(57)【要約】  本発明は、下記式（Ｉ）：2017094897.tif 000018 （各記号は明細書に定義される通りである。）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物からなる、生体内での安定性が改善された抗ＩＬ−１７アプタマーを提供する。
2017094897.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
2017094897.tif 000015
［式中、
ｍは０又は１であり、
ｎ１及びｎ２は、同一又は異なって、０又は１であり、
Ｌ１及びＬ２は、同一又は異なって、１〜６の整数であり、
ｑは０〜６の整数であり、
Ｔ１及びＴ２は、同一又は異なって、‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は
【化２】
2017094897.tif 000016
（＊はｂＰＥＧ１又はｂＰＥＧ２の結合位置を示し、＊＊はＸ１又はＸ２の結合位置を示す。）であり、
Ｘ１及びＸ２は、同一又は異なって、‐（ＣＨ２）３‐、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｇ‐（ここで、ｇは２〜５の整数である。）であり、
Ｙ１及びＹ２は、同一又は異なって、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｊ-（ここで、ｊは２〜６の整数である。）であり、
Ｗは、‐（ＣＨ２）３ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、‐（ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、‐（ＣＨ２）１２ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、又は‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｊ-ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐であり、（ここで、ｊは２〜６の整数である。）であり、
ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２は、同一又は異なって、分岐鎖を持つ１０〜８０ｋＤａのポリエチレングリコールであり、
Ｚは、下記式（Ｉａ）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０５）
又は下記式（Ｉｂ）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０６）
又は下記式（Ｉｃ）：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）(配列番号１０７)
又は下記式（Ｉｄ）：
ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）（配列番号１０８）
｛上記の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）及び（Ｉｄ）中、
ａ、ｇ、ｃ及びｕは、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン、シトシン及びウラシルであるリボヌクレオチドを示し、
ｒは、塩基がアデニン又はグアニンであるリボヌクレオチドを示し、
ａ’、ｇ’及びｃ’は、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン及びシトシンである、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを示し、
ｕ’は、塩基がウラシルであるリボヌクレオチド、塩基がウラシルであるデオキシリボヌクレオチド又は塩基がチミンであるデオキシリボヌクレオチドを示し、
ヌクレオチドにおける括弧は、そのヌクレオチドの修飾を示し、
（Ｍ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｆ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、
（Ｘ1）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、ホスホロチオエート化されているか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、
（Ｘ2）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、
（Ｘ3）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｘ4）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子又はＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｘ5）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、ホスホロチオエート化されていることを示し、
（Ｘ6）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、ホスホロチオエート化されているか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｘ7）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子又はＯ−メチル基で置き換えられていることを示す。｝、
又は下記式（ＩＩａ）：
ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）（配列番号１０９）
又は下記式（ＩＩｂ）：
ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）（配列番号１１０）
又は下記式（ＩＩｃ）：
ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）（配列番号１１１）
｛上記の式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び（ＩＩｃ）中、
（Ｓ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、ホスホロチオエート化されていることを示し、
（ｘ1）は、ヌクレオチドがＬｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ（ＬＮＡ）修飾されているか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（ｘ2）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（ｘ3）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はＬＮＡ修飾されていることを示し、
その他の記号は前記と同義である。｝
で表される配列を含むアプタマーである。］
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項２】
ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも、０又は１であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、
Ｔ１及びＴ２は、同一又は異なって、‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は、
【化３】
2017094897.tif 000017
（＊はｂＰＥＧ１又はｂＰＥＧ２の結合位置を示し、＊＊はＸ１又はＸ２の結合位置を示す。）であり、
Ｘ１及びＸ２が同一であって、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐であり、且つ、
Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である、
請求項１に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項３】
ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも０又は１であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、
Ｔ１及びＴ２がいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ２がいずれも、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐であり、且つ、
Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である、
請求項１に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項４】
ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも１であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、
Ｔ１及びＴ２がいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ２がいずれも‐（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐であり、且つ、
Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である、
請求項１に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項５】
ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも０であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、且つ、
Ｔ１及びＴ２がいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ２がいずれも‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐である、
請求項１に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項６】
Ｚが、配列番号１〜１０４に示す配列を含むアプタマーである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項７】
ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２が、分岐鎖を持つ１５〜４５ｋＤａのポリエチレングリコールであり、且つ、
Ｚが、配列番号１〜１０４のいずれかに示す配列を含むアプタマーである、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項８】
ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２が、分岐鎖を持つ３５〜４５ｋＤａのポリエチレングリコールである、請求項1〜７のいずれか１項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を含む医薬。
【請求項１０】
炎症性疾患、自己免疫疾患、癌、アレルギー、又は感染症に関連する治療又は予防に用いるための、請求項９に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）に対するアプタマー及びその利用方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明者らは以前に、従来公知の抗ＩＬ−１７アプタマーに比べて顕著に高い、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合阻害活性を有し、ＩＬ−１７の生理活性を阻害できる、極めて良質な抗ＩＬ−１７アプタマーを作製することに成功し、それを特許文献１に開示した。【０００３】
ところで、アプタマーの活性本体は核酸であるが、そのまま生体に投与すると数分で腎臓から排泄され血中から消失してしまう。そこで、腎臓での排泄を遅らせ血中滞留性を確保するためにコレステロールやポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等を付加する。ＰＥＧは分岐が多く、かつ分子量が大きい程血中滞留性が良くなること（直鎖＜２分岐＜４分岐、２０ｋＤａ＜４０ｋＤａ＜８０ｋＤａ）も知られているが、十分満足のいくものではない（特許文献２、３）。しかも、ＰＥＧの分岐数と分子量に比例してコストは増大し、現実に使用できるＰＥＧが限られてくるという問題もある。一方、予め２つに分岐した官能基を核酸に付加する（特許文献４）、あるいはデンドリック（枝分かれ）構造を利用し（特許文献５）、それぞれの末端にＰＥＧを付加することで血中滞留性を改善した報告もあるが、核酸部分に関する具体的なデータの記載はない。また、核酸の場合は、ＰＥＧを付加することにより、活性が減弱する場合もあることが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２０１４／１４８６３８
【特許文献２】ＷＯ２００６／０２９２５８
【特許文献３】ＵＳ２００３０１１４６４７
【特許文献４】ＷＯ２００８／０４８０７９
【特許文献５】特表２００９−５１７４１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、アプタマー医薬品の最大の課題である生体内での血中滞留性が改善された抗ＩＬ−１７アプタマーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
特許文献１では、抗ＩＬ−１７アプタマーにおける結合活性の増強と血中の核酸分解酵素（ヌクレアーゼ）に対する抵抗性を高めた構造最適化を検討したが、マウスやヒトの生体に投与する場合には、分子量の大きいＰＥＧ等を付加し腎臓での排泄を遅らせることにより、血中での滞留性を高める工夫が必要である。しかし、公知技術である２〜４分岐型４０ｋＤａ  ＰＥＧを使用した場合の血中滞留性の指標である血中半減期は７時間程度であり、より改善が望まれていた。【０００７】
そこで本発明者らは、鋭意検討を行ったところ、当該抗ＩＬ−１７アプタマーに対し、新規にブランチャーで「分岐構造」を導入し、この部分を介してそれぞれの末端に４０ｋＤａのＰＥＧを結合して合計８０ｋＤａにすることにより、直接８０ｋＤａのＰＥＧをつけるよりも、予想以上に高い血中滞留性を確保できることを見出した。本発明者らは更に、分岐構造を導入したとしても付加するＰＥＧが直鎖では血中滞留性は上がらず、ＰＥＧ自体も分岐している必要があることも見出した。本発明者らはこれらの知見に基づき更なる検討を行い、本発明を完成するに至った。【０００８】
本発明は即ち、以下の通りである。
［１］下記式（Ｉ）：【０００９】
【化１】
2017094897.tif 000003
【００１０】
［式中、
ｍは０又は１であり、
ｎ１及びｎ２は、同一又は異なって、０又は１であり、
Ｌ１及びＬ２は、同一又は異なって、１〜６の整数であり、
ｑは０〜６の整数であり、
Ｔ１及びＴ２は、同一又は異なって、‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は【００１１】
【化２】
2017094897.tif 000004
【００１２】
（＊はｂＰＥＧ１又はｂＰＥＧ２の結合位置を示し、＊＊はＸ１又はＸ２の結合位置を示す。）であり、
Ｘ１及びＸ２は、同一又は異なって、‐（ＣＨ２）３‐、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｇ‐（ここで、ｇは２〜５の整数である。）であり、
Ｙ１及びＹ２は、同一又は異なって、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｊ-（ここで、ｊは２〜６の整数である。）であり、
Ｗは、‐（ＣＨ２）３ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、‐（ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、‐（ＣＨ２）１２ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、又は‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｊ-ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐であり、（ここで、ｊは２〜６の整数である。）であり、
ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２は、同一又は異なって、分岐鎖を持つ１０〜８０ｋＤａのポリエチレングリコールであり、
Ｚは、下記式（Ｉａ）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０５）
又は下記式（Ｉｂ）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０６）
又は下記式（Ｉｃ）：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）(配列番号１０７)
又は下記式（Ｉｄ）：
ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）（配列番号１０８）
｛上記の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）及び（Ｉｄ）中、
ａ、ｇ、ｃ及びｕは、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン、シトシン及びウラシルであるリボヌクレオチドを示し、
ｒは、塩基がアデニン又はグアニンであるリボヌクレオチドを示し、
ａ’、ｇ’及びｃ’は、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン及びシトシンである、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを示し、
ｕ’は、塩基がウラシルであるリボヌクレオチド、塩基がウラシルであるデオキシリボヌクレオチド又は塩基がチミンであるデオキシリボヌクレオチドを示し、
ヌクレオチドにおける括弧は、そのヌクレオチドの修飾を示し、
（Ｍ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｆ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、
（Ｘ1）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、ホスホロチオエート化されているか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、
（Ｘ2）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、
（Ｘ3）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｘ4）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子又はＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｘ5）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、ホスホロチオエート化されていることを示し、
（Ｘ6）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、ホスホロチオエート化されているか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（Ｘ7）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子又はＯ−メチル基で置き換えられていることを示す。｝、
又は下記式（ＩＩａ）：
ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）（配列番号１０９）
又は下記式（ＩＩｂ）：
ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）（配列番号１１０）
又は下記式（ＩＩｃ）：
ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）（配列番号１１１）
｛上記の式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）及び（ＩＩｃ）中、
（Ｓ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、ホスホロチオエート化されていることを示し、
（ｘ1）は、ヌクレオチドがＬｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ（ＬＮＡ）修飾されているか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（ｘ2）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを示し、
（ｘ3）は、ヌクレオチドが非修飾であるか、又はＬＮＡ修飾されていることを示し、
その他の記号は前記と同義である。｝
で表される配列を含むアプタマーである。］
で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［２］ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも、０又は１であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、
Ｔ１及びＴ２は、同一又は異なって、‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は、【００１３】
【化３】
2017094897.tif 000005
【００１４】
（＊はｂＰＥＧ１又はｂＰＥＧ２の結合位置を示し、＊＊はＸ１又はＸ２の結合位置を示す。）であり、
Ｘ１及びＸ２が同一であって、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐であり、且つ、
Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である、
上記［１］に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［３］ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも０又は１であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、
Ｔ１及びＴ２がいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ２がいずれも、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐であり、且つ、
Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である、
上記［１］に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［４］ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも１であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、
Ｔ１及びＴ２がいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ２がいずれも‐（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐であり、且つ、
Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である、
上記［１］に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［５］ｍが０であり、
ｎ１及びｎ２がいずれも０であり、
Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、
ｑが０であり、且つ、
Ｔ１及びＴ２がいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ２がいずれも‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐である、
上記［１］に記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［６］Ｚが、配列番号１〜１０４に示す配列を含むアプタマーである、上記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［７］ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２が、分岐鎖を持つ１５〜４５ｋＤａのポリエチレングリコールであり、且つ、
Ｚが、配列番号１〜１０４のいずれかに示す配列を含むアプタマーである、
上記［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［８］ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２が、分岐鎖を持つ３５〜４５ｋＤａのポリエチレングリコールである、上記［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物。
［９］上記［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物を含む医薬。
［１０］炎症性疾患、自己免疫疾患、癌、アレルギー、又は感染症に関連する治療又は予防に用いるための、上記［９］に記載の医薬。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、生体内での血中滞留性が改善された抗ＩＬ−１７アプタマーが提供される。本発明のアプタマーは、ＩＬ−１７への結合活性を維持し、動物疾患への薬効も保ったまま、血中半減期を従来の限界であった１０〜２０時間程度から大幅（例えば、サルで１００時間程度）に延長することができる。そのため、当該構造を有するアプタマーを用いた乾癬等の疾患への全身投与による治療可能性を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】実施例で使用したアプタマーの構造を示す図である。図中、Ｏｌｉｇｏｍｅｒ部分の核酸は実施例配列１〜４に示した配列である。
【図２−１】実施例におけるアプタマーの合成手順の概略を示す図である。
【図２−２】実施例におけるアプタマー合成の最終産物の確認例として、実施例配列４のＰＥＧ化オリゴヌクレオチドのＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ-ＭＳ分析結果を示す図である。
【図３】アプタマー（実施例配列１）をサルに静脈内投与（黒丸）又は皮下投与（白丸）したときの血中濃度の推移を示す図である。各値は平均値±標準偏差（ｎ＝３）を示す。
【図４】アプタマー（実施例配列３）をサルに静脈内投与（黒丸）又は皮下投与（白丸）したときの血中濃度の推移を示す図である。各値は平均値±標準偏差（ｎ＝３）を示す。
【図５】アプタマー（実施例配列４）をサルに静脈内投与（黒丸）又は皮下投与（白丸）したときの血中濃度の推移を示す図である。各値は平均値±標準偏差（ｎ＝３）を示す。
【図６】アプタマー（実施例配列１）のｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＩＬ−１７中和活性（空気嚢炎症モデル）を示す図である。各値は平均値＋標準誤差（ｎ＝７、８）。★ｐ<０.０１、 ★★ｐ< ０.００１（ＩＬ−１７＋、ｓａｌｉｎｅ投与群との比較、Ｄｕｎｎｅｔｔの検定）。−：ヒトＩＬ−１７を含まない２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与。＋：ヒトＩＬ−１７（０．５μｇ）を含む２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与。
【図７】アプタマー（実施例配列３）のｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＩＬ−１７中和活性（空気嚢炎症モデル）を示す図である。各値は平均値＋標準誤差（ｎ＝７、８）。*ｐ< ０.００１（ＩＬ−１７＋、ｓａｌｉｎｅ投与群との比較、Ｄｕｎｎｅｔｔの検定）。−：ヒトＩＬ−１７を含まない２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与。＋：ヒトＩＬ−１７（０．５μｇ）を含む２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与。
【図８】アプタマー（実施例配列４）のｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＩＬ−１７中和活性（空気嚢炎症モデル）を示す図である。各値は平均値＋標準誤差（ｎ＝８）。*ｐ< ０.０５、**ｐ< ０.０１、***ｐ< ０.００１（ＩＬ−１７＋、ｓａｌｉｎｅ投与群との比較、Ｄｕｎｎｅｔｔの検定）。−：ヒトＩＬ−１７を含まない２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与。＋：ヒトＩＬ−１７（０．５μｇ）を含む２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与。
【図９】アプタマー（実施例配列１）のｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＩＬ−１７中和活性（コラーゲン誘導関節炎モデル）を示す図である。関節炎スコア（１肢あたり）  ０：症状なし、１：１関節のみの発赤・腫脹、２：２関節以上の発赤・腫脹、３：肢全体の腫脹、４：肢全体の最大の腫脹。黒丸：ＰＥＧ−リンカー−スペーサー−ブランチャーあり（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ）、黒三角：ｓａｌｉｎｅ。各値は４肢の関節炎スコアの平均値±標準誤差（ｎ＝１２）。*ｐ< ０.０１、**ｐ< ０.００１（ｓａｌｉｎｅ投与群との比較、Ｄｕｎｎｅｔｔの検定）。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、下記式（Ｉ）：
【００１８】
【化４】
2017094897.tif 000006
【００１９】
（式中の各記号の定義については後述する。）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩、溶媒和物若しくは水和物（以下、これらを総称して本発明の化合物ともいう。）を提供する。
【００２０】
式（Ｉ）において、ｍは０又は１である。
【００２１】
ｎ１及びｎ２は、同一又は異なって、０又は１である。好ましくは、ｎ１及びｎ２がいずれも０又は１であり、より好ましくは、合成時のＰＥＧ化収率の観点からｎ１及びｎ２はいずれも１である。
【００２２】
Ｔ１及びＴ２は、同一又は異なって、‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は
【００２３】
【化５】
2017094897.tif 000007
【００２４】
（＊はｂＰＥＧ１又はｂＰＥＧ２の結合位置を示し、＊＊はＸ１又はＸ２の結合位置を示す。）である。Ｔ１及びＴ２は、好ましくは同一であり、より好ましくはいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−である。
【００２５】
Ｘ１及びＸ２は、同一又は異なって、‐（ＣＨ２）３‐、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｇ‐（ここで、ｇは２〜５の整数である。）である。好ましくは、Ｘ１及びＸ２は同一である。
【００２６】
Ｙ１及びＹ２は、同一又は異なって、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）６‐、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）１２‐、又は‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｊ-（ここで、ｊは２〜６の整数である。）である。好ましくは、Ｙ１及びＹ２は同一である。
【００２７】
Ｗは、‐（ＣＨ２）３ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、‐（ＣＨ２）６ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、‐（ＣＨ２）１２ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ‐、又は‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｊ-ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐であり、（ここで、ｊは２〜６の整数である。）である。
【００２８】
上述の通り、本発明の化合物においてはブランチャーにより枝分かれ構造（分岐構造）が付与されているので、２つのＰＥＧ鎖をアプタマーに付加することができる。ブランチャーは下記式に示される構造を有し得る。
【００２９】
【化６】
2017094897.tif 000008
【００３０】
ここで、Ｌ１及びＬ２は、同一又は異なって、１〜６の整数である。好ましくは、Ｌ１及びＬ２は同一である。
ｑは０〜６の整数である。
【００３１】
上記式（Ｉ）に見られる通り、本発明の化合物は、アプタマー構造（式（Ｉ）中のＺ）に加えてリンカー（式（Ｉ）中のＸ１、Ｘ２）及び任意にスペーサー（式（Ｉ）中のＹ１、Ｙ２、Ｗ）を含む。
【００３２】
一つの実施形態において、上記式（Ｉ）において、Ｔ１及びＴ２はいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｘ１及びＸ２は、同一又は異なって、‐（ＣＨ２）３‐、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］ｇ‐（ここで、ｇは２〜５の整数である。）であり、Ｚは、式（Ｉａ）又は式（ＩＩａ）で表される配列を含むアプタマーである。当該実施形態において、例えば、（１）ｍが０であり、ｎ１及びｎ２がいずれも１であり、Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、ｑが０であり、Ｘ１及びＸ２が同一であって、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐であり、且つ、Ｙ１及びＹ２がいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-であるか、又は、（２）ｍが０であり、ｎ１及びｎ２がいずれも０であり、Ｌ１及びＬ２がいずれも１であり、ｑが０であり、且つ、Ｘ１及びＸ２が同一であって、‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐である。
【００３３】
好ましい実施形態において、ｍは０であり、ｎ１及びｎ２はいずれも０又は１であり、Ｌ１及びＬ２はいずれも１であり、ｑは０であり、Ｔ１及びＴ２はいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｘ１及びＸ２はいずれも‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐であり、且つ、Ｙ１及びＹ２はいずれも‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３-である。別の好ましい実施形態において、ｍは０であり、ｎ１及びｎ２はいずれも０であり、Ｌ１及びＬ２はいずれも１であり、ｑは０であり、Ｔ１及びＴ２はいずれも‐Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、且つ、Ｘ１及びＸ２はいずれも‐（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）６‐、‐（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）６‐、又は‐（ＣＨ２）２‐［Ｏ（ＣＨ２）２］３‐である。
【００３４】
ｂＰＥＧ１及びｂＰＥＧ２は、同一又は異なって、分岐鎖を持つ１０〜８０ｋＤａのポリエチレングリコール（分岐ＰＥＧ、ｂＰＥＧ）である。ＰＥＧの分岐の種類は問わず、例えば、従来技術である２鎖分岐型、３鎖分岐型、４鎖分岐型等であってよい。
【００３５】
ＰＥＧは、好ましくは分岐鎖を持つ１０〜８０ｋＤａのＰＥＧであり、より好ましくは分岐鎖を持つ１５〜４５ｋＤａのＰＥＧ、更により好ましくは分岐鎖を持つ３５〜４５ｋＤａのＰＥＧ（例えば約４０ｋＤａ）である。
【００３６】
このようなＰＥＧとしては、当業者であれば市販あるいは公知のＰＥＧを適宜選択して用いることができる（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｅｇ−ｄｒｕｇ．ｃｏｍ／ｐｅｇ＿ｐｒｏｄｕｃｔ／ｂｒａｎｃｈｅｄ．ｈｔｍｌを参照のこと）が、本発明のアプタマーに適用するＰＥＧの好適例として具体的には、分子量４００００の２分岐ＧＳ型ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ２−４００ＧＳ２  日油社製）、分子量４００００の２分岐ＴＳ型ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ２−４００ＴＳ  日油社製）、分子量４００００の４分岐ＴＳ型ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ４−４００ＴＳ  日油社製）、分子量８００００の２分岐ＴＳ型ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ２−８００ＴＳ  日油社製）、または分子量８００００の４分岐ＴＳ型ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＬ４−８００ＴＳ  日油社製）、アミド構造により２鎖に分岐した分子量４００００のＪｅｎＫｅｍ社製  Ｙ−ｓｈａｐｅ  ４０ｋＤａ  ＰＥＧなどが挙げられる。
【００３７】
Ｚは、下記式（Ｉａ）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０５）
又は下記式（Ｉｂ）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０６）
又は下記式（Ｉｃ）：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１０７）
又は下記式（Ｉｄ）：
ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ4）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ’（Ｘ2）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｘ7）ａ’（Ｍ）（配列番号１０８）
又は下記式（ＩＩａ）：
ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）（配列番号１０９）
又は下記式（ＩＩｂ）：
ｇ（ｘ1）ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）ｃ’（ｘ3）（配列番号１１０）
又は下記式（ＩＩｃ）：
ｇ（ｘ1）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ’（Ｓ）ｇ（ｘ2）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｃ’（ｘ3）（配列番号１１１）
（ここで、式中の記号は上記の通りである。）
で表される配列を含むアプタマーである。
【００３８】
また、好ましい実施態様において、Ｚは、下記式（Ｉａ’）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｘ4）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ（Ｘ2）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｘ7）ａ（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１１２）
［式中、ａ、ｇ、ｃ、ｕ及びｒ、ａ’、ｃ’及びｕ’、並びに（Ｍ）、（Ｆ）及び（Ｘ2）〜（Ｘ5）及び（Ｘ7）は式（Ｉａ）と同義であり、
Ｇは、塩基がグアニンであるデオキシリボヌクレオチドを示す］
で表される配列を含むアプタマーである。
【００３９】
また、好ましい実施態様において、Ｚは、下記式（Ｉａ'''）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ’（Ｘ1）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ’ｇ（Ｍ）ａ’（Ｘ2）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ’（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ’（Ｘ2）ｇｕ’（Ｆ）ａ（Ｘ3）ａ’（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ’（Ｆ）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１１３）
［式中、ａ、ｇ、ｃ及びｕ、ａ’、ｇ’、ｃ’及びｕ’、並びに（Ｍ）、（Ｆ）及び（Ｘ1）〜（Ｘ3）は、式（Ｉａ）と同義である。］
で表される配列を含むアプタマーである。
【００４０】
また、好ましい実施態様において、Ｚは、下記式（Ｉａ”）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ’（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｘ7）ｇ（Ｘ5）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｘ5）ｕ’（Ｆ）ｃ（Ｘ7）ａ（Ｆ）ｇ（Ｘ6）ｕ’（Ｆ）ｒ（Ｘ3）ａ（Ｘ3）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｘ7）ａ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）（配列番号１１４）
［式中、ａ、ｇ、ｃ、ｕ及びｒ、ａ’、ｃ’及びｕ’、並びに（Ｍ）、（Ｆ）、（Ｘ3）及び（Ｘ5）〜（Ｘ7）は式（Ｉａ）と同義であり、
Ｇは、塩基がグアニンであるデオキシリボヌクレオチドを示す］
で表される配列を含むアプタマーである。
【００４１】
また、好ましい実施態様において、Ｚは、式（Ｉａ”）において、３’末端側のｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）ｃ’（Ｍ）がｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）であるアプタマーである。
【００４２】
アプタマーとは、所定の標的分子に対する結合活性を有する核酸分子をいう。アプタマーは、所定の標的分子に対して結合することにより、所定の標的分子の活性を阻害し得る。本発明において、アプタマーは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾核酸又はそれらの混合物であり得る。アプタマーはまた、直鎖状又は環状の形態であり得る。
【００４３】
本発明において、アプタマーは、ＩＬ−１７に結合し、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害し得る。ＩＬ−１７とはＴｈ１７細胞などによって分泌されるサイトカインで、例えばＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｄｅ  ＡＡＨ６７５０５やＮＰ００２１８１で表されるアミノ酸配列を持つタンパク質である。ＩＬ−１７はＩＬ−１７Ａ又はＣＴＬＡ−８と呼ばれることもある。本発明で示すＩＬ−１７は動物体内で作られる他、マウスなどの哺乳細胞、昆虫細胞、大腸菌などの細胞を用いて作製することができ、更に、化学合成によっても作ることができる。培養細胞や化学合成によって作製する場合、容易に変異体を作製することができる。ここで変異体とはアミノ酸が数個置換されたものや一部分のアミノ酸配列を意味し、本来ＩＬ−１７が有している少なくとも一つ以上の活性を有しているタンパク質又はペプチドを意味する。アミノ酸が置換される場合、置換アミノ酸は天然のアミノ酸であってもよいし非天然のアミノ酸であってもよい。本発明で言うＩＬ−１７はこれらの変異体を含む。
【００４４】
ＩＬ−１７受容体とはＩＬ−１７が結合する細胞表面タンパク質で、細胞内のシグナリングを媒介するタンパク質を意味する。ＩＬ−１７受容体ファミリーとしてＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤ、ＩＬ−１７ＲＥが知られている。本発明で言うＩＬ−１７受容体とは天然のアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよいし、その変異体であってもよい。ここで変異体とはアミノ酸が数個置換されたものや一部分のアミノ酸配列を意味し、ＩＬ−１７に対して結合活性を有するタンパク質又はペプチドを意味する。本発明の化合物は、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害し得るものである。結合阻害活性は、Ｂｉａｃｏｒｅ試験等の自体公知の方法により測定することができる（例えば、ＷＯ２０１４／１４８６３８を参照）。
【００４５】
好ましい態様によれば、該アプタマー、従って本発明の化合物はＩＬ−１７に結合し、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害することによって、任意の哺乳動物に由来するＩＬ−１７のシグナリング活性を阻害し得る。哺乳動物としては、例えば、霊長類（例、ヒト、サル）、げっ歯類（例、マウス、ラット、モルモット）、並びにペット、家畜及び使役動物（例、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）が挙げられる。
【００４６】
ＩＬ−１７シグナリング活性を阻害するとは、ＩＬ−１７が保有する任意のシグナリング活性に対する阻害能を意味する。例えば、ＩＬ−１７はＩＬ―１７受容体に結合した後、ＴＲＡＦ６などを介してＮＦ−κＢ経路やＭＡＰキナーゼ経路を活性化することが知られており、これらシグナル伝達経路を介して各種サイトカインやケモカインの産生が誘導される。従って、ＩＬ−１７シグナリング阻害活性とは、ＩＬ−１７シグナル伝達経路の下流に存在する、これらのサイトカインやケモカインなどの産生を阻害する活性のことである。これらサイトカインやケモカインの発現は炎症性細胞の遊走や活性化を導くので、ＩＬ−１７のシグナリング阻害活性とはそれらの活性の阻害をも意味する。
【００４７】
ＩＬ−１７シグナリング阻害活性は、例えば以下の試験により評価できる。
培養細胞を用いた試験では、培養細胞においてＩＬ−１７とＴＮＦαの細胞刺激により放出されるＩＬ−６量を測定することにより行う。
ヒトＩＬ−１７と各アプタマーを３７℃で３０分間プレインキュベートし、マウスＴＮＦαとともにＮＩＨ３Ｔ３細胞に加える。次いで、２４時間インキュベートした後、培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡ法によってＩＬ−６の産生量を測定し、ＩＣ５０を算出する。
マウス空気嚢炎症モデルを用いた試験では、測定は以下のように行う。
雄性マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背部皮下に２日おきに空気を２.５ｍＬ注入し、３日後アプタマーを腹腔内投与する。１時間後に空気嚢内にＩＬ−１７（０.５μｇ）を含む２％カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、その２４時間後に空気嚢内の滲出液を回収し、滲出液中のＩＬ−６量をＥＬＩＳＡで測定する（例えば、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７７，  ８７８−８８７  ２００９）。
コラーゲン関節炎モデルマウスを用いた試験では、測定は以下のように行う。
雄性ＤＢＡ／１マウスの尾根部に完全アジュバントで乳化したウシＩＩ型コラーゲンを皮内投与し、２２日後に不完全アジュバントで乳化したウシＩＩ型コラーゲンで追加免疫するとともに、アプタマーを２日に１回、腹腔内投与する。毎日動物を観察し、各肢の炎症の程度を０（無症状）から４（肢全体の発赤と最大の腫脹）までの５段階でスコア化し、本発明のアプタマーの関節炎に対する薬効を評価する（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  １２，Ｒ９２（２０１０））。
いずれも数値が低い程、該アプタマーはＩＬ−１７シグナリング活性を強く阻害すると判定する。
【００４８】
本明細書において、ヌクレオチドが非修飾であるとは、リボヌクレオチドのリボースの２’位のヒドロキシル基、又はデオキシリボヌクレオチドのリボースの２’位の水素が、他の元素で置換されていないことをいい、ヌクレオチドが修飾されているとは、例えば、リボヌクレオチドのリボースの２’位のヒドロキシル基が、フッ素原子、又はＯ−メチル基で置き換えられていること、ヌクレオチドがホスホロチオエート化されていること、或いはＬｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ（ＬＮＡ）修飾されていることなどを意味する。「ヌクレオチドがホスホロチオエート化されている」とは、隣接するヌクレオチド間の結合部位にあるリン酸基が硫黄化されている、すなわち、ホスホジエステル結合がホスホロチオエート結合に改変されていることを示し、ＬＮＡ修飾されているとは、ヌクレオチドのリボースの２’位の酸素原子と４’位の炭素原子間がメチレン架橋されていることを示す。
式（Ｉａ）〜（Ｉｄ）、（Ｉａ’）、（Ｉａ'''）、（Ｉａ”）及び（ＩＩａ）〜（ＩＩｃ）に示すような各種の修飾は、自体公知の方法により行うことができる（例えば、Ｓｐｒｏａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１９，７３３−７３８；Ｃｏｔｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１９，２６２９−２６３５；Ｈｏｂｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７３），Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２，５１３８−５１４５など参照）。
【００４９】
Ｚはまた、上記式（Ｉａ）〜（Ｉｄ）、（Ｉａ’）、（Ｉａ'''）、（Ｉａ”）及び（ＩＩａ）〜（ＩＩｃ）で表される配列の５’末端に、リボヌクレオチドの場合にはリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていてもよい、塩基がグアニン又はウラシルであるヌクレオチドが付加され、及び／又は３’末端に塩基がシトシン又はアデニンであるヌクレオチドが付加された配列を含むアプタマーであってもよい。
【００５０】
好ましくは、該アプタマーは、以下に示すアプタマー番号１〜１０４のいずれかから選択される配列を含むアプタマーであってもよく、或いは、ＩＬ−１７に結合し、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合を阻害する限り、当該アプタマーの複数の連結物であってもよい。
【００５１】
上記アプタマーの複数の連結物において、連結はタンデム結合にて行われ得る。また、連結に際し、リンカーを利用してもよい。リンカーとしては、ヌクレオチド鎖（例、１〜約２０ヌクレオチド）、非ヌクレオチド鎖（例、−（ＣＨ2）n−リンカー、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）n−リンカー、ヘキサエチレングリコールリンカー、ＴＥＧリンカー、ペプチドを含むリンカー、−Ｓ−Ｓ−結合を含むリンカー、−ＣＯＮＨ−結合を含むリンカー、−ＯＰＯ3−結合を含むリンカー）が挙げられる。上記複数の連結物における複数とは、２以上であれば特に限定されないが、例えば、２個、３個又は４個であり得る。
【００５２】
また上記アプタマーの複数の連結物のタンデム結合において、アプタマー長の伸長を主たる目的として、スペーサーを用いてもよい。スペーサーとしては、多くはアプタマーの結合活性に直接関与しないと考えられる構造が使用されるが、ここではヌクレオチド鎖（例、１〜約２０ヌクレオチド）、非ヌクレオチド鎖（例、‐ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−）Ｏ（ＣＨ２）３‐スペーサー、その他の−ＯＰＯ3−結合を含むスペーサー等）が挙げられる。上記複数の連結物における複数とは、リンカー同様、２以上であれば特に限定されないが、例えば、２個、３個又は４個であり得る。
【００５３】
上記のリンカー及びスペーサーは、アプタマーの複数の連結物のタンデム結合に限らず、本発明の化合物の構造に含めることができる。
【００５４】
アプタマーの長さは特に限定されず、通常、約２００ヌクレオチド以下であり得るが、総ヌクレオチド数が少なければ、化学合成及び大量生産がより容易であり、かつコスト面でのメリットも大きい。また、化学修飾も容易であり、生体内安定性も高いと考えられる。従って、医薬品用途への適用の観点からすれば、アプタマーは７０ヌクレオチドよりもさらに短い塩基長であることがより望ましく、好ましくは約５０ヌクレオチド以下であり、より好ましくは約４０ヌクレオチド以下（例、４０ヌクレオチド以下、３９ヌクレオチド以下、３８ヌクレオチド以下、３７ヌクレオチド以下、３６ヌクレオチド以下）であり、最も好ましくは約３５ヌクレオチド以下（例、３５ヌクレオチド以下、３４ヌクレオチド以下、３３ヌクレオチド以下）であり得る。
【００５５】
本発明の化合物は、ＩＬ−１７に対する結合性、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体との結合阻害活性、安定性等を高めるために、核酸塩基がさらに改変（例、化学的置換）されたものであってもよい。このような改変としては、キャッピングのような３’末端及び／又は５’末端の改変が含まれる。
【００５６】
改変はさらに、ポリエチレングリコール、アミノ酸、ペプチド、ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｄＴ、核酸、ヌクレオシド、ポリヌクレオチド、Ｍｙｒｉｓｔｏｙｌ、Ｌｉｔｈｏｃｏｌｉｃ−ｏｌｅｙｌ、Ｄｏｃｏｓａｎｙｌ、Ｌａｕｒｏｙｌ、Ｓｔｅａｒｏｙｌ、Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ、Ｏｌｅｏｙｌ、Ｌｉｎｏｌｅｏｙｌ、その他の脂質、ステロイド、コレステロール、カフェイン、ビタミン、色素、蛍光物質、抗癌剤、毒素、酵素、放射性物質、ビオチン、リンカー各種などを３’末端及び／又は５’末端に付加することにより行われ得る。このような改変については、例えば、米国特許第５，６６０，９８５号、同第５，７５６，７０３号を参照のこと。
【００５７】
ＰＥＧとアプタマーのリンカー、スペーサーおよびブランチャーとしては特に限定されず、炭素鎖数や官能基などを結合部位やＰＥＧの種類などに応じて適宜選択することができる。このようなリンカーとしては、例えばアミノ基を有するリンカーやスルフヒドリル基を有するリンカーが挙げられ、具体的には、ＴＦＡ  Ａｍｉｎｏ  Ｃ−６  ｌｃａａ  ＣＰＧ（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ）やＴｈｉｏｌ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒ  Ｈｅｘｙｌ  ＣＥＤ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ）などが例示される。アミノ基を有するリンカーを選択した場合、ＰＥＧには、例えばＮ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅの活性基を付加した上で、これをリンカー側のアミノ基と反応させることで、アプタマーとＰＥＧとをリンカーを介して結合することができる。あるいは、スルフヒドリル基を有するリンカーを選択した場合、ＰＥＧにはＭａｌｅｉｍｉｄｅの活性基を付加しておけばＰＥＧとリンカーを容易に結合することが出来る。またブランチャーとしては、Ｓｙｎｍｍｅｔｒｉｃａｌ-ｂｒａｎｃｈｉｎｇ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ）などが例示される。
【００５８】
なおＰＥＧやリンカー、スペーサーおよびブランチャーとしては、市販のものを好ましく用いることができる。また、ＰＥＧ、リンカー、スペーサー、ブランチャーおよびアプタマーの結合に関する反応条件などは、当業者であれば適宜設定することが可能である。
【００５９】
Ｚが示すアプタマーの好適な具体的として、以下の配列を含むアプタマー番号１〜１０４を挙げることができる。アプタマー番号１〜１０４において、好ましくは、３’末端にｉｄＴ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｄｅｏｘｙ  ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）が付加されている。各配列の先頭は５’末端であり、終端が３’末端である。なお、ａ、ｇ、ｃ、ｕは、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン、シトシン及びウラシルであるリボヌクレオチドを示し、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｕ、Ｔは、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン、シトシン、ウラシル及びチミンであるデオキシリボヌクレオチドを示し、ｍｃは、塩基がメチルシトシンであるリボヌクレオチドを示す。ヌクレオチドにおける括弧は、そのヌクレオチドの修飾を示し、（Ｍ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がＯ−メチル基で置き換えられていることを、（Ｆ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示す。（Ｓ）は、ヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることを示し、（Ｌ）は、ＬＮＡ修飾されていることを示す。例えば、ｃ（Ｆ）は、リボースの２’位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられたシチジンを示し、ａ（Ｍ）はリボースの２’位がＯ−メチル基で置き換えられたアデノシンを示し、ｇ（Ｍ）はリボースの２’位がＯ−メチル基で置き換えられたグアノシンを示す（以下、同様に記載する）。
【００６０】
アプタマー番号１：
ｇ（Ｌ）ｇ（Ｌ）ｇ（Ｌ）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｇａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａｍｃ（Ｌ）ｍｃ（Ｌ）ｍｃ（Ｌ）（配列番号１）
【００６１】
アプタマー番号２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｆ）ｃ（Ｆ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇａｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ｇｇｕ（Ｆ）ａＣＣＣ（配列番号２）
【００６２】
アプタマー番号３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ＡＣＣＣ（配列番号３）
【００６３】
アプタマー番号４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号４）
【００６４】
アプタマー番号５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ＡＣＣＣＣ（配列番号５）
【００６５】
アプタマー番号６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ＡＣＣＣ（配列番号６）
【００６６】
アプタマー番号７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号７）
【００６７】
アプタマー番号８（実施例配列１）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号８）
【００６８】
アプタマー番号９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号９）
【００６９】
アプタマー番号１０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ＡＣＣＣ（配列番号１０）
【００７０】
アプタマー番号１１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号１１）
【００７１】
アプタマー番号１２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号１２）
【００７２】
アプタマー番号１３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号１３）
【００７３】
アプタマー番号１４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｆ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号１４）
【００７４】
アプタマー番号１５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｆ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号１５）
【００７５】
アプタマー番号１６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣＣ（配列番号１６）
【００７６】
アプタマー番号１７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣＣ（配列番号１７）
【００７７】
アプタマー番号１８：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣＣ（配列番号１８）
【００７８】
アプタマー番号１９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号１９）
【００７９】
アプタマー番号２０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号２０）
【００８０】
アプタマー番号２１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２１）
【００８１】
アプタマー番号２２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２２）
【００８２】
アプタマー番号２３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ＴＡｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２３）
【００８３】
アプタマー番号２４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ＴＡｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２４）
【００８４】
アプタマー番号２５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ＴＡｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２５）
【００８５】
アプタマー番号２６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２６）
【００８６】
アプタマー番号２７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２７）
【００８７】
アプタマー番号２８：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２８）
【００８８】
アプタマー番号２９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号２９）
【００８９】
アプタマー番号３０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３０）
【００９０】
アプタマー番号３１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ＴＡｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３１）
【００９１】
アプタマー番号３２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ＴＡＣＣＣ（配列番号３２）
【００９２】
アプタマー番号３３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ＴＡＣＣＣ（配列番号３３）
【００９３】
アプタマー番号３４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ＡｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３４）
【００９４】
アプタマー番号３５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ＡｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３５）
【００９５】
アプタマー番号３６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ＡＧｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）Ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３６）
【００９６】
アプタマー番号３７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａＡｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３７）
【００９７】
アプタマー番号３８：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３８）
【００９８】
アプタマー番号３９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ＡｇＴａａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号３９）
【００９９】
アプタマー番号４０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ＡｇＴａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号４０）
【０１００】
アプタマー番号４１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号４１）
【０１０１】
アプタマー番号４２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａＡｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号４２）
【０１０２】
アプタマー番号４３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号４３）
【０１０３】
アプタマー番号４４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ＡｇＴａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号４４）
【０１０４】
アプタマー番号４５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号４５）
【０１０５】
アプタマー番号４６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号４６）
【０１０６】
アプタマー番号４７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号４７）
【０１０７】
アプタマー番号４８（実施例配列２）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号４８）
【０１０８】
アプタマー番号４９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）Ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号４９）
【０１０９】
アプタマー番号５０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５０）
【０１１０】
アプタマー番号５１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５１）
【０１１１】
アプタマー番号５２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＵｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＵａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５２）
【０１１２】
アプタマー番号５３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴｇａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５３）
【０１１３】
アプタマー番号５４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５４）
【０１１４】
アプタマー番号５５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５５）
【０１１５】
アプタマー番号５６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５６）
【０１１６】
アプタマー番号５７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号５７）
【０１１７】
アプタマー番号５８：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号５８）
【０１１８】
アプタマー番号５９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｍ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ（配列番号５９）
【０１１９】
アプタマー番号６０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６０）
【０１２０】
アプタマー番号６１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６１）
【０１２１】
アプタマー番号６２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６２）
【０１２２】
アプタマー番号６３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６３）
【０１２３】
アプタマー番号６４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６４）
【０１２４】
アプタマー番号６５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６５）
【０１２５】
アプタマー番号６６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）Ａｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６６）
【０１２６】
アプタマー番号６７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６７）
【０１２７】
アプタマー番号６８：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６８）
【０１２８】
アプタマー番号６９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号６９）
【０１２９】
アプタマー番号７０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７０）
【０１３０】
アプタマー番号７１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７１）
【０１３１】
アプタマー番号７２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７２）
【０１３２】
アプタマー番号７３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７３）
【０１３３】
アプタマー番号７４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）Ａｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７４）
【０１３４】
アプタマー番号７５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）Ａｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７５）
【０１３５】
アプタマー番号７６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７６）
【０１３６】
アプタマー番号７７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７７）
【０１３７】
アプタマー番号７８：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）Ａｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７８）
【０１３８】
アプタマー番号７９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号７９）
【０１３９】
アプタマー番号８０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８０）
【０１４０】
アプタマー番号８１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８１）
【０１４１】
アプタマー番号８２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８２）
【０１４２】
アプタマー番号８３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８３）
【０１４３】
アプタマー番号８４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８４）
【０１４４】
アプタマー番号８５：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔｇａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８５）
【０１４５】
アプタマー番号８６：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｇａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８６）
【０１４６】
アプタマー番号８７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８７）
【０１４７】
アプタマー番号８８（実施例配列３）：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８８）
【０１４８】
アプタマー番号８９：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号８９）
【０１４９】
アプタマー番号９０：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａａ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号９０）
【０１５０】
アプタマー番号９１：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号９１）
【０１５１】
アプタマー番号９２：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）ｕ（Ｆ）ａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号９２）
【０１５２】
アプタマー番号９３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号９３）
【０１５３】
アプタマー番号９４：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣ（配列番号９４）
【０１５４】
アプタマー番号９５：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）Ｃ（配列番号９５）
【０１５５】
アプタマー番号９６：
ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）（配列番号９６）
【０１５６】
アプタマー番号９７：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣ（配列番号９７）
【０１５７】
アプタマー番号９８：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）Ｃ（配列番号９８）
【０１５８】
アプタマー番号９９：
ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）（配列番号９９）
【０１５９】
アプタマー番号１００：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号１００）
【０１６０】
アプタマー番号１０１：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号１０１）
【０１６１】
アプタマー番号１０２：
ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）（配列番号１０２）
【０１６２】
アプタマー番号１０３：
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号１０３）
【０１６３】
アプタマー番号１０４：
ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）（配列番号１０４）
【０１６４】
本発明の化合物において、製薬学的に許容される塩としては、すべての塩が含まれるが、塩酸または臭化水素酸などの無機酸との塩、有機酸との塩、アルカリ金属との塩、有機塩基との塩またはアミノ酸との塩が挙げられる。
【０１６５】
本発明の化合物が溶媒和物の形態で提供される場合、溶媒としては、生理学的に許容される有機溶媒、例えば、エタノール、アセトン、酢酸エチル等が挙げられる。
【０１６６】
本発明の化合物は、本明細書中の開示及び当該技術分野における自体公知の方法により化学合成することができる。具体的には、本発明の化合物は、例えば以下の手順に従って合成することができる。即ち、先ず、市販のオリゴヌクレオチド合成装置（ＡＢＩ社製など）を用いてホスホロアミダイト法（Nucleic Acids Research, 17, 7059-7071, 1989）等の周知のオリゴヌクレオチド合成法により３’末端から５’末端の方向にアプタマー（Ｚ）を合成する。次いで、上記と同様に自動合成装置を用いて、アプタマーの５’末端にリン酸ジエステル結合を介してブランチャーを導入、あるいは上述したようなスペーサー（Ｗ）を付加した後に、ブランチャーを導入する。ブランチャーとなる合成用ホスホロアミダイトは、公知の方法により上記式（Ｉ）のＬ１、Ｌ２、及びｑを様々に選択して合成可能である。例えば、Ｌ１及びＬ２が２、ｑが０の場合は、特表２０１０-５１２４２１に記載された方法に従い、またＬ１及びＬ２が１、ｑが１の場合は、特表２００６-５１３２４４に記載された方法に従い、それぞれ合成できる。同様に、Ｌ１及びＬ２が１、ｑが０の場合は、文献（Chemistry A European Journal, 20, 12165-12171, 2014、Bioorganic and Medicinal Chemistry, 18, 8277-8282, 2010）に記載の方法の他に、Ｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ  ｂｒａｎｃｈｉｎｇ  ＣＥＤ  ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ社製）などの市販のものを用いることができる。スペーサー（Ｗ）、ブランチャーはアプタマー１当量に対して通常１〜９当量程度を使用する。このブランチャーの付加に引き続いて、アプタマー１当量に対して通常２〜１４当量程度のスペーサー（Ｙ）を用いて、同様に自動合成装置を用いてリン酸ジエステル結合を介して上述したようなスペーサーの付加を行う。更に、アプタマー１当量に対して通常２〜１４当量程度のリンカー（Ｘ）を用いて、同様に自動合成装置を用いてリン酸ジエステル結合を介して上述したようなリンカーの付加を行う。リンカーまで付加した後、合成した化合物をアンモニア水溶液などを用いて担体から切り離し、塩基部分及びリン酸基部分の脱保護を行う。次いで、逆相クロマトグラフィーやイオン交換クロマトグラフィー等により化合物を精製し、５’アミノ化オリゴヌクレオチドあるいは５’メルカプト化オリゴヌクレオチド（安定化の為にジスルフィドの形態であっても良い）を得る。その後、得られた５’アミノ化オリゴヌクレオチドあるいは５’メルカプトオリゴヌクレオチド（反応に際しジスルフィドを還元しても良い）を、上述したようなＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化した分岐ＰＥＧあるいはメルカプト基が容易に反応するマレイミドを持つ分岐ＰＥＧと適当な溶液（例、リン酸緩衝液や炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ  ６．５〜９．０、４〜２５℃）中で例えば２〜４時間程度反応させることにより、各リンカーの５’末端に分岐ＰＥＧを付加させることができる。反応後、液体クロマトグラフィーなどにより精製することで本発明の化合物を得ることができる。
【０１６７】
本発明の化合物において、Ｚが示すアプタマーは、それに結合した１以上（例、２又は３個）の機能性物質を更に含んでいてもよい。結合は、共有結合又は非共有結合であり得る。機能性物質は、本発明の化合物に何らかの機能を新たに付加するもの、或いは本発明の化合物が保持し得る何らかの特性を変化（例、向上）させ得るものである限り特に限定されない。機能性物質としては、例えば、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、糖質、単糖、ポリヌクレオチド、ヌクレオチドが挙げられる。機能性物質としてはまた、例えば、親和性物質（例、ビオチン、ストレプトアビジン、標的相補配列に対して親和性を有するポリヌクレオチド、抗体、グルタチオンセファロース、ヒスチジン）、標識用物質（例、蛍光物質、発光物質、放射性同位体）、酵素（例、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ）、薬物送達媒体（例、リポソーム、ミクロスフェア、ペプチド、ポリエチレングリコール類）、薬物（例、カリケアマイシンやデュオカルマイシンなどミサイル療法に使用されているもの、イブプロフェンなど血液成分に結合して血中の半減期を延長させるために使用されるもの、シクロフォスファミド、メルファラン、イホスファミド又はトロホスファミドなどのナイトロジェンマスタード類似体、チオテパなどのエチレンイミン類、カルムスチンなどのニトロソ尿素、テモゾロミド又はダカルバジンなどのアルキル化剤、メトトレキセート又はラルチトレキセドなどの葉酸類似代謝拮抗剤、チオグアニン、クラドリビン又はフルダラビンなどのプリン類似体、フルオロウラシル、テガフール又はゲムシタビンなどのピリミジン類似体、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンオレルビンなどのビンカアルカロイド及びその類似体、エトポシド、タキサン、ドセタキセル又はパクリタキセルなどのポドフィロトキシン誘導体、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びミトキサントロンなどのアントラサイクリン類及び類似体、ブレオマイシン及びミトマイシンなどの他の細胞毒性抗生物質、シスプラチン、カルボプラチン及びオキザリプラチンなどの白金化合物、ペントスタチン、ミルテフォシン、エストラムスチン、トポテカン、イリノテカン及びビカルタミド）、毒素（例、リシン毒素、ジフテリア毒素及びベロ毒素）が挙げられる。これらの機能性分子は最終的に取り除かれる場合がある。更に、トロンビンやマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、Ｆａｃｔｏｒ Ｘなどの酵素が認識して切断することができるペプチド、ヌクレアーゼや制限酵素が切断できるポリヌクレオチドであってもよい。
【０１６８】
本発明の化合物は、従来のアプタマーと比べて動物体内での血中滞留性に優れている。具体的には例えば、本発明の化合物は、上述したような対象動物の体内において、１０時間以上、好ましくは１５時間以上、より好ましくは２０時間以上の血中半減期を有し得る。あるいは、本発明の化合物は、（ｉ）ブランチャーを有しない、ＰＥＧの分岐の様式及びＰＥＧ総分子量が等しい、同一配列のアプタマー、又は（ｉｉ）ブランチャーを有し、ＰＥＧ総分子量が等しいが、ＰＥＧは分岐を有しない、同一配列のアプタマーと比較して、上述したような対象動物中での血中半減期が１．２倍以上、好ましくは１．５倍以上、より好ましくは２倍以上であり得る。血中半減期の測定は、例えば、被験物質を生理食塩水に溶解し（例、マウスについて０．２ｍｇ／ｍＬ、サルについて１ｍｇ／ｍＬ）、それを１ｍｇ／ｋｇで対象動物に静脈内投与してから所定の時間後に経時的に血液を採取する。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ  Ｍ．  Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００４，Ｖｏｌｕｍｅ  ２１，Ｉｓｓｕｅ  １２，ｐｐ２２３４−２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて被験物質の残存核酸濃度を測定することにより行うことができる。
【０１６９】
本発明の化合物は、例えば、医薬又は診断薬、検査薬、試薬として使用され得る。特に、本発明の化合物は、従来のアプタマーと比べて生体内での安定性が改善されているので、医薬、とりわけ全身投与が必要な炎症性疾患及び自己免疫疾患などの医薬（例えば、予防又は治療用医薬）として有用である。
ここで炎症性疾患及び自己免疫疾患などとしては、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、シェーグレン症候群、多発性筋炎（ＰＭ）、皮膚筋炎（ＤＭ）、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症（ＯＡ）、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸菌など）、全身性硬化症（ＳＳｃ）、強皮症、結節性動脈周囲炎（ＰＮ）、甲状腺疾患（バセドウ病、橋本病など）、ギラン・バレー症候群、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、突発性血小板減少性紫斑病、自己免疫溶血性貧血、重症筋無力症（ＭＧ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、I型糖尿病、尋常性乾癬、膿疱性乾癬、関節症性乾癬、乾癬性紅皮症、滴状乾癬、喘息、好中球機能異常、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、癌（例、食道癌、甲状腺癌、膀胱癌、大腸癌、胃癌、膵臓癌、胸部癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、神経芽細胞腫、グリオブラストーマ、子宮癌、子宮頚癌、卵巣癌、ウィルムス腫瘍、前立腺癌、骨肉腫）、肥厚性瘢痕、ケロイド、移植疾患（例、拒絶反応、移植片対宿主病）、アレルギー（例、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、蕁麻疹、過敏性肺臓炎）、接触性皮膚炎、ＡＮＣＡ関連疾患、川崎病、急性熱性皮膚粘膜リンパ節症候群（ＭＣＬＳ）、デュシャンヌ型筋ジストロフィー、肺気腫、肺水腫、肺結核、肺胞タンパク症、肺リンパ脈管筋腫症（ＬＡＭ）、気胸、胸膜炎、術後癒着、子宮内膜症、成人性歯周炎、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、感染症、加齢黄斑変性症、網膜症、緑内障、白内障、ブドウ膜炎、ベーチェット病、肝炎、肝硬変、肝不全、腎梗塞、腎炎、腎不全、膀胱炎、脳梗塞、脳出血、頭蓋内出血、くも膜下出血、高血圧性脳疾患、脳塞栓症、一過性脳虚血発作、骨髄炎、化膿性関節炎、骨粗鬆症、椎間板ヘルニア、痛風、汗腺膿瘍、掌蹠膿疱症、円形脱毛症、アテローム性動脈硬化症、乾性角結膜炎（ドライアイ）などが挙げられる。
【０１７０】
また本発明の化合物は、薬物送達剤、インビボイメージング用プローブ、ＩＬ−１７の血中濃度測定用プローブ、組織染色用プローブ、ＥＬＩＳＡ用プローブ、ＩＬ−１７の分離精製用リガンドとしても使用され得る。
【０１７１】
ＩＬ−１７は線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、樹状細胞前駆細胞、骨髄由来間質細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、好中球などの各種細胞に作用することが知られている。ＩＬ−１７はこれらの細胞に作用することで各種サイトカイン、ケモカイン、受容体、接着分子、酵素等の産生及び発現を誘導する。具体的にはＣＸＣＬ１（ＫＣ又はＧｒｏα）、ＣＸＣＬ２（ＭＩＰ２又はＧｒｏβ）、ＣＸＣＬ５（ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ１１（Ｅｏｔａｘｉｎ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ３α）、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１９、ＴＮＦ、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ２）、ＮＯＳ２（ｉＮＯＳ）、ＬＣＮ２（２４ｐ３）、ＤＥＦＢ４（ＢＤ２）、Ｓ１００Ａ７（Ｐｓｏｒｉａｓｉｎ）、Ｓ１００Ａ８（Ｃａｌｇｒａｎｕｌｉｎ  Ａ）、Ｓ１００Ａ９（Ｃａｌｇｒａｎｕｌｉｎ  Ｂ）、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＥＲＥＧ、ＳＯＣＳ３、ＴＮＦＳＦ１１（ＲＡＮＫＬ）、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１３、ＴＩＭＰ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＰＧＥ２、ＳＣＦ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣなどが挙げられる。従って、本発明の化合物は、これらの細胞及びサイトカイン、ケモカインなどに関係した疾患の医薬又は診断薬、検査薬、試薬として使用され得る。
【０１７２】
ＩＬ−１７はＩＬ−１７受容体に結合することでＡｃｔ１やＴＲＡＦ６を活性化し、ＮＦ−κＢ経路やＭＡＰキナーゼ経路、Ｃ／ＥＢＰ経路などを活性化する。従って、本発明の化合物は、これらのシグナル伝達経路の活性化に関係した疾患の医薬又は診断薬、検査薬、試薬として使用され得る。
【０１７３】
本発明の医薬は、医薬上許容される担体が配合されたものであり得る。医薬上許容される担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム−グリコール−スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、アルギニン、ヒスチジン、リジン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
【０１７４】
経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水、オレンジジュースのような希釈液に有効量のリガンドを溶解させた液剤、有効量のリガンドを固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、サッシェ剤又は錠剤、適当な分散媒中に有効量の有効成分を懸濁させた懸濁液剤、有効量の有効成分を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤等である。
【０１７５】
また、本発明の医薬は必要により、味のマスキング、腸溶性或いは持続性などの目的のため、自体公知の方法でコーティングすることができる。コーティングに用いられるコーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン８０、プルロニックＦ６８、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、オイドラギット（ローム社製、ドイツ、メタアクリル酸・アクリル酸共重合体）及び色素（例、ベンガラ、二酸化チタンなど）などが用いられる。当該医薬は、速放性製剤、徐放性製剤のいずれであってもよい。徐放の基材としては、例えば、リポソーム、アテロコラーゲン、ゼラチン、ヒドロキシアパタイト、ＰＬＧＡなどが挙げられる。
【０１７６】
非経口的な投与（例えば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所投与、腹腔内投与、経鼻投与、経肺投与、経皮投与など）に好適な製剤としては、水性及び非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性及び非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。当該製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量或いは複数回投与量ずつ容器に封入することができる。また、有効成分及び医薬上許容される担体を凍結乾燥し、使用直前に適当な無菌の溶媒に溶解又は懸濁すればよい状態で保存することもできる。更に注射液剤以外にも、吸入剤、軟膏剤も可能である。吸入剤の場合、凍結乾燥状態の有効成分を微細化し適当な吸入デバイスを用いて吸入投与又はネブライザーを用いて吸入する等の方法が含まれてもよい。吸入剤には、更に必要に応じて従来より使用されている界面活性剤、油、調味料、シクロデキストリン又はその誘導体等を適宜配合することができる。
【０１７７】
ここで界面活性剤としては、例えばオレイン酸、レシチン、ジエチレングリコールジオレエート、テトラヒドロフルフリルオレエート、エチルオレエート、イソプロピルミリステート、グリセリルトリオレエート、グリセリルモノラウレート、グリセリルモノオレエート、グリセリルモノステアレート、グリセリルモノリシノエート、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ポリエチレングリコール４００、セチルピリジニウムクロリド、ソルビタントリオレエート（商品名スパン８５）、ソルビタンモノオレエート（商品名スパン８０）、ソルビタンモノラウエート（商品名スパン２０）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（商品名ＨＣＯ−６０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（商品名ツイーン２０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（商品名ツイーン８０）、天然資源由来のレシチン（商品名エピクロン）、オレイルポリオキシエチレン（２）エーテル（商品名ブリジ９２）、ステアリルポリオキシエチレン（２）エーテル（商品名ブリジ７２）、ラウリルポリオキシエチレン（４）エーテル（商品名ブリジ３０）、オレイルポリオキシエチレン（２）エーテル（商品名ゲナポル０−０２０）、オキシエチレンとオキシプロピレンとのブロック共重合体（商品名シンペロニック）等が挙げられる。油としては、例えばトウモロコシ油、オリーブ油、綿実油、ヒマワリ油等が挙げられる。また、軟膏剤の場合、適当な医薬上許容される基剤（黄色ワセリン、白色ワセリン、パラフィン、プラスチベース、シリコン、白色軟膏、ミツロウ、豚油、植物油、親水軟膏、親水ワセリン、精製ラノリン、加水ラノリン、吸水軟膏、親水プラスチベース、マクロゴール軟膏等）を用い、有効成分と混合し製剤化し使用する。
【０１７８】
吸入剤は常法に従って製造することができる。すなわち、上記本発明の化合物を粉末又は液状にして、吸入噴射剤及び／又は担体中に配合し、適当な吸入容器に充填することにより製造することができる。また上記本発明の化合物が粉末の場合は通常の機械的粉末吸入器を、液状の場合はネブライザー等の吸入器をそれぞれ使用することもできる。ここで噴射剤としては従来公知のものを広く使用でき、フロン−１１、フロン−１２、フロン−２１、フロン−２２、フロン−１１３、フロン−１１４、フロン−１２３、フロン−１４２ｃ、フロン−１３４ａ、フロン−２２７、フロン−Ｃ３１８、１，１，１，２−テトラフルオロエタン等のフロン系化合物、プロパン、イソブタン、ｎ−ブタン等の炭化水素類、ジエチルエーテル等のエーテル類、窒素ガス、炭酸ガス等の圧縮ガス等を例示できる。
【０１７９】
本発明の医薬の投与量は、有効成分の種類・活性、病気の重篤度、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、通常、成人１日あたり有効成分量として約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０００１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００５〜約１ｍｇ／ｋｇであり得る。
【０１８０】
本発明はまた、本発明の化合物が固定化された固相担体を提供する。固相担体としては、例えば、基板、樹脂、プレート（例、マルチウェルプレート）、フィルター、カートリッジ、カラム、多孔質材が挙げられる。基板は、ＤＮＡチップやプロテインチップなどに使われているものなどであり得、例えば、ニッケル−ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）基板やガラス基板、アパタイト基板、シリコン基板、アルミナ基板などで、これらの基板にポリマーなどのコーティングを施したものが挙げられる。樹脂としては、例えば、アガロース粒子、シリカ粒子、アクリルアミドとＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの共重合体、ポリスチレン架橋ジビニルベンゼン粒子、デキストランをエピクロロヒドリンで架橋した粒子、セルロースファイバー、アリルデキストランとＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドの架橋ポリマー、単分散系合成ポリマー、単分散系親水性ポリマー、セファロース、トヨパールなどが挙げられ、また、これらの樹脂に各種官能基を結合させた樹脂も含まれる。本発明の固相担体は、例えば、ＩＬ−１７の精製、及びＩＬ−１７の検出、定量に有用であり得る。
【０１８１】
本発明の化合物は、自体公知の方法により固相担体に固定できる。例えば、親和性物質（例、上述したもの）や所定の官能基を本発明の化合物に導入し、次いで当該親和性物質や所定の官能基を利用して固相担体に固定化する方法が挙げられる。本発明はまた、このような方法を提供する。所定の官能基は、カップリング反応に供することが可能な官能基であり得、例えば、アミノ基、チオール基、ヒドロキシル基、カルボキシル基が挙げられる。本発明はまた、このような官能基が導入されたアプタマーを提供する。
【０１８２】
本発明はまた、ＩＬ−１７の精製及び濃縮方法を提供する。特に本発明はＩＬ−１７を他のファミリータンパク質から分離することが可能である。
従って、一実施態様において、本発明は、（ａ）本発明の化合物をＩＬ−１７を含むサンプルと接触させて、サンプル中のＩＬ−１７と本発明の化合物とを結合させる工程、及び（ｂ）本発明の化合物に結合したＩＬ−１７をサンプルから分離する工程を含む、ＩＬ−１７の精製方法を提供する。
本発明の精製及び濃縮方法は、本発明の固相担体にＩＬ−１７を吸着させ、吸着したＩＬ−１７を溶出液により溶出させることを含み得る。本発明の固相担体へのＩＬ−１７の吸着は自体公知の方法により行うことができる。例えば、ＩＬ−１７を含有する試料（例、細菌又は細胞の培養物又は培養上清、血液）を、本発明の固相担体又はその含有物に導入する。ＩＬ−１７の溶出は、中性溶液等の溶出液を用いて行うことができる。中性溶出液は特に限定されるものではないが、例えばｐＨ約６〜約９、好ましくは約６．５〜約８．５、より好ましくは約７〜約８であり得る。中性溶液はまた、例えば、カリウム塩（例、ＫＣｌ）、ナトリウム塩（例、ＮａＣｌ）、マグネシウム塩（例、ＭｇＣｌ2）、界面活性剤（例、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｒｉｔｏｎ、ＮＰ４０）、グリセリンを含むものであり得る。本発明の精製及び濃縮方法はさらに、ＩＬ−１７の吸着後、洗浄液を用いて固相担体を洗浄することを含み得る。洗浄液としては、例えば、尿素、キレート剤（例、ＥＤＴＡ）、Ｔｒｉｓ、酸、アルカリ、Ｔｒａｎｆｅｒ  ＲＮＡ、ＤＮＡ、Ｔｗｅｅｎ  ２０などの表面活性剤、ＮａＣｌなどの塩を含むものなどが挙げられる。本発明の精製及び濃縮方法はさらに、固相担体を加熱処理することを含み得る。かかる工程により、固相担体の再生、滅菌が可能である。
【０１８３】
本発明の化合物は、検出用プローブ、特にＩＬ−１７の検出用プローブとして利用することができる。アプタマーの標識方法としては特に限定されず、自体公知の方法が適用可能である。このような方法としては、例えば放射性同位元素による標識、蛍光色素や蛍光蛋白質による標識などが挙げられる。
【０１８４】
本発明はまた、ＩＬ−１７の検出及び定量方法を提供する。特に本発明はＩＬ−１７を他のファミリータンパク質と区別して検出及び定量することができる。本発明の検出及び定量方法は、本発明の化合物を利用して（例、本発明の固相担体の使用により）ＩＬ−１７を測定することを含み得る。
従って、一実施態様において、本発明は、（ａ）本発明の化合物を試験サンプルと接触させて、試験サンプル中のＩＬ−１７と本発明の化合物とを結合させる工程、及び（ｂ）本発明の化合物と結合したＩＬ−１７を検出する工程を含む、ＩＬ−１７の検出方法を提供する。
ＩＬ−１７の検出及び定量方法は、抗体の代わりに本発明の化合物を用いること以外は、免疫学的方法と同様の方法により行われ得る。従って、抗体の代わりに本発明の化合物を用いることにより、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（例、直接競合ＥＬＩＳＡ、間接競合ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ウエスタンブロット法（例、ウエスタンブロット法における二次抗体の代わりとしての使用）、免疫組織化学的染色法、セルソーティング法等の方法と同様の方法により、検出及び定量を行うことができる。このような方法は、例えば、生体又は生物学的サンプルにおけるＩＬ−１７量の測定やＩＬ−１７が関連する疾患の診断に有用であるだけでなく、抗体の代わりに本発明の化合物を用いることにより、ヒトやヒト以外の動物由来の生体サンプルを用いて、或いは生体以外のサンプルを用いて、ＩＬ−１７を検出又は定量する科学的目的や、実験・研究目的など疾患診断目的以外にも有用であり得る。
【０１８５】
本明細書中で挙げられた特許及び特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、本明細書での引用により、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
【０１８６】
以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は下記実施例等に何ら制約されるものではない。
【０１８７】
実施例１：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーの合成（あるいは調製）
実施例のアプタマーに用いた核酸配列を以下に示す。実施例配列１〜４はいずれも先行出願であるＰＣＴ／ＪＰ２０１４／０５７９１９（ＷＯ２０１４／１４８６３８）の請求の範囲に含まれる配列である。
実施例配列１(アプタマー番号８)
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ_（ｔ）（配列番号８）
実施例配列２(アプタマー番号４８)
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ＣＣＣ_（ｔ）（配列番号４８）
実施例配列３(アプタマー番号８８)
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇ（Ｓ）Ｔｃ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇ（Ｓ）Ｔａ（Ｍ）ａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）_（ｔ）（配列番号８８）
実施例配列４(アプタマー番号９３)
ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｍ）Ａｇ（Ｓ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）Ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｆ）ｇｇ（Ｍ）ａ（Ｍ）ｇＴｃ（Ｆ）ａ（Ｆ）ｇＴａａｕ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｇ（Ｍ）ｕ（Ｆ）ａ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）ｃ（Ｍ）_（ｔ）（配列番号９３）
ａ、ｇ、ｃ、ｕは、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン、シトシン及びウラシルであるリボヌクレオチドを示し、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔは、それぞれ、塩基がアデニン、グアニン、シトシン及びチミンであるデオキシリボヌクレオチドを示す。ヌクレオチドにおける括弧は、そのヌクレオチドの修飾を示し、（Ｍ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２'位のヒドロキシル基がО-メチル基で置き換えられていることを示し、（Ｆ）は、ヌクレオチドがリボヌクレオチドの場合に、そのリボースの２'位のヒドロキシル基がフッ素原子で置き換えられていることを示し、（Ｓ）は、ヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることを示す。_（ｔ）はｉｎ  ｖｉｖｏ試験の際、３'末端又は５'末端に付加したｉｄＴ（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｄｅｏｘｙ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）を示す。３'末端にｉｄＴを付加した場合には、配列の先頭は５'末端であり、終端が３'末端である。
【０１８８】
各アプタマーは、オリゴヌクレオチド自動合成装置を使用して、ホスホロアミダイト法を用いた固相法により合成した。
各核酸配列の３'末端側に位置するヌクレオチドを出発材料とし、最初の仕込み量として合成開始点での量が１５０μｍｏｌになるように当該ヌクレオチドを合成用担体上に担持し、合成用カラムに詰め、自動合成装置に設置した。通常の自動合成プログラムに従い、核酸配列を３' → ５' 方向に１塩基ずつ伸長し、配列末端の５’‐ＯＨまで合成した。
ブランチャー、スペーサー、リンカーについても、上記と同様に自動合成装置を用いた合成反応によりアプタマーに導入した。ブランチャーとしてＳｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ ＣＥＤ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ社製）を６当量、すなわち９００μｍｏｌ用いて核酸配列の５'末端側にリン酸ジエステル結合を介して付加反応を行った。このブランチャーの付加に引き続いて、同様に自動合成機を用いた合成反応により、リン酸ジエステル結合を介してスペーサー（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ社製 ＤＭＴ−ｔｒｉｅｔｈｙｌｏｘｙ−Ｇｌｙｃｏｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）を付加した。さらに５'末端側にアミノ基を付加させるためにリン酸ジエステル結合を介してｓｓＨアミノリンカー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製  ｓｓＨ−Ｌｉｎｋｅｒ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）を付加した。これらは９当量（１３５０μｍｏｌ）を使用した。
ｓｓＨアミノリンカーまで付加した後、アンモニア水溶液により合成用担体から切り離し、塩基部分及びリン酸基部分の脱保護を行った。逆相クロマトグラフィーあるいはイオン交換クロマトグラフィー等で精製し、目的の５'アミノ化オリゴヌクレオチドを得た。
得られた５'アミノ化オリゴヌクレオチドの水溶液（３ｍｍｏｌ/Ｌ）４５６０μＬ（１３.６８μｍｏｌ，アミノ基は２７.３６μｍｏｌ）と、ＤＭＳＯ：ＡＣＮ＝４：１に溶解したＪｅｍｋｅｍ社製 ＰＥＧ（Ｙ−ＮＨＳ−４０Ｋ Ｙ−ｓｈａｐｅ ＰＥＧ ＮＨＳ Ｅｓｔｅｒ, ＭＷ４００００、５ｍｍｏｌ/Ｌ）２４６２４μＬ（１２３.１２μｍｏｌ）を、０.１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ９.０）中で２５℃、２時間反応させた。このときのオリゴヌクレオチドの終濃度は０.４２ｍｍｏｌ/Ｌで、ＰＥＧの終濃度は３.７９ｍｍｏｌ/Ｌであった。反応後液体クロマトグラフィーにより精製することにより目的のＰＥＧ化オリゴヌクレオチドを得た（図１、２参照）。
【０１８９】
試験例１：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーのマウス血中動態
アプタマーへのＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーの導入による効果をみるため、ブランチャーを介して２分岐のＰＥＧを付加したアプタマー（実施例配列1、２、４、図１  構造１）と、ブランチャーなしの従来公知の構造に分岐ＰＥＧを付加したアプタマー（同  図１  構造４）を合成し、マウスにおける血中動態を調べた。各アプタマーを０.２ｍｇ／ｍＬで生理食塩水に溶解し、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（チャールス・リバー社）に１ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。５分から７２時間後まで経時的に血液を採取した。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ Ｍ. Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４, Ｖｏｌｕｍｅ ２１, Ｉｓｓｕｅ １２, ｐｐ２２３４-２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて本発明のアプタマーについて血漿中のアプタマー濃度を測定した。結果を下記表１に示す。
【０１９０】
【表１】
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【０１９１】
測定の結果、新たにブランチャーを導入したアプタマー（実施例配列１、２、４、図１  構造１）は、従来公知のアプタマー（同  図１  構造４）と比較して、最大で２倍以上血中半減期が延長された。したがって、アプタマーの血中濃度の維持には、リンカー―スペーサー―ブランチャーを用いて核酸配列とＰＥＧを繋ぐことが非常に有用であることが確認された。
【０１９２】
試験例２：ＰＥＧとブランチャーを繋ぐスペーサー・リンカーの違いによるマウス血中動態の比較
ブランチャーとＰＥＧの間を繋ぐスペーサー・リンカーの有無及び種類について検討した。実施例配列２の核酸配列にブランチャーを付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧと連結させるためにスペーサーとｓｓＨアミノリンカーを用いたアプタマー（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ、図１  構造１）、スペーサーを介さずにｓｓＨアミノリンカーのみを用いたアプタマー（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ、図１  構造２）、及びリンカーとして「５’-ＭＭＴ-Ａｍｉｎｏ-Ｍｏｄｉｆｉｅｒ-１１-ＣＥリンカー」を用いたアプタマー（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ、図１  構造３）をそれぞれ合成した。アプタマーを０.２ｍｇ／ｍＬで生理食塩水に溶解し、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（チャールス・リバー社）に１ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。５分から７２時間後まで経時的にそれぞれ血液を採取した。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ Ｍ. Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４, Ｖｏｌｕｍｅ ２１, Ｉｓｓｕｅ １２, ｐｐ２２３４-２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて本発明のアプタマーについて血漿中のアプタマー濃度を測定した。結果を下記表２に示す。
【０１９３】
【表２】
2017094897.tif 000010
【０１９４】
測定の結果、ｓｓＨ アミノリンカーのみでＰＥＧとブランチャーを繋いだアプタマー（図１  構造２）の血中半減期が２７時間で最も延長されていたが、スペーサーとｓｓＨ アミノリンカーでＰＥＧとブランチャーを繋いだアプタマー（図１  構造１）及び「５’-ＭＭＴ-Ａｍｉｎｏ-Ｍｏｄｉｆｉｅｒ-１１-ＣＥリンカー」でＰＥＧとブランチャーを繋いだアプタマー（図１  構造３）の血中半減期は２２.５時間、２１.８時間となり、３つのアプタマーで血中半減期に大きな差はみられなかった。
以上より、アプタマーの血中濃度を著しく長期に渡り維持することが明らかになったＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーの構造において、必ずしもスペーサーは必要とせず、また、リンカーは種類を限定する必要がないことが確認された。
【０１９５】
試験例３：核酸にブランチャー―スペーサー―リンカーを介して付加されるＰＥＧの種類の違いによるマウス血中動態の比較
試験例１に従い、実施例配列３の核酸配列にブランチャー、スペーサー、ｓｓＨ アミノリンカーと付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧ或いは４０ｋＤａ分岐なしのＰＥＧを付加させたアプタマー（ともに総ＰＥＧ分子量：計８０ｋＤａ）をそれぞれ合成した（図１  構造１）。アプタマーを０.２ｍｇ／ｍＬで生理食塩水に溶解し、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（チャールス・リバー社）に１ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。５分から７２時間後まで経時的にそれぞれ血液を採取した。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ Ｍ. Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４, Ｖｏｌｕｍｅ ２１, Ｉｓｓｕｅ １２, ｐｐ２２３４-２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて本発明のアプタマーについて血漿中のアプタマー濃度を測定した。結果を下記表３に示す。
【０１９６】
【表３】
2017094897.tif 000011
【０１９７】
分岐なしのＰＥＧを用いた場合、アプタマーの血中半減期は４．９時間と２分岐のＰＥＧを用いた場合（２２.８時間）と比較して著しく短くなった。
以上より、アプタマーの血中濃度を著しく長期にわたり維持することが明らかになったＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーの構造において、付加するＰＥＧは少なくとも２つ以上の分岐鎖をもつものが好ましいことが確認できた。
【０１９８】
試験例４：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーのマウス皮下投与での血中動態
試験例１に従い、実施例配列１、２、３及び４の核酸配列にブランチャー、スペーサー、ｓｓＨ アミノリンカーと付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧを付加させたアプタマー（ともに総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ）をそれぞれ合成した（図１  構造１）。アプタマーを０.１ｍｇ／ｍＬで生理食塩水に溶解し、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（チャールス・リバー社）に１ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。３０分から７２時間後まで経時的にそれぞれ血液を採取した。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ Ｍ. Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４, Ｖｏｌｕｍｅ ２１, Ｉｓｓｕｅ １２, ｐｐ２２３４-２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて本発明のアプタマーについて血漿中のアプタマー濃度を測定した。結果を下記表４に示す。
【０１９９】
【表４】
2017094897.tif 000012
【０２００】
ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーは皮下投与でも血中に移行し、高い血中濃度を長時間維持できることが確認できた。
【０２０１】
試験例５：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーのサル血中動態
サルでの血中動態をみるため、試験例４と同様に実施例配列１、３及び４の核酸配列にブランチャー、スペーサー、ｓｓＨ アミノリンカーと付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧを付加させたアプタマー（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ）をそれぞれ合成した（図１  構造１）。これらのアプタマーをカニクイザルに静脈内あるいは皮下投与して血中動態を調べた。アプタマーを１ｍｇ／ｍＬで生理食塩水に溶解し、カニクイザルに１ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、５分から９６時間までそれぞれ血液を採取した。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ Ｍ. Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４, Ｖｏｌｕｍｅ ２１, Ｉｓｓｕｅ １２, ｐｐ２２３４-２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて本発明のアプタマーについて血漿中の残存核酸濃度を測定した。また同じくアプタマーを１ｍｇ／ｋｇ／ｍＬにて皮下投与し、１５分から１２０時間までそれぞれ血液を採取した。以下同様の方法にて血漿分離し−７０℃に保存後、ＥＬＯＳＡ法を用いて血漿中のアプタマー濃度を測定した。
測定の結果、図３、図４及び図５に示すようにＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーは、サルにおいても投与後１日から５日に相当する非常に長期間、高い血中濃度を維持できることがわかった。特に実施例配列３のアプタマーにおいては、７２.０時間（静脈内投与）及び１０７.０時間（皮下投与）と、半減期の大幅な延長が認められた（図４）。
【０２０２】
試験例６：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーのＩＬ−１７中和活性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
実施例配列１、２、３及び４の核酸配列にブランチャー、スペーサー、ｓｓＨ アミノリンカーと付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧを付加させたアプタマー（ともに総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ）をそれぞれ合成した（図１  構造１）。そして、もとの核酸配列のみのアプタマーと併せて、それぞれのアプタマーのＩＬ−１７中和活性を測定した。評価は培養細胞においてＩＬ−１７とＴＮＦαの細胞刺激により放出されるＩＬ−６量を測定することにより行った。
ヒトＩＬ−１７（１０ｎｇ／ｍＬ）と様々な濃度に希釈したアプタマーを３７℃で３０分間プレインキュベートし、マウスＴＮＦα（２ｎｇ／ｍＬ）とともにＮＩＨ３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１６５８、１．２５×１０５  ｃｅｌｌ／ｍＬ）に加えた。次いで、２４時間インキュベートした後、培養上清を回収した。−７０℃に保存後、ＥＬＩＳＡ法によってＩＬ−６の産生量を測定した。ＩＬ−６産生量から各アプタマーのＩＬ−１７阻害作用を評価した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０値）を下記表５に示す。
アプタマーのＩＬ−１７阻害作用を検証するＥＬＩＳＡ法は以下の通りに行った。
ＥＬＩＳＡ用マイクロタイタープレートを、ＰＢＳで希釈したラット抗マウスＩＬ−６抗体（ＢＤバイオサイエンス社、２μｇ／ｍＬ；１００μＬ/ウェル）を用いて被膜し、４℃で一晩インキュベートした。翌日、マイクロタイタープレートをＰＢＳ／０.０５％ツイーン２０で３回洗浄した後に、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ（２００μＬ/ウェル）を用いて室温で２時間ブロッキングした。次いでプレートを、ＰＢＳ／０.０５％ツイーン２０で３回洗浄した。ＰＢＳ／１％ＢＳＡ／０.０５％ツイーン２０を用いて段階希釈したリコンビナントマウスＩＬ−６（ＢＤ  バイオサイエンス社；１００μＬ／ウェル）および培養上清（１００μＬ／ウェル）を加え、室温で２時間インキュベーションした後、プレートをＰＢＳ/０.０５％ツイーン２０で３回洗浄した。ビオチンコンジュゲートラット抗マウスＩＬ−６抗体を（ＢＤバイオサイエンス社、最終希釈１／５００；１００μＬ／ウェル)で加え、室温で１時間反応させた。ＰＢＳ／０.０５％ツイーン２０で３回洗浄後、アルカリホスファターゼコンジュゲートストレプトアビジンを（最終希釈１／１０００；１００μＬ/ウェル)で加えた。室温で３０分後、プレートを再びＰＢＳ／０.０５％ツイーン２０で４回洗浄し、基質(１−Ｓｔｅｐ  ＰＮＰＰ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ；１００μＬ／ウェル)を加えた。１５分後に水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ：５０μＬ／ウェル)を加えて反応を停止し、プレートをマイクロタイターリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で、４０５ｎｍのフィルターを用いて読み取った。
【０２０３】
【表５】
2017094897.tif 000013
【０２０４】
測定の結果、ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーは、ＩＬ−１７により誘導されるＩＬ−６産生を阻害した。したがって、本発明におけるＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーは、ＩＬ−１７中和活性を保持することが確認された。
【０２０５】
試験例７―１：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーのＩＬ−１７中和活性試験（ｉｎ  ｖｉｖｏ）
ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーがＩＬ−１７の作用を生体内でも阻害できるか否かを、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７７，  ８７８−８８７  （２００９）を参考に、マウス空気嚢炎症モデルで確認した。
試験例６と同様に、実施例配列１、３及び４の核酸配列にブランチャー、スペーサー、ｓｓＨ アミノリンカーと付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧを付加させたアプタマー（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ）をそれぞれ合成した（図１  構造１）。雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（７週齢、チャールス・リバー社）マウスの背部を剃毛し、その翌日及び４日後に背部皮下に空気を２.５ｍＬ注入した。２回目の空気注入より３日後に、ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートした本発明のアプタマー（０.３、１、３  ｍｇ／ｋｇ）あるいは生理食塩水を腹腔内投与し、１時間後にＩＬ−１７（０.５μｇ）を含む２％カルボメチルセルロース水溶液を空気嚢内に投与した。ＩＬ−１７を注入してから２４時間後に空気嚢内の滲出液を回収した。−７０℃に保存後、滲出液中のＩＬ−６量を試験例６に記載したＥＬＩＳＡで測定した。
図６、７、８に示すように本発明のアプタマーを投与した群では、有意に空気嚢内のＩＬ−６量が少なかった。したがって、本発明におけるＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーは、ＩＬ−１７中和活性を生体内でも保持することが確認された。
【０２０６】
試験例７―２：ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーのＩＬ−１７中和活性試験（ｉｎ  ｖｉｖｏ）
ＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーと従来用いられているＰＥＧ―リンカーのみをコンジュゲートしたアプタマーの生体内でのＩＬ−１７中和活性の持続性を、コラーゲン誘発関節炎モデルマウスで比較した。試験例６と同様に、実施例配列１の核酸配列にブランチャー、スペーサー、ｓｓＨ アミノリンカーと付加させた後、４０ｋＤａ ２分岐のＰＥＧを付加させたアプタマー（総ＰＥＧ分子量：８０ｋＤａ）をそれぞれ合成した（図１  構造１）。Ｓ  Ｔｏｙａｍａらの方法（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  １２，Ｒ９２（２０１０））に従い、本発明のアプタマーのコラーゲン誘導関節炎モデルに対する抑制作用を調べた。
すなわち、雄性ＤＢＡ／１マウス（８週齢、チャールス・リバー社）の尾根部に完全アジュバント（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社）で乳化したウシＩＩ型コラーゲン（２００μｇ／ｈｅａｄ、コラーゲン技術研修会）を皮内投与した（実験第１日目）。実験第２２日目に不完全アジュバントで乳化したウシＩＩ型コラーゲンで追加免疫するとともに、合成したアプタマー（３ｍｇ／ｋｇ）をそれぞれ２日に１回、腹腔内投与した。なお、コントロールとして、生理食塩水を１０ｍＬ／ｋｇで２日に１回、腹腔内投与した。毎日動物を観察し、各肢の炎症の程度を０（無症状）から４（肢全体の発赤と最大の腫脹）までの５段階でスコア化し（１匹あたり最大１６）、本発明のアプタマーの関節炎に対する薬効を評価した。
図９に示すようにブランチャーを介してＰＥＧを付加したアプタマー（同、図１  構造１）を投与した群では、生理食塩水を投与した群と比較して、関節炎スコアは初回免疫後３０日目より有意に減少していた。したがって、本発明におけるＰＥＧ―リンカー―スペーサー―ブランチャーをコンジュゲートしたアプタマーは、ＩＬ−１７中和活性を生体内でより長く保持することが確認された。
【０２０７】
また、同試験で、最終投与４８時間後に血液を採取した。血漿に分離し−７０℃で保存した後、Ｊｕｄｉｔｈ Ｍ. Ｈｅａｌｙら（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４, Ｖｏｌｕｍｅ ２１, Ｉｓｓｕｅ １２, ｐｐ２２３４-２２４６）の方法に従い、ＥＬＯＳＡ法（ハイブリダイゼーション法）を用いて本発明のアプタマーについて血漿中の残存核酸濃度を測定した。アプタマー濃度を測定した結果を下記表６に示す。
【０２０８】
【表６】
2017094897.tif 000014
【０２０９】
測定の結果、新たにブランチャーを導入したアプタマー（実施例配列１、図１  構造１）は、ブランチャーを導入しないアプタマーと比較して、１００倍以上血漿中の濃度が高いことが分かった。したがって、アプタマーが長期に血中濃度を維持し、薬効を示すためには、リンカー−スペーサー−ブランチャーを介して核酸配列とＰＥＧを繋ぐことが非常に有用であることが確認された。
【０２１０】
本出願は、日本で出願された特願２０１５−２３７４９１（出願日：２０１５年１２月４日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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