(57)【要約】  基材表面を被覆することにより、該基材表面に多種多様な標的物質を該標的物質に特異的に結合するリガンドを介して選択的に捕捉できる樹脂組成物を提供する。  本発明の樹脂組成物は、マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を有する単位（ａ）と、下式（１）で表される基、下式（２）で表される基および下式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種の基を有する単位（ｂ）と、を有する重合体、または、マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を有する単位（ａ）を有する重合体（Ａ）と、下式（１）で表される基、下式（２）で表される基および下式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種の基を有する単位（ｂ）を有する重合体（Ｂ）と、を含む。［化１］2017110923.tif 000030
2017110923.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を有する単位（ａ）と、下記一般式（１）で表される基、一般式（２）で表される基および一般式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種の基を有する単位（ｂ）と、を有する重合体、または、
前記単位（ａ）を有する重合体（Ａ）と、前記単位（ｂ）を有する重合体（Ｂ）と、を含む、樹脂組成物。
【化１】
2017110923.tif 000027
［前記式中、アスタリスクは重合体主鎖との直接的結合部位または連結基を介した間接的結合部位を示す。前記式（１）中、ｎは１〜１０の整数を示し、Ｒ１１は水素原子、メチル基またはエチル基を示す。前記式（２）中、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ独立に炭素数１〜５のアルキレン基を示し、Ｒ２３〜Ｒ２５はそれぞれ独立に炭素数１〜５のアルキル基を示す。前記式（３）中、Ｒ３１は炭素数１〜２０のアルキレン基を示し、Ｒ３４は炭素数１〜５のアルキレン基を示し、Ｒ３２およびＲ３３はそれぞれ独立に炭素数１〜５のアルキル基を示す。Ｘ−は下記式（４）で表される基または下記式（５）で表される基を示す。下記式（４）および（５）中、アスタリスクはＲ３４との結合部位を示す。］
【化２】
2017110923.tif 000028
【請求項２】
さらに、下記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）を有する重合体（Ｃ）を含む、または、
前記単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体が、下記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）を有する、もしくは、前記重合体（Ａ）および前記重合体（Ｂ）の少なくともいずれか一方が、下記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）を有する請求項１に記載の樹脂組成物。
【化３】
2017110923.tif 000029
［前記式（６）中、アスタリスクは重合体主鎖との直接的結合部位を示し、Ｙ６１は単結合または２価の有機基を示し、Ｒ６１は炭素数１〜２０のアルキル基を示す。］
【請求項３】
前記単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体または前記重合体（Ａ）中に含まれる単位（ａ）が組成物を構成する単位の総数に対して０．００１〜５ｍｏｌ％である請求項１または２に記載の樹脂組成物。
【請求項４】
前記単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体または前記重合体（Ｂ）中に含まれる単位（ｂ）が、組成物を構成する単位の総数に対して５〜６０質量％である請求項１〜３のいずれか一項に記載の樹脂組成物。
【請求項５】
前記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）が、組成物を構成する単位の総数に対して３０〜９０質量％含まれる請求項２〜４のいずれか一項に記載の樹脂組成物。
【請求項６】
さらに、加水分解によりシラノール基を生成する官能基、エポキシ基、（メタ）アクリル基またはグリシジル基からなる架橋性基を有する単位（ｄ）が含まれる請求項２〜５のいいずれか一項に記載の樹脂組成物。
【請求項７】
前記単位（ａ）が０．００２〜３質量％、前期単位（ｂ）が１０〜４５質量％、前記単位（ｃ）が５０〜８０質量％、および前記単位（ｄ）が０〜２．５質量％含まれる請求項６に記載の樹脂組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の樹脂組成物によって、少なくとも表面の一部が被覆された、基材。
【請求項９】
前記基材が細胞培養用である、請求項８に記載の基材。
【請求項１０】
請求項８に記載の基材の表面上のマレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基に、標的細胞の細胞表面と特異的に結合する部位を有するリガンドを結合させる工程と、
前記リガンドを結合させた基材に、標的細胞を接触させて、前記リガンドに前記標的細胞を結合させる工程と、
前記リガンドに結合した前記標的細胞を培養する工程と、を有する細胞培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に、特定の細胞を選択的に捕捉するための基材等の被覆材として好適な樹脂組成物、基材および細胞培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
疎水性高分子（ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、シリコン樹脂、ポリメタクリル酸エステル、含フッ素樹脂等）や、親水性高分子（ポリビニルアルコール、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）、ポリアクリルアミド等）等の合成高分子材料は、医用材料として広く用いられている。たとえば、細胞培養容器、カテーテル、人工臓器、アフィニティー精製用担体等の医療用デバイスが知られている。【０００３】
しかし、前記合成高分子材料は生体適合性が不充分である場合が多い。すなわち、フィブリノーゲン、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、インスリン、ヒストン、炭酸脱水酵素等の蛋白質がデバイス表面に吸着しやすい。前記蛋白質がデバイス表面に吸着すると、その部分にさらに細胞（血球、血小板等）が接着しやすくなる。そのため、血栓形成、炎症反応等の生体への悪影響や、デバイスの劣化等の問題が引き起こされる。
そこで、合成高分子材料を用いた医療用デバイスでは、生体膜類似構造を有する２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンの重合体や、ポリオキシエチレングリコールを含む高分子等の合成高分子材料から形成される被覆層を表面に形成し、生体適合性を高めている。【０００４】
また、近年、多能性幹細胞に用いる細胞培養容器として、マウス肉腫細胞から抽出した蛋白質を培養容器に塗付する技術が開発されている（非特許文献１参照）。しかしながら、再生医療の分野においては、異種動物や非自己由来の細胞や血清、蛋白質等の不純物は、人体に対し、予期せぬ悪影響をもたらす可能性がある。これらの不特定因子によってもたらされるリスクを排除するために、異種動物や非自己由来の成分を含まず、含有する組成が明確であり、多能性幹細胞を培養可能な容器が求められている。【０００５】
特許文献１には、基材表面にカルボキシ基を有する（メタ）アクリレートモノマー等を重合させて積層し、カルボキシ基に細胞接着性のペプチドを共有結合させた細胞培養器具が開示されている。該細胞培養器具では、幹細胞および未分化幹細胞を含む真核細胞は、該ペプチドを介して固定化して培養できる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１１−５１０６５５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Xu, Chunhui., et al., Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells, Nat. Biotech., 19(10), 971-979, 2001.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１に記載の細胞培養器具では、基材表面に細胞由来の蛋白質等が非特異的に吸着し、細胞培養に悪影響を及ぼす可能性がある。また、カルボキシ基と共有結合可能な官能基（アミノ基等）しか固定化することができない。【０００９】
本発明は、前記事情に鑑みてなされたものであって、基材表面を被覆することにより、蛋白質等の非特異的な吸着を抑制しつつ、該基材表面に、多種多様な標的物質を、該標的物質に特異的に結合するリガンドを介して選択的に捕捉できる樹脂組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は以下の態様を含む。
［１］マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を有する単位（ａ）と、下記一般式（１）で表される基、一般式（２）で表される基および一般式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種の基を有する単位（ｂ）と、を有する重合体、または、前記単位（ａ）を有する重合体（Ａ）と、前記単位（ｂ）を有する重合体（Ｂ）と、を含む、樹脂組成物。【００１１】
【化１】
2017110923.tif 000003
【００１２】
［前記式中、アスタリスク（★）は重合体主鎖との直接的結合部位または連結基を介した間接的結合部位を示す。前記式（１）中、ｎは１〜１０の整数を示し、Ｒ１１は水素原子、メチル基またはエチル基を示す。前記式（２）中、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれ独立に炭素数１〜５のアルキレン基を示し、Ｒ２３〜Ｒ２５はそれぞれ独立に炭素数１〜５のアルキル基を示す。前記式（３）中、Ｒ３１は炭素数１〜２０のアルキレン基を示し、Ｒ３４は炭素数１〜５のアルキレン基を示し、Ｒ３２およびＲ３３はそれぞれ独立に炭素数１〜５のアルキル基を示す。Ｘ−は下記式（４）で表される基または下記式（５）で表される基を示す。下記式（４）および（５）中、アスタリスクはＲ３４との結合部位を示す。］【００１３】
【化２】
2017110923.tif 000004
【００１４】
［２］さらに、下記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）を有する重合体（Ｃ）を含む、または、前記単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体が、下記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）を有する、もしくは、前記重合体（Ａ）および前記重合体（Ｂ）の少なくともいずれか一方が、下記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）を有する［１］に記載の樹脂組成物。【００１５】
【化３】
2017110923.tif 000005
【００１６】
［前記式（６）中、アスタリスクは重合体主鎖との直接的結合部位を示し、Ｙ６１は単結合または２価の有機基を示し、Ｒ６１は炭素数１〜２０のアルキル基を示す。］
［３］前記単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体または前記重合体（Ａ）中に含まれる単位（ａ）が組成物を構成する単位の総数に対して０．００１〜５ｍｏｌ％である［１］または［２］に記載の樹脂組成物。
［４］前記単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体または前記重合体（Ｂ）中に含まれる単位（ｂ）が組成物を構成する単位の総数に対して５〜６０質量％である［１］〜［３］のいずれか一つに記載の樹脂組成物。
［５］前記一般式（６）で表される基を有する単位（ｃ）が、組成物を構成する単位の総数に対して３０〜９０質量％含まれる［２］〜［４］のいずれか一つに記載の樹脂組成物。
［６］さらに、加水分解によりシラノール基を生成する官能基、エポキシ基、（メタ）アクリル基またはグリシジル基からなる架橋性基を有する単位（ｄ）が含まれる［２］〜［５］のいいずれか一つに記載の樹脂組成物。
［７］前記単位（ａ）が０．００２〜３質量％、前期単位（ｂ）が１０〜４５質量％、前記単位（ｃ）が５０〜８０質量％、および前記単位（ｄ）が０〜２．５質量％含まれる［６］に記載の樹脂組成物。
［８］［１］〜［７］のいずれか一つに記載の樹脂組成物によって、少なくとも表面の一部が被覆された基材。
［９］前記基材が細胞培養用である、［８］に記載の基材。
［１０］［８］に記載の基材の表面上のマレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基に、標的細胞の細胞表面と特異的に結合する部位を有するリガンドを結合させる工程と、前記リガンドを結合させた基材に、標的細胞を接触させて、前記リガンドに前記標的細胞を結合させる工程と、前記リガンドに結合した前記標的細胞を培養する工程と、を有する、細胞培養方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る樹脂組成物で表面を被覆した基材は、標的物質以外の非特異的な吸着を抑えつつ、標的物質を、該物質と特異的に結合しかつ単位（ａ）中の官能基と共有結合可能な官能基を有するリガンドを介して、該基板表面に選択的に捕捉することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】試験例３における例１〜３で得られた２４ウェルマイクロプレートでのＲＧＤペプチド（システイン含有）の残存する割合と反応時間の関係を示すグラフである。
【図２】試験例４におけるＴＩＧ−３細胞を用いた細胞接着アッセイ後のプレートの様子を撮影した画像である。
【図３】試験例４における各実験条件での接着細胞数を定量化した結果を示すグラフである。
【図４】試験例４における高濃度のＲＧＤペプチド（システイン含有）を固定化させたウェルと、未処理のウェルにおけるＴＩＧ−３細胞の形体を比較した画像である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下の用語の定義及び表現法は、本明細書および特許請求の範囲において適用される。
「一般式（７）で表されるモノマー」は、「モノマー（７）」とも記す。他の一般式で表されるモノマーも、これに準じて同様に記す。
「一般式（１）で表される基」は、「基（１）」とも記す。他の一般式（１）で表される基も、これに準じて同様に記す。
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味し、好ましくは、塩素原子またはフッ素原子である。
「単位」とは、重合体中に存在して重合体を構成する、単量体に由来する部分（重合単位）を意味する。炭素−炭素不飽和二重結合を有する単量体の付加重合により生じる、該単量体に由来する単位は、該不飽和二重結合が開裂して生じた２価の単位である。また、ある単位の構造を重合体形成後に化学的に変換したものも単位という。なお、以下、場合により、個々の単量体に由来する単位をその単量体名に「単位」を付した名称で呼ぶ。
「（メタ）アクリレート」とは、アクリレートおよびメタクリレートの総称である。
【００２０】
「生体親和性基」とは、蛋白質が重合体に吸着することまたは細胞が重合体に接着して動かなくなることを抑制する性質を有する基を意味する。
「生体適合性」とは、蛋白質等の生体試料が吸着しない、または細胞が接着しない性質を意味する。
「蛋白質」とは、オリゴペプチド、ポリペプチドおよび蛋白質、またはこれらを断片化した状態のものを含む。天然物由来の蛋白質であってもよいし、人工的に化学合成して得られたものであってもよく、限定はされず、中でも、天然物由来の蛋白質は、細胞毒性等の悪影響がない場合が多いため、好ましい。
【００２１】
「細胞」とは、生体を構成する最も基本的な単位であり、細胞膜の内部に細胞質と各種の細胞小器官をもつものを意味する。ＤＮＡを内包する核は、細胞内部に含まれても含まれなくてもよい。
動物由来の細胞には、生殖細胞（精子、卵子等）、生体を構成する体細胞、幹細胞、前駆細胞、生体から分離された癌細胞、生体から分離され不死化能を獲得して体外で安定して維持される細胞（細胞株）、生体から分離され人為的に遺伝子改変された細胞、生体から分離され人為的に核が交換された細胞等が含まれる。
【００２２】
生体を構成する体細胞には、線維芽細胞、骨髄細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、好中球、赤血球、血小板、マクロファージ、単球、骨細胞、骨髄細胞、周皮細胞、樹枝状細胞、ケラチノサイト、脂肪細胞、間葉細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞、血管内皮細胞、肝実質細胞、軟骨細胞、卵丘細胞、神経系細胞、グリア細胞、ニューロン、オリゴデンドロサイト、マイクログリア、星状膠細胞、心臓細胞、食道細胞、筋肉細胞（たとえば、平滑筋細胞、骨格筋細胞）、膵臓ベータ細胞、メラニン細胞、造血前駆細胞、単核細胞等が含まれる。
【００２３】
「体細胞」には、皮膚、腎臓、脾臓、副腎、肝臓、肺、卵巣、膵臓、子宮、胃、結腸、小腸、大腸、膀胱、前立腺、精巣、胸腺、筋肉、結合組織、骨、軟骨、血管組織、血液、心臓、眼、脳、神経組織等の任意の組織から採取される細胞等が含まれる。
幹細胞とは、自分自身を複製する能力と他の複数系統の細胞に分化する能力を兼ね備えた細胞であり、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、胚性腫瘍細胞、胚性生殖幹細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、筋幹細胞、生殖幹細胞、腸幹細胞、癌幹細胞、毛包幹細胞等が含まれる。
「前駆細胞」とは、前記幹細胞から特定の体細胞または生殖細胞に分化する途中の段階にある細胞である。
【００２４】
「癌細胞」とは、体細胞から派生して無限の増殖能を獲得した細胞である。
「細胞株」とは、生体外での人為的な操作により無限の増殖能を獲得した細胞であり、ＨＣＴ１１６、Ｈｕｈ７、ＨＥＫ２９３（ヒト胎児腎細胞）、ＨｅＬａ（ヒト子宮頸癌細胞株）、ＨｅｐＧ２（ヒト肝癌細胞株）、ＵＴ７／ＴＰＯ（ヒト白血病細胞株）、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞株）、ＭＤＣＫ、ＭＤＢＫ、ＢＨＫ、Ｃ−３３Ａ、ＨＴ−２９、ＡＥ−１、３Ｄ９、Ｎｓ０／１、Ｊｕｒｋａｔ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＰＣ１２、Ｓ２、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ、Ｖｅｒｏ等が含まれる。
「リガンド」とは、標的物質と特異的に結合可能な物質を意味する。リガンドとしては、たとえば、蛋白質、糖鎖、脂質複合体、低分子化合物等が挙げられる。
【００２５】
＜樹脂組成物＞
本発明は、マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を有する単位（ａ）と、上記した一般式（１）で表される基、一般式（２）で表される基および一般式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種の基を有する単位（ｂ）と、を有する重合体、または、前記単位（ａ）を有する重合体（Ａ）と、前記単位（ｂ）を有する重合体（Ｂ）と、を含む、樹脂組成物を提供する。
本発明の樹脂組成物（以下、特定樹脂組成物ともいう。）は、単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する共重合体を含む樹脂組成物であってもよく、重合体（Ａ）と重合体（Ｂ）とを含む樹脂組成物であってもよい。また、特定樹脂組成物は単位（ａ）または単位（ｂ）以外の単位（ｃ）及び単位（ｄ）を含んでいてもよい。
特定樹脂組成物において各単位の割合を調節しやすい点から、特定樹脂組成物は重合体（Ａ）と重合体（Ｂ）とを含む樹脂組成物であることが好ましい。重合体（Ａ）は単位（ａ）のみからなっていてもよく、他の単位（ｃ）や単位（ｄ）を有していてもよい。特定樹脂組成物の耐水溶性が向上しやすい点から重合体（Ａ）は単位（ａ）および単位（ｃ）を有することが好ましい。また重合体（Ｂ）は単位（ｂ）のみからなっていてもよく、他の単位（ｃ）や単位（ｄ）を有していてもよい。特定樹脂組成物の耐水溶性が向上しやすい点から重合体（Ｂ）は単位（ｂ）および単位（ｃ）を有することが好ましい。すなわち特定樹脂組成物は、単位（ａ）と単位（ｃ）とを有する重合体（Ａ）及び単位（ｂ）と単位（ｃ）とを有する重合体（Ｂ）の混合物であることが好ましい。
【００２６】
上記一般式（１）〜（３）中の各記号の定義は、それぞれ、前記したとおりである。なかでも、ｎは１〜５が好ましい。Ｒ１１はメチル基またはエチル基が好ましい。Ｒ２１およびＲ２２はエチレン基が好ましい。Ｒ２３〜Ｒ２５はメチル基が好ましい。Ｒ３１およびＲ３４はエチレン基が好ましい。Ｒ３２およびＲ３３はメチル基が好ましい。Ｘ−は−ＳＯ３−が好ましい。
【００２７】
本発明において固定化基とは、マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を意味する。
単位（ａ）中の固定化基は、生物由来の多くの分子が有している、他の分子との結合性を担う基、具体的には、アミノ基、チオール基、カルボキシ基、およびアルデヒド基と共有結合可能な基である。特定樹脂組成物は、構成（ａ）中の固定化基により、多種多様な物質と非可逆的に結合できる。
また、特定樹脂組成物は、生体親和性基を有する単位（ｂ）を含むため、該固定化基と特異的に結合する物質以外の物質、特に蛋白質等の生物由来の分子の非特異的な吸着が抑制されている。
【００２８】
生物から採取された生体試料のように複数の細胞や様々な生体分子を含む試料から、目的の細胞（標的細胞）のみを選択的に培養するためには、細胞培養容器に、標的細胞のみを選択的に捕捉し、かつその他の生体分子の該細胞培養容器への非特異的吸着を抑制する必要がある。特定樹脂組成物は、標的物質と特異的に結合するリガンドと固定化基で非可逆的に結合できる上に、生体親和性基により蛋白質の非特異的な吸着を抑制できる。このため、特定樹脂組成物で表面を被覆した後、表面上の固定化基に、選択的に捕捉したい目的の標的物質に対するリガンドを共有結合させた基材に生体試料を接触させることにより、生体試料から標的物質を、蛋白質等の他の生体分子から分離して選択的に捕捉できる。
特定樹脂組成物で表面を被覆した細胞培養用基材は、生体試料に由来する蛋白質等の他の生体分子から分離した状態で特定の標的細胞のみを培養するための細胞培養容器として好適である。
【００２９】
特定樹脂組成物は、エチレン系不飽和重合性モノマー由来の単位を基本構造として有することが好ましい。エチレン系不飽和重合性モノマーとしては、たとえば、（メタ）アクリル系樹脂、オレフィン系樹脂（たとえば、ポリエチレン、ポリプロピレン等）、スチレン系樹脂（たとえば、ポリスチレン、アクリロニトリル−スチレン共重合体、メタクリル酸メチル−スチレン共重合体等）、塩素含有樹脂（たとえば、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン等）、フッ素含有樹脂等の樹脂を構成可能なモノマー単位が挙げられる。
特定樹脂組成物において、単位（ａ）を有する重合体は、前記エチレン系不飽和重合性モノマー由来の単位から選択される１種を基本構造とする重合体であってもよく、複数種のモノマー単位を組み合わせた重合体であってもよい。その他単位（ｂ）、単位（ｃ）または単位（ｄ）を有する重合体においても、同様である。
【００３０】
≪単位（ａ）≫
特定樹脂組成物において、単位（ａ）は固定化基として、マレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種を有する。単位（ａ）中の固定化基は、生物由来の多くの分子が有している、他の分子との結合性を担う基、具体的には、アミノ基、チオール基、カルボキシ基、およびアルデヒド基と共有結合可能な基である。該樹脂組成物は、構成（ａ）中の固定化基により、多種多様な標的物質に対するリガンドと非可逆的に結合できる。
【００３１】
特定樹脂組成物中の単位（ａ）中の固定化基は、１種類のみであってもよく、２種類以上を適宜組み合わせて有していてもよい。たとえば、標的物質が２種類以上である場合、２種類のリガンドを結合させられるように、特定樹脂組成物は、２種類の単位（ａ）（たとえば、マレイミド基を有する単位（ａ）とスクシンイミド基を有する単位（ａ））を備えていてもよい。
【００３２】
固定化基がマレイミド基である場合、システイン残基を有するリガンドを固定化することができる。固定化基がスクシンイミド基である場合、アミノ基を有するリガンドを固定化することができる。固定化基がチオール基である場合、カルボキシ基を有するリガンドを固定化することができる。固定化基がヒドラジノ基である場合、アルデヒド基を有するリガンドを固定化することができる。中でも、固定化できるリガンドについて汎用性が高いことから、固定化基はスクシンイミド基またはチオール基が好ましい。
【００３３】
前記固定化基を有する単位（ａ）の由来元となるモノマーとしては、たとえば、下記一般式（７）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００３４】
【化４】
2017110923.tif 000006
【００３５】
前記モノマー（７）中、Ｒ７１は水素原子、ハロゲン原子またはメチル基を示す。Ｙ７１は単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−、炭素数１〜１０のアルキレン基または炭素数１〜１０のアルキレングリコール基を示し、ｐは１〜１０の整数を示す。１分子のモノマー（７）中に複数あるＹ７１は（ｐが２以上のとき）同じあってもよく異なっていてもよい。Ｗはマレイミド基、スクシンイミド基、チオール基またはヒドラジノ基を示す。
前記モノマー（７）において、Ｒ７１は水素原子またはメチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００３６】
Ｙ７１における炭素数１〜１０のアルキレン基としては、メチレン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、ｎ−ブチレン基、ｎ−ペンチレン基、ｎ−へキシレン基、ｎ−ヘプチレン基、ｎ−オクチレン基、ｎ−ノニレン基、ｎ−デシレン基等の直鎖状のアルキレン基、２−メチルプロピレン基、２−メチルへキシレン基、テトラメチルエチレン基等の分岐鎖状のアルキレン基等が挙げられる。また、アルキレン基は、１または数個の水素原子がハロゲン原子に置換されていてもよい。中でも、炭素数１〜１０の直鎖状のアルキレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、またはヘキシレン基がより好ましい。
【００３７】
上記アルキレングリコール残基とは、アルキレングリコール（ＨＯ−Ｒ−ＯＨ、ここでＲはアルキレン基）の片側末端または両末端の水酸基が他の化合物と縮合反応した後に残る、アルキレンオキシ基（−Ｒ−Ｏ−、ここでＲはアルキレン基）をいう。たとえば、メチレングリコール（ＨＯ−ＣＨ２−ＯＨ）の場合のアルキレングリコール残基はメチレンオキシ基（−ＣＨ２−Ｏ−）であり、エチレングリコール（ＨＯ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ）の場合のアルキレングリコール残基はエチレンオキシ基（−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−）である。また、アルキレングリコール残基は、１または数個の水素原子がハロゲン原子に置換されていてもよい。
【００３８】
Ｙ７１における炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基としては、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、ｎ−プロピレンオキシ基、ｎ−ブチレンオキシ基、ｎ−ペンチレンオキシ基、ｎ−へキシレンオキシ基、ｎ−ヘプチレンオキシ基、ｎ−オクチレンオキシ基、ｎ−ノニレンオキシ基、ｎ−デシレンオキシ基等の直鎖状のアルキレンオキシ基、２−メチルプロピレンオキシ基、２−メチルへキシレンオキシ基、テトラメチルエチレンオキシ基等の分岐鎖状のアルキレンオキシ基等が挙げられる。中でも、炭素数１〜１０の直鎖状のアルキレンオキシ基が好ましく、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、プロピレンオキシ基、ブチレンオキシ基、ペンチレンオキシ基、またはへキシレンオキシ基がより好ましく、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、プロピレンオキシ基、またはブチレンオキシ基がさらに好ましい。
【００３９】
アルキレングリコール残基は、それ自体が蛋白質の非特異吸着を抑制する性質を有する。そのため、前記モノマー（７）において、リンカーＹ７１がアルキレングリコール残基である場合、モノマー（７）から誘導される単位（ａ）は、リガンドを固定化する性質と、細胞由来の蛋白質等の非特異吸着を抑制する性質とを併せ持つ。
【００４０】
ｐは、１〜１０の整数であってよい。Ｙ７１がアルキレングリコール残基の場合、ｐは、１〜８が好ましく、１〜７がより好ましく、１〜６がさらに好ましい。
特定樹脂組成物において、重合体に含まれる単位（ａ）が、ｐの数が異なる複数種の単位によって構成されている場合には、ｐは、該樹脂組成物全体における平均値として特定される。ｐが２以上の場合は、Ｙ７１は同一でも、異なっていてもよい。
【００４１】
前記モノマー（７）において、リンカーＹ７１がアルキレン基である場合、ｐ個分のアルキレン基（（Ｙ７１）ｐ）の炭素数の合計が１〜１００が好ましく、１〜２０がより好ましい。ｐが２以上の場合は、Ｙ７１は同一でも、異なっていてもよい。
【００４２】
固定化基Ｗとしては、上述した通り、固定化できるリガンドについて汎用性が高いことから、スクシンイミド基またはチオール基が好ましい。
【００４３】
前記モノマー（７）として、より具体的には、下記一般式（８）で表されるモノマー、下記一般式（９）で表されるモノマー、下記一般式（１０）で表されるモノマー、下記一般式（１１）で表されるモノマーと呼ぶ。）、下記一般式（１７）で表されるモノマーまたは、下記一般式（１８）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００４４】
【化５】
2017110923.tif 000007
【００４５】
各モノマー中、Ｙ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１は単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−、炭素数１〜１０のアルキレン基または炭素数１〜１０のアルキレングリコール基を示す。ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖは１〜１０の整数を示す。１分子のモノマー中に複数あるＹ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１またはＹ１８１は（ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕまたはｖが２以上のとき）、同じあってもよく異なっていてもよい。
【００４６】
Ｙ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１における炭素数１〜１０のアルキレン基および炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基としては、上述のＹ７１と同様のものが挙げられる。
【００４７】
各モノマーにおいて、リンカーＹ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１は、リンカーの可動性が良い点から、単結合、メチレン基、エチレン基またはエチレンオキシ基が好ましく、単結合、メチレン基またはエチレンオキシ基がさらに好ましい。
【００４８】
繰り返し数ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖは、それぞれ、１〜１０の整数であってよい。
Ｙ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１がアルキレングリコール残基の場合、前記Ｙ７１のｐと同様に、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖは、１〜８の整数が好ましく、１〜７がより好ましく、１〜６がさらに好ましい。樹脂組成物において、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖの数が異なる複数種の単位によって構成されている場合には、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖは、それぞれ当該樹脂組成物全体における平均値として特定される。ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖが２以上の場合は、Ｙ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１はそれぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
【００４９】
リンカーＹ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１がアルキレン基である場合、リンカーＹ７１と同様に、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕまたはｖ個分のアルキレン基の炭素数の合計が１〜１００が好ましく、１〜２０がより好ましい。ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｖが２以上の場合は、Ｙ８１、Ｙ９１、Ｙ１０１、Ｙ１１１、Ｙ１７１およびＹ１８１は同一であっても、異なっていてもよい。
【００５０】
前記モノマー（８）として、より具体的には、下式（８−１）で表されるモノマーまたは下式（８−２）で表されるモノマー等が挙げられる。
前記モノマー（９）として、より具体的には、下式（９−１）で表されるモノマー、下式（９−２）で表されるモノマーまたは下式（９−３）で表されるモノマー等が挙げられる。
前記モノマー（１０）として、より具体的には、下式（１０−１）で表されるモノマーまたは下式（１０−２）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００５１】
前記モノマー（１１）として、より具体的には、下式（１１−１）で表されるモノマーまたは下式（１１−２）で表されるモノマー等が挙げられる。
前記モノマー（１７）として、より具体的には、下式（１７−１）で表されるモノマーまたは下式（１７−２）で表されるモノマー等が挙げられる。
前記モノマー（１８）として、より具体的には、下式（１８−１）で表されるモノマー、下式（１８−２）で表されるモノマーまたは下式（１８−３）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００５２】
下記モノマー（８−１）、（８−２）、（９−２）、（９−３）、（１０−１）〜（１１−２）、（１７−１）、（１７−２）、（１８−２）、（１８−３）中、ａは１〜１０の整数を示し、ｂは１〜６の整数を示す。
【００５３】
【化６】
2017110923.tif 000008
【００５４】
固定化基を有するモノマーを重合して組成物を得ることが困難である場合、固定化基が予め保護基で保護されたモノマーを用いて重合を行い、重合体を得た後に保護基を外してもよい。
固定化基がマレイミド基またはスクシンイミド基である場合、保護基としては、たとえばフラン等が挙げられる。保護基がフランである場合、加熱により容易に脱離させることができる。
固定化基がチオールである場合、保護基としては、たとえばトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基等が挙げられる。これらの基が保護基である場合、水溶液中において酸または塩基により容易に脱離させることができる。
【００５５】
固定化基がヒドラジノ基である場合、保護基としては、アミノ基を保護できるものであれば、特別な制限はなく、たとえば、ｔ―ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）やベンジロキシカルボニル基（Ｚ基、Ｃｂｚ基）、９−フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）等が挙げられる。保護基がＢｏｃ基である場合、水溶液中においてトリフルオロ酢酸等の強酸により容易に脱離させることができる。また、保護基がＺ基である場合、活性炭に担持させたパラジウム等を触媒として水素ガスを吹き込むことにより容易に脱離させることができる。また、保護基がＦｍｏｃ基である場合、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン等の二級アミンにより容易に脱離させることができる。
【００５６】
固定化基を有する単位（ａ）の割合は、特に限定されず、たとえば、組成物を構成する単位の総数に対して、０．００１〜５ｍｏｌ％が好ましく、０．００５〜０．５ｍｏｌ％がより好ましく、０．０１〜０．１ｍｏｌ％がさらに好ましい。ただし「組成物を構成する単位の総数」とは、特定樹脂組成物に含まれる重合体（単位（ａ）と単位（ｂ）とを有する重合体、重合体（Ａ）、及び重合体（Ｂ））が有する全ての単位の総数を意味する。
固定化基を有する単位（ａ）の割合は、特に限定されず、たとえば、組成物を構成する単位の総数に対して、０．０００４〜３質量が好ましく０．００２〜０．６質量％がより好ましく、０．００４〜０．３質量％がさらに好ましい。
【００５７】
≪単位（ｂ）≫
特定樹脂組成物において、単位（ｂ）は生体親和性基を有する。特定樹脂組成物は生体親和性を有する基を有することにより、蛋白質等の非特異的な吸着を抑制することができる。
生体親和性基は、蛋白質の非特異的な吸着防止効果が高い被覆層を形成しやすい点から、上記した一般式（１）で表される基、一般式（２）で表される基および一般式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種が好ましい。生体親和性基としては、蛋白質の非特異的な吸着防止効果が得られやすい点から、基（１）のみ、または、基（２）および基（３）のいずれか一方若しくは両方が好ましく、基（１）、基（２）または基（３）のいずれか１つが特に好ましい。生体親和性基としては、入手容易性の点から基（１）が特に好ましい。
【００５８】
上記一般式（１）〜（３）中の各記号のそれぞれの定義、およびそれぞれの好ましい態様は、前記したものと同じである。
【００５９】
［基（１）］
基（１）は、特定樹脂組成物からなる被覆層の表面に結合しようとする細胞由来の蛋白質等の非特異的吸着を抑制できる。基（１）は、単位（ｂ）の主鎖に含まれていてもよく、側鎖に含まれていてもよい。
基（１）は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。細胞由来の蛋白質等の非特異的な吸着を抑制する効果がより高い点から、基（１）は直鎖状であることが好ましい。基（１）におけるＲ１１は、耐水性に優れる点から、メチル基またはエチル基が好ましい。
【００６０】
基（１）におけるｎは、基（１）が単位（ｂ）の側鎖に含まれる場合、耐水性に優れる点から、１〜１０が好ましく、１〜５が特に好ましい。
基（１）におけるｎは、基（１）が単位（ｂ）の主鎖に含まれる場合、耐水性に優れる点から、２〜１０が好ましく、４〜１０が特に好ましい。
【００６１】
［基（２）］
基（２）は、血液中等に含まれるリン脂質に対して強い親和性を持つ一方、血漿蛋白質に対する相互作用力は弱い。そのため、単位（ｂ）が基（２）を有することで、たとえば特定樹脂組成物からなる被覆層上にリン脂質が優先して吸着し、該リン脂質が自己組織化して吸着層が形成されると考えられる。その結果、表面が血管内皮表面に類似した構造となるために、フィブリノーゲン等の蛋白質の非特異的な吸着が抑制される。
基（２）は、特定樹脂組成物の側鎖に含まれることが好ましい。
【００６２】
Ｒ２１は、炭素数１〜５のアルキレン基であり、たとえば、メチレン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、ｎ−ブチレン基、ｎ−ペンチレン基等の直鎖状のアルキレン基、２−メチルプロピレン基、トリメチルエチレン基等の分岐鎖状のアルキレン基が挙げられる。中でも、原料の入手容易性の点から、炭素数１〜５の直鎖状のアルキレン基が好ましく、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、またはペンチレン基がより好ましく、エチレン基がさらに好ましい。
【００６３】
Ｒ２２は、炭素数１〜５のアルキレン基であり、たとえば、前記Ｒ２１と同様のものが挙げられる。中でも、蛋白質の非特異的な吸着を抑制できる点から、炭素数１〜５の直鎖状のアルキレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、またはブチレン基がより好ましく、エチレン基がさらに好ましい。
【００６４】
Ｒ２３〜Ｒ２５は、それぞれ独立に炭素数１〜５のアルキル基であり、たとえば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基等の直鎖状のアルキル基、２−メチルプロピル基、トリメチルエチル基等の分岐鎖状のアルキル基が挙げられる。中でも、原料の入手容易性の点から、炭素数１〜５の直鎖状のアルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、プロピル基、またはブチル基がより好ましく、メチル基がさらに好ましい。
単位（ｂ）が基（２）を有する場合、基（２）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００６５】
［基（３）］
単位（ｂ）が基（３）を有することで、単位（ｂ）が基（２）を有する場合と同様の理由から細胞由来の蛋白質等の非特異的な吸着が抑制される。
基（３）は、単位（ｂ）の側鎖に含まれることが好ましい。
Ｒ３１は、炭素数１〜２０のアルキレン基であり、たとえば、メチレン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、ｎ−ブチレン基、ｎ−ペンチレン基、ｎ−へキシレン基、ｎ−ヘプチレン基、ｎ−オクチレン基、ｎ−ノニレン基、ｎ−デシレン基、ｎ−ドデシレン基等の直鎖状のアルキレン基、２−メチルプロピレン基、２−メチルへキシレン基、テトラメチルエチレン基等の分岐鎖状のアルキレン基等が挙げられる。特定樹脂組成物が柔軟性に優れる点から、炭素数１〜２０の直鎖状のアルキレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、へキシレン基、ヘプチレン基、オクチレン基、ノニレン基、デシレン基、ドデシレン基、トリデシレン基、テトラデシレン基、またはペンタデシレン基がより好ましく、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、へキシレン基、ヘプチレン基、オクチレン基、ノニレン基、またはデシレン基がさらに好ましく、エチレン基が特に好ましい。
【００６６】
Ｒ３４は、炭素数１〜５のアルキレン基であり、たとえば、前記Ｒ２１と同様のものが挙げられる。中でも、蛋白質の非特異的な吸着を抑制できる点から、炭素数１〜５の直鎖状のアルキレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基、プロピレン基またはブチレン基がより好ましく、エチレン基がさらに好ましい。
【００６７】
Ｒ３２およびＲ３３は、それぞれ独立に炭素数１〜５のアルキル基であり、たとえば、前記Ｒ２３〜Ｒ２５と同様のものが挙げられる。中でも、蛋白質の非特異的な吸着を抑制できる点から、炭素数１〜５の直鎖状のアルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、プロピル基、またはブチル基がより好ましく、メチル基がさらに好ましい。
【００６８】
単位（ｂ）が基（３）を有する場合、基（３）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
また、単位（ｂ）が基（３）を有する場合、蛋白質の非特異的な吸着を抑制できる点から、単位（ｂ）は、Ｘ−が基（４）である基（３）を有するか、またはＸ−が基（５）である基（３）を有するかのいずれかであることが好ましい。
【００６９】
前記生体親和性基を有する単位（ｂ）の由来元となるモノマーとしては、たとえば、下記一般式（１２）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００７０】
【化７】
2017110923.tif 000009
【００７１】
前記モノマー（１２）中、Ｒ１２１は水素原子、ハロゲン原子またはメチル基を示す。Ｙ１２１は単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−、炭素数１〜１０のアルキレン基または炭素数１〜１０のアルキレングリコール基を示す。ｃは１〜１０の整数を示す。１分子のモノマー（１２）中に複数あるＹ１２１は（ｃが２以上のとき）同じあってもよく異なっていてもよい。Ｚは前記基（１）、前記基（２）および前記基（３）からなる群から選ばれる少なくとも１種の基を示す。
【００７２】
前記モノマー（１２）において、Ｒ１２１は水素原子またはメチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００７３】
Ｙ１２１における炭素数１〜１０のアルキレン基としては、たとえば、前記Ｙ７１と同様のもの等が挙げられる。また、アルキレン基は、水素原子がハロゲン原子に置換されていてもよい。中でも、炭素数１〜１０の直鎖状のアルキレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、またはヘキシレン基がより好ましい。
【００７４】
Ｙ１２１における炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基としては、たとえば、前記Ｙ７１と同様のもの等が挙げられる。中でも、炭素数１〜１０の直鎖状のアルキレンオキシ基が好ましく、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、プロピレンオキシ基、ブチレンオキシ基、ペンチレンオキシ基、またはへキシレンオキシ基がより好ましく、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、プロピレンオキシ基、またはブチレンオキシ基がさらに好ましく、エチレンオキシ基が特に好ましい。
【００７５】
Ｙ１２１の繰り返し数ｃは、１〜１０の整数であってよい。
Ｙ１２１がアルキレングリコール残基の場合、１〜８の整数が好ましく、１〜７がより好ましく、１〜６がさらに好ましい。樹脂組成物において、ｃの数が異なる複数種の単位によって構成されている場合には、ｃは、該樹脂組成物全体における平均値として特定される。ｃが２以上の場合は、Ｙ１２１は同一であっても、異なっていてもよい。
【００７６】
前記モノマー（１２）において、リンカーＹ１２１がアルキレン基である場合、ｃ個分のアルキレン基（（Ｙ１２１）ｃ）の炭素数の合計が１〜１００が好ましく、１〜２０がより好ましい。ｃが２以上の場合は、Ｙ１２１は同一であっても、異なっていてもよい。
【００７７】
生体親和性基Ｚとしては、上述した通り、蛋白質の非特異的な吸着を抑制する効果が得られやすい点から、基（１）のみ、または、基（２）および基（３）のいずれか一方若しくは両方が好ましく、基（１）、基（２）または基（３）のいずれか１つが特に好ましい。
【００７８】
前記モノマー（１２）として、より具体的には、下記一般式（１３）で表されるモノマー、下記一般式（１４）で表されるモノマー）または下記一般式（１５）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００７９】
【化８】
2017110923.tif 000010
【００８０】
前記モノマー中、Ｙ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１は前記Ｙ１０１と同様のものを示す。ｄ、ｅおよびｆは１〜１０の整数を示す。１分子のモノマー中に複数あるＹ１３１、Ｙ１４１またはＹ１５１は（ｄ、ｅまたはｆが２以上のとき）、同じあってもよく異なっていてもよい。ｍは１〜１０の整数を示す。Ｒ１４１、Ｒ１４２およびＲ１５２は炭素数１〜５のアルキレン基を示す。Ｒ１５１は炭素数１〜２０のアルキレン基を示す。
【００８１】
Ｙ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１における炭素数１〜１０のアルキレン基および炭素数１〜１０のアルキレングリコール残基としては、たとえば、前記Ｙ７１と同様のものが挙げられる。
【００８２】
各モノマーにおいて、リンカーＹ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１は、耐水性に優れ、モノマーを合成しやすい点から、単結合、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−、メチレン基、エチレン基、またはエチレンオキシ基が好ましく、単結合、メチレン基またはエチレンオキシ基がさらに好ましい。
ｄ、ｅおよびｆは、それぞれ１〜１０の整数であってよい。
【００８３】
前記Ｙ１２１のｃと同様に、Ｙ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１がアルキレングリコール残基の場合、ｄ、ｅおよびｆは、１〜８が好ましく、１〜７がより好ましく、１〜６がさらに好ましい。特定樹脂組成物において、ｄ、ｅおよびｆの数が異なる複数種の単位によって構成されている場合には、ｄ、ｅおよびｆは、それぞれ該樹脂組成物全体における平均値として特定される。ｄ、ｅおよびｆが２以上の場合は、Ｙ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１はそれぞれ同一でも、異なっていてもよい。
【００８４】
リンカーＹ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１がアルキレン基である場合、リンカーＹ７１と同様に、ｄ、ｅおよびｆ個分のアルキレン基の炭素数の合計が１〜１００好ましく、１〜２０がより好ましい。ｄ、ｅおよびｆが２以上の場合は、Ｙ１３１、Ｙ１４１およびＹ１５１は同一であっても、異なっていてもよい。
【００８５】
前記モノマー（１３）、前記モノマー（１４）および前記モノマー（１５）として、より具体的には、下記式（１３−１）で表されるモノマー、下記式（１４−１）で表されるモノマーおよび下記式（１５−１）で表されるモノマー等が挙げられる。モノマー（１３−１）中、ｋは１〜１０の整数を示す。
【００８６】
【化９】
2017110923.tif 000011
【００８７】
生体親和性基を有する単位（ｂ）の割合は、特に限定されず、たとえば、組成物を構成する単位の総数に対して、５〜６０質量％が好ましく１０〜５０質量％がより好ましく、１０〜４５質量％がさらに好ましい。
【００８８】
≪単位（ｃ）≫
また、特定樹脂組成物において、疎水性基を有する単位（ｃ）を備えていてもよい。特定樹脂組成物は、単位（ｃ）を有することにより、親水性の物質との非特異的な結合が抑制される。さらに、耐水性が向上する。
【００８９】
［基６］
疎水性基としては、たとえば、下記一般式（６）で表される基等が挙げられる。
【００９０】
【化１０】
2017110923.tif 000012
【００９１】
基（６）中、アスタリスクは結合部位を示す。Ｙ６１は単結合または２価の有機基を示す。Ｒ６１は炭素数１〜２０のアルキル基を示す。
【００９２】
基（６）は、単位（ｃ）の主鎖に含まれていてもよく、側鎖に含まれていてもよい。基（６）は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。
基（６）におけるＹ６１は、合成の容易さの点から、以下の基が挙げられる。
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＰＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｎ（Ｏ）＝Ｎ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＳ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−、直鎖状または分岐鎖状のアルキレン基、アルケニレン基、アルキレンオキシ基、２価の４〜７員環の置換基、２価の６員環の芳香族炭化水素基、２価の４〜６員環の脂環式炭化水素基、２価の５または６員環の複素環基、これらの縮合環、２価の連結基の組み合わせから構成される基等。
【００９３】
２価の有機基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、水酸基、ハロゲン原子、シアノ基、アルコキシ基（メトキシ基、エトキシ基、ブトシキ基、オクチルオキシ基、メトキシエトキシ基等）、アリーロキシ基（フェノキシ基等）、アルキルチオ基（メチルチオ基、エチルチオ基等）、アシル基（アセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基等）、スルホニル基（メタンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基等）、アシルオキシ基（アセトキシ基、ベンゾイルオキシ基等）、スルホニルオキシ基（メタンスルホニルオキシ基、トルエンスルホニルオキシ基等）、ホスホニル基（ジエチルホスホニル基等）、アミド基（アセチルアミノ基、ベンゾイルアミノ基等）、カルバモイル基（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル基、Ｎ−フェニルカルバモイル基等）、アルキル基（メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、２−カルボキシエチル基、ベンジル基等）、アリール基（フェニル基、トルイル基等）、複素環基（ピリジル基、イミダゾリル基、フラニル基等）、アルケニル基（ビニル基、１−プロペニル基等）、アルコシアシルオキシ基（アセチルオキシ基、ベンゾイルオキシ基等）、アルコシキカルボニル基（メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基等）、重合性基（ビニル基、アクリロイル基、メタクロイル基、スリリル基、桂皮酸残基等）が挙げられる。
【００９４】
基（６）におけるＹ６１としては、単結合、−Ｏ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）γ−（ただし、γは１〜１０の整数である。）、−ＣＯＯ−、６員環芳香族炭化水素基、直鎖状または分岐状のアルキレン基、水素原子の一部が水酸基に置換された直鎖状または分岐状のアルキレン基、これら２価の連結基の組み合わせから構成される基が好ましく、単結合、炭素数１〜５のアルキレン基、−ＣＯＯ−、−ＣＯＯＡ１−が特に好ましい。
Ａ１としては、−（ＣＨ２）δ−、−（ＣＨ２）δ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）ε−、−（ＣＨ２）δ−ＮＡ２−ＳＯ２−が挙げられ、−（ＣＨ２）δ−が特に好ましい。ただし、δは１〜５の整数であり、εは１〜５の整数であり、Ａ２は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基である。
【００９５】
基（６）におけるＲ６１としては、合成しやすい点から、炭素数１〜１５のアルキル基で好ましく、炭素数１〜１２のアルキル基がより好ましく、炭素数２〜１０のアルキル基がさらに好ましい。
【００９６】
前記疎水性基を有する単位（ｃ）の由来元となるモノマーとしては、たとえば、下記一般式（１６）で表されるモノマー等が挙げられる。
【００９７】
【化１１】
2017110923.tif 000013
【００９８】
モノマー（１６）中、Ｙ１６１は前記Ｙ６１と同様のものを示し、Ｒ１６１は水素原子、ハロゲン原子またはメチル基示し、Ｒ１６２は前記Ｒ６１と同様のものを示す。
Ｙ１６１は単結合、−Ｏ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）γ−（ただし、γは１〜１０の整数である。）、−ＣＯＯ−、６員環芳香族炭化水素基、直鎖状または分岐状のアルキレン基、水素原子の一部が水酸基に置換された直鎖状または分岐状のアルキレン基、これら２価の連結基の組み合わせから構成される基が好ましく、単結合、炭素数１〜５のアルキレン基、−ＣＯＯ−、−ＣＯＯＡ１−が特に好ましい。
Ａ１としては、−（ＣＨ２）δ−、−（ＣＨ２）δ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）ε−、−（ＣＨ２）δ−ＮＡ２−ＳＯ２−が挙げられ、−（ＣＨ２）δ−が特に好ましい。ただし、δは１〜５の整数であり、εは１〜５の整数であり、Ａ２は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基である。
Ｒ１６１は、ハロゲン原子またはメチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００９９】
前記モノマー（１６）として、より具体的には、以下のモノマーが挙げられる。
ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ブチル（メタ）アクリレート、ｓｅｃ−ブチル（メタ）アクリレート、t−ブチル（メタ）アクリレート、ｎ−ネオペンチル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ネオペンチル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ネオペンチル（メタ）アクリレート、ネオペンチル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、ｎ−ヘキシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ヘキシル（メタ）アクリレート、ヘプチル（メタ）アクリレート、ｎ−オクチル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−オクチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ｎ−ノニル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ノニル（メタ）アクリレート、ｎ−デシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−デシル（メタ）アクリレート、ｎ−ドデシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ドデシル（メタ）アクリレート、ｎ−トリデシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−トリデシル（メタ）アクリレート、ｎ−テトラデシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−テトラデシル（メタ）アクリレート、ｎ−ペンタデシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ペンタデシル（メタ）アクリレート、ｎ−ヘキサデシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−ヘキサデシル（メタ）アクリレート、ｎ−オクタデシル（メタ）アクリレート、ｉｓｏ−オクタデシル（メタ）アクリレート、イソボニル（メタ）アクリレート、ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯ（ＣＨ２）ｅＣＦ２ＣＦ２ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯ（ＣＨ２）ｅＣＦ２ＣＦ（ＣＦ３）２、ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯＣＨ（ＣＦ３）２、ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯＣ（ＣＦ３）３等。
【０１００】
疎水性基を有する単位（ｃ）の割合は、特に限定されず、たとえば、組成物を構成する単位の総数に対して、０〜９０質量％が好ましく、３０〜８０質量％がより好ましく、５０〜８０質量％がさらに好ましい。
【０１０１】
≪単位（ｄ）≫
また、特定樹脂組成物は、架橋基を有する単位（ｄ）を有していてもよい。架橋基は、たとえば各単位の主鎖を架橋させることにより、組成物に不溶性を付与することができる。また、基材等の固相表面に架橋することにより、該樹脂組成物と基材表面をより強固に接着させることができる。
架橋基は、単位同士を架橋する基、または単位と固相表面とを架橋する基であれば特に限定されない。
このような架橋基は、架橋可能な官能基を有するモノマーを重合させた後、架橋可能な官能基を反応させて、各単位同士を架橋することによって生じさせることができる。
【０１０２】
架橋可能な官能基としては、モノマーの重合反応中には反応しない架橋性基であれば特に限定されない。たとえば、加水分解によりシラノール基を生成する官能基やエポキシ基、（メタ）アクリル基、グリシジル基等が挙げられる。
【０１０３】
単位（ｄ）の割合は、特に制限されず、たとえば、組成物を構成する単位の総数に対して、０〜１０質量％が好ましく、０〜５質量％がより好ましく、０〜２．５質量％がさらに好ましい。
本発明の樹脂組成物は、単位（ａ）を０．００２〜３質量％、単位（ｂ）を１０〜４５質量％、単位（ｃ）を５０〜８０質量％、および単位（ｄ）を０〜２．５質量％含むことが好ましい。
【０１０４】
≪製造方法≫
特定樹脂組成物は、たとえば、原料となるモノマーを有機溶媒に溶解し、重合させることにより、重合体を得る方法により製造してもよい。重合体の各モノマーの結合方式は、ランダム、ブロック、グラフト等いずれの形態であってもよい。
【０１０５】
有機溶媒としては、たとえば、２−ブタノン、エタノール、メタノール、ｔ−ブチルアルコール、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。
【０１０６】
特定樹脂組成物は、それぞれ単一のモノマーを有機溶媒に溶解し、重合して単独重合体を製造した後に、混合して製造してもよく、２種以上のモノマーを共重合させた共重合体を２種類以上製造した後に、得られた２種類以上の共重合体を混合して製造してもよく、全ての原料モノマーを共重合させた共重合体として製造してもよい。
すなわち、特定樹脂組成物は、単位（ａ）の由来元となるモノマーを重合させて得られた重合体（Ａ）と、単位（ｂ）の由来元となるモノマーを重合させて得られた重合体（Ｂ）とを混合して製造してもよく、また単位（ａ）の由来元となるモノマーと、単位（ｂ）の由来元となるモノマーとの共重合体を製造してもよい。
【０１０７】
また、特定樹脂組成物は、単位（ｂ）の由来元となるモノマーを重合させて得られた重合体（Ｂ）に固定化基を導入して、固定化基と生体親和性基とを有する共重合体を製造してもよい。さらに特定樹脂組成物が単位（ｃ）を有する場合、単位（ｂ）の由来元となるモノマーまたは疎水性基を有する単位（ｃ）の由来元となるモノマーを重合させて単位（ｂ）と単位（ｃ）を有する共重合体を製造した後に、該共重合体中の生体親和性基または疎水性基の一部に既知の化学反応を用いて固定化基を修飾することにより、固定化基を有する単位（ａ）をも有する共重合体を製造してもよい。
【０１０８】
それぞれの単位の割合の調節しやすい点から、重合体に固定化基を導入する方法よりも、各単位の原料モノマーを重合させて製造する方法により製造することが好ましい。なかでも、２成分以上の前記モノマーを共重合させることにより、共重合体を得る方法、または、２成分以上の前記モノマーを共重合させた共重合体を２種類以上製造した後に、得られた２種類以上の共重合体を混合する方法により製造することが好ましい。さらに特定樹脂組成物が単位（ｃ）を有する場合、特に単位（ａ）と単位（ｃ）とを有する共重合体、および、単位（ｂ）と単位（ｃ）とを有する共重合体を混合して樹脂組成物を得ることが好ましい。
特定樹脂組成物は、その他の樹脂組成物と同様に、基材表面を被覆して薄膜を形成したり、成形体を形成できる。
【０１０９】
＜基材＞
本発明は、実施形態として、特定樹脂組成物で少なくとも表面の一部が被覆された、基材を提供する。
【０１１０】
本発明の基材によれば、より多種多様なリガンドを基材表面上に固定化することができる。さらに、リガンドが固定化された基材を使用することで、リガンドと特異的に結合する標的物質を選択的に捕捉するために使用することができる。たとえば、リガンドを結合させた該基材は、標的物質を選択的に捕捉するためのアフィニティークロマトグラフィのカラム充填材としても利用できる。
【０１１１】
基材の形状としては、特別な限定はなく、たとえば、平板状、球状等が挙げられる。基材の材質としては、たとえば無機物質としてシリカ、アルミナ、ガラス、金属等が挙げられる。また、有機高分子物質として熱可塑性樹脂等が挙げられる。より具体的には、ポリエチレン、ポリプロピレン等の直鎖状ポリオレフィン樹脂：環状ポリオレフィン樹脂：含フッ素樹脂等が挙げられる。
【０１１２】
飽和環状ポリオレフィン樹脂としては、環状オレフィン構造を有する単独重合体または環状オレフィンとα−オレフィンとの共重合体に水素添加した飽和重合体が挙げられる。
【０１１３】
また、基材が細胞培養用である場合、材質は、細胞を培養するのに適した任意の材料であれば特別な限定はなく、たとえば、ソーダ石灰ガラス、パイレックス（商品名）ガラス、バイコール（商品名）ガラス、石英ガラス等のガラス材料；シリコン；ポリ（塩化ビニル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（酢酸ビニル−共−無水マレイン酸）、ポリ（ジメチルシロキサン）モノメタクリレート、環状オレフィンポリマー、フルオロカーボンポリマー、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンイミン等の樹状ポリマーを含むプラスチックまたはポリマー；ポリ（酢酸ビニル−共−無水マレイン酸）、ポリ（スチレン−共−無水マレイン酸）、ポリ（エチレン−共−アクリル酸）またはこれらの誘導体等のコポリマー等が挙げられる。
【０１１４】
基材として、より具体的には、担体（たとえば、磁気担体、アフィニティーカラム精製用担体等）、細胞培養用基材、プレパラート、マイクロデバイス、膜等が挙げられる。細胞培養用基材としては、任意の数のウェルが配置されたマルチウェルプレート、シャーレ等が挙げられる。ウェルの数としては、プレート１枚当たり、たとえば、６、１２、２４、９６、３８４、１，５３６個等が挙げられる。
【０１１５】
また、基材が球状の粒子である場合、粒子の平均粒径０．１〜５００μｍのポリマー粒子がより好ましい。前記範囲の粒径を有する担体の粒子は、遠心分離、フィルタ等による回収が容易であり、かつ、充分な表面積を有しているために標的物質との反応効率も高いと考えられる。平均粒径が５００μｍ以下の場合、表面積が小さ過ぎず、蛋白質との反応効率が高い。平均粒径０．１μｍ以上の場合、フィルタによる粒子の回収を効率よく行うことができ、粒子をカラムに充填して用いる場合に、通液の際の圧力損失が大きくなるおそれがない。
【０１１６】
≪被覆方法≫
基材表面に特定樹脂組成物を被覆する方法としては、たとえば有機溶媒に溶解した前記高分子化合物を、前記基材上に、浸漬、スプレー、スピンコーティング等により塗布した後、１０〜１２０℃程度の環境下で乾燥させることにより行うことができる。前記有機溶媒としては、たとえば、上述の≪製造方法≫において、例示したものと同様のもの等が挙げられる。
【０１１７】
被覆層の厚さは、１ｎｍ〜１ｍｍが好ましく、５ｎｍ〜８００μｍが特に好ましい。厚さが前記下限値以上であれば、細胞由来等の不要な蛋白質等の非特異的な吸着を抑制できる。厚さが前記上限値以下であれば、被覆層が基材表面に密着しやすい。
【０１１８】
≪リガンドの固定化方法≫
特定樹脂組成物で表面を被覆した基材にリガンドを固定化することにより、標的物質を選択的に捕捉可能な基材を製造できる。リガンドを固定化する方法については、共有結合により、基材上の被覆層が有する固定化基に応じて、公知の方法に従って当業者が決定できる。たとえば、リガンドを含有する溶液を、リガンドと共有結合する固定化基を備えた被覆層を有する基材に接触させる方法等が挙げられる。
基材表面上の固定化基がスクシンイミド基であり、アミノ基を有するリガンドを固定化する場合には、たとえば、基材表面が、リガンドをｐＨ７．０〜１０．０の一般的な緩衝液に混合した溶液に接触する状態で所定時間インキュベートすることにより、リガンドを固定化基に結合させられる。該緩衝液としては、たとえば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液等が挙げられる。
【０１１９】
基材が細胞培養用である場合、固定化するリガンドとしては、標的細胞の細胞表面に特異的に結合する物質であれば特別な限定はなく、たとえば、抗体、抗体断片、アプタマー、細胞接着性因子等が挙げられる。
【０１２０】
抗体は、たとえば、マウス等のげっ歯類の動物に標識ペプチドを抗原として免疫することによって作製することができる。また、たとえば、ファージライブラリーのスクリーニングにより作製することができる。抗体断片としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ等が挙げられる。
【０１２１】
アプタマーとは、目的物質に対する特異的結合能を有する物質である。アプタマーとしては、ペプチドアプタマー等が挙げられる。目的物質に特異的結合能を有するペプチドアプタマーは、たとえば酵母を用いたＴｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ法等により選別することができる。
【０１２２】
細胞接着性因子は、細胞の接着を担う分子の総称である。細胞接着性因子としては、たとえば、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリノーゲン、トロンボスポンジン等が挙げられ、これらに限定されない。細胞接着性因子は、培養する細胞によって適宜選択することができる。
【０１２３】
天然物由来の細胞接着性因子は、天然物から公知の回収法および精製法により直接得てもよいし、または、公知の遺伝子組換え技術により、当該蛋白質をコードする遺伝子を各種発現ベクター等に組込んで細胞に導入し、発現させた後、公知の回収法および精製法により得てもよい。あるいは、市販のキット、たとえば、試薬キットＰＲＯＴＥＩＯＳＴＭ（東洋紡）、ＴＮＴＴＭ  Ｓｙｓｔｅｍ（プロメガ）、合成装置のＰＧ−ＭａｔｅＴＭ（東洋紡）およびＲＴＳ（ロシュ・ダイアグノスティクス）等を用いた無細胞蛋白質合成系により当該蛋白質を産生し、公知の回収法および精製法により得てもよく限定されない。
【０１２４】
また、化学合成した細胞接着性因子は、公知の蛋白質合成方法を用いて得ることができる。合成方法としては、たとえば、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法、カルボイミダゾール法および酸化還元法等が挙げられる。また、その合成は、固相合成法および液相合成法のいずれをも適用することができる。市販の蛋白質合成装置を使用してもよい。合成反応後は、クロマトグラフィ等の公知の精製法を組み合わせて細胞接着性因子を精製することができる。
【０１２５】
リガンドと結合する標的物質としては、特別な限定はなく、たとえば、抗原、抗体、薬剤（合成化合物または天然由来の化合物）、核酸、細胞等が挙げられる。
【０１２６】
基材は、リガンドと固定化基が共有結合しているため、標的物質と結合させる場合でも、リガンドは基材に安定的に固定されており、不用意に遊離することはない。
【０１２７】
≪固定化基の不活性化処理≫
リガンド固定後は、リガンドと固定化基との反応のための溶液を除去後、リガンドの固定化に関与しなかった固定化基を不活性化処理することが好ましい。不活性化処理は、固定化基の種類に応じ、蛋白質との結合性を有さない他の基に変更させることによって行うことができる。たとえば、固定化基がマレイミド基またはスクシンイミド基である場合は、メルカプトエタノール等の還元剤で不活化処理することができる。固定化基がチオール基である場合は、ヨード酢酸、Ｎ−エチルマレイミド等で不活性化処理することができる。固定化基がヒドラジノ基である場合は、無水酢酸、無水コハク酸等の酸無水物で不活化処理することができる。
【０１２８】
＜細胞培養方法＞
一実施形態として、本発明は、基材の表面上のマレイミド基、スクシンイミド基、チオール基およびヒドラジノ基からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基に、標的細胞の細胞表面と特異的に結合する部位を有するリガンドを結合させる工程と、前記リガンドを結合させた基材に、標的細胞を接触させて、前記リガンドに前記標的細胞を結合させる工程と、前記リガンドに結合した前記標的細胞を培養する工程と、を有する、細胞培養方法を提供する。
【０１２９】
本発明の細胞培養方法によれば、固定化されたリガンドと特異的に結合する標的細胞を含む生体試料を基材表面上に接触させることで、標的細胞のみを選択的に捕捉して純化培養することができる。また、固定化するリガンドの種類を適宜選択することで、多種多様な細胞を培養することができる。
【０１３０】
≪リガンドの結合工程≫
上述の≪リガンドの固定化方法≫と同様の方法により、リガンドを基材表面上に固定化することができる。また、リガンドとしては、上記と同様のものを用いることができる。
【０１３１】
≪標的細胞の結合工程≫
続いて、リガンドが固定化された基板に、標的細胞を含む生体試料を接触させて、標的細胞を基材表面上のリガンドと結合させることによって選択的に捕捉する。リガンドと標的細胞の結合は、可逆的であってもよく、非可逆的であってもよい。
生体試料としては、特別な限定はなく、たとえば、血液、血漿、血清、リンパ液、唾液、涙液、尿、汗等の体液、組織片から調製された細胞の懸濁液等が挙げられる。該基板に接触させる生体試料としては、生物から採取されたものを緩衝液等で希釈する等の前処理を行ったものであってもよい。
標的細胞と基材とを接触させる時間は、１〜２４時間であればよい。
【０１３２】
≪培養工程≫
続いて、充分量の培地を加えて、標的細胞を培養する。培養する時間は、細胞の種類によって適宜設定することができる。培養前に、培地を用いて、標的細胞以外の物質、例えば、生体試料に含まれていた蛋白質、死細胞、標的細胞以外の細胞等を洗浄してもよい。
【０１３３】
使用する培地は、細胞の生存増殖に必要な成分（無機塩、炭水化物、ホルモン、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、ビタミン）等を含む基本培地であればよく、細胞の種類により適宜選択することができる。たとえば、ＤＭＥＭ、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｅａｇｌｅ（ＢＭＥ）、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  Ｆ−１２（ＤＭＥＭ／Ｆ−１２）、Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｌａｓｇｏｗ ＭＥＭ）等が挙げられる。
【実施例】
【０１３４】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定して解釈されるものではない。
［製造例１］
（１）固定化基を有する単位の由来元となるモノマーの調製
１Ｌ（リットル）の３つ口フラスコに、ヘキサエチレングリコール４５．２ｇ（１６０ｍｍｏｌ）、パラトルエンスルホン酸クロリド７．６３ｇ（４０ｍｍｏｌ）およびクロロホルム４００ｍｌを加えた。続いて、得られた混合物にトリエチルアミン５．７０ｇ（５６ｍｍｏｌ）、クロロホルム１００ｍＬの混合物を０℃、窒素雰囲気下で滴下し、その後室温で１６時間攪拌した。続いて、得られた反応混合物を１Ｌ分液ロートに移し、１Ｎ塩酸水溶液で１回、飽和食塩水で２回有機層を洗浄した。続いて、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ濃縮した後、酢酸エチル：メタノール＝９：１（ｖｏｌ）を展開溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。無色透明液体（下記化合物Ａ）が得られ、収量は１３．０ｇ、収率は７４．７％であった。【０１３５】
【化１２】
2017110923.tif 000014
【０１３６】
次に、１Ｌ２つ口フラスコに、マレイミド２９．１ｇ（３００ｍｍｏｌ）、フラン６１．３ｇ（９００ｍｍｏｌ）、ジブチルヒドロキシトルエン２２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）およびトルエン６００ｍＬを加えた。続いて、得られた混合物を６０℃、窒素雰囲気下で２４時間撹拌し、反応液を氷冷した後、析出した結晶をろ過し、冷トルエンで洗浄した。白色粉末（下記化合物Ｂ）が得られ、収量は４３．５ｇ、収率は８７．８％であった。【０１３７】
【化１３】
2017110923.tif 000015
【０１３８】
次に、５００ｍＬ２つ口フラスコに、化合物Ａ１３．０ｇ（３０ｍｍｏｌ）、化合物Ｂ７．４３ｇ（４５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム２０．７ｇ（１５０ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル３００ｍＬを加えた。続いて、得られた混合物を窒素雰囲気下で２時間還流撹拌した。続いて、得られた反応混合物を１Ｌ分液ロートに移し、クロロホルム５００ｍＬを加え、１Ｎ塩酸水溶液で１回、飽和食塩水で２回有機層を洗浄した。続いて、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ濃縮した後、酢酸エチル：メタノール＝８：２（ｖｏｌ）を展開溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。無色透明液体（下記化合物Ｃ）が得られ、収量は６．２９ｇ、収率は４８．８％であった。【０１３９】
【化１４】
2017110923.tif 000016
【０１４０】
得られた化合物Ｃを１Ｈ−ＮＭＲにて測定した結果は下記の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ＝６．５２（２Ｈ、ＣＨ＝ＣＨ）、５．２６（２Ｈ、ＣＨＯＣＨ）、３．６９−３．６０（２Ｈ+２０Ｈ+２Ｈ、ＮＣＨ２、ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）、２．８７（２Ｈ、ＣＨＣＨＣＯＮ）。【０１４１】
次に、３００ｍＬの３つ口フラスコに、化合物Ｃ６．０１ｇ（１４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン２．８３ｇ（２８ｍｍｏｌ）およびクロロホルム１００ｍＬを加えた。続いて、得られた混合物に、メタクリル酸クロリド１．７６ｇ（１６．８ｍｍｏｌ）およびクロロホルム５０ｍＬの混合物を０℃、窒素雰囲気下で滴下し、その後室温で１時間攪拌した。続いて、得られた反応混合物を５００ｍＬ分液ロートに移し、１Ｎ塩酸水溶液で１回、飽和食塩水で２回有機層を洗浄した。続いて、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ濃縮した後、酢酸エチル：メタノール＝９：１（ｖｏｌ）を展開溶媒としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。無色透明液体（下記化合物Ｄ）が得られ、収量は４．８６ｇ収率は６９．８％であった。【０１４２】
【化１５】
2017110923.tif 000017
【０１４３】
得られた化合物Ｄを１Ｈ−ＮＭＲにて測定した結果は下記の通りである。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ＝６．５１（２Ｈ、ＣＨ＝ＣＨ）、６．１３（１Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ２）、５．５８（１Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ２）、５．２６（２Ｈ、ＣＨＯＣＨ）、４．３０（２Ｈ、ＣＯＯＣＨ２）、３．７６−３．６０（２０Ｈ+２Ｈ、ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２Ｎ）、２．８６（２Ｈ、ＮＣＯＣＨＣＨ）、１．９５（３Ｈ、ＣＣＨ３）。【０１４４】
（２）疎水性基を有する単位と固定化基を有する単位とを有する重合体の調製
１００ｍＬの３つ口フラスコに、メチルメタクリレート１．８０ｇ（１８ｍｍｏｌ）、Ｄ０．９９５ｇ（２ｍｍｏｌ）、２,２'-アゾビス（２,４‐ジメチルバレロニトリル）２８．０ｍｇ（０．１１３ｍｍｏｌ）、およびトルエン１１．２ｇを加えた。続いて、反応液中の単量体の濃度を２０質量％、開始剤濃度を１質量％とした。続いて、得られた混合物を５８℃、窒素雰囲気下で１６時間撹拌し、反応液を氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。続いて、得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｅを得た。収量は１．４７ｇ、収率は５２．５％であった。【０１４５】
【化１６】
2017110923.tif 000018
【０１４６】
次に、マレイミド基の保護基であるフランを脱離するために、１００ｍＬのフラスコに、重合体Ｅ１．０ｇ、ジブチルヒドロキシトルエン１ｍｇ（４．５μｍｏｌ）、およびトルエン２０ｇを加えた。続いて、得られた混合物を３時間還流撹拌し、氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｆを０．７６ｇ得た。【０１４７】
【化１７】
2017110923.tif 000019
【０１４８】
［製造例２］
（１）疎水性基を有する単位と生体親和性基を有する単位とを有する重合体の調製
１００ｍＬ３つ口フラスコに、トリエチレングリコールモノエチルエーテルモノメタクリレート４．９３ｇ（２０ｍｍｏｌ）、メチルメタクリレート２．００ｇ（２０ｍｍｏｌ）、２,２'-アゾビス（２,４‐ジメチルバレロニトリル）６９．３ｍｇ（０．２７９ｍｍｏｌ）、およびトルエン２７．７ｇを加えた。続いて、反応液中の単量体の濃度を２０質量％、開始剤濃度を１質量％とした。続いて、得られた混合物を５８℃、窒素雰囲気下で１６時間撹拌し、反応液を氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。続いて、得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｇを得た。【０１４９】
【化１８】
2017110923.tif 000020
【０１５０】
［製造例３］
（１）固定化基を有する単位の由来元となるモノマーの調製
ヘキサエチレングリコールの代わりに１，３−プロパンジオールを用いた以外は製造例１と同様の方法で、固定化基を有する単位の由来元となるモノマーを調製し、化合物Ｈを得た。【０１５１】
（２）疎水性基を有する単位と固定化基を有する単位とを有する重合体の調製
１００ｍＬの３つ口フラスコに、メチルメタクリレート２．７０ｇ（２７ｍｍｏｌ）、化合物Ｈ０．８７ｇ（３ｍｍｏｌ）、２,２'-アゾビス（２,４‐ジメチルバレロニトリル）３５．７ｍｇ（０．１４４ｍｍｏｌ）、およびトルエン１４．３ｇを加えた。続いて、反応液中の単量体の濃度を２０質量％、開始剤濃度を１質量％とした。続いて、得られた混合物を５８℃、窒素雰囲気下で１６時間撹拌し、反応液を氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｉを得た。収量は１．５３ｇ、収率は４２．９％であった。【０１５２】
【化１９】
2017110923.tif 000021
【０１５３】
次に、マレイミド基の保護基であるフランを脱離するために、１００ｍＬのフラスコに、重合体Ｉの１．０ｇ、ジブチルヒドロキシトルエン１ｍｇ（４．５μｍｏｌ）、およびトルエン２０ｇを加えた。続いて、得られた混合物を３時間還流撹拌し、氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。続いて、得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｊを０．８２ｇ得た。【０１５４】
【化２０】
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【０１５５】
［製造例４］
（１）固定化基を有する単位の由来元となるモノマーの調製
ヘキサエチレングリコールの代わりに１，６−ヘキサンジオールを用いた以外は製造例１と同様の方法で、固定化基を有する単位の由来元となるモノマーを調製し、化合物Ｋを得た。【０１５６】
（２）疎水性基を有する単位と固定化基を有する単位とを有する重合体の調製
１００ｍＬ３つ口フラスコに、メチルメタクリレート３．６０ｇ（３６ｍｍｏｌ）、化合物Ｋ１．３３ｇ（４ｍｍｏｌ）、２,２'-アゾビス（２,４‐ジメチルバレロニトリル）４９．３ｍｇ（０．１９８ｍｍｏｌ）、およびトルエン１９．７ｇを加えた。続いて、反応液中の単量体の濃度を２０質量％、開始剤濃度を１質量％とした。続いて、得られた混合物を５８℃、窒素雰囲気下で１６時間撹拌し、反応液を氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。続いて、得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｌを得た。収量は０．６８ｇ、収率は１３．８％であった。【０１５７】
【化２１】
2017110923.tif 000023
【０１５８】
次に、マレイミド基の保護基であるフランを脱離するために、１００ｍＬフラスコに、重合体Ｌ０．５ｇ、ジブチルヒドロキシトルエン１ｍｇ（４．５μｍｏｌ）、およびトルエン１０ｇを加えた。続いて、得られた混合物を３時間還流撹拌し、氷冷した後、ヘキサンに滴下することにより重合体を沈殿させた。続いて、得られた重合体を充分にヘキサンで洗浄した後、減圧乾燥して白色粉末状の重合体Ｍを０．３７ｇ得た。【０１５９】
【化２２】
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【０１６０】
［例１］
製造例１で得られた重合体Ｆと、製造例２で得られた重合体Ｇとをその重量比を表２に示すように、１００：０、９９．５：０．５、９９．０：１．０、９５．０：５．０，９０．０：１０．０、５０：５０および０：１００になるように秤量し、その濃度が０．１質量％となるようにＡＫ−２２５（旭硝子社製）に溶解させ、塗布液を調製した。続いて、該塗布液を２４ウェルのマイクロプレート（ＡＴＧ社製）に２．２ｍＬずつ各３ウェルに分注し、１日間放置して溶媒を揮発させ、ウェル表面に被覆層を形成した。【０１６１】
［例２］
重合体（Ｆ）の代わりに製造例３で得られた重合体Ｊを用いて、製造例２で得られた重合体Ｇとの重量比を表２に示すように、１００：０、９９．５：０．５、９９．０：１．０、９５．０：５．０，９０．０：１０．０および５０：５０になるように秤量した以外は、例１と同様の方法により塗布液を調製した。続いて、該塗布液を用いて、例１と同様に方法により、２４ウェルのマイクロプレートのウェル表面に被覆層を形成した。【０１６２】
［例３］
重合体（Ｆ）の代わりに製造例４で得られた重合体Ｍを用いて、製造例２で得られた重合体Ｇとの重量比を表２に示すように、１００：０、９９．５：０．５、９９．０：１．０、９５．０：５．０，９０．０：１０．０および５０：５０になるように秤量した以外は、例１と同様の方法により塗布液を調製した。続いて、該塗布液を用いて、例１と同様に方法により、２４ウェルのマイクロプレートのウェル表面に被覆層を形成した。【０１６３】
［試験例１］重合体の耐水溶性試験
製造例１、３、４で得られた重合体Ｆ、Ｊ、Ｍのそれぞれ１０ｍｇと、水１ｇとをサンプル管に秤取し、室温で１時間撹拌した後に目視にて耐水溶性を確認した。評価は以下の基準で行った。結果を表１に示す。
＜評価基準＞
○（良好）：含フッ素重合体が残存していた。
×（不良）：含フッ素重合体が完全に溶解し、残存していなかった。【０１６４】
【表１】
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【０１６５】
表１より、各重合体は充分に耐水溶性を有することが確認できた。【０１６６】
［試験例２］マイクロプレートの蛋白質非吸着性確認試験
（１）発色液、蛋白質溶液の調製
発色液は、ペルオキシダーゼ発色液（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢＺ）、ＫＰＬ社製）５０ｍＬとＴＭＢ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ社製）５０ｍＬとを混合したものを使用した。また、蛋白質溶液として、蛋白質（POD−goat  anti  mouse  IgG、Biorad社）をリン酸緩衝溶液（Ｄ−ＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ社製）で１６，０００倍に希釈したものを使用した。【０１６７】
（２）蛋白質の吸着
例１〜３で得られた被覆層を形成した２４ウェルマイクロプレートにおいて、それぞれ被覆層を形成したウェルに蛋白質溶液の２ｍＬを分注し（１ウェル毎に２ｍＬ分注）、室温で１時間放置した。ブランクとして、何も被覆されていない９６ウェルマイクロプレートにおいて、３ウェルに蛋白質溶液の２μＬを分注（１ウェル毎に２μＬ分注）した。【０１６８】
（３）ウェルの洗浄
次いで、２４ウェルマイクロプレートを、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ２０、和光純薬社製）を０．０５質量％含ませたリン酸緩衝溶液（Ｄ−ＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ社製）の４ｍＬで４回洗浄した（１ウェル毎に４ｍＬを使用）。【０１６９】
（４）発色液の分注
次いで、洗浄を終えた２４ウェルマイクロプレートに、発色液の２ｍＬを分注し（１ウェル毎に２ｍＬを使用）、７分間発色反応を行った。２Ｎ硫酸の１ｍＬを加えることで（１ウェル毎に１ｍＬを使用）発色反応を停止させた。ブランクは、９６ウェルマイクロプレートに、発色液の１００μＬを分注し（１ウェル毎に１００μＬを使用）、７分間発色反応を行い、２Ｎ硫酸の５０μＬを加えることで（１ウェル毎に５０μＬを使用）発色反応を停止させた。【０１７０】
（５）吸光度測定および蛋白質吸着率Ｑの計算
次いで、２４ウェルマイクロプレートの各ウェルから１５０μＬの液を取り、９６ウェルマイクロプレートに移した。吸光度は、ＭＴＰ−８１０Ｌａｂ（コロナ電気社製）により４５０ｎｍの吸光度を測定した。ここで、ブランクの吸光度（Ｎ＝３）の平均値をＡ０とした。２４ウェルマイクロプレートから９６ウェルマイクロプレートに移動させた液の吸光度をＡ１とした。蛋白質吸着率Ｑ１を下式により求め、蛋白質吸着率Ｑはその平均値とした。結果を表２に示す。Ｑは０．２％以下が好ましく、０．１％以下がより好ましい。
Ｑ１＝Ａ１／｛Ａ０×（１００／ブランクの蛋白質溶液の分注量）｝×１００
＝Ａ１／｛Ａ０×（１００／２μＬ）｝×１００  ［％］【０１７１】
【表２】
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【０１７２】
（６）結果
表２において、例１−１、１−７、２−６、及び３−６は比較例である。例１−２〜１−６、例２−１〜２−５、及び例３−１〜３−５は実施例である。
表２より、例１〜３において、生体親和性を有する基を有する単位を有することにより、蛋白質の非特異的な吸着が抑制されていることが確かめられた。例１−７、２−６及び３−６は蛋白質吸着率が０．２％超であり非特異的吸着がおきていることがわかる。また、例１−７の結果より、例１の重合体については、重合体Ｆのリンカーがポリエチレングリコール基であるため、蛋白質の非特異的な吸着が抑制される傾向ではあるが、他の実施例と比較すると抑制は充分ではない。【０１７３】
［試験例３］プレートのペプチドの選択的固定化確認試験
（１）重合体を被覆したプレートの調製
例１〜３で得られた被覆層を形成した２４ウェルマイクロプレートにおいて、表２の例１−５、例２−４、例３−４の割合の重合体が被覆されたウェルを用いた。【０１７４】
（２）ペプチドの固定化
次に、細胞接着活性のあるＲＧＤペプチド （システイン含有）が１ウェルにつき０．１μｍｏｌとなるように分注し、ウェル内のマレイミドと反応させ、共有結合による容器への固定化を行った。【０１７５】
（３）Ｅｌｌｍａｎ試薬を用いた未反応のペプチドの定量
次に、２−ニトロ−５−メルカプト安息香酸（ＴＮＢ）溶液を１０μＬずつ分注した。ＴＮＢ溶液は、遊離のチオール基と反応して黄色に呈色する。経時的に未反応のＲＧＤペプチド （システイン含有）を呈色し、吸光度を測定することにより定量化し、反応前のペプチドに対する残存するペプチドの割合を計算した。結果を図１に示す。【０１７６】
（４）結果
図１から、例１〜３の全てにおいて、残存するペプチドの割合が経時的に減っていた。さらに、例２および３については、ペプチドとマレイミド基との反応効率がより優れていることが明らかとなった。【０１７７】
［試験例４］プレートの細胞接着確認試験
（１）重合体を被覆したプレートの調製
製造例１で得られた化合物Ｄとメチルメタクリレートとの反応させるモル比を調節して、５種類の重合体Ｆを調製した。続いて、５種類の重合体Ｆと重合体Ｇとをそれぞれ１０：９０の重量比で混合して、５種類のプレートに被覆する重合体を得た。得られた重合体中に含まれるマレイミド基を有する単位の量は、それぞれ０、０．０２、０．１９、０．９５、１．８５μｍｏｌであった。【０１７８】
次いで、各得られた重合体について、その濃度が０．１質量％となるようにＡＫ−２２５（旭硝子社製）に溶解させ、塗布液を調製した。続いて、調製した塗布液を２４ウェルのマイクロプレート（ＡＴＧ社製）に２．２ｍＬずつ各縦４ウェルに分注し、１日間放置して溶媒を揮発させ、ウェル表面に被覆層を形成した。コントロールとして、一番左側の縦４ウェルについては、未処理のままとした。【０１７９】
（２）マレイミド基の不活性化処理
重合体中に含まれるマレイミド基が蛋白質を特異的に固定化することを確認するために、ネガティブコントロールとして、２４ウェルマイクロプレートの一番下の１行（６ウェル）に対して、以下の方法により、マレイミド基の不活性化処理を施した。
まず、粉末のシステインを１０ｍｇ／ｍＬとなるよう、ＰＢＳで溶解し、システイン溶液を調製した。続いて、該システイン溶液に、終濃度１００ｍＭとなるようにジチオトレイトール  （dithiothreitoｌ；ＤＴＴ）（和光純薬）を溶解した。続いて、該ＤＴＴ含有システイン溶液を２４ウェルマイクロプレートの一番下の１行（６ウェル）に３００μＬずつ分注し、室温で３時間反応させた。続いて、ＰＢＳで３回洗浄した。【０１８０】
（３）ペプチドの固定化
次に、細胞接着活性のあるＲＧＤペプチド （システイン含有）を低濃度（０．０２μｍｏｌ）と高濃度（０．２μｍｏｌ）でウェル内のマレイミドと反応させ、共有結合による容器への固定化を行った。
まず、粉末のＲＧＤペプチド （システイン含有）５ｍｇをＰＢＳの７２４μＬに溶解して、１０ｍＭのペプチド溶液を調製した。続いて、ＰＢＳで２０倍に希釈して高濃度のＲＧＤペプチド （システイン含有）溶液と、ＰＢＳで２００倍に希釈して低濃度のＲＧＤペプチド （システイン含有）溶液とを調製した。続いて、低濃度のＲＧＤペプチド （システイン含有）溶液を上から２番目の１行（６ウェル）に、高濃度のＲＧＤペプチド（システイン含有）溶液を上から３番目および４番目の２行（１２ウェル）に、それぞれ４００μＬずつ分注し、４℃で一晩反応させた。このとき、低濃度のＲＧＤペプチド （システイン含有）溶液を分注した１ウェル中に含まれるペプチドの量は、０．０２μｍｏｌであり、高濃度のＲＧＤペプチド （システイン含有）溶液を分注した１ウェル中に含まれるペプチドの量は、０．２μｍｏｌであった。続いて、上清を除き、ＰＢＳで３回洗浄した。【０１８１】
（４）未反応のマレイミド基の不活性化処理
ＲＧＤペプチド （システイン含有）が固定化されていないマレイミド基と、細胞分泌因子または細胞自身が結合することを防ぐために、細胞を播種する前に、重合体中に残存する未反応のマレイミド基の不活性化処理を行った。
まず、２４ウェル全てに（１）で調製したＤＴＴ含有システイン溶液を４００μＬずつ分注し、室温で３時間反応させた。続いて、ＰＢＳで３回洗浄した。【０１８２】
（５）細胞播種
細胞接着性を確認するために、ＴＩＧ−３細胞を用いた細胞接着アッセイを実施した。ＴＩＧ−３細胞とは、日本人の男性１０週胎児肺の組織片より、トリプシン法でとられた線維芽細胞である。ＴＩＧ−３細胞は、１０％ウシ胎児血清（Thermo  Fisher  Scientific社）を含むＭＥＭ培地（Thermo  Fisher  Scientific社）（以下、維持培地と記載）を用いて、５％二酸化炭素を通気したＣＯ２インキュベーター中、３７℃で継代培養を行ったものを用いた。
まず、１００ｍｍディッシュで培養したＴＩＧ−３細胞を５ｍＬＰＢＳで洗浄した。続いて、細胞剥離溶液としてＴｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ（Thermo  Fisher  Scientific社)を１ｍＬ加え、３７℃で３分間反応させた。続いて、維持培地９ｍＬを加え、剥離溶液を希釈して反応を停止した。続いて、１５ｍＬ遠沈管へ移し、遠心を行った（１６０×ｇ，５ｍｉｎ）。続いて、上清を除き、血清を含まないＭＥＭ培地５ｍＬに懸濁し、再度遠心を行った（１６０×ｇ，５ｍｉｎ）。血清成分を除くため、上記の血清を含まないＭＥＭ培地を用いた洗浄を２回行った。続いて、ＭＥＭ培地に懸濁し、細胞数を計測し、５×１０５ ｃｅｌｌ／ｍＬとなるように調整した。続いて、２４ウェルマイクロプレートの各ウェルに３００μＬずつ細胞懸濁液を播種し、３７℃で１時間、ＣＯ２インキュベーター内で静置した。続いて、培養上清を除き、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（同仁化学研究所）を全体の１／１０量含むＭＥＭ培地を各ウェルに３００μＬずつ分注した。１時間後、培養上清を回収し、そのうちの１００μＬを用いて４５０ｎｍの吸光度を計測した。得られた吸光度を用いて、接着した細胞数を定量化した。結果を図２および図３に示す。【０１８３】
（６）結果
図２より、プレート内の未処理のウェルに関しては、ＲＧＤペプチド （システイン含有）の有無にかかわらず、多くの細胞が接着する傾向が観察された (図２中の「未処理」の列参照。)。一方、マレイミド基を含まない重合体では (図２中の重合中に含まれるマレイミド基の量「０」の列参照。)、細胞接着がほとんど見られなかったことから、重合体の基本的性質である細胞接着抑制効果を確認することができた。
また、図３よりＲＧＤペプチド （システイン含有）を固定化したウェルでは、重合体中に含まれるマレイミド基の量と相関して、接着細胞数が増加する傾向が確認された （図３中のＲＧＤ（低濃度）およびＲＧＤ（高濃度）参照。）。この傾向は、マレイミド基をシステイン溶液で不活性化処理したウェルでは、見られず (図３中のＲＧＤ（マレイミド不活性化）参照。)、細胞がペプチドに接着していること、そのペプチドが重合体に含まれるマレイミド基を介して固定化されていることが示された。【０１８４】
また、図３から、マレイミド基の量が０．０２μｍｏｌであるとき、ペプチドの濃度依存性が見られなかった。これは、マレイミド基へのペプチドの結合が飽和しているであると推察される。
また、マレイミド基の量が０．１９μｍｏｌであるとき、ペプチドの濃度依存的な細胞接着活性が検出された。これはマレイミド基が充分量存在するためであると推察される。
また、マレイミド基が０．９５または１．８５μｍｏｌであるとき、未処理のウェルおよびマレイミド基を不活性化させたウェルにおいて、吸光度が上昇していた。これは、マレイミド基が多く、生体親和性を有する基（本試験例においては、ポリエチレングリコール基）の割合が相対的に減少するため、細胞由来の蛋白質が非特異的に吸着したためであると推察される。
よって、ＲＧＤペプチド（システイン含有）の量が０．２μｍｏｌであって、マレイミド基の量が０．１９μｍｏｌで結合させることが最適であり、目的の蛋白質と固定化基の量は、同程度であることが望ましいことが示唆された。【０１８５】
図４は、高濃度のＲＧＤペプチド（システイン含有）を固定化したウェルおよび未処理のウェルでのＴＩＧ−３細胞の形体を比較した画像である。図４より、高濃度のＲＧＤペプチド（システイン含有）を固定化したウェルでは、ＴＩＧ−３細胞は丸い細胞形体を示し、浮き上がっていた。一方、未処理のウェルでは、ＴＩＧ−３細胞は扁平な形体をとっており、強く伸展していた。この差異は、培養容器に対し、細胞が「点」で接着しているか、「面」で接着しているかの違いによるものであると推測される。
以上の結果から、実施例の重合体が「選択的部分接着」というコンセプト通りの機能を有していることが強く示唆された。
【産業上の利用可能性】
【０１８６】
本発明に係る樹脂組成物は、標的物質を選択的に捕捉するための基材の被覆材として好適であり、特に、特的の細胞を選択的に捕捉して、他の蛋白質等の混入をできる限り防止した状態で培養するための細胞培養用基材の被覆材として好適である。【０１８７】
なお、２０１５年１２月２４日に出願された日本特許出願２０１５−２５１５１８号の明細書、特許請求の範囲、図面、及び要約書の全内容をここに引用し、本発明の明細書の開示として、取り入れるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2017110923.tif 000036
2017110923.tif 000037
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