(57)【要約】本発明の試験具は、体液中の所定成分を測定するために用いられる試験具であって、前記体液中の所定成分と反応する乃至前記体液中の所定成分との反応を促進する第１試薬と、前記第１試薬の反応に付随して反応する第２試薬とを含む試薬層構造を有し、前記試薬層構造は、前記第１試薬と前記第２試薬とが層内で互いに分離して配置された試薬分離層を有する。
2017068929.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液中の所定成分を測定するために用いられる試験具であって、
前記体液中の所定成分と反応する乃至前記体液中の所定成分との反応を促進する第１試薬と、前記第１試薬の反応に付随して反応する第２試薬とを含む試薬層構造を有し、
前記試薬層構造は、前記第１試薬と前記第２試薬とが層内で互いに分離して配置された試薬分離層を有することを特徴とする試験具。
【請求項２】
前記試薬分離層は、前記第１試薬を含む粒状の第１粒状部と、前記第２試薬を含む粒状の第２粒状部と備え、
前記第１粒状部と前記第２粒状部とが分離して配置されている請求項１に記載の試験具。
【請求項３】
前記試薬層構造は、前記試薬分離層が積層された多層構造である請求項２に記載の試験具。
【請求項４】
前記多層構造のうちの第１試薬分離層における第１粒状部は、前記第１試薬分離層上に形成された第２試薬分離層における第２粒状部と隣接し、
前記第１試薬分離層における第２粒状部は、前記第２試薬分離層における第１粒状部と隣接する請求項３に記載の試験具。
【請求項５】
前記第１粒状部は前記第２粒状部のみと隣接するように塗布され、前記第２粒状部は前記第１粒状部のみと隣接するように塗布される請求項２乃至４のいずれか１項に記載の試験具。
【請求項６】
前記試薬層構造は、前記第１粒状部及び前記第２粒状部のいずれか一方の粒状部のみからなる一種粒層をさらに有する請求項２乃至５のいずれか１項に記載の試験具。
【請求項７】
前記一種粒層は、前記一方の粒状部が、前記試薬分離層における前記第１粒状部及び前記第２粒状部の他方の粒状部と隣接するように、前記試薬分離層に積層されている請求項６に記載の試験具。
【請求項８】
前記一方の粒状部は、前記第１試薬又は前記第２試薬のみからなる請求項６又は７に記載の試験具。
【請求項９】
前記第１試薬が酵素及びメディエータの少なくともいずれかを含み、前記第２試薬が色素である請求項１乃至８のいずれか１項に記載の試験具。
【請求項１０】
前記試験具は、体液が供給される供給口と、該供給口が一端に形成された流路と、を備える、体液中の所定成分を測定する成分測定装置に装着可能な体液測定チップであり、
前記試薬層構造が、前記流路内に設けられる請求項１乃至９のいずれか１項に記載の試験具。
【請求項１１】
請求項１０に記載の試験具としての体液測定チップと、前記体液測定チップが装着され、
前記体液中の所定成分を測定する成分測定装置と、を備えることを特徴とする成分測定装置セット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試験具及び成分測定装置セットに関し、特に、反応速度の低下を抑制しつつ、経時劣化を抑制することができる試験具及び成分測定装置セットに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、血液や尿等の体液中の所定成分を測定する成分測定装置が広汎に利用されている（例えば、特許文献１及び２参照）。この種の成分測定装置として、発色試薬を有する体液測定チップに血液等の体液を注入し、発色試薬と体液とを反応させた際の呈色度合を光学的に測定する比色式の成分測定装置が知られている（例えば、特許文献３参照）。【０００３】
このような成分測定装置を用いて血液や尿等の体液中の成分を測定する場合において、発色試薬層を、図１７に示すように、酵素（例えば、ペルオキシダーゼ）からなる下層Ｐと、色素（例えば、酸化還元系発色試薬）からなる上層Ｑとを、それぞれ異なる層とする技術がある（例えば、特許文献４参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１４／０４９７０４号
【特許文献２】特許第４９９９００７号公報
【特許文献３】特表平１０−５０５６７６号公報
【特許文献４】特許第５４４０６３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、酵素と色素とをそれぞれ異なる層に担持させる場合、血液や尿等の体液が、上層Ｑにおける色素を溶かし、該色素を含有する溶液が下層Ｐにおける酵素を溶かして反応するのに時間を要するので、反応速度が遅くなってしまうという問題がある。【０００６】
一方、発色試薬中の各試薬が混合された状態で均一に塗布されている場合（均一構造の場合）、特に、湿潤状態時において、血液や尿等の体液が注入される前の段階であっても、発色して、経時劣化してしまうという問題があった。斯かる経時劣化の問題について、本発明者らは、鋭意研究した結果、発色試薬中の色素が発色試薬中の他の試薬（メディエータ又は酵素）と反応することが原因であるとの知見を得た。【０００７】
そこで、本発明の目的は、反応速度の低下を抑制しつつ、経時劣化を抑制することができる試験具及び成分測定装置セットを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第１の態様としての試験具は、体液中の所定成分を測定するために用いられる試験具であって、前記体液中の所定成分と反応する乃至前記体液中の所定成分との反応を促進する第１試薬と、前記第１試薬の反応に付随して反応する第２試薬とを含む試薬層構造を有し、前記試薬層構造は、前記第１試薬と前記第２試薬とが層内で互いに分離して配置された試薬分離層を有することを特徴とするものである。
これにより、第１試薬と前記第２試薬と分離しつつ、拡散距離を短くすることができ、もって、同じ厚みで均一構造とした場合と比較して、反応速度の低下を抑制しつつ、経時劣化を抑制することができる。【０００９】
本発明の１つの実施形態として、前記試薬分離層は、前記第１試薬を含む粒状の第１粒状部と、前記第２試薬を含む粒状の第２粒状部と備え、前記第１粒状部と前記第２粒状部とが分離して配置されていることが好ましい。【００１０】
本発明の１つの実施形態として、前記試薬層構造は、前記試薬分離層が積層された多層構造であることが好ましい。【００１１】
本発明の１つの実施形態として、前記多層構造のうちの第１試薬分離層における第１粒状部は、前記第１試薬分離層上に形成された第２試薬分離層における第２粒状部と隣接し、前記第１試薬分離層における第２粒状部は、前記第２試薬分離層における第１粒状部と隣接することが好ましい。【００１２】
本発明の１つの実施形態として、前記第１粒状部は前記第２粒状部のみと隣接するように塗布され、前記第２粒状部は前記第１粒状部のみと隣接するように塗布されていることが好ましい。【００１３】
本発明の１つの実施形態として、前記試薬層構造は、前記第１粒状部及び前記第２粒状部のいずれか一方の粒状部のみからなる一種粒層をさらに有することが好ましい。【００１４】
本発明の１つの実施形態として、前記一種粒層は、前記一方の粒状部が、前記試薬分離層における前記第１粒状部及び前記第２粒状部の他方の粒状部と隣接するように、前記試薬分離層に積層されていることが好ましい。【００１５】
本発明の１つの実施形態として、前記一方の粒状部は、前記第１試薬又は前記第２試薬のみからなることが好ましい。【００１６】
本発明の１つの実施形態として、前記第１試薬が酵素及びメディエータの少なくともいずれかを含み、前記第２試薬が色素であることが好ましい。【００１７】
本発明の１つの実施形態として、前記試験具は、体液が供給される供給口と、該供給口が一端に形成された流路と、を備える、体液中の所定成分を測定する成分測定装置に装着可能な体液測定チップであり、前記試薬層構造が、前記流路内に設けられることが好ましい。【００１８】
本発明の第２の態様としての成分測定装置セットは、本発明の第１の態様としての試験具としての体液測定チップと、前記体液測定チップが装着され、前記体液中の所定成分を測定する成分測定装置と、を備えることを特徴とするものである。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、反応速度の低下を抑制しつつ、経時劣化を抑制することができる試験具及び成分測定装置セットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明の一実施形態に係る体液測定チップを示す平面図である。
【図２】図１における線Ｉ−Ｉに沿った断面図である。
【図３】図１における試薬層構造を構成する試薬分離層の一例を示す平面図である。
【図４】図３における試薬分離層の変形例を示す平面図である。
【図５】図１における試薬層構造の一例（３次元モザイク構造）を示す斜視図である。
【図６】本発明の一実施形態に係る血糖計セットを示す平面図である。
【図７】図６に示す血糖計セットの血糖計及び血糖測定チップを示す縦断面図である。
【図８】実験例１の反応溶液スペクトルを示すグラフであり、縦軸は吸光度を、横軸は波長（ｎｍ）を示す。
【図９】実験例２の反応溶液スペクトルを示すグラフであり、縦軸は吸光度を、横軸は波長（ｎｍ）を示す。
【図１０】実験例３の反応溶液スペクトルを示すグラフであり、縦軸は吸光度を、横軸は波長（ｎｍ）を示す。
【図１１】実験例４の反応溶液スペクトルを示すグラフであり、縦軸は吸光度を、横軸は波長（ｎｍ）を示す。
【図１２】比較例１の試薬層構造を示す平面図（電子顕微鏡写真）である。
【図１３】実施例１の試薬層構造を示す平面図（電子顕微鏡写真）である。
【図１４】各試薬層構造（比較例１、比較例２、実施例１）の反応速度（発色速度）を示すグラフであり、縦軸は吸光度を、横軸は点着後の時間（ｍｓ：ミリセコンド）を示す。
【図１５】各試薬層構造（比較例１、比較例２、実施例１）の０．６秒間当たりの吸光度増加量変化を示すグラフであり、縦軸は吸光度変化を、横軸は点着後の時間（ｍｓ：ミリセコンド）を示す。
【図１６Ａ】各試薬層構造（比較例１、実施例１）の蛍光灯３時間照射後の吸光度増加量変化を示すグラフである。
【図１６Ｂ】各試薬層構造（比較例１、実施例１）の熱加速試験（６０℃、３日間）後の吸光度増加量変化を示すグラフである。
【図１７】比較例２の２層構造を示す斜視図である。
【図１８】液滴のピッチＰを説明するための図である。
【図１９Ａ】比較例３の試薬層構造を説明するための図である。
【図１９Ｂ】実施例２〜４の試薬層構造を説明するための図である。
【図２０】比較例３及び実施例２〜４の２５秒間後の吸光度（発色量）を示すグラフであり、縦軸が吸光度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
（試験具）
以下、本発明に係る試験具の実施形態について、図１〜図２を参照して説明する。なお、各図において共通の部材には、同一の符号を付している。
【００２２】
本発明の試験具は、体液中の所定成分を測定するために用いられるものである限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、体液測定チップ、試験紙、などが挙げられる。
【００２３】
＜＜体液測定チップ＞＞
以下、試験具の具体例としての体液測定チップを詳細に説明する。
図１は、本発明の一実施形態に係る体液測定チップを示す平面図である。また、図２は、図１における線Ｉ−Ｉに沿った断面図である。
【００２４】
図１及び図２に示すように、本実施形態における体液測定チップ１００は、供給口１０と、流路２０と、試薬層構造３０と、を備え、後述する成分測定装置に装着可能である。
以下、本実施形態における体液測定チップ１００の各部材及び各部材により構成される特徴部の詳細について説明する。
【００２５】
＜＜供給口１０、流路２０、及び試薬層構造３０＞＞
図１及び図２に示すように、体液測定チップ１００は、底面部を形成する第１基材１と、天面部を形成する第２基材２と、これらの第１基材１及び第２基材２の間に、且つ、チップ厚み方向に対して直交する幅方向の両端に設けられた接着部３，４とを備える。
このように、接着部３，４において、第１基材１及び第２基材２の間に任意の厚みを有するスペーサ（図には示していない）を挟んだまま、第１基材１及び第２基材２を接着させることで、第１基材１と第２基材２との間に所定の大きさの空隙が形成される。この所定の大きさの空隙が、供給口１０が一端に形成された流路２０となり、体液を体液測定チップ１００内に流入することができる。さらに、流路２０内には、試薬層構造３０が設けられている。図１及び図２では、試薬層構造３０は、第１基材１上に形成されているが、これに限定されるものではなく、流路２０を閉塞することなく、流路２０内に設けられていればよい。
【００２６】
第１基材１の材質としては、特に制限はなく、目的（光の照射・受光）に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリメチルメタアクリレート、ポリスチレン、環状ポリオレフィン、環状オレフィンコポリマー、ポリカーボネート等の透明な有機樹脂材料；ガラス、石英等の透明性な無機材料；などが挙げられる。
【００２７】
第２基材２の材質としては、特に制限はなく、目的（光の照射・受光）に応じて適宜選択することができ、例えば、親水処理ポリエステルフィルム（３Ｍ親水化フィルム）等の透明な有機樹脂材料、などが挙げられる。
【００２８】
接着部３，４の厚みは、流路２０のチップ厚み方向の距離を所望の値にするために、適宜調整される。例えば、第１基材と第２基材との間に任意の厚みを有するスペーサを配置してから接着あるいは融着したり、第１基材と第２基材を接着させる接着部材としてスペーサの機能を兼ねる両面テープを用いてもよい。
【００２９】
−試薬層構造３０−
試薬層構造３０は、少なくとも、体液中の所定成分と反応する乃至体液中の所定成分との反応を促進する第１試薬と、第１試薬の反応に付随して反応する第２試薬とを含み、必要に応じて、その他の成分を含む。第１試薬と第２試薬の組合せとしては、例えば、「それぞれのｐＨが異なり、斯かるｐＨの異なる試薬が混ざると活性を失う組合せ」、などが考えられる。
【００３０】
また、試薬層構造３０の層構造としては、試薬分離層を有する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択される。
試薬層構造３０としては、試薬分離層のみからなる１層構造であってもよく、試薬分離層を少なくとも１層有する多層構造であってもよいが、反応速度の観点から、試薬分離層のみが積層された２層以上の多層構造（即ち、全ての層が試薬分離層である多層構造）が好ましい。
【００３１】
−−試薬分離層−−
本明細書においては、「試薬分離層」は、「第１試薬と２試薬とが層内で互いに分離して配置された層」を意味する。例えば、図３及び図４のように、試薬分離層３０ａ及び３０ｂは、第１試薬を含む（但し、第２試薬を含まない）部分Ａと、第２試薬を含む（但し、第１試薬を含まない）部分Ｂとが互いに分離して配置されている。
【００３２】
ここで、第１試薬を含む（但し、第２試薬を含まない）部分Ａ（図３及び図４参照）が複数の第１粒状部で構成され、第２試薬を含む（但し、第１試薬を含まない）部分Ｂ（図３及び図４参照）が複数の第２粒状部で構成されていてもよい。
【００３３】
前記第１粒状部及び前記第２粒状部の平均粒径としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３４】
また、図５に示す実施形態では、試薬分離層３０は、第１試薬を含む（但し、第２試薬を含まない）粒状の第１粒状部Ｘと、第２試薬を含む（但し、第１試薬を含まない）粒状の第２粒状部Ｙと備え、第１粒状部Ｘと第２粒状部Ｙとが分離して配置されていることが好ましい。
またここで、試薬層構造３０は、図５に示すように、試薬層構造３０のうちの任意の試薬分離層（第１試薬分離層）における第１粒状部Ｘ１が、第１試薬分離層上に形成された第２試薬分離層における第２粒状部Ｙ２と隣接し、第１試薬分離層における第２粒状部Ｙ１は、第２試薬分離層における第１粒状部Ｘ２と隣接することがより好ましい。
なお、図５において、第１粒状部Ｘは第２粒状部Ｙのみと隣接するように塗布され、第２粒状部Ｙは第１粒状部Ｘのみと隣接するように塗布されている。即ち、第１粒状部Ｘの周りは全て第２粒状部Ｙであり、第２粒状部Ｙの周りは全て第１粒状部Ｘとなるように塗布される。ここで、図５の３次元構造は、塩化ナトリウムの結晶構造（塩化ナトリウム型構造）に類似する構造である。
これにより、斯かる３次元構造に検体（体液）が注入されると、検体は、第一粒状部および第２粒状部の周囲の間隙を３次元的に回り込み、試薬を溶解させながら均一に拡散するので、同じ厚みで均一構造とした場合と比較して、反応速度の低下を抑制することができる。
【００３５】
−−第１試薬−−
前記第１試薬としては、体液中の所定成分と反応する乃至体液中の所定成分との反応を促進する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、酵素、メディエータ、ヒドロペルオキシド、などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３６】
−−−酵素−−−
前記酵素は、例えば、体液（血液、尿）中の所定成分（グルコース）と反応して、グルコースから電子を引き抜く、などの役割を果たす。
前記酵素としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）、グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）、コレステロールオキシダーゼ、コレステロールエステラーゼ、リポプロテインリパーゼ、グリセロールオキシダーゼ、ホスホリパーゼＤ、コリンオキシダーゼ、などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３７】
−−−メディエータ−−−
前記メディエータは、例えば、（ｉ）第１試薬（酵素）と体液（血液、尿）中の所定成分（グルコース）との反応を促進する、（ｉｉ）酵素がグルコースから引き抜いた電子を一旦受け取って色素に渡す、などの役割を果たす。
前記メディエータとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ＰＭＳ）、１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）、ＮＡＤ，ＦＡＤ、ＰＱＱ、フェリシアン化カリウム、などが挙げられる。
これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３８】
−−第２試薬−−
前記第２試薬としては、第１試薬の反応に付随して反応する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上述のメディエータ、色素（発色剤）、蛍光物質、遷移金属塩、亜硝酸ナトリウム、などが挙げられる。
【００３９】
−−−メディエータ−−−
前記メディエータは、例えば、酵素とグルコースとの反応によって生じた電子を一旦受け取って色素に渡す（第１試薬の反応に付随して反応する）、などの役割を果たす。
【００４０】
−−−色素−−−
前記色素（発色剤）は、例えば、酵素とグルコースとの反応によって生じた電子や過酸化水素を受け取って発色する（第１試薬の反応に付随して反応する）、などの役割を果たす。
前記色素としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、テトラゾリウム塩（例えば、ＷＳＴ−４、ＷＳＴ−１、ＷＳＴ−５、ＭＴＳ、ＭＴＴ、テトラゾリウム塩（Ａ））、Ｏ−トリジン、ｍ−トリジン、ベンジジン、テトラメチルベンジジン、Ｏ−メチルベンジジン、Ｏ−ジアニシジン、２，７−ジアミノフルオレン、カプラーとトリンダー試薬を酸化的にカップリングさせたものなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
テトラゾリウム塩（Ａ）の化学式を以下に示す。
【００４１】
【化１】
2017068929.tif 000003
式中  Ｘ＝Ｎａである。
【００４２】
−−−亜硝酸ナトリウム−−−
例えば、血糖測定においては、本来、グルコースの反応に基づく発色のみを観測したいが、血液が溶血すると、ヘモグロビンが色素と反応して、発色（擬発色）してしまう。ここで、前記亜硝酸ナトリウムは、ヘモグロビンをメトヘモグロビンという色素と反応しない別の物質に変換する性質を有するので、前記亜硝酸ナトリウムを第２試薬中に含ませることで、ヘモグロビンのメト化を図り、擬発色を防止することができる。
なお、亜硝酸ナトリウムは、酵素を失活する性質を有するので、酵素と一緒にすると反応が起らなくなってしまう。よって、酵素を含む第１試薬とは分離した第２試薬中に含ませる必要がある。
【００４３】
−−−遷移金属塩−−−
前記色素がテトラゾリウム塩である場合、遷移金属塩（遷移金属イオン）とテトラゾリウム塩とを、キレート反応させ、キレート錯体を生成して発色させてもよい。遷移金属塩としては、水性液体（例えば、水、緩衝液、血液、体液）中でイオンを生成するものであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、ニッケルやコバルトの塩化物、臭化物、硫酸塩、有機酸塩が好ましい。
【００４４】
−試薬層構造３０の製造方法−
前記試薬層構造の製造方法は、少なくとも、塗布工程と、乾燥工程とを含み、必要に応じて、その他の工程を含む。
【００４５】
−−塗布工程−−
前記塗布工程は、第１の試薬を含む第１塗布液と、第２の試薬を含む第２塗布液とを分離して塗布する工程である。
前記塗布方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、インクジェット法、スクリーン印刷法、グラビア印刷法などが挙げられる。
これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００４６】
−−乾燥工程−−
前記乾燥工程は、塗布された塗布液を乾燥する工程である。
前記乾燥工程における、乾燥温度及び乾燥時間としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００４７】
試薬層構造３０が３次元構造（図５）である場合、例えば、以下のように製造することができる。
まず、２種類の溶液（例えば、「色素溶液（第１溶液）」と「メディエータ及び酵素の混合物の溶液（第２溶液）」）を作製する。次に、インクジェット法、スクリーン印刷法、グラビア印刷法等の印刷技術により、第１溶液及び第２溶液から、粒径が略同一の２種類の液滴（第１溶液由来の第１液滴、第２溶液由来の第２液滴）を作製し、第１液滴及び第２液滴を基材上に一滴一滴置いて行く。その際、第１液滴を１列塗り、液滴配列方向に関して粒径の半分だけずらして第２液滴を１列塗り、液滴配列方向に関して粒径の半分だけずらして第１液滴を１列塗るという操作を繰り返して、第１試薬分離層を塗布して形成する（図５参照）。
次に、形成した第１試薬分離層を乾燥した後、同様にして、第１試薬分離層上に第２試薬分離層を塗布して形成する。
さらに、形成した第２試薬分離層を乾燥し、乾燥した後、同様にして、第２試薬分離層上に第３試薬分離層を形成して、３層構造の３次元構造（図５）を作製する。上層（例えば、第２試薬分離層）を形成する際は、下層（例えば、第１試薬分離層）に対して液滴配列方向に関して縦方向および横方向に粒径の半分だけずらして積層することを繰り返すことで、反応速度の低下および経時劣化を抑制することが可能となる。
ここで、印刷技術を用いることにより、液滴の流動性をコントロールすることができる。
なお、本明細書における「溶液」は、溶媒に溶質が完全に溶解した場合のみならず、溶質の一部又は全部が溶解せずに分散している場合も含むものとする。また、前記溶液は、通常、高粘度であり、ゲル状の場合もある。
【００４８】
上述した３次元構造（図５）は、２種類の溶液（液滴）を用いて作製しているが、これに限定されるものではなく、３種類の溶液（液滴）（例えば、「色素溶液（第１溶液）」、「メディエータ溶液（第２溶液）」、「酵素溶液（第３溶液）」）を用いて作製してもよい。３種類の溶液（液滴）を用いるパターンとしては、（ｉ）各層を３種類の溶液（液滴）を一定の規則で分離して、配列し、複層する第１のパターン、（ｉｉ）各層を３種類の溶液（液滴）のうちの２種類の溶液（液滴）で分離して、配列し、複層する第２のパターン、（ｉｉｉ）３種類の溶液（液滴）を一定の規則で分離して、配列した層（３種液滴層）と、２種類の溶液（液滴）を分離して、配列した層（２種液滴層）とを積層する第３のパターン、などのように、３種類の液滴（粒子）が同種の液滴（粒子）と接しないように塗布されることが好ましい。
前記（ｉｉ）第２のパタ−ンの具体例としては、例えば、第１溶液（液滴）と第２溶液（液滴）とを用いて作製した第１試薬分離層と、該第１試薬分離層上に形成され、第２溶液（液滴）と第３溶液（液滴）とを用いて作製した第２試薬分離層と、該第２試薬分離層上に形成され、第３溶液（液滴）と第１溶液（液滴）とを用いて作製した第３試薬分離層とを備える３層構造、などが挙げられる。上層（例えば、第３試薬分離層）を形成する際は、下層（例えば、第２試薬分離層）に対して液滴配列方向に関して縦方向および横方向に粒径の半分だけずらして積層することを繰り返すことで、より反応速度の低下および経時劣化を抑制することが可能となる。
【００４９】
以下、前記塗布工程における、液滴が基材に着弾した際の液滴のピッチ（間隔）について詳述する。
前記液滴のピッチＰ（図１８）としては、結果物として得られる試験具における試薬分離層内で、第１試薬と第２試薬とが互いに分離して配置されている限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、（ｒ１＋ｒ２）／２〜（ｒ１＋ｒ２）×２が好ましく、ｒ１＋ｒ２程度がより好ましい。但し、ｒ１は、第１試薬を含む第１液滴（図１８における参照番号２００）が球状であると仮定した場合における球の半径を示し、ｒ２は、第２試薬を含む第２液滴（図１８における参照番号３００）が球状であると仮定した場合における球の半径を示す。
前記液滴のピッチが（ｒ１＋ｒ２）／２未満であると、前記第１液滴と前記第２液滴が重なり過ぎてしまって、酵素が失活する等の理由で、反応が起らないことがあり、前記液滴のピッチが（ｒ１＋ｒ２）×２超であると、前記第１液滴と前記第２液滴との間の隙間（デッドスペース）が大き過ぎて、反応に要する時間が長くなってしまうことがある。
前記塗布方法がインクジェット法である場合、通常、液滴は球状であり、塗布後の液滴は円形になるが、前記塗布方法が、例えば、スクリーン印刷法である場合、塗布後の液滴は矩形状となり得る。このように、塗布後の液滴が矩形状である場合、円の半径ｒ１、ｒ２の代わりに、矩形の１辺の長さの０．５倍の長さを用いることができる。
【００５０】
＜試験紙＞
以下、試験具の具体例としての試験紙を詳細に説明する。
前記試験紙は、基材と、基材上に形成された試薬層構造（上述の試薬層構造３０と同じ構成）とを備える。
【００５１】
＜＜基材＞＞
前記基材の材質としては、ある程度剛性を有する材質である限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリエーテルスルホン、環状ポリオレフィン、環状ポリオレフィンコポリマー、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ポリプロピレン、セルロイド等のプラスチック；セラミックス；金属；などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００５２】
（成分測定装置セット）
次に、本発明の一実施形態としての成分測定装置セットについて説明する。
本発明の一実施形態としての成分測定装置セットは、上述した本発明の試験具の一例である体液測定チップと、該体液測定チップが装着され、体液中の所定成分を測定する成分測定装置とを備える。
以下、体液と発色試薬との反応物を透過した光を測定する透過型の成分測定装置を備える成分測定装置セットについて説明するが、本発明は、これに限定されるものでなく、例えば、前記反応物から反射した光を測定する反射型の成分測定装置を備える成分測定装置セットであってもよい。
【００５３】
図６は本発明の一実施形態に係る成分測定装置セットとしての血糖計セット５００を示す。血糖計セット５００は、成分測定装置としての血糖計１１０と体液測定チップ１００としての血糖測定チップ１００ａと、を備えている。当該血糖測定チップ１００ａは血糖計１１０の先端部に装着される。血糖計１１０は、測定結果や操作内容などを表示するディスプレー１１１と、血糖計１１０の起動と終了を指示する電源ボタン１１２と、操作ボタン１１３と、血糖測定チップ１００ａを取り外す取外レバー１１４と、を備えている。ディスプレー１１１は、液晶またはＬＥＤ等で構成される。
【００５４】
図７は血糖計セット５００の血糖計１１０の先端部と血糖測定チップ１００ａを別々に示す縦断面図である。血糖計１１０に血糖測定チップ１００ａを装着するため、血糖計１１０の先端に開口部２１が形成された装着部２２を設け、血糖計１１０の内部に血糖測定チップ１００ａを装着する装着孔２３を区画する。また、血糖計１１０の内部には、血糖測定チップ１００ａに採取した体液（本実施形態では主に血液を例に説明する）の所定成分（本実施形態では主に血糖値を例に説明する）を測定するための光学測定部２４を設ける。また、血糖計１１０は、測定光から得られる信号を処理し血糖値を算出する処理部２５と、取外レバー１１４（図６）と連動し血糖測定チップ１００ａを取り外すイジェクトピン２６と、を備えている。以下、各構成について説明する。
【００５５】
測定の際は血糖測定チップ１００ａが装着孔２３に装着される。装着作業はユーザーにより手作業で行われる。図示はしないが、手作業より生ずる装着位置のバラツキを最小限にするために、好ましくは、血糖測定チップ１００ａを装着孔２３内の所定位置に固定するための適当なロック機構等を設置する。
【００５６】
光学測定部２４は、発色試薬と血液との反応物に光を照射する照射部３１と、反応物を透過した光を測定光として受光する受光部３２と、を備えている。本実施形態では、照射部３１には、発光ダイオード（ＬＥＤ）を用いるが、ハロゲンランプ、レーザー等であってもよい。受光部３２には、例えば、フォトダイオード（ＰＤ）を用いる。受光部３２は受光した光を所定の信号に変換できるものであればよく、ＣＣＤ、ＣＭＯＳ等であってもよい。
【００５７】
本実施形態では、照射部３１は、第１の波長を有する光を発する第１の発光素子５１と、第１の波長と異なる第２の波長を有する光を発する第２の発光素子５２とを含む。ここで、第１の波長は、血糖量に応じた発色度合を検出するための波長であり、例えば６００〜９００ｎｍの波長帯にある。第２の波長は、血液中の赤血球濃度を検出するための波長であり、例えば５１０〜５９０ｎｍの波長帯にある。
【００５８】
照射部３１と受光部３２の配置および両者の位置関係を説明する。血糖計１１０の内部には、第１の空間４１と第２の空間４２とが形成されている。照射部３１は当該第１の空間４１に、受光部３２は当該第２の空間４２に、それぞれ配置されている。血糖測定チップ１００ａが血糖計１１０に装着されていない状態では、当該第１の空間４１と、当該第２の空間４２とは、装着孔２３を挟んで対向する（図７参照）。血糖測定チップ１００ａが血糖計１１０に装着された状態では、当該第１の空間４１と、当該第２の空間４２とは、当該血糖測定チップ１００ａ上の試薬層構造３０が保持されている位置を挟んで対向する。なお、照射光３３のエネルギーロスを少なくするために、照射部３１は、照射光３３が血糖測定チップ１００ａの底面に垂直に照射できる位置に配置されるのが好ましい。
【００５９】
図示はしないが、照射部３１に白色を照射するハロゲンランプを用いる場合は、特定の波長のみを照射光３３として抽出するために分光フィルタを設ける方法であってもよい。
また、低エネルギーの照射で有効に実施するために、集光レンズを備える方法も好適である。
【００６０】
以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明は下記の実施例に何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００６１】
（実験例１）
まず、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬと、メディエータとしての５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ＰＭＳ）１０ｍＭと、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）５０ｍＭと、ＭＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ６．５）を含む水溶液を作製し、作製直後のサンプル（ＰＭＳ／０ｈ）と、室温遮光状態で２２時間放置した後のサンプル（ＰＭＳ／２２ｈ）との吸光度を紫外可視分光光度計を用いて測定した。測定結果を図８に示す。
次に、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）３３．３ｎｋａｔ（２Ｕ）と、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１０ｍＭと、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）５０ｍＭと、ＭＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ６．５）とを含む水溶液を作製し、作製直後のサンプル（ｍＰＭＳ／０ｈ）と、室温遮光状態で２２時間放置した後のサンプル（ｍＰＭＳ／２２ｈ）との吸光度を紫外可視分光光度計を用いて測定した。測定結果を図８に示す。
図８より、サンプルＰＭＳ／２２ｈの吸光度スペクトルは、サンプルＰＭＳ／０ｈの吸光度スペクトルと比較して、６５０ｎｍ付近が盛り上がっており、また、サンプルｍＰＭＳ／２２ｈの吸光度スペクトルは、サンプルｍＰＭＳ／０ｈの吸光度スペクトルと比較して、６５０ｎｍ付近が盛り上がっていることが分かる。これは、色素が発色していることを示す。
以上より、酵素とメディエータと色素とを含む溶液を室温遮光状態で２２時間放置すると、意図していない発色が生じてしまい、安定性が低いことが分かった。【００６２】
（実験例２）
色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）５０ｍＭと、ＭＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ６．５）とを含む水溶液を作製し、作製直後のサンプル（ＷＳＴ４−０ｈ）と、室温遮光状態で２２時間放置した後のサンプル（ＷＳＴ４−２２ｈ）との吸光度を紫外可視分光光度計を用いて測定した。測定結果を図９に示す。
図９より、サンプルＷＳＴ４−２２ｈの吸光度スペクトルは、サンプルＷＳＴ４−０ｈの吸光度スペクトルとほぼ同じであった。これは、色素がほとんど発色していないことを示す。
以上より、色素のみを含む溶液を室温遮光状態で２２時間放置しても、発色はほとんど生じず、安定性が高いことが分かった。【００６３】
（実験例３）
まず、メディエータとしての５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ＰＭＳ）１０ｍＭと、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）５０ｍＭと、ＭＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ６．５）とを含む水溶液を作製し、作製直後のサンプル（ＰＭＳ／ＷＳＴ４−０ｈ）と、室温遮光状態で２２時間放置した後のサンプル（ＰＭＳ／ＷＳＴ４−２２ｈ）との吸光度を紫外可視分光光度計を用いて測定した。測定結果を図１０に示す。
次に、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１０ｍＭと、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）５０ｍＭと、ＭＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ６．５）とを含む水溶液を作製し、作製直後のサンプル（ｍＰＭＳ／ＷＳＴ４−０ｈ）と、室温遮光状態で２２時間放置した後のサンプル（ｍＰＭＳ／ＷＳＴ４−２２ｈ）との吸光度を紫外可視分光光度計を用いて測定した。測定結果を図１０に示す。
図１０より、サンプルＰＭＳ／ＷＳＴ４−２２ｈの吸光度スペクトルは、サンプルＰＭＳ／ＷＳＴ４−０ｈの吸光度スペクトルと比較して、６５０ｎｍ付近が盛り上がっており、また、サンプルｍＰＭＳ／ＷＳＴ４−２２ｈの吸光度スペクトルは、サンプルｍＰＭＳ／ＷＳＴ４−０ｈの吸光度スペクトルと比較して、６５０ｎｍ付近が盛り上がっていることが分かる。これは、色素が発色していることを示す。
以上より、メディエータと色素とを含む溶液を室温遮光状態で２２時間放置すると、意図していない発色が生じてしまい、安定性が低いことが分かった。【００６４】
（実験例４）
まず、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬと、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）５０ｍＭと、ＭＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ６．５）とを含む水溶液を作製し、作製直後のサンプル（ＧＤＨ／ＷＳＴ４−０ｈ）と、室温遮光状態で２２時間放置した後のサンプル（ＧＤＨ／ＷＳＴ４−２２ｈ）との吸光度を紫外可視分光光度計を用いて測定した。測定結果を図１１に示す。
図１１より、サンプルＧＤＨ／ＷＳＴ４−２２ｈの吸光度スペクトルは、サンプルＧＤＨ／ＷＳＴ４−０ｈの吸光度スペクトルと比較して、６５０ｎｍ付近が盛り上がっていることが分かる。これは、色素が発色していることを示す。
以上より、酵素と色素とを含む溶液を室温遮光状態で２２時間放置すると、意図していない発色が生じてしまうことがあることが分かった。【００６５】
本発明者らは、実験例１〜４の実験を行い、鋭意研究した結果、初めて、色素と、メディエータ又は酵素とは、混合するのではなく（均一構造とするのではなく）、分離すべきであることを発見し、本発明を想到するに至ったのである。【００６６】
（比較例１）
＜均一構造試薬シートの作製＞
酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬと、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭと、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）１００ｍＭと、ＰＩＰＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ７．５）とを含む水溶液を作製した。次に、作製した溶液をポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム上（製造会社名：東レ株式会社、商品名：ルミラーＴ６０）に、インクジェットプリンター（製造会社名：マイクロジェット、商品名：Ｌａｂ−Ｊｅｔ５００  Ｂｉｏ）を用いて塗布し、２５℃で一晩乾燥して、均一構造試薬シート（膜厚３０μｍ）を作製した。作製した均一構造試薬シートの均一構造表面の顕微鏡写真を図１２に示す。
＜検体の調製＞
血液に、高濃度のグルコース溶液（４０ｇ／ｄＬ）を添加して、グルコース濃度が３００ｍｇ／ｄＬの検体を調製した。
＜検体点着後の吸光度測定＞
調製した検体３ｍｍ３を、作製した試薬シートに点着し、紫外可視分光光度計を用いて吸光度測定を行った。結果を図１４及び図１５に示す。
＜光照射後の吸光度測定＞
作製直後（イニシャル）の試薬シート、及び、室内蛍光灯下（平均７５０Ｌｘ）で３時間放置した後（蛍光照射後）の試薬シートについて、紫外可視分光光度計を用いて吸光度測定した。イニシャルに対する光照射後後の平均吸光度比率（％）を図１６Ａに示す。
＜熱加速試験後の吸光度測定＞
作製直後（イニシャル）の試薬シート、及び、熱加速試験（６０℃、３日間）後の試薬シートについて、紫外可視分光光度計を用いて吸光度測定した。イニシャルに対する熱加速試験後の平均吸光度比率（％）を図１６Ｂに示す。【００６７】
（比較例２）
比較例１において、均一構造試薬シートを作製する代わりに、２層構造試薬シートを作製したこと以外は、比較例１と同様に、検体の調製及び検体点着後の吸光度測定を行った。評価結果を図１４及び１５に示す。【００６８】
＜２層構造試薬シートの作製＞
酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬと、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭを含む水溶液（第１液）を作製した。次に、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）１００ｍＭと、ＰＩＰＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ７．５）とを含む水溶液（第２液）を作製した。第１液をポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム上にインクジェットプリンターを用いて塗布して第１層を形成し、２５℃で１０分間乾燥した。乾燥後、第２液を第１層上にインクジェットプリンターを用いて塗布し、２５℃で一晩乾燥し、２層構造試薬シート（膜厚３０μｍ）を作製した。【００６９】
（実施例１）
比較例１において、均一構造試薬シートを作製する代わりに、３次元モザイク構造試薬シートを作製したこと以外は、比較例１と同様に、検体の調製、検体点着後の吸光度測定、光照射後の吸光度測定、及び熱加速試験後の吸光度測定を行った。評価結果を図１４〜１６Ｂに示す。【００７０】
＜３次元モザイク構造試薬シートの作製＞
まず、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬと、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭとを含む水溶液（第１液）を作製した。次に、色素としての２−ベンゾ−チアゾリル−３−（４−カルボキシ−２−メトキシフェニル）−５−〔４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム（ＷＳＴ−４）１００ｍＭと、ＰＩＰＥＳバッファー２５０ｍＭ（ｐＨ７．５）とを含む水溶液（第２液）を作製した。
作製した第１液及び第２液を、インクジェットプリンター（製造会社名：マイクロジェット、商品名：Ｌａｂ−Ｊｅｔ５００  Ｂｉｏ）におけるそれぞれの貯蔵部に投入して、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム上に塗布して第１層を形成し、２５℃で１０分間乾燥した。乾燥後、第１層と同様に、第１層上に所定の積層状態（図５）となるように第２層を形成し、乾燥した。乾燥後、第２層と同様に、第２層上に所定の積層状態（図５）となるように第３層を形成し、乾燥し、３次元モザイク構造試薬シート（図５、膜厚３０μｍ）を作製した。作製した３次元モザイク構造試薬シートの３次元モザイク構造表面の電子顕微鏡写真を図１３に示す。【００７１】
図１４及び図１５より、比較例１の均一構造試薬シートと比べて、比較例２の２層構造試薬シートは反応速度が小さいのに対し、実施例１の３次元モザイク構造試薬シートは、比較例１の均一構造試薬シートと比べて、反応速度の低下を抑制できることが分かった。【００７２】
図１６Ａより、蛍光灯の下で３時間放置した場合に、比較例１の均一構造試薬シート（蛍光照射前のオリジナルに対して約１．５倍の吸光度）と比べて、実施例１の３次元モザイク構造試薬シート（蛍光照射前のオリジナルに対して約１．３倍の吸光度）は、発色が抑制されており、経時劣化を抑制することができることが分かった。
図１６Ｂより、熱加速試験（６０℃、３日間）を行った場合に、比較例１の均一構造試薬シート（熱加速試験前のオリジナルに対して約１．４倍の吸光度）と比べて、実施例１の３次元モザイク構造試薬シート（熱加速試験前のオリジナルに対して約１．２倍の吸光度）は、発色が抑制されており、経時劣化を抑制することができることが分かった。【００７３】
（比較例３）
＜均一構造試薬シートの作製＞
酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）４Ｕ／μＬと、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭと、色素としてのテトラゾリウム塩（Ａ）５０ｍＭと、ニッケルイオン２００ｍＭと、亜硝酸ナトリウム３５０ｍＭとを含む水溶液を作製した。次に、作製した溶液をポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（製造会社名：東レ株式会社、商品名：ルミラーＴ６０：図１９Ａにおける１）上に、インクジェットプリンター（製造会社名：マイクロジェット、商品名：Ｌａｂ−Ｊｅｔ５００  Ｂｉｏ）を用いて塗布し（ベタ塗り：図１９Ａ）、２５℃で一晩乾燥して、均一構造試薬シート（膜厚１２μｍ）を作製した。
なお、均一構造試薬シートにおける各試薬の濃度は以下の通りである。
グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）：４Ｕ／μＬ
１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）：１ｍＭ
テトラゾリウム塩（Ａ）：５０ｍＭ
ニッケルイオン：２００ｍＭ
亜硝酸ナトリウム：３５０ｍＭ
＜検体の調製＞
水に、高濃度のグルコース溶液（４０ｇ／ｄＬ）を添加して、グルコース濃度が４００ｍｇ／ｄＬの検体を調製した。
＜検体点着後の吸光度測定＞
調製した検体３ｍｍ３を、作製した試薬シートに点着し、紫外可視分光光度計を用いて点着してから２５秒間後の吸光度測定を行った。結果を図２０に示す。【００７４】
（実施例２）
比較例３において、均一構造試薬シートを作製する代わりに、積層構造試薬シート（２段塗り）を作製したこと以外は、比較例３と同様に、検体の調製及び検体点着後の吸光度測定を行った。評価結果を図２０に示す。【００７５】
＜積層構造試薬シート（２段塗り）の作製＞
まず、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬを含む水溶液（第１液）を作製した。次に、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭと、色素としてのテトラゾリウム塩（Ａ）５０ｍＭと、ニッケルイオン２００ｍＭと、亜硝酸ナトリウム３５０ｍＭとを含む水溶液（第２液）を作製した。
作製した第１液及び第２液を、インクジェットプリンター（製造会社名：マイクロジェット、商品名：Ｌａｂ−Ｊｅｔ５００  Ｂｉｏ）におけるそれぞれの貯蔵部に投入して、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム上に塗布して第１層を形成し（図１９Ｂの４００Ａ）、２５℃で１０分間乾燥した。乾燥後、第１層と同様に、第１層上に所定の積層状態（図１９Ｂの４００Ｂ）となるように第２層を形成し、乾燥し、積層構造試薬シート（２段塗り：膜厚１０μｍ）を作製した。
なお、積層構造試薬シート（２段塗り）における各試薬の濃度は以下の通りである。
グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）：２Ｕ／μＬ
１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）：１ｍＭ
テトラゾリウム塩（Ａ）：５０ｍＭ
ニッケルイオン：２００ｍＭ
亜硝酸ナトリウム：３５０ｍＭ【００７６】
（実施例３）
比較例３において、均一構造試薬シートを作製する代わりに、積層構造試薬シート（３段塗り）を作製したこと以外は、比較例３と同様に、検体の調製及び検体点着後の吸光度測定を行った。評価結果を図２０に示す。【００７７】
＜積層構造試薬シート（３段塗り）の作製＞
まず、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬを含む水溶液（第１液）を作製した。次に、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭと、色素としてのテトラゾリウム塩（Ａ）５０ｍＭと、ニッケルイオン２００ｍＭと、亜硝酸ナトリウム３５０ｍＭとを含む水溶液（第２液）を作製した。
作製した第１液及び第２液を、インクジェットプリンター（製造会社名：マイクロジェット、商品名：Ｌａｂ−Ｊｅｔ５００  Ｂｉｏ）におけるそれぞれの貯蔵部に投入して、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム上に塗布して第１層を形成し（図１９Ｂの４００Ａ）、２５℃で１０分間乾燥した。乾燥後、第１層と同様に、第１層上に所定の積層状態（図１９Ｂの４００Ｂ）となるように第２層を形成し、乾燥した。乾燥後、第２層上に所定の積層状態（図１９Ｂの４００Ｃ）となるように、第３層（第１液からなる第１粒状部のみからなる一種粒層）を形成し、乾燥し、積層構造試薬シート（３段塗り：膜厚１１μｍ）を作製した。ここで、第３層における第１粒状部は、第２層（試薬分離層）における第２液からなる第２粒状部と隣接するように、第２層（試薬分離層）に積層されている。
なお、積層構造試薬シート（３段塗り）における各試薬の濃度は以下の通りである。
グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）：３Ｕ／μＬ
１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）：１ｍＭ
テトラゾリウム塩（Ａ）：５０ｍＭ
ニッケルイオン：２００ｍＭ
亜硝酸ナトリウム：３５０ｍＭ【００７８】
（実施例４）
比較例３において、均一構造試薬シートを作製する代わりに、積層構造試薬シート（４段塗り）を作製したこと以外は、比較例３と同様に、検体の調製及び検体点着後の吸光度測定を行った。評価結果を図２０に示す。【００７９】
＜積層構造試薬シート（４段塗り）の作製＞
まず、酵素としてのグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）２Ｕ／μＬを含む水溶液（第１液）を作製した。次に、メディエータとしての１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）１ｍＭと、色素としてのテトラゾリウム塩（Ａ）５０ｍＭと、ニッケルイオン２００ｍＭと、亜硝酸ナトリウム３５０ｍＭとを含む水溶液（第２液）を作製した。
作製した第１液及び第２液を、インクジェットプリンター（製造会社名：マイクロジェット、商品名：Ｌａｂ−Ｊｅｔ５００  Ｂｉｏ）におけるそれぞれの貯蔵部に投入して、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム上に塗布して第１層を形成し（図１９Ｂの４００Ａ）、２５℃で１０分間乾燥した。乾燥後、第１層と同様に、第１層上に所定の積層状態（図１９Ｂの４００Ｂ）となるように第２層を形成し、乾燥した。乾燥後、第２層上に所定の積層状態（図１９Ｂの４００Ｃ）となるように第３層（第１液からなる第１粒状部のみからなる一種粒層）を形成し、乾燥した。乾燥後、第３層上に所定の積層状態（図１９Ｂの４００Ｄ）となるように第４層（第１液からなる第１粒状部のみからなる一種粒層）を形成し、積層構造試薬シート（４段塗り：膜厚１２μｍ）を作製した。ここで、第３層における第１粒状部は、第２層（試薬分離層）における第２液からなる第２粒状部と隣接するように、第２層（試薬分離層）に積層されている。さらに、第４層における第１粒状部は、第３層における第１粒状部と互い違いになるように（図１９Ｂの４００Ｄ）積層されている。
なお、積層構造試薬シート（４段塗り）における各試薬の濃度は以下の通りである。
グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）：４Ｕ／μＬ
１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルスルファート（ｍＰＭＳ）：１ｍＭ
テトラゾリウム塩（Ａ）：５０ｍＭ
ニッケルイオン：２００ｍＭ
亜硝酸ナトリウム：３５０ｍＭ【００８０】
図２０より、コントロールとしての比較例３（ベタ塗り：図１９Ａ）では酵素が失活しているためほとんど発色していないのに対して、試薬分離層（１段目、２段目）を有する実施例２〜４は、発色していることが分かった。
また、図２０より、実施例２〜４では、実施例３、実施例４と酵素の量が増加するに従って、発色速度が大きくなった結果、吸光度が大きくなっていることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明は、試験具及び成分測定装置セットに関し、特に、反応速度の低下を抑制しつつ、経時劣化を抑制することができる試験具及び成分測定装置セットに関する。
【符号の説明】
【００８２】
１：第１基材
２：第２基材
３：接着部
４：接着部
１０：供給口
２０：流路
２１：開口部
２２：装着部
２３：装着孔
２４：光学測定部
２５：処理部
２６：イジェクトピン
３０：試薬層構造
３０ａ：試薬分離層
３０ｂ：試薬分離層
３１：照射部
３２：受光部
３３：照射光
４１：第１の空間
４２：第２の空間
５１：第１の発光素子
５２：第２の発光素子
１００：体液測定チップ
１００ａ：血糖測定チップ
１１０：血糖計
１１１：ディスプレー
１１２：電源ボタン
１１３：操作ボタン
１１４：取外レバー
２００：第１液滴
３００：第２液滴
４００Ａ：１段目の塗布状態
４００Ｂ：２段目の塗布状態
４００Ｃ：３段目の塗布状態
４００Ｄ：４段目の塗布状態
５００：血糖計セット（成分測定装置）
Ａ：第１試薬を含む（但し、第２試薬を含まない）部分
Ｂ：第２試薬を含む（但し、第１試薬を含まない）部分
Ｐ：酵素からなる下層
Ｑ：色素からなる上層
Ｘ：第１粒状部
Ｘ１：第１試薬分離層における第１粒状部
Ｘ２：第２試薬分離層における第１粒状部
Ｙ：第２粒状部
Ｙ１：第１試薬分離層における第２粒状部
Ｙ２：第２試薬分離層における第２粒状部
ｒ１：第１液滴（円形）の半径
ｒ２：第２液滴（円形）の半径
【図１】
2017068929.tif 000004
【図２】
2017068929.tif 000005
【図３】
2017068929.tif 000006
【図４】
2017068929.tif 000007
【図５】
2017068929.tif 000008
【図６】
2017068929.tif 000009
【図７】
2017068929.tif 000010
【図８】
2017068929.tif 000011
【図９】
2017068929.tif 000012
【図１０】
2017068929.tif 000013
【図１１】
2017068929.tif 000014
【図１２】
2017068929.tif 000015
【図１３】
2017068929.tif 000016
【図１４】
2017068929.tif 000017
【図１５】
2017068929.tif 000018
【図１６Ａ】
2017068929.tif 000019
【図１６Ｂ】
2017068929.tif 000020
【図１７】
2017068929.tif 000021
【図１８】
2017068929.tif 000022
【図１９Ａ】
2017068929.tif 000023
【図１９Ｂ】
2017068929.tif 000024
【図２０】
2017068929.tif 000025
【国際調査報告】
2017068929.tif 000026
2017068929.tif 000027
2017068929.tif 000028
2017068929.tif 000029