(57)【要約】【課題】従来のものに比べて安定性に優れたコラーゲン産生促進剤の提供。【解決手段】栗（Castanea crenata）皮の抽出物を有効成分として含有するコラーゲン産生促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
栗（Castanea crenata）皮の抽出物を有効成分として含有するコラーゲン産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、栗皮の抽出物を有効成分として含有するコラーゲン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは、体内に最も多く存在するタンパク質であり、特に、人体が有する全コラーゲン量の４０％が皮膚に、２０％が骨や軟骨に存在している。またコラーゲンを産生する主な細胞としては、皮膚に存在する線維芽細胞、軟骨に存在する軟骨細胞、骨を形成する骨芽細胞などが挙げられる。コラーゲンの中でも、皮膚や骨に多く存在するＩ型コラーゲンは、線維芽細胞によって前駆体のＩ型プロコラーゲンが生合成され、細胞外へ分泌された後、酵素によってＩ型プロコラーゲンの両末端が切断され、コラーゲン線維として重合することで生成する。
しかし加齢や紫外線によって、このＩ型コラーゲンを産生する線維芽細胞の機能が低下すると、コラーゲン量が減少する。このコラーゲン量の減少は、皮膚のシワ、肌のたるみ、肌のキメ、骨や軟骨の骨粗鬆症、歯周炎、角膜障害の原因の一つとなっている。
【０００３】
コラーゲン産生促進効果があると言われている代表的な成分として、Ｌ−アスコルビン酸（非特許文献１）やレチノール（非特許文献２）が挙げられる。
しかしながら、これらの成分は酸化や分解され易いという問題がある。そのため、安定性に優れたコラーゲン産生促進剤の提供が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００４−１７５７３４号公報
【特許文献２】特開平７−１９６５２６号公報
【特許文献３】特開２０１２−１７１９０９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Archives of Dermatology, 1987, Vol. 123, No. 12, p.1684-1686
【非特許文献２】Journal of Investigative Dermatology, 1990, Vol. 94, No.5, p.717-723
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、従来のものに比べて安定性に優れたコラーゲン産生促進剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために、コラーゲン産生促進作用について、様々な植物抽出物を用いて鋭意研究を重ねてきた。その結果、栗 (Castanea crenata) 皮の抽出物が低濃度からコラーゲン産生促進作用を有すること、すなわちコラーゲン産生促進剤となり得ることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、栗（Castanea crenata）皮の抽出物を有効成分として含有するコラーゲン産生促進剤である。
【０００９】
なお、栗の抽出物としては、栗葉の抽出物が抗ヒスタミン作用（特許文献１）や抗コラーゲナーゼ作用（特許文献２）を有することが知られており、また栗皮の抽出物が抗糖化作用 (特許文献３）を有することが知られているが、栗皮の抽出物がコラーゲン産生促進作用を有することは未だ報告されていない。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のコラーゲン産生促進剤は、Ｌ−アスコルビン酸等の従来のコラーゲン産生促進剤よりも安定性に優れる。また、栗の中でも食用となる部位は果実のみであり、他の部位は通常、廃棄されるので、本発明は栗皮の有効活用に資する効果もある。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施形態を説明する。
まず本発明に用いられる栗について説明する。
栗（Castanea crenata）はブナ科クリ属の落葉高木樹であり、栗の果実は炭水化物、ビタミン、ミネラルが多く含まれている。また世界の栗の種類は、主に、ヨーロッパ栗、アメリカ栗、中国栗、日本栗に大きく分けられており、栗は古くから世界各地で貴重な食物として使用され、安全性の高い植物であるといえる。
【００１２】
〔栗皮の抽出物〕
本発明に用いられる栗皮は、ブナ科クリ属の栗（Castanea crenata）の皮であれば、栽培種、野生種など特に限定はされないが、日本栗が好ましい。また栗皮は、栗の果実の皮であり、渋皮、鬼皮、またはそれら両方をいう。栗皮の抽出物は、栗皮をそのまま、もしくは乾燥や破砕処理を行った後、各種溶媒にて抽出したものであり、抽出液そのもの、もしくはその希釈物や濃縮物をいう。
【００１３】
抽出に用いられる溶媒としては、炭化水素、エステル、ケトン、エーテル、ハロゲン化炭化水素、水溶性のアルコール類および水などが挙げられる。中でも好ましくは、水、低級アルコールおよび多価アルコールから選ばれる１種の溶媒または２種以上の混合溶媒であり、更に好ましくは、水、エタノールおよび１，３−ブチレングリコールから選ばれる１種の溶媒または２種以上の混合溶媒である。
【００１４】
抽出方法は常法に従い、栗皮をそのまま、もしくは乾燥させたり、破砕処理を行った後、１種または２種以上の溶媒に１時間以上浸漬し、ろ過することで、目的の抽出物を得ることができる。抽出は、常圧、加圧、または減圧下で、室温、加熱、または冷却下で行うことができる。さらに、二酸化炭素などを利用した超臨界抽出法や亜臨界抽出法、水蒸気蒸留などの蒸留を用いて抽出する方法、栗皮を圧搾して抽出する方法、還流抽出法なども利用することができる。
得られた抽出液は、溶媒留去により濃縮したり、カラムクロマトグラフィーや溶媒分画等の処理により精製しても良い。中でも好ましくは、栗皮をそのまま破砕処理した後、室温条件で、水、エタノールおよび１，３−ブチレングリコールから選ばれる１種の溶媒または２種以上の混合溶媒を用いて得られた抽出液であり、さらに好ましくは、水および１，３−ブチレングリコールの混合溶媒を用いて得られた抽出液である。
【００１５】
〔コラーゲン産生促進剤〕
本発明のコラーゲン産生促進剤は、上記の栗皮の抽出物を有効成分として含有するものであり、医薬品、医薬部外品、食品、化粧品類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、美容液、パック、オイル、軟膏、スプレー、貼付剤など）として利用することができる。
【００１６】
本発明のコラーゲン産生促進剤を皮膚外用剤、例えば化粧水に用いる場合、栗皮の抽出物の含有量は、乾燥固形分として、皮膚外用剤全量に対して、０．００１〜１質量％であり、好ましくは０．００５〜０．１質量％である。
【実施例】
【００１７】
以下、実施例および比較例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
【００１８】
（実施例１：栗皮の抽出物の調製）
栗の渋皮および鬼皮２０ｇ（総量）を乾燥させ破砕した後、４００ｇの５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液を加え、室温下で７日間抽出し、栗の渋皮および鬼皮をろ過することで栗皮の抽出物を得た。この栗皮の抽出物中の抽出溶媒（５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液）を除いた固形分の含有量は、１．０質量％であった。
【００１９】
（比較例１：栗葉の抽出物の調製）
栗の葉２０ｇを乾燥させ破砕した後、４００ｇの５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液を加え、室温下で７日間抽出し、栗の葉をろ過することで栗葉の抽出物を得た。この栗葉の抽出物中の抽出溶媒（５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液）を除いた固形分の含有量は、０．９質量％であった。
【００２０】
（比較例２：栗のいがの抽出物の調製）
栗のいが２０ｇを乾燥させ破砕した後、４００ｇの５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液を加え、室温下で７日間抽出し、栗のいがをろ過することで栗のいがの抽出物を得た。この栗のいがの抽出物中の抽出溶媒（５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液）を除いた固形分の含有量は、０．８質量％であった。
【００２１】
〔コラーゲン産生促進試験：Ｉ型コラーゲンアッセイ〕
実施例１、比較例１、２の各抽出物、アスコルビン酸（シグマ社製、比較例３）を５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液で適宜希釈し、試験溶液とした。
ヒト皮膚線維芽細胞を９６ウェルプレートに１. ０×１０４cells／100μＬ／wellになるように播種した。播種培地はダルベッコ変法イーグル培地（Dalbecco’s Modified Eagle Medium, DMEM 和光純薬社製）に牛胎児血清（Biowest 社製）を終濃度１０％になるように添加し、さらに終濃度１００Ｕ／ｍＬのペニシリン・ストレプトマイシン（GIBCO社製）を使用した。
３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養後、培地を除去し各濃度の試料を含む無血清培地（DMEM）に置換し、４８時間培養した。培養終了後に、培養上清を播種し、別の９６ウェルプレートで１００倍希釈（１０倍×１０倍の２段階希釈) した。
次に、この調製した試薬を用いて、宝酒造社製キットＭＫ−１０１でＩ型コラーゲン生合成能を測定した。すなわち、ＥＬＩＳＡ法でヒト皮膚線維芽細胞が産出するＩ型プロコラーゲンＣ末端ペプチド（ＰＩＰ：Procollagen typeＩ carboxyterminal propeptide）量を測定し、コラーゲン産生率を算出した。
その結果を表１に示す。なお、表１における有効分とは、乾燥残留物のことである。
【００２２】
【表１】
2014141453.tif 000002
【００２３】
上記コラーゲン産生促進試験では、栗の使用部位におけるコラーゲン産生促進効果を比較するため、栗皮、葉、いがを用いて試験を行なった。また比較例３では、陽性対照として、コラーゲン産生促進作用を有することが既知であるアスコルビン酸を用いた。実施例１、比較例１、２の結果から、栗の使用部位により抽出される成分が異なることが示された。すなわち、実施例１の栗皮の抽出物は、コラーゲン産生促進作用を有しており、しかも濃度依存的にコラーゲン産生率が向上した。一方、比較例１の栗葉抽出物、および比較例２の栗いが抽出物は、コラーゲン産生促進作用を示さなかった。
【００２４】
〔安定性試験〕
栗皮（実施例１）、葉（比較例１）、いが（比較例２）の各抽出物、アスコルビン酸（シグマ社製）を、５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液を用いて、10,000μｇ／ｍＬに希釈し、試験溶液とした。この試験溶液を透明ガラス容器に密封して、０℃、２５℃、４０℃でそれぞれ３ヶ月間保存し、その外観を観察して、下に示す２段階で評価した。
○：安定性良好（いずれの温度においても外観の変化がない。）
×：安定性不良（いずれかの温度において澱（おり）、沈殿を生じるまたは分離する。もしくは変色が著しい。）
結果を表２に示す。なお、表２における有効分とは、乾燥残留物のことである。
【００２５】
【表２】
2014141453.tif 000003
【００２６】
上記の安定性試験において、栗皮、葉、いがの各抽出物は、良好な安定性を示した。一方、アスコルビン酸では、澱が確認されたことから、安定性が低いことが分かる。
したがって、栗皮抽出物を有効成分として含有する本発明のコラーゲン産生促進剤は、従来のコラーゲン産生促進剤であるアスコルビン酸よりも、安定性に優れていることが分かる。
【００２７】
（実施例２、３および比較例４、５、６：官能評価）
実施例１で得られた栗皮の抽出物、比較例１で得られた栗葉の抽出物、比較例２で得られた栗のいがの抽出物をそれぞれ用いて、表３に示す化粧水（皮膚外用剤）を調製し、下記４項目についてそれぞれの評価基準により評価と判定を行った。結果を表３に示す。
【００２８】
〔評価項目および評価基準〕
（１）シワ改善
２０名の女性（３５才〜６０才）をパネラーとし、皮膚外用剤を１日２回、４週間使用した後の肌の状態について下記のように官能評価を行った。
２点：シワが明らかに少なくなったと感じた場合
１点：シワがやや少なくなったと感じた場合。
０点：シワ改善効果が見られないと感じた場合。
【００２９】
さらに、２０名の評価を加算し、合計点を下記の基準で判定した。
◎：３５点以上かつ０点が１人もいない（非常に優れたシワ改善効果を有する皮膚外用剤）
○：３０点以上かつ０点が１人まで（優れたシワ改善効果を有する皮膚外用剤）
△：１５点以上かつ０点が２人まで（わずかにシワ改善効果を有する皮膚外用剤）
×：１５点未満または０点が３人以上（シワ改善効果を有しない皮膚外用剤）
【００３０】
（２）肌の張り
２０名の女性（３５才〜６０才）をパネラーとし、皮膚外用剤を１日２回、４週間使用した後の肌の状態について下記のように官能評価を行った。
２点：肌の張りが明らかに出てきたと感じた場合。
１点：肌の張りがやや出てきたと感じた場合。
０点：肌に張りを与える効果が見られないと感じた場合。
【００３１】
さらに、２０名の評価を加算し、合計点を下記の基準で判定した。
◎：３５点以上かつ０点が１人もいない（肌に張りを与える効果が非常に優れた皮膚外用剤）
○：３０点以上かつ０点が１人まで（肌に張りを与える効果が優れた皮膚外用剤）
△：１５点以上かつ０点が２人まで（肌に張りを与える効果をわずかに有する皮膚外用剤）
×：１５点未満または０点が３人以上（肌に張りを与える効果を有しない皮膚外用剤）
【００３２】
（３）肌のキメ
２０名の女性（３５才〜６０才）をパネラーとし、皮膚外用剤を１日２回、４週間使用した後の肌の状態について下記のように官能評価を行った。
２点：肌のキメが明らかに整い、肌が明らかに若々しくなったと感じた場合。
１点：肌のキメがやや整い、肌がやや若々しくなったと感じた場合。
０点：肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果が見られないと感じた場合。
【００３３】
さらに、２０名の評価を加算し、合計点を下記の基準で判定した。
◎：３５点以上かつ０点が１人もいない（肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果が非常に優れた皮膚外用剤）
○：３０点以上かつ０点を評価したパネラーが１人まで（肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果が優れた皮膚外用剤）
△：１５点以上かつ０点を評価したパネラーが２人まで（肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果をわずかに有する皮膚外用剤）
×：１５点未満または０点を評価したパネラーが３人以上（肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果を有しない皮膚外用剤）
【００３４】
（４）化粧ノリ
２０名の女性（３５才〜６０才）をパネラーとし、皮膚外用剤を１日２回、４週間使用した後の肌の状態について下記のように官能評価を行った。
２点：化粧のノリが良いと感じた場合。
１点：化粧のノリがやや良いと感じた場合。
０点：化粧のノリが良くないと感じた場合。
【００３５】
さらに、２０名の評価を加算し、合計点を下記の基準で判定した。
◎：３５点以上かつ０点が１人もいない（化粧のノリが非常に良い皮膚化粧料）
○：３０点以上かつ０点を評価したパネラーが１人まで（化粧のノリが良い皮膚化粧料）
△：１５点以上かつ０点を評価したパネラーが２人まで（化粧のノリがやや良い皮膚化粧料）
×：１５点未満または０点を評価したパネラーが3 人以上（化粧のノリがあまり良くない皮膚化粧料）
【００３６】
【表３】
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【００３７】
実施例２および３の結果から、本発明のコラーゲン産生促進剤の有効成分である栗皮の抽出物を含有する化粧水が、シワ改善効果、肌に張りを与える効果、肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果、および化粧のノリを向上させる効果を有することが分かる。
また、栗葉の抽出物（比較例５）や栗のいがの抽出物（比較例６）を含有する化粧水に対して、実施例３の化粧水は、上記の効果がより優れることも分かる。
すなわち、本発明のコラーゲン産生促進剤を含有する皮膚外用剤（化粧水）は、シワ改善効果、肌に張りを与える効果、肌のキメを整えて若々しい肌に導く効果、および化粧のノリを向上させる効果に非常に優れることが分かる。