(57)【要約】  本発明は、特に被験物質を検出するために適した金ナノプレートを含む組成物を提供することを目的としている。本発明の金ナノプレートを含む、被験物質を検出するための組成物は、前記金ナノプレートの平均アスペクト比（金ナノプレートの最大長さを厚さで割った値）が、１より大きく１０以下であり、前記組成物中の第四級アンモニウムカチオンの濃度が、１ｍＭ以下であり、前記第四級アンモニウムカチオンが、Ｎ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表されることを特徴としている。
2017154989.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
金ナノプレートを含む、被験物質を検出するための組成物であって、
前記金ナノプレートの平均アスペクト比（金ナノプレートの最大長さを厚さで割った値）が、１より大きく１０以下であり、
前記組成物中の第四級アンモニウムカチオンの濃度が、０〜１ｍＭであり、
前記第四級アンモニウムカチオンが、Ｎ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表されることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
前記第四級アンモニウムカチオンが、デシルトリメチルアンモニウムカチオン、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムカチオン、及び、ヘプタデシルトリメチルアンモニウムカチオンから成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
分子量５００以上の水溶性高分子を含まない、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
分子量５００以上の水溶性高分子をさらに含み、前記組成物中の前記分子量５００以上の水溶性高分子の濃度が、０より大きく１質量％以下である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
分子量５００以上の水溶性高分子をさらに含み、前記組成物中の前記分子量５００以上の水溶性高分子の濃度が、０より大きく１００μＭ以下である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
前記金ナノプレートと前記水溶性高分子とが複合体を形成している、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項７】
前記水溶性高分子が、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、及び、チオール末端ポリエチレングリコールから成る群から選択される、請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
クエン酸ナトリウムを含まない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
クエン酸ナトリウムをさらに含み、前記組成物中の前記クエン酸ナトリウムの濃度が、０より大きく５０ｍＭ以下である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記金ナノプレートの平均最大長さが、１００ｎｍより小さい、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記金ナノプレートが、表面プラズモン共鳴による光吸収ピークを５５０〜７４０ｎｍの波長領域に有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
赤色、マゼンタ、紫色、紺色、青色、シアン、又は、薄水色の色調を呈する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記金ナノプレートが、前記被験物質に対する特異的結合物質を担持している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記被験物質と前記特異的結合物質の組み合わせが、抗原とそれに結合する抗体、抗体とそれに結合する抗原、糖鎖又は複合糖質とそれに結合するレクチン、レクチンとそれに結合する糖鎖又は複合糖質、ホルモン又はサイトカインとそれに結合する受容体、受容体とそれに結合するホルモン又はサイトカイン、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマー、酵素とそれに結合する基質、基質とそれに結合する酵素、ビオチンとアビジン又はストレプトアビジン、アビジン又はストレプトアビジンとビオチン、ＩｇＧとプロテインＡ又はプロテインＧ、プロテインＡ又はプロテインＧとＩｇＧ、及び、第１の核酸とそれに結合する第２の核酸から成る群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
被験物質を検出するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物の凍結乾燥物。
【請求項１６】
請求項１３又は１４に記載の組成物又は請求項１５に記載の凍結乾燥物を使用して、前記被験物質を検出する方法であって、
該組成物、又は、該凍結乾燥物の再懸濁液を、該被験物質と混合して、該被験物質と前記特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体を形成する工程、及び、
該複合体を検出する工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項１７】
前記複合体の形成を、消光度測定、吸光度測定、濁度測定、粒度分布測定、粒子径測定、ラマン散乱光測定、色調変化の観察、凝集又は沈殿形成の観察、イムノクロマトグラフィー、電気泳動、及び、フローサイトメトリーから成る群から選択される手段によって検出する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物中の金ナノプレートに、前記被験物質に対する特異的結合物質を担持させて、請求項１３又は１４に記載の組成物を調製する工程、及び／又は、請求項１５に記載の凍結乾燥物を再懸濁する工程をさらに含む、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物又は請求項１５に記載の凍結乾燥物を含む、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法に使用するためのキット。
【請求項２０】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物又は請求項１５に記載の凍結乾燥物を製造する方法であって、
（１）金ナノプレート種粒子の懸濁液を調製する工程、及び、
（２）金ナノプレートの懸濁液を調製する工程
を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２１】
前記工程（１）が、金ナノプレート種粒子を予備成長させる工程を含まない、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金ナノプレート又は被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートを含む、被験物質を検出するための組成物又は凍結乾燥物、及び、それらを利用した被験物質の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
貴金属ナノ粒子ベースの局在表面プラズモン共鳴（Ｌｏｃａｌｉｚｅｄ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ：ＬＳＰＲ）由来の光吸収は、先進的なバイオセンシング技術に応用されており、その吸収波長は、当該ナノ粒子の形状や金属の特性などに依存している。この技術分野では種々の金属ナノ粒子が研究されており、金ナノ粒子又は金ナノプレートも、感受性の高いバイオセンサーの開発において注目を集めている（特許文献１〜４、非特許文献１及び２）。金ナノプレートは、可視光から近赤外光の領域に最大吸収波長を有し、形状の制御によってその最大吸収波長の位置を操作することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２０１５−５２２８２８号公報
【特許文献２】特許第４４２８５６８号公報
【特許文献３】特表２００８−５４５８８４公報
【特許文献４】国際公開第２００６／０９９３１２号
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Chen L., et al., Nano Letters (2014), Vol. 14, No. 12, pp. 7201-7206
【非特許文献２】Scarabelli L, et al., ACS Nano (2014), Vol. 8, No. 6, pp. 5833-5842
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、例えば、肉眼での検出のしやすさ、及び、抗体などの被験物質に対する特異的結合物質の担持のしやすさを兼ね揃えた金ナノプレートは開発されておらず、金ナノプレートの応用範囲は十分には広がっていなかった。本発明は、特に被験物質を検出するために適した金ナノプレートを含む組成物を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、金ナノプレートの平均アスペクト比を特定の範囲内に設定し、かつ、組成物中の特定の第四級アンモニウムカチオンの濃度を少なくすることで、金ナノプレートを含む組成物が被験物質を検出するために適したものとなることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、以下に示す被験物質を検出するための組成物、被験物質を検出するための凍結乾燥物、被験物質を検出する方法、及び被験物質を検出するためのキットを提供するものである。
〔１〕金ナノプレートを含む、被験物質を検出するための組成物であって、
前記金ナノプレートの平均アスペクト比（金ナノプレートの最大長さを厚さで割った値）が、１より大きく１０以下であり、
前記組成物中の第四級アンモニウムカチオンの濃度が、０〜１ｍＭであり、
前記第四級アンモニウムカチオンが、Ｎ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表されることを特徴とする、組成物。
〔２〕前記第四級アンモニウムカチオンが、デシルトリメチルアンモニウムカチオン、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムカチオン、及び、ヘプタデシルトリメチルアンモニウムカチオンから成る群から選択される、前記〔１〕に記載の組成物。
〔３〕分子量５００以上の水溶性高分子を含まない、前記〔１〕又は〔２〕に記載の組成物。
〔４〕分子量５００以上の水溶性高分子をさらに含み、前記組成物中の前記分子量５００以上の水溶性高分子の濃度が、０より大きく１質量％以下である、前記〔１〕又は〔２〕に記載の組成物。
〔５〕分子量５００以上の水溶性高分子をさらに含み、前記組成物中の前記分子量５００以上の水溶性高分子の濃度が、０より大きく１００μＭ以下である、前記〔１〕又は〔２〕に記載の組成物。
〔６〕前記金ナノプレートと前記水溶性高分子とが複合体を形成している、前記〔４〕又は〔５〕に記載の組成物。
〔７〕前記水溶性高分子が、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、及び、チオール末端ポリエチレングリコールから成る群から選択される、前記〔４〕〜〔６〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔８〕クエン酸ナトリウムを含まない、前記〔１〕〜〔７〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔９〕クエン酸ナトリウムをさらに含み、前記組成物中の前記クエン酸ナトリウムの濃度が、０より大きく５０ｍＭ以下である、前記〔１〕〜〔７〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１０〕前記金ナノプレートの平均最大長さが、１００ｎｍより小さい、前記〔１〕〜〔９〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１１〕前記金ナノプレートが、表面プラズモン共鳴による光吸収ピークを５５０〜７４０ｎｍの波長領域に有する、前記〔１〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１２〕赤色、マゼンタ、紫色、紺色、青色、シアン、又は、薄水色の色調を呈する、前記〔１〕〜〔１１〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１３〕前記金ナノプレートが、前記被験物質に対する特異的結合物質を担持している、前記〔１〕〜〔１２〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１４〕前記被験物質と前記特異的結合物質の組み合わせが、抗原とそれに結合する抗体、抗体とそれに結合する抗原、糖鎖又は複合糖質とそれに結合するレクチン、レクチンとそれに結合する糖鎖又は複合糖質、ホルモン又はサイトカインとそれに結合する受容体、受容体とそれに結合するホルモン又はサイトカイン、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマー、酵素とそれに結合する基質、基質とそれに結合する酵素、ビオチンとアビジン又はストレプトアビジン、アビジン又はストレプトアビジンとビオチン、ＩｇＧとプロテインＡ又はプロテインＧ、プロテインＡ又はプロテインＧとＩｇＧ、及び、第１の核酸とそれに結合する第２の核酸から成る群から選択される、前記〔１３〕に記載の組成物。
〔１５〕被験物質を検出するための、前記〔１〕〜〔１４〕のいずれか一項に記載の組成物の凍結乾燥物。
〔１６〕前記〔１３〕又は〔１４〕に記載の組成物又は前記〔１５〕に記載の凍結乾燥物を使用して、前記被験物質を検出する方法であって、
該組成物、又は、該凍結乾燥物の再懸濁液を、該被験物質と混合して、該被験物質と前記特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体を形成する工程、及び、
該複合体を検出する工程を含むことを特徴とする、方法。
〔１７〕前記複合体の形成を、消光度測定、吸光度測定、濁度測定、粒度分布測定、粒子径測定、ラマン散乱光測定、色調変化の観察、凝集又は沈殿形成の観察、イムノクロマトグラフィー、電気泳動、及び、フローサイトメトリーから成る群から選択される手段によって検出する、前記〔１６〕に記載の方法。
〔１８〕前記〔１〕〜〔１２〕のいずれか一項に記載の組成物中の金ナノプレートに、前記被験物質に対する特異的結合物質を担持させて、前記〔１３〕又は〔１４〕に記載の組成物を調製する工程、及び／又は、前記〔１５〕に記載の凍結乾燥物を再懸濁する工程をさらに含む、前記〔１６〕又は〔１７〕に記載の方法。
〔１９〕前記〔１〕〜〔１４〕のいずれか一項に記載の組成物又は前記〔１５〕に記載の凍結乾燥物を含む、前記〔１６〕〜〔１８〕のいずれか一項に記載の方法に使用するためのキット。
〔２０〕前記〔１〕〜〔１４〕のいずれか一項に記載の組成物又は前記〔１５〕に記載の凍結乾燥物を製造する方法であって、（１）金ナノプレート種粒子の懸濁液を調製する工程、及び、
（２）金ナノプレートの懸濁液を調製する工程
を含むことを特徴とする、方法。
〔２１〕前記工程（１）が、金ナノプレート種粒子を予備成長させる工程を含まない、前記〔２０〕に記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明に従って、金ナノプレートの平均アスペクト比（金ナノプレートの最大長さを厚さで割った値）が１より大きく１０以下の範囲になるように金ナノプレートを作製し、Ｎ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表される第四級アンモニウムカチオンの濃度が１ｍＭ以下に組成物を作製すれば、可視光域に最大吸収波長を有し、かつ、抗体などの被験物質に対する特異的結合物質を容易に担持することのできる金ナノプレートを含む組成物を提供することができる。そして、後述するように、第四級アンモニウムカチオンは、金ナノプレートと被験物質に対する特異的結合物質との結合性を低下させ得るものであるし、生体毒性が懸念されるものであるから、第四級アンモニウムカチオンの濃度が低減されている本発明の組成物は、被験物質を検出するのに好適なものである。
また、金ナノプレートは、厚みが薄いプレートの形状であるから、その平均最大長さと同じ粒子径の球状金ナノ粒子よりも体積及び質量が小さい。そのため、金ナノプレートは、分散媒中で安定に分散しやすく、分散剤が必要な場合であっても、球状金ナノ粒子の分散に必要な量よりも少ない量の分散剤で分散することができる。そして、抗体などの被験物質に対する特異的結合物質は、分散剤としても機能し得るが、高価であることが多いので、その使用量が少なければ製造コストを削減できる。その他の分散剤は、金ナノプレートと被験物質に対する特異的結合物質との結合を妨げることがあるので、金ナノプレートの懸濁液中の分散剤の量が少なければ、当該金ナノプレート上に被験物質に対する特異的結合物質を効率よく担持でき、そのことによっても、当該被験物質に対する特異的結合物質の使用量を節約することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】金ナノプレート種粒子の懸濁液の光学特性を示す。
【図２】懸濁液Ａの光学特性を示す。
【図３】懸濁液Ａ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図４】懸濁液Ｂの光学特性（Ａ）及びその消光スペクトルの懸濁液Ａとの比較（Ｂ）を示す。
【図５】懸濁液Ｂ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図６】懸濁液Ｅの光学特性を示す。
【図７】懸濁液Ｅ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図８】懸濁液Ｈの光学特性を示す。
【図９】懸濁液Ｈ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図１０】銀ナノプレート種粒子の懸濁液の光学特性を示す。
【図１１】銀ナノプレート種粒子のＳＥＭ観察写真を示す。
【図１２】銀ナノプレートの懸濁液の光学特性を示す。
【図１３】懸濁液Ｉの光学特性を示す。
【図１４】懸濁液Ｉ中の金被覆銀ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図１５】懸濁液Ｊの光学特性を示す。
【図１６】イムノクロマト試験の手順を示す。
【図１７】懸濁液Ｋの光学特性を示す。
【図１８】懸濁液Ｋ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図１９】懸濁液Ｌの光学特性を示す。
【図２０】懸濁液Ｌ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図２１】懸濁液Ｍの光学特性を示す。
【図２２】懸濁液Ｍ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図２３】懸濁液Ｎの光学特性を示す。
【図２４】懸濁液Ｎ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真を示す。
【図２５】懸濁液Ｏの光学特性（Ａ）及びその消光スペクトルの懸濁液Ｋとの比較（Ｂ）を示す。
【図２６】懸濁液Ｏ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真（Ａ）及びＳＴＥＭ観察写真（Ｂ）を示す。
【図２７】懸濁液Ｐの光学特性（Ａ）及びその消光スペクトルの懸濁液Ｌとの比較（Ｂ）を示す。
【図２８】懸濁液Ｐ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真（Ａ）及びＳＴＥＭ観察写真（Ｂ）を示す。
【図２９】懸濁液Ｑの光学特性（Ａ）及びその消光スペクトルの懸濁液Ｍとの比較（Ｂ）を示す。
【図３０】懸濁液Ｑ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真（Ａ）及びＳＴＥＭ観察写真（Ｂ）を示す。
【図３１】懸濁液Ｒの光学特性（Ａ）及びその消光スペクトルの懸濁液Ｎとの比較（Ｂ）を示す。
【図３２】懸濁液Ｒ中の金ナノプレートのＳＥＭ観察写真（Ａ）及びＳＴＥＭ観察写真（Ｂ）を示す。
【図３３】懸濁液Ｓ〜Ｖの光学特性を示す。
【図３４】最大吸収波長における消光度が１．０になるように補正した懸濁液Ｓ〜Ｖの光学特性を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の被験物質を検出するための組成物は、平均アスペクト比が１より大きく１０以下である金ナノプレートを含み、かつ該組成物中のＮ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表される第四級アンモニウムカチオンの濃度が０〜１ｍＭであることを特徴としている。
【００１０】
本明細書に記載の「金ナノプレート」とは、金から製造されたナノプレート（板）のことをいい、上面と下面の形状は三角形、四角形、五角形、六角形などの多角形（角が丸みを帯びた形状を含む）又は円形などの板状構造を有している。金ナノプレートの上面と下面、それぞれ最大長が異なる場合もあり、このとき長い方が金ナノプレートの最大長さとなる。また、ナノプレートの最大長さを厚さで割った値をアスペクト比といい、これはナノプレートの形状を表すための指標の１つとして用いることができる。金ナノプレートの形状が変わると、その最大吸収波長の位置も変化するので、金ナノプレートのアスペクトは、最大吸収波長の指標ともいえる。本発明の金ナノプレートのアスペクト比の平均値（平均アスペクト比）は、１より大きく１０以下である。アスペクト比が１より大きいことによって、前記金ナノプレートは、球状の金ナノ粒子では達成することのできない色調を示すことができる。そして、アスペクト比が１より大きく１０以下であると、前記金ナノプレートは、可視光領域又はその周辺に最大吸収波長を有するようになるので、特に被験物質の有無を目視で判定する検出方法に有利に使用することができる。例えば、前記金ナノプレートの厚さが１０ｎｍ一定で平均アスペクト比が、１より大きく１０以下であると、水懸濁液中における表面プラズモン共鳴による光吸収ピーク（最大吸収波長）を５５０ｎｍ以上〜７４０ｎｍの波長領域に調節することができ、前記金ナノプレートの平均アスペクト比が、３．５〜８．６であると、水懸濁液中において最大吸収波長を６００ｎｍ〜７００ｎｍの範囲で調節することができる。このような最大吸収波長を有する金ナノプレートの水懸濁液は赤色、マゼンタ、紫色、紺色、青色、シアン、又は、薄水色の色調を呈し、水懸濁液中の金ナノプレートの濃度によって色の濃淡を制御することが可能である。また、金ナノプレートは、キューブ形状やロッド形状の金ナノ粒子と比較し、最大吸収波長付近の光吸収波形がシャープになるため、その懸濁液は鮮やかな色調を呈する。また、金ナノプレート以外の粒子が濁液中に混在することは特に制限されないが、プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子（最大吸収波長：５４０ｎｍ）が混在している場合、その比率によって色調の鮮やかさが異なる。金ナノプレートの懸濁液が鮮やかな色調を呈するためには、（１）金ナノプレートの最大吸収波長である５５０ｎｍ〜７４０ｎｍの消光度を、（２）プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度、で除算したときの値が１．２５以上であってもよく、好ましくは１．５以上、さらに好ましくは１．７５以上である。前記金ナノプレートの最大長さの平均値（平均最大長さ）は、被験物質の検出のために使用できるものであれば特に制限されないが、例えば１００ｎｍより小さくてもよく、好ましくは９５〜１０ｎｍ、さらに好ましくは９５〜１５ｎｍである。前記金ナノプレートの最大長さ及び厚さは、例えば、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察、走査透過電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）観察、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察を行って計測してもよく、最大長に関しては動的光散乱式粒度分布測定装置（ＤＬＳ）で測定してもよい。ＳＥＭ観察写真、ＳＴＥＭ観察写真、及びＴＥＭ観察写真から金ナノプレートの最大長さを計測する場合、任意の金ナノプレート１００個について、各粒子の最大長さを計測した計１００点のデータの内、上下１０％を除いた８０点の平均値を用いてもよい。なお、球状の金ナノ粒子は、板状構造を有していないし、平均アスペクト比は１であるので、本発明の金ナノプレートの定義には含まれない。
また、金ナノプレートの表面に担持させる抗体などの被験物質に対する特異的結合物質の表面電荷が正電荷である場合、金ナノプレートのゼータ電位が好ましくはマイナスである。
金ナノプレートは吸収波長を制御可能であり、生体内で使用可能な電磁波（光）を照射することで治療や診断などへの利用も期待されている。例えば、吸収した光エネルギーを熱に変換する光熱変換効果を利用したがんの温熱療法（ハイパーサーミア）や、発生した熱により温められた周囲の媒質が体積膨張した際に生じる音響波、すなわち光音響効果（フォトアコースティック効果）を検出する光音響波イメージングへの利用も期待される。
【００１１】
本発明の被験物質を検出するための組成物は、前記金ナノプレートを含んでいる。前記組成物中の金含有率は、被験物質を検出するために必要な量であればよく、前記組成物の総質量に対して、例えば、０．０００００１〜５０質量％であってもよく、好ましくは０．００００１〜１０質量％、さらに好ましくは０．００００５〜１質量％、特に好ましくは０．０００１〜０．１質量％である。
金ナノプレートを含む組成物中の金含有率は、例えばＩＣＰ発光分析装置や紫外可視分光光度計で測定してもよい。
ＩＣＰ発光分析装置で測定する場合、具体的には、以下の手順に示すように、懸濁液を遠心分離後、上澄み液を除去し、得られた沈殿物を、除去した上澄み液と同量の超純水で再度懸濁する。そして、その懸濁液に王水を添加後、煮沸して、得られた溶液を、ＩＣＰ発光分析装置を用いて分析する。
１）金ナノプレート懸濁液を遠心分離（８，０００×ｇ）後、上澄み液を除去し、得られた沈殿物を、除去した上澄み液と同量の超純水で再度懸濁する。
２）上記工程１で得られた懸濁液に王水を添加後、５分間煮沸して、金及び銀を王水中へ溶解させる。
３）上記工程２で得られた溶液を、ＩＣＰ発光分析装置を用いて測定する。金の濃度は、任意濃度の標準サンプルを上述と同様に測定することで作成した検量線より算出する。
紫外可視分光光度計で測定する場合、具体的には、以下の手順に示すように測定して、金含有率を算出する。
１）金ナノプレート合成液のＩＣＰ測定、または金添加量より金含有率を算出
精製前の金ナノプレート合成液（例えば、実施例の懸濁液ＡやＫなど）中の金含有率をＩＣＰ発光分析装置で測定する。または、金ナノプレート合成時に添加する金の総量に基づき、合成の収率が１００％であると仮定して、金含有率Ａを算出する。
２）金ナノプレート合成液の光学特性を紫外可視分光光度計で測定
金ナノプレート合成液を超純水で４倍希釈して紫外可視分光光度計で測定する。
３）消光度１あたりの金含有率の算出
得られた消光スペクトルの５４０ｎｍの消光度Ｂ（プレート状ではない多面体又は球状金ナノ粒子の消光度）、及び、５５０〜７４０ｎｍの最大吸収波長の消光度Ｃの合計値が、金ナノプレート合成液中の金の総量に由来する消光であるとする。そうすると、消光度１あたりの金含有率は、以下の式によって求められる。
消光度１あたりの金含有率（質量％／消光度）＝Ａ÷（Ｂ＋Ｃ）
４）金ナノプレート精製液の光学特性を紫外可視分光光度計で測定
金ナノプレートの精製液（例えば、実施例の懸濁液ＢやＯ）を超純水で４倍希釈して紫外可視分光光度計で測定する。
５）金含有率の算出
得られた消光スペクトルの５４０ｎｍの消光度Ｄ（プレート状ではない多面体又は球状金ナノ粒子の消光度）、及び、５５０〜７４０ｎｍの最大吸収波長の消光度Ｅの合計値に、上記消光度１あたりの金含有率を乗算して、金含有率をそれぞれ算出する。
金含有率（質量％）＝（Ｄ＋Ｅ）×（Ａ÷（Ｂ＋Ｃ））
【００１２】
本明細書では、組成物中の金ナノプレートの純度を表す指標として、金ナノプレートの「純度指数」を使用してもよい。本明細書に記載の「純度指数」とは、金ナノプレートを含む組成物中におけるプレート状ではない多面体又は球状金ナノ粒子の金ナノプレートに対する比率のことをいう。具体的には、金ナノプレートの純度指数は、金ナノプレートを含む組成物を紫外可視分光光度計で測定し、得られた消光スペクトルの５４０ｎｍの消光度Ｂ（プレート状ではない多面体又は球状金ナノ粒子由来）を、５５０〜７４０ｎｍの最大吸収波長の消光度Ｃ（金ナノプレート由来）で除算することで算出する。
純度指数＝Ｂ÷Ｃ
前記純度指数の値が低いほど金ナノプレートの純度が高いと言える。本発明の被験物質を検出するための組成物においては、被験物質の検出が可能である限り、金ナノプレートの純度指数は限定されるものではないが、例えば、前記純度指数は、０．０５〜２．００であってもよく、好ましくは０．１０〜１．０である。金ナノプレートの純度指数は、金含有率、金ナノプレートの平均最大長さ、及び金ナノプレートの最大吸収波長が等しい組成物同士を比較する場合に有用であり得る。
【００１３】
本発明の被験物質を検出するための組成物は、前記金ナノプレートが分散媒中に懸濁した懸濁液の形態であり得る。前記分散媒としては、金ナノプレートを分散できるものであれば特に制限なく用いることができる。例えば、前記分散媒は、水、水性緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水、トリス塩酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液など）、アルコール類（エタノール、メタノールなど）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトンなど）、及びテトラヒドロフランなどを１種類又はそれ以上含んでもよく、好ましくは、生化学実験において好適である水又は水性緩衝液を含む。また、前記分散媒は、後述の本発明の組成物に含まれ得る任意成分を含んでいてもよい。前記金ナノプレートの懸濁液は、静置状態で前記分散媒中に分散しているものであってもよく、静置状態では沈降しているが振盪や超音波処理によって前記分散媒中に分散するものであってもよい。
【００１４】
本発明の被験物質を検出するための組成物においては、Ｎ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表される第四級アンモニウムカチオンの濃度が、前記分散媒中で０〜１ｍＭ、好ましくは０〜０．５ｍＭであり、さらに好ましくは、前記第四級アンモニウムカチオンは、前記分散媒中には含まれない（すなわち、その濃度は０ｍＭである）。前記第四級アンモニウムカチオンは、可視光領域に最大吸収波長を示す金ナノプレートを作製するために必要な化合物であるが、これは、前記金ナノプレートと後述する被験物質に対する特異的結合物質との結合性を低下させ得るものである。このため、前記分散媒中の前記第四級アンモニウムカチオンの濃度、特に前記金ナノプレートと被験物質に対する特異的結合物質とを結合する際の前記第四級アンモニウムカチオンの濃度は、低い方が好ましい。また、上記の温熱療法や光音響イメージングといった生体内で金ナノプレートが使用される場合に、第四級アンモニウムカチオンの生体毒性が懸念されるという点でも、前記第四級アンモニウムカチオンの濃度が低いほうが好ましい。前記第四級アンモニウムカチオンの４種のＲの組み合わせは、例えば、炭素数１〜９（好ましくは１〜６、さらに好ましくは１〜３）の直鎖又は分枝鎖アルキル基（Ｒa）と炭素数１０〜２０（好ましくは１２〜１８、さらに好ましくは１４〜１７）の直鎖又は分枝鎖アルキル基（Ｒb）との組み合わせであってもよく、好ましくは２種のＲaと２種のＲbとの組み合わせ、さらに好ましくは３種のＲaと１種のＲbとの組み合わせである。このような第四級アンモニウムカチオンは、例えば、デシルトリメチルアンモニウムカチオン、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムカチオン、又は、ヘプタデシルトリメチルアンモニウムカチオンであってもよい。前記第四級アンモニウムカチオンの対イオンとしては、このカチオンの対イオンとして通常採用されているものを特に制限なく用いることができ、例えば、塩化物イオン、臭化物イオン、又は、ヨウ化物イオンを採用してもよい。
【００１５】
前記溶媒中の前記第四級アンモニウムカチオンの濃度は、当技術分野で通常使用される方法によって特に制限されることなく測定及び／又は計算することができる。例えば、前記金ナノプレートを作製するときの第四級アンモニウムカチオンの使用量から、当該第四級アンモニウムカチオンの濃度を算出し、さらにその後の遠心分離などによる分散媒置換工程における希釈倍率をかけることで、結果として得られる懸濁液の分散媒中の前記第四級アンモニウムカチオンの濃度を計算してもよい。また、前記分散媒中の前記第四級アンモニウムカチオンを、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）、質量分析（ＭＳ）、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などによって直接測定して、その濃度を計算してもよい。
【００１６】
ＮＭＲの場合、本発明の組成物を乾燥させ、得られた固形分を重溶媒で溶解（分散）させて測定する。重溶媒には既知濃度の内部標準物質（例えば、マレイン酸）を予め添加し、得られたスペクトル中の第四級アンモニウムカチオン由来のシグナルの積分値と内部標準物質由来のシグナルの積分値を比較することで第四級アンモニウムカチオンの濃度を算出することができる。
また、ＭＳの場合、既知濃度の第四級アンモニウムカチオンを含む溶液を測定し、第四級アンモニウムカチオン由来のシグナル強度より検量線を作成する。次に、本発明の組成物を測定し、得られた検出強度より第四級アンモニウムカチオンの濃度を算出することができる。例えば、飛行時間型質量分析計を使用する場合、一定強度のイオン化レーザーにより既知濃度の第四級アンモニウムカチオンを含む試料を測定後、本発明の組成物を測定し、シグナル強度を比較することで第四級アンモニウムカチオンの濃度を算出することができる。若しくは、本発明の組成物に既知濃度内部標準物質を添加し、得られたスペクトル中の第四級アンモニウムカチオン由来のシグナル強度と内部標準物質由来のシグナル強度を比較することで第四級アンモニウムカチオンの濃度を算出することができる。
さらにＨＰＬＣの場合、初めに複数の既知濃度の第四級アンモニウムカチオンを含む溶液を測定し、得られたチャート中の第四級アンモニウムカチオン由来のピーク面積より検量線を作成する。次に、本発明の組成物を測定し、得られたチャート中の第四級アンモニウムカチオン由来のピーク面積より第四級アンモニウムカチオンの濃度を算出することができる。例えば、第四級アンモニウムカチオンの分離カラムにはＳｈｏｄｅｘ  Ａｓａｈｉｐａｋ  ＧＦ−３１０  ＨＱ（昭和電工株式会社製）、第四級アンモニウムカチオンの検出には電気伝導度検出器や示差屈折率検出器が使用できる。
【００１７】
本発明の被験物質を検出するための組成物は、水溶性高分子を任意に含んでもよく、含まなくてもよい。本明細書に記載の「水溶性高分子」とは、分子量が５００以上、好ましくは５００〜１，０００，０００、さらに好ましくは５００〜１００，０００の水溶性物質のことをいう。本明細書に記載の「水溶性」とは、常温常圧下で高分子が水に０．００１質量％以上溶解することをいう。前記水溶性高分子としては、例えば、ポリスチレンスルホン酸又はそのナトリウム塩、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアリルアミン、デキストラン、ポリメタクリルアミド、ポリビニルフェノール、ポリ安息香酸ビニル、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、又は、ビス（ｐ−スルホナトフェニル）フェニルホスフィンを使用してもよく、これらは、本発明の金ナノプレートと化学結合する官能基である水酸基、メルカプト基、ジスルフィド基、アミノ基、カルボキシル基などで修飾されていてもよい。好ましくは、前記水溶性高分子は、ポリスチレンスルホン酸又はそのナトリウム塩、ＰＶＰ、又は、チオール末端ポリエチレングリコールである。これらの水溶性高分子を含有している、塗料やインクなどに用いられる市販の分散剤を、本発明の組成物に配合する水溶性高分子として使用してもよい。
【００１８】
本発明の組成物に含まれる水溶性高分子の種類は、その組成物の用途に応じて選択することができる。例えば、生体実験や細胞実験に使用する場合、生体適合性が良好なポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールやポリビニルアルコールなどを用いてもよい。
本発明の組成物が水溶性高分子を含む場合には、その組成物中に溶解又は分散している水溶性高分子の濃度は、例えば１００μＭ以下であってもよく、好ましくは５０μＭ以下、さらに好ましくは１０μＭ以下である。あるいは、前記水溶性高分子の濃度は、例えば１質量％以下であってもよく、好ましくは０．５質量％以下、さらに好ましくは０．１質量％以下である。
本発明は、特定の理論に拘束されるものではないが、本発明の組成物に水溶性高分子を配合すると、前記組成物中において金ナノプレートの分散安定性が向上する。また、水溶性高分子の濃度が１００μＭ以下又は１質量％以下であると、その濃度が１００μＭ又は１質量％を超える場合と比較して、例えば、前記被験物質に対する特異的結合物質が金ナノプレートに良好に担持されるか、又は、被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートが被験物質と安定した複合体を形成するため、結果としてその被験物質の検出感度を高めることができる。
【００１９】
水溶性高分子の濃度の測定方法として、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）（例えば、ゲルろ過クロマトグラフィー（ＧＰＣ））、示唆熱・熱重量測定（ＴＧ−ＤＴＡ）などが挙げられる。
ＮＭＲの場合、本発明の組成物を乾燥させ、得られた固形分を重溶媒で溶解（分散）させて測定する。重溶媒には既知濃度の内部標準物質（例えば、マレイン酸）を予め添加し、得られたスペクトル中の水溶性高分子由来のシグナルの積分値と内部標準物質由来のシグナルの積分値を比較することで水溶性高分子の濃度を算出することができる。
また、ＧＰＣの場合、初めに複数の既知濃度の水溶性高分子水溶液を分析し、得られたチャート中の水溶性高分子由来のピーク面積より検量線を作成する。次に、本発明の組成物を測定し、得られたチャート中の水溶性高分子由来のピーク面積より水溶性高分子の濃度を算出することができる。
さらに、ＴＧ−ＤＴＡの場合、本発明の組成物の乾燥固形分を測定した際の、重量変化から水溶性高分子量を算出することができる。
【００２０】
本発明の被験物質を検出するための組成物は、クエン酸ナトリウムを任意に含んでもよく、含まなくてもよい。クエン酸ナトリウムが含まれていると、前記組成物中の金ナノプレートの分散性が向上する。前記組成物がクエン酸ナトリウムを含む場合には、その組成物中のクエン酸ナトリウムの濃度は、例えば５０ｍＭ以下であってもよく、好ましくは２５ｍＭ以下、さらに好ましくは１３ｍＭ以下である。クエン酸ナトリウムの濃度が５０ｍＭ以下であると、前記組成物中の金ナノプレートは凝集しにくい。
【００２１】
本発明の組成物は、金ナノプレートへ悪影響を与えない限り任意の成分を含んでいてもよい。任意成分としては、例えば、金ナノプレートを製造する際に用いた試薬（例えば、水素化ホウ素ナトリウムやアスコルビン酸）や分散剤（例えば、分子量が５００より小さいポリエチレングリコール）などがあげられる。
【００２２】
本発明の被験物質を検出するための組成物は、被験物質に対する特異的結合物質、すなわち検出試薬を標識するために用いることができる。換言すると、本発明の金ナノプレートは、被験物質に対する特異的結合物質を担持することができる。本明細書に記載の「担持」とは、共有結合若しくは非共有結合又は直接的若しくは間接的な結合などの様式にかかわらず、金ナノプレートと被験物質に対する特異的結合物質とが結合して複合体を形成していることを意味している。担持の方法としては、通常の担持方法を特に制限なく用いることができ、物理吸着、化学吸着（表面への共有結合）、化学結合（共有結合、配位結合、イオン結合又は金属結合）等を利用して、金ナノプレートと被験物質に対する特異的結合物質とを直接的に結合させる方法や、金ナノプレートの表面に前述の水溶性高分子の一部を結合させて、その水溶性高分子の末端又は主鎖若しくは側鎖に、直接的又は間接的に被験物質に対する特異的結合物質を結合させる方法を採用することができる。例えば、被験物質に対する特異的結合物質が抗体である場合には、本発明の金ナノプレートと抗体の溶液とを混合し、振盪し、遠心分離することで、抗体を担持した金ナノプレート（標識された検出試薬）を沈殿物として得ることができる。また、本発明の金ナノプレートと抗体とを静電吸着により担持させる場合、マイナス電荷を有するポリスチレンスルホン酸で前記金ナノプレート表面を被覆すると、前記抗体の担持効率が向上し得る。なお、前記被験物質に対する特異的結合物質は、前記水溶性高分子と同様に、懸濁液である本発明の組成物中での前記金ナノプレートの分散安定性を向上し得るので、特に前記被験物質に対する特異的結合物質を担持する金ナノプレートの分散剤としても好適である。
【００２３】
本発明の被験物質に対する特異的結合物質としては、検出の対象である被験物質を、該被験物質との複合体形成により検出できるものであって、金ナノプレートを標識として利用することができるものであれば、特に制限なく用いることができる。被験物質と被験物質に対する特異的結合物質との組み合わせの具体例としては、抗原とそれに結合する抗体、糖鎖又は複合糖質とそれに結合するレクチン、レクチンとそれに結合する糖鎖又は複合糖質、ホルモン又はサイトカインとそれに結合する受容体、受容体とそれに結合するホルモン又はサイトカイン、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマー、酵素とそれに結合する基質、基質とそれに結合する酵素、ビオチンとアビジン又はストレプトアビジン、アビジン又はストレプトアビジンとビオチン、ＩｇＧとプロテインＡ又はプロテインＧ、プロテインＡ又はプロテインＧとＩｇＧ、あるいは、第１の核酸とそれに結合する（ハイブリダイズする）第２の核酸等があげられる。前記第２の核酸は、前記第１の核酸と相補的な配列を含む核酸であってもよい。
【００２４】
被験物質が抗原である場合には、該抗原に対する特異的結合物質は抗体であってもよい。前記抗体は、前記抗原に対して特異的に結合するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体又はそれらの断片であってもよく、該断片は、Ｆ（ａｂ）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント又はＦ（ｖ）フラグメントであってもよい。被験物質としての抗原は、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、麦芽アグルチニン及びリシンなどのレクチンであってもよく、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ロタウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス及びＢ型肝炎ウイルス、ジカウイルス、デングウイルスなどのウイルス又はそれらが有する物質（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス抗原（ＨＢｓ抗原）又はインフルエンザウイルスのヘマグルチニン）であってもよく、アスペルギルス・フラバス、クラミジア、梅毒トレポネーマ、溶連菌、炭疽菌、黄色ブドウ球菌、赤痢菌、大腸菌、サルモネラ菌、ネズミチフス菌、パラチフス菌、緑膿菌及び腸炎ビブリオ菌などの病原性微生物又はそれらが有する物質（例えば、アスペルギルス・フラバスのアフラトキシン（Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２又はＭ１など）、腸管出血性大腸菌のベロ毒素又は溶連菌のストレプトリジンＯ）であってもよく、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、リウマチ因子及びＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）などの血中タンパク質であってもよく、ムチンなどの糖タンパク質であってもよく、インスリン、下垂体ホルモン（例えば、成長ホルモン（ＧＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、プロラクチン、又はメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ））、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、甲状腺ホルモン（例えば、ジヨードサイロニン又はトリヨードサイロニン）、絨毛性ゴナドトロピン、カルシウム代謝調節ホルモン（例えば、カルシトニン又はパラトルモン）、膵ホルモン、消化管ホルモン、血管作動性腸管ペプチド、卵胞ホルモン（例えば、エストロン）、天然又は合成黄体ホルモン（例えば、プロゲステロン）、男性ホルモン（例えば、テストステロン）、及び副腎皮質ホルモン（例えば、コルチゾール）などのホルモンであってもよく、セロトニン、ウロキナーゼ、フェリチン、サブスタンＰ、プロスタグランジン及びコレステロールなどのその他生体内物質であってもよく、前立腺性酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、アルカリ性フォスファターゼ、トランスアミナーゼ、トリプシン、ペプシノーゲン、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）及び癌胎児性抗原（ＣＥＡ）などの腫瘍マーカーであってもよく、血液型抗原などの糖鎖抗原であってもよく、ヘモグロビン及びトランスフェリンなどの便潜血の検出に用いられるマーカーであってもよく、血液凝固・線溶系において活性型第ＸＩＩＩ因子作用によりクロスリンクを受けた安定化フィブリンがプラスミンによって分解されたフィブリン分解産物の一種であるＤダイマーであってもよい。そして、被験物質である抗原がホルモン又はサイトカインなどの生体内物質である場合には、該生体内物質に対する特異的結合物質は、抗体だけでなく受容体であってもよく、被験物質である抗原が糖鎖又は糖鎖を有する複合糖質である場合には、該糖鎖又は糖鎖を有する複合糖質に対する特異的結合物質は、抗体だけでなくレクチンであってもよい。また、被験物質としての抗原は、ペニシリン及びカドミウムなどのハプテンであってもよい。
【００２５】
被験物質が抗体である場合には、該抗体に対する特異的結合物質は抗原であってもよい。前記抗原は、前記抗体に対して特異的に結合する抗原全体又はその断片であってもよく、それらを他の担体と結合した融合物質であってもよい。被験物質としての抗体は、抗環状シトルリン化ペプチド（ＣＣＰ）抗体又は抗リン脂質抗体などの自己抗体であってもよく、抗クラミジア抗体、抗ＨＩＶ抗体又は抗ＨＣＶ抗体などの外来抗原に対する抗体であってもよい。
【００２６】
被験物質が糖鎖である場合には、該糖鎖に対する特異的結合物質はレクチンであってもよい。前記レクチンは、前記糖鎖に特異的に結合するガレクチン、Ｃ型レクチン、マメ科レクチン又はそれらの断片であってもよい。被験物質としての糖鎖は、単糖又は多糖であってもよく、それらがタンパク質又は脂質に結合した複合糖質であってもよい。例えば、被験物質がマンノースを含む糖鎖である場合には、該糖鎖に対する特異的結合物質としてマメ科レクチンのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を使用することができる。
【００２７】
被験物質がレクチンである場合には、該レクチンに対する特異的結合物質は糖鎖であってもよい。前記糖鎖は、前記レクチンに特異的に結合する単糖、多糖、複合糖質又はそれらが他の担体と結合した融合物質であってもよい。被験物質としてのレクチンは、ガレクチン、Ｃ型レクチン又はマメ科レクチンであってもよい。例えば、被験物質がマメ科レクチンのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）である場合には、該レクチンに対する特異的結合物質としてマンノースを含む糖鎖を使用することができる。
【００２８】
被験物質と被験物質に対する特異的結合物質との組み合わせが、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマーである場合には、核酸アプタマーは、例えば、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、Ｄ群赤痢菌・ソンネ赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、溶連菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、パラチフス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｐａｒａｔｙｐｈｉ  Ａ）、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ  Ｂ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腸炎ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）等の細菌、ムチン１等の上皮の細胞表面に表れる腫瘍マーカー、若しくはβ−ガラクトシダーゼやトロンビン等の酵素等と結合するＤＮＡアプタマー、又は、ヒト免疫不全ウイルスのＴａｔタンパク質やＲｅｖタンパク質と結合するＲＮＡアプタマーであってもよく、ペプチドアプタマーは、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）の腫瘍性タンパク質ＨＰＶ１６  Ｅ６と結合するペプチドアプタマーであってもよい。
【００２９】
被験物質がビタミン類である場合には、該ビタミン類に対する特異的結合物質は、ビタミンＤと結合するトランスカルシフェリン及びビタミンＢ１２と結合するトランスコバラミンなどのビタミン結合タンパク質であってもよい。被験物質が抗生物質である場合には、該抗生物質に対する特異的結合物質は、ペニシリンに結合するＰＢＰ１及びＰＢＰ２などのペニシリン結合タンパクであってもよい。
被験物質又は被験物質に結合する物質としての核酸は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又は、それらの増幅物であってもよい。
【００３０】
ある態様では、本発明は、被験物質を検出するための凍結乾燥物に関しており、前記凍結乾燥物は、前記被験物質を検出するための組成物の凍結乾燥物である。本発明の凍結乾燥物は、当技術分野で通常使用される方法によって特に制限されることなく、前記被験物質を検出するための組成物から作製することができる。本発明の凍結乾燥物は、前記被験物質を検出する物質を運搬又は保管するのに好適な形態である。本発明の凍結乾燥物は、被験物質を検出するときに、分散媒に再懸濁して使用することができる。本発明の凍結乾燥物の分散媒としては、前記被験物質を検出するための組成物に使用され得る前述の分散媒を、特に制限されることなく使用することができる。
【００３１】
ある態様では、本発明は、被験物質を検出する方法にも関する。前記被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートは、対応する被験物質に結合して、それを検出することができる。本発明の被験物質を検出する方法は、本発明の組成物、又は、本発明の凍結乾燥物の再懸濁液を、被験物質と混合して、前記被験物質と前記被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体を形成する工程、及び、その複合体を検出する工程を含む。本発明の被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートは、本発明の被験物質を検出する方法を実施する直前に調製してもよい。換言すれば、本発明の被験物質を検出する方法は、金ナノプレートに、被験物質に対する特異的結合物質を担持させる工程をさらに含んでもよい。また、本発明の被験物質を検出する方法は、本発明の凍結乾燥物を再懸濁する工程をさらに含んでもよい。
前記複合体は、被験物質の検出の分野で通常用いられる手段又は凝集物若しくは沈殿物を検出するのに通常用いられる手段を、特に制限なく利用することによって検出することができる。例えば、前記複合体の形成を、消光度測定、吸光度測定、濁度測定、粒度分布測定、粒子径測定、ラマン散乱光測定、色調変化の観察、凝集又は沈殿形成の観察、イムノクロマトグラフィー法、電気泳動、及び、フローサイトメトリーから成る群から選択される手段によって検出してもよい。
【００３２】
吸光度は、平行光線が物体中を透過するときの該物体の光吸収の強さをいうが（狭義の吸光度）、実測にあたっては、該物体の表面での反射又は散乱などによる光の損失も考慮する必要がある（広義の吸光度）。光の吸収、反射及び散乱などのあらゆる要因による光の損失の強度を意味する広義の吸光度を、本明細書では特に消光度という。被験物質とその被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体が形成すると、金ナノプレートの最大吸収波長前後の波長領域における消光度又は吸光度が減少する。
消光度測定又は吸光度測定は、２００〜２５００ｎｍの範囲の波長領域で行ってもよく、４３０〜２０００ｎｍの範囲の金ナノプレートの最大吸収波長において行ってもよい。消光度又は吸光度は、これらの測定のために通常用いられる紫外可視分光光度計（例えば、紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣ、株式会社島津製作所）などによって測定してもよい。
【００３３】
被験物質とその被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体が形成すると、金ナノプレート同士が前記被験物質を介して架橋され、単独の金ナノプレートよりも粒子径が大きくなる。本発明の組成物中に分散している粒子の粒子径が大きくなると、その組成物に入射する光の吸収、反射又は散乱が増大し、その組成物は濁りを示す。濁りを示す組成物での光の吸収、反射又は散乱は、消光度又は吸光度として測定することができ、このような濁り度合いに依存して上昇する消光度又は吸光度を濁度ともいう。
本発明の組成物においては、被験物質とその被験物質に対する特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体が形成することで複数の粒子が隣接して存在する場合、双極子−双極子相互作用により金ナノプレートの最大吸収波長よりも長波長側に、前記複合体の形成に依存して消光度又は吸光度が上昇する波長領域が存在している（Nano Lett., Vol. 4, No. 9, (2004), p.1627-1631）。この波長領域における消光度又は吸光度を濁度として測定することにより、前記複合体を検出してもよい。例えば、金ナノプレートの最大吸収波長が５６０ｎｍである場合には、６６０〜８４０ｎｍの波長領域において濁度測定を行ってもよく、金ナノプレートの最大吸収波長が６２０ｎｍである場合には、７２０〜９００ｎｍの波長領域において濁度測定を行ってもよい。濁度は、その測定のために通常用いられる紫外可視分光光度計（例えば、紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣ、株式会社島津製作所）又は濁度計などによって測定してもよい。
【００３４】
イムノクロマトグラフィー法では、検出部位（ライン状）に金ナノプレートが集合する。このとき、金ナノプレートが可視域の光を吸収する場合、前記複合体の形成を色として認識することができる。本試験の結果は目視判定と、輝度差解析によって数値化できる。目視判定はイムノクロマト試験後の検出ライン有無を目視によって確認し、検出ラインが確認可能な最低被験物質濃度を検出感度とすることができる。輝度解析では、以下の輝度差１から輝度差２を引いた値の絶対値が２（検出限界輝度差）以上である時の最低被験物質濃度を検出感度とすることができる。
１．被験物質を含まない展開液を使用したイムノクロマト試験時の検出ラインと検出ライン以外の部分（対照領域）との輝度差
２．被験物質を含む展開液を使用したイムノクロマト試験時のイムノクロマト担体上の検出ラインと検出ライン以外の部分（対照領域）との輝度差
また、近赤外域の光を吸収する金ナノプレートを使用したイムノクロマト試験においては、試験後に近赤外光を検出部に照射し、そのときの吸光を測定することで検出を確認することができる。
【００３５】
金ナノプレートは、厚みが薄いプレートの形状であるから、その平均最大長さと同じ粒子径の球状金ナノ粒子よりも体積及び質量が小さい。そのため、本発明の組成物中の金ナノプレート（被験物質に対する特異的結合物質を担持している金ナノプレート）は、イムノクロマト担体上で良好な移動能（展開性）を示し、球状金ナノ粒子を使用した場合と比較して、検出ラインと検出ライン以外の部分（対照領域）との輝度差を大きくすることができる。また、本発明の組成物中の金ナノプレート（被験物質に対する特異的結合物質を担持している金ナノプレート）は、イムノクロマト担体上で速やかに展開するため、被験物質の判定（検出）に要する時間を短縮することができる。加えて、一般に、イムノクロマト担体のバックグラウンドの色は、完全な白よりも青白い方がより白く見えて、検出ラインの色が強調されるところ、青色を呈する金ナノプレートを白いイムノクロマト担体に使用すると、たとえ展開後の担体に金ナノプレートの色が残ったとしても、当該担体はほんのり青みがかった白色になるため、赤色にしか調製できない球状金ナノ粒子を使用した場合と比較して、顕著に検出ラインの視認性を向上することができる。
【００３６】
上述のように、本発明の被験物質を検出するための組成物を用いれば、高感度で被験物質を検出することができるので、被験物質に対する特異的物質の使用量を抑えることができる。抗体などの被験物質に対する特異的物質は高価であるので、本発明に従って被験物質に対する特異的物質の使用量が減少すれば、被験物質の検出のためのコストを削減することが可能となる。
【００３７】
ある態様では、本発明は、前記被験物質を検出するための組成物又は前記被験物質を検出するための凍結乾燥物を含む、前記被験物質を検出する方法に使用するためのキットに関する。本発明のキットは、被験物質の標準品、イムノクロマト試験紙、又は、使用方法を記載した取扱説明書などをさらに含んでもよい。
【００３８】
ある態様では、本発明は、（１）金ナノプレート種粒子の懸濁液を調製する工程、及び、（２）金ナノプレートの懸濁液を調製する工程を含む、前記被験物質を検出するための組成物又は前記被験物質を検出するための凍結乾燥物を製造する方法に関する。前記工程（１）は、金ナノプレート種粒子を予備成長させる工程及びそれを本成長させる工程の２段階の工程を含んでもよいし、金ナノプレート種粒子を予備成長させる工程含まず、いきなり本成長させる工程を開始してもよい。金ナノプレート種粒子を予備成長させてから本成長させる場合には、まずヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロリドなどの第四級アンモニウムカチオンの濃度が低い条件（例えば、１５ｍＭ）で種粒子を効率的に成長させ（予備成長）、その後前記第四級アンモニウムカチオンの濃度を高く（例えば、５０ｍＭ）して粒子成長速度を落とし、種粒子を均一に成長させる（本成長）。金ナノプレート種粒子を予備成長させずに、いきなり本成長させる場合には、前記第四級アンモニウムカチオンの濃度を途中で変更する必要がないので、より簡便に種粒子を製造することができる。予備成長工程があると、種粒子の形状や大きさが揃いやすいが、その工程がなくても、前記被験物質を検出するための組成物、前記被験物質を検出する方法、及び、前記キットに使用する金ナノプレートを製造するために必要な均一性を十分に備えた種粒子を製造することができる。金ナノプレートを製造する際に生成し得るプレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子（最大吸収波長：５４０〜５５０ｎｍ）を除去する精製方法として、懸濁液中の第四級アンモニウムカチオンの濃度を高め、金ナノプレートを選択的に沈殿させる方法（枯渇凝集法）や、粒子サイズの違いを利用した精製方法の限外ろ過（例えば、タンジェンシャルフロー・フィルトレーションによる限外ろ過）、サイズ除外クロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過クロマトグラフィー）、密度勾配遠心法などが挙げられる。
【００３９】
また、前記種粒子から調製された金ナノプレートの懸濁液の分散媒中の第四級アンモニウムカチオンの濃度は、遠心分離法、透析、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過クロマトグラフィー）、及び／又は限外ろ過（例えば、タンジェンシャルフロー・フィルトレーションによる限外ろ過）などにより、当該分散媒を第四級アンモニウムカチオンを含まない分散媒と置換することによって減少させることができる。例えば、遠心分離法により第四級アンモニウムカチオン濃度を低減する場合、具体的には、金ナノプレートの懸濁液を遠心分離して上澄み液を除去し、得られた沈殿物の質量を測定した後、除去した上澄み液と同量の分散媒（第四級アンモニウムカチオンを含まないもの）で当該沈殿物を再度懸濁する。例えば、沈殿物の質量が１ｇであり、再懸濁に使用した分散媒の質量が９９ｇであると、金ナノプレートを含む懸濁液の分散媒中の第四級アンモニウムカチオンの濃度は、１００倍に希釈される。
【００４０】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４１】
１．金ナノプレートを含む懸濁液
（１）金ナノプレート種粒子の懸濁液の作製
１００ｍＭのヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＣＴＡＣ）水溶液２４ｇに、５０ｍＭの塩化金酸水溶液０．１３ｇ、１０ｍＭの水素化ホウ素ナトリウム水溶液１．５ｇを撹拌しながら添加した。得られた溶液をインキュベーター（３０℃）中で１２０分間静置し、金ナノプレート種粒子懸濁液を作製した。作製した懸濁液（原液）の光学特性を図１に示す。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。
金ナノプレート種粒子懸濁液の金含有率は、懸濁液の総質量に対して０．００４９質量％であった。この懸濁液の光学特性を図１に示す。【００４２】
（２）金ナノプレートの懸濁液の作製
（２−１）予備成長を含まない合成
（２−１−１）金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ａ）の作製
５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液３６ｇに強力攪拌子（φ８×３８ｍｍ）を入れ、５００ｒｐｍで攪拌し、５０ｍＭの塩化金酸水溶液を０．５ｇ、１０ｍＭのよう化ナトリウム水溶液を０．３ｇ、そして１００ｍＭのＬ−アスコルビン酸水溶液を０．４ｇ添加した。３０秒間攪拌後、金ナノプレート種粒子懸濁液の１０倍希釈溶液を０．３ｇ添加し、５秒間攪拌した。得られた懸濁液をインキュベーター（３０℃）内で１２時間静置し、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ａ）を作製した。この懸濁液の作製に使用したＣＴＡＣ水溶液からの希釈率により比例計算（ただし、各溶液の比重は１と仮定し、前記金ナノプレート種粒子懸濁液の１０倍希釈溶液中のＣＴＡＣの量は無視）すると、懸濁液Ａの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は４８．０ｍＭと求められた（特に断らない限り、他の実施例でも同様の計算方法を採用した）。
懸濁液Ａを超純水で４倍容に希釈したときの懸濁液の色調は青色であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図２に示す。最大吸収を示す波長は６４８ｎｍ（消光度：０．８６）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．５２であったので、金ナノプレートの純度指数は０．６０と計算された。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ａ中の金ナノプレートを、超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図３に示す。ＳＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは５０ｎｍ、厚さは２４ｎｍで、アスペクト比は２．１であることがわかった。
懸濁液ＡのｐＨは、室温下（２０℃）で測定した結果、２．４であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ａの金含有率は、懸濁液の総質量に対して０．０１３１質量％であった。【００４３】
（２−２）予備成長を含む合成
（２−２−１）金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｋ）の作製
１５ｍＭのＣＴＡＣ水溶液３．１６ｇを攪拌し、２０ｍＭのよう化ナトリウム水溶液を０．００４ｇ、５０ｍＭの塩化金酸水溶液を０．０１３ｇ、そして１００ｍＭのＬ−アスコルビン酸水溶液０．０１３ｇを添加し、予備成長液を作製した。次いで、５１ｍＭのＣＴＡＣ水溶液４０ｇを攪拌し、２０ｍＭのよう化ナトリウム水溶液を０．１５ｇ、５０ｍＭの塩化金酸水溶液を０．５ｇ、そして１００ｍＭのＬ−アスコルビン酸水溶液０．４ｇを添加し、本成長液を作製した。予備成長液へ金ナノプレート種粒子懸濁液の１０倍希釈溶液を０．０３１ｇ添加し、予備成長金ナノプレート懸濁液を作製した。予備成長金ナノプレート懸濁液全量を本成長液へ添加した。得られた懸濁液をインキュベーター（３０℃）内で１２時間静置し、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｋ）を作製した。懸濁液Ｋの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は４７．２ｍＭと計算された。
懸濁液Ｋを超純水で４倍容に希釈したときの懸濁液の色調は青色であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図１７に示す。最大吸収を示す波長は６４４ｎｍ（消光度：０．９４）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．５３であったので、金ナノプレートの純度指数は０．５６と計算された。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ｋ中の金ナノプレートを、超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図１８に示す。また、懸濁液ＫのｐＨは、室温下（２０℃）で測定した結果、２．５であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ｋの金含有率は、懸濁液の総質量に対して０．０１１４質量％であった。【００４４】
（２−２−２）金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｌ）の作製
上記金ナノプレート種粒子懸濁液の１０倍希釈溶液の添加量を０．０３１ｇから０．０１６ｇに変更した以外は、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｋ）と同様にして、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｌ）を作製した。懸濁液Ｌの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は４７．１ｍＭと計算された。
懸濁液Ｌを超純水で４倍容に希釈したときの懸濁液の色調は青色であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図１９に示す。最大吸収を示す波長は６６８ｎｍ（消光度：０．９９）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．４８であったので、金ナノプレートの純度指数は０．４８と計算された。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ｌ中の金ナノプレートを、超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図２０に示す。また、懸濁液ＬのｐＨは、室温下（２０℃）で測定した結果、２．５であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ｌの金含有率は、懸濁液の総質量に対して０．０１１４質量％であった。【００４５】
（２−２−３）金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｍ）の作製
上記金ナノプレート種粒子懸濁液の１０倍希釈溶液の添加量を０．０３１ｇから０．０６２ｇに変更した以外は、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｋ）と同様にして、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｍ）を作製した。懸濁液Ｍの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は４７．１ｍＭと計算された。
懸濁液Ｍを超純水で４倍容に希釈したときの懸濁液の色調は青色であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図２１に示す。最大吸収を示す波長は６２８ｎｍ（消光度：０．８４）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．５９であったので、金ナノプレートの純度指数は０．７０と計算された。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ｍ中の金ナノプレートを、超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図２２に示す。また、懸濁液ＭのｐＨは、室温下（２０℃）で測定した結果、２．４であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ｍの金含有率は、懸濁液の総質量に対して０．０１１４質量％であった。【００４６】
（２−２−４）金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｎ）の作製
上記金ナノプレート種粒子懸濁液の１０倍希釈溶液の添加量を０．０３１ｇから０．１５５ｇに変更した以外は、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｋ）と同様にして、金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｎ）を作製した。懸濁液Ｎの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は４７．０ｍＭと計算された。
懸濁液Ｎを超純水で４倍容に希釈したときの懸濁液の色調は紫色であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図２３に示す。消光スペクトルの内、最大吸収を示す波長の長波長側に有るピークの位置（金ナノプレート由来のピーク）は６０２ｎｍ（消光度：０．５８）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．６４であったので、金ナノプレートの純度指数は１．１０と計算された。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ｎ中の金ナノプレートを、超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図２４に示す。また、懸濁液ＮのｐＨは、室温下（２０℃）で測定した結果、２．４であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ｎの金含有率は、懸濁液の総質量に対して０．０１１４質量％であった。【００４７】
（３）懸濁液の精製
（３−１）懸濁液Ａの精製（懸濁液Ｂの作製）
懸濁液Ａ３０ｇに、１．０ＭのＣＴＡＣ水溶液を４．０ｇ注入して攪拌した。３０℃で、１２時間静置し、上澄み液を除去した。沈殿物を５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液２０ｇで分散し、懸濁液Ａの精製物（懸濁液Ｂ）を作製した。懸濁液Ｂの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は５０ｍＭとみなした（再分散時に使用した分散媒におけるＣＴＡＣ濃度）。
懸濁液Ｂを超純水で４倍容に稀釈したときの懸濁液の色調はシアン調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図４Ａに示す。最大吸収を示す波長は６４４ｎｍ（消光度：０．６１）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．２２であったので、金ナノプレートの純度指数は０．３６と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｂの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００７９質量％であった。最大吸収波長における消光度の高さを合せるために測定波長域すべての消光度に１．４１を乗算した懸濁液Ｂの消光スペクトル（実線）と、上記懸濁液Ａの消光スペクトル（破線）との比較を図４Ｂに示す。懸濁液Ｂの消光スペクトルでは、プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度が、３９％減少していた。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ｂ中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図５に示す。ＳＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは５２ｎｍ、厚さは１９ｎｍで、アスペクト比は２．７であることがわかった。
懸濁液Ｂ中の金ナノプレートのゼータ電位は＋４１．４ ± １．２であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。
また、上記懸濁液Ａの沈殿物を５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液０．０２ｇで分散し、懸濁液Ａの精製物（懸濁液Ｗ）を作製した時、金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して７．９質量％であった。【００４８】
（３−２）懸濁液Ｋの精製（懸濁液Ｏの作製）
懸濁液Ｋ３０ｇに、１．０ＭのＣＴＡＣ水溶液を４．０ｇ注入して攪拌した。３０℃で、１２時間静置し、上澄み液を除去した。沈殿物を５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液２０ｇで分散し、懸濁液Ｋの精製物（懸濁液Ｏ）を作製した。懸濁液Ｏの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は５０ｍＭとみなした。
懸濁液Ｏを超純水で４倍容に稀釈したときの懸濁液の色調はシアン調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図２５Ａに示す。最大吸収を示す波長は６４４ｎｍ（消光度：０．８０）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．２９であったので、金ナノプレートの純度指数は０．３６と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｏの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００８５質量％であった。最大吸収波長における消光度の高さを合せるために測定波長域すべての消光度に１．１８を乗算した懸濁液Ｏの消光スペクトル（実線）と、上記懸濁液Ｋの消光スペクトル（破線）との比較を図２５Ｂに示す。懸濁液Ｏの消光スペクトルでは、プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度が、３６％減少していた。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液Ｏ中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図２６Ａに示す。鮮明な像を観察するため、懸濁液Ｏにチオール末端ポリエチレングリコール（Ｍｗ：２０，０００）を添加し、透過走査電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）観察を行った結果を図２６Ｂに示す。ＳＥＭ、ＳＴＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは６５ｎｍ、厚さは３１ｎｍで、アスペクト比は２．１であることがわかった。
懸濁液Ｏ中の金ナノプレートのゼータ電位は＋４２．０ ± １．５であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。【００４９】
（３−３）懸濁液Ｌの精製（懸濁液Ｐの作製）
懸濁液Ｌ３０ｇに、１．０ＭのＣＴＡＣ水溶液を注入して攪拌した。注入量は懸濁液Ｌの上澄みが赤紫色になる量とした。３０℃で、１２時間静置し、赤紫色の上澄み液を除去した。沈殿物を５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液３０ｇで分散し、懸濁液Ｌの精製物（懸濁液Ｐ）を作製した。懸濁液Ｐの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は５０ｍＭとみなした。
懸濁液Ｐを超純水で４倍容に稀釈したときの懸濁液の色調は薄水色調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図２７Ａに示す。最大吸収を示す波長は６６８ｎｍ（消光度：０．５８）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．１７であったので、金ナノプレートの純度指数は０．２９と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｐの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００５９質量％であった。最大吸収波長における消光度の高さを合せるために測定波長域すべての消光度に１．７０を乗算した懸濁液Ｐの消光スペクトル（実線）と、上記懸濁液Ｌの消光スペクトル（破線）との比較を図２７Ｂに示す。懸濁液Ｐの消光スペクトルでは、プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度が、４０％減少していた。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図２８Ａに示す。鮮明な像を観察するため、懸濁液Ｐにチオール末端ポリエチレングリコール（Ｍｗ：２０，０００）を添加し、透過走査電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）観察を行った結果を図２８Ｂに示す。ＳＥＭ、ＳＴＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは９１ｎｍ、厚さは４１ｎｍで、アスペクト比は２．２であることがわかった。
懸濁液Ｐ中の金ナノプレートのゼータ電位は＋４１．６ ± ２．０であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。【００５０】
（３−４）懸濁液Ｍの精製（懸濁液Ｑの作製）
懸濁液Ｍ３０ｇに、１．０ＭのＣＴＡＣ水溶液を注入して攪拌した。注入量は懸濁液Ｍの上澄みが赤紫色になる量とした。３０℃で、１２時間静置し、赤紫色の上澄み液を除去した。沈殿物を５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液３０ｇで分散し、懸濁液Ｍの精製物（懸濁液Ｑ）を作製した。懸濁液Ｑの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は５０ｍＭとみなした。
懸濁液Ｑを超純水で４倍容に稀釈したときの懸濁液の色調は薄水色調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図２９Ａに示す。最大吸収を示す波長は６２８ｎｍ（消光度：０．６９）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．３１であったので、金ナノプレートの純度指数は０．４５と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｑの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００８０質量％であった。最大吸収波長における消光度の高さを合せるために測定波長域すべての消光度に１．２２を乗算した懸濁液Ｑの消光スペクトル（実線）と、上記懸濁液Ｍの消光スペクトル（破線）との比較を図２９Ｂに示す。懸濁液Ｑの消光スペクトルでは、プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度が、３６％減少していた。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図３０Ａに示す。鮮明な像を観察するため、懸濁液Ｑにチオール末端ポリエチレングリコール（Ｍｗ：２０，０００）を添加し、透過走査電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）観察を行った結果を図３０Ｂに示す。ＳＥＭ、ＳＴＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは５４ｎｍ、厚さは２７ｎｍで、アスペクト比は２．０であることがわかった。
懸濁液Ｑ中の金ナノプレートのゼータ電位は＋４２．１± １．０であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。【００５１】
（３−５）懸濁液Ｎの精製（懸濁液Ｒの作製）
懸濁液Ｎ３０ｇに、１．０ＭのＣＴＡＣ水溶液を注入して攪拌した。注入量は懸濁液Ｎの上澄みが赤紫色になる量とした。３０℃で、１２時間静置し、赤紫色の上澄み液を除去した。沈殿物を５０ｍＭのＣＴＡＣ水溶液３０ｇで分散し、懸濁液Ｎの精製物（懸濁液Ｒ）を作製した。懸濁液Ｒの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は５０ｍＭとみなした。
懸濁液Ｒを超純水で４倍容に稀釈したときの懸濁液の色調は薄水色調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図３１Ａに示す。最大吸収を示す波長は６０２ｎｍ（消光度：０．２８）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．１６であったので、金ナノプレートの純度指数は０．５７と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｒの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００４１質量％であった。最大吸収波長における消光度の高さを合せるために測定波長域すべての消光度に２．０６を乗算した懸濁液Ｒの消光スペクトル（実線）と、上記懸濁液Ｎの消光スペクトル（破線）との比較を図３１Ｂに示す。懸濁液Ｒの消光スペクトルでは、プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度が、４８％減少していた。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。得られた懸濁液中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図３２Ａに示す。鮮明な像を観察するため、懸濁液Ｒにチオール末端ポリエチレングリコール（Ｍｗ：２０，０００）を添加し、透過走査電子顕微鏡（ＳＴＥＭ）観察を行った結果を図３２Ｂに示す。ＳＥＭ、ＳＴＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは３７ｎｍ、厚さは１９ｎｍで、アスペクト比は１．９であることがわかった。
懸濁液Ｒ中の金ナノプレートのゼータ電位は＋４１．１± １．８であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。【００５２】
（４）ＰＳＳ被覆金ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｃ〜Ｅ）の作製（懸濁液Ｂの分散媒中のＣＴＡＣ濃度の低減）
上記（３）で作製した懸濁液Ｂを４０ｍＬ遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）して金ナノプレートを沈殿させ、上澄み液３９．６ｍＬを除去した。その後、遠沈管底部の金ナノプレートに２０μＭのポリ（ｐ−スチレンスルホン酸ナトリウム）（Ｎａ−ＰＳＳ）水溶液を３９．６ｍＬ添加して再分散させ、ＰＳＳ被覆金ナノプレート中間体１懸濁液（懸濁液Ｃ）を作製した。懸濁液Ｃの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は２０μＭとみなした（再分散時に使用した分散媒におけるＰＳＳ濃度）。懸濁液Ｃ中の金ナノプレートのゼータ電位は−５１．０ ± ０．７であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。
懸濁液Ｃを遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）してＰＳＳ被覆金ナノプレート中間体１を沈殿させ、上澄み液３９．６ｍＬを除去した。その後、遠沈管底部のＰＳＳ被覆金ナノプレート中間体１に２０μＭのＰＳＳ水溶液を３９．６ｍＬ添加して再分散させ、ＰＳＳ被覆金ナノプレート中間体２懸濁液（懸濁液Ｄ）を作製した。懸濁液Ｄの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-2ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は２０μＭとみなした。懸濁液Ｄ中の金ナノプレートのゼータ電位は−５１．０ ± ０．４であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。懸濁液Ｄを遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）してＰＳＳ被覆金ナノプレート中間体２を沈殿させ、上澄み液３９．６ｍＬを除去した。その後、ＰＳＳ被覆金ナノプレート中間体２に２０μＭのＰＳＳ水溶液を３９．６ｍＬ添加して再分散させ、ＰＳＳ被覆金ナノプレート懸濁液（懸濁液Ｅ）を作製した。懸濁液Ｅの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-4ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は２０μＭとみなした。懸濁液Ｅ中の金ナノプレートのゼータ電位は−５４．５ ± ２．０であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。ＰＳＳ被覆金ナノプレートの懸濁液のｐＨは、室温下（２０℃）で測定した結果、７．０であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ｅを超純水で４倍容に希釈した懸濁液の色調はシアン調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図６に示す。最大吸収を示す波長は６３８ｎｍ（消光度：０．６４）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．２５であったので、金ナノプレートの純度指数は０．３９と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｅの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００８５質量％であった。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。
懸濁液Ｅ中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図７に示す。ＳＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは５３ｎｍ、厚さは１９ｎｍで、アスペクト比は２．８であることがわかった。【００５３】
（５）クエン酸被覆金ナノプレート懸濁液の作製
（５−１）クエン酸被覆金ナノプレート懸濁液（懸濁液Ｆ〜Ｈ）の作製（ＰＳＳ被覆金ナノプレート水懸濁液Ｅ中のＣＴＡＣ濃度の低減及びＰＳＳ濃度の低減）
上記（４）で作製したＰＳＳ被覆金ナノプレート水懸濁液（懸濁液Ｅ）の４０ｍＬを遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）してＰＳＳ被覆金ナノプレートを沈殿させ、上澄み液３９．６ｍＬを除去した。その後、遠沈管底部のＰＳＳ被覆金ナノプレートに４．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液を３９．６ｍＬ添加して再分散させ、クエン酸被覆金ナノプレート中間体１懸濁液（懸濁液Ｆ）を作製した。懸濁液Ｆの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-6ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０μＭと計算された。懸濁液Ｆ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４７．５ ± １．０であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。懸濁液Ｆを遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）してクエン酸被覆金ナノプレート中間体１を沈殿させ、上澄み液３９．６ｍＬを除去した。その後、遠沈管底部のクエン酸被覆金ナノプレート中間体１に４．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液３９．６ｍＬを添加して再分散させ、クエン酸被覆金ナノプレート中間体２懸濁液（懸濁液Ｇ）を作製した。懸濁液Ｇの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-8ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０×１０-2μＭと計算された。懸濁液Ｇ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４４．２ ± １．７であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。懸濁液Ｇを遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）してクエン酸被覆金ナノプレート中間体２を沈殿させ、上澄み液３９．６ｍＬを除去した。その後、クエン酸被覆金ナノプレート中間体２に４．５ｍＭのクエン酸水溶液を３９．６ｍＬ添加して再分散させ、クエン酸被覆金ナノプレート懸濁液（懸濁液Ｈ）を作製した。懸濁液Ｈの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-10ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０×１０-4μＭと計算された。懸濁液Ｈ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４２．２ ± １．４であった。ゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。懸濁液ＨのｐＨを室温下（２０℃）で測定した結果、ｐＨ８．４であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
懸濁液Ｈを超純水で４倍容に希釈した懸濁液の色調はシアン調であった。この４倍希釈懸濁液の光学特性を図８に示す。最大吸収を示す波長は６３８ｎｍ（消光度：０．３３）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．１４であったので、金ナノプレートの純度指数は０．４２と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｈの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００４５質量％であった。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。
懸濁液Ｈ中の金ナノプレートを超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図９に示す。ＳＥＭ観察より、金ナノプレートの最大長さは５５ｎｍ、厚さは１９ｎｍで、アスペクト比は２．９であることがわかった。【００５４】
（５−２）クエン酸被覆金ナノプレート懸濁液（懸濁液Ｓ〜Ｖ）の作製
金ナノプレート懸濁液Ｂを懸濁液Ｈとする上記工程を、懸濁液Ｏ〜Ｒについても同様に実施し、クエン酸被覆金ナノプレート懸濁液（懸濁液Ｓ〜Ｖ）を作製した。
懸濁液Ｓ
懸濁液Ｓの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-10ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０×１０-4μＭと計算された。懸濁液Ｓ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４１．５ ± ０．５であった。懸濁液ＳのｐＨを室温下（２０℃）で測定した結果、ｐＨ７．９であった。懸濁液Ｓを超純水で４倍容に希釈した懸濁液の色調はシアン調であった。最大吸収を示す波長は６３４ｎｍ（消光度：０．３２）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．１２であったので、金ナノプレートの純度指数は０．３８と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｓの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００３４質量％であった。
懸濁液Ｔ
懸濁液Ｔの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-10ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０×１０-4μＭと計算された。懸濁液Ｔ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４２．２ ± １．２であった。懸濁液ＴのｐＨを室温下（２０℃）で測定した結果、ｐＨ８．２であった。懸濁液Ｔを超純水で４倍容に希釈した懸濁液の色調は薄水色調であった。最大吸収を示す波長は６５８ｎｍ（消光度：０．２３）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．０７であったので、金ナノプレートの純度指数は０．３０と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｔの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００２３質量％であった。
懸濁液Ｕ
懸濁液Ｕの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-10ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０×１０-4μＭと計算された。懸濁液Ｕ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４１．７ ± ２．７であった。懸濁液ＵのｐＨを室温下（２０℃）で測定した結果、ｐＨ８．１であった。懸濁液Ｕを超純水で４倍容に希釈した懸濁液の色調は青色調であった。最大吸収を示す波長は６１８ｎｍ（消光度：０．２８）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．１３であったので、金ナノプレートの純度指数は０．４６と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｕの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００３３質量％であった。
懸濁液Ｖ
懸濁液Ｖの分散媒中のＣＴＡＣ濃度は０．５０×１０-10ｍＭと計算され、ＰＳＳ濃度は０．２０×１０-4μＭと計算された。懸濁液Ｖ中の金ナノプレートのゼータ電位は−４０．８ ± １．５であった。懸濁液ＶのｐＨを室温下（２０℃）で測定した結果、ｐＨ８．２であった。懸濁液Ｖを超純水で４倍容に希釈した懸濁液の色調は青色調であった。最大吸収を示す波長は５９２ｎｍ（消光度：０．１１）であった。プレート状ではない多面体又は球状の金ナノ粒子の最大吸収波長である５４０ｎｍの消光度は０．０７であったので、金ナノプレートの純度指数は０．６４と計算された。消光度比率より、懸濁液Ｕの金含有率の概算値は、懸濁液の総質量に対して０．００１７質量％であった。
懸濁液Ｓ〜Ｖのゼータ電位測定は大塚電子株式会社のＰｈｏｔａｌ ＥＬＳ−Ｚを用いた。懸濁液Ｓ〜ＶのｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。懸濁液Ｓ〜Ｖの光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。また、懸濁液Ｓ〜Ｖの懸濁液の光学特性を図３３、最大吸収波長の消光度を１．０とした際の光学特性を図３４に示す。【００５５】
２．金被覆銀ナノプレートを含む懸濁液
（１）銀ナノプレート種粒子の作製
２．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液２０ｍＬに、０．５ｇ／Ｌの分子量７０，０００ポリスチレンスルホン酸水溶液１ｍＬと、１０ｍＭの水素化ホウ素ナトリウム水溶液１．２ｍＬとを添加し、次いで、２０ｍＬ／分で攪拌しながら、０．５ｍＭの硝酸銀水溶液５０ｍＬを添加した。得られた溶液をインキュベーター（３０℃）中で６０分間静置し、銀ナノプレート種粒子の懸濁液を作製した。
作製した懸濁液（原液）の光学特性を図１０に示す。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。銀ナノプレート種粒子の最大吸収波長は、球状銀ナノ粒子のＬＳＰＲ由来の最大吸収波長に相当する３９６ｎｍ（消光度３．３）であった。なお、本発明の消光度とは懸濁液を分光光度計で測定した際の吸光度の値である。また、超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図１１に示す。ＳＥＭ観察より、粒子径は主に３ｎｍ以上、１０ｎｍ未満の粒子（アスペクト比は約１．０）であることがわかった。【００５６】
（２）銀ナノプレートの作製
超純水２００ｍＬに、１０ｍＭのアスコルビン酸水溶液４．５ｍＬを添加し、上記（１）で作製した銀ナノプレート種粒子の懸濁液２ｍＬをさらに添加した。得られた溶液に、０．５ｍＭの硝酸銀水溶液１２０ｍＬを３０ｍＬ／分で攪拌しながら添加した。硝酸銀水溶液の添加が終了した４分後に攪拌を停止し、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム水溶液２０ｍＬを添加し、得られた溶液を大気雰囲気下のインキュベーター（３０℃）中で１００時間静置し、銀ナノプレートの懸濁液を作製した。
作製した懸濁液を超純水で４倍容に希釈した懸濁液の光学特性を図１２に示す。最大吸収を示す波長は６１８ｎｍ（消光度１．２０）であった。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。懸濁液中の銀ナノプレートをＳＥＭにより観察したところ、銀ナノプレートの平均粒子径は５０ｎｍであり、平均厚さは１０ｎｍで、アスペクト比は５．０であることがわかった。ＳＥＭ観察写真の解析には株式会社日立製作所製の超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０を用いた。【００５７】
（３）金被覆銀ナノプレートの作製（色調：シアン）
上記（２）で作製した銀ナノプレートの懸濁液１２０ｍＬに、０．１２５ｍＭのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）（分子量：４０，０００）の水溶液９．１ｍＬを添加し、０．５Ｍのアスコルビン酸水溶液１．６ｍＬを添加した後、０．１４ｍＭの塩化金酸水溶液９．６ｍＬを０．５ｍＬ／分で攪拌しながら添加した。得られた溶液をインキュベーター（３０℃）中に２４時間静置し、銀ナノプレートの表面が金で被覆された金被覆銀ナノプレートの懸濁液を作製した。
金被覆銀ナノプレートの懸濁液の主要分散媒は水であった。この懸濁液に含まれる金被覆銀ナノプレートは、主面の最大長（粒子径）の平均が５０ｎｍの三角形状を含む多角形状、円形状であるプレートの混合物であり、厚さの平均は１０ｎｍであった。また、当該金被覆銀ナノプレートにおける金の厚さの平均は０．３０ｎｍであった。
金被覆銀ナノプレートの懸濁液のｐＨは、室温下（２０℃）で４．０であった。ｐＨ測定は株式会社堀場製作所のＴｗｉｎ  ｐＨメータ  Ｂ−２１２（ガラス電極法）を用いた。
金被覆銀ナノプレートの懸濁液の銀含有率は、懸濁液の総質量に対して０．００１６質量％であった。【００５８】
（４）金被覆銀ナノプレートの懸濁液のｐＨ調整
上記（３）で得られた懸濁液の１．９５ｍＬに、２００ｍＭのリン酸緩衝生理食塩水（二価イオンを含まない；以下、「ＰＢＳ（−）緩衝液」ということもある）０．０５ｍＬおよび１９０ｍＭの炭酸ナトリウム水溶液０．０２５ｍＬを攪拌しながら添加し、ｐＨ調整された金被覆銀ナノプレートの懸濁液（懸濁液Ｉ）を作製した。
懸濁液Ｉを超純水で３．４倍容に希釈した懸濁液の光学特性を図１３に示す。最大吸収を示す波長は６２８ｎｍ（消光度１．０７）であった。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。
懸濁液Ｉの主要分散媒は水であった。
懸濁液Ｉに含まれる金被覆銀ナノプレートは、三角形状を含む多角形状であるプレートと円形状であるプレートとの混合物であり、主面の最大長の平均は５０ｎｍで、厚さの平均は１０ｎｍであった。また、懸濁液Ｉに含まれる金被覆銀ナノプレートにおける金の厚さの平均は０．３０ｎｍであった。超高分解能分析走査電子顕微鏡ＳＵ−７０（株式会社日立製作所製）により、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）観察を行った結果を図１４に示す。
懸濁液Ｉの３倍希釈溶液の色調はシアンであった。
懸濁液ＩのｐＨは、室温下（２０℃）で７．３であった。
懸濁液Ｉの銀含有率は、懸濁液の総質量に対して０．００１５質量％であった。【００５９】
３．ＰＶＰ安定化球状金ナノ粒子の懸濁液
（１）ＰＶＰ安定化球状金ナノ粒子懸濁液の作製
市販の球状金ナノ粒子（粒子径：４０ｎｍ、濃度：０．００６８質量％）１２ｍＬに０．１２５ｍＭのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）（分子量：４０，０００）の水溶液０．９１ｍＬを攪拌しながら添加した。得られた溶液をインキュベーター（３０℃）中に２４時間静置し、ＰＶＰ安定化球状金ナノ粒子懸濁液を作製した。
（２）ＰＶＰ安定化球状金ナノ粒子懸濁液のｐＨ調整
（１）で得られた懸濁液Ｊの１．９５ｍＬに２００ｍＭのＰＢＳ緩衝液０．０５ｍＬおよび１９０ｍＭの炭酸ナトリウム水溶液０．０２５ｍＬを攪拌しながら添加し、ｐＨ調整されたＰＶＰ安定化球状金ナノ粒子懸濁液（懸濁液Ｊ）を作製した。
調製した懸濁液Ｊを超純水で３．８倍容に希釈した水懸濁液の光学特性を図１５に示す。最大吸収を示す波長は５２２ｎｍ（消光度０．３８）であった。光学特性の測定は、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを用い、光路長：１ｃｍ及び測定波長：１９０−１３００ｎｍの条件下で行われた。
懸濁液の主要分散媒は水であった。
懸濁液Ｊに含まれる球状金ナノ粒子は、平均粒子径が４０ｎｍであった。
懸濁液Ｊの色調は赤色であった。
懸濁液ＪのｐＨは、室温下（２０℃）で７．０であった。
懸濁液Ｊの金含有率は、懸濁液の総質量に対して質量０．００６１質量％であった。【００６０】
４．イムノクロマト試験
実施例及び比較例の各懸濁液を下記手順のイムノクロマト試験を用いて、試験結果を評価した。
（１）イムノクロマト試験に使用する展開液の作製（金ナノプレートの各種懸濁液への特異的結合物質の担持；検出試薬の標識）
１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度５０μｇ／ｍＬのＢ型肝炎ウイルス抗原（ＨＢｓ抗原）に対する抗体（品名：Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ  ＨＢｓＡｇ、製造元：Ａｒｉｓｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）（イムノクロマト法における検出抗体）の溶液０．２ｍＬと、金ナノプレートの各種懸濁液（懸濁液Ａ〜Ｈ、Ｓ〜Ｖ）１．８ｍＬとを混合し、得られた混合物を室温下で６０分間振とうした。次いで、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度０．４ｍＭの末端がチオール基で修飾されたポリエチレングリコールであるＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−０２０ＳＨ（分子量：２，０００、ＮＯＦ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ製）の溶液０．０４４ｍＬを添加し、得られた懸濁液を室温下で３０分間振とうした。次いで、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度０．５ｍＭのウシ血清アルブミン（品名：Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ、略称：ＢＳＡ、分子量：６６ｋＤａ、製造元：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の溶液を０．１００ｍＬ添加し、得られた懸濁液を室温下で３０分間振とうした。次いで、この懸濁液を遠心分離（８，０００×ｇ、３０℃、１０分間）して抗体−金ナノプレート複合体を沈殿させ、上澄み液１．９０ｍＬを除去した。その後、抗体−金ナノプレート複合体に、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液（４．９μＭのＢＳＡ含有）を０．４０ｍＬ添加して再分散させ、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを使用して消光度（Ｅｘｔｉｎｃｔｉｏｎ）が１．０になるように調整し、展開液を作製した。【００６１】
（２）イムノクロマト試験に使用する展開液の作製（金被覆銀ナノプレートへの特異的結合物質の担持（検出試薬の標識））
１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度５０μｇ／ｍＬのＢ型肝炎ウイルス抗原（ＨＢｓ抗原）に対する抗体（品名：Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ  ＨＢｓＡｇ、製造元：Ａｒｉｓｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）（イムノクロマト法における検出抗体）の溶液０．２ｍＬと、金被覆銀ナノプレート懸濁液（懸濁液Ｉ）１．８ｍＬとを混合し、得られた混合物を室温下で６０分間振とうした。次いで、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度０．４ｍＭの末端がチオール基で修飾されたポリエチレングリコールであるＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−０２０ＳＨ（分子量：２，０００、ＮＯＦ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ製）の溶液０．０４４ｍＬを添加し、得られた懸濁液を室温下で３０分間振とうした。次いで、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度０．５ｍＭのウシ血清アルブミン（品名：Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ、略称：ＢＳＡ、分子量：６６ｋＤａ、製造元：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の溶液０．１００ｍＬを添加し、得られた懸濁液を室温下で３０分間振とうした。次いで、この懸濁液を遠心分離（２６，０００×ｇ、３０℃、１０分間）して抗体−金被覆銀ナノプレート複合体を沈殿させ、上澄み液１．９０ｍＬを除去した。その後、抗体−金被覆銀ナノプレート複合体に、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液（４．９μＭのＢＳＡ含有）を１．９０ｍＬ添加して再分散させ、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを使用して消光度（Ｅｘｔｉｎｃｔｉｏｎ）が１．０になるように調整し、展開液Ｉ（色調：シアン）を作製した。【００６２】
（３）イムノクロマト試験に使用する展開液の作製（球状金ナノ粒子への特異的結合物質の担持；検出試薬の標識）
１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度５０μｇ／ｍＬのＢ型肝炎ウイルス抗原（ＨＢｓ抗原）に対する抗体（品名：Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ  ＨＢｓＡｇ、製造元：Ａｒｉｓｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）（イムノクロマト法における検出抗体）の溶液０．２ｍＬと、ＰＶＰ安定化球状金ナノ粒子懸濁液（懸濁液Ｊ）１．８ｍＬとを混合し、得られた混合物を室温下で６０分間振とうした。次いで、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度０．８ｍＭの末端がチオール基で修飾されたポリエチレングリコールであるＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−０２０ＳＨ（分子量：２，０００、ＮＯＦ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ製）の溶液０．０４４ｍＬを添加し、得られた懸濁液を室温下で３０分間振とうした。次いで、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中における濃度０．５ｍＭのウシ血清アルブミン（品名：Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ、略称：ＢＳＡ、分子量：６６ｋＤａ、製造元：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の溶液０．１００ｍＬを添加し、得られた懸濁液を室温下で３０分間振とうした。次いで、この懸濁液を遠心分離（４２００×ｇ、３０℃、１０分間）して抗体−球状金ナノ粒子複合体を沈殿させ、上澄み液１．９０ｍＬを除去した。その後、抗体−球状金ナノ粒子複合体に、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液（４．９μＭのＢＳＡ含有）を１．９０ｍＬ添加して再分散させ、株式会社島津製作所製の紫外可視近赤外分光光度計ＭＰＣ３１００ＵＶ−３１００ＰＣを使用して消光度（Ｅｘｔｉｎｃｔｉｏｎ）が１．０になるように調整し、展開液Ｊ（色調：赤色）を作製した。【００６３】
使用した金ナノプレートの懸濁液の物性と作製された展開液との関係を、次の表１に示す。懸濁液及び展開液のそれぞれについて、Ｃ〜Ｈ及びＳ〜Ｖが本発明の実施例に相当し、Ａ、Ｂ、Ｉ、及びＪが比較例に相当する。
【表１】
2017154989.tif 000003
【００６４】
（４）イムノクロマト試験
図１６に示す手順により、Ｂ型肝炎ウイルス抗原（ＨＢｓ抗原）を被験物質としたイムノクロマト試験を、抗ＨＢｓ抗体（捕獲抗体）を直線状（図１６の検出ライン）に固定化したイムノクロマト試験紙を用いて行った。
イムノクロマト試験紙はイムノクロマト試験紙の受託作製会社（有限会社バイオデバイステクノロジー）より購入したものを使用した。捕獲抗体を直線状に固定する際、捕獲抗体を５ｍＭ  ＰＢＳ（−）緩衝液で濃度１ｍｇ／ｍＬに調整したものを使用した。
第１展開液（図１６（ａ）で用いる展開液）は、１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液中におけるＨＢｓ抗原（品名：ＨＢｓＡｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｓｕｂｔｙｐｅ  ａｄｒ）、製造元：Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）の溶液であった。第１展開液として、ＨＢｓ抗原の濃度が６．０μＭ、０．６μＭ、０．０６μＭ、０．００６μＭ、０Ｍ（ブランク）の溶液を用意した。
第２展開液は１ｍＭのＰＢＳ（−）緩衝液であった。
第３展開液（図１６（ｃ）で用いる展開液）は、上述の展開液Ａ〜Ｊである。【００６５】
具体的な試験手順は以下の通りであった。
イムノクロマト試験紙に、第１展開液１５μＬを展開させた（図１６（ａ））。第１展開液の展開により、ＨＢｓ抗原が試験紙の検出ライン上に固定化された捕獲抗体によって捕獲される（図１６（ｂ））。
次いで、第２展開液３０μＬを展開させて、イムノクロマト試験紙上の余剰抗原の洗浄を行った。
最後に、第３展開液６０μＬを展開させた（図１６（ｃ））。第３展開液の展開により、試験紙の検出ライン上で捕獲されたＨＢｓ抗原へ検出抗体（抗体−ＰＳＳ被覆金ナノプレート複合体など）が結合する（図１６（ｄ））。
同一の手順をＨＢｓ濃度の異なる第１展開液ごとに繰り返した。【００６６】
（５）イムノクロマト試験の目視判定による評価
第３展開液展開後の検出ラインにおける金属ナノ粒子の着色を目視で確認することにより、ＨＢｓ抗原の有無を判定した。結果を次の表２に示す。
【表２】
2017154989.tif 000004
＋＋：検出ラインにおける濃い着色を確認できた。
＋：検出ラインにおける着色を確認できた。
−：検出ラインにおける着色を確認できなかった。【００６７】
（６）イムノクロマト試験の輝度解析による評価
第３展開液展開後のイムノクロマト試験紙をスキャニング（装置名：Ｃａｎｏ  Ｓｃａｎ  ＬｉＤＥ５００Ｆ、製造元：キヤノン株式会社）し、検出ライン（捕獲抗体の固定化部分）の最低輝度と、検出ライン以外の部分（対照領域）の最低輝度とを画像解析ソフト（Ｉｍａｇｅ−Ｊ：アメリカ国立衛生研究所でＷａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄが開発したオープン・ソースで公有の画像処理ソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｉｍａｇｅｊ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／））を用いて数値化した。最低輝度は、検出ラインと対照領域における異なる５箇所の輝度をそれぞれ１回ずつ測定し、得られた数値の中央値を採用した。輝度差（検出ラインの最低輝度−対照領域の最低輝度）を計算し、結果を次の表３に示す。【００６８】
【表３】
2017154989.tif 000005
各展開液の欄の数値は輝度差を示す。【００６９】
（７）イムノクロマト試験後の乾燥耐性試験
第１展開液中のＨＢｓ抗原濃度が６．０μＭであり、第３の展開液展開後のイムノクロマト試験紙を温度２０℃、湿度５０％の室内で乾燥させた。乾燥開始時（０時間）、乾燥開始後２４時間、４８時間、１６８時間、７２０時間、７２０時間、２１６０時間経過時にイムノクロマト試験紙をスキャニング（装置名：Ｃａｎｏ  Ｓｃａｎ  ＬｉＤＥ５００Ｆ、製造元：キヤノン株式会社）し、得られた画像をビットマップ画像編集ソフトウェアのＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐで取り込み、検出ライン、及び対象領域（検出ライン又は検出ライン以外の部分）のＣＩＥＬＡＢ  Ｄ５０を測定した。検出ラインと対象領域の色差（ΔＥ）を、次の式１より算出した。
（式１）色差算出式
ΔＥ＝√（ΔＬ2＋Δａ2＋Δｂ2）
ΔＬ＝Ｌ1−Ｌ2
Δａ＝ａ1−ａ2
Δｂ＝ｂ1−ｂ2
（補色空間の一種であるＬａｂ色空間において、Ｌ値は明度を示し、ａ値及びｂ値は色味の強弱を示す。ａ値がプラスのときは赤味を示し、マイナスのとき緑味を示す。ｂ値がプラスのときは黄味を示し、マイナスのときは青紫味を示す。式１中、Ｌ1は検出ラインのＬ値、Ｌ2は対照領域のＬ値、ａ1は検出ラインのａ値、ａ2は対照領域のａ値、ｂ1は検出ラインのｂ値、そして、ｂ2は対照領域のｂ値をそれぞれ意味する。）【００７０】
色差算出結果を次の表４に示す。
【表４】
2017154989.tif 000006
Ｎ．Ｄ．：データなし【００７１】
イムノクロマト試験において、抗体を担持していない金ナノプレートを含む第３展開液を使用しても検出ラインの着色は観察されず、輝度差も生じていなかったが（データは掲載せず）、懸濁液Ｃ〜Ｈ又はＳ〜Ｖに由来する抗体を担持した金ナノプレートを含む第３展開液を使用すると、抗体を担持した金被覆銀ナノプレートや抗体を担持した球状の金ナノ粒子を含む第３展開液を使用した場合と同様に、目視で判定可能な明瞭なラインが観察され、顕著な輝度差も測定された。特に、前記金ナノプレートを使用した場合には、速やかに検出ラインが出現した。これに対して、懸濁液Ａ及びＢに由来する抗体を担持した金ナノプレートを含む第３展開液を使用すると、検出ラインの着色は観察されず、輝度差も生じていなかった。これは、ＣＴＡＣが、金ナノプレート上への抗体の担持を阻害したからであると考えられる。すなわち、ＣＴＡＣのヘキサデシルトリメチルアンモニウムカチオンが金ナノプレート表面で二重層を形成することで、当該カチオンが金ナノプレートの最表面を覆い、ゼータ電位がプラスになると、抗体もプラスの電荷を有しているため、金ナノプレートと抗体とが反発し合い、金ナノプレート上への抗体の担持が阻害される。一方、ポリアニオン系高分子であるＰＳＳを用いた処理や、それに次ぐクエン酸処理を施すことで、組成物中のＣＴＡＣの濃度を低減させるとともに、金ナノプレート表面をこれらの物質で覆うと、金ナノプレートのゼータ電位がマイナスとなり、当該金ナノプレート上に抗体を担持させることが可能となる。
本実施例のイムノクロマト試験と同様の結果は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）などの他の被験物質を対象としたイムノクロマト試験においても得ることができたので、本発明の利点は、特定の実施態様に限定されるべきものではないと理解される。【００７２】
以上より、金ナノプレートの平均アスペクト比（金ナノプレートの最大長さを厚さで割った値）が１より大きく１０以下の範囲になるように金ナノプレートを作製し、Ｎ＋（Ｒ）４（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表される第四級アンモニウムカチオンの濃度が１ｍＭ以下になるように組成物を作製すれば、可視光域に最大吸収波長を有し、かつ、抗体などの被験物質に対する特異的結合物質を容易に担持することのできる金ナノプレートを含む組成物を提供することができることがわかった。
【図１】
2017154989.tif 000007
【図２】
2017154989.tif 000008
【図３】
2017154989.tif 000009
【図４】
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【図５】
2017154989.tif 000011
【図６】
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【図７】
2017154989.tif 000013
【図８】
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【図９】
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【図１０】
2017154989.tif 000016
【図１１】
2017154989.tif 000017
【図１２】
2017154989.tif 000018
【図１３】
2017154989.tif 000019
【図１４】
2017154989.tif 000020
【図１５】
2017154989.tif 000021
【図１６】
2017154989.tif 000022
【図１７】
2017154989.tif 000023
【図１８】
2017154989.tif 000024
【図１９】
2017154989.tif 000025
【図２０】
2017154989.tif 000026
【図２１】
2017154989.tif 000027
【図２２】
2017154989.tif 000028
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
2017154989.tif 000031
【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
2017154989.tif 000034
【図２９】
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【図３０】
2017154989.tif 000036
【図３１】
2017154989.tif 000037
【図３２】
2017154989.tif 000038
【図３３】
2017154989.tif 000039
【図３４】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年11月2日(2017.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
金ナノプレートを含む、被験物質を検出するための組成物であって、
前記金ナノプレートの平均アスペクト比（金ナノプレートの最大長さを厚さで割った値）が、１より大きく１０以下であり、
前記組成物中の第四級アンモニウムカチオンの濃度が、０ｍＭより大きく１ｍＭ以下であり、
前記第四級アンモニウムカチオンが、Ｎ+（Ｒ）4（各Ｒは、それぞれ独立して、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝鎖アルキル基から選択される）で表されることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
前記第四級アンモニウムカチオンが、デシルトリメチルアンモニウムカチオン、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムカチオン、及び、ヘプタデシルトリメチルアンモニウムカチオンから成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
分子量５００以上の水溶性高分子を含まない、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
分子量５００以上の水溶性高分子をさらに含み、前記組成物中の前記分子量５００以上の水溶性高分子の濃度が、０より大きく１質量％以下である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
分子量５００以上の水溶性高分子をさらに含み、前記組成物中の前記分子量５００以上の水溶性高分子の濃度が、０より大きく１００μＭ以下である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
前記金ナノプレートと前記水溶性高分子とが複合体を形成している、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項７】
前記水溶性高分子が、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、及び、チオール末端ポリエチレングリコールから成る群から選択される、請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
クエン酸ナトリウムを含まない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
クエン酸ナトリウムをさらに含み、前記組成物中の前記クエン酸ナトリウムの濃度が、０より大きく５０ｍＭ以下である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記金ナノプレートの平均最大長さが、１００ｎｍより小さい、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記金ナノプレートが、表面プラズモン共鳴による光吸収ピークを５５０〜７４０ｎｍの波長領域に有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
赤色、マゼンタ、紫色、紺色、青色、シアン、又は、薄水色の色調を呈する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記金ナノプレートが、前記被験物質に対する特異的結合物質を担持している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記被験物質と前記特異的結合物質の組み合わせが、抗原とそれに結合する抗体、抗体とそれに結合する抗原、糖鎖又は複合糖質とそれに結合するレクチン、レクチンとそれに結合する糖鎖又は複合糖質、ホルモン又はサイトカインとそれに結合する受容体、受容体とそれに結合するホルモン又はサイトカイン、タンパク質とそれに結合する核酸アプタマー若しくはペプチドアプタマー、酵素とそれに結合する基質、基質とそれに結合する酵素、ビオチンとアビジン又はストレプトアビジン、アビジン又はストレプトアビジンとビオチン、ＩｇＧとプロテインＡ又はプロテインＧ、プロテインＡ又はプロテインＧとＩｇＧ、及び、第１の核酸とそれに結合する第２の核酸から成る群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
被験物質を検出するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物の凍結乾燥物。
【請求項１６】
請求項１３又は１４に記載の組成物又は請求項１５に記載の凍結乾燥物を使用して、前記被験物質を検出する方法であって、
該組成物、又は、該凍結乾燥物の再懸濁液を、該被験物質と混合して、該被験物質と前記特異的結合物質を担持した金ナノプレートとの複合体を形成する工程、及び、
該複合体を検出する工程を含むことを特徴とする、方法。
【請求項１７】
前記複合体の形成を、消光度測定、吸光度測定、濁度測定、粒度分布測定、粒子径測定、ラマン散乱光測定、色調変化の観察、凝集又は沈殿形成の観察、イムノクロマトグラフィー、電気泳動、及び、フローサイトメトリーから成る群から選択される手段によって検出する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物中の金ナノプレートに、前記被験物質に対する特異的結合物質を担持させて、請求項１３又は１４に記載の組成物を調製する工程、及び／又は、請求項１５に記載の凍結乾燥物を再懸濁する工程をさらに含む、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物又は請求項１５に記載の凍結乾燥物を含む、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法に使用するためのキット。
【請求項２０】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物又は請求項１５に記載の凍結乾燥物を製造する方法であって、
（１）金ナノプレート種粒子の懸濁液を調製する工程、及び、
（２）金ナノプレートの懸濁液を調製する工程
を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２１】
前記工程（１）が、金ナノプレート種粒子を予備成長させる工程を含まない、請求項２０に記載の方法。
【国際調査報告】
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