(57)【要約】  本発明によって提供されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、該決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、を包含する。そして、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルが、特定の分子量において上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連することを特徴とする。
2017150680.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病の検出を補助するための方法であって、
被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が１０００〜３５００の範囲内のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、
前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、を包含し、
ここで、前記被検体のシグナルペプチドプロファイルが、以下の分子量：
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1620.77±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1801.91±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1933.29±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1966.96±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.12±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2134.56±2, 2135.18±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2269.26±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2331.10±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2539.62±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2620.55±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2631.23±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2673.96±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2、3353.34±2；
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する、アルツハイマー病の検出を補助するための方法。
【請求項２】
前記被検体のシグナルペプチドのプロファイルについて、以下の分子量：
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2134.56±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2； 
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大している場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被検体のシグナルペプチドプロファイルについて、以下の分子量：
1620.77±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1801.91±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2135.18±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2269.26±2, 2331.10±2, 2539.62±2, 2620.55±2, 2631.23±2, 2673.96±2, 3353.34±2；
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少している場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被検体由来の体液中のシグナルペプチドプロファイルを、質量分析装置を用いて検査する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記シグナルペプチドのプロファイルを決定する前に、被検体由来の体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、
前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計を用いて決定する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記体液が、脳脊髄液である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
アルツハイマー病の検出を補助するための方法であって、
被検体由来の体液中において、アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在しているか否か、或いは、該アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含し、
ここで、前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なるシグナルペプチドであって、該シグナルペプチドの分子量が、
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1620.77±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1801.91±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1933.29±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1966.96±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.12±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2134.56±2, 2135.18±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2269.26±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2331.10±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2539.62±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2620.55±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2631.23±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2673.96±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2、または、3353.34±2である、アルツハイマー病の検出を補助するための方法。
【請求項８】
前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
上記検査したアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2134.56±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2674.65±2, 2698.27±2、または、 3319.44±2
であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して大きいことを確認する、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号1〜4、16〜39、72〜82、85〜86、99〜104、110〜135、140〜161、167〜172、175〜203、207〜220、222〜232、236〜241、244〜255、260〜267、272〜302、307〜327、336〜396、416〜457、466〜479、486〜550、558〜582、587〜592、597〜606、614〜623に示すアミノ酸配列のうちの何れかである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
上記検査したアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1620.77±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1801.91±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2135.18±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2269.26±2, 2331.10±2, 2539.62±2, 2620.55±2, 2631.23±2, 2673.96±2, または、3353.34±2
であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して小さいことを確認することを更に包含する、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１２】
前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号5〜11、40、41、46、47、54〜65、83、84、106、107、162〜166、174、204、233、234、242、243、271、306、397〜404、458〜465、484、485、551〜553、595、596、607〜609、624に示すアミノ酸配列のうちの何れかである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
分子量が、1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2
であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量の程度を少なくとも検査する、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記被検体由来の体液について、分子量が相互に３以上異なる１０種以上のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて検査する、請求項７〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記被検体由来の体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を、質量分析装置を用いて検査する、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を検査する前に、該体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、
前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計を用いて検査する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記体液が、脳脊髄液である、請求項７〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
アルツハイマー病の診断に用いられるバイオマーカーであって、
配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかのアミノ酸配列からなるシグナルペプチドである、バイオマーカー。
【請求項２０】
アルツハイマー病の検出に用いられる組成物であって、
配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかから成る合成ペプチドと、
１種または２種以上の担体と、
を含む、組成物。
【請求項２１】
アルツハイマー病の検出に用いられるキットであって、
配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる合成ペプチドと、
被検体由来の体液または前記合成ペプチドを固定するための支持体と、
を含む、アルツハイマー病診断用キット。
【請求項２２】
前記支持体が熱可塑性樹脂製である、請求項２１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シグナルペプチドを指標にしたアルツハイマー病の診断方法に関する。
なお、本出願は２０１６年３月３日に出願された日本国特許出願２０１６−０４１０５２号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
【背景技術】
【０００２】
神経変性疾患は、特定の神経が障害され、認知機能の低下、運動失調、不随意運動といった症状を示すことを特徴とする疾患である。かかる神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症などが含まれる。【０００３】
アルツハイマー病は、高次脳機能に関係する神経細胞が障害される神経変性疾患であり、認知症の原因の一つである。アルツハイマー病の主な臨床症状として、記憶障害、言語障害、失行等の認知機能の低下、暴力、暴言等の人格の変化、徘徊等の異常行動などが挙げられる。【０００４】
アルツハイマー病でみられる上記の臨床症状は他の認知症において共通してみられるものも多く、当該臨床症状に基づいてアルツハイマー病を確定診断することは極めて困難である。このため、一般的なアルツハイマー病の診断では、問診、認知機能を把握するための検査（例えば、ミニメンタルステート検査：ＭＭＳＥ等の神経心理学的検査）、脳の画像解析（ＣＴやＭＲＩ等）といった複数の検査を行い、得られる結果から総合的に判断（診断）される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第５４２２７８５号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】アルツハイマー  アンド  ディメンシア（Alzheimer & Dementia）、１０巻、２０１４年、ｐｐ．７９９−８０７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところが、上述のように複数の検査から得られる結果を組み合わせて診断を行ったとしても、アルツハイマー病の診断を高い精度で行うことは難しい。専門医であっても、アルツハイマー病が見逃される（他の疾患と誤診される）リスクが存在する。【０００８】
さらに、上記認知機能を把握するための検査（例えば、ミニメンタルステート検査：ＭＭＳＥ等の神経心理学的検査）はその実施に長い時間を要する場合が多く、患者および医療機関にとって負担となりがちである。そして、上記認知機能を把握するための検査は、主に認知症のスクリーニングの目的で利用され、アルツハイマー病を診断する方法としての精度（感度および特異性）は高くない。
また、上記脳の画像解析を行うためには、特殊であり且つ高額な医療機器を導入する必要があり、該画像解析を実施可能な医療機関は限定される。さらに、かかる画像解析で得られる結果の判断には熟練の技術を要する。【０００９】
現在、アルツハイマー病を確定診断し得る唯一の方法は、患者が死亡した後で剖検し、老人斑および神経原線維変化といったアルツハイマー病に特異的な病理学的特徴を確認することである。しかし、生きている患者の診断において、脳の病理学的特徴を確認することは極めて困難である。【００１０】
このような背景から、近年、アルツハイマー病の診断に有用な情報を提供し得るバイオマーカーの同定およびその利用が切望されている。かかるバイオマーカーを用いてアルツハイマー病の診断を行うことで、該診断の特異性および感度の向上が期待できる。
例えば、非特許文献１には、アルツハイマー病患者と健常人との間で、脳脊髄液（ＣＳＦ）中に含まれる特定のタンパク質の存在量が異なることが記されている。
しかしながら、アルツハイマー病の診断に利用可能なバイオマーカーの同定およびその利用に関する研究が盛んに行われているものの、精度や信頼性等の課題から臨床でのルーチン検査として実用化されるまでに至ったものはない。【００１１】
本発明は、アルツハイマー病の検出を補助し得る新たな方法、および該方法に利用可能なバイオマーカーの提供を目的とする。また、かかるアルツハイマー病の検出を補助する方法に利用可能なアルツハイマー病検査組成物、およびアルツハイマー病検査キットの提供を他の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、体液中に存在するシグナルペプチドに着目し、該シグナルペプチドを指標としたアルツハイマー病の診断方法を確立するべく、鋭意検討しつつ体液中に存在するシグナルペプチドに関する研究を重ねた。その結果、アルツハイマー病患者由来の体液と健常者由来の体液との間で、特定のシグナルペプチドの存在の有無および存在量が異なることを見出した。そして、かかる特定のシグナルペプチドを指標とすることによって、アルツハイマー病を診断するために有用な情報を入手可能であるという知見を得て、本発明を完成するに至った。【００１３】
本発明者らは、第一に、アルツハイマー病患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルが健常者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと異なることを見出した。そこで、本発明の第一の態様として、アルツハイマー病の検出を補助するための方法であって、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が１０００〜３５００の範囲内のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、を包含する方法を提供する。ここで、かかる方法は、前記被検体のシグナルペプチドプロファイルが、以下の分子量：
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1620.77±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1801.91±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1933.29±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1966.96±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.12±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2134.56±2, 2135.18±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2269.26±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2331.10±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2539.62±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2620.55±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2631.23±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2673.96±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2、3353.34±2；
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する）ことを特徴とする。【００１４】
なお、本明細書において、「シグナルペプチドのプロファイル」とは、特定の分子量の範囲内に存在する複数のシグナルペプチドの存在状態（シグナルペプチドが存在しているか否か、または、該シグナルペプチドの存在量の程度）に関するデータの集合をいう。典型的に、上記複数のシグナルペプチドは、分子量に基づいて区別（分類）される。
かかるシグナルペプチドのプロファイルは、例えば、質量分析（マススペクトロメトリー）によって決定することが可能であり、マススペクトルとして表すことができる。或いはまた、上記シグナルペプチドのプロファイルは、シグナルペプチドの物理化学的性質または生化学的性質に基づいた他の分析手法によって決定してもよい。例えば、シグナルペプチドを二次元電気泳動した場合の電気泳動性の差に基づいて決定することが可能であり、該二次元電気泳動ゲルで確認される複数のスポットの状態として表すことができる。或いはまた、上記シグナルペプチドのプロファイルは、該シグナルペプチドに対する抗体を用いた免疫学的手法（同時に複数のタンパク質を分析可能なタンパク質マイクロアレイが好ましい）によって決定することも可能である。
なお、かかるシグナルペプチドのプロファイルは、特定の分子量の範囲内に存在する全てのシグナルペプチドに関するデータを含む必要はなく、比較対象の分子量のシグナルペプチドに関するデータが含まれていればよい。したがって、上記シグナルペプチドのプロファイルは、２又は３以上、または５以上、または１０以上、または２０以上、または３０以上、または４０以上、または５０以上、または６０以上、または７０以上、または８０以上、または９０以上、または１００以上のシグナルペプチドに関するデータを含む。【００１５】
ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該シグナルペプチドプロファイルを上記健常検体由来のシグナルペプチドのプロファイルと比較するという簡易な方法により、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症しているか否かを判断するために有用な情報を入手することができる。かかるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、アルツハイマー病の予知、診断（早期診断）、治療の導入、治療開始後の経過観察指標（典型的には、治療効果の判断指標）に好適に利用することができる。
かかる方法は、被検体から採取した体液を検査対象とするインビトロの検査であるため、被検体（患者）自身が体液中のシグナルペプチドのプロファイルを入手可能な機関へ出向く必要がない。即ち、ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法は、多くの医療機関で実施可能である。
また、上記の方法によると、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が、決定されたシグナルペプチドのプロファイルを総合的に解析した結果として示される。このため、上記の方法によると、アルツハイマー病を診断するための信頼性の高い情報を提供することができる。【００１６】
本発明者らは、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、特定の分子量で特定されるシグナルペプチドの存在量が増大している場合に被検体がアルツハイマー病に罹患もしく発症している可能性が増大することを確認した。即ち、ここで第一の態様として開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様は、上記被検体のシグナルペプチドのプロファイルについて、以下の分子量：
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2134.56±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2； 
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大している場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する）ことを特徴とする。【００１７】
また、本発明者らは、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、特定の分子量で特定されるシグナルペプチドの存在量が減少している場合に被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が増大することを確認した。即ち、ここで第一の態様として開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様は、上記被検体のシグナルペプチドのプロファイルについて、以下の分子量：
1620.77±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1801.91±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2135.18±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2269.26±2, 2331.10±2, 2539.62±2, 2620.55±2, 2631.23±2, 2673.96±2, 3353.34±2；
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少している場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する）ことを特徴とする。【００１８】
ここで第一の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記シグナルペプチドプロファイルを、質量分析装置を用いて決定する。
質量分析装置を用いることで、体液中のシグナルペプチドの網羅解析を容易かつ高精度に実施することができる。即ち、体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、質量分析装置を使用することで、容易かつ高精度に決定することができる。
なお、特許文献１には、質量分析法を利用して癌を検出する方法について記載されているが、アルツハイマー病の検出に関しては記載が無い。【００１９】
また、ここで第一の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、前記シグナルペプチドのプロファイルを決定する前に、被検体由来の体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計（Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization−Time of Flight Mass Spectrometry：ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）により決定する。
従来は、熱可塑性樹脂に固定した試料に対してイオン化レーザーを照射して質量分析を行うと、上記試料とともに該試料が固定された熱可塑性樹脂もイオン化されてしまい、質量分析の精度が低下すると考えられていた。しかし、本発明者らの検討によると、熱可塑性樹脂上に分析対象の体液を固定した状態で質量分析を行うことで、シグナルペプチドのイオン化が促進され、質量分析を精度よく実施し得ることが確認された。
即ち、体液を熱可塑性樹脂上に固定し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを用いて分析することで、体液中にイオン化しづらいシグナルペプチドを含む場合であっても、該シグナルペプチドを含んだ状態のシグナルペプチドプロファイルを好適に決定することができる。【００２０】
本発明者らは、アルツハイマー病患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルに関してさらに検討を進めたところ、アルツハイマー病患者由来の体液と健常検体由来の体液では、特定のシグナルペプチドの存在量の程度が異なることを確認した。【００２１】
そこで、本発明の第二の態様として、アルツハイマー病の検出を補助する方法であって、被検体由来の体液中において、アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在しているか否か、或いは、該アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含する方法を提供する。
ここで、前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なるシグナルペプチドである。そして、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドは、その分子量が、
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1620.77±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1801.91±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1933.29±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1966.96±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.12±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2134.56±2, 2135.18±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2269.26±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2331.10±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2539.62±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2620.55±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2631.23±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2673.96±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2、または、3353.34±2である。【００２２】
かかる方法によると、上記被検体由来の体液について、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在しているか否か、また、存在している場合はその存在量を検査するという簡易な方法により、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性を容易に調べることができる。かかるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、アルツハイマー病の予知、診断（早期診断）、治療の導入、治療開始後の経過観察指標（典型的には、治療効果の判断指標）に好適に利用することができる。
上記方法によれば、被検体から採取した体液を検査対象とするインビトロの検査であるため、被検体（患者）自身が体液中のシグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査可能な機関へ出向く必要がない。即ち、ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法は、多くの医療機関で実施可能である。【００２３】
ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである。
配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちのいずれかからなるシグナルペプチドは、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの分子量に対応するシグナルペプチドの典型例である。即ち、上記配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列からなるシグナルペプチドは、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドとして適する。【００２４】
ここで開示する上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なることが、本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。このためかかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病を診断するためのバイオマーカーとして利用可能である。
即ち、本発明は、他の側面として、アルツハイマー病の診断に用いられるバイオマーカーを提供する。かかるバイオマーカーは、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなるシグナルペプチドである。【００２５】
また、ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記検査したアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2134.56±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2674.65±2, 2698.27±2、または、 3319.44±2
であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、前記基準レベルと比較して大きいことを確認する。
好ましい一態様では、前記アルツハイマー病関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号1〜4、16〜39、72〜82、85〜86、99〜104、110〜135、140〜161、167〜172、175〜203、207〜220、222〜232、236〜241、244〜255、260〜267、272〜302、307〜327、336〜396、416〜457、466〜479、486〜550、558〜582、587〜592、597〜606、614〜623に示すアミノ酸配列のうちの何れかである。
かかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中の存在量が基準レベルと比較して大きいことを発明者らが確認したシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液中の該アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量が基準レベルと比較して大きいことは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する）。【００２６】
また、ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記検査したアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの、分子量が、
1620.77±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1801.91±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2135.18±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2269.26±2, 2331.10±2, 2539.62±2, 2620.55±2, 2631.23±2, 2673.96±2, または、3353.34±2
であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのいずれかについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度から設定した基準レベルと比較して小さいことを確認することを更に包含する。
好ましい一態様では、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドのアミノ酸配列が、配列番号5〜11、40、41、46、47、54〜65、83、84、106、107、162〜166、174、204、233、234、242、243、271、306、397〜404、458〜465、484、485、551〜553、595、596、607〜609、624に示すアミノ酸配列のうちの何れかである。
かかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中の存在量が基準レベルと比較して小さいことを発明者らが確認したシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液中の該アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量が基準レベルと比較して小さいことは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する）。【００２７】
また、ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、分子量が、1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量の程度を少なくとも検査する。
特に好ましい一態様では、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドを構成するアミノ酸配列が、配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列のうちのいずれかである。
かかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度（典型的には上記基準レベル）と比較して特に顕著に異なっていることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。このため、被検体由来の体液について、かかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在するか否か、或いは該存在する場合にはかかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量の程度を検査することで、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症しているか否かを判断するために有用な信頼性の高い情報を入手することができる。【００２８】
また、ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、前記被検体由来の体液について、分子量が相互に３以上異なる１０種以上のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて検査する。
分子量が相互に異なる複数のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて検査することで、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症しているか否かを判断するための情報として、より信頼性（精度）の高い情報を入手することができる。【００２９】
また、ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記被検体由来の体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を、質量分析装置を用いて検査する。
上記質量分析装置を用いることで、複数のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を効率よく検査することができる。【００３０】
また、ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、前記体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を検査する前に、該体液を熱可塑性樹脂上に固定すること、を包含し、前記熱可塑性樹脂上に固定した体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）を用いて検査する。
上記熱可塑性樹脂上に体液を固定し、該固定した体液中のアルツハイマー病関連シグナルペプチドをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを用いて調べることで、イオン化しづらいシグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度についても、高い精度で分析することができる。【００３１】
また、ここで第一の態様或いは第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記体液が、脳脊髄液である。
脳脊髄液は夾雑物の混入が少ない。また、脳脊髄液は、脳内および脊髄内を絶えず循環しているため、脳内環境の変化が反映されやすい。このため、脳脊髄液は、シグナルペプチドのプロファイルの検査対象、または、アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査する対象として好適である。【００３２】
また、本発明は、他の側面として、アルツハイマー病の検出に用いられる組成物（以下、「アルツハイマー病検査組成物」ともいう）を提供する。ここで開示される一つの態様のアルツハイマー病検査組成物は、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかから成る合成ペプチドと、１種または２種以上の担体と、を含む。【００３３】
また、本発明は、他の側面として、アルツハイマー病の検出に用いられるキット（以下、「アルツハイマー病検査キット」ともいう）を提供する。ここで開示される一つの態様のアルツハイマー病検査キットは、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる合成ペプチドと、被検体由来の体液または前記合成ペプチドを固定（担持）するための支持体と、を含む。【００３４】
上記アルツハイマー病検査組成物およびアルツハイマー病検査キットに含まれる合成ペプチドは、本発明者らによって上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドとして見出されたシグナルペプチドと同じアミノ酸配列からなる人為的に合成されたペプチドである。したがって、かかる合成ペプチドは、アルツハイマー病の検出を補助する方法において、比較対照（典型的には、陽性対照：ポジティブコントロール）或いは、標準物質として利用することができる。したがって、ここで開示する組成物あるいはキットを使用することで、アルツハイマー病の検出を補助する方法を高い信頼性で実施することが可能である。【００３５】
ここで開示する上記アルツハイマー病検査キットの好適な一態様では、上記支持体が熱可塑性樹脂製である。
熱可塑性樹脂製の支持体の上に合成ペプチドを固定することで、イオン化しづらいペプチドであっても、イオン化方法としてＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化法）を用いた質量分析（典型的にはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）によって好適に分析（測定）することができる。このため、上記アルツハイマー病検査キットは、上記アルツハイマー病の検出を補助する方法としてイオン化方法にＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化法）を用いた質量分析（典型的にはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）を用いた場合に特に好適に使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、シグナルペプチドのプロファイルの典型例を示す図（グラフ）である。かかるグラフは、仮想の検体Ａ由来の体液中に存在すると仮定したシグナルペプチドのプロファイルを模式的に示している。横軸はシグナルペプチドの分子量を示し、縦軸は各シグナルペプチドの存在量（mol）を示す。
【図２】図２は、図１で示した検体Ａのシグナルペプチドのプロファイルと、該検体Ａのシグナルぺプチドのプロファイルとは別に決定した検体Ｂのシグナルペプチドのプロファイルを重ねて表示する図（グラフ）である。横軸はシグナルペプチドの分子量を示し、縦軸は各シグナルペプチドの存在量（mol）を示す。なお、かかるグラフにおける検体Ｂのシグナルペプチドのプロファイルについても上記検体Ａの場合と同様に、仮想の検体Ｂ由来の体液中に存在すると仮定したシグナルペプチドのプロファイルを示す。
【図３】図３は、一実施例において、質量分析によってm/z1629.17に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図４】図４は、一実施例において、質量分析によってm/z1767.38に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図５】図５は、一実施例において、質量分析によってm/z1900.43に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図６】図６は、一実施例において、質量分析によってm/z1933.29に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図７】図７は、一実施例において、質量分析によってm/z1966.96に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図８】図８は、一実施例において、質量分析によってm/z1996.12に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図９】図９は、一実施例において、質量分析によってm/z2187.30に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図１０】図１０は、一実施例において、m質量分析によってm/z2196.08に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図１１】図１１は、一実施例において、質量分析によってm/z2196.64に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【図１２】図１２は、一実施例において、質量分析によってm/z2240.20に検出されるピークに対応するシグナルペプチドの脳脊髄液中の存在量（ここではピーク値）を検査した結果を示す図（散布図）であり、脳脊髄液の提供者をアルツハイマー病患者群および健常者群に分類して示す。横軸の「ＡＤ」はアルツハイマー病患者群を示し、「Ｎｏｒｍａｌ」は健常者群を示す。また、縦軸はピーク値（Peak Value）を示す。なお、図中の「＋」は各群におけるシグナルペプチドの存在量（ピーク値）の平均を示し、「p value (U-Test)」として示す数値は、両群間でＵ検定を行って算出したＰ値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、本発明の好適な実施態様を説明する。本明細書において特に言及している事項（例えばここで開示されるアルツハイマー病関連シグナルペプチドの分子量およびアミノ酸配列等）以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄（例えば体液中のシグナルペプチドの分析方法、ペプチドの化学合成法、ペプチドを成分とする検査組成物の調製に関するような一般的事項）は、細胞工学、生理学、医学、薬学、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、遺伝学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、場合に応じてアミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した１文字表記（但し配列表では３文字表記）で表す。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
【００３８】
また、本明細書において「合成ペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみ独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造され、所定の組成物（例えばアルツハイマー病の検出に用いられるアルツハイマー病検査組成物またはＡＬＳ検査キット）中で安定して存在し得るペプチド断片をいう。
また、本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、構成アミノ酸残基数に応じてポリペプチド、オリゴペプチドと呼ばれるものを包含する用語である。典型的には全アミノ酸残基数が概ね５０以下（好ましくは３０以下、例えば２０以下）のような比較的分子量の小さいものをいう。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
なお、本明細書中に記載されるアミノ酸配列は、常に左側がＮ末端側であり右側がＣ末端側である。
【００３９】
「健常」「健康」「正常」という用語は本明細書において同義語として使用される。それらは、アルツハイマー病の臨床症状を全く示さず、また、アルツハイマー病であると診断されない個人の健康状態を示す。即ち、本明細書において「健常検体」「健常人」および「健常者」は、「健康な個体」「正常な個体」と同義語として使用され、それらは、アルツハイマー病の臨床症状を全く示さず、また、アルツハイマー病であると診断されない個人を指す。なお、本明細書において、「健常検体」とは、「健常者」であって、ここで開示する発明において比較対象として用いられる被検体を指す。
好ましくは、上記「健常検体」は他の認知症（例えば、脳血管性認知症、レビー小体型認知症、ピック病等）に罹患あるいは発症しておらず、より好ましくは、他の神経変性疾患（例えば、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病等）にも罹患あるいは発症していない。
また、上記「健常検体」は、試験対象の被検体と比較して、人種、年齢、性別等の背景因子が類似していることが好ましい。
【００４０】
本明細書において、「シグナルペプチドの存在量の程度」とは、体液中に存在するシグナルペプチドの絶対的な定量値に限定されず、該シグナルペプチドの相対的な定量値を含む。例えば、特定の体液（典型的には、健常検体由来の体液）におけるシグナルペプチドの存在量と比較した大小、または、特定の基準値（典型的には、健常検体由来の体液中のシグナルペプチドの存在量の程度から決定した基準レベル）と比較した大小であり得る。
【００４１】
また、本明細書において、特定の分子量Ｍについて「Ｍ±２」と示す場合、該「±２」は、分析装置、分析方法、および測定条件およびその違いによって生じ得る誤差範囲を意味する。ここでは、汎用型のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを用いた質量分析において生じ得る誤差範囲を基準として「±２」と設定したが、該誤差範囲はこれに限定されず、分析装置、分析方法、測定条件に応じて適宜（例えば±１、±３等）に設定すればよい。
【００４２】
＜第一の態様＞
本発明者らは、第一に、体液中のシグナルペプチドに着目し、アルツハイマー病患者由来の体液および健常検体由来の体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドの網羅解析を鋭意検討しつつ行った。そして、アルツハイマー病患者の体液中のシグナルペプチドのプロファイルが健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと異なることに着目し、該シグナルペプチドのプロファイルの相違に基づいたアルツハイマー病の検出を補助する方法を完成するに至った。
【００４３】
即ち、ここで第一の態様として開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルが、特定の分子量において健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと相違する場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する、例えば被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性の増大を示す）ことを特徴とする方法である。
【００４４】
具体的には、ここで第一の態様として開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、
（ｉ）被検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドについて、分子量が１０００〜３５００のシグナルペプチドのプロファイルを決定すること、および、
（ｉｉ）前記決定した被検体のシグナルペプチドプロファイルを、予め決定した健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルと比較すること、
を包含する。
【００４５】
かかるアルツハイマー病の検出を補助する方法では、被検体のシグナルペプチドプロファイルが、以下の分子量：
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1620.77±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1801.91±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1933.29±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1966.96±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.12±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2134.56±2, 2135.18±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2269.26±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2331.10±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2539.62±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2620.55±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2631.23±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2673.96±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2、3353.34±2；
のうちのいずれかにおいて前記健常検体のシグナルペプチドプロファイルと相違する場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する）。
【００４６】
ここで、アルツハイマー病患者由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルでは、以下の分子量：
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2134.56±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2； 
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が、健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して増大する。
即ち、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、これらの分子量のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が健常検体のシグナルペプチドと比較して増大していることは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
【００４７】
また、アルツハイマー病患者由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルでは、以下の分子量：
1620.77±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1801.91±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2135.18±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2269.26±2, 2331.10±2, 2539.62±2, 2620.55±2, 2631.23±2, 2673.96±2, 3353.34±2； 
のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が、健常検体のシグナルペプチドプロファイルと比較して減少する。
即ち、被検体のシグナルペプチドプロファイルにおいて、これらの分子量のうちのいずれかで特定されるシグナルペプチドの存在量が健常検体のシグナルペプチドと比較して減少していることは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
【００４８】
図１に、検体Ａのシグナルペプチドのプロファイルの典型例を示す。図１に示すように、シグナルペプチドのプロファイルは、検体Ａの体液中に存在すると仮定したシグナルペプチドの分子量を横軸とし、該シグナルペプチドの存在量を縦軸とした棒グラフとして表すことができる。
また、図２に、図１に示した検体Ａのシグナルぺプチドのプロファイルとは別に検体Ｂのシグナルペプチドのプロファイルを決定し、これら２つのシグナルペプチドのプロファイルを重ねて表示した図を示す。かかる検体Ａに係るシグナルペプチドのプロファイルと検体Ｂに係るシグナルペプチドのプロファイルとが図２に示す関係である場合、検体Ａに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量１０００、１２００、１４００、１６００、１７００において検体Ｂに係るシグナルペプチドのプロファイルと相違する。具体的には、検体Ａに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量１０００、１７００で特定されるシグナルペプチドの存在量が、検体Ｂにかかるシグナルペプチドのプロファイルと比較して増大しており、また、検体Ａに係るシグナルペプチドのプロファイルは、分子量１２００、１４００、１６００で特定されるシグナルペプチドの存在量が、検体Ｂにかかるシグナルペプチドのプロファイルと比較して減少している。
【００４９】
ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法において、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する情報（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性の増大を示す情報）を入手するためには、被検体のシグナルペプチドのプロファイルが健常検体のシグナルペプチドのプロファイルと比較して、上記特定の分子量において少なくとも１つ相違する（典型的には、該特定の分子量において特定される少なくとも１つのシグナルペプチドの存在量が増大している或いは減少している）ことを確認すればよい。被検体がアルツハイマー病に罹患しているか否かをより高い信頼性で（高精度で）判断し得る情報を入手する観点からは、上記特定の分子量から選択される複数（２個または３個以上、より好ましくは１０個以上、さらに好ましくは２０個以上）の分子量において、被検体のシグナルペプチドプロファイルが健常検体のシグナルペプチドと相違すること（典型的には、該特定の分子量において特定されるシグナルペプチドの存在量が増大している或いは減少している）を確認することが好ましい。
【００５０】
体液中のシグナルペプチドのプロファイルの決定は、目的の分子量で特定されるシグナルペプチドの有無を確認し得る公知の方法（定性的測定方法）により行えばよい。好ましくは、目的の分子量で特定されるシグナルペプチドの存在量を測定し得る方法（定量的測定方法）により行われる。
【００５１】
好適な一態様では、上記シグナルペプチドのプロファイルは、質量分析装置を用いた分析により決定される。即ち、上記シグナルペプチドのプロファイルは、質量分析法により決定されることが好ましい。典型的に、質量分析法によると、複数のシグナルペプチドを同時に分析し得るため、効率よくシグナルペプチドのプロファイルを決定することができる。
分析対象の体液を質量分析法により分析することで、該体液中に存在するシグナルペプチドの質量スペクトルを（マススペクトル）得ることができる。かかるマススペクトルは、上記体液中に存在するシグナルペプチドを質量電荷比（m/z）に応じて分離した結果として得られるスペクトルであり、上記シグナルペプチドのプロファイルとして利用可能である。
【００５２】
上記質量分析は特に限定されず、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフ質量分析）、ＥＳＩ−ＭＳ（エレクトロスプレーイオン化質量分析）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型質量分析）といった従来公知の質量分析法から適宜選択すればよい。換言すると、質量分析におけるイオン化方法およびイオンの検出方法は特に限定されない。例えば、イオン化方法としてＥＩ(Electron Ionization:電子イオン化)法、ＣＩ（Chemical Ionization、化学イオン化）法、ＦＡＢ（Fast Atom Bombardment、高速原子衝撃）法、ＥＳＩ（ElectroSpray Ionization、エレクトロスプレーイオン化）法、ＡＰＣＩ（Atomospheric Pressure Cheimcal Ionization、大気圧化学イオン化）法、ＩＣＰ（Inductively Coupled Plasma、誘導結合プラズマ）、ＭＡＬＤＩ（Matrix Assisted Laser Desorption Ionization、マトリックス支援レーザー脱離イオン化）法といった従来公知の手法から適宜選択すればよい。また、イオン化された分子の検出方法についても、磁場偏向型 (Magnetic Sector)、四重極型 (Quadrupole, Q)、イオントラップ型 (Ion Trap, IT)、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型 (Fourier-Transform Ion Cyclotron Resonance, FT-ICR)、加速器質量分析 (Accelerator Mass Spectrometry, AMS)、飛行時間型 (Time-of-Flight, TOF)、或いはこれらの検出方法を複数組み合わせたタンデム型といった従来公知の手法から適宜選択すればよい。
【００５３】
特に好適な一態様では、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化法）を用いた質量分析（以下、ＭＮＡＬＤＩＭＳともいう）により分析する。ＭＡＬＤＩＭＳによると、典型的に、イオン化されにくい高分子（例えば、タンパク質やぺプチド等の生体分子）の分析が可能である。また、上記ＭＡＬＤＩＭＳは、典型的に、微量サンプルや、純度が低いサンプルについても分析が可能である場合が多い点も、体液中のシグナルペプチドの分析に適している。なお、かかるＭＡＬＤＩを用いた質量分析では、典型的に、飛行時間型質量分析（ＴＯＦＭＳ）によりイオン化した分子が分析（検出）される。即ち、好ましくは、質量分析として、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳを採用し得る。
【００５４】
上記ＭＡＬＤＩＭＳ（典型的にはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）により体液中のシグナルペプチドを分析する場合は、該体液を熱可塑性樹脂上に固定することが好ましい。シグナルペプチドは、典型的に、疎水性アミノ酸を多く有する疎水性が高い分子である場合が多く、イオン化効率が低い傾向にある。熱可塑性樹脂上に固定することで、シグナルペプチドのイオン化を促進し得る。また、体液を熱可塑性樹脂上に固定することで、体液中に含まれる夾雑物のイオン化が抑制し得るため、シグナルペプチドの分析精度を向上し得る。
【００５５】
ここで、上記体液を固定する熱可塑性樹脂としては、従来公知の樹脂材料を特に制限なく使用することができる。例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン樹脂、ポリメチルメタクリレート等のアクリル系樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合体樹脂（ＥＶＡ）、ポリ塩化ビニル樹脂、ポリエステル樹脂等を主成分とする樹脂材料であり得る。シグナルペプチドのイオン化の促進と夾雑物のイオン化抑制の観点からは、エチレンー酢酸ビニル共重合体樹脂を好適に使用し得る。
【００５６】
好適な一態様では、薄膜状（フィルム状、シート状）に成形された熱可塑性樹脂（典型的には、熱可塑性フィルム）上に分析対象の体液を固定する。かかる熱可塑性樹脂フィルムの厚みは特に限定されない。例えば５０μｍ〜２００μｍ程度（典型的には１００μｍ程度）の厚みのものであり得る。
【００５７】
また、上記ＭＡＬＤＩＭＳ（典型的にはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）により体液中のシグナルペプチドを分析する場合に使用されるマトリックスは特に限定されず、ＭＡＬＤＩにより質量分析する際に使用される従来公知のマトリックスから適宜選択すればよい。例えば、シナピン酸（3,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシケイ皮酸）、ＣＨＣＡ（α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸）、フェルラ酸（trans-4-ヒドロキシ-3-メトキシケイ皮酸）、ゲンチジン酸、ＤＨＢＡ（2,5-ジヒドロキシ安息香酸）、ＨＰＡ（3-ヒドロキシピコリン酸）、ジスラノール（1,8-ジヒドロキシ-9,10-ジヒドロアントラセン-9-オン）等が挙げられる。シナピン酸は高分子量の分子を質量分析する際のマトリックスとして好適であり、また、ペプチドおよびタンパク質の質量分析に好適なマトリックスの一つである。このため、シグナルペプチドの質量分析におけるマトリックスとして、上記シナピン酸を好適に使用し得る。
【００５８】
好適な一態様では、対象の体液に対して相互に独立して複数回の質量分析を繰り返し行う。かかる複数回の質量分析により得られた結果を統計学的に処理することで、体液中に含まれるシグナルペプチドを精度よく定量し得る。
例えば、複数回の質量分析において目的のシグナルペプチドの存在が確認される頻度（検出される頻度）を算出し、該頻度を当該シグナルペプチドの定量値とみなすことで、体液中に存在するシグナルペプチドの存在量を確認することができる。或いはまた、単回の質量分析により目的のシグナルペプチドを定量し得る場合であれば、複数回の質量分析により得られた結果（定量値）から算出される平均値、または中央値は、当該シグナルペプチドの定量値として好適に採用し得る。
質量分析を繰り返す回数が増えるほど上記定量精度が向上し得るため、例えば５０回以上（好ましくは１００回以上、より好ましくは２００回以上、さらに好ましくは３００回以上）の質量分析を繰り返すことが好ましい。
【００５９】
例えば、上記質量分析法としてＭＡＬＤＩＭＳを採用する場合であれば、例えば以下の方法により、体液中のシグナルペプチドの存在量を確認することができる。
まず、対象の体液に対して複数回（例えば５０回以上、好ましくは１００回以上、より好ましくは２００回以上、さらに好ましくは３００回以上）イオン化レーザーを繰り返し照射する。このとき、各レーザー照射毎に質量分析（好ましくはＴＯＦＭＳ）を行い、目的の分子量の分子（即ち、目的の分子量のシグナルペプチド）が存在するか（検出されるか）否かを確認する。そして、上記複数回のＭＡＬＤＩＭＳにおいて目的の分子量の分子の存在が確認される頻度（検出される頻度）を算出し、該頻度を目的のシグナルペプチドの存在量とみなすことで、当該目的のシグナルペプチドの存在量を確認し得る。
【００６０】
また、他の好適な一態様では、上記シグナルペプチドのプロファイルは、免疫学的手法により決定されてもよい。ここで、免疫学的手法とは、典型的には、抗原（又はその断片）と特異的に反応する抗体とを抗原抗体反応させて免疫複合体を形成し、該抗体を検出（可視化）することで抗原量を把握する方法である。即ち、目的のシグナルペプチドまたはその断片と特異的に反応する抗体を用いた手法により決定され得る。
【００６１】
上記免疫学的手法としては、目的のシグナルペプチドを検出し得る限りにおいて、従来公知の手法を特に制限なく採用し得る。例えば、ＥＩＡ、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、ゲル内沈降反応、免疫比濁法、粒子凝集反応法、等が挙げられる。
【００６２】
上記免疫学的手法としては、予め何らかの標識をした抗体（標識一次抗体）を用いる方法（直接法）、又は、シグナルペプチドに対する抗体（即ち一次抗体）を特異的に認識する標識二次抗体を用いる方法（間接法）のどちらの方法も好適に採用できる。
上記抗体（一次抗体または二次抗体）の標識物質としては、ＥＬＩＳＡ等の免疫化学的手法による診断分野において当業者が通常用いる標識化合物を使用することができる。例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ等の放射性同位元素；β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等の酵素；フルオレスカミン、フルオレセインイソチオシアネート等の蛍光物質；ルシフェリン、ルミノール誘導体、イソルミノール誘導体等の発光物質；等が挙げられる。
これらの標識物質を使用した抗体の標識は、従来公知の方法で行えばよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
【００６３】
上記免疫学的手法に用いられる抗体は、目的のシグナルペプチドを検出可能である限りにおいて、特に限定されない。例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単鎖抗体、キメラ抗体等を含む。また、免疫動物（抗体産生動物、Host、Source）や免疫グロブリンの定常領域（アイソタイプ、クラスともいう）についても特に限定されない。例えば、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ等を免疫して得られた抗体であってもよいし、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのうちのいずれであってもよい（好ましくはＩｇＧである）。
これらの抗体は、従来公知の方法により作製すればよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
なお、本発明の他の側面としては、目的のシグナルペプチドを検出可能な抗体を含む組成物、キット、或いはタンパク質アレイ（典型的にはタンパク質マイクロアレイ）等が提供される。
【００６４】
上記健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルは、アルツハイマー病に罹患あるいは発症していない少なくとも一人の健常検体から採取した体液中のシグナルペプチドのプロファイルであればよい。しかし、健常検体であっても、個々人によって体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルに相違（個体差）が生じ得る。このため、上記健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルは、複数（２人または３人以上、好ましくは５人以上、より好ましくは１０人以上）の健常検体の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルから総合的に決定されることが好ましい。
なお、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、被検体のシグナルペプチドのプロファイルと同様の手法で決定されたものであることが好ましい。
【００６５】
ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法において、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドとの比較は、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルとの相違がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量のうちの少なくとも１つについて比較すればよい。
上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの相違がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量であって、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの比較において比べられる分子量の個数が多いほど、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性（典型的には該可能性の増加あるいは減少）をより高い信頼性で（高精度で）示す情報を入手することができる。即ち、上記健常検体由来の体液中のシグナルペプチドのプロファイルとの相違がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示す上記特定の分子量のうちの２個または３個以上（より好ましくは１０個以上、より好ましくは２０個以上）について、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常検体のシグナルペプチドプロファイルとを比較することが好ましい。
【００６６】
ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法では、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルぺプチドプロファイルとを特定の分子量に着目して比較した場合に、該比較した特定の分子量において相違する頻度が高いほど、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性（典型的には該可能性の増加）を高い精度で示す。
即ち、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性（典型的には該可能性の増加）をより高い信頼性で（高精度で）示す情報を入手する観点からは、上記被検体のシグナルペプチドプロファイルと上記健常検体のシグナルペプチドプロファイルとの比較において比べられる上記特定の分子量のうちの、６０％以上（好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９５％以上）において、被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常検体のシグナルペプチドプロファイルとで相違することを確認することが好ましい。
【００６７】
＜第二の態様＞
本発明者らは、アルツハイマー病患者由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルと、健常検体由来の体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルとをより詳細に比較、検討した。そして、アルツハイマー病患者由来の体液と健常検体由来の体液とでは、特定のシグナルペプチド（即ち、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチド）の存在の有無およびその存在量の程度が異なることを見出した。そして、該特定のシグナルペプチド（即ち、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチド）を指標にしたアルツハイマー病の検出を補助する方法を完成するに至った。
【００６８】
即ち、ここで第二の態様として開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、被検体由来の体液中における上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なる場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する、例えば、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性の増大を示す）ことを特徴とする方法である。
【００６９】
具体的には、ここで第二の態様として開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、
（ｉ）被検体由来の体液中において、アルツハイマー病関連シグナルペプチドが１種または２種以上存在しているか否か、或いは、該アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在している場合にはその存在量の程度を検査すること、を包含する。
【００７０】
かかるアルツハイマー病の検出を補助する方法において、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドは、その分子量が、
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1620.77±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1801.91±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1933.29±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1966.96±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.12±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2134.56±2, 2135.18±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2269.26±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2331.10±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2539.62±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2620.55±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2631.23±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2673.96±2, 2674.65±2, 2698.27±2, 3319.44±2、または、3353.34±2である。
これらの分子量で特定されるシグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、健常検体由来の体液中における該シグナルペプチドの存在の有無あるいはその存在量の程度から設定した基準レベルと異なることが、本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。
【００７１】
ここで開示される上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの典型例は、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちのいずれかからなるシグナルペプチドである。
【００７２】
ここで第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法において、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無およびその存在量の程度の検査は、上記第一の態様において体液中のシグナルペプチドのプロファイルを決定する場合と同様の方法により行うことができる。従って、かかる検査方法に関する詳細な説明は割愛する。
【００７３】
ここで、上記基準レベルは、アルツハイマー病に罹患（あるいは発症）していない少なくとも一人の健常検体から採取した体液について、該体液中に目的のシグナルペプチドが存在するか否か、或いは存在する場合はその存在量の程度を検査し、該検査結果から設定すればよい。しかし、健常検体であっても、個々人によって、体液中に目的のシグナルペプチドが存在するか否か（或いはその存在量）に相違（個体差）が生じ得る。このため、上記基準レベルは、複数（２人または３人以上、好ましくは５人以上、より好ましくは１０人以上）の健常検体の体液を検査した結果から総合的に決定されることが好ましい。
なお、健常検体から採取した体液の検査方法は、被検体由来の体液についてアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査する場合と同様の方法により行うことが好ましい。
【００７４】
検査対照の健常検体が一人である場合は、上記基準レベルは、該一人の健常検体の検査結果を基準レベルとして決定すればよい。
【００７５】
一方で、検査対照の健常検体が複数である場合は、上記基準レベルは、該複数の健常検体の検査結果に対して適当な統計処理を行って決定すればよい。かかる統計処理の手法は特に限定されない。例えば、複数の健常検体の検査結果の平均値（或いは中央値）を算出し、該平均値（或いは中央値）を基準レベルの上限或いは下限として設定し得る。或いはまた、該平均値（或いは中央値）の所定倍の値を、上記基準レベルの上限或いは下限として設定してもよい。例えば、上記平均値（或いは中央値）の１．５倍、２倍、３倍、または５倍、或いは、上記平均値（或いは中央値）の０．８倍、０．５倍、または０．３倍を基準レベルの上限或いは下限とし得る。
【００７６】
或いはまた、上記平均値（或いは中央値）を含む適当な数値範囲を基準レベルと設定してもよい。例えば、統計学的な許容誤差範囲或いはその所定倍の範囲を上記基準レベルと設定すればよく、上記平均値（或いは中央値）から標準偏差（或いは標準誤差）の１倍、１．５倍、２倍、３倍、または５倍離れた数値までの範囲を、上記基準レベルと設定し得る。或いはまた、例えば、該平均値（或いは中央値）±１０％、±２０％、±３０％、±４０％、±５０％、または±６０％の数値範囲を、上記基準レベルとしてもよい。
【００７７】
或いはまた、適当なカットオフ値（或いは閾値）を算出し、該カットオフ値（閾値）を上記基準レベルとしてもよい。かかるカットオフ値（或いは閾値）は、アルツハイマー病患者と健常者とを、所定の（例えば、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、または９８％以上の）感度および／または特異性で判別し得る値として設定すればよい。かかるカットオフ値（或いは閾値）は、従来公知の統計学的手法で算出可能であり、健常者群におけるシグナルペプチドの存在量とアルツハイマー病患者群における存在量の分布を比較して任意に決定することができる。
例えば、ＲＯＣ曲線(Receiver Operatorating Characteristic curve、受信者動作特性曲線)を利用して設定することができる。ＲＯＣ曲線は、縦軸にアルツハイマー病の検出感度を、横軸に擬陽性率（すなわち"１−特異度"）を示すグラフである。上記カットオフ値を設定するために目的のシグナルペプチドの存在量について適宜基準値を設定し、該基準値を連続的に変化させたときの感度と擬陽性率の変化をプロットすることによって、ROC曲線を得ることができる。そして、得られたＲＯＣ曲線に基づいて、所望の感度および特異度を期待できる値をカットオフ値として設定すればよい。
ここで、「感度」とは、アルツハイマー病患者群において、シグナルペプチドの存在量を所定の値（上記基準値）に設定したときに該アルツハイマー病患者群が陽性と判断される確率（真陽性率）をいい、上記「特異度」とは、健常者群において、シグナルペプチドの存在量を所定の値（上記基準値）に設定したときに該健常者群が陰性と判断される確率（真陰性率）をいう。
或いはまた、健常者群或いはアルツハイマー病患者群におけるシグナルペプチドの存在量の５パーセンタイル値（好ましくは１パーセンタイル値）あるいは９５パーセンタイル値（９９パーセンタイル値）をカットオフ値に設定してもよい。
【００７８】
ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法では、被検体由来の体液について、少なくとも１種のアルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度を検査することで、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する情報（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性に関する情報）を入手することができる。かかる方法により得られる情報の信頼性（典型的には精度）を向上する観点からは、２種または３種以上、より好ましくは１０種以上、さらに好ましくは２０種以上）のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて検査することが好ましい。また、複数のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて検査する場合は、これらアルツハイマー病関連シグナルペプチドの分子量は相互に３以上（より好ましくは５以上）異なることが好ましい。
【００７９】
ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法では、上記検査されたアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの少なくとも１種について、その検査結果（即ち、該アルツハイマー病関連シグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か、或いは被検体由来の体液中における該シグナルぺプチドの存在量）が、該アルツハイマー病関連シグナルペプチドの基準レベルと異なる場合に、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する）。
即ち、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、上記被検体由来の体液を検査した結果（即ち、被検体由来の体液中に、アルツハイマー病関連シグナルペプチドが１種または２種以上存在するか否か、或いは、該アルツハイマー病関連シグナルペプチドが存在する場合にはその存在量の程度）を、対応するアルツハイマー病関連シグナルペプチドの基準レベルと比較することをさらに含む。
【００８０】
ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法では、上記被検体由来の体液を検査した結果を対応するアルツハイマー病関連シグナルペプチドの基準レベルと比較した場合に、該被検体由来の体液中における上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量の程度（或いは存在の有無）が上記基準レベルと異なる頻度が高いほど、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性（典型的には該可能性の増加）を高い信頼性（精度）で示す。
即ち、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性（典型的には該可能性の増加）を示す信頼性の高い（精度の高い）情報を入手する観点からは、検査されたアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの６０％以上（好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９５％以上）が、該シグナルペプチドの基準レベルと異なることを確認することが好ましい。
【００８１】
換言すると、ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法では、上記被検体由来の体液を検査した結果を対応するアルツハイマー病関連シグナルペプチドの基準レベルと比較した場合に、該被検体由来の体液中における上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの存在量の程度（或いは存在の有無）が上記基準レベルと異なる頻度が低いほど、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していない可能性（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症している可能性の減少）を高い信頼性（精度）で示す。
即ち、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していない可能性（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症している可能性の減少）を示す信頼性の高い（精度の高い）情報を入手する観点からは、検査されたアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの６０％以上（好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９５％以上）が、該シグナルペプチドの基準レベル内であることを確認することが好ましい。
【００８２】
ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、アルツハイマー病関連シグナルペプチドとして、分子量が、1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちのいずれかを少なくとも検査する。より好ましくは、アルツハイマー病関連シグナルペプチドとして、配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列からなるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちのいずれかを少なくとも検査する。換言すると、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法における検査対象の好適なアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2であるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちのいずれか（好ましくは、配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列からなるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちのいずれか）を少なくとも含む。
かかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中の該シグナルペプチドの存在の有無或いはその存在量の程度が、上記基準レベルと比較して特に顕著に異なることが本発明者らによって確認されたアルツハイマー病関連シグナルぺプチドである。従って、被検体由来の体液について、かかるアルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの少なくとも１種（好ましくは２種または３種以上、より好ましくは５種以上、さらに好ましくは１０種以上）が存在するか否か、或いは存在する場合には存在量を検査することで、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法で得られる情報（即ち、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する情報、典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患若しくは発症していることを示唆する情報、例えば被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性に関する情報）の信頼性（典型的には精度）を向上することができる。
【００８３】
また、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、アルツハイマー病患者と健常検体とを高い感度および／または高い特異性で判別可能なシグナルペプチドの存在量を検査する。例えば、ＲＯＣ曲線下面積（ＡＵＣ：area under the curve）を算出し、該ＡＵＣが大きいシグナルペプチドの存在量を検査する（即ち、該シグナルペプチドの存在量を上記基準レベルと比較する）ことが好ましい。なお、上記ＡＵＣはＲＯＣ曲線下の面積であり、該ＡＵＣが大きい指標ほど高い診断能（予測能）で疾患を検出可能な指標であることが知られている。
【００８４】
ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、特定のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して大きいことを確認する。以下、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して大きいことを確認する上記特定のアルツハイマー病関連シグナルペプチドを、「アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチド」ともいう。
【００８５】
かかるアルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドは、典型的に、分子量が、
1474.95±2, 1497.91±2, 1516.00±2, 1532.22±2, 1534.67±2, 1536.19±2, 1544.01±2, 1556.44±2, 1559.85±2, 1561.62±2, 1591.89±2, 1592.66±2, 1611.67±2, 1622.09±2, 1629.17±2, 1632.48±2, 1642.66±2, 1675.65±2, 1687.50±2, 1690.86±2, 1717.35±2, 1724.64±2, 1731.08±2, 1736.78±2, 1767.38±2, 1779.67±2, 1784.07±2, 1786.71±2, 1791.82±2, 1800.02±2, 1821.62±2, 1841.19±2, 1860.98±2, 1865.22±2, 1876.11±2, 1883.01±2, 1900.43±2, 1906.28±2, 1936.24±2, 1958.71±2, 1966.43±2, 1980.85±2, 1994.59±2, 1996.79±2, 2005.98±2, 2084.90±2, 2090.75±2, 2102.82±2, 2134.56±2, 2137.45±2, 2159.33±2, 2169.86±2, 2196.64±2, 2240.20±2, 2257.07±2, 2261.04±2, 2292.01±2, 2302.72±2, 2330.24±2, 2339.45±2, 2340.89±2, 2345.00±2, 2385.34±2, 2432.63±2, 2452.57±2, 2475.26±2, 2497.02±2, 2506.70±2, 2515.58±2, 2532.19±2, 2540.74±2, 2543.60±2, 2545.55±2, 2553.90±2, 2594.54±2, 2621.08±2, 2629.71±2, 2635.51±2, 2659.81±2, 2674.65±2, 2698.27±2、または、 3319.44±2で特定されるアルツハイマー病関連シグナルペプチドである。
【００８６】
好ましい一態様では、上記アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドは、配列番号1〜4、16〜39、72〜82、85〜86、99〜104、110〜135、140〜161、167〜172、175〜203、207〜220、222〜232、236〜241、244〜255、260〜267、272〜302、307〜327、336〜396、416〜457、466〜479、486〜550、558〜582、587〜592、597〜606、614〜623に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる。
【００８７】
かかるアルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドは、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちの一部であって、アルツハイマー病患者由来の体液中における存在量の程度が、上記基準レベルと比較して大きいことが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。即ち、被検体由来の体液において、アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドのいずれかの存在量の程度が基準レベルと比較して大きいことは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
【００８８】
また、ここで開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法の好適な一態様では、特定のアルツハイマー病関連シグナルペプチドについて、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して小さいことを確認する。以下、被検体由来の体液中の該シグナルペプチドの存在量の程度が前記基準レベルと比較して小さいことを確認する上記特定のアルツハイマー病関連シグナルペプチドを、「アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチド」ともいう。
【００８９】
かかるアルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドは、典型的に、分子量が、
1620.77±2, 1692.39±2, 1694.78±2, 1801.91±2, 1867.67±2, 1868.76±2, 1875.59±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2121.37±2, 2133.94±2, 2135.18±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2269.26±2, 2331.10±2, 2539.62±2, 2620.55±2, 2631.23±2, 2673.96±2, または、3353.34±2で特定されるアルツハイマー病関連シグナルペプチドである。
【００９０】
好ましい一態様では、上記アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドは、配列番号5〜11、40、41、46、47、54〜65、83、84、106、107、162〜166、174、204、233、234、242、243、271、306、397〜404、458〜465、484、485、551〜553、595、596、607〜609、624に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる。
【００９１】
かかるアルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドは、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドの一部であって、アルツハイマー病患者由来の体液中における存在量の程度が、上記基準レベルと比較して小さいことが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。即ち、被検体由来の体液において、アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドのいずれかの存在量の程度が基準レベルと比較して小さいことは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いことを好適に反映する。
【００９２】
上記被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能が高いことを確認する場合は、被検体由来の体液について、上記アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドの存在量の程度（或いは該アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か）を検査することが好ましい。
一方で、上記被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していない可能性が高いことを確認する場合には、被検体由来の体液について、上記アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドの存在量の程度（或いは該アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドが被検体由来の体液中に存在するか否か）を検査することが好ましい。
【００９３】
ここで第一の態様或いは第二の態様として開示するアルツハイマー病の検出を補助する方法において、上記体液は、疾患の検出（診断）を補助するインビトロの検査において検査対象物として用いられ得るものであれば特に制限はなく、予め被検体から採取した被検体由来の生体試料、例えば、脳脊髄液、血液、血漿、血清、リンパ液、腹水、唾液、滑液、精液、涙液、汗、尿、等をそのまま若しくは適宜希釈等して調製したものを使用することができる。特に、脳脊髄液、血液、血清、または血漿の使用が好ましく、特に脳脊髄液の使用が好ましい。
或いはまた、上記体液は、被検体から採取した生体試料から予めシグナルペプチドを単離する（該シグナルペプチドの存在量を増大させる）前処理が施されたものであってもよい。
【００９４】
＜バイオマーカー＞
アルツハイマー病患者由来の体液中の存在量の程度（或いは存在の有無）と健常者由来の体液中の存在量の程度（或いは存在の有無）とが有意に異なるシグナルペプチドであって、該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることでアルツハイマー病の検出（診断）を可能にするシグナルペプチドは、アルツハイマー病の診断に用いられるバイオマーカー（以下、ＡＤバイオマーカーともいう）として利用することができる。
ここで、本明細書において「有意に異なる」ことは、統計学的有意差検定における有意水準を５％として評価し得る。即ち、統計学的有意差検定によって得られるｐ値がｐ＜０．０５である場合、有意に異なると判断することができる。なお、上記統計学的有意差検定としては、ｔ検定（例えばStudent's t-test）やＵ検定（Mann-Whitney's U test）といった従来公知の検定方法を特に制限なく適用し得る。
【００９５】
上記アルツハイマー病の検出を補助する方法の第二の態様においてアルツハイマー病関連シグナルペプチド（上記アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチドおよび上記アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチドを含む）として示されるシグナルペプチドは、アルツハイマー病患者由来の体液中の存在量の程度と健常者由来の体液中の存在量の程度とをＵ検定（Mann-Whitney's U test）により比較した際のｐ値がいずれもＰ＜０．０５であることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。従って、これらアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、ＡＤバイオマーカーとして好適に利用可能である。
即ち、本発明によって提供されるＡＤバイオマーカーの典型例は、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなるシグナルペプチドである。
【００９６】
なかでも、上記アルツハイマー病関連シグナルペプチドのうちで、分子量が1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2であるシグナルペプチド（典型的には、配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列から成るシグナルペプチド）は、アルツハイマー病患者由来の体液中の存在量の程度と健常者由来の体液中の存在量の程度とをＵ検定（Mann-Whitney's U test）により比較した際のｐ値がいずれもＰ＜０．０１であることが本発明者らによって確認されたシグナルペプチドである。従って、これらのアルツハイマー病関連シグナルペプチドは、ＡＤバイオマーカーとして特に好適に利用可能である。
【００９７】
或いはまた、上記アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチド（典型的には、配列番号1〜4、16〜39、72〜82、85〜86、99〜104、110〜135、140〜161、167〜172、175〜203、207〜220、222〜232、236〜241、244〜255、260〜267、272〜302、307〜327、336〜396、416〜457、466〜479、486〜550、558〜582、587〜592、597〜606、614〜623に示すアミノ酸配列のいずれかから成るシグナルペプチド）は、該シグナルペプチドの存在量の増大がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、アルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する、例えばアルツハイマー病に罹患若しくは発症している可能性の増大を示す）バイオマーカー（以下、ポジティブバイオマーカーともいう）として好適に利用し得る。
また、上記アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチド（典型的には、配列番号5〜11、40、41、46、47、54〜65、83、84、106、107、162〜166、174、204、233、234、242、243、271、306、397〜404、458〜465、484、485、551〜553、595、596、607〜609、624に示すアミノ酸配列のいずれかから成るシグナルペプチド）は、該シグナルペプチドの存在量の減少がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、アルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを示唆する、例えばアルツハイマー病に罹患若しくは発症している可能性の増大を示す）バイオマーカー（以下、ネガティブバイオマーカーともいう）として好適に利用し得る。
【００９８】
また、本発明によると、上記アルツハイマー病診断用バイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる人為的に合成されたペプチド（以下、合成マーカーペプチドともいう）が提供される。
かかる合成マーカーペプチドは、アルツハイマー病の検出を補助する方法において、比較対照（典型的には、陽性対照：ポジティブコントロール）、或いは、標準物質（典型的には、内部標準物質、または、外部標準物質）として好適に利用することができる。或いはまた、かかる合成マーカーペプチドは、アルツハイマー病の検出を補助する方法において使用する機器を校正する目的にも好適に使用し得る。
【００９９】
即ち、本発明によって提供される合成マーカーペプチドの典型例は、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列のうちの何れかからなる人為的に合成されたペプチドである。
なお、以下、上記ポジティブバイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる合成マーカーペプチドを「合成陽性マーカーペプチド」ともいう。また、上記ネガティブバイオマーカーを構成するアミノ酸配列のうちのいずれかからなる合成マーカーペプチドを「合成陰性マーカーペプチド」ともいうこととする。
【０１００】
或いはまた、本発明によると、ここで開示される合成マーカーペプチドのうちから選択される２種または３種以上（好ましくは５種以上、より好ましくは１０種以上、さらに好ましくは２０種以上）の合成マーカーペプチドの組み合わせからなるペプチドセットが提供される。合成マーカーペプチドの組み合わせは、アルツハイマー病の検出を補助する方法において着目するＡＤバイオマーカーに対応して適宜選択すればよい。
かかるペプチドセットは、アルツハイマー病の検出を補助する方法にとして、同時に複数のシグナルペプチドに着目する場合（或いは、シグナルペプチドのプロファイルについて、同時に複数の分子量に着目する場合）に好適に利用することができる。
【０１０１】
ここで開示されるペプチドセットは、例えば、上記合成陽性マーカーペプチドのうちから選択されるペプチドセット、或いは、上記合成陰性マーカーペプチドのうちから選択されるペプチドセットであり得る。
また、上記ペプチドセットは、分子量が1629.17±2, 1767.38±2, 1900.43±2, 1933.29±2, 1966.96±2, 1996.12±2, 2187.30±2, 2196.08±2, 2196.64±2, または、2240.20±2であるアルツハイマー病関連シグナルペプチド（即ちＡＤバイオマーカー）に対応する合成マーカーペプチド（典型的には、配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列の何れかからなる合成マーカーペプチド）から選択されるペプチドセットであり得る。
或いはまた、上記ペプチドセットは、分子量が特定の範囲内のアルツハイマー病関連シグナルペプチド（即ちＡＤバイオマーカー）に対応する合成マーカーペプチドから選択されるペプチドセットであり得る。例えば、分子量が１０００以上２０００未満、２０００以上２５００未満、２５００以上３０００未満、または３０００以上３５００未満のアルツハイマー病関連シグナルペプチド（即ちＡＤバイオマーカー）に対応する合成マーカーペプチドから選択されるペプチドセットであり得る。
【０１０２】
ここで開示される合成マーカーペプチドは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてＢｏｃ（t-butyloxycarbonyl）或いはＦｍｏｃ（9-fluorenylmethyloxycarbonyl）を適用した固相合成法が好適である。
ここで開示される合成マーカーペプチドは、市販のペプチド合成機（例えば、Intavis AG社、Protein Technologies社等から入手可能である。）を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
【０１０３】
或いは、遺伝子工学的手法に基づいて合成マーカーペプチドを生合成してもよい。すなわち、所望する合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（ＡＴＧ開始コドンを含む。）のポリヌクレオチド（典型的にはＤＮＡ）を合成する。そして、合成したポリヌクレオチド（ＤＮＡ）と該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント（プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。）とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の合成マーカーペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
【０１０４】
例えば、宿主細胞内で効率よく大量に生産させるために融合タンパク質発現システムを利用することができる。すなわち、目的の合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子（ＤＮＡ）を化学合成し、該合成遺伝子を適当な融合タンパク質発現用ベクター（例えばノバジェン社から提供されているｐＥＴシリーズ及びアマシャムバイオサイエンス社から提供されているｐＧＥＸシリーズのようなＧＳＴ(Glutathione S-transferase)融合タンパク質発現用ベクター）の好適なサイトに導入する。そして該ベクターにより宿主細胞（典型的には大腸菌）を形質転換する。得られた形質転換体を培養して目的の融合タンパク質を調製する。次いで、該タンパク質を抽出し、精製する。次いで、得られた精製融合タンパク質を所定の酵素（プロテアーゼ）で切断し、遊離した目的のペプチド断片（設計した合成マーカーペプチド）をアフィニティクロマトグラフィー等の方法によって回収する。また、必要に応じて適当な方法によってリフォールディングする。このような従来公知の融合タンパク質発現システム（例えばアマシャムバイオサイエンス社により提供されるＧＳＴ／Ｈｉｓシステムを利用し得る。）を用いることによって、ここで開示される合成マーカーペプチドを製造することができる。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち合成マーカーペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の（株）セルフリーサイエンスから入手可能なPROTEIOS（商標）Wheat germ cell-free protein synthesis kit）が市販されている。
【０１０５】
ここで開示される合成マーカーペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む一本鎖又は二本鎖のポリヌクレオチドは、従来公知の方法によって容易に製造（合成）することができる。すなわち、設計したアミノ酸配列を構成する各アミノ酸残基に対応するコドンを選択することによって、合成マーカーペプチドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列が容易に決定され、提供される。そして、ひとたびヌクレオチド配列が決定されれば、ＤＮＡ合成機等を利用して、所望するヌクレオチド配列に対応するポリヌクレオチド（一本鎖）を容易に得ることができる。さらに得られた一本鎖ＤＮＡを鋳型として用い、種々の酵素的合成手段（典型的にはＰＣＲ）を採用して目的の二本鎖ＤＮＡを得ることができる。また、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡの態様であってもよく、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）の態様であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖（センス鎖）であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、合成マーカーペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
【０１０６】
ここで開示される合成マーカーペプチドは、塩の態様であってもよい。例えば、常法に従って通常使用されている無機酸又は有機酸を付加反応させることにより得られ得る該ペプチドの酸付加塩を使用することができる。或いは、他の塩（例えば金属塩）であってもよい。従って、本明細書及び特許請求の範囲に記載の「ペプチド」は、かかる塩態様のものを包含する。
【０１０７】
＜アルツハイマー病検査組成物＞
本発明によって提供されるアルツハイマー病検査組成物は、上記合成マーカーペプチドの少なくとも１つを含む。かかる組成物は、例えば、アルツハイマー病の検出を補助する方法において、比較対照（典型的には、陽性対照：ポジティブコントロール）或いは、標準物質として利用することができる。換言すると、本発明によって、アルツハイマー病の検出を補助する方法における比較対照用組成物（典型的には、ポジティブコントロール用組成物）或いは、標準物質用組成物が提供される。
なお、ここで開示されるアルツハイマー病検査組成物は、２つまたは３つ以上の上記合成マーカーペプチドを含むものであり得る。即ち、かかるアルツハイマー病検査組成物は、上述した合成マーカーペプチドセットを含むものであり得る。
【０１０８】
ここで開示されるアルツハイマー病検査組成物は、従来の体外診断薬（体外検査薬）やペプチド製剤と同様、主成分たる合成マーカーペプチドの他に、種々の成分を含みうる。通常、合成マーカーペプチドの他、該ペプチドを安定して（典型的には変性、または分解されずに）保持し得る少なくとも１種の副成分を含みうる。かかる副成分は、アルツハイマー病検査組成物の用途や態様（使用態様）に応じて適宜異なり得るが、薬学（医薬）上許容され得る種々の担体（キャリア）であり得る。従来の体外診断薬（体外検査薬）において希釈剤、賦形剤等として一般的に使用される担体が好ましい。
例えば、生理食塩水や薬学的に許容できる各種の緩衝液を溶媒、即ちキャリア（担体）として含ませることができる。典型的には、水、生理学的緩衝液（例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。或いはまた各種糖質（デキストリン、乳糖等）のような賦形剤を含ませることができる。その他、従来の診断薬剤やペプチド製剤と同様、防腐剤、安定化剤、ｐＨ調整剤等の薬剤、或いは、々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等を添加してもよい。
アルツハイマー病検査組成物の態様に関して特に限定はない。例えば、典型的な態様として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、合成マーカーペプチド（主成分）及び種々の担体（副成分）を材料にして種々の態様の薬剤（組成物）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
【０１０９】
＜アルツハイマー病検査キット＞
本発明によって、アルツハイマー病の検出を補助する方法に用いられるアルツハイマー病検査キットが提供される。かかる検査キットは、上記合成マーカーペプチドの少なくとも１つを備える。
或いはまた、かかるアルツハイマー病検査キットは、２つまたは３つ以上の上記合成マーカーペプチドを備えるものであり得る。即ち、かかるアルツハイマー病検査キットは、上述した合成マーカーペプチドセットを備えるものであり得る。
【０１１０】
かかるキットに含まれる試薬や器具は、検査方法（典型的には、体液中のシグナルペプチドの存在量の程度（或いは存在の有無）を分析する手法、或いは、体液中のシグナルペプチドのプロファイルを決定する方法）の種類や適用される検出・測定装置（通常は市販の装置を用い、その使用マニュアルに応じて適する薬品類や器具（基材等）が選択される。）に応じて、適宜選択すればよい。例えば、上記アルツハイマー病検査組成物を構成する上記合成マーカーペプチドや各種担体（生理食塩水のような溶媒を包含する。）の他に、上記合成マーカーペプチドまたは測定対象の体液を希釈するための希釈液（典型的には各種の緩衝液）や、ＭＡＬＤＩ  ＭＳにおけるマトリックス等が挙げられる。
【０１１１】
ここで開示されるアルツハイマー病検査キットの好適な一態様として、相互に異なる合成マーカーペプチドを含む上記アルツハイマー病検査組成物を複数備えたキットが挙げられる。例えば、上記合成陽性マーカーペプチドのうちの少なくとも１つを含むアルツハイマー病検査組成物と、上記合成陰性マーカーペプチドのうちの少なくとも１つを含むアルツハイマー病検査組成物とを備えたキットであり得る。
【０１１２】
また、ここで開示されるアルツハイマー病検査キットの好適な一態様は、上記合成マーカーペプチドまたは体液を固定（担持）する基材を備えたものであり得る。
例えば、合成マーカーペプチドが予め基材に固定（担持）されたものを含むキットであり得る。或いは、キットに基材と上記合成マーカーペプチドとを別個に装備しておき、使用時に該合成マーカーペプチドを当該基材に担持（固定化）させてもよい。
なお、測定対象の体液（即ち被検体由来の体液）は、上記合成マーカーペプチドが固定された基材と同一、または異なる基材のいずれに固定してもよく、検査方法に応じて選択すればよい。
【０１１３】
上記基材としては、典型的には種々の高分子化合物（例えばアガロース、セルロース）や合成樹脂（例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート）製若しくはガラス等のセラミック製であるものが挙げられる。基材の形状は、使用目的に応じてプレート、ビーズ、メンブレン、スティック、試験管等の形状が挙げられ、特に制限はない。ペプチドの基材への担持（固定）方法は、従来と同様でよく特に制限はない。例えば、従来公知の物理的吸着法、共有結合法、イオン結合法、架橋法等を採用すればよい。
上記上記合成マーカーペプチド又は体液を固定（保持）する面が熱可塑性樹脂製である基材（好ましくは、熱可塑性樹脂製の基材）を備えたキットは、ＭＡＬＤＩ  ＭＳを用いた検査方法（アルツハイマー病の検出を補助する方法）に好適に使用し得る。このとき、かかる基材の形状は薄膜（フィルム、シート）、プレート、メンブレン、スティック、チップ等が好ましい。また、かかる基材へのペプチドの担持は、該熱可塑性樹脂を加熱により溶融することにより行い得る。
【０１１４】
或いはまた、ここで開示されるアルツハイマー病検査キットの好適な一態様として、薄膜状あるいは板状の基材上に上記合成マーカーペプチドのうちのすくなくとも１つが固定（担持）されたアルツハイマー病検査チップを備えたキットが挙げられる。かかる基材は、上記合成マーカーペプチドの担持面が熱可塑性樹脂製である。
換言すると、本発明によって、薄膜状あるいは板状の基材上に上記合成マーカーペプチドのうちのすくなくとも１つが固定（担持）されたアルツハイマー病検査チップであって、上記基材の合成マーカーペプチドの担持面が熱可塑性樹脂製のアルツハイマー病検査チップが提供される。
【０１１５】
かかるアルツハイマー病検査チップの好適な一態様では、２種または３種以上（好ましくは５種以上、より好ましくは１０種以上、さらに好ましくは２０種以上）の合成マーカーペプチドが同一の基材上に固定されている。典型的には、上述した合成マーカーペプチドセットを構成する合成マーカーペプチドが同一の基材上に固定されたものであり得る。
【０１１６】
上記同一の基材上に複数の合成マーカーペプチドが固定されたアルツハイマー病検査チップにおいて、かかる複数の合成マーカーペプチドは、基材上に同一スポットとして固定されていてもよいし、相互に独立した別のスポットとして固定されていてもよい。例えば、上述した合成マーカーペプチドセットを構成する合成マーカーペプチドごとに、同一スポットとして固定されたものであり得る。
【０１１７】
ここで開示されるアルツハイマー病検査キットの好適な一態様として、相互に異なる合成マーカーペプチドが固定されたアルツハイマー病検査チップを複数備えたキットが挙げられる。例えば、上記合成陽性マーカーペプチドのうちの少なくとも１つをが固定されたアルツハイマー病検査チップと、上記合成陰性マーカーペプチドのうちの少なくとも１つを含むアルツハイマー病検査チップとを備えたキットであり得る。
【０１１８】
以下、本発明に関するいくつかの実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。
【０１１９】
＜実施例１＞
健常者群およびアルツハイマー病患者群から得られた各体液について、該体液中に含まれるシグナルペプチドのプロファイルを決定した。本実施例では、体液中のシグナルペプチドのプロファイルは、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦＭＳを用いた網羅解析により決定した。具体的な手順を以下に示す。
【０１２０】
本実施例では、５名の健常検体から採取された脳脊髄液と５名のアルツハイマー病患者（ヒスパニック系：２名、コーカサス系：３名）から採取された脳脊髄液を試料とした。かかる脳脊髄液試料は、何れも市販のものを購入して使用した。各群における脳脊髄液提供者の特性（性別、人種、病期等）を表１に示す。
なお、表１中の病期分類は、ＦＡＳＴ（Functional Assessment Staging of Alzheimer’s Disease）により判定したものであり、表中の「ＥＡＲＬＹ」は軽度（ＦＡＳＴスコア４）、「ＰＲＯＧ」は中等度（ＦＡＳＴスコア５）を示す。
【０１２１】
【表１】
2017150680.tif 000003
【０１２２】
各脳脊髄液試料をマトリックスと混合して基材上に固定した。
まず、脳脊髄液試料と、マトリックス液とを、１：１の体積比で混合した。上記マトリックス液としては、マトリックスとしてのシナピン酸（ＣＨＣＡ）が０．１体積％のトリフルオロ酢酸を含む５０体積％のアセトニトリル水溶液（０．１％ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ水溶液）中に５ｍｇ／ｍＬの濃度で含まれるものを用いた。
そして、上記マトリックス液と脳脊髄液試料とを混合したマトリックス混合脳脊髄液試料を２μＬ基材上に滴下し、該マトリックス混合脊髄液試料を真空乾燥した。基材としては、ＭＡＬＤＩ  ＭＳにおいて通常使用される測定用プレート上に、ＥＶＡフィルムを貼りつけたものを使用した。即ち、本実施例において体液を固定する基材は、体液が固定される面が熱可塑性樹脂製である。
【０１２３】
上記準備した測定試料について、質量分析を行った。
質量分析装置（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ）としては、島津製作所社製のＡＸＩＭＡ（登録商標）  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅを用いた。測定条件は、レーザー光源：Ｎ２封入型レーザー（λ＝３３７．１ｎｍ）、加速電圧：＋２０ｋＶ、遅延引き出し：ｍ／ｚ２２００に最適化、飛行モード：Ｌｉｎｅｒモードに設定した。このとき、キャリブラント（キャリブレーション用スタンダード）としては、Antiotensin II (m/z 1046.54)、ACTH fragment 18-39 (m/z 2465.20)、Insulin (m/z5730.61)を用い、外部標準法により測定機器の校正を行った。そして、各脳脊髄液試料に対して、２００回のレーザー照射を行い、単回のレーザー照射毎にマススペクトルを得た。
上記レーザー照射毎に個別に得られたマススペクトルを積算平均化して各脳脊髄液試料の代表マススペクトルとした。
また、上記２００回のレーザー照射により個別に得られた各マススペクトルを比較し、かかる２００個のマススペクトルにおいて各ピークが検出される回数を積算し、該積算値をピーク値（Peak Value）とした。即ち、上記２００回のレーザー照射により個別に得られた２００個のマススペクトルにおいて、m/z１０００のピークが１００回検出された場合、該ピークのピーク値は１００である。
【０１２４】
上記得られた代表マススペクトルにおいて検出されるピークは、対象の脳脊髄液試料中に該ピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが存在することを反映している。即ち、かかる代表マススペクトルは、脳脊髄液中のシグナルペプチドのプロファイルを定性的に示す。従って、ここで開示する方法によって、体液中（脳脊髄液中）に存在するシグナルペプチドのプロファイルを代表マススペクトルとして決定することができる。
また、上記得られたピーク値は、対象の脳脊髄液試料中における、該ピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドの存在量の程度を反映している。即ち、これらピーク値に関するデータの集合は、脳脊髄液中のシグナルペプチドのプロファイルを定量的に示す。従って、ここで開示する方法によって、体液中（脳脊髄液中）に存在するシグナルペプチドのプロファイルをピーク値に関するデータの集合として決定することができる。
【０１２５】
＜実施例２：アルツハイマー病患者群と健常者群との比較＞
そして、上記実施例１で得られた各ピークのピーク値について、アルツハイマー病患者群と健常者群との間でそれぞれ統計学的有意差検定を行った。ここでは、上記統計学的有意差検定として、Ｕ検定（Mann-Whitney's U test）を採用し、両側検定（twe-tail test
)を行った。かかる有意差検定では、有意水準を５％（即ち、Ｐ値がＰ＜０．０５の場合に有意差有り）とした。
その結果、アルツハイマー病患者群と健常者群との間で、１０９個のピークについて有意差が認められた。結果を表２〜４に示す。また、かかる有意差が認められたピークのうちの幾つかについて、ピーク値を散布図として図３〜１２に示す。
【０１２６】
【表２】
2017150680.tif 000004
【０１２７】
【表３】
2017150680.tif 000005
【０１２８】
【表４】
2017150680.tif 000006
【０１２９】
表２〜４および図３〜１２に示すように、アルツハイマー病患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる１０９個のピーク（m/zが1424.73, 1444.52, 1470.78, 1474.95, 1497.91, 1516.00, 1528.84, 1532.22, 1534.67, 1536.19, 1544.01, 1556.44, 1559.85, 1561.62, 1591.89, 1592.66, 1611.67, 1620.77, 1622.09, 1629.17, 1632.48, 1642.66, 1675.65, 1687.50, 1690.86, 1692.39, 1694.78, 1717.35, 1724.64, 1731.08, 1736.78, 1767.38, 1779.67, 1784.07, 1786.71, 1791.82, 1800.02, 1801.91, 1821.62, 1841.19, 1860.98, 1865.22, 1867.67, 1868.76, 1875.59, 1876.11, 1883.01, 1900.43, 1906.28, 1933.29, 1936.24, 1958.71, 1966.43, 1966.96, 1980.85, 1994.59, 1996.12, 1996.79, 2005.98, 2084.90, 2090.75, 2102.82, 2121.37, 2133.94, 2134.56, 2135.18, 2137.45, 2159.33, 2169.86, 2187.30, 2196.08, 2196.64, 2240.20, 2257.07, 2261.04, 2269.26, 2292.01, 2302.72, 2330.24, 2331.10, 2339.45, 2340.89, 2345.00, 2385.34, 2432.63, 2452.57, 2475.26, 2497.02, 2506.70, 2515.58, 2532.19, 2539.62, 2540.74, 2543.60, 2545.55, 2553.90, 2594.54, 2620.55, 2621.08, 2629.71, 2631.23, 2635.51, 2659.81, 2673.96, 2674.65, 2698.27, 3319.44、3353.34, 3366.98であるピーク）を同定した。即ち、これらの結果は、上記アルツハイマー病患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる１０９個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが、アルツハイマー病関連シグナルペプチドであることを示している。
また、上記の結果は、上記アルツハイマー病患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる１０９個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチド（即ちアルツハイマー病関連シグナルペプチド）は、体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることで、アルツハイマー病患者と健常者とを判別可能なシグナルペプチド（即ち、ＡＤバイオマーカー）であることを示している。
【０１３０】
また、これらの結果は、実施例２において決定したアルツハイマー病患者のシグナルペプチドプロファイルと、健常者のシグナルペプチドプロファイルとが、これら１０９個のピークのm/z（或いは該ピークのm/zに対応する分子量）のいずれかにおいて相違することを示している。即ち、これらの結果から、被検体から採取した体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常者のシグナルペプチドプロファイルとを、これら１０９個のピークのm/z（或いは該ピークのm/zに対応する分子量）のいずれかについて比較することで、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す情報を入手し得ることを確認した。
また、これらの結果から、被検体から採取した体液について、これら１０９個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドのうちのいずれかの存在量の程度を検査し、健常者由来の体液における該シグナルペプチドの存在量の程度と比較することで、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す情報を入手し得ることを確認した。
【０１３１】
また、表２〜４および図３〜１２に示すように、m/zが1424.73, 1444.52,1474.95, 1497.91, 1516.00, 1532.22, 1534.67, 1536.19, 1544.01, 1556.44, 1559.85, 1561.62, 1591.89, 1592.66, 1611.67, 1622.09, 1629.17, 1632.48, 1642.66, 1675.65, 1687.50, 1690.86, 1717.35, 1724.64, 1731.08, 1736.78, 1767.38, 1779.67, 1784.07, 1786.71, 1791.82, 1800.02, 1821.62, 1841.19, 1860.98, 1865.22, 1876.11, 1883.01, 1900.43, 1906.28, 1936.24, 1958.71, 1966.43, 1980.85, 1994.59, 1996.79, 2005.98, 2084.90, 2090.75, 2102.82, 2134.56, 2137.45, 2159.33, 2169.86, 2196.64, 2240.20, 2257.07, 2261.04, 2292.01, 2302.72, 2330.24, 2339.45, 2340.89, 2345.00, 2385.34, 2432.63, 2452.57, 2475.26, 2497.02, 2506.70, 2515.58, 2532.19, 2540.74, 2543.60, 2545.55, 2553.90, 2594.54, 2621.08, 2629.71, 2635.51, 2659.81, 2674.65, 2698.27, 3319.44, 3366.98のいずれかであるピーク（計８５個のピーク）は、アルツハイマー病患者群におけるピーク値が、健常者群におけるピーク値と比較して、有意に高値であった。かかる結果は、これら８５個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが、アルツハイマー病ポジティブシグナルペプチド（即ち、ポジティブバイオマーカー）であることを示している。
【０１３２】
また、表２〜４および図３〜１２に示すように、m/zが1470.78, 1528.84, 1620.77, 1692.39, 1694.78, 1801.91, 1867.67, 1868.76, 1875.59, 1933.29, 1966.96, 1996.12, 2121.37, 2133.94, 2135.18, 2187.30, 2196.08, 2269.26, 2331.10, 2539.62, 2620.55, 2631.23, 2673.96, 3353.34のいずれかであるピーク（計２４個のピーク）は、アルツハイマー病患者群におけるピーク値が、健常者群におけるピーク値と比較して、有意に低値であった。かかる結果は、これら２４個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドが、アルツハイマー病ネガティブシグナルペプチド（即ち、ネガティブバイオマーカー）であることを示している。
【０１３３】
また、表２〜４および図３〜１２に示すように、m/zが1629.17, 1767.38, 1900.43, 1933.29, 1966.96, 1996.12, 2187.30, 2196.08, 2196.64, 2240.20のいずれかであるピーク（計１０個のピーク）は、アルツハイマー病患者群におけるピーク値が、健常者群におけるピーク値と比較して、特に顕著に異なる（p≦０．０１）ピークであった。かかる結果は、これら１０個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドは、体液中における該シグナルペプチドの存在量の程度を指標にすることで、アルツハイマー病患者と健常者とを高い精度で（高い信頼性で）判別可能なシグナルペプチドであることを示している。
即ち、かかる結果は、被検体から採取した体液について、該体液中に存在するシグナルペプチドのプロファイルを決定し、該被検体のシグナルペプチドプロファイルと健常者のシグナルペプチドプロファイルとがこれら２０個のピークのm/z（或いは該ピークのm/zに対応する分子量）のいずれかにおいて相違する場合に、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いことを示す信頼性の高い（精度の高い）情報を入手し得ることを確認した。
換言すると、被検体から採取した体液について、これら１０個のピークのm/zに対応する分子量のシグナルペプチドのうちのいずれかの存在量の程度を検査し、健常者由来の体液における該シグナルペプチドの存在量の程度と比較することで、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いか否かを示す信頼性の高い（精度の高い）情報を入手し得ることを確認した。
【０１３４】
＜実施例３：シグナルペプチドの特定＞
上記実施例２で同定された、アルツハイマー病患者群と健常者群でピーク値が有意に異なる１０９個のピークについて、該ピークに対応するシグナルペプチドを特定した。即ち、各ピークのm/zと従来公知のシグナルペプチドの分子量とを比較し、シグナルペプチドの分子量が目的のピークのm/z±２の範囲内であるシグナルペプチドを、目的のピークに対応するシグナルペプチドとして特定した。結果を表５〜２０に示す。
【０１３５】
表５〜２０に示すように、ここで開示されるアルツハイマー病関連シグナルペプチド（即ち、ＡＤバイオマーカー）として、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列から成るシグナルペプチドが特定された。
これらの結果は、配列番号１〜６２４に示すアミノ酸配列の何れかから成るシグナルペプチドについて、該シグナルペプチドの体液中の存在量の程度を指標とすることで、アルツハイマー病の検出（診断）を補助する情報を入手し得る（典型的には、アルツハイマー病の診断が可能である）ことを示している。
【０１３６】
【表５】
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【０１３７】
【表６】
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【０１３８】
【表７】
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【０１３９】
【表８】
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【０１４０】
【表９】
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【０１４１】
【表１０】
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【０１４２】
【表１１】
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【０１４３】
【表１２】
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【０１４４】
【表１３】
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【０１４５】
【表１４】
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【０１４６】
【表１５】
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【０１４７】
【表１６】
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【０１４８】
【表１７】
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【０１４９】
【表１８】
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【０１５０】
【表１９】
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【０１５１】
【表２０】
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【０１５２】
＜実施例３：ペプチド合成＞
上述した配列番号１〜７５に示すアミノ酸配列から成る合成ペプチドを市販のペプチド合成機（Intavis AG社製）を用いてマニュアルどおりに固相合成法（Ｆｍｏｃ法）を実施して合成した。なお、以下の説明では、当該合成ペプチドをペプチド１〜７５と呼称する。なお、ペプチド合成機の使用態様自体は本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
【０１５３】
＜実施例４：液状組成物の調製＞
上記ペプチド１〜７５に係る合成ペプチド（合成マーカーペプチド）を１μｍｏｌ／ｍＬのペプチド濃度となるように、０．１％ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ水溶液にそれぞれ溶解し、ここで開示される合成マーカーペプチドを主成分とする液状組成物（アルツハイマー病検査組成物）を得た。
【０１５４】
＜実施例５：アルツハイマー病検査用チップの作製＞
上記ペプチド１〜７５に係る合成ペプチド（合成マーカーペプチド）を基材上に固定したアルツハイマー病検査用チップを作製した。基材としては、ＭＡＬＤＩ  ＭＳにおいて通常使用される測定用プレート上に、ＥＶＡフィルムを貼りつけたものを使用した。即ち、かかる基材は、合成マーカーペプチドが固定される面が熱可塑性樹脂製の板状の基材である。
まず、各アルツハイマー病検査組成物を、それぞれ、０．１％ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ水溶液で１００倍希釈し、合成マーカーペプチド希釈液を準備した。そして、かかる合成マーカーペプチド希釈液と、マトリックス液とを１：１の体積比で混合した。上記マトリックス液としては、シナピン酸（ＣＨＣＡ）が０．１％ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ水溶液中に５ｍｇ／ｍＬ含まれるものを用いた。
そして、上記マトリックス液と合成マーカーペプチド希釈液とを混合した混合溶液を２μＬ基材上に滴下し、真空乾燥することにより、アルツハイマー病検査用チップを作製した。
【産業上の利用可能性】
【０１５５】
上述のように、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法によると、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることに関連する（典型的には、被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症している可能性が高いか否か示す）情報を入手することができる。即ち、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法によると、アルツハイマー病を高い精度で検出することができる。したがって、ここで開示されるアルツハイマー病の検出を補助する方法は、アルツハイマー病の予知、アルツハイマー病の診断（早期診断）、治療の導入、治療開始後の経過観察指標（典型的には、治療効果の判断指標）に好適に利用することができる。
また、ここで開示されるＡＤバイオマーカーは、該被検体がアルツハイマー病に罹患もしくは発症していることを高い精度で検出（診断）するための指標として好適に利用することができる。即ち、ここで開示される合成マーカーペプチド、（または、該合成マーカーペプチドを含むアルツハイマー病検査組成物、アルツハイマー病検査キット、アルツハイマー病検査チップ）は、アルツハイマー病を高い精度で検出（診断）する目的で好適に利用することができる。
【配列表フリーテキスト】
【０１５６】
配列番号１〜６２４    ペプチド
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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