(57)【要約】  本発明は、カルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物、カルノシンジペプチダーゼを阻害するための当該組成物の使用、及びカルノシンジペプチダーゼを阻害する方法を提供することを目的とする。また、本発明は、生物安全性が高く、カルノシンジペプチダーゼ阻害作用を利用してカルノシンの作用効果を増強することのできる組成物を提供することを目的とする。  ポリフェノール等の所定の化合物が、カルノシンジペプチダーゼ阻害作用を有することを見出した。本発明は、血糖値上昇抑制等に資する、効果的かつ新たな手段を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリフェノールを含有する、カルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物。
【請求項２】
ポリフェノールがフラボノイド、クルクミノイド、スチルベノイド、フェニルエタノイド、及びフェニルプロパノイドからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
フラボノイドがケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、カテキン類、及びアピゲニンからなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
クルクミノイドがクルクミンである、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
スチルベノイドがレスベラトロール又はピセアタンノールである、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
フェニルエタノイドがヒドロキシチロソールである、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
フェニルプロパノイドがカフェ酸又はフェルラ酸である、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
疲労、肌のシワ形成、認知機能低下、糖尿病、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善用である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が剤である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
カルノシンジペプチダーゼ阻害により発揮される機能の表示を付した、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
ポリフェノール及びカルノシンを含有する組成物であって、
前記ポリフェノールがピセアタンノール又はヒドロキシチロソールである、前記組成物。
【請求項１２】
カルノシンジペプチダーゼ活性阻害を目的に使用される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
カルノシンの薬理作用増強を目的に使用される、請求項１１又は１２に記載の組成物。
【請求項１４】
カルノシンの薬理作用が、抗疲労作用、肌のシワ予防又は改善作用、認知機能維持作用、糖尿病予防又は改善作用、免疫機能低下抑制作用、血管又は組織の炎症の予防又は改善作用、酸化ストレス又は終末糖化産物の産生に起因する各種疾患改善作用、アルツハイマーの予防又は改善作用、又は自閉症の予防又は改善作用である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
カルノシンの薬理作用により発揮される機能の表示を付した、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
機能の表示が、「身体を疲れにくくする」、「身体の疲労回復を促す」、「肌のシワ形成を予防する」、「肌のシワやたるみを改善する」、「美容をサポートする」、「認知機能の低下を抑制する」、「認知機能の維持を期待する」、「血糖値の上昇を抑制する」、「免疫機能を高める」、「抗酸化作用を期待する」、「酸化ストレスを低減する」、「抗糖化作用を期待する」、「糖化ストレスを低減する」、「血管の炎症を抑制する」、「アルツハイマー症の予防若しくは改善を期待する」、及び「自閉症の予防若しくは改善を期待する」からなる群から選択されるものである、請求項１０又は１５に記載の組成物。
【請求項１７】
組成物の形態が固体又は液体である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
組成物が飲食品組成物である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
カルノシンジペプチダーゼを阻害するための、ポリフェノールの使用。
【請求項２０】
ポリフェノールを使用する、カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物に関する。さらに詳しくは、本発明は、ポリフェノール等の所定の化合物を含むカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物、カルノシンジペプチダーゼを阻害するためのポリフェノール等の使用、及びカルノシンジペプチダーゼを阻害する方法に関する。また、本発明は、カルノシンを含有する組成物に関する。さらに詳しくは、本発明は、カルノシンと特定のポリフェノールとを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
カルノシンは、β−アラニンとヒスチジンとからなるジペプチドであり、ヒト等の哺乳動物では筋肉や神経組織に高濃度に存在している。カルノシンの作用としては、（１）プロトンバッファーリング活性、（２）カルシウム分泌とカルシウム感受性制御、（３）抗酸化作用、（４）金属イオンキレート作用、（５）ヒスチジン／ヒスタミンの細胞外供与体、（６）高血糖改善作用、（７）抗炎症作用、（８）肌のシワ形成抑制作用、（９）疲労回復促進作用等が知られている。また、カルノシンの作用については、終末糖化産物の生成抑制や、脳虚血による細胞死の抑制、アルツハイマー病（ＡＤ）モデルマウスにおけるアミロイドβの蓄積抑制作用、免疫調節作用等も報告されている。このようにカルノシンは生体内において様々な機能を発揮しているが、血清や組織中に存在するカルノシンジペプチダーゼによってカルノシンが分解されることが、カルノシンの機能発揮の妨げとなっている。【０００３】
カルノシンジペプチダーゼには血清カルノシナーゼ（carnosine dipeptidase 1；ＣＮＤＰ１）と組織カルノシナーゼ（carnosine dipeptidase2；ＣＮＤＰ２）との２種類が存在することが知られている。carnosine dipeptidase 1及びcarnosine dipeptidase 2はともに、ヒスチジン残基をカルボキシル末端に有するジペプチド（Ｘ−Ｈｉｓ（Ｘは天然アミノ酸）と表す）に対して分解活性を示すことが知られており（非特許文献１）、カルノシンは、その分解されるジペプチドの一つである。これらcarnosine dipeptidase 1及びcarnosine dipeptidase 2は、その組織分布や酵素的特性はそれぞれ異なっているが、互いに相同性の高いタンパク質である。このうちcarnosine dipeptidase 1は、血清中においては高等霊長類（ヒト及び大型のサル）にのみ活性が認められ、多くの他の哺乳動物には活性が認められないことが示されている（非特許文献２）。【０００４】
carnosine dipeptidase 1の活性阻害に関しては、例えばフェナントロリンが当該分解酵素の阻害剤として報告されている（非特許文献１）。また、上記フェナントロリンは、酵素阻害活性を有していながらもその副作用として経口毒性を示すことが知られている。またそれ以外の阻害剤についての報告はほとんどなく、carnosine dipeptidase 1の活性阻害に着目したカルノシン分解抑制剤はあまり知られていないのが現状である。一方、carnosine dipeptidase 2に関しては、例えば、ベスタチンがその阻害剤として知られており（非特許文献３）、その他には、β−アラニンやその誘導体等もcarnosine dipeptidase 2の阻害に有効であることが報告されている（特許文献１）。【０００５】
カルノシンジペプチダーゼのうちcarnosine dipeptidase 1に関しては、ｄｂ／ｄｂマウスにヒトcarnosine dipeptidase 1を遺伝子導入したモデルにおいて、若年期からの空腹時血糖値とＨｂＡ１ｃの上昇や、体重減少を示すなどの糖尿病様症状が現れることを認めている（非特許文献４）。即ち、carnosine dipeptidase 1によるカルノシン分解亢進が、疾患発症原因になる可能性が示唆されている。従って、carnosine dipeptidase 1の阻害剤は、Ｌ−カルノシンを血漿、標的器官あるいはその他の器官に効率的に送達させ、糖尿病や酸化ストレス、終末糖化産物の産生に起因する各種疾患に対して予防効果を高めるためのアプローチとして考えられる。【０００６】
また、非特許文献５等の複数の文献において、carnosine dipeptidase 1遺伝子における特定の遺伝子多型（（ＣＴＧ）ｎ）と糖尿病性腎障害の発症との間に相関が認められていることが報告されている。これに関連して、非特許文献６においてはホモ接合型（ＣＴＧ）５保持者において糖尿病性腎障害の発症リスクが低く、carnosine dipeptidase 1活性が低いという報告が存在している。従って、carnosine dipeptidase 1活性を抑制することがカルノシン濃度の維持に重要であり、関連する疾患の予防や治療に有効である可能性があると考えられている。【０００７】
また、ヒトにおけるカルノシン経口摂取後の体内動態試験の例としては、非特許文献７が挙げられる。当該文献によれば、カルノシン６０ｍｇ／ｋｇ摂取後各時間におけるカルノシン血中濃度の個人差は大きく、摂取前と比較して血中カルノシン濃度に著しい上昇が認められない被験者も存在した（２５名中１７名）。上昇が認められた群ではそうではない群と比較してcarnosine dipeptidase 1の活性やタンパク質量が有意に低かった。このことからcarnosine dipeptidase 1の働きを抑制することが血中カルノシン濃度維持に有効である可能性が高いと考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開ＷＯ２００４／０６４８６６号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Molecules, 2014, 19, 2299-2329
【非特許文献２】Clin. Chim. Acta, 1991, 196, 193-205.
【非特許文献３】Biol. Chem. Hoppe Seyler, 1988, 369, 1281-1286.
【非特許文献４】Diabetes, 2007, 56, 2425-2432. Epub 2007 Jun 29.
【非特許文献５】Diabetes, 2007, 56, 2410-2413.
【非特許文献６】Diabetes, 2005, 54, 2320-2327.
【非特許文献７】Am. J. Physiol. Renal. Physiol., 2012, 302(12), F1537-F1544.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
これまで示したように、カルノシンジペプチダーゼは、哺乳動物として特にヒトの体内において様々な影響を及ぼしていることから、この活性を効果的に阻害する技術の開発は非常に重要である。また、上記に示したフェナントロリンは、酵素阻害活性を有していながらもその副作用として経口毒性を示すことが知られている。そのため、カルノシンジペプチダーゼを阻害する組成物には、その活性を効果的に阻害するとともに高い安全性が強く求められている。また、カルノシンにこのようなカルノシンジペプチダーゼ阻害効果を有する組成物を合せることで、組成物中のカルノシン分解が抑制されることから、そのカルノシンの作用効果をさらに高めることができるものと期待される。【００１１】
本発明の課題は、生物安全性が高く、カルノシンの体内濃度の維持に寄与するカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物を提供すること、及び、生物安全性が高く、カルノシンジペプチダーゼ阻害作用を利用してカルノシンの薬理作用を増強することのできる組成物を提供することにある。また、本発明の課題は、カルノシンジペプチダーゼを阻害するための当該組成物の使用、及びカルノシンジペプチダーゼを阻害する方法等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、ポリフェノールがカルノシンジペプチダーゼの阻害活性を有することを初めて見出した。また、本発明者らは、前記活性を有する特定のポリフェノールとカルノシンとを含む組成物が新規であることを見出した。これらの知見に基づき、本発明者らは本発明を完成するに至った。【００１３】
即ち、本発明は以下に関するが、これらに限定されない。
（１）ポリフェノールを含有する、カルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物。
（２）ポリフェノールがフラボノイド、クルクミノイド、スチルベノイド、フェニルエタノイド、及びフェニルプロパノイドからなる群より選択される、（１）に記載の組成物。
（３）フラボノイドがケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、カテキン類、及びアピゲニンからなる群より選択される、（２）に記載の組成物。
（４）クルクミノイドがクルクミンである、（２）に記載の組成物。
（５）スチルベノイドがレスベラトロール又はピセアタンノールである、（２）に記載の組成物。
（６）フェニルエタノイドがヒドロキシチロソールである、（２）に記載の組成物。
（７）フェニルプロパノイドがカフェ酸又はフェルラ酸である、（２）に記載の組成物。
（８）疲労、肌のシワ形成、認知機能低下、糖尿病、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善用である、（１）〜（７）のいずれかに記載の組成物。
（９）前記組成物が剤である、（１）〜（８）のいずれかに記載の組成物。
（１０）カルノシンジペプチダーゼ阻害により発揮される機能の表示を付した、（１）〜（９）のいずれかに記載の組成物。
（１１）ポリフェノール及びカルノシンを含有する組成物であって、
前記ポリフェノールがピセアタンノール又はヒドロキシチロソールである、前記組成物。
（１２）カルノシンジペプチダーゼ活性阻害を目的に使用される、（１１）に記載の組成物。
（１３）カルノシンの薬理作用増強を目的に使用される、（１１）又は（１２）に記載の組成物。
（１４）カルノシンの薬理作用が、抗疲労作用、肌のシワ予防又は改善作用、認知機能維持作用、糖尿病予防又は改善作用、免疫機能低下抑制作用、血管又は組織の炎症の予防又は改善作用、酸化ストレス又は終末糖化産物の産生に起因する各種疾患改善作用、アルツハイマーの予防又は改善作用、又は自閉症の予防又は改善作用である、（１３）に記載の組成物。
（１５）カルノシンの薬理作用により発揮される機能の表示を付した、（１１）〜（１４）のいずれか１項に記載の組成物。
（１６）機能の表示が、「身体を疲れにくくする」、「身体の疲労回復を促す」、「肌のシワ形成を予防する」、「肌のシワやたるみを改善する」、「美容をサポートする」、「認知機能の低下を抑制する」、「認知機能の維持を期待する」、「血糖値の上昇を抑制する」、「免疫機能を高める」、「抗酸化作用を期待する」、「酸化ストレスを低減する」、「抗糖化作用を期待する」、「糖化ストレスを低減する」、「血管の炎症を抑制する」、「アルツハイマー症の予防若しくは改善を期待する」、及び「自閉症の予防若しくは改善を期待する」からなる群から選択されるものである、（１０）又は（１５）に記載の組成物。
（１７）組成物の形態が固体又は液体である、（１）〜（１６）のいずれかに記載の組成物。
（１８）組成物が飲食品組成物である、（１）〜（１７）のいずれかに記載の組成物。
（１９）カルノシンジペプチダーゼを阻害するための、ポリフェノールの使用。
（２０）ポリフェノールを使用する、カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によって、優れたカルノシンジペプチダーゼ阻害作用を有する組成物を提供することができる。また、本発明によって、カルノシンジペプチダーゼ阻害効果を利用して、カルノシンの作用効果が増強された組成物を提供することができる。いずれの組成物においても、カルノシンジペプチダーゼの機能抑制に伴うカルノシンの分解遅延効果が得られるため、より高濃度のカルノシンを血漿、標的器官あるいはその他の器官に効率的に送達させることが可能となる。また、本発明のカルノシン含有組成物は、組成物中に含まれるカルノシンのみならず、既に体内に存在しているカルノシンも分解遅延させることができる。【００１５】
このように、本発明の組成物はいずれもカルノシンの作用効果を増強できることから、元来カルノシンに関して知られている各種薬理学的作用（統合失調症などに伴う認知機能低下、糖尿病、免疫機能低下、血管や組織の炎症、酸化ストレスに起因する各種疾患発症、アルツハイマー、自閉症に対する予防、改善効果）の向上に有効であり得る。また、本発明の組成物は、カルノシンジペプチダーゼの阻害活性を有することから、カルノシンのみならず、ヒスチジン残基をカルボキシル末端に有するあらゆるジペプチド（Ｘ−Ｈｉｓ（Ｘは天然アミノ酸）と表す）の分解を抑制する目的に対しても使用可能である。さらに、本発明の組成物に含まれるポリフェノールは植物等に存在する天然化合物であり、食品成分として使用可能な素材も多いことから、本発明の組成物の安全性は高く、その副作用は従来の医薬品に比して極めて少ないと考えられる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
１．カルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物
本発明の一態様は、ポリフェノールを含むカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物である。
【００１７】
１−１．ポリフェノール
本明細書において「ポリフェノール」とは、複数のフェノール性ヒドロキシ基（ベンゼン環、ナフタレン環などの芳香族炭化水素に結合したヒドロキシ基）を有する化合物を意味する。また、当該化合物の配糖体も、「ポリフェノール」に含まれる。
【００１８】
本発明において含有されるポリフェノールとしては、特に限定されないが、例えば、フラボノイド、クルクミノイド、スチルベノイド、フェニルエタノイド、フェニルプロパノイド、又はこれらの配糖体が挙げられる。
【００１９】
フラボノイドには、フラボノール、フラバノール、フラボン、フラバノン、イソフラボン、アントシアニジン等が含まれる。本発明では、これらのうちフラボノール、フラバノール、及びフラボンが好ましい。フラボノールの具体例としては、ケルセチン、ミリセチン、アザレアチン、フィセチン、ケンフェロール、ラムナジン、ラムネジン等が挙げられる。フラバノールの具体例としては、カテキン類（カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート（没食子酸エピガロカテキン）等を含む）、テアフラビン等が挙げられる。フラボンの具体例としては、アピゲニン、ルテオリン、タンゲリチン、ジオスミン、フラボキサート等が挙げられる。フラバノンの具体例としては、エリオジクチオール、ヘスペレチン、ホモエリオジクチオール、ナリンゲニン等が挙げられる。イソフラボンの具体例としては、クメステロール、ダイゼイン、ダイジン、ゲニステイン等が挙げられる。アントシアニジンの具体例としては、シアニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペラルゴニジン、ペオニジン等が挙げられる。
【００２０】
クルクミノイドの具体例としては、クルクミン、ジメトキシクルクミン、ビスジメトキシクルクミン等が挙げられ、スチルベノイドの具体例としては、レスベラトロール、ピセアタンノール、ピノシルビン、プテロスチルベン等が挙げられる。
【００２１】
フェニルエタノイドの具体例としては、チロソール、ヒドロキシチロソール等が挙げられる。
【００２２】
フェニルプロパノイドの具体例としては、カフェ酸、フェルラ酸、クマル酸、ケイヒ酸、リグニン、リグナン等が挙げられる。
【００２３】
上述した通り、本発明では各種化合物の配糖体も使用可能である。本明細書において「配糖体」とは、糖の水酸基が非糖質化合物と結合してできる化合物をいう。配糖体における糖は、単糖であってもよく、或いは二糖又はそれ以上の複数の糖であってもよい。糖の種類も特に限定されず、グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、ラムノース、アラビノース、キシロース等のアルドース、フルクトース等のケトース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸等のウロン酸、アピオース、ルチノース等が挙げられる。また、用いられる糖はＤ体であってもよいし、Ｌ体であってもよい。ポリフェノールにおける配糖体の具体例としては、ルチン、ケルシトリン、イソケルシトリン、ヒペロシド、スピレオシド、ミリシトリン、アザレイン、アストラガリン、ケンペリトリン、ロビニン、アムレンシン、アピイン、ダイジン、ヘスペリジン、ナリンギン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
上記に例示したポリフェノールのうち、本発明ではケルセチンを使用することが好ましい。ケルセチン（quercetin）は、クエルセチン又はクェルセチンとも称され、柑橘類やタマネギ、ソバ等の多くの植物に含まれるフラボノールの一種である。ケルセチンの別名は2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-4H-1-benzopyran-4-oneであり、そのＣＡＳ登録番号は１１７−３９−５である。ケルセチンの配糖体としては、ルチン、ケルシトリン、イソケルシトリン、ヒペロシド、スピレオシド等が挙げられる。
【００２５】
また、本発明における別の好ましい成分はミリセチンである。ミリセチン（myricetin）は、ブドウ、ベリー等の果物や、野菜、ハーブ等に含まれるフラボノールの一種である。ミリセチンの別名は3,3',4',5,5',7-Hexahydroxyflavoneであり、そのＣＡＳ登録番号は５２９−４４−２である。ミリセチンの配糖体としては、ミリシトリン、ミリセチン３−Ｏ−ルチノシド等が挙げられる。
【００２６】
また、本発明における別の好ましい成分はケンフェロールである。ケンフェロール（kaempferol）は、茶、ブロッコリー、キャベツ、ケール等の植物に含まれるフラボノールの一種である。ケンフェロールの別名は3,5,7-Trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-oneであり、そのＣＡＳ登録番号は５２０−１８−３である。
【００２７】
また、本発明における別の好ましい成分はルテオリンである。ルテオリン（luteolin）は、セロリ、ピーマン、シソ等の植物に含まれるフラボンの一種である。ルテオリンの別名は2-(3,4-Dihydroxyphenyl)- 5,7-dihydroxy-4-chromenoneであり、そのＣＡＳ登録番号は４９１−７０−３である。
【００２８】
また、本発明における別の好ましい成分はカテキン類である。カテキン類は、緑茶や烏龍茶等の茶葉等に多く含まれるフラバノールの一種である。カテキン類には、カテキン（ＣＡＳ登録番号：７２９５−８５−４、１８８２９−７０−４、１５４−２３−４）、エピカテキン（ＣＡＳ登録番号：４９０−４６−０、３５３２３−９１−２）、ガロカテキン（ＣＡＳ登録番号：３３７１−２７−５、９７０−７３−０）、エピガロカテキン（ＣＡＳ登録番号：９７０−７４−１）、カテキンガレート（ＣＡＳ登録番号：１３０４０５−４０−２）、エピカテキンガレート（ＣＡＳ登録番号：１２５７−０８−５）、ガロカテキンガレート（ＣＡＳ登録番号：４２３３−９６−９）及びエピガロカテキンガレート（ＣＡＳ登録番号：９８９−５１−５）等が具体的な種類として含まれ、エピガロカテキンガレートが特に好ましい。
【００２９】
また、本発明における別の好ましい成分はアピゲニンである。アピゲニン（apigenin）は、セロリやパセリ等の野菜等に含まれるフラボンの一種である。アピゲニンの別名は5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4-benzopyroneであり、そのＣＡＳ登録番号は５２０−３６−５である。アピゲニンの配糖体としては、アピイン、アピゲトリン、ビテキシン、イソビテキシン、ロイフォリン等が挙げられる。
【００３０】
また、本発明における別の好ましい成分はクルクミンである。クルクミン（curcumin）は、上述の通りクルクミノイドの一種であり、ウコン等に含まれている。クルクミンの別名は(E,E)-1,7-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dioneであり、そのＣＡＳ登録番号は４５８−３７−７である。
【００３１】
また、本発明における別の好ましい成分はレスベラトロールである。レスベラトロール（resveratrol）は、上述の通りスチルベノイドの一種であり、ブドウ果皮等に含まれている。レスベラトロールの別名は(E)-5-(p-Hydroxystyryl)resorcinol又は(E)-5-(4-hydroxystyryl)benzene-1,3-diolであり、そのＣＡＳ登録番号は５０１−３６−０である。
【００３２】
ピセアタンノール（piceatannol）は、ポリフェノールの中でスチルベノイドと呼ばれる化合物群のうちの一種であり、オウシュウトウヒ（Picea abies）やトゲハリクジャクヤシ（Aiphanes horrida）等の植物に含まれている。ピセアタンノールの別名は3',4',3,5-Tetrahydroxy-trans-stilbene Astringininであり、そのＣＡＳ登録番号は１００８３−２４−６である。ピセアタンノールの配糖体としては、例えばpiceatannol-3'-O-β-D-glucopyranosideやpiceatannol-4'-O-β-D-glucopyranosideなどが挙げられる。
【００３３】
また、本発明における別の好ましい成分はフェルラ酸である。フェルラ酸（ferulic acid）は、ケイヒ酸誘導体の一種であり、米、小麦、大麦等の植物に幅広く含まれている。フェルラ酸の別名は(E)-3-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)prop-2-enoic acidであり、そのＣＡＳ登録番号は１１３５−２４−６である。米糠の脂質に含まれるガンマ-オリザノール（γ-oryzanol）は、フェルラ酸とステロールが縮合したエステル類の総称であり、ガンマ-オリザノールの経口摂取後に分解物であるフェルラ酸の血中濃度上昇が認められることがわかっている。
【００３４】
また、本発明における別の好ましい成分はカフェ酸である。カフェ酸（caffeic acid）は、ケイヒ酸誘導体の一種であり、植物に幅広く含まれている。カフェ酸の別名は(E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoic acidであり、そのＣＡＳ登録番号は３３１−３９−５１である。コーヒー豆中に高含有されるクロロゲン酸は、カフェ酸のカルボキシル基がキナ酸3位のヒドロキシ基と脱水縮合した構造を持つ化合物であり、クロロゲン酸の経口摂取後に分解物であるカフェ酸の血中濃度上昇が認められることがわかっている。
【００３５】
また、本発明における別の好ましい成分はヒドロキシチロソールである。ヒドロキシチロソール（hydroxytyrosol）は、フェニルエタノイドの一種であり、オリーブの葉等の植物に含まれている。ヒドロキシチロソールの別名は4-(2-Hydroxyethyl)-1,2-benzenediolであり、そのＣＡＳ登録番号は１０５９７−６０−１である。オリーブの葉等に含有されるオレウロペインについては、その加水分解や代謝によってヒドロキシチロソールが産生することがわかっている。
【００３６】
上記に例示した化合物を含めて、本発明においてポリフェノールは１種単独で、或いは２種以上を組み合わせて使用することができる。各種ポリフェノールは、水（熱水を含む）や有機溶媒等を用いて植物や果物等の天然物から抽出したものであってもよく、或いは化学合成したものであってもよい。ポリフェノールの抽出（単離、精製等を含む）や合成は、化合物の種類等に応じて当業者に公知の方法を用いて行うことができる。各種ポリフェノールは自ら調製したものを用いてもよく、或いは市販品を用いてもよい。本発明では、特に制限されないが、好ましくは市販品が用いられる。また、上記の各種ポリフェノールを含有する植物抽出物を利用することもできる。用いられるポリフェノールの形態は特に限定されず、遊離体（遊離型）であってもよいし、水和物やエタノール和物等の溶媒和物の形態であってもよい。血中に有効成分が暴露されるのであれば、クロロゲン酸、ガンマ−オリザノール又はオレウロペインのように有効成分とその他成分のエステル体として用いてもよい。また、ポリフェノールを含む抽出物を好適に用いることができる。
【００３７】
１−２．その他の有効成分
１−２−１．５環性トリテルペン酸
本発明ではまた、５環性トリテルペン酸をカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物に含有させることができる。５環性トリテルペン酸としては、特に限定されないが、例えば、ウルソール酸、マスリン酸、コロソリン酸、ベツリン酸、オレアノール酸等が挙げられる。本発明では、好ましくはウルソール酸が用いられる。
【００３８】
ウルソール酸（ursolic acid）は、ウルソル酸と称されることもあり、リンゴ、バジル、ビルベリー、クランベリー、エルダーフラワー、ペパーミント、ローズマリー、ラベンダー、オレガノ、タイム、サンザシ、プルーンを含む多くの植物に存在している。特に、リンゴの皮には大量のウルソール酸が含まれている。ウルソール酸の別名は3β-Hydroxy-12-ursen-28-oic Acidであり、そのＣＡＳ登録番号は７７−５２−１である。
【００３９】
本発明において５環性トリテルペン酸は１種単独で、或いは２種以上を組み合わせて使用することができる。各種５環性トリテルペン酸は、水（熱水を含む）や有機溶媒等を用いて植物や果物等の天然物から抽出したものであってもよく、或いは化学合成したものであってもよい。５環性トリテルペン酸の抽出（単離、精製等を含む）や合成は、化合物の種類等に応じて当業者に公知の方法を用いて行うことができる。各種５環性トリテルペン酸は自ら調製したものを用いてもよく、或いは市販品を用いてもよい。本発明では、好ましくは市販品が用いられる。用いられる５環性トリテルペン酸の形態は特に限定されず、遊離体（遊離型）であってもよいし、水和物やエタノール和物等の溶媒和物の形態であってもよい。
【００４０】
１−２−２．アンセリン
本発明ではまた、アンセリンをカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物に含有させることができる。アンセリン（anserine）は、哺乳動物の骨格筋及び脳、並びに鳥類に存在するジペプチドである。アンセリンはβ−アラニンと１−メチル−Ｌ−ヒスチジンとのペプチド結合によって形成されるジペプチドであることから、別称として、β−アラニル−Ｎ−メチルヒスチジン、又はβ−アラニル−１−Ｎ−メチルヒスチジンと称される。また、アンセリンのＣＡＳ登録番号は５８４−８５−０である。
【００４１】
アンセリンは、動物組織から単離したものであってもよく、或いは化学合成したものであってもよい。その単離や合成は、当業者に公知の方法を用いて行うことができる。アンセリンは自ら調製したものを用いてもよく、或いは市販品を用いてもよい。本発明では、好ましくは市販品が用いられる。また、アンセリンの形態は特に限定されず、塩の形態であってもよい。アンセリンの塩としては、例えば、塩酸塩、硝酸塩、酢酸塩等が挙げられるが、特にこれらに限定されない。
【００４２】
１−３．カルノシンジペプチダーゼ及びカルノシンジペプチダーゼ阻害
本明細書において「カルノシンジペプチダーゼ」とは、カルノシン（Ｌ−カルノシン）をβ−アラニンとヒスチジンとに分解することができるカルノシン分解酵素をいう。カルノシンジペプチダーゼ（カルノシン分解酵素）は、ＣＮＤＰ（carnosine dipeptidase）と省略して表すことができ、また、カルノシナーゼ又はカルノシダーゼとも称される。カルノシンジペプチダーゼには血清（型）カルノシン分解酵素であるcarnosine dipeptidase 1（ＣＮＤＰ１）と組織（型）カルノシン分解酵素であるcarnosine dipeptidase 2（ＣＮＤＰ２）とが含まれる。これらのうち、本発明で対象とされるカルノシンジペプチダーゼは、好ましくはcarnosine dipeptidase 1である。なお、carnosine dipeptidase 1及びcarnosine dipeptidase 2はともに、カルノシンのみならず、ヒスチジン残基をカルボキシル末端に有するあらゆるジペプチド（Ｘ−Ｈｉｓ（Ｘは天然アミノ酸）と表す）に対して分解活性を示すことが知られている。
【００４３】
本明細書において「カルノシンジペプチダーゼ阻害」とは、カルノシンジペプチダーゼのカルノシン分解活性を阻害することをいう。カルノシンジペプチダーゼの阻害作用は、公知の方法に従って評価することができる。例えば、カルノシンとカルノシンジペプチダーゼとを接触させるとカルノシンからヒスチジンが生成され、このときヒスチジンの存在によりヒスチジン特有の蛍光が測定可能であることから、その蛍光強度の低下を調べることによりカルノシンジペプチダーゼの阻害作用を評価することができる。
【００４４】
１−４．作用
上述した通り、カルノシンジペプチダーゼが阻害されることで、カルノシンジペプチダーゼにより分解されるカルノシンのヒト等の哺乳動物における体内濃度が維持、又は当該濃度の低下が抑制される。カルノシンの作用としては、プロトンバッファーリング活性、カルシウム分泌とカルシウム感受性制御、抗酸化作用、金属イオンキレート作用、ヒスチジン／ヒスタミンの細胞外供与体、高血糖改善作用、抗炎症作用、疲労回復促進作用、肌のシワ形成抑制作用、終末糖化産物の生成抑制、脳虚血による細胞死の抑制、アルツハイマー病（ＡＤ）モデルマウスにおけるアミロイドβの蓄積抑制作用、免疫調節作用等が挙げられる。そのため、カルノシンの体内濃度を高く保持することによって、統合失調症などに伴う認知機能低下やアルツハイマー、自閉症の予防又は改善効果が、高血糖改善作用に基づいて糖尿病又は酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患発症の予防又は改善効果が、抗炎症作用に基づいて血管や組織の炎症の予防又は改善効果が、免疫調節作用に基づいて免疫機能低下の予防又は改善効果が期待できる。
【００４５】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物におけるポリフェノール等の成分の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、本発明の所望の効果が得られるような量であればよく、特に限定されるものではない。例えば、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物におけるポリフェノールの含有量は、０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、上限値として、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物の形態としては、例えば、固体（錠剤など）及び液体（ペットボトル入り飲料など）が挙げられ、特に、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が固体である場合、組成物中のポリフェノールの含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が液体である場合、組成物中のポリフェノールの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００４６】
ポリフェノールとして、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、クルクミン、レスベラトロール、ピセアタンノール、ヒドロキシチロソール、フェルラ酸、又はカフェ酸を用いる場合、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物におけるこれらの化合物の含有量は、それぞれ、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、クルクミン、レスベラトロール、ピセアタンノール、ヒドロキシチロソール、フェルラ酸、又はカフェ酸の組成物中の含有量は、上限値として、それぞれ、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が固体である場合、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、クルクミン、レスベラトロール、ピセアタンノール、ヒドロキシチロソール、フェルラ酸、又はカフェ酸の組成物中の含有量は、それぞれ、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が液体である場合、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、クルクミン、レスベラトロール、ピセアタンノール、ヒドロキシチロソール、フェルラ酸、又はカフェ酸の組成物中の含有量は、それぞれ、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００４７】
５環性トリテルペン酸を用いる場合、例えば、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物におけるその含有量は、０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、上限値として、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が固体である場合、組成物中の５環性トリテルペン酸の含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が液体である場合、組成物中の５環性トリテルペン酸の含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００４８】
５環性トリテルペン酸としてウルソール酸を用いる場合、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物におけるウルソール酸の含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、ウルソール酸の組成物中の含有量は、上限値として、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が固体である場合、ウルソール酸の組成物中の含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が液体である場合、ウルソール酸の組成物中の含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００４９】
アンセリンを用いる場合、例えば、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物におけるその含有量は０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が固体である場合、組成物中のアンセリンの含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物が液体である場合、組成物中のアンセリンの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００５０】
本明細書において用いる「重量％」は、特に断りがない限り、重量／重量（ｗ／ｗ）の重量％を意味する。また、各種成分が塩や水和物等の形態にある場合は、これを遊離体（フリー体）に換算した上で上記含有量を算出するものとする。
【００５１】
ポリフェノール等の成分の含有量は、当業者に公知の方法に従って測定することができる。例えば、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、ＨＰＬＣ等を用いて、成分の種類等に応じて適宜条件を設定して測定することができる。
【００５２】
１−５．他の成分
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、その形態に応じて、上記成分の他に、任意の添加剤や通常用いられる任意の成分を含有することができる。これらの添加剤及び／又は成分の例としては、ビタミンＥ、ビタミンＣ等のビタミン類、ミネラル類、栄養成分、香料などの生理活性成分の他、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、又はコーティング剤等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００５３】
１−６．用途
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、前述のポリフェノール等を含有することを特徴としており、当該成分がカルノシンジペプチダーゼの活性を阻害して、カルノシンジペプチダーゼにより分解されるカルノシン体内濃度の維持、又は当該濃度の低下抑制が期待される。体内においてカルノシンが高い濃度で保持されることで、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善を効果的に行うことができる。従って、本発明の組成物は、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善用のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物である。これらの用途に基づき、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善用組成物ともなり得る。なお、本明細書において「予防又は改善」には、現在の状態をより良い状態にすることと現在の状態よりも悪い状態になることを防ぐこととの両方の概念が包含されることから、治療、回復、軽減、緩和等の用語もこれに含まれ得る。
【００５４】
また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、carnosine dipeptidase 1及び／又はcarnosine dipeptidase 2の阻害活性を有することから、カルノシンのみならず、ヒスチジン残基をカルボキシル末端に有するあらゆるジペプチド（Ｘ−Ｈｉｓ（Ｘは天然アミノ酸）と表す）の分解を抑制する目的に対しても使用可能である。
【００５５】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物の形態は、特に限定されないが、例えば固体又は液体である。固体の組成物としては、例えば、錠剤（被覆錠剤を含む）、顆粒剤、散剤、粉末剤、及びカプセル剤等が挙げられ、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、公知の方法に従って、そのような固形剤に製剤化して提供することができる。液体の組成物としては、例えば、経口液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、及びドリンク剤等が挙げられ、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、公知の方法に従って、そのような液剤に製剤化して提供することができる。また、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、飲料（ペットボトル入り飲料、清涼飲料、及び茶飲料等を含む）、ヨーグルトや乳酸菌飲料等の乳製品、調味料、加工食品、デザート類、菓子（例えば、ガム、キャンディ、ゼリー）等とすることもできる。これらの組成物はそのまま、或いは水等と共に服用することができる。また、容易に配合することが出来る形態（例えば、粉末形態や顆粒形態）に調製後、例えば、医薬品や飲食品の原材料として用いることができるが、本形態に限定されるものではない。
【００５６】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、一例として、剤の形態で提供することができるが、本形態に限定されるものではない。当該剤をそのまま組成物として、或いは当該剤を含む組成物として提供することができる。本発明の組成物としては、医薬品（医薬組成物）、飲食品（食品、飲料、飲食品組成物、食品組成物、飲料組成物を含む）、化粧品（化粧用組成物）等が挙げられるが、これらに限定されない。食品組成物の限定的でない例として、機能性食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養補助食品、食事療法用食品、健康食品、サプリメント、食品添加剤等が挙げられる。
【００５７】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、治療的用途（医療用途）又は非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。具体的には、医薬品、医薬部外品及び化粧料等としての使用が挙げられ、また、薬事法上はこれらに属さないが、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善効果等を明示的又は暗示的に訴求する組成物としての使用が挙げられる。
【００５８】
本発明は、別の側面では、カルノシンジペプチダーゼ阻害により発揮される機能の表示を付した、前記カルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物に関する。このような表示又は機能表示は特に限定されないが、例えば、「身体を疲れにくくする」、「身体の疲労回復を促す」、「肌のシワ形成を予防する」、「肌のシワやたるみを改善する」、「美容をサポートする」、「認知機能の低下を抑制する」、「認知機能の維持を期待する」、「血糖値の上昇を抑制する」、「免疫機能を高める」、「抗酸化作用を期待する」、「酸化ストレスを低減する」、「抗糖化作用を期待する」、「糖化ストレスを低減する」、「血管の炎症を抑制する」、「アルツハイマー症の予防若しくは改善を期待する」、「自閉症の予防若しくは改善を期待する」等、或いは、これらと同視できる表示又は機能性表示が挙げられる。本明細書において、当該表示及び機能表示のような表示は、組成物自体に付されてもよいし、組成物の容器又は包装に付されていてもよい。
【００５９】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物は、その形態に応じた適当な方法で摂取することができる。摂取方法は、本発明に係る有効成分が循環血中に移行できるのであれば特に限定はない。例えば、経口用固形製剤、内服液剤若しくはシロップ剤等の経口用液体製剤、又は注射剤、外用剤、坐剤若しくは経皮吸収剤等の非経口用製剤などの形態とすることができるが、これらに限定されない。なお、本明細書において「摂取」とは、摂取、服用、又は飲用等の全態様を含むものとして用いられる。
【００６０】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物の適用量は、その形態、投与方法、使用目的及び投与対象である患者又は患獣の年齢、体重、症状によって適時設定され、一定ではない。本発明の組成物の有効ヒト摂取量も一定ではなく、特に限定されない。本発明の組成物の有効ヒト摂取量は、含有成分がポリフェノールである場合、ポリフェノールの重量として、例えば、体重５０ｋｇのヒトで一日あたり１０ｍｇ以上、好ましくは３０ｍｇ以上である。含有成分が５環性トリテルペン酸である場合、本発明の組成物の有効ヒト摂取量は、５環性トリテルペン酸の重量として、例えば、体重５０ｋｇのヒトで一日あたり１０ｍｇ以上、好ましくは３０ｍｇ以上である。含有成分がアンセリンである場合、本発明の組成物の有効ヒト摂取量は、アンセリンの重量として、例えば、体重５０ｋｇのヒトで一日あたり１０ｍｇ以上、好ましくは３０ｍｇ以上である。また、投与は所望の投与量範囲内において、１日内において単回又は数回に分けて行ってもよい。投与期間も任意である。なお、本発明の組成物の有効ヒト摂取量とは、ヒトにおいて有効な効果を示す本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物の摂取量のことであり、当該組成物に含まれる有効成分の種類は特に限定されない。
【００６１】
本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物の適用対象は、好ましくはヒトであるが、ウシ、ウマ、ヤギ等の家畜動物、イヌ、ネコ、ウサギ等のペット動物、又は、マウス、ラット、モルモット、サル等の実験動物であってもよい。ヒト以外の動物を対象に投与する場合、マウス１個体当たり約２０ｇに対して１日あたりの使用量は、組成物中の有効成分の含有量、適用対象者の状態、体重、性別及び年齢等の条件により異なる。
【００６２】
１−７．カルノシンとの組み合わせ（併用）
上述したポリフェノール等の成分は、カルノシンと併用することができる。そのため本発明は、一つの態様として、上述したポリフェノール等の成分とカルノシンとを組み合わせてなる組成物（以下、「本発明の併用組成物」とも称する）を提供することができる。
【００６３】
上記の成分とカルノシンとを組み合わせて用いることによって、当該成分のカルノシンジペプチダーゼ阻害作用がカルノシンジペプチダーゼからのカルノシンの分解を遅延させ、標的とする組織や器官に効果的に当該カルノシンを送達することが期待できる。体内に元来存在しているカルノシンのみならず、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物とカルノシンとを併用することで、体内のカルノシン濃度をより高く維持することや、カルノシンの作用を効果的に増強させることが期待できる。
【００６４】
本発明の併用組成物は、上述したポリフェノール等の成分を含むことからカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物となり得る。また、本発明の併用組成物は、カルノシン作用効果の増強という観点から、上記に説明した用途に用いることが好ましい。即ち、本発明の併用組成物は、好ましくは、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善用組成物である。
【００６５】
本発明の併用組成物は、特に限定されないが、上述したカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物と同様に、一例として剤（合剤）の形態で提供することもできる。本発明の併用組成物は、医薬品（医薬組成物）や飲食品（食品、飲料、飲食品組成物、食品組成物、飲料組成物を含む）等の形態で提供することができるが、本形態に限定されるものではない。食品組成物の限定的でない例として、機能性食品、健康補助食品、栄養機能食品、特別用途食品、特定保健用食品、栄養補助食品、食事療法用食品、健康食品、サプリメント、食品添加剤等が挙げられる。
【００６６】
本発明におけるカルノシンはβ−アラニンとヒスチジンとで構成されるジペプチドであり、β−アラニルヒスチジンとも称する。カルノシンには、Ｄ体（Ｄ−カルノシン）、Ｌ体（Ｌ−カルノシン）及びＤＬ体（ＤＬ−カルノシン）のいずれもが含まれるが、本発明では、好ましくはＬ体（Ｌ−カルノシン）及びＤＬ体（ＤＬ−カルノシン）、より好ましくはＬ体（Ｌ−カルノシン）である。なお、Ｄ体（Ｄ−カルノシン）のＣＡＳ登録番号は５８５３−００−９であり、Ｌ体（Ｌ−カルノシン）のＣＡＳ登録番号は３０５−８４−０である。
【００６７】
本発明の併用組成物におけるポリフェノール、５環性トリテルペン酸、又はアンセリンの含有量は上述した通りである。本発明の併用組成物におけるカルノシンの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、上限値として、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明の併用組成物が固体である場合、組成物中のカルノシンの含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明の併用組成物が液体である場合、組成物中のカルノシンの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００６８】
本発明において用いられるカルノシンは、その入手方法については特に限定されず、動物に由来する天然のもの、或いは化学合成法等により得られるもののいずれであってもよい。本発明では、好適には市販されているカルノシンが使用される。また、本発明の併用組成物におけるカルノシンの含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、本発明の所望の効果が得られるような量であればよく、特に限定されるものではない。
【００６９】
２．カルノシンジペプチダーゼを阻害するためのポリフェノール等の使用
本発明の一態様は、カルノシンジペプチダーゼを阻害するためのポリフェノールの使用である。
【００７０】
本発明において使用されるポリフェノールは、好ましくは、フラボノイド、クルクミノイド、スチルベノイド、フェニルエタノイド、フェニルプロパノイドである。フラボノイドの中ではケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン類が好ましく、特にエピガロカテキンガレートが好ましい。クルクミノイドの中ではクルクミンが好ましく、スチルベノイドの中でレスベラトロール又はピセアタンノールが好ましく、フェニルエタノイドの中ではヒドロキシチロソールが好ましく、フェニルプロパノイドの中ではカフェ酸又はフェルラ酸が好ましい。
【００７１】
また、本発明の別の態様は、カルノシンジペプチダーゼを阻害するための５環性トリテルペン酸の使用である。５環性トリテルペン酸の中では、ウルソール酸が好ましい。また、本発明の更なる別の態様は、カルノシンジペプチダーゼを阻害するためのアンセリンの使用である。
【００７２】
本発明の使用には、例えば、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善するための、ポリフェノール、５環性トリテルペン酸、又はアンセリン等の使用が含まれる。また、当該使用は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為、即ち、治療による人体への処理行為を含まない概念である。
【００７３】
３．カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法
本発明の一態様は、ポリフェノールを使用する、カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法である。
【００７４】
本発明において使用されるポリフェノールは、好ましくは、フラボノイド、クルクミノイド、スチルベノイド、フェニルプロパノイドである。フラボノイドの中ではケルセチンミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン類が好ましく、特にエピガロカテキンガレートが好ましい。クルクミノイドの中ではクルクミンが好ましく、スチルベノイドの中でレスベラトロール又はピセアタンノールが好ましく、フェニルエタノイドの中ではヒドロキシチロソールが好ましく、フェニルプロパノイドの中ではカフェ酸又はフェルラ酸が好ましい。
【００７５】
また、本発明の別の態様は、５環性トリテルペン酸を使用する、カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法である。５環性トリテルペン酸の中では、ウルソール酸が好ましい。また、本発明の更なる別の態様は、アンセリンを使用する、カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法である。
【００７６】
上記方法に関する別の態様は、カルノシンジペプチダーゼの阻害を必要とする対象に、ポリフェノール、５環性トリテルペン酸、又はアンセリンを有効成分として治療有効量を投与することを含む、カルノシンジペプチダーゼを阻害する方法である。ポリフェノールの中では好ましくは、フラボノイド、クルクミノイド、スチルベノイド、フェニルエタノイド、フェニルプロパノイドである。フラボノイドの中ではケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン、カテキン類が好ましく、特にエピガロカテキンガレートが好ましい。クルクミノイドの中ではクルクミンが好ましく、スチルベノイドの中でレスベラトロール又はピセアタンノールが好ましく、フェニルエタノイドの中ではヒドロキシチロソールが好ましく、フェニルプロパノイドの中ではカフェ酸又はフェルラ酸が好ましい。５環性トリテルペン酸は、好ましくはウルソール酸である。
【００７７】
上記方法において、カルノシンペプチダーゼの阻害を必要とする対象は、例えばヒトであるが、これに限定されない。本明細書中において治療有効量とは、本発明のカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物を個体に投与した場合に、投与していない個体と比較して、カルノシンジペプチダーゼのカルノシン分解活性が阻害される量のことである。具体的な有効量としては、投与形態、投与方法、使用目的及び対象の年齢、体重、症状等によって適時設定され一定ではない。
【００７８】
本発明の方法においては、前記治療有効量となるよう、前記ポリフェノール、５環性トリテルペン酸、又はアンセリンをそのまま、或いは、ポリフェノール、５環性トリテルペン酸、又はアンセリンを含有する組成物として投与してもよい。
【００７９】
本発明の方法によれば、副作用を生じることなくカルノシンジペプチダーゼを阻害することが可能になる。また、本発明の方法は、カルノシンジペプチダーゼの阻害を通じて、例えば、疲労、肌のシワ形成、認知機能低下、糖尿病、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症を予防又は改善する方法となり得る。
【００８０】
４．ポリフェノール及びカルノシンを含有する組成物
本発明の一態様は、ポリフェノール及びカルノシンを含有する組成物であり、当該ポリフェノールはピセアタンノール及び／又はヒドロキシチロソールである、前記組成物である。
【００８１】
４−１．カルノシン
本発明の組成物に含まれるカルノシンについては、上記に説明した通りである。本発明の組成物におけるカルノシンの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、上限値として、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、８０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。本発明の組成物の形態としては、例えば、固体（錠剤など）及び液体（ペットボトル入り飲料など）が挙げられ、特に、本発明の組成物が固体である場合、組成物中のカルノシンの含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明の組成物が液体である場合、組成物中のカルノシンの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００８２】
本発明の組成物におけるピセアタンノールとカルノシンとの含有比率（ピセアタンノール：カルノシン）は、重量比として、例えば１：１０００〜１００：１、好ましくは１：１００〜５０：１、より好ましくは１：１０〜１０：１である。また、本発明の組成物におけるヒドロキシチロソールとカルノシンとの含有比率（ヒドロキシチロソール：カルノシン）は、重量比として、例えば１：１０００〜１００：１、好ましくは１：１００〜５０：１、より好ましくは１：１０〜１０：１である。
【００８３】
４−２．ピセアタンノールとヒドロキシチロソール
本発明の組成物に含まれるポリフェノールは、ピセアタンノール及び／又はヒドロキシチロソールである。ピセアタンノール（piceatannol）については、上記に説明した通りである。なお、ピセアタンノールの生理作用としては、ヒトにおける血管老化抑制作用や疲労改善作用、実験動物レベルでのｅＮＯＳ（endothelial nitric oxide synthase）発現促進作用や血管拡張作用など、細胞レベルでの肌のシミ形成抑制作用、シワ形成抑制作用、及び紫外線防御作用などが報告されており、健康食品の原料としてピセアタンノール含有素材が活用されている。
【００８４】
本発明の組成物に含まれるヒドロキシチロソール（hydroxytyrosol）については、上記に説明した通りである。なお、ヒドロキシチロソールの生理作用としては、実験動物レベルでの美白効果、動脈硬化予防効果、及び抗酸化作用など、細胞レベルでの血管平滑筋細胞増殖抑制作用、血管内皮細胞に対する創傷治癒効果、及び酸化ストレスに対する細胞保護効果などが示されており、健康食品や化粧品中の有効成分としてヒドロキシチロソールは幅広く活用されている。
【００８５】
ピセアタンノールとヒドロキシチロソールは、いずれも配糖体であってもよい。配糖体における糖は、単糖であってもよく、或いは二糖又はそれ以上の複数の糖であってもよく、特に限定されない。糖の種類も特に限定されず、グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、ラムノース、アラビノース、キシロース等のアルドース、フルクトース等のケトース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸等のウロン酸、アピオース、ルチノース等が挙げられる。また、用いられる糖はＤ体であってもよいし、Ｌ体であってもよい。ピセアタンノールの配糖体としては、例えばpiceatannol-3'-O-β-D-glucopyranosideやpiceatannol-4'-O-β-D-glucopyranosideなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
ピセアタンノールとヒドロキシチロソールはまた、水（熱水を含む）や有機溶媒等を用いて植物や果物等の天然物から抽出したものであってもよく、或いは化学合成したものであってもよい。これらの化合物の抽出（単離、精製等を含む）や合成は、その種類等に応じて当業者に公知の方法を用いて行うことができる。
【００８７】
ピセアタンノールとヒドロキシチロソールは、自ら調製したものを用いてもよく、或いは市販品を用いてもよく、特に制限されない。本発明では、特に制限されないが、好ましくは市販品が用いられる。また、ピセアタンノールを含有する植物抽出物やヒドロキシチロソールを含有する植物抽出物を利用することもできる。ピセアタンノール及びヒドロキシチロソールの形態は特に限定されず、遊離体（遊離型）であってもよいし、水和物やエタノール和物等の溶媒和物の形態であってもよい。血中に有効成分が暴露されるのであれば、オレウロペインのように有効成分とその他成分のエステル体として用いてもよい。
【００８８】
本発明の組成物におけるピセアタンノールの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、８０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明の組成物が固体である場合、組成物中のピセアタンノールの含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明の組成物が液体である場合、組成物中のピセアタンノールの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００８９】
本発明の組成物におけるヒドロキシチロソールの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。また、当該含有量は、例えば、５０重量％以下、７０重量％以下、８０重量％以下、又は９０重量％以下としてもよい。特に、本発明の組成物が固体である場合、組成物中のヒドロキシチロソールの含有量は、例えば０．１重量％以上、好ましくは０．３重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上とすることができる。また、本発明の組成物が液体である場合、組成物中のヒドロキシチロソールの含有量は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．００３重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上とすることができる。
【００９０】
本発明の組成物において、各種化合物が塩、水和物又は配糖体等の形態にある場合は、これを遊離体（フリー体）に換算した上で上記含有量を算出するものとする。また、本発明における各種成分の含有量は、上記に説明した通り、当業者に公知の方法に従って測定することができる。
【００９１】
ピセアタンノールとヒドロキシチロソールとの両方を用いる場合、両者の含有比率（ピセアタンノール：ヒドロキシチロソール）は、重量比として、例えば１：１００〜１００：１、１：１０〜１０：１、又は１：５〜５：１とすることができる。
【００９２】
４−３．他の成分
本発明の組成物は、その形態に応じて、上記２種のポリフェノール及びカルノシンの他に、任意の添加剤や成分を含有することができる。これらの添加剤及び／又は成分の例としては、ビタミンＥ、ビタミンＣ等のビタミン類、ミネラル類、栄養成分、香料などの生理活性成分の他、製剤化において配合される賦形剤、結合剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、凝固剤、又はコーティング剤等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００９３】
４−４．組成物
本発明の組成物は、特に限定されるものではないが、例えば、カルノシンと上記２種のポリフェノール（即ち、ピセアタンノール及び／又はヒドロキシチロソール）とを含有する医薬品又は飲食品であり、好ましくは飲料や食品である。当該医薬品又は飲食品におけるカルノシン及び上記２種のポリフェノールの含有量は前記の通りである。
【００９４】
本発明の組成物が医薬品である場合、投与経路は特に限定されないが、経口であることが好ましい。経口投与に適した医薬組成物の形態には、錠剤（被覆錠剤を含む）、顆粒剤、散剤、粉末剤、又はカプセル剤等の固形剤や、経口液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、又はドリンク剤等の液剤などが含まれる。
【００９５】
本発明の組成物が飲食品である場合、その形態は、錠剤（被覆錠剤を含む）、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、又はドリンク剤等の健康食品の形態とすることができ、飲料（ペットボトル入り飲料、清涼飲料、及び茶飲料等を含む）、ヨーグルトや乳酸菌飲料等の乳製品、調味料、加工食品、デザート類、菓子（例えば、ガム、キャンディ、ゼリー）等の形態とすることもできる。
【００９６】
本発明の組成物の形態は、特に限定されないが、例えば固体又は液体であり、その具体例は上記の通りである。本発明の組成物はそのまま、或いは水等と共に服用することができる。また、容易に配合することが出来る形態（例えば、粉末形態や顆粒形態）に調製後、例えば、医薬品や飲食品の原材料として用いることができる。
【００９７】
本発明の組成物は、例えば、公知の医薬品又は飲食品を調製する際に、その原材料にカルノシンと上記２種のポリフェノール（即ち、ピセアタンノール及び／又はヒドロキシチロソール）とを所定量混合して、公知の製造方法に従って調製してもよく、また、既製の公知の医薬品又は飲食品に、上記２種のポリフェノールとカルノシンとを前記所定量となるように添加して、溶解及び／又は懸濁することで調製してもよい。なお、公知の医薬品又は飲食品が、カルノシンと上記２種のポリフェノールを元来含有するものであってもよく、本発明に係るカルノシン及び２種のポリフェノールが所定量となるのであれば、適宜配合して調製することができる。
【００９８】
本発明の組成物は、治療的用途（医療用途）又は非治療用途（非医療用途）のいずれにも適用することができる。具体的には、医薬品、医薬部外品及び化粧料等としての使用が挙げられ、また、薬事法上はこれらに属さないが、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善効果等を明示的又は暗示的に訴求する組成物としての使用が挙げられる。
【００９９】
本発明の組成物の適用対象は、好ましくはヒトであるが、ウシ、ウマ、ヤギ等の家畜動物、イヌ、ネコ、ウサギ等のペット動物、又は、マウス、ラット、モルモット、サル等の実験動物であってもよい。ヒト以外の動物を対象に投与する場合、その使用量は、組成物中の有効成分の含有量、適用対象の状態、体重、性別及び年齢等の条件により異なる。
【０１００】
４−５．作用・用途
本発明の組成物は、カルノシンとピセアタンノール及び／又はヒドロキシチロソールとを含有しており、ピセアタンノール及びヒドロキシチロソールはカルノシンジペプチダーゼ阻害作用を有することを特徴とする。
【０１０１】
「カルノシンジペプチダーゼ」については、上記に説明した通りである。本発明で対象とされるカルノシンジペプチダーゼは、好ましくは、血清（型）カルノシン分解酵素であるcarnosine dipeptidase 1（ＣＮＤＰ１）である。
【０１０２】
「カルノシンジペプチダーゼ阻害」については、上記に説明した通りである。本発明の組成物はピセアタンノール及び／又はヒドロキシチロソールを含むことから、そのカルノシンジペプチダーゼ阻害作用によりカルノシンの体内での分解を遅延させることができ、標的とする組織や器官に効果的にカルノシンを送達することができる。これにより、本発明の組成物は、組成物中に含まれているカルノシンや体内に元来存在しているカルノシンに関して、これらのカルノシンの薬理作用を効果的に増強させることができる。
【０１０３】
カルノシンの薬理作用については、カルノシンの作用として上記に説明した通りである。このようなカルノシンジペプチダーゼ阻害作用に基づき、本発明の組成物は、カルノシン薬理作用増強用の組成物（カルノシン薬理作用増強を目的に使用される組成物）とすることができる。さらに、本発明の組成物は、カルノシン薬理作用の増強に基づき、認知機能低下、糖尿病、疲労、肌のシワ形成、免疫機能低下、血管若しくは組織の炎症、酸化ストレス若しくは終末糖化産物の産生に起因する各種疾患、アルツハイマー、又は自閉症の予防又は改善用の組成物とすることもできる。
【０１０４】
また、本発明の組成物は、carnosine dipeptidase 1及び／又はcarnosine dipeptidase 2の阻害活性を有することから、カルノシンのみならず、ヒスチジン残基をカルボキシル末端に有するあらゆるジペプチド（Ｘ−Ｈｉｓ（Ｘは天然アミノ酸）と表す）の分解を抑制する目的に対しても使用可能である。
【０１０５】
本発明は、別の側面では、カルノシンの薬理作用により発揮される機能の表示を付した組成物に関する。このような表示又は機能表示は特に限定されないが、例えば、「身体を疲れにくくする」、「身体の疲労回復を促す」、「肌のシワ形成を予防する」、「肌のシワやたるみを改善する」、「美容をサポートする」、「認知機能の低下を抑制する」、「認知機能の維持を期待する」、「血糖値の上昇を抑制する」、「免疫機能を高める」、「抗酸化作用を期待する」、「酸化ストレスを低減する」、「抗糖化作用を期待する」、「糖化ストレスを低減する」、「血管の炎症を抑制する」、「アルツハイマー症の予防若しくは改善を期待する」、「自閉症の予防若しくは改善を期待する」等、或いは、これらと同視できる表示又は機能性表示が挙げられる。本明細書において、当該表示及び機能表示のような表示は、組成物自体に付されてもよいし、組成物の容器又は包装に付されていてもよい。
【０１０６】
本発明の組成物は、その形態に応じた適当な方法で摂取することができる。摂取方法は、組成物中に含まれる有効成分が循環血中に移行できるのであれば特に限定はない。例えば、経口用固形製剤、内服液剤若しくはシロップ剤等の経口用液体製剤、又は注射剤、外用剤、坐剤若しくは経皮吸収剤等の非経口用製剤などの形態とすることができるが、これらに限定されない。
【実施例】
【０１０７】
以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明するが、これにより本発明の範囲を限定するものではない。当業者は、本発明の方法を種々変更、修飾して使用することが可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。【０１０８】
実施例１．carnosine dipeptidase 1活性阻害効果の検討
評価化合物として、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール、ルテオリン、アピゲニン（以上、Extrasynthese社（フランス）製）、カテキン（長良サイエンス社製）、エピガロカテキン（栗田工業社製）、エピカテキン、エピガロカテキンガレート、クルクミン、フェルラ酸、カフェ酸（以上、ナカライテスク社製）、レスベラトロール、ウルソール酸（以上、Sigma社製）、ピセアタンノール、ヒドロキシチロソール（以上、東京化成工業社製）、及びアンセリン（和光純薬社製）を用いた。また、ヒトcarnosine dipeptidase 1は、recombinant Human Carnosine Dipeptidase1/CNDP1（R＆D systems）を用い、酵素反応を調べるため、カルノシン（東京化成工業社製）を用いた。以下の手順で、室温でcarnosine dipeptidase 1活性阻害効果を検討した。【０１０９】
1.5mLエッペンドルフチューブに、バッファー（50mM Tris, pH7.5）に溶解させた2ng/μL carnosine dipeptidase 1溶液50μL及び評価化合物含有水溶液25μLを添加し、同じくバッファーに溶解させた4mMカルノシン溶液25μLを添加することで反応を開始した。反応溶液を室温で60分間インキュベートした後、脱イオン水で溶解した1% Trichloroaceticacid (TCA) (Sigma)水溶液50μLを添加し、ボルテックスにて混和することで反応を終結させた。反応終了後のサンプルに、5mg/mL o-Phthaldialdehyde (OPA) (Sigma)含有1.8M水酸化ナトリウム水溶液（10%DMSO含有）を添加し、混和後室温でさらに30分間インキュベートした。バッファーを用いてL-ヒスチジン希釈系列を15.625〜250μMの範囲内で作成し、同様にTCAおよびOPAを添加した後、30分間インキュベートしたものを検量線溶液とした。なお、評価化合物含有水溶液の代わりに同含有率のDMSOを含有した水を添加したものをコントロールとした。サンプルおよび検量線溶液全量を96 well black plateに添加し、蛍光光度計を用いて励起波長360nm、蛍光波長460nmにおけるヒスチジンの蛍光強度を測定した。各群についてn=2で検討を実施した。【０１１０】
結果については、酵素（carnosine dipeptidase 1）の代わりにバッファーを添加したサンプルにおける蛍光強度を差し引くことで補正値を算出し、コントロールにおける蛍光強度の補正値を100%としたときの評価化合物群における蛍光強度の補正値をcarnosine dipeptidase 1残存活性(%)とした。その結果を表１〜４に示す。【０１１１】
【表１】
2017104777.tif 000002
【０１１２】
【表２】
2017104777.tif 000003
【０１１３】
【表３】
2017104777.tif 000004
【０１１４】
【表４】
2017104777.tif 000005
【０１１５】
上記の結果から、表１〜４に示した化合物はいずれもcarnosine dipeptidase 1活性の阻害作用を有することが明らかとなった。これらの化合物はカルノシンジペプチダーゼ阻害作用を有することから、これらの化合物とカルノシンとを組み合わせて含有する組成物は、組成物中のカルノシン及び体内に元来存在するカルノシンの作用効果を増強できる可能性があることが示された。【０１１６】
本発明の組成物の製造例を以下に示す。
（製造例１）錠剤
エピガロカテキンガレート          １０ｇ
ビタミンＥ                        ６０ｇ
デンプン                        ２２３ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                ９ｇ
酸化ケイ素                          ９ｇ
これらを混合し、単発式打錠機にて打錠して径９ｍｍ、質量３００ｍｇの錠剤を製造した。【０１１７】
（製造例２）顆粒剤
クルクミン                        １０ｇ
カルノシン                        １０ｇ
酢酸トコフェロール                １０ｇ
無水ケイ酸                        ２０ｇ
トウモロコシデンプン            １１０ｇ
以上の粉体を均一に混合した後に１０％のハイドロキシプロピルセルロース・エタノール溶液１００ｍｌを加え、常法通り練和し、押し出し、乾燥して顆粒剤を得た。【０１１８】
（製造例３）ドリンク剤
ＤＬ−酒石酸ナトリウム          ０．１ｇ
コハク酸                    ０．００９ｇ
液糖                            ８００ｇ
クエン酸                          １２ｇ
ビタミンＣ                        １０ｇ
レスベラトロール                  ２０ｇ
ビタミンＥ                        ２０ｇ
シクロデキストリン                  ５ｇ
乳化剤                              ５ｇ
香料                              １５ｇ
塩化カリウム                        １ｇ
硫酸マグネシウム                ０．５ｇ
上記成分を配合し、水を加えて１リットルとした。このドリンク剤は、１回あたり１００ｍｌ以上を飲用する。【０１１９】
（製造例４）錠剤
ピセアタンノール                  １０ｇ
カルノシン                        １０ｇ
ビタミンＥ                        ６０ｇ
デンプン                        ２２３ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                ９ｇ
酸化ケイ素                          ９ｇ
これらを混合し、単発式打錠機にて打錠して径９ｍｍ、質量３００ｍｇの錠剤を製造した。【０１２０】
（製造例５）顆粒剤
ヒドロキシチロソール              １０ｇ
カルノシン                        １０ｇ
酢酸トコフェロール                １０ｇ
無水ケイ酸                        ２０ｇ
トウモロコシデンプン            １１０ｇ
以上の粉体を均一に混合した後に１０％のハイドロキシプロピルセルロース・エタノール溶液１００ｍｌを加え、常法通り練和し、押し出し、乾燥して顆粒剤を得た。【０１２１】
（製造例６）ドリンク剤
ＤＬ−酒石酸ナトリウム          ０．１ｇ
コハク酸                    ０．００９ｇ
液糖                            ８００ｇ
クエン酸                          １２ｇ
ビタミンＣ                        １０ｇ
ヒドロキシチロソール              １０ｇ
カルノシン                        １０ｇ
ビタミンＥ                        ２０ｇ
シクロデキストリン                  ５ｇ
乳化剤                              ５ｇ
香料                              １５ｇ
塩化カリウム                        １ｇ
硫酸マグネシウム                ０．５ｇ
上記成分を配合し、水を加えて１リットルとした。このドリンク剤は、１回あたり１００ｍｌ以上を飲用する。【０１２２】
（製造例７）ジュース
冷凍濃縮温州みかん果汁              ５重量部
果糖ブドウ糖液糖                  １１重量部
クエン酸                        ０．２重量部
Ｌ−アスコルビン酸            ０．０２重量部
ピセアタンノール              ０．０６重量部
Ｌ−カルノシン                      １重量部
香料                            ０．２重量部
色素                            ０．１重量部
水                          ８２．４２重量部【０１２３】
（製造例８）ヨーグルト
生乳（３．４％脂肪）              ８０重量部
生クリーム（５０％脂肪）            ８重量部
脱脂粉乳                        １．５重量部
クエン酸                      ０．０８重量部
水                            ６．３６重量部
スターター                          ３重量部
ピセアタンノール              ０．０６重量部
Ｌ−カルノシン                      １重量部【０１２４】
（製造例９）乳酸菌飲料
乳固形分２１％発酵乳        １４．７６重量部
果糖ブドウ糖液糖            １３．３１重量部
ペクチン                        ０．５重量部
クエン酸                      ０．０８重量部
香料                          ０．１５重量部
水                          ７０．１８重量部
ヒドロキシチロソール          ０．０２重量部
Ｌ−カルノシン                      １重量部【０１２５】
（製造例１０）乳酸菌飲料
生クリーム（４５％脂肪）      ３３．８重量部
脱脂粉乳                          １１重量部
グラニュー糖                  １４．８重量部
加糖卵黄                        ０．３重量部
バニラエッセンス                ０．１重量部
水                          ３８．９４重量部
ヒドロキシチロソール          ０．０６重量部
Ｌ−カルノシン                      １重量部【０１２６】
（製造例１１）コーヒー飲料
グラニュー糖                        ８重量部
脱脂粉乳                            ５重量部
カラメル                        ０．２重量部
コーヒー抽出物                      ２重量部
香料                            ０．１重量部
ポリグリセリン脂肪酸エステル  ０．０５重量部
食塩                          ０．０５重量部
水                          ８３．５４重量部
ピセアタンノール              ０．０６重量部
Ｌ−カルノシン                      １重量部【０１２７】
（製造例１２）アルコール飲料
５０％容量％エタノール              ８重量部
砂糖                                ５重量部
果汁                            ０．２重量部
ヒドロキシチロソール          ０．０６重量部
Ｌ−カルノシン                      １重量部
精製水                      ８５．７４重量部
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
本発明は、ポリフェノール等を含有するカルノシンジペプチダーゼ阻害用組成物を提供するものである。また、本発明は、カルノシンとカルノシンジペプチダーゼ阻害作用を有する特定のポリフェノールとを含有する組成物を提供するものである。本発明は、血糖値上昇抑制等に資する新たな手段を提供するものであるため、産業上の利用性が高い。
【国際調査報告】
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