(57)【要約】  ［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩を含有する神経麻痺性角膜症の治療剤又は角膜知覚低下の改善剤などのＰＰＡＲδアゴニストの新規医薬用途を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩を含有する神経麻痺性角膜症の治療剤。
【請求項２】
神経麻痺性角膜症が糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症である、請求項１に記載の治療剤。
【請求項３】
糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症が糖尿病性角膜症である、請求項２に記載の治療剤。
【請求項４】
［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩を含有する角膜知覚低下の改善剤。
【請求項５】
神経麻痺性角膜症の治療剤を製造するための、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の使用。
【請求項６】
神経麻痺性角膜症が糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症が糖尿病性角膜症である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
角膜知覚低下の改善剤を製造するための、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
神経麻痺性角膜症の治療を必要とする対象に、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、神経麻痺性角膜症を治療する方法。
【請求項１０】
神経麻痺性角膜症が糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症が糖尿病性角膜症である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
角膜知覚の低下の改善を必要とする対象に、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、角膜知覚の低下を改善する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経麻痺性角膜症の治療薬に関し、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体；Peroxisome Proliferator-Activated Receptor）δアゴニストの神経麻痺性角膜症の治療薬としての新規医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＰＡＲは、殆どの脊椎動物において発現している核内レセプターの一種であり、細胞内の糖・脂質代謝や細胞の分化に密接に関与している転写因子群であるとされている。サブタイプとしては、α、δ、γ型が知られている。なお、ＰＰＡＲδは、ＰＰＡＲβと表記されることもある（非特許文献１）。
ＰＰＡＲの眼組織における分布としては、ＰＰＡＲα及びβがウサギの角膜上皮細胞に発現していることが知られている（非特許文献２）。
これまでに、主としてＰＰＡＲγ活性化作用を有すると考えられる５−［４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオンが、角結膜障害の治療剤として利用できること（特許文献１及び２）、眼疾患（結膜炎、ドライアイ症候群、角膜炎等）の治療においてＰＰＡＲα、δ又はγアゴニストが投与されること（特許文献３）が報告されている。また、ＰＰＡＲαに関しては、肝臓、腎臓などに分布し、脂質代謝・輸送に作用することが知られており、さらに、そのアゴニストが角膜疾患の治療剤として利用できることも報告されている（特許文献４）。ＰＰＡＲδアゴニストについては、これまで、ラット皮脂腺上皮細胞の増殖及び分化を促進すること（非特許文献３）、皮膚の創傷治癒を促進すること（非特許文献４）についての報告がある。その他にも、非チアゾリジンジオンＰＰＡＲリガンドとＧＬＰ−１誘導体を投与することによりβ−細胞の増殖を刺激する方法（特許文献５）、ＰＰＡＲγアゴニストであるピオグリタゾンが白血病細胞や前立腺癌細胞などの増殖を阻害すること（特許文献６）などが知られている。
本発明者らは、特定のＰＰＡＲδアゴニストが、角膜上皮細胞の増殖促進作用を有し、角膜上皮障害及び種々の疾患に伴う角膜上皮障害：シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼球乾燥症候群（ドライアイ）等の内因性疾患に伴う角膜上皮障害；術後、薬剤性、外傷、角膜潰瘍、マイボーム腺炎、コンタクトレンズ装用等における外因性疾患に伴う角膜上皮障害；春季カタルやアトピー性角結膜炎等の角膜病変を伴う眼アレルギー性疾患に伴う角膜上皮障害の治療に有用であることを見出している（特許文献７）。しかし、特許文献７には、ＰＰＡＲδアゴニストが角膜知覚低下の改善作用を有すること、その結果、神経麻痺性角膜症の治療剤としての利用が可能であることの示唆はされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第４２１６２６６号公報
【特許文献２】特開２００６−３０４６１１号公報
【特許文献３】特許第３７５６３１３号公報
【特許文献４】特許第４７３１３２４号公報
【特許文献５】特許第４３８３１７８号公報
【特許文献６】特許第５０３０９９８号公報
【特許文献７】特許第５２４７６８６号公報（国際公開第２００８／１４３２５４号）
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】J Med Chem 2000, 43: 527-550
【非特許文献２】J Biol Chem 2000, 275: 2837-2844
【非特許文献３】Molecular Genetic and Metabolism 2001, 74: 362-369
【非特許文献４】Am J Clin Dermatol 2003, 4(8): 523-530
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明が解決しようとする課題は、ＰＰＡＲδアゴニストの眼科領域における新たな医薬用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは上記課題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、特定のＰＰＡＲδアゴニストが、神経麻痺性角膜症の治療効果に優れることを見出し、本発明を完成させるに至った。
したがって、本発明は以下の内容を少なくとも含む。
〔１〕  ［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩を含有する神経麻痺性角膜症の治療剤。
〔２〕  神経麻痺性角膜症が糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症である、〔１〕に記載の治療剤。
〔３〕  糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症が糖尿病性角膜症である、〔２〕に記載の治療剤。
〔３−１〕  眼局所用である［１］〜〔３〕に記載の治療剤。
〔４〕  ［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩を含有する角膜知覚低下の改善剤。
〔４−１〕  眼局所用である［４］に記載の改善剤。
〔５〕  神経麻痺性角膜症の治療剤を製造するための、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の使用。
〔６〕  神経麻痺性角膜症が糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症である、〔５〕に記載の使用。
〔７〕  糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症が糖尿病性角膜症である、〔６〕に記載の使用。
〔８〕  角膜知覚低下の改善剤を製造するための、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の使用。
〔９〕  神経麻痺性角膜症の治療を必要とする対象に、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、神経麻痺性角膜症を治療する方法。
〔１０〕  神経麻痺性角膜症が糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症である、〔９〕に記載の方法。
〔１１〕  糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症が糖尿病性角膜症である、〔１０〕に記載の方法。
〔１２〕  角膜知覚の低下の改善を必要とする対象に、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む、角膜知覚の低下を改善する方法。
〔１３〕  ［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩を含有する角膜神経障害の治療剤。
〔１３−１〕角膜神経障害が糖尿病による障害である〔１３〕に記載の治療剤。
〔１３−２〕  眼局所用である〔１３〕又は〔１３−１〕に記載の治療剤。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、神経麻痺性角膜症の治療剤が提供される。神経麻痺性角膜症とは、角膜知覚を支配している角膜神経が損傷、変性、又は麻痺等の障害を受けることにより生じる角膜疾患であり、角膜知覚の低下、角膜上皮細胞の障害、及び創傷治癒の遅延を臨床所見とする。当該疾患の治療においては、角膜そのものに原因を求めたり、角膜上皮障害自体の治療を試みても、十分に目的を達成できないことが多い。しかし、本発明に係る有効成分は、角膜知覚の低下の改善作用を有することから、神経麻痺性角膜症に対する治療剤として極めて有用である。神経麻痺性角膜症や角膜知覚低下を発症させる原因としては、ヘルペス角膜炎、外科的外傷などのほか、糖尿病合併症としての角膜症があり、殊に、糖尿病性角膜症の治療には、単に角膜上皮細胞を増殖させるだけでなく、角膜知覚低下を改善することが重要であるため、本発明の医薬は、糖尿病性角膜症の治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ウサギ角膜のフラップ作製の概要及び角膜知覚の測定位置（１−４）を示す。
【図２】図２は、角膜フラップ作製後の測定位置１における角膜知覚のグラフである。
【図３】図３は、角膜フラップ作製後の測定位置２における角膜知覚のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸又はその薬理学的に許容される塩（以下総称して、「本発明の化合物」とも称する）を有効成分として含有する、神経麻痺性角膜症の治療剤、角膜知覚低下の改善剤、糖尿病性角膜症の治療剤、及び角膜神経障害の治療剤を提供する。本発明の神経麻痺性角膜症の治療剤、角膜知覚低下の改善剤、糖尿病性角膜症、及び角膜神経障害の治療剤を総称して、本発明の医薬と称する。
【００１０】
本発明における「神経麻痺性角膜症」とは、角膜知覚を支配している角膜神経が損傷、変性、又は麻痺等の障害を受けることにより生じる角膜疾患であり、角膜知覚の低下や、角膜上皮細胞の障害と、創傷治癒の遅延を臨床所見とする。
本発明における「角膜知覚の低下」とは、角膜神経が損傷、変性又は麻痺により角膜神経の知覚が低下した状態をいう。
本発明における「角膜神経」とは、知覚神経である三叉神経の支配を受け、角膜周囲に形成される輪状神経叢、角膜実質に網目状に分布する実質内神経叢、ボーマン膜直下で形成される上皮下神経叢、ボーマン膜を貫通したところで形成される基底細胞神経叢および神経線維をいう。
【００１１】
本発明における「治療」とは、症状の改善、進行の遅延、重症化の防止だけではなく、予防も含む概念である。予防とは症状の発症を抑制または遅延させることであり、詳細には、種々の原因で角膜神経が損傷、変性、又は麻痺等の障害を受けることにより生じる、角膜知覚の低下、角膜上皮細胞の障害、及び創傷治癒の遅延を臨床所見とする「神経麻痺性角膜症」を、角膜神経の障害を回復させることにより、臨床所見の発症を抑制又は遅延させることを意味する。
具体的には、「神経麻痺性角膜症」の予防とは、上記臨床所見が顕在化する前に、種々の原因を有する対象に本願の化合物を投与することにより、臨床所見の発症を抑制又は遅延させることを意味する。
種々の原因としては、糖尿病、加齢、角膜移植、眼手術、コンタクトレンズ装用、角膜ヘルペス、三叉神経麻痺などが挙げられる。
【００１２】
角膜上皮障害の程度は、フルオレセイン染色した角膜上皮をスリットランプを用いて観察し、AD分類（臨眼 1994, 48, 183-188）を用いて確認することができる。
【００１３】
角膜知覚の低下の程度は、コシュ・ボネ角膜知覚計（LUNEAU社製）を用いて角膜表面の特定の測定地点での知覚を測定することにより確認することができる。加齢により角膜知覚は低下するため、例えばヒトの正常値を正確に規定することはできないが、測定地点を規定し、左右眼を比較することが重要である。
【００１４】
本発明の化合物は、角膜知覚低下の改善を促進する効果を有するため、神経麻痺性角膜症の治療に有用である。また、糖尿病は神経の障害を招き、さらに神経障害が角膜上皮障害を招くことが知られているため、本発明の化合物は、特に、角膜神経の損傷、変性又は麻痺を伴う、糖尿病に起因する神経麻痺性角膜症、さらには糖尿病性角膜症の治療に有用である。また、本発明の化合物は、損傷された神経の回復効果を有するため、神経障害が招く角膜上皮障害、特に糖尿病性角膜症を予防するのに有用である。
【００１５】
本発明の化合物は、角膜神経の障害を回復する効果を有するため、角膜神経障害の治療に有用である。
角膜神経障害の原因としては、糖尿病、加齢、角膜移植、眼手術、コンタクトレンズ装用、角膜ヘルペス、三叉神経麻痺などが挙げられる。なかでも糖尿病に起因する角膜神経障害を治療するのに有用である。
【００１６】
本発明の医薬に有効成分として含まれる３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸（ＣＡＳ  Ｎｏ．５１５１３８−０６−４）：
【００１７】
【化１】
2016199871.tif 000002
【００１８】
は、国際公開第２００３／０３３４９３号パンフレット（特に実施例５）に記載されたＰＰＡＲδアゴニスト活性を有する化合物である。
【００１９】
上記化合物の薬理学的に許容される塩としては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属等との金属塩などがあげられる。また、本発明の化合物は、その溶媒和物も含まれる。
【００２０】
本発明においてＰＰＡＲδアゴニストとは、ＰＰＡＲδのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）に結合して、当該受容体を活性化し、ＰＰＡＲ標的遺伝子の転写を調節する物質をいう。ＰＰＡＲδアゴニスト活性は、哺乳動物の細胞に内在する他の核受容体の影響を除外するため、ＬＢＤと酵母（ｙｅａｓｔ）のＧＡＬ４とのキメラ受容体と、レポーター遺伝子とを用いた酵母ツーハイブリッド法により測定することができる。具体的な測定方法は、参考文献、T.M. Willson et al., Journal of Medicinal Chemistry, 2000, vol.43, No.4, p.528-550及びJ.M.Lehmann et al., The Journal of Biological Chemistry, 1995, vol.270, No.22, p.12953-12956に記載のＰＰＡＲ−ＧＡＬ４アッセイがあげられる。本発明の化合物は、国際公開第２００３／０３３４９３号パンフレットの実施例１２に記載された方法により、ＰＰＡＲδアゴニスト活性を有することが確認されている。
【００２１】
本発明の化合物は、国際公開第２００３／０３３４９３号パンフレット（特に実施例５）の記載に準じて合成することができる。  
【００２２】
本発明の医薬は、上記有効成分に加え、任意の担体を含むことができる。かかる担体としては、例えば、溶媒（例えば、水、アルコール等）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸、イプシロンアミノカプロン酸等）、保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル類、エデト酸ナトリウム、ホウ酸等）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ブドウ糖、プロピレングリコール等）などがあげられる。
【００２３】
本発明の医薬の投与対象としては、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル等）があげられる。
【００２４】
本発明の医薬は、点眼剤、貼付剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、経口剤等の剤形で用いられ、上記有効成分に加え、任意の担体、例えば医薬上許容され得る担体を含むことができる。
【００２５】
本発明の医薬は、上述の治療効果を奏する限りその投与経路は特に限定されないが、好ましくは眼局所投与される。眼局所投与用剤形には、例えば、点眼剤や眼軟膏剤があげられる。
例えば、本発明の医薬を点眼剤又は眼軟膏剤として用いる場合、安定剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン等）、溶解補助剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、マクロゴール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等）、懸濁化剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等）、乳化剤（例えば、ポリビニルピロリドン、大豆レシチン、卵黄レシチン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０等）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸、イプシロンアミノカプロン酸等）、粘稠剤（例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等の水溶性セルロース誘導体、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等）、保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル類、エデト酸ナトリウム、ホウ酸等）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ブドウ糖、プロピレングリコール等）、ｐＨ調整剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸等）、清涼化剤（例えば、ｌ−メントール、ｄ−カンフル、ｄ−ボルネオール、ハッカ油等）、軟膏基剤（例えば、白色ワセリン、精製ラノリン、流動パラフィン、植物油（オリーブ油、椿油、落花生油等）等）などを添加剤として加えることができる。これら添加剤の添加量は、添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度となるように添加すればよい。
本発明の医薬を点眼剤又は眼軟膏剤とする場合、製剤分野で通常用いられている方法に従って製造すればよく、例えば第１６改正日本薬局方、製剤総則、点眼剤の項及び眼軟膏剤の項に記載された方法に基づき製造することができる。
【００２６】
点眼剤の形態は、水性点眼剤（水性点眼液、水性懸濁点眼液、粘性点眼液等）、非水性点眼剤（非水性点眼液、非水性懸濁点眼液等）又はエマルション点眼剤などが挙げられる。
【００２７】
点眼剤のｐＨは、その点眼剤の形態によって適宜設定されるが、通常4〜8の範囲である。また、点眼剤が水性点眼液の場合、有効成分の溶解性の観点から、ｐＨは、6〜8に設定されることが特に好ましい。
【００２８】
点眼剤は通常、濾過滅菌、照射滅菌（例えば、電子線滅菌、紫外線滅菌、ガンマ線滅菌等）、オートクレーブ滅菌、乾熱滅菌などの方法により無菌化された製剤である。
【００２９】
点眼剤として製剤化される場合、液剤は、眼への滴下を容易にするための液滴量を制御可能な小径の注液孔を備えた点眼容器に収容されていることが好ましい。該容器の材質は、合成樹脂、ガラス、セルロース、パルプなどが用いられ、有効成分及び基剤の性質や使用量によって適宜選択される。スクイズ性及び耐久性の観点から、該容器は合成樹脂製が好ましい。合成樹脂の具体的な材質としては、ポリエチレン樹脂（例えば、低密度ポリエチレン又は高密度ポリエチレン）、ポリプロピレン樹脂、エチレン−プロピレン共重合体樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂等が挙げられる。
【００３０】
点眼容器は、別々に成形された容器本体と中栓部材とが嵌合された容器や、容器の成形と同時に液剤が密封充填される一体成形充填容器（例えば、ＷＯ２００４／００６８２６）等が挙げられる。一体成形充填容器を採用した場合、容器と液剤とが一環生産されるため、コスト面又は衛生面に優れている。点眼容器は、１回ずつ使い捨てにするユニットドーズ型の容器（例えば、特開平９−２０７９５９号）であってもよい。この容器を採用した場合、角膜に対して安全性の高い、防腐剤を配合しない製剤の処方化が可能となる。また、これらの容器は紫外線遮断性フィルムで密着包装されていてもよい。また、容器は、紫外線遮断性を高めるため、着色（茶色、緑色、青色、黄色等）されていてもよい。
【００３１】
本発明は、神経麻痺性角膜症又は糖尿病性角膜症の治療を必要とする対象に、本発明の化合物の有効量を投与することを含む、神経麻痺性角膜症又は糖尿病性角膜症の治療方法を提供する。
【００３２】
同様に本発明は、神経麻痺性角膜症もしくは糖尿病性角膜症を罹患するリスクがある、又は罹患が予想される対象に、本発明の化合物の有効量を投与することを含む、神経麻痺性角膜症又は糖尿病性角膜症の予防方法を提供する。前記対象としては、糖尿病を罹患している対象や、角膜ヘルペス、コンタクトレンズ装用、眼手術、加齢等のリスクファクターを有する対象が挙げられる。
【００３３】
糖尿病性角膜症は、角膜知覚の低下が認められる疾患でもあるので、本発明は、角膜知覚の低下の改善を必要とする対象に、本発明の化合物の有効量を投与することを含む、角膜知覚の低下の改善方法を提供する。
【００３４】
本発明は、角膜知覚の低下のリスクがある、又は低下が予想される対象に、本発明の化合物の有効量を投与することを含む、角膜知覚の低下の予防方法を提供する。前記対象としては、糖尿病を罹患している対象が挙げられる。
【００３５】
本発明は、角膜神経障害の治療を必要とする対象に、本発明の化合物の有効量を投与することを含む、角膜神経障害の治療方法を提供する。
【００３６】
本発明の化合物の有効量は、投与対象の年齢、体重、状態、治療目的等により一概に規定できないが、本発明の医薬をヒトに投与する場合には、通常０．０００１〜０．１ｗ／ｖ％、好ましくは０．００１〜０．０１ｗ／ｖ％、最も好ましくは０．００５ｗ／ｖ％の本発明の化合物を含む溶液を、１日３回〜４回、１回に片眼あたり１〜２滴、すなわち、１回当り約１０〜１００μＬの量が例示され、かかる濃度と容量の範囲内の溶液に含まれる化合物の量を有効量として例示することができる。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明を詳細に説明するため試験例を挙げるが、本発明はこれらによってなんら限定されるものではない。試験例中、特記しない限り、％はｗ／ｖ％を意味する。【００３８】
（試験例１）
ウサギ角膜知覚低下に対する化合物Ａの効果
1.使用動物
北山ラベスより購入した雄性日本白色種ウサギ（体重2.80〜3.32 kg）を使用した。動物は入荷後から試験終了日まで、室温23℃ ± 3℃、湿度55% ± 10% RH、12時間照明（08:00点灯、20:00消灯）に設定された飼育室内で飼育した。動物には固型飼料（ラボRストック、日本農産工業）を1日100〜120 g与え、動物飲料滅菌装置を通した市水を自動給水装置により自由に摂取させた。当該試験は、動物の愛護及び管理に関する法律（昭和48年10月1日法律第105号、最終改正：平成25年6月12日法律第38号）等に基づく動物実験倫理委員会の承認を受けて実施した。【００３９】
2.被験物質
被験物質として、［３−［２−［４−イソプロピル−２−（４−トリフルオロメチル）フェニル−５−チアゾリル］エチル］−５−メチル−１，２−ベンズイソキサゾール−６−イル］オキシ酢酸（以下、化合物Ａと称する）を用いた。化合物Ａは、0.005%となるように表1に示す基剤に溶解したものを点眼液として使用した。また、対照群として化合物Ａを含まない基剤（表１）のみからなる基剤点眼液を用いた。なお、角膜知覚測定者には、測定するウサギがいずれの点眼液を投与しているのかわからないように点眼液のラベルを暗号化した（単盲検法）。【００４０】
【表１】
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【００４１】
3.試験方法
1）群分け
角膜フラップ作製前にウサギの前眼部を肉眼観察し、異常を認めないウサギを選定した。次に、コシュ・ボネ角膜知覚計（LUNEAU社製）を用いて、図１の測定位置1及び2の角膜知覚を測定し、測定位置1及び2の角膜知覚閾値が共に15 mm以上のウサギを選定した。選定されたウサギ16匹を各群の角膜知覚閾値が均一になるように、化合物Ａ点眼液投与群及び基剤点眼液投与群の2群に8匹ずつ割り付けた。
2）角膜フラップの作製
キシラジン塩酸塩注射液（セラクタール2%注射液（登録商標）、バイエル薬品）とケタミン塩酸塩注射液（ケタラール筋注用500 mg（登録商標）、第一三共）の1:2混合液（0.9mL/kg）の筋肉内注射によりウサギに全身麻酔を施した後、0.4%オキシブプロカイン塩酸塩点眼液（ベノキシール点眼液0.4%（登録商標）、参天製薬）を用いて局所麻酔を施した。眼球を充分に露出させた後、マイクロケラトーム（MK-2000、ニデック社製）を用いて、130μm厚で直径8.6 mmの角膜フラップを作製した。手術顕微鏡下でフラップを復位させた後、麻酔から覚醒するまでの間、術部を上にしてウサギを横臥させた。覚醒後、0.3%ガチフロキサシン点眼液（ガチフロ点眼液（登録商標）、千寿製薬）を点眼投与した。
3）投与
フラップ作製翌日、フラップの剥離や角膜の感染症を認めず、また測定位置1〜4（図１）のいずれの位置でも知覚を認めないウサギに、化合物Ａ点眼液又は基剤点眼液を17日間点眼投与した。点眼投与は2時間以上の間隔をあけて1日4回（ただし、術翌日、術14、16及び21日後は1日2回、術4日後は1日3回とした。）、それぞれ処置眼に対して1回50μLずつ、マイクロピペットを用いて点眼した。術1、2、4、5及び6日後、化合物Ａ点眼液又は基剤点眼液の点眼投与10分以上前に、0.3%ガチフロキサシン点眼液を処置眼に点眼投与した。
4）角膜知覚測定
コシュ・ボネ角膜知覚計を用いて、フラップ作製翌日、作製1、2、3及び4週後に測定位置1及び2（図１）の角膜知覚を測定した。【００４２】
4.試験結果
試験の結果を図２及び図３に示す。化合物Ａ点眼液投与群の知覚は、基剤点眼液投与群の知覚よりも速やかに回復した。以上のことから、化合物Ａはフラップ作製によって損傷された神経の回復を促進し、神経障害に伴う角膜知覚の低下を早期に回復させることが明らかになった。【００４３】
（試験例２）
自然発症糖尿病ラット（Goto-Kakizaki（GK）ラット）に生じる角膜上皮障害に対する化合物Ａの効果
1.使用動物
日本クレアから購入した雄性GKラット（Wakuta M., et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007 48 590-596）を使用した（20匹）。GKラットは神経障害に伴う角膜上皮障害の所見が認められている動物である（Wang F., et al., Am J Pathol. 2012 181 2058-2066）。GKラットは、Wistarラットを起源としていることから、正常対照群としてWistarラットを使用した（7匹）。動物は入荷後から試験終了日まで、室温23℃ ± 3℃、湿度55% ± 10% RH、12時間照明（08:00点灯、20:00消灯）に設定された飼育室内で飼育した。動物には固型飼料（ラボMRストック、日本農産工業）を自由に摂取させ、また、動物飲料滅菌装置を通した市水を自動給水装置により自由に摂取させた。当該試験は、動物の愛護及び管理に関する法律（昭和48年10月1日法律第105号、最終改正：平成25年6月12日法律第38号）等に基づく動物実験倫理委員会の承認を受けて実施した。【００４４】
2.被験物質
被験物質には化合物Ａを用いた。化合物Ａは、0.005%となるように基剤（表２）に溶解したものを点眼液として使用した。また、対照群として化合物Ａを含まない基剤（表２）のみからなる基剤点眼液を用いた。【００４５】
【表２】
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【００４６】
3.試験方法
1) 群分け
点眼投与前に測定した血中グルコース濃度の平均値及び角膜上皮障害スコアの平均値が均一になるように、統計解析ソフトウェア（SAS clinical package ver. 5.0, SAS Institute Japan）を用いて、GKラットを化合物Ａ点眼液投与群に4匹、非投与群及び基剤点眼液投与群に8匹ずつ、3群に割り付けた。
2) 投与
化合物Ａ点眼液又は基剤点眼液を14日間点眼投与した。点眼投与は1日4回、それぞれ両眼に対して1回10 μLずつ、マイクロピペットを用いて実施した。なお、非投与群及びWistarラットについては投与を実施しなかった。
3) 血中グルコース濃度の測定
点眼投与前にグルコースCIIテストワコー（和光純薬工業）を用いて血中グルコース濃度を測定した。
4) 角膜上皮障害の観察
0.1%フルオレセインナトリウム（和光純薬工業）を5μL点眼投与し、スリットランプを用いて角膜上皮のフルオレセイン染色を観察することにより、角膜上皮障害の程度を判定した。異常所見の程度を詳細に示すため、McDonald-Shadduck法の判定基準に1項目追加し、これを当該試験の判定基準とした（表３）。角膜上皮障害のスコアは上・中・下3つの領域につきそれぞれ採点し、3つの領域のスコアを合算した。角膜上皮障害の観察は点眼投与2、4、6、8、11及び15日後に実施した。【００４７】
【表３】
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【００４８】
4.試験結果
表４に示すとおり、非投与群及び基剤点眼液投与群と比較して、化合物Ａ点眼液投与群はGKラットの角膜上皮障害を改善させることが明らかとなった。以上のことから、化合物Ａは糖尿病性角膜症の治療に有用である。【００４９】
【表４】
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【００５０】
糖尿病性角膜症は、糖尿病を背景とし、角膜知覚の低下が関与する疾患である。角膜には、i)サブスタンスP陽性神経線維が存在すること、ii)健常者でも涙液中にサブスタンスPあるいはサブスタンスPの代謝物が存在すること、iii)角膜知覚が低下した例では、涙液中のサブスタンスPが低下していることから、サブスタンスPが角膜上皮細胞に対するneurotropic factorとして作動していることが考えられている。また、知覚神経系の神経伝達物質であるサブスタンスPが成長因子と協調して角膜上皮創傷治癒を促進することが報告されている（西田輝夫著、角膜テキスト、164頁、2010年3月30日発行、エルゼビア・ジャパン株式会社発行）。このような知見に鑑みて、化合物Ａは角膜知覚の低下を改善することで、neurotropic factorの分泌を促進するため、角膜神経の損傷、変性又は麻痺を伴う角膜上皮障害の典型例である糖尿病性角膜症に特に有用である。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の医薬は、角膜知覚低下の改善作用を有するため、神経麻痺性角膜症の治療剤、さらには糖尿病の合併症である糖尿病性角膜症の治療剤として有用である。【００５２】
本出願は日本で出願された特願２０１５−１１６９７４を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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