(57)【要約】  精神疾患の客観的な診断に使用することのできる精神疾患判定マーカーの提供。  Bifidobacterium、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Atopobium cluster、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeから選ばれる１以上の腸内細菌からなる精神疾患の判定マーカー。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Bifidobacterium、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Atopobium cluster、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeから選ばれる１以上の腸内細菌からなる精神疾患の判定マーカー。
【請求項２】
精神疾患の判定が、精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度を判定するものである請求項１記載のマーカー。
【請求項３】
精神疾患が、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上である請求項２記載のマーカー。
【請求項４】
精神疾患を判定する目的で、検体中のBifidobacterium、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Atopobium cluster、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeから選ばれる１以上の腸内細菌を測定する方法。
【請求項５】
精神疾患の判定が、精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度を判定するものである請求項４記載の方法。
【請求項６】
精神疾患が、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上である請求項５記載の方法。
【請求項７】
検体が被験者の糞便である請求項４〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
検体中の請求項１〜３のいずれか１項記載の腸内細菌の測定試薬及びプロトコールを含むことを特徴とする請求項４〜７のいずれか１項記載の測定方法を実施するためのキット。
【請求項９】
検体が被験者の糞便である請求項８記載のキット。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれか１項記載の腸内細菌の菌数の変動を指標とする精神疾患改善剤のスクリーニング方法。
【請求項１１】
精神疾患が、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上である請求項１０記載のスクリーニング方法。
【請求項１２】
請求項１０又は１１記載の方法により得られた精神疾患改善剤。
【請求項１３】
Atopobium cluster、Clostridium coccoides group及びStaphylococcusから選ばれる１以上の腸内細菌からなる躁うつ病患者における過敏性腸症候群の判定マーカー。
【請求項１４】
過敏性腸症候群の判定が、過敏性腸症候群の有無及び／又は過敏性腸症候群の重症度を判定するものである請求項１３記載のマーカー。
【請求項１５】
躁うつ病患者における過敏性腸症候群を判定する目的で、検体中のAtopobium cluster、Clostridium coccoides group及びStaphylococcusから選ばれる１以上の腸内細菌を測定する方法。
【請求項１６】
過敏性腸症候群の判定が、過敏性腸症候群の有無及び／又は過敏性腸症候群の重症度を判定するものである請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
検体が躁うつ病患者の糞便である請求項１５又は１６記載の方法。
【請求項１８】
検体中の請求項１３又は１４記載の腸内細菌の測定試薬及びプロトコールを含むことを特徴とする請求項１５〜１７のいずれか１項記載の測定方法を実施するためのキット。
【請求項１９】
検体が躁うつ病患者の糞便である請求項１８記載のキット。
【請求項２０】
請求項１３又は１４記載の腸内細菌の菌数の変動を指標とする躁うつ病患者における過敏性腸症候群治療剤のスクリーニング方法。
【請求項２１】
請求項２０記載の方法により得られた躁うつ病患者における過敏性腸症候群治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は簡便に検査可能な精神疾患の判定マーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
現代社会では、様々な要因がストレスの原因となっており、ストレスにより精神疾患に至ることが多々ある。ＷＨＯ国際疾病分類第１０版（ＩＣＤ−１０）に基づくと、精神疾患は１０種類１分類に分けられ、認知症、統合失調症、気分障害等の様々な疾患を含むとされているが、これら精神疾患の発症には、遺伝と環境（ストレス）が非常に重要な危険因子であると考えられている。近年、精神疾患の患者数は世界的に増加傾向にあり、社会的に大きな問題となっている。【０００３】
精神疾患の中でもうつ病、躁うつ病、統合失調症は、患者数が多く、関連する研究も多数なされている。
うつ病は、気分の低下、活力の喪失、興味の喪失、身体的疾患を伴っている感覚、集中力の低下、食欲の変化、睡眠の変化、身体機能及び精神機能の減退等の症状の組み合わせを特徴とし、無力感、不安感等をもたらす障害である。
躁うつ病は、うつ病におけるうつ状態に加え、うつ状態とは対極の躁状態も現れ、これらを繰り返す疾患であり、双極性障害とも呼ばれる。
また、統合失調症は、幻聴や妄想等の陽性症状や、意欲の低下や感情の鈍化等の陰性症状によって特徴づけられる。【０００４】
これら精神疾患の診断は、患者への問診に基づき、場合によってはその家族から得られる情報も総合して、ＷＨＯ国際疾病分類第１０版や米国精神医学会（ＡＰＡ）の「診断・統計マニュアル・第５版」（ＤＳＭ−５）を判断基準として行われる。しかしながら、最終的な判断は担当医の経験に基づく主観に頼らざるを得ず、客観的な診断という点で診断の精度は十分であるといえない。【０００５】
一方、腸内細菌と精神症状との関わりに関する研究において、健常者に対してLactobacillus helveticus R0052及びBifidobacterium longum R0175を投与した際に自己診断で不安、抑うつ等の改善が認められたこと（非特許文献１）や、Clostridium bolteaeが自閉症児の腸内に高頻度に存在していること（非特許文献２）が知られているが、腸内細菌と精神疾患の判定に関する知見は知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Michael et. al., Gut Microbes 2:4, 256-261, 2011
【非特許文献２】Kinross et. al., Genome Medicine 2011, 3:14
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
前記のように精神疾患の診断は、未だ担当医の経験に基づく主観に頼っていることから精度は十分でない。
従って、本発明の課題は、より客観的で簡便かつ非侵襲的な新たな精神疾患の判定マーカーを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで本発明者は、腸内細菌に着目し、精神疾患の判定に使用できないか検討したところ、従来知られている腸内細菌とは相違する特定の腸内細菌と種々の精神疾患との間に相関性があり、この腸内細菌の有無や菌数を検査することにより精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度が判定できること、さらにはこれらの腸内細菌を指標とすれば精神疾患予防治療剤のスクリーニングが可能になることを見出し、本発明を完成した。【０００９】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔２１〕を提供するものである。【００１０】
〔１〕Bifidobacterium、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Atopobium cluster、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeから選ばれる１以上の腸内細菌からなる精神疾患の判定マーカー。
〔２〕精神疾患の判定が、精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度を判定するものである〔１〕記載のマーカー。
〔３〕精神疾患が、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上である〔２〕記載のマーカー。
〔４〕精神疾患を判定する目的で、検体中のBifidobacterium、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Atopobium cluster、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeから選ばれる１以上の腸内細菌を測定する方法。
〔５〕精神疾患の判定が、精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度を判定するものである〔４〕記載の方法。
〔６〕精神疾患が、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上である〔５〕記載の方法。
〔７〕検体が被験者の糞便である〔４〕〜〔６〕のいずれかに記載の方法。
〔８〕検体中の〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の腸内細菌の測定試薬及びプロトコールを含むことを特徴とする〔４〕〜〔７〕のいずれかに記載の測定方法を実施するためのキット。
〔９〕検体が被験者の糞便である〔８〕記載のキット。
〔10〕〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の腸内細菌の菌数の変動を指標とする精神疾患改善剤のスクリーニング方法。
〔11〕精神疾患が、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上である〔１０〕記載のスクリーニング方法。
〔12〕〔１０〕又は〔１１〕記載の方法により得られた精神疾患改善剤。
〔13〕Atopobium cluster、Clostridium coccoides group及びStaphylococcusから選ばれる１以上の腸内細菌からなる躁うつ病患者における過敏性腸症候群の判定マーカー。
〔14〕過敏性腸症候群の判定が、過敏性腸症候群の有無及び／又は過敏性腸症候群の重症度を判定するものである〔１３〕記載のマーカー。
〔15〕躁うつ病患者における過敏性腸症候群を判定する目的で、検体中のAtopobium cluster、Clostridium coccoides group及びStaphylococcusから選ばれる１以上の腸内細菌を測定する方法。
〔16〕過敏性腸症候群の判定が、過敏性腸症候群の有無及び／又は過敏性腸症候群の重症度を判定するものである〔１５〕記載の方法。
〔17〕検体が躁うつ病患者の糞便である〔１５〕又は〔１６〕記載の方法。
〔18〕検体中の〔１３〕又は〔１４〕記載の腸内細菌の測定試薬及びプロトコールを含むことを特徴とする〔１５〕〜〔１７〕のいずれかに記載の測定方法を実施するためのキット。
〔19〕検体が躁うつ病患者の糞便である〔１８〕記載のキット。
〔20〕〔１３〕又は〔１４〕記載の腸内細菌の菌数の変動を指標とする躁うつ病患者における過敏性腸症候群治療剤のスクリーニング方法。
〔21〕〔２０〕記載の方法により得られた躁うつ病患者における過敏性腸症候群治療剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の判定マーカーを測定すれば、簡便かつ非侵襲的に、うつ病、躁うつ病、統合失調症等の精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度を判定できる。また、うつ病患者における過敏性腸症候群の有無及び／又は重症度も判定できる。さらに、本発明の判定マーカーを指標とすれば、精神疾患改善剤がスクリーニングできる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】うつ病患者におけるLactobacillusの菌数とストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる不安症状の得点との相関性を示す。重症度が高いほど菌数が少なく、重症度が低いほど菌数が多い。
【図２】０か月目と６か月目のＨＡＭ−Ｄ２１のスコア差と０か月目と６か月目のBifidobacteriumの菌数の差の相関性を示す。０か月目に比べ６か月目の菌数が増加しているうつ病患者ほど、ＨＡＭ−Ｄ２１のスコアが低下してうつ症状が緩和されている。
【図３】躁うつ病患者におけるBifidobacteriumの菌数とストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる強迫症状の得点との相関性を示す。重症度が高いほど菌数が少なく、重症度が低いほど菌数が多い。
【図４】躁うつ病患者におけるBifidobacteriumの菌数とストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる対人関係過敏症の得点との相関性を示す。対人関係過敏症の得点が高いほど菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多い。
【図５】躁うつ病患者におけるBifidobacteriumの菌数とストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる不安症状の得点との相関性を示す。不安症状の得点が高いほど菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多い。
【図６】躁うつ病患者におけるBifidobacteriumの菌数とストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる抑うつ症状の得点との相関性を示す。抑うつ症状の得点が高いほど菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多い。
【図７】躁うつ病患者におけるBifidobacteriumの菌数とストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる総合計の得点との相関性を示す。総合計の得点が高いほど菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多い。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の精神疾患の判定マーカーは、Atopobium cluster、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Bifidobacterium、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeから選ばれる１以上の腸内細菌である。これらの腸内細菌がヒトの腸内に存在することは知られているが、これらの腸内細菌と精神疾患との関係は全く報告されていない。Lactobacillusは、Lactobacillusに属する菌全体を意味するものであり、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroupはそのgroupに属する菌を意味する。
【００１４】
後記試験例に示すように、精神疾患を有する患者の糞便中の前記腸内細菌の菌数と、精神疾患との間には有意な相関関係が見られた。より詳細には、前記腸内細菌の菌数と、精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度との間に有意な相関関係が見られた。
ここで、精神疾患には、うつ病、躁うつ病及び統合失調症から選ばれる１以上が含まれる。
【００１５】
より具体的な、腸内細菌と精神疾患の関係は次の如くである。
１．Atopobium cluster
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではAtopobium clusterの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのAtopobium clusterの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではAtopobium clusterの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのAtopobium clusterの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００１６】
２．Lactobacillus
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではLactobacillusの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillusの菌数が１０6.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
また、ストレス自己診断アンケートの不安症状の得点が高いほどLactobacillusの菌数が少なく、症状や得点が低いほど菌数が多くなるという有意な相関があり、Lactobacillusの菌数でうつ病の重症度が判定できる。具体的には、不安症状については、Lactobacillusの菌数が検体１ｇあたり１０6.5ｃｅｌｌｓ以上のとき不安症状が軽度、１０6.4〜１０5.8ｃｅｌｌｓのとき不安症状が中等度、１０5.7ｃｅｌｌｓ以下のとき不安症状が重度である可能性が高いと判定できる。
【００１７】
３．Lactobacillus brevis
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではLactobacillus brevisの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus brevisの菌数が１０3.7ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではLactobacillus brevisの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus brevisの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（３）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではLactobacillus brevisの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus brevisの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００１８】
４．Lactobacillus reuteri subgroup
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではLactobacillus reuteri subgroupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.7ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではLactobacillus reuteri subgroupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（３）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではLactobacillus reuteri subgroupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００１９】
５．Lactobacillus sakei subgroup
（１）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではLactobacillus sakei subgroupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのLactobacillus sakei subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００２０】
６．Bifidobacterium
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではBifidobacteriumの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのBifidobacteriumの菌数が１０10.1ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
また、Bifidobacteriumの菌数が増加しているうつ病患者ほど、うつ症状が緩和されている傾向にあった。
（２）躁うつ病
Bifidobacteriumの菌数は、躁うつ病患者の重症度の判定に有用である。ストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる評価において、躁うつ病患者では、強迫症状、対人関係過敏症、不安症状、抑うつ症状、総合計の得点が高いほどBifidobacteriumの菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多くなるという有意な相関がある。
具体的には、強迫症状については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０9.9ｃｅｌｌｓ以上のとき強迫症状が軽度、１０9.8〜１０9.5ｃｅｌｌｓのとき強迫症状が中等度、１０9.4ｃｅｌｌｓ以下のとき強迫症状が重度である可能性が高いと判定できる。対人関係過敏症については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０10.1ｃｅｌｌｓ以上のとき対人関係過敏症が軽度、１０10.0〜１０9.9ｃｅｌｌｓのとき対人関係過敏症が中等度、１０9.8ｃｅｌｌｓ以下のとき対人関係過敏症が重度である可能性が高いと判定できる。また、不安症状については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０9.7ｃｅｌｌｓ以上のとき不安症状が軽度、１０9.6〜１０9.3ｃｅｌｌｓのとき不安症状が中等度、１０9.2ｃｅｌｌｓ以下のとき不安症状が重度である可能性が高いと判定できる。抑うつ症状については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０9.9ｃｅｌｌｓ以上のとき抑うつ症状が軽度、１０9.8〜１０9.4ｃｅｌｌｓのとき抑うつ症状が中等度、１０9.3ｃｅｌｌｓ以下のとき抑うつ症状が重度である可能性が高いと判定できる。
【００２１】
７．Bacteroides fragilis group
（１）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではBacteroides fragilis groupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのBacteroides fragilis groupの菌数が１０9.1ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００２２】
８．Enterococcus
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではEnterococcusの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのEnterococcusの菌数が１０7.1ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではEnterococcusの菌数が有意差をもって多い。具体的には、検体１ｇあたりのEnterococcusの菌数が１０5.0ｃｅｌｌｓ以上のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
【００２３】
９．Clostridium coccoides group
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではClostridium coccoides groupの菌数が有意差をもって多い。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium coccoides groupの菌数が１０10.3ｃｅｌｌｓ以上のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではClostridium coccoides groupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（３）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではClostridium coccoides groupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００２４】
10．Clostridium leptum subgroup
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではClostridium coccoides groupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium leptum subgroupの菌数が１０9.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではClostridium leptum subgroupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium leptum subgroupの菌数が１０10.2ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（３）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではClostridium leptum subgroupの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium leptum subgroupの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００２５】
11．Staphylococcus
（１）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではStaphylococcusの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのStaphylococcusの菌数が１０4.4ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
【００２６】
12．Clostridium perfringens
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではClostridium perfringensの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium perfringensの菌数が１０2.3ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではClostridium perfringensの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium perfringensの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（３）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではClostridium perfringensの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのClostridium perfringensの菌数が１０4.7ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
【００２７】
13．Enterobacteriaceae
（１）うつ病
健常者と比較して、うつ病患者ではEnterobacteriaceaeの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのEnterobacteriaceaeの菌数が１０6.4ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（２）躁うつ病
健常者と比較して、躁うつ病患者ではEnterobacteriaceaeの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのEnterobacteriaceaeの菌数が１０7.2ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できる。
（３）統合失調症
健常者と比較して、統合失調症患者ではEnterobacteriaceaeの菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのEnterobacteriaceaeの菌数が１０6.4ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できる。
14．躁うつ病患者におけるＩＢＳとの関係
躁うつ病患者においてＩＢＳを有する患者と有しない患者でAtopobium cluster、Clostridium coccoides group、Staphylococcusの菌数を比較したところ、ＩＢＳを有する患者では各腸内細菌の菌数が有意差をもって少ない。具体的には、検体１ｇあたりのAtopobium clusterの菌数が１０8.8ｃｅｌｌｓ未満、Clostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満、Staphylococcusの菌数が１０3.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病患者においてＩＢＳを有する可能性が高いと判定できる。
【００２８】
本発明のマーカーを用いて精神疾患（以下、精神疾患には、精神疾患及びうつ病患者におけるＩＢＳが含まれる）を判定するには、検体中の前記腸内細菌数を測定すればよい。検体としては、被験者由来の生体試料、例えば腸液、糞便等の消化管内容物が挙げられるが、糞便が被験者に対する負担が少なく、特に好ましい。
【００２９】
検体中の腸内細菌の測定には、腸内細菌の存在の有無の判定（定性）、腸内細菌数の測定（定量）のいずれも含まれる。腸内細菌の存在の有無を判定する手段は、例えば、あらかじめ予測した選択培地において腸内細菌を培養し、対象とする腸内細菌のコロニーの有無を確認する培養法、標的とする遺伝子や遺伝子由来のｍＲＮＡを検出するサザンハイブリダイゼーション法、ノーザンハイブリダイゼーション法、ＤＮＡマイクロアレイ法等が挙げられる。
また、検体中の腸内細菌数を測定する手段は、例えばあらかじめ予測した選択培地において腸内細菌を培養し菌数を計測する方法、選択液体培地中で腸内細菌を培養し濁度や吸光度を測定する方法、ＦＩＳＨ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＲＴ−ＰＣＲ法等が挙げられ、このうちＲＴ−ＰＣＲ法で行うことが好ましい。
【００３０】
ここで、ＲＴ−ＰＣＲ法について説明する。ＲＴ−ＰＣＲ法を用いる分析方法は、例えば、（１）検体中の目的とする腸内細菌のＲＮＡを抽出する工程、（２）抽出したＲＮＡにハイブリダイズする核酸断片（プライマー）を用いてＲＴ−ＰＣＲを行う工程、及び（３）工程（２）により増幅されたＤＮＡ断片を検出する工程により行うことができる。検体由来の鋳型ｃＤＮＡに上記核酸断片を組み合わせ、増幅反応を行うことにより、目的とする腸内細菌に特異的なＤＮＡ断片（ＰＣＲ産物）を得ることができる。ＰＣＲ産物を経時的に観察し、一定のＤＮＡ量に達した時のＰＣＲサイクル数を特定することにより、検体中の目的とする腸内細菌数を定量することが可能となる。
【００３１】
増幅されるＰＣＲ産物の経時的な観察は、ＰＣＲ産物をＳＹＢＲ（Ｒ）Ｇｒｅｅｎ Ｉ等のインターカレーター性蛍光色素により標識し、各ＰＣＲ段階での蛍光強度を測定することにより行うことができる。インターカレーター性色素は二本鎖核酸にインターカレーションすることで蛍光強度が増加する性質を有することから、標的細菌のｃＤＮＡからＰＣＲ反応により生成するＰＣＲ産物を正確に測定することができ、特にＳＹＢＲ（Ｒ）Ｇｒｅｅｎ Ｉが好適に用いられる。
【００３２】
任意に設定された一定の蛍光強度（ＤＮＡ量）に達した時のＰＣＲサイクル数（以下ＣT値とする）を特定することにより、検体中の目的とする腸内細菌の定量が可能となる。また、蛍光色素により標識したＴａｑＭａｎプローブやＭｏｌｅｃｕｌｅｒ Ｂｅａｃｏｎ等を使用することもできる。ＴａｑＭａｎプローブやＭｏｌｅｃｕｌｅｒ Ｂｅａｃｏｎは、ＰＣＲにより増幅される領域の内部配列と相同性を有するオリゴヌクレオチドに蛍光色素とクエンチャーを結合させたプローブであり、ＰＣＲ反応に共存させて用いる。プローブに結合した蛍光色素とクエンチャーの相互作用でＰＣＲ増幅反応に応じた蛍光を発するため、各ＰＣＲ段階での蛍光強度を測定することにより増幅されるＰＣＲ産物の経時的な観察を行うことができる。
【００３３】
検体中の目的とする腸内細菌の定量は、ＤＡＰＩカウント法や培養法等により計測した細菌数の対数値とＣT値の検量線により求めることができる。すなわち、標的とする細菌数の対数値を横軸に、ＣT値を縦軸にプロットした検量線を予め作成し、ＰＣＲ反応の結果得られたＣT値を該検量線に適用して、検体中の目的とする腸内細菌の定量を行う。
【００３４】
精神疾患の有無の判定においては、健常者由来の検体中の前記腸内細菌数（うつ病患者におけるＩＢＳの有無の判定においては、うつ病患者のうちＩＢＳを有さない患者由来の検体中のAtopobium clusterの菌数）を基準として判定すればよい。一方、精神疾患の重症度の判定においては、腸内細菌数が少ないほど重症と判定することができるが、重症度の段階に応じて予め設定した基準を設けておくのが好ましい。
【００３５】
精神疾患の有無の判定においては、以下の基準の１以上を満たす場合に、下記の（１）〜（３）の精神疾患を有する可能性が高いと判定できる。これらの基準は、組み合わせて使用することもできる。
【００３６】
（１）うつ病
（ａ）Atopobium clusterの菌数が検体１ｇあたり１０9.5ｃｅｌｌｓ未満
（ｂ）Lactobacillusの菌数が検体１ｇあたり１０6.5ｃｅｌｌｓ未満
（ｃ）Lactobacillus brevisの菌数が検体１ｇあたり１０3.7ｃｅｌｌｓ未満
（ｄ）Lactobacillus reuteri subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０4.7ｃｅｌｌｓ未満
（ｅ）Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０10.1ｃｅｌｌｓ未満
（ｆ）Enterococcusの菌数が検体１ｇあたり１０7.1ｃｅｌｌｓ未満
（ｇ）Clostridium coccoides groupの菌数が検体１ｇあたり１０10.3ｃｅｌｌｓ以上
（ｈ）Clostridium leptum subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０9.8ｃｅｌｌｓ未満
（ｉ）Clostridium perfringensの菌数が検体１ｇあたり１０2.3ｃｅｌｌｓ未満
（ｊ）Enterobacteriaceaeの菌数が検体１ｇあたり１０6.4ｃｅｌｌｓ未満
【００３７】
（１）躁うつ病
（ａ）Lactobacillus brevisの菌数が検体１ｇあたり１０4.0ｃｅｌｌｓ未満
（ｂ）Lactobacillus reuteri subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０4.8ｃｅｌｌｓ未満
（ｃ）Enterococcusの菌数が検体１ｇあたり１０5.0ｃｅｌｌｓ以上
（ｄ）Clostridium coccoides groupの菌数が検体１ｇあたり１０9.3ｃｅｌｌｓ未満
（ｅ）Clostridium leptum subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０10.2ｃｅｌｌｓ未満
（ｆ）Staphylococcusの菌数が検体１ｇあたり１０4.4ｃｅｌｌｓ未満
（ｇ）Clostridium perfringensの菌数が検体１ｇあたり１０4.0ｃｅｌｌｓ未満
（ｈ）Enterobacteriaceaeの菌数が検体１ｇあたり１０7.2ｃｅｌｌｓ未満
【００３８】
（３）統合失調症
（ａ）Atopobium clusterの菌数が検体１ｇあたり１０9.5ｃｅｌｌｓ未満
（ｂ）Lactobacillus brevisの菌数が検体１ｇあたり１０4.0ｃｅｌｌｓ未満
（ｃ）Lactobacillus reuteri subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０4.8ｃｅｌｌｓ未満
（ｄ）Lactobacillus sakei subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０4.8ｃｅｌｌｓ未満
（ｅ）Bacteroides fragilis groupの菌数が検体１ｇあたり１０9.1ｃｅｌｌｓ未満
（ｆ）Clostridium coccoides groupの菌数が検体１ｇあたり１０9.3ｃｅｌｌｓ未満
（ｇ）Clostridium leptum subgroupの菌数が検体１ｇあたり１０9.5ｃｅｌｌｓ未満
（ｈ）Clostridium perfringensの菌数が検体１ｇあたり１０4.7ｃｅｌｌｓ未満
（ｉ）Enterobacteriaceaeの菌数が検体１ｇあたり１０6.4ｃｅｌｌｓ未満
【００３９】
（４）躁うつ病におけるＩＢＳ
（ａ）Atopobium clusterの菌数が検体１ｇあたり１０8.8ｃｅｌｌｓ未満
（ｂ）Clostridium coccoides groupの菌数が検体１ｇあたり１０9.3ｃｅｌｌｓ未満
（ｃ）Staphylococcusの菌数が検体１ｇあたり１０3.5ｃｅｌｌｓ未満
【００４０】
精神疾患の重症度の判定においては、以下の基準の１以上を満たす場合に、下記の（１）〜（２）の精神疾患の重症度を判定できる。これらの基準は、組み合わせて使用することもできる。
（１）うつ病
（ａ）Lactobacillusの菌数が検体１ｇあたり１０6.5ｃｅｌｌｓ以上のとき不安症状が軽度、１０6.4〜１０5.8ｃｅｌｌｓのとき不安症状が中等度、１０5.7ｃｅｌｌｓ以下のとき不安症状が重度である可能性が高いと判定する。
【００４１】
（２）躁うつ病
（ａ）強迫症状については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０9.9ｃｅｌｌｓ以上のとき強迫症状が軽度、１０9.8〜１０9.5ｃｅｌｌｓのとき強迫症状が中等度、１０9.4ｃｅｌｌｓ以下のとき強迫症状が重度である可能性が高いと判定する。
（ｂ）対人関係過敏症については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０10.1ｃｅｌｌｓ以上のとき対人関係過敏症が軽度、１０10.0〜１０9.9ｃｅｌｌｓのとき対人関係過敏症が中等度、１０9.8ｃｅｌｌｓ以下のとき対人関係過敏症が重度である可能性が高いと判定する。
（ｃ）不安症状については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０9.7ｃｅｌｌｓ以上のとき不安症状が軽度、１０9.6〜１０9.3ｃｅｌｌｓのとき不安症状が中等度、１０9.2ｃｅｌｌｓ以下のとき不安症状が重度である可能性が高いと判定する。
（ｄ）抑うつ症状については、Bifidobacteriumの菌数が検体１ｇあたり１０9.9ｃｅｌｌｓ以上のとき抑うつ症状が軽度、１０9.8〜１０9.4ｃｅｌｌｓのとき抑うつ症状が中等度、１０9.3ｃｅｌｌｓ以下のとき抑うつ症状が重度である可能性が高いと判定する。
【００４２】
また、精神疾患の重症度の判定においては、被験者の前記腸内細菌数を継続的に測定した際に、腸内細菌数が増加傾向にあれば精神疾患が軽症になっていると判断し、逆に腸内細菌数が低下傾向にあれば精神疾患が重症になっていると判断できる。
【００４３】
本発明の精神疾患の判定方法、特に精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度の判定方法、躁うつ病患者におけるＩＢＳの有無及び／又はＩＢＳの重症度の判定方法を実施するには、検体中の前記腸内細菌を測定するためのプロトコールを含むキットを用いるのが好ましい。当該キットには、本発明のマーカーの測定試薬及びプロトコール（腸内細菌の測定方法、並びに精神疾患の判定方法、特に精神疾患の有無及び／又は精神疾患の重症度及び躁うつ病患者におけるＩＢＳの有無及び／又はＩＢＳの重症度を判定するための基準、測定結果に影響を与える要因とその影響の程度等が記載されたもの）が含まれる。当該判定基準には、前記腸内細菌の標準菌数、精神疾患を有する可能性が高いと判断される菌数等が含まれ、重症度の判定においては重症度の段階に応じて予め設定された所定菌数範囲等が含まれ、これらの菌数は、対象とする検体、精神症状の類型ごとに設定することが可能である。当該基準を用いて前記判定方法のように判定することができる。ここで、マーカーの測定試薬としては、前述の腸内細菌数測定用試薬、ｍＲＮＡ検出用試薬、ＤＮＡ検出用試薬等が挙げられる。
【００４４】
前記腸内細菌の菌数の変動を指標とすれば、精神症状改善剤がスクリーニングできる。ここで、指標とする「菌数の変動」とは、被検物質を投与した後に前記腸内細菌の菌数が増加（上昇）した場合、投与前後を対比して前記腸内細菌の菌数の増加（上昇）が促進された場合、投与前後を対比して前記腸内細菌の菌数の低下が抑制された場合を含む概念である。すなわち、in vitro又はin vivoにおいて前記腸内細菌の菌数を増加（上昇）させた、菌数の増加を促進した、菌数の低下を抑制した被検物質は、精神症状の改善作用を有するものと判断する。
例えば、ヒトやマウス、ラット又はウサギ等の実験動物に被検物質を投与して、未投与のヒトや実験動物と比較し、当該被検物質が検体中の前記腸内細菌の菌数を変動させるか否かを判定する。当該被検物質が前記腸内細菌の菌数を増加（上昇）させた、菌数の増加を促進した、菌数の低下を抑制した物質と判定された際には、当該被検物質を精神症状改善剤として利用できる。
【実施例】
【００４５】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。【００４６】
［１］使用菌株
株式会社ヤクルト本社中央研究所にて保存していた、表１に示す菌株を使用した。各菌株の初発菌数は、１×１０4ｃｅｌｌｓ程度となるように調整した。
各菌株の培養条件を表１に示した。培養条件Ａ〜Ｃの詳細は以下の通りである。
条件Ａ：１％グルコース加変法ＧＡＭブロスにて、３７℃、嫌気条件下で２４〜７２時間の静置培養を行った。
条件Ｂ：ＭＲＳブロスにて、３７℃、嫌気条件下で２４時間〜７２時間の静置培養を行った。
条件Ｃ：ブレインハートインフュージョンブロスにて、３７℃、好気条件下で１８時間振盪培養を行った。
これらの菌体は、ＤＡＰＩ法により菌数を測定した後、一定の菌数となるように適宜希釈し、菌液を調製した。【００４７】
【表１】
2016167365.tif 000002
【００４８】
参考例１
Atopobium cluster、Lactobacillus、Lactobacillus brevis、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Bifidobacterium、Bacteroides fragilis group、Enterococcus、Clostridium coccoides group、Clostridium leptum subgroup、Staphylococcus、Clostridium perfringens及びEnterobacteriaceaeの特異的プライマーの準備
前記腸内細菌数の測定に使用した各プライマーを表２に示した。また、各プライマーが記載された文献も表２に示した。【００４９】
【表２】
2016167365.tif 000003
【００５０】
A : Matsuki T, Watanabe K, Fujimoto J, et al. Quantitative PCR with 16S rRNA-gene-targeted species-specific primers for analysis of human intestinal bifidobacteria. Applied and Environmental Microbiology 2004;70:167-73.
B : Matsuda K., Tsuji H., Asahara T., Matsumoto K., Takada T., and Nomoto K. Establishment of an Analytical System for the Human Fecal Microbiota, Based on Reverse Transcription-Quantitative PCR Targeting of Multicopy rRNA Molecules. Appl Environ Microbiol 2009;75:1961-1969.
C :特開2001-112485号
D : Matsuki T, Watanabe K, Tanaka R, et al. Rapid identification of human intestinal bifidobacteria by 16S rRNA-targeted species- and group-specific primers. FEMS Microbiol Lett 1998;167:113-21.
E :Matsuki T, Watanabe K, Fujimoto J, et al. Development of 16S rRNA-gene-targeted group-specific primers for the detection and identification of predominant bacteria in human feces. Appl Environ Microbiol 2002;68:5445-51.
F : Matsuki T, Watanabe K, Fujimoto J, et al. Use of 16S rRNA gene-targeted group-specific primers for real-time PCR analysis of predominant bacteria in human feces. Appl Environ Microbiol 2004;70:7220-8.
G: Matsuki, T. Development of quantitative PCR detection method with 16S rRNA gene-targeted genus- and species-specific primers for the analysis of human intestinal microflora and its application. Nippon Saikingaku Zasshi 2007;62:255-261.
H: Kikuchi E., Miyamoto Y., Narushima S., and Itoh K. Design of species-specific primers to identify 13 species of Clostridium harbored in human intestinal tracts. Microbiol Immunol 2002;46:353-358.【００５１】
参考例２
ＲＴ−ＰＣＲで使用する検量線の準備
検体中の目的とする腸内細菌の定量を行う際に使用する検量線を作成した。具体的には下記の手順に従い、ＤＡＰＩカウント法で計測した腸内細菌数を横軸に、ＣT値を縦軸にプロットした検量線を作成した。
１）上記［１］使用菌株で調製した各菌株の菌液２００μＬにＲＮＡｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ）４００μＬを添加し、５分間室温にて静置した。その後、１３，０００ｇにて５分間遠心分離し、デカンテーションにより上清を除去した。上清を除去した後の残渣に溶菌バッファー  ４５０μＬ（１サンプルあたり３４６．５μＬのＲＬＴ  ｂｕｆｆｅｒ、１００μＬのＴＥ及び３．５μＬのβ−Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌを混合して調製する）及び直径が０．１ｍｍのガラスビーズ（ＴＯＭＹ精工）を３００ｍｇ添加した。
２）振とう機（ＳｈａｋｅＭａｓｔｅｒ）にサンプルチューブをセットした後、５分間振とうし、菌体を破砕した。
３）５００μＬ水飽和Ｐｈｅｎｏｌを加え、ボルテックスにより５〜１０秒間撹拌した。
４）６０℃のヒートブロックにサンプルチューブをセットし、１０分間反応させた（ホットフェノール法）。
５）１００μＬ  Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ／Ｉｓｏａｍｙｌ  ａｌｃｈｏｌ（２４：１）を加え、ボルテックスにより５〜１０秒間撹拌した。
６）遠心分離後（１３，０００ｇ×５分）、上清４７０μＬを新しい蓋付マイクロチューブ（１．５ｍＬ）に移した。
７）４７０μＬ  Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ／Ｉｓｏａｍｙｌ  ａｌｃｈｏｌ（２４：１）を加え、ボルテックスにより５〜１０秒間撹拌した。
８）遠心分離後（１３，０００ｇ×５分）、上清４００μＬを新しい蓋付マイクロチューブ（１．５ｍＬ）に移した。
９）３Ｍ  酢酸Ｎａ（ｐＨ５．４）４０μＬ及びＩｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ  ４００μＬを加え、転倒混和した。
１０）遠心分離（２０，０００ｇ×１０分）を行った。
１１）デカンテーションにて上清を除いた後、８０％Ｅｔｈａｎｏｌ  ５００μＬを加えた。
１２）遠心分離後（２０，０００ｇ×２分）、デカンテーションにて上清を除いた。
１３）風乾（口を上にして約２０分間）した後、ＤＡＰＩ法による菌数測定に基づき、２×１０8ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるようにＮｕｃｌｅａｓｅ−ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ）を加えて、撹拌して均一に溶解させた。さらにＮｕｃｌｅａｓｅ−ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒにより１０倍段階希釈を実施し、２×１０-3〜２×１０ｃｅｌｌｓ／ｍＬの範囲の希釈したサンプルを次の１４）記載のＲＮＡサンプルとして使用し、ＲＴ−ｑＰＣＲ反応に供試した。
１４）ＲＴ−ｑＰＣＲは、ＱＩＡＧＥＮ  ＯｎｅＳｔｅｐ  ＲＴ-ＰＣＲ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて実施し、反応液組成は、１ｘＱＩＡＧＥＮ  ＯｎｅＳｔｅｐ  ＲＴ-ＰＣＲ  Ｂｕｆｆｅｒ、０．５ｘＱ−Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、０．４ｍＭ  ｄＮＴＰ  Ｍｉｘ、１／２５量のＱＩＡＧＥＮ  ＯｎｅＳｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｍｉｘ、１／１００，０００量のＳＹＢＲ（Ｒ）Ｇｒｅｅｎ  Ｉ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、１ｘＲＯＸ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｄｙｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．６０μＭの表２に示した各プライマー、及び５μＬの上記１３）で調製したＲＮＡサンプルを含む反応液（総量１０μＬ）で行った。
１５）反応液はまず５０℃で３０分間逆転写反応を行い、その後逆転写酵素を失活させるため９５℃で１５分間加熱した。引き続いて、９４℃・２０秒、５５℃あるいは６０℃（表２の配列番号１〜２及び１５〜２８は５５℃、配列番号３〜１４及び２９〜３０は６０℃）・２０秒、７２℃・５０秒を４５サイクル行い、増幅産物を得た。増幅産物の量をサイクルごとにＳＹＢＲ（Ｒ）Ｇｒｅｅｎ  Ｉの蛍光強度として測定し、ＰＣＲ曲線を作製した。蛍光強度のベースラインおよび閾値を設定し、ＰＣＲ曲線と閾値が交差するサイクル数（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｃｙｃｌｅ:ＣT値）を求めた。得られたＣT値を縦軸に、ＰＣＲ反応に供試したサンプル菌数を横軸にプロットした。これらの解析には、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＳＤＳ）ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。なお、ＰＣＲにおける増幅が特異的に行われたか否かを確認するため、変性温度の測定を別途行った。変性温度の測定は、上記増幅産物を得た後、９４℃で１５秒間反応させ、その後５５℃あるいは６０℃から９９℃にかけて０．２℃／秒の速度で緩やかに温度を上昇させ、温度をｘ軸に、ＳＹＢＲ（Ｒ）Ｇｒｅｅｎ  Ｉの蛍光強度をｙ軸にプロットして増幅産物の変性曲線を作製し、蛍光強度が急激に減少する温度を測定することにより行った。これらの一連の反応は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（Ｒ）７９００ＨＴシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により行った。
１６）ＤＡＰＩ法により測定した各腸内細菌の菌数をｘ軸に、それに対応するＲＴ−ｑＰＣＲにより得たＣT値をｙ軸にプロットし、検量線を作成した。【００５２】
実施例１
精神疾患と腸内細菌叢の関係
精神疾患（うつ病、躁うつ病、統合失調症）患者の腸内細菌叢を精査し、精神疾患と腸内細菌叢の関係を評価した。
（１）精神疾患の診断
精神疾患の診断は、精神科医が精神疾患簡易構造化面接法ＭＩＮＩ（Mini−International Neuropsychiatric Interview, 日本語版：Otsubo T, et al. Reliability and validity of Japanese version of the Mini-International Neuropsychiatric Interview. Psychiatry and Neurosciences 2005;59:517-526.）を使用し、患者を健常者、うつ病、躁うつ病、統合失調症のいずれかに診断した。
（２）検体の入手
上記（１）にて精神疾患の診断を行った後、下記患者から得られた糞便については、検体から除外した。
（ａ）６３歳以上の男女
（ｂ）重篤な内科疾患を合併している患者
（ｃ）抗生物質を服用した患者
（ｄ）知的障害、てんかん、重篤な先天異常を有する患者
（ｅ）腸管の手術歴のある患者
その結果、検体として、健常者（Ｎｏｒｍａｌ）６２名、うつ病患者（ＭＤＤ）４３名、躁うつ病患者（ＭＤＩ）３９名、統合失調症患者（Ｓｚ）４７名の糞便を入手した。【００５３】
（３）検体中の腸内細菌の定量
（ａ）ＲＮＡ抽出用サンプルの調製
検体４ｍｇに０．２ｍＬのＲＮＡｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ）を添加し、５分間室温にて静置した。その後、１４,０００ｇにて１０分間遠心分離し、デカンテーションにより上清を除去した後、残渣をＲＮＡ抽出用サンプルとして使用した。【００５４】
（ｂ）核酸抽出
下記手順に従い、ＲＮＡ抽出操作を行った。
１）（ａ）で調製したＲＮＡ抽出用サンプルに溶菌バッファー  ４５０μＬ（１サンプルあたり３４６．５μＬのＲＬＴ  ｂｕｆｆｅｒ、１００μＬのＴＥ及び３.５μＬのβ−Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌを混合して調製する）及び直径が０．１ｍｍのガラスビーズを３００ｍｇ添加した。
２）前記参考例２の２）〜１２）記載の方法と同様に核酸の抽出操作を行った。
３）風乾（口を上にして約２０分間）した後、２００μＬのＮｕｃｌｅａｓｅ−ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒを加えて、撹拌して均一に溶解させ、ＲＮＡサンプルとした。【００５５】
（ｃ）菌数の測定
（ｂ）で得られたＲＮＡサンプルについて、ＲＴ−ｑＰＣＲ法を用いて、菌数を測定した。ＲＴ−ｑＰＣＲは、前記参考例２の１４）〜１５）記載の方法と同様に行った。なお、Lactobacillusの菌数は、配列番号３〜２０のプライマーを用いて測定した。Lactobacillus casei subgroup、Lactobacillus gasseri subgroup、Lactobacillus plantarum subgroup、Lactobacillus reuteri subgroup、Lactobacillus ruminis subgroup、Lactobacillus sakei subgroup、Lactobacillus brevis、Lactobacillus fermentum及びLactobacillus fructivoransの菌数の総和として求めた。【００５６】
（４）解析方法
（ａ）精神疾患の有無と腸内細菌数の関係の解析
１）精神疾患患者と健常者の菌数比較
うつ病、躁うつ病、統合失調症患者の各腸内細菌の菌数と健常者の各腸内細菌の菌数の間の差に関する検定をＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  ｕ−ｔｅｓｔにて行った。健常者群の解析対象者数は各疾患群の性、年齢において統計的有意差が生じないよう合わせた。
２）ｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較
Ｒｅｃｅｉｖｅｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ａｎａｌｙｓｉｓ（ＲＯＣ）解析を行い、うつ病、躁うつ病、統合失調症患者と健常者の各腸内細菌の菌数を最もよく識別するｃｕｔ−ｏｆｆ値を求め、うつ病、躁うつ病、統合失調症患者と健常者において、ｃｕｔ−ｏｆｆ値未満の菌数を有する人数の割合を算出した。
（ｂ）精神疾患の重症度と腸内細菌数の関係の解析
１）ＧＲＩＤ  ＨＡＭ−Ｄによる重症度と腸内細菌数の評価
うつ病の重症度の評価方法の一つとして、ＧＲＩＤ  ハミルトンうつ病評価尺度（ＧＲＩＤ−ＨＡＭＤ）（Hamilton, M., A rating scale of depression. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 1960;23,56-62.及びA. Kalali, et al., The new GRID HAM-D: pilot testing and international field trials. International Journal of Neuropsychopharmacology. 2002;5,S147？S148.）を使用した。今回、ＧＲＩＤ−ＨＡＭＤのうち、２１問の質問項目で構成されるＨＡＭＤ２１を使用した。０点〜７点を正常（寛解）、８点〜１３点を軽度、１４点〜１８点を中等度、１９点以上を重度と判定した。
２）ストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる重症度と腸内細菌数の評価
ストレス自己診断アンケートＨＳＣＬ（Derogatis LR, et al., The Hopkins Symptom Checklist (HSCL): a self-report symptom inventory. Behavioral science 1974;19,1-15.及び中野敬子 2005. ストレス・マネジメント入門  自己診断と対処法を学ぶ. 金剛出版）を用いて、心身症状、強迫、対人関係過敏症、不安症状、抑うつ症状のそれぞれの得点及び総合計の得点を算出し、うつ病及び躁うつ病の得点と健常者の得点の差に関する検定をＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  ｕ−ｔｅｓｔにて行った。
（ｃ）躁うつ病患者におけるＩＢＳの有無とAtopobium cluster、Clostridium coccoides group、Staphylococcusの菌数の関係の解析
ＩＢＳの診断は、国際的に共通する基準として定義づけられているＲｏｍｅ  III診断基準（Longstreth GF, et al., Functional bowel disorders. Gastroenterology. 2006;130,1480-91）を使用した。
躁うつ病の群内でＩＢＳを有する群と有しない群の２群に分け、ＩＢＳを有する群のAtopobium cluster、Clostridium coccoides group、Staphylococcusの菌数と有しない群の菌数の差に関する検定をＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  ｕ−ｔｅｓｔにて行った。【００５７】
（５）結果
（ａ）Atopobium cluster
１）うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３に示すように、Atopobium clusterの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのAtopobium clusterの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００５８】
【表３】
2016167365.tif 000004
【００５９】
２）統合失調症
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表４に示すように、統合失調症患者ではAtopobium clusterの菌数が有意差をもって少なかった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表５に示すように、Atopobium clusterの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのAtopobium clusterの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００６０】
【表４】
2016167365.tif 000005
【００６１】
【表５】
2016167365.tif 000006
【００６２】
（ｂ）Lactobacillus
１）うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表６に示すように、Lactobacillusの菌数が１０6.5ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillusの菌数が１０6.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。
また、（４）（ｂ）２）に述べたストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる評価において、うつ病患者では、不安症状の得点が高いほどLactobacillusの菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多くなるという有意な相関が得られた（図１）。具体的には、不安症状については、Lactobacillusの菌数が糞便１ｇあたり１０6.5ｃｅｌｌｓ以上のとき不安症状が軽度、１０6.4〜１０5.8ｃｅｌｌｓのとき不安症状が中等度、１０5.7ｃｅｌｌｓ以下のとき不安症状が重度である可能性が高いと判定できることが分かった。【００６３】
【表６】
2016167365.tif 000007
【００６４】
（ｃ）Lactobacillus brevis
１）うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表７に示すように、Lactobacillus brevisの菌数が１０3.7ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus brevisの菌数が１０3.7ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００６５】
【表７】
2016167365.tif 000008
【００６６】
２）躁うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表８に示すように、Lactobacillus brevisの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus brevisの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００６７】
【表８】
2016167365.tif 000009
【００６８】
３）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表９に示すように、Lactobacillus brevisの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus brevisの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００６９】
【表９】
2016167365.tif 000010
【００７０】
（ｄ）Lactobacillus reuteri subgroup
１）うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１０に示すように、Lactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.7ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.7ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００７１】
【表１０】
2016167365.tif 000011
【００７２】
２）躁うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１１に示すように、Lactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００７３】
【表１１】
2016167365.tif 000012
【００７４】
３）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１２に示すように、Lactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus reuteri subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００７５】
【表１２】
2016167365.tif 000013
【００７６】
（ｅ）Lactobacillus sakei subgroup
１）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１３に示すように、Lactobacillus sakei subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのLactobacillus sakei subgroupの菌数が１０4.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００７７】
【表１３】
2016167365.tif 000014
【００７８】
（ｆ）Bifidobacterium
１）うつ病
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表１４に示すように、うつ病患者ではBifidobacteriumの菌数が有意差をもって少なかった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１５に示すように、Bifidobacteriumの菌数が１０10.1ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのBifidobacteriumの菌数が１０10.1ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００７９】
【表１４】
2016167365.tif 000015
【００８０】
【表１５】
2016167365.tif 000016
【００８１】
また、（４）（ｂ）１）に述べたＧＲＩＤ  ＨＡＭ−Ｄによる評価において、うつ病患者の０か月目と６か月目のＨＡＭ−Ｄ２１のスコア差（（６か月目のＨＡＭ−Ｄ２１のスコア）−（０か月目のＨＡＭ−Ｄ２１のスコア））及び０か月目と６か月目のBifidobacteriumの菌数の差（（６か月目のBifidobacteriumの菌数）−（０か月目のBifidobacteriumの菌数））を求め、その相関をみると、０か月目に比べ６か月目のBifidobacteriumの菌数が増加しているうつ病患者ほど、有意にＨＡＭ−Ｄ２１のスコアが低下してうつ症状が緩和されていた（図２）。これより、Bifidobacteriumの菌数とうつ症状には相関があることが分かった。なお、本試験は０か月目と６か月目の両方の検体が入手可能であった２０名のうつ病患者に対して解析を行った。【００８２】
２）躁うつ病
（４）（ｂ）２）に述べたストレス自己診断アンケートＨＳＣＬによる評価において、躁うつ病患者では、強迫症状、対人関係過敏症、不安症状、抑うつ症状、総合計の得点が高いほどBifidobacteriumの菌数が少なく、得点が低いほど菌数が多くなるという有意な相関が得られた（図３〜７）。具体的には、強迫症状については、Bifidobacteriumの菌数が糞便１ｇあたり１０9.9ｃｅｌｌｓ以上のとき強迫症状が軽度、１０9.8〜１０9.5ｃｅｌｌｓのとき強迫症状が中等度、１０9.4ｃｅｌｌｓ以下のとき強迫症状が重度である可能性が高いと判定でき、対人関係過敏症については、Bifidobacteriumの菌数が糞便１ｇあたり１０10.1ｃｅｌｌｓ以上のとき対人関係過敏症が軽度、１０10.0〜１０9.9ｃｅｌｌｓのとき対人関係過敏症が中等度、１０9.8ｃｅｌｌｓ以下のとき対人関係過敏症が重度である可能性が高いと判定できることが分かった。また、不安症状については、Bifidobacteriumの菌数が糞便１ｇあたり１０9.7ｃｅｌｌｓ以上のとき不安症状が軽度、１０9.6〜１０9.3ｃｅｌｌｓのとき不安症状が中等度、１０9.2ｃｅｌｌｓ以下のとき不安症状が重度である可能性が高いと判定でき、抑うつ症状については、Bifidobacteriumの菌数が糞便１ｇあたり１０9.9ｃｅｌｌｓ以上のとき抑うつ症状が軽度、１０9.8〜１０9.4ｃｅｌｌｓのとき抑うつ症状が中等度、１０9.3ｃｅｌｌｓ以下のとき抑うつ症状が重度である可能性が高いと判定できることが分かった。【００８３】
（ｇ）Bacteroides fragilis group
１）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１６に示すように、Bacteroides fragilis groupの菌数が１０9.1ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのBacteroides fragilis groupの菌数が１０9.1ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００８４】
【表１６】
2016167365.tif 000017
【００８５】
（ｈ）Enterococcus
１）うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１７に示すように、Enterococcusの菌数が１０7.1ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのEnterococcusの菌数が１０7.1ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００８６】
【表１７】
2016167365.tif 000018
【００８７】
２）躁うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表１８に示すように、Enterococcusの菌数が１０5.0ｃｅｌｌｓ以上の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのEnterococcusの菌数が１０5.0ｃｅｌｌｓ以上のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００８８】
【表１８】
2016167365.tif 000019
【００８９】
（ｉ）Clostridium coccoides group
１）うつ病
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表１９に示すように、うつ病患者ではClostridium coccoides groupの菌数が有意差をもって多かった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表２０に示すように、Clostridium coccoides groupの菌数が１０10.3ｃｅｌｌｓ以上のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Clostridium coccoides groupの菌数が１０10.3ｃｅｌｌｓ以上のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００９０】
【表１９】
2016167365.tif 000020
【００９１】
【表２０】
2016167365.tif 000021
【００９２】
２）躁うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表２１に示すように、Clostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Clostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００９３】
【表２１】
2016167365.tif 000022
【００９４】
３）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表２２に示すように、Clostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのClostridium coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００９５】
【表２２】
2016167365.tif 000023
【００９６】
（ｊ）Clostridium leptum subgroup
１）うつ病
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表２３に示すように、うつ病患者ではClostridium leptum subgroupの菌数が有意差をもって多かった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表２４に示すように、Clostridium leptum subgroupの菌数が１０9.8ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Clostridium leptum subgroupの菌数が１０9.8ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【００９７】
【表２３】
2016167365.tif 000024
【００９８】
【表２４】
2016167365.tif 000025
【００９９】
２）躁うつ病
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表２５に示すように、躁うつ病患者ではClostridium leptum subgroupの菌数が有意差をもって多かった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表２６に示すように、Clostridium leptum subgroupの菌数が１０10.2ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Clostridium leptum subgroupの菌数が１０10.2ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１００】
【表２５】
2016167365.tif 000026
【０１０１】
【表２６】
2016167365.tif 000027
【０１０２】
３）統合失調症
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表２７に示すように、統合失調症患者ではClostridium leptum subgroupの菌数が有意差をもって多かった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表２８に示すように、Clostridium leptum subgroupの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのClostridium leptum subgroupの菌数が１０9.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１０３】
【表２７】
2016167365.tif 000028
【０１０４】
【表２８】
2016167365.tif 000029
【０１０５】
（ｋ）Staphylococcus
１）躁うつ病
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表２９に示すように、躁うつ病患者ではStaphylococcusの菌数が有意差をもって少なかった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３０に示すように、Staphylococcusの菌数が１０4.4ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって少なかった。これにより、糞便１ｇあたりの、Staphylococcusの菌数が１０4.4ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１０６】
【表２９】
2016167365.tif 000030
【０１０７】
【表３０】
2016167365.tif 000031
【０１０８】
（ｌ）Clostridium perfringens
１）うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３１に示すように、Clostridium perfringensの菌数が１０2.3ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Clostridium perfringensの菌数が１０2.3ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１０９】
【表３１】
2016167365.tif 000032
【０１１０】
２）躁うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３２に示すように、Clostridium perfringensの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Clostridium perfringensの菌数が１０4.0ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１１１】
【表３２】
2016167365.tif 000033
【０１１２】
３）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３３に示すように、Clostridium perfringensの菌数が１０4.7ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのClostridium perfringensの菌数が１０4.7ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１１３】
【表３３】
2016167365.tif 000034
【０１１４】
（ｍ）Enterobacteriaceae
１）うつ病
（４）（ａ）１）に述べた健常者との菌数の比較において、表３４に示すように、うつ病患者ではEnterobacteriaceaeの菌数が有意差をもって少なかった。また、（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３５に示すように、Enterobacteriaceaeの菌数が１０6.4ｃｅｌｌｓ未満のうつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Enterobacteriaceaeの菌数が１０6.4ｃｅｌｌｓ未満のとき、うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１１５】
【表３４】
2016167365.tif 000035
【０１１６】
【表３５】
2016167365.tif 000036
【０１１７】
２）躁うつ病
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３６に示すように、Enterobacteriaceaeの菌数が１０7.2ｃｅｌｌｓ未満の躁うつ病患者の割合と健常者の割合を比較すると、躁うつ病患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりの、Enterobacteriaceaeの菌数が１０7.2ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１１８】
【表３６】
2016167365.tif 000037
【０１１９】
３）統合失調症
（４）（ａ）２）に述べたｃｕｔ−ｏｆｆ値を用いた比較において、表３７に示すように、Enterobacteriaceaeの菌数が１０6.4ｃｅｌｌｓ未満の統合失調症患者の割合と健常者の割合を比較すると、統合失調症患者の割合は有意差をもって多かった。これにより、糞便１ｇあたりのEnterobacteriaceaeの菌数が１０6.4ｃｅｌｌｓ未満のとき、統合失調症を有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１２０】
【表３７】
2016167365.tif 000038
【０１２１】
（ｎ）躁うつ病患者におけるＩＢＳとの関係
（４）（ｃ）に述べた躁うつ病患者においてＩＢＳを有する患者と有しない患者でAtopobium cluster、Clostriduim coccoides group、Staphylococcusの菌数を比較したところ、ＩＢＳを有する患者では各腸内細菌の菌数が有意差をもって少なかった（表３８〜表４０）。これより、糞便１ｇあたりのAtopobium clusterの菌数が１０8.8ｃｅｌｌｓ未満、Clostriduim coccoides groupの菌数が１０9.3ｃｅｌｌｓ未満、Staphylococcusの菌数が１０3.5ｃｅｌｌｓ未満のとき、躁うつ病患者においてＩＢＳを有する可能性が高いと判定できることが分かった。【０１２２】
【表３８】
2016167365.tif 000039
【０１２３】
【表３９】
2016167365.tif 000040
【０１２４】
【表４０】
2016167365.tif 000041
【図１】
2016167365.tif 000042
【図２】
2016167365.tif 000043
【図３】
2016167365.tif 000044
【図４】
2016167365.tif 000045
【図５】
2016167365.tif 000046
【図６】
2016167365.tif 000047
【図７】
2016167365.tif 000048
【配列表】
2016167365000001.app
【国際調査報告】
2016167365.tif 000049
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2016167365.tif 000052
2016167365.tif 000053
2016167365.tif 000054
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