(57)【要約】  炎症症状の緩和、改善、さらには炎症性疾患の予防、治療に効果的で、且つ、副作用が少ない安全な抗炎症剤を提供することを課題とし、また、前記抗炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することを課題とし、７分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤及び前記抗炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することにより上記課題を解決する。
2017018336.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤。
【請求項２】
前記ケトアルドヘキソース構造が３−ケトアルドヘキソース構造又は２−ケトアルドヘキソース構造である請求項１記載の抗炎症剤。
【請求項３】
前記糖質が、単糖、二糖又はその糖アルコールである請求項１又は２記載の抗炎症剤。
【請求項４】
前記糖質が、そのケトアルドヘキソース構造の１位水酸基が他の糖又は糖以外の置換基と結合している糖質であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項５】
前記３−ケトアルドヘキソース構造が、３−ケトグルコース構造又は３−ケトガラクトース構造である請求項２乃至４のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項６】
前記３−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質が、３−ケトトレハロース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトラクトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース及び３−ケトマルチトールから選ばれる１種又は２種以上である請求項２乃至５のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項７】
前記２−ケトアルドヘキソース構造が、２−ケトグルコース構造である請求項２乃至４のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項８】
前記２−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質が、２−ケトグルコース又は２−ケトトレハロースである請求項２乃至４及び７のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項９】
炎症性サイトカインである腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）又はインターロイキン−８（ＩＬ−８）の産生を抑制する請求項１乃至８のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項１０】
前記抗炎症剤の対象とする炎症が慢性炎症である請求項１乃至９のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項１１】
慢性炎症が糖尿病、慢性呼吸器疾患、慢性関節リウマチ、胃炎、肝炎、炎症性腸疾患、神経変性疾患、心血管障害、乾癬、アトピー性皮膚炎、歯周病のいずれかである請求項１０記載の抗炎症剤。
【請求項１２】
分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を０．１％乃至９０％含有する請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗炎症剤。
【請求項１３】
請求項１乃至１２のいずれかに記載の抗炎症剤を含有する化粧品、食品、医薬部外品又は医薬品。
【請求項１４】
分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質において、そのアルドヘキソース構造における他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基をケト基に変換することを特徴とする、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用の向上方法。
【請求項１５】
前記他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基が３位水酸基又は２位水酸基である請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
ケト基への変換が、酵素法又は発酵法によって行われる請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１７】
分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質が単糖又は二糖である請求項１４乃至１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記二糖がトレハロース、コージビオース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、スクロース及びマルチトールである請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記単糖がグルコースである請求項１７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤に関し、詳細には、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン８（ＩＬ−８）の産生を抑制することにより抗炎症作用を発揮する、抗炎症剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、生体組織に何らかの有害な刺激を起こす物質（起炎物質）が作用したときに生体が示す局所での一過性の反応であり、生体防御反応の一種である。しかしながら、生体組織に対してもダメージを与えることから、炎症が慢性化した場合、過剰な炎症反応はかえって有害となる。近年、生活スタイルの変化や、大気汚染、排気ガスや過度の紫外線への暴露などによる酸化ストレスの増大などにより、多種多様な炎症性疾患に関する患者数が全体として増大傾向にある。【０００３】
スキンケア製品などの化粧品、歯磨きなどの医薬部外品及び口内炎治療剤などの医薬品の抗炎症成分として、グリチルリチン酸ジカリウム（以下、「ＧＫ２」と略称する場合がある）が幅広く利用されている。しかしながら、ＧＫ２は、マメ科の植物であるカンゾウ（甘草）の根に含まれるグリチルリチン酸の誘導体であり、優れた抗炎症効果を有するものの、ステロイド様作用を有するため、配合比率、使用量の上限が厳しく規定されている。このような状況下、炎症症状の緩和、改善に加え、炎症性疾患の予防、治療のために安心して利用できる抗炎症剤が求められている。【０００４】
一般に糖質は、安全性が高い化合物として認識されており、近年、各種糖質の抗炎症剤としての利用が提案されている。特許文献１には、グルコ二糖であるニゲロース（３−Ｏ−α−グルコシルグルコース）やこれを多く含むニゲロオリゴ糖が炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α又はインターロイキン６（ＩＬ−６）の産生を抑制し、抗炎症剤として使用できることが開示されている。また、特許文献２には、アガロース（寒天）をβ−アガラーゼによって分解して得られるネオアガロビオース、ネオアガロテトラオース及びネオアガロヘキサオースからなる糖類がＩＬ−６の産生を抑制し、抗炎症剤として使用できることが開示されている。さらに、非特許文献１には、ケトヘキソースの一種であるＤ−プシコースが抗炎症作用を有することが開示されている。加えて、特許文献３には、トレハロースとコンドロイチン硫酸とを含有する抗炎症用食品が開示されている。【０００５】
しかしながら、上記の糖質を有効成分とする抗炎症剤は、安全性が高い半面、抗炎症作用が比較的弱く、多量に用いないと所期の効果が得られない場合があるなどの問題点があった。このような状況下、炎症症状の緩和、改善に加え、炎症性疾患の予防、治療のために、より効果的で、且つ、副作用が少ない安全な抗炎症剤の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第５４４４４２５号公報
【特許文献２】特許第５１５４７６２号公報
【特許文献３】特許第３２４７８７３号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】ムラオ（Ｋ.  Ｍｕｒａｏ）ら、『ライフサイエンス（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）』、第８１巻、５９２−５９９（２００７年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、炎症症状の緩和、改善、さらには炎症性疾患の予防、治療に効果的で、且つ、副作用が少ない安全な抗炎症剤を提供することを課題とし、また、前記炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することを課題とするものである。さらに、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用向上方法を提供することを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、一般的に安全性が高いと期待される糖質を対象に、従来から抗炎症作用を有することが知られている上記糖質より強い抗炎症作用を有する物質を探索した。具体的には、生体における過剰な炎症反応の多くが、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）などの炎症性サイトカインの過剰な産生が原因であることに注目し、これらの炎症性サイトカインの産生の抑制を指標にして強い抗炎症作用を有する糖質を探索した。その結果、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質が、炎症性サイトカインの産生を抑制する作用を強く示しながら、同時に有効な濃度では細胞障害性を示さず、副作用が少ない安全な抗炎症剤の有効成分として利用できることを見出し、本発明を完成させた。【００１０】
すなわち、本発明は、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤を提供することにより上記課題を解決するものである。【００１１】
また、本発明は、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分とする抗炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することにより上記の課題を解決するものである。【００１２】
さらに、本発明は、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質において、そのアルドヘキソース構造における他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基をケト基に変換することを特徴とする分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用向上方法を提供することにより上記の課題を解決するものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、炎症性サイトカインの産生を抑制する、副作用が少ない安全な抗炎症剤を提供することができる。また、本発明の抗炎症剤によれば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８などの炎症性サイトカインの産生を顕著に抑制することができるので、これら炎症性サイトカインの過剰産生に起因する炎症症状の緩和、改善に、さらには炎症性疾患の予防、治療に用いることができる。したがって、本発明の抗炎症剤は、化粧品、医薬部外品、食品、医薬品等の経口剤、外用剤として有利に利用でき、とりわけ、皮膚の炎症に対する抗炎症剤としては、十分な抗炎症作用を有し、高い安全性を有しているため、有利に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】３−ケトトレハロース標品のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２】３−ケトトレハロース標品の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤に関するものである。
【００１６】
本発明でいう「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」とは、アルドヘキソース（１位にアルデヒド基を有する六炭糖）において、他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基のいずれかが酸化されケト基に変換された構造を分子内に有する糖質及びその誘導体全般を意味する。「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」は、その由来、製法を問わず、有機化学的に合成したものであっても、微生物酵素を原料糖質又はその誘導体に作用させる方法（酵素法）により得られるものであっても、また、原料糖質又はその誘導体を炭素源として微生物を培養し変換させる方法（発酵法）により培養液中に得られるものであってもよい。因みに、ヘキソース（六炭糖）は、１位にアルデヒド基を有するアルドヘキソースと、２位にケトン基を有するケトヘキソースに分類され、アルドヘキソースとしては、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース及びタロースの８種が知られている。また、ケトヘキソースとしては、プシコース、フラクトース、ソルボース及びタガトースの４種が知られている。本発明でいう「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」は、通常、天然における存在比の高いＤ体により構成される。
【００１７】
本発明の抗炎症剤において有効成分として用いる「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」は特に限定されないものの、アルドヘキソースの３位水酸基又は２位水酸基が酸化されケト基に変換された３−ケトアルドヘキソース構造又は２−ケトアルドヘキソース構造を分子内に有する糖質及びその誘導体が好適に用いられる。斯かる分子内に３−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質及びその誘導体（以下、本明細書では「３−ケト糖」と略称する。）又は２−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質及びその誘導体（以下、本明細書では「２−ケト糖」と略称する。）は、単糖であっても、ホモ又はヘテロの二糖以上のオリゴ糖、さらには多糖であっても好適に用いることができる。
【００１８】
＜３−ケト糖＞
本発明における３−ケト糖に包含される単糖としては、例えば、グルコースの３位水酸基が酸化されケト基に変換された３−ケトグルコース、ガラクトースの３位水酸基が酸化されケト基に変換された３−ケトガラクトースなどが挙げられる。また、単糖の誘導体としては、例えば、メチルα−グルコシド又はメチルβ−グルコシドのそれぞれのグルコース残基の３位水酸基が酸化されケト基に変換されたメチルα−３−ケトグルコシド又はメチルβ−３−ケトグルコシド、メチルα−ガラクトシド又はメチルβ−ガラクトシドのそれぞれのガラクトース残基の３位水酸基が酸化されケト基に変換されたメチルα−３−ケトガラクトシド又はメチルβ−３−ケトガラクトシドなどが挙げられる。また、その他の単糖の誘導体としては、例えば、１，５−アンヒドログルシトールの３位水酸基が酸化されケト基に変換された１，５−アンヒドロ−３−ケトグルシトールなどが挙げられる。
【００１９】
本発明における３−ケト糖に包含される二糖としては、例えば、グルコース２分子が結合した還元性グルコ二糖であるコージビオース（２−Ｏ−α−グルコシルグルコース）、ニゲロース（３−Ｏ−α−グルコシルグルコース）、マルトース（４−Ｏ−α−グルコシルグルコース）、イソマルトース（６−Ｏ−α−グルコシルグルコース）及びセロビオース（４−Ｏ−β−グルコシルグルコース）の、非還元末端側のグルコース残基の３位水酸基がそれぞれ酸化されケト基に変換された３−ケトコージビオース（２−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）、３−ケトニゲロース（３−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）、３−ケトマルトース（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）、３−ケトイソマルトース（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）及び３−ケトセロビオース（４−Ｏ−β−３−ケトグルコシルグルコース）；
非還元性グルコ二糖であるトレハロース（α−グルコシルα−グルコシド、α、α−トレハロース）、ネオトレハロース（α−グルコシルβ−グルコシド、α，β−トレハロース）、又はイソトレハロース（β−グルコシルβ−グルコシド、β，β−トレハロース）を構成する一方のグルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトトレハロース、３−ケトネオトレハロース、又は３−ケトイソトレハロース；
トレハロース、ネオトレハロース、又はイソトレハロースを構成する２分子のグルコース残基の２つの３位水酸基がいずれもケト基に変換された３，３´−ジケトトレハロース、３、３´−ジケトネオトレハロース、又は３，３´−ジケトイソトレハロース；
異なる単糖同士が結合したヘテロ二糖である、例えば、グルコースとフラクトースとで構成される非還元性ヘテロ二糖であるスクロース又はイソマルツロースのグルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトスクロース（Ｏ−α−３−ケトグルコシル（１→２）β−フラクトシド）又は３−ケトイソマルツロース（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルフラクトース）；
ガラクトースとグルコースとで構成される還元性ヘテロ二糖であるラクトース（４−Ｏ−β−ガラクトシルグルコース）のガラクトース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトラクトース（４−Ｏ−β−３−ケトガラクトシルグルコース）；が挙げられ、
３−ケト糖に包含される二糖の誘導体としては、マルトース、又はイソマルトースの還元末端グルコースのアルデヒド基が還元された糖アルコールであるマルチトール、又はイソマルチトールのグルコース残基の３位水酸基がさらにケト基に変換された３−ケトマルチトール（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルソルビトール）、又は３−ケトイソマルチトール（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルソルビトール）；ラクトースの還元末端グルコースのアルデヒド基が還元された糖アルコールであるラクチトールの、ガラクトース残基の３位水酸基がさらにケト基に変換された３−ケトラクチトール（４−Ｏ−β−３−ケトガラクトシルソルビトール）；などが挙げられる。
【００２０】
本発明における３−ケト糖に包含される三糖としては、例えば、メレチトース（３Ｆ−Ｏ−α−グルコシルスクロース）、エルロース（４Ｇ−Ｏ−α−グルコシルスクロース）の末端グルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトメレチトース（３Ｆ−Ｏ−α−３−ケトグルコシルスクロース）及び３−ケトエルロース（４Ｇ−Ｏ−α−３−ケトグルコシルスクロース）や、マルトトリオースの非還元末端グルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトマルトトリオース（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルマルトース）などが挙げられる。
【００２１】
分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質が、分子内にアルドヘキソース構造を複数有する場合、通常、非還元末端のアルドヘキソースの３位水酸基のみが酸化によりケト化され、３−ケト糖となる。３−ケト糖においては、３−ケトアルドヘキソース構造が抗炎症作用の発揮に関与していると考えられ、分子内において３−ケトアルドヘキソース構造の占める割合が高いものほど強い抗炎症作用を発揮すると考えられる。この観点からは、３−ケト糖としては、分子内の３−ケトアルドヘキソース構造が占める割合の多い二糖又は単糖が抗炎症剤の有効成分として、とりわけ有用である。
【００２２】
しかしながら、３−ケト糖が単糖である場合、その１位水酸基はアルデヒド基の構造をとり得ることから還元力を示し、さらに３位のケト基がさらに還元力を示すことから反応性に富み、化合物としては不安定となる。本発明の抗炎症剤の有効成分としては、より安定な３−ケト糖が望ましく、単糖である場合は、その１位水酸基が糖以外の置換基と結合することにより、アルデヒド基の構造を取らずに３位のケト基のみが還元力を示すものがより好適である。このような３−ケト糖の単糖としては、例えば、１位水酸基がメチル化されているメチルα−３−ケトグルコシド、メチルβ−３−ケトグルコシドが挙げられる。
【００２３】
３−ケト糖が還元性の二糖の場合は、通常、非還元末端側のアルドヘキソースの３位水酸基のみがケト基に変換され、当該アルドヘキソースの１位は他の糖と結合しており同一アルドヘキソース分子内に還元力を示すアルデヒド基がなく、より安定であるため好適に用いることができる。さらには、非還元性の二糖であるトレハロースやスクロースから得られる３−ケトトレハロース、３−ケトスクロースや、トレハロースから得られる３，３´−ジケトトレハロースも好適に用いられる。
【００２４】
同様の理由で、二糖の還元末端グルコースのアルデヒド基が還元された糖アルコールは、還元性を示さず化合物としてはさらに安定であるため、好適に用いることができる。そのような、３−ケト糖の二糖の糖アルコールとしては、例えば、３−ケトマルチトール、３−ケトイソマルチトール、３−ケトラクチトールが挙げられる。
【００２５】
本発明における３−ケト糖は、３−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質である限り、特に限定されないものの、分子内にグルコース構造又はガラクトース構造を有する糖質は、天然に多く存在し、また、これら糖質からは酵素法又は発酵法での３−ケト糖の生成率が高いため、本発明を産業上有利に実施する目的においては、３−ケト糖として分子内に３−ケトグルコース構造又は３−ケトガラクトース構造を有する糖質がとりわけ好適に用いられる。
【００２６】
通常、３−ケト糖の調製は、アルドヘキソースの３位水酸基を選択的に酸化して、目的とする３−ケト糖を製造することが出来る３−ケト糖生成酵素を用いた酵素法や発酵法により行われる。
【００２７】
アルドヘキソースの３位水酸基を酸化してケト基に変換する反応を触媒し、３−ケト糖を生成する酵素としては、グルコシド３−脱水素酵素（ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ  ３−ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＥＣ．１．１．９９．１３）やピラノース脱水素酵素（ｐｙｒａｎｏｓｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＥＣ．１．１．９９．２９）などが知られている。
【００２８】
また、グルコシド３−脱水素酵素の産生能を有する微生物としては、リゾビウム・ラジオバクター（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ、旧分類ではアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｃｅ））、フラボバクテリウム・サッカロフィラム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｍ）、スフィンゴバクテリウム・ファエシウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆａｅｃｉｕｍ）、その他ハロモナス（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ）属、サイトファーガ（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）属、アガリクス（Ａｇａｒｉｃｕｓ）属に属する微生物などが挙げられる。
【００２９】
また、ピラノース脱水素酵素の産生能を有する微生物としては、アガリクス・ビスポラス（Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ）、アガリクス・メレアグリス（Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｍｅｌｅａｇｒｉｓ）、アガリクス・ザンソデルマ（Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｘａｎｔｈｏｄｅｒｍａ）、マクロレピオタ・ラコドス（Ｍａｃｒｏｌｅｐｉｏｔａ  ｒｈａｃｏｄｅｓ）などが挙げられる。なお、ピラノース脱水素酵素は、反応条件や反応させる基質によっては、糖質のアルドヘキソースの３位水酸基を酸化するのみならず、２位及び４位の水酸基を酸化する場合があるので、３−ケト糖を選択的に調製したい場合には、アルドヘキソースの３位水酸基のみを選択的に酸化するグルコシド３−脱水素酵素がより好適に用いられる。
【００３０】
３−ケト糖は、通常、原料糖質又はその誘導体を含む溶液に上記のグルコシド３−脱水素酵素若しくはピラノース脱水素酵素などの３−ケト糖生成酵素を作用させ、酵素反応により変換（酸化）されて生成する３−ケト糖を反応液より回収、精製する方法で製造されるか、もしくは、原料となる糖質又はその誘導体を炭素源として含む液体培地で、上記のグルコシド３−脱水素酵素若しくはピラノース脱水素酵素などの３−ケト糖生成酵素の産生能を有する微生物を培養し、培養液中において原料糖質又はその誘導体が微生物変換（酸化）されて生成する３−ケト糖を培養液より回収、精製する方法で製造される。３−ケト糖の反応液もしくは、培養液からの回収、精製は、遠心分離による菌体や酵素の除去、培養液及び反応液上清の加熱処理により不溶化するタンパク質等の除去、アルコール沈殿処理などによる高分子多糖類の除去、活性炭による脱色、イオン交換樹脂又は電気透析器を用いた脱塩、イオン交換樹脂などを用いたクロマトグラフィー、アルコールを用いた３−ケト糖の結晶化など種々の操作を適宜組合せて行うことができる。
【００３１】
上記した種々の３−ケト糖の内、とりわけ３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトラクトース、３−ケトトレハロースなどの３−ケト二糖は、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロースなど汎用の二糖を原料として得られ、また、分子内に３−ケトグルコース構造又は３−ケトガラクトース構造を有し、いずれも結晶の形態で得られることが知られていることから、高純度品を比較的効率よく製造することができるので、本発明の抗炎症剤の有効成分として、より好適に用いることができる。
【００３２】
＜２−ケト糖＞
本発明における２−ケト糖は、２−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質である限り、特に限定されないものの、本発明において好適に用いられる２−ケト単糖又は２−ケト二糖としては、例えば、２−ケトグルコース（２−デヒドロ−Ｄ−グルコース）、２−ケトトレハロース、２−ケトネオトレハロース、２−ケトイソトレハロースなどが挙げられる。
【００３３】
２−ケト糖の調製は、通常、グルコースの２位水酸基を選択的に酸化して、２−ケトグルコースを製造することが出来るピラノース２−オキシダーゼ（ＥＣ  １．１．３．１０）を用いた酵素法により行われる。また、ピラノース２−オキシダーゼの産生能を有する微生物としては、キノコ類、例えば、カワラタケ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）、担子菌（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ  ｆｕｎｇｕｓ）などが挙げられる。２−ケトグルコースや、２−ケトグルコースを受容体とした糖転移反応により得られる２−ケトトレハロースなどの２−ケト糖も、上述の３−ケト糖の項で述べたと同様の方法で精製、単離することができる。
【００３４】
後述する実験３などに示すとおり、３−ケト二糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケト二糖の糖アルコールである３−ケトマルチトール、及び、２−ケト糖である２−ケトグルコース及び２−ケトトレハロースは、ＴＮＦ−α又はＩＬ−８の産生抑制作用を有意に発揮する濃度において、細胞増殖や細胞の生存率に悪影響を及ぼすことがないことから、３−ケト糖及び２−ケト糖などの分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、生体に適用して安全な糖質であると考えられる。
【００３５】
先に述べたとおり、生体における過剰な炎症反応の多くは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）などの炎症性サイトカインの過剰な産生が原因であると言われている。
【００３６】
ＴＮＦ−αは、主として活性化マクロファージから産生される炎症性サイトカインであり、ＴＮＦ−αが過剰に産生されることにより炎症反応が強まると共に、好中球等の細胞障害性のある細胞を強く活性化することにより血管内皮細胞や組織の障害が誘導され、臓器の機能不全につながることも報告されている。また、ＴＮＦ−αは肥満により肥大化した脂肪細胞からも産生され、インスリン抵抗性を誘導することによりＩＩ型糖尿病の発症と病態形成に関与することもわかっている。一般に、ＴＮＦ−αの過剰産生は、皮膚炎、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患などの炎症に関与していると言われている。一方、ＩＬ−８は、好中球を炎症局所に浸潤させる炎症性サイトカインとして知られている。炎症局所に浸潤した好中球は脱顆粒を起こすことによって、ミエロパーオキシダーゼやエラスターゼ等の組織障害作用のある酵素が放出される。そのため、炎症反応が長期化すると組織障害も見られるようになる。一般に、ＩＬ−８の過剰産生は、関節リウマチ、乾癬、気管支喘息、敗血症、血管炎症、肝炎などの炎症に関与していると言われている。すなわち、炎症の発症又は増悪を引き起こす炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することは、炎症症状の緩和、改善に加え、炎症性疾患の予防、治療に有効であると期待される。
【００３７】
本発明における分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、後述する実験の項で示すように、ヒトの皮膚線維芽細胞、表皮ケラチノサイト、歯肉線維芽細胞、腸管上皮細胞などにおいて、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８などの産生を抑制することから、経口摂取しても、また、皮膚に塗布してもその作用効果を発揮し、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８など炎症性サイトカインの過剰産生が関与する炎症に対する抗炎症剤として有利に利用できる。
【００３８】
また、活性酸素種による酸化ストレスが細胞障害を引き起こし、炎症性疾患を含む様々な疾患や老化現象に直接関与していることが報告されており、活性酸素種による細胞障害を予防することが炎症性疾患の予防、治療にも有効であると考えられている。本発明の抗炎症剤の有効成分である３−ケト糖は、抗酸化作用を有するため、この点においても抗炎症剤として有用である。
【００３９】
一般に、炎症は急性炎症と慢性炎症に二つに大別される。急性炎症は、外部からの浸襲刺激に対して発赤、腫脹、発熱、疼痛が主な徴候として現われ、炎症の原因物質や感染が無くなり、障害を受けた組織、細胞が元通りに修復すれば症状が収束方向に向かうため、短期間に終結する。一方、慢性炎症は、不完全もしくは過剰な生体免疫応答により組織の構造変化と機能欠損が惹起されるため、症状が急性炎症と比較すると長期間維持される。
【００４０】
慢性炎症に該当する疾患としては、例えば、花粉症のようなアレルギー、慢性呼吸器疾患、喘息、敗血症、慢性関節リウマチ、ＡＲＤＳ（急性呼吸促迫症候群）、肝炎、胃炎、炎症性腸疾患、膵炎、関節炎、動脈硬化、虚血再潅流障害、ブドウ膜炎、エンドトキシンショック、熱傷、ウイルス性心筋炎、特発性拡張型心筋症、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、多臓器不全、溶血性尿毒症症候群や出血性大腸炎をはじめとする血管内皮細胞障害に起因する疾患、高γ−グロブリン血症、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症、モノクローナルＢ細胞異常症、ポリクローナルＢ細胞異常症、心房粘液腫、カストルマン症候群、原発性糸球体腎炎、メサンギュウム増殖性腎炎、糖尿病性腎炎などの腎炎、閉経後骨粗鬆症、歯肉炎、歯周病、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎などの皮膚の炎症が挙げられる。ちなみに、上記肝炎としてはアルコール性肝炎、ウイルス性肝炎、薬剤性肝炎、非アルコール性脂肪肝、自己免疫性肝炎、肝線維化、肝硬変及び劇症肝炎などを例示することができる。また、炎症性腸疾患としては潰瘍性大腸炎、クローン病などを例示することができる。さらに、神経細胞の炎症に起因する神経変性疾患として、パーキンソン病、アルツハイマー病なども挙げられる。慢性炎症は、上記のような炎症性疾患のみにとどまらず、肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病、動脈硬化性疾患などの生活習慣病の共通基盤になっている。
【００４１】
本発明の抗炎症剤の有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、安全性の高い物質であり、長期間にわたり経口剤、外用剤として有利に利用できるため、とりわけ慢性炎症に対する抗炎症剤として有効に利用できる。有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を配合する場合、抗炎症剤に対して０．１乃至９０質量％（以下、特にことわらない限り本明細書では質量％を「％」と表記する）含有せしめるのが望ましく、１０乃至９０％含有せしめるのがより望ましい。
【００４２】
本発明の抗炎症剤の有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、安全性、抗炎症効果、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８など炎症性サイトカインの産生抑制作用に影響を及ぼさない限り、製造原料由来の成分や製造過程で生じる副生成物を含んでいる標品であってもよい。しかしながら、できるだけ高純度のものを用いるのが望ましく、通常、固形物換算で、純度８０％以上、望ましくは純度９０％以上、より望ましくは純度９５％以上のものが好適に用いられる。
【００４３】
また、本発明の抗炎症剤は、化粧品、医薬部外品、食品、医薬品などの各種組成物に配合することができる。有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質の各種組成物への配合量は、抗炎症作用を発揮できる量であればよく、特に制限はないが、通常、化粧品、医薬部外品、食品又は医薬品の総質量に対して、無水物換算で、０．０１％以上、望ましくは、０．１％以上を含有せしめるのが好適であり、０．２％以上が特に望ましい。通常０．０１％未満では、抗炎症効果を発揮するには不充分な場合がある。
【００４４】
本発明の抗炎症剤は、単独でも抗炎症作用を発揮することができるものの、抗炎症作用を有する公知の成分と併用することも有利に実施できる。
【００４５】
抗炎症作用を有する公知の成分としては、例えば、アラントイン又はその誘導体、グリチルレチン又はその誘導体、パントテン酸又はその誘導体、ビタミンＥ又はその誘導体、Ｌ−アスコルビン酸又はその誘導体、塩酸ピリドキシン、メントール、ビオチン、カンフル、テレピン油、酸化亜鉛、アズレン、グアイアズレン及びその誘導体、メフェナム酸及びその誘導体、フェニルブタゾン及びその誘導体、インドメタシン及びその誘導体、イブプロフェン及びその誘導体、ケトプロフェン及びその誘導体、ε−アミノカプロン酸、ジクロフェナクナトリウム、ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸及びその誘導体、デキサメタゾン、コルチゾン及びそのエステル、ヒドロコルチゾン及びそのエステル、プレドニゾン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ホルモン、藍、アセンヤク、アマチャ、アルテア、アルニカ、アロエ、イブトラノオ、イラクサ、ウコン、エイジツ、エチナシ、エンメイソウ、オウゴン、オウバク、オオムギ、オトギリソウ、オドリコソウ、オレンジ、カノコソウ、カミツレ、カモミラエキス、カロット、カワラヨモギ、カンゾウ、キュウリ、キンギンカ、クチナシ、クマザサ、クレソン、クワ、ゲンチアナ、ゲンノショウコウ、ゴカヒ、ゴボウ、コンフリー、サルビア、サンショウ、シコン、シソ、シモツケソウ、シャクヤク、シラカバ、スギナ、セイヨウオトギリソウ、セイヨウキズタ、セイヨウネズ、セイヨウハッカ、セージセンキュウ、センブリ、ソハクヒ、タイソウ、タイム、チャ、チンピ、テンチャ、トウガシ、トウキ、トウキンセンカ、トウニン、ドクダミ、トルメンチラ、ニワトコ、ニンジン、パセリ、ハッカ、バラ、ビャクダン、ビワ、ブクリョウ、ブッチャーブルーム、ブドウ、ブロッコリー、ベニバナ、ホオウ、ボダイジュ、ボタン、マロニエ、ムクロジ、モモ、ヤグルマギク、ヤグルマソウ、ユーカリエキス、ヨウバイヒ、ヨモギ、ラベンダー、ローズヒップ、ローズマリー、ローマカミツレなどの植物又は植物由来成分などが挙げられる。
【００４６】
本発明の抗炎症剤を含有する組成物の製造にあたっては、有効成分である上記分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質の少なくとも１種以上と、化粧品、医薬部外品、食品、医薬品等を製造する場合において通常用いられている任意成分を適宜配合すればよい。剤の形態は特に限定されず外用剤や経口剤とすることができる。
【００４７】
本発明の抗炎症剤を含有する組成物が化粧品である場合は、任意成分として、精製水、ｐＨ調製剤、低級アルコール、多価アルコール、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、エステル類、有機溶媒、シリコーン類、界面活性剤、増粘剤、軟化剤、乳化剤、消泡剤、加湿剤、芳香剤、金属イオン封鎖剤、染料、着色材、水溶性高分子、防腐剤、緩衝液、色素、紫外線吸収剤、収斂剤、殺菌・抗菌剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、香料、各種薬効成分等を配合することができる。
【００４８】
本発明の抗炎症剤を含有する化粧品としては、化粧石鹸、洗顔クリーム、洗顔フォーム、クレンジングクリーム、クレンジングミルク、クレンジングローション、クレンジングオイル、マッサージクリーム、コールドクリーム、モイスチャークリーム、バニシングクリーム、ハンドクリーム、モイスチャーローション、化粧油、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、ケーキ状ファンデーション、スティックファンデーション、油性コンパクトファンデーション、クリーム状ファンデーション、チークブラッシャー、乳化ファンデーション、下地化粧料、ボディパウダー、クリーム状白粉、粉白粉、水白粉、固型白粉、タルカムパウダー、練り白粉、ルーズシャドウ、ベビーパウダー、ほお紅、眉墨、マスカラ、リップスティック、リップクリーム、パック、シェービングクリーム、アフターシェービングクリーム、ローション、ハンドローション、シェービングローション、アフターシェービングローション、日焼け止めクリーム、日焼け用オイル、日焼け止めローション、日焼け用ローション、柔軟化化粧水、収斂化粧水、洗浄化粧水、多層式化粧水、フェイシャルシャンプー、ボディシャンプー、ヘアシャンプー、髪洗い粉、ハンドソープ、フェイシャルリンス、ホディリンス、ヘアリンス、ヘアトリートメント、チック、ポマード、ヘアクリーム、ヘアリキッド、ヘアトニック、セットローション、スキ油、鬢付け油、ヘアスプレー、ヘアムース、ヘアトニック、ヘアダイ、ヘアブリーチ、カラーリンス、カラースプレー、パーマネントウェーブ液、プレスパウダー、ルースパウダー、アイクリーム、アイシャドー、クリームアイシャドー、パウダーアイシャドー、アイライナー、アイブラウペンシル、マスカラ、脱毛クリーム、一般香水、練り香水、粉末香水、オーデコロン、デオドラント、浴用剤、バスオイル、バスソルト、化粧用油、ベビーオイル、ネイルカラー、エナメル、エナメル除去液、ネールトリートメントなどが挙げられる。
【００４９】
本発明の抗炎症剤を含有する組成物が医薬部外品の場合は、任意成分として、賦形剤、基剤、界面活性剤、分散剤、可溶化剤、溶剤、アルカリ剤、粘度調節剤、増粘剤、皮膜剤、起泡剤、消泡剤、着香剤、着色剤、安定剤、防腐剤、殺菌剤、退色防止剤、酸化防止剤、毛髪処理剤、湿潤剤、毛髪保護剤、毛胞賦活剤、帯電防止剤、助剤、溶剤、溶解剤、溶解補助剤、流動化剤、懸濁剤、緩衝剤、結合剤、吸着剤、噴射剤、コーティング剤、咀嚼剤、充填剤、軟化剤、調整剤、金属封鎖剤、褪色防止剤、油脂、油溶性高分子、鎮痛剤、崩壊剤、滑沢剤、乳化剤、等張化剤などの慣用の添加剤を配合することができる。
【００５０】
本発明の抗炎症剤を含有する医薬部外品としては、口腔に用いられる医薬部外品、例えば、歯磨き、マウスウォッシュ、マウスリンス、ドリンク剤、頭皮に用いられる医薬部外品、例えば、養毛剤、育毛剤、脱毛防止剤、除毛剤、マッサージ料、それ以外には、虫除け剤、外傷治療用軟膏、抗菌クリーム、ステロイド軟膏、口腔内や皮膚の患部に貼り付けるシート状やフィルム状のはっぷ剤、美容液、薬用石鹸、清浄綿、浴用剤、ベビーパウダー、ソフトコンタクトレンズ用消毒剤などが挙げられる。
【００５１】
本発明の抗炎症剤を含有する組成物が食品の場合は、任意成分として、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料又は素材等を配合することができる。
【００５２】
本発明の抗炎症剤を含有する食品としては、飲料、スープ、アルコール飲料、ゼリー、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、チューインガム、チョコレート、タブレット、冷菓等が挙げられる。食品には、機能性食品、健康食品、健康志向食品等も含まれる。
【００５３】
本発明の抗炎症剤を含有する医薬品の形態としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、ゲル剤等が挙げられる。錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施してもよいし、胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、前記の製剤を公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、前記液剤を注射剤、点滴剤に配合して使用してもよい。
【００５４】
本発明の抗炎症剤を含有する医薬品を使用する場合、その投与量又は摂取量は、所望の改善、治療又は予防効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。例えば、該医薬品中に有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を無水物換算で、０．０１乃至３０％の含量となるように配合し、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質として１日当たり約０．１ｍｇ乃至１，０００ｍｇの範囲で摂取させればよい。
【００５５】
また、本発明の抗炎症剤は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤、飼料又は餌料に配合してもよい。飼料又は餌料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードなどが挙げられる。
【００５６】
また、本発明の抗炎症作用の向上方法によれば、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質における、他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基をケト基に変換することにより、抗炎症作用が弱い糖質の抗炎症作用を向上させることができるので、アルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用の向上方法としても有用である。
【００５７】
当該抗炎症作用の向上方法として好適な方法としては、アルドヘキソース構造における３位水酸基又は２位水酸基を酵素法又は発酵法によりケト基へ変換させる方法が挙げられ、当該方法の場合、アルドヘキソース構造を分子内に有する糖質の非還元末端のアルドヘキソースの３位水酸基又は２位水酸基が酸化され、当該糖質の抗炎症作用が変換前に比べて向上する。
【００５８】
以下、本発明につき実験により具体的に説明する。
【００５９】
＜実験１：各種３−ケト糖の調製＞
トレハロース、コージビオース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、スクロース及びマルチトールをそれぞれ原料糖質として、発酵法により３−ケトトレハロース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトラクトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース及び３−ケトマルチトールを調製した。加えて、トレハロース及びメチルα−グルコシドをそれぞれ原料糖質として、酵素法により３，３´−ジケトトレハロース及びメチルα−３−ケトグルコシドを調製した。
【００６０】
＜実験１−１：３−ケトトレハロースの調製＞
トレハロース（登録商標『トレハ』、株式会社林原販売、トレハロース純度９８．０％以上）２０（ｗ／ｖ）％、ポリペプトン（日本製薬株式会社製）１（ｗ／ｖ）％、酵母エキスＳ（日本製薬株式会社製）０．２（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム７水和物０．０１（ｗ／ｖ）％、及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）を試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、寒天スラント培地にて２７℃で培養したフラボバクテリウム・サッカロフィラム  ＮＢＲＣ１５９４４株を一白金耳接種し、２７℃で７２時間、２７０ｒｐｍで振トウ培養したものをシード培養液とした。
【００６１】
上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに５０ｍＬ入れたものを５０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した後、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、０．５ｍＬずつ接種した後、２７℃で７２時間、２４０ｒｐｍで回転振トウ培養しメイン培養液とした。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるトレハロース以外の新しい糖質ピークが確認された。
【００６２】
培養終了後、得られた約２，３００ｍＬの培養液を１０，０００ｒｐｍで遠心分離することにより菌体を除去し、得られた培養上清液を１００℃の湯浴中で加熱処理し、さらに１０，０００ｒｐｍで遠心分離して不溶物を除去して上清を回収した。得られた上清液にエタノール９，２００ｍＬを添加し、１０，０００ｒｐｍで遠心分離して上清を回収した。回収した溶液をエバポレーターにて減圧下で１，１００ｍＬに濃縮し、０．２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、電気透析器（商品名『マイクロアシライザー  Ｇ０』、旭化成工業株式会社製）に供し脱塩した。得られた電気透析液を０．２μｍメンブランフィルターでろ過し、下記条件による分取ＨＰＬＣに供し、原料トレハロースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品７６．５ｇを得た。
【００６３】
（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ
（内径５０ｍｍ、長さ５００ｍｍ、株式会社ワイエムシイ製）
溶離液：超純水
流  速：５．０ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
検  出：示差屈折計
【００６４】
得られた標品を下記条件によるＨＰＬＣ分析に供し、ＨＰＬＣクロマトグラム（図１）に基づき、純度を９８．１％と決定した。また、当該標品を、ＬＣ／ＭＳ分析に供したところ、トレハロースの分子量３４２よりも２（水素原子２つ分）小さい分子量３４０を有することが判明した。さらに、当該標品を試料としてＮＭＲ（１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトルを測定したところ、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図２）において、トレハロースを構成する２つのグルコース残基の片方のグルコース残基の３位炭素のシグナルが大きく低磁場側にシフトしていることが確認（国立研究開発法人産業技術総合研究所が提供している有機化合物のスペクトルデータベース（ＳＤＢＳ）『http://sdbs.db.aist.go.jp/sdbs/cgi-bin/cre_index.cgi』に記載の原料トレハロースの１３Ｃ−ＮＭＲデータとの比較）され、本標品が３−ケトトレハロースであることが判明した。
【００６５】
（分析用ＨＰＬＣ条件）
装  置：Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（株式会社島津製作所製）
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＳＵＧＡＲ  ＫＳ−８０１
（内径８ｍｍ、長さ３００ｍｍ、昭和電工株式会社製）
溶離液：超純水
流  速：０．４ｍＬ／分
カラム温度：７５℃
検  出：示差屈折計
【００６６】
＜実験１−２：３−ケトコージビオースの調製＞
マルトース５．０％（ｗ／ｖ）、酵母エキスＳ（日本製薬株式会社製）０．１（ｗ／ｖ）、魚肉エキス（マルハ株式会社製）０．３（ｗ／ｖ）％、リン酸水素２カリウム０．０１（ｗ／ｖ）％、リン酸２水素ナトリウム１水和物０．０６（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５（ｗ／ｖ）％、硫酸鉄７水和物０．００１（ｗ／ｖ）％、硫酸マンガンｎ水和物０．００１（ｗ／ｖ）％、炭酸カルシウム０．３（ｗ／ｖ）％及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）を試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、寒天スラント培地にて２７℃で培養したリゾビウム・ラジオバクター  Ｇ３７株を一白金耳接種し、２７℃で７２時間振トウ培養したものをシード培養液とした。
【００６７】
マルトースをコージビオース（株式会社林原調製品、純度９５．９％）に替えた以外は上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに５０ｍＬ入れたものを１０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した。次いで、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、０．５ｍＬずつ接種した後、２７℃で５４時間、回転振トウ培養しメイン培養液とした。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるコージビオース以外の新しい糖質ピークが確認された。
【００６８】
培養終了後、得られた約５００ｍＬの培養液に脱イオン水１，２００ｍＬを添加し希釈した後、８，０００ｒｐｍで遠心分離することにより菌体を除去し、得られた遠心上清にエタノール５，１００ｍＬを添加し、沈殿物をろ過にて除いた。次いで、ろ液をエバポレーターにて減圧下で２５０ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液にエタノール５００ｍＬを添加し、８，０００ｒｐｍで遠心分離して上清を回収した。回収した溶液をエバポレーターにて減圧下で３００ｍＬに濃縮し、１１，０００ｒｐｍで遠心分離して上清を回収し、０．２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、電気透析器（商品名『マイクロアシライザー  Ｇ１』、旭化成工業株式会社製）に供し脱塩した。得られた電気透析液をエバポレーターにて減圧下で約２０ｍＬに濃縮し、０．２μｍメンブランフィルターでろ過し、下記条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料コージビオースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品８．７ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９１．２％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様のＬＣ／ＭＳ分析、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル分析により分析したところ、得られた標品が３−ケトコージビオース（２−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）であることが判明した。
【００６９】
（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ  ＯＤＳ−Ａ
（内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシイ製）
溶離液：超純水
流  速：３．５ｍＬ／分
カラム温度：３５℃
検  出：示差屈折計
【００７０】
＜実験１−３：３−ケトイソマルトースの調製＞
メイン培養に用いる液体培地の糖質をイソマルトース（株式会社林原調製品、純度９７．７％）に替えた以外は実験１−２と同様にリゾビウム・ラジオバクター  Ｇ３７株を培養し、同様の操作により精製したところ、脱塩後の濃縮液から結晶が析出した。結晶懸濁液から遠心分離により結晶を回収し、特級エタノールにて洗浄し、オーブン（４０℃）で乾燥することにより、標品６．０ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．５％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトイソマルトース（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）であることが判明した。
【００７１】
＜実験１−４：３−ケトラクトースの調製＞
ラクトース２．０％（ｗ／ｖ）、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ株式会社製）０．１（ｗ／ｖ）％及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）をシード培養及びメイン培養に用い、５００ｍＬ容三角フラスコに培地１００ｍＬを入れたものを３本用いた以外は、実験１−２と同様にリゾビウム・ラジオバクター  Ｇ３７株を培養した。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるラクトース以外の新しい糖質ピークが確認された。
【００７２】
培養終了後、得られた培養液約３００ｍＬを珪藻土ろ過することにより菌体を除去し、ろ液をエバポレーターにて減圧濃縮し、得られた濃縮液を実験１−２に準じた分取ＨＰＬＣに供し、新たに生成した糖質のピーク画分を分取した。分取した溶液を活性炭で脱色ろ過し、ろ液をエバポレーターにて減圧濃縮し、濃縮液の５倍量のメタノールを添加し室温に放置したところ、約１週間で結晶が析出した。結晶懸濁液を濾過して結晶を回収し、真空乾燥することにより標品３．８ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．６％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトラクトース（４−Ｏ−β−３−ケトガラクトシルグルコース）であることが判明した。
【００７３】
＜実験１−５：３−ケトマルトースの調製＞
マルトース５．０％（ｗ／ｖ）、ビール酵母エキス（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．０２（ｗ／ｖ）、ソルリス０９５Ｅ（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．０４（ｗ／ｖ）％、クエン酸２アンモニウム０．４５（ｗ／ｖ）％、リン酸水素２アンモニウム０．４５（ｗ／ｖ）％、コハク酸アンモニウム０．６０（ｗ／ｖ）％、リン酸水素二カリウム０．１０（ｗ／ｖ）％、塩化カルシウム２水和物０．０５（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５（ｗ／ｖ）％、硫酸鉄７水和物０．００５（ｗ／ｖ）％、ミネラル酵母Ｚｎ０．００１（ｗ／ｖ）％及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）を試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、寒天スラント培地にて２７℃で培養したリゾビウム・ラジオバクター  Ｇ３７株を一白金耳接種し、２７℃で４８時間振トウ培養したものをシード培養液とした。
【００７４】
上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに５０ｍＬ入れたものを２０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した。次いで、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、０．５ｍＬずつ接種した後、２７℃で７２時間、回転振トウ培養しメイン培養液とした。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるマルトース以外の新しい糖質ピークが確認された。
【００７５】
培養終了後、得られた約１Ｌの培養液を１０，０００ｒｐｍで遠心分離することにより菌体を除去し、得られた遠心上清を１００℃で１０分間加熱処理した後、再び１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。得られた遠心上清にエタノール２，７００ｍＬを添加し、さらに１０，０００ｒｐｍで遠心処理を行った。次いで、遠心上製をエバポレーターにて減圧下で５００ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液を０．２２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、実験１−１と同じ条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料マルトースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品５．１ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９６．２％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトマルトース（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）であることが判明した。
【００７６】
＜実験１−６：３−ケトスクロースの調製＞
シード培養及びメイン培養に用いる液体培地の糖質をスクロース（和光純薬工業株式会社、試薬特級）に替えた以外は実験１−５と同様にリゾビウム・ラジオバクター  Ｇ３７株を培養した。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるスクロース以外の新しい糖質ピークが確認された。培養終了後、３−ケトマルトースとほぼ同様の操作により精製し、標品７．５ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９０．３％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトスクロース（Ｏ−α−３−ケトグルコシル（１→２）β−フラクトシド）であることが判明した。
【００７７】
＜実験１−７：３−ケトマルチトールの調製＞
シード培養及びメイン培養に用いる液体培地の糖質をマルチトール（東京化成工業株式会社、純度９３．０％以上）に替え、濃度を３％に変更した以外は実験１−５と同様にリゾビウム・ラジオバクター  Ｇ３７株を培養した。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるマルチトール以外の新しい糖質ピークが確認された。培養終了後、３−ケトマルトースと同様の操作により精製し、標品９．４ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９０．２％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトマルチトール（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルソルビトール）であることが判明した。
【００７８】
＜実験１−８：３，３´−ジケトトレハロースの調製＞
スクロース１．０（ｗ／ｖ）％、トレハロース４．０（ｗ／ｖ）％、尿素０．０９（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム七水和物０．０１５（ｗ／ｖ）％、硫酸鉄七水和物０．００１（ｗ／ｖ）％、クエン酸一水和物０．０１７（ｗ／ｖ）％、リン酸二水素カリウム０．１０７（ｗ／ｖ）％、リン酸二水素ナトリウム二水和物０．２１７（ｗ／ｖ）％を含む液体培地をｐＨ６．８に調整後、試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、フラボバクテリウム・サッカロフィラム  ＮＢＲＣ１５９４４株をグリセロールストックから３０μＬ接種した。２７℃で９６時間振トウ培養したものをシード培養液とした。
【００７９】
上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに１００ｍＬ入れたものを４０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した。次いで、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、１ｍＬずつ接種した後、２７℃で２４時間、回転振トウ培養しメイン培養液とした。
【００８０】
上記メイン培養液を１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心上清は除去し、得られた菌体にＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、リゾチームを添加し、室温で１時間撹拌した。次いで、−８０℃に１時間置くことで凍結し、３８℃の湯浴中で１時間融解した。次いで、超音波破砕を行い、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。得られた遠心上清をグルコシド３−脱水素酵素の粗酵素液とした。
【００８１】
グルコシド３−脱水素酵素の活性は、概略、以下の原理に基づき測定した。すなわち、メチルα−グルコシドを基質とし、グルコシド３−脱水素酵素がメチル−α−グルコシドを酸化しメチル−α−３−ケトグルコシドに変換する際にグルコシド３−脱水素酵素の補酵素であるフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）が還元され、還元型ＦＡＤ（ＦＡＤＨ２）が生成することから、フェナジンメトサルフェイト（ＰＭＳ）とジクロロインドフェノール（ＤＣＩＰ）を共役させ、最終的に酸化型ＤＣＩＰの減少（還元型ＤＣＩＰの生成）を波長６６０ｎｍの吸光度を測定することでメチル−α−グルコシドの酸化活性を評価した。具体的には、適宜希釈した酵素液をマイクロプレートのウェルに１９５μＬ入れ、これに、メチル−α−グルコシド、ＰＭＳ、ＤＣＩＰ、及び、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含む基質溶液５０μＬを添加することにより、反応液量を２００μＬとし、且つ、メチル−α−グルコシド、ＰＭＳ、ＤＣＩＰ及びリン酸緩衝液の終濃度をそれぞれ１０ｍＭ、１ｍＭ、６０μＭ及び５０ｍＭになるように調製し酵素反応液とした。酵素反応はｐＨ７．０、３０℃、暗所で１０分間行い、経時的に波長６６０ｎｍの吸光度をプレートリーダーにて測定した。なお、グルコシド３−脱水素酵素の活性１単位は、上記条件下で１分間に１μｍｏｌの基質を酸化する活性と定義した。
【００８２】
トレハロース、フェリシアン化カリウム、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の終濃度が、それぞれ４０ｍＭ、１００ｍＭ、及び２５０ｍＭ、上記で得た粗酵素液がトレハロース１ｇ当たり１８単位となるように調製した反応液３９０ｍＬを２７℃、８時間反応させた。得られた反応液に９１０ｍＬのエタノールを添加し、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心上清をエバポレーターにて減圧下で６０ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液を０．２２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、実験１−１と同じ条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料トレハロースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮した。次いで、下記条件で分取を繰り返して、原料トレハロースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品４．３ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．１％であった。標品の一部を実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３，３´−ジケトトレハロースであることが判明した。
【００８３】
（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＳＵＧＡＲ  ＫＳ−８０１
（内径８．０ｍｍ、長さ３００ｍｍ、昭和電工株式会社製）
溶離液：超純水
流  速：０．４ｍＬ／分
カラム温度：７５℃
検  出：示差屈折計
【００８４】
＜実験１−９：メチルα−３−ケトグルコシドの調製＞
メチルα−グルコシド、フェリシアン化カリウム、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の終濃度が、それぞれ４０ｍＭ、１００ｍＭ、及び２５０ｍＭ、実験１−８と同様の手法で調製した粗酵素液がメチルα−グルコシド１ｇ当たり８．１単位となるように調製した反応液２４０ｍＬを、室温にて２時間反応させた。得られた反応液に５６０ｍＬのエタノールを添加し、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心上清をエバポレーターにて減圧下で４０ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液を０．２２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、実験１−１と同じ条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料メチルα−グルコシドから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品０．９ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．１％であった。標品の一部を実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品がメチルα−３−ケトグルコシドであることが判明した。
【００８５】
＜実験２：２−ケトグルコース及び２−ケトトレハロースの調製＞
ピラノース２−オキシダーゼを用いた酵素法によりＤ−グルコースから２−ケトグルコースを調製するとともに、得られた２−ケトグルコースを受容体とし、β−グルコース−１−リン酸（以下、「β−Ｇ１Ｐ」と略称する。）をグルコシル供与体としたトレハロースホスホリラーゼの糖転移反応により２−ケトトレハロースを調製した。
【００８６】
＜実験２−１：２−ケトグルコースの調製＞
Ｄ−グルコースを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）に終濃度３％（ｗ／ｖ）になるように溶解した基質溶液１００ｍＬに、基質１ｇ当たり３１単位のピラノース２−オキシダーゼ（カワラタケ（Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｓｐ．）由来、シグマアルドリッチジャパン社販売）、及び、基質１ｇ当たり２，７００単位のカタラーゼ（牛肝臓由来、和光純薬工業株式会社販売）を添加し、２４０ｒｐｍで振トウしながら、２７℃で２４時間反応させた。なお、カタラーゼを併用した理由は、ピラノース２−オキシダーゼがＤ−グルコースに作用し２−ケトグルコースを生成する反応過程で過酸化水素が生成するため、酵素を失活させる懸念がある過酸化水素を分解するためである。酵素反応後、得られた反応液を１００℃で１０分間加熱することにより酵素を失活させた。得られた反応液における２−ケトグルコースの純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９６．４％であった。なお、得られた標品が２−ケトグルコースであることは、市販の２−ケトグルコース標準品（試薬、シグマアルドリッチジャパン社販売）とＨＰＬＣ分析におけるクロマトグラムを比較することにより確認した。最終的に３ｇのＤ−グルコースから２．８６ｇの２−ケトグルコースが得られた。
【００８７】
＜実験２−２：２−ケトトレハロースの調製＞
実験２−１の方法で得た２−ケトグルコース含有反応液にβ−Ｇ１Ｐ（林原調製品）、５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）を添加し、２−ケトグルコースの終濃度を１％（ｗ／ｖ）、β−Ｇ１Ｐの終濃度を１０％となるように調整した基質溶液２００ｍＬに、β−Ｇ１Ｐ  １ｇ当たり１０単位（２−ケトグルコース当たり１００単位）のトレハロースホスホリラーゼ（サーモアナエロバクター由来、林原調製品）を添加し４０℃で２４時間反応させた。酵素反応後、得られた反応液を１００℃で１０分間加熱することにより酵素を失活させた。反応液をＬＣ／ＭＳ分析に供し、分子量がトレハロースより２小さい２−ケトトレハロースの生成を確認した。反応液中の２−ケトトレハロース含量は０．３７ｇであった。得られた反応液を脱塩した後、実験１−１で行ったと同じ条件で分取ＨＰＬＣを行い、２−ケトトレハロース画分を回収し、実験１−１で行ったと同じ分析条件で２−ケトトレハロースの純度を測定したところ、９５．０％であった。最終的に２ｇの２−ケトグルコースを用いて０．３６ｇの２−ケトトレハロースが得られた。
【００８８】
＜実験３：ヒト単球性細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす３−ケト糖又は２−ケト糖の影響＞
ヒト単球性細胞株であるＴＨＰ−１細胞は、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）とインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）で刺激すると大量のＴＮＦ−αを産生する。そこで、この実験系を用いて３−ケト糖又は２−ケト糖がＴＮＦ−α産生に及ぼす影響を検討した。
【００８９】
本実験で用いたＴＨＰ−１細胞は、細胞分化誘導剤としても知られている酪酸ナトリウムで処理するとＬＰＳに対する応答性が高まることが報告されていることから、予め２ｍＭの酪酸ナトリウムで４〜５日間培養したものを用いた。酪酸ナトリウム処理したＴＨＰ−１細胞を、１０％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用い１×１０６個／ｍＬの細胞濃度に調製したものを９６ウェルマイクロプレートに０．１ｍＬ添加した。次に同培地に実験１で得た３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール、３，３´−ジケトトレハロース、メチルα−３−ケトグルコシド、実験２で得た２−ケトグルコース、２−ケトトレハロースをウェル当たり０．０５ｍＬ添加して、表１に示す各終濃度になるよう調整し、３７℃で２〜３時間インキュベーションした。その後、同培地に、１２．５μｇ/ｍＬの濃度に調製したＬＰＳと１，２５０ＩＵ/ｍＬの濃度に調製したヒトＩＦＮ-γを混合した培地を、ウェル当たり０．１ｍＬ添加してＴＨＰ−１細胞を刺激した。ＴＨＰ−１細胞を３７℃で１８時間培養した後に、培養上清中のＴＮＦ−α産生量を特異的ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫測定）法により測定した。なお、ＴＮＦ−α産生量は、被験物質無添加の対照における培養上清中のＴＮＦ−α産生量を１００％として、下記計算式により相対評価した。また、従来から抗炎症剤として知られているグリチルリチン酸ジカリウム（ＧＫ２）の作用と比較した。
【００９０】
【数１】
2017018336.tif 000003
【００９１】
ＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす３−ケト糖又は２−ケト糖の影響を表１に示す。実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表１に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。
【００９２】
【表１】
2017018336.tif 000004
【００９３】
表１から明らかなように、抗炎症剤として知られているＧＫ２は、濃度依存的にＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生を抑制し、１．０ｍＭで対照の５３．３％、２．０ｍＭで１７．４％まで抑制した。一方、３−ケト二糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール及び３，３´−ジケトトレハロースも、０．５ｍＭ乃至２．０ｍＭの濃度範囲で、いずれもＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生を対照の１．５〜８７．８％まで抑制し、その抑制はいずれも濃度依存的で、且つ、有意なものであった。
【００９４】
３−ケト単糖の誘導体であるメチルα−３−ケトグルコシドは、ＴＮＦ−α産生抑制作用が弱く、４．０ｍＭでも有意な抑制を示さなかったものの、８．０ｍＭで７９．７％、１６．０ｍＭで４９．５％まで抑制した。一方、２−ケトグルコースは２．０ｍＭで６９．０％、４．０ｍＭで５３．８％までＴＮＦ−αの産生を抑制し、２−ケトトレハロースは０．５乃至２．０ｍＭの濃度範囲で６９．６〜４１．３％まで抑制した。
【００９５】
なお、本実験においては、各被験試料の各濃度において細胞数についても同時に測定したところ、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール及びメチルα−３−ケトグルコシド、２−ケト糖である２−ケトグルコース及び２−ケトトレハロースは、いずれの濃度で用いた場合も、細胞数はほぼ対照と同等であり、これらの３−ケト糖又は２−ケト糖の添加によりＴＨＰ−１細胞の生細胞数は低下しないことが確認された。なお、３，３´−ジケトトレハロースの場合には、１．０〜２．０ｍＭの濃度ではわずかに生細胞数が低下したものの、生細胞数を低下させない０．２５ｍＭの低濃度においてもＴＮＦ−αの産生抑制作用が認められた。
【００９６】
本実験の結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール、３，３´−ジケトトレハロース及びメチルα−３−ケトグルコシド、及び、２−ケト糖である２−ケトグルコース、２−ケトトレハロースはいずれも炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの産生を抑制し、抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。ＴＨＰ−１細胞が分泌する炎症性サイトカインＴＮＦ−αは、糖尿病、慢性呼吸器疾患、慢性関節リュウマチ、胃炎、炎症性腸疾患、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、ニキビ、アトピー性皮膚炎、神経変性疾患などにおいてその病態形成に深く関与していることがわかっており、本実験の結果は、これらの疾患を含む幅広い炎症に対する抗炎症剤の有効成分として、３−ケト糖又は２−ケト糖が利用できることを示している。
【００９７】
＜比較実験１：ヒト単球性細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす原料糖質の影響＞
上記で用いた３−ケト糖の原料糖質、すなわち、トレハロース、ラクトース、コージビオース、イソマルトース、マルトース、スクロース、マルチトール、メチル−α−グルコシドに加えて、非特許文献１において抗炎症作用を有することが報告されているＤ−プシコースを被験試料とし、実験３で用いた実験系を用いＴＮＦ−α産生抑制作用を同様に調べた。なお、培地中の各被験試料の濃度を、トレハロース、ラクトース、コージビオース、イソマルトース、マルトース、スクロース、マルチトールについては、４．８ｍＭ、１９．２ｍＭ及び５７．２ｍＭ、メチル−α−グルコシド、Ｄ−プシコースについては、４．８ｍＭ、１４．４ｍＭ及び４３．２ｍＭの三段階とした。
【００９８】
ＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす３−ケト糖の原料糖質及びＤ−プシコースの影響を表２に示す。実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表２に実験３回の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。
【００９９】
【表２】
2017018336.tif 000005
【０１００】
表２から明らかなように、トレハロース、ラクトース、コージビオース、マルトース、スクロース、マルチトールは濃度を５７．６ｍＭ又は４３．２ｍＭまで高めた場合にはじめてＴＮＦ−α産生抑制作用を示したものの、イソマルトースは５７．６ｍＭの濃度でも作用を示さなかった。３−ケト二糖がいずれも２ｍＭ以下の濃度でＴＮＦ−α産生抑制作用を示した上記表１の結果と比べると、これら原料二糖の作用はごく弱く、少なくとも５０倍以上の濃度を用いなければ、同様のＴＮＦ−α産生抑制作用を示さないことが分かった。一方、抗炎症作用が報告されているＤ−プシコース、さらにメチル−α−グルコシドは４３．２ｍＭの濃度でＴＮＦ−α産生抑制作用を示した。しかしながら、Ｄ−プシコース及びメチル−α−グルコシドの作用は３−ケト二糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール、３，３´−ジケトトレハロースの作用、及び、２−ケト糖である２−ケトグルコース、２−ケトトレハロースの作用に比べ弱いものであった。
【０１０１】
これらの結果から、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質において、そのアルドヘキソース構造における３位水酸基又は２位水酸基をケト基に変換することによりアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用を顕著に向上させることができることが明らかとなった。
【０１０２】
＜実験４：ヒト皮膚線維芽細胞のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響＞
炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生に及ぼす３−ケト糖の影響をヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ細胞）について調べた。
【０１０３】
９６ウェルマイクロプレートに、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、１×１０５個／ｍＬの濃度に調製したＮＨＤＦ細胞を０．２ｍＬ添加し、ウェルの底面全体を占める状態まで培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース又は３−ケトイソマルトースを０．０５ｍＬ添加し、終濃度が表３に示す濃度になるよう調整し３７℃で２４時間培養し、これにＩＬ−８の産生を刺激するヒトＩＬ−１βを終濃度１ｎｇ／ｍＬとなるように添加してさらに２４時間培養した。比較のため、抗炎症剤として知られているＧＫ２についても同様に行った。
【０１０４】
培養上清中のＩＬ−８量は特異的ＥＬＩＳＡキット（アフィメトリックス社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。被験試料を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、対照における培養上清中のＩＬ−８産生量を１００％として、下記計算式により、ＩＬ−８産生量を相対評価した。
【０１０５】
【数２】
2017018336.tif 000006
【０１０６】
ＮＨＤＦ細胞のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響を表３に示す。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表３に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。
【０１０７】
【表３】
2017018336.tif 000007
【０１０８】
表３から明らかなように、対照と比較して、３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースでは、試験した濃度範囲においてＩＬ−８産生抑制作用が認められた。なお、ＩＬ−８産生抑制作用が認められた濃度では、３−ケトトレハロースの３．０ｍＭでわずかに細胞数の減少が認められた以外は、細胞数に影響は認められなかったことから、３−ケト糖によるＩＬ−８産生抑制は細胞自体の障害作用によるものではないことが確認された。また、ＧＫ２は３．０ｍＭでは対照に対してＩＬ−８産生の有意な抑制が認められたものの、０．５ｍＭ及び１．０ｍＭでは逆にＩＬ−８産生の増加が認められた。
【０１０９】
本実験の結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースはいずれも炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生を抑制し、抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。より具体的には、３−ケト糖がヒト正常皮膚線維芽細胞からのＩＬ−８産生を抑制したことから、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ニキビ、乾癬などの皮膚の炎症症状の緩和、改善に加え、各種炎症性疾患の予防、治療に有用であることを物語っている。
【０１１０】
＜実験５：ヒト表皮ケラチノサイト細胞（ＮＨＥＫ細胞）のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響＞
炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生に及ぼす３−ケト糖の影響をヒト表皮ケラチノサイト細胞（ＮＨＥＫ細胞）について調べた。
【０１１１】
コラーゲンコートした９６ウェルマイクロプレートに、増殖因子含有ケラチノサイト用培地（商品名「ＥｐｉＬｉｆｅ」，ライフテクノロジーズ社製）を用いて、５．０×１０４個／ｍＬの濃度に調製した正常ＮＨＥＫ細胞を０．２ｍＬ添加し、１〜２日おきに培地を交換しながら３７℃で３日間培養した。その後、増殖因子を含有しないケラチノサイト用培地に交換し、さらに２４時間培養することにより細胞を調製した。培養上清を吸引除去した後、増殖因子を含有しないケラチノサイト用培地で、適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース又は３−ケトイソマルトースをウェル当たり０．２ｍＬ添加し、終濃度が表４に示す濃度になるよう調整し３７℃で２４時間培養し、これにＩＬ−８の産生を刺激するヒトＴＮＦ‐αを終濃度１０ｎｇ／ｍＬ、ヒトＩＦＮ-γを１００ＩＵ／ｍＬとなるようにウェル当たり０．０５ｍＬ添加し、さらに１８〜２０時間培養した。比較のため、抗炎症剤として知られているＧＫ２についても同様に行った。
【０１１２】
培養上清中のＩＬ−８量は特異的ＥＬＩＳＡキット（アフィメトリックス社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。被験試料を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、実験４と同様にＩＬ−８産生量を相対評価した。
【０１１３】
ＮＨＥＫ細胞のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響を表４に示す。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表４に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。
【０１１４】
【表４】
2017018336.tif 000008
【０１１５】
表４から明らかなように、対照と比較して、３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースでは、試験した濃度範囲においてＩＬ−８産生抑制作用が認められた。また、ＩＬ−８産生抑制作用が認められた濃度では、３−ケトトレハロースの３．０ｍＭでわずかな細胞数の減少が認められた以外は、細胞数に影響は認められなかったことから、３−ケト糖によるＩＬ−８産生抑制は細胞の障害作用によるものではないことが確認された。また、ＧＫ２は０．５ｍＭ及び１．０ｍＭでは対照に対してＩＬ−８産生の有意な抑制が認められたものの、逆に３．０ｍＭでは有意なＩＬ−８産生の増加が認められた。
【０１１６】
本実験の結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースはいずれも炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生を抑制し、抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。より具体的には、３−ケト糖がヒト表皮ケラチノサイト細胞からのＩＬ−８産生を抑制したことから、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ニキビ、乾癬などの皮膚の炎症症状の緩和、改善に加え、各種炎症性疾患の予防、治療に有用であることを物語っている。
【０１１７】
＜実験６：ヒト歯肉線維芽細胞のプロスタグランジンＥ２及びＩＬ−６産生に及ぼす３−ケト糖及び２−ケト糖の影響＞
歯周病では歯周病原性細菌の感染により、歯周組織のマクロファージや線維芽細胞が活性化され、炎症関連サイトカインであるＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及びプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）が過剰に産生され、組織破壊を誘導していると考えられている。特に歯周病患者の歯肉組織や歯肉溝滲出液中では、ＰＧＥ２レベルが健常者のそれに比べて亢進しており、実際に非ステロイド性抗炎症剤のインドメタシンやイブプロフェンを歯周炎モデルに投与すると歯周病の進行が抑制されることも報告されている（「野口和行、歯周病とプロスタグランジン、鹿歯紀要、２８巻、３９-４８頁（２００８）」）。従って、活性化歯肉線維芽細胞からのＰＧＥ２やＩＬ−６等の炎症メディエーターの産生を抑制できれば、歯周病の予防や治療に有効と考えられる。
【０１１８】
ＩＬ−１β刺激による活性化ヒト歯肉線維芽細胞（ＨＧＦ細胞）からのＰＧＥ２及びＩＬ−６産生系を用いて、３−ケトトレハロース及び２−ケトグルコースがＰＧＥ２及びＩＬ−６産生に及ぼす影響を調べ、ＧＫ２と比較した。
【０１１９】
コラーゲンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＡＳＡＨＩガラス社製）に、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、５×１０４個／ｍＬの濃度に調製したＨＧＦ細胞を０．２ｍＬ添加し、ウェルの底面全体を占める状態まで培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な1０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１５ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、２−ケトグルコース又はＧＫ２を０．０５ｍＬ添加し、３７℃で２４時間培養した。その後、ヒトＩＬ−１βを終濃度１ｎｇ／ｍＬとなるように添加し、さらに２４時間培養した。
【０１２０】
培養上清中のＰＧＥ２及びＩＬ−６は、それぞれ特異的ＥＬＩＳＡキット（ＰＧＥ２；Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社製、ＩＬ−６；Ｒ＆Ｄ社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定することにより定量した。被験物質を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、対照における培養上清中のＰＧＥ２及びＩＬ−６を１００％として、実験４でＩＬ−８産生量について示したと同様の計算式により、ＰＧＥ２及びＩＬ−６産生量を相対評価した。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。危険率ｐ＜０．０１を有意差ありとし、＊で示した。結果を表５に示す。
【０１２１】
【表５】
2017018336.tif 000009
【０１２２】
表５から明らかなように、被験物質を添加しない対照と比較して、３−ケトトレハロースでは濃度依存的、且つ、有意なＰＧＥ２産生抑制作用が認められた。しかも１ｍＭ以下の濃度ではＧＫ２よりも強いＰＧＥ２産生抑制作用が認められた。一方、２−ケトグルコースでは２ｍＭの濃度で有意なＰＧＥ２産生抑制作用が見られた。また、３−ケトトレハロース及び２−ケトグルコースはいずれも２ｍＭの濃度でＧＫ２と同程度のＩＬ−６産生抑制作用を示した。なお、試験した濃度範囲では細胞障害作用は認められなかった。
【０１２３】
これらの結果から、３−ケトトレハロース及び２−ケトグルコースには活性化歯肉線維芽細胞からの炎症メディエーターの産生を抑制する作用があり、歯周病の予防又は治療に有効であることが判明した。
【０１２４】
＜実験７：ヒト腸管上皮細胞株Ｃａｃｏ−２のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響＞
腸管への細菌の侵入による炎症時には、生体の防御反応として粘膜固有層のマクロファージ等から産生されたＩＬ−１やＴＮＦ−αが上皮細胞に作用してＩＬ−８等のケモカインが産生され、このＩＬ−８により好中球を炎症局所に浸潤・集積させて微生物の排除にあたる。しかし炎症性腸疾患の場合のように、何らかの理由により炎症が長期化、慢性化した場合、過剰な炎症応答（例えばＩＬ−８産生量持続的増大）の結果として浸潤した好中球による組織破壊が起こるとも報告されている。従って、ＩＬ−１やＴＮＦ−αによる腸管上皮細胞からの炎症メディエーターとしてのＩＬ−８産生を抑制することは、潰瘍性大腸炎やクローン病等の炎症性腸疾患の軽減又は治療につながると考えられることから、ヒト腸管上皮細胞からのＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響を調べた。
【０１２５】
コラーゲンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＩＷＡＫＩガラス社製）に、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、３×１０４個／ｍＬの濃度に調製したＣａｃｏ−２細胞を０．２ｍＬ添加し、３７℃で３日間培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な１％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトマルチトール、又はＧＫ２をウェル当り０．０５ｍＬ添加し、３７℃で７時間インキュベーションした。インキュベーション後、同培地で２．５ｎｇ/ｍＬの濃度に調整したＩＬ−１βと６２．５ｎｇ/ｍＬの濃度に調整したＴＮＦ−αを含む培地をウェル当り０．１ｍＬ添加して刺激した。刺激から１６〜１８時間後に、培養上清中のＩＬ−８産生量を、特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。ＩＬ−８産生量は、被験物質を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、対照における培養上清中のＩＬ−８産生量を１００％として、実験４で用いたと同じ計算式により相対評価した。
【０１２６】
【表６】
2017018336.tif 000010
【０１２７】
表６から明らかなように、活性化腸管上皮細胞株Ｃａｃｏ−２細胞において、ＧＫ２ではＩＬ−１βとＴＮＦ-αの刺激によるＩＬ−８産生の抑制は全く認められなかった。これに対して３−ケトトレハロース及び３−ケトマルチトールでは濃度依存的、且つ有意なＩＬ−８産生抑制作用が認められた。
【０１２８】
この結果は、３−ケトトレハロース及び３−ケトマルチトールが炎症性腸疾患の予防又は治療効果を有することを示している。
【０１２９】
＜実験８：３−ケト糖による前処理がヒト皮膚線維芽細胞の酸化障害への耐性に及ぼす影響＞
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ細胞）を用い、ヒト皮膚線維芽細胞の酸化障害に対する耐性に及ぼす３−ケト糖の影響、詳細には、細胞の３−ケト糖存在下での前処理が活性酸素種の１つである過酸化水素で処理したときに生じる細胞障害に及ぼす影響を調べた。
【０１３０】
９６ウェルマイクロプレートに、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、１×１０５個／ｍＬの濃度に調製したＮＨＤＦ細胞を０．２ｍＬ添加し、ウェルの底面全体を占める状態まで培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース又は３−ケトイソマルトースを０．１ｍＬ添加し、３７℃で２４時間培養した。比較のため、抗炎症剤として知られているＧＫ２についても同様に行った。
【０１３１】
培養後、培養上清を吸引除去した後、ＨＡＮＫＳ緩衝液にて１５０μＭの濃度に調製した過酸化水素をウェル当り０．２ｍＬ添加し、３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、過酸化水素溶液を吸引除去し、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．２ｍＬ添加した後、さらに３７℃で４８時間培養した。
【０１３２】
培養後の細胞数は、セルカウンティングキット（株式会社同人化学研究所製）を用いて測定した。すなわち、４８時間培養した細胞の培養上清を吸引除去した後、新鮮な１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加し、さらに同培地にて１０倍希釈したセルカウンティングキットをウェル当り０．１ｍＬ添加して３７℃で２時間インキュベーションした。最後に、細胞数に対応する４５０ｎｍの吸光度を分光光度計にて測定した。被験物質（３−ケト糖）での前処理を行わない以外は同様に過酸化水素処理した細胞を対照とし、対照における吸光度を１００％として、下記計算式により細胞数を相対細胞数として評価した。
【０１３３】
【数３】
2017018336.tif 000011
【０１３４】
３−ケト糖存在下での前処理が過酸化水素で処理したときに生じるヒト皮膚線維芽細胞の細胞障害への耐性に及ぼす影響を表５に示した。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表７に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。
【０１３５】
【表７】
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【０１３６】
表７から明らかなように、３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースで前処理したヒト皮膚線維芽細胞は、対照と比較して、試験した濃度範囲において濃度依存的且つ有意に細胞数が多かったことから、３−ケト糖がヒト皮膚線維芽細胞の過酸化水素による細胞障害に対する耐性を賦与する作用を有することが判明した。なお、ＧＫ２にはそのような作用は認められなかった。
【０１３７】
本実験結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースは、いずれも活性酸素種による細胞障害への耐性をヒト皮膚線維芽細胞に賦与する効果があり、活性酸素種を原因とする炎症に対する抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。より具体的には、活性酸素種の関与が報告されている手術侵襲、虚血再灌流障害、潰瘍性大腸炎、さらには、アトピー性皮膚炎などの皮膚炎症疾患や紫外線暴露による皮膚の老化の予防乃至治療に有用であることを物語っている。
【０１３８】
実験３乃至８の結果から、３−ケト糖又は２−ケト糖などの分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、細胞に悪影響を与えることなく、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−８、ＰＧＥ２、ＩＬ−６などの産生を抑制し、また、３−ケト糖は活性酸素種による細胞障害を予防する作用も有していることから、これら３−ケト糖及び２−ケト糖は抗炎症剤の有効成分として用いることができることが判明した。また、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分とする本発明の抗炎症剤は、ＧＫ２と比較すると、低濃度で炎症性サイトカインの産生を抑制し、抗酸化作用を有するためより効果的で、且つ、副作用の懸念が少ない安全な抗炎症剤と言える。
【０１３９】
次に実施例を挙げて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【０１４０】
＜抗炎症剤＞
下記組成を混合し、定法により０．５ｇずつ打錠して、経口用抗炎症剤を調製した。
（組成）                                                  （質量％）
３−ケトトレハロース                                    １０．０
トレハロース                                            ９０．０
ステアリン酸マグネシウム                                  ０．２【０１４１】
本品は、抗炎症作用の有効成分として３−ケトトレハロースを含有しているので、敗血症、慢性関節リウマチ、ＡＲＤＳ、肝炎、炎症性腸疾患、活性酸素が関与する疾患等を改善できる経口用抗炎症剤である。
【実施例２】
【０１４２】
＜クレンジングクリーム＞
下記組成のクレンジングクリームを常法により調製した。
（組成）                                                  （質量％）
ステアリン酸                                              ２．０
ステアリルアルコール                                      ３．０
親油型モノステアリン酸グリセリル                          ２．０
ミツロウ                                                  １．５
ワセリン                                                  ６．０
流動パラフィン                                          ４０．０
ジメチルポリシロキサン（１００ＣＳ）                      ０．５
セスキオレイン酸ソルビタン                                １．０
防腐剤                                                    適量
トリエタノールアミン                                      １．０
プロピレングリコール                                    １０．０
ポリエチレングリコール２００００                          ０．５
カルボキシビニルポリマー                                  ０．０５
精製水                                                    残量
３−ケトトレハロース５％（ｗ／ｖ）水溶液                  １．０
香料                                                      適量【０１４３】
本品は、３−ケトトレハロースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。また、本品は、皮膚を滑らかにするクレンジングクリームであり、軽やかな伸び広がりでメイクの汚れ落ちもよい。
【実施例３】
【０１４４】
＜洗顔料＞
下記組成の洗顔料を常法により調製した。
（組成）                                                  （質量％）
ラウリン酸                                                ５．０
ミリスチン酸                                            １８．５
ステアリン酸                                              ６．０
グリセリン                                              １２．０
ポリエチレングリコール１５００                            ５．０
水酸化カリウム                                            ６．５
精製水                                                    残量
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                            ５．０
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                      １．８
ポリオキシエチレンラウリルエーテル（７．５Ｅ．Ｏ．）      ２．０
ジステアリン酸エチレングリコールラウリルエーテル          １．０
ヒドロキシプロピルメチルセルロース１％（ｗ／ｖ）水溶液    ５．０
３−ケトラクトース５％（ｗ／ｖ）水溶液                    ２．０
香料                                                      適量【０１４５】
本品は、３−ケトラクトースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。また、本品は、皮膚をキメ細やかに保つ洗顔料であり、豊かな泡立ちとさっぱりとした使用感を奏する。
【実施例４】
【０１４６】
＜パック＞
下記組成のパックを常法により調製した。
（組成）                                                  （質量％）
ポリビニルアルコール                                    １５．０
ポリエチレングリコール                                    ３．０
プロピレングリコール                                      ７．０
エタノール                                              １０．０
ローヤルゼリーエキス                                      １．０
３−ケトコージビオース                                    ０．５
防腐剤                                                    適量
香料                                                      適量
精製水                                                    残量【０１４７】
本品は、３−ケトコージビオースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。本品は、その典型的な使用態様により、皮膚の炎症を改善し、皮膚の状態を良好に維持することができるパックであり、美白効果にも優れている。
【実施例５】
【０１４８】
＜日焼け止め用ゲルクリーム＞
下記組成の日焼け止め用ゲルクリームを常法により調製した。
配合成分                                                （質量％）
パラメトキシケイ皮酸オクチル                              ４．０
オキシベンゾン                                            ３．０
流動パラフィン                                          １６．０
オリーブ油                                                ９．０
ジブチルヒドロキシトルエン                                ０．０１
３−ケトイソマルトース                                    １．０
アクリル酸／メタクリル酸アルキル共重合体                  ０．６
カルボキシビニルポリマー                                  ０．４
アスコルビン酸２−グルコシド                              ２．０
アラントイン                                              １．０
トリエタノールアミン                                      １．０
防腐剤                                                    適量
精製水                                                    残量【０１４９】
本品は、３−ケトイソマルトースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。また、本品は、３−ケトイソマルトース及びアラントインの持つ抗炎症作用により、日焼けを抑制し、ほてりをおさめる消炎効果に優れたジェルである。
【実施例６】
【０１５０】
＜乳液＞
ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５質量部、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１質量部、ピルビン酸０．５質量部、ベヘニルアルコール０．５質量部、アボガド油１質量部、３−ケトマルトース１質量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸ナトリウム１質量部、１，３−ブチレングリコール５質量部、カルボキシビニルポリマー０．１質量部及び精製水８５．３質量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合し乳液を製造した。【０１５１】
本品は、３−ケトマルトースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善するとともに、皮膚の状態を良好に維持ことができる。本品は、日焼け止め、しみ・そばかす防止、美肌、色白用の乳液として有利に利用できる。
【実施例７】
【０１５２】
＜ジュース＞
下記組成のジュースを常法により製造した。
（組成）                                                  （質量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                                    ５．０
果糖ブドウ糖液糖                                        １１．０
クエン酸                                                  ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                                        ０．０２
香料                                                      ０．２
色素                                                      ０．１
３−ケトラクトース                                        ０．２
水                                                      ８９．２８【０１５３】
本品は、３−ケトラクトースが配合されているので、歯周病や歯肉炎を予防するのに有用なジュースである。また、本品は、ビタミンＣ作用が強化されているため、みかんの風味が長期間劣化しにくいジュースである。
【実施例８】
【０１５４】
＜グレープフルーツゼリー＞
下記組成のグレープフルーツゼリーを常法により製造した。
（組成）                                                  （質量％）
３−ケトトレハロース                                      ６．０
安定剤                                                    １．２
グレープフルーツ砂じょう                                  １．０
ｐＨ調整剤                                                ０．９
グレープフルーツ果汁（６倍濃縮果汁）                      ０．５
アスコルビン酸２−グルコシド                              ２．０
酵素処理ステビア                                          ０．０４
ベニバナ黄色                                              ０．０１
精製水                                                    残量【０１５５】
本品は、３−ケトトレハロースが配合されているので、歯周病や歯肉炎を予防するのに有用なグレープフルーツゼリーである。また、本品は、ビタミンＣ作用が強化されているため、グレープフルーツの風味が長期間劣化しにくいゼリーである。
【実施例９】
【０１５６】
＜チューインガム＞
ガムベース３質量部を柔らかくなるまで加熱融解し、これにトレハロース含量約５０％（ｗ／ｗ）の粉末緑黄色野菜を７質量部加え、さらに、適量の着色料及び着香料とともに、３−ケトスクロースを固形分重量含量０．１％になるように加えた後、常法により練り合わせ、成型し、包装して３−ケトスクロースを含有するチューインガムを得た。【０１５７】
３−ケトスクロースを配合した本品は、皮膚の炎症を抑制し、歯周病や歯肉炎の予防効果に優れたチューインガムであり、テクスチャー、呈味ともに良好である。
【実施例１０】
【０１５８】
＜液剤＞
定法により、下記の成分を混合し、膜濾過した後、滅菌したプラスチック製容器に３０ｍＬずつ充填して液剤を得た。
（組成）                                                  （質量％）
塩化ナトリウム                                            ０．６
塩化カリウム                                              ０．０３
塩化カルシウム                                            ０．０２
乳酸ナトリウム                                            ０．３１
トレハロース                                              ４．４
パラチニット                                              ０．２
３−ケトトレハロース                                      ０．０５
精製水                                                    残量【０１５９】
３−ケトトレハロースを配合した本品は、結膜炎や炎症性疾患を治療するための点眼剤や注射剤として有用であり、ビタミン、カロリー及びミネラルの補給作用を兼備している。
【実施例１１】
【０１６０】
＜マウスウォッシュ＞
下記組成のマウスウォッシュを常法により製造した。
（組成）                                                  （質量％）
グリセリン                                              １０．０
１，３−プロパンジオール                                  ３．０
低分子量寒天                                              ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                            ０．２
３−ケトイソマルトース                                    ０．５
アスコルビン酸２−グルコシド                              １．０
塩化セチルピリジニウム                                    ０．０５
ｌ−メントール                                            ０．０５
ラネキサム酸                                              ０．０５
サッカリンナトリウム                                      ０．０２
パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．０１
香料                                                      ０．０５
クエン酸                                                  適量
水                                                      ８９．２８【０１６１】
本品は、３−ケトイソマルトースが配合されているので、歯周病や歯肉炎の予防に優れたマウスウォッシュとして有利に利用できる。
【実施例１２】
【０１６２】
＜練歯磨＞
下記組成の練歯磨を常法により製造した。
（組成）                                                  （質量％）
第二リン酸カルシウム                                    ３０．０
ハイドロキシアパタイト                                  １０．０
炭酸カルシウム                                            ５．０
３−ケトトレハロース                                    ３０．０
ラウリル硫酸ナトリウム                                    １．５
モノフルオロリン酸ナトリウム                              ０．７
ポリオキシエチレンソルビタンラウレート                    ０．５
塩酸ジフェンヒドラミン                                    ０．５
防腐剤                                                    ０．０５
精製水                                                  ２２．０【０１６３】
本品は、３−ケトトレハロースが配合されているので、口腔内の炎症、歯槽膿漏などによる歯茎の腫れ、炎症、出血などの予防や治療に優れた歯磨剤として有利に利用できる。
【実施例１３】
【０１６４】
＜ファンデーション＞
下記組成のファンデーションを常法により調製した。
（組成）                                                  （質量％）
タルク                                                    ２０．０
マイカ                                                    ３３．０
カオリン                                                    ７．０
ナイロンパウダー                                          １０．０
二酸化チタン                                              １０．０
雲母チタン                                                  ３.０
ステアリン酸亜鉛                                            １．０
赤酸化鉄                                                    １．０
黄色酸化鉄                                                  ３．０
２−ケトグルコース                                          １．５
クチナシ黄・ベニバナ赤処理セルロース                        ２．０
糖転移ヘスペリジン                                          ３．０
スクワラン                                                  ６．０
酢酸ラノリン                                                １．０
ミリスチン酸オクチルドデシル                                ２．０
香料                                                        適量
防腐剤                                                      適量【０１６５】
本品は、２−ケトグルコースが配合されているので、皮膚の炎症を抑制し、皮膚の状態を良好に維持し、日焼け止め、しみ・そばかす防止、美肌、色白用のファンデーションとして利用することができる。また、本品は、抗酸化作用、ラジカル補足作用、エラスターゼ阻害作用、リパーゼ阻害作用等を有するクチナシ黄・ベニバナ赤を担持したセルロースパウダーを含有しているので、ニキビやシワの発生を抑制し、ハリがある肌を保持することができる。
【産業上の利用可能性】
【０１６６】
本発明の、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤は、各種の炎症症状の緩和剤又は改善剤、及び、各種の炎症の予防剤又は治療剤として、化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品の分野で利用することができる。
【符号の説明】
【０１６７】
図２において、
←：トレハロースの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルに比べ低磁場側にシフトしたＣ−３位炭素のシグナル
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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