(57)【要約】  本発明は、効率的なリナロールの製造方法を提供することを目的とする。本発明は、リナロールシンターゼを発現する微生物を培養培地中で培養してリナロールを生成することを含む、リナロールの製造方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式で表されるモチーフ：
ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇ
（式中、Ｄはアスパラギン酸を示し、Ｆはフェニルアラニンを示し、Ｙはチロシンを示し、Ｇはグリシンを示し、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3はそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示し、［ＦＹ］はＦ又はＹを示し、［ＤＹ］はＤ又はＹを示す。）
を少なくとも１つ有すること、及び
植物又は微生物由来であること
の少なくともいずれかを満たすリナロールシンターゼを発現する細菌を培養培地中で培養してリナロールを生成することを含む、リナロールの製造方法。
【請求項２】
式中、
Ｘ1は、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）又はフェニルアラニン（Ｆ）を表すこと
Ｘ2は、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、アラニン（Ａ）又はトレオニン（Ｔ）を表すこと、及び
Ｘ3は、チロシン（Ｙ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）又はフェニルアラニン（Ｆ）を表すこと
のうちいずれかを満たす、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記リナロールシンターゼが、アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、バクホウシア属、シロイヌナズナ属、ミカン属、リンゴ属、シソ属、ブドウ属、ラベンデュラ属、メンタ属、メボウキ属、又はサンジソウ属に属する植物、若しくは放線菌由来である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
放線菌は、ストレプトマイセス属に属する細菌である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記リナロールシンターゼは、アクチニジア・アルグータ、コリアンドラム・サティバム、アルテミシア・アヌア、バクホウシア・シトリオドラ、アラビドプシス・タリアナ、シトラス・ウンシュウ、マルス・ドメスティカ、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ、ビティス・ビニフェラ、ラベンデュラ・アングスティフォリア、メンタ・シトラータ、オシマム・バシリカム、クラルキア・ブリュワリ、又はストレプトマイセス・クラブリゲルスに由来する、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記細菌は、前記リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
前記ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｃ２３）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、請求項６記載の方法：
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、（ｉｉ１）配列番号２で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号５で表される塩基配列、（ｉｉ２）配列番号５で表される塩基配列中の１１５〜１７７３番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ２）配列番号６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ３）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号７０で表される塩基配列、（ｉｉ４）配列番号７０で表される塩基配列中の８５〜１７０４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ４）配列番号７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７３で表される塩基配列、（ｉｉ５）配列番号７３で表される塩基配列中の１６９〜１７８５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ５）配列番号７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ６）配列番号１０２（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ７）配列番号１０４（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号１０６（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１０８（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１０）配列番号１１０（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１１２（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１１４（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１１６（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１８（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１２０（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１２２（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１２４（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１２６（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号１７０で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１９）配列番号１７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号１７３で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２０）配列番号１７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２１）（ｉ２１）配列番号１７６で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２１）配列番号１７７で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２２）（ｉ２２）配列番号１７９で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２２）配列番号１８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２３）（ｉ２３）配列番号１８２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２３）配列番号１８３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｃ３１）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法：
（Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ１’）配列番号１で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１）前記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１）前記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２）（ｉ２’）配列番号４で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ２’）配列番号４で表されるアミノ酸配列中の３９〜５９０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２）前記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２）前記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３）（ｉ３’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ４）（ｉ４’）配列番号６９で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ４’）配列番号６９で表されるアミノ酸配列中の２９〜５６７番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ４）前記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ４）前記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ５）（ｉ５’）配列番号７２で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ５’）配列番号７２で表されるアミノ酸配列中の５７〜５９４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ５）前記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ５）前記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ６）（ｉ６’）配列番号１０３（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ７）（ｉ７’）配列番号１０５（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ７）前記（ｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ７）前記（ｉ７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ８）（ｉ８’）配列番号１０７（Ｍ１９）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０９（Ｍ２１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；  
（Ｃ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１０）（ｉ１０’）配列番号１１１（Ｍ２３）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；  
（Ｃ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１１）（ｉ１１’）配列番号１１３（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１２）（ｉ１２’）配列番号１１５（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１１７（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１９（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１２１（Ｍ３３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１２３（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１７）（ｉ１７’）配列番号１２５（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１２７（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１９）前記（ｉ１９’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２２）（ｉ２２’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１６５で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６６で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１７２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２９）（ｉ２９’）配列番号１７５で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２９）前記（ｉ２９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２９）前記（ｉ２９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３０）（ｉ３０’）配列番号１７８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３０）前記（ｉ３０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３０）前記（ｉ３０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３１）（ｉ３１’）配列番号１８１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３１）前記（ｉ３１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ３１）前記（ｉ３１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
【請求項９】
前記細菌は、さらにゲラニル二リン酸シンターゼを発現する細菌である請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記細菌が、メチルエリスリトールリン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
前記細菌が、メバロン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、請求項１〜１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
前記細菌は、腸内細菌科細菌、コリネ型細菌又はラン藻に属する細菌である、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
前記細菌は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記細菌は、エシェリヒア・コリ、パントエア・アナナティス、シネコシスティス  ｓｐ．、又はコリネバクテリウム・グルタミカムである、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記細菌は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている細菌である、請求項１〜１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
２−ケトグルコン酸生成経路が、グルコース脱水素酵素活性の低減により遮断されている、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記細菌において、グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドが破壊されている、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリヌクレオチドは、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、請求項１７記載の方法。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号５９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号５９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記グルコース脱水素酵素は、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、請求項１６記載の方法。
（Ｘ）配列番号６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号６０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号６０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質。
【請求項２０】
前記培養培地中に蓄積されるリナロールが２００ｍｇ／Ｌ以上である、請求項１〜１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
前記培養培地中に蓄積されるリナロールが５００ｍｇ／Ｌ以上である、請求項１〜１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、バクホウシア属、シロイヌナズナ属、ミカン属、リンゴ属、シソ属、ブドウ属、ラベンデュラ属、メンタ属、又はメボウキ属、又はサンジソウ属に属する植物由来の、又は放線菌由来のリナロールシンターゼを発現する細菌。
【請求項２３】
リナロールシンターゼは、アクチニジア・アルグータ、コリアンドラム・サティバム、アルテミシア・アヌア、バクホウシア・シトリオドラ、アラビドプシス・タリアナ、シトラス・ウンシュウ、マルス・ドメスティカ、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ、ビティス・ビニフェラ、ラベンデュラ・アングスティフォリア、メンタ・シトラータ、オシマム・バシリカム、クラルキア・ブリュワリ、又はストレプトマイセス・クラブリゲルスに由来する、請求項２２記載の細菌。
【請求項２４】
前記微生物は、前記リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、請求項２２又は２３記載の細菌。
【請求項２５】
前記ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｃ２３）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、請求項２４記載の細菌。
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、（ｉｉ１）配列番号２で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号５で表される塩基配列、（ｉｉ２）配列番号５で表される塩基配列中の１１５〜１７７３番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ２）配列番号６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ３）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号７０で表される塩基配列、（ｉｉ４）配列番号７０で表される塩基配列中の８５〜１７０４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ４）配列番号７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７３で表される塩基配列、（ｉｉ５）配列番号７３で表される塩基配列中の１６９〜１７８５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ５）配列番号７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ６）配列番号１０２（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ７）配列番号１０４（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号１０６（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１０８（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１０）配列番号１１０（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１１２（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１１４（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１１６（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１８（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１２０（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１２２（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１２４（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１２６（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号１７０で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１９）配列番号１７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号１７３で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２０）配列番号１７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２１）（ｉ２１）配列番号１７６で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２１）配列番号１７７で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２２）（ｉ２２）配列番号１７９で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２２）配列番号１８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２３）（ｉ２３）配列番号１８２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２３）配列番号１８３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記細菌は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌である、請求項２２〜２５のいずれか１項記載の細菌。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リナロールの製造方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
芳香物質として知られるリナロールは、ラベンダーやオレンジをはじめ、様々な植物の精油中に含まれるモノテルペンアルコールの一種である。リナロールは、香水、化粧品、シャンプーや石鹸といった香粧品に使われる他に、食品や飲料へのフレーバー付加のための添加物としても利用されている。また、リナロールは、他のモノテルペン系香料の原料になるほか、ビタミンＡやＥの中間体としても重要な化合物である。リナロールにはエナンチオマーが存在し、（３Ｒ）−（−）−ｌｉｎａｌｏｏｌ（（３Ｒ）−３，７−ジメチルオクタ−１，６−ジエン−３−オール、Ｒ−リナロール）、及び（３Ｓ）−（＋）−ｌｉｎａｌｏｏｌ（（３Ｓ）−３，７−ジメチルオクタ−１，６−ジエン−３−オール、Ｓ−リナロール）はそれぞれリカレオール、コリアンドロールと呼ばれている。リカレオールとコリアンドロールは異なる香りを呈することが知られており、リカレオールはウッディーなラベンダー様香気を、コリアンドロールはプチグレンに近い甘い柑橘系の香気を呈するとされている。２つのエナンチオマーは香気の性質に加えて匂いの閾値も異なり、リカレオールはコリアンドロールの９倍程度低い閾値を示すとされる（例えば、非特許文献１を参照）。リナロールは最もその機能の研究が進んでいる香気成分の一つであり、鎮静作用、抗炎症作用、抗酸化作用など、比較的多くの生物活性を有することが明らかとなってきている。近年、健康志向の高まりから機能性の植物由来素材が添加された食品及び飲料のニーズが高まってきており、リナロールを添加することでリナロールが有する機能を訴求した商品の開発も行われている。今後もこのような食品や飲料のニーズが高まると予想され、それに伴いリナロールの需要も高まることが考えられることから、効率的にリナロールを生産できる製法の確立が望まれている。【０００３】
リナロールはリナロールシンターゼによって、モノテルペンの共通前駆体であるゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）より合成される。ＧＰＰはイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）、及びその異性体であるジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）の縮合によって生成する。ＩＰＰやＤＭＡＰＰの生合成経路として、メバロン酸経路、及び非メバロン酸経路（ＭＥＰ経路）の存在が知られている。メバロン酸経路は植物、動物、酵母などの真核生物や一部の放線菌や古細菌に存在している。一方、ＭＥＰ経路はバクテリアや植物のプラスチドに存在している。従来、リナロールをはじめとした植物の精油成分は様々な抽出法によって植物から抽出することで製造されている。抽出法として例えば特許文献１には水蒸気蒸留法が、特許文献２には減圧蒸留法が、それぞれ記載されている。また、特許文献３には植物材料と溶媒の混合物を超高温処理することで植物成分を抽出する方法の記載がある。一方で、化学合成による製法も確立されており、例えば、非特許文献２にはα−ピネンを原料に触媒を利用した化学合成によるリナロールの製造法が記載されている。さらに近年では遺伝子組換え技術を用いて酵母又は大腸菌でのリナロール生産が報告されている（例えば、特許文献４、及び非特許文献３〜６を参照）。しかしながら、遺伝子組換え酵母によるリナロール生産量は非常に微量なレベルに止まっており、必ずしも効率的な生産方法とはいえない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−２９８５８０号公報
【特許文献２】特開２００６−２９１００７号公報
【特許文献３】特表２０１１−５０６７１３号公報
【特許文献４】中国特許出願公開第１０２０７１１５５号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ａｎａ  Ｃｌａｒａ  Ａｐｒｏｔｏｓｏａｉｅ，  Ｍｏｎｉｃａ  Ｈａｎｃｉａｎｕ，  Ｉｒｉｎａ−Ｉｕｌｉａｎａ  Ｃｏｓｔａｃｈｅ  Ａｎｃａ  Ｍｉｒｏｎ，Ｆｌａｖｏｕｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１４，２９，１９３−２１９．
【非特許文献２】Ｖ．Ａ．Ｓｅｍｉｋｏｌｅｎｏｖ，Ｉ．Ｉ．Ｉｌｙｎａ，ａｎｄ  Ｉ．Ｌ．Ｓｉｍａｋｏｖａ，  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃａｔａｌｙｓｉｓ  Ａ，Ｇｅｎｅｒａｌ，２００１，２１１：９１−１０７．
【非特許文献３】Ｓｕｎ  ＭＸ，  Ｌｉｕ  ＪＤ，  Ｄｕ  ＧＣ，Ｚｈｏｕ  Ｊ，ａｎｄ  Ｃｈｅｎ  Ｊ．，Ｃｈｉｎ  Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１３，２９（６）：  ７５１−７５９．
【非特許文献４】Ｈｅｒｒｅｒｏ  Ｏ，Ｒａｍｏｎ  Ｄ，ａｎｄ  Ｏｒｅｊａｓ  Ｍ，，Ｍｅｔａｂ  Ｅｎｇ，２００８，１０，７８−８６．
【非特許文献５】Ｒｉｃｏ  Ｊ，Ｐａｒｄｏ  Ｅ，ａｎｄ  Ｏｒｅｊａｓ  Ｍ，Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１０，７６，  ６４４９−６４５４．
【非特許文献６】Ｒａｔａｎａ  Ｔｈａｎａｓｏｍｂｏｏｎ，Ｄｕｊｄｕａｎ  Ｗａｒａｈｏ，Ｓｕｐａｐｏｎ  Ｃｈｅｅｖａｄｈａｎａｒａｋ，ａｎｄ  Ａｓａｗｉｎ  Ｍｅｅｃｈａｉａ，Ｐｒｏｃｅｄｉａ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １１（２０１２）８８−９５．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、効率的なリナロールの製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、植物由来の、又は放線菌由来のリナロールシンターゼを発現する細菌を培養培地で培養することにより、リナロールを効率的に生産することができることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕以下の式で表されるモチーフ：
ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇ
（式中、Ｄはアスパラギン酸を示し、Ｆはフェニルアラニンを示し、Ｙはチロシンを示し、Ｇはグリシンを示し、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3はそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示し、［ＦＹ］はＦ又はＹを示し、［ＤＹ］はＤ又はＹを示す。）
を少なくとも１つ有すること、及び
植物又は微生物由来であること
の少なくともいずれかを満たすリナロールシンターゼを発現する細菌を培養培地中で培養してリナロールを生成することを含む、リナロールの製造方法。
〔２〕式中、
Ｘ1は、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）又はフェニルアラニン（Ｆ）を表すこと
Ｘ2は、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、アラニン（Ａ）又はトレオニン（Ｔ）を表すこと、及び
Ｘ3は、チロシン（Ｙ）、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）又はフェニルアラニン（Ｆ）を表すこと
のうちいずれかを満たす、〔１〕記載の方法。
〔３〕前記リナロールシンターゼが、アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、バクホウシア属、シロイヌナズナ属、ミカン属、リンゴ属、シソ属、ブドウ属、ラベンデュラ属、メンタ属、メボウキ属、又はサンジソウ属に属する植物、若しくは放線菌由来である、〔１〕又は〔２〕記載の方法。
〔４〕放線菌は、ストレプトマイセス属に属する細菌である、〔３〕記載の方法。
〔５〕前記リナロールシンターゼは、アクチニジア・アルグータ、コリアンドラム・サティバム、アルテミシア・アヌア、バクホウシア・シトリオドラ、アラビドプシス・タリアナ、シトラス・ウンシュウ、マルス・ドメスティカ、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ、ビティス・ビニフェラ、ラベンデュラ・アングスティフォリア、メンタ・シトラータ、オシマム・バシリカム、クラルキア・ブリュワリ、又はストレプトマイセス・クラブリゲルスに由来する、〔１〕〜〔４〕のいずれか１項記載の方法。
〔６〕前記細菌は、前記リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、〔１〕〜〔５〕のいずれか１項記載の方法。
〔７〕前記ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｃ２３）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔６〕記載の方法：
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、（ｉｉ１）配列番号２で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号５で表される塩基配列、（ｉｉ２）配列番号５で表される塩基配列中の１１５〜１７７３番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ２）配列番号６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ３）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号７０で表される塩基配列、（ｉｉ４）配列番号７０で表される塩基配列中の８５〜１７０４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ４）配列番号７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７３で表される塩基配列、（ｉｉ５）配列番号７３で表される塩基配列中の１６９〜１７８５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ５）配列番号７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ６）配列番号１０２（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ７）配列番号１０４（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号１０６（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１０８（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１０）配列番号１１０（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１１２（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１１４（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１１６（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１８（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１２０（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１２２（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１２４（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１２６（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号１７０で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１９）配列番号１７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号１７３で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２０）配列番号１７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２１）（ｉ２１）配列番号１７６で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２１）配列番号１７７で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２２）（ｉ２２）配列番号１７９で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２２）配列番号１８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２３）（ｉ２３）配列番号１８２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２３）配列番号１８３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔８〕前記リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｃ３１）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の方法：
（Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ１’）配列番号１で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１）前記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１）前記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２）（ｉ２’）配列番号４で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ２’）配列番号４で表されるアミノ酸配列中の３９〜５９０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２）前記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２）前記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３）（ｉ３’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ４）（ｉ４’）配列番号６９で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ４’）配列番号６９で表されるアミノ酸配列中の２９〜５６７番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ４）前記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ４）前記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ５）（ｉ５’）配列番号７２で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ５’）配列番号７２で表されるアミノ酸配列中の５７〜５９４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ５）前記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ５）前記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ６）（ｉ６’）配列番号１０３（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ７）（ｉ７’）配列番号１０５（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ７）前記（ｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ７）前記（ｉ７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ８）（ｉ８’）配列番号１０７（Ｍ１９）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０９（Ｍ２１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；  
（Ｃ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１０）（ｉ１０’）配列番号１１１（Ｍ２３）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１１）（ｉ１１’）配列番号１１３（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１２）（ｉ１２’）配列番号１１５（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１１７（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１９（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１２１（Ｍ３３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１２３（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１７）（ｉ１７’）配列番号１２５（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１２７（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１９）前記（ｉ１９’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２２）（ｉ２２’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１６５で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６６で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１７２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２９）（ｉ２９’）配列番号１７５で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２９）前記（ｉ２９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２９）前記（ｉ２９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３０）（ｉ３０’）配列番号１７８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３０）前記（ｉ３０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３０）前記（ｉ３０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３１）（ｉ３１’）配列番号１８１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３１）前記（ｉ３１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ３１）前記（ｉ３１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
〔９〕前記細菌は、さらにゲラニル二リン酸シンターゼを発現する細菌である〔１〕〜〔８〕のいずれか１項記載の方法。
〔１０〕前記細菌が、メチルエリスリトールリン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、〔１〕〜〔９〕のいずれか１項記載の方法。
〔１１〕前記細菌が、メバロン酸経路によるジメチルアリル二リン酸の合成能を有する、〔１〕〜〔１０〕のいずれか１項記載の方法。
〔１２〕前記細菌は、腸内細菌科細菌、コリネ型細菌又はラン藻に属する細菌である、〔１〕〜〔１１〕のいずれか１項記載の方法。
〔１３〕前記細菌は、エシェリヒア属、パントエア属、又はシネコシスティス属に属する細菌、若しくはコリネバクテリウム属に属する細菌である、〔１２〕記載の方法。
〔１４〕前記細菌は、エシェリヒア・コリ、パントエア・アナナティス、シネコシスティス  ｓｐ．又はコリネバクテリウム・グルタミカムである、〔１３〕記載の方法。
〔１５〕前記細菌は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている細菌である、〔１〕〜〔１４〕のいずれか１項記載の方法。
〔１６〕２−ケトグルコン酸生成経路が、グルコース脱水素酵素活性の低減により遮断されている、〔１５〕記載の方法。
〔１７〕前記細菌において、グルコース脱水素酵素遺伝子であるポリヌクレオチドが破壊されている、〔１６〕記載の方法。
〔１８〕前記ポリヌクレオチドは、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔１７〕記載の方法。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号５９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号５９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔１９〕前記グルコース脱水素酵素は、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１又は２以上のタンパク質である、〔１６〕記載の方法。
（Ｘ）配列番号６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号６０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号６０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつグルコース脱水素酵素活性を有するタンパク質。
〔２０〕前記培養培地中のリナロールが２００ｍｇ／Ｌ以上である、〔１〕〜〔１９〕のいずれか１項記載の方法。
〔２１〕前記培養培地中のリナロールが５００ｍｇ／Ｌ以上である、〔１〕〜〔１９〕のいずれか１項記載の方法。
〔２２〕アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、もしくはバクホウシア属に属する植物由来の、又は放線菌由来のリナロールシンターゼを発現する細菌。
〔２３〕リナロールシンターゼは、アクチニジア・アルグータ、コリアンドラム・サティバム、アルテミシア・アヌア、バクホウシア・シトリオドラ、アラビドプシス・タリアナ、シトラス・ウンシュウ、マルス・ドメスティカ、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ、ビティス・ビニフェラ、ラベンデュラ・アングスティフォリア、メンタ・シトラータ、オシマム・バシリカム、クラルキア・ブリュワリ、又はストレプトマイセス・クラブリゲルスに由来する、〔２２〕記載の細菌。
〔２４〕前記微生物は、前記リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む、〔２２〕又は〔２３〕記載の細菌。
〔２５〕前記ポリヌクレオチドは、以下の（ａ１）〜（ｃ２３）からなる群より選ばれる１又は２以上のポリヌクレオチドである、〔２４〕記載の細菌。
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、（ｉｉ１）配列番号２で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号５で表される塩基配列、（ｉｉ２）配列番号５で表される塩基配列中の１１５〜１７７３番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ２）配列番号６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ３）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号７０で表される塩基配列、（ｉｉ４）配列番号７０で表される塩基配列中の８５〜１７０４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ４）配列番号７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７３で表される塩基配列、（ｉｉ５）配列番号７３で表される塩基配列中の１６９〜１７８５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ５）配列番号７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ６）配列番号１０２（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ７）配列番号１０４（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号１０６（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１０８（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１０）配列番号１１０（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１１２（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１１４（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１１６（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１８（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１２０（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１２２（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１２４（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１２６（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号１７０で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１９）配列番号１７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号１７３で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２０）配列番号１７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２１）（ｉ２１）配列番号１７６で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２１）配列番号１７７で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２２）（ｉ２２）配列番号１７９で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２２）配列番号１８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２３）（ｉ２３）配列番号１８２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２３）配列番号１８３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔２６〕前記細菌は、エシェリヒア属、パントエア属、シネコシスティス属、又はコリネバクテリウム属に属する細菌である、〔２２〕〜〔２５〕のいずれか１項記載の細菌。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、リナロールを効率よく製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｐａｒａプロモーター及びリプレッサー遺伝子ａｒａＣの制御下にあるＥ．ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥＳオペロンを保有するｐＡＨ１６２−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳプラスミドを示す図である。
【図２】図２は、ｐＡＨ１６２−ｍｖａＥＳのマップを示す図である。
【図３】図３は、ｐＡＨ１６２−ＭＣＳ−ｍｖａＥＳ染色体固定用プラスミドを示す図である。
【図４】図４は、（Ａ）ＰｌｌｄＤ、（Ｂ）ＰｐｈｏＣ、又は（Ｃ）ＰｐｓｔＳの転写制御下にあるｍｖａＥＳ遺伝子を保持する染色体固定用プラスミドのセットを示す図である。
【図５】図５は、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＫｍＲ−λａｔｔＲベクターの構築の概要を示す図である。
【図６】図６は、ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ染色体固定用発現ベクターを示す図である。
【図７】図７は、化学合成により得られたＫＤｙＩオペロン中のコドン最適化を示す図である。
【図８】図８は、コドン最適化したＫＤｙＩオペロンを保持する、（Ａ）ｐＡＨ１６２−Ｔｃ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、及び（Ｂ）ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩの染色体固定プラスミドを示す図である。
【図９】図９は、Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ由来のメバロン酸キナーゼ遺伝子を保持する染色体固定プラスミドを示す図である。
【図１０】図１０は、（Ａ）ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０、（Ｂ）ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０、及び（Ｃ）Δｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０のゲノム改変体のマップを示す図である。
【図１１】図１１は、（Ａ）Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｘ）、及び（Ｂ）Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｘ）のゲノム改変物のマップを示す図である。
【図１２】図１２は、（Ａ）ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、（Ｂ）ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、及び（Ｃ）ΔａｍｐＣ：：Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩの染色体改変物のマップを示す図である。
【図１３】図１３は、（Ａ）ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ、及び（Ｂ）ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳの染色体改変物のマップを示す図である。
【図１４】図１４は、リナロール添加試験の結果を示す図である。
【図１５】図１５は、リナロール蓄積の経時変化の結果を示す図である。
【図１６】図１６は、Ｏ．Ｄ．６２０ｎｍの経時変化の結果を示す図である。
【図１７】図１７は、モチーフ１のシーケンスロゴを示す図である。
【図１８】図１８は、モチーフ２のシーケンスロゴを示す図である。
【図１９】図１９は、モチーフ３のシーケンスロゴを示す図である。
【図２０】図２０は、モチーフ４のシーケンスロゴを示す図である。
【図２１】図２１は、モチーフ５のシーケンスロゴを示す図である。
【図２２】図２２は、モチーフ１のアラインメントを示す図である。
【図２３】図２３は、モチーフ２のアラインメントを示す図である。
【図２４】図２４は、モチーフ３のアラインメントを示す図である。
【図２５】図２５は、モチーフ４のアラインメントを示す図である。
【図２６】図２６は、モチーフ５のアラインメントを示す図である。
【図２７】図２７は、モチーフ１〜５の入力配列における分布を示す図である。
【図２８】図２８は、リナロールシンターゼ（配列番号１０３：Ｍ１５）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図２９】図２９は、リナロールシンターゼ（配列番号１０５：Ｍ１７）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３０】図３０は、リナロールシンターゼ（配列番号１０７：Ｍ１９）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３１】図３１は、リナロールシンターゼ（配列番号１０９：Ｍ２１）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３２】図３２は、リナロールシンターゼ（配列番号１１１：Ｍ２３）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３３】図３３は、リナロールシンターゼ（配列番号１１３：Ｍ２５）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３４】図３４は、リナロールシンターゼ（配列番号１１５：Ｍ２７）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３５】図３５は、リナロールシンターゼ（配列番号１１７：Ｍ２９）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３６】図３６は、リナロールシンターゼ（配列番号１１９：Ｍ３１）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３７】図３７は、リナロールシンターゼ（配列番号１２１：Ｍ３３）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３８】図３８は、リナロールシンターゼ（配列番号１２３：Ｍ３５）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図３９】図３９は、リナロールシンターゼ（配列番号１２５：Ｍ３７）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４０】図４０は、リナロールシンターゼ（配列番号１２７：Ｍ３９）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４１】図４１は、リナロールシンターゼ（配列番号１６１）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４２】図４２は、リナロールシンターゼ（配列番号１６２）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４３】図４３は、リナロールシンターゼ（配列番号１６３）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４４】図４４は、リナロールシンターゼ（配列番号１６４）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４５】図４５は、リナロールシンターゼ（配列番号１６５）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４６】図４６は、リナロールシンターゼ（配列番号１６６）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４７】図４７は、リナロールシンターゼ（配列番号１６７）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【図４８】図４８は、リナロールシンターゼ（配列番号１６８）におけるモチーフ１の分布を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、リナロールの製造方法を提供する。
【００１２】
本発明の方法はリナロールシンターゼを発現する微生物を培養培地中で培養してリナロールを生成することを含む。リナロールシンターゼは、後述のモチーフを少なくとも１つ有すること、及び植物又は微生物由来であることの少なくとも１つ以上を満たすリナロールシンターゼである。
【００１３】
リナロールは、Ｃ10Ｈ18Ｏで表されるイソプレノイド化合物の１種である。ＣＡＳ番号７８−７０−６で表され、Ｒ体は１２６−９１−０、Ｓ体は１２６−９０−９で表記される。
【００１４】
リナロールシンターゼとは、ゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）からのリナロールの合成に関与する１以上の酵素をいう。
【００１５】
リナロールシンターゼは例えば、以下の式で表されるモチーフ：
ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇ
を少なくとも１つ有するリナロールシンターゼであってもよい。
【００１６】
式中、Ｄはアスパラギン酸を示す。［ＦＹ］はフェニルアラニン（Ｆ）又はチロシン（Ｙ）を示す。［ＤＹ］はＤ又はＹを示す。Ｘ1、Ｘ2、Ｘ及びＸ3はそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示す。Ｘ1としては例えば、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、Ｆが挙げられ、Ｉ又はＶが好ましい。Ｘ2としては例えば、Ｖ、Ｉ、アラニン（Ａ）、トレオニン（Ｔ）が挙げられ、Ｖが好ましい。Ｘ3としては例えば、Ｙ、システイン（Ｃ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）、Ｆが挙げられ、Ｙが好ましい。
リナロールシンターゼは、前記モチーフを１つ、または複数有するリナロールシンターゼでもよいが、１つ有するリナロールシンターゼが好ましい。
【００１７】
前記モチーフとしては例えば、以下のものが挙げられる：
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＨの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＴ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＹ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＣの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＩ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＡ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＩ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＶ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＩ、Ｘ3がＹの組み合わせ；
・Ｘ1がＶ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＦの組み合わせ；
・Ｘ1がＭ、［ＦＹ］がＹ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＩ、Ｘ3がＹの組み合わせ；及び
・Ｘ1がＦ、［ＦＹ］がＦ、［ＤＹ］がＤ、Ｘ2がＶ、Ｘ3がＥの組み合わせ。
【００１８】
リナロールシンターゼを有する生物としては、例えば、アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、バクホウシア属、フラガリア属、サンジソウ属、シロイヌナズナ属、ミカン属、シソ属、メンタ属、ラベンデュラ属、トウヒ属、ナス属、ブドウ属、メボウキ属、リンゴ属に属する植物、放線菌が挙げられ、好ましくは、アクチニジア属、コリアンドラム属、ヨモギ属、バクホウシア属、ミカン属、リンゴ属、シソ属、ブドウ属、ラベンデュラ属、メンタ属、又はメボウキ属に属する植物、又は放線菌である。
【００１９】
アクチニジア属に属する植物としては例えば、サルナシ（アクチニジア・アルグータ；Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｐｏｌｙｇａｍａ）が挙げられ、サルナシが好ましい。コリアンドラム属に属する植物としては例えば、コリアンダー（コリアンドラム・サティバム；Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）が挙げられる。ヨモギ属に属する植物としては例えば、クソニンジン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ）が挙げられる。バクホウシア属に属する植物としては例えば、レモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）が挙げられる。フラガリア属に属する植物としては例えば、イチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｘ  ａｎａｎａｓｓａ）が挙げられる。サンジソウ属に属する植物としては例えば、サンジソウ（Ｃｌａｒｋｉａ  ｂｒｅｗｅｒｉ）が挙げられる。シロイヌナズナ属に属する植物としては例えば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）が挙げられる。ミカン属に属する植物としては例えば、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ）が挙げられる。シソ属に属する植物としては例えば、シソ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｈｉｒｔｅｌｌａ、Ｐｅｒｉｌｌａ  ｓｅｔｏｅｎｓｉｓ；Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  ｖａｒ．ｃｒｉｓｐａ；Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  ｖａｒ．ｈｉｒｔｅｌｌａ）が挙げられ、Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  ｖａｒ．ｃｒｉｓｐａが好ましい。メンタ属に属する植物としては例えば、ベルガモットミント（Ｍｅｎｔｈａ  ｃｉｔｒａｔａ）、ウォーターミント（Ｍｅｎｔｈａ  ａｑｕａｔｉｃａ）が挙げられ、ベルガモットミントが好ましい。ラベンデュラ属に属する植物としては例えば、ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）が挙げられる。トウヒ属に属する植物としては例えば、ベイトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ｓｉｔｃｈｅｎｓｉｓ）、ドイツトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ）が挙げられる。ナス属に属する植物としては例えばトマト（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）が挙げられる。リンゴ属に属する植物としては例えば、リンゴ（Ｍａｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）が挙げられる。ブドウ属に属する植物としては例えばヨーロッパブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ）が挙げられる。メボウキ属に属する植物としては例えばバジリコ（Ｏｃｉｍｕｍ  ｂａｓｉｌｉｃｕｍ）が挙げられる。
【００２０】
放線菌としては例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属、Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒａ属、Ｓｔｒｅｐｔａｃｉｄｉｐｈｉｌｕｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ属、Ａｃｔｉｎｏａｌｌｏｔｅｉｃｈｕｓ属、Ａｃｔｉｎｏｋｉｎｅｏｓｐｏｒａ属、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｏｓｐｏｒａ属、Ａｃｔｉｎｏｐｈｙｔｏｃｏｌａ属、Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａ属、Ａｌｌｏａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａ属、Ａｌｌｏｋｕｔｚｎｅｒｉａ属、Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ属、Ｃｒｏｓｓｉｅｌｌａ属、Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗｉｅｌｌａ属、Ｈａｌｏｅｃｈｉｎｏｔｈｒｉｘ属、Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ属、Ｋｕｔｚｎｅｒｉａ属、Ｌａｂｅｄａｅａ属、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ属、Ｌｅｎｔｚｅａ属、Ｌｏｎｇｉｍｙｃｅｌｉｕｍ属、Ｐｒａｕｓｅｒｅｌｌａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ属、Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ属、Ｓｃｉｓｃｉｏｎｅｌｌａ属、Ｓｔｒｅｐｔｏａｌｌｏｔｅｉｃｈｕｓ属、Ｔａｍａｒｉｃｉｈａｂｉｔａｎｓ属、Ｔｈｅｒｍｏｂｉｓｐｏｒａ属、Ｔｈｅｒｍｏｃｒｉｓｐｕｍ属、Ｔｈｅｒｍｏｔｕｎｉｃａ属、Ｕｍｅｚａｗａｅａ属、Ｙｕｈｕｓｈｉｅｌｌａ属等の微生物が挙げられ、好ましくはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属微生物（例：Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｅｕｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ、Ｓｔｅｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ  ｖａｒ．ｌｉｍｏｎｅｕｓ）である。
【００２１】
リナロールシンターゼは、アクチニジア属、又はコリアンドラム属、ヨモギ属、バクホウシア属、ミカン属、リンゴ属、シソ属、ブドウ属、ラベンデュラ属、メンタ属、又はメボウキ属に属する植物に由来するか、又は放線菌に由来することが好ましい。
【００２２】
前記生物に由来するリナロールシンターゼは、前記モチーフを有していてもよく、植物由来のリナロールシンターゼは、前記モチーフを有することが好ましい。なお、リナロールシンターゼは、前記モチーフを少なくとも１つ有していればよく、前記生物に由来するリナロールシンターゼに限定されない。
【００２３】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、例えば、上記生物由来のリナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む異種発現単位を含む発現ベクターで微生物を形質転換することにより得ることができる。
【００２４】
遺伝子、プロモーター等の核酸配列、又はタンパク質等のアミノ酸配列について本明細書中で用いられる語句「由来」は、微生物により天然又はネイティブに合成される、あるいは天然又は野生型の微生物から単離され得るヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を意味し得る。
【００２５】
リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチドは、例えば以下の（ａ１）〜（ｃ２３）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドであることが好ましい：
（ａ１）（ｉ１）配列番号２で表される塩基配列、（ｉｉ１）配列番号２で表される塩基配列中の７９〜１７２５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ１）配列番号３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１）前記（ｉ１）、（ｉｉ１）もしくは（ｉｉｉ１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２）（ｉ２）配列番号５で表される塩基配列、（ｉｉ２）配列番号５で表される塩基配列中の１１５〜１７７３番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ２）配列番号６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２）前記（ｉ２）、（ｉｉ２）もしくは（ｉｉｉ２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ３）（ｉ３）配列番号６２で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ３）配列番号６３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ３）前記（ｉ３）もしくは（ｉｉ３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ４）（ｉ４）配列番号７０で表される塩基配列、（ｉｉ４）配列番号７０で表される塩基配列中の８５〜１７０４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ４）配列番号７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ４）前記（ｉ４）、（ｉｉ４）もしくは（ｉｉｉ４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ５）（ｉ５）配列番号７３で表される塩基配列、（ｉｉ５）配列番号７３で表される塩基配列中の１６９〜１７８５番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列、もしくは（ｉｉｉ５）配列番号７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ５）前記（ｉ５）、（ｉｉ５）もしくは（ｉｉｉ５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ６）（ｉ６）配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ６）配列番号１０２（Ｍ１４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ６）前記（ｉ６）、もしくは（ｉｉ６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ７）（ｉ７）配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ７）配列番号１０４（Ｍ１６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ７）前記（ｉ７）もしくは（ｉｉ７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ８）（ｉ８）配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ８）配列番号１０６（Ｍ１８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ８）前記（ｉ８）もしくは（ｉｉ８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ９）（ｉ９）配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ９）配列番号１０８（Ｍ２０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ９）前記（ｉ９）もしくは（ｉｉ９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１０）（ｉ１０）配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１０）配列番号１１０（Ｍ２２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１０）前記（ｉ１０）もしくは（ｉｉ１０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１１）（ｉ１１）配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１１）配列番号１１２（Ｍ２４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１１）前記（ｉ１１）もしくは（ｉｉ１１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１２）（ｉ１２）配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１２）配列番号１１４（Ｍ２６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１２）前記（ｉ１２）もしくは（ｉｉ１２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１３）（ｉ１３）配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１３）配列番号１１６（Ｍ２８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１３）前記（ｉ１３）もしくは（ｉｉ１３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１４）（ｉ１４）配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１４）配列番号１１８（Ｍ３０）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１４）前記（ｉ１４）もしくは（ｉｉ１４）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１５）（ｉ１５）配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１５）配列番号１２０（Ｍ３２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１５）前記（ｉ１５）もしくは（ｉｉ１５）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１６）（ｉ１６）配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１６）配列番号１２２（Ｍ３４）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１６）前記（ｉ１６）もしくは（ｉｉ１６）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１７）（ｉ１７）配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１７）配列番号１２４（Ｍ３６）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；  
（ｃ１７）前記（ｉ１７）もしくは（ｉｉ１７）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１８）（ｉ１８）配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列、もしくは（ｉｉ１８）配列番号１２６（Ｍ３８）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１８）前記（ｉ１８）もしくは（ｉｉ１８）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ１９）（ｉ１９）配列番号１７０で表される塩基配列もしくは（ｉｉ１９）配列番号１７１で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ１９）前記（ｉ１９）もしくは（ｉｉ１９）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２０）（ｉ２０）配列番号１７３で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２０）配列番号１７４で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２０）前記（ｉ２０）もしくは（ｉｉ２０）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２１）（ｉ２１）配列番号１７６で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２１）配列番号１７７で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２１）前記（ｉ２１）もしくは（ｉｉ２１）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２２）（ｉ２２）配列番号１７９で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２２）配列番号１８０で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ２２）前記（ｉ２２）もしくは（ｉｉ２２）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ａ２３）（ｉ２３）配列番号１８２で表される塩基配列もしくは（ｉｉ２３）配列番号１８３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｂ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；及び
（ｃ２３）前記（ｉ２３）もしくは（ｉｉ２３）の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【００２６】
配列番号２で表される塩基配列は、サルナシ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長の塩基配列である。配列番号２で表される塩基配列は、配列番号１で表されるアミノ酸配列をコードし、１〜７８番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、推定上の葉緑体移行シグナルをコードし、７９〜１７２５（１７２２）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号３で表される塩基配列は、配列番号２で表される塩基配列における７９〜１７２５（１７２２）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されており、さらに５’末端にメチオニンコドンが付加されているヌクレオチド配列からなる。
【００２７】
配列番号５で表される塩基配列は、コリアンダー由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号５で表される塩基配列は、配列番号４で表されるアミノ酸配列をコードし、１〜１１４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、推定上の葉緑体移行シグナルをコードし、１１５〜１７７３（１７７０）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号６で表される塩基配列は、配列番号５で表される塩基配列における１１５〜１７７３（１７７０）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００２８】
配列番号６２で表される塩基配列は、ストレプトマイセス・クラブリゲルス由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号６２で表される塩基配列は、配列番号６１で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号６３で表される塩基配列は、配列番号６２で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、ストレプトマイセス・クラブリゲルスのリナロールシンターゼには、推定上の葉緑体移行シグナルは存在しない。
【００２９】
配列番号７０で表される塩基配列は、クソニンジン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号７０で表される塩基配列は、配列番号６９で表されるアミノ酸配列をコードし、１〜８４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、推定上の葉緑体移行シグナルをコードし、８５〜１７０４（１７０１）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号７１で表される塩基配列は、配列番号７０で表される塩基配列における８５〜１７０４番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３０】
配列番号７３で表される塩基配列は、レモンマートル由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号７３で表される塩基配列は、配列番号７２で表されるアミノ酸配列をコードし、１〜１６８番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、推定上の葉緑体移行シグナルをコードし、１６９〜１７８５（１７８２）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号７４で表される塩基配列は、配列番号７３で表される塩基配列における１６９〜１７８５（１７８２）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３１】
配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列は、シロイヌナズナ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列は、配列番号１０３（Ｍ１５）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０２（Ｍ１４）で表される塩基配列は、配列番号８９（Ｍ１）で表される塩基配列における７０〜１６４４（１６４１）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列にあるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３２】
配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列は、シロイヌナズナ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列は、配列番号１０５（Ｍ１７）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０４（Ｍ１６）で表される塩基配列は、配列番号９０（Ｍ２）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３３】
配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列は、ウンシュウミカン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列は、配列番号１０７（Ｍ１９）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０６（Ｍ１８）で表される塩基配列は、配列番号９１（Ｍ３）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３４】
配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列は、ウンシュウミカン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列は、配列番号１０９（Ｍ２１）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１０８（Ｍ２０）で表される塩基配列は、配列番号９２（Ｍ４）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３５】
配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列は、ウンシュウミカン由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列は、配列番号１１１（Ｍ２３）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１０（Ｍ２２）で表される塩基配列は、配列番号９３（Ｍ５）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３６】
配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列は、リンゴ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列は、配列番号１１３（Ｍ２５）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１２（Ｍ２４）で表される塩基配列は、配列番号９４（Ｍ６）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３７】
配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列は、シソ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列は、配列番号１１５（Ｍ２７）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１４（Ｍ２６）で表される塩基配列は、配列番号９５（Ｍ７）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３８】
配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列は、ヨーロッパブドウ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列は、配列番号１１７（Ｍ２９）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１６（Ｍ２８）で表される塩基配列は、配列番号９６（Ｍ８）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００３９】
配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列は、ヨーロッパブドウ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列は、配列番号１１９（Ｍ３１）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１１８（Ｍ３０）で表される塩基配列は、配列番号９７（Ｍ９）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００４０】
配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列は、ラベンダー由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列は、配列番号１２１（Ｍ３３）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１２０（Ｍ３２）で表される塩基配列は、配列番号９８（Ｍ１０）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００４１】
配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列は、ベルガモットミント由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列は、配列番号Ｍ３５で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号Ｍ３４で表される塩基配列は、配列番号９９（Ｍ１１）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００４２】
配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列は、バジリコ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列は、配列番号１２５（Ｍ３７）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１２４（Ｍ３６）で表される塩基配列は、配列番号１００（Ｍ１２）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００４３】
配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列は、サンジソウ由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列は、配列番号１２７（Ｍ３９）で表される成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列をコードし得る。配列番号１２６（Ｍ３８）で表される塩基配列は、配列番号１０１（Ｍ１３）で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。
【００４４】
配列番号１７０で表される塩基配列は、アラビドプシス・タリアナ（シロイヌナズナ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１７０で表される塩基配列は、配列番号１６９で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号１７１で表される塩基配列は、配列番号１７０で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号１６９〜１７１で表される各配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
【００４５】
配列番号１７３で表される塩基配列は、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ（シソ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１７３で表される塩基配列は、配列番号１７２で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号１７４で表される塩基配列は、配列番号１７３で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号１７２〜１７４で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
【００４６】
配列番号１７６で表される塩基配列は、ビティス・ビニフェラ（ヨーロッパブドウ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１７６で表される塩基配列は、配列番号１７５で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号１７７で表される塩基配列は、配列番号１７６で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号１７５〜１７７で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
【００４７】
配列番号１７９で表される塩基配列は、メンタ・シトラータ（ベルガモットミント）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１７９で表される塩基配列は、配列番号１７８で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号１８０で表される塩基配列は、配列番号１７９で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号１７８〜１８０で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
【００４８】
配列番号１８２で表される塩基配列は、オシマム・バシリクム（バジリコ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の完全長である。配列番号１８２で表される塩基配列は、配列番号１８１で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟リナロールシンターゼのアミノ酸配列のコーディング領域を含み得る。配列番号１８３で表される塩基配列は、配列番号１８２で表される塩基配列におけるコドンが改変されたヌクレオチド配列からなる。なお、配列番号１８１〜１８３で表される配列には、推定上の葉緑体移行シグナルに対応する配列部分は含まれていない。
【００４９】
塩基配列との同一性％は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上であってもよい。リナロールシンターゼ活性とは、ゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）からリナロールを生成する活性をいう（以下同様）。
【００５０】
塩基配列の同一性％及び後述するようなアミノ酸配列の同一性％は、例えばＫａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌによるアルゴリズムＢＬＡＳＴ（Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０，５８７３（１９９３））、ＰｅａｒｓｏｎによるＦＡＳＴＡ（ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．，１８３，６３（１９９０））を用いて決定することができる。このアルゴリズムＢＬＡＳＴに基づいて、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮとよばれるプログラムが開発されているので（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ参照）、これらのプログラムをデフォルト設定で用いて、塩基配列及びアミノ酸配列の同一性％を計算してもよい。また、アミノ酸配列の相同性としては、例えば、Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法を採用している株式会社ゼネティックスのソフトウェアＧＥＮＥＴＹＸ  Ｖｅｒ７．０．９を使用し、ＯＲＦにコードされるポリペプチド部分全長を用いて、Ｕｎｉｔ  Ｓｉｚｅ  ｔｏ  Ｃｏｍｐａｒｅ＝２の設定でＳｉｍｉｌａｒｉｔｙをｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ計算させた際の数値を用いてもよい。塩基配列及びアミノ酸配列の同一性％として、これらの計算で導き出される値のうち、最も低い値を採用してもよい。
【００５１】
「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。このような条件を明確に数値化することは困難であるが、一例を示せば、高い同一性を有する実質的に同一のポリヌクレオチド同士、例えば上述した同一性％を有するポリヌクレオチド同士がハイブリダイズし、それより低い相同性を示すポリヌクレオチド同士がハイブリダイズしない条件である。具体的には、このような条件としては、６×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、続いて、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０〜６５℃での１又は２回以上の洗浄が挙げられる。ハイブリッドが形成されるＤＮＡの同一性は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上であってもよい。
【００５２】
上記（ａ１）〜（ｃ２３）のポリヌクレオチドは、ＤＮＡであっても、チミン塩基をウラシル塩基に置換することにより対応するＤＮＡから得られるＲＮＡであってもよいが、ＤＮＡであることが好ましい。
【００５３】
リナロールシンターゼは、以下の（Ａ１）〜（Ｃ３１）からなる群より選ばれる１以上のタンパク質であることが好ましい：
（Ａ１）（ｉ１’）配列番号１で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ１’）配列番号１で表されるアミノ酸配列中の２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１）前記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１）前記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２）（ｉ２’）配列番号４で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ２’）配列番号４で表されるアミノ酸配列中の３９〜５９０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２）前記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２）前記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３）（ｉ３’）配列番号６１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３）前記（ｉ３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ４）（ｉ４’）配列番号６９で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ４’）配列番号６９で表されるアミノ酸配列中の２９〜５６７番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ４）前記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ４）前記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ５）（ｉ５’）配列番号７２で表される全長アミノ酸配列、もしくは（ｉｉ５’）配列番号７２で表されるアミノ酸配列中の５７〜５９４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ５）前記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ５）前記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ６）（ｉ６’）配列番号１０３（Ｍ１５）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ６）前記（ｉ６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ７）（ｉ７’）配列番号１０５（Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ７）前記（ｉ７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ７）前記（ｉ７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ８）（ｉ８’）配列番号１０７（Ｍ１９）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ８）前記（ｉ８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ９）（ｉ９’）配列番号１０９（Ｍ２１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ９）前記（ｉ９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１０）（ｉ１０’）配列番号１１１（Ｍ２３）で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１０）前記（ｉ１０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１１）（ｉ１１’）配列番号１１３（Ｍ２５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１１）前記（ｉ１１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１２）（ｉ１２’）配列番号１１５（Ｍ２７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１２）前記（ｉ１２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１３）（ｉ１３’）配列番号１１７（Ｍ２９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１３）前記（ｉ１３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１４）（ｉ１４’）配列番号１１９（Ｍ３１）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１４）前記（ｉ１４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１５）（ｉ１５’）配列番号１２１（Ｍ３３）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１５）前記（ｉ１５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１６）（ｉ１６’）配列番号１２３（Ｍ３５）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１６）前記（ｉ１６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１７）（ｉ１７’）配列番号１２５（Ｍ３７）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１７）前記（ｉ１７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１８）（ｉ１８’）配列番号１２７（Ｍ３９）で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１８）前記（ｉ１８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ１９）（ｉ１９’）配列番号１６１で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ１９）前記（ｉ１９’）ものアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ１９）前記（ｉ１９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２０）（ｉ２０’）配列番号１６２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２０）前記（ｉ２０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２１）（ｉ２１’）配列番号１６３で表される全長アミノ酸配列からなるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２１）前記（ｉ２１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２２）（ｉ２２’）配列番号１６４で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２２）前記（ｉ２２’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２３）（ｉ２３’）配列番号１６５で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２３）前記（ｉ２３’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２４）（ｉ２４’）配列番号１６６で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２４）前記（ｉ２４’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２５）（ｉ２５’）配列番号１６７で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２５）前記（ｉ２５’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２６）（ｉ２６’）配列番号１６８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ２６）前記（ｉ２６’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２７）（ｉ２７’）配列番号１６９で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２７）前記（ｉ２７’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２８）（ｉ２８’）配列番号１７２で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２８）前記（ｉ２８’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ２９）（ｉ２９’）配列番号１７５で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ２９）前記（ｉ２９’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ２９）前記（ｉ２９’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３０）（ｉ３０’）配列番号１７８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３０）前記（ｉ３０’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ｃ３０）前記（ｉ３０’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；
（Ａ３１）（ｉ３１’）配列番号１８１で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ３１）前記（ｉ３１’）のアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質；及び
（Ｃ３１）前記（ｉ３１’）のアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつリナロールシンターゼ活性を有するタンパク質。
【００５４】
配列番号１で表されるアミノ酸配列中の１〜２６番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、推定上の葉緑体移行シグナルを含み得る。２７〜５７４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、成熟リナロールシンターゼを含み得る。微生物で成熟リナロールシンターゼの発現を実施する際には、通常、Ｎ末端にメチオニン残基を付与した配列を用いる。
【００５５】
配列番号４で表されるアミノ酸配列中の１〜３８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、推定上の葉緑体移行シグナルを含み、３９〜５９０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、成熟リナロールシンターゼを含み得る。
【００５６】
配列番号６１で表される全長アミノ酸配列は、成熟リナロールシンターゼを含み得る。
【００５７】
配列番号６９で表されるアミノ酸配列中の１〜２８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、推定上の葉緑体移行シグナルを含み、２９〜５６７番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、成熟リナロールシンターゼを含み得る。
【００５８】
配列番号７２で表されるアミノ酸配列中の１〜５６番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、推定上の葉緑体移行シグナルを含み、５７〜５９４番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は、成熟リナロールシンターゼを含み得る。
【００５９】
配列番号１０３及び１０５（Ｍ１５、Ｍ１７）で表される全長アミノ酸配列はそれぞれ、アラビドプシス・タリアナ（シロイヌナズナ）由来の成熟リナロールシンターゼ（配列番号１０３（Ｍ１５）はテルペンシンターゼ１０、配列番号１０５（Ｍ１７）はテルペンシンターゼ１４）を含み得る。配列番号１０７、１０９、１１１（Ｍ１９、Ｍ２１、Ｍ２３）で表されるアミノ酸配列はそれぞれ、シトラス・ウンシュウ（ウンシュウミカン）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１１３（Ｍ２５）で表されるアミノ酸配列は、マルス・ドメスティカ（リンゴ）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１１５（Ｍ２７）で表されるアミノ酸配列は、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ（シソ）由来の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１１７及び１１９（Ｍ２９及びＭ３１）で表されるアミノ酸配列はそれぞれ、ビティス・ビニフェラ（ヨーロッパブドウ）由来の成熟リナロールシンターゼ（それぞれ（３Ｓ）−リナロール／（Ｅ）−ネロリドールシンターゼ、（３Ｒ）−リナロールシンターゼ）の成熟アミノ酸配列を含み得る。配列番号１２１（Ｍ３３）で表されるアミノ酸配列は、ラベンデュラ・アングスティフォリア（ラベンダー）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１２３（Ｍ３５）で表されるアミノ酸配列は、メンタ・シトラータ（ベルガモットミント）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１２５（Ｍ３７）で表されるアミノ酸配列は、オシマム・バシリカム（バジリコ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｒ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１２７（Ｍ３９）で表されるアミノ酸配列は、クラルキア・ブリュワリ（サンジソウ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含む。配列番号１６１のアミノ酸配列は、ソラナム・リコペルシクム（トマト）の成熟リナロールシンターゼ（Ｒ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１６２のアミノ酸配列は、バクホウシア・シトリオドーラ（レモンマートル）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１６３及び１６４のアミノ酸配列は、アルテミシア・アヌア（クソニンジン）の成熟リナロールシンターゼを含み得る。配列番号１６５のアミノ酸配列は、アクチニジア・アルグータ（サルナシ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１６６のアミノ酸配列は、アクチニジア・ポリガマ（マタタビ）の成熟リナロールシンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含む。配列番号１６７のアミノ酸配列は、ペリラ・フルテセンス・バー・ヒルテラ（シソ）の成熟アミノ酸シンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含み得る。配列番号１６８のアミノ酸配列は、ペリラ・セトエンシス（シソ）の成熟アミノ酸シンターゼ（Ｓ−リナロールシンターゼ）を含み得る。
【００６０】
配列番号１６９、１７２、１７５、１７８及び１８１で表される全長アミノ酸配列は、それぞれ、アラビドプシス・タリアナ（シロイヌナズナ）、ペリラ・フルテセンス・バー・クリスパ（シソ）、ビティス・ビニフェラ（ヨーロッパブドウ）、メンタ・シトラータ（ベルガモットミント）及びオシマム・バシリクム（バジリコ）由来の成熟リナロールシンターゼ（Ｒ−リナロールシンターゼ）を含み得る。
【００６１】
配列番号１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７（Ｍ１５、Ｍ１７、Ｍ１９、Ｍ２１、Ｍ２３、Ｍ２５、Ｍ２７、Ｍ２９、Ｍ３１、Ｍ３３、Ｍ３５、Ｍ３７、Ｍ３９）、１６１〜１６８、１６９、１７２、１７５、１７８及び１８１のアミノ酸配列は、それぞれ式ＤＤＸ1［ＦＹ］［ＤＹ］Ｘ2Ｘ3Ｇで表されるモチーフを有する。
【００６２】
アミノ酸配列との同一性％は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上であってもよい。
【００６３】
アミノ酸残基の変異としては、例えば、アミノ酸残基の欠失、置換、付加及び挿入が挙げられる。１個もしくは数個のアミノ酸残基の変異は、アミノ酸配列中の１つの領域に導入されてもよいが、複数の異なる領域に導入されてもよい。用語「１個もしくは数個」は、タンパク質の立体構造や活性を大きく損なわない範囲を示すものである。タンパク質の場合における用語「１もしくは数個」が示す数は、例えば、１〜１００個、好ましくは１〜８０個、より好ましくは１〜５０個、１〜３０個、１〜２０個、１〜１０個又は１〜５個である。上記（Ａ１）〜（Ｃ２６）のタンパク質は、Ｎ末端に開始メチオニン残基を有していてもよい。上記（Ａ１）〜（Ｃ２６）のタンパク質は、Ｃ末端にヒスチジンタグ等の精製用タグを有していてもよい。
【００６４】
（Ｂ１）及び（Ｃ１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１’）もしくは（ｉｉ１’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
【００６５】
（Ｂ２）及び（Ｃ２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２’）もしくは（ｉｉ２’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
【００６６】
（Ｂ３）及び（Ｃ３）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ３’）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
【００６７】
（Ｂ４）及び（Ｃ４）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ４’）もしくは（ｉｉ４’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
【００６８】
（Ｂ５）及び（Ｃ５）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ５’）もしくは（ｉｉ５’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。
【００６９】
（Ｂ６）及び（Ｃ６）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ６’）もしくは（ｉｉ６’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ６）及び（Ｃ６）のタンパク質は、（Ａ６）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７０】
（Ｂ７）及び（Ｃ７）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ７’）もしくは（ｉｉ７’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ７）及び（Ｃ７）のタンパク質は、（Ａ７）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７１】
（Ｂ８）及び（Ｃ８）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ８’）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ８）及び（Ｃ８）のタンパク質は、（Ａ８）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７２】
（Ｂ９）及び（Ｃ９）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ９’）もしくは（ｉｉ９’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ９）及び（Ｃ９）のタンパク質は、（Ａ９）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７３】
（Ｂ１０）及び（Ｃ１０）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１０’）もしくは（ｉｉ１０’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１０）及び（Ｃ１０）のタンパク質は、（Ａ１０）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７４】
（Ｂ１１）及び（Ｃ１１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１１’）もしくは（ｉｉ１１’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１１）及び（Ｃ１１）のタンパク質は、（Ａ１１）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７５】
（Ｂ１２）及び（Ｃ１２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１２’）もしくは（ｉｉ１２’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１２）及び（Ｃ１２）のタンパク質は、（Ａ１２）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７６】
（Ｂ１３）及び（Ｃ１３）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１３’）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１３）及び（Ｃ１３）のタンパク質は、（Ａ１３）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７７】
（Ｂ１４）及び（Ｃ１４）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１４’）もしくは（ｉｉ１４’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１４）及び（Ｃ１４）のタンパク質は、（Ａ１４）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７８】
（Ｂ１５）及び（Ｃ１５）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１５’）もしくは（ｉｉ１５’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１５）及び（Ｃ１５）のタンパク質は、（Ａ１５）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００７９】
（Ｂ１６）及び（Ｃ１６）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１６’）もしくは（ｉｉ１６’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１６）及び（Ｃ１６）のタンパク質は、（Ａ１６）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８０】
（Ｂ１７）及び（Ｃ１７）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１７’）もしくは（ｉｉ１７’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１７）及び（Ｃ１７）のタンパク質は、（Ａ１７）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８１】
（Ｂ１８）及び（Ｃ１８）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１８’）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１８）及び（Ｃ１８）のタンパク質は、（Ａ１８）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８２】
（Ｂ１９）及び（Ｃ１９）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ１９’）もしくは（ｉｉ１９’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ１９）及び（Ｃ１９）のタンパク質は、（Ａ１９）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８３】
（Ｂ２０）及び（Ｃ２０）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２０’）もしくは（ｉｉ２０’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２０）及び（Ｃ２０）のタンパク質は、（Ａ２０）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８４】
（Ｂ２１）及び（Ｃ２１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２１’）もしくは（ｉｉ２１’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２１）及び（Ｃ２１）のタンパク質は、（Ａ２１）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８５】
（Ｂ２２）及び（Ｃ２２）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２２’）もしくは（ｉｉ２２’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２２）及び（Ｃ２２）のタンパク質は、（Ａ２２）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８６】
（Ｂ２３）及び（Ｃ２３）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２３’）のアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２３）及び（Ｃ２３）のタンパク質は、（Ａ２３）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８７】
（Ｂ２４）及び（Ｃ２４）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２４’）もしくは（ｉｉ２４’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２４）及び（Ｃ２４）のタンパク質は、（Ａ２４）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８８】
（Ｂ２５）及び（Ｃ２５）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２５’）もしくは（ｉｉ２５’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２５）及び（Ｃ２５）のタンパク質は、（Ａ２５）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００８９】
（Ｂ２６）及び（Ｃ２６）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２６’）もしくは（ｉｉ２６’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２６）及び（Ｃ２６）のタンパク質は、（Ａ２６）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００９０】
（Ｂ２７）及び（Ｃ２７）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２７’）もしくは（ｉｉ２７’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２７）及び（Ｃ２７）のタンパク質は、（Ａ２７）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００９１】
（Ｂ２８）及び（Ｃ２８）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２８’）もしくは（ｉｉ２８’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２８）及び（Ｃ２８）のタンパク質は、（Ａ２８）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００９２】
（Ｂ２９）及び（Ｃ２９）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ２９’）もしくは（ｉｉ２９’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ２９）及び（Ｃ２９）のタンパク質は、（Ａ２９）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００９３】
（Ｂ３０）及び（Ｃ３０）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ３０’）もしくは（ｉｉ３０’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ３０）及び（Ｃ３０）のタンパク質は、（Ａ３０）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００９４】
（Ｂ３１）及び（Ｃ３１）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、上記（ｉ３１’）もしくは（ｉｉ３１’）のいずれか一つのアミノ酸配列を含むタンパク質のリナロールシンターゼ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。（Ｂ３１）及び（Ｃ３１）のタンパク質は、（Ａ３１）のタンパク質に含まれるモチーフを維持することが好ましい。
【００９５】
上記タンパク質は、目的活性を保持し得る限り、触媒ドメイン中の部位、及び触媒ドメイン以外の部位に変異が導入されていてもよい。目的活性を保持し得る、タンパク質中の変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置は、当業者に自明である。具体的には、当業者は、１）同種の活性を有する複数のタンパク質のアミノ酸配列（例、配列番号１又は４により表されるアミノ酸配列、及び他のリナロールシンターゼのアミノ酸配列）を比較し、２）相対的に保存されている領域、及び相対的に保存されていない領域を明らかにし、次いで、３）相対的に保存されている領域及び相対的に保存されていない領域から、それぞれ、機能に重要な役割を果たし得る領域及び機能に重要な役割を果たし得ない領域を予測できるので、構造・機能の相関性を認識できる。したがって、当業者は、リナロールシンターゼのアミノ酸配列において変異が導入されてもよいアミノ酸残基の位置を特定できる。
【００９６】
アミノ酸残基が置換により変異される場合、アミノ酸残基の置換は、保存的置換であってもよい。本明細書中で用いられる場合、用語「保存的置換」とは、所定のアミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換することをいう。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で周知である。例えば、このようなファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β位分岐側鎖を有するアミノ酸（例、スレオニン、バリン、イソロイシン）、芳香族側鎖を有するアミノ酸（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）、ヒドロキシル基含有側鎖（例、アルコール、フェノキシ基含有側鎖）を有するアミノ酸（例、セリン、スレオニン、チロシン）、及び硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（例、システイン、メチオニン）が挙げられる。好ましくは、アミノ酸の保存的置換は、アスパラギン酸とグルタミン酸との間での置換、アルギニンとリジンとヒスチジンとの間での置換、トリプトファンとフェニルアラニンとの間での置換、フェニルアラニンとバリンとの間での置換、ロイシンとイソロイシンとアラニンとの間での置換、及びグリシンとアラニンとの間での置換であってもよい。
【００９７】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、ゲラニル二リン酸シンターゼも発現してもよく、導入されるリナロールシンターゼによっては発現することが好ましい。ジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ、ｄｉｍｅｔｈｙｌａｌｌｙｌ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）は、ペプチドグリカンや電子受容体（メナキノン等）の前駆体であり、微生物の増殖に必須であることが知られている（Ｆｕｊｉｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８６；９９：１１３７−１１４６）。ゲラニル二リン酸シンターゼ活性とは、ＩＰＰ及びＤＭＡＰＰからゲラニル二リン酸を生成する活性をいう。ゲラニル二リン酸シンターゼとしては、例えば、エシェリヒア・コリ由来のゲラニル二リン酸シンターゼが挙げられる。もしくは、パントエア・アナナティス（Ｐａｎｔｏｅａ  ａｎａｎａｔｉｓ）（例えば、国際公開第２００７／０２９５７７Ａ１号）由来、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、特開２０００−２４５４８２号公報）、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）等の微生物由来のゲラニル二リン酸シンターゼが挙げられる。また、アメリカオオモミ（Ａｂｉｅｓ  ｇｒａｎｄｉｓ）、ペパーミント（Ｍｅｎｔｈａ  ×  ｐｉｐｅｒｉｔａ）、オウシュウトウヒ（Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ）、ニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ）、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）、キンギョソウ（Ａｎｔｉｒｒｈｉｎｕｍ  ｍａｊｕｓ）、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）等の植物由来のゲラニル二リン酸シンターゼが挙げられる。
【００９８】
ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチドは、以下の〔ｐ〕、〔ｑ〕及び〔ｒ〕からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドであることが好ましい。
〔ｐ〕〔ｘｉ〕配列番号７で表される塩基配列、もしくは〔ｘｉｉ〕配列番号８で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド；
〔ｑ〕前記〔ｘｉ〕、もしくは〔ｘｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
〔ｒ〕前記〔ｘｉ〕、もしくは〔ｘｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【００９９】
配列番号７で表される塩基配列は、エシェリヒア・コリ由来ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子の塩基配列である。配列番号８で表される塩基配列は、配列番号８７で表されるアミノ酸配列をコードし、成熟ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子のコーディング領域を含み得る。配列番号８で表される塩基配列は、配列番号７で表される塩基配列にあるコドンが改変されており、配列番号８７で表されるタンパク質の８０番目のセリンをコードするコドンがフェニルアラニンをコードするコドンに変異している（Ｓ８０Ｆ変異）。すなわち、配列番号８で表される塩基配列は、配列番号８８で表されるアミノ酸配列をコードし、配列番号８８で示されるタンパク質は、配列番号８７で表されるタンパク質の８０番目のセリン残基がフェニルアラニン残基に置換されている（Ｓ８０Ｆ）変異タンパク質である。このＳ８０Ｆ変異を有するファルネシル二リン酸シンターゼは、ゲラニル二リン酸シンターゼとしての機能が向上していることが知られている（Ｒｅｉｌｉｎｇ  ＫＫ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．８７（２）  ２００−２１２）。ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチドは上記〔ｑ〕又は〔ｒ〕でもよいことから、上記のＳ８０Ｆ変異に限らず、同様の効果が得られる変異を有していてもよく、変異はＳ８０Ｆ変異に限定されるものではない。また、ファルネシル二リン酸シンターゼ遺伝子の由来はエシェリヒア・コリに限定されるものではなく、例えばバチルス・ステアロサーモフィルス由来のファルネシル二リン酸シンターゼにおいて、菌体内のゲラニル二リン酸の濃度を高める変異が明らかにされている（Ｎａｒｉｔａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １２６（３）  ５６６−５７１．）。また、ファルネシル二リン酸シンターゼ遺伝子への変異導入によって得られるゲラニル二リン酸シンターゼに限らず、本来ゲラニル二リン酸シンターゼとして機能する遺伝子を用いてもよい。例えば、ニチニチソウ由来ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子（Ｒａｉ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ  Ｐｌａｎｔ．６（５）１５３１−４９）、シロイヌナズナ由来ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子（Ｃａｍａｒａ  Ｂ，．（２０００）Ｐｌａｎｔ  Ｊ．２４（２），２４１−２５２）、放線菌由来ゲラニル二リン酸シンターゼ遺伝子（国際公開２００７／０２９５７７Ａ１号）等を用いてもよい。ファルネシル二リン酸シンターゼ活性とは、ゲラニル二リン酸（ＧＰＰ）からファルネシル二リン酸を生成する活性をいう。塩基配列の同一性、ストリンジェントな条件、ポリヌクレオチドの定義は、上記（ａ１）〜（ｃ２３）のポリヌクレオチドにて説明したのと同様である。
【０１００】
ゲラニル二リン酸シンターゼは、以下の〔Ｐ〕〜〔Ｒ〕からなる群より選ばれる１以上のタンパク質であることが好ましい。
〔Ｐ〕配列番号８７又は８８で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
〔Ｑ〕前記アミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質；及び
〔Ｒ〕前記アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつゲラニル二リン酸シンターゼ活性を有するタンパク質。
【０１０１】
配列番号８７で表されるアミノ酸配列は、成熟ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼを含み得る。配列番号８８で表されるアミノ酸配列は、変異型成熟ファルネシル二リン酸／ゲラニル二リン酸シンターゼを含み得る。〔Ｑ〕及び〔Ｒ〕のタンパク質は、同一条件で測定された場合、配列番号８７又は８８で表されるアミノ酸配列を含むタンパク質のゲラニル二リン酸シンターゼ活性の、好ましくはゲラニル二リン酸シンターゼ活性及びファルネシル二リン酸シンターゼ活性の、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。欠失、置換、付加もしくは挿入の定義、アミノ酸の同一性等については、（Ａ１）〜（Ｃ３１）のタンパク質にて説明したのと同様である。
【０１０２】
本発明で用いられる微生物が含み得る発現単位では、所望のタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びプロモーターの一方は、宿主細胞に固有のものではない。したがって、発現単位は、異種発現単位であり得る。好ましくは、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド、及びプロモーターの双方が、宿主細胞に固有のものではない。プロモーターは、所望のタンパク質をコードするポリヌクレオチドに対して同種であっても異種であってもよい。発現単位はさらに、ターミネーター、リボソーム結合部位、及び薬物耐性遺伝子等のさらなるエレメントを含んでいてもよい。発現単位はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよいが、好ましくはＤＮＡである。異種発現単位は、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド以外のタンパク質をコードする遺伝子を含んでもよい。斯かるタンパク質としては、例えば、リナロールシンターゼ、メバロン酸経路に関与する１以上の酵素、及びメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
本発明で用いられる微生物は、例えば、以下の発現ベクターで形質転換することにより得ることができる：リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含む発現ベクター；リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド、ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含む発現ベクター；リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む第１の発現単位と、ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む第２の発現単位とを含む発現ベクター；及び、リナロールシンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む第１の発現ベクターと、ゲラニル二リン酸シンターゼをコードするポリヌクレオチド及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含む第２の発現ベクターの組み合わせ。発現ベクターは、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクターであっても、非組込み型ベクターであってもよい。発現ベクターにおいて、前記リナロールシンターゼをコードする遺伝子は、構成型プロモーター、又は誘導型プロモーターの制御下に配置され得る。構成型プロモーターとしては、例えば、ｔａｃプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔｒｃプロモーター、Ｔ７プロモーター、Ｔ５プロモーター、Ｔ３プロモーター、及びＳＰ６プロモーターが挙げられる。誘導型プロモーターとしては、例えば、後述の増殖促進剤逆依存プロモーターが挙げられる。用語「作動可能に連結された」とは、調節領域のヌクレオチド配列が核酸分子又は遺伝子（すなわち、ポリヌクレオチド）のヌクレオチド配列にポリヌクレオチドの発現（例、増強された、向上された、構成的な、基礎的な、抗転写終結の、弱毒化された、調節解除された、減少した、又は抑制された、発現）が可能な形式で連結しており、これによりヌクレオチド配列によりコードされるポリヌクレオチドの発現産物が生産されることを意味する。
【０１０４】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、効率的なリナロールの製造のためのＩＰＰ及びＤＭＡＰＰの供給の観点からジメチルアリル二リン酸供給経路によるジメチル二リン酸の合成能を有することが好ましい。ジメチルアリル二リン酸供給経路としては、例えば、メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路及びメバロン酸（ＭＶＡ）経路が挙げられる。
【０１０５】
メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路とは、非メバロン酸経路とも呼ばれ、リナロールの前駆体であるイソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）とジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）の生合成経路である。メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路に関与する酵素としては、例えば、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸シンターゼ（ＥＣ：２．２．１．７、例１、Ｄｘｓ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１４９５４；例２、ＡＴ３Ｇ２１５００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿５６６６８６；例３、ＡＴ４Ｇ１５５６０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１９３２９１；例４、ＡＴ５Ｇ１１３８０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿００１０７８５７０）、１−デオキシ−Ｄ−キシルロース−５−リン酸リダクトイソメラーゼ（ＥＣ：１．１．１．２６７；例１、Ｄｘｒ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１４７１５；例２、ＡＴ５Ｇ６２７９０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿００１１９０６００）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールシンターゼ（ＥＣ：２．７．７．６０；例１、ＩｓｐＤ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１７２２７；例２、ＡＴ２Ｇ０２５００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿５６５２８６）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールキナーゼ（ＥＣ：２．７．１．１４８；例１、ＩｓｐＥ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１５７２６；例２、ＡＴ２Ｇ２６９３０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１８０２６１）、２−Ｃ−メチル―Ｄ−エリスリトール−２，４−シクロ二リン酸シンターゼ（ＥＣ：４．６．１．１２；例１、ＩｓｐＦ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１７２２６；例２、ＡＴ１Ｇ６３９７０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿５６４８１９）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２−（Ｅ）−ブテニル−４−二リン酸シンターゼ（ＥＣ：１．１７．７．１；例１、ＩｓｐＧ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１７０１０；例２、ＡＴ５Ｇ６０６００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿００１１１９４６７）、４−ヒドロキシ−３−メチル−２−ブテニル二リン酸レダクターゼ（ＥＣ：１．１７．１．２；例１、ＩｓｐＨ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１４５７０；例２、ＡＴ４Ｇ３４３５０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿５６７９６５）が挙げられる。発現ベクターにおいて、メチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路に関与する１以上の酵素をコードする遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下に配置されてもよい。
【０１０６】
メバロン酸（ＭＶＡ）経路に関与する酵素としては、例えば、メバロン酸キナーゼ（ＥＣ：２．７．１．３６；例１、Ｅｒｇ１２ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１３９３５；例２、ＡＴ５Ｇ２７４５０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿００１１９０４１１）、ホスホメバロン酸キナーゼ（ＥＣ：２．７．４．２；例１、Ｅｒｇ８ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１３９４７；例２、ＡＴ１Ｇ３１９１０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿００１１８５１２４）、ジホスホメバロン酸デカルボキシラーゼ（ＥＣ：４．１．１．３３；例１、Ｍｖｄ１ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１４４４１；例２、ＡＴ２Ｇ３８７００、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１８１４０４；例３、ＡＴ３Ｇ５４２５０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿５６６９９５）、アセチル−ＣｏＡ−Ｃ−アセチルトランスフェラーゼ（ＥＣ：２．３．１．９；例１、Ｅｒｇ１０ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１５２９７；例２、ＡＴ５Ｇ４７７２０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿００１０３２０２８；例３、ＡＴ５Ｇ４８２３０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿５６８６９４）、ヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡシンターゼ（ＥＣ：２．３．３．１０；例１、Ｅｒｇ１３ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１３５８０；例２、ＡＴ４Ｇ１１８２０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１９２９１９；例３、ＭｖａＳ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＡＡＧ０２４３８）、ヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡリダクターゼ（ＥＣ：１．１．１．３４；例１、Ｈｍｇ２ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１３５５５；例２、Ｈｍｇ１ｐ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１３６３６；例３、ＡＴ１Ｇ７６４９０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１７７７７５；例４、ＡＴ２Ｇ１７３７０、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１７９３２９、ＥＣ：１．１．１．８８、例、ＭｖａＡ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  Ｐ１３７０２）、アセチル−ＣｏＡ−Ｃ−アセチルトランスフェラーゼ／ヒドロキシメチルグルタリル−ＣｏＡリダクターゼ（ＥＣ：２．３．１．９／１．１．１．３４、例、ＭｖａＥ、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＡＡＧ０２４３９）が挙げられる。
【０１０７】
リナロールの材料であるＩＰＰ及びＤＭＡＰＰは、上記のとおり通常、微生物が固有又はネイティブに有するメチルエリスリトールリン酸経路又はメバロン酸経路のいずれかにより生合成される。したがって、効率的なリナロールの製造のためのＩＰＰ及びＤＭＡＰＰの供給の観点から、本発明で用いられる微生物は、メチルエリスリトールリン酸経路及び／又はメバロン酸経路が強化されていてもよい。
【０１０８】
このような強化のため、本発明で用いられる微生物は、リナロールシンターゼに加えて、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路の酵素、例えばメバロン酸キナーゼをさらに発現していてもよい。したがって、リナロールシンターゼを発現する微生物は、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素が導入されていてもよい。言い換えれば、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素をコードする遺伝子及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む発現単位を含んでいてもよい。メバロン酸キナーゼ遺伝子としては、例えば、メタノサルシナ・マゼイ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ｍａｚｅｉ）等のメタノサルシナ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ）属、メタノセラ・パルディコラ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｅｌｌａ  ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）等のメタノセラ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｅｌｌａ）属、コリネバクテリウム・ヴァリアビル（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖａｒｉａｂｉｌｅ）等のコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、メタノセタ・コンキリ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｅｔａ  ｃｏｎｃｉｌｉｉ）等のメタノセタ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｅｔａ）属、及びニトロソプミラス・マリチマス（Ｎｉｔｒｏｓｏｐｕｍｉｌｕｓ  ｍａｒｉｔｉｍｕｓ）等のニトロソプミラス（Ｎｉｔｒｏｓｏｐｕｍｉｌｕｓ）属に属する微生物の遺伝子が挙げられる。
【０１０９】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、メバロン酸経路又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素発現ベクターにより形質転換されていてもよい。発現ベクターは、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクターであっても、非組込み型ベクターであってもよい。発現ベクターにおいて、メバロン酸キナーゼをコードする遺伝子は、構成型プロモーター、又は誘導型プロモーター（例、増殖促進剤逆依存プロモーター）の制御下に配置され得る。具体的には、メバロン酸キナーゼをコードする遺伝子は、構成型プロモーターの制御下に配置され得る。構成型プロモーターとしては、例えば、ｔａｃプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔｒｃプロモーター、Ｔ７プロモーター、Ｔ５プロモーター、Ｔ３プロモーター、及びＳＰ６プロモーターが挙げられる。誘導型プロモーターとしては、例えば、後述の増殖促進剤逆依存プロモーターが挙げられる。
【０１１０】
発現ベクターはさらに、メバロン酸経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する複数の酵素（例、１種、２種、３種又は４種以上）を一緒又は個別に発現するものであってもよく、例えば、ポリシストロニックｍＲＮＡの発現ベクターであってもよい。
【０１１１】
メバロン酸経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する１以上の酵素の由来は、宿主に対して同種であってもよいし、異種であってもよい。メバロン酸経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸経路に関与する酵素の由来が宿主に対して異種である場合、例えば、宿主が上述したような細菌（例、大腸菌）であり、かつ、メバロン酸経路に関与する酵素が真菌（例、サッカロミセス・セレビシエ）に由来するものであってもよい。また、宿主が、メチルエリスリトールリン酸経路に関与する酵素を固有に産生するものである場合、宿主に導入される発現ベクターは、メバロン酸経路に関与する酵素を発現するものであってもよい。
【０１１２】
発現ベクターにおいて、メバロン酸（ＭＶＡ）経路及び／又はメチルエリスリトールリン酸（ＭＥＰ）経路に関与する１以上の酵素をコードする遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下に配置されてもよい。
【０１１３】
また、メチルエリスリトールリン酸経路及び／又はメバロン酸経路強化のため、イソペンテニル二リン酸（ＩＰＰ）からジメチルアリル二リン酸（ＤＭＡＰＰ）への変換能を有するイソペンテニル二リン酸デルタイソメラーゼが、微生物に導入されてもよい。
【０１１４】
イソペンテニル二リン酸デルタイソメラーゼ（ＥＣ:５．３．３．２）としては、例えば、Ｉｄｉ１ｐ（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿０１５２０８）、ＡＴ３Ｇ０２７８０（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１８６９２７）、ＡＴ５Ｇ１６４４０（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿１９７１４８）、及びＩｄｉ（ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  ＩＤ  ＮＰ＿４１７３６５）が挙げられる。発現ベクターにおいて、イソペンテニル二リン酸デルタイソメラーゼをコードする遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下に配置されてもよい。
【０１１５】
発現ベクターによる宿主の形質転換は、１以上の公知の方法を用いて行うことができる。このような方法としては、例えば、カルシウム処理された菌体を用いるコンピテント細胞法や、エレクトロポレーション法等が挙げられる。また、プラスミドベクター以外にもファージベクターを用いて、菌体内に感染させ導入する方法によってもよい。
【０１１６】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、ジメチルアリル二リン酸供給経路を有し、かつ２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されていることが好ましい。
【０１１７】
本発明で用いる微生物は、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物であることが好ましい。２−ケトグルコン酸生成経路においては、グルコースがグルコース脱水素酵素により酸化されてグルコン酸が生成され、次いでグルコン酸がグルコン酸２−ケト脱水素酵素により酸化されてＮＡＤＰＨと２−ケトグルコン酸が生成される。よって、２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている微生物は、グルコース脱水素酵素（ＧＣＤ）及びグルコン酸２−ケト脱水素酵素からなる群より選ばれる１以上の酵素の活性を低減させることにより得ることができる。好ましくは、２−ケトグルコン酸生成経路は、酵素活性の低減により遮断される。すなわち、本発明で用いる微生物は、グルコースデヒドロゲナーゼ及びグルコン酸２−ケト−デヒドロゲナーゼからなる群より選ばれる１以上の酵素の酵素活性が低減しており、これにより微生物内で２−ケトグルコン酸生成経路が遮断されている。
【０１１８】
微生物における酵素活性の低減は、例えば、酵素活性の低下及び完全消失を含む。また、微生物における酵素活性の低減は、例えば、微生物における酵素の発現の低下及び完全消失を含む。微生物における酵素の発現の低下又は完全消失は、微生物が保有する活性の低下又は完全消失につながるためである。微生物における酵素活性の低減は、例えば、酵素をコードする遺伝子、酵素の発現又は活性を調節し得る因子をコードする遺伝子、又はこれらの遺伝子の上流に位置する転写調節領域、翻訳調節領域等の発現調節領域（例、プロモーター、シャインダルガルノ（ＳＤ）配列）、非翻訳領域を破壊することにより達成することができる。上記の遺伝子又は領域の破壊は、酵素の発現又は活性を低下又は完全消失させるように、上記の遺伝子又は領域に対応するゲノム領域を改変することにより行うことができる。このような改変としては、例えば、上記ゲノム領域の一部又は全ての欠失、上記ゲノム領域へのポリヌクレオチドの挿入、及び上記ゲノム領域の別のポリヌクレオチドへの交換が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、ピロロキノリンキノン（ＰＱＱ）を合成する能力のある、あるいは、培養環境中に含まれるＰＱＱを利用する能力のある微生物であることが好ましい。
【０１２０】
リナロールシンターゼを発現する微生物は、グルコース脱水素酵素の活性が低減していることが好ましく、ＰＱＱを補酵素として利用するグルコース脱水素酵素の活性が低減していることがより好ましい。
【０１２１】
リナロールシンターゼを発現する微生物が、リナロールシンターゼの発現ベクターで、本来的に２−ケトグルコン酸経路を有している腸内細菌科に属する微生物等の宿主を形質転換して得られる微生物である場合には、該微生物は２−ケトグルコン酸経路を遮断するための改変がなされることが好ましい。
【０１２２】
例えば、エシェリヒア・コリ等の腸内細菌科に属する微生物はグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を持ち、ＧＣＤアポ酵素を産生するが、ＰＱＱ産生能を有していないため、ＰＱＱ非添加ではＧＣＤ活性を有しない。しかしながらある外来遺伝子を菌体内で発現させるとＰＱＱを代替する物質が生成し、ＧＣＤ活性を発現することが知られている（国際公開第２００６／１３３８９８号）。ＧＣＤ活性を後天的に獲得した上述の腸内細菌科に属する微生物等の微生物は、本発明における「本来的に２−ケトグルコン酸経路を有する微生物」に含まれる。
【０１２３】
２−ケトグルコン酸生成経路を遮断するための改変は、グルコース脱水素酵素活性を低減するための改変であることが好ましく、ＰＱＱを補酵素として利用するグルコース脱水素酵素活性を低減するための改変であることが好ましい。改変は、微生物の細胞あたりのＧＣＤ活性が、非改変株、例えば野生型の腸内細菌科に属する菌株よりも低くなるように行い得る。例えば、改変株の細胞あたりのＧＣＤの分子数、又は分子あたりのＧＣＤ活性が、野生株のそれよりも低下すればよい。細胞あたりのＧＣＤ活性の比較は、例えば、同じ条件で培養した改変株と野生株の細胞抽出液に含まれるＧＣＤ活性を比較することによって、行うことができる。比較の対照となり得る野生型のパントエア属細菌としては、例えば、パントエア・アナナティスＡＪ１３３５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６６１４）、パントエア・アナナティスＳＣ１７株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１０９１）、パントエア・アナナティス  ＳＣ１７（０）株（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４  ＶＫＰＭ  Ｂ−９２４６）が挙げられる。
【０１２４】
ＰＱＱを補酵素とするＧＣＤの活性は、下記反応を触媒する活性をいう。
【０１２５】
β−Ｄ−グルコース＋酸化型ＰＱＱ→Ｄ−δ−グルコノラクトン＋還元型ＰＱＱ
【０１２６】
ＧＣＤ活性は、例えば、以下の反応を介した還元型ＤＣＰＩＰの生成を６００ｎｍの吸光度を測定による検出に基づき、測定することができる（特開２００７−１２９９６５号公報）。
Ｄ−グルコース＋酸化型ＰＭＳ→Ｄ−グルコノ−１，５−ラクトン＋還元型ＰＭＳ
還元型ＰＭＳ＋酸化型ＤＣＰＩＰ→酸化型ＰＭＳ＋還元型ＤＣＰＩＰ
ＰＭＳ：フェナジンメトサルフェート
ＤＣＰＩＰ：２，６−ジクロロフェノール−インドフェノール
【０１２７】
ＧＣＤの活性は、ＧＣＤをコードする遺伝子（ｇｃｄ遺伝子）、ＧＣＤの発現又は活性を調節し得る因子をコードする遺伝子、又はこれらの遺伝子の上流に位置する転写調節領域を破壊することにより低減させることができる。
【０１２８】
ｇｃｄ遺伝子としては、以下の（ｘ）〜（ｚ）からなる群より選ばれる１以上のポリヌクレオチドであることが好ましい。
（ｘ）〔ｉ〕配列番号５９で表される塩基配列、もしくは〔ｉｉ〕配列番号５９で表される塩基配列中３０１〜２６９１番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列を含むポリヌクレオチド；
（ｙ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と９０％以上の同一性を有する塩基配列を含み、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；又は
（ｚ）前記〔ｉ〕もしくは〔ｉｉ〕の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【０１２９】
配列番号５９に示す塩基配列は、パントエア・アナナティスのｇｃｄ遺伝子の完全長の塩基配列である。配列番号５９で表される塩基配列は、配列番号６０で表されるアミノ酸配列をコードし、３０１〜２６９１（２６８８）番目のヌクレオチド残基からなる塩基配列は、成熟ＧＣＤのアミノ酸配列をコードし得る。塩基配列の同一性、ストリンジェントな条件、ポリヌクレオチドの定義は、上記（ａ１）〜（ｃ２３）のポリヌクレオチドにて説明したのと同様である。
【０１３０】
ＧＣＤは、以下の（Ｘ）〜（Ｚ）からなる群より選ばれる１以上のタンパク質であることが好ましい。
（Ｘ）配列番号６０で表される全長アミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｙ）配列番号６０で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質；及び
（Ｚ）配列番号６０で表されるアミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されているアミノ酸配列を含み、かつＧＣＤ活性を有するタンパク質。
【０１３１】
配列番号６０で表されるアミノ酸配列は、成熟ＧＣＤを含み得る。（Ｙ）及び（Ｚ）のタンパク質は、同一条件で測定された場合、配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含むタンパク質のＧＣＤ活性の５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上又は９５％以上の活性を有することが好ましい。欠失、置換、付加もしくは挿入の定義、アミノ酸の同一性等については、（Ａ１）〜（Ｃ３１）のタンパク質にて説明したのと同様である。
【０１３２】
ｇｃｄ遺伝子は、これらの配列に基づき、オリゴヌクレオチドを合成し、パントエア・アナナティスの染色体を鋳型としてＰＣＲ反応を行うことによってクローニングすることができる。ｇｃｄ遺伝子の破壊は、相同組換えにより行ってもよい。この場合、染色体上のｇｃｄ遺伝子と一定以上の相同性、例えば、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上の相同性を有する遺伝子を用いてもよい。また、染色体上のｇｃｄ遺伝子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする遺伝子を用いてもよい。ストリンジェントな条件としては、例えば、６０℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、好ましくは、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳに相当する塩濃度で、１回より好ましくは２〜３回洗浄する条件が挙げられる。
【０１３３】
ｇｃｄ遺伝子の破壊は、例えば、染色体上の標的遺伝子の上下流の配列を含めた標的遺伝子全体の欠失、ｇｃｄ遺伝子の不活化は、染色体上のｇｃｄ遺伝子のコード領域にアミノ酸置換（ミスセンス変異）の導入、終始コドンの導入（ナンセンス変異）、あるいは一〜二塩基付加・欠失するフレームシフト変異の導入によっても達成出来る（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７２：８６１１−８６１７（１９９７），Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ  ９５  ５５１１−５５１５（１９９８），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６６，２０８３３−２０８３９（１９９１））。
【０１３４】
各遺伝子の破壊は、遺伝子組換えにより行われることが好ましい。遺伝子組換えによる方法としては例えば、相同組換えを利用して、染色体上の標的遺伝子の発現調節配列（例、プロモーター領域、又はコード領域、もしくは非コード領域）の一部又は全部を欠失させること、又はこれらの領域にポリヌクレオチドを挿入することが挙げられる。
【０１３５】
発現調節配列の破壊は、好ましくは１塩基以上、より好ましくは２塩基以上、更に好ましくは３塩基以上につき行われる。また、コード領域を欠失させる場合は、各遺伝子が産生するタンパク質の機能が低減するのであれば、欠失させる領域は、Ｎ末端領域、内部領域、Ｃ末端領域のいずれの領域であってもよく、コード領域全体であってもよい。通常、欠失させる領域は長い方が確実に標的遺伝子を破壊することができる。欠失させる領域の上流と下流のリーディングフレームは一致しないことが好ましい。
【０１３６】
コード領域にポリヌクレオチドを挿入する場合、挿入位置は、標的遺伝子のいずれの領域であってもよいが、挿入する配列は長い方が、確実に標的遺伝子を破壊することができる。挿入部位の前後の配列は、リーディングフレームが一致しないことが好ましい。ポリヌクレオチドとしては、標的遺伝子によりコードされるタンパク質の機能を低減させるものであれば特に制限されないが、例えば、抗生物質耐性遺伝子を又はＬ−アミノ酸生産に有用な遺伝子を搭載したトランスポゾン等が挙げられる。
【０１３７】
染色体上の標的遺伝子を上記のように改変する方法としては、例えば以下の方法が挙げられる。まず、標的遺伝子の部分配列を欠失し、正常に機能するタンパク質を産生できない変異遺伝子を作製する。次に、該遺伝子を含むＤＮＡで細菌を形質転換して、変異遺伝子と染色体上の標的遺伝子とで相同組換えを起こさせることにより、染色体上の標的遺伝子を変異遺伝子に置換する。得られる欠失型標的遺伝子によってコードされるタンパク質は、生成したとしても、野生型タンパク質とは異なる立体構造を有し、その活性が低減する。このような相同組換えを利用した遺伝子置換による遺伝子破壊は既に確立している。例えば、「Ｒｅｄドリブンインテグレーション(Ｒｅｄ−ｄｒｉｖｅｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ)」と呼ばれる方法（Ｄａｔｓｅｎｋｏ，Ｋ．Ａ，ａｎｄ  Ｗａｎｎｅｒ，Ｂ．Ｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９７：６６４０−６６４５（２０００））、又は、Ｒｅｄドリブンインテグレーション法とλファージ由来の切り出しシステム（Ｃｈｏ，Ｅ．Ｈ．，Ｇｕｍｐｏｒｔ，Ｒ．Ｉ．，Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｊ．Ｆ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８４：５２００−５２０３（２００２））とを組み合わせた方法（国際公開第２００５／０１０１７５号）等の直鎖状ＤＮＡを用いる方法や、温度感受性複製起点を含むプラスミド、接合伝達能力を有するプラスミドを用いる方法、宿主内で複製起点を持たないスイサイドベクターを利用する方法などが挙げられる（米国特許第６３０３３８３号明細書、又は特開平０５−００７４９１号公報）。
【０１３８】
標的遺伝子の転写が低下するか否かの確認は、標的遺伝子から転写されるｍＲＮＡの量を野生株、あるいは非改変株と比較することによって行うことが出来る。ｍＲＮＡの量を評価する方法としては、ノーザンハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ等が挙げられる（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（ＵＳＡ），２００１））。転写量は、野生株あるいは非改変株のいずれかと比較して低下していればよいが、例えば野生株、非改変株と比べて少なくとも７５％以下、５０％以下、２５％以下、又は１０％以下に低下していることが好ましく、全く発現していないことが特に好ましい。
【０１３９】
標的遺伝子がコードするタンパク質の量が低下したことの確認は、同タンパク質に結合する抗体を用いてウェスタンブロットによって行うことが出来る（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（ＵＳＡ），２００１））。タンパク質量の低下は、野生株あるいは非改変株と比較して、低下していればいずれでもよいが、例えば、野生株あるいは非改変株と比べて少なくとも７５％以下、５０％以下、２５％以下、又は１０％以下に減少していることが好ましく、全くタンパク質を産生していない（完全に活性が消失している）ことがより好ましい。
【０１４０】
ＧＣＤの活性を低下させるには、上述の遺伝子操作法以外に、例えば、パントエア属に属する細菌等の腸内細菌科に属する微生物を紫外線照射又は、Ｎ−メチル−Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）もしくは亜硝酸等の通常変異処理に用いられている変異剤によって処理し、ＧＣＤの活性が低下した菌株を選択する方法が挙げられる。
【０１４１】
ＧＣＤの活性は、ＰＱＱの合成能の低減によっても低減させることができる。ＰＱＱの合成能は、例えば、ＰＱＱ生合成に必要なオペロンであるｐｑｑＡＢＣＤＥＦの一部又は全部を欠失させることによって、低下させることができる（Ｊ．Ｓ．Ｖｅｌｔｅｒｏｐ，Ｐ．Ｗ．Ｐｏｓｔｍａ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  １７７（１７）：５０８８−５０９８（１９９５））。
【０１４２】
本発明で宿主として用いられる微生物は、通常は細菌であり得る。細菌は、グラム陽性菌であってもグラム陰性菌であってもよい。微生物としては例えば、腸内細菌科に属する微生物及びラン藻を含む後述する微生物が挙げられ、腸内細菌科又はラン藻がより好ましい。
【０１４３】
グラム陽性細菌としては、例えば、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）属細菌、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属細菌、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属細菌等が挙げられ、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌が好ましい。
【０１４４】
バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌としては、例えば、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）等が挙げられ、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）がより好ましい。
【０１４５】
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属細菌としては、例えば、コリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）、コリネバクテリウム・カルナエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｌｌｕｎａｅ）等が挙げられ、コリネバクテリウム・グルタミカムがより好ましい。
【０１４６】
グラム陰性細菌としては、例えば、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属細菌、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属細菌、ビブリオ（Ｖｉｖｒｉｏ）属細菌、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、ラン藻（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）等が挙げられ、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属細菌、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌、ラン藻（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）が好ましい。
【０１４７】
エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌としては、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）が好ましい。例えば、エシェリヒア・コリＭＧ１６５５、エシェリヒア・コリＷ３１１０等が挙げられる。
【０１４８】
パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属細菌としては、例えば、パントエア・アナナティス（Ｐａｎｔｏｅａ  ａｎａｎａｔｉｓ）、パントエア・スチューアルティ（Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｔｅｗａｒｔｉｉ）、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、パントエア・シトレア（Ｐａｎｔｏｅａ  ｃｉｔｒｅａ）等が挙げられ、パントエア・アナナティス（Ｐａｎｔｏｅａ  ａｎａｎａｔｉｓ）、パントエア・シトレア（Ｐａｎｔｏｅａ  ｃｉｔｒｅａ）が好ましい。また、パントエア属細菌としては、欧州特許出願公開第０９５２２２１号明細書に例示された株を使用してもよい。パントエア属細菌の代表的な株としては、例えば、欧州特許出願公開第０９５２２２１号明細書に開示されるパントエア・アナナティスＡＪ１３３５５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６６１４）及びパントエア・アナナティスＡＪ１３３５６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６６１５）、パントエア・アナナティスＳＣ１７株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１０９１）、パントエア・アナナティスＳＣ１７（０）株（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４  ＶＫＰＭ  Ｂ−９２４６）が挙げられる。
【０１４９】
エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属細菌としては、例えば、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）等が挙げられ、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｇｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）が好ましい。また、エンテロバクター属細菌としては、欧州特許出願公開第０９５２２２１号明細書に例示された菌株を使用してもよい。エンテロバクター属細菌の代表的な株としては、例えば、エンテロバクター・アグロメランスＡＴＣＣ１２２８７株、エンテロバクター・アエロゲネスＡＴＣＣ１３０４８株、エンテロバクター・アエロゲネスＮＢＲＣ１２０１０株（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．  ２００７  Ｍａｒ  ２７；９８（２）：３４０−３４８）、エンテロバクター・アエロゲネスＡＪ１１０６３７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５５）株等が挙げられる。エンテロバクター・アエロゲネスＡＪ１１０６３７株は、２００７年８月２２日付で独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（〒３０５−８５６６  日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６；現在は、独立行政法人製品評価技術基盤機構  バイオテクノロジーセンター  特許生物寄託センター(ＮＩＴＥ−ＩＰＯＤ)（〒２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２０号室））に受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１３４８として寄託され、２００８年３月１３日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９５５の受領番号が付与されている。
【０１５０】
ラン藻（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）としては、例えば、アナベナ（Ａｎａｂａｅｎａ）属ラン藻、アルスロスピラ（Ａｒｔｈｒｏｓｐｉｒａ）属ラン藻、シアノテーセ（Ｃｙａｎｏｔｈｅｃｅ）属ラン藻、ノストック（Ｎｏｓｔｏｃ）属ラン藻、プロクロロコッカス（Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｓ）属ラン藻、シネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）属ラン藻、サーモシネココッカス（Ｔｈｅｒｍｏｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）属ラン藻等が挙げられ、シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属ラン藻が好ましい。
【０１５１】
シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属細菌としては、例えば、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．（例、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．ＰＣＣ６８０３、ＰＣＣ６７０１、ＰＣＣ６７１４、ＰＣＣ６９０２、ＰＣＣ７００８）等が挙げられ、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．ＰＣＣ６８０３が好ましい。シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属細菌の代表的な株としては、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株（国際公開第２０１４／１４２０５１Ａ１号）が挙げられる。
【０１５２】
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３はフランスのパスツール研究所、あるいはＡＴＣＣ２７１８４はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手でき、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株等の株は、Ｑｉｎｇｌｏｎｇ  Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１５，１６，２４０８１−２４０９３に記載の方法に基づき前記ＰＣＣ６８０３株から派生させ得る。
【０１５３】
さらに本発明の方法は、培養培地中にリナロールが蓄積していてもよい。リナロールの蓄積量は、２００ｍｇ／Ｌ以上でもよく、５００ｍｇ／Ｌ以上でもよく、５００ｍｇ／Ｌ以上が好ましい。リナロールはリナロールを生産する微生物に対して通常毒性を示し、多量にリナロールが蓄積した条件ではほとんど生育ができない。一方、本発明では、培地中にリナロールが蓄積していてもよく、蓄積量が２００ｍｇ／Ｌ以上、又は５００ｍｇ／Ｌ以上であっても、細菌は生育することができる。本発明の方法においては、培養培地中にリナロールが２００ｍｇ／Ｌ以上又は５００ｍｇ／Ｌ以上、好ましくは６００ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは６２５ｍｇ／Ｌ、７００ｍｇ／Ｌ以上蓄積していてもよく、むしろ高い濃度で蓄積していることが好ましい。培養培地に含まれてもよい成分の例等、培養条件については後段にて説明する。
【０１５４】
培養培地中のリナロールの蓄積量とは、培養培地１Ｌあたりのリナロール含量（ｍｇ）を意味する。リナロール及び他の揮発性成分の合計含量中のリナロール含量とは、リナロール及び他の揮発性成分の合計１Ｌあたりのリナロールの含量（ｍｇ）を意味する。
【０１５５】
リナロール以外の揮発性成分としては、例えば、３−メチル−１−ブタノール、１−ペンタノール、３−メチル−２−ブテン−１−オール、β−シトロネロール、（Ｒ）−（＋）−β−シトロネロール、ゲラニオール、ネロール、トランス−ネロリドール、ネロリジル酢酸、酢酸リナリル、リモネン、カリオフィリン等の揮発性香気成分（香気揮発性成分）が挙げられるが、培養培地中にこれらが含まれない場合もある。リナロール及び他の揮発性成分の合計含量に対してリナロール及び他の揮発性成分の合計含量とは、組成物に含まれる揮発性有機化合物の総重量を意味する。
【０１５６】
リナロール組成物に含まれる揮発性有機化合物及びリナロールの同定、定量方法としては、例えば、ガスクロマトグラフィー、ヘッドスペース法が挙げられる。
【０１５７】
ヘッドスペース法は、一般的に揮発性成分を分析するのに広く使用されている方法である（長井  裕美、酒類の香気成分分析におけるヘッドスペースＧＣ法の改良、日本食品工業学会誌、３９（３），２６４−２７０，１９９２）。ヘッドスペース法によりリナロール組成物中の揮発性成分の合計含量を測定する場合、例えば以下の手順で行えばよい。リナロール組成物を含む溶液をヘッドスペースバイアルに封入し、一定条件の下で加温の後、ガスクロマトグラフにより分離、質量分析によりその種類を同定する。同定された化合物について検量線を作成することにより、溶液中に含まれる濃度に換算することができ、そこから、揮発性成分の合計含量と、各成分の構成比を求めることができる。このようにして、組成物中の揮発性成分の合計含量を測定することができる。
【０１５８】
ガスクロマトグラフィーによりリナロール及び他の揮発性成分の合計含量を測定する場合、例えば以下の手順で行えばよい。揮発性成分を、例えば、Ｔｅｎａｘ  ＴＡ（登録商標）吸着剤（ジーエルサイエンス株式会社）を用いてサンプリングし、水素炎イオン化検出器又は質量分析計を用いて無極性のキャピラリーカラムでｎ−ヘキサンとｎ−ヘキサデカンの範囲で溶出及び検出される、クロマトグラムピーク面積の合計をトルエン相当量に換算する方法（日本工業規格ＪＩＳ  Ａ  １９６５）等が知られている。
【０１５９】
本発明の方法は、以下の工程１）〜３）を含むことが好ましい。
１）十分な濃度の増殖促進剤の存在下でリナロールシンターゼを発現する微生物を培養して、リナロール生成微生物を増殖させること；
２）増殖促進剤の濃度を減少させて、前記微生物によるリナロールの生成を誘導すること；及び
３）前記微生物を培養してリナロールを生成すること。
【０１６０】
効率的なリナロールの製造の観点から、微生物の増殖期に対応する上記工程１）、及びリナロールの生成期に対応する上記工程３）が分離される。また、上記工程２）は、微生物の増殖期からリナロールの生成期に移行させるため、リナロール生成の誘導期に対応する。
【０１６１】
増殖促進剤とは、微生物により消費され得る、微生物の増殖に必須の因子又は微生物の増殖の促進作用を有する因子であって、微生物により消費され培地中の量が減少すると微生物の増殖が喪失又は低減するものをいう。例えば、ある量の増殖促進剤を用いた場合、その量の増殖促進剤が消費されるまで微生物は増殖し続けるが、一旦増殖促進剤が全て消費されると、微生物は増殖し得ず、又は増殖速度が低下し得る。したがって、増殖促進剤により、微生物の増殖の程度を調節することができる。このような増殖促進剤としては、例えば、酸素（ガス）等の物質；鉄、マグネシウム、カリウム、カルシウムのイオン等のミネラル；リン酸（例、モノリン酸、二リン酸、ポリリン酸）又はその塩等のリン化合物；アンモニア、硝酸、亜硝酸、尿素等の窒素化合物（ガス）；硫酸アンモニウム、チオ硫酸等の硫黄化合物；ビタミン（例、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン、パントテン酸、ビオチン、アスコルビン酸）、及びアミノ酸（例、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチヂン、ロイシン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、セレノシステイン）等の栄養素が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法では、１種の増殖促進剤を用いてもよいし、２種以上の増殖促進剤を組み合わせて用いてもよい。
【０１６２】
本発明の方法が上記工程１）〜３）を含む場合、リナロールシンターゼを発現する微生物は、増殖促進剤に依存して増殖する能力、及び増殖促進剤逆依存プロモーターに依存してリナロールを生成する能力を有する、酵素反応によるリナロール合成能を付与された微生物であることが好ましい。斯かる微生物は、微生物の増殖に十分な濃度の増殖促進剤の存在下で、増殖できる。ここで、「十分な濃度」とは、微生物の増殖に有効な濃度で増殖促進剤が用いられることをいい得る。表現「増殖促進剤逆依存プロモーターに依存してリナロールを生成する能力」とは、相対的に高い濃度の増殖促進剤の存在下では、リナロールを少しも生成できず、又はリナロールの生成効率が低いが、相対的に低い濃度の増殖促進剤の存在下又は増殖促進剤の不在下では、リナロールを生成できること、又はリナロールの生成効率が高いことを意味し得る。したがって、本発明で好ましく用いられる微生物は、十分な濃度の増殖促進剤の存在下では、良好に増殖し得るが、リナロールを生成できず、又はリナロールの生成効率が低い。本発明で用いられる微生物はまた、不十分な濃度の増殖促進剤の存在下又は増殖促進剤の不在下では、良好に増殖し得ないが、リナロールを生成でき、又はリナロールの生成効率が高いことが好ましい。
【０１６３】
本発明の方法が上記工程１）〜３）を含む場合、リナロールシンターゼを発現する微生物のリナロールシンターゼ遺伝子は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下にあり得る。表現「増殖促進剤逆依存プロモーター」とは、相対的に高い濃度の増殖促進剤の存在下では、転写活性を有しない、又は低い転写活性を有するが、相対的に低い濃度の増殖促進剤の存在下又は増殖促進剤の不在下では、転写活性を有する、又は高い転写活性を有するプロモーターを意味し得る。したがって、増殖促進剤逆依存プロモーターは、微生物の増殖に十分な濃度の増殖促進剤の存在下では、リナロールシンターゼ遺伝子の発現を抑制でき、一方、微生物の増殖に不十分な濃度の増殖促進剤の存在下では、前記リナロールシンターゼ遺伝子の発現を促進できる。具体的には、微生物は、増殖促進剤逆依存プロモーターの制御下にある。
【０１６４】
例えば、増殖促進剤がリン化合物である場合、リン欠乏誘導型プロモーターを利用することができる。表現「リン欠乏誘導型プロモーター」とは、低濃度のリン化合物で下流遺伝子の発現を促進できるプロモーターをいい得る。低濃度のリン化合物とは、（遊離）リン濃度１００ｍｇ／Ｌ以下の条件をいい得る。表現「リン」は、表現「リン化合物」と同義であり、それらは交換可能な様式で使用され得る。総リン濃度は、溶液中の全種のリン化合物を、強酸あるいは酸化剤によってオルトリン酸態リンに分解して定量可能である。リン欠乏条件下の総リン濃度は、１００ｍｇ／Ｌ以下、５０ｍｇ／Ｌ以下、１０ｍｇ／Ｌ以下、５ｍｇ／Ｌ以下、１ｍｇ／Ｌ以下、０．１ｍｇ／Ｌ以下、又は０．０１ｍｇ／Ｌ以下であってもよい。リン欠乏誘導型プロモーターとしては、例えば、アルカリフォスファターゼをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＡ）のプロモーター、酸性フォスファターゼをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＣ）のプロモーター、センサーヒスチジンキナーゼをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＲ）のプロモーター、レスポンスレギュレーターをコードする遺伝子（例、ｐｈｏＢ）のプロモーター、及びリン取り込み担体をコードする遺伝子（例、ｐｓｔＳ）のプロモーターが挙げられる。
【０１６５】
上記工程１）では、リナロールシンターゼを発現する微生物が、十分な濃度の増殖促進剤の存在下で増殖される。より具体的には、リナロールシンターゼを発現する微生物の増殖は、十分な濃度の増殖促進剤の存在下で、培地中でリナロールシンターゼを発現する微生物を培養することにより行うことができる。
【０１６６】
例えば、リン化合物が増殖促進剤として用いられる場合、リナロールシンターゼを発現する微生物は、十分な濃度のリン化合物の存在下で良好に増殖することができるので、リン化合物は、増殖促進剤として作用することができる。増殖促進剤がリン化合物である場合、１）において、増殖に十分なリン化合物の濃度は、特に限定されないが、例えば２００ｍｇ／Ｌ以上、３００ｍｇ／Ｌ以上、５００ｍｇ／Ｌ以上、１０００ｍｇ／Ｌ以上、又は２０００ｍｇ／Ｌ以上であってもよい。増殖のためのリン化合物の濃度はまた、例えば２０ｇ／Ｌ以下、１０ｇ／Ｌ以下、又は５ｇ／Ｌ以下であってもよい。
【０１６７】
上記工程２）では、微生物によるリナロールの生成の誘導が、増殖促進剤の濃度を減少させることにより行われる。より具体的には、増殖促進剤の濃度の減少は、培地中への増殖促進剤の供給量を低下させることにより、行うことができる。増殖促進剤の濃度の減少はまた、培地中への増殖促進剤の供給量を工程１）及び２）を通じて一定にした場合であっても、微生物の増殖を利用して行うことができる。工程１）における微生物の増殖の初期では、微生物が十分に増殖しておらず、培地中の微生物数が少ないため、微生物による増殖促進剤の消費も相対的に少ない。したがって、増殖の初期では、培地中の増殖促進剤の濃度は、相対的に高い。一方、工程１）における微生物の増殖の後期では、微生物が十分に増殖しており、培地中の微生物数が多いため、微生物による増殖促進剤の消費も相対的に多い。したがって、増殖の後期では、培地中の増殖促進剤の濃度は、相対的に低くなる。このように、一定量の増殖促進剤を、工程１）及び２）を通じて培地中に供給し続けた場合、微生物の増殖と反比例して、培地中の増殖促進剤の濃度は減少する。この減少した濃度をトリガーとして、微生物によるリナロールの生成を誘導することができる。
【０１６８】
例えば、リン化合物又はアミノ酸が増殖促進剤として用いられる場合、微生物によるリナロールの生成を誘導できる培地中のリン化合物又はアミノ酸の培地中の濃度は、例えば１００ｍｇ／Ｌ以下、５０ｍｇ／Ｌ以下、又は１０ｍｇ／Ｌ以下であり得る。
【０１６９】
上記工程３）では、リナロールの生成が、微生物を培養することにより行われる。より具体的には、リナロールの生成は、増殖促進剤の濃度が減少した工程２）の条件下において培地中で微生物を培養することにより行うことができる。培地中の増殖促進剤の濃度は、微生物によるリナロールの生成を可能にするため、工程２）で上述したような濃度に維持され得る。
【０１７０】
本発明の方法では、工程３）における微生物の培養期間を、工程１）のその期間よりも長く設定することも可能である。誘導剤を利用する従来の方法では、より多量のリナロールを得るためには、リナロールの生成期において誘導剤を用いて微生物を長期培養する必要があった。しかし、長期培養すると誘導剤が分解することから、微生物がリナロールの生産能を維持できなくなる。そのため、誘導剤を継続的に培養培地に添加する必要があるが、誘導剤は高価であり得、リナロール製造費が上昇し得る。したがって、リナロールの生成期において誘導剤を用いる微生物の長期培養は、その培養期間の長さに応じて、リナロールの製造費が上昇し得るという問題があった。一方、工程３）において誘導剤等の特定物質を用いない本発明の方法では、当該特定物質の分解を考慮する必要がなく、リナロールの生成期における長期培養がリナロール製造費の上昇を引き起こすという従来の問題も生じない。したがって、本発明の方法は、誘導剤を用いる従来の方法とは異なり、工程３）の期間を長く設定し易い。本発明の方法では、工程３）の期間を長く設定すればするほど、より多量のリナロールを製造することができる。
【０１７１】
本発明の方法は、リナロールの生成量をさらに向上させる観点等から、他の方法と併用されてもよい。このような方法としては、例えば、光（Ｐｉａ  Ｌｉｎｄｂｅｒｇ，Ｓｕｎｇｓｏｏｎ  Ｐａｒｋ，Ａｎａｓｔａｓｉｏｓ  Ｍｅｌｉｓ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １２（２０１０）：７０−７９）又は温度（Ｎｏｒｍａ  Ａ  Ｖａｌｄｅｚ−Ｃｒｕｚ，Ｌｕｉｓ  Ｃａｓｐｅｔａ，Ｎｅｓｔｏｒ  Ｏ  Ｐｅｒｅｚ，Ｏｃｔａｖｉｏ  Ｔ  Ｒａｍｉｒｅｚ，Ｍａｕｒｉｃｉｏ  Ａ  Ｔｒｕｊｉｌｌｏ−Ｒｏｌｄａｎ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ  ２０１０，９：１）等の環境因子を利用する方法、ｐＨの変化（欧州特許公開第１２３３０６８Ａ２号明細書）、界面活性剤の添加（特開平１１−００９２９６Ａ号公報）、自己誘導法（国際公開第２０１３／１５１１７４号）が挙げられる。
【０１７２】
本発明の方法で用いられる培地は、リナロール生成のための炭素源を含んでいてもよい。炭素源としては、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類等の炭水化物；ショ糖を加水分解した転化糖；グリセロール；メタノール、ホルムアルデヒド、ギ酸塩、一酸化炭素、二酸化炭素等の炭素数が１の化合物（以下、Ｃ１化合物という。）；コーン油、パーム油、大豆油等のオイル；アセテート；動物油脂；動物オイル；飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等の脂肪酸；脂質；リン脂質；グリセロ脂質；モノグリセライド、ジグリセライド、トリグリセライド等のグリセリン脂肪酸エステル；微生物性タンパク質、植物性タンパク質等のポリペプチド；加水分解されたバイオマス炭素源等の再生可能な炭素源；酵母エキス；又はこれらを組み合わせたものが挙げられる。窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、大豆加水分解物などの有機窒素、アンモニアガス、アンモニア水等を用いることができる。有機微量栄養源としては、ビタミンＢ１、Ｌ−ホモセリンなどの要求物質又は酵母エキス等を適量含有させることが好ましい。これらの他に、必要に応じて、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、鉄イオン、マンガンイオン等が少量添加される。なお、本発明で用いる培地は、炭素源、窒素源、無機イオン及び必要に応じてその他の有機微量成分を含む培地であれば、天然培地、合成培地のいずれでもよい。
【０１７３】
単糖類としては、ケトトリオース（ジヒドロキシアセトン）、アルドトリオース（グリセルアルデヒド）等のトリオース；ケトテトロース（エリトルロース）、アルドテトロース（エリトロース、トレオース）等のテトロース；ケトペントース（リブロース、キシルロース）、アルドペントース（リボース、アラビノース、キシロース、リキソース）、デオキシ糖（デオキシリボース）等のペントース；ケトヘキソース（プシコース、フルクトース、ソルボース、タガトース）、アルドヘキソース（アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース）、デオキシ糖（フコース、フクロース、ラムノース）等のヘキソース；セドヘプツロース等のヘプトースが挙げられ、フルクトース、マンノース、ガラクトース、グルコース等のＣ６糖；キシロース、アラビノース等のＣ５糖の炭水化物が好ましい。
【０１７４】
二糖類としては、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、ツラノース、セロビオース等が挙げられ、スクロース、ラクトースが好ましい。
【０１７５】
オリゴ糖類としては、ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース等の三糖類；アカルボース、スタキオース等の四糖類；フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）等のその他のオリゴ糖類が挙げられる。
【０１７６】
多糖類としては、グリコーゲン、デンプン（アミロース、アミロペクチン）、セルロース、デキストリン、グルカン（β−１，３−グルカン）が挙げられ、デンプン、セルロースが好ましい。
【０１７７】
微生物性タンパク質としては、酵母又は細菌由来のポリペプチドが挙げられる。
【０１７８】
植物性タンパク質としては、大豆、コーン、キャノーラ、ジャトロファ、パーム、ピーナッツ、ヒマワリ、ココナッツ、マスタード、綿実、パーム核油、オリーブ、紅花、ゴマ、亜麻仁由来のポリペプチドが挙げられる。
【０１７９】
脂質としては、Ｃ４以上の飽和、不飽和脂肪酸を１以上含む物質が挙げられる。
【０１８０】
オイルとしては、Ｃ４以上の飽和、不飽和脂肪酸を１以上含み、室温で液体の脂質であり得、大豆、コーン、キャノーラ、ジャトロファ、パーム、ピーナッツ、ヒマワリ、ココナッツ、マスタード、綿実、パーム核油、オリーブ、紅花、ゴマ、亜麻仁、油性微生物細胞、ナンキンハゼ、又はこれらの２以上の組み合わせからなるものが挙げられる。
【０１８１】
脂肪酸としては、式ＲＣＯＯＨ（「Ｒ」は２以上の炭素原子を有する炭化水素基を表す。）で表される化合物が挙げられる。
【０１８２】
不飽和脂肪酸は、上記の基「Ｒ」における２つの炭素原子間に少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する化合物であり、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、パルミテライジン酸、アラキドン酸等が挙げられる。
【０１８３】
飽和脂肪酸は、「Ｒ」が飽和脂肪族基である化合物であり、ドコサン酸、イコサン酸、オクタデカン酸、ヘキサデカン酸、テトラデカン酸、ドデカン酸等が挙げられる。
【０１８４】
中でも、脂肪酸としては、１以上のＣ２からＣ２２の脂肪酸が含まれるものが好ましく、Ｃ１２脂肪酸、Ｃ１４脂肪酸、Ｃ１６脂肪酸、Ｃ１８脂肪酸、Ｃ２０脂肪酸、Ｃ２２脂肪酸が含まれるものがより好ましい。
【０１８５】
また、炭素源としては、これら脂肪酸の塩、誘導体、誘導体の塩も挙げられる。塩としては、リチウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩等が挙げられる。
【０１８６】
また、炭素源としては、脂質、オイル、油脂、脂肪酸、グリセロール脂肪酸エステルとグルコース等の炭水化物との組み合わせが挙げられる。
【０１８７】
再生可能な炭素源としては、加水分解されたバイオマス炭素源が挙げられる。
【０１８８】
バイオマス炭素源としては、木、紙、及びパルプの廃材、葉状植物、果肉等のセルロース系基質；柄、穀粒、根、塊茎等の植物の一部分が挙げられる。
【０１８９】
バイオマス炭素源として用いられる植物としては、コーン、小麦、ライ麦、ソルガム、トリティケイト、コメ、アワ、大麦、キャッサバ、エンドウマメ等のマメ科植物、ジャガイモ、サツマイモ、バナナ、サトウキビ、タピオカ等が挙げられる。
【０１９０】
バイオマス等の再生可能な炭素源を細胞培地に添加する際には、炭素源は、前処理され得る。前処理としては、酵素的前処理、化学的前処理、酵素的前処理と化学的前処理の組み合わせが挙げられる。
【０１９１】
再生可能な炭素源を細胞培地に添加する前に、その全部又は一部を加水分解することが好ましい。
【０１９２】
また、炭素源としては、酵母エキス、又は酵母エキスと、グルコース等の他の炭素源との組み合わせが挙げられ、酵母エキスと、二酸化炭素やメタノール等のＣ１化合物との組み合わせが好ましい。
【０１９３】
本発明の方法では、リナロールシンターゼを発現する微生物を生理食塩水と栄養源を含む標準的培地で培養することが好ましい。
【０１９４】
培養培地としては、特に限定されず、Ｌｕｒｉａ  Ｂｅｒｔａｎｉ（ＬＢ）ブロス、Ｓａｂｏｕｒａｕｄ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ（ＳＤ）ブロス、Ｙｅａｓｔ  ｍｅｄｉｕｍ（ＹＭ）ブロス等の一般的に市販されている既成の培地が挙げられる。特定の宿主細胞の培養に適した培地を適宜選択して用いることができる。
【０１９５】
培地には適切な炭素源の他に、適切なミネラル、塩、補助因子、緩衝液、及び培養に適していること、又はリナロールの産出を促進することが当業者にとって公知の成分が含まれていることが好ましい。
【０１９６】
微生物の培養条件としては、標準的な培養条件を用いることができる。
【０１９７】
培養温度としては、２０℃〜４０℃であり得、ｐＨが、約４．５〜約９．５であり得る。
【０１９８】
また、リナロール微生物の宿主の性質に応じて好気性、無酸素性、又は嫌気性条件下で培養を行うことが好ましい。培養方法としては、バッチ培養法、流加培養法、連続培養法等の公知の発酵方法を適宜用いることができる。
【０１９９】
なお、リナロールは水に対する溶解度が低く、培地中に有機層を形成させ、二相で培養することにより、有機層に溶解させて回収することができる。有機層を形成させるために添加する物質としては例えば、ドデカン、オレイン酸メチル、オレイルアルコール、フタル酸ジブチル、又はイソプロピルミリステート等を使用することができる。
【実施例】
【０２００】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
参考例１：リナロール添加試験
後述する実施例４で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株を市販のプラスミドベクターｐＳＴＶ２８（タカラバイオ株式会社製）にて形質転換したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＳＴＶ２８株のグリセロールストックを融解し、菌体懸濁液５０μＬを６０ｍｇ／Ｌのクロラムフェニコールを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１８時間静置培養した。得られたプレート上の菌体を回収し、６０ｍｇ／Ｌのクロラムフェニコールを含む以下に記載の培地４ｍＬを注入した小型Ｌ型培養管（型式：ＴＶ１０００３０、アドバンテック東洋株式会社製）に開始Ｏ．Ｄ．が０．０１から０．０２の範囲になるように植菌し、キャップ式のシリコ栓を培養栓として用いた。生育培地は最少培地とし、表１記載の１０×Ｍ９  ｓａｌｔｓ  ５０ｍＬに対して、別殺菌（ＡＣ  １２０℃、２０分、１Ｍ  ＣａＣｌ２はフィルトレーション）した２０％（ｗ／ｖ）グルコース１０ｍＬ、１Ｍ  ＣａＣｌ２  ０．０５ｍＬ、１Ｍ  ＭｇＳＯ４  １．０ｍＬを冷却後（５０℃以下）添加し、滅菌水で５００ｍＬになるよう混合調製した。培養温度を３４℃、振盪速度を７０ｒｐｍとし、小型振盪培養装置ＴＶＳ０６２ＣＡ（アドバンテック東洋株式会社製）を用いて２３時間培養し、１５分毎に５．０ｓｅｃ振盪を停止し、Ｏ．Ｄ．値を自動計測した。【０２０１】
【表１】
2017051928.tif 000002
【０２０２】
培養開始後、Ｏ．Ｄ．値が０．６−０．７に達した時点で、それぞれ培地中の試薬リナロール濃度が１２５１、８３７、６２６、４１７ｍｇ／Ｌとなるようリナロール溶液を各小型Ｌ型培養管に添加した。リナロール溶液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を１５％、１０％、７．５％、５．０％、０．０％（ｖ／ｖ）となるようエタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈し、各小型Ｌ型培養管に４０μＬ添加した。培地中のリナロール濃度は試薬リナロールの比重０．８６（２０／４℃）（引用文献：和光純薬工業株式会社実績値）から算出した。【０２０３】
ＴＶＳ０６２ＣＡ通信ソフト（ＴＶ１０００７０、アドバンテック東洋株式会社製）を用いて測定した培養経時のＯ．Ｄ．値の経時変化のグラフを図１４に示す。【０２０４】
一般的に、リナロールをはじめとした複数種のモノテルペノイドは抗菌性を示すことが知られている（Ｐａｒｋ  ＳＮ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｅｒｏｂｅ，１８（３），３６９−３７２，２０１２）。ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＳＴＶ２８株において、培地へ６２６ｍｇ／Ｌ以上のリナロールを添加することによってＯ．Ｄ．値の減少が認められた（図１４）。これらの結果は、菌体生育の阻害を抑制するためには培地中のリナロール濃度が６２６ｍｇ／Ｌ未満であることが好ましいことを示している。【０２０５】
実施例１：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
１−１）Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ（サルナシ）由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼ（ＡａＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＧＱ３３８１５３）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：  ＡＤＤ８１２９４）は既に知られている（Ｃｈｅｎ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３７，２３２−２４３）。Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号１、及び配列番号２に示す。ＡａＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、さらに葉緑体移行シグナルが切断されたＡａＬＩＮＳ遺伝子を設計し、これをｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳの塩基配列を配列番号３に示す。ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳと名付けた。【０２０６】
１−２）Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ（コリアンダー）由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼ（ＣｓＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＫＦ７００７００）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：  ＡＨＣ５４０５１）は既に知られている（Ｇａｌａｔａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１０２，６４−７３）。Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子配列を配列番号４、及び配列番号５に示す。ＣｓＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、さらに葉緑体移行シグナルが切断されたＣｓＬＩＮＳ遺伝子を設計し、これをｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳの塩基配列を配列番号６に示す。ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳと名付けた。【０２０７】
１−３）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ由来変異型ファルネシル二リン酸シンターゼ遺伝子の取得
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉのファルネシル二リン酸シンターゼは、ｉｓｐＡ遺伝子（配列番号７）によりコードされている（Ｆｕｊｉｓａｋｉ  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ）  １０８：９９５−１０００．）。Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ由来のファルネシル二リン酸シンターゼにおいて、菌体内のゲラニル二リン酸の濃度を高める変異が明らかにされている（Ｎａｒｉｔａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １２６（３）：５６６−５７１．）。本知見を基にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉのファルネシル二リン酸シンターゼにおいても、同様の変異体が作出されている（Ｒｅｉｌｉｎｇ  ＫＫ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．８７（２）  ２００−２１２．）。ゲラニル二リン酸生成活性の高いｉｓｐＡ変異体（Ｓ８０Ｆ）遺伝子を効率的に発現させるため、コドンを最適化した配列を設計し、これをｉｓｐＡ*と名付けた。ｉｓｐＡ*の塩基配列を配列番号８に示す。ｉｓｐＡ＊遺伝子は化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ*と名付けた。【０２０８】
１−４）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号１１に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号１２に示したプライマーと配列番号１３に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ*断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０２０９】
１−５）ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現用プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号１４に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号１５に示したプライマーと配列番号１３に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０２１０】
１−６）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号１０に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片、及び制限酵素Ｐｓｔ  ＩとＳｃａ  Ｉで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを構築した。【０２１１】
実施例２：Ｅ．ｃｏｌｉ野生株におけるリナロール発酵
２−１）Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５のコンピテントセルを調製し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ、あるいはｐＡＣＹＣ１７７をエレクトロポレーション法にて導入した。得られた株をＥ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ＡａＬＩＮＳ株、及びＥ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ｐＡＣＹＣ１７７株と命名した。【０２１２】
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢ液体培地にて終Ｏ．Ｄ．６００≒０．３となるように３７℃で培養した後、培養液と等量の４０％グリセロール溶液を加えて攪拌した後、適当量ずつ分注し−８０℃に保存した。【０２１３】
２−２）Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ＡａＬＩＮＳ株、及びＥ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３７℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む発酵培地（表２）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２１４】
【表２】
2017051928.tif 000003
【０２１５】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２１６】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。Ｏ．Ｄ．値は分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ  Ｕ−２９００）によって６２０ｎｍで測定した。以下、特に断りがない限り、Ｏ．Ｄ．値は本機器で測定した。【０２１７】
気化室温度            ３６０．０℃
注入量                １．０μＬ
注入モード            スプリット  １：１０
キャリアガス          Ｈｅ
制御モード            線速度
圧力                  １２５．５ｋＰａ
全流量                ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量            １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度                ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量            ３．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラムオーブン温度プログラム  合計時間  ２１．５ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ）  温度（℃）    ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０      ５．０
５．０              １０５．０      ０．５
３５．０            ２９７．５      ２．５
検出器温度            ３７５．０℃
検出器                ＦＩＤ
メイクアップガス      Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量              ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気                  ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２１８】
リナロール濃度は培地量に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表３に示す。対照ベクターｐＡＣＹＣ１７７を導入した対照株ではリナロール生産は認められなかったが、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ＡａＬＩＮＳ株とＥ．ｃｏｌｉ  ＭＧ１６５５／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株においてリナロール生産が確認された。【０２１９】
【表３】
2017051928.tif 000004
【０２２０】
実施例３：Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７におけるリナロール発酵
３−１）Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法によりｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳあるいはｐＡＣＹＣ１７７を導入した。得られた株をそれぞれ、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ株、及びＰ．ａｎａｎａｔｉｓ／ｐＡＣＹＣ１７７と命名した。【０２２１】
３−２）Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ株、及びＰ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地（表４）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２２２】
【表４】
2017051928.tif 000005
【０２２３】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２２４】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。【０２２５】
気化室温度            ３６０．０℃
注入量                １．０μＬ
注入モード            スプリット  １：１０
キャリアガス          Ｈｅ
制御モード            線速度
圧力                  １２５．５ｋＰａ
全流量                ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量            １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度                ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量            ３．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２２６】
カラムオーブン温度プログラム  合計時間  ２１．５ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ）  温度（℃）  ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０    ５．０
５．０                １０５．０  ０．５
３５．０              ２９７．５  ２．５
検出器温度            ３７５．０℃
検出器                ＦＩＤ
メイクアップガス      Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量              ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気                  ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２２７】
リナロール濃度は培地量に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表５に示す。対照ベクターｐＡＣＹＣ１７７を導入した対照株ではリナロール生産は認められなかったが、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ株、及びＰ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株においてリナロール生産が確認された。【０２２８】
【表５】
2017051928.tif 000006
【０２２９】
参考実施例１：微好気誘導型イソプレノイド化合物生成微生物（ＳＷＩＴＣＨ−Ｐｌｌｄ／ＩｓｐＳＭ）及びリン酸欠乏誘導型イソプレノイド化合物生成微生物（ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＩｓｐＳＭ，ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｓｔＳ／ＩｓｐＳＭ）、アラビノース誘導型イソプレノイド化合物生成微生物（ＳＷＩＴＣＨ−Ｐａｒａ／ＩｓｐＳＭ）の構築
１−１）ｐＭＷ−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−Ｔｔｒｐの構築
１−１−１）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥ遺伝子の化学合成
ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅとｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｌｇｌｕｔａｒｙｌ−ＣｏＡｒｅｄｕｃｔａｓｅをコードするＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥの塩基配列、及びアミノ酸配列はすでに知られている（塩基配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＦ２９００９２．１、（１４７９．．３８９０）、アミノ酸配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＡＧ０２４３９）（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８２（１５），４３１９−４３２７（２０００））。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号２０、及び配列番号２１にそれぞれ示す。ｍｖａＥ遺伝子をＥ．ｃｏｌｉで効率的に発現させるためにＥ．ｃｏｌｉのコドン使用頻度に最適化したｍｖａＥ遺伝子を設計し、これをＥＦｍｖａＥと名付けた。この塩基配列を配列番号２２に示す。ｍｖａＥ遺伝子は化学合成された後、ｐＵＣ５７（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＥと名付けた。【０２３０】
１−１−２）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＳ遺伝子の化学合成
ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ−ＣｏＡ  ｓｙｎｔｈａｓｅをコードするＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＳの塩基配列、及びアミノ酸配列はすでに知られている（塩基配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＦ２９００９２．１、ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ（１４２．．１２９３）、アミノ酸配列のＡＣＣＥＳＳＩＯＮ番号：ＡＡＧ０２４３８）（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８２（１５），４３１９−４３２７（２０００））。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＳタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号２３、及び配列番号２４にそれぞれ示す。ｍｖａＳ遺伝子をＥ．ｃｏｌｉで効率的に発現させるためにＥ．ｃｏｌｉのコドン使用頻度に最適化したｍｖａＳ遺伝子を設計し、これをＥＦｍｖａＳと名付けた。この塩基配列を配列番号２５に示す。ｍｖａＳ遺伝子は化学合成された後、ｐＵＣ５７（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＳと名付けた。【０２３１】
１−１−３）アラビノース誘導型ｍｖａＥＳ発現ベクターの構築
アラビノース誘導型メバロン酸経路上流遺伝子発現ベクターは次の手順で構築した。プラスミドｐＫＤ４６を鋳型として配列番号２６と配列番号２７に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＥ．ｃｏｌｉ由来ａｒａＣとａｒａＢＡＤプロモーター配列からなるＰａｒａを含むＰＣＲ断片を得た。プラスミドｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＥを鋳型として配列番号２８と配列番号２９に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＥＦｍｖａＥ遺伝子を含むＰＣＲ断片を得た。プラスミドｐＵＣ５７−ＥＦｍｖａＳを鋳型として配列番号３０と配列番号３１に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＥＦｍｖａＳ遺伝子を含むＰＣＲ断片を得た。プラスミドｐＳＴＶ−Ｐｔａｃ−Ｔｔｒｐ（国際公開第２０１３／０６９６３４Ａ１号）を鋳型として配列番号３２と配列番号３３に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしたＰＣＲによりＴｔｒｐ配列を含むＰＣＲ断片を取得した。これら４つのＰＣＲ断片を得るためのＰＣＲにはＰｒｉｍｅ  Ｓｔａｒポリメラーゼ（タカラバイオ株式会社製）を用いた。反応溶液はキットに添付された組成に従って調製し、９８℃にて１０秒、５５℃にて５秒、７２℃にて１分／ｋｂの反応を３０サイクル行った。精製したＰａｒａを含むＰＣＲ産物とＥＦｍｖａＥ遺伝子を含むＰＣＲ産物を鋳型として配列番号２６と配列番号２９に示す合成オリゴヌクレオチドを、精製したＥＦｍｖａＳ遺伝子を含むＰＣＲ産物とＴｔｒｐを含むＰＣＲ産物を鋳型として配列番号３０と配列番号３３に示す合成オリゴヌクレオチドをプライマーとしてＰＣＲを行った。その結果、ＰａｒａとＥＦｍｖａＥ遺伝子、ＥＦｍｖａＳとＴｔｒｐ含むＰＣＲ産物を取得した。プラスミドｐＭＷ２１９（株式会社ニッポンジーン製）は常法に従ってＳｍａＩ消化した。ＳｍａＩ消化後ｐＭＷ２１９と精製したＰａｒａとＥＦｍｖａＥ遺伝子を含むＰＣＲ産物、ＥＦｍｖａＳ遺伝子とＴｔｒｐを含むＰＣＲ産物はＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いて連結した。得られたプラスミドは、ｐＭＷ−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−Ｔｔｒｐと命名した。【０２３２】
１−２）メバロン酸経路の上流及び下流遺伝子を保有する組込み型コンディショナル複製プラスミドの構築
１−２−１）異なるプロモーターの制御下にあるｍｖａＥＳ遺伝子を含むプラスミドの構築
メバロン酸経路の上流及び下流遺伝子を保有する組込み型プラスミドを構築するため、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲ  ｖｅｃｔｏｒ（Ｍｉｎａｅｖａ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；８：６３）を用いた。【０２３３】
ｐＭＷ−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−ＴｔｒｐのＫｐｎＩ−ＳａｌＩフラグメントを、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲのＳｐｈＩ−ＳａｌＩ認識部位中にクローニングした。その結果、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｐａｒａプロモーター及びリプレッサー遺伝子ａｒａＣの制御下にあるＥ．ｆａｅｃａｌｉｓ由来ｍｖａＥＳオペロンを保有するｐＡＨ１６２−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳプラスミドを構築した（図１）。【０２３４】
オペロンのプロモーター欠損バリアントを得るために、ｐＭＷ２１９−Ｐａｒａ−ｍｖａＥＳ−ＴｔｒｐのＥｃｌ１３６ＩＩ−ＳａｌＩフラグメントを、同じ組込み型ベクター中にサブクローニングした。得られたプラスミドのマップを、図２に示す。【０２３５】
異なるプロモーターの制御下にあるｍｖａＥＳ遺伝子を保持する染色体固定用プラスミドのセットを構築した。この目的のために、Ｉ−ＳｃｅＩ、ＸｈｏＩ、ＰｓｔＩ及びＳｐｈＩ認識部位を含むポリリンカーを、ｍｖａＥＳ遺伝子の上流に位置する唯一のＨｉｎｄＩＩＩ認識部位中に挿入した。この目的を達成するために、プライマー１及び２（表６）とポリヌクレオチドキナーゼを用いてアニーリングを行った。得られた二本鎖ＤＮＡフラグメントを、ポリヌクレオチドキナーゼで５’リン酸化し、得られたリン酸化フラグメントをＨｉｎｄＩＩＩにて切断したｐＡＨ１６２−ｍｖａＥＳプラスミドにライゲーション反応により挿入した。得られたｐＡＨ１６２−ＭＣＳ−ｍｖａＥＳプラスミド（図３）は、ｍｖａＥＳ遺伝子の前で所望の配向性を保ちながらプロモーターをクローニングするのに都合が良いものである。ｌｌｄＤ、ｐｈｏＣ及びｐｓｔＳ遺伝子の調節領域を保持するＤＮＡフラグメントを、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７（０）株（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）のゲノムＤＮＡを鋳型として、ならびにプライマー３及び４、プライマー５及び６、ならびにプライマー７及び８（表６）をそれぞれ用いて、ＰＣＲにより生成し、ｐＡＨ１６２−ＭＣＳ−ｍｖａＥＳの適切な制限酵素認識部位中にクローニングした。得られたプラスミドを、図４に示す。クローニングされたプロモーターフラグメントの配列決定を行い、予想されるヌクレオチド配列に正確に対応することを確認した。【０２３６】
１−２−２）ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ染色体固定用プラスミドの構築
ｔｅｔＡＲ遺伝子を含むｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲ（Ｍｉｎａｅｖａ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３）のＡａｔＩＩ−ＡｐａＩフラグメントを、プライマー９及び１０（表６）、ならびにｐＵＣ４Ｋプラスミド（Ｔａｙｌｏｒ  ＬＡ及びＲｏｓｅ  ＲＥ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１６，３５８，１９８８）を鋳型として用いたＰＣＲで得られたＤＮＡフラグメントと置換した。その結果、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＫｍＲ−λａｔｔＲが得られた（図５）。【０２３７】
Ｐｔａｃプロモーターを、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＴｃＲ−λａｔｔＲベクター（Ｍｉｎａｅｖａ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３）のＨｉｎｄＩＩＩ−ＳｐｈＩ認識部位に挿入した。その結果、染色体固定用発現ベクターｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃが構築された。クローニングしたプロモーターフラグメントの配列を決定し、設計通りの配列であることを確認した。ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃのマップを、図６に示す。【０２３８】
ＡＴＧ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｇｅｎｅ（ロシア）により化学合成された、レアコドンを同義コドンに置換したＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来ＰＭＫ、ＭＶＤ及びｙＩｄＩ遺伝子を保持するＤＮＡフラグメント（図７）を、染色体固定用ベクターｐＡＨ１６２−ＰｔａｃのＳｐｈＩ−ＫｐｎＩ制限酵素認識部位中にサブクローニングした。化学合成されたＫＤｙＩオペロンを含むＤＮＡ配列を配列番号５８に示す。Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ発現カセットを保持する得られたプラスミドｐＡＨ１６２−Ｔｃ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩを、図８（Ａ）に示す。その後、薬剤耐性マーカー遺伝子を置換する目的でｔｅｔＡＲ遺伝子を保持するｐＡＨ１６２−Ｔｃ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩのＮｏｔＩ−ＫｐｎＩフラグメントを、ｐＡＨ１６２−λａｔｔＬ−ＫｍＲ−λａｔｔＲにて対応するフラグメントにより置換した。その結果、カナマイシン耐性遺伝子ｋａｎをマーカーとするｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩプラスミドを得た（図８（Ｂ））。【０２３９】
古典的ＳＤ配列に連結された、メタノセラ・パルディコラ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｅｌｌａ  ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）株であるＳＡＮＡＥ［完全ゲノム配列については、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＰ０１１５３２を参照］由来の推定ｍｖｋ遺伝子のコーディング部分を含む化学合成ＤＮＡフラグメントを、上記組込み型発現ベクターｐＡＨ１６２−ＰｔａｃのＰｓｔＩ−ＫｐｎＩ認識部位中にクローニングした。ｍｖｋ遺伝子を保持する染色体固定プラスミドのマップを、図９に示す。【０２４０】
１−３）レシピエント株ＳＣ１７（０）  ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０  ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０  Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）の構築
ａｔｔＬｐｈｉ８０及びａｔｔＲｐｈｉ８０に隣接したｋａｎ遺伝子、ならびに標的染色体部位に相同な４０ｂｐ配列を含むＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントのλＲｅｄ依存的な組込み（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）、続いて、カナマイシン耐性マーカーのファージｐｈｉ８０  Ｉｎｔ／Ｘｉｓ依存的な除去（Ａｎｄｒｅｅｖａ  ＩＧ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０）を含む２段階の手法を用いて、ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０及びΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０染色体改変を、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７（０）株に段階的に導入した。ＳＣ１７（０）は、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＡＪ１３３５５のλＲｅｄ耐性誘導体である（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）；Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＡＪ１３３５５の注釈付完全ゲノム配列は、ＰＲＪＤＡ１６２０７３又はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＰ０１２０３２．１及びＡＰ０１２０３３．１として利用可能である。ｐＭＷａｔｔｐｈｉプラスミド［Ｍｉｎａｅｖａ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３］を鋳型として用いて、プライマー１１及び１２、ならびにプライマー１３及び１４（表６）をプライマーとして用いて、それぞれａｍｐＨ及びａｍｐＣ遺伝子領域への組込みに使用されるＤＮＡフラグメントを生成した。プライマー１５及び１６、ならびにプライマー１７及び１８（表６）を、得られた染色体改変物のＰＣＲ検証に用いた。【０２４１】
並行して、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＡＪ１３３５５ゲノムの一部である、ｐＥＡ３２０  ３２０ｋｂメガプラスミド上に位置するｃｒｔオペロンの代わりにｐｈｉ８０ファージのａｔｔＢ部位を保持するＰ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７（０）の誘導体を構築した。この株を得るために、ゲノム中の標的部位に相同な４０ｂｐ領域に隣接したａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０を保持するＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントのλＲｅｄ依存的な組込みを、以前に記載された手法（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）にしたがって行った。ａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０によるｃｒｔオペロンの置換に用いられるＤＮＡフラグメントを、プライマー１９及び２０（表６）を用いる反応で増幅した。ｐＭＷａｔｔｐｈｉプラスミド（Ｍｉｎａｅｖａ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８；８：６３）を、この反応で鋳型として用いた。得られた組込み体を、ＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０と名付けた。プライマー２１及び２２（表６）を、ＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＬｐｈｉ８０−ｋａｎ−ａｔｔＲｐｈｉ８０．の染色体構造のＰＣＲ検証に用いた。構築株からのカナマイシン耐性マーカーの除去を、既報の手法に従いｐＡＨ１２９−ｃａｔヘルパープラスミドを用いて行った（Ａｎｄｒｅｅｖａ  ＩＧ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０）。オリゴヌクレオチド２１及び２２を、得られたＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０株のＰＣＲ検証に用いた。得られたΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０、ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０及びΔｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０ゲノム改変物のマップをそれぞれ、図１０（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）に示す。【０２４２】
上記ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）プラスミドを、既報のプロトコル（Ａｎｄｒｅｅｖａ  ＩＧ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０）にしたがってＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０のａｔｔＢｐｈｉ８０部位に組み込んだ。プラスミドの組込みを、プライマー２１及び２３、ならびにプライマー２２及び２４（表６）を用いたポリメラーゼ連鎖反応で確認した。その結果、ＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）株を得た。Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）改変物のマップを、図１１（Ａ）に示す。
その後、ゲノムＤＮＡエレクトロポレーション手法（Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４）を介してＳＣ１７（０）Δｃｒｔ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）の遺伝形質をＳＣ１７（０）  ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０  ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０へ移行させた。得られた株はテトラサイクリン耐性遺伝子ｔｅｔＲＡをマーカーとして利用している。ｔｅｔＲＡマーカー遺伝子を含むｐＡＨ１６２−Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）組込み型プラスミドのベクター部分を、既報のｐＭＷ−ｉｎｔｘｉｓ−ｃａｔヘルパープラスミド［Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，２００９；１０：３４］を用いて除去した。その結果、マーカー遺伝子欠損株ＳＣ１７（０）  ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢφ８０  ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢφ８０  Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）を得た。Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）ゲノム改変物のマップを、図１１（Ｂ）に示す。【０２４３】
１−４）ＳＷＩＴＣＨ株のセットの構築
ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩプラスミドを、既報のプロトコル（Ａｎｄｒｅｅｖａ  ＩＧ  ｅｔ  ａｌ．  ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．  ２０１１；３１８（１）：５５−６０）にしたがい、ＳＣ１７（０）ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢφ８０  ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢφ８０  Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）／ｐＡＨ１２３−ｃａｔ株の染色体に組み込んだ。５０ｍｇ／Ｌカナマイシンを含むＬＢアガー上に細胞を撒いた。増殖したＫｍＲクローンを、プライマー１１及び１５、ならびにプライマー１１及び１７（表６）を用いたＰＣＲ反応で試験した。ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢφ８０又はΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢφ８０ｍに組み込まれたｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩプラスミドを保持する株を選択した。ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ、ΔａｍｐＣ：：Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ染色体改変物のマップを、図１２（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）に示す。【０２４４】
ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ（ここで、Ｐｘは、以下の調節領域のうちの一つである：ａｒａＣ−Ｐａｒａ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＰｌｌｄＤ、ＰｐｈｏＣ、ＰｐｓｔＳ）を、既報のプロトコル［Ａｎｄｒｅｅｖａ  ＩＧ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．，２０１１；３１８（１）：５５−６０］にしたがってｐＡＨ１２３−ｃａｔヘルパープラスミドを用いてＳＣ１７（０）  ΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ  ΔａｍｐＨ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０  Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）及びＳＣ１７（０）  ΔａｍｐＣ：：ａｔｔＢｐｈｉ８０  ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｋｍ−Ｐｔａｃ−ＫＤｙＩ  Δｃｒｔ：：Ｐｔａｃ−ｍｖｋ（Ｍ．ｐａｌｕｄｉｃｏｌａ）レシピエント株のａｔｔＢｐｈｉ８０部位に挿入した。その結果、ＳＷＩＴＣＨ−Ｐｘ−１及びＳＷＩＴＣＨ−Ｐｘ−２とそれぞれ名付けられた２セットの株を得た。ΔａｍｐＨ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ及びΔａｍｐＣ：：ｐＡＨ１６２−Ｐｘ−ｍｖａＥＳ染色体改変物のマップを図１３に示す。【０２４５】
【表６】
2017051928.tif 000007
【０２４６】
実施例４：ＳＣ１７（０）ΔｇｃｄとＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣΔｇｃｄの構築
Ｐ．アナナティスのｇｃｄ遺伝子は、グルコースデヒドロゲナーゼをコードしており、Ｐ．アナナティスは好気性増殖中にグルコン酸を蓄積することが知られている（Ａｎｄｒｅｅｖａ  ＩＧら，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．２０１１  Ｍａｙ；３１８（１）：５５−６０）。【０２４７】
プライマーｇｃｄ−ａｔｔＬ及びｇｃｄ−ａｔｔＲ（表７）及び鋳型としてｐＭＷ１１８−ａｔｔＬ−ｋａｎ−ａｔｔＲプラスミドを用いるＰＣＲで得られたＤＮＡフラグメントのλＲｅｄ依存的な組込み（Ｍｉｎａｅｖａ  ＮＩら，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；８：６３）を用いて、ｇｃｄ遺伝子が破壊されたＳＣ１７（０）Δｇｃｄ株を構築する。組込み体を確認するため、プライマーｇｃｄ−ｔ１及びｇｃｄ−ｔ２（表７）を用いる。【０２４８】
ＳＣ１７（０）Δｇｃｄ株のゲノムＤＮＡを、Ｗｉｚａｒｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（プロメガ）を用いて単離し、既報の方法〔Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩら，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００９；１０：３４〕にしたがってＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株のマーカーを含まない誘導体中に電気形質転換する。その結果、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ−Δｇｃｄ（ＫｍＲ）株を得る。プライマーｇｃｄ−ｔ１及びｇｃｄ−ｔ２（表７）を、得られた組込み体のＰＣＲ解析に用いる。カナマイシン耐性マーカー遺伝子を、標準的なλＩｎｔ／Ｘｉｓ媒介手法〔Ｋａｔａｓｈｋｉｎａ  ＪＩら，ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００９；１０：３４〕にしたがって得る。得られた株を、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株と命名する。【０２４９】
【表７】
2017051928.tif 000008
【０２５０】
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣのコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーションによりｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊あるいはｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ｐＡＣＹＣ１７７、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊と命名した。【０２５１】
実施例５：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
実施例４で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む表８に記載の発酵培地５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２５２】
【表８】
2017051928.tif 000009
【０２５３】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２５４】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。【０２５５】
気化室温度      ３６０．０℃
注入量          １．０μＬ
注入モード      スプリット  １：１０
キャリアガス    Ｈｅ
制御モード      線速度
圧力            １２５．５ｋＰａ
全流量          ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量      １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度          ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量      ３．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２５６】
カラムオーブン温度プログラム  合計時間        ２１．５分
レート（℃／ｍｉｎ）  温度（℃）  ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０      ５．０
５．０                １０５．０    ０．５
３５．０              ２９７．５    ２．５
検出器温度            ３７５．０℃
検出器                ＦＩＤ
メイクアップガス      Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量              ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気                  ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２５７】
リナロール濃度は培地量に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表９に示す。リナロールシンターゼ発現株においてリナロールを生産していることが示された。【０２５８】
【表９】
2017051928.tif 000010
【０２５９】
実施例６：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
実施例４で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーションによりｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊あるいはｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名した。【０２６０】
得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む表１０に記載の発酵培地５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２６１】
【表１０】
2017051928.tif 000011
【０２６２】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２６３】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。【０２６４】
気化室温度            ３６０．０℃
注入量                １．０μＬ
注入モード            スプリット  １：１０
キャリアガス          Ｈｅ
制御モード            線速度
圧力                  １２５．５ｋＰａ
全流量                ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量            １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度                ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量            ３．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２６５】
カラムオーブン温度プログラム  合計時間        ２１．５分
レート（℃／ｍｉｎ）      温度（℃）          ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０                    ５．０
５．０                    １０５．０                  ０．５
３５．０                  ２９７．５                  ２．５
検出器温度            ３７５．０℃
検出器                ＦＩＤ
メイクアップガス      Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量              ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気                  ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２６６】
リナロール濃度は培地量に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表１１に示す。対照ベクターｐＡＣＹＣ１７７を導入した対照株ではリナロール生産は認められなかったが、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株においてリナロール生産が確認された。【０２６７】
【表１１】
2017051928.tif 000012
【０２６８】
実施例７：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
７−１）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼ（ＳｃＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＤＳ５７０６９２）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＥＤＹ５２２６３）は既に知られている（Ｎａｋａｎｏ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．Ｖｏｌｕｍｅ  １２，Ｉｓｓｕｅ  １６，ｐａｇｅｓ  ２４０３−２４０７）。Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号６１、及び配列番号６２に示す。ＳｃＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、これをｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳの塩基配列を配列番号６３に示す。ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳと名付けた。【０２６９】
７−２）ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ＊遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号６４に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号６５に示したプライマーと配列番号１３に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を構築した。【０２７０】
７−３）ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号６６に示したプライマーを用いてｐＵＣ５７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ断片を制限酵素Ｐｓｔ  ＩとＳｃａ  Ｉで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳを構築した。【０２７１】
７−４）発現量を至適化したｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ＊遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号６７に示したプライマーと配列番号１３に示したプライマーを用いて実施例１で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、ＣｓＬＩＮＳ上流の配列が一部変更されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片を得た。精製したＣｓＬＩＮＳ上流の配列が一部変更されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、構築されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊発現プラスミドをｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊と名付けた。【０２７２】
７−５）発現量を至適化したｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの構築
配列番号６７に示したプライマーと配列番号６８に示したプライマーを用いて実施例１で取得したｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＣｓＬＩＮＳの上流の配列が一部変更されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ断片を得た。精製したＣｓＬＩＮＳ上流の配列が一部変更されたｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、構築されたプロモーター改変ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ発現プラスミドをｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳと名付けた。【０２７３】
７−６）Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ（クソニンジン）由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ由来リナロールシンターゼ（ＡｎＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＡＦ１５４１２５）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＡＡＦ１３３５７）は既に知られている（Ｊｉａ  ＪＷ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  ３７２，  １４３−１４９）。さらに、他にもＡｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ由来リナロールシンターゼ遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＡＦ１５４１２４）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＡＡＦ１３３５６）が既に知られている。前者のＡｒｔｅｍｉｓｉａ  ａｎｎｕａ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号６９、及び配列番号７０に示す。ＡｎＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、さらに葉緑体移行シグナルが切断されたＡｎＬＩＮＳ遺伝子を設計し、これをｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳの塩基配列を配列番号７１に示す。ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳと名付けた。【０２７４】
７−７）Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ（レモンマートル）由来リナロールシンターゼ遺伝子の取得
Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ由来リナロールシンターゼ（ＢｃＬＩＮＳ）遺伝子の塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＡＢ４３８０４５）、及びアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ：ＢＡＧ８２８２５）は既に知られている（Ｓｕｇｉｕｒａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１１）  Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ７５，  １２４５−８）。Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ由来リナロールシンターゼタンパク質のアミノ酸配列、及び遺伝子の塩基配列を配列番号７２、及び配列番号７３に示す。ＢｃＬＩＮＳ遺伝子を効率的に発現させる為、コドンを最適化し、さらに葉緑体移行シグナルが切断されたＢｃＬＩＮＳ遺伝子を設計し、これをｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳと名付けた。ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳの塩基配列を配列番号７４に示す。ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳ遺伝子にｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）を付加したＤＮＡは化学合成された後、ｐＭＷ１１９（株式会社ニッポンジーン製）にクローニングされ、得られたプラスミドをｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳと名付けた。【０２７５】
７−８）ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ＊遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号７５に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号７６に示したプライマーと配列番号１３に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を構築した。【０２７６】
７−９）ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ＊遺伝子の同時発現プラスミドの構築
配列番号９に示したプライマーと配列番号７７に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳ断片を得た。さらに、配列番号７８に示したプライマーと配列番号１３に示したプライマーを用いてｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳ断片、及びｉｓｐＡ＊断片を制限酵素ＰｓｔＩとＳｃａＩで消化したｐＡＣＹＣ１７７（株式会社ニッポンジーン製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を構築した。【０２７７】
実施例８：Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７におけるリナロール発酵
８−１）Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例７で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊あるいはｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳを導入した。得られた株をそれぞれ、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＳｃＬＩＮＳ株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＰ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株と命名した。【０２７８】
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。【０２７９】
８−２）Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＳｃＬＩＮＳ株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株、並びに、実施例３で構築したＰ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ｐＡＣＹＣ１７７株、及びＰ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、Ｐ．ａｎａｎａｔｉｓ  ＳＣ１７／ＡａＬＩＮＳ株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地（表１２）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２８０】
【表１２】
2017051928.tif 000013
【０２８１】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２８２】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。【０２８３】
気化室温度                        ３６０．０℃
注入量                            １．０μＬ
注入モード                        スプリット  １：１０
キャリアガス                      Ｈｅ
制御モード                        線速度
圧力                              １２５．５ｋＰａ
全流量                            ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量                        １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度                            ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量                        ３．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２８４】
カラムオーブン温度プログラム  合計時間  ２１．５ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ）  温度（℃）  ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０              ５．０
５．０                １０５．０            ０．５
３５．０              ２９７．５            ２．５
検出器温度                        ３７５．０℃
検出器                            ＦＩＤ
メイクアップガス                  Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量                          ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気                              ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ【０２８５】
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表１３に示す。対照ベクターｐＡＣＹＣ１７７を導入した対照株以外の全ての株においてリナロール生産が確認された。【０２８６】
【表１３】
2017051928.tif 000014
【０２８７】
実施例９：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
９−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
参考実施例１で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株より常法に従いマーカーを除去後、コンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例７で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳあるいは実施例１で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＳｃＬＩＮＳ株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＡａＬＩＮＳ株と命名した。【０２８８】
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。【０２８９】
９−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＳｃＬＩＮＳ株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＡａＬＩＮＳ株、実施例４で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ｐＡＣＹＣ１７７株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む実施例８に記載の発酵培地（表１２）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２９０】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２９１】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。【０２９２】
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表１４に示す。【０２９３】
【表１４】
2017051928.tif 000015
【０２９４】
実施例１０：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
１０−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
実施例４で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例７で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＳｃＬＩＮＳ、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ２−ｏｐｔ＿ＣｓＬＩＮＳ、あるいは実施例１で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ株と命名した。【０２９５】
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。【０２９６】
１０−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ株、実施例６で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む実施例８に記載の発酵培地（表１２）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。【０２９７】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０２９８】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。【０２９９】
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表１５に示す。【０３００】
【表１５】
2017051928.tif 000016
【０３０１】
実施例１１：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
１１−１）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株へ形質転換可能なプラスミド
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３は自然形質転換が可能であることは既に知られている。プラスミドｐＴＣＰ２０３１Ｖには、ｓｌｒ２０３０、ｓｌｒ２０３１のコーディング領域の一部の配列、クロラムフェニコール耐性遺伝子の配列、ｐｓｂＡ２（ｓｌｒ１３１１）プロモーター配列等が含まれており、ｓｌｒ２０３０、ｓｌｒ２０３１のコーディング領域を相同配列とすることでＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３株のゲノム組換えが可能である（Ｈｏｒｉｕｃｈｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ４３１：１３５−１４０）。プラスミドｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６には、ｓｌｌ０８２２、ｓｌｒ０８４６、ｓｌｌ０８２１のコーディング領域の一部の配列、カナマイシン耐性遺伝子の配列等が含まれており、ｓｌｒ０８４６、ｓｌｌ０８２１のコーディング領域を相同配列とすることでＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３株のゲノム組換えが可能である（Ｍｉｄｏｒｉｋａｗａ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３（１）：１６４−１７２）。これらのプラスミドを東京大学大学院総合文化研究科の池内昌彦教授から分譲いただいた。【０３０２】
１１−２）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの構築
配列番号７９に示したプライマーと配列番号８０に示したプライマーを用いて、実施例１で取得されたｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片を得た。精製したｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片及び制限酵素ＮｄｅＩで消化したｐＴＣＰ２０３１ＶにＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＴＣＰ２０３１Ｖ−ＰｐｓｂＡ２−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを構築した。【０３０３】
１１−３）ｉｓｐＡ＊遺伝子発現用プラスミドの構築
配列番号８１に示したプライマーと配列番号８２に示したプライマーを用いて、実施例１で取得されたｐＭＷ１１９−ｉｓｐＡ＊を鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したｉｓｐＡ＊断片及び制限酵素ＡａｔＩＩとＨｐａＩで消化したｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＴＫＨＴ０８４６−Ｐｔａｃ−ｉｓｐＡ＊を構築した。【０３０４】
実施例１２：Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株におけるリナロール生産
１２−１）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの導入
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株を既報に従い形質転換を行った（国際公開２０１５／１１５５２０Ａ１号）。Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株のＯ．Ｄ７３０＝０．５〜１．０の培養液１ｍＬに対し、構築したプラスミドｐＴＣＰ２０３１Ｖ−ＰｐｓｂＡ２−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを１〜２μｇ混合し、これを細胞−ＤＮＡ混合液とした。Ｏ．Ｄ．値は９６穴プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  Ｍ２ｅ）によって７２０ｎｍで測定した。以下、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株を用いた培養のＯ．Ｄ．値は本機器で測定した。薬剤無添加のＢＧ−１１寒天培地（表１６）にニトロセルロース膜（ミリポア、界面活性剤フリー、孔径０．２μｍ、型番：ＨＡＴＦ０８２５０）をのせ、細胞−ＤＮＡ混合液を塗布した。１８〜２４時間、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で培養した後、クロラムフェニコールが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）にニトロセルロース膜を移した。その後２〜４週間、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で培養し、出現したコロニーを新しいクロラムフェニコールが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）へ植え継いだ。この植え継ぎ操作を３〜４回繰り返し、得られたコロニーについて、配列番号８３に示したプライマーと配列番号８４に示したプライマーを用いてコロニーＰＣＲを行った。ゲノム中の目的の場所に目的の大きさのＤＮＡ断片が挿入されていることを確認し、得られた株をＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ株と命名した。【０３０５】
上記で得られた株を、クロラムフェニコールが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）で生育させた。菌体をイノキュレーティングループ１μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、６穴プレート（コーニング社製、型番：３５１１４６）中のクロラムフェニコールが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１液体培地（表１６）５ｍＬへ接種した。ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ  ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社  ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で約３日間培養した。その培養液約１ｍＬを７０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、室温で遠心して集菌し、上清を除去しＢＧ−１１液体培地（表１６）にジメチルスルホキシドを終濃度５％になるように加えて調製したストック溶液を添加し懸濁した後、適当量ずつ分注し、フリーズストックとして−８０℃に保存した。【０３０６】
１２−２）ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ株へのｉｓｐＡ＊遺伝子発現用プラスミドの導入
１２−１と同様の方法で形質転換を行った。ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ株のＯ．Ｄ７３０＝０．５〜１．０の培養液１ｍＬに対し、構築したプラスミドｐＴＫＨＴ０８４６−Ｐｔａｃ−ｉｓｐＡ＊を１〜２μｇ混合し、これを細胞−ＤＮＡ混合液とした。薬剤無添加のＢＧ−１１寒天培地（表１６）にニトロセルロース膜（ミリポア、界面活性剤フリー、孔径０．２μｍ、型番：ＨＡＴＦ０８２５０）をのせ、細胞−ＤＮＡ混合液を塗布した。１８〜２４時間、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で培養した後、クロラムフェニコール、及びカナマイシンがそれぞれ２０ｍｇ／Ｌずつ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）にニトロセルロース膜を移した。その後２〜４週間、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で培養し、出現したコロニーを新しいクロラムフェニコール、及びカナマイシンがそれぞれ２０ｍｇ／Ｌずつ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）へ植え継いだ。この植え継ぎ操作を３〜４回繰り返し、得られたコロニーについて、配列番号８５に示したプライマーと配列番号８６に示したプライマーを用いてコロニーＰＣＲを行った。ゲノム中の目的の場所に目的の大きさのＤＮＡ断片が挿入されていることを確認し、得られた株をＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ＿０８４６Ｋ−ｉｓｐＡ＊株と命名した。【０３０７】
上記で得られた株を、クロラムフェニコール及びカナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）で生育させ、そこから菌体をイノキュレーティングループ１μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、６穴プレート（コーニング社製、型番：３５１１４６）中のクロラムフェニコール、及びカナマイシンがそれぞれ２０ｍｇ／Ｌずつ添加されたＢＧ−１１液体培地（表１６）５ｍＬへ接種した。ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ  ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社  ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で約３日間培養した。その培養液約１ｍＬを７０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、室温で遠心して集菌して上清を除去し、ＢＧ−１１液体培地（表１６）にジメチルスルホキシドを終濃度５％になるように添加して調製したストック溶液を加え懸濁した後、適当量ずつ分注し、フリーズストックとして−８０℃に保存した。【０３０８】
１２−３）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株、ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ＿０８４６Ｋ−ｉｓｐＡ＊株のフリーズストックを融解し、５０μＬを必要な薬剤を含むＢＧ−１１寒天培地（表１６）に均一に塗布し、３４℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓの条件で約７日間培養した。Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株は薬剤無添加で培養し、ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ株はクロラムフェニコールを２０ｍｇ／Ｌ添加して培養し、ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ＿０８４６Ｋ−ｉｓｐＡ＊株はクロラムフェニコール、及びカナマイシンをそれぞれ２０ｍｇ／Ｌずつ添加した上で培養を実施した。得られた寒天培地上の菌体を、イノキュレーティングループ１μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループを用いて適当量掻き取り、６穴プレート（コーニング社製、型番：３５１１４６）中の必要な薬剤を含むＢＧ−１１液体培地（表１６）５ｍＬへ接種した。培養条件は、ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ  ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社  ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３０℃、ＣＯ２濃度１％、光強度５０μＥ／ｍ２／ｓとし、約３日間培養した。この培養液を用いてＯ．Ｄ７３０＝０．０５になるように５０ｍＬ容三角フラスコ（ＨＡＲＩＯ）中の必要な薬剤を含む培養用ＢＧ−１１液体培地（表１６）１０ｍＬへ接種し、ＬＥＤ光照射ユニット（ＬＣ−ＬＥＤ  ４５０Ｗ（白色））を設置した旋回振とう培養装置（タイテック株式会社  ＮＲ−２０あるいはＮＲ−３０）で６０ｒｐｍ、３０℃、ＣＯ２濃度１％、光強度１００μＥ／ｍ２／ｓの条件で約６日間培養した。【０３０９】
【表１６】
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【０３１０】
液体培地は、ＩＩ液を５０ｍＬ、ＩＩＩ液を２ｍＬ、ＩＶ液を１ｍＬ、Ａ６液を１ｍＬ，１Ｍ  ＴＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ８．２）を２０ｍＬ，ＲＯ水を９２６ｍＬ混合し、ＡＣ１２１℃、２０分し、同じくＡＣ１２１℃、２０分したＩ液を２ｍＬ混合した。【０３１１】
寒天培地は、Ｉ液を１ｍＬ、ＩＩ液を２５ｍＬ、ＩＩＩ液を１ｍＬ、ＩＶ液を０．５ｍＬ、Ａ６液を０．５ｍＬ、チオ硫酸ナトリウム（無水）を１．５ｇ、１Ｍ  ＴＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ  ７．８）を１０ｍＬ、ＲＯ水を２６１ｍＬ混合し、ＡＣ１２１℃、２０分した溶液と、同じくＡＣ１２１℃、２０分したＢａｃｔｏＡｇａｒ（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社製）７．５ｇとＲＯ水２００ｍＬの混合液を全量混合した。【０３１２】
三角フラスコに分注した１０ｍＬの培養用ＢＧ−１１液体培地（表１６）に対して２ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０３１３】
培養開始から約６日後に、ミリスチン酸イソプロピルのリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製、長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。【０３１４】
リナロールは培養液中の蓄積濃度に換算した値として示す。三角フラスコ２本の結果の平均値を表１７に示す。対照株のＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株ではリナロール生産は認められなかったが、ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ株は、ＧＴ２０３１Ｃ−ＡａＬＩＮＳ＿０８４６Ｋ−ｉｓｐＡ＊株においてリナロール生産が確認された。【０３１５】
【表１７】
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【０３１６】
実施例１３：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
１３−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
実施例４で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例７で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡｎＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＢｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡｎＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＢｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株と命名した。【０３１７】
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。【０３１８】
１３−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡｎＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＢｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及び実施例６で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地（表１８）５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて４８時間培養した。【０３１９】
【表１８】
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【０３２０】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０３２１】
培養開始から４８時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。【０３２２】
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。試験管２本の結果の平均値を表１９に示す。【０３２３】
【表１９】
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【０３２４】
実施例１４：ジャーファーメンターを用いたミリスチン酸イソプロピル無添加条件（単相条件）でのリナロール発酵
実施例６で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及び実施例１０で構築したＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株を試験に用いた。グリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１８時間培養した。得られた菌体をプレートより回収した。続いて、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地（表２０）３００ｍＬを１Ｌ容積のジャーファーメンターに注入した。そして、開始Ｏ．Ｄ．が０．１になるように植菌した。発酵培地は滅菌完了後に表２０に記載のＡ区、Ｂ区を混合した。培養温度を３０℃、通気量を１ｖｖｍとし、撹拌により溶存酸素濃度を６％以上に、アンモニアガスを用いて培養ｐＨを６．５に制御しながら３０時間培養した。【０３２５】
【表２０】
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【０３２６】
培養開始後、適宜サンプリングし、Ｏ．Ｄ．値とリナロールの分析を実施した。リナロール濃度はガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。【０３２７】
培養終了時のリナロール濃度とＯ．Ｄ．値を表２１に示し、経時変化のグラフをそれぞれ図１５、図１６に示す。【０３２８】
【表２１】
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【０３２９】
表２１、図１５及び１６（ジャー培養の結果）からＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株に対して生育阻害を起こす６２６ｍｇ／Ｌのリナロール濃度に達してもリナロール発酵は可能であることが示された。参考例１において培地中のリナロールを６２５ｍｇ／Ｌ以下に抑えて培養することが好ましいことが示唆されていたが、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株は宿主に毒性を与える濃度以上のリナロールを蓄積し、十分な生育を伴いながら培養が可能であった。実施例１４の結果は、培養条件に拘らず生育阻害が起きにくく、効率的なリナロール発酵が可能であることを示している。【０３３０】
【表２２】
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【０３３１】
実施例１５：リナロールシンターゼデータベース検索
サルナシ由来リナロールシンターゼ（ＧｅｎＰｅｐｔ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  ＡＤＤ８１２９４．１）のアミノ酸配列を問い合わせ配列とし、ＢＬＡＳＴＰプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，"Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ．"Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０，１９９０）によりｎｏｎ  ｒｅｄｕｎｄａｎｔデータベースに対して相同性検索を行った。また、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌデータベース（Ｋｕｍａｒｉ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，“ＥｓｓＯｉｌＤＢ：ａ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｏｉｌｓ  ｒｅｆｌｅｃｔｉｎｇ  ｔｅｒｐｅｎｅ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｌａｎｔ  ｋｉｎｇｄｏｍ”Ｄａｔａｂａｓｅ，２０１４，１−１２  ｄｏｉ：１０．１０９３／ｄａｔａｂａｓｅ／ｂａｕ１２０）よりリナロールを産生する事が報告されている植物名を検索した。二つの結果を照らし合わせる事で、リナロール生産能が知られた植物種よりリナロールシンターゼの候補を抽出した。更に、候補となる配列の参照文献を確認し、リナロールシンターゼとしての機能が期待された１３種の酵素を抽出した（表２３）。これら１３種の酵素のアミノ酸配列について、葉緑体移行シグナル配列をＳｉｇｎａｌＰあるいは表２４に記載のある文献情報に従い調査した。シグナル配列の存在が示唆されるものについては、予想されるシグナル配列を除き、成熟体のアミノ酸配列を得た。これらのアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を配列番号８９〜１０１に示す（表２３：Ｍ１〜Ｍ１３）。これらについて、コドン利用をＰａｎｔｏｅａ  ａｎａｎａｔｉｓに最適化した配列に基づき遺伝子合成を行った。コドン利用最適化後のＤＮＡ配列を配列番号１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６に示す（表２４：Ｍ１４，Ｍ１６，Ｍ１８，Ｍ２０，Ｍ２２，Ｍ２４，Ｍ２６，Ｍ２８，Ｍ３０，Ｍ３２，Ｍ３４，Ｍ３６，Ｍ３８）。これらのＤＮＡ配列に対し、表２５に示す遺伝子名を付与した。これらのＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列を配列番号１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７に示す（表２４：Ｍ１５，Ｍ１７，Ｍ１９，Ｍ２１，Ｍ２３，Ｍ２５，Ｍ２７，Ｍ２９，Ｍ３１，Ｍ３３，Ｍ３５，Ｍ３７，Ｍ３９）。コドン利用最適化後の各遺伝子のＤＮＡを化学合成により得た後、ｐＵＣ５７にクローニングした。得られたプラスミドの名称を表２５に記す。【０３３２】
【表２３】
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【０３３３】
【表２４】
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【０３３４】
〔表２４の脚注〕
（１）はコドン至適化後のＤＮＡ配列に相当する配列表の配列番号［記号］
（２）は試験に用いたリナロールシンターゼのアミノ酸配列に該当する配列表の配列番号【０３３５】
【表２５】
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【０３３６】
実施例１６：各種リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
１６−１）Ａｔ１ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ２８（配列番号１２８）とプライマーＱ２９（配列番号１２９）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−Ａｔ１ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ａｔ１ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含むＤＮＡ断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３３７】
１６−２）Ａｔ２ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３０（配列番号１３０）とプライマーＱ３１（配列番号１３１）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−ＡＴ２ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ａｔ２ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３３８】
１６−３）ＭｄＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３２（配列番号１３２）とプライマーＱ３３（配列番号１３３）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−ＭｄＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＭｄＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３３９】
１６−４）ＰｆＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３４（配列番号１３４）に示した配列とプライマーＱ３５（配列番号１３５）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−ＰｆＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＰｆＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３４０】
１６−５）Ｖｖ１ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３６（配列番号１３６）とプライマーＱ３７（配列番号１３７）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−Ｖｖ１ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｖｖ１ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３４１】
１６−６）Ｖｖ２ＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ３８（配列番号１３８）とプライマーＱ３９（配列番号１３９）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−Ｖｖ２ＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｖｖ２ＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３４２】
１６−７）ＭｃＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ４０（配列番号１４０）とプライマーＱ４１（配列番号１４１）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−ＭｃＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＭｃＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３４３】
１６−８）ＯｂＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ４２（配列番号１４２）とプライマーＱ４３（配列番号１４３）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−ＯｂＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＯｂＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３４４】
１６−９）ＣｂＬＩＮＳ、及びｉｓｐＡ*遺伝子の同時発現プラスミドの構築
プライマーＱ４４（配列番号１４４）とプライマーＱ４５（配列番号１４５）を用いて、表２５に記載のｐＵＣ５７−ＣｂＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、ＣｂＬＩＮＳ断片を得た。さらにプライマーＱ４６（配列番号１４６）とプライマーＱ４７（配列番号１４７）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｐＡＣＹＣ１７７とｔａｃプロモーター領域（ｄｅＢｏｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，２１−２５）およびｉｓｐＡ*を含む断片を得た。これら２種のＤＮＡ断片をＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＡＣＹＣ１７７−ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３４５】
実施例１７：ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
１７−１）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株へのリナロールシンターゼ発現プラスミドの導入
実施例４で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株のコンピテントセルを調製し、エレクトロポレーション法により実施例１６で構築したｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*、ｐＡＣＹＣ１７７−ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*あるいはｐＡＣＹＣ１７７を導入した。得られた株をそれぞれ、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株と命名した。【０３４６】
上記で得られた株を５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートにて３４℃、１６時間培養した後、プレート上の菌体をイノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて適当量掻き取り、２０％グリセロール溶液に懸濁し、適当量ずつ分注した上で−８０℃に保存した。【０３４７】
１７−２）ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ａｔ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ａｔ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＭｄＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＰｆＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｖｖ１ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｖｖ２ＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＭｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＯｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＣｂＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ｐＡＣＹＣ１７７株のグリセロールストックを融解し、各株の菌体懸濁液５０μＬを５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含むＬＢプレートに均一に塗布し、３４℃にて１６時間培養した。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／４程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中の、５０ｍｇ／Ｌのカナマイシンを含む以下に記載の発酵培地５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて２４時間培養した。発酵培地を表２６に示す。【０３４８】
【表２６】
2017051928.tif 000027
【０３４９】
滅菌完了後に上記Ａ区、Ｂ区、Ｃ区を混合した。試験管に分注した５ｍＬの発酵培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加した。【０３５０】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて以下に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製  長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。測定用のサンプルは適宜エタノール（和光純薬工業株式会社製）で希釈した。【０３５１】
気化室温度            ３６０．０℃
注入量                １．０μＬ
注入モード            スプリット  １：１０
キャリアガス          Ｈｅ
制御モード            線速度
圧力                  １２５．５ｋＰａ
全流量                ２０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量            １．５９ｍＬ／ｍｉｎ
線速度                ３６．３ｃｍ／ｓｅｃ
パージ流量            ３．０ｍＬ／ｍｉｎ【０３５２】
カラムオーブン温度プログラム  合計時間  ２１．５ｍｉｎ
レート（℃／ｍｉｎ）  温度（℃）  ホールド時間（ｍｉｎ）
６５．０              ５．０
５．０                １０５．０            ０．５
３５．０              ２９７．５            ２．５
検出器温度            ３７５．０℃
検出器                ＦＩＤ
メイクアップガス      Ｈｅ（３０．０ｍＬ／ｍｉｎ）
水素流量              ４０．０ｍＬ／ｍｉｎ
空気                  ４００．０ｍＬ／ｍｉｎ【０３５３】
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。ミリスチン酸イソプロピル添加条件の試験管２本の結果の平均値を表２７に示す。【０３５４】
【表２７】
2017051928.tif 000028
【０３５５】
実施例１８：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
コリネ型細菌としてＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ（Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）２２５６株（ＡＴＣＣ１３８６９）を利用した（Ｏｋｕｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９６２，Ｓａｎｔａｍａｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｔｓｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）。Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍでｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子とｉｓｐＡ遺伝子を発現させる為のプラスミドは次の手順で構築した。配列番号１４８及び１４９に示したプライマー８１４及び８１５を用いて、実施例１で取得したｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片を取得した。次にＥｌｏｎｇａｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｔｕのプロモーター配列（以下、Ｐ０４８０）（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）を取得する目的でＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ２２５６株の染色体ＤＮＡを鋳型として、配列番号１５０及び１５１に示したプライマー８１２及び８１３を用いてＰＣＲを行い、Ｐ０４８０断片を取得した。続いてＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍとＥ．ｃｏｌｉのシャトルベクター・ｐＶＫ９（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）を制限酵素ＸｂａＩ（タカラバイオ社製）にて消化した（Ｍｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）。精製したｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片と、Ｐ０４８０のＰＣＲ産物、ＸｂａＩにて消化後精製したｐＶＫ９を、Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いて連結した。得られたｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*遺伝子発現用プラスミドをｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名し、このプラスミドの配列情報を配列番号１５２に示した。【０３５６】
実施例１９：Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ２２５６株におけるリナロール生産
１９−１）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ２２５６株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*遺伝子発現プラスミドの導入
Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ２２５６株を既報に従い形質転換を行った（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）。ｐＶＫ９、ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*の各プラスミドＤＮＡを導入し、カナマイシン２５μｇ／ｍｌを含むＣＭ−Ｄｅｘプレート培地（国際公開２０１３／１７９７２２Ａ１号）に塗布し、３０℃にて４８時間培養した。培養後のプレートから、カナマイシン耐性を示す形質転換体を取得し、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ２２５６株にｐＶＫ９が導入された株を２２５６／ｐＶＫ９株、ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*が導入された株を２２５６／ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名した。【０３５７】
１９−２）Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ２２５６株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
２２５６／ｐＶＫ９株、２２５６／ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株を、２５（ｍｇ／Ｌ）のカナマイシンを含むＣＭ−Ｄｅｘプレートに均一に塗布し、３０℃にて約１８時間培養した。培養後のプレートから、１／６プレート分の菌体を２５（ｍｇ／Ｌ）のカナマイシンを含むコリネ＿リナロール生産用培地（表２８）５ｍｌを張り込んだ太試験管に接種し、３０℃にて２４時間培養した。【０３５８】
【表２８】
2017051928.tif 000029
【０３５９】
太試験管に分注した５ｍＬのコリネ＿リナロール生産用培地（表２８）に対して１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業社製）を添加した。【０３６０】
培養開始から２４時間後に、ミリスチン酸イソプロピル、及び培養上清中のリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（島津製作所社製）を用いて実施例８と同じ条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント社製、長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬社製）を用いて調整した。【０３６１】
リナロール濃度は培地量に換算した値として示す。太試験管３本の結果の平均値を表３０に示す。対照株の２２５６／ｐＶＫ９株ではリナロール生産は認められなかったが、２２５６／ｐＶＫ９−Ｐ０４８０−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株においてリナロール生産が確認された（表２９）。【０３６２】
【表２９】
2017051928.tif 000030
【０３６３】
実施例２０：リナロールシンターゼ発現プラスミドの構築
２０−１）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株へ形質転換可能なプラスミド
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３は自然形質転換が可能であることは既に知られている。プラスミドｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６、ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６には、ｓｌｌ０８２２、ｓｌｒ０８４６、ｓｌｌ０８２１のコーディング領域の一部の配列、カナマイシン耐性遺伝子の配列等が含まれており、ｓｌｒ０８４６、ｓｌｌ０８２１のコーディング領域を相同配列とすることでＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３株のゲノム組換えが可能である（Ｍｉｄｏｒｉｋａｗａ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３（１）：１６４−１７２）。ｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６のプラスミドは東京大学大学院総合文化研究科の池内昌彦教授から分譲いただき、ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６はＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社製に全合成を依頼した。【０３６４】
２０−２）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの構築
配列番号１５３に示したプライマー６７１と配列番号１５４に示したプライマー６９１を用いて、実施例１で取得されたｐＭＷ１１９−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを鋳型にＰＣＲを行い、Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片を得た。精製したＰｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ断片及び制限酵素ＡａｔＩＩとＨｐａＩで消化したｐＴＫＨＴ０８４６−ｓｌｒ０８４６にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＴＫＨＴ０８４６−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳを構築した。【０３６５】
２０−３）ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊遺伝子発現用プラスミドの構築
配列番号１５５に示したプライマー７１９と配列番号１５６に示したプライマー７２１を用いて、実施例１で取得されたｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片及び制限酵素ＮｈｅＩで消化したｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６−ＰｐｓｂＡ２にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６−ＰｐｓｂＡ２−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊を構築した。【０３６６】
実施例２１：Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株におけるリナロール生産
２１−１）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ遺伝子発現プラスミドの導入
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株を実施例１１に記載した方法で形質転換を行った。ｐＴＫＨＴ０８４６−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳが導入された形質転換体の選抜のための薬剤としてカナマイシン２０ｍｇ／Ｌが添加された培地（表１６）を使用した。得られたコロニーについて、配列番号１５７及び１５８に示したプライマー６８３及び６８４を用いてコロニーＰＣＲを行った。ゲノム中の目的の場所に目的の大きさのＤＮＡ断片が挿入されていることを確認し、得られた株をＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株と命名した。【０３６７】
上記で得られた株を、カナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）で生育させた。実施例１２に記載した方法でフリーズストックを作製し、−８０℃に保存した。【０３６８】
２１−２）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株へのｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊遺伝子発現プラスミドの導入
実施例１１と同様の方法で形質転換を行った。ｐＵＣ５７−ｓｌｒ０８４６−ＰｐｓｂＡ２−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊が導入された形質転換体の選抜のための薬剤としてカナマイシン２０ｍｇ／Ｌが添加された培地（表１６）を使用した。得られたコロニーについて、配列番号１５７及び１５８に示したプライマー６８３及び６８４に示したプライマーを用いてコロニーＰＣＲを行った。ゲノム中の目的の場所に目的の大きさのＤＮＡ断片が挿入されていることを確認し、得られた株をＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株と命名した。【０３６９】
上記で得られた株を、カナマイシンが２０ｍｇ／Ｌ添加されたＢＧ−１１寒天培地（表１６）で生育させた。実施例１２に記載した方法でフリーズストックを作製し、−８０℃に保存した。【０３７０】
２１−３）Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株由来リナロールシンターゼ発現株のリナロール生産能の評価
Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株、ＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株について実施例１２と同様の方法でリナロール生産能の評価を行った。Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株は薬剤無添加で培養し、ＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株はカナマイシンを２０ｍｇ／Ｌ添加した上で培養を実施した。【０３７１】
培養開始から約６日後に、ミリスチン酸イソプロピルのリナロール濃度をガスクロマトグラフＧＣ−２０２５ＡＦ（株式会社島津製作所製）を用いて実施例８に記載の条件にて測定した。カラムはＤＢ−５（アジレント・テクノロジー株式会社製、長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）を使用し、リナロール標準液は試薬リナロール（和光純薬工業株式会社製）を用いて調製した。【０３７２】
リナロールは培養液中の蓄積濃度に換算した値として示す。三角フラスコ３本の結果の平均値を表３０に示す。対照株のＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．  ＰＣＣ６８０３  ＧＴ株ではリナロール生産は認められなかったが、ＧＴ０８４６Ｋ−Ｐｔａｃ−ＡａＬＩＮＳ株、ＧＴ０８４６Ｋ−ＰｐｓｂＡ２−ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株においてリナロール生産が確認された。【０３７３】
【表３０】
2017051928.tif 000031
【０３７４】
実施例２２：酵母からのＡｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ（サルナシ）由来リナロールシンターゼ発現プラスミド導入株の構築
２２−１）酵母でＡｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ由来リナロールシンターゼを発現するプラスミドの構築
プライマーＱ４８（配列番号１５９）とプライマーＱ４９（配列番号１６０）を用いて、実施例１で構築したプラスミドｐＡＣＹＣ１７７−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を鋳型にＰＣＲを行い、ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊断片を得た。精製したＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*断片を制限酵素ＫｐｎＩとＢａｍＨＩで消化したベクターｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）にＩｎ−Ｆｕｓｉｏｎ  ＨＤ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｋｉｔ（クロンテック社製）を用いて連結し、ｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を構築した。【０３７５】
２２−２）酵母へのＡｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ由来リナロール発現プラスミド導入
特許第５８５７９７３号公報に記載があるＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳ２８８Ｃ  ｕｒａ３Δ０株にｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*を導入した。【０３７６】
Ｓ２８８Ｃ  ｕｒａ３Δ０株は、ＹＰＤ液体培地に植菌して３０℃で１６時間培養した後に、その培養液０．６ｍｌを１０ｍｌに植え継いでさらに３０℃で２時間培養した後に全量を集菌してＦｒｏｚｅｎ−ＥＺ  Ｙｅａｓｔ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＩＩTMキット（ＺＹＭＯ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ  ＣＯＲＰ．製）を用いてコンピテントセルを調製した。作製したコンピテントセルをｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*で形質転換し、ＳＤ−Ｕｒａプレートに塗布した後に３０℃で３日間培養して形質転換体を得た。得られた株はＳ２８８Ｃ  ｕｒａ３Δ０／ｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*と命名した。ＹＰＤ培地の組成を表３１に、ＳＤ−Ｕｒａ培地の組成を表３２に示す。【０３７７】
【表３１】
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【０３７８】
【表３２】
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【０３７９】
実施例２３：酵母におけるリナロール生産
実施例２２で得られたＳ２８８Ｃ  ｕｒａ３Δ０／ｐＹＥＳ２−Ｐｔａｃ−ｏｐｔ＿ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株を、表３３に組成を示したＳＤ−Ｕｒａプレートに均一に塗布し、３０℃にて約２４時間培養する。得られたプレート上の菌体を、イノキュレーティングループ１０μＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）のループ部分１／２程度の量を掻き取り、ＡＧＣテクノグラス株式会社製試験管（直径×長さ×肉厚（ｍｍ）＝２５×２００×１．２）中のＳＤ−Ｕｒａ−Ｇａｌ培地５ｍＬに接種し、往復振とう培養装置で３０℃、１２０ｒｐｍの条件にて４８時間培養することでリナロールを得ることができる。ＳＤ−Ｕｒａ−Ｇａｌ培地の組成を表３３に示す。【０３８０】
【表３３】
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【０３８１】
試験管に分注した５ｍＬのＳＤ−Ｕｒａ−Ｇａｌ培地に対して、植菌後に１ｍＬのミリスチン酸イソプロピル（東京化成工業株式会社製）を添加する。【０３８２】
実施例２４：リナロールシンターゼに局所的に保存されたアミノ酸配列モチーフの探索
遺伝子合成をおこなった１３種のリナロールシンターゼを入力配列とし、局所的に保存されている配列を見出すことができるＭＥＭＥ（Ｔｉｍｏｔｈｙ  Ｌ．Ｂａｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｅｌｋａｎ，"Ｆｉｔｔｉｎｇ  ａ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｍｏｄｅｌ  ｂｙ  ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ  ｍａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｄｉｓｃｏｖｅｒ  ｍｏｔｉｆｓ  ｉｎ  ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ"，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐｐ．２８−３６，ＡＡＡＩ  Ｐｒｅｓｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，１９９４、ｈｔｔｐ：／／ｍｅｍｅ−ｓｕｉｔｅ．ｏｒｇ．）を用い、モチーフ探索を行った。ＭＥＭＥの検索オプションとして、部位の分布（ｓｉｔｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）条件は各配列に類似のモチーフが一つ存在する（Ｏｎｅ  ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ（ｏｆ  ａ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇ  ｍｏｔｉｆ  ｓｉｔｅ）ｐｅｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）、という条件を採用し、これ以外はデフォルト条件を利用して検索を行った。その結果、５つのモチーフを出力として得た（図１７〜２１）。各モチーフ配列を構成するアラインメントを図２２〜２６に示す。１３種のリナロールシンターゼにおいて、各モチーフの分布位置を図２７に示す。【０３８３】
続いて、見いだされたモチーフを文字列として規定する為に、モチーフを構成するアミノ酸残基が一意に決まる残基、或いは二種類のアミノ酸のみで規定される残基とそれ以外の残基に分類した。その後、モチーフ長が８から２０アミノ酸となるように規定し、表３４に示す６種のアミノ酸配列モチーフを得た。【０３８４】
これら６種類のアミノ酸配列モチーフについて検出感度を調べた。偽陰性の調査として、ＧｅｎＰｅｐｔデータベースより”ｌｉｎａｌｏｏｌ  ｓｙｎｔｈａｓｅ”のキーワード検索で抽出された１６８種のアミノ酸配列に対して６種のアミノ酸モチーフ配列の保存性をｆｕｚｚｐｒｏにより調べた。偽陽性の調査として、ＧｅｎＰｅｐｔデータベースより”ｌｉｍｏｎｅｎｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ”のキーワード検索で抽出された１５１種のアミノ酸配列に対して６種のアミノ酸モチーフ様配列が保存されているかをｆｕｚｚｐｒｏにより調べた（表３４）。【０３８５】
【表３４】
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【０３８６】
リナロールシンターゼのキーワード検索により抽出された配列のうちのいくつかは、極端に配列が短い、あるいは、実際にはリナロールシンターゼとは異なる酵素がおよそ１０から２０含まれる。一方表２４に示す各リナロールシンターゼは、ＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフを含むことが明らかとなった（図２８〜４０）。表２４には示していない他のリナロールシンターゼ（表３５）においても、ＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフが観察された（図４１〜４８）。これらのことから、今回得られたＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧはリナロールシンターゼを検出可能なアミノ酸配列モチーフであることがわかった。一方、偽陽性が８６／１６１（５７％）と高いことから、ＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフを有することだけではリナロールシンターゼのみを的確に予測することはできない。Ｌｘｘ［ＦＬ］［ＴＡ］ｘ（４）［ＲＮ］Ｗ［ＤＥ］、［ＥＶ］Ｙｘｘｘ［ＡＧ］ｘｘ［ＳＴ］、Ｒ［ＬＩ］ｘ［ＤＮ］Ｄ［ＬＩ］ｘ［ＳＴ］ｘｘｘＥｘｘｘＧについても、偽陽性が多い点ではＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧと同様の特徴があると言える。【０３８７】
テルペンシンターゼに分布しているモチーフとして、ＤＤｘｘＤモチーフ、ＮＳＥモチーフ、ＤｘＤＤモチーフが知られている（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１１）６６，２１２−２２９）。今回見出されたＤＤｘ［ＦＹ］［ＤＹ］ｘｘＧモチーフは、ＤＤｘｘＤモチーフを含むが、それに限定されず、より細かく配列を規定することのできるモチーフである。【０３８８】
【表３５】
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【０３８９】
【表３６】
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【０３９０】
【表３７】
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【０３９１】
実施例２５：ＳｃＬＩＮＳ、ＣｓＬＩＮＳ、及びＡａＬＩＮＳをそれぞれ発現するＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ株のグルコース６０ｇ／Ｌ条件での培養評価
実施例６で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、実施例１０で得られたＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株を実施例１３に記載の条件で培養した。また、リナロールの定量は実施例３に記載の条件で実施した。【０３９２】
リナロールは発酵液中の蓄積濃度に換算した値として示す。試験管３本の結果の平均値を表３８に示す。対照ベクターｐＡＣＹＣ１７７を導入した対照株ではリナロール生産は認められなかったが、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＡａＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ*株、ＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／ＳｃＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株、及びＳＷＩＴＣＨ−ＰｐｈｏＣ  Δｇｃｄ／Ｐｔａｃ２−ＣｓＬＩＮＳ−ｉｓｐＡ＊株において前例のない著量のリナロール生産が確認された。【０３９３】
【表３８】
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【０３９４】
その好ましい実施形態を参照して本発明を詳細に記述したが、本発明の範囲を逸脱することなく、種々の変更が為され得ること、及び均等物が採用され得ることは、当業者に明らかである。本明細書中の全ての引用文献は、本願の一部として参照により援用される。
【産業上の利用可能性】
【０３９５】
本発明の方法は、リナロールの製造に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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