(57)【要約】  環状ジペプチド又はその塩を含むカロリー低減用組成物、及び、前記カロリー低減用組成物を含有してなる飲食品。本発明のカロリー低減用組成物は、含有される環状ジペプチドが生体で効率的に吸収され、遊離アミノ酸に分解されることなく、主に未変化体又はグルクロン酸等の水溶性分子の抱合体としてそのまま排泄されることから、例えば、ダイエット、カロリー低減用、あるいはメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善のために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
環状ジペプチド又はその塩を含むカロリー低減用組成物。
【請求項２】
環状ジペプチド又はその塩が、グリシン及び／又はプロリンを構成要素として含む請求項１記載のカロリー低減用組成物。
【請求項３】
環状ジペプチド又はその塩が、植物成分及び／又は動物成分を熱処理して得られる、請求項１又は２記載のカロリー低減用組成物。
【請求項４】
植物成分が、大豆、麦芽、大麦、小麦、コーヒー、黒豆、ゴマ、及び茶からなる群より選ばれる１種又は２種以上の抽出物である、請求項３記載のカロリー低減用組成物。
【請求項５】
動物成分が、コラーゲンペプチド、牛乳、ホエイ、カゼイン、及び胎盤エキスからなる群より選ばれる１種又は２種以上である、請求項３記載のカロリー低減用組成物。
【請求項６】
環状ジペプチドがシクログリシルプロリン含む、請求項１〜５いずれか記載のカロリー低減用組成物。
【請求項７】
固形の組成物であって、乾燥固形物中にシクログリシルプロリンを０．０１重量（ｗ／ｗ）％以上含有してなる、請求項６記載のカロリー低減用組成物。
【請求項８】
固形の組成物であって、乾燥固形物中にシクログリシルプロリンを０．１重量（ｗ／ｗ）％以上含有してなる、請求項６記載のカロリー低減用組成物。
【請求項９】
液状の組成物であって、液体中にシクログリシルプロリンを１．０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ以上含有してなる、請求項６記載のカロリー低減用組成物。
【請求項１０】
液状の組成物であって、液体中にシクログリシルプロリンを１０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ以上含有してなる、請求項６記載のカロリー低減用組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０いずれか記載のカロリー低減用組成物を含有してなる、飲食品。
【請求項１２】
請求項１〜１０いずれか記載のカロリー低減用組成物を用いることを特徴とする、飲食品の製造方法。
【請求項１３】
組成物に環状ジペプチド又はその塩を配合することを特徴とする、該組成物のカロリー低減方法。
【請求項１４】
組成物のカロリーを低減させるための、環状ジペプチド又はその塩の使用。
【請求項１５】
環状ジペプチド又はその塩を、カロリー摂取の低減を必要とする個体に、その有効量を投与する工程を含む、カロリー摂取の低減方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カロリー低減用組成物に関する。より詳しくは、環状ジペプチドを有効成分とするカロリー低減用組成物、該環状ジペプチドを含有する低カロリー組成物、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化に伴い、特にカロリーの摂取過多による肥満及びこれに伴う各種の疾病が問題となっており、摂取カロリーの低減を目的とした用途に使用可能な素材の開発が望まれている。【０００３】
例えば、特許文献１には、高アミロース米及び／又は中アミロース米を含む米に、０．５倍量を超える水を添加し熱処理して得られる糊化物を機械的に攪拌処理して得られる米ゲルを、食品素材又は食品が本来含むタンパク質、油脂、米以外の穀類の一部又は全量に置き換えることで、ダイエット又はカロリー低減用の代替食品素材又は代替食品として利用できることが開示されている。【０００４】
一方、アミノ酸が二つ結合した「ジペプチド」が機能性物質として注目されている。ジペプチドは単体アミノ酸にない物理的性質や新たな機能を付加することが可能であり、アミノ酸以上の応用範囲を有するものとして期待されている。なかでも、環状のジペプチドであるジケトピペラジンは、様々な生理活性を有することが知られており、各種検討が行われている。【０００５】
例えば、特許文献２には、少なくとも１個のプロリン又はヒドロキシプロリンを構成成分として含む、直鎖ジペプチド及び直鎖トリペプチドの少なくとも１種を含有する水溶液を加熱することにより、少なくとも１個のプロリン又はヒドロキシプロリンを構成成分として含む環状ジペプチドが容易に製造できることが開示されている。具体的には、例えば、直鎖ジペプチド、グリシルプロリン(Gly-Pro)を水溶液中において加熱処理（９０℃、２４ｈｒ）することで、効率的にシクロ(Gly-Pro)が生成されている（変換率９２．６％）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＷＯ２０１４／１９９９６１号公報
【特許文献２】特許第５４５６８７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、環状ジペプチドがカロリー低減用の素材として利用できるか否かについては未だ知られていない。【０００８】
本発明の課題は、環状ジペプチドを有効成分とするカロリー低減用素材、該環状ジペプチドを含有するカロリー低減用組成物、及びその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、下記〔１〕〜〔６〕に関する。
〔１〕  環状ジペプチド又はその塩を含むカロリー低減用組成物。
〔２〕  前記〔１〕記載のカロリー低減用組成物を含有してなる、飲食品。
〔３〕  前記〔１〕記載のカロリー低減用組成物を用いることを特徴とする、飲食品の製造方法。
〔４〕  組成物に環状ジペプチド又はその塩を配合することを特徴とする、該組成物のカロリー低減方法。
〔５〕  組成物のカロリーを低減させるための、環状ジペプチド又はその塩の使用。
〔６〕  環状ジペプチド又はその塩を、カロリー摂取の低減を必要とする個体に、その有効量を投与する工程を含む、カロリー摂取の低減方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のカロリー低減用組成物は、カロリー低減用の素材として利用できるという優れた効果を奏し、これを含む組成物はダイエットに有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、摂取カロリーを低減させるために、環状ジペプチドを用いることに特徴を有する。このような効果が奏せられる理由は、一つには環状ペプチドが腸管からの透過性に優れ、かつ、ペプチダーゼ等の分解を受けにくいという特徴に起因すると考えられる。環状ジペプチドはアミド結合を介して二個のアミノ酸の末端部分が結合しているため（即ち、環状ジペプチドは、アミノ末端とカルボキシ末端とがアミド結合することによって形成される環状構造を有しているため）、分子末端部分に極性基であるカルボキシ基やアミノ基が露出している直鎖状ジペプチド（特に、同種のアミノ酸組成からなる直鎖状ジペプチド）と比較して脂溶性が高い。そのため、環状ジペプチドは直鎖状のジペプチドと比較して、消化管透過性や膜透過性、ひいては吸収性に優れる。このことは、過去に報告されているラット反転腸管を用いた化合物透過試験の結果からも明らかである（J. Pharmacol, 1998, 50: 167-172）。また、環状ジペプチドはその環状構造のために直鎖ペプチドに比べ体内でぺプチダーゼの影響を受け難いことから、消化管からの吸収後に遊離アミノ酸に分解されない。その結果、環状ジペプチドはタンパク質合成に利用されることなく、主に未変化体又はグルクロン酸等の水溶性分子の抱合体として体外に排泄され、エネルギー源にならないと考えられる。ただし、これらの推測は、本発明を限定するものではない。このような環状ジペプチドの特徴を利用して、飲食品中の栄養分の一部を環状ジペプチドに置き換えることで摂取後の満腹感、満足感を満たしつつ、カロリーを低減させた飲食品を提供することが可能となる。また、環状ジペプチドの効能に着目した機能性食品等については、環状ジペプチドの奏する効果効能に加え、低カロリーであるという付加価値をもった飲食品を提供することが可能となる。
【００１２】
本発明のカロリー低減用素材は、環状ジペプチド又はその塩を有効成分とするカロリー低減用組成物である。以降、本発明のカロリー低減用素材はカロリー低減用組成物とも言う。また、摂取カロリーを低減させるために用いる環状ジペプチド又はその塩のことを、まとめて、本発明の環状ジペプチドと記載することもある。
【００１３】
本発明の環状ジペプチドとしては、例えば、シクログリシルプロリン〔Cyclo(Gly-Pro)〕、シクロプロリルヒドロキシプロリン〔Cyclo(Pro-Hyp)〕、シクロヒドロキシプロリルグリシン〔Cyclo(Hyp-Gly)〕、シクロバリルセリン〔Cyclo(Val-Ser)〕、シクロアルギニルグリシン〔Cyclo(Arg-Gly)〕、シクロアラニルバリン〔Cyclo(Ala-Val)〕、シクログルタミニルセリン〔Cyclo(Gln-Ser)〕などが挙げられる。これらは１種単独で又は２種以上組み合わせて用いてもよい。なかでも、環状ジペプチドがグリシン及び／又はプロリンを構成要素として含む場合を好適例として挙げることができる。なお、本明細書において、環状ジペプチドにおけるアミノ酸の構成が同じであれば、それらの記載順序はいずれが先でも構わなく、例えば、Cyclo(Gly-Pro)とCyclo(Pro-Gly)は同じ環状ジペプチドのことである。
【００１４】
本明細書において、環状ジペプチドの塩とは、前記環状ジペプチドの薬理学的に許容される任意の塩(無機塩及び有機塩を含む)をいい、例えば、前記環状ジペプチドのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、燐酸塩、有機酸塩(酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、ピクリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩等)等が挙げられる。
【００１５】
本発明の環状ジペプチドは、当該分野で公知の方法に従って調製することができ、市販品も用いることができる。例えば、化学合成方法や酵素法、微生物発酵法により製造されてもよく、直鎖ペプチドを脱水・環化反応させることにより合成されてもよい。例えば、植物成分及び／又は動物成分を熱処理して得られる熱処理物を好適に用いることができる。
【００１６】
本発明で用いられる植物成分としては、直鎖状のジペプチド、トリペプチド、又はオリゴペプチドを含むものであれば特に限定はない。具体的には、例えば、大豆、麦芽、大麦、小麦、コーヒー、黒豆、ゴマ、及び茶からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物が挙げられる。抽出方法としては、公知の方法を用いることができ、前記した直鎖のペプチドを含むように抽出すればよい。また、市販品を用いることができる。
【００１７】
本発明で用いられる動物成分としては、直鎖状のジペプチド、トリペプチド、又はオリゴペプチドを含むものであれば特に限定はない。具体的には、例えば、コラーゲンペプチド、牛乳、ホエイ、カゼイン、及び胎盤エキスからなる群より選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。これらの起源動物も特に限定されない。これらの動物成分は公知技術に従って調製してもよく、市販品を用いてもよい。
【００１８】
前記植物成分及び／又は動物成分の熱処理の方法としては、植物成分及び／又は動物成分を溶液中又は固相中で加熱する方法が挙げられる。
【００１９】
熱処理の際に用いられる溶液の媒体としては、水、有機溶媒、及びそれらの混合物が挙げられる。有機溶媒としては、エタノール、ヘキサンなどが挙げられる。水と混合する場合の混合割合は特に限定されない。
【００２０】
熱処理の際の溶液のｐＨや加熱に供される原料濃度は特に限定されず、加熱が行なえる範囲であれば媒体の種類に合わせて適宜設定することができる。
【００２１】
加熱温度としては、加熱に供される原料や媒体の種類によって一概には設定されないが、溶液中での加熱、固相中での加熱のいずれにおいても、１００〜１７０℃が例示され、なかでも１１０〜１５０℃が好ましい。加熱時間は、加熱温度により適宜設定することができ、例えば、０．２５〜１０時間が例示される。
【００２２】
加熱処理について一例を挙げて説明すると、例えば、シクログリシルプロリン〔Cyclo(Gly-Pro)〕の場合、直鎖状ジペプチドGly-Proを含有するコラーゲンペプチドを任意の濃度の水溶液に調製後、１００〜１７０℃で０．２５〜１０時間程度加熱することにより、Cyclo(Gly-Pro)を含有する素材が得られる。
【００２３】
かくして、本発明の環状ジペプチドを含有するカロリー低減用素材が得られる。
【００２４】
本発明のカロリー低減用素材は前記した環状ジペプチド又はその塩を含有するのであれば、その他の成分は特に限定されない。例えば、素材が固形の素材である場合、乾燥固形物中の環状ジペチド又はその塩の含有量は、加熱に供する原料によって一概には設定されないが、０．０１重量（ｗ／ｗ）％以上であることが好ましく、０．１ｗ／ｗ％以上であることがより好ましい。例えば、Cyclo(Gly-Pro)については、大豆中の含有量は０．０２〜０．３０ｗ／ｗ％、大麦麦芽中の含有量は０．０１〜０．２０ｗ／ｗ％、茶中の含有量は０．０２〜０．３０ｗ／ｗ％、コラーゲンペプチドの含有量は１．０〜３０ｗ／ｗ％程度である。なお、環状ジペチド又はその塩の含有量は、例えば、ＨＰＬＣ方法により測定することができる。
【００２５】
また、素材が液状の素材である場合、液体中のＢｒｉｘ当たりの環状ジペチド又はその塩の含有量は、加熱に供する原料によって一概には設定されないが、１．０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ以上であることが好ましく、１０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ以上であることがより好ましい。例えば、Cyclo(Gly-Pro)については、大豆中の含有量は２．０〜３０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ、大麦麦芽中の含有量は１．０〜２０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ、茶中の含有量は２．０〜３０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ、コラーゲンペプチドの含有量は１００〜３０００ｐｐｍ／Ｂｒｉｘ程度である。本明細書において「Ｂｒｉｘ当たりの量」は、２０℃のショ糖溶液（ショ糖のみを溶質として含む水溶液）の質量百分率に相当する値で定められる量を意味する。尚、特に断りがない限り、本明細書において用いる「ｐｐｍ」は、重量／容量（ｗ／ｖ）のｐｐｍを意味し、１．０ｐｐｍ／Ｂｒｉｘは溶媒の比重が１の場合、０．１ｍｇ／ｍＬと換算され、０．０１重量％と換算されるものである。なお、Ｂｒｉｘ当たりの環状ジペチド又はその塩の含有量は、例えば、ＨＰＬＣまたは糖度計を用いて測定することができる。
【００２６】
本発明のカロリー低減用素材において、環状ジペチド又はその塩が脱離した環状ジペプチドは、生体内でのぺプチダーゼよる代謝が抑制されるため、摂取した環状ジペプチドを１００重量％とした場合、少なくとも３５重量％、好ましくは５０重量％以上、より好ましくは９０重量％以上が未変化体又はグルクロン酸等の水溶性分子の抱合体として尿中に排泄される。なお、上限は設定されず、１００重量％以下であればよい。
【００２７】
なお、得られる本発明のカロリー低減用素材に対しては、ろ過、遠心分離、濃縮、限外ろ過、凍結乾燥、粉末化、及び分画からなる群より選ばれる１種又は２種以上の処理を、公知の方法に従って行ってもよく、そのまま製剤化したり、医薬品、医薬部外品、又は飲食品等の原材料に用いることが可能な形態に調製したりしてもよい。よって、本発明のカロリー低減用素材の一態様として前記処理物が含まれる。
【００２８】
本発明はまた、本発明のカロリー低減用素材、即ち、本発明のカロリー低減用組成物を含有する組成物を提供する。本発明のカロリー低減用素材を組成物中に含有させることで、当該組成物は低カロリー組成物として好適に使用され得る。以降、当該組成物を単に、本発明の組成物と記載することもある。よって、かかる組成物は、本発明のカロリー低減用素材の一態様であり、環状ジペプチド又はその塩を配合する組成物は本発明に含まれる。なお、本明細書において、低カロリーとは、好ましくは５ｋｃａｌ／１００ｍＬ(固形物の場合１００ｇ)未満、より好ましくは４ｋｃａｌ／１００ｍＬ(固形物の場合１００ｇ)未満、更に好ましくは３ｋｃａｌ／１００ｍＬ(固形物の場合１００ｇ)未満であることを意味する。ここで、カロリー数は、基本的に健康増進法に関連して公表されている「栄養表示基準における栄養成分等の分析方法等について」に従って算出した値のことである。
【００２９】
本発明の低カロリー組成物は、摂取カロリーの低減やダイエットの目的に、あるいは、カロリー摂取の低減作用を要する疾患のために好適に使用され得、例えば、医薬品、医薬部外品、又は飲食品の形態として用いられる。よって、本発明の低カロリー組成物の態様としては、医薬品、医薬部外品、又は飲食品が挙げられる。
【００３０】
本発明においてカロリー摂取の低減作用を要する疾患としては、カロリー摂取を低減することにより治療効果がみられる疾患であれば特に限定はない。例えば、糖尿病、高血圧症、肥満、高尿酸血症、脂質異常症、動脈硬化症等が例示される。
【００３１】
また、本発明の組成物は、本発明の環状ジペプチド又はその塩を含有することによりカロリー摂取が抑制されることから、カロリー摂取の低減作用を要する疾患の症状改善、予防に極めて有用である。すなわち、本発明の組成物は、上記疾患の予防又は改善を目的とすることを付した特定保健用食品、栄養機能食品、特別用途食品、機能性表示食品、健康補助食品（サプリメント）として、例えば、ダイエット、カロリー低減用、あるいはメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善のために用いられるものである旨の表示を付して提供することが可能になり、中性脂肪が気になる方、体脂肪が気になる方、血圧が気になる方、食後の血糖が気になる方、尿酸値が気になる方等にとって極めて有用な組成物となる。
【００３２】
また、本発明の組成物は、カロリー低減を主目的とした組成物に限定されず、含有成分の一部を本発明のカロリー低減用素材に置き換えることで、食事制限による空腹感やストレスを感じることなく、食後の満腹感を得ながら、上記のような疾患の予防又は改善を達成することが可能となる。
【００３３】
本発明の組成物における本発明の環状ジペプチド又はその塩の含有量としては、環状ジペプチドの種類、その調製条件や後処理条件等によって一概に設定することはできないが、その効果を発揮する観点から、好ましくは０．０１ｗ／ｗ％以上、より好ましくは０．１ｗ／ｗ％以上、更に好ましくは１．０ｗ／ｗ％以上である。また、上限は特に設定されず、従来配合されていた成分、例えば、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチドなどのペプチド類、タンパク質、脂質、糖質などの代替成分として、その量を適宜調整して配合することができる。このように代替することで、体内でのアミノ酸への分解が抑制されて、主に未変化体又はグルクロン酸等の水溶性分子の抱合体として尿中に排泄されるため、従来成分に相当するカロリー摂取を抑制することができる。
【００３４】
本発明の組成物は、本発明の環状ジペプチド又はその塩以外の成分として、本発明の効果を損なわない範囲で、適宜含有することができる。また、他の有用成分を併用して組成物の安定性や付加価値を向上させることも可能である。それらの含有量は、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に限定されない。
【００３５】
本発明の組成物は、公知の医薬品、医薬部外品、又は飲食品を調製する際に、その原材料に本発明のカロリー低減用素材を混合して、公知の製造方法に従って調製してもよく、また、既製の公知の飲食品に、本発明のカロリー低減用素材を添加して、溶解及び／又は懸濁することで調製してもよい。なお、公知の医薬品、医薬部外品、又は飲食品が、前記環状ジペプチド又はその塩を元来含有するものであってもよく、本発明の効果が奏される範囲内で適宜配合して調製することができる。
【００３６】
本発明の組成物の形態としては、特に限定はなく、例えば炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、清涼飲料水（果汁入りも含む）、果肉飲料、果粒入り果実食品、野菜系飲料、豆乳・豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、ゼリー飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の嗜好飲料類、栄養食品、サプリメント、丸剤、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、錠剤〔素錠、糖衣錠、口腔内速崩壊錠、咀嚼可能錠（チュアブル錠）、発泡錠、トローチ剤、フィルムコーティング錠等を含む〕等を例示できる。
【００３７】
本発明はまた、本発明のカロリー低減用素材を、本発明の組成物の原料として使用することを特徴とする、低カロリー組成物の製造方法を提供する。
【００３８】
本発明の製造方法は、本発明のカロリー低減用素材を組成物の原料として使用するのであれば使用量、添加時期、添加方法は特に限定されず、その他に添加配合される成分も限定なく用いることができ、その使用量や添加方法も公知技術に従って適宜選択することができる。具体的には、例えば、製剤分野や食品分野等において通常使用される担体、基剤、及び／又は添加剤等を本発明の目的を達成する範囲内で適宜配合することができる。
【００３９】
また、本発明の一態様として、本発明のカロリー低減用素材を、組成物に配合することで、当該組成物のカロリーを低減させる方法も提供することができる。この場合、本発明のカロリー低減用素材を組成物の原料として使用するのであれば、前項を参照にすることができる。
【００４０】
また、本発明は、カロリー摂取の低減を必要とする個体に、本発明の環状ジペプチド又はその塩を、あるいは本発明の低カロリー組成物の有効量を投与することを含む、カロリー摂取の低減方法を提供する。この場合、有効量とは一概には設定することができず、所望するカロリー低下量に応じて適宜調整することができる。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。【００４２】
実施例１  環状ジペプチドCyclo(Gly-Pro)投与後の尿中排泄率の検討
日本クレア社より、雄性SDラット（6週齢）を購入した後、約1週間馴化させた動物を試験に供した。Cyclo(Gly-Pro)標品（Bachem社）を0.3mg/mLとなるように蒸留水に溶解し、投与量が3mg/kgとなるようシリンジ及びゾンデを用いて経口投与した。投与開始時より48時間後までに排泄した尿全量を、代謝ケージを用いて回収した。回収した尿試料は重量を測定した後に除タンパク質処理を施し、LC-MS/MS(4000QTRAP、ABSCIEX社)を用いて以下の条件で分析を行った。定量解析はブランク尿試料と標準品水溶液を用いて作成した検量線データを利用して実施した。得られた尿中のCyclo(Gly-Pro)濃度及び尿重量よりCyclo(Gly-Pro)の尿中排泄量を計算し、Cyclo(Gly-Pro)の尿中排泄量をCyclo(Gly-Pro)の投与量で除することで尿中排泄率を算出した。結果を表２に示す。なお、参考例として、直鎖状ジペプチドGly-Proについても同様に試験を行ったので、結果を合わせて示す。
＜LC-MS/MSの分析条件＞
[HPLC条件]
移動相は以下の溶媒を使用し、下記のグラジェント条件を適用した。
（基本条件）
流速：0.2mL/分
分析時間：14.0分/サンプル
カラム：Cadenza CD-C18 150(mm)×2(mm), 粒子径3μm
（移動相）
Ａ相：0.1％ ギ酸水溶液
Ｂ相：0.1％ ギ酸含有アセトニトリル
（グラジェント条件）【００４３】
【表１】
2017002765.tif 000002
【００４４】
[MS/MS条件]
測定モード：MRM potsitive
Q1/Q3：155.2>70.2（Cyclo(Gly-Pro）)
214.1>155.1 (内標準化合物：Cyclo(Arg-Gly)) 
インジェクション量：5μL【００４５】
【表２】
2017002765.tif 000003
【００４６】
以上の結果から、環状ジペプチドCyclo(Gly-Pro)はほぼ全量が分解されずに未変化体として排出されたことがわかる。すなわち、環状ジペプチドCyclo(Gly-Pro)は腸管を通して良好に吸収されたのち、ペプチダーゼ等による分解を殆ど受けることなく腎臓を介して尿中に排出されることが明らかとなった。【００４７】
実施例２  環状ジペプチドCyclo(Gly-Tyr)投与後の尿中排泄率の検討
環状ジペプチドとしてCyclo(Gly-Tyr)を用い、尿回収時間を72時間までに設定する以外は、実施例１と同様にして試験を行った。なお、サンプルは、Cyclo(Gly-Tyr)標品（神戸天然物化学社）を用いた。【００４８】
また、分析はLC-MS/MS(API5000、ABSCIEX社)を用いて行い、分析対象物質はCyclo(Gly-Tyr)及びCyclo(Gly-Tyr)-GlcA.(グルクロン抱合体、公知の合成方法に従って調製)とし、HPLC及びMS分析条件は以下記載の通りとした。【００４９】
定量解析はブランク尿試料と標準品水溶液を用いて作成した検量線データを利用して実施した。得られた尿中のCyclo(Gly-Tyr)未変化体及び代謝物（グルクロン酸抱合体）の濃度と、尿重量より尿中排泄量を計算し、物質量（モル）換算における尿中排泄量を投与量で除することで尿中排泄率を算出した。結果を表４に示す。
＜LC-MS/MSの分析条件＞
[HPLC条件]
移動相は以下の溶媒を使用し、下記のグラジェント条件を適用した。
（基本条件）
流速：0.2mL/分
分析時間：40分/サンプル
カラム：Cadenza CD-C18 150(mm)×2(mm), 粒子径3μm
（移動相）
Ａ相：0.1％ ギ酸水溶液
Ｂ相：メタノール
（グラジェント条件）【００５０】
【表３】
2017002765.tif 000004
【００５１】
[MS/MS条件]
測定モード：MRM negative
Q1/Q3：  219 > 113（未変化体：Cyclo(Gly-Tyr)）
395 > 113 (グルクロン酸抱合体：Cyclo(Gly-Tyr)-GlcA.)【００５２】
【表４】
2017002765.tif 000005
【００５３】
以上の結果から、投与したCyclo(Gly-Tyr)のうち、少なくとも約40％が72時間以内に生体に蓄積されることなく尿中に排泄されることが示された。他の代謝物産生の可能性や、糞中に排泄される可能性を加味すれば、さらに高割合の化合物の生体外排泄が想定される。【００５４】
以下、本発明の環状ジペプチド又はその塩を配合した組成物の具体的処方を例示する。これらの組成物は公知の方法に従って調製することができる。【００５５】
製造例１：用時溶解用粉末
下記表５に示すように、本発明の環状ジペプチド又はその塩を配合した組成物と、セラミド原料、エラスチンペプチド、プロテオグリカン、ビタミンＣ、デキストリン等その他賦形剤を秤量し、均一になるよう混合することで用時溶解用粉末（6.5 g）を製造した。得られた粉末を水に溶解したところ、いずれも分散性はよく、用時溶解飲料として適切であった。【００５６】
【表５】
2017002765.tif 000006
【００５７】
製造例２：錠剤
下記表６に示すように、本発明の環状ジペプチド又はその塩を配合した組成物と他の原料を配合した混合物を、常法により造粒ならびに成型し、錠剤を得た。【００５８】
【表６】
2017002765.tif 000007
【００５９】
製造例３：コラーゲンペプチド含有飲料
コラーゲンペプチドを原材料として公知の方法により得られる、本発明の環状ジペプチド又はその塩を配合した組成物を用いて、下記の組成の飲料を得た。【００６０】
【表７】
2017002765.tif 000008
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明のカロリー低減用組成物は、含有される環状ジペプチドが生体で効率的に吸収され、遊離アミノ酸に分解されることなく、主に未変化体又はグルクロン酸等の水溶性分子の抱合体としてそのまま排泄されることから、例えば、ダイエット、カロリー低減用、あるいはメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善のために有用である。
【国際調査報告】
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