これらに限定されない。「単一層」により、両親媒性化合物は二重層を形成せずに、むしろ疎水性部分が一方の側に向き、親水性部分が反対側に向いた層にとどまることが意味される。「二重層」により、両親媒性化合物が２層になったシートを形成して、典型的には各層の疎水性部分が二重層の中心方向に内側に向き、親水性部分が外側に向いていることが意味される。しかしながら、反対の配置も可能である。用語「多層」は、単一及び二重層構造の任意の組合せを包含することが意味される。採用される形態は、使用される特定の抗原、特定の両親媒性化合物、及び／又は特定の疎水性担体に依存し得る。
【０１０１】
[00103]一実施形態において、両親媒性化合物によって形成される構造、アセンブリー又はアレイは、抗原を部分的に又は完全に包囲することができる。例として、両親媒性化合物は、抗原の周りに閉じた小胞構造を形成することができる。
【０１０２】
[00104]一実施形態において、小胞構造は、単一層の小胞構造である。そのような構造の例はミセルである。水溶液中の典型的なミセルは、親水性部分が周囲の水溶液と接触しており、疎水性部分をミセル中心に隔離している凝集を形成する。対照的に、疎水性担体中では、逆ミセルが形成されて疎水性部分が周囲の水溶液と接触しており、親水性部分をミセル中心に隔離している。球形の逆ミセルは、親水親和性の抗原をそのコア内に包むことができる。
【０１０３】
[00105]一実施形態において、小胞構造は、ミセル又は逆ミセルである。ミセル又は逆ミセルのサイズは、直径が２ｎｍ（２０Ａ）〜２０ｎｍ（２００Ａ）の範囲であるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、ミセル又は逆ミセルのサイズは、直径が約１０ｎｍである。
【０１０４】
[00106]別の実施形態において、小胞構造は、二重層の小胞構造、例えば、リポソームなどである。リポソームは、閉じ込められた水性体積を含有する完全に閉じた脂質二重層膜である。リポソームは、単ラメラの小胞（単一の二重層膜を有する）又は多膜二重層により特徴づけられる多層状の小胞であることもあり、各二重層は、水性層により隣から分離されていることもあり、分離されていないこともある。リポソームの一般的考察は、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  Ｇ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１１巻：８９〜９７頁、１９９０年；及びＦｒｅｚａｒｄ、Ｆ．Ｂｒａｚ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．Ｒｅｓ．、３２巻：１８１〜１８９頁、１９９９年に見出すことができる。リポソームは、実質的には任意のタイプの細胞に吸着することができ、次に組み込まれた作用物質（例えば抗原）を放出する。或いは、リポソームは、標的細胞と融合することができ、それによりリポソームの内容物を標的細胞に移す。或いは、リポソームは、食作用のある細胞によりエンドサイトーシスにより取り込まれ得る。
【０１０５】
[00107]リポソームは、抗原並びに乳化剤をカプセル化して製剤を安定化する小胞として、疎水性担体を含む組成物の調製で使用されてきた（例えば国際公開第２００２／０３８１７５号；国際公開第２００７／０４１８３２号；国際公開第２００９／０３９６２８号；国際公開第２００９／１４６５２３号及び国際公開第２０１３／０４９９４１号を参照されたい）。親水性抗原は、典型的には、水性の内部に閉じ込められ、一方、疎水性抗原は、脂質二重層中に挿入されるか又は油相中に分散され得る。
【０１０６】
[00108]二重層及び多層小胞構造の他の実施形態には、ニオソーム、トランスファーソーム、ビロソーム、多ラメラ状小胞（ＭＬＶ）、オリゴラメラ状小胞（ＯＬＶ）、単ラメラ状小胞（ＵＶ）、小さい単ラメラ状小胞（ＳＵＶ）、中程度のサイズの単ラメラ状小胞（ＭＵＶ）、大きい単ラメラ状小胞（ＬＵＶ）、巨大な単ラメラ状小胞（ＧＵＶ）、多胞小胞（ＭＶＶ）、逆相蒸発法により作製される単一ラメラ又はオリゴラメラ状小胞（ＲＥＶ）、逆相蒸発法により作製される多ラメラ状小胞（ＭＬＶ−ＲＥＶ）、安定な多ラメラ状小胞（ＳＰＬＶ）、凍結解凍されたＭＬＶ（ＦＡＴＭＬＶ）、押出し法により調製された小胞（ＶＥＴ）、フレンチプレスにより調製された小胞（ＦＰＶ）、融合により調製された小胞（ＦＵＶ）、脱水再水和された小胞（ＤＲＶ）、及びバブルソーム（ＢＳＶ）が含まれるが、これらに限定されない。当業者であれば、これらの小胞構造を調製する技法が、当技術分野で周知であることを認識していると予想される（例えば、Ｋｒｅｕｔｅｒ、Ｊ．ら、Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、６６巻、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、１９９４年を参照されたい）。
【０１０７】
[00109]疎水性担体
【０１０８】
[00110]本明細書で開示されたアジュバント系及び組成物は、疎水性担体、好ましくは液体の疎水性物質を含む。
【０１０９】
[00111]疎水性担体は、本質的に純粋な疎水性物質であっても又は疎水性物質の混合物であってもよい。本明細書に記載されている組成物において有用な疎水性物質は、薬学的に及び／又は免疫学的に許容される物質である。担体は、典型的には液体であるが、大気温で液体ではなく、例えば加温することにより液化し得るある種の疎水性物質も、有用であり得る。
【０１１０】
[00112]油又は油の混合物は、特に本明細書で開示されたアジュバント系及び組成物で使用するために適当な担体である。油は、薬学的に及び／又は免疫学的に許容されるべきである。適当な油には、例えば、鉱油（特に軽又は低粘度の鉱油、例えば、ドラケオール（Ｄｒａｋｅｏｌ）（登録商標）６ＶＲなど）、植物油（例えば、ダイズ油）、ナッツ油（例えば、ピーナツ油）、又はそれらの混合物が含まれる。したがって、一実施形態において疎水性担体は、疎水性物質、例えば、植物油、ナッツ油又は鉱油などである。動物脂肪及び人工疎水性ポリマー材料、特に大気温で液体であるもの又は比較的容易に液化され得るものも使用することができる。
【０１１１】
[00113]幾つかの実施形態において、疎水性担体は、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、鉱油系モデルの疎水性担体であるか、又はそれらを含むこともできる。別の実施形態において、疎水性担体は、鉱油溶液のマンニドオレエート、例えば、モンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）として市販されているものであるか又はそれらを含むこともできる。これらの担体は、油中水エマルションを調製するために一般的に使用されるが、本開示は、本明細書に記載されているように、実質的量の水の不在下で、成分を懸濁させるために、両親媒性の化合物を使用することによって、このタイプの製剤を避ける。
【０１１２】
[00114]Ｉｍｍｕｎｏｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｎｃ．は、デポバックス（ＤｅｐｏＶａｘ）（商標）（ＤＰＸ）と称するワクチン送達プラットホームを開発した。ＤＰＸは、油中脂質の製剤であり、任意の抗原、又は抗原の混合物で製剤化することができる。抗原及びアジュバントを含有する水滴を閉じ込めている油に依存する油中水エマルション系のワクチンと異なって、デポバックス（商標）に基づく製剤は、油中への抗原及びアジュバントの直接の組み込みを容易にする脂質に依存して、乳化する必要がない。この手法の利点は、（１）さもなければ水系希釈剤において通常最大溶解度を有する、親水性抗原／アジュバントの油希釈剤における溶解度の増大、及び（２）ワクチン投与に先立つ煩雑な乳化手順の排除を含む。
【０１１３】
[00115]幾つかの実施形態において、本明細書で開示されたアジュバント系の疎水性担体及びワクチン組成物は、Ｉｍｍｕｎｏｖａｃｃｉｎｅ，Ｉｎｃの送達プラットホームデポバックス（商標）であってもよい。
【０１１４】
[00116]ワクチン組成物
【０１１５】
[00117]本明細書で開示されたアジュバント系は、１つ又は複数の抗原と組み合わされるか又は混合されて、ワクチン組成物、例えば、本明細書で開示された水を含まないワクチン組成物を提供することができる。
【０１１６】
[00118]本明細書において使用する、用語「ワクチン」、「ワクチン組成物」又は「組成物」は、情況に応じて、互換的に使用することができる。
【０１１７】
[00119]本明細書で開示されたワクチン組成物は、対象に治療的有効量で投与することができる。本明細書において使用する、「治療的有効量」は、対象における免疫応答を刺激、誘発、維持、追加刺激又は強化するために効果的な、ワクチン又は活性成分（例えば、１つ又は複数の抗原）の量を意味する。幾つかの実施形態において、ワクチンの治療的有効量は、特定の疾患又は障害の治療において、対象において臨床的応答を誘発することができる量である。ワクチンの治療的有効量の決定は、特に本明細書で提供された開示に照らして、十分当業者の能力内である。治療的有効量は、対象の状態、体重、性別及び年齢などの種々の要因に従って変化し得る。
【０１１８】
[00120]一実施形態において、ワクチン組成物は、１つ又は複数の抗原と一緒に本明細書で開示されたアジュバント系を含む。したがって、一実施形態において、本開示は、（ａ）抗原；（ｂ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；（ｃ）脂質系アジュバント；（ｄ）両親媒性化合物；及び（ｅ）疎水性担体を含む組成物に関する。ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体は、上で本明細書に開示されている。
【０１１９】
[00121]抗原
【０１２０】
[00122]本明細書で開示された組成物は、１つ又は複数の抗原を含むことができる。
【０１２１】
[00123]本明細書において使用する、用語「抗原」は、免疫系の成分に特に結合することができる任意の物質又は分子を指す。幾つかの実施形態において、本発明における組成物の適当な抗原は、対象において免疫応答を誘発するか又は発生させることができるものである。免疫応答を誘発することができる抗原は、免疫原性であると言われ、免疫原と呼ばれることもある。したがって、本明細書において使用する、用語「抗原」は、免疫原を含み、該用語は特に断りのない限り互換的に使用することができる。本明細書において使用する用語、抗原は、ハプテンも含む。当技術分野で理解されているように、ハプテンは、抗原性である小さい分子であるが（例えば、免疫系の成分により結合され得る）、担体分子に取り付けられない限り免疫原性でない。
【０１２２】
[00124]本明細書で開示された組成物で有用であり得る抗原は、例えば、ポリペプチド、炭水化物、微生物又はそれらの一部、例えば、生きている、減弱した、不活性化された即ち殺滅された細菌、ウイルス又は原生動物、又はそれらの一部を含むが、これらに限定されない。抗原は、例えば、病原性の生物学的作用物、毒素、アレルゲン、ペプチド、適当な自然のままの、自然のままでない、組換え又は変性されたタンパク質又はポリペプチド、又はそれらのフラグメント、又は対象において免疫応答を誘発するか若しくは強化することができるエピトープであってもよい。幾つかの実施形態において、抗原は、動物（動物抗原）、例えば、ヒトから誘導された抗原（ヒト抗原）、又はそれらに実質的に関係する抗原であってもよい。
【０１２３】
[00125]本明細書において使用する、用語「から誘導される」は、発生する供給源（例えば対象）から直接単離されるか若しくは得られる抗原；発生する供給源からの抗原と同一の若しくは実質的に関係する抗原である合成若しくは組換えで発生された抗原；又は発生する供給源の抗原から作製された抗原若しくはそれらのフラグメントを包含するが、これらに限定されない。抗原が供給源「から」であると述べられた場合、用語「から」は、「から誘導される」と等しいといってもよい。この関係における用語「実質的に関係する」は、抗原が化学的、物理的又は他の手段（例えば配列の改変）により改変されたかもしれないが、その結果生じた生成物が、元の抗原に又は元の抗原と関連する疾患又は障害に対して免疫応答を生ずることができるままであることを意味する。
【０１２４】
[00126]本明細書において使用する、用語「抗原」は、抗原として機能するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも含む。ポリヌクレオチドを含有するワクチン組成物が対象に投与される核酸系ワクチン接種の戦略は既知である。ポリヌクレオチドによりコードされる抗原性ポリペプチドは、対象において発現されて、その結果、丁度ワクチン組成物自体が該ポリペプチドを含有していたように、抗原性ポリペプチドが、最終的に対象中に存在する。本開示の目的のために、用語「抗原」は、情況が決める場合、抗原として機能するポリペプチドをコードするそのようなポリヌクレオチドを包含する。
【０１２５】
[00127]幾つかの実施形態において、抗原は、下で定義される少なくとも１つのＢ細胞エピトープ又はＣＴＬエピトープを含む分子であり、それは、対象に適当に投与されたときに、疾患に対する保護となる液性の及び／又は細胞媒介免疫応答を誘発又は強化する。
【０１２６】
[00128]幾つかの実施形態において、抗原は、癌、感染性疾患、又は習慣性疾患と関連するものであってもよい
【０１２７】
[00129]本発明における組成物中の抗原として有用であり得るウイルス、又はそれらの一部は、例えば、牛痘ウイルス（Ｃｏｗｐｏｘｖｉｒｕｓ）、ワクシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓ）、偽牛痘ウイルス（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｗｐｏｘ  ｖｉｒｕｓ）、ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウイルス１（Ｈｕｍａｎ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  １）、ヒトヘルペスウイルス２（Ｈｕｍａｎ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ２）、サイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）、ヒトアデノウイルスＡ〜Ｆ（Ｈｕｍａｎ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ａ−Ｆ）、ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓ）、ヒトパピローマウイルス（ｈｕｍａｎ  ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ）（ＨＰＶ）、パルボウイルス（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、Ａ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ａ  ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、オルトレオウイルス（Ｏｒｔｈｏｒｅｏｖｉｒｕｓ）、ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）、エボラ出血熱ウイルス（Ｅｂｏｌａ  ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ）、インフルエンザウイルス（ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ）（例えばＨ５Ｎ１インフルエンザウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス）、はしかウイルス（Ｍｅａｓｌｅｓ  ｖｉｒｕｓ）、おたふく風邪ウイルス（Ｍｕｍｐｓ  ｖｉｒｕｓ）、風疹ウイルス（Ｒｕｂｅｌｌａ  ｖｉｒｕｓ）、ニューモウイルス（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ）、ＲＳウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ）、ヒトＲＳウイルス（ｈｕｍａｎ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ）、狂犬病ウイルス（Ｒａｂｉｅｓ  ｖｉｒｕｓ）、カリフォルニア脳炎ウイルス（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）、日本脳炎ウイルス（Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）、ハンターンウイルス（Ｈａｎｔａａｎ  ｖｉｒｕｓ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）、コロナウイルス（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エンテロウイルス（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、ライノウイルス（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、ポリオウイルス（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）、ノロウイルス（Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ）、フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）、デング熱ウイルス（Ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ）、西ナイルウイルス（Ｗｅｓｔ  Ｎｉｌｅ  ｖｉｒｕｓ）、黄熱病ウイルス（Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ）及び水疱瘡（ｖａｒｉｃｅｌｌａ）を含むが、これらに限定されない。
【０１２８】
[00130]一実施形態において、本明細書で開示された組成物は、それらを必要とする対象におけるインフルエンザウイルス感染を治療及び／又は予防するために有用な可能性のある抗原を含む。インフルエンザは、ファミリーオルトミクソウイルス科の一本鎖のＲＮＡウイルスであり、ウイルスの粒子の外側にある２種の大きい糖タンパク質、ヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）に基づいてしばしば特徴づけられる。Ａ型インフルエンザの多数のＨＡサブタイプが同定されている（Ｋａｗａｏｋａら、１９９０年；Ｗｅｂｓｔｅｒら、１９８３年）。幾つかの実施形態において、抗原は、ＨＡ又はＮＡ糖タンパク質から誘導され得る。特定の実施形態において、抗原は、組換えＨＡ抗原（Ｈ５Ｎ１、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；米国）、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ８１８１３５で見出される配列から誘導されたもの又は任意のそれらの適当な配列の変形体であってもよい。
【０１２９】
[00131]別の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、エボラ出血熱ウイルス感染を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために有用な可能性のある抗原を含む。
【０１３０】
[00132]別の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために有用である可能性のある抗原を含む。より特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、ＨＰＶが関連する子宮頚癌又はＨＰＶが関連する頭部及び頸部癌を治療及び／又は予防するために有用である可能性のある抗原を含む。幾つかの実施形態において、抗原は、配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（ＨＰＶ１６Ｅ７（Ｈ−２Ｄｂ）ペプチド４９−５７；Ｒ９Ｆ；配列番号２）を含むペプチドである。
【０１３１】
[00133]別の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）感染を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために有用である可能性のある抗原を含む。より特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、ＲＳＶ感染と関連する肺疾患を治療及び／又は予防するために有用な可能性のある抗原を含む。幾つかの実施形態において、該抗原は、例えば、国際公開第２０１２／０６５９９７号で開示された小さい疎水性タンパク質の外部ドメインから誘導される。幾つかの実施形態において、抗原の配列は、ＲＳＶ株Ａの小さい疎水性ドメイン：ＮＫＬＣＥＹＮＶＦＨＮＫＴＦＥＬＰＲＡＲＶＮＴ（配列番号２２）（Ｓｃｈｅｐｅｎｓら、２０１４年；国際公開第２０１２／０６５９９７号）、又は任意の適当なそれらの配列の変形体から誘導される。
【０１３２】
[00134]本発明における組成物中の抗原として有用であり得る細菌又はそれらの一部は、例えば、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、コレラ（Ｃｈｏｌｅｒａ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトカッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジフテリア（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｏ１５７：Ｈ７、腸管出血性大腸菌（Ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、腸内毒素原性大腸菌（Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコバクテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、肺炎（Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びエンテロコリチカ菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  Ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）を含むが、これらに限定されない。
【０１３３】
[00135]一実施形態において、本明細書で開示された組成物は、炭疽菌感染（即ち炭疽）を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために有用である可能性のある抗原を含む。組成物に含有される抗原は、例えば、炭疽菌の組換え保護抗原（ｒＰＡ）（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、キャンベル、カリフォルニア州）又は炭疽菌変異体組換え保護抗原（ｍｒＰＡ）（Ｐｆｅｎｅｘ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、カリフォルニア州）によることもあるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において抗原は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｐ１３４２３で見出される配列；又は任意の適当なそれらの配列の変形体から誘導され得る。
【０１３４】
[00136]本発明における組成物中の抗原として有用であり得る原生動物又はそれらの一部は、例えば、マラリアを惹起するプラスモディウム属（ｇｅｎｕｓ  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）（熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）又は二日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｋｎｏｗｌｅｓｉ））を含むが、これらに限定されない。
【０１３５】
[00137]一実施形態において、本明細書で開示された組成物は、四日熱マラリア原虫感染（即ちマラリア）を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために有用である可能性のある抗原を含む。
【０１３６】
[00138]或いは、抗原は、天然に存在する又は合成毒素又はアレルゲンであってもよい。本明細書において使用する「毒素」とは、生きている細胞若しくは生物体（例えば植物、動物、微生物その他）により産生される、疾患若しくは軽い病気を惹起し得る任意の物質、若しくは感染性物質、又は有害な効果を及ぼし得る組換え若しくは合成分子を指す。毒素は、例えば、小さい分子、ペプチド、又はタンパク質であってもよい。毒素は、例えば、コカインなどの薬剤物質を含む。毒素は、抗体により中和され得ることもある。そのような実施形態では、抗原は、循環（例えば血液）中の毒素に結合して隔離し、それにより身体の別の領域（例えば脳）へのその送達を予防する可能性がある抗体の産生を誘発することもある。
【０１３７】
[00139]本明細書において使用する「アレルゲン」は、アレルギーを惹起し得る任意の物質を指す。アレルゲンは、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖類、多糖コンジュゲート、ペプチド及び多糖類の非ペプチド模倣体及び他の分子、小さい分子、脂質、糖脂質、及び植物の炭水化物、動物、カビ、昆虫、食品、薬剤、塵埃、及びダニから誘導され得るが、これらに限定されない。アレルゲンには、環境の空気中のアレルゲン；植物花粉（例えばブタクサ／枯草熱）；雑草花粉アレルゲン；牧草花粉アレルゲン；セイバンモロコシ；木の花粉のアレルゲン；ライグラス；クモ形綱アレルゲン（例えばハウスダストダニアレルゲン）；蓄積ダニアレルゲン；スギ花粉／枯草熱；糸状菌／カビの胞子のアレルゲン；動物アレルゲン（例えば、イヌ、テンジクネズミ、ハムスター、アレチネズミ、ラット、マウス、その他のアレルゲン）；食物アレルゲン（例えば甲殻類；ナッツ；柑橘類果実；小麦粉；コーヒー）；昆虫アレルゲン（例えばノミ、ゴキブリ）；毒液：（膜翅目、スズメバチ、ミツバチ、ジガバチ、スズメバチ、トフシアリ；細菌アレルゲン（例えば連鎖球菌の抗原；回虫抗原などの寄生生物アレルゲン）；ウイルス抗原；薬物アレルゲン（例えばペニシリン）；ホルモン（例えばインスリン）；酵素（例えばストレプトキナーゼ）；及び不完全な抗原又はハプテンとして作用し得る薬剤又は化学物質（例えば、酸無水物及びイソシアネート）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３８】
[00140]ハプテンが、本明細書で開示された組成物で使用される場合、それは、例えばタンパク質などの担体に取り付けられて、ハプテン−担体付加物を形成することができる。ハプテン−担体付加物は免疫応答を導き出すことができるが、ハプテン自体は、通常は、応答を導き出すことはない。ハプテンの例は、アニリン、ウルシオール（ウルシの毒素）、ヒドラジン、フルオレセイン、ビオチン、ジゴキシゲニン及びジニトロフェノールであるが、これらに限定されない。
【０１３９】
[00141]別の実施形態において、抗原は、循環中の抗原、例えば、アミロイドタンパク質（例えばアルツハイマー病）などを隔離することが望ましい疾患と関連する抗原であってもよい。したがって、幾つかの実施形態において、本明細書で開示された組成物は、抗原の発現と関連する神経変性疾患の治療及び／又は予防に、それらを必要とする対象において有用である可能性のある抗原を含む。
【０１４０】
[00142]別の実施形態において、抗原は、国際公開第２００７／０４１８３２号で開示された任意の１つ又は複数の抗原；例えば国際公開第２００７／０４１８３２号の１７〜１９頁における表１で開示されたペプチド抗原などであってもよい。
【０１４１】
[00143]例えば、本発明における組成物中の抗原として有用であり得るポリペプチド又はそれらのフラグメントには、コレラトキソイド、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、Ｂ型肝炎表面抗原、ヘマグルチニン（例えばＨ５Ｎ１組換えヘマグルチニンタンパク質）、炭疽の組換え保護抗原（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．；キャンベル、カリフォルニア州）、炭疽変異体の組換え保護抗原（Ｐｆｅｎｅｘ，Ｉｎｃ．；サンディエゴ、カリフォルニア州）、ノイラミニダーゼ、インフルエンザＭタンパク質、ＰｆＨＲＰ２、ｐＬＤＨ、アルドラーゼ、ＭＳＰ１、ＭＳＰ２、ＡＭＡ１，Ｄｅｒ−ｐ−１、Ｄｅｒ−ｆ−１、アジポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ−２、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、α−フェトプロテイン、ＢＣＬ−２、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＢＩＮＧ−４、ＣＥＡ、ＣＰＳＦ、ＣＴ、サイクリンＤ１Ｅｐ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥＬＦ−２、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧＮＲＨ）、ＨＥＲ−２、腸カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、ＩＬ１３Ｒα２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＤＭ−２、ＭＭＰ−２、ＭＵＣ−１、ＮＹ−ＥＯＳ−１、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、百日咳トキソイドタンパク質、ｐ５３、ＰＢＦ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＮＦ４３、ＲＵ１、ＲＵ２ＡＳ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＡＧＥ−１、ＳＣＲＮ１、ＳＯＸ２、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、テロメラーゼ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＥＲＴ及びＷＴ１から誘導されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４２】
[00144]用語「ポリペプチド」は、長さは問わない（例えば、少なくとも６、８、１０、１２、１４、１６、１８、又は２０アミノ酸）又は翻訳後改変された（例えば、グリコシル化又はリン酸化）アミノ酸の任意の鎖を包含し、例えば、天然のタンパク質、合成又は組換えポリペプチド及びペプチド、エピトープ、ハイブリッド分子、変形体、同族体、アナログ、ペプトイド、ペプチド模倣体などを含む。それ故、変形体又は誘導体は、切り落とし及びフラグメントを含む欠失；挿入及び付加、例えば保存的置換、箇所指定変異体及び対立遺伝子の変形体；及びペプチドに共有結合で連結した及び翻訳後改変された１つ又は複数の非アミノアシル基を有するペプトイド（例えば、糖、脂質など）を含む改変を含む。本明細書において使用する、用語「保存されたアミノ酸置換」又は「保存的置換」とは、ペプチド中で、所与の位置で１個のアミノ酸が別のアミノ酸と置換されて、その置換は関連する機能の実質的損失なしで行われ得ることを指す。そのような変化をするときに、似たアミノ酸残基の置換は、側鎖置換基の相対類似性、例えば、それらのサイズ、電荷、疎水性、親水性等を基準にして行うことができ、そのような置換は、日常的試験により、ペプチドの機能に対するそれらの効果を検定することができる。特定の保存的置換の例には、以下の例が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４３】
【表４】
0006989134.tif 000006
【０１４４】
[00145]抗原配列と実質的同一性を有するポリペプチド又はペプチドが使用され得る。２つの配列は、最適に整列された場合に（ギャップは許容される）、それらが少なくとも約５０％の配列同一性を共有するか、又は該配列が規定された機能性モチーフを共有するならば、実質的同一性を有すると考えられる。代替的実施形態において、最適に整列された配列は、それらが、指定された領域にわたって少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有すれば、実質的に同一である（即ち、実質的同一性を有する）と考えてもよい。用語「同一性」は、２つのポリペプチド分子間の配列の類似性を指す。同一性は、整列された配列中における各位置を比較することにより決定することができる。アミノ酸配列間の同一性の程度は、配列により共有される位置における、例えば、指定された領域にわたる同一の又は一致するアミノ酸の数の関数である。同一性を比較するための配列の最適の整列は、ｈｔｔｐ：／／ｃｌｕｓｔａｌｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ａｄ．ｊｐで入手できるＣｌｕｓｔａｌＷプログラム、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎの局所的相同性アルゴリズム（１９８１年）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈの相同性アラインメントアルゴリズム（１９７０年）、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎの類似性方法の捜索（１９８８年）、及びこれらのアルゴリズムのコンピューターで処理される実行（例えばＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、マディソン、ウィスコンシン州、米国）を含む、当技術分野で公知の種々のアルゴリズムを使用して実施することができる。配列同一性は、Ａｌｔｓｃｈｕｌらに記載された（１９９０年）（公開されたデフォルトの設定を使用する）ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して決定することもできる。例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通じて入手できる（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｗｂｌａｓｔ２．ｃｇｉでインターネットを通じて）「ＢＬＡＳＴ  ２  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」のツールを、「ｂｌａｓｔｐ」プログラムを選択して、以下のデフォルトの設定：期待閾値１０；ワードサイズ３；マトリックスＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップコスト存在１１、エクステンション１で使用することもできる。別の実施形態において、当業者は、任意の所与の配列を容易に及び適当に整列して、配列同一性及び／又は相同性を視覚的検査のみによって推定することができる。
【０１４５】
[00146]本発明を実施するために使用されるポリペプチド及びペプチドは、天然の供給源から単離されるか、合成されるか、又は組換えにより発生したポリペプチドであり得る。ペプチド及びタンパク質は、遺伝子組換えによりインビトロ又はインビボで発現させることができる。本発明を実施するために使用されるペプチド及びポリペプチドは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して作製及び単離することができる。本発明を実施するために使用されるポリペプチド及びペプチドは、全体的又は部分的に、当技術分野で周知の化学的方法を使用して合成することもできる。例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、１９８０年；Ｈｏｍ、１９８０年；Ｂａｎｇａ、１９９５年を参照されたい。例えば、ペプチド合成は、種々の固相技法を使用して実施することができて（例えば、Ｒｏｂｅｒｇｅ、１９９５年；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、１９９７年を参照されたい）、例えば、ＡＢＩ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を、メーカーにより提供された使用説明書に従って使用して、自動化された合成を達成することもできる。
【０１４６】
[00147]幾つかの実施形態において、抗原は、例えば、約２５％〜５０％純粋な、約５０％〜約７５％純粋な、約７５％〜約８５％純粋な、約８５％〜約９０％純粋な、約９０％〜約９５％純粋な、約９５％〜約９８％純粋な、約９８％〜約９９％純粋な、又は９９％を超えて純粋な精製抗原であってもよい。
【０１４７】
[00148]上で特に言及したように、用語「抗原」は、抗原として機能するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも含む。本明細書において使用する、用語「ポリヌクレオチド」は、任意の長さのヌクレオチド鎖（例えば９、１２、１８、２４、３０、６０、１５０、３００、６００、１５００以上のヌクレオチド）又は数のストランド（例えば一本鎖の又は二重らせん）を包含する。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ（例えばゲノムのＤＮＡ又はｃＤＮＡ）又はＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）又はそれらの組合せであってもよい。それらは、天然に存在するか又は合成（例えば化学的に合成）されることもある。ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド鎖中に１個又は複数の窒素を含む塩基の改変、ペントース糖類又はリン酸基を含有することができると予想される。そのような改変は、当技術分野で周知であり、例えば、ポリヌクレオチドの安定性を改善する目的のためであってもよい。
【０１４８】
[00149]ポリヌクレオチドは、種々の形態で送達することができる。幾つかの実施形態において、裸のポリヌクレオチドが、直鎖状形態で、又はプラスミド中に挿入されて、例えば発現プラスミドのいずれかで使用することができる。他の実施形態では、ウイルスの又は細菌ベクターなどの生きているベクターが使用されることもある。
【０１４９】
[00150]ＤＮＡのＲＮＡへの転写及び／又はＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を助成する１つ又は複数の制御配列が存在することもある。幾つかの場合に、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子であるポリヌクレオチドの場合などでは、転写プロセスに関係する制御配列（例えばプロモーター）は必要とされず、タンパク質の発現は、プロモーターの不在で生じ得る。当業者は、情況が要求するように適当な制御配列を含めることができる。
【０１５０】
[00151]幾つかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、発現カセット中に存在しており、その中でそれは、ポリヌクレオチドが本明細書で開示された組成物が投与される対象中で発現されることを可能にする制御配列と作動可能に連結されている。発現カセットの選択は、組成物が投与される対象並びに発現されるポリペプチドに望まれる特徴に依存する。
【０１５１】
[00152]典型的には、発現カセットは、対象において機能して；リボソーム結合箇所；必要であれば開始コドン（ＡＴＧ）；関心のあるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；停止コドン；及び任意選択で３’末端領域（翻訳及び／又は転写ターミネーター）を構成し得る又は誘発し得るプロモーターを含む。シグナルペプチドをコードする領域などの追加の配列が含まれてもよい。関心のあるポリペプチドコードするポリヌクレオチドは、発現カセット中の任意の他の制御配列と相同性であってもよく又は非相動性であってもよい。関心のあるポリペプチドと一緒に発現されるべき配列、例えば領域をコードするシグナルペプチドは、発現されるべきタンパク質をコードするポリヌクレオチドと典型的には隣接して位置し、適したリーディングフレームの前に置かれる。発現されるべきタンパク質（例えば、シグナルペプチド）をコードするポリヌクレオチドにより構成されるオープンリーディングフレームは、転写及び翻訳が、組成物が投与される対象中で起こるように、単独で又は発現されるべき任意の他の配列と一緒に、プロモーターの制御下に置かれる。
【０１５２】
[00153]一実施形態において、本明細書で開示された組成物は、それ自体抗原である抗原を含む。実施形態では、本明細書で開示された組成物は、癌に関連する抗原である抗原を含む。
【０１５３】
[00154]本発明に記載された組成物を用いる単回の治療で使用される抗原の量は、抗原のタイプ及び対象の特性（例えば背格好、体重、年齢、性別など）に依存して変化し得る。当業者は、過度の実験なしに、特定の適用で使用する抗原の有効量を決定できると予想される。本明細書において使用する用語「有効量」は、所望の結果を達成するために必要な投薬及び期間で有効な量を意味する。
【０１５４】
[00155]一実施形態において、組成物は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された等価用量として、約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５又は１０マイクログラムの抗原を含むことができる。幾つかの実施形態において、組成物は、ポリＩ：Ｃ及び／又は脂質系アジュバントと等価用量の抗原を含むことができる。特定の実施形態において、組成物は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された等価用量として約１マイクログラムの抗原を含むことができる。ヒトに投与するための単位用量当たりの抗原の量は、５００マイクログラムまでであってもよく、通常は１００マイクログラム以下であるが、これに限定されない。
【０１５５】
[00156]ヒトからマウスに換算する用量の研究は、本明細書で前に提供した方程式を使用して計算することができる。
【０１５６】
[00157]癌に関連する抗原
【０１５７】
[00158]幾つかの実施形態において、抗原は、癌又は腫瘍に関連するタンパク質又はそれらのフラグメントであってもよい。多くの癌又は腫瘍に関連するタンパク質は、当技術分野で知られており、例えば、国際公開第２００７／０４１８３２号で開示されたのもなどであるが、これらに限定されない。
【０１５８】
[00159]幾つかの実施形態において、癌は、ウイルスなどの病原体により惹起され得る。癌の発生と関連するウイルスは、当業者に知られており、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｊｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルス（ＪＣＶ）、ヒトヘルペスウイルス８、エプスタイン・バールウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  Ｖｉｒｕｓ）（ＥＢＶ）、メルケル細胞ポリオーマウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス及びヒトＴ細胞白血病ウイルス−１を含むが、これらに限定されない。したがって、一実施形態において、本明細書で開示された組成物は、癌の発生と関連するウイルスと関連する抗原を含むことができる。
【０１５９】
[00160]幾つかの実施形態において、抗原は、標的とされる腫瘍細胞における特異的構造を効果的に認識して、それらの破壊を惹起することができる、特異的細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）の免疫応答を誘発することができる任意のものであってもよい。
【０１６０】
[00161]さらなる実施形態において、抗原は、以下の表から選択されるペプチド配列を含むことができる。
【０１６１】
[00162]
【表５】
0006989134.tif 000007
0006989134.tif 000008
0006989134.tif 000009
【０１６２】
[00163]特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、ＨＰＶから誘導された抗原を含むことができる。一実施形態において、抗原は、ＨＰＶのＥ６、Ｅ７、Ｌ１又はＬ２タンパク質から誘導され得る。
【０１６３】
[00164]一実施形態において、ＨＰＶのＥ６タンパク質の抗原は、ペプチド配列ＴＩＨＤＩＩＬＥＣＶ（Ｔ１０Ｖ；配列番号６０）を含む。別の実施形態において、ＨＰＶのＥ７タンパク質の抗原は、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（Ｒ９Ｆ；配列番号２）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（Ｙ１０Ｔ；配列番号６１）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶ（Ｌ９Ｖ；配列番号６２）、又はＴＬＧＩＶＣＰＩ（Ｔ８Ｉ；配列番号６３）のペプチド配列を含む。
【０１６４】
[00165]他の実施形態では、ＨＰＶから誘導された抗原は、国際公開第１９９３／０２２３３８号；国際公開第２００２／０７０００６号；国際公開第２００６／１１５４１３号；国際公開第２００８／１４７１８７号；国際公開第２００９／００２１５９号又は国際公開第２０１０／１２３３６５号で開示された１つ又は複数のＨＰＶ抗原であってもよい。
【０１６５】
[00166]別の実施形態において、抗原は、例えば、メラノーマに関連するタンパク質などの腫瘍に関連するタンパク質から選択され得る。さらなる実施形態において、メラノーマに関連するタンパク質は、チロシンが関係するタンパク質−２（ＴＲＰ−２）又はｐ５３である。一実施形態において、ＴＲＰ−２タンパク質から誘導された抗原は、ペプチド配列ＳＶＹＤＦＦＶＷＬ（Ｓ９Ｌ；配列番号５６）を含む。別の実施形態において、ＴＲＰ−２タンパク質から誘導された抗原は、ペプチド配列ＶＹＤＦＦＶＷＬ（Ｖ８Ｌ；配列番号６４）を含む。別の実施形態において、ｐ５３タンパク質から誘導された抗原は、ＫＹＭＣＮＳＳＣＭ（Ｋ９Ｍ；野性型ｐ５３；配列番号６５）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（ｍＫ９Ｍ；改変されたｐ５３；配列番号６６）、及びＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（ｍＫ９Ｍ；配列番号６７）から選択されるペプチド配列を含む。
【０１６６】
[00167]一実施形態において、組成物に含有される抗原は、１つ又は複数の本明細書に記載された抗原の混合物、任意選択で、抗原との間のスペーサー配列があるか又はない融合タンパク質として融合されて一緒になったものを含むことができる。
【０１６７】
[00168]他の実施形態では、抗原は、膜表面に結合した癌に関連するタンパク質由来であってもよいが、これらに限定されない。表面に結合した癌に関連するタンパク質（又はそれらの抗原）は、抗体により認識されることができることもある。
【０１６８】
[00169]特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、１つ又は複数のサバイビン抗原を含むことができる。
【０１６９】
[00170]アポトーシス反復含有バキュロウイルス阻害剤５（ＢＩＲＣ５）とも呼ばれるサバイビンは、アポトーシスの負の調節に関与するタンパク質である。それは、アポトーシスタンパク質の阻害剤（ＩＡＰ）のファミリーのメンバーとして分類されてきた。サバイビンは、単一ＢＩＲモチーフ、及びＲＩＮＧフィンガーの代わりに高度に荷電したカルボキシ末端のコイル状の領域を含有する１６．５ｋＤａの細胞質タンパク質である。サバイビンをコードする遺伝子は、エフェクター細胞のプロテアーゼ受容体−１（ＥＰＲ−１）の配列と殆ど同一であるが、反対方向に向いている。サバイビン（ホモサピエンス）の配列をコードするのは、停止コドンを含めて４２９ヌクレオチドの長さである。
atgggtgccc cgacgttgcc ccctgcctgg cagccctttctcaaggacca ccgcatctct       60
acattcaaga actggccctt cttggagggc tgcgcctgcaccccggagcg gatggccgag      120
gctggcttca tccactgccc cactgagaac gagccagacttggcccagtg tttcttctgc      180
ttcaaggagc tggaaggctg ggagccagat gacgaccccatagaggaaca taaaaagcat      240
tcgtccggtt gcgctttcct ttctgtcaag aagcagtttgaagaattaac ccttggtgaa      300
tttttgaaac tggacagaga aagagccaag aacaaaattgcaaaggaaac caacaataag      360
aagaaagaat ttgaggaaac tgcgaagaaa gtgcgccgtgccatcgagca gctggctgcc      420
atggattga                                                           429
配列番号６８
【０１７０】
[00171]コードされるタンパク質サバイビン（ホモサピエンス）は１４２アミノ酸長である。
Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp GlnPro Phe Leu Lys Asp
1              5                 10                15
His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro PheLeu Glu Gly Cys Ala
20                25                 30
Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly PheIle His Cys Pro Thr
35                40                 45
Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe PheCys Phe Lys Glu Leu
50                55                  60
Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile GluGlu His Lys Lys His
65                 70                75                80
Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys LysGln Phe Glu Glu Leu
85                90                 95
Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg GluArg Ala Lys Asn Lys
100                105                110
Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys GluPhe Glu Glu Thr Ala
115               120                125
Lys Lys Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu AlaAla Met Asp
130               135               140   
配列番号６９
【０１７１】
[00172]サバイビンタンパク質は、カスパーゼ活性化を阻害し、それによりアポトーシス即ちプログラムされた細胞死の負の調節をもたらすように機能すると仮定されている。この機能と一致して、サバイビンは、多くのタイプの癌で必ず上方制御されているが、正常組織ではそのようなことはない重要な遺伝子の１つと同定されている（例えば、Ａｌｔｉｅｒｉら、１９９９年；及び米国特許第６，２４５，５２３号を参照されたい）。それ故、この事実は、サバイビンを、癌細胞は標的とされるが正常細胞はそうされない癌治療のために理想的な標的にする。実際、サバイビンは、ヒト癌の大部分を含む多くの腫瘍タイプで高度に発現されており、予後予測としての価値が報告されている。
【０１７２】
[00173]幾つかの実施形態において、本明細書で開示された組成物は、１つ又は複数のサバイビン抗原を含むこともできる。本明細書において使用する、用語「サバイビン抗原」は、サバイビンタンパク質又はそれらのフラグメントから誘導された任意のペプチド、ポリペプチド又はそれらの変形体（例えばサバイビンペプチドの変形体）を包含する。用語「サバイビン抗原」は、サバイビンペプチド、サバイビンペプチド変形体又は本明細書に記載されるサバイビンペプチドの機能的等価物をコードするポリヌクレオチドも包含する。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ（例えばゲノムのＤＮＡ又はｃＤＮＡ）又はＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）又はそれらの組合せであってもよい。それらは、天然に生じても又は合成されてもよい（例えば化学的に合成）。ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド鎖中において１個又は複数の窒素を含む塩基、ペントース糖類又はリン酸基の改変を含有していてもよいと考えられる。そのような改変は当技術分野で周知であり、例えば、ポリヌクレオチドの安定性を改善する目的のためであってもよい。
【０１７３】
[00174]一実施形態において、サバイビン抗原は、完全長のサバイビンポリペプチド又は完全長のサバイビンポリペプチドをコードする核酸を含むことができる。或いは、サバイビン抗原は、サバイビンタンパク質の任意の長さのフラグメントを含むサバイビンペプチドであってもよい。典型的実施形態は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸残基を含むサバイビンペプチドを含む。特定の実施形態において、サバイビンペプチドは、サバイビンタンパク質の７、８、９、１０、１１と整数が続くアミノ酸残基からなる、それぞれヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド又はウンデカペプチドからなる（例えば配列番号６９）。サバイビン抗原の特定の実施形態は、約９個又は１０個のアミノ酸のサバイビンペプチドを含む。
【０１７４】
[00175]本開示のサバイビン抗原は、サバイビンペプチドの変形体及び機能的等価物も包含する。サバイビンペプチドの変形体又は機能的等価物は、サバイビンタンパク質の特定の配列と比較して、１個又は複数のアミノ酸置換、欠失又は付加、又は任意のそれらの組合せなどの相違を有するアミノ酸配列を示すペプチドを包含する。上記相違は、サバイビンタンパク質の配列とサバイビンペプチドの変形体又はサバイビンペプチドの機能的等価物との間の同一性における低下として測定され得る。
【０１７５】
[00176]アミノ酸配列間の同一性は、当技術分野で周知のアルゴリズムを使用して計算することができる。サバイビンペプチドの変形体又は機能的等価物は、それらが、それらの全長にわたって、サバイビンタンパク質のペプチド配列と少なくとも７０％同一、例えば、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、又は、サバイビンタンパク質のペプチド配列と９６％、９７％、９８％又は９９％同一を含む少なくとも９５％同一である場合に、「サバイビン抗原」の意味の内に入ると考えることができる。特定の実施形態において、サバイビンペプチドの変形体は、配列番号６９のアミノ酸の数が整数で続く配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一の配列を有する。
【０１７６】
[00177]サバイビン抗原がそれから誘導され得るサバイビンタンパク質は、タンパク質が発現される任意の動物種からのサバイビンタンパク質である。特定の実施形態は、ヒトからのサバイビンタンパク質（配列番号６９）である。選択されたサバイビンタンパク質の配列に基づいて、サバイビン抗原は、サバイビンタンパク質又はコード化核酸の何らかの適当な化学的又は酵素的処理により誘導され得る。或いは、サバイビン抗原は、当業者が熟知している任意の従来のペプチド又は核酸合成手順により合成することもできる。
【０１７７】
[00178]サバイビン抗原（ペプチド又は核酸）は、サバイビンの自然のままの配列である配列を有していてもよい。或いは、サバイビン抗原は、１つ又は複数の置換、欠失又は付加により改変されたペプチド又は核酸配列、例えば本明細書に記載されているサバイビンペプチド変形体又は機能的等価物であってもよい。ペプチドの免疫原性を増大させる典型的手順及びサバイビンペプチドの改変は、ＨＬＡクラスＩの分子へのペプチド結合を増大させる、アンカー位置に導入されたアミノ酸置換を含む、例えば国際公開第２００４／０６７０２３号に記載されたものを含む。
【０１７８】
[00179]一実施形態において、サバイビン抗原は、ＭＨＣクラスＩのＨＬＡ分子に結合することができる、サバイビンタンパク質又はそれらの任意のサバイビンペプチド変形体から誘導された任意のペプチドである。これらの方向に沿って、サバイビン抗原は、任意のサバイビンペプチド、又は対象において免疫応答を誘発するか若しくは強化することができるそれらのサバイビンペプチドの変形体であってもよい。
【０１７９】
[00180]一実施形態において、サバイビン抗原は、対象において細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を導き出すことができるサバイビンタンパク質からのアミノ酸配列（例えば配列番号６９）、又は前記ペプチドをコードする核酸分子を含むペプチド抗原である。
【０１８０】
[00181]一実施形態において、組成物は、１つ又は複数の合成サバイビンペプチド、又はサバイビンタンパク質のアミノ酸配列、例えば、配列番号６９で表されるアミノ酸配列などに基づくそれらの変形体を含む。
【０１８１】
[00182]サバイビンペプチド、サバイビンペプチド変形体及びサバイビン機能的等価物、及び特に癌における診断及び治療の目的のためのそれらの使用は、例えば、国際公開第２００４／０６７０２３号及び国際公開第２００６／０８１８２６号に記載されている。これらの刊行物で開示された新規ペプチドは、癌患者で細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）応答を導き出すことができることが見出された。特に、国際公開第２００４／０６７０２３号で；ＭＨＣクラスＩに限定されたペプチドは、ＭＨＣクラスＩのＨＬＡ分子に結合することができ、それにより広範囲癌疾患を患う患者において、ｅｘ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｓｉｔｕの両方でＣＴＬ免疫応答を導き出すことができるサバイビンタンパク質から誘導することができることが見出された。
【０１８２】
[00183]一実施形態において、本明細書で開示された組成物は、任意の１つ又は複数のサバイビンペプチド、サバイビンペプチド変形体又は国際公開第２００４／０６７０２３号及び国際公開第２００６／０８１８２６号で開示されたサバイビンペプチドの機能的等価物を含むこともできる。
【０１８３】
[00184]別の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、１つ又は複数のサバイビンペプチド、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ又はＨＬＡ−Ｃ分子から選択される任意のＭＨＣクラスＩ分子に結合する能力を有するサバイビンペプチド変形体又はサバイビンペプチドの機能的等価物を含むこともできる。
【０１８４】
[00185]サバイビンペプチド、サバイビンペプチド変形体、又はサバイビンペプチドの機能的等価物が結合することができる典型的ＭＨＣクラスＩのＨＬＡ−Ａ分子は、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ１９、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ３６、ＨＬＡ−Ａ４３、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、及びＨＬＡ−Ａ６９を含むが、これらに限定されない。
【０１８５】
[00186]サバイビンペプチド、サバイビンペプチド変形体、又はサバイビンペプチドの機能的等価物が結合することができる典型的ＭＨＣクラスＩのＨＬＡ−Ｂ分子は、ＨＬＡ−Ｂ５、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１２、ＨＬＡ−Ｂ１３、ＨＬＡ−Ｂ１４、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ１６、ＨＬＡ−Ｂ１７、ＨＬＡ−Ｂ１８、ＨＬＡ−Ｂ２１、ＨＬＡ−Ｂ２２、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ３７、ＨＬＡ−Ｂ３８、ＨＬＡ−Ｂ３９、ＨＬＡ−Ｂ４０、ＨＬＡ−Ｂ４１、ＨＬＡ−Ｂ４２、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ４５、ＨＬＡ−Ｂ４６及びＨＬＡ−Ｂ４７を含むが、これらに限定されない。
【０１８６】
[00187]サバイビンペプチド、サバイビンペプチド変形体、又はサバイビンペプチドの機能的等価物が結合することができる典型的ＭＨＣクラスＩのＨＬＡ−Ｃ分子は、ＨＬＡ−Ｃ１、ＨＬＡ−Ｃ２、ＨＬＡ−Ｃ３、ＨＬＡ−Ｃ４、ＨＬＡ−Ｃ５、ＨＬＡ−Ｃ６、ＨＬＡ−Ｃ７及びＨＬＡ−Ｃ１６を含むが、これらに限定されない。
【０１８７】
[00188]特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、
ｉ）ＦＥＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７０）      ［ＨＬＡ−Ａ１］
ｉｉ）ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７１）    ［ＨＬＡ−Ａ１］
ｉｉｉ）ＬＴＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７２）  ［ＨＬＡ−Ａ２］
ｉｖ）ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７３）    ［ＨＬＡ−Ａ２］
ｖ）ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦ（配列番号７４）    ［ＨＬＡ−Ａ３］
ｖｉ）ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号７５）  ［ＨＬＡ−Ａ３］
ｖｉｉ）ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号７６）  ［ＨＬＡ−Ａ２４］
ｖｉｉｉ）ＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号７７）［ＨＬＡ−Ｂ７］
から選択される１つ又は複数のサバイビンペプチド抗原を含むこともできる。
【０１８８】
[00189]上でリストに挙げたサバイビンペプチドは、本開示により包含される典型的ＭＨＣクラスＩに限定されたペプチドを表すが、これらに限定されない。サバイビンペプチドの各々が結合すると考えられる特異的ＭＨＣクラスＩのＨＬＡ分子が、角括弧中で右側に示されている。本明細書で開示された組成物は、１つ又は複数のこれらのサバイビンペプチドを、任意の適当な組合せで含むこともできる。
【０１８９】
[00190]さらなる実施形態において、本明細書で開示された組成物は、下にリストを挙げた５種のサバイビンペプチドのうちの任意の１つ又は複数を、任意の適当な組合せで含むこともできる。
ｉ）ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７１）      ［ＨＬＡ−Ａ１］
ｉｉ）ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７３）    ［ＨＬＡ−Ａ２］
ｉｉｉ）ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号７５）［ＨＬＡ−Ａ３］
ｉｖ）ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号７６）    ［ＨＬＡ−Ａ２４］
ｖ）ＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号７７）      ［ＨＬＡ−Ｂ７］
【０１９０】
[00191]特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、上のリストに挙げたサバイビンペプチド抗原の全ての５種を含む。
【０１９１】
[00192]幾つかの実施形態において、少なくとも上記の少なくとも１種のサバイビン抗原に加えて、本明細書で開示された組成物は、１つ又は複数の追加の抗原、例えば、これらの本明細書に記載されたものなどを含むこともできる。
【０１９２】
[00193]ＣＴＬエピトープ及びＢ細胞エピトープ
【０１９３】
[00194]上記のように、幾つかの実施形態において、抗原は、少なくとも１つのＢ細胞エピトープ又はＣＴＬエピトープを含む分子である。
【０１９４】
[00195]エピトープは、ペプチド、炭水化物、脂質、グリコペプチド及び糖脂質を含むが、これらに限定されない任意の化学的な天然物であることもできる。特定の実施形態において、エピトープは、本明細書に記載された抗原のいずれかから誘導されたペプチドである。エピトープは、天然に存在するエピトープと同一であっても、天然に存在するエピトープの改変された形態であってもよい。
【０１９５】
[00196]Ｂ細胞のエピトープは、Ｂ細胞及び抗体により認識されるエピトープである。Ｂ細胞のペプチドエピトープは、典型的には少なくとも５個のアミノ酸、多くの場合、少なくとも６個のアミノ酸、さらに多くの場合、少なくとも７又は８個のアミノ酸の長さであり、連続（「直鎖状」）であっても不連続（「立体的」）であってもよく、後者は、例えば、一次アミノ酸配列の不連続な部分を物理的に近接させるようなタンパク質のフォールディングにより形成されている。Ｂ細胞エピトープは、炭水化物エピトープであってもよい。
【０１９６】
[00197]一実施形態において、本明細書に記載されている組成物の抗原は、液性の免疫応答を誘発することができるＢ細胞エピトープであるか又はそれを含むことができる。
【０１９７】
[00198]幾つかの実施形態において、本明細書に記載されている組成物の抗原は、感染性疾患と関連するＢ細胞エピトープであるか又はそれを含むこともできる。該抗原は、例えば、インフルエンザウイルス又はＲＳウイルスなどのウイルスから誘導されたＢ細胞エピトープであるか又はそれを含むこともできる。別の実施形態において、Ｂ細胞エピトープは、Ｈ５Ｎ１インフルエンザウイルスのヘマグルチニン糖タンパク質から誘導されたエピトープであってもよい。
【０１９８】
[00199]別の実施形態において、本明細書に記載されている組成物の抗原は、例えば、百日咳菌又は炭疽菌などの細菌から誘導されたＢ細胞エピトープであるか又はそれを含むこともできる。特定の実施形態において、Ｂ細胞エピトープは、百日咳菌により産生された百日咳トキソイドタンパク質のエピトープであることもできる。別の特定の実施形態では、Ｂ細胞エピトープは、炭疽菌の組換え保護抗原（ｒＰＡ）又は炭疽菌変異体の組換え保護抗原（ｍｒＰＡ）のエピトープであることもできる。
【０１９９】
[00200]別の実施形態において、本明細書に記載されている組成物の抗原は、プラスモディウム属などの原生動物から誘導されたＢ細胞エピトープであるか又はそれを含むこともできる。
【０２００】
[00201]さらなる実施形態において、組成物は、Ｂ細胞エピトープの混合物を、液性の免疫応答を誘発するための抗原として含むこともできる。Ｂ細胞エピトープは連結されて、単一のポリペプチドを形成することもある。
【０２０１】
[00202]ＣＴＬエピトープは、細胞傷害性Ｔリンパ球により認識される分子である。ＣＴＬエピトープは、典型的には、ＭＨＣ分子と複合体化して抗原提示細胞の表面に存在している。本明細書において使用する、用語「ＣＴＬエピトープ」は、抗原（ハプテンを含む）の天然ＣＴＬエピトープと実質的に同じである分子（例えばペプチド）を指す。ＣＴＬエピトープは、その天然の対応物と比較して、例えば１個又は２個のアミノ酸だけ改変されていてもよい。特に断りのない限り、本明細書ではＣＴＬエピトープへの言及は、細胞により取り上げられて抗原提示細胞の表面に存在することができる結合していない分子についてである。
【０２０２】
[00203]ＣＴＬエピトープは、細胞媒介免疫応答が起こり得るように、典型的には、Ｔ細胞受容体により認識されるように修正することができるものであるべきである。ペプチドとして、ＣＴＬエピトープは、クラスＩ又はクラスＩＩのＭＨＣ分子と相互作用することができる。ＭＨＣクラスＩの分子により提示されるＣＴＬエピトープは、典型的には、８〜１５個の間のアミノ酸長さの、及びより多くのしばしば９〜１１個の間のアミノ酸長さのペプチドである。ＭＨＣクラスＩＩの分子により提示されるＣＴＬエピトープは、典型的には５〜２４個のアミノ酸の長さ、及びより多くのしばしば１３〜１７個の間のアミノ酸の長さのペプチドである。抗原がこれらのサイズを超える場合には、抗原は、免疫系により処理されてＭＨＣクラスＩ又はＩＩの分子との相互作用のために、より適当なサイズのフラグメントになると予想される。それ故、ＣＴＬエピトープは、上記のものより大きいペプチドの一部であってもよい。
【０２０３】
[00204]多くのＣＴＬエピトープが公知である。追加のＣＴＬエピトープを同定する数通りの技法が当技術分野により認識されている。一般的に、これらは、ＣＴＬエピトープを提供する可能性のある分子を調製すること、及びその分子に対する免疫応答を特徴づけることを包含する。
【０２０４】
[00205]一実施形態において、本明細書に記載されている組成物の抗原は、ＣＴＬ応答を誘発することができるＣＴＬエピトープであるか又はそれを含むことができる。例えば、抗原は、ＨＰＶなどのウイルスから誘導されたＣＴＬエピトープであってもよい。
【０２０５】
[00206]別の実施形態において、抗原は、ＨＰＶのＥ６又はＥ７タンパク質から誘導されたＣＴＬエピトープであるか又はそれを含むこともできる。例えば、ＨＰＶのＥ６タンパク質のＣＴＬエピトープは、ペプチド配列ＴＩＨＤＩＩＬＥＣＶ（Ｔ１０Ｖ；配列番号６０）を含むことができ、及びＨＰＶのＥ７タンパク質のＣＴＬエピトープは、ペプチド配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（Ｒ９Ｆ；配列番号２）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（Ｙ１０Ｔ；配列番号６１）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶ（Ｌ９Ｖ；配列番号６２）、及びＴＬＧＩＶＣＰＩ（Ｔ８１；配列番号６３）を含むことができるが、これらに限定されない。
【０２０６】
[00207]別の実施形態において、ＣＴＬエピトープは、例えば、１つ又は複数の本明細書に記載されているサバイビンペプチド又はメラノーマに関連するタンパク質などの腫瘍に関連するタンパク質のエピトープであることができる。一実施形態において、メラノーマに関連するタンパク質は、チロシンと関係するタンパク質−２（ＴＲＰ−２）又はｐ５３であってもよく、それは、組換え技術又は化学合成を含む種々の方法により得ることができる。
【０２０７】
[00208]例えば、ＴＲＰ−２誘導タンパク質のＣＴＬエピトープは、ペプチド配列ＳＶＹＤＦＦＶＷＬ（Ｓ９Ｌ；配列番号５６）又はＶＹＤＦＦＶＷＬ（Ｖ８Ｌ；配列番号６４）を含むことができるが、これらに限定されない。ｐ５３から誘導されたタンパク質のＣＴＬエピトープは、例えば、ペプチド配列ＫＹＭＣＮＳＳＣＭ（Ｋ９Ｍ；野性型ｐ５３；配列番号６５）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（ｍＫ９Ｍ；改変されたｐ５３；配列番号６６）又はＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（ｍＫ９Ｍ；配列番号６７）を含むことができる。
【０２０８】
[00209]さらなる実施形態において、組成物は、ＣＴＬエピトープの混合物を、ＣＴＬ応答を誘発するための抗原として含むこともできる。ＣＴＬエピトープは連結されて、単一のポリペプチドを形成していることもある。
【０２０９】
[00210]幾つかの実施形態において、Ｂ細胞及びＣＴＬエピトープは、疾患と関連する及び／又は疾患に特異的なエピトープである。そのような疾患は、前に本明細書に記載されたいずれかを含むが、これらに限定されない。例えば、疾患は、癌（例えば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膠芽細胞腫又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫など）、感染性疾患（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）感染、インフルエンザウイルス感染、エボラ出血熱ウイルス感染、百日咳菌感染、又は四日熱マラリア原虫感染により惹起されるか又はそれらと関連する疾患など）又は習慣性疾患（例えば、コカインに対する習慣性など）であってもよいが、これらに限定されない。
【０２１０】
[00211]他の成分
【０２１１】
[00212]本明細書で開示された組成物は、組成物が水を含まないか又は水を実質的に含まないままである限り、当技術分野で公知の１つ又は複数の追加の成分をさらに含むことができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、ペンシルベニア州、米国、１９８５年；及び米国薬局方：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ２４ＮＦ１９）、１９９９年出版を参照されたい）。
【０２１２】
[00213]幾つかの実施形態において、ワクチン組成物は、それに加えてＴヘルパーエピトープ、乳化剤及び／又は賦形剤を含むことができる。
【０２１３】
[00214]Ｔヘルパーエピトープ
【０２１４】
[00215]幾つかの実施形態において、本明細書で開示された組成物は、少なくとも１つのＴヘルパーエピトープ又はＴヘルパー抗原も含むことができる。
【０２１５】
[00216]Ｔヘルパーエピトープは、Ｔヘルパー活性を有するアミノ酸の配列（天然又は非天然アミノ酸）である。Ｔヘルパーエピトープは、ヘルパーＴリンパ球により認識されて、それは、免疫系の能力を確立して最大化することに重要な役割を担い、他の免疫細胞、例えば細胞傷害性Ｔリンパ球などを活性化して指示することに関与する。
【０２１６】
[00217]Ｔヘルパーエピトープは、連続した又は不連続のエピトープからなることができる。それ故、Ｔヘルパーの全てのアミノ酸がエピトープの部分であるとは限らない。したがって、Ｔヘルパーエピトープのアナログ及びセグメントを含むＴヘルパーエピトープは、免疫応答を増強又は刺激することができる。免疫優性Ｔヘルパーエピトープは、動物及びヒトの集団で広く広がるＭＨＣタイプと広く反応性である（Ｃｅｌｉｓら（１９８８年）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０巻：１８０８〜１８１５頁；Ｄｅｍｏｔｚら（１９８９年）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２巻：３９４〜４０２頁；Ｃｈｏｎｇら（１９９２年）、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０巻：４６４０〜４６４７頁）。対象のペプチドのＴヘルパードメインは、約１０〜約５０個のアミノ酸、より特に約１０〜約３０個のアミノ酸を有することができる。複数のＴヘルパーエピトープが存在する場合、そのときは、各Ｔヘルパーエピトープが独立に作用する。
【０２１７】
[00218]幾つかの実施形態において、Ｔヘルパーエピトープは、本明細書に記載された抗原の一部を形成していることもある。特に、抗原が十分なサイズのものであれば、それは、Ｔヘルパーエピトープとして機能するエピトープを含有することができる。他の実施形態では、Ｔヘルパーエピトープは、抗原とは別の分子である。
【０２１８】
[00219]別の実施形態において、Ｔヘルパーエピトープのアナログは、Ｔヘルパーエピトープ中に１個〜約１０個のアミノ酸残基の置換、欠失及び挿入を含むことができる。Ｔヘルパーセグメントは、免疫応答を強化又は刺激するために十分なＴヘルパーエピトープの近接部分である。Ｔヘルパーセグメントの例は、単一の比較的長いペプチドから誘導された一連の部分に一致するペプチドである。
【０２１９】
[00220]特定の実施形態において、本明細書で開示された組成物は、Ｔヘルパーエピトープ又は抗原として、安定性を強化するためにアラニン残基がそのアミノ末端に付加されて（Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、７巻：３０１２〜３０２４頁；、２００１年）、改変された破傷風毒素ペプチドＡ１６Ｌ（８３０〜８４４；ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号７８）を含むことができる。
【０２２０】
[00221]本発明の組成物で使用することができるＴヘルパーエピトープの他の供給源は、例えば、Ｂ型肝炎表面抗原のヘルパーＴ細胞エピトープ、百日咳毒素のヘルパーＴ細胞エピトープ、はしかウイルスのＦタンパク質のヘルパーＴ細胞エピトープ、トラコーマ病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）の主要な外部膜タンパク質のヘルパーＴ細胞エピトープ、ジフテリア毒素のヘルパーＴ細胞エピトープ、熱帯熱マラリア原虫胞子虫周囲（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  ｃｉｒｃｕｍｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ）のヘルパーＴ細胞エピトープ、マンソン住血吸虫トリオース（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ  ｔｒｉｏｓｅ）のリン酸イソメラーゼのヘルパーＴ細胞エピトープ、大腸菌ＴｒａＴのヘルパーＴ細胞エピトープ及び任意のこれらのＴヘルパーエピトープの免疫増強アナログ及びセグメントを含む。
【０２２１】
[00222]幾つかの実施形態において、Ｔヘルパーエピトープは、普遍的なＴヘルパーエピトープであってもよい。本明細書において使用する普遍的なＴヘルパーエピトープは、クラスＩＩ（ＣＤ４＋Ｔ細胞）に限定された様式でＴ細胞機能を活性化する様式で、多様なＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するペプチド又は他の免疫原性分子、又はそれらのフラグメントを指す。普遍的なＴヘルパーエピトープの例は、ペプチド配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号７９）を含むＰＡＤＲＥ（汎ＤＲエピトープ）であり、ここで、Ｘは、シクロヘキシルアラニルであることができる。ＰＡＤＲＥは、特に、ＣＤ４＋Ｔヘルパーエピトープを有し、即ち、それはＰＡＤＲＥに特異的なＣＤ４＋Ｔヘルパー応答の誘発を刺激する。
【０２２２】
[00223]前に言及した改変され破傷風毒素ペプチドＡ１６Ｌに加えて、破傷風トキソイドは、ＰＡＤＲＥと同様な様式ではたらく他のＴヘルパーエピトープを有する。破傷風及びジフテリアの毒素は、ヒトＣＤ４＋細胞にとって普遍的なエピトープを有する（Ｄｉｅｔｈｅｌｍ−Ｏｋｉｔａ、Ｂ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ、１８１巻：１００１〜１００９頁；２０００年）。別の実施形態において、Ｔヘルパーエピトープは、ペプチド配列ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（アミノ酸９４７〜９６７；配列番号８０）を含むＦ２１Ｅなどの破傷風トキソイドペプチドであってもよい。
【０２２３】
[00224]ある実施形態では、Ｔヘルパーエピトープは、本明細書で開示された組成物中の１つ又は複数の抗原の少なくとも１種と融合している（例えば融合ペプチド）。
【０２２４】
[00225]乳化剤
【０２２５】
[00226]幾つかの実施形態において、本明細書で開示されたワクチン組成物は、１つ又は複数の乳化剤を含むことができる。乳化剤は、純粋な乳化剤であっても又は乳化剤の混合物であってもよい。乳化剤（１つ又は複数）は、薬学的に及び／又は免疫学的に許容されるべきである。
【０２２６】
[00227]乳化剤の使用は、水を含まないか又は水を実質的に含まない組成物を調製することに特別の関係があり得る。例えば、幾つかの実施形態において、乳化剤は、両親媒性化合物又は混合物を疎水性担体中に再懸濁するときに、両親媒性化合物、両親媒性の化合物と抗原との混合物、又は両親媒性の化合物、抗原及び他のワクチン成分（例えば、ポリＩ：Ｃ及び／又は脂質系アジュバント、Ｔヘルパーエピトープなど）の混合物の安定化を助けるために使用することができる。乳化剤の使用は、例えば、疎水性担体中における両親媒性の化合物又は混合物のより均一な分布を助長することができる。
【０２２７】
[00228]乳化剤は、両親媒性であってもよく、それ故、乳化剤は、広範囲の化合物を含み得る。幾つかの実施形態において、乳化剤は、例えば、非イオン性界面活性剤などの界面活性剤であってもよい。使用することができる乳化剤の例は、ポリエチレングリコール化されたソルビトール、及びソルビタンエステルから誘導された油性液体であるポリソルベートを含む。ポリソルベートは、例えば、ソルビタンモノオレエートを含んでもよい。通常の乳化剤は当技術分野で周知であり、マンニドオレエート（アラセル（商標）Ａ）、レシチン、ツイーン（商標）８０、スパン（商標）２０、８０、８３及び８５を含むが、これらに限定されない。一実施形態において、ワクチン組成物で使用するための乳化剤は、マンニドオレエートである。
【０２２８】
[00229]乳化剤は、一般的に疎水性担体と予め混合される。幾つかの実施形態において、すでに乳化剤を含有する疎水性担体が使用されることもある。例えば、モンタニド（商標）ＩＳＡ５１などの疎水性担体は、乳化剤マンニドオレエートをすでに含有している。他の実施形態では、疎水性担体は、乳化剤と混合されてから、両親媒性化合物、両親媒性の化合物と抗原の混合物、又は両親媒性の化合物、抗原及び他のワクチン成分（例えば、ポリＩ：Ｃ及び／又は脂質系アジュバント、Ｔヘルパーエピトープなど）の混合物と組み合わされてもよい。
【０２２９】
[00230]乳化剤は、疎水性担体中における両親媒性の化合物の均一な分布を助長するために、及び／又は本明細書に記載されている構造、集成体若しくはアレイの形成を助けるために有効な量で使用される。典型的には、疎水性担体の乳化剤に対する体積比（ｖ／ｖ）は、約５：１〜約１５：１、より特に１０：１の範囲にある。
【０２３０】
[00231]水を含まない天然の組成物
【０２３１】
[00232]本明細書で開示されたアジュバント系は、水を含まないか又は水を実質的に含まないワクチン組成物を調製するために設計されており、即ちワクチン組成物はエマルションではない。
【０２３２】
[00233]「水を含まない」により、組成物は水を全く含有しないことが意味される。別の実施形態において、組成物は、水を実質的に含まなくてもよい。用語「水を実質的に含まない」は、疎水性担体が少量の水を未だ含有することもあるが、但し水は担体の非連続相中に存在する実施形態を包含することが意図される。例えば、組成物の個々の成分は、凍結乾燥又は蒸発などのプロセスにより完全には除去されない可能性のある少量の結合した水を有していてもよく、ある疎水性担体は、溶解された少量の水を含有することもある。一般的に、「水を実質的に含まない」本明細書で開示された組成物は、例えば、組成物の担体成分の合計重量に基づき重量／重量で、約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％又は０．０１％未満の水を含有する。少量の水を未だ含有する組成物は、エマルションが形成されるような十分な量の水を含有することはない。
【０２３３】
[00234]本明細書で示したように、驚くべきことに及び予想外なことに、本明細書で開示されたアジュバント系を含む、水を含まないワクチン組成物は、有意により高い抗体力価及びより強い細胞媒介免疫応答を、より低い用量のポリＩ：Ｃ及び脂質系アジュバントで発生させることができることが見出された。
【０２３４】
[00235]したがって、一実施形態において、本明細書で開示された水を含まないワクチン組成物は、本明細書で上に記載されたポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントの単位用量当たりの低い量を含む。
【０２３５】
[00236]本明細書で開示された水を含まない組成物の幾つかの実施形態において、単位用量当たりの低い量は、単位用量当たりのより高い量のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントを含む同一の対照組成物と比較して、増強された免疫原性を提供することができる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示された水を含まない組成物は、規定された同一の対照組成物より少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍又は１０倍高い抗体免疫応答を誘発する。特定の実施形態において、本明細書で開示された水を含まない組成物は、規定された同一の対照組成物より約６．５倍高い抗体免疫応答を誘発する。
【０２３６】
[00237]本明細書で開示された水を含まない組成物の幾つかの実施形態において、単位用量当たりの低い量は、単位用量当たりの等価な量又は単位用量当たりのより高い量のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントを含み、両親媒性化合物を含まず、油エマルション組成物として製剤化された同一の対照組成物と比較して、増強された免疫原性を提供することができる。幾つかの実施形態において、本明細書で開示された水を含まない組成物は、規定された同一の対照組成物より少なくとも等価又は少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍又は１０倍高い抗体免疫応答、及び／又は同一の対照組成物より少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍又は５倍高い細胞性免疫応答を誘発する。特定の実施形態において、本明細書で開示された水を含まない組成物は、規定された同一の対照組成物より約２倍高い抗体免疫応答を誘発する。特定の実施形態において、本明細書で開示された水を含まない組成物は、規定された同一の対照組成物より約２〜３倍高い細胞性免疫応答を誘発する。
【０２３７】
[00238]幾つかの実施形態において、単位用量当たりのより高い量は、単位用量当たりの低い量より少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍又は５０倍多くてもよい。
【０２３８】
[00239]幾つかの実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントの単位用量当たりのより高い量は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された単位用量当たりの等価な量の少なくとも約１０マイクログラム、約１５マイクログラム、又は約２０マイクログラム以上である。ヒトにおける換算された単位用量当たりの高い量は、例えば、単位用量当たり約２００マイクログラム以上であってもよい。
【０２３９】
[00240]幾つかの実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントの単位用量当たりの低い量は、マウスで計算して、又はヒトのために換算された単位用量当たりの等価な量の約０．２マイクログラム、約０．５マイクログラム、約１マイクログラム、約５マイクログラム以下である。本明細書で前に記載されたように、幾つかの実施形態において、ヒトにおける換算された低い用量は、単位用量当たり２〜５０マイクログラムの間、例えば約２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４０又は５０マイクログラムであってもよい。
【０２４０】
[00241]幾つかの実施形態において、単位用量当たりの低い量は、対象のワクチン接種後約１２週間までに、少なくとも約１５００万、２０００万、２５００万、３０００万又は３５００万の対数化されていない抗体力価で抗原特異的抗体免疫応答を誘発することができる。特定の実施形態において、単位用量当たりの低い量は、対象のワクチン接種後約１２週間までに、約２９００万〜３０００万の間の対数化されていない抗体力価で、抗原特異的抗体免疫応答を誘発することができる。
【０２４１】
[00242]如何なる特定の作用理論にもとらわれず、本開示の水を含まない組成物が使用される場合、製剤は、数週間にわたって持続して長期にわたる抗原のクレアランス及びワクチンの免疫系との相互作用を可能にする強いデポー製剤を創り出すと考えられる。このことに関して、油中脂質系製剤は、免疫の３週間以内にクレアランスのピークに達して、クレアランスはより低い速度で６ヵ月にわたって持続することが報告された（Ｂｒｅｗｅｒら、２０１４年）。これは、２〜３時間〜１週間で速やかに抗原を放出する水性ワクチン製剤；又は短寿命のデポー製剤を形成するエマルションと対照的である。
【０２４２】
[00243]前に記載されたように、１種のＴＬＲアゴニストへの以前の曝露は、他のアゴニストに対する寛容を生じ得るので、タイミングがＴＬＲアゴニストの有効性にとって非常に重要であると考えられる。本明細書で開示された水を含まないワクチン組成物は、ワクチン成分を（例えばアジュバント及び抗原）を注射箇所に長期間潜在で保持する強いデポー製剤効果を助長することにより、同時曝露を実現することに特に申し分なく適することができる。
【０２４３】
[00244]その上、前に記載されたように、広範囲の細胞におけるポリＩ：Ｃの受容体の発現は、アジュバントとしてポリＩ：Ｃを使用することを制限してきた。しかしながら、驚くべきことに、水を含まないワクチン組成物は、ポリＩ：Ｃアジュバントの有意に低下された用量で（例えば２０倍の低下）、強い抗体及び細胞媒介免疫応答を発生させることができることが示される。これは、単位用量当たりのより低い量のポリＩ：Ｃの使用は、全身的曝露を低下させ得るので、大きな利点になり得る。同様に、水を含まない組成物により創られる強いデポー製剤の効果は、全身的曝露も限定することができる。
【０２４４】
[00245]キット及び試薬
【０２４５】
[00246]本明細書で開示されたアジュバント系又はワクチン組成物は、任意選択でキットとして、使用者に提供される。例えば、本開示のキットは、本明細書で開示されたアジュバント系の１種若しくは複数の成分又は組成物を含有する。キットは、１つ又は複数の追加の試薬、包装材料、キットの成分を保持するための容器、及びキット成分を使用する好ましい方法を詳述している使用説明セット又は使用者マニュアルをさらに含むことができる。一実施形態において、容器はバイアルである。
【０２４６】
[00247]一態様において、１個又は複数の別々の容器に、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体を含むキットが本明細書で開示されている。キットは、任意の数の適当な形態を取ることもできる。
【０２４７】
[00248]キットの第１の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体が、各々別の容器に提供される。
【０２４８】
[00249]キットの第２の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；及び両親媒性化合物が、一緒に第１の容器に提供され、疎水性担体は第２の容器に提供される。この実施形態では、第１の容器の成分は、凍結乾燥された乾燥ケークの形態であってもよく、水を含まないワクチン組成物は、例えば注射の直前に、第１の容器の内容物を第２の容器からの抗原及び疎水性担体で再懸濁させることにより調製することができる。
【０２４９】
[00250]キットの第３の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントが、一緒に第１の容器に提供され；両親媒性化合物は第２の容器に提供され；疎水性担体は第３の容器に提供される。
【０２５０】
[00251]キットの第４の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントが、一緒に第１の容器に提供され、両親媒性化合物及び疎水性担体は一緒に第２の容器に提供される。
【０２５１】
[00252]キットの第５の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが第１の容器に提供され、脂質系アジュバントは第２の容器に提供され、両親媒性化合物及び疎水性担体は、一緒に第３の容器に提供される。
【０２５２】
[00253]キットの第６の実施形態では、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチド、脂質系アジュバント、両親媒性化合物及び疎水性担体が、全て一緒に単一の容器に提供される。
【０２５３】
[00254]別の態様で、本明細書に記載されたキットは、それに加えて本明細書に記載された抗原を含むことができる。一実施形態において、抗原は、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、脂質系アジュバント、両親媒性の化合物、疎水性担体、及び／又はそれらの任意の混合物のうちの任意の１つ又は複数と一緒に容器に提供されてもよい。別の実施形態では、抗原は、別の容器に提供されてもよい。
【０２５４】
[00255]特定の実施形態において、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチド、脂質系アジュバント、両親媒性化合物及び抗原が一緒に第１の容器に、凍結乾燥された乾燥ケークとして提供され、疎水性担体は一緒に第２の容器に提供される。この実施形態では、水を含まないワクチン組成物は、例えば、第１の容器の内容物を第２の容器からの疎水性担体中に再懸濁させることにより、注射の直前に調製することができる。
【０２５５】
[00256]別の態様では、本明細書に記載されたキットは、それに加えて本明細書に記載されたＴヘルパーエピトープを含むこともできる。一実施形態において、Ｔヘルパーエピトープは、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、脂質系アジュバント、両親媒性の化合物、疎水性担体、抗原、及び／又はそれらの任意の混合物のうちの任意の１つ又は複数と一緒に容器に提供されてもよい。別の実施形態において、Ｔヘルパーは、別の容器に提供することもできる。
【０２５６】
[00257]本明細書に記載されたキットは、ワクチン組成物、及び特に水を含まないか又は水を実質的に含まないワクチン組成物の調製で使用するための説明書をさらに含むこともできる。幾つかの実施形態において、キットは、対象において抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答の誘発で使用するための説明書をさらに含むこともできる。
【０２５７】
[00258]本明細書に記載されたキットの特定の実施形態において、脂質系アジュバントは、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）であり、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントは、ポリＩ及びポリＣのストランド種々の長さの混合物であり、前記混合物は９８９，４８６ダルトンのおよその分子量を含み；両親媒性化合物は、Ｓ１００脂質とコレステロールの混合物又はジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）とコレステロールの混合物であり、疎水性担体はモンタニド（登録商標）ＩＳＡ５１ＶＧである。
【０２５８】
[00259]上の実施形態のいずれにおいても、アジュバント、抗原、及び／又はＴヘルパーは、溶液中にあって、疎水性担体に再構成される前に、混合されて凍結乾燥されるように用意されていてもよく；又はすでに凍結乾燥されていて、疎水性担体中の再構成されるために用意されていてもよい。いずれの実施形態においても、疎水性担体中における再構成は、水を含まないか又は水を実質的に含まないワクチン組成物を提供する。
【０２５９】
[00260]免疫応答及び使用方法
【０２６０】
[00261]本明細書で開示されたアジュバント系及び組成物は、抗原を対象に投与することが望まれる任意の場合に、適用を見出すことができる。対象は、脊椎動物、例えば魚類、鳥類又は哺乳動物、好ましくはヒトであってもよい。
【０２６１】
[00262]本明細書で称する「免疫応答」は、細胞媒介免疫応答又は抗体（液性）免疫応答のいずれかであることができる。
【０２６２】
[00263]幾つかの実施形態において、本明細書で開示されたワクチン組成物は、細胞媒介免疫応答を誘発するために使用することができる。
【０２６３】
[00264]本明細書において使用する、免疫応答を「誘発する」は、免疫応答を導き出すこと及び／又は強化することである。免疫応答を誘発することは、免疫応答が、増強され、高められ、改善され又は強められて、免疫応答状態の前、例えば、本明細書で開示された組成物の投与前と比較して、ホストの利益になる場合を包含する。
【０２６４】
[00265]本明細書において使用する、用語「細胞媒介免疫応答」、「細胞性免疫」、「細胞性免疫応答」又は「細胞傷害性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）免疫応答」（本明細書では互換的に使用される）は、抗原に対する応答による、マクロファージ及びナチュラルキラー細胞の活性化、抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の産生及び／又は種々のサイトカインの放出により特徴づけられる免疫応答を指す。細胞傷害性Ｔリンパ球は、感染した体細胞又は腫瘍細胞の死を誘発することができるＴリンパ球の亜群（白血球のタイプ）であり、それらはウイルス（又は他の病原体）に感染した細胞、又は他の理由で損傷したか又は機能不全である細胞を殺滅する。
【０２６５】
[00266]大部分の細胞傷害性Ｔ細胞は、クラスＩのＭＨＣ分子に結合している特異的ペプチド抗原を認識することができるＴ細胞受容体を発現する。典型的には、細胞傷害性Ｔ細胞は、ＣＤ８（即ちＣＤ８＋Ｔ細胞）も発現し、それはクラスＩのＭＨＣ分子の一部分に引きつけられる。この親和性は、抗原特異的活性化の間、細胞傷害性Ｔ細胞と標的細胞を密接に結合させて一緒に保つ。
【０２６６】
[00267]細胞性免疫は、例えば、それらの表面に外来性抗原のエピトープを表示している身体の細胞、例えば、ウイルスに感染した細胞、細胞内に細菌がいる細胞、及び腫瘍抗原を表示している癌細胞などを溶解することができる抗原特異的細胞傷害性Ｔ−リンパ球（例えば、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞）を活性化することにより；マクロファージ及びナチュラルキラー細胞を活性化して、それらが細胞内病原体を破壊できるようにすることにより；及び適応性の免疫応答及び生来の免疫応答に関与する他の細胞の機能に影響する種々のサイトカインを分泌する細胞を刺激することにより、身体を保護する。
【０２６７】
[00268]細胞性免疫は、適応性の免疫応答の重要な成分であり、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞、Ｂリンパ球及び程度は低いがマクロファージなどとそれらの相互作用を通した細胞による抗原の認識に従って、種々の機構、例えば：
１．外来性抗原のエピトープをそれらの表面に表示している身体の細胞、例えば、ウイルスに感染した細胞、細胞内に細菌がいる細胞、及び腫瘍抗原を表示している癌細胞などにおいて、アポトーシスを誘発することができる抗原特異的細胞傷害性Ｔ−リンパ球を活性化すること；
２．マクロファージ及びナチュラルキラー細胞を活性化して、それらが細胞内病原体を破壊できるようにすること；及び
３．適応性の免疫応答及び生来の免疫応答に関与する他の細胞の機能に影響する種々のサイトカインを分泌するように細胞を刺激すること
により、身体を保護する。
【０２６８】
[00269]細胞媒介免疫は、ウイルスに感染した細胞を除去することに最も効果的であるが、カビ、原生動物、癌、及び細胞内細菌に対する防御にも加わる。それは移植拒絶においても主要な役割を担う。
【０２６９】
[00270]細胞媒介免疫は、種々の細胞のタイプの参加を包含し、様々な機構により媒介されるので、数通りの方法をワクチン接種による免疫の誘発を示すために使用することができる。これらは、ｉ）特異的抗原提示細胞；ｉｉ）特異的エフェクター細胞及びそれらの機能及びｉｉｉ）サイトカインなどの可溶性メディエーターの放出の検出に広く分類することができる。
【０２７０】
[00271]ｉ）抗原提示細胞：樹状細胞及びＢ細胞（及び程度がより低いマクロファージ）は、Ｔ細胞の増強された活性化を可能にする特別の免疫刺激性受容体を備えており、専門的抗原提示細胞（ＡＰＣ）と称される。これらの免疫刺激物質分子（共刺激分子とも呼ばれる）は、感染又はワクチン接種の後、ＣＤ４及びＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞などのエフェクター細胞に抗原を提供する過程の間、これらの細胞（ＡＰＣ）で上方制御されている。そのような共刺激分子（ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩなど）は、例えば、これらの分子に向けられた蛍光色素−コンジュゲート抗体を、特にＡＰＣ（樹状細胞に対するＣＤ１１ｃなど）を同定する抗体と共に用いるフローサイトメトリーを使用することにより検出され得る。
【０２７１】
[00272]ｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞：（Ｔｃ、キラーＴ細胞、又は細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）としても公知である）は、ウイルス（及び他の病原体）に感染しているか、又は腫瘍抗原を発現する細胞の死を誘発するＴ細胞の亜群である。これらのＣＴＬは、ある外来性又は異常な分子をそれらの表面に有する他の細胞を直接攻撃する。そのような細胞の細胞傷害性の能力は、インビトロで細胞溶解アッセイ（クロム放出アッセイ）を使用して検出することができる。したがって、適応性の細胞性免疫の誘発は、そのような細胞傷害性Ｔ細胞の存在により示すことができ、その場合、抗原を搭載する標的細胞がインビボにおいてワクチン接種又は感染の後で生じた特異的ＣＴＬにより溶解される。
【０２７２】
[00273]ナイーブな細胞傷害性Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が、ペプチドの結合したＭＨＣクラスＩ分子と強く相互作用する場合に活性化される。この親和性は、抗原／ＭＨＣ複合体のタイプ及び配向に依存して、ＣＴＬと感染した細胞とを結合させて一緒に保つ性質である。ひとたび活性化されると、ＣＴＬは、それが機能性を獲得して急速に分裂するクローン増殖と呼ばれる過程を経て、「武装された」エフェクター細胞の大群を生ずる。活性化されたＣＴＬは、次にその固有のＭＨＣクラスＩ＋ペプチドを担持する細胞を探して身体中をくまなく移動すると予想される。これは、フローサイトメーターによるアッセイでペプチドＭＨＣクラスＩテトラマーを使用することによりインビトロで、そのようなＣＴＬを同定するために使用することができた。
【０２７３】
[00274]これらの感染した又は機能不全の体細胞に曝されたときに、エフェクターＣＴＬは、パーフォリン及びグラニュリシン：標的細胞のプラズマ膜に孔を開けて、イオン及び水を感染した細胞中に流入させて、それを破裂又は溶解させる細胞毒を放出する。ＣＴＬは、グランザイム、細胞に孔を通って進入し、アポトーシス（細胞死）を誘発するセリンプロテアーゼを放出する。ＣＴＬからのこれらの分子の放出は、ワクチン接種後の細胞媒介免疫応答の誘発の成功の測定として使用することができる。これは、ＣＴＬを定量的に測定することができる酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）又は酵素免疫スポットアッセイ（ＥＬＩＳＰＯＴ）により行うことができる。ＣＴＬは、ＩＦＮ−γなどの重要なサイトカインを測定することもできるので、ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８細胞の定量的測定は、これらの細胞における細胞内ＩＦＮ−γのＥＬＩＳＰＯＴ及びフローサイトメーターによる測定により達成することができる。
【０２７４】
[00275]ＣＤ４＋「ヘルパー」Ｔ細胞：ＣＤ４＋リンパ球、又はヘルパーＴ細胞は、免疫応答メディエーターであり、適応性のある免疫応答の性能の確立及び最大化に重要な役割を担う。これらの細胞は、細胞傷害性又は食作用の活性はなく；感染した細胞を殺滅すこと又は病原体を除去することはできないが、他の細胞にこれらの役割を実施するように指示することにより、免疫応答を本質的に「運営する」。２つのタイプのエフェクターＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞応答が専門的ＡＰＣにより誘発され得、Ｔｈ１及びＴｈ２と名付けられ、各々異なるタイプの病原体を排除するように設計されている。
【０２７５】
[00276]ヘルパーＴ細胞は、クラスＩＩのＭＨＣ分子に結合した抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。ナイーブなヘルパーＴ細胞の活性化は、それにサイトカイン放出を起こさせて、そのことが、それを活性化させたＡＰＣを含む多くの細胞タイプの活性に影響する。ヘルパーＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞よりもはるかに穏やかな活性化の刺激を必要とする。ヘルパーＴ細胞は、細胞傷害性細胞の活性化を「助長する」特別のシグナルを提供することができる。２つのタイプのエフェクターＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞応答が、専門的ＡＰＣにより誘発され得て、Ｔｈ１及びＴｈ２と名付けられ、各々異なるタイプの病原体を排除するように設計されている。これら２種のＴｈ細胞集団は、エフェクタータンパク質（サイトカイン）産生のパターンが異なる。一般的に、Ｔｈ１細胞は、マクロファージ及び細胞傷害性Ｔ細胞の活性化により細胞媒介免疫応答を助け；それに対してＴｈ２細胞は、プラズマ細胞に変換するようにＢ細胞を刺激して抗体の形成による液性免疫応答を助長する。例えば、Ｔｈ１細胞により調節される応答は、マウスでｌｇＧ２ａ及びｌｇＧ２ｂ（ヒトにおけるＩｇＧＩ及びｌｇＧ３）を誘発して、抗原に対する細胞媒介免疫応答に助力することができる。抗原に対するＩｇＧ応答がＴｈ２タイプの細胞により調節される場合には、それは、マウスでＩｇＧＩの産生（ヒトにおけるｌｇＧ２）を主に強化することができる。Ｔｈ１又はＴｈ２応答に関連するサイトカインの測定は、ワクチン接種の成功の尺度になると予想される。これは、Ｔｈ１−サイトカイン、例えば、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αその他など、又はＴｈ２−サイトカイン、例えば、とりわけＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ１０のために設計された特異的ＥＬＩＳＡによって達成することができる。
【０２７６】
[00277]ｉｉｉ）サイトカインの測定：局所のリンパ節から放出されて免疫の成功の良い示度を与える。抗原提示細胞及びＡＰＣ及び免疫エフェクター細胞、例えば、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の成熟の結果として、数通りのサイトカインがリンパ節細胞により放出される。これらのＬＮＣをインビトロで、抗原の存在下に培養することにより、抗原特異的免疫応答は、ある重要なサイトカイン、例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α及びＧＭ−ＣＳＦの放出を測定することにより検出することができる。これは、培養上清及び標準として組換えサイトカインを使用してＥＬＩＳＡにより行うことができる。
【０２７７】
[00278]成功した免疫は、当業者公知の機能性抗体を検出するための多くの方法で決定することができ、そのような方法としては、血球凝集阻害（ΗＡＩＪ）及び血清中和阻害アッセイ；ワクチン接種の効力を決定するために、ワクチン接種された対象が関連する病原体で攻撃される攻撃研究；及び特異的細胞表面マーカーを発現する細胞の集団を決定するための、例えば、活性化された又は記憶リンパ球を同定するための蛍光性の活性化された細胞選別（ＦＡＣＳ）の使用を含むが、これらに限定されない。当業者は、本明細書で開示された組成物を用いる免疫が抗体及び／又は細胞媒介免疫応答を導き出したかどうかを、他の公知の方法を使用して決定することもできる。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｌｉｇａｎら編（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、２００７年）を参照されたい。
【０２７８】
[00279]幾つかの実施形態において、本明細書で開示されたワクチン組成物は、抗体免疫応答を誘発するために使用することもできる。
【０２７９】
[00280]細胞媒介免疫に対する「抗体免疫応答」又は「液性の免疫応答」（本明細書では互換的に使用される）は、Ｂリンパ球系統の細胞（Ｂ細胞）で産生されて分泌された抗体により媒介される。そのような分泌された抗体は、例えば、外来性物質、病原体（例えばウイルス、細菌など）及び／又は癌細胞の表面にある抗原などに結合して、破壊するために目印を付ける。
【０２８０】
[00281]本明細書において使用する、「液性免疫応答」とは、抗体産生を指し、それに加えて、又はその代わりにそれに伴う付属の過程、例えば、Ｔヘルパー２（Ｔｈ２）又はＴヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞の発生及び／又は活性化、サイトカインの産生、アイソタイプスイッチ、親和性成熟及び記憶細胞の活性化なども含むことができる。「液性の免疫応答」は、抗体のエフェクター機能、例えば、毒素中和、古典的補体活性化、及び食作用の助長及び病原体排除なども含むことができる。液性の免疫応答は、しばしばＣＤ４＋Ｔｈ２細胞により助けられ、それ故この細胞タイプの活性化又は発生は、液性の免疫応答を示すこともできる。用語「液性の免疫応答」は、本明細書では「抗体応答」又は「抗体免疫応答」と互換的に使用される。
【０２８１】
[00282]「抗体」は、実質的に又は部分的に免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされた１つ又は複数のポリペプチドを含むタンパク質である。認識される免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖は、κ又はλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ又はεとして分類されて、それは順送りで免疫グロブリンのクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを、それぞれ規定する。典型的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は、４種のポリペプチドを含有するタンパク質を含む。各抗体の構造単位は、ポリペプチド鎖の、各々１つの「軽」鎖及び１つの「重」鎖を有する２つの同一の対で構成される。各鎖のＮ末端が抗原認識を主に担当する可変領域を定義する。抗体の構造単位（例えば、ＩｇＡ及びＩｇＭクラスの）は、互いに及び追加のポリペプチド鎖と共に集合して、例えばＪ鎖ポリペプチドと会合してＩｇＭペンタマーとして、オリゴマー形態になることもできる。
【０２８２】
[00283]抗体は、Ｂリンパ球（Ｂ細胞）と呼ばれる白血球のサブセットの抗原特異的糖タンパク質の生成物である。抗原のＢ細胞の表面に発現された抗体との係り合いが、活性化されて、有糸分裂を経て最後にプラズマ細胞に分化するＢ細胞の刺激を含む抗体応答を誘発することができて、プラズマ細胞は抗原特異的抗体の合成及び分泌のために特殊化されている。
【０２８３】
[00284]Ｂ細胞は、免疫応答中に抗体を産生する唯一の細胞であり、したがって効果的な液性免疫にとって非常に重要な要素である。それは大量の抗体を産生することに加えて、Ｂ細胞は、抗原提示細胞としても作用して、ＴヘルパーＣＤ４又は細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞に抗原を呈示することができ、その結果、免疫応答を伝播させる。Ｂ細胞並びにＴ細胞は、適応性の免疫応答の一部である。例えば、ワクチン接種又は天然感染のいずれかにより誘発された活性な免疫応答中に、抗原特異的なＢ細胞が活性化されて、クローン増殖する。増殖中に、Ｂ細胞は、エピトープに対するより高い親和性を有するように進化する。Ｂ細胞の増殖は、活性化されたヘルパーＴ細胞により間接的に、及びＴＬＲなどの受容体の刺激により直接にも誘発され得る。
【０２８４】
[00285]抗原提示細胞、例えば、樹状細胞及びＢ細胞などは、ワクチン接種部位に引き寄せられ、ワクチン組成物に含有される抗原及びアジュバントと相互作用することができる。典型的には、アジュバントは、細胞を刺激して活性化させ、抗原が標的のための青写真を提供する。異なるタイプのアジュバントが、異なる刺激のシグナルを細胞に提供することもできる。例えば、ポリＩ：Ｃ（ＴＬＲ３アゴニスト）は、樹状細胞を活性化することができるが、Ｂ細胞を活性化することはできない。アジュバント、例えば、ＰＡＭ３Ｃｙｓ、ＰＡＭ２Ｃｙｓ及びＦＳＬ−１などは、Ｂ細胞の増殖を活性化して開始させることに特に熟達しており、それは抗体応答が生ずることを容易にすると期待される（Ｍｏｙｌｅら、Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、２００８年；Ｓｏ．、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１２年）。
【０２８５】
[00286]液性の免疫応答は、効果的な感染性疾患のワクチンのための一般的な機構の１つである（例えば、ウイルス又は細菌の侵入に対する保護のために）。しかしながら、液性の免疫応答は、癌と闘うために役立つこともできる。癌ワクチンは、典型的には、癌細胞を認識して破壊することができる細胞媒介免疫応答を生ずるように設計されているが、Ｂ細胞媒介応答は、幾つかの場合に最大の利益のために細胞傷害性Ｔ細胞と協同することができる他の機構を通じて、癌細胞を標的とすることもできる。Ｂ細胞に媒介（例えば液性の免疫応答媒介）される抗腫瘍応答の例には、１）腫瘍細胞又は腫瘍形成に影響する他の細胞に見出される表面抗原に結合するＢ細胞により産生された抗体。そのような抗体は、例えば、抗体依存性の細胞に媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体固定により標的細胞の殺滅を誘発することができ、免疫系により認識され得る追加の抗原の放出を生ずる可能性がある；２）腫瘍細胞上の受容体に結合し、それらの刺激を遮断して、結果においてそれらの効果を中和する抗体；３）腫瘍又は腫瘍に関連する細胞により又は関連して放出された因子に結合し、癌を支持するシグナル伝達又は細胞の経路を変調させる抗体；及び４）細胞内標的に結合し、現在未知の機構により抗腫瘍活性を媒介する抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０２８６】
[00287]抗体応答を評価する１つの方法は、特定の抗原と反応性の抗体の力価を測定することである。これは、当技術分野で公知の種々の方法、例えば、動物から得られた抗体を含有する物質の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して実施することができる。例えば、特定の抗原に結合する血清抗体の力価は、抗原に対する曝露の前及び後の両方の対象において決定することができる。抗原に曝露後の抗原特異的抗体の力価における統計的に有意の増大は対象が抗原に対する抗体の応答を上げたことを示すと予想される。
【０２８７】
[00288]抗原特異的抗体の存在を検出するために使用することができる他のアッセイは、免疫学的アッセイ（例えば放射免疫測定（ＲＩＡ））、免疫沈降アッセイ、及びタンパク質ブロット（例えばウェスタンブロット）アッセイ；及び中和アッセイ（例えば、インビトロ又はインビボアッセイにおけるウイルスの感染力の中和）を含むが、これらに限定されない。
【０２８８】
[00289]本明細書で開示されたワクチン組成物は、細胞媒介免疫応答又は液性の免疫応答により緩和される疾患及び／又は障害を治療又は予防するために有用であり得る。ワクチンは、抗原を対象に投与して、細胞媒介免疫応答又は液性免疫応答を誘発することが望ましい任意の場合に適用を見出すことができる。
【０２８９】
[00290]一実施形態において、本開示は、本発明に記載された組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。幾つかの実施形態において、該方法は、前記対象における前記抗原に対して抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答を誘発するためのものである。幾つかの実施形態において、該方法は、細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、アレルゲン、又は抗原を発現する腫瘍細胞により惹起された疾患の治療及び／又は予防のためである。
【０２９０】
[00291]本明細書において使用する「治療すること」又は「の治療」、又は「予防すること」又は「の予防」は、有益な又は所望の結果を得るための手法を指す。有益な又は所望の結果は、１つ又は複数の症状又は状態の軽減又は軽快、疾患の程度の縮小、疾患の状態の安定化、疾患の発生の予防、疾患の広がりの予防、疾患進行の減速又は低下（例えば抑制）、疾患発症の遅延又は低下、疾患の原因となる作用物質に対する防御免疫の授与及び疾患状態の軽快又は一時的軽減を含むことができるが、これらに限定されない。「治療すること」又は「予防すること」は、患者の生存を、治療の不在で予想される生存を超えて延長させることを意味することもでき、及び疾患の進行を一時的に阻止すること又は対象における感染を予防することなどにより疾患の発生を予防することも意味することができる。「治療すること」又は「予防すること」は、腫瘍質量のサイズにおける低下、腫瘍の進行の速さの低下なども指すことができる。
【０２９１】
[00292]「治療すること」は、典型的には、疾患又は障害をすでに有するか、又は感染性作用物質にすでに曝露されたことがわかっている対象において行われるが、それに対して「予防する」は、典型的には、疾患又は障害を有しないか、又は感染性作用物質の曝露されたことがわかっていない対象において行われることにおいて、「予防する」と区別することができる。認識されるように、治療と予防には重なりもあり得る。例えば、対象における疾患を「治療している」が、その一方で同時に疾患の症状又は進行を「予防する」ことは可能である。その上、少なくともワクチン接種の関係では、「治療すること」と「予防すること」とは、対象の治療は、病原体による感染を予防するか又は病原体による感染により惹起される潜在する疾患若しくは症状を予防するその後の効果を有し得る免疫応答を誘発することであることにおいて重なり合うこともある。これらの予防的態様は、本明細書では「感染性疾患の治療」又は「癌の治療」などの表現によって包含される。
【０２９２】
[00293]一実施形態において、本明細書で開示された方法及び組成物は、癌を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために使用するためのものであることもできる。対象は、癌を有することもあり、又は癌を発生するリスクがあることもある。
【０２９３】
[00294]本明細書において使用する用語「癌」、「癌細胞」、「腫瘍」及び「腫瘍細胞」（互換的に使用される）は、細胞増殖の制御の有意の喪失又は不死化された細胞により特徴づけられる異常な成長を示す細胞を指す。用語「癌」又は「腫瘍」は、転移並びに非転移の癌又は腫瘍を含む。癌は、悪性腫瘍の存在を含む、当分野で一般的に受け入れられている基準を使用して診断され得る。
【０２９４】
[00295]本明細書で開示された組成物の使用又は投与により治療及び／又は予防され得る癌は、癌腫、腺癌、リンパ腫、白血病、肉腫、芽細胞腫、骨髄腫、及び胚芽細胞腫瘍を含むが、これらに限定されない。特に適当な実施形態は、膠芽細胞腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、乳癌、輪卵管癌、前立腺癌又は腹腔内癌を含むことができるが、これらに限定されない。一実施形態において、癌は、ウイルスなどの病原体により惹起されることもある。癌の発生と関連するウイルスは、当業者に知られており、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｊｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルス（ＪＣＶ）、ヒトヘルペスウイルス８、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、メルケル細胞ポリオーマウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス及びヒトＴ細胞白血病ウイルス−１を含むが、これらに限定されない。別の実施形態において、癌は、１つ又は複数の癌特異抗原（例えばサバイビン）を発現するものであってもよい。
【０２９５】
[00296]特定の実施形態において、癌は、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、輪卵管癌、腹腔内癌、膠芽細胞腫又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【０２９６】
[00297]本明細書で開示された方法及び組成物は、癌の治療又は予防のいずれのためにも有用であり得る；例えば、癌の重症度（例えば、腫瘍のサイズ、進行の速さ及び／又は侵襲性、悪性など）の低下又は癌再発の予防など。
【０２９７】
[00298]別の実施形態において、本明細書で開示された方法及び組成物は、例えば、ウイルス感染などにより惹起された感染性疾患を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために使用することができる。対象は、ウイルスに感染していてもよいし、又はウイルス感染を発生するリスクを有していてもよい。本明細書で開示された組成物の使用又は投与により治療及び／又は予防され得るウイルス感染は、限定されないが、牛痘ウイルス、ワクシニアウイルス、偽牛痘ウイルス、ヒトヘルペスウイルス１、ヒトヘルペスウイルス２、サイトメガロウイルス、ヒトアデノウイルスＡ−Ｆ、ポリオーマウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、パルボウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、オルトレオウイルス、ロタウイルス、エボラ出血熱ウイルス、パラインフルエンザウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、はしかウイルス、おたふく風邪ウイルス、風疹ウイルス、ニューモウイルス、ヒトＲＳウイルス、狂犬病ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、ハンターンウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、コロナウイルス、エンテロウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、ノロウイルス、フラビウイルス、デング熱ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス及び水疱瘡である。特定の実施形態において、ウイルス感染は、ヒトパピローマウイルス、エボラ出血熱ウイルス、ヒトＲＳウイルス又はインフルエンザウイルス。
【０２９８】
[00299]別の実施形態において、本明細書で開示された方法又は組成物は、例えば、非ウイルス病原体（細菌又は原生動物など）により惹起される感染性疾患を、それらを必要とする対象において治療及び／又は予防するために使用することもできる。対象は、病原体に感染していることもあり、又は病原体による感染を発生するリスクがあることもある。典型的な細菌の病原体は、炭疽（炭疽菌）、ブルセラ、百日咳菌、カンジダ、肺炎クラミジア、オウム病クラミジア、コレラ、ボツリヌス菌、コクシジオイデス・イミチス、クリプトコッカス、ジフテリア、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、腸管出血性大腸菌、腸内毒素原性大腸菌、インフルエンザ菌、ピロリ菌、レジオネラ、レストスピラ、リステリア、髄膜炎菌、肺炎マイコプラズマ、マイコバクテリア、百日咳、肺炎、サルモネラ、赤痢菌、ブドウ球菌、肺炎球菌及びエンテロコリチカ菌を含むことができるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、細菌感染は炭疽である。典型的原生動物病原体は、マラリアを惹起するプラスモディウム属（熱帯熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫又は二日熱マラリア原虫）を含むこともあるが、これらに限定されない。
【０２９９】
[00300]別の実施形態において、本明細書で開示された方法又は組成物は、抗原の発現と関連する神経変性疾患を、それらを必要とする対象において、治療及び／又は予防するために使用することができる。対象は、神経変性疾患を有していることもあり、又は神経変性疾患を発生するリスクがあることもある。本明細書で開示された方法又は組成物により治療及び／又は予防され得る神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３００】
[00301]別の実施形態において、本明細書で開示された方法又は組成物は、習慣性疾患（例えば、コカイン習慣性など）を治療及び／又は予防するために使用することもできる。
【０３０１】
[00302]別の実施形態において、本明細書で開示された方法又は組成物は、毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを抗体で中和するために使用することができて、前記方法は、本発明に記載された組成物を対象に投与することを含む。例えば、ワクチン中の抗原に応答する抗体産生は、毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを中和又は隔離することができる。一実施形態において、毒素は、例えば、コカインなどの薬物である。
【０３０２】
[00303]ワクチン組成物を調製する方法
【０３０３】
[00304]アジュバント系及びワクチン組成物は、実施例に記載された方法を含むが、これらに限定されない本開示と関係のある当技術分野で公知の方法により調製することができる。本明細書で開示されたアジュバント系及びワクチン組成物を調製するための典型的実施形態は、下に記載されるが、これらに限定されない。
【０３０４】
[00305]この節で使用される用語「抗原」は、抗原が本開示のワクチン組成物でどのように製剤化され得るかを一般的に説明するために使用される。用語「抗原」は、単数形の「抗原」及び複数形の「抗原」の両方を包含する。全ての抗原が、ワクチン組成物中に同様に導入されることは必要ではない。
【０３０５】
[00306]ワクチン組成物を調製するための一実施形態において、抗原、アジュバント及び任意選択で他のワクチン成分（例えばＴヘルパーエピトープ）が、適当な溶媒中で両親媒性化合物と一緒に再構成される。次に、ワクチン成分は、乾燥されてケークを形成し、該乾燥ケークは疎水性担体中に再懸濁される。乾燥ステップは、当技術分野で公知の種々の手段、例えば、フリーズドライ、凍結乾燥、回転蒸発、減圧蒸発などにより実施することができる。成分の完全性を損なわない低温乾燥も使用することができる。加熱も抗原／両親媒性化合物の混合物の再懸濁を助けるために使用することができる。
【０３０６】
[00307]「適当な溶媒」は、抗原、アジュバント及び／又は両親媒性化合物を可溶性化するために適当な溶媒であり、当業者により決定され得る。一実施形態において、リン酸ナトリウム緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ６．０）又はリン酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）を使用することができる。別の実施形態において、極性プロトン性溶媒、例えば、アルコール（例えば、ｔｅｒｔブタノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、エタノール又はメタノール）、水、酢酸塩緩衝液、ギ酸又はクロロホルムが使用され得る。幾つかの場合、同じ溶媒を、両親媒性化合物、抗原及びアジュバントの各々を可溶化するために使用することができて、可溶化された成分が次に混合される。或いは、抗原、アジュバント及び両親媒性化合物が、可溶性化に先立って混合されて、次に可溶化されて一緒になってもよい。さらなる代替で、両親媒性化合物、抗原又はアジュバントのうちの１種又は複数のみが可溶化されて、非可溶化成分（１つ又は複数）が添加される。
【０３０７】
[00308]特定の実施形態において、ワクチン組成物を調製するために、抗原及びアジュバントが、一緒に又は別々にリン酸ナトリウム緩衝液中でＳ１００脂質及びコレステロール（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ）と共に再構成される。次に、これらのワクチン成分を凍結乾燥して乾燥ケークを形成させる。注射の直前に、乾燥ケークをＩＳＡ５１  ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）中に再懸濁させて水を含まない油系ワクチン組成物を調製する。
【０３０８】
[00309]別の実施形態では、ワクチン組成物を調製するために、コンジュゲート化された抗原／Ｔヘルパーエピトープを、０．２％ＰＥＧ−Ｈ２Ｏ中で脂質ＤＯＰＣ及びコレステロール（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ）と共に再構成する。ポリＩ：Ｃ及び脂質系アジュバントが、水中で再構成されて、次に抗原−脂質混合物に加えられる。次に、これらのワクチン成分を凍結乾燥して乾燥ケークを形成させる。注射の直前に、乾燥ケークをＩＳＡ５１  ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）中で再懸濁させて水を含まないワクチン組成物を調製する。
【０３０９】
[00310]上の実施形態では、特定の作用理論にとらわれず、溶媒を除去（乾燥）すると、それらの親水性の頭部の基をワクチン成分に向けて配向した両親媒性化合物分子のアレイ中の抗原を含むワクチン成分が残ると考えられる。次に、ワクチン成分及び両親媒性化合物は、それらは十分に疎水性になっているので、水の不在下で疎水性担体（油など）中に再懸濁され得る。
【０３１０】
[00311]本明細書に記載されている追加の成分、例えば、Ｔヘルパーエピトープは、製剤化工程中の任意の段階で添加されてもよい。例えば、１つ又は複数のそのような追加の成分は、抗原、アジュバント及び／又は両親媒性化合物と、可溶性化の前若しくは後のいずれかで配合されてもよく、又は可溶化された混合物に添加されてもよい。別の実施形態において、追加の成分が、代わりに、抗原、アジュバント及び両親媒性化合物の乾燥された混合物に添加されるか若しくは配合されてもよく、又は疎水性担体と抗原、アジュバント及び両親媒性化合物の乾燥混合物の再懸濁の前若しくは後のいずれかで疎水性担体中で配合されてもよい。一実施形態において、Ｔヘルパーエピトープは、抗原と同様にしてワクチン組成物に添加される。一実施形態において、抗原及びＴヘルパーエピトープは融合ペプチドである。
【０３１１】
[00312]幾つかの実施形態において、それらが疎水性担体に再懸濁されるときに、乾燥ケークのワクチン成分の安定化を助けるために、疎水性担体中に乳化剤を含むことが適当なこともある。乳化剤は、抗原、アジュバント及び両親媒性化合物の乾燥混合物を、疎水性担体中に再懸濁して、抗原、アジュバント及び両親媒性化合物を、疎水性担体中で懸濁状態に維持するために十分な量で提供される。例えば、乳化剤は、疎水性担体の約５％〜約１５％重量／重量又は重量／体積で存在することができる。
【０３１２】
[00313]生物学的活性を維持又は化学的安定性を改善して任意のワクチン成分の貯蔵寿命を延長させる糖類、抗酸化剤、又は防腐剤などの安定剤を、上記の組成物に添加することもできる。
【０３１３】
[00314]本明細書で開示されたアジュバント系は、抗原が除外されたことを除いて、ワクチン組成物のために上で記載されたのと同様な方式で調製することができる。次に、水を含まないワクチン組成物を調製するために、抗原は、両親媒性化合物と別に調製され、乾燥され、疎水性担体で再懸濁され、次に、アジュバント系と混合されてもよい。或いは、抗原は、直接アジュバント系に、単独で又は両親媒性化合物と混合後に添加されてもよい。
【０３１４】
[00315]実施形態
【０３１５】
[00316]本開示の特定の実施形態は、以下の
【０３１６】
[00317]（１）
（ａ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；
（ｂ）脂質系アジュバント；
（ｃ）両親媒性化合物；及び
（ｄ）疎水性担体
を含むアジュバント系；
【０３１７】
[00318]（２）脂質系アジュバントが１つ又は複数のリポペプチド（１つ又は複数）を含む、段落（１）のアジュバント系；
【０３１８】
[00319]（３）少なくとも１種のリポペプチドが、脂質成分としてパルミチン酸を含む、段落（２）のアジュバント系；
【０３１９】
[00320]（４）脂質系アジュバントが、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（ＰＡＭ２Ｃｙｓ）又はトリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（ＰＡＭ３Ｃｙｓ）を含む、段落（１）〜（３）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２０】
[00321]（５）脂質系アジュバントがＰＡＭ２Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）又はＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）である、段落（４）のアジュバント系；
【０３２１】
[00322]（６）脂質系アジュバントがＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）である、段落（５）のアジュバント系；
【０３２２】
[00323]（７）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの組合せを含む、段落（１）〜（６）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２３】
[00324]（８）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが二重らせんであり、各ストランドがイノシン又はシチジル残基のホモポリマーである、段落（１）〜（７）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２４】
[00325]（９）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが二重らせんであり、各ストランドが、イノシン及びシチジル残基の両方を含むヘテロポリマーである、段落（１）〜（７）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２５】
[00326]（１０）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、ホモポリマー状のポリＩ：Ｃポリヌクレオチド及びヘテロポリマー状のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの両方を含む混合物である、段落（１）〜（７）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２６】
[00327]（１１）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドのアジュバントが、変化するストランド長さのポリＩ及びポリＣの混合物であり、前記混合物は約９８９，４８６ダルトンの分子量を有する、段落（１）〜（７）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２７】
[00328]（１２）両親媒性化合物が脂質である、段落（１）〜（１１）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３２８】
[00329]（１３）脂質が抗原の周りに閉じた小胞構造を形成する、段落（１２）のアジュバント系；
【０３２９】
[00330]（１４）閉じた小胞構造が、単一層の小胞構造又は二重層の小胞構造である、段落（１３）のアジュバント系；
【０３３０】
[00331]（１５）単一層の小胞構造がミセルである、段落（１４）のアジュバント系；
【０３３１】
[00332]（１６）二重層の小胞構造が単ラメラの又は多ラメラ状のリポソームである、段落（１４）のアジュバント系；
【０３３２】
[00333]（１７）脂質がリン脂質又はリン脂質の混合物である、段落（１２）〜（１６）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３３３】
[00334]（１８）リン脂質が、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）又はＤＯＰＣを含むリン脂質の混合物である、段落（１７）のアジュバント系；
【０３３４】
[00335]（１９）リン脂質が、レシチン又はレシチンを含むリン脂質の混合物である、段落（１７）のアジュバント系；
【０３３５】
[00336]（２０）レシチンがＬｉｐｏｉｄ  Ｓ１００である、段落（１９）のアジュバント系；
【０３３６】
[00337]（２１）担体が油又は油の混合物である、段落（１）〜（２０）のいずれか１つのアジュバント系；
【０３３７】
[00338]（２２）担体が、植物油、ナッツ油、又は鉱油を含む、段落（２１）のアジュバント系；
【０３３８】
[00339]（２３）担体が、鉱油であるか又は鉱油溶液中のマンニドオレエートである、段落（２２）のアジュバント系；
【０３３９】
[00340]（２４）担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ  ５１  ＶＧである、段落（２３）のアジュバント系；
【０３４０】
[00341]（２５）
（ａ）抗原、
（ｂ）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、
（ｃ）脂質系アジュバント、
（ｄ）両親媒性化合物、及び
（ｅ）疎水性担体
を含み、水を含まないか又は水を実質的に含まない組成物；
【０３４１】
[00342]（２６）水を含まない段落（２５）の組成物；
【０３４２】
[00343]（２７）担体の合計重量に基づき重量／重量で、約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％又は０．０１％未満の水を含む、段落（２５）の組成物；
【０３４３】
[00344]（２８）脂質系アジュバントが、１つ又は複数のリポペプチド（１つ又は複数）を含む、段落（２５）〜（２７）のいずれか１つの組成物；
【０３４４】
[00345]（２９）少なくとも１種のリポペプチドが、脂質成分としてパルミチン酸を含む、段落（２８）の組成物；
【０３４５】
[00346]（３０）脂質系アジュバントが、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（ＰＡＭ２Ｃｙｓ）又はトリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（ＰＡＭ３Ｃｙｓ）を含む、段落（２５）〜（２９）のいずれか１つの組成物；
【０３４６】
[00347]（３１）脂質系アジュバントが、ＰＡＭ２Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）又はＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）である、段落（３０）の組成物；
【０３４７】
[00348]（３２）脂質系アジュバントが、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）である、段落（３１）の組成物；
【０３４８】
[00349]（３３）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの組合せを含む、段落（２５）〜（３２）のいずれか１つの組成物；
【０３４９】
[00350]（３４）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが二重らせんであり、各ストランドがイノシン又はシチジル残基のホモポリマーである、段落（２５）〜（３３）のいずれか１つの組成物；
【０３５０】
[00351]（３５）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが二重らせんであり、各ストランドがイノシン及びシチジル残基の両方を含むヘテロポリマーである、段落（２５）〜（３３）のいずれか１つの組成物；
【０３５１】
[00352]（３６）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、ホモポリマー状のポリＩ：Ｃポリヌクレオチド及びヘテロポリマー状のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドの両方を含む混合物である、段落（２５）〜（３３）のいずれか１つの組成物；
【０３５２】
[00353]（３７）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、変化するストランド長さのポリＩとポリＣとの混合物であり、前記混合物は約９８９，４８６ダルトンの分子量を有する、段落（２５）〜（３３）のいずれか１つの組成物；
【０３５３】
[00354]（３８）両親媒性化合物が脂質である、段落（２５）〜（３７）のいずれか１つの組成物；
【０３５４】
[00355]（３９）脂質が抗原の周りに閉じた小胞構造を形成している、段落（３８）の組成物；
【０３５５】
[00356]（４０）閉じた小胞構造が、単一層の小胞構造又は二重層の小胞構造である、段落（３９）の組成物；
【０３５６】
[00357]（４１）単一層の小胞構造がミセルである、段落（４０）の組成物；
【０３５７】
[00358]（４２）二重層の小胞構造が単ラメラの又は多ラメラ状のリポソームである、段落（４０）の組成物；
【０３５８】
[00359]（４３）脂質が、リン脂質又はリン脂質の混合物である、段落（３８）〜（４２）のいずれか１つの組成物；
【０３５９】
[00360]（４４）リン脂質が、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）又はＤＯＰＣを含むリン脂質の混合物である、段落（４３）の組成物；
【０３６０】
[00361]（４５）リン脂質が、レシチン又はレシチンを含むリン脂質の混合物である、段落（４３）の組成物；
【０３６１】
[00362]（４６）レシチンがＬｉｐｏｉｄ  Ｓ１００である、段落（４５）の組成物；
【０３６２】
[00363]（４７）担体が油又は油の混合物である、段落（２５）〜（４６）のいずれか１つの組成物；
【０３６３】
[00364]（４８）担体が、植物油、ナッツ油、又は鉱油を含む、段落（４７）の組成物；
【０３６４】
[00365]（４９）担体が、鉱油であるか又は鉱油溶液中のマンニドオレエートである、段落（４８）の組成物；
【０３６５】
[00366]（５０）担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ  ５１  ＶＧである、段落（４９）の組成物；
【０３６６】
[00367]（５１）抗原が、ポリペプチド、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、炭水化物、微生物若しくはそれらの一部、又は毒素である、段落（２５）〜（５０）のいずれか１つの組成物；
【０３６７】
[00368]（５２）抗原が、（ｉ）ウイルス、細菌又は原生動物から誘導され、（ｉｉ）膜表面に結合している癌抗原、又は（ｉｉｉ）毒素である、段落（５１）の組成物；
【０３６８】
[00369]（５３）抗原が、エボラ出血熱ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、百日咳菌、炭疽菌又は四日熱マラリア原虫から誘導された、段落（５２）の組成物；
【０３６９】
[00370]（５４）炭疽菌から誘導された抗原が、炭疽毒素から誘導された組換え保護抗原（ＰＡ）である、段落（５３）の組成物；
【０３７０】
[00371]（５５）ＨＰＶから誘導された抗原が、アミノ酸配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）を含む、段落（５３）の組成物；
【０３７１】
[00372]（５６）インフルエンザウイルスから誘導された抗原が組換えＨＡ抗原である、段落（５３）の組成物；
【０３７２】
[00373]（５７）膜表面に結合している癌抗原がサバイビン抗原である、段落（５２）の組成物；
【０３７３】
[00374]（５８）サバイビン抗原が、サバイビンタンパク質（配列番号６９）若しくは改変されたそれらの変形体からのアミノ酸配列を含むペプチド抗原、又は前記ペプチド抗原をコードする核酸分子である、段落（５７）の組成物；
【０３７４】
[00375]（５９）サバイビン抗原が、ＦＥＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７０）；ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７１）；ＬＴＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７２）；ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７３）；ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦ（配列番号７４）；ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号７５）；ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号７６）；又はＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号７７）、又は任意のそれらの組合せから選択されるアミノ酸配列を含むペプチド抗原、又は前記ペプチド抗原をコードする核酸分子である、段落（５７）の組成物；
【０３７５】
[00376]（６０）アミノ酸配列：ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号７１）；ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号７３）；ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号７５）；ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号７６）；及びＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号７７）を含む５種のペプチド抗原の混合物を含む、段落（５７）の組成物；
【０３７６】
[00377]（６１）毒素が薬物、例えばコカインである、段落（５２）の組成物；
【０３７７】
[00378]（６２）抗原が、少なくとも１つのＢ細胞エピトープ、少なくとも１つのＣＴＬエピトープ又はそれらの組合せを含む、段落（２５）〜（６１）のいずれか１つの組成物；
【０３７８】
[00379]（６３）Ｔヘルパーエピトープをさらに含む、段落（２５）〜（６２）のいずれか１つの組成物；
【０３７９】
[00380]（６４）Ｔヘルパーエピトープが、抗原とのコンジュゲート又は融合体である、段落（６３）の組成物；
【０３８０】
[00381]（６５）Ｔヘルパーが、アミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号７９）を含むＰＡＤＲＥ、アミノ酸配列ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号８０）を含む破傷風トキソイドペプチドＦ２１Ｅ；又はアミノ酸配列ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号７８）を含む改変された破傷風毒素ペプチドＡ１６Ｌである、段落（６２）又は（６３）の組成物；
【０３８１】
[00382]（６６）ポリＩ：ＣポリヌクレオチドアジュバントがＴｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニストであり、脂質系アジュバントがＴＬＲ１／２ヘテロダイマーのアゴニストである、段落（２５）〜（６５）のいずれか１種の組成物；
【０３８２】
[00383]（６７）抗体免疫応答及び／又は細胞媒介免疫応答を、単回用量で誘発することができる、段落（２５）〜（６６）のいずれか１つの組成物；
【０３８３】
[00384]（６８）単位用量当たりの低い量のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントを含む、段落（６７）の組成物；
【０３８４】
[00385]（６９）単位用量当たりの低い量が、単位用量当たりのより高い量のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントを含む同一の対照組成物と比較して、増強された免疫原性を提供することができる、段落（６８）の組成物；
【０３８５】
[00386]（７０）組成物が、規定された同一の対照組成物より少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍又は１０倍高い抗体免疫応答を誘発する、段落（６９）の組成物；
【０３８６】
[00387]（７１）単位用量当たりの低い量が、単位用量当たりの等価な量又は単位用量当たりのより高い量のポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントを含み、両親媒性化合物を含まず、油性エマルション組成物として製剤化されている同一の対照組成物と比較して、増強された免疫原性を提供することができる、段落（６８）の組成物；
【０３８７】
[00388]（７２）組成物が、規定された同一の対照組成物と少なくとも等価又はそれより少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍若しくは１０倍高い抗体免疫応答を誘発し、及び／又は同一の対照組成物より少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍若しくは５倍高い細胞性免疫応答を誘発する、段落（７１）の組成物；
【０３８８】
[00389]（７３）単位用量当たりのより高い量は、単位用量当たりの低い量より少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍又は５０倍多い、段落（６９）〜（７２）のいずれか１つの組成物；
【０３８９】
[00390]（７４）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントの単位用量当たりのより高い量が、各用量当たり少なくとも約１０マイクログラム、約１５マイクログラム、又は約２０マイクログラム以上である、段落（６９）〜（７３）のいずれか１つの組成物；
【０３９０】
[00391]（７５）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントの単位用量当たりの低い量が、各用量当たり、約０．２マイクログラム、約０．５マイクログラム、約１マイクログラム、又は約５マイクログラム以下である、段落（６８）〜（７４）のいずれか１つの組成物；
【０３９１】
[00392]（７６）単位用量当たりの低い量が、対象のワクチン接種後約１２週間までに、少なくとも約１５００万、２０００万、２５００万、３０００万又は３５００万の対数化されていない抗体力価で、抗原特異的抗体免疫応答を誘発することができる、段落（６８）〜（７５）のいずれか１つの組成物；
【０３９２】
[00393]（７７）抗体免疫応答及び／又は細胞媒介免疫応答により緩和される疾患又は障害の治療又は予防における使用のための、段落（２５）〜（７６）のいずれか１つの組成物；
【０３９３】
[00394]（７８）細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、アレルゲン、又は抗原を発現する腫瘍細胞により惹起される疾患の治療又は予防における使用のための、段落（２５）〜（７７）のいずれか１つの組成物；
【０３９４】
[00395]（７９）毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを、抗原に対して産生された抗体で中和するための、段落（２５）〜（７７）のいずれか１つの組成物；
【０３９５】
[00396]（８０）段落（２５）〜（７７）のいずれか１つの組成物を、それらを必要とする対象に投与することを含む方法；
【０３９６】
[00397]（８１）前記対象における前記抗原に対する抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答を誘発する方法である、段落（８０）に記載の方法；
【０３９７】
[00398]（８２）細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、アレルゲン、又は抗原を発現する腫瘍細胞により惹起される疾患の治療及び／又は予防のための方法である、段落（８１）に記載の方法；
【０３９８】
[00399]（８３）疾患が、インフルエンザ、ヒトＲＳウイルス、百日咳、炭疽又はマラリアにより惹起された気道感染である、段落（８２）に記載の方法；
【０３９９】
[00400]（８４）疾患が癌である、段落（８２）に記載の方法；
【０４００】
[00401]（８５）抗原の発現と関連する神経変性疾患の治療及び／又は予防のための方法である、段落（８１）に記載の方法；
【０４０１】
[00402]（８６）神経変性疾患がアルツハイマー病である、段落（８５）に記載の方法；
【０４０２】
[00403]（８７）毒素、ウイルス、細菌又はアレルゲンを、抗体で中和するための方法であって、段落（２５）〜（７７）のいずれか１つの組成物を対象に投与することを含む方法；
【０４０３】
[00404]（８８）毒素が、薬物、例えばコカインである、段落（８７）の方法；
【０４０４】
[00405]（８９）１個又は複数の別の容器に、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントであり、任意選択で段落（７）〜（１１）のいずれか１つで規定されたアジュバント；脂質系アジュバントであり、任意選択で段落（２）〜（６）のいずれか１つで規定されたアジュバント；両親媒性化合物であり、任意選択で段落（１２）〜（２０）のいずれか１つで規定された化合物；及び疎水性担体であり、任意選択で段落（２１）〜（２４）のいずれか１つで規定された担体を含むキット；
【０４０５】
[00406]（９０）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント；脂質系アジュバント；両親媒性化合物；及び疎水性担体が各々別の容器中にある、段落（８９）のキット；
【０４０６】
[00407]（９１）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、脂質系アジュバント、及び両親媒性化合物が、一緒に第１の容器中にあり、疎水性担体が第２の容器中にある、段落（８９）のキット；
【０４０７】
[00408]（９２）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントが一緒に第１の容器中にあり、両親媒性化合物が第２の容器中にあり、及び疎水性担体が第３の容器中にある、段落（８９）のキット；
【０４０８】
[00409]（９３）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント及び脂質系アジュバントが一緒に第１の容器中にあり、両親媒性化合物及び疎水性担体が一緒に第２の容器中にある、段落（８９）のキット；
【０４０９】
[00410]（９４）ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが第１の容器中にあり、脂質系アジュバントが第２の容器中にあり、両親媒性化合物及び疎水性担体が一緒に第３の容器中にある、段落（８９）のキット；
【０４１０】
[00411]（９５）抗原をさらに含み、抗原が、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、脂質系アジュバント、両親媒性化合物、疎水性担体、及び／又はそれらの任意の混合物のうちの任意の１つ又は複数と一緒に容器中にあるか；又は抗原が別の容器中にある、段落（８９）〜（９４）のいずれか１つのキット；
【０４１１】
[00412]（９６）抗原が、段落（５１）〜（６２）のいずれか１つで規定された、段落（９５）のキット；
【０４１２】
[00413]（９７）Ｔヘルパーエピトープをさらに含み、Ｔヘルパーエピトープが、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバント、脂質系アジュバント、両親媒性化合物、疎水性担体、抗原のうちの任意の１つ若しくは複数及び／又はそれらの任意の混合物と一緒に容器中にあるか；又はＴヘルパーが別の容器中にある、段落（９５）又は（９６）のキット；
【０４１３】
[00414]（９８）Ｔヘルパーエピトープが抗原と同じ容器中にあり、抗原と分離されたものであるか又は抗原とのコンジュゲート若しくは融合物である、段落（９７）のキット；
【０４１４】
[00415]（９９）Ｔヘルパーが、アミノ酸配列ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号７９）を含むＰＡＤＲＥ、アミノ酸配列ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号８０）を含む破傷風トキソイドペプチドＦ２１Ｅ；又はアミノ酸配列ＡＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号７８）を含む改変された破傷風毒素ペプチドＡ１６Ｌである、段落（９７）又は（９８）のキット；
【０４１５】
[00416]（１００）医薬組成物の調製で使用するための説明書及び／又は対象において抗体応答及び／又は細胞媒介免疫応答の誘発で使用するための説明書をさらに含む、段落（８９）〜（９９）のいずれか１つのキット；
【０４１６】
[00417]（１０１）水を含まないか又は水を実質的に含まない組成物を調製することにおいて使用するためのものであり、水を実質的に含まない組成物が、担体の合計重量に基づき重量／重量で、約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％又は０．０１％未満の水を含む、段落（８９）〜（１００）のいずれか１つのキット；
【０４１７】
[00418]（１０２）脂質系アジュバントが、段落（２）〜（６）のいずれか１つで規定された通りであり、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが段落（７）〜（１１）のいずれか１つで規定された通りであり、両親媒性化合物が段落（１２）〜（２０）のいずれか１つ規定された通りであり、及び／又は疎水性担体が段落（２１）〜（２４）のいずれか１つで規定された通りである、段落（８９）〜（１０１）のいずれか１つのキット；
【０４１８】
[00419]（１０３）脂質系アジュバントが、ＰＡＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１）であり、ポリＩ：Ｃポリヌクレオチドアジュバントが、変化するストランド長さのポリＩとポリＣとの混合物であり、前記混合物が約９８９，４８６ダルトンの分子量を含み；両親媒性化合物が、Ｓ１００脂質とコレステロールとの混合物であるか又はジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）とコレステロールとの混合物であり、疎水性担体がモンタニド（登録商標）ＩＳＡ  ５１  ＶＧである、段落（８９）〜（１０２）のいずれか１つのキット；
を含むが、これらに限定されない。
【０４１９】
[00420]本発明は、以下の実施例によりさらに例示されるが、これらに限定されない。
【実施例】
【０４２０】
[00421]実施例１
【０４２１】
[00422]病原体を含まない、週齢６〜８週間のＣＤ−１マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ、ケベック州）から購入して、研究所の指針に従って収容し、フィルターで制御された空気循環下で水及び食品を随意に摂取させた。
【０４２２】
[00423]全てのワクチンは、炭疽毒素（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）から誘導された組換えＰＡ抗原と共にアジュバントのポリＩ：Ｃ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ、米国）及び／又はＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１、ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ、ドイツ）を用いて調製した。油系の水を含まない製剤を調製するために、抗原及び／又はポリＩ：Ｃ及び／又はＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントを、リン酸ナトリウム緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ６．０）中で、Ｓ１００脂質（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ；１ミリリットル当たり１２０ミリグラム）及びコレステロール（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ；１ミリリットル当たり１２ミリグラム）と共に調製した。次に、この調製物を凍結乾燥して乾燥ケークを形成させた。注射の直前に、乾燥ケークをＩＳＡ５１ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）中に再懸濁させた。最終のワクチン調製物の用量体積は、５０マイクロリットルであり、１マイクログラムのＰＡ抗原（１ミリリットル当たり２０マイクログラム）を、指示された（１ミリリットル当たり２０マイクログラムの濃度）１マイクログラムのポリＩ：Ｃ及び／又はＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントと共に含有した。
【０４２３】
[00424]マウスは、左及び右わき腹に各々２５マイクロリットルとして送達されて筋肉内ワクチン接種を受けた。群１（ｎ＝１０）には、アジュバントを含有しない油系の水を含まない製剤をワクチン接種した。群２（ｎ＝１０）には、ポリＩ：Ｃアジュバントを含有する油系の水を含まない製剤をワクチン接種した。群３（ｎ＝１０）には、Ｐａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントを含有する油系の水を含まない製剤をワクチン接種した。群４（ｎ＝１０）には、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）の両方を含有する油系の水を含まない製剤をワクチン接種した。
【０４２４】
[00425]ワクチンの免疫原性は、ワクチン接種の４、６、８、１２、１６、２０及び２４週間後に採取した血清の終点滴定により決定した。簡単に説明すると、９６ウェルのＥＩＡプレートを、炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）中の１ミリリットル当たり１マイクログラムの組換えＰＡ抗原を用いて、４℃で終夜コーティングした。翌日、プレートを、１００ミリモル濃度のトリス緩衝生理食塩水／ツイーン（ＴＢＳＴ）で洗浄し、１時間３７℃で３％ゼラチン（Ｂｉｏｒａｄ、米国）を用いて封鎖した。プレートをＴＢＳＴで徹底的に洗浄し、次に血清を各プレートの最上列に加えて、上から下に各カラムでＴＢＳＴを用いて１：１希釈物を調製した。各プレートで、陰性対照カラムを血清無添加でインキュベートした。プレートを終夜４℃でインキュベートした。発色させるために、プレートをＴＢＳＴで洗浄し、タンパク質Ｇとアルカリホスファターゼとのコンジュゲート（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、米国）の１：１０００希釈液を加え、１時間３７℃でインキュベートし、次に１００ミリモル濃度のトリス緩衝液（ツイーン無添加）で洗浄し、次にトリス緩衝液中３７℃で、１ミリリットル当たり１マイクログラムの４−ニトロフェニルホスフェートとインキュベートした。ＯＤ４０５をＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて測定した。抗体の終点力価を、陰性対照の平均ＯＤ４０５を超える１標準偏差ＯＤ４０５を得るのに要する希釈倍率の逆数として決定した。値はＬｏｇ（１０）で表す。
【０４２５】
[00426]幾つかの時点で、毒素中和アッセイも実施し、血清中における抗体の機能性を評価した。簡単に説明すると、血清の希釈物を炭疽毒素（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、米国、からの組換えＰＡ及びＬＦタンパク質）と、３０分間３７℃でインキュベートした。次に、血清−毒素調製物を１ウェル当たり５×１０Ｅ４のＪ７７４標的細胞を含有する９６ウェルプレートに加えた。プレートを３７℃／５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。インキュベーション後に細胞の生存能力を決定するために、ＭＴＴを各ウェルに加え、プレートを２時間３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートした。次に、ホルマザンの量をＯＤ５７０でプレートリーダーを使用して測定した。次に、ＯＤ５７０を希釈に対してプロットして、ＥＤ５０を曲線の変曲点から決定した。ＥＤ５０は、Ｌｏｇ（１０）として表す。
【０４２６】
[00427]血清力価の結果を図１ａに示す。統計値はボンフェローニの事後検定を用いて２元分散分析により測定し、群１を各群と各時点で比較した。群４として表した本発明のワクチンは、７時点のうち４時点で、群１に投与されたワクチンにより生じた力価より有意に高い力価を生じた。群２及び３に投与されたワクチンにより生じた力価は、群１の力価より有意に高くはなかった。
【０４２７】
[00428]毒素中和アッセイは、８週目に採取した血清を使用して実施し、結果を図１ｂに示す。統計値をチューキー事後検定を用いて１元分散分析により測定した。群４として表した本発明のワクチンは、群１より有意に高いＥＤ５０を生じた。群２及び３のＥＤ５０は群１と有意に異なることはなかった。
【０４２８】
[00429]このデータは、ポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントの組合せで製剤化された油系の水を含まないワクチンは、アジュバントを含有しない同様な製剤と比較して、長い期間有意に高い抗体力価を生ずることができ、これはこれらのアジュバントのうちの１種のみの使用では達成できないことを示す。このワクチンに対して生じた抗体も増大した機能能力を有する。
【０４２９】
[00430]実施例２
【０４３０】
[00431]病原体を含まない、週齢６〜８週間のＣＤ−１マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ、ケベック州）から購入し、研究所の指針に従って収容し、フィルターで制御された空気循環下で水及び食品随意に摂取させた。
【０４３１】
[00432]全てのワクチンは、組換えＨＡ抗原（Ｈ５Ｎ１、Ａ／Ｖｉｅｔｎａｍ／１２０３／２００４；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）を、アジュバント：Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（Ｂｒｅｎｔａｇｇ、カナダ）、又はポリＩ：Ｃ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ、米国）及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１；ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ、ドイツ）と共に用いて調製した。Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ−アジュバントを含む製剤（アラム）を調製するために、抗原をリン酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）中で調製し、ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌと混合した。最終のワクチン調製物は、５０マイクロリットルの用量体積中に１マイクログラムの抗原を含有した。エマルション製剤を調製するために、抗原及びポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントをリン酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）中で最初に調製し、次にＩＳＡ５１  ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）と１：１（ｖ／ｖ）で混合した。最終のワクチン調製物は、１マイクログラムの抗原を、５０マイクロリットル用量体積中にポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントの各々１又は２０マイクログラム（１ミリリットル当たり２０マイクログラム又は１ミリリットル当たり４００マイクログラムの濃度）と共に含有した。油系の水を含まない製剤を調製するために、抗原及びポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントをリン酸ナトリウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．０）中でＳ１００脂質（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ；１ミリリットル当たり１２０マイクログラム）及びコレステロール（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ；１ミリリットル当たり１２マイクログラム）と共に調製した。次にこの調製物を凍結乾燥して乾燥ケークを形成させた。注射の直前に、乾燥ケークをＩＳＡ５１  ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）中に再懸濁させた。最終のワクチン調製物の用量体積は、５０マイクロリットルであり、１マイクログラムのＨＡ抗原（１ミリリットル当たり２０マイクログラム）を、ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントの各々１又は２０マイクログラム（１ミリリットル当たり２０マイクログラム又は１ミリリットル当たり４００マイクログラムの濃度）と共に含有した。
【０４３２】
[00433]マウスの左及び右わき腹に各々２５マイクロリットルを送達して筋肉内ワクチン接種した。群１（ｎ＝８）には、アラム−アジュバントを含むワクチンを接種した。群２（ｎ＝８）を、各々１マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有する油系の水を含まない製剤でワクチン接種した。群３（ｎ＝８）は、各々２０マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有する油系の水を含まない製剤でワクチン接種した。群４（ｎ＝４）は、各々１マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有するエマルション製剤でワクチン接種した。群５（ｎ＝４）は、各々２０マイクログラムのポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有するエマルション製剤でワクチン接種した。
【０４３３】
[00434]ワクチンの免疫原性は、ワクチン接種の１２週間後に採取した血清の終点滴定により決定した。簡単に説明すると、９６ウェルのＥＩＡプレートを、炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）中の１ミリリットル当たり１マイクログラムの組換えＨＡ抗原を用いて４℃で終夜コーティングした。翌日、プレートを、１００ミリモル濃度のトリス緩衝生理食塩水／ツイーン（ＴＢＳＴ）で洗浄し、１時間３７℃で３％ゼラチン（Ｂｉｏｒａｄ、米国）を用いて封鎖した。プレートをＴＢＳＴで徹底的に洗浄し、次に血清を各プレートの最上列に加えて、上から下に各カラムでＴＢＳＴを用いて１：１希釈物を調製した。各プレートで、陰性対照カラムを血清無添加でインキュベートした。プレートを終夜４℃でインキュベートした。発色させるために、プレートをＴＢＳＴで洗浄し、タンパク質Ｇとアルカリホスファターゼ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、米国）とコンジュゲートの１：１０００希釈液を加えて１時間３７℃でインキュベートして、次に１００ミリモル濃度トリス緩衝液（ツイーン無添加）で洗浄し、次にトリス緩衝液中３７℃で、１ミリリットル当たり１マイクログラムの４−ニトロフェニルホスフェートとインキュベートした。ＯＤ４０５をＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて測定した。抗体の終点力価を、陰性対照の平均ＯＤ４０５を超える１標準偏差ＯＤ４０５を得るのに要する希釈倍率の逆数として決定した。値はＬｏｇ（１０）で表す。結果を図２に示す。
【０４３４】
[00435]結果を表５及び図２に示す。群２として表した本発明のワクチンは、群１、群３及び群４よりも有意に高い応答を生じた（ｐ＜０．０５）。群２と群５の間の応答が有意に異なることはない（ｐ＞０．０５）。統計的有意性は、スチューデントのｔ検定を使用して群の間で計算した。
【０４３５】
[00436]このデータは、油系製剤は、アジュバントポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）（１ミリリットル当たり２０マイクログラム）の低い用量の組合せを使用して、抗原に対して高い抗体力価を生じさせるために使用することができることを示す。応答は、２０×高い用量のアジュバント（１ミリリットル当たり４００マイクログラム）を用いて調製されたエマルション製剤に匹敵し、同じ低い用量のアジュバントを用いたエマルション製剤により生じた応答よりも有意に高い。
【０４３６】
[00437]
【表６】
0006989134.tif 000010
【０４３７】
[00438]実施例３
【０４３８】
[00439]病原体を含まない、週齢６〜８週のＣ５７ＢＬ６マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ、ケベック州）から購入し、研究所の指針に従って収容し、フィルターで制御された空気循環下で水及び食品を随意に摂取させた。
【０４３９】
[00440]全てのワクチンは、抗原ＨＰＶ１６Ｅ７４９−５７（Ｒ９Ｆ：ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ；配列番号２）の普遍的なＴヘルパーエピトープＰＡＤＲＥ（Ｒ９Ｆ−ＰＡＤＲＥ；ＮｅｏＭＰＳ、米国）とのコンジュゲート及びアジュバントのポリＩ：Ｃ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ、米国）及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１；ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ、ドイツ）を用いて調製した。油系の水を含まない製剤を調製するために、Ｒ９Ｆ−ＰＡＤＲＥ抗原を、最初に０．２％ＰＥＧ−Ｈ２Ｏ中に脂質ＤＯＰＣ（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ；１ミリリットル当たり１２０ミリグラム）及びコレステロール（Ｌｉｐｏｉｄ、ドイツ；１ミリリットル当たり１２ミリグラム）と共に希釈した。アジュバント（ポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４；配列番号１）の混合物を水中で調製し、次に抗原−脂質混合物に加えた。次に、ワクチン成分を凍結乾燥して乾燥ケークを形成させた。注射の直前に、乾燥ケークをＩＳＡ５１  ＶＧ油（ＳＥＰＰＩＣ、フランス）中に再懸濁させた。最終のワクチン製剤の用量体積は５０マイクロリットルであり、１マイクログラムのＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥ抗原（１ミリリットル当たり２０マイクログラム）を、０．２マイクログラム（１ミリリットル当たり４マイクログラム）、１．０マイクログラム（１ミリリットル当たり２０マイクログラム）、５．０マイクログラム（１ミリリットル当たり１００マイクログラム）又は１０．０マイクログラム（１ミリリットル当たり２００マイクログラム）のアジュバントと共に含有した。
【０４４０】
[00441]マウスは、右わき腹に５０マイクロリットルとして送達された皮下ワクチンの接種を受けた。群１（ｎ＝４）は、各々０．２マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有する油系の水を含まないワクチン製剤中のＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥでワクチン接種した。群２（ｎ＝４）は、各々１．０マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有する油系の水を含まないワクチン製剤中のＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥでワクチン接種した。群３（ｎ＝４）は、各々５．０マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有する油系の水を含まないワクチン製剤中のＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥでワクチン接種した。群４（ｎ＝４）は、各々１０．０マイクログラム用量のポリＩ：Ｃ及びＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）を含有する油系の水を含まないワクチン製剤中のＲ９Ｆ−ＰＡＤＲＥでワクチン接種した。
【０４４１】
[00442]ワクチン製剤の免疫原性は、免疫の８日後に実施されたＩＦＮ−γのＥＬＩＳＰＯＴアッセイにより評価した。簡単に説明すると、全てのマウスを麻酔して脾臓を取り出した。１匹の未だ抗原に曝されていないマウスも殺滅して、未だ抗原に曝されておらず、ワクチン接種もされていない対照として利用した。単一の細胞懸濁液を調製し、脾臓細胞を抗ＩＦＮ−γをコーティングしたＥＬＩＳＰＯＴプレート（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、米国）のウェルに入れた（１ウェル当たり５００，０００細胞）。細胞を、１ミリリットル当たり１０マイクログラムのＨＰＶ１５Ｅ７４９−５７ペプチド（Ｒ９Ｆ：ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ；配列番号２）又はペプチドを含有しない媒体（バックグラウンド）で、ＥＬＩＳＰＯＴプレート中で１８時間刺激した。翌日、プレートを、ＡＥＣキット（Ｓｉｇｍａ、米国）を使用して発色させ、個々のＩＦＮ−γを分泌する細胞をＩｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートリーダー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ、米国）を使用して数えた。結果を図３に示す。統計処理はチューキーの事後検定を用いて１元分散分析により実施した。
【０４４２】
[00443]群１中のマウスは、Ｒ９Ｆペプチドによる刺激に対して平均４１８±１３スポット形成単位（ＳＦＵ）の応答を生じた。バックグラウンドに対する応答は無視し得るものであった、＜１０ＳＦＵ。群２中のマウスは、Ｒ９Ｆペプチドによる刺激に対して平均２６０±７０ＳＦＵの応答を生じた。バックグラウンドに対する応答は無視し得るものであった、＜１０ＳＦＵ。群３中のマウスは、Ｒ９Ｆペプチドによる刺激に対して平均２４７±７６ＳＦＵの応答を生じた。バックグラウンドに対する応答は無視し得るものであった、＜１０ＳＦＵ。群４中のマウスは、Ｒ９Ｆペプチドによる刺激に対して平均１４９±２５ＳＦＵの応答を生じた。バックグラウンドに対する応答は無視し得るものであった、＜１０ＳＦＵ。この応答は、群１により生じた応答より有意に低い、＊ｐ＜０．０５。
【０４４３】
[00444]これらの結果は、ポリＩ：ＣとＰａｍ３ＣＳＫ４（配列番号１）アジュバントとの組合せは、ワクチン抗原に対して強いＩＦＮ−γの免疫応答を刺激することができ、それは１ミリリットル当たり２００マイクログラム未満の用量で使用されたときに最も効果的であることを示す。
【０４４４】
[00445]本明細書で挙げた全ての公開物及び特許出願は、参照により、恰も個々の各公開物又は特許出願が、具体的に及び個々に参照により組み込まれていることが示されるかのように、本明細書に組み込まれる。任意の公開物の援用は、出願日に先立つその開示のためであり、本発明が先行発明のために、そのような公開物に先立つ権利を与えられないことを容認すると解釈されるべきでない。
【０４４５】
[00446]前述の発明は、例示のために、及び理解を明確にする目的のための例として幾らか詳細に記載されているが、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の精神又は範囲から逸脱することなく、それに対してある一定の変化及び改変が為され得ることは、当業者には容易に明白である。
【０４４６】
[00447]本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、そうでないことが文脈から明らかでない限り、複数の言及を含むことを特に留意しなければならない。他に定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているのと同じ意味を有する。
【０４４７】
[00448]本明細書及び特許請求の範囲において使用する「及び／又は」という句は、そのように連接する構成要素、即ち、ある場合には接続して存在し、他の場合には分離して存在する構成要素の「いずれか又は両方」を意味すると理解されるべきである。「及び／又は」でリストを挙げられた複数の構成要素は、同様に、即ち、そのように連接した構成要素の「１つ又は複数」と解釈されるべきである。他の構成要素は、「及び／又は」の節により特に同定された構成要素以外にも、特に同定されたこれらの構成要素と関係しても又は関係しなくても任意選択で存在し得る。したがって、限定にならない例として、「Ａ及び／又はＢ」に対する言及は、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのオープンエンドの言語と接続して使用される場合、一実施形態においては、Ａのみに（Ｂ以外の構成要素を任意選択で含む）；別の実施形態では、Ｂのみに（Ａ以外の構成要素を任意選択で含む）；さらに別の実施形態では、Ａ及びＢの両方その他に（他の構成要素を任意選択で含む）言及することができる。
【０４４８】
[00449]本明細書及び特許請求の範囲において使用する、「又は」は、上で定義された「及び／又は」と同じ意味を包含すると理解されるべきである。例えば、リストで項目を分離する場合、「又は」又は「及び／又は」は、包括的であると、即ち、少なくとも１つの項目を含むだけでなく、構成要素の数又はリストの２つ以上の項目も含む、及び任意選択で、追加のリストにない項目も含むと解釈されるべきである。
【０４４９】
[00450]明細書中であっても添付の特許請求の範囲中であっても、本明細書で使用される移行用語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「を担持する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「を有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「包含する（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」等は、包括的又はオープンエンドである（即ち、含むが限定しないことを意味する）と理解することができ、それらは、挙げられていない構成要素、材料又は方法のステップを排除しない。移行句「からなる」及び「から本質的になる」だけは、それぞれ、本明細書における特許請求の範囲及び典型的実施形態の段落に関して、閉じた又は半分閉じた移行句である。移行句「からなる」は、特に挙げられていない如何なる要素、ステップ、又は成分も排除する。移行句「から本質的になる」は、範囲を、特定された構成要素、材料又はステップ並びに、開示された及び／又は本出願で請求された本発明の基本的特徴（１つ又は複数）に実質的に影響しない構成要素、材料又はステップに限定する。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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