(57)【要約】  発光体の発光を増強させる方法、物質検出方法、物質検出装置及び発光増強剤を提供すること。  液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、  該発光検出部に光を照射することを含み、該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、発光体の発光増強方法。
2017010152.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、
該発光検出部に光を照射することを含み、
該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、
発光体の発光増強方法。
【請求項２】
前記光は紫外線及び／又は可視光である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記発光体は蛍光色素又は蛍光ビーズである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記コロイド粒子は前記発光検出部における液体中に５質量％〜２０質量％の濃度で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記コロイド粒子は０．１μｍ〜１μｍの粒径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記コロイド粒子は、ラテックス、アクリル、シリコーン、ポリウレタン、ポリビニル、ポリ乳酸、ポリ酢酸、ＰＶＤＦ、ＰＦＡ、ＰＴＦＥ、ポリカーボネート、ポリオレフィン、ポリエチレングリコール、ポリエチレン、ナイロン、脂質、タンパク質、核酸、リポソーム及び微生物細胞からなる群から選択される少なくとも１種類の粒子である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
液体に含まれる発光体で標識した検出対象物質と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、
該発光検出部に光を照射することを含み、
該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、
物質検出方法。
【請求項８】
液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを存在させ得る、内径が光軸方向において３００μｍ以下である発光検出部と、
前記発光検出部に光を照射するための光源部と、
前記発光体から発せられた光を受光する受光部と
を備える物質検出装置。
【請求項９】
粒径０．１μｍ〜１μｍの白色のコロイド粒子を有効成分として含有する発光増強剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、発光を増強させる方法、物質検出方法、物質検出装置及び発光増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
蛍光色素で標識された検出対象物を検出するとき、蛍光色素に特定の波長の励起光を照射し、蛍光色素から放出される蛍光を受光して、対象物を検出する。このとき、蛍光強度が強い程、対象物を検出しやすくなり、検出感度の向上が望まれていた。【０００３】
そこで、従来、検出感度を高くするために、例えば、検出部の内壁に反射板を備えて、蛍光色素から放出される蛍光をその反射板により反射させて、受光部に蛍光を集めることが行われていた。【０００４】
一方で、近年、蛍光色素を含む液と蛍光増強希釈剤との混合物を、生体組織切片に適用して蛍光染色すると、増強した蛍光が得られるという蛍光増強方法が開発された（特許文献１）。
該方法では、蛍光色素に近赤外線蛍光色素であるインドシアニングリーンを用い、蛍光増強希釈剤には、乳、調製粉乳、脂肪乳剤、大豆油、卵のリン脂質、又は登録商標Intralipid、Lyposyn、Nutralipid、Soyacal、Travamulsion、SOMFlipid、Clinoleic、Lipovenoes等の乳剤を用いている。
前記特許文献１によれば、蛍光色素と蛍光増強希釈剤との混合物で生体組織切片を染色し、該切片に近赤外線を照射して観察すると、蛍光増強希釈剤を混合しない場合と比較して蛍光強度が５〜２０倍に増強された、とのことである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２０１３／１０９９６３号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、前記特許文献１に開示される技術は、１００ｎｍよりも小さい粒径を有する粒子の乳液を含む蛍光増強希釈剤と、近赤外線蛍光色素とを用いて、生体組織を染色することのみである。【０００７】
本技術は、生体組織の染色のみに留まらない、発光体の発光を増強させる方法、物質検出方法、物質検出装置及び発光増強剤を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
すなわち、本技術は、液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、
該発光検出部に光を照射することを含み、
該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、
発光体の発光増強方法を提供する。
前記光は、紫外線及び／又は可視光を用いることができる。
前記発光体には、蛍光色素又は蛍光ビーズを用いることができる。
前記コロイド粒子は、前記発光検出部における液体中に５質量％〜２０質量％の濃度で存在させることができる。
また、前記コロイド粒子は、０．１μｍ〜１μｍの粒径を有し得る。
更に、前記コロイド粒子は、ラテックス、アクリル、シリコーン、ポリウレタン、ポリビニル、ポリ乳酸、ポリ酢酸、ＰＶＤＦ、ＰＦＡ、ＰＴＦＥ、ポリカーボネート、ポリオレフィン、ポリエチレングリコール、ポリエチレン、ナイロン、脂質、タンパク質、核酸、リポソーム及び微生物細胞からなる群から選択される少なくとも１種類の粒子にすることができる。【０００９】
また、本技術は、液体に含まれる発光体で標識した検出対象物質と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、
該発光検出部に光を照射することを含み、
該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、
物質検出方法を提供する。【００１０】
また、本技術は、液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを存在させ得る、内径が光軸方向において３００μｍ以下である発光検出部と、
前記発光検出部に光を照射するための光源部と、
前記発光体から発せられた光を受光する受光部と
を備える物質検出装置を提供する。【００１１】
更に本技術は、粒径０．１μｍ〜１μｍの白色のコロイド粒子を有効成分として含有する発光増強剤を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本技術によれば、液体中の発光体の発光を顕著に高めることができる。
なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本開示中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本技術に係る発光検出装置の概略図である。
【図２】本技術に係る白色コロイド粒子による蛍光強度の増強を示すグラフである。
【図３】本技術に係る発光検出部の内径の大きさの検討結果を示すグラフである。
【図４】本技術に係る蛍光ビーズによる励起波長及び放射波長の検討結果を示すグラフである。
【図５】本技術に係る蛍光分子による励起波長及び放射波長の検討結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本技術を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本技術の代表的な実施形態を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。説明は以下の順序で行う。
１．発光体の発光増強方法
（１）発光体
（２）白色コロイド粒子
（３）発光検出部
（４）光照射
（５）受光
２．物質検出方法
（１）検出対象物
（２）物質を検出する方法
３．物質検出装置
（１）発光検出部
（２）光源部
（３）受光部
（４）物質検出装置の応用
４．発光増強剤
５．実験例
（Ａ）白色コロイド粒子による蛍光強度の増強
（Ｂ）発光検出部の内径の検討
（Ｃ）蛍光ビーズによる励起波長及び放射波長の検討
（Ｄ）蛍光分子による励起波長及び放射波長の検討
【００１５】
＜１．発光体の発光増強方法＞
本発明者らは、蛍光色素を液体に分散させ、その液体に白色のコロイド粒子を懸濁したところ、液体の透過度が下がるにも関わらず、一定の条件下で蛍光強度が増強されることを発見した。
本技術は、この発見に基づいて開発されたものであり、発光体と白色コロイド粒子を共存させた液体を、３００μｍ以下の内径を有する発光検出部に導入し、光を照射することによって、発光体からの発光を増強させる技術である。
【００１６】
（１）発光体
本技術に用いる発光体は、エネルギーを吸収して、そのエネルギーを光で放出する物質である。本技術では、特に紫外線、可視光線、赤外線等の光を刺激源と、該光のエネルギーを吸収し、発光するフォトルミネッセンスが適用される。
発光体として、例えば、蛍光又はりん光を発する色素化合物が含まれる。蛍光又はりん光を発する色素化合物の具体例としては、市販の蛍光色素であるAlexa Fluor、MegaStokes Dye、Oyster、HiLyte Fluor、Pacific Blue、Coumarin、BODIPY FL、Oregon Green、Pacific Oarnge、Texas Red、DyLight、AMCA、Royal Blue、ATTO、FAM、MFP、Spectrum Green、NorthernLight、TAMRA、PE、ROX、Spectrum Red、ECD、Phycocyanin、Quantum Red、PerCP、IRDye、DY、R-Phycoerythrin、Allophycocyanin、DIPI、Nile Blue、Europium、Dragon Green、Flush Red、Cy色素、メロシアニン、ルブレン、5,12-ビス（フェニルエチニル）ナフタセン、ピラニン、ウンベリフェロン、サイバーグリーン、臭化エチジウム、フルオレセイン、ローダミン、TRITC、スチルベン等が挙げられる。
【００１７】
また、本技術の発光体には、前記色素化合物の誘導体、CFP、GFP、RFP、UnaG等の蛍光タンパク質、種々の蛍光色素で染色した核酸（DNA、RNA及びPNA）やアミノ酸、ペプチド、抗体等、及び蛍光ビーズも含まれ、本技術においてはこれらに限定されない。
【００１８】
各発光体は、それぞれ独自の励起波長及び蛍光波長を有する。前記蛍光又はりん光を発する色素化合物のほとんどは、励起波長約４００〜８００ｎｍの範囲、蛍光波長４２０〜８２０ｎｍの範囲に入る。従って、後述の光照射の際には、当該波長範囲内の各発光体に好適な励起光を発光体に照射することが好ましい。
【００１９】
なお、本技術に用いる発光体は、該発光体単独で液体中に存在してもよいし、発光体を液体中の検出対象物と接触させたときに発光体と検出対象物とが結合した形で存在してもよい。
また、発光体は、プレート、ウェル、ビーズ、後述の発光検出部の内側等に固定化されていてもよい。
【００２０】
（２）白色コロイド粒子
コロイド粒子は、視覚により、黒色、赤色、紫色、青色、黄色、白色等、種々の色に認識されるが、本技術に用いるコロイド粒子は、白又は白に近い色に認識されるものが用いられる。例えば、カーボン粒子のような黒色のコロイド粒子を、液体中に発光体と共存させた場合は、発光体の放射光の増強は観察されなかった。
【００２１】
本技術に用いられる白色コロイド粒子は、液体の分散媒に分散可能な微粒子である。コロイド粒子は一般には球形であるが、非球形であってもよい。
本技術に用いられる白色コロイド粒子の粒径は、特に限定されないが、例えば、０．１μｍ〜１μｍである。粒径が０．１μｍ未満まで小さな粒子でなくても、本技術の効果が十分に得られる。また、粒径が１μｍよりも大きな粒子だと、コロイド粒子としての効果が得られない場合がある。
【００２２】
粒径は、本技術において平均径をいい、該平均径は、コロイド粒子の形の種類により、長径、短径、定方向径、定方向等分径、定方向最長幅、２軸平均径、３軸平均径、立方等価径、円等価径、同等表面積径、同等体積径等を選択して決定することができる。  
【００２３】
白色コロイド粒子として、例えば、乳、スキムミルク、ラテックス、アクリル、シリコーン、ポリウレタン、ポリビニル、ポリ乳酸、ポリ酢酸、ＰＶＤＦ、ＰＦＡ、ＰＴＦＥ、ポリカーボネート、ポリオレフィン、ポリエチレングリコール、ポリエチレン、ナイロン、脂質、タンパク質、核酸、リポソーム、微生物細胞が挙げられ、本技術においてはこれらに限定されない。
【００２４】
白色コロイド粒子の液体中の濃度は、特に限定されないが、５質量％〜２０質量％が好ましい。この濃度にすることにより、液体中に共存させた発光体からの放射光が顕著に増強され得る。５質量％未満及び２０質量％を超えると、本技術の効果が十分に得られないことがある。
【００２５】
（３）発光検出部
本技術に用いられる発光検出部は、後述の光源部から光を照射したときの光軸方向において３００μｍ以下の内径を有する。内径を３００μｍ以下にすると、該発光検出部内に発光体と白色コロイドを存在させたときに、発光体からの放射光が顕著に増強されて、後述の受光部に強い放射光を受光させることができ、検出感度を大幅に向上できる。
また、内径は、１μｍ以上あることが好ましい。コロイド粒子には粒径が約１μｍのものもあり、そのようなコロイド粒子が当該発光検出部に存在できるようにするためである。
【００２６】
発光検出部は、光を照射したときに、光軸方向において３００μｍ以下の内径（深度）が得られる箇所を少なくとも１つ確保できれば、どのような形状を有してもよい。例えば、円柱型、円錐台型、逆円錐台型、楕円柱型、楕円台型、逆楕円錐台型、球状、楕円体、及び、これらの形状において凹部及び／又は凸部があってもよい。
【００２７】
発光検出部は、少なくとも１本の液体流路が連結されており、発光体及び／又は白色コロイド粒子を含有する液体が流入・流出できることが好ましい。
また、該液体は、発光体、白色コロイド粒子の他に、検出対象物を含有することができる。
例えば、発光検出部の上流及び／又は内部では、発光体と検出対象物とが結合し、結合せずに残った発光体が除去されて、発光体と検出対象物の結合体が存在する。発光検出部内には、同時に白色コロイド粒子が存在し、発光検出部に光を照射すると、発光体からの放射光が増強されて、検出対象物の濃度が低くても容易に検出対象物を検出することができる。
【００２８】
（４）光照射
本技術では、用いる発光体の種類に応じて光の種類を選択することができる。該光は、発光体の励起波長とすることができ、例えば前述の色素化合物の固有の励起波長を選択できる。色素化合物に応じて、近赤外線、紫外線、可視光線等を選択できる。具体的には、可視光線の約４００〜８００ｎｍの波長の光が挙げられる。
【００２９】
光照射は、光方向、波長、光強度等が一定になるように行うことが好ましく、光源として、例えば、アルゴンイオンレーザー、ヘリウム−ネオンレーザー、ダイレーザー、クリプトンレーザー等のレーザー、LED、水銀灯等を用いることができる。
また、光照射の際には、適宜、ダイクロイック素子、集光レンズ、光学フィルター等を備えて、入光の角度や光の透過率等を調整することができる。
【００３０】
（５）受光
受光するには、光検出器、例えば分光輝度計、ＣＣＤ、ＣＭＯＳ等を用いることができる。
また、発光体からの特定の波長の放射光のみを受光することが好ましいが、これに限定されない。特定の波長以外の光を遮断するには、例えば、赤外線カットフィルタ、可視光カットフィルタ、紫外線カットフィルタ等を用いることができる。
【００３１】
＜２．物質検出方法＞
本技術の物質検出方法は、液体中の検出対象物質を発光体で標識し、前記発光検出部に、発光体標識検出対象物質と白色コロイド粒子とを共存させて、光を発光検出部に照射し、発光体から放射される増強された放射光を受光し、検出対象物質を検出する方法である。
【００３２】
（１）検出対象物
本技術における検出対象物は、特に限定されず、前記発光体で標識可能なものであればよい。例えば、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、核酸分子、これらの前駆物質、これらの分解物質が挙げられる。具体的には、ウイルス、細菌、ホルモン、サイトカイン、抗原、抗体、酵素、及び生体の内外組織（例えば、皮膚組織上や組織内部等）から採取できるものが挙げられる。
検出対象物は液体中に分散され、その濃度は特に限定されない。ごくわずかな量でも、本技術による物質検出方法は感度が高いため、従来技術と比較して、十分に検出可能である。
【００３３】
（２）物質を検出する方法
本技術の物質を検出する方法は、例えば、次のようにして行う：
（ｉ）試料に発光体を添加する。これにより、試料に含まれる検出対象物の量と相関して発光体が結合し、発光体標識された検出対象物が形成される。
（ｉｉ）必要に応じて、結合しなかった発光体を除去する。
（ｉｉｉ）白色コロイド粒子を添加する。好ましくは、液体中に５質量％〜２０質量％になるように添加する。これにより、発光体標識された検出対象物が更に分散される。
（ｉｖ）発光検出部に、発光体標識された検出対象物及び白色コロイド粒子の混合物を流入する。なお、前記（ｉｉｉ）の白色コロイド粒子の添加は、発光検出部に発光体標識された検出対象物を流入する前又は後に行うことができる。
（ｖ）発光検出部に、標識に用いた発光体に応じた波長の光を照射する。
（ｖｉ）発光体から放射された放射光を受光する。
（ｖｉｉ）放射光の強度により、検出対象物の有無を調べる。また、あらかじめ検量用の標準試料を調製しておき、得られる放射光の強度でキャリブレーションカーブを得て、検出対象物の定量をすることも可能である。
【００３４】
＜３．物質検出装置＞
本技術の発光検出装置は、光源部、発光検出部、受光部を少なくとも備え、発光検出部の内径が、光源部からの光軸方向において３００μｍ以下であることを特徴とする。
以下、図１を参照して本技術の発光検出装置の一例を説明する。
【００３５】
（１）発光検出部
発光検出部１１は、光源部２１から照射される光軸方向において内径６１が３００μｍ以下になるように形成された、例えば石英ガラス、ホウ珪酸ガラス、ポリメタクリル酸メチル、ポリジメチルシロキサン、ポリエチレンテレフタレートのセルである。発光検出部１１には、流入口１２及び流出口１３が形成されており、それぞれ流路１４、１５が上流側、下流側に延びる。
流路１４の上流には、試料導入口１６があり、発光体４１又は発光体で標識された検出対象物を含有する試料を導入する。流路１４と発光検出部１１の間に、白色コロイド粒子導入口１７があり、ここから白色コロイド粒子５１が、発光検出部１１での最終濃度が５質量％〜２０質量％になるように導入される。
流出口１３から延びる流路１５の下流では、発光検出部１１で測定した後の試料や発光体、白色コロイド粒子等が廃棄される。
【００３６】
（２）光源部
光源部２１は、発光検出部１１内の発光体４１を励起する波長の光を発する。光源部２１は、照射光２２が指向性や収束性を有するような光源を用いることができる。また、光源は発光体の種類によって選択でき、例えば、半導体レーザー、発光ダイオード等から選択することができる。また、光源部２１と発光検出部１１との間に、集光レンズ等を備えることもできる。
【００３７】
（３）受光部
受光部３１は、発光検出部１１内の励起された発光体から発せられる放射光３２を受光する。受光部は、例えば、光検出器を用いればよい。従来は、発光体からの放射光が増強されていなかったため、感度の高い受光部の改善が求められていたが、本技術では発光体の発光が数十倍以上に増強されるため、従来用いられていた受光部でも十分に適用可能である。
また、受光部３１と発光検出部１１との間に、例えば集光レンズを備えて、より感度よく受光することもできる。
なお、受光による電気信号を制御・処理する信号処理装置、解析部等を更に備えてもよい。
【００３８】
（４）物質検出装置の応用
本技術は、例えば、フローサイトメトリーのような技術にも適用可能である。
例えば、以下のような装置が挙げられる：
発光体標識検出対象物をフローセルの代わりに設置した前記発光検出部内で１列に配列するための流体（フロー）系と、各細胞に励起波長のレーザー光を照射し、発光体から発せられる光を検出するための光学系とで構成される。
【００３９】
前記発光検出部内において、発光体標識検出対象物を含む試料と、その周囲を流れるシース（鞘）液とで層流を形成する。このとき、シース液にあらかじめ白色コロイド粒子を、例えば５質量％〜２０質量％の濃度になるように添加する。更に、試料とシース液との間にわずかな圧力差を生じさせて、試料液中に含まれる複数の発光体標識された検出対象物を１列に並べる。その状態で発光検出部に励起波長の光を照射すると、検出対象物が励起光を横切るように１個ずつ通過する。このとき、励起されて各検出対象物から放射された発光を、受光部により受光する。
このような構成によっても、本技術の発光体からの放射光の増強効果が得られる。
【００４０】
＜４．発光増強剤＞
本技術の発光増強剤は、粒径０．１μｍ〜１μｍの白色のコロイド粒子を有効成分として含有する。
発光増強剤を用いると、発光体に励起波長の光が照射されたときに発せられる光を増強することができる。発光増強剤は、励起波長の光が照射される前に、あらかじめ発光体含有試料に添加する。
発光増強剤は、添加前は、液状、ゲル状、固体状、凍結乾燥状態等、保存に適した状態であってよい。使用前に水、バッファー等で希釈して、適切な濃度に調製することができる。また、本技術の効果を妨げない範囲で、防腐剤、保存料等の添加物を含んでもよい。
【実施例】
【００４１】
＜５．実験例＞
（Ａ）白色コロイド粒子による蛍光強度の増強
発光体として、励起波長４８０ｎｍ、放射波長５２０ｎｍの蛍光ビーズ（商品名：Dragon Green、Bangs Laboratories Inc.）を用いた。白色コロイド粒子として、５種類のサブミクロンサイズ（粒径０．０６μｍ、０．１０μｍ、０．２４μｍ、０．６４μｍ、０．８７μｍ）のラテックスビーズ（商品名：Latex Microsphere、Thermo Fisher Scientific Inc.）と、スキムミルクコロイド分散溶液を用いた。分散媒、濃度調製の希釈剤には水を用いた。【００４２】
まず、白色コロイド粒子が含まれておらず、蛍光ビーズが含まれるサンプル（Clear）を調製した。
次に、濃度０．０００１％ｗ／ｖの蛍光ビーズと濃度１０重量％の前記各サイズのラテックスビーズが分散するサンプルを調製した。
また、蛍光ビーズと濃度５重量％、１０重量％、２０重量％のスキムミルクが分散するサンプルを調製した。
サンプルを、内径が光軸方向において３００μｍの発光検出部に入れ、４８０ｎｍの光を照射し、５２０ｎｍの光を受光した。
白色コロイド粒子が含まれていないサンプル（Clear）の蛍光シグナルを１としたとき、前記各サンプルの相対蛍光強度を比蛍光強度とした。【００４３】
各サンプルの比蛍光増強度をグラフ化したものを図２に示す。
前記Clearのサンプルと比較した結果、発光検出部中にコロイド分散溶液が存在すると、蛍光強度が増強されることが明らかとなった。特に、０．２４μｍのラテックスビーズが分散するサンプルの場合、比蛍光強度が２０、つまり蛍光シグナルが２０倍になった。【００４４】
（Ｂ）発光検出部の内径の検討
発光検出部の光軸方向に沿った流路の長さ（深さ）を、１２０μｍ、２４０μｍ、３６０μｍ、４８０μｍに変えて、比蛍光強度の変化を観察した。
蛍光ビーズは前記（Ａ）と同じ、白色コロイド粒子は０．２４μｍの前記（Ａ）と同じものを濃度１０重量％にし、段階希釈してサンプルを調製した。【００４５】
結果を図３に示す。
本技術をマイクロ流路に適用して、数十μｍ〜数百μｍ程度の深さにおいてシグナル検出した場合、より高い蛍光増強効果を示すことが明らかとなった。これは、発光検出部の流路の深さが増すと、透過度が低下するためと考えられた。【００４６】
（Ｃ）蛍光ビーズによる励起波長及び放射波長の検討
励起波長（Ｅｘ）、放射波長（Ｅｍ）の異なるナノ蛍光ビーズを用いて、前記（Ａ）で用いた濃度１重量％、５重量％、１０重量％の粒径０．２４μｍのラテックスコロイド溶液中での蛍光増強効果を確認した。用いた蛍光ビーズは、以下の３種である。
Ｄｒａｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（粒径５４ｎｍ、Ｅｘ４８０／Ｅｍ５２０、Bangs Laboratories Inc.）
Ｆｌａｓｈ  Ｒｅｄ（粒径１９０ｎｍ、Ｅｘ６６０／Ｅｍ６９０、Bangs Laboratories Inc.）
Ｅｕｒｏｐｉｕｍ（粒径２００ｎｍ、Ｅｘ３６５／Ｅｍ６１０、Bangs Laboratories Inc.）【００４７】
それぞれの蛍光ビーズに対応する励起波長の光を照射し、放射波長の光を受光して得られた結果を図４に示す。
Ｅｘ４８０ｎｍ／Ｅｍ５２０の蛍光ビーズ、Ｅｘ６６０／Ｅｍ６９０の蛍光ビーズのいずれでも蛍光が増強されることが示された。また、紫外線励起波長であるＥｘ３６５ｎｍ／Ｅｍ６１０ｎｍの蛍光ビーズにおいても蛍光増強効果が示された。【００４８】
（Ｄ）蛍光分子による励起波長及び放射波長の検討
蛍光ビーズの代わりに蛍光分子を用いて、白色コロイド粒子による蛍光増強効果を確認した。蛍光分子は以下の２種である。
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ（Ｅｘ４８０／Ｅｍ５２０）
Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ（Ｅｘ５５２／Ｅｍ５８８）
白色コロイド粒子は、前記（Ａ）で用いた濃度１０重量％のラテックスコロイド溶液を用いた。
蛍光分子は１０μＭになるように調製した。【００４９】
それぞれの蛍光分子に対応する励起波長の光を照射し、放射波長の光を受光して得られた結果を図５に示す。
蛍光ビーズのときよりも滝蛍光増強効果が確認され、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ（Ｅｘ５５２／Ｅｍ５８８）では８０倍以上の蛍光増強効果が確認された。【００５０】
なお、本技術は、以下のような構成も採ることができる。
〔１〕液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、
該発光検出部に光を照射することを含み、
該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、
発光体の発光増強方法。
〔２〕前記光は紫外線及び／又は可視光である、前記〔１〕に記載の方法。
〔３〕前記発光体は蛍光色素又は蛍光ビーズである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の方法。
〔４〕前記コロイド粒子は前記発光検出部における液体中に５質量％〜２０質量％の濃度で存在する、前記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の方法。
〔５〕前記コロイド粒子は０．１μｍ〜１μｍの粒径を有する、前記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の方法。
〔６〕前記コロイド粒子は、ラテックス、アクリル、シリコーン、ポリウレタン、ポリビニル、ポリ乳酸、ポリ酢酸、ＰＶＤＦ、ＰＦＡ、ＰＴＦＥ、ポリカーボネート、ポリオレフィン、ポリエチレングリコール、ポリエチレン、ナイロン、脂質、タンパク質、核酸、リポソーム及び微生物細胞からなる群から選択される少なくとも１種類の粒子である、前記〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕  液体に含まれる発光体で標識した検出対象物質と白色のコロイド粒子とを発光検出部に存在させて、
該発光検出部に光を照射することを含み、
該発光検出部の内径が光軸方向において３００μｍ以下である、
物質検出方法。
〔８〕液体に含まれる発光体と白色のコロイド粒子とを存在させ得る、内径が光軸方向において３００μｍ以下である発光検出部と、
前記発光検出部に光を照射するための光源部と、
前記発光体から発せられた光を受光する受光部と
を備える物質検出装置。
〔９〕粒径０．１μｍ〜１μｍの白色のコロイド粒子を有効成分として含有する発光増強剤。
【符号の説明】
【００５１】
１１    発光検出部
１２    流入口
１３    流出口
１４    流路
１５    流路
１６    試料導入口
１７    白色コロイド粒子導入口
２１    光源部
２２    照射光
３１    受光部
３２    放射光
４１    発光体
５１    白色コロイド粒子
６１    内径
【図１】
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【図２】
2017010152.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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