(57)【要約】  本発明の課題は、リポソーム内に難水溶性薬理活性物質を高い効率で内包させるための方法を提供することである。  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む組成物であって、フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を、３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５のモル比で含む、組成物の提供。
2017061562.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む組成物であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、組成物。
【請求項２】
フォスファチジルコリン基を有する脂質が、水素添加大豆レシチン卵黄リン脂質、ジステアロイルフォスファチジルコリン、ジミリストイルフォスファチジルコリン、ジパルミトイルフォスファチジルコリンおよびジオレストイルフォスファチジルコリンからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
コレステロール化合物が、コレステロール、コレスタノール、７−デヒドロコレステロールおよびフィトステロールからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質が、ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルフォスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルフォスファチジルエタノールアミンおよびジオレオイルフォスファチジルエタノールアミンからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、コレステロール化合物、およびフォスファチジルコリン基を有する脂質のいずれかが、ポリアルキレングリコールで修飾されてなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
難水溶性薬理活性物質が、タキサン化合物、マクロライド化合物、ビンカアルカロイド化合物、キノリンアルカロイド化合物、およびエトポシド化合物からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
タキサン化合物がパクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセルおよびこれらの配糖体からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
マクロライド化合物が、バフィロマイシン、コンカナマイシン、アジスロマイシン、およびクラリスロマイシンからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
脂質フィルム形成用である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む脂質フィルムであって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、脂質フィルム。
【請求項１１】
水系溶剤中で、請求項１０に記載の脂質フィルムと、ポリオキシエチレンエステル化合物とを接触させる工程を含む、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法。
【請求項１２】
水系溶剤として、さらに低級アルコールを含む、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
水系溶剤として、さらに緩衝液を含む、請求項１１または１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
さらに、ガン細胞を認識する抗体を担持させる工程を含む、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１５】
フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、難水溶性薬理活性物質、およびポリオキシエチレンエステル化合物を内包するリポソームを含むリポソーム製剤であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、リポソーム製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はタキサン化合物を内包するリポソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
パクリタキセルやドセタキセルなどのタキサン化合物は優れた抗ガン活性を有するが、その一方でこれらの化合物は難水溶性であるといったデメリットも有する。そこで、タキサン化合物をクレモホールなどの界面活性剤を含むエタノールに溶解させることによって、ガン患者に投与されている。【０００３】
ところが、これらの界面活性剤はヒトに対する副作用が大きいという、新たな問題点が浮上している。そこで、タキサン化合物を内包するリポソームを開発し、得られたリポソームをＤＤＳ製剤として用いる試みが行われている。【０００４】
具体的には、特許文献１に記載のような溶解度勾配の原理を利用するリモートロディング法を採用して、リポソーム内にタキサン化合物を内包させる方法が知られている。【０００５】
他方、リポソーム作製用の脂質二重膜内に予めタキサン化合物を含有させ、上述のような界面活性剤を用いてリポソーム形成させるパッシブローディング法を採用する非特許文献１に示される方法も知られている
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＷＯ２０１３／１４１３４６
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ；３３８（２００７）３１７−３２６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上述の特許文献１に記載される方法では、リポソーム内に難水溶性薬理活性物質を内包させる効率が極めて低くい。また、非特許文献１に示す難水溶性薬理活性物質を含む脂質二重膜に対し、水系溶剤中でクレモホールなどの界面活性剤と接触させても、リポソームの形成にすら至らなかったことを本願発明者らは確認している。本発明の課題は、リポソーム内に難水溶性薬理活性物質を高い効率で内包させるための方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願発明者らは、斯かる課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、下記に示す特定の成分を含む組成物を用いることで、難水溶性薬理活性物質を効率よくリポソームに内包させ得ることを見出した。【００１０】
本発明は斯かる知見に基づいて完成されたものであり、下記に示す態様の発明を広く包含する。【００１１】
項１  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む組成物であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、組成物。【００１２】
項２  フォスファチジルコリン基を有する脂質が、水素添加大豆レシチン（ＨＳＰＣ）、卵黄リン脂質（ＥＰＣ）、ジステアロイルフォスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルフォスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびジオレオイルフォスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項１に記載の組成物。【００１３】
項３  コレステロール化合物が、コレステロール、コレスタノール、７−デヒドロコレステロールおよびフィトステロールからなる群より選択される少なくとも一種である、上記項１または項２に記載の組成物。【００１４】
項４  フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質が、ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、およびジオレオイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項１〜項３のいずれか１項に記載の組成物。【００１５】
項５  フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、コレステロール化合物、およびフォスファチジルコリン基を有する脂質のいずれかが、ポリアルキレングリコールで修飾される脂質である、上記項１〜項４のいずれか１項に記載の組成物。【００１６】
項６  難水溶性薬理活性物質が、タキサン化合物、マクロライド化合物、ビンカアルカロイド化合物、キノリンアルカロイド化合物、およびエトポシド化合物からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項１〜項５のいずれか１項に記載の組成物。【００１７】
項７  タキサン化合物がパクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセルおよびこれらの配糖体からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項６に記載の組成物。【００１８】
項８  マクロライド化合物が、バフィロマイシン、コンカナマイシン、アジスロマイシン、およびクラリスロマイシンからなる群より選択される少なくとも一種である、上記項６に記載の組成物。【００１９】
項９  脂質フィルム形成用である、上記項１〜項８のいずれか１項に記載の組成物。【００２０】
項１０  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む脂質フィルムであって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、脂質フィルム。【００２１】
項１１  水系溶剤中で、上記項１０に記載の脂質フィルムと、ポリオキシエチレンエステル化合物とを接触させる工程を含む、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法。【００２２】
項１２  水系溶剤として、さらに低級アルコールを含む、上記項１１に記載の製造方法。【００２３】
項１３  水系溶剤として、さらに緩衝液を含む、上記項１１または項１２に記載の製造方法。【００２４】
項１４  さらに、ガン細胞を認識する抗体を担持させる工程を含む、請求項１１〜項１３のいずれか１項に記載の製造方法。【００２５】
項１５  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、難水溶性薬理活性物質、およびポリオキシエチレンエステル化合物を内包するリポソームを含むリポソーム製剤であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５であるリポソーム製剤。【００２６】
I. 組成物
組成物(I)は、以下の(I-1)〜(I-9)に示す態様の発明を包含する。【００２７】
(I-1)  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む組成物であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモルが、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、組成物。【００２８】
(I-2)  フォスファチジルコリン基を有する脂質が、水素添加大豆レシチン（ＨＳＰＣ）、卵黄リン脂質（ＥＰＣ）、ジステアロイルフォスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルフォスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびジオレオイルフォスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項(I-1)に記載の組成物。【００２９】
(I-3)  コレステロール化合物が、コレステロール、コレスタノール、７−デヒドロコレステロールおよびフィトステロールからなる群より選択される少なくとも一種である、上記項(I-1)または項(I-2)に記載の組成物。【００３０】
(I-4)  フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質が、ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）およびジオレオイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項(I-1)〜項(I-3)のいずれか１項に記載の組成物。【００３１】
(I-5)  フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、コレステロール化合物、およびフォスファチジルコリン基を有する脂質のいずれかが、ポリアルキレングリコールで修飾されてなる、上記項(I-1)〜項(I-4)のいずれか１項に記載の組成物。【００３２】
(I-6)  難水溶性薬理活性物質が、タキサン化合物、マクロライド化合物、ビンカアルカロイド化合物、キノリンアルカロイド化合物、およびエトポシド化合物からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項(I-1)〜項(I-4)のいずれか１項に記載の組成物。【００３３】
(I-7)  タキサン化合物がパクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、およびこれらの配糖体からなる群より選択される少なくとも一種である、上記項(I-6)に記載の組成物。【００３４】
(I-8)  マクロライド化合物が、バフィロマイシン、コンカナマイシン、アジスロマイシン、およびクラリスロマイシンからなる群より選択される少なくとも一種である、上記項(I-6)に記載の組成物。【００３５】
(I-9)  脂質フィルム形成用である、上記項(I-1)〜項(I-8)のいずれか１項に記載の組成物。【００３６】
II. 脂質フィルム
脂質フィルム(II)は、以下の(II-1)に示す態様の発明を包含する。【００３７】
(II-1)  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む脂質フィルムであって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、脂質フィルム。【００３８】
III. 難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法
難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法(III)は、以下の(III-1)〜(III-4)に示す態様の発明を包含する。【００３９】
(III-1)  水系溶剤中で、脂質フィルム(II)とポリオキシエチレンエステル化合物とを接触させる工程を含む、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法。【００４０】
(III-2)  水系溶剤として、さらに低級アルコールを含む、上記(III-1)に記載の製造方法。【００４１】
(III-3)  水系溶剤として、さらに緩衝液を含む、上記(III-1)または(III-2)に記載の製造方法。【００４２】
(III-4)  さらに、ガン細胞を認識する抗体を担持させる工程を含む、上記項(III-1)〜(III-3)のいずれかに記載の製造方法。【００４３】
IV. リポソーム製剤
リポソーム製剤(IV)とは、以下の(IV-1)〜(IV-6)に示す態様の発明を包含する。【００４４】
(IV-1)  フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、難水溶性薬理活性物質、およびポリオキシエチレンエステル化合物を内包するリポソーム含むリポソーム製剤であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５であるリポソーム製剤。【００４５】
(IV-2)  前記リポソーム中に、水系溶媒としてさらに低級アルコールを含む、(IV-1)に記載のリポソーム製剤。【００４６】
(IV-3)  前記リポソームが、水系溶媒としてさらに緩衝液を含む、(IV-1)および(IV-2)に記載のリポソーム製剤。【００４７】
(IV-4)  前記リポソームが、さらにガン細胞を認識する抗体を担持する、(VI-1)〜(VI-3)の何れか１項に記載のリポソーム製剤。【００４８】
(IV-5)  前記リポソームが、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法(III)に記載の方法で製造されたリポソームである、(VI-1)〜(VI-4)の何れか１項に記載のリポソーム製剤。【００４９】
(IV-6)  ガンの治療または予防に用いられるものである、(VI-1)〜(VI-5)の何れか１項に記載のリポソーム製剤。
【発明の効果】
【００５０】
本発明の組成物は、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造する際に好適に用いられる。【００５１】
本発明のリポソーム製剤は、副作用が軽減される効果を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】ＰＴＸ−Ｌ（Ａ）およびｇＰＴＸ−Ｌ（Ｂ）の内包効率（ＥＥ：％）および担持率（ＬＥ：％）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝４で、＊はＰ＜０．０５を示す。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したＰＴＸおよびｇＰＴＸの、それぞれ全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図２】ＤＴＸ−Ｌの内包効率（ＥＥ：％）および担持率（ＬＥ：％）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝４で、＊はＰ＜０．０５を示す。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したＤＴＸの、全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図３】ＰＴＸ−Ｌ（Ａ）およびｇＰＴＸ−Ｌ（Ｂ）の物性評価（粒子径：ｎｍ、多分散指数、およびゼータ電位：ｍＶ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝４である。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したＰＴＸおよびｇＰＴＸの、それぞれ全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図４】ＤＴＸ−Ｌの物性評価（粒子径：ｎｍ、多分散指数、ゼータ電位：ｍＶ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝３である。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したＤＴＸの、全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図５】ＰＴＸ−Ｌ（Ａ）およびｇＰＴＸ−Ｌ（Ｂ）の保持率（％）および粒子径（ｍｍ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝３である。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したＰＴＸおよびｇＰＴＸの、それぞれ全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図６】ＤＴＸ−Ｌの保持率（％）および粒子径（ｎｍ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝３である。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したＤＴＸの、全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図７】ＰＴＸ−Ｌ（Ａ）およびｇＰＴＸ−Ｌ（Ｂ）の抗がん活性評価（ＩＣ５０値：ｎＭ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝５で、＊はＰ＜０．０５を示す。
【図８】ＤＴＸ−Ｌの抗ガン活性評価（ＩＣ５０値：ｎＭ）についての実験結果を示すグラフ。
【図９】ＢａｆＡ１−Ｌの内包効率（ＥＥ：％）、担持率（ＬＥ：％）、および物性評価（粒子径：ｍｍ、多分散指数、およびゼータ電位：ｍＶ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝３で、＊はＰ＜０．０５を示す。なお、グラフ横軸は、リポソームに添加したバフィロマイシンの、全体に対するモル比の値（ｘ）を示す。
【図１０】ＢａｆＡ１−Ｌの抗ガン活性評価（ＩＣ５０値：ｎＭ）についての実験結果を示すグラフ。Ｎ＝５で、＊はＰ＜０．０５を示す。
【図１１】比較実験例の結果を示す写真像。Ａは本願発明の脂質フィルムを基に製造したリポソームであり、Ｂは非特許文献１に記載された組成の脂質フィルムを基にして製造したリポソームである。
【図１２】実施例３に示す、本発明のドセタキセル内包リポソームを用いた毒性試験結果を示す、カプラン・マイヤー図である。グラフの縦軸はサバイバルレート（％）を示す。グラフの横軸は、投与後の日数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本明細書において、「脂質」とは、単純脂質、複合脂質、誘導脂質などを意味し、特にこれらに限定はされない。また、これらの脂質に、例えばポリアルキレングリコールなどの高分子などによって修飾される脂質も包含される。
【００５４】
組成物(I)
本発明の組成物(I)は、フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む組成物であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５のモル比である、組成物である。
【００５５】
より好ましくは、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、４〜８：２〜６：０．２〜２：０．０１〜４である、組成物である。
【００５６】
さらに好ましくは、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、５〜７：３〜５：０．３〜１．５：０．０５〜３である、組成物である。
【００５７】
最も好ましくは、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、５〜６：４〜５：０．５〜１：０．１〜２である、組成物である。
【００５８】
フォスファチジルコリン基を有する脂質は、特に限定されない。例えば、リン脂質を挙げることができ、より具体的には、ＨＳＰＣ、ＥＣＰ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＣなどのリン脂質を挙げることができる。これらの中でも、水素添加大豆レシチン（ＨＳＰＣ）が好ましい。なお、上述のフォスファチジルコリン基を有する脂質は、１種のみならず、２種以上を適当に組み合わせて用いることができる。
【００５９】
コレステロール化合物は、特に限定されない。例えば、コレステロール、コレスタノール、７−デヒドロコレステロールおよびフィトステロールなどを挙げることができる。これらの中でも、コレステロールが好ましい。なお、上述のコレステロール化合物は、１種のみならず、２種以上を適当に組み合わせて用いることができる。
【００６０】
フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質は、特に限定されない。例えば、リン脂質を挙げることができ、より具体的には、ＤＳＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＥなどのリン脂質を挙げることができる。これらの中でも、ＤＳＰＥが好ましい。なお、上述のフォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質は、１種のみならず、２種以上を適当に組み合わせて用いることができる。
【００６１】
上述のフォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、またはフォスファチジルエタノール基を有する脂質は、何れもポリアルキレングリコールにて修飾されてなるものとすることもできる。
【００６２】
ポリアルキレングリコールは、特に限定されない。例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールなどを挙げることができる。これらの中でも、ポリエチレングリコールが好ましい。
【００６３】
ポリアルキレングリコールの分子量は特に限定はされない。例えば、数平均分子量であれば、５００〜３０００を挙げることができる。例えば、重量平均分子量であれば、５００〜１００００を挙げることができる。
【００６４】
上述のポリアルキレングリコールによる修飾の態様は、特に限定されない。例えば、化学結合されてなる態様にて修飾されることが挙げられる。特に、フォスファチジルコリン基を有する脂質またはフォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質であれば、その親油性基ではなく、親水性基（アルコール誘導性基）に対して、ポリアルキレングリコールが化学結合されてなることが好ましい。より具体的には、ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥなどのポリエチレングリコールによって修飾されてなるリン脂質を挙げることができる。
【００６５】
難水溶性薬理活性物質は、特に限定されない。例えば、水への溶解性が著しく低い薬理活性物質を採用することができ、０℃での水への溶解度が１００００ｍｇ／Ｌ以下、好ましくは１０００ｍｇ／Ｌ以下である。なお、このような溶解度の下限値が０以上であることは言うまでもない。このような具体的な難水溶性薬理活性物質として、タキサン化合物、マクロライド化合物、ビンカアルカロイド化合物、キノリンアルカロイド化合物、およびエトポシド化合物などを挙げることができる。
【００６６】
ここで、タキサン化合物は、特に限定されない。例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、およびこれらの配糖体などを挙げることができる。
【００６７】
配糖体は、特に限定はされず、公知の配糖体を採用すればよい。具体的には、グルコース、ガラクトースなどの単糖によって修飾された配糖体が挙げられる。中でも、グルコース配糖体が好ましい。さらに、単糖の形状として、ピラノース、フラノースなどの環状糖によって修飾された配糖体とすることが好ましい。本発明の単としてグルコピラノシドとすることがより好ましい。
【００６８】
なお、配糖体とは、そのアグリコンに適宜な基を設けたうえで糖修飾することもできる。、例えば、パクリタキセルとグルコピラノシドとの間に、オキシアセチル基が設けた、７−グルコシルオキシアセチルパクリタキセルとすることが最も好ましい。
【００６９】
また、マクロライド化合物は、特に限定されない。例えば、バフィロマイシン、バフィロマイシン、コンカナマイシン、アジスロマイシン、およびクラリスロマイシンなどを挙げることができる。
【００７０】
また、キノリンアルカロイド化合物は、特に限定はされない。例えば、カンプトテシン、イリノテカンなどを挙げることができる。
【００７１】
また、ビンカアルカロイド化合物は、特に限定はされない。例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどを挙げることができる。
【００７２】
また、エトポシド化合物は、特に限定はされない。例えば、エトポシド、テニポシドなどを挙げることができる。
【００７３】
本発明の組成物(I)は、公知の溶媒に溶解させることができる。具体的な溶媒は特に限定はされず、例えば、クロロホルムなどの有機溶剤と、必要に応じてメタノール、エタノールなどのアルコールとを適宜混合しながら、採用することができる。
【００７４】
本発明の組成物(I)は、後述の脂質フィルム(II)の形成のために好適に用いることができる。
【００７５】
脂質フィルム(II)
本発明の脂質フィルム(II)は、上述の組成物(I)と同一の組成を有するものとすることができる。すなわち、本発明の脂質フィルムの一態様として、上述の組成物(I)と同一の組成からなる態様が包含され得る。
【００７６】
本発明の脂質フィルム(II)とは、より詳細には、フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質を含む脂質フィルムであって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、脂質フィルムである。
【００７７】
例えば、上述のように、組成物(I)を公知の溶媒に溶解させた場合には、これを蒸発乾固に供することによっても、脂質フィルム(II)を得ることができる。
【００７８】
具体的な蒸発乾固の方法は、特に限定はされないが、例えばエバポレーターなどを用いる方法を挙げることができる。蒸発乾固の条件については特に限定はされず、脂質二重膜などに代表される、脂質多重膜を形成させることできる範囲において適宜設定すればよい。
【００７９】
このようにして得られる脂質フィルム(II)は、以下に示す、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造するための方法の原料として、好適に用いることができる。
【００８０】
難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームの製造方法(III)
本発明の難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造する方法(III)は、水系溶剤中で、上述の脂質フィルム(II)と、ポリオキシエチレンエステル化合物とを接触させる工程を含む。
【００８１】
本明細書における用語「内包」とは、特に限定はされない。例えば、リポソーム内に難水溶性薬理活性物質が完全に包含される態様、その一部の分子がリポソームを構成する脂質多重膜に突き刺さった態様などを挙げることができる。
【００８２】
本明細書における用語「接触」は、特に限定はされない。例えば、脂質フィルム(II)とポリオキシエチレンエステル化合物を含む水系溶剤とを混合させる態様などを挙げることができる。
【００８３】
本明細書における用語「水系溶剤」は、特に限定はされない。例えば、水を少なくとも含む溶剤の態様を挙げることができる。さらに下記に示す緩衝液および／または低級アルコールを含む態様とすることもできる。
【００８４】
ポリオキシエチレンエステル化合物は、特に限定されない。例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルリン酸、ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）メチルポリシロキサン共重合体、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンステアリン酸アミド、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシ、ポリオキシエチレンヒマシ油エステルなどを挙げることができる。
【００８５】
これらの中でも、ポリオキシエチレンヒマシ油エステルが好ましく、ポリオキシアルキレン(Ｃ２４)ヒマシ油脂肪酸エステル（クレモホール（登録商標）ＥＬ）がより好ましい。
【００８６】
上述の脂質フィルム(II)と、ポリオキシエチレンエステル化合物とを接触させた後に、斯かる接触物を公知のリポソーム形成処理に供することによって、難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造することができる。
【００８７】
具体的なリポソーム形成処理の方法は、特に限定はされないが、例えば、薄層水和法、超音波処理法、エクストルーダー処理法などの方法を挙げることができる。また、リポソーム形成処理に供した後に、これをメンブレンフィルターを用いた限外濾過法に供することもできる。
【００８８】
なお、上記の水系溶剤には、水に加えてさらに低級アルコールを含む態様とすることができる。低級アルコールは、特に限定はされず、例えば、炭素数が１〜４のアルコールを挙げることができる。
【００８９】
そして、上記の水系溶剤には、水および／または低級アルコールに加えて、さらに緩衝液を含む態様とすることもできる。緩衝液は、特に限定されず、例えば、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳなどを挙げることができる。これらの中でも、ＰＢＳが好ましい。
【００９０】
上述の水系溶剤における、ポリオキシエチレンエステル化合物の使用量は、特に限定はされないが、通常は溶剤１００容量部に対して、１０〜３０容量部、好ましくは１５〜２５容量部、更に好ましくは１７〜２３容量部、最も好ましくは１８〜２２容量部である。
【００９１】
なお、容量部とは常圧および室温（１５〜４０℃程度）の環境下で測定される数値である。
【００９２】
本発明の難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造する方法(III)によって得られるリポソームの粒子径の測定値は、特に限定はされず、通常は、２００ｎｍ程度以下とすることができる。
【００９３】
また、本発明の難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造する方法(III)によって得られるリポソームのゼータ電位の測定値も、特に限定はされない。通常は、−１０ｍＶ程度のアニオン性リポソームとすることができる。
【００９４】
本発明の難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造する方法(III)の一態様として、上述の方法にて形成させたリポソームに対して、さらにガン細胞を認識する抗体を担持させる工程を含む方法を挙げることができる。すなわち、本発明の製造方法によって製造される難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームは、ガン細胞を認識する抗体を担持するリポソームとすることができる。
【００９５】
ガン細胞を認識する抗体は特に限定はされない。例えば、イムノグロブリンとすることもでき、Ｆａｂなどの抗体断片とすることもできる。これらの抗体のなかでもイムノグロブリンとすることが好ましく、ＩｇＧとすることが好ましい。
【００９６】
ガン細胞を認識する抗体を担持させる方法は特に限定はされない。例えば、リンカーを用いて、化学的な修飾が施されてなるものとすることができる。
【００９７】
上記のガン細胞とは特に限定されない。例えば、肺ガン細胞、非小細胞肺ガン、乳ガン細胞、食道ガン、胃ガン細胞、肝臓ガン細胞、膵臓ガン細胞、大腸ガン細胞、卵巣ガン、子宮頸ガン細胞、子宮体ガン細胞、前立腺ガン細胞、頭頸部ガン細胞（口腔ガン細胞、咽頭ガン細胞、喉頭ガン細胞、鼻腔、若しくは副鼻腔ガン細胞、唾液腺ガン細胞、および甲状腺ガン細胞等を含む）などを挙げることができる。
【００９８】
なかでも、パクリタキセルの臨床的な適用知見に基づいて、非小細胞肺ガン細胞、乳ガン細胞、食道ガン細胞、胃ガン細胞、子宮体ガン細胞、卵巣ガン細胞、および前立腺ガン細胞などが好ましい。
【００９９】
上述のガン細胞を認識する抗体として、ガン細胞の表層に存在するタンパク質（例えば、ＣＤ４４、ＣＤ１３３等のようなＣＤタンパク質群を形成するＣＤタンパク質；成長因子、若しくはホルモンに対するレセプター；膜貫通、若しくは膜結合ドメインを有するタンパク質等。）、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を特異的に認識する抗体を挙げることができる。このような抗体は、特に限定されるものではなく、それぞれのガン細胞の表層に存在することが公知となっている抗体を適宜選択することができる。
【０１００】
乳ガン細胞を認識する抗体として、例えば、乳ガンに罹患する患者から採取した乳ガン細胞、具体的には、乳ガン組織由来細胞であるＨｓ２７４．Ｔ細胞、Ｈｓ２８０．Ｔ細胞、Ｈｓ２８１．Ｔ細胞、Ｈｓ３４３．Ｔ細胞、Ｈｓ３６２．Ｔ細胞、Ｈｓ７３９．Ｔ細胞、Ｈｓ７４１．Ｔ細胞、Ｈｓ７４２．Ｔ細胞、Ｈｓ１９０．Ｔ細胞、Ｈｓ３１９．Ｔ細胞、Ｈｓ３２９．Ｔ細胞、Ｈｓ３４４．Ｔ細胞、Ｈｓ３５０．Ｔ細胞、Ｈｓ３７１．Ｔ細胞、Ｈｓ７４８．Ｔ細胞、Ｈｓ８４１．Ｔ細胞、Ｈｓ８４９．Ｔ細胞、Ｈｓ８５１．Ｔ細胞、Ｈｓ８６１．Ｔ細胞、Ｈｓ９０５．Ｔ細胞、Ｈｓ４７９．Ｔ細胞、Ｈｓ５４０．Ｔ細胞、Ｈｓ５６６(Ｂ)．Ｔ細胞、Ｈｓ６０５．Ｔ細胞、Ｈｓ６０６細胞、ＢＴ−２０細胞、ＵＡＣＣ−８１２細胞、ＨＣＣ１９５４細胞、Ｈｓ５７４．Ｔ細胞、ＢＴ−４８３細胞、ＢＴ−５４９細胞、ＤＵ４４７５細胞、Ｈｓ５７８Ｔ細胞、ＢＴ−４７４細胞、ＵＡＣＣ−８９３細胞、ＨＣＣ３８細胞、ＨＣＣ７０細胞、ＨＣＣ２０２細胞、ＨＣＣ１１４３細胞、ＨＣＣ１１８７細胞、ＨＣＣ１３９５細胞、ＨＣＣ１４１９細胞、ＨＣＣ１５００細胞、ＨＣＣ１５９９細胞、ＨＣＣ１９３７細胞、ＨＣＣ２１５７細胞、ＨＣＣ２２１８細胞、ＨＣＣ１５６９細胞、ＭＢ１５７細胞、ＳＫ−ＢＲ３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−３３０細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−１５７細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−１３４細胞、Ｔ−４７Ｄ細胞、ＺＲ−７５細胞、またはＭＣＦ−７細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１０１】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体（抗ＥｒｂＢ２抗体）、または抗ＣＥＡ抗体などを挙げることができる。
【０１０２】
肺ガン細胞を認識する抗体として、例えば、肺ガンに罹患する患者から採取した肺ガン細胞、具体的には、肺ガン組織由来細胞であるＨｓ２２９．Ｔ細胞、ＮＣＩ−Ｈ２０６６細胞、ＮＣＩ−Ｈ２２８６細胞、ＮＣＩ−Ｈ１７０３細胞、Ｈｓ５７３．Ｔ細胞、Ａ５４９細胞、Ａ４２７細胞、Ｎ４１７細胞、ＮＣＩ−Ｈ５９６細胞、ＳＷ１５７３細胞、ＮＣＩ−Ｈ８３５Ｕ細胞、ＭＣ１１細胞、ＮＣＩ−Ｈ７２７細胞、ＮＣＩ−Ｈ７２０細胞、ＮＣＩ−Ｈ８１０細胞、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞、ＮＣＩ−Ｈ２１２６細胞、Ｈ６９細胞、ＮＣＩ−Ｈ１６８８細胞、ＮＣＩ−Ｈ１４１７細胞、ＮＣＩ−Ｈ１６７２細胞、ＮＣＩ−Ｈ１８３６細胞、ＤＭＳ７９細胞、ＤＭＳ５３細胞、ＤＭＳ１１４細胞、ＳＷ１２７１細胞、ＮＣＩ−Ｈ２２２７細胞、ＮＣＩ−Ｈ１９６３細胞、ＳＨＰ−７７細胞、Ｈ６９細胞、Ｈ６９ＡＲ細胞、ＮＣＩ−Ｈ２１７０細胞、ＮＣＩ−Ｈ５２０細胞、またはＳＷ９００細胞などの細胞表層に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、または抗ＣＥＡ抗体などを挙げることができる。
【０１０３】
非小細胞肺ガン細胞を認識する抗体として、例えば、非小細胞肺ガンに罹患する患者から採取した非小細胞肺ガン細胞、具体的には、非小細胞肺ガン組織由来細胞であるＮＣＩ−Ｈ２３細胞、ＮＣＩ−Ｈ５２２細胞、ＮＣＩ−Ｈ１４３５細胞、ＮＣＩ−Ｈ１５６３細胞、ＮＣＩ−Ｈ１６５１細胞、ＮＣＩ−Ｈ１７３４細胞、ＮＣＩ−Ｈ１７９３細胞、ＮＣＩ−Ｈ１８３８細胞、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞、ＮＣＩ−Ｈ２０７３細胞、ＮＣＩ−Ｈ２０８５細胞、ＮＣＩ−Ｈ２２２８細胞、ＮＣＩ−Ｈ２３４２細胞、ＮＣＩ−Ｈ２３４７細胞、ＮＣＩ−Ｈ２１３５細胞、ＮＣＩ−Ｈ２１７２細胞、またはＮＣＩ−Ｈ２４４４細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１０４】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、または抗ＥＧＦＲ抗体などを挙げることができる。
【０１０５】
食道ガン細胞を認識する抗体として、例えば、食道ガンに罹患する患者から採取した食道ガン細胞、具体的には、食道ガン組織由来細胞であるＳＧＦ−３細胞、ＥＣ−ＹＯ細胞、ＴＥ−１細胞、ＴＥ−２細胞、ＴＥ−３細胞、ＴＥ−４細胞、ＴＥ−５細胞、ＴＥ−６細胞、ＴＥ−７細胞、ＴＥ−８細胞、ＴＥ−９細胞、ＴＥ−１０細胞、ＴＥ−１１細胞、ＴＥ−１２細胞、ＴＥ−１３細胞、ＴＥ−１４細胞、またはＴＥ−１５細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１０６】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、または抗ＥＧＦＲ抗体などを挙げることができる。
【０１０７】
胃ガン細胞を認識する抗体として、例えば、胃ガンに罹患する患者から採取した胃ガン細胞、具体的には、胃ガン組織由来細胞であるＡＺ５２１細胞、ＡＧＳ細胞、ＳＮＵ−１細胞、ＳＮＵ−５細胞、ＳＮＵ−１６細胞、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞、Ｈｓ７４６Ｔ細胞、またはＫＡＴＯ  ＩＩＩ細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１０８】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＥＡ抗体、または抗ＳＬＸ抗体などを挙げることができる。
【０１０９】
肝臓ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、肝臓ガンに罹患する患者から採取した肝臓ガン細胞、具体的には、肝臓ガン組織由来細胞であるＨｅｐＧ２細胞、Ｈｕｈ−７細胞、Ｃ３Ａ細胞、ＳＮＵ−３９８細胞、ＳＮＵ−４４９細胞、ＳＮＵ−１８２細胞、ＳＮＵ−４７５細胞、Ｈｅｐ３Ｂ２．１−７細胞、ＰＬＨＣ−１細胞、ＳＮＵ−３８７細胞、ＳＮＵ−４２３細胞、またはＳＫ−ＨＥＰ−１などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１１０】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体などを挙げることができる。
【０１１１】
膵臓ガン細胞を認識する抗体として、例えば、膵臓ガンに罹患する患者から採取した膵臓ガン細胞、具体的には、膵臓ガン組織由来細胞であるＭＩＡＰａＣａ−２細胞、ＢｘＰＣ−３細胞、ＨＰＡＦ−ＩＩ細胞、ＨＰＡＣ細胞、Ｐａｎｃ０３．２７細胞、Ｐａｎｃ０８．１３細胞、Ｐａｎｃ０２．０３細胞、Ｐａｎｃ０２．１３細胞、Ｐａｎｃ０４．０３細胞、Ｐａｎｃ０５．０４細胞、Ｃａｐａｎ−２細胞、ＣＦＰＡＣ−１細胞、ＰＬ４５細胞、Ｐａｎｃ１０．０５細胞、ＰＡＮＣ−１細胞、ＡｓＰＣ−１細胞、Ｃａｐａｎ−１細胞、ＳＷ１９９０細胞、Ｈｓ７６６Ｔ細胞、またはＳＵ．８６．８６細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１１２】
このような抗体として、具体的には、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＥＡ抗体、または抗ＳＬＸ抗体などを挙げることができる。
【０１１３】
大腸ガン細胞を認識する抗体として、例えば、大腸ガンに罹患する患者から採取した大腸ガン細胞、具体的には、大腸ガン組織由来細胞であるＷｉＤｒ細胞、Ｃａｃｏ−２細胞、ＮＣＩ−Ｈ５４８細胞、Ｈｓ２５５．Ｔ細胞、ＴＡＣ−１細胞、ＣＯＬＯ３２０ＤＭ細胞、ＣＯＬＯ３２０ＨＳＲ細胞、ＤＬＤ−１細胞、ＨＣＴ−１５細胞、ＳＷ４８０細胞、ＳＷ４０３細胞、ＳＷ４８細胞、ＳＷ１１１６細胞、ＳＷ９４８細胞、ＳＷ１４１７細胞、ＬＳ１２３細胞、ＬＳ180細胞、ＬＳ１７４Ｔ細胞、Ｃ２ＢＢｅ１細胞、Ｈｓ２５７．Ｔ細胞、Ｈｓ５８７．Ｉｎｔ細胞、ＨＴ−２９細胞、ＨＣＴ−８細胞、Ｈｓ６７５．Ｔ細胞、ＨＣＴ１１６細胞、ＡＴＲＦＬＯＸ細胞、Ｈｓ６９８．Ｔ細胞、ＳＷ６２６細胞、ＳＮＵ−Ｃ１細胞、ＣＯＬＯ２０５細胞、ＣＯＬＯ２０１細胞、ＳＷ６２０細胞、ＬｏＶｏ細胞、ＳＫ−ＣＯ−１細胞、およびＴ８４細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１１４】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、または抗ＣＥＡ抗体などを挙げることができる。
【０１１５】
卵巣ガンを認識する抗体としては、例えば、卵巣ガンに罹患する患者から採取した卵巣ガン細胞、具体的には、卵巣ガン組織由来細胞であるＰＡ−１細胞、Ｃａｏｖ−３細胞、ＴＯＶ−２１Ｇ細胞、ＴＯＶ−１１２Ｄ細胞、Ｈｓ３８．Ｔ細胞、Ｈｓ５７１．Ｔ細胞、ＥＳ−２細胞、ＴＥ８４．Ｔ細胞、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞、ＳＫ−ＯＶ−３細胞、Ｃａｏｖ−４細胞、またはＯＶ−９０細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１１６】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体などを挙げることができる。
【０１１７】
子宮頸ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、子宮頸ガンに罹患する患者から採取した子宮頸ガン細胞、具体的には、子宮頚ガン組織由来細胞であるＨｅＬａ細胞、ＨｅＬａ２２９細胞、ＨｅＬａＳ３細胞、Ｈ１ＨｅＬａ細胞、Ｈｓ５８８．Ｔ細胞、ＧＨ３２９細胞、ＧＨ３５４細胞、ＨｅＬａＮＲ１細胞、Ｃ−４Ｉ細胞、Ｃ−４ＩＩ細胞、ＤｏＴｃ２  ４５１０細胞、Ｃ−３３Ａ細胞、ＳＷ７５６細胞、ＳｉＨａ細胞、ＨＴ−３細胞、ＭＳ７５１細胞、ＣａＳｋｉ細胞、ＭＥ−１８０細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１１８】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体などを挙げることができる。
【０１１９】
子宮体ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、子宮体ガンに罹患する患者から採取した子宮体ガン細胞、具体的には、子宮体ガン組織由来細胞であるＨＨＵＡ細胞、ＫＬＥ細胞、ＨＥＣ−１−Ａ細胞、ＨＥＣ−１−Ｂ細胞、ＨＥＣ−６細胞、ＨＥＣ−５０細胞、ＨＥＣ−５９細胞、ＨＥＣ−１０８細胞、ＨＥＣ−１１６細胞、ＲＬ９５−２細胞、ＳＫ−ＵＴ−１細胞、ＳＫ−ＵＴ−１Ｂ細胞、ＭＥＳ−ＳＡ細胞、ＭＥＳ−ＳＡ／Ｄｘ５細胞、ＭＥＳ−ＳＡ／ＭＸ２細胞、ＡＮ３ＣＡ細胞、ＳＮＧ−Ｐ細胞、ＳＮＧ−Ｍ細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などに代表される各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２０】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＥＡ抗体などを挙げることができる。
【０１２１】
前立腺ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、前立腺ガンに罹患する患者から採取した前立腺ガン細胞、具体的には、前立腺ガン組織由来細胞であるＬＮＣａＰ細胞、２２Ｒｖ１細胞、ＰＣ−３細胞、ＭＤＡ  ＰＣａ  ２ｂ細胞、ＴＲＡＭＰ−Ｃ３細胞、ＤＵ１４５細胞、ＮＣＩ−Ｈ６６０細胞、ＴＳＵ−ＰＲ１ＰＣ−８２細胞、ＰＰＣ−１細胞、ＶＣＲＵ−Ｐｒ−２細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２２】
このような抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体を挙げることができる。
【０１２３】
頭頚部ガン細胞の一種である口腔ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、口腔ガンに罹患する患者から採取した口腔ガン細胞、具体的には、口腔ガン組織由来細胞であるＨｓ５３．Ｔ細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２４】
頭頚部ガン細胞の一種である咽頭ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、咽頭ガンに罹患する患者から採取した咽頭ガン細胞、具体的には、咽頭ガン組織由来細胞であるＣ６６６−１細胞、ＮＰＣ−ＴＹ８６１細胞、ＭＰＣ−Ｙ８５１細胞、ＭＰＣ−Ｋ８５２細胞、ＫＫＫ−ＹＴ細胞、ＭＰＣ−ＳＴ細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２５】
頭頚部ガン細胞の一種である喉頭ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、喉頭ガンに罹患する患者から採取した喉頭ガン細胞、具体的には、喉頭ガン組織由来細胞であるＦａＤｕ細胞、Ｈｓ８４０．Ｔ細胞、Ｄｅｔｒｏｉｔ  ５６２細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２６】
頭頚部ガン細胞の一種である鼻腔または副鼻腔ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、それぞれ鼻腔または副鼻腔ガンに罹患する患者から採取した鼻腔または副鼻腔ガン細胞、具体的には、鼻腔腔ガン組織由来細胞または副鼻腔ガン組織由来細胞であるＲＰＭＩ２６５０細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２７】
頭頚部ガン細胞の一種である唾液腺ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、唾液腺ガンに罹患する患者から採取した唾液腺ガン細胞、具体的には、唾液腺ガン組織由来細胞であるＳＧＴ−１細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２８】
頭頚部ガン細胞の一種である甲状腺ガン細胞を認識する抗体としては、例えば、甲状腺ガンに罹患する患者から採取した甲状腺ガン細胞、具体的には、甲状腺ガン組織由来細胞であるＨＴＣ／Ｃ３細胞、ＳＷ５７９細胞、ＴＴ細胞などの細胞表面に存在するタンパク質、ペプチド、糖鎖、および脂質などの各種生体分子を認識する抗体を挙げることができる。
【０１２９】
これらの頭頚部ガン細胞を認識する抗体として、具体的には、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体などを挙げることができる。
【０１３０】
このような本発明のリポソームに対してガン細胞を認識する抗体を担持する方法は特に限定はされない。例えば、特許文献１に記載の方法を挙げることができる。
【０１３１】
IV. リポソーム製剤
本発明のリポソーム製剤とは、上記の難水溶性薬理活性物質を内包するリポソームを製造する方法(III)によって得られるリポソームを含むものである。
【０１３２】
すなわち、本発明のリポソーム製剤とは、フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および難水溶性薬理活性物質ならびにポリオキシエチレンエステル化合物を内包するリポソーム、および薬学的に許容される担体ならびに添加剤を含むリポソーム製剤であって、前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．００１〜５である、リポソーム製剤である。
【０１３３】
このようなリポソーム製剤は、これに内包される難水溶性薬理活性物質が治療効果を発揮する各種疾患に基づいた疾患の予防または治療のために用いることができる。
【０１３４】
例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、またはこれらの配糖体などに代表されるタキサン系化合物をリポソーム製剤に内包される難水溶性薬理活性物質とした場合、上記のリポソームを含むリポソーム製剤は、ガン、アルツハイマー、アトピー性皮膚炎、潰瘍性大腸炎、リウマチ性関節炎（自己免疫性疾患）、ピロリ箘性胃炎、ウイルス性肝炎、（感染性炎症）などの予防または治療のために用いることができる。また、解熱、鎮痛、鎮咳、細菌、免疫抑制、抗寄生虫などの効果を発揮する目的に用いることができる。
【０１３５】
例えば、バフィロマイシン、バフィロマイシン、コンカナマイシン、アジスロマイシン、およびクラリスロマイシンなどに代表されるマクロライド化合物をリポソーム製剤に内包される難水溶性薬理活性物質とした場合、上記のリポソームを含むリポソーム製剤は、ガン、アルツハイマー、アトピー性皮膚炎、潰瘍性大腸炎、リウマチ性関節炎（自己免疫性疾患）、ピロリ箘性胃炎、ウイルス性肝炎（感染性炎症）などの予防または治療のために用いることができる。また、解熱、鎮痛、鎮咳、細菌、免疫抑制、抗寄生虫などの効果を発揮する目的に用いることができる。
【０１３６】
例えば、カンプトテシン、イリノテカンなどに代表されるキノリンアルカロイド化合物をリポソーム製剤に内包される難水溶性薬理活性物質とした場合、上記のリポソームを含むリポソーム製剤は、ガン、アルツハイマー、アトピー性皮膚炎、潰瘍性大腸炎、リウマチ性関節炎（自己免疫性疾患）、ピロリ箘性胃炎、ウイルス性肝炎、（感染性炎症）などの予防または治療のために用いることができる。また、解熱、鎮痛、鎮咳、細菌、免疫抑制、抗寄生虫などの効果を発揮する目的に用いることができる。
【０１３７】
例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンなどビンカアルカロイド化合物をリポソーム製剤に内包される難水溶性薬理活性物質とした場合、上記のリポソームを含むリポソーム製剤は、ガン、アルツハイマー、アトピー性皮膚炎、潰瘍性大腸炎、リウマチ性関節炎（自己免疫性疾患）、ピロリ箘性胃炎、ウイルス性肝炎、（感染性炎症）などの予防または治療のために用いることができる。また、解熱、鎮痛、鎮咳、細菌、免疫抑制、抗寄生虫などの効果を発揮する目的に用いることができる。
【０１３８】
上記のガンとは特に限定はされない。例えば、肺ガン細胞、非小細胞肺ガン、乳ガン細胞、食道ガン、胃ガン細胞、肝臓ガン細胞、膵臓ガン細胞、大腸ガン細胞、卵巣ガン、子宮頸ガン細胞、子宮体ガン細胞、前立腺ガン細胞、頭頸部ガン細胞（口腔ガン細胞、咽頭ガン細胞、喉頭ガン細胞、鼻腔、若しくは副鼻腔ガン細胞、唾液腺ガン細胞、および甲状腺ガン細胞等を含む）などを挙げるができる。
【０１３９】
本発明のリポソーム製剤とは、例えば、上記に挙げた各種疾患に罹患する患者に対して投与することができる。具体的な投与経路は、特に限定はされない。例えば、点滴などの静脈内注射（静注）、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などを選択することができ、患者の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができる。
【０１４０】
リポソーム製剤の具体的な投与方法としては、医薬組成物をシリンジや点滴を用いて投与することができる。また、カテーテルを上記の患者の体内、例えば管腔内、血管内などに挿入して、その先端を標的部位付近に導き、当該カテーテルを通して、所望の標的部位またはその近傍あるいは標的部位への血流が期待される部位から投与することも可能である。
【０１４１】
本発明のリポソーム製剤は、上記に挙げた各種疾患に罹患する患者に対して、その疾患の症状を治癒するか、または少なくとも部分的に阻止するために十分な量で投与される。
【０１４２】
具体的なリポソーム製剤に封入される薬物の有効投与量は、特に限定はされない。例えば、リポソーム製剤に内包される難水溶性薬理活性物質の量に換算して、通常は０.０１〜５０ｍｇ／ｋｇ程度の範囲とすることができる。
【０１４３】
本発明のリポソーム製剤には、薬学的に許容される担体および添加剤が含まれていてもよい。これらの、薬学的に許容される担体および添加剤とは、特に限定はされず、当該分野で従来公知のものを広く使用することができる。
【０１４４】
以下に、本発明をより詳細に説明するための実施例を示す。なお、本発明は以下に示す実施例に限定されないのは言うまでもない。
【０１４５】
＜製造例１＞
ＰＴＸ、ｇＰＴＸ、またはＤＴＸを内包するリポソーム
ＰＴＸ（パクリタキセル）、ｇＰＴＸ（７−グルコシルオキシアセチルパクリタキセル）、またはＤＴＸ（ドセタキセル）を内包するリポソームを薄層水和法により調製した。
【０１４６】
９．６ｍｇの水素添加大豆レシチン（ＨＳＰＣ）、３．２ｍｇのコレステロール（Ｃｈｏｌ）、３．２ｍｇの１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール−３ーホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）およびタキサン化合物（ＰＴＸ、ｇＰＴＸ、またはＤＴＸ）を秤量し、ＨＳＰＣ：Ｃｈｏｌ：ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ：タキサン化合物＝６：４：０．５：Ｘのモル比となるようにでナス型フラスコへ加えた。
【０１４７】
具体的に、ＰＴＸは０．９、１．８、または３．５ｍｇ（ｘ＝０．５〜２）、ｇＰＴＸは２．２、４．４、または６．６ｍｇ（ｘ＝１〜３）、そしてＤＴＸは１．７、３．３または５．０ｍｇ（ｘ＝１〜３）を秤量し、これらをナス型フラスコに加えた。
【０１４８】
そのナス型フラスコへ、４ｍＬの有機溶媒（クロロホルム：メタノール＝９：１）を加え、混合した脂質をよく溶解させた。その後、混合脂質をロータリーエバポレーターにより真空乾燥させて有機溶媒を完全に除去し、タキサン化合物を内包する脂質フィルムを形成させた。
【０１４９】
このように作成した脂質フィルムに１ｍＬのＣＥＰ（クレモホールＥＬ：エタノール：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）＝２０：１５：６５〔体積比〕）を加え、６０℃に加温しながら懸濁し、リポソームを形成させた。粒径を調節するため、６０℃での加温下で、ソニケーション処理を行った。その後、１００ＫＤａの膜フィルターを用いた限外濾過法により、未内包の薬剤を取り除くためにリポソーム外液をＰＢＳに置換した。
【０１５０】
このように調製したリポソームの粒径とゼータ電位をＥＬＳ−８０００（大塚電子社製）を用いて動的散乱光法と電気泳動散乱光法により測定した。また、リポソーム内の薬剤濃度を逆相ＨＰＬＣにより測定し、内包効率および担持率を求めた。
【０１５１】
リポソームに内包させた薬剤濃度は逆相高速液体クロマトグラフィー（逆相ＨＰＬＣ）により求めた。測定条件は以下のように設定した。ＨＰＬＣカラムとしてＷＰ３００  Ｃ１８．５μｍ  ４．６×１５０ｍｍを用いた。検出波長としてはＰＴＸおよびｇＰＴＸに対して２２７ｎｍ、またＤＴＸに対して検出波長２２９ｎｍを選択し、移動相としてメタノール：超純水＝７：３の溶媒を使用した。具体的には１０μＬのリポソームサンプルをＨＰＬＣカラムにインジェクションし、１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速の移動相で送液した。
【０１５２】
得られた薬剤含有量から以下の式（１）及び（２）を用いて内包効率および担持率を算出した。
【０１５３】
内包効率（ＥＥ：％）＝薬剤含有量／初期使用薬剤量×１００  （１）
担持率（ＬＥ：％）＝（薬剤含有量／薬剤モル重量）／初期脂質モル数×１００  （２）
【０１５４】
＜製造例２＞
バフィロマイシンＡ１（ＢａｆＡ１）を内包するリポソーム
ＢａｆＡ１を内包するリポソームを薄層水和法により調製した。９．６ｍｇのＨＳＰＣ、３．２ｍｇのＣｈｏｌ、３．２ｍｇのｍＰＥＧ−ＤＳＰＥおよびＢａｆＡ１を秤量し、ＨＳＰＣ：Ｃｈｏｌ：ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ＝６：４：０．５：ｘのモル比で、これらをナス型フラスコへ加えた。
【０１５５】
ＢａｆＡ１は１４５μｇもしくは２９０μｇ（ｘ＝０．１もしくは０．２）を秤量し、これに加えた。
【０１５６】
そのナス型フラスコへ４ｍＬの有機溶媒（クロロホルム：メタノール＝９：１）を加え、混合した脂質をよく溶解させた。その後、混合脂質をロータリーエバポレーターにより真空乾燥させて有機溶媒を完全に除去し、ＢａｆＡ１を内包する脂質フィルムを形成させた。
【０１５７】
このようにして作成したＢａｆＡ１を内包する脂質フィルムを用いたリポソーム形成処理および物性評価は、上記のタキサン化合物を内包するリポソームの調製と同様に行った。
【０１５８】
リポソームに内包させたＢａｆＡ１の濃度は、以下の測定条件で逆相ＨＰＬＣにより求めた。ＨＰＬＣカラムとしてＷＰ３００  Ｃ１８．５μｍ  ４．６×１５０ｍｍを用いた。、検出波長としては２４５ｎｍを選択し、移動相としてメタノール：超純水＝８：３の溶媒を使用した。具体的には１０μＬのサンプルをＨＰＬＣカラムにインジェクションし、１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速の移動相で送液した。
【０１５９】
内包効率および担持率を上記の式（１）および式（２）により算出した。
【０１６０】
＜実施例１＞
４℃におけるリポソーム安定性試験
上記のタキサン化合物を内包するリポソームを調製後に、これらを４℃にて静置した。２週間後および４週間後に、１００ＫＤａの膜フィルターを用いた限外濾過法により、リポソーム外液中に漏れ出した薬剤を取り除いた。その後、リポソームの粒径を動的散乱光法により測定し、また、リポソーム溶液中の薬剤濃度を逆相ＨＰＬＣにより求めた。得られた薬剤量から以下の式（３）を用いて保持率を求めた。
保持率（％）＝内包薬剤含有量／初期内包薬剤量×１００  （３）
【０１６１】
＜実施例２＞
細胞毒性評価
ＰＴＸ、ｇＰＴＸ、またはＤＴＸの各薬剤を内包するリポソームの細胞毒性をＭＴＴアッセイ法により評価した。試験対象細胞に、ヒト大腸がん由来細胞株であるＨＴ−２９細胞、ヒト卵巣がん由来細胞であるＳＫ−ＯＶ−３細胞およびヒト乳がん由来細胞株であるＳＫ−ＢＲ−３細胞を用いた。がん細胞を９６ウェルプレートに５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種した。
【０１６２】
２４時間培養後、異なる濃度の薬剤を各ウェルへ加えた。７２時間の薬剤暴露後、ＭＴＴ溶液を終濃度０．５ｍｇ／ｍＬで加え、４時間培養した。その後、生成されたホルマザンをホルマザン溶解液（１０％ＳＤＳ＋０．０２規定のＨＣｌ）により溶解させた。各ウェルの４７０ｎｍの細胞生存率曲線より５０％細胞致死濃度（ＩＣ５０）を算出した。
【０１６３】
なお、ＢａｆＡ１およびＢａｆＡ１を内包するリポソームの細胞毒性は、以下の手段のＭＴＴアッセイ法により評価した。試験対象細胞に、ヒト大腸がん由来細胞株であるＨＴ−２９細胞およびヒト乳がん由来細胞株であるＭＣＦ７を用いた。がん細胞を９６ウェルプレートに５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種した。２４時間培養後、異なる濃度の薬剤を各ウェルへ加えた。４８時間の薬剤暴露後、ＭＴＴ溶液を終濃度０．８ｍｇ／ｍＬで加え、２時間培養した。その後、生成されたホルマザンをホルマザン溶解液（１０％ＳＤＳ＋０．０２規定のＨＣｌ）により溶解させた。各ウェルの４７０ｎｍの細胞生存率曲線より５０％細胞致死濃度（ＩＣ５０）を算出した。
【０１６４】
＜比較例１＞
公知の脂質組成（非特許文献１）を用いたパクリタキセル内包リポソームの調製との比較
９．６ｍｇのＨＳＰＣ、３．２ｍｇのＣｈｏｌ、３．２ｍｇのｍＰＥＧーＤＳＰＥおよび １．８ｍｇのＰＴＸ、もしくは、１４．５ｍｇのＨＳＰＣ、０．８ｍｇのＣｈｏｌ、２．８ｍｇのｍＰＥＧーＤＳＰＥおよび１．８ｍｇのＰＴＸを秤量し（９：１：０．５：１〔モル比〕)、これらをナス型フラスコへ加えた。そのナス型フラスコへ４ｍＬの有機溶媒（クロロホルム：メタノール＝９：１）を加え、混合した脂質をよく溶解させた。ロータリーエバポレーターにより真空乾燥させて真有機溶媒を完全に除去し、抗がん剤を含む脂質フィルムを形成させた。
【０１６５】
形成させた脂質フィルムを１ｍＬのＣＥＰ（クレモホールＥＬ：エタノール：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）=２０：１５：６５〔体積比〕）を加え、６０℃に加温しながら懸濁し、リポソームを形成させた。そして、形成させた多重膜リポソームの形成を顕微鏡下にて観察した。
【０１６６】
＜各種実験結果＞
図１および図２では、ＰＴＸ、ｇＰＴＸ、およびＤＴＸの各タキサン化合物の、リポソーム内への内包効率（ＥＥ：％）およびその担持率（ＬＥ：％）を測定した結果を示している。
【０１６７】
これによると、ＰＴＸではモル比が５モルおよび１０モルのときに、ｇＰＴＸではモル比が１０モルのときに、そしてＤＴＸではモル比が１０モルおよび２０モルのときに、内包効率が１００％近くなることを確認した。各薬剤の担持率については、モル比を多くすればするほど大きくなる傾向が見受けられた。
【０１６８】
図３および図４に示すタキサン化合物を内包させたリポソームの物性評価によると、粒子径、多分散指数、およびゼータ電位の全ての観点で、全てリポソーム製剤として用いることができることが示唆された。特に、粒子径が２００ｎｍ以下である点とゼータ電位が負側である点について、前者はＥＰＲ効果に適するサイズであり、後者は肝臓に認識されにくい点で有用である。
【０１６９】
次いで、図５および図６に示す保持率について、タキサン化合物を内包させたリポソームは、全てリポソーム製剤として有用であることが示唆された。また、著しい粒子径の変化も、４週間の４℃での保存期間中には見受けられなかった。
【０１７０】
図７および図８は、ＰＴＸ、ｇＰＴＸ、およびＤＴＸの各タキサン化合物を内包させたリポソームによるガン細胞への抗ガン活性評価を示している。これらの結果によると、何れのタキサン化合物を内包させたリポソームも、各種ガン細胞に対して好適な抗ガン活性を示すことが明らかとなった。特に、ＰＴＸについては、これをリポソーム内に内包させたほうが、より好適な抗ガン活性を発揮することが明らかとなった。
【０１７１】
図９および図１０には、バフィロマイシンを内包させたリポソームについて、各種タキサン化合物と同様に実験した結果を示している。図９に示すバフィロマイシンのリポソーム内への内包効率（ＥＥ：％）によると、タキサン化合物と同様に、モル比が１モルの場合にほぼ１００％の内包効率が達成されることが分かる。また、その担持率（ＬＥ：％）についても、モル比を多くすればするほど大きくなる傾向が見受けられた。また、粒子径及びゼータ電位についても、タキサン系薬剤と同様の傾向が確認された。
【０１７２】
また、図１０に関して、リポソームに内包させたＢａｆＡ１は、ＢａｆＡ１と同等かそれ以上の細胞毒性を発揮することが確認された。
【０１７３】
図１１について、公知の脂質組成を有するパクリタキセルを包含する脂質フィルムを作成し、これを基にリポソームを作製したとしても（図１１（Ｂ）参照。）、図１１のＡに示すようなリポソーム膜を形成することは無かった。このような針状の構造は明らかではないが、パクリタキセルの凝集物と考えられる。
【０１７４】
＜実施例３＞
リポソームの生存試験
上記のリポソームをリポソーム製剤としたときの安全性を確認するために、これを生存試験に供した。
【０１７５】
ＳＰＦ／ＶＡＦマウス（系統名：ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒ１Ｃｒ１ｊ；日本チャールズリバー社）を用いた。メス、６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを各群４匹に分けた。マウスは２３℃環境化で飼育し、滅菌した水および食物を与えた。
【０１７６】
生理食塩水に溶解した上記のドセタキセルリポソーム（ＤＴＸ−Ｌ）のうち、リポソーム全体に対するドセタキセルの含有モル量（ｘ）が２の場合に得られたＤＴＸ−Ｌを、ドセタキセルの含有量に換算して、それぞれ１０、５０、１００もしくは１５０ｍｇ／ｋｇの投与量で上記のマウスに尾静脈より投与した。また、ＰＢＳをコントロールとして同様に投与した。結果を図１２に示す。
【０１７７】
ドセタキセルの量に換算して１５０ｍｇ／ｋｇのＤＴＸ−Ｌを添加した際には、投与後１日での生存率が２５％となり、２日目には０％になった。また、ドセタキセルの量に換算して１００ｍｇ／ｋｇのＤＴＸ−Ｌを添加した際には、投与後１日での生存率が７５％に下がり、その後１５日目まで変化はなかった。
【０１７８】
よって、上記のＤＴＸ−Ｌの投与量は５０ｍｇ／ｋｇ程度を上限とすることができることが示唆された。上記のＤＴＸ−Ｌは少なく見積もっても約９５％の封入率でドセタキセルを内包しているので、この上限値を体重６６ｋｇのヒトに換算すると、おおよそ３ｇ以上の投与が可能となる。この数値は、現在ドセタキセルの投与量として認められている数値と比較して、遥かに多い量であることが明らかである。
【図１】
2017061562.tif 000003
【図２】
2017061562.tif 000004
【図３】
2017061562.tif 000005
【図４】
2017061562.tif 000006
【図５】
2017061562.tif 000007
【図６】
2017061562.tif 000008
【図７】
2017061562.tif 000009
【図８】
2017061562.tif 000010
【図９】
2017061562.tif 000011
【図１０】
2017061562.tif 000012
【図１１】
2017061562.tif 000013
【図１２】
2017061562.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成29年7月18日(2017.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセル或いはその配糖体、ドセタキセル又はバフィロマイシンを含む組成物であって、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセルのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．５〜２であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセル配糖体のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：１〜３であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびドセタキセルのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：１〜３であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびバフィロマイシンのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．１〜０．２
である、組成物。
【請求項２】
フォスファチジルコリン基を有する脂質が、水素添加大豆レシチン卵黄リン脂質、ジステアロイルフォスファチジルコリン、ジミリストイルフォスファチジルコリン、ジパルミトイルフォスファチジルコリンおよびジオレストイルフォスファチジルコリンからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
コレステロール化合物が、コレステロール、コレスタノール、７−デヒドロコレステロールおよびフィトステロールからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質が、ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルフォスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルフォスファチジルエタノールアミンおよびジオレオイルフォスファチジルエタノールアミンからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、コレステロール化合物、およびフォスファチジルコリン基を有する脂質のいずれかが、ポリアルキレングリコールで修飾されてなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
脂質フィルム形成用である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセル或いはその配糖体、ドセタキセル又はバフィロマイシンを含む脂質フィルムであって、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、および前記難水溶性薬理活性物質のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．５〜２であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセル体糖体のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：１〜３であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびドセタキセルのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：１〜３であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびバフィロマイシンのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．１〜０．２である、脂質フィルム。
【請求項１１】
水系溶剤中で、請求項１０に記載の脂質フィルムと、ポリオキシエチレンエステル化合物とを接触させる工程を含む、パクリタキセル或いはその配糖体、ドセタキセル又はバフィロマイシンを内包するリポソームの製造方法。
【請求項１２】
水系溶剤として、さらに低級アルコールを含む、請求項１１に記載の製造方法。
【請求項１３】
水系溶剤として、さらに緩衝液を含む、請求項１１または１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
さらに、ガン細胞を認識する抗体を担持させる工程を含む、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１５】
フォスファチジルコリン基を有する脂質、コレステロール化合物、フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、パクリタキセル或いはその配糖体、ドセタキセル又はバフィロマイシン、およびポリオキシエチレンエステル化合物を内包するリポソームを含むリポソーム製剤であって、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセルのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．５〜２であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびパクリタキセル体糖体のモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：１〜３であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびドセタキセルのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：１〜３であり、
前記フォスファチジルコリン基を有する脂質、前記コレステロール化合物、前記フォスファチジルエタノールアミン基を有する脂質、およびバフィロマイシンのモル比が、それぞれ３〜８：２〜７：０．１〜３：０．１〜０．２である、リポソーム製剤。
【国際調査報告】
2017061562.tif 000015
2017061562.tif 000016
2017061562.tif 000017
2017061562.tif 000018
2017061562.tif 000019
2017061562.tif 000020