(57)【要約】  本発明は、優れた治療効果を有するがん治療薬を提供することを目的とする。CBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてがんを治療することにより、がんへの治療効果が増すだけではなく、免疫チェックポイント阻害剤だけでは感受性の低いがん患者に対しても効果的に治療することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
CBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬。
【請求項２】
免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1アンタゴニスト、PD-L1アンタゴニスト、PD-L2アンタゴニスト、CTLA-4アンタゴニスト、KIRアンタゴニスト、CD137アンタゴニスト、LAG3アンタゴニストおよびOX40アンタゴニストから選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である請求項１記載のがん治療薬。
【請求項３】
免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗KIR抗体、抗LAG3抗体および抗OX40抗体から選択されるが１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である請求項１記載のがん治療薬。
【請求項４】
CBP／カテニン阻害剤が、CBP／カテニン阻害活性をもつα−へリックス模倣化合物である請求項１〜３のいずれか１項に記載のがん治療薬。
【請求項５】
前記α−へリックス模倣化合物がＷＯ２００３／０３１４４８、ＷＯ２００４／０９３８２８、ＷＯ２００５／１１６０３２、ＷＯ２００９／１４８１９２、ＷＯ２０１０／０４４４８５、ＷＯ２０１０／１２８６８５、ＷＯ２０１２／１１５２８６、及び／又はＷＯ２０１５／０９８８５３に記載されるα−へリックス模倣化合物のいずれか１種以上の化合物である請求項４記載のがん治療薬。
【請求項６】
CBP／カテニン阻害剤が下記の化合物から選ばれる１種以上である請求項１〜４のいずれか１項に記載のがん治療薬。
（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソ−３，６，９，９ａ−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボキサミド（ＩＣＧ−００１）、
４−（（（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート、
（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、及び
（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−８−（（６−（３−（４−エチルピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル）ピリジン−２−イル）メチル）−６−（（２−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）メチル）−４，７−ジオキソ−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド
【請求項７】
有効量のCBP／カテニン阻害剤および有効量の免疫チェックポイント阻害剤をそれを必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法。
【請求項８】
免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1アンタゴニスト、PD-L1アンタゴニスト、PD-L2アンタゴニスト、CTLA-4アンタゴニスト、KIRアンタゴニスト、CD137アンタゴニスト、LAG3アンタゴニストおよびOX40アンタゴニストから選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である請求項７記載の方法。
【請求項９】
免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗KIR抗体、抗LAG3抗体および抗OX40抗体から選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である請求項７記載の方法。
【請求項１０】
CBP／カテニン阻害剤が、CBP／カテニン阻害活性をもつα−へリックス模倣化合物である請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記α−へリックス模倣化合物がＷＯ２００３／０３１４４８、ＷＯ２００４／０９３８２８、ＷＯ２００５／１１６０３２、ＷＯ２００９／１４８１９２、ＷＯ２０１０／０４４４８５、ＷＯ２０１０／１２８６８５、ＷＯ２０１２／１１５２８６、及び／又はＷＯ２０１５／０９８８５３に記載されるα−へリックス模倣化合物のいずれか１種以上の化合物である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
CBP／カテニン阻害剤が下記化合物から選ばれる１種以上である請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソ−３，６，９，９ａ−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボキサミド（ＩＣＧ−００１）、
４−（（（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート、
（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、及び
（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−８−（（６−（３−（４−エチルピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル）ピリジン−２−イル）メチル）−６−（（２−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）メチル）−４，７−ジオキソ−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、CBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてがんを治療する方法およびがん治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、がん治療においては免疫チェックポイント阻害剤の開発が活発化しており、その中で抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体はがん治療薬として市販されている。
PD-1（programmed death 1）は、抗原提示細胞に発現するそのリガンドであるPD-L1およびPD-L2と結合し、細胞障害性T細胞（CD8陽性T細胞）に抑制性シグナルを伝達して細胞障害性T細胞の活性化状態を負に調節している。PD-L1を強制発現させたがん細胞は、抗原特異的CD8陽性T細胞の細胞傷害活性を減弱させたり、アポトーシスを誘導したりすることが知られている。多くのがん細胞では、PD-L1が発現しており、高発現であるほどその予後が悪いことが知られている。抗PD-1抗体、ニボルブマブは、抑制性シグナルの伝達を遮断し、細胞障害性T細胞の活性化状態を維持し、がん細胞を攻撃する。
また、CTLA (cytotoxic T lymphocyte associated antigen)-4と抗原提示細胞にある共刺激分子CD80（B7-1）またはCD86（B7-2）が結合すると、抗原提示細胞によって細胞障害性T細胞の活性化が抑制される。抗CTLA-4抗体、イピリムマブはこの結合を阻害することで細胞障害性T細胞を活性化し増殖させる（図１参照）。
また、PD-L1については、胆道がんのがん幹細胞の研究において、PD-L1の発現が低下している細胞が、様々ながん幹細胞の特徴（造腫瘍能・静止期・ALDH活性等）を備えていることが報告されている（非特許文献１）。がん幹細胞の多くは、ＨＬＡクラスIの発現が陰性であり、細胞傷害性Ｔ細胞に認識されない。【０００３】
一方、がん細胞の多くはWntシグナルによりβ−カテニンが活性化されており、その結果、細胞増殖の制御機構が破綻し、細胞の癌化が進行すると考えられている。このようなことから、Wntシグナル経路の阻害剤が抗がん剤として検討されているが実用化されたものはない。
本発明者らが、抗がん剤として臨床開発中のCBP／カテニン阻害剤であるPRI-724は、ヒトにおいて従来の他のメカニズムのWnt阻害剤に比べ、明らかに低毒性であることを示した（非特許文献２）。このメカニズムとして、CBPとカテニンの結合を阻害した結果、CBPの代わりにCBPと類似性の高いP300が結合するようになる。この変化により、がんの増殖を抑え、分化を誘導すると考えられる(非特許文献３)。
最近、胆管がんは、Wnt-β−カテニン経路により腫瘍が増殖することが主たる経路であることが示され、CBP／カテニン阻害剤であるICG-001が動物モデルにおいて強い増殖阻害効果を有することが示された（非特許文献４）。
従来のWnt阻害剤は、Wntリガンドの産生を阻害し，受容体の機能をブロックし，カテニンの分解を促進する、などのメカニズムでシグナルを遮断するメカニズムのため、前臨床試験や臨床試験において毒性面の問題が生じ、開発が中止されたものがほとんどであった。これは、Wnt経路が生命維持に必須のためと考えられているからである。一方、CBP／カテニン阻害剤は、シグナルを遮断するのではなく、CBPからP300にスイッチを入れ替えることにより効果を示していることから安全性が高いと推測することができる。
さらに、β−カテニンは、T細胞分化を抑制することによりT細胞の活性化を抑制することも知られている（非特許文献５）。従って、CBP/β−カテニン阻害剤は、T細胞の分化を促進し、T細胞を活性化すると考えられる。
抗PD-1抗体や抗CTLA-4抗体は、臨床で著効を示す患者は限定的である。その理由として、がん患者において、CD-8陽性細胞数とβ−カテニンの発現が完全に逆に相関しておりβ−カテニンの発現が高い組織では、T細胞が少なく、逆に発現が低い組織では、T細胞が多いことが示され、T細胞が多い組織では著効を示す（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Cancer Sci (105) 667-674, 2014
【非特許文献２】J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 2501)
【非特許文献３】The EMBO Journal 2013, 1-13
【非特許文献４】J Clin Invest. 2015 Mar 2;125(3):1269-85. doi: 10.1172/JCI76452
【非特許文献５】J Immunol 2011; 186:784-790
【非特許文献６】Nature. 2015 May 11. doi: 10.1038 /nature14404.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
抗PD-1抗体や抗CTLA-4抗体が臨床で著効を示す患者は限定的であり、従来から用いられている様々ながん治療薬との併用が試みられているが、必ずしも満足な効果が得られていない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、PD-1−PD-L1阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤とCBP／カテニン阻害剤を組み合わせて使用することで、優れた治療効果が得られるであろうことを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）CBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬。
（２）免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1アンタゴニスト、PD-L1アンタゴニスト、PD-L2アンタゴニスト、CTLA-4アンタゴニスト、KIRアンタゴニスト、CD137アンタゴニスト、LAG3アンタゴニストおよびOX40アンタゴニストから選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である上記（１）記載のがん治療薬。
（３）免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗KIR抗体、抗LAG3抗体および抗OX40抗体から選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である上記（１）記載のがん治療薬。
（４）CBP／カテニン阻害剤が、CBP／カテニン阻害活性をもつα−へリックス模倣化合物である上記（１）〜（３）記載のがん治療薬。
（５）前記α−へリックス模倣化合物がＷＯ２００３／０３１４４８、ＷＯ２００４／０９３８２８、ＷＯ２００５／１１６０３２、ＷＯ２００９／１４８１９２、ＷＯ２０１０／０４４４８５、ＷＯ２０１０／１２８６８５、ＷＯ２０１２／１１５２８６、及び／又はＷＯ２０１５／０９８８５３に記載されるα−へリックス模倣化合物のいずれか１種以上の化合物である上記（４）記載のがん治療薬。
（６）CBP／カテニン阻害剤が下記化合物から選ばれる１種以上である上記（１）〜（４）記載のがん治療薬。
（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソ−３，６，９，９ａ−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボキサミド（ＩＣＧ−００１）、４−（（（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート、（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、及び（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−８−（（６−（３−（４−エチルピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル）ピリジン−２−イル）メチル）−６−（（２−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）メチル）−４，７−ジオキソ−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド
（７）有効量のCBP／カテニン阻害剤および有効量の免疫チェックポイント阻害剤をそれを必要とする対象に投与することを含む、がんの治療方法。
（８）免疫チェックポイント阻害剤が、PD-1アンタゴニスト、PD-L1アンタゴニスト、PD-L2アンタゴニスト、CTLA-4アンタゴニスト、KIRアンタゴニスト、CD137アンタゴニスト、LAG3アンタゴニストおよびOX40アンタゴニストから選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である上記（７）記載の方法。
（９）免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2抗体、抗CTLA-4抗体、抗KIR抗体、抗LAG3抗体および抗OX40抗体から選択される１種以上の免疫チェックポイント阻害剤である上記（７）記載の方法。
（１０）CBP／カテニン阻害剤が、CBP／カテニン阻害活性をもつα−へリックス模倣化合物である上記（７）〜（９）記載の方法。
（１１）前記α−へリックス模倣化合物がＷＯ２００３／０３１４４８、ＷＯ２００４／０９３８２８、ＷＯ２００５／１１６０３２、ＷＯ２００９／１４８１９２、ＷＯ２０１０／０４４４８５、ＷＯ２０１０／１２８６８５、ＷＯ２０１２／１１５２８６、及び／又はＷＯ２０１５／０９８８５３に記載されるα−へリックス模倣化合物のいずれか１種以上の化合物である上記（１０）記載の方法。
（１２）CBP／カテニン阻害剤が下記化合物から選ばれる１種以上である上記（７）〜（１０）記載の方法。
（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソ−３，６，９，９ａ−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボキサミド（ＩＣＧ−００１）、４−（（（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート、（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、及び（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−８−（（６−（３−（４−エチルピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル）ピリジン−２−イル）メチル）−６−（（２−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）メチル）−４，７−ジオキソ−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド
【発明の効果】
【０００７】
免疫チェックポイント阻害剤のがん治療効果と、CBP／β−カテニン阻害剤のがん治療効果との単純な相加効果ではなく、CBP／β−カテニン阻害剤は、細胞傷害性T細胞の活性化およびがん組織への遊走を促進しがん治療効果を増強するとともに、CBP／β−カテニンのがん細胞増殖効果を抑制する。CBP／β−カテニン阻害剤は、がん幹細胞の分化を促し抗原性を増すが、一方でPD-L1の発現を通じて、細胞傷害性T細胞の働きを抑制する恐れがあるが、免疫チェックポイント阻害剤は、PD-1とPD-L1の結合を阻害することで、CBP／β−カテニン阻害剤のがん治療効果を増す。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は免疫チェックポイント阻害剤の作用メカニズムを表す模式図である。
【図２】図２はCBP／β−カテニン阻害剤の作用メカニズムを表す模式図である。
【図３】図３は実施例１においてCBP／β−カテニン阻害剤が乳がん幹細胞を消失させたことを示す図である。
【図４】図４は実施例３においてCBP／β−カテニン阻害剤が結腸直腸がんの増殖を抑制したことを示す図である。
【図５】図５は実施例４においてCBP／β−カテニン阻害剤がIL-10を減らしたことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、CBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬を提供するものである。以下、詳細に説明する。
（ＣＢＰ／カテニン阻害剤）
β−カテニンは、Ｗｎｔシグナル伝達のメディエーターとして働き、転写因子であるＴｃｆ／Ｌｅｆ（T cell factor/Lymphocyte enhancing factor）と結合し、Ｗｎｔシグナル伝達に関係する様々な遺伝子（cyclin D1やc-Myc等）の発現を促進し、細胞の増殖や分化を制御する（He et al.,1998 Science 281 1509-1512: Kolligs et al.,1999 Mol.Cell.Biol.19,5696-5706: Crawford et al.,1999,Oncogene 18,2883-2891: Shtutman et al.,1999,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,11,5522-5527: Tetsu and McCormick,1999 Nature,398,422-426）（図２参照）。
ＣＢＰ（サイクリックＡＭＰ反応性エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）結合タンパク質）は、ＣＲＥＢ結合ドメインにおいてβ−カテニンと直接相互作用し、Ｔｃｆ／Ｌｅｆの転写活性化を促進する（Ken-Ichi Takemaru and Randall T.Moon,2000 J.Cell.Biol.,149,2,249-254）。
CBP／カテニン阻害剤とは、ＣＢＰとカテニン、特にβ−カテニンとの相互作用を阻害するものであれば特に限定されず、β−カテニンとＣＢＰとの結合を阻害し、その結果、β−カテニン複合体による遺伝子発現を抑制する態様が好ましい。
CBP／β−カテニン阻害は、自体公知のバインディングアッセイ（ラジオバインディングアッセイ等）、レポーターアッセイ法等によって測定することができるが、好ましくは、ＷＯ２００９／１４８１９２に記載のレポーターアッセイ法により、Ｗｎｔシグナル伝達の遺伝子発現を測定することにより確認することができる。
本発明のCBP／カテニン阻害剤は、上記に定義されるものである限り特に限定されるものではないが、好ましくは、CBP／カテニン阻害活性をもつα−へリックス模倣化合物であり、例えば、ＷＯ２００３／０３１４４８、ＷＯ２００４／０９３８２８、ＷＯ２００５／１１６０３２、ＷＯ２００９／１４８１９２、ＷＯ２０１０／０４４４８５、ＷＯ２０１０／１２８６８５、ＷＯ２０１２／１１５２８６等に記載されるα−へリックス模倣化合物、その医薬的に許容される塩などが挙げられる。
好ましくは、（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソ−３，６，９，９ａ−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボキサミド（ＩＣＧ−００１）、４−（（（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート（化合物１）、及び（６Ｓ，９Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド（化合物２）等が挙げられる。
【００１０】
本発明のCBP／カテニン阻害剤としては、ＷＯ２０１５／０９８８５３に記載されるＷｎｔ  Ｐａｔｈｗａｙ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ作用を有する化合物、その医薬的に許容される塩などもまた挙げられる。
好ましくは、（６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−８−（（６−（３−（４−エチルピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル）ピリジン−２−イル）メチル）−６−（（２−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）メチル）−４，７−ジオキソ−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド（化合物Ａ）等が挙げられる。
【００１１】
CBP／カテニン阻害剤は、常法により製剤化した医薬製剤（例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤など）として、投与することができる。例えば、有効成分の量に換算して、１日あたり約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１日あたり約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の投与量で、１回または数回に分けて投与するとよいが、その投与量、投与方法や投与回数は、症状、年齢などにより適宜変更しうる。例えば注射剤に製剤化する場合には、蒸留水、生理食塩水などの担体を用いるとよく、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤に製剤化する場合には、デンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウムなどの賦形剤、デンプンのり液、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの結合剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤など、デンプン、寒天、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤などを用いるとよい。製剤中の有効成分の含有率は、１〜９９重量％の間で変動させることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態をとる場合には、有効成分を５〜８０重量％含有させるのが好ましく、注射剤の場合には、有効成分を１〜１０重量％含有させるのが好ましい。
【００１２】
（免疫チェックポイント阻害剤）
免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、T細胞抑制受容体に対する遮断剤があげられる。Ｔ細胞抑制受容体に対する遮断剤は、一般に、特異的にＴ細胞抑制受容体の細胞外ドメイン又はＴ細胞抑制受容体リガンドの細胞外ドメインに結合する分子であり、例えば、Ｔ細胞抑制受容体の、CD80、CD86、PD-L1、PD-L2などのそれらのリガンドとの結合を遮断することによりＴ細胞抑制受容体の活性化を妨げる。具体的には、PD-1アンタゴニスト（ニボルブマブ、ペムブロリズマブ等の抗PD-1抗体等）、PD-L1アンタゴニスト（ピジリズマブ、MPDL-3280A、MEDI4736、MSB0010718C、MEDI0680等の抗PD-L1抗体等）、PD-L2アンタゴニスト（抗PD-L2抗体等）、CTLA-4アンタゴニスト（イビリムマブ、トレメリマブ等の抗CTLA-4抗体等）、KIRアンタゴニスト（リリルマブ等の抗キラー細胞免疫グロブリン様受容体抗体（抗KIR抗体）等）、CD137アンタゴニスト（ウレルマブ、PF-05082566等の抗CD137抗体等）、LAG3アンタゴニスト（BMS-986016等の抗リンパ球活性化因子３抗体（抗LAG3抗体）等）およびOX40アンタゴニスト（MEDI6469等の抗OX40抗体）が挙げられる。抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体が好ましい。
免疫チェックポイント阻害剤は常法により医薬組成物とすることができる。該医薬組成物は、多くの場合、１つ以上の緩衝液（例えば、中性の緩衝化された生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水）、糖質（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、又はデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチド、又はグリシンなどのアミノ酸、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、二亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソールなど）、静菌剤、ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤、組成物をレシピエントの血液と等張、低張、又はわずかに高張にする溶質、懸濁剤、増粘剤、防腐剤、香料、甘味料及び／又は着色化合物を必要に応じて更に含む。
【００１３】
（がん治療薬、がんの治療方法）
本発明はCBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬を患者へ投与することを含むがんを患う患者を治療する方法である。本明細書において記載されている方法は、がん治療、例えば白血病及び固形腫瘍（例えば黒色腫、がん、肉腫、リンパ腫など）を対象とする。具体的には腎臓がん、腎細胞がん、膀胱がん、尿路上皮がん、泌尿生殖器腫瘍、肺がん、肺扁平上皮がん、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、悪性黒色腫、ブドウ膜メラノーマ、眼メラノーマ、胃がん、食道がん、膠芽細胞腫、神経膠肉腫、転移性脳腫瘍、肝がん、転移性肝臓がん、肝細胞がん、肝細胞上皮がん、大腸がん、結腸がん、すい臓がん、転移性すい臓がん、転移性頭部扁平上皮がん、乳がん、転移性乳がん、悪性胸膜中皮腫、転移性頸部扁平上皮がん、転移性鼻咽頭がん、HPV-16陽性固形がん、骨髄線維症、原発性骨髄線維症（Primary myelofibrosis, PMF）及び真性多血症（Polycythemia vera, PV）又は本態性血小板血症（Essential thrombocythemia, ET）から移行した骨髄線維症、原発性骨髄線維症、再発上皮性卵巣がん、卵管がん、腹膜がん、転移性肉腫、ホルモン抵抗性前立腺がん、副腎皮質がん、非ホジキンリンパ腫、B-細胞リンパ腫、B-細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、T-細胞白血病、T-細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、骨髄異形成症候群などが挙げられる。
また、これらのがん患者のうち、β-カテニンが活性化されているがんに対して特に効果的である。
【００１４】
本発明のCBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬は、それぞれ別々にまたは一緒に、例えば、経口、経鼻、粘膜、直腸、膣内、局所、静脈内、腹膜内、皮内、皮下、及び筋肉内投与など、任意の投与に適切な方法で処方されうる。
本発明において、CBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬のそれぞれの投与量及び治療上有効な量の投与の時間を決めることは、十分当業者の知識の範囲である。例えば、最初の有効量は、細胞培養又はその他のインビトロアッセイから推定することができる。投与量は、動物モデルにおいて、細胞培養アッセイにより求められたＩＣ50の濃度など、循環濃度又は組織濃度を作りだすように処方することができる。
この発明の目的に関して、投与の方法は治療されている状態及び治療薬に依存して選択される。CBP／カテニン阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の投与は、多様な方法で行うことができ、例えば、限定はされないが、皮下、静脈内、腹膜内、筋肉内、及び、全身投与が好ましいが場合により特定の器官又は腫瘍への直接注入などが挙げられる。CBP／カテニン阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の投与は、単一の経路を通してか、又は同時にいくつかの経路によりうる。
CBP／カテニン阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤は、とりわけ、治療適応及び処方医師の判断により、１日１回、１日２回〜数回、又は更に１日複数回投与されうる。
治療効果を得るために必要なCBP／カテニン阻害剤及び免疫チェックポイント阻害剤の量は、特定の目的のための従来の手順に従って経験的に決定されうる。一般に、治療目的で細胞に投与するには、細胞は、薬理学的に有効な投与量にて与えられる。「薬理学的に有効な量」又は「薬理的に有効な投与量」とは、特に障害又は疾患の状態を治療するために、例えば障害又は疾患の１つ以上の症状又は兆候を低減又は取り除くことなど、所望の生理学的効果を生み出すのに十分なだけの量、又は所望の結果を達成できる量を指す。
本発明のCBP／カテニン阻害剤および免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせてなるがん治療薬は、その他のがん治療、例えば、外科的切除、放射線療法、化学療法、免疫療法、並びに支持療法（例えば鎮痛剤、利尿薬、抗利尿薬、抗ウイルス薬、抗生物質、栄養剤、貧血治療、血液凝固治療、骨治療、並びに精神病理学的及び心理学的な治療）などと組み合わせられうる。
以下に実施例を示して、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００１５】
実施例１
ヒト乳がん細胞株（MDA-MB-231）をHoechst BlueとHoechst Redで2次元セルソートしたSide Population画分（がん幹細胞が濃縮されていると考えられている）に、０．３μMのCBP／カテニン阻害剤（化合物２）を培養液に添加して４日後にはSide Population画分はほぼ消失（薬剤未処理の場合１．６％のSP細胞が検出されたが、化合物２処理群では、０％であった。）し、がん幹細胞は分化したと考えられた(図３)。【００１６】
治療例１
根治切除不能な悪性黒色腫患者に、ニボルマブを１回2mg/kg（体重）を3週間間隔で点滴静注するとともに、CBP／β−カテニン阻害剤(化合物１)を30mg/m2/日を点滴静注する。【００１７】
治療例２
根治切除不能な悪性黒色腫患者に、イピリムマブを１回3mg/kg（体重）を3週間間隔で点滴静注するとともに、CBP／β−カテニン阻害剤(化合物１)を100mg/m2/日を点滴静注する。【００１８】
実施例２
トランスジェニックマウス（MMTV-Wnt-1）自然発症乳がんを継代移植したモデル動物におけるCBP／カテニン阻害剤（化合物Ａ）と抗マウスPD-1（ＣＤ２７９）抗体の併用効果
乳腺上皮細胞に局所的にWnt-1を発現させたトランスジェニックマウス（MMTV-Wnt-1）の自然発症乳がんを採取し、背景系統となるマウス（C57BL/6J）にトラカールで移植継代した。移植継代した腫瘍が１．５ｇ程度になった時点で摘出し、３０ｍｇ程度の断片にし、各群５例のマウス（C57BL/6J）の体側皮下に移植した。腫瘍の生着を確認した後、化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、２１日間、経口投与）および抗マウスＰＤ−１抗体（Clone:RMP1-14、BioXCell）（１０ｍｇ／ｋｇ、１週２回、３週間、腹腔投与）をそれぞれ単独で、あるいは併用で投与した。
投与開始日を０日とし、以下、４、７、１１、１４、１８、および２１日に、各マウスに発生した腫瘍の長径および短径を、デジマチックキャリパ（Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ）で測定した。
以下の式に従って、腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積ＴＶ（ｍｍ３）＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
ＴＶの結果を表１にまとめた。化合物Ａおよび抗マウスＰＤ−１抗体を併用することにより、それぞれを単独投与した場合と比較して、統計的有意（＊ｐ＜０．０５）に優れた抗腫瘍効果を示した(Repeated measures ANOVA followed by Dunnett’s type multiple comparison)。【００１９】
【表１】
2016204193.tif 000002
【００２０】
実施例３
ＢＡＬＢ／Ｃマウスに結腸直腸がん細胞を移植したモデル動物におけるCBP／カテニン阻害剤（化合物１）と抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体の併用効果
結腸直腸がん細胞であるＣＴ２６細胞を雌性ＢＡＬＢ／Ｃマウスの右腹部に皮下移植した。平均８０ｍｍ３の平均腫瘍サイズになるまで飼育した後、１群１０例となるように以下に従って群分けした。
群１：ベヒクル群
群２：抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体単独投与群
群３：化合物１単独投与群
群４：化合物１及び抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体の併用投与群
化合物１（８０ｍｇ／ｋｇ、１日１回、２１日間、腹腔内投与）および抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体（カタログ番号：ＢＥ０１０１−１００ＭＧ、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）（２ｍｇ／ｋｇ、１週２回、２週間、腹腔投与）をそれぞれ単独で、あるいは併用で投与した。
投与開始日を０日とし、以下、３、６、９、１２、および１５日に、各マウスに発生した腫瘍の長径および短径を測定した。
以下の式に従って、腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
腫瘍体積の結果を図４にまとめた。化合物１および抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体を併用することにより、それぞれを単独投与した場合と比較して、統計的有意（＊ｐ＜０．０１）に優れた抗腫瘍効果を示した(Repeated measurement Two-Way ANOVA)。【００２１】
実施例４
CBP／カテニン阻害剤（化合物１）のＩＬ−１０産生抑制作用
米国ＮＩＨでヒト悪性黒色腫患者から樹立された細胞株（メラノーマ）である、６２４ｍｅｌ細胞及び９２８ｍｅｌ細胞を用いた。これらの細胞は活性化され、ＩＬ−１０産生能を有している。
培養液（１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０、ペニシリン及びストレプトマイシン添加）中、１×１０５細胞／２ｍｌ／ウェルの濃度で各メラノーマ細胞を６ウェルプレートに播種した。播種後、化合物１を所定の濃度になるように添加し２４時間培養した。２４時間後に培養上清を回収し、上清中のＩＬ−１０の濃度を測定した。ＩＬ−１０濃度の測定には、Human IL10 OptEIA ELISA set（ＢＤ社、♯５５５１５７）を用いた。
結果を図５に示す。
化合物１を１μＭ添加した場合はいずれの細胞においても増殖への影響が確認されたが、化合物１を０．２μＭ添加した場合はいずれの細胞においても増殖への影響は確認されなかった。増殖に影響が出ない条件下（０．２μＭ）でもＩＬ−１０の産生が抑制されたことから、化合物１がＩＬ−１０産生抑制作用を有していることがわかった。
免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ−１抗体や抗ＣＴＬＡ−４抗体に臨床で著効を示す患者は限定的であり、その効果はがん患者におけるCD-8陽性Ｔ細胞数に左右されることが知られている。特にCD-8陽性Ｔ細胞数とβ−カテニンの発現は完全に逆に相関しておりβ−カテニンの発現が高い組織では、T細胞が少なく、逆に発現が低い組織では、T細胞が多い。
CBP／カテニン阻害剤はβ−カテニンの発現が高い組織により高い効果を示すが、一方でそのＩＬ−１０産生抑制作用によりCD-8陽性Ｔ細胞数を増加させることができる。従って、CBP／カテニン阻害剤は免疫チェックポイント阻害剤と併用することによって、より高い抗がん効果が得られることがわかった。【００２２】
本出願は、日本で出願された特願２０１５−１２１４７９（出願日２０１５年６月１６日）を基礎としておりその内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１】
2016204193.tif 000003
【図２】
2016204193.tif 000004
【図３】
2016204193.tif 000005
【図４】
2016204193.tif 000006
【図５】
2016204193.tif 000007
【国際調査報告】
2016204193.tif 000008
2016204193.tif 000009
2016204193.tif 000010
2016204193.tif 000011
2016204193.tif 000012
2016204193.tif 000013