(57)【要約】  ＣＯＰＤ、間質性肺炎及び喘息といった慢性呼吸器疾患の予防又は治療に有効な新たな薬剤を提供する。  慢性呼吸器疾患治療剤は、一般式（１）【化１】2016171102.tif 000017（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含む。
2016171102.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2016171102.tif 000014
（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含むことを特徴とする慢性呼吸器疾患治療剤。
【請求項２】
前記ハイドロキノン誘導体が、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル ４−アセテートであることを特徴とする請求項１に記載の慢性呼吸器疾患治療剤。
【請求項３】
前記慢性呼吸器疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺炎及び喘息からなる群より選ばれた少なくとも１つの疾患であることを特徴とする請求項１又は２に記載の慢性呼吸器疾患治療剤。
【請求項４】
前記慢性呼吸器疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）であることを特徴とする請求項１又は２に記載の慢性呼吸器疾患治療剤。
【請求項５】
前記間質性肺炎が、薬剤により惹起されるものであることを特徴とする請求項３に記載の慢性呼吸器疾患治療剤。
【請求項６】
前記薬剤が、ブレオマイシン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ボルテゾミブ、シスプラチン、オキサリプラチン、シクロフォスファミド、アザチオプリン、タクロリムス、ペニシラミン、メトトレキサート、サラゾスルファピリジン、レフルノミド、ヒドララジン、小柴胡湯、アミオダロン及びインターフェロンからなる群から選ばれる少なくとも１種の薬剤であることを特徴とする請求項５に記載の慢性呼吸器疾患治療剤。
【請求項７】
一般式（１）
【化２】
2016171102.tif 000015
（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含む慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物。
【請求項８】
前記ハイドロキノン誘導体が、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル ４−アセテートであることを特徴とする請求項７に記載の慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物。
【請求項９】
前記慢性呼吸器疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺炎及び喘息からなる群より選ばれた少なくとも１つの疾患であることを特徴とする請求項７又は８に記載の慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１０】
前記慢性呼吸器疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）であることを特徴とする請求項７又は８に記載の慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物。
【請求項１１】
一般式（１）
【化３】
2016171102.tif 000016
（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含むことを特徴とする心臓の線維化抑制組成物。
【請求項１２】
前記ハイドロキノン誘導体が、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル ４−アセテートであることを特徴とする請求項１１に記載の心臓の線維化抑制組成物。
【請求項１３】
前記心臓の線維化が、薬剤により惹起されるものであることを特徴とする請求項１１又は１２に記載の心臓の線維化抑制組成物。
【請求項１４】
前記薬剤が、アントラサイクリン系抗癌剤であることを特徴とする請求項１３に記載の心臓の線維化抑制組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は特定のハイドロキノン誘導体を有効成分とする慢性呼吸器疾患治療剤、慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物、心臓の線維化抑制組成物及び薬剤の副作用軽減組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性呼吸器疾患とは、非感染性の気道や肺組織の慢性疾患であり、主なものとして、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息及び間質性肺炎等が挙げられる。このうち、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）とは、主にタバコの煙や汚染された大気といった有害物質を長期に吸入することによって発症する肺の炎症性疾患であり、進行性の気流閉塞を呈する。ＣＯＰＤの有病率及び死亡率は世界的に高いレベル（世界の死因の第４位、ＷＨＯ調査、２００４年）にあり、今後数十年間は患者数が増加すると予測されている。また、ＣＯＰＤという疾患が一般に広く認知されていない状態であることから、潜在的な患者も相当数いるものと考えられる。【０００３】
また、慢性呼吸器疾患のうち、間質性肺炎は、肺の間質組織に炎症が生じた結果、炎症組織の線維化が起こることにより発症する。肺では約３億個ともいわれる肺胞に大気を取り込み、この肺胞に絡み付いた毛細血管を介してガス交換が行われているが、これらを取り囲んで支持する組織が間質である。間質が線維化すると肺全体が硬くなり肺の正常な膨張や収縮が妨げられて肺活量が低下するとともに、肺胞と毛細血管の間で行われるガス交換の効率も低下する。この間質性肺炎には発症原因がすでに明らかになっているものと原因が特定できないものが含まれるが、明らかになっている発症原因の一つに、薬剤によるものがある。例えば、ブレオマイシンはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｓから分離された抗癌性抗生物質であり、抗癌剤で頻繁にみられる骨髄抑制作用が少なく吐き気や嘔吐が比較的軽いことから多くの種類の癌に対する治療剤として用いられている。しかし、ブレオマイシンは間質性肺炎を誘発しやすいという重篤な副作用を有する。そのため、ブレオマイシンは、間質性肺炎の疾患モデル動物を作製するためにも利用されている。このブレオマイシンの他にも、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ及びボルテゾミブ等の抗癌剤、シスプラチン及びオキサリプラチン等の白金製剤（抗癌剤）、シクロフォスファミド、アザチオプリン、タクロリムス及びペニシラミン等の免疫抑制剤、メトトレキサート、サラゾスルファピリジン及びレフルノミド等の抗リウマチ薬、ヒドララジン等の血管拡張薬、小柴胡湯等の漢方薬、アミオダロン等の抗不整脈薬のほか、インターフェロン、抗菌剤、抗てんかん剤、利尿剤など非常に多くの薬剤が間質性肺炎の原因物質となることが知られている。さらに、鉱物、陶器又は石材等の粉やアスベスト等の吸引、放射線による被ばく、膠原病や感染症も間質性肺炎の原因となることが知られている。また、原因が特定できない特発性間質性肺炎は国から特定疾患、いわゆる難病に指定されている。【０００４】
上述した間質性肺炎のように、臓器の線維化疾患には難治性の疾患が多く含まれ、原因の特定が困難なものや治療方法が確立されていないものが多い。臓器の組織の線維化が進行すると臓器全体が硬くなり、中空臓器の場合には正常な拡張および収縮が困難になり機能不全に陥る。中空臓器の線維化疾患としては、上述した間質性肺炎のほか、心臓における心筋症が挙げられるが、肺と心臓はともに機能不全が死に直結する重要な臓器であるため、間質性肺炎や心筋症は致命的な疾患となる可能性がある。【０００５】
心筋症は、様々な原因により心筋細胞に炎症や変性を生じた結果、心筋細胞が壊死して線維性組織に置き換わることにより発症する。心臓の組織が線維化すると正常な収縮機能は失われ、血液を全身に送るポンプとしての心臓の機能に重大な支障を来たすことになる。この心筋症も、原因が明らかなものとそうでないものが含まれるが、上述の間質性肺炎同様に、薬剤の投与により発症することが知られている。例えば、アントラサイクリン系抗癌剤であるドキソルビシン（別名アドリアマイシン）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  Ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ  ｖａｒ．Ｃａｅｃｉｕｓから抽出された抗癌性抗生物質であり、強力かつ広い抗癌スペクトラムを有することから臨床で各種の癌の治療剤として用いられている。しかし、ドキソルビシンをはじめとしたアントラサイクリン系抗癌剤は、用量依存的に心筋障害を誘発するという重篤な副作用を有する。具体的には、ドキソルビシンの総投与量の増加とともに、徐々に心筋が線維化して心筋全体が硬化し、心筋症と同様の所見を呈することが知られている。そのため、ドキソルビシンは、心筋症の疾患モデル動物を作製するためにも利用されている。さらに、ウイルス感染、糖尿病、肥満、甲状腺疾患、アルコール等も心筋症の原因となることが知られている。【０００６】
一方、下記一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体は、強力な抗酸化作用とＮＯ産生阻害作用を有する物質である。特許文献１〜４には、このハイドロキノン誘導体を有効成分とする抗酸化剤（特許文献１）、動脈硬化治療用組成物（特許文献２）、神経変性疾患治療薬（特許文献３）及び肝線維化抑制剤（特許文献４）が記載されている。【０００７】
【化１】
2016171102.tif 000003
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平５−３０１８３６号公報
【特許文献２】特開２００２−２４１３６６号公報
【特許文献３】特開２００９−１０２２６２号公報
【特許文献４】特開２００９−２５６２２６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述したように、ＣＯＰＤでは有害物質により気道や肺の炎症反応が増強されており、治療方法としては根治的な治療法はなく、気管支拡張剤や去痰剤による対症療法のみが行われている。そのため、気道や肺の炎症反応を抑制して、深刻な病態に至らないよう、ＣＯＰＤの病状の進行を止めることのできる薬剤が求められていた。また、慢性呼吸器疾患である間質性肺炎や、心筋症といったこれらの線維化疾患はさまざまな原因により発症するということもあり、効果的な治療方法はいまだ検討されている段階である。間質性肺炎の治療薬としては、日本国内ではピルフェニドンのみが有効性が認められているが、光線過敏症や皮膚がんの危険性が高まる等の副作用を有するという問題があった。また、心筋症の治療としては、心臓移植や補助人工心臓等の外科的治療が主であり、根治的な内科的治療が求められていた。【００１０】
他方、特許文献１〜４に記載されたハイドロキノン誘導体については、各特許文献中に抗酸化剤として用いられるほか、動脈硬化、神経変性疾患及び肝線維化疾患の治療剤として用いられることは記載されているが、肺又は心臓の線維化疾患に関する検討はなされておらず、その有効性は不明であった。【００１１】
さらに、薬剤により誘発される肺や心臓の線維化疾患は、その薬剤本来の効能を期待して患者に投与された結果、副作用として生じるものである。例えば、ブレオマイシンやアントラサイクリン系抗癌剤であるドキソルビシンは、いずれも広い抗癌スペクトラムを有することから抗癌剤治療における代表的な治療薬として用いられているが、副作用としてそれぞれ肺又は心臓の線維化疾患を誘発することから、本来の抗癌治療効果は良好であるにもかかわらず、副作用の発生により投薬が中止になったり、副作用が生ずることがないよう総投与量に上限がある等、使用が制限されている。このように、重篤な疾患に有効な治療薬があるにもかかわらず、間質性肺炎や心筋障害という副作用のために、その治療薬を十分に使用できないという問題があった。【００１２】
本発明は上述した点に鑑み案出されたもので、その目的は、ＣＯＰＤ、間質性肺炎及び喘息といった慢性呼吸器疾患の予防又は治療に有効な新たな薬剤を提供することにある。【００１３】
また、本発明の他の目的としては、心臓の線維化疾患の予防又は治療に有効な新たな薬剤を提供することにある。【００１４】
また、本発明の他の目的としては、治療薬の投与により副作用として生じる肺又は心臓の線維化疾患の予防、治療又は副作用の低減に有効な新たな薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らはかかる実情に鑑み鋭意研究を重ねた結果、上記一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体がＣＯＰＤ、喘息及び間質性肺炎を抑制し、喀痰を排出させる作用並びに心筋障害を抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成させた。【００１６】
上記課題を解決するため、本発明の慢性呼吸器疾患治療剤は、以下一般式（１）（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含む。【００１７】
【化２】
2016171102.tif 000004
【００１８】
また、このハイドロキノン誘導体が、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル４−アセテートであることも好ましい。これにより、薬理活性及び生体適合性に優れ、特に有効に用いることのできる物質が選択される。【００１９】
さらに、慢性呼吸器疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺炎及び喘息からなる群より選ばれた少なくとも１つの疾患であることも好ましい。これにより、治療対象として好適な疾患が選択される。このうち、間質性肺炎は、薬剤により惹起されるものであることも好ましい。本発明の治療剤により、薬剤により誘発される肺の組織の炎症が抑制され、間質性肺炎が呈する肺の線維化が有効に抑制される。【００２０】
また、上述の薬剤は、ブレオマイシン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ボルテゾミブ、シスプラチン、オキサリプラチン、シクロフォスファミド、アザチオプリン、タクロリムス、ペニシラミン、メトトレキサート、サラゾスルファピリジン、レフルノミド、ヒドララジン、小柴胡湯、アミオダロン及びインターフェロンからなる群から選ばれる少なくとも１種の薬剤であることが好ましい。これにより、肺の線維化、すなわち、間質性肺炎を誘発する薬剤として、適当なものが選択される。【００２１】
また、本発明の慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物は、以下一般式（１）（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含んでいる。【００２２】
【化３】
2016171102.tif 000005
【００２３】
また、本発明の慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物の有効成分であるハイドロキノン誘導体が、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル４−アセテートであることも好ましい。これにより、薬理活性及び生体適合性に優れ、特に有効に用いることのできる物質が選択される。【００２４】
さらに、慢性呼吸器疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺炎及び喘息からなる群より選ばれた少なくとも１つの疾患であることも好ましい。これにより、予防又は改善する病態として好適なものが選択される。【００２５】
さらに、本発明の心臓の線維化抑制組成物は、以下一般式（１）（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含む。【００２６】
【化４】
2016171102.tif 000006
【００２７】
また、このハイドロキノン誘導体が、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル４−アセテートであることも好ましい。これにより、薬理活性及び生体適合性に優れ、特に有効に用いることのできる物質が選択される。【００２８】
また、本発明の心臓の線維化抑制組成物は、心臓の線維化が、薬剤により惹起されるものであることも好ましい。本発明の線維化抑制組成物により、薬剤により誘発される心臓の組織の炎症が抑制され、心臓の線維化が有効に抑制される。【００２９】
また、上述の薬剤は、アントラサイクリン系抗癌剤であることも好ましい。これにより、心臓の線維化を誘発する薬剤として、適当なものが選択される。【００３０】
さらに、本発明の薬剤の副作用軽減組成物は、一般式（１）（式中、Ｒ１は炭素数４〜８のアルキル基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基または炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基を示す。）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含む。【００３１】
【化５】
2016171102.tif 000007
【００３２】
さらに、本発明の薬剤の副作用軽減組成物は、薬剤がブレオマイシン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ボルテゾミブ、シスプラチン、オキサリプラチン、シクロフォスファミド、アザチオプリン、タクロリムス、ペニシラミン、メトトレキサート、サラゾスルファピリジン、レフルノミド、ヒドララジン、小柴胡湯、アミオダロン、インターフェロン及びアントラサイクリン系抗癌剤からなる群から選ばれる少なくとも１種の薬剤であることが好ましい。本発明の副作用軽減組成物により、これらの薬剤により誘発される肺や心臓の組織の炎症が抑制され、心筋障害及び間質性肺炎といった副作用が有効に軽減される。【００３３】
さらに、本発明の薬剤の副作用軽減組成物は、上述の薬剤がブレオマイシン又はアントラサイクリン系抗癌剤であることも好ましい。本発明の副作用軽減組成物により、これらの抗癌剤により誘発される肺や心臓の組織の炎症が抑制され、心筋障害及び間質性肺炎といった副作用が有効に軽減される。
【発明の効果】
【００３４】
本発明によれば、以下のような優れた効果を有する慢性呼吸器疾患治療剤、慢性呼吸器疾患の予防又は改善用食品組成物、心臓の線維化抑制組成物及び薬剤の副作用軽減組成物を提供することができる。
（１）気道や肺組織の炎症を抑制し、喀痰の排出を促進させて、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息及び間質性肺炎といった慢性呼吸器疾患の病状の進行を有効に抑制し、病態を改善することができる。また、安全性の高い物質から構成されているため、これらの疾患の予防又は治療に有効に用いることができる。
（２）心臓の組織の炎症を抑制し、心臓の線維化疾患を有効に抑制することができる。また、安全性の高い物質から構成されているため、疾患の予防又は治療に有効に用いることができる。
（３）２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルまたは２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル  ４−アセテートを選択することにより、薬理活性及び生体適合性に優れ、特に有効に用いることができる組成物を得ることができる。
（４）治療薬剤が原因で生じる肺又は心臓の線維化を抑制することができるため、治療薬剤を有効に投与することができる。
（５）ブレオマイシン又はアントラサイクリン系抗癌剤といった抗癌剤により誘発される肺又は心臓の線維化を抑制し、間質性肺炎又は心筋障害といった副作用を軽減することができるため、抗癌剤の投与を確実に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】実施例１における対照群及び各試験群のラットの肺相対重量（％）を示すグラフである。
【図２】実施例１の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中の総細胞数を示すグラフである。
【図３】実施例１の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中の肺胞マクロファージ数を示すグラフである。
【図４】実施例１の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中の好中球数を示すグラフである。
【図５】実施例１の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中のリンパ球数を示すグラフである。
【図６】実施例２におけるＨＴＨＱ投与群の試験フローを示す説明図である。
【図７】実施例２の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中の炎症細胞数を示すグラフである。
【図８】実施例２の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中の活性酸素（ＲＯＳ）量を示すグラフである。
【図９】実施例２の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中のＴＮＦ−α量を示すグラフである。
【図１０】実施例２の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中のＩＬ−６量を示すグラフである。
【図１１】実施例２における対照群及び各試験群の気管支周辺の肺組織を示す写真である。
【図１２】実施例３における感作、惹起及び被験物質の投与スケジュールを示す説明図である。
【図１３】実施例３の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中の炎症細胞数を示すグラフである。
【図１４】実施例３の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中のＩＬ−４量を示すグラフである。
【図１５】実施例３の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中のＩＬ−５量を示すグラフである。
【図１６】実施例３の気管支肺胞洗浄検査におけるＢＡＬ液中のＩＬ−１３量を示すグラフである。
【図１７】実施例３における血清中の総ＩｇＥ含量を示すグラフである。
【図１８】実施例３における血清中の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ含量を示すグラフである。
【図１９】実施例４における対照群及び各試験群の喀痰排出能を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００３７】
上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体において、Ｒ１で示される炭素数４〜８のアルキル基は直鎖状、分岐状、環状のいずれであってもよく、その例としては各種ブチル基、各種ペンチル基、各種ヘキシル基、各種ヘプチル基、各種オクチル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基などを挙げることができる。このアルキル基としては、薬理活性の面から、炭素数４〜７の直鎖状のものが好ましく、特にｎ−ヘキシル基が好適である。
【００３８】
また、Ｒ２のうちの炭素数２〜６のアルキルカルボニル基は直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基などが挙げられる。さらに、Ｒ２のうちの炭素数２〜６のアルコキシカルボニル基は直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基などが挙げられる。
【００３９】
この一般式（１）で表わされる化合物のうち、いずれの用途においても、特に薬理活性の点から好ましい化合物としては、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ブチルエーテル、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテルおよび２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル４−アセテートを挙げることができる。
【００４０】
上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体はたとえば特許文献２に記載の方法で製造することができる。
【００４１】
本発明の慢性呼吸器疾患治療剤、心臓の線維化抑制組成物及び薬剤の副作用軽減組成物は、前述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含むものであって、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息及び間質性肺炎といった慢性呼吸器疾患を予防又は治療し、心臓の線維化を抑制する作用を有する。それゆえ、本発明の慢性呼吸器疾患治療剤、心臓の線維化抑制組成物及び薬剤の副作用軽減組成物は、これらの疾患を予防、治療又は改善するための医薬品、医薬部外品及び食品組成物として用いることができる。慢性呼吸器疾患のうち、ＣＯＰＤの原因としては、有害物質の暴露、すなわち、喫煙（タバコの煙）や、大気汚染、有機燃料煙及び粉塵等の吸入が挙げられるが、本発明においては、これら有害物質の暴露によって発症しうる気道及び肺組織の炎症を有効に抑制させると共に、喀痰の排出を促して症状を改善させることができる。他方、慢性呼吸器疾患のうち間質性肺炎は肺の線維化によって発症するが、肺の線維化の原因としては、薬剤の副作用のほか、鉱物、陶器又は石材等の粉やアスベスト等の吸引、放射線による被ばく、膠原病や感染症等がある。また、心臓の線維化の原因としては、薬剤の副作用のほか、ウイルス感染、糖尿病、肥満、甲状腺疾患、アルコール等がある。なお、肺及び心臓の線維化には、発症原因が特定されていないものも含まれる。本発明においては、さまざまな原因による肺又は心臓の線維化を抑制するが、特に、薬剤により惹起される肺又は心臓の線維化、すなわち、薬剤により惹起される間質性肺炎又は心筋症を好適に抑制することができる。この種の薬剤としては、肺又は心臓の線維化を惹起する薬剤であればよいが、一例として抗癌剤、免疫抑制剤、抗リウマチ薬、血管拡張薬、抗不整脈薬、漢方薬、インターフェロン、抗菌剤、抗てんかん剤、利尿剤又は抗生物質等が挙げられる。具体的には、抗癌剤としては、心臓の線維化を惹起するものとして、アントラサイクリン系抗癌剤が挙げられ、肺の線維化を惹起するものとして、ブレオマイシン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ボルテゾミブ、ビノレルビン、ペプロマイシン、ブスルファン、イリノテカン、シスプラチン、オキサリプラチン又はカルボプラチン等が挙げられる。そのうち、アントラサイクリン系抗癌剤としてはドキソルビシン（アドリアマイシン）、ダウノルビシン、ピラルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、アムルビシン、バルルビシン又はミトキサントロン等が挙げられる。また、免疫抑制剤としては、肺の線維化を惹起するものとして、シクロフォスファミド、アザチオプリン、タクロリムス又はペニシラミン等が挙げられ、抗リウマチ薬としては、肺の線維化を惹起するものとして、メトトレキサート、サラゾスルファピリジン又はレフルノミド等が挙げられる。これらの薬剤は、悪性腫瘍やリウマチ等の疾患の治療のために使用されるが、副作用として肺や心臓の線維化を引き起こす。それゆえ、本発明の慢性呼吸器疾患治療剤又は心臓の線維化抑制組成物をこの種の薬剤の投与の前に、あるいはこの種の薬剤の投与と同時に又は時間差をおいて摂取することにより、肺又は心臓の線維化といった副作用を低減することができる。
【００４２】
本発明の治療剤又は組成物の投与量は、目標とする予防又は治療効果、投与方法、年齢、体重などによって変化するので一概には規定できないが、通常一日の非経口的な投与量は、上述のハイドロキノン誘導体として約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは約０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重である。また、本発明の治療剤又は組成物の投与量は、経口的には上述のハイドロキノン誘導体として約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは約０．５〜２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、これを１〜３回に分割して投与すればよい。他の薬剤による肺や心臓の線維化を抑制するために本発明の治療剤又は組成物を使用する場合には、本発明の治療剤又は組成物の投与は、肺や心臓の線維化を引き起こす抗癌剤等の薬剤の投与の前に予め行っておくことが好ましいが、薬剤の投与と同時に又は別々に行ってもよい。
【００４３】
なお、肺や心臓の線維化を引き起こす抗癌剤や免疫抑制剤等の薬剤と、本発明の治療剤又は組成物の有効成分である上述のハイドロキノン誘導体とを同時に投与するために、肺や心臓の線維化を引き起こすこの種の薬剤とハイドロキノン誘導体とを組み合わせた配合薬としてもよい。
【００４４】
さらに、本発明の慢性呼吸器疾患治療剤、心臓の線維化抑制組成物及び薬剤の副作用軽減組成物には、前述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体に加えて、遺伝子組み換えヒトエリスロポエチン（ＥＰＯ）を含有させることができる。これにより、より向上した線維化抑制効果及び炎症抑制効果が得られる。上述のハイドロキノン誘導体とヒトエリスロポエチンを組み合わせた際のヒトエリスロポエチンとしての投与量は、目標とする治療効果、投与方法、年齢、体重などによって変化するので一概には規定できないが、通常一日の非経口的な投与量は、約０．１〜１００ＩＵ／ｋｇ体重であり、好ましくは約０．５〜５０ＩＵ／ｋｇ体重である。経口的には約１〜１０００ＩＵ／ｋｇ体重であり、好ましくは約５〜５００ＩＵ／ｋｇ体重であり、これを１〜３回に分割して投与すればよい。上述のハイドロキノン誘導体と上述のヒトエリスロポエチンとを組み合わせてなる組成物や治療剤は、これらの有効成分を別々に、又は同時に、医薬組成物として経口的又は非経口的に投与することができる。なお、有効成分であるハイドロキノン誘導体とヒトエリスロポエチンとを別々に製剤化した場合、別々に製剤化したものを使用時に混合して投与することができるほか、別々に製剤化したものを、別々に、あるいは同時に、または時間差をおいて同一対象に投与してもよい。
【００４５】
本発明の慢性呼吸器疾患治療剤、心臓の線維化抑制組成物及び薬剤の副作用軽減組成物は、従来慣用されている方法により種々の形態に調製することができる。この場合、通常製剤用の担体や賦形剤など、医薬品の添加剤として許容されている添加剤を用いて製剤化することができる。また、本化合物のバイオアベイラビリティーや安定性を向上させるために、マイクロカプセル、微粉末化、シクロデキストリン等を用いた包接化などの製剤技術を含むドラッグデリバリーシステムを用いることもできる。
【００４６】
上記組成物を経口投与製剤として用いる場合には、錠剤、顆粒剤、カプセル剤又は内服用液剤等の形態で用いることができるが、消化管からの吸収に適した形態で用いることが好ましい。また、流通性、保存性などの理由により所望される形態での製剤を提供する場合にも従来の製剤技術を用いることができる。また、非経口投与剤として用いる場合には、注射剤、坐剤およびテープ、パップなどの経皮吸収剤等の形態とすることができるが、流通性、保存性などの理由から固形製剤を使用時に適当な溶剤で溶解してから用いることもでき、液剤および半固形剤の形態で提供することも従来の製剤技術により可能である。
【００４７】
また、前述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体を有効成分として含む、慢性呼吸器疾患、心臓の線維化疾患又は薬剤の副作用の予防・改善用の食品組成物は、錠剤やカプセル剤、顆粒剤、シロップ剤などのサプリメント形態、飲料、菓子、パン、粥、シリアル、麺類、ゼリー、スープ、乳製品、調味料、食用油等のあらゆる形態で用いることができる。また、食品組成物として用いる際には、本発明の有効成分の効能に影響を与えない範囲において、他の有効成分や、ビタミン、ミネラル若しくはアミノ酸等の栄養素等を種々組み合わせることも可能である。本発明の食品組成物から展開される食品には、サプリメント、健康食品、機能性食品、特定保健用食品等が含まれる。また、本発明の食品組成物の摂取量は、上述のハイドロキノン誘導体として約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重とすることが好ましく、約０．５〜２００ｍｇ／ｋｇ体重とすることがより好ましく、これを１〜３回に分割して摂取することが好ましい。
【００４８】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例によってなんら限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
［実施例１］
１．ブレオマイシンにより誘発される肺線維症に対する作用の検討
ブレオマイシンは、間質性肺炎の疾患モデル動物を作製するために利用されている。このブレオマイシンを生後１０週齢の雄ＳＤラットに投与すると共に、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体として２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）を投与し、その作用効果を調べた。試験群の構成は、対照群：滅菌生理食塩水を投与、試験群１：ブレオマイシン（７．５ｍｇ／ｋｇ体重）を単独投与、試験群２：ブレオマイシン（７．５ｍｇ／ｋｇ体重）及びＨＴＨＱ（５０ｍｇ／ｋｇ体重／日）を併用投与、試験群３：ブレオマイシン（７．５ｍｇ／ｋｇ体重）及びＨＴＨＱ（２００ｍｇ／ｋｇ体重／日）を併用投与、とした。【００５０】
試験群１〜３について、ブレオマイシンの投与は単回とし、投与は経口にて行った。また、試験群２及び３について、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）の投与はブレオマイシンの投与２４時間後から行い、１０日間又は２０日間に亘り、毎日経口投与することによって行った。また、試験群１については、ブレオマイシン投与２４時間後から、ＨＴＨＱの溶媒として用いたオリーブ油を１０ｍＬ／ｋｇ／日となるように毎日経口投与した。各群の動物数は１群当たり１６頭とした。ブレオマイシン投与１０日目及び投与２０日目に各群について８頭ずつ屠殺し、体重測定、肺剖検、肺の病理組織検査及び気管支肺胞洗浄検査を行った。【００５１】
＜体重及び肺相対重量＞
対照群のラットの体重は試験期間中経時的に増加した。他方、ブレオマイシンを投与した試験群１〜３は試験期間中、徐々に体重が減少していた。次に、肺相対重量の結果を図１に示す。肺の間質組織は線維化することにより重量が増加し、肺相対重量が増大する傾向を示す。グラフ中の数字は、対応する試験群を示しており、バー上に記載された＃＃は、対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示し、＊は、試験群１と比較したときのｐ値がｐ＜０．０５であることを示している。図１に示すように、ブレオマイシンを投与した試験群１〜３の肺相対重量は、対照群に比べて有意に増加した（ｐ＜０．０１）。しかし、投与後２０日における肺相対重量についてみると、ＨＴＨＱを投与した試験群２及び３の肺相対重量は、ブレオマイシン単独投与群（試験群１）に比べ有意に低かった（ｐ＜０．０５）。これにより、ＨＴＨＱを投与した試験群２及び３のラットは、試験群１のラットよりも肺の線維化が進行していないことが推測された。【００５２】
＜肺の肉眼的所見＞
肺の剖検を行い、肉眼的所見を観察した結果、試験群１（ブレオマイシン単独投与群）の投与２０日目のラットの肺では、肺門部を中心に境界明瞭な結節が観察されたほか、暗赤色及び淡赤色の出血班点が多数観察され、肺表面は陥没していた。一方、ＨＴＨＱを投与した試験群２及び試験群３のラットの肺にはこのような病変が軽減されていた。【００５３】
＜肺の病理組織検査所見＞
試験群１（ブレオマイシン単独投与群）の投与１０日後のラットの主な肺病変としては、気管支及び細気管支周囲の肺胞拡大、肺胞壁の肥厚、肺胞壁と間質組織における単核球とリンパ球の浸潤、肺胞腔内に肺胞マクロファージの滲出が観察された。試験群２及び３（ＨＴＨＱ投与群）のラットでは、これらの所見は試験群１の組織に比べ軽減されていた。さらに、試験群１では、核小体が明確ではない大きな核を持つ肺胞上皮の異型（Ａｔｙｐｉａ）が認められ、肺胞の形態がまだ維持されている部位の肺胞腔内には泡沫状の肺胞マクロファージが観察される等、肺の線維化が進行していることがわかった。【００５４】
ブレオマイシン投与２０日目の対照群及び各試験群の肺の病理組織検査結果を以下表１に示す。重症度スコアは、「−」はなし、「＋」は軽度、「＋＋」は中等度、「＋＋＋」は重篤を示している。試験群１（ブレオマイシン単独投与群）の所見では、投与１０日目の組織よりも、気管支の周囲及び隣接する肺胞壁の肥厚と線維化が顕著となり、リンパ球及び好中球の浸潤によって肺胞の形態は殆ど消失した。また、肺胞腔内に浸潤した肺胞マクロファージは周囲組織によって埋没していた。他方、ＨＴＨＱ投与群である試験群２及び３では、肺胞の形態を見ることができる部位の肺胞腔内において、空胞を含む肺胞マクロファージ、細気管支周囲における細胞浸潤及び肺胞壁の肥厚が認められたが、その程度はブレオマイシン単独投与群である試験群１と比べると、いずれも軽度であった。【００５５】
【表１】
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【００５６】
＜気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）検査＞
対照群及び各試験群のラットについて、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）検査を行った。気管支肺胞洗浄液内の総細胞数の測定結果を図２に示す。間質性肺炎に罹患すると炎症細胞浸潤が起こり、ＢＡＬ液中の総細胞数が増加する。ブレオマイシン投与後１０日の総細胞数についてみると、対照群は２×１０５個、試験群１（ブレオマイシン単独投与群）は９×１０５個、試験群２（低用量ＨＴＨＱ投与群、５０ｍｇ／ｋｇ体重）は６．５×１０５個、試験群３（高用量ＨＴＨＱ投与群、２００ｍｇ／ｋｇ体重）は１０．５×１０５個であり、ブレオマイシン投与１０日目には、ＨＴＨＱ投与による効果は認められなかった。しかし、ブレオマイシン投与２０日後には、ブレオマイシン単独投与群の総細胞数は１２．８×１０５個、低用量ＨＴＨＱ投与群は７．９×１０５個、高用量ＨＴＨＱ投与群は３．８×１０５個と減少した。これにより、ＨＴＨＱは用量依存的に肺細胞の滲出を抑制することがわかった。【００５７】
また、気管支肺胞洗浄液内の肺胞マクロファージ数の測定結果を図３に示す。間質性肺炎に罹患すると間質組織への肺胞マクロファージの浸潤がおこり、ＢＡＬ液中の肺胞マクロファージ数が増加する。ブレオマイシン投与後１０日の肺胞マクロファージ数についてみると、対照群は１．４５×１０５個、試験群１（ブレオマイシン単独投与群）は４．５×１０５個、試験群２（低用量ＨＴＨＱ投与群）は１．９９×１０５個、試験群３（高用量ＨＴＨＱ投与群）は３．２４×１０５個であり、ブレオマイシン投与１０日目においてはＨＴＨＱ投与による効果は認められなかった。しかし、投与２０日目には、ブレオマイシン単独投与群の肺胞マクロファージ数は５．５×１０５個であるのに対し、低用量ＨＴＨＱ投与群は３×１０５個、そして、高容量ＨＴＨＱ投与群は２×１０５個と低減した。これにより、ＨＴＨＱは用量依存的に肺胞マクロファージの滲出を抑制することがわかった。【００５８】
さらに、気管支肺胞洗浄液内の好中球数の測定結果を図４に示す。間質性肺炎に罹患すると間質組織への好中球の炎症細胞浸潤がおこり、ＢＡＬ液中の好中球数が増加する。ブレオマイシン投与後１０日目の好中球数についてみると、対照群は１．０４×１０４個、試験群１（ブレオマイシン単独投与群）は２．２８×１０５個、試験群２（低用量ＨＴＨＱ投与群）は１．４４×１０５個、試験群３（高用量ＨＴＨＱ投与群）は５．８３×１０５個であり、ブレオマイシン投与１０日目においてはＨＴＨＱの効果は認められなかった。しかし、投与後２０日目には、ブレオマイシン単独投与群が４．９７×１０５個であるのに対し、低用量ＨＴＨＱ投与群は４．３４×１０５個、そして、高用量ＨＴＨＱ投与群は１．４９×１０５個と顕著に減少した。このことから、ＨＴＨＱを高用量で投与することによって、好中球数を顕著に減少させることができることがわかった。【００５９】
続いて、気管支肺胞洗浄液内のリンパ球数の測定結果を図５に示す。間質性肺炎に罹患すると間質組織へのリンパ球の炎症細胞浸潤がおこり、ＢＡＬ液中のリンパ球数が増加する。ブレオマイシン投与１０日目のリンパ球数についてみると、対照群は４．４２×１０４個、試験群１（ブレオマイシン単独投与群）は２．７２×１０５個、試験群２（低用量ＨＴＨＱ投与群）は３．０７×１０５個、試験群３（高用量ＨＴＨＱ投与群）は１．４３×１０５個であり、投与１０日目の段階ではＨＴＨＱ投与の効果は認められなかった。しかし、投与後２０日目にはブレオマイシン単独投与群は２．０９×１０５個であるのに対し、低用量ＨＴＨＱ投与群は０．５３×１０５個、高用量ＨＴＨＱ投与群は０．３×１０５個と顕著に減少し、ＨＴＨＱはリンパ球の滲出を用量依存的に抑制することがわかった。【００６０】
これらの病理組織検査及び気管支肺胞洗浄検査等の結果から、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体は、ブレオマイシンが誘発する肺の線維化を効果的に抑制し、間質性肺炎を予防又は治療する効果があることがわかった。【００６１】
［実施例２］
２．タバコの煙により誘発される肺の炎症に対する作用の検討
体重２０〜２５ｇの６週齢  ＳＰＦ  Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ  雄マウスをコアテック株式会社（韓国）より購入した。約１週間の検疫及び適応期間を経たのち、マウスを以下表２に示す５つの群に分けた。【００６２】
【表２】
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【００６３】
試験は次のようにして行った。試験群のうち、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）モデル群については、１日のうち１時間タバコの煙（８本のタバコ／ｄａｙ）に暴露させることを１０日間行い、試験開始から８日目にＬＰＳ（５μｇ／５０μＬ／マウス）を鼻腔内に投与した。陽性対照物質投与群については、陽性対照物質であるロフルミラストを経口で１０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙ投与してから１時間後にタバコの煙に１時間暴露させることを１０日間行った。また、試験開始から８日目にＬＰＳ（５μｇ／５０μＬ／マウス）を鼻腔内に投与した。ここで、ロフルミラストとは選択的ホスフォジエステラーゼ４阻害剤であり、ＣＯＰＤ及び喘息の治療薬として用いられている物質（欧州、米国にて承認、日本では未承認）である。他方、ＨＴＨＱ投与群についても、図６に示すように、試験物質である２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）を経口で低用量群は１０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙ、高用量群は２０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙをそれぞれ投与してから１時間後にタバコの煙に１時間暴露させることを１０日間行った。また、８日目にＬＰＳ（５μｇ／５０μＬ／マウス）を鼻腔内に投与した。すべての動物は１１日目に安楽死させ、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）検査及び肺の病理組織検査を実施した。実験期間中は、正常対照群及び試験群の各マウスには滅菌した水道水とげっ歯類用標準飼料を与えた。全ての実験手続きは韓国生命工学研究院のＩＡＣＵＣ承認を受けた後に行った。【００６４】
＜気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）検査＞
各試験群のマウスについてはＬＰＳ投与７２時間後、正常対照群のマウスについては試験開始１１日目に、ペントバルビタール（ハンリム製薬、韓国）を腹腔内に５０ｍｇ／ｋｇ注射して安楽死させた後、気管支を切除した。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ液）を採取するため、氷冷した７００μＬのＰＢＳを肺に注入した後、これを回収することを２回実施し、１．４ｍＬのＢＡＬ液を採取した。採取したＢＡＬ液を４℃、１５００ｒｐｍ×５分の条件にて遠心分離した。後で炎症性サイトカイン分析（ＴＮＦ−α及びＩＬ−６）を行うために上清を採取し、−７０℃の超低温槽に保管した。他方、遠心分離により沈殿した細胞に１ｍＬのＰＢＳを注入し、軽くたたいて懸濁させ、ＢＡＬ細胞液とした。サイトスピン（４℃、１０００ｒｐｍ×５分）を利用して、ＢＡＬ細胞液１００μＬからスライド標本を作った後、ディフ・クイック染色キットを利用して、ＢＡＬ液内に存在する炎症細胞（好中球、マクロファージ）の細胞数をカウントした。結果を図７に示す。図７に示すように、タバコの煙によって誘発されたＣＯＰＤモデル群には炎症細胞の浸潤が認められた。他方、ＨＴＨＱ投与群のマウスは、ＣＯＰＤモデル群と比べて炎症細胞の浸潤が効果的に減少していた。ＨＴＨＱの投与用量による効能の差は観察されず、陽性対照物質であるロフルミラスト（ＲＯＦ）投与群とも同程度の効能を示した。【００６５】
次に、ＢＡＬ細胞液中の活性酸素（ＲＯＳ）量を測定した。ＢＡＬ細胞液が５×１０３／１００μＬ／ウェルとなるように９６ウェルプレートの各ウェルにＢＡＬ細胞液を入れた後、ＲＯＳ指示薬として２０ｍＭのＤＣＦ−ＤＡを各ウェルに１０μＬずつ添加し、３０分間振とうした。蛍光プレート分析機（パーキンエルマー社製品）にて、励起４８５ｎｍ／蛍光５３０ｎｍの波長にて細胞内の活性酸素（ＲＯＳ）量を測定した。結果を図８に示す。図８に示すように、タバコの煙によって誘発されたＣＯＰＤモデル群には高い活性酸素の生成が認められた。他方、ＨＴＨＱ投与群のマウスは、ＣＯＰＤ群と比べて活性酸素が効果的に減少しており、陽性対照物質（ロフルミラスト、ＲＯＦ）投与群との比較では、おおむね同様の効能を示した。【００６６】
また、保管していたＢＡＬ液の上清を超低温槽から取り出し、上清内の炎症性サイトカイン量として、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の量を測定した。測定には、定量ＥＬＩＳＡキット（インビトロジェン社製品）及びＥＬＩＳＡ分析機（モレキュラーデバイス社製品）を用い、測定波長は４５０ｎｍとした。ＴＮＦ−α量の結果を図９に、ＩＬ−６量の結果を図１０に示す。図９に示すように、ＣＯＰＤモデル群のＢＡＬ液にはＴＮＦ−αが高いレベルで含まれることがわかった。他方、ＨＴＨＱ投与群については、ＣＯＰＤモデル群と比べるとＴＮＦ−α量が効果的に減少しており、陽性対照物質（ロフルミラスト、ＲＯＦ）投与群との比較では、陽性対象物質とおおむね同様の効能を示した。また、ＩＬ−６については、図１０に示すように、ＣＯＰＤモデル群のＢＡＬ液にはＩＬ−６が非常に高いレベルで含まれていた。ＨＴＨＱ投与群については、ＣＯＰＤモデル群と比べるとＩＬ−６量が顕著に減少しており、ＲＯＦ（ロフルミラスト）との比較では同様の効能を示すことがわかった。【００６７】
＜肺の病理組織検査＞
正常対照群及び各試験群のマウスについて、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ液）を採取した後、気管支周辺の肺組織を１０％中性ホルマリン液で固定した。肺組織をパラフィンで包埋した後、４μｍの厚さにスライスし、ヘマトキシリン・エオジン染色して観察を行った。正常対照群（写真中「ＮＣ」）及び各試験群の気道周辺の肺組織の写真を図１１に示す。図１１の各写真において、炎症細胞の浸潤が生じている部分（ＨＥ染色により濃色に染色された部分）を矢印で示す。図１１の写真に示すように、タバコの煙によって誘発されたＣＯＰＤモデル群（写真中、「ＣＯＰＤ」）には広範囲に多数の炎症細胞の浸潤が認められた。他方、ＨＴＨＱ投与群（写真中、「ＨＴＨＱ１０」及び「ＨＴＨＱ２０」）は、ＣＯＰＤモデル群と比べ、用量依存的に炎症細胞の浸潤が著しく減少していた。また、陽性対照物質として使用されたロフルミラスト投与群（写真中、「ＲＯＦ」）との比較では、同様の効能を示した。【００６８】
これらの気管支肺胞洗浄検査及び病理組織検査の結果から、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体は、タバコの煙が誘発する肺組織の炎症、すなわち、ＣＯＰＤの進行を効果的に抑制し、ＣＯＰＤを予防又は治療する効果があることがわかった。また、本実施例において、本発明のハイドロキノン誘導体は、陽性対照物質として用いたロフルミラストと同様の効能を示したことから、ＣＯＰＤの予防及び治療に有効であることが示された。【００６９】
［実施例３］
３．喘息に対する作用の検討
卵白アルブミン感作によるマウスにおけるアレルギー性喘息モデルを用い、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体の喘息に対する有効性を検討した。【００７０】
６週齢のＢＡＬＢ／ｃ  雌マウスを購入し、約２週間の馴化飼育を経た後、マウスを以下表３に示す５つの群に５匹ずつ配した。【００７１】
【表３】
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【００７２】
試験は図１２に示す感作、惹起及び被験物質の投与スケジュールで行った。図１２における「ＩＰ」とは卵白アルブミン／水酸化アルミニウム腹腔内投与による卵白アルブミン感作処置を示し、「ＩＨ」とは卵白アルブミンの吸入暴露処置を示し、「ＰＯ」とは各被験物質の投与を示している。具体的には、正常対照群を除く４群のすべてのマウスに対し、卵白アルブミン２０μｇ及びアジュバントとして水酸化アルミニウム２ｍｇを加えて乳化させたＰＢＳ（ｐＨ７．４）２００μＬを腹腔内投与した（初回感作、試験１日目）。次いで２週間後（試験１４日目）に初回感作と同様の方法で２回目の感作処置を行った。さらに、試験２１〜２３日目に、超音波ネブライザーを用いて、マウスに卵白アルブミン１％含有ＰＢＳを各日１時間ずつ吸入暴露させた。他方、試験１８〜２３日目に被験物質の経口投与を各日行った。具体的には、正常対照群にはＰＢＳを、卵白アルブミン感作対照群には後述するＨＴＨＱの溶媒に用いた３％Ｔｗｅｅｎ８０含有生理食塩水を経口投与し、陽性対照物質投与群にはＰＢＳに溶かしたモンテルカスト（シグマアルドリッチ社製品）を３０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙで経口投与した。ここで、モンテルカストとは、ロイコトリエン受容体拮抗剤であり、気管支喘息の治療薬として用いられている物質である。また、ＨＴＨＱ投与群については、試験物質である２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）を３％Ｔｗｅｅｎ８０に溶かし、低用量群は２０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙ、高用量群は４０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙでそれぞれ経口投与した。試験２５日目に、すべてのマウスの眼窩静脈叢から血液をそれぞれ採取し、その後安楽死させ、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）検査及び血清中の総ＩｇＥ含量および卵白アルブミン特異的ＩｇＥ含量の測定を行った。【００７３】
＜気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）検査＞
すべてのマウスについて、試験２５日目にペントバルビタール（ハンリム製薬、韓国）を５０ｍｇ／ｋｇ腹腔内注射して安楽死させ、気管支を切除した。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ液）を採取するため、氷冷した７００μＬのＰＢＳを肺に注入した後、これを回収することを２回実施し、１．４ｍＬのＢＡＬ液を採取した。採取したＢＡＬ液を４℃、１５００ｒｐｍ×５分の条件にて遠心分離した。後で炎症性サイトカインの分析を行うために上清を採取し、−７０℃の超低温槽に保管した。遠心分離により沈殿した細胞に１ｍＬのＰＢＳを注入し、軽くたたいて懸濁させ、ＢＡＬ細胞液とした。サイトスピン（４℃、１０００ｒｐｍ×５分）を利用して、ＢＡＬ細胞液１００μＬからスライド標本を作った後、ディフ・クイック染色キットを利用して、ＢＡＬ液内に存在する炎症細胞（好酸球、マクロファージ、リンパ球、好中球）の細胞数をカウントした。結果を図１３に示す。図１３のグラフのバー上に記載された＃は、正常対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示し、＊＊は、卵白アルブミン感作対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示している。図１３に示すように、卵白アルブミンの腹腔内投与により感作され、卵白アルブミンの吸入によりアレルギー性喘息が惹起された卵白アルブミン感作対照群「ＯＶＡ」は、正常対照群「ＮＣ」と比べて好酸球、マクロファージおよび炎症細胞の総数が増加していた。これに対し、ＨＴＨＱ投与群では上述した炎症細胞数が有意に、かつ、ＨＴＨＱの用量依存的に減少しており、その炎症細胞数の抑制作用は気管支喘息の治療薬として使用されている、陽性対照物質のモンテルカスト（陽性対照物質投与群「Ｍｏｎ」参照）に匹敵するものであることがわかった。【００７４】
また、保管していたＢＡＬ液の上清を超低温槽から取り出し、ＢＡＬ液上清中の炎症性サイトカイン含量として、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の量を測定した。測定には、定量ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄシステム社製品）とマイクロプレートリーダー（バイオラッド社製品）を用い、測定波長は４５０ｎｍとした。ＩＬ−４の結果を図１４に、ＩＬ−５の結果を図１５に、ＩＬ−１３の結果を図１６に示す。図１４〜図１６のグラフのバー上に記載された＃は、正常対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示し、＊は、卵白アルブミン感作対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０５であることを示し、＊＊は、卵白アルブミン感作対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示している。図１４〜図１６に示すように、卵白アルブミン感作対照群「ＯＶＡ」のＢＡＬ液は、正常対照群「ＮＣ」と比べて、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の含有量が顕著に増加していた。これに対し、ＨＴＨＱ投与群では、これらのサイトカイン量が卵白アルブミン感作対照群「ＯＶＡ」と比べて有意に減少することが示され、陽性対照物質投与群「Ｍｏｎ」でも同様に有意な減少が認められた。【００７５】
＜血清中の総ＩｇＥ含量および卵白アルブミン特異的ＩｇＥ含量＞
試験２５日目にマウスの眼窩静脈叢から採取した血液を用い、血清中の総ＩｇＥおよび卵白アルブミン特異的ＩｇＥ含量を測定した。測定には、ＩｇＥ測定用ＥＬＩＳＡキット（バイオレジェンド社製品）を用い、マイクロプレートリーダー（バイオラッド社製品）を用いて波長４５０ｎｍにて測定した。血清中の総ＩｇＥ含量の結果を図１７に、血清中の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ含量を図１８に示す。図１７及び図１８のグラフのバー上に記載された＃は、正常対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示し、＊は、卵白アルブミン感作対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０５であることを示している。図１７及び図１８に示すように、卵白アルブミン感作対照群「ＯＶＡ」では血清中の総ＩｇＥ量および卵白アルブミン特異的ＩｇＥ量が、正常対照群「ＮＣ」と比べて明らかに増加した。これに対し、ＨＴＨＱ投与群では、図１７に示す総ＩｇＥ量では、ＨＴＨＱの２０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙ投与群「ＨＴＨＱ２０」で有意な減少が認められ、ＨＴＨＱの４０ｍｇ／ｋｇ体重／ｄａｙ投与群「ＨＴＨＱ４０」でも減少傾向が見られた。他方、図１８に示す卵白アルブミン特異的ＩｇＥ量ではＨＴＨＱ投与による有意差は認められなかったが、減少傾向が見られた。【００７６】
以上の結果から、ＨＴＨＱは、気管支喘息治療薬としてすでに臨床で使用されているロイコトリエン受容体拮抗薬であるモンテルカストに匹敵する作用を有すること、すなわち、アレルギー反応に基づく気道の炎症を有効に抑制する作用を有することが認められた。よって、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体は、気管支喘息の治療に有効であることが示された。【００７７】
［実施例４］
４．喀痰排出作用の検討
８週齢の雄ＩＣＲマウスに本発明のハイドロキノン誘導体を単回経口投与し、Ｅｎｇｌｅｒらによる方法（Ｅｎｇｌｅｒ Ｈ、Ｓｚｅｌｅｎｙｉ Ｉ、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｍｏｔｈ．１１、１５１〜１５７、１９８４）に準じて、喀痰の排出作用を評価した。まず、８週齢のＩＣＲ雄マウスを以下表４に示す５つの群に８匹ずつ配した。【００７８】
【表４】
2016171102.tif 000011
【００７９】
具体的に、試験は次のようにして行った。対照群及び各試験群のマウスに被験物質を経口投与した。すなわち、陰性対照群には２％アラビアゴム水溶液を投与し、ＨＴＨＱ投与群には、試験物質である２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）を１００ｍｇ／ｋｇ体重、２００ｍｇ／ｋｇ体重、４００ｍｇ／ｋｇ体重でそれぞれ経口投与した。また、Ａｍｂｒｏｘｏｌ投与群にはアンブロキソール（シグマアルドリッチ社製品）を２５０ｍｇ／ｋｇ体重で経口投与した。ここで、アンブロキソールとは、去痰作用を有する物質であり、陽性対照物質として選択している。被験物質の経口投与３０分後に、フェノールレッド（シグマアルドリッチ社製品）を０．０５ｇ／ｍＬの濃度で溶かした生理食塩水を１５ ｍＬ／ｋｇ腹腔内投与した。そして、フェノールレッドの投与３０分後に、二酸化炭素吸入によりマウスを安楽死させ、気管をそれぞれ摘出した。摘出された気管の所定の部位を一定の大きさに切って気管片を得た。得られた気管片を各々遠心チューブに入れ、１ｍＬの生理食塩水を添加し、超音波洗浄機を用いて１５分間超音波処理を実施した。１００００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、上層液０．５ｍＬを遠心チューブに分注し、０．０５ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウムを添加した。ボルテックスミキサーで攪拌した後、０．２ｍＬのサンプルを９６ウェルプレートに分注し、マイクロプレートリーダー（バイオテック社製品）を用いて５４６ｎｍで吸光度を測定した。測定された吸光度をフェノールレッド標準品（７５．０、３７．５、１８．８、９．４、７．４、２．３及び１．２ｎｇ／ｍＬ）の吸光度に基づく検量線に代入して、対照群及び各試験群のマウス気管片から排出されたフェノールレッド量を算出した。この気管片から排出されたフェノールレッドの量を次式に代入して被験物質の喀痰排出能を求めた。喀痰排出能を求める式は、「喀痰排出能（％）＝｛（Ａ／Ｂ）−１｝×１００」、Ａ：各被験物質投与群のフェノールレッド量（平均値）、Ｂ：陰性対照群のフェノールレッド量（平均値）、である。【００８０】
本実施例の結果を図１９に示す。図１９のグラフのバー上に記載された＊は、陰性対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０５であることを示し、＊＊は陰性対照群と比較したときのｐ値がｐ＜０．０１であることを示している。ＨＴＨＱ投与群の喀痰排出能はそれぞれ２４．６％（ＨＴＨＱ１００ｍｇ／ｋｇ）、３０．０％（ＨＴＨＱ２００ｍｇ／ｋｇ）及び３６．２％（ＨＴＨＱ４００ｍｇ／ｋｇ）であり、２００ｍｇ／ｋｇ投与群および４００ｍｇ／ｋｇ投与群では陰性対照群と比較して有意な増加が認められた。同様に、陽性対照であるＡｍｂｒｏｘｏｌ群の喀痰排出能は４１．１％であり、陰性対照群と比較して有意な増加が認められた。以上の結果から、ＨＴＨＱにはアンブロキソール同様に喀痰の排出を促進する作用、すなわち、去痰作用を有することが認められた。それゆえ、ＨＴＨＱは、アンブロキソール同様にカゼや急性気管支炎といった呼吸器疾患のほか、ＣＯＰＤ、喘息及び間質性肺炎といった慢性呼吸器疾患に起因する喀痰の排出も促進することができ、これらの疾患の治療や改善に有効であることが示された。【００８１】
［実施例５］
５．ドキソルビシンにより誘発される心筋障害に対する作用の検討
ドキソルビシンは、心筋症の疾患モデル動物を作製するために利用されている。このドキソルビシンを生後４週齢の雌ＳＤラットに投与すると共に、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体として２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）を投与し、その作用効果を調べた。試験群の構成は、対照群：滅菌生理食塩水を投与、試験群１：ドキソルビシン（１３ｍｇ／ｋｇ体重）を単独投与、試験群２：ドキソルビシン（１３ｍｇ／ｋｇ体重）及びＨＴＨＱ（５０ｍｇ／ｋｇ体重）を併用投与、試験群３：ドキソルビシン（１３ｍｇ／ｋｇ体重）、ＨＴＨＱ（５０ｍｇ／ｋｇ体重）及び組み換えヒトエリスロポエチン（４００ＩＵ／ｋｇ体重）を併用投与、とした。なお、組み換えヒトエリスロポエチン（ｒＨｕＥＰＯ）は、主に腎性貧血治療等に用いられているが、心筋保護効果を有する。試験群３は、ＨＴＨＱとｒＨｕＥＰＯとの併用による心筋障害抑制効果の有無を確認するものである。【００８２】
試験群１〜３について、ドキソルビシンの投与は単回とし、投与は経口にて行った。また、試験群２及び３について、２，３，５−トリメチルハイドロキノン−１−ヘキシルエーテル（ＨＴＨＱ）の投与はドキソルビシン投与３日前とドキソルビシン投与当日の計２回とし、投与は経口にて行った。また、試験群３について、組み換えヒトエリスロポエチンはドキソルビシン投与３日前から毎日投与を行い、投与は静脈内注射にて行った。各群の動物数は１群当たり１６頭とした。ドキソルビシン投与７日目及び投与１４日目に各群について８頭ずつ採血した後屠殺し、心臓剖検、心臓相対重量の算出、心臓の病理組織検査及び血液検査を行った。【００８３】
＜心臓相対重量＞
心筋は線維化することにより肥大して心筋重量が増加し、心臓相対重量が増大する傾向を示す。対照群及び試験群１〜３のラットの心臓相対重量の結果を以下表５に示す。ドキソルビシン投与後７日目において、試験群２の心臓相対重量が試験群１よりも大きな値を示したが、投与後１４日目においては、試験群２の心臓相対重量は試験群１と比べて有意差はなかった。また、その他の群間についても、投与後７日目及び１４日目ともに有意差は認められなかった（ｐ＜０．０５）。【００８４】
【表５】
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【００８５】
＜心臓剖検及び心臓の肉眼的所見＞
心臓剖検を行い、肉眼的所見を観察した結果、対照群と比較して、試験群１〜３のドキソルビシン投与群には明らかな病変は観察されなかった。【００８６】
＜病理組織検査所見１（光学顕微鏡）＞
心臓の病理組織検査結果を以下表６に示す。表の重症度スコアは、「−」はなし、「＋」は軽度、「＋＋」は中等度、「＋＋＋」は重篤を示している。ドキソルビシン投与後７日目の心臓の組織についてみると、試験群１において心筋細胞の変性、心筋線維の喪失と組織崩壊、心筋壊死、横紋の喪失及び間質組織における細胞浸潤等が観察された。しかし、ＨＴＨＱを投与した試験群２では試験群１に比べてこれらの病変が軽減されており、ＨＴＨＱ及びｒＨｕＥＰＯを投与した試験群３はさらにこれらの病変が軽減され、ほぼ正常の心筋組織に近い所見を示した。ドキソルビシン投与後１４日目の組織の病変は、試験群１では投与後７日目のものよりもさらに進行しており、心筋細胞と間質組織における高度の空胞変性、心筋線維の肥大と萎縮、心筋線維の喪失と組織崩壊、心筋壊死及び横紋の喪失等の所見が観察された。投与後１４日目においても、投与後７日目と同様に、ＨＴＨＱを投与した試験群２と試験群３の組織の病変は試験群１に比べ軽減されていた。【００８７】
【表６】
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【００８８】
＜病理組織検査所見２（透過電子顕微鏡）＞
ドキソルビシン投与後７日目における試験群１の心筋細胞では、横紋の喪失、介在板の喪失、ミトコンドリアの腫脹、ミトコンドリア外膜の喪失及びクリステの離脱などが観察された。しかし、ＨＴＨＱを投与した試験群２と試験群３では横紋の喪失が軽減されており、心筋細胞とミトコンドリアがほぼ均一に配列してする等、正常な細胞と近い所見を示した。ドキソルビシン投与後１４日目の心筋細胞においても、試験群１〜３は投与後７日目と同様な所見が観察された。【００８９】
これらの病理組織検査の所見から、本発明の上述の一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体は、ドキソルビシンが誘発する心臓の線維化を抑制する効果があり、心筋症を予防又は治療する効果があることが示された。また、このハイドロキノン誘導体と組み換えヒトエリスロポエチンとを合わせて用いることにより、心臓の線維化の抑制または治療効果がさらに向上することがわかった。【００９０】
＜クレアチンホスホキナーゼ；ＣＰＫ＞
クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）は筋肉、脳、神経に多量に分布し、エネルギー代謝に関与する酵素である。特に骨格筋や心筋に障害が起きたときに血中に流出する逸脱酵素として臨床上重要な指標となっている。ドキソルビシン投与後１４日目におけるクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）値を測定したところ、対照群に比べ、試験群１及び試験群２の値が有意に高い値を示した（ｐ＜０．０５）。しかしながら、ＨＴＨＱを投与した試験群２と試験群３のＣＰＫ値は試験群１と比べて有意に低い値であり（ｐ＜０．０５）、ＨＴＨＱ及びｒＨｕＥＰＯを投与した試験群３ではＣＰＫ値の増加が見られなかった。以上の結果から、一般式（１）で表されるハイドロキノン誘導体は、ドキソルビシンが誘発する心筋の障害を抑制する作用があり、心筋症を予防又は治療する効果があることが示された。また、このハイドロキノン誘導体と組み換えヒトエリスロポエチンとを合わせて用いることにより、心筋障害の抑制または治療効果がさらに向上することがわかった。【００９１】
本発明は、上記の実施形態又は実施例に限定されるものでなく、特許請求の範囲に記載された発明の要旨を逸脱しない範囲内での種々、設計変更した形態も技術的範囲に含まれるものである。
【産業上の利用可能性】
【００９２】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息及び間質性肺炎といった慢性呼吸器疾患、心筋症及び抗癌剤等の薬剤の投与により誘発される肺又は心臓の線維化を抑制、改善することができ、慢性呼吸器疾患、心筋症及び抗癌剤等の薬剤の副作用による肺又は心臓の線維化疾患の予防、治療又は改善のために有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【国際調査報告】
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