(57)【要約】  ２０２の肺癌症例からアスベスト、喫煙と相関の高いｍｉＲＮＡを抽出し、各群を特徴付けることのできるｍｉＲＮＡを得た。これにより、肺癌の原因と相関のあるマーカーを提供することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者から得られた試料中のｍｉＲＮＡ量を測定し、
ｍｉＲ−４３１，ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つを解析することによって、肺癌の原因を特定することを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の肺癌の原因を特定する方法であって、
肺癌の原因がアスベスト暴露、及び／又は喫煙であることを特徴とする方法。
【請求項３】
ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
【請求項４】
請求項３記載のマーカーであって、
肺癌の原因がアスベスト暴露、及び／又は喫煙であることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
【請求項５】
請求項３又は４記載のマーカーであって、
前記肺癌の原因がアスベスト沈着量と相関するかを検出するためのマーカーであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
【請求項６】
請求項３又は４記載のマーカーであって、
前記肺癌の原因が非喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのマーカーであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
【請求項７】
請求項３又は４記載のマーカーであって、
前記肺癌の原因が重喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのマーカーであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−５７４−５ｐの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
【請求項８】
請求項３又は４記載のマーカーであって、
前記肺癌の原因がアスベスト暴露群で喫煙の関与を検出するためのマーカーであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
【請求項９】
ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
【請求項１０】
請求項９記載のキットであって、
前記肺癌の原因がアスベスト暴露、及び／又は喫煙であることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
【請求項１１】
請求項９又は１０に記載のキットであって、
前記肺癌の原因がアスベスト沈着量と相関するかを検出するためのキットであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
【請求項１２】
請求項９又は１０に記載のキットであって、
前記肺癌の原因が非喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのキットであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
【請求項１３】
請求項９又は１０に記載のキットであって、
前記肺癌の原因が重喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのキットであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−５７４−５ｐの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
【請求項１４】
請求項９又は１０に記載のキットであって、
前記肺癌の原因がアスベスト暴露群で喫煙の関与を検出するためのキットであり、
前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
【請求項１５】
肺癌を治療するための薬剤をスクリーニングする方法であって、
ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つの発現量の増減を指標とすることを特徴とするスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺癌の原因を特定するｍｉＲＮＡに関する。特に、アスベスト暴露、喫煙による肺癌において、増加・減少するｍｉＲＮＡを検出することにより、肺癌の原因がアスベスト暴露であるか、喫煙によるものであるか、あるいは両者が関連しているかを特定する方法、及び原因を特定するためのマーカーに関する。また、これらｍｉＲＮＡを検出することにより、アスベスト暴露、喫煙による肺癌を検出する方法、及び検出するためのキットに関する。さらに、これらｍｉＲＮＡ配列を利用した肺癌の治療薬、及び肺癌治療薬のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肺癌は、日本で最も死亡者数の多い悪性腫瘍である。国立がん研究センターがん対策情報センターの資料によれば、２０１３年では男性５２，０５４人、女性２０，６８０人の計７２，７６４人が死亡しており、２０１４年の死亡者数は、７６，５００人に達すると推定されている。肺癌は、１９９８年以来、死亡率がトップの悪性腫瘍となっている。また、肺癌は、日本だけではなく欧米でも悪性腫瘍による死亡の主要な原因となっている。疫学的調査から肺癌は喫煙との関係が深いことが知られているが、アスベスト（石綿）暴露も近年大きな問題となっている。【０００３】
アスベストは繊維状の鉱物で、電気伝導の面でも熱伝導の面でも絶縁性が高く、第二次大戦以前から耐火用の材料として広く用いられてきた。アスベストが発癌性を有することは既に２０世紀の初めから知られていた。しかし、その健康被害について社会的に認識されたのは最近になってからである。病理学的には、アスベスト関連の悪性腫瘍として、悪性中皮腫と肺癌がよく知られている。発生数は肺癌のほうがやや多く、職業的な曝露者を対象とした疫学調査では、肺癌：悪性中皮腫＝２：１ないし３：２程度といわれている。このように、２種類の悪性腫瘍がアスベスト暴露により発生し、数は肺癌の方がやや多いと推定されている。しかし、アスベストが悪性中皮腫を引き起こすことは知られているものの、アスベストが原因とされる肺癌はさほど注目されていない。【０００４】
その理由としては、肺癌は数が多いうえに、喫煙をはじめ、粉塵、放射線、大気汚染、体質、高齢化など多くの原因で発症し、アスベストに起因する肺癌は一部にすぎないと考えられているからである。したがって、肺癌は、その数の多さ、原因の多様さから、癌の発生が特定の発癌因子を示唆する、いわゆる「指標癌」にはなりにくい腫瘍である。【０００５】
判明している肺癌の原因としては、喫煙が最大のものである。喫煙による肺癌は主として扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞癌であり、腺癌は比較的関係が薄いといわれている。一方、アスベスト暴露により発生する癌は組織学的特徴はないと言われており、組織型の判定は、アスベスト暴露の指標とはならない。【０００６】
アスベストもタバコと同様に肺癌における重要な吸入性発癌物質である。また、日本では、石綿救済制度においてもアスベストが原因となっている肺癌を正確に抽出することが求められている。現状では、肺内のアスベスト小体やアスベスト繊維の量を光顕的あるいは電顕的に定量するという非常に手間のかかる作業を行っている。【０００７】
加えて、アスベストには、蛇紋岩系のクリソタイルと角閃石系のクロシドライトやアモサイトがあり、その発癌性に差のあることが知られている。クリソタイルは肺内で消化されて消失することもあると言われ、石綿小体を作りにくいとも考えられている。すなわち、肺内にアスベスト小体がないからといって必ずしも、アスベスト肺癌でないとは言い切れない。そのため、顕微鏡による定量は手間がかかるうえに、正確な判断ができないという問題も抱えていた。【０００８】
喫煙やアスベストに限らず、多様な肺癌の原因と相関する遺伝子の変化を明らかにすることができれば、肺癌の早期診断に役立てることができるだけでなはなく、予防や治療に役立てることができる。【０００９】
マイクロＲＮＡ（以下、ｍｉＲＮＡと記載する。）は２０〜２５塩基程度の一本鎖ＲＮＡ分子であり、真核生物において遺伝子の転写後発現調節に関与する。ヒトゲノムには１０００以上のｍｉＲＮＡがコードされていると考えられている。ｍｉＲＮＡは、その標的ｍＲＮＡに対して部分相補的に結合し、標的ｍＲＮＡを不安定化するとともに翻訳抑制を行なうことでタンパク質産生を抑制する。ｍｉＲＮＡは一般的に複数の標的ＲＮＡに対して部分相補的に結合し転写を制御することから、複数の異なるｍＲＮＡ量を同時に抑制して制御する。【００１０】
ｍｉＲＮＡが介する転写抑制は、発生、細胞増殖、細胞分化、アポトーシス、代謝といった広範なプロセスの制御を担うことが明らかにされてきている。さらに、ｍｉＲＮＡは、癌、感染症、生活習慣病等、様々な疾患に関与していることが報告されている。中でも、細胞の癌化に深く関与していることが知られている（非特許文献１）。また、肺癌においても、癌化に相関の高いｍｉＲＮＡが存在することがすでに報告されている（特許文献１〜６、非特許文献２）。【００１１】
特許文献１〜４はいずれも肺癌を検出可能なｍｉＲＮＡが開示されているが、肺癌全般を対象としている。特許文献５は肺癌を扁平上皮細胞癌、非扁平上皮非小細胞癌、カルチノイド肺癌、小細胞癌に分類する方法が開示されている。特許文献６は、小細胞癌の予後予測等に関する方法が開示されている。非特許文献２には、アスベストが関与する肺癌において関連のあるｍｉＲＮＡが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Lin,S. & Gregory, R.I., 2015, Nat. Rev. Cancer, Vol.15(6), p.321-333.
【非特許文献２】Nymark, P. et al., 2011, Genes Chrom. Cancer, Vol.50(8), p.585-597.
【非特許文献３】Roden,C. et al., 2015, Adv, Exp. Med. Biol., Vol.888, p.409-421.
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特表２００９−５３１０１８号公報
【特許文献２】特表２０１１−５０５１４３号公報
【特許文献３】特表２０１１−５１６０４６号公報
【特許文献４】特表２０１３−５０２９３１号公報
【特許文献５】特表２０１４−５０９５２２号公報
【特許文献６】国際公開第２０１１／１２５２４５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
しかしながら、上記特許文献１〜６は、いずれも肺癌に関連するｍｉＲＮＡを開示しているが発癌の原因と相関するｍｉＲＮＡを解析したものではない。また、非特許文献２は、アスベスト関連ｍｉＲＮＡを抽出するのに用いた肺癌の例数が７例、アスベスト暴露のない肺癌６例と、非常に例数が少ない。また、アスベスト高暴露の肺癌患者において変動しているｍｉＲＮＡを報告しているが、アスベストにのみ起因している肺癌を抽出して解析したものではない。前述のように、肺癌はアスベスト以外にも多くの原因で発症することから、アスベスト高暴露であるからといって、アスベストのみに起因する肺癌とは限らない。特に肺癌の最大の原因と言われている喫煙の影響を無視することはできない。【００１５】
本発明は、肺癌の原因、特に喫煙とアスベストにより変化するｍｉＲＮＡを同定し、当該ｍｉＲＮＡによって、肺癌の原因を特定する方法、及び特定するためのキットを提供することを課題とする。また、肺癌の原因を特定するだけではなく、当該ｍｉＲＮＡを指標として新しい治療薬のスクリーニング方法や治療薬を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、以下に示す肺癌の原因を特定する方法、マーカー、キット、及び肺癌を治療するための薬剤をスクリーニングする方法に関する。【００１７】
（１）被験者から得られた試料中のｍｉＲＮＡ量を測定し、ｍｉＲ−４３１，ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つを解析することによって、肺癌の原因を特定することを特徴とする方法。
（２）（１）に記載の肺癌の原因を特定する方法であって、肺癌の原因がアスベスト暴露、及び／又は喫煙であることを特徴とする方法。
（３）ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
（４）（３）記載のマーカーであって、肺癌の原因がアスベスト暴露、及び／又は喫煙であることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
（５）（３）又は（４）記載のマーカーであって、前記肺癌の原因がアスベスト沈着量と相関するかを検出するためのマーカーであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
（６）（３）又は（４）記載のマーカーであって、前記肺癌の原因が非喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのマーカーであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
（７）（３）又は（４）記載のマーカーであって、前記肺癌の原因が重喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのマーカーであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ５７４−５ｐの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
（８）（３）又は（４）記載のマーカーであって、前記肺癌の原因がアスベスト暴露群で喫煙の関与を検出するためのマーカーであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つであることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのマーカー。
（９）ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
（１０）（９）記載のキットであって、前記肺癌の原因がアスベスト暴露、及び／又は喫煙であることを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
（１１）（９）又は（１０）に記載のキットであって、前記肺癌の原因がアスベスト沈着量と相関するかを検出するためのキットであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
（１２）（９）又は（１０）に記載のキットであって、前記肺癌の原因が非喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのキットであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
（１３）（９）又は（１０）に記載のキットであって、前記肺癌の原因が重喫煙者におけるアスベスト暴露によるかを検出するためのキットであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−５７４−５ｐの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
（１４）（９）又は（１０）に記載のキットであって、前記肺癌の原因がアスベスト暴露群で喫煙の関与を検出するためのキットであり、前記ｍｉＲＮＡが、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂの少なくともいずれか１つを測定するためのプローブ、及び検出に必要な試薬を含むことを特徴とする肺癌の原因を特定するためのキット。
（１５）肺癌を治療するための薬剤をスクリーニングする方法であって、ｍｉＲ−４３１、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ａの少なくともいずれか１つの発現量の増減を指標とすることを特徴とするスクリーニング方法。
【発明の効果】
【００１８】
以下で詳細に説明するｍｉＲＮＡを用いることによって、肺癌の原因がアスベスト暴露であるか、喫煙暴露であるか、あるいはその両者であるか、発癌の原因を同定することできる。また、発癌と相関の高い新規のマーカーを見出したことによって、新しい検査方法、検査キット、医薬のスクリーニング方法を提供することが可能となる。さらに、当該ｍｉＲＮＡを配列を利用した医薬を調整することも可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】アスベスト、喫煙の混合暴露において、有意に暴露と相関が確認されたｍｉＲＮＡの症例分布と回帰曲線。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下に示す実施例ではアレイを用いて、アスベスト、喫煙、あるいはこれら両者と相関するｍｉＲＮＡを特定している。しかし、本発明で特定されたｍｉＲＮＡを個々の患者の検査として用いる場合には、定量的ＲＴ-ＰＣＲによって解析することができる。解析方法は、例えば非特許文献３に開示されている方法など、一般的に用いられている方法によって行うことができる。定量的ＲＴ-ＰＣＲは感度が高いことから、より精度良く肺癌の原因を特定することができる。
【００２１】
癌患者由来の生体試料は、ここではホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）して作製した切片材料からｍｉＲＮＡを抽出して用いているが、手術や内視鏡等で採取した癌組織を固定せずに、あるいは新鮮凍結組織を用いてもよい。本発明者らは、新鮮凍結組織とＦＦＰＥ材料との間でｍｉＲＮＡ発現の一致度を調べた結果、一定以上発現している２００〜３００個のｍｉＲＮＡではＲ＝０．７６〜０．９０と良い相関が得られることを確認している。したがって、ＦＦＰＥ材料又は新鮮凍結組織のいずれを用いた場合でも、発癌の原因を特定することができる。
【００２２】
具体的には、本発明で特定されたアスベスト、喫煙、あるいはこれら両者と相関のあるｍｉＲＮＡであるｈｓａ−ｍｉＲ−１４７１、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６５１、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５７、ｈｓａ−ｍｉＲ−９２ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ（非喫煙者におけるアスベストの有無を特徴付けるｍｉＲＮＡ群）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ｃ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５７４−５ｐ（重喫煙者におけるアスベストの有無を特徴付けるｍｉＲＮＡ群）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９７２、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１３７、ｈｓａ−ｍｉＲ−３６４８、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１３ｂ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９９ｂ（アスベスト沈着群における喫煙の有無を特徴付ける群）のｍｉＲＮＡ又はそれらの前駆体の変化を解析することによって、肺癌発症の原因にアスベスト、及び／又は喫煙が関与するか特定することができる。以下、ヒトのｍｉＲＮＡであることを明記する「ｈｓａ」を省略して記載することもあるが、すべてヒト型のｍｉＲＮＡである。
【００２３】
検査に使用するｍｉＲＮＡは、各群において１種のｍｉＲＮＡを単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよいが、２種以上組み合わせて用いる方が検査の精度の向上を図ることができる。
【００２４】
また、上述のアスベスト暴露、喫煙によって増減が見られるｍｉＲＮＡのうち、癌発症により増加が見られるｍｉＲＮＡの機能を抑制する核酸分子をデザインし、治療薬として用いることができる。また、肺癌で開発が行われているｌｅｔ−７を対象としたｍｉＲＮＡ補充剤のように、発現の低下しているｍｉＲＮＡを補充することによって治療効果を期待することができる。したがって、癌発症に伴って増加するｍｉＲＮＡのアンタゴニストを開発したり、減少するｍｉＲＮＡを補充剤として用いることにより、ｍｉＲＮＡを直接標的とする医薬を開発することができる。
【００２５】
また、本発明は、アスベスト又は喫煙に起因する肺癌の治療剤候補化合物のスクリーニング方法に関する。具体的には、培養細胞の培養液に治療薬の候補化合物を添加して、上述のアスベスト暴露、喫煙によって増減が見られるｍｉＲＮＡを指標としてスクリーニングを行うことができる。細胞株は、本発明で変化の見られたｍｉＲＮＡを検出することができればどのような細胞を用いてもよいが、肺組織に由来する細胞株、例えば喫煙者の肺腺癌に由来する細胞株Ａ５４９を用いることができる。また、肺に由来する初代培養細胞を用いることが好ましい。
【００２６】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【実施例】
【００２７】
１．材料と方法
１-１．症例について
喫煙とアスベスト沈着の有無により患者を４群に分けて発現に変化のあるｍｉＲＮＡの検索を行った。解析に用いた２０２例の患者の症例を表１（表１−１〜表１−４）に示す。【００２８】
【表１−１】
2017110687.tif 000002
【表１−２】
2017110687.tif 000003
【表１−３】
2017110687.tif 000004
【表１−４】
2017110687.tif 000005
【００２９】
表１中、Ａｓｂｅｓｔｏｓ  Ｂｕｒｄｅｎは、アスベスト沈着量（ＡＢ）を乾燥肺重量あたりのアスベスト小体数で表したものである。Ｓｍｏｋｉｎｇ  Ｉｎｄｅｘ（ＳＩ、喫煙指数）は（１日に吸うたばこの本数）×（喫煙年数）により算出した値を示す。また、ＡＢ＿０１２は、アスベスト小体数が、０：アスベスト小体無し、１：０＜ＡＢ＜５０００、２：ＡＢ≧５０００を表す。ＳＩ＿０１２は、喫煙指数を表し、０：非喫煙、１：０＜ＳＩ＜４００、２：ＳＩ≧４００を表す。ＡＢ＝０は５３例、ＡＢ＝１は３８例、ＡＢ＝２は１１１例であった。また、ＳＩ＝０は４９例、ＳＩ＝１は２４例、ＳＩ＝２は１２９例であった。【００３０】
アスベスト沈着量や喫煙指数による患者の分類は、予め１１０例の患者サンプルについて、閾値を検討し分類を行った。ＡＢ≧５０００の群とＡＢ＜５０００の群とに分けると、アスベスト沈着の多い群とアスベストの少ない群とを特徴付けられるｍｉＲＮＡを抽出し、両群を分類できる可能性が示唆された。喫煙関連では、閾値をＳＩ＝４００としたＳＩ≧４００群とＳＩ＜４００群とを比較した結果、階層クラスター解析では有意な結果は得られなかったが、ｖｏｌｃａｎｏ  ｐｌｏｔでは高度喫煙群がややまとまる傾向が見られた。そこで、アスベスト沈着量は、５０００を閾値とし、ＡＢ＝０、０＜ＡＢ＜５０００、ＡＢ≧５０００の３つの群に分類し、喫煙指数は、４００を閾値とし、ＳＩ＝０、０＜ＳＩ＜４００、ＳＩ≧４００の３つの群に分類した。【００３１】
また、Ｈｉｓｔｌｏｇｙの欄において、ＡＤＣは腺癌（Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ＳＣＬＣは小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）、ＮＳＣＬＣは非小細胞肺癌（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）、ＳＣＣは扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を表す。【００３２】
１−２．方法
（１）アスベスト量の計測
全２０２症例を対象に、全国の労災病院で使用されている低温灰化法（神山変法）により、パラフィンブロック中の正常肺組織を脱パラフィン処理し、乾燥組織からの抽出液を用いて、光学顕微鏡により肺内アスベスト数を計測し、乾燥肺重量あたりのアスベスト量を求めた。【００３３】
（２）ＲＮＡの抽出
ＲＮＡは腫瘍組織のＦＦＰＥ材料から抽出した。腫瘍ＦＦＰＥ材料は、８μｍに薄切しヘマトキシリン染色した切片から、病理医が実体顕微鏡の下で腫瘍組織を用手的に採取し、ｍｉＲＮｅａｓｙ  ＦＦＰＥ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡは、電気泳動により２３−２６ｎｔで高いピークがあり、十分量のｍｉＲＮＡが含まれていることを確認した。ＲＮＡ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｎｕｍｂｅｒ（ＲＩＮ値）は、概ね２．１〜２．６と良好であった。【００３４】
（３）ｍｉＲＮＡ解析
全２０２症例のＦＦＰＥ組織から上記の方法によって抽出した全ＲＮＡを用い、網羅的ｍｉＲＮＡ発現解析を実施した。ｍｉＲＮＡは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ｍｉＲＮＡ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｖ１６．０を用い解析した。このマイクロアレイは、１３６８個のｍｉＲＮＡプローブを搭載している。このうち、ヒトのｍｉＲＮＡ（ｈｓａ  ｍｉＲ）プローブは１２２３個であった。【００３５】
本発明では多施設（がん研究会がん研究所、岡山労災病院、東京女子医科大学、千葉労災病院、広島大学）から得られた症例をもとに分析を行っている。一般に遺伝子発現解析というものは、施設や国によってその発現の特徴が大きく異なると言われる。言い換えれば、ある施設で得られた結果は他の施設では再現されないことが多い。そこで一般に、多施設で得られた検体を用いる場合には、全症例をｔｒａｉｎｉｎｇ  ｓｅｔとｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｓｅｔに分け、ｔｒａｉｎｉｎｇ  ｓｅｔで得られた結果をｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｓｅｔで検証する、ということが行われる。本発明においても、表２に示すように、２０２症例を全体の３分の２をＴｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔ（ｎ＝１３５）とし、残りの３分の１をＶａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔ（ｎ＝６７）とした。セットの作成には、Ｅｘｃｅｌで発生させた乱数により、各症例を無作為に振り分けた。【００３６】
【表２】
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【００３７】
表２に示すように、ＡＢ＝０は５３例、０＜ＡＢ＜５０００は３８例、ＡＢ≧５０００は１１１例である。喫煙については、ＳＩ＝０は４９例、０＜ＳＩ＜４００は２４例、ＳＩ≧４００は１２９例である。対象症例の発癌因子への曝露量は、アスベストの沈着量はゼロから職業曝露まで、喫煙は非喫煙者から重喫煙者まで、非常に広範囲に分布している症例群である。アスベスト暴露、喫煙、それぞれの発癌との相関を解析する場合には、表２で示した患者症例の分類を用いて解析を行った。【００３８】
さらに、アスベスト単独、喫煙単独、アスベストと喫煙の共同効果のそれぞれを特徴付けるｍｉＲＮＡを検出するために、アスベストと喫煙という二つ因子により症例を４群に分けた。すなわち、表３に示すように、ＡＢ＝０、ＡＢ＝５０００、ＳＩ＝０、ＳＩ＝４００という閾値を設け、アスベスト曝露・喫煙量の少なくとも一方が中間群（０＜ＡＢ＜５０００、０＜ＳＩ＜４００）に入らない１４９例を抽出し解析の対象とした。このように症例を分類することにより、混合曝露の解析対象を、職業曝露レベルのアスベスト沈着（ＡＢ≧５０００）、および重喫煙（ＳＩ≧４００）を満たす症例に絞ったことになる。この１４９例の群では、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔはｎ＝９８、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔはｎ＝５１であった。【００３９】
【表３】
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【００４０】
表３下には、該当する症例をアスベストに対する職業暴露の有無、重喫煙の有無により夫々分けた場合の人数（職業暴露、重喫煙群の構成）、また、各群を組み合わせた際に構成する人数（組み合わせ）の内訳を示している。アスベストと喫煙の混合暴露を解析する場合には、表３で示した患者症例の分類を用いて解析を行った。【００４１】
２．解析結果
［実施例１］
［アスベスト曝露により発現が変動するｍｉＲＮＡ（Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔにおける解析）］
Ｔｒａｉｎｉｎｇ  ＳｅｔにおいてＡＢ＝０群（ｎ＝３４）、０＜ＡＢ＜５０００群（ｎ＝２８）、ＡＢ≧５０００群（ｎ＝７３）の相互間で３種類の比較をし、Ｏｎｅｗａｙ  ＡＮＯＶＡ検定（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ補正）でｐ値により有意となる変動幅を示したｍｉＲＮＡの数を表４に示した。ｐ＜０．０５という条件では、３８個のｈｓａ−ｍｉＲＮＡ（ｈｓａ−ｍｉＲ）が抽出された。【００４２】
【表４】
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【００４３】
Ｐ＜０．０５の条件では３８個のｈｕｍａｎ  （ｈｓａ−）ｍｉＲＮＡが残った。この３８個を表５に示した。例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−４３１については、ｐ値は１．３９Ｅ−０２（ｐ＝０．０１３９）であり、ＡＢ≧５０００群とＡＢ＝０群との間の比較（［２］ｖｓ［０］）におけるｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ（ＦＣ）は３．８２倍で、アスベストの増加と共に発現量は減少した（ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ、表中、ｄｏｗｎで示す。）。この表では、ＡＢ＝０群とＡＢ≧５０００群間の比較（［２］ｖｓ［０］）、すなわちアスベスト暴露によりアスベストの沈着量が高い群と、アスベスト沈着の無い群において、ＦＣの大きいｍｉＲＮＡを上から順に示した。ＡＢ＝０群とＡＢ≧５０００群間の比較（［２］ｖｓ［０］）において、ＦＣ１．５０以上のｍｉＲＮＡ１４種については、表中で影をつけて示している。【００４４】
なお、表中ＦＣはシグナル値の比であるＦｏｌｄ  Ｃｈａｎｇｅを示し、Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎの欄の（［１］ｖｓ［０］）は、［１］（０＜ＡＢ＜５０００）と［０］（アスベスト小体無し）間の比較、（［２］ｖｓ［０］）は［２］（ＡＢ≧５０００）と［０］（アスベスト小体無し）間の比較、（［２］ｖｓ［１］）は、［２］（ＡＢ≧５０００）と［１］（０＜ＡＢ＜５０００）との比較を表す。また、ｕｐは、ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎであり、発現量の増加、ｄｏｗｎは、ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎであり、発現量の減少を示す。さらに、ｃｈｒは、ｍｉＲＮＡの染色体上の位置を示す。【００４５】
【表５】
2017110687.tif 000009
【００４６】
また、発現量がアスベスト沈着量とどのように関連しているか、症例がどのようにクラスターしているかを、主成分分析と階層クラスター解析を行った。ここでは、結果を図示しないが、どちらのクラスター解析の結果も、アスベスト沈着量が多い症例は、比較的まとまりがあるように見えるが、ＡＢ≧５０００とＡＢ＝０がきれいに分かれているとは言えなかった。【００４７】
［実施例２］
［喫煙により発現が変動するｍｉＲＮＡ（Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔにおける解析）］
同様の解析を、喫煙についてもＴｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔにおいて実施した。すなわち、ＳＩ＝０群（ｎ＝４９、［０］）、０＜ＳＩ＜４００群（ｎ＝２４、［１］）、ＳＩ≧４００群（ｎ＝１２９、［２］）の相互間で３種類の比較をし、Ｏｎｅｗａｙ  ＡＮＯＶＡ検定（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ補正）でｐ値により有意となる変動幅を示したｍｉＲＮＡの数を表６に示した。Ｐ＜０．０５の条件で５０個のｈｕｍａｎ（ｈｓａ−）  ｍｉＲＮＡが残った。【００４８】
【表６】
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【００４９】
Ｐ＜０．０５の５０個のｍｉＲＮＡを表７に示した。アスベストの場合と同様に、この表では、ＳＩ＝０群とＳＩ≧４００群間の比較（［２］ｖｓ［０］）において、ＦＣの大きいｍｉＲＮＡを上から順に示した。【００５０】
【表７】
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【００５１】
ここでは、結果を図示しないが、発現量が喫煙量とどのように関連しているについても、主成分分析と階層クラスター解析で示した。主成分分析の結果では、喫煙量が多い症例は、比較的まとまりがあるように見えたが、階層クラスター解析では、非喫煙者がまとまっているとは言いがたかった。【００５２】
［実施例３］
［アスベスト曝露に関連して、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔで得られたｍｉＲＮＡのＶａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおける検証］
実施例１に示したように、アスベストの曝露（ＡＢ≧５０００）に関連してＦＣ＞１．５の条件を満たしたもの（表５、ＦＣ［２］ｖｓ［０］）は１４個であったが、条件を少し緩めてＦＣ＞１．４として抽出される２１個のｍｉＲＮＡに関して、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔにおける傾向（ｕｐ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎかｄｏｗｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎか）がＶａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔで再現されるかどうかを検討した。表８に、対象とした２１個のｍｉＲＮＡと、それらのＶａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおける統計値を示す。【００５３】
【表８】
2017110687.tif 000012
【００５４】
相関回帰分析による検定で有意（ｐ＜０．０５）となったのは、ｍｉＲ−４３１，ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−１９７３、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−７６５、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ｂの９個であった。また、ｍｉＲ−３２０ｃは、ｐ値が０．０８６４であり、境界領域のｍｉＲＮＡであり、有効である可能性がある。これら９つのｍｉＲＮＡは、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔにおいてアスベスト沈着量と有意に相関があるものとして抽出され、さらに、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおいても有意な相関が見られたｍｉＲＮＡである。したがって、これらのｍｉＲＮＡによって、アスベスト沈着量を推定することができる。【００５５】
［実施例４］
［喫煙に関連して、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔで得られたｍｉＲＮＡのＶａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおける検証］
実施例３と同様に、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔにおける解析により抽出した、喫煙群において有意に発現変動した８個のｍｉＲＮＡを用いて、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおける相関性を、単回帰分析により検定した。その結果、表９に示すように、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおいてｐ＜０．０５の水準で有意となったものは無かった。【００５６】
【表９】
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【００５７】
［実施例５］
［アスベストと喫煙との混合曝露の解析］
アスベストとタバコの混合曝露を解析するために、表３に示す１４９症例を用いた４群を構成した。Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔは９８例、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔは５１例である。表１０にＴｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔを構成する症例数を示す。【００５８】
【表１０】
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【００５９】
ａ群とｃ群とを比較して、非喫煙者におけるアスベスト曝露を特徴づけるｍｉＲＮＡを、ｐ＜０．０５およびＦＣ＞２．０の条件で１０個抽出した。ｂ群とｄ群との比較では、重喫煙者におけるアスベスト曝露を特徴付けるｍｉＲＮＡを、ｐ＜０．０５、ＦＣ＞１．５の条件で８個抽出した。一方、ｄ群とｃ群との比較により、アスベスト曝露なし群における喫煙を特徴づけるｍｉＲＮＡは、ｐ＜０．０５、ＦＣ＞１．２の条件で３個抽出された。ｂ群とａ群との比較では、アスベスト沈着群における喫煙を特徴づけるｍｉＲＮＡを、ｐ＜０．０５、ＦＣ＞１．５の条件で２０個抽出できた。抽出された各群でのｍｉＲＮＡを表１１（表１１−１〜表１１−２）に示す。【００６０】
【表１１−１】
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【００６１】
【表１１−２】
2017110687.tif 000016
【００６２】
次に、Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｓｅｔで抽出されたこれらのｍｉＲＮＡについて、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおいて有意かどうかを検討した。結果をまとめて表１２に示す。【００６３】
【表１２】
2017110687.tif 000017
【００６４】
非喫煙者におけるアスベスト曝露を特徴付けるｍｉＲＮＡ１０個のうち、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９９ｂの６個が有意に相関、あるいは境界値であった。重喫煙者においてアスベスト曝露を特徴付ける８個のｍｉＲＮＡでは、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３７８ｂ、ｍｉＲ５７４−５ｐの３個が有意、あるいは境界値であった。一方、喫煙については、アスベスト沈着なしの群で喫煙を特徴づける３個のｍｉＲＮＡは、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔではいずれも有意とならなかった。アスベスト曝露群で喫煙と相関していた２０個のｍｉＲＮＡでは、ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂ、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂの７個が有意、あるいは境界値であった。【００６５】
以上の結果から、ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７は、ｐ値が０．０５未満であることから、非喫煙者におけるアスベストの有無を特徴付けるｍｉＲＮＡとして統計学的に有意である。また、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９９ｂは、ｐ値が０．０５以上０．１未満の境界領域のｍｉＲＮＡであり、非喫煙者におけるアスベストの有無を特徴付けるｍｉＲＮＡとして有効である可能性がある。また、ｍｉＲ−５７４−５ｐは、ｐ値が０．０５未満であることから、重喫煙者におけるアスベストの有無を特徴付けるｍｉＲＮＡとして統計学的に有意である。ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３７８ｂは、ｐ値が０．０５以上０．１未満の境界領域のｍｉＲＮＡであり、重喫煙者におけるアスベストの有無を特徴付けるｍｉＲＮＡとして有効である可能性がある。さらに、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂはｐ値が０．０５未満であることから、アスベスト沈着群における喫煙の有無を特徴付けるｍｉＲＮＡとして統計学的に有意である。ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂは、ｐ値が０．０５以上０．１未満の界領域のｍｉＲＮＡであり、アスベスト沈着群における喫煙の有無を特徴付けるｍｉＲＮＡとして有効である可能性がある。【００６６】
これらのうち、ｐ＜０．０５で有意なもの、あるいは境界領域であり有効である可能性の高いもの１１個のｍｉＲＮＡ（非喫煙におけるアスベスト暴露を特徴付けるｍｉＲＮＡ：ｍｉＲ−１４７１、ｍｉＲ−３１３７、ｍｉＲ−３６５１、ｍｉＲ−４２５７、ｍｉＲ−９２ａ、重喫煙におけるアスベスト暴露を特徴付けるｍｉＲＮＡ：ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、アスベスト暴露群における喫煙を特徴づけるｍｉＲＮＡ：ｍｉＲ−１９７２、ｍｉＲ−３６４８、ｍｉＲ-５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ｂ）について、Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｅｔにおける症例分布と回帰曲線を図１に示した。図１に示すように、回帰曲線の傾きは比較的大きく、アスベスト小体計測に代わるマーカーとしてこれらｍｉＲＮＡの発現の変化を使用できることは明らかである。ししたがって、これらｍｉＲＮＡをマーカーとして使用することにより、石綿救済制度が適用できる患者を精度よく見極めることができる。【００６７】
また、これらｍｉＲＮＡは新たな肺癌のマーカーでもあることから、これらｍｉＲＮＡを指標に薬剤のスクリーニング、あるいはｍｉＲＮＡ自体を肺癌の治療薬として使用できる可能性もある。
【図１】
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【国際調査報告】
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