(57)【要約】【課題】容易かつ安定的に、Ｐ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート結晶を長期保管するための方法を提供する。【解決手段】下記（１）〜（３）の保管条件のうち、いずれか１つの条件を選択し、当該条件にて保管することを特徴とする、包装されたＰ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート結晶又はその薬学的に許容可能な塩の保管方法。（１）保管温度０℃以上２５℃未満、（２）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜８．０、（３）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．０〜６．４。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の低下率を０．１５％以下に抑えるために、下記（１）〜（３）の保管条件のうち、いずれか１つの条件を選択し、当該条件にて保管することを特徴とする、包装されたＰ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート結晶又はその薬学的に許容可能な塩の保管方法。（１）保管温度０℃以上、２５℃未満、（２）保管温度２５℃以上、４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜８．０、（３）保管温度４０℃以上、６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．０〜６．４。
【請求項２】
４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の低下率を０．１％以下に抑えるために、下記（４）〜（６）の保管条件のうち、いずれか１つの条件を選択し、当該条件にて保管することを特徴とする、包装されたＰ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート結晶又はその薬学的に許容可能な塩の保管方法。（４）保管温度０℃以上２５℃未満、（５）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜７．４、（６）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．２〜６．２。
【請求項３】
４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の低下率を０．０５％以下に抑えるために、下記（７）または（８）の保管条件のうち、いずれか１つの条件を選択し、当該条件にて保管することを特徴とする、包装されたＰ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート結晶又はその薬学的に許容可能な塩の保管方法。（７）保管温度０℃以上２５℃未満、（８）保管温度２５℃以上〜４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．６〜６．６。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｐ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート結晶を安定的に保管する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記式［Ｉ］で示されるＰ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート（慣用名「ＵＰ４Ｕ」）またはその塩は、ドライアイに伴う角結膜上皮障害の治療薬として用いられている。また、当該化合物は、痰排出誘導作用を有しており、去痰剤または肺炎治療薬としての開発が期待されている。  【０００３】
【化１】
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【０００４】
Ｐ１，Ｐ４−ビス（５’−ウリジル）テトラホスフェート（以下「ＵＰ４Ｕ」と表記する場合がある）を安定的に保管可能するため、当該化合物またはその塩の結晶が取得されている（特許文献１）。しかしながら、従来文献は、結晶が凍結乾燥品に比較して安定であることは示しているものの、どのような条件において結晶を安定的に保管できるかについては検討していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０００／０２０４３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＵＰ４Ｕは医薬品の原料として使用される化合物であり、医薬品原料として使用する際には、含まれている不純物による副生成物の生成を極力抑制するため、きわめて高い純度の中間体製品を使用する必要があり、０．１％の不純物も問題となるほど厳しい規格を要求される場合もある。したがって、製造した中間体製品の保管する際には、分解を可能な限り抑制できるような条件を設定する必要があるが、ＵＰ４Ｕ結晶の保管時に、どのような条件が分解に寄与しているのか、またどのように条件設定を行うことで分解を抑制することができるのか、従来全く知られていない。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
したがって本発明の課題は、容易かつ安定的にＵＰ４Ｕ結晶を長期保管するための方法を提供することである。  【０００８】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、結晶の保管温度およびｐＨによって、ＵＰ４Ｕの安定性が大きく変動することを見出した。そして、さらに検討を重ねた結果、下記（１）から（３）のいずれかの保管条件にてＵＰ４Ｕ結晶を保管すると、結晶を４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の変化率が０．１５％以下に抑制され、保管時のＨＰＬＣ純度の低下率を軽減させることができることを見出し、本発明を完成させた。（１）保管温度０℃以上２５℃未満、（２）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜８．０、（３）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．０〜６．４、
【発明の効果】
【０００９】
本発明の保管方法を用いることにより、ＵＰ４Ｕをほぼ分解させることなく、安定した状態で長期間保管することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、様々な結晶ｐＨを呈するＵＰ４Ｕの結晶を容器に包装し、５℃〜６０℃の温度で４週間保管したときのＨＰＬＣ純度変化率（％）を示す。凡例として、＊は５℃、×は２５℃、△は４０℃、●は６０℃を表し、それぞれの近似曲線についても示している。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の保管方法は、ＵＰ４Ｕ結晶の保管方法に関するものである。結晶に用いるＵＰ４Ｕは、フリー体であっても、薬学的に許容可能な塩であっても構わない。具体的な塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等の薬学的に許容される塩が例示される。塩の置換数は、１〜４個の金属が置換したものが挙げられる。  
【００１２】
本発明の保管方法では、結晶を４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の変化率を０．１５％以下に抑制するために、ＵＰ４Ｕの結晶を下記（１）〜（３）のいずれか１つの条件にて保管する。（１）保管温度０℃以上２５℃未満、（２）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜８．０、（３）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．０〜６．４。  
【００１３】
また、本発明の保管方法では、結晶を４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の変化率を０．１０％以下に抑制するために、ＵＰ４Ｕの結晶を、下記（４）〜（６）のいずれか１つの条件にて保管する。（４）保管温度０℃以上２５℃未満、（５）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜７．４、（６）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．２〜６．２。  
【００１４】
さらに、本発明の保管方法では、結晶を４週間保管したときのＨＰＬＣ純度の変化率を０．０５％以下に抑制するために、ＵＰ４Ｕの結晶を、下記（７）（８）のいずれか１つの条件にて保管する。（７）保管温度０℃以上２５℃未満、（８）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．６〜６．６。  
【００１５】
本発明において、結晶のｐＨとは、結晶１ｇを、２０ｍＬの水に溶解させて測定したときのｐＨの値を指す。  ＵＰ４Ｕ結晶のｐＨを所期の値の範囲内に調整するためには、たとえば結晶化に用いる元液のｐＨを調整すればよい。ｐＨ調整のためには、医薬品原料等の製造に使用可能な任意の酸またはアルカリを必要に応じて用いればよく、酸としては塩酸、硝酸、リン酸などから任意のものを、アルカリとしては水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどから任意のものを使用することができる。  
【００１６】
本発明に用いるＵＰ４Ｕは、公知の方法（たとえば特許文献１）により合成し、結晶化させることができる。一具体例には、化学合成法や酵素合成法など任意の製法によって合成した粗ＵＰ４Ｕを、陰イオン交換クロマトグラフィーと活性炭クロマトグラフィーとを用いて精製し、精製されたＵＰ４Ｕの溶液に、親水性有機溶媒を加えることで、ＵＰ４Ｕ結晶を取得することができる。ただし、結晶を取得することが可能によるものであれば、他の方法によって取得された結晶であっても構わない。また、取得した結晶は、減圧乾燥、通風乾燥、加熱乾燥等の通常の方法によって適宜乾燥させることができる。  
【００１７】
取得されたＵＰ４Ｕ結晶は、医薬品用途であることを考慮すると、純度９５％以上、また好ましくは純度９７％以上、さらに好ましくは純度９９％以上であることが好ましい。また、これらの結晶は、付着水が付着していたり、水和物となっていてもよい。より具体的には、ＵＰ４Ｕ１分子に対し、３〜８分子の水が結合または付着していてもよい。  
【００１８】
本発明の方法では、ＵＰ４Ｕ結晶を任意の容器に包装して保管する。保管に用いる容器としては、袋、ビン、缶、箱、アンプルなど任意の形状のものを用いることができる。  
【００１９】
容器の材質としては、低密度ポリエチレン、高密度ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル等のビニル系樹脂、ナイロン６、ナイロン６６等のポリアミド系樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリテトラメチレンテレフタレート等のポリエステル系樹脂などの未延伸フィルムや、一軸又は二軸延伸フィルムを用いることができる。  
【００２０】
これらのフィルム材は、単層で、又は二種以上を積層して用いることができるほか、アルミニウム等の金属箔、金属又は金属酸化物の蒸着フィルムなどを積層して用いることもできる。また、容器は二重または三重以上にして保管してもよい。容器における封入状態は、密閉、気密、密封等、開放でない状態において封入することが好ましく、密封または気密状態において封入することがさらに好ましい。  
【００２１】
結晶ｐＨまたは温度が上記の範囲外である条件においてＵＰ４Ｕを保管すると、ＵＰ４Ｕの分解が生じやすくなり、医薬品原料等の用途として使用する場合に不適となるリスクが生じる。  
【００２２】
本発明の方法によれば、ＵＰ４Ｕを４週間保管したときの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）純度の低下を０．１５％以下、または０．１０％以下、さらには０．０５％以下に抑制することができ、分解を抑える上できわめて好適である。  
【００２３】
すなわち、ＵＰ４Ｕを保管するにあたり、たとえば医薬品製造の原薬としてＨＰＬＣ純度の低下０．１５％未満が求められる場合には、（１）保管温度０℃以上２５℃未満、（２）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜８．０（３）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．０〜６．４のいずれかの保管条件にて、密閉、密封または気密状態にて保管する。  保管温度を０℃以上２５℃未満に制御できる保管環境であれば、結晶ｐＨを調整する必要性はない。  しかし保管環境の温度が安定せず、２５℃以上４０℃未満に達するおそれがある場合、４週間保管時のＨＰＬＣ純度の低下を０．１５％未満に抑えるためには、結晶ｐＨを４．５〜７．４に調整する必要がある。温度が４０℃以上６０℃未満と、さらに高くなる恐れがある場合には、結晶ｐＨを５．２〜６．２に調整する。  
【００２４】
同様に、ＵＰ４ＵのＨＰＬＣ純度の低下を０．１０％未満に抑えるためには、（４）保管温度０℃以上２５℃未満、（５）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜７．４、（６）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．２〜６．２のいずれかの保管条件にて保管を行う必要がある。  
【００２５】
さらに、ＵＰ４ＵのＨＰＬＣ純度の低下を０．０５％未満に抑えるためには、（７）保管温度０℃以上２５℃未満、（８）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．６〜６．６のいずれかの保管条件にて保管を行う。  
【００２６】
これらをまとめると、（Ａ）保管温度が０℃以上２５℃未満に維持されれば、ＵＰ４Ｕの結晶ｐＨによらず結晶のＨＰＬＣ純度低下はほとんど生じず、長期間の保管に適する。一方、温度制御が難しい環境下でＵＰ４Ｕの結晶を保管するためには、結晶元液のｐＨを調節することにより、結晶ｐＨを特定の範囲内に調整することが必要となる。  
【００２７】
（Ｂ）保管温度が２５℃以上４０℃未満に達するおそれがある場合には、結晶ｐＨを４．５〜８．０、好ましくは４．５〜７．４、さらに好ましくは４．６〜６．６に設定することで、４週間保管時の結晶のＨＰＬＣ純度低下をそれぞれ０．１５％、０．１０％、０．０５％以下に抑制することができ、好適である。  
【００２８】
（Ｃ）保管温度が４０℃以上６０℃未満に達するおそれがある場合には、結晶ｐＨを５．０〜６．４、好ましくは５．２〜６．２に設定することで、４週間保管時の結晶のＨＰＬＣ純度低下をそれぞれ０．１５％、０．１０％以下に抑制することができる。ＨＰＬＣ純度低下を０．０５％以下に抑制する必要がある場合、保管温度が４０℃を超えることは好ましくない。  
【００２９】
（Ｄ）また、保管温度が６０℃以上に達するのは、結晶ｐＨに拠らず結晶のＨＰＬＣ純度を大幅に低下させてしまうおそれがあるため、好ましくない。  
【００３０】
なお、ＵＰ４Ｕ結晶を４週間以上（２〜３ヶ月）保管するとき、ＨＰＬＣ純度の低下を所期の値以下に抑制するためには、保管温度を０℃以上２５℃未満に設定するか、上記（Ｂ）または（Ｃ）の記載において、それぞれの温度帯にて必要と記載している結晶ｐＨの範囲よりも、さらに好ましいとする範囲内に結晶ｐＨを設定すればよい。
【実施例】
【００３１】
以下、実施例をあげて具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。（実施例１）ｐＨの異なるＵＰ４Ｕ結晶の調整  既知の方法により調製したＵＰ４Ｕ結晶を脱イオン水に溶解した。ＵＰ４Ｕ
を溶解した液にリン酸水溶液または水酸化ナトリウム水溶液を添加し、ｐＨの異なる溶液（以下「元液」と呼ぶ）を調製した。  【００３２】
それぞれの元液にエタノールを投入してうすく白濁させ、少量のＵＰ４Ｕ結晶を添加して、十数時間撹拌した。結晶の析出を確認した後、さらにエタノールを投入して撹拌後、遠心分離器により結晶を分離した。得られた結晶を通風乾燥機で乾燥させることで、ｐＨの異なるＵＰ４Ｕ結晶を調整した。  【００３３】
（ｐＨ測定）十分に煮沸した後二酸化炭素吸収管を付して冷却した蒸留水を準備した。試験検体１．０ｇを、準備した蒸留水を用いて２０ｍＬに溶解した。この溶液のｐＨ（結晶ｐＨ）を測定した。下記表１に、結晶化前に調製した元液ｐＨと、結晶ｐＨとの対応を示す。  【００３４】
【表１】
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【００３５】
（実施例２）安定性試験（試験検体の包装）試験検体約２０ｍｇを低密度ポリエチレン製の袋に入れ、ヒートシールで密封した。この袋を、また低密度ポリエチレン製の袋に入れ、ヒートシールで密封した。この袋を、さらに低密度ポリエチレン製の袋に入れ、ヒートシールで密封した。この袋を、アルミ蒸着フィルムの袋に入れヒートシールで密封し、安定性試験用検体とした。  【００３６】
（安定性試験）  包装した検体を５℃、２５℃、４０℃、６０℃の恒温槽に入れ、４週間保管した。  【００３７】
（分析）  安定性試験開始０日目の検体と、それぞれの温度で４週間保管した後の検体について、密封した包装を開封し、試験検体を脱イオン水に溶解した。この溶液をＨＰＬＣによって分析し、その結果から安定性の評価を行った。なお、本分析におけるＨＰＬＣの測定条件は、以下の通りである。    
【表２】
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【００３８】
評価においては、４週間保管後の結晶のＨＰＬＣ純度（％）から安定性試験開始０日目の結晶のＨＰＬＣ純度（％）を引いた値を変化率（％）として、評価を行った。それぞれの条件における変化率（％）を表３および図１に示す。  【００３９】
【表３】
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【００４０】
表３および図１の結果から分かるように、ＵＰ４Ｕ結晶の保管条件として、まず、（１）保管温度０℃以上２５℃未満、（２）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜８．０、（３）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．０〜６．４。のうちいずれか１つの条件であれば、ＨＰＬＣ純度の変化率を０．１５％以下に抑制できることが明らかになった。  【００４１】
また、保管条件として、（４）保管温度０℃以上２５℃未満、（５）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．５〜７．４、（６）保管温度４０℃以上６０℃未満であり、結晶ｐＨ５．２〜６．２。のうちいずれか１つの条件であれば、ＨＰＬＣ純度の変化率を０．１０％以下に抑制できることが明らかになった。  【００４２】
さらに、保管条件として、（７）保管温度０℃以上２５℃未満、（８）保管温度２５℃以上４０℃未満であり、結晶ｐＨ４．６〜６．６。のうちいずれか１つの条件であれば、ＨＰＬＣ純度の変化率を０．０５％以下に抑制できることが明らかになった。
【図１】
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【国際調査報告】
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