(57)【要約】  生体安全性に優れ、かつ、甘味料に起因するＧＬＰ−１分泌促進効果を増強することができる組成物を提供する。  組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率を特定の範囲内にする。これにより、甘味料によるＧＬＰ−１分泌促進効果が増強される。
2017018404.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物であって、
組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記組成物。
【請求項２】
環状ジペプチドが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
甘味料が、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
甘味料が、グルコースを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とグルコースの含有量の比率が、１：３０００〜１：１５００００００である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
甘味料が、スクラロースを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とスクラロースの含有量の比率が、１：６０〜１：３０００００である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
甘味料が、アセスルファムカリウムを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とアセスルファムカリウムの含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
甘味料が、アスパルテームを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とアスパルテームの含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
甘味料が、ステビオール配糖体を含むものであり、
前記ステビオール配糖体が、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤからなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
ステビオール配糖体が、ステビオシドを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とステビオシドの含有量の比率が、１：３０〜１：１：２００００である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
甘味料が、レバウディオシドＡを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＡの含有量の比率が、１：３０〜１：１：２００００である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
甘味料が、レバウディオシドＤを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＤの含有量の比率が、１：３０〜１：１：２００００である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
甘味料の含有量が１．０ｐｐｍ〜６．０×１０5ｐｐｍである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
甘味料の含有量がショ糖濃度換算量で０．５重量％〜６００重量％である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
環状ジペプチド又はその塩が、大豆ペプチド、茶ペプチド、又は麦芽ペプチドから得られたものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
ＧＬＰ−１分泌促進作用を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
糖代謝改善用、食欲抑制用、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善用である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
ＧＬＰ−１の分泌を促進するための、環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物の使用であって、
組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記使用。
【請求項１８】
環状ジペプチドが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
甘味料が、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、請求項１７又は１８に記載の使用。
【請求項２０】
環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物を使用する、ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法であって、
組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記方法。
【請求項２１】
環状ジペプチドが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むものである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
甘味料が、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
ステビオール配糖体を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進用組成物であって、
前記ステビオール配糖体が、レバウディオシドＢ、及びレバウディオシドＤの少なくとも一方を含むものである、前記ＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
【請求項２４】
糖代謝改善用、食欲抑制用、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善用である、請求項２３に記載のＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
【請求項２５】
ＧＬＰ−１分泌促進により発揮される機能の表示を付した請求項２３に記載のＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
【請求項２６】
機能の表示が、「糖の代謝を改善する」、「糖尿病を予防する」、「糖尿病を改善する」、「食後の血糖値の上昇を抑制する」、「血糖値をコントロールする」、「食欲を抑制する」、「肥満症を予防する」、及び「肥満症を改善する」からなる群から選択されるものである、請求項２５に記載のＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
【請求項２７】
ＧＬＰ−１の分泌を促進するための、ステビオール配糖体の使用であって、
前記ステビオール配糖体が、レバウディオシドＢ、及びレバウディオシドＤの少なくとも一方を含むものである、前記使用。
【請求項２８】
ステビオール配糖体を有効成分として使用する、ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法であって、
前記ステビオール配糖体が、レバウディオシドＢ、及びレバウディオシドＤの少なくとも一方を含むものである、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環状ジペプチド及び甘味料を含有する組成物に関する。さらに詳しくは、環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有し、環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が特定の範囲内にある組成物、ＧＬＰ−１の分泌を促進するための前記組成物の使用、及びＧＬＰ−１の分泌を促進する方法に関する。また、本発明は、特定のステビオール配糖体を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進用組成物、ＧＬＰ−１の分泌を促進するための特定のステビオール配糖体の使用に関するものでもある。
【背景技術】
【０００２】
現代社会では生活様式の変化等により、糖尿病患者又はその予備軍が増加している。糖尿病は、糖代謝の異常によって起こる疾患であり、血糖値（血液中のグルコース濃度）が病的に高まることによって、様々な合併症（糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症および糖尿病性神経障害など）を引き起こす危険性のある疾患である。特に、インスリン非依存型糖尿病（２型糖尿病）患者は、糖尿病患者の９０％以上を占めていることから、その治療、改善又は予防が強く望まれている。【０００３】
糖尿病の治療、改善、又は予防においては、血糖値を適切にコントロールすることが重要であり、血糖値を低下させるための種々の薬剤が糖尿病治療薬として開発されている。例えば、膵臓β細胞に作用してインスリン分泌を刺激するスルフォニル尿素剤が広く使用されているが、副作用として低血糖症状や胃腸障害等が報告されている。また、消化管での糖質の消化・吸収を遅延させるα−グリコシダーゼ阻害剤においては、副作用として低血糖症状や腹部膨張感、放屁増加等の腹部症状、肝機能障害等が報告されている。さらに、肝臓からのグルコース放出を抑制するビグアナイド剤では、消化管障害や乳酸アシドーシス等の生体毒性が懸念され、安全性の面で必ずしも満足するものではない。【０００４】
ダイエットホルモンとして知られるグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１：Glucagon-like peptide-1）は、３０個又は３１個のアミノ酸からなるインクレチンであり、食事由来の脂肪、炭水化物、及びタンパク質摂取に応答して腸内分泌細胞であるＬ細胞から分泌される。ＧＬＰ−１の分泌は２型糖尿病患者において低下することが見出されているため、ＧＬＰ−１の分泌を促進することは、２型糖尿病やその他の関連疾患の治療のために有効である（非特許文献１）。また、ＧＬＰ−１は、正常時にグルコース摂取に応答してインスリンの分泌を増加し、食欲を抑制する働きがあることも知られている（非特許文献２）。【０００５】
このような背景の下、グルコース、スクロース、スクラロース、レバウディオシドＡ等の甘味料がＧＬＰ−１分泌促進作用を示すことが報告されている（非特許文献３、４）。また、ステビオシドが糖尿病治療に有効であることも報告されている（非特許文献５）。さらに、アセスルファムカリウムとスクラロースを含むダイエットソーダがＧＬＰ−１分泌促進作用を示すことも報告されている（非特許文献６）。特に、スクラロース等の人工甘味料は血糖値の上昇に及ぼす影響が少ないため、ＧＬＰ−１分泌促進作用を有する人工甘味料は糖尿病患者の血糖値コントロールに適している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Journal of Clinical Investigation, 91(3), 301-307 (1993)
【非特許文献２】Lancet, 359, 824-830 (2002)
【非特許文献３】Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 104(38), 15069-15074 (2007)
【非特許文献４】Journal of Agricultural Food Chemistry, 62(33), 8365-8370 (2014)
【非特許文献５】Metabolism, 53(1), 73-76 (2004)
【非特許文献６】日本栄養・食糧学会誌  第66巻  第2号  69-75(2013)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、甘味料が有するＧＬＰ−１分泌促進活性を増強することができる組成物を提供することにある。また、ＧＬＰ−１分泌促進用組成物、ＧＬＰ−１分泌を促進するための素材の使用、及びＧＬＰ−１の分泌を促進する方法等を提供することも本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、環状ジペプチド又はその塩を利用することに着目した。環状ジペプチドは、直鎖状ジペプチドの末端に存在するアミノ基とカルボキシル基とが脱水縮合することにより生成した環状構造を有するジペプチドであり、近年ではその様々な生理活性が注目されている。本発明者らは、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量と、甘味料の含有量の比率を特定の範囲内にすることで、甘味料単独によるＧＬＰ−１分泌促進活性が増強されることを見出した。【０００９】
さらに本発明者らは、特定のステビオール配糖体が顕著なＧＬＰ−１分泌促進効果を有することも見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
即ち、本発明は以下に関するが、これらに限定されない。
（１）環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物であって、
組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記組成物。
（２）環状ジペプチドが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むものである、（１）に記載の組成物。
（３）甘味料が、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、（１）又は（２）に記載の組成物。
（４）甘味料が、グルコースを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とグルコースの含有量の比率が、１：３０００〜１：１５００００００である、（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）甘味料が、スクラロースを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とスクラロースの含有量の比率が、１：６０〜１：３０００００である、（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（６）甘味料が、アセスルファムカリウムを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とアセスルファムカリウムの含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００である、（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（７）甘味料が、アスパルテームを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とアスパルテームの含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００である、（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（８）甘味料が、ステビオール配糖体を含むものであり、
前記ステビオール配糖体が、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤからなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（９）ステビオール配糖体が、ステビオシドを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とステビオシドの含有量の比率が、１：３０〜１：１：２００００である、（８）に記載の組成物。
（１０）甘味料が、レバウディオシドＡを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＡの含有量の比率が、１：３０〜１：１：２００００である、（８）に記載の組成物。
（１１）甘味料が、レバウディオシドＤを含むものであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＤの含有量の比率が、１：３０〜１：１：２００００である、（８）に記載の組成物。
（１２）甘味料の含有量が１．０ｐｐｍ〜６．０×１０5ｐｐｍである、（１）〜（１１）のいずれかに記載の組成物。
（１３）甘味料の含有量がショ糖濃度換算量で０．５重量％〜６００重量％である、（１）〜（１２）のいずれかに記載の組成物。
（１４）環状ジペプチド又はその塩が、大豆ペプチド、茶ペプチド、又は麦芽ペプチドから得られたものである、（１）〜（１３）のいずれかに記載の組成物。
（１５）ＧＬＰ−１分泌促進作用を有する、（１）〜（１４）のいずれかに記載の組成物。
（１６）糖代謝改善用、食欲抑制用、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善用である、（１）〜（１５）のいずれかに記載の組成物。
（１７）ＧＬＰ−１の分泌を促進するための、環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物の使用であって、
組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記使用。
（１８）環状ジペプチドが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むものである、（１７）に記載の使用。
（１９）甘味料が、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、（１７）又は（１８）に記載の使用。
（２０）環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物を使用する、ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法であって、
組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、
環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記方法。
（２１）環状ジペプチドが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むものである、（２０）に記載の方法。
（２２）甘味料が、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものである、（２０）又は（２１）に記載の方法。
（２３）ステビオール配糖体を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進用組成物であって、
前記ステビオール配糖体が、レバウディオシドＢ、及びレバウディオシドＤの少なくとも一方を含むものである、前記ＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
（２４）糖代謝改善用、食欲抑制用、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善用である、請求項２３に記載のＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
（２５）ＧＬＰ−１分泌促進により発揮される機能の表示を付した請求項２３に記載のＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
（２６）機能の表示が、「糖の代謝を改善する」、「糖尿病を予防する」、「糖尿病を改善する」、「食後の血糖値の上昇を抑制する」、「血糖値をコントロールする」、「食欲を抑制する」、「肥満症を予防する」、及び「肥満症を改善する」からなる群から選択されるものである、請求項２５に記載のＧＬＰ−１分泌促進用組成物。
（２７）ＧＬＰ−１の分泌を促進するための、ステビオール配糖体の使用であって、
前記ステビオール配糖体が、レバウディオシドＢ、及びレバウディオシドＤの少なくとも一方を含むものである、前記使用。
（２８）ステビオール配糖体を有効成分として使用する、ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法であって、
前記ステビオール配糖体が、レバウディオシドＢ、及びレバウディオシドＤの少なくとも一方を含むものである、前記方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によって、甘味料単独によるＧＬＰ−１分泌促進活性が増強された組成物を提供することができる。また、本発明によって、特定のステビオール配糖体を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進用組成物を提供することもできる。ＧＬＰ−１の分泌促進により糖代謝改善作用が得られるため、本発明の組成物の摂取により、食後血糖値の上昇抑制効果や、糖尿病又は肥満症の予防又は改善効果等が発揮される。【００１２】
また、本発明の組成物に含まれる環状ジペプチドは植物由来ペプチドの熱処理物等に含まれているため安全性が高く、本発明の組成物による重篤な副作用の発現リスクは極めて低いと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、ステビオシド、又はレバウディオシドＡとＣｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）との共存下でＮＣＩ−Ｈ７１６細胞を１時間培養した場合の、ＧＬＰ−１分泌量に及ぼす影響を示す。
【図２】図２は、レバウディオシドＤとＣｙｃｌｏ(Ｇｌｙ−Ｔｙｒ)との共存下でＮＣＩ−Ｈ７１６細胞を１時間培養した場合の、ＧＬＰ−１分泌量に及ぼす影響を示す。
【図３】図３は、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤの添加条件下でＮＣＩ−Ｈ７１６細胞を１時間培養した場合の、ＧＬＰ−１分泌量に及ぼす影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
１．環状ジペプチド又はその塩
本明細書において「環状ジペプチド」とは、アミノ酸を構成単位とすることを特徴とし、アミノ酸のアミノ基とカルボキシル基とが脱水縮合することにより生成したジケトピペラジン構造を有する環状ジペプチドのことをいう。尚、本明細書において、環状ジペプチド又はその塩をまとめて、単に、環状ジペプチドと称する場合がある。また、本明細書において、環状ジペプチドのアミノ酸構成が同じであれば、それらの記載順序はいずれが先でも構わなく、例えば、〔Cyclo(Gly-Tyr)〕と〔Cyclo(Tyr-Gly)〕は同じ環状ジペプチドを表すものである。
【００１５】
環状ジペプチドではアミド結合を介して二個のアミノ酸の末端部分が結合しているため（即ち、環状ジペプチドは、アミノ末端とカルボキシ末端とがアミド結合することによって形成される環状構造を有しているため）、分子末端部分に極性基であるカルボキシル基やアミノ基が露出している直鎖状ジペプチド（特に、同種のアミノ酸組成からなる直鎖状ジペプチド）と比較して環状ジペプチドは脂溶性が高いという特徴を有する。そのため、環状ジペプチドは直鎖状のジペプチドと比較して、消化管透過性や膜透過性に優れる。このことは、過去に報告されているラット反転腸管を用いた化合物透過試験の結果からも明らかである（J. Pharmacol, 1998, 50: 167-172）。また、環状ジペプチドは、その特異的な構造から各種ペプチダーゼに対する耐性も高いと考えられる。
【００１６】
本発明に含まれる環状ジペプチド又はその塩は特に限定されないが、例えば、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むことが好ましい。
【００１７】
本明細書において「環状ジペプチドの塩」とは、前記環状ジペプチドの薬理学的に許容される任意の塩（無機塩及び有機塩を含む）をいい、例えば、前記環状ジペプチドのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、燐酸塩、有機酸塩（酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、ピクリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等）等が挙げられるが、これらに限定されない。環状ジペプチドの塩は、当該分野で公知の任意の方法により、当業者によって容易に調製され得る。
【００１８】
本発明で用いる環状ジペプチドは、当該分野で公知の方法に従って調製することができる。例えば、化学合成法や酵素法、微生物発酵法により製造されてもよく、直鎖状ペプチドを脱水及び環化させることにより合成されてもよく、特開２００３−２５２８９６号公報、Journal of Peptide Science, 10, 737-737, 2004、及び国際公開第２０１４／２０００００号等に記載の方法に従って調製することもできる。例えば、植物由来タンパク質を含む原料に酵素処理や熱処理を施して得られる植物由来ペプチドを、さらに高温加熱処理することで、環状ジペプチドを豊富に含む植物由来ペプチド熱処理物を得ることができる。尚、得られた植物由来ペプチド熱処理物に対して、所望により、濾過、遠心分離、濃縮、限外濾過、凍結乾燥、粉末化等の処理を行ってもよい。また、植物由来ペプチド熱処理物中の特定の環状ジペプチドが所望の含有量に満たなければ、不足する特定の環状ジペプチドについては他の植物由来ペプチドや市販品、合成品を用いて適宜追加することもできる。
【００１９】
本発明において、環状ジペプチド又はその塩は、大豆ペプチド、茶ペプチド、又は麦芽ペプチド等の植物由来ペプチドから得られたものであってもよく、大豆ペプチド熱処理物、茶ペプチド熱処理物、又は麦芽ペプチド熱処理物等の植物由来ペプチド熱処理物から得られたものであってもよい。
【００２０】
２．植物由来ペプチド
本明細書における「植物由来ペプチド」は特に限定されないが、例えば、大豆ペプチド、茶ペプチド、麦芽ペプチド等を用いることができる。植物由来のタンパク質又はタンパク質を含む原料から植物由来ペプチドを調製して用いてもよいが、市販品を用いてもよい。
【００２１】
２−１．大豆ペプチド
本明細書でいう「大豆ペプチド」とは、大豆タンパク質に酵素処理や熱処理を施し、タンパク質を低分子化することによって得られる低分子ペプチドをいう。原料となる大豆（学名：Glycine max）は品種や産地などの制限なく用いることができ、粉砕品などの加工品段階のものを用いることもできる。
【００２２】
２−２．茶ペプチド
本明細書でいう「茶ペプチド」とは、茶（茶葉や茶殻を含む）抽出物に酵素処理や熱処理を施し、タンパク質を低分子化することによって得られる茶由来の低分子ペプチドをいう。抽出原料となる茶葉としては、茶樹（学名：Camellia sinensis）を用いて製造された茶葉の葉、茎など、抽出して飲用可能な部位を使用することができる。また、その形態も大葉、粉状など制限されない。茶葉の収穫期についても、所望する香味に合わせて適宜選択できる。
【００２３】
２−３．麦芽ペプチド
本明細書でいう「麦芽ペプチド」とは、麦芽又はその粉砕物から得られる抽出物に酵素処理や熱処理を施し、タンパク質を低分子化することによって得られる麦芽由来の低分子ペプチドをいう。原料となる麦芽ペプチドは、品種や産地などの制限なく用いることができるが、特に大麦の種子を発芽させた大麦麦芽が好適に用いられる。尚、本明細書では大麦麦芽のことを単に麦芽と表記することもある。
【００２４】
３．甘味料
本発明の組成物は、甘味料として天然甘味料、糖アルコール、人工甘味料等を用いることができる。例えば、天然甘味料としては、グルコース、フルクトース、ステビオール配糖体、モグロール配糖体、グリチルリチン酸配糖体、マルトース、スクロース、ラクトース、希少糖、高果糖液糖、果糖ブドウ糖液糖、ブドウ糖果糖液糖、オリゴ糖、はちみつ、サトウキビ搾汁液（黒糖蜜）、砂糖（白糖、三温糖、黒糖、和三盆、等）、メープルシロップ、モラセス（糖蜜）、水飴等が挙げられるが、これらに限定されない。糖アルコールとしては、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、マンニトール等が挙げられるが、これらに限定されない。また、人工甘味料としては、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、サッカリン、アリテーム、ネオテーム、等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
本発明で使用される甘味料は、好ましくは、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、フルクトース、サッカリン、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、ステビオシドやレバウディオシドAなどのステビオール配糖体、モグロール配糖体、及びグリチルリチン酸配糖体、からなる群より選ばれる１種又は２種以上を含むものであり、より好ましくは、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、及びアスパルテームからなる群より選ばれる１種又は２種以上を含むものである。
【００２６】
３−１．ステビオール配糖体
キク科ステビア（Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）の葉にはジテルペノイドの一種であるステビオール（Ｓｔｅｖｉｏｌ）とよばれる二次代謝産物が含まれており、その配糖体であるステビオール配糖体は砂糖の約３００倍もの甘味を呈することからカロリーレスの甘味料として食品産業に利用されている。ステビオールは最終的にはレバウディオシド（Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ（Ｒｅｂ））と呼ばれる配糖体にまで糖で修飾され、その前駆体であるステビオール三糖配糖体のステビオシド（Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ）が量的に最も多い。レバウディオシドとしては、例えばＷＯ２０１３／１４６５５５に記載されているように、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、ＲｅｂＤ等の複数の分子種が知られている。以下に、ステビオシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、及びＲｅｂＤの化学構造を示す。
【００２７】
【化１】
2017018404.tif 000003
【００２８】
【化２】
2017018404.tif 000004
【００２９】
【化３】
2017018404.tif 000005
【００３０】
【化４】
2017018404.tif 000006
【００３１】
【化５】
2017018404.tif 000007
【００３２】
本発明において、甘味料としてステビオール配糖体が使用される場合、特に限定されないが、ステビオシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、及びＲｅｂＤからなる群より選ばれる１つ又は２つ以上を含むものであり、より好ましくは、ステビオシド、ＲｅｂＡ、及びＲｅｂＤからなる群より選ばれる１つ又は２つ以上を含むものである。
【００３３】
４．組成物
本発明の一態様は、環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有し、環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が特定の範囲内にある組成物である。
【００３４】
４−１．環状ジペプチドと甘味料の含有量比率
本発明においては、環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が特定の範囲内にあることが重要である。具体的には、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率（組成物中の環状ジペプチド又はその塩の総量：組成物中の甘味料の含有量）は特に限定されないが、例えば、１：３０以上、１：６０以上、１：７５以上、１：１５０以上、１：３００以上、１：３０００以上、１：７５００以上、又は１：１５０００以上であり、１：１５００００００以下、１：６００００００以下、１：３００００００以下、３０００００以下、１：１５００００以下、１：１２００００以下、又は１：６００００以下である。典型的には、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率の範囲は、１：３０〜１：１５００００００、好ましくは１：３０００〜１：１５００００００、１：７５００〜１：６００００００、１：１５０００〜１：３００００００、１：６０〜１：３０００００、１：１５０〜１：１２００００、１：３００〜１：６００００、１：３０〜１：１５００００、１：７５〜１：６００００、又は１：１５０〜１：３００００である。
【００３５】
本発明に含まれる環状ジペプチド又はその塩は特に限定されないが、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むことが好ましい。
【００３６】
本発明に含まれる甘味料は特に限定されないが、好ましくはグルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、フルクトース、サッカリン、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤからなる群より選ばれる１種又は２種以上のものであり、より好ましくは、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤからなる群より選ばれる１種又は２種以上のものである。
【００３７】
甘味料がグルコースを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とグルコースの含有量の比率は、好ましくは１：３０００〜１：１５００００００、より好ましくは１：７５００〜１：６００００００、さらにより好ましくは１：１５０００〜１：３００００００である。
【００３８】
甘味料がスクラロースを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とスクラロースの含有量の比率は、好ましくは１：６０〜１：３０００００、より好ましくは１：１５０〜１：１２００００、さらにより好ましくは１：３００〜１：６００００である。
【００３９】
甘味料がアセスルファムカリウムを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とアセスルファムカリウムの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：１５００００、より好ましくは１：７５〜１：６００００、さらにより好ましくは１：１５０〜１：３００００である。
【００４０】
甘味料がアスパルテームを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とアスパルテームの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：１５００００、より好ましくは１：７５〜１：６００００、さらにより好ましくは１：１５０〜１：３００００である。
【００４１】
甘味料がステビオール配糖体を含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とステビオール配糖体の含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：２５００００、より好ましくは１：４０〜１：１５００００、さらにより好ましくは１：５０〜１：１０００００である。
【００４２】
甘味料がステビオシドを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とステビオシドの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：５００００、より好ましくは１：４０〜１：３００００、さらにより好ましくは１：５０〜１：２００００である。
【００４３】
甘味料がレバウディオシドＡを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＡの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：５００００、より好ましくは１：４０〜１：３００００、さらにより好ましくは１：５０〜１：２００００である。
【００４４】
甘味料がレバウディオシドＢを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＢの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：５００００、より好ましくは１：４０〜１：３００００、さらにより好ましくは１：５０〜１：２００００である。
【００４５】
甘味料がレバウディオシドＣを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＣの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：５００００、より好ましくは１：４０〜１：３００００、さらにより好ましくは１：５０〜１：２００００である。
【００４６】
甘味料がレバウディオシドＤを含む場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量とレバウディオシドＤの含有量の比率は、好ましくは１：３０〜１：５００００、より好ましくは１：４０〜１：３００００、さらにより好ましくは１：５０〜１：２００００である。
【００４７】
４−２．環状ジペプチドの含有量
本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、組成物中のアミノ酸又はその塩の含有量と環状ジペプチド又はその塩の含有量の比率が前記範囲を満たすものであれば、特に限定されるものではない。例えば、大豆ペプチド、茶ペプチド、又は麦芽ペプチド等の植物由来ペプチドを原料として用いる場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量は、例えば、５．０×１０-4ｐｐｍ以上、好ましくは１．０×１０-3ｐｐｍ以上、より好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ以上であり、さらにより好ましくは１．０×１０-2ｐｐｍ以上であり、１．５×１０4ｐｐｍ以下、好ましくは１．０×１０4ｐｐｍ以下、より好ましくは５．０×１０3ｐｐｍ以下、より好ましくは２．５×１０3ｐｐｍ以下であり、典型的には、５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍ、好ましくは１．０×１０-3ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍ、より好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ〜５．０×１０3ｐｐｍ、さらにより好ましくは１．０×１０-2ｐｐｍ〜２．５×１０3ｐｐｍである。また、大豆ペプチド、茶ペプチド、又は麦芽ペプチド等の植物由来ペプチドを原料として用いる場合、本発明の組成物における環状ジペプチド（シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、又はシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕等）、又はそれらの塩の個別の含有量は特に限定されるものではないが、例えば、５．０×１０-6ｐｐｍ以上、好ましくは５．０×１０-5ｐｐｍ以上、より好ましくは５．０×１０-4ｐｐｍ以上であり、さらにより好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ以上であり、１．５×１０2ｐｐｍ以下、好ましくは１．０×１０2ｐｐｍ以下、より好ましくは５０ｐｐｍ以下、より好ましくは２５ｐｐｍ以下であり、典型的には、５．０×１０-6ｐｐｍ〜１．５×１０2ｐｐｍ、好ましくは５．０×１０-5ｐｐｍ〜１．０×１０2ｐｐｍ、より好ましくは５．０×１０-4ｐｐｍ〜５０ｐｐｍ、さらにより好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ〜２５ｐｐｍである。尚、特に断りがない限り、本明細書において用いる「ｐｐｍ」は、重量／容量（ｗ／ｖ）のｐｐｍを意味し、１．０ｐｐｍは１．０×１０-3ｍｇ／ｍＬと換算され、１．０×１０-4重量％と換算されるものである。
【００４８】
また、本発明の組成物に配合された環状ジペプチド又はその塩の含有量は、公知の方法に従って測定することができる。例えば、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用することで測定することができる。
【００４９】
環状ジペプチド又はその塩として、合成品又は精製品を用いる場合、本発明の組成物における環状ジペプチド又はその塩の含有量は、特に限定されるものではないが、例えば、５．０×１０-4ｐｐｍ以上、好ましくは１．０×１０-3ｐｐｍ以上、より好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ以上であり、さらにより好ましくは１．０×１０-2ｐｐｍ以上であり、１．５×１０4ｐｐｍ以下、好ましくは１．０×１０4ｐｐｍ以下、より好ましくは５．０×１０3ｐｐｍ以下、より好ましくは２．５×１０3ｐｐｍ以下であり、典型的には、５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍ、好ましくは１．０×１０-3ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍ、より好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ〜５．０×１０3ｐｐｍ、さらにより好ましくは１．０×１０-2ｐｐｍ〜２．５×１０3ｐｐｍである。また、環状ジペプチド又はその塩として、合成品又は精製品を用いる場合、本発明の組成物における環状ジペプチド（シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、又はシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕等）、又はそれらの塩の個別の含有量は特に限定されるものではないが、例えば、５．０×１０-6ｐｐｍ以上、好ましくは５．０×１０-5ｐｐｍ以上、より好ましくは５．０×１０-4ｐｐｍ以上であり、さらにより好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ以上であり、１．５×１０2ｐｐｍ以下、好ましくは１．０×１０2ｐｐｍ以下、より好ましくは５０ｐｐｍ以下、より好ましくは２５ｐｐｍ以下であり、典型的には、５．０×１０-6ｐｐｍ〜１．５×１０2ｐｐｍ、好ましくは５．０×１０-5ｐｐｍ〜１．０×１０2ｐｐｍ、より好ましくは５．０×１０-4ｐｐｍ〜５０ｐｐｍ、さらにより好ましくは５．０×１０-3ｐｐｍ〜２５ｐｐｍである。
【００５０】
４−３．甘味料の含有量
本発明の組成物における甘味料の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が前記範囲を満たすものであれば、特に限定されるものではない。例えば、本発明の組成物における甘味料の総量は、１．０ｐｐｍ以上、１０ｐｐｍ以上、３０ｐｐｍ以上、１．０×１０2ｐｐｍ以上、１．０×１０3ｐｐｍ以上、１．０×１０4ｐｐｍ以上であり、６．０×１０5ｐｐｍ以下、４．０×１０5ｐｐｍ以下、２．０×１０5ｐｐｍ以下、１．０×１０5ｐｐｍ以下、５．０×１０4ｐｐｍ以下、１．０×１０4ｐｐｍ以下であり、典型的には、１．０ｐｐｍ〜６．０×１０5ｐｐｍ、１．０×１０2ｐｐｍ〜６．０×１０5ｐｐｍ、１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、１０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍである。甘味料がグルコースを含む場合、本発明の組成物中のグルコースの含有量は、好ましくは１．０×１０2ｐｐｍ〜６．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１．０×１０3ｐｐｍ〜４．０×１０5ｐｐｍ、さらにより好ましくは１．０×１０4ｐｐｍ〜２．０×１０5ｐｐｍである。甘味料がスクラロースを含む場合、本発明の組成物中のスクラロースの含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がアセスルファムカリウムを含む場合、本発明の組成物中のアセスルファムカリウムの含有量は、好ましくは１０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１．０×１０2ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは１．０×１０3ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がアスパルテームを含む場合、本発明の組成物中のアスパルテームの含有量は、好ましくは１０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１．０×１０2ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは１．０×１０3ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がステビオール配糖体を含む場合、本発明の組成物中のステビオール配糖体の含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜５．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜２．５×１０5ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がステビオシドを含む場合、本発明の組成物中の含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がレバウディオシドＡを含む場合、本発明の組成物中のレバウディオシドＡの含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がレバウディオシドＢを含む場合、本発明の組成物中のレバウディオシドＢの含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がレバウディオシドＣを含む場合、本発明の組成物中のレバウディオシドＣの含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。甘味料がレバウディオシドＤを含む場合、本発明の組成物中のレバウディオシドＤの含有量は、好ましくは１．０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、より好ましくは１０ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、さらにより好ましくは３０ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。
【００５１】
本発明の組成物における甘味料の含有量は、各甘味料の甘味度に基づいて算出されるショ糖濃度換算量（重量％）によって規定することもできる。本明細書において「甘味度」は、ショ糖の甘味を基準とした甘味の度合いで、ショ糖水溶液におけるショ糖濃度（重量％）に相当する。例えば、甘味度２は、ショ糖水溶液２重量％の甘味に相当する。以下に、ショ糖の甘味度を１とした場合の各甘味料の甘味度の例を示す。グルコース：０．６０〜０．７０、スクラロース：６００、アセスルファムカリウム：２００、アスパルテーム：１００〜２００、サッカリン：２００〜７００、エリスリトール：０．７５〜０．８０、キシリトール：０．６０、ソルビトール：０．６０〜０．７０、マルチトール：０．８０〜０．９０、マンニトール：０．６０、フルクトース：１．７３、ステビオシド：３００、レバウディオサイドＡ：４５０、レバウディオサイドＢ：３００、レバウディオサイドＣ：３０、レバウディオサイドＤ：２８５
尚、甘味度の調整のためには、使用される天然甘味料、糖アルコール、又は人工甘味料の量を調整すればよい。
【００５２】
本発明の組成物における甘味料の含有量は、前記の通り、その投与形態、投与方法などを考慮し、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が前記範囲を満たすものであれば、特に限定されるものではないが、例えば、ショ糖濃度換算量（重量％）で、好ましくは１．０重量％以上、より好ましくは１．５重量％以上、さらにより好ましくは１．８重量％以上である。また、本発明の組成物における甘味度の上限値は、好ましくは６００重量％以下、より好ましくは４００重量％以下、さらにより好ましくは３６０重量％以下である。典型的には、本発明の組成物における甘味料の含有量は、ショ糖濃度換算量（重量％）で、好ましくは１．０重量％〜６００重量％、より好ましくは１．５重量％〜４００重量％、さらにより好ましくは１．８重量％〜３６０重量％である。
【００５３】
本発明の組成物に配合された甘味料の濃度は、ＨＰＬＣ等の公知の方法により測定することができる。
【００５４】
本発明の組成物は、例えば、公知の組成物を調製する際に、その原材料に前記環状ジペプチド若しくはその塩、又は前記甘味料を所定量混合し、公知の組成物の製造方法に従って調製してもよく、また、既製の公知の組成物に、前記環状ジペプチド若しくはその塩、又は前記甘味料を前記所定量となるように添加して、溶解及び／又は懸濁することで調製してもよい。尚、公知の組成物が、前記環状ジペプチド若しくはその塩、又は前記甘味料を元来含有するものであってもよく、本発明の環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が所定の範囲内になるのであれば、適宜配合して調製することができる。
【００５５】
４−４．作用メカニズム
ダイエットホルモンとして知られるグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１：Glucagon-like peptide-1）は、３０個又は３１個のアミノ酸からなるインクレチンであり、食事由来の脂肪、炭水化物、及びタンパク質摂取に応答して腸内分泌細胞であるＬ細胞から分泌される。ＧＬＰ−１の分泌は２型糖尿病患者において低下しているため、ＧＬＰ−１の分泌を促進することは、２型糖尿病やその他の関連疾患の治療のために有効である。
【００５６】
甘味料、特にスクラロース等の人工甘味料は、ＧＬＰ−１分泌を促進し、かつ血糖値を上昇させることなくインスリン分泌を促す作用を有するため、２型糖尿病患者の血糖値コントロールに有用であることも知られている。従って、甘味料に起因するＧＬＰ−１分泌促進活性を増強することで、より強力な優れた糖代謝改善作用が得られるため、食後血糖値の上昇抑制効果や、糖尿病又は肥満症の予防又は改善効果を向上させることができる。さらに、ＧＬＰ−１は、正常時にグルコース摂取に応答してインスリンの分泌を増加し、食欲を抑制する作用を有する。従って、甘味料に起因するＧＬＰ−１分泌促進活性を増強することで、より強力な食欲抑制作用を得ることもできる。
【００５７】
４−５．他の成分
本発明の組成物は、例えば、前記の環状ジペプチド又はその塩、及び前記特定の甘味料を含有する原料に、任意の添加剤、通常の剤に用いられる任意の成分を含有することができる。これらの添加剤及び／又は成分の例としては、ビタミン類、ミネラル類、栄養成分及び香料などの生理活性成分の他、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、又はコーティング剤等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
４−６．用途
本発明の組成物は、前記の環状ジペプチド又はその塩の含有量と前記甘味料の含有量の比率を特定の範囲内に調整することにより、甘味料単独によるＧＬＰ−１分泌促進効果を増強させることができる。これにより、糖代謝改善作用が得られるため、本発明の組成物は、糖尿病若しくは肥満症の治療、予防若しくは改善、又は糖尿病に関連する疾患の治療、予防若しくは改善のために用いることができる。また、甘味料単独によるＧＬＰ−１分泌促進効果を増強させることで、より強力な食欲抑制作用を得ることもできる。従って、本発明の一態様は、糖代謝改善用、食欲抑制用、糖尿病若しくは肥満症の治療、予防若しくは改善用、又は糖尿病に関連する疾患の治療、予防若しくは改善用の組成物である。
【００５９】
尚、本明細書において、糖尿病に関連する疾患は特に限定されないが、例えば、糖尿病性高血圧症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症等が挙げられる。従って、本発明の組成物は、糖尿病性高血圧症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症等の治療、予防又は改善のために用いることができる。
【００６０】
本発明の組成物としては、医薬、飲料、食品、化粧品等が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の飲料の具体例としては、烏龍茶飲料、紅茶飲料、緑茶飲料、果汁飲料、野菜ジュース、スポーツドリンク、アイソトニック飲料、エンハンスドウォーター、ミネラルウォーター、ニアウォーター、栄養ドリンク剤等を挙げることができる。また、本発明の食品としては、例えば、機能性食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養補助食品、食事療法用食品、健康食品、サプリメント等を挙げることができる。尚、本発明の飲食品は、例えば、公知の飲食品を製造する際に、その原材料に前記環状ジペプチド又はその塩を所定量混合して、公知の食品の製造方法に従って調製してもよく、また、既製の公知の飲食品に、前記環状ジペプチド又はその塩を前記所定量となるように添加することで製造してもよい。
【００６１】
本発明の組成物は、治療的用途（医療用途）又は非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。具体的には、医薬品、医薬部外品及び化粧料等としての使用が挙げられ、また、薬事法上はこれらに属さないが、糖代謝の改善効果、糖尿病の予防効果、糖尿病の改善効果、食後の血糖値の上昇抑制効果、食欲抑制効果、肥満症の予防効果、又は肥満症の改善効果等を明示的又は暗示的に訴求する組成物としての使用が挙げられる。
【００６２】
本発明は、別の側面では、ＧＬＰ−１の分泌促進により発揮される機能の表示を付した組成物に関する。このような表示又は機能表示は特に限定されないが、例えば、「糖の代謝を改善する」、「糖尿病を予防する」、「糖尿病を改善する」、「食後の血糖値の上昇を抑制する」、「血糖値をコントロールする」、「食欲を抑制する」、「肥満症を予防する」、又は「肥満症を改善する」等が挙げられる。本明細書において、当該表示及び機能表示のような表示は、組成物自体に付されてもよいし、組成物の容器又は包装に付されていてもよい。
【００６３】
本発明の組成物は、その形態に応じた適当な方法で摂取することができる。摂取方法は、本発明の組成物に含まれる環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料が循環血中に移行できるのであれば特に限定されるものではない。例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、又はカプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、又はシロップ剤等の経口用液体製剤、注射剤、外用剤、坐剤、又は経皮吸収剤等の非経口用製剤などの形態とすることができるが、これらに限定されない。尚、本明細書において「摂取」とは、摂取、服用、又は飲用等の全態様を含むものとして用いられる。
【００６４】
本発明の組成物の適用量は、その形態、投与方法、使用目的及び当該組成物の摂取対象である患者又は患獣の年齢、体重、症状によって適宜設定され一定ではない。本発明の組成物の有効ヒト摂取量は一定ではないが、例えば、本発明における環状ジペプチド又はその塩の重量として、体重５０ｋｇのヒトで一日当たり、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上である。また、本発明における甘味料の重量として、体重５０ｋｇのヒトで一日あたり、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上、さらにより好ましくは３ｍｇ以上、特に好ましくは３０ｍｇ以上である。である。また、投与は所望の適用量範囲内において、１日内において単回又は数回に分けて行ってもよい。投与期間も任意である。尚、ここで、本発明の環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料の有効ヒト摂取量とは、ヒトにおいて有効な効果を示す環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料それぞれの合計摂取量のことであり、環状ジペプチド及び甘味料の種類は特に限定されない。
【００６５】
本発明の組成物の適用対象は、好ましくはヒトであるが、ウシ、ウマ、ヤギ等の家畜動物、イヌ、ネコ、ウサギ等のペット動物、又は、マウス、ラット、モルモット、サル等の実験動物であってもよい。ヒト以外の動物を対象に投与する場合、マウス１個体当たり約２０ｇに対して１日あたりの使用量は、組成物中の環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料の含有量、適用対象者の状態、体重、性別及び年齢等の諸条件により異なるが、通常、環状ジペプチド又はその塩の総配合量として、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ以上、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ以上を摂取できる量にするとよい。また、甘味料の総配合量として、０．００２ｍｇ／ｋｇ以上、より好ましくは０．０２ｍｇ／ｋｇ以上、さらにより好ましくは３ｍｇ／ｋｇ以上、特に好ましくは３０ｍｇ／ｋｇ以上を摂取できる量にするとよい。
【００６６】
５．ＧＬＰ−１の分泌を促進するための、環状ジペプチド及び甘味料を含有する組成物の使用
本発明の一態様は、環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有し、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である組成物の、ＧＬＰ−１の分泌を促進するための使用である。
【００６７】
また、前記環状ジペプチドは、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むことが好ましく、前記甘味料は、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものであることが好ましい。また、前記ステビオール配糖体は、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤからなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものであることが好ましい。
【００６８】
環状ジペプチド又はその塩の種類及び含有量、甘味料の種類及び含有、及び環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率の範囲等は、組成物に関して上記した通りである。また、追加される他の成分の具体例や量も、組成物に関して上記した通りである。
【００６９】
本発明の使用には、例えば、糖代謝改善、食欲抑制、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善のための使用が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、当該使用は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為、即ち、治療による人体への処理行為を含まない概念である。
【００７０】
６．ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法
本発明の一態様は、環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料を含有する組成物を使用する、ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法であって、組成物中の環状ジペプチド又はその塩の含有量が５．０×１０-4ｐｐｍ〜１．５×１０4ｐｐｍであり、環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率が、１：３０〜１：１５００００００である、前記方法である。
【００７１】
また、前記環状ジペプチドは、シクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕、及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕の一方又は両方を含むことが好ましく、前記甘味料は、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、及びステビオール配糖体からなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものであることが好ましい。また、前記ステビオール配糖体は、ステビオシド、レバウディオシドＡ、レバウディオシドＢ、レバウディオシドＣ、及びレバウディオシドＤからなる群から選択される１つ又は２つ以上を含むものであることが好ましい。
【００７２】
環状ジペプチド又はその塩の種類及び含有量、甘味料の種類及び含有、及び環状ジペプチド又はその塩の含有量と甘味料の含有量の比率の範囲等は、組成物に関して上記した通りである。また、追加される他の成分の具体例や量も、組成物に関して上記した通りである。
【００７３】
上記方法において、ＧＬＰ−１の分泌促進を必要とする対象とは、本発明の組成物の前記適用対象と同様である。また、本明細書中において治療有効量とは、本発明の組成物を上記対象に投与した場合に、投与していない対象と比較して、ＧＬＰ−１の分泌が促進される量のことである。具体的な有効量としては、投与形態、投与方法、使用目的及び対象の年齢、体重、症状等によって適時設定され一定ではない。
【００７４】
本発明の方法においては、前記治療有効量となるよう、前記特定の環状ジペプチド若しくはその塩、又は甘味料をそのまま、或いは、特定の環状ジペプチド若しくはその塩、又は甘味料を含有する組成物として投与してもよい。
【００７５】
本発明の方法によれば、副作用を生じることなくＧＬＰ−１の分泌を促進することが可能になる。
【００７６】
７．ＧＬＰ−１分泌促進用組成物
本発明の一態様は、特定のステビオール配糖体を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進用組成物である。
【００７７】
本明細書において「ステビオール配糖体」とは前記した通りである。本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物において、有効成分として含有するステビオール配糖体は、ステビオシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤからなる群より選ばれる１種又は２種以上のものであることが好ましく、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤの少なくとも一方を含むものであることがより好ましい。
【００７８】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物におけるステビオール配糖体の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、本発明の所望の効果が得られるような量であればよく、特に限定されるものではないが、例えば、本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物におけるステビオール配糖体の総量は、５０ｐｐｍ以上、好ましくは７０ｐｐｍ以上、より好ましくは１００ｐｐｍ以上であり、１．０×１０5ｐｐｍ以下、好ましくは２．５×１０4ｐｐｍ以下、より好ましくは１．０×１０4ｐｐｍ以下であり、典型的には、５０ｐｐｍ〜１．０×１０5ｐｐｍ、好ましくは７０ｐｐｍ〜２．５×１０4ｐｐｍ、より好ましくは１００ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍである。また、本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物におけるステビオシドの総量は、好ましくは２００ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、好ましくは４００ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍ、より好ましくは８００ｐｐｍ〜５．０×１０3ｐｐｍである。本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物におけるレバウディオシドＡの量は、好ましくは２００ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、好ましくは４００ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍ、より好ましくは８００ｐｐｍ〜５．０×１０3ｐｐｍである。本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物におけるレバウディオシドＢの量は、好ましくは２００ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、好ましくは４００ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍ、より好ましくは８００ｐｐｍ〜５．０×１０3ｐｐｍである。本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物におけるレバウディオシドＤの量は、好ましくは２００ｐｐｍ〜５．０×１０4ｐｐｍ、好ましくは４００ｐｐｍ〜１．０×１０4ｐｐｍ、より好ましくは８００ｐｐｍ〜５．０×１０3ｐｐｍである。
【００７９】
本発明の組成物に配合されたステビオール配糖体の濃度は、ＨＰＬＣ等の公知の方法により測定することができる。
【００８０】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物は、その形態に応じて、ステビオール配糖体の他に、任意の添加剤、通常用いられる任意の成分を含有することができる。これらの添加剤及び／又は成分の例としては、ビタミン類、ミネラル類、栄養成分、香料などの生理活性成分の他、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、又はコーティング剤等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８１】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物は、前述のステビオール配糖体を有効量含有するという特徴を有することによりＧＬＰ−１の分泌が促進されることで、糖代謝改善効果や食欲抑制効果等を奏することができる。その結果、糖尿病若しくは肥満症の治療、予防若しくは改善効果、又は糖尿病に関連する疾患の治療、予防若しくは改善効果が発揮される。従って、本発明の一態様は、特定のステビオール配糖体を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進用組成物であって、糖代謝改善作用、食欲抑制作用、糖尿病若しくは肥満症の治療、予防若しくは改善作用を有する前記組成物である。
【００８２】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物としては、医薬、飲料、食品、化粧品等が挙げられるが、これらに限定されない。飲料及び食品の具体例としては、前記の通りである。尚、本発明の飲食品は、例えば、公知の飲食品を製造する際に、その原材料に前記ステビオール配糖体を所定量混合して、公知の食品の製造方法に従って調製してもよく、また、既製の公知の飲食品に、前記ステビオール配糖体を前記所定量となるように添加することで製造してもよい。
【００８３】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物は、治療的用途（医療用途）又は非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。具体的には、医薬品、医薬部外品及び化粧料等としての使用が挙げられ、また、薬事法上はこれらに属さないが、糖代謝の改善効果、糖尿病の予防効果、糖尿病の改善効果、食後の血糖値の上昇抑制効果、食欲抑制効果、肥満症の予防効果、又は肥満症の改善効果等を明示的又は暗示的に訴求する組成物としての使用が挙げられる。
【００８４】
本発明は、別の側面では、ＧＬＰ−１の分泌促進により発揮される機能の表示を付した組成物に関する。このような表示又は機能表示は特に限定されないが、例えば、「糖の代謝を改善する」、「糖尿病を予防する」、「糖尿病を改善する」、「食後の血糖値の上昇を抑制する」、「血糖値をコントロールする」、「食欲を抑制する」、「肥満症を予防する」、又は「肥満症を改善する」等が挙げられる。本明細書において、当該表示及び機能表示のような表示は、組成物自体に付されてもよいし、組成物の容器又は包装に付されていてもよい。
【００８５】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物は、その形態に応じた適当な方法で摂取することができる。摂取方法は、本発明の組成物に含まれる環状ジペプチド又はその塩、及び甘味料が循環血中に移行できるのであれば特に限定されるものではない。例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、又はカプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、又はシロップ剤等の経口用液体製剤、注射剤、外用剤、坐剤、又は経皮吸収剤等の非経口用製剤などの形態とすることができるが、これらに限定されない。尚、本明細書において「摂取」とは、摂取、服用、又は飲用等の全態様を含むものとして用いられる。
【００８６】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物の適用量は、その形態、投与方法、使用目的及び当該組成物の摂取対象である患者又は患獣の年齢、体重、症状によって適宜設定され一定ではない。本発明の組成物の有効ヒト摂取量は一定ではないが、例えば、本発明におけるステビオール配糖体の重量として、体重５０ｋｇのヒトで一日当たり、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上である。また、投与は所望の適用量範囲内において、１日内において単回又は数回に分けて行ってもよい。投与期間も任意である。尚、ここで、本発明のステビオール配糖体の有効ヒト摂取量とは、ヒトにおいて有効な効果を示すステビオール配糖体の合計摂取量のことである。
【００８７】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物の適用対象は、好ましくはヒトであるが、ウシ、ウマ、ヤギ等の家畜動物、イヌ、ネコ、ウサギ等のペット動物、又は、マウス、ラット、モルモット、サル等の実験動物であってもよい。ヒト以外の動物を対象に投与する場合、マウス１個体当たり約２０ｇに対して１日あたりの使用量は、組成物中のステビオール配糖体の含有量、適用対象者の状態、体重、性別及び年齢等の諸条件により異なるが、通常、ステビオール配糖体の総配合量として、好ましくは０．００２ｍｇ／ｋｇ以上、より好ましくは０．０２ｍｇ／ｋｇ以上を投与できる量にするとよい。
【００８８】
８．ＧＬＰ−１の分泌を促進するためのステビオール配糖体の使用
本発明の一態様は、ＧＬＰ−１の分泌を促進するための、ステビオール配糖体の使用である。当該使用において、有効成分として使用されるステビオール配糖体は、ステビオシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤからなる群より選ばれる１種又は２種以上を含むものであり、より好ましくは、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤの少なくとも一方を含むものである。
【００８９】
ステビオール配糖体の種類及び含有量等は、上記した通りである。また、追加される他の成分の具体例や量も、上記した通りである。
【００９０】
本発明の使用には、例えば、糖代謝改善、食欲抑制、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善のための使用が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、当該使用は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為、即ち、治療による人体への処理行為を含まない概念である。
【００９１】
９．ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法
本発明の一態様は、ＧＬＰ−１の分泌促進を必要とする対象に、特定のステビオール配糖体を有効成分として治療有効量を投与することを含む、ＧＬＰ−１の分泌を促進する方法を提供するものである。当該方法において、有効成分として投与されるステビオール配糖体は、ステビオシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤからなる群より選ばれる１種又は２種以上を含むものであり、より好ましくは、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤの少なくとも一方を含むものである。
【００９２】
尚、ＧＬＰ−１分泌促進を必要とする対象とは、本発明のＧＬＰ−１分泌促進用組成物の前記適用対象と同様である。
【００９３】
また、本明細書中において治療有効量とは、本発明のステビオール配糖体を上記対象に摂取させた場合に、摂取していない対象と比較して、ＧＬＰ−１分泌が増加する量のことである。具体的な有効量としては、投与形態、投与方法、使用目的及び対象の年齢、体重、症状等によって適時設定され一定ではない。
【００９４】
本発明の方法においては、前記治療有効量となるよう、前記特定のステビオール配糖体をそのまま、或いは、特定のステビオール配糖体を含有する組成物として投与してもよい。
【００９５】
本発明の方法によれば、副作用を生じることなくＧＬＰ−１の分泌を促進することが可能になる。
【実施例】
【００９６】
以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明するが、これにより本発明の範囲を限定するものではない。当業者は、本発明の方法を種々変更、修飾して使用することが可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。【００９７】
実施例１．甘味料のＧＬＰ−１の分泌促進作用に対する環状ジペプチドの増強効果
（１−１）試薬
環状ジペプチドであるシクログリシルチロシン〔Cyclo(Gly-Tyr)〕（ＣＧＹ）及びシクロロイシルフェニルアラニン〔Cyclo(Leu-Phe)〕（ＣＬＦ）は化学合成した標品を使用した。Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ  ９６−ｗｅｌｌプレートはＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（ＢＤ）社より入手した。ＰＢＳ（＋）、抗生物質、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）、及びグルコースはナカライテスク社、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルテームは和光純薬工業社、活性型ＧＬＰ−１  ＥＬＩＳＡキットはＭｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ）はＳｉｇｍａ社、Ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅはＳａｎｔａＣｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社よりそれぞれ入手して使用した。ヒト腸管細胞株であるＮＣＩ−Ｈ７１６細胞は、ＡＴＣＣ社より譲渡されたものを用いた。【００９８】
（１−２）解析
以降の試験例において、データは平均値±標準誤差で表示した。【００９９】
（１−３）細胞培養
ＤＭＥＭ培地(１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１％抗生物質添加済)に懸濁させたＮＣＩ−Ｈ７１６細胞をＰｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ  ９６−ｗｅｌｌプレートに０．５×１０5ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで１００μＬずつ播種し、ＣＯ2インキュベーター(ｅｓｐｅｃ社製)で４８時間培養した。【０１００】
（１−４）反応溶液調製
甘味料溶液としてPBS(+)にグルコースは３％、スクラロースは０．６％、アセスルファムカリウムは０．３％、アスパルテームは０．３％になるように調製した。また、環状ジペプチドはＤＭＳＯに溶解後、甘味料溶液への添加後に表１、表２に記載の最終濃度となるよう添加した。尚、すべての細胞添加溶液はＤＭＳＯを０．１％、１０μＭのＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅを含むように調製した。【０１０１】
（１−５）細胞への添加・回収、ＧＬＰ−１の定量
ＰＢＳ（＋）で１回洗浄後、細胞に反応溶液を添加し、１時間後に添加溶液を回収した。その後、ＥＬＩＳＡキットを用いて回収溶液中の活性型ＧＬＰ−１量を測定した。解析は甘味料及び環状ジペプチドを添加していない群の活性型ＧＬＰ−１量を１００としたときの相対値を用いた。【０１０２】
結果を表１及び２に示す。【０１０３】
【表１】
2017018404.tif 000008
【０１０４】
【表２】
2017018404.tif 000009
【０１０５】
表１及び２に示す通り、グルコース、スクラロース、アセスルファムカリウム、及びアスパルテームのいずれの甘味料においても、ＧＬＰ−１の分泌量が環状ジペプチド（Cyclo(Gly-Tyr)又はCyclo(Leu-Phe)）の添加濃度依存的に増加することが明らかとなった。【０１０６】
実施例２：ステビオシド、又はＲｅｂＡとＣｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）の組み合わせによるＧＬＰ−１の分泌促進作用
試薬等は実施例１と同じメーカーの製品を使用した。また、以降の試験例において、データは平均値±標準誤差で表示した。統計学的検定は、ＥｘｃｅｌのＳｔｕｄｅｎｔ’s  ｔ−ｔｅｓｔを用いた。結果における「＊」はｐ＜０．０５、「♯」はｐ＜０．１の有意差ありを意味する。【０１０７】
ＤＭＥＭ培地（１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１％抗生物質を添加済)に懸濁させたＮＣＩ−Ｈ７１６細胞をＰｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ  ９６−ｗｅｌｌプレートに０．５×１０5ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで１００μＬずつ播種し、ＣＯ2インキュベーター(ｅｓｐｅｃ社製)で４８時間培養した。ＰＢＳ（＋）で洗浄後、１０μＭのＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅを添加済のＰＢＳ（＋）溶液中のステビオシド最終濃度、又はＲｅｂＡ最終濃度が０．０１％となるように調整し、Ｃｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）最終濃度が０．０２μｇ／ｍＬ、又は２μｇ／ｍＬとなるように調整し、ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞に１００μＬずつ添加した。添加１時間後に添加溶液を回収し、ＥＬＩＳＡキットを用いて溶液中の活性型ＧＬＰ−１量を測定した。解析はステビオール配糖体もＣｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）も添加していない群の活性型ＧＬＰ−１量を１００としたときの相対値を用を基準に行った。【０１０８】
結果を表３及び図１に示す。尚、図１において、ステビオシドを「Ｓｔｅｖ．」と表記し、Ｃｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）を「ＣＬＦ」を表記する。また、Ｃｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）の最終濃度が０．０２μｇ／ｍＬの群を「ＣＬＦ（Ｌｏｗ）」と表記し、２μｇ／ｍＬの群を「ＣＬＦ（Ｈｉｇｈ）」と表記する。【０１０９】
【表３】
2017018404.tif 000010
【０１１０】
表３及び図１に示す通り、ステビオシド、ＲｅｂＡともに単独ではＧＬＰ−１分泌が促進されない０．０１％という濃度において、Ｃｙｃｌｏ（Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）と組み合わせることでＧＬＰ−１分泌促進作用が得られることが明らかとなった。【０１１１】
実施例３：ＲｅｂＤとＣｙｃｌｏ(Ｇｌｙ−Ｔｙｒ)の組み合わせによるＧＬＰ−１の分泌促進作用
実験は実施例２に準じて行った。１０μＭのＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅを添加済のＰＢＳ（＋）溶液中のＲｅｂＤ最終濃度が０．０１％となるように調整し、Ｃｙｃｌｏ(Ｇｌｙ−Ｔｙｒ)の最終濃度が０．０１μｇ／ｍＬ、又は１μｇ／ｍＬとなるように調整し、ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞に１００μＬ添加し、以下実施例２と同様の活性型ＧＬＰ−１量の測定及び統計解析を行った。【０１１２】
結果を表４及び図２に示す。尚、図２において、Ｃｙｃｌｏ(Ｇｌｙ−Ｔｙｒ)を「ＣＧＹ」を表記する。また、Ｃｙｃｌｏ(Ｇｌｙ−Ｔｙｒ)の最終濃度が０．０１μｇ／ｍＬの群を「ＣＬＦ（Ｌｏｗ）」と表記し、１μｇ／ｍＬの群を「ＣＬＦ（Ｈｉｇｈ）」と表記する。【０１１３】
【表４】
2017018404.tif 000011
【０１１４】
表４及び図２に示す通り、ＲｅｂＤ単独ではＧＬＰ−１分泌が促進されない０．０１％という濃度において、Ｃｙｃｌｏ(Ｇｌｙ−Ｔｙｒ)と組み合わせることでＧＬＰ−１分泌促進作用が得られることが明らかとなった。【０１１５】
実施例４：ステビオール配糖体のＧＬＰ−１分泌促進作用
ＤＭＥＭ培地（１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１％抗生物質を添加済)に懸濁させたＮＣＩ−Ｈ７１６細胞をＰｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ  ９６−ｗｅｌｌプレートに０．５×１０5ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで１００μＬずつ播種し、ＣＯ2インキュベーター(ｅｓｐｅｃ社製)で４８時間培養した。ＰＢＳ（＋）で洗浄後、１０μＭのＳｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅを添加済のＰＢＳ（＋）溶液中のステビオシド、ＲｅｂＡ、又はＲｅｂＢの最終濃度が０．００１、０．０１、又は０．１％となるように調整し、ＲｅｂＣ、又はＲｅｂＤの最終濃度が０．００１、又は０．０１％となるように調整したＰＢＳ（＋）溶液１００μＬを細胞に添加した。１時間後に添加溶液を回収し、ＥＬＩＳＡキットを用いて溶液中の活性型ＧＬＰ−１量を測定した。解析はステビオール配糖体を添加していない群の活性型ＧＬＰ−１量を１００としたときの相対値を基準として行った。【０１１６】
結果を表５及び図３に示す。【０１１７】
【表５】
2017018404.tif 000012
【０１１８】
表５及び図３に示す通り、ＲｅｂＣではＧＬＰ−１分泌促進作用が認められなかったものの、ステビオシド、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、及びＲｅｂＤの添加によってＧＬＰ−１分泌促進作用が得られることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１１９】
本発明は、環状ジペプチド又はその塩と甘味料を一定の比率で含有する組成物に関し、これにより甘味料単独によるＧＬＰ−１分泌促進効果を増強することができる。また、本発明の組成物に含まれる環状ジペプチドは植物由来ペプチドの熱処理物等に含まれているため安全性が高く、本発明の組成物による重篤な副作用の発現リスクは極めて低い。さらに本発明は、特定のステビオール配糖体を有効成分として含有するＧＬＰ−１分泌促進用組成物等を提供するものでもある。従って、本発明は、糖代謝改善、又は糖尿病若しくは肥満症の予防若しくは改善等に資する新たな手段を提供するものであるため、産業上の利用性が高い。
【図１】
2017018404.tif 000013
【図２】
2017018404.tif 000014
【図３】
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【国際調査報告】
2017018404.tif 000016
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