(57)【要約】  本発明は、剤による重篤な副作用や放射線被爆がなく、腫瘍細胞を兵糧攻めにするという極めてシンプルで侵襲性の低い療法を改善して、根治を可能とする療法に使用される腫瘍封止剤を提供することを目的とする。本発明によれば、腫瘍細胞に特異的なＥＰＲ効果を利用し、腫瘍血管のみを透過し腫瘍に集積し定着する微粒子により腫瘍細胞を組織ごと覆い、血管新生誘導因子を放出させず、また低酸素状態で運動性が向上した腫瘍細胞も分離して他の場所へ移動させない、５０ｎｍから５００ｎｍの腫瘍血管内皮細胞の間隙を透過し、該間隙近くの腫瘍細胞及び細胞外マトリックスに付着した後、生体内分解することを特徴とする腫瘍封止剤を提供する。
2017104840.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ラメラ液晶を形成することが可能な低分子の両親媒性化合物を基材とする微粒子を含む生体分解性腫瘍封止剤。
【請求項２】
前記微粒子が２０ｎｍ〜５００ｎｍの粒子径を有する、請求項１に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【請求項３】
前記微粒子が水性媒体中に分散させたエマルションの形態で存在する、請求項１又は２に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【請求項４】
前記両親媒性化合物が下記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【化１】
2017104840.tif 000009
（式中、Ｘ及びＹは、それぞれ、水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し；ｎは、０〜２の整数を表し；ｍは、１又は２を表し；
【化２】
2017104840.tif 000010
は、単結合又は二重結合を表し；及びＲは、２つ以上の水酸基を有する親水性基を表す）
【請求項５】
一般式（Ｉ）中、Ｘ及びＹは一緒になって酸素原子を表し、Ｒがグリセロールから１つの水酸基が除かれた親水基を表す、請求項４に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【請求項６】
前記両親媒性化合物が、以下のいずれかである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の生体分解性腫瘍封止剤：
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカ−４−エノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４，８，１２−トリエノイル）グリセロール、又はモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカ−４，８，１２，１６−テトラエノイル）グリセロール。
【請求項７】
前記微粒子が造影剤及び／又は色素を包含する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【請求項８】
前記両親媒性化合物がモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールであり、前記造影剤がリピオドールである、請求項７に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍部位の血管を透過し、腫瘍組織に選択的に集積及び／又は接着し、一定時間定着して、腫瘍を包囲及び／又は密閉することにより、血管を含む周辺組織から腫瘍組織を遮断及び／又は隔離する微粒子状のデバイス、あるいは腫瘍部位の血管と腫瘍組織間を遮断する微粒子状のデバイスに関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓がんの低侵襲治療の一つとして、肝動脈塞栓術（ＴＡＥ：ｔｒａｎｓ−ｃａｔｈｅｔｅｒ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ）がある。肝臓の障害度が高く、手術ができないほど進行している場合など緩和医療や終末期医療に採用されている。これは、肝動脈を塞栓し、血液が運ぶ栄養や酸素の供給を絶ち、がんを兵糧攻めにして死滅させる治療法である。肝細胞は、肝動脈と門脈血管から栄養等を受けているが、がん化した肝細胞は肝動脈からしか栄養供給を受けない。一方、正常な肝細胞では門脈からの血流が７０％を占めているため、肝動脈を塞栓しても正常細胞が死滅することはないと言われている。【０００３】
また、肝動脈塞栓術に抗がん剤を併用する肝動脈塞栓化学療法（ＴＡＣＥ：ｔｒａｎｓ−ｃａｔｈｅｔｅｒ  ｃｈｅｍｏ−ｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ）では、造影剤と抗がん剤の混濁液を注入後に塞栓材で肝動脈を塞栓する。このとき、混濁液が門脈に流れ出ることがあり、肝動脈と門脈を塞栓して肝梗塞を起こす危険性がある。更に造影剤、抗がん剤及び塞栓材が胆嚢や膵臓に流れれば胆嚢炎や膵炎になる可能性もある。【０００４】
このような危険性に鑑み、前述のような混濁液ではなく、高分子ポリマーを基材とする数百μｍ程度の粒子径の球状ビーズ（マイクロスフィア）に抗がん剤を吸着させ、閉塞した血管内で徐放する機能を備えることによって、薬剤等が血管内に一機に流出することを抑制する塞栓材も出現してきた。【０００５】
塞栓材には、前述のように高分子ポリマーを原材料として体内に永久留置する永久塞栓材と、デンプンやゼラチンのような生体分解性物質を原材料として分解代謝される一時塞栓材がある。しかし、多くの一時塞栓材は塞栓効果が充分ではなく、また動物由来物質は国内の学会で禁忌とされている。【０００６】
一方、塞栓効果の比較的大きな永久塞栓材では永久留置のリスクを覚悟しなければならない。肝硬変のような元々肝臓の機能が損なわれている場合には、肝エネルギーレベルの低下に伴って代謝障害が発生し、肝不全を起こしやすくなる。できるだけ肝機能のダメージを抑えるためには、肝動脈と門脈の血流の再疎通が必要になる。【０００７】
そこで、特許文献１は、カテーテルや目的外の血管内において凝集詰まりを起こすことなく、血管内の目的部位にて完全に塞栓し、特定時間後に血流閉塞状態が解除され、生体内で分解され、代謝又は体外に排出する生分解性物質からなる塞栓材を提案している。【０００８】
動脈塞栓療法（ＴＡＥ／ＴＡＣＥ）では、塞栓効果の不十分な一時塞栓材を使用したり、隙間の生じる球形の塞栓ビーズ等を用いて不完全な塞栓状況が生じると、正常細胞への血流を阻害してダメージを与えるばかりでなく、腫瘍環境を低酸素状態に導き、悪性化の元凶となるリスクが高まる。【０００９】
非特許文献１によると、低酸素状態では、正常細胞さえもがんに対抗する免疫細胞の働きを抑制するタンパク質を分泌し、免疫細胞の一部はがんの味方に回るという。低酸素状態によって悪性度の低いがん細胞は死滅しても、組織に浸潤して拡大するような悪性度の高いがん細胞は、他臓器に転移して浸潤能力を高めるという恐るべき状況が現出することが記載されている。【００１０】
一般に、がん治療においては、がん組織のみを処置することは極めて難しい。外科的切除においては、がん細胞の取り残しを避けるため正常組織まで広めに切除する。抗がん剤を用いる化学療法においては、点滴や静脈注射による投与で全身の正常組織にも大きなダメージを与えている。放射線照射においては、粒子線などビームが絞られてきたものの、放射線の通過する正常組織へのダメージは避けられない。腫瘍組織及び腫瘍細胞のみを選択的に治療できる療法が望まれる所以である。【００１１】
上記の通り、マイクロカテーテルを用いた療法（ＴＡＥ／ＴＡＣＥ）では、医師の技量によるところも多いが、マイクロカテーテルを用いて腫瘍近傍の動脈の中から、腫瘍の栄養動脈を選択的に塞栓することができる。【００１２】
薬物を投与する化学療法では、腫瘍のみを選択に腫瘍に送達させる工夫がなされるようになってきた。一つは、腫瘍に特異的な標識を目指して腫瘍細胞のみに薬剤が奏功する分子標的機能の付与であり、アクティブターゲティング方式と呼ばれている。これに対し腫瘍組織及び腫瘍細胞に特徴的な性質及び構造に即して薬剤が送達されるパッシブターゲティング方式もある。【００１３】
パッシブターゲティングの代表的な原理がＥＰＲ効果（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  Ｅｆｆｅｃｔ）である。【００１４】
正常組織の血管は内皮細胞が隙間なく詰まっているため、薬物等が血管の途中から漏れ出ることはないが、腫瘍血管は構造的に不完全で内皮細胞間の隙間が大きく、５０ｎｍ〜５００ｎｍであると言われている。５００ｎｍ以下の粒径を有する微粒子であれば、腫瘍血管を透過することができる（Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ）。【００１５】
また、腫瘍組織ではリンパ管が未発達であり、物質の循環が不完全になっている。そのため腫瘍血管を透過した物質は、結果的に腫瘍近辺に滞留し、集積することになる（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）。【００１６】
薬剤送達に上記ＥＰＲ効果を利用したＤＤＳ（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ）製剤の研究も盛んになっているが、実用化された例はあまり知られていない。薬剤を腫瘍近傍まで送達しても、然るべきタイミングで細胞内に打込まなければ、薬剤としての効果は薄い。このため、細胞内に薬剤を浸透させる更に巧妙な仕掛けが必要となる。【００１７】
医用材料として、優れた生体適合性、生体分解性、生体環境応答性などの目覚ましい進歩があり、動物由来のリスクを回避できる人工合成化学物質が開発されている。【００１８】
人工合成化学物質として液晶を形成することが知られている両親媒性化合物において、ミセル構造、ベクシル構造、デンドリマー構造などの生体接着性に劣るラメラ構造ではなく、キュービック構造や逆ヘキサゴナル構造などの生体接着性に優れた非ラメラ構造等を自己組織化する低分子液晶化合物が報告されている（特許文献２、特許文献３）。【００１９】
例えば、特許文献２及び３には、注射剤用基材（特許文献２）や、生体接着性を活かした癒着防止剤（特許文献３）が開発されている。しかし、これらの特許文献では、塞栓材若しくは封止材、又は塞栓若しくは封止の用途に関する記述は無い。【００２０】
また、非特許文献２、特許文献４〜５には、非ラメラ液晶を用いた動脈塞栓用塞栓材が開示されている。しかし、非特許文献２、特許文献４〜６に記載の塞栓剤は、両親媒性化合物と水溶性有機溶媒等との混合液を非ラメラ液晶の前駆体としており、血管内でバルクの液晶ゲルを形成させて血流を制御し、又は血管を閉塞する血管内に限定した塞栓であって、ＥＰＲ効果を活用した腫瘍組織への直接的集積や封止を意図していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】特開２００４−３１３７５９号公報
【特許文献２】国際公開第２０１１／０７８３８３号
【特許文献３】国際公開第２０１４／１７８２５６号
【特許文献４】中国特許第１０３０４０７４１号明細書
【特許文献５】中国特許第１０１８２２６３５号明細書
【特許文献６】中国特許第１０３５３６９７４号明細書
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】日経サイエンス２０１４年１１月号  Ｒ．Ｋ．ジェイン「腫瘍血管を味方につける」Ｐ６１
【非特許文献２】「中国の科学技術の今を伝えるＳｃｉｅｎｃｅ  Ｐｏｒｔａｌ  Ｃｈｉｎａ」第４８号：新薬の研究・開発−呉伝斌『「放出制御製剤におけるキュービック液晶」についての研究の進展』２０１０年９月６日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明は、腫瘍細胞を兵糧攻めにする療法によって、侵襲性が低く、がんの悪性化を阻止し、がんの根治を可能とする腫瘍封止剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、所定の両親媒性化合物（脂質）を基材とする微粒子が、腫瘍血管内皮細胞の間隙を透過し、血管外の腫瘍組織に付着し、腫瘍への栄養と酸素の供給並びに腫瘍からの誘導因子の伝達を遮断することによって、その腫瘍細胞を壊死に至らしめることを見出し、本発明を完成させた。【００２５】
すなわち、本発明は以下を包含する。
［１］  非ラメラ液晶を形成することが可能な低分子の両親媒性化合物を基材とする微粒子を含む生体分解性腫瘍封止剤。
［２］  上記微粒子が２０ｎｍ〜５００ｎｍの粒子径を有する、上記［１］に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
［３］  上記微粒子が水性媒体中に分散させたエマルションの形態で存在する、上記［１］又は［２］に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
［４］  上記両親媒性化合物が下記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩である、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の生体分解性腫瘍封止剤。【００２６】
【化１】
2017104840.tif 000003
【００２７】
（式中、Ｘ及びＹは、それぞれ、水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し；ｎは、０〜２の整数を表し；ｍは、１又は２を表し；【００２８】
【化２】
2017104840.tif 000004
【００２９】
は、単結合又は二重結合を表し；及びＲは、２つ以上の水酸基を有する親水性基を表す）
［５］  一般式（Ｉ）中、Ｘ及びＹは一緒になって酸素原子を表し、Ｒがグリセロールから１つの水酸基が除かれた親水基を表す、上記［４］に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
［６］  上記両親媒性化合物が、以下のいずれかである、上記［１］〜［５］のいずれかに記載の生体分解性腫瘍封止剤：
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカ−４−エノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４，８，１２−トリエノイル）グリセロール、又はモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカ−４，８，１２，１６−テトラエノイル）グリセロール。
［７］  上記微粒子が造影剤及び／又は色素を包含する、上記［１］〜［６］のいずれかに記載の生体分解性腫瘍封止剤。
［８］  上記両親媒性化合物がモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールであり、上記造影剤がリピオドールである、上記［７］に記載の生体分解性腫瘍封止剤。
【発明の効果】
【００３０】
本発明によれば、腫瘍細胞を兵糧攻めにする療法によって、抗がん剤等による重篤な副作用や外科手術による大きな外傷もなく、固形悪性腫瘍を治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、本発明の概念を説明するための図である。ＥＰＲ効果により腫瘍血管を透過した微粒子が腫瘍を包囲して栄養等を遮断することを模式的に示した。
【図２】図２（１）は、一実施形態における本発明の造影剤を含む微粒子を含有したエマルションを説明する模式図である。図２（２）は、該微粒子の構造を説明する模式図である。
【図３】図３は、実施例２で調製したゲル状組成物に関するＳＡＸＳ測定の強度分布図である。
【図４】図４は、実施例３で調製したゲル状組成物に関するＳＡＸＳ測定の強度分布図である。
【図５】図５は、実施例４で調製したエマルションに関するＳＡＸＳ測定の強度分布図である。
【図６】図６は、実施例４で調製したエマルションに関する動的光散乱法を用いた粒径分布図である。
【図７】図７は、実施例５で調製したエマルションに関するＳＡＸＳ測定の強度分布図である。
【図８】図８は、実施例５で調製したエマルションに関する動的光散乱法を用いた粒径分布図である。
【図９】図９は、実施例７で調製したエマルションに関する動的光散乱法を用いた粒径分布図である。
【図１０】図１０は、担癌マウス、及び、その腫瘍部位を拡大した近赤外蛍光画像である。
【図１１】図１１は、実施例４で調製したエマルションの投与前後における、担癌マウス腫瘍部位のＣＴ画像である。
【図１２】図１２は、実施例４で調製したエマルションの１０倍希釈液の投与前、１回目投与後、及び２回目投与後における、担癌マウス肺臓のＣＴ画像である。
【図１３】図１３は、ヒト血清中で、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールによるゲル組成物の分解が進行したことを示す撮影画像である。
【図１４】図１４Ａは、乳癌細胞のルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）活性を指標とした、エマルションによる腫瘍部位における血流阻止の効果を示す。図１４Ｂは、エマルションの非投与マウスに対する、血流が阻止された腫瘍部分のサイズ比を経時的にプロットした図である。
【図１５】図１５は、エマルション投与後の腫瘍部位における血中酸素濃度の経時的変化を切片画像として示した図である。青色が還元型ヘモグロビンを示し、赤色が酸化型ヘモグロビンを示す。
【図１６】図１６Ａは、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）を用いて血流を経時的に測定した腫瘍切片の画像を示す図である。図１６Ｂは、エマルションの投与の有無による血流の変化を経時的に記録した結果を示す図である。
【図１７】エマルションを複数回投与した場合の腫瘍体積の変化を経時的に観察した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に係る生体分解性腫瘍封止剤は、非ラメラ液晶を形成することが可能な低分子の両親媒性化合物を基材とし、腫瘍血管内皮細胞の間隙を透過し得る粒子径を有する微粒子であって、この微粒子がその間隙を透過後、高い生体接着性により間隙近傍に存在する腫瘍組織に付着し、腫瘍への栄養と酸素の供給並びに腫瘍からの誘導因子の伝達を遮断することによって、その腫瘍細胞を壊死に至らしめ、その後、付着した微粒子が生体内で分解及び／又は代謝されることを特徴とする。また、本発明に係る生体分解性腫瘍封止剤は、上記特徴を有するが、腫瘍への栄養血管を圧迫して血流を阻止することにより、腫瘍部位での血中の酸素濃度及び栄養供給を減少させ、腫瘍細胞を壊死させる効果も有することから、本発明の腫瘍封止剤には、上記の付加的効果を有する血流阻止剤としても機能する。
【００３３】
１．両親媒性化合物
本発明に係る生体分解性腫瘍封止剤は、非ラメラ液晶を形成することが可能な低分子の両親媒性化合物を含有する。本発明の「低分子」とは、約２０〜１０，０００の分子量を有するものをいう。分子量は、好ましくは５０〜５，０００、より好ましくは１００〜２，５００、さらに好ましくは２００〜１，０００である。また、本発明の「両親媒性化合物」とは、水性媒体中で油中水型の非ラメラ液晶を形成する親水基と疎水基を持つ両親媒性化合物である。
【００３４】
非ラメラ液晶を形成することが可能な低分子の両親媒性化合物の例としては、限定されないが、下記一般式（Ｉ）：
【００３５】
【化３】
2017104840.tif 000005
【００３６】
で表される化合物又はその塩が挙げられる。
【００３７】
一般式（Ｉ）中、Ｘ及びＹは、それぞれ、水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、好ましくは一緒になって酸素原子を表す。
【００３８】
ｎは、０〜２の整数を表し、ｍは、１又は２を表す。一般式（Ｉ）で表される両親媒性化合物において、ｎとｍの組み合わせは、ｎ＝０、ｍ＝１；ｎ＝０、ｍ＝２；ｎ＝１、ｍ＝１；ｎ＝１、ｍ＝２；ｎ＝２、ｍ＝１；又はｎ＝２、ｍ＝２のいずれであってもよい。
【００３９】
上記一般式（Ｉ）中の表記：
【００４０】
【化４】
2017104840.tif 000006
【００４１】
は、単結合又は二重結合を表す。
【００４２】
さらに、上記一般式（Ｉ）中のＲは、２つ以上の水酸基を有する親水性基を表し、以下に限定するものではないが、例えば、グリセロール、エリスリトール、ペンタエリスリトール、ジグリセロール、グリセリン酸、トリグリセロール、キシロース、ソルビトール、アスコルビン酸、グルコース、ガラクトース、マンノース、ジペンタエリスリトール、マルトース、マンニトール、及びキシリトールからなる群から選択されるいずれか１つから１つの水酸基が除かれた親水性基が挙げられる。Ｒの好ましい例は、グリセロールから１つの水酸基が除かれた親水性基である。
【００４３】
また、本発明において、一般式（Ｉ）中の表記：
【００４４】
【化５】
2017104840.tif 000007
【００４５】
は、上記両親媒性化合物が幾何異性体のＥ体（シス体）若しくはＺ体（トランス体）又はそれらの混合物であることを意味する。
【００４６】
一般式（Ｉ）で表される両親媒性化合物の好ましい具体例としては、Ｘ及びＹは一緒になって酸素原子を表し、Ｒがグリセロールから１つの水酸基が除かれた親水基を表した化合物が好ましい。
【００４７】
更に、一般式（Ｉ）で表される両親媒性化合物として、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカ−４−エノイル）グリセロール、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４，８，１２−トリエノイル）グリセロール、又はモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカ−４，８，１２，１６−テトラエノイル）グリセロールが好ましい。さらに、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールがより好ましい。
【００４８】
本発明の両親媒性化合物は、後述の実施例の記載を参考にして合成することができる。あるいは、例えば、国際公開ＷＯ２０１４／１７８２５６、ＷＯ２０１１／０７８３８３、又はＷＯ２００６／０４３７０５に記載されている合成法に従って合成することができる。合成された化合物については、ＮＭＲ測定等の常法により、目的の化合物が得られたことを確認することができる。
【００４９】
２．両親媒性化合物の性質
本発明に係る生体分解性腫瘍封止剤に用いる両親媒性化合物は、水性媒体中において自己組織化することによって、ゲル状組成物として、非ラメラ液晶を形成することができる。本発明で用いる両親媒性化合物によって形成される非ラメラ液晶は、ラメラ液晶ではない構造体であって、Ｌ３相を含むが、疎水基を外側に向けて配向したＩＩ型（油中水型）の液晶であることが好ましく、具体的には、キュービック液晶又は逆ヘキサゴナル液晶であることがより好ましい。
【００５０】
以上の非ラメラ液晶形成能は、常法により液晶構造を解析することによって確認することができる。偏光顕微鏡を用いたペネトレイション法では、Ｉ型（水中油型）キュービック液晶とＩＩ型（油中水型）キュービック液晶を容易に判別できる。また、Ｘ線小角散乱（ＳＡＸＳ）測定により散乱ピークの比から、Ｐｎ３ｍキュービック液晶、Ｉａ３ｄキュービック液晶、Ｉｍ３ｍキュービック液晶、逆ヘキサゴナル液晶を容易に判別することができ、さらにＳＡＸＳデータから算出したピーク値の逆数の比を求めることにより、空間群と格子定数を容易に決定することができる。
【００５１】
本発明に係る両親媒性化合物が非ラメラ液晶を形成できる水性媒体としては、特に限定するものではないが、滅菌水、精製水、蒸留水、イオン交換水、超純水などの水；生理的食塩水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カルシウム水溶液、塩化マグネシウム水溶液、硫酸ナトリウム水溶液、硫酸カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、酢酸ナトリウム水溶液等の電解質水溶液；リン酸緩衝溶液、トリス塩酸緩衝溶液などの緩衝溶液；グリセリン、エチレングリコール、エタノール等の水溶性有機物を含有する水溶液；グルコース、スクロース、マルトース等の糖分子を含有する水溶液；ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール等の水溶性高分子を含む水溶液；オクチルグルコシド、ドデシルマルトシド、プルロニック（ポリエチレングリコール／ポリプロピレングリコール／ポリエチレングリコール共重合体）等の界面活性剤を含む水溶液；細胞内液、細胞外液、間質液、リンパ液、髄液、血液、胃液、血清、血漿、唾液、涙、精液、尿などの体液等が挙げられる。
【００５２】
特に、上記一般式（Ｉ）で表される両親媒性化合物は、広範な環境条件下で高い安定性を示す。例えば、本発明に係る両親媒性化合物は、疎水性基としてイソプレノイド鎖を有することを特徴とし、疎水性基としてオレイン酸などの直鎖脂肪鎖を有する両親媒性化合物と異なって、加水分解に対する耐性が高く、酸化安定性も比較的高い。本発明に係る両親媒性化合物はまた、液晶を形成し得る温度領域が広く、クラフト温度が低く、低温（６℃又はそれ以下、好ましくは０℃又はそれ以下）でも安定して液晶を形成することができる。
【００５３】
本発明で用いる両親媒性化合物によって形成される非ラメラ液晶の特筆すべき機能は、細胞膜の２層のリン脂質と、非ラメラ液晶の外側にある疎水基によって、生体表面への付着性を有することである。
【００５４】
さらに、本発明で用いる両親媒性化合物によって形成される非ラメラ液晶の特筆すべき機能は、化合物の取り込み能である。例えば、疎水性化合物では、液晶の内側に安定して取り込むことができ、水溶性化合物では、液晶が構築した水チャネルに安定して取り込むことができる。
【００５５】
３．生体分解性腫瘍封止剤の調製
本発明に係る生体分解性腫瘍封止剤は、上記両親媒性化合物を含有する基材とする微粒子を含み又は該微粒子からなり、上記微粒子を水性媒体中に分散させたエマルションの形態に調製され得る。
【００５６】
上記微粒子をエマルションの形態に調製するための水性媒体は、特に限定するものではないが、滅菌水、精製水、蒸留水、イオン交換水、超純水などの水；生理的食塩水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カルシウム水溶液、塩化マグネシウム水溶液、硫酸ナトリウム水溶液、硫酸カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、酢酸ナトリウム水溶液等の電解質水溶液；リン酸緩衝溶液、トリス塩酸緩衝溶液などの緩衝溶液；グリセリン、エチレングリコール、エタノール等の水溶性有機物を含有する水溶液；グルコース、スクロース、マルトース等の糖分子を含有する水溶液；ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール等の水溶性高分子を含む水溶液；オクチルグルコシド、ドデシルマルトシド、プルロニック（ポリエチレングリコール／ポリプロピレングリコール／ポリエチレングリコール共重合体）等の界面活性剤を含む水溶液；細胞内液、細胞外液、間質液、リンパ液、髄液、血液、胃液、血清、血漿、唾液、涙、精液、尿などの体液等が挙げられる。
【００５７】
上記微粒子の基剤として、上記両親媒性化合物のみ含有してもよいが、さらに、機能性物質を包含してもよい。実用上、腫瘍封止剤の封止状況（具体的には、血管を透過した後に腫瘍部位に付着、留置する状態や、付着後に徐々に生体分解する経緯）を可視化するために、造影剤や色素のいずれか又はその両者を含有することが好ましい。このように、本発明の腫瘍封止剤は、造影剤及び／又は色素を包含することができることから、臨床的にがんの診断に応用することができる。
【００５８】
造影剤として、Ｘ線ＣＴ用には、疎水性造影剤であるヨウド系リピオドール、水性造影剤であるイオパミロン等、ＭＲＩ用には、Ｇｄ（ガドリニウム）系又はＦｅ（鉄）系の磁性物質、エコー用には超音波リポソーム粒子が挙げられる。これらは、１種類又は２種類以上を含有させてもよい。
【００５９】
また、手術前及び手術中の視認性を確保する色素として、疎水性のクマリンや水溶性のフルオレセイン、ピラニン、シアニンなどの蛍光色素、ルシフェリンなどの発光色素が挙げられる。これらは、１種類又は２種類以上を含有させてもよい。
【００６０】
さらに、造影剤と色素を同時に、それぞれ１種類又は２種類以上を含有させてもよい。
【００６１】
前記両親媒性化合物と造影剤又は／及び色素との配合比は、１００：１〜１：１００であってもよく、例えば、９５：５、１０：１、９０：１０、１０：２、８０：２０、１０：３、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０、１０：９０、５：９５であり得る。好ましくは１００：１〜５０：５０であり、さらに好ましくは１０：１〜１０：３である。
【００６２】
図２（１）は、生体分解性腫瘍封止剤を構成する、様々な粒径を有する微粒子１３を含有するエマルション２０を模式的に示している。微粒子１３は、後述する非ラメラ液晶の細断によって形成されるため、粒径サイズは均一ではなく、図２（１）に示すように様々なサイズが混在しているが、２０ｎｍ〜５００ｎｍの粒径サイズが主体（微粒子全体で好ましくは７０％以上、より好ましくは９０％以上を占め、場合により１００％占めてもよい）であって、２０ｎｍ未満の微粒子１３又は５００ｎｍ超の微粒子１３も存在し得る。したがって、本明細書において、使用の形態に応じて、微粒子１３を粒径サイズによって特定する場合、「２０ｎｍ〜５００ｎｍ」である粒径を有する微粒子には、例えば、「１０ｎｍ〜２００ｎｍ」の粒径を有する微粒子、「３００ｎｍ〜７００ｎｍ」の粒径を有する微粒子等を排除することを意図しない。一方で、「２０ｎｍ〜５００ｎｍ」の粒径サイズには、例示的に「２０ｎｍ〜４００ｎｍ」、「２０ｎｍ〜３００ｎｍ」、「２０ｎｍ〜２００ｎｍ」、「２０ｎｍ〜１００ｎｍ」、「３０ｎｍ〜５００ｎｍ」、「３０ｎｍ〜４００ｎｍ」、「３０ｎｍ〜３００ｎｍ」、「３０ｎｍ〜２００ｎｍ」、「３０ｎｍ〜１００ｎｍ」、「４０ｎｍ〜５００ｎｍ」、「４０ｎｍ〜４００ｎｍ」、「４０ｎｍ〜３００ｎｍ」、「４０ｎｍ〜２００ｎｍ」、「４０ｎｍ〜１００ｎｍ」、「５０ｎｍ〜５００ｎｍ」、「５０ｎｍ〜４００ｎｍ」、「５０ｎｍ〜３００ｎｍ」、「５０ｎｍ〜２００ｎｍ」、「５０ｎｍ〜１００ｎｍ」、「１００ｎｍ〜５００ｎｍ」、「１００ｎｍ〜４００ｎｍ」、「１００ｎｍ〜３００ｎｍ」、「１００ｎｍ〜２００ｎｍ」なども包含することが意図される。
【００６３】
上記微粒子は、典型的には、任意の順番で、１種類又は２種類以上の上記両親媒性化合物又はその塩、造影剤又は／及び色素（含有させる場合）、１種類又は２種類以上の適量の製薬上許容される界面活性剤、及び適量の水性媒体（例えば、生理食塩水、注射用水）等を加えて撹拌・ホモジナイズすることによって調製できる。例えば、微粒子の内相が逆ヘキサゴナル液晶、造影剤又は／及び色素が疎水性である場合、図２（２）の微粒子１３で示される。すなわち、疎水性の造影剤又は／及び色素２４は逆ヘキサゴナル液晶２１の液晶構造側に含まれる。逆に、水溶性の造影剤又は／及び色素２４では、水チャネル２２に包含される。なお、界面活性剤を含む外相２３に覆われることによって、水性媒体中で、微粒子１３は安定に存在する。
【００６４】
前記製薬上許容される界面活性剤としては、製薬又は化粧品分野で使用される任意のものを使用することができ、以下に限定するものではないが、例えば、プルロニック（例えば、プルロニックＦ１２７；ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン（２００ＥＯ）（７０ＰＯ））、ポリソルベート８０（オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン；Ｔｗｅｅｎ  ８０）等を用いることができる。
【００６５】
一実施形態において、本発明の生体分解性腫瘍封止剤は、前記微粒子を分散可能な濃度（例えば、０．００１〜１５重量％）で含んでもよいが、投与対象、投与量などによって決定される。
【００６６】
前記微粒子の確認方法として、微粒子の構造は、例えば、Ｘ線小角散乱（ＳＡＸＳ）やクライオＴＥＭによって解析できる。また、微粒子の粒子径分布は、例えば、ゼータ電位・粒径測定装置によって測定できる。
【００６７】
本発明の微粒子は、上記の典型例に示したように、１種類以上の両親媒性化合物を界面活性剤等と混合し、撹拌及びホモジナイズすることにより調製することができるが、後述する実施例１０に示されるように、超音波破砕やマイクロ流体技術を用いても調製することができる。ここで、「マイクロ流体技術」とは、微小空間で流体を扱う技術の総称であるが、該技術に使用されるデバイスを「マイクロ流体デバイス」と呼ぶ。これは、半導体微細加工技術や精密機械加工技術を応用して作製された、深さ及び幅が典型的には数μｍ〜数１００μｍ程度の流路構造を有する装置である。本明細書では、マイクロ流体技術を用いて微粒子を作製しているが、所望の粒径を有する微粒子を安定に調製することができることから、該技術を用いて微粒子を作製することが好ましい。なお、微粒子の粒径は、当業者に周知の一般的な方法を用いて測定することができる。
【００６８】
４．生体分解性腫瘍封止剤の性質と特徴
（１）シリンジ又はマイクロカテーテル通過性
本発明に係る生体分解性腫瘍封止剤は、前述したように、上記両親媒性化合物によって形成される非ラメラ液晶を微粒子化して、生体適合する水性媒体に分散したエマルションを含む。本エマルションによって、シリンジ又はマイクロカテーテルの通過性を確保している。
（２）腫瘍血管透過性
腫瘍組織に特異的に形成された腫瘍新生血管は、血管を覆うペリサイト（血管周皮細胞）が減少しているため、腫瘍血管における内皮細胞間の間隙は、正常細胞と比較して広がっている。その間隙を漏れ出る粒子が存在する。本生体分解性腫瘍封止剤は、その間隙を通過するのに十分小さな粒子径を持つ。間隙の大きさは個人差があり、腫瘍種別、部位にもよるが、一般に５ｎｍ以上７００ｎｍ以下とされている。
（３）異なる粒子径で構成される分散性
前記腫瘍血管の間隙は大小様々である。本生体分解性腫瘍封止剤は、粒子径は単一ではなく数百ｎｍ幅の分布をもつエマルションのため、どの間隙からも透過することによって集積密度を増加させることができる。
（４）腫瘍組織集積性
前述のように腫瘍血管を透過した微粒子は、腫瘍周辺に放出されるが、正常組織と異なり腫瘍組織では、リンパ管網が未発達である。このため体液と共にリンパ管経由で、他の部位に運ばれることは無い。従って、放出された微粒子即ち本生体分解性腫瘍封止剤は、腫瘍部位に留まる集積性がある。前記（２）と（４）を合わせてＥＰＲ効果と呼ぶ。
（５）腫瘍組織定着性
前述のように腫瘍組織に集積しても、腫瘍細胞や間質に定着しなければ、体液等の流れと共に流出してしまう。本生体分解性腫瘍封止剤は、ラメラ構造以外の液晶構造物質であるため、細胞膜やコラーゲン、繊維芽細胞等からなる細胞外マトリクスへの接着性が高く定着性に優れる。
（６）酸素と栄養の遮断性
本生体分解性腫瘍封剤が集合合体しゲル状の瘍封剤が稠密に腫瘍組織を封止することによって、腫瘍細胞は増殖に必要な栄養と酸素が遮断され、細胞死（壊死）にいたる。
（７）伝達系転写誘導因子の伝達阻害性
腫瘍組織・細胞からは、各種誘導因子が発せられる。例えば、低酸素ストレス下のがん細胞から発せられるＨＩＦ（低酸素誘導因子）は、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）に伝達して腫瘍血管新生を促し、腫瘍への栄養と酸素の供給量を増大させ増殖に寄与している。本生体分解性腫瘍封剤は、腫瘍組織を隙間なく覆い封じ込めることによって、これら腫瘍から発せられる伝達因子の拡散を阻止することで悪性化を食い止めることができる。
（８）速やかな代謝・排泄
本生体分解性腫瘍封剤は、腫瘍細胞が壊死するのに十分な時間・期間を経た後は、体内酵素による分解又は可溶化、一部はさらなる分解などを経て、体外へ排泄される。
（９）視認性及び可視化性
（６）までは本生体分解性腫瘍封剤の基本的な機能に限定した性質であるが、実用上の機能として、医師が使用する場面で有用な機能を付加している。
第一が、目視による視認性である。色素（蛍光色素を含む）を包含することによって、他の医薬品との取り違えリスクを軽減し、更にはマーカーとして手術部位・範囲を表示することで、間違った箇所への施術を回避できる。
第二に、造影剤を包含させることにより、術中の画像装置によるモニタリングで的確な箇所へ十分な施術が行われている或いは行われたかを確認できる。更には、造影剤のみを使用した時のように流出せずに腫瘍部位に定着するため、再度造影剤を注入する手術をすることなく、術後の腫瘍の状況を画像装置でモニタリングできる可視化性を有する。
（１０）塞栓性
本生体分解性腫瘍封止剤は、動脈塞栓用塞栓材としても使用できる。塞栓材としては、永久塞栓材と同等の塞栓効果を発揮する一時塞栓材として、永久留置リスクを回避でき、更に腫瘍封止効果と塞栓効果との相乗効果を期待することもできる。
【００６９】
５．生体分解性腫瘍封止剤の使用
上記の通りに調製した生体分解性腫瘍封止剤は、例えば、固形悪性腫瘍を診断及び／又は治療するために使用することができる。本明細書で使用するとき、「固形悪性腫瘍」には、有棘細胞がん、乳がん、皮膚リンパ腫、血管肉腫、肝胆道系のがん、頭頸部がん、肺がん、中皮腫、縦隔がん、食道がん、胃がん、膵臓がん、小腸がん、結腸がん、結直腸がん、大腸がん、肛門がん、腎臓がん、尿道がん、膀胱、前立腺、尿道がん、陰茎がん、睾丸がん、婦人科臓器のがん、卵巣がん、内分泌系のがん、皮膚がん、脳を含む中枢神経系のがん；軟組織及び骨肉腫；並びに皮膚及び眼内起源の黒色腫を含む。使用形態としては、限定されないが、１種類又は２種類以上の両親媒性化合物を含有する基材とする微粒子を水性媒体中に分散させたエマルションの形態で使用してもよく、又は該微粒子を含む医薬組成物として使用してもよい。このように、本発明の腫瘍封止剤は、固形悪性腫瘍などのがんの診断に適用可能であるだけでなく、がんの治療に応用することもできることから、「セラノスティクス・デバイス」として称することができる。
【００７０】
本発明によれば、シリンジ又はマイクロカテーテルを用いて、生体分解性腫瘍封止剤が腫瘍近傍の動脈から腫瘍を塞栓及び／又は血流を阻止するように導入されてもよい。一態様において、本発明の生体分解性腫瘍封止剤は、限定されないが、シリンジを用いて腫瘍近傍に局所投与することができる。ここで、導入時の生体分解性腫瘍封止剤の量、濃度、回数、及び頻度等は、対象（被験者）の性別、年齢、体重、患部の状態等を考慮して、医師及び獣医師が、適宜、調整することができる。ここで、本発明の生体分解性腫瘍封止剤による治療対象は、哺乳動物であることが好ましく、哺乳動物としては、限定されないが、ヒト、サル等の霊長類、マウス、ラット、ウサギ、モルモット等のげっ歯類、ネコ、イヌ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ロバ、ヤギ、フェレット等が挙げられる。
【００７１】
後述する実施例８においては、胆癌マウスにエマルション形態の生体分解性腫瘍封止剤（実施例４）の１００μＬを注射器によって、腫瘍近傍の血管より投与（具体的には、注入）し、抗腫瘍効果が得られた。ヒトへの適用に関しては、これらの胆癌マウスの実験結果に基づいて、単純に体重換算すれば、例えば、ヒトの固形悪性腫瘍に対しては、本発明の生体分解性腫瘍封止剤を１回あたり１０ｍｌ〜２００ｍｌ程度の量を腫瘍近傍の血管より投与することに相当する。また、本発明の生体分解性腫瘍封止剤は、所望の治療効果が得られるまで、複数回（例えば、２〜１０回）、適宜、間隔（例えば、１日に２回、１日に１回、１週間に２回、１週間に１回、２週間に１回）をおいて投与されてもよい。なお、本発明の生体分解性腫瘍封止剤の１回あたりの投与量（具体的には、注入量）及び投与頻度は、上記に限定されるものではなく、当業者（例えば、医師又は獣医師）が、適宜調整して決定され得る。
【００７２】
本発明の生体分解性腫瘍封止剤を医薬組成物として使用する場合には、有効成分としての生体分解性腫瘍封止剤の他に、担体、賦形剤、及び／又は安定化剤等を適宜添加して形態で使用されてもよい。また、本発明によれば、生体分解性腫瘍、溶媒（生理食塩水など）、担体等をそれぞれ封入した容器（バイアル等）、及び使用説明書等を含むキットとして提供される。また、本発明の生体分解性腫瘍封止剤は医用材料を包含する。
【実施例】
【００７３】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。【００７４】
［実施例１］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールの合成【００７５】
【化６】
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【００７６】
グリセロール０．６５ｇ（７．１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム０．５９ｇ（４．３ｍｍｏｌ）の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）溶液に、８０℃で５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エン酸メチル１．０ｇ（３．５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。１００℃で１８時間撹拌した後、反応液に１Ｍ塩酸を添加し、エーテルで抽出した。抽出液を飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン混液）で精製することにより、表題化合物を無色透明液体として得た。【００７７】
得られた化合物について、１Ｈ−ＮＭＲ測定及び粘度測定を行った結果は以下の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８０−０．９０（ｍ，９Ｈ），１．００−１．７０（ｍ，１５Ｈ），１．９７（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１３（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ），２．２５−２．４５（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ），３．５０−４．００（ｍ，３Ｈ），４．１０−４．２５（ｍ，２Ｈ），５．０８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）
粘度：０．４８Ｐａ・ｓ（せん断速度９２  １／ｓ）【００７８】
［実施例２］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールによる液晶の形成及び解析
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールに対して、水性媒体として５０質量％以上の生理食塩水を添加して混合操作を行い、分離した生理食塩水を除いた。その結果、外観上は白濁〜無色透明なゲル状組成物を得た。【００７９】
ＮＡＮＯ  Ｖｉｅｗｅｒナノスケールエックス線構造評価装置（Ｒｉｇａｋｕ製）を使用して、上記ゲル状組成物のエックス線小角散乱（ＳＡＸＳ）による液晶構造を解析した。大気圧下、ピンホールスリットに上記ゲル状組成物を詰めたものを大気圧下で測定を行った結果、ＳＡＸＳの強度分布を測定したグラフ（図３（１））と、ピークリサーチ結果（図３（２））が得られた。これにより、少なくとも３本の散乱ピークが観測され、ピークの比は逆ヘキサゴナル液晶に特有の比１：√３：２を示したことから、上記ゲル状組成物は逆ヘキサゴナル液晶であることが確認できた。【００８０】
［実施例３］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールとリピオドールによる液晶の形成及び解析
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールと造影剤であるリピオドールを重量比１０：５、７０：３０、１０：３、８０：２０、１０：２、９０：１０、１０：１で混合した。各混合物に対して、水性媒体として５０質量％以上の生理食塩水を添加して混合操作を行い、分離した生理食塩水を除いて、それぞれ混合物を得た。重量比１０：５、７０：３０の混合物は、二層に分離した組成物であった。重量比１０：３、８０：２０、１０：２、９０：１０、１０：１の混合物は、それぞれ白濁したゲル状組成物となり、リピオドールの重量比が低くなるにしたがって粘性は高まった。【００８１】
ＳｍａｒｔＬａｂ高輝度Ｉｎ−ｐｌａｎｅ型エックス線回折装置（Ｒｉｇａｋｕ製）を使用して、上記ゲル状組成物のエックス線小角散乱（ＳＡＸＳ）による液晶構造を解析した。大気圧下、センタースリットに上記ゲル状組成物を詰めたものを大気圧下で測定を行った。【００８２】
図４（１）は重量比１０：３、図４（２）は重量比１０：２、図４（３）は重量比１０：１の場合のＳＡＸＳ測定のグラフである。３サンプルともに、非ラメラ液晶を形成していると認められた。重量比１０：１では逆ヘキサゴナル液晶に特有の比である３本の強い散乱ピークがあるのに対して、重量比１０：２、重量比１０：３へ向かうに伴って、３本の散乱ピークは減弱しており、液晶構造の規則性が弱まった。【００８３】
［実施例４］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールとリピオドールによるエマルションの調製
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールとリピオドールの重量比が１０：１となるよう、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール１．８４１ｇと造影剤であるリピオドール０．１８４ｇを混合し、プルロニックＦ１２７（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｐ２４４３）０．５１ｇとエタノール０．２８５ｇを添加して、均一になるまで溶解した。さらに、生理食塩水（大塚生食注）１２．１８ｇを添加して、撹拌した後、スターバスト（スギノマシン製）でホモジナイズすることによって、微粒子を含有するエマルションを調製した。【００８４】
上記エマルションに対して、ＮＡＮＯ  Ｖｉｅｗｅｒナノスケールエックス線構造評価装置（Ｒｉｇａｋｕ製）を使用して、エックス線小角散乱（ＳＡＸＳ）による液晶構造を解析した。大気圧にてキャピラリーに導入し、減圧状態の装置内で測定（試料自体は大気圧下）した結果、ＳＡＸＳの強度分布を測定したグラフ（図５（１））と、ピークリサーチ結果（図５（２））が得られた。これにより、少なくとも３本の散乱ピークが観測され、ピークの比は逆ヘキサゴナル液晶に特有の比１：√３：２を示したことから、上記エマルションは逆ヘキサゴナル液晶の微粒子が分散した液晶エマルション（ヘキサソーム）であることが示された。【００８５】
さらに、上記エマルションに対して、ゼータサイザーＮａｎｏ−ＺＳ（マルバーン製）を使用して、粒子径分布を測定した。測定サンプルは上記エマルションを蒸留水で１００倍希釈して調製した。得られた測定データを図６に示す。平均粒子径（Ｚ−Ａｖｅｒａｇｅ）は、１３１．４ｎｍであった。図６中、６０ｎｍ辺りの粒径の微粒子が形成され始め、粒径が増大するにつれて粒度分布が急速に増大し、粒径１３０ｎｍ近傍でピークに達する。その後、粒径が増大するにつれ、粒度分布が減少しつつ、粒径３５０ｎｍ辺りで微粒子形成が終了する。すなわち、上記エマルションは６０ｎｍ〜３５０ｎｍの粒径の微粒子が大部分を占めるエマルションであった。【００８６】
［実施例５］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールのエマルションの調製
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール５．４ｇ、プルロニックＦ１２７（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｐ２４４３）１．３６ｇとエタノール０．７６ｇ、注射用水（大塚蒸留水）３２．４８ｇを用いて、実施例４と同様に攪拌・ホモジナイズすることによって、微粒子を含有するエマルションを調製した。【００８７】
上記エマルションに対して、実施例４と同様にしてＳＡＸＳ測定を行った。その結果を、その結果、ＳＡＸＳの強度分布を測定したグラフ（図７（１））と、ピークリサーチ結果（図７（２））が得られた。これにより、少なくとも６本の散乱ピークが観測され、ピークの比は結晶学的空間群Ｐｎ３ｍに属するキュービック液晶に特有の比√２：√３：√４：√６：√８：√９を示したことから、上記エマルションは結晶学的空間群Ｐｎ３ｍに属するキュービック液晶の液晶エマルション（キューボソーム）であることが示された。【００８８】
さらに、上記エマルションに対して、実施例４と同様にして、粒子径分布を測定した。測定サンプルは上記エマルションを蒸留水で１００倍希釈して調製した。その結果を図８に示す。図８より、上記エマルションの平均粒子径（Ｚ−Ａｖｅｒａｇｅ）は、２０８．８ｎｍであり、９０ｎｍ〜６００ｎｍの粒径の微粒子が大部分を占めた。【００８９】
［実施例６］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールとＣｙ７カルボン酸のエマルションの調製
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール３．３７５ｇ、蛍光色素であるＣｙ７カルボン酸（Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅ−０５５０−９０，Ｌｕｍｉｐｒｏｂｅ社）０．００７４ｇ、プルロニックＦ１２７（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｐ２４４３）０．８５ｇとエタノール０．４７５ｇ、生理食塩水（大塚生食注）２０．３ｇを用いて、実施例４と同様に攪拌・ホモジナイズすることによって、微粒子を含有するエマルションを調製した。【００９０】
［実施例７］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールとリピオドール、フルオレセインナトリウムのエマルションの調製
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール２．４５４６ｇ、造影剤であるリピオドール０．２４５４ｇ、蛍光色素であるフルオレセインナトリウム（ウラニン）０．００３７ｇ、プルロニックＦ１２７（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｐ２４４３）０．６８ｇとエタノール０．３８ｇ、生理食塩水（大塚生食注）１６．２３６３ｇを用いて、実施例４と同様に攪拌・ホモジナイズすることによって、微粒子を含有するエマルションを調製した。【００９１】
上記エマルションに対して、実施例４と同様にして、粒子径分布を測定した。測定サンプルは上記エマルションを蒸留水で１００倍希釈して調製した。その結果を図９に示す。図９より、上記エマルションの平均粒子径（Ｚ−Ａｖｅｒａｇｅ）は、１２４．８ｎｍであり、６０ｎｍ〜３００ｎｍの粒径の微粒子が大部分を占めた。【００９２】
［実施例８］エマルションを用いた腫瘍封止効果、正常組織への影響に関する評価
（１）担癌マウスの作成
実験動物のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６  ａｌｂｉｎｏ雄）の背中中央部皮下１ｍｍの部位に対して、ホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｌｕｃ）を恒常発現する癌腫ＬＬＣ（ｍｏｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（ＬＬＣ／ｌｕｃ）移植した。３６日間かけて腫瘍を成長させることによって、生後週齢１０週の担癌マウス（体重２６．２ｇ）を作成した。図１０に、担癌マウスとその腫瘍部位をｌｕｃによる生物発光で可視化した画像を示す。【００９３】
（２）腫瘍封止効果に関する実験
上記担癌マウスの腫瘍に対して、実施例４で調製したエマルション１００μＬを注射器によって、腫瘍近傍の血管より投与した。小型実験動物用３ＤマイクロＸ線ＣＴ装置（ＣｏｓｍｏＳｃａｎ  ＦＸ、リガク社）を用いて、投与前と投与５分後に腫瘍部位を観察した。得られたＣＴ画像を解析した結果、エマルション中の微粒子が腫瘍血管を透過して腫瘍部位に付着していることが明らかとなった。図１１に、本エマルション投与前後における担癌マウス腫瘍部位のＣＴ画像を示す。【００９４】
（３）正常組織への影響に関する実験
上記担癌マウスに対して、実施例４で調製したエマルションを生理食塩水で１０倍希釈したエマルション２００μＬを注射器によって、尾部より１０分毎に２回投与した。小型実験動物用３ＤマイクロＸ線ＣＴ装置（ＣｏｓｍｏＳｃａｎ  ＦＸ、リガク社）を用いて、投与前、投与１回目５分後、投与２回目５分後に担癌マウスの全体を観察した。とりわけ、最も細い毛細血管が存在する肺臓において、１回目投与後と２回目投与後のいずれにおいても、エマルション中の微粒子が付着していないことが明らかとなった。図１２に、本エマルション投与前、１回目投与後、２回目投与後における担癌マウス肺臓のＣＴ画像を示す。【００９５】
以上の結果より、本発明の微粒子（生体分解性腫瘍封止剤）は、腫瘍細胞特異的に付着し、正常組織へは付着しないことが示唆された。【００９６】
［実施例９］モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールによる液晶、及び、リピオドールを含むその液晶のヒト血清中における安定性評価
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール約１００μＬ、又はモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールとリピオドールの重量比が１０：１、１０：２、１０：３の各混合溶液、約１００μＬをそれぞれバイアル中のヒト血清（Ｈｕｍａｎ  ＯＴＣ  Ｓｅｒｕｍ，Ａｃｃｅｓｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ社）２ｍＬに添加した。各バイアルを軽く揺らして、ゲル状組成物を形成させた後、３７℃の湯浴中に静置して、直後、１０時間後、２４時間後に観察した。時間の経過によって、各バイアル中のヒト血清はいずれも徐々に白濁した。なお、ヒト血清の代わりに蒸留水を用いた場合、２４時間以内にいずれも、ゲル状組成物に変化はなく、蒸留水中はほとんど白濁しない。【００９７】
図１３に、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロール約１００μＬのサンプル経過を示す撮影画像を示した。ヒト血清中に添加直後（図１３（１））では、ゲル状組成物が形成し、ヒト血清は透明のままである。添加１０時間後（図１３（２））では、白濁化が進行している。添加２４時間後（図１３（３））では、ゲル状組成物は残存しているものの、さらに白濁化が進行している。添加２４時間後の薄膜クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行った結果、主成分は溶出したモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデカ−４−エノイル）グリセロールと加水分解して得られるカルボン酸（５，９，１３−トリメチル−４−テトラデカエノン酸）であった。【００９８】
［実施例１０］エマルションを用いた腫瘍部位の血流阻止効果に関する評価
（１）乳癌細胞移植マウスの作製
ルシフェラーゼを安定に発現する４Ｔ１乳癌細胞（４Ｔ１−Ｌｕｃ）を入手し、ヌードマウスＢａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕ（日本チャールス・リバー株式会社）の皮下に２．５×１０７細胞／ｍｌのＰＢＳ／Ｇｅｌｔｒｅｘ（登録商標）＝１／１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の細胞懸濁液を０．０４ｍｌ移植した。【００９９】
（２）血流阻止効果
上記の乳癌細胞を移植されたマウス腫瘍部位に、高圧ホモジナイザーを用いて作製したエマルションを局所投与した。投与後、ルシフェラーゼの基質であるＤ−ルシフェリンを含むリン酸緩衝生理食塩水を腹腔内投与により投与して血流循環させ、上記乳癌細胞のルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）活性をＩｎ  ｖｉｖｏイメージング装置（ＩＶＩＳ）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）で経時的に観察した。腫瘍部位では、血中のルシフェリンの存在によりＬｕｃ活性に基づいて蛍光が確認される。図１４Ａに示される通り、エマルションの非投与マウスでは、移植した乳癌細胞のＬｕｃ発現により継続的に蛍光を観察できるのに対して、エマルションを投与したマウスでは、投与直後から蛍光が減少したことから、エマルションの投与により、血中のＤ−ルシフェリンの腫瘍への送達、エマルション投与により腫瘍部位への血流が阻止されることが示唆された。また、この観察結果について、非投与マウスに対する投与マウスにおけるＬｕｃ活性の比を算出し、経時的な変化を図１４Ｂとして示す。【０１００】
さらに、エマルション投与による腫瘍部位での血流阻止効果をさらに検討するために、腫瘍部位の血管内ヘモグロビンの酵素濃度及び血流をＭｕｌｔｉＳｐｅｃｔｒａｌ  Ｏｐｔｏａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ（ＭＯＳＴ）を用いて測定した。血管内ヘモグロビンに関して、通常、血液中の酸素濃度に比例して、血量が認められる測定部位では酸化型ヘモグロビン濃度が高く、一方、酸素欠乏に陥っている測定部位では還元型ヘモグロビン濃度が高い。エマルション投与後の腫瘍部位における血中酸素濃度の経時的変化を測定した結果を図１５に示す。還元型ヘモグロビンのシグナル（図中、青色）は、投与から増加し、１日後に最大となった。このように、エマルションを投与した腫瘍部位では酸素濃度が顕著に低下していることから、エマルションが、血液によって運搬される酸素や栄養の腫瘍組織への供給を遮断し得る上記の血流阻止効果を裏付けている。【０１０１】
（３）血流測定
腫瘍血管における血流阻止をさらに確認するために、エマルション投与１日後の担癌マウスの静脈内に蛍光物質であるインドシアニングリーン（ＩＣＧ）を投与し、腫瘍部位における血流をＭＳＯＴ（ｉＴｈｅｒａ  Ｍｅｄｉｃａｌ社、ｉｎＶｉｓｉｏｎ  ２５６）を用いてモニタリングした。このようなＩＣＧ蛍光血管撮影法は、臨床的に利用されている方法であって、血中で血漿タンパクと結合したＩＣＧが赤外光で励起され、蛍光を発する特性を活かしたものである。経時的にＩＣＧシグナルの変化を撮像した結果を図１６Ａに示し、これに対応するシグナル強度の経時的変化を図１６Ｂに示した。エマルションを投与していない腫瘍部位は、投与直後からＩＣＧシグナルが増加し、一定時間、維持された。一方、エマルションを投与した腫瘍部位では、ＩＣＧシグナルの増加が観察されなかった。この結果から、腫瘍部位にエマルションを投与した場合、腫瘍血管における血流が阻止されることが示唆された。【０１０２】
（４）腫瘍抑制
エマルションを複数回投与した場合の腫瘍体積の変化について検討した。上記（１）に記載したように、４Ｔ１−Ｌｕｃを移植されたヌードマウスを用いて経時的に観察した。エマルションの投与は、初回（０日目）、２日目、３日目、及び５日目に行った。腫瘍体積の経時的な変化を図１７に示す。図１７から明らかなように、生理食塩水を投与した対照と比較して、エマルションを投与したマウスの腫瘍体積は減少した。これは、１回投与の場合と比較して、腫瘍体積の減少は顕著であった（データ示さず）。
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
本発明の腫瘍封止剤の微粒子を用いることにより、癌の転移又は浸潤を防ぐ低侵襲性療法の新たな選択肢が増えることが期待される。また、該微粒子は、塞栓剤として分解性や可視化機能のアドバンテージを有しており、動脈塞栓療法の新しい塞栓剤としての可能性が拓け、更に造影剤及び／又は色素を包含することができるため、癌の診断や施術時のマーキング材への応用も展開できる。【０１０４】
本明細書に引用する全ての刊行物及び特許文献は、参照により全体として本明細書中に援用される。なお、例示を目的として、本発明の特定の実施形態を本明細書において説明したが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の改変が行われる場合があることは、当業者に容易に理解されるであろう。
【符号の説明】
【０１０５】
１０    腫瘍血管
１１    内皮細胞間隙
１２    腫瘍組織
１３    微粒子
１４    腫瘍細胞
１５    赤血球
２０    エマルション
２１    逆ヘキサゴナル液晶
２２    水チャネル
２３    外相
２４    造影剤
６０    担癌マウス
６１    腫瘍部
６２    投与後腫瘍部
６３    付着微粒子
６４    肺
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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