(57)【要約】  マイオスタチンをｍＲＮＡレベルで阻害する新規なアンチセンス核酸などが求められていた。  本発明はマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングを可能にしたり、マイオスタチン遺伝子のｍＲＮＡの分解を誘導する所定のアンチセンスオリゴマーを提供する。
2017047741.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ａ)ヒトまたはマウスのマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン内の連続する７〜１５塩基の第１のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列を含む第１のユニットオリゴマー；及び
（ｂ）前記第２番目のエクソン内の連続する７〜１５塩基の第２のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列を含む第２のユニットオリゴマー、
が連結してなる１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマーであって、
前記第１のヌクレオチド配列及び第２のヌクレオチド配列は連続又は互いに重複するものではない、
アンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項２】
前記アンチセンスオリゴマーが、以下の（ｃ）又は（ｄ）である請求項１に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（ｃ）以下の（ｃ−１）〜（ｃ−６）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｃ−１）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−２）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−３）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−４）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−５）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｃ−６）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
（ｄ）以下の（ｄ−１）〜（ｄ−７）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｄ−１）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−２）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−３）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−４）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−５）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−６）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｄ−７）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
【請求項３】
以下の（ｅ）又は（ｆ）である請求項１に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（ｅ）以下の（ｅ−１）〜（ｅ−６）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｅ−１）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−２）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−３）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−４）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−５）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｅ−６）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
（ｆ）以下の（ｆ−１）〜（ｆ−７）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｆ−１）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−２）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−３）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−４）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−５）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２２５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−６）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｆ−７）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
【請求項４】
前記（ｃ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号103（ＮＭＳ−４８）、配列番号116（ＮＭＳ−８９）、配列番号117（ＮＭＳ−９０）、配列番号120（ＮＭＳ−９３）、配列番号128（ＮＭＳ−１０１）、配列番号131（ＮＭＳ−１０４）、配列番号136（ＮＭＳ−１１３）、配列番号137（ＮＭＳ−１１７）、配列番号140（ＮＭＳ−１２３）、配列番号145（ＮＭＳ−１３６）、配列番号146（ＮＭＳ−１３９）、配列番号147（ＮＭＳ−１４０）、配列番号148（ＮＭＳ−１４１）、配列番号149（ＮＭＳ−１４２）、配列番号152（ＮＭＳ−１４５）、配列番号155（ＮＭＳ−１４８）、配列番号156（ＮＭＳ−１４９）、配列番号157（ＮＭＳ−１５０）、配列番号159（ＮＭＳ−１５２）、配列番号162（ＮＭＳ−１５６）、配列番号163（ＮＭＳ−１５７）、配列番号165（ＮＭＳ−１６２）、配列番号166（ＮＭＳ−１６３）、配列番号167（ＮＭＳ−１６４）、配列番号168（ＮＭＳ−１６６）、配列番号169（ＮＭＳ−１６７）、配列番号170（ＮＭＳ−１６８）、配列番号171（ＮＭＳ−１６９）、配列番号176（ＮＭＳ−１７４）、配列番号177（ＮＭＳ−１７５）、配列番号178（ＮＭＳ−１７６）、配列番号179（ＮＭＳ−１７７）、配列番号180（ＮＭＳ−１７８）、配列番号183（ＮＭＳ−１８１）、配列番号187（ＮＭＳ−１８５）、配列番号189（ＮＭＳ−１８８）、配列番号190（ＮＭＳ−１８９）、配列番号191（ＮＭＳ−１９０）、配列番号192（ＮＭＳ−１９１）、配列番号193（ＮＭＳ−１９２）、配列番号196（ＮＭＳ−１９５）、配列番号199（ＮＭＳ−１９８）、配列番号200（ＮＭＳ−１９９）、配列番号201（ＮＭＳ−２００）、配列番号203（ＮＭＳ−２０２）、配列番号204（ＮＭＳ−２０３）、配列番号206（ＮＭＳ−２０６）、配列番号208（ＮＭＳ−２０８）、配列番号212（ＮＭＳ−２１２）、配列番号213（ＮＭＳ−２１３）、配列番号214（ＮＭＳ−２１４）、配列番号215（ＮＭＳ−２１５）、配列番号217（ＮＭＳ−２１７）、配列番号225（ＮＭＳ−２２５）、配列番号226（ＮＭＳ−２２８）、配列番号228（ＮＭＳ−２３０）、配列番号229（ＮＭＳ−２３１）、配列番号231（ＮＭＳ−２３３）、配列番号232（ＮＭＳ−２３４）、配列番号233（ＮＭＳ−２３５）、配列番号236（ＮＭＳ−２４０）、配列番号237（ＮＭＳ−２４１）、配列番号240（ＮＭＳ−２４４）、配列番号243（ＮＭＳ−２４７）、配列番号244（ＮＭＳ−２４８）、配列番号245（ＮＭＳ−２４９）、配列番号246（ＮＭＳ−２５０）、配列番号247（ＮＭＳ−２５１）、配列番号248（ＮＭＳ−２５２）、配列番号252（ＮＭＳ−２５６）、配列番号261（ＮＭＳ−２７２）、配列番号273（ＮＭＳ−２８４）、配列番号274（ＮＭＳ−２８５）、配列番号275（ＮＭＳ−２８６）および配列番号277（ＮＭＳ−２９７）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、請求項２に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項５】
前記（ｄ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号95（ＮＭＳ−３８）、配列番号96（ＮＭＳ−３９）、配列番号107（ＮＭＳ−６６）、配列番号223（ＮＭＳ−２２３）、配列番号234（ＮＭＳ−２３８）、配列番号235（ＮＭＳ−２３９）、配列番号242（ＮＭＳ−２４６）、配列番号249（ＮＭＳ−２５３）、配列番号250（ＮＭＳ−２５４）、配列番号251（ＮＭＳ−２５５）、配列番号257（ＮＭＳ−２６８）、配列番号（ＮＭＳ−２８０）、配列番号（ＮＭＳ−２８１）、配列番号（ＮＭＳ−２８２）、配列番号（ＮＭＳ−２８８）、配列番号（ＮＭＳ−２８９）、配列番号（ＮＭＳ−２９０）、配列番号（ＮＭＳ−２９２）、配列番号（ＮＭＳ−２９３）、配列番号（ＮＭＳ−２９４）、配列番号（ＮＭＳ−２９５）、配列番号（ＮＭＳ−２９８）、配列番号（ＮＭＳ−２９９）、配列番号（ＮＭＳ−３００）、配列番号（ＮＭＳ−３０２）および配列番号（ＮＭＳ−３０３）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、請求項２に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項６】
前記アンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分及び／又は少なくとも１つのリン酸結合部分が修飾されている、請求項６に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項８】
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分が、２’位の−ＯＨ基が、ＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、Ｎ３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択されるいずれかの基で置換されたリボースである、請求項７に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（上記Ｒは、アルキル又はアリールを示し、上記Ｒ’は、アルキレンを示す。）
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドのリン酸結合部分が、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、及びボラノフォスフェート結合からなる群より選択されるいずれか１つのものである、請求項７又は８に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項１０】
前記アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項１１】
前記モルホリノオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、請求項１０に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項１２】
５’末端が、下記化学式（１）〜（３）のいずれかの基である、請求項１０又は１１に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【化１】
2017047741.tif 000043
【請求項１３】
前記アンチセンスオリゴマーが配列番号171（ＮＭＳ−１６９）、配列番号192（ＮＭＳ−１９１）、配列番号245（ＮＭＳ−２４９）、および配列番号231（ＮＭＳ−２３３）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、請求項４、６〜１２のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項１４】
請求項３〜１３のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
さらに医薬的に許容可能な担体を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用である、請求項１４又は１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
筋ジストロフィー治療用である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に、治療的有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を投与することを含む、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療方法。
【請求項１９】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患が筋ジストロフィーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
対象が、ヒトである、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用医薬組成物の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物の使用。
【請求項２２】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療に使用するための請求項１〜１３のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項２３】
以下の（Ａ）〜（Ｈ）からなる群より選択されるいずれか１つのアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（Ａ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｂ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｃ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｄ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｅ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｆ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｇ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー；及び
（Ｈ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
【請求項２４】
以下の（Ｉ）〜（Ｌ）からなる群より選択されるいずれか１つのアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（Ｉ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｊ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマーであって、前記１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列の３’末端の塩基が前記第２番目のエクソンの５’末端から第１４０番目の塩基であるアンチセンスオリゴマー
（Ｋ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー；及び
（Ｌ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
【請求項２５】
前記（Ａ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号13（ＮＭＳ−１７）、配列番号7
6（ＮＭＳ−１３８）、配列番号68（ＮＭＳ−１２０）、配列番号75（ＮＭＳ−１３７）、配列番号51（ＮＭＳ−７６）、配列番号52（ＮＭＳ−７９）、配列番号54（ＮＭＳ−８１）、配列番号55（ＮＭＳ−８２）、配列番号56（ＮＭＳ−８３）、配列番号53（ＮＭＳ−８０）、配列番号33（ＮＭＳ−４９）、配列番号63（ＮＭＳ−１１４）、配列番号69（ＮＭＳ−１２４）、配列番号70（ＮＭＳ−１２５）、配列番号61（ＮＭＳ−１１０）、配列番号31（ＮＭＳ−４６）、配列番号34（ＮＭＳ−５０）、配列番号50（ＮＭＳ−７５）、配列番号45（ＮＭＳ−６７）及び配列番号64（ＮＭＳ−１１５）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項２６】
前記（Ｂ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号3（ＮＭＳ−６）、配列番号66（ＮＭＳ−１１８）、配列番号67（ＮＭＳ−１１９）、配列番号28（ＮＭＳ−３３）、配列番号72（ＮＭＳ−１２７）、配列番号16（ＮＭＳ−２０）、配列番号82（ＮＭＳ−１８７）及び配列番号25（ＮＭＳ−３０）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項２７】
前記（Ｃ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号12（ＮＭＳ−１６）の塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項２８】
前記（Ｄ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号4（ＮＭＳ−７）の塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項２９】
前記（Ｅ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号90（ＮＭＳ−５１）の塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３０】
前記（Ｆ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号91（ＮＭＳ−５２）、配列番号28（ＮＭＳ−３３）及び配列番号25（ＮＭＳ−３０）、配列番号41（ＮＭＳ−６１）、配列番号24（ＮＭＳ−２９）、配列番号42（ＮＭＳ−６２）、配列番号43（ＮＭＳ−６３）、配列番号11（ＮＭＳ−１５）、配列番号67（ＮＭＳ−１１９）、配列番号80（ＮＭＳ−１６１）及び配列番号82（ＮＭＳ−１８７）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３１】
前記（Ｇ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号7（ＮＭＳ−１０）の塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３２】
前記（Ｈ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号4（ＮＭＳ−７）、配列番号9（ＮＭＳ−１２）、配列番号10（ＮＭＳ−１４）及び配列番号14（ＮＭＳ−１８）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の塩基配列からなる、請求項２３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３３】
オリゴヌクレオチドである、請求項２３〜３２のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３４】
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分及び／又は少なくとも１つのリン酸結合部分が修飾されている、請求項３３に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３５】
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分が、２’位の−ＯＨ基が、ＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、Ｎ３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択されるいずれかの基で置換されたリボースである、請求項３４に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（上記Ｒは、アルキル又はアリールを示し、上記Ｒ’は、アルキレンを示す。）
【請求項３６】
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドのリン酸結合部分が、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、及びボラノフォスフェート結合からなる群より選択されるいずれか１つのものである、請求項３４又は３５に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３７】
前記アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、請求項２３〜３２のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３８】
前記モルホリノオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、請求項３７に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【請求項３９】
５’末端が、下記化学式（１）〜（３）のいずれかの基である、請求項３７又は３８に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【化２】
2017047741.tif 000044
【請求項４０】
請求項２３〜３９のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を含む、医薬組成物。
【請求項４１】
さらに医薬的に許容可能な担体を含む、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用である、請求項４０又は４１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
筋ジストロフィー治療用である、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に、治療的有効量の請求項２３〜３９のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を投与することを含む、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療方法。
【請求項４５】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患が筋ジストロフィーである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
対象が、ヒトである、請求項４４又は４５に記載の方法。
【請求項４７】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用医薬組成物の製造における、請求項２３〜３９のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物の使用。
【請求項４８】
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療に使用するための請求項２３〜３９のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンスキッピングを可能にするアンチセンスオリゴマー、該オリゴマーを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
マイオスタチン（別名、ＧＤＦ−８）は、１９９７年にＴＧＦ−βスーパーファミリーに属する新規サイトカインとして発見された。発現組織は運動や代謝活動の主要担当組織である骨格筋に特異的である。マイオスタチン欠損変異動物は、骨格筋量が野生型の２倍量に増大する著明な筋肥大を呈することから、マイオスタチンは骨格筋量の負の制御因子であると考えられている。
上記知見により、マイオスタチンを阻害することによる筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療戦略が考えられる。骨格筋の萎縮は、筋力低下による日常生活動作制限だけでなく、低栄養や呼吸不全など重篤な全身合併症を惹起する。治療戦略の対象疾患としては、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー、封入体筋炎等の筋原性の筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、球脊髄性筋萎縮症等の神経原性の筋萎縮症、脳卒中による廃用症候群等の廃用性の筋萎縮症、癌悪液質、敗血症に伴う筋萎縮等の筋消耗性疾患、老化に伴う加齢性骨格筋減少症（加齢性サルコペニア）を含む各種サルコペニア等が考えられる。
ヒトのマイオスタチン遺伝子は２番染色体の長腕に位置する。構成要素である３つのエクソンから鎖長約２．８キロ塩基の成熟ｍＲＮＡが転写され、３７５アミノ酸残基からなる前駆体ポリペプチドが翻訳される。マイオスタチン前駆体ポリぺプチドはＣ末端ドメイン間のジスルフィド結合を介して２量体を形成した後、小胞体においてＦｕｒｉｎファミリーのプロテアーゼにより、２６６番目と２６７番目のアミノ酸残基（Ｒ−Ｄ）の間で切断され、Ｎ末端側のプロペプチドと後に活性型マイオスタチンとして機能するＣ末端ドメイン２量体とに分割される。これらのペプチドは非共有結合によって会合し、不活性型複合体として細胞外に分泌される。この複合体はさらに、ＢＭＰ１／Ｔｏｌｌｏｉｄファミリーのマトリックスメタロプロテアーゼにより、９８番目と９９番目のアミノ酸残基（Ｒ−Ｄ）の間でＮ末端プロペプチドが切断されることで会合が解け、活性型マイオスタチン２量体が出現する。
近年、ｍＲＮＡ前駆体の一部に相補的に結合する短いアンチセンス人工核酸を設計・化学合成して、ｍＲＮＡの機能阻害を目指すアンチセンス核酸医薬が注目を浴びている。正常の遺伝子転写機構においては、ｍＲＮＡ前駆体のイントロンは、スプライソソームと呼ばれる酵素複合体によって切断・除去され、成熟ｍＲＮＡが生成される。エクソンスキップアンチセンス核酸は、このスプライソソームによるスプライシング調節機構を改変し、正常の成熟ｍＲＮＡとは異なるｍＲＮＡの生成を誘導することにより、当該遺伝子の機能を阻害するものである。また、ｍＲＮＡは、スプライソソーム以外にも、ｍＲＮＡ安定化タンパク質や発現翻訳調節因子（ｍｉＲＮＡを含む）等との会合により、ｍＲＮＡの分解、発現・翻訳が調節されている。アンチセンス核酸は、このようなｍＲＮＡ結合タンパク質の標的ｍＲＮＡへの会合を阻害することで、当該遺伝子の機能を阻害することも考えられている。
ここで、マイオスタチンのエクソンスキップアンチセンス核酸がいくつか知られている（特許文献１〜３および非特許文献１〜４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＵＳ２０１３／００８５１３９Ａ１
【特許文献２】ＷＯ２００６／０８６６６７Ａ２
【特許文献３】特開２００７−１０４９７１
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｋａｎｇ  ＪＫ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１１）１９（１）：１５９−１６４
【非特許文献２】Ｋｅｍａｌａｄｅｗｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．(２０１１)４：３６
【非特許文献３】Ａｌｂｅｒｔｏ  Ｍａｌｅｒｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．（２０１２）１：ｅ６２
【非特許文献４】Ｂｅｓｔａｓ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｔｈｅｒ．（２０１４）２４（１）：１３−２４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような状況において、マイオスタチンをｍＲＮＡレベルで阻害する新規なアンチセンス核酸が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、所定の機能阻害アンチセンス核酸をマイオスタチン遺伝子に対して適用したときに、マイオスタチンをｍＲＮＡレベルで効率よく阻害できることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の通りである。
［１］
(ａ)ヒトまたはマウスのマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン内の連続する７〜１５塩基の第１のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列を含む第１のユニットオリゴマー；及び
（ｂ）前記第２番目のエクソン内の連続する７〜１５塩基の第２のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列を含む第２のユニットオリゴマー、
が連結してなる１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマーであって、
前記第１のヌクレオチド配列及び第２のヌクレオチド配列は連続又は互いに重複するものではない、
アンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［２］
前記アンチセンスオリゴマーが、以下の（ｃ）又は（ｄ）である前記［１］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（ｃ）以下の（ｃ−１）〜（ｃ−６）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｃ−１）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−２）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−３）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−４）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−５）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｃ−６）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
（ｄ）以下の（ｄ−１）〜（ｄ−７）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｄ−１）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−２）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−３）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−４）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−５）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−６）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｄ−７）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
［３］
以下の（ｅ）又は（ｆ）である前記［１］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（ｅ）以下の（ｅ−１）〜（ｅ−６）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｅ−１）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−２）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−３）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−４）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−５）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｅ−６）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
（ｆ）以下の（ｆ−１）〜（ｆ−７）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｆ−１）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−２）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−３）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−４）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−５）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２２５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−６）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｆ−７）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
［４］
前記（ｃ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号103（ＮＭＳ−４８）、配列番号116（ＮＭＳ−８９）、配列番号117（ＮＭＳ−９０）、配列番号120（ＮＭＳ−９３）、配列番号128（ＮＭＳ−１０１）、配列番号131（ＮＭＳ−１０４）、配列番号136（ＮＭＳ−１１３）、配列番号137（ＮＭＳ−１１７）、配列番号140（ＮＭＳ−１２３）、配列番号145（ＮＭＳ−１３６）、配列番号146（ＮＭＳ−１３９）、配列番号147（ＮＭＳ−１４０）、配列番号148（ＮＭＳ−１４１）、配列番号149（ＮＭＳ−１４２）、配列番号152（ＮＭＳ−１４５）、配列番号155（ＮＭＳ−１４８）、配列番号156（ＮＭＳ−１４９）、配列番号157（ＮＭＳ−１５０）、配列番号159（ＮＭＳ−１５２）、配列番号162（ＮＭＳ−１５６）、配列番号163（ＮＭＳ−１５７）、配列番号165（ＮＭＳ−１６２）、配列番号166（ＮＭＳ−１６３）、配列番号167（ＮＭＳ−１６４）、配列番号168（ＮＭＳ−１６６）、配列番号169（ＮＭＳ−１６７）、配列番号170（ＮＭＳ−１６８）、配列番号171（ＮＭＳ−１６９）、配列番号176（ＮＭＳ−１７４）、配列番号177（ＮＭＳ−１７５）、配列番号178（ＮＭＳ−１７６）、配列番号179（ＮＭＳ−１７７）、配列番号180（ＮＭＳ−１７８）、配列番号183（ＮＭＳ−１８１）、配列番号187（ＮＭＳ−１８５）、配列番号189（ＮＭＳ−１８８）、配列番号190（ＮＭＳ−１８９）、配列番号191（ＮＭＳ−１９０）、配列番号192（ＮＭＳ−１９１）、配列番号193（ＮＭＳ−１９２）、配列番号196（ＮＭＳ−１９５）、配列番号199（ＮＭＳ−１９８）、配列番号200（ＮＭＳ−１９９）、配列番号201（ＮＭＳ−２００）、配列番号203（ＮＭＳ−２０２）、配列番号204（ＮＭＳ−２０３）、配列番号206（ＮＭＳ−２０６）、配列番号208（ＮＭＳ−２０８）、配列番号212（ＮＭＳ−２１２）、配列番号213（ＮＭＳ−２１３）、配列番号214（ＮＭＳ−２１４）、配列番号215（ＮＭＳ−２１５）、配列番号217（ＮＭＳ−２１７）、配列番号225（ＮＭＳ−２２５）、配列番号226（ＮＭＳ−２２８）、配列番号228（ＮＭＳ−２３０）、配列番号229（ＮＭＳ−２３１）、配列番号231（ＮＭＳ−２３３）、配列番号232（ＮＭＳ−２３４）、配列番号233（ＮＭＳ−２３５）、配列番号236（ＮＭＳ−２４０）、配列番号237（ＮＭＳ−２４１）、配列番号240（ＮＭＳ−２４４）、配列番号243（ＮＭＳ−２４７）、配列番号244（ＮＭＳ−２４８）、配列番号245（ＮＭＳ−２４９）、配列番号246（ＮＭＳ−２５０）、配列番号247（ＮＭＳ−２５１）、配列番号248（ＮＭＳ−２５２）、配列番号252（ＮＭＳ−２５６）、配列番号261（ＮＭＳ−２７２）、配列番号273（ＮＭＳ−２８４）、配列番号274（ＮＭＳ−２８５）、配列番号275（ＮＭＳ−２８６）および配列番号277（ＮＭＳ−２９７）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、前記［２］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［５］
前記（ｄ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号95（ＮＭＳ−３８）、配列番号96（ＮＭＳ−３９）、配列番号107（ＮＭＳ−６６）、配列番号223（ＮＭＳ−２２３）、配列番号234（ＮＭＳ−２３８）、配列番号235（ＮＭＳ−２３９）、配列番号242（ＮＭＳ−２４６）、配列番号249（ＮＭＳ−２５３）、配列番号250（ＮＭＳ−２５４）、配列番号251（ＮＭＳ−２５５）、配列番号257（ＮＭＳ−２６８）、配列番号（ＮＭＳ−２８０）、配列番号（ＮＭＳ−２８１）、配列番号（ＮＭＳ−２８２）、配列番号（ＮＭＳ−２８８）、配列番号（ＮＭＳ−２８９）、配列番号（ＮＭＳ−２９０）、配列番号（ＮＭＳ−２９２）、配列番号（ＮＭＳ−２９３）、配列番号（ＮＭＳ−２９４）、配列番号（ＮＭＳ−２９５）、配列番号（ＮＭＳ−２９８）、配列番号（ＮＭＳ−２９９）、配列番号（ＮＭＳ−３００）、配列番号（ＮＭＳ−３０２）および配列番号（ＮＭＳ−３０３）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、前記［２］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［６］
前記アンチセンスオリゴマーがオリゴヌクレオチドである、前記［１］〜［５］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［７］
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分及び／又は少なくとも１つのリン酸結合部分が修飾されている、前記［６］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［８］
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分が、２’位の−ＯＨ基が、ＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、Ｎ３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択されるいずれかの基で置換されたリボースである、前記［７］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（上記Ｒは、アルキル又はアリールを示し、上記Ｒ’は、アルキレンを示す。）
［９］
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドのリン酸結合部分が、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、及びボラノフォスフェート結合からなる群より選択されるいずれか１つのものである、前記［７］又は［８］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［１０］
前記アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、前記［１］〜［５］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［１１］
前記モルホリノオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、前記［１０］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［１２］
５’末端が、下記化学式（１）〜（３）のいずれかの基である、前記［１０］又は［１１］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【化１】
2017047741.tif 000003
［１３］
前記アンチセンスオリゴマーが配列番号171（ＮＭＳ−１６９）、配列番号192（ＮＭＳ−１９１）、配列番号245（ＮＭＳ−２４９）、および配列番号231（ＮＭＳ−２３３）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、前記［４］、［６］〜［１２］のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［１４］
前記［３］〜［１３］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を含む、医薬組成物。
［１５］
さらに医薬的に許容可能な担体を含む、前記［１４］に記載の医薬組成物。
［１６］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用である、前記［１４］又は［１５］に記載の医薬組成物。
［１７］
筋ジストロフィー治療用である、前記［１６］に記載の医薬組成物。
［１８］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に、治療的有効量の前記［１］〜［１３］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を投与することを含む、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療方法。
［１９］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患が筋ジストロフィーである、前記［１８］に記載の方法。
［２０］
対象が、ヒトである、前記［１８］又は［１９］に記載の方法。
［２１］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用医薬組成物の製造における、前記［１］〜［１３］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物の使用。
［２２］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療に使用するための前記［１］〜［１３］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［２３］
以下の（Ａ）〜（Ｈ）からなる群より選択されるいずれか１つのアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（Ａ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｂ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｃ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｄ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｅ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｆ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｇ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー；及び
（Ｈ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
［２４］
以下の（Ｉ）〜（Ｌ）からなる群より選択されるいずれか１つのアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（Ｉ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｊ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマーであって、前記１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列の３’末端の塩基が前記第２番目のエクソンの５’末端から第１４０番目の塩基であるアンチセンスオリゴマー
（Ｋ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー；及び
（Ｌ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
［２５］
前記（Ａ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号13（ＮＭＳ−１７）、配列番号7
6（ＮＭＳ−１３８）、配列番号68（ＮＭＳ−１２０）、配列番号75（ＮＭＳ−１３７）、配列番号51（ＮＭＳ−７６）、配列番号52（ＮＭＳ−７９）、配列番号54（ＮＭＳ−８１）、配列番号55（ＮＭＳ−８２）、配列番号56（ＮＭＳ−８３）、配列番号53（ＮＭＳ−８０）、配列番号33（ＮＭＳ−４９）、配列番号63（ＮＭＳ−１１４）、配列番号69（ＮＭＳ−１２４）、配列番号70（ＮＭＳ−１２５）、配列番号61（ＮＭＳ−１１０）、配列番号31（ＮＭＳ−４６）、配列番号34（ＮＭＳ−５０）、配列番号50（ＮＭＳ−７５）、配列番号45（ＮＭＳ−６７）及び配列番号64（ＮＭＳ−１１５）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［２６］
前記（Ｂ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号3（ＮＭＳ−６）、配列番号66（ＮＭＳ−１１８）、配列番号67（ＮＭＳ−１１９）、配列番号28（ＮＭＳ−３３）、配列番号72（ＮＭＳ−１２７）、配列番号16（ＮＭＳ−２０）、配列番号82（ＮＭＳ−１８７）及び配列番号25（ＮＭＳ−３０）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［２７］
前記（Ｃ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号12（ＮＭＳ−１６）の塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［２８］
前記（Ｄ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号4（ＮＭＳ−７）の塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［２９］
前記（Ｅ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号90（ＮＭＳ−５１）の塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３０］
前記（Ｆ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号91（ＮＭＳ−５２）、配列番号28（ＮＭＳ−３３）及び配列番号25（ＮＭＳ−３０）、配列番号41（ＮＭＳ−６１）、配列番号24（ＮＭＳ−２９）、配列番号42（ＮＭＳ−６２）、配列番号43（ＮＭＳ−６３）、配列番号11（ＮＭＳ−１５）、配列番号67（ＮＭＳ−１１９）、配列番号80（ＮＭＳ−１６１）及び配列番号82（ＮＭＳ−１８７）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３１］
前記（Ｇ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号7（ＮＭＳ−１０）の塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３２］
前記（Ｈ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号4（ＮＭＳ−７）、配列番号9（ＮＭＳ−１２）、配列番号10（ＮＭＳ−１４）及び配列番号14（ＮＭＳ−１８）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列の塩基配列からなる、前記［２３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３３］
オリゴヌクレオチドである、前記［２３］〜［３２］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３４］
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分及び／又は少なくとも１つのリン酸結合部分が修飾されている、前記［３３］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３５］
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分が、２’位の−ＯＨ基が、ＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、Ｎ３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択されるいずれかの基で置換されたリボースである、前記［３４］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
（上記Ｒは、アルキル又はアリールを示し、上記Ｒ’は、アルキレンを示す。）
［３６］
前記オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドのリン酸結合部分が、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、及びボラノフォスフェート結合からなる群より選択されるいずれか１つのものである、前記［３４］又は［３５］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３７］
前記アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、前記［２３］〜［３２］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３８］
前記モルホリノオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、前記［３７］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
［３９］
５’末端が、下記化学式（１）〜（３）のいずれかの基である、前記［３７］又は［３８］に記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【化２】
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［４０］
前記［２３］〜［３９］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を含む、医薬組成物。
［４１］
さらに医薬的に許容可能な担体を含む、前記［４０］に記載の医薬組成物。
［４２］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用である、前記［４０］又は［４１］に記載の医薬組成物。
［４３］
筋ジストロフィー治療用である、前記［４２］に記載の医薬組成物。
［４４］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に、治療的有効量の前記［２３］〜［３９］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物を投与することを含む、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療方法。
［４５］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患が筋ジストロフィーである、前記［４４］に記載の方法。
［４６］
対象が、ヒトである、前記［４４］又は［４５］に記載の方法。
［４７］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用医薬組成物の製造における、前記［２３］〜［３９］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物の使用。
［４８］
筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療に使用するための前記［２３］〜［３９］のいずれか１つに記載のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のいくつかの態様のアンチセンスオリゴマーにより、マイオスタチン遺伝子のエクソンスキッピングを誘導することが可能である。また、本発明の好ましい態様のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に投与することにより、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患を予防又は治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図２】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図３】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図４】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図５】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図６】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図７】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図８】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図９】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図１０】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図１１】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図１２】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図１３】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン２のスキッピング効率を示す図である。
【図１４】ヒト横紋筋肉腫細胞株（RD細胞）におけるヒトマイオスタチン遺伝子のエクソン３のスキッピング効率を示す図である。
【図１５】試験例２の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した全ての文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、２０１５年９ 月１６日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願（特願２０１５−１８２１４号）の明細書及び図面に記載の内容を包含する。
【００１０】
１．本発明のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物
本発明は、マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングを可能にするアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物（以下、「本発明のアンチセンスオリゴマー」と総称する）を提供する。
以下の「本発明のアンチセンスオリゴマーＡ」及び「本発明のアンチセンスオリゴマーＢ」を、「本発明のアンチセンスオリゴマー」と総称する場合がある。
【００１１】
１．１．本発明のアンチセンスオリゴマーＡ
本発明のアンチセンスオリゴマーＡは、以下の(ａ)及び（ｂ）よりなる群より選ばれる２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物である。
(ａ)ヒトまたはマウスのマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン内の連続する７〜１５塩基の第１のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列を含む第１のユニットオリゴマー；及び
（ｂ）前記第２番目のエクソン内の連続する７〜１５塩基の第２のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列を含む第２のユニットオリゴマー
ここで、前記第１のヌクレオチド配列及び第２のヌクレオチド配列は連続又は互いに重複するものではない。
【００１２】
本発明のアンチセンスオリゴマーＡは、具体的には以下の（ｃ）又は（ｄ）のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物である。
（ｃ）以下の（ｃ−１）〜（ｃ−６）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｃ−１）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−２）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−３）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−４）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｃ−５）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｃ−６）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
（ｄ）以下の（ｄ−１）〜（ｄ−７）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｄ−１）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１番目〜第６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−２）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−３）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−４）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−５）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｄ−６）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｄ−７）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー
【００１３】
さらに、本発明のアンチセンスオリゴマーＡは、具体的には以下の（ｅ）又は（ｆ）のアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物である。
（ｅ）以下の（ｅ−１）〜（ｅ−６）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｅ−１）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−２）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−３）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−４）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｅ−５）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｅ−６）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー；
（ｆ）以下の（ｆ−１）〜（ｆ−７）のユニットオリゴマーからなる群より選択される２つのユニットオリゴマーが連結した、１４〜３０塩基長のアンチセンスオリゴマー：
（ｆ−１）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−２）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−３）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、
（ｆ−４）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー、および
（ｆ−５）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２２５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー
（ｆ−６）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー
（ｆ−７）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する７〜１５塩基のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるユニットオリゴマー
【００１４】
本発明のアンチセンスオリゴマーＡにおいて、「遺伝子」には、ゲノム遺伝子以外に、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体及びｍＲＮＡも含まれる。好ましくは、遺伝子は、ｍＲＮＡ前駆体、即ち、ｐｒｅ−ｍＲＮＡである。
マイオスタチン遺伝子の転写物であるｐｒｅ−ｍＲＮＡは、３つのエクソンと２つのイントロンを、（５’末端）第１番目のエクソン−第１番目のイントロン−第２番目のエクソン−第２番目のイントロン−第３番目のエクソン（３’末端）の順で含む。ｐｒｅ−ｍＲＮＡは、スプライシングを受けて成熟ｍＲＮＡを生成する。ヒト及びマウスの野生型マイオスタチン遺伝子の塩基配列は公知である（それぞれ、ＲｅｆＳｅｑ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００５２５９（ヒト）；及びＲｅｆＳｅｑ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿０１０８３４（マウス））。野生型マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの塩基配列は次の通りである。
第２番目のエクソン（ヒト）  ：配列番号３２３；及び
第２番目のエクソン（マウス）：配列番号３２４
【００１５】
前記（ｃ−１）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３７に示す。
前記（ｃ−２）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３８に示す。
前記（ｃ−３）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３９に示す。
前記（ｃ−４）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４０に示す。
前記（ｃ−５）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４１に示す。
前記（ｃ−６）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４２に示す。
【００１６】
前記（ｄ−１）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４３に示す。
前記（ｄ−２）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４４に示す。
前記（ｄ−３）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４５に示す。
前記（ｄ−４）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４６に示す。
前記（ｄ−５）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４７に示す。
前記（ｄ−６）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３６４に示す。
前記（ｄ−７）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４８に示す。
【００１７】
前記（ｅ−１）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３４９に示す。
前記（ｅ−２）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５０に示す。
前記（ｅ−３）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５１に示す。
前記（ｅ−４）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５２に示す。
前記（ｅ−５）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５３に示す。
前記（ｅ−６）のユニットオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５４に示す。
【００１８】
前記（ｆ−１）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５５に示す。
前記（ｆ−２）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５６に示す。
前記（ｆ−３）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５７に示す。
前記（ｆ−４）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５８に示す。
前記（ｆ−５）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２２５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３５９に示す。
前記（ｆ−６）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３６５に示す。
前記（ｆ−７）のユニットオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３６６に示す。
本発明のアンチセンスオリゴマーＡは、マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングにより、マイオスタチン遺伝子でコードされるタンパク質を、マイオスタチンの機能を有しない変異タンパク質に改変することを目的として作製されたものである。「マイオスタチンの機能」とは、例えば、骨格筋量を負に制御する機能または活性である。本発明のアンチセンスオリゴマーＡのエクソンスキッピングの対象となるマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンには、野生型だけではなく、変異型も含まれる。
変異型のマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン又はその一部は、具体的には、以下の（ａ）又は（ｂ）に記載のポリヌクレオチドである。
【００１９】
（ａ）配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３３７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５４（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３４３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３４６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５９（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３６６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３３７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５４（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３４３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３４６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５９（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３６６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列に対して、９０％以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド
【００２０】
本明細書中、「ポリヌクレオチド」とは、ＤＮＡ又はＲＮＡを意味する。
本明細書中、「相補的な塩基配列」とは、対象となる塩基配列とワトソン・クリック対を形成する塩基配列に限定されるものではなく、揺らぎ塩基対（Ｗｏｂｂｌｅ  ｂａｓｅ  ｐａｉｒ）を形成する塩基配列も含む。ここで、ワトソン・クリック対とは、アデニン−チミン、アデニン−ウラシル及びグアニン−シトシン間に水素結合が形成される塩基対を意味し、揺らぎ塩基対とは、グアニン−ウラシル、イノシン−ウラシル、イノシン−アデニン及びイノシン−シトシン間に水素結合が形成される塩基対を意味する。また、「相補的な塩基配列」とは、対象となる塩基配列と１００％の相補性を有していなくてもよく、例えば、対象となる塩基配列に対して、１〜３個、１〜２個又は１個の非相補的塩基が含まれていてもよい。
【００２１】
本明細書中、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、例えば、配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３３７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５４（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３４３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３４６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５９（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３６６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドの全部又は一部をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法又はサザンハイブリダイゼーション法などを用いることにより得られるアンチセンスオリゴマーをいう。ハイブリダイゼーションの方法としては、例えば、“Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ＆  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２０１２”、“Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９８７−１９９７”などに記載されている方法を利用することができる。
本明細書中、「ストリンジェントな条件」とは、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件及び高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」とは、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。また、「中ストリンジェントな条件」とは、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃又は５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」とは、例えば、（１）５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃、（２）０．２  ｘ  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６０℃、（３）０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６２℃、（４）０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃、又は（５）０．１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃の条件であるが、これに限定されるものではない。これらの条件において、温度を上げるほど高い配列同一性を有するアンチセンスオリゴマーが効率的に得られることが期待できる。ただし、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度、プローブ濃度、プローブの長さ、イオン強度、時間、塩濃度等の複数の要素が考えられ、当業者であればこれらの要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
なお、ハイブリダイゼーションに市販のキットを用いる場合は、例えばＡｌｋｐｈｏｓ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いることができる。この場合は、キットに添付のプロトコルにしたがい、標識したプローブとのインキュベーションを一晩行った後、メンブレンを５５℃の条件下で０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳを含む１次洗浄バッファーで洗浄後、ハイブリダイズしたアンチセンスオリゴマーを検出することができる。あるいは、配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３３７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５４（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３４３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３４６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５９（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３６６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と相補的な塩基配列の全部又は一部に基づいてプローブを作製する際に、市販の試薬（例えば、ＰＣＲラベリングミックス（ロシュ・ダイアグノスティクス社）等）を用いて該プローブをジゴキシゲニン（ＤＩＧ）ラベルした場合には、ＤＩＧ核酸検出キット（ロシュ・ダイアグノスティクス社）を用いてハイブリダイゼーションを検出することができる。
上記以外にハイブリダイズ可能なアンチセンスオリゴマーとしては、ＢＬＡＳＴの相同性検索ソフトウェアにより、デフォルトのパラメーターを用いて計算したときに、配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３３７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０４番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−４番目〜第２５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１２番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５１（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２８番目〜第１４２番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６９番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２０９番目〜第２２８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５４（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３４３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第６５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１３５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１２１番目〜第１５５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３４６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１５１番目〜第２１０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１９６番目〜第２３３番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２６６番目〜第２９５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３４８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３２６番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１番目〜第１８番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１６番目〜第１３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５７（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１３０番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５８（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６０番目〜第２０６番目のヌクレオチド配列）、配列番号３５９（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２１１番目〜第２５５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６５（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第２７１番目〜第２８２番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３６６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３４１番目〜第３６５番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．１％以上、９９．２％以上、９９．３％以上、９９．４％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、又は９９．９％以上の同一性を有するポリヌクレオチドをあげることができる。
なお、塩基配列の同一性は、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７２２６４−２２６８，１９９０；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：  ５８７３，１９９３）を用いて決定できる。ＢＬＡＳＴを用いる場合は、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。
【００２２】
前記（c）〜（ｆ）における各ユニットオリゴマー（以下、単に「ユニット」と称する場合もある）のサイズは、７〜１５塩基長であり、好ましくは８〜１５塩基長、９〜１５塩基長、１０〜１５塩基長、１０〜１４塩基長、１０〜１３塩基長又は１１〜１３塩基長である。上記（c）〜（ｆ）における各ユニットのサイズは同じであってもよく、異なっていてもよい。
【００２３】
前記（c）のアンチセンスオリゴマーにおいて、前記（c−１）〜（c−６）からなる群より選択される２つのユニットのいずれが５’末端側に配置されてもよい。
【００２４】
前記（d）のアンチセンスオリゴマーにおいて、前記（d−１）〜（ｄ−７）からなる群より選択される２つのユニットのいずれが５’末端側に配置されてもよい。
【００２５】
前記（ｅ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、前記（ｅ−１）〜（ｅ−６）からなる群より選択される２つのユニットのいずれが５’末端側に配置されてもよい。
【００２６】
前記（ｆ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、前記（ｆ−１）〜（ｆ−７）からなる群より選択される２つのユニットのいずれが５’末端側に配置されてもよい。
【００２７】
ここで、「連結」とは、２つのユニットが直結していることを意味する。すなわち、２つのユニットが連結している場合、５’末端側に位置するユニットの３’末端と、３’末端側に位置するユニットの５’末端とがリン酸結合又は以下の基を形成することを意味する。
【化３】
2017047741.tif 000005
（式中、Ｘは、−ＯＨ、−ＣＨ２Ｒ１、−Ｏ−ＣＨ２Ｒ１、−Ｓ−ＣＨ２Ｒ１、−ＮＲ２Ｒ３又はＦを表し；
Ｒ１は、Ｈ、アルキルを表し；
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、又は、アリールを表し；
Ｙ１は、０、Ｓ、ＣＨ２又はＮＲ１を表し；
Ｙ２は、０、Ｓ又はＮＲ１を表し；
Ｚは、０又はＳを表す。）
【００２８】
本発明の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＡにおいて、前記（ｃ）のアンチセンスオリゴマーが、、配列番号１０３（ＮＭＳ−４８）、配列番号116（ＮＭＳ−８９）、配列番号117（ＮＭＳ−９０）、配列番号120（ＮＭＳ−９３）、配列番号128（ＮＭＳ−１０１）、配列番号131（ＮＭＳ−１０４）、配列番号136（ＮＭＳ−１１３）、配列番号137（ＮＭＳ−１１７）、配列番号140（ＮＭＳ−１２３）、配列番号145（ＮＭＳ−１３６）、配列番号146（ＮＭＳ−１３９）、配列番号147（ＮＭＳ−１４０）、配列番号148（ＮＭＳ−１４１）、配列番号149（ＮＭＳ−１４２）、配列番号152（ＮＭＳ−１４５）、配列番号155（ＮＭＳ−１４８）、配列番号156（ＮＭＳ−１４９）、配列番号157（ＮＭＳ−１５０）、配列番号159（ＮＭＳ−１５２）、配列番号162（ＮＭＳ−１５６）、配列番号163（ＮＭＳ−１５７）、配列番号165（ＮＭＳ−１６２）、配列番号166（ＮＭＳ−１６３）、配列番号167（ＮＭＳ−１６４）、配列番号168（ＮＭＳ−１６６）、配列番号169（ＮＭＳ−１６７）、配列番号170（ＮＭＳ−１６８）、配列番号171（ＮＭＳ−１６９）、配列番号176（ＮＭＳ−１７４）、配列番号177（ＮＭＳ−１７５）、配列番号178（ＮＭＳ−１７６）、配列番号179（ＮＭＳ−１７７）、配列番号180（ＮＭＳ−１７８）、配列番号183（ＮＭＳ−１８１）、配列番号187（ＮＭＳ−１８５）、配列番号189（ＮＭＳ−１８８）、配列番号190（ＮＭＳ−１８９）、配列番号191（ＮＭＳ−１９０）、配列番号192（ＮＭＳ−１９１）、配列番号193（ＮＭＳ−１９２）、配列番号196（ＮＭＳ−１９５）、配列番号199（ＮＭＳ−１９８）、配列番号200（ＮＭＳ−１９９）、配列番号201（ＮＭＳ−２００）、配列番号203（ＮＭＳ−２０２）、配列番号204（ＮＭＳ−２０３）、配列番号206（ＮＭＳ−２０６）、配列番号208（ＮＭＳ−２０８）、配列番号212（ＮＭＳ−２１２）、配列番号213（ＮＭＳ−２１３）、配列番号214（ＮＭＳ−２１４）、配列番号215（ＮＭＳ−２１５）、配列番号217（ＮＭＳ−２１７）、配列番号225（ＮＭＳ−２２５）、配列番号226（ＮＭＳ−２２８）、配列番号228（ＮＭＳ−２３０）、配列番号229（ＮＭＳ−２３１）、配列番号231（ＮＭＳ−２３３）、配列番号232（ＮＭＳ−２３４）、配列番号233（ＮＭＳ−２３５）、配列番号236（ＮＭＳ−２４０）、配列番号237（ＮＭＳ−２４１）、配列番号240（ＮＭＳ−２４４）、配列番号243（ＮＭＳ−２４７）、配列番号244（ＮＭＳ−２４８）、配列番号245（ＮＭＳ−２４９）、配列番号246（ＮＭＳ−２５０）、配列番号247（ＮＭＳ−２５１）、配列番号248（ＮＭＳ−２５２）、配列番号252（ＮＭＳ−２５６）、配列番号261（ＮＭＳ−２７２）、配列番号273（ＮＭＳ−２８４）、配列番号274（ＮＭＳ−２８５）、配列番号275（ＮＭＳ−２８６）および配列番号277（ＮＭＳ−２９７）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
【００２９】
本発明の別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＡにおいて、前記（ｄ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号９５（ＮＭＳ−３８）、配列番号９６（ＮＭＳ−３９）、配列番号１０７（ＮＭＳ−６６）、配列番号223（ＮＭＳ−２２３）、配列番号234（ＮＭＳ−２３８）、配列番号235（ＮＭＳ−２３９）、配列番号242（ＮＭＳ−２４６）、配列番号249（ＮＭＳ−２５３）、配列番号250（ＮＭＳ−２５４）、配列番号251（ＮＭＳ−２５５）、配列番号257（ＮＭＳ−２６８）、配列番号（ＮＭＳ−２８０）、配列番号（ＮＭＳ−２８１）、配列番号（ＮＭＳ−２８２）、配列番号（ＮＭＳ−２８８）、配列番号（ＮＭＳ−２８９）、配列番号（ＮＭＳ−２９０）、配列番号（ＮＭＳ−２９２）、配列番号（ＮＭＳ−２９３）、配列番号（ＮＭＳ−２９４）、配列番号（ＮＭＳ−２９５）、配列番号（ＮＭＳ−２９８）、配列番号（ＮＭＳ−２９９）、配列番号（ＮＭＳ−３００）、配列番号（ＮＭＳ−３０２）および配列番号（ＮＭＳ−３０３）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
【００３０】
本発明の特に好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＡにおいて、前記（ｃ）または（ｅ）のアンチセンスオリゴマーが、配列番号171（ＮＭＳ−１６９）、配列番号192（ＮＭＳ−１９１）、配列番号245（ＮＭＳ−２４９）、および配列番号231（ＮＭＳ−２３３）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
【００３１】
「マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングを可能にする」とは、ヒトマイオスタチン遺伝子の転写物（例えば、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ）に本発明のアンチセンスオリゴマーＡが結合することにより、該転写物がスプライシングを受けた際に、第２番目のエクソンの全部または一部を欠損し、マイオスタチンの機能を有しない変異マイオスタチンをコードする成熟ｍＲＮＡが形成されることを意味する。
本発明のアンチセンスオリゴマーＡは、マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングを可能にする限り、ターゲット配列に対して１００％相補的な塩基配列を有していなくてもよい。例えば、本発明のオリゴマーＢには、ターゲット配列に対して、１〜３個、１〜２個又は１個の非相補的塩基が含まれていてもよい。
ここで、前記「結合」は、本発明のアンチセンスオリゴマーＡとマイオスタチン遺伝子の転写物とを混合した場合に、生理的条件下で両者がハイブリダイズして二本鎖を形成することを意味する。上記「生理的条件下」とは、生体内と類似のｐＨ、塩組成、温度に調節された条件を意味する。例えば、２５〜４０℃、好ましくは３７℃、ｐＨ５〜８、好ましくは、ｐＨ７．４であって、塩化ナトリウム濃度が１５０ｍＭの条件が挙げられる。
【００３２】
スキッピング効率については、後述の通りである。
【００３３】
本発明のアンチセンスオリゴマーＡは、オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー又はペプチド核酸オリゴマーであってよい。オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー又はペプチド核酸オリゴマーについては、後述の通りである。
【００３４】
１．２．本発明のアンチセンスオリゴマーＢ
本発明のアンチセンスオリゴマーＢは、以下の（Ａ）〜（Ｈ）からなる群より選択されるいずれか１つのアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物である。
（Ａ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｂ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｃ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｄ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｅ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｆ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｇ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー；及び
（Ｈ）マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
【００３５】
より好ましい態様の本発明のアンチセンスオリゴマーＢは、以下の（Ｉ）〜（Ｌ）からなる群より選択されるいずれか１つのアンチセンスオリゴマー又はその医薬的に許容可能な塩若しくは水和物である。
（Ｉ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
（Ｊ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマーであって、前記１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列の３’末端の塩基が前記第２番目のエクソンの５’末端から第１４０番目の塩基であるアンチセンスオリゴマー
（Ｋ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー；及び
（Ｌ）ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列から選択される連続する１４〜３０塩基長のヌクレオチド配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンスオリゴマー
【００３６】
本発明のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、「遺伝子」には、ゲノム遺伝子以外に、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体及びｍＲＮＡも含まれる。好ましくは、遺伝子は、ｍＲＮＡ前駆体、即ち、ｐｒｅ−ｍＲＮＡである。
マイオスタチン遺伝子の転写物であるｐｒｅ−ｍＲＮＡは、３つのエクソンと２つのイントロンを、（５’末端）第１番目のエクソン−第１番目のイントロン−第２番目のエクソン−第２番目のイントロン−第３番目のエクソン（３’末端）の順で含む。ｐｒｅ−ｍＲＮＡは、スプライシングを受けて成熟ｍＲＮＡを生成する。ヒト及びマウスの野生型マイオスタチン遺伝子の塩基配列は公知である（ＲｅｆＳｅｑ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００５２５９（ヒト）；及びＲｅｆＳｅｑ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿０１０８３４（マウス））。野生型マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの塩基配列は次の通りである。
【００３７】
第２番目のエクソン（ヒト）  ：配列番号３２３；及び
第２番目のエクソン（マウス）：配列番号３２４；
【００３８】
第２番目のエクソン（ヒト）の５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列を、配列番号３２５に示す。
第２番目のエクソン（マウス）の５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列を、配列番号３２６に示す。
【００３９】
前記（Ａ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３２７に示す。
前記（Ｂ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３２８に示す。
前記（Ｃ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３２９に示す。
前記（Ｄ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３０に示す。
前記（Ｅ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３１に示す。
前記（Ｆ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３２に示す。
前記（Ｇ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３３に示す。
前記（Ｈ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３４に示す。
前記（Ｉ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３５に示す。
前記（Ｊ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３３６に示す。
前記（Ｋ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３６２に示す。
前記（Ｌ）のアンチセンスオリゴマーにおいて、「ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列」を、配列番号３６３に示す。
【００４０】
本発明のアンチセンスオリゴマーＢは、マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングにより、マイオスタチン遺伝子でコードされるタンパク質を、マイオスタチンの機能を有しない変異タンパク質に改変することを目的として作製されたものである。「マイオスタチンの機能」とは、例えば、骨格筋量を負に制御する機能または活性である。本発明のアンチセンスオリゴマーＢのエクソンスキッピングの対象となるマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンには、野生型だけではなく、変異型も含まれる。
変異型のマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン又はその一部は、具体的には、以下の（ａ）又は（ｂ）に記載のポリヌクレオチドである。
（ａ）配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３２７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３６（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３３１（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３２（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列）配列番号３３３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３３４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３２７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３６（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３３１（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３２（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列）配列番号３３３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３３４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列に対して、９０％以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド
本明細書中、「ポリヌクレオチド」とは、ＤＮＡ又はＲＮＡを意味する。
本明細書中、「相補的な塩基配列」とは、対象となる塩基配列とワトソン・クリック対を形成する塩基配列に限定されるものではなく、揺らぎ塩基対（Ｗｏｂｂｌｅ  ｂａｓｅ  ｐａｉｒ）を形成する塩基配列も含む。ここで、ワトソン・クリック対とは、アデニン−チミン、アデニン−ウラシル及びグアニン−シトシン間に水素結合が形成される塩基対を意味し、揺らぎ塩基対とは、グアニン−ウラシル、イノシン−ウラシル、イノシン−アデニン及びイノシン−シトシン間に水素結合が形成される塩基対を意味する。また、「相補的な塩基配列」とは、対象となる塩基配列と１００％の相補性を有していなくてもよく、例えば、対象となる塩基配列に対して、１〜３個、１〜２個又は１個の非相補的塩基が含まれていてもよい。
【００４１】
本明細書中、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、例えば、配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３２７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３６（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３３１（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３２（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列）配列番号３３３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３３４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドの全部又は一部をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法又はサザンハイブリダイゼーション法などを用いることにより得られるアンチセンスオリゴマーをいう。ハイブリダイゼーションの方法としては、例えば、“Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ＆  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２０１２”、“Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９８７−１９９７”などに記載されている方法を利用することができる。
本明細書中、「ストリンジェントな条件」とは、低ストリンジェントな条件、中ストリンジェントな条件及び高ストリンジェントな条件のいずれでもよい。「低ストリンジェントな条件」とは、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、３２℃の条件である。また、「中ストリンジェントな条件」とは、例えば、５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、４２℃又は５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０％ホルムアミド、４２℃の条件である。「高ストリンジェントな条件」とは、例えば、（１）５×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、５０℃、（２）０．２  ｘ  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６０℃、（３）０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６２℃、（４）０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃、又は（５）０．１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃の条件であるが、これに限定されるものではない。これらの条件において、温度を上げるほど高い配列同一性を有するアンチセンスオリゴマーが効率的に得られることが期待できる。ただし、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度、プローブ濃度、プローブの長さ、イオン強度、時間、塩濃度等の複数の要素が考えられ、当業者であればこれらの要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
なお、ハイブリダイゼーションに市販のキットを用いる場合は、例えばＡｌｋｐｈｏｓ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いることができる。この場合は、キットに添付のプロトコルにしたがい、標識したプローブとのインキュベーションを一晩行った後、メンブレンを５５℃の条件下で０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳを含む１次洗浄バッファーで洗浄後、ハイブリダイズしたアンチセンスオリゴマーを検出することができる。あるいは、配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３２７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３６（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３３１（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３２（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列）配列番号３３３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３３４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と相補的な塩基配列の全部又は一部に基づいてプローブを作製する際に、市販の試薬（例えば、ＰＣＲラベリングミックス（ロシュ・ダイアグノスティクス社）等）を用いて該プローブをジゴキシゲニン（ＤＩＧ）ラベルした場合には、ＤＩＧ核酸検出キット（ロシュ・ダイアグノスティクス社）を用いてハイブリダイゼーションを検出することができる。
【００４２】
上記以外にハイブリダイズ可能なアンチセンスオリゴマーとしては、ＢＬＡＳＴの相同性検索ソフトウェアにより、デフォルトのパラメーターを用いて計算したときに、配列番号３２３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３２７（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２８（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第９１番目〜第１４５番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２９（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３０（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３５（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３６（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１４０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６２（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１４６番目〜第１８０番目のヌクレオチド配列）、配列番号３６３（ヒトマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）、配列番号３２４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソン）、配列番号３２６（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜３’末端のヌクレオチド配列）、配列番号３３１（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第−１０番目〜第３１番目のヌクレオチド配列）、配列番号３３２（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１１１番目〜第１６２番目のヌクレオチド配列）配列番号３３３（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第１６６番目〜第１９５番目のヌクレオチド配列）及び配列番号３３４（マウスマイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンの５’末端から第３３１番目〜第３７４番目のヌクレオチド配列）からなる群より選択されるいずれかの塩基配列と９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、９９．１％以上、９９．２％以上、９９．３％以上、９９．４％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、又は９９．９％以上の同一性を有するポリヌクレオチドをあげることができる。
なお、塩基配列の同一性は、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７２２６４−２２６８，１９９０；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：  ５８７３，１９９３）を用いて決定できる。ＢＬＡＳＴを用いる場合は、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。
【００４３】
「マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングを可能にする」とは、ヒトマイオスタチン遺伝子の転写物（例えば、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ）に本発明のアンチセンスオリゴマーＢが結合することにより、該転写物がスプライシングを受けた際に、第２番目のエクソンの全部または一部を欠損し、マイオスタチンの機能を有しない変異マイオスタチンをコードする成熟ｍＲＮＡが形成されることを意味する。
本発明のアンチセンスオリゴマーＢは、マイオスタチン遺伝子の第２番目のエクソンのスキッピングを可能にする限り、ターゲット配列に対して１００％相補的な塩基配列を有していなくてもよい。例えば、本発明のアンチセンスオリゴマーＢには、ターゲット配列に対して、１〜３個、１〜２個又は１個の非相補的塩基が含まれていてもよい。
ここで、前記「結合」は、本発明のアンチセンスオリゴマーＢとマイオスタチン遺伝子の転写物とを混合した場合に、生理的条件下で両者がハイブリダイズして二本鎖を形成することを意味する。上記「生理的条件下」とは、生体内と類似のｐＨ、塩組成、温度に調節された条件を意味する。例えば、２５〜４０℃、好ましくは３７℃、ｐＨ５〜８、好ましくは、ｐＨ７．４であって、塩化ナトリウム濃度が１５０ｍＭの条件が挙げられる。
【００４４】
本発明の別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ａ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号１３（ＮＭＳ−１７）、配列番号７６（ＮＭＳ−１３８）、配列番号６８（ＮＭＳ−１２０）、配列番号７５（ＮＭＳ−１３７）、配列番号５１（ＮＭＳ−７６）、配列番号５２（ＮＭＳ−７９）、配列番号５４（ＮＭＳ−８１）、配列番号５５（ＮＭＳ−８２）、配列番号５６（ＮＭＳ−８３）、配列番号５３（ＮＭＳ−８０）、配列番号３３（ＮＭＳ−４９）、配列番号６３（ＮＭＳ−１１４）、配列番号６９（ＮＭＳ−１２４）、配列番号７０（ＮＭＳ−１２５）、配列番号６１（ＮＭＳ−１１０）、配列番号３１（ＮＭＳ−４６）、配列番号３４（ＮＭＳ−５０）、配列番号５０（ＮＭＳ−７５）、配列番号４５（ＮＭＳ−６７）及び配列番号６４（ＮＭＳ−１１５）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
本発明の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｂ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号３（ＮＭＳ−６）、配列番号６６（ＮＭＳ−１１８）、配列番号６７（ＮＭＳ−１１９）、配列番号２８（ＮＭＳ−３３）、配列番号７２（ＮＭＳ−１２７）、配列番号１６（ＮＭＳ−２０）、配列番号８２（ＮＭＳ−１８７）及び配列番号２５（ＮＭＳ−３０）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
【００４５】
本発明の別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｃ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号１２（ＮＭＳ−１６）の塩基配列からなる。
【００４６】
本発明の別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｄ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号４（ＮＭＳ−７）の塩基配列からなる。
【００４７】
本発明のさらに別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｅ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号９０（ＮＭＳ−５１）の塩基配列からなる。
【００４８】
本発明のさらに別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｆ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号９１（ＮＭＳ−５２）、配列番号２８（ＮＭＳ−３３）及び配列番号２５（ＮＭＳ−３０）、配列番号４１（ＮＭＳ−６１）、配列番号２４（ＮＭＳ−２９）、配列番号４２（ＮＭＳ−６２）、配列番号４３（ＮＭＳ−６３）、配列番号１１（ＮＭＳ−１５）、配列番号６７（ＮＭＳ−１１９）、配列番号８０（ＮＭＳ−１６１）及び配列番号８２（ＮＭＳ−１８７）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
【００４９】
本発明のさらに別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｇ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号7（ＮＭＳ−１０）の塩基配列からなる。
【００５０】
本発明のさらに別の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーＢにおいて、前記（Ｈ）のアンチセンスオリゴマーは、配列番号４（ＮＭＳ−７）、配列番号９（ＮＭＳ−１２）、配列番号１０（ＮＭＳ−１４）及び配列番号１４（ＮＭＳ−１８）からなる群より選択されるいずれか１つの塩基配列からなる。
【００５１】
スキッピング効率については、後述の通りである。
【００５２】
本発明のアンチセンスオリゴマーＢは、オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー又はペプチド核酸オリゴマーであってよい。オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー又はペプチド核酸オリゴマーについては、後述の通りである。
【００５３】
１．３．スキッピング効率
マイオスタチン遺伝子のエクソンスキッピングが生じたか否かは、マイオスタチン発現細胞（例えば、ヒト横紋筋肉腫細胞）に本発明のアンチセンスオリゴマーを導入し、前記マイオスタチン発現細胞のｔｏｔａｌ  ＲＮＡから、マイオスタチン遺伝子のｍＲＮＡのエクソンの周辺領域をＲＴ−ＰＣＲ増幅し、該ＰＣＲ増幅産物に対してｎｅｓｔｅｄ  ＰＣＲ又はシークエンス解析を行うことにより確認することができる。
スキッピング効率は、マイオスタチン遺伝子のｍＲＮＡを被検細胞から回収し、該ｍＲＮＡのうち、エクソンスキップしたバンドのポリヌクレオチド量「Ａ」と、エクソンスキップしなかったバンドのポリヌクレオチド量「Ｂ」を測定し、これら「Ａ」及び「Ｂ」の測定値に基づき、以下の式に従って計算することができる。
スキッピング効率（％）＝{Ａ／（Ａ＋Ｂ）}ｘ１００
本発明の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーは、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、又は９０％以上の効率でエクソンスキッピングする。
スキッピング効率の計算については、国際公開公報第２０１２／０２９９８６号を参照することができる。
【００５４】
１．４．オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー又はペプチド核酸オリゴマー
本発明のアンチセンスオリゴマーとしては、例えば、１４〜３０塩基の長さを有する、オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー、又はペプチド核酸（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ：ＰＮＡ）オリゴマーを挙げることができる。１５〜２９塩基、１６〜２８塩基、１７〜２７塩基、又は１８〜２６塩基の長さが好ましく、モルホリノオリゴマーが好ましい。
前記オリゴヌクレオチド（以下、「本発明のオリゴヌクレオチド」という）は、ヌクレオチドを構成単位とする本発明のアンチセンスオリゴマーであり、かかるヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド又は修飾ヌクレオチドのいずれであってもよい。
修飾ヌクレオチドとは、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを構成する核酸塩基、糖部分、及びリン酸結合部分の全部又は一部が修飾されているものをいう。
本発明において、核酸塩基としては、例えば、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、チミン、ウラシル又はそれらの修飾塩基を挙げることができる。かかる修飾塩基としては、例えば、シュードウラシル、３−メチルウラシル，ジヒドロウラシル、５−アルキルシトシン（例えば、５−メチルシトシン）、５−アルキルウラシル（例えば、５−エチルウラシル）、５−ハロウラシル（５−ブロモウラシル）、６−アザピリミジン、６−アルキルピリミジン（６−メチルウラシル）、２−チオウラシル、４−チオウラシル、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）  ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、１−メチルアデニン、１−メチルヒポキサンチン、２，２−ジメチルグアニン、３−メチルシトシン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メチルカルボニルメチルウラシル、５−メチルオキシウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸、２−チオシトシン、プリン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、イソグアニン、インドール、イミダゾール、キサンチン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
糖部分の修飾としては、例えば、リボースの２’位の修飾及び糖のその他の部分の修飾を挙げることができる。リボースの２’位の修飾としては、例えば、リボースの２’位の−ＯＨ基をＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、Ｎ３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉに置換する修飾を挙げることができる。ここで、Ｒはアルキル又はアリールを表す。Ｒ’はアルキレンを表す。
糖のその他の部分の修飾としては、例えば、リボース又はデオキシリボースの４’位のＯをＳに置換したもの、糖の  ２’  位と  ４’  位を架橋したもの、例えば、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ）又はＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−Ｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｂｒｉｄｇｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
リン酸結合部分の修飾としては、例えば、ホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、ボラノフォスフェート結合（Ｅｎｙａ  ｅｔ  ａｌ：  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ，２００８，  １８，  ９１５４−９１６０  ）に置換する修飾を挙げることができる（例えば、特許再公表公報第２００６／１２９５９４号及び第２００６／０３８６０８号を参照）。
本発明において、アルキルとしては、直鎖状または分枝鎖状の炭素数１〜６のアルキルが好ましい。具体的には、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。当該アルキルは置換されていてもよく、かかる置換基としては、例えば、ハロゲン、アルコキシ、シアノ、ニトロを挙げることができ、これらが１〜３個置換されていてもよい。
本発明において、シクロアルキルとしては、炭素数５〜１２のシクロアルキルが好ましい。具体的には、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシルが挙げられる。
本発明において、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を挙げることができる。
アルコキシとしては、直鎖状または分枝鎖状の炭素数１〜６のアルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ等を挙げることができる。とりわけ、炭素数１〜３のアルコキシが好ましい。
本発明において、アリールとしては、炭素数６〜１０のアリールが好ましい。具体的には、例えば、フェニル、α−ナフチル、β−ナフチルを挙げることができる。とりわけフェニルが好ましい。当該アリールは置換されていてもよく、かかる置換基としては、例えば、アルキル、ハロゲン、アルコキシ、シアノ、ニトロを挙げることができ、これらが１〜３個置換されていてもよい。
本発明において、アルキレンとしては、直鎖状または分枝鎖状の炭素数１〜６のアルキレンが好ましい。具体的には、例えば、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、２−（エチル）トリメチレン、１−（メチル）テトラメチレンを挙げることができる。
本発明において、アシルとしては、直鎖状若しくは分枝鎖状のアルカノイル、又はアロイルを挙げることができる。アルカノイルとしては、例えば、ホルミル、アセチル、２−メチルアセチル、２，２−ジメチルアセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、２，２−ジメチルプロピオニル、ヘキサノイル等が挙げられる。アロイルとしては、例えば、ベンゾイル、トルオイル、ナフトイルを挙げることができる。かかるアロイルは置換可能な位置において置換されていてもよく、アルキルで置換されていてもよい。
本発明のオリゴヌクレオチドは、好ましくは、リボースの２’位の−ＯＨ基がメトキシで置換され、リン酸結合部分がホスホロチオエート結合である、下記一般式で表される基を構成単位とする本発明のアンチセンスオリゴマーである。
【化４】
2017047741.tif 000006
（式中、Ｂａｓｅは、核酸塩基を表す。）
【００５５】
本発明のオリゴヌクレオチドは、各種自動合成装置（例えば、ＦＯＣＵＳ（Ａａｐｐｔｅｃ）、ＡＫＴＡ  ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ  ｐｌｕｓ  １０／１００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ））を用いて容易に合成することが可能であり、あるいは、第三者機関（例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ社、Ｔａｋａｒａ社、又は日本バイオサービス社）等に委託して作製することもできる。
【００５６】
本発明のモルホリノオリゴマーは、下記一般式で表される基を構成単位とする本発明のアンチセンスオリゴマーである。
【化５】
2017047741.tif 000007
（式中、Ｂａｓｅは、前記と同義であり；
Ｗは、以下のいずれかの式で表わされる基を表す。
【化６】
2017047741.tif 000008
（式中、Ｘは、−ＣＨ２Ｒ１、−Ｏ−ＣＨ２Ｒ１、−Ｓ−ＣＨ２Ｒ１、−ＮＲ２Ｒ３又はＦを表し；
Ｒ１は、Ｈ、アルキルを表し；
Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、又は、アリールを表し；
Ｙ１は、０、Ｓ、ＣＨ２又はＮＲ１を表し；
Ｙ２は、０、Ｓ又はＮＲ１を表し；
Ｚは、０又はＳを表す。））
モルホリノオリゴマーは、好ましくは、以下の式で表わされる基を構成単位とするオリゴマー（ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（以下、「ＰＭＯ」という））である。
【化７】
2017047741.tif 000009
（式中、Ｂａｓｅ、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同義である。）
モルホリノオリゴマーは、例えば、国際公開公報第１９９１／００９０３３号、又は国際公開公報第２００９／０６４４７１号に従って製造することができる。特に、ＰＭＯは、国際公開公報第２００９／０６４４７１号に記載の方法に従って製造するか、又は以下に示す方法に従って製造することができる。
【００５７】
［ＰＭＯの製法］
ＰＭＯの１つの態様として、例えば、次の一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、ＰＭＯ（Ｉ）という。）を挙げることができる。
【化８】
2017047741.tif 000010
［式中、各Ｂａｓｅ、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同義であり；
ｎは、１〜９９の範囲内にある任意の整数であり、好ましくは、１３〜２９  、１４〜２８又は１５〜２７、１６〜２６、１７〜２５の範囲内にある任意の整数である。］
ＰＭＯ（Ｉ）は、公知の方法に従い製造することができるが、例えば、下記工程の操作を実施することにより製造することができる。
下記工程に使用されている化合物及び試薬は、ＰＭＯの製造に一般的に使用されているものであれば特に限定されない。
また、下記のすべての工程は、液相法又は固相法（マニュアル又は市販の固相自動合成機を用いる）で実施することができる。固相法でＰＭＯを製造する場合、操作手順の簡便化及び合成の正確性の点から自動合成機を用いる方法が望ましい。
【００５８】
（１）工程Ａ：
次の一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩ）という。）に酸を作用させることによって、次の一般式（ＩＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩＩ）という。）を製造する工程。
【化９】
2017047741.tif 000011
［式中、ｎ、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同義であり；
各ＢＰは，独立して、保護されていてもよい核酸塩基を表し；
Ｔは、トリチル基、モノメトキシトリチル基、又はジメトキシトリチル基を表し；
Ｌは、水素、アシル、又は次の一般式（ＩＶ）で表される基（以下、基（ＩＶ）という。）を表す。］
【化１０】
2017047741.tif 000012
【００５９】
ＢＰに係る「核酸塩基」としては、Ｂａｓｅと同じ「核酸塩基」を挙げることができる。但し、ＢＰに係る核酸塩基のアミノ基又は水酸基は保護されていてもよい。
かかるアミノ基の保護基としては、核酸の保護基として使用されるものであれば特に制限されず、具体的には、例えば、ベンゾイル、４−メトキシベンゾイル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、フェニルアセチル、フェノキシアセチル、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチル、４−イソプロピルフェノキシアセチル、（ジメチルアミノ）メチレンを挙げることができる。水酸基の保護基としては、例えば、２−シアノエチル、４−ニトロフェネチル、フェニルスルホニルエチル、メチルスルホニルエチル、トリメチルシリルエチル、置換可能な任意の位置で１〜５個の電子吸引性基で置換されていてもよいフェニル、ジフェニルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、ジエチルカルバモイル、メチルフェニルカルバモイル、１−ピロリジニルカルバモイル、モルホリノカルバモイル、４−（ｔｅｒｔ−ブチルカルボキシ）ベンジル、４−［（ジメチルアミノ）カルボキシ］ベンジル、４−（フェニルカルボキシ）ベンジルを挙げることができる（例えば、国際公開公報第２００９／０６４４７１号公報参照）。
「固相担体」としては、核酸の固相反応に使用しうる担体であれば特に制限されないが、例えば、（ｉ）モルホリノ核酸誘導体の合成に使用しうる試薬（例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、テトラゾール、Ｎ−メチルイミダゾール、ピリジン、無水酢酸、ルチジン、トリフルオロ酢酸）にほとんど溶解せず、（ｉｉ）モルホリノ核酸誘導体の合成に使用しうる試薬に対して化学的に安定であり、（ｉｉｉ）化学修飾ができ、（ｉｖ）望ましいモルホリノ核酸誘導体の装填ができ、（ｖ）処理中にかかる高圧に耐える十分な強度をもち、（ｖｉ）一定の粒径範囲と分布であるものが望ましい。具体的には、膨潤性ポリスチレン（例えば、アミノメチルポリスチレン樹脂  １％ジビニルベンゼン架橋（２００〜４００メッシュ）（２．４〜３．０ｍｍｏｌ／ｇ）（東京化成社製）、Ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ  Ｒｅｓｉｎ・ＨＣｌ［ジビニルベンゼン１％，１００〜２００メッシュ］（ペプチド研究所社製））、非膨潤性ポリスチレン（例えば、Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｕｐｐｏｒｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製））、ＰＥＧ鎖結合型ポリスチレン（例えば、ＮＨ２−ＰＥＧ  ｒｅｓｉｎ（渡辺化学社製）、ＴｅｎｔａＧｅｌ  ｒｅｓｉｎ）、定孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ；ＣＰＧ）（例えば、ＣＰＧ社製）、オキサリル化−定孔ガラス（例えば、Ａｌｕｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．１９，１５２７（１９９１）を参照）、ＴｅｎｔａＧｅｌ支持体−アミノポリエチレングリコール誘導体化支持体（例えば、Ｗｒｉｇｈｔら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３４，３３７３（１９９３）を参照）、Ｐｏｒｏｓ−ポリスチレン／ジビニルベンゼンのコポリマーを挙げることができる。
「リンカー」としては、通常核酸やモルホリノ核酸誘導体を連結するために使用される公知のものを用いることができるが、例えば、３−アミノプロピル、スクシニル、２，２’−ジエタノールスルホニル、ロングチェーンアルキルアミノ（ＬＣＡＡ）を挙げることができる。
本工程は、化合物（ＩＩ）に酸を作用させることにより実施することができる。
本工程に使用しうる「酸」としては、例えば、トリフルオロ酢酸、ジクロロ酢酸又はトリクロロ酢酸を挙げることができる。酸の使用量としては、例えば、化合物（ＩＩ）１モルに対して０．１モル当量〜１０００モル当量の範囲内が適当であり、好ましくは１モル当量〜１００モル当量の範囲内である。
また、前記酸と一緒に、有機アミンを使用することができる。有機アミンとしては、特に限定されるものではないが、例えば、トリエチルアミンを挙げることができる。有機アミンの使用量は、例えば、酸１モルに対して、０．０１モル当量〜１０モル当量の範囲内が適当であり、好ましくは、０．１モル当量〜２モル当量の範囲内である。
本工程において酸と有機アミンとの塩又は混合物を使用する場合には、例えば、トリフルオロ酢酸とトリエチルアミンの塩又は混合物を挙げることができ、より具体的には、トリフルオロ酢酸２当量に対してトリエチルアミン１当量を混合したものを挙げることができる。
本工程に使用しうる酸は、０．１％〜３０％の範囲内の濃度になるように適当な溶媒で希釈して使用することもできる。溶媒としては、反応に関与しなければ特に限定されないが、例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、アルコール類（エタノール、イソプロパノール、トリフルオロエタノールなど）、水又はこれらの混合物を挙げることができる。
上記反応における反応温度は、例えば、１０℃〜５０℃の範囲内が好ましく、より好ましくは、２０℃〜４０℃の範囲内であり、さらに好ましくは、２５℃〜３５℃の範囲内である。
反応時間は、使用する酸の種類、反応温度によって異なるが、通常０．１分〜２４時間の範囲内が適当である。好ましくは、１分〜５時間の範囲内である。
また、本工程が終了した後、必要に応じて、系中に存在する酸を中和するために塩基を添加することができる。「塩基」としては、特に限定されないが、例えば、ジイソプロピルアミンが挙げられる。塩基は、０．１％（ｖ／ｖ）〜３０％（ｖ／ｖ）の範囲内の濃度になるように適当な溶媒で希釈して使用することもできる。
本工程に用いる溶媒としては、反応に関与しなければ特に限定されないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、アルコール類（エタノール、イソプロパノール、トリフルオロエタノールなど）、水又はこれらの混合物を挙げることができる。反応温度は、例えば、１０℃〜５０℃の範囲内が好ましく、より好ましくは、２０℃〜４０℃の範囲内であり、さらに好ましくは、２５℃〜３５℃の範囲内である。
反応時間は、使用する塩基の種類、反応温度によって異なるが、通常０．１分〜２４時間の範囲内が適当であり、好ましくは、１分〜５時間の範囲内である。
【００６０】
なお、化合物（ＩＩ）において、ｎ＝１であって、Ｌが基（ＩＶ）である、次の一般式（ＩＩａ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩａ）という。）は、以下の方法に従って製造することができる。
【化１１】
2017047741.tif 000013
［式中、ＢＰ、Ｔ、リンカー、固相担体は、前記と同義である。］
【００６１】
工程１：
次の一般式（Ｖ）で表される化合物にアシル化剤を作用させることによって、次の一般式（ＶＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＶＩ）という。）を製造する工程。
【化１２】
2017047741.tif 000014
［式中、ＢＰ、Ｔ、リンカーは、前記と同義であり；
Ｒ４は、水酸基、ハロゲン、カルボキシル基、又は、アミノを表す。］
本工程は、化合物（Ｖ）を出発原料として、公知のリンカーの導入反応により実施することができる。
特に、次の一般式（ＶＩａ）で表される化合物は、化合物（Ｖ）と無水コハク酸とを用いてエステル化反応として知られた方法を実施することにより製造することができる。
【化１３】
2017047741.tif 000015
［式中、ＢＰ、Ｔは、前記と同義である。］
【００６２】
工程２：
化合物（ＶＩ）に縮合剤等を作用させることによって、固相担体と反応させ、化合物（ＩＩａ）を製造する工程。
【化１４】
2017047741.tif 000016
［式中、ＢＰ、Ｒ４、Ｔ、リンカー、固相担体は、前記と同義である。］
本工程は、化合物（ＶＩ）と固相担体とを用いて縮合反応として知られた方法により製造することができる。
化合物（ＩＩ）において、ｎ＝２〜９９（好ましくは１３〜２９  、１４〜２８、１５〜２７、１６〜２６又は１７〜２５の範囲内にある任意の整数である）であって、Ｌが基（ＩＶ）である、次の一般式（ＩＩａ２）で表される化合物は、化合物（ＩＩａ）を出発原料とし、本明細書に記載のＰＭＯの製法にかかる工程Ａ及び工程Ｂを所望の回数繰り返し実施することにより製造することができる。
【化１５】
2017047741.tif 000017
［式中、ＢＰ、Ｒ２、Ｒ３、Ｔ、リンカー、固相担体は、前記と同義であり；
ｎ’は、１〜９８（特定の態様ではｎ’は、１〜２８、１〜２７、１〜２６、１〜２５、１〜２４）を表す。］
【００６３】
（２）工程Ｂ：
化合物（ＩＩＩ）に塩基存在下にモルホリノモノマー化合物を作用させることによって、次の一般式（ＶＩＩ）で表される化合物（以下、化合物（ＶＩＩ）という。）を製造する工程。
【化１６】
2017047741.tif 000018
［式中、各ＢＰ、Ｌ、ｎ、Ｒ２、Ｒ３、Ｔは、前記と同義である。］
本工程は、化合物（ＩＩＩ）に塩基存在下にモルホリノモノマー化合物を作用させることにより実施することができる。
モルホリノモノマー化合物としては、例えば、次の一般式（ＶＩＩＩ）で表される化合物を挙げることができる。
【化１７】
2017047741.tif 000019
［式中、ＢＰ、Ｒ２、Ｒ３、Ｔは前記と同義である。］
本工程に使用しうる「塩基」としては、例えば、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、又は、Ｎ−エチルモルホリンを挙げることができる。塩基の使用量としては、例えば、化合物（ＩＩＩ）１モルに対して、１モル当量〜１０００モル当量の範囲内が適当であり、好ましくは１０モル当量〜１００モル当量の範囲内である。
本工程に使用しうるモルホリノモノマー化合物および塩基は、０．１％〜３０％の濃度になるように適当な溶媒で希釈して使用することもできる。溶媒としては、反応に関与しなければ特に限定されないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリドン、Ｎ−メチルピペリドン、ＤＭＦ、ジクロロメタン、アセトニトリル、テロラヒドロフラン、又はこれらの混合物を挙げることができる。
反応温度は、例えば、０℃〜１００℃の範囲内が好ましく、より好ましくは、１０℃〜５０℃の範囲内である。
反応時間は、使用する塩基の種類、反応温度によって異なるが、通常１分〜４８時間の範囲内が適当であり、好ましくは、３０分〜２４時間の範囲内である。
さらに本工程の終了後、必要に応じて、アシル化剤を添加することができる。「アシル化剤」としては、例えば、無水酢酸、酢酸クロライド、フェノキシ酢酸無水物を挙げることができる。アシル化剤は、例えば、０．１％〜３０％の範囲内の濃度になるように適当な溶媒で希釈して使用することもできる。溶媒としては、反応に関与しなければ特に限定されないが、例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、アルコール類（エタノール、イソプロパノール、トリフルオロエタノールなど）、水又はこれらの混合物を挙げることができる。
また、必要であれば、アシル化剤と一緒に、例えば、ピリジン、ルチジン、コリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−エチルモルホリン等の塩基を使用することができる。アシル化剤の使用量としては、０．１モル当量〜１００００モル当量の範囲内が好ましく、１モル当量〜１０００モル当量の範囲内がより好ましい。塩基の使用量としては、例えば、アシル化剤１モルに対して、０．１モル当量〜１００モル当量の範囲内が適当であり、好ましくは１モル当量〜１０モル当量の範囲内である。
本反応の反応温度は、１０℃〜５０℃の範囲内が好ましく、より好ましくは、１０℃〜５０℃の範囲内が好ましく、より好ましくは、２０℃〜４０℃の範囲内であり、さらに好ましくは、２５℃〜３５℃の範囲内である。反応時間は、例えば、使用するアシル化剤の種類、反応温度によって異なるが、通常０．１分〜２４時間の範囲内が適当であり、好ましくは、１分から５時間の範囲内である。
【００６４】
（３）工程Ｃ：
工程Ｂにおいて製造される化合物（ＶＩＩ）において、脱保護剤を用いて保護基を脱離し、一般式（ＩＸ）で表される化合物を製造する工程。
【化１８】
2017047741.tif 000020
［式中、Ｂａｓｅ、ＢＰ、Ｌ、ｎ、Ｒ２、Ｒ３、Ｔは、前記と同義である。］
本工程は、化合物（ＶＩＩ）に脱保護剤を作用させることにより実施することができる。
「脱保護剤」としては、例えば、濃アンモニア水、メチルアミンを挙げることができる。本工程に使用しうる「脱保護剤」は、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリドン、Ｎ−メチルピペリドン又はこれらの混合溶媒で希釈して使用することもできる。なかでも、エタノールが好ましい。脱保護剤の使用量としては、例えば、化合物（ＶＩＩ）１モルに対して、例えば、１モル当量〜１０００００モル当量の範囲内が適当であり、好ましくは１０モル当量〜１０００モル当量の範囲内である。
反応温度は、例えば、１５℃〜７５℃の範囲内が適当であり、好ましくは４０℃〜７０℃の範囲内であり、より好ましくは５０℃〜６０℃の範囲内である。脱保護反応時間は、化合物（ＶＩＩ）の種類、反応温度等によって異なるが、１０分〜３０時間の範囲内が適当であり、好ましくは３０分〜２４時間の範囲内であり、より好ましくは５時間〜２０時間の範囲内である。
【００６５】
（４）工程Ｄ：
工程Ｃにおいて製造される化合物（ＩＸ）に酸を作用させることによって、ＰＭＯ（Ｉ）を製造する工程。
【化１９】
2017047741.tif 000021
［式中、Ｂａｓｅ、ｎ、Ｒ２、Ｒ３、Ｔは、前記と同義である。］
本工程は、化合物（ＩＸ）に酸を加えることによって実施することができる。
本工程において使用しうる「酸」としては、例えば、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、酢酸、リン酸及び塩酸等を挙げることができる。酸の使用量としては、例えば、溶液のｐＨが０．１〜４．０の範囲内になるように使用するのが適当であり、より好ましくは１．０〜３．０の範囲内になるように使用する。溶媒としては、反応に関与しなければ特に限定されないが、例えば、アセトニトリル、水、又はこれらの混合溶媒を挙げることができる。
反応温度は、１０℃〜５０℃の範囲内が好ましく、より好ましくは、２０℃〜４０℃の範囲内であり、さらに好ましくは、２５℃〜３５℃の範囲内である。脱保護反応時間は、化合物（ＩＸ）の種類、反応温度等によって異なるが、０．１分〜５時間の範囲内が適当であり、好ましくは１分〜１時間の範囲内であり、より好ましくは１分〜３０分の範囲内である。
ＰＭＯ（Ｉ）は、本工程で得られた反応混合物から通常の分離精製手段、例えば、抽出、濃縮、中和、濾過、遠心分離、再結晶、Ｃ８からＣ１８の逆相カラムクロマトグラフィー、陽イオン交換カラムクロマトグラフィー、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、透析、限界ろ過などの手段を単独若しくは組み合わせて用いることにより得ることができ、所望のＰＭＯ（Ｉ）を単離精製することができる（例えば、国際公開公報ＷＯ１９９１／０９０３３を参照）。
逆相クロマトグラフィーを用いてＰＭＯ（Ｉ）を精製する場合には、溶出溶媒として、例えば２０ｍＭのトリエチルアミン／酢酸緩衝液とアセトニトリルの混合溶液を使用することができる。
また、イオン交換クロマトグラフィーを用いてＰＭＯ（Ｉ）を精製する場合には、例えば、１Ｍの食塩水と１０ｍＭの水酸化ナトリウム水溶液の混合溶液を使用することができる。
ペプチド核酸は、下記一般式で表される基を構成単位とする本発明のアンチセンスオリゴマーである。
【化２０】
2017047741.tif 000022
（式中、Ｂａｓｅは、前記と同義である。）
【００６６】
ペプチド核酸は、例えば、以下の文献に従って製造することができる。
１）Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４，１４９７（１９９１）
２）Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ，Ｊａｃｓ．，１１４，１８９５（１９９２）
３）Ｋ．Ｌ．Ｄｕｅｈｏｌｍ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｃ．Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｌ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｈ．Ｆ．Ｈａｎｓｅｎ，Ｔ．Ｖｕｌｐｉｕｓ，Ｋ．Ｈ．Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ，Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５９，５７６７（１９９４）
４）Ｌ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｒ．Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，Ｂ．Ｇｉｌｄｅａ，Ｋ．Ｈ．Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｈ．Ｆ．Ｈａｎｓｅｎ，Ｔ．Ｋｏｃｈ，Ｍ．Ｅｇｈｏｌｍ，Ｏ．Ｂｕｃｈａｒｄｔ，Ｐ．Ｅ．Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ．Ｃｏｕｌｌ，Ｒ．Ｈ．Ｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．，１，１７５（１９９５）
５）Ｔ．Ｋｏｃｈ，Ｈ．Ｆ．Ｈａｎｓｅｎ，Ｐ．Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｔ．Ｌａｒｓｅｎ，Ｈ．Ｇ．Ｂａｔｚ，Ｋ．Ｏｔｔｅｓｏｎ，Ｈ．Ｏｒｕｍ，Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．，４９，８０（１９９７）
【００６７】
また、本発明のアンチセンスオリゴマーは、５’末端が、下記化学式（１）〜（３）のいずれかの基であってもよい。好ましくは（３）−ＯＨである。
【化２１】
2017047741.tif 000023
【００６８】
２．医薬組成物
本発明の好ましい態様のアンチセンスオリゴマーは、エクソンスキッピング又はｍＲＮＡの分解を誘導することにより、マイオスタチンをｍＲＮＡレベルで阻害することを可能にする。従って、本発明の好ましい態様のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に投与することにより、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患を予防又は治療することができる。
本発明のいくつかの態様は、本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を有効成分として含む医薬組成物（以下、「本発明の医薬組成物」という）を提供する。本発明の医薬組成物は、好ましくは、肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病などの代謝障害、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患治療用である。筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患は、例えば、筋ジストロフィー（デュシェンヌ型筋ジストロフィー、福山型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー等）、先天性ミオパチー、封入体筋炎等の筋原性の筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、球脊髄性筋萎縮症等の神経原性の筋萎縮症、脳卒中による廃用症候群等の廃用性の筋萎縮症、癌悪液質、敗血症に伴う筋萎縮等の筋消耗性疾患、老化に伴う加齢性骨格筋減少症（加齢性サルコペニア）を含む各種サルコペニア等であり、好ましくは、筋ジストロフィーである。
本発明の別のいくつかの態様は、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療を必要とする対象に、治療的有効量の本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を投与することを含む、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の予防又は治療方法を提供する。当該治療方法において、本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物は、本発明の医薬組成物の形態で対象に投与してよい。
本発明において、「対象」は、ヒトまたは非ヒト温血動物、例えばトリ、およびウシ、サル、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ブタ、イヌ、ウサギ、ヒツジ、ウマなどの非ヒト哺乳動物である。好ましくは、「対象」は、ヒトである。
本発明のさらに別のいくつかの態様は、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療用医薬組成物の製造における、本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物の使用を提供する。
本発明のさらに別のいくつかの態様は、筋萎縮性疾患または筋消耗性疾患の治療に使用するための本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を提供する。
本発明の医薬組成物に含まれる本発明のアンチセンスオリゴマーの医薬的に許容可能な塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩などの金属塩；アンモニウム塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機アミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩；酢酸塩、リンゴ酸塩、フマール酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩などが挙げられる。これらの塩は、公知の方法で製造することができる。
本発明の医薬組成物に含まれる本発明のアンチセンスオリゴマーは、その水和物の形態にあってもよい。そのような水和物は、公知の方法で製造することができる。
本発明の医薬組成物の投与形態は、医薬的に許容可能な投与形態であれば特に制限されず、治療方法に応じて選択することができるが、筋組織への送達容易性の観点から、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、組織内投与、経皮投与等が好ましい。また、本発明の組成物が取り得る剤型としては、特に制限されないが、例えば、各種の注射剤、経口剤、点滴剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤等を挙げることができる。
本発明の医薬組成物は、該オリゴマーの筋組織への送達を促進する担体を含むことができる。このような担体は、医薬的に許容可能なものであれば特に制限されず、その例として、カチオン性リポソーム、カチオン性ポリマー等のカチオン性担体、またはウイルスエンベロープを利用した担体を挙げることができる。カチオン性リポソームとしては、例えば、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル−１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロールとリン脂質とを必須構成成分として形成されるリポソーム（以下、「リポソームＡ」という）、オリゴフェクトアミン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、リポフェクチン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、リポフェクトアミン（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＤＭＲＩＥ−Ｃ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＧｅｎｅＳｉｌｅｎｃｅｒ（登録商標）（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）、ＴｒａｎｓＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）（ＱＩＡＧＥＮ社製）、ＴｒａｎｓＩＴ  ＴＫＯ（登録商標）（Ｍｉｒｕｓ社製）、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  ＩＩ（Ｌｏｎｚａ）を挙げることができる。それらの中で、リポソームＡが好ましい。カチオン性ポリマーとしては、例えば、ＪｅｔＳＩ（登録商標）（Ｑｂｉｏｇｅｎｅ社製）、Ｊｅｔ−ＰＥＩ（登録商標）（ポリエチレンイミン、Ｑｂｉｏｇｅｎｅ社製）を挙げることができる。ウイルスエンベロープを利用した担体としては、例えば、ＧｅｎｏｍｅＯｎｅ（登録商標）（ＨＶＪ−Ｅリポソーム、石原産業社製）を挙げることができる。あるいは、特許２９２４１７９号に記載の医薬デバイス、特許再公表公報第２００６／１２９５９４号及び特許再公表公報第２００８／０９６６９０号に記載のカチオン性担体を用いることもできる。
詳細については、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，７３７，３２３号、国際公開公報第９６／１４０５７号、”Ｎｅｗ  ＲＲＣ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０）ｐａｇｅｓ  ３３−１０４”等を参照することができる。
本発明の医薬組成物に含まれる本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物の濃度は、担体の種類等によって異なるが、０．１ｎＭ〜１００μＭの範囲内が適当であり、１００ｎＭ〜１０μＭの範囲内が好ましい。また、本発明の医薬組成物に含まれる本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物と担体との重量比（担体／本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物）は、該オリゴマーの性質及び該担体の種類等によって異なるが、０．１〜１００の範囲内が適当であり、０．１〜１０の範囲内が好ましい。
本発明の医薬組成物には、本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物と上述した担体以外に、任意に医薬的に許容可能な添加剤を配合することができる。かかる添加剤として、例えば、乳化補助剤（例えば、炭素数６〜２２の脂肪酸やその医薬的に許容可能な塩、アルブミン、デキストラン）、安定化剤（例えば、コレステロール、ホスファチジン酸）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、グルコース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース）、ｐＨ調整剤（例えば、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン）を挙げることができる。これらを一種又は二種以上使用することができる。本発明の医薬組成物中の当該添加剤の含有量は、９０重量％以下が適当であり、７０重量％以下が好ましく、５０重量％以下がより好ましい。
本発明の医薬組成物は、担体の分散液に本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を加え、適当に攪拌することにより調製することができる。また、添加剤は、本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物の添加前でも添加後でも適当な工程で添加することができる。本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物を添加させる際に用い得る水性溶媒としては、医薬的に許容可能なものであれば特に制限されず、例えば、注射用水、注射用蒸留水、生理食塩水等の電解質液、ブドウ糖液、マルトース液等の糖液を挙げることができる。また、かかる場合のｐＨ及び温度等の条件は、当業者が適宜選択することができる。
本発明の医薬組成物は、例えば、液剤やその凍結乾燥製剤とすることができる。当該凍結乾燥製剤は、常法により、液剤の形態を有している本発明の医薬組成物を凍結乾燥処理することにより調製することができる。例えば、液剤の形態を有している本発明の医薬組成物を適当な滅菌を行った後、所定量をバイアル瓶に分注し、約−４０〜−２０℃の条件で予備凍結を２時間程度行い、約０〜１０℃で減圧下に一次乾燥を行い、次いで、約１５〜２５℃で減圧下に二次乾燥して凍結乾燥することができる。そして、一般的にはバイアル内部を窒素ガスで置換し、打栓して本発明の医薬組成物の凍結乾燥製剤を得ることができる。
本発明の医薬組成物の凍結乾燥製剤は、一般には任意の適当な溶液（再溶解液）の添加によって再溶解し使用することができる。このような再溶解液としては、注射用水、生理食塩水、その他一般輸液を挙げることができる。この再溶解液の液量は、用途等によって異なり特に制限されないが、凍結乾燥前の液量の０．５〜２倍量、又は５００ｍＬ以下が適当である。
本発明の医薬組成物を投与する際の用量としては、含有される本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物の種類、剤形、年齢や体重等の対象の状態、投与経路、疾患の性質と程度を考慮した上で調製することが望ましいが、対象がヒトの場合、成人に対して本発明のアンチセンスオリゴマー、その医薬的に許容可能な塩又は水和物の量として、１日当たり０．１ｍｇ〜１０ｇ／ヒトの範囲内が、好ましくは１ｍｇ〜１ｇ／ヒトの範囲内が一般的である。この数値は標的とする疾患の種類、投与形態、標的分子によっても異なる場合がある。従って、場合によってはこれ以下でも十分であるし、また逆にこれ以上の用量を必要とするときもある。また１日１回から数回の投与又は１日から数日間の間隔で投与することができる。
本発明の医薬組成物の別の態様として、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現し得るベクターと上述した担体とを含む医薬組成物を挙げることができる。かかる発現ベクターは、複数の本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現し得るものであってもよい。そのような医薬組成物には、前記と同様に、医薬的に許容可能な添加剤を添加することができる。当該医薬組成物中に含まれる発現ベクターの濃度は、担体の種類等によって異なるが、０．１ｎＭ〜１００μＭの範囲内が適当であり、１００ｎＭ〜１０μＭの範囲内が好ましい。当該医薬組成物中に含まれる発現ベクターと担体との重量比（担体／発現ベクター）は、発現ベクターの性質、担体の種類等によって異なるが、０．１〜１００の範囲内が適当であり、０．１〜１０の範囲内が好ましい。また、当該医薬組成物中に含まれる担体の含有量は、前記と同様であり、その調製方法等に関しても、前記と同様である。
【００６９】
尚、本明細書において引用した全ての文献、及び公開公報、特許公報、その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。
以下に、実施例を掲げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は実施例に示される範囲に限定されるものではない。
【実施例】
【００７０】
以下に、実施例及び試験例を掲げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は実施例に示される範囲に限定されるものではない。【００７１】
［参考例1］
アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（5-メチル−2，4−ジオキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸
工程1：4−｛［（2S，6R）−6−（5-メチル−2，4−ジオキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸の製造
アルゴン雰囲気下、1−［（2R，6S）−6−（ヒドロキシメチル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］−5−メチルピリミジン−2，4−ジオン41.11gと4−ジメチルアミノピリジン（4−DMAP）15.58gをジクロロメタン850mLに懸濁し、無水コハク酸12.76gを加え、室温で3.5時間撹拌した。反応液にジクロロメタンと１Mのリン酸二水素ナトリウム水溶液を用いて抽出操作を行った。得られた有機層を１Mのリン酸二水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄した。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。得られた固体にジクロロメタン600mLを加えて結晶化し、ろ過を行った。さらにジクロロメタン300mLを加えて5分間撹拌した後、ろ過および終夜減圧乾燥を行うことで、目的物50.2gを得た。【００７２】
工程2：アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（5-メチル−2，4−ジオキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸の製造
4−｛［（2S，6R）−6−（5-メチル−2，4−ジオキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸50.2gをピリジン（脱水）600mLに溶解し、4−DMAP12.4g、1‐（3−ジメチルアミノプロピル）−3−エチルカルボジイミド塩酸塩77.6gを加えた。次いで、アミノポリスチレン樹脂：Aminomethyl resin (渡辺化学工業株式会社製、A00673、200-400mesh、1mmol/g、1％DVB)40.5g、トリエチルアミン69.6mLを加え、室温で4日間振とうした。反応後、樹脂をろ取した。得られた樹脂をピリジン、メタノール、ジクロロメタンの順で洗浄し、減圧乾燥した。得られた樹脂にテトラヒドロフラン（脱水）500mL、無水酢酸104mL、2，6−ルチジン128mLを加え、室温で4時間振とうした。樹脂をろ取し、ピリジン、メタノール、ジクロロメタンの順で洗浄し、減圧乾燥し、59.0gの目的物を得た。
当該目的物のローディング量は、公知の方法を用いて、樹脂1g当たりのトリチルのモル量を409nmにおけるUV吸光度を測定することにより決定した。樹脂のローディング量は、467.83μmol/gであった。【００７３】
UV測定条件
機器：U-2910（日立製作所）
溶媒：メタンスルホン酸
波長：409 nm
ε値：45000【００７４】
［参考例2］
アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（4−ベンズアミド−2−オキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸
参考例1と同様の方法に従って、標記化合物を製造した。但し、参考例1の工程1で用いた1−［（2R，6S）−6−（ヒドロキシメチル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］−5−メチルピリミジン−2，4−ジオンの代わりに、本工程では、N−｛1−［（2R，6S）−6−（ヒドロキシメチル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］−2−オキソ−1，2−ジヒドロピリミジン−4−イル｝ベンズアミドを使用した。
当該目的物のローディング量は、公知の方法を用いて、樹脂1g当たりのトリチルのモル量を409nmにおけるUV吸光度を測定することにより決定した。樹脂のローディング量は、460.28μmol/gであった。【００７５】
［参考例3］
アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（6−ベンズアミドプリン−9−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸
参考例1と同様の方法に従って、標記化合物を製造した。但し、参考例1の工程1で用いた1−［（2R，6S）−6−（ヒドロキシメチル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］−5−メチルピリミジン−2，4−ジオンの代わりに、本工程では、N-｛9-[(2R,6S)-6-(ヒドロキシメチル)-4-トリチルモルフォリン-2-イル]プリン-6-イル｝ベンズアミドを使用した。
当該目的物のローディング量は、公知の方法を用いて、樹脂1g当たりのトリチルのモル量を409nmにおけるUV吸光度を測定することにより決定した。樹脂のローディング量は、425.13μmol/gであった。【００７６】
［参考例4］
アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛｛（2S，6R）−6−｛6−（2−シアノエトキシ）−2−［（2−フェノキシアセチル）アミノ]プリン−9−イル}−4−トリチルモルホリン−2−イル｝メトキシ｝−4−オキソブタン酸
参考例1と同様の方法に従って、標記化合物を製造した。但し、参考例1の工程1で用いた1−［（2R，6S）−6−（ヒドロキシメチル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］−5−メチルピリミジン−2，4−ジオンの代わりに、本工程では、N−｛6−（2−シアノエトキシ）−9−[（2R，6S）−6−（ヒドロキシメチル）−4−トリチルモルホリン−2−イル]プリン−2−イル｝−2−フェノキシアセトアミドを使用した。
当該目的物のローディング量は、公知の方法を用いて、樹脂1g当たりのトリチルのモル量を409nmにおけるUV吸光度を測定することにより決定した。樹脂のローディング量は、341.09μmol/gであった。【００７７】
以下の実施例1の記載に従い、またはPCT/JP2015/57180に記載の方法に従い核酸合成機（ＡＫＴＡ  Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ  １０  ｐｌｕｓ）を使用して、表１〜３のPMO No.１〜１９１、１９８、１９９、２０１〜３１６、３２１〜３２３、３２５〜３２７、３３３（５′末端は基（３）である）を合成した。【００７８】
【表１−１】
2017047741.tif 000024
【表１−２】
2017047741.tif 000025
【表１−３】
2017047741.tif 000026
【表１−４】
2017047741.tif 000027
【表１−５】
2017047741.tif 000028
【表１−６】
2017047741.tif 000029
【表１−７】
2017047741.tif 000030
【表１−８】
2017047741.tif 000031
【表２−１】
2017047741.tif 000032
【表２−２】
2017047741.tif 000033
【表２−３】
2017047741.tif 000034
【表３−１】
2017047741.tif 000035
【表３−２】
2017047741.tif 000036
【００７９】
［実施例1］
5’末端塩基に対応する、アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（5-メチル−2,4−ジオキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸（参考例1）、もしくは、アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（4−ベンズアミド−2−オキソピリミジン−1−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸（参考例2）、もしくは、アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛［（2S，6R）−6−（6−ベンズアミドプリン−9−イル）−4−トリチルモルホリン−2−イル］メトキシ｝−4−オキソブタン酸（参考例3）、もしくは、アミノポリスチレン樹脂に担持された4−｛｛（2S，6R）−6−｛6−（2−シアノエトキシ）−2−［（2−フェノキシアセチル）アミノ]プリン−9−イル}−4−トリチルモルホリン−2−イル｝メトキシ｝−4−オキソブタン酸（参考例4）0.1gをフィルター付き反応容器に充填し、ペプチド合成機（FOCUS）を使用して、下記合成サイクルを開始した。表１〜４に記載の各化合物の塩基配列になるよう、各カップリングサイクルにおいて所望のモルホリノモノマー化合物を添加した(下記表４を参照)。【００８０】
【表４】
2017047741.tif 000037
【００８１】
なお、デブロック溶液としては、トリフルオロ酢酸（2当量）とトリエチルアミン（1当量）の混合物を3％（w/v）になるように、１％（v/v）のエタノールと10％（v/v）の2，2，2−トリフルオロエタノールを含有するジクロロメタン溶液で溶解したものを用いた。中和溶液としては、N，N−ジイソプロピルエチルアミンを5％（v/v）になるように、25％（v/v）の2−プロパノールを含有するジクロロメタン溶液で溶解したものを用いた。アクチベーター液としては、20％（v/v）N，N−ジイソプロピルエチルアミンを含有する1，3−ジメチル−2−イミダゾリジノン溶液を用いた。モノマー溶液としては、モルホリノモノマー化合物を0.20Mになるように、テトラヒドロフランで溶解したものを用いた。キャッピング溶液としては、ジクロロメタンに対して10％（v/v）の無水酢酸と15％（v/v）の2，6−ルチジンを溶解したものを使用した。【００８２】
上記で合成したPMOが担持されたアミノポリスチレン樹脂を反応容器から回収し、2時間以上30℃で減圧乾燥した。乾燥したアミノポリスチレン樹脂に担持されたPMOを反応容器に入れ、28％アンモニア水−エタノール（1/3）5mLを加え、55℃で16時間静置した。アミノポリスチレン樹脂をろ別し、水−アセトニトリル（1/1）3mLで洗浄した。得られたろ液にエタノール3mLとジエチルエーテル35mLを加え、遠心分離した後、デカンテーションで上澄液を除去し、残渣を減圧乾燥した。得られた残渣を20mMの酢酸アンモニウム水溶液とアセトニトリルの混合溶媒（4/1）10mLに溶解し、逆相HPLCにて精製した。使用した条件は、以下の表５に示す通りである。【００８３】
【表５】
2017047741.tif 000038
【００８４】
各フラクションを分析して、目的物を回収した。得られた溶液に0.1Mの塩酸水溶液4mLを加え、2時間静置した。反応後、1Mの水酸化ナトリウム水溶液0.4mLを加えて中和し、メンブレンフィルター（0.22μm）でろ過した。
得られた目的物を含有する水溶液に1Mの水酸化ナトリウム水溶液0.4mLを加えてアルカリ性とし、陰イオン交換樹脂カラムで精製した。使用した条件は下記表６に示す通りである。【００８５】
【表６】
2017047741.tif 000039
【００８６】
各フラクションを分析（HPLC）し、目的物を水溶液として得た。得られた水溶液に0.1Mのリン酸緩衝液（pH 6.0）を添加し中和した。次いで、下記表７に示す条件で逆相HPLCにて脱塩した。【００８７】
【表７】
2017047741.tif 000040
【００８８】
目的物を回収し、減圧濃縮した。得られた残渣を水に溶かし、凍結乾燥して、白色綿状固体として目的化合物を得た。ESI-TOF-MSの計算値、測定値を表１〜３に示す。【００８９】
[試験例1]
in vitroアッセイ
RD細胞（ヒト横紋筋肉腫細胞株）3×105個に対して、表１又は３のアンチセンスオリゴマー1、3、および10μMをAmaxa Cell Line Nucleofector Kit Lを用いてNucleofector II（Lonza）により導入した。プログラムはT-030を用いた。
導入後、細胞を、10％ウシ胎児血清（FCS）（インビトロジェン社製）を含むDulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)培地（シグマ社製、以下同じ） 2mL中、37℃、5％CO2条件下で三晩培養した。
細胞をPBS（ニッスイ社製、以下同じ）で1回洗浄した後、1%の2-メルカプトエタノール（ナカライテスク社製）を含むBuffer RLT（キアゲン社製）を350 μL細胞に添加し、数分間室温に放置して細胞を溶解させ、QIAshredder ホモジナイザー（キアゲン社製）に回収した。20,400 ×gで2分間遠心し、ホモジネートを作製した。RNeasy Mini Kit （キアゲン社製）に添付のプロトコールに従ってtotal RNAを抽出した。抽出したtotal RNAの濃度はNanoDrop ND-1000（エル・エム・エス社製）を用いて測定した。【００９０】
抽出したtotal RNA  10 ngを鋳型に、QIAGEN OneStep RT-PCR Kit（キアゲン社製）を用いてOne-Step RT-PCRを行った。キットに添付のプロトコールに従って、反応液を調製した。サーマルサイクラーはTaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch（タカラバイオ社製）を用いた。RT-PCRのプログラムは、以下の通りである。
50℃、30分間：逆転写反応
95℃、15分間：ポリメラーゼ活性化、逆転写酵素不活性化
[94℃、30秒間；61℃、30秒間；72 ℃、1分間]x 27サイクル：PCR 
72℃、7分間：最終伸長反応【００９１】
RT-PCRに使用したフォワードプライマーとリバースプライマーの塩基配列は以下の通りである。
フォワードプライマー：5’-TTCGTCTGGAAACAGCTCCT-3’  （配列番号３６０）
リバースプライマー：5’-AGAGGGTAACGACAGCATCG-3’  （配列番号３６１）
上記PCRの反応産物1 μLをBioanalyzer（アジレント社製）を用いて解析した。
エクソン2がスキップしたPCRアンプリコンのポリヌクレオチド量「A」と、野生型のPCRアンプリコンのポリヌクレオチド量「B」を測定した。これら「A」及び「B」の測定値より、以下の式に従いスキッピング効率を求めた。
スキッピング効率（％）= A /（ A ＋ B ）× 100【００９２】
実験結果
結果を図１〜１４に示す。
図１〜１４から、本発明のアンチセンスオリゴマーはエクソン２を有効にスキッピングさせることが判明した。【００９３】
[試験例２]
In vitroアッセイ
試験例１と同様の方法で実験を行った。但し、RD細胞（ヒト横紋筋肉腫細胞株）3×105個に対して、PMO No.100(NMS-191)、 PMO No. 139(NMS-233)、 PMO No. 79(NMS-169)、 PMO No. 114(NMS-206)の本発明オリゴマー単独、またはそれぞれを構成している2本のユニットオリゴマーのそれぞれ単独あるいは2本のユニットオリゴマーのカクテルを、Amaxa Cell Line Nucleofector Kit Lを用いてNucleofector II（Lonza）により導入した。パルスプログラムはT-030を用いた。導入した配列の組み合わせは以下の通りである。
【表８−１】
2017047741.tif 000041
【表８−２】
2017047741.tif 000042
【００９４】
実験結果
結果を図１５に示す。本実験により、エクソン2内の異なる部位を標的とする2本のアンチセンス核酸の混合物（PMO No. 290(NMS-258)及びPMO No. 289 (NMS-257)、PMO No. 290(NMS-258)及びPMO No. 288(NMS-237)、PMO No. 287(NMS-236)及びPMO No. 293 (NMS-265)、PMO No. 287 (NMS-236)及びPMO No. 288 (NMS-237)、PMO No. 291(NMS-263)及びPMO No. 292 (NMS-264)と比較して、それぞれを連結したPMO No. 100(NMS-191)、PMO No. 139(NMS-233)、PMO No. 79(NMS-169)、PMO No. 114(NMS-206)の本発明のオリゴマーは高い効率でエクソン2をスキッピングさせることが判明した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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