(57)【要約】【課題】グルココルチコステロイド化合物を有効成分として含有する水性懸濁液を提供することを目的とする。具体的には，実用化可能なグルココルチコステロイド化合物を有効成分として含有する医薬組成物を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子および分散安定剤を含有することを特徴とする水性懸濁液剤，ナノ微粒子の平均粒子径が３００ｎｍ以下でＤ９０粒子径が４５０ｎｍ以下である水性懸濁液剤，該水性懸濁液を含有する非経口投与用医薬組成物，注射剤，点眼剤又は点耳剤，より具体的には，眼の炎症性疾患の治療又は予防のための点眼剤，又は，耳の炎症性疾患の治療又は予防のための点耳剤を提供するものである。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有することを特徴とする水性懸濁液剤。
【請求項２】
前記ナノ微粒子の平均粒子径が３００ｎｍ以下でＤ９０粒子径が４５０ｎｍ以下である請求項１記載の水性懸濁液剤。
【請求項３】
前記ナノ微粒子が，グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオールと，表面修飾剤とを混合することにより製造された微粒子であることを特徴とする，請求項１又は請求項２に記載の水性懸濁液剤。
【請求項４】
前記グルココルチコステロイド化合物が，プロピオン酸クロベタゾール，酢酸ジフロラゾン，プロピオン酸デキサメタゾン，ジフルプレドナード，フランカルボン酸モメタゾン，吉草酸ジフルコルトロン，酪酸プロピオン酸ベタメタゾン，フルオシノニド，酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン，プロピオン酸ベクロムタゾン，プロピオン酸デプロドン，吉草酸ベタメタゾン，吉草酸デキサメタゾン，吉草酸酢酸プレドニゾロン，フルオシノロンアセトニド，酪酸ヒドロコルチゾン，酪酸クロベタゾン，プロピオン酸アルクロメタゾン，トリアムシノロンアセトニド，フルメタゾンビバル酸エステル，プレドニゾロン，及びヒドロコルチゾンから選択される１種類以上の物質である，請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤。
【請求項５】
更に，分散安定剤を含有することを特徴とする，請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤。
【請求項６】
前記分散安定剤がポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール及び／又はポリビニルアルコールである，請求項５に記載の水性懸濁液剤。
【請求項７】
更に，粘度調整剤を含有することを特徴とする，請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤。
【請求項８】
前記粘度調整剤が，メチルセルロース，ヒドロキシルプロピルメチルセルロース，及びポリビニルアルコールから選択される１種類以上の物質である，請求項７に記載の水性懸濁液剤。
【請求項９】
前記粘度調整剤を，１〜１０ｍｇ／ｍＬ含有する，請求項７又は請求項８に記載の水生懸濁液剤。
【請求項１０】
請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤を含有する医薬組成物。
【請求項１１】
非経口投与用である，請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
注射剤又は局所適用製剤である，請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
眼用局所適用製剤，耳用局所適用製剤，鼻用局所適用製剤，又は肺用局所適用製剤である，請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
点眼剤，点耳剤，点鼻剤，又は吸入剤である，請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
炎症性疾患又は感染性疾患の治療薬または予防薬である，請求項１０〜請求項１４いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
炎症性疾患又は感染性疾患が，全身性の炎症性疾患又は感染性疾患である，請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
炎症性疾患又は感染性疾患が，局所性の炎症性疾患又は感染性疾患である，請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
局所が，眼，耳，鼻（上気道），及び肺（下気道）から選択される１以上の組織又は臓器であるである，請求項１７記載の医薬組成物。
【請求項１９】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を備える，請求項１０〜請求項１８いずれか１項に記載の医薬組成物を調製するためのキット。
【請求項２０】
グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオール及び／又は水と，分散安定剤とを混合することを含む，請求項１０〜請求項１８いずれか１項に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項２１】
グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，グリセリンと，無水クエン酸と，水添大豆レシチンとを混合することを含む，請求項２０記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【クロスリファレンス】
【０００１】
本出願は、２０１５年５月８日に日本国において出願された特願２０１５−０９５６１０号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は，グルココルチコステロイドのナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤及びその利用に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
グルココルチコステロイドは疎水性であることから，従来は水性懸濁液として提供されてきた。しかし，グルココルチコステロイド化合物の水性懸濁液は含有するステロイド粒子が時間の経過と共に沈殿することから，患者は使用時に容器を振って活性成分を液相中に均一に分散させなければならなかった。また，患者が使用時に必ず容器を振ったにもかかわらず，懸濁液中の粒子が凝集して塊となりやすく，薬剤の粒径は増加することにより，均一性が失われやすいものであった。このように，分散が均一でなくなることで，予定されていた投与量が投与されず，炎症や痛みの抑制が不十分となるという問題があった。【０００４】
そこで，ステロイドにおけるこのような問題を解決する方法の一つとして，エマルジョン製剤が提案されている（特許文献１，非特許文献１，２）。例えば，ジフルプレドナートの水中油滴（Ｏ／Ｗ型）エマルジョン製剤（Ｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標）：０．０５％  ｄｉｆｌｕｐｒｅｄｎａｔｅ製剤）は，その保存状態及び使用前の振盪の有無に関わらず，安定して均一な薬剤を患部に提供できることが確認されている。【０００５】
しかし，水中油滴（Ｏ／Ｗ型）エマルジョン製剤は，油性の溶媒を使用する必要があることから，異物感，充血などの刺激作用が認められるという問題があった。よって，油性溶媒を使用しなくとも，均一性を保つことができるグルココルチコステロイドの水性製剤が求められていた。【０００６】
また，デキサメタゾンリン酸エステルナトリウムのように，化合物の構造を親水性とすることにより，水中に溶解させることが試みられている。しかし，水中に溶解させる製剤は，溶解度による制約から含有させることができる有効成分濃度に限界があるという問題があった。【０００７】
一方，難溶性薬剤を含有する水性液剤として，水性懸濁液中の有効成分の粒子をナノサイズとしたナノ懸濁液剤（ｎａｎｏｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ）が提案されている。ナノ懸濁液剤は，粒子径がナノメートルサイズまで小さいことで比表面積を実質的に広げることにより，溶解度が増すことで血清レベルがより早く最大になること，様々な投与形態に提供可能であること，含有させる有効成分量を高めることができることが知られている。これまで，グルココルチコステロイド化合物のナノ懸濁液剤として，ガラスビーズを用いたＷｅｔ  ｍｉｌｌで製造したフルチカゾン（Ｄ９０  ０．４μｍ）及びブデソニド（Ｄ９０  ０．４μｍ）を含有する水性懸濁液剤が４℃で５週間後にも均一性，結晶構造，粒子径を維持していることが開示されている（非特許文献３）。また，ナノ粒子形成のボトムアップアプローチとして，グルココルチコステロイド化合物のヒドロコルチゾンを沈殿により平均粒径が約３００ｎｍのナノ粒子を生成させて水性懸濁液とする方法が報告されている（非特許文献４）。しかし，この報告においては眼圧上昇及び安定性のいずれにおいても，トップダウンアプローチ（ｍｉｌｌｉｎｇ）の方が優れていたことが示されている。また，主に経鼻投与に用いられるコルチコステロイド（具体的には，フランカルボン酸モメタゾン）のナノ懸濁液剤として，Ｄ５０が５０〜５００ｎｍのコルチコステロイド，親水性ポリマー，湿潤剤，及び，錯化剤を含む製剤が開示されている（特許文献２）。その他，オートクレーブ滅菌可能なグルココルチコステロイド化合物の水性懸濁液剤が報告されている（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開ＷＯ９７／０５８８２号公報
【特許文献２】米国公開２０１１／０００８４５３号公報
【特許文献３】国際公開ＷＯ２００７／０８９４９０号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｅｒｉｃ  Ｄ  Ｄｏｎｎｅｎｆｅｌｄ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２０１１）５：８１１−８１６
【非特許文献２】Ｈｅｔａｌ  Ｋ．  Ｐａｔｅｌら，Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ：Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ（２０１３）１０２：８６−９４
【非特許文献３】Ｊｅｒｒｙ  Ｚ．  Ｙａｎｇら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００８）９７（１１）：４８６９−４８７８
【非特許文献４】Ｈａｎｙ  Ｓ．Ｍ．  Ａｌｉら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（２０１１）１４９：１７５−１８１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
このような難溶性薬物を含有する水性液剤に関する種々の検討にも関わらず，クロベタゾールプロピオン酸エステル等のグルココルチコステロイド化合物を含有する注射剤，点眼剤や点耳剤などの水性懸濁液剤の実用化は未だに困難であり，経時安定性および分散安定性に優れた，グルココルチコステロイド化合物を有効成分とする注射剤及び局所投与用水性懸濁液剤，特には点眼剤及び点耳剤の開発が望まれている。【００１１】
よって，一態様において，本発明は，経時安定性および分散安定性に優れた，グルココルチコステロイド化合物を有効成分として含有する水性懸濁液を提供することを目的とする。より具体的には，本発明は，グルココルチコステロイド化合物を有効成分として含有し，澄明性，分散性，保存安定性に優れた，注射剤，点眼剤，点耳剤，点鼻剤，及び／又は吸入剤等の水性医薬組成物を提供することを目的とする。更に本発明は，角膜滞留性及び房水移行性に優れたグルココルチコステロイド化合物を有効成分として含有する点眼剤を提供することを目的とする。また，本発明は，グルココルチコステロイド化合物としてクロベタゾールプロピオン酸エステルを有効成分として含有する前記水性懸濁液又は水性医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは鋭意検討した結果，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子，及び必要に応じて，分散安定剤，界面活性剤，凝集防止剤，及び／又は粘度調整剤を含有する水性懸濁液剤が，澄明性，（長期）分散性，保存安定性，角膜滞留性，及び房水移行性に優れ，水性医薬組成物として優れることを見出した。特に，本発明者らは，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子，及び必要に応じて，分散安定剤，界面活性剤，凝集防止剤，及び／又は粘度調整剤を含有する水性懸濁液剤が，異物感，充血などの刺激作用を有する有機化合物を含むことなく，優れた澄明性，（長期）分散性，及び保存安定性を達成することができることを見出し，これにより，刺激性が少ないにもかかわらず，安定して均一な薬剤を患部に提供でき、また抗炎症効果の高いグルココルチコステロイド化合物の水性製剤を完成させた。【００１３】
より具体的には，本発明は以下に関する：
（１）  グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有することを特徴とする水性懸濁液剤。
（２）  前記ナノ微粒子の平均粒子径が３００ｎｍ以下でＤ９０粒子径が４５０ｎｍ以下である（１）記載の水性懸濁液剤。
（３）  前記ナノ微粒子が，グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオールと，表面修飾剤とを混合することにより製造された微粒子であることを特徴とする，（１）又は（２）に記載の水性懸濁液剤。
（４）  前記グルココルチコステロイド化合物が，プロピオン酸クロベタゾール，酢酸ジフロラゾン，プロピオン酸デキサメタゾン，ジフルプレドナード，フランカルボン酸モメタゾン，吉草酸ジフルコルトロン，酪酸プロピオン酸ベタメタゾン，フルオシノニド，酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン，プロピオン酸ベクロムタゾン，プロピオン酸デプロドン，吉草酸ベタメタゾン，吉草酸デキサメタゾン，吉草酸酢酸プレドニゾロン，フルオシノロンアセトニド，酪酸ヒドロコルチゾン，酪酸クロベタゾン，プロピオン酸アルクロメタゾン，トリアムシノロンアセトニド，フルメタゾンビバル酸エステル，プレドニゾロン，及びヒドロコルチゾンから選択される１種類以上の物質である，（１）〜（３）のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤。
（５）  更に，分散安定剤を含有することを特徴とする，（１）〜（４）のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤。
（６）  前記分散安定剤がポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール及び／又はポリビニルアルコールである，（５）に記載の水性懸濁液剤。
（７）  更に，粘度調整剤を含有することを特徴とする，（１）〜（６）のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤。
（８）  前記粘度調整剤が，メチルセルロース，ヒドロキシルプロピルメチルセルロース，及びポリビニルアルコールから選択される１種類以上の物質である，（７）に記載の水性懸濁液剤。
（９）  前記粘度調整剤を，１〜１０ｍｇ／ｍＬ含有する，（７）又は（８）に記載の水生懸濁液剤。
（１０）  （１）〜（９）のいずれか１項に記載の水性懸濁液剤を含有する医薬組成物。
（１１）  非経口投与用である，（１０）記載の医薬組成物。
（１２）  注射剤又は局所適用製剤である，（１１）記載の医薬組成物。
（１３）  眼用局所適用製剤，耳用局所適用製剤，鼻用局所適用製剤，又は肺用局所適用製剤である，（１２）に記載の医薬組成物。
（１４）  点眼剤，点耳剤，点鼻剤，又は吸入剤である，（１３）記載の医薬組成物。
（１５）  炎症性疾患又は感染性疾患の治療薬または予防薬である，（１０）〜（１４）いずれか１項に記載の医薬組成物。
（１６）  炎症性疾患又は感染性疾患が，全身性の炎症性疾患又は感染性疾患である，（１５）に記載の医薬組成物。
（１７）  炎症性疾患又は感染性疾患が，局所性の炎症性疾患又は感染性疾患である，（１５）に記載の医薬組成物。
（１８）  局所が，眼，耳，鼻（上気道），及び肺（下気道）から選択される１以上の組織又は臓器であるである，（１７）記載の医薬組成物。
（１９）  グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を備える，（１０）〜（１８）いずれか１項に記載の医薬組成物を調製するためのキット。
（２０）  グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオール及び／又は水と，分散安定剤とを混合することを含む，（１０）〜（１８）いずれか１項に記載の医薬組成物の製造方法。
（２１）  グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，グリセリンと，無水クエン酸と，水添大豆レシチンとを混合することを含む，（２０）記載の製造方法。【００１４】
特に，本発明者らは，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を，平均粒子径（以下，「Ｄｖ」という）が３００ｎｍ以下であり，かつ，９０％径（以下，「Ｄ９０」という）が４５０ｎｍ以下（好ましくは，Ｄｖが２５０ｎｍ以下であり，かつ，Ｄ９０が３００ｎｍ以下，又は，Ｄｖが２００ｎｍ以下であり，かつ，Ｄ９０が２５０ｎｍ以下）の微粒子とすることにより，非常に優れた眼房水中への移行性及び抗炎症作用に優れることを見出した。また，このようなナノ粒子を採用することでグルココルチコステロイド化合物の溶解性の向上が期待でき，それにより生物学的利用性を高めて投与量を減少させることが期待できる。平均粒子径は、散乱強度（Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）平均粒子径、体積（Ｖｏｌｕｍｅ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）平均粒子径および個数（Ｎｕｍｂｅｒ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）平均粒子径として測定することができる。好ましくは本明細書ではＤｖは散乱強度平均粒子径を表す。【００１５】
よって，一態様において，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有することを特徴とする水性懸濁液剤に関し，好ましくは，ナノ微粒子のＤｖが３００ｎｍ以下でＤ９０が４５０ｎｍ以下である水性懸濁液剤に関する。例えば，本発明の水性懸濁液剤は，グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオール及び／又は水と，分散安定剤とを混合することにより製造されたグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する。より好ましくは，本発明の水性懸濁液剤は，グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，グリセリンと無水クエン酸と，水添大豆レシチンとを混合することにより製造されたグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する。【００１６】
また，本発明者らは，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有することを特徴とする水性懸濁液剤が，分散安定剤として，ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（以下，「ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール」という）及び／又はポリビニルアルコール（以下，「ＰＶＡ」という）を使用し，かつ／又は，増粘剤として，ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び／又はメチルセルロースを使用することにより長期間にわたり優れた澄明性，分散性，及び保存安定性に優れることを見出した。【００１７】
よって，一態様において，本発明は，Ｄｖが３００ｎｍ以下であり，かつ，Ｄ９０が４５０ｎｍ以下（好ましくは，Ｄｖが２５０ｎｍ以下であり，かつ，Ｄ９０が３００ｎｍ以下，又は，Ｄｖが２００ｎｍ以下であり，かつ，Ｄ９０が２５０ｎｍ以下）のグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有することを特徴とする水性懸濁液剤に関する。また，別の態様において，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を有効成分として含有し，分散安定剤及び／又は粘度調整剤を添加物として含有することを特徴とする水性医薬組成物に関する。【００１８】
本明細書において，「水性医薬組成物」とは，水性の液体状又はゲル状の医薬組成物を意味し，具体的には水性の液体又はゲルにグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子が懸濁された状態の医薬組成物を意味する。よって，特にそれに反する記載がない限り，本明細書において医薬組成物は水性の医薬組成物を意味する。水性医薬組成物は，注射剤及び局所適用製剤を含む。よって，特にそれに反する記載がない限り，本明細書において局所適用製剤は局所に投与するための水性の製剤を意味する。水性医薬組成物は，医薬品としての使用を妨げない限りにおいて粘性を有していてもよく，水状製剤の他，ゲル状製剤を含む。【００１９】
本明細書において，「局所」とは，体の一部を意味し，例えば，患部，その周辺，又は患部の存在する臓器等であり，好ましくは，眼，耳，鼻（上気道）又は肺（下気道）である。【００２０】
具体的には，本発明の注射剤は，全身性または局所の炎症性疾患又は感染性疾患の治療または予防のための注射剤であり得，静脈注射用，皮下注射用，筋肉注射用，点滴用等の注射剤を含む。【００２１】
本明細書において，「局所適用製剤」とは，局所に投与することを目的とした医薬組成物を意味する。好ましくは，局所適用製剤は，眼用局所適用製剤（例えば，点眼剤），耳用局所適用製剤（例えば，点耳剤），鼻用局所適用製剤（例えば，点鼻剤）及び肺用局所適用製剤（例えば，吸入剤）を含む。このような局所適用製剤は，眼，耳，鼻又は肺の炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防のための局所適用製剤とすることができる。また，製剤形態としては，例えば，点眼剤，点耳剤，点鼻剤，及び吸入剤とすることができる。本発明の局所適用製剤は，好ましくは，眼の炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防のための眼用局所適用製剤（点眼剤を含む），耳の炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防のための耳用局所適用製剤（点耳剤を含む），鼻の炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防のための鼻用局所適用製剤（点鼻剤を含む），あるいは，肺の炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防のための肺用局所適用製剤（吸入剤を含む）であってもよい。【００２２】
また，本発明の水性医薬組成物は，それを必要とする患者の局所に有効量を投与することにより，炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防に用いることができる。即ち，一態様において，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有し，随意に分散安定剤及び／又は粘度調整剤を含有することを特徴とする水性懸濁液剤又は該水性懸濁液剤を含有する医薬組成物を，それを必要とする患者に有効量を投与することを含む，炎症性疾患又は感染性疾患の治療方法又は予防方法に関する。例えば，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有し，随意に分散安定剤も含有することを特徴とする局所適用製剤を，それを必要とする患者の局所に有効量を投与することを含む，炎症性疾患又は感染性疾患の治療方法又は予防方法を含む。【００２３】
あるいは，本発明は，水性医薬組成物（例えば，注射剤及び局所適用製剤）を製造するための，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子（及び，随意に分散安定剤及び／又は粘度調整剤）又は，該ナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤の使用に関する。【００２４】
本明細書において，「グルココルチコステロイド化合物」とは，グルココルチコイド及びその誘導体化合物であれば特に限定されるものではない。グルココルチコステロイド化合物としては，例えば，プロピオン酸クロベタゾール，酢酸ジフロラゾン，プロピオン酸デキサメタゾン，ジフルプレドナード，フランカルボン酸モメタゾン，吉草酸ジフルコルトロン，酪酸プロピオン酸ベタメタゾン，フルオシノニド，酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン，プロピオン酸ベクロムタゾン，プロピオン酸デプロドン，吉草酸ベタメタゾン，吉草酸デキサメタゾン，吉草酸酢酸プレドニゾロン，フルオシノロンアセトニド，酪酸ヒドロコルチゾン，酪酸クロベタゾン，プロピオン酸アルクロメタゾン，トリアムシノロンアセトニド，フルメタゾンビバル酸エステル，プレドニゾロン，及びヒドロコルチゾンを挙げることができ，好ましくは，プロピオン酸クロベタゾールである。【００２５】
本明細書において，「水性懸濁液剤」とは，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子が懸濁された水性液剤を意味する。本明細書において，水性懸濁液剤は，それ自体が医薬品として投与可能な医薬組成物を構成していてもよいし，適宜他の成分や希釈剤が添加されることにより医薬組成物を構成するもの（例えば，医薬組成物の原料）であってもよいし，特に医薬品として使用されないものでもよい。【００２６】
本明細書における水性懸濁液剤は，分散安定化された水性懸濁液剤を含む。分散安定化されたとは，攪拌等により分散させた後，室温（２５℃）で２４時間（好ましくは，２日，３日，４日，５日，６日，７日，１月，２月，３月，４月，５月，６月，１年，又は２年間）静置後において，（１）沈殿が目視で確認できない，（２）澄明性が高い，（３）顕微鏡観察で凝集物・結晶が観察されない，（４）Ｄｖの値が実質的に変化しない（５０％以上増加しない）のいずれか，又は２以上の性質を有する。好ましくは，本明細書におけるグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤は，試験管封入から７日後において，沈殿物が目視で確認できず，澄明性が高く，かつ，顕微鏡観察において凝集物・結晶が確認されない水性懸濁液剤である。【００２７】
澄明性は，日本薬局方収載の澄明性試験法に準じて判定することができる。具体的には，以下の手順で判定することができる：ホルマジン標準乳濁液５ｍＬに水を加えて１００ｍＬとし，濁りの比較液とする。被検水性懸濁液剤及び新たに調製した濁りの比較液を，それぞれ内径１５ｍｍの無色透明のガラス製平底試験管に液層が深さ３０ｍｍ又は４０ｍｍになるようにとり，散乱光中で黒色の背景を用い，上方から観察して比較する。被検水性懸濁液剤の澄明性が水又は用いた溶媒と同じか，その濁りの度合いが濁りの比較液以下のとき，澄明性が高いと判定することができる。あるいは，被検水性懸濁液剤及び新たに調製した濁りの比較液につき，層長５０ｍｍのセルを用い，水又は用いた溶媒を対照として紫外可視吸光度測定法により試験を行い，６６０ｎｍにおける透過率を測定し，被検水性懸濁液剤の透過率が濁りの比較液以上のとき，澄明性が高いと判定することができる。【００２８】
別の態様において，本発明の局所適用製剤は，眼房水への移行性を有する眼用局所適用製剤である。ここで「眼房水への移行性を有する」とは，０．０５％（ｗ／ｖ）に調整したグルココルチコステロイド化合物の水性局所適用製剤の１回点眼投与から６０分後において，眼房水中のグルココルチコステロイド化合物濃度（平均値）が４５ｎｇ／ｍＬ以上（好ましくは，５０ｎｇ／ｍＬ以上，５５ｎｇ／ｍＬ以上，６０ｎｇ／ｍＬ以上，６５ｎｇ／ｍＬ以上，７０ｎｇ／ｍＬ以上，７５ｎｇ／ｍＬ以上）であることを意味する。あるいは，「眼房水への移行性を有する」とは，０．０５％（ｗ／ｖ）に調整したグルココルチコステロイド化合物の水性局所適用製剤の１回点眼投与から３０分後において，眼房水中のグルココルチコステロイド化合物濃度（平均値）が４０ｎｇ／ｍＬ以上（好ましくは，５０ｎｇ／ｍＬ以上，５５ｎｇ／ｍＬ以上，６０ｎｇ／ｍＬ以上，６３ｎｇ／ｍＬ以上，６４ｎｇ／ｍＬ以上，６５ｎｇ／ｍＬ以上，７０ｎｇ／ｍＬ以上，７５ｎｇ／ｍＬ以上）であることを意味する。【００２９】
更に，別の態様において，本発明の局所適用製剤は，結膜への移行性を有する眼用局所適用製剤である。ここで「結膜への移行性を有する」とは，０．０５％（ｗ／ｖ）に調整したグルココルチコステロイド化合物の水性局所適用製剤の１回点眼投与から１５分後において，結膜中のグルココルチコステロイド化合物濃度（平均値）が５００ｎｇ／ｍＬ以上（好ましくは，６５９ｎｇ／ｍＬ以上，９００ｎｇ／ｍＬ以上，９７２ｎｇ／ｍＬ以上，１０００ｎｇ／ｍＬ以上，１２００ｎｇ／ｍＬ以上，１２１０ｎｇ／ｍＬ以上，１４００ｎｇ／ｍＬ以上，１４５５ｎｇ／ｍＬ以上，１５００ｎｇ／ｍＬ以上，又は２０００ｎｇ／ｍＬ以上，２１４１ｎｇ／ｍＬ以上）であることを意味する。【００３０】
眼房水への移行性及び結膜への移行性は，適切な実験動物を用いて，本願実施例に記載の方法に準じて行うことができ，例えば，以下の方法で行うことができる。ウサギの下眼瞼を穏やかに引き離し，左眼の結膜嚢内に被験物質をピペットを用いて点眼（単回点眼投与）し，点眼後，上下眼瞼を緩やかに合わせ約２秒間保持する。点眼１５分，３０分，６０分および９０分後に麻酔を行い，放血安楽死させ，注射用水で眼をよく洗浄した後，眼房水又は結膜を採取する。採取した眼房水中のグルココルチコステロイド化合物濃度は，採取した眼房水にメタノールおよび内標準（プレドニゾロン）溶液を加えて攪拌後，さらにアセトニトリルを加えて攪拌し，遠心（１３１００×ｇ，４℃，５分）して得られた上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法で測定することにより決定することができる。また，採取した結膜中のグルココルチコステロイド化合物濃度は，得られた結膜の湿重量に対して９倍容量の超純水を加えてホモジナイズし，メタノールおよび内標準（プレドニゾロン）溶液を加えて攪拌後，さらにアセトニトリルを加えて攪拌し，遠心（１３１００×ｇ，４℃，５分）して得られた上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法で測定することにより決定することができる。【００３１】
別の態様において，本発明の局所適用製剤は，眼房水中のタンパク質濃度の上昇率を低下させることができる眼用局所適用製剤である。ここで，「眼房水中のタンパク質濃度の上昇率を低下させることができる」とは，０．０５％（ｗ／ｖ）又は０．１％（ｗ／ｖ）に調整したグルココルチコステロイド化合物の水性局所適用製剤の４０μＬを，実験動物（例えば，ウサギ）の角膜穿刺前後に３０〜６０分間隔で７回投与（好ましくは，角膜穿刺を０分として，１８０分前，１２０分前，６０分前，３０分前，３０分後，６０分後，及び９０分後の７回投与）し，投与終了から３０分後の眼房水中のタンパク質濃度が，角膜穿刺していない眼房水中のタンパク質濃度の３倍未満（好ましくは，２．５倍未満，又は２倍未満）であることを意味する。【００３２】
別の態様において，本発明の局所適用製剤は，眼の炎症抑制作用を発揮可能な眼用局所適用製剤である。より詳細には，本発明の局所適用製剤は，炎症メディエーターであるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の産生を抑制可能な眼用局所適用製剤である。ここで，「ＰＧＥ２の産生を抑制可能」とは，０．０５％（ｗ／ｖ）又は０．１％（ｗ／ｖ）に調整したグルココルチコステロイド化合物の水性局所適用製剤の４０μＬを，実験動物（例えば，ウサギ）の角膜穿刺前後に３０〜６０分間隔で７回投与（好ましくは，角膜穿刺を０分として，１８０分前，１２０分前，６０分前，３０分前，３０分後，６０分後，及び９０分後の７回投与）し，投与終了から３０分後の眼房水中のＰＧＥ２濃度が，同様に投与したＤｕｒｅｚｏｌｅ （登録商標）投与群におけるＰＧＥ２濃度と比較して低いことを意味する。【００３３】
本発明の眼用局所適用製剤は，上述の眼房水への移行性，結膜への移行性，眼房水中のタンパク質濃度の上昇率が低い，及び眼の炎症抑制作用から選択される２以上（２種類，３種類，又は全て）の性質を有していても良い。【００３４】
ある態様において，本発明の水性懸濁液剤は，刺激性が低い水性懸濁液剤である。ここで，刺激性が低いとは，該水性懸濁液剤が対象に投与された際に，従来用いられてきた同じ有効成分を含有する水性製剤と比較して刺激性の反応（例えば，発赤，腫脹，充血等の炎症性反応）の程度が低いことを意味する。被検水性懸濁液剤の刺激性が低いかどうかは，例えば，Ｊｏｎａｓ，Ｊ．Ｋｕｅｈｎｅら，Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ（２００４）１３８：５４７−５５３記載の方法に準じてウサギの眼に被検水性懸濁液剤を投与し，眼の炎症の程度を測定して，標準液剤（同上）より炎症の程度が低い場合には刺激性が低いとして判定することができる。より具体的には，点眼剤の場合，刺激性は，グルココルチコステロイド化合物の濃度が１．０％の製剤を３０分〜数時間間隔で１日１〜２０回点眼し，投与前，最終投与後１，３，５，２４時間における角膜，虹彩，及び結膜を観察し，Ｄｒａｉｚｅの評価基準（ＯＥＣＤ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ  ＦＯＲ  ＴＥＳＴＩＮＧ  ＯＦ  ＣＨＥＭＩＣＡＬＳ  ４０５  （２４  Ｆｅｂ．  １９８７）Ａｃｕｔｅ  Ｅｙｅ  Ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ／Ｃｏｒｒｏｓｉｏｎ参照）に従いスコア化することにより判定することができる。【００３５】
本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，１種類又は２種類以上の生理学的に許容される塩を含有していてもよい。本明細書における「生理学的に許容される塩」としては，例えば，塩化ナトリウム，塩化カリウム，塩化アンモニウム，硫酸ナトリウム，硫酸マグネシウム，硫酸カリウム，硫酸カルシウム，リンゴ酸ナトリウム，クエン酸ナトリウム，クエン酸二ナトリウム，クエン酸二水素ナトリウム，クエン酸二水素カリウム，リン酸二水素ナトリウム，リン酸二水素カリウム，リン酸水素二ナトリウム，及びリン酸水素二カリウム等が挙げられる。塩化ナトリウム，塩化カリウム，硫酸マグネシウム，硫酸カルシウム，クエン酸ナトリウム，リン酸二水素ナトリウム，リン酸二水素カリウム，リン酸水素二ナトリウム，リン酸水素二カリウム等を挙げることができ，好ましくは塩化ナトリウムである。【００３６】
本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，生理学的に許容される塩を０．０１〜１０％含有することができ，好ましくは０．１〜５％であり，例えば，０．５〜３％，０．８〜２％含有することもできる。あるいは，本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，生理学的に許容される塩を０．０１〜５０ｍｇ／ｍＬ，０．１〜２０ｍｇ／ｍＬ，又は１〜５ｍｇ／ｍＬ含有することができる。【００３７】
本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，１種類又は２種類以上の界面活性剤を含有していてもよく，かつ／又は，１種類又は２種類以上の凝集防止剤を含有していてもよい。【００３８】
本明細書において，「界面活性剤」とは，医薬品添加物としてヒトに投与しても毒性を示さない界面活性剤であって，グルココルチコステロイド化合物の作用を妨げない界面活性剤であれば特に限定されるものではなく，例えば，ポロクサマー４０７，ポロクサマー２３５，ポロクサマー１８８等のポリオキシエチレン（以下，「ＰＯＥ」という）−ポリオキシプロピレン（以下，「ＰＯＰ」という）ブロックコポリマー；ポロキサミン等のエチレンジアミンのポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー付加物；モノラウリル酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート２０），モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０），ポリソルベート６０などのＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類；ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油などのＰＯＥ硬化ヒマシ油；ＰＯＥ（９）ラウリルエーテルなどのＰＯＥアルキルエーテル類；ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（４）セチルエーテルなどのＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類；ＰＯＥ（１０）ノニルフェニルエーテルなどのＰＯＥアルキルフェニルエーテル類；ＰＯＥ（１０５）ＰＯＰ（５）グリコール，ＰＯＥ（１２０）ＰＯＰ（４０）グリコール，ＰＯＥ（１６０）ＰＯＰ（３０）グリコール，ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（２０）グリコール，ＰＯＥ（２００）ＰＯＰグリコール（７０），ＰＯＥ（３）ＰＯＰ（１７）グリコール，ＰＯＥ（４２）ＰＯＰ（６７）グリコール，ＰＯＥ（５４）ＰＯＰ（３９）グリコール，ＰＯＥ（１９６）ＰＯＰ（６７）グリコールなどのＰＯＥ・ＰＯＰグリコール類等の非イオン性界面活性剤；アルキルジアミノエチルグリシンなどのグリシン型，ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタインなどの酢酸ベタイン型，イミダゾリン型などの両性界面活性剤；ＰＯＥ（１０）ラウリルエーテルリン酸ナトリウムなどのＰＯＥアルキルエーテルリン酸及びその塩，ラウロイルメチルアラニンナトリウムなどのＮ−アシルアミノ酸塩，アルキルエーテルカルボン酸塩，Ｎ−ココイルメチルタウリンナトリウムなどのＮ−アシルタウリン塩，テトラデセンスルホン酸ナトリウムなどのスルホン酸塩，ラウリル硫酸ナトリウムなどのアルキル硫酸塩，ＰＯＥ（３）ラウリルエーテル硫酸ナトリウムなどのＰＯＥアルキルエーテル硫酸塩，α−オレフィンスルホン酸塩などの陰イオン界面活性剤；アルキルアミン塩，アルキル４級アンモニウム塩（塩化ベンザルコニウム，塩化ベンゼトニウムなど），アルキルピリジニウム塩（塩化セチルピリジニウム，臭化セチルピリジニウムなど）などの陽イオン界面活性剤等を挙げることができる。本発明の水性懸濁液剤は，界面活性剤として，１種類の界面活性剤を含有していてもよく，又は，２種類以上の界面活性剤を含有していてもよい。【００３９】
また，本明細書において，「凝集防止剤」は，グルココルチコステロイド化合物の凝集を防止することができ，人体に投与して毒性を示さない物質であって，グルココルチコステロイド化合物の作用を妨げない凝集防止剤であれば特に限定されるものではなく，例えば，アルキル硫酸塩，Ｎ−アルキロイルメチルタウリン塩，エタノール，グリセリン，プロピレングリコール，クエン酸ナトリウム，グリセロリン脂質（レシチン（ホスファチジルコリン）（例えば，精製大豆レシチン，水添大豆レシチン），ホスファチジルセリン，ホスファチジルエタノールアミン，ホスファチジルイノシトール，ホスファチジン酸，ホスファチジルグリセロール，リゾホスファチジルコリン，リゾホスファチジルセリン，リゾホスファチジルエタノールアミン，リゾホスファチジルイノシトール，リゾホスファチジン酸，及びリゾホスファチジルグリセロール），及びスフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン，セラミド，スフィンゴ糖脂質，又はガングリオシド）等のリン脂質，Ｄ−ソルビトール，乳糖，キシリトール，アラビアゴム，ショ糖脂肪酸エステル，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油，ポリオキシエチレン脂肪酸エステル，ポリエチレングリコール（ＰＥＧ），ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，アルキルベンゼンスルホン酸塩，スルホコハク酸エステル塩，ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール，ポリビニルピロリドン，ＰＶＡ，ヒドロキシプロピルセルロース，メチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カルメロースナトリウム，カルボキシビニルポリマー，Ｎ−アシル−グルタミン酸塩，アクリル酸コポリマー，メタクリル酸コポリマー，カゼインナトリウム，Ｌ−バリン，Ｌ−ロイシン，Ｌ−イソロイシン，塩化ベンザルコニウム，塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。本発明の水性懸濁液剤は，凝集防止剤として１種類を含有していてもよく，又は，２種類以上の凝集防止剤を含有していてもよい。【００４０】
本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，凝集防止剤を０．００１〜１０％，又は０．０１〜１０％含有することができ，好ましくは０．０２〜５％であり，例えば，０．０３〜１％，０．０４〜０．５％，０．０５〜０．２％，含有することもできる。あるいは，本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，凝集防止剤を０．０１〜５０ｍｇ／ｍＬ，０．１〜２０ｍｇ／ｍＬ，又は１〜５ｍｇ／ｍＬ含有することができる。【００４１】
界面活性剤及び／又は凝集防止剤として，好ましくは，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０（例えば，ＨＣＯ−６０），ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０（例えば，ＨＣＯ−４０），ポリソルベート８０（例えば，Ｔｗｅｅｎ８０），ポリソルベート２０（例えば，Ｔｗｅｅｎ２０），ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール（例えば，プロノン４０７Ｐ，プルロニックＦ６８，ユニルーブ７０Ｄ  Ｐ−９５０Ｂ，及びＰＶＡ（例えば，クラレポバール２１７ｃ）から選択される１種類以上の物質であり，より好ましくは，ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール及びＰＶＡから選択される１種類以上の物質である。【００４２】
本明細書において，「粘度調整剤」とは，本発明の水性懸濁液剤の粘度を調製することが可能な物質であって，医薬品添加物としてヒトに投与しても毒性を示さない物質であって，グルココルチコステロイド化合物の作用を妨げない物質であれば特に限定されるものではなく，例えば，多糖類又はその誘導体（アラビアゴム，カラヤガム，キサンタンガム，キャロブガム，グアーガム，グアヤク脂，クインスシード，ダルマンガム，トラガントガム，ベンゾインゴム，ローカストビーンガム，カゼイン，寒天，アルギン酸，デキストリン，デキストラン，カラギーナン，ゼラチン，コラーゲン，ペクチン，デンプン，ポリガラクツロン酸，キチン及びその誘導体，キトサン及びその誘導体，エラスチン，ヘパリン，ヘパリノイド，ヘパリン硫酸，ヘパラン硫酸，ヒアルロン酸，コンドロイチン硫酸など），セラミド，セルロース誘導体（メチルセルロース，エチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カルボキシメチルセルロース，カルボキシエチルセルロース，セルロース，ニトロセルロースなど），ＰＶＡ（完全，又は部分ケン化物），ポリビニルピロリドン，マクロゴール，ポリビニルメタアクリレート，ポリアクリル酸，カルボキシビニルポリマー，ポリエチレンイミン，ポリエチレンオキサイド，ポリエチレングリコール，リボ核酸，デオキシリボ核酸，メチルビニルエーテル・無水マレイン酸共重合体など，及びその薬理学的に許容される塩類（例えば，アルギン酸ナトリウム）等を挙げることができる。本発明の水性懸濁液剤は，粘度調整剤として１種類を含有していてもよく，又は，２種類以上の粘度調整剤を含有していてもよい。粘度調整剤として，好ましくは，ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えば，ＴＣ−５（Ｒ），Ｍｅｔｌｏｓｅ  ６０ＳＨ−５０），ＰＶＡ（クラレポバール２１７Ｃ），及びメチルセルロース（例えば，Ｍｅｔｌｏｓｅ  ＳＭ−１００，Ｍｅｔｌｏｓｅ  ＳＭ−１５）から選択される１種類以上の物質であり，より好ましくは，ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びメチルセルロースから選択される１種類以上の物質である。【００４３】
本発明の水性懸濁液剤は，粘度調整剤を１〜１０ｍｇ／ｍＬ含有することができ，好ましくは１〜５ｍｇ／ｍＬであり，例えば，１〜４ｍｇ／ｍＬ，１〜３ｍｇ／ｍＬ，１〜２ｍｇ／ｍＬ含有することもできる。【００４４】
本明細書における分散安定剤は，上述の界面活性剤，凝集防止剤，及び／又は粘度調整剤として記載した物質を用いることができ，好ましくは，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０，ポリソルベート８０，ポリソルベート２０，ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール，ＰＶＡ，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，及びメチルセルロースから選択される１種類以上の物質であり，より好ましくは，ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール，ＰＶＡ，ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びメチルセルロースから選択される１種類以上の物質である。【００４５】
本明細書において，分散安定剤としても用い得る界面活性剤，凝集防止剤，及び／又は粘度調整剤（以下，本段落において「添加剤」という）は，グルココルチコステロイド化合物のナノ粒子の表面に付着し又は吸着されていてもよい。このような添加剤が粉砕工程前に添加された場合には，グルココルチコステロイド化合物のナノ粒子の表面に付着し又は吸着されることにより，粉砕工程中でのナノ粒子の凝集が抑制される。また，グルココルチコステロイド化合物のナノ粒子の表面に付着し又は吸着されることにより，水性懸濁液中においても凝集を抑制する効果がある。なお，本明細書において，分散安定剤である界面活性剤，凝集防止剤，及び／又は粘度調整剤が，グルココルチコステロイド化合物のナノ粒子の表面に付着し又は吸着されているとは，ナノ粒子表面に少なくとも一部のこれらの添加剤が付着し又は吸着されて（表面修飾に寄与して）いることを意味するものであり，水性懸濁液剤中に付着も吸着もされていないこれらの添加剤が存在しないことを意味するものではない。本明細書において，「表面修飾剤」とは，このようにグルココルチコステロイド化合物のナノ粒子の表面を表面修飾することができる分散安定剤である界面活性剤，凝集防止剤，及び／又は粘度調整剤を意味する。【００４６】
本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，１種類又は２種類以上の生理学的に許容されるポリオールを含有していてもよい。例えば，本発明の医薬組成物は，上述の生理学的に許容されるポリオールを含有することができる。「生理学的に許容されるポリオール」としては，例えば，グリセリン，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール，ジプロピレングリコール，及び，ジエチレングリコール等を挙げることができ，好ましくは，プロピレングリコール又はグリセリンである。本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，生理学的に許容されるポリオールを，例えば，０．００１〜１０％，又は０．０１〜１０％含有することができ，好ましくは０．０２〜５％であり，例えば，０．０３〜１％，０．０４〜０．５％，０．０５〜０．２％，含有することもできる。あるいは，本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，生理学的に許容されるポリオールを０．０１〜１０ｍｇ／ｍＬ，０．０５〜５ｍｇ／ｍＬ，又は０．１〜３ｍｇ／ｍＬ含有することができる。【００４７】
本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物は，油性の溶媒を含有しない。油性の溶媒とは，水に溶けないか，ほとんど溶けない溶媒を意味する。【００４８】
本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物は，ナノ微粒子状である。該グルココルチコステロイド化合物ナノ粒子の平均粒子径（Ｄｖ）は，３００ｎｍ以下であり，好ましくは，２５０ｎｍ以下，２４０ｎｍ以下，２３０ｎｍ以下，２２０ｎｍ以下，２１０ｎｍ以下，２００ｎｍ以下，１９０ｎｍ以下，１８０ｎｍ以下，１７０ｎｍ以下，１６０ｎｍ以下，１５０ｎｍ以下，１４０ｎｍ以下，１３０ｎｍ以下，１２０ｎｍ以下，１１０ｎｍ以下であってもよい。例えば，グルココルチコステロイド化合物の平均粒子径の範囲は，５０〜３００ｎｍ，５０〜２５０ｎｍ，５０〜２４０ｎｍ，５０〜２３０ｎｍ，５０〜２２０ｎｍ，５０〜２１０ｎｍ，５０〜２００ｎｍ，５０〜１９０ｎｍ，５０〜１８０ｎｍ，５０〜１７０ｎｍ，５０〜１６０ｎｍ，５０〜１５０ｎｍ，５０〜１４０ｎｍ，５０〜１３０ｎｍ，５０〜１２０ｎｍ，５０〜１１０ｎｍ，１００〜３００ｎｍ，１００〜２５０ｎｍ，１００〜２４０ｎｍ，１００〜２３０ｎｍ，１００〜２２０ｎｍ，１００〜２１０ｎｍ，１００〜２００ｎｍ，１００〜１９０ｎｍ，１００〜１８０ｎｍ，１００〜１７０ｎｍ，１００〜１６０ｎｍ，１００〜１５０ｎｍ，１００〜１４０ｎｍ，１００〜１３０ｎｍ，１００〜１２０ｎｍ，又は１００〜１１０ｎｍである。【００４９】
また，本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子の９０％径（Ｄ９０）は，４５０ｎｍ以下であり，好ましくは，４００ｎｍ以下，３５０ｎｍ以下，３００ｎｍ以下，２９０ｎｍ以下，２８０ｎｍ以下，２７０ｎｍ以下，２６０ｎｍ以下，２５０ｎｍ以下，２４０ｎｍ以下，２３０ｎｍ以下である。例えば，グルココルチコステロイド化合物の９０％径（Ｄ９０）の範囲は，５０〜４００ｎｍ，５０〜３５０ｎｍ，５０〜３００ｎｍ，５０〜２９０ｎｍ，５０〜２８０ｎｍ，５０〜２７０ｎｍ，５０〜２６０ｎｍ，５０〜２５０ｎｍ，５０〜２４０ｎｍ，５０〜２３０ｎｍ，１００〜４００ｎｍ，１００〜３５０ｎｍ，１００〜３００ｎｍ，１００〜２９０ｎｍ，１００〜２８０ｎｍ，１００〜２７０ｎｍ，１００〜２６０ｎｍ，１００〜２５０ｎｍ，１００〜２４０ｎｍ，又は１００〜２３０ｎｍであってもよい。【００５０】
また，本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子の５０％径（Ｄ５０）は，２００ｎｍ以下であってもよく，好ましくは，１９０ｎｍ以下，１８０ｎｍ以下，１７０ｎｍ以下，１６０ｎｍ以下，１５０ｎｍ以下，１４０ｎｍ以下，１３０ｎｍ以下，１２０ｎｍ以下，１１０ｎｍ以下，１００ｎｍ以下である。例えば，グルココルチコステロイド化合物の５０％径（Ｄ５０）の範囲は，５０〜１９０ｎｍ，５０〜１８０ｎｍ，５０〜１７０ｎｍ，５０〜１６０ｎｍ，５０〜１５０ｎｍ，５０〜１４０ｎｍ，５０〜１３０ｎｍ，５０〜１２０ｎｍ，５０〜１１０ｎｍ，５０〜１００ｎｍ，８０〜１９０ｎｍ，８０〜１８０ｎｍ，８０〜１７０ｎｍ，８０〜１６０ｎｍ，８０〜１５０ｎｍ，８０〜１４０ｎｍ，８０〜１３０ｎｍ，８０〜１２０ｎｍ，８０〜１１０ｎｍ，又は８０〜１００ｎｍであってもよい。【００５１】
本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子は，上述の平均粒子径（Ｄｖ），９０％径（Ｄ９０）及び５０％径（Ｄ５０）から選択される２以上の粒径に関する条件を満たすものであってもよい。また，例えば，本発明の水性懸濁液剤が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子は，平均粒子径（Ｄｖ）が１６６ｎｍ以下，Ｄ５０が１３８ｎｍ以下，及び／又はＤ９０が２４１ｎｍ以下とすることができる。また，例えば，本発明の水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子は，平均粒子径（Ｄｖ）が２０４ｎｍ以下，Ｄ５０が１７７ｎｍ以下，及び／又はＤ９０が３０６ｎｍ以下とすることができる。【００５２】
本発明の水性懸濁液剤はその有効成分であるグルココルチコステロイド化合物がナノ微粒子状であることから，フィルターによる滅菌が可能であり，よって，容易で活性成分の物理化学的性質への影響が少ない滅菌を行うことができる。【００５３】
本発明の水性懸濁液剤が含有するグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子は，好ましくは，グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオールと，分散安定剤とを混合することにより製造されたナノ微粒子である。より好ましくは，本発明のグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子は，グルココルチコステロイド化合物と，生理学的に許容される塩と，生理学的に許容されるポリオールと，分散安定剤とを混合することにより製造されたナノ微粒子であって，粉砕中若しくは粉砕後に，レシチン（例えば，水添大豆レシチン）を添加することにより製造されたナノ微粒子である。【００５４】
本発明の水性懸濁液剤の一例としては，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子；塩化ナトリウム；水添大豆レシチン；グリセリン；無水クエン酸；ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール類，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油，ポリソルベート８０，ＰＶＡ，ＰＯＥ−ＰＯＰブロックコポリマーから選択される１以上の物質；塩化ベンザルコニウム，ソルビン酸またはその塩（ソルビン酸カリウム，ソルビン酸ナトリウム，ソルビン酸トリクロカルバンなど），又は，パラオキシ安息香酸エステル（パラオキシ安息香酸メチル，パラオキシ安息香酸エチル，パラオキシ安息香酸プロピル，パラオキシ安息香酸ブチルなど））；ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び／又はメチルセルロース；並びにクエン酸ナトリウム（クエン酸三ナトリウムを含む）を含有する製剤を挙げることができる。【００５５】
本明細書において，水性懸濁液剤及び医薬組成物は水を主成分として含有することができる。また，本明細書において医薬組成物，水性懸濁液剤及び／又は希釈剤は，必要に応じて添加物として，安定(化)剤，矯味剤，増粘剤，界面活性剤，防腐剤，殺菌剤又は抗菌剤，ｐＨ調節剤，等張化剤，緩衝剤などの各種添加剤を含有していてもよい。【００５６】
防腐剤，殺菌剤又は抗菌剤としては，例えば，ソルビン酸またはその塩（ソルビン酸カリウム，ソルビン酸ナトリウム，ソルビン酸トリクロカルバンなど），パラオキシ安息香酸エステル（パラオキシ安息香酸メチル，パラオキシ安息香酸エチル，パラオキシ安息香酸プロピル，パラオキシ安息香酸ブチルなど），アクリノール，塩化メチルロザニリン，塩化ベンザルコニウム，塩化ベンゼトニウム，塩化セチルピリジニウム，臭化セチルピリジニウム，クロルヘキシジン又はその塩，ポリヘキサメチレンビグアニド，アルキルポリアミノエチルグリシン，ベンジルアルコール，フェネチルアルコール，クロロブタノール，イソプロパノール，エタノール，フェノキシエタノール，リン酸ジルコニウムの銀，マーキュロクロム，ポピドンヨード，チメロサール，デヒドロ酢酸，クロルキシレノール，クロロフェン，レゾルシン，オルトフェニルフェノール，イソプロピルメチルフェノール，チモール，ヒノキチオール，スルファミン，リゾチーム，ラクトフェリン，トリクロサン，８−ヒドロキシキノリン，ウンデシレン酸，カプリル酸，プロピオン酸，安息香酸，ハロカルバン，チアベンダゾール，ポリミキシンＢ，５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン，２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン，ポリリジン，過酸化水素，塩化ポリドロニウム，Ｇｌｏｋｉｌｌ（商品名：例えば，Ｇｌｏｋｉｌｌ  ＰＱ，ローディア社製），ポリジアリルジメチルアンモニウムクロライド，ポリ［オキシエチレン（ジメチルイミニオ）エチレン−（ジメチルイミニオ）エトレンジクロリド］，ポリエチレンポリアミン・ジメチルアミンエピクロルヒドリン重縮合物（商品名：例えば，Ｂｕｓａｎ１１５７，バックマン社製），ビグアニド化合物（コスモシルＣＱ（商品名，ポリヘキサメチレンビグアニド塩酸塩を約２０重量％含有，アピシア社製））など，及びその薬理学的に許容される塩類等が挙げられる。好ましくは，塩化ベンザルコニウムである。【００５７】
ｐＨ調整剤としては，例えば，無機酸（塩酸，硫酸，リン酸，ポリリン酸，ホウ酸など），有機酸（乳酸，酢酸，クエン酸，無水クエン酸，酒石酸，リンゴ酸，コハク酸，シュウ酸，グルコン酸，フマル酸，プロピオン酸，酢酸，アスパラギン酸，イプシロン−アミノカプロン酸，グルタミン酸，アミノエチルスルホン酸など），グルコノラクトン，酢酸アンモニウム，無機塩基（炭酸水素ナトリウム，炭酸ナトリウム，水酸化カリウム，水酸化ナトリウム，水酸化カルシウム，水酸化マグネシウムなど），有機塩基（モノエタノールアミン，トリエタノールアミン，ジイソプロパノールアミン，トリイソプロパノールアミン，リジンなど），ホウ砂，及びその薬理学的に許容される塩類等が挙げられる。【００５８】
等張化剤としては，例えば，無機塩類（例えば，塩化ナトリウム，塩化カリウム，炭酸ナトリウム，炭酸水素ナトリウム，塩化カルシウム，硫酸マグネシウム，リン酸水素ナトリウム，リン酸水素二ナトリウム，リン酸水素二カリウム，チオ硫酸ナトリウム，酢酸ナトリウムなど），多価アルコール類（例えば，グリセリン，プロピレングリコール，エチレングリコール，１，３−ブチレングリコールなど），糖類（例えば，ブトウ糖，マンニトール，ソルビトールなど）等が挙げられる。【００５９】
緩衝剤としては，例えば，トリス緩衝剤，ホウ酸緩衝剤，リン酸緩衝剤，炭酸緩衝剤，クエン酸緩衝剤，酢酸緩衝剤，イプシロン−アミノカプロン酸，アスパラギン酸塩等が挙げられる。具体的には，ホウ酸またはその塩（ホウ酸ナトリウム，テトラホウ酸カリウム，メタホウ酸カリウムなど），リン酸又はその塩（リン酸水素ナトリウム，リン酸二水素ナトリウム，リン酸二水素カリウムなど），炭酸又はその塩（炭酸水素ナトリウム，炭酸ナトリウムなど），クエン酸又はその塩（クエン酸ナトリウム，クエン酸カリウム，無水クエン酸など）等が挙げられる。【００６０】
本明細書において，水性懸濁液剤及び医薬組成物の粘度は，１〜５ｍＰａ・ｓとすることができ，例えば，１〜３ｍＰａ・ｓであってもよい。【００６１】
本明細書においては，特に明示する場合を除き，組成又は含有量における「％」とは，重量％（ｗ／ｗ）を表す。
【発明の効果】
【００６２】
本発明のグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤は，澄明性，分散性，保存安定性，結膜移行性，及び房水移行性に優れ，刺激性が低く，滅菌が容易で，経時安定性および分散安定性に優れていることから，非経口投与用医薬組成物，特には点眼剤として使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】実施例５（１）〜（３）で作製したナノ化点眼懸濁液を点眼後の眼房水中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度の経時変化を示すグラフである。縦軸は眼房水中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（ｎｇ／ｍＬ）を表し，横軸は点眼後の経過時間（分）を表す。黒丸は０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径１００ｎｍ）を表し，黒四角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径３００ｎｍ）を表し，黒三角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径６００ｎｍ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図２】実施例５（１）〜（３）で作製したナノ化点眼懸濁液を点眼後の結膜中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度の経時変化を示すグラフである。縦軸は結膜中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（ｎｇ／ｍＬ）を表し，横軸は点眼後の経過時間（分）を表す。黒丸は０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径１００ｎｍ）を表し，黒四角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径３００ｎｍ）を表し，黒三角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径６００ｎｍ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図３】実施例７（１）〜（４）で作製したナノ化点眼懸濁液を点眼後の眼房水中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度の経時変化を示すグラフである。縦軸は眼房水中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（ｎｇ／ｍＬ）を表し，横軸は点眼後の経過時間（分）を表す。白丸は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｐ（ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−５０）  ３ｍｇ／ｍＬ）を表し，黒丸は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｑ（ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−４０００）  １．５ｍｇ／ｍＬ）を表し，白三角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｒ（ＭＣ（ＳＭ−１００）  ２ｍｇ／ｍＬ）を表し，黒三角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｓ（ＭＣ（ＳＭ−４０００）  １．５ｍｇ／ｍＬ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図４】実施例７（１）〜（４）で作製したナノ化点眼懸濁液を点眼後の結膜中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度の経時変化を示すグラフである。縦軸は結膜中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（ｎｇ／ｍＬ）を表し，横軸は点眼後の経過時間（分）を表す。白丸は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｐ（ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−５０）  ３ｍｇ／ｍＬ）を表し，黒丸は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｑ（ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−４０００）  １．５ｍｇ／ｍＬ）を表し，白三角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｒ（ＭＣ（ＳＭ−１００）  ２ｍｇ／ｍＬ）を表し，黒三角は０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｓ（ＭＣ（ＳＭ−４０００）  １．５ｍｇ／ｍＬ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図５】ウサギＢＳＡ誘発ぶどう膜炎モデルにおける，外眼部の炎症スコアを示すグラフである。縦軸は炎症スコアを表し，横軸は１回目ＢＳＡ投与からの経過日数（１５日後から１８日後）を表す。白抜きは対照群（生理食塩水）を表し，濃いグレーは０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液投与群を表し，淡いグレーは陽性対象群（０．１％フルオロメトロン点眼液投与群）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図６】ウサギＢＳＡ誘発ぶどう膜炎モデルにおける，内眼部の炎症スコアを示すグラフである。縦軸は炎症スコアを表し，横軸は１回目ＢＳＡ投与からの経過日数（１５日後から１８日後）を表す。白抜きは対照群（生理食塩水）を表し，濃いグレーは０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液投与群を表し，淡いグレーは陽性対象群（０．１％フルオロメトロン点眼液投与群）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図７】ウサギＢＳＡ誘発ぶどう膜炎モデルにおける，１回目ＢＳＡ投与２９日後の外眼部（Ａ）及び内眼部（Ｂ）の炎症スコアを示すグラフである。縦軸は炎症スコアを表す。白抜きは対照群（生理食塩水）を表し，濃いグレーは０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液投与群を表し，淡いグレーは陽性対象群（０．１％フルオロメトロン点眼液投与群）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図８】ラットのクロトン誘発結膜炎モデルにおける，結膜重量を表すグラフである。縦軸は結膜重量（ｇ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図９】ラットのカラゲニン誘発結膜浮腫モデルにおける，眼瞼結膜重量を表すグラフである。縦軸は眼瞼結膜重量（ｇ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図１０】ウサギのＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける房水中ＰＧＥ２濃度を示すグラフである。縦軸は房水中ＰＧＥ２濃度（ｐｇ／ｍＬ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図１１】ウサギのＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける硝子体中ＰＧＥ２濃度を示すグラフである。縦軸は硝子体中ＰＧＥ２濃度（ｐｇ／ｍＬ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図１２】ウサギ前房穿刺炎症モデルにおける房水中のタンパク濃度を示すグラフである。縦軸は前房水中のタンパク濃度（ｍｇ／ｍＬ）を表す。値は平均値を示し，エラーバーは標準偏差を示す。
【図１３】ウサギＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける硝子体中ＰＧＥ２濃度を示すグラフである。縦軸は硝子体中ＰＧＥ２濃度（ｐｇ／ｍＬ）を表す。値は平均値を示す。「ｂ．ｉ．ｄ」は、１日２回点眼を、「ｑ．ｉ．ｄ」は１日４回点眼を表す。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
１．グルココルチコステロイド化合物の微粒子を含有する水性懸濁液剤
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子は，グルココルチコステロイド化合物を，生理学的に許容される塩及び生理学的に許容されるポリオールと混合して，前記有機化合物を湿式粉砕することにより製造することができる。このような製造方法は，国際公開ＷＯ２００８／１２６７９７号に詳細に記載されている。混合は，グルココルチコステロイド化合物，生理学的に許容される塩，及び生理学的に許容されるポリオールが最終的に混合されればよく，これら成分の添加順序は限定されるものではない。例えば，該混合は，グルココルチコステロイド化合物に生理学的に許容される塩及び生理学的に許容されるポリオールを添加することにより行ってもよいし，又は生理学的に許容される塩及び生理学的に許容されるポリオールにグルココルチコステロイド化合物を添加することで行ってもよい。特に，本発明の粉体に含まれるグルココルチコステロイド化合物微粒子は，融点が８０℃以上の有機化合物に，生理学的に許容される塩及び生理学的に許容されるポリオールを添加して，前記有機化合物を湿式粉砕することにより製造することができる。本製造方法においては，前記塩及び前記ポリオールを除去することなく水性懸濁液を調製することができる。よって，前記塩及び前記ポリオールを除去する必要が無いことから，非常に簡便な工程により製造可能である。湿式粉砕は，有機化合物，塩及びポリオールを混合し，該混合物を混練することにより，行うことができる。好ましくは，本発明のグルココルチコステロイド化合物の微粒子は，粉砕する工程中若しくは該工程後に，レシチンを添加することにより製造することができる。
【００６５】
グルココルチコステロイド化合物ナノ微粒子は，好ましくは，硬質の固体粉砕助剤を使用せずに湿式粉砕することにより製造され，より好ましくは，ガラス製，ステンレス等の金属製，ジルコニア及びアルミナ等のセラミックス製又は硬質ポリスチレン等の高分子製の固体粉砕助剤を使用せず湿式粉砕することにより製造され，最も好ましくは，本発明のグルココルチコステロイド化合物微粒子は，前記生理学的に許容される塩及び粘度調整剤以外に固体粉砕助剤を使用せず湿式粉砕することにより製造される。
【００６６】
本明細書において，「生理学的に許容される」とは，生理学上特に問題を生じることなく摂取することができると考えられる，という意味であり，ある物質が生理学的に許容される物質であるか否かは，摂取対象である生物種や，摂取の態様等により，適宜決定される。生理学的に許容される溶媒として，例えば，医薬品や食品等の添加剤や溶媒等として認可されている物質等を挙げることができる。
【００６７】
本明細書における「生理学的に許容される塩」は，生理学上特に問題を生じることなく摂取することができる塩であれば特に限定されない。生理学的に許容される塩として，好ましくは，ポリオールに対する溶解性が低い塩，水に対する溶解性が高い塩及び／又は吸湿性の少なく有機化合物の微粉砕化に適した硬さを有している塩である。グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法に用いられる生理学的に許容される塩として，より好ましくは，これらの性質の２以上を備える塩である。生理学的に許容される塩のポリオールに対する溶解度は，好ましくは，１０（質量／容量）％以下である。また，粉砕後の除去を簡便にする場合には，生理学的に許容される塩として，好ましくは水に対する溶解性が高い塩である。具体的には上述の塩が挙げられる。
【００６８】
本明細書における「生理学的に許容される塩」は，グルココルチコステロイド化合物と混合する前に，粉砕等を行って，粒子径を整えておくほうが好ましい。また，必要に応じて，含有水分による粒子融着及び粒子成長を防ぐ目的で，例えば３０〜２００℃の温度で減圧乾燥し，水分含有量を低下させておいてもよい。生理学的に許容される塩の粒子径を予め調整する場合，粒子の体積平均径として，例えば，５〜３００μｍ，１０〜２００μｍであってもよいが，好ましくは０．０１〜３００μｍであり，より好ましくは０．１〜１００μｍであり，更に好ましくは，０．５〜５０μｍであり，最も好ましくは，１〜５μｍである。また，該塩の使用量は，グルココルチコステロイド化合物に対して，１〜１００倍質量であることが好ましく，５〜３０倍質量であることがより好ましく，１０〜２０倍であることが更に好ましい。さらに，該塩は１種類の塩を用いてもよく，２種類以上の塩を混合して用いてもよい。
【００６９】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法に用いられる「生理学的に許容されるポリオール」は，生理学上特に問題を生じることなく摂取することができるポリオールあれば特に限定されない。生理学的に許容されるポリオールとして，好ましくは，塩の溶解性の低いもの，水に対する溶解性が高いもの，凝固点が低いもの及び／又は引火点が高いものである。また，粉砕後の除去を簡便に行う場合には，生理学的に許容されるポリオールは，水に対する溶解性が高いことが好ましい。
【００７０】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法に用いるポリオールは，好ましくは，粘度が高いポリオールである。このようなポリオールの２０℃における粘度としては，例えば，４０ｍＰａ・ｓ以上であり，好ましくは５０ｍＰａ・ｓ以上であり，より好ましくは，８０ｍＰａ・ｓ以上である。グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法に用いるポリオールの２０℃における粘度として，上限は特に限定されるものではないが，例えば，４０ｍＰａ・ｓ以上５，０００ｍＰａ・ｓ以下の範囲から選択可能であり，好ましくは５０ｍＰａ・ｓ以上３，０００ｍＰａ・ｓ以下であり，より好ましくは８０ｍＰａ・ｓ以上２，０００ｍＰａ・ｓ以下である。具体的には上述のポリオールが挙げられる。
【００７１】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法における生理学的に許容されるポリオールの使用量は，微粉砕化する対象である有機化合物に対して，０．５〜１００倍質量であることが好ましく，１〜１０質量倍であることがより好ましい。また，使用するポリオールの種類は，微粉砕化する対象である有機化合物の溶解性を考慮して，適宜決定することができる。さらに，該ポリオールは１種類のポリオールを用いてもよく，２種類以上のポリオールを混合して用いてもよい。
【００７２】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法において，グルココルチコステロイド化合物，ポリオール及び塩の混練物は，粘度が高いことが好ましい。混練物の粘度を上げる方法としては，ポリオールに粘度調整剤を添加した混合物を使用する方法やポリオールとは別個に粘度調整剤を単独で添加する方法が好ましく，粉砕効率を効果的に上げることができる。ポリオールに添加する粘度調整剤としては，上述の物質を使用することができる。このような粘度調整剤を添加したポリオールの２０℃における粘度として，好ましくは１,０００ｍＰａ・ｓ以上であり，より好ましくは２,０００ｍＰａ・ｓ以上であり，更に好ましくは，５，０００ｍＰａ・ｓ以上であり，最も好ましくは，１０，０００ｍＰａ・ｓ以上である。本発明の粘度調整剤を添加したポリオールの２０℃における粘度としては，上限は特に限定されるものではないが，例えば，１，０００ｍＰａ・ｓ以上５，０００,０００ｍＰａ・ｓ以下の範囲から選択可能であり，好ましくは１，０００ｍＰａ・ｓ以上１，０００，０００ｍＰａ・ｓ以下であり，より好ましくは２，０００ｍＰａ・ｓ以上５００，０００ｍＰａ・ｓ以下であり，更に好ましくは，５，０００ｍＰａ・ｓ以上３００，０００ｍＰａ・ｓ以下であり，最も好ましくは，１０，０００ｍＰａ・ｓ以上１００，０００ｍＰａ・ｓ以下である。
【００７３】
グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子の製造方法において，グルココルチコステロイド化合物を湿式粉砕するために用いられる粉砕装置は，機械的手段によって，グルココルチコステロイド化合物，塩，ポリオール，及び／又は分散安定剤の混練・分散が可能である能力を有するものであれば，特に制限なく用いることができる。該粉砕装置として，例えば，ニーダー，二本ロール，三本ロール，フレットミル，フーバーマーラー，円盤ブレード混練分散機等の通常用いられている粉砕装置がある。
【００７４】
粉砕温度は，微粉砕化されるグルココルチコステロイド化合物や，粉砕装置等を考慮して適宜決定することができる。粉砕温度として，特に制限はないが，好ましくは−５０〜５０℃であり，より好ましくは−２０〜３０℃であり，最も好ましくは，−１０〜２５℃である。また，粉砕時間は，微粉砕化される有機化合物や，粉砕装置等を考慮して適宜決定することができる。粉砕時間は，例えば，１〜５０時間，２〜３０時間，３〜２０時間，４〜１８時間，５〜１０時間とすることができる。
【００７５】
グルココルチコステロイド化合物の粉砕終了後，粉砕に用いた塩及びポリオールを除去することなく目的の微粉砕化グルココルチコステロイド化合物微粒子を得ることができる。よって，洗浄工程が必要ないことから，より簡便かつ安価にナノ粒子製剤を製造することができる。よって，溶媒中で，ホモジナイザー等を用いて，グルココルチコステロイド化合物，塩，ポリオール及び／又は粘度調整剤の混合物を均一にすることにより製造することができる。該混合物を均一にする際に使用する溶媒は，ポリオール，塩及び粘度調整剤が溶解し易く，かつ，微粉砕されたグルココルチコステロイド化合物が溶解し難い溶媒であって，かつ，生理学的に許容される溶媒であれば，特に限定されるものではない。該溶媒は，水が好ましいが，水以外の溶媒も使用することができる。該水以外の溶媒として，例えば，酢酸，メタノール，エタノール等の有機溶媒を水との混合液がある。また，必要に応じて均一化した混合物を濾過することができる。濾過方法は，特に限定されるものではなく，通常，有機化合物の含有物を濾過するために用いられる公知の方法で行うことができる。該濾過方法として，例えば，減圧濾過法，加圧濾過法，限外濾過膜法等がある。
【００７６】
微粉砕化粒子は，通常，高い表面エネルギーを有しているため，凝集し易い。従って，塩等を除去した後，二次凝集を防止するために上述の凝集防止剤を加えてもよい。凝集防止剤は１種類を用いてもよく，２種類以上を混合して用いてもよい。
【００７７】
塩及びポリオールを除去した後，乾燥処理を行うことにより，得られた微粉砕化グルココルチコステロイド化合物微粒子から，塩等の除去に用いた溶媒を除去することができる。該乾燥方法は，特に限定されるものではなく，通常，有機化合物を乾燥するために用いられる方法で行うことができる。該乾燥方法として，例えば，減圧乾燥法，凍結乾燥法，噴霧乾燥法，凍結噴霧乾燥法等がある。該乾燥における乾燥温度や乾燥時間等は特に制限されるものではないが，医療用有機化合物粒子の化学的安定性の保持及び粒子の二次凝集を防止するめに，該乾燥は低温で行うことが好ましく，凍結乾燥法，噴霧乾燥法，凍結噴霧乾燥法で行うことが好ましい。
【００７８】
グルココルチコステロイド化合物の製造方法により得られる微粉砕化グルココルチコステロイド化合物微粒子の平均粒子径の範囲としては，上述の本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子の平均粒子径と同様とすることができる。また，グルココルチコステロイド化合物の製造方法により得られる微粉砕化グルココルチコステロイド化合物微粒子の９０％径（Ｄ９０）及び５０％径（Ｄ５０）の範囲も，上述の本発明の水性懸濁液剤又は水性医薬組成物が含有するグルココルチコステロイド化合物ナノ粒子の，それぞれ，９０％径（Ｄ９０）及び５０％径（Ｄ５０）と同様とすることができる。
【００７９】
本明細書でいう「平均粒子径」又は「Ｄｖ」とは，動的光散乱光子相関法によって測定される粒度分布における算術平均径を意味する。５０％径（メディアン径，Ｄ５０ともいう）は，上記測定法にて測定される粒度分布において粉体をある粒子径から２つに分けたとき，大きい側と小さい側が等量となる径を意味する。「９０％径」とは，上記測定法にて測定される粒度分布において粒子径の小さい側から順に０（最小）〜１００％（最大）までカウントしたときの９０％の位置にある粒子径（Ｄ９０）を意味する。「１０％径」とは，上記測定法にて測定される粒度分布において粒子径の小さい側から順に０（最小）〜１００％（最大）までカウントしたときの１０％の位置にある粒子径（Ｄ１０）を意味する。動的光散乱光子相関法による測定方法，及び粒度分布の算出方法については，当技術分野において広く知られている。
【００８０】
２．医薬組成物
また，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有することを特徴とする医薬組成物に関する。好ましくは，本発明の医薬組成物は非経口投与用医薬組成物であり，例えば，注射剤又は局所適用製剤とすることができる。本明細書において，医薬組成物の種類は特に限定されず，剤型としては，眼用局所適用製剤（例えば，点眼剤），耳用局所適用製剤（例えば，点耳剤），鼻用局所適用製剤（例えば，点鼻剤），懸濁剤，軟膏，クリーム剤，ゲル剤，吸入剤，注射剤（例えば，静脈注射用注射剤，皮下投与用注射剤，筋肉注射用注射剤，点滴）等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製することができる。好ましくは，本発明の医薬組成物は分散安定剤を含有する。注射剤の場合には，本発明のグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を水に懸濁させて調製されるが，必要に応じて生理食塩水或いはブドウ糖溶液に懸濁させてもよく，また分散剤，緩衝剤や保存剤を添加してもよい。本発明の医薬組成物は，例えば，静脈内投与用，筋肉内投与用，若しくは皮下投与用などの注射剤，点滴剤，経皮吸収剤，経粘膜吸収剤，点眼剤，点耳剤，点鼻剤，吸入剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。
【００８１】
本発明の医薬組成物は，薬理学的に許容される担体（製剤用添加物）を含有していてもよい。医薬組成物の製造に用いられる製剤用添加物の種類，有効成分に対する製剤用添加物の割合，又は医薬組成物の製造方法は，組成物の形態に応じて当業者が適宜選択することが可能である。製剤用添加物としては無機又は有機物質，或いは固体又は液体の物質を用いることができ，一般的には，有効成分重量に対して１重量％から９０重量％の間で配合することができる。具体的には，その様な物質の例として乳糖，ブドウ糖，マンニトール，デキストリン，シクロデキストリン，デンプン，蔗糖，メタケイ酸アルミン酸マグネシウム，合成ケイ酸アルミニウム，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ヒドロキシプロピルデンプン，カルボキシメチルセルロースカルシウム，イオン交換樹脂，メチルセルロース，ゼラチン，アラビアゴム，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，ポリビニルピロリドン，ＰＶＡ，軽質無水ケイ酸，ステアリン酸マグネシウム，タルク，トラガント，ベントナイト，ビーガム，酸化チタン，ソルビタン脂肪酸エステル，ラウリル硫酸ナトリウム，グリセリン，脂肪酸グリセリンエステル，精製ラノリン，グリセロゼラチン，ポリソルベート，マクロゴール，植物油，ロウ，流動パラフィン，白色ワセリン，フルオロカーボン，非イオン性界面活性剤，プロピレングルコール，水，塩化ベンザルコニウム，塩酸，塩化ナトリウム，水酸化ナトリウム，乳酸，ナトリウム，リン酸一水素ナトリウム，リン酸二水素ナトリウム，クエン酸，クエン酸ナトリウム，エデト酸２ナトリウム，ポロキサマー４０７，ポリカルボフィル等が挙げられる。例えば，本発明の医薬組成物は，ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール，ＰＶＡ，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，及びメチルセルロースから選択される１種類以上の製剤用添加物を含有する。
【００８２】
本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物は，キットの形態で，外箱，容器，希釈剤，濁液剤，及び／又は調製方法・投与方法に関する説明書と共に含めることができる。本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物がキットとして供給される場合，該水性懸濁液剤又は医薬組成物のうち異なる構成成分が別々の容器中に包装され，一つのキットに含まれていてもよいし，あるいは，該水性懸濁液剤又は医薬組成物のうち一以上の一部の構成成分（少なくとも，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含む）のみがキットに含まれ，別の構成成分がキットとは別に提供されていてもよい。また，本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物がキットとして供給される場合，本発明の水性懸濁液剤又は医薬組成物を得るため，好ましくは，必要な構成成分が使用直前に混合される。
【００８３】
例えば，本発明のキットは，以下のキットとすることができる：
（ａ）グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤を備える，医薬組成物を調製するためのキット
（ｂ）  更に，分散安定剤を備えることを特徴とする，（ａ）に記載のキット；
（ｃ）  前記分散安定剤がＰＯＥ・ＰＯＰグリコール，ＰＶＡ，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，及びメチルセルロースから選択される１種類以上の物質である（ｂ）に記載のキット；
（ｄ）  非経口投与用医薬組成物を調製するためのキットである，（ａ）〜（ｃ）のいずれか１項に記載のキット；
（ｅ）  注射剤又は局所適用製剤を調製するためのキットである，（ａ）〜（ｄ）のいずれか１項に記載のキット。
（ｆ）  眼用局所適用製剤，耳用局所適用製剤，鼻用局所適用製剤，若しくは肺用局所適用製剤，又は，点眼剤，点耳剤，点鼻剤，若しくは吸入剤を調製するためのキットである，（ｅ）に記載のキット。
（ｇ）  医薬組成物が眼，耳，鼻，又は肺の炎症性疾患又は感染性疾患の治療薬又は予防薬である，（ａ）〜（ｆ）のいずれか１項に記載のキット。
【００８４】
一態様において，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤と希釈剤とを混合することを含む，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する水性医薬組成物の調製方法であってもよい。
【００８５】
本発明の医薬組成物（例えば，注射剤，眼用局所適用製剤（好ましくは，点眼剤），耳用局所適用製剤（好ましくは，点耳剤），鼻用局所適用製剤（好ましくは，点鼻剤），又は肺用局所適用製剤（好ましくは，吸入剤））を調製する場合，そのｐＨ及び浸透圧については，局所適用製剤として許容されることを限度として，特に制限されないが，ｐＨ５〜９．５とすることが好ましく，ｐＨ６〜９がより好ましく，ｐＨ７〜９が更に好ましい。該製剤（軟膏剤以外の場合）の生理食塩液に対する浸透圧比としては，例えば０．３〜４．３であり，好ましくは０．３〜２．２，特に好ましくは０．５〜１．５程度である。ｐＨや浸透圧の調節は，ｐＨ調整剤，等張化剤，塩類等を用いて，当該技術分野で既知の方法で行うことができる。
【００８６】
本発明の医薬組成物の調製は，適宜公知の方法で行うことができ，例えば，蒸留水または精製水等の適当な希釈剤中で，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子を含有する水性懸濁液剤と任意の配合成分とを混合して，上記の浸透圧及びｐＨに調整し，無菌環境下，高圧蒸気滅菌あるいはろ過滅菌処理し，洗浄滅菌済みの容器に無菌充填することにより製造することができる。
【００８７】
本発明の医薬組成物は，炎症性疾患又は感染性疾患の治療薬又は予防薬とすることができる。例えば，本発明の医薬組成物は，感染に起因する炎症性疾患又は感染性疾患の治療用又は予防用とすることができる。よって，本発明は，医薬（炎症性疾患又は感染性疾患の治療薬又は予防薬）として使用するためのグルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子および分散安定剤を含有することを特徴とする水性懸濁液剤を包含する。
【００８８】
本明細書において，炎症性疾患又は感染性疾患とは，全身性の炎症性疾患及び感染性疾患，並びに局所性の炎症性疾患又は感染性疾患を包含する。炎症性疾患には，感染に起因する炎症性疾患の他，アレルギー性の炎症性疾患（例えば，アレルギー性鼻炎，アレルギー性結膜炎，アレルギー性皮膚炎，アレルギー性湿疹，アレルギー性喘息，アレルギー性肺炎）も含まれる。全身性の炎症性疾患としては，表在性・深在性皮膚感染症，リンパ管・リンパ節炎，乳腺炎，骨髄炎，扁桃炎，肺炎，腎盂腎炎，尿道炎，淋菌感染症，梅毒，子宮内感染，猩紅熱，ジフテリア，百日咳，外傷・火傷及び手術等の二次感染，咽頭・喉頭炎，気管支炎，慢性呼吸器病変の二次感染，歯冠周囲炎，歯周組織炎，破傷風，膀胱炎，前立腺炎，感染性腸炎，顎炎，感染性関節炎，胃炎等の全身の炎症性疾患又は感染性疾患を挙げることができる。
【００８９】
具体的には，本発明の医薬組成物は，眼の炎症性疾患及び感染性疾患並びにそれらに付随する多様な症状を治療または予防するために使用することができる。眼の炎症性疾患及び感染性疾患としては，例えば，眼瞼炎，眼瞼結膜炎，マイボーム腺炎，急性もしくは慢性麦粒腫，霰粒腫，涙嚢炎，涙腺炎，および酒さ性座瘡を含む眼瞼の症状；結膜炎，新生児眼炎，およびトラコーマを含む結膜の症状；角膜潰瘍，表在性角膜炎および角膜実質炎，角結膜炎，異物，および術後感染症を含む角膜の症状；ならびに眼内炎，感染性ぶどう膜炎，および術後感染症を含む前眼房およびぶどう膜の症状を挙げることができる。感染症の予防としては，手術等の外科処置前，感染性症状を呈する者との接触前に投与することを含む。予防のために使用する場合，例えば，眼瞼形成術，霰粒腫の摘出，瞼板縫合術，カニュアリキュリや涙管排液システムのための手術，および眼瞼と涙器に関係する他の外科処置といった外科処置；翼状片，結膜脂肪斑および腫瘍の摘出，結膜移植，切り傷，火傷および擦過といった外傷性の傷，および結膜被覆術を含む結膜の手術；異物の除去，角膜切開術および角膜移植を含む角膜の手術；光屈折率処置を含む屈折率手術；ブレブの濾過を含む緑内障手術；前眼房の穿刺；虹彩切除術；白内障手術；網膜手術；ならびに外眼筋に関係する手術の前に投与することができる。また，新生児眼炎の予防も本明細書における予防に含まれる。
【００９０】
例えば，本発明の医薬組成物は，耳の炎症性疾患又は感染性疾患に付随する多様な症状の治療又は予防に使用することができる。耳の炎症性疾患又は感染性疾患としては，例えば，中耳炎，又は外耳炎を挙げることができる。感染症の予防とは，手術前の処置，並びに感染の可能性のある状態（例えば，感染が疑われる人又は感染した人との接触）の前の処置を含む。予防的状況の例としては，耳の外傷若しくは損傷を伴う外科的処置及びその他の手術又は処置の前の治療が挙げられる。
【００９１】
また，本発明の医薬組成物は，鼻の炎症性疾患又は感染性疾患に付随する多様な症状を治療又は予防することができる。なお，本明細書全体にわたって「鼻の炎症性疾患又は感染性疾患」，及び「鼻用局所適用製剤」の語における「鼻」とは，上気道全体を含む意味であり，例えば鼻腔，鼻咽喉，咽頭，及び喉頭を含むものである。鼻の炎症性疾患又は感染性疾患としては，例えば，副鼻腔炎，アレルギー性鼻炎，及び鼻炎を挙げることができる。
【００９２】
また，本発明の医薬組成物は，肺の炎症性疾患又は感染性疾患に付随する多様な症状の治療又は予防に使用することができる。なお，本明細書全体にわたって「肺の炎症性疾患又は感染性疾患」，及び「肺用局所適用製剤」の語における「肺」とは，下気道全体を含む意味であり，例えば気管，気管支，細気管支，及び肺を含むものである。肺の炎症性疾患又は感染性疾患としては，例えば，肺炎，気管支炎，アレルギー性肺炎，及び喘息等を挙げることができる。
【００９３】
より好ましくは，本発明の医薬組成物は多様な細菌または寄生虫により引き起こされる感染性疾患（例えば，眼，耳，鼻又は肺の感染性疾患）の治療または予防に使用することができる。そのような微生物としては，例えば，黄色ブドウ球菌および表皮ブドウ球菌を含むブドウ球菌属；肺炎連鎖球菌および化膿連鎖球菌ならびにＣ，ＦおよびＧ群の連鎖球菌およびビリダンス群の連鎖球菌を含む連鎖球菌属；バイオタイプＩＩＩを含むインフルエンザ菌；軟性下疳菌；モラクセラ・カタラリス；淋菌および髄膜炎菌を含むナイセリア属；トラコーマクラジミア，オウム病クラジミアおよびクラジミア・ニューモニエを含むクラジミア属；ヒト結核菌およびトリ結核菌細胞内複合体ならびにミコバクテリウム・マリナム，ミコバクテリウム・フォルツイツムおよびカメ結核菌を含む非定型ミコバクテリウム菌を含むミコバクテリウム属；百日咳菌；カンピロバクター・ジェジュニ；レジオネラ・ニューモフィラ；バクテロイデス・ビビウス；ウェルシュ菌；ペプトストレプトコッカススピーシーズ；ボレリア・ブルグドルフェリ；肺炎マイコプラスマ；梅毒トレポネーマ；ウレアプラスマ・ウレアリチカム；トキソプラスマ；マラリア；ならびにノセマを挙げることができる。
【００９４】
３．治療方法・予防方法
本発明の医薬組成物は，それを必要とする患者に有効量を投与することにより，炎症性疾患又は感染性疾患の治療又は予防に用いることができる。よって，本発明は，グルココルチコステロイド化合物のナノ微粒子（および分散安定剤）を含有することを特徴とする水性懸濁液剤を含む医薬組成物を，それを必要とする患者に有効量を投与することを含む，炎症性疾患又は感染性疾患の治療方法又は予防方法に関する。ここで，対象となる患者は，哺乳類に分類される任意の動物を意味し，これに限定されるものではない。例として，ヒト；イヌ，ネコ，ウサギなどの愛玩動物；ウシ，ブタ，ヒツジ，ウマなどの家畜動物を含み，好ましくは，ヒトである。
【００９５】
本発明の医薬組成物の投与量及び投与回数は特に限定されず，治療対象疾患の悪化・進展の防止及び／又は治療の目的，疾患の種類，患者の体重や年齢などの条件に応じて，医師の判断により適宜選択することが可能である。一般的には，成人一日あたりの投与量は０．０１〜１０００ｍｇ（有効成分重量）程度であり，一日１回又は数回投与することができる。投与経路は，注射又は局所投与であり，例えば，静脈注射，筋肉内注射，若しくは皮下注射，点滴，点眼，点耳，点鼻，経皮，経粘膜，吸入等が挙げられる。また，例えば，本発明の医薬組成物における有効成分の含有量は，０．００１％〜１０％，０．０１％〜１％，又は０．０５％〜０．１％とすることができる。
【００９６】
本発明の医薬組成物が注射剤の場合，成人に対して一日量０．００１〜１００ｍｇ（有効成分重量）を連続投与又は間欠投与することができる。
【００９７】
本発明の水性医薬組成物が局所投与用の場合，患部，患部の周辺部又は患部を含む臓器などの局所に直接投与されるものである。例えば，本発明の医薬組成物は眼用局所適用製剤，耳用局所適用製剤，鼻用局所適用製剤，又は肺用局所適用製剤とすることができる。本発明の医薬組成物が局所投与用製剤の場合，日常的に適用することもできるし，局所の炎症性疾患又は感染性疾患が発症した後に，任意の回数適用することができる。また，適用量は，症状等に応じて適宜設定することができ，通常一日あたり１〜６回程度、例えば、一日当たり、１回、２回、３回、４回、５回又は６回点眼し，１回に１〜３滴程度適用する。また，投与期間は，症状が十分に治まるまで任意の期間とすることができるが，例えば，２週間〜１年とすることができる。
【００９８】
以下に実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが，これは本発明の範囲を限定するものではない。なお，本願明細書全体を通じて引用する文献は，参照によりその全体が本願明細書に組み込まれる。
【００９９】
（実施例１）クロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕方法の検討
クロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕における無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加の影響を調べるため，以下の（１）〜（９）の粉砕を行い，得られた粒子の平均粒子径（Ｄｖ），中心粒子径（Ｄ５０），及び９０％粒子径（Ｄ９０）を粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて測定した。
【０１００】
（１）無水クエン酸及び水添大豆レシチン無添加条件下における粉砕
水冷式１．０Ｌ竪型ニーダー（井上製作所）に，平均粒子径３８，３９０ｎｍのクロベタゾールプロピオン酸エステル（融点：１９３〜２００℃，東京化成製）１０ｇ及び塩化ナトリウム（トミタソルトＫ−３０，富田製薬製）１１０ｇを仕込んで均一に混合した後，グリセリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）１７ｇを投入して内容物をこね粉状態に保って，５℃で６時間粉砕を行なった。その後，得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇ，分散剤として０．１％ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール（ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ，日本油脂製）５ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，均一に分散し，精製水４５ｇを加えて懸濁液５０ｇを得た。粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて，得られた懸濁液の粒度分布を測定した結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）２８５ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）２３１ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）４３３ｎｍであった。
【０１０１】
（２）無水クエン酸添加条件下における粉砕
無水クエン酸（純正化学社製）０．８ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件で，５℃で７時間粉砕を行なった。その後，実施例１と同様に粉砕混練物（ドウ）の分散処理を行ない，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）２６０ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）２２２ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）３６３ｎｍであった。
【０１０２】
（３）水添大豆レシチン添加条件下における粉砕
水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）１０ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件にて，粉砕およびその後の分散処理を行なった。その結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１４７ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１２４ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２１０ｎｍであった。
【０１０３】
（４）無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加条件下における粉砕１
無水クエン酸（純正化学社製）０．８ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社）５ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件にて，粉砕およびその後の分散処理を行なった。その結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１６６ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１３８ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２４１ｎｍであった。
【０１０４】
（５）無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加条件下における粉砕２
無水クエン酸（純正化学製）０．８ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社）１０ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件で，５℃で７時間粉砕を行なった。その後，実施例１と同様に粉砕混練物（ドウ）の分散処理を行ない，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）１０１ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）８７ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１４１ｎｍであった。
【０１０５】
（６）無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加条件下における粉砕３
無水クエン酸（純正化学社製）０．８ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）２０ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件で，５℃で７時間粉砕を行なった。その後，実施例１と同様に粉砕混練物（ドウ）の分散処理を行ない，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）１４４ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１２１ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２１４ｎｍであった。
【０１０６】
（７）無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加条件下における粉砕４
無水クエン酸（純正化学社製）２ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）５ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件で，５℃で７時間粉砕を行なった。その後，得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇ，分散剤として０．０１％ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール（ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ，日本油脂製）５ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，均一に分散し，精製水１５ｇを加えて懸濁液２０ｇを得た。粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて，得られた懸濁液の粒度分布を測定した結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１３７ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１１２ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２０９ｎｍであった。
【０１０７】
（８）無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加条件下における粉砕５
無水クエン酸（純正化学社製）２ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）１０ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件で，５℃で６時間粉砕を行なった。その後，得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇを実施例１（１）と同様に分散処理を行ない，得られた懸濁液の粒度分布を測定した結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１２９ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１１２ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１７９ｎｍであった。
【０１０８】
（９）無水クエン酸及び水添大豆レシチン添加条件下における粉砕６
無水クエン酸（純正化学社製）２ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）２０ｇを追加した以外は，実施例１（１）と同一条件で，５℃で７時間粉砕を行なった。その後，得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇを実施例１（１）同様に分散処理を行ない，得られた懸濁液の粒度分布を測定した結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１４７ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１２１ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２２８ｎｍであった。
【０１０９】
（１）〜（９）の粉砕条件及び粉砕の結果得られた粒子径を表１に示す。本実験の結果から，（５）の粉砕処方が最も良好な粉砕性能であることが示された。
【０１１０】
【表１】
2016181935.tif 000003
【０１１１】
（実施例２）クロベタゾールプロピオン酸エステルの製剤化検討
（１）分散剤の検討
実施例１（４）で得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇと表２に記載の各分散剤の水溶液５ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，均一に分散し，精製水４５ｇを加えて分散液５０ｇとした。得られた各分散液を室温（約２５℃）にて１日保存し，分散直後と１日経過後の各分散液の澄明性と沈殿の有無を目視により観察して分散液の安定性を評価した。
【０１１２】
結果を表２に示す。表２において，保存安定性の評価に記載された記号は，以下を意味する。○：安定性が良好；△：分散直後は安定だが，時間の経過とともに沈殿が生成；×：調製直後から濁り感があり，不安定。表２に示されたように，本実験の結果から，分散剤としてＰＯＥ・ＰＯＰグリコール（プロノン４０７Ｐ，プルロニックＦ６８，ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ）およびＰＶＡ（クラレポバール２１７Ｃ）を使用した場合，分散直後のみならず，１日経過後においても沈殿の生成は見られず，澄明性を保持しており，安定性が良好であった。
【０１１３】
【表２】
2016181935.tif 000004
【０１１４】
（２）増粘剤の検討
実施例１（４）で得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇと０．１％プルロニックＦ６８／０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０（１：１）混合水溶液７．３ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波ホモジナイザー（Ｓｏｎｉｃａｔｏｒ  Ｓ−４０００，チップ４１８号，出力３０，アストラソン社製）を使用して，３分間，均一に分散した後，表３に記載の各増粘剤の水溶液１．５ｇを添加し，さらに精製水１３．５ｇを加えて分散液２２．４ｇとした。なお，各増粘剤の最終濃度は表３に記載したとおりにした。得られた各分散液を室温（約２５℃）にて４日間保存し，各分散液の澄明性と沈殿の有無を目視により観察して安定性を評価した。
【０１１５】
結果を表３に示す。表３において，保存安定性の評価に記載された記号は，以下を意味する。○：安定性が良好；△：若干の沈殿が見られ，安定性が低い；×：完全沈殿が見られ，不安定。表３に示されるとおり，本実験の結果から，増粘剤としてヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびメチルセルロースを使用した場合，分散直後のみならず，４日経過後においても沈殿の生成は見られず，澄明性を保持しており，安定性が良好であった。
【０１１６】
【表３】
2016181935.tif 000005
【０１１７】
（３）防腐剤の検討１
実施例１（４）で得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇと０．１％プルロニックＦ６８／０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０（１：１）混合水溶液７．３ｇならびに１％クラレポバール２１７Ｃ水溶液１．４３ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波ホモジナイザー（Ｓｏｎｉｃａｔｏｒ  Ｓ−４０００，チップ４１８号，出力３０，アストラソン社製）を使用して，７分間，均一に分散した後，０．０１％塩化ベンザルコニウム水溶液１．４３ｇおよび３％ＴＣ−５（Ｒ）水溶液１．４３ｇを加え，撹拌しながら１００ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液を徐々に添加してｐＨ７．０に調整し，さらに精製水を加えて点眼剤１４．６ｇとした。得られた点眼剤を５℃−２５℃のサイクルおよび４０℃にて７日間保存し，該点眼剤の澄明性を目視により観察して安定性を評価した。
【０１１８】
実施例２（３）の結果を表４に示す。表４における保存温度の「サイクル（５℃−２５℃）」とは，５℃で６時間保存した後，２５℃で６時間保存することを繰り返したことを意味する。表４に示すとおり，本実験の結果から，防腐剤として塩化ベンザルコニウムを使用して調製した点眼剤は，調製直後のみならず，７日経過後においても澄明性を保持しており，安定性が良好であった。
【０１１９】
【表４】
2016181935.tif 000006
【０１２０】
（実施例３）濾過滅菌の検討
（１）点眼剤の調製１
１Ｌのビーカーに実施例１（５）で得られた粉砕混練物（ドウ）６．０ｇ，０．０１％ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ水溶液４０８ｇおよび１．０％クラレポバール２１７Ｃ水溶液８１．６ｇを加え，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して粗分散させた後，高圧ホモジナイザー（Ｌ０１−ＹＨ１，９０ＭＰａ×５パス，三和エンジニアリング社製）にて均一に分散させた。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液７．４８ｇおよび３％ＴＣ−５（Ｒ）水溶液７．４８ｇを加え，５分間撹拌した後，１００ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液を添加してｐＨ７．０とした後，撹拌しながら精製水を加え総量７４８ｇとした。粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて，得られた点眼剤の粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）１７３ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１５１ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２３３ｎｍであった。
【０１２１】
（２）点眼剤の調製２
１Ｌのビーカーに実施例１（７）で得られた粉砕混練物（ドウ）６．０ｇ，０．０１％ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ水溶液４１４ｇおよび１．０％クラレポバール２１７Ｃ水溶液８２．８ｇを加え，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して粗分散させた後，高圧ホモジナイザー（Ｌ０１−ＹＨ１，９０ＭＰａ×５パス，三和エンジニアリング社製）にて均一に分散させた。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液７．５ｇおよび３％ＴＣ−５（Ｒ）水溶液７．５ｇを加え，５分間撹拌した後，１００ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液を添加してｐＨ７．０とした後，撹拌しながら精製水を加え総量７５０ｇとした。粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて，得られた点眼剤の粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）２０１ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１７７ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）２６０ｎｍであった。
【０１２２】
（３）点眼剤の調製３
１Ｌのビーカーに実施例１（８）で得られた粉砕混練物（ドウ）６．２９ｇ，０．０１％ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ水溶液４１５ｇおよび１．０％クラレポバール２１７Ｃ水溶液８３．０ｇを加え，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して粗分散させた後，高圧ホモジナイザー（Ｌ０１−ＹＨ１，９０ＭＰａ×５パス，三和エンジニアリング社製）にて均一に分散させた。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液７．８４ｇおよび３％ＴＣ−５（Ｒ）水溶液７．８４ｇを加え，５分間撹拌した後，１００ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液を添加してｐＨ７．０とした後，撹拌しながら精製水を加え総量７８４ｇとした。粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて，得られた点眼剤の粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）２０４ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１６６ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）３０６ｎｍであった。
【０１２３】
（４）フィルター濾過透過性の検討
実施例３（１）〜（３）で調製した各点眼剤に関して，ミリポア社製の２種類のフィルター濾過膜（Ｏｐｔｉｓｃａｌｅ２５およびＯｐｔｉｓｃａｌｅ２５  Ｃａｐｓｕｌｅ）を用いてフィルター濾過透過性の検討を行なった。濾過条件は以下の通りである。
【０１２４】
フィルター名：
Ｏｐｔｉｓｃａｌｅ２５（プレフィルター０．５μｍ／本フィルター０．２２μｍ）
Ｏｐｔｉｓｃａｌｅ２５  Ｃａｐｓｕｌｅ（プレフィルター０．２μｍ／本フィルター０．２２μｍ）
フィルター材質：ポリビニリデンフロライド（ＰＶＤＦ）
有効濾過面積：３．５ｃｍ２
試験圧力：０．１８ＭＰａ
【０１２５】
試験の方法は，経時的に点眼剤の透過流量を測定し，完全にフィルターが目詰まりするまで濾過を行なわず，フィルターの最大処理量を予測することができるＶｍａｘ法にて実施した。
【０１２６】
結果を表５に示した。表５中の透過量は，各点眼剤がフィルターを透過した量をＬ／ｍ２に換算した値を示した。また透過率は，フィルター濾過前後のクロベタゾールプロピオン酸エステルの濃度をＨＰＬＣで測定し，濾過前に対する濾過後の濃度を百分率で示した。表５に示された結果より，いずれの粒子径についても，フィルター濾過滅菌が可能であることが分かった。粉砕後のクロベタゾールプロピオン酸エステルの粒子径が最も小さい実施例３（１）で調製した点眼剤が，透過量と透過率の両方とも高い値を示した。
【０１２７】
【表５】
2016181935.tif 000007
【０１２８】
（実施例４）クロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕
（１）平均粒子径１００〜１５０ｎｍのナノ粒子の作製
水冷式１．０Ｌ竪型ニーダー（井上製作所）に，平均粒子径３８，３９０ｎｍのクロベタゾールプロピオン酸エステル（融点：１９３〜２００℃，東京化成製）１０ｇ，塩化ナトリウム（トミタソルトＫ−３０，富田製薬製）１１０ｇ，水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）１０ｇおよび無水クエン酸（純正化学社製）０．８ｇを仕込んで均一に混合した後，グリセリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）１７ｇを投入して内容物をこね粉状態に保って，５℃で７時間粉砕を行なった。その後，得られた粉砕混練物（ドウ）０．１ｇ，分散剤として０．０１％ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール（ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ，日本油脂製）５ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，均一に分散し，精製水４５ｇを加えて懸濁液５０ｇを得た。粒度分布測定装置（Ｄｅｌｓａ  Ｎａｎｏ  Ｓ，ベックマンコールター社製）を用いて，得られた懸濁液の粒度分布を測定した結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１０１ｎｍ，１０％粒子径（Ｄ１０）５６ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）８７ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１４１ｎｍであった。
【０１２９】
（２）平均粒子径１００〜１５０ｎｍのナノ粒子の作製
（１）と同様にクロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕および粒度分布測定を行なった。その結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）１０８ｎｍ，１０％粒子径（Ｄ１０）５７ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）８９ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１５１ｎｍであった。
【０１３０】
（３）平均粒子径２５０〜３００ｎｍのナノ粒子の作製
水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ９０Ｈ，リポイド社製）１０ｇを添加しなかった以外は，（１）と同様にクロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕および粒度分布測定を行なった。その結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）２６０ｎｍ，１０％粒子径（Ｄ１０）１４３ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）２２２ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）３６３ｎｍであった。
【０１３１】
（４）平均粒子径５００〜７００ｎｍのナノ粒子の作製
平均粒子径３８，３９０ｎｍのクロベタゾールプロピオン酸エステル１ｇ，塩化ナトリウムおよびグリセリンの混合物（塩化ナトリウム１１ｇ，グリセリン２ｇ）２ｇをモルタグラインダＲＭ２００（レッチェ社製）に投入し，室温にて１回１分間の運転を９回繰り返して粉砕を行なった。その後，得られた粉砕混練物（ドウ）０．０４ｇ，分散剤として０．０１％ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール（ユニルーブ７０ＤＰ−９５０Ｂ）５ｇを５０ｍＬスクリュー管に計り取り，超音波装置を使用して，均一に分散し，精製水４５ｇを加えて懸濁液５０ｇを得た。粒度分布測定装置を用いて，得られた懸濁液の粒度分布を測定した結果，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布は，平均粒子径（Ｄｖ）６３７ｎｍ，１０％粒子径（Ｄ１０）２３３ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）４７５ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１１２９ｎｍであった。
【０１３２】
（実施例５）ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
（１）０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径が約１００ｎｍ）の作製
実施例４（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）２．４ｇ，０．０１％ユニルーブ水溶液１５０ｇおよび１．０％ＰＶＡ（メルク社製）水溶液３０ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，約５分間均一に分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で処理して分散液を得た。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）水溶液２．５ｇおよび３．０％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）水溶液２．５ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウムを徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，注射用水を加えて全量を４１７．６ｇとして，０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径が約１００ｎｍ）を作製した。該点眼懸濁液の浸透圧比は０．８であった。
【０１３３】
（２）０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径が約３００ｎｍ）の作製
実施例４（３）で作製した粉砕混練物（ドウ）２．１ｇ，０．０１％ユニルーブ水溶液１５０ｇおよび１．０％ＰＶＡ水溶液３０ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，約５分間均一に分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で処理して分散液を得た。さらに０．１％ＢＡＣ水溶液２．５ｇおよび３．０％ＨＰＭＣ水溶液２．５ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウムを徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，注射用水を加えて全量を４０５．４ｇとして，０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径が約３００ｎｍ）を作製した。該点眼懸濁液の浸透圧比は０．８であった。
【０１３４】
（３）０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径が約６００ｎｍ）の作製
実施例４（４）で作製した粉砕混練物（ドウ）０．５２ｇ，注射用水１５０ｇおよび１．０％ＰＶＡ水溶液３０ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，約５分間均一に分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で処理して分散液を得た。さらに０．１％ＢＡＣ水溶液２．５ｇおよび３．０％ＨＰＭＣ水溶液２．５ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウムを徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，塩化ナトリウム１．４５ｇを加え，注射用水を加えて全量を２４５ｇとして，０．０５％ナノ化点眼懸濁液（平均粒子径が約６００ｎｍ）を作製した。該点眼懸濁液の浸透圧比は０．９であった。
【０１３５】
実施例５（１）〜（３）で作製した各０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の組成を以下の表６に示す。
【０１３６】
【表６】
2016181935.tif 000008
【０１３７】
（実施例６）眼内薬物動態試験
実施例５（１）〜（３）で作製した各ナノ化点眼懸濁液をウサギ（Ｋｂｌ：ＪＷ，雄）に点眼して眼内薬物動態試験を行なった（ｎ＝３）。ウサギの下眼瞼を穏やかに引き離し，左眼の結膜嚢内に被験物質をピペットを用いて点眼（単回点眼投与，５０μＬ／ｅｙｅ）し，点眼後，上下眼瞼を緩やかに合わせ約２秒間保持した。点眼１５分，３０分，６０分および９０分後に，ペントバルビタールナトリウム（東京化成工業株式会社）水溶液の耳介静脈内投与により麻酔を行い，放血安楽死させ，注射用水で眼をよく洗浄した後，眼房水（左眼）を採取した。その後，結膜（左眼）を採取した。採取した眼房水及び結膜はそれぞれ，電子天秤を用いて重量を測定した後，液体窒素にて凍結し，測定まで超低温フリーザー（許容範囲：−７０℃以下）に保存した。眼房水および結膜中のクロベタゾールプロピオン酸エステル濃度は，ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法で測定した。
【０１３８】
（眼房水の前処理）
採取した眼房水２５μＬにメタノール２０μＬおよび内標準（プレドニゾロン）溶液２０μＬを加えて十分に攪拌した。さらにアセトニトリル１００μＬを加えて十分に攪拌し，遠心（１３１００×ｇ，４℃，５分）した後，上清１０μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入した。
【０１３９】
（結膜の前処理）
採取した結膜は，その湿重量に対して９倍容量の超純水を加えてホモジナイズした。該ホモジネート２５μＬにメタノール２５μＬおよび内標準（プレドニゾロン）溶液２０μＬを加えて十分に攪拌した。さらにアセトニトリル１００μＬを加えて十分に攪拌し，遠心（１３１００×ｇ，４℃，５分）した後，上清２０μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入した。
【０１４０】
（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件）
（ＨＰＬＣの測定条件）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧＩＩＩ（５μｍ，２ｍｍ×１５０ｍｍ，資生堂）
移動相Ａ：０．２％  ぎ酸水溶液
移動相Ｂ：アセトニトリル
グラジエントのタイムプログラム：以下の容量比で行なった
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
時間（ｍｉｎ）    移動相Ａ（％）    移動相Ｂ（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
０．００          ７０              ３０
２．２０          ７０              ３０
２．５０          ２０              ８０
５．４０          ２０              ８０
５．４１          ７０              ３０
７．００          ７０              ３０
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
オートサンプラー温度：４℃
分析時間：７分間
【０１４１】
（ＭＳ／ＭＳの測定条件）
Ｉｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ：Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＥＳＩ）
Ｓｃａｎ  Ｔｙｐｅ：Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ（ＭＲＭ）
Ｐｏｌａｒｉｔｙ：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ
Ｓｏｕｒｃｅ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：４００℃
モニターイオン：
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
化合物                    Ｑ１（ｍ／ｚ）    Ｑ３（ｍ／ｚ）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル  ４６８．１        ３５６．３
内標準物質（プレドニゾロン）        ３６１．３        １４７．１
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
許容範囲：±０．５以内
【０１４２】
実施例５（１）〜（３）で作製したナノ化点眼懸濁液の眼内薬物動態試験の結果として，眼房水中の薬物濃度の経時変化を図１及び表７に，結膜中の薬物濃度の経時変化を図２及び表８に示した。眼房水中の薬物濃度には，粒子径依存性が見られた。すなわち粒子径が小さくなるに従い，眼房水中の薬物濃度が高くなる傾向が示された。このことから，点眼したナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステルの眼房水中への移行性には，粒子径が小さい方が適していることが示された。また結膜中の薬物濃度にも同様に粒子径依存性の傾向が見られ，点眼したナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステルの結膜への移行性には，粒子径が小さい方が適していることが示された。
【０１４３】
【表７】
2016181935.tif 000009
【０１４４】
【表８】
2016181935.tif 000010
【０１４５】
（実施例７）ナノ化点眼懸濁液における増粘剤の影響の検討
実施例６より，ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステルの平均粒子径は約１００ｎｍが適していることが示されたため，次に，平均粒子径は約１００ｎｍのナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステルを含有する点眼懸濁液において，様々な増粘剤を採用することによりナノ化点眼懸濁液の粘度を変えて，眼内薬物動態試験を行なった。
【０１４６】
（１）ナノ化点眼懸濁液Ｐの作製
実施例４（２）で作製した粉砕混練物（ドウ）５ｇ，０．０１％ユニルーブ水溶液３３５ｇおよび１．０％ＰＶＡ水溶液６７ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，約５分間均一に分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で処理して分散液を得た。さらに０．１％ＢＡＣ水溶液６．７ｇおよび１．０％ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−５０）水溶液２０１ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウムを徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，注射用水を加えて全量を６７０ｇとして，０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｐを作製した。該点眼懸濁液の粘度は約２ｍＰａ・Ｓであった。
【０１４７】
（２）ナノ化点眼懸濁液Ｑの作製
「１．０％ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−５０）水溶液２０１ｇ」を「１．０％ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−４０００）水溶液１００．５ｇ」に変えた以外は，実施例７（１）と同様にして０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｑを作製した。該点眼懸濁液の粘度は約３ｍＰａ・Ｓであった。
【０１４８】
（３）ナノ化点眼懸濁液Ｒの作製
「１．０％ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−５０）水溶液２０１ｇ」を「１．０％ＭＣ（ＳＭ−１００）水溶液１３４ｇ」に変えた以外は，実施例７（１）と同様にして０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｒを作製した。該点眼懸濁液の粘度は約２ｍＰａ・Ｓであった。
【０１４９】
（４）ナノ化点眼懸濁液Ｓの作製
「１．０％ＨＰＭＣ（６０ＳＨ−５０）水溶液２０１ｇ」を「１．０％ＭＣ（ＳＭ−４０００）水溶液１００．５ｇ」に変えた以外は，実施例７（１）と同様にして０．０５％ナノ化点眼懸濁液Ｓを作製した。該点眼懸濁液の粘度は約３ｍＰａ・Ｓであった。
【０１５０】
実施例７（１）〜（４）で作製した各０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の組成を以下の表９に示す。
【０１５１】
【表９】
2016181935.tif 000011
【０１５２】
（５）眼内薬物動態試験
実施例７（１）〜（４）で作製したナノ化点眼懸濁液を実施例６記載の方法にて，眼内薬物動態試験を行なった。
【０１５３】
（６）結果
眼房水中の薬物濃度の経時変化を図３及び表１０に，結膜中の薬物濃度の経時変化を図４及び表１１に示した。図３に示した結果より，点眼懸濁液の粘度が高い方が，眼房水中への移行性が高い傾向があることが明らかとなった。また図４に示した結果より，点眼懸濁液の粘度が高い方が，初期（１５分後）の結膜への移行性が高い傾向があることが明らかとなった。
【０１５４】
【表１０】
2016181935.tif 000012
【０１５５】
【表１１】
2016181935.tif 000013
【０１５６】
（実施例８）ナノ化クロベタゾール点眼懸濁液のウサギのＢＳＡ誘発ぶどう膜炎モデルにおける薬効試験
（１）クロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕
実施例４（１）と同様にクロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕を行ない，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布が，平均粒子径（Ｄｖ）１３２ｎｍ，１０％粒子径（Ｄ１０）６５ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１０９ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１８６ｎｍである粉砕混練物（ドウ）を作製した。
【０１５７】
（２）０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
上記（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）２．４ｇ，０．０１％ＰＯＥ・ＰＯＰグリコール水溶液１６７．５ｇおよび１．０％ＰＶＡ水溶液３３．５ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，ドウを分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で５回処理してドウ分散液を得た。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液２．８ｇおよび１．０％メチルセルロース水溶液５６．４ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，グリセリン１．５ｇを添加して浸透圧比を１．０に調整し，注射用水を加えて全量を２８２．１ｇとして，０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液を作製した。該点眼懸濁液の組成と物性を以下の表に示す。
【０１５８】
点眼懸濁液の組成
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
成分                                              組成（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル                ０．０５
塩化ナトリウム                                    ０．５０
水添大豆レシチン                                  ０．０５
グリセリン                                        ０．０８
無水クエン酸                                      ０．００４
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール  ０．００５
ポリビニルアルコール                              ０．１
塩化ベンザルコニウム                              ０．００１
メチルセルロース                                  ０．２０
クエン酸ナトリウム                                適量
注射用水                                          適量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１５９】
点眼懸濁液の物性
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
測定項目                                      測定値
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（％）  ０．０５
浸透圧比                                      １．０
ｐＨ                                          ７．０
粘度（ｍＰａ・ｓ）                            ２．１
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１６０】
（３）ウサギのＢＳＡ誘発ぶどう膜炎モデルを用いた薬効試験
ウサギ（Ｓｔｄ：ＪＷ／ＣＳＫ）をケタミン塩酸塩（ケタラール筋注用５００ｍｇ）およびキシラジン（セラクタール２％注射液）の併用麻酔下で，右眼球に０．４％オキシブプロカイン塩酸塩（ベノキシール点眼液０．４％）を点眼麻酔して角膜反射が消失した後，右眼の硝子体中央部に１０％ＢＳＡ生理食塩液を０．１ｍＬ注入して，ぶどう膜炎の惹起（1回目）を行なった。この翌日より，対照（生理食塩液），被験物質（上記（２）で作製した０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液）および陽性対照物質（０．１％フルオロメトロン点眼液，市販品）をマイクロピペットを用いて５０μＬ採取し，１日２回（原則として９：００と１７：００），２９日連続して右眼球に点眼投与した。左眼は無処置とし，各群ｎ＝５で薬効試験を行なった。
【０１６１】
１回目のＢＳＡ投与１５日後から１８日後までの４日間は，山内らの眼炎症採点基準（山内  秀泰ほか（１９７３），日本眼科紀要，２４，９６９−９７９）に従って外眼部（角膜の外側）と内眼部（角膜の内側）の炎症症状をスコア化することで，抗炎症効果の評価を行なった。また２７日後には１．２５％  ＢＳＡ生理食塩液を２ｍＬ／ｋｇの用量で耳介静脈より注入して，ぶどう膜炎の惹起（２回目）を行ない，２９日後には上記と同様に外眼部と内眼部の炎症症状をスコア化して抗炎症効果を評価した。
【０１６２】
（４）結果
結果を図５〜７に示す。本結果より，０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液は，外眼部と内眼部の炎症モデルに対して，０．１％フルオロメトロン点眼液と同程度の抗炎症効果があることが明らかとなった。
【０１６３】
（実施例９）ラットのクロトン誘発結膜炎モデルにおける薬効試験
（１）０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
上記実施例８（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）４．２ｇ，０．０１％ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン水溶液１５０ｇおよび１．０％ＰＶＡ水溶液３０ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，ドウを分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で５回処理してドウ分散液を得た。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液２．４ｇおよび１．０％メチルセルロース水溶液４８．３ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，注射用水を加えて全量を２４１．４ｇとして，０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液を作製した。該点眼懸濁液の組成と物性を以下の表に示す。
【０１６４】
点眼懸濁液の組成
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
成分                                              組成（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル                ０．１
塩化ナトリウム                                    １．１
水添大豆レシチン                                  ０．１
グリセリン                                        ０．１６
無水クエン酸                                      ０．００８
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール  ０．００５
ポリビニルアルコール                              ０．１
塩化ベンザルコニウム                              ０．００１
メチルセルロース                                  ０．２０
クエン酸ナトリウム                                適量
注射用水                                          適量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１６５】
点眼懸濁液の物性
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
測定項目                                      測定値
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（％）  ０．１
浸透圧比                                      １．６
ｐＨ                                          ７．０
粘度（ｍＰａ・ｓ）                            １．９
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１６６】
（２）ラットのクロトン誘発結膜炎モデルを用いた薬効試験
ラット（Ｗｉｓｔａｒ，雌）の両眼に，−４１分と０分の２回，エタノール（起炎剤）を２．５μＬ／ｓｉｔｅで点眼し，合計２回起炎させた。被験物質（（１）で作製した０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液）および陽性対照物質（０．１％デキサメタゾン，市販品）を１回目の起炎剤投与１分前（−４２分）および２回目の起炎剤投与１分前（−１分）の２回，マイクロピペットを用いて両眼に５μＬ／ｓｉｔｅで点眼投与をした。なお正常対照群（起炎なし，薬物投与なし）および起炎対照群（起炎あり，薬物投与なし）をコントロール群とし，各群ｎ＝１０で試験を行なった。
【０１６７】
２回目の起炎剤投与４０分後，１００分後および１６０分後の合計３回，１０％クロトン油エタノール溶液（炎症誘発剤）を両眼に５μＬ／ｓｉｔｅで点眼して炎症を誘発させた。１０％クロトン油エタノール溶液の最終点眼から２時間後に，ラットをイソフルラン麻酔下で頸椎脱臼により安楽死させた後，両眼の結膜を採取して重量を測定した。起炎対照群の結膜重量と比較することで，被験物質の抗炎症効果を評価した。
【０１６８】
得られた結果を図８に示す。本結果より，起炎対照群の結膜重量は，正常対照群と比較して高値を示していることから，本モデルは炎症が誘発されていることが確認できた。また，被験物質（０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液）および陽性対照物質（０．１％デキサメタゾン）を点眼した群の結膜重量は，いずれも起炎対照群と比較して低値を示した。したがって，本特許の０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液は，ラットのクロトン誘発結膜炎モデルに点眼することで，結膜の浮腫を抑制できることが明らかとなった。
【０１６９】
（実施例１０）ラットのカラゲニン誘発結膜浮腫モデルにおける薬効試験
（１）０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
上記実施例８（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）４．３ｇ，０．０１％ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン水溶液１５０ｇおよび１．０％ＰＶＡ水溶液３０ｇをビーカーに計り取り，超音波装置（ＭＯＤＥＬ  ＶＳ−１００ＩＩＩ，アズワン社製）を使用して，ドウを分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で５回処理してドウ分散液を得た。さらに０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液２．４ｇおよび１．０％メチルセルロース水溶液４７．９ｇを添加した後，５００ｍＭ  クエン酸ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ７．０に調整した。その後，注射用水を加えて全量を２３９．５ｇとして，０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液を作製した。該点眼懸濁液の組成と物性を下表に示す。
【０１７０】
点眼懸濁液の組成
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
成分                                              組成（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル                ０．１
塩化ナトリウム                                    １．０
水添大豆レシチン                                  ０．１
グリセリン                                        ０．１６
無水クエン酸                                      ０．００８
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール  ０．００５
ポリビニルアルコール                              ０．１
塩化ベンザルコニウム                              ０．００１
メチルセルロース                                  ０．２０
クエン酸ナトリウム                                適量
注射用水                                          適量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１７１】
点眼懸濁液の物性
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
測定項目                                      測定値
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（％）  ０．１
浸透圧比                                      １．５
ｐＨ                                          ７．０
粘度（ｍＰａ・ｓ）                            １．９
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１７２】
（２）ラットのカラゲニン誘発結膜浮腫モデルを用いた薬効試験
ラット（Ｗｉｓｔａｒ，雄）の右眼にマイクロピペットを用いてコントロール（生理食塩液），被験物質（実施例８（２）で調製した０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液および実施例１０（１）で調製した０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液）および陽性対照物質（０．１％フルオロメトロン点眼液，市販品）を点眼投与した（各群ｎ＝８）。点眼投与１５分後に，イソフルラン麻酔下にて１％カラゲニン生理食塩液溶液（起炎物質）を右上眼瞼結膜に５０μＬ皮下投与することで，結膜浮腫モデルを作製した。起炎物質投与４時間後にラットをイソフルラン麻酔下にて腹大動脈からの放血により安楽死させ，右眼球および副涙腺（ハーダー腺）を含む浮腫部位を摘出した後，右眼瞼結膜を分離してその重量を測定した。得られた眼瞼結膜重量を比較することにより，抗炎症効果の評価を行なった。
【０１７３】
図９に眼瞼結膜重量の結果を示す。本結果より，ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液では濃度に依存した抗炎症効果が認められ，０．１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液は陽性対照の０．１％フルオロメトロン点眼液とほぼ同様の抗炎症作用を示すことが明らかになった。
【０１７４】
（実施例１１）ナノ化クロベタゾール点眼懸濁液のウサギＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける薬効試験
（１）クロベタゾールプロピオン酸エステルの粉砕
水冷式１．０Ｌ竪型ニーダー（井上製作所）に，クロベタゾールプロピオン酸エステル（Ｆａｒｍａｂｉｏｓ  ＳＰＡ社製）５０ｇ，塩化ナトリウム（トミタソルトＫ−３０，富田製薬製）５５０ｇ，無水クエン酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）４ｇおよび水添大豆レシチン（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ  ９０Ｈ，リポイド社製）５０ｇを仕込んで均一に混合した後，グリセリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）７０ｇを投入して内容物をこね粉状態に保って，５℃で５時間粉砕を行なった。得られた粉砕混練物（ドウ）を実施例１（１）と同様に分散剤で分散させ懸濁液とし，クロベタゾールプロピオン酸エステルの粒度分布を測定した結果，平均粒子径（Ｄｖ）１３２ｎｍ，１０％粒子径（Ｄ１０）６７ｎｍ，中心粒子径（Ｄ５０）１１０ｎｍ，９０％粒子径（Ｄ９０）１８４ｎｍであった。
【０１７５】
（２）０．００２％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）０．０７６ｇ，０．０１％Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７水溶液３１．３ｇ，１．０％ＰＶＡ水溶液２５．０ｇ，塩化ナトリウム０．２１７ｇ，注射用水９３．３ｇをビーカーに計り取り，超音波装置を使用して，ドウを分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で４回処理してドウ分散液を得た。該ドウ分散液１１０．６７ｇをビーカーに計り取り，０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液１．８５ｇおよび１．０％メチルセルロース水溶液３６．９１ｇを添加した後，１Ｍ  クエン酸ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ７．０に調製した。その後，グリセリンを添加して浸透圧比を１．０に調整し，注射用水を加えて全量を１８４．６ｇとして，０．００２％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液を作製した。該点眼懸濁液の組成と物性を下表に示す。
【０１７６】
点眼懸濁液の組成
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
成分                                組成（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル    ０．００２
塩化ナトリウム                        ０．１１
水添大豆レシチン                      ０．００２
グリセリン                            ２．２
無水クエン酸                          ０．０００２
Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７              ０．００１３
ポリビニルアルコール                  ０．１
塩化ベンザルコニウム                  ０．００１
メチルセルロース                      ０．２０
クエン酸ナトリウム                    適量
注射用水                              適量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１７７】
点眼懸濁液の物性
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
測定項目                                      測定値
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（％）      ０．００２
浸透圧比                                          １．０
ｐＨ                                              ７．０
粘度（ｍＰａ・ｓ）                                １．９８
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１７８】
（３）０．０１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）０．３８ｇ，０．０１％Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７水溶液６２．５ｇ，１．０％ＰＶＡ水溶液２５．０ｇ，注射用水６２．５ｇをビーカーに計り取り，超音波装置を使用して，ドウを分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で４回処理してドウ分散液を得た。該ドウ分散液１１９．４４ｇをビーカーに計り取り，０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液１．９８ｇおよび１．０％メチルセルロース水溶液３９．７０ｇを添加した後，１Ｍ  クエン酸ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ７．０に調製した。その後，グリセリンを添加して浸透圧比を１．０に調整し，注射用水を加えて全量を１９８．５ｇとして，０．０１％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液を作製した。該点眼懸濁液の組成と物性を下表に示す。
【０１７９】
点眼懸濁液の組成
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
成分                                組成（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル      ０．０１
塩化ナトリウム                          ０．１２
水添大豆レシチン                        ０．０１
グリセリン                              ２．１
無水クエン酸                            ０．０００８
Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７                ０．００２５
ポリビニルアルコール                    ０．１
塩化ベンザルコニウム                    ０．００１
メチルセルロース                        ０．２０
クエン酸ナトリウム                      適量
注射用水                                適量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１８０】
点眼懸濁液の物性
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
測定項目                                    測定値
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（％）    ０．０１０
浸透圧比                                        １．０
ｐＨ                                            ７．０
粘度（ｍＰａ・ｓ）                              １．９９
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１８１】
（４）０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の作製
（１）で作製した粉砕混練物（ドウ）１．８４ｇ，０．０１％Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７水溶液１２５．０ｇ，１．０％ＰＶＡ水溶液２５．０ｇをビーカーに計り取り，超音波装置を使用して，ドウを分散して粗分散液とし，該粗分散液を高圧ホモジナイザー（三和工業社製，Ｌ０１−ＹＨ１）で４回処理してドウ分散液を得た。該ドウ分散液１１６．７９ｇをビーカーに計り取り，０．１％塩化ベンザルコニウム水溶液１．９２ｇおよび１．０％メチルセルロース水溶液３８．４５ｇを添加した後，１Ｍ  クエン酸ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ７．０に調製した。その後，グリセリンを添加して浸透圧比を１．０に調整し，注射用水を加えて全量を１９２．３ｇとして，０．０５％ナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液を作製した。該点眼懸濁液の組成と物性を下表に示す。
【０１８２】
点眼懸濁液の組成
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
成分                                          組成（％）
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
クロベタゾールプロピオン酸エステル                  ０．０５
塩化ナトリウム                                      ０．５６
水添大豆レシチン                                    ０．０５
グリセリン                                          ０．５０
無水クエン酸                                        ０．００４
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール    ０．００５
ポリビニルアルコール                                ０．１
塩化ベンザルコニウム                                ０．００１
メチルセルロース                                    ０．２０
クエン酸ナトリウム                                  適量
注射用水                                            適量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
【０１８３】
点眼懸濁液の物性
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測定項目                                      測定値
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クロベタゾールプロピオン酸エステル濃度（％）      ０．０４８
浸透圧比                                          １．０
ｐＨ                                              ７．０
粘度（ｍＰａ・ｓ）                                １．９９
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【０１８４】
（５）ウサギのＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける薬効試験
ウサギ（Ｋｂｓ：ＪＷ）にペントバルビタールナトリウム（ソノムペンチル）を耳介静脈より投与することで麻酔を施し，さらに０．４％オキシプロカイン塩酸塩（ベノキシール点眼液）を両眼に点眼し，角膜反射が消失した後，ウサギに開瞼器を装着し，３０Ｇ注射針付きシリンジを用いて，２μｇ／ｍＬに調製したＬＰＳ（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ｆｒｏｍ  Ｅ．ＣｏｌｉＯ５５：ｓｉｇｍａ）を硝子体内へ０．０２ｍＬ投与し炎症を惹起した。点眼はコントロール（ｓａｌｉｎｅ），陽性対照物質（ｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標）：０．０５％ｄｉｆｌｕｐｒｅｄｎａｔｅ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ，Ａｌｃｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）および上記（４）で作製した被験物質（０．０５％点眼懸濁液）を５０μＬずつ，マイクロピペットを用いて両眼にＬＰＳ投与の４時間前，１５分後，６時間および８時間後に実施した。なお，各群６羽ずつ両眼を使用し，各群ｎ＝１２とした。ＬＰＳ投与から２４時間後，ウサギへペントバルビタールナトリウム（ソノムペンチル）を過量投与することで安楽死させ，２６Ｇ注射針付きシリンジで前房水を全量採取した．さらに眼球を摘出し強膜−角膜移行部付近を切開し，１ｍＬシリンジにて硝子体を採取した。採取した両サンプル中のＰＧＥ２濃度はＥＬＩＳＡ法（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ：ｃａｙｍａｎ）により測定した。
【０１８５】
（６）結果
図１０に房水中ＰＧＥ２濃度（前眼部評価），図１１に硝子体中ＰＧＥ２濃度（後眼部評価）の結果を示す。本発明のナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液は，ウサギのＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルに点眼することで，ぶどう膜炎（前眼部）に対して陽性対照のｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標）と同様の抗炎症作用を示すことが明らかになった。また，硝子体内のＰＧＥ２濃度はＤｕｒｅｚｏｌ（登録商標）投与群と比較して，本発明のナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液投与群においてより低くなったことから，ぶどう膜炎（後眼部）に対しては，Ｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標）よりも高い抗炎症作用を示すことが明らかになった。
【０１８６】
（実施例１２）ナノ化クロベタゾール点眼懸濁液のウサギ前房穿刺炎症モデルにおける薬効試験
（１）ウサギの前房穿刺炎症モデルにおける薬効試験
ウサギ（Ｋｂｓ：ＪＷ）にコントロール（ｓａｌｉｎｅ），陽性対照物質（ｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標））および実施例１１（２）（３）（４）で作製した被験物質（０．００２％，０．０１％および０．０５％点眼懸濁液）を５０μＬずつ，マイクロピペットを用いて両眼に１回ずつ点眼投与した。なお，各群６羽ずつ両眼を使用し，各群ｎ＝１２とした。その４時間後に０．４％オキシプロカイン塩酸塩（ベノキシール点眼液）を両眼に点眼し，角膜反射が消失した後，ウサギに開瞼器を装着し，２６Ｇ注射針付きシリンジを前房内へ刺入させ，前房水全量を採取することで前眼部炎症を惹起した。さらにその３時間後に再度２６Ｇ注射針付きシリンジを用いて前房水を全量採取し，前房水中タンパク濃度をＢＣＡ法（ＰｉｅｒｃｅＴＭ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）を用いて測定した。また，前房穿刺による前眼部炎症を惹起していない群（Ｎｏｒｍａｌ）の前房水中タンパク濃度もＢＣＡ法を用いて測定した。
【０１８７】
（２）結果
図１２に前房水中のタンパク濃度の結果を示す。本結果より，本発明のナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液（０．００２％，０．０１％および０．０５％）は，ウサギの前房穿刺炎症モデルに点眼することで陽性対照のｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標）（０．０５％  ｄｉｆｌｕｐｒｅｄｎａｔｅ）と同様の抗炎症作用を示すことが明らかになった。
【０１８８】
（実施例１３）ナノ化クロベタゾール点眼懸濁液のウサギＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける薬効試験
（１）ウサギのＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルにおける薬効試験
ウサギ（Ｋｂｓ：ＪＷ）にペントバルビタールナトリウム（ソノムペンチル）を耳介静脈より投与することで麻酔を施し、さらに０．４％オキシプロカイン塩酸塩（ベノキシール点眼液）を両眼に点眼し、角膜反射が消失した後、ウサギに開瞼器を装着し、３０Ｇ注射針付きシリンジを用いて、２μｇ／ｍＬに調製したＬＰＳ（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、ｆｒｏｍ  Ｅ．ＣｏｌｉＯ５５：ｓｉｇｍａ）を硝子体内へ０．０２ｍＬ投与し炎症を惹起した。点眼はコントロール（ｓａｌｉｎｅ）、陽性対照物質（ｄｕｒｅｚｏｌ：０．０５％ｄｉｆｌｕｐｒｅｄｎａｔｅ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ、Ａｌｃｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）および実施例１１（４）で作製した被験物質（０．０５％点眼懸濁液）を５０μＬずつ、マイクロピペットを用いて両眼にＬＰＳ投与の翌日よりｂ．ｉ．ｄ（１日２回点眼）では９：００および１７：００、ｑ．ｉ．ｄ（１日４回点眼）では９：００、１２：００、１５：００および１８：００に連続６日間実施した。なお、各群４羽又は５羽ずつ両眼を使用し、各群ｎ＝８又は１０とした。ＬＰＳ投与から２４時間後、ウサギへペントバルビタールナトリウム（ソノムペンチル）を過量投与することで安楽死させ、眼球を摘出し強膜−角膜移行部付近を切開し、１ｍＬシリンジにて硝子体を採取した。採取したサンプル中のＰＧＥ２濃度はＥＬＩＳＡ法（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ：ｃａｙｍａｎ）により測定した。
【０１８９】
（２）結果
図１３に硝子体中ＰＧＥ２濃度（後眼部評価）の結果を示す。コントロールの硝子体中ＰＧＥ２濃度は３４５．６ｐｇ／ｍｌであった。陽性対照のｄｕｒｅｚｏｌの１日２回点眼及び１日４回点眼は、それぞれ硝子体中ＰＧＥ２濃度が２５６．３５ｐｇ／ｍｌ及び１７９．４ｐｇ／ｍｌと改善傾向を示した。本発明のナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液の１日２回点眼及び１日４回点眼は、それぞれ硝子体中ＰＧＥ２濃度が２１９．２ｐｇ／ｍｌ及び１６７．６を示し、ｄｕｒｅｚｏｌよりもさらに優れた抗炎症作用を示した。よって、本発明のナノ化クロベタゾールプロピオン酸エステル点眼懸濁液は、ウサギのＬＰＳ誘発ぶどう膜炎モデルに点眼することで、陽性対照のｄｕｒｅｚｏｌと比較して、ｂ．ｉ．ｄ（１日２回点眼）およびｑ．ｉ．ｄ（１日４回点眼）の両方において高い抗炎症作用を示すことが明らかになった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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