(57)【要約】  式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩。（式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルコキシ基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基。Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基。Ｘは、水素原子、糖分子数１〜１０の直鎖状または分岐状の糖鎖。）［化１］2017051875.tif 000014
2017051875.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表わされる紫外線吸収能を有する化合物またはその塩。
【化１】
2017051875.tif 000012
（式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルコキシ基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基を表す。Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基を表す。Ｘは、水素原子、糖分子数１〜１０の直鎖状または分岐状の糖鎖を表す。）
【請求項２】
式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩が、式（ＩＩ）で表わされる化合物またはその塩である請求項１に記載の化合物またはその塩。
【化２】
2017051875.tif 000013
【請求項３】
式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２がメチル基であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｘが糖分子数５の直鎖状の糖鎖である請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物またはその塩の製造方法であり、
植物に生育する微生物を培養して菌体を得る工程と、
前記菌体を溶媒で抽出して抽出物を得る工程と、
前記抽出物から式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を回収する工程とを含む化合物またはその塩の製造方法。
【請求項５】
前記菌体が、メチロバクテリウム属である請求項４に記載の化合物またはその塩の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物またはその塩を含む皮膚外用剤。
【請求項７】
請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物またはその塩を含む化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線吸収能を有する化合物またはその塩、およびその製造方法、皮膚外用剤、化粧料に関する。
本出願は、２０１５年９月２４日に日本に出願された特願２０１５−１８７１８１に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
太陽光線に含まれる紫外線は、人間の皮膚などに様々な影響を及ぼす。具体的には、皮膚にシミ、シワを発生させて老化を促進する、アレルギー反応を引き起こす、発癌の原因となるなど、紫外線による様々な有害性が知られている。
太陽光線に含まれる紫外線は、波長３２０〜４００ｎｍの紫外線Ａ波（ＵＶＡ）、波長２８０〜３２０ｎｍの紫外線Ｂ波（ＵＶＢ）、波長２００〜２８０ｎｍの紫外線Ｃ波（ＵＶＣ）に大別される。【０００３】
従来、紫外線から人間の皮膚などを守るために、様々な紫外線吸収剤が利用されている。例えば、ＵＶＢ吸収能を有する紫外線吸収剤として、サリチル酸誘導体、ｐ−アミノ安息香酸、ベンゾフェノン誘導体等の化学的に合成されたものがある。また、ＵＶＡ吸収能を有する紫外線吸収剤として、アボベンゼン等の化学的に合成されたものがある。【０００４】
また、ＵＶＡ吸収能を有する紫外線吸収剤として、コショウ科の植物から抽出して得られるヤンゴニン（例えば、特許文献１参照。）、Ｇｒａｍｉｎｅａｅ科植物から得られる抽出物（例えば、特許文献２参照。）、ヒトおよび霊長類の眼球水晶体から抽出する２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシド（例えば、特許文献３参照。）が報告されている。【０００５】
海洋細菌が生産するＵＶＢ吸収能を有する紫外線吸収剤として、ぺラジオバクター属に属する微生物の培養物から採取した化合物（特許文献４）が知られている。また、海洋細菌が生産するＵＶＣ吸収能を有する紫外線吸収剤として、サーモアクチノマイセス属に属する微生物の培養物から採取した化合物（特許文献５）が知られている。【０００６】
また、特許文献６には、植物表面に生息する微生物に由来する紫外線吸収剤組成物であって、ＵＶＡ領域に紫外線吸収スペクトルの吸収ピークを有する紫外線吸収剤組成物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平９−６７２３８号公報
【特許文献２】特表２０１２−５１６３１１号公報
【特許文献３】特開平８−３１８３号公報
【特許文献４】特開２０００−０１６９７６号公報
【特許文献５】特開２００６−１６０６６２号公報
【特許文献６】特開２０１３−１２７０２７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＵＶＡは、ＵＶＢおよびＵＶＣよりも皮膚の深部に侵入して、皮膚の老化を促進することが広く知られている。このため、ＵＶＡから人間の皮膚などを守ることに対する社会の関心は高く、ＵＶＡ吸収能を有する紫外線吸収剤の需要は多い。
また、皮膚外用剤などの材料として用いる紫外線吸収剤は、水系溶媒に対する溶解性を有する化合物であることが望ましい。【０００９】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、ＵＶＡ吸収能および水系溶媒に対する溶解性を有する新規化合物およびその製造方法を提供することを課題とする。
また、本発明は、ＵＶＡ吸収能および水系溶媒に対する溶解性を有する新規化合物を含む皮膚外用剤、化粧料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討した。
その結果、本発明者らは、ＵＶＡ吸収能および水系溶媒に対する溶解性を有する新規化合物の同定および製造に成功し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の構成を採用する。【００１１】
［１］  式（Ｉ）で表わされる紫外線吸収能を有する化合物またはその塩。【００１２】
【化１】
2017051875.tif 000003
【００１３】
（式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルコキシ基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基を表す。Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基を表す。Ｘは、水素原子、糖分子数１〜１０の直鎖状または分岐状の糖鎖を表す。）【００１４】
［２］  式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩が、式（ＩＩ）で表わされる化合物またはその塩である［１］に記載の化合物またはその塩。【００１５】
【化２】
2017051875.tif 000004
【００１６】
［３］  式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２がメチル基であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｘが糖分子数５の直鎖状の糖鎖である［１］に記載の化合物またはその塩。【００１７】
［４］  ［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物またはその塩の製造方法であり、
植物に生育する微生物を培養して菌体を得る工程と、
前記菌体を溶媒で抽出して抽出物を得る工程と、
前記抽出物から式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を回収する工程とを含む化合物またはその塩の製造方法。【００１８】
［５］  前記菌体が、メチロバクテリウム属である［４］に記載の化合物またはその塩の製造方法。【００１９】
［６］  ［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物またはその塩を含む皮膚外用剤。
［７］  ［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物またはその塩を含む化粧料。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の化合物またはその塩は、紫外線吸収能および水系溶媒に対する溶解性を有する。特に、本発明の化合物またはその塩は、ＵＶＡ領域での紫外線吸収能に優れる。
また、本発明の化合物またはその塩は、水系溶媒に対する溶解性に優れるので、化粧料および皮膚外用剤の材料として用いる場合、水系溶媒を用いて容易に配合できる。
本発明の化粧料、皮膚外用剤は、本発明の化合物またはその塩を含むため、優れたＵＶＡ吸収能を有し、疎水性溶媒を使わずに製造できる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】実施例１で得られた粗精製物のＨＰＬＣ解析における紫外線吸収強度と溶出時間との関係を示したグラフである。
【図２】実施例１で得られた精製化合物の質量電荷比と検出感度（相対強度）との関係を示したグラフである。
【図３】実施例１で得られた精製化合物のＸ線結晶構造解析結果を示す図である。
【図４】実施例１で得られた精製化合物のＨＰＬＣ解析における紫外線吸収強度と溶出時間との関係を示したグラフである。
【図５】実施例２で得られた精製化合物の質量電荷比と検出感度（相対強度）との関係を示したグラフである。
【図６】実施例２で得られた精製化合物のＨＰＬＣ解析における紫外線吸収強度と溶出時間との関係を示したグラフである。
【図７】実施例３で得られた粗精製物の質量電荷比と検出感度（相対強度）との関係を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明について詳細に説明する。
「紫外線吸収能を有する化合物またはその塩」
本実施形態の化合物またはその塩は、下記式（Ｉ）で表わされる新規化合物またはその塩である。
【００２３】
【化３】
2017051875.tif 000005
【００２４】
（式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルコキシ基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基を表す。Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基を表す。Ｘは、水素原子、糖分子数１〜１０の直鎖状または分岐状の糖鎖を表す。）
【００２５】
式（Ｉ）において、Ｒ１は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルコキシ基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基であり、炭素数１〜５の直鎖状のアルキル基、メトキシ基、ビニル基であることが好ましく、炭素数１〜２のアルキル基であることがより好ましく、メチル基であることが最も好ましい。
【００２６】
Ｒ２は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルコキシ基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基であり、炭素数１〜５の直鎖状のアルキル基、メトキシ基であることが好ましく、炭素数１〜２のアルキル基であることがより好ましく、メチル基であることが最も好ましい。
なお、Ｒ２が炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基である場合、−ＣＨ２−Ｃ４Ｈ７基であると、紫外線吸収能に関係のある電子の共役に対する影響が少ないため好ましい。
【００２７】
Ｒ３は、水素原子、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルキル基、炭素数１〜５の直鎖状または分岐状のアルケニル基であり、水素原子または炭素数１〜２アルキル基であることが好ましく、水素原子またはメチル基であることがより好ましく、水素原子であることが最も好ましい。
【００２８】
式（Ｉ）において、Ｒ３が水素原子である場合、式（Ｉ）で表わされる化合物が有しているカルボキシル基は、塩を形成していてもよい。化合物の有しているカルボキシル基が塩を形成している場合、カルボン酸アルカリ金属塩またはカルボン酸アミン塩であることが好ましく、カルボン酸アルカリ金属塩であることがより好ましく、カルボン酸ナトリウム塩であることが最も好ましい。
【００２９】
Ｘは、水素原子、糖分子数１〜１０の直鎖状または分岐状の糖鎖であり、水素原子または糖分子数１〜１０の直鎖状の糖鎖であることが好ましく、水素原子または糖分子数３〜８の直鎖状の糖鎖であることがより好ましく、水素原子または糖分子数５の直鎖状の糖鎖であることがさらに好ましい。
【００３０】
式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩は、特に、Ｒ１およびＲ２がメチル基であり、Ｒ３およびＸが水素原子である式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩、またはＲ１およびＲ２がメチル基であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｘが糖分子数５の直鎖状の糖鎖である化合物またはその塩であることが好ましい。糖分子はピラノースでもフラノースでもよいが、ピラノースであることが好ましい。
【００３１】
【化４】
2017051875.tif 000006
【００３２】
Ｒ１およびＲ２がメチル基であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｘが糖分子数５の直鎖状の糖鎖である化合物またはその塩は、Ｘが互いに１，４−グリコシド結合した５つの六炭糖（ピラノース）からなる糖鎖である式（ＩＩＩ）で表される化合物またはその塩、Ｘが互いに１，６−グリコシド結合した５つの六炭糖（ピラノース）からなる糖鎖である式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩、式（Ｉ）におけるＸが５つの六炭糖（ピラノース）からなる直鎖状の糖鎖であって六炭糖同士が１，４−グリコシド結合している部分と１，６−グリコシド結合している部分とが混在している糖鎖である化合物またはその塩であることが好ましい。式（ＩＩＩ）で表される化合物またはその塩、式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩、式（Ｉ）におけるＸが５つの六炭糖（ピラノース）からなる直鎖状の糖鎖であって六炭糖同士が１，４−グリコシド結合している部分と１，６−グリコシド結合している部分とが混在している糖鎖である化合物またはその塩は、これらの中から選ばれる２種以上が任意の割合で混合された混合物として存在していてもよい。
【００３３】
【化５】
2017051875.tif 000007
【００３４】
【化６】
2017051875.tif 000008
【００３５】
式（ＩＩ）で表わされる化合物またはその塩は、式（Ｖ）で表わされる平衡状態の分子内塩として存在しているものであってもよい。より詳細には、式（Ｖ）では、式（ＩＩ）で表わされる化合物またはその塩における炭素原子と二重結合している窒素原子から別の窒素原子との間の構造（Ｎ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ）が、平衡状態（Ｎ＋＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ⇔Ｎ−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｎ＋）となっている。
【００３６】
【化７】
2017051875.tif 000009
【００３７】
式（Ｉ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）で表される化合物またはその塩においても、式中における（Ｎ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ）の部分が、平衡状態（Ｎ＋＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ⇔Ｎ−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｎ＋（式（Ｖ）参照））の分子内塩として存在していてもよい。
また、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩には、複数の立体異性体が存在する。式（Ｉ）で表される化合物またはその塩には、これらすべての立体異性体が包含される。
【００３８】
本実施形態の化合物またはその塩は、式（Ｉ）で表わされる構造を有するため、水系溶媒に対する溶解性を有し、ＵＶＡ領域での紫外線吸収能に優れる。
式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩における紫外線吸収能は、式（Ｉ）における共役系（炭素原子と二重結合している窒素原子からＲ１の結合した窒素原子までの間の構造（Ｎ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ））が寄与するものと推定される。詳細なメカニズムは不明だが、ｐＨ等を調整することにより、式（Ｉ）における（Ｎ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ）の部分が平衡状態（Ｎ＋＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｎ⇔Ｎ−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｎ＋（式（Ｖ）参照））を形成し、電子の共役に関与して、紫外線吸収能を示すものと考えられる。
【００３９】
なお、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘはいずれも上述した電子の共役に影響を与えない位置に配置されている。このため、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘが、上述した如何なるものであっても同様に優れた紫外線吸収能が得られる。
【００４０】
「紫外線吸収能を有する化合物またはその塩の製造方法」
本実施形態の化合物またはその塩は、例えば、以下に示す製造方法により製造できる。
すなわち、植物に生育する微生物を培養して菌体を得る工程（第１工程）と、菌体を溶媒で抽出して抽出物を得る工程（第２工程）と、抽出物から式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を回収する工程（第３工程）とを行う。
【００４１】
（第１工程）
本実施形態において培養する微生物は、植物に成育しているものである。
微生物を採取する植物の種類は、特に限定されるものではない。植物の種類としては、例えば、コムギ穂、イチゴ葉、月見草の花弁、イネ葉鞘などが挙げられる。これらの植物は、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を生成するメチロバクテリウム属の微生物が多く生育しているため好ましい。
植物に生育する微生物を植物から採取する方法としては、例えば、植物をリン酸緩衝液中に浸漬して、乳鉢中で磨砕し、微生物を含む磨砕液を得る方法などが挙げられる。
【００４２】
微生物の培養方法としては、従来公知の方法を用いることができる。具体的には、微生物の培養方法として、液体培養法を用いてもよいし、固体培養法を用いてもよいし、液体培養法および固体培養法を用いてもよく、培養する菌体の種類等に応じて適宜決定できる。
微生物の培養に用いる培地としては、例えば、標準寒天培地、Ｌ（Ｌｅｎｎｏｘ）培地、ＬＢ（Ｌｕｒｉａ  Ｂｅｒｔａｎｉ）培地、ＮＢ（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ）培地、ＰＤ（ポテトデキストロース）培地、ＰＰＤ（ポテト・ぺプトン・デキストロース）培地、ＴＢ（Ｔｅｒｒｉｆｉｃ  ｂｒｏｔｈ）培地などを使用できる。
【００４３】
本実施形態では、微生物の培養方法の一例として、以下に示す方法を用いる場合を例に挙げて説明する。
まず、植物から採取した微生物を固体培養法により培養し、植物から採取した微生物中に含まれる各菌体を分離回収する。具体的には、上記の方法により植物から採取した微生物を含む磨砕液を、固体培地の表面に塗布（塗抹）して培養し、コロニーを形成させる。固体培地を用いる場合における微生物の培養条件としては、従来公知の条件を採用できる。具体的には、例えば、２５℃で３〜７日間、好気条件とすることができる。
【００４４】
次いで、固体培地の表面に出現した単コロニーを掻き取る方法により、単コロニーを形成している菌体を回収し、植物から採取した微生物中に含まれる各菌体を分離する。
固体培地の表面に出現した単コロニーから回収した各菌体は、必要に応じて、各菌体毎に、新たな固体培地の表面に塗布して培養（純粋培養）し、回収してもよい。
【００４５】
次に、このようにして植物から採取した微生物中から分離回収した各菌体について、分光測色方法、吸光光度法などにより、紫外線吸収能の有無を調べる。
次いで、分離回収した各菌体のうち紫外線吸収能を有する菌体を同定する。菌体の同定方法としては、例えば、ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に基づき同定する方法など、従来公知の方法を用いることができる。
【００４６】
本実施形態では、同定した菌体のうち、メチロバクテリウム属の菌体を、液体培養法により培養する。メチロバクテリウム属の微生物は、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を生成する。メチロバクテリウム属に属する微生物の中でも特に、後述するＷＩ−１８２株（菌株名）、Ｗ−２１３株（菌株名）、ｆ１１株（菌株名）、２４Ｎ−２５株（菌株名）を用いることが好ましい。これらの菌株は、植物に成育する微生物であり、培養により増やすことができ、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を効率よく生成できる。特に、ＷＩ−１８２株（菌株名）は、培養により容易に増やすことができ、好ましい。
【００４７】
次に、植物から採取した微生物中から上記の方法により分離回収したメチロバクテリウム属の菌体を、液体培養法により培養する。植物から採取した微生物から分離回収した菌体中に、複数種のメチロバクテリウム属の菌体が含まれている場合、複数種のメチロバクテリウム属の菌体から紫外線吸収能の最も高い菌体を選択して、液体培養法により培養することが好ましい。
本実施形態では、植物から採取した微生物を個体培養法により培養・分離回収し、得られた各菌体のうち、紫外線吸収能を有するメチロバクテリウム属の菌体のみを液体培養法により培養する。このため、植物から採取した微生物中に含まれる紫外線吸収能を有する菌体を、効率よく増やすことができる。
【００４８】
液体培地を用いる場合における菌体の培養条件としては、従来公知の条件を採用できる。具体的には、例えば、２５℃で３〜７日間、好気条件とすることができる。
液体培養法では、菌体を効率よく増やすために、菌体を含む液体培地を撹拌したり振盪したり、菌体を含む液体培地に空気を供給したりしながら培養してもよい。
液体培地を用いて培養して得られた菌体は、例えば、遠心分離法、濾過法などを用いて回収できる。液体培地から回収した菌体は、凍結し、真空乾燥してから、次の工程において溶媒で抽出してもよいし、回収した状態のまま、次の工程において溶媒で抽出してもよい。
【００４９】
また、液体培地で培養した菌体は、式（Ｉ）で表される化合物またはその塩の生成量を十分に確保するために、必要に応じて、新たな液体培地を用いてさらに培養してから回収してもよい。
【００５０】
（第２工程）
次に、第１工程で培養して回収したメチロバクテリウム属の菌体を、溶媒で抽出して抽出物を得る。抽出物を得る方法としては、例えば、以下に示す方法が挙げられる。まず、菌体に溶媒を加えて撹拌し、菌体から溶媒中に式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を抽出する。次いで、抽出後の菌体を含む溶媒を濾過することにより、濾過液として抽出液を得る。その後、抽出液を濃縮し、凍結、真空乾燥させることにより、抽出物が得られる。
本実施形態において、菌体の抽出に用いる溶媒としては、例えば、アルコール、またはアルコールと水との混合溶液などが挙げられる。これらの中でも、溶媒として、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、またはこれらと水との混合溶液を用いることが好ましく、メタノールと水との混合溶液を用いることがより好ましい。
【００５１】
（第３工程）
次に、第２工程で得た抽出物から目的物である式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を回収する工程を行う。
本実施形態では、抽出物から目的物を回収する工程として、アルカリ処理と精製処理とを行う。アルカリ処理は、精製処理の前に行ってもよいし、精製処理の後に行ってもよいし、精製処理とともに行ってもよい。
【００５２】
アルカリ処理は、抽出物とアルカリ性溶液とを接触させて、抽出物からさらに目的物を抽出することにより実施する。アルカリ性溶液のｐＨは、好ましくは９．０〜１４．０、より好ましくは１０．０〜１３．０、さらに好ましくは１１．０〜１２．０である。アルカリ性溶液としては、例えば、アンモニア水とメタノールとの混合溶液が挙げられる。
【００５３】
精製処理の方法としては、従来公知の方法を用いることができ、例えば、アニオン交換クロマトグラフィー法、カチオン交換クロマトグラフィー法、疎水性クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法、逆相クロマトグラフィー法などが挙げられる。精製処理は、上記のクロマトグラフィー法を混合した混合モードクロマトグラフィー法により行ってもよいし、異なる種類のクロマトグラフィー法を複数回実施する方法により行ってもよい。精製処理の方法としては、上記の中でも特に、カラムとしてＷＡＴＥＲＳ製のＰｏｒａＰａｋ  Ｒｘｎ  ＣＸ等を用いるカチオン交換クロマトグラフィー法、カラムとしてクロマニックテクノロジーズ製のＳｕｎｒｉｓｅ  Ｃ２８等を用いる疎水性クロマトグラフィー法が好ましい。
【００５４】
精製処理とともにアルカリ処理を行う方法としては、例えば、前述のクロマトグラフィー法を前述のアルカリ性溶液を用いて実施する方法が挙げられる。具体的には、カラムとしてＷＡＴＥＲＳ製のＰｏｒａＰａｋ  Ｒｘｎ  ＣＸを用いるカチオン交換クロマトグラフィー法を用い、アルカリ性溶液であるアンモニア水とメタノールとの混合溶液で溶出した成分を回収する方法を用いることが好ましい。
【００５５】
以上の工程を行うことにより、目的物である式（Ｉ）で表される化合物またはその塩が得られる。
【００５６】
本実施形態の製造方法により回収した目的物は、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）解析、ＮＭＲ（核磁気共鳴）解析、Ｘ線結晶構造解析などを用いて、式（Ｉ）で表される化合物であることを確認できる。
【００５７】
ＬＣ／ＭＳ解析は、例えば、以下に示す条件で実施できる。
ＬＣ（液体クロマトグラフィー）としては、株式会社島津製作所製のＬＣＳｏｌｕｔｉｏｎ、ＰＤＡ検出器（ＳＰＤ−Ｍ１０Ａ）を用い、カラム温度４０℃、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、移動相として、ギ酸アンモニウム、ギ酸水溶液、ギ酸メタノール溶液から選ばれるいずれか１種以上を用いて実施できる。ＭＳ（質量分析）は、ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）イオントラップ法にしたがって実施できる。
ＮＭＲ解析は、例えば、ＢＲＵＫＥＲ  ＢＩＯＳＰＩＮ製のＡＶＡＮＣＥ５００を使用して、重水中で実施できる。
【００５８】
式（Ｉ）で表わされる本実施形態の化合物またはその塩は、紫外線吸収能および水系溶媒に対する溶解性を有する。特に、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩は、波長３５０〜３６０ｎｍ領域に高い吸収ピークを有し、ＵＶＡ領域での紫外線吸収能に優れる。
また、本実施形態の化合物またはその塩は、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオールのいずれか１種以上と水との混合液、アルカリ金属、アルカリ土類金属塩、有機酸、アミノ酸のいずれか１種以上と水との混合液、水などの水系溶媒に対する溶解性に優れるので、化粧料および皮膚外用剤の材料として用いる場合、水系溶媒を用いて容易に配合できる。
【００５９】
また、本実施形態の化合物またはその塩の製造方法によれば、高純度の式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を製造できる。したがって、例えば、本実施形態の製造方法で得られた式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を、化粧料および皮膚外用剤の材料として用いた場合、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩に含まれる不純物に起因する不具合が生じにくく、好ましい。
【００６０】
なお、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩の製造方法は、上記の方法に限定されるものではない。
例えば、本実施形態の製造方法により製造した目的物を原料として化学的に合成することにより、製造した目的物と式（Ｉ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘのうちのいずれか１以上が異なっている式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を製造してもよい。
また、原料として、植物に生育する微生物を培養して得た菌体から抽出したものを用いず、天然に由来しない成分のみを用いて、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を化学的に合成してもよい。
【００６１】
「皮膚外用剤、化粧料」
本実施形態の皮膚外用剤および化粧料は、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を含む。本実施形態の皮膚外用剤および化粧料に含まれる式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩は、１種類のみであってもよいし、２種類以上であってもよい。本実施形態の皮膚外用剤および化粧料は、式（Ｉ）で表わされる化合物のみを含有し、式（Ｉ）で表わされる化合物の塩を含有していないものでもよいし、式（Ｉ）で表わされる化合物の塩のみを含有し、式（Ｉ）で表わされる化合物を含有していないものでもよいし、式（Ｉ）で表わされる化合物および式（Ｉ）で表わされる化合物の塩を共に含有するものでもよい。皮膚外用剤および化粧料の含有する式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩が２種以上である場合、その組み合わせおよび比率は、目的に応じて適宜選択できる。
【００６２】
皮膚外用剤および化粧料は、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩の他に、必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲で、皮膚外用剤または化粧料に通常用いられる成分などの他の成分を、一般的な濃度で含有していてもよい。
皮膚外用剤または化粧料に通常用いられる成分としては、例えば、既存の原料規格書または公定書に記載された原料、皮膚外用剤として薬学的に許容される担体、添加剤等の成分が挙げられる。これらの他の成分は、１種単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００６３】
皮膚外用剤および化粧料の種類としては、例えば、トリートメント、ヘアパック、ヘアフォーム、ヘアムース、ヘアスプレー、ヘアミスト、ヘアワックス、ヘアジェル、ウォーターグリース、セットローション、カラーローション、ヘアトニック、ヘアリキッド、ポマード、チック、ヘアクリーム、ヘアブロー、枝毛コート、ヘアオイル、ヘアカラーアフタートリートメント、パーマアフタートリートメント、ヘアマニキュア、育毛剤等の毛髪用化粧料；化粧水、柔軟化粧水、収れん化粧水、洗浄用化粧水、多層式化粧水、乳液、エモリエントローション、モイスチャーローション、ミルキィーローション、ナリシングローション、ナリシングミルク、スキンモイスチャー、モイスチャーエマルション、メーキャップローション、エルボーローション、ハンドローション、ボディローション、クリーム、エモリエントクリーム、栄養クリーム、ナリシングクリーム、バニシングクリーム、モイスチャークリーム、ナイトクリーム、メーキャップクリーム、ベースクリーム、プレメーキャップクリーム、ジェル、モイスチャージェル、美白エッセンス、リポソーム美容液、リポソーム化粧水等の基礎化粧料；白粉・打粉類、ファンデーション類、化粧下地、口紅類、リップグロス、頬紅類、アイライナー、マスカラ、アイシャドー、眉墨等のメーキャップ化粧料；香水、パフューム、パルファム、オードパルファム、オードトワレ、オーデコロン、練香水、芳香パウダー、ボディローション、バスオイル等の芳香化粧料；ボディーパウダー、デオドラントローション、デオドラントパウダー、デオドラントスプレー、デオドラントスティック、防臭化粧料、虫よけスプレー、インセクトリペラー等のボディ化粧料；軟膏剤、貼付剤、ローション剤、リニメント剤、液状塗布剤等が例示できる。
【００６４】
皮膚外用剤および化粧料の剤型としては、水中油（Ｏ／Ｗ）型、油中水（Ｗ／Ｏ）型、Ｗ／Ｏ／Ｗ型、Ｏ／Ｗ／Ｏ型等の乳化型；乳化高分子型；固形；液状；練状；スティック状；揮発性油型；粉状；水状；ゼリー状；ジェル状；ペースト状；クリーム状；シート状；フィルム状；ミスト状；スプレー型；多層状；泡状；フレーク状等が例示できる。
【００６５】
皮膚外用剤および化粧料は、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩、および必要に応じて他の成分を配合し、製剤化することで製造できる。皮膚外用剤および化粧料は、式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を配合すること以外は、公知の皮膚外用剤および化粧料と同様の方法で製造できる。
【００６６】
本実施形態の皮膚外用剤および化粧料は、優れたＵＶＡ吸収能を有する式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を含有する。したがって、本実施形態の皮膚外用剤および化粧料は、ＵＶＡから人間の皮膚などを守る効果が高い。また、本実施形態の皮膚外用剤および化粧料は、水系溶媒に対する溶解性を有する式（Ｉ）で表わされる化合物またはその塩を含むため、疎水性溶媒を使わずに製造できるとともに、用途に応じて様々な剤型にすることができる。
【実施例】
【００６７】
以下、実施例により本発明を詳細に説明する。本発明は、以下に示す実施例によって何ら限定されるものではない。
＜実施例１＞
「１．微生物の採取」
イチゴ葉を１０ｍＭリン酸緩衝液中に浸漬して、乳鉢中で磨砕し、微生物を含む磨砕液を得た。【００６８】
「２．微生物の培養」
「１．微生物の採取」で得た微生物を含む磨砕液を、標準寒天培地（Ｄｉｆｃｏ製）の表面に塗布し、２５℃で５日間、好気条件で培養した。その後、標準寒天培地の表面に出現した単コロニーを掻き取り、単コロニーを形成している菌体を分離回収した。
次に、単コロニーから回収した各菌体を、複数のＮＢ（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ）寒天平板培地（Ｄｉｆｃｏ製）の表面に塗布して、それぞれ２５℃で６日間、好気条件で培養した。その後、寒天平板培地の表面に出現したコロニーを掻き取り、菌体を回収した。【００６９】
次に、このようにして植物から採取した微生物中から分離回収した各菌体について、吸光光度法により、紫外線吸収能の有無を調べた。
次いで、分離回収した各菌体のうち最も高い紫外線吸収能を有する菌体を同定した。菌体の同定は、ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に基づいて行った。その結果、菌体はメチロバクテリウム属であった。この菌体をＷＩ−１８２株と名付けた。【００７０】
次に、メチロバクテリウム属の菌体（ＷＩ−１８２株）の得られた寒天平板培地を２枚用意し、各寒天平板培地にそれぞれ無菌精製水１０ｍｌを加えて懸濁し、懸濁液を得た。２枚の寒天平板培地から得た懸濁液を混合して混合液とし、７本の１００ｍｌのＰＤ培地（Ｄｉｆｃｏ製）にそれぞれ２ｍｌずつ加え、２５℃で９０時間、好気条件で培養した。
７本のＰＤ培地で培養した培養物から６００ｍｌ採取して、３０ＬのＰＤ培地（Ｄｉｆｃｏ製）に加えた。そして、菌体を含む液体培地を回転速度４００ｒｐｍで撹拌機を用いて撹拌しながら、液体培地に１５Ｌ／ｍｉｎの空気を供給し、好気状態で、２５℃で７日間培養した。【００７１】
「３．菌体の回収」
上記の通りにして培養した培養物２８ｋｇ（培養した菌体を含む液体培地）を、回転速度８０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して、ウェット状の菌体を回収した。その後、回収した菌体を凍結し、真空乾燥して、５１ｇの菌体を得た。【００７２】
「４．微生物からの抽出」
上記の通りにして得た菌体（ＷＩ−１８２株）４５ｇに、水とメタノールとの混合溶液（水：メタノール（体積比）＝２：８）２２５０ｍｌを加えて、２５℃で１時間、スリーワンモーター撹拌翼を用いて回転速度１４０ｒｐｍで撹拌することにより抽出した。次いで、抽出後の菌体を含む溶媒を吸引濾過することにより、濾過液として抽出液を回収した。その後、回収した抽出液をロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結、真空乾燥させて１２．２ｇの抽出物を得た。【００７３】
「５．抽出物からの目的物の回収（１）」
以下に示すように、アルカリ性溶液を用いるカチオン交換クロマトグラフィー法により、抽出物を精製した。
まず、メタノールに抽出物を加えて溶解し、メタノール溶液とした。次いで、メタノール溶液をカラム（ＷＡＴＥＲＳ製  ＰｏｒａＰａｋ  Ｒｘｎ  ＣＸ）に通過させて、イオン交換樹脂に抽出物を吸着させた。次に、カラムに、アルカリ性溶液としてアンモニア水（２８質量％）とメタノールとの混合溶液（アンモニア水：メタノール（体積比）＝５：９５（ｐＨ１１．２））を通過させて、イオン交換樹脂に吸着した抽出物からアルカリ性溶液に溶解する成分を溶出させて溶出液を得た。
その後、溶出液をロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結、真空乾燥させて粗精製物である１．３６ｇの黄褐色化合物を回収した。【００７４】
「６．抽出物からの目的物の回収（２）」
上記の通りにして得られた粗精製物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（株式会社島津製作所製ＬＣＳｏｌｕｔｉｏｎ、ＰＤＡ（フォトダイオードアレイ）検出器（ＳＰＤ−Ｍ１０Ａ））を用いて精製した。条件は下記の通りとした。【００７５】
カラム：Ｓｕｎｒｉｓｅ  Ｃ２８（カラム内に充填されている基材の粒子径：５μｍ、カラムの内径：１０ｍｍ、カラムの長さ：２５０ｍｍ、クロマニックテクノロジーズ製）カラム温度：４０℃
流速：５．０ｍｌ／ｍｉｎ
移動相Ａ：１０ｍＭギ酸アンモニウム、０．２％ギ酸
溶媒  水
移動相Ｂ：１０ｍＭギ酸アンモニウム、０．２％ギ酸
溶媒  水とメタノールとの混合溶液（メタノール：水（体積比）＝９５：５）
グラジエント条件：０〜７ｍｉｎ    移動相Ａ１００％で固定
７〜１５ｍｉｎ    移動相Ａ：移動相Ｂ＝１００：０〜移動相Ａ：移動相Ｂ＝２４：７６のリニアグラジエント
１５〜２５ｍｉｎ  移動相Ｂ９５％で固定
２５〜３５ｍｉｎ  移動相Ａ１００％で固定【００７６】
高速液体クロマトグラフィー解析結果を図１に示す。図１は、実施例１で得られた粗精製物の紫外線吸収強度と溶出時間との関係を示したグラフである。図１に示すように、実施例１で得られた粗精製物では、ＵＶ測定波長３６０ｎｍで測定したときに、溶出時間３．３ｍｉｎ、４．３ｍｉｎ、５．２ｍｉｎ、１６．８ｍｉｎ、１７．６ｍｉｎの位置に主要ピークが検出された。溶出時間４．３ｍｉｎ、１６．８ｍｉｎ、１７．６ｍｉｎのピークにおいては、波長３５０〜３６０ｎｍ領域に高い吸収ピークを示すことが確認された。【００７７】
また、ＨＰＬＣ解析において最も紫外線吸収強度の強い結果が得られた、溶出時間４．３ｍｉｎのピークの溶出分を分取した。そして、分取した溶出分をロータリーエバポレーターで減圧濃縮し、凍結、真空乾燥させて精製化合物である黄白色化合物（目的物）を回収した。【００７８】
「精製化合物の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）解析」
上記の通りにして得た実施例１の精製化合物をＬＣ／ＭＳ解析し、分子量を求めた。
ＬＣ（液体クロマトグラフィー）は、カラムの内径を４．６ｍｍにし、流速を１．０ｍＬ／ｍｉｎにし、グラジエント条件を下記の通りに変更した点以外は、「６．抽出物からの目的物の回収（２）」のＨＰＬＣと同じ条件で行った。【００７９】
グラジエント条件：０〜１０ｍｉｎ    移動相Ａ１００％で固定
１０〜２０ｍｉｎ    移動相Ａ：移動相Ｂ＝１００：０〜移動相Ａ：移動相Ｂ＝５：９５のリニアグラジエント
２０〜２３ｍｉｎ    移動相Ｂ９５％で固定
２３〜３０ｍｉｎ    移動相Ａ１００％で固定【００８０】
ＭＳ（質量分析）は、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ法）イオントラップで、ポジティブ、ネガティブ検出モード、ソース電圧（ポジティブモード３．５ｋＶ、ネガティブモード−３．０ｋＶ）、キャピラリー温度２７５℃、ソースヒーター温度４５０℃の条件で、サーモフィッシャーサイエンティフィック Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｅｌｉｔｅを用いて行った。
その結果を図２に示す。図２は、実施例１で得られた精製化合物の質量電荷比と検出感度（相対強度）との関係を示したグラフである。図２より、実施例１で得られた精製化合物の分子量は３０２であることが確認された。【００８１】
「精製化合物の核磁気共鳴（ＮＭＲ）解析」
上記の通りにして得た実施例１の精製化合物のＮＭＲ解析を行った。ＮＭＲ装置としては、ＢＲＵＫＥＲ  ＢＩＯＳＰＩＮ製ＡＶＡＮＣＥ５００を使用し、重水中で解析した。その結果を以下に示す。【００８２】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）
δｐｐｍ２．３６（ｓ,３Ｈ）,３．４１（ｓ,３Ｈ）,３．７８（ｄｄ,１Ｈ）,３．８４（ｄｄ,１Ｈ）,３．９０（ｄｄ,１Ｈ）４．００（ｓ,１Ｈ）４．３０（ｄｄ,１Ｈ）５．４２（ｄ,１Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ）：
δｐｐｍ１８．０（ｑ）,４５．４（ｑ）,６４．０（ｔ）,６４．１（ｄ）,７１．７（ｄ）,７１．７（ｄ）,７６．２（ｄ）,９４．０（ｄ）,１２１．７（ｓ）,１５６．９（ｓ）,１５９．９（ｓ）,１７１．４（ｓ)【００８３】
「精製化合物のＸ線結晶構造解析」
上記の通りにして得た実施例１の精製化合物８ｍｇを１０ｍＬのガラス製スピッチグラス内に秤量し、超純水０．２ｍＬを加えて完全に溶解させた。次に、エタノール１ｍＬを、器壁を伝わせながら静かに上層に添加し、二日間実験室内に静置し、結晶を析出させた。
得られた結晶をＲｉｇａｋｕ製のＲ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ  ＩＩを用いてＸ線結晶構造解析した。その結果、分子式はＣ１２Ｈ１８Ｎ２Ｏ７であることが分かった。実施例１で得られた精製化合物のＸ線結晶構造解析結果を図３に示す。【００８４】
上記の「精製化合物の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）解析」「精製化合物の核磁気共鳴（ＮＭＲ）解析」「精製化合物のＸ線結晶構造解析」の結果から、実施例１で得られた精製化合物は、式（Ｖ）で表わされる化合物であることが確認できた。【００８５】
「精製化合物のＨＰＬＣ解析」
上記の通りにして得た精製化合物をＨＰＬＣ（株式会社島津製作所製ＬＣＳｏｌｕｔｉｏｎ、ＰＤＡ検出器（ＳＰＤ−Ｍ１０Ａ））を用いて解析した。
その結果を図４に示す。図４は、実施例１で得られた精製化合物の紫外線吸収強度と溶出時間との関係を示したグラフである。
図４に示すように、実施例１で得られた精製化合物では、ＵＶ測定波長３６０ｎｍで測定したときに溶出時間４．１ｍｉｎにおいてピークが検出された。このピークは、波長３５０〜３６０ｎｍ領域に高い吸収ピークを示すことが確認された。【００８６】
「精製化合物の溶解性試験」
上記の通りにして得た精製化合物について、以下に示す方法により、水、メタノール、アセトニトリルに対する溶解性試験を行った。
実施例１で得られた精製化合物５ｍｇを精秤し、表１に示す１〜７の各溶媒を０．５ｍｌ加えて３０秒間撹拌した後、ろ過し、１〜７の各溶解液を得た。次に、得られた１〜７の溶解液１００μｌを、それぞれ９６穴のマイクロプレートに入れ、マイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ製  ＩＮＦＩＮＩＴＥ２００  ＰＲＯ）で紫外線吸収スペクトルを測定した。紫外線吸収スペクトルは、２００〜６００ｎｍ領域の波長を１０ｎｍ間隔で連続測定するスペクトルスキャン法で測定した。【００８７】
そして、１〜７の各溶解液の波長３６０ｎｍの吸光度について、溶媒として水１００％（溶媒１）を用いた溶解液の吸光度を１．０００としたときの各溶解液の吸光度の値（吸光度比率）を求めた。その結果を表１に示す。
表１に示すように、溶媒中の水の割合が高い溶解液ほど、吸光度の値が大きくなっている。このことから精製化合物の水への溶解度が高いことが分かった。【００８８】
【表１】
2017051875.tif 000010
【００８９】
＜実施例２＞
実施例１で得られた粗精製物を実施例１での「６．抽出物からの目的物の回収（２）」と同様にしてＨＰＬＣ解析を行い、ＨＰＬＣ解析において２番目に紫外線吸収強度の強い結果が得られた、溶出時間１６．８ｍｉｎのピーク（図１参照）の溶出分を分取した。そして、分取した溶出分をロータリーエバポレーターで減圧濃縮し、凍結、真空乾燥させて黄白色化合物を回収した。【００９０】
その後、グラジエント条件を下記の通りとしたこと以外は実施例１での「６．抽出物からの目的物の回収（２）」と同様にして、実施例２で得られた黄白色化合物をＨＰＬＣにて精製した。
グラジエント条件：  ０〜１３ｍｉｎ      移動相Ａ１００％で固定
１３〜１８ｍｉｎ      移動相Ｂ５％で固定
１８〜２０ｍｉｎ      移動相Ｂ１０％で固定
２０〜２２ｍｉｎ      移動相Ｂ１５％で固定
２２〜２３ｍｉｎ      移動相Ａ：移動相Ｂ＝８５：１５〜移動相Ａ：移動相Ｂ＝５：９５のリニアグラジエント
２３〜２６ｍｉｎ      移動相Ｂ９５％で固定
２６〜３３ｍｉｎ      移動相Ａ１００％で固定
回収して得た液をロータリーエバポレーターで減圧濃縮し、凍結、真空乾燥させて、精製化合物である黄色化合物を回収した。【００９１】
実施例２で得られた精製化合物について、グラジエント条件を下記の通りに変更した点以外は実施例１と同様にして「精製化合物の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）解析」を行った。
グラジエント条件：０〜１０ｍｉｎ    移動相Ａ１００％で固定
１０〜１５ｍｉｎ    移動相Ｂ５％で固定
１５〜１７ｍｉｎ    移動相Ｂ１０％で固定
１７〜１９ｍｉｎ    移動相Ｂ１５％で固定
１９〜２０ｍｉｎ    移動相Ａ：移動相Ｂ＝８５：１５〜移動相Ａ：移動相Ｂ＝５：９５のリニアグラジエント
２０〜２３ｍｉｎ    移動相Ｂ９５％で固定
２３〜３０ｍｉｎ    移動相Ａ１００％で固定
その結果を図５に示す。図５は、実施例２で得られた精製化合物の質量電荷比と検出感度（相対強度）との関係を示したグラフである。図５より、実施例２で得られた精製化合物の分子量は１１１２であることが確認された。【００９２】
実施例２で得られた精製化合物について、実施例１と同様にして「精製化合物の核磁気共鳴（ＮＭＲ）解析」を行った。その結果を以下に示す。【００９３】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）
δｐｐｍ２．３６（ｓ,３Ｈ）,３．３５（ｔ,１Ｈ）, ３．４１−３．５８（ｍ，１６Ｈ）,３．６５（ｔ,１Ｈ）,３．７３−３．８０（ｍ,１０Ｈ），３．９０−４．０９（ｍ,１０Ｈ），４．４７（ｄｄ,１Ｈ），４．６５（ｄ，１Ｈ），４．８０−４．９０（ｍ，４Ｈ），５．４２（ｄ,１Ｈ）、
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ）：
δｐｐｍ１８．０（ｑ）,４５．４（ｑ）,６３．４（ｔ），６３．５（ｔ），６３．６（ｔ），６３．７（ｔ），６４．１（ｄ），７１．５（ｄ），７１．７（ｄ），７１．９（ｔ），７２．１（ｄ），７２．３（ｄ），７４．７（ｄ），７６．７（ｄ），７８．３（ｄ），７８．５（ｄ），７８．６（ｄ），７８．７（ｄ），７８．９（ｄ），７９．１（ｄ），７９．３（ｄ），８４．１（ｄ），８４．９（ｄ），８５．０（ｄ），８６．１（ｄ），９４．０（ｄ），１０４．１（ｄ）,１０４．５（ｄ），１０４．８（ｄ），１０５．３（ｄ），１０６．０（ｄ），１２１．７（ｓ），１５６．８（ｓ），１６０．０（ｓ）【００９４】
上記の「精製化合物の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）解析」「精製化合物の核磁気共鳴（ＮＭＲ）解析」の結果から、実施例２で得られた精製化合物は、式（Ｉ）におけるＲ１およびＲ２がメチル基であり、Ｒ３が水素原子であり、Ｘが糖分子数５の直鎖状の糖鎖である化合物またはその塩であることが確認できた。
また、上記の「精製化合物の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）解析」「精製化合物の核磁気共鳴（ＮＭＲ）解析」の結果から、実施例２で得られた精製化合物は、式（ＩＩＩ）で表わされる化合物および／または式（ＩＶ）で表わされる化合物であることが確認された。【００９５】
次に、実施例２で得られた精製化合物について、実施例１と同様にして「精製化合物のＨＰＬＣ解析」を行った。
その結果を図６に示す。図６は、実施例２で得られた精製化合物の紫外線吸収強度と溶出時間との関係を示したグラフである。
図６に示すように、実施例２で得られた精製化合物では、ＵＶ測定波長３６０ｎｍで測定したときに溶出時間２１．２５ｍｉｎにおいてピークが検出された。このピークは、波長３５０〜３６０ｎｍ領域に高い吸収ピークを示すことが確認された。【００９６】
次に、実施例２で得られた精製化合物について、実施例１と同様にして「精製化合物の溶解性試験」を行った。
その結果、実施例２で得られた精製化合物においても、溶媒中の水の割合が高い溶解液ほど、吸光度の値が大きくなった。このことから精製化合物の水への溶解度が高いことが分かった。【００９７】
＜実施例３＞
「１．微生物の採取」
コムギ葉を１０ｍＭリン酸緩衝液中に浸漬して、乳鉢中で磨砕し、微生物を含む磨砕液を得た。
その後、「２．微生物の培養」〜「５．抽出物からの目的物の回収（１）」までの工程を実施例１と同様に行った。【００９８】
実施例３において「２．微生物の培養」で分離回収して得られた各菌体について実施例１と同様にして紫外線吸収能の有無を調べ、実施例１と同様にして分離回収した各菌体のうち最も高い紫外線吸収能を有する菌体を同定した。その結果、菌体はメチロバクテリウム属であった。この菌体をＷ−２１３株と名付けた。
また「５．抽出物からの目的物の回収（１）」を行うことにより、実施例１で得られた粗精製物と外観の類似する粗精製物である黄褐色化合物が得られた。【００９９】
実施例３で得られた粗精製物について、実施例１での「精製化合物の液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）解析」と同様にして、ＬＣ／ＭＳ解析を行った。
その結果を図７に示す。図７は、実施例３で得られた粗精製物の質量電荷比と検出感度（相対強度）との関係を示したグラフである。図７より、実施例３で得られた粗精製物は、分子量３０２の化合物を含むことが確認された。【０１００】
実施例３で得られた粗精製物は、同定した菌体がメチロバクテリウム属であることと、得られた粗精製物のＬＣ／ＭＳ解析の結果とから、実施例１で得られた粗精製物と同じであると考えられる。
実施例３で得られた粗精製物に対して実施例１での「６．抽出物からの目的物の回収（２）」を行うことにより、精製化合物を得た。このようにして得た実施例３の精製化合物に対して実施例１での「精製化合物のＨＰＬＣ解析」を行った。その結果、実施例１の精製化合物と同様に、ＵＶ測定波長３６０ｎｍで測定したときに溶出時間４．１ｍｉｎにおいてピークが検出された。このピークは、波長３５０〜３６０ｎｍ領域に高い吸収ピークを示すことが確認された。また、実施例３で得られた精製化合物について、実施例１の「精製化合物の溶解性試験」と同様の試験を行った。その結果、溶媒中の水の割合が高い溶解液ほど、吸光度の値が大きくなり、水への溶解度が高いことが確認された。【０１０１】
＜実施例４＞
「１．微生物の採取」において、イチゴ葉に代えて、月見草の花弁を用いたこと以外は、実施例１と同様にして「１．微生物の採取」〜「５．抽出物からの目的物の回収（１）」までの工程を行った。
実施例４において「２．微生物の培養」で分離回収して得られた各菌体について実施例１と同様にして紫外線吸収能の有無を調べ、実施例１と同様にして分離回収した各菌体のうち最も高い紫外線吸収能を有する菌体を同定した。その結果、菌体はメチロバクテリウム属であった。この菌体をｆ１１株と名付けた。
また「５．抽出物からの目的物の回収（１）」を行うことにより、実施例１で得られた粗精製物と外観の類似する粗精製物である黄褐色化合物が得られた。【０１０２】
＜実施例５＞
「１．微生物の採取」において、イチゴ葉に代えて、イネ葉鞘を用いたこと以外は、実施例１と同様にして「１．微生物の採取」〜「５．抽出物からの目的物の回収（１）」までの工程を行った。
実施例５において「２．微生物の培養」で分離回収して得られた各菌体について実施例１と同様にして紫外線吸収能の有無を調べ、実施例１と同様にして分離回収した各菌体のうち最も高い紫外線吸収能を有する菌体を同定した。その結果、菌体はメチロバクテリウム属であった。この菌体を２４Ｎ−２５株と名付けた。
また「５．抽出物からの目的物の回収（１）」を行うことにより、実施例１で得られた粗精製物と外観の類似する粗精製物である黄褐色化合物が得られた。【０１０３】
次に、実施例４および実施例５で得られた粗精製物を、それぞれ実施例１での「６．抽出物からの目的物の回収（２）」と同様にしてＨＰＬＣ解析を行った。その結果、実施例４と実施例５の両方とも、ＨＰＬＣ解析において、溶出時間４．３ｍｉｎに最も紫外線吸収強度の強いピークが得られた。【０１０４】
実施例４および実施例５で得られた粗精製物は、同定した菌体がメチロバクテリウム属であることと、得られた粗精製物のＨＰＬＣ解析の結果とから、実施例１で得られた粗精製物と同じであると考えられる。
また、実施例４および実施例５で得られた粗精製物に対して、実施例１での「６．抽出物からの目的物の回収（２）」を行うことにより、精製化合物を得た。このようにして得た実施例４および実施例５の精製化合物に対して実施例１での「精製化合物のＨＰＬＣ解析」を行った。その結果、実施例１の精製化合物と同様に、ＵＶ測定波長３６０ｎｍで測定したときに溶出時間４．１ｍｉｎにおいてピークが検出された。このピークは、波長３５０〜３６０ｎｍ領域に高い吸収ピークを示すことが確認された。また、実施例４および実施例５で得られた精製化合物について、実施例１の「精製化合物の溶解性試験」と同様の試験を行った。その結果、溶媒中の水の割合が高い溶解液ほど、吸光度の値が大きくなり、水への溶解度が高いことが確認された。【０１０５】
実施例１〜５において、微生物を採取した植物、精製化合物の分子量、精製化合物の構造、紫外線吸収能、溶解性を表２に示す。表２において、紫外線吸収能「○」とは、波長３２０〜４００ｎｍの紫外線Ａ波（ＵＶＡ）領域での吸収能を有することを意味する。また、溶解性「○」とは、水への溶解性を有することを意味する。【０１０６】
【表２】
2017051875.tif 000011
【０１０７】
以上説明したように、本発明の化合物またはその塩は、ＵＶＡ領域での紫外線吸収能および水系溶媒に対する溶解性を有し、化粧料および皮膚外用剤の材料として好適である。
【産業上の利用可能性】
【０１０８】
本発明の化合物またはその塩は、化粧料や皮膚外用剤等において、紫外線吸収剤として利用の利用が期待できる。
【図１】
2017051875.tif 000015
【図２】
2017051875.tif 000016
【図３】
2017051875.tif 000017
【図４】
2017051875.tif 000018
【図５】
2017051875.tif 000019
【図６】
2017051875.tif 000020
【図７】
2017051875.tif 000021
【国際調査報告】
2017051875.tif 000022
2017051875.tif 000023
2017051875.tif 000024
2017051875.tif 000025