(57)【要約】      （修正有）【課題】天然グルカゴンに比べ、グルカゴン受容体に対する効力が強化された修飾グルカゴンペプチドを提供する。【解決手段】ラクタム架橋の形成、または、アミド基による末端カルボン酸の置換によって、該グルカゴンペプチドをさらに修飾することによって、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニスト活性を示すペプチド。これらの高効力グルカゴン類縁体の可溶性および安定性は、該ポリペプチドを、ＰＥＧ化、カルボキシ末端アミノ酸の置換、または、配列ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ、配列Ｋ−ＲＮＲＮＮＩＡ、および配列ＫＲＮＲから成る群から選ばれるペプチドのカルボキシ末端への付加、によって修飾することで、さらに向上させることが可能である。【選択図】図９Ａ
2014141500.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号５５、または配列番号５５の類縁体の配列を含む、非天然グルカゴンペプチドであって、ＧＬＰ−１受容体に対し天然ＧＬＰ−１活性の少なくとも２０％を示し、前記類縁体は、非天然産ペプチドであり、且つ、位置１、２、３、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２１、２４、２７、２８、および２９から選ばれる１乃至３個のアミノ酸修飾だけ配列番号５５とは異なることを特徴とする、非天然グルカゴンペプチド。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
プレ−プログルカゴンは、１５８アミノ酸の、前駆体ポリペプチドであって、これは、種々の組織で処理されて、いくつかの、異なるプログルカゴン由来ペプチド、例えば、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、およびオキシントモジュリン（ＯＸＭ）など、広汎な生理的機能、例えば、グルコースホメオスターシス、インスリン分泌、胃の内容物輸送、および腸管成長の外、食物摂取の調節に与るペプチドを形成する。グルカゴンは、プレ−プログルカゴンのアミノ酸３３から６１に相当する、２９アミノ酸ペプチドであり、一方、ＧＬＰ−１は、プレ−プログルカゴンのアミノ酸７２から１０８に相当する、３７アミノ酸ペプチドとして生産される。ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、またはＧＬＰ−１（７−３７）酸は、ＧＬＰ−１の生物学的に活性のある形態であって、これらは、ＧＬＰ−１受容体に対し事実上等価的活性を示す。
【０００２】
低血糖症は、血中グルコースレベルが、生体の活動に対し十分なエネルギーを供給することができないほど低く下降した場合に発生する。成人、または１０歳を超える児童では、低血糖症は、糖尿病治療の副作用の場合を除き稀であるが、他の投薬または疾患、ホルモンまたは酵素の欠乏、または腫瘍によって起こり得る。血中グルコースが下降を始めると、すい臓で生産されるホルモンであるグルカゴンは、肝臓に対し、グリコーゲンを分解してグルコースを放出するよう指令を発し、これは、血中グルコースレベルの、正常レベルへの上昇を引き起こす。このようにして、グルコース調節におけるグルカゴンの一般的役割は、インスリンの作用に対抗し、血中グルコースレベルを維持することである。しかしながら、糖尿病では、低血糖症に対するこのグルカゴン反応が損なわれる場合があり、その場合、グルコースレベルが正常範囲に復帰することがより難しくなる。
【０００３】
低血糖症は、緊急の医学的介助を要する、生命を脅かす事象である。急性低血糖症の治療では、グルカゴン投与が確立された投薬治療であり、これによって、投与後数分以内にグルコースの正常レベルを回復することが可能である。グルカゴンが、低血糖症の、急性医学処置として使用される場合、結晶形グルカゴンが、酸性バッファー希釈剤によって可溶化され、この溶液が筋肉内に注入される。この治療は有効ではあるが、その方法原理は、面倒であり、且つ、意識が完全でなくなった人にとっては危険である。従って、母体分子の生物学的性能を維持、または超越するが、関連する生理的条件下において十分に可溶で、安定であり、そのため、直ちに注射できるよう溶液としてあらかじめ処方することが可能な、グルカゴン類縁体が求められている。
【０００４】
さらに、糖尿病患者は、微細血管の合併症を遅延または阻止するため、正常に近い血中グルコースレベルを維持するように奨励される。この目標の実現は、通常、強力なインスリン治療を必要とする。この目標を実現しようとする努力の際、医師は、その糖尿病患者において、低血糖症の頻度および重度の実質的上昇に遭遇してきた。従って、糖尿病治療において、現今のインスリン治療よりも低血糖症を誘導する可能性の低い、改良された製剤および方法原理が求められている。
【０００５】
ＧＬＰ−１は、グルカゴンと比較すると、異なる様々の生物学的活性を有する。その作用としては、例えば、インスリン合成および分泌の刺激、グルカゴン分泌の抑制、食物摂取の抑制などが挙げられる。ＧＬＰ−１は、糖尿病において高血糖（グルコースレベルの上昇）を下げることが示されている。ＧＬＰ−１と約５０％のアミノ酸同一性を共有する、トカゲ毒由来のペプチドであるエキセンディン−４（Ｅｘｅｎｄｉｎ−４）は、ＧＬＲ−１受容体を活性化し、同様に、糖尿病において高血糖症を軽減することが示されている。
【０００６】
さらに、ＧＬＰ−１およびエキセンディン−４は、食物摂取を抑え、且つ、減量を促進する可能性があるという証拠があり、この効果は、糖尿病患者だけでなく、肥満症に悩む患者にとっても有益と考えられる。肥満症患者は、糖尿病、高血圧、高脂血症、循環器病、および筋骨格系疾患に対しより高いリスクを有する。
【０００７】
従って、糖尿病および肥満症を治療するための、従来のものに代わる、好ましくは改良された方法が依然として求められている。
【発明の概要】
【０００８】
本明細書において記載されるように、高効力グルカゴンアゴニスト類縁体であって、グルカゴン受容体における活性増大を示し、さらに別の実施態様では、生物物理学的安定性および／または水性可溶性の強化を示す物質が提供される。さらに、本発明の別の態様によれば、ＧＬＰ−１受容体に比べ、グルカゴン受容体に対して示される元々のグルカゴンの選択性を失い、そのために、これら二つの受容体に対しコアゴニスト（co-agonist）となる、グルカゴンアゴニスト類縁体が提供される。このグルカゴン類縁体内の、選ばれたアミノ酸を修飾することによって、グルカゴン受容体に比べ、ＧＬＰ−１受容体に対する該類縁体の相対的活性を調節することが可能である。従って、本発明のさらに別の態様では、ＧＬＰ−１受容体に比べ、グルカゴン受容体に対しより高い活性を持つ、グルカゴンコアゴニスト類縁体、両受容体に対し、ほぼ等価的活性を持つグルカゴンコアゴニスト類縁体、および、グルカゴン受容体に比べ、ＧＬＰ−１受容体に対しより高い活性を持つ、グルカゴンコアゴニスト類縁体が提供される。後者のカテゴリーのコアゴニストは、グルカゴン受容体に対しては、ほとんど、またはまったく活性を示さないが、ＧＬＰ−１受容体を活性化する能力は依然として保持し、しかもその能力は、天然のＧＬＰ−１と同じか、またはより優れるように遺伝子工学的に加工することが可能である。さらに、これらの類縁体は、いずれも、生物物理学的安定性および／または水性可溶性の強化を与える修飾を含んでもよい。
【０００９】
グルカゴンおよびＧＬＰ−１受容体に対するコアゴニズム（co-agonism）を示すグルカゴン類縁体は、いくつかの用途において有利である。先ず第一に、低血糖症を治療するためのグルカゴンの使用は、低い血中グルコースレベルを過剰補償し、過度の血中グルコースレベルをもたらす場合がある。グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストを投与した場合、付加的ＧＬＰ−１刺激が、グルカゴンアゴニストの作用を緩衝し、低血糖症治療に由来する過度な血中グルコースレベルを阻止することが予想される。
【００１０】
さらに、本明細書に記載するように、本発明のグルカゴンコアゴニスト類縁体は、単独で、または、他の抗糖尿病薬、または抗肥満治療と組み合わせて投与されると、高血糖症のコントロール、または、減量誘導または増量の阻止のために使用が可能である。減量を誘導するもう一つの化合物は、オキシントモジュリン、すなわち、小腸に見られる、天然の消化ホルモンである（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２００５；５４：２３９０−２３９５を参照）。オキシントモジュリンは、グルカゴンの２９アミノ酸配列（すなわち、配列番号１）、それに続く、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）の、８アミノ酸カルボキシ末端延長部を含む、３７アミノ酸ペプチドである。本発明は、本明細書に記載されるグルカゴン類縁体は、必要に応じて、この８アミノ酸カルボキシ末端延長部（配列番号２７）に結合されてもよいと考察するが、その一方で、本発明はさらに、ある実施態様では、配列番号２７の、８個の連続カルボキシアミノ酸を欠如する類縁体、および該類縁体の使用を特に考慮の対象とする。
【００１１】
これらの化合物は、アミノ酸修飾によって所望の目的に合わせ、そのペプチドのＧＬＰ−１活性を調節することが可能であり、従って、本発明のグルカゴン類縁体は、特定の病態または疾患を治療するように、それに合わせて特注することが可能である。より具体的には、本明細書では、それぞれ、グルカゴンおよびＧＬＰ−１受容体に対し、ある特徴的相対レベルの活性を発揮するような、グルカゴン類縁体たちが提供される。例えば、天然のＧＬＰ−１に比べ、ＧＬＰ−１受容体に対し、少なくとも約１０％のレベルから少なくとも約２００％（少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％を含む）またはそれ以上の高レベルの間の任意のレベルの活性を有するグルカゴンペプチド、および、天然のグルカゴンに比べ、グルカゴン受容体に対し、少なくとも約１０％のレベルから約５００％（少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％を含む）またはそれ以上の高レベルの間の任意のレベルの活性を有するグルカゴンペプチド、を生産するように各ペプチドに対し修飾を施すことが可能である。天然グルカゴンのアミノ酸配列は配列番号１であり、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドのアミノ酸配列は、配列番号５２であり、ＧＬＰ−１（７−３７）酸のアミノ酸配列は、配列番号５０である。例示の実施態様では、グルカゴンペプチドは、グルカゴン受容体に対して、天然グルカゴンの活性の少なくとも１０％を示し、ＧＬＰ−１受容体に対して、天然ＧＬＰ−１の活性の少なくとも５０％を示すか、または、グルカゴン受容体に対して、天然グルカゴンの活性の少なくとも４０％を示し、ＧＬＰ−１受容体に対して、天然ＧＬＰ−１の活性の少なくとも４０％を示すか、または、グルカゴン受容体に対して、天然グルカゴンの活性の少なくとも６０％を示し、ＧＬＰ−１受容体に対して、天然ＧＬＰ−１の活性の少なくとも６０％を示してもよい。
【００１２】
ＧＬＰ−１受容体と比べた、グルカゴン受容体に対するグルカゴンペプチドの選択性は、グルカゴン／ＧＬＰ−１活性の相対比（天然グルカゴンと比べたときの、グルカゴン受容体に対する該ペプチドの相対的活性を、天然ＧＬＰ−１と比べたときの、ＧＬＰ−１受容体に対する該ペプチドの相対的活性で割った値）として記載することが可能である。例えば、グルカゴン受容体に対し天然グルカゴンの活性の６０％を発揮し、ＧＬＰ−１受容体に対し天然ＧＬＰ−１の活性の６０％を発揮するグルカゴンペプチドは、１：１比のグルカゴン／ＧＬＰ−１活性を持つ。グルカゴン／ＧＬＰ−１活性の例示の比としては、例えば、約１：１、１．５：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１、または約１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、または１：１．５が挙げられる。例として、１０：１のグルカゴン／ＧＬＰ−１活性比は、ＧＬＰ−１受容体に比べ、グルカゴン受容体に対し１０倍の選択性を示す。同様に、１０：１のＧＬＰ−１／グルカゴン活性比は、グルカゴン受容体に比べ、ＧＬＰ−１受容体に対し１０倍の選択性を示す。
【００１３】
一実施態様によれば、効力が強化され、必要に応じて可溶性および安定性が改善されたグルカゴン類縁体が提供される。一実施態様では、グルカゴン効力の強化は、天然グルカゴン（配列番号１）の位置１６におけるアミノ酸修飾によって実現される。非限定的例として挙げるのであるが、このような効力の強化は、位置１６において天然に起こるセリンを、４原子長の側鎖を持つ、別の負に帯電した荷電アミノ酸によって置換することによって、またはそれとは別に、グルタミン、ホモグルタミン酸、またはホモシステリン酸の内のいずれかによって、または、少なくとも一つのヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｐ）を含み、約４（または３〜５）原子の側鎖長を持つ側鎖を有する荷電アミノ酸によって置換することによって、実現することが可能である。一実施態様では、効力を強化されたグルカゴンアゴニストは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７のペプチド、または、配列番号５のグルカゴンアゴニスト類縁体を含む。一実施態様によれば、野生型グルカゴンよりも、グルカゴン受容体に対する効力が強化されたグルカゴン類縁体タンパクが提供されるが、このグルカゴンペプチドは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０の配列を含み、ＧＬＰ−１受容体に比べ、グルカゴン受容体に対する選択性を保持する。
【００１４】
グルカゴン受容体活性は、位置３におけるアミノ酸修飾によって、例えば、位置３における天然のグルタミンを任意のアミノ酸で置換することによって下げることが可能である。この位置における、酸性、塩基性、または疎水性アミノ酸（グルタミン酸、オルニチン、ノルロイシン）による置換は、グルカゴン受容体活性を実質的に下げるか、または破壊することが示されている。ある実施態様では、類縁体は、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の約１０％以下、例えば、約１〜１０％、または約０．１〜１０％、または０．１％より上であるが、約１０％よりも下の活性を有する一方、ＧＬＰ−１受容体に対しては、ＧＬＰ−１の活性の少なくとも２０％を示す。例えば、本明細書に記載される例示の類縁体は、天然グルカゴンの活性の約０．５％、約１％、または約７％を有するが、一方、ＧＬＰ−１受容体に対しては、ＧＬＰ−１の活性の少なくとも２０％を発揮する。
【００１５】
別の実施態様では、天然のグルカゴンペプチドに比べ、グルカゴン受容体に対する効力が強化または保持されるばかりでなく、ＧＬＰ−１受容体に対する活性が大きく強化されるグルカゴン類縁体が提供される。グルカゴンは、通常、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１の活性の約１％を有するが、一方、ＧＬＰ−１は、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の約０．０１％未満を有する。ＧＬＰ−１受容体に対する活性の強化は、Ｃ末端アミノ酸のカルボン酸を、荷電中性基、例えば、アミドまたはエステルによって置換することによって実現される。一実施態様では、これらのグルカゴン類縁体は、配列番号２０の配列を含み、この配列では、カルボキシ末端アミノ酸は、天然のアミノ酸に見られるカルボン酸基の代わりにアミド基を有する。これらのグルカゴン類縁体は、グルカゴンおよびＧＬＰ−１両受容体に対し強力な活性を有し、従って、両受容体に対しコアゴニストとして作用する。一実施態様によれば、グルカゴンおよびＧＬＰ−１受容体のコアゴニストであって、配列番号２０の配列を含み、その配列では、位置２８のアミノ酸がＡｓｎまたはＬｙｓであり、位置２９のアミノ酸がＴｈｒ−アミドである、コアゴニストペプチドが提供される。
【００１６】
ＧＬＰ−１受容体に対する活性の強化はさらに、三つの介在アミノ酸によって隔てられる、二つのアミノ酸側鎖の間に分子内架橋を形成することによって、グルカゴンのＣ−末端部分（アミノ酸１２−２９周辺）のアルファヘリックス構造を安定化することによって実現される。例示の実施態様では、この架橋（リンカー）は、約８（または約７〜９）原子長で、位置１２および１６、または位置１６および２０、または位置２０および２４、または位置２４および２８におけるアミノ酸側鎖の間に形成される。これらのアミノ酸の側鎖同士は、水素結合、例えば塩架橋の形成のようなイオン相互作用、、または共有結合によって互いに連結することが可能である。一実施態様によれば、配列番号２０のグルカゴンペプチドを含むグルカゴンアゴニストが提供される。該配列番号では、位置１２、２０、または２８に配置されるリシン残基、および位置１６または２４に配置されるグルタミン酸残基の間にラクタム環が形成され、該グルカゴンペプチドにおける、その側鎖が該ラクタム環の形成に参加する二つのアミノ酸は、三つの介在アミノ酸によって互いに隔てられる。一実施態様によれば、このラクタム担持グルカゴン類縁体は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８から成る群から選ばれるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ラクタム担持ペプチドのカルボキシ末端アミノ酸は、末端カルボン酸の代わりに、アミド基またはエステル基を含む。一実施態様では、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８のグルカゴンペプチドは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、または配列番号１８のカルボキシ末端に共有結合する、さらに別のアミノ酸を含む。さらに別の実施態様では、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９から成る群から選ばれる配列を含むグルカゴンペプチドが提供されるるが、該ペプチドはさらに、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９のカルボキシ末端に共有結合する、さらに別のアミノ酸を含む。一実施態様では、位置２８におけるアミノ酸は、アスパラギンまたはリシンであり、位置２９におけるアミノ酸はトレオニンである。
【００１７】
ＧＬＰ−１受容体に対する活性の強化は、位置２０におけるアミノ酸修飾によっても実現される。一実施態様では、位置２０におけるグルタミンは、帯電しているか、または、水素結合する能力を持ち、少なくとも約５（または約４〜６）原子長の側鎖を有する、別の疎水性アミノ酸、例えば、リシン、シトルリン、アルギニン、またはオルニチンによって置換される。
【００１８】
グルカゴン受容体活性を増減させ、且つ、ＧＬＰ−１受容体活性を増強する、前述の修飾の内のどれかを、個別に、または組み合わせて適用することが可能である。ＧＬＰ−１受容体活性を増強する修飾同士の組み合わせは、一般に、それらの修飾がいずれのものであれ、単独で用いるよりも、より高いＧＬＰ−１活性を実現する。例えば、本発明は、位置１６、位置２０、およびＣ末端カルボン酸基に修飾を含み、必要に応じて、位置１６および２０のアミノ酸の間に共有結合を有するグルカゴン類縁体；位置１６、およびＣ末端カルボン酸基に修飾を含むグルカゴン類縁体；位置１６および２０に修飾を含み、必要に応じて、位置１６および２０のアミノ酸の間に共有結合を有するグルカゴン類縁体；および、必要に応じて、位置２０およびＣ末端カルボン酸基に修飾を含む、ただし位置１２のアミノ酸はＡｒｇではないか、または、位置９のアミノ酸はＧｌｕではない、グルカゴン類縁体を提供する。
【００１９】
本明細書に記載される、位置１または２における他の修飾は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ  ＩＶ）切断に対する、該ペプチドの耐性を増強する可能性がある。例えば、位置２のアミノ酸は、Ｄ−セリン、アラニン、Ｄ−アラニン、バリン、グリシン、Ｎ−メチルセリン、Ｎ−メチルアラニン、またはアミノイソブチル酸によって置換されてもよい。それとは別に、またはそれに加えてさらに、位置１のアミノ酸は、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノヒスチジン、ヒドロキシル−ヒスチジン、アセチル−ヒスチジン、ホモ−ヒスチジン、Ｎ−メチルヒスチジン、アルファ−メチルヒスチジン、イミダゾール酢酸、またはアルファ，アルファ−ジメチルイミジアゾール酢酸（ＤＭＩＡ）によって置換されてもよい。位置２における複数の修飾（例えば、位置２におけるＡＩＢ）、および、ある場合、位置１における複数の修飾は、グルカゴン活性を、時には著明に抑えることが観察された。驚くべきことに、グルカゴン活性におけるこの低下は、位置１２と１６、１６と２０、または２０と２４の間の共有結合、例えば、位置１６のグルタミン酸と位置２０のリシンの間のラクタム環によって回復することが可能である。
【００２０】
さらに別の例示の実施態様では、前記化合物のいずれにおいても、配列番号１の位置１５のアミノ酸を修飾し、該ペプチドの、特に酸性またはアルカリ性バッファーにおける経時的分解を抑えることによって、安定性を改善することが可能である。
【００２１】
別の実施態様では、本明細書に開示されるグルカゴンペプチドの可溶性は、該ペプチドに対する親水性成分の共有結合によって強化される。一実施態様では、親水性成分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖であり、必要に応じて、位置１６、１７、２１、２４、２９、またはＣ末端の内の一つ以上において該ペプチドに連結される。ある実施態様では、その位置の天然アミノ酸は、親水性成分と架橋結合を形成するのに好適な側鎖を持つアミノ酸によって置換され、それによって、そのペプチドに対する親水性成分の連結がやり易くされる。別の実施態様では、親水基を含むように修飾されるアミノ酸が、ペプチドのＣ末端に加えられる。一実施態様では、ペプチドコアゴニストは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９から成る群から選ばれる配列を含み、前記グルカゴンペプチドの位置１６、１７、２１、または２４の内の一つにおけるアミノ酸残基の側鎖はさらに、約５００から約４０，０００ダルトンの範囲から選ばれる分子量を有する、ポリエチレングリコール鎖を含む。一実施態様では、このポリエチレングリコール鎖は、約５００から約５，０００ダルトンの範囲から選ばれる分子量を有する。別の実施態様では、ポリエチレングリコール鎖は、約１０，０００から約２０，０００ダルトンの範囲から選ばれる分子量を有する。さらに別の実施態様では、ポリエチレングリコール鎖は、約２０，０００から約４０，０００ダルトンの範囲から選ばれる分子量を有する。
【００２２】
別の実施態様では、前記グルカゴン類縁体の内のいずれかにおいて、その可溶性は、該ペプチドのＣ末端部分、好ましくは、配列番号１のＣ末端から位置２７の位置に荷電アミノ酸を導入するアミノ酸置換および／または付加によって、高めることが可能である。必要に応じて、一つ、二つ、または三つの荷電アミノ酸が、そのＣ末端部分内、好ましくはＣ末端から位置２７の位置に導入されてもよい。一実施態様によれば、位置２８および／または２９における天然アミノ酸（単数または複数）は、荷電アミノ酸によって置換され、および／または、さらに別の実施態様では、一から三の荷電アミノ酸が、該ペプチドのＣ末端に付加される。例示の実施態様では、上記荷電アミノ酸の内の一つ、二つ、または全てが、負に帯電している。さらに別の修飾、例えば、保存的置換を行って、グルカゴンペプチドが、依然としてグルカゴン活性を保持するようにさせることも可能である。一実施態様では、配列番号２０のペプチドの類縁体であって、位置１７−２６における１乃至２個のアミノ酸置換によって配列番号２０とは異なるペプチドが提供され、一実施態様では、該類縁体は、位置２０におけるアミノ酸置換によって配列番号２０のペプチドとは異なる。
【００２３】
一実施態様によれば、本明細書に開示されるグルカゴンペプチドは、例えば、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８のグルカゴンペプチドのカルボキシ末端に第２ペプチドを付加することによって修飾される。一実施態様では、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９から成る群から選ばれるペプチド配列を有するグルカゴンペプチドが、ペプチド結合を介して、第２ペプチドに共有結合され、ここで、第２ペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から成る群から選ばれる配列を含む。さらに別の実施態様では、Ｃ末端延長部を含むグルカゴンペプチドでは、天然グルカゴンペプチドの位置２９におけるトレオニンが、グリシンによって置換される。位置２９においてトレオニンをグリシンによって置換させ、且つ、配列番号２６のカルボキシ末端延長部を含む、グルカゴン類縁体は、配列番号２６のカルボキシ末端延長部を含むように修飾された天然グルカゴンと比べ、ＧＬＰ−１受容体に対し４倍強力である。ＧＬＰ−１受容体に対する活力は、位置１８における天然アルギニンをアラニンで置換することによってさらに強化することが可能である。
【００２４】
従って、本明細書に開示されるように、可溶性および／または安定性の向上を示す、高活力グルカゴン類縁体またはグルカゴンコアゴニスト類縁体が提供される。例示の高活力グルカゴン類縁体は、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の少なくとも約２００％を示し、必要に応じて、ｐＨ６と８の間（例えば、ｐＨ７）において、少なくとも１ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、必要に応じて、２５℃で２４時間後、元のペプチドの少なくとも９５％を保持する（例えば、元のペプチドの５％以下が分解、または分断される）。別の例として、例示のグルカゴンコアゴニスト類縁体は、グルカゴンおよびＧＬＰ−１両受容体に対し、約４０％を超えるか、または約６０％を超える活性を示し（約１：３乃至３：１、または約１：２乃至２：１の比）、必要に応じて、ｐＨ６と８の間（例えば、ｐＨ７）において、少なくとも１ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、必要に応じて、２５℃で２４時間後、元のペプチドの少なくとも９５％を保持する。別の、例示のグルカゴンコアゴニスト類縁体は、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の約１７５％以上を示す一方、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１の活性の約２０％以下を示し、必要に応じて、ｐＨ６と８の間（例えば、ｐＨ７）において、少なくとも１ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、必要に応じて、２５℃で２４時間後、元のペプチドの少なくとも９５％を保持する。さらに別の、例示のグルカゴンコアゴニスト類縁体は、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の約１０％以下を示す一方、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１の活性の約２０％を示し、必要に応じて、ｐＨ６と８の間（例えば、ｐＨ７）において、少なくとも１ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、必要に応じて、２５℃で２４時間後、元のペプチドの少なくとも９５％を保持する。さらに別の、例示のグルカゴンコアゴニスト類縁体は、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の約１０％以下であるが、約０．１％、０．５％、または１％以上を示す一方、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１の活性の、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％以上を示し、必要に応じて、ｐＨ６と８の間（例えば、ｐＨ７）において、少なくとも１ｍｇ／ｍＬの濃度で可溶であり、必要に応じて、２５℃で２４時間後、元のペプチドの少なくとも９５％を保持する。ある実施態様では、これらのグルカゴン類縁体は、天然グルカゴンの対応位置における天然アミノ酸の内、少なくとも約２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８個を保持する（例えば、天然グルカゴンに対して、１〜７、１〜５、または１〜３個の修飾を有する）。
【００２５】
下記のペプチドはいずれも本発明の化合物から排除される。ただし、所望のコアゴニスト活性を示す、これらの化合物に対する修飾体と、これらの化合物を用いた、製薬組成物、キット、および治療法は、本発明に含まれてもよい：配列番号１のペプチドであって、［Ａｒｇ１２］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；配列番号１のペプチドであって、［Ａｒｇ１２，Ｌｙｓ２０］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；配列番号１のペプチドであって、［Ａｒｇ１２，Ｌｙｓ２４］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；配列番号１のペプチドであって、［Ａｒｇ１２，Ｌｙｓ２９］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；配列番号１のペプチドであって、［Ｇｌｕ９］置換を持つもの；Ｈｉｓ１を欠如する配列番号１のペプチドであって、［Ｇｌｕ９，Ｇｌｕ１６，Ｌｙｓ２９］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；配列番号１のペプチドであって、［Ｇｌｕ９，Ｇｌｕ１６，Ｌｙｓ２９］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；配列番号１のペプチドであって、ラクタム架橋を介して連結される［Ｌｙｓ１３，Ｇｌｕ１７］置換、およびＣ末端アミドを持つもの；Ｈｉｓ１を欠如する配列番号１のペプチドであって、ラクタム架橋を介して連結される［Ｇｌｕ２０，Ｌｙｓ２４］置換を持つもの、である。
【００２６】
一実施態様によれば、本明細書に開示される新規グルカゴンペプチドのいずれかを、好ましくは滅菌的に、好ましくは、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の純度レベルにおいて含み、且つ、薬学的に受容可能な希釈剤、担体、または賦形剤を含む製薬組成物が提供される。このような組成物は、グルカゴン組成物を、少なくとも、０．５ｍｇ／ｍｌ，１ｍｇ／ｍｌ，２ｍｇ／ｍｌ，３ｍｇ／ｍｌ，４ｍｇ／ｍｌ，５ｍｇ／ｍｌ，６ｍｇ／ｍｌ，７ｍｇ／ｍｌ，８ｍｇ／ｍｌ，９ｍｇ／ｍｌ，１０ｍｇ／ｍｌ，１１ｍｇ／ｍｌ，１２ｍｇ／ｍｌ，１３ｍｇ／ｍｌ，１４ｍｇ／ｍｌ，１５ｍｇ／ｍｌ，１６ｍｇ／ｍｌ，１７ｍｇ／ｍｌ，１８ｍｇ／ｍｌ，１９ｍｇ／ｍｌ，２０ｍｇ／ｍｌ，２１ｍｇ／ｍｌ，２２ｍｇ／ｍｌ，２３ｍｇ／ｍｌ，２４ｍｇ／ｍｌ，２５ｍｇ／ｍｌ、またはそれ以上の濃度で含んでもよい。一実施態様では、製薬組成物は、滅菌され、必要に応じて各種容器の中に保存される水溶液を含む。本発明の化合物は、直ぐに使用が可能なあらかじめ処方された溶液を調製するための一実施態様に従って使用することが可能である。別の実施態様では、製薬組成物は、凍結乾燥粉末である。製薬組成物はさらに、該組成物を患者に投与するためのディスポーザブルデバイスを含むキットの一部として包装することも可能である。容器またはキットは、室温、または冷蔵温度で保存するためにラベル表示されてもよい。
【００２７】
一実施態様によれば、本発明のグルカゴンペプチドの、あらかじめ処方された水性組成物を用いて、グルコースレベルを速やかに上昇させる方法、または低血糖症を治療する方法が提供される。本方法は、本開示の新規グルカゴンペプチド修飾体を含む、有効量の水溶液を投与する工程を含む。一実施態様では、グルカゴンペプチドは、該グルカゴンペプチドの位置２１または２４においてＰＥＧ化され、このＰＥＧ鎖は、約５００から約５，０００ダルトンの分子量を持つ。一実施態様では、このグルカゴン修飾体溶液は、該組成物を、低血糖症に罹っている患者に投与するのに使用されるデバイスの中にあらかじめ包装される。
【００２８】
一実施態様によれば、インスリン依存性患者において血中グルコースレベルを調節する改良された方法が提供される。本方法は、糖尿病のコントロールのために治療的に有効な量のインスリンを投与する工程、および、低血糖症の予防のために治療的に有効な量の、本開示の新規グルカゴンペプチド修飾体を投与する工程を含み、これらの投与工程は、互いに１２時間以内に実行される。一実施態様では、グルカゴンペプチドおよびインスリンは、単一組成物として同時投与され、ここで、該グルカゴンペプチドは、約５，０００から約４０，０００ダルトンの範囲から選ばれる分子量を有するＰＥＧ鎖でＰＥＧ化されている。
【００２９】
別の実施態様では、小腸管の一過性麻痺を誘導するための方法が提供される。本方法は、本明細書に開示されるグルカゴンペプチドの一つ以上を、患者に投与することを含む。
【００３０】
さらに別の実施態様では、低血糖症を治療する方法、または、体重増加を抑えるか、または体重減少を誘導する方法が提供され、該方法は、本発明のグルカゴンペプチドを含む、有効量の水溶液を投与することを含む。一実施態様では、いずれの方法も、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９から成る群から選ばれるグルカゴンアゴニストを含む、有効量の組成物を投与することを含む。別の実施態様では、本方法は、グルカゴンアゴニストを含む、有効量の組成物を投与することを含み、該グルカゴンアゴニストは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、および配列番号６９から成る群から選ばれるグルカゴンペプチドを含み、該グルカゴンペプチドのアミノ酸２９は、ペプチド結合を介して第２ペプチドに結合し、前記第２ペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８の配列を含む。さらに別の実施態様では、通常用量または低減用量のインスリン、および本発明のグルカゴンペプチドを同時投与することを含む、糖尿病の治療方法が提供される。さらに、インスリンの同時投与無しに、本発明のグルカゴンペプチドによって糖尿病を治療する方法も提供される。
【００３１】
さらに別の態様では、本発明は、高血糖症を治療する新規方法、および、食欲を減退するか、または減量を増進する新規方法であって、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体の両方を活性化するグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニスト分子（その薬学的に受容可能な塩を含む）の投与を含む方法を提供する。グルカゴンおよびＧＬＰ−１の両受容体のアゴニズム、すなわち、活性化は、高血糖症の治療において、ＧＬＰ−１作用単独に比べ、予想外の改善をもたらす。従って、グルカゴン作用の付加は、予想外の、加算的または相乗的効果、または、その他の予想外の臨床的利益（単数または複数）をもたらす。通常用量のインスリン若しくは低減用量のインスリンと併せた投与、またはインスリン無しでの投与も、これらの方法において考慮の対象とされる。さらに、グルカゴン受容体の作用は、減量の増強または体重増加の防止において、ＧＬＰ−１作用単独に比べ、予想外の有益な効果を及ぼす。
【００３２】
例示の、グルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニスト分子は、本発明のグルカゴンペプチド、ＧＬＰ−１およびグルカゴン受容体の両方を活性化するＧＬＰ−１類縁体、グルカゴンとＧＬＰ−１の融合体、または、グルカゴン類縁体とＧＬＰ−１類縁体の融合体、または化学的に修飾されたそれらの誘導体を含む。それとは別に、グルカゴン受容体を活性化する化合物は、ＧＬＰ−１受容体を活性化する化合物（例えば、ＧＬＰ−１類縁体、エキセンディン−４類縁体、またはその誘導体）と同時投与することが可能である。本発明はさらに、グルカゴンアゴニスト類縁体の、ＧＬＰ−１アゴニスト類縁体との同時投与を考慮の対象とする。
【００３３】
高血糖症の治療および／または食欲減退または減量増強のための、これらの方法は、位置１２（例えば、Ａｒｇ１２）における修飾を、必要に応じて、位置１６および／または２０における修飾と組み合わせて持つグルカゴン類縁体の投与を含む。本発明の方法はまた、グルカゴン類縁体の投与を含むが、ここで、該グルカゴン類縁体は、アミノ酸１２および２９の領域内の二つのアミノ酸：例えば、位置１２と１６、位置１３と１７（例えば、Ｌｙｓ１３  Ｇｌｕ１７、またはＧｌｕ１３  Ｌｙｓ１７）、位置１６と２０、位置１７と２１（例えば、Ｌｙｓ１７  Ｇｌｕ２１、またはＧｌｕ１７  Ｌｙｓ２１）、位置２０と２４、または位置２４と２８、の側鎖同士の間の、三つの介在アミノ酸によって隔てられる架橋を含み、必要に応じて、位置９のアミノ酸はＧｌｕではなく、必要に応じてＣ末端アミドまたはエステルを含む。
【００３４】
このようなグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニスト分子から排除される一実施態様に合致するものは、このような方法で有用であることが知られる、先行技術の任意のグルカゴン類縁体またはＧＬＰ−１類縁体である。別の実施態様では、米国特許第６，８６４，０６９号において、糖尿病治療のための、ＧＬＰ−１アゴニスト、およびグルカゴンアンタゴニストの両方として作用すると記載されるペプチドも、グルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニスト分子としては排除される。別の実施態様で、排除されるのは、糖尿病治療のためのグルカゴンアンタゴニスト、例えば、Ｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：７８９−７９４（１９８９），Ａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４：３１０９−３１１６（２００１）、およびＳａｐｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，８（５）：２５１−２６２（２００２）に記載されるアンタゴニストの使用である。さらに別の実施態様では、オキシントモジュリン、または、オキシントモジュリンの８個のＣ末端アミノ酸（配列番号２７）を含むグルカゴン類縁体も、グルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニスト分子としては排除される。
【００３５】
高血糖症を治療するためのこれらの方法は、種々のタイプの高血糖症、例えば、インスリン依存性または非インスリン依存性の、糖尿病、Ｉ型真性糖尿病、ＩＩ型真性糖尿病、または、妊娠糖尿病、糖尿病などに対して、および、糖尿病の合併症、例えば、ニューロパシー、網膜症、および血管病などの抑制に対して有用であることが期待される。食欲減退または減量増強のためのこれらの方法は、減量、体重増加の防止、または、各種原因による肥満症、例えば、薬物誘導性肥満症などの治療、および、肥満症関連の合併症、例えば、血管病（冠状動脈疾患、発作、抹消血管病、虚血性再還流など）、高血圧、ＩＩ型糖尿病の開始、高脂血症、および筋骨格病などの軽減において有用であることが期待される。
【００３６】
本明細書に記載される全ての治療法、製薬組成物、キット、およびその他の、類似の実施態様においては、グルカゴン類縁体という用語の使用は、類縁体の薬学的に受容可能な全ての塩またはエステルを含むものとする。
【００３７】
（関連出願に対する相互参照）
本出願は、２００７年２月１５日出願の米国特許仮出願第６０／８９０，０８７号、および、２００７年５月１７日出願の米国特許仮出願第６０／９３８，５６５号に対する優先権を主張する。参照により、これらの仮出願に開示される主題を本出願に含めることをここに明言する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】図１は、３７℃において、それぞれ、２４、４８、７２、９６、１４４、および１６６時間インキュベートした、グルカゴンＣｙｓ21マレイミドＰＥＧ5Kの安定性を表す棒グラフである。
【図２】図２は、３７℃において、２４、７２、または１４４時間インキュベートしたｐＨ５のグルカゴンＣｙｓ21マレイミドＰＥＧ5KのＨＰＬＣ分析から得られたデータを表す。
【図３】図３は、グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。さらに具体的には、図３Ａは、グルカゴン類縁体Ｅ１６、Ｋ２０●、Ｅ１５、Ｅ１６▲、Ｅ１６、Ｋ２０▼、Ｅ１５、Ｅ１６（左向き黒三角）、Ｅ１６（右向き黒三角）、およびＧｌｕｃ−ＮＨ2■によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。
【図４】図４Ａと図４Ｂは、グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。さらに具体的には、図４Ａは、天然グルカゴン■に対して、各グルカゴン類縁体Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▲、Ｅ３，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▼、Ｏｒｎ３，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（左向き黒三角）、および、Ｎｌｅ３，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（右向き黒三角）によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。一方、図４Ｂは、天然ＧＬＰ−１■に対して、各グルカゴン類縁体Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▲、Ｅ３，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▼、Ｏｒｎ３，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（左向き黒三角）、および、Ｎｌｅ３，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（右向き黒三角）によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。
【図５】図５Ａと図５Ｂは、グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。さらに具体的には、図５Ａは、グルカゴン−ＮＨ2（■）に対して、各グルカゴン類縁体（Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕ−ＮＨ2●（５ｎＭ、保存液）、Ｅ１５，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▲（５ｎＭ、保存液）、Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▼（１０ｎＭ、保存液）、Ｅ１５，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（左向き黒三角）（１０ｎＭ、保存液）、および、Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（右向き黒三角））によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。一方、図５Ｂは、ＧＬＰ−１（■）およびグルカゴン−ＮＨ2（□）に対して、各グルカゴン類縁体（Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｅ１５，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▲、および、Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（右向き黒三角））によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。
【図６】図６Ａと図６Ｂは、グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。さらに具体的には、図６Ａは、グルカゴン（■）に対して、各グルカゴン類縁体（Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｋ１２Ｅ１６−ＮＨ2ラクタム▲、Ｅ１６Ｋ２０−ＮＨ2ラクタム▼、Ｋ２０Ｅ２４−ＮＨ2ラクタム（左向き黒三角）、および、Ｅ２４Ｋ２８−ＮＨ2ラクタム（右向き黒三角））によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。一方、図６Ｂは、ＧＬＰ−１（■）に対して、各グルカゴン類縁体（Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｋ１２Ｅ１６−ＮＨ2ラクタム▲、Ｅ１６Ｋ２０−ＮＨ2ラクタム▼、Ｋ２０Ｅ２４−ＮＨ2ラクタム（左向き黒三角）、および、Ｅ２４Ｋ２８−ＮＨ2ラクタム（右向き黒三角））によって引き起こされるＧＬＰ−１受容体の誘導を比較する。
【図７】図７Ａと図７Ｂは、グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。さらに具体的には、図７Ａは、グルカゴン（■）に対して、各グルカゴン類縁体（Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▲、Ｋ１２，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2ラクタム▼、Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（左向き黒三角）、および、Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2ラクタム（右向き黒三角））によって引き起こされるグルカゴン受容体の誘導を比較する。一方、図７Ｂは、ＧＬＰ−１（■）に対して、各グルカゴン類縁体（Ｇｌｕ−ＮＨ2●、Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2▲、Ｋ１２，Ｅ１６  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2ラクタム▼、Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2（左向き黒三角）、および、Ｅ１６，Ｋ２０  Ｇｌｕｃ−ＮＨ2ラクタム（右向き黒三角）によって引き起こされるＧＬＰ−１受容体の誘導を比較する。
【図８】図８Ａ〜図８Ｆは、グルカゴン受容体（図８Ａ、８Ｃ、および８Ｅ）、またはＧＬＰ−１受容体（図８Ｂ、８Ｃ、および８Ｆ）に対して、グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。同図において、ｈＥ＝ホモグルタミン酸、およびｈＣ＝ホモシステイン酸。
【図９】図９Ａと図９Ｂは、ＧＬＰ（１７−２６）グルカゴン類縁体によって引き起こされる、受容体媒介性ｃＡＭＰ誘導を示すデータを表す。該類縁体において、天然グルカゴン（配列番号１）のアミノ酸位置１７−２６は、天然ＧＬＰ−１（配列番号５０）の位置１７−２６のアミノ酸によって置換された。さらに具体的には、図９Ａは、表示ＧＬＰ（１７−２６）のグルカゴン類縁体によるグルカゴン受容体の誘導を比較し、図９Ｂは、表示ＧＬＰ（１７−２６）のグルカゴン類縁体によるＧＬＰ−１受容体の誘導を比較する。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｅは、本発明のグルカゴンペプチドについて、それぞれの化合物の表示量をマウスに皮下注入した場合の、それぞれの、マウスにおける減量誘導能力を示すインビボデータを提示するグラフである。図１０Ａ−１０Ｅに列挙するグルカゴンペプチドの配列番号は下記の通り。図１０Ａについては：キメラ２  Ａｉｂ２  Ｃ２４  ４０Ｋ  ＰＥＧ（配列番号４８６）、Ａｉｂ２  Ｃ２４  キメラ２  ４０Ｋラクタム（配列番号５０４）、およびＡｉｂ２  Ｅ１６  Ｋ２０  Ｇｌｕｃ−ＮＨ２  Ｌａｃ  ４０Ｋ（配列番号５２８）；図１０Ｂ：Ａｉｂ２  Ｃ２４  Ｃｈｉ２  ラクタム４０Ｋ（配列番号５０４）、ＤＭＩＡ１  Ｃ２４  Ｃｈｉ２  ラクタム４０Ｋ（配列番号５０５）、キメラ２  ＤＭＩＡ１  Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号５１９）、およびキメラ２  Ａｉｂ２  Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号４８６）、同図において、文字列の終わりの数字は、使用用量である７０または３５０ｎｍｏｌ／ｋｇを示す；図１０Ｃ：ＡＩＢ２  ラクタム有Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号５０４）、ＡＩＢ２  Ｅ１６  Ｋ２０ラクタム有Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号５２８）、ＤＭＩＡ１  Ｅ１６  Ｋ２０  ラクタム有Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号５１０）、ＤＭＩＡ１  Ｅ１６  Ｋ２０  ラクタム有  ＣＥＫ  ４０Ｋ（配列番号５１３）、およびＤＭＩＡ１  Ｅ１６  Ｋ２０  ラクタム無  ＣＥＸ  ４０Ｋ（配列番号５２９）；図１０Ｄ：ＡＩＢ２  ラクタム有  Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号５２８）、ＤＭＩＡ１  Ｅ１６  Ｋ２０  ラクタム有  Ｃ２４−４０Ｋ（配列番号５１０）およびＤＭＩＡ１  Ｅ１６  Ｋ２０  ラクタム有／Ｃｅｘ  Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号５１３）、同図において、文字列の終わりの数字は、使用用量である１４または７０ｎｍｏｌ／ｋｇ／週を示す；図１０Ｅ：ＡＩＢ２  ラクタム無  Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号４８６）、Ｃｈｉ２  ＡＩＢ２  Ｃ２４  ＣＥＸ  ４０Ｋ（配列番号５３３）、ＡＩＢ２  Ｅ１６  Ａ１８  Ｋ２０  Ｃ２４  ４０Ｋ（配列番号４９２）、ＡＩＢ２  ラクタム無  ＣＥＸ  Ｇ２９  Ｃ４０  ４０Ｋ（配列番号４８８）、ＡＩＢ２  ラクタム無  ＣＥＸ  Ｃ４０  Ｃ４１−２（配列番号５３２）、ＡＩＢ２  ラクタム無  ＣＥＸ  Ｃ２４  Ｃ４０−２（配列番号５３１）およびＡＩＢ２  ラクタム無  Ｃ２４  ６０Ｋ（配列番号４９８）、同図において、表示４０Ｋまたは６０Ｋは、グルカゴンペプチドに付着するポリエチレン鎖の分子量を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
＜定義＞
本発明を説明し、その特許を主張するに当たり、下記の語法が、下記に記載される定義に従って使用される。
【００４０】
本明細書で用いる「薬学的に受容可能な担体」という用語は、標準的な製剤担体、例えば、リン酸バッファー生理的食塩水、水、乳液、例えば、油／水または水／脂乳液、および種々のタイプの湿潤剤の内のいずれかを含む。本用語はさらに、ヒトを含む動物における使用に関して、米国連邦政府の規制当局によって承認されるか、または、米国薬局方に掲載される、任意の薬剤を包含する。
【００４１】
本明細書で用いる「薬学的に受容可能な塩」という用語は、母体化合物の生物活性を保持するが、生物学的にもまたは他の点でも有害でない、化合物の塩を指す。本明細書に開示される化合物の多くは、アミノ基および／またはカルボキシル基、または、それと同様の基があるために、酸性および／または塩基性塩を形成することが可能である。
【００４２】
薬学的に受容可能な塩基添加塩は、無機および有機塩から調製することが可能である。無機塩から得られる塩としては、例示としてのみ述べると、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基から得られる塩としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、一次、二次、および三次アミンの塩が挙げられる。
【００４３】
薬学的に受容可能な酸添加塩は、無機および有機酸から調製されてもよい。無機酸から得られる塩としては、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。有機酸から得られる塩としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、シナモン酸、マンデル酸、メタンスルフォン酸、エタンスルフォン酸、ｐ−トルエンスルフォン酸、サリチル酸などが挙げられる。
【００４４】
本明細書で用いる「治療する」という用語は、特定の障害または病態の予防、または、特定の障害または病態に関連する症状の緩和、および／または、前記症状の防止または根絶を含む。例えば、本明細書で用いる「糖尿病を治療する」という用語は、一般に、血中のグルコースレベルを正常レベルに向けて変えることを指し、与えられた条件に応じて血中のグルコースレベルを上昇または下降させることを含んでもよい。
【００４５】
本明細書で用いる、グルカゴンペプチドの「有効」量、または「治療的有効量」とは、該ペプチドの、無害であるが、所望の作用を実現するのに十分な量を指す。例えば、一つの所望の作用は、例えば、血中グルコースレベルの増加によって測定される、低血糖症の予防または治療が考えられる。本開示のコアゴニスト類縁体の、別の所望の作用としては、例えば、血中グルコースレベルの正常により近づく変化によって測定される、高血糖症の治療、または、例えば、体重の低下によって測定される減量の誘導／体重増加の阻止、または、体重増加の阻止若しくは軽減、または、体脂肪分布の正常化が挙げられよう。「有効な」量は、被検体によってまちまちで、個体の年齢および一般的状態、投与方式などに応じて変動する。従って、正確な「有効量」を特定することは常に可能とは限らない。しかしながら、任意の個別症例における適切な「有効」量は、当業者であれば、通例の実験手法によって定めることが可能である。
【００４６】
「非経口的」という用語は、消化管を介さず、何らかの別ルート、例えば、皮下、筋肉内、脊髄内、または静脈内によることを意味する。
【００４７】
本明細書で用いる「精製された」および同様の用語は、ある分子または化合物について、それが生まれた、または天然の環境において、通常それと関連する汚染物を事実上含まない形に、該分子または化合物を単離することを指す。本明細書で用いる「精製」という用語は、絶対的純度を要求しない；むしろ、本用語は相対的定義であることが意図される。「精製ポリペプチド」という用語は、本明細書では、他の化合物、例えば、ただしこれらに限定されないが、核酸分子、脂質、および炭水化物から分離されたポリペプチドを記載するのに用いられる。
【００４８】
「単離された」という用語は、参照される物質が、その元々の環境（例えば、それが天然産であれば、天然環境）から取り出されることを要求する。例えば、生きている動物の体内に存在する天然産ポリヌクレオチドは単離されていないが、同じポリヌクレオチドは、天然系において共存する物質のいくつか、または全てと分離されていると、単離されている。
【００４９】
本明細書で用いる「ペプチド」という用語は、３個以上で、通常５０個未満のアミノ酸で、該アミノ酸が、天然または非天然アミノ酸である、アミノ酸配列を包含する。非天然アミノ酸とは、天然では体内に見られないが、にも拘らず、本明細書に記載されるペプチド構造の中に取り込むことが可能なアミノ酸を指す。
【００５０】
本明細書で用いる「ポリペプチド」および「タンパク」という用語は、アミノ酸のポリマーを、該ポリマーの長さとは無関係に、指すために相互交換的に用いられる用語である。通常、ポリペプチドおよびタンパクは、「ペプチド」のものよりも大きいポリマー長を有する。
【００５１】
本明細書で用いる「グルカゴンペプチド」は、配列番号１のアミノ酸配列か、または、配列番号１のアミノ酸配列の類縁体であって、アミノ酸置換、付加、欠失、または翻訳後修飾（例えば、メチル化、アシル化、ユビキチン化、分子内共有結合、例えば、ラクタム架橋形成、ＰＥＧ化など）を含み、例えば実施例１４に記載するアッセイを用いるｃＡＭＰ生産の測定において、グルカゴンまたはＧＬＰ−１受容体活性を刺激するような類縁体を含む、任意のペプチドを含む。
【００５２】
「グルカゴンアゴニスト」という用語は、例えば実施例１４に記載するアッセイを用いるｃＡＭＰ生産の測定においてグルカゴン受容体活性を刺激するようなグルカゴンペプチドを含む、複合体を指す。
【００５３】
「グルカゴンアゴニスト類縁体」とは、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５から成る群から選ばれる配列か、または、該配列の類縁体であって、位置２、５、７、１０、１１、１２、１３、１４、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２７、２８、または２９の一つ以上において、一つ以上の保存的アミノ酸置換を含むように修飾される類縁体を含む、グルカゴンペプチドである。
【００５４】
本明細書で用いるアミノ酸「修飾」とは、アミノ酸の置換、付加、または欠失を指し、ヒトのタンパク質中に一般的に見出される２０種のアミノ酸、および、非典型的または非天然産アミノ酸の内の任意のアミノ酸による、置換または付加を含む。本明細書を通じて、数字による、ある特定アミノ酸位置の参照（例えば、位置２８）は、全て、天然グルカゴン（配列番号１）中のその位置におけるアミノ酸、または、天然グルカゴンの任意の類縁体中の、対応するアミノ酸位置におけるアミノ酸を指す。例えば、本明細書における「位置２８」への参照は、配列番号１の最初のアミノ酸が欠失されたグルカゴン類縁体では、対応する位置２７を意味する。同様に、本明細書における「位置２８」への参照は、配列番号１のＮ末端の前に一アミノ酸を付加されたグルカゴン類縁体では、対応する位置２９を意味する。非典型的アミノ酸の市販の供給源としては、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）、ＣｈｅｍＰｅｐ  Ｉｎｃ．（Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）、およびＧｅｎｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）が挙げられる。非典型的アミノ酸は、供給業者から購入してもよいし、新たに合成してもよいし、または、他のアミノ酸を化学的に修飾しても、または他のアミノ酸から誘導してもよい。
【００５５】
本明細書で用いる「グルカゴンコアゴニスト」とは、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンに比べ、少なくとも約１０％から約５００％以上の活性を示し、さらに、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１に比べ、少なくとも約１０％から約２００％かそれ以上の活性を示す、グルカゴンペプチドである。
【００５６】
本明細書で用いる「グルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニスト分子」とは、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンに比べ、少なくとも約１０％の活性を示し、さらに、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１に比べ、少なくとも約１０％の活性を示す、分子である。
【００５７】
本明細書で用いる「天然グルカゴン」という用語は、配列番号１の配列から成るペプチドを指し、「天然ＧＬＰ−１」という用語は、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド（配列番号５２の配列から成る）、ＧＬＰ−１（７−３７）酸（配列番号５０の配列から成る）、または、これら二つの化合物の混合物を示す一般用語である。本明細書で用いる場合、「グルカゴン」または「ＧＬＰ−１」に対する、それ以上の表示無しの、一般的参照は、それぞれ、天然グルカゴン、または天然ＧＬＰ−１を意味することが意図される。
【００５８】
本明細書で用いるアミノ酸「置換」とは、一アミノ酸残基の、異なるアミノ酸残基による置換を指す。
【００５９】
本明細書で用いる「保存的アミノ酸置換」という用語は、本明細書では、下記の５群の内の一群内における交換と定義される。
Ｉ．小型の脂肪族で、非極性か、または僅かな極性を持つ残基：
Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性で、負に帯電した残基、およびそれらのアミドおよびエステル：
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、システイン酸、およびホモシステイン酸；
ＩＩＩ．極性で、正に帯電した残基：
Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；オルニチン（Ｏｒｎ）
ＩＶ．大型で、脂肪族で、非極性の残基：
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
Ｖ．大型で、芳香族の残基：
Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、アセチルフェニルアラニン
【００６０】
本明細書で用いる一般用語「ポリエチレングリコール鎖」または「ＰＥＧ鎖」は、一般式Ｈ（ＯＣＨ2ＣＨ2）nＯＨ（ｎは９以上）によって表される、分枝鎖または直鎖形状を取る、エチレンオキシドおよび水の縮合ポリマーの混合物を指す。それ以上の特定が無い場合、この用語は、５００から４０，０００ダルトンの範囲から選ばれる平均総分子量を持つ、エチレングリコールのポリマーを含むことが意図される。「ポリエチレングリコール鎖」または「ＰＥＧ鎖」は、その、凡その平均分子量を示すために、数字接尾語と組み合わせて使用される。例えば、ＰＥＧ−５，０００は、約５，０００の平均総分子量を持つポリエチレングリコール鎖を指す。
【００６１】
本明細書で用いる「ＰＥＧ化」という用語、および同様の用語は、ポリエチレングリコールを連結することによってその天然状態から修飾されている化合物を指す。「ＰＥＧ化グルカゴンペプチド」とは、共有結合させたＰＥＧ鎖を有するグルカゴンペプチドである。
【００６２】
本明細書で用いる、ペプチドに対する一般的な参照は、アミノおよびカルボキシ末端が修飾されたペプチドを包含することが意図される。例えば、末端カルボン酸に代わってアミド基を含むアミノ酸は、標準的アミノ酸を表示するアミノ酸配列によって包含されることが意図される。
【００６３】
本明細書で用いる「リンカー」とは、二つの別々の実体を互いに結合する、結合体、分子、または分子の基である。リンカーは、二つの実体の間の最適間隔を実現してもよいし、あるいはさらに、二つの実体の互いからの分離を可能とする不安定リンカーを供給してもよい。不安定結合としては、光分断基、酸不安定成分、塩基不安定成分、および酵素分断基が挙げられる。
【００６４】
本明細書で用いる「二量体」とは、リンカーを介して互いに共有結合される二つのサブユニットを含む複合体である。それ以上の特徴説明無く使用される場合、二量体という用語は、ホモ二量体とヘテロ二量体の両方を含む。ホモ二量体は、二つの同一サブユニットを含み、一方、ヘテロ二量体は、異なる二つのサブユニットを含むが、ただし、これらの二つのサブユニットは、事実上互いに近似する。
【００６５】
本明細書で用いる「荷電アミノ酸」という用語は、生理的ｐＨの水溶液において負に帯電（すなわち、脱プロトン化）、または正に帯電（すなわち、プロトン化）する側鎖を含むアミノ酸を指す。例えば、負に帯電するアミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン酸、ホモシステイン酸、およびホモグルタミン酸を含み、一方、正に帯電するアミノ酸は、アルギニン、リシン、およびヒスチジンを含む。荷電アミノ酸は、ヒトタンパク質の中に一般に見出される２０個のアミノ酸の中の荷電アミノ酸の外、非典型的な、すなわち、非天然産のアミノ酸も含む。
【００６６】
本明細書で用いる「酸性アミノ酸」という用語は、第２酸性成分、例えば、カルボン酸、またはスルフォン酸基を含むアミノ酸を指す。
【００６７】
＜実施態様＞
本発明は、グルカゴン受容体、またはＧＬＰ−１受容体のいずれか、または両方に対して、活性が増大しているか、低下しているグルカゴンペプチドを提供する。本発明はさらに、ＧＬＰ−１受容体に比べ、グルカゴン受容体に対する選択性を変更されているグルカゴンペプチドを提供する。
【００６８】
グルカゴン受容体に対する活性の増大は、本明細書に記載される通り、天然グルカゴン（配列番号１）の位置１６におけるアミノ酸修飾によって実現される。
【００６９】
グルカゴン受容体に対する活性の低下は、本明細書に記載される通り、例えば位置３におけるアミノ酸修飾によって実現される。
【００７０】
ＧＬＰ−１受容体に対する活性の増大は、Ｃ末端アミノ酸のカルボン酸を、荷電−中性基、例えば、アミドまたはエステルによって置換することによって実現される。
【００７１】
ＧＬＰ−１受容体に対する活性の増大は、本明細書に記載される通り、３個の介在アミノ酸によって隔てられる、二つのアミノ酸、例えば、位置１２と１６、または１６と２０、または２０と２４のアミノ酸、の側鎖の間において分子内架橋の形成を可能とするような、修飾によって実現される。
【００７２】
ＧＬＰ−１受容体に対する活性の増大は、本明細書に記載される通り、位置２０におけるアミノ酸の修飾によって実現される。
【００７３】
ＧＬＰ−１受容体に対する活性の増大は、配列番号２６のＣ末端延長部を含むグルカゴン類縁体において実現される。配列番号２６を含むこれらの類縁体におけるＧＬＰ−１活性は、本明細書に記載される通り、位置１８、２８、若しくは２９、または位置１８および２９においてアミノ酸を修飾することによって、さらに増大させることが可能である。
【００７４】
位置１および２におけるアミノ酸修飾によって低下したグルカゴン活性の回復は、３個の介在アミノ酸によって隔てられる二つのアミノ酸、例えば、本明細書に記載される通り、位置１２と１６、または１６と２０、または２０と２４のアミノ酸、の側鎖の間の共有結合によって実現される。
【００７５】
ＧＬＰ−１効力のさらなる中程度の増大が、位置１０におけるアミノ酸をＴｒｐとなるように修飾することによって実現される。
【００７６】
グルカゴン受容体活性を増大または低下させる上記修飾、および、ＧＬＰ−１受容体活性を増大させる上記修飾は、そのいずれも、個別に、または組み合わせて適用してよい。さらに、前述の修飾のいずれも、他の所望の特性、例えば、可溶性および／または安定性および／または作用持続時間の増大・延長をもたらす、他の修飾と組み合わせることも可能である。それとは別に、前述の修飾は、いずれも、可溶性または安定性または活性に事実上影響を及ぼさない、他の修飾と組み合わせることも可能である。例示の修飾としては下記が挙げられるが、ただしこれらに限定されない：
（Ａ）可溶性の向上、これを、例えば、天然グルカゴンのＣ末端部分に対し、好ましくは、位置２７のＣ末端部において、一つ、二つ、三つ、またはそれ以上の荷電アミノ酸（単数または複数）を導入することによって実現する。このような荷電アミノ酸は、例えば、位置２８または２９において天然アミノ酸を荷電アミノ酸で置換することによって、または、それとは別に、例えば、位置２７、２８、または２９の後に荷電アミノ酸を加えることによって、導入することが可能である。例示の実施態様では、荷電アミノ酸の内の一つ、二つ、三つ、または全てが負に帯電してる。別の実施態様では、荷電アミノ酸の内の一つ、二つ、三つ、または全てが正に帯電している。このような修飾は、可溶性を増し、例えば、２５℃で２４時間後測定した場合、約５．５と８の間の任意のｐＨ、例えば、ｐＨ７において、天然のグルカゴンに比べ、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２５倍、３０倍、またはそれ以上の可溶性を実現する。
（Ｂ）可溶性、および作用持続時間または循環中の半減期の増大、これを、本明細書に記載される通り、例えば、ペプチドの位置１６、１７、２０、２１、２４、または２９、またはＣ末端において、親水性成分、例えば、ポリエチレングリコール鎖を付加することによって実現する。
（Ｃ）安定性の増大、これを、位置１５におけるアスパラギン酸の修飾、例えば、欠失、またはグルタミン酸、ホモグルタミン酸、システイン酸、またはホモシステイン酸による置換によって実現する。このような修飾は、５．５から８の範囲のｐＨにおいて分解または切断を抑え、２５℃で２４時間後、元のペプチドの少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を維持することができる。
（Ｄ）安定性の増大、これを、位置２７におけるアミノ酸の修飾、例えば、メチオニン、ロイシン、またはノルロイシンによる置換によって実現する。このような修飾は、酸化分解を抑えることが可能である。
（Ｅ）ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ  ＩＶ）切断に対する耐性の増大、これを、本明細書に記載される通り、位置１または２におけるアミノ酸の修飾によって実現する。
（Ｆ）活性に影響を及ぼさない保存的置換、付加、または欠失、例えば、位置２、５、７、１０、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２７、２８、または２９の内の一つ以上における保存的置換；または、アミノ酸２９の欠失、これを、必要に応じて、Ｃ末端カルボン酸基の代わりとしての、Ｃ末端アミドまたはエステルと組み合わせること。
（Ｇ）本明細書に記載される通り、Ｃ末端延長部を付加すること。
（Ｈ）本明細書に記載される通り、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成すること。
【００７７】
例示の実施態様では、グルカゴンペプチドは、天然グルカゴン配列に対し、合計で、１個、最大２、最大３、最大４、最大５、最大６、最大７、最大８、最大９、または最大１０個のアミノ酸修飾を含んでもよい。
【００７８】
本明細書に開示される一実施態様は、グルカゴン受容体に対するペプチド効力を強化するために、Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ（配列番号１）の野生型ペプチドに対して修飾された、グルカゴンアゴニストに関する。驚くべきことに、本出願人らは、天然グルカゴン（配列番号１）の位置１６において通常見られるセリンは、選ばれた酸性アミノ酸で置換することによって、有効性実証済みインビトロモデルアッセイ（実施例１４参照）におけるｃＡＭＰ合成を刺激する能力という観点から見た場合、グルカゴンの効力を強化することが可能であることを発見した。さらに具体的に言うと、この置換は、グルカゴン受容体に対する、この類縁体の効力を、少なくとも２倍、４倍、５倍、および最大１０倍まで強化する。この置換はさらに、ＧＬＰ−１受容体に対する該類縁体の活性も、天然グルカゴンに比べ、少なくとも５倍、１０倍、または１５倍強化するが、ＧＬＰ−１受容体に対してよりもグルカゴン受容体に対してより高い選択性は維持される。
【００７９】
一実施態様によれば、天然グルカゴンの位置１６におけるセリン残基は、グルタミン酸、グルタミン、ホモグルタミン酸、ホモシステイン酸、トレオニン、またはグリシンから成る群から選ばれるアミノ酸によって置換される。一実施態様によれば、天然グルカゴンの位置１６におけるセリン残基は、グルタミン酸、グルタミン、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成る群から選ばれるアミノ酸によって置換され、一実施態様では、該セリン残基は、グルタミン酸によって置換される。一実施態様では、グルカゴン受容体に対する特異性を強化されたグルカゴンペプチドは、配列番号８、配列番号９、配列番号１０のペプチド、または、そのグルカゴンアゴニスト類縁体を含み、ここで、カルボキシ末端アミノ酸は、その天然のカルボン酸基を保持する。一実施態様によれば、ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＣＯＯＨ（配列番号１０）の配列を含むグルカゴンアゴニストが提供されるが、ここで、本ペプチドは、実施例１４のインビトロｃＡＭＰアッセイで測定した場合、天然グルカゴンに比べ、グルカゴン受容体に対しほぼ５倍に強化された効力を示す。
【００８０】
本発明のグルカゴンペプチドは、生理的ｐＨの水溶液において、天然グルカゴンに比べ高い生物学的活性を維持しつつ、該ペプチドの可溶性および安定性を向上させるように修飾することが可能である。一実施態様によれば、配列番号９または配列番号１０のペプチドの位置１７、２１、および２４に親水基を導入することによって、生理的ｐＨを持つ溶液において、この高効力グルカゴン類縁体の可溶性および安定性も向上されることが期待される。このような基の導入はさらに、例えば、循環における半減期の延長によって測定した場合、作用持続時間を延長する。適切な親水性成分としては、当該技術分野で公知の水溶性ポリマーであればいずれのものであってもよいが、例えば、ＰＥＧ、ＰＥＧのホモまたはコポリマー、ＰＥＧのモノメチル置換ポリマー（ｍＰＥＧ）、またはポリオキシエチレングリセロール（ＰＯＧ）が挙げられる。一実施態様によれば、親水基は、ポリエチレン（ＰＥＧ）鎖を含む。より具体的には、一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号６または配列番号７の配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖は、グルカゴンペプチドの位置２１および２４に存在するアミノ酸の側鎖に共有結合され、該ペプチドのカルボキシ末端アミノ酸は、カルボン酸基を持つ。
【００８１】
本開示はさらに、本発明のグルカゴンペプチドが、必要に応じて共有結合を介して、必要に応じてリンカーを介して、連結される、他の結合体も包含する。連結は、化学的共有結合や、例えば静電気、水素、イオン性、ファンデルワールスなどの物理的力、または疎水性若しくは親水性の相互作用によって実現されてもよい。種々の非共有結合性の結合システム、例えば、ビオチン−アビジン、リガンド／受容体、酵素／基質、核酸／核酸結合タンパク、脂質／脂質結合タンパク、細胞接着分子パートナー同士；または、相互に親和性を持つ、任意の結合パートナー同士、またはそれらの断片、を用いてもよい。
【００８２】
例示の結合体としては、例えば、ただしこれらに限定されないが、異種ペプチドまたはポリペプチド（例えば、血漿タンパクを含む）、標的剤、免疫グロブリンまたはその一部（例えば、可変域、ＣＤＲ、またはＦｃ領域）、例えば、放射性同位元素、蛍光色素、または酵素標識のような診断標識、水溶性ポリマーを含むポリマー、または他の治療または診断薬剤が挙げられる。一実施態様では、本発明のグルカゴンペプチドおよび血漿タンパクを含む結合体が提供される。ここで、血漿タンパクは、アルブミン、トランスフェリン、フィブリノーゲン、およびグロブリンから選ばれる。一実施態様では、結合体の血漿タンパク成分は、アルブミンまたはトランスフェリンである。ある実施態様では、リンカーは、１〜約６０、または１〜３０原子長またはそれ以上、２〜５原子、２〜１０原子、５〜１０原子、または１０〜２０原子長の原子鎖を含む。ある実施態様では、鎖原子は全て炭素原子である。ある実施態様では、リンカーのバックボーンの鎖原子は、Ｃ、Ｏ、Ｎ、およびＳから成る群から選ばれる。鎖原子およびリンカーは、より可溶性の高い結合体を実現するために、その期待される可溶性（親水性）に従って選ばれてもよい。ある実施態様では、リンカーは、酵素、または他の触媒によって、または、標的組織または器官または細胞の中に認められる加水分解条件によって分断され易い官能基を提供する。ある実施態様では、リンカーの長さは、立体的阻害の可能性を下げるのに十分な長さである。リンカーが共有結合か、またはペプチジル結合で、結合体がポリペプチドである場合、結合体の全体は、融合タンパクであってもよい。このようなペプチジルリンカーは、任意の長さを持ってもよい。例示のリンカーは、約１〜５０アミノ酸長、５〜５０、３〜５、５〜１０、５〜１５、または１０〜３０アミノ酸長である。このような融合タンパクは、別法として、当業者には公知の組み換え遺伝子工学法によって生産してもよい。
【００８３】
本開示はさらに、第２ペプチドまたはポリペプチドが、グルカゴンペプチドの末端、例えば、カルボキシ末端に融合される、グルカゴン融合ペプチドまたはタンパクを包含する。さらに具体的には、この融合グルカゴンペプチドは、グルカゴンペプチドのアミノ酸２９に連結した、配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）、または配列番号２８（ＫＲＮＲ）のアミノ酸をさらに含む、配列番号５５、配列番号９、または配列番号１０のグルカゴンアゴニストを含んでもよい。一実施態様では、配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）、または配列番号２８（ＫＲＮＲ）のアミノ酸配列は、ペプチド結合を介して、グルカゴンペプチドのアミノ酸２９に結合される。本出願人らは、エキセンディン−４（例えば、配列番号２６、または配列番号２９）のＣ末端延長ペプチドを含む、グルカゴン融合ペプチドにおいて、位置２９における天然のトレオニン残基をグリシンで置換すると、ＧＬＰ−１受容体活性が目覚しく増大することを発見した。このアミノ酸置換は、ＧＬＰ−１受容体に対するグルカゴン類縁体の親和性を強化するために、本明細書に開示される他の修飾と組み合わせて使用することが可能である。例えば、Ｔ２９Ｇ置換は、必要に応じてアミノ酸１６と２０の間のラクタム架橋、および、必要に応じて、本明細書に記載される通り、ＰＥＧ鎖の付加と共に、Ｓ１６ＥおよびＮ２０Ｋアミノ酸置換と組み合わせることが可能である。一実施態様では、配列番号６４の配列を含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供される。一実施態様では、グルカゴン融合ペプチドのグルカゴンペプチド部分は、配列番号５５、配列番号２、配列番号３、配列番号４、および配列番号５から成る群から選ばれ、ここで、ＰＥＧ鎖は、位置１７、２１、２４、またはＣ末端アミノ酸にある場合、または、２１および２４の両方にある場合、５００から４０，０００ダルトンの範囲から選ばれる。さらに具体的には、一実施態様では、グルカゴンペプチド・セグメントは、配列番号７、配列番号８、および配列番号６３から選ばれ、ここで、ＰＥＧ鎖は、５００から５，０００の範囲から選ばれる。一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号５５および配列番号６５の配列を含む融合タンパクであり、ここで、配列番号６５のペプチドは、配列番号５５のカルボキシ末端に連結される。
【００８４】
一実施態様によれば、配列番号１０のグルカゴンペプチドの、付加的化学修飾は、グルカゴン受容体およびＧＬＰ−１受容体に対する相対的活性がほぼ等しくなる点まで、ＧＬＰ−１受容体効力の増大をもたらす。従って、一実施態様では、本発明のグルカゴンペプチドの末端アミノ酸が、天然のアミノ酸に存在するカルボン酸基の代わりにアミド基を持つ、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供される。このグルカゴン類縁体の、グルカゴンおよびＧＬＰ−１受容体それぞれに対する相対的活性は、該グルカゴンペプチドに対するさらに追加の修飾によって調節することが可能であって、グルカゴン受容体に対し、天然グルカゴンの活性の約４０％から約５００％またはそれ以上、ＧＬＰ−１受容体に対し、天然ＧＬＰ−１の活性の約２０％から約２００％またはそれ以上、例えば、ＧＬＰ−１受容体にたいするグルカゴンの通常活性に比べて、５０倍、１００倍またはそれ以上の増大を示す類縁体を生じることができる。
【００８５】
さらに別の実施態様では、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニスト活性を示す、グルカゴン類縁体が提供されるが、ここで、該ペプチドのカルボキシ末端の三次元構造を安定化するために、二つのアミノ酸側鎖の間に分子内架橋が形成される。さらに具体的には、アミノ酸ペア１２および１６、１６および２０、２０および２４、または、２４および２８の側鎖が、互いに連結されて、グルカゴンのアルファヘリックスを安定化する。この二つの側鎖は、水素結合、イオン相互作用、例えば、塩橋の形成など、または共有結合によって互いに連結することが可能である。ある実施態様では、リングまたはリンカーのサイズは、約８原子、または約７〜９原子である。
【００８６】
共有結合して７原子連結架橋を形成することが可能な、アミノ酸ペアの例としては、Ｏｒｎ−Ｇｌｕ（ラクタム環）；Ｌｙｓ−Ａｓｐ（ラクタム）；またはＨｏｍｏｓｅｒ−Ｈｏｍｏｇｌｕ（ラクトン）が挙げられる。８原子リンカーを形成することが可能なアミノ酸ペアの例としては、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ（ラクタム）；Ｈｏｍｏｌｙｓ−Ａｓｐ（ラクタム）；Ｏｒｎ−Ｈｏｍｏｇｌｕ（ラクタム）；４−アミノＰｈｅ−Ａｓｐ（ラクタム）；またはＴｙｒ−Ａｓｐ（ラクトン）が挙げられる。９原子リンカーを形成することが可能なアミノ酸ペアの例としては、Ｈｏｍｏｌｙｓ−Ｇｌｕ（ラクタム）；Ｌｙｓ−Ｈｏｍｏｇｌｕ（ラクタム）；４−アミノＰｈｅ−Ｇｌｕ（ラクタム）；またはＴｙｒ−Ｇｌｕ（ラクトン）が挙げられる。これらのアミノ酸における側鎖のいずれも、アルファヘリックスの三次元構造が破壊されない限り、別の化学基によってさらに置換されてもよい。当業者であれば、同様のサイズ、および所望の作用の安定化構造を生み出すと考えられる、別のペアまたは別のアミノ酸類縁体を着想することが可能である。例えば、ホモシステイン−ホモシステインジスルフィド架橋は６原子長であるが、所望の作用を発揮するようさらに修飾してもよい。場合によっては共有結合でなくとも、当業者が着想可能な、前述のアミノ酸ペア、または類似のペアが、非共有結合性の結合を介して、例えば、塩橋または水素結合相互作用の形成を介して、アルファヘリックスに対しさらに安定性を付与することも可能である。
【００８７】
さらに別の例示実施態様として、必要に応じてラクタム架橋を有する、下記のペアが挙げられる：位置１２のＧｌｕと位置１６のＬｙｓ；位置１２の天然Ｌｙｓと位置１６のＧｌｕ；位置１６のＧｌｕと位置２０のＬｙｓ；位置１６のＬｙｓと位置２０のＧｌｕ；位置２０のＧｌｕと位置２４のＬｙｓ；位置２０のＬｙｓと位置２４のＧｌｕ；位置２４のＧｌｕと位置２８のＬｙｓ；位置２４のＬｙｓと位置２８のＧｌｕ。
【００８８】
一実施態様によれば、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニスト活性を呈するグルカゴン類縁体であって、配列番号１１、４７、４８、および４９から成る群から選ばれるアミノ酸を含むグルカゴン類縁体が提供される。一実施態様では、側鎖同士が互いに共有結合され、一実施態様では、二つのアミノ酸同士が互いに結合されてラクタム環を形成する。このラクタム環のサイズは、アミノ酸側鎖の長さに応じて変動することが可能であるが、一実施態様では、ラクタムは、リシンアミノ酸の側鎖を、グルタミン側鎖に連結することによって形成される。
【００８９】
ラクタム環におけるアミド結合の順序は逆転してもよい（例えば、ラクタム環は、Ｌｙｓ１２およびＧｌｕ１６の側鎖の間に形成されてもよいし、あるいは別に、Ｇｌｕ１２とＬｙｓ１６の間に形成されてもよい）。一実施態様によれば、配列番号４５のグルカゴン類縁体が提供されるが、ここで、少なくとも一つのラクタム環が、アミノ酸ペア１２および１６、１６および２０、２０および２４、または２４および２８から成る群から選ばれるアミノ酸ペアの側鎖の間に形成される。一実施態様では、配列番号２０のグルカゴンペプチド類縁体を含むグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストが提供されるが、ここで、該ペプチドは、アミノ酸位置１２および１６間、またはアミノ酸位置１６および２０の間に形成される分子内ラクタム架橋を含む。一実施態様では、配列番号２０の配列を含むグルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストが提供されるが、ここで、分子内ラクタム架橋が、アミノ酸位置１２および１６の間、アミノ酸位置１６および２０の間、またはアミノ酸位置２０および２４の間に形成され、また、位置２９のアミノ酸はグリシンであり、配列番号２０のＣ末端アミノ酸に対し配列番号２９の配列が連結される。さらに別の実施態様では、位置２８のアミノ酸は、アスパラギン酸である。
【００９０】
配列番号２０のグルカゴンペプチドの可溶性は、例えば、配列番号２０のグルカゴンペプチドのＣ末端部分、好ましくはＣ末端位置から位置２７において、１、２、３、またはそれ以上の荷電アミノ酸（単数または複数）を導入することによって、さらに高めることが可能である。このような荷電アミノ酸は、例えば、位置２８または２９において天然アミノ酸を荷電アミノ酸で置換することによって、または、それとは別に、例えば、位置２７、２８、または２９の後に荷電アミノ酸を加えることによって、導入することが可能である。例示の実施態様では、荷電アミノ酸の内の、一つ、二つ、三つ、または全部が負に帯電している。それとは別に、可溶性は、該ペプチドに、親水性成分、例えば、ポリエチレングリコールを共有結合することによって強化することが可能である。
【００９１】
一実施態様によれば、配列番号５５の配列を含むが、位置１、２、３、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２１、２４、２７、２８、および２９から選ばれる１乃至３個のアミノ酸だけ、配列番号５５とは異なるグルカゴン類縁体であって、ＧＬＰ−１受容体に対し天然ＧＬＰ−１活性の少なくとも２０％を示すグルカゴン類縁体が提供される。
【００９２】
一実施態様によれば、配列：ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号３３）を含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供されるが、ここで、位置１５のＸａａが、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、システイン酸、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成るアミノ酸群から選ばれ、位置１６のＸａａが、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成るアミノ酸群から選ばれ、位置２０のＸａａがＧｌｎまたはＬｙｓであり、位置２４のＸａａがＧｌｎまたはＧｌｕであり、位置２８のＸａａが、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、または酸性アミノ酸であり、位置２９のＸａａが、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、または酸性アミノ酸であり、Ｒが、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ2であり、ただし、位置１６がセリンである場合、位置２０はＬｙｓであること、あるいはまた、位置１６がセリンである場合、位置２４がＧｌｕであり、且つ位置２０または位置２８のどちらかがＬｙｓであることを条件とする。一実施態様では、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストは、配列番号３３の配列を含み、ここで、位置２８のアミノ酸はアスパラギン酸であり、位置２９のアミノ酸はグルタミン酸である。別の実施態様では、位置２８のアミノ酸は、天然アスパラギンであり、位置２９のアミノ酸はグリシンであり、配列番号２９または配列番号６５のアミノ酸配列は、配列番号３３のカルボキシ末端に共有結合される。
【００９３】
一実施態様において、配列番号３３の配列において、該ペプチドのカルボキシ末端に、さらに別の酸性アミノ酸が付加される配列を含む、コアゴニストが提供される。さらに別の実施態様では、このグルカゴン類縁体のカルボキシ末端のアミノ酸は、天然アミノ酸のカルボン酸基の代わりに、アミドを持つ。一実施態様では、このグルカゴン類縁体は、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４から成る群から選ばれる配列を含む。
【００９４】
一実施態様によれば、位置１、２、３、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２１、および２７から選ばれる１乃至３個のアミノ酸だけ配列番号３３とは異なる、配列番号３３のグルカゴンペプチド類縁体が提供されるが、ただし、位置１６のアミノ酸がセリンである場合、位置２０はリシンであるか、または、位置２４のアミノ酸と、位置２０または位置２８のアミノ酸との間にラクタム架橋が形成されることを条件とする。一実施態様によれば、該類縁体は、位置１、２、３、２１、および２７から選ばれる１乃至３個のアミノ酸だけ配列番号３３とは異なる。一実施態様では、配列番号３３の該グルカゴン類縁体は、その配列とは１乃至２個のアミノ酸だけ異なるか、または、一実施態様では、位置１、２、３、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２１、および２７から選ばれる１個のアミノ酸だけ、その配列とは異なるが、ただし、位置１６のアミノ酸がセリンである場合、位置２０はリシンであるか、または、位置２４のアミノ酸と、位置２０または位置２８のアミノ酸との間にラクタム架橋が形成されることを条件とする。
【００９５】
別の実施態様によれば、配列ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｘａａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号５３）を含む、比較的選択性の高いＧＬＰ−１受容体アゴニストが提供されるが、ここで、位置３のＸａａは、Ｇｌｕ、Ｏｒｎ、またはＮｌｅから成るアミノ酸群から選ばれ、位置１５のＸａａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、システイン酸、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成るアミノ酸群から選ばれ、位置１６のＸａａは、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成るアミノ酸群から選ばれ、位置２０のＸａａはＧｌｎまたはＬｙｓであり、位置２４のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕであり、位置２８のＸａａは、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、または酸性アミノ酸であり、位置２９のＸａａは、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、または酸性アミノ酸であり、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、配列番号２６、または配列番号２９であり、ただし、位置１６がセリンである場合、位置２０はＬｙｓであること、あるいはまた、位置１６がセリンである場合、位置２４がＧｌｕであり、且つ位置２０または位置２８のどちらかがＬｙｓであることを条件とする。一実施態様では、位置３のアミノ酸はグルタミン酸である。一実施態様では、位置２８および／または位置２９において置換される酸性アミノ酸は、アスパラギン酸か、またはグルタミン酸である。一実施態様では、コアゴニストペプチドを含むグルカゴンペプチドであって、配列番号３３の配列において、該ペプチドのカルボキシ末端に、さらに別の酸性アミノ酸が付加される配列を含む、グルカゴンペプチドが提供される。さらに別の実施態様では、このグルカゴン類縁体のカルボキシ末端のアミノ酸は、天然アミノ酸のカルボン酸基の代わりに、アミドを持つ。
【００９６】
一実施態様によれば、配列：ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号３４）から成る群から選ばれる修飾グルカゴンペプチドを含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供されるが、ここで、位置１５のＸａａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、システイン酸、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成るアミノ酸群から選ばれ、位置１６のＸａａは、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成るアミノ酸群から選ばれ、位置２０のＸａａはＧｌｎまたはＬｙｓであり、位置２４のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕであり、位置２８のＸａａは、Ａｓｎ、Ａｓｐ、またはＬｙｓであり、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2であり、位置２９のＸａａは、ＴｈｒまたはＧｌｙであり、およびＲはＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、配列番号２６、または配列番号２９であり、ただし、位置１６がセリンである場合、位置２０はＬｙｓであること、あるいはまた、位置１６がセリンである場合、位置２４がＧｌｕであり、且つ位置２０または位置２８のどちらかがＬｙｓであることを条件とする。一実施態様では、ＲはＣＯＮＨ2であり、位置１５のＸａａはＡｓｐであり、位置１６のＸａａは、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ホモグルタミン酸、およびホモシステイン酸から成る群から選ばれ、位置２０および位置２４のＸａａは、それぞれ、Ｇｌｎであり、位置２８のＸａａは、ＡｓｎまたはＡｓｐであり、位置２９のＸａａは、Ｔｈｒである。一実施態様では、位置１５および１６のＸａａは、それぞれ、Ｇｌｕであり、位置２０および２４のＸａａは、それぞれ、Ｇｌｎであり、位置２８のＸａａは、ＡｓｎまたはＡｓｐであり、位置２９のＸａａはＴｈｒであり、ＲはＣＯＮＨ2である。
【００９７】
天然グルカゴンペプチドのいくつかの位置は、母体ペプチドの活性を少なくとも部分的に保持しながら、修飾することが可能であることが報告されている。従って、本出願人らは、配列番号１１の位置２、５、７、１０、１１、１２、１３、１４、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２７、２８、または２９に配置されるアミノ酸の一つ以上を、天然のグルカゴンペプチドに存在するものとは異なるアミノ酸によって置換し、それでもなお、グルカゴン受容体に対する活性を保持することが可能であることを予想する。一実施態様では、天然ペプチドの位置２７に存在するメチオニン残基は、該ペプチドの酸化分解を阻止するために、ロイシンまたはノルロイシンに変えられる。別の実施態様では、位置２０のアミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、またはシトルレンによって置換され、および／または位置２１は、Ｇｌｕ、ホモグルタミン酸、またはホモシステイン酸によって置換される。
【００９８】
一実施態様では、配列番号２０のグルカゴン類縁体であって、位置１、２、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２１、２７、２８、または２９から選ばれる１乃至６個のアミノ酸は配列番号１の対応アミノ酸とは異なるグルカゴン類縁体が提供されるが、ただし、位置１６のアミノ酸がセリンである場合、位置２０はＬｙｓであること、あるいはまた、位置１６がセリンである場合、位置２４はＧｌｕであり、且つ位置２０または位置２８のいずれかがＬｙｓであることを条件とする。別の実施態様によれば、配列番号２０のグルカゴン類縁体であって、位置１、２、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２０、２１、２７、２８、または２９から選ばれる１乃至３個のアミノ酸が配列番号１の対応アミノ酸とは異なる、グルカゴン類縁体が提供される。別の実施態様では、配列番号８、配列番号９、または配列番号１１のグルカゴン類縁体であって、位置１、２、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２０、または２１から選ばれる１乃至２個のアミノ酸が配列番号１の対応アミノ酸とは異なるグルカゴン類縁体が提供され、さらに別の実施態様では、前記１乃至２個の異なるアミノ酸は、天然のグルカゴン配列（配列番号１）に存在するアミノ酸に対し、保存的アミノ酸置換を表す。一実施態様では、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５のグルカゴンペプチドであって、位置２、５、７、１０、１１、１３、１４、１７、１８、１９、２０、２１、２７、または２９の位置から選ばれる位置に、一つ、二つ、または三つのアミノ酸置換をさらに含む、グルカゴンペプチドが提供される。一実施態様では、位置２、５、７、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２７、または２９における置換は、保存的アミノ酸置換である。
【００９９】
一実施態様によれば、配列番号３３の配列の変種を含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供されが、ここに、該変種の位置１６、１７、１８、２０、２１、２３、２４、２７、２８、および２９から選ばれる１乃至１０個のアミノ酸は、それぞれ、配列番号１の対応アミノ酸と異なる。一実施態様によれば、配列番号３３の変種が提供され、ここで、該変種は、Ｇｌｎ１７、Ａｌａ１８、Ｇｌｕ２１、Ｉｌｅ２３、Ａｌａ２４、Ｖａｌ２７、およびＧｌｙ２９から成る群から選ばれる一つ以上のアミノ酸置換だけ配列番号３３とは異なる。一実施態様によれば、配列番号３３の配列の変種を含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供されるが、ここに、該変種の位置１７−２６から選ばれる１乃至２個のアミノ酸は、配列番号１の対応するアミノ酸と異なる。一実施態様によれば、配列番号３３の変種が提供され、ここで、該変種は、Ｇｌｎ１７、Ａｌａ１８、Ｇｌｕ２１、Ｉｌｅ２３、およびＡｌａ２４から成る群から選ばれるアミノ酸置換だけ配列番号３３とは異なる。一実施態様によれば、配列番号３３の配列の変種であって、位置１８におけるアミノ酸置換だけ、配列番号３３と異なる変種が提供され、ここで、その置換アミノ酸は、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、およびＧｌｙから成る群から選ばれる。一実施態様によれば、配列番号３３の配列の変種であって、位置１８におけるＡｌａのアミノ酸置換だけ、配列番号３３とは異なる変種が提供される。このような変種は、配列番号５５によって包含される。別の実施態様では、配列番号３３の配列の変種であって、位置１７〜２２から選ばれる１乃至２個のアミノ酸が、配列番号１の対応アミノ酸とは異なる変種を含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供され、さらに別の実施態様では、配列番号３３の変種であって、位置２０および２１における１または２アミノ酸置換だけ、配列番号３３とは異なる変種が提供される。一実施態様によれば、配列：ＮＨ２−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号５１）を含むグルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供されるが、ここで、位置１５のＸａａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、システイン酸、ホモグルタミン酸、またはホモシステイン酸であり、位置１６のＸａａは、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ホモグルタミン酸、またはホモシステイン酸であり、位置２０のＸａａは、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、またはシトルリンであり、位置２１のＸａａは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ホモグルタミン酸、またはホモシステイン酸であり、位置２４のＸａａはＧｌｎまたはＧｌｕであり、位置２８のＸａａは、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、または酸性アミノ酸であり、位置２９のＸａａは、Ｔｈｒ、または酸性アミノ酸であり、Ｒは、ＣＯＯＨ、またはＣＯＮＨ2である。一実施態様では、ＲはＣＯＮＨ2である。一実施態様によれば、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号４７、配列番号４８、または配列番号���９の変種を含むグルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供され、ここに、該変種は、位置２０におけるアミノ酸置換だけ前記配列とは異なる。一実施態様では、そのアミノ酸置換は、位置２０に対するＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、またはシトルリンから成る群から選ばれる。
【０１００】
一実施態様では、配列番号３４の類縁体ペプチドを含むグルカゴンアゴニストが提供され、該類縁体は、位置２において、セリン以外のアミノ酸を持つことによって配列番号３４とは異なる。一実施態様では、このセリン残基は、アミノイソブチル酸またはアラニンによって置換され、一実施態様では、該セリン残基は、アミノイソブチル酸によって置換される。これらの修飾は、母体化合物の内在的効力（例えば、母体化合物の効力の少なくとも７５、８０、８５、９０、９５％、またはそれ以上）を保持しながら、ジペプチジルペプチダーゼＩＶによる分断を抑える。一実施態様では、類縁体の可溶性は、例えば、天然グルカゴンのＣ末端部分、好ましくは、位置２７からＣ末端までの位置に、１、２、３、またはそれ以上の荷電アミノ酸（単数または複数）を導入することによって増大させられる。例示の実施態様では、該荷電アミノ酸の内の一つ、二つ、三つ、または全てが負に帯電している。別の実施態様では、該類縁体はさらに、位置２８または２９において天然アミノ酸の代わりに置換される酸性アミノ酸を含むか、または、配列番号３４のペプチドのカルボキシ末端に付加された酸性アミノ酸を含む。
【０１０１】
一実施態様では、本明細書に開示されるグルカゴン類縁体はさらに、ジペプチジルペプチダーゼＩＶによる分断に対する感受性を下げるために、位置１または２において修飾される。一実施態様では、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５のグルカゴン類縁体であって、位置２の置換だけ母体分子と異なり、ジペプチジルペプチダーゼＩＶによる分断に対する感受性の低下（すなわち、耐性）を示す、グルカゴン類縁体が提供される。さらに具体的には、一実施態様では、該類縁体ペプチドの位置２は、ｄ−セリン、アラニン、バリン、アミノｎ−ブチル酸、グリシン、Ｎ−メチルセリン、およびアミノイソブチル酸から成る群から選ばれるアミノ酸によって置換される。一実施態様では、該類縁体ペプチドの位置２は、ｄ−セリン、アラニン、グリシン、Ｎ−メチルセリン、およびアミノイソブチル酸から成る群から選ばれるアミノ酸によって置換される。別の実施態様では、該類縁体ペプチドの位置２は、ｄ−セリン、グリシン、Ｎ−メチルセリン、およびアミノイソブチル酸から成る群から選ばれるアミノ酸によって置換される。一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号２１または配列番号２２の配列を含む。
【０１０２】
一実施態様では、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５のグルカゴン類縁体であって、位置１における置換だけ母体分子と異なり、ジペプチジルペプチダーゼＩＶによる分断に対する感受性の低下（すなわち、耐性）を示すグルカゴン類縁体が提供される。さらに具体的には、該類縁体ペプチドの位置１は、ｄ−ヒスチジン、アルファ，アルファ−ジメチルイミダゾール酢酸（ＤＭＩＡ）、Ｎ−メチルヒスチジン、アルファ−メチルヒスチジン、イミダゾール酢酸、デスアミノヒスチジン、ヒドロキシル−ヒスチジン、アセチル−ヒスチジン、およびホモ−ヒスチジンから成る群から選ばれるアミノ酸によって置換される。別の実施態様では、配列番号３４の類縁体ペプチドを含み、位置１においてヒスチジン以外のアミノ酸を有することによって配列番号３４とは異なる、グルカゴンアゴニストが提供される。一実施態様では、該類縁体の可溶性は、例えば、天然グルカゴンのＣ末端部分、好ましくは、位置２７からＣ末端までの位置に、１、２、３、またはそれ以上の荷電アミノ酸（単数または複数）を導入することによって増大させられる。例示の実施態様では、該荷電アミノ酸の内の一つ、二つ、三つ、または全てが負に帯電している。別の実施態様では、該類縁体はさらに、位置２８または２９において天然アミノ酸の代わりに置換される酸性アミノ酸を含むか、または、配列番号３４のペプチドのカルボキシ末端に付加された酸性アミノ酸を含む。一実施態様では、酸性アミノ酸は、アスパラギン酸か、またはグルタミン酸である。
【０１０３】
一実施態様では、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストは、配列番号２０の配列であって、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から成る群から選ばれる、一個のアミノ酸または一個のペプチドの、付加的カルボキシ末端延長部をさらに含む配列を含む。配列番号２０のカルボキシ末端に１個のアミノ酸が付加される実施態様では、該アミノ酸は、通常、２０種の一般的アミノ酸の内の一つから選ばれ、一実施態様では、付加的カルボキシ末端アミノ酸は、天然アミノ酸のカルボン酸の代わりにアミド基を持つ。一実施態様では、該付加的アミノ酸は、グルタミン酸、アスパラギン酸、およびグリシンから成る群から選ばれる。
【０１０４】
別の実施態様では、グルタミン酸残基とリシン残基の側鎖の間に、少なくとも一つのラクタム環を含み、該グルタミン酸残基およびリシン残基が、３アミノ酸だけ隔てられるグルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供される。一実施態様では、ラクタム担持グルカゴンペプチドのカルボキシ末端アミノ酸は、天然アミノ酸のカルボン酸の代わりにアミド基を持つ。さらに具体的には、一実施態様では、下記から成る群から選ばれる修飾グルカゴンペプチドを含むグルカゴンおよびＧＬＰ−１コアゴニストが提供される：
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号６６）
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号６７）
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号６８）
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｘａａ−Ｒ（配列番号６９）
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｒ（配列番号１６）
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｒ（配列番号１７）
ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｒ（配列番号１８）。
上記配列において、位置２８のＸａａ＝ＡｓｐまたはＡｓｎ、位置２９のＸａａは、ＴｈｒまたはＧｌｙであり、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から成る群から選ばれ、ラクタム架橋は、配列６６の場合は、位置１２のＬｙｓおよび位置１６のＧｌｕの間に形成され、配列６７の場合は、位置１６のＧｌｕおよび位置２０のＬｙｓの間に形成され、配列６８の場合は、位置２０のＬｙｓおよび位置２４のＧｌｕの間に形成され、配列６９の場合は、位置２４のＧｌｕおよび位置２８のＬｙｓの間に形成され、配列１６の場合は、位置１２のＬｙｓおよび位置１６のＧｌｕの間、および、位置２０のＬｙｓおよび位置２４のＧｌｕの間に形成され、配列１７の場合は、位置１２のＬｙｓおよび位置１６のＧｌｕの間、および、位置２４のＧｌｕおよび位置２８のＬｙｓの間に形成され、配列１８の場合は、位置１６のＧｌｕおよび位置２０のＬｙｓの間、および、位置２４のＧｌｕおよび位置２８のＬｙｓの間に形成される。一実施態様では、Ｒは、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシンから成る群から選ばれ、位置２８のアミノ酸はＡｓｎであり、位置２９のアミノ酸はトレオニンである。一実施態様では、Ｒは、ＣＯＮＨ2であり、位置２８のアミノ酸はＡｓｎであり、位置２９のアミノ酸はトレオニンである。別の実施態様では、Ｒは、配列番号２６、配列番号２９、および配列番号６５から成る群から選ばれ、位置２９のアミノ酸はグリシンである。
【０１０５】
さらに別の実施態様では、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８から成る群から選ばれ、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から成る群から選ばれる一アミノ酸またはペプチドの、付加的カルボキシ末端延長部をさらに含む、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストが提供される。一実施態様では、この末端延長部は、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号６５の配列を含み、このグルカゴンペプチドは、配列番号５５の配列を含む。一実施態様では、このグルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストは、配列番号３３の配列を含み、ここで、位置１６のアミノ酸はグルタミン酸であり、位置２０のアミノ酸はリシンであり、位置２８のアミノ酸はアスパラギンであり、配列番号２６または配列番号２９のアミノ酸配列は、配列番号３３のカルボキシ末端に連結される。
【０１０６】
１個のアミノ酸が配列番号２０のカルボキシ末端に付加される実施態様では、そのアミノ酸は、通常、２０種の一般的アミノ酸の一つから選ばれるが、一実施態様では、このアミノ酸は、天然アミノ酸のカルボン酸の代わりにアミド基を有する。一実施態様では、この付加的アミノ酸は、グルタミン酸およびアスパラギン酸、およびグリシンから成る群から選ばれる。このグルカゴンアゴニスト類縁体がさらにカルボキシ末端延長部を含む実施態様では、一実施態様では、延長部のカルボキシ末端アミノ酸は、カルボン酸ではなく、アミド基、またはエステル基で終わる。
【０１０７】
別の実施態様では、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストは、配列：ＮＨ2−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｘａａ−ＣＯＮＨ2（配列番号１９）を含み、上式において、位置３０のＸａａは、任意のアミノ酸を表す。一実施態様では、Ｘａａは、２０種の一般的アミノ酸の一つから選ばれ、一実施態様では、このアミノ酸は、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはグリシンである。このペプチドの可溶性は、配列番号１９の位置１７、２１、２４、または３０のアミノ酸の側鎖にＰＥＧ鎖を共有結合することによってさらに向上させることが可能である。さらに別の実施態様では、このペプチドは、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から成る群から選ばれる一ペプチドの、付加的カルボキシ末端延長部を含む。一実施態様によれば、このグルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストは、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３２の配列を含む。
【０１０８】
種々の程度のＧＬＰ−１アゴニズムを持つ一組のグルカゴンアゴニストを生成するために、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、および配列番号６４のグルカゴン配列内部において、さらに別の部位特異的修飾を加えることが可能である。従って、各受容体に対し、ほとんど同じインビトロ効力を持つ複数のペプチドが調製され、その特徴が解明されている。同様に、二つの受容体のそれぞれに対して効力が選択的に１０倍強化されたペプチドが特定され、その特徴が解明されている。前述のように、位置１６のセリン残基をグルタミン酸で置換することによって、グルカゴンとＧＬＰ−１の両受容体に対する、天然グルカゴンの効力が強化されるが、グルカゴン受容体に対する約１０倍の選択性は維持される。さらに、位置３の天然グルタミンをグルタミン酸によって置換することによって（配列番号２２）、ＧＬＰ−１受容体に対し約１０倍の選択性を示すグルカゴン類縁体が生成される。
【０１０９】
さらに、グルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドの、天然グルカゴンに比べて高い生物学的活性を保持しながら、生理的ｐＨの水溶液に対する可溶性を強化することが、該ペプチドの位置１６、１７、２１、および２４に親水基を導入するか、または、カルボキシ末端に、単一の修飾アミノ酸（すなわち、親水基を含むように修飾されるアミノ酸）を付加することによって、実現可能である。一実施態様によれば、親水基は、ポリエチレン（ＰＥＧ）鎖を含む。さらに具体的には、一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、または配列番号１８の配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖は、このグルカゴンペプチドの位置１６、１７、２１、２４、２９のアミノ酸、または、Ｃ末端アミノ酸の側鎖に共有結合され、ただし、ペプチドが、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３を含む場合は、ポリエチレングリコール鎖は、位置１７、２１、または２４のアミノ酸残基に共有結合し、ペプチドが、配列番号１４または配列番号１５を含む場合は、ポリエチレングリコール鎖は、位置１６、１７、または２１のアミノ酸残基に共有結合し、ペプチドが、配列番号１６、配列番号１７、または配列番号１８の配列を含む場合は、ポリエチレングリコール鎖は、位置１７または２１のアミノ酸に共有結合する。
【０１１０】
一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖が、このグルカゴンペプチドの位置１７、２１、２４のアミノ酸、または、Ｃ末端アミノ酸の側鎖に共有結合され、ペプチドのカルボキシ末端アミノ酸は、天然アミノ酸のカルボン酸基の代わりにアミド基を有する。一実施態様では、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストペプチドは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９から成る群から選ばれる配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖は、このグルカゴンペプチドの配列番号１２、配列番号１３、および配列番号１９の位置１７、２１、若しくは２４のアミノ酸、配列番号１４および配列番号１５の位置１６、１７、若しくは２１のアミノ酸、または、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８の位置１７、若しくは２１のアミノ酸、の側鎖に共有結合される。別の実施態様では、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストペプチドは、配列番号１１または配列番号１９の配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖は、位置１７、２１、若しくは２４のアミノ酸、または、このグルカゴンペプチドのＣ末端アミノ酸の側鎖に共有結合される。
【０１１１】
一実施態様によれば、先行パラグラフに記載される制限条件に従うと、グルカゴンコアゴニストペプチドは、位置１６、１７、２１、２４、または２９、またはＣ末端アミノ酸において一つ以上のアミノ酸置換を含むように修飾され、ここで、天然アミノ酸は、例えば、ＰＥＧなどの親水性成分による架橋結合のために好適な側鎖を有するアミノ酸によって置換される。この天然ペプチドは、天然アミノ酸、または合成（非天然産）アミノ酸によって置換することが可能である。合成または非天然産アミノ酸とは、体内で自然状態では発生しないが、にも拘わらず、本明細書に記載されるペプチド構造の中に組み込むことが可能なアミノ酸を指す。それとは別に、例えば、ＰＥＧなどの親水性成分と架橋結合するのに好適な側鎖を有するアミノ酸は、本明細書に開示するどのグルカゴン類縁体であっても、そのカルボキシ末端に付加することが可能である。一実施態様によれば、グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストペプチドにおけるアミノ酸置換は、１６、１７、２１、２４、または２９から成る群から選ばれる位置において、リシン、システイン、オルニチン、ホモシステイン、およびアセチルフェニルアラニンから成る群から選ばれるアミノ酸によって、天然アミノ酸を置換することよって実行され、ここで、さらに、該アミノ酸の側鎖にＰＥＧ鎖が共有結合される。一実施態様では、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９から成る群から選ばれるグルカゴンペプチドはさらに、位置１７または２１のアミノ酸の側鎖にＰＥＧ鎖を共有結合させるように修飾される。一実施態様では、このＰＥＧ化グルカゴン／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストはさらに、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２９を含む。
【０１１２】
別の実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号５５または配列番号５６の配列を含み、さらに、配列番号５５または配列番号５６のＣ末端アミノ酸に連結される、配列番号２６、配列番号２９、または配列番号６５のＣ末端延長部を含み、さらに必要に応じて、位置１７、１８、２１、２４、若しくは２９のアミノ酸、または、Ｃ末端アミノ酸の側鎖に共有結合される、ＰＥＧ鎖を含む。別の実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号５５または配列番号５６の配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖が、該グルカゴンペプチドの位置２１または２４のアミノ酸の側鎖に共有結合し、該ペプチドはさらに、配列番号２６または配列番号２９のＣ末端延長部を含む。
【０１１３】
別の実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号５５、または配列番号３３または配列番号３４の配列を含み、ここで、配列番号３３または配列番号３４のカルボキシ末端にさらに別のアミノ酸が付加され、ＰＥＧ鎖が、該付加アミノ酸の側鎖に共有結合される。さらに別の実施態様では、このＰＥＧ化グルカゴン類縁体はさらに、配列番号３３または配列番号３４のＣ末端アミノ酸に連結される配列番号２６または２９のＣ末端延長部を含む。別の実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号１９の配列を含み、ここで、ＰＥＧ鎖が、該グルカゴンペプチドの位置３０のアミノ酸の側鎖に共有結合され、該ペプチドはさらに、配列番号１９のＣ末端アミノ酸に連結される配列番号２６または配列番号２９のＣ末端延長部を含む。
【０１１４】
ポリエチレングリコール鎖は、直鎖形状を取ってもよいし、分枝鎖状であってもよい。一実施態様によれば、ポリエチレングリコール鎖は、約５００から約１０，０００ダルトンの範囲から選ばれる平均分子量を有する。一実施態様では、ポリエチレングリコール鎖は、約１，０００から約５，０００ダルトンの範囲から選ばれる平均分子量を有する。別の実施態様では、ポリエチレングリコール鎖は、約１０，０００から約２０，０００ダルトンの範囲から選ばれる平均分子量を有する。一実施態様によれば、ＰＥＧ化グルカゴンペプチドは、該グルカゴンペプチドに共有結合する、２本以上のポリエチレン鎖を含み、ここで、該グルカゴン鎖の総分子量は、約１，０００から約５，０００ダルトンである。一実施態様では、ＰＥＧ化グルカゴンアゴニストは、配列番号５から成るペプチド、または、配列番号５のグルカゴンアゴニスト類縁体を含み、ここで、ＰＥＧ鎖は、位置２１および位置２４のアミノ酸残基に共有結合され、この二つのＰＥＧ鎖の合計分子量は約１，０００から約５，０００ダルトンである。
【０１１５】
本実施例に詳述されるように、本発明のグルカゴンアゴニストは、強化された生物物理学的安定性および水性可溶性を有する一方で、天然ペプチドに比べ、強化された生体活性を示す。従って、本発明のグルカゴンアゴニストは、天然グルカゴンペプチドについて従来記載されてきたいずれの使用についても好適であると考えられる。従って、本明細書において記載される、このグルカゴンペプチド修飾体は、低血糖症の治療、または血中グルコースレベルの上昇、放射線学的用途のための腸管の一過性麻痺、または、血中グルカゴンの低レベルに起因する、他の代謝疾患の治療のために使用することが可能である。本明細書に記載されるグルカゴンペプチドは、体重の減少または維持、または低血糖症の治療、または、血中グルコースレベルの低下、または血中グルコースレベルの正常化のためにも使用できることが期待される。
【０１１６】
本発明のグルカゴンペプチドは単独で投与してもよいし、他の抗糖尿病または抗肥満剤と組み合わせて投与してもよい。当該技術分野で公知であるか、または現在研究中の抗糖尿病剤としては、インスリン、スルフォニル尿素、例えば、トルブタミド（Ｏｒｉｎａｓｅ）、アセトヘキサミド（Ｄｙｍｅｌｏｒ）、トラザミド（Ｔｏｌｉｎａｓｅ）、クロールプロパミド（Ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリピジド（Ｇｌｕｃｏｔｒｏｌ）、グリブリド（Ｄｉａｂｅｔａ，Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ，Ｇｌｙｎａｓｅ）、グリメピリド（Ａｍａｒｙｌ）、またはグリクラジド（Ｄｉａｍｉｃｒｏｎ）；メグリチニド類、例えば、レパグリニド（Ｐｒａｎｄｉｎ）、またはナテグリニド（Ｓｔａｒｌｉｘ）；ビグアニド類、例えば、メトフォルミン（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ）、またはフェンフォルミン；チアゾリジンジオン類、例えば、ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）、ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ）、またはトログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）、または他のＰＰＡＲγ阻害剤；炭水化物消化を抑制する、アルファグルコシダーゼ阻害剤、例えば、ミグリトール（Ｇｌｙｓｅｔ）、アカルボース（Ｐｒｅｃｏｓｅ／Ｇｌｕｃｏｂａｙ）；エキセナチド（Ｂｙｅｔｔａ）またはプラムリンチド；ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害剤、例えば、ビリダグリプチン、またはシタグリプチン；ＳＧＬＴ（ナトリウム依存性グルコーストランスポーター１）阻害剤；またはＦＢＰアーゼ（フルクトース１，６−ビスフォスファターゼ）阻害剤が挙げられる。
【０１１７】
当該技術分野で公知であるか、または現在研究中の抗肥満剤としては、食欲抑制剤、例えば、フェネチルアミン型刺激剤、フェンテルミン（必要に応じて、フェンフルラミンまたはデキスフェンフルラミンと併用）、ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フェンジメトラジン（Ｐｒｅｌｕ−２（登録商標）、Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標））、ベンズフェタミン（Ｄｉｂｒｅｘ（登録商標））、シブトラミン（Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標）、Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（登録商標））；リモナバント（Ａｃｏｍｐｌｉａ（登録商標））、他の、カンナビノイド受容体アンタゴニスト；オキシントモジュリン；フルオキセチン塩酸（Ｐｒｏｚａｃ）；Ｑｎｅｘａ（トピラメート、およびフェンテルミン）、Ｅｘｃａｌｉａ（ブプロピオン、およびゾニサミド）、またはＣｏｎｔｒａｖｅ（ブプロピオン、およびナルトレキソン）；または、リパーゼ阻害剤、例えば、ゼニカル（Ｏｒｌｉｓｔａｔ）、またはＣｅｔｉｌｉｓｔａｔ（ＡＴＬ−９６２とも呼ばれる）、またはＧＴ３８９−２５５と同様のものが挙げられる。
【０１１８】
本開示の一態様は、低血糖症治療に使用される、本開示のグルカゴンアゴニストの、あらかじめ処方された水溶液に関する。本明細書に記載されるアゴニスト組成物は安定性および可溶性が強化されているので、緊急投与および低血糖治療用として、予め処方されたグルカゴンの水溶液を調製することが可能である。一実施態様では、低血糖症を患う患者に対する投与用として、ＰＥＧ化グルカゴンアゴニストを含む溶液が提供される。該グルカゴンアゴニストに連結されるＰＥＧ鎖の総分子量は、約５００から約５，０００ダルトンである。一実施態様では、ＰＥＧ化グルカゴンアゴニストは、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５のグルカゴンアゴニスト類縁体、配列番号２０の配列を含むグルカゴンのＰＥＧ化ラクタム誘導体、から成る群から選ばれるペプチドを含み、前記グルカゴンペプチドのアミノ酸残基の側鎖が、該ポリエチレングリコール鎖に対し共有結合する。
【０１１９】
本発明による低血糖症の治療法は、任意の標準的な投与ルートを用いて、例えば、非経口的に、例えば、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内、硬膜下腔内、経皮、直腸内、経口、鼻腔内、または吸引によって、本開示のグルカゴンアゴニストを患者に対して投与する工程を含む。一実施態様では、組成物は、皮下または筋肉内に投与される。一実施態様では、組成物は、非経口的に投与され、グルカゴン組成物は、シリンジに入れた状態で包装される。
【０１２０】
驚くべきことに、本出願人らは、母体ペプチドの生物活性および特異性を保持する、ＰＥＧ化グルカゴンペプチドを調製することが可能であることを発見した。しかしながら、ＰＥＧ鎖の長さを延長したり、または、ペプチドに複数のＰＥＧ鎖を付着させ、連結ＰＥＧの総分子量が５，０００ダルトンを超えると、この修飾グルカゴンの時間作用に遅延が出始める。一実施態様によれば、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５のグルカゴンペプチド、または、そのグルカゴンアゴニスト類縁体、または、配列番号２０の配列を含むグルカゴンのＰＥＧ化ラクタム誘導体であって、一つ以上のポリエチレングリコール鎖を含み、連結ＰＥＧの総分子量が５，０００ダルトンを超えるペプチドが提供され、一実施態様では、連結ＰＥＧの総分子量は、１０，０００ダルトンを超えるが、４０，０００ダルトン未満である。このような修飾グルカゴンペプチドは、活性時間が遅延されるか、延長されるが、生体活性が失われることはない。従って、このような化合物は、投与されたグルカゴンペプチドの作用を延長するために投与することが可能である。
【０１２１】
１０，０００ダルトンを超える分子量を持つＰＥＧ鎖に共有結合するよう修飾されたグルカゴンペプチドは、糖尿病患者において、インスリンと組み合わせて、インスリンの作用を緩衝し、安定な血中グルコースレベルの維持を補佐するために投与することが可能である。本開示の修飾グルカゴンペプチドは、単一組成物としてインスリンと共投与すること、または、別々の溶液として同時に投与することが可能であり、またはそれとは別に、インスリンと修飾グルカゴンペプチドは、互いに異なる時点において投与することも可能である。一実施態様では、インスリンを含む組成物、および、修飾グルカゴンペプチドを含む組成物は、互いに１２時間以内に投与される。投与インスリンに対する、修飾グルカゴンペプチドの正確な相対比は、患者のグルカゴンレベルの決定に部分的に依存し、通例の実験によって決定することが可能である。
【０１２２】
一実施態様によれば、インスリンと、配列番号２、配列番号３、配列番号４、および配列番号５のグルカゴンペプチド、および、それらのグルカゴンアゴニスト類縁体から成る群から選ばれる修飾グルカゴンペプチドであって、位置１７、２１、２４、または２１および２４におけるアミノ酸側鎖に共有結合するポリエチレングリコール鎖をさらに含む修飾グルカゴンペプチドと、を含む、組成物が提供される。一実施態様では、組成物は、インスリンおよびグルカゴン類縁体を含む水溶液である。グルカゴンペプチドが、配列番号２４または配列番号２５の配列を含む実施態様では、ＰＥＧ鎖は、該グルカゴンペプチドの位置２１または２４に共有結合する。一実施態様では、ポリエチレングリコール鎖は、約１０，０００から約４０，０００の分子量を有する。
【０１２３】
一実施態様によれば、本明細書に開示される修飾グルカゴンペプチドは、腸管の一過性麻痺を誘導するために使用される。この方法は、放射線学的目的において有用性を持ち、ＰＥＧ化グルカゴンペプチド、Ｃ末端延長部を含むグルカゴンペプチド、または、それらのペプチドの二量体を含む、有効量の製薬組成物を投与する工程を含む。一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５から成る群から選ばれる配列を含む。一実施態様では、グルカゴンペプチドはさらに、位置２１または２４のアミノ酸残基に対し共有結合する、約１，０００から約４０，０００ダルトンのＰＥＧ鎖を含む。一実施態様では、グルカゴンペプチドは、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５から成る群から選ばれる。一実施態様では、ＰＥＧ鎖は、約５００から約５，０００のダルトンの分子量を有する。
【０１２４】
さらに別の実施態様では、腸管の一過性麻痺を誘導するために使用される組成物は、第１修飾グルカゴンペプチド、および第２修飾グルカゴンペプチドを含む。第１修飾ペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５から成る群から選ばれる配列であって、必要に応じて約５００から約５，０００ダルトンのＰＥＧ鎖に連結される配列を含み、第２ペプチドは、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５から成る群から選ばれる配列であって、約１０，０００から約４０，０００ダルトンのＰＥＧ鎖に共有結合される配列を含む。この実施態様では、各ペプチドのＰＥＧ鎖は、互いに独立に、それぞれのペプチドの位置１７、２１、または２７のいずれかのアミノ酸残基に共有結合する。
【０１２５】
小腸に見出される天然の消化ホルモンであるオキシントモジュリンは、ラットまたはヒトに投与されると、減量を引き起こすことが報告されている（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２００５；５４：２３９−２３９５を参照）。オキシントモジュリンは、グルカゴンの２９アミノ酸配列（すなわち、配列番号１）と、それに続く、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）の、８アミノ酸カルボキシ末端延長部を含む、３７アミノ酸ペプチドである。従って、本出願人らは、オキシントモジュリンのグルカゴンペプチド部分を、本明細書で開示される修飾グルカゴンペプチドで置換することによって、オキシントモジュリンの可溶性および安定性を強化し、薬理動態を改善しながら、その生体活性（すなわち、食欲の抑制および減量／体重維持の誘導）を保持することが可能であろうと考える。さらに、本出願人らは、オキシントモジュリンの末端の４個のアミノ酸を除去された、本発明のグルカゴンペプチドを含む、短縮型オキシントモジュリン分子も、食欲を抑え、減量／体重維持を誘導するのに有効であろうと考える。
【０１２６】
従って、本発明はさらに、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）、または配列番号２８のカルボキシ末端延長部を持つ、本発明の修飾グルカゴンペプチドも包含する。これらの化合物は、減量の誘導、または体重増加の阻止のために、個体に対し投与することが可能である。一実施態様によれば、配列番号３３または配列番号２０のグルカゴンアゴニスト類縁体であって、さらに、該グルカゴンペプチドのアミノ酸２９に、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）または配列番号２８のアミノ酸配列を連結させた類縁体が、減量の誘導、または体重増加の阻止のために個体に対し投与される。さらに具体的には、グルカゴンペプチドは、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５から成る群から選ばれる配列であって、さらに、アミノ酸２９に、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）または配列番号２８のアミノ酸配列を連結させた配列を含む。
【０１２７】
エキセンディン−４は、３９アミノ酸から構成されるペプチドである。これは、ＧＬＰ−１という名の受容体に対する強力な刺激因子である。このペプチドも、食欲を抑え、減量を誘導することが報告されている。本出願人らは、エキセンディン−４の末端配列は、グルカゴンのカルボキシ末端に付加されると、グルカゴンの生体活性を損なうことなくグルカゴンの可溶性および安定性を強化することを見出した。一実施態様では、エキセンディン−４の末端の１０アミノ酸（すなわち、配列番号２６の配列（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ））が、本開示のグルカゴンペプチドのカルボキシ末端に連結される。これらの融合タンパクは、食欲の抑制および減量／体重維持の誘導をもたらす薬理学的活性を有することが期待される。一実施態様によれば、配列番号３３または配列番号２０のグルカゴンアゴニスト類縁体であって、アミノ酸２９に配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）または配列番号２９のアミノ酸配列を連結させたグルカゴンペプチドが、個体に対し、減量の誘導、または体重増加の阻止のために投与される。さらに具体的には、該グルカゴンペプチドは、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号５５、および配列番号５６から成る群から選ばれる配列を含み、さらに、アミノ酸２９に連結した、配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）または配列番号２９のアミノ酸配列を含む。一実施態様では、投与されるグルカゴンペプチド類縁体は、配列番号６４の配列を含む。
【０１２８】
本開示はさらに、本明細書に開示される修飾グルカゴンペプチドの多量体を包含する。二つ以上の修飾グルカゴンペプチドは、当業者に公知の標準的連結剤および手順を用いて連結することが可能である。例えば、二つの修飾グルカゴンペプチド、特に、システイン、リシン、オルニチン、ホモシステイン、またはアセチルフェニルアラニン残基によって置換されたグルカゴンペプチド（例えば、配列番号３および４）では、二官能性チオール架橋剤および二官能性アミン架橋剤を用いて、その二つの修飾グルカゴンペプチドの間に二量体を形成することが可能である。この二量体はホモ二量体であってもよく、それとは別にヘテロ二量体であってもよい。一実施態様では、二量体は、グルカゴン融合ペプチドのホモ二量体であり、そのグルカゴンペプチド部分は、配列番号１１または配列番号２０、および、アミノ酸２９に連結する、配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）、または配列番号２８（ＫＲＮＲ）のアミノ酸配列を含む。別の実施態様では、二量体は、配列番号１１のグルカゴンアゴニスト類縁体のホモ二量体を含み、該グルカゴンペプチドはさらに、位置２１または２４に共有結合するポリエチレングリコール鎖を含む。
【０１２９】
一実施態様によれば、リンカーを介して第２グルカゴンペプチドに結合する、第１グルカゴンペプチドを含む二量体が提供され、ここで、第１グルカゴンペプチドは、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、および配列番号１１から成る群から選ばれるペプチドを含み、第２グルカゴンペプチドは、配列番号２０を含む。別の実施態様によれば、リンカーを介して第２グルカゴンペプチドに結合する、第１グルカゴンペプチドを含む二量体、および、その薬学的に受容可能な塩が提供され、ここで、前記第１グルカゴンペプチドは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１から成る群から選ばれる配列を含み、第２グルカゴンペプチドは、配列番号１１を含む。別の実施態様によれば、リンカーを介して第２グルカゴンペプチドに結合する、第１グルカゴンペプチドを含む二量体、および、その薬学的に受容可能な塩が提供され、ここで、前記第１グルカゴンペプチドは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８から成る群から選ばれ、第２グルカゴンペプチドは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８から成る群から独立に選ばれる。一実施態様では、第１グルカゴンペプチドは、配列番号２０から成る群から選ばれ、第２グルカゴンペプチドは、配列番号８、配列番号９、および配列番号１１から成る群から独立に選ばれる。一実施態様では、二量体は、各ペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、二つのペプチドの間に形成される。
【０１３０】
本発明の修飾グルカゴンペプチドは、一実施態様によれば、キットの一部として提供することも可能である。一実施態様では、グルカゴンアゴニストを必要とする患者に対しグルカゴンアゴニストを投与するためのキットが提供されるが、該キットは、以下のものから成る群から選ばれる修飾グルカゴンペプチドを含む：１）配列番号２０、配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１の配列を含むグルカゴンペプチド；２）配列番号１１、配列番号２０、または配列番号５５のグルカゴンアゴニスト類縁体、および、該グルカゴンペプチドのアミノ酸２９に連結する、配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）、または配列番号２８（ＫＲＮＲ）のアミノ酸配列を含む、グルカゴン融合ペプチド；および、３）配列番号１１または配列番号５１のＰＥＧ化グルカゴンペプチドであって、アミノ酸２９に連結する、配列番号２６（ＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ）、配列番号２７（ＫＲＮＲＮＮＩＡ）、または配列番号２８（ＫＲＮＲ）のアミノ酸配列をさらに含み、位置１７、２１、または２４に共有結合する該ＰＥＧ鎖が約５００から約４０，０００ダルトンの分子量を持つ、ＰＥＧ化グルカゴンペプチド。一実施態様では、キットは、グルカゴン／ＧＬＰ−１コアゴニストを含み、該ペプチドは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８から成る群から選ばれる配列を含む。
【０１３１】
一実施態様では、患者に対し本グルカゴン組成物を投与するためのデバイス、例えば、注射針、ペン型注入器、ジェット式注入器または他の無針注入器を備えるキットが提供される。それとは別に、またはそれに加えてさらに、キットは、凍結乾燥状か、または溶液状のグルカゴンペプチドを必要に応じて含む、一つ以上の容器、例えば、バイアル、チューブ、瓶、あらかじめ充填された単室または複室シリンジ、カートリッジ、輸液ポンプ（体外型または埋め込み型）、ジェット式注入器、充填済みペンデバイスなどを含んでもよい。好ましくは、キットはさらに使用説明書を含む。一実施態様によれば、キットのデバイスは、エアロゾル・ディスペンサーであり、組成物は、該エアロゾル・ディスペンサーの中にあらかじめ封入される。別の実施態様では、キットはシリンジおよび針を含み、一実施態様では、滅菌グルカゴン組成物は、このシリンジの内部に封入される。
【０１３２】
本発明の化合物は、標準的合成法、組み換えＤＮＡ技術、または、他の、任意のペプチドおよび融合タンパク調製法によって調製してよい。ある種の非天然アミノ酸は、標準的組み換えＤＮＡ技術では発現させることができないが、その調製のための技術は当該技術分野において公知である。非ペプチド部分を包含する、本発明の化合物は、適用可能な場合は、標準的ペプチド化学反応に加えて、標準的有機化学反応を用いて合成してもよい。
【実施例】
【０１３３】
＜一般的合成プロトコール＞
グルカゴン受容体は、改変Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ４３０Ａペプチド合成機において、０．２ミリモルＢｏｃ  Ｔｈｒ（ＯＢｚｌ）Ｐａｍ樹脂からスタートする、ＨＢＴＵ活性化「Ｆａｓｔ  Ｂｏｃ」単一カップリングを用いて合成した。Ｂｏｃアミノ酸およびＨＢＴＵは、Ｍｉｄｗｅｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｆｉｓｃｈｅｒｓ，ＩＮ）から入手した。用いた側鎖保護基は：Ａｒｇ（Ｔｏｓ），Ａｓｎ（Ｘａｎ），Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ），Ｃｙｓ（ｐＭｅＢｚｌ），Ｈｉｓ（Ｂｏｍ），Ｌｙｓ（２Ｃｌ−Ｚ），Ｓｅｒ（ＯＢｚｌ），Ｔｈｒ（ＯＢｚｌ），Ｔｙｒ（２Ｂｒ−Ｚ），およびＴｒｐ（ＣＨＯ）であった。Ｎ−末端Ｈｉｓの側鎖保護基はＢｏｃであった。
完成した各ペプチジル樹脂を、ジメチルフォルムアミドに溶解した２０％ピペリジン溶液で処理し、トリプトファンからフォルミル基を除去した。ｐ−クレゾールおよびジメチルスルフィドの存在下に液体フッ化水素切断を実行した。切断は、ＨＦ装置（Ｐｅｎｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｓ）を用い氷浴において１時間実行した。ＨＦの蒸発後、残留物をジエチルエーテルに縣濁し、固体物質をろ過回収した。各ペプチドは、３０−７０ｍｌの酢酸水溶液で抽出し、希釈分液をＨＰＬＣ［Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄ，０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ，Ａバッファー＝０．１％  ＴＦＡ，Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／９０％アセトニトリル、勾配は、１０分間で１０％から８０％Ｂ］によって分析した。
【０１３４】
精製は、ＦＰＬＣを用い、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８カラムにおいて、２１４ｎｍでＵＶを監視し、５分毎の分画を収集しながら行った。均質分画をまとめ、凍結乾燥し、＞９５％の純度の産物を得た。適正な分子質量および純度は、ＭＡＬＤＩ質量分析によって確認した。
【０１３５】
＜一般的ＰＥＧ化プロトコール（Ｃｙｓ−マレイミド）＞
通常、グルカゴンＣｙｓ類縁体は、リン酸緩衝生理的食塩水に溶解し（５〜１０ｍｇ／ｍｌ）、０．０１Ｍのエチレンジアミン四酢酸を加える（全体体積の１０〜１５％）。過剰（２倍）な、マレイミドメトキシＰＥＧ試薬（Ｎｅｋｔａｒ）を加え、この反応物を、ＨＰＬＣによって反応の進行を監視しながら、室温で攪拌する。８〜２４時間後、反応混合物を、酸性とし、分取用逆相カラムに負荷し、精製のために０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル勾配を用いた。適切な分画をまとめ、凍結乾燥し、所望のＰＥＧ化類縁体を得た。
【０１３６】
（実施例１）
グルカゴンＣｙｓ17（１−２９）および類似のモノＣｙｓ類縁体の合成
６０ｍｌ反応容器に納めた０．２ミリモルＢｏｃ  Ｔｈｒ（ＯＢｚｌ）Ｐａｍ樹脂、および下記の配列を、改変Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ４３０Ａペプチド合成機に入力し、ＦａｓｔＢｏｃ  ＨＢＴＵ活性化単一カップリングを用いて合成した。
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＣＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ（配列番号３５）
下記の側鎖保護基を用いた：Ａｒｇ（Ｔｏｓ），Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ），Ａｓｎ（Ｘａｎ），Ｃｙｓ（ｐＭｅＢｚｌ），Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ），Ｈｉｓ（Ｂｏｃ），Ｌｙｓ（２Ｃｌ−Ｚ），Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），Ｔｒｐ（ＣＨＯ）およびＴｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）。完成したペプチジル樹脂を、２０％ピペリジン／ジメチルフォルムアミドで処理し、Ｔｒｐフォルミル保護を除去し、次いでＨＦ反応容器に移し、真空乾燥した。１．０ｍｌ  ｐ−クレゾールおよび０．５ｍｌジメチルスルフィドを、マグネット攪拌バーと共に加えた。この容器を、ＨＦ装置（Ｐｅｎｎｉｓｕｌａ  Ｌａｂｓ）に取り付け、ドライアイス／メタノール浴において冷却し、減圧し、約１０ｍｌの液体フッ化水素を填塞した。この反応物を氷浴において１時間攪拌し、次いでＨＦを減圧留去した。残留物をエチルエーテルに縣濁し、固体物質をろ過回収し、エーテルで洗浄し、ペプチドを、５０ｍｌの酢酸水溶液で抽出した。分析ＨＰＬＣ［０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ，Ａバッファー０．１％  ＴＦＡ，Ｂバッファー０．１％  ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ、勾配＝１０分間で１０％Ｂから８０％Ｂ］を、切断抽出物の小サンプルについて実施した。残りの抽出物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷し、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣシステムを用いてアセトニトリル勾配を流した。２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％アセトニトリル、勾配＝４５０分間で３０％Ｂから１００％Ｂ。
【０１３７】
最高純度の産物を含む分画（４８−５２）をまとめて凍結し、凍結乾燥したところ３０．１ｍｇが得られた。この産物のＨＰＬＣ分析から、＞９０％の純度が示され、ＭＡＬＤＩ質量分析によって、所望の質量３４２９．７が示された。グルカゴンＣｙｓ21、グルカゴンＣｙｓ24、およびグルカゴンＣｙｓ29も同様に調製した。
【０１３８】
（実施例２）
グルカゴン−Ｃｅｘ、および他のＣ末端延長類縁体の合成
２８５ｍｇ（０．２ミリモル）のメトキシベンゾヒドリルアミン樹脂（Ｍｉｄｗｅｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、６０ｍｌ反応容器に入れ、下記の配列を、改変Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ４３０Ａペプチド合成機に入力し、ＦａｓｔＢｏｃ  ＨＢＴＵ活性化単一カップリングを用いて合成を実施した。
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号３６）
下記の側鎖保護基を用いた：Ａｒｇ（Ｔｏｓ），Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ），Ａｓｎ（Ｘａｎ），Ｃｙｓ（ｐＭｅＢｚｌ），Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ），Ｈｉｓ（Ｂｏｃ），Ｌｙｓ（２Ｃｌ−Ｚ），Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），Ｔｒｐ（ＣＨＯ）およびＴｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）。完成したペプチジル樹脂を、２０％ピペリジン／ジメチルフォルムアミドで処理し、Ｔｒｐフォルミル保護を除去し、次いでＨＦ反応容器に移し、真空乾燥した。１．０ｍｌ  ｐ−クレゾールおよび０．５ｍｌジメチルスルフィドを、マグネット攪拌バーと共に加えた。この容器を、ＨＦ装置（Ｐｅｎｎｉｓｕｌａ  Ｌａｂｓ）に取り付け、ドライアイス／メタノール浴において冷却し、減圧し、約１０ｍｌの液体フッ化水素を填塞した。この反応物を氷浴において１時間攪拌し、次いでＨＦを減圧留去した。残留物をエチルエーテルに縣濁し、固体物質をろ過回収し、エーテルで洗浄し、ペプチドを、５０ｍｌの酢酸水溶液で抽出した。分析ＨＰＬＣ［０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ，Ａバッファー０．１％  ＴＦＡ，Ｂバッファー０．１％  ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ、勾配＝１０分間で１０％Ｂから８０％Ｂ］を、切断抽出物の分液について実施した。抽出物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷し、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣシステムを用いて溶出のためにアセトニトリル勾配を流した。２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％アセトニトリル、勾配＝４５０分間で３０％Ｂから１００％Ｂ。分画５８−６５をまとめ、凍結し、凍結乾燥したところ１９８．１ｍｇが得られた。
【０１３９】
この産物のＨＰＬＣ分析から、９５％を超える純度が示され、ＭＡＬＤＩ質量分析によって、本産物においてＣ末端アミドを有するものとして、所望の理論的質量４３１６．７が示された。同様に、適切に負荷したＰＡＭ樹脂からスタートさせたＣ末端カルボン酸を有するものとして、オキシントモジュリンおよびオキシントモジュリン−ＫＲＮＲが調製された。
【０１４０】
（実施例３）
グルカゴンＣｙｓ17Ｍａｌ−ＰＥＧ−５Ｋ
１５．１ｍｇのグルカゴンＣｙｓ17（１−２９）、および２７．３ｍｇのメトキシ（ポリエチレングリコール）マレイミド平均分子量５０００（ｍＰＥＧ−Ｍａｌ−５０００，Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を、３．５ｍｌのリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）に溶解し、０．５ｍｌの０．０１Ｍ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を加えた。この反応物を室温で攪拌し、反応の進行をＨＰＬＣ分析［０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ（０．５Ａ），Ａ＝０．１％  ＴＦＡ，Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ、勾配＝１０分間で１０％Ｂから８０％Ｂ］によって監視した。
【０１４１】
５時間後、反応混合物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷した。アセトニトリル勾配をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣに流し、２１４ｎｍでＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％アセトニトリル、勾配＝４５０分間で３０％Ｂから１００％Ｂ。産物に対応する分画をまとめ、凍結し、凍結乾燥したところ２５．９ｍｇが得られた。
【０１４２】
この産物を、ＨＰＬＣ［０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ（０．５Ａ），Ａ＝０．１％  ＴＦＡ，Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ、勾配＝１０分間で１０％Ｂから８０％Ｂ］で分析したところ、約９０％の純度が示された。ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化）質量分析によって、８７００から９５００の広い質量範囲（ＰＥＧ誘導体に典型的に見られる）が示された。これは、開始グルカゴンペプチド（３４２９）の質量に対する約５，０００原子質量単位の付加を示す。
【０１４３】
（実施例４）
グルカゴンＣｙｓ21Ｍａｌ−ＰＥＧ−５Ｋ
２１．６ｍｇのグルカゴンＣｙｓ21（１−２９）、および２４ｍｇのｍＰＥＧ−Ｍａｌ−５０００（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を、３．５ｍｌのリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）に溶解し、０．５ｍｌの０．０１Ｍ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を加えた。この反応物を室温で攪拌した。２時間後、さらに２７．５ｍｇのｍＰＥＧ−ＭＡＬ−５０００を加えた。８時間後、反応混合物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷し、アセトニトリル勾配をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣに４ｍｌ／分で流しながら、５分毎の分画を収集した。Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％アセトニトリル、勾配＝４５０分間で２０％Ｂから８０％Ｂ。
【０１４４】
産物の出現に対応する分画をまとめ、凍結し、凍結乾燥したところ３４ｍｇが得られた。分析的ＨＰＬＣ［０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ（０．５Ａ），Ａ＝０．１％  ＴＦＡ，Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ、勾配＝１０分間で１０％Ｂから８０％Ｂ］によって産物を分析したところ、開始のグルカゴンペプチドとは異なる均質な産物が示された。ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化）質量分析によって、８７００から９７００の広い質量範囲が示された（ＰＥＧ誘導体に典型的に見られる）。これは、開始グルカゴンペプチド（３４７０）の質量に対する約５，０００原子質量単位の付加を示す。
【０１４５】
（実施例５）
グルカゴンＣｙｓ24Ｍａｌ−ＰＥＧ−５Ｋ
２０．１ｍｇのグルカゴンＣｙｓ24（１−２９）、および３９．５ｍｇのｍＰＥＧ−Ｍａｌ−５０００（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を、３．５ｍｌのＰＢＳに攪拌下に溶解し、０．５ｍｌの０．０１Ｍ  ＥＤＴＡを加えた。この反応物を室温で７時間攪拌し、次いで、さらに４０ｍｇのｍＰＥＧ−ＭａＬ−５０００を加えた。約１５時間後、反応混合物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷し、アセトニトリル勾配をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣに流し、２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。Ａバッファー＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂバッファー＝０．１％  ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ、勾配＝４５０分間で３０％Ｂから１００％Ｂ。産物に対応する分画をまとめ、凍結し、凍結乾燥したところ４５．８ｍｇが得られた。ＭＡＬＤＩ質量分析によって、グルカゴンＣ24（３４５７．８）よりも約５，０００原子質量単位だけ大きい９１７５．２に最大値を持つ典型的なＰＥＧ広範囲シグナルが見られた。
【０１４６】
（実施例６）
グルカゴンＣｙｓ24Ｍａｌ−ＰＥＧ−２０Ｋ
２５．７ｍｇのグルカゴンＣｙｓ24（１−２９）、および４０．７ｍｇのｍＰＥＧ−Ｍａｌ−２０Ｋ（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を、３．５ｍｌのＰＢＳに攪拌下に室温で溶解し、０．５ｍｌの０．０１Ｍ  ＥＤＴＡを加えた。６時間後、開始物質の、産物に対する比は、ＨＰＬＣで定量したところ約６０：４０であった。さらに２５．１ｍｇのｍＰＥＧ−ＭａＬ−２０Ｋを加え、反応物をさらに１６時間攪拌した。産物比は著明には改善しなかったので、この反応混合物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷し、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣにおいて、４５０分間３０％Ｂから１００％Ｂの勾配、Ａバッファー＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂバッファー＝０．１％  ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ、流速＝４ｍｌ／分を用いて精製し、２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。均質な産物を含む分画をまとめ、凍結し、凍結乾燥したところ２５．７ｍｇが得られた。純度は、分析的ＨＰＬＣによって〜９０％と定量された。ＭＡＬＤＩ質量分析によって、開始グルカゴンＣ24（３４５７．８）よりも約２０，０００原子質量単位だけ大きい２３，０００から２７，０００の広いピークが見られた。
【０１４７】
（実施例７）
グルカゴンＣｙｓ29Ｍａｌ−ＰＥＧ−５Ｋ
２０．０ｍｇのグルカゴンＣｙｓ29（１−２９）、および２４．７ｍｇのｍＰＥＧ−Ｍａｌ−５０００（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を、３．５ｍｌのＰＢＳに攪拌下に室温で溶解し、０．５ｍｌの０．０１Ｍ  ＥＤＴＡを加えた。４時間後、さらに１５．６ｍｇのｍＰＥＧ−ＭＡＬ−５０００を加え反応を完了させた。８時間後、反応混合物を、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷し、アセトニトリル勾配をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣシステムに流した。２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ。分画７５−９７をまとめて凍結し、凍結乾燥したところ、ＨＰＬＣで回収された開始物質（分画５８−６３）とは異なる産物４０．０ｍｇが得られた。分析的ＨＰＬＣ［０．４６ｘ５ｃｍ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ８，１ｍｌ／分、４５Ｃ，２１４ｎｍ（０．５Ａ），Ａ＝０．１％  ＴＦＡ，Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ、勾配＝１０分間で１０％Ｂから８０％Ｂ］によって産物を分析したところ、９５％を超える純度が示された。ＭＡＬＤＩ質量分析によって、開始物質（３４８４．８）よりも５，５４０原子質量単位だけ大きい８，０００から１０，０００（９０２５．３に最大値）の質量範囲を持つＰＥＧ成分が示された。
【０１４８】
（実施例８）
グルカゴンＣｙｓ24（２−ブチロラクトン）
２４．７ｍｇのグルカゴンＣｙｓ24（１−２９）に、４ｍｌの０．０５Ｍ炭酸水素アンモニウム／５０％アセトニトリル、および、５．５ｕｌの、２−ブロモ−４−ヒドロキシブチル酸−γ−ラクトン溶液（９００ｕｌのアセトニトリルに対し１００ｕｌ）を加えた。室温で３時間攪拌した後、この反応混合物に、さらに１０５ｕｌのラクトン液を加え、さらに１５時間攪拌した。この反応混合物を、１０％酢酸水溶液で１０ｍｌに希釈し、これを、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷した。アセトニトリル勾配（４５０分間で２０％Ｂから８０％Ｂ）をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣ上に流し、２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。流速＝４ｍｌ／分、Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ。分画７４−７７をまとめて凍結し、凍結乾燥したところ、７．５ｍｇが得られた。ＨＰＬＣ分析から９５％の純度が示され、ＭＡＬＤＩ質量分析によって、３５４０．７の質量、すなわち、開始物質よりも８４質量単位大きい質量が示された。この結果は、１個のブチロラクトン成分の付加と一致する。
【化１】
2014141500.tif 000003
【０１４９】
（実施例９）
グルカゴンＣｙｓ24（Ｓ−カルボキシメチル）
１８．１ｍｇのグルカゴンＣｙｓ24（１−２９）を、９．４ｍｌの０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ＝９．２）に溶解し、０．６ｍｌのブロム酢酸溶液（１．３ｍｇ／ｍｌのアセトニトリル液）を加えた。この反応物を室温で攪拌し、反応の進行を分析ＨＰＬＣによって追跡した。１時間後、さらに０．１ｍｌのブロム酢酸を加えた。この反応物をさらに６０分攪拌し、次いで酢酸水溶液で酸性とし、精製するために２．２ｘ２５ｃｍ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８分取用逆相カラムに負荷した。アセトニトリル勾配をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣ上（流速＝４ｍｌ／分）に流し、２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、５分毎の分画を収集した。Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ。分画２６−２９をまとめて凍結し、凍結乾燥したところ、数ｍｇの産物が得られた。ＨＰＬＣ分析から９０％の純度が示され、ＭＡＬＤＩ質量分析から、所望の産物の３５１５の質量が確認された。
【化２】
2014141500.tif 000004
【０１５０】
（実施例１０）
グルカゴンＣｙｓ24マレイミド，ＰＥＧ−３．４Ｋ−二量体
１６ｍｇのグルカゴンＣｙｓ24、および１．０２ｍｇのＭａｌ−ＰＥＧ−Ｍａｌ−３４００、ポリ（エチレングリコール）−ビス−マレイミド、平均分子量３４００（Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を、３．５ｍｌのリン酸緩衝生理的食塩水、および０．５ｍｌの０．０１Ｍ  ＥＤＴＡに溶解し、この反応混合物を室温で攪拌した。１６時間後、さらに１６ｍｇのグルカゴンＣｙｓ24を加え、攪拌を続けた。約４０時間後、この反応混合物をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＰｅｐＲＰＣ  １６／１０カラムに負荷し、アセトニトリル勾配をＰｈａｒｍａｃｉａ  ＦＰＬＣ上に流し、２１４ｎｍ（２．０Ａ）でＵＶを監視しながら、２分毎の分画を収集した。流速＝２ｍｌ／分、Ａ＝０．１％  ＴＦＡ、Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ／５０％ＡＣＮ。分画６９−７４をまとめて凍結し、凍結乾燥したところ、１０．４ｍｇが得られた。ＨＰＬＣ分析から９０％の純度が示され、ＭＡＬＤＩ質量分析から、９５００−１１，０００範囲の成分が示された。これは、所望の二量体と一致する。
【化３】
2014141500.tif 000005
【０１５１】
（実施例１１）
グルカゴンラクタムの合成
２８５ｍｇ（０．２ミリモル）のメトキシベンゾヒドラミン樹脂（Ｍｉｄｗｅｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、６０ｍＬの反応容器に加え、下記の配列を、Ｂｏｃ  ＤＥＰＢＴ活性化単一カップリングを用い、改変Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ４３０Ａペプチド合成機において集合した。
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ−ＮＨ２（１２−１６ラクタム；配列番号１２）
【０１５２】
下記の側鎖保護基を用いた：Ａｒｇ（Ｔｏｓ），Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ），Ａｓｎ（Ｘａｎ），Ｇｌｕ（ＯＦｍ），Ｈｉｓ（ＢＯＭ），Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ），Ｓｅｒ（Ｂｚｌ），Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），Ｔｒｐ（ＣＨＯ），Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）。Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）は、ラクタムが１６−２０、２０−２４、または２４−２８において構築される場合、位置１２に使用した。完成したペプチジル樹脂を、２０％ピペリジン／ジメチルフォルムアミドで回転させながら１時間処理し、Ｌｙｓ１２およびＧｌｕ１６から、Ｔｒｐフォルミル基とともにＦｍｏｃおよびＯＦｍ保護を除去した。ニンヒドリン陽性試験によって除去を確認した後、樹脂をジメチルフォルムアミドで洗浄し、次いで、ジクロロメタン、さらに再びジメチルフォルムアミドで洗浄した。この樹脂を、ジメチルフォルムアミドおよびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）に溶解した、５２０ｍｇ（１ミリモル）のベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−フォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェート（ＰｙＢＯＰ）で処理した。反応は８〜１０時間進行し、結晶化は、ニンヒドリン陰性試験によって確認された。樹脂を、ジメチルフォルムアミド、次いでジクロロメタンで洗浄し、次いで、トリフルオロ酢酸によって１０分間処理した。Ｂｏｃ基の除去は、ニンヒドリン陽性反応によって確認された。樹脂を、ジメチルフォルムアミドおよびジクロロメタンによって洗浄し、乾燥した後、フッ化水素酸（ＨＦ）反応容器に移した。５００μＬ  ｐ−クレゾールを、マグネット攪拌バーと共に加えた。この容器を、ＨＦ装置（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｓ）に取り付け、ドライアイス／メタノール浴において冷却し、減圧し、約１０ｍｌの液体フッ化水素を填塞した。この反応物を氷浴において１時間攪拌し、次いでＨＦを減圧留去した。残留物をエチルエーテルに縣濁し、固体物質をろ過回収し、エーテルで洗浄し、ペプチドを、１５０ｍＬの２０％アセトニトリル／１％酢酸で可溶化した。
【０１５３】
この未精製可溶化ペプチドのＨＰＬＣ分析を下記の条件で行った［４．６Ｘ３０ｍｍ  Ｘｔｅｒｒａ  Ｃ８，１．５０ｍｌ／分、２２０ｎｍ，Ａバッファー０．１％  ＴＦＡ／１０％  ＡＣＮ，Ｂバッファー０．１％  ＴＦＡ／１００％ＡＣＮ、勾配＝１５分間で５−９０％Ｂ］。この抽出物を水で２倍に希釈し、２．２ｘ２５ｃｍ  Ｖｙｄａｃ  Ｃ４分取用逆相カラムに負荷し、Ｗａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステムにおいてアセトニトリル勾配を用いて溶出した（Ａバッファーは、０．１％  ＴＦＡ／１０％  ＡＣＮ、Ｂバッファーは、０．１％  ＴＦＡ／１０％  ＣＡＮ、および、勾配は、１２０分において０−１００％Ｂで流速１５．００／分であった）。精製ペプチドのＨＰＬＣ分析から、９５％を超える純度が示され、エレクトロスプレイイオン化質量分析によって、１２−１６のラクタムについて３５０６ダルトンの質量が確認された。１６−２０、２０−２４、および２４−２８のラクタムも同様に調製された。
【０１５４】
（実施例１２）
グルカゴン溶解度アッセイ
グルカゴン（または類縁体）の、０．０１Ｎ  ＨＣｌ溶液（１ｍｇ／ｍｌ、または３ｍｇ／ｍｌ）を調製する。１００ｕｌの保存液を、０．０１Ｎ  ＨＣｌで１ｍｌに希釈し、ＵＶ吸収（２７６ｎｍ）を定量する。残留保存液のｐＨを、２００−２５０ｕｌの０．１Ｍ  Ｎａ2ＨＰＯ4（ｐＨ９．２）を用いてｐＨ７に調整した。この溶液を４℃で一晩放置し、次いで遠心した。次に、１００ｕｌの上清を、０．０１Ｎ  ＨＣｌで１ｍｌに希釈し、ＵＶ吸収（二重に）を定量する。
【０１５５】
最初の吸収読み取り値を、容量の増加について補正し、下記の計算を用いてパーセント溶解度を定量する：
（最終吸収）／（初回吸収）×１００＝パーセント溶解度
結果を表１に示す。表において、グルカゴン−Ｃｅｘは、野生型グルカゴン（配列番号１）に配列番号２６のカルボキシン末端付加を加えたものを表し、グルカゴン−Ｃｅｘ  Ｒ12は、配列番号３９を表す。
【０１５６】
【表１】
2014141500.tif 000006
【０１５７】
（実施例１３）
グルカゴン受容体結合アッセイ
ペプチドのグルカゴン受容体に対する親和度は、シンチレーション近接アッセイ技法による競合結合アッセイにおいて測定した。シンチレーション近接アッセイバッファー（０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５，０．１５Ｍ  ＮａＣｌ，０．１％  ｗ／ｖウシ血清アルブミン）において調製したペプチドの３倍連続希釈液を、９６ウェル白色／透明基底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）において、ウェル当たり１〜６マイクログラムの、０．０５ｎＭ（３−［125Ｉ］−イオドチロシル）Ｔｙｒ１０グルカゴン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ヒトのグルカゴン受容体を過剰発現する細胞から調製した原形質膜断片、および、ウェル当たり１ｍｇの、ポリエチレンイミン処理Ａ型麦芽アグルチニン・シンチレーション近接アッセイビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）と混ぜ合わせた。回転式シェーカーにおいて８００ｒｐｍで５分間振とうした後、プレートを室温で１２時間インキュベートし、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  １４５０液体シンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）において読み取りした。非特異的結合（ＮＳＢ）放射活性は、試験サンプルの最高濃度よりも４倍高濃度の、「冷たい」天然リガンドを含むウェルにおいて測定され、総合結合放射活性は、競合因子を含まないウェルにおいて検出された。特異的結合パーセントは下記に従って計算した：特異的結合％＝（（結合ＮＳＢ）／（総合結合ＮＳＢ））Ｘ１００。ＩＣ50は、Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を用いて定量した。
【０１５８】
（実施例１４）
機能的アッセイ−ｃＡＭＰ合成
グルカゴン類縁体がｃＡＭＰを誘導する能力を、蛍ルシフェラーゼ系リポーターアッセイにおいて測定した。グルカゴンまたはＧＬＰ−１受容体のいずれかと、ｃＡＭＰ応答要素に連結されたルシフェラーゼ遺伝子とによって同時トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を、０．２５％のウシ培養血清（ＨｙＣｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を添加したＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）において１６時間培養して血清を除去し、次いで、９６ウェルの、ポリ−Ｄ−リシン塗布「Ｂｉｏｃｏａｔ」プレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）において５％  ＣＯ2下にて、グルカゴン、ＧＬＰ−１、または新規グルカゴン類縁体のいずれかの連続希釈液と共に、３７℃で５時間インキュベートした。インキュベーション終了時、１００マイクロリットルのＬｕｃＬｉｔｅ発光基質試薬（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を各ウェルに加えた。プレートを短時間振とうし、暗黒中で１０分インキュベートし、光出力を、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ−１４５０液体シンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）にて測定した。５０％有効濃度を、Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を用いて計算した。結果を図３〜９および表２〜１０に示す。
【０１５９】
【表２】
2014141500.tif 000007
【０１６０】
【表３】
2014141500.tif 000008
【０１６１】
【表４】
2014141500.tif 000009
【０１６２】
【表５】
2014141500.tif 000010
【０１６３】
【表６】
2014141500.tif 000011
【０１６４】
【表７】
2014141500.tif 000012
【０１６５】
【表８】
2014141500.tif 000013
Ｅ１６  Ｇｌｕｃ  ＮＨ2は、Ｇ１６−ＣＯＯＨおよびＴ１６  Ｇｌｕｃ  ＮＨ2に比べ、これらの化合物を並べて試験した場合、グルカゴン受容体に対し４倍強力であった。
【０１６６】
【表９】
2014141500.tif 000014
【０１６７】
【表１０】
2014141500.tif 000015
【０１６８】
（実施例１５）
グルカゴンＣｙｓ−マレイミドＰＥＧ類縁体の安定性アッセイ
各グルカゴン類縁体を水またはＰＢＳに溶解し、最初のＨＰＬＣ分析を行った。ｐＨの調整（４、５、６、７）後、サンプルを、３７℃で指定の期間インキュベートし、ペプチドの完全性を定量するために再度ＨＰＬＣ分析した。対象とする特異的ペプチドの濃度を定量し、無傷の残留パーセントを、最初の分析値に対する相対値として計算した。グルカゴンＣｙｓ21マレイミドＰＥＧ5Kの結果を図１および２に示す。
【０１６９】
（実施例１６）
下記のグルカゴンペプチドは、全体として前述の実施例１〜１１に記載される通りに構築された：
下記の配列において、「ａ」は、Ｃ末端アミドを意味する。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号７０）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号７１）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号７２）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号７３）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号７４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号７５）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号７６）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号７７）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号７８）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号７９）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号８０）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号８１）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号８２）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号８３）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号８４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号８５）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号８６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号８７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号８８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号８９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号９０）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号９１）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号９２）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号９３）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号９４）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号９５）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号９６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号９７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号９８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号９９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１００）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号１０１）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１０２）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１０３）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓ。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１０４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１０５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１０６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１０７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１０８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１０９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１１０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１１１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１１２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１１３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１１４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１１５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１１６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１１７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号１１８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１１９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１２０）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１２１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１２２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１２３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１２４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１２５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１２６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１２７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１２８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１２９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１３０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１３１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１３２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１３３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１３４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号１３５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１３６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１３７）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）。
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１３８）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１３９）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１４０）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１４１）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１４２）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１４３）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１４４）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１４５）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１４６）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１４７）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１４８）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１４９）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１５０）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１５１）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号１５２）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１５３）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１５４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１５５）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬｌＶＩＮＴａ（配列番号１５６）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１５７）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１５８）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１５９）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１６０）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１６１）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１６２）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１６３）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１６４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１６５）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１６６）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１６７）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１６８）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号１６９）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１７０）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１７１）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓ。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１７２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１７３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１７４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１７５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１７６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１７７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号 １７８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１７９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１８０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１８１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１８２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１８３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１８４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１８５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号１８６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１８７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１８８）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１８９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１９０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１９１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１９２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１９３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１９４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号１９５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１９６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１９７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号１９８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号１９９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号２００）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２０１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２０２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号２０３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２０４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２０５）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２０６）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２０７）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２０８）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２０９）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２１０）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２１１）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２１２）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２１３）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２１４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２１５）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２１６）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２１７）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２１８）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２１９）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号２２０）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２２１）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２２２）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２２３）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２２４）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２２５）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２２６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２２７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２２８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２２９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２３０）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２３１）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２３２）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２３３）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２３４）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２３５）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＴＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２３６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号２３７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２３８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２３９）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓであり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２４０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２４１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２４２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２４３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２４４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２４５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２４６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２４７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２４８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２４９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２５０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２５１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２５２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２５３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号２５４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２５５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２５６）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２５７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２５８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２５９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２６０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２６１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２６２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２６３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２６４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２６５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２６６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２６７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２６８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２６９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２７０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号２７１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２７２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２７３）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２７４）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２７５）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２７６）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２７７）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２７８）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２７９）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２８０）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２８１）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２８２）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２８３）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２８４）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２８５）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２８６）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２８７）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号２８８）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２８９）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２９０）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２９１）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２９２）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２９３）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２９４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２９５）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２９６）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号２９７）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号２９８）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号２９９）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３００）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３０１）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３０２）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３０３）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＴＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３０４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号３０５）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３０６）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＴＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３０７）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓであり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３０８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３０９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３１０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３１１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３１２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３１３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３１４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３１５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３１６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３１７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３１８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３１９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３２０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３２１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号３２２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３２３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３２４）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３２５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３２６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３２７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３２８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３２９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３３０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３３１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３３２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３３３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３３４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３３５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号３３６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３３７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３３８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（配列番号３３９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３４０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＴＣ＊Ｗ ＬＶＫＧａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号 ３４１）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３４２）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３４３）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３４４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３４５）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３４６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３４７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３４８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３４９）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓであり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３５３）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号 ３５５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３５７）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５８）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３５９）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６０）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３６１）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６２）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６３）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３６５）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓであり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３６８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３６９）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３７０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３７１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＴａ（配列番号３７２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ Ｃ＊ＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＶＫＧａ（配列番号３７３）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）であり；Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３７４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３７５）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３７６）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３７７）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３７８）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３７９）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３８０）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３８１）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３８２）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３８３）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３８４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号 ３８５）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３８６）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３８７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３８８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３８９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３９０）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３９１）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３９２）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３９３）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３９４）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３９５）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３９６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号３９７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号３９８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号３９９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４００）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４０１）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓ。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４０２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４０３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４０４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４０５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４０６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４０７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４０８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４０９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４１０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４１１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４１２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４１３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４１４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４１５）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４１６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４１７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４１８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４１９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４２０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４２１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４２２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４２３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４２４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４２５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４２６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４２７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４２８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４２９）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）。
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４３０）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４３１）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４３２）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４３３）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４３４）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４３５）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４３６）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４３７）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４３８）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４３９）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４４０）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４４１）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＨＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４４２）
ＨＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４４３）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４４４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４４５）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４４６）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４４７）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４４８）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４４９）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４５０）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４５１）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４５２）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４５３）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４５４）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４５５）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４５６）
Ｘ１ＳＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号 ４５７）
上記配列において、Ｘ１＝（Ｄｅｓ−アミノ）Ｈｉｓ。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４５８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４５９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４６０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４６１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号 ４６２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号 ４６３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号 ４６４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４６５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号 ４６６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４６７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４６８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４６９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４７０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４７１）
上記配列において、Ｘ２＝アミノイソブチル酸。
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４７２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４７３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４７４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４７５）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４７６）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＲＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４７７）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４７８）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４７９）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４８０）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４８１）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＫＲＡＡＥ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４８２）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（配列番号４８３）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１２−１６；配列番号４８４）
ＨＸ２ＥＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＤＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４８５）
上記配列において、Ｘ２＝（Ｄ−Ａｌａ）。
【０１７０】
さらに、ＧＬＰ−１／グルカゴン活性比が約５またはそれ以上を持つ、下記のグルカゴンペプチドを、全体として前述の実施例１〜１１に記載の通りに構築した。一般に、これらのペプチドでは、位置２のＡＩＢは、ＤＰＰ  ＩＶ耐性を与えるばかりでなく、グルカゴン活性も著明に下げる。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＴＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号４８６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＣ＊ａ（配列番号４８７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（配列番号 ４８８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４８９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（配列番号４９０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４９１）
上記配列において、Ｘ２＝ＡＩＢであり、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号４９２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＣ＊ａ（配列番号４９３）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（配列番号４９４）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号 ４９５）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（配列番号４９６）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＡＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号４９７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号４９８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＣ＊ａ（配列番号４９９）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（配列番号５００）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０１）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（配列番号５０２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０３）
上記配列において、Ｘ２＝ＡＩＢであり、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
【０１７１】
さらに、ＧＬＰ−１／グルカゴンコアゴニストである、下記のグルカゴンペプチドを、全体として前述の実施例１〜１１に記載の通りに構築した。アミノ酸１６および２０の間のラクタム架橋形成は、位置２の置換によってもたらされるグルカゴン活性の低下を回復する。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０４）
上記配列において、Ｘ２＝ＡＩＢであり、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０５）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０６）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０７）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５０９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５１０）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５１１）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＣ＊ａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５１２）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５１３）
上記配列において、Ｘ１＝ＤＭＩＡ（アルファ，アルファ−ジメチルイミダゾール酢酸）であり、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（必要に応じてラクタム＠１６−２０；配列番号５１４）
上記配列において、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５１７）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（ラクタム＠１６−２０；配列番号５２８）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＥＦＩＣ*Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊ａ（配列番号５３１ ）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳＣ＊Ｃ＊ａ（配列番号５３２）
ＨＸ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（配列番号５３３）
上記配列において、Ｘ２＝ＡＩＢであり、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号５１８）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号５１９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＥＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＭＮＣ＊ａ（配列番号５２０）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＧＧ ＰＳＳＧＡ ＰＰＰＳａ（配列番号５２９）
Ｘ１ＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＣ＊Ｗ ＬＭＮＴａ（配列番号５３０）
上記配列において、Ｘ１＝ＤＭＩＡ（アルファ，アルファ−ジメチルイミダゾール酢酸）であり、Ｃ＊はＣｙｓであるか、または親水ポリマーに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約２０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓであるか、またはそれとは別に、Ｃ＊は、約４０ｋＤの平均重量を持つポリエチレングリコールに付着するＣｙｓである。
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＳＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＴＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳａ（配列番号５２１）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＳＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳａ（配列番号５２２）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＳＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳａ（配列番号５２３）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＳＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＶＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳａ（配列番号５２４）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＳＲＲＡＱ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳａ（配列番号５２５）
ＨＳＱＧＴ ＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤ ＥＲＲＡＫ ＤＦＶＱＷ ＬＭＤＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳａ（配列番号５２６）
ＨＡＥＧＴ ＦＴＳＤＶ ＳＳＹＬＥ ＧＱＡＡＫ ＥＦＩＡＷ ＬＶＫＧＧａ（配列番号５２７）
Ｘ１Ｘ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＲＸ５ＡＫ ＤＦＶＸ３Ｗ ＬＭＮＸ４（配列番号６１）
上記配列において、
Ｘ１＝Ｈｉｓ、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノヒスチジン、ヒドロキシル−ヒスチジン、アセチル−ヒスチジン、ホモ−ヒスチジン、またはアルファ，アルファ−ジメチルイミダゾール酢酸（ＤＭＩＡ）、Ｎ−メチルヒスチジン、アルファ−メチルヒスチジン、または、イミダゾール酢酸、
Ｘ２＝Ｓｅｒ、Ｄ−セリン、Ａｌａ、Ｖａｌ、グリシン、Ｎ−メチルセリン、またはアミノイソブチル酸（ＡＩＢ）、Ｎ−メチルアラニン、Ｄ−アラニン、
Ｘ３＝Ａｌａ、Ｇｌｎ、またはＣｙｓ−ＰＥＧ、
Ｘ４＝Ｔｈｒ−ＣＯＮＨ２、またはＣｙｓ−ＰＥＧ、またはＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号５１５）、またはＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ−ＰＥＧ（配列番号５１６）、
ただし、Ｘ３がＣｙｓ−ＰＥＧである場合、Ｘ４は、Ｃｙｓ−ＰＥＧ、またはＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ−ＰＥＧ（配列番号５１６）ではなく、Ｘ２＝Ｓｅｒである場合、Ｘ１はＨｉｓではなく、
Ｘ５＝ＡｌａまたはＡｒｇ。
Ｘ１Ｘ２ＱＧＴ ＦＴＳＤＹ ＳＫＹＬＤ ＥＱ Ｘ５ＡＫ ＥＨ Ｘ３Ｗ ＬＭＮＸ４（配列番号６２）
上記配列において、
Ｘ１＝Ｈｉｓ、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノヒスチジン、ヒドロキシル−ヒスチジン、アセチル−ヒスチジン、ホモ−ヒスチジン、またはアルファ，アルファ−ジメチルイミダゾール酢酸（ＤＭＩＡ）、Ｎ−メチルヒスチジン、アルファ−メチルヒスチジン、またはイミダゾール酢酸、
Ｘ２＝Ｓｅｒ、Ｄ−セリン、Ａｌａ、Ｖａｌ、グリシン、Ｎ−メチルセリン、またはアミノイソブチル酸（ＡＩＢ）、Ｎ−メチルアラニン、Ｄ−アラニン、
Ｘ３＝Ａｌａ、Ｇｌｎ、またはＣｙｓ−ＰＥＧ、
Ｘ４＝Ｔｈｒ−ＣＯＮＨ２、またはＣｙｓ−ＰＥＧ、またはＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号５１５）、またはＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ−ＰＥＧ（配列番号５１６）、
ただし、Ｘ３がＣｙｓ−ＰＥＧである場合、Ｘ４は、Ｃｙｓ−ＰＥＧ、またはＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＣ−ＰＥＧ（配列番号５１６）ではなく、Ｘ２＝Ｓｅｒである場合、Ｘ１はＨｉｓではなく、
Ｘ５＝ＡｌａまたはＡｒｇ。
【０１７２】
上記配列はいずれも、さらに他に修飾を含んでもよく、例えば、活性を破壊しない、１、２、３、４、または５個の修飾、例えば、ただしこれらに限定されないが、効力を強化するために使用することが可能なＷ１０、またはＲ２０置換を含んでもよい。さらに、上記配列はいずれも、ＤＰＰ  ＩＶ耐性を付与する修飾無しで、すなわち、天然Ｈｉｓが位置１にあり、天然Ｓｅｒが位置２にある状態で生産することも可能である。さらに、上記の化合物はいずれも、例えば、異種ポリペプチド、免疫グロブリンまたはその一部（例えば、Ｆｃ領域）、標的剤、診断標識、または診断または治療剤に、必要に応じて連結させた、結合体としてもよい。
【０１７３】
（実施例１７）
グルカゴンペプチドのカルボキシ末端に連結する、配列番号２６のＣ末端延長部を含むように修飾された、下記のグルカゴンペプチドを、全体として前述の実施例１〜１１に記載の通りに構築し、実施例１４に記載するインビトロアッセイを用いて、ＧＬＰ−１およびグルカゴン受容体に対する活性に関して分析した。
【０１７４】
表１１は、グルカゴンおよびＧＬＰ−１受容体に対する、各種グルカゴン類縁体の活性を表す。このデータから、配列番号２６のＣ末端延長部を含むグルカゴン類縁体では、位置１６、２０、２８、および２９におけるアミノ酸置換は、ＧＬＰ−１受容体に対する類縁体の活性に影響を及ぼす可能性のあることが示される。
【０１７５】
【表１１】
2014141500.tif 000016
【０１７６】
（実施例１８）
表１２は、各種グルカゴンペプチドについて、グルカゴンおよびＧＬＰ−１受容体に対する、それらの相対的活性を比較して蓄積された、インビトロのデータを表す。
【０１７７】
【表１２】
2014141500.tif 000017
【図１】
2014141500.tif 000018
【図２】
2014141500.tif 000019
【図３】
2014141500.tif 000020
【図４Ａ】
2014141500.tif 000021
【図４Ｂ】
2014141500.tif 000022
【図５Ａ】
2014141500.tif 000023
【図５Ｂ】
2014141500.tif 000024
【図６Ａ】
2014141500.tif 000025
【図６Ｂ】
2014141500.tif 000026
【図７Ａ】
2014141500.tif 000027
【図７Ｂ】
2014141500.tif 000028
【図８Ａ】
2014141500.tif 000029
【図８Ｂ】
2014141500.tif 000030
【図８Ｃ】
2014141500.tif 000031
【図８Ｄ】
2014141500.tif 000032
【図８Ｅ】
2014141500.tif 000033
【図８Ｆ】
2014141500.tif 000034
【図９Ａ】
2014141500.tif 000035
【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
2014141500.tif 000037
【図１０Ｂ】
2014141500.tif 000038
【図１０Ｃ】
2014141500.tif 000039
【図１０Ｄ】
2014141500.tif 000040
【図１０Ｅ】
2014141500.tif 000041
【配列表】
2014141500000001.app
【外国語明細書】
2014141500000001.pdf