(57)【要約】【課題】抗老化効果に優れ、かつ安全性の高い有効成分の提供が望まれており、このような抗老化成分を提供すること。【解決手段】ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物を有効成分とする抗老化組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物を有効成分とする抗老化組成物。
【請求項２】
低級アルコール−水抽出物が２０ないし８０％低級アルコール水溶液による抽出物である請求項１記載の抗老化組成物。
【請求項３】
低級アルコールがエタノールである請求項１または２記載の抗老化組成物。
【請求項４】
医薬品の形態である、請求項１ないし３の何れかの項記載の抗老化組成物。
【請求項５】
飲食品に配合する形態である、請求項１ないし３の何れかの項記載の抗老化組成物。
【請求項６】
皮膚用化粧科または皮膚外用剤の形態である、請求項１ないし３の何れかの項記載の抗老化組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物を有効成分とする抗老化組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
何時までも若いことは、人類共通の願望であり、昔より老化を遅らせるためのいろいろな研究がなされてきた。この研究のベースとして老化のメカニズムの研究も、盛んに行われ、いろいろな説が提示されている。しかし、老化メカニズムに関する研究は未だ基礎研究段階にあり、寿命を延ばしたり、老化に特徴的な諸症状を遅延させるといったような、老化防止のために有効な手だてが確立されたとはいい難い。
【０００３】
このような状況下で、老化防止に有効であると思われるいくつかの成分が報告されている。例えば、動物実験の結果から、ビタミンＥ、ビタミンＣなどに老化現象を遅延する効果があると報告されたが、その後の研究で、これらには明確な寿命延長効果の見られないことが確認されている。
【０００４】
また、植物抽出物、アミノ酸類、高分子化合物あるいは配糖体等についても広く研究が行われており、例えばフィランタス・ニルリ（Phyllanthus niruri）の抽出物（特許文献１）、特定の脱アセチル化度のキトサン（特許文献２）、スレオニン又はこれとメチオニン（特許文献３）、ニコチンアミドリボシド（特許文献４）等が抗老化作用を有すると報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平８−１７６００４
【特許文献２】特開２００５−２８９８３９
【特許文献３】特開２０１０-８３８４８
【特許文献４】特開２０１２−１７６９６２
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】”Okinawa  no  Chouju”,pp.31-48(1999)
【非特許文献２】”J.Am.Coll.Nutr.”,28,500s-516s(1999)
【非特許文献３】”ACS  Symposium  Series  507”,pp72-86(1992)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記したように、抗老化作用を与える有効成分については種々の検討、提案がなされているが、更に抗老化効果に優れ、かつ安全性の高い有効成分の提供が望まれており、このような抗老化成分を提供することが本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、沖縄における長寿の理由の一つとして、地元の人が健康に良い植物の摂取あり、これが現地の人々の寿命に貢献していることを先に報告した（非特許文献１および２）。また、中谷は、沖縄の植物の中に含まれる抗酸化化合物が島民の健康に貢献したことを報告している（非特許文献３）。そして、これらの植物の多くは、抗酸化作用を有するポリフェノールを豊富に含んでいることが知られている。
【０００９】
そこで本発明者は、日本では沖縄だけに自生する植物の１つであるゲットウ（月桃；Alpinia zerumbet）に着目し、これが含有する成分について詳しく研究を行った結果、ゲットウ葉を低級のアルコールと水の混液で抽出して得た抽出物は、ポリフェノール含量が極めて高く、生物の寿命を延長しうるものであることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち本発明は、ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物を有効成分とする抗老化組成物である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の抗老化組成物により、老化を抑制し、寿命の延長が期待される。従って、本発明の抗老化組成物は、これを経口摂取することで高齢化または加齢に関連した疾患の患者の身体の老化を防止し、また、これを皮膚等に塗布することで、皮膚の老化を防ぎ、しわ、シミ等の発生を防止することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】各ゲットウ葉抽出物中のポリフェノールの量を示す図面である。
【図２】ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物（ＡＬＰ）のラジカル消去作用を、濃度との関係で示した図面である。
【図３】トランスジェニックＣ．エレガンスＣＦ１５５３における、ＳＯＤ−３：：ＧＦＰの発現が上げられた状況を示す図面である。
【図４】トランスジェニックＣ．エレガンスＣＬ２０７０における、ＨＳＰ−１６.２：：ＧＦＰの発現が上げられた状況を示す図面である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明に用いられるゲットウ（月桃；Alpinia zerumbet）は、ショウガ科ハナミョウガ属として分類される多年草植物であり、その葉や茎は抗菌剤や防虫剤として、またその種子は健胃薬や鎮吐薬などの漢方薬として使用されてきた。
【００１４】
本発明においては、このゲットウの葉部および茎部が、抽出物の原料として用いられる。
この葉部および茎部は、収穫したものをそのまま使用しても良いし、ある程度乾燥させたものを使用しても良い。
【００１５】
本発明で使用するゲットウ葉エキスを得るに当たっては、原料であるゲットウの葉部ないし茎部（以下、「ゲットウ原料」という）を適当な大きさに細断ないし粉砕した後、これを低級アルコール−水混液（以下、「アルコール混液」という）に浸漬し、抽出を行えばよい。
【００１６】
この抽出においてアルコール混液に用いられる低級アルコールとしては、エタノール、メタノール、イソプロパノール等が挙げられるが、安全性等の面からはエタノールが好ましい。また、アルコール混液における低級アルコールと水との混合割合は、２０％ないし８０％低級アルコール水溶液となる程度の範囲が好ましい。更に、１重量部のゲットウ原料に対するアルコール混液の量は、１ないし２０重量部程度とすることが望ましい。
【００１７】
なお、上記の抽出における温度は、特に制約はないが、２５ないし６０℃程度であることが好ましく、また、抽出に当たっては、ゆっくりとした機械撹拌することが望ましい。
【００１８】
以上のようにして得られるゲットウ葉抽出物は、水−エタノール等の非毒性の抽出液を用いた場合は抽出液をそのまま用いてもよく、また、濃縮して濃縮エキスとして用いても良い。更に、凍結乾燥などの周知の乾燥手段により更に乾燥粉末物としたり、ペースト状としてもよい。
【００１９】
かくして得られるゲットウ葉抽出物は、これを周知の担体ないし配合成分と組みあわせることで、抗老化組成物とすることができる。
【００２０】
本発明の抗老化組成物の調製に当たり使用される担体ないし配合成分は、当該組成物の形態によって相違するが、例えば飲食品に配合する形態や、医薬品などとして使用する形態の場合は、周知の食品素材あるいは食品中に配合したり、周知の医薬担体ないし配合成分と組み合わせ、製剤化すれば良い。このうち、医薬品などとしての形態例としては、錠剤、カプセル剤、散剤、内服液、細粒剤、顆粒剤等の内服剤が挙げられる。一方、皮膚組織等の細胞における組織賦活化効果を目的とする、皮膚用化粧科、皮膚外用剤等の形態の場合は、周知の外用剤ないし化粧料成分に配合し、リニメント、スプレー、ローション、水溶液、乳液、軟膏、パウダー等の外用形態とすれば良い。
【００２１】
なお、飲食品に配合する形態や、医薬品などとして使用する形態の場合でのゲットウ葉抽出物の配合量は、特に制約はないが成人１日当たりの投与量として１０〜１０００ｍｇ程度、好ましくは５０〜２００ｍｇ程度が適当である。また、皮膚用化粧科、皮膚外用剤として使用する場合のゲットウ葉抽出物の配合量は、通常組成物全体の０.１〜２０質量％程度であり、特に１〜５質量％程度が好ましい。
【００２２】
本発明の抗老化組成物の効果は、後記実施例において詳しく説明するが、例えば、ストレス耐性を評価するために行った試験では、２.５、５および１０μｇ／ｍＬ濃度のゲットウ葉抽出物において、Ｃ．エレガンスは、酸化耐性試験および熱耐性試験の両者においてストレス耐性の増加が認められた。また、生存期間分析では、１００μｇ／ｍＬのゲットウ葉抽出物が、１００μＭのレスベラトロールよりもＣ．エレガンスの生存期間を有意に延長することを見出した。
【００２３】
多くの研究者が、ブルーベリーからのポリフェノール、ブドウのレスベラトロール、イチョウの葉、緑茶からのエピガロカテキン・ガレート、およびホウレンソウからのフェノール性抗酸化剤がＣ．エレガンスの加齢に有益な効果をもつことができることを示してきたが、本発明もゲットウ葉抽出物が有するポリフェノールが通常およびストレス状態でＣ．エレガンスの生存期間を有意に増加させているものと判断される。
【００２４】
後記実施例の結果は、ゲットウ葉に含まれるポリフェノールがＣ．エレガンスの生存期間に有益な効果を有すること、およびそれが高齢化または加齢に関連する疾患に対する天然化合物の探索において大きなポテンシャルを有する可能性があることを示すものである。
【実施例】
【００２５】
次に実施例および製剤例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例等に何ら制約されるものではない
【００２６】
実  施  例  １
ゲットウ葉抽出物の調製：
新鮮なゲットウ（アルピニア・ゼルムベット；Alpinia zerumbet）の葉５０ｇを２０分間、５００ｍｌの沸騰水中で処理し、冷却した。この処理水をろ過し、濾液を粗抽出液として得、４０℃で真空乾燥した。得られた粗抽出物を水（１０ｍｇ／ｍＬ）に再び溶解し、ゲットウ葉の熱水抽出物（ＡＬＨ）を得た。このものは使用まで冷蔵庫に保管した（ＡＬＨ）。
【００２７】
同様に５０ｇの新鮮なゲットウ葉を、２５℃の５０％エタノール（５００ｍｌ）で４８時間抽出した。得られた抽出液をろ過し、４０℃減圧下で蒸発乾固した。この固形物を水で１０ｍｇ／ｍｌに溶解することで、ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物（ＡＬＰ）が得られた。このものは、使用まで４℃で貯蔵した。
【００２８】
抽出溶媒を、５０％エタノールからヘキサンおよび酢酸エチルに変えることで、それぞれゲットウ葉のヘキサン抽出画分および酢酸エチル抽出画分を得た。これら抽出画分も、４０℃で減圧乾燥し、上記と同様にしてヘキサン抽出物（Ａｌｈ）および酢酸エチル抽出物（Ａｌｅ）を得た。
【００２９】
実  施  例  ２
得られた各抽出物の全フェノール含量測定：
実施例１で得られた各抽出物（ＡＬＨを除く）の全フェノール含量を、フォーリン試薬を使用して測定した。また比較としてゲットウ葉自体の全フェノール量も測定した。この結果を図１に示す。
【００３０】
図１から明らかなように、ＡＬＰの全フェノール含量は、ゲットウ葉自体の１０倍であり、酢酸エチル抽出物と比べても７倍以上であった。
【００３１】
実  施  例  ３
ＡＬＰの抗酸化活性作用：
ＡＬＰのインビトロの抗酸化活性を、フェノプロラミン（ＤＰＰＨ）および２,２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）ラジカルの除去活性を評価することにより調べた。この結果を、図２に示す。
【００３２】
図２から明らかなように、ＡＬＰの濃度依存的にラジカル活性が上昇しており、ＡＬＰが抗酸化活性を有することが示された。
【００３３】
実  施  例  ４
ゲットウ葉抽出物による、酸化ストレスに対する線虫の生存率評価試験：
（１）使用線虫種およびその維持
カエノラブディティス．エレガンス（Caenohabdiyis elegans；以下、「Ｃ.エレガンス」という）のワイルドタイプ、Ｎ２（var.ブリストル）並びにトランスジェニック種ＣＦ１５５３（muls84）およびＣＬ２０７０（dvls70）を、エシェリヒア・コリ株ＯＰ−５０と共に、カエノラブディティス・ジェネティク・センター（ミネソタ大学）より得た。全ての種は、日常的に、Ｅ・コリ
ＯＰ−５０を食物源とするネマトード・グロウス・メディアム（ＮＧＭ）プレート上で、２０℃で増殖させた。
【００３４】
線虫培養の同期化は、たくさんの卵をかかえた雌雄同体を漂白剤（５０％次亜塩素酸ナトリウム；２.５Ｍ水酸化ナトリウム）で処理し、ＮＧＭ／ＯＰ５０プレート上で孵化したＬ１幼生を回収することにより、達成された。
【００３５】
（２）酸化および熱のストレスに対する抵抗の評価
異なる濃度のゲットウ葉抽出物およびクエルセチンでＮＧＭプレートを処理した。ゲットウ葉抽出物によるプレート処理は、新しく５５℃で加圧滅菌処理されたＮＧＭプレートにゲットウ葉抽出物のストック液を所望の最終濃度まで添加することで行われた。この処理ＮＧＭプレートに、年齢が同期化された線虫の幼生（Ｌ１）を添加し、２０℃で９６時間維持した。
【００３６】
次いで、約３０〜４０匹の線虫を、８時間、０.５ｍＭ過酸化水素水を含むＳ−ベーザル培地中に置き、酸化ストレスを与えた。この後、生きている線虫と死んだ線虫の両方を含むＳ−ベーザル培地は、新しいＮＧＭプレートに移され、生きている線虫と死んだ線虫の数が数えられた。生存は、プレート上のもとの線虫と同様に、柔らかな接触に反応する数としてスコアされた。この結果を表１に示す。
【００３７】
【表１】
2014210723.tif 000002
【００３８】
この結果、ＡＬＨおよびＡＬＰにより、酸化ストレスにさらされた線虫での生存率はいずれも高まったが、ＡＬＨ１２５μｇ／ｍＬと、ＡＬＰ１０μｇ／ｍＬでの効果がほぼ同等であり、ＡＬＰの作用がより高いことが明らかになった。また、６２.５〜２５０μｇ／ｍＬのＡＬＨおよび２．５〜１０μｇ／ｍＬのＡＬＰの何れでも、その生存率はクエルセチン５０μｇ／ｍＬより優れていた。
【００３９】
実  施  例  ４
ゲットウ葉抽出物による、熱ストレスに対する線虫の生存率評価試験：
熱耐性評価は、大多数の産卵が終わった後の、５日齢の雌雄同体ワイルド型Ｃ．エレガンス、Ｎ２の成虫によって行われた。線虫は、前記のように栄養補給された３.５ｃｍのＮＧＭ寒天プレート上に移され、次に３５℃で培養された。スコアは、２時間毎に、プラチナの先端による柔らかな接触に反応しなかった死んだ線虫を数えることにより行われた。プレートの側面上の乾燥により死んだ線虫は、数えなかった。この結果を表２に示す。
【００４０】
【表２】
2014210723.tif 000003
【００４１】
表２の結果より、３５℃の熱ストレス下で、ワイルド型線虫Ｎ２は、ＡＬＨ（６２.５、１２５、２５０μｇ／ｍＬ）およびＡＬＰ（２５、５０、１００μｇ／ｍＬ）の何れにおいても生存率が向上した。なお、値は、単位時間における生存率（％）であり、Ｑ５０は比較であるクエルセチン５０μｇ／ｍＬを意味する。
【００４２】
実  施  例  ５
ゲットウ葉抽出物のエレガンスの生存期間延長効果：
生存期間評価のために、同期化された線虫（プレート当り２０−３０匹）を、生きているＥ．コリＯＰ−５０ともに３.５ｃｍのＮＧＭプレートにシードして、維持し、更に種々の濃度（０、２５、５０および１００μｇ／ｍＬ）のゲットウ葉抽出物およびレスベラトロール（１００μＭ）が与えられた。
【００４３】
成虫期初日（４日）に、増殖を防ぐために４００μＬの５−フルオロデオキシウリジン（ＦＵｄＲ）が添加された。線虫は、生きているＥ.コリＯＰ−５０で養われ、４日目ごとに、線虫が飢えないようにするために８０μＬの生きているＥ.コリ  ＯＰ−５０がＮＧＭプレートに添加された。死んだ線虫のカウントは、前述のように２日ごとに行われた。この結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
2014210723.tif 000004
【００４５】
表３より、寿命が濃度に依存する効果が、認められた。５０および１００μｇ／ｍＬのＡＬＰでの線虫の推定平均生存期間において有意な増加があった。この試験でのコントロールに対する平均生存期間も、２５、５０および１００μｇ／ｍＬのＡＬＰで平均生存期間が、８.２７、２６.８および４９.５％増加した。
【００４６】
レスベラトロール（１００μＭ）の処理では、対照と比べて２３.７％の増加があったが、ＡＬＰ１００で処理された群は、２０.８％の増加があり、レスベラトロールで処理された線虫よりも良好な生存期間を延長する特性を有していた。また、ＡＬＰ５０で処理された線虫も、レスベラトロールと同様な生存期間を延長する特性を有していた。
【００４７】
なお、対照群において最早生きている線虫がいなくなったとき、１００μｇ／ｍＬのＡＬＰで処理された群ではおよそ４０％の線虫がまだ生きていた。同様に、線虫の最大生存期間もまた、２５、５０および１００μｇ／ｍＬのＡＬＰ濃度のもので、１３.２、３２.６および６０.９％と有意に増加したのに対し、レスベラトロール（１００μＭ）では、対照と比べて３３.５％増加したに留まった。
【００４８】
以上のように高いフェノール含量であるＡＬＰは、Ｃ．エレガンスの加齢を遅らせる実質的な役割を有していると思われ、これは他の生物に対しても同様な作用を示すと考えられる。
【００４９】
実  施  例  ６
蛍光の定量化および可視化試験
ＧＦＰを発現する集団のＧＦＰ蛍光は、ＭＴＰ−８８０蛍光メータ（コロナ電気、日本）を使用して評価された。４日齢の、対照または１０μｇ／ｍＬのＡＬＰで処理された１５匹の線虫は、１００μＬのリン酸緩衝液中、ヌンク９６−ウェル・マイクロタイター・プレート（黒、透明、平底のウェル）に移され、全ＧＦＰ蛍光が４９０ｎｍ励起および５３０ｎｍ発光フィルターを使用して測定された。
【００５０】
実験は、３連で２回繰り返して行われた。結果は６回の実験の平均±ＳＥとして提供された。蛍光顕微鏡検査のために、トランスジェニック線虫のＧＦＰ写真がオリンパスＤＰ−７０顕微鏡により撮られた。
【００５１】
この結果、ＡＬＰは、トランスジェニックＣ．エレガンスＣＦ１５５３においてＳＯＤ−３：：ＧＦＰの発現を上げるように調節することがわかった。
【００５２】
ストレス抵抗の増加は、ＡＬＰ特定のストレスに反応する遺伝子を調整することが原因であったかどうかを調査するために、抗酸化酵素ＳＯＤの反応性を１０μｇ／ｍＬまで調べた。
【００５３】
ＡＬＰで処理された群は、共焦点レーザー顕微鏡でとった写真において有意により高いＳＯＤ−３：：ＧＦＰの明度を示した（図示せず）。マイクロプレート・リーダーを通しての明度の数量化では、ＡＬＰが１０μｇ／ｍＬで１４３％以上、ＳＯＤ−３：：ＧＦＰの発現を有意に調節することができたことを示された（図３）。
【００５４】
また、同様にＡＬＰは、トランスジェニックＣ．エレガンスＣＬ２０７０でヒート・ショック蛋白質ＨＳＰ−１６.２の発現を上げるように調節することがわかった。
【００５５】
蛋白質のＨＳＰ―１６.２族は、αβ―結晶性で同種であり、Ｃ．エレガンスでストレス状態において発現した。Ｃ．エレガンスで寿命を予測することは、ストレスに敏感なレポーターとして役目を果たすことができる。ＨＳＰ−１６.２：：ＧＦＰのより高いレベルは、Ｃ．エレガンスのより長い平均残存寿命を予測する。
【００５６】
この研究において、ＨＳＰ−１６.２の発現についてＡＬＰの効果が調査され、熱ストレス下のＣ．エレガンスでＡＬＰの保護効果へのより多くの手がかりが得られた。ＨＳＰ−１６.２：：ＧＦＰのレポーター遺伝子を含むＣＬ２０７０線虫は、３５℃で２時間ヒート・ショック処理し、２０℃で１２時間回復された。１０μｇ／ｍＬで処理されたサンプルは、共焦点レーザー顕微鏡で、より高いＨＳＰ−１６.２：：ＧＦＰの強度を示した（図示せず）。
【００５７】
蛍光の強さが定量化された結果は、ＡＬＰがＣＬ２０７０で大体１.５倍のＨＳＰ−１６.２：：ＧＦＰの発現を有意に上げるよう調節したことを示した（図４）。
【００５８】
製  剤  例  １
美  容  液  ：
ＡＬＰ          １００ｍｇ
グリセリン          ４ｇ
エタノール        １０ｇ
キサンタンガム  ３００ｍｇ
香料              微  量
精製水            バランス  
計          １００ｇ
【００５９】
製  剤  例  ２
顆  粒  ：
コラーゲンペプチド      ５００ｍｇ
ＡＬＰ                    ３０ｍｇ
大豆イソフラボン          ５０ｍｇ
還元乳糖                バランス
大豆オリゴ糖              ３６ｍｇ
エリスリトール            ３６ｍｇ
デキストリン              ２５ｍｇ
クエン酸                  ２４ｍｇ
香料                      微  量
計              １２００ｍｇ
【００６０】
製  剤  例  ３
ドリンク剤  ：
ＡＬＰ                      ５０ｍｇ
ローヤルゼリー              １０ｍｇ
液糖                        １０ｇ
ＤＬ−酒石酸ナトリウム      １０ｍｇ
クエン酸                  １００ｍｇ
ビタミンＣ                １００ｍｇ
ビタミンＥ                ２００ｍｇ
シクロデキストリン        ２５０ｍｇ
塩化カリウム                ２０ｍｇ
硫酸マグネシウム            １０ｍｇ
精製水                  バランス
計                  １００ｍｌ
【産業上の利用可能性】
【００６１】
ＡＬＰ（ゲットウ葉の低級アルコール−水抽出物）中には、高い含量でポリフェノールが含まれており、このものは生物の寿命の延長が期待されるものである。
【００６２】
従って、このものを含有する食品や医薬品を日常的に摂取することにより、高齢化または加齢に関連した疾患の患者の身体の老化防止が期待され、抗老化組成物として利用可能である。
【００６３】
また、上記のＡＬＰはこれを皮膚等に塗布することで、皮膚組織等の細胞における組織賦活化効果が期待でき、皮膚の老化を防ぎ、しわ、シミ等の発生を防止することが可能となる。
【図１】
2014210723.tif 000005
【図２】
2014210723.tif 000006
【図３】
2014210723.tif 000007
【図４】
2014210723.tif 000008