(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２５のアミノ酸配列または配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなるペプチドを含む化合物であって、該化合物は、カリウムチャネルＫｖ１．３に特異的に結合することが可能であり、かつ、カリウムチャネルＫｖ１．１と比較してカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能であり、
前記配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列が、下記のアミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２４）
であり、上式中、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、ＮおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ
である、前記化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項４】
経口、経鼻、舌下、経皮、静脈内または筋肉内投与に適する、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶の治療または予防のための、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病、脈管炎、橋本病、シェーグレン症候群、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、妊娠性類天疱瘡、痛風、ベーチェット病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群、特発性血小板減少紫斑病、川崎病、エリテマトーデス、重症筋無力症、オプソクローヌスミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、悪性貧血、多発関節炎（イヌ）、原発性胆汁性肝硬変、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血およびヴェーゲナー肉芽腫症からなる群から選択される自己免疫性疾患の治療または予防のための、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
関節リウマチの治療または予防のための、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合して、その活性を阻害することが可能である化合物に関する。本発明は、そのような化合物を含む医薬組成物、ならびに自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶の治療または予防のための前記化合物および前記医薬組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫性疾患は、宿主の免疫応答が外来抗原を自己分子（自己抗原）と区別することができず、それによって異常な免疫応答を誘導するときに出現する一群の８０種を超える異なる疾患である。自己免疫性疾患の原因はまだ不明確であるが、それらは遺伝および環境因子の組合せによって引き起こされると考えられている。
【０００３】
多発性硬化症、乾癬および関節リウマチのような免疫炎症性障害は、共通する病原性原理を共有する。それらの病因は、刺激に応じた慢性炎症性過程を媒介する自己反応性記憶Ｔ細胞によって特徴付けられる。特に、自己免疫性疾患で通常起こる反復抗原チャレンジは、ナイーブ細胞のように同族抗原に遭遇するためにリンパ節に戻る長寿命の中心記憶細胞（ＴＣＭ）を、抗原誘導活性化のためにリンパ節に向かう必要のない短寿命エフェクター記憶細胞（ＴＥＭ）へと分化させる。活性化ＴＥＭ細胞はＴＥＭエフェクターに変化し、それらは炎症部位に速やかに移動し、そこでそれらは大量の炎症誘発性サイトカインを生成する。ＣＤ８＋ＴＥＭ細胞は多量のパーフォリンをさらに生成し、したがって高度に破壊的である。
【０００４】
自己免疫性疾患のための現在の治療法には、抗炎症薬および強力な免疫抑制剤および免疫調節剤の全身使用が含まれる。しかし、これらの薬物は、感染症および新生物のリスクを伴う、例えば免疫系の全体的抑制を含む多数の有害な副作用を引き起こす。さらに、一部の患者では、前記薬物は、臨床的に有意な軽快を誘導することができない。
【０００５】
電位型Ｋｖ１．３Ｋ＋チャネルは、ヒトゲノム中の７６個のカリウムチャネルのうちの１つであり、ヒトＴリンパ球に存在することが見出されている。全てのヒトＴ細胞は、Ｋｖ１．３チャネルならびにカルシウム活性化ＫＣａ３．１を発現し、それらは一緒に、Ｔ細胞の活性化および増殖のために必要なカルシウム流入を相殺するカリウム流出をもたらす。所与の細胞によって発現されるチャネルの数は、その活性化および分化の状態に依存する。抗原または有糸分裂促進因子よって刺激されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＴＥＭ細胞は、概ね４から５倍増加したＫｖ１．３の発現を示し、ヒトのナイーブまたはＴＣＭ細胞は、活性化状態において膜電位およびＣａ２＋シグナル伝達を調節するためにカルシウム活性化ＫＣａ３．１チャネルを上方調節する。
【０００６】
ＴＥＭ細胞でのこの差異的過剰発現を考慮すると、Ｋｖ１．３チャネルは、その病因に自己反応性ＴＥＭ細胞が関わる自己免疫性疾患、例えば多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬および１型糖尿病の治療のためだけでなく、例えば歯周炎などの他の慢性炎症性疾患のための有望な新しいＴＥＭ細胞特異的治療標的となる。
【０００７】
さらに、Ｋｖ１．３チャネルが体重の調節で役割を果たすことが示されている。したがって、Ｋｖ１．３チャネルは、肥満の治療のための有望な標的ともなる。
【０００８】
したがって、Ｋｖ１．３チャネルと強力で特異的な相互作用を示し、その活性を遮断または低減することが可能であるＫｖ１．３チャネル特異的治療化合物の必要性が継続してある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の１つの目的は、カリウムチャネルＫｖ１．３に特異的に結合して、その活性を阻害または低減することが可能である化合物を提供することである。本発明のさらなる目的は、自己免疫性疾患、例えば多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬および／もしくは１型糖尿病、肥満ならびに／または歯周炎の治療で使用するためのそのような阻害性化合物およびそのような阻害性化合物を含む医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
後に続く記載および請求項から明らかになるこれらおよび他の目的は、独立請求項の対象発明によって達成される。好ましい実施形態のいくつかは、従属請求項によって規定される。
【００１１】
第１の態様では、本発明は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２３）
を含むかそれからなる化合物に関し、上式で、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｙ、Ｎ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ、Ｙ、Ｓ、Ｖ、Ａ、Ｌ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００１２】
第１の態様の変形では、本発明は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２３）
を含むかそれからなる化合物に関し、上式で、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｙ、Ｎ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ、Ｙ、Ｓ、Ｖ、Ａ、Ｌ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００１３】
第２の態様では、本発明は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号１）
を含むかそれからなる化合物に関し、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００１４】
第２の態様または別の態様の変形では、本発明は、配列番号１によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物に関し：
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００１５】
第３の態様では、本発明は、アミノ酸配列：
Ｇ−Ｖ−Ｘ１−Ｉ−Ｎ−Ｖ−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２７）
を含むかそれからなる化合物に関し、上式で、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００１６】
第３の態様の変形では、本発明は、配列番号２７によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物に関し：
式中、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００１７】
別の態様では、本発明は、本発明によるアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。
【００１８】
さらに別の態様では、本発明は、本発明による核酸配列を含むベクターをさらに提供する。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は、本発明による核酸配列またはベクターを含む宿主細胞も提供する。
【００２０】
さらに別の態様では、本発明は、本発明による化合物を含む医薬組成物に関する。
【００２１】
さらなる態様では、本発明は、自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶の治療または予防で使用するための本発明による化合物または本発明による医薬組成物にも関する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶の治療または予防のための医薬の製造における、本発明による化合物または本発明による医薬組成物の使用にも関する。
【００２３】
別の態様では、本発明は、それを必要とする哺乳動物に本発明による化合物または本発明による医薬組成物を投与することによって、哺乳動物で自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶を治療または予防する方法に関する。
【００２４】
さらなる態様では、本発明は、本発明による化合物、核酸配列、ベクターまたは医薬組成物を製造する方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１−１】パッチ−クランプによるＫｖ１．３、Ｋｖ１．５およびＫｖ１．１チャネルの阻害の測定を示す図である。
【図１−２】パッチ−クランプによるＫｖ１．３、Ｋｖ１．５およびＫｖ１．１チャネルの阻害の測定を示す図である。
【図１−３】パッチ−クランプによるＫｖ１．３、Ｋｖ１．５およびＫｖ１．１チャネルの阻害の測定を示す図である。
【図１−４】パッチ−クランプによるＫｖ１．３、Ｋｖ１．５およびＫｖ１．１チャネルの阻害の測定を示す図である。
【図１−５】パッチ−クランプによるＫｖ１．３、Ｋｖ１．５およびＫｖ１．１チャネルの阻害の測定を示す図である。
【図１−６】パッチ−クランプによるＫｖ１．３、Ｋｖ１．５およびＫｖ１．１チャネルの阻害の測定を示す図である。
【図２】配列表ｃｇｔｘ５３８〜５４８を示す図である。
【図３−１】化合物１〜８（Ｃ１〜８）の効果を示す図である。  化合物１：ｃｇｔｘ５３８  化合物２：ｃｇｔｘ５３９  化合物３：ｃｇｔｘ５４０  化合物４：ｃｇｔｘ５４１  化合物５：ｃｇｔｘ５４２  化合物６：ｃｇｔｘ５４３  化合物７：ｃｇｔｘ−５４４  化合物８：ｃｇｔｘ５４７左に、外部溶液（黒色）、化合物適用（青色）およびキニジン（灰色）の適用の後の、ｈＥＲＧの電流の例示的トレースを示す。右パネルは、ピーク電流振幅の経時的変化を示す。点線は、化合物適用を示す。各化合物濃度の影響は、１０または２０スイープについて評価した。全ての化合物は、ｈＥＲＧにほとんど影響を及ぼさないようであった。代わりに、キニジンは電流を完全に遮断した。化合物の適用開始から記録したスイープの終わりにかけてランダウンが起こったことに注意する。
【図３−２】化合物１〜８（Ｃ１〜８）の効果を示す図である。  化合物１：ｃｇｔｘ５３８  化合物２：ｃｇｔｘ５３９  化合物３：ｃｇｔｘ５４０  化合物４：ｃｇｔｘ５４１  化合物５：ｃｇｔｘ５４２  化合物６：ｃｇｔｘ５４３  化合物７：ｃｇｔｘ−５４４  化合物８：ｃｇｔｘ５４７左に、外部溶液（黒色）、化合物適用（青色）およびキニジン（灰色）の適用の後の、ｈＥＲＧの電流の例示的トレースを示す。右パネルは、ピーク電流振幅の経時的変化を示す。点線は、化合物適用を示す。各化合物濃度の影響は、１０または２０スイープについて評価した。全ての化合物は、ｈＥＲＧにほとんど影響を及ぼさないようであった。代わりに、キニジンは電流を完全に遮断した。化合物の適用開始から記録したスイープの終わりにかけてランダウンが起こったことに注意する。
【図３−３】化合物１〜８（Ｃ１〜８）の効果を示す図である。  化合物１：ｃｇｔｘ５３８  化合物２：ｃｇｔｘ５３９  化合物３：ｃｇｔｘ５４０  化合物４：ｃｇｔｘ５４１  化合物５：ｃｇｔｘ５４２  化合物６：ｃｇｔｘ５４３  化合物７：ｃｇｔｘ−５４４  化合物８：ｃｇｔｘ５４７左に、外部溶液（黒色）、化合物適用（青色）およびキニジン（灰色）の適用の後の、ｈＥＲＧの電流の例示的トレースを示す。右パネルは、ピーク電流振幅の経時的変化を示す。点線は、化合物適用を示す。各化合物濃度の影響は、１０または２０スイープについて評価した。全ての化合物は、ｈＥＲＧにほとんど影響を及ぼさないようであった。代わりに、キニジンは電流を完全に遮断した。化合物の適用開始から記録したスイープの終わりにかけてランダウンが起こったことに注意する。
【図４】Ｓｆ２１細胞（Ａ）で発現したおよびＴＥＭ細胞（Ｂ）で内因的に発現したＫｖ１．３チャネルの代表的な電圧依存性活性化を示す図である。（Ｃ）電圧依存性Ｋｖ１．３活性化のためのパルスプロトコールを示す図。
【図５】Ｓｆ２１（中央と上の線）およびＴＥＭ細胞（下の線）で発現したＫｖ１．３チャネルの特徴的正規化電圧−電流相関を示す図である。それぞれｎ＝４１、ｎ＝１２およびｎ＝２９。Ｓｆ２１バキュロウイルス発現系では、多量のＫｖ１．３カリウムチャネルを発現することが可能である。
【図６】ＴＥＭ細胞およびＳｆ２１細胞の比較を示す図である。ｃｇｔｘ−５４４によるＳｆ２１（Ａ）およびＴＥＭ（Ｂ）細胞で発現したＫｖ１．３チャネルの遮断。Ｋｖ１．３アンタゴニストペプチドの濃度を増加させたときの代表的な生の電流トレースおよび時間用量応答を示す。
【図７】ラット膝の関節炎の局所誘導の概略図である。
【図８】局所関節炎の誘導後の膝関節の腫脹を示す図である。
【図９】末梢血でのＷＢＣ数に基づく実験動物の免疫状態を示す図である。ＡＩ：関節炎誘導、ナイーブ動物＝ＮａＣｌ「免疫化動物」、免疫化動物＝ｍＢＳＡを含むフロイントアジュバントで処置した動物
【図１０】ｃｇｔｘ−５４４処置と未処置の対照動物の間の膝関節の腫脹の差を示す図（各群：ｎ＝１４；青色：未処置の対照動物；赤色：ｃｇｔｘ−５４４処置動物）である。
【図１１】メトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおける絶対的膝腫脹増加の差の時間経過を示す図である。−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、０日目のメチル化ＢＳＡの関節内注射によって抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）を誘導した。高用量ＭＴＸ療法は、−２１日目に開始してから０日目まで体重１ｋｇにつき１ｍｇのＭＴＸの適用を週１回ｓ．ｃ．で受けた。低用量ＭＴＸ療法は、−３日目に開始してから６日目まで体重１ｋｇにつき１００μｇのＭＴＸの毎日の適用をｉ．ｖ．で受け、ビヒクル対照群は、０日目に開始してから６日目まで０．９％ＮａＣｌの毎日の適用をｉ．ｖ．で受けた。膝腫脹の絶対的増加は、各群で別々の非誘導膝の値と関節炎誘導膝の値の間の差である。値は、平均±ＳＤである。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１回群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝１４）。
【図１２】ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法と比較したメトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおける絶対的膝腫脹増加の差の時間経過を示す図である。−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、０日目のメチル化ＢＳＡの関節内注射によって抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）を誘導した。低用量ＭＴＸ療法は、−３日目に開始してから６日目まで体重１ｋｇにつき１００μｇのＭＴＸの毎日の適用をｉ．ｖ．で受けた。対して、ｃｇｔｘ−５４４療法群は、−３日目に開始してから６日目まで体重１ｋｇにつき１ｍｇのｃｇｔｘ−５４４の毎日の適用をｉ．ｖ．で受け、ビヒクル対照群は、０日目に開始してから０．９％ＮａＣｌの毎日の適用をｉ．ｖ．で同じく受けた。膝腫脹の絶対的増加は、各群で別々の非誘導膝の値と関節炎誘導膝の値の間の差である。値は、平均±ＳＤである。紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色グラフ：ｃｇｔｘ−５４４療法群（Ｉ群；ｎ＝１４）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝１４）。
【図１３】メトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおける相対的膝腫脹増加の差の時間経過を示す図である。−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、０日目のメチル化ＢＳＡの関節内注射によって抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）を誘導した。高用量ＭＴＸ療法は、−２１日目に開始してから０日目まで体重１ｋｇにつき１ｍｇのＭＴＸの適用を週１回ｓ．ｃ．で受けた。低用量ＭＴＸ療法は、−３日目に開始してから６日目まで体重１ｋｇにつき１００μｇのＭＴＸの毎日の適用をｉ．ｖ．で受け、ビヒクル対照群は、０日目に開始してから６日目まで０．９％ＮａＣｌの毎日の適用をｉ．ｖ．で受けた。膝腫脹の相対的増加は、値の正規化後の各群で別々の非誘導膝の値と関節炎誘導膝の値の間の差である。正規化された値（−２１日目＝１）は、平均±ＳＤである。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝１４）。
【図１４】ｃｇｔｘ−５４４療法と比較したメトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおける相対的膝腫脹増加の差の時間経過を示す図である。−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、０日目のメチル化ＢＳＡの関節内注射によって抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）を誘導した。低用量ＭＴＸ療法は、−３日目に開始してから６日目まで体重１ｋｇにつき１００μｇのＭＴＸの毎日の適用をｉ．ｖ．で受けた。対して、ｃｇｔｘ−５４４療法群は、−３日目に開始してから６日目まで体重１ｋｇにつき１ｍｇのｃｇｔｘ−５４４の毎日の適用をｉ．ｖ．で受け、ビヒクル対照群は、０日目に開始してから０．９％ＮａＣｌの毎日の適用をｉ．ｖ．で同じく受けた。膝腫脹の相対的増加は、値の正規化後の各群で別々の非誘導膝の値と関節炎誘導膝の値との差である。正規化された値（−２１日目＝１）は、平均±ＳＤである。紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色グラフ：ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法群（Ｉ群；ｎ＝１４）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝１４）。
【図１５】ｃｇｔｘ−５４４療法と比較したメトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットの免疫状態を示す図である。絶対的白血球（ＷＢＣ）数；値は、平均±ＳＤ（ｎ＝７）である。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色のグラフ：ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法ｉ．ｖ．１日１回群（Ｉ群、ｎ＝７）；青色のグラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照ｉ．ｖ．１日１回群（Ｈ群、ｎ＝７）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。ＥＤＴＡ全血を、Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＴ−２０００ｉ．Ｖで測定した。
【図１６】ｃｇｔｘ−５４４療法と比較したメトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおける好中性顆粒球を示す図である。Ａ．絶対値は、平均±ＳＤ（ｎ＝７）である。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色のグラフ：ｃｇｔｘ−５４４療法ｉ．ｖ．１日１回群（Ｉ群、ｎ＝７）；青色のグラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照ｉ．ｖ．１日１回群（Ｈ群、ｎ＝７）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。Ｂ．ＷＢＣの全量に対する相対的な好中球（％）。値は、平均±ＳＤ（ｎ＝７）である。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色のグラフ：ｃｇｔｘ−５４４療法ｉ．ｖ．１日１回群（Ｉ群、ｎ＝７）；青色のグラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照ｉ．ｖ．１日１回群（Ｈ群、ｎ＝７）。黒色の矢印（−２１日目および−１４日目と推量される）：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。ＥＤＴＡ全血を、Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＴ−２０００ｉ．Ｖで測定した。
【図１７】ｃｇｔｘ−５４４療法と比較したメトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおけるリンパ球の時間経過を示す図である。Ａ．絶対値は、平均±ＳＤ（ｎ＝７）である。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色のグラフ：ｃｇｔｘ−５４４−ペプチド療法ｉ．ｖ．１日１回群（Ｉ群、ｎ＝７）；青色のグラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照ｉ．ｖ．１日１回群（Ｈ群、ｎ＝７）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。Ｂ．ｃｇｔｘ−５４４療法と比較したメトトレキセート（ＭＴＸ）標準療法の関節炎ラットにおけるリンパ球の百分率を示す図である  −  ＷＢＣの全量に対する相対的なリンパ球（％）。値は、平均±ＳＤ（ｎ＝７）である。オレンジ色グラフ：ＭＴＸ  ｓ．ｃ．週１群（Ｊ群、ｎ＝７）；紫色のグラフ：ＭＴＸ  ｉ．ｖ．１日１回群（Ｌ群、ｎ＝７）；赤色のグラフ：ｃｇｔｘ−５４４療法ｉ．ｖ．１日１回群（Ｉ群、ｎ＝７）；青色のグラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照ｉ．ｖ．１日１回群（Ｈ群、ｎ＝７）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。ＥＤＴＡ全血を、Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＴ−２０００ｉ．Ｖで測定した。
【図１８】予防的治療および用量依存性  −  膝直径の相対的増加の時間経過（高／中間／低用量）を示す図である。値は、平均±ＳＤである。破線の赤色グラフ：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド５ｍｇの療法群（Ｎ群、ｎ＝５）；実線の赤色グラフ：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｉ群、ｎ＝１４）；点線の赤色グラフ：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド０．１ｍｇの療法群（Ｍ群、ｎ＝５）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、＃１５〜１９、ｎ＝５）。
【図１９】ｃｇｔｘ−５４４有効性結果の統計分析を示す図である。全てのボックスプロットは、中央値、四分位範囲、試料最小値および最大値を示している。有意性の分析のために、ビヒクル対照を療法群と比較した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２０】治療処置  −  ｄ＝０またはｄ＝１に治療開始  −  ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法（ｄ０およびｄ１に治療開始）の有り無しの関節炎ラットにおける膝直径の差の時間経過（個体内、サブストラクションｉｎｄ．／ｕｎｉｎｄ．）を示す図である。値は、平均±ＳＤである。破線の赤色グラフ−ｄ１での治療開始：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｑ群、ｎ＝７）；点線の赤色グラフ−ｄ０での治療開始：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｐ群、ｎ＝６）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群）。
【図２１】ｃｇｔｘ−５４４有効性結果の統計分析を示す図である。全てのボックスプロットは、中央値、四分位範囲、試料最小値および最大値を示している。有意性の分析のために、ビヒクル対照を療法群と比較した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２２】治療処置  −  ｄ＝０またはｄ＝１に治療の開始  −  ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法（ｄ０およびｄ１に治療開始）の有り無しの関節炎ラットにおけるＷＢＣ数の時間経過を示す図である。絶対的白血球（ＷＢＣ）数；値は、平均±ＳＤである。破線の赤色グラフ−ｄ１での治療開始：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４（ミックス）ペプチド１ｍｇの療法群（Ｑ群、ｎ＝７）；点線の赤色グラフ−ｄ０での治療開始：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｐ群、ｎ＝６）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝５）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。
【図２３】治療処置  −  ｄ＝０またはｄ＝１に治療の開始  −  ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法（ｄ０およびｄ１に治療開始）の有り無しの関節炎ラットにおけるＷＢＣのパーセントで表した好中性顆粒球の相対量の時間経過を示す図である。ＷＢＣの全量に対する好中球（％）。値は、平均±ＳＤである。破線の赤色グラフ−ｄ１での治療開始：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｑ群、ｎ＝７）；点線の赤色グラフ−ｄ０での治療開始：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｐ群、ｎ＝６）；青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝５）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。
【図２４】治療処置  −  ｄ＝０またはｄ＝１に治療の開始  −  ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法（ｄ０およびｄ１に治療開始）の有り無しの関節炎ラットにおけるＷＢＣのパーセントで表したリンパ球の相対量の時間経過を示す図である。ＷＢＣの全量に対するリンパ球（％）。値は、平均±ＳＤである。破線の赤色グラフ：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド５ｍｇの療法群（Ｎ群、ｎ＝５）；実線の赤色グラフ：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｉ群、ｎ＝７）；点線の赤色グラフ：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド０．１ｍｇの療法群（Ｍ群、ｎ＝５）；濃青色のグラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝５）。黒色の矢印：結核菌（M. tuberculosis）（７５０μｇ）およびｍＢＳＡによる免疫化時間。
【図２５】治療処置（１週に１回または１週に２回）  −  膝関節直径の相対的増加の時間経過を示す図である。値は、平均±ＳＤである。破線の赤色グラフ−ｄ１に単回の治療：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｒ６〜１０群、ｎ＝５）；点線の赤色グラフ−ｄ１およびｄ４に単回治療：体重１ｋｇにつきｃｇｔｘ−５４４ペプチド１ｍｇの療法群（Ｒ１〜５群、ｎ＝５）；両方の群は４日目まで一緒であった。青色グラフ：ビヒクル（ＮａＣｌ）対照群（Ｈ群、ｎ＝５）。
【図２６】治療処置（１週に１回または１週に２回）  −  ｃｇｔｘ−５４４有効性の統計分析を示す図である。全てのボックスプロットは、中央値、四分位範囲、試料最小値および最大値を示している。有意性の分析のために、ビヒクル対照を療法群と比較した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２７】ｍＢＳＡ特異的抗体の分析を示す図である。実験群ＨおよびＩでは、全ての動物は、免疫化およびＡＩＡ誘導期間中に抗原ｍＢＳＡに対する抗体を生成した。対照群Ｆ（ナイーブ動物）では、特異的ｍＢＳＡ抗体を検出できなかった。
【図２８】ＭＴＸ有効性結果の統計分析を示す図である。全てのボックスプロットは、中央値、四分位範囲、試料最小値および最大値を示している。有意性の分析のために、ビヒクル対照を療法群と比較した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、ｎ．ｓ．有意でない。
【図２９】ペプチド合成スキームを示す図である。
【図３０】折畳み後のｃｇｔｘ−５４４ペプチドのＵＰＬＣプロファイルを示す図である。
【図３１−１】ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のＩＣ５０を示す図である。Ａ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、結果をヒル曲線にあてはめたときに６．９ｎＭのＩＣ５０値を示した。Ｂ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度の増加に伴う段階的電流低減。Ｃ．異なるｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度での測定の間の電流トレース。
【図３１−２】ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のＩＣ５０を示す図である。Ａ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、結果をヒル曲線にあてはめたときに６．９ｎＭのＩＣ５０値を示した。Ｂ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度の増加に伴う段階的電流低減。Ｃ．異なるｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度での測定の間の電流トレース。
【図３２−１】ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の選択性を示す図である。Ａ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、結果をヒル曲線にあてはめたときにＫｖ１．１で約６μＭのＩＣ５０値を示した。Ｂ．Ｋｖ１．１でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度の増加に伴う段階的電流低減。Ｃ．Ｋｖ１．１での異なるｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度での測定の間の電流トレース。Ｄ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の１０μＭの溶液はＫｖ１．５電流の有意な低減を誘導しなかったが、電流はキニジンに感受性であった。Ｅ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の１００ｎＭの溶液は、安定してトランスフェクトさせたＣＨＯ細胞でＫｖ１．２電流を変化させなかった。＞１μＭの濃度は、電流のわずかな低減だけをもたらした。ＩＣ５０は、２．５μＭで確立された。
【図３２−２】ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の選択性を示す図である。Ａ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、結果をヒル曲線にあてはめたときにＫｖ１．１で約６μＭのＩＣ５０値を示した。Ｂ．Ｋｖ１．１でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度の増加に伴う段階的電流低減。Ｃ．Ｋｖ１．１での異なるｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）濃度での測定の間の電流トレース。Ｄ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の１０μＭの溶液はＫｖ１．５電流の有意な低減を誘導しなかったが、電流はキニジンに感受性であった。Ｅ．ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の１００ｎＭの溶液は、安定してトランスフェクトさせたＣＨＯ細胞でＫｖ１．２電流を変化させなかった。＞１μＭの濃度は、電流のわずかな低減だけをもたらした。ＩＣ５０は、２．５μＭで確立された。
【図３３】３７℃のヒト血清中でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の減衰を示す図である。既知量のｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）を３人の血液ドナーからのヒト血清に加え、３７℃で５７日間インキュベートした。ペプチドのブロッキング活性は、この期間中にＫｖ１．３チャネルで測定した。ペプチドは１６時間安定なままであり、それは４５日後になお検出することができる。５７日目に、ブロッキング効果はもはや見ることはできない。減衰は、以下によって決定されるｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の濃度の低減として表される：Ｃ（ｔ）＝ＩＣ５０（ｔ０）／ＩＣ５０（ｔ）．Ｃ０。減衰は、単純な減衰曲線：Ｃ（ｔ）＝Ｃ０．２（−ｔ／ｔ１／２）によってあてはめられ、式中、Ｃ０は溶液中のペプチドの初期濃度であり、ｔ０は３７℃で０分のインキュベーションの時点であり、ｔ１／２は半減期である。
【図３４】ｉ．ｖ．注射後の処置ラットの血清中のｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の減少を示す図である。未結合の循環ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の濃度を、標準曲線に基づいて計算した。平均値の標準誤差は、エラーバー（ｎ＝６）で表す。
【図３５】図３５Ａ）：ｃｇｔｘ−５４４の長期インキュベーションは、ピコモルのＩＣ５０値をもたらすことを示す図である。Ｋｖ１．３電流を初期ピーク電流および非特異的カリウムチャネルブロッカーキニジンによる完全な遮断に正規化した（データ示さず）。対照条件（緑色、ｎ＝１１）下では電流は少なくとも１０分間安定しているが、ｃｇｔｘ−５４４（赤色、ｎ＝１３）の単回適用（矢印）は経時的に増加する遮断を引き起こす。  図３５Ｂ）：長期インキュベーション時間でのｃｇｔｘ−５４４の用量応答曲線を示す図である。青で、短期インキュベーション時間によるｃｇｔｘ−５４４の用量応答曲線を示し、赤色曲線はｃｇｔｘ−５４４がＫｖ１．３チャネルと長期間、すなわち１５分間インキュベートしたときに生じる。長期インキュベーション時間（赤色点）による６０％遮断と比較した短期インキュベーション時間（青色点）による２０％の観察された遮断は、用量応答曲線の左シフトをもたらし、したがってＩＣ５０（水平破線）はより低い。  図３５Ｃ）：長期および短期インキュベーション時間によるＫｖ１．３およびＫｖ１．１でのｃｇｔｘ−５４４のＩＣ５０値を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明を以下に詳細に記載する前に、本明細書に記載される特定の方法、プロトコールおよび試薬は異なることがあるので、本発明はそれらに限定されないことを理解すべきである。本明細書で用いられる専門用語は、特定の実施形態を記載するためのみであり、添付の請求項のみによって限定される本発明の範囲を限定するものではないことも理解すべきである。特に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。本明細書で用いられる１文字および３文字のアミノ酸略記号は、ＩＵＰＡＣ命名法に対応する（例えば、European Journal of Biochemistry, 138:9-37, 1984を参照する）。
【００２７】
以下の定義が導入される：
本明細書および意図する請求項で用いられるように、内容が明らかに別途指示しない限り、「ａ」および「ａｎ」の単数形にはそれぞれの複数形も含まれる。
【００２８】
用語「含む」ならびに「含む」および「含んでいる」などの変形は、限定するものではないことを理解すべきである。本発明のために、用語「からなる」は、用語「含む」の好ましい実施形態であるとみなされる。以降で群が少なくともある特定の数の実施形態を含むと規定されるならば、これは、好ましくはこれらの実施形態のみからなる群も包含することを意味する。
【００２９】
本発明の文脈において用語「約」および「概ね」は、問題の特長の技術的効果をなお保証すると当業者が理解する精度の間隔を表す。この用語は、示された数値からの±１０％および好ましくは±５％の偏差を一般的に包含する。
【００３０】
本明細書で用いる用語「ペプチド」はアミノ酸の分子鎖を指し、生成物の特定の長さを指さない；したがって、ポリペプチド、オリゴペプチドおよびタンパク質はペプチドの定義の中に含まれる。定義によるペプチドは、天然に存在するペプチド、および天然に存在するまたは天然に存在しないアミノ酸を含むことができる合成ペプチドの両方であってもよい。定義には、ペプチドの機能的誘導体、すなわち、例えば、好ましくはそれぞれのアミノ酸の同一性を変更することなく、天然に存在するまたは天然に存在しないアミノ酸の側鎖、遊離のアミノおよび／またはカルボキシ末端を改変することによって化学改変されているペプチドがさらに含まれる。例えば、ペプチドのアミノ酸の側鎖または遊離のアミノもしくはカルボキシ末端は、例えばグリコシル化、アミド化、リン酸化、ユビキチン化、カルボキシル化などによって改変することができる。好ましい実施形態では、本発明によるペプチドは、ＰＥＧ化、ＨＥＳ化またはＰＡＳ化によって改変することができる。
【００３１】
本明細書に開示される化合物は、驚くべきことに、他のカリウムチャネル、例えばＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）以上にＫｖ１．３カリウムチャネルに選択的に結合することが可能であることが本発明の発明者によって見出された。ＴＥＭ細胞中のＫｖ１．３の保有率を考慮すると、本発明による化合物は、したがって例えば自己免疫性疾患などのＴＥＭ細胞媒介性疾患のための強力な治療剤となる。さらに、開示される化合物は、他のタイプの細胞または組織に分布する他のカリウムチャネルの活性を実質的にモジュレートしないので、副作用の低減という利点を提供する。
【００３２】
したがって、本発明は、例えばＫｖ１．１などの他のカリウムチャネル以上にＫｖ１．３カリウムチャネルに選択的に結合することが可能である化合物に一般に関する。そのような化合物は、自己免疫性疾患の治療または予防での使用が企図される。そのような化合物は、ペプチド、抗体または小分子からなる群から選択することができる。特に好ましい実施形態では、前記化合物は、本発明の第１、第２および第３の態様のために記載されるペプチドおよびその変異体である。
【００３３】
カリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体であってもよい。一部の実施形態では、抗体は、抗体変異体または断片、例えば単鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃ（Ｆｖ））、ｓｃ（Ｆｖ）２抗体、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ’）２断片から選択することもできるが、ただし前記抗体変異体または断片はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００３４】
本明細書で用いる用語「小分子」は、低分子量を有する小さい有機化合物を指す。
【００３５】
小分子は、天然に存在することが知られていない合成化合物、または天然の供給源、例えば細胞、植物、真菌、動物などから単離されるかもしくはそれに存在することが知られている天然に存在する化合物であってもよい。本発明の文脈において小分子は、好ましくは５０００ダルトン未満、より好ましくは４０００ダルトン未満、より好ましくは３０００ダルトン未満、より好ましくは２０００ダルトン未満、さらにより好ましくは１０００ダルトン未満の分子量を有する。特に好ましい実施形態では、本発明の文脈において小分子は、８００ダルトン未満の分子量を有する。
【００３６】
別の好ましい実施形態では、本発明の文脈において小分子は、５０から３０００ダルトン、好ましくは１００から２０００ダルトン、より好ましくは１００から１５００ダルトン、さらにより好ましくは１００から１０００ダルトンの分子量を有する。本発明の文脈において最も好ましい小分子は、１００から８００ダルトンの分子量を有する。
【００３７】
カリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能な小分子は、例えば小化合物ライブラリーをスクリーニングすることによって識別することができる。
【００３８】
したがって、第１、第２および第３の態様およびその変形の本発明は、カリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能であるペプチド化合物に関する。好ましくは、前記化合物は、他のカリウムチャネル、例えばＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）以上にカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。特に好ましい実施形態では、本発明による化合物は、カリウムチャネルＫｖ１．１以上にカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００３９】
第１の態様では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２３）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｙ、Ｎ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ、Ｙ、Ｓ、Ｖ、Ａ、Ｌ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００４０】
第１の態様の変形では、本発明は、配列番号２３によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｙ、Ｎ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ、Ｙ、Ｓ、Ｖ、Ａ、Ｌ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００４１】
第１の態様の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２４）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、ＮおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒである。
【００４２】
第１の態様の変形の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号２４によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、ＮおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００４３】
第１の態様およびその変形のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号２５（ｃｇｔｘ−５４４）または配列番号２６（ｃｇｔｘ５４７）のアミノ酸配列を含むかそれからなる。この文脈において、第１の態様およびその変形の別のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号２５（ｃｇｔｘ−５４４）と少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の百分率同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる。２つの配列間のパーセント同一性の決定は、好ましくはKarlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 5873-5877の数学アルゴリズムを用いて遂行される。そのようなアルゴリズムは、例えばＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cge）で入手可能なAltschul et al. (1990) J. MoI. Biol. 215: 403-410のＢＬＡＳＴｎおよびＢＬＡＳＴｐプログラムに組み込まれる。パーセント同一性の決定は、好ましくはＢＬＡＳＴｎおよびＢＬＡＳＴｐプログラムの標準パラメータで実施される。ＢＬＡＳＴポリヌクレオチド検索は、好ましくはＢＬＡＳＴｎプログラムで実施される。一般的なパラメータについては、「最大ターゲット配列」ボックスを１００に設定し、「ショートクエリー」ボックスをチェックし、「予想閾値」ボックスを１０に設定し、「ワードサイズ」ボックスを２８に設定することができる。スコアリングパラメータについては、「マッチ／ミスマッチスコア」を１、−２に設定し、「ギャップコスト」ボックスを直線に設定することができる。フィルターおよびマスキングパラメータについては、「低複雑性領域」ボックスをチェックしてはならず、「種特異的反復配列」ボックスをチェックしてはならず、「ルックアップテーブルのためだけのマスク」ボックスをチェックすることができ、「小文字をマスクする」ボックスをチェックしてはならない。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、好ましくはＢＬＡＳＴｐプログラムで実施される。一般的なパラメータについては、「最大ターゲット配列」ボックスを１００に設定し、「ショートクエリー」ボックスをチェックし、「予想閾値」ボックスを１０に設定し、「ワードサイズ」ボックスを「３」に設定することができる。スコアリングパラメータについては、「マトリックス」ボックスを「ＢＬＯＳＵＭ６２」に設定し、「ギャップコスト」ボックスを「Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ：１１  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ：１」に設定し、「構成調整」ボックスを「条件付き構成スコアマトリックス調整」に設定することができる。フィルターおよびマスキングパラメータについては、「低複雑性領域」ボックスをチェックしてはならず、「ルックアップテーブルのためだけのマスク」ボックスをチェックしてはならず、「小文字をマスクする」ボックスをチェックしてはならない。
【００４４】
第１の態様およびその変形のさらにより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号２５（ｃｇｔｘ−５４４）のアミノ酸配列を含むかそれからなる。
【００４５】
以降記載される実施形態は、好ましくは本発明の第１の態様およびその変形の化合物を指す。しかし、これらの実施形態、例えば以降考察されるペプチドの長さ、Ｋｖ１．３対Ｋｖ１．１への選択性などが、後述するように、本発明の第２および第３の態様およびそれらの変形ならびにそれらの好ましい実施形態の化合物にも適用されることを理解する必要がある。
【００４６】
さらに好ましい実施形態では、本発明による化合物は、ペプチドである。
【００４７】
本発明による化合物がペプチドである場合は、本発明による化合物は、好ましくは１０００アミノ酸未満、５００アミノ酸未満、２００アミノ酸未満、好ましくは１５０アミノ酸未満、１００アミノ酸未満、９０アミノ酸未満、８０アミノ酸未満、７０アミノ酸未満、６０アミノ酸未満、５０アミノ酸未満または４０アミノ酸未満の長さを有する。
【００４８】
さらに好ましい実施形態では、本発明による化合物は、少なくとも２０から１０００の間のアミノ酸、好ましくは少なくとも２５から５００の間のアミノ酸、より好ましくは少なくとも３０から２００の間のアミノ酸、より好ましくは少なくとも３４から１５０の間のアミノ酸、より好ましくは少なくとも３４から１００の間のアミノ酸、より好ましくは少なくとも３４から９０の間のアミノ酸、さらにより好ましくは少なくとも３４から８０の間のアミノ酸、少なくとも３４から７０の間のアミノ酸、３４から６０の間のアミノ酸、３４から５０の間のアミノ酸または３４から４０の間のアミノ酸の長さを有する。
【００４９】
より好ましい実施形態では、本発明による化合物は、示されるアミノ酸配列から本質的になる。
【００５０】
本発明による化合物に含まれるアミノ酸は、Ｌ−またはＤ−アミノ酸であってもよい。好ましくは、本発明による化合物に含まれるアミノ酸は、Ｌ−アミノ酸である。一部の実施形態では、特に、タンパク質分解への高い抵抗性が所望される場合には、Ｄ−アミノ酸が好ましいことがある。
【００５１】
異なるカリウムチャネルの活性を同時に阻害する化合物は、異なるタイプの細胞に異なるカリウムチャネルが差異的に分布しているために、生体に適用された場合にかなりの副作用を及ぼす可能性がある。したがって、本発明は、他のカリウムチャネルと比較して、特にカリウムチャネルＫｖ１．１と比較してカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である化合物を提供する。
【００５２】
本明細書で用いる用語「選択的に結合する」は、他のイオンチャネル以上の、特に、例えばＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）のような他のカリウムチャネル以上の、Ｋｖ１．３チャネルへの本発明による化合物の優先的結合を指す。
【００５３】
好ましくは、本発明による化合物は、カリウムチャネルＫｖ１．１以上にカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。この場合、本発明による化合物は、Ｋｖ１．１チャネルによりもかなり高い親和性でＫｖ１．３チャネルに結合する。
【００５４】
本発明の文脈において、毒素ＨｓＴｘ１は同様にＫｖ１．１チャネルに結合して強力に阻害するので、カリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である化合物と考えられていない。
【００５５】
好ましい実施形態では、本発明によりＫｖ１．３に選択的に結合する化合物は、前記化合物がＫｖ１．１チャネルに結合するときのＫｄ値と比較して、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１００倍、１０００倍、２０００倍、好ましくは少なくとも３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００または１００００倍低いＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合する。さらに好ましい実施形態では、本発明によりＫｖ１．３に選択的に結合する化合物は、前記化合物が他のカリウムチャネル、例えばＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）に結合するときのＫｄ値と比較して少なくとも４０００、５０００または１００００倍低いＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合する。
【００５６】
特に好ましい実施形態では、本発明によりＫｖ１．３に選択的に結合する化合物は、前記化合物がＫｖ１．１チャネルに結合するときのＫｄ値と比較して少なくとも４０００、５０００または１００００倍低いＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合する。
【００５７】
好ましい実施形態では、本発明による化合物は、一般的に約０．１ｎＭから約２５０ｎＭの間、約０．５ｎＭから約２５０ｎＭの間、約１ｎＭから約２２５ｎＭの間、約１ｎＭから約２００ｎＭの間、さらにより好ましくは約１ｎＭから約１００ｎＭの間、最も好ましくは約１ｎＭから約５０ｎＭの間のＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合する。
【００５８】
本発明による化合物は、他のカリウムチャネル、例えばＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）に、好ましくは０．１ｍＭを超える、０．２ｍＭを超える、０．３ｍＭを超える、０．４ｍＭを超えるまたは０．５ｍＭを超えるＫｄ値で結合する。特に好ましい実施形態では、本発明による化合物は、０．１ｍＭを超える、０．２ｍＭを超える、０．３ｍＭを超える、０．４ｍＭを超えるまたは０．５ｍＭを超えるＫｄ値でＫｖ１．１チャネルに結合する。
【００５９】
したがって、本発明による化合物は、好ましくは約０．５から約２００ｎＭの間、例えば約１または２ｎＭから約２００ｎＭの間のＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合し、０．１ｍＭを超える、０．２ｍＭを超える、０．３ｍＭを超える、０．４ｍＭを超えるまたは０．５ｍＭを超えるＫｄ値でＫｖ１．１チャネルに結合する。より好ましくは、本発明による化合物は、約０．５から約１００ｎＭの間、例えば約１または２ｎＭから約１００ｎＭの間のＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合し、０．１ｍＭを超える、０．２ｍＭを超える、０．３ｍＭを超える、０．４ｍＭを超えるまたは０．５ｍＭを超えるＫｄ値でＫｖ１．１チャネルに結合する。さらにより好ましくは、本発明による化合物は、約０．５から約５０ｎＭの間、例えば約１または２ｎＭから約５０ｎＭの間のＫｄ値でカリウムチャネルＫｖ１．３に結合し、０．５ｍＭを超えるＫｄ値でＫｖ１．１チャネルに結合する。
【００６０】
本発明による化合物は、好ましくはカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合して、その活性を遮断または低減することが可能である。本発明による化合物は、カリウムチャネルＫｖ１．３の活性を、対照と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％低減することができる。一部の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、カリウムチャネルＫｖ１．３の活性を１００％遮断することができる。
【００６１】
Ｋｖ１．３チャネルに選択的に結合してその活性を遮断または低減する本発明による化合物の能力は、当技術分野で公知のアッセイによって試験することができる。例えば、１つの手法では、Ｋｖ１．３または別のカリウムチャネル、例えばＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）を発現する哺乳動物の細胞株は、本発明の化合物と接触させることができ、チャネル電流は、例えばGrissmer et al. (Mol Pharmacol 45; 1227-34 (1994))または下で本明細書の実施例の項において記載されるパッチクランプ方法によって測定することができる。各化合物は、例えば異なる濃度で試験することができる。本発明による化合物のＫｄ値は、次に、例えば、ピーク電流の測定された低減にヒル式をあてはめることによって決定することができる。
【００６２】
例えば実施例２に記載されるＫｄを決定するための方法は、測定されるチャネル数を考慮しないことを理解すべきであり、これが理由で、本開示の目的ではＫｄがＩＣ５０値に対応し、それにより用語ＫｄおよびＩＣ５０が本明細書で同義的に用いられる。不完全に折り畳まれたペプチドを含む混合物に対して完全に折り畳まれて精製されたペプチドが用いられる場合に、より低いＫｄ値を観察することができることを理解すべきである（実施例２を参照する）。
【００６３】
一部の実施形態では、本発明による化合物は、そのＮ末端アミノ基またはそのＣ末端カルボキシ基に結合している、ＴＥＭ細胞を認識して標的とすることが可能である抗体または他の分子を有することができる。
【００６４】
本発明の化合物は、当技術分野で公知の技術を用いて調製することができる。例えば、ペプチドは、例えばMeienhofer et al. (J. Peptide Prot. Res. 13; 35 (1979))およびFields, et al., Peptide Res. 4; 95 (1991))によってその後改変された、Merrifield (J. Am. Chem. Soc. 85; 7129 (1963))によって最初に記載された原理による固相Ｆｍｏｃ化学を用いて合成することができる。そのような合成は、例えば自動ペプチド合成装置で実行することができる。合成されたならば、配列は自動ペプチドシーケンサーを用いて検証することができる。
【００６５】
本発明の文脈において記載されるカリウムチャネル、例えばカリウムチャネルＫｖ１．１、Ｋｖ１．２、Ｋｖ１．３、Ｋｖ１．５、Ｋｖ１．６、ＩＫＣａ１、ｈＥＲＧまたは大コンダクタンスＣａ２＋活性化Ｋ＋チャネル（ＢＫチャネル）は、当技術分野で周知である。したがって、平均的な当業者は、これらのチャネルのポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列ならびにそのオルソログおよびスプライスアイソフォームを、任意の適する公開データベースから、例えばＮＣＢＩデータベース（例えばhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/）から容易に検索することができる。
【００６６】
第２の態様では、本発明は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号１）
を含むかそれからなる化合物に関し、式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００６７】
好ましい実施形態では、前記化合物はＨｓＴｘ  １（配列番号３２）でない。
【００６８】
第２の態様の変形では、本発明は、配列番号１によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００６９】
好ましい実施形態では、前記化合物はＨｓＴｘ  １でない。
【００７０】
第２の態様の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、ＮおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００７１】
好ましい実施形態では、前記化合物はＨｓＴｘ１でない。
【００７２】
第２の態様の変形の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号２によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、ＮおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００７３】
好ましい実施形態では、前記化合物は、ＨｓＴｘ１でない。
【００７４】
第２の態様の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｃ（配列番号３）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１５＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１６＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００７５】
第２の態様の変形の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号３によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１５＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１６＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００７６】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｃ（配列番号４）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１５＝Ｙ、ＮおよびＸ１６＝Ｇ、Ｒである。
【００７７】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号４によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１５＝Ｙ、ＮおよびＸ１６＝Ｇ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００７８】
第２の態様の別の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号５）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬおよびＸ１６＝Ｋ、Ｒである。
【００７９】
第２の態様の変形の別の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号５によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬおよびＸ１６＝Ｋ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００８０】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号６）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、ＧおよびＸ１６＝Ｋ、Ｒである。
【００８１】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号６によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、ＧおよびＸ１６＝Ｋ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００８２】
第２の態様の別の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号７）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、ＩおよびＸ１４＝Ｋ、Ｒである。
【００８３】
第２の態様の変形の別の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号７によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、ＩおよびＸ１４＝Ｋ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００８４】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号８）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、ＬおよびＸ１４＝Ｋ、Ｒである。
【００８５】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号８によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、ＬおよびＸ１４＝Ｋ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００８６】
第２の態様のさらにより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号９（ｃｇｔｘ５３８）によるアミノ酸配列を含むかそれからなる。
【００８７】
第２の態様の別の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｑ−Ｃ−Ｘ７−Ｒ−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１０）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、ＮおよびＸ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉである。
【００８８】
第２の態様の変形の別の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号１０によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、ＮおよびＸ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００８９】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｑ−Ｃ−Ｘ７−Ｒ−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１１）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、ＮおよびＸ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉである。
【００９０】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号１１によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、ＮおよびＸ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００９１】
第２の態様のさらにより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号１２（ｃｇｔｘ５３９）によるアミノ酸配列を含むかそれからなる。
【００９２】
第２の態様の別の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｑ−Ｃ−Ｙ−Ｐ−Ｈ−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１３）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ４＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ５＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ７＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＸ８＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉである。
【００９３】
第２の態様の変形の別の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号１３によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ４＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ５＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ７＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＸ８＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００９４】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｑ−Ｃ−Ｙ−Ｐ−Ｈ−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１４）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ４＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ５＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ７＝Ｋ、Ｄ、Ａ、ＲおよびＸ８＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００９５】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号１４によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ４＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ５＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ７＝Ｋ、Ｄ、Ａ、ＲおよびＸ８＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００９６】
第２の態様のさらにより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号１５（ｃｇｔｘ５４０）によるアミノ酸配列を含む。
【００９７】
第２の態様の別の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｒ−Ｃ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｃ（配列番号１６）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１５＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【００９８】
第２の態様の変形の別の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号１６によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１５＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【００９９】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｒ−Ｃ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｃ（配列番号１７）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、ＮおよびＸ１５＝Ｇ、Ｒである。
【０１００】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号１７によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、ＮおよびＸ１５＝Ｇ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【０１０１】
第２の態様のさらにより特に好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号１８（ｃｇｔｘ５４１）または配列番号１９（ｃｇｔｘ５４２）によるアミノ酸配列を含むかそれからなる。
【０１０２】
第２の態様の別の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｉ−Ｓ−Ｃ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号２０）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ２＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ３＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ４＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ５＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ６＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＸ１１＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉである。
【０１０３】
第２の態様の変形の別の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号２０によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ２＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ３＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ４＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ５＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ６＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＸ１１＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【０１０４】
第２の態様のより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｉ−Ｓ−Ｃ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号２１）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ２＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ３＝Ｐ、Ｓ；Ｘ４＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ５＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ６＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、ＲおよびＸ１１＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌである。
【０１０５】
第２の態様の変形のより好ましい実施形態では、本発明は、配列番号２１によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ２＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ３＝Ｐ、Ｓ；Ｘ４＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ５＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ６＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、ＲおよびＸ１１＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【０１０６】
第２の態様のさらにより好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号２２（ｃｇｔｘ５４５）によるアミノ酸配列を含むかそれからなる。
【０１０７】
第３の態様では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｇ−Ｖ−Ｘ１−Ｉ−Ｎ−Ｖ−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２７）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋである。
【０１０８】
第３の態様の変形では、本発明は、配列番号２７によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【０１０９】
第３の態様の好ましい実施形態では、本発明による化合物は、アミノ酸配列：
Ｇ−Ｖ−Ｘ１−Ｉ−Ｎ−Ｖ−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２８）
を含むかそれからなり、上式で、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、ＮおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒである。
【０１１０】
第３の態様の変形の好ましい実施形態では、本発明は、配列番号２８によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物にも関し、
式中、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、ＮおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒであり、
この化合物はカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である。
【０１１１】
第３の態様の特に好ましい実施形態では、本発明による化合物は、配列番号２９（ｃｇｔｘ５４３）、配列番号３０（ｃｇｔｘ５４６）または配列番号３１（ｃｇｔｘ５４８）によるアミノ酸配列を含むかそれからなる。
【０１１２】
したがって、本発明による化合物が、配列番号９、１２、１５、１８、１９、２２、２５、２６、２９、３０または３１によるアミノ酸配列を含むかそれからなることが特に好ましく、配列番号２５によるアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物が最も好ましい。
【０１１３】
一部の実施形態では、配列番号９、１２、１５、１８、１９、２２、２５、２６、２９、３０または３１によるアミノ酸配列を含むかそれからなる前述の化合物は、０から５の間、すなわち０、１、２、３、４または５つのアミノ酸置換、欠失または挿入を含むことができるが、ただし化合物はＫｖ１．３カリウムチャネルに選択的に結合することおよび／またはその活性を遮断もしくは低減することがなお可能である。そのようなアミノ酸突然変異を有する化合物は変異体と呼ばれ、本発明の一部を同様に形成する。
【０１１４】
置換は保存的または非保存的な置換であってもよく、好ましくは、置換は保存的な置換である。保存的な置換は、置換されるアミノ酸に類似の化学特性を有する別のアミノ酸によるアミノ酸の置換を含む。一部の実施形態では、置換は、天然に存在するアミノ酸と天然に存在しないアミノ酸との交換であってもよい。
【０１１５】
用語「アミノ酸欠失」および「アミノ酸挿入」は、当技術分野でのそれらの従来のおよび周知の意味に従って本明細書で用いられる。
【０１１６】
別の態様では、本発明は、本発明によるアミノ酸配列をコードする核酸も提供する。
【０１１７】
本発明の文脈において、用語「核酸」または「核酸配列」は、所与のアミノ酸配列をコードすることが可能である、一本鎖または二本鎖形の天然に存在するかまたは合成されたデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのポリマーを指す。この用語は、当業者に公知の方法によって元の配列の１つまたは複数のヌクレオチドが他のヌクレオチドによって置換され、および／または（化学的に）改変されるという点で、元のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのポリマーと異なることがある、所与のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのポリマーの誘導体も包含するが、ただし、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのポリマーはそのそれぞれのアミノ酸配列をコードすることがなお可能である。
【０１１８】
遺伝子コードの変性のために、本発明による所与のアミノ酸配列が異なるヌクレオチド配列によってコードされていてもよいことは、当業者に明らかであろう。
【０１１９】
さらなる態様では、本発明は、本発明による核酸配列を含むベクターも提供する。
【０１２０】
ベクターは、本発明による１つまたは複数のヌクレオチド配列を含有し、異なる宿主細胞の間での転移のために好ましくは設計される任意の分子ビヒクル、例えばプラスミドベクター、ウイルスベクター、バクテリオファージベクターまたは任意の他のビヒクルであってもよい。好ましい実施形態では、ベクターは、原核または真核生物の発現ベクターである。
【０１２１】
本明細書で用いる用語「発現ベクター」は、作動可能に連結されるコード配列の発現のために必要な所望のコード配列および適当なＤＮＡ配列を含有し、特定の宿主生物体（例えば、細菌、酵母、植物、昆虫または哺乳動物）で、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系でタンパク質発現を誘導することが可能であるベクターを指す。発現ベクターは、機能的エレメント、例えば転写される核酸配列に作動可能に連結されるプロモーター、転写の適切な終結を可能にする終結配列および選択マーカーを含むことができる。当業者は、プロモーターの性質は、ベクターが原核生物かまたは真核生物の宿主細胞で用いられるかに依存することを知っているであろう。安定した発現を長期間得るために、発現ベクターは複製起点（ＯＲＩ）をさらに含むことができる。適する発現ベクターは、当業者に公知である。発現が原核もしくは真核生物の宿主細胞で、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系で達成されるかによって、ベクターは、プラスミド、コスミド、ミニクロモゾーム、細菌ファージ、レトロウイルスベクターなどの原核および／または真核生物の発現ベクターであってもよい。当業者は、具体的な必要に従って適当なベクターを選択する方法に精通しているだろう。
【０１２２】
別の態様では、本発明は、本発明による核酸配列またはベクターを含む宿主細胞を指す。
【０１２３】
適用場所によって、宿主細胞は、原核かまたは真核生物の宿主細胞であってもよい。一般的な原核宿主細胞には、例えば大腸菌（Escherichia coli）（E. coli）などの細菌細胞が含まれる。一般的な真核宿主細胞には、例えば酵母細胞、例えば酵母（Saccharomyces cerevisiae）、昆虫細胞、例えばＳｆ９／Ｓｆ２１細胞、植物細胞ならびに哺乳動物細胞、例えばＣＯＳ、ＣＨＯおよびＨｅＬａ細胞が含まれる。
【０１２４】
さらなる態様では、本発明は、本発明による化合物を含む医薬組成物にも関する。
【０１２５】
一部の実施形態では、本発明による医薬組成物は、本発明による化合物の１つより多くのものを含むことができる。例えば、本発明による医薬組成物は、本発明による化合物の２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または１０個を超えて含むことができる。一部の好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明による１つまたは複数の化合物を含むことができ、化合物は、配列番号９、１２、１５、１８、１９、２２、２５、２６、２９、３０または３１のアミノ酸配列を含むかそれからなる化合物群から選択される。
【０１２６】
本開示全体で治療上の使用に特に好ましいと考えられているペプチドは、配列番号２５（ｃｇｔｘ−５４４）、配列番号２９（ｃｇｔｘ５４３）および配列番号９（ｃｇｔｘ５３８）のペプチドである。以降に記載される実験のほとんどは、配列番号２５（ｃｇｔｘ−５４４）のペプチドを用いて実施されたことに注意する。しかし、配列番号２９（ｃｇｔｘ５４３）および配列番号９（ｃｇｔｘ５３８）のペプチドもそれらの対ｈＥＲＧ選択性について同様に試験されており、それらの配列類似性に基づくと、ｃｔｇｘ５４４と類似の効果をこれらのペプチドについても観察することができると結論付けることが、したがって、合理的なようである。
【０１２７】
これらのペプチドならびに本明細書に記載される他のペプチドは、固相合成などの当技術分野で公知の方法によって製造することができる。これらのペプチドはシステイン残基を含み、したがって、最適な活性を達成するために天然状態への能動的折畳みを必要とする可能性があることに注意する。活性は、完全に折り畳まれたペプチドを精製することによってさらに増強することができる。システイン残基の間のジスルフィド架橋を達成するために合成されたペプチドを酸化にかけることによって、折畳みを達成することができる。実施例８に記載のように、これは、ペプチドを、例えば大気酸素の存在下でｐＨ約８．０のリン酸緩衝液中でインキュベートすることによって実行することができる。折り畳まれたペプチドはジスルフィド架橋形成中の水素原子の喪失に対応するわずかに低減された質量を示すので、折畳みの後に質量分析を行ってもよい。ｃｔｇｘ５４４の場合、質量の差は、４２１２対４２２０．２Ｄａであろう。
【０１２８】
完全に折り畳まれたペプチドの精製は、ＨＰＬＣ精製などの当技術分野で公知の方法によって達成することができる。適する手法は、実施例８に記載される。
【０１２９】
本発明による医薬組成物は、経口的に、例えば吸入可能な散剤、丸剤、錠剤、上塗り錠剤、糖衣錠剤、顆粒、ハードおよびソフトゼラチンカプセル、水性、アルコール性もしくは油性の溶液、シロップ、乳剤もしくは懸濁液の形態で、または経直腸的に、例えば坐薬の形態で投与することができる。
【０１３０】
投与は、鼻腔内にまたは舌下的に実行することもできる。
【０１３１】
投与は、注射または注入のための溶液の形態で、例えば皮下、筋肉内または静脈内に非経口的にさらに実行することができる。他の適する投与形態は、例えば軟膏、チンキ剤、噴霧もしくは経皮治療システムの形態の経皮的もしくは局所投与、または鼻内噴霧もしくはエアゾール混合物の形態の吸入式投与である。
【０１３２】
本開示全体で特に好ましいと考えられる投与の形態は、静脈内、筋肉内または皮下投与である。
【０１３３】
丸剤、錠剤、糖衣錠剤およびハードゼラチンカプセルの生産のために、例えば、ラクトース、デンプン、例えばトウモロコシデンプン、またはデンプン誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩などを用いることが可能である。ソフトゼラチンカプセルおよび坐薬のための担体は、例えば、脂肪、ワックス、半固体および液体多価アルコール、天然または硬化油などである。溶液、例えば注射用溶液の、または乳剤もしくはシロップの調製のための適する担体は、例えば、水、生理食塩液、アルコール、例えばエタノール、グリセロール、多価アルコール、スクロース、転化糖、グルコース、マンニトール、植物油などである。医薬組成物は、添加剤、例えばフィラー、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味料、着色剤、香料、着香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝物質、溶媒、可溶化剤、デポー効果を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤または抗酸化剤も含有することができる。
【０１３４】
本明細書に記載される様々な異なる形態の医薬組成物のための適する賦形剤の例は、"Handbook of Pharmaceutical Excipients", 2nd Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Wellerに見出すことができる。
【０１３５】
一部の実施形態では、医薬組成物は、持続性放出製剤であってもよい。
【０１３６】
一部の実施形態では、本発明による医薬組成物は、本発明による少なくとも１つの化合物に加えて、自己免疫性疾患の治療に適する他の免疫抑制剤をさらに含むことができる。そのような免疫抑制剤の例には、例えば、コルチゾール、ヒドロコルチゾール、デキサメタゾン、シクロホスファミド、ニトロソ尿素、メトトレキセート、メルカプトプリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、シクロスポリン、ラパマイシン、アザチオプリン、プレドニゾンおよびデオキシスペルグアリンおよびインターフェロンが含まれる。
【０１３７】
他の好ましい実施形態では、前述のさらなる免疫抑制剤を含む別の組成物は、本発明による１つまたは複数の化合物を含む医薬組成物と組み合わせて、それを必要とする哺乳動物に投与することができる。
【０１３８】
さらなる態様では、本発明は、エフェクター記憶細胞（ＴＥＭ細胞）が関与する疾患の治療または予防で使用するための本発明による化合物または本発明による医薬組成物に関する。
【０１３９】
好ましくは、本発明は、自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶からなる群から選択される疾患の治療で使用するための本発明による化合物または本発明による医薬組成物に関する。
【０１４０】
本開示のために、用語「治療」は疾患の治療的緩和を指し、用語「予防」は予防的予防処置を指す。両用語はそれぞれの疾患の完全な軽快も予防も暗示しないが、薬学的に活性な薬剤が治療目的のためにも予防目的のためにも投与されない状況と比較して改善が見られることを理解すべきである。
【０１４１】
特に好ましい実施形態では、本発明は、自己免疫性疾患の治療または予防で使用するための本発明による化合物または本発明による医薬組成物の使用に関する。
【０１４２】
本発明の文脈において、用語「自己免疫性疾患（複数可）」は、自己コード実体、すなわち自己抗原を対象とする不適当な免疫応答によって引き起こされる疾患状態を指す。この定義の中には、体がそれ自身の組織を攻撃することを可能にする免疫系の欠陥によって引き起こされるいくつかの障害のいずれもが包含される。好ましい実施形態では、自己免疫性疾患は、Ｔ細胞媒介性自己免疫性障害である。
【０１４３】
本発明の化合物および医薬組成物によって治療または予防することができる自己免疫性疾患の例には、例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病、脈管炎、橋本病、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性眼疾患、シェーグレン症候群、急性の播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、妊娠性類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群、特発性血小板減少紫斑病、川崎病、エリテマトーデス、重症筋無力症、オプソクローヌスミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、悪性貧血、多発関節炎（イヌ）、原発性胆汁性肝硬変、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血、ヴェーゲナー肉芽腫症、ＡＮＣＡ関連全身性脈管炎、チャーグ−ストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、大腸炎、炎症性腸疾患、ブドウ膜炎および乾癬性関節炎が含まれる。
【０１４４】
これらの自己免疫性疾患のいくつか、例えば、ＡＮＣＡ関連全身性脈管炎（Abdulahad, Nephrology, 2009 vol. 14 pp 26）、チャーグ−ストラウス症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（Berden, Arthritis & Rheumatism, 2009, vol.60, pp 1578）、強直性脊椎炎、ベーチェット病、大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、シェーグレン症候群、１型糖尿病（Ulivieri, Expert Rev. Vaccines, 2013 vol. 12 pp 297）、全身性エリテマトーデス（Devarajan, Immunol. Res, 2013 vol. 57 pp 12）、ブドウ膜炎（Amadi-Obi, Nephrology, 2009, vol 14 pp 26）および乾癬性関節炎（De Vlam, Acta Derm. Venereol, 2014, vol. 94, pp 627）は、ＴＥＭ細胞に関連付けられている。
【０１４５】
同じことが肥満にもあてはまる（Xu, Human Molecular Genetics, 2003, vol. 12, pp 551）。
【０１４６】
ｃｔｇｘ５４４がＴＥＭ細胞に選択的に作用し、関節リウマチに効果を有することが示されたことを考慮すると、そのような疾患を治療または予防するためにｃｇｔｘ５４４および本明細書に開示される他のペプチドを用いることができると仮定することは合理的なようである。
【０１４７】
好ましい実施形態では、本発明の化合物および医薬組成物によって治療または予防される自己免疫性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病および脈管炎からなる群から選択される。
【０１４８】
新しい宿主への器官または組織の移植は、新しい器官または組織（例えば、心臓、肝臓、腎臓、すい臓または皮膚）に対するＴ細胞媒介性免疫応答のために、移植器官または組織の拒絶をしばしば引き起こすことがある。したがって、本発明は、器官または組織の移植拒絶の治療または予防で使用するための本発明による化合物または本発明による医薬組成物にも関する。器官移植拒絶には、ＴＥＭ細胞が同様に関与することが示された（例えば、Macedo, Transplantation, 2012 vol 93 pp 813を参照する）。ｃｇｔｘ５４４および本明細書に開示される他のペプチドの高い選択性を考慮すると、そのような疾患を治療または予防するためにｃｇｔｘ５４４および本明細書に開示される他のペプチドを用いることができると仮定することは合理的なようである。
【０１４９】
別の態様では、本発明は、それを必要とする哺乳動物に本発明による化合物または本発明による医薬組成物を投与することによって、哺乳動物で自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶を治療または予防する方法に関する。
【０１５０】
好ましくは、自己免疫性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病および脈管炎からなる群から選択される。
【０１５１】
本明細書で用いる用語「哺乳動物」には、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギなどが含まれる。好ましい哺乳動物は、ヒトである。
【０１５２】
本発明による医薬組成物の単位剤形は、採用される目的とする１日投薬量範囲に相応した、本発明による化合物の任意の適する有効量を含有することができる。
【０１５３】
本発明による化合物または本発明による医薬組成物の投与を必要とする哺乳動物は、例えば、Ｔ細胞媒介性疾患、好ましくはＴ細胞媒介性自己免疫性疾患を患っているかまたはその発症のリスクがある哺乳動物である。好ましい実施形態では、前記自己免疫性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、１型糖尿病および脈管炎からなる群から選択される。
【０１５４】
さらなる態様では、本発明は、本発明による化合物、本発明による核酸配列、本発明によるベクターまたは本発明による医薬組成物を製造する方法にも同様に関する。
【０１５５】
本発明は、以下にも関する：
（１）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号１）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋ
である化合物。
【０１５６】
好ましい実施形態では、前記化合物は、ＨｓＴｘ１（配列番号３２）でない。
【０１５７】
（２）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、ＮおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ
である、（１）による化合物。
【０１５８】
好ましい実施形態では、前記化合物は、ＨｓＴｘ１でない。
【０１５９】
（３）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｃ（配列番号３）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１５＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１６＝Ｇ、Ｒ、Ｋ
である、（１）による化合物。
【０１６０】
（４）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｃ（配列番号４）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ  Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１５＝Ｙ、ＮおよびＸ１６＝Ｇ、Ｒ
である、（３）による化合物。
【０１６１】
（５）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号５）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬおよびＸ１６＝Ｋ、Ｒ
である、（１）による化合物。
【０１６２】
（６）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号６）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、ＧおよびＸ１６＝Ｋ、Ｒ
である、（５）による化合物。
【０１６３】
（７）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号７）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、ＩおよびＸ１４＝Ｋ、Ｒ
である、（１）による化合物。
【０１６４】
（８）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｎ−Ａ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１４−Ｃ−Ｙ−Ｇ−Ｃ（配列番号８）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、ＬおよびＸ１４＝Ｋ、Ｒ
である、（７）による化合物。
【０１６５】
（９）配列番号９のアミノ配列を含む、（８）による化合物。
【０１６６】
（１０）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｑ−Ｃ−Ｘ７−Ｒ−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１０）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、ＮおよびＸ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ
である、（１）による化合物。
【０１６７】
（１１）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｑ−Ｃ−Ｘ７−Ｒ−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１１）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、ＮおよびＸ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ
である、（１０）による化合物。
【０１６８】
（１２）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、（１１）による化合物。
【０１６９】
（１３）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｑ−Ｃ−Ｙ−Ｐ−Ｈ−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１３）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ４＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ５＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ７＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＸ８＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ
である、（１）による化合物。
【０１７０】
（１４）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｒ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｑ−Ｃ−Ｙ−Ｐ−Ｈ−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号１４）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ４＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ５＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ７＝Ｋ、Ｄ、Ａ、ＲおよびＸ８＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ
である、（１３）による化合物。
【０１７１】
（１５）配列番号１５のアミノ酸配列を含む、（１４）による化合物。
【０１７２】
（１６）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｒ−Ｃ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｃ（配列番号１６）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ、Ｔ、Ｙ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１５＝Ｇ、Ｒ、Ｋ
である、（１）による化合物。
【０１７３】
（１７）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｒ−Ｃ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｃ（配列番号１７）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ａ、Ｖ、Ｉ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ、Ｋ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、ＮおよびＸ１５＝Ｇ、Ｒ
である、（１６）による化合物。
【０１７４】
（１８）配列番号１８または配列番号１９のアミノ酸配列を含む、（１７）による化合物。
【０１７５】
（１９）アミノ酸配列：
Ｉ−Ｓ−Ｃ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号２０）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ２＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ３＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ４＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ５＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ６＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＸ１１＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ
である、（１）による化合物。
【０１７６】
（２０）アミノ酸配列：
Ｉ−Ｓ−Ｃ−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｃ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｃ−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｇ−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｃ−Ｎ−Ｒ−Ｃ（配列番号２１）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ２＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ３＝Ｐ、Ｓ；Ｘ４＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ５＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ６＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ８＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ９＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１０＝Ｋ、Ｄ、Ａ、ＲおよびＸ１１＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ
である、（１９）による化合物。
【０１７７】
（２１）配列番号２２のアミノ酸配列を含む、（２０）による化合物。
【０１７８】
（２２）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２３）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ、Ｓ、Ｙ、Ｎ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ、Ｙ、Ｓ、Ｖ、Ａ、Ｌ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ、Ｋ
である化合物。
【０１７９】
（２３）アミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｎ−Ｖ−Ｘ４−Ｃ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｃ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｃ−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１８−Ｃ−Ｘ１９−Ｘ２０−Ｃ（配列番号２４）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ｔ、Ｑ；Ｘ２＝Ｉ、Ｆ；Ｘ３＝Ｉ、Ｔ；Ｘ４＝Ｋ、Ｓ；Ｘ５＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ６＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ７＝Ｐ、Ｓ；Ｘ８＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ９＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ１０＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ１１＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１２＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１３＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１４＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１５＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１７＝Ａ、Ｇ；Ｘ１８＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１９＝Ｙ、ＮおよびＸ２０＝Ｇ、Ｒ
である、（２２）による化合物。
【０１８０】
（２４）配列番号２５または配列番号２６のアミノ酸配列を含む、（２３）による化合物。
【０１８１】
（２５）アミノ酸配列：
Ｇ−Ｖ−Ｘ１−Ｉ−Ｎ−Ｖ−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２７）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｗ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｒ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ、Ｓ、Ｙ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ、Ｋ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｙ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ、Ｔ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｌ、Ｆ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｙ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ、Ｄ、Ｎ、Ｖ、Ｉ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｑ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、ＳおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ、Ｋ
である化合物。
【０１８２】
（２６）アミノ酸配列：
Ｇ−Ｖ−Ｘ１−Ｉ−Ｎ−Ｖ−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｃ−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｃ−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｔ−Ｇ−Ｃ−Ｐ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｋ−Ｃ−Ｍ−Ｎ−Ｒ−Ｋ−Ｃ−Ｘ１６−Ｃ−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｃ（配列番号２８）
を含み、上式で、
Ｘ１＝Ｐ、Ｉ、Ｆ；Ｘ２＝Ｋ、Ｓ；Ｘ３＝Ｒ、Ｔ、Ｋ；Ｘ４＝Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｎ、Ｉ；Ｘ５＝Ｐ、Ｓ；Ｘ６＝Ｒ、Ｋ、Ｐ；Ｘ７＝Ｄ、Ｑ、Ｎ、Ｅ；Ｘ８＝Ａ、Ｙ、Ｉ、Ｌ、Ｗ；Ｘ９＝Ｄ、Ｒ、Ｐ、Ｋ、Ｅ、Ｓ；Ｘ１０＝Ｐ、Ｈ、Ｖ；Ｘ１１＝Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｘ１２＝Ｋ、Ｄ、Ａ、Ｒ；Ｘ１３＝Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｌ；Ｘ１４＝Ｙ、Ｎ；Ｘ１５＝Ａ、Ｇ；Ｘ１６＝Ｋ、Ｒ、Ｘ１７＝Ｙ、ＮおよびＸ１８＝Ｇ、Ｒ
である、（２５）による化合物。
【０１８３】
（２７）配列番号２９、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列を含む、（２６）による化合物。
【０１８４】
カリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である、（２８）（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１３）、（１４）、（１７）、（１９）、（２０）、（２２）、（２３）、（２５）または（２６）のいずれかによる化合物。
【０１８５】
カリウムチャネルＫｖ１．１と比較してカリウムチャネルＫｖ１．３に選択的に結合することが可能である、（２９）（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１３）、（１４）、（１７）、（１９）、（２０）、（２２）、（２３）、（２５）または（２６）のいずれかによる化合物。
【０１８６】
（３０）（１）から（２７）のいずれかで述べたアミノ酸配列をコードする核酸配列。
【０１８７】
（３１）（３０）による核酸配列を含むベクター。
【０１８８】
（３２）（３０）による核酸配列または（３１）によるベクターを含む宿主細胞。
【０１８９】
（３３）（１）から（２９）のいずれかによる化合物を含む医薬組成物。
【０１９０】
（３４）自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶の治療で使用するための、（１）から（２９）のいずれかによる化合物または（３３）による医薬組成物。
【０１９１】
（３５）自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶の治療または予防のための医薬の製造における、（１）から（２９）のいずれかによる化合物または（３３）による医薬組成物の使用。
【０１９２】
（３６）それを必要とする哺乳動物に（１）から（２９）のいずれかによる化合物または（３３）による医薬組成物を投与することによって、哺乳動物で自己免疫性疾患、肥満、歯周炎および／または組織移植拒絶を治療または予防する方法。
【０１９３】
（３７）（３０）による核酸配列、（３１）によるベクターまたは（３２）による宿主細胞を用いて（１）から（２９）のいずれかによる化合物を製造する方法。
（実施例）
【実施例１】
【０１９４】
電気生理学的測定
カリウム電流は、ヒトＫｖ１．３（ｈＫｖ１．３）チャネルを発現するスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）（ＳＦ２１）の細胞を用いて測定した。チャネル活性は、−４０ｍＶより正の電圧への膜脱分極により誘導される。活性化速度論は急速で、電圧依存性が強いが、不活性化はずっと遅く、有意な電圧依存性を示さない。Ｓｆ２１細胞では、ｈＫｖ１．３は、＋４０ｍＶで２５０ｐＡ〜５ｎＡの間の平均電流振幅を有する。
【０１９５】
感染の１〜３日後、Ｐｏｒｔ−Ａ−Ｐａｔｃｈ（Ｎａｎｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＧｍｂＨ）を用いて、平面パッチクランプ技術でカリウム電流を記録した。イオン電流は、２００ｍｓで＋４０ｍＶの脱分極電位への電圧ステップによって活性化した。
【０１９６】
ＳＦ２１細胞は、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、２ｍＭグルタミン、１×イーストレート（５０倍保存溶液から）および０．１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８（ＢＡＳＦ）を追加したグレースの昆虫細胞培地で、細胞数２〜３×１０６／ｍｌの細胞密度まで培養した。
【０１９７】
電気生理学的緩衝液は以下の通りだった：
外部緩衝液：
１６０ｍＭ  ＮａＣｌ
４．５ｍＭ  ＫＣｌ
１ｍＭ  ＭｇＣｌ２
２ｍＭ  ＣａＣｌ２
５ｍＭ  Ｄ−グルコース一水和物
１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＮａｏＨ  ｐＨ７．４
内部緩衝液：
７５ｍＭ  ＫＣｌ
１０ｍＭ  ＮａＣｌ
７０ｍＭ  フッ化カリウム
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１０ｍＭ  ＥＧＴＡ
１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＫＯＨ  ｐＨ７．２
【０１９８】
本明細書に記載されるペプチド（配列番号１から３１、特にｃｇｔｘ−５４４（配列番号２５）の選択性を実証するために、Ｋｖ１．３、Ｋｖ１．１およびＫｖ１．５へのｃｇｔｘ−５４４の結合についてＩＣ５０を決定した。対照として、ＨｓＴｘ１（配列番号３２）を試験した。
【０１９９】
２０ｍＭ  ＮａＰＯ４緩衝液ｐＨ８．２（１ｍｌの折畳み緩衝液に１ｍｇ）にペプチドを１μｇ／μｌで溶解し、同じ緩衝液３×１Ｌ、Ｆｌｏａｔ−ａ−Ｌｙｚｅｒカットオフ５００Ｄａ（Ｓｐｅｃｔｒａｐｏｒ）に対して室温で透析した。
【０２００】
試験したチャネルによって、例えば１００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭおよび１μＭの様々な濃度でＨｓＴｘ１の結合を試験した。Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．３およびＫｖ１．５の代表的測定を、それぞれ図１ａ）、１ｂ）および１ｃ）に表す。
【０２０１】
Ｋｖ１．３へのＨｓＴｘ１結合のＩＣ５０は、２５±２．１ｎＭであった。Ｋｖ１．１へのＨｓＴｘ１結合のＩＣ５０は、１１．３μＭであった。Ｋｖ１．５に関しては、結合は検出できなかった。したがって、ＨｓＴｘ１は、Ｋｖ１．１に比較してＫｖ１．３への約４５０倍高い選択性を有する。
【０２０２】
試験したチャネルによって、例えば、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭおよび５μＭの様々な濃度でｃｇｔｘ−５４４の結合を試験した。Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．３およびＫｖ１．５の代表的測定を、それぞれ図１ｄ）、１ｅ）および１ｆ）に示す。
【０２０３】
Ｋｖ１．３へのｃｇｔｘ−５４４の結合のＩＣ５０は、６．９ｎＭであった。１０μＭの濃度まで、Ｋｖ１．５への結合は検出できなかった。Ｋｖ１．１は、１０μＭで約２２％遮断された。したがって、ｃｇｔｘ−５４４は、ＨｓＴｘ１と比較してＫｖ１．１よりＫｖ１．３へのより高い選択性を有する。
【実施例２】
【０２０４】
Ｋｖ１．３およびｈＥＲＧへの結合の比較
下の実施例では、Ｋｖ１．３およびｈＥＲＧへの選択されたペプチドの結合を、電気生理学的測定によって比較した。
【０２０５】
細胞系
Ｋｖ１．３への結合を決定するために、Ｋｖ１．３を内因的に発現するジャーカット細胞を用いた。ｈＥＲＧへの結合のために、ｈＥＲＧを安定して発現するＨＥＫ細胞を用いた。
【０２０６】
細胞培養
標準の細胞培養技術を用いて、細胞培養を実施した。簡潔には、１０ｃｍ培養皿またはＴ７５培養フラスコで、細胞をＤＭＥＭベースの培地で増殖させた。約６０〜８０％の集密で、細胞を２〜３日おきに分けた。Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒ（Ｎａｎｉｏｎ）での記録のために、ジャーカット細胞を再懸濁させ、次に遠心分離機で回転させた。遠心回転の前に、皿の表面からそれらを切り離すために、ＨＥＫ細胞をトリプシンで処理した。遠心回転させた後に、１ｍｌにつき細胞数が概ね１，０００，０００〜２，０００，０００の密度まで、細胞を外部記録緩衝液に再懸濁させた。
【０２０７】
内部記録溶液：
５０ｍＭ  ＫＣｌ
１０ｍＭ  ＮａＣｌ
６０ｍＭ  ＫＦ
２０ｍＭ  ＥＧＴＡ
１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＫＯＨ、ｐＨ７．２、（Ｏｓｍ：約２９０ｍＯｓｍ）
【０２０８】
５ｍＭ  Ｍｇ−ＡＴＰおよび０．３ｍＭ  Ｎａ−ＧＴＰを内部溶液に新たに加え、ｐＨを７．２に調整した。
【０２０９】
外部記録緩衝液：
１４０ｍＭ  ＮａＣｌ
４ｍＭ  ＫＣｌ
１ｍＭ  ＭｇＣｌ２
２ｍＭ  ＣａＣｌ２
５ｍＭ  Ｄ−グルコース一水和物
１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ  ｐＨ７．４（Ｏｓｍ：約２９８ｍＯｓｍ）
【０２１０】
化合物
以下の化合物を試験した：
化合物１：ｃｇｔｘ５３８
化合物２：ｃｇｔｘ５３９
化合物３：ｃｇｔｘ５４０
化合物４：ｃｇｔｘ５４１
化合物５：ｃｇｔｘ５４２
化合物６：ｃｇｔｘ５４３
化合物７：ｃｇｔｘ−５４４
化合物８：ｃｇｔｘ５４７
【０２１１】
電気生理学的測定
Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒで電気生理学的記録を実施し、最高８チャネルまで同時に記録した。Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒは、ホウケイ酸ガラスチップ（ＮＰＣ−１６）を平面パッチクランプのために利用し、ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴソフトウェアによって動作する、自動パッチクランプシステムである。ジャーカット細胞には３〜５ＭΩおよびＨＥＫ細胞には２〜３ＭΩの抵抗を有するＮＰＣ−１６チップを記録のために用いた。記録の間、細胞を「細胞ホテル」に保管し、そこでは生存率を維持するためにピペットによりそれらを定期的に吸入、吐出した。細胞は、概ね２〜３時間生存能力があった。
【０２１２】
ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴソフトウェア
Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒを動作させるためには、ＮａｎｉｏｎのＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴおよびＨＥＫＡからのＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒの２つのプログラムをコンピュータ上で同時に実行する。
【０２１３】
ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒはＨＥＫＡ  ＥＰＣ１０増幅器を制御し、記録を実行する。パルスプロトコールおよびオンラインアナリシスを、このプログラムの中で生成することができる。ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴは、細胞の捕獲およびシーリングから細胞全体に行き、所望の記録を得る、完全な実験ルーチンを定義するために用いられる。ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴとＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒの間の双方向性通信は、ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴが細胞状態（ギガシール、全細胞構成）によってその作用を調整することを可能にする。
【０２１４】
このプログラムは、溶液交換の実行のためのピペットを含むＰａｔｃｈｌｉｎｅｒのロボット機能を完全にナビゲートする。同時に、ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴは増幅器も制御し、ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒから全ての重要なパッチパラメータを読み出す。ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴはグラフィカルなユーザーインターフェイスであり、そこには、実験の全てのパラメータおよび成功基準が定義されている。ある記録ウェルで成功基準が達成されない場合は、ＰａｔｃｈＣｏｎｔｒｏｌＨＴがその特定のウェルからの記録を中止するオプションが利用できる。
【０２１５】
実験ルーチン
適当な記録条件を確立するために、Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒの標準手順機能によってチップフィリング、細胞の捕獲、シーリングおよび全細胞モードの開始を行った。このルーチンの終わりに、増幅器設定（例えば保持電位、遅いキャパシティ補償およびゲイン）を所望の記録のために適切に設定し、その後記録を開始した。
【０２１６】
各実験の中で、安定した記録を確実にするために、外部溶液で細胞を３回洗浄した。化合物１〜８は、ｈＥＲＧ発現細胞でさらに試験した。各化合物の曝露時間は４分であり、合計で、各実験は２４分実行された。
【０２１７】
電圧プロトコール
ｈＥＲＧについては：ｈＥＲＧ電流は、まず−８０ｍＶから−４０ｍＶの保持電位を５００ｍｓ、続いて＋４０ｍＶを５００ｍｓへのステップ、テール電流を得るための−４０ｍＶの試験パルスを５００ｍｓ、その後保持電位に戻る電圧ステッププロトコールを用いて誘導した。ステップは、１０秒おきに繰り返した。
【０２１８】
プロトコールは連続的に実行し、オンライン結果を連続的に読み出した。これは、洗浄および／または化合物適用による変化を監視でき、定常状態への到達を評価できるように実行された。
【０２１９】
データ分析
データの記録および分析は、２台のＥＰＣ１０  Ｑｕａｄｒｏ増幅器、ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒソフトウェアパッケージ（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ／Ｐｆａｌｚ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥｘｃｅｌおよびＩｇｏｒ（ＷａｖｅＭｅｔｒｉｃｓ、ＵＳＡ）で実施した。
【０２２０】
ｈＥＲＧに関する薬理学のために、第２の−４０ｍＶのステップ（テール電流）のピークの振幅を、ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒのオンライン分析機能を用いて計算した。真のピークを計算するためにリーク（第１のステップから−４０ｍＶまで計算した）をこのピークから引き算し、これらは時間の関数としてプロットすることができた。
【０２２１】
Ｉｇｏｒで濃度応答曲線を計算するために、値はＥｘｃｅｌにエクスポートした。図を描写し、Ｉｇｏｒ（ＷａｖｅＭｅｔｒｉｃｓ、ＵＳＡ）を用いてエクスポートした。濃度応答曲線は、Ｉｇｏｒで構築された。各化合物のＩＣ５０を推定するためにヒル式をあてはめ、ＩＣ５０は最大遮断に対して計算した。可能な場合、値は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍで表す。
【０２２２】
結果
ｈＥＲＧ電流で試験した化合物１〜８
Ｋｖ１．３電流での化合物１〜８の電気生理学的測定は、これらのペプチドが活性であることを示した。したがって、化合物１〜８をｈＥＲＧ発現ＨＥＫ細胞で試験した。これらの化合物の効果を検討するために、２点スクリーニング法を実施した。精度を確実にするために、通常、３から５個の細胞を試験した。安定した電流を確実にするために、各実験を３回の洗浄から開始した。ｈＥＲＧ電流はわずかに増加したが、２回目の洗浄の後に安定した。化合物１、２、４、５、７および８は、ｈＥＲＧ電流に低い効果だけを有するようであった。通常、化合物１〜８の効果は、ｈＥＲＧ電流のランダウン効果によって説明することもできた。結果を、図３に示す。全ての化合物の平均電流遮断±ＳＥＭの概要を、表１に示す。
【０２２３】
【表１】
0006989377.tif 000002
【０２２４】
さらなる分析
上記の分析は、完全に折り畳まれたペプチドを精製せずに、それぞれのペプチドを実施例８に記載の折畳みプロトコールにかけた後に実行した。
【０２２５】
さらに、上記のようにｃｇｔｘ−５４４を折り畳み、精製した。次に、このｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）で分析を繰り返した。さらに、より長い期間、すなわち約２０分間、ペプチドの長いオンレートとより良好に相関する時間、インキュベートすることによって、ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）をＫｖ１．３で次に試験した。これらの条件下で、未精製のｃｇｔｘ−５４４の６．９ｎＭと比較して、ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、折畳みおよび精製の後約９００ｐＭのＩＣ５０を示す（実施例１を参照する）。結果を、図３５に示す。
【実施例３】
【０２２６】
ヒトおよびラットの血漿中のｃｇｔｘ−５４４（配列番号２５）の安定性
１．ヒトおよびラットの血清試料でのｅｘ  ｖｉｖｏ安定性の決定
目的は、室温（ＲＴ）および３７℃での異なるインキュベーション時間の後に、哺乳動物の血漿中でのｃｇｔｘ−５４４ペプチドの安定性を試験することであった。安定性は、室温および３７℃での異なるインキュベーション時間の後の、ｃｇｔｘ−５４４のＩＣ５０値と規定された。血漿は、健康なラットまたはヒトからの新鮮な血液試料から調製した。血栓を予防するために、新鮮な血液試料にヘパリンを加えた。血漿調製は、室温において２０００×ｇで２分間の遠心分離によって実施した。
【０２２７】
実験の開始の前に、電気生理学的アッセイによって４６．１ｎＭ±３．９ｎＭ（細胞数ｎ＝５について）のＩＣ５０値を得ることでｃｇｔｘ−５４４のＩＣ５０を決めた。これらの実験で用いたｃｇｔｘ−５４４ペプチドは不完全に折り畳まれたので、正常より高いＩＣ５０が決定された。調製したヒトおよびラット血漿の陰性対照は、Ｓｆ２１昆虫細胞で発現されたＫｖ１．３チャネルへの、血漿構成成分の非特異的結合を示さなかった。
【０２２８】
血漿中での安定性および活性を検討するために、新たに調製したヒトおよびラット血漿に、ペプチドを２０μＭの最終濃度で加えた。試料を２つのアリコートに分け、３７℃および室温（ＲＴ、２０℃）でインキュベートした。電気生理学的分析のために、試料の系列希釈を調製した。
【０２２９】
時点  ０時間：血漿にペプチドを加えた直後に、試料が分析され、Ｋｖ１．３チャネルへの強力な親和性を示した。ＩＣ５０値は、ヒト血漿中のｃｇｔｘ−５４４については２０．９ｎＭに、ラット血漿では１５．０ｎＭに改善された（データ示さず）。
時点  ２４時間：次の２４時間の間に、３７℃および室温で保存されたペプチドプローブの活性に有意な変化は検出できなかった。
時点  ４８時間：４８時間後、３７℃でインキュベートしたペプチドの活性は低下し、ヒト血漿またはラット血漿でインキュベートしたｃｇｔｘ−５４４のＩＣ５０値は、ｔ＝０時間と比較して２倍高かった（それぞれ、３７．３ｎＭおよび５７．８ｎＭ）。室温で保存したｃｇｔｘ−５４４の活性は、不変であった。
時点  １４日間：３７℃で１４日間のインキュベーションの後、活性は検出されなかった。室温でインキュベートしたｃｇｔｘ−５４４プローブは、不変の活性を示した。
【実施例４】
【０２３０】
単離したヒトＴＥＭ細胞でのｃｇｔｘ−５４４（配列番号２５）の有効性
１．単離したヒトＴＥＭでのＫｖ１．３電流の分析
昆虫細胞株スポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）（Ｓｆ２１）を、バキュロウイルス感染系と一緒に用いて組換えイオンチャネルを異種発現させた。Ｓｆ２１細胞は高度に特異的なタンパク質発現、および適切な翻訳後修飾を提供し、ｉｎ  ｖｉｖｏでイオンチャネルの電気生理学的パラメータと同等であると提案されている機能的チャネルをもたらす。したがって、Ｓｆ２１細胞で発現されるカリウム選択的イオンチャネルＫｖ１．３およびＴＥＭ細胞で内因的に発現されるＫｖ１．３チャネルの電気生理学的特性を比較することが必要だった。
【０２３１】
特徴的電圧依存性Ｋｖ１．３チャネル活性化の比較のために、２０ｍＶステップ（活性化パルス２００ｍｓ）での−６０ｍＶから＋６０ｍＶへの一般的な電圧プロトコールを用いた。細胞は、−１００ｍＶの保持電位で固定した。図４は、２つの個々のＳｆ２１およびＴＥＭ細胞の電流応答（それぞれ、図４Ａおよび４Ｂ）および電圧依存性Ｋｖ１．３活性化のためのパルスプロトコール（図４Ｃ）を示す。
【０２３２】
図５は、対応する正規化された電圧−電流相関を示す。Ｋｖ１．３は保持電位（−１００ｍＶ）から−２０ｍＶへの膜の脱分極で開き始め、＋６０ｍＶでその最大開放状態に到達する。Ｋｖ１．３の発現がＳｆ２１細胞でずっと高いとしても、特徴的な電圧依存性の活性化は不変のままである。
【０２３３】
Ｋｖ１．３活性から明らかに生じる最大観察電流、および印加電圧は、全てのＫｖ１．３チャネルの全体の伝導率の評価を可能にする。したがって、チャネル数は、単一のＫｖ１．３チャネルの公知の伝導率を用いて抽出することができる。最大のＫ＋外向き電流は、電流トレースの最初の２０％の間の活性化された遮断されていない電流と最大に遮断された（完全遮断）電流の間の差と規定される。検討の必要性に応じて、感染条件の変更することによってＳｆ２１細胞でのＫｖ１．３の発現レベルを制御することが可能である。本発明者らの標準の条件下で、２〜５ｎＡの最大電流、３３〜５０ｎＳのコンダクタンスおよび１細胞につき２５００〜３８００チャネル数を推定することができる。
【０２３４】
Ｓｆ２１細胞での異種発現系は、薬理的に興味深いイオンチャネルのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの電気生理的分析に適する方法を提示する。これらの観察に基づいて、Ｓｆ２１細胞の原形質膜へのＫｖ１．３イオンチャネルの折畳みおよび挿入は、ＴＥＭ細胞の天然のＫｖ１．３タンパク質と同等であると仮定することができる。
【０２３５】
非相同的に発現されたＫｖ１．３チャネルが電気生理学的パラメータの評価によって薬物ターゲティングを研究するためのモデル系の役割を果たすことができることが、はっきりと実証される可能性がある。特異的Ｋｖ１．３遮断を、ペプチド化合物ｃｇｔｘ−５４４を用いて実施した。前に示され、単離したヒトＴＥＭ細胞でも試験されたように、ペプチドはＫｖ１．３チャネルに対し高い親和性を示す（図６）。これらの実験で用いたｃｇｔｘ−５４４は不完全に折り畳まれ、正常より高いＩＣ５０を示すことに留意する。それにもかかわらず、化合物は、Ｋｖ１．３をトランスフェクトされたＳｆ２１細胞で、ヒトＴＥＭ細胞と同じ値を示した（図６）。
【実施例５】
【０２３６】
ペプチドｃｇｔｘ−５４４（配列番号２５）による抗原誘導関節炎の療法
１．実験モデル
１．ＡＩＡ−抗原誘導関節炎
ラットの疾患モデル抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）は、ヒトの関節リウマチの多くの特長に似ているＴ細胞依存性自己免疫性関節炎に相当する。したがって、この系は、本明細書に開示されるＴ細胞抑制性ペプチドの治療成功を評価するための疾患モデルの役割を果たすことができる。現行の療法（例えば、一般的な細胞増殖抑制剤の使用）に勝るこの治療手法の１つの主要な利点は、疾患の生成で原因として関与する免疫系の小さいサブセットだけが抑制されるが、例えば先天性免疫系のような免疫防御の他の重要な構成成分はなお元の通りであるという事実である。さらに、この疾患モデルは、ｃｇｔｘ−ペプチドの有効性および耐容性のｉｎ  ｖｉｖｏでの試験を可能にする。
【０２３７】
２．関節炎の誘導
全実験は、４週間で行われる。ｍＢＳＡと不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中の結核菌（M. tuberculosis）調製物の混合物の皮下注射によって、予備免疫化は、−２１日目（実験の開始）および−１４日目に起こる。１つの膝関節での炎症の局所誘導は、０日目の右膝での抗原ｍＢＳＡの単一の関節内注射によって誘導される。この実験セットアップでは、第２の（左の）未処置膝関節は、個体内対照の役割を果たす。
【０２３８】
処置された膝関節は、誘導後の最初の１時間に重度の腫脹反応を起こし、それは誘導の１日目および２日目に最大の腫脹に通常到達する。この表現型はさらなる２〜３日間安定し、その後腫脹は再び衰える。
【０２３９】
このスキームは、実験動物の＞９５％で、局所の再現可能な関節炎の誘導を可能にする。陰性対照実験では、０．９％ＮａＣｌの（ｍＢＳＡ誘導溶液と）同じ量を、対照動物の膝に投与した（図７および８を参照する）。
【０２４０】
２．材料および方法
２．１．動物
ルイスラット、雌、１８０〜２００ｇの体重（ＢＷ）、約８週齢、Ｊａｎｖｉｅｒ、Ｆｒａｎｃｅ
動物は、ＭａｋｒｏｌｏｎケージタイプＩＶにつき５匹の動物、１２時間の昼／夜リズムで食物および水は無制限、２２±２℃の室温で空気湿度は５５±５％の、従来のハウジング条件下においた。
【０２４１】
２．２．免疫化のためのエマルジョンの生産、動物の免疫化と局所関節炎の誘導
２．２．１．免疫化のためのエマルジョンおよび免疫化の過程
２．２．１．１．材料：
結核菌（Mycobacterium tuberculosis）Ｈ３７Ｒａ（ＢＤ２３１１４１）
不完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ  Ｆ５５０６）
ｍＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａ１００９−１Ｇ）
０．９％ＮａＣｌ（Ｂｒａｕｎ）
イソフルラン（Ａｂｂｏｔｔ）
【０２４２】
２．２．１．２．予備免疫化エマルジョン：
溶液Ａ：
ｍＢＳＡ保存溶液（５０ｍｇ／ｍｌ）：
無菌条件下で１バイアルｍＢＳＡ（１ｇ）への２０ｍｌ注射用水の添加。
無菌溶液は、４℃で数カ月間保存することができる。
溶液Ｂ：
完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）保存溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）：
１００ｍｇの細菌を含有する１バイアルの結核菌（M. tuberculosis）への１０ｍｌ（１バイアル）の不完全フロイントアジュバントの添加。
溶液は、４℃で１カ月間保存することができる。
混合物の調製
両方の構成成分を等量で混合してエマルジョンをもたらす（クリーンベンチ内の無菌条件下で混合する）。構成成分は、以下に記載の通り１５ｍｌまたは５０ｍｌのファルコンチューブにピペットで移す：
１．溶液Ａ：ｍＢＳＡ保存溶液
２．溶液Ｂ：結核菌（M. tuberculosis）溶液。
構成成分の添加の直後に、チューブを２０秒間撹拌する。最後の調製ステップでは、濃厚なエマルジョンが形成されるまで、溶液を超音波プロセッサー（６０％の振幅で０．５サイクル）で乳化する。
【０２４３】
２．２．１．３．予備免疫化
最終の関節炎誘導の前に動物を２回予備免疫化した。予備免疫は、−２１日目および−１４日目に行った。これらの時点で、免疫化溶液を皮下に注射した。５％イソフルランによる昏睡の誘導の後、２％イソフルランで麻酔を維持した。乳化された溶液の合計５００μｌを、２５Ｇカニューレを用いて適用した。尾基部の２つの側（右および左）ならびに左右の肩甲骨の上の２つの側に、１２５μｌの予備免疫化エマルジョンを皮下に注射した。
【０２４４】
２．２．１．４．局所関節炎の誘導
０日目に、右膝関節への抗原（５０μｌの０．９％ＮａＣｌに５００μｇのｍＢＳＡ）の関節内投与によって、関節炎を誘導した。左の膝は、個体内対照としてそのままにした。動物を麻酔にかけ、注射部位を消毒した。組織傷害を最小にするために、短く細いカニューレ（３０Ｇ、１／２）で適用を実行した。抗原の投与およびカニューレの抜き取りの後、関節を数回ゆっくりと曲げ伸ばした。
【０２４５】
２．２．２．膝関節の腫脹の測定
膝関節の矢状方向の直径を、カリパスで決定した。実験動物を短時間麻酔にかけ、仰向けにした。脚を９０度の角度に調整し、膝の矢状方向の直径の測定を３回実行した。
【０２４６】
２．２．３．血液抜き取り
血液抜き取りのために、動物を短時間麻酔にかけ、尾を消毒し、尾静脈をカニューレで穿刺し、５０μｌの血液をヘパリンコートピペットで抜き取り、５μｌの安定化剤（ＣＰＤ）および１μｌのヘパリン（０．９％ＮａＣｌで１：４に希釈した１．５Ｕ／μｌ）と混合した。
【０２４７】
２．２．３．血液学
自動モードのコールターカウンターで、白血球（ＷＢＣ）を数えた。
【０２４８】
２．２．４．体重の測定
実験動物の体重を、午前８：００と午前９：００の間に１日に１回測定した。
【０２４９】
２．２．５．臨床検査および膝関節の腫脹の測定
局所関節炎の誘導の後、実験動物を毎日検査した。膝関節の腫脹を測定し、一般健康状態をスコア化した。
【０２５０】
２．３．実験動物の処置
動物の処置は、−３日目に、０．６ｍｌの０．９％ＮａＣｌの量に１ｍｇ／ｋｇ体重（ＢＷ）の投薬によるペプチドｃｇｔｘ−５４４（配列番号２５）の適用から、あるいは対照動物の場合は０．９％ＮａＣｌ（賦形剤）の同量の適用から開始した。ペプチドまたは賦形剤は、麻酔にかけた動物の尾静脈にそれぞれ静脈内投与した。処置した動物は、処置後約１時間観察した。
【０２５１】
３．結果
予備免疫化段階の間、実験動物を集中的に監視し、−２１、−１４、−７、０および７日目に動物の免疫状態を監視するために血液試料を抜き取った。分析の対応する時点で、炎症の発生と末梢血での白血球（ＷＢＣ、白血球）の数の間に非常に優れた相関があった。
【０２５２】
最近免疫化された動物（−２１および−１４日目）の末梢血でのＷＢＣの数は、未処置動物と比較して劇的に増加する（図９を参照する）。ＷＢＣの数は、−１４から−７日目の間に最大値に到達し、その後減退する。ＷＢＣの増加は、免疫化によって誘導される炎症の重症度と相関する。
【０２５３】
局所関節炎の誘導の直後に、ＷＢＣは短期増加を示す（図９を参照する）。しかし、炎症性応答は局在化されているので、この短期増加はより小さい。０．９％ＮａＣｌで免疫化された対照動物は、ＷＢＣ数のいかなる差も示さなかった。
【０２５４】
予備免疫化された動物は、ｍＢＳＡ注射による局所関節炎の誘導のわずか数時間後に右の膝関節に重度の腫脹反応を起こす（図８を参照）。逆に、個体内対照膝の役目を果たす未処置の左の膝は、腫脹反応のいかなる徴候も示さない。
【０２５５】
ｃｇｔｘ−５４４ペプチドで処置した動物と未処置の（賦形剤）対照との比較は、未処置の対照動物と比較してｃｇｔｘ−５４４処置が膝関節腫脹の明白な低減につながることを明らかにする（図１０を参照する）。ｃｇｔｘ−５４４で処置した動物は、未処置の対照動物と比較して、膝関節腫脹の明らかな低減および腫脹のより速い回復を示すと結論付けることができる。
[実施例５ａ]
【０２５６】
ＲＡのＡＩＡラットモデルでのｃｇｔｘ−５４４ペプチドの予防的有効性
１．材料および方法
完全フロイントアジュバント中の抗原ｍＢＳＡおよび７５０μｇの熱不活性化結核菌（Mycobacterium (M.) tuberculosis）のエマルジョンによる−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、実施例５に記載の通り、０日目に右の膝へのメチル化ＢＳＡの関節内注射によってＡＩＡを誘導した。ｃｇｔｘ−５４４ペプチドの有効性の研究のために、ラットは、１０日間（−３日目から６日目まで）、−３日目から開始した０．１、１もしくは５ｍｇ／ｋｇのｃｇｔｘ−５４４ペプチド（低、中間および高用量レベル）またはビヒクル（０．９％ＮａＣｌ）の静脈内注射を毎日受けた。
【０２５７】
関節炎の重症度は、ノギスを用いる膝関節直径の３反復の測定によって監視した。値は、−２１日目に正規化した。膝腫脹値の差は、右の（誘導した）膝直径から左の（非誘導）直径を引き算することによって計算した。
【０２５８】
血液学的パラメータを監視するために、血液試料を定期的に取った。誘導の前、誘導の日および誘導の１０日後（−２１、−１４、−７、０および１０日目）に、全ての動物で血液学的パラメータを毎週評価した。未処置動物（−２１日目）の血液学的データは、文献（Waynforth & Flecknell, 1992）で報告されたものと同等だった。とりわけ白血球（ＷＢＣ）、好中性顆粒球およびリンパ球の絶対数を分析し、最後の２つは全ＷＢＣの百分率でも明記した。ビヒクルおよびｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法群の両方からの７個体のＥＤＴＡ全血を、Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＴ−２０００ｉで測定した。
【０２５９】
２．結果
ｃｇｔｘ−５４４の全ての試験した用量レベル（０．１、１および５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ）は、処置動物で膝腫脹を低減する明らかな用量依存性のおよび統計的に有意な効果を示した（図１８）。
【０２６０】
結果の統計分析のために、ウェルシュの２試料ｔ検定を用いた。以下では、ｃｇｔｘ−５４４の全ての試験した用量レベル（０．１、１および５ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ）の統計分析を、１日目および３日目について示す。ビヒクル対照群と比較したとき、全ての試験した用量レベルは膝腫脹の統計的に有意な低減を示した（図１９）。
【０２６１】
要約すると、ＡＩＡモデルでのｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法は、炎症性関節炎症状、特に膝腫脹に強力な効果を示し、最大低減は７０％であった。処置の７日後、療法群での膝直径は、誘導しなかった個体内対照膝とほとんど同等の直径にさらに減少した。さらに、ｃｇｔｘ−５４４ペプチド処置個体のＷＢＣ、好中性顆粒球およびリンパ球（データ示さず）は、ビヒクル処置個体と同等の絶対的および相対的細胞数を示した。
[実施例５Ｂ]
【０２６２】
ＲＡのＡＩＡラットモデルでのｃｇｔｘ−５４４の治療的有効性
１．材料および方法
完全フロイントアジュバント中の抗原ｍＢＳＡおよび７５０μｇの熱不活性化結核菌（Mycobacterium (M.) tuberculosis）のエマルジョンによる−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、上の実施例５に記載の通り、０日目に右の膝へのメチル化ＢＳＡの関節内注射によってＡＩＡを誘導した。ｃｇｔｘ−５４４ペプチドの有効性の研究のために、ラットは、関節炎誘導の直後の０日目に開始されたかまたは１日目に開始された、１ｍｇ／ｋｇのｃｇｔｘ−５４４ペプチドの静脈内注射を毎日受けた。対照動物は、ビヒクル（０．９％ＮａＣｌ）の注射を毎日受けた。
【０２６３】
関節炎の重症度は、ノギスを用いる膝関節直径の３反復の測定によって監視した。値は、−２１日目に正規化した。膝腫脹値の差は、右の（誘導した）膝直径から左の（非誘導）直径を引き算することによって計算した。
【０２６４】
２．結果
ｃｇｔｘ−５４４（混合物）（１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ）により試験した両方の処置開始時点は、処置動物で膝腫脹を明らかに低減する統計的に有意な効果を示した（図２０）。
【０２６５】
結果の統計分析のために、ウェルシュの２試料ｔ検定を用いた。以下では、ｃｇｔｘ−５４４の両方の処置レジメン（ｄ０およびｄ１）の統計分析を、１、２および３日目について示す。ビヒクル対照と比較したとき、両処置レジメンは膝腫脹の統計的に有意な低減を示した（図２１）。
【０２６６】
白血球（ＷＢＣ）数の時間経過を、図２２に示す。好中球の時間経過は、図２３に示す。リンパ球の時間経過は、図２４に示す。
【０２６７】
ｃｇｔｘ−５４４（混合物）処置は、膝関節腫脹の有意な低減を示す。処置した動物での残りの腫脹は、抗体／抗原反応のせいであると仮定された。したがって、免疫化された動物ならびにナイーブな動物を、ｍＢＳＡ特異的抗体の存在について試験した。ｍＢＳＡに対する抗体は、関節炎誘導の７日後に群ＨおよびＩの全ての免疫化動物で検出することができた（図２７）。ナイーブ動物（実験群Ｆ）は、ｍＢＳＡに対しいかなる反応性も示さなかった。ｃｇｔｘ−５４４療法は、Ｂリンパ球および抗体形成を抑制しないようである。さらに、ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法下で１０日後の免疫化動物は、ｃｇｔｘ−５４４（混合物）（ｔｒｘタグとの融合タンパク質Ｌ５４４−２ａ、データ示さず）で反応性を示さなかった。
【０２６８】
要約すると、ＡＩＡモデルでのｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法は、炎症性関節炎症状、特に膝腫脹に強力な効果を有し、最大低減は、療法が０日目に関節炎誘導の直後に開始された場合は４０％、または療法が１日目に開始された場合は５８％であった。処置の７日後、療法群での膝直径は、誘導しなかった個体内対照膝とほとんど同等の直径にさらに減少した。さらに、ｃｇｔｘ−５４４ペプチド処置個体のＷＢＣ、好中性顆粒球およびリンパ球は、ビヒクル処置個体と同等の絶対的および相対的細胞数を示した。
[実施例５Ｃ]
【０２６９】
ＲＡのＡＩＡラットモデルでのｃｇｔｘ−５４４（混合物）の持続的有効性
以前の実験（実施例５Ａおよび５Ｂを参照する）は、異なる処置レジメン、治療的および予防的、の下で毎日適用したとき、ｃｇｔｘ−５４４がＡＩＡラットモデルで優れた有効性を有することを実証した。ｃｇｔｘ−５４４による処置間隔がどのくらいの長さになるかについてのヒントを得るために、ｃｇｔｘ−５４４の活性がＡＩＡモデルでどのくらい長く持続するか明らかにしようと試みた。したがって、週１回の適用スキームによる治療処置レジメンを設定した。
【０２７０】
１．材料および方法
完全フロイントアジュバント中の抗原ｍＢＳＡおよび７５０μｇの熱不活性化結核菌（Mycobacterium (M.) tuberculosis）のエマルジョンによる−２１日目および−１４日目の２回の免疫化の後、上の実施例５に記載の通り、０日目に右の膝へのメチル化ＢＳＡの関節内注射によってＡＩＡを誘導した。ｃｇｔｘ−５４４ペプチドの有効性および持続的療法効果の研究のために、ラット（１０個体）は、関節炎誘導から１日目（ｄ１）に１ｍｇ／ｋｇのｃｇｔｘ−５４４ペプチドの単回の静脈内注射を受けた。４日目（ｄ４）に、ｃｇｔｘ−５４４療法群を各々５個体の２つのサブグループに分けた。第１のサブグループは、２回目の注射が腫脹のさらなる低減につながるかどうか評価するために、ｃｇｔｘ−５４４の２回目の注射を受けた。第２のサブグループは、追加の投薬を受けなかった。対照動物は、１日目にビヒクル（０．９％ＮａＣｌ）の単回注射を受けた。
【０２７１】
関節炎の重症度は、ノギスを用いた膝関節直径の３反復の測定によって監視した。値は、−２１日目に正規化した。膝腫脹値の差は、右の（誘導した）膝直径から左の（非誘導）直径を引き算することによって計算した。
【０２７２】
２．結果
ｃｇｔｘ−５４４（１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ）による単回注射（１×ｄ１）は、適用の２４時間後に処置動物で膝腫脹の明らかで統計的に有意な低減を示した（図２５）。腫脹は、４日目の２回目の単回注射の後（１×ｄ１および１×ｄ４）に、有意な値に再び低減することができた。１回目および２回目の注射の後、膝腫脹は同じレベルのままであり、増加しなかった。
【０２７３】
結果の統計分析のために、ウェルシュの２試料ｔ検定を用いた。以下では、ｃｇｔｘ−５４４の両処置レジメン（１×ｄ１または１×ｄ１および１×ｄ４）の統計分析を、２日目（群の分割前）および５日目（分割群）について示す。ビヒクル対照と比較したとき、両処置レジメンは各注射の２４時間後に膝腫脹の統計的に有意な低減を示した（図２６）。
【０２７４】
要約すると、ＡＩＡモデルでのｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法は、炎症性関節炎症状、特に膝腫脹に強力で持続的な効果を示し、腫脹低減の開始は単回注射の２４時間後であった。単回注射の３日後でさえ、ｃｇｔｘ−５４４ペプチドは持続的活性および臨床効果を実証し、膝腫脹のレベルは一定であった。したがって、ＡＩＡラットモデルでの持続的治療効果のために、ペプチドを毎日投与する必要はない。したがって、静脈内投与のために３〜４日間の処置間隔（または、可能な皮下投与経路のためにはより長い）を達成することができる可能性がある。
【実施例６】
【０２７５】
ＡＩＡラットモデルでのメトトレキセート（ＭＴＸ）療法とｃｇｔｘ−５４４ペプチド（配列番号２５）療法との比較
１．ＡＩＡラットモデルでのメトトレキセート（ＭＴＸ）療法とｃｇｔｘ−５４４（配列番号２５）療法との比較
疾患の形態および重症度によって、メトトレキセート（ＭＴＸ）による療法は、用量およびレジメンが異なる。標準療法との比較で、高用量ＭＴＸ療法１ｍｇ／ｋｇ体重を皮下に週１回（Ｊ群、ｎ＝７）、および１００μｇ／ｋｇ体重を静脈内に１日１回の低用量ＭＴＸ療法（Ｌ群、ｎ＝７）をＡＩＡラットモデルで検査した。高用量ＭＴＸ療法は実験の初日（−２１日目）に開始し、さらに３回（−１４、−７、０日目）投与した。低用量ＭＴＸ療法は関節炎誘導の３日前（−３日目）に開始し、関節炎誘導後のさらに７日間続いた。結果を、ｃｇｔｘ−５４４療法群Ｉ（１ｍｇ／ｋｇ体重のｃｇｔｘ−５４４、Ｌ群と同じレジメン）およびビヒクル対照群Ｈ（誘導日の０日目に開始した０．９％ＮａＣｌの１日１回の静脈内投与）と比較した。関節炎の重症度は、ノギスを用いた膝関節直径の３反復の測定によって監視した。免疫状態を監視するために、ＥＤＴＡ全血試料を定期的に取った。
【０２７６】
１．１ｃｇｔｘ−５４４療法と比較してより低い程度へのＭＴＸ療法による膝腫脹の低減
最初に、用量およびレジメンによる可能な有効性の差を示すために、高用量（Ｊ）および低用量（Ｌ）ＭＴＸ療法群の膝パラメータを、ビヒクル対照群（Ｈ）と比較する。第２に、同じレジメン（毎日の静脈内適用）の３群、低用量（Ｌ）ＭＴＸ療法群、ｃｇｔｘ−５４４療法群（Ｉ）およびビヒクル対照群（Ｈ）を比較する。右の（誘導した）膝直径から左の（非誘導）直径を引き算することによって、腫脹の絶対的増加の差を計算した。両膝のサイズは同等であるので、実験の初めのＭＴＸ高用量および低用量療法の両群の計算された差はゼロに近かった（それぞれ、０．０１±０．０６ｍｍおよび０．０±０．０３ｍｍ）。関節炎誘導の１日後に、差はそれぞれ３．１７±１．２６ｍｍおよび３．４５±０．８７ｍｍまで上昇する（図１１）。
【０２７７】
ｃｇｔｘ−５４４療法群と対照的に、３．７９±１．１０ｍｍの絶対差を有するビヒクル対照群と比較して、腫脹の減少はあまり速くない（図１２）。
【０２７８】
０から１の間のスケーリングによる値の正規化のために、実験開始時（−２１日目）の腫脹の相対的増加を０に設定し、腫脹の相対的増加の差を前の通り計算した。ＭＴＸ高用量および低用量療法群の相対的な差は、それぞれ０．３９±０．１６および０．４３±０．１１になった（図１３）。
【０２７９】
対して、ビヒクル対照群およびｃｇｔｘ−５４４療法群は、それぞれ０．４６±０．１４および０．１８±０．０５になった（図１４）。要約すると、関節炎誘導の２４時間後に、ビヒクル対照群に対して、ｃｇｔｘ−５４４療法ラットでの６０％と比較して、ＭＴＸ高用量療法ラットで平均１５％の、およびＭＴＸ低用量療法ラットでは７％の膝腫脹の低減を観察した。
【０２８０】
１．２増殖細胞へのＭＴＸの細胞増殖抑制効果
スクリーニングのために、全個体の健康状態、完全なヘモグラムを再び用いた。誘導前に毎週、誘導の日ならびに誘導の４および７日後に（−２１、−１４、−７、０、４および７日目；ＭＴＸ低用量療法群ではさらに静脈内適用を開始した−３日目に）、ＭＴＸ高用量および低用量療法の両群からの７個体のＥＤＴＡ全血を、Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＴ−２０００ｉ．Ｖで測定した。未処置動物（−２１日目）の血液学的データは、文献で提供されたデータと同等である。
【０２８１】
１．２．１白血球
実験の開始時（−２１日目）、ＭＴＸ高用量および低用量療法群の白血球数は、それぞれ、９．４１±１．４２×１０３／μｌおよび１１．６６±２．８１×１０３／μｌであった。免疫系の炎症性反応のために、ＷＢＣ数は、１回目および２回目の免疫化の後にそれぞれ２０．７９±５．９６×１０３／μｌおよび２４．０１±３．８１×１０３／μｌまで上昇した（−７日目）。値は、ビヒクル対照群およびｃｇｔｘ−５４４療法群と同等である。７日以内に、ＷＢＣ数はわずかに減少した。関節炎誘導の４日後、おそらく誘導と関係する急性炎症性過程のために、ＭＴＸ高用量療法群のＷＢＣ数は再び増加した。ｃｇｔｘ−５４４療法群およびビヒクル対照群についてはＥＤＴＡ全血をこの日に分析しなかったので、この効果がこれらの２つの群でも同様に起こるかどうか言うことができない。同様に、ＭＴＸ低用量療法群については、関節炎誘導の４日後にＭＴＸの細胞傷害性効果が血液組成に影響する可能性があるので、ＷＢＣ数は適当な比較の役割を果たすことができない。関節炎誘導からさらに７日後、ＭＴＸ高用量および低用量療法の両群で、ＷＢＣ数がそれぞれ１４．６８±２．１５×１０３／μｌおよび６．６３±１．３７×１０３／μｌにさらに減少し（７日目）（図１５）、したがって、ＭＴＸ低用量療法の細胞増殖抑制効果を示している。ＷＢＣ数は、実験の初めと比較して、ほぼ５０％減少した。対照的に、ＭＴＸ高用量療法群のＷＢＣ数は、ｃｇｔｘ−５４４療法群およびビヒクル対照群のそれらと同等である。
【０２８２】
１．２．２好中性顆粒球
実験の初め（−２１日目）、ＭＴＸ高用量および低用量療法群の絶対的好中性顆粒球数は、それぞれ、１．５５±０．５２×１０３／μｌおよび１．９３±０．６×１０３／μｌであった（図１６Ａ）（それぞれ、全ＷＢＣ数の１６．３９±４．８５％の相対的好中球および全ＷＢＣ数の１６．６４±４．０７％の相対的好中球に等しい（図１６Ｂ））。ＷＢＣ数のように、好中性顆粒球数も、１回目および２回目の免疫化の後にそれぞれ７．５４±３．１９×１０３／μｌおよび１０．７７±２．７×１０３／μｌまで上昇した（−７日目、それぞれＷＢＣの３５．４６±７．０８％およびＷＢＣの４４．３３±５．４％に等しい）。７日以内に、好中性顆粒球数は減少し、誘導の７日後には、ＭＴＸ高用量療法群での数は実験の初めのそれらと同等だった（１．９４±１．１×１０３／μｌ、ＷＢＣの１２．６３±６．１％に等しい）。この効果は、ｃｇｔｘ−５４４療法群およびビヒクル対照群でも同様に観察された。ＭＴＸ低用量療法群は、０．３３±０．３６×１０３／μｌの好中性顆粒球と、ずっと大きな減少を示した（７日目、ＷＢＣの４．４１±４．６３％に等しい）。
【０２８３】
１．２．３リンパ球
実験の開始時（−２１日目）、ＭＴＸ高用量および低用量療法群の絶対的リンパ球数は、それぞれ、７．３９±１．０５×１０３／μｌおよび９．２１±２．４×１０３／μｌであった（図１７Ａ）（それぞれ、ＷＢＣの７８．７７±４．７６％およびＷＢＣの７８．９７±３．９４％に等しい（図１７Ｂ））。ＷＢＣおよび好中性顆粒球数と異なり、ＭＴＸ高用量および低用量療法の両群でのリンパ球数は、１回目および２回目の免疫化の後に有意に上昇せず、それぞれの数は１１．６８±２．８×１０３／μｌおよび１１．８３±１．３５×１０３／μｌであった（−７日目）。これは、それぞれＷＢＣの５７．０１±６．４５％およびＷＢＣの４９．８３±５．４５％に等しく（−７日目）、全ＷＢＣ数が強く増加したので百分率の低下を示している。７日以内に、リンパ球のＷＢＣ百分率は再び増加し、誘導の７日後、ＭＴＸ高用量療法群では、それは実験の初めの百分率と同等であって（ＷＢＣの７８．１６±７．２０％、７日目）、それがさらにより高くなったＭＴＸ低用量療法群（ＷＢＣの９３．１３±４．６６％、７日目）とは異なる。実験の初めと比較して、ＭＴＸ高用量療法群での絶対数は増加し、ＭＴＸ低用量療法群は減少した：それぞれ、１１．３８±１．１５×１０３／μｌおよび６．１４±１．１１×１０３／μｌ（７日目）。実験の初めと比較してＭＴＸ低用量療法群の絶対的リンパ球数は関節炎誘導の７日後に低減するが、それは全白血球の約９３％をなお占める。これから、白血球の他の亜集団がリンパ球集団よりも細胞傷害性効果によって影響を受けるという仮定が導かれる。
【０２８４】
ＭＴＸによる処置は、ジヒドロ葉酸還元酵素の阻害につながり、増殖細胞への細胞増殖抑制効果をもたらす。全身性免疫抑制を示さなかったｃｇｔｘ−５４４療法下の個体と異なり、ＭＴＸで処置された個体は、ビヒクル対照群と比較してヘモグラムで異なる効果を示した。関節炎誘導の７日後に、低用量で処置された個体は、ＷＢＣ数、好中性顆粒球数およびリンパ球数が低減した。さらに、これは全ての白血球百分率の異なる組成をもたらす。さらに、両方のＭＴＸレジメンで、関節炎誘導の２４時間後に、ｃｇｔｘ−５４４療法ラットにおける６０％と比較してずっと小さい膝腫脹の低減を観察した（７％および１５％）。
【０２８５】
ＭＴＸ有効性結果の統計分析のために、ウェルシュの２試料ｔ検定を用いた。以下では、全ての試験したＭＴＸ用量レベル（０．１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ静脈内および１ｍｇ／ｋｇ  ＢＷ皮下）の統計分析を、１日目および３日目について示す（図２８）。
【０２８６】
要約すると、ＭＴＸによる処置は、ジヒドロ葉酸還元酵素の阻害につながり、増殖細胞への細胞増殖抑制効果をもたらす。ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法下の個体と異なり、ＭＴＸで処置された個体は、ビヒクル対照群と比較してヘモグラムで異なる効果を示した。関節炎誘導の７日後に、低用量で処置された個体は、ＷＢＣ数、好中性顆粒球数およびリンパ球数が低減した。さらに、これは全ての白血球百分率の異なる組成をもたらす。さらに、両方のＭＴＸレジメンで、関節炎誘導の２４時間後に、ｃｇｔｘ−５４４ペプチド療法ラットにおける最大の７０％と比較してずっと小さい膝腫脹の低減を観察した（７％および１５％）。
【実施例７】
【０２８７】
ｃｇｔｘ−５４４のさらなる特徴付け
ｃｇｔｘ−５４４ペプチドは改変なしで３８個の天然アミノ酸からなり、概ね４２２０Ｄａの分子量を有する。それは、ある特定の機能的ドメイン類似性をサソリペプチドのα−ＫＴｘ６サブファミリーと共有する。ｃｇｔｘ−５４４は４つのジスルフィド架橋によって拘束され、その３Ｄ構造はα−ヘリックス／β−シート立体配置を含む。
【０２８８】
ｃｇｔｘ−５４４の製造
図２９は、ｃｇｔｘ−５４４ペプチドの製造ステップの概略図を提供する。ペプチド合成は、Ｆ−ｍｏｃ戦略により不溶性ポリスチロール樹脂で実行する。固相結合ペプチドの遊離のＮ末端アミンを、単一のＮ保護アミノ酸単位に結合する。この単位を次に脱保護し（Ｆ−ｍｏｃ基はピペリジンによって塩基性ｐＨで切断される）、さらなるアミノ酸を結合することができる新しいＮ末端アミンを露出させる。ｔｅｒｔ．−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基は恒久的な側鎖保護基の役割を果たし、ペプチド合成の終了後にＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）処理によって切断される。
【０２８９】
ペプチド合成の完了後、ペプチドを脱保護し、ポリスチロール樹脂から切断する。この時点で、生のペプチド生成物は、分析的ＵＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳに従って約５０％の純度を示す。以降のステップでは、分取ＨＰＬＣによって生のペプチドを精製し、≧９０％の純度を有する直鎖ペプチド生成物をもたらす。
【０２９０】
ｃｇｔｘ−５４４ペプチドの折畳み
このペプチド溶液は、酸化（ジスルフィド結合の形成）によって折り畳まれる。折畳み方法は、大気酸素の存在下のｐＨ８．３のリン酸緩衝液での結合形成に基づく。このプロトコールに従って折り畳まれたｃｇｔｘ−５４４のＨＰＬＣ分析は、このペプチドが、折り畳まれたおよび部分的に折り畳まれた変異体の混合物として存在することを示した。この中間折畳み生成物は、ｃｇｔｘ−５４４（混合物）と呼ばれる。異なる単離されたＵＰＬＣピークの材料で生成された電気生理学的データに基づくと、折畳み混合物の１つのピーク（滞留時間１２．７７分）は天然の活性ペプチドと相関するが、他の全てのピークは電気生理学的活性と相関しないと結論付けられた（図３０）。そこで、折畳み反応の後、折り畳まれたおよび部分的に折り畳まれたペプチドのｃｇｔｘ−５４４混合物から、活性ペプチド（滞留時間１２．７７分）を分取ＨＰＬＣによって精製した。この精製ステップの後、ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）と呼ばれる活性ペプチドは、９５％を超える推定純度を通常有する。精製されたｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）ペプチドは、室温および４℃で最高数週間、０．９％ＮａＣｌ溶液に高度に可溶性で安定している。
【０２９１】
プロセス開発のために、精製ペプチドｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、小規模フォーマットだけで生成した。したがって、材料が制限されており、Ｋｖ１．３、Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．２およびＫｖ１．５でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のＩＣ５０値を特定することを目的とした実験で用いた（実施例８を参照する）。用語ｃｇｔｘ−５４４（ｓｉｎｇ）によって特記されない限り、本明細書（実施例１〜６）に記載される他の全ての実験では、ｃｇｔｘ−５４４の未精製折畳み混合物（ｃｇｔｘ−５４４（混合物））を用いた。混合物中の活性物質の含有量は、１５％であると計算された。
【０２９２】
要約すると、ｃｇｔｘ−５４４ペプチドは、生化学的分析にとって重要になる以下の生化学的特性を示す：
・ｃｇｔｘ−５４４は高塩基性のペプチドであり、６つのリジンおよび２つのアルギニンアミノ酸を含有し、低濃度（＜１００ｎｇ／ｍｌ）でガラスバイアルの表面に固着することができる。
・それは８つのシステインアミノ酸を含有し、それらは４つのジスルフィド架橋で連結される。
・等電点：９．２９。
・ＭＷ：４２１２Ｄａ、ジスルフィド架橋が結合しているとき、ＭＷ：４２２０．２Ｄａ、還元形態
・４つのジスルフィド架橋の存在のために、ｃｇｔｘ−５４４の構造はコンパクトである。
【実施例８】
【０２９３】
電気生理学的分析に基づくｃｇｔｘ−５４４（ｓｉｎｇ）のイオンチャネル選択性のさらなる特徴付け
１．材料および方法
イオンチャネルは、実施例１、２および４に記載の通り、バキュロウイルス（Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．３およびＫｖ１．５構築物）感染Ｓｆ２１細胞または安定してトランスフェクトされたＣＨＯ細胞（Ｋｖ１．２）によって発現させた。電気生理学的分析は、自動化パッチクランプ装置「Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒ」（Ｎａｎｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｕｎｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で実施した。Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒは、ガラスピペットの代わりに平面パッチクランプ方法のホウケイ酸ガラスチップ（ＮＰＣ−１６）に基づく。Ｐａｔｃｈｌｉｎｅｒは、同時に４つの細胞を記録することができる。全てのチャネル記録は、全細胞モードで行った。データの記録は、ＰａｔｃｈＭａｓｔｅｒソフトウェア（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ／Ｐｆａｌｚ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で実施した。実験結果の可視化は、ＩＧＯＲソフトウェア（Ｗａｖｅｍｅｔｒｉｃｓ、ＵＳＡ）で実現した。平均データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）で提供される。
【０２９４】
試験化合物は、濃縮した保存溶液（大部分は１．５μｇ／μｌ）として用いた。保存溶液は、必要な最終濃度に緩衝液で希釈した。
【０２９５】
２．結果
２．１  ＩＣ５０  −  標的チャネルＫｖ１．３の分析
化学合成（実施例７を参照する）の後、大気酸素による酸化によってペプチドを折り畳み、正しく折り畳まれた（生物学的に活性な）ペプチド画分を分取ＨＰＬＣによって精製した。この精製されたｃｇｔｘ−５４４ペプチドは、単一のピークを有するのでｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）と命名した。
【０２９６】
ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の電気生理学的分析は、６．９ｎＭの優れたＩＣ５０値をもたらした（図３１）。
【０２９７】
２．２  Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．２およびＫｖ１．５でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の電気生理学的分析
Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．２およびＫｖ１．５でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の電気生理学的分析は、ｃｇｔｘ−５４４が高度に選択的であることを実証した。Ｋｖ１．１、Ｋｖ１．２およびＫｖ１．５でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の電気生理学的特徴付けの結果を、図３２に要約する。
【実施例９】
【０２９８】
ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のプロテアーゼ抵抗性
実施例３に記載される実験に加えて、ｃｇｔｘ−５４４ペプチドの安定性をｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下において血清試料で試験した。したがって、ヒト血清中でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の安定性は、ヒト血清へのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の既知量の添加および以降の３７℃でのインキュベーションによって決定した。ｃｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のブロッキング活性を５７日間にわたってＫｖ１．３チャネルで測定した。ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）は、ヒト血清中で極めて安定している。その活性は少なくとも１６時間一定であり、５７日後にいかなるペプチドブロッキング効果も検出できなくなるまで徐々に衰える。これは、ｃｇｔｘ−５４４が血中プロテアーゼの作用に非常に抵抗性であることを実証する（図３３）。
【０２９９】
血清の非存在下で実行された測定に対してブロッキング効力の低減は観察されず、ＩＣ５０は７ｎＭ域のままである。ペプチドなしの血清対照試料は、Ｋｖ１．３の非特異的遮断を示さなかった。したがって、見られたブロッキング効果はｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の効果だけによると結論付けられた。５７日間のインキュベーション溶液で測定されたｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の濃度に対応することには、３７℃のヒト血清でｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の５０％活性が５日間保たれた。
【０３００】
要約すると、３７℃のヒト血清中でのｃｇｔｘ−５４４の持続性は非常に高い。ｃｇｔｘ−５４４は血清構成成分に結合せず、たとえ結合したとしても非常に低い親和性においてのみ結合し、ヒト血清中に存在するプロテアーゼによる分解に極めて抵抗性である。
【実施例１０】
【０３０１】
ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期
この研究の目的は、ラットにおいてｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を評価する生物検定を実行することであった。以前の実験（実施例３）は、血清に混入させて３７℃でインキュベートしたときに、ｃｇｔｘ−５４４は速やかに分解されないことを示していた。
【０３０２】
１．材料および方法
ラットは、ｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）（７５０μｇ／ｋｇ  ＢＷ）の静脈内注射を受けた。０、１、１０および６０分の時点で、血液を抜き取った。その後、血液試料から血清を調製した。これらの試料中のｃｇｔｘ−５４４含有量は、ＣＨＯ細胞で発現されるＫｖ１．３チャネルへのブロッキング効果を測定することによって電気生理学的に分析した。ペプチドのない血清対照試料（０分）はＫｖ１．３の非特異的遮断を示さず、１分試料のｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）活性は１００％と考えられた。第３の時点（６０分）で収集した試料は、元のブロッキング活性の１０％を示した。ラットで未結合のｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の量を研究するために、上記の時点での循環血液中に存在するｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の量を、較正曲線によって計算した。この較正曲線は、血清へのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の既知量の添加および以降のＫｖ１．３チャネルでの電気生理学的測定によって得られた。これらの混入試料によるＫｖ１．３電流の遮断は、血清の非存在下でｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）で得られたものに類似していた（データ示さず）。
【０３０３】
２．結果
処置ラットの血液でのｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）の減衰は一般的な減衰曲線に従い、およそｔ１／２＝２６分（図３４）の半減期を与え、循環血液中のｃｇｔｘ−５４４（Ｓｉｎｇ）のおよその濃度は６２ｎＭであった。この濃度は、Ｋｖ１．３チャネルの完全な遮断を達成するのに十分である。この半減期は、他のペプチドチャネルブロッカーで見られる範囲内であり、ＳｈＫ毒素の変異体は２０から５０分の間の半減期を示す。
【０３０４】
要約すると、ラットにおける静脈内適用の後のｃｇｔｘ−５４４のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、競合剤ペプチドＳｈＫの範囲内である。ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、概ね２６分である。ｃｇｔｘ−５４４の小さいサイズおよびコンパクトな構造のため、このペプチドはおそらく腎臓濾過を通して血液から除かれると仮定される。ラットはヒトよりずっと速い代謝速度を有するので、ヒトでのｃｇｔｘ−５４４の半減期はラットでより長いと仮定することは合理的である。ペプチドはイオンチャネルにタイトに結合して長時間それを遮断するので、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は薬物効果の持続期間に対応しない。
【実施例１１】
【０３０５】
臨床データ
臨床試験は、今日まで実施されていない。
【０３０６】
ファースト−イン−マン研究
フェーズ１研究は、健康対象における無作為化二重盲検プラセボ対照単一施設試験であってもよい。
【０３０７】
この研究の第１部は、より低い用量群のための４被験者（３＋１）およびより高い用量群のための８被験者（２＋６）のコホートにおける、単回投与用量増加試験であってもよい。初回用量は、産業のためのＦＤＡ指針「成人健康ボランティアで治療薬のための初期臨床治験で最大安全初回用量を推定する」で定められた、毒性研究におけるＮＯＡＥＬから推定される。
【０３０８】
フェーズ１ａの第２部は、多回投与研究として設計することができる。８被験者（６＋２）の１つのコホートは、７回の毎日の連続適用のためにＭＴＤ未満の１つの用量レベルに曝露させられる。
【０３０９】
この標準のフェーズ１ａ研究の主な目標は、健康対象でｃｇｔｘ−５４４の安全性、耐容性および薬物動態を評価することであってもよい。
【０３１０】
概念実証試験
このフェーズ２ａ試験は、中等度から重度のプラーク型乾癬患者での、無作為化二重盲検プラセボ対照多施設概念実証および用量設定試験であってもよい。
【０３１１】
プレーンフェーズ２ａ概念実証試験は、８０人の成人患者（２０＋６０）および３つの用量レベルを含む。各用量レベルは、１２週の間、２０人の患者で試験される。
【０３１２】
一次エンドポイント：１２週でＰＡＳＩ  ７５を達成する被験者（少なくとも７５％のベースラインＰＡＳＩからの改善を有する患者）の割合。
【０３１３】
二次エンドポイント：有害事象、バイタルサイン、臨床検査パラメータ、身体検査およびＥＥＧを評価することによる、最高１２週間のｃｇｔｘ−５４４の安全性の評価。
【０３１４】
最初の処置から１２週間の異なる時点のｃｇｔｘ−５４４の薬物動態。１２週でＩＧＡスコア「クリア」または「ほとんどクリア」を達成する被験者の割合。
【０３１５】
１２週でＰＡＳＩ  ５０を達成する被験者（少なくとも５０％のベースラインＰＡＳＩからの改善を有する患者）の割合。
【０３１６】
１２週でＰＡＳＩ  ９０を達成する被験者（少なくとも９０％のベースラインＰＡＳＩからの改善を有する患者）の割合。
【０３１７】
類似の研究を、脈管炎のために実行することができる。それに応じて、エンドポイントを評価しなければならない。
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１−１】
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【図３１−２】
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【図３２−１】
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【図３２−２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【配列表】
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