(57)【要約】アクアポリン４機能促進剤は、下記一般式（１）若しくは（２）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。［化１］2017150704.tif 000018（式中、ｎ１１は１〜１０の整数である。Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基、脂環式複素環基、芳香族炭化水素基、又は芳香族複素環基である。）
2017150704.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン４機能促進剤。
【化１】
2017150704.tif 000016
（式中、ｎ１１は１〜１０の整数である。）
【請求項２】
前記化合物が２−グアニジノ−１−エタンスルホン酸である請求項１又は２に記載のアクアポリン４機能促進剤。
【請求項３】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のアクアポリン４機能促進剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含むことを特徴とする神経疾患用の医薬組成物。
【請求項４】
前記神経疾患がアルツハイマー病、脳梗塞及び脳腫瘍からなる群から選ばれるいずれか一つである、請求項４に記載の神経疾患用の医薬組成物。
【請求項５】
下記一般式（２）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン４機能促進剤。
【化２】
2017150704.tif 000017
（式中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基、脂環式複素環基、芳香族炭化水素基、又は芳香族複素環基である。）
【請求項６】
前記Ｒ２１がメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基、２−テトラヒドロフラニル基、３−テトラヒドロフラニル基、２−ピロリル基、３−ピロリル基、２−フラニル基、又は３−フラニル基である、請求項６に記載のアクアポリン４機能促進剤。
【請求項７】
前記化合物が２−フェニルスルホアミド−３−ベンジルオキシピリミジンである請求項６又は７に記載のアクアポリン４機能促進剤。
【請求項８】
請求項６〜８のいずれか一項に記載のアクアポリン４機能促進剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含むことを特徴とする神経疾患用の医薬組成物。
【請求項９】
前記神経疾患がアルツハイマー病、脳梗塞及び脳腫瘍からなる群から選ばれるいずれか一つである、請求項９に記載の神経疾患用の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アクアポリン４機能促進剤及び神経疾患用の医薬組成物に関する。
本願は、２０１６年３月４日に、日本に出願された特願２０１６−０４２７６６号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。【０００２】
脳内における細胞内外の水の輸送は、アクアポリン（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ；ＡＱＰ）及びアクアグリセロポリン（Ａｑｕａｇｌｙｃｅｒｏｐｏｒｉｎ）よりなるアクアポリンファミリーと呼ばれる膜貫通の水チャネルにより、調整されている。アクアポリン４（ＡＱＰ４） は、水選択性のきわめて高いアクアポリンファミリーの一つであり、脳内の水の輸送に関与する主要なＡＱＰである。また、ＡＱＰ４は、脳、特に基底膜と接する星状膠細胞のエンドフィート（ｅｎｄ−ｆｅｅｔ）膜に多く存在する。【０００３】
脳内に分布する血管と脳組織との間に存在する血管周囲腔は、発見者の名前にちなんで「Ｖｉｒｃｈｏｗ−Ｒｏｂｉｎ腔（ウィルヒョウ−ロビン腔）」と呼ばれている。近年、タンパク質の分解産物及びその他の細胞における老廃物は、大静脈内に再吸収され得るように、ウィルヒョウ−ロビン腔を介して輸送され、脳室中の脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ；ＣＳＦ）に流れ込むことが示唆された。この輸送はリンパ系に類似しており、血管周囲腔を介して脳から老廃物を排出する仕組みは、Ｇｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ（グリンパティックシステム）と呼ばれている。【０００４】
ＡＱＰ４を遺伝的に欠失させたマウスでは、水を第１及び第２の血管周囲腔を介して脳室へ排出する能力が落ちており、グリンパティックシステムはＡＱＰ４の発現レベルに依存することが見出された（例えば、非特許文献１参照。）。【０００５】
また、アルツハイマー病の病理学的特徴の一つである老人斑の主要構成成分であるアミロイドβタンパク質（Ａβ）とその切断副産物は、グリンパティックシステムを介して排出されることが知られている。アルツハイマー病モデル遺伝子改変マウスにおいて、水を第１及び第２の血管周囲腔を介して脳室へ排出する能力が落ちており、Ａβが蓄積することが示唆された（例えば、非特許文献２参照。）。【０００６】
また、アルツハイマー病患者の脳において、ＣＳＦへの血管周囲腔からの老廃物の流れ込みが有意に減少していることが示唆された（例えば、非特許文献３参照。）。
よって、脳におけるＡＱＰ４による水の輸送を促進することにより、加齢とともに低下するＣＳＦの流れ及びグリンパティックシステムによる排出機能を促進させ、アルツハイマー病の発症及び進行を遅らせることを期待できる。【０００７】
特許文献１には、主にＡＱＰ２又は３の機能を亢進することを目的として、ヒアルロン酸を有効成分とするアクアポリン機能亢進剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１５−９６４９３号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Igarashi, H. et al., “Water influx into cerebrospinal fluid is primarily controlled by aquaporin-4, not by aquaporin-1: 17O JJVCPE MRI studyin knockout mice”, NeuroReport, Vol.25, No.1, pp39-43, 2014.
【非特許文献２】Igarashi, H. et al., “Water influx into cerebrospinal fluid is significantly reduced in senile plaque bearing transgenic mice, supporting beta-amyloid clearance hypothesis of Alzheimer’s disease”, Neurol. Res., Vol.36, No.12, pp1094-1098, 2014.
【非特許文献３】Suzuki, Y. et al., “Reduced CSF Water Influx in Alzheimer’s Disease Supporting the β-Amyloid Clearance Hypothesis”, PLOS ONE, DOI:10.1371/journal.pone.0123708, 2015.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
特許文献１に記載のアクアポリン機能亢進剤は、主にＡＱＰ２又は３をターゲットにしており、ＡＱＰ４の機能を促進することについては検証されていない。【００１１】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、ＡＱＰ４を直接促進する作用を有し、疾患の治療に有用な新規のアクアポリン４機能促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、以下の態様を含む。
本発明の第１態様に係るアクアポリン４機能促進剤は、下記一般式（１）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。【００１３】
【化１】
2017150704.tif 000003
【００１４】
（式中、ｎ１１は１〜１０の整数である。）【００１５】
前記化合物が２−グアニジノ−１−エタンスルホン酸であってもよい。【００１６】
本発明の第２態様に係る神経疾患用の医薬組成物は、上記第１態様に係るアクアポリン４機能促進剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含む。【００１７】
前記神経疾患がアルツハイマー病、脳梗塞及び脳腫瘍からなる群から選ばれるいずれか一つであってもよい。【００１８】
本発明の第３態様に係るアクアポリン４機能促進剤は、下記一般式（２）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。【００１９】
【化２】
2017150704.tif 000004
【００２０】
（式中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基、脂環式複素環基、芳香族炭化水素基、又は芳香族複素環基である。）【００２１】
前記Ｒ２１がメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基、２−テトラヒドロフラニル基、３−テトラヒドロフラニル基、２−ピロリル基、３−ピロリル基、２−フラニル基、又は３−フラニル基であってもよい。
前記化合物が２−フェニルスルホアミド−３−ベンジルオキシピリミジンであってもよい。【００２２】
本発明の第４態様に係る神経疾患用の医薬組成物は、上記第３態様に係るアクアポリン４機能促進剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含む。【００２３】
前記神経疾患がアルツハイマー病、脳梗塞及び脳腫瘍からなる群から選ばれるいずれか一つであってもよい。
【発明の効果】
【００２４】
上記態様によれば、ＡＱＰ４を直接促進する作用を有し、疾患の治療に有用な新規のアクアポリン４機能促進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例１におけるＡＱＰ４機能促進剤候補化合物を評価するためのアフリカツメガエルの卵母細胞を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの結果を示すグラフである。
【図２Ａ】試験例１におけるインドメタシンを投与したマウス脳内でのＡＱＰ４の機能の変化を測定した結果を示すグラフである。
【図２Ｂ】試験例１における化合物２Ａを投与したマウス脳内でのＡＱＰ４の機能の変化を測定した結果を示すグラフである。
【図３】試験例２における化合物１Ａを投与したマウス脳内でのＡＱＰ４の機能の変化を測定した結果を示すグラフである。
【図４Ａ】試験例２における無投薬群、化合物１Ａ投与群、及び化合物２Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像である。
【図４Ｂ】試験例２における無投薬群、化合物１Ａ投与群、及び化合物２Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像での老人班の定量結果を示すグラフである。
【図５Ａ】試験例２における無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてトータルＡβを染色した画像である。
【図５Ｂ】試験例２における無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてトータルＡβを染色した画像での老人班の定量結果を示すグラフである。
【図６Ａ】試験例２における無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４０を染色した画像である。
【図６Ｂ】試験例２における無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４０を染色した画像での老人班の定量結果を示すグラフである。
【図７Ａ】試験例２における無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像である。
【図７Ｂ】試験例２における無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像での老人班の定量結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
＜＜アクアポリン４機能促進剤＞＞
＜第１実施形態＞
本発明の第１実施形態に係るアクアポリン４（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ  ４；ＡＱＰ４）機能促進剤は、下記一般式（１）で表される化合物（本明細書において、「化合物（１）」と称することがある。）、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
【００２７】
【化３】
2017150704.tif 000005
【００２８】
（式中、ｎ１１は１〜１０の整数である。）
【００２９】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤は、ＡＱＰ４を直接促進する作用を有し、主に神経疾患を治療することができる。
【００３０】
本発明者らは、これまで２−グアニジノ−１−エタンスルホン酸（Ｇｕａｎｉｄｉｎｏｅｔｈｙｌ  Ｓｕｌｆｏｎａｔｅ；ＧＥＳ）が脳内ｐＨのアルカリシフターであることを明らかにした（参考文献：Nakada T., et al., “Guanidinoethane sulfate: brain pH alkaline shifter”, Neurochemistry, vol.4, no.8, 1993.）。今回、後述の実施例に示すとおり、アルツハイマー病モデルマウスを用いた試験により、ＧＥＳ及びその類縁体である上記化合物（１）が優れたＡＱＰ４の機能促進効果を有することを見出した。
【００３１】
本明細書において、「ＡＱＰ４の機能促進」とは、ＡＱＰ４を介した水の輸送が促進されることを意味する。ＡＱＰ４を介した水の輸送が促進されることにより、ＣＳＦの流れ及びグリンパティックシステムによる排出機能を促進させ、これらの機能低下が引き起こす疾患を予防又は治療することができる。
【００３２】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤を用いて、予防又は治療可能な疾患としては、主に神経疾患が挙げられ、より具体的には、脳浮腫、脳虚血、脳梗塞、脳腫瘍、脱髄疾患、てんかん、神経因性疼痛、片頭痛、躁鬱病、大鬱病性障害、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、及びこれらの疾病に起因する合併症等が挙げられる。
【００３３】
［化合物（１）］
化合物（１）はグアニジノ基、及びスルホ基を有する化合物であり、ＡＰＱ４に直接結合する。
【００３４】
（ｎ１１）
ｎ１１は１〜１０の整数である。ｎ１１はアルキレン基の繰り返し数である。ｎ１１は、親水性が高いことから、１〜８の整数が好ましく、１〜６の整数がより好ましく、１〜４の整数がさらに好ましく、１〜２の整数が特に好ましい。
【００３５】
化合物（１）で好ましいものとしては、例えば、以下に示す化合物等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（１）の一例に過ぎず、好ましい化合物（１）はこれらに限定されない。
【００３６】
【化４】
2017150704.tif 000006
【００３７】
中でも、化合物（１）は、ＮＨ２Ｃ（ＮＨ）ＮＨ（ＣＨ２）２ＳＯ３Ｈ、すなわち、２−グアニジノ−１−エタンスルホン酸（Ｇｕａｎｉｄｉｎｏｅｔｈｙｌ  Ｓｕｌｆｏｎａｔｅ；ＧＥＳ）であることが好ましい。ＧＥＳは公知の化合物であって、すでに多くの臨床研究がなされており、安全性の面から好適である。
【００３８】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤は、化合物（１）の薬学的に許容できる塩を含んでいてもよい。
【００３９】
本明細書において、「薬学的に許容できる」とは、被検動物に適切に投与された場合に、概して、副作用を起こさない程度を意味する。
塩としては、薬学的に許容できる酸付加塩又は塩基性塩が好ましい。
酸付加塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸等の無機酸との塩；酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等の有機酸との塩が挙げられる。
塩基性塩としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム等の無機塩基との塩；カフェイン、ピペリジン、トリメチルアミン、ピリジン等の有機塩基との塩が挙げられる。
【００４０】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤は、他の成分として、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ等の緩衝液、アジ化ナトリウム、グリセロール等の添加剤を含んでいてもよい。
【００４１】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤を用いて、疾患（特に、神経疾患）の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
【００４２】
［化合物（１）の製造方法］
化合物（１）は、例えば、亜硫酸ナトリウムと、所望のＲ１１を有するハロゲン化物と、グアニジノ基を有する脂肪族炭化水素とを、公知の反応を用いて反応させることで製造できる。より具体的には以下のとおりである。
【００４３】
化合物（１）は、例えば、以下の２つの工程を有する製造方法により、製造できる。
第１工程：下記一般式（１ａ）で表される化合物（以下、「化合物（１ａ）」と略記することがある。）と、亜硫酸ナトリウムと、を反応させて、下記一般式（１ｂ）で表される化合物（以下、「化合物（１ｂ）」と略記することがある。）を得る工程（以下、「化合物（１）製造工程」と略記することがある。）
第２工程：化合物（１ｂ）と、下記一般式（１ｃ）で表される化合物（以下、「化合物（１ｃ）」と略記することがある。）と、を反応させて、化合物（１）を得る工程（以下、「化合物（１）製造工程」と略記することがある。）
以下、各工程について、詳細に説明する。
【００４４】
【化５】
2017150704.tif 000007
【００４５】
（式中、Ｘはハロゲン原子である。Ｚはハロゲン原子又は脱離基（例えば、メタンスルフォニルオキシ基、ｐ−トルエンスルフォニルオキシ基等）である。ｎ１１はそれぞれ上記と同じである。）
【００４６】
［化合物（１ｂ）製造工程］
前記化合物（１ｂ）製造工程においては、化合物（１ａ）と亜硫酸ナトリウムとを反応させて化合物（１）を得る。
【００４７】
（化合物（１ａ））
化合物（１ａ）は公知化合物である。
化合物（１ａ）において、ｎ１１は１〜１０の整数である。ｎ１１はアルキレン基の繰り返し数である。ｎ１１は、親水性が高いことから、１〜８の整数が好ましく、１〜６の整数がより好ましく、１〜４の整数がさらに好ましく、１〜２の整数が特に好ましい。
【００４８】
（化合物（１ｂ）
化合物（１ｂ）は公知化合物である。
化合物（１ｂ）において、ｎ１１は、化合物（１ａ）におけるｎ１１と同じである。
【００４９】
（反応条件）
化合物（１ｂ）製造工程においては、例えば、適当な有機溶媒、又は前記有機溶媒及び水の混合溶媒等の水性溶媒を反応溶媒として用いることが好ましい。
化合物（１ｂ）製造工程において使用可能な有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、アセトン、ジクロロメタン、クロロホルム、トルエン、トリフルオロメチルベンゼン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、１，４−ジオキサン、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル等が挙げられ、これらに限定されない。
前記溶媒は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよく、２種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
【００５０】
化合物（１ｂ）製造工程において、亜硫酸ナトリウムの使用量は、例えば、化合物（１ａ）の使用量の０．５〜２倍モル量であることが好ましく、１〜１．５倍モル量であることがより好ましい。
【００５１】
化合物（１ｂ）製造工程においては、さらに添加剤を用いて反応を行うことが好ましい。
前記添加剤としては、例えば、ヨウ化ナトリウム等が挙げられ、これらに限定されない。
化合物（１ｂ）製造工程において、添加剤の使用量は、例えば、化合物（１ａ）の使用量の０．１〜１倍モル量であることが好ましく、０．２〜０．５倍モル量であることがより好ましい。
【００５２】
化合物（１ｂ）製造工程において、反応温度は、例えば、１５〜４０℃であることが好ましく、２０〜３０℃であることがより好ましい。
化合物（１ｂ）製造工程において、反応時間は、例えば、４８〜９６時間であることが好ましく、６０〜８４時間であることがより好ましい。
【００５３】
化合物（１ｂ）製造工程において、反応終了後は、公知の手法によって、必要に応じて後処理を行い、化合物（１ｂ）を取り出せばよい。すなわち、適宜必要に応じて、ろ過、洗浄、抽出、ｐＨ調整、脱水、濃縮等の後処理操作をいずれか単独で、又は２種以上組み合わせて行い、濃縮、結晶化、再沈殿、カラムクロマトグラフィー等により、化合物（１ｂ）を取り出せばよい。また、取り出した化合物（１ｂ）は、さらに必要に応じて、結晶化、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、抽出、溶媒による結晶の撹拌洗浄等の操作をいずれか単独で、又は２種以上組み合わせて１回以上行うことで、精製してもよい。
化合物（１ｂ）製造工程においては、反応終了後、化合物（１ｂ）を取り出さずに、次工程で用いてもよいが、目的物である化合物（１）の収率が向上する点から、化合物（１ｂ）を上述の方法で取り出すことが好ましい。
【００５４】
［化合物（１）製造工程］
前記化合物（１）製造工程においては、化合物（１ｂ）と化合物（１ｃ）とを反応させて、化合物（１）を得る。
化合物（１）を得る前記反応は、公知の置換反応である。
【００５５】
（化合物（１ｃ））
化合物（１ｃ）は公知のハロゲン化水素である。具体的には、例えば、ＨＦ、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ等が挙げられ、これらに限定されない。
【００５６】
（反応条件）
化合物（１）製造工程においては、例えば、適当な有機溶媒、又は前記有機溶媒及び水の混合溶媒等の水性溶媒を反応溶媒として用いることが好ましい。
化合物（１）製造工程において使用可能な有機溶媒としては、上述の［化合物（１ｂ）製造工程］において例示されたものと同じものである。
前記溶媒は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよく、２種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
【００５７】
化合物（１）製造工程において、化合物（１ｃ）の使用量は、例えば、化合物（１ｂ）の使用量の０．５〜２倍モル量であることが好ましく、１〜１．５倍モル量であることがより好ましい。
【００５８】
化合物（１）製造工程においては、さらに酸を用いて反応を行うことが好ましい。
前記酸としては、例えば、塩酸等の無機酸；酢酸、パラトルエンスルホン酸等の有機酸等が挙げられる。
前記酸は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよく、２種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
化合物（２）製造工程において、例えば、酸の使用量は、化合物（１ｂ）の使用量の１〜５倍モル量であることが好ましく、２〜４倍モル量であることがより好ましい。
【００５９】
化合物（１）製造工程において、反応温度は、例えば、１５〜４０℃であることが好ましく、２０〜３０℃であることがより好ましい。
化合物（１）製造工程において、反応時間は、例えば、４８〜９６時間であることが好ましく、６０〜８４時間であることがより好ましい。
【００６０】
化合物（１）製造工程において、反応終了後は、公知の手法によって、必要に応じて後処理を行い、化合物（１）を取り出せばよい。すなわち、適宜必要に応じて、ろ過、洗浄、抽出、ｐＨ調整、脱水、濃縮等の後処理操作をいずれか単独で、又は２種以上組み合わせて行い、濃縮、結晶化、再沈殿、カラムクロマトグラフィー等により、化合物（１）を取り出せばよい。また、取り出した化合物（１）は、さらに必要に応じて、結晶化、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、抽出、溶媒による結晶の撹拌洗浄等の操作をいずれか単独で、又は２種以上組み合わせて１回以上行うことで、精製してもよい。
【００６１】
化合物（１）、化合物（１ａ）、化合物（１ｂ）、化合物（１ｃ）等の各化合物は、例えば、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析法（ＭＳ）、赤外分光法（ＩＲ）等、公知の手法で構造を確認できる。
【００６２】
＜第２実施形態＞
本発明の第２実施形態に係るアクアポリン４（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ  ４；ＡＱＰ４）機能促進剤は、下記一般式（２）で表される化合物（本明細書において、「化合物（２）」と称することがある。）、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
【００６３】
【化６】
2017150704.tif 000008
【００６４】
（式中、Ｒ２１は、炭素数１〜１０のアルキル基、脂環式複素環基、芳香族炭化水素基、又は芳香族複素環基である。）
【００６５】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤は、ＡＱＰ４を直接促進する作用を有し、主に神経疾患を治療することができる。
【００６６】
本発明者らは、コンピュータ利用によるシミュレーションであるｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（イン・シリコ・スクリーニング）を用いて、ＡＱＰ４機能促進剤候補を低分子化合物ライブラリーより探索した。さらに、後述の実施例で示す通り、ＡＱＰ４を発現するようにＡＱＰ４ｍＲＮＡがトランスフェトされたアフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ） 卵母細胞における６０〜８０ｍＯｓｍの低浸透圧条件下の体積が増加する能力に基づいた化合物の選別を行った。これらのことから、上記化合物（２）が優れたＡＱＰ４の機能促進効果を有することを見出した。
【００６７】
［化合物（２）］
化合物（２）は、２−スルホンアミド−３−ベンジルオキシピリジン骨格を有する化合物であり、ＡＱＰ４に直接結合する。
【００６８】
（Ｒ２１）
一般式（２）中、Ｒ２１は、炭素数１〜１０のアルキル基、脂環式複素環基、芳香族炭化水素基、又は芳香族複素環基である。
【００６９】
Ｒ２１における前記炭素数１〜１０のアルキル基は、直鎖状、分岐鎖状及び環状のいずれでもよく、環状である場合、単環状及び多環状のいずれでもよい。そして、前記アルキル基は、炭素数が１〜１０であることが好ましく、１〜８であることがより好ましく、１〜６であることがさらに好ましく、１〜４であることが特に好ましい。
【００７０】
直鎖状又は分岐鎖状の前記アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、ｎ−ヘプチル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、２，２−ジメチルペンチル基、２，３−ジメチルペンチル基、２，４−ジメチルペンチル基、３，３−ジメチルペンチル基、３−エチルペンチル基、２，２，３−トリメチルブチル基、ｎ−オクチル基、イソオクチル基、２−エチルヘキシル基、ノニル基、デシル基等が挙げられる。
直鎖状又は分岐鎖状の前記アルキル基は、炭素数が１〜１０であることが好ましく、１〜８であることがより好ましく、１〜６であることがさらに好ましく、１〜４であることが特に好ましい。
【００７１】
より具体的には、Ｒ２１における直鎖状又は分岐鎖状の前記アルキル基はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基又はｎ−ヘキシル基であることが好ましい。
【００７２】
環状の前記アルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基、ノルボルニル基、イソボルニル基、１−アダマンチル基、２−アダマンチル基、トリシクロデシル基等が挙げられ、さらに、これら環状のアルキル基の１個以上の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、又は直鎖状、分岐鎖状或いは環状のアルキル基で置換されたものが挙げられる。ここで、水素原子を置換するハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。また、直鎖状、分岐鎖状、及び環状のアルキル基としては、Ｒ２１におけるアルキル基として例示した上記のものが挙げられる。
【００７３】
環状の前記アルキル基は、単環状であることが好ましい。また、環状の前記アルキル基は、炭素数が３〜１０であることがより好ましく、３〜８であることがさらに好ましく、３〜６であることがより好ましい。
【００７４】
より具体的には、Ｒ２１における環状の前記アルキル基はシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基であることが好ましい。
【００７５】
Ｒ２１における前記脂環式複素環基は、炭素及びその他の元素（例えば、窒素、酸素、硫黄等）により構成される。前記脂環式複素環基は、単環状及び多環状のいずれでもよい。
【００７６】
前記脂環式複素環基としては、例えば、エチレンイミノ基、アザシクロブチル基、ピロリジニル基、ピペリジル基、ピペリジノ基、ピペラジニル基、ヘキサメチレンイミノ基、ヘプタメチレンイミノ基、オクタメチレンイミノ基、ノナメチレンイミノ基、１，３，５，７−テトラアザアダマンチル基等の窒素含有脂環式複素環基；エポキシ基、トリメチレンオキシド基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロピラニル基、ヘキサメチレンオキシド基、ヘプタメチレンオキシド基、オクタメチレンオキシド基、ノナメチレンオキシド基、２，４，６，８，９，１０−ヘキサオキサアダマンチル基等の酸素含有脂環式複素環基；エチレンスルフィド基、トリメチレンスルフィド基、テトラヒドロチエニル基、テトラヒドロチオピラニル基、ヘキサメチレンスルフィド基、ヘプタメチレンスルフィド基、オクタメチレンスルフィド基、ノナメチレンスルフィド基、２，４，６，８，９，１０−ヘキサチアアダマンチル基等の硫黄含有脂環式複素環基；モルホリノ基等の窒素及び酸素含有脂環式複素環基；チオモルホリノ基等の窒素及び硫黄含有脂環式複素環基等が挙げられ、さらに、これら環状のアルキル基の１個以上の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、又は、直鎖状、分岐鎖状、若しくは環状のアルキル基で置換されたものが挙げられる。ここで、水素原子を置換するハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。また、直鎖状、分岐鎖状、及び環状のアルキル基としては、（Ｒ１１）において例示されたものが挙げられる。
【００７７】
前記脂環式複素環基は、単環状であることが好ましい。また、前記脂環式複素環基は、環を構成する原子数が３〜１０であることが好ましく、３〜８であることがより好ましく、３〜６であることがより好ましい。
【００７８】
より具体的には、Ｒ２１における前記脂環式複素環基は２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基、２−テトラヒドロフラニル基、又は３−テトラヒドロフラニル基であることが好ましい。
【００７９】
Ｒ２１における前記芳香族炭化水素基は、単環状及び多環状のいずれでもよい。
【００８０】
前記芳香族炭化水素基としては、例えば、フェニル基、ペンタレニル基、インデニル基、ナフチル基、アントラセニル基、アズレニル基、ヘプタレニル基、オクタレニル基等が挙げられ、さらに、これら芳香族炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、又は、直鎖状、分岐鎖状、若しくは環状のアルキル基で置換されたものが挙げられる。ここで、水素原子を置換するハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。また、直鎖状、分岐鎖状、及び環状のアルキル基としては、（Ｒ１１）において例示されたものが挙げられる。
【００８１】
前記芳香族炭化水素基は、単環状であることが好ましい。また、前記芳香族炭化水素基は、炭素数が６〜１４であることが好ましく、６〜１２であることがより好ましく、６〜１０であることがより好ましい。
【００８２】
より具体的には、Ｒ２１における前記芳香族炭化水素基はフェニル基、２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、２，３−ジメチルフェニル基、３，４−ジメチルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、２，４，６−トリメチルフェニル基、２−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、４−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２−（トリフルオロメチル）フェニル基、３−（トリフルオロメチル）フェニル基又は４−（トリフルオロメチルフェニル基）であることが好ましい。
【００８３】
Ｒ２１における前記芳香族複素環基は、炭素及びその他の元素（例えば、窒素、酸素、硫黄等）により構成される。前記芳香族複素環基は、単環状及び多環状のいずれでもよい。
【００８４】
前記芳香族複素環基としては、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピラジル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、インドリジニル基、インドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、プリニル基、キノジニル基、キノリル基、イソキノリル基、ナフチリジニル基、フタラジニル基、キノキサリニル基、キナゾリニル基、シンノリニル基、プテリジニル基、カルバゾリル基、β−カルボリニル基、フェナントリジニル基、アクリジニル基、ペリミジニル基、フェナントロリニル基、フェナジニル基、アンチリジニル基等の窒素含有芳香族複素環基；フラニル基（フリル基）、ピラニル基、ベンゾフラニル基、イソベンゾフラニル基、クロメニル基、イソクロメニル基、キサンテニル基等の酸素含有芳香族複素環基；チエニル基、チオピラニル基、チオクロメニル基、イソチオクロメニル基、チオキサンテニル基、イソチオキサンテニル基、チアントレニル基等の硫黄含有芳香族複素環基；オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、フラザニル基、フェノキサジニル基等の窒素及び酸素含有芳香族複素環基；チアゾリル基、イソチアゾリル基、フェノチアジニル基等の窒素及び硫黄含有芳香族複素環基；フェノキサチイニル基等の酸素及び硫黄含有芳香族複素環基等が挙げられ、さらに、これら芳香族複素環基の１個以上の水素原子が、ハロゲン原子、水酸基、又は、直鎖状、分岐鎖状、若しくは環状のアルキル基で置換されたものが挙げられる。ここで、水素原子を置換するハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。また、直鎖状、分岐鎖状、及び環状のアルキル基としては、（Ｒ１１）において例示されたものが挙げられる。
【００８５】
前記芳香族複素環基は、単環状であることが好ましい。また、前記芳香族複素環基は、炭素数が５〜１４であることが好ましく、５〜１２であることがより好ましく、５〜１０であることがより好ましい。
【００８６】
より具体的には、Ｒ２１における前記芳香族複素環基は２−ピロリル基、３−ピロリル基、２−フラニル基、又は３−フラニル基であることが好ましい。
【００８７】
中でも、化合物（２）においてＲ２１は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基、２−テトラヒドロフラニル基、３−テトラヒドロフラニル基、２−ピロリル基、３−ピロリル基、２−フラニル基、又は３−フラニル基であることが好ましい。
【００８８】
化合物（２）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ２１が炭素数１〜１０のアルキル基である場合、以下に示す化合物等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（２）の一例に過ぎず、好ましい化合物（２）はこれらに限定されない。
【００８９】
【化７】
2017150704.tif 000009
【００９０】
化合物（２）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ２１が脂環式複素環基である場合、以下に示す化合物等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（２）の一例に過ぎず、好ましい化合物（２）はこれらに限定されない。
【００９１】
【化８】
2017150704.tif 000010
【００９２】
化合物（２）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ２１が芳香族炭化水素基である場合、以下に示す化合物等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（２）の一例に過ぎず、好ましい化合物（２）はこれらに限定されない。
【００９３】
【化９】
2017150704.tif 000011
【００９４】
化合物（２）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ２１が芳香族複素環基である場合、以下に示す化合物等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（２）の一例に過ぎず、好ましい化合物（２）はこれらに限定されない。
【００９５】
【化１０】
2017150704.tif 000012
【００９６】
中でも、化合物（２）は、後述の実施例に示すとおり、優れたＡＱＰ４機能促進効果を有することから、２−フェニルスルホアミド−３−ベンジルオキシピリミジンであることが好ましい。
【００９７】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤は、化合物（２）の薬学的に許容できる塩を含んでいてもよい。
【００９８】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤は、他の成分として、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ等の緩衝液、アジ化ナトリウム、グリセロール等の添加剤を含んでいてもよい。
【００９９】
本実施形態のＡＱＰ４機能促進剤を用いて、疾患（特に、神経疾患）の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
【０１００】
［化合物（２）の製造方法］
化合物（２）は、例えば、所望のＲ２１を有する塩化スルホニルと、２−アミノ−３−ベンジルオキシピリジンとを、公知の反応を用いて縮合させることで製造できる。より具体的には以下のとおりである。
【０１０１】
化合物（２）は、例えば、下記一般式（２ａ）で表される化合物（以下、「化合物（２ａ）」と略記することがある。）と、下記一般式（２ｂ）で表される化合物（以下、「化合物（２ｂ）」と略記することがある。）と、を反応させて、化合物（２）を得る工程（以下、「化合物（２）製造工程」と略記することがある。）を有する製造方法により、製造できる。
以下、各工程について、詳細に説明する。
【０１０２】
【化１１】
2017150704.tif 000013
【０１０３】
（式中、Ｒ２１は、上記と同じである。）
【０１０４】
［化合物（２）製造工程］
前記化合物（２）製造工程においては、化合物（２ａ）と化合物（２ｂ）とを反応させて、化合物（２）を得る。
化合物（２）を得る前記反応は、公知の縮合反応である。
【０１０５】
（化合物（２ａ））
化合物（２ａ）は公知化合物である。
化合物（２ａ）において、Ｒ２１が炭素数１〜１０の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基である場合、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基又はｎ−ヘキシル基であることが好ましい。
【０１０６】
また、Ｒ２１が炭素数１〜１０の環状のアルキル基である場合、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基であることが好ましい。
【０１０７】
また、Ｒ２１が脂環式複素環基である場合、２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基、２−テトラヒドロフラニル基、又は３−テトラヒドロフラニル基であることが好ましい。
【０１０８】
また、Ｒ２１が芳香族炭化水素基である場合、フェニル基、２−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、２，３−ジメチルフェニル基、３，４−ジメチルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、２，４，６−トリメチルフェニル基、２−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、４−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２−（トリフルオロメチル）フェニル基、３−（トリフルオロメチル）フェニル基、又は４−（トリフルオロメチルフェニル基）であることが好ましい。
【０１０９】
また、Ｒ２１が芳香族複素環基である場合、２−ピロリル基、３−ピロリル基、２−フラニル基、又は３−フラニル基であることが好ましい。
【０１１０】
（化合物（２ｂ））
化合物（２ｂ）は公知化合物（２−アミノ−３−ベンジルオキシピリジン）である。化合物（２ｂ）は、公知の方法を用いて合成してもよく、市販のものを用いてもよい。
【０１１１】
（反応条件）
化合物（２）製造工程においては、例えば、適当な有機溶媒、又は前記有機溶媒及び水の混合溶媒等の水性溶媒を反応溶媒として用いることが好ましい。
化合物（２）製造工程において使用可能な有機溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、トルエン、トリフルオロメチルベンゼン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、１，４−ジオキサン、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル等が挙げられ、これらに限定されない。
前記溶媒は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよく、２種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
【０１１２】
化合物（２）製造工程において、化合物（２ａ）の使用量は、例えば、化合物（２ｂ）の使用量の０．５〜２倍モル量であることが好ましく、１〜１．５倍モル量であることがより好ましい。
【０１１３】
化合物（２）製造工程においては、さらに塩基を用いて反応を行うことが好ましい。
前記塩基としては、例えば、ピリジン、２，６−ルチジン、２，６−ビス（ｔｅｒｔ−ブチル）ピリジン、トリエチルアミン、ジメチルイソプロピルアミン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムアミド等の無機塩基；リチウムジイソプロピルアミド、ブチルリチウム等の有機金属塩等が挙げられ、これらに限定されない。
前記塩基は、１種を単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよく、２種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
化合物（２）製造工程において、塩基の使用量は、例えば、化合物（２ｂ）の使用量の１〜５倍モル量であることが好ましく、２〜４倍モル量であることがより好ましい。
【０１１４】
化合物（２）製造工程において、反応温度は、例えば、１５〜４０℃であることが好ましく、２０〜３０℃であることがより好ましい。
化合物（２）製造工程において、反応時間は、例えば、４８〜９６時間であることが好ましく、６０〜８４時間であることがより好ましい。
【０１１５】
化合物（２）製造工程においては、不活性ガスの雰囲気下で反応を行うことが好ましい。
前記不活性ガスとしては、例えば、アルゴンガス、ヘリウムガス、窒素ガス等が挙げられる。
【０１１６】
化合物（２）製造工程において、反応終了後は、公知の手法によって、必要に応じて後処理を行い、化合物（２）を取り出せばよい。すなわち、適宜必要に応じて、ろ過、洗浄、抽出、ｐＨ調整、脱水、濃縮等の後処理操作をいずれか単独で、又は２種以上組み合わせて行い、濃縮、結晶化、再沈殿、カラムクロマトグラフィー等により、化合物（２）を取り出せばよい。また、取り出した化合物（２）は、さらに必要に応じて、結晶化、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、抽出、溶媒による結晶の撹拌洗浄等の操作をいずれか単独で、又は２種以上組み合わせて１回以上行うことで、精製してもよい。
【０１１７】
化合物（２）、化合物（２ａ）、化合物（２ｂ）等の各化合物は、例えば、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析法（ＭＳ）、赤外分光法（ＩＲ）等、公知の手法で構造を確認できる。
【０１１８】
＜＜神経疾患用の医薬組成物＞＞
本発明の一実施形態に係る神経疾患用の医薬組成物は、上述のアクアポリン４機能促進剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含む。
【０１１９】
本実施形態の神経疾患用の医薬組成物によれば、神経疾患を簡便且つ効果的に予防又は治療することができる。神経疾患としては、上述の＜＜アクアポリン４機能促進剤＞＞において例示したものと同様のものが挙げられる。中でも、本実施形態の神経疾患用の医薬組成物は、アルツハイマー病、脳梗塞、脳腫瘍、脱髄疾患、てんかん又は神経因性疼痛の予防又は治療に用いられることが好ましい。
【０１２０】
＜投与量＞
本実施形態の医薬組成物は、被検動物（ヒト又は非ヒト動物を含む各種哺乳動物、好ましくはヒト）の年齢、性別、体重、症状、治療方法、投与方法、処理時間等を勘案して適宜調節される。
【０１２１】
本実施形態の神経疾患用の医薬組成物に含まれる上述のＡＱＰ４機能促進剤が化合物（１）であるとき、その投与量は、症状により差異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり約１から２０ｇ、好ましくは約４から１２ｇ、より好ましくは約８から１０ｇであると考えられる。
非経口的に投与する場合は、その１回の投与量は症状、投与方法によっても異なるが、例えば注射剤の形では通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、通常、１日当り約０．５ｇから１０ｇ、好ましくは約２から５ｇ、より好ましくは約３から４ｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であると考えられる。
【０１２２】
本実施形態の神経疾患用の医薬組成物に含まれる上述のＡＱＰ４機能促進剤が化合物（２）である場合、その投与量は、症状により差異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり約０．１から３ｇ、好ましくは約０．５から１．５ｇ、より好ましくは約１から１．４ｇであると考えられる。
非経口的に投与する場合は、その１回の投与量は症状、投与方法によっても異なるが、例えば注射剤の形では通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、通常、１日当り約0.05から２ｇ、好ましくは約０．３から１．５ｇ、より好ましくは約０．５から０．８ｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であると考えられる。
【０１２３】
投与回数としては、１週間平均当たり、１回〜数回投与することが好ましい。
投与形態としては、例えば、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射、鼻腔内的、腹腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、または経口的に当業者に公知の方法が挙げられ、静脈内注射又は腹腔内的投与が好ましい。
注射剤は、非水性の希釈剤（例えば、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、エタノール等のアルコール類など）、懸濁剤、又は乳濁剤として調製することもできる。このような注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤等の配合により行うことができる。注射剤は、用事調製の形態として製造することができる。即ち、凍結乾燥法などによって、無菌の固体組成物とし、使用前に注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。
【０１２４】
＜組成成分＞
本実施形態の医薬組成物は、治療的に有効量の上述のキャリア及び生理活性物質、並びに薬学的に許容されうる担体又は希釈剤を含む。薬学的に許容されうる担体又は希釈剤は、賦形剤、稀釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤、添加剤等が挙げられる。これら担体の１種以上を用いることにより、注射剤、液剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、又はシロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。
【０１２５】
また、担体としてコロイド分散系を用いることもできる。コロイド分散系は、上述のＡＱＰ４機能促進剤の生体内安定性を高める効果や、特定の臓器、組織、又は細胞へ、上述のＡＱＰ４機能促進剤の移行性を高める効果が期待される。コロイド分散系としては、例えばｍポリエチレングリコール、高分子複合体、高分子凝集体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油系の乳化剤、ミセル、混合ミセル、リポソームを包含する脂質を挙げることができ、特定の臓器、組織、又は細胞へ、上述のＡＱＰ４機能促進剤を効率的に輸送する効果のある、リポソームや人工膜の小胞が好ましい。
【０１２６】
本実施形態の医薬組成物における製剤化の例としては、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤として経口的に使用されるものが挙げられる。
または、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用されるものが挙げられる。更には、薬理学上許容される担体又は希釈剤、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化されたものが挙げられる。
【０１２７】
錠剤、カプセル剤に混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖又はサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油又はチェリーのような香味剤が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記の材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
【０１２８】
本実施形態の医薬組成物が注射剤である場合、無菌組成物は、例えば、注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。また、注射用の水溶液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等が挙げられ、適当な溶解補助剤（例えば、アルコール（具体的には、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等））、又は非イオン性界面活性剤（例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０等）と併用してもよい。
【０１２９】
また、油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油等が挙げられ、溶解補助剤として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液等）、無痛化剤（例えば、塩酸プロカイン等）、安定剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノール等）、又は酸化防止剤をさらに配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
【０１３０】
また、注射剤は、非水性の希釈剤（例えば、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、エタノール等のアルコール類等）、懸濁剤、又は乳濁剤として調製することもできる。このような注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤等の配合により行うことができる。注射剤は、用事調製の形態として製造することができる。即ち、凍結乾燥法などによって、無菌の固体組成物とし、使用前に注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。
【０１３１】
本実施形態の医薬組成物は、単独で用いてもよく、その他の神経疾患用の医薬組成物と組み合わせて用いてもよい。
【０１３２】
＜治療方法＞
本発明の一側面は、神経疾患の治療のための上述のＡＱＰ４機能促進剤を含む医薬組成物を提供する。
また、本発明の一側面は、治療的に有効量の上述のＡＱＰ４機能促進剤、並びに薬学的に許容されうる担体又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
また、本発明の一側面は、前記医薬組成物を含む、神経疾患の治療剤を提供する。
また、本発明の一側面は、神経疾患の治療剤を製造するための上述のＡＱＰ４機能促進剤の使用を提供する。
また、本発明の一側面は、上述のＡＱＰ４機能促進剤の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、神経疾患の治療方法を提供する。
【実施例】
【０１３３】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【０１３４】
［製造例１］化合物２Ａの製造方法
以下に示す経路で、コンピューター・シミュレーションにより選定された化合物の一つである化合物２Ａ（２−（ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｏ）−３−ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｐｙｒｉｄｉｎｅ）を製造した。【０１３５】
【化１２】
2017150704.tif 000014
【０１３６】
まず、２−アミノ−３−ベンジルオキシピリジン（１．５０ｇ、７．５０ｍｍｏｌ）を乾燥したジクロロメタン（３５ｍＬ）を添加した５０ｍＬ容量の丸底フラスコに加えた。続いて、２，６−ルチジン（２．６２ｍＬ、２２．５ｍｍｏｌ）水溶液を、シリンジを用いて撹拌中の溶液に加え、反応容器にアルゴンを充填した。続いて、ベンゼンスルホニルクロリド（１．０５ｍＬ、８．２５ｍｍｏｌ）を、シリンジを用いて撹拌中の溶液に加えた。続いて、７２時間アルゴン雰囲気下、室温で撹拌しながら反応を行った。続いて、得られた黄色の溶液を１０％クエン酸溶液（２×２５ｍＬ）及び飽和炭酸ナトリウム溶液（２×２５ｍＬ）で洗浄した。続いて、硫酸マグネシウムを用いて乾燥させ、濾過し、水分を蒸発させることにより、暗赤色の半固体の結晶を得た。続いて、得られた暗赤色の結晶をヘキサンで洗浄した。続いて、シリカゲル（ワコーゲル３００）を用いたフラッシュクロマトグラフィーカラムにより、３３％酢酸エチル／ヘキサン用出来で溶出し、白色の結晶（化合物２Ａ）を得た（収量０．３０９ｇ、収率１３．５％）。【０１３７】
得られた化合物２Ａの高速液体クロマトグラフィー （Ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＨＰＬＣ）、高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒａ；ＨＲ−ＭＳ）及び１Ｈ−ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。
HPLC: rt = 1.72 min (DAD), purity >95% (DAD, ELSD).
HR-MS: anal calc'd for C18H17N2O3S+(M+H+), 341.0955; found, 341.0932 (9.4 ppm).
1H NMR: δ5.14 ppm, s, 2H; 6.90 ppm, br-t, 1H; 7.29-7.41 ppm, m, 4H; 7.47-7.64 ppm, m, 6H; 7.96 ppm, br-d, J = 6.6 Hz, 2H.【０１３８】
［実施例１］
（１）ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて使用する試薬は、特記しない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社又は和光純薬社から購入し、そのまま使用した。
改変バース培地（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｂａｒｔｈ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ；ＭＢＳ）は、ＮａＣｌ（８８ｍＭ）、ＫＣｌ（１ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、ＭｇＳＯ４（０．８２ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２．４ｍＭ）、ＣａＣｌ２（０．９１ｍＭ）、Ｃａ（ＮＯ３）２（０．３３ｍＭ）、ゲンタマイシン（１００ｍｇ／Ｌ）をそれぞれ含有し、ｐＨ７．５となるように調製し、調製後最大１週間以内に使用した。
分離用緩衝液は、ＮａＣｌ（１０８ｍＭ）、ＫＣｌ（２ｍＭ）、ＥＤＴＡ（２ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）をそれぞれ含有し、ｐＨ７．５となるように調製した。【０１３９】
（１−１）卵母細胞の準備
アフリカツメガエル卵母細胞の単離、調製、トランスフェクションについては、参考文献（Sakimura, et al. , FEBSLett. , 272, 73-80, 1990.） に記載の方法を用いて、行った。具体的には、アフリカツメガエルの成体メス（重量１５０ｇ）から卵母細胞を取り出して、ＭＢＳに移した。続いて、卵母細胞を単離緩衝液へ部分的に移し、卵胞膜を手作業で除去して卵母細胞を露出させた。続いて、膜を除去した卵母細胞を新鮮なＭＢＳに移し、マイクロインジェクションに先立って、２時間平衡化させた。【０１４０】
（１−２）ＡＱＰ４  ｍＲＮＡ発現ベクターの調製
続いて、ヒトＡＱＰ４（ｈＡＱＰ４）−Ｍ２３アイソフォームをコードするｃＤＮＡ（配列番号１）は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によりクローニングし、第１鎖のｃＤＮＡはヒト小脳全ＲＮＡから、Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ＲＴ−ｆｏｒ−ＰＣＲ  ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いて、合成した。ＰＣＲプライマーは、公知のｈＡＱＰ４−４Ｍ２３の塩基配列に基づいて設計した。フォワードプライマー及びリバースプライマーの塩基配列はそれぞれ配列番号２及び３である。また、アフリカツメガエル卵母細胞に導入するために、ｈＡＱＰ４−Ｍ２３のｍＲＮＡをｐＳＰ３５Ｔ発現ベクターにサブクローニングした。【０１４１】
（１−３）卵母細胞へのマイクロインジェクション
Ｄｒｕｍｍｏｎｄマイクロインジェクションシステムを用いて、（１−２）で調製したｈＡＱＰ４−Ｍ２３  ｍＲＮＡ発現ベクターのマイクロインジェクションを行った。それぞれ３０ｎＬのｈＡＱＰ４−Ｍ２３  ｍＲＮＡ発現ベクター（１つの卵母細胞について３ｎｇのｍＲＮＡ発現ベクターを注入）、又はネガティブコントロールとして水を、卵母細胞に注入した。ＭＢＳ中において２０℃で３０分間、注入した卵母細胞を培養した。【０１４２】
（１−４）候補化合物の投与
続いて、注入の４８時間後、卵母細胞のうち４又は５個を４５０μＬ  ＭＢＳとともに４８ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３５２６）へ移した。続いて、アッセイの３０分前に、１％のＤＭＳＯ水溶液（Ｓｉｇｍａ社製、Ｈｉｂｒｉ−Ｍａｘ）中の２００μＭの候補化合物（製造例１で調製した化合物２Ａ）の溶液（５０μＬ）、又はブランク（１％のＤＭＳＯ）を分取して卵母細胞に投与した。培養培地の最終濃度は、候補化合物（製造例１で調製した化合物２Ａ）が２０μＭ、ＤＭＳＯが０．１％であった。【０１４３】
続いて、ＤＰ２６デジタルカメラ（オリンパス社製）に接続されたＳＺＸ１６顕微鏡（オリンパス社製）を用いて、移された卵母細胞を画像化した。プレートの温度は、ＭＡＴＳ−５５５５温度調整ステージ（東海ヒット社製）を用いて、２４℃にセットした。Ｈｙｐｏｔｏｎｉｃ試薬（１０００μＬ）を入れて、アッセイ初期画像（ｔ＝３秒）と、１５秒間隔の画像を、投与後２５０秒後まで記録した。２５０秒より前に死んだ卵母細胞は、分析から除外した。【０１４４】
（１−５）卵母細胞の容積の分析
続いて、画像をパーソナルコンピュータへ移し、各卵母細胞の領域をＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ−Ｊを用いて評価した。等しく定められた複数の測定時間における各卵母細胞の断面積値は、球状と仮定した体積に変換した。初期の卵母細胞画像と比較した相対体積は、各時間点において、少なくとも５個体（ｎ＝５）の卵母細胞で平均をとり、標準偏差を求めた。化合物２Ａを投与した結果を図１に示す。図１において、「Ｓｈａｍ」は水をインジェクションした卵母細胞を示し、「Ｂｌａｎｋ」はＡＱＰ４のｍＲＮＡをインジェクションし、化合物を投与していない卵母細胞を示し、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２Ａ」はＡＱＰ４のｍＲＮＡをインジェクションし、化合物２Ａを投与した卵母細胞を示している。【０１４５】
図１から、化合物２Ａを投与した卵母細胞において、有意に容積が増加したことが確かめられた。このことから、化合物２ＡはＡＱＰ４の機能を促進することにより、卵母細胞内に水を取り込ませ、容積が増加したものであると推察できる。【０１４６】
［試験例１］マウスを用いたＡＱＰ４の機能促進確認試験
（１）候補化合物のマウスへの投与
ジャクソン研究所から入手したオス正常Ｂ６ＳＪＬ−Ｔｇマウスを生後８週目まで飼育した。続いて、マウス５匹ずつに、比較例としてインドメタシン、製造例１で調製した化合物２Ａ、又はコントロールとして生理食塩水を腹腔内に投与した。【０１４７】
続いて、２０％Ｈ２１７Ｏを含む通常の生理食塩水０．２ｍＬを、各マウスの右大腿静脈に挿入されたＰＥ１０チューブを介して、０．０４ｍＬ／秒の速度で自動注射器を用いて、投与した。続いて、磁気共鳴イメージング（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ；ＭＲＩ）を用いて、マウス脳内（皮質（Ｃｏｒｔｅｘ）及び脳室（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ；ＣＳＦ））でのＨ２１７Ｏの動態を８秒間隔の画像を、投与後７０分後まで記録した。結果を図２Ａ（インドメタシン投与）及び図２Ｂ（化合物２Ａ投与）に示す。図２Ａ及び図２Ｂにおいて、Ｃｏｒｔｅｘに対するＣＳＦの相対値（ＣＳＦ／Ｃｏｒｔｅｘ）を示している。図２Ａ及び図２Ｂにおいて、「Ｖｅｈｅｃｌｅ」は無投薬のコントロール群を示し、「Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ」はインドメタシン投与群、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２Ａ」は化合物２Ａ投与群を示す。【０１４８】
図２Ａ及び図２Ｂにおいて、化合物２Ａを投与したマウスにおいて、ＣＳＦ／Ｃｏｒｔｅｘの数値が下がっており、水の排出（脳脊髄液の流れ）が良くなっていた。このことから、化合物２ＡはＡＱＰ４に直接作用し、機能を促進することができると推察される。【０１４９】
［試験例２］アルツハイマー病モデルマウスを用いたＡＱＰ４の機能促進確認試験
（１）候補化合物の準備
製造例１で調製した化合物２Ａ、及び以下の反応式で得られる２−グアニジノ−１−エタンスルホン酸（Ｇｕａｎｉｄｉｎｏｅｔｈｙｌ  Ｓｕｌｆｏｎａｔｅ；ＧＥＳ）（以下、「化合物１Ａ」と称する場合がある。）を委託製造して、用いた。【０１５０】
【化１３】
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【０１５１】
（２）候補化合物のマウスへの投与
５×ＦＡＤ  アルツハイマー病モデルマウスを生後４か月齢まで飼育した。続いて、マウスに、化合物１Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）、又は製造例１で調製した化合物２Ａ（２００ｍｇ／ｋｇ）を３か月間経口投与した。また、コントロールとして無投薬群も準備した。【０１５２】
（３）ＭＲＩを用いたマウス脳内（皮質（Ｃｏｒｔｅｘ）及び脳室（ＣＳＦ））でのＨ２１７Ｏの動態
化合物１Ａを投与したマウス群、及び無投薬群について、試験例１と同様の方法を用いて、ＭＲＩによるマウス脳内（皮質（Ｃｏｒｔｅｘ）及び脳室（ＣＳＦ））でのＨ２１７Ｏの動態を８秒間隔の画像を、投与後７０分後まで記録した。結果を図３に示す。図３において、「Ｖｅｈｅｃｌｅ」は無投薬群を示し、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ１Ａ」は化合物１Ａ投与群を示す。また、Ｃｏｒｔｅｘに対するＣＳＦの相対値（ＣＳＦ／Ｃｏｒｔｅｘ）を示している。【０１５３】
図３から、ＧＥＳを投与したアルツハイマー病モデルマウスにおいて、ＡＱＰ４機能促進を惹起することが明らかとなった。このメカニズムとしては、血管周囲腔のイオン緩衝作用によるＡＱＰ４の機能が促進亢進されたものと推察された。【０１５４】
（４）脳の免疫染色
次いで、各マウスから脳を摘出し、脳組織よりパラフィン包埋切片（４μｍ厚）を作製し、以下の方法により免疫組織染色を行った。
まず、切片をギ酸処理後、一次抗体として［１］Ｍｏｕｓｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄ  β（Ｔｏｔａｌ Ａβ）（１００２７、  ＩＢＬ、Ｊａｐａｎ）、［２］Ｒａｂｂｉｔ  ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄ  β１−４０（Ａβ４０）（１８５８０、ＩＢＬ、Ｊａｐａｎ）、又は［３］Ｒａｂｂｉｔ  ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄ  β１−４２（Ａβ４２）（１８５８２、ＩＢＬ、Ｊａｐａｎ）を用いて、４℃でＯｖｅｒｎｉｇｈｔ  ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎを行った。なお、各抗体の希釈倍率は［１］×５０、［２］×２００、［３］×２００である。二次抗体適用後に、ヒストファインＤＡＢ基質キット（ニチレイバイオサイエンス、ＪＡＰＡＮ）を用いたポリマー法により可視化した。無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてトータルＡβを染色した画像を図５Ａ、無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４０を染色した画像を図６Ａ、無投薬群、化合物１Ａ投与群、及び化合物２Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像を図４Ａ、並びに、無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像を図７Ａに示す。
図４Ａ〜図７Ａにおいて、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は無投薬群、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ１Ａ」は化合物１Ａ投与群、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２Ａ」は化合物２Ａ投与群を示す。【０１５５】
（５）老人班の定量
次いで、染色後の標本は明視野光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５３、ＤＰ７３）により組織像を撮影し、ＴＩＦＦフォーマット（２，４００×１，８００ｐｉｘｅｌｓ、３．５×２．６ｍｍ、２．１３μｍ２／ｐｉｘｅｌ）により画像を保存した。各画像を画像解析処理ソフト（Ａｑｕａｃｏｓｍｏｓ、浜松ホトニクス、Ｊａｐａｎ）の粒子解析機能を用いて以下の解析を行った。大脳皮質にＲＯＩを設定し、２値化方式による粒子の抽出と抽出した各粒子の面積（ｐｉｘｅｌ数）を自動計算して出力した。出力された粒子データのうち、１０ｐｉｘｅｌｓ以下の粒子はノイズとして除去し定量化した。無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてトータルＡβを染色した画像での老人班の定量結果を図５Ｂ、無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４０を染色した画像での老人班の定量結果を図６Ｂ、無投薬群、化合物１Ａ投与群、及び化合物２Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像での老人班の定量結果を図４Ｂ、並びに、無投薬群及び化合物１Ａ投与群の脳切片を用いてＡβ４２を染色した画像での老人班の定量結果を図７Ｂに示す。
図４Ｂ〜図７Ｂにおいて、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は無投薬群、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ１Ａ」は化合物１Ａ投与群、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２Ａ」は化合物２Ａ投与群を示す。
アミロイドβ（Ａβ）はアルツハイマー病の直接的な障害の原因と考えられており、その障害の中心をなすのが疎水性で凝集しやすいＡβ４２である。動物実験では親水性のＡβ４０を低下させた報告は多いが、これまでＡβ４２を有意に低下させる薬剤の報告は少ない。なお、トータルの老人班数はＡβ４０及びＡβ４２の両者を含んだものである。【０１５６】
図４Ａ及び図４Ｂから、化合物１Ａ及び化合物２Ａの経口投与により、アルツハイマー病モデルマウスの神経脱落の原因であるＡβ４２からなる老人班の増加を抑制できることが明らかとなった。【０１５７】
まず、図５Ａ、図５Ｂ、図６Ａ、図６Ｂ、図７Ａ，及び図７Ｂから、化合物１Ａの経口投与により、アルツハイマー病モデルマウスの老人班の増加を有意に抑制できることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１５８】
本実施形態のアクアポリン４機能促進剤は、ＡＱＰ４を直接促進する作用を有し、疾患の治療に有用な新規のアクアポリン４機能促進剤である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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