(57)【要約】【課題】水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤を提供することを目的とする。【解決手段】水溶性スルファサラジンを下記式で表されるＰＥＧ修飾スルファサラジンとして、抗腫瘍剤とする。【化１】2017119462.tif 000007（式中、ｎの平均値は４以上１１３６以下である。）
2017119462.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤であって、
前記水溶性スルファサラジンが下記式で表されるＰＥＧ修飾スルファサラジンである、抗腫瘍剤。
【化１】
2017119462.tif 000006
（式中、ｎの平均値は４以上１１３６以下である。）
【請求項２】
スルファサラジンを修飾しているＰＥＧの平均分子量が５００以上６０００以下である、請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
スルファサラジンを修飾しているＰＥＧの平均分子量が４０００以上６０００以下である、請求項１または２に記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】
注射剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ４４ｖは多くの上皮系腫瘍で発現が観察されるが、癌細胞の中でも、特に酸化ストレス抵抗性が高いことが知られる癌幹細胞と呼ばれる細胞集団で高発現している。【０００３】
ＣＤ４４ｖは、細胞表面分子であるシスチントランスポーターｘＣＴの安定性を高めるため、ＣＤ４４ｖが高く発現することでｘＣＴ発現が上昇し、その結果、細胞内へのシスチンの取り込みが促進される。取り込まれたシスチンは、細胞内の強力な抗酸化物質であるグルタチオンの産生に用いられ、細胞内のグルタチオン量が上昇する。その結果、癌細胞は高い酸化ストレス対応能を有し、治療抵抗性が高くなるとされている（特開２０１２−１４４４９８）。【０００４】
ところで、潰瘍性大腸炎や関節リウマチの治療に使用されている薬剤に、スルファサラジン(別名：サラゾスルファピリジン、サラゾピリン、サリチルアゾスルファピリジン)がある。スルファサラジンは、スルファピリジンと５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）の酸性アゾ化合物であり、経口投与すると、腸内で腸内細菌によりスルファピリジンと５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）に分解される。前記疾患に対しては、特に５−ＡＳＡが主な有効成分とされている。【０００５】
しかし近年、分解される前の未変化体のスルファサラジンにｘＣＴ阻害作用があり、抗腫瘍剤として有効であることが明らかになった（Leukemia vol.15, pp.1633-1640, 2001）。つまり、スルファサラジンを癌細胞に添加すると、ｘＣＴによる細胞内へのシスチンの取り込みが抑制され、グルタチオン産生量が低下し、その結果、癌細胞の酸化ストレス抵抗性が下がり、抗がん剤への感受性が上昇するのである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、腫瘍に有効なのは未変化体のスルファサラジンであるため、従来の経口剤のままでは、抗腫瘍効果が減弱することが考えられる。よって、局所注射剤などの注射剤としての開発が期待されるが、スルファサラジンは、水酸化ナトリウム水溶液やエタノールに溶解するものの、水に対してはほとんど溶解しない。【０００７】
そこで、本発明は、水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤を提供することを目的としてなされた。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一実施態様は、水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤であって、前記水溶性スルファサラジンが下記式で表されるＰＥＧ修飾スルファサラジンである、抗腫瘍剤である。【０００９】
【化１】
2017119462.tif 000003
（式中、ｎの平均値は４以上１１３６以下である。）
スルファサラジンを修飾しているＰＥＧの平均分子量が５００以上６０００以下であってもよく、１６００以上６０００以下であってもよく、４０００以上６０００以下であってもよい。また、前記抗腫瘍剤は注射剤であってもよい。【００１０】
＝＝関連文献とのクロスリファレンス＝＝
本出願は、２０１６年１月６日付で出願した日本国特許出願２０１６−００１１２８に基づく優先権を主張するものであり、当該基礎出願を引用することにより、本明細書に含めるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の一実施例において得られた、スルファサラジンの抗腫瘍効果を示すグラフである。*はp<0.05を示す。
【図２】実施例で用いたＰＥＧ化スルファサラジンの構造式である。上式をＡ型、下式をＢ型と呼ぶ。
【図３】本発明の一実施例において製造したＡ型ＰＥＧ化スルファサラジン及びＢ型ＰＥＧ化スルファサラジンの、ＮＭＲによる解析結果を示すグラフである。
【図４】本発明の一実施例において得られた、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンのグルタミン酸排出抑制効果を示すグラフである。*はp<0.05を示す。
【図５】本発明の一実施例において得られた、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンの細胞内活性酸素レベル増強効果を示すグラフである。*はp<0.05を示す。
【図６】本発明の一実施例において、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンの細胞毒性の濃度依存性を示すグラフである。
【図７】本発明の一実施例において用いられた、腫瘍形成マウスに対するスルファサラジンの投薬スケジュールである。
【図８】本発明の一実施例における、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）の投薬開始日からの腫瘍形成マウスの体重平均値の推移を表すグラフである。
【図９】本発明の一実施例における、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）の投薬開始日からの腫瘍形成マウスの腫瘍体積平均値の推移を表すグラフである。*はp<0.05を、**はp<0.001を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【００１３】
＝＝ＰＥＧ修飾スルファサラジン＝＝
本発明の水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤は、下記式で表されるＰＥＧ修飾スルファサラジンである。
【００１４】
【化１】
2017119462.tif 000004
（式中、ｎの平均値は４以上１１３６以下であることが好ましく、２０以上２２７以下であることがより好ましく、８０以上１３６以下であることがさらに好ましい。）
スルファサラジンを修飾しているＰＥＧの平均分子量は特に限定されないが、下限は、２００であることが好ましく、５００であることがより好ましく、１０００であることがさらに好ましく、１６００であることがさらに好ましく、１８００であることがさらに好ましく、４０００以上であることがさらに好ましく、４５００以上であることがさらに好ましい。上限は、５００００であることが好ましく、２００００であることがより好ましく、１００００であることがさらに好ましく、６０００であることがさらに好ましく、５５００であることがさらに好ましい。
【００１５】
ＰＥＧ修飾スルファサラジンの製造は、＜製造例１＞及び＜製造例２＞に記載のように、ＰＥＧ分子末端とスルファサラジンとの化学反応によって行われるが、具体的な方法は特に限定されず、周知技術によって行うことができる。製造方法の概要は、例えば、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンについてはＰＥＧ末端のアミノ基とスルファサラジン内カルボン酸との縮合反応にて行い、Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジンについてはＰＥＧ末端のヨウ素基とスルファサラジン内水酸基との求核置換反応によって行われる。
【００１６】
＝＝抗腫瘍剤＝＝
水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤の剤形は、特に限定されず、種々の剤形が考えられるが、非経口剤であることが好ましく、例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤などの注射剤；経皮投与または貼付剤、軟膏またはローション；口腔内投与のための舌下剤、口腔貼付剤；ならびに経鼻投与のためのエアゾール剤；坐剤とすることができるが、これらには限定されない。これらの製剤は、製剤工程において通常用いられる公知の方法により製造することができる。また本発明に係る薬剤は、持続性または徐放性剤形であってもよい。
【００１７】
中でも注射剤が好ましく、それによって、腫瘍近傍または腫瘍内に注射することのできる局所注射剤がさらに好ましい。腫瘍近傍とは、腫瘍塊の外表面から、約５ｃｍ以内であることが好ましく、約３ｃｍ以内であることがより好ましく、約１ｃｍ以内であることがさらに好ましく、約０．５ｃｍ以内であることがさらに好ましい。注射剤を調製する場合は、有効成分にpH調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加し、周知技術により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。この場合のpH調節剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどを挙げることができる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、チオグリコール酸、チオ乳酸などを挙げることができる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどを挙げることができる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが例示できる。
【００１８】
薬剤に含有される有効成分の量は、該有効成分の用量範囲や投薬の回数などにより適宜決定できる。そして投与する用量範囲は特に限定されず、含有される成分の有効性、投与形態、投与経路、疾患の種類、対象の性質（体重、年齢、病状および他の医薬の使用の有無など）、および担当医師の判断などに応じて適宜選択される。一般的には適当な用量は、例えば対象の体重１ｋｇあたり約０．０１μｇ〜１００ｍｇ程度、好ましくは約０．１μｇ〜１ｍｇ程度の範囲であることが好ましい。しかしながら、当該分野においてよく知られた最適化のための一般的な常套的実験を用いてこれらの用量の変更を行うことができる。上記投与量は１日１回〜数回に分けて投与することができる。
【実施例】
【００１９】
（１）スルファサラジンの抗腫瘍効果
ＣＤ４４ｖ依存的に増殖するヒト大腸がん細胞ＨＣＴ１１６を用い、ＫＳＮヌードマウスに皮下投与し、腫瘍を形成させた。１０匹のマウスに細胞を移植し、５匹は、２５０ｍｇ／ｋｇのスルファサラジン、５匹は１００μｌの生理食塩水を毎日一回腹腔内注射した。移植１４日後と２８日後に腫瘍径を計測し、腫瘍径に基づき重量を計算し、各群で比較した。【００２０】
図１に示すように、スルファサラジンを投与した群では、対照群に比べて腫瘍増殖が有意に遅かった。このように、スルファサラジンは、腫瘍増殖抑制効果を有する。【００２１】
（２）ＰＥＧ修飾スルファサラジンの合成
本実施例では、図２の上図に示すＡ型ＰＥＧ化スルファサラジンおよび下図に示すＢ型ＰＥＧ化スルファサラジンを合成した。【００２２】
＜製造例１＞Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンの製造
５００ｍｇのα-Methoxy-ω-amino-poly(ethylene glycol)（平均分子量：５０００ Ｄａ）［日本油脂（株）、SUNBRIGHT PA (商品名)、CAS登録番号：116164-53-5］を２０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、３００ｍｇのＤＭＴ−ＭＭ（4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium Chloride） [CAS登録番号：3945-69-5]、４００ｍｇのスルファサラジンと混合した後に５０℃で２４時間撹拌した。得られた溶液中のテトラヒドロフランを減圧留去し、１０ｍＬの０．０１Ｍ塩酸にて再度懸濁した。懸濁溶液を２００００×ｇ、４℃で６０分遠心処理し、上澄みを飽和塩化アンモニウム水と塩化メチレンとを用いて分液処理し、塩化メチレン層を抽出した後に溶媒を減圧留去した。得られた固形物を純水に溶解した後にＰＤ−１０カラムにて精製し、凍結乾燥することで目的物（Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン）として黄色粉末を得た（収量：４５０ｍｇ）。図３ＡにＮＭＲの測定結果を示す。【００２３】
＜製造例２＞Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジンの製造
３００ｍｇのα-Iodoacetamidopropyl-ω-methoxy-poly(ethylene glycol)を５ｍＬのDMFに溶解し、さらに炭酸セシウム１００ｍｇを懸濁させた。６３ｍｇのスルファサラジンをさらに加えて、５０℃にて一晩撹拌した。反応溶液をメタノールにて透析精製し、溶媒を減圧留去した後に１０ｍＬの０．０１Ｍ塩酸にて再度懸濁した。懸濁溶液を２００００ｘｇ、４℃で６０分遠心処理し、上澄みをＰＤ−１０カラムにて精製し、凍結乾燥することで目的物（Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジン）として黄色粉末を得た（収量：２７０ｍｇ）。図３ＢにＮＭＲの測定結果を示す。【００２４】
（３）グルタミン酸排出量の測定
スルファサラジンはｘＣＴ阻害作用が有り、癌細胞に添加すると、ｘＣＴによる細胞内へのシスチンの取り込みを抑制するが、ｘＣＴはシスチンの取り込みと共役してグルタミン酸の排出を行うため、グルタミン酸の排出量抑制を調べることによって、ｘＣＴ阻害活性を調べることができる。そこで、本実施例では、ＰＥＧ化スルファサラジンのｘＣＴ阻害活性をグルタミン酸排出量を測定することによって調べた。【００２５】
ＤＭＥＭ（ナカライテスク、０８４５９−６４；なお、グルタミン酸、１０％ＦＢＳ、抗生剤非含有）を用いて、６ウェルプレートに頭頸部扁平上皮癌細胞株であるＯＳＣ１９細胞株を２００，０００個／ウェルで播種した。１２時間後、細胞がプレート底面に張り付いたあとに、ＤＭＥＭで２度洗い、スルファサラジン、ＰＥＧ化スルファサラジン（Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン：ＰＥＧ２０００またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの、及びＢ型ＰＥＧ化スルファサラジン：ＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）を、４００μＭ（スルファサラジン換算）含有する２ｍｌのグルタミン酸無添加培地に置換した。８時間後に、Glutamate assay kit (Abcam社製)を用い、培地中に含有されるグルタミン酸量を吸光度で測定した。なお、薬剤無添加培地そのものの吸光度測定値をバックグラウンドとして、薬剤添加培地または薬剤無添加培地で培養した後の各培地の測定値より減算し、グルタミン酸量の測定値とした。そして、薬剤無添加の値を１として、各々の値を比で求め、グラフ化した（図４）。【００２６】
図４のグラフから明らかなように、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンは、ＰＥＧ２０００またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したものが共に、薬剤無添加と比べ、有意にグルタミン酸排出を抑制した。また、Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジンと比べても、有意にグルタミン酸排出を抑制した。【００２７】
このように、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンは、スルファサラジンより若干弱いものの、ｘＣＴ阻害活性を有する。しかし、Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジンは、ｘＣＴ阻害活性を有しない。【００２８】
（４）細胞内活性酸素測定
スルファサラジンはｘＣＴ阻害作用が有り、癌細胞に添加すると、ｘＣＴによる細胞内へのシスチンの取り込みを抑制する。シスチンは細胞内で還元型グルタチオンに変換される。還元型グルタチオンは、細胞内の活性酸素量の増加を抑制する作用があるため、ｘＣＴを阻害すると、細胞内の活性酸素量が上昇する。従って、細胞内の活性酸素量を調べることによって、ｘＣＴ阻害活性を調べることができる。そこで、本実施例では、ＰＥＧ化スルファサラジンのｘＣＴ阻害活性を細胞内の活性酸素量を測定することによって調べた。【００２９】
（３）と同じ培地を用いて９６ウェルプレートにＯＳＣ１９細胞株を４０００個／ウェルで播種した。翌日、スルファサラジン、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンを、４００μＭ（スルファサラジン換算）で添加した。２４時間後、細胞内活性酸素レベルとしてＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ（Ｈ２ＤＣＦＤＡのクロロメチル誘導体）の蛍光強度をプレートリーダーで測定した。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡは、細胞内において過酸化水素、ヒドロキシラジカル、ペルオキシナイトライトなどと反応することで、Ｈ２ＤＣＦが速やかに酸化されてＤＣＦが生成し、蛍光を発するため、蛍光強度が細胞内活性酸素レベルの指標となる。また、細胞数をＨｏｃｈｅｓｔ３３３４２の蛍光強度で測定した。Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２は核を染色するため、その蛍光強度は細胞数と比例する。そして、各ウェルの１細胞あたりの細胞内活性酸素レベルを、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ／Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２の比として算出した。薬剤無添加の細胞内活性酸素レベルを１として、薬剤添加群の細胞内活性酸素レベルの相対値を算出し、グラフ化した（図５）。【００３０】
図５のグラフから明らかなように、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンは、ＰＥＧ２０００またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したものが共に、薬剤無添加と比べ、有意に細胞内活性酸素レベルを増強した。また、Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジンと比べても、有意に細胞内活性酸素レベルを増強した。【００３１】
このように、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンは、スルファサラジンより若干弱いものの、細胞内活性酸素レベルを増強する。しかし、Ｂ型ＰＥＧ化スルファサラジンは、細胞内活性酸素レベルを増強しない。【００３２】
（５）細胞生存アッセイ
本実施例では、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ２０００またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）を用い、濃度による細胞毒性をスルファサラジンと比較した。【００３３】
（３）と同じ培地を用いて、９６ウェルプレートにＴ９８Ｇ細胞株を３０００個／ウェルで播種した。翌日、スルファサラジン、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンを、スルファサラジン濃度換算で０〜１２５０μＭで添加した。その２日後に、細胞の生存率を、CellTiter-Glo (Promega社製)を用いて測定した。無添加（０μＭ）の生存率を１００％として、各濃度での生存率を求め、グラフ化した（図６）。【００３４】
図６のグラフから明らかなように、４００μＭまでは、いずれも細胞生存率が上昇した。そして、スルファサラジンとＡ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ２０００でＰＥＧ化したもの）は、ほぼ同じ濃度依存性を示したが、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）は、４００μＭ以降も、スルファサラジンとＡ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ２０００でＰＥＧ化したもの）より細胞生存率が高かった。【００３５】
このように、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）では、細胞生存率が上昇するが、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ２０００でＰＥＧ化したもの）でも、スルファサラジンと同等の細胞生存率を有する。【００３６】
（６）スルファサラジン、ＰＥＧ化スルファサラジンの溶解性試験
粉末状の１０ｍｇのスルファサラジンと２５ｍｇのＡ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）を１００μＬの純水および生理食塩水に溶解させた。この際、室温において、スルファサラジンの不溶分が水溶液中に残存していることが確認されたため、スルファサラジンが飽和しているものと考えられた。Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンに関しては完全に溶解し、不溶分は存在しなかった。得られた水溶液を室温にて８０００ｒｐｍで３０分遠心処理し、上澄みの５０μＬをとった。上澄みに対して１μＬの５Ｎ―ＮａＯＨ水溶液を添加し、得られた水溶液におけるＵＶ吸収（２３８ｎｍ）を測定することで、水溶液中のスルファサラジン濃度（純水および生理食塩水への溶解度）を算出した。【００３７】
表１に示すように、スルファサラジンの室温での水および生理食塩水中への飽和溶解度は、それぞれ０．０５０ｍｇ／ｍＬおよび０．０３７ｍｇ／ｍＬであったのに対し、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンとすることで、それぞれ少なくとも２０．５ｍｇ／ｍＬおよび１９．１ｍｇ／ｍＬのスルファサラジンが室温で可溶となった。【００３８】
【表１】
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【００３９】
（７）Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）の抗腫瘍活性評価
本実施例では、スルファサラジンをＰＥＧ化するために用いるＰＥＧの平均分子量の、抗腫瘍活性に対する影響を評価した。【００４０】
１×１０6個のＯＳＣ１９細胞を含む細胞懸濁液を４週齢の雌マウス（ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕ）の背部に皮下移植し、腫瘍を形成させた。移植から６日後、腫瘍体積が約６０ｍｍ3になった時点で、細胞を移植した２５匹のマウスを５匹ずつ５群に分け、各群それぞれＡ型ＰＥＧ化スルファサラジン（ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、またはＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）、又は生理食塩水を投薬した。まず、Ａ型ＰＥＧ500−スルファサラジン（スルファサラジンをＰＥＧ５００でＰＥＧ化したもの）１１．３ｍｇ、Ａ型ＰＥＧ1k−スルファサラジン（スルファサラジンをＰＥＧ１０００でＰＥＧ化したもの）１７．６ｍｇ、Ａ型ＰＥＧ2k−スルファサラジン（スルファサラジンをＰＥＧ２０００でＰＥＧ化したもの）３０．１ｍｇ、Ａ型ＰＥＧ5k−スルファサラジン（スルファサラジンをＰＥＧ５０００でＰＥＧ化したもの）６７．８ｍｇをそれぞれ生理食塩水に溶解させることで、３１．５ｍＭ（スルファサラジン換算）の注射剤を調整した。調整した薬剤の一回投与用量を４００μｌ（スルファサラジン換算で２５０ｍｇ／ｍｌ）とし、図７の投薬スケジュールに従い、各群２日に１回、調整したＡ型ＰＥＧ化スルファサラジン注射剤または生理食塩水を静脈注射した。なお、投薬回数は計７回（投薬開始日を０日とし、投薬開始０、２、４、６、８、１０、１２日後）とした。投薬開始０、３、６、９、１２、１５日後に、腫瘍形成マウスの体重と、体外から観察した腫瘍の長径、短径を計測し、測定した腫瘍径に基づき腫瘍体積を算出した。図８と図９に、投薬開始日からの各群の体重平均値の推移（図８）と各群の腫瘍体積平均値の推移（図９）をグラフ化した。【００４１】
図８に示すように、すべての群で有意な体重の変化が観察されなかったことから、投与したＡ型ＰＥＧ化スルファサラジンに毒性がないことが確認された。そして、図９に示すように、投薬開始から１５日後において、Ａ型ＰＥＧ化スルファサラジンを投与したすべての群で、生理食塩水を投与した群と比べて有意に高い抗腫瘍活性を確認することができた。【００４２】
このように、スルファサラジンをＰＥＧ化するために用いるＰＥＧの平均分子量に関わらず、ＰＥＧ修飾スルファサラジンは抗腫瘍活性を有する。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明によって、水溶性スルファサラジンを有効成分として含有する抗腫瘍剤を提供することができるようになった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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