(57)【要約】  安全に長期間摂取可能な成分を含有する、新たな筋脂肪化抑制用組成物等を提供することを目的とする。  ケルセチン又はその配糖体が筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを見出した。本発明では、ケルセチン又はその配糖体を筋脂肪化抑制用組成物等に利用する。
2016175136.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケルセチン又はその配糖体を含有する、筋脂肪化抑制用組成物。
【請求項２】
ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋脂肪化抑制用組成物。
【請求項３】
ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋肉の質改善用組成物。
【請求項４】
ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋肉量改善用組成物。
【請求項５】
ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋力改善用組成物。
【請求項６】
ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋萎縮抑制用組成物。
【請求項７】
ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、運動機能改善用組成物。
【請求項８】
筋肉中の脂肪細胞様細胞の増加抑制作用を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
筋肉中の脂肪滴の増加抑制作用を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
筋肉中のトリグリセリド量の増加抑制作用を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が剤である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制するための、ケルセチン又はその配糖体の使用。
【請求項１３】
ケルセチン又はその配糖体を投与することを含む、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケルセチン又はその配糖体を含有する筋脂肪化抑制用組成物に関する。また、本発明は、ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋脂肪化抑制用組成物、筋肉量改善用組成物、筋力改善用組成物、筋萎縮抑制用組成物、及び運動機能改善用組成物にも関する。さらに、本発明は、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制するためのケルセチン又はその配糖体の使用、及びケルセチン又はその配糖体を使用する筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
日本のような人口構成における高齢者比率の高い国では、超高齢社会を迎え、中高年者の社会参加や余暇の過ごし方などについて多くの提案がなされている。一方で、人口の高齢化に伴い顕在化する運動器機能障害の問題は、その対象数が極めて多く、また重症例や複数の疾患が合併する例がある等、これまでの考え方の単なる延長では対応が難しい新しい課題である。特に、筋肉機能の低下に起因する運動器機能の低下は、転倒リスク上昇、骨折、長期臥床、更なる運動器機能低下という悪循環を招き、運動器不安定症やロコモティブシンドローム等の主要な原因の一つとなっている。さらに、運動器機能障害は、代謝障害や感染症の合併頻度を高めるなど、生活の質（クオリティーオブライフ（ＱＯＬ））のみならず疾患の予後も悪化させることから、超高齢化社会を迎えるに際して、解決すべき喫緊の課題である。現在、上記運動器機能の低下を予防する手段として、リハビリなどの運動療法に加えて、栄養学的アプローチが研究されており、筋肉量や筋力を増強し得る成分が見出されつつある（特許文献１及び２）。【０００３】
近年、「筋肉量改善」のみならず「筋肉の質改善」も、運動器機能障害の予防及び改善のために重要であることが認識され、筋肉の質に関する研究が行われ始めている。筋肉の質は、筋肉量又は筋断面積あたりの筋力を意味し、加齢に伴い低下することが知られている（非特許文献１）。その主要な原因として、加齢に伴う筋肉中の脂肪滴の増加が挙げられ、これにより握力や膝伸展力などの筋力の低下、及び歩行速度などの身体機能の低下などの影響が生じると考えられている。【０００４】
筋肉内には、多能性幹細胞である筋サテライト細胞が存在する。筋サテライト細胞は、通常は未分化状態であるが、筋肉損傷時や筋肉成長時に活性化されて増殖し、筋管細胞に分化して筋線維を形成する。従って、筋サテライト細胞の筋管細胞への分化を促進することで、筋肉の肥大化及び筋肉の再生を促すことができ、筋肉量及び筋力の増加や、筋萎縮の予防及び改善を実現することができる。例えば、特許文献３及び４には、ベンケイソウ科植物のロゼア、バラ科植物のサンザシ、キョウチクトウ科植物のラフマ、又はそれらの抽出物が、筋サテライト細胞の筋管細胞への分化促進作用を有することが記載されている。また、特許文献５には、特定のアミノ酸配列を有するジペプチド又はトリペプチドが、筋芽細胞の筋肉細胞への分化を促進する作用を有することが記載されている。【０００５】
一方で、筋サテライト細胞は筋管細胞のみならず脂肪細胞様細胞にも分化し、これにより筋肉の質が低下し、筋肉量又は筋断面積あたりの筋力が低下することが知られている。そして、筋サテライト細胞が脂肪細胞様細胞に分化する割合は、加齢に伴い増加することが報告されている（非特許文献２）。従って、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することは、筋肉の質の低下を予防又は筋肉の質を改善する有効な手段と考えられる。また、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することで、結果として筋肉量及び筋力の低下の予防及び改善や、筋萎縮の予防及び抑制を実現することができる。【０００６】
しかしながら、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化メカニズムは、筋サテライト細胞の筋管細胞への分化メカニズムとは異なる（非特許文献３）。そして、現在のところ、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化を抑制する成分は見出されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００９−０６２３４６号公報
【特許文献２】ＷＯ２０１１／１０８４８７号公報
【特許文献３】特開２０１４−０１５４２９号公報
【特許文献４】特開２０１４−０１５４２８号公報
【特許文献５】ＷＯ２０１４／０９２１５０号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Journal of Applied Physiology, 86(1), 188-194, 1999.
【非特許文献２】Mechanisms of Ageing and Development, 123(6), 649-661, 2002.
【非特許文献３】Nature Cell Biology, 12(2), 143-152, 2010.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、安全に長期間摂取可能な成分を含有する、筋脂肪化抑制用組成物を提供することを目的とする。また、本発明は、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋脂肪化抑制用組成物、筋肉の質改善用組成物、筋肉量改善用組成物、筋力改善用組成物、筋萎縮抑制用組成物、及び運動機能改善用組成物を提供することも目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは鋭意検討した結果、ポリフェノールの一種であるケルセチン又はその配糖体が筋脂肪化抑制効果等を有することを見出した。具体的には、ケルセチン又はその配糖体が筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。【００１１】
即ち、本発明は、以下のものに関するが、これらに限定されない。
（１）ケルセチン又はその配糖体を含有する、筋脂肪化抑制用組成物。
（２）ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋脂肪化抑制用組成物。
（３）ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋肉の質改善用組成物。
（４）ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋肉量改善用組成物。
（５）ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋力改善用組成物。
（６）ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋萎縮抑制用組成物。
（７）ケルセチン又はその配糖体を含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、運動機能改善用組成物。
（８）筋肉中の脂肪細胞様細胞の増加抑制作用を有する、（１）〜（７）のいずれかに記載の組成物。
（９）筋肉中の脂肪滴の増加抑制作用を有する、（１）〜（８）のいずれかに記載の組成物。
（１０）筋肉中のトリグリセリド量の増加抑制作用を有する、（１）〜（９）のいずれかに記載の組成物。
（１１）前記組成物が剤である、（１）〜（１０）のいずれかに記載の組成物。
（１２）筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制するための、ケルセチン又はその配糖体の使用。
（１３）ケルセチン又はその配糖体を投与することを含む、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制する方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、ケルセチン又はその配糖体を筋脂肪化抑制、筋肉の質改善、筋肉量改善、筋力改善、筋萎縮抑制、及び運動機能改善等を目的とした組成物に利用することが可能になる。また、本発明の組成物は、筋肉の質を高めること等に寄与するため、有病者や高齢者のＱＯＬ改善に資する新たな手段を提供することができる。【００１３】
さらに、ケルセチン又はその配糖体は血流改善作用や抗ガン作用等の様々な生理活性を有する。その上、食用とされる植物に含まれる成分であるため極めて安全性が高い。従って、本発明はケルセチン又はその配糖体の筋脂肪化抑制効果以外の有用な生理作用も期待でき、かつ安全で継続摂取可能な剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１には、ケルセチン添加条件下で脂肪分化培養（Adipogenic induction medium中で７２時間培養→Adipogenic maintenance medium中で７２時間培養）後のラット由来筋サテライト細胞のオイルレッド−Ｏ染色像を示す。
【図２】図２には、ケルセチン又はＰＰＡＲγ阻害剤（ＧＷ９２２６）添加条件下で脂肪分化培養（Adipogenic induction medium中で７２時間培養→Adipogenic maintenance medium中で７２時間培養）後のラット由来筋サテライト細胞のオイルレッド−Ｏ染色像を示す。
【図３】図３には、ケルセチン添加条件下で脂肪分化培養（Adipogenic induction medium中で７２時間培養→Adipogenic maintenance medium中で７２時間培養）後のラット由来筋サテライト細胞中のトリグリセリド量の測定結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ケルセチン又はその配糖体を有効成分として含有する、筋脂肪化抑制用組成物に関する。また、本発明は、ケルセチン又はその配糖体を有効成分として含有し、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする、筋脂肪化抑制用組成物、筋肉の質改善用組成物、筋肉量改善用組成物、筋力改善用組成物、筋萎縮抑制用組成物、及び運動機能改善用組成物等にも関する。尚、本明細書において、筋脂肪化抑制用組成物、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋脂肪化抑制用組成物、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋肉の質改善用組成物、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋肉量改善用組成物、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋力改善用組成物、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋萎縮抑制用組成物、及び筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする運動機能改善用組成物を、まとめて「筋脂肪化抑制用組成物等」と記載する場合がある。
【００１６】
本明細書において「筋脂肪化」とは、筋サテライト細胞が脂肪細胞様細胞に分化することを意味する。従って、本明細書において「筋脂肪化抑制」とは、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを意味する。筋脂肪化は、筋組織のオイルレッド−Ｏ染色や筋組織中のトリグリセリド量測定などにより、筋組織中の脂肪滴量を測定することで評価することができる。
【００１７】
また、本明細書において「筋肉の質」とは、筋肉量又は筋断面積あたりの筋力を意味する。従って、本明細書において「筋肉の質改善」とは、筋肉量又は筋断面積の増加以上に、筋力が増加することを意味する。尚、「筋肉量改善」とは、筋組織中の筋繊維数若しくは筋繊維断面積の低下を予防又は抑制すること、又は筋組織中の筋タンパク質合成速度が筋タンパク質分解速度を下回ることを予防又は抑制することを意味する。また、「筋力改善」とは、各筋肉の潜在張力の低下を予防又は抑制することを意味し、膝進展力や握力などで測定可能である。
【００１８】
さらに、本明細書において「筋萎縮」とは、筋肉合成と筋肉分解の代謝回転が分解に傾くことによって、筋細胞が減少または縮小し、筋肉量が低下することをいう。筋萎縮は、長期間の安静臥床や骨折等によるギプス固定、疾病、加齢等によるものに大別される。従って、「筋萎縮抑制」は、上記原因による運動機能の低下や筋量の低下の抑制等に繋がる。
【００１９】
１．ケルセチン及びケルセチン配糖体
本発明の一態様は、ケルセチン又はその配糖体を有効成分として含有する、筋脂肪化抑制用組成物等に関する。本明細書において「ケルセチン」とは、ポリフェノールの一種であるケルセチン（クエルセチンとも呼ばれる）を意味し、式（Ｉ）で表される。
【００２０】
【化１】
2016175136.tif 000003
式（Ｉ）
【００２１】
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等は、有効成分をケルセチン配糖体として含有していてもよい。ケルセチン配糖体はケルセチンに糖鎖がグリコシド結合した化合物をいい、具体的には３位のヒドロキシル基に１以上の糖鎖がグリコシド結合した一連の化合物の総称である。ケルセチンとケルセチン配糖体では、化学構造的にも化学特性的にも大きく異なる。また、ケルセチンは難水溶性であるため、主に配糖体として植物等から摂取され、消化管から体内に吸収後、消化酵素又は代謝酵素の働きによりケルセチンとなり、体内で所望の効果を発揮する。
【００２２】
本明細書において「ケルセチン配糖体」は、式（ＩＩ）で表される。
【００２３】
【化２】
2016175136.tif 000004
式（ＩＩ）
（式中、（Ｘ）ｎは、糖鎖を表し、ｎは、１以上の整数である。）
【００２４】
ここで、ケルセチンにグリコシド結合するＸで表される糖鎖を構成する糖は、例えば、グルコース、ラムノース、ガラクトース、グルクロン酸等であり、好ましくはグルコース、ラムノースである。また、ｎは１以上であれば、特に制限されないが、好ましくは１〜１６、さらに好ましくは１〜８である。ｎが２以上であるとき、Ｘ部分は１種類の糖鎖からなっていてもよく、複数の糖鎖からなっていてもよい。
【００２５】
本発明のケルセチン配糖体は、既存のケルセチン配糖体を、酵素などで処理して糖転移させたものも含む。本発明でいうケルセチン配糖体は、具体的には、ルチン、酵素処理ルチン、クエルシトリン、イソクエルシトリンなどを含む。
【００２６】
本発明の特に好ましい態様においては、ケルセチン配糖体として、ルチンの酵素処理物を使用する。酵素処理ルチンの特に好ましい例は、ケルセチン配糖体を酵素処理してラムノース糖鎖部分を除去したイソクエルシトリン、イソクエルシトリンを糖転移酵素で処理してグルコース１〜７個からなる糖鎖が結合したもの、及びその混合物を主成分とするものである。
【００２７】
本発明では、ケルセチン又はその配糖体を単独で用いてもよいし、複数の化合物を混合して用いてもよい。本発明で使用するケルセチン又はその配糖体は、その由来、製法について特に制限はなく、例えば、ケルセチン又はその配糖体を多く含む植物から得ることができる。例えば、ケルセチン又はその配糖体を多く含む植物として、ソバ、エンジュ、ケッパー、リンゴ、茶、タマネギ、ブドウ、ブロッコリー、モロヘイヤ、ラズベリー、コケモモ、クランベリー、オプンティア、葉菜類、柑橘類等が知られており、これらの植物からケルセチン又はその配糖体を得ることができる。本発明で用いられるケルセチン又はその配糖体は、天然物から抽出したものを濃縮、精製等によってケルセチン又はその配糖体の含有量を高めたもの、例えば、ケルセチン又はその配糖体を含む抽出物の濃縮物又は精製物を用いることができる。尚、濃縮方法又は精製方法は、公知の方法を用いることができる。
【００２８】
２．筋脂肪化抑制用組成物等
本発明は、ケルセチン又はその配糖体を含有する筋脂肪化抑制用組成物、ケルセチン又はその配糖体を含有し筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋脂肪化抑制用組成物、ケルセチン又はその配糖体を含有し筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋肉量改善用組成物、ケルセチン又はその配糖体を含有し筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋力改善用組成物、ケルセチン又はその配糖体を含有し筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする筋萎縮抑制用組成物、及びケルセチン又はその配糖体を含有し筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することを特徴とする運動機能改善用組成物等（筋脂肪化抑制用組成物等）に関する。
【００２９】
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等におけるケルセチン又はその配糖体の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、本発明の所望の効果が得られるような量であればよく、特に限定されるものではない。例えば、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等におけるケルセチン又はその配糖体の含有量はケルセチン換算値として０．１ｍｇ〜８０００ｍｇ、好ましくは０．３ｍｇ〜４０００ｍｇ、より好ましくは１．０ｍｇ〜１０００ｍｇ、さらにより好ましくは１０ｍｇ〜１００ｍｇである。また、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等におけるケルセチン又はその配糖体の含有割合も特に限定されないが、例えば、当該用組成物の全重量に対して０．００１〜９５重量％であり、好ましくは０．０１〜８０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％、さらにより好ましくは１．０〜２０重量％である。
【００３０】
尚、ケルセチン又はその配糖体の含有量は、公知の方法に従って測定することができ、例えば、ＨＰＬＣ法などを用いることができる。
【００３１】
２−１．作用メカニズム
筋組織には、多能性幹細胞である筋サテライト細胞が存在し、通常は未分化状態にあるが、筋肉損傷時や筋肉成長時に活性化されて増殖し、筋管細胞に分化して筋線維を形成する。従って、筋サテライト細胞の筋管細胞への分化促進により、筋肉の肥大化等が可能になる。一方で、前記筋サテライト細胞は、筋管細胞のみならず脂肪細胞様細胞にも分化し、これにより筋肉の質が低下し、筋肉量又は筋断面積あたりの筋力が低下する。従って、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することで、筋脂肪化を抑制することができる。また、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程が抑制されることで、筋肉の質の低下や筋肉量の低下、筋力の低下、及び筋萎縮を予防、抑制又は改善することができる。さらに、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等により前記効果が得られることで、運動機能の改善効果も発揮される。
【００３２】
本明細書において「筋サテライト細胞」とは、筋繊維の基底膜と細胞膜の間隙に存在する多能性幹細胞を意味する。従って、本発明において、脂肪細胞様細胞への分化が抑制される筋サテライト細胞は、多能性幹細胞であってもよい。
【００３３】
前記筋サテライト細胞は、特定の環境下において脂肪細胞様細胞に分化する。例えば、筋サテライト細胞は、脂肪分化誘導培地及び脂肪分化促進培地などの特定の培地に供されることによって、脂肪細胞様細胞に分化する。この筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化は、加齢に伴い増加することが知られている。
【００３４】
本明細書において「脂肪細胞様細胞」とは、細胞内の脂肪滴（Oil droplet）が増加した細胞を意味する。即ち、「脂肪細胞様細胞」とは、筋肉細胞と比べてトリグリセリドの含有量が増加した細胞を意味する。本明細書において、脂肪細胞様細胞は筋サテライト細胞の分化により生じる。筋サテライト細胞の分化により、筋組織中の脂肪細胞様細胞が増加すると、筋肉の質の低下や筋肉量の低下、筋力の低下、及び筋萎縮を招き、その結果、運動機能の低下を招くことになる。
【００３５】
２−２．他の成分
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等は、その形態に応じて、ケルセチン又はその配糖体の他に、任意の添加剤、通常の組成物に用いられる任意の成分を含有することができる。これらの添加剤又は成分の例としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＥ、ビタミンＣ等のビタミン類、ミネラル類、栄養成分、生理活性成分の他、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、コーティング剤や、香料等が挙げられる。
【００３６】
２−３．用途
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等は、前記ケルセチン又はその配糖体を有効量含有するという特徴を有することにより、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制することができる。これにより、脂肪細胞様細胞の増加が抑制され、それに伴い、筋肉中の脂肪滴の増加や筋肉中のトリグリセリド量の増加も抑制される。また、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等を摂取すると、筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化の過程が抑制されることにより、相対的に筋サテライト細胞の筋管細胞への分化が促進され、筋肉量の低下や筋力の低下の予防又は改善効果、及び筋萎縮を抑制する効果が発揮される。さらに、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等の摂取に伴い発揮される、脂肪細胞様細胞の増加抑制効果、筋肉の質改善効果、筋肉量や筋力の低下抑制効果、筋萎縮の抑制効果等に伴い、運動機能の改善効果も得ることができる。さらには、これらに起因する運動器機能障害の予防、改善、又は処置のために使用することもできる。例えば、長期間の安静臥床や骨折等によるギプス固定、疾病、加齢等に起因する運動器機能障害やロコモティブシンドローム等の予防、改善、又は処置が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等は、治療的用途（医療用途）又は非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。具体的には、医薬等としての使用が挙げられる。尚、「非治療的」とは、医療行為、即ち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００３８】
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等は、一例として、剤の形態で提供することができるが、本形態に限定されるものではない。当該剤をそのまま組成物として、または当該剤を含む組成物として提供することもできる。例えば、医薬組成物、飲食品組成物、飲料組成物、化粧料組成物等の形態で提供することができるが、本形態に限定されるものではない。また、本発明は動物用医薬等の形態で提供することもできる。飲食品組成物の限定的でない例として、機能性食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養補助食品、食事療法用食品、健康食品、サプリメント、食品添加物等が挙げられる。さらに、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等により発揮される前記効果、例えば、筋脂肪化抑制効果、筋肉の質改善効果、筋肉量改善効果、筋力改善効果、筋萎縮抑制効果、及び運動機能改善効果等を、明示的又は暗示的に表示した組成物として提供することもできる。
【００３９】
本発明の筋脂肪化抑制用組成物等は、その形態に応じた適当な方法で投与することができる。例えば、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等の投与形態は経口投与でもよいし、注射剤等の形態で投与してもよく、各々の投与に適した製剤として公知のものを適宜用いればよい。例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、又はカプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、又はシロップ剤等の経口用液体製剤、注射剤、外用剤、坐剤、又は経皮吸収剤等の非経口用製剤などの形態とすることができるが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
動物を対象に投与する場合、（マウス１個体当たり約２０ｇに対して）、ケルセチン又はその配糖体の総配合量は、ケルセチン換算値として０．１ｍｇ〜１６ｍｇ、好ましくは０．３ｍｇ〜４ｍｇ、より好ましくは０．５ｍｇ〜２ｍｇを摂取できるような量にするとよい。特に、ヒト（成人）を対象に投与する場合、ケルセチン又はその配糖体の総配合量は、ケルセチン換算値として０．１ｍｇ〜８０００ｍｇ、好ましくは０．３ｍｇ〜４０００ｍｇ、より好ましくは１．０ｍｇ〜１０００ｍｇ、さらにより好ましくは１０ｍｇ〜１００ｍｇを摂取できるような量にするとよい。
【００４１】
また、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等におけるケルセチン又はその配糖体は、その投与形態、投与方法などを考慮し、本発明の所望の効果が得られるような量、すなわち有効量を含有させることが好ましい。例えば、酵素処理ルチン摂取量として一個体あたり１日０．１〜２０ｇ、好ましくは０．３〜１０ｇ、より好ましくは０．５〜５ｇとすることができる。また、本発明の筋脂肪化抑制用組成物等におけるケルセチン又はその配糖体の体重１ｋｇあたりの１日摂取量も特に限定されないが、例えば、酵素処理ルチン摂取量として体重１ｋｇあたり１日０．００２〜４００ｍｇ、好ましくは０．００６〜２００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜５０ｍｇ、さらにより好ましくは０．１〜１０ｍｇとすることができる。
【００４２】
３．筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制するためのケルセチン又はその配糖体の使用
本発明の一態様は、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制するための、ケルセチン又はその配糖体の使用である。例えば、運動器機能障害に関連する様々な疾患又は症状、例えば、長期間の安静臥床や骨折等によるギプス固定、疾病、加齢等に起因する運動器不安定症やロコモティブシンドローム等を予防、改善、又は処置するための使用が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、当該使用は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００４３】
４．筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制する方法
本発明の一態様は、対象に、ケルセチン又はその配糖体を投与することを含む、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制する方法を提供するものである。本発明の投与量は、前記所望の効果が得られる量、即ち、有効量であれば特に限定されるものではない。また、本発明の方法によれば、副作用を生じることなく筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化を抑制することが可能になる。尚、当該投与対象は、本発明の剤の投与対象と同様である。
【００４４】
本明細書において有効量とは、本発明のケルセチン又はその配糖体を前記対象に投与した場合に、投与していない対象と比較して、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化が抑制される量のことをいう。具体的な有効量としては、投与形態、投与方法、使用目的及び対象の年齢、体重、症状等によって適宜設定される。
【００４５】
本発明の方法では、前記治療有効量となるよう、前記ケルセチン又はその配糖体をそのまま投与してもよいし、ケルセチン又はその配糖体を含有する組成物として投与してもよい。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明を実施例により更に詳しく説明するが、これにより本発明の範囲を限定するものではない。当業者は、本発明の方法を種々変更、修飾して使用することが可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。【００４７】
実施例１：ケルセチンによる脂肪蓄積抑制効果
（１）筋サテライト細胞の単離
麻酔下、１０〜１４週齢のＦｉｓｃｈｅｒ３４４ラットから腓腹筋、ヒラメ筋、前頸骨筋、長趾伸筋、及び大腿四頭筋を摘出し、ミンスした。Protease（Sigma-Aldrich社）で前記組織を酵素分解後に、遠心分離処理により沈殿物を得た。得られた沈殿物を１０％ウマ胎児血清含有Dulbecco's Modified Eagle Medium（ＤＭＥＭ）に懸濁し、筋サテライト細胞として５×１０４〜７×１０４細胞／ｍＬとなるように８ウェルスライドガラス（ＢＤサーモサイエンス社）に播種した。
（２）脂肪細胞様細胞への分化誘導
２０％ウシ血清を含むＦ−１０（GIBCO社）で単離した筋サテライト細胞を７２時間培養した。その後、０．１％ＤＭＳＯ（コントロール）、５μＭケルセチン、１０μＭケルセチン、又は５０μＭケルセチンを含有するAdipogenic induction medium（Lonza社）で７２時間培養した。その後、コントロール、５μＭケルセチン、１０μＭケルセチン、又は５０μＭケルセチンを含有するAdipogenic maintenance medium（Lonza社）で７２時間培養した。【００４８】
また、ケルセチンとＰＰＡＲγ阻害剤（ＧＷ９６６２：ＩＣ５０＝３．３ｎＭ）との比較実験では、１０μＭケルセチンと１、５、１０μＭのＧＷ９６６２の添加条件下で、上記の通り培養した。
（３）細胞中脂肪滴の染色
培養した細胞をＰＢＳで洗浄後、１０分間室温にて１０％ホルマリン液（和光純薬）により固定した。その後、２−プロパノールに溶解した１０％オイルレッド−Ｏ溶液（Sigma Aldrich社）に３０分間室温で反応させた。その後、顕微鏡にて観察し、オイルレッド−Ｏで染色される脂肪細胞様細胞数を計測した。結果を図１及び２に示す。
（４）細胞中トリグリセリド量の定量
脂肪分化培養した細胞をＰＢＳで洗浄後、細胞可溶化液として５％Triton-X100を含むＰＢＳを加え、細胞溶液を回収し加熱冷却を行った。遠心分離後、回収した上清中のトリグリセリド量とタンパク質量を定量した。トリグリセリドの定量にはラボアッセイＴＭトリグリセリド（和光純薬社）を用いた。タンパク質の定量にはPierce BCA Protein Assay Kit （Thermo Scientific社）を用いた。尚、各濃度のケルセチン存在下で脂肪分化させた細胞中のトリグリセリド量（左）、タンパク質量（中央）、トリグリセリド／タンパク質比（右）の平均値±標準誤差の値とそのグラフを図３に示す。Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔ検定を用いて検定し、５％以下を有意とした（＊：ｐ＜０．０５ vs ０μＭ。†：ｐ＜０．０５ vs ５μＭ）。【００４９】
オイルレッド−Ｏ染色の結果、コントロール群ではオイルレッド−Ｏで染色された脂脂肪滴が増加した肪細胞様細胞が観察された。５μＭのケルセチン添加ではオイルレッド−Ｏで染色される脂肪滴はコントロールと同程度であり、脂肪細胞様細胞数の顕著な低下は認められなかった。一方、１０μＭ及び５０μＭのケルセチン添加により、濃度依存的にオイルレッド−Ｏで染色される脂肪滴が減少し、脂肪細胞様細胞数の低下が確認された。なお、ＧＷ９６６２添加では１、５、１０μＭいずれの濃度においても脂肪細胞様細胞数の低下が認められなかったことから、ケルセチンによる低下効果は、ＰＰＡＲγ非依存的であることが示された。【００５０】
また、脂肪分化培養後の細胞中のトリグリセリド量を定量した結果、ケルセチンの濃度依存的にトリグリセリド量の低下が認められた。また、ウェル内の細胞のタンパク質量はケルセチン添加による変化は認められず、タンパク質量で補正したトリグリセリド量もケルセチンの濃度依存的な低下が認められた。従って、ケルセチンは筋サテライト細胞の脂肪細胞様細胞への分化を抑制することが示された。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明では、ケルセチン又はその配糖体を有効成分として投与することで、筋サテライト細胞から脂肪細胞様細胞への分化の過程を抑制し、筋脂肪化等を抑制することができる。また、ケルセチン又はその配糖体は食用とされる植物に含まれる成分であるため、極めて安全性が高く、服用又は摂取に伴う予期せぬ有害事象の発現可能性が低い。従って、本発明の剤は、安全で継続摂取可能であり、筋脂肪化に伴って低下する筋肉量や筋力に起因する運動器機能障害の予防、改善、又は処置のための新たな手段として、産業上の利用可能性が高い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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