(57)【要約】【課題】  高純度のプラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、簡単な操作で製造する方法を提供する。【解決手段】  この製造方法は、生物系素材から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程（イ）ならびに前記工程（イ）で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解する工程（ロ）を含む。  これにより、高純度のプラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、簡単な操作で製造することができる。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物系素材から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程（イ）
ならびに
前記工程（イ）で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解する工程（ロ）
を含むこと
を特徴とするエーテルリン脂質の製造方法。
【請求項２】
前記非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液は、
ヘキサン・イソプロパノール混合液であること
を特徴とする請求項１に記載のエーテルリン脂質の製造方法。
【請求項３】
前記工程（ロ）に付した後、精製工程に付すことにより、精製されたエーテルリン脂質を得る工程
を含むこと
を特徴とする請求項１又は２に記載のエーテルリン脂質の製造方法。
【請求項４】
前記精製工程は、
溶液分配によるものであること
を特徴とする請求項３に記載のエーテルリン脂質の製造方法。
【請求項５】
前記溶液分配は、
脂質をヘキサンに抽出して、アセトン又は水によって分配するものであること
を特徴とする請求項４に記載のエーテルリン脂質の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、エーテルリン脂質の製造方法に関するものである。
より詳しくは、高純度のエーテルリン脂質を、簡単な操作で製造する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脂質とは、分子中に長鎖脂肪酸又は類似の炭化水素鎖を有し、生体内に存在するか、生物に由来する物質を指す。
この脂質は、単純脂質と複合脂質に分類することができる。
単純脂質は、Ｃ、ＨおよびＯより構成され、一般にアセトンに可溶で、単純脂質のトリアシルグリセロールは、動物体では、脂肪組織にエネルギーの貯蔵体として存在する。【０００３】
一方、複合脂質は、リン酸のＰや塩基のＮなどを含む脂質群である。
したがって、複合脂質は、疎水性部分（脂肪酸部分）と親水性部分（リン酸や塩基の部分）からなるもので、両親媒性を示す。
一般的には、前記単純脂質がアセトンに可溶であるのに対し、複合脂質はアセトンに不溶である。
このような複合脂質は、生体膜の構成成分となっている。【０００４】
前記複合脂質は、以下のように大別することができる。
１）グリセロリン脂質；
ホスファチジルコリン（別名レシチン）、ホスファチジルエタノールアミンなどが属する。
２）スフィンゴリン脂質；
スフィンゴミエリン、セラミドシリアチンなどが属する。
３）スフィンゴ糖脂質；
セレブロシド、スルファチド、ガングリオシドなどが属する。
および
４）グリセロ糖脂質；
微生物や高等植物に存在するジアシルグリセロールに種々の糖が結合したもの
などがある。
なお、前記２）スフィンゴリン脂質および３）のスフィンゴ糖脂質を総称して、スフィンゴ脂質と呼ばれる。【０００５】
前記グリセロリン脂質は、グリセロールを骨格に持つリン脂質の総称で、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンなどがある。
このグリセロリン脂質は、非極性部分とエステル結合（アシル結合）しているものが多いが、グリセロールの１位（ｓｎ−１）に、ビニルエーテル結合（アルケニル結合）あるいはエーテル結合（アルキル結合）したものがある。
前記ビニルエーテル結合したものは、プラズマローゲンとも呼ばれている。
前記ビニルエーテル結合およびエーテル結合を持つグリセロリン脂質を合わせて、エーテルリン脂質と呼ばれている。【０００６】
リン脂質は、生体膜の構成成分として重要である。
なかでもエーテルリン脂質であるプラズマローゲンは、哺乳動物の生体膜のリン脂質の約１８％を占めている。
特に、脳神経、心筋、骨格筋  白血球、精子に多い。
プラズマローゲンは、ドコサヘキサエン酸やアラキドン酸などの多価不飽和脂肪酸と多く結合している。
したがって、これらの多価不飽和脂肪酸から産生する、プロスタグランヂンやロイコトリエンなどの細胞間シグナルの、２次メッセンジャーの貯留所となっているだけでなく、細胞融合、イオン移送など重要な働きをしている。【０００７】
さらに、プラズマローゲンのビニルエーテル結合（アルケニル結合）が、特に酸化ストレスに敏感であるため、細胞の抗酸化の役目もしている。
哺乳動物においても、少量ではあるがアルキル結合を有するエーテルリン脂質が存在する。
特に、ラットの脳の海馬には、アルキル結合を持つホスファチジルコリン、フォスファチジルエタノラミンを確認した。
さらに、摂取されたエーテル結合（アルキル結合）を持つリン脂質は、哺乳動物ではプラズマローゲンに転化されることが知られている。【０００８】
最近、プラズマローゲン型グリセロリン脂質は、例えば、国際公開第２０１１／０８３８２７号（特許文献１）に示されるように、脳神経細胞新生効果を有することが報告されている。
さらに、国際公開第２０１２／０３９４７２号（特許文献２）や、Ｉｆｕｋｕら，Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｇｔｉｏｎ，９：１９７（２０１２）（非特許文献１）に示されるように、プラズマローゲン型グリセロリン脂質は、中枢神経系炎症を引き起こす原因の一つと考えられているグリア細胞の増加を抑制し、中枢神経系炎症を改善する効果を有し、特にアルツハイマー病などの神経変性疾患の予防および治療に効果的であることが指摘されている。【０００９】
さらに、前記プラズマローゲン型グリセロリン脂質は、例えば、特許文献３〜５に示されるように、ニワトリ表皮、鶏ムネ肉などの鳥組織から容易にかつ大量に得られることが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０８３８２７号（請求の範囲）
【特許文献２】国際公開第２０１２／０３９４７２号（請求の範囲）
【特許文献３】特開２００８−１７９５８８号公報（特許請求の範囲）
【特許文献４】国際公開第２００８／１４６９４２号（請求の範囲）
【特許文献５】国際公開第２０１０／０４７４０４号（請求の範囲）
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ifuku ら，Journal of Neuroinflammagtion， 9: 197 (2012)
【非特許文献２】Y.Yamashitaら，J Oleo Sci，63，423-430 (2014)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従来、食品、動物組織などの総脂質から高純度のリン脂質を得るためには、クロロホルム／メタノール系による抽出工程に付したのち、カラムクロマトグラフィーで中性脂質とリン脂質を分離する精製法を利用することが一般的で、複雑な手順が必要であった。【００１３】
前記特許文献３〜５に記載されている製造方法は、ニワトリ表皮、鶏ムネ肉などの鳥組織から、プラズマローゲン型グリセロリン脂質を、容易かつ大量に製造するものである。
しかしながら、これらの製造方法は、エーテルリン脂質ないしプラズマローゲン型グリセロリン脂質の簡単な製造方法としては満足のいくものではなかった。【００１４】
前記非特許文献２に記載されている製造方法は、手順も複雑で、純度の点において不十分であった。
したがって、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドロームや、種々の感染症や免疫異常の治療および改善の効果において優れた、プラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、高純度かつ簡単な操作で製造できる方法が求められている。【００１５】
この発明はかかる現状に鑑み、高純度のプラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、簡単な操作で製造する方法を提供することを目的として鋭意検討を行なった。【００１６】
その結果、生物系素材を特定の工程に付すことによって、高純度のプラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、簡単な操作で製造することができることを見出して、この発明を完成させたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
生物系素材から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程（イ）
ならびに
前記工程（イ）で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解する工程（ロ）
を含むこと
を特徴とするエーテルリン脂質の製造方法である。【００１８】
この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載のエーテルリン脂質の製造方法において、
前記非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液は、
ヘキサン・イソプロパノール混合液であること
を特徴とするものである。【００１９】
この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項１又は２に記載のエーテルリン脂質の製造方法において、
前記工程（ロ）に付した後、精製工程に付すことにより、精製されたエーテルリン脂質を得る工程
を含むこと
を特徴とするものである。【００２０】
この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項３に記載のエーテルリン脂質の製造方法において、
前記精製工程は、
溶液分配によるものであること
を特徴とするものである。【００２１】
この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項４に記載のエーテルリン脂質の製造方法において、
前記溶液分配は、
脂質をヘキサンに抽出して、アセトン又は水によって分配するものであること
を特徴とするものである。
【発明の効果】
【００２２】
この発明のエーテルリン脂質の製造方法は、生物系素材から、その総脂質を、非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程（イ）ならびに前記工程（イ）で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解する工程（ロ）を含むもので、この製造方法によれば、高純度のエーテルリン脂質を簡単な操作で得ることができる。【００２３】
特に、この発明のエーテルリン脂質の製造方法においては、カラムクロマトグラフィーを使用することなく、脂質をヘキサンに抽出して、アセトン又は水によって分配するだけで、より高い純度のエーテルリン脂質を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ＨＰＬＣチャートであって、  図１（ａ）は、アサリ由来の総リン脂質のＨＰＬＣチャートを、図１（ｂ）は、精製されたアサリ由来のエーテルリン脂質のＨＰＬＣチャートを示す。
【図２】図２は、ＨＰＬＣチャートであって、  図２（ａ）は、シジミ由来の総リン脂質のＨＰＬＣチャートを、図２（ｂ）は、精製されたシジミ由来のエーテルリン脂質のＨＰＬＣチャートを示す。
【図３】図３は、ＨＰＬＣチャートであって、  図３（ａ）は、鶏胸肉由来の総リン脂質のＨＰＬＣチャートを、図３（ｂ）は、精製された鶏胸肉由来のエーテルリン脂質のＨＰＬＣチャートを示す。
【図４】図４は、ＨＰＬＣチャートであって、  図４（ａ）は、鶏胸肉由来のエーテルリン脂質の、全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の含有率を示すＨＰＬＣチャートを、図４（ｂ）は、アサリ由来のエーテルリン脂質の全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の含有率を示すＨＰＬＣチャートを、図４（ｃ）は、シジミ由来のエーテルリン脂質の全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の含有率を示すＨＰＬＣチャートを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、この発明にかかるエーテルリン脂質の製造方法の実施の形態について、具体的に説明する。
なお、この発明について、好ましい代表的な例を中心に説明するが、この発明はこのような代表例に限定されるものではない。
【００２６】
この発明のエーテルリン脂質の製造方法は、以下の工程を含むものである。
このような構成によって、プラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、簡単な操作で得ることができる。
【００２７】
工程（イ）；生物系素材から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程
ならびに
工程（ロ）；前記工程イ．で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解する工程。
【００２８】
ここで、エーテルリン脂質とは、グリセロール骨格の１位（ｓｎ−１）に、ビニルエーテル結合（アルケニル結合）あるいはエーテル結合（アルキル結合）を持つグリセロリン脂質をいう。
以下に、エーテルリン脂質の一般式を示す。
式（１）で示される化合物がアルケニルリン脂質（プラズマローゲン）で、式（２）で示される化合物がアルキルリン脂質である。
【００２９】
【化１】
2016181491.tif 000002
【００３０】
【化２】
2016181491.tif 000003
【００３１】
前記式中、Ｒ１  は脂肪族炭化水素基を示す。
Ｒ１  は、通常、炭素数１４〜１８の脂肪族炭化水素基である。
Ｒ２  は、脂肪族炭化水素基で、例えば、アラキドン酸（ＡＲＡ）、ドコサヘサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）などの多価不飽和脂肪酸が結合している場合が多い。
さらに、式中、Ｘは極性基を示す。
Ｘは、好ましくはエタノールアミン、コリン、セリン、イノシトールなどである。
【００３２】
特に、前記式中Ｘが、エタノールアミンであるエタノールアミンプラズマローゲンと、コリンであるコリンプラズマローゲンは、哺乳動物に存在するエーテルリン脂質として主要である。
摂取されたエーテル結合（アルキル結合）をもつグリセロリン脂質は、そのまま吸収されて各組織で利用されるか、体内でアルケニル結合型リン脂質（プラズマローゲン）に転化する。
【００３３】
この発明において使用する生物系素材としては、プラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を含むものであればよく、特に制限されない。
例えば、動物及び微生物を挙げることができる。
【００３４】
前記動物としては、哺乳類、鳥類および魚介類などが例示される。
前記哺乳類としては、供給安定性と安全性の両面から家畜が好適で、例えば、牛や豚の他、馬、山羊、綿羊、鹿、らくだ、ラマなどの哺乳類、さらには、鶏やアヒル、七面鳥、ダチョウなどの家禽を例示することができる。
前記哺乳類の場合において、エーテルリン脂質を含有している主な組織としては、皮膚や脳、腸、心臓、生殖器などを挙げることができる。
【００３５】
前記魚介類としては、飼育、すなわち、養殖可能であるものが好適で、
クルマエビ、ブラックタイガー、タイショウエビ、ガザミなどの甲殻類
アワビ、サザエ、ホタテ貝、カキなどの貝類
ウニ類、ホヤ類、ヒトデ類、ナマコ類、イソギンチャク類
が例示される。
特に、アサリ、シジミ、ハマグリ、ホタテ、カキなどの二枚貝がより好適である。
前記二枚貝の場合において、エーテルリン脂質を含有している主な組織としては、内臓や性腺、筋肉などが挙げられる。
【００３６】
前記微生物としては、嫌気性細菌が好適で、例えば、腸内細菌のAcidaminococcaceae科の細菌などは、特に好ましい。
なお、細菌の場合においては、「生体組織」は、細菌そのものである。
【００３７】
前記工程（イ）では、生物系素材又はその組織の総脂質を得る。
なお、前記生物系素材として、その組織を用いる際には、予めミンチ化や、粉砕をしておくことが好ましい。
【００３８】
前記非極性有機溶媒としては、飽和脂肪族炭化水素類が挙げられる。
好ましくは直鎖状の飽和炭化水素、さらに好ましくはヘキサンが選択される。
【００３９】
前記分岐アルコールには、二級アルコールおよび三級アルコールが含まれ、好ましくは二級アルコール、より好ましくはイソプロパノールが選択される。
【００４０】
前記工程（ロ）は、前記工程（イ）で得られた、総グリセロリン脂質から混在するジアシル型グリセロリン脂質を加水分解することで、ジアシル型リン脂質を除く工程である。
【００４１】
前記加水分解には、ホスホリパーゼＡ１（ＰＬＡ１）が使用される。
このＰＬＡ１は、ジアシル型リン脂質のｓｎ−１のアシル結合を、特異的に加水分解する。
したがって、エーテルリン脂質のｓｎ−１はエーテル結合であるので、ＰＬＡ１は作用しない。
【００４２】
前記ＰＬＡ１による処理によって、ジアシルグリセロリン脂質は、遊離脂肪酸とリゾリン脂質に分解される。
遊離脂肪酸とリゾリン脂質は、比較的水溶性であることなどを利用して除去することができる。
【００４３】
前記ＰＬＡ１については、前記効果が得られるものであれば、その由来などは特に制限されない。
前記ＰＬＡ１として、例えば、アスペルギルス・オリゼ由来のＰＬＡ１が挙げられる。
かかるＰＬＡ１は、例えば、三菱化学フーズ株式会社などから購入可能である。
【００４４】
前記ＰＬＡ１の使用量については、前記総グリセロリン脂質の量に応じて適宜選択され得る。
好ましくは、総グリセロリン脂質１ｇに対して、０．１５〜０．４５ｇ、より好ましくは０．２〜０．３ｇである。
【００４５】
前記ＰＬＡ１による酵素反応を、バッファー中で行うことができるが、このようなバッファーは、使用するＰＬＡ１に応じて適宜選択され、例えば、０．１Ｍクエン酸−ＨＣｌバッファー（ｐＨ４．５）を用いることができる。
この場合、総グリセロリン脂質に前記バッファーを加えて溶解させてから、これにＰＬＡ１を加えればよい。
【００４６】
前記バッファーの使用量については、酵素反応が進行し得るものであればよく、特に制限はないが、好ましくは総グリセロリン脂質１ｇ当たり１〜３０ｍＬ、より好ましくは５〜１５ｍＬである。
【００４７】
反応条件については、適宜選択できる。
好ましくは温度３０〜７０℃、より好ましくは温度４５〜５５℃、さらに好ましくは温度５０℃で撹拌させながら、好ましくは１〜５時間、より好ましくは１〜２時間反応させる。
その際のｐＨは、好ましくはｐＨ３．５〜５．５、より好ましくはｐＨ４〜５である。
【００４８】
この発明の製造方法においては、さらに、エーテルリン脂質を精製する工程を含めることができる。
前記精製工程を含めることによって、精製濃縮された、より優れた効果を有するエーテルリン脂質を得ることができるので、前記精製工程を含めることが好ましい。
具体的には、前記工程（ロ）で得られた、ジアシルリン脂質が分解された処理液を、さらに精製工程に付すことができる。
【００４９】
前記精製は、公知の方法に従って行うことができる。
例えば、エーテルリン脂質は、ヘキサンに溶解するが、アセトンなどの水溶性ケトン系溶剤には難溶性であることから、これらの溶媒および水を適宜組み合わせて分配を行い、さらに水又は水溶液により溶液分配すること（溶媒分配法）で、リゾリン脂質を除去してエーテルリン脂質を精製することができる。
すなわち、アセトンなどの水溶性ケトン系溶媒によりリン脂質以外の中性脂質を除去でき、水系溶液分配によりエーテルリン脂質とリゾリン脂質とに分離できる。
【００５０】
具体的には、前記処理液（加水分解処理液）に、５〜１０倍溶のヘキサン・イソプロパノール混合液（３：２）を加えて分液ロートに移し、その約３分の２の水を加えて、２層に分け、上層（ヘキサン層）を回収することで、脂質分解産物（遊離脂肪酸、リゾリン脂質）、酵素タンパク質、酵素バッファーを除去できる。
さらに、２０〜２５倍溶の、アセトンなどの水溶性ケトン系溶媒によりリン脂質以外の中性脂質を除去する。
【００５１】
この発明の製造方法によって得られるエーテルリン脂質は、主にエタノールアミンリン脂質とコリンリン脂質を含むものである。
このような脂質の構成については、前記エーテルリン脂質を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で解析・確認することができる。
【００５２】
かかる構成の製造方法によって得られるエーテルリン脂質は、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善にきわめて有効である。
しかも、この発明の製造方法によれば、前記エーテルリン脂質を、高純度、特に純度８０％以上で得ることができる。
【００５３】
特に、二枚貝組織由来のエーテルリン脂質は、そのｓｎ−２において、多くのドコサペンタエン酸（ＤＨＡ）や、アラキドン酸（ＡＲＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）と結合している。
すなわち、ドコサヘキサエノイル基、アラキドノイル基およびエイコサペンタエノイル基からなる群から選択される１種以上を残基として多く含むので、極めて優れた作用効果を有している。
【００５４】
かかるエーテルリン脂質は、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善に有効であるので、生体内に摂取されることによって、これらの効果が発揮され得る。
【００５５】
前記エーテルリン脂質を、飲食品の素材として、あるいは医薬の原料として、利用することができる。
このような飲食品および医薬は、公知の方法に従って製造すればよい。
【００５６】
さらに、前記エーテルリン脂質については、前述の如く、公知の又は将来開発される様々な飲食品の形態を適宜採用することができる。
この場合において、機能性食品又は特定保健用食品の形態についても、同様に採用することができる。
【００５７】
様々な飲食品の製品の形態として、例えば、菓子（冷菓、ゼリー、ケーキ、キャンディー、チューインガムなど）、パン、牛乳やヨーグルトなどの乳製品などの各種製品を挙げることができる。
飲食品として使用できる調味剤や甘味剤を使用し、溶液としてドリンクの形態で使用することもできる。
【００５８】
なお、前記エーテルリン脂質は、使用される製品に混合して使用することが簡便であるが、前記作用を奏するに有効な量のエーテルリン脂質を含有すべきことは当然のことである。
例えば、前記エーテルリン脂質を、飲食品に、好ましくは０．０１〜８０質量％程度、より好ましくは０．０５〜２０質量％程度含有することができる。
【実施例】
【００５９】
以下に、実施例を挙げて、この発明のエーテルリン脂質の製造方法を詳細に説明する。
なお、この発明は、これら実施例によって制限されるものではない。【００６０】
＜実施例１＞
（アサリ由来エーテルリン脂質の製造）
（１）アサリ総リン脂質の抽出
貝殻を除いて得たアサリ約２００ｇにヘキサン・イソプロパノール混合液（３：２）１，０００ｍＬを加えて、ブレンダーを用いて粉砕し、攪拌しながら室温に１時間置いた。
その後、吸引ろ過し、残渣を２００ｍＬのヘキサン・イソプロパノール混合液（３：２）で洗い、合わせた濾液を分液ロートに移した。
分液ロートに水または硫酸ナトリウム水溶液（水１５０ｍＬに対して硫酸ナトリウム１ｇを溶解させたもの）８００ｍＬを加えて混和後、静置した。
２層に分離した下層を捨てて、上層のヘキサン層を回収した。
得られたヘキサン層を、ロータリーエバポレーターで乾固し、アサリ総リン脂質を得た。【００６１】
（２）アサリ由来総リン脂質のＨＰＬＣ解析
得られた総リン脂質について、下記条件でＨＰＬＣを行った。
その結果を、図１（ａ）に示す。
なお、図中、
ＤＰＧ：ジホスホグリセリド
ＰＥ  ：エタノールアミンリン脂質
ＰＣ  ：コリンリン脂質
ＰＳ  ：セリンリン脂質
ＰＩ：イノシトールリン脂質
ＳＭ  ：スフィンゴミエリン
である。【００６２】
＜ＨＰＬＣの条件＞
使用機器：ＨＰＬＣ  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｏｋｙｏ）
カラム  ：Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  １００Ｄｉｏｌ  （２５０×３ｍｍ，５μｍ）（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
流  量  ：０．８ｍｌ／分
検  出  ：ＥＬＳＤ（蒸発光検出器）（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
移動相  ：
（Ａ）ヘキサン／イソプロパノール／酢酸（８２：１７：１，ｖ／ｖ，０．０８％ＴＥＡ＊）
（Ｂ）イソプロパノール／水／酢酸（８５：１４：１，０．０８％ＴＥＡ＊）
＊ＴＥＡ：トリエチルアミン
なお、時間帯と移動相（Ａ）と（Ｂ）の液組成を、表１に示す。【００６３】
【表１】
2016181491.tif 000004
【００６４】
（３）総リン脂質の酵素処理と抽出によるエーテルリン脂質の精製
得られた総リン脂質を、ホスホリパーゼＡ１（三菱化学フーズ（株）製）溶液（２０ｍｇ／ｍＬ  ０．１Ｍ  クエン酸緩衝液（ｐＨ４．５））４０ｍＬ中に分散させ、超音波などで、充分混和し、時々撹拌して、温度５０℃、１時間反応させた。
その後、冷却し、反応を止めた。
ヘキサン／イソプロパノール（３：２）３６０ｍＬを加えて、分液ロートに移し、混和後、水２００ｍＬを加えて、静置し、水層を除いた。
ヘキサン層を回収し、水２００ｍＬを加えて、混和した。
上層のヘキサン層を回収し、ロータリーエバポレーターで乾固した。
その後、残留しているコレステロールなどの中性脂質を除くため、これに、２０倍溶のアセトンを加えてよく混和し、温度−３０℃で２時間冷却した。
温度４℃、１０００ｇ、１０分間で遠心して沈殿を回収し、精製されたアサリ由来エーテルリン脂質（純度  約８０％）を得た。【００６５】
（４）精製されたアサリ由来エーテルリン脂質（エーテル型グリセロリン脂質）のＨＰＬＣ解析
得られたアサリ（二枚貝）由来エーテル型グリセロリン脂質について、前記ＨＰＬＣ条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図１（ｂ）に示す。【００６６】
この結果、純度  約８０％の高純度アサリ由来エーテルリン脂質を得ることができた。
したがって、この発明によれば、生物系素材中に含まれているエーテルリン脂質を、高い純度で簡単な操作で製造することができることは明らかである。【００６７】
＜実施例２＞
（シジミ由来エーテルリン脂質の製造）
（１）シジミ総リン脂質の抽出の抽出
アサリに代えてシジミを用いること以外、実施例１と同様の方法により、総リン脂質を得た。【００６８】
（２）シジミ由来総リン脂質のＨＰＬＣ解析
得られた総リン脂質について、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図２（ａ）に示す。【００６９】
（３）総リン脂質の酵素処理と抽出によるエーテルリン脂質の精製
実施例１と同様の方法によって、総脂質からシジミ由来エーテルリン脂質を調製し、このエーテルリン脂質を精製した（純度  約９０％）。【００７０】
（４）精製されたシジミ由来エーテルリン脂質のＨＰＬＣ解析
得られたシジミ由来エーテルリン脂質について、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図２（ｂ）に示す。【００７１】
この結果、純度  約９０％の高純度シジミ由来エーテルリン脂質を得ることができた。
したがって、この発明によれば、生物系素材中に含まれているエーテルリン脂質を、高い純度で簡単な操作で製造することができることは明らかである。【００７２】
＜実施例３＞
（鶏胸肉由来エーテルリン脂質の製造）
（１）鶏胸肉総脂質の抽出の抽出
アサリに代えて鶏胸肉を用いること以外、実施例１と同様の方法により、総リン脂質を得た。【００７３】
（２）鶏胸肉由来総リン脂質のＨＰＬＣ解析
得られた総リン脂質について、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図３（ａ）に示す。
なお、図中、
ｅＰＥ：エタノールアミンエーテルリン脂質
ｅＰＣ：コリンエーテルリン脂質
である。【００７４】
（３）総脂質の酵素処理と抽出によるエーテルリン脂質の精製
実施例１と同様の方法によって、総リン脂質から鶏胸肉由来エーテルリン脂質を調製し、このエーテルリン脂質を精製した（純度  約９２％）。【００７５】
（４）精製された鶏胸肉由来エーテルリン脂質のＨＰＬＣ解析
得られた鶏胸肉由来エーテルリン脂質について、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図３（ｂ）に示す。【００７６】
この結果、純度  約９２％の高純度鶏胸肉由来エーテルリン脂質を得ることができた。
したがって、この発明によれば、生物系素材中に含まれているエーテルリン脂質を、高い純度で簡単な操作で製造することができることは明らかである。【００７７】
＜実施例４＞
（エーテルリン脂質の全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の分析）
二枚貝（アサリ，シジミ）由来のエーテルリン脂質、および鶏組織由来のエーテルリン脂質に含まれている全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、ＤＨＡおよびＡＲＡ）の割合について、下記方法に従い、ＨＰＬＣを用いて、分析をした。
その結果を、表３および４、ならびに図４に示す。【００７８】
（各種エーテルリン脂質の加水分解）
各種エーテルリン脂質を分取し、乾固したものを０．５規定水酸化カリウムのメタノール溶液で加水分解し、遊離脂肪酸を得た。【００７９】
（各種エーテルリン脂質からの遊離脂肪酸のラベル）
上記エーテルリン脂質から加水分解で産生した、遊離脂肪酸を０．０５％  ９−アントレルヂアゾメタン（ＡＤＡＭ）でラベルした。【００８０】
（脂肪酸の分析）
前記ラベルした脂肪酸を、下記条件のＨＰＬＣで分析した。【００８１】
［ＨＰＬＣの条件］
使用機器：アジレント  ＨＰＬＣ  １１００  シリーズ（アジレント社）
カラム  ：Ultrasphere 100 RP-18e （メルク社）
流  量  ：０．８ｍｌ／分
検  出  ：蛍光検出器
移動相： 
（Ａ）アセトニトリル
（Ｂ）エタノール
（Ｃ）ヘキサン
なお、時間帯と移動相（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）の液組成を、表２に示す。【００８２】
【表２】
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【００８３】
【表３】
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【００８４】
【表４】
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【００８５】
表３および４、ならびに図４から、二枚貝（アサリ，シジミ）由来のエーテルリン脂質は、そのｓｎ−２において、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸（ＡＲＡ）を多量に結合していることが分かる。
一方、二枚貝由来のエーテルリン脂質と同時に同じ方法で分析した鶏胸肉由来のエーテルリン脂質では、ＰＥ，ＰＣともにアルケニルリン脂質であって、アルキルＰＣは存在していない。
したがって、脂肪酸の構成を比較すると、二枚貝由来エーテルリン脂質には、ＥＰＡおよびＤＨＡが多く含まれることが示された。
アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常において、ＥＰＡおよびＤＨＡが減少しており、食餌性の二枚貝由来のエーテルリン脂質は、ＥＰＡおよびＤＨＡを補う役目もするものである。
二枚貝由来のエーテルリン脂質には、このようにＥＰＡおよびＤＨＡが多数含まれているが、鶏胸肉由来のエーテルリン脂質には、ＥＰＡは含まれておらず、含まれているＤＨＡも二枚貝由来のエーテルリン脂質よりも少量である。
よって、この発明の二枚貝由来のエーテルリン脂質は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸（ＡＲＡ）などの高度多価不飽和脂肪酸を多く含むため、従来のエーテルリン脂質、特に鶏胸肉由来のエーテルリン脂質よりも優れた効果を奏することが期待される。
【産業上の利用可能性】
【００８６】
この発明によれば、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善に有効なエーテルリン脂質を、高純度かつ簡単な操作で製造することが可能となるので、医薬業界において幅広く利用されるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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