(57)【要約】  新規な筋肉エネルギー代謝活性化剤等を提供し、更に、医薬、食品として摂取することができる組成物を提供する。  上記課題を解決するための本発明の技術的特徴は以下のとおりである。（１）5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone、Techtochrysin、3,7,4'-Trimethylkaempferol、Retusine、Pentamethylquercetin、Trimethylapigenin、Tetramethylkaempferol、及び5,7-dimethoxyflavoneから選ばれる少なくとも1種を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。（２）Techtochrysin、及び5,7-dimethoxyflavoneのうちの少なくとも１種を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。（３）下記化学式（１）【化１】2016163245.tif 000009[ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基である。]で示される化合物のうちのいずれか1種からなる筋肉細胞における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
2016163245.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−ヒドロキシ−３，７−ジメトキシフラボン（5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone）、テクトクリシン（Techtochrysin）、３，７，４’−トリメチルケンペロール（3,7,4'-Trimethylkaempferol）、レツシン（Retusine）、ペンタメチルケルセチン（Pentamethylquercetin）、トリメチルアピゲニン（Trimethylapigenin）、テトラメチルケンペロール（Tetramethylkaempferol）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）から選ばれる少なくとも１種を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
【請求項２】
テクトクリシン（Techtochrysin）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）のうちの少なくとも１種を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
【請求項３】
下記化学式（１）
【化１】
2016163245.tif 000007
[ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基である。]
で示される化合物のうちのいずれか1種からなる筋肉細胞における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
【請求項４】
５−ヒドロキシ−３，７−ジメトキシフラボン（5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone）、テクトクリシン（Techtochrysin）、３，７，４’−トリメチルケンペロール（3,7,4'-Trimethylkaempferol）、レツシン（Retusine）、ペンタメチルケルセチン（Pentamethylquercetin）、トリメチルアピゲニン（Trimethylapigenin）、テトラメチルケンペロール（Tetramethylkaempferol）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）から選ばれる少なくとも１種を有効成分とするＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
【請求項５】
テクトクリシン（Techtochrysin）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）のうちの少なくとも１種を有効成分とするＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
【請求項６】
下記化学式（１）
【化１】
2016163245.tif 000008
[ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基である。]
で示される化合物のうちのいずれか1種からなる筋肉細胞におけるＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
【請求項７】
前記請求項１〜６のいずれか１項の剤からなるエネルギー代謝活性化剤。
【請求項８】
黒ショウガ抽出物を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
【請求項９】
黒ショウガ抽出物を有効成分とするＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
【請求項１０】
テクトクリシン（Techtochrysin）を有効成分とする、筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化用食品組成物。
【請求項１１】
５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）を有効成分とする、筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な筋肉エネルギー代謝活性化剤に関するものである。本発明は、飲食品、医薬品、医薬部外品等に広く利用される。
【背景技術】
【０００２】
運動時、筋肉では膨大な量のエネルギーが消費され、そのエネルギー源の大部分は糖（グルコース等）に依存していることが知られている。従って、筋肉における糖の取り込みはエネルギー生産において重要な役割を担っている。従って、筋肉における糖の取り込み量の上昇は運動時のパフォーマンスの向上が期待できる（非特許文献１参照）。
ここで、この糖の筋肉細胞への取り込みに関わっているのが、糖輸送体（ＧＬＵＴ４：グルコーストランスポーター４）である。【０００３】
また、骨格筋のエネルギー代謝制御に関与する因子ＰＧＣ−１αが知られている（非特許文献２）。【０００４】
ＰＧＣ−１αとは、Peroxisome proliferator-activated receptor γ co-activator 1αであり、ミトコンドリアの合成を促進する働きを有すること、血液中のブドウ糖（血糖）を骨格筋に取り込む糖輸送体であるＧＬＵＴ４を増加させることが知られている。また、ヒトの筋肉でのＰＧＣ−１α発現量が糖尿病や老化によってミトコンドリア機能とともに低下し、ＰＧＣ−１αはエネルギー消費量の低下によるメタボリックシンドロームなどの生活習慣病の疾患治療標的となることが知られている。【０００５】
また、マウスを寒冷環境下におくと骨格筋でのＰＧＣ−１αが増加する。そのため骨格筋組織での熱産生の制御に関わることが知られている。また、ＰＧＣ−１αを強制発現させると、ミトコンドリア呼吸鎖に関わる因子の転写を促すＮＲＦや、ミトコンドリアにおいてエネルギー消費を起こすと考えられている脱共役蛋白質、ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＵＣＰ）の発現が誘導されるほか、ミトコンドリアのゲノム複製や転写反応過程に重要な役割を果たすｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ａ（ｍｔＴＦＡ）の発現が誘導され、これら分子の機能発現によって細胞内のミトコンドリア数が増加し、また細胞の酸素消費量が増大することも明らかとなった。このことから、ヒト由来細胞内において、ミトコンドリアの機能が活性化することで、熱産生、即ちエネルギー消費を引き起こし、さらには細胞内でエネルギー源となる糖や脂質の代謝を活性化させることが知られている（非特許文献３）。【０００６】
これまで、運動機能改善剤について、抗疲労剤として、ビタミン類（特許文献１）、カツオやマグロの多量に含まれるイミダゾール化合物（特許文献２）、オルニチン（特許文献３）などが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１０−１３８１７０号公報
【特許文献２】特開２００２−３３８４７３号公報
【特許文献３】国際公開第２００７／１４２２８６号
【特許文献４】特開２０１５−１００７８号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】八田秀雄著，「エネルギー代謝を活かしたスポーツトレーニング」講談社，２００４年発行
【非特許文献２】Ｃｅｌｌ，９２，８２９−８３８，１９９８
【非特許文献３】Ｃｅｌｌ，９８，１１５−１２４，１９９９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
このような背景の下、本発明者は、黒ショウガに含まれる所定の化合物において筋肉細胞中における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子の発現を促進し、さらにＰＧＣ−１αの遺伝子を活性化し、ミトコンドリアＤＮＡの産生量が増加することを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、新規な、筋肉細胞中における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤、及びＰＧＣ−１α遺伝子活性化剤、並びにこれらを用いた筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化剤を提供することにより、優れた質を有する筋肉を生成することを目的とする。
なお、本発明に関連する技術として、特許文献４には、黒ショウガ抽出物及びポリメトキシフラボンが筋肉量を増加させる作用を有することが記載されている。しかしながら、本願発明は、黒ショウガ抽出物及びポリメトキシフラボンが筋肉細胞の代謝機能を向上させる作用を明らかにしたものであり、筋肉量の増加に着眼した特許文献４にかかる発明とは明確に区別される。
つまり、筋肉量を増加させることと、筋肉の代謝機能を向上させることは異なったメカニズムによって制御されている。筋肉量を増加させるためには筋合成を増加させ、筋分解を減少させることが重要であり、筋肉の代謝機能を向上させるためには、栄養素（糖など）の取り込み量やグリコーゲンの蓄積量、ミトコンドリア量を増加させることが重要である。このことは、実際に、市場では筋肉量を増やすためには大豆由来タンパク質や乳清タンパク質（ホエイプロテイン）などが良く用いられ、筋肉の代謝機能を向上させるためにはカルニチンやコエンザイムQ10などが良く用いられるように、これらが用途によって使い分けられていることからも明かである。
特許文献４には、その効果がマウスで実験した場合、ヒラメ筋に限定的で他の運動筋肉には効果がなかったことが示されている。本発明者は、後述する試験例において、補正したデータでその効果を評価することにより、総体的に代謝機能が向上したのではなく筋細胞一つ一つの代謝機能が向上した点を確認した上で本発明を完成させるに至ったものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するための本発明の技術的特徴は以下のとおりである。
（１）５−ヒドロキシ−３，７−ジメトキシフラボン（5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone）、テクトクリシン（Techtochrysin）、３，７，４’−トリメチルケンペロール（3,7,4'-Trimethylkaempferol）、レツシン（Retusine）、ペンタメチルケルセチン（Pentamethylquercetin）、トリメチルアピゲニン（Trimethylapigenin）、テトラメチルケンペロール（Tetramethylkaempferol）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）から選ばれる少なくとも１種を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
（２）テクトクリシン（Techtochrysin）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）のうちの少なくとも１種を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
（３）下記化学式（１）
【化１】
2016163245.tif 000003
[ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基である。]
で示される化合物のうちのいずれか1種からなる筋肉細胞における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
（４）５−ヒドロキシ−３，７−ジメトキシフラボン（5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone）、テクトクリシン（Techtochrysin）、３，７，４’−トリメチルケンペロール（3,7,4'-Trimethylkaempferol）、レツシン（Retusine）、ペンタメチルケルセチン（Pentamethylquercetin）、トリメチルアピゲニン（Trimethylapigenin）、テトラメチルケンペロール（Tetramethylkaempferol）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）から選ばれる少なくとも1種を有効成分とするＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
（５）テクトクリシン（Techtochrysin）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）のうちの少なくとも1種を有効成分とするＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
（６）下記化学式（１）
【化１】
2016163245.tif 000004
[ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基である。]
で示される化合物のうちのいずれか１種からなる筋肉細胞におけるＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
（７）上記（１）〜（６）のいずれか１項の剤からなる筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化剤。
（８）黒ショウガ抽出物を有効成分とする糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
（９）黒ショウガ抽出物を有効成分とするＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
（１０）テクトクリシン（Techtochrysin）を有効成分とする、筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化用食品組成物。
（１１）５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）を有効成分とする、筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化用食品組成物。
（１２）５−ヒドロキシ−３，７−ジメトキシフラボン（5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone）、テクトクリシン（Techtochrysin）、３，７，４’−トリメチルケンペロール（3,7,4'-Trimethylkaempferol）、レツシン（Retusine）、ペンタメチルケルセチン（Pentamethylquercetin）、トリメチルアピゲニン（Trimethylapigenin）、テトラメチルケンペロール（Tetramethylkaempferol）、及び５，７−ジメトキシフラボン（5,7-dimethoxyflavone）から選ばれる少なくとも1種をヒトに投与することにより、当該ヒトの筋肉細胞におけるエネルギー代謝を活性化させる方法。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone、Techtochrysin、3,7,4'-Trimethylkaempferol、Retusine、Pentamethylquercetin、Trimethylapigenin、Tetramethylkaempferol、及び5,7-dimethoxyflavoneの単離スキームである。
【図２】黒ショウガ抽出物（KPE）及び分離画分（Compund 1-8）が糖輸送体（ＧＬＵＴ４）のmRNA発現に及ぼす影響を示すグラフである。
【図３】黒ショウガ抽出物（KPE）及び分離画分（Compund 1-8）がＰＧＣ−１αのmRNA発現に及ぼす影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明の筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化剤は、5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone、Techtochrysin、3,7,4'-Trimethylkaempferol、Retusine、Pentamethylquercetin、Trimethylapigenin、Tetramethylkaempferol、及び5,7-dimethoxyflavone（以下、単にこれらの化合物を「化合物群」という）のうちの少なくとも１種からなることを特徴とする。
上記化合物群は下記化学式（２）にて示されるものである。
【化２】
2016163245.tif 000005
【００１３】
また、これらの化合物群のうち特にTechtochrysin及び5,7-dimethoxyflavoneが好ましい。
【００１４】
上記化合物群を得る方法は特に限定されないが、黒ショウガから抽出することにより得ることが好ましい。黒ショウガには上記化合物群を高濃度に含有するからである。
ここで上記「黒ショウガ」とは、ケンフェリア・パルビフローラ（Ｋａｅｍｐｆｅｒｉａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）という学名をもつ植物で、東南アジアに分布しておりショウガ科ケンフェリア属に属する。 
【００１５】
タイやラオスなどの伝承医学において、精力増進、滋養強壮、血糖値の低下、体力回復、消化器系の改善、膣帯下、痔核、痔疾、むかつき、口内炎、関節痛、胃痛の改善などに利用されている。
【００１６】
上記化合物群を得るために使用される黒ショウガの部位は特に限定されないが、根茎を用いることが好ましい。上記化合物群を高濃度に含有するからである。黒ショウガの形態は、特に限定するものではなく、未熟根茎、完熟根茎、乾燥根茎等のいずれでもよい。なお、根茎を絞って得られる搾汁液の使用も同様に好ましい。搾汁液の形態は、特に限定するものではなく液状でも濃縮乾燥した粉末状のいずれでもよい。
【００１７】
しかしながら、生の根茎や搾汁液の場合は保管に注意が必要なため、根茎をスライスして乾燥させたものがもっとも好ましい。
【００１８】
スライスした乾燥根茎を使用する場合には、抽出効率を高めるために、あらかじめ根茎を粉砕機等で４０メッシュ程度に粉砕しておくことが好ましい。
【００１９】
抽出に使用する溶媒や温度条件等については、特に限定されるものではなく、任意に選択、設定することができる。抽出溶媒としては、水、酸、塩基等といった非有機溶媒や、親水性溶媒、アセトン等といった有機溶媒を選択することができる。親水性溶媒としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール及びブチルアルコールからなる低級アルコール群から選択される１種類以上が、操作性、抽出効率の点から好ましい。ただし、有機溶媒による抽出よりもむしろ非有機溶媒による抽出が好ましく、なかでも水、温水や熱水、及びわずかに酸を添加した水、エタノールのいずれかの選択がよい。
【００２０】
このとき使用する酸としては、特に限定するものではない。ただし、入手のしやすさ及び安全性、後処理の観点から、酢酸の使用が好ましい。
【００２１】
さらに、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回またはそれ以上繰り返すことが好ましく、この方法によれば抽出効率を向上させることができる。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じものであっても異なるものであってもよい。
【００２２】
上記化合物群を得るために上記抽出物を濾過、遠心分離及び分留といった処理を行って、不溶性物質及び溶媒を取り除き、その後、常法に従って抽出液に希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施し、エネルギー代謝活性化剤等とする。
なお、精製方法としては、例えば、活性炭処理、樹脂吸着処理、イオン交換樹脂、液−液向流分配等の方法が挙げられるが、食品等に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままで使用してもよい。具体的には下記実施例の図１のスキームに従って化合物群の画分を得ることができる。
【００２３】
その画分はそのままで使用することも可能であるが、必要に応じて噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００２４】
また、本発明のエネルギー代謝活性化剤は、下記化学式（１）に記載された化合物を有効成分とすることを特徴とする。
【化１】
2016163245.tif 000006
[ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基である。]
【００２５】
また、上記化学式（１）に示された化合物のうち特にTechtochrysin及び5,7-dimethoxyflavoneが好ましい。
【００２６】
上記化学式（１）に示された化合物を得る方法は特に限定されないが、植物から抽出することにより得ることが好ましい。
また、上記化学式（１）に示された化合物のうち、Techtochrysin及び5,7-dimethoxyflavoneを得るときは黒ショウガを用いることが好ましい。これらの化合物は上述した方法にて抽出単離することができる。
【００２７】
本発明のエネルギー代謝活性化剤は、各種飲食品の素材（食品用組成物）として使用することができる。
ここで「各種飲食品の素材として使用することができる」とは、本発明のエネルギー代謝活性化剤の効果を発揮することを目的として剤型とて食品を選択することができるという意味であり、エネルギー代謝活性化剤としての効果を希望する人のみが食することを目的としており、エネルギー代謝活性化剤としての効果を期待しない人をも含む広く万人に食することができるという意味ではない。
また、エネルギー代謝活性化剤として効果を発揮するための配合量は特に限定されないが、飲食品に対して有効成分の含量が合計１〜２０wt％であるのが好ましい。
また、配合する飲食品として特に限定さないが、例えば、食用油（サラダ油）、菓子類（ガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、スナック、ゼリー、グミ、錠菓等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（ミルク、アイスクリーム、ヨーグルト等）、調味料（味噌、醤油等）、スープ類、飲料（ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料等）をはじめとする一般食品や、健康食品（錠剤、カプセル等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）が挙げられる。これらの飲食品に本発明のエネルギー代謝活性化剤等（上記（１）〜（８）のいずれか１項の剤を含む。）を適宜配合するとよい。
【００２８】
これら飲食品には、その種類に応じて種々の成分を配合することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等の食品素材を使用することができる。
さらに、健康維持機能をもった本エネルギー代謝活性化剤等には、他の抗酸化物質や健康食品素材などの配剤、例えば、抗酸化物質（還元型アスコルビン酸（ビタミンC）、ビタミンE、還元型グルタチン、トコトリエノール、ビタミンＡ誘導体、リコピン、ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、フコキサンチン、尿酸、ユビキノン、コエンザイムＱ10、葉酸、ニンニクエキス、アリシン、セサミン、リグナン類、カテキン、イソフラボン、カルコン、タンニン類、フラボノイド類、クマリン、イソクマリン類、ブルーベリーエキス）、健康食品素材（V.（ビタミン）A、V.B1、V.B2、V.B6、V.B12、V.C、V.D、V.E、V.P、コリン、ナイアシン、パントテン酸、葉酸カルシウム、EPA、オリゴ糖、食物繊維、スクアレン、大豆レシチン、タウリン、ドナリエラ、プロテイン、オクタコサノール、卵黄レシチン、リノール酸、ラクトフェリン、マグネシウム、クロム、セレン、カリウム、ヘム鉄、カキ肉エキス、キトサン、キチンオリゴ糖、コラーゲン、コンドロイチン、ウコン、カンゾウ、クコシ、ケイヒ、サンザシ、生姜、霊芝、シジミエキス、カンゾウ、クコシ、ケイヒ、サンザシ、生姜、霊芝、オオバコ、カミツレ、カモミール、セイヨウタンポポ、ハイビスカス、ハチミツ、ボーレン、ローヤルゼリー、ライム、ラベンダー、ローズヒップ、ローズマリー、セージ、ビフィズス菌、フェーカリス菌、ラクリス、小麦胚芽油、ゴマ油、シソ油、大豆油、中鎖脂肪酸、アガリクス、イチョウ葉エキス、ウコン、コンドロイチン、玄米胚芽エキス、レイシ、タマネギ、DHA、 EPA、 DPA、甜茶、冬虫夏草、ニンニク、蜂の子、パパイヤ、プーアル、プロポリス、メグスリの木、ヤブシタケ、ロイヤルゼリー、ノコギリヤシ、ヒアルロン酸、コラーゲン、ギャバ、ハープシールオイル、サメ軟骨、グルコサミン、レシチン、ホスファチジルセリン、田七ニンジン、桑葉、大豆抽出物、エキナセア、エゾウコギ、大麦抽出物、オリーブ葉、オリーブ実、ギムネマ、バナバ、サラシア、ガルシニア、キトサン、セントジョーンズワート、ナツメ、ニンジン、パッションフラワー、ブロッコリー、プラセンタ、ハトムギ、ブドウ種子、ピーナッツ種皮、ビルベリー、ブラックコホシュ、マリアアザミ、月桂樹、セージ、ローズマリー、ラフマ、黒酢、ゴーヤー、マカ、紅花、亜麻、ウーロン茶、花棘、カフェイン、カプサイシン、キシロオリゴ糖、グルコサミン、ソバ、シトラス、食物繊維、プロテイン、プルーン、スピルリナ、大麦若葉、核酸、酵母、椎茸、梅肉、アミノ酸、深海鮫抽出物、ノニ、カキ肉、スッポン、シャンピニオン、オオバコ、アセロラ、パイナップル、バナナ、モモ、アンズ、メロン、イチゴ、ラズベリー、オレンジ、フコイダン、メシマコブ、クランベリー、コンドロイチン硫酸、亜鉛、鉄、セラミド、シルクペプチド、グリシン、ナイアシン、チェストツリー、L-システイン、赤ワイン葉、ミレット、ホーステール、ビオチン、センテラアジアティカ、ハスカップ、ピクノジェノール、フキ、ルバーブ、クローブ、ローズマリー、カテキン、プーアル、クエン酸、ビール酵母、メリロート、ブラックジンガー、ショウガ、ガジュツ、ナットウキナーゼ、ベニコウジ、トコトリエノール、ラクトフェリン、シナモン、韃靼ソバ、��コア、ユズ種子エキス、シソの実エキス、ライチ種子エキス、月見草エキス、黒米エキス、α−リポ酸、ギャバ、生コーヒー豆エキス、フキエキス、キウイ種子エキス、温州みかんエキス、アカショウガエキス、アスタキサンチン、クルミエキス、ニラ種子エキス、赤米エキス、カンカエキス、白キクラゲ多糖体、フコキサンチン、リンゴンベリーエキス、桜の花エキス、マキベリーエキス、ササクレヒトヨタケエキス、米ポリアミン、小麦ポリアミン）なども配合することができる。
【００２９】
具体的な製法としては、エネルギー代謝活性化剤等を粉末セルロースとともにスプレードライまたは凍結乾燥し、これを粉末、顆粒、打錠または溶液にすることで容易に飲食品（インスタント食品等）に含有させることができる。また、エネルギー代謝活性化剤等を、例えば、油脂、エタノール、グリセリンあるいはこれらの混合物に溶解して液状にし、飲料に添加するか、固形食品に添加することが可能である。必要に応じてアラビアガム、デキストリン等のバインダーと混合して粉末状あるいは顆粒状にし、飲料に添加するか固形食品に添加することも可能である。
【００３０】
本発明のエネルギー代謝活性化剤等は、薬品（医薬品および医薬部外品を含む。）の素材として用いてもよい。薬品製剤用の原料に、本発明のエネルギー代謝活性化剤等を適宜配合して製造することができる。本発明のエネルギー代謝活性化剤等に配合しうる製剤原料としては、例えば、賦形剤（ブドウ糖、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等）、結合剤（蒸留水、生理食塩水、エタノール水、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（アルギン酸ナトリウム、カンテン、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖、アラビアゴム末、ゼラチン、エタノール等）、崩壊抑制剤（白糖、ステアリン、カカオ脂、水素添加油等）、吸収促進剤（第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等）、吸着剤（グリセリン、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、硅酸等）、滑沢剤（精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコール等）などが挙げられる。
【００３１】
本発明によるエネルギー代謝活性化剤等の投与方法は、一般的には、錠剤、丸剤、軟・硬カプセル剤、細粒剤、散剤、顆粒剤、液剤等の形態で経口投与することができるが、非経口投与であってもよい。非経口剤として投与する場合は、溶液の状態、または分散剤、懸濁剤、安定剤などを添加した状態で、ハップ剤、ローション剤、軟膏剤、チンキ剤、クリーム剤などの剤形で適用することができる。
投与量は、投与方法、病状、患者の年齢等によって変化し得るが、大人では、通常、１日当たり有効成分として０．５〜１０００ｍｇ、子供では通常０．５〜５００ｍｇ程度投与することができる。
【実施例】
【００３２】
以下、本発明を実施例に基づいて説明する。
［実施例：黒ショウガ抽出物及び化合物群の作製］
（１）黒ショウガ抽出物の調製
黒ショウガをスライスして乾燥させ、乾燥物１００ｋｇを得た。この乾燥物１０ｋｇを破砕し、エタノール濃度７０wt％の含水エタノール（70%エタノール（w/w））８０℃で２時間抽出し、エタノール抽出液を乾固させて黒ショウガ抽出物３．２５ｋｇを得た。
なお、黒ショウガ抽出物の含有成分をＨＰＬＣ分析したところ、５，７−ジメトキシフラボン8ｗｔ％以上、総フラボノイド35ｗｔ％以上含有されていた。
（２）化合物群の作製
粉砕した黒ショウガ（Kaempferia parviflora）2.0 kgを70%エタノール（w/w）10 kgを用いて70℃で2時間抽出を行った。得られた抽出液を濾過し、残渣に70%エタノール（w/w）8 kgを加え、同様の操作で再度抽出を行った。その後、抽出液を合わせて減圧下溶媒留去し、固形分20〜30%の時点で2倍量の水を加えた。得られた加水抽出液を酢酸エチルで分配抽出し、各移行部を減圧下溶媒留去して酢酸エチル移行部（90.92 g, 4.5%）を得た。
得られた酢酸エチル可溶部の一部（50.0 g）を図１の精製スキームに従って分離した。
すなわち順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン-酢酸エチル（4：1→2：1→1：1, v/v）→酢酸エチル→クロロホルム-メタノール（4：1→1：1, v/v）→メタノール]により分離し、５画分[fraction 1（8.26 g）、fraction 2（6.35 g）、fraction 3（24.31 g）、fraction 4（5.92 g）、fraction 5（0.83 g）]を得た。
Fraction 1をHPLC[メタノール, Inertsil PREP-ODS]により分離し、compound 1 （5-Hydroxy-3,7-dimethoxyflavone）（32.9 mg）、compound 2（Techtochrysin）（30.4 mg）、compound 3（3,7,4'-Trimethylkaempferol）（25.2 mg）を得た。
Fraction 2を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン-酢酸エチル（9：1→1：1→1：2, v/v）→メタノール]により分離し、fraction 2-1（0.46 g）、fraction 2-2（0.59 g）、fraction 2-3（4.25 g）を得た。Fraction 2-2をHPLC[メタノール-水（95：5）, Inertsil PREP-ODS]により分離し、compound 4（Retusine）（48.2 mg）を得た。
Fraction 3をHPLC[メタノール-水（80：20）, Inertsil PREP-ODS]で分離し、fraction 3-1（0.75 g）、fraction 3-2（9.71 g）、fraction 3-3（5.32 g）、fraction 4（0.09 g）を得た。Fraction 3の一部（1.06 g）をHPLC[メタノール-水（80：20）, TSK-Gel ODS-120T]で分離し、compound 5（Pentamethylquercetin）（90.0 mg）、compound 6 (Trimethylapigenin)（90.0 mg）、compound 7(Tetramethylkaempferol)（100.0 mg）、compound 8（5,7-dimethoxyflavone）（160.0 mg）を得た。尚、compound 1-8の構造は2次元ＮＭＲにて同定した。【００３３】
［試験例１；糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進作用の評価］
マウス筋芽細胞株C2C12（DMEM FCS10%で培養）を24well plate（mRNA発現定量用）に播種し（1×104 cell/ml）、24h培養した。24h後、分化誘導用の培地（DMEM FCS1%）に黒ショウガ抽出物10μg/mL及び分離画分（Compund 1-8）を1μMもしくは10μM（それぞれDMSOに溶解したサンプルが培地に対して0.1%(v/v)）の濃度になるように加え1週間培養した。また、コントロールにはDMSOを培地に対して0.1%（v/v）の濃度で添加した。1週間培養した後、細胞を回収し、RNAを抽出した。得られたRNAを定量型RT-PCR法を用いて糖輸送体（ＧＬＵＴ４）のmRNA発現量を定量した。この際、内因性コントロールとしてGAPDHを用いた。その結果を図2に示す。【００３４】
［結果及び試験例１における実施例の効果］
図２に示されるように、黒ショウガ抽出物（KPE）はC2C12において糖輸送体（ＧＬＵＴ４）の発現を促進することがわかった。一方、KPE中より８種類の化合物を分離精製し、これら８つのフラクションに関して糖輸送体（ＧＬＵＴ４）の発現促進作用を評価した。その結果、これらの分離画分で発現促進が見られた。その中でもCompund 2（Techtochrysin）、Compund3（3,7,4'-Trimethylkaempferol）、Compund 7、(Tetramethylkaempferol) Compund 8（5,7-dimethoxyflavone）は顕著な増加が認められ、更には、その中でもCompund 2及びCompund 8において特に顕著な増加が認められた。【００３５】
［試験例２； ＰＧＣ−１αの発現促進作用の評価］
マウス筋芽細胞株C2C12（DMEM FCS10%で培養）を24well plate（mRNA発現定量用）に播種し（1×104 cell/ml）、24h培養した。24h後、分化誘導用の培地（DMEM FCS1%）に黒ショウガ抽出物10μg/mLまたは分離画分（Compund 1-8）を1μMもしくは10μM（それぞれDMSOに溶解したサンプルが培地に対して0.1%(v/v)）の濃度になるように加え1週間培養した。また、コントロールにはDMSOを培地に対して0.1%（v/v）の濃度で添加した。1週間培養した後、細胞を回収し、RNAを抽出した。
得られたRNAを定量型RT-PCR法を用いてＰＧＣ−１αのmRNA発現量を定量した。この際、内因性コントロールとしてGAPDHを用いた。その結果を図３に示す。【００３６】
［結果及び試験例２における実施例の効果］
図３に示すように、黒ショウガ抽出物（KPE）はC2C12においてＰＧＣ−１αの発現を促進することがわかった。一方、KPE中より８種類の化合物を分離精製し、これら８つのフラクションに関してＰＧＣ−１αの発現促進作用を評価した。その結果、ＰＧＣ−１α発現促進が見られ、更には、その中でもCompund 2（Techtochrysin）及びCompund 8（5,7-dimethoxyflavone）において特に顕著な増加が認められた。【００３７】
［実施例の効果］
上記化合物群によって糖輸送体（ＧＬＵＴ４）及びＰＧＣ−１αの発現は増加した（図２及び図３）。さらに、糖輸送体（ＧＬＵＴ４）及びＰＧＣ−１αの発現上昇に関して構造活性相関が認められた。化合物群の中でも、B環にメトキシ基の少ない方が、活性が強いことが分かった。これにより、上記化学式（１）に示された化合物がこれらの活性が強いことが確認された。
実際に、活性が高かったのはB環にメトキシ基のないCompund 2（techtochrysin）とCompund 8 (5,7-dimethoxyflavone)であり、活性が低かったのはB環にメトキシ基が2つあるCompund 4 (Retsine)やCompund 5 (Pentamethylquercetin)であった（図３）。
以上により、上記化合物群及び上記化学式（１）で示される化合物において糖代謝輸送因子である糖輸送体（ＧＬＵＴ４）及びエネルギー代謝制御に関与する因子ＰＧＣ−１αの遺伝子の発現を促進し、これによりエネルギー代謝活性化作用を有することが確認された。
これにより、上記化合物群、化学式（１）に示された化合物は糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤、ＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤、エネルギー代謝活性化剤として使用することができ、また、黒ショウガ抽出物はＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤として使用することができることが確認された。【００３８】
以下に本発明のエネルギー代謝活性化剤の配合例を挙げるが、下記配合例は本発明を限定するものではない。
配合例１：チューインガム
砂糖                                  ５３．０ｗｔ％
ガムベース                            ２０．０
グルコース                            １０．０
水飴                                  １６．０
香料                                    ０．５
エネルギー代謝活性化剤                  ０．５    
１００．０ｗｔ％【００３９】
配合例２：グミ
還元水飴                              ４０．０ｗｔ％
グラニュー糖                          ２０．０
ブドウ糖                              ２０．０
ゼラチン                                ４．７
水                                      ９．６８
キウイ果汁                              ４．０
キウイフレーバー                        ０．６
色素                                    ０．０２
エネルギー代謝活性化剤                  １．０    
１００．０ｗｔ％【００４０】
配合例３：キャンディー
砂糖                                  ５０．０ｗｔ％
水飴                                  ３３．０
水                                    １４．４
有機酸                                  ２．０
香料                                    ０．２
エネルギー代謝活性化剤                  ０．４    
１００．０ｗｔ％【００４１】
配合例４：ヨーグルト（ハード・ソフト）
牛乳                                  ４１．５ｗｔ％
脱脂粉乳                                ５．８
砂糖                                    ８．０
寒天                                    ０．１５
ゼラチン                                ０．１
乳酸菌                                  ０．００５
エネルギー代謝活性化剤                  ０．４    
香料                                    微量
水                                      残余      
１００．０ｗｔ％【００４２】
配合例５：清涼飲料
果糖ブドウ糖液糖                      ３０．０ｗｔ％
乳化剤                                  ０．５
エネルギー代謝活性化剤                  ０．０５
香料                                    適量
精製水                                  残余      
１００．０ｗｔ％【００４３】
配合例６：ソフトカプセル
米胚芽油                              ８７．０ｗｔ％
乳化剤                                １２．０
エネルギー代謝活性化剤                  １．０    
１００．０ｗｔ％【００４４】
配合例７：錠剤
乳糖                                  ５４．０ｗｔ％
結晶セルロース                        ３０．０
澱粉分解物                            １０．０
グリセリン脂肪酸エステル                ５．０
エネルギー代謝活性化剤                  １．０    
１００．０ｗｔ％【００４５】
配合例８：顆粒内服剤（医薬品）
エネルギー代謝活性化剤                        １．０ｗｔ％
乳糖                                        ３０．０
コーンスターチ                              ６０．０
結晶セルロース                                ８．０
ポリビニールピロリドン                        １．０
１００．０ｗｔ％【００４６】
配合例９：錠菓
砂糖                                  ７６．４ｗｔ％
グルコース                            １９．０
ショ糖脂肪酸エステル                    ０．２
エネルギー代謝活性化剤                  ０．５
精製水                                  ３．９      
１００．０ｗｔ％【００４７】
配合例１０：キャットフード
とうもろこし                        ３４．０ｗｔ％
小麦粉                              ３５．０
ミートミール                        １５．０
牛脂                                  ８．９
食塩                                  １．０
かつおエキス                          ４．０
エネルギー代謝活性化剤                １．０
タウリン                              ０．１
ビタミン類                            ０．５
ミネラル類                            ０．５
１００．０ｗｔ％【００４８】
配合例１１：ドッグフード
とうもろこし                          ３０．０ｗｔ％
肉類（チキン）                        １５．０
脱脂大豆                              １０．０
小麦粉                                ２５．０
糟糠類                                  ５．０
エネルギー代謝活性化剤                  ５．０
動物性油脂                              ８．９
オリゴ糖                                ０．１
ビタミン                                ０．５
ミネラル                                ０．５
１００．０ｗｔ％
【産業上の利用可能性】
【００４９】
以上、説明したように、本発明は、安全であり、副作用が少ない筋肉細胞のエネルギー代謝活性化剤を提供することができる。
【図１】
2016163245.tif 000010
【図２】
2016163245.tif 000011
【図３】
2016163245.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成28年11月15日(2016.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（削除）
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
下記化学式（１）で示されるメトキシフラボンを有効成分とする、筋肉細胞における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
2016163245.tif 000013
［ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基であり、フラボン骨格のＢ環及びＣ環は、いずれも置換基を有していないものである。］
【請求項１３】
請求項１２記載の糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤であって、前記メトキシフラボンが、テクトクリシン（Ｔｅｃｈｔｏｃｈｒｙｓｉｎ）、及び５，７−ジメトキシフラボン（５，７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）のうちの少なくとも１種である、筋肉細胞における糖輸送体（ＧＬＵＴ４）遺伝子発現促進剤。
【請求項１４】
下記化学式（１）で示されるメトキシフラボンを有効成分とする、筋肉細胞におけるＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
2016163245.tif 000014
［ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基であり、フラボン骨格のＢ環及びＣ環は、いずれも置換基を有していないものである。］
【請求項１５】
請求項１４記載のＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤であって、前記メトキシフラボンが、テクトクリシン（Ｔｅｃｈｔｏｃｈｒｙｓｉｎ）、及び５，７−ジメトキシフラボン（５，７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）のうちの少なくとも１種である、筋肉細胞におけるＰＧＣ−１α遺伝子発現促進剤。
【請求項１６】
下記化学式（１）で示されるメトキシフラボンを有効成分とする、筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化剤。
2016163245.tif 000015
［ここで、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ水素あるいは炭素数１〜３のアルキル基であり、フラボン骨格のＢ環及びＣ環は、いずれも置換基を有していないものである。］
【請求項１７】
請求項１６記載のエネルギー代謝活性化剤であって、前記メトキシフラボンが、テクトクリシン（Ｔｅｃｈｔｏｃｈｒｙｓｉｎ）、及び５，７−ジメトキシフラボン（５，７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）のうちの少なくとも１種である、筋肉細胞におけるエネルギー代謝活性化剤。
【請求項１８】
請求項１６記載のメトキシフラボンを有効成分とする、エネルギー代謝活性化用食品組成物。
【国際調査報告】
2016163245.tif 000016
2016163245.tif 000017
2016163245.tif 000018
2016163245.tif 000019
2016163245.tif 000020
2016163245.tif 000021
2016163245.tif 000022
2016163245.tif 000023