(57)【要約】  本発明は、効果的に筋肉量や筋力を増加または維持でき、且つ筋肉量や筋力の低下を抑制できる安全な筋肉増強剤、当該筋肉増強剤を含む筋肉増強組成物、および、当該筋肉増強剤または筋肉増強組成物を用いて筋肉を増強するための方法を提供することを目的とする。本発明に係る筋肉増強剤は、レモンマートルの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
レモンマートルの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする筋肉増強剤。
【請求項２】
上記レモンマートル抽出物が、水、または水と水混和性溶媒との混合溶媒による抽出物である請求項１に記載の筋肉増強剤。
【請求項３】
上記レモンマートル抽出物が水による抽出物である請求項１に記載の筋肉増強剤。
【請求項４】
上記レモンマートル抽出物が、水とエタノールとの混合溶媒による抽出物である請求項１に記載の筋肉増強剤。
【請求項５】
上記レモンマートル抽出物がレモンマートルの葉由来のものである請求項１〜４のいずれかに記載の筋肉増強剤。
【請求項６】
１日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与するものである請求項１〜５のいずれかに記載の筋肉増強剤。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の筋肉増強剤を含有することを特徴とする筋肉増強組成物。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれかに記載の筋肉増強剤または請求項７に記載の筋肉増強組成物を動物に投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋肉量や筋力の低下を効果的に予防または治療できる安全な筋肉増強剤および筋肉増強方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、交通手段の発達などによる運動不足や高齢化の進行に伴い、筋肉量や筋力の低下（筋萎縮）が大きな問題となっている。一般的に、４０歳前後から筋肉量や筋力は低下するといわれており、高齢者の多くはサルコペニア（加齢性筋肉減少症）の状態にあるといわれている。サルコペニアは、主に加齢による筋肉量や筋力の低下をいい、ロコモティブシンドローム（運動器症候群：筋肉や骨、関節、軟骨、椎間板といった運動器の障害によって移動機能の低下をきたして、要介護になったり、要介護になる危険の高い状態になったりすること）やフレイル（筋力や心身の活力が低下した状態）の重要な要素であり、要介護の原因となることが指摘されている。このように、筋肉量や筋力の低下は、生活の質（ＱＯＬ：Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｏｆ  Ｌｉｆｅ）の低下のみならず、日常生活動作（ＡＤＬ：Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｄａｉｌｙ  Ｌｉｖｉｎｇ）の低下、合併症の発生、介護負担の増加にも密接に関連している。米国では健康リスクの上位５位に入っており、関連医療費は約２．５兆円と試算されている。【０００３】
筋肉の増強、すなわち、筋肉量や筋力の増加および維持、さらには筋肉量や筋力の低下の抑制には、適切な栄養摂取と運動の両方が必要であるとされている。しかし、特に高齢者では、食欲の減退による摂食量の低下に加え、嚥下機能、唾液量、消化器官機能の低下などにより、栄養の摂取量に対する吸収量が低下している傾向がある。また、吸収されたペプチドやアミノ酸から筋タンパク質へ変換する生体機能効率も低下している。さらに、高齢者では運動の機会が少ない上に、運動による筋肉量の増加効率も低下している。よって、例えば高齢者の活動量が怪我や病気などにより減少すると、それに伴って筋肉量や筋力がさらに低下し、活動量の低下と筋萎縮の悪化という負のサイクルに陥ることがある。【０００４】
また、スポーツにおける運動能力の向上、肥満やメタボリックシンドロームの予防または改善、痩身などの目的に、また、ヒト以外の動物においても成育促進、肉量増加、肉質改善などの目的に、筋肉の増強が望まれている。【０００５】
筋肉を増強するためには、筋肉を構成する筋線維を大きくする、またはその大きさを維持する必要がある。筋線維は多核の細胞であり、その核の数が細胞の大きさを制御している。このため、筋線維を大きくする、または維持するためには、核の数を増加する必要があるが、筋線維の核は増殖することはなく、細胞外より筋線維に核を供給することが不可欠である。筋線維への核の供給は、筋肉を構成する筋細胞の基底膜と細胞膜の間に存在している筋衛星細胞（サテライト細胞ともいう）が担っている。通常、筋衛星細胞は静止状態にあり未分化な状態であるが、運動負荷や筋肉の損傷、成長の際に筋衛星細胞は活性化され、増殖、分化、筋線維との融合といった一連の過程により、筋線維に核を供給する。このため、筋衛星細胞を活性化することは筋肉の増強に寄与する。【０００６】
また、上述したように筋肉量や筋力の低下は加齢により進行するので、顕在化しないうちに予防すべきであるといえる。その他、高齢者は持病の抑制のため常薬を服用し続けなければならないことがあり、合成医薬品には飲み合わせによる予測不能な副作用の問題がある。
そこで、安全な成分から筋肉増強作用のあるものが探索されている。【０００７】
例えば特許文献１には、茶飲料に含まれるカテキン類を有効成分とする筋機能低下抑制剤が開示されている。特許文献２には、インド、スリランカ、東南アジア諸国に自生しているニシキギ科のサラシア属植物またはその抽出物を含む筋肉増強剤が記載されている。また、非特許文献１には、分岐鎖アミノ酸であるロイシンの筋タンパク質合成作用が報告されている。また、特許文献３には、キョウチクトウ科の植物であるラフマまたはその抽出物を有効成分とするサテライト細胞分化促進剤が開示されているが、骨格筋由来細胞に対する分化誘導効果を示しているにすぎず、筋衛星細胞を活性化するものではない。【０００８】
ところで、レモンマートルはオーストラリア原産のフトモモ科の常緑樹であり、学名をバックハウジア・シトリオドーラ（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）という。精油成分としてシトラールを多く含み、強い清涼感の芳香を有するハーブの一種であって料理などに使われており、その研究も行われている。例えば特許文献４〜６には、それぞれレモンマートルまたはその抽出物を含み、チロシナーゼ阻害活性を示す美白用組成物、紫外線などによる皮膚のトラブルを予防および改善するための皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、糖尿病または糖尿病合併症の予防および治療に有用な終末糖化産物生成抑制剤が開示されている。しかしながら、これまでにレモンマートルの筋肉に対する効果については何ら検討されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００８−１３４７３号公報
【特許文献２】特開２０１０−２３５５４２号公報
【特許文献３】特開２０１２−７７０１０号公報
【特許文献４】特開２００９−５７３２５号公報
【特許文献５】特開２０１０−２０２５２０号公報
【特許文献６】特開２０１５−２４９８２号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｒｏｚｉｅｒ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．  Ｎｕｔｒ．，ｖｏｌ．１３５，Ｎｏ．３，３７６−８２，２００５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
上述したように、近年、高齢化社会を迎えて筋肉量や筋力の低下は深刻な問題になってきており、その対策が求められている。筋肉量や筋力を増加、維持するための研究も為されてはいるが、実際の対策としては適切な栄養摂取と運動が薦められているのみである。筋肉量や筋力の低下を予防したり治療したりするための薬剤などは流通しつつあるが、安全で且つ十分な筋肉増強効果を示す薬剤などは未だ流通していない。【００１２】
そこで本発明は、効果的に筋肉量や筋力を増加または維持でき、且つ筋肉量や筋力の低下を抑制できる安全な筋肉増強剤、当該筋肉増強剤を含む筋肉増強組成物、および、当該筋肉増強剤または筋肉増強組成物を用いて筋肉を増強するための方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、レモンマートル由来の抽出物が、安全であり、且つ、筋肉量や筋力の増加や維持に重要な役割を果たす筋衛星細胞を活性化することを見出して、本発明を完成した。
以下、本発明を示す。【００１４】
［１］  レモンマートルの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする筋肉増強剤。
［２］  上記レモンマートル抽出物が、水、または水と水混和性溶媒との混合溶媒による抽出物である上記［１］に記載の筋肉増強剤。
［３］  上記レモンマートル抽出物が水による抽出物である上記［１］に記載の筋肉増強剤。
［４］  上記レモンマートル抽出物が、水とエタノールとの混合溶媒による抽出物である上記［１］に記載の筋肉増強剤。
［５］  上記レモンマートル抽出物がレモンマートルの葉由来のものである上記［１］〜［４］のいずれかに記載の筋肉増強剤。
［６］  １日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与するものである上記［１］〜［５］のいずれかに記載の筋肉増強剤。
［７］  上記［１］〜［６］のいずれかに記載の筋肉増強剤を含有することを特徴とする筋肉増強組成物。
［８］  上記［１］〜［６］のいずれかに記載の筋肉増強剤または上記［７］に記載の筋肉増強組成物を動物に投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法。
［９］  筋肉を増強するためのレモンマートルの抽出物の使用。
［１０］  上記レモンマートル抽出物が、水、または水と水混和性溶媒との混合溶媒による抽出物である上記［９］に記載の使用。
［１１］  上記レモンマートル抽出物が水による抽出物である上記［９］に記載の使用。
［１２］  上記レモンマートル抽出物が、水とエタノールとの混合溶媒による抽出物である上記［９］に記載の使用。
［１３］  上記レモンマートル抽出物がレモンマートルの葉由来のものである上記［９］〜［１２］のいずれかに記載の使用。
［１４］  上記レモンマートル抽出物を１日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する上記［９］〜［１３］のいずれかに記載の使用。
［１５］  レモンマートルの抽出物を有効成分として投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法。
［１６］  上記レモンマートル抽出物が、水、または水と水混和性溶媒との混合溶媒を抽出溶媒として用いて抽出されたものである上記［１５］に記載の筋肉増強方法。
［１７］  上記レモンマートル抽出物が水を抽出溶媒として用いて抽出されたものである上記［１５］に記載の筋肉増強方法。
［１８］  上記レモンマートル抽出物が、水とエタノールとの混合溶媒を抽出溶媒として用いて抽出されたものである上記［１５］に記載の筋肉増強方法。
［１９］  上記レモンマートル抽出物がレモンマートルの葉由来のものである上記［１５］〜［１８］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
［２０］  上記レモンマートル抽出物を１日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上投与する上記［１５］〜［１９］のいずれかに記載の筋肉増強方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明に係る筋肉増強剤は、料理で香り付けなどにも用いられているレモンマートルの抽出物が有効成分であることから安全なものであり、毎日の恒常的な摂取も可能である。また、運動と同様に筋衛星細胞を活性化する作用を示し、筋肉量や筋力の増加または維持、さらには筋肉量や筋力の低下の抑制に利用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明に係る筋肉増強剤は、レモンマートル抽出物を有効成分として含有する。本発明に係る筋肉増強剤は、筋肉増強作用を有するものである。
【００１７】
本発明において「筋肉増強」とは、筋肉量や筋力を増加または維持することに加え、筋肉量や筋力の低下を抑制することをいうものとする。したがって、本発明の「筋肉増強剤」は、筋肉量や筋力を増加または維持、さらには筋肉量や筋力の低下を抑制するために用いることができる。本発明の筋肉増強剤は、筋肉の増強を所望する健常者およびアスリート、身体の発達が必要な小児および若者に対して、筋肉の増強を促すために用いることができる。さらに、本発明の筋肉増強剤は、運動不足や長期安静臥床、ギブス固定などによる不活動、低栄養、加齢（サルコペニア）、筋原性の疾患（筋ジストロフィー、先天性ミオパチー等）、神経原性の疾患（筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症等）等による筋肉量や筋力の低下に対して、その予防や改善に用いることもできる。また、ロコモティブシンドロームやフレイル等の筋肉量や筋力の低下に起因する状態や疾患に対しても、その予防や改善に用いることもできる。また、本発明の筋肉増強剤は、成育促進または肉量増加や肉質改善が所望される家畜などの動物に対しても用いることもできる。なお、本発明の筋肉増強剤は、筋肉の増強が可能であることから、肥満やメタボリックシンドロームの予防または改善、痩身などの目的のためにも用いることもできる。
【００１８】
筋衛星細胞とは、筋肉を構成する筋細胞の基底膜と細胞膜の間に存在している未分化の筋幹細胞である。本発明における「筋衛星細胞活性化」とは、静止状態にある筋衛星細胞が増殖期に移行し、分化と筋線維への融合を経て筋線維へ核を供給することをいう。筋衛星細胞の活性化は、筋線維の大きさを制御する核の数を増加させることから、筋線維の肥大、ひいては筋肉の増強に繋がるものである。筋衛星細胞の活性化は、細胞数、核酸量、ブロモデオキシウリジンといったＤＮＡ類似物質の取り込み量などを測定することで評価することができる。
【００１９】
レモンマートルはオーストラリア原産のフトモモ科の常緑樹であり、学名をバックハウジア・シトリオドーラ（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）という。特に葉からは独特の芳香を発し、その精油は香料などとして用いられている。
【００２０】
レモンマートル抽出物の原料部位としては、葉、茎、根、枝、花など特に限定されないが、葉が好ましい。また、使用形態も特に限定されず、例えば生の状態、乾燥物、その乾燥物の粉砕物など全てを含む。
【００２１】
本発明に係る筋肉増強剤は、レモンマートルと抽出溶媒を混合し、筋肉増強のための有効成分を抽出する工程を含む方法により製造することができる。
【００２２】
本発明に係るレモンマートル抽出物を得るための抽出溶媒としては、特に限定されないが、水系溶媒が好ましい。水系溶媒とは、水、水混和性溶媒、および水と水混和性溶媒との混合溶媒をいうものとする。水混和性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｓ−ブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノールなどのＣ1-4アルコール；アセトンなどのケトン系溶媒；ジメチルホルムアミドやジメチルアセトアミドなどのアミド系溶媒；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド系溶媒；アセトニトリルなどのニトリル系溶媒；酢酸などの有機酸溶媒などが挙げられ、Ｃ1-4アルコールが好ましく、Ｃ2-3アルコールがより好ましく、安全性の観点からエタノールまたはイソプロパノールがよりさらに好ましく、エタノールが特に好ましい。
【００２３】
抽出溶媒としては、水、および水と水混和性溶媒との混合溶媒が好ましい。当該混合溶媒における水混和性溶媒の割合の上限は、特に限定されないが、９５ｖ／ｖ％以下が好ましく、９０ｖ／ｖ％以下、８０ｖ／ｖ％以下または７０ｖ／ｖ％以下がより好ましく、６０ｖ／ｖ％以下がさらに好ましい。当該割合の下限も特に制限されず、０％、すなわち水のみからも優れた効果を示す抽出物が得られるが、水混和性溶媒による抽出効果を期待するのであれば当該割合としては５ｖ／ｖ％以上が好ましい。特に、９０ｖ／ｖ％以下のエタノール水が好ましく、８０ｖ／ｖ％以下または７０ｖ／ｖ％以下のエタノール水がより好ましく、６０ｖ／ｖ％以下のエタノール水がさらに好ましい。
【００２４】
抽出溶媒の使用量は特に制限されず、適宜調整すればよい。当該使用量の下限は特に限定されないが、例えば、乾燥状態のレモンマートル原料または生レモンマートルに対して、１ｍＬ／ｇ以上が好ましく、２ｍＬ／ｇ以上がより好ましく、３ｍＬ／ｇ以上がさらに好ましい。また、当該使用量の上限も特に限定されず、例えば、乾燥状態のレモンマートル原料または生レモンマートルに対して、５０ｍＬ／ｇ以下が好ましく、２０ｍＬ／ｇ以下がより好ましく、１０ｍＬ／ｇ以下がさらに好ましい。
【００２５】
抽出温度も適宜調整すればよい。当該温度の下限は特に限定されないが、−２０℃以上が好ましく、１℃以上がより好ましく、１０℃以上がさらに好ましい。また、当該温度の上限も特に限定されず、１２１℃以下が好ましく、１００℃以下がより好ましく、９０℃以下がさらに好ましい。なお、溶媒の沸点以上で抽出する場合には、抽出容器を密閉するか、加圧することが好ましい。また、抽出溶媒を加熱還流してもよい。さらに、抽出温度は段階的に変更してもよい。なお、抽出は、撹拌又は静置で行えばよく、また、必要に応じて複数回繰り返してもよい。
【００２６】
抽出時間も適宜調整すればよい。当該時間の合計の下限は特に限定されないが、５分以上が好ましく、１０分以上がより好ましく、３０分以上がさらに好ましい。また、当該時間の合計の上限も特に限定されず、４８時間以下が好ましく、２４時間以下がより好ましく、１０時間以下がさらに好ましい。
【００２７】
抽出後の混合液は、そのまま用いることができるが、通常の後処理を行ってもよい。例えば、濾過や遠心分離などにより抽出液を抽出残渣から分離したり、また、分離した抽出液を、濃縮、加熱乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などを適宜組み合わせて乾燥してもよい。さらに、間接加熱方式、直接加熱方式、電気加熱方式、マイクロ波加熱方式などにより加熱殺菌してもよい。飲食品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は粗抽出物あるいは半精製抽出物として使用できる。レモンマートルはシトラールに代表される特有の芳香を有するが、これをレモンマートル抽出物より除去するためには、濃縮、加熱乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの乾燥操作を行うことが、好ましい。
【００２８】
なお、本発明に係るレモンマートル抽出物に含まれる成分のうちいずれの成分が筋肉増強作用を発揮しているのかについては、その成分が主成分ではなく微量成分である可能性、並びに、また、複数の成分が相乗的に作用している可能性もあり、現時点では特定は困難である。
【００２９】
本発明に係る筋肉増強剤は、他の成分と組み合わせた筋肉増強組成物として用いてもよい。例えば、レモンマートル抽出液自体や乾燥レモンマートル抽出物自体を用いてもよいが、乾燥レモンマートル抽出物を適切な溶媒に再溶解、懸濁したものであってもよい。また、レモンマートル抽出物を製剤化したものであってもよい。製剤としては、特に制限されないが、例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、糖衣錠、顆粒剤、液剤、外用剤などを挙げることができる。本発明に係る筋肉増強剤には、剤形に合わせ、薬学上許容される添加剤を用いてもよい。かかる添加剤としては、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、甘味料、凝集防止剤、有効成分の溶解補助剤、安定化剤などを挙げることができる。上記賦形剤としては特に制限されないが、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、デキストリン、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどを挙げることができる。上記崩壊剤としては特に制限されないが、例えば、でんぷん、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガントなどを挙げることができる。上記滑沢剤としては特に制限されないが、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などを挙げることができる。上記結合剤としては特に制限されないが、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトールなどを挙げることができる。上記酸化防止剤としては、特に制限されないが、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などを挙げることができる。上記着色剤としては特に制限されないが、例えば、医薬品、食品に添加することが許可されているものなどを挙げることができる。上記甘味料としては特に制限されないが、例えば、医薬品や食品に添加することが許可されているものなどを挙げることができる。上記凝集防止剤としては特に制限されないが、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸などを挙げることができる。上記有効成分の溶解補助剤としては特に限定されないが、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸などの有機酸などが挙げられる。上記安定化剤としては特に制限されないが、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチル、プロピレングルコールなどが挙げられる。
【００３０】
本発明に係る筋肉増強剤を含む筋肉増強組成物は、例えば、飲食品、医薬品、医薬部外品、飼料、ペットフードまたは動物用医薬品として用いることもできる。
【００３１】
本発明に係る筋肉増強剤を、筋肉増強作用を示す特定保健用食品などの飲食品、医薬品、医薬部外品、サプリメント、飼料、ペットフードまたは動物用医薬品に含有させて使用する場合、そのまま摂取してもよい。また本発明の筋肉増強組成物は、経口摂取用製剤の形態であってもよい。経口摂取用製剤としては、カプセル剤（ハードカプセル、マイクロカプセル、ソフトカプセル）、錠剤、散剤、チュアブル製剤、シロップ、液剤などの、経口的に摂取出来る形態が挙げられる。カプセル剤とする場合のカプセル基材としては特に制限されず、牛骨、牛皮、豚皮、魚皮などを由来とするゼラチンをはじめとして、他の基材、例えば、食品添加物として使用しうるカラギーナン、アルギン酸などの海藻由来品やローカストビーンガムやグアーガムなどの植物種子由来品、プルラン、カードランなどの微生物由来品やセルロース類を含む製造用剤も使用することができる。
【００３２】
また、本発明に係る筋肉増強剤は、一般的な飲食品に添加することもできる。本発明に係る筋肉増強剤を添加する飲食品は特に限定されないが、例えば、乳飲料、清涼飲料、スポーツドリンク、栄養ドリンク、美容ドリンク、液体栄養剤などの飲料；チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ケーキ、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；パン、ハム、雑炊、米飯、スープ、各種レトルト食品、各種冷凍食品などに適宜添加して用いることができる。本発明に係る筋肉増強剤を含有する飲食品は、いわゆる健康食品、サプリメント、機能性食品、機能性表示食品、栄養補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、介護食品、スマイルケア食、咀嚼・嚥下補助食品、濃厚流動食品、病者用食品などの用途に用いることができる。言うまでもなく、他の食品形態として利用することもできる。さらにはペットフードや家畜飼料などへも利用することができる。
【００３３】
さらに、本発明の筋肉増強組成物は、非経口剤の形態であってもよい。例えば皮膚に塗布する形態とすることもできる。この場合、剤型は、特に限定されるものではなく、例えば、本発明に係る筋肉増強剤を基剤中に溶解または混合分散させて、クリーム状、ペースト状、ゼリー状、ゲル状、乳液状、液状の形状になされたもの（軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、スプレー剤など）、基剤中に上記組成物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（パップ剤など）、粘着剤中に上記組成物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（プラスター剤、テープ剤など）が挙げられる。
【００３４】
本発明の組成物を医薬部外品として使用する場合の医薬部外品とは、薬事法に定められた医薬部外品を指し、経口剤（エキス剤、エリキシル剤、シロップ剤、チンキ剤、リモナーデ剤等の液剤とカプセル剤、顆粒剤、丸剤、散剤、錠剤等の固形剤）などが挙げられる。
【００３５】
本発明に係る筋肉増強剤は、筋衛星細胞の活性化作用など、優れた筋肉増強作用を示す。かかる筋衛星細胞活性化作用は、例えば、以下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験により評価することができる。具体的には、被検動物より単離した筋衛星細胞の培養液に被検物質を添加して２４時間培養した後、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を終濃度が１０μＭになるよう添加し、２時間インキュベートする。次いで、筋衛星細胞を氷冷した０．１％Ｈ2Ｏ2添加メタノールを使って４℃で１０分間固定し、さらに２Ｎ塩酸を使って３７℃で１時間ＤＮＡ変性処理を行った後、一次抗体として抗ＢｒｄＵ抗体、二次抗体としてＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体を用い、ジアミノメンチジン（ＤＡＢ）にて発色させ、ＢｒｄＵ陽性細胞を検出する。総細胞数に占めるＢｒｄＵ陽性細胞の割合を求め、筋衛星細胞活性化率とすることができる。本発明に係る筋肉増強剤の筋衛星細胞活性化率としては、４２％以上または４３％以上が好ましく、４４％以上または４５％以上がより好ましく、４６％または４８％以上がよりさらに好ましい。
【００３６】
本発明に係る筋肉増強剤は、ヒトに加えて、ヒト以外の動物にも投与可能である。即ち、本発明は、本発明に係る筋肉増強剤または本発明に係る筋肉増強組成物を動物に投与する工程を含むことを特徴とする筋肉増強方法にも関する。投与対象動物としては、例えば、養殖動物、愛玩動物、競技動物などが挙げられる。養殖動物としては特に限定されないが、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物、ニワトリ、アヒル、七面鳥、駝鳥などの家禽、魚類、甲殻類または貝類が例示される。愛玩動物としては特に限定されないが、イヌ、ネコなどが例示される。競技動物としては特に限定されないが、競走馬などが例示される。但し、特許の対象の問題から、本発明に係る筋肉増強剤または本発明に係る筋肉増強組成物を投与する動物からはヒトを除外してもよい。
【００３７】
本発明に係る筋肉増強剤の投与頻度や投与量は、投与対象、年齢、性別、状態などに応じて適宜調整すればよく、筋肉増強効果を発揮できる量を投与対象へ投与する。例えばヒトに対する投与量の下限は特に限定されないが、１日当たり１ｍｇ／ｋｇ体重以上が好ましく、２ｍｇ／ｋｇ体重以上が好ましく、３ｍｇ／ｋｇ体重以上がさらに好ましい。また、例えばヒトに対する投与量の上限も特に限定されないが、１日当たり５０ｍｇ／ｋｇ体重以下が好ましく、４０ｍｇ／ｋｇ体重以下がより好ましく、３０ｍｇ／ｋｇ体重以下がさらに好ましい。また、１日当たりの投与回数は、特に限定されず、所望の投与範囲内において、単回、または数回に分けて投与すればよい。
【００３８】
本発明に係る筋肉増強剤は、筋肉量や筋力を増加または維持する効果の向上を目的に、適宜、レジスタンス運動などの運動、理学療法、リハビリテーションなどと併用することができる。また、本発明に係る筋肉増強剤は、筋肉量や筋力を増加または維持する効果の向上を目的に、他の医薬品や筋肉増強作用を有する食品等と併用して使用することも可能である。上記筋肉増強作用を有する食品としては特に制限されないが、ホエイタンパク、ホエイペプチド、カゼイン、カゼインペプチド、大豆タンパク、大豆ペプチド、小麦タンパク、小麦ペプチド、バリン、ロイシン、イソロイシン、アルギニン、シトルリン、オルニチンなどのアミノ酸、クレアチン、β−ヒドロキシ−β−メチル酪酸などが挙げられる。
【００３９】
本願は、２０１５年１０月１６日に出願された日本国特許出願第２０１５−２０４２５５号に基づく優先権の利益を主張するものである。２０１５年１０月１６日に出願された日本国特許出願第２０１５−２０４２５５号の明細書の全内容が、本願に参考のため援用される。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。【００４１】
実施例１：  レモンマートル抽出物の調製
レモンマートルの乾燥葉（１００ｇ）を表１に示す水またはエタノール水（５００ｍＬ）に浸漬し、５０℃で２時間撹拌しつつ抽出を行った。ろ過により固形分を分離し、抽出液を得た。さらに、得られた抽出液を減圧濃縮および凍結乾燥して溶媒を除去し、レモンマートル抽出物を得た。【００４２】
【表１】
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【００４３】
実施例２：  筋衛星細胞活性化能評価のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
（１）  筋衛星細胞の単離
６月齢の雄性ＳＤラット（日本エスエルシー社）より大腿部筋組織を摘出し、脂肪および結合組織などを除去・ミンスした後、３７℃で１時間、１．２５ｍｇ／ｍＬプロテアーゼ水溶液（Ｓｉｇｍａ社）で処理した。分画遠心分離にて筋線維断片などを除去した後、ポリリジン（Ｓｉｇｍａ社）およびフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ社）をコーティングしたプレートに播種し、５％ＣＯ2雰囲気中、３７℃で２４時間前培養後、ＰＢＳで洗浄することで筋衛星細胞を単離した。培地としては、１０％ウマ血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を添加したＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いた。以下、当該培地を「１０％ＨＳ−ＤＭＥＭ」と略記する。【００４４】
（２）  被検物質処理
実施例１で調製した各レモンマートル抽出物を水に溶解または懸濁した後、１０％ＨＳ−ＤＭＥＭに添加し、被検物質を含む１０％ＨＳ−ＤＭＥＭを調製した。単離筋衛星細胞の培地を、被検物質を含む１０％ＨＳ−ＤＭＥＭに交換し、２４時間培養した。なお、被検物質の処理濃度は２．５μｇ／ｍＬとし、溶媒対照として水を用いた。【００４５】
（３）  筋衛星細胞活性化評価
培養終了から２時間前に、培地にブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ，Ｓｉｇｍａ社）を終濃度が１０μＭになるよう添加した。培養終了後、被検物質で処理した筋衛星細胞を、氷冷した０．１％Ｈ2Ｏ2添加メタノールを使って４℃で１０分間固定した。さらに、２Ｎ塩酸を使って３７℃で１時間ＤＮＡ変性処理を行った後、一次抗体として抗ＢｒｄＵ抗体（Ｓｉｇｍａ社）、二次抗体としてＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ社）を用い、ジアミノメンチジン（ＤＡＢ，Ｓｉｇｍａ社）にて発色させ、ＢｒｄＵ陽性細胞を検出した。総細胞数に占めるＢｒｄＵ陽性細胞の割合を求め、筋衛星細胞活性化率とした。結果を表２に示す。【００４６】
【表２】
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【００４７】
表２に示す結果のとおり、溶媒対照と比較して、レモンマートルの水抽出物および２０〜９５ｖ／ｖ％エタノール水抽出物には、明確な筋衛星細胞活性化効果が認められた。【００４８】
実施例３：  筋衛星細胞活性化能評価のためのｉｎ  ｖｉｖｏ試験
（１）  被検物質投与
１４週齢の雄性ＳＤラット（日本エスエルシー社）を、体重を基準にして、６匹ずつ、対照群、レモンマートル水抽出物投与群、レモンマートルエタノール水抽出物投与群の３群に分けた。各群に、それぞれ水、レモンマートル水抽出物またはレモンマートル６０ｖ／ｖ％エタノール水抽出物を、５００ｍｇ／ｋｇ体重となるように１日１回、４日間経口投与した。さらに、解剖２時間前に、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ，Ｓｉｇｍａ社）を５０ｍｇ／ｋｇ体重の割合で腹腔内投与した。【００４９】
（２）  筋衛星細胞の単離
上記ラットより大腿部筋組織を摘出し、脂肪および結合組織などを除去・ミンスした後、３７℃で１時間、１．２５ｍｇ／ｍＬプロテアーゼ水溶液（Ｓｉｇｍａ社）で処理した。分画遠心分離にて筋線維断片などを除去した後、ポリリジン（Ｓｉｇｍａ社）およびフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ社）をコーティングしたプレートに播種し、５％ＣＯ2雰囲気中、３７℃で２４時間前培養後、ＰＢＳで洗浄することで筋衛星細胞を単離した。培地としては、上記実施例２（１）で用いた１０％ＨＳ−ＤＭＥＭを使った。【００５０】
（３）  筋衛星細胞活性化評価
単離した筋衛星細胞を、氷冷した０．１％Ｈ2Ｏ2添加メタノールを使って４℃で１０分間固定した。さらに、２Ｎ塩酸を使って３７℃で１時間ＤＮＡ変性処理を行った後、一次抗体として抗ＢｒｄＵ抗体（Ｓｉｇｍａ社）、二次抗体としてＨＲＰ結合抗マウスＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ社）を用い、ジアミノメンチジン（ＤＡＢ，Ｓｉｇｍａ社）にて発色させ、ＢｒｄＵ陽性細胞を検出した。総細胞数に占めるＢｒｄＵ陽性細胞の割合を求め、筋衛星細胞活性化率とした。さらに、対照群の筋衛星細胞活性化率を基準として、各群の筋衛星細胞活性化率の比を筋衛星細胞活性化度とした。結果を表３に示す。【００５１】
【表３】
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【００５２】
表３に示す結果のとおり、レモンマートルの水抽出物および６０ｖ／ｖ％エタノール水抽出物の筋衛星細胞活性化効果は、対照群に比してそれぞれ約２．０倍および約１．７倍となっていた。Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を行ったところ、水抽出物投与群および６０ｖ／ｖ％エタノール水投与群には危険率５％以下で有意な筋衛星細胞活性化効果が認められた。表３中、「＊」は、対照群に対して有意差があることを示す。
【国際調査報告】
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