(57)【要約】【課題】金属サレン錯体を利用した有益な抗ガン剤を提供する。【解決手段】本発明は、（Ｎ，Ｎ，Ｏ，Ｏ）を４座配位子として金属を配位させた金属サレン錯体に、タキサン系抗がん性分子を結合した複合体を有効成分として含有し、細胞周期の複数のフェーズで作用する、持続性磁性抗がん剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｎ，Ｎ，Ｏ，Ｏ）を４座配位子として金属を配位させた金属サレン錯体に、タキサン系抗がん性分子を結合した複合体を有効成分として含有し、細胞周期の複数のフェーズで作用する、持続性磁性抗がん剤。
【請求項２】
前記金属サレン錯体は、
2014210742.tif 000013
（Ｍは、Fe、Cr、Mn、Co、Ni、Mo、Ru、Rh、Pd、W、Re、0s、Ir、Pt、Nd、Sm、Eu、又は、Gdである。）
である、請求項１記載の持続性磁性抗がん剤。
【請求項３】
前記金属錯体は、
2014210742.tif 000014
（Ｍは、Fe、Cr、Mn、Co、Ni、Mo、Ru、Rh、Pd、W、Re、0s、Ir、Pt、Nd、Sm、Eu、又は、Gdである。）
である、請求項１記載の持続性磁性抗がん剤。
【請求項４】
前記タキサン系抗がん分子がパクリタキセルである、請求項１記載の持続性磁性抗がん剤。
【請求項５】
前記複合体が、
2014210742.tif 000015
である、請求項１記載の持続性磁性抗がん剤。
【請求項６】
前記複合体が、
2014210742.tif 000016
である、請求項１記載の持続性磁性抗がん剤。
【請求項７】
前記複合体は投与後、外部磁場が適用された患部領域で保持されて、持続的な抗がん作用を発揮する、請求項１から６の何れか一項記載の持続性磁性抗がん剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自己磁性を有する金属サレン錯体を含む持続性磁性抗がん剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般に薬剤は生体内に投与されると患部に到達し、その患部において薬理効果を発揮することで治療効果を引き起こすが、薬剤が患部以外の組織（つまり正常組織）に到達しても治療には繋がらない。
【０００３】
したがって、いかにして効率的に患部に薬剤を誘導するかが重要である。薬剤を患部に誘導する技術はドラッグ・デリバリと呼ばれ、近年研究開発が盛んに行われている分野である。このドラッグ・デリバリには少なくとも二つの利点がある。一つは患部組織において十分に高い薬剤濃度が得られることである。薬理効果は患部における薬剤濃度が一定以上でないと発揮されず、低い濃度では治療効果が期待できない。二つめは薬剤を患部組織のみに誘導して、正常組織への副作用を抑制することである。
【０００４】
このようなドラッグ・デリバリが最も効果を発揮するのが抗がん剤によるがん治療である。抗がん剤は細胞分裂の活発ながん細胞の細胞増殖を抑制するものが大半であるため、正常組織においても細胞分裂の活発な組織、例えば、骨髄あるいは毛根、消化管粘膜などの細胞増殖を抑制する。
【０００５】
このため抗がん剤の投与を受けたがん患者には貧血、抜け毛、嘔吐などの副作用が発生する。これら副作用は患者にとって大きな負担となるため、投薬量を制限しなければならず、抗がん剤の薬理効果を十分に得ることが出来ないという問題がある。
【０００６】
抗がん剤の中で、アルキル系抗がん剤は、核酸蛋白などにアルキル基（-CH2-CH2-）を結合させる能力をもつものの総称である。ＤＮＡをアルキル化してＤＮＡの複製を阻害し、がん細胞の細胞死をもたらす。この作用は細胞周期に無関係に働きＧ0期の細胞にもおよび、増殖が盛んな細胞に対する作用が強く、骨髄、消化管粘膜、生殖細胞、毛根などに障害を与えやすい。
【０００７】
また、代謝拮抗系抗がん剤は、核酸や蛋白合成過程の代謝物と類似の構造をもつ化合物であり、核酸合成を阻害するなどして細胞を障害し、分裂期の細胞に特異的に作用する。
【０００８】
また、抗がん性抗生物質は、微生物によって産生される化学物質であり、ＤＮＡ合成抑制、ＤＮＡ鎖切断などの作用を持つ。
【０００９】
また、微小管阻害薬は、細胞分裂の際に紡錘体を形成したり、細胞内小器官の配置や物質輸送など、細胞の正常機能の維持に重要な役割を果たしている微小管に直接作用することで抗腫瘍効果を示す。微小管阻害剤は細胞分裂が盛んな細胞や神経細胞などに作用を及ぼす。
【００１０】
また、白金製剤は、ＤＮＡ鎖または鎖間結合あるいはＤＮＡ蛋白結合を作ってＤＮＡ合成を阻害する。シスプラチンが代表的薬剤であるが腎障害が強く、多量の補液が必要とされる。
【００１１】
また、ホルモン類似薬系抗がん剤は、ホルモン依存性の腫瘍に対して有効である。男性ホルモン依存性の前立腺がんに対して女性ホルモンを投与したり抗男性ホルモン剤を投与したりする。
【００１２】
また、分子標的薬は、それぞれの悪性腫瘍に特異的な分子生物学的特徴に対応する分子を標的とした治療法である。
【００１３】
また、トポイソメラーゼ阻害薬は、ＤＮＡに一時的に切れ目を入れてＤＮＡ鎖のからまり数を変える酵素である。トポイソメラーゼＩは、環状ＤＮＡの一方の鎖に切れ目を入れ、もう一方の鎖を通過させた後、切れ目を閉じる酵素であり、トポイソメラーゼ阻害薬ＩＩは環状ＤＮＡの２本鎖両方を一時的に切断し、その間を別の２本鎖ＤＮＡを通過させ、再び切れ目をつなぎ直す酵素である。
【００１４】
さらに、非特異的免疫賦活薬は、免疫系を活性することによってがん細胞の増殖を抑制する。
【００１５】
抗がん剤は細胞分裂の活発ながん細胞の細胞増殖を抑制するものが大半であるため、正常組織においても細胞分裂の活発な組織、例えば骨髄あるいは毛根、消化管粘膜などの細胞増殖を抑制してしまう。このため抗がん剤の投与を受けた癌患者には貧血、抜け毛、嘔吐などの副作用が発生する。
【００１６】
既述のとおり、これら副作用は患者にとって大きな負担となるため投薬量を制限しなければならず、抗がん剤の薬理効果を十分に得ることが出来ないという問題があった。
【００１７】
そこで、ドラッグ・デリバリによって抗がん剤をがん細胞まで誘導し、がん細胞に集中して薬理効果を発揮させることによって、副作用を抑えつつ効果的にがん治療を行うことができると期待されている。ドラッグ・デリバリの具体的な手法としては、例えば、担体（キャリア）を用いたものがある。これは患部に集中しやすい担体に薬剤を載せて、薬剤を患部まで運ばせようというものである。
【００１８】
担体として有力視されているのが磁性体であり、薬剤に磁性体である担体を付着させ、磁場によって患部に集積される方法が提案されている（例えば、特開2001‐10978号公報参照）。
【００１９】
しかしながら、磁性体担体をキャリアとして使用する場合、経口投与が困難なこと、担体分子が一般に巨大であること、担体と薬剤分子との間の結合強度、親和性に技術的な問題があることがわかり、そもそも実用化が困難であった。
【００２０】
そこで、本願出願人は、有機化合物の基本骨格に対して、正又は負のスピン電荷密度付与する側鎖が結合され、全体として外部磁場に対して磁気共有誘導される範囲の適性を持ち、人体や動物に適用された際に、体外からの磁場によって局所的に磁場が与えられている領域で保持され、元来保有している医薬効果を、磁性体担体の助けを請わず、前記領域において発揮するようにした、局所治療薬を提案した（国際公開第2008/001851号公報）。同公報には、このような薬剤として、抗がん性を有する鉄サレン錯体が記載されている。また、国際公開第2010/058280号公報には、抗がん剤を金属サレン錯体に結合させた磁性薬が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】特開2001-10978号公報
【特許文献２】国際公開第2008/001851号公報
【特許文献３】国際公開第2010/058280号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
国際公開第2010/058280号公報の中で、パクリタキセル（タキソール）を鉄サレン錯体に縮合させた化合物は磁性を有すると共にラットＬ６細胞に対するＤＮＡ抑制作用があることが記載されている。
【００２３】
しかしながら、ラットＬ６細胞に対するＤＮＡ抑制は元来鉄サレン錯体が有する作用であって、パクリタキセル−鉄サレン錯体からなる化合物がパクリタキセルの抗がん作用に対してどのように影響するのかは明らかにされていなかった。
【００２４】
そこで、本発明は、金属サレン錯体を利用した有益な抗ガン剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明は、（Ｎ，Ｎ，Ｏ，Ｏ）を４座配位子として金属を配位させた金属サレン錯体に、タキサン系抗がん性分子を結合した複合体を有効成分として含有し、細胞周期の複数のフェーズで作用する、持続性磁性抗がん剤であることを特徴とする。
【００２６】
金属サレン錯体は好適には下記化合物から構成される。
【化１】
2014210742.tif 000002
【化２】
2014210742.tif 000003
【００２７】
化１の化合物と化２の化合物の違いは、化２が、化１（単量体）が酸素を介して結合した多量体（２量体）である点である。鉄サレン錯体が単量体構造をとるか、多量体構造をとるかは、金属キレート構造を生成させる際に使用するハロゲン化金属のハロゲンの価数、或いは、ハロゲン化金属が水和物であるか否かによって変わってくる。例えば、２ハロゲン化金属の水和塩（例：FeCl24H2O）では、金属サレン錯体は単量体構造（化１）をとり、３ハロゲン化金属（例：FeCl3）では、金属サレン錯体は多量体構造（化２）をとる。化２の化合物の方が化１より磁性は高い。
【００２８】
Ｍは金属サレン錯体の中心金属であり、例えば、Fe、Cr、Mn、Co、Ni、Mo、Ru、Rh、Pd、W、Re、0s、Ir、Pt、Nd、Sm、Eu、又は、Gdである。化２は、化１の金属サレン錯体２分子が電子供与体（Ｏ）を介して結合したものである。本発明の金属サレン錯体は、化１、化２の側鎖の水素が他の官能基で置換されたものも含まれる。金属サレン錯体は、上記のものの他、特開2013-28543号公報に記載の化合物でもよい。
【００２９】
タキサン系抗がん分子としては、例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）がある。タキサン系抗がん剤は、細胞周期のＧ２／Ｍ期を阻害するもので、微小管に結合して安定化させ脱重合を阻害することで腫瘍細胞の分裂を阻害する。一方、金属サレン錯体は、細胞周期のＧ１／Ｓ期でのＤＮＡの複製を抑制する。したがって、金属サレン錯体−タキサン系抗がん性分子の複合体は、パクリタキセルが有効と認定されていない、子宮体がん等にも有効で、かつ、パクリタキセルの抗がん効果を増強させる等、細胞周期の複数のフェーズ（Ｇ１からＭ期）に作用、即ち、細胞周期において、がん細胞の分裂のための生理機能（ＤＮＡ複製、微小管の脱重合作用）を抑制する広域性抗がん剤を提供する。
【００３０】
金属サレン錯体−タキサン系抗がん性分子の複合体は金属サレン錯体由来の磁性を有するために、人や動物に投与されると磁化領域に留まり持続的な抗がん作用を発揮する。パクリタキセルの半減期を１とすると、金属サレン錯体−タキサン系抗がん分子複合体の半減期を、例えば、２倍以上にすることができる。人や動物の磁化領域は、外部磁場を患部に適用することによって形成される。外部磁場は、永久磁石やコイルを体表面に配置することによって、人や動物に適応される。或いは、ＭＲＩによって、人や動物に外部磁場が適用されてもよい。また、永久磁石やコイルは、体内のがん組織近傍に配置してもよい。磁場強度は、金属サレン錯体−タキサン系抗がん性分子の複合体が患部に留まることができるように適宜設定される。金属サレン錯体−タキサン系抗がん性分子の複合体は、注射、又は、点滴による静注によって静脈から毛細血管を経て患部に供給される。外部磁場の強度は、金属サレン錯体−タキサン系抗がん分子を患部に留め置けるに足る値であればよく、患部の位置、深さ、人や動物などの固体の特徴等に基づいて適宜設定すればよい。本願発明者が検討したところ、１.５−０．５Ｔ、特に、０．６Ｔが好適であった。
【００３１】
パクリタキセルによる癌治療は、週単位で、一回又は数回の投薬を、休薬期間を置きながら繰り返えされることによって進められる。これに対して、金属サレン錯体−タキサン系抗がん性分子の複合体は、金属サレン錯体由来の磁性を備えているために、外部磁場によって患部領域に留まることができるために、休薬期間を置きながら投薬を繰り返さなくても、持続的な抗がん効果を維持することができる。また、金属サレン錯体−タキサン系抗がん分子の複合体は磁場が適用された患部に留まり全身に拡散しないために、タキサン系抗がん剤の副作用（白血球減少等の骨髄抑制、末梢神経障害等）を顕著に抑制することができる。
【００３２】
金属サレン錯体とタキサン系抗がん性分子はアミド結合等の中間結合体分子（架橋構造）を介して結合される。中間結合体を金属サレン錯体及び／又はタキサン系抗がん分子に導入して、金属サレン体とタキサン系抗がん分子を結合する。金属サレン錯体の中間体をタキサン系抗がん性分子に結合させて、その後、金属サレン錯体の金属キレート構造が生成されるようにしてもよい。
【００３３】
金属サレン錯体とタキサン系抗がん性分子の複合体は、好ましくは、生理食塩水、ブドウ糖液等の溶媒に溶解又は分散されて注射剤又は輸液として提供される。金属サレン錯体−タキサン系抗がん剤の複合体の濃度は、１μＭから１００μＭの範囲である。金属サレン錯体−タキサン系抗がん分子の複合体は薬剤学的に許容される塩の形態でもよい、また、必要に応じて、プロドラッグ等の誘導体の形態でもよい。金属サレン錯体−タキサン系抗がん分子の複合体を有する抗がん剤の製剤には、公知の保存剤、安定剤、着色剤等が含有されてもよい。
【００３４】
次の化合物（化３、化４）は、金属サレン錯体とパクリタキセルの複合体の好適な例である。
【化３】
2014210742.tif 000004
鉄サレン錯体（化１）−パクリタキセル複合体
【００３５】
【化４】
2014210742.tif 000005
鉄サレン錯体（化２）−パクリタキセル複合体
【００３６】
既述の化３、化４において、タキサン系抗がん分子のさらにもう一つが、鉄サレン錯体のタキサン系抗がん分子が結合していないアミノ基に結合してもよい。また、タキサン系抗がん分子が結合する鉄サレン錯体に対する位置は、既述の化３、化４におけるアミノ基の位置をパラとすると、ベンゼン環のオルト又はメタの位置でもよい。アミド基を中間結合体としたが、国際公開第2010/058280号公報記載の他の中間結合体を用いてもよい。さらにまた、金属サレン錯体に対して結合、或いは、縮合するタキソール系抗がん分子数は、複数でもよいし、異なる構造のタキソール系分子が金属サレンに結合してもよい。
【発明の効果】
【００３７】
本発明によれば、金属サレン錯体利用した有益な抗ガン剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３、化４）の着磁試験結果の写真である。
【図２】鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）のＭＲＩ装置での撮影試験結果を示す写真である。
【図３】鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化４）のＭＲＩ装置での撮影試験結果を示す写真である。
【図４】鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）のがん細胞抑制試験（ＸＴＴアッセイ）における、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体の濃度とＸＴＴアッセイ法の吸光度との関係を示す特性図である。
【図５】鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化４）のがん細胞抑制試験（ＸＴＴアッセイ）における、時間経過に応じたがん細胞の成長率を示す特性図である。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
（実施例１）
鉄サレン錯体（化１）−パクリタキセル（タキソール）の複合体の合成
2014210742.tif 000006
化合物１、無水酢酸(acetic anhydride)、H2SO4を室温で１時間混合した。混合中の反応は、薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ:Thin-Layer Chromatography)で確認した。詳細確認後、酢酸エチル（EtOAc）／ホスファチジルエタノールアミン（P.E.）で再結晶化した後、化合物２を得た。化合物２であることは質量分析で分子量を測定し確認した。
【００４０】
2014210742.tif 000007
メタノール（MeOH）中で化合物２と１０％のパラジウムを含む炭素を、水素雰囲気中で２時間の水素化処理を行った。得られた化合物をろ過したところ化合物３が得られた。化合物３であることは質量分析で分子量を測定して確認した。
【００４１】
2014210742.tif 000008
ジクロロメタン(ＤＣＭ)中で、化合物３と二酸化ジ-tert-ブチル（di(tert-butyl) dicarbonate）を溶液化し、一晩攪拌した。真空中でその溶媒を気化させて反応させた後、付着した油をメタノールで落とし、NaOH水溶液を加え、得られた溶液を５時間還流させた。詳細確認後、原料を、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーで精製して化合物５を得た。
【００４２】
2014210742.tif 000009
EtOHで化合物５の溶液を作り、還流し、エチレンジアミン(ethlenediamine)を数滴添加し、温浴中でした。エチレンジアミン添加後、０．５時間還流させながら混合した。ろ過を行ったところ、薄い黄色で針状のShiff基をもつ配位子である化合物６を得た。
【００４３】
2014210742.tif 000010
ジクロロメタンで化合物６の溶液を作るために、エーテルに塩酸を入れた溶液を加えた。その溶液は、室温で５時間攪拌し、ジクロロメタンとエーテルを使ってろ過、洗浄し化合物７を得た。化合物７であることは1HNMRで確認した。
【００４４】
2014210742.tif 000011
ジクロロメタンに溶かしたパクリタキセル(Paclitaxel)にジクロロメタンに溶解させたクロロギ酸４−ニトロフェニルを数滴添加した。その溶液は、摂氏−５０度で３時間攪拌させた。反応後、溶媒を蒸発させた。得られた固形物はシリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製を行ったところ収率６８％で化合物Ｃが得られた。この化合物を質量分析で確認した。
【００４５】
2014210742.tif 000012
無水ＤＭＦ（N,N-ジメチルホルムアミド：N,N-dimethlformamide）中に化合物８（化合物Ｃ）２４６ミリグラム、０．２４ｍｍｏｌ、および、K2CO3  ９９ミリグラム、０．７２ｍｍｏｌを入れ、その溶液に摂氏−３０度、窒素下で無水ＤＭＦ中の化合物７の溶液（１４４ミリグラム、０．４８ミリモル）を滴下した。混合物を3時間摂氏−２０度で攪拌し、濾過し、粗生成物を真空中で濃縮した。粗生成物をMeOH（５ｍＬ）に溶解し、この溶液を窒素下でMeOH（５ｍｌＬ）中のFeCl24H2Oの混合物（４３ミリグラム、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、得られた暗褐色の混合物を３０分間窒素下、摂氏４０度で撹拌した。溶媒はethanol/Et2O（１：１）３０ｍＬで処理した粗生成物、濾過し、粗化合物を濃縮するために、真空中で溶媒を蒸発させた。残留固形物をメタノールおよびジエチルエーテルから再結晶し、真空中で溶媒を蒸発させて目的の鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）からなる化合物９（１３０ミリグラムを収率４８％）を得て、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）であることを、質量分析によって確認した。質量分析結果はAPI−ES法で測定したところ計算値は1272.40、実測値は1272.0であった。
【００４６】
（実施例２）
鉄サレン錯体（化２）−パクリタキセル（タキソール）の複合体の合成
この合成のための方法は、実施例１のステップ８において、金属サレン錯体部分の金属キレートを生成する段階で使用される金属ハロゲンを“FeCl24H2O”から“FeCl3”に変更した以外は、ほぼ実施例１と同じである。得られた化合物が鉄サレン錯体（２量体）−パクリタキセル複合体（化４）であることを質量分析よって確認した。質量分析結果は同じくAPI−ES法で測定したところ計算値2478.74に対して、 2481.6であった。
【００４７】
（実施例３）
次に、実施例１で得られた、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）と、実施例２で得られた、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化４）について、それぞれの化合物を丸型シャーレ内の精製水に分散し、ネオジウム永久磁石（表面磁束密度８００ｍＴ）を近づけて、夫々の化合物が磁石で誘導できるか否かを確認した。図１の「磁石なし」の写真に示すように、磁力が適用されない場合には、精製水に化合物が分散された状態に成るのに対して、「磁石あり」の写真では、化合物が、磁場が及ぶ領域に集合することが確認された。即ち、各化合物は、鉄サレン錯体に由来する磁力を失わず、維持していることが確認された。
【００４８】
（実施例４）
鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）を、放射線医学総合研究所分子イメージセンターに設置してあるＭＲＩ装置（７．０Ｔ  Burker社製）で撮影した。撮影結果としての写真を図２に示す。市販薬剤であるタキソール(Taxol)はシグナル変化なしの白色を呈するのに対して、化３の化合物(EI-2574M)の水溶液は１．５ｍＭから１８７ｍＭへと濃度が高くなるにつれて白色のシグナルが得られることがわかった。よって、金属サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）は、ＭＲＩ造影剤としても機能することが分かった。
【００４９】
（実施例５）
実施例４と同様にして、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化４）の水溶液をＭＲＩ装置で撮影した。撮影結果としての写真を図３に示す。化４の化合物(EI-2573M)は１．５ｍＭから１８７ｍＭへと濃度が高くなるにつれて白色のシグナルが得られることがわかった。よって、金属サレン錯体−パクリタキセル複合体（化４）は、ＭＲＩ造影剤としても機能することが分かった。
【００５０】
（実施例６）
鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）のがん細胞に対する殺傷効果の確認試験を実施した。実験材料及び試験方法は次のとおりである。
１.材料
細胞株：理化学研究所から譲渡された乳がん細胞株(ＭＣＦ−７)
２.試験試薬
XTT cell proliferation assay kit (American Type Culture Collection社製)
３.試験方法
（１）細胞培養
乳がん細胞株(MCF-7)を、１０％非働化ウシ血清(GIBCO, USA)、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン・ストレプトマイシン(Wako大阪)を添加したＲＰＭＩ−１６４０(Wako、大阪)を用いて摂氏３７度、５％ＣＯ２の条件下で培養した。
（２）ＸＴＴアッセイ
鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）の抗腫瘍効果を評価するためＸＴＴアッセイ法を用いた。各細胞をマイクロプレート（組織培養用、９６穴、平底）に各ウェル１００μｌをＣＯ２インキュベーターで摂氏３７度、５％ＣＯ２条件下で３時間培養した。
【００５１】
鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）による細胞傷害性を検討するため、生細胞数の計測をした。腫瘍細胞を、１．９μＭ、３．８μＭ、７．５μＭ、１５μＭ、３０μＭ、６０μＭの濃度の鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）で２４時間刺激した。
【００５２】
各々のウェルに５０μｌのＸＴＴ標識混合液（ＸＴＴ標識混合液は５ｍｌとActivation Reagent試薬０．１ｍｌとを混合）を加えて、ＣＯ２インキュベーターで４時間培養した。吸光度をModel 680 microplate Reader(BIO-RAD Laboratories社製 CA, USA)で測定した。産生されたフォルマザンの吸光度を４５０ｎｍで測定した。対照波長を６６５ｎｍに設定した。測定結果を図４に示す。図４の縦軸はがん細胞の増殖率、横軸は鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）の濃度を表す。図４から分かるように、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化３）の濃度が高くなるに従って、がん細胞の生存率が低下していることが分かる。
【００５３】
（実施例７）
実施例６と同様にして、鉄サレン錯体−パクリタキセル（タキソール）の複合体（磁性化タキソール：化４）の抗がん効果の試験を行った。なお、１．９μＭ、３．８μＭ、７．５μＭ、１５μＭ、３０μＭ、６０μＭの濃度の鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体（化４）でがん細胞を２４、４８、７２時間刺激し、夫々の時点での吸光度を実施例６と同様にして求めた。測定結果に基づいて、時間経過に応じたがん細胞の成長率を算出した。結果を図５に示す。図５から分かるように、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体は、パクリタキセル（タキソール）に鉄サレン錯体が結合した構造にも拘わらず、タキソールの抗がん効果を維持していることが分かった。なお、磁場環境では、鉄サレン錯体−パクリタキセル複合体の濃度はパクリタキセルに比べて数倍高いために、前者の抗がん効果は後者に比較して顕著に向上される。また、金属サレン−パクリタキセル複合体の抗がん効果は、パクリタキセル単独に比較して顕著に向上された。
【図５】
2014210742.tif 000017
【図１】
2014210742.tif 000018
【図２】
2014210742.tif 000019
【図３】
2014210742.tif 000020
【図４】
2014210742.tif 000021