(57)【要約】  本発明によれば、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を新規な製造中間体として使用することにより、出発原料である４’−エピダウノルビシンに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンを効率的に除去することができ、高純度エピルビシンを製造することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）
【化１】
2016159092.tif 000009
で示される４’−エピダウノルビシンと、有機酸とを溶媒中で混合し、下記式（２）
【化２】
2016159092.tif 000010
で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を形成させる工程を含む、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の製造方法。
【請求項２】
４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を形成させる工程が、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物を形成させる工程を含む請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を形成させる工程が、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の結晶化工程を含む請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
４’−エピダウノルビシンの有機酸塩がシュウ酸塩である請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
４’−エピダウノルビシンの有機酸塩がベンゼンスルホン酸塩である請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
４’−エピダウノルビシンの有機酸塩がｐ−トルエンスルホン酸塩である請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の製造方法により製造された４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を中間体として使用して、下記式（３）
【化３】
2016159092.tif 000011
で示されるエピルビシンまたはその塩を製造する工程を含む、エピルビシンまたはその塩の製造方法。
【請求項８】
最終生成物がエピルビシン塩酸塩である請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
下記式（４）で示される
【化４】
2016159092.tif 000012
４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１０】
ＨＰＬＣ純度が９０％以上である４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１１】
有機酸塩がシュウ酸塩である請求項１０に記載の４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１２】
有機酸塩がベンゼンスルホン酸塩である請求項１０に記載の４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物。
【請求項１３】
有機酸塩がｐ−トルエンスルホン酸塩である請求項１０に記載の４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はエピルビシンおよびその塩（例えば、医薬的に許容される塩）の製造方法ならびにその新規な製造中間体および該中間体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
エピルビシンは、アントラサイクリン系の抗生物質であり、急性白血病、悪性リンパ腫、乳癌、卵巣癌、胃癌、肝癌、尿路上皮癌などの治療に用いられている。また、エピルビシンはその抗腫瘍活性と副作用低減の面で同じアントラサイクリン系の抗生物質であるダウノルビシンやドキソルビシンよりも優れており、臨床上、極めて有用な薬剤である。【０００３】
エピルビシンの製造方法としては、微生物発酵生産物であるダウノルビシンを出発原料として化学変換を経てエピルビシンを製造する方法が開示されている。例えば、メタノリシスでダウノルビシンをダウノマイシノンおよびダウノサミンに分割し、ダウノマイシノンの１４位にアセトキシ基を導入してダウノマイシノンを１４−アセトキシダウノマイシノンに変換し、ダウノサミンのアミノ糖部分の４’位水酸基を反転させてダウノサミンを４’−エピダウノサミンに変換し、４’−エピダウノサミンを１４−アセトキシダウノマイシノンとカップリングし、得られた化合物をエピルビシンに変換することでエピルビシンを製造する方法が開示されている（特許文献１）。【０００４】
上記のエピルビシンの製造方法は、多段階の合成工程を必要とすることから煩雑であり、収率が低いという工業的製造法の観点での課題がある。【０００５】
一方、４’−エピダウノルビシンまたはその塩を出発原料とし、短工程でエピルビシンを製造する方法が開示されている（特許文献２）。【０００６】
しかし、該特許文献には、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を出発原料とする例だけが開示されているだけで、その他の塩についての具体的な記載および例示はない。また、この方法によって得られるエピルビシンの純度に関する記述は無く、例示されている４’−エピダウノルビシン塩酸塩を出発原料として得られた、エピルビシン塩酸塩の純度については言及していない。【０００７】
エピルビシンは各国の医薬品規格、例えば、日本薬局方、欧州薬局方、米国薬局方などに既に記載されていることから、高純度のエピルビシンの製造技術の構築、すなわち、製造における不純物の管理も製造上の課題である。【０００８】
前述の課題を解決するために、高純度な出発原料を使用することは、エピルビシンの不純物を低減し、より高純度なエピルビシンの製造を可能とする。とりわけ、高純度な４’−エピダウノルビシンまたはその塩が調製可能であれば、高純度なエピルビシンが効率的に製造可能となり、工業的製造法の観点での課題も解決可能となる。【０００９】
４’−エピダウノルビシンは、例えば微生物の発酵培養、続く精製により製造される（特許文献３、非特許文献１）。発酵培養を起源として製造される４’−エピダウノルビシンには、代表的な不純物として１３−ジヒドロエピダウノルビシン、４’−エピフュードマイシンが含まれることが知られている。また、４’−エピダウノルビシン塩酸塩化の方法（特許文献４、特許文献５および非特許文献２）および４’−エピダウノルビシン塩酸塩の結晶化の方法（特許文献６）が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許５８７４５５０号公報
【特許文献２】特開２００７−２６１９７６号公報
【特許文献３】特表２０１０−５２５８２８号公報
【特許文献４】米国特許４１１２０７６号公報
【特許文献５】米国特許４３４５０６８号公報
【特許文献６】特表２０１３−５０３８２６号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１６，６９−７４，１９９８
【非特許文献２】Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７９，１９３−２０４，１９８０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、高純度な４’−エピダウノルビシンを調製するため、発酵培養により製造された４’−エピダウノルビシンを、当業者に周知の精製方法、例えば、イオン交換樹脂および合成吸着剤の使用、分液、抽出等を実施したが、精製効果は低く、高純度な４’−エピダウノルビシンは得られなかった。【００１３】
また、本発明者らは、公知の方法、例えば、特許文献４、特許文献５および非特許文献２に開示されている４’−エピダウノルビシン塩酸塩化の方法に従い、発酵培養により製造された４’−エピダウノルビシンから４’−エピダウノルビシン塩酸塩を調製した。その結果、精製効果は低く、高純度な４’−エピダウノルビシン塩酸塩は得られなかった。【００１４】
一方、本発明者らは、特許文献６に開示されている４’−エピダウノルビシン塩酸塩を結晶化する方法を追試した結果、１３−ジヒドロエピダウノルビシン、４’−エピフュードマイシンの低減が認められた。しかし、その効果は十分でなく、高純度の４’−エピダウノルビシン塩酸塩を得るためには結晶化を繰り返す必要がある。結晶化の繰り返しは、工業的製造法の観点（収率、操作性、製造コスト）から不向きである。【００１５】
そこで、本発明は、４’−エピダウノルビシンに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンが十分除去された新規な製造中間体、４’−エピダウノルビシンを出発原料とし、この中間体を効率的に製造する方法、並びに、この中間体を使用し、エピルビシンまたはその塩（例えば、医薬上許容しうる塩）を効率的かつ高純度に製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、鋭意検討した結果、４’−エピダウノルビシンに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンが十分除去された新規な製造中間体である４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物と、４’−エピダウノルビシンを出発原料とし、この中間体を効率的に製造する方法を見出し、更にこの中間体を使用し、エピルビシンまたはその塩（例えば、医薬上許容しうる塩）を効率的かつ高純度に製造する方法を見出し、本発明を完成させたものである。【００１７】
すなわち、本発明は、
［１］下記式（１）
【化１】
2016159092.tif 000002
で示される４’−エピダウノルビシンと、有機酸とを溶媒中で混合し、下記式（２）
【化２】
2016159092.tif 000003
で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を形成させる工程を含む、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の製造方法、
［２］４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を形成させる工程が、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物を形成させる工程を含む［１］に記載の製造方法、
［３］４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を形成させる工程が、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の結晶化工程を含む［１］に記載の製造方法、
［４］４’−エピダウノルビシンの有機酸塩がシュウ酸塩である［１］から［３］のいずれかに記載の製造方法、
［５］４’−エピダウノルビシンの有機酸塩がベンゼンスルホン酸塩である［１］から［３］のいずれかに記載の製造方法、
［６］４’−エピダウノルビシンの有機酸塩がｐ−トルエンスルホン酸塩である［１］から［３］のいずれかに記載の製造方法、
［７］上記［１］から［６］のいずれかに記載の製造方法により製造された４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を中間体として使用して、下記式（３）
【化３】
2016159092.tif 000004
で示されるエピルビシンまたはその塩を製造する工程を含む、エピルビシンまたはその塩の製造方法、
［８］最終生成物がエピルビシン塩酸塩である［７］に記載の製造方法、
［９］下記式（４）で示される
【化４】
2016159092.tif 000005
４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、
［１０］ＨＰＬＣ純度が９０％以上である４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、
［１１］有機酸塩がシュウ酸塩である［１０］に記載の４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、
［１２］有機酸塩がベンゼンスルホン酸塩である［１０］に記載の４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、
［１３］有機酸塩がｐ−トルエンスルホン酸塩である［１０］に記載の４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、に関する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の方法によれば、式（１）で示される４’−エピダウノルビシンを出発原料とし、そこに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンが十分除去された式（２）で示される新規な製造中間体である４’−エピダウノルビシン有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物が調製可能であり、更にこの中間体を使用し、エピルビシンまたはその塩（例えば、医薬上許容しうる塩）を効率的かつ高純度に製造することが可能となる。【００１９】
本発明の方法によれば、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を使用する方法とは異なり、４’−エピダウノルビシンから４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を製造する過程において１回の沈殿化を行うことで、４’−エピダウノルビシンに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンを、効果的に除去することが可能である。加えて、得られた４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物に対して１回の結晶化を行うことで、更に、これら不純物の除去ができる。従って、少ない精製回数（短い製造工程）で効果的に高純度なエピルビシンの製造に供する、式（２）の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を得ることが可能である利点を有している。【００２０】
また、式（２）の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿化ならびに結晶化は、安価な有機酸や汎用溶媒の組み合わせを使用して実施可能であり、本発明の方法は、煩雑な操作を組み合わせることなく式（２）の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物を得ることができる点で効率的であり、製造コスト等の工業的な観点からも有用な方法である。【００２１】
更に、このようにして得られた高純度な式（２）の化合物またはその水和物もしくは溶媒和物の結晶は、例えば、特許文献２に記載の方法により、高純度なエピルビシンまたはその塩への誘導が可能である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、以下のスキームによって高純度なエピルビシン（３）を製造する方法および新規な製造中間体であるエピルビシンの有機酸塩（２）に関するものである。
【化５】
2016159092.tif 000006
【００２３】
ここで使用される式（１）で示される４’−エピダウノルビシンとしては、例えば微生物の発酵培養およびそれに続く培養液の精製により製造された４’−エピダウノルビシン（特許文献３、非特許文献１）を使用することができる。
【００２４】
または、発酵培養により製造されるダウノルビシンから化学合成変換を経て製造された４’−エピダウノルビシンも使用可能である。
【００２５】
発酵培養により製造されるダウノルビシンに含まれる代表的な類縁物質として１３−ジヒドロダウノルビシン、フュードマイシンなどが知られている。これら類縁物質が化学合成変換で４’位の水酸基の反転を受けて１３−ジヒドロエピダウノルビシン、４’−エピフュードマイシンなどを与え、４’−エピダウノルビシン粗製物に不純物として含まれる。また、発酵培養により直接製造される４’−エピダウノルビシン粗製物にも１３−ジヒドロエピダウノルビシン、４’−エピフュードマイシンなどが不純物として含まれる。
【００２６】
本発明で使用される有機酸としては、水和物も使用することができる。有機酸の種類は特に限定されないが、好ましくはシュウ酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸である。
【００２７】
本発明の式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物は、特に限定されないが、好ましくは４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、および４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物である。
【００２８】
本発明が提供する４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物は、具体的には以下の方法で製造することができる。
【００２９】
４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物については、４’−エピダウノルビシンを溶媒Ａに溶解させ、この溶液に、溶媒Ｂに溶かしたシュウ酸またはシュウ酸二水和物を加えて４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を沈殿させる。その後、沈殿物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００３０】
溶媒Ａとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ａとして使用可能な有機溶媒は、好ましくはハロゲン系溶媒、具体的にはジクロロメタン、クロロホルムなどであり、更に好ましくはジクロロメタンである。溶媒Ａの使用量は４’−エピダウノルビシンが溶解し得る量であれば特に制限されないが、好ましくは４’−エピダウノルビシンに対し１０〜４００倍容量である。
【００３１】
溶媒Ｂとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｂとして使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドなどであり、好ましくはメタノールである。溶媒Ｂの使用量は、例えば、溶媒Ａの０．１〜１倍容量であり、好ましくは０．２〜０．５倍容量である。シュウ酸またはシュウ酸二水和物の使用量は、例えば１〜２２当量、好ましくは２〜１２当量である。沈殿化温度は通常の製造工程で使用されている温度であり、例えば０〜３０℃であり、好ましくは１５〜２５℃である。沈殿後は必要に応じて所定時間撹拌する。例えば１時間以上など、製造上許容される時間である。
【００３２】
４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物は、別の製造方法、例えば、シュウ酸またはシュウ酸二水和物の水溶液に４’−エピダウノルビシンを添加して溶解させ、この溶液に任意の溶媒を加えて４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を沈殿させる方法でも調製可能である。
【００３３】
この場合、任意の溶媒としては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。任意の溶媒として使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドなどであり、好ましくはメタノール、２−プロパノールである。水の使用量は４’−エピダウノルビシンに対して、例えば５〜５０倍容量であり、好ましくは１０〜２０倍容量である。任意の溶媒の使用量は、例えば、水の１〜１０倍容量であり、好ましくは１〜５倍容量である。シュウ酸またはシュウ酸二水和物の使用量は、例えば１〜１０当量であり、好ましくは１〜５当量である。４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿化温度は、通常の製造工程で使用されている温度、例えば０〜６０℃であり、好ましくは０〜３０℃である。沈殿後は必要に応じて所定時間撹拌する。例えば１時間以上など、製造上許容される時間である。
【００３４】
４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物については、４’−エピダウノルビシンを溶媒Ｃに溶解させ、この溶液に、溶媒Ｄに溶かしたベンゼンスルホン酸一水和物を加えて４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を沈殿させる。その後、沈殿物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００３５】
溶媒Ｃとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｃとして使用可能な有機溶媒は、好ましくはハロゲン系溶媒、具体的にはジクロロメタン、クロロホルムなどであり、更に好ましくはジクロロメタンである。溶媒Ｃの使用量は４’−エピダウノルビシンが溶解し得る量であれば特に制限されないが、好ましくは４’−エピダウノルビシンに対し１０〜４００倍容量である。
【００３６】
溶媒Ｄとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｄとして使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリルなどであり、好ましくはメタノールである。溶媒Ｄの使用量は、例えば、溶媒Ｃの０．０２〜０．２倍容量であり、好ましくは０．０５〜０．１倍容量である。ベンゼンスルホン酸一水和物の使用量は、例えば１〜５当量、好ましくは１〜２当量である。沈殿化温度は通常の製造工程で使用されている温度であり、例えば０〜３０℃であり、好ましくは１５〜２５℃である。沈殿後は必要に応じて所定時間撹拌する。例えば１時間以上など、製造上許容される時間である。
【００３７】
４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物は、別の製造方法、例えば、ベンゼンスルホン酸一水和物の水溶液に４’−エピダウノルビシンを添加して溶解させ、この溶液に任意の溶媒を加えて４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を沈殿させる方法でも調製可能である。
【００３８】
この場合、任意の溶媒としては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。任意の溶媒として使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトニトリルなどであり、好ましくはエタノール、およびアセトンである。水の使用量は４’−エピダウノルビシンに対して、例えば２．５〜１５倍容量であり、好ましくは５〜１０倍容量である。４’−エピダウノルビシンの溶解温度は通常の製造工程で使用されている温度、例えば２０〜６０℃である。任意の溶媒の使用量は、例えば、水の１〜１０倍容量であり、好ましくは１〜５倍容量である。ベンゼンスルホン酸一水和物の使用量は、例えば１〜５当量、好ましくは１〜２当量である。
【００３９】
４’−エピダウノルビシンp−トルエンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物については、４’−エピダウノルビシンを溶媒Ｅに溶解させ、この溶液に、溶媒Ｆに溶かしたp−トルエンスルホン酸一水和物を加えて４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を沈殿させる。その後、沈殿物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００４０】
溶媒Ｅとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｅとして使用可能な有機溶媒は、好ましくはハロゲン系溶媒、アミド系溶媒、およびスルホキシド系溶媒、具体的にはジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドなどであり、更に好ましくはジクロロメタンである。溶媒Ｅの使用量は４’−エピダウノルビシンが溶解し得る量であれば特に制限されないが、好ましくは４’−エピダウノルビシンに対し１０〜４００倍容量である。
【００４１】
溶媒Ｆとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｆとして使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、トルエン、アセトニトリルなどであり、好ましくはメタノールである。溶媒Ｆの使用量は、例えば、溶媒Ｅの０．０２〜１０倍容量であり、好ましくは０．０５〜５倍容量である。p−トルエンスルホン酸一水和物の使用量は１〜２当量の範囲が好ましく、より好ましくは１〜１．５当量である。沈殿化温度は通常の製造工程で使用されている温度であり、例えば０〜３０℃であり、好ましくは１５〜２５℃である。沈殿後は必要に応じて所定時間撹拌する。例えば１時間以上など、製造上許容される時間である。
【００４２】
上記で製造された４’−エピダウノルビシンの各種有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物は、更に結晶化することが可能である。
【００４３】
具体的には、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を水に懸濁させ、これを通常の製造工程で使用されている温度、例えば２０〜６０℃で溶解させる。続いて、この溶液に、任意の溶媒を加えて徐々に冷却させる。その温度は任意であるが、好ましくは０〜３０℃まで徐々に冷却させる。その後、析出物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００４４】
任意の溶媒としては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。任意の溶媒として使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトニトリルなどであり、好ましくはメタノール、および２−プロパノールである。水の使用量は４’−エピダウノルビシンに対して、例えば５〜２０倍容量であり、好ましくは１０〜１５倍容量である。任意の溶媒の使用量は、例えば、水の１〜１０倍容量であり、好ましくは１〜５倍容量である。
【００４５】
４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物については、溶媒Ｇに懸濁させ、これを通常の製造工程で使用されている温度、例えば２０〜６０℃で溶解させる。続いて、この溶液に、溶媒Ｈを加えて徐々に冷却させる。その温度は任意であるが、好ましくは０〜３０℃まで徐々に冷却させる。その後、析出物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００４６】
溶媒Ｇは、例えば、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドなどであり、好ましくは水である。溶媒Ｈとしては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｈとして使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトニトリルなどであり、好ましくはエタノール、およびアセトンである。溶媒Ｇの使用量は４’−エピダウノルビシンに対して、例えば２．５〜１５倍容量であり、好ましくは５〜１０倍容量である。溶媒Ｈの使用量は、例えば、溶媒Ｇの１〜１０倍容量であり、好ましくは１〜５倍容量である。
【００４７】
４’−エピダウノルビシンp−トルエンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物については、有機溶媒と水の混液に懸濁し、これを通常の製造工程で使用されている温度、例えば２０〜６０℃で溶解させる。続いて、この溶液を徐々に冷却させる。その温度は任意であるが、好ましくは０〜３０℃まで徐々に冷却させる。その後、析出物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００４８】
有機溶媒としては、当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、アセトニトリルなどであり、好ましくはアセトンである。有機溶媒と水の割合は、例えば、１：１〜５：１であり、好ましくは１：１〜２：１である。混液の使用量は４’−エピダウノルビシンに対して、例えば、１０〜３０倍容量であり、好ましくは１０〜２０倍容量である。
【００４９】
また、４’−エピダウノルビシンp−トルエンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物は、以下の方法でも結晶化が可能である。
【００５０】
４’−エピダウノルビシンp−トルエンスルホン酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を溶媒Ｉに懸濁させ、これを通常の製造工程で使用されている温度、例えば２０〜６０℃で溶解させる。この溶液に、溶媒Ｊを加えて析出させ、必要であれば徐々に冷却させる。その後、析出物を濾取し、必要に応じて減圧乾燥させる。
【００５１】
溶媒Ｉは、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドなどであり、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである。溶媒Ｊとしては、水または当業者が汎用する有機溶媒を使用することができる。溶媒Ｊとして使用可能な有機溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アセトン、酢酸エチル、トルエンなどであり、好ましくはエタノールである。溶媒Ｉの使用量は、４’−エピダウノルビシンに対して、例えば２．５〜１５倍容量であり、好ましくは５〜１０倍容量である。溶媒Ｊの使用量は、例えば、溶媒Ｉの１〜５倍容量であり、好ましくは２〜２．５倍容量である。
【００５２】
４’−エピダウノルビシンから４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を製造する過程において、１回の沈殿化を行うことによる、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率は、出発原料である式（１）で示される４’−エピダウノルビシンに含まれる量に対して、それぞれ２５％以上、および３７％以上である。また、沈殿物として得られた４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を１回結晶化することによる、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率は、沈殿物として得られた４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物に含まれる量に対して、それぞれ７７％以上、および６３％以上である。
【００５３】
本発明により製造された式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物に含まれる不純物の量（ＨＰＬＣ分析における有機酸ピークを除いたピーク面積の和に対する不純物ピーク面積の百分率）は、出発原料として用いる４’−エピダウノルビシンに含まれる不純物の量によって変わるため、一定しないが、１回の沈殿化により１３−ジヒドロエピダウノルビシンは２．６％以下となり、４’−エピフュードマイシンは３．５％以下となる。また、さらに１回の結晶化を実施することにより、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の結晶中の１３−ジヒドロエピダウノルビシンは１．６％以下となり、４’−エピフュードマイシンは０．９％以下となる。これらの不純物の量は純度の高い出発原料を使用することにより、さらに低減させることが可能である。
【００５４】
本発明により製造された式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物のＨＰＬＣ純度は９０％以上である。また沈殿物として得られた４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物をさらに結晶化することにより、ＨＰＬＣ純度は９５％以上に向上させることができる。
【００５５】
本発明により製造された式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を用いて、例えば、特許文献２に記載の方法により高純度なエピルビシンまたはその塩（例えば、医薬上許容しうる塩）を製造することができる。例えば、エピルビシン塩酸塩を製造するには、初めに、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を、ケタール剤存在下、臭素化剤と反応させて、ブロモケタール体を得る。次に、酸性条件下、ケトン系溶媒と処理してブロモケトン体を得る。更に、カルボン酸金属塩存在下、ブロモケトン体を加水分解し、エピルビシンを主成分として含有する溶液とする。エピルビシンを主成分として含有する溶液はイオン交換樹脂（塩化物イオン型）に通してエピルビシン塩酸塩の水溶液とし、更に吸着性樹脂により精製する。エピルビシン塩酸塩溶液の主分画を濃縮し、エピルビシン塩酸塩を得る。
【００５６】
より具体的には、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物に有機溶媒を加える。有機溶媒は当該反応が進行するものであれば特に制限されず、単一溶媒でも数種類の溶媒を混合してもよい。また、溶媒の混合比は任意の割合をとることができる。アルコール類、エーテル類およびこれらからなる任意の混合溶媒が好ましい。さらに好ましくはメタノールと１，４−ジオキサンの混合溶媒である。次に、４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物に、ケタール剤と臭素化剤を作用させ、ブロモケタール体とする。使用するケタール剤は、例えば、オルトギ酸アルキルであり、オルトギ酸アルキルとしては、例えば、オルトギ酸トリメチル、オルトギ酸トリエチル、オルトギ酸トリプロピル、オルトギ酸トリブチルなどが使用可能である。ケタール剤は、好ましくはオルトギ酸トリメチルである。臭素化剤は好適には臭素である。反応終了後、反応液に存在する過剰な酸を除くため、酸捕捉剤、例えば酸化プロピレンを添加する。酸捕捉剤を添加した後、濃縮し、濃縮液に貧溶媒を添加してブロモケタール体を沈殿物として単離する。貧溶媒としてはエーテル類が使用可能である。貧溶媒は、好ましくはジイソプロピルエーテルである。
【００５７】
ブロモケタール体の沈殿物は乾燥することなく次工程に使用することができる。湿状または乾燥ブロモケタール体を臭化水素酸の水溶液とケトン系溶媒に溶解して反応させる。ケトン系溶媒としては、アセトン、メチルエチルケトンなどが使用可能である。ケトン系溶媒は、好ましくはアセトンである。反応後は、ブロモケトン体を単離することなく、エピルビシンに変換することが可能である。即ち、ブロモケトン体の溶液にカルボン酸アルカリ金属塩を混合し、次いで、塩基でｐＨを調整することでエピルビシンを主成分として含有する溶液を得る。カルボン酸アルカリ金属塩としては、ギ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ギ酸カリウム、酢酸カリウムなどが使用可能である。カルボン酸アルカリ金属塩は、好ましくはギ酸ナトリウムである。塩基としては、アルカリ金属水酸化物が使用可能である。塩基は、好ましくは水酸化ナトリウムである。ｐＨは４．０〜６．０に調整することが好ましく、４．５〜５．５に調整することが更に好ましい。
【００５８】
エピルビシンを主成分として含有する溶液からエピルビシンを塩酸塩として単離するため、溶液を水で希釈した後、塩酸を加えｐＨを調整する。ｐＨは２．０〜４．０に調整することが好ましく、２．５〜３．５に調整することが更に好ましい。次に、調整液をイオン交換樹脂（塩化物イオン型）に通してエピルビシン塩酸塩の水溶液を得る。更にこの水溶液を吸着性樹脂に吸着させ、水、有機溶媒と水の混合溶液の順で通液し精製する。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトンなどが使用可能である。有機溶媒は、好ましくはメタノールである。エピルビシン塩酸塩の主分画は濃縮され、この濃縮液にエタノールを加えて更に濃縮し、これを濃縮乾固してエピルビシン塩酸塩を得る。
【００５９】
以上に説明した通り、本発明は、４’−エピダウノルビシンに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンが十分除去された新規な製造中間体である４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物、４’−エピダウノルビシンを出発原料とし、この中間体を効率的に製造する方法、並びに、この中間体を使用し、エピルビシンまたはその塩（例えば、医薬上許容しうる塩）を効率的かつ高純度に製造する方法を提供するものである。
【実施例】
【００６０】
以下に本発明の実施例および比較例を示すが、本発明は下記実施例に限定されない。【００６１】
４’−エピダウノルビシン、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩、４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩、４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩、および４’−エピダウノルビシン塩酸塩のＨＰＬＣ純度は、以下の条件でＨＰＬＣ分析した際の４’−エピダウノルビシンのピーク面積比である。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率は、４’−エピダウノルビシンまたは４’−エピダウノルビシン塩を以下の条件でＨＰＬＣ分析した際、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンのピーク面積を４’−エピダウノルビシンのピーク面積で除した値をそれぞれ１３−ジヒドロエピダウノルビシンの含有量および４’−エピフュードマイシンの含有量とし、算出した。
ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ  ２．６ｕ  Ｃ１８  １００Ａ、２．６μｍ、３．０×１５０ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製）
移動相Ａ：５ｍｍｏｌ／Ｌラウリル硫酸ナトリウム＋１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．２）
移動相Ｂ：アセトニトリル
流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：４０℃
測定波長：２５４ｎｍ
分析時間：１３分
データ収集時間：２．０〜１３．０分
グラジェント条件：
時間（分）      移動相Ａの％      移動相Ｂの％
０              ７５．０％        ２５．０％
１０．００      ３５．０％        ６５．０％
１０．０１      ７５．０％        ２５．０％
１３．００      ７５．０％        ２５．０％
上記測定条件において、４’−エピダウノルビシンは約８．７分にピークが確認され、１３−ジヒドロエピダウノルビシンは約８．１分、４’−エピフュードマイシンは約８．５分にピークが確認される。【００６２】
エピルビシン塩酸塩のＨＰＬＣ純度は以下の条件でＨＰＬＣ分析した際のエピルビシンのピーク面積比である。
ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｓｅｎｓｈｕ  Ｐａｋ  ＯＤＳ−１３０１Ｓ  ４．６×３００ｍｍ（センシュー科学社製）
移動相：（０．３（ｗ／ｖ）％ラウリル硫酸ナトリウム＋０．１４（ｖ／ｖ）％リン酸緩衝液）／アセトニトリル溶液＝１／１
流量：１．１ｍｌ／ｍｉｎ．
温度：２５℃
測定波長：２５４ｎｍ
分析時間：３０分
上記測定条件において、エピルビシンは約１１分にピークが確認される。【００６３】
実施例１：
４’−エピダウノルビシン１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度７９．９％）をジクロロメタン６０ｍＬに溶かし、シュウ酸２９９ｍｇのメタノール１５ｍＬ溶液を加え、１５〜２５℃で２２時間撹拌した。沈殿物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩１５０ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして１２９ｍｇ）を得た。収率は８５．５％、ＨＰＬＣ純度は９４．８％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ５２％および５１％であった。また、ＨＰＬＣ分析にて４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩中のシュウ酸ピークはシュウ酸（試薬特級品）の保持時間と完全に一致した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）；７．５５（１Ｈ，ｄｄ）、７．３５（１Ｈ，ｄ）、７．２７（１Ｈ，ｄ）、５．３０（１Ｈ，ｄ）、４．６８（１Ｈ，ｍ）、３．８６（１Ｈ，ｍ）、３．７８（３Ｈ，ｓ）、３．２６（２Ｈ，ｍ）、２．７６（１Ｈ，ｄ）、２．５６（１Ｈ，ｄ）、２．３１（３Ｈ，ｄ）、２．１４（２Ｈ，ｍ）、１．９８（１Ｈ，ｄｄ）、１．８１（１Ｈ，ｄｄｄ）、１．２２（３Ｈ，ｄ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ）；ｍ／ｚ  ５２８［Ｍ＋Ｈ］＋【００６４】
実施例２：
４’−エピダウノルビシン５．０ｇ（ＨＰＬＣ純度７６．８％）をジクロロメタン２０００ｍＬに溶かし、シュウ酸１０ｇのメタノール４００ｍＬ溶液を加え、１５〜２５℃で２２時間撹拌した。沈殿物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩５．１ｇ（４’−エピダウノルビシンとして４．４ｇ）を得た。収率は８８．３％、ＨＰＬＣ純度は９４．４％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ４８％および４８％であった。【００６５】
実施例３：
４’−エピダウノルビシン１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度７９．９％）をジクロロメタン６０ｍＬに溶かし、シュウ酸二水和物４１９ｍｇのメタノール１２ｍＬ溶液を加え、１５〜２５℃で２０時間撹拌した。沈殿物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩１５３ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして１３２ｍｇ）を得た。収率は８８．１％、ＨＰＬＣ純度は９５．３％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ５６％および５８％であった。【００６６】
実施例４：
４’−エピダウノルビシン１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度７９．９％）をシュウ酸５１ｍｇの水１．５ｍＬ溶液に溶かし、メタノール１．５ｍＬを加え、１５〜２５℃で２２時間撹拌した。沈殿物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩１３５ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして１０９ｍｇ）を得た。収率は７２．８％、ＨＰＬＣ純度は９５．９％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ７６％および６１％であった。【００６７】
実施例５：
４’−エピダウノルビシン１．０ｇ（ＨＰＬＣ純度７５．８％）をジクロロメタン１００ｍＬに溶かし、ベンゼンスルホン酸一水和物３３４ｍｇのメタノール５ｍＬ溶液を加え、１５〜２５℃で１９時間撹拌した。沈殿物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩１．１２ｇ（４’−エピダウノルビシンとして０．８８ｇ）を得た。収率は８７．７％、ＨＰＬＣ純度は９１．６％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ２５％および３７％であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）；７．７４（２Ｈ，ｍ，Ｃ６Ｈ５ＳＯ３Ｈ）、７．６４（１Ｈ，ｄｄ）、７．５０（３Ｈ，ｍ，Ｃ６Ｈ５ＳＯ３Ｈ）、７．４３（１Ｈ，ｄ）７．３６（１Ｈ，ｄ）、５．３９（１Ｈ，ｄ）、４．７６（１Ｈ，ｍ）、３．９９（１Ｈ，ｍ）、３．８８（３Ｈ，ｓ）、３．３６（２Ｈ，ｍ）、２．８６（１Ｈ，ｄ）、２．６５（１Ｈ，ｄ）、２．４０（３Ｈ，ｓ）、２．２２（２Ｈ，ｍ）、２．０６（１Ｈ，ｄｄ）、１．９０（１Ｈ，ｄｄｄ）、１．３１（３Ｈ，ｄ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ）；ｍ／ｚ  ５２８［Ｍ＋Ｈ］＋【００６８】
実施例６：
４’−エピダウノルビシン１．０ｇ（ＨＰＬＣ純度７５．８％）をジクロロメタン１００ｍＬに溶かし、p−トルエンスルホン酸一水和物３６１ｍｇのメタノール５ｍＬ溶液を加え、１５〜２５℃で２２時間撹拌した。沈殿物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩１．０８ｇ（４’−エピダウノルビシンとして０．８４ｇ）を得た。収率は８３．８％、ＨＰＬＣ純度は９２．８％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ３７％および４７％であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）；７．５９（１Ｈ，ｄ，ｐ−ＭｅＣ６Ｈ４ＳＯ３Ｈ）、７．５８（１Ｈ，ｄｄ）、７．３４（１Ｈ，ｄ）、７．３０（１Ｈ，ｄ）、７．２６（１Ｈ，ｄ，ｐ−ＭｅＣ６Ｈ４ＳＯ３Ｈ）、５．３８（１Ｈ，ｄ）、４．７４（１Ｈ，ｍ）、３．９８（１Ｈ，ｍ）、３．８３（３Ｈ，ｓ）、３．３６（２Ｈ，ｍ）、２．８２（１Ｈ，ｄ）、２．６２（１Ｈ，ｄ）、２．４０（３Ｈ，ｓ）、２．３０（３Ｈ，ｓ，ｐ−ＭｅＣ６Ｈ４ＳＯ３Ｈ）、２．２３（２Ｈ，ｍ）、２．０３（１Ｈ，ｄｄ）、１．９１（１Ｈ，ｄｄｄ）、１．３２（３Ｈ，ｄ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ）；ｍ／ｚ  ５２８［Ｍ＋Ｈ］＋【００６９】
比較例１：
４’−エピダウノルビシン１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度７９．９％）を用い、特許文献５の実施例２の塩酸塩化の方法に従い、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を得た。収率は７７．０％、ＨＰＬＣ純度は８４．３％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ０％および６％であった。【００７０】
比較例２：
４’−エピダウノルビシン１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度７９．９％）を用い、非特許文献２の塩酸塩化の方法に従い、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を得た。収率は８０．８％、ＨＰＬＣ純度は７７．０％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ３％および９％であった。【００７１】
比較例３：
４’−エピダウノルビシン１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度７９．９％）を用い、特許文献４の実施例９に従い、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を得た。収率は９２．１％、ＨＰＬＣ純度は８０．２％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ０％および４％であった。【００７２】
１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率、ＨＰＬＣ純度、ならびに収率を下記表１に示した。【００７３】
【表１】
2016159092.tif 000007
【００７４】
実施例１〜６で得られた式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩、および比較例１〜３で得られた４’−エピダウノルビシン塩酸塩の１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率を比較した結果、式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩でこれら不純物が効率的に除去された。【００７５】
実施例７：
４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩２．６５ｇ（４’−エピダウノルビシンとして２．００ｇ）（ＨＰＬＣ純度９２．９％）を水２０ｍＬに懸濁し、６０℃で加温溶解した。この溶液にメタノール２０ｍＬを加え、２５℃まで徐々に冷却した。析出物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩１．８３ｇ（４’−エピダウノルビシンとして１．７０ｇ）を得た。収率は８５．１％、ＨＰＬＣ純度は９９．２％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ９２％および８９％であった。また、得られた４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩は偏光が認められた。【００７６】
実施例８：
４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩２６２ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして２００ｍｇ）（ＨＰＬＣ純度９２．９％）を水２．０ｍＬに懸濁し、６０℃で加温溶解した。この溶液に２−プロパノール２．０ｍＬを加え、２５℃まで徐々に冷却した。析出物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩１９７ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして１７８ｍｇ）を得た。収率は８９．１％、ＨＰＬＣ純度は９８．６％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ９０％および８９％であった。また、得られた４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩は偏光が認められた。【００７７】
実施例９：
４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩６４ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして５０ｍｇ）（ＨＰＬＣ純度９１．６％）を水２５０μＬに懸濁し、４５℃で加温溶解した。この溶液にエタノール２５０μＬを加え、２５℃まで徐々に冷却した。析出物を濾取し、４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩３１ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして２７ｍｇ）を得た。収率は５３．３％、ＨＰＬＣ純度は９８．７％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ９１％および８０％であった。また、得られた４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩は偏光が認められた。【００７８】
実施例１０：
４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩６４ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして５０ｍｇ）（ＨＰＬＣ純度９１．６％）を水２５０μＬに懸濁し、４５℃で加温溶解した。この溶液にアセトン２５０μＬを加え、２５℃まで徐々に冷却した。析出物を濾取し、４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩４１ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして３５ｍｇ）を得た。収率は６９．２％、ＨＰＬＣ純度は９８．１％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ８３％および７７％であった。また、得られた４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩は偏光が認められた。【００７９】
実施例１１：
４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩６１ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして５０ｍｇ）（ＨＰＬＣ純度９２．８％）を水２５０μＬおよびアセトン３７５μＬの混液に懸濁し、４５℃で加温溶解した。続いて、この溶液を０〜５℃まで徐々に冷却した。析出物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩３１ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして２７ｍｇ）を得た。収率は５３．６％、ＨＰＬＣ純度は９８．４％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ８３％および６３％であった。また、得られた４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩は偏光が認められた。【００８０】
実施例１２：
４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩６５８ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして５００ｍｇ）（ＨＰＬＣ純度９１．０％）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬを加え、３０℃で溶解した。この溶液にエタノール１２．５ｍＬを加え撹拌した。析出物を濾取後、減圧乾燥し、４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩４４７ｍｇ（４’−エピダウノルビシンとして３６５ｍｇ）を得た。収率は７３．０％、ＨＰＬＣ純度は９７．４％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ７７％および６８％であった。また、得られた４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩は偏光が認められた。【００８１】
比較例４：
比較例３の方法により得た４’−エピダウノルビシン塩酸塩８．７ｇ（ＨＰＬＣ純度８４．３％）を用い、特許文献６の実施例２に従い、結晶性４’−エピダウノルビシン塩酸塩を得た。収率は７６．６％、ＨＰＬＣ純度は９４．０％であった。また、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率はそれぞれ７５％および５５％であった。【００８２】
１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率、ＨＰＬＣ純度、ならびに収率を下記表２に示した。【００８３】
【表２】
2016159092.tif 000008
【００８４】
実施例７〜１２で得られた式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩と、比較例４で得られた結晶性４’−エピダウノルビシン塩酸塩との間で、１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンの除去率を比較した。その結果、４’−エピダウノルビシン塩酸塩の結晶化でも１３−ジヒドロエピダウノルビシン、４’−エピフュードマイシンに対する精製効果が認められた。しかし、その効果は４’−エピダウノルビシンの有機酸塩と比べ十分でなく、高純度の４’−エピダウノルビシン塩酸塩を得るためには結晶化を繰り返す必要があることが判明した。結晶化の繰り返しは、工業的製造法の観点（収率、操作性、製造コスト）から不向きである。【００８５】
実施例１３：
実施例７の方法で製造された４’−エピダウノルビシンシュウ酸塩（４’−エピダウノルビシンとして６．２７ｇ、ＨＰＬＣ純度９９．２％）、メタノール６７ｍＬ、１，４−ジオキサン６７ｍＬ、オルトギ酸トリメチル１２ｍＬを混合した後、臭素１．１ｍＬを加えた。室温で４時間撹拌した後、酸化プロピレン３．２ｍＬを加えて更に０．５時間撹拌した。この液を６０ｍＬまで濃縮し、濃縮液をジイソプロピルエーテル７４０ｍＬに添加してブロモケタール体を沈殿化させた。生じた沈殿物を濾取し、乾燥することなく、水１４２ｍＬとアセトン１４６ｍＬの混合溶媒に加えた。混合液に臭化水素酸４．２ｍＬを加えて、室温で２１時間撹拌した。続いて、この反応液に予め調製したギ酸ナトリウム１０ｇと水４２ｍＬの混合溶液を加えた。室温で２４時間撹拌した後、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを５に調整し、更に２４時間撹拌した。この液を塩酸でｐＨ３に調整し、濃縮した。得られた濃縮液を水で２０００ｍＬに調整し、イオン交換樹脂（塩化物イオン型）に通液し、続いて水を通液してエピルビシン塩酸塩を含む溶液を得た。更に、この溶液を吸着性樹脂に吸着させ、水、水／メタノール＝８０／２０（ｖ／ｖ）、水／メタノール＝７０／３０（ｖ／ｖ）の順で、エピルビシン塩酸塩溶液を溶離した。主分画を濃縮し、エタノールを加えて更に濃縮した。得られた残渣を減圧乾燥し、エピルビシン塩酸塩３．２９ｇ（エピルビシンとして２．９９ｇ）を得た。収率は４６．６％、ＨＰＬＣ純度は９９．２％であった。【００８６】
実施例１４：
実施例９の方法で製造された式（２）で示される４’−エピダウノルビシンベンゼンスルホン酸塩（４’−エピダウノルビシンとして６．２７ｇ、ＨＰＬＣ純度９８．７％）を用い、実施例１３と同様の方法でエピルビシン塩酸塩２．４８ｇ（エピルビシンとして２．２２ｇ）を得た。収率は３４．３％、ＨＰＬＣ純度は９７．９％であった。【００８７】
実施例１５：
実施例１１の方法で製造された式（２）で示される４’−エピダウノルビシンｐ−トルエンスルホン酸塩（４’−エピダウノルビシンとして６．２７ｇ、ＨＰＬＣ純度９８．７％）を用い、実施例１３と同様の方法でエピルビシン塩酸塩２．５０ｇ（エピルビシンとして２．２６ｇ）を得た。収率は３５．０％、ＨＰＬＣ純度は９８．１％であった。【００８８】
比較例５：
比較例４の方法で製造された４’−エピダウノルビシン塩酸塩（４’−エピダウノルビシンとして６．２７ｇ、ＨＰＬＣ純度９３．１％）を用い、実施例１３と同様の方法でエピルビシン塩酸塩４．０２ｇ（エピルビシンとして３．４１ｇ）を得た。収率は５２．８％、ＨＰＬＣ純度は９３．７％であった。【００８９】
実施例１３〜１５、および比較例５で得られたエピルビシン塩酸塩についてＨＰＬＣ純度を比較した。その結果、式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩を使用して製造されたエピルビシン塩酸塩のＨＰＬＣ純度は、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を使用して製造されたエピルビシン塩酸塩よりも高純度であった。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
本発明の方法により、高純度な式（２）で示される４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を新規な製造中間体として使用することで高純度なエピルビシンまたは塩を製造することが可能である。また、本発明の方法によれば、４’−エピダウノルビシン塩酸塩を使用する方法とは異なり、４’−エピダウノルビシンから４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物を製造する過程において１回の沈殿化を行うことで４’−エピダウノルビシンに含まれうる代表的な不純物である１３−ジヒドロエピダウノルビシンおよび４’−エピフュードマイシンを、効果的に除去することが可能である。加えて、得られた４’−エピダウノルビシンの有機酸塩またはその水和物もしくは溶媒和物の沈殿物に対して、１回の結晶化を行うことで、更に、これら不純物の除去ができる。
従って、従来の４’−エピダウノルビシン塩酸塩に比べて、少ない精製回数（短い製造工程）で効果的に高純度なエピルビシンまたはその塩の製造に供する、式（２）の化合物を得ることが可能であることから、エピルビシンの工業的な製造の分野において大変有用である。
【国際調査報告】
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