(57)【要約】  【課題】  簡易な構成で正確な肌情報を入手可能な皮膚検査キットを提供する。  【解決手段】  皮膚組織を付着させることが可能な粘着部１ａを有するテープ１と、粘着部１ａを露出させた状態でテープ１を保持するテープ保持部１０と、皮膚組織と呈色，発光または蛍光を伴う反応を生じる反応性物質が固定化された反応場３０を有する台座部５０と、反応を進行させるための反応液２１を反応場３０から分離した状態で保持する反応液保持部２０と、反応液保持部２０から反応場３０に反応液２１を導く反応液供給手段４０とを有し、テープ保持部１０と台座部５０とは、粘着部１ａと反応場３０との間に反応液２１を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、近接状態において粘着部１ａと反応場３０との間に反応液２１を保持することによって反応を進行させる。【選択図】  図１
2014089117.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚組織と呈色，発光または蛍光を伴う反応を進行させて皮膚の状態を検査する皮膚検査キットであって、
皮膚組織を付着させることが可能な粘着部を有するテープと、
前記粘着部を露出させた状態で前記テープを保持するテープ保持部と、
皮膚組織と呈色，発光または蛍光を伴う反応を生じる反応性物質が固定化された反応場を有する台座部と、
前記反応を進行させるための反応液を前記反応場から分離した状態で保持する反応液保持部と、
前記反応液保持部から前記反応場に前記反応液を導く反応液供給手段とを有し、
前記テープ保持部と前記台座部とは、前記テープの前記粘着部と前記反応場との間に前記反応液を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、
前記近接状態において前記テープの前記粘着部と前記反応場との間に前記反応液を保持することによって前記反応を進行させる、皮膚検査キット。
【請求項２】
前記テープ保持部および前記台座部はいずれも平板状であって、互いが向き合う角度を変化させ得る状態で一端同士が接続されており、前記角度を変化させることによって前記テープの前記粘着部と前記反応場との距離を変化させる、請求項１記載の皮膚検査キット。
【請求項３】
前記近接状態において、前記テープ保持部および前記台座部の少なくとも一方には、前記テープの前記粘着部および前記反応場の周囲を囲繞して、前記テープの前記粘着部および前記反応場とともに前記反応液を内部に収容する収容空間を形成する封止部が設けられている、請求項１または２に記載の皮膚検査キット。
【請求項４】
前記反応性物質は、ジアホラーゼ、乳酸の脱水酵素およびアミノ酸の脱水酵素であり、前記反応液は、バッファ液とテトラゾリウム塩とニコチンアミドアデニンジヌクロオチド酸化体と細胞壁破壊可能な界面活性剤とを含む、請求項１乃至３のいずれかに記載の皮膚検査キット。
【請求項５】
前記テープ保持部において前記テープは前記粘着部と反対側の面を前記テープ保持部に接しており、前記テープおよび前記粘着部ならびに前記テープ保持部のうち前記粘着部が配置される部分は透光性を有する、請求項１乃至４のいずれかに記載の皮膚検査キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚のテープストリッピング操作後の検査及び結果表示を行うための皮膚検査キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、皮膚に小型カメラを接触させて、皮膚組織を拡大観察したり、皮膚に電極を接触させて、電気抵抗等を測定したりすることにより、間接的に皮膚の状態を判断する技術がある。
【０００３】
また、皮膚組織を採取して、検査溶液に溶解した上で特定の蛋白質等を検出することで、皮膚疾患を判定したり、天然保湿因子（ＮＭＦ）等の機能を判定したりする技術がある（例えば、特許文献１，２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開２００９／１４２２６８号
【特許文献２】特開２００９−３６５５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、前者の技術では、皮膚の状況を間接的な情報から推定することとなり、正確な皮膚（肌）情報を得ることはできなかった。
【０００６】
一方、特許文献１，２に開示された技術では、特定の物質を正確に測定することはできるが、検査にかかる工程が複雑かつ煩雑であるという問題点があった。
【０００７】
このため、簡易に正確な肌情報を得る技術が求められている。
【０００８】
本発明は、上述の事情のもとで考え出されたものであって、簡易な構成で正確な肌情報を得ることのできる皮膚検査キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の実施形態の皮膚検査キットは、皮膚組織と呈色，発光または蛍光を伴う反応を進行させて皮膚の状態を検査する皮膚検査キットであって、皮膚組織を付着させることが可能な粘着部を有するテープと、前記粘着部を露出させた状態で前記テープを保持するテープ保持部と、皮膚組織と呈色，発光または蛍光を伴う反応を生じる反応性物質が固定化された反応場を有する台座部と、前記反応を進行させるための反応液を前記反応場から分離した状態で保持する反応液保持部と、前記反応液保持部から前記反応場に前記反応液を導く反応液供給手段とを有し、前記テープ保持部と前記台座部とは、前記テープの前記粘着部と前記反応場との間に前記反応液を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、前記近接状態において前記テープの前記粘着部と前記反応場との間に前記反応液を保持することによって前記反応を進行させるものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、簡易な構成で正確な肌情報を得ることのできる皮膚検査キットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の１つの実施形態に係る皮膚検査キットを示す斜視図である。
【図２】本発明の他の実施形態に係る皮膚検査キットを示す斜視図である。
【図３】本発明の他の実施形態に係る皮膚検査キットを示す斜視図である。
【図４】本発明の他の実施形態に係る皮膚検査キットを示す要部拡大図であり、（ａ）は上面図、（ｂ），（ｃ）は断面模式図である。
【図５】（ａ）〜（ｃ）はそれぞれ、図１に示す皮膚検査キットの反応液供給手段における変形例を示す要部拡大図である。
【図６】図１に示す皮膚検査キットの変形例を示す要部拡大図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の皮膚検査キットの実施形態について、図面を参照しつつ、説明する。
【００１３】
（実施形態１）
本実施形態に係る皮膚検査キット１００は、テープ保持部１０と、反応液保持部２０と、反応場３０と、反応液供給手段４０と、を有する。
【００１４】
テープ保持部１０は、粘着テープ片１（以下、テープ１という）を保持するためのものであり、平面部１１と留め具１２とを有する。ここで、テープ１は、一方面に粘着性を有する粘着部１ａを含む。言い換えると、テープ基体上に粘着部１ａが形成されてなる。理由は後述するが、テープ１は、平面視でこの粘着部１ａが位置する領域において透光性を有することが好ましい。このことから、テープ１のテープ基体の材質として光透過性等を考慮したシリコーン樹脂，シリコンアクリル樹脂，アクリル樹脂のいずれかが好ましいが、その他の樹脂であってもよい。なお、ここで「透光性」とは可視光に対するものに限定されず、後述の皮膚組織が関与する反応により生じる呈色、発光または蛍光を観察可能とする条件とする。このようなテープ１の形状及びサイズは、特に限定はされないが、皮膚に接触させて角質等の皮膚組織を採取するという目的から、数ｃｍ角内に収まるサイズであることが好ましく、鋭角を有さない形状、即ち矩形状や円形状，楕円形状等が好ましい。皮膚に粘着部１ａ全体を平均的に接触させることができるからである。また、矩形状や円形状，楕円形状等の場合には、検出する物質の面内における分布状態を評価するために適している。
【００１５】
このようなテープ１としては市販のセロハンテープや角質採取テープを用いればよい。この例では、テープ１は直径２．２ｃｍの円形の角質採取テープとし、弦で区切られる２つの領域のうち大きい領域に粘着部１ａを形成したものであり、テープ１に対する粘着部１ａが占める面積の割合を８０％以上としている。
【００１６】
このようなテープ１の粘着部１ａを皮膚に貼付した後に剥離することで、皮膚の平面情報を粘着部１ａに転写することができる。具体的には皮脂・角質等を採取することができる。このテープ１の貼付・剥離に先立ち、皮膚の汚れを取ることが望ましい。
【００１７】
テープ１は、他方の面を平面部１１に向かい合わせて留め具１２によりテープ保持部１０に保持される。言い換えると、テープ１は粘着部１ａが上側に向くようにテープ保持部１０に保持される。保持方法は、平面視で粘着部１ａの位置する領域以外に位置する留め具１２を用いて、粘着部１ａが露出するように保持できれば特に限定されない。例えば、平面視で平面部１１の粘着部１ａの位置する領域以外に、平面部１１から延び、平面部１１とテープ１の厚み以上の間隔を開けて平行に延びるフック状の留め具１２を設けてもよいし、粘着テープからなる留め具１２を設けてもよい。この例では、平面視で平面部１１の粘着部１ａの位置する領域を挟んだ両側に粘着テープからなる留め具１２を設けている。具体的には留め具１２は両面テープで、一方面が平面部１１に貼付された状態であり、
他方の面は、剥離可能な保護テープで保護されている。テープ１を保持する際にこの保護テープを取り除き粘着テープ部を露出させて貼りあわせて保持する。留め具１２をこのように構成することにより、平面部１１とテープ１とを隙間なく保持することができるので好ましい。
【００１８】
平面部１１はテープ１を保持でき、テープ１が保持される側の面に水を透過させないような撥水性を有し、後述の反応液２１に対して化学的に安定であれば、その材料、形状等は適宜自由に選択できる。例えば、厚紙やプラスチック等を用い、粘着部１ａは配置される領域が透光性を有する材料で形成されるようにすればよい。平面部１１のサイズは特に限定されないが、簡易検査キットという性質上から片手で保持、取り扱いができることが好ましく、厚み０．０１ｍｍから１ｍｍ程度、平面視におけるサイズを数ｃｍ角内に収まる大きさとすることが望ましい。平面部１１の材質は、反応液２１に難溶で、指での押圧に対して強度が保持できることが望ましい。光透過性を考えるとアクリル樹脂が適当であるが、他の樹脂材料等でもよく、特段限定されるものではない。この例では短辺が５ｃｍ、長辺が９ｃｍの矩形状であり、厚さ０．４ｍｍのアクリル樹脂板を用いて説明している。
【００１９】
このようなテープ保持部１０は台座部５０とその主面同士を対向配置可能に保持される。具体的には、テープ保持部１０の平面部１１の一端が台座部５０の一端で接続されている。この接続された部分を支点としてテープ保持部１０のテープ１の粘着部１ａが台座部５０に対向するように折り畳めるように変位可能となっている。言い換えると、テープ保持部１０に保持されたテープ１の粘着部１ａと、台座部５０に配置された後述の反応場３０との距離を変えることができる。
【００２０】
台座部５０は、その上面に反応場３０と封止部５１とを有する。反応場３０は、粘着部１ａと接触して、粘着部１ａに転写され皮膚から採取された物質と反応を生じたり反応を促進させたりする反応性物質をその表面に保持するものである。ここで生じる反応は、呈色、発光、蛍光等、反応の結果、光学的に検出可能な現象を生じるものとする。反応性物質としては、酵素、触媒等が挙げられる。
【００２１】
特に反応性物質として酵素を用いることが好ましい。酵素は生体内で様々な化学反応を触媒し、生体の代謝維持に欠かすことができない。一方で、通常の状態では進行しない化学反応が、特定の酵素の存在によって、特異的に進行する場合が多々存在する。皮膚組織中の様々な物質は、皮膚中に存在する酵素が触媒として機能し、生化学的な反応が進行することで代謝が維持されている。逆に、皮膚組織中に存在する酵素と同一の酵素、あるいは同様の作用を有する特定の酵素を利用すれば、皮膚組織中の特定の物質（バイオマーカ）の存在を高精度で、定性的、あるいは定量的情報として得ることが可能となる。
【００２２】
ただし、これは酵素に限定した事柄ではなく、特定のバイオマーカに特異的に反応する皮膚組織と反応するその他の物質でもかまわない。特定のバイオマーカと特異的に化学反応し、かつその化学反応が検出可能な物質であればよく、たとえば、呈色、蛍光、発色試薬する検出試薬であってもよい。
【００２３】
反応場３０は、金属上に皮膚から採取された物質中の特定の検出物質と特異的に反応を生じる反応性物質を固定化することで形成してもよいし、絶縁物質上に修飾基を介して皮膚から採取された物質中の特定の検出物質と特異的に反応を生じる反応性物質を固定化してもよい。この例では、反応場３０として、台座部５０上に配置されたカーボンまたはシリカゲルのポーラス層を形成し、その表面をカルボキシル基で修飾し、このカルボキシル基に、反応を促進する触媒的役割を果たす酵素が乾燥した状態でアミド結合により固定化されている。
【００２４】
この様に、反応場３０において、反応性物質を固定化するための土台としてポーラス層を用いることにより、反応場３０の単位面積あたりの表面積を格段に増大させることができる。これに伴い、固定化できる酵素の密度を大幅に向上させることができ、反応の効率化を実現できる。ポーラス層の孔の開口径は、その上に固定する反応性物質と同程度であることが好ましい。例えば、反応性物質として酵素を用いる場合には、数ｎｍから数１０ｎｍとする。開口率は、固定化する酵素の設計密度できまるが、最大１×１０９から1×
１０１０個／ｍｍ２である。
【００２５】
ポーラス層の孔の深さは、数ｎｍ〜１００ｎｍとする。反応による呈色、発光または蛍光を持続させるためには、反応性物質、皮膚組織、反応液２１を近接配置させることが必要である。具体的には、これらを近接配置することにより、解離を繰り返す反応性物質に新たな基質を効率的に供給することができる。このようなポーラス層における孔は、反応場３０の面内で均等に反応を進行させるために、秩序立って形成されていることが望ましい。このようなポーラス層の一例として、カーボンナノチューブを例示することができる。
【００２６】
反応液供給部２０は、台座部５０の上面のうち、反応場３０よりもテープ保持部１０との接続部側に配置される。反応液保持部２０は、反応液２１と反応液２１を保持するフィルムからなる小胞部２２とを有する。反応液２１は、検出物質と反応場３０に固定化された反応性物質または触媒物質との組み合わせにより適宜決定する。フィルムからなる小胞部２２は台座部５０に固定化されている。
【００２７】
小胞部２２は、反応場３０に均一に溶液を供給できるサイズにすることが望ましい。小胞部２２は、円筒状のビニール袋に溶液を包含させた後に封止し、その一部の側面を台座部５０に接着固定してもよい。また、予め半円筒状の空袋に反応液を注射針等で注入した後に袋を封止してもよい。反応液の液量は、反応場３０が均一に濡れる程度が適当であり、多すぎると反応液が漏れ、少なすぎると十分な反応が生じなくなる恐れがある。
【００２８】
このように、小胞部２２により、反応液２１と反応場３０とを分離して保持することができる。これにより、反応性物質を乾燥した状態で保存することができる。これにより、品質を維持した状態で長期保存が可能となる。また、両者が分離しているため、反応の進行に必要な物質をそれぞれの物質に応じた望ましい状態で準備することができる。すなわち、反応に必要な物質のうち、乾燥状態で保存することが好ましものや、反応液２１中では不安定な物質は反応場３０に固定化し、溶液中で安定して存在しうるものを反応液２１中に溶解させた状態とすることができる。このように反応が進まない状態で準備可能であるため、必要なときに即座に反応をスタートさせることができる。
【００２９】
台座部５０は上述のような各構成要素を保持し、かつ、少なくともその上面は、反応液２１に対して透過性及び反応性の少ない材料で構成されている。本発明の皮膚検査キットは、簡便にその場で即時に診断できることを目指しているから、台座部５０のサイズは、片手に載せることのできるサイズであることが望ましい。また、基体材質に特段の制限はなく、有機高分子樹脂、金属、セラミック、陶器、ガラス、その他の剛性を有するものであればよいが、簡便さの理由から有機高分子材料、たとえば、アクリル樹脂、シリコーン樹脂、塩化ビニール樹脂、エポキシ樹脂、ポリイミド樹脂等々が好ましい。この例では短辺が５ｃｍ、長辺が９ｃｍの矩形状であり、厚さ０．４ｍｍのアクリル樹脂板を用いて説明している。
【００３０】
そして、台座部５０の上面には、封止部５１を有する。封止部５１は、封止部５１と、台座部５０の上面と、テープ保持部１０の一方主面とで、反応液保持部２０，反応場３０
が配置された領域を囲うように形成される。言い換えると、テープ１の粘着部１ａと反応場３０の周囲を囲繞して、粘着部１ａと反応場３０と反応液２１を内部に収容するような収容空間を形成するために、台座部５０とテープ保持部１０とを近接状態としたときに生じる隙間を塞ぐように封止部５１が配置される。この例では、テープ保持部１０の外周部に沿うように形成されている。より具体的には、テープ保持部１０と台座部５０との一端が接続されているためその接続部を除くようなコの字状（Ｕ字状）に配置されている。封止部５１により、反応液２１の漏洩を防ぐとともに、反応場３０がおかれた環境を一定とすることができる。
【００３１】
なお、この例では封止部５１は台座部５０の上面に配置されているが、テープ保持部１０側に配置してもよいし、テープ保持部１０と台座部５０との双方に設けてもよい。
【００３２】
このような封止部５１としては、両面テープが最も簡便であるが、弾性ゲル材を用いて封止してもよい。また周囲の一部に突起上の構造を形成してグリース等の封止材を用いることができる。
【００３３】
そして、テープ保持部１０の平面部１１のうち、テープ保持部１０を台座部５０と対向するように変位させたときに、小胞部２２と当接する位置に反応液供給手段４０を設ける。反応液供給手段４０は突起構造４１からなる。突起構造４１は、小胞部２２に当接させても変形しない強度を有する材料であれば特に材料は限定されず、例えばプラスチック等で形成される。
【００３４】
（操作方法）
このような皮膚検査キット１００の動作について説明する。まずテープ１を用いてテープストリッピング操作を行い、皮膚組織の一部を粘着部１ａに転写する。このテープ１を粘着部１ａが露出するようにして、留め具１２によりテープ保持部１０に保持する。この工程においては、突起構造４１は不図示の保護テープにより保護されていてもよい。
【００３５】
次に、突起構造４１を露出させた状態で、テープ保持部１０を台座部５０側に折り重ねるように変位させる。言い換えると、テープ保持部１０と台座部５０とが互いに向き合う角度を変える。変位により、粘着部１ａと反応場３０とが近接状態で対向配置される。
【００３６】
ここで、近接状態とは、粘着部１ａと反応場３０との間に反応液２１を保持可能な状態である。そして、この近接状態において粘着部１ａと反応場３０との間に反応液２１を保持することで反応が進行する。具体的にこの近接状態とは、１ｎｍ〜１００μｍ程度であり、反応液２１が反応場３０上に表面張力で保持可能な状態をいうものとする。
【００３７】
変位後に封止部５１により収容空間内に反応場３０、テープ１の粘着部１ａを収容する。
【００３８】
そして、変位後に突起構造４１を小胞部２２に当接させ押圧することにより、小胞部２２に孔を形成し、反応液２１を自由に流動させる。反応液２１は小胞部２２から移動し反応場３０と粘着部１ａとの間隙に供給され充填される。これにより、粘着部１ａに付着した皮膚採取物と、反応液２１と、反応場３０により、所定の反応が開始する。所定の時間が経過した後に反応の結果生じる、呈色、蛍光発光等の確認を行う。
【００３９】
ここで、テープ１が粘着部１ａ、基体のうち粘着部１ａが形成されている領域（テープ１の粘着部１ａの反対側の面）、テープ保持部１０の粘着部１ａが配置される領域は透光性を有している。このため、反応液２１を封止した状態で反応を確認することができる。
【００４０】
このような構成・動作をする皮膚検査キット１００を用いることにより、以下の２点の顕著な効果を有する。
【００４１】
まず、反応場３０に高密度で反応性物質を固定化し、これに皮膚組織を近接配置した状態で反応を進めることができるので、効率よく反応を進めることができる。すなわち、短時間で測定可能であり、かつ低濃度の場合でも反応を進めて検出することができる。
【００４２】
次に、粘着部１ａに皮膚組織を転写してそのままの状態で反応を進行させることができる。これにより、皮膚における検出希望物質の分布状態を二次元的に把握することができる。すなわち、単なる皮膚における検出希望物質の数値・平均値を得るのではなく、特異点の有無等まで把握することができる。
【００４３】
本実施形態の皮膚検査キット１００は、このような優れた効果を有するものを簡易な構成で実現したものである。
【００４４】
（評価対象物）
上述の皮膚検査キット１００で具体的に行われる反応の例について詳述する。
【００４５】
＜ＮＭＦ（天然保湿因子）バランス評価＞
反応場３０にアミノ酸、乳酸の脱水素酵素を固定する。具体的には、乳酸デヒドロゲナーゼ、アミノ酸デヒドロゲナーゼを固定化する。同様に、触媒であるジアホラーゼを固定する。
【００４６】
反応液２１として、トリスーＨＣｌバッファ液、リン酸バッファ液、ホウ酸バッファ液のいずれか、または２種以上の混合液に、テトラゾリウム塩、ＮＡＤ＋（ニコチンアミドアデニンジヌクロオチド酸化体）、トリトンＸ−１００等の界面活性剤を添加したものを用いる。
【００４７】
このような酵素が固定化された反応場３０と反応液２１との組み合わせにより、粘着部１ａに付着した皮膚からの採取した角質のＮＭＦ中のアミノ酸と乳酸とを検出することができる。具体的には、反応液２１中のトリトンＸ−１００等により角質の細胞膜を破壊する。そして、角質中の乳酸およびアミノ酸の脱水反応により、ＮＡＤ＋が還元され還元体であるＮＡＤＨが生成する。このＮＡＤＨが発生する蛍光により、乳酸およびアミノ酸量、粘着部１ａにおける分布状況等を確認できる。
【００４８】
さらに、乳酸は、ＮＡＤＨとテトラゾリウムとの存在下において、ジアホラーゼを触媒として赤色を呈色するホルマゾン色素を生成する。
【００４９】
この蛍光強度、呈色強度等を測定することにより、１つの反応場３０で、乳酸とアミノ酸とを区別してその量，比率および分布状態を検出することができる。
【００５０】
＜皮脂バランス評価＞
皮脂バランスをみるために、皮脂中の脂肪酸を区別して判別する。具体的には、反応場３０に、アシルＣｏＡシンセターゼ、アスコルビンオキシターゼ、アシルＣｏＡオキシターゼ、ペルオキシターゼ、コレシテロールオキシターゼを固定化する。
【００５１】
反応液２１として、トリスーＨＣｌバッファ液、リン酸バッファ液、ホウ酸バッファ液のいずれか、または２種以上の混合液に、ＡＴＰ（アデニシン三リン酸）、ＡＤＨＰ（１０−アシル−３，７−デヒドロキシフェノキサジン）、トリトンＸ−１００，ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を添加したものを用いる。
【００５２】
これら系により、コレステロールと遊離脂肪酸の分析が可能となる。皮膚中の遊離脂肪酸，あるいはコレステロールを基質として反応場３０に固定されている酵素との反応を元に連鎖的に進行する反応の過程で発生した過酸化水素を用いて、呈色試薬ＡＤＨＰを発色させ、目視にて存在、あるいは存在比を確かめることができる。
【００５３】
具体的には、反応場３０にアシルＣｏＡシンセターゼ、アスコルビンオキシターゼ、アシルＣｏＡオキシターゼを含む群と、コレシテロールオキシターゼを含む群を分離して形成する。このような反応場に反応液２１を供給する。この反応液２１中のトリトンＸ−１００等により皮膚組織の細胞膜を破壊する。皮膚中の遊離脂肪酸とＡＴＰとコエンザイムとにより、アシルＣｏＡシンセターゼを触媒としてアシルＣｏＡを生成する。このアシルＣｏＡと酸素とがアセチルコリンオキシターゼの存在下でトランスエノイルＣｏＡと過酸化水素とを生成する。この過酸化水素とＡＤＨＰがペルオキシターゼの存在下でレゾルフィンと水とを生成する。このレゾルフィンの生成時に蛍光を生じる。
【００５４】
また、皮膚中のコレステロールは、コレシテロールオキシターゼの存在下で酸素と反応してトランスエノイルＣｏＡと過酸化水素とを生成する。そして、この過酸化水素とＡＤＨＰがペルオキシターゼの存在下でレゾルフィンと水とを生成する。このレゾルフィンの生成時に蛍光を生じる。
【００５５】
これらの蛍光を観察することにより、遊離脂肪酸とコレステロールとを確認することができる。
【００５６】
＜紫外線ダメージ測定＞
紫外線ダメージを評価するために、スクワレン（スクワレンヒドロペルオキシド）等、過酸化脂質を測定する。具体的には、反応場３０として、チトクロムＣまたはペルオキシターゼを固定化する。
【００５７】
反応液２１として、トリスーＨＣｌバッファ液、リン酸バッファ液、ホウ酸バッファ液のいずれか、または２種以上の混合液に、ルミノール、ルシフェリン、ｐ−ヨードフェニール、トリトンＸ−１００，ＤＭＳＯ、エタノールを添加したものを用いる。
【００５８】
これらの系により、ＵＶ光被爆により生じた皮膚中の過酸化スクワレンの量を定量的に把握することができるようになる。具体的な反応経路を説明する。チトクロムＣにより皮膚中の過酸化スクワレンからラジカル酸素を遊離させる。次にこのラジカル酸素がルミノールを酸化させることにより励起状態の３−アミノフタル酸を生成する。この、３−アミノフタル酸が励起状態から基底状態に遷移する際に蛍光を発生する（ルミノールの発光現象）。この蛍光を観察すればよい。
【００５９】
＜セラミド生成能測定＞
肌の潤いに関係するセラミドを生成するために必要な、スフィンゴミエリナーゼ活性を測定する。具体的には、反応場３０として、アルカリフォスファターゼ、コリンオキシターゼ、ペルオキシターゼを固定する。
【００６０】
反応液２１として、トリスーＨＣｌバッファ液、リン酸バッファ液、ホウ酸バッファ液のいずれか、または２種以上の混合液に、スフィンゴミエリン、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、ＡＤＨＰ，トリトンＸ−１００，ＤＭＳＯを添加したものを用いる。
【００６１】
これらの系により、皮膚のセラミド生成能を定量的に捕らえることができ、生化学的に定量な肌年齢を評価することができる。反応液中に予め、基質であるスフィンゴミエリン
が包含されており、皮膚中の酵素であるスフィンゴミエリナーゼの活性を受け、セラミドに転換される。そのときの副生成物でホスホコリンを利用する。このホスホコリンがアルカリフォスファターゼの存在下でリン酸とコリンと転換される。このコリンは、コリンオキシターゼの存在下でトリメチルグリシンに転換する際に過酸化水素を生じる。この過酸化水素とＡＤＨＰとがペルオキシターゼの存在下でレゾルフィンに転換する際に蛍光が発生する。このようにセラミドを生成する際の副生成物を利用して、呈色試薬ＡＤＨＰを発色させ、目視にて存在と活性を定量的に把握できるようになる。
【００６２】
このような評価対象物に特化した皮膚検査キット１００により、簡易な構成で正確な肌情報を得ることができるものとなる。
【００６３】
（実施形態２）
本発明の実施形態２の皮膚検査キット１００Ａについて、図２を用いて説明する。図１に示す皮膚検査キット１００はテープ保持部１０と台座部５０とが一体である場合を例に説明したが、皮膚検査キット１００Ａは、テープ保持部１０Ａと台座部５０Ａとが別体となっている点で異なる。また、皮膚検査キット１００は反応液保持部２０が台座部５０に固定化されているが、皮膚検査キット１００Ａは、反応液保持部２０Ａが台座部５０とは別体となっている点で異なる。以下、実施形態１と異なる部分のみ説明し、重複する部分の説明は省略する。
【００６４】
皮膚検査キット１００Ａは、テープ保持部１０Ａと台座部５０Ａとが別体となっている。台座部５０Ａには封止部５１Ａが、反応場３０を囲うように形成されている。
【００６５】
そして、反応液保持部２０Ａは、ゲル状のシートで構成される。反応液保持部２０Ａの形状は円形、矩形、その他任意の形状が考えられるが、反応液２１を供給する機能を考慮すると出来るだけテープ１、もしくは反応場３０と対称的な形状が望ましい。また、テープ１の粘着部１ａと反応場３０が均一に濡れる程度の反応液が供給できる程度のゲル厚みが適当であり、多すぎると反応液が漏れ、少なすぎると十分な反応が生じなくなる恐れがあるので、ゲル厚みは１ｍｍから５ｍｍ程度が適当である。
【００６６】
反応液保持部２０Ａを構成するゲル剤については多糖類からなるアルギン酸ナトリウム、κ‐カラギーナン、ι‐カラギーナン、ジェランガム、寒天、アガロース、カルボキシメチルセルロースや水溶性高分子のポリアクリル酸ナトリウム等を例示できる。
【００６７】
また反応液保持部２０Ａは反応液２１をゲルに含有させる方式とゲル膜内に反応液２１を内包させた方式がある。反応液２１をゲルに含有させる方式の場合は、ゲルは脆くなく若干の弾性を有するほうが好ましく、押圧のない状態ではゲルから反応液の離水が少ないことが望ましく、ι‐カラギーナン、アガロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸ナトリウム等が適当である。ゲル膜内に反応液２１を内包させる方式の場合は、二価金属イオンと架橋反応することで、素早く容易にゲル化し、取扱いが容易なアルギン酸ナトリウムが適当である。
【００６８】
反応液供給手段４０Ａは、反応液保持部２０Ａを粘着部１ａと反応場３０との間に挟持させた上で押圧する工程である。このような反応液供給手段４０Ａにより、ゲルを液状とすることできる。
【００６９】
このように反応液２１の供給にゲルを用いることにより、より取扱いが容易となる。また、反応液保持部２０Ａのゲルを多重構造とすることで反応液２１の流動性を制御することができる。
【００７０】
（実施形態３）
本発明の実施形態３の皮膚検査キット１００Ｂについて、図３を用いて説明する。図１に示す皮膚検査キット１００において、反応液保持部２０は台座部５０に配置されていたが、皮膚検査キット１００Ｂでは、反応液保持部２０Ｂが別体となっている点で異なる。以下、異なる点についてのみ説明し、重複する説明を省略する。
【００７１】
皮膚検査キット１００Ｂは、反応液保持部２０Ｂが、スポイト状となっており、その中に反応液２１が充填されている。検査前は取り外し可能の蓋部で反応液２１は密封されている。
【００７２】
テープ保持部１０Ｂ、台座部５０Ｂの一部に反応液保持部２０Ｂのスポイトの出口形状に応じた変形部１３Ｂ、５２Ｂが形成されている。テープ保持部１０Ｂを台座部５０Ｂ側に変位させ、変形部１３Ｂ、５２Ｂが合わさることで、反応液保持部２０Ｂのスポイトの出口形状と略同一の形状となる挿入口を形成する。そして、この挿入口が反応液供給手段４０Ｂである流路を形成する。
【００７３】
反応液供給手段４０Ｂである挿入口に、反応液保持部２０Ｂであるスポイトの出口を挿入し、スポイトを押圧することで、スポイト内の反応液２１を反応場３０に供給することができる。
【００７４】
なお、この例では、反応液供給手段４０Ｂである挿入口を、テープ保持部１０Ｂ、台座部５０Ｂの一部に形成した変形部１３Ｂ、５２Ｂで形成したが、封止部５１に挿入口を形成してもよい。
【００７５】
（実施形態４）
本発明の実施形態４の皮膚検査キット１００Ｃについて、図４を用いて説明する。図１に示す皮膚検査キット１００において、反応液保持部２０は台座部５０に配置されていたが、皮膚検査キット１００Ｃでは、テープ保持部１０Ｃと一体となり形成されている点で異なる。以下、異なる点についてのみ説明し、重複する説明を省略する。
【００７６】
テープ保持部１０Ｃの一方の面にはプラスチックまたは樹脂で形成された反応液保持部２０Ｃが形成されている。反応液保持部２０Ｃは、反応液収容部２３Ｃと反応液収容部２３Ｃに続く細長い形状の出口流路部２４Ｃとで構成される。反応液収容部２３Ｃはテープ保持部１０Ｃの平面部１１Ｃの外周部側に配置され、出口流路部２４Ｃは平面部１１Ｃののうち、テープ１が保持される領域に向かって延びている。そして、出口流路２４Ｃと平面部１１との接着強度は、反応液収容部２３Ｃと平面部１１Ｃとの接着強度に比べて小さくなるように設定されている。このような構成とすることにより、テープ保持部１０Ｃを台座部５０Ｃ側に変位させた後に、平面部１１Ｃの留め具１２が配置された面と反対側の他方主面側から、反応液収容部２３Ｃと出口流路部２４Ｃと間付近を押圧することにより、出口流路部２４Ｃが平面部１１Ｃから剥離し、出口流路部２４Ｃが反応場３０と粘着部１ａとの間へと反応液２１を導く流路となる。この例では、この一連の押圧、出口流路部２４Ｃ剥離の工程が反応液供給手段４０Ｃとなる。
【００７７】
（変形例１：反応液供給手段）
図１に示す例では、反応液供給手段４０として突起構造４１がその先端を上に向けた状態でテープ保持部１０に設けられた例を説明したが、図５（ａ）に示すように、突起構造４１Ｄがその先端部が面方向に延びるように配置され、テープ保持部１０を台座部５０側に変位させた後に、平面部１１の他方主面側から、突起構造４１Ｄの根本付近を押圧することにより、その先端を平面部１１の面方向から台座部５０側に立ち上がらせることにより、小胞部２２に孔を設けてもよい。
【００７８】
また、図１に示す例では、突起構造４１をテープ保持部１０側に設けているが、図５（ｂ），（ｃ）に示すよう台座部５０側に設けてもよい。台座部５０側に重ねあわされるようにテープ保持部１０が変位し小胞部２２が押圧されたときに、小胞部２２が変形する。台座部５０側に設ける場合には、図５（ｂ）に示すように、台座部５０のうち、小胞部２２が変形することにより初めて小胞部２２に覆われる領域に突起構造４１Ｅを設ければよい。また、図５（ｃ）に示すように、小胞部２２と台座部５０との間に可撓性を有する弾性剤からなる小片４２Ｆを設け、小片４２Ｆに隣接配置するように突起構造４１Ｆを設けてもよい。この場合には、小胞部２２が押圧されたときに、小片４２Ｆが変形し突起構造４１Ｆの先端が露出させることができる。
【００７９】
（変形例２：反応液保持部）
反応液保持部２０として、反応液２１をゼラチンで固化して保持してもよい。その場合には、酵素反応が進行する反応温度付近（４０度弱）では再溶融するので、反応場３０に反応液２１を溶液状で供給することができる。
【００８０】
（変形例３：反応場）
上述の実施形態によれば、反応場３０が１つの例を用いて説明したが、図６に示すように、２以上設けてもよい。その場合には、標準試料と実検体資料との比較を行うことが可能となる。また、複数の皮膚採取箇所の測定を同時に行い、皮膚位置における比較を行うことができる。
【００８１】
（変形例４：台座部とテープ保持部との接合方法）
上述の実施形態１において、矩形状の台座部５０とテープ保持部１０との平面視における一辺を接合した例を説明したが、両者が近接状態を実現可能に変位可能であればその接続方法は限定されない。例えば、一方が他方に対してその平板の主面方向にスライド、回転させるような構成としてもよい。
【００８２】
（変形例５：台座部とテープ保持部との形状）
上述の実施形態によれば、台座部５０とテープ保持部１０との形状は矩形状の場合を例に説明したが、円形、楕円形とし、コンパクトを模した形としてもよい。
【符号の説明】
【００８３】
１・・・テープ
１ａ・・・粘着部
１０・・・テープ保持部
２０・・・反応液保持部部
３０・・・反応場
４０・・・反応液供給手段
５０・・・台座部
１００・・・皮膚検査キット
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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