(57)【要約】  細胞の捕捉効率が高く、耐水性に優れる細胞捕捉フィルターの提供。  基材に、大きさによる細胞分離機構が設けられた細胞捕捉フィルターであって、生体親和性基を有する単位を有し、フッ素原子含有率が５〜６０質量％であり、かつ下式で表される割合Ｐが０．１〜５％である含フッ素重合体から形成される層を、前記基材の少なくとも表面に有する細胞捕捉フィルター。    割合Ｐ＝（含フッ素重合体の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割合（質量％）／含フッ素重合体のフッ素原子含有率（質量％））×１００【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材に、大きさによる細胞分離機構が設けられた細胞捕捉フィルターであって、
生体親和性基を有する単位を有し、フッ素原子含有率が５〜６０質量％であり、かつ下式で表される割合Ｐが０．１〜５％である含フッ素重合体から形成される層を、前記基材の少なくとも表面に有する細胞捕捉フィルター。
割合Ｐ＝（含フッ素重合体の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割合（質量％）／含フッ素重合体のフッ素原子含有率（質量％））×１００
【請求項２】
前記割合Ｐが０．１〜４．５％である請求項１に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項３】
含フッ素重合体における生体親和性基が、下式（１）で表される基、下式（２）で表される基および下式（３）で表される基からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１または２に記載の細胞捕捉フィルター。
【化１】
2017110184.tif 000016
（前記式中、ｎは１〜１０の整数であり、ｍは前記式（１）で表される基が含フッ素重合体において側鎖に含まれる場合は１〜１００の整数であり、主鎖に含まれる場合は５〜３００であり、Ｒ１〜Ｒ３は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、ａは１〜５の整数であり、ｂは１〜５の整数であり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、Ｘ−は下式（３−１）で表される基または下式（３−２）で表される基であり、ｃは１〜２０の整数であり、ｄは１〜５の整数である。）
【化２】
2017110184.tif 000017
【請求項４】
前記含フッ素重合体が、下式（ｍ１）で表される単量体に由来する単位（ｍ１）と、下式（ｍ２）で表される単量体に由来する単位（ｍ２）および下式（ｍ３）で表される単量体に由来する単位（ｍ３）からなる群から選ばれる少なくとも１種と、を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【化３】
2017110184.tif 000018
（前記式中、Ｒ６は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、ｅは０〜３の整数であり、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に、水素原子、フッ素原子またはトリフルオロメチル基であり、Ｒｆ１は炭素数１〜２０のペルフルオロアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ１は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｒ１〜Ｒ３は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、ａは１〜５の整数であり、ｂは１〜５の整数であり、Ｒ１０は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ２は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、Ｘ−は下式（３−１）で表される基または下式（３−２）で表される基であり、ｃは１〜２０の整数であり、ｄは１〜５の整数である。）
【化４】
2017110184.tif 000019
【請求項５】
前記含フッ素重合体が、下式（ｍ１）で表される単量体に由来する単位（ｍ１）と、下式（ｍ４）で表される単量体に由来する単位（ｍ４）と、を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【化５】
2017110184.tif 000020
（前記式中、Ｒ６は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、ｅは０〜３の整数であり、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に、水素原子、フッ素原子またはトリフルオロメチル基であり、Ｒｆ１は炭素数１〜２０のペルフルオロアルキル基であり、Ｒ１１は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ３は−ＣＯＯ−または−ＣＯＯ（ＣＨ２）ｈ−ＮＨＣＯＯ−（ただし、ｈは１〜４の整数である。）であり、Ｒ１２は水素原子または−（ＣＨ２）ｉ−Ｒ１３（ただし、Ｒ１３は炭素数１〜８のアルコキシ基、水素原子、フッ素原子、トリフルオロメチル基またはシアノ基であり、ｉは１〜２５の整数である。）であり、ｆは１〜１０の整数であり、ｇは１〜１００の整数である。）
【請求項６】
前記含フッ素重合体が、下式（ｍ６）で表される単量体に由来する単位（ｍ６）を含むセグメント（Ｉ）と、下式（６）で表される構造を有する高分子アゾ開始剤に由来する分子鎖を含むセグメント（ＩＩ）とを有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【化６】
2017110184.tif 000021
（前記式中、Ｒ１６は水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、またはハロゲン原子であり、Ｑ５は単結合または２価の有機基であり、Ｒ１７は炭素原子と炭素原子の間にエーテル性酸素原子を有していてもよい炭素数１〜６のポリフルオロアルキル基であり、αは５〜３００の整数であり、βは１〜２０の整数である。）
【請求項７】
前記含フッ素重合体から形成される層が、水酸基を有する含フッ素重合体と、多官能イソシアネート化合物からなる架橋剤とから形成される層である請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項８】
前記大きさによる細胞分離機構が貫通孔である請求項１〜７のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項９】
前記貫通孔の少なくとも一部の内壁に前記含フッ素重合体からなる層が形成されている請求項８に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１０】
前記貫通孔が、円形の断面を有し、その平均直径が５００ｎｍ〜１００μｍである請求項８または９に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１１】
前記貫通孔が、円形の断面を有し、その平均直径が４〜１０μｍである請求項８または９に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１２】
前記貫通孔が、矩形の断面を有し、その短辺の平均長が４〜１０μｍである請求項８または９に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１３】
前記基材が、間隔をおいて多数の貫通孔を有し、かつ隣り合う貫通孔の間隔が３〜２００μｍである請求項８〜１２のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１４】
前記基材が、５〜７０％の開口率を有する請求項１〜１３のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１５】
基材が、石英ガラス、ほう珪酸ガラス、ソーダライムガラス、無アルカリガラス、アルカリガラスまたはアルミナシリケートガラスからなる請求項１〜１４のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１６】
基材が、エチレン−テトラフルオロエチレン共重合体（ＥＴＦＥ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）またはポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）からなる請求項１〜１４のいずれか一項に記載の細胞捕捉フィルター。
【請求項１７】
請求項１〜１６に記載の細胞捕捉フィルター上に、捕捉対象である細胞を含む懸濁液を接触させて、捕捉対象である細胞を該フィルターに捕捉し、捕捉した細胞を回収する細胞分取方法。
【請求項１８】
請求項１〜１６に記載の細胞捕捉フィルター上に血液を接触させ、該フィルター上にＣＴＣを補足し、回収するＣＴＣの分取方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は細胞捕捉フィルター、およびそれを用いる細胞の捕捉方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、多数の孔が配置された基板を使用の孔に単一細胞を捕捉、分離する方法や、補足した単一細胞を解析する方法が知られている（特許文献１、２）。
また、上記基板の表面や孔の内壁を親水性の高分子材料で被覆して親水化処理を行う方法や（特許文献３）、非イオン性界面活性をもつ高分子材料で被覆する方法（特許文献４）が知られている。これらの方法によれば、細胞の捕捉効率の向上が期待できる。【０００３】
しかし、上記方法においては、高分子材料が水溶性であるため、該高分子材料単独で基板上に被覆層を形成すると、使用中に被覆層から高分子材料が溶出し、細胞毒になったり、あるいはその後の分析において不純物となり、これらが原因となる問題を引き起こすおそれがあった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１２−１７７６８６号公報
【特許文献２】特許第５０８１８５４号公報
【特許文献３】特許第５４８７１５２号公報
【特許文献４】特許第５７０４５９０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、細胞の捕捉効率が高く、耐水性に優れる細胞捕捉フィルター、および該細胞捕捉フィルターを用いる細胞の捕捉方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、基材に、大きさによる細胞分離機構が設けられた細胞捕捉フィルターであって、生体親和性基を有する単位を有し、フッ素原子含有率が５〜６０質量％であり、かつ下式で表される割合Ｐが０．１〜５％である含フッ素重合体から形成される層を基材表面に有する細胞捕捉フィルターを提供する。
割合Ｐ＝（含フッ素重合体の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割合（質量％）／含フッ素重合体のフッ素原子含有率（質量％））×１００
【発明の効果】
【０００７】
本発明の細胞捕捉フィルターは、タンパク質に対する吸着性が小さいために細胞の捕捉効率が高く、耐水性に優れる。かかる細胞捕捉フィルターは、その使用中に高分子材料が溶出し、細胞毒となったり、あるいはその後の分析において不純物となり、これらが原因となる問題を引き起こすことを防止できる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下の用語の定義は、本明細書および特許請求の範囲にわたって適用される。
「含フッ素重合体」とは、分子中にフッ素原子を有する高分子化合物を意味する。
重合体の「ガラス転移温度（Ｔｇ）」とは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）法で測定したゴム状態からガラス状態へ変化する温度を意味する。
「単位」とは、重合体中に存在して重合体を構成する、単量体に由来する部分を意味する。炭素−炭素不飽和二重結合を有する単量体の付加重合により生じる、該単量体に由来する単位は、該不飽和二重結合が開裂して生じた２価の単位である。また、ある単位の構造を重合体形成後に化学的に変換したものも単位という。なお、以下、場合により、個々の単量体に由来する単位をその単量体名に「単位」を付した名称で呼ぶ。
「（メタ）アクリレート」とは、アクリレートおよびメタクリレートの総称である。
「生体親和性基」とは、タンパク質が重合体に吸着および細胞が重合体に接着して動かなくなることを抑制する性質を有する基を意味する。
「セグメント」とは、２以上の単位が連なって形成された分子鎖を意味する。
「生体適合性」とは、タンパク質が吸着しない、または細胞が接着しない性質を意味する。
【０００９】
「細胞」とは、生体を構成する最も基本的な単位であり、細胞膜の内部に細胞質と各種の細胞小器官をもつものを意味する。ＤＮＡを内包する核は、細胞内部に含まれても含まれなくてもよい。
動物由来の細胞には、生殖細胞（精子、卵子等）、生体を構成する体細胞、幹細胞、前駆細胞、生体から分離された癌細胞、生体から分離され不死化能を獲得して体外で安定して維持される細胞（細胞株）、生体から分離され人為的に遺伝子改変された細胞、生体から分離され人為的に核が交換された細胞等が含まれる。
生体を構成する体細胞には、線維芽細胞、骨髄細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、好中球、赤血球、血小板、マクロファージ、単球、骨細胞、骨髄細胞、周皮細胞、樹枝状細胞、ケラチノサイト、脂肪細胞、間葉細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞、血管内皮細胞、肝実質細胞、軟骨細胞、卵丘細胞、神経系細胞、グリア細胞、ニューロン、オリゴデンドロサイト、マイクログリア、星状膠細胞、心臓細胞、食道細胞、筋肉細胞（例えば、平滑筋細胞、骨格筋細胞）、膵臓ベータ細胞、メラニン細胞、造血前駆細胞、単核細胞等が含まれる。
【００１０】
幹細胞とは、自分自身を複製する能力と他の複数系統の細胞に分化する能力を兼ね備えた細胞であり、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、胚性腫瘍細胞、胚性生殖幹細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、筋幹細胞、生殖幹細胞、腸幹細胞、癌幹細胞、毛包幹細胞等が含まれる。
前駆細胞とは、前記幹細胞から特定の体細胞または生殖細胞に分化する途中の段階にある細胞である。
癌細胞とは、体細胞から派生して無限の増殖能を獲得した細胞である。
細胞株とは、生体外での人為的な操作により無限の増殖能を獲得した細胞であり、ＨＣＴ１１６、Ｈｕｈ７、ＨＥＫ２９３（ヒト胎児腎細胞）、ＨｅＬａ（ヒト子宮頸癌細胞株）、ＨｅｐＧ２（ヒト肝癌細胞株）、ＵＴ７／ＴＰＯ（ヒト白血病細胞株）、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞株）、ＭＤＣＫ、ＭＤＢＫ、ＢＨＫ、Ｃ−３３Ａ、ＨＴ−２９、ＡＥ−１、３Ｄ９、Ｎｓ０／１、Ｊｕｒｋａｔ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＰＣ１２、Ｓ２、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ、Ｖｅｒｏ等が含まれる。
血中循環癌細胞ＣＴＣ（Circulating  Turnor  Cell）とは、癌患者の血液中に存在する癌細胞である。ＣＡＭＬｓ（Circulating  Cancer  Associated  Macrophage−like  Cells）とは、癌患者の血液中に存在するマクロファージ様細胞である。
本明細書においては、式（１）で表される基を基（１）と記す。他の式で表される基もこれに準じて記す。
【００１１】
（含フッ素重合体）
本発明における含フッ素重合体（以下、「含フッ素重合体（Ａ）」とも記す。）は、生体親和性基を有する単位を有し、フッ素原子含有率が５〜６０質量％であり、かつ下式で表される割合Ｐが０．１〜５％である含フッ素重合体である。本発明の細胞捕捉フィルターは、含フッ素重合体（Ａ）からなる層を基材表面に有することで、タンパク質の付着を防止できる。そして、含フッ素重合体（Ａ）からなる層は耐水性に優れる。
割合Ｐ＝（含フッ素重合体（Ａ）の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割（質量％）／含フッ素重合体（Ａ）のフッ素原子含有率（質量％））×１００
【００１２】
＜生体親和性基＞
生体親和性基としては、タンパク質の吸着防止効果が高い被覆層を形成しやすい点から、下記の基（１）、基（２）および基（３）からなる群から選ばれる少なくとも１種が好ましい。生体親和性基としては、タンパク質の吸着防止効果が得られやすい点から、基（１）のみ、または、基（２）および基（３）のいずれか一方もしくは両方が好ましく、基（１）、基（２）または基（３）のいずれか１つが特に好ましい。含フッ素重合体（Ａ）は基（１）、基（２）および基（３）からなる群から選ばれる少なくとも１種を含むと生体適合性に優れる。
【００１３】
【化１】
2017110184.tif 000002
【００１４】
ただし、前記式中、ｎは１〜１０の整数であり、ｍは基（１）が含フッ素重合体（Ａ）において側鎖に含まれる場合は１〜１００の整数であり、主鎖に含まれる場合は５〜３００であり、Ｒ１〜Ｒ３は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、ａは１〜５の整数であり、ｂは１〜５の整数であり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、Ｘ−は下記の基（３−１）または下記の基（３−２）であり、ｃは１〜２０の整数であり、ｄは１〜５の整数である。
【００１５】
【化２】
2017110184.tif 000003
【００１６】
基（１）：
基（１）は、血液中等で運動性が高く、被覆層の表面にタンパク質が吸着しにくい。
基（１）は、含フッ素重合体（Ａ）の主鎖に含まれていてもよく、側鎖に含まれていてもよい。基（１）におけるｎは、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜６の整数が好ましく、１〜４の整数が特に好ましい。基（１）は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。タンパク質の吸着抑制効果がより高い点から、基（１）は直鎖状であることが好ましい。
基（１）におけるｍは、基（１）が含フッ素重合体（Ａ）の側鎖に含まれる場合、耐水性に優れる点から、１〜４０が好ましく、１〜２０が特に好ましい。ｍは、基（１）が含フッ素重合体（Ａ）の主鎖に含まれる場合、耐水性に優れる点から、５〜３００が好ましく、１０〜２００が特に好ましい。
【００１７】
ｍが２以上の場合、基（１）の（ＣｎＨ２ｎＯ）は１種であってもよく、２種以上であってもよい。また、２種以上の場合、その並び方はランダム、ブロック、交互のいずれであってもよい。ｎが３以上の場合、直鎖構造であってもよく、分岐構造であってもよい。含フッ素重合体（Ａ）が基（１）を有する場合、含フッ素重合体（Ａ）が有する基（１）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００１８】
基（２）：
基（２）は、血液中のリン脂質に対して強い親和性を持つ一方、血漿タンパク質に対する相互作用力は弱い。そのため、基（２）を有する含フッ素重合体（Ａ）を用いることで、例えば、血液中では被覆層上にリン脂質が優先して吸着し、該リン脂質が自己組織化して吸着層が形成されると考えられる。その結果、表面が血管内皮表面に類似した構造となるために、フィブリノーゲン等のタンパク質の吸着が抑制される。
基（２）は、含フッ素重合体（Ａ）の側鎖に含まれることが好ましい。
【００１９】
基（２）におけるＲ１〜Ｒ３は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、原料の入手容易性の点から、炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。基（２）におけるａは、１〜５の整数であり、原料の入手容易性の点から、２〜５の整数が好ましく、２が特に好ましい。基（２）におけるｂは１〜５の整数であり、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜４の整数が好ましく、２が特に好ましい。
含フッ素重合体（Ａ）が基（２）を有する場合、含フッ素重合体（Ａ）が有する基（２）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００２０】
基（３）：
基（３）を有する含フッ素重合体（Ａ）を用いることで、基（２）を有する含フッ素重合体（Ａ）を用いる場合と同様の理由からタンパク質の吸着が抑制される。基（３）は、含フッ素重合体（Ａ）の側鎖に含まれることが好ましい。
基（３）におけるＲ４およびＲ５は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、タンパク質が吸着しにくい点から、炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。基（３）におけるｃは、１〜２０の整数であり、含フッ素重合体（Ａ）が柔軟性に優れる点から、１〜１５の整数が好ましく、１〜１０の整数がより好ましく、２が特に好ましい。基（３）におけるｄは、１〜５の整数であり、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜４の整数が好ましく、１が特に好ましい。
【００２１】
含フッ素重合体（Ａ）が基（３）を有する場合、含フッ素重合体（Ａ）が有する基（３）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
また、含フッ素重合体（Ａ）が基（３）を有する場合、タンパク質が吸着しにくい点から、含フッ素重合体（Ａ）は、Ｘ−が基（３−１）である基（３）を有するか、またはＸ−が基（３−２）である基（３）を有するかのいずれかであることが好ましい。
【００２２】
＜含フッ素重合体（Ａ）の物性＞
含フッ素重合体（Ａ）の割合Ｐは、０．１〜５．０％である。割合Ｐが前記下限値以上であれば、タンパク質が吸着しにくい生体適合性に優れた被覆層を形成できる。割合Ｐが前記上限値以下であれば、耐水性に優れた被覆層を形成でき、血液中等に含フッ素重合体（Ａ）が溶出しにくくなる。割合Ｐは、０．１〜４．７％が好ましく、特に、０．１〜４．５％が好ましい。
なお、割合Ｐは、実施例に記載の方法で測定できる。また、含フッ素重合体（Ａ）の製造に使用する単量体、および開始剤の仕込み量から算出することもできる。
【００２３】
含フッ素重合体（Ａ）のフッ素原子含有率は、５〜６０質量％である。該フッ素原子含有率は５〜５５質量％が好ましく、５〜５０質量％が特に好ましい。フッ素原子含有率が前記下限値以上であれば、耐水性に優れる。フッ素原子含有率が前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
なお、フッ素原子含有率（質量％）は、下式で求められる。
（フッ素原子含有率）＝［１９×ＮＦ／ＭＡ］×１００
上記式中、ＮＦは、含フッ素重合体を構成する単位の種類毎に、単位のフッ素原子数と、全単位に対する当該単位のモル比率とを乗じた値の総和である。ＭＡは、含フッ素重合体を構成する単位の種類毎に、単位を構成する全ての原子の原子量の合計と、全単位に対する当該単位のモル比率とを乗じた値の総和である。
【００２４】
例として、テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）単位５０モル％とエチレン（Ｅ）単位５０モル％とを有する含フッ素重合体のフッ素原子含有率について以下に説明する。
該含フッ素重合体の場合、ＴＦＥ単位のフッ素原子数（４個）と、全単位に対するＴＦＥ単位のモル比率（０．５）とを乗じた値は２であり、Ｅ単位のフッ素原子数（０個）と、全単位に対するＥ単位のモル比率（０．５）とを乗じた値は０であるため、ＮＦは２となる。また、ＴＦＥ単位を構成する全ての原子の原子量の合計（１００）と、全単位に対するＴＦＥ単位のモル比率（０．５）とを乗じた値は５０であり、Ｅ単位を構成する全ての原子の原子量の合計（２８）と、全単位に対するＥ単位のモル比率（０．５）とを乗じた値は１４であるため、ＭＡは６４となる。したがって、該含フッ素重合体のフッ素原子含有率は５９．４質量％となる。
なお、フッ素原子含有率は、実施例に記載の方法で測定できる。また、含フッ素重合体（Ａ）の製造に使用する単量体、および開始剤の仕込み量からも算出できる。
【００２５】
含フッ素重合体（Ａ）の数平均分子量（Ｍｎ）は、２，０００〜１，０００，０００が好ましく、２，０００〜８００，０００が特に好ましい。含フッ素重合体（Ａ）の数平均分子量が前記下限値以上であれば、耐久性に優れ、前記上限値以下であれば、加工性に優れる。
含フッ素重合体（Ａ）の質量平均分子量（Ｍｗ）は、２，０００〜２，０００，０００が好ましく、２，０００〜１，０００，０００が特に好ましい。含フッ素重合体（Ａ）の質量平均分子量が前記下限値以上であれば、耐久性に優れ、前記上限値以下であれば、加工性に優れる。
含フッ素重合体（Ａ）の分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は、１〜１０が好ましく、１．１〜５が特に好ましい。含フッ素重合体（Ａ）の分子量分布が前記範囲内であれば、耐水性に優れ、かつタンパク質が吸着しにくい。
【００２６】
含フッ素重合体（Ａ）は市販品を使用してもよい。市販品としては、例えば、以下のものが挙げられる。
３Ｍ社製、ノベック  シリーズ：
ＦＣ−４４３０（ノニオン性、ペルフルオロブタンスルホン酸基含有、表面張力：２１ｍＮ／ｍ）、ＦＣ−４４３２（ノニオン性、ペルフルオロブタンスルホン酸基含有、表面張力：２１ｍＮ／ｍ）等。
ＡＧＣセイミケミカル社製、サーフロン  シリーズ：
Ｓ−２４１（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有、表面張力：１６．２ｍＮ／ｍ）、Ｓ−２４２（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有エチレンオキシド付加物、表面張力：２２．９ｍＮ／ｍ）、Ｓ−２４３（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有エチレンオキシド付加物、表面張力：２３．２ｍＮ／ｍ）、Ｓ−４２０（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有エチレンオキシド付加物、表面張力：２３．１ｍＮ／ｍ）、
Ｓ−６１１（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有重合物、表面張力：１８．４ｍＮ／ｍ）、Ｓ−６５１（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有重合物、表面張力：２３．０ｍＮ／ｍ）、
Ｓ−６５０（ノニオン性、炭素数が１〜６のペルフルオロアルキル基含有重合物）等。
ＤＩＣ社製、メガファック  シリーズ：
Ｆ−４４４（ノニオン性、ペルフルオロアルキルエチレンオキシド付加物、表面張力：１６．８ｍＮ／ｍ）等。
旭硝子社製、アサヒガード  シリーズ：Ｅ１００等。
【００２７】
＜好ましい含フッ素重合体（Ａ）＞
含フッ素重合体（Ａ）としては、耐水性に優れ、被覆成分が溶出しにくく、タンパク質が吸着しにくい生体適合性に優れた被覆層を簡便に形成できる点から、後述の含フッ素重合体（Ａ１）〜（Ａ３）が好ましい。含フッ素重合体（Ａ１）および（Ａ２）は生体親和性基を側鎖のみに有する含フッ素重合体（Ａ）であり、含フッ素重合体（Ａ３）は生体親和性基を、少なくとも主鎖に有する含フッ素重合体（Ａ）である。
【００２８】
≪含フッ素重合体（Ａ１）≫
含フッ素重合体（Ａ１）は、下記の単量体（ｍ１）に由来する単位（以下、単位（ｍ１）とも記す。）と、単量体（ｍ２）に由来する単位（以下、単位（ｍ２）とも記す。）および単量体（ｍ３）に由来する単位（以下、単位（ｍ３）とも記す。）からなる群から選ばれる少なくとも１種と、を有する含フッ素重合体である。
【００２９】
【化３】
2017110184.tif 000004
【００３０】
ただし、Ｒ６は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、ｅは０〜３の整数であり、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に、水素原子、フッ素原子またはトリフルオロメチル基であり、Ｒｆ１は炭素数１〜２０のペルフルオロアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ１は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｒ１〜Ｒ３は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、ａは１〜５の整数であり、ｂは１〜５の整数であり、Ｒ１０は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ２は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、Ｘ−は基（３−１）または基（３−２）であり、ｃは１〜２０の整数であり、ｄは１〜５の整数である。
【００３１】
単量体（ｍ１）：
式（ｍ１）中、Ｒ６は、重合しやすい点から、水素原子またはメチル基が好ましい。
ｅは、含フッ素重合体（Ａ１）の柔軟性に優れる点から、１〜３の整数が好ましく、１または２が特に好ましい。Ｒ７およびＲ８は、耐水性に優れる点から、フッ素原子が好ましい。Ｒｆ１のペルフルオロアルキル基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。Ｒｆ１としては、原料が入手容易な点から、炭素数１〜１０のペルフルオロアルキル基が好ましく、炭素数１〜５のペルフルオロアルキル基が特に好ましい。
【００３２】
単量体（ｍ１）の具体例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯ（ＣＨ２）ｅＣＦ２ＣＦ２ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯ（ＣＨ２）ｅＣＦ２ＣＦ（ＣＦ３）２、
ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯＣＨ（ＣＦ３）２、ＣＨ２＝ＣＲ６ＣＯＯＣ（ＣＦ３）３等。
【００３３】
単量体（ｍ１）としては、耐水性に優れる点から、ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、またはＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＦ３が特に好ましい。単位（ｍ１）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００３４】
単量体（ｍ２）：
単量体（ｍ２）は、基（２）を有する単量体である。
式（ｍ２）中、Ｒ９は、重合しやすい点から、水素原子またはメチル基が好ましい。
Ｑ１は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、タンパク質が吸着しにくい点から、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−が好ましい。Ｒ１〜Ｒ３は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、タンパク質が吸着しにくい点から、炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。ａは、１〜５の整数であり、含フッ素重合体（Ａ１）の柔軟性に優れる点から、１〜４の整数が好ましく、２が特に好ましい。ｂは１〜５の整数であり、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜４の整数が好ましく、２が特に好ましい。
【００３５】
単量体（ｍ２）の具体例としては、例えば、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン、２−アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等が挙げられる。
含フッ素重合体（Ａ１）が単位（ｍ２）を有する場合、単位（ｍ２）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００３６】
単量体（ｍ３）：
単量体（ｍ３）は、基（３）を有する単量体である。
式（ｍ３）中、Ｒ１０は、重合しやすい点から、水素原子またはメチル基が好ましい。
Ｑ２は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、含フッ素重合体（Ａ１）のタンパク質が吸着しにくい点から、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−が好ましい。Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、炭素数１〜５のアルキル基であり、原料が入手容易な点から、炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。Ｘ−は、基（３−１）または基（３−２）が好ましい。ｃは、１〜２０の整数であり、原料が入手容易な点から、１〜１５の整数が好ましく、１〜１０の整数がより好ましく、２が特に好ましい。ｄは、１〜５の整数であり、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜４の整数が好ましく、１が特に好ましい。
【００３７】
単量体（ｍ３）の具体例としては、以下の化合物が挙げられる。
Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、Ｎ−アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−プロピルスルホキシベタイン、Ｎ−メタクリロイルアミノプロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−プロピルスルホキシベタイン等。
【００３８】
単量体（ｍ３）としては、タンパク質が吸着しにくい点から、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、またはＮ−アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタインが好ましい。含フッ素重合体（Ａ１）が単位（ｍ３）を有する場合、単位（ｍ３）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００３９】
含フッ素重合体（Ａ１）においては、タンパク質が吸着しにくい点から、生体親和性基を有する単位として、単位（ｍ２）または単位（ｍ３）のいずれか１つを有していることが特に好ましい。なお、含フッ素重合体（Ａ１）は、単位（ｍ１）、単位（ｍ２）および単位（ｍ３）をすべて有していてもよい。
含フッ素重合体（Ａ１）は、単位（ｍ１）と、単位（ｍ２）および単位（ｍ３）から選ばれる１種以上とに加えて、単位（ｍ１）、単位（ｍ２）および単位（ｍ３）以外の他の単量体に由来する単位を有していてもよい。
【００４０】
他の単量体としては、耐水性に優れる点から、下記の単量体（ｍ７）が好ましい。
【００４１】
【化４】
2017110184.tif 000005
【００４２】
ただし、Ｒ１９は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ６は６員環芳香族炭化水素基（−Ｃ６Ｈ４−）または−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ρ−（ただし、ρは１〜１００の整数である。）であり、Ｒ２０およびＲ２１は、それぞれ独立に、炭素数１〜３のアルキル基である。ηは１〜３の整数であり、η＋θは３である。
式（ｍ７）中、Ｒ１９は、重合しやすい点から、水素原子またはメチル基が好ましい。
Ｑ６は、入手容易性の点から、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）２−が好ましい。Ｒ２０およびＲ２１は、入手容易性の点から、それぞれ独立に、炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、炭素数１〜２のアルキル基が特に好ましい。ηは、基板密着性の点から、２または３が好ましい。
【００４３】
単量体（ｍ７）の具体例としては、例えば、ｐ−スチリルトリメトキシシラン、３−メタクリロイルオキシプロピルトリメトキシシラン、３−メタクリロイルオキシプロピルメチルジメトキシシラン、３−メタクリロイルオキシプロピルメチルジエトキシシラン、３−メタクリロイルオキシプロピルトリエトキシシラン、３−アクリロイルオキシプロピルトリメトキシシラン等が挙げられる。
単量体（ｍ７）としては、３−メタクリロイルオキシプロピルトリメトキシシラン、３−メタクリロキシプロピルメチルジメトキシシラン、３−メタクリロキシプロピルメチルジエトキシシラン、３−メタクリロキシプロピルトリエトキシシラン、または３−アクリロキシプロピルトリメトキシシランが好ましい。
含フッ素重合体（Ａ１）が単量体（ｍ７）に由来する単位（ｍ７）を有する場合、単位（ｍ７）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００４４】
また、単量体（ｍ７）以外の他の単量体としては、例えば、含フッ素重合体（Ａ１）における他の単量体で挙げた化合物が挙げられる。
単量体（ｍ７）以外の他の単量体としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ−（メタ）アクリロイルモルホリン、Ｎ−（メタ）アクリロイルペピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノオキシドエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノオキシドエチル（メタ）アクリレート等が挙げられる。また、２−イソシアネートエチル（メタ）アクリレート、２−イソシアネートエチル（メタ）アクリレートの３，５−ジメチルピラゾール付加体、３−イソシアネートプロピル（メタ）アクリレート、４−イソシアネートブチル（メタ）アクリレート、トリアリルイソシアヌレート、グリシジル（メタ）アクリレート、ポリオキシアルキレングリコールモノグリシジルエーテル（メタ）アクリレート等を用いてもよい。
【００４５】
含フッ素重合体（Ａ１）の全単位に対する単位（ｍ１）の割合は、５〜９５モル％が好ましく、１０〜９０モル％が特に好ましい。単位（ｍ１）の割合が前記下限値以上であれば、耐水性に優れ、前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
含フッ素重合体（Ａ１）の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割合は、５〜９５モル％が好ましく、１０〜９０モル％が特に好ましい。前記単位の割合が前記下限値以上であれば、タンパク質が吸着しにくく、前記上限値以下であれば、耐水性に優れる。
【００４６】
含フッ素重合体（Ａ１）の全単位に対する単位（ｍ２）と単位（ｍ３）との合計の割合は、５〜９５モル％が好ましく、１０〜９０モル％が特に好ましい。単位（ｍ２）と単位（ｍ３）との合計の割合が前記下限値以上であれば、タンパク質が吸着しにくく、前記上限値以下であれば、耐水性に優れる。
【００４７】
含フッ素重合体（Ａ１）が単位（ｍ７）を有する場合、含フッ素重合体（Ａ１）の全単位に対する単位（ｍ７）の割合は、０．１〜１０モル％が好ましく、０．５〜１０モル％が特に好ましい。単位（ｍ７）の割合が前記下限値以上であれば、耐水性に優れ、前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
【００４８】
含フッ素重合体（Ａ１）は、公知の方法を用いて、重合溶媒中で単量体の重合反応を行うことにより得られる。
重合溶媒としては、特に限定されず、例えば、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等）、アルコール類（メタノール、２−プロピルアルコール等）、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、エーテル類（ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等）、グリコールエーテル類（エチレングリコール、プロピレングリコール、またはジプロピレングリコールのエチルエーテルまたはメチルエーテル等）およびその誘導体、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類（パークロロエチレン、トリクロロ−１，１，１−エタン、トリクロロトリフルオロエタン、ジクロロペンタフルオロプロパン等）、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ブチロアセトン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等が挙げられる。
【００４９】
含フッ素重合体（Ａ１）を得る重合反応における反応液中のすべての単量体の合計濃度は、５〜６０質量％が好ましく、１０〜４０質量％が特に好ましい。
含フッ素共重合体（Ａ１）を得る重合反応においては、重合開始剤を用いることが好ましい。重合開始剤としては、過酸化物（ベンジルパーオキシド、ラウリルパーオキシド、スクシニルパーオキシド、ｔｅｒｔ−ブチルパーピバレート等）、アゾ化合物等が挙げられる。
【００５０】
重合開始剤としては、２，２’−アゾイソブチロニトリル、２，２’−アゾビス−２−メチルブチロニトリル、ジメチル−２，２’−アゾビスイソブチレート、２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２イル）プロパン］、２，２’−アゾビス（４−メトキシ−２、４−ジメチルバレロニトリル）、１、１’−アゾビス（２シクロヘキサン−１−カルボニトリル）、２，２’−アゾビス（２、４−ジメチルバレロニトリル）、１、１’−アゾビス（１−アセトキシ−１−フェニルエタン）、ジメチルアゾビスイソブチレート、４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）などが好ましく、２，２’−アゾイソブチロニトリル、２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２イル）プロパン］、または４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）が特に好ましい。
重合開始剤の使用量は、単量体の合計量１００質量部に対して０．１〜１．５質量部が好ましく、０．１〜１．０質量部がより好ましい。
【００５１】
含フッ素重合体（Ａ１）の重合度（分子量）を調節するために、重合反応において連鎖移動剤を用いてもよい。連鎖移動剤を用いることにより、重合溶媒中の単量体の濃度の合計を高められる効果もある。
連鎖移動剤としては、アルキルメルカプタン（ｔｅｒｔ−ドデシルメルカプタン、ｎ−ドデシルメルカプタン、ステアリルメルカプタン等）、アミノエタンチオール、メルカプトエタノール、３−メルカプトプロピオン酸、２−メルカプトプロピオン酸、チオリンゴ酸、チオグリコール酸、３，３’−ジチオ−ジプロピオン酸、チオグリコール酸２−エチルヘキシル、チオグリコール酸ｎ−ブチル、チオグリコール酸メトキシブチル、チオグリコール酸エチル、２，４−ジフェニル−４−メチル−１−ペンテン、四塩化炭素等が挙げられる。
連鎖移動剤の使用量は、単量体の合計量１００質量部に対して０〜２質量部が好ましく、０．１〜１．５質量部がより好ましい。
【００５２】
重合反応における反応温度は、室温から反応液の沸点までの範囲が好ましい。重合開始剤を効率良く使う観点からは、重合開始剤の半減期温度以上が好ましく、３０〜９０℃がより好ましく、４０〜８０℃がより好ましい。
【００５３】
≪含フッ素重合体（Ａ２）≫
含フッ素重合体（Ａ２）は、上記の単量体（ｍ１）に由来する単位（ｍ１）と下記の単量体（ｍ４）に由来する単位（以下、単位（ｍ４）とも記す。）とを有する含フッ素重合体である。
【００５４】
【化５】
2017110184.tif 000006
【００５５】
ただし、式中、Ｒ１１は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｑ３は−ＣＯＯ−または−ＣＯＯ（ＣＨ２）ｈ−ＮＨＣＯＯ−（ただし、ｈは１〜４の整数である。）であり、Ｒ１２は水素原子または−（ＣＨ２）ｉ−Ｒ１３（ただし、Ｒ１３は炭素数１〜８のアルコキシ基、水素原子、フッ素原子、トリフルオロメチル基またはシアノ基であり、ｉは１〜２５の整数である。）であり、ｆは１〜１０の整数であり、ｇは１〜１００の整数である。
【００５６】
単量体（ｍ１）：
単量体（ｍ１）の好ましい範囲や例示は、含フッ素重合体（Ａ１）で説明したものと同様である。単位（ｍ１）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
【００５７】
単量体（ｍ４）：
単量体（ｍ４）は、基（１）を有する単量体である。式（ｍ４）中、Ｒ１１は、重合しやすい点から、水素原子またはメチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。Ｑ３は、−ＣＯＯ−が好ましい。Ｒ１２は、水素原子が好ましい。
ｇが２以上の場合、複数存在する（ＣｆＨ２ｆＯ）の種類が同じであっても異なっていてもよい。異なる場合には、その並び方はランダム、ブロック、交互（例えば（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）等）のいずれであってもよい。ｆが３以上の場合には、直鎖構造でも分岐構造でもよい。（ＣｆＨ２ｆＯ）としては（ＣＨ２Ｏ）、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、（ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ）、（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）等が挙げられる。ｆは、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜６の整数が好ましく、１〜４の整数が特に好ましい。ｇは、排除体積効果が高く、タンパク質が吸着しにくい点から、１〜５０の整数が好ましく、１〜３０の整数がより好ましく、１〜２０の整数が特に好ましい。ｉは、含フッ素重合体（Ａ２）の柔軟性に優れる点から、１〜４の整数が好ましく、１または２が特に好ましい。
Ｒ１３は、タンパク質が吸着しにくい点から、アルコキシ基が好ましい。
【００５８】
単量体（ｍ４）としては、下式（ｍ４１）で表される単量体（ｍ４１）が好ましい。
【００５９】
【化６】
2017110184.tif 000007
【００６０】
単量体（ｍ４）の具体例としては、以下の化合物が挙げられる。
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）４−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）５−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９−ＣＨ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９−Ｈ、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）４−Ｈ、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）５−Ｈ、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９−ＣＨ３、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２Ｏ）−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ１−ＣＨ２−ＯＨ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ２−（Ｃ４Ｈ８Ｏ）ｇ３−Ｈ、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ２−（Ｃ４Ｈ８Ｏ）ｇ３−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ２−（Ｃ４Ｈ８Ｏ）ｇ３−ＣＨ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ２−（Ｃ４Ｈ８Ｏ）ｇ３−ＣＨ３等。
上式において、ｇ１は１〜２０の整数であり、ｇ２およびｇ３は、それぞれ独立に、１〜５０の整数である。
【００６１】
単量体（ｍ４）としては、タンパク質が吸着しにくい点から、以下の化合物が好ましい。
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）４−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）５−Ｈ、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９−ＣＨ３、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２Ｏ）−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ１−ＣＨ２−ＯＨ、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＯＯ−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ２−（Ｃ４Ｈ８Ｏ）ｇ３−Ｈ。
【００６２】
含フッ素重合体（Ａ２）は、単量体（ｍ１）および単量体（ｍ４）以外の他の単量体に由来する単位を有していてもよい。
他の単量体としては、耐水性に優れる点から、下式（ｍ５）で表される単量体（ｍ５）が好ましい。
ＣＨ２＝ＣＲ１４−ＣＯＯ−Ｑ４−Ｒ１５  ・・・（ｍ５）
【００６３】
ただし、Ｒ１４は水素原子、塩素原子またはメチル基であり、Ｒ１５は炭素数１〜８のアルコキシ基、水素原子、ヒドロキシ基またはシアノ基であり、Ｑ４は単結合、炭素数１〜２０のアルキレン基、炭素数１〜１２のポリフルオロアルキレン基または−ＣＦ２−（ＯＣＦ２ＣＦ２）ｙ−ＯＣＦ２−（ただし、ｙは１〜６の整数である。）である。
【００６４】
式（ｍ５）中、Ｒ１４は、重合しやすい点から、水素原子またはメチル基が好ましく、水素原子が特に好ましい。ｙは、含フッ素重合体（Ａ２）の柔軟性に優れる点から、１〜１５の整数が好ましく、２〜１５の整数が特に好ましい。Ｑ４のアルキレン基およびポリフルオロアルキレン基は、直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。Ｑ４は、含フッ素重合体（Ａ２）の柔軟性に優れる点から、炭素数１〜１２のアルキレン基が好ましく、メチレン基、イソブチレン基が特に好ましい。Ｒ１５は耐水性に優れる点から、水素原子が好ましい。
【００６５】
単量体（ｍ５）の具体例としては、以下の化合物が挙げられる。
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）４−Ｈ、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）６−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）８−Ｈ、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）16−Ｈ、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−ＣＨ２ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３等。
単量体（ｍ５）としては、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）４−Ｈ、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ（ＣＨ２）８−Ｈ、またはＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）１６−Ｈが好ましく、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）８−Ｈ、またはＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）１６−Ｈが特に好ましい。
【００６６】
含フッ素重合体（Ａ２）は、耐水性に優れる点から、単量体（ｍ７）に由来する単位（ｍ７）を有することも好ましい。単量体（ｍ７）の好ましい態様は、含フッ素重合体（Ａ１）の場合と同じである。
また、単量体（ｍ５）および単量体（ｍ７）以外の他の単量体としては、例えば、含フッ素重合体（Ａ１）において単量体（ｍ７）以外の他の単量体として挙げた化合物と同じ化合物が挙げられる。
【００６７】
含フッ素重合体（Ａ２）が単位（ｍ５）を有する場合、単位（ｍ５）は、１種でもよく、２種以上でもよい。
含フッ素重合体（Ａ２）が単位（ｍ１）および単位（ｍ４）に加えて単位（ｍ５）を有する場合、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３単位と、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２Ｏ）−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｇ１−ＣＨ２−ＯＨ（ｇ１＝１〜２０）単位と、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−（ＣＨ２）１６−Ｈ単位とを有する含フッ素重合体が特に好ましい。
【００６８】
含フッ素重合体（Ａ２）の全単位に対する単位（ｍ１）の割合は、５〜９５モル％が好ましく、１０〜９０モル％が特に好ましい。単位（ｍ１）の割合が前記下限値以上であれば、耐水性に優れ、前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
【００６９】
含フッ素重合体（Ａ２）の全単位に対する単位（ｍ４）の割合は、５〜９５モル％が好ましく、１０〜９０モル％が特に好ましい。単位（ｍ４）の割合が前記下限値以上であれば、タンパク質が吸着しにくく、前記上限値以下であれば、耐水性に優れる。
含フッ素重合体（Ａ２）が単位（ｍ５）を有する場合、単位（ｍ１）と単位（ｍ４）との合計に対する単位（ｍ５）の割合は、５〜９５モル％が好ましく、１０〜９０モル％が特に好ましい。単位（ｍ５）の割合が前記下限値以上であれば、耐水性に優れ、前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
【００７０】
含フッ素重合体（Ａ２）が単位（ｍ７）を有する場合、含フッ素重合体（Ａ２）の全単位に対する単位（ｍ７）の割合は、０．１〜１０モル％が好ましく、０．５〜１０モル％が特に好ましい。単位（ｍ７）の割合が前記下限値以上であれば、耐水性に優れ、前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
含フッ素重合体（Ａ２）は、単量体（ｍ１）、（ｍ４）、（ｍ５）および（ｍ７）を用いる以外は、含フッ素重合体（Ａ１）と同様の方法で製造できる。
【００７１】
≪含フッ素重合体（Ａ３）≫
含フッ素重合体（Ａ３）は、下式（ｍ６）で表される単量体（ｍ６）に由来する単位（以下、単位（ｍ６）とも記す。）を含むセグメント（Ｉ）と、下式（６）で表される構造（以下、構造（６）と記す。）を有する高分子アゾ開始剤に由来する分子鎖を含むセグメント（ＩＩ）と、を有するブロック共重合体である。構造（６）の分子鎖は、生体親和性基である基（１）を有する単位で形成されている。このように、含フッ素重合体（Ａ３）は、基（１）を主鎖に有する。
【００７２】
【化７】
2017110184.tif 000008
【００７３】
ただし、前記式中、Ｒ１６は水素原子、塩素原子およびメチル基であり、Ｑ５は単結合または２価の有機基であり、Ｒ１７は炭素原子と炭素原子の間にエーテル性酸素原子を有していてもよい炭素数１〜６のポリフルオロアルキル基であり、αは５〜３００の整数であり、βは１〜２０の整数である。
【００７４】
セグメント（Ｉ）：
セグメント（Ｉ）は、単位（ｍ６）を含む分子鎖からなるセグメントである。
式（ｍ６）中、Ｒ１６は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、またはハロゲン原子であり、原料の入手容易な点から、水素原子またはメチル基が好ましい。
【００７５】
Ｑ５は、合成の容易さ、含フッ素重合体（Ａ３）の物性の点から、以下の基が挙げられる。
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＰＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｎ（Ｏ）＝Ｎ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＳ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯＯ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−、直鎖状または分岐鎖状のアルキレン基、アルケニレン基、アルキレンオキシ基、２価の４〜７員環の置換基、２価の６員環の芳香族炭化水素基、２価の４〜６員環の脂環式炭化水素基、２価の５または６員環の複素環基、これらの縮合環、２価の連結基の組み合わせから構成される基等。
【００７６】
２価の有機基は、置換基を有していてもよい。置換基としては、水酸基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子）、シアノ基、アルコキシ基（メトキシ基、エトキシ基、ブトシキ基、オクチルオキシ基、メトキシエトキシ基等）、アリーロキシ基（フェノキシ基等）、アルキルチオ基（メチルチオ基、エチルチオ基等）、アシル基（アセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基等）、スルホニル基（メタンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基等）、アシルオキシ基（アセトキシ基、ベンゾイルオキシ基等）、スルホニルオキシ基（メタンスルホニルオキシ基、トルエンスルホニルオキシ基等）、ホスホニル基（ジエチルホスホニル基等）、アミド基（アセチルアミノ基、ベンゾイルアミノ基等）、カルバモイル基（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル基、Ｎ−フェニルカルバモイル基等）、アルキル基（メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、２−カルボキシエチル基、ベンジル基等）、アリール基（フェニル基、トルイル基等）、複素環基（ピリジル基、イミダゾリル基、フラニル基等）、アルケニル基（ビニル基、１−プロペニル基等）、アルコシアシルオキシ基（アセチルオキシ基、ベンゾイルオキシ基等）、アルコシキカルボニル基（メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基等）、重合性基（ビニル基、アクリロイル基、メタクロイル基、スリリル基、桂皮酸残基等）などが挙げられる。
【００７７】
Ｑ５としては、単結合、−Ｏ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）γ−（ただし、γは１〜１０の整数である。）、−ＣＯＯ−、６員環芳香族炭化水素基（「−ｂｅｎｚ−」とも表す）、直鎖状または分岐状のアルキレン基、水素原子の一部が水酸基に置換された直鎖状または分岐状のアルキレン基、これら２価の連結基の組み合わせから構成される基などが好ましく、単結合、炭素数１〜５のアルキレン基、または−ＣＯＯＹ１−が特に好ましい。Ｙ１としては、−（ＣＨ２）δ−、−（ＣＨ２）δ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）ε−、−（ＣＨ２）δ−ＮＲ１８−ＳＯ２−等が挙げられ、−（ＣＨ２）δ−が特に好ましい。ただし、δは１〜５の整数であり、εは１〜５の整数であり、Ｒ１８は水素原子または炭素数１〜３のアルキル基である。
Ｑ５が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）γ−である場合、含フッ素重合体（Ａ３）は主鎖と側鎖の両方に生体親和性基を有する。
【００７８】
Ｒ１７は炭素原子と炭素原子の間にエーテル性酸素原子を有していてもよい炭素数１〜６のポリフルオロアルキル基である。耐水性に優れる点から、Ｒ１７は炭素数３〜６のポリフルオロアルキル基が好ましく、炭素数４または６のポリフルオロアルキル基が特に好ましい。Ｒ１７は直鎖状であってもよく、分岐鎖状であってもよい。また、Ｒ１７のポリフルオロアルキル基は、耐水性に優れる点から、ペルフルオロアルキル基であることが好ましい。
【００７９】
単量体（ｍ６）の具体例としては、以下の化合物が挙げられる。
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）３（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）３（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）３（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）３（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨ−benz−（ＣＦ２）３ＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨ−benz−（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＳＯ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＳＯ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＳＯ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＳＯ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）ＳＯ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）ＳＯ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）ＳＯ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）ＳＯ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）ＳＯ２（ＣＦ２）３ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）ＳＯ２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）2Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）ＳＯ2（ＣＦ２）3ＣＦ３,
ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）2Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）ＳＯ2（ＣＦ２）5ＣＦ３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ２Ｃ４Ｆ９、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ２Ｃ５Ｆ１１、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ２Ｃ６Ｆ13、ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＯＣ４Ｆ９、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＯＣ５Ｆ１１、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＯＣ６Ｆ１３、
ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ（ＣＦ３）２、ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ（ＣＦ３）２等。
【００８０】
含フッ素重合体（Ａ３）の全単位に対する、単位（ｍ６）の割合は、１〜９９モル％が好ましく、１〜９０モル％が特に好ましい。単位（ｍ６）の割合が前記下限値以上であれば、耐水性に優れる。単位（ｍ６）の割合が前記上限値以下であれば、タンパク質が吸着しにくい。
【００８１】
セグメント（Ｉ）（１００質量％）中の単位（ｍ６）の割合は、５〜１００質量％が好ましく、１０〜１００質量％が特に好ましい。前記単位（ｍ６）の割合が前記範囲の下限値以上であれば、セグメント（Ｉ）を構成する単量体の重合が容易になる。
【００８２】
セグメント（ＩＩ）：
セグメント（ＩＩ）は、構造（６）を有する高分子アゾ開始剤に由来する分子鎖からなるセグメントである。
式（６）のαは、５〜３００の整数であり、タンパク質が吸着しにくい点から、１０〜２００の整数が好ましく、２０〜１００の整数が特に好ましい。βは、１〜２０の整数であり、重合しやすい点から、２〜２０の整数が好ましく、５〜１５の整数が特に好ましい。
【００８３】
構造（６）を有する高分子アゾ開始剤としては、例えば、和光純薬工業社製のＶＰＥシリーズ（ＶＰＥ−０２０１、ＶＰＥ−０４０１、ＶＰＥ−０６０１）等が挙げられる。
【００８４】
含フッ素重合体（Ａ３）の全単位に対する、構造（６）の分子鎖における各単位の合計割合は、１〜５０モル％が好ましく、１〜４０モル％が特に好ましい。前記単位の割合が前記下限値以上であれば、タンパク質が吸着しにくい。前記割合が前記上限値以下であれば、耐水性に優れる。
【００８５】
含フッ素重合体（Ａ３）は、単量体（ｍ６）と、構造（６）を有する高分子アゾ開始剤とを用いる以外は、含フッ素重合体（Ａ１）と同様の方法で製造できる。含フッ素重合体（Ａ３）を得る際の重合反応には、重合開始剤として、構造（６）を有する高分子アゾ開始剤に加えて、含フッ素重合体（Ａ１）の場合に挙げた重合開始剤を併用してもよい。
【００８６】
本発明では、含フッ素重合体（Ａ）として、含フッ素重合体（Ａ１）〜（Ａ３）のうちのいずれか１つのみを使用してもよく、含フッ素重合体（Ａ１）〜（Ａ３）からなる群から選ばれる２つ以上を併用してもよい。
なお、含フッ素重合体（Ａ）は、前記した含フッ素重合体（Ａ１）〜（Ａ３）には限定されない。
【００８７】
（含フッ素重合体からなる層の形成方法）
本発明における含フッ素重合体（Ａ）が常温（２０〜２５℃）で液体である場合は、基材にそのまま塗布することが可能である。一方必要に応じて、含フッ素重合体（Ａ）に加えて、溶媒（以下、「溶媒（Ｂ）」とも記す。）を含む塗布液を基材に塗布した後、溶媒を除去することで含フッ素重合体（Ａ）からなる層を形成してもよい。
【００８８】
塗布液を塗布する際には、塗布液に含フッ素重合体（Ａ）および溶媒（Ｂ）以外の成分、例えば、レベリング剤、架橋剤等を含ませて塗布してもよい。塗布液に架橋剤を含ませない場合は、形成される層はフッ素重合体（Ａ）のみからなる層となる。また、塗布液に架橋剤を含ませる場合は、形成される層は含フッ素重合体（Ａ）と架橋剤とから形成される層となる。
【００８９】
溶媒（Ｂ）としては、非含フッ素溶媒、含フッ素溶媒などが挙げられ、非含フッ素溶媒としては、アルコール系溶媒、含ハロゲン系溶媒等が挙げられる。例えば、エタノール、メタノール、アセトン、クロロホルム、アサヒクリンＡＫ２２５（旭硝子社製）、ＡＣ６０００（旭硝子社製）等が挙げられる。溶媒（Ｂ）としては、基材を溶解しない種類を選択することが好ましい。基材の材質としてポリスチレンを使用する場合、エタノール、メタノール、アサヒクリンＡＫ２２５（旭硝子社製）、ＡＣ６０００（旭硝子社製）等が好ましい。
【００９０】
塗布液中の含フッ素重合体（Ａ）の濃度は、０．０００１〜１０質量％が好ましく、０．０００５〜５質量％が特に好ましい。含フッ素重合体（Ａ）の濃度が前記範囲であれば、均一に塗布することができ、均一な被覆層を形成できる。
塗布液は、必要に応じて、含フッ素重合体（Ａ）および溶媒（Ｂ）以外の他の成分を含んでもよい。他の成分としては、例えば、レベリング剤、架橋剤等が挙げられる。
【００９１】
細胞捕捉フィルターを長期間使用する場合には、含フッ素重合体（Ａ）を架橋する架橋剤を塗布液に添加し、被覆層中の架橋度合いを調整することで、優れた生体適合性がより長期にわたって持続する、優れた耐久性を有する被覆層を形成できる。具体的には、含フッ素重合体（Ａ）が水酸基を有する場合は、該水酸基と反応する架橋剤を添加することで、優れた耐久性を有する被覆層を形成できる。特に、水酸基を有する単位を含む含フッ素重合体（例えば、Ｒ１２が水素原子である単位（ｍ４）を含む含フッ素重合体（Ａ２））を用いる場合に、該水酸基と反応する架橋剤を添加することが好ましい。
【００９２】
水酸基と反応する架橋剤としては、多官能イソシアネート化合物が挙げられる。多官能イソシアネート化合物としては、ヘキサメチレンジイソシアネート（ＨＤＩ）、ＨＤＩ系ポリイソシアネート、イソホロンジイソシアネート（ＩＰＤＩ）等が挙げられる。ＨＤＩ系ポリイソシアネートには、２液型用としてビウレットタイプ、イソシアヌレートタイプ、アダクトタイプ、２官能型等が挙げられ、硬化開始温度に閾値があるブロック型も挙げられる。ＨＤＩ系ポリイソシアネートは、市販品を使用することができ、デュラネート（旭化成社製）等が挙げられる。
使用する多官能イソシアネート化合物は、反応温度、基材の材質によって適宜選択できる。例えば、基材の材質としてポリスチレンを使用する場合、アサヒクリンＡＫ２２５（旭硝子社製）、ＡＣ６０００（旭硝子社製）等に溶解でき、かつポリスチレンの熱変形温度である８０℃以下でも硬化反応が進行する、ビウレットタイプ、イソシアヌレートタイプなどが好ましい。
【００９３】
被覆層中の架橋度合いは、含フッ素重合体（Ａ）中の水酸基量と添加する架橋剤の量や反応率によって決まり、本発明の効果を損なわない範囲で適宜調節できる。
架橋剤の使用量は、含フッ素重合体（Ａ）の１００質量部に対して、０．０１〜１０質量部が好ましく、０．１〜１質量部が特に好ましい。架橋剤の使用量が前記範囲の下限値以上であれば、耐久性に優れた被覆層を形成しやすい。架橋剤の使用量が前記範囲の上限値以下であれば、生体適合性に優れた被覆層を形成しやすい。
以上説明した、本発明における含フッ素重合体からなる層は、生体親和性基を有し、割合Ｐが特定の範囲に制御された含フッ素重合体（Ａ）を含むため、耐水性に優れ、被覆成分が溶出しにくく、タンパク質が吸着しにくい。
【００９４】
（基材）
本発明において、基材を形成する材質は、特に限定されない。好ましい具体例としては、エチレン−テトラフルオロエチレン共重合体（ＥＴＦＥ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリエチレンナフタレート（ＰＥＮ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、エチレン−酢酸ビニル共重合体（ＥＶＡ）、エチレン−ビニルアルコール共重合体（ＥＶＯＨ）、テトラフルオロエチレン−ヘキサフルオロプロピレン共重合体（ＦＥＰ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）、二軸延伸ポリプロピレン（ＯＰＰ）、ポリアミド（ＰＡ）、ポリアミドイミド（ＰＡＩ）、エチレン−クロロトリフルオロエチレン共重合体（ＥＣＴＦＥ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリイミド（ＰＩ）、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）などの樹脂が挙げられる。
また、石英ガラス、ほう珪酸ガラス、ソーダライムガラス、無アルカリガラス、アルカリガラスまたはアルミナシリケートガラス等の無機ガラスが挙げられる。
通常、細胞捕捉フィルターはディスポーサルであることから材料コスト、加工コストの低い樹脂が好ましい。一方で、１細胞解析などのより高精度な分析については、材料自体の透明性が高く、蛍光が少なく、化学的に安定で、剛性に優れる無機ガラスが望ましい。
【００９５】
基材の形状は、通常、シート状、フィルム状であるが、特に限定されない。基材の厚みは、基板が細胞液をろ過する際に受ける圧力に耐える観点から、通常、５μｍ〜１ｍｍであるが、基材の材質によっても異なる。材質が樹脂の場合には、３μｍ〜２００μｍが好ましく、５μｍ〜２５μｍがより好ましい。また、材質がガラスの場合には、５０μｍ〜２ｍｍが好ましく、８０μｍ〜１ｍｍがより好ましい。
【００９６】
基材の表面に形成される被覆層としては、含フッ素重合体（Ａ）のみから形成される層、または含フッ素重合体（Ａ）と架橋剤とから形成される層が挙げられる。
被覆層の厚さは、１ｎｍ〜１ｍｍが好ましく、５ｎｍ〜８００μｍが特に好ましい。被覆層の厚さが前記下限値以上であれば、タンパク質が吸着しにくく、前記上限値以下であれば、被覆層が基材の表面に密着しやすい。
被覆層と基材との密着性を向上させるために、基材と被覆層の間に接着層を設けてもよい。接着層を形成する接着剤としては、被覆層と基材の双方に対して充分な接着力を発揮するものを適宜使用できる。例えば、基材の材質によっても異なるが、フッ素樹脂用接着剤であるシアノアクリレート系接着剤、シリコーン変性アクリル接着剤、エポキシ変性シリコーン接着剤等が挙げられる。
【００９７】
具体例としては、例えば、基材の材質がポリスチレンの場合、シアノアクリレート系接着剤を使用する。この場合、接着剤層の基材側では、シアノアクリレート系接着剤中のシアノアクリレートモノマーが、空気中または基材の表面の水分と反応して硬化する。被覆層中には含フッ素重合体（Ａ）由来の生体親和性基が存在するため、被覆層中およびその周辺部に水分が存在する。そのため、接着剤層の被覆層側でも、シアノアクリレートモノマーがそれらの水分と反応して硬化する。接着層により被覆層と基材との密着性を向上できる。
【００９８】
本発明の細胞捕捉フィルターは、基材に、大きさによる細胞分離機構が設けられている。細胞分離機構としては、基材の表面と裏面とを貫通する貫通孔、ピラー状の構造などが挙げられる。
貫通孔の（横）断面の形状は、一細胞を捕捉しながら並べる用途には円形状が好ましいが、少ない面積で効率的に希少細胞を捕捉する際には、長方形、三角形、正方形、楕円形などの形状であってもよい。また、基材の厚さ方向から見た貫通孔の（縦断面の）形状は、ストレート型、先細り型、先太り型、或いは、鼓型や円錐台形状であってもよい。
細胞分離機構が貫通孔である場合、その（横）断面の平均直径は捕捉したい細胞の大きさによって決定されるが、通常、５００ｎｍ〜１００μｍが好ましく、６００ｎｍ〜３０μｍがより好ましい。血中の循環がん細胞などの希少細胞を捕捉する場合は、貫通孔の断面の平均直径は４〜１２μｍが好ましく、４〜１０μｍがより好ましい。上記範囲である場合は、血中細胞は貫通孔を透過し、希少細胞を効果的に基材上に捕捉できる。
【００９９】
樹脂フィルムからなる基材に形成された（横）断面の形状が長方形または長円形である貫通孔の場合、その短幅は０．５〜１００μｍが好ましい。また、血中の循環がん細胞などの希少細胞を捕捉する場合は、その短幅は４〜１０μｍが好ましい。上記範囲である場合は、血中細胞は貫通孔を透過し、希少細胞を効果的に基材上に捕捉できる。ここで、短幅とは、断面の形状が長方形である場合、その短辺を意味し、また、長円形である場合、該長円形に接するような一組の平行線において、最も幅が狭くなるような平行線の幅を意味する。
なお、ここで、貫通孔の断面の形状及び平均直径や平均短幅の測定は、光学顕微鏡、レーザー顕微鏡、または電子顕微鏡による測長により行なわれる。
【０１００】
基材に形成される、貫通孔と、該貫通孔に隣接する貫通孔との間隔（ピッチ）は、配置可能孔数、フィルター強度および捕捉後の目的物の観察の観点から４〜２００μｍが好ましく、７〜３０μｍがより好ましい。
基材の開口率は、フィルター上下に生ずる圧力差低減の観点から５〜７０％が好ましく、１５〜６５％がより好ましい。ここで、基材の開口率は、「(開口面積／基材面積)×１００」で定義され、以下のようにして測定される。
光学顕微鏡やレーザー顕微鏡を用いて撮影したある領域Ａを基材面積とし、領域Ａに含まれる開口面積をコントラストに基づく画像処理によって算出する。
【０１０１】
（貫通孔を有する基材の製造方法１）
基材がガラスからなる場合、貫通孔は、例えばレーザを用いて形成できる。以下に一例を示す。ガラス基板を準備し、レーザとしては、例えば、第３高調波Ｎｄ：ＹＶＯ４レーザ装置から出射される高繰り返しパルスレーザ（波長３５５ｎｍ、繰り返し周波数１１０ｋＨｚ、２８Ｗ）を用いる。レーザ装置から出射されたレーザパルス（パルス幅２０ｎｓ、パワー７Ｗ、ビーム径３．５ｍｍ）を、対物レンズでガラス基板の表面に集光させる。１つの貫通孔当たりの照射時間は約３．５ｍｓとし、ガラス基板をＸＹステージに固定して、貫通孔を加工する毎にＸＹステージを任意に動かす。これにより、ピッチが２００μｍで縦１０個×横１０個に２次元配列された貫通孔群を作製することができる。
【０１０２】
（貫通孔を有する基材の製造方法２）
基材が樹脂からなる場合、貫通孔を有する基材は、例えば以下のようにドライエッチングを用いて形成できる。樹脂フィルム上にスパッタを用いてＴｉメタルハードマスクを成膜する。次いで、フォトリソグラフィーによってレジストを所望の孔形状にパターニングする。そして、塩素ガスによるドライエッチングによりＴｉハードマスクをレジストパターンと同形状に加工する。パターニングされたＴｉ膜をマスクとして、酸素ガスによるドライエッチングを行い樹脂フィルムに貫通孔を形成する。最後に、塩素ガスによるドライエッチングによりＴｉマスクを除去して透明な孔空き樹脂フィルムが得られる。
【０１０３】
（基材への被覆層の形成方法）
本発明の細胞捕捉フィルターを構成する基材には、その少なくとも表面に、液状の含フッ素重合体（Ａ）を塗布するか、含フッ素重合体（Ａ）が液状でない場合は、含フッ素重合体（Ａ）を溶媒に溶解または分散させた液を塗布した後、溶媒を除去することにより被覆層が形成できる。
含フッ素重合体（Ａ）からなる層は、細胞捕捉フィルターを構成する基材の少なくとも表面の一部に設けられていればよい。通常、細胞液と接触させる側の基材表面に設けられているが、さらに貫通孔の内壁に設けられていてもよく、さらに細胞液が排出される側の基材表面に設けられていてもよい。
基材の表面に設けられる層の厚みは、特に限定されないが、５０ｎｍ〜５μｍが好ましく、１００ｎｍ〜２μｍがより好ましい。
【実施例】
【０１０４】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の解釈は以下の記載によっては限定されない。例１〜３、６、７、９〜１４、１６〜２１、２３〜３０、および３１〜４２は実施例であり、例４、５、８、１５、および２２は比較例である。
なお、例１〜３、６、７、９〜１４、１６〜２１、２３〜３０は、本発明の細胞捕捉フィルターを構成する含フッ素重合体の被覆層を有する基材について、タンパク質や細胞との吸着率が小さく、耐久性に優れるなどの特性を示す実施例である。
［共重合組成］
得られた含フッ素重合体の２０ｍｇをクロロホルムに溶かし、１Ｈ−ＮＭＲにより共重合組成を求めた。【０１０５】
［フッ素原子含有率］
フッ素原子含有率は、１Ｈ−ＮＭＲ、イオンクロマトグラフイー、および元素分析により測定した。
［ガラス転移温度（Ｔｇ）］
含フッ素重合体のガラス転移温度は、ＤＳＣ（ＴＡインスツメント社製）で１０℃／分の速度で、−３０℃〜２００℃まで昇降温させて測定した。降温時の２サイクル目のゴム状態からガラス状態へ変化する温度をガラス転移温度とした。【０１０６】
［分子量］
含フッ素重合体の数平均分子量（Ｍｎ）、質量平均分子量（Ｍｗ）および分子量分布（質量平均分子量（Ｍｗ）／数平均分子量（Ｍｎ））は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を溶媒とするＧＰＣ装置（ＨＬＣ８２２０、東ソー社製）を用いて測定した。【０１０７】
［割合Ｐ］
割合Ｐは下式により算出した。含フッ素重合体の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割合（質量％）は、１Ｈ−ＮＭＲ（ＪＥＯＬ社  ＡＬ３００）、イオンクロマト（Ｄｉｏｎｅｘ  ＤＸ５００）、および元素分析（パーキンエルマー社  ２４００・ＣＨＳＮ）により測定した。
割合Ｐ（％）＝（含フッ素重合体の全単位に対する生体親和性基を有する単位の割合（質量％）／フッ素原子含有率（質量％））×１００【０１０８】
［評価方法］
（耐水溶性）
各例で使用した含フッ素重合体の１０ｍｇと、水の１ｇとをサンプル管に秤取し、室温で１時間撹拌した後に、目視にて耐水溶性を確認した。評価は以下の基準で行った。
○（良好）：含フッ素重合体が残存していた。
×（不良）：含フッ素重合体が完全に溶解し、残存していなかった。【０１０９】
（タンパク質非吸着性）
＜タンパク質非吸着性試験＞
（１）発色液、およびタンパク質溶液の準備
発色液は、ペルオキシダーゼ発色液（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢＺ）、ＫＰＬ社製）５０ｍＬとＴＭＢ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ社製）５０ｍＬとを混合したものを使用した。
タンパク質溶液として、タンパク質（ＰＯＤ−ｇｏａｔ  ａｎｔｉ  ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ、Ｂｉｏｒａｄ社製）を、リン酸緩衝溶液（Ｄ−ＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ社製）で１６，０００倍に希釈したものを使用した。
（２）タンパク質吸着
各ウェル表面に被覆層を形成したポリスチレン製２４ウェルマイクロプレートにおける３ウェルに、タンパク質溶液の２ｍＬを分注し（１ウェル毎に２ｍＬを使用）、室温で１時間放置した。
ブランクとして、タンパク質溶液を９６ウェルマイクロプレートにおける３ウェルに、２μＬ分注（１ウェル毎に２μＬを使用）した。
（３）ウェル洗浄
次いで、２４ウェルマイクロプレートを、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ２０、和光純薬工業社製）を０．０５質量％含ませたリン酸緩衝溶液（Ｄ−ＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ社製）の４ｍＬで４回洗浄した（１ウェル毎に４ｍＬを使用）。
（４）発色液分注
次いで、洗浄を終えた２４ウェルマイクロプレートに、発色液の２ｍＬを分注し（１ウェル毎に２ｍＬを使用）、７分間発色反応を行った。２Ｎ硫酸の１ｍＬを加えることで（１ウェル毎に１ｍＬを使用）発色反応を停止させた。
ブランクは、９６ウェルマイクロプレートに、発色液の１００μＬを分注し（１ウェル毎に１００μＬを使用）、７分間発色反応を行い、２Ｎ硫酸の５０μＬを加えることで（１ウェル毎に５０μＬを使用）発色反応を停止させた。
（５）吸光度測定準備
次いで、２４ウェルマイクロプレートの各ウェルから１５０μＬの液を取り、９６ウェルマイクロプレートに移した。
（６）吸光度測定およびタンパク質吸着率Ｑ
吸光度は、ＭＴＰ−８１０Ｌａｂ（コロナ電気社製）により、４５０ｎｍの吸光度を測定した。ここで、ブランクの吸光度（Ｎ＝３）の平均値をＡ０とした。２４ウェルマイクロプレートから９６ウェルマイクロプレートに移動させた液の吸光度をＡ１とした。タンパク質吸着率Ｑ１（％）を下式により求め、その平均値とした。
Ｑ１（％）＝１００×Ａ１／｛Ａ０×（１００／ブランクのたんぱく質溶液の分注量）｝＝１００×Ａ１／｛Ａ０×（１００／２μＬ）｝【０１１０】
（被覆層の耐久性）
（１）マイクロプレートのウェル表面に形成した被覆層の耐久性
後述の各例で、ウェル表面に被覆層を形成した２４ウェルのマイクロプレートを３７℃の水に１週間浸漬させた後、６０℃で２時間加熱して乾燥させた。その後、前記したタンパク質非吸着性試験を行ってタンパク質吸着率Ｑを測定し、被覆層の耐久性を以下の基準で評価した。なお、タンパク質吸着率Ｑの上昇率は、以下の式より算出した。
タンパク質吸着率Ｑの上昇率（％）＝１００×｛（３７℃の水に１週間浸漬させた後のタンパク質吸着率（％）÷初期のタンパク質吸着率（％））−１｝
○（良好）：初期と比べて浸漬後のタンパク質吸着率Ｑの上昇率が５％未満。
△（可）：初期と比べて浸漬後のタンパク質吸着率Ｑの上昇率が５％以上２０％未満。
×（不良）：初期と比べて浸漬後のタンパク質吸着率Ｑの上昇率が２０％以上。【０１１１】
（２）ガラスシャーレの表面に形成した被覆層の耐久性
後述の各例で、表面に被覆層を形成したガラスシャーレに水を６ｍＬ入れ、４０℃のオーブン内で２４時間静置させた。次いで、水を除去した後、該ガラスシャーレをオーブンにより１００℃で１時間加熱して乾燥させた。その後、前記したタンパク質非吸着性試験を行ってタンパク質吸着率Ｑを測定し、被覆層の耐久性を以下の基準で評価した。なお、基材密着率Ｚは、以下の式より算出した。基材密着率の値が小さいほど、被複層の耐久性が優れている。
基材密着率Ｚ＝水を入れて４０℃で２４時間静置させた後のタンパク質吸着率（％）÷初期のタンパク質吸着率（％）【０１１２】
含フッ素重合体の製造に用いた原料の略号を以下に示す。
（単量体）
Ｃ６ＦＭＡ：ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
Ｃ６ＦＡ：ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（ＣＨ２）２（ＣＦ２）５ＣＦ３、
Ｃ１ＦＭＡ：ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯＣＨ２ＣＦ３。
ＣＢＡ：Ｎ−アクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、
ＣＢＭＡ：Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン。
ＭＰＣ：２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン。
２−ＥＨＡ：２−エチルヘキシルアクリレート（ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）。
ＰＥＧ９Ａ：ポリエチレングリコールモノアクリレート（ＥＯ数平均９）（ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）９Ｈ）。
ＯＭＡ：オクチルメタクリレート（ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（ＣＨ２）８Ｈ）。
ＰＥＧ４．５Ａ：ポリエチレングリコールモノアクリレート（ＥＯ数平均４．５）（ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）4.5Ｈ）。
ＰＥＰＥＧＡ：ＣＨ２＝ＣＨＣＯＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）10（Ｃ３Ｈ６Ｏ）20（Ｃ２Ｈ４Ｏ）10Ｈ。
ＭＰＥＧ９ＭＡ：ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ（Ｃ２Ｈ４Ｏ）9ＣＨ３。
ＰＥＢＭＡ：ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＯＯ［（Ｃ２Ｈ４Ｏ）10（Ｃ４Ｈ８Ｏ）５］Ｈ。
ＤＡＥＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート。
ＩＭＡＤＰ：２−イソシアネートエチルメタクリレートの３，５−ジメチルピラゾール付加体（下式（７）で表される化合物）。
ＫＢＭ−５０３：３−メタクリロイルオキシプロピルトリメトキシシラン（製品名「ＫＢＭ−５０３」、信越シリコーン社製）。【０１１３】
【化８】
2017110184.tif 000009
【０１１４】
（重合開始剤）
ＡＩＢＮ：２，２’−アゾイソブチロニトリル、
ＶＰＥ：「ＶＰＥ−０２０１」（構造（６）を有する高分子アゾ開始剤、和光純薬工業社商品名）。【０１１５】
（重合溶媒）
ＥｔＯＨ：エタノール、    ＭＰ：１−メトキシ−２−プロパノール。【０１１６】
［製造例１］
ＭＰＣの０．８８６ｇ（３．０ｍｍｏｌ）とＣ６ＦＭＡの３．０２５ｇ（７．０ｍｍｏｌ）とを３００ｍＬの３つ口フラスコに秤取し、重合開始剤としてＡＩＢＮの０．３９１ｇと、重合溶媒としてエタノール（ＥｔＯＨ）の１５．６ｇを加えた。Ｃ６ＦＭＡとＭＰＣとの仕込みモル比をＣ６ＦＭＡ／ＭＰＣ＝７０／３０、反応液中の単量体の合計濃度を２０質量％、開始剤濃度を１質量％とした。
フラスコ内を充分にアルゴン置換した後に密封し、１６時間７５℃に加温することにより重合反応を行った。反応液を氷冷した後、ジエチルエーテルに滴下することにより、重合体を沈殿させた。得られた重合体を充分にジエチルエーテルで洗浄した後、減圧乾燥して、白色粉末状の含フッ素重合体（Ａ−１）を得た。
得られた含フッ素重合体（Ａ−１）の共重合組成を、１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、Ｃ６ＦＭＡ単位／ＭＰＣ単位＝４４／５６（モル比）であった。【０１１７】
［製造例２〜１５］
単量体の種類、仕込み比、および重合溶媒の種類を表１に示すとおりに変更した以外は、製造例１と同様にして製造例２〜１５の各重合体を得た。
製造例１〜１５の単量体の仕込み比、重合開始剤の添加量、重合溶媒の種類、得られた含フッ素重合体の種類、共重合体組成およびフッ素原子含有率を表１に示す。【０１１８】
【表１】
2017110184.tif 000010
【０１１９】
［製造例１６］
Ｃ６ＦＭＡの５ｇ（１１．６ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの３つ口フラスコに秤取し、重合開始剤としてＶＰＥの０．７ｇ、重合溶媒としてＭＰの１３．３ｇを加えた。反応液中の単量体の合計濃度を３０質量％、Ｃ６ＦＭＡとＶＰＥとの仕込みモル比をＣ６ＦＭＡ／ＶＰＥ＝９７／３とした。
フラスコ内を充分にアルゴン置換した後に密封し、１６時間７５℃に加温することにより重合反応を行った。反応液を氷冷した後、ジエチルエーテルに滴下することにより重合体を沈殿させた。得られた重合体を充分にジエチルエーテルで洗浄した後、減圧乾燥して、白色粉末状の含フッ素重合体（Ａ−１２）を得た。【０１２０】
［製造例１７〜１９］
単量体の種類、単量体と重合開始剤の仕込み比を表２に示すように変更した以外は、製造例１６と同様にして各重合体を得た。
製造例１６〜１９の単量体と、重合開始剤の種類および仕込み比、重合溶媒の種類、ならびに得られた含フッ素重合体の種類、共重合体組成およびフッ素原子含有率を表２に示す。なお、表２中の「ＮＡ」は、ガラス転移温度が検出されなかったことを意味する。【０１２１】
【表２】
2017110184.tif 000011
【０１２２】
［製造例２０］
１００ｍＬの耐圧ガラス瓶に、２−ＥＨＡの４０ｇ、ＰＥＧ９Ａの４０ｇ、Ｖ−６０１（油溶性アゾ重合開始剤、和光純薬社製）の０．６６ｇ、およびｍ−キシレンヘキサフルオリド（セントラル硝子社製、以下、「ｍ−ＸＨＦ」と記す。）の４９．８ｇを仕込み、密閉させた後、７０℃で１６時間加熱した。この反応液に、Ｃ６ＦＡの２０ｇ、ｍ−ＸＨＦの４０ｇ、およびＶ−６０１の０．４８ｇを仕込み、密閉させた後、７０℃で１６時間加熱し、含フッ素重合体（Ａ−１６）を得た。含フッ素重合体（Ａ−１６）の共重合組成を測定した結果、ＰＥＧ９Ａ単位とＣ６ＦＡ単位と２−ＥＨＡ単位とを、モル比２４：１４：６２（質量比４０：２０：４０）で有する含フッ素重合体であることを確認した。分子量の測定を行った結果、含フッ素重合体（Ａ−１６）の数平均分子量（Ｍｎ）は１７，０００、質量平均分子量（Ｍｗ）は４０，０００および分子量分布（質量平均分子量（Ｍｗ）／数平均分子量（Ｍｎ））は２．３であった。【０１２３】
［製造例２１］
１００ｍＬ耐圧ガラス瓶に、ＯＭＡの１５ｇ、ＰＥＧ４．５Ａの３５ｇ、Ｖ−６０１の０．４１ｇ、およびｍ−ＸＨＦの３１．３ｇを仕込み、密閉させた後、７０℃で１６時間加熱した。この反応液に、Ｃ６ＦＭＡの５０ｇ、ｍ−ＸＨＦの１００ｇ、およびＶ−６０１の１．２ｇを仕込み、密閉させた後、７０℃で１６時間加熱し、含フッ素重合体（Ａ−１７）を得た。
含フッ素重合体（Ａ−１７）の共重合組成を測定した結果、ＰＥＧ４．５Ａ単位とＣ６ＦＭＡ単位とＯＭＡ単位とを、モル比４０：３６：２４（質量比３５：５０：１５）で有する含フッ素重合体であることを確認した。【０１２４】
［製造例２２］
１００ｍＬ耐圧ガラス瓶に、ＰＥＰＥＧＡの８０ｇ、Ｖ−６０１の０．６６ｇ、およびｍ−ＸＨＦの４９．８ｇを仕込み、密閉させた後、７０℃で１６時間加熱した。この反応液に、Ｃ６ＦＡの２０ｇ、ｍ−ＸＨＦの４０ｇ、およびＶ−６０１の０．４８ｇを仕込み、密閉させた後、７０℃で１６時間加熱し、含フッ素重合体（Ａ−１８）を得た。含フッ素重合体（Ａ−１８）の共重合組成を測定した結果、ＰＥＰＥＧＡ単位とＣ６ＦＡ単位とを、モル比４４：５６（質量比８０：２０）で有する含フッ素重合体であることを確認した。【０１２５】
［製造例２３］
Ｃ６ＦＭＡの１０．８ｇ（５４質量部）、ＭＰＥＧ９ＭＡの５．２ｇ（２６質量部）、ＰＥＢＭＡの３．２ｇ（１６質量部）、ＤＡＥＭＡの０．４ｇ（２質量部）、ＩＭＡＤＰの０．４ｇ（２質量部）、重合溶媒としてアセトンの５９．８ｇ、および重合開始剤として４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）の０．２ｇ（１質量部）を仕込み、窒素雰囲気下で振とうしつつ、６５℃で２０時間重合を行い、淡黄色溶液（含フッ素共重合体（Ａ−１９）を含む重合体溶液）を得た。
含フッ素重合体（Ａ−１９）の共重合組成を測定した結果、Ｃ６ＦＭＡ単位とＰＥＢＭＡ単位とＭＰＥＧ９ＭＡ単位とＤＡＥＭＡ単位とＩＭＡＤＰ単位とを、モル比５９：２４：８：６：４（質量比５４：２６：１６：２：２）で有する含フッ素重合体であることを確認した。【０１２６】
［例１］
製造例１で得た含フッ素重合体（Ａ−１）を、その濃度が０．０５質量％となるようにエタノールに溶解させ、塗布液を調製した。該塗布液を２４ウェルのマイクロプレート（浮遊培養用マイクロプレート(表面処理なし) ２４ウェル、ＡＧＣテクノグラス社製）に２．２ｍＬ分注し、３日間放置して溶媒を揮発させ、ウェル表面に被覆層を形成した。【０１２７】
［例２〜１９］
含フッ素重合体（Ａ−１）の代わりに、表３に示す重合体を用いた以外は、例１と同様にして塗布液を調製した。また、該塗布液を用いて、例１と同様にして、２４ウェルのマイクロプレートのウェル表面に被覆層を形成した。【０１２８】
［例２０〜２３］
含フッ素重合体（Ａ−１）の代わりに、表３に記載の含フッ素重合体を用いた以外は、例１と同様にして塗布液を調製した。また、該塗布液を用いて、例１と同様にして、２４ウェルのマイクロプレートのウェル表面に被覆層を形成した。【０１２９】
［例２４〜２６］
製造例２０で得た含フッ素重合体（Ａ−１６）を、その濃度が０．０５質量％となるようにＡＣ６０００（旭硝子社製）に溶解させた溶液に、架橋剤を添加して塗布液を調製した。架橋剤としては、前記溶液の２８ｇに対して、例２４ではヘキサメチレンジイソシアネートの０．１ｍｇ、例２５ではイソホロンジイソシアネートの０．１３ｍｇ、および例２６ではＴＬＡ−１００（旭化成社製）の０．１ｍｇを添加した。該塗布液を用いて、例１と同様にして、２４ウェルのマイクロプレートのウェル表面に被覆層を形成した。【０１３０】
各例の塗布液に含まれる含フッ素重合体の種類、フッ素原子含有率、および割合Ｐ、ならびに耐水溶性およびタンパク質非接着性の評価結果を表３に示す。【０１３１】
【表３】
2017110184.tif 000012
【０１３２】
表３に示すように、生体親和性基を有する単位を有し、割合Ｐが０．１〜４．５％である含フッ素重合体（Ａ）を含む塗布液を用いた、例１〜３、６、７、９〜１４、１６〜２１、および２３では、タンパク質が表面に吸着しにくく、細胞が表面に接着しにくく、生体適合性に優れていた。また、含フッ素重合体が水に溶解しにくく、耐水溶性に優れていた。
一方、割合Ｐが４．５％超である重合体を用いた、例４、８、１５、および２２では、重合体が水に溶解しやすく、耐水性が不充分であった。また、割合Ｐが０．１％未満である重合体を用いた例５では、タンパク質が表面に吸着し、さらに細胞が表面に接着し、生体適合性が不充分であった。
また、含フッ素重合体（Ａ）と架橋剤とを併用した塗布液を用いた、例２４〜２６では、架橋剤を併用していない例１、２０、および２３に比べて、３７℃の水に１週間浸漬させた後においても、タンパク質吸着率Ｑの上昇率が小さく抑えられており、耐久性が優れていた。【０１３３】
［製造例２４］
ＭＰＣの１．４８ｇ（５．０ｍｍｏｌ）とＣ６ＦＭＡの１．７３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）とＫＢＭ−５０３（トリメトキシシリルプロピルメタクリレート）の０．２５ｇ（１．０ｍｍｏｌ）とを、３００ｍＬの３つ口フラスコに秤取し、重合開始剤としてＡＩＢＮの０．３４６ｇと、重合溶媒としてエタノール（ＥｔＯＨ）の１３．８ｇを加えた。ＭＰＣとＣ６ＦＭＡとＫＢＭ−５０３の仕込みモル比を、ＭＰＣ／Ｃ６ＦＭＡ／ＫＢＭ−５０３＝５０／４０／１０、反応液中の単量体の合計濃度を２０質量％、および開始剤濃度を１質量％とした。
フラスコ内を充分にアルゴン置換した後に密封し、１６時間７５℃に加温することにより重合反応を行った。反応液を氷冷した後、ジエチルエーテルに滴下することにより重合体を沈殿させた。得られた重合体を充分にジエチルエーテルで洗浄した後、減圧乾燥して、白色粉末状の含フッ素重合体（Ａ−２０）を得た。
得られた含フッ素重合体（Ａ−２０）の共重合組成を、１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、ＭＰＣ単位／Ｃ６ＦＭＡ単位／ＫＢＭ−５０３単位＝５０／４０／１０（モル比）であった。【０１３４】
［製造例２５〜２７］
単量体の仕込み比を表４に示すように変更した以外は、製造例２４と同様にして各重合体を得た。【０１３５】
【表４】
2017110184.tif 000013
【０１３６】
［例２７］
含フッ素重合体（Ａ−２０）の０．５ｇを２０ｍＬバイアルに秤取し、０．１質量％硝酸水溶液の０．０７８ｇと、加水分解溶媒としてエタノール（ＥｔＯＨ）の９．４２ｇとを加え、反応液中の含フッ素重合体（Ａ−２０）の濃度を５質量％とした。これは、含フッ素重合体（Ａ−２０）の１ユニット当たりの分子量を共重合の際の実測モル比から、ＭＰＣ分子量×０．５＋Ｃ６ＦＭＡ分子量×０．４＋ＫＢＭ−５０３分子量×０．１＝３４５．３４として、トリメトキシシリル基に対する水の添加量を３モル等量としたものである。
バイアルを室温にて２０時間ミックスローターで撹拌し、含フッ素重合体（Ａ−２０）の濃度を０．０５質量％となるようにエタノール（ＥｔＯＨ）で希釈して塗布液とした。該塗布液の３．３ｍＬを、直径３５ｍｍのガラスシャーレに塗布した。塗布後、ホットプレートにより、１２０℃で２時間縮合を行うことで被覆層を形成した。【０１３７】
［例２８〜３０］
含フッ素重合体（Ａ−２０）の代わりに、表５に示す含フッ素重合体を用いた以外は、例１と同様にして、ガラスシャーレの表面に被覆層を形成した。
各例の塗布液に含まれる含フッ素重合体の種類、フッ素原子含有率、および割合Ｐ、ならびに各評価結果を表５に示す。【０１３８】
【表５】
2017110184.tif 000014
【０１３９】
表５に示すように、生体親和性基を有する単位を有し、割合Ｐが０．１〜４．５質量％である、含フッ素重合体（Ａ）を含む塗布液を用いた例２７〜３０では、タンパク質が表面に吸着しにくく、細胞が表面に接着しにくく、生体適合性に優れていた。また、単位（ｍ７）を有する含フッ素重合体（Ａ）を含む塗布液を用いた例２７〜２９では、単位（ｍ７）を有しない含フッ素重合体（Ａ）を含む塗布液を用いた例３０に比べて、耐水溶性により優れていた。【０１４０】
［例３１］
厚さ１２μｍの透明なＰＥＴフィルムの基材上に、スパッタを用いてＴｉ膜を形成し、次いで、Ｔｉ膜上にフォトリソグラフィーによってレジストを所望の孔形状にパターニングした。そして、塩素ガスによるドライエッチングにより、Ｔｉハードマスクをレジストパターンと同形状に加工し、パターニングされたＴｉ膜をマスクとして、酸素ガスによるドライエッチングを行い樹脂フィルムに貫通孔を形成した。最後に、塩素ガスによるドライエッチングによりＴｉマスクを除去し、複数の貫通孔を有するＰＥＴフィルムを得た。得られたＰＥＴフィルムの貫通孔の断面形状は円形であり、平均直径は７μｍであり、フィルムの開口率は１５％であった。
製造例７で得た含フッ素重合体（Ａ−５）を、その濃度が１．０質量％となるようにエタノールに溶解させた溶液を調製した。この溶液中に上記で得られたＰＥＴフィルムを浸漬してディップコートした後、室温で１８時間乾燥させることにより、表面に被覆層を有するＰＥＴフィルムを得た。被覆層の厚さは１μｍであった。
得られたフィルムについて、がん細胞捕捉試験、がん細胞の１細胞分取試験、および耐水溶性の評価を行った。評価結果を表６に示す。【０１４１】
［例３２〜３７］
貫通孔の直径が７ｕｍ、開口率が１５％のＰＥＴフィルム用いた代わりに、表６に示した各特性を有するＰＥＴフィルムを用いた以外は例３１と同様にして、表面に被覆層を有するＰＥＴフィルムを得た。被覆層の厚さはいずれの例においても１μmであった。評価結果を表６に示す。【０１４２】
［例３８］
含フッ素重合体（Ａ−５）の代わりに、製造例１５で得た重合体（Ｘ−４）を用いた以外は例３１と同様にして表面に被覆層を有する孔空きＰＥＴフィルムを得た。被覆層の厚さは１μｍであった。評価結果を表６に示す。【０１４３】
［例３９］
含フッ素重合体（Ａ−５）の代わりに、製造例８で得た含フッ素重合体（Ｘ−３）を用い、開口率が１５％のPETフィルムを用いた代わりに、開口率が２０％のＰＥＴフィルムを用いた以外は例３１と同様にして、表面に被覆層を有する孔空きＰＥＴフィルムを得た。被覆層の厚さは１μｍであった。評価結果を表６に示す。【０１４４】
［例４０］
含フッ素重合体（Ａ−５）を用いた代わりに、製造例５で得た含フッ素重合体（Ｘ−２）を用い、開口率が１５％のＰＥＴフィルムを用いた代わりに、開口率が２０％のＰＥＴフィルムを用いた以外は例３１と同様にして、表面に被覆層を有する孔空きＰＥＴフィルムを得た。被覆層の厚さは１μｍであった。評価結果を表６に示す。【０１４５】
［例４１］
横断形状が平均直径７umのストレート型貫通孔を有し、かつ開口率が２０％であるＰＥＴフィルムの表面に被覆層を設けないものをフィルターとして用いた。評価結果を表６に示す。【０１４６】
［例４２］
貫通孔の直径が７μｍ、開口率が１５％のＰＥＴフィルム用いた代わりに、表６に示した各特性を有するＥＴＦＥフィルムを用いた以外は例３１と同様にして、表面に被覆層を有するＥＴＦＥフィルムを得た。被覆層の厚さはいずれの例においても１μｍであった。評価結果を表６に示す。【０１４７】
（がん細胞培養および細胞懸濁液の調製）
RPMI培地（Life technologies社製、11875-093）を用いて、H358細胞（ATCC CRL-5807）を培養した後、トリプシン処理により培養皿から細胞を剥離回収し、３×１０4ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。その後、CellTracker Red CMTPX（Life technologies社製）にて、３７℃、３０分間の細胞染色を実施した。
０．１mLの細胞縣濁液を３．６５mLのリン酸緩衝溶液（Life technologies社製、20012-027）にスパイクし、がん細胞が２００個含まれる細胞縣濁液3.75mLを用意した。【０１４８】
（がん細胞捕捉試験）
シリンジ、フィルターホルダー(Millipore社製、SX0001300)とシリンジポンプkd Scientific社製、KDS-210からなる装置を作製し、フィルターホルダーに例３１〜３３で作製したＰＥＴフィルムをセットし、がん細胞捕捉試験を実施した。上記調製したがん細胞懸濁液3.75mLおよび血液サンプル3.75mLをシリンジに導入し、ポンプ速度3mLにて吸引してフィルター上にがん細胞を捕捉した。
続いて、蛍光顕微鏡（Biorevo BZ-9000、キーエンス社製）を使用してフィルター上のがん細胞を観察し、捕捉された数をカウントし、下記の式により捕捉率を求めた。その結果を表６に示す。
捕捉率（％）=（フィルター上に回収されたがん細胞数/血液サンプル中に導入したがん細胞数）×１００。【０１４９】
（１細胞分取試験）
がん細胞捕捉試験後のフィルターを取り出しスライドガラス上に設置して0.1mLのリン酸緩衝溶液を滴下した後に、ピコピペット（ネッパジーン社製）を用い、顕微鏡下でフィルター上に存在する細胞の１つ１つを分取できるかどうかを試みた。分取可能であった場合を○、不可の場合を×とした。結果を表６に示す。【０１５０】
【表６】
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【０１５１】
含フッ素重合体の割合Ｐが０．１〜５である例３１〜３７および４２ではタンパク質吸着率が低く、細胞との吸着接着性が小さいために、細胞捕捉後に分取が可能であった。一方、上記割合Ｐの範囲外である例３８〜４１では、タンパク質の吸着が大きく、細胞捕捉後の分取が不可能であった。また、例３８では、フッ素原子含有率０％であるため耐水溶性に優れなかった。
【産業上の利用可能性】
【０１５２】
本発明の細胞捕捉フィルターは、種々の細胞を捕捉するのに有用である。血液中のＣＴＣ数をカウントすることで、癌の早期診断、転移の可能性、治療効果の判定の指標およびＣＴＣの遺伝子解析、ＣＴＣ表面のたんぱく質やｍＲＮＡ解析をすることで治療選択をすることが検討されているが、本発明の細胞捕捉フィルターは、このＣＴＣの捕捉に有用である。
また、本発明の細胞捕捉フィルターは、貫通孔を利用して透過する物質と透過しない物質を効果的に分けることができる。例えば、細胞培養液中の細胞と培養液の分離、血液中の血清成分と赤血球、白血球の分離、血液中の血球成分と希少細胞（ＣＴＣやＣＡＭＬｓ等）の分離に使用できる。【０１５３】
なお、２０１５年１２月２４日に出願された日本特許出願２０１５−２５２２３７号の明細書、特許請求の範囲、図面、及び要約書の全内容をここに引用し、本発明の明細書の開示として、取り入れるものである。
【国際調査報告】
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