(57)【要約】  本発明は、糖尿病性腎症（特に初期の糖尿病性腎症）の発症リスクや病期を判定できるバイオマーカーを提供することを課題とする。  被験者から採取された生体試料、好ましくは血漿や尿中のフェニル硫酸又はその塩（フェニル硫酸類）濃度を測定又は定量することにより、フェニル硫酸類を検出し、糖尿病性腎症を判定する。本発明は、第１期（腎症前期）〜第３期（顕性腎症期）の病期判定や、糖尿病性腎症（早期腎症期の糖尿病性腎症）の発症リスクの判定に、特に優れた効果を発揮する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者から採取された生体試料中のフェニル硫酸又はその塩を検出することを特徴とする、糖尿病性腎症の判定方法。
【請求項２】
生体試料が血液又は尿であることを特徴とする請求項１に記載の判定方法。
【請求項３】
被験者が、糖尿病性腎症を発症していない被験者であり、かつ
被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の閾値以上である場合、被験者は、糖尿病性腎症を発症する可能性が高いことを示すことを特徴とする請求項２に記載の判定方法。
【請求項４】
所定の閾値が、５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であることを特徴とする請求項３に記載の判定方法。
【請求項５】
被験者が、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者、又は糖尿病性腎症の病期が不明な被検者であり、かつ
被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の閾値未満である場合、被験者は、腎症前期の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、
被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の値Ａの範囲内である場合、被験者は、早期腎症期又は顕性腎症期の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、
被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の値Ｂの範囲内である場合、被験者は、顕性腎症期の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示すことを特徴とする請求項２に記載の判定方法。
【請求項６】
所定の閾値が、０．５１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であり、
所定の値Ａが、５４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であり、
所定の値Ｂが、７４．１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であることを特徴とする請求項５に記載の判定方法。
【請求項７】
フェニル硫酸又はその塩からなる、糖尿病性腎症を判定するためのバイオマーカー。
【請求項８】
糖尿病性腎症の判定が、糖尿病性腎症の発症リスクの判定であることを特徴とする請求項７に記載のバイオマーカー。
【請求項９】
糖尿病性腎症の判定が、糖尿病性腎症の病期の判定であることを特徴とする請求項７に記載のバイオマーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病性腎症の判定方法や、かかる判定方法に用いる糖尿病性腎症の判定用バイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は種々の慢性血管合併症を起こすことが知られており、その予後はその合併症により左右される。中でも糖尿病性腎症は生命予後にとって重要であるため、その発症や発症リスクを早期に診断し進行を阻止することが望まれている。【０００３】
従来、糖尿病性腎症の病期の診断は、糖尿病の既往に加え、尿所見の変化（タンパク尿・微量アルブミン尿の検出）や、推算糸球体濾過量値（ｅＧＦＲ）の低下や、眼底検査所見（眼底血管病変の観察）に基づいて行っていた。しかし、これら診断では、糖尿病性腎症以外の他の腎疾患と区別するためには不十分であることが問題とされていた。【０００４】
一方、近年、尿又は血中の新規バイオマーカーの探索研究も行われている。例えば、ＳＥＬＤＩ（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization）−飛行時間型質量分析計（ＴＯＦＭＳ）を用いて、２型糖尿病患者の中から糖尿病性腎症患者を識別するために有用な尿中タンパク質を報告している（非特許文献１）。また、キャピラリー電気泳動質量分析計（ＣＥ−ＭＳ）を用いて、尿中ポリペプチドをプロファイリングし、健常者と２型糖尿病患者を識別し得るパターンを見出している（非特許文献２）。しかし、これら文献記載の発明は、糖尿病性腎症の病期や、糖尿病性腎症の発症リスクを判定できるバイオマーカーに関するものではない。また、ＣＥ−ＴＯＦＭＳを用いて、糖尿病性腎症の早期識別を可能にするバイオマーカーが同定されたことが報告されている（特許文献１）。しかし、同定されたバイオマーカー（化合物）の濃度は、異なる病期間で統計学的有意差は示されているものの、その差は少なく、実用化可能なものであるか不明である。また、かかるバイオマーカーは、糖尿病性腎症の発症リスクを判定できるものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１４−３２０４６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Dihazi, H. et al, Clin Chem 2007, 53:1636-1645.
【非特許文献２】Mischak, H. et al, Clin Sci (Lond) 2004, 107:485-495.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、糖尿病性腎症（特に初期の糖尿病性腎症）の発症リスクや病期を判定できるバイオマーカーを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため、フェニル硫酸塩（ＰＳ）濃度と、糖尿病性腎症の指標であるＡＣＲとの関連性について解析を進めたところ、ＰＳ濃度増加を指標として、糖尿病性腎症（特に初期の糖尿病性腎症）の発症リスクや病期を判定できることを見いだし、本発明を完成するに至った。【０００９】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
［１］被験者から採取された生体試料中のフェニル硫酸又はその塩を検出することを特徴とする、糖尿病性腎症の判定方法。
［２］生体試料が血液又は尿であることを特徴とする上記［１］に記載の判定方法。
［３］被験者が、糖尿病性腎症を発症していない被験者であり、かつ被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の閾値以上である場合、被験者は、糖尿病性腎症を発症する可能性が高いことを示すことを特徴とする上記［２］に記載の判定方法。
［４］所定の閾値が、５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であることを特徴とする上記［３］に記載の判定方法。
［５］被験者が、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者、又は糖尿病性腎症の病期が不明な被検者であり、かつ被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の閾値未満である場合、被験者は、腎症前期の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の値Ａの範囲内である場合、被験者は、早期腎症期又は顕性腎症期の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の値Ｂの範囲内である場合、被験者は、顕性腎症期の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示すことを特徴とする上記［２］に記載の判定方法。
［６］所定の閾値が、０．５１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であり、所定の値Ａが、５４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であり、所定の値Ｂが、７４．１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であることを特徴とする上記［５］に記載の判定方法。
［７］フェニル硫酸又はその塩からなる、糖尿病性腎症を判定するためのバイオマーカー。
［８］糖尿病性腎症の判定が、糖尿病性腎症の発症リスクの判定であることを特徴とする上記［７］に記載のバイオマーカー。
［９］糖尿病性腎症の判定が、糖尿病性腎症の病期の判定であることを特徴とする上記［７］に記載のバイオマーカー。【００１０】
上記本発明の判定方法は、医師による糖尿病性腎症の診断を補助する方法であって、医師による診断行為を含まない。また、上記判定方法のその他の態様としては、糖尿病性腎症を診断するためのデータを収集する方法を挙げることができる。【００１１】
また、本発明の実施の他の形態として、被験者から採取された生体試料中のフェニル硫酸又はその塩を検出することを特徴とする糖尿病性腎症の診断方法を挙げることができる。かかる診断方法としては、糖尿病性腎症と診断された被験者（患者）の腎機能を向上させるために、前記診断された被験者（患者）に治療を施す工程をさらに備えるものが好ましい。
また、本発明の実施の他の形態として、糖尿病性腎症の診断（判定）方法におけるバイオマーカーとして使用のためのフェニル硫酸又はその塩を挙げることができる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によると、比較的初期の糖尿病性腎症の発症リスクや発症の有無を精度よく判定することができるため、糖尿病性腎症の早期発見に必要な定期健診等の糖尿病性腎症の検診者の増加が期待される他、糖尿病性腎症の発症を予防したり、初期の段階で糖尿病性腎症を効果的に治療することが可能となるため、腎機能障害や腎不全への進行を防ぎ、ＱＯＬ（Quality of Life）の向上や医療費削減等の効果が期待される。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の糖尿病性腎症の判定方法（以下、単に「本件判定方法」という）としては、被験者（提供者）から採取された生体試料中のフェニル硫酸又はその塩（以下、これらを総称して「フェニル硫酸類」ということがある）濃度を測定又は定量することにより、フェニル硫酸類を検出し、糖尿病性腎症を判定する方法（但し、医師による診断行為を除く。）であれば特に制限されず、また、本発明の糖尿病性腎症を判定するためのバイオマーカー（以下、単に「本件バイオマーカー」という）としては、フェニル硫酸類からなる、被験者における糖尿病性腎症の判定（診断）用バイオマーカーであれば特に制限されず、ここで「糖尿病性腎症の判定」には、糖尿病性腎症の発症リスクの判定や、糖尿病性腎症の病期（ステージ）の判定が含まれる。
【００１４】
上記糖尿病性腎症の病期（ステージ）は、糖尿病性早期腎症の指標である尿アルブミン／クレアチニン比（ＡＣＲ）や、推算糸球体濾過量値（ｅＧＦＲ）を基に分類することができる。例えば、糖尿病性腎症合同委員会による２０１３年１２月付で改訂された糖尿病性腎症病期分類に基づき分類した場合、ＡＣＲが３０（ｍｇ／ｇ）未満の正常アルブミン尿であり、かつｅＧＦＲが３０（ｍＬ／分／１．７３ｍ２）以上を示す糖尿病患者は、第１期（腎症前期）に分類され、ＡＣＲが３０〜２９９（ｍｇ／ｇ）の微量アルブミン尿であり、かつｅＧＦＲが３０（ｍＬ／分／１．７３ｍ２）以上を示す糖尿病患者は、第２期（早期腎症期）に分類され、ＡＣＲが３００（ｍｇ／ｇ）以上の顕性アルブミン尿、又は持続性蛋白尿が０．５以上であり、かつｅＧＦＲが３０（ｍＬ／分／１．７３ｍ２）以上を示す糖尿病患者は、第３期（顕性腎症期）に分類され、ｅＧＦＲが３０（ｍＬ／分／１．７３ｍ２）未満を示す糖尿病患者（好ましくはＡＣＲが３００［ｍｇ／ｇ］以上の顕性アルブミン尿、又は持続性蛋白尿が０．５以上を示す糖尿病患者）は、第４期（腎不全期）に分類され、透析療法中の糖尿病患者は、第４期（透析療法期）に分類される。本件判定方法や本件バイオマーカーは、第１期（腎症前期）〜第３期（顕性腎症期）の病期判定に、特に優れた効果を発揮する。
【００１５】
本発明において、「糖尿病性腎症の発症」とは、微量アルブミン尿が検出される、第２期（早期腎症期）以降の病期の糖尿病性腎症を発症した状態を意味する。すなわち、第１期（腎症前期）は糖尿病性腎症の発症前に相当し、第２期（早期腎症期）は糖尿病性腎症の発症後（糖尿病性腎症が発症した状態）に相当する。本件判定方法や本件バイオマーカーは、第１期（腎症前期）の病期において、糖尿病性腎症（早期腎症期の糖尿病性腎症）の発症リスクの判定に、特に優れた効果を発揮する。
【００１６】
上記被験者としては、糖尿病性腎症を発症していない被検者や、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期（進行度）が不明な被検者（糖尿病性腎症患者）を挙げることができる。かかる糖尿病性腎症かどうか不明な被験者には、過去に糖尿病性腎症に罹患したことがあり、被検時に糖尿病性腎症かどうか不明な被験者も含まれ、また、上記糖尿病性腎症の病期（進行度）が不明な糖尿病性腎症患者には、過去に糖尿病性腎症に罹患したことがあり、被検時に糖尿病性腎症の病期（進行度）が不明な糖尿病性腎症患者も含まれる。
【００１７】
上記生体試料としては、組織、細胞、器官等の非液性試料や、血液、尿、唾液等の液性試料を挙げることができ、これらの中でも血液（血漿、血清）又は尿が好ましい。
【００１８】
本件判定方法において、検出対象のフェニル硫酸や、本件バイオマーカーのフェニル硫酸は下記の化合物（分子量１７４．１７）である。
【００１９】
【化１】
2017056498.tif 000002
【００２０】
本件判定方法において、検出対象のフェニル硫酸塩や、本件バイオマーカーのフェニル硫酸塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から生成された金属塩や、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リジン、プロカイン等から生成された有機塩などが含まれる。
【００２１】
本件判定方法において、糖尿病性腎症を発症していない被験者から採取された生体試料中のフェニル硫酸類の濃度が、健常者由来の生体試料と比較して高い場合、かかる被験者は糖尿病性腎症を発症する可能性（リスク）が高いことを示し、糖尿病性腎症を発症していない被験者から採取された生体試料中のフェニル硫酸類の濃度が、健常者由来の生体試料と比較して高くない場合、かかる被験者は糖尿病性腎症を発症する可能性が低いことを示す。なお、かかる健常者由来の生体試料は、採取された後に、被験者由来の生体試料と同様の処理が施されたものが好ましい。
【００２２】
また、本件判定方法において、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被検者から採取された生体試料中のフェニル硫酸類の濃度が、対照者由来の生体試料と比較して高い場合、かかる被験者は対照者よりも糖尿病性腎症の病期が進行している可能性が高いことを示し、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被験者から採取された生体試料中のフェニル硫酸類の濃度が、対照者由来の生体試料と比較して高くない場合、かかる被験者は対照者よりも糖尿病性腎症の病期が進行している可能性が低いことを示す。なお、かかる対照者由来の生体試料は、採取された後に、被験者由来の生体試料と同様の処理が施されたものが好ましい。
【００２３】
また、本件判定方法において、糖尿病性腎症を発症していない被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値以上（超）、例えば、５．２（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、好ましくは５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、より好ましくは６．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、さらに好ましくは７．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上である場合、かかる被験者は、糖尿病性腎症を発症する可能性が高いことを示し、糖尿病性腎症を発症していない被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値未満（以下）、例えば、５．２（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、好ましくは５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、より好ましくは６．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、さらに好ましくは７．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満である場合、かかる被験者は、糖尿病性腎症を発症する可能性が低いことを示す。
【００２４】
また、本件判定方法において、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値未満（以下）、例えば、０．５１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、好ましくは０．５０（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、より好ましくは０．４９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、さらに好ましくは０．４８（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、さらにより好ましくは０．４７（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下である場合、かかる被験者は、上記第１期（腎症前期）の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、所定の閾値以上（超）、例えば、０．５１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、好ましくは０．５０（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、より好ましくは０．４９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、さらに好ましくは０．４８（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、さらにより好ましくは０．４７（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超である場合、被験者は、上記第１期（腎症前期）の糖尿病性腎症に分類される可能性が低いことを示す。
【００２５】
また、本件判定方法において、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値超（以上）、例えば、５４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、好ましくは５４．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、より好ましくは５４．６（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、さらに好ましくは５４．７（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、さらにより好ましくは所定の値の範囲内、例えば、５４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の範囲内、特に好ましくは５４．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の範囲内、最も好ましくは５４．６（ｎｍｏｌ／ｍＬ）〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の範囲内である場合、かかる被験者は、上記第２期（早期腎症期）又は第３期（顕性腎症期）の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値以下（未満）又は以上（超）、例えば、５４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、好ましくは５４．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、より好ましくは５４．６（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、さらに好ましくは５４．７（ｎｍｏｌ／ｍＬ）未満、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上である場合、被験者は、上記第２期（早期腎症期）又は第３期（顕性腎症期）の糖尿病性腎症に分類される可能性が低いことを示す。
【００２６】
また、本件判定方法において、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値超（以上）、例えば、７４．１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、好ましくは７４．２（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、より好ましくは７４．３（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、さらに好ましくは７４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上、さらにより好ましくは所定の値の範囲内、例えば、７４．１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の範囲内、特に好ましくは７４．２（ｎｍｏｌ／ｍＬ）〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の範囲内、最も好ましくは７４．３（ｎｍｏｌ／ｍＬ）〜１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の範囲内である場合、かかる被験者は、上記第３期（顕性腎症期）の糖尿病性腎症に分類される可能性が高いことを示し、糖尿病性腎症かどうか不明な被験者や、糖尿病性腎症の病期が不明な被験者から採取された血液中のフェニル硫酸類の濃度が、所定の閾値以下（未満）又は超（以上）、例えば、７４．１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、好ましくは７４．２（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、より好ましくは７４．３（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超、さらに好ましくは７４．４（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以下、又は１５９（ｎｍｏｌ／ｍＬ）超である場合、かかる被験者は、上記第３期（顕性腎症期）の糖尿病性腎症に分類される可能性が低いことを示す。
上記所定の閾値（カットオフ値）や所定の値は、糖尿病性腎症発症患者、健常者、及び／又は対照者から採取された生体試料中のフェニル硫酸類濃度のデータを基に、定法にしたがって算出することができる。
【００２７】
本件判定方法において、フェニル硫酸類を検出する方法としては、フェニル硫酸類の濃度を測定又は定量できる方法であればどのような方法であってもよく、具体的には、質量分析計（ＭＳ）を用いた質量分析法や、免疫組織化学染色法を挙げることができ、これらの中でも、質量分析法が好ましい。
【００２８】
上記質量分析計（ＭＳ）としては、例えば、液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフ質量分析計（ＧＣ／ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析計（ＣＥ−ＭＳ）、ＥＬＤＩ（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization）−飛行時間型質量分析計（ＴＯＦＭＳ）を挙げることができる。
【００２９】
上記免疫組織化学染色法としては、例えば、フェニル硫酸類に特異的に結合する抗体を用い、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、免疫組織染色法、ウエスタンブロッティング法により解析する方法を挙げることができる。
【００３０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３１】
被検者３１６名（男性１４３名、女性１７３名）から血漿サンプル及び尿サンプルを採取し、性別、１１種類の項目（フェニル硫酸塩［ＰＳ］濃度、心拍数、血漿グルコース濃度、ヘモグロビンＡ１ｃ［ＨｂＡ１ｃ］値、尿ｐＨ値、推算糸球体濾過量値［ｅＧＦＲ］、尿アルブミン／クレアチニン比［ＡＣＲ］、トリグリセライド［ＴＧ］値、尿酸［ＵＡ］値、血中尿素窒素［ＢＵＮ］値、脈波伝播速度［ＰＷＶ］値）について検査した。ＰＳ濃度を従属関数とし、ＰＳ濃度を除く上記１０種類の項目の検査値の他、年齢及び性別を加えた１２種類の値を独立変数として重回帰分析を行った。その結果、ＰＳ濃度は、糖尿病の指標である血漿グルコース濃度（ｐ＝０．３４３）及びＨｂＡ１ｃ値（ｐ＝０．３５１）や、腎機能の指標であるｅＧＦＲ（ｐ＝０．５１２）及びＢＵＮ値（ｐ＝０．０４６）や、肝機能の指標であるＴＧ値（ｐ＝０．３６８）、痛風の指標であるＵＡ値（ｐ＝０．５２４）や、動脈硬化の指標であるＰＷＶ値（０．２１３）等よりも、糖尿病性早期腎症の指標であるＡＣＲと高い相関関係（ｐ＜０．００１）を示した。【００３２】
糖尿病性腎症合同委員会は、２０１３年１２月付で“ＡＣＲが３０〜２９９ｍｇ／ｇの場合に、糖尿病性早期腎症と診断する”との新しい早期診断基準を規定した。そこで、被検者を、それぞれＡＣＲが０〜３０（ｍｇ／ｇ）未満（正常アルブミン尿）、３０〜２９９（ｍｇ／ｇ）（微量アルブミン尿）、及び３００（ｍｇ／ｇ）以上（顕性アルブミン尿）を示す群（それぞれ腎症前期群、早期腎症期群、及び顕性腎症期群という）に分類し、ＰＳ濃度との関連性を調べた（表１）。【００３３】
【表１】
2017056498.tif 000003
表中の「＊」は、「０〜３０（ｍｇ／ｇ）未満ＡＣＲ」の血中ＰＳ濃度（ｎｍｏｌ／ｍＬ）に対して、統計学的に有意差（ｐ＝０．０３５）があることを示す。
また、表中の「＊＊」は、「０〜３０（ｍｇ／ｇ）未満ＡＣＲ」及び「３０〜３００（ｍｇ／ｇ）ＡＣＲ」の血中ＰＳ濃度（ｎｍｏｌ／ｍＬ）に対して、統計学的に有意差（それぞれｐ＝０．０００１９２、及びｐ＝０．００１１１）があることを示す。
また、表中の「＊＊＊」は、「０〜３０（ｍｇ／ｇ）未満ＡＣＲ」及び「３０〜３００（ｍｇ／ｇ）ＡＣＲ」の尿中ＰＳ濃度（ｎｍｏｌ／ｍＬ）に対して、統計学的に有意差（それぞれｐ＝０．０００１６７、及びｐ＝０．００３９２）があることを示す。【００３４】
その結果、血中のＰＳ濃度は、腎症前期群よりも早期腎症期群の方が高く、また、早期腎症期群よりも顕性腎症期群の方が高かった。この結果は、尿アルブミン値で定義される糖尿病性腎症のステージが進行するにつれて血中のＰＳ濃度は増加することを示している（表１）。
また、尿中のＰＳ濃度は、腎症前期群と早期腎症期群の間で違いは認められなかったものの、腎症前期群や早期腎症期群と比べ、顕性腎症期群の方が高かった。
以上の結果から、血中や尿中のＰＳ濃度の増加を指標として、糖尿病性腎症の病期（特に初期）を判定できることが示された。【００３５】
一方、健常者由来の血中ＰＳ濃度は、０．０７±０．０２（ｍｇ／ｄＬ）（≒４．０±１．１［ｎｍｏｌ／ｍＬ］）であることが知られている（文献「Itoh, Y. et al, Anal. Bioanal. Chem. 2012, 403:1841-1850」）。すなわち、健常者由来の血中ＰＳ濃度が正規分布していると仮定した場合、４．０±１．１（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の血中ＰＳ濃度を示す健常者は、全体の約６８％であり、４．０±２．２（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の血中ＰＳ濃度を示す健常者は、全体の約９５％であり、４．０±３．３（ｎｍｏｌ／ｍＬ）の血中ＰＳ濃度を示す健常者は、全体の約９９％である。そこで、ＰＳ濃度の閾値を、５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）、６．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）、及び７．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）に設定し、糖尿病性腎症（早期腎症期）の発症前にＰＳ濃度が増加しているかどうか確認した（表２）。【００３６】
【表２】
2017056498.tif 000004
表中の「５．５未満」、「６．５未満」、「７．５未満」、「５．５以上」、「６．５以上」、及び「７．５以上」は、血中のＰＳ濃度（ｎｍｏｌ／ｍＬ）を示す。括弧の数値（％）は、被検者全体に対する割合を示す。【００３７】
その結果、ＰＳ濃度の閾値を、５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）、６．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）、及び７．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）のいずれで設定した場合においても、糖尿病性腎症（早期腎症期の糖尿病性腎症）の発症前の腎症前期において、ＰＳ濃度が増加している被検者が含まれることが示された（表２の「５．５以上」、「６．５以上」、及び「７．５以上」）。
ＰＳ濃度の増加を指標として、糖尿病性腎症の病期を判定できることを示す表１の結果と合わせて考えると、このように糖尿病性腎症の発症前にＰＳ濃度の増加が認められた被験者は、糖尿病性腎症を発症するリスクが高いと考えられる。また、血中ＰＳ濃度が正規分布していると仮定した場合、５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上の血中ＰＳ濃度を示す被検者は、少なくとも８４％の確率で健常者の血中ＰＳ濃度よりも上昇しているといえ、また、６．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上の血中ＰＳ濃度を示す被検者は、少なくとも９７．５％の確率で健常者の血中ＰＳ濃度よりも上昇しているといえ、また、７．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）以上の血中ＰＳ濃度を示す被検者は、少なくとも９９．５％の確率で健常者の血中ＰＳ濃度よりも上昇しているといえる。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明は、糖尿病性腎症の早期発見及び早期治療や、糖尿病性腎症発症の予防に資するものである。
【手続補正書】
【提出日】平成29年2月28日(2017.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者から採取された血液試料中のフェニル硫酸又はその塩を検出することを特徴とする、糖尿病性腎症の発症リスクの判定方法。
【請求項２】
被験者が、糖尿病性腎症を発症していない被験者であり、かつ
被験者から採取された血液中のフェニル硫酸又はその塩の濃度が、所定の閾値以上である場合、被験者は、糖尿病性腎症を発症する可能性が高いことを示すことを特徴とする請求項１に記載の判定方法。
【請求項３】
所定の閾値が、５．５（ｎｍｏｌ／ｍＬ）であることを特徴とする請求項２に記載の判定方法。
【請求項４】
血液試料中のフェニル硫酸又はその塩からなる、糖尿病性腎症の発症リスクを判定するためのバイオマーカー。
【国際調査報告】
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