(57)【要約】  ４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩を含む胆道癌治療剤を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する胆道癌治療剤。
【請求項２】
４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する胆道癌治療用医薬組成物。
【請求項３】
薬理学的に許容される塩が、メタンスルホン酸塩である請求項１に記載の治療剤または請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
さらに賦形剤を含有する請求項１〜３のいずれか１項に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項５】
胆道癌が肝内胆管癌、肝外胆管癌、胆嚢管癌、胆嚢癌または十二指腸乳頭部癌である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項６】
胆道癌が肝内胆管癌である、請求項５に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項７】
胆道癌が肝外胆管癌である、請求項５に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項８】
胆道癌が胆嚢管癌である、請求項５に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項９】
胆道癌が胆嚢癌である、請求項５に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項１０】
胆道癌が十二指腸乳頭部癌である、請求項５に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項１１】
４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩が、１日あたり１〜１００ｍｇの投与量で経口投与されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の治療剤または医薬組成物。
【請求項１２】
４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、胆道癌を治療する方法。
【請求項１３】
さらに少なくとも１種の抗腫瘍剤を当該患者に投与することを含む、請求項１２の方法。
【請求項１４】
胆道癌治療のための４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する医薬組成物。
【請求項１５】
胆道癌治療用医薬組成物を製造するための４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キナーゼ阻害作用を有する化合物を含有する胆道癌治療剤に関する。より詳細には、マルチ・チロシンキナーゼ阻害作用を有する化合物である４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する胆道癌治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
【化１】
2017030146.tif 000003
【０００３】
式（Ｉ）で表される４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ］−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（以下、化合物Ａと表記する場合がある）は、血管新生阻害作用（特許文献１）および腫瘍の悪性化に関与することが報告されている複数のチロシンキナーゼ（非特許文献１〜非特許文献５）に対する阻害作用（特許文献２〜特許文献５）などを有する。化合物Ａのメタンスルホン酸塩（メシル酸塩）は、甲状腺癌および腎細胞癌の治療薬として承認されており、肺癌、黒色腫、子宮内膜癌、神経膠腫、肝細胞癌、卵巣癌などの種々の腫瘍に対しても臨床試験が行われている。【０００４】
胆道癌は、肝内胆管、肝外胆管、胆嚢管、胆嚢ならびに十二指腸乳頭部の癌であり、その発生率は低いものの、予後の悪い腫瘍として知られている。胆道癌の根治的な治療方法は外科出術による摘出であるが、診断時に手術可能である場合は少なく、手術が可能であったとしても完全に摘出しきれない場合が多い。手術ができない場合には、ゲムシタビンとシスプラチンの併用投与が行われている（非特許文献６、非特許文献７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００４−０５３９０８号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００４−２５３２０５号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１０−１０５０３１号明細書
【特許文献４】米国特許出願公開第２００９−２０９５８０号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２００９−２６４４６４号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Lasota et al., "Mutations in Exons 9 and 13 of KIT Gene Are Rare Events in Gastrointestinal Stromal Tumors", American Journal of Pathology, vol.157, p.1091-1095, 2000.
【非特許文献２】Berdel et al., "Recombinant Human Stem Cell Factor Stimulates Growth of a Human Glioblastoma Cell Line Expressing c-kit Protooncogene1", Cancer Research, vol.52, p.3498-3502, 1992.
【非特許文献３】Lennartsson et al., "The stem cell factor receptor/c-Kit as a drug target in cancer", Current Cancer Drug Targets, vol.6, p.65-75, 2006.
【非特許文献４】Turner et al., "Fibroblast growth factor signalling: from development to cancer", Nature Reviews Cancer, vol.10, p.116-129, 2010.
【非特許文献５】Wells et al., "Targeting the RET Pathway in Thyroid Cancer", Clinical Cancer Research, vol.15, p.7119-7123, 2009.
【非特許文献６】Juan et al., " Cisplatin plus gemcitabine versus gemcitabine for biliary tract cancer", The New England Journal of Medicine, vol.362, p.1273-1281, 2010.
【非特許文献７】Ang, "Role of the fibroblast growth factor receptor axis in cholangiocarcinoma", Journal of Gastroenterology and Hepatology, vol.30, p.1116-1122, 2015.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、これまでに報告されている胆道癌治療剤による治療効果は十分ではなく、さらに新しい治療剤の開発が待たれている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
このような状況に鑑み、本発明者らは鋭意検討を進めた結果、化合物Ａが胆道癌に対して、高い治療効果を示すことを見出し、本発明を完成させた。【０００９】
すなわち、本発明は以下の［１］〜［１７］を提供する。
［１］  化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩を含有する胆道癌治療剤。
［２］  化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩を含有する胆道癌治療用医薬組成物。
［３］  化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、胆道癌を治療する方法。
［４］  さらに少なくとも１種の抗腫瘍剤を当該患者に投与することを含む、上記方法。
［５］  胆道癌治療のための化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩。
［６］  胆道癌治療のための化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩を含有する医薬組成物。
［７］  化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩の胆道癌治療のための使用。
［８］  胆道癌治療剤または胆道癌治療用医薬組成物を製造するための化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩の使用。
［９］  さらに賦形剤を含有する、上記治療剤または医薬組成物。
［１０］  上記化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩が、化合物Ａのメタンスルホン酸塩である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１１］  胆道癌が肝内胆管癌、肝外胆管癌、胆嚢管癌、胆嚢癌または十二指腸乳頭部癌である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１２］  胆道癌が肝内胆管癌である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１３］  胆道癌が肝外胆管癌である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１４］  胆道癌が胆嚢管癌である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１５］  胆道癌が胆嚢癌である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１６］  胆道癌が十二指腸乳頭部癌である、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
［１７］  化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩が、１日あたり１〜１００ｍｇの投与量で経口投与されることを特徴とする、上記治療剤、医薬組成物、治療方法、使用または化合物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、マルチ・チロシンキナーゼ阻害作用を有する化合物Ａを含有する胆道癌治療剤を提供する。実施例に記載した方法で、胆道癌腫瘍モデルまたは胆道癌患者に化合物Ａを投与することにより、化合物Ａによる腫瘍体積の縮小効果を確認することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ヒト肝外胆管癌細胞株皮下移植モデルに対する化合物Ａの抗腫瘍効果を示すグラフである。
【図２】ヒト肝外胆管癌細胞株皮下移植モデルにおける第１５日目の各群の腫瘍体積の平均値を示すグラフである。
【図３】ヒト胆管癌細胞株皮下移植モデルに対する化合物Ａの抗腫瘍効果を示すグラフである。
【図４】ヒト胆管癌細胞株皮下移植モデルにおける第１５日目の各群の腫瘍体積の平均値を示すグラフである。
【図５】ヒト十二指腸乳頭部癌細胞株皮下移植モデルに対する化合物Ａの抗腫瘍効果を示すグラフである。
【図６】ヒト十二指腸乳頭部癌細胞株皮下移植モデルにおける第１５日目の各群の腫瘍体積の平均値を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に本発明の実施の形態について説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
【００１３】
本出願は、日本で出願された特願２０１５−１６２００４に優先権を主張するものである。本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
【００１４】
本発明に係る化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩は、特許文献１に記載された方法により製造することができる。化合物Ａの薬学的に許容される塩の一例は、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）である。
【００１５】
薬理学的に許容される塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩、無機塩基との塩、有機塩基との塩、酸性または塩基性アミノ酸との塩などがあげられる。
【００１６】
無機酸との塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などとの塩があげられる。有機酸との塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、ステアリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸（メシル酸塩）、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩があげられる。
【００１７】
無機塩基との塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩などがあげられる。有機塩基との塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、メグルミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩があげられる。
【００１８】
酸性アミノ酸との塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩があげられる。塩基性アミノ酸との塩は特定の塩の種類に限定されないが、例えば、アルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩があげられる。
【００１９】
化合物Ａの薬理学的に許容される塩の一態様は、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）である。
【００２０】
化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩の投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投与間隔、医薬製剤の種類などに応じて、適宜選択することができる。通常、成人（体重６０ｋｇ）に対して経口投与する場合、１日あたり０．１〜５００ｍｇ、好ましくは０．５〜３００ｍｇ、さらに好ましくは１．０〜１００ｍｇである。これを１日１回または２〜３回に分けて投与することができる。成人（体重６０ｋｇ）に対して経口投与する場合の化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩の投与量の一態様は、フリー体の化合物Ａに換算して１日あたり２４ｍｇである。
【００２１】
本発明の治療剤は、例えば、第十六改正日本薬局方（ＪＰ）、米国薬局方（ＵＳＰ）または欧州薬局方（ＥＰ）に記載された方法で製剤化することができる。
【００２２】
本発明の治療剤は、錠剤、顆粒剤、細粒剤、粉剤、カプセル剤などの固形製剤または液剤、ゼリー剤、シロップ剤などの形態で、経口投与することができる。
【００２３】
また、本発明の治療剤は注射剤、坐剤、軟膏剤、パップ剤などの形態で、非経口的に投与してもよい。
【００２４】
経口用固形製剤を調製する場合には、主薬、すなわち化合物Ａまたはその薬理学的に許容される塩に、添加剤として、賦形剤、さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤などとすることができる。上記添加剤は、適宜組み合わせて製剤化することができる。また、これらの錠剤、顆粒剤などは、必要に応じてコーティングを施してもよい。
【００２５】
賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、リン酸水素カルシウムなどがあげられる。
【００２６】
結合剤としては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、などがあげられる。
【００２７】
崩壊剤としては、例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスポビドンなどがあげられる。
【００２８】
滑沢剤としては、例えば、タルク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ポリエチレングリコールなどがあげられる。
【００２９】
着色剤としては、例えば、三二酸化鉄、黄色三二酸化鉄、カルミン、β−カロチン、酸化チタン、リン酸リボフラビンナトリウム、黄色アルミニウムレーキ、コチニールなどがあげられる。
【００３０】
矯味矯臭剤としては、例えば、ココア末、アスコルビン酸、酒石酸、ハッカ油、ボルネオール、桂皮末などがあげられる。
【００３１】
注射剤を調製する場合には、必要により主薬にｐＨ調整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤などを添加し、常法により静脈、皮下、筋肉内注射剤、点滴静注剤とすることができる。その際必要により、常法により凍結乾燥物とすることもできる。
【００３２】
ｐＨ調整剤や緩衝剤としては、例えば、塩酸、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸２水素ナトリウムグリジン、リン酸、リン酸２水素ナトリウム、リン酸１水素ナトリウム、水酸化ナトリウム、酢酸、酢酸ナトリウム、メグルミンなどがあげられる。
【００３３】
懸濁化剤としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０、アラビアゴム、トラガント末、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートなどがあげられる。
【００３４】
溶解補助剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリエタノールアミン、などがあげられる。
【００３５】
安定化剤としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウムなどがあげられる。
【００３６】
等張化剤としては、例えば、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトールなどがあげられる。
【００３７】
保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどがあげられる。
【００３８】
本明細書において胆道癌とは、肝内胆管癌、肝外胆管癌、胆嚢管癌、胆嚢癌または十二指腸乳頭部癌を意味する。肝内胆管癌および肝外胆管癌を総じて、胆管癌という。上記胆道癌には、これらの癌が胆道以外の部位に転移したものも含まれる。
【実施例】
【００３９】
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。【００４０】
［実施例１］ヒト肝外胆管癌細胞株（ＴＦＫ−１株）皮下移植モデルに対する化合物Ａの腫瘍増殖阻害作用
各群６例のヌードマウス（ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊ、雌、日本チャールズリバー株式会社）を使用して、化合物Ａを投与した場合の抗腫瘍効果を評価した。ヒト由来の肝外胆管癌細胞株ＴＦＫ−１（理研バイオリソースセンター）を、ＲＰＭＩ１６４０培地（和光純薬工業株式会社、１０％ＦＢＳ含有）に、２×１０８個／ｍＬの濃度となるように懸濁し、十分に混和した。その混和液をさらに等量のマトリゲル基底膜マトリクス（コーニング社）と混合して１×１０８個／ｍＬの細胞混和液を調製し、各マウスの右脇腹皮下部に、０．１ｍＬずつ移植した。移植から７日後に、腫瘍の長径および短径を電子デジタルノギス（ＡＢＳデジマチックキャリパ、株式会社ミツトヨ）で測定した。各群の腫瘍体積の平均値がほぼ等しくなるように、マウスを群分けした。なお、腫瘍の体積を、以下の式に従って算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２【００４１】
化合物Ａのメシル酸塩を０．０５、０．１５、０．５、１．５および５ｍｇ／ｍＬの濃度となるように、３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液に溶解した。【００４２】
対照群、化合物Ａ群（１、３、１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇ）を設定した。対照群には３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液、化合物Ａ群にはそれぞれの用量の化合物Ａのメシル酸塩を含む３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液を、それぞれ２０ｍＬ／ｋｇずつ、１日１回、経口投与した。投与期間は１４日間とした。【００４３】
投与開始日（１日目）、４、８、１１および投与最終日の翌日（１５日目）に、腫瘍の体積を測定した。その経日的変化を図１に示し、第１５日目の各群の腫瘍体積の平均値を図２に示した。また、第１５日目の腫瘍体積をもとに、Ｄｕｎｎｅｔｔ多重検定にて対照群と各化合物Ａ群の比較を行い、０．０５未満のＰ値を有意差であるとみなした。その結果、化合物Ａは、ヒト肝外胆管癌由来細胞株（ＴＦＫ−１株）皮下移植モデルにおいて、用量依存的に抗腫瘍効果を有することが明らかとなった（図１、図２）。図２中の＊＊＊＊は、統計学的に有意に（Ｐ値は０．０００１未満）腫瘍増殖が阻害されたことを示す。【００４４】
［実施例２］ヒト胆管癌細胞株（ＯＺ株）皮下移植モデルに対する化合物Ａの腫瘍増殖阻害作用
各群５例のヌードマウス（ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊ、雌、日本チャールズリバー株式会社）を使用して、化合物Ａを投与した場合の抗腫瘍効果を評価した。ヒト由来の胆管癌細胞株ＯＺ（ＪＣＲＢ細胞バンク）を、Ｗｉｌｌｉａｍｓ’Ｅ（シグマアルドリッチ社、２ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｌ−グルタミン，１０％ＦＢＳ含有）に、２×１０８個／ｍＬの濃度となるように懸濁し、十分に混和した。その混和液をさらに等量のマトリゲル基底膜マトリクス（コーニング社）と混合して１×１０８個／ｍＬの細胞混和液を調製し、各マウスの右脇腹皮下部に、０．１ｍＬずつ移植した。移植から１３日後に、腫瘍の長径および短径を電子デジタルノギス（ＡＢＳデジマチックキャリパ、株式会社ミツトヨ）で測定した。各群の腫瘍体積の平均値がほぼ等しくなるように、マウスを群分けした。なお、腫瘍の体積を、以下の式に従って算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２【００４５】
化合物Ａのメシル酸塩を０．０５、０．１５、０．５、１．５および５ｍｇ／ｍＬの濃度となるように、３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液に溶解した。【００４６】
対照群、化合物Ａ群（１、３、１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇ）を設定した。対照群には３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液、化合物Ａ群にはそれぞれの用量の化合物Ａのメシル酸塩を含む３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液を、それぞれ２０ｍＬ／ｋｇずつ、１日１回、経口投与した。投与期間は１４日間とした。【００４７】
投与開始日（１日目）、５、８、１２および投与最終日の翌日（１５日目）に、腫瘍の体積を測定した。その経日的変化を図３に示し、第１５日目の各群の腫瘍体積の平均値を図４に示した。また、第１５日目の腫瘍体積をもとに、Ｄｕｎｎｅｔｔ多重検定にて対照群と各化合物Ａ群の比較を行い、０．０５未満のＰ値を有意差であるとみなした。その結果、化合物Ａは、ヒト胆管癌由来細胞株（ＯＺ株）皮下移植モデルにおいて、用量依存的に抗腫瘍効果を有することが明らかとなった（図３、図４）。図４中の＊＊＊＊は、統計学的に有意に（Ｐ値は０．０００１未満）腫瘍増殖が阻害されたことを示す。【００４８】
［実施例３］ヒト十二指腸乳頭部癌細胞株（ＳＮＵ−８６９株）皮下移植モデルに対する化合物Ａの腫瘍増殖阻害作用
各群６例のヌードマウス（ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊ、雌、日本チャールズリバー株式会社）を使用して、化合物Ａを投与した場合の抗腫瘍効果を評価した。ヒト由来のヒト十二指腸乳頭部癌細胞株ＳＮＵ−８６９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏａｒｒａｙ社）を、ＲＰＭＩ１６４０培地（和光純薬工業株式会社、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０％ＦＢＳ含有）に、２×１０８個／ｍＬの濃度となるように懸濁し、十分に混和した。その混和液をさらに等量のマトリゲル基底膜マトリクス（コーニング社）と混合して１×１０８個／ｍＬの細胞混和液を調製し、各マウスの右脇腹皮下部に、０．１ｍＬずつ移植した。移植から７日後に、腫瘍の長径および短径を電子デジタルノギス（ＡＢＳデジマチックキャリパ、株式会社ミツトヨ）で測定した。各群の腫瘍体積の平均値がほぼ等しくなるように、マウスを群分けした。なお、腫瘍の体積を、以下の式に従って算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）／２【００４９】
化合物Ａのメシル酸塩を０．０５、０．１５、０．５、１．５および５ｍｇ／ｍＬの濃度となるように、３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液に溶解した。【００５０】
対照群、化合物Ａ群（１、３、１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇ）を設定した。対照群には３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液、化合物Ａ群にはそれぞれの用量の化合物Ａのメシル酸塩を含む３ｍｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液を、それぞれ２０ｍＬ／ｋｇずつ、１日１回、経口投与した。投与期間は１４日間とした。【００５１】
投与開始日（１日目）、４、８、１１および投与最終日の翌日（１５日目）に、腫瘍の体積を測定した。その経日的変化を図５に示し、第１５日目の各群の腫瘍体積の平均値を図６に示した。また、第１５日目の腫瘍体積をもとに、Ｄｕｎｎｅｔｔ多重検定にて対照群と各化合物Ａ群の比較を行い、０．０５未満のＰ値を有意差であるとみなした。その結果、化合物Ａは、ヒト十二指腸乳頭部癌細胞株（ＳＮＵ−８６９株）皮下移植モデルにおいて、用量依存的に抗腫瘍効果を有することが明らかとなった（図５、図６）。図６中の＊＊＊＊は、統計学的に有意に（Ｐ値は０．０００１未満）腫瘍増殖が阻害されたことを示す。【００５２】
［実施例４］ゲムシタビン併用化学療法後の切除不能な胆道癌患者を対象とした化合物Ａの非盲検、多施設共同の第２相臨床試験
本治験は、切除不能の胆道癌に対しゲムシタビンを含む２剤併用化学療法（ゲムシタビンおよびシスプラチン、またはゲムシタビンおよび他の白金製剤もしくはフッ化ピリミジン製剤の２剤併用化学療法）の前治療歴１レジメンを有する患者を対象とした多施設共同、単群、非盲検の臨床試験であった。【００５３】
本治験は、投与前期、投与期、追跡期の３期で構成された。投与前期では、２１日以内にスクリーニングを実施した。投与期は、各サイクルで治験薬である化合物Ａのメシル酸塩の投与および６〜８週毎の腫瘍評価から構成された。追跡期は、投与中止日以降すぐに開始し、被験者による同意撤回または本治験の終了まで、被験者が生存している期間、継続した。【００５４】
治験薬の化合物Ａのメシル酸塩は、２８日を１サイクルとして化合物Ａのフリー体換算で２４ｍｇを１日１回経口投与され、病勢の進行、許容できない有害事象または被験者による同意撤回などがあるまで投与を継続した。【００５５】
本治験の主要目的は、ゲムシタビン併用化学療法後の切除不能な胆道癌患者に対する治験薬の客観的奏効率（ＯＲＲ）を評価することであった。【００５６】
本治験の副次目的は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、臨床的有用率（ＣＢＲ）、有害事象（ＡＥｓ）および重篤な有害事象（ＳＡＥｓ）が発現した被験者の数ならびに血中濃度を評価することであった。ここで、ＯＲＲは、最良総合効果（ＢＯＲ）が完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）の被験者の割合と定義される。ＰＦＳは、治験薬の初回投与日から最初にイベントが確認された日（病勢の進行または死因を問わない死亡のうち、いずれか早い方）までの期間と定義される。ＯＳは、治験薬の初回投与日から死因を問わない死亡日までの期間と定義される。ＤＣＲは、ＣＲ、ＰＲまたは安定（ＳＤ）の被験者の割合として定義される。また、ＣＢＲは、ＣＲ、ＰＲまたは長期ＳＤの被験者の割合として定義される。長期ＳＤはＳＤ期間が２３週以上とする。【００５７】
以下の全ての基準を満たす被験者を、本治験の対象とした。
（１）組織学的または細胞学的に腺癌と診断された胆道癌（肝内胆管癌、肝外胆管癌、胆嚢癌、Ｖａｔｅｒ膨大部癌）患者
（２）切除不能（例：局所進行または転移を有する）の胆道癌を有する患者
（３）切除不能の胆道癌に対してゲムシタビンを含む２剤併用化学療法（例：ゲムシタビンおよびシスプラチン）の前治療を１レジメン受けており、それ以外の胆道癌に対する化学療法を受けていない患者
ここで、術後補助化学療法を受けた患者は、当該療法が完了しており、完了後６ヵ月間再発が認められない場合には適格とする。
（４）以下の基準を満たす測定可能な病変を有する患者
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ  １．１（ＲＥＣＩＳＴ１．１）に基づき、ＣＴまたはＭＲＩを用いて、非リンパ節の場合は長径が１．０ｃｍ以上またはリンパ節の場合は短径が１．５ｃｍ以上の継続的に測定可能な病変を少なくとも１つ有する。
放射線外照射療法（ＥＢＲＴ）またはラジオ波（ＲＦ）焼灼などの局所療法を受けた病変を標的病変とする場合は、ＲＥＣＩＳＴ１．１に基づく病勢の進行が認められていること。
（５）Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｓｔａｔｕｓが０〜１の患者
（６）本治験薬投与開始後、３ヵ月以上の生存が見込まれる患者
（７）同意取得時の年齢が２０歳以上の男性または女性
（８）脱毛、不妊および選択基準の範囲内の有害事象を除く、化学療法または放射線療法に関連した全ての毒性がＣｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＡＣＡＥ  ｖ４．０３）でＧｒａｄｅ０〜１まで回復している患者
（９）降圧剤使用の有無にかかわらず血圧（ＢＰ）が十分にコントロールされている（定義：収縮期血圧１５０ｍｍＨｇ以下および拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以下、かつ、本治験薬投与開始前の１週間以内に降圧剤の変更がない）患者
（１０）主要臓器機能および抗凝固能が十分保たれている患者
１）好中球数（ＡＮＣ）≧１５００／ｍｍ３（≧１．５×１０３／μＬ）
２）血小板数≧１００，０００／ｍｍ３（≧１００×１０９/Ｌ）
３）ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ
４）総ビリルビン≦２．０ ｍｇ／ｄＬ（非抱合型高ビリルビン血症またはＧｉｌｂｅｒｔ症候群の場合を除く）
５)ＡＬＰ、ＡＳＴ およびＡＬＴ≦３．０×ＵＬＮ（施設基準値上限）（肝転移を有する場合は≦５．０×ＵＬＮ）
６）クレアチニン・クリアランス≧４０ ｍＬ／ｍｉｎ（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ−Ｇａｕｌｔ法）
７）プロトロンビン時間国際標準比（ＰＴ−ＩＮＲ）≦１．５
（１１）自由意志により本治験参加に文書で同意した患者
（１２）治験実施計画書を遵守する意思があり、かつ、遵守することができる患者【００５８】
以下の基準のいずれかに該当する被験者は、本治験の対象から除外した。
（１）本治験薬投与開始前の２１日以内に抗がん治療（ＢＳＣを除く）を受けた患者
（２）本治験薬投与開始前の２１日以内に大手術（麻酔または呼吸補助を要する手術）を受けた患者、または本治験中に手術が計画されている患者（胆道ドレナージを除く）
（３）中等度、高度またはドレナージを要する腹水を有する患者
（４）尿試験紙で２＋以上の蛋白尿を有する患者（定量評価でＧｒａｄｅ１以下の場合は適格とする）
（５）消化管の吸収不良、または治験責任医師もしくは治験分担医師により本治験薬の吸収に影響を与える可能性があると判断されるその他の身体状態を示す患者
（６）本治験薬投与開始前の６ヵ月以内に、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ分類でクラス２以上のうっ血性心不全、不安定狭心症、心筋梗塞または臨床的意義のある心血管障害に関連した重篤な不整脈を有する患者
（７）ＱＴ／ＱＴｃ間隔延長（ＱＴｃＦ＞４８０ｍｓ）を有する患者
（８）ＨＩＶ抗体検査で陽性と判明している患者
（９）全身療法を要する活動性の感染症を有する患者
（１０）出血性もしくは血栓性疾患を有する、またはＩＮＲモニタリングを要するワーファリンもしくは同種の薬剤などの抗凝固薬（低分子量へパリンの使用は可）を慢性使用している患者
（１１）本治験薬投与開始前の２１日以内に消化管出血または活動性喀血（小さじ１／２以上の鮮血）が認められた患者
（１２）本治験薬投与開始前の２４ヵ月以内に活動性の悪性腫瘍を有する患者（胆道癌、完全に処置された非浸潤性メラノーマ、皮膚の基底細胞癌または扁平上皮癌、非浸潤性子宮頚部癌および早期胃癌／大腸癌は除く）
（１３）髄膜癌腫症と診断された患者
（１４）脳または硬膜下転移を有する患者。ただし、本治験薬投与開始の２８日以上前に、局所の治療が既に完了しており、当該転移の治療として副腎皮質ホルモンの投与を中止している患者は除く。本治験薬投与開始の２８日以上前に脳転移の徴候（例えば放射線検査上）または症状が安定していなければならない。
（１５）本治験薬または賦形剤の成分に忍容性がないと判明している患者
（１６）本治験薬投与開始前の２４ヵ月以内に薬物もしくはアルコールの依存または乱用の既往がある患者
（１７）医学的またはその他の理由により、治験責任医師または治験分担医師が本治験の参加対象として不適格と判断した患者
（１８）女性の場合には、スクリーニング時またはベースライン時に、授乳中または妊娠している患者（ヒト絨毛性ゴナドトロピン［ｈＣＧまたはβ−ｈＣＧ］検査で陽性が確認された患者）。スクリーニング時の検査が本治験薬投与開始より３日以上前に行われた場合には、当該検査で陰性であったとしても、再度検査をする必要がある。
（１９）生殖能力のある男性および妊娠する可能性のある女性の場合、本人およびそのパートナーが治験期間を通じて医学的に適切な避妊方法を用いることに同意しない患者
上記避妊方法においては、コンドーム、避妊用スポンジ、避妊用フォーム、避妊用ゼリー、避妊用ペッサリーもしくは避妊リングを使用、または本治験薬投与開始の２８日以上前から経口（経皮または経膣も可能）の避妊薬を使用すること。【００５９】
中間解析の結果
本臨床試験の中間解析を行った。中間解析対象の患者総数は１７人であり、そのうち肝外胆管癌患者は３人、肝内胆管癌患者４人、胆嚢癌患者は９人、十二指腸乳頭部癌患者は１人であった。
中間解析の結果、部分奏効（ＰＲ）は１人（５．９％）、安定（ＳＤ；６週以上）は１３人（７６．５％）であった。また、ＳＤ１３人のうち８人において、腫瘍縮小傾向が確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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