(57)【要約】  リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するＩＬ−６産生抑制剤。また、リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する抗炎症剤。また、上記ＩＬ−６産生抑制剤又は抗炎症剤を有効成分として含有する抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤。さらに、上記したＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤を含有する医薬品又は食品。  本発明によれば、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することが明らかになったリナカンチンＣを用いたＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品を提供できる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するＩＬ−６産生抑制剤。
【請求項２】
リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する抗炎症剤。
【請求項３】
請求項１に記載のＩＬ−６産生抑制剤又は請求項２に記載の抗炎症剤を有効成分として含有する抗神経変性疾患剤。
【請求項４】
請求項３に記載の抗神経変性疾患剤において、
神経変性疾患が、パーキンソン病、パーキンソン症候群、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中、脳梗塞及び脳虚血のうち少なくとも１つである抗神経変性疾患剤。
【請求項５】
請求項１に記載のＩＬ−６産生抑制剤又は請求項２に記載の抗炎症剤を有効成分として含有する抗精神神経疾患剤。
【請求項６】
請求項５に記載の抗精神神経疾患剤において、
精神神経疾患が、統合失調症、うつ病、自閉症スペクトラム障害、依存症及びてんかんのうち少なくとも１つである抗精神神経疾患剤。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤を含有し、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有する医薬品。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれかに記載のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤を含有し、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有する食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リナカンチンＣを用いたＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品に関する。
【技術背景】
【０００２】
ミクログリアは、中枢神経系（脳や脊髄）に存在するグリア細胞の一種である。ミクログリアは、小膠細胞やＨｏｒｔｅｇａ細胞とも呼ばれる。
ミクログリアは、マクロファージのような免疫担当細胞であると考えられている。ミクログリアは、免疫反応の起点となる抗原提示作用、異物に対する自然免疫作用、異物や老廃物に対する食作用、神経回路の形成補助、周囲の細胞に影響を与える各種物質の産生といった様々な作用や役割を有する。
【０００３】
ミクログリアは、外的刺激やストレス等により活性状態となり、抗酸化物質や栄養因子等、有用な物質を産生する。しかし、ミクログリアは、病的な活性化により、炎症性サイトカインやケモカイン、核酸、グルタミン酸等の興奮性アミノ酸、活性酸素種、プロテアーゼ等を分泌し、周囲の細胞を傷害することで、神経炎症の起点となる。このため、ミクログリアは、中枢神経系の神経変性の原因にもなりうる（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００４】
ＩＬ−６（インターロイキン−６）は、ミクログリアにより産生されるサイトカインの一種である。ＩＬ−６は、炎症と関連が深いことが知られている（例えば、非特許文献２参照。）。ミクログリアにより産生されたＩＬ−６は中枢神経系において炎症を引き起こし、パーキンソン病、パーキンソン症候群、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中、脳梗塞及び脳虚血といった神経変性疾患の原因となる。また、中枢神経系における炎症は、統合失調症、うつ病、自閉症スペクトラム障害、依存症及びてんかんといった精神神経疾患の原因にもなる（例えば、非特許文献３参照。）。
このため、ミクログリアによるＩＬ−６の産生を抑制することができれば、神経変性疾患や精神神経疾患の予防、症状の進行の抑制又は治療が可能であると考えられる。
【０００５】
ところで、白鶴霊芝（Ｒｈｉｎａｃａｎｔｈｕｓ  ｎａｓｕｔｕｓ  （Ｌ．）  Ｋｕｒｚ。白鶴霊芝草ともいう。）は、インド南部デカン高原の原産とされるリナカンサス属キツネノマゴ科に属する常緑小低木である。白鶴霊芝の全草は駆虫、消炎、皮膚真菌に対する抗菌作用があることが知られ（例えば、非特許文献４参照。）、主に中国、台湾、タイ、インド等において民間薬や食品として用いられている。また、白鶴霊芝は、最近では日本においても食品として用いられている。本出願の出願人による以前の出願で、白鶴霊芝に活性酸素消去能があること（例えば、特許文献１参照。）、排泄促進作用があること（例えば、特許文献２参照。）、抗アレルギー作用があること（例えば、特許文献３参照。）及び抗腫瘍作用があること（例えば、特許文献４参照。）等が開示されている。
【０００６】
また、白鶴霊芝には、リナカンチンＣという化合物が含まれている（例えば、非特許文献５参照。）。リナカンチンＣはナフトキノン骨格を有する化合物であり、以下の化学式（１）により表される。
【化１】
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【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平９−１４３０９１号公報
【特許文献２】特開平９−１６９６６２号公報
【特許文献３】特開２００１−１０９６４号公報
【特許文献４】特開２００２−５３４８１号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】「医学のあゆみ」、医歯薬出版株式会社、２０１４年３月２２日、Ｖｏｌ．２４８、Ｎｏ．１２、８８１〜８８６頁
【非特許文献２】「実験医学」、羊土社、２０１４年１１月１日、Ｖｏｌ．３２、Ｎｏ．１７（増刊）、２７８２〜２７９０頁、
【非特許文献３】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｕｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ、（韓国）、Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｏｎｔｉｎｅｎｃｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１６、Ｍａｙ；２０（Ｓｕｐｐｌ  １）、Ｓ２−７
【非特許文献４】「原色牧野和漢薬草大図鑑」、北隆館、１９８８年、４９２頁
【非特許文献５】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ、和漢医薬学会、２００６、Ｖｏｌ.２３、Ｎｏ.５、Ｐ１６６−１７２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、リナカンチンＣがミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することは知られていない。【００１０】
そこで、本発明は、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するＩＬ−６産生抑制剤を提供することを目的とする。また、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する抗炎症剤を提供することも目的とする。また、上記したＩＬ−６産生抑制剤又は抗炎症剤に関連する抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品を提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の発明者らは、リナカンチンＣの性質について鋭意研究を行った。その結果、リナカンチンＣにはミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制する作用があることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明は、下記の事項により構成される。【００１２】
［１］リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するＩＬ−６産生抑制剤。【００１３】
［２］リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する抗炎症剤。【００１４】
［３］上記［１］に記載のＩＬ−６産生抑制剤又は上記［２］に記載の抗炎症剤を有効成分として含有する抗神経変性疾患剤。【００１５】
［４］上記［３］に記載の抗神経変性疾患剤において、神経変性疾患が、パーキンソン病、パーキンソン症候群、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中、脳梗塞及び脳虚血のうち少なくとも１つである抗神経変性疾患剤。【００１６】
［５］上記［１］に記載のＩＬ−６産生抑制剤又は上記［２］に記載の抗炎症剤を有効成分として含有する抗精神神経疾患剤。【００１７】
［６］上記［５］に記載の抗精神神経疾患剤において、精神神経疾患が、統合失調症、うつ病、自閉症スペクトラム障害、依存症及びてんかんのうち少なくとも１つである抗精神神経疾患剤。【００１８】
［７］上記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤を含有し、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有する医薬品。【００１９】
［８］上記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤を含有し、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有する食品。【００２０】
本発明によれば、後述する試験例に示すようにミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制する作用を有することが明らかになったリナカンチンＣを用いた、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するＩＬ−６産生抑制剤を提供することができる。また、リナカンチンＣを用いた、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する抗炎症剤を提供することができる。さらに、上記したＩＬ−６産生抑制剤又は抗炎症剤に関連する、つまり、リナカンチンＣを用いた抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品を提供することができる。【００２１】
なお、上記［１］については、例えば、「リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するＩＬ−６産生抑制剤を製造するための、前記リナカンチンＣの有効成分としての使用。」のように表現することもできる。
また、上記［２］については、例えば、「リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリア由来のＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する抗炎症剤を製造するための、前記リナカンチンＣの有効成分としての使用。」のように表現することもできる。
また、上記［３］については、例えば、「抗神経変性疾患剤を製造するための、上記［１］に記載のＩＬ−６産生抑制剤又は上記［２］に記載の抗炎症剤の有効成分としての使用。」のように表現することもできる。
また、上記［５］については、例えば、「抗精神神経疾患剤を製造するための、上記［１］に記載のＩＬ−６産生抑制剤又は上記［２］に記載の抗炎症剤の有効成分としての使用。」のように表現することもできる。
また、上記［７］については、例えば、「ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有する医薬品を製造するための、上記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤の使用。」のように表現することもできる。
また、上記［８］については、例えば、「ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有する食品を製造するための、上記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤の使用。」のように表現することもできる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】試験例におけるＡβを用いた試験の結果を示すグラフである。
【図２】試験例におけるＩＦＮ−γ及びＬＰＳを用いた試験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品について説明する。
【００２４】
本発明のＩＬ−６産生抑制剤は、リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制するものである。
本明細書において、ＩＬ−６産生抑制剤について「リナカンチンＣのみを有効成分として含有する」とは、ＩＬ−６産生抑制剤がミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制する作用を有する有効成分としてリナカンチンＣのみを含有することをいう。このため、ＩＬ−６産生抑制剤が当該有効成分ではない成分（例えば、補助的な添加剤、賦形剤や溶媒等）を含有することを否定しない。
本明細書においては、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制する作用のことを、「ＩＬ−６産生抑制作用」という。
【００２５】
本発明の抗炎症剤は、リナカンチンＣのみを有効成分として含有し、ミクログリア由来のＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制するものである。
本明細書において、抗炎症剤について「リナカンチンＣのみを有効成分として含有する」とは、抗炎症剤がミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する作用を有する有効成分としてリナカンチンＣのみを含有することをいい、抗炎症剤が当該有効成分ではない成分（例えば、補助的な添加剤、賦形剤や溶媒等）を含有することを否定しない。
本明細書においては、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで中枢神経系の炎症を予防又は抑制する作用のことを、「抗炎症作用」という。
【００２６】
本発明の抗神経変性疾患剤及び抗精神神経疾患剤は、本発明のＩＬ−６産生抑制剤又は抗炎症剤（つまり、実質的にはリナカンチンＣ）を有効成分として含有するものである。
リナカンチンＣは、後述する試験例に示すように、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制する。このため、本発明のＩＬ−６産生抑制剤又は抗炎症剤を有効成分として含有する、つまり、リナカンチンＣを有効成分として含有する本発明の抗神経変性疾患剤及び抗精神神経疾患剤は、中枢神経系における炎症を予防又は抑制するため、抗神経変性疾患剤及び抗精神神経疾患剤としての作用を有するようになる。
【００２７】
本明細書において「抗神経変性疾患剤」とは、神経変性疾患の予防、進行の抑制又は治療に用いることができるもののことをいう。本明細書において「神経変性疾患」とは、中枢神経系の細胞の異常、特に中枢神経系の炎症に起因する疾患のことをいう。本発明の抗神経変性疾患剤が対象とする神経変性疾患としては、パーキンソン病、パーキンソン症候群、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中、脳梗塞及び脳虚血を挙げることができ、本発明の抗神経変性疾患剤は、これらのうち少なくとも１つに対する作用を有することが好ましい。
本明細書においては、中枢神経系における炎症を予防又は抑制することで、神経変性疾患を予防する又は症状の進行を抑制する作用のことを、「抗神経変性疾患作用」という。
【００２８】
なお、神経変性疾患には、アルツハイマー病も含まれる。ただし、「リナカンチンＣを有効成分として含有する抗アルツハイマー病剤」については、本発明とは作用機序が異なるものの、本出願の出願人による以前の出願の、出願当初の請求の範囲に記載されているため、本出願の抗神経変性疾患剤から、「終局的用途において抗アルツハイマー剤であるもの」を除くこともできる（本出願の出願時において公開されていないＰＣＴ/ＪＰ２０１５/６９３６３を参照。）。
【００２９】
本明細書において「抗精神神経疾患剤」とは、精神神経疾患の予防、進行の抑制又は治療に用いることができるもののことをいう。本明細書において「精神神経疾患」とは、中枢神経系の細胞の異常、特に中枢神経系の炎症に起因し、主に精神に影響を及ぼす疾患のことをいう。「精神神経疾患」は、「精神・神経疾患」と表記されることもある。本発明の抗精神神経疾患剤が対象とする精神神経疾患としては、統合失調症、うつ病、自閉症スペクトラム障害、依存症及びてんかんを挙げることができ、本発明の抗精神神経疾患剤は、これらのうち少なくとも１つに対する作用を有することが好ましい。
本明細書においては、中枢神経系における炎症を予防又は抑制することで、精神神経疾患を予防する又は症状の進行を抑制する作用のことを、「抗精神神経疾患作用」という。
【００３０】
本発明の抗神経変性疾患剤及び抗精神神経疾患剤は、抗神経変性疾患作用又は抗精神神経疾患作用に係る有効成分として、本発明のＩＬ−６産生抑制剤又は抗炎症剤以外の有効成分を含有していてもよい。
【００３１】
本発明の医薬品及び食品は、本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤を含有し、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有するものである。
つまり、本発明の医薬品及び食品は、有効成分としてリナカンチンＣを含有する。
【００３２】
本発明の医薬品及び食品は、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有するのであれば、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用を主目的としないものであってもよい。
【００３３】
本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品には、リナカンチンＣを含有する天然物（例えば、白鶴霊芝）、当該天然物の加工物（例えば、白鶴霊芝の乾燥物）、当該天然物の抽出物（例えば、白鶴霊芝のエタノール抽出物）、当該天然物又はその抽出物の精製物（例えば、白鶴霊芝のエタノール抽出物をカラムクロマトグラフィー等で精製した精製物）等を用いることができる。
また、本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品には、リナカンチンＣを含有する天然物から単離したリナカンチンＣを用いることもできる。
また、本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品には、化学合成（全合成又は部分合成）により得たリナカンチンＣを用いることもできる。
【００３４】
本発明に用いるリナカンチンＣは、体内で作用するときにおいてリナカンチンＣの形態をとっていればよく、投与、処方又は使用前においては、薬学上許容される塩や前駆体の形態をとっていてもよい。
【００３５】
本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患及び医薬品（ここでは、内用又は内服の医薬品）の投与経路は特に限定されないが、例えば、経口投与・直腸内投与等の経腸投与、経鼻投与などの粘膜投与、静脈内投与・皮下投与などの注射投与等を挙げることができる。剤型としては、いずれも投与方法に適した製剤の形態をとることができ、例えば、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、粉末、丸剤、トローチ剤等の固形剤、溶液、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、注射剤などの液剤、ゲル状の製剤等を挙げることができる。本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤及び医薬品は、そのまま投与してもよいが、薬理的に許容される賦形剤とともに投与しても良い。賦形剤としては、単糖類、二糖類、多糖類、無機塩類、油脂、蒸留水など、製剤として一般に使用可能なものであればいずれも用いることができる。製剤化する際には、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００３６】
本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤及び医薬品の有効投与量は、投与経路、剤形、疾患の症状、対象者の年齢等により異なるが、リナカンチンＣについて、通常成人一日あたり０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．５〜３００ｍｇ、さらに好ましくは１〜１００ｍｇであると考えられる。リナカンチンＣの含有量は、製剤の形態・有効投与量・製剤としての投与量のデータに基づき、各投与形態に最適な製剤中の有効成分含有量を設定することができる。
【００３７】
本発明の医薬品は、外用医薬品であってもよい。外用医薬品の形態は特に限定されないが、例えば、軟膏剤、クリーム剤、パップ剤、テープ剤、外用剤等を挙げることができる。本発明の外用医薬品は、リナカンチンＣに加え、必要に応じて種々の医薬成分を含有することができる。また、結合剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００３８】
本発明の食品としては、本発明のＩＬ−６産生抑制剤、抗炎症剤、抗神経変性疾患剤又は抗精神神経疾患剤、本質的にはリナカンチンＣを配合したお茶や加工食品としての形態の食品を例示することができる。
【００３９】
お茶としては、リナカンチンＣを含有する天然物、例えば、白鶴霊芝の葉・茎若しくは根の乾燥物を用いたものを例示することができる。リナカンチンＣを含有する天然物は、他の茶原料と混合して用いることが好ましい。茶原料としては、緑茶、ウーロン茶、プーアル茶、紅茶、ほうじ茶、玄米茶、杜仲茶、柿の葉茶、桑の葉茶等、通常お茶として用いられるものであれば、用いることができる。なお、リナカンチンＣが破壊されない限りにおいて、リナカンチンＣを含有する天然物（例えば、白鶴霊芝の葉・茎または根の乾燥物）は、他の茶原料と同様に焙煎して用いることもできる。
【００４０】
加工食品の形態としては、ドリンク剤、ゼリー、ビスケット、錠剤、丸剤、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等、通常加工食品として提供可能な形態であれば、いずれの形態も用いることができる。また、加工食品の副原料として、賦形剤、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることもできる。
【００４１】
本発明の食品の有効摂取量は、摂取形態、対象者の健康状態、対象者の年齢等により異なるが、リナカンチンＣについて、通常成人一日あたり０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．５〜３００ｍｇ、さらに好ましくは１〜１００ｍｇであると考えられる。
【００４２】
本発明の食品中のリナカンチンＣの含有量は、食品の形態によっても異なるが、通常０．０００１〜１ｗｔ％、好ましくは０．００１〜０．５ｗｔ％、より好ましくは、０．０１〜０．１ｗｔ％であると考えられる。
【００４３】
［試験例］
以下、リナカンチンＣの作用に関する試験例により本発明をさらに詳しく説明する。なお、以下の試験例はいわば具体例であり、本発明は以下の試験例に制約されるものではない。
【００４４】
試験例では、リナカンチンＣの作用を、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を促進すると考えられる物質の影響とともに検証する試験を行った。
ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を促進すると考えられる物質として、アミロイドβ、インターフェロン−γ及びリポ多糖を用いた。
【００４５】
アミロイドβは、アミロイドタンパク質の一種であり、神経細胞に対する直接的又は間接的な毒性があると考えられている。試験例においては、アミロイドβとして、神経毒性の作用中心として知られるアミロイドβ（２５−３５）を用いた。アミロイドβ（２５−３５）として、米国のシグマアルドリッチ社から購入したもの（Ａｍｙｌｏｉｄ  β−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ２５−３５、Ｃａｔ.  Ｎｏ.  Ａ４５５９。以下、単に「Ａβ」と記載する。）を用いた。
【００４６】
インターフェロン−γは、サイトカインの一種であり、抗ウイルス作用、ＮＫ細胞の活性増強作用、マクロファージの活性化作用等を有する。一方、インターフェロン−γには、炎症を増強する作用もある。試験例においては、インターフェロン−γとして、米国のＲ＆Ｄシステムズ社から購入したもの（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｍｏｕｓｅ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｃａｔ．４８５−ＭＩ−１００。以下、単に「ＩＦＮ−γ」と記載する。）を用いた。
【００４７】
リポ多糖（リポポリサッカライド）は、グラム陰性菌における細胞壁外膜を構成する糖脂質である。リポ多糖は、ヒト等の細胞に作用して炎症性サイトカインの産生を促進する。試験例においては、リポ多糖として、米国のシグマアルドリッチ社から購入したもの（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４、Ｃａｔ．Ｌ４３９１。以下、単に「ＬＰＳ」と記載する。）を用いた。
【００４８】
なお、試験例で用いたリナカンチンＣは、白鶴霊芝から単離したものを用いた。単離方法は、以下の通りである。
【００４９】
まず、白鶴霊芝（Ｒｈｉｎａｃａｎｔｈｕｓ  ｎａｓｕｔｕｓ（Ｌ．）Ｋｕｒｚ）の根の乾燥物２ｋｇを準備し、汎用のグラインダーで粉砕した。
続いて、９０％エタノールによる抽出を行った。抽出は、白鶴霊芝を２０ｌの９０％エタノールに３日間浸漬し、その後、溶媒を１時間還流させることで行った。抽出液と抽出残渣とは、濾紙により分離した。当該抽出を同じ原料に対して計３回行った。減圧により抽出液から溶媒を取り除き、乾固したエタノール抽出物７７．８２ｇを得た。
【００５０】
上記エタノール抽出物から４ｇを分析用サンプルとして取り除いた後、残りのエタノール抽出物７３．８２ｇ全量について、ヘキサン及び９０％メタノールで液−液分配を行った。まず、エタノール抽出物に９０％メタノール５００ｍｌを加え、その後、ヘキサン５００ｍｌをさらに加えて１分間振とうした。溶媒が分離するまで１０分程度待ち、９０％メタノール相を採取した。さらに２回同様の操作を繰り返し、得られた９０％メタノール相から減圧により溶媒を取り除き、乾固した分配物５４．３２ｇを得た。
【００５１】
上記分配物から４ｇを分析用サンプルとして取り除いた後、残りの分配物５０．３２ｇ全量について、二塩化メチレン及び水で液−液分配を行った。まず、分配物に精製水５００ｍｌを加え、その後、二塩化メチレン５００ｍｌをさらに加えて１分間振とうした。溶媒が分離するまで１０分程度待ち、二塩化メチレン相を採取した。さらに２回同様の操作を繰り返し、得られた塩化メチレン相から減圧により溶媒を取り除き、所定の分配物２７．５５ｇを得た。
【００５２】
その後、所定の分配物２．５０ｇとシリカゲル（０．０６３〜０．２ｍｍの汎用品）１０ｇとを混合した。その後、シリカゲル（０．０４０〜０．０６３ｍｍの汎用品）２００ｇを詰めたカラム（直径２ｃｍ、長さ３０ｃｍ、体積約６０ｍｌのオープンカラム）を用意し、溶出溶媒（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で平衡化させた後、所定の分配物とシリカゲルとの混合物を乗せ、溶出溶媒による溶出を行った。なお、溶出溶媒の量は５００ｍｌとした。
【００５３】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、約１０ｍｌずつに分けて試験管で採取し、ＴＬＣにより溶出のパターンを観察した。おおよその溶出のパターンにより、１本目の試験管で得られたものを分画物２−１（溶媒量約０〜１０ｍｌ）、２〜３本目の試験管で得られたものを分画物２−２（溶媒量約１０〜３０ｍｌ）、４〜１０本目の試験管で得られたものを分画物２−３（溶媒量約３０〜１００ｍｌ）とした。
【００５４】
その後、分画物２−１〜２−３について１ＨＮＭＲ及び１３ＣＮＭＲのデータを文献値（ジャーナル  オブナチュラル  プロダクツ、５９巻、８０８〜８１１ページ、１９９６年）と比較することで構造の解析を行い、分画物２−２がリナカンチンＣであることを確認した。得られたリナカンチンＣの量は、４４４．２ｍｇであった。
【００５５】
なお、核磁気共鳴スペクトル装置として、ＪＥＯＬ  ＪＮＭ−ＧＳＸ５００型核磁気共鳴スペクトル装置（日本電子株式会社製）を用いた。
【００５６】
以下、試験方法について説明する。
試験例では、ミクログリアとしてマウス由来ミクログリアであるＢＶ−２細胞（以下、単にＢＶ−２細胞という。）を用いた。ＢＶ−２細胞は、台湾の台北医学大学の陳嘉玲博士の研究室で作製したものを用いた。当該ＢＶ−２細胞は、ｖ−ｒａｆ／ｖ−ｍｙｃ癌遺伝子をレトロウイルスによりマウスのミクログリア培養細胞に導入し、株化することにより得たものである。
入手したＢＶ−２細胞は、１０％牛胎児血清、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地を用い、５％炭酸ガス存在下、３７℃で前培養を行った。
【００５７】
ＢＶ−２細胞は、９６ウェルのプレート（米国のコーニング社の９６  Ｗｅｌｌ  Ｃｌｅａｒ  Ｆｌａｔ  Ｂｏｔｔｏｍ  Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ  ＴＣ−Ｔｒｅａｔｅｄ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ,  Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ  Ｗｒａｐｐｅｄ,  ｗｉｔｈ  Ｌｉｄ,  Ｓｔｅｒｉｌｅ（Ｐｒｏｄｕｃｔ  ＃３５９９））に、５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、５％炭酸ガス存在下、３７℃で１６時間培養した。
その後、リナカンチンＣを添加するサンプルについては、所定の濃度のリナカンチンＣを添加して４時間前処理を行った。さらにその後、Ａβを添加するサンプル、ＩＦＮ−γを添加するサンプル及びＬＰＳを添加するサンプルについて、所定の濃度の各物質を添加し、５％炭酸ガス存在下、３７℃で４８時間培養した。
【００５８】
培養後、上清を採取し、産生されたＩＬ−６の量を定法のＥＬＩＳＡ法により測定した。ＥＬＩＳＡ測定は、米国のアフィメトリクス社、ｅＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥのＭｏｕｓｅ  ＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ  Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ！を用いて行った。
また、細胞生存率については、常用のＭＴＴ試験法により算出した。具体的には、５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液（米国のサーモフィッシャーサイエンティフィック社製）１０μｌを１００μｌの細胞培養液に加え、５％炭酸ガス存在下、３７℃で１．５時間培養した。その後、培養液を除去し、１００μｌの溶解溶液（０．０４規定の塩酸を含むイソプロパノール溶液）を加え生成物を完全溶解し、波長５７０ｎｍ（対照６４０ｎｍ）の吸光度を測定することで細胞生存率を算出した。
【００５９】
試験例では、Ａβを用いた試験と、ＩＦＮ−γ及びＬＰＳを用いた試験とを分けて行った。
Ａβを用いた試験では、リナカンチンＣの濃度を０．２５，０．５μＭとし、Ａβの濃度を２０μＭとした。
ＩＦＮ−γ及びＬＰＳを用いた試験では、リナカンチンＣの濃度を０．０６，０．１３，０．２５，０．５μＭとし、ＩＦＮ−γの濃度を０．１ｎｇ／ｍｌとし、ＬＰＳの濃度を１００ｎｇ／ｍｌとした。
なお、各サンプルにおける添加物の濃度は、事前に細胞毒性等に関するスクリーニング等を行い、適切な濃度を決定した。
【００６０】
以下、試験の結果について説明する。
【００６１】
（１）Ａβを用いた試験
図１は、試験例におけるＡβを用いた試験の結果を示すグラフである。図１（ａ）はサンプルごとのＩＬ−６の産生量を示す棒グラフであり、図１（ｂ）はサンプルごとの細胞生存率を示す棒グラフである。図１（ａ）及び図１（ｂ）の横軸の下部に記載されている「ＲＣ」の項目はリナカンチンＣの添加の有無と添加量を示し、「−」が記載されているサンプルにはリナカンチンＣを添加せず、数値が記載されているサンプルにはリナカンチンＣを数値の量だけ添加した（単位：μＭ）。一方、「Ａβ」の項目はＡβの添加の有無を示し、「−」が記載されているサンプルにはＡβを添加せず、「＋」が記載されているサンプルにはＡβを添加した。図１（ａ）の縦軸はＩＬ−６の産生量（単位：ｐｇ／ｍｌ）を示し、図１（ｂ）の縦軸は細胞生存率（単位：％）を示す。図１において棒グラフの上に記載されている数値は、縦軸に対応する数値である。
【００６２】
なお、ＩＬ−６産生量変化の有意差検定に関しては、以下に記載するとおりであった。リナカンチンＣのみを添加したサンプルについては、何も添加しなかったサンプルを基準としてｐ＜０．００１の有意差をもって低下した。Ａβのみを添加したサンプルについては、何も添加しなかったサンプルを基準としてｐ＜０．０５の有意差をもって増加した。リナカンチンＣを０．５μＭ添加し、Ａβも添加したサンプルについては、Ａβのみを添加したサンプルを基準としてｐ＜０．０５の有意差をもって低下した。
【００６３】
（２）ＩＦＮ−γ及びＬＰＳを用いた試験
図２は、試験例におけるＩＦＮ−γ及びＬＰＳを用いた試験の結果を示すグラフである。図２（ａ）はサンプルごとのＩＬ−６の産生量を示す棒グラフであり、図２（ｂ）はサンプルごとの細胞生存率を示す棒グラフである。図２（ａ）及び図２（ｂ）の横軸の下部に記載されている「ＲＣ」の項目はリナカンチンＣの添加の有無と添加量を示し、「−」が記載されているサンプルにはリナカンチンＣを添加せず、数値が記載されているサンプルにはリナカンチンＣを数値の量だけ添加した（単位：μＭ）。一方、「ＩＦＮ−γ」の項目はＩＦＮ−γの添加の有無を示し、「−」が記載されているサンプルにはＩＦＮ−γを添加せず、「＋」が記載されているサンプルにはＩＦＮ−γを添加した。また、「ＬＰＳ」の項目はＬＰＳの添加の有無を示し、「−」が記載されているサンプルにはＬＰＳを添加せず、「＋」が記載されているサンプルにはＬＰＳを添加した。図２（ａ）の縦軸はＩＬ−６の産生量（単位：ｐｇ／ｍｌ）を示し、図２（ｂ）の縦軸は細胞生存率（単位：％）を示す。図２において棒グラフの上に記載されている数値は、縦軸に対応する数値である。
【００６４】
なお、ＩＬ−６産生量変化の有意差検定に関しては、以下に記載するとおりであった。リナカンチンＣのみを０．１３μＭ添加したサンプルについては、何も添加しなかったサンプルを基準としてｐ＜０．０１の有意差をもって低下した。リナカンチンＣのみを０．２５μＭ添加したサンプル及び０．５μＭ添加したサンプルについては、何も添加しなかったサンプルを基準としてｐ＜０．００１の有意差をもって低下した。ＩＦＮ−γのみを添加したサンプル及びＬＰＳのみを添加したサンプルについては、何も添加しなかったサンプルを基準としてｐ＜０．０５の有意差をもって増加した。リナカンチンＣを０．０６μＭ又は０．２５μＭ添加し、ＩＦＮ−γも添加したサンプルについては、ＩＦＮ−γのみを添加したサンプルを基準としてｐ＜０．０５の有意差をもって低下した。リナカンチンＣを０．５μＭ添加し、ＩＦＮ−γも添加したサンプルについては、ＩＦＮ−γのみを添加したサンプルを基準としてｐ＜０．００１の有意差をもって低下した。リナカンチンＣを０．０６μＭ添加し、ＬＰＳも添加したサンプルについては、ＬＰＳのみを添加したサンプルを基準としてｐ＜０．０５の有意差をもって低下した。リナカンチンＣを０．１３μＭ添加し、ＬＰＳも添加したサンプルについては、ＬＰＳのみを添加したサンプルを基準としてｐ＜０．０１の有意差をもって低下した。リナカンチンＣを０．２５μＭ又は０．５μＭ添加し、ＬＰＳも添加したサンプルについては、ＬＰＳのみを添加したサンプルを基準としてｐ＜０．００１の有意差をもって低下した。
【００６５】
上記の試験例から、図１及び図２に示すように、Ａβ、ＩＦＮ−γ及びＬＰＳには、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を促進する作用があることが確認できた。
また、リナカンチンＣがＩＬ−６の産生を抑制することが確認できた。
さらに、リナカンチンＣの作用には、濃度依存性があることについても確認できた。
なお、細胞生存率については、どのサンプルも特に問題が無いレベルの数値となっていた。
【００６６】
このため、本発明のＩＬ−６産生抑制剤は、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することが可能であると考えられる。また、本発明の抗炎症剤は、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制することで、ＩＬ−６に起因する中枢神経系の炎症を予防又は抑制することが可能であると考えられる。また、本発明の抗神経変性疾患剤、抗精神神経疾患剤、医薬品及び食品は、ミクログリアにおけるＩＬ−６の産生を抑制し、中枢神経系の炎症を予防又は抑制することで、ＩＬ−６産生抑制作用、抗炎症作用、抗神経変性疾患作用及び抗精神神経疾患作用のうち少なくとも１つを有するようになると考えられる。
【００６７】
［実施例］
以下の実施例により、本発明のＩＬ−６産生抑制剤及び抗炎症剤の有効成分であり、本発明の抗神経変性疾患剤及び抗精神神経疾患剤の実質的な有効成分でもあるリナカンチンＣを含有する医薬品及び食品の調製法について記載する。
【００６８】
（１）錠剤
リナカンチンＣを用いて、次の処方で錠剤を作製する。
リナカンチンＣ                                  ０．２ｇ
乳糖                                          ９５．８ｇ
乾燥コーンスターチ                              ２．０ｇ
タルク                                          １．８ｇ
ステアリン酸カルシウム                          ０．２ｇ
（調製法）
乳糖（９５．８ｇ）に、リナカンチンＣ（０．２ｇ）、乾燥コーンスターチ（２ｇ）、タルク（１．８ｇ）、ステアリン酸カルシウム（０．２ｇ）を添加して混合する。次いで、単発式打錠機を用いて常法により錠剤を作製する。
【００６９】
（２）ハードカプセル剤
リナカンチンＣを用いて、次の処方でハードカプセル剤（１カプセルあたり３６０ｍｇ）を作製する。
リナカンチンＣ                                      ５ｍｇ
乳糖                                            ２２０ｍｇ
コーンスターチ                                  １１０ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース                      ２５ｍｇ
（調製法）
リナカンチンＣ（５ｇ）に、乳糖（２２０ｇ）及びコーンスターチ（１１０ｇ）を添加して混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース（２５ｇ）の水溶液を添加して練合する。次いで、押し出し造粒機を用いて、常法により顆粒を製造する。この顆粒をゼラチンハードカプセルに充填することにより、ハードカプセル剤を作製する。
【００７０】
（３）ソフトカプセル剤
リナカンチンＣを用いて、次の処方でソフトカプセル剤（１カプセルあたり１７０ｍｇ）を作製する。
リナカンチンＣ                                  ０．５ｍｇ
大豆油                                      １６９．５ｍｇ
（調製法）
大豆油（１６９．５ｇ）に、リナカンチンＣ（０．５ｇ）を添加して混合する。次いで、ロータリー・ダイズ式自動成型機を用いて、常法に従い、ソフトカプセルに充填することにより、ソフトカプセル剤を作製する。
【００７１】
（４）丸剤
リナカンチンＣを用いて、次の処方で丸剤（１粒あたり１００ｍｇ）を作製する。
リナカンチンＣ                                  ０．５ｍｇ
モロヘイヤ末                                  ２０．０ｍｇ
デンプン                                      ３０．０ｍｇ
糖蜜                                          ２０．０ｍｇ
茶抽出物                                      １５．０ｍｇ
大豆ファイバー                                １４．０ｍｇ
セラック                                        ０．５ｍｇ
（調製法）
上記配合で原料を混合し、適量加水後、練合機で均質な練合物を製造し、得られた練合物を圧延し製丸機を用いて製丸後乾燥して丸剤を作製する。
【００７２】
（５）散剤
リナカンチンＣを用いて、次の処方で常法により散剤（１包あたり１０００ｍｇ）を作製する。
リナカンチンＣ                                      １ｍｇ
乳糖                                            ７９９ｍｇ
コーンスターチ                                  ２００ｍｇ
【００７３】
（６）ゼリー
リナカンチンＣを用いて、次の処方で、常法によりゼリー（１００ｇ）を作製する。
リナカンチンＣ                              ０．００２ｇ
ゼラチン                                    ２．０ｇ
オレンジ果汁                              ２０．０ｇ
水                                        ７７．９９８ｇ
（調製法）
上記成分を混合し、９０℃へ加熱する。ゼラチンの溶解を確認してから容器に充填し、冷却する。ゼラチンを固化することでゼリーを作製する。
【００７４】
（７）軟膏
リナカンチンＣを用いて、次の処方で、常法により軟膏（１００ｇ）を作製する。
（油相成分）
リナカンチンＣ                                  ０．１ｇ
白色ワセリン                                  ２０．０ｇ
ミネラルオイル                                ２０．０ｇ
ステアリルアルコール                            ５．０ｇ
ステアレス−２                                  ３．０ｇ
プロピルパラベン                                ０．１ｇ
天然ビタミンＥ                                  ０．１ｇ
（水相成分）
１，３−ブチレングリコール                      ５．０ｇ
フェノキシエタノール                            ０．４ｇ
ポリソルベート  ６０                            ４．５ｇ
精製水                                        適量
全量  １００ｇ
（調製法）
油相成分及び水相成分をそれぞれ８０℃に熱して均一にし、水相を油相に攪拌しながら加え、乳化後冷却し軟膏を作製する。
【００７５】
（８）テープ剤
リナカンチンＣを用いて、次の処方で、常法によりテープ剤（１００ｇ）を作製する。
（粘着剤溶剤）
スチレン−イソプロピレン−スチレンブロック共重合体    ７．０ｇ
ピコライト                                          ２５．０ｇ
イソプロピレンゴム                                    ５．０ｇ
トルエン                                            １５．０ｇ
酢酸エチル                                          １４．２ｇ
ヘキサン                                            ２５．０ｇ
（薬効成分）
リナカンチンＣ                                        ０．１ｇ
エタノール                                            ５．０ｇ
（経皮吸収促進剤）
オレイルアルコール                                    ０．８ｇ
全量  １００ｇ
（調製法）
粘着剤溶剤及び薬効成分をそれぞれ均一にし、薬効成分及び経皮吸収促進剤を粘着剤溶剤に加え、室温で攪拌し組成物を作製する。この組成物をシリコーン処理したポリエステルフィルム上に延展し、１２０℃で乾燥させ冷却後、ポリエチレンフィルムへ粘着剤層を転写させ、テープ剤を作製する。
【図１】
2018029793.tif 000004
【図２】
2018029793.tif 000005
【国際調査報告】
2018029793.tif 000006
2018029793.tif 000007
2018029793.tif 000008
2018029793.tif 000009