(57)【要約】      （修正有）【課題】アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質に関する組成物および方法の提供。【解決手段】ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、それぞれのＣＤＲが：特定のアミノ酸配列の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに特定のアミノ酸配列の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３からなる群より選択される、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、それぞれのＣＤＲが：
ａ）配列番号５５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｂ）配列番号５６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに
ｃ）配列番号５７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号６０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
からなる群より選択される、前記単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項２】
ａ）軽鎖可変領域が配列番号５５を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５８を含む、抗原結合タンパク質；
ｂ）軽鎖可変領域が配列番号５５を含み、ここでＮ末端Ｇｌｕのいくつか、大部分またはすべてが環化され、そして重鎖可変領域が配列番号５８を含む、抗原結合タンパク質；
ｃ）軽鎖可変領域が配列番号５６を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５９を含む、抗原結合タンパク質；および
ｄ）軽鎖可変領域が配列番号５７を含み、そして重鎖可変領域が配列番号６０を含む、抗原結合タンパク質；
からなる群より選択される、請求項１のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項３】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が：
ａ）それぞれ、配列番号３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｂ）それぞれ、配列番号５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｃ）それぞれ、配列番号７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｄ）それぞれ、配列番号２２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｅ）それぞれ、配列番号２４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
からなる群より選択され、
そして重鎖可変ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が配列番号５８由来である
前記単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項４】
軽鎖可変領域が：
ａ）配列番号３に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；
ｂ）配列番号５に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；
ｃ）配列番号７に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；
ｄ）配列番号２２に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；および
ｅ）配列番号２４に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；
からなる群より選択され、
そして重鎖可変領域が配列番号５８を含む
請求項３のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項５】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が：
ａ）それぞれ、配列番号１２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｂ）それぞれ、配列番号２５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに
ｃ）それぞれ、配列番号２６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
からなる群より選択され、
そして重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が：
ａ’）それぞれ、配列番号４１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに
ｂ’）それぞれ、配列番号５４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
からなる群より選択される、前記単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項６】
軽鎖可変領域が、配列番号１２、２５および２６のいずれか１つに少なくとも９０％同一である可変領域からなる群より選択され、そして重鎖可変領域が、配列番号４１および５４のいずれか１つに少なくとも９０％同一である可変領域からなる群より選択される、請求項５のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項７】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、それぞれのＣＤＲが：
ａ）配列番号１０由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２０由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４６由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３６由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１９由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４７由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｊ）配列番号２１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｋ）配列番号３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｌ）配列番号７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３５由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｍ）配列番号６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｎ）配列番号１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｏ）配列番号２２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｐ）配列番号２４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｑ）配列番号９由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３７由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｒ）配列番号４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｓ）配列番号２８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｔ）配列番号１６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４５由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｕ）配列番号１５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｖ）配列番号１４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｗ）配列番号２７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｘ）配列番号５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｙ）配列番号１２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｚ）配列番号２３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ａ’）配列番号２５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに
ｂ’）配列番号２６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
からなる群より選択されるＣＤＲに少なくとも９０％同一である、前記単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項８】
それぞれのＣＤＲが：
ａ）配列番号１０由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｃ）配列番号２０由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｄ）配列番号１１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｅ）配列番号１３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｆ）配列番号１７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４６由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｇ）配列番号８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３６由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１９由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４７由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｊ）配列番号２１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｋ）配列番号３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｌ）配列番号７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３５由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｍ）配列番号６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｎ）配列番号１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｏ）配列番号２２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｐ）配列番号２４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｑ）配列番号９由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３７由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｒ）配列番号４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｓ）配列番号２８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｔ）配列番号１６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４５由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｕ）配列番号１５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｖ）配列番号１４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｗ）配列番号２７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｘ）配列番号５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｙ）配列番号１２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ｚ）配列番号２３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
ａ’）配列番号２５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに
ｂ’）配列番号２６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；
からなる群より選択される、請求項７のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項９】
ａ）軽鎖可変領域が配列番号１０に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３８に少なくとも９０％同一である；
ｂ）軽鎖可変領域が配列番号２に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が
配列番号３０に少なくとも９０％同一である；
ｃ）軽鎖可変領域が配列番号２０に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５１に少なくとも９０％同一である；
ｄ）軽鎖可変領域が配列番号１１に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３９に少なくとも９０％同一である；
ｅ）軽鎖可変領域が配列番号１３に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４２に少なくとも９０％同一である；
ｆ）軽鎖可変領域が配列番号１７に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４６に少なくとも９０％同一である；
ｇ）軽鎖可変領域が配列番号８に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３６に少なくとも９０％同一である；
ｈ）軽鎖可変領域が配列番号１９に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４９に少なくとも９０％同一である；
ｉ）軽鎖可変領域が配列番号１８に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４７に少なくとも９０％同一である；
ｊ）軽鎖可変領域が配列番号２１に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５２に少なくとも９０％同一である；
ｋ）軽鎖可変領域が配列番号３に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３１に少なくとも９０％同一である；
ｌ）軽鎖可変領域が配列番号７に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３５に少なくとも９０％同一である；
ｍ）軽鎖可変領域が配列番号６に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３４に少なくとも９０％同一である；
ｎ）軽鎖可変領域が配列番号１に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号２９に少なくとも９０％同一である；
ｏ）軽鎖可変領域が配列番号２２に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５０に少なくとも９０％同一である；
ｐ）軽鎖可変領域が配列番号２４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４０に少なくとも９０％同一である；
ｑ）軽鎖可変領域が配列番号９に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３７に少なくとも９０％同一である；
ｒ）軽鎖可変領域が配列番号４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３２に少なくとも９０％同一である；
ｓ）軽鎖可変領域が配列番号２８に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５３に少なくとも９０％同一である；
ｔ）軽鎖可変領域が配列番号１６に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４５に少なくとも９０％同一である；
ｕ）軽鎖可変領域が配列番号１５に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４４に少なくとも９０％同一である；
ｖ）軽鎖可変領域が配列番号１４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４３に少なくとも９０％同一である；
ｗ）軽鎖可変領域が配列番号２７に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４３に少なくとも９０％同一である；
ｘ）軽鎖可変領域が配列番号５に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３３に少なくとも９０％同一である；
ｙ）軽鎖可変領域が配列番号１２に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４１に少なくとも９０％同一である；
ｚ）軽鎖可変領域が配列番号２３に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４８に少なくとも９０％同一である；
ａ’）軽鎖可変領域が配列番号２５に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領
域が配列番号５４に少なくとも９０％同一である；ならびに
ｂ’）軽鎖可変領域が配列番号２６に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５４に少なくとも９０％同一である；
請求項７のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１０】
ａ）軽鎖可変領域が配列番号１０を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３８を含む；
ｂ）軽鎖可変領域が配列番号２を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３０を含む；
ｃ）軽鎖可変領域が配列番号２０を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５１を含む；
ｄ）軽鎖可変領域が配列番号１１を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３９を含む；
ｅ）軽鎖可変領域が配列番号１３を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４２を含む；
ｆ）軽鎖可変領域が配列番号１７を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４６を含む；
ｇ）軽鎖可変領域が配列番号８を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３６を含む；
ｈ）軽鎖可変領域が配列番号１９を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４９を含む；
ｉ）軽鎖可変領域が配列番号１８を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４７を含む；
ｊ）軽鎖可変領域が配列番号２１を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５２を含む；
ｋ）軽鎖可変領域が配列番号３を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３１を含む；
ｌ）軽鎖可変領域が配列番号７を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３５を含む；
ｍ）軽鎖可変領域が配列番号６を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３４を含む；
ｎ）軽鎖可変領域が配列番号１を含み、そして重鎖可変領域が配列番号２９を含む；
ｏ）軽鎖可変領域が配列番号２２を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５０を含む；
ｐ）軽鎖可変領域が配列番号２４を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４０を含む；
ｑ）軽鎖可変領域が配列番号９を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３７を含む；
ｒ）軽鎖可変領域が配列番号４を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３２を含む；
ｓ）軽鎖可変領域が配列番号２８を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５３を含む；
ｔ）軽鎖可変領域が配列番号１６を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４５を含む；
ｕ）軽鎖可変領域が配列番号１５を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４４を含む；
ｖ）軽鎖可変領域が配列番号１４を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４３を含む；
ｗ）軽鎖可変領域が配列番号２７を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４３を含む；
ｘ）軽鎖可変領域が配列番号５を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３３を含む；
ｙ）軽鎖可変領域が配列番号１２を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４１を含む；
ｚ）軽鎖可変領域が配列番号２３を含み、そして重鎖可変領域が配列番号４８を含む；
ａ’）軽鎖可変領域が配列番号２５を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５４を含む；
ｂ’）軽鎖可変領域が配列番号２６を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５４を含む；
請求項９の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１１】
さらに軽鎖定常領域および重鎖定常領域を含む、請求項１〜１０のいずれか一項の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１２】
軽鎖定常領域が：
ａ）カッパ型軽鎖定常領域；および
ｂ）ラムダ型軽鎖定常領域；
からなる群より選択され
そして重鎖定常領域が：
ａ’）ＩｇＤ抗体由来の定常領域；
ｂ’）ＩｇＥ抗体由来の定常領域；
ｃ’）ＩｇＭ抗体由来の定常領域；
ｄ’）ＩｇＧ１抗体由来の定常領域；
ｅ’）ＩｇＧ２抗体由来の定常領域；
ｆ’）ＩｇＧ３抗体由来の定常領域；
ｇ’）ＩｇＧ４抗体由来の定常領域；および
ｈ’）ヒンジ領域中に、Ｈ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を軽減させる、少なくとも１つの突然変異を有する、ＩｇＧ４抗体由来の定常領域；
からなる群より選択される、請求項１１の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１３】
軽鎖定常領域が：
ａ）配列番号７０を含むポリペプチド；
ｂ）配列番号７０に少なくとも９０％同一であるポリペプチド；
ｃ）１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸が取り除かれている、配列番号７０に示すようなアミノ酸配列を有するポリペプチド；ならびに
ｄ）１以上の翻訳後修飾を取り込む、ａ）、ｂ）またはｃ）のポリペプチド；
からなる群より選択され、
そして重鎖定常領域が：
ａ’）配列番号７２を含むポリペプチド；
ｂ’）配列番号７２に少なくとも９０％同一であるポリペプチド；
ｃ’）１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸が取り除かれている、配列番号７０に示すようなアミノ酸配列を有するポリペプチド；ならびに
ｄ’）１以上の翻訳後修飾を取り込む、ａ’）、ｂ’）またはｃ’）のポリペプチド；からなる群より選択される、請求項１２の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１４】
ＣＤ４＋メモリーＴ細胞結合アッセイにおいて、３５ｎｇ／ｍｌ未満のＥＣ５０を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１５】
ＣＤ４＋メモリーＴ細胞結合アッセイにおいて、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＥＣ５０を有する、請求項１４の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１６】
ＭＡｄＣＡＭ競合アッセイにおいて、３０ｎｇ／ｍ未満のＩＣ５０を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１７】
ＭＡｄＣＡＭ競合アッセイにおいて、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１８】
アルファ４ベータ７のＳ２５０Ｎ突然変異体に結合する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項の抗原結合タンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項２０】
請求項１９の核酸を含むベクター。
【請求項２１】
請求項２０のベクターでトランスフェクションまたは形質転換されている、単離された宿主細胞。
【請求項２２】
発現を促進する条件下で請求項２１の宿主細胞を培養し、そして培地からタンパク質を回収することを含む、抗原結合タンパク質を産生するための方法。
【請求項２３】
請求項１〜１８のいずれか一項のポリペプチド、および生理学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーを含む、組成物。
【請求項２４】
アルファ４ベータ７の少なくとも１つの活性を阻害する方法であって、アルファ４ベータ７を発現している細胞と、請求項１〜１８のいずれか一項記載のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を、ＭＡｄＣＡＭ−１への細胞の接着が部分的にまたは完全に阻害されるように、接触させることを含む、前記方法。
【請求項２５】
アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現する細胞を含む組織に輸送されるのを阻害する方法であって、アルファ４ベータ７を発現している細胞と、請求項１〜１８のいずれか一項記載のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を、ＭＡｄＣＡＭ−１への細胞の接着が部分的にまたは完全に阻害されるように、接触させることを含む、前記方法。
【請求項２６】
アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞を含む組織に不適切に輸送されることによって特徴付けられる状態に罹患している個体を治療する方法であって、アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞を含む組織に輸送されるのを阻害するのに十分な量で、請求項２３記載の組成物を該個体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項２７】
状態が炎症性腸疾患である、請求項２６の方法。
【請求項２８】
状態が、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清陰性関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的またはコラーゲン性大腸炎、好酸球性胃腸炎、ならびに直腸結腸切除術および回腸肛門吻合術後に生じる嚢炎からなる群より選択される、請求項２７の方法。
【請求項２９】
状態が、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息および移植片対宿主病からなる群より選択される、請求項２６の方法。
【請求項３０】
ハイブリダイゼーションプローブ、ＰＣＲプライマーまたは配列決定プライマーとして使用するのに十分な、請求項１９の核酸分子またはその相補体の断片である、単離されたポリヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）に基づいて、２００９年３月２０日出願の米国特許出願第６１／１６２，１５４号および２０１０年２月２２日出願の米国特許出願第６１／３０６，８２９号の優先権を主張し、これらの出願は本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本出願は、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質に関する組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
インテグリンは、２つのサブユニット（１つのアルファ・サブユニットおよび１つのベータ・サブユニット）で形成される、ヘテロ二量体Ｉ型膜貫通タンパク質であり、そして多くの異なる細胞−細胞および細胞−細胞外マトリックス相互作用を仲介する。機能的には、インテグリンは、白血球遊走および再循環、ならびに免疫応答を含む、多様な生物学的プロセスに関与することが示されてきている。哺乳動物において、１８の既知のアルファ・サブユニットおよび８つの既知のベータ・サブユニットがあり、組み合わせて２４の別個のインテグリンが形成される。リガンド特異性は、大部分、発現されるアルファおよびベータ・サブユニットの特定の組み合わせによって決定され、一方、リガンドに対するアフィニティは、インテグリン・コンホメーション変化によって調節され、そして二価陽イオン依存性である。
【０００４】
インテグリンに対するリガンドは、構造的に多様な群を形成し、これには、コラーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチンおよびラミニンなどの細胞外マトリックスタンパク質；細胞性接着分子（例えば血管細胞性接着分子またはＶＣＡＭ）などの対抗受容体、ならびに血漿タンパク質が含まれる。多くの病原性微生物もまた、感染開始のため、または毒素結合部位として、インテグリンを利用する。構造的に多様なリガンドは、通常は伸長した柔軟なループ中に存在する、露出したグルタミン酸またはアスパラギン酸残基を共有し、これはインテグリンによる認識に重要である。
【０００５】
アルファ４インテグリン（アルファ４とベータ１またはベータ７サブユニットいずれかがパートナーを組んだもの）は、免疫系において重要な役割を果たす。アルファ４ベータ１は、リンパ球および骨髄細胞上で発現され；血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）に対する主な結合パートナーであるようである。ＶＣＡＭは、血管内皮上で遍在性に発現され、炎症中に上方制御され、そしてアルファ４ベータ７ならびにアルファ４ベータ１（アルファ４ベータ７に対するよりは弱いが）に結合する。末梢Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および好酸球上でも検出されるが、アルファ４ベータ７は、優先的に腸にホーミングすることが示されているＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−  メモリーＴ細胞の下位集団上で最も高く発現される。アルファ４ベータ７ヘテロ二量体に対する主なリガンドは、腸内皮中で発現される粘膜アドレシン細胞接着分子１（ＭＡｄＣＡＭ−１またはＭＡｄＣＡＭ）である。
【０００６】
アルファ４鎖と対形成するのに加え、ベータ７サブユニットはまた、アルファＥともパートナーを組んで、アルファＥベータ７を形成し、アルファＥベータ７は主に、腸、肺および尿生殖路中の上皮内リンパ球（ＩＥＬ）上で発現される。アルファＥベータ７はまた、腸の樹状細胞上でも発現される。アルファＥベータ７ヘテロ二量体は、上皮細胞上で発現されるＥ−カドヘリンに結合する。ＩＥＬ細胞は、上皮区画内で免疫監視のための機構を提供すると考えられる。
【０００７】
アルファ４に結合し、そしてＶＣＡＭ−１およびフィブロネクチンへのアルファ４ベータ１の結合を阻害する抗体は、アルファ４の残基１５２〜２０３の間の５２アミノ酸領域に位置した（Ｓｃｈｉｆｆｅｒら，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：１４２７０；  １９９５）。Ｔｉｄｓｗｅｌｌら（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏ  １５９：１４９７；  １９９７)は、マウス／ヒト・キメラ・ベータ７サブユニット・アプローチにおいて、ベー
タ７に結合する一団の抗体を利用して、ＭＡｄＣＡＭ−１への結合に重要な、ベータ７のドメインを同定した。彼らは、ＭＡｄＣＡＭ−１およびＥ−カドヘリンへの結合を阻害した７つの抗体のうち６つが、アミノ酸１７６〜２５０を含む領域に位置することを見出しており、この領域は、他のインテグリンサブユニットの金属イオン依存性接着部位（ＭＩＤＡＳ）に相同性を有するようである。Ｔｉｄｓｗｅｌｌらが用いた抗体の１つは、ＡＣＴ−１と称されるアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗体であった。
【０００８】
ＡＣＴ−１抗体は、元来、Ｌａｚａｒｏｖｉｔｚら（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３３：１８５７；  １９８４）によって、マウスを、ＰＢＭＣ由来のヒト破傷風トキソイド特異的Ｔリンパ球株で免疫することによって生じる抗体として記載された。後に、ＡＣＴ−１がアルファ４ベータ７ヘテロ二量体に特異的に結合することが示された（Ｓｃｈｗｅｉｇｈｏｆｆｅｒら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：７１７，  １９９３）。ＡＣＴ−１はネズミ・アルファ４ベータ７には結合しないが、少なくともいくつかの非ヒト霊長類種由来のアルファ４ベータ７には結合し、そして捕獲ワタボウシタマリン（captive cotton-top tamarin）において、自発性大腸炎を軽減させることが示されてきている（Ｈｅｓｔｅｒｂｅｒｇら，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１１：１３７３；  １９９６）。
【０００９】
ＡＣＴ−１は、ヒト化されており、そして潰瘍性大腸炎において（Ｆｅａｇａｎら，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３５２：２４９９；  ２００５）、そして最近、クローン病において（Ｆｅａｇａｎら，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ
ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ６：１３７０，  ２００８）、ヒト療法剤として評価されてきている。ベドリズマブとしてもまた知られるヒト化ＡＣＴ−１は、ＷＯ  ９８／０６２４８、および米国特許７，１４７，８５、ならびにＷＯ  ０７／０６１６７９およびＵＳ  ２００７−０１２２４０４に記載される。別のヒト化抗体、ナタリズマブ（チサブリ（登録商標））はクローン病を治療するのに用いられてきている。ナタリズマブは、アルファ４特異的ネズミ抗体のヒト化型である。ベドリズマブは、患者の一部で、中和抗ヒト化抗体反応を導くことが示されてきており、そしてナタリズマブは、免疫低下個体における、ＪＣウイルスの以前の感染の再活性化と関連する神経学的障害である、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）と関連付けられてきている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＷＯ  ９８／０６２４８
【特許文献２】米国特許７，１４７，８５
【特許文献３】ＷＯ  ０７／０６１６７９
【特許文献４】ＵＳ  ２００７−０１２２４０４
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｓｃｈｉｆｆｅｒら，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：１４２７０；  １９９５
【非特許文献２】Ｔｉｄｓｗｅｌｌら（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏ  １５９：１４９７；  １９９７)
【非特許文献３】Ｌａｚａｒｏｖｉｔｚら（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３３：１８５７；  １９８４）
【非特許文献４】Ｓｃｈｗｅｉｇｈｏｆｆｅｒら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：７１７，  １９９３
【非特許文献５】Ｈｅｓｔｅｒｂｅｒｇら，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１１：１３７３；  １９９６
【非特許文献６】Ｆｅａｇａｎら，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３５２：２４９９；  ２００５
【非特許文献７】Ｆｅａｇａｎら，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ６：１３７０，  ２００８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、アルファ４ベータ７／ＭＡｄＣＡＭ−１経路を破壊しつつ、これらの不都合な点を軽減する療法剤に関するニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
１つの側面において、本発明は、ヒト・アルファ４ベータ７に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（すなわちアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質）を提供する。本発明の別の側面において、抗原結合タンパク質は、非ヒト霊長類、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）、チンパンジー（ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅ）、非霊長類哺乳動物、げっ歯類、マウス、ラット、ハムスター（ｈａｍｓｔｅｒ）、モルモット（ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ）、ネコ、またはイヌのアルファ４ベータ７に特異的に結合する。別の態様において、単離された抗原結合タンパク質は、ヒト抗体；キメラ抗体；モノクローナル抗体；組換え抗体；抗原結合性抗体断片；一本鎖抗体；ディアボディ；トリアボディ；テトラボディ；Ｆａｂ断片；Ｆ（ａｂ’）２断片；ドメイン抗体；ＩｇＤ抗体；ＩｇＥ抗体；ＩｇＭ抗体；ＩｇＧ１抗体；ＩｇＧ２抗体；ＩｇＧ３抗体；ＩｇＧ４抗体；またはＨ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を軽減する、ヒンジ領域中の少なくとも１つの突然変異を有するＩｇＧ４抗体；を含む。別の側面において、単離された抗原結合タンパク質は前述の抗体の１つに由来する重鎖定常領域を含み；別の側面において、定常領域は、配列番号７２を含むポリペプチド；配列番号７２に少なくとも９０％同一であるポリペプチド；１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸が取り除かれている、配列番号７２に示すようなアミノ酸配列を有するポリペプチド；あるいは１以上の翻訳後修飾を取り込む、前述のポリペプチド；の１つである。１つの態様において、単離抗原結合タンパク質はカッパ軽鎖定常領域を含み、別の態様において、ラムダ軽鎖領域を含む。１つの態様において、軽鎖定常領域は、配列番号７０を含むポリペプチド；配列番号７０に少なくとも９０％同一であるポリペプチド；１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸が取り除かれている、配列番号７０に示すようなアミノ酸配列を有するポリペプチド；あるいは１以上の翻訳後修飾を取り込む、前述のポリペプチド；の１つである。
【００１４】
本発明の１つの態様は、重鎖および軽鎖を有し、これらが各々１以上の相補性決定領域、またはＣＤＲを含む、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。本発明の別の側面において、重鎖可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、そして軽鎖可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、それぞれのＣＤＲは、配列番号５５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号５６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに配列番号５７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号６０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；からなる群より選択される。
【００１５】
本発明の別の側面において、重鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含み、そして軽鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。１つの側面において、ＦＲはＣＤＲと同じ配列番号より選択され；別の側面において、ＦＲは異なる配列番号より選択される。さらなる態様において、本発明は、軽鎖可変領域が配列番号５５を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５８を含む；軽鎖可変領域が配列番号５６を含み、そして重鎖可変領域が配列番号５９を含む；または軽鎖可変領域が配列番号５７を含み、そして重鎖可変領域が配列番号６０を含む；アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。
【００１６】
本発明の別の側面において、本発明は、重鎖および軽鎖を有し、これらが各々１以上の相補性決定領域、またはＣＤＲを含む、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。本発明の別の側面において、重鎖可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、そして軽鎖可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。１つの態様において、軽鎖ＣＤＲは、それぞれ、配列番号３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；それぞれ、配列番号５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；それぞれ、配列番号７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；それぞれ、配列番号２２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびにそれぞれ、配列番号２４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３からなる群より選択され；そして重鎖可変ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は配列番号５８由来である。
【００１７】
本発明の別の側面において、重鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含み、そして軽鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。１つの側面において、ＦＲはＣＤＲと同じ配列番号より選択され；別の側面において、ＦＲは異なる配列番号より選択される。さらなる態様において、本発明は、軽鎖可変領域が、配列番号３に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；配列番号５に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；配列番号７に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；配列番号２２に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；および配列番号２４に少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域；からなる群より選択され、そして重鎖可変領域が配列番号５８を含む、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。
【００１８】
本発明の別の側面は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が：それぞれ、配列番号１２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；それぞれ、配列番号２５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびにそれぞれ、配列番号２６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；からなる群より選択され、そして重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が：それぞれ、配列番号４１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびにそれぞれ、配列番号５４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に、少なくとも９０％同一であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；からなる群より選択
される、前記単離アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。１つの態様において、軽鎖可変領域は、配列番号１２、２５および２６のいずれか１つに少なくとも９０％同一である可変領域からなる群より選択され、そして重鎖可変領域は、配列番号４１および５４のいずれか１つに少なくとも９０％同一である可変領域からなる群より選択される。本発明の別の側面において、重鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含み、そして軽鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。１つの側面において、ＦＲはＣＤＲと同じ配列番号より選択され；別の側面において、ＦＲは異なる配列番号より選択される。
【００１９】
１つの態様において、本発明は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、それぞれのＣＤＲが、配列番号１０由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２０由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４６由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３６由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１９由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４７由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３１由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３５由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２９由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４０由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号９由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３７由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３２由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２８由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４５由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１４由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２７由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３３由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号１２由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４１由来の重鎖ＣＤＲ
１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２３由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号４８由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；配列番号２５由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに配列番号２６由来の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号５４由来の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；からなる群より選択されるＣＤＲに少なくとも９０％同一である、前記単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。別の側面において、重鎖および軽鎖ＣＤＲは、列挙する配列番号のそれぞれのＣＤＲに同一である。本発明の１つの態様において、重鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含み、そして軽鎖可変領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４と称される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。１つの側面において、ＦＲはＣＤＲと同じ配列番号より選択され；別の側面において、ＦＲは異なる配列番号より選択される。
【００２０】
別の態様において、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質は、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域が配列番号１０に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３８に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３０に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２０に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５１に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１１に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３９に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１３に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４２に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１７に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４６に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号８に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３６に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１９に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４９に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１８に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４７に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２１に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５２に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号３に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３１に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号７に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３５に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号６に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３４に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号２９に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２２に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５０に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４０に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号９に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３７に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３２に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２８に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５３に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１６に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４５に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１５に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４４に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４３に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２７に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４３に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号５に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可
変領域が配列番号３３に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号１２に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４１に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２３に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号４８に少なくとも９０％同一である；軽鎖可変領域が配列番号２５に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５４に少なくとも９０％同一である；または軽鎖可変領域が配列番号２６に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号５４に少なくとも９０％同一である。別の側面において、重鎖および軽鎖可変領域は、列挙する配列番号のそれぞれの可変領域に同一である。
【００２１】
本発明の１つの側面は、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞結合アッセイにおいて、３５ｎｇ／ｍｌ未満のＥＣ５０を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供し；別の側面は、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞結合アッセイにおいて、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＥＣ５０を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本発明は、ＭＡｄＣＡＭ競合アッセイにおいて、３０ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供し；別の側面において、ＭＡｄＣＡＭ競合アッセイにおいて、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を有する、単離アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。本発明の１つの側面は、アルファ４ベータ７のＳ２５０Ｎ突然変異体に結合する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を提供する。
【００２２】
本発明の１つの側面において、本発明は、前述のポリペプチドをコードする核酸を提供する。本発明の別の側面において、核酸はベクターである。本発明の別の態様において、本発明は、本発明の核酸で形質転換またはトランスフェクションされている、宿主細胞を提供する。本発明の別の側面において、ポリペプチドの発現を促進する条件下で、宿主細胞をインキュベーションし、そしてポリペプチドを採取する工程を含む、ポリペプチドを調製する方法を提供する。
【００２３】
別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７に結合する抗原結合タンパク質を分泌する単離された細胞を提供する。別の態様において、細胞はハイブリドーマである。別の態様において、本発明は、アルファ４ベータ７（すなわちヒト・アルファ４ベータ７）に特異的に結合する抗原結合タンパク質を作製する方法であって、前記単離された細胞が前記抗原結合タンパク質を発現するのを可能にする条件下で該細胞をインキュベーションする工程を含む、前記方法を提供する。
【００２４】
１つの側面において、本発明は、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体に特異的に結合する、単離された抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、該単離された抗原結合タンパク質は、ヒト・アルファ４ベータ７に結合した際、アルファ４ベータ７のＭＡｄＣＡＭ−１への結合を阻害する。したがって、本発明の１つの態様は、アルファ４ベータ７の少なくとも１つの活性を阻害する方法であって、活性が部分的にまたは完全に阻害されるように、アルファ４ベータ７を発現している細胞を、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質と接触させる工程を含む、前記方法を提供する。１つの側面において、こうした方法をｉｎ  ｖｉｖｏで行う。本発明の１つの側面において、単離された抗原結合タンパク質は、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞に、アルファ４ベータ７を発現している細胞が接着するのを阻害する。本発明のさらに別の側面において、単離された抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞が存在する領域または組織に輸送されるのを阻害し；こうした態様の１つの例において、単離抗原結合タンパク質は、リンパ球の腸への輸送を阻害する。
【００２５】
別の側面において、本発明は抗原結合タンパク質を含む薬学的組成物を提供する。１つ
の態様において、本発明は、被験体において状態を治療する方法であって、被験体に薬学的組成物を投与する工程を含み、状態が被験体においてアルファ４ベータ７の活性を（部分的にまたは完全に）減少させることによって治療可能である、前記方法を提供する。別の態様において、被験体はヒトである。別の態様において、状態は胃腸系の炎症状態である。したがって、アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞を含む組織に不適切に輸送されることによって特徴付けられる状態に罹患している個体を治療する方法であって、アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞を含む組織に輸送されるのを（部分的にまたは完全に）阻害するのに十分な量で、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を該個体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。１つの態様において、状態は、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清陰性関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的またはコラーゲン性大腸炎、好酸球性胃腸炎、または直腸結腸切除術および回腸肛門吻合術後に生じる嚢炎である。別の態様において、状態は、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息または移植片対宿主病である。
【００２６】
別の態様において、方法は、被験体に第二の治療を投与する工程をさらに含む。別の態様において、薬学的組成物を被験体に投与する前におよび／またはそれと同時におよび／またはそれより後に、第二の治療を被験体に投与する。別の態様において、第二の治療は抗炎症剤を含む。別の態様において、第二の薬学的組成物は、非ステロイド性抗炎症剤、ステロイド、および免疫調節剤からなる群より選択される剤を含む。別の態様において、方法は、第三の治療を被験体に投与する工程を含む。
【００２７】
別の側面において、本発明は、被験体の寿命を増加させる方法であって、被験体に薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７活性を減少させる必要がある被験体において、該活性を減少させる方法であって、該被験体に薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７が仲介する輸送（例えばアルファ４ベータ７が仲介する腸ホーミング）を減少させる必要がある被験体において、該輸送を減少させる方法であって、該被験体に薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、インテグリン・アルファ４ベータ７（「アルファ４ベータ７」）に結合する分子であって、アルファ４ベータ７をアゴナイズするかまたはアンタゴナイズする分子、例えば抗アルファ４ベータ７抗体、抗体断片、および抗体誘導体、例えばアンタゴニスト性抗アルファ４ベータ７抗体、抗体断片、または抗体誘導体を含む分子に関連する、組成物、キット、および方法を提供する。やはり提供するのは、アルファ４ベータ７に結合するポリペプチドのすべてまたは一部をコードするヌクレオチドの配列を含む、核酸、ならびにその誘導体および断片、例えば抗アルファ４ベータ７抗体、抗体断片、または抗体誘導体のすべてまたは一部をコードする核酸、こうした核酸を含むプラスミドおよびベクター、ならびにこうした核酸および／またはベクターおよびプラスミドを含む細胞または細胞株である。提供する方法には、例えば、アルファ４ベータ７に結合する分子、例えば抗アルファ４ベータ７抗体を作製するか、同定するか、または単離する方法、分子がアルファ４ベータ７に結合するかどうかを決定する方法、分子がアルファ４ベータ７をアゴナイズするかまたはアンタゴナイズするかどうかを決定する方法、アルファ４ベータ７に結合する分子を含む、薬学的組成物などの組成物を作製する方法、ならびにアルファ４ベータ７に結合する分子を被験体に投与するための方法、例えばアルファ４ベータ７によって仲介される状態を治療するための方法、およびアルファ４ベータ７の生物学的活性をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏでアゴナイズするかまたはアンタゴナイズするための方法が含まれる。
【００２９】
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列は、標準的な１文字または３文字略記を用いて示される。別に示さない限り、各ポリペプチド配列は、アミノ末端を左側に、そしてカルボキシ末端を右側に有し；各一本鎖核酸配列、および各二本鎖核酸配列の上部鎖は、５’端を左に、そして３’端を右に有する。特定のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列はまた、参照配列とどのように異なるかを説明することによって記載されうる。
【００３０】
本明細書において、別に定義しない限り、本発明と関連して用いられる科学的および技術的用語は、一般の当業者に一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別に必要とされない限り、単数形の用語は複数のものを含み、そして複数形の用語は単数形を含むものとする。一般的に、本明細書に記載する、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションと関連して用いられる術語、ならびにそれらの技術は、当該技術分野に周知であり、そして一般的に用いられるものである。本発明の方法および技術は、別に示さない限り、一般的に、当該技術分野に周知の慣用法にしたがって、そして本明細書全体で引用され、そして論じられる、多様な一般的な参考文献およびより特異的な参考文献に記載されるように、行われる。例えば、本明細書に援用される、Ｓａｍｂｒｏｏｋら  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  第２版，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，
ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８９）、ならびにＡｕｓｕｂｅｌら，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９９０）を参照されたい。酵素反応および精製技術は、当該技術分野に一般的に達成されるように、または本明細書に記載するように、製造者の指定にしたがって行われる。本明細書記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医学的および薬学的化学と関連して用いられる専門用語、ならびにこうした化学の実験法および技術は、当該技術分野に周知であり、そして一般的に知られるものである。化学合成、化学分析、薬学的調製、配合、および送達、ならびに患者の治療には、標準的技術を用いてもよい。
【００３１】
以下の用語は、別に示さない限り、以下の意味を有すると理解されるべきである：
用語「単離された分子」は（分子が、例えばポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体である場合）、その起源または派生供給源によって、（１）天然状態で該分子に付随する、天然に関連する構成要素と関連していないか、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まないか、（３）異なる種由来の細胞によって発現されるか、または（４）人の介入なしに天然には存在しない分子である。したがって、化学的に合成されたか、または天然に由来する細胞とは異なる細胞系において合成される分子は、天然に関連する構成要素から「単離されている」であろう。分子はまた、当該技術分野に周知の精製技術を用いた単離によって、天然に関連する構成要素を実質的に含まないようにされうる。当該技術分野に周知のいくつかの手段によって、分子純度または均一性をアッセイしてもよい。例えば、当該技術分野に周知の技術を用いて、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用い、そしてゲルを染色してポリペプチドを視覚化して、ポリペプチド試料の純度をアッセイしてもよい。特定の目的のため、ＨＰＬＣまたは当該技術分野に周知の精製のための他の手段を用いることによって、より高い解像度を提供してもよい。
【００３２】
用語「アルファ４ベータ７阻害剤」および「アルファ４ベータ７アンタゴニスト」は交換可能に用いられる。各々は、アルファ４ベータ７の少なくとも１つの機能を検出可能に阻害する分子である。逆に、「アルファ４ベータ７アゴニスト」は、アルファ４ベータ７
の少なくとも１つの機能を検出可能に増加させる分子である。アルファ４ベータ７阻害剤によって引き起こされる阻害は、例えばアッセイを用いることによって検出可能である限り、完全である必要はない。アルファ４ベータ７の機能のいかなるアッセイを用いてもよく、それらの例を本明細書に提供する。アルファ４ベータ７阻害剤によって阻害可能な（またはアルファ４ベータ７アゴニストによって増加可能な）アルファ４ベータ７の機能の例には、リガンド結合（すなわちＭＡｄＣＡＭ−１への結合）、リガンド発現細胞への接着、特定の区画、例えば腸への輸送、サイトカイン、ケモカイン、および他の仲介因子の放出、免疫応答の増進または悪化、および組織損傷などが含まれる。アルファ４ベータ７阻害剤およびアルファ４ベータ７アゴニストのタイプの例には、限定されるわけではないが、抗原結合タンパク質（例えばアルファ４ベータ７抗原結合タンパク質）、抗体、抗体断片、および抗体誘導体などの、アルファ４ベータ７結合ポリペプチドが含まれる。
【００３３】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、各々、ペプチド結合によって互いに連結された２以上のアミノ酸残基を含む分子を指す。これらの用語は、例えば天然および人工的タンパク質、タンパク質断片、およびタンパク質配列のポリペプチド類似体（突然変異タンパク質（ｍｕｔｅｉｎ）、変異体、および融合タンパク質など）、ならびに翻訳後、あるいは別の共有的または非共有的修飾タンパク質を含む。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、単量体性または多量体性であってもよい。
【００３４】
用語「ポリペプチド断片」は、本明細書において、対応する全長タンパク質に比較した際、アミノ末端および／またはカルボキシ末端欠失を有するポリペプチドを指す。断片は、例えば、少なくとも長さ５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、５０、７０、８０、９０、１００、１５０または２００アミノ酸であってもよい。断片はまた、例えば、最大で、長さ１，０００、７５０、５００、２５０、２００、１７５、１５０、１２５、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１５、１４、１３、１２、１１、または１０アミノ酸であってもよい。断片はまた、予測されるものから、１〜５アミノ酸のアミノおよび／またはカルボキシ末端の変異を生じる、タンパク質分解的（または他の）プロセシングから生じてもよい。断片は、さらに、どちらかまたは両方の端に、１以上のさらなるアミノ酸、例えば異なる天然存在タンパク質（例えばＦｃまたはロイシンジッパードメイン）または人工的アミノ酸配列（例えば人工的リンカー配列またはタグタンパク質）由来のアミノ酸の配列を含んでもよい。
【００３５】
本発明のポリペプチドには、例えば：（１）タンパク質分解に対する感受性を減少させ、（２）酸化に対する感受性を減少させ、（３）タンパク質複合体を形成するための結合アフィニティを改変し、（４）結合アフィニティを改変し、そして（４）他の物理化学特性または機能特性を与えるかまたはこうした特性を修正するように、いずれかの方式で、そしていずれかの理由のために修飾されているポリペプチドが含まれる。類似体には、ポリペプチドの突然変異タンパク質が含まれる。例えば、単数または多数のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を天然存在配列において（例えば、分子間接触を形成するドメイン（単数または複数）外のポリペプチドの部分において）行うことも可能である。コンセンサス配列を用いて、置換するアミノ酸残基を選択してもよく；当業者はさらなるアミノ酸残基もまた置換可能であることを認識する。
【００３６】
「保存的アミノ酸置換」は、親配列の構造特徴を実質的に変化させないものである（例えば置換アミノ酸は、親配列に存在するらせんを壊すか、あるいは親配列を特徴付けるかまたはその機能に必要な他の種類の二次構造を破壊する傾向があってはならない）。当該技術分野に認識されるポリペプチド二次構造および三次構造の例が、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，
Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ監修，  Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  ニューヨーク（１９８４））；  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ（Ｃ．  ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．  Ｔｏｏｚｅ監修，  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  ニューヨーク州ニューヨーク（１９９１））；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら  Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載され、これらは各々、本明細書に援用される。
【００３７】
本発明はまた、アルファ４ベータ７結合ポリペプチドの非ペプチド類似体も提供する。非ペプチド類似体は、テンプレート・ペプチドのものに類似の特性を持つ薬剤として、薬学的産業において一般的に用いられる。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体」（「ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ」または「ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ」）と称され、例えば、本明細書に援用される、Ｆａｕｃｈｅｒｅ，  Ｊ．  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．  １５：２９（１９８６）；  ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）；ならびにＥｖａｎｓら  Ｊ．  Ｍｅｄ．
Ｃｈｅｍ．  ３０：１２２９（１９８７）を参照されたい。療法的に有用なペプチドに構造的に類似のペプチド模倣体を用いて、同等の療法効果または予防効果を生じることも可能である。一般的に、ペプチド模倣体は、ヒト抗体などの模範（ｐａｒａｄｉｇｍ）ポリペプチド（すなわち所望の生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）に構造的に類似であるが、当該技術分野に周知の方法によって：−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−、および−−ＣＨ２ＳＯ−−からなる群より選択される連結により、場合によって置換された１以上のペプチド連結を有する。コンセンサス配列の１以上のアミノ酸を、同じタイプのＤ−アミノ酸（例えばＬ−リジンの代わりにＤ−リジン）で体系的に置換して、より安定なペプチドを生成することも可能である。さらに、コンセンサス配列または実質的に同一なコンセンサス配列変動を含む、制約された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ペプチドを、当該技術分野に知られる方法（本明細書に援用される、ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６１：３８７（１９９２））によって生成することも可能であり、これは例えば、ペプチドを環化する、分子内ジスルフィド架橋を形成可能な内部システイン残基を付加することによる。
【００３８】
ポリペプチド（例えば抗体）の「変異体」は、別のポリペプチド配列に比較して、１以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列内に挿入され、該配列から欠失し、そして／または該配列内で置換された、アミノ酸配列を含む。本発明の変異体には融合タンパク質が含まれる。
【００３９】
ポリペプチドの「誘導体」は、例えば別の化学部分（例えばポリエチレングリコール、またはアルブミン、例えばヒト血清アルブミンなど）へのコンジュゲート化、リン酸化、およびグリコシル化を介して、化学的に修飾されているポリペプチド（例えば抗体）である。別に示さない限り、用語「抗体」には、２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含む抗体に加えて、その誘導体、変異体、断片、および突然変異タンパク質が含まれ、それらの例を以下に記載する。
【００４０】
「抗原結合タンパク質」は、抗原に結合する部分、および場合によって、抗原結合部分が、抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進するコンホメーションを採用するのを可能にする足場またはフレームワーク部分を含む、タンパク質である。抗原結合タンパク質の例には、抗体、抗体断片（例えば抗体の抗原結合部分）、抗体誘導体、および抗体類似体が含まれる。抗原結合タンパク質は、例えば移植されたＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を含む別のタンパク質足場または人工的足場を含むことも可能である。こうした足場には、限定されるわけではないが、例えば抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化させるために導入された突然変異を含む抗体由来足場、ならびに例えば生体適合性ポリマーを含む完全に合成の足場が含まれる。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒら，  ２００３，  Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，  第５３巻，  第１号：１２１−１２９；  Ｒｏｑｕｅら，  ２００４，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｐｒｏｇ．  ２０：６３９−６５４を参照されたい。さらに、ペプチド抗体模倣体（「ＰＡＭ」）、ならびにフィブロネクチン構成要素を足場として利用する抗体模倣体に基づく足場を使用してもよい。
【００４１】
抗原結合タンパク質は、例えば、天然存在免疫グロブリンの構造を有することも可能である。「免疫グロブリン」は、四量体分子である。天然存在免疫グロブリンにおいて、各四量体は、２つの同一対のポリペプチド鎖で構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分には、主に抗原認識に関与する、約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域が含まれる。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する、定常領域を明示する。ヒト軽鎖は、カッパまたはラムダ軽鎖と分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンと分類され、そしてそれぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして、抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域で連結され、重鎖はまた、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  第７章（Ｐａｕｌ，  Ｗ．監修，  第２版  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，
ニューヨーク（１９８９））（あらゆる目的のため、その全体が本明細書に援用される）を参照されたい。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように、抗体結合部位を形成する。
【００４２】
天然存在免疫グロブリン鎖の可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる、３つの超可変領域によって連結される、比較的保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）の、同じ一般構造を示す。軽鎖および重鎖はどちらも、Ｎ末端からＣ末端に、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、ＫａｂａｔらのＳｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第５版，  米国保健社会福祉省，  ＰＨＳ，  ＮＩＨ，  ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号，  １９９１の定義にしたがう。免疫グロブリン鎖中のアミノ酸に関する他の番号付け系には、ＩＭＧＴ（登録商標）（国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報系；  Ｌｅｆｒａｎｃら，  Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：１８５−２０３；  ２００５）およびＡＨｏ（ＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０９（３）：６５７−６７０；  ２００１）が含まれる。
【００４３】
多様な抗原特異性を有する免疫グロブリンを含有する血清または血漿などの供給源から、抗体を得てもよい。こうした抗体をアフィニティ精製に供すると、特定の抗原特異性に関して濃縮可能である。抗体のこうした濃縮調製物は、通常、特定の抗原に関する特異的結合活性を有する、約１０％未満の抗体で構成される。これらの調製物をアフィニティ精製に数回供すると、抗原に関して特異的結合活性を有する抗体の比率を増加させうる。この方式で調製される抗体は、しばしば、「単一特異性」と称される。単一特異性抗体調製物は、特定の抗原に関する特異的結合活性を有する抗体、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または９９．９％で構成されうる。
【００４４】
「抗体」は、別に明記しない限り、損なわれていない免疫グロブリン、または特異的結合に関して、損なわれていない抗体と競合する、その抗原結合部分を指す。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、あるいは損なわれていない抗体の酵素的切断または化学的切断によって、産生可能である。抗原結合部分には、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、
可変領域断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ならびに少なくとも、ポリペプチドへの特異的抗原結合性を与えるのに十分な免疫グロブリン部分を含有するポリペプチドが含まれる。
【００４５】
Ｆａｂ断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片であり；Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ断片を有する二価断片であり；Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し；Ｆｖ断片は、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有し；そしてｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、あるいはＶＨまたはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号、第６，６９６，２４５号、米国出願公報第０５／０２０２５１２号、第０４／０２０２９９５号、第０４／００３８２９１号、第０４／０００９５０７号、第０３／００３９９５８号、Ｗａｒｄら，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，
１９８９）。
【００４６】
一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬおよびＶＨ領域がリンカー（例えばアミノ酸残基の合成配列）を介して連結されて、連続タンパク質鎖を形成する抗体であり、ここでリンカーは、タンパク質鎖が、それ自体、折り畳まれ、そして一価抗原結合部位を形成するのを可能にするのに十分に長い（例えば、Ｂｉｒｄら，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−２６およびＨｕｓｔｏｎら，  １９８８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−８３を参照されたい）。ディアボディは、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であって、各ポリペプチド鎖は、同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成するのを可能にするにはあまりにも短く、したがって各ドメインが別のポリペプチド鎖上の相補ドメインと対形成するのを可能にするリンカーによって連結されたＶＨおよびＶＬドメインを含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら，  １９９３，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８、およびＰｏｌｊａｋら，  １９９４，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−２３を参照されたい）。ディアボディの２つのポリペプチド鎖が同一であるならば、その対形成から生じるディアボディは、２つの同一の抗原結合部位を有するであろう。異なる配列を有するポリペプチド鎖を用いて、２つの異なる抗原結合部位を持つディアボディを作製することも可能である。同様に、トリアボディおよびテトラボディは、それぞれ、３つおよび４つのポリペプチド鎖を含み、そして、同じであってもまた異なってもよい、それぞれ、３つおよび４つの抗原結合部位を形成する抗体である。
【００４７】
Ｋａｂａｔら、上記；Ｌｅｆｒａｎｃら、上記および／またはＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、上記に記載される系を用いて、所定の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）を同定してもよい。１以上のＣＤＲを共有的または非共有的のいずれかで分子内に取り込んで、抗原結合タンパク質にすることも可能である。抗原結合タンパク質は、より長いポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲ（単数または複数）を取り込むことも可能であるし、別のポリペプチド鎖にＣＤＲ（単数または複数）を共有結合させることも可能であるし、または非共有的にＣＤＲ（単数または複数）を取り込むことも可能である。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が、関心対象の特定の抗原に特異的に結合するのを可能にする。
【００４８】
抗原結合タンパク質は、１以上の結合部位を有してもよい。１より多い結合部位がある場合、結合部位は、互いに同一であっても、また異なってもよい。例えば、天然存在ヒト免疫グロブリンは、典型的には２つの同一の結合部位を有し、一方、「二重特異性」または「二官能性」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。
【００４９】
用語「ヒト抗体」には、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１以上の可変領域および定常領域を有する抗体すべてが含まれる。１つの態様において、可変ドメインおよび定常ド
メインのすべてがヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全ヒト抗体）。これらの抗体は、多様な方法で調製可能であり、その例を以下に記載し、これらには、ヒト重鎖および／または軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝子修飾されたマウスの、関心対象の抗原での免疫を通じたものが含まれる。
【００５０】
ヒト化抗体は、ヒト被験体に投与された際、非ヒト種抗体に比較すると、免疫応答を誘導する可能性がより低く、そして／またはより重度でない免疫応答を誘導するように、１以上のアミノ酸置換、欠失、および／または付加によって、非ヒト種に由来する抗体の配列と異なる配列を有する。１つの態様において、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークおよび定常ドメイン中の特定のアミノ酸を突然変異させて、ヒト化抗体を産生する。別の態様において、ヒト抗体由来の定常ドメイン（単数または複数）を、非ヒト種の可変ドメイン（単数または複数）に融合させる。別の態様において、非ヒト抗体の１以上のＣＤＲ配列中の１以上のアミノ酸残基を変化させて、ヒト被験体に投与された際、非ヒト抗体のありうる免疫原性を減少させ、ここで抗原へのヒト化抗体の結合が、抗原への非ヒト抗体の結合より有意に劣らないように、変化させるアミノ酸残基は、抗原への抗体の免疫特異的結合にそれほど重要でないか、または作製されるアミノ酸配列への変化が保存的変化であるか、いずれかである。ヒト化抗体をどのように作製するかの例を、米国特許第６，０５４，２９７号、第５，８８６，１５２号、および第５，８７７，２９３号に見出すことも可能である。
【００５１】
用語「キメラ抗体」は、１つの抗体由来の１以上の領域および１以上の他の抗体由来の１以上の他の領域を含有する抗体を指す。１つの態様において、１以上のＣＤＲが、ヒト抗アルファ４ベータ７抗体に由来する。別の態様において、すべてのＣＤＲが、ヒト抗アルファ４ベータ７抗体に由来する。別の態様において、１より多いヒト抗アルファ４ベータ７抗体由来のＣＤＲを混合し、そしてキメラ抗体中でマッチングさせる。例えば、キメラ抗体は、第一のヒト抗アルファ４ベータ７抗体の軽鎖由来のＣＤＲ１、第二のヒト抗アルファ４ベータ７抗体の軽鎖由来のＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに第三の抗アルファ４ベータ７抗体由来の重鎖由来のＣＤＲを含んでもよい。他の組み合わせが可能であり、そして本発明の態様内に含まれる。
【００５２】
さらに、フレームワーク領域は、同じ抗アルファ４ベータ７抗体の１つに、ヒト抗体などの１以上の異なる抗体に、またはヒト化抗体に由来してもよい。キメラ抗体の１つの例において、重鎖および／または軽鎖の部分は、特定の種由来であるか、あるいは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体と同一であるか、該抗体に相同であるか、または該抗体に由来する一方、鎖（単数または複数）の残りは、別の種由来であるか、あるいは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体（単数または複数）と同一であるか、該抗体に相同であるか、または該抗体に由来する。やはり含まれるのは、所望の生物学的活性（すなわちアルファ４ベータ７に特異的に結合する能力）を示す、こうした抗体の断片である。例えば米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎ，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−０７を参照されたい。
【００５３】
「中和抗体」または「阻害性抗体」は、本明細書において実施例に記載するものなどのアッセイを用いて、過剰な抗アルファ４ベータ７抗体が、相互作用の量を、少なくとも約２０％減少させる場合の、アルファ４ベータ７のＭＡｄＣＡＭ−１との相互作用を阻害する抗体である。多様な態様において、抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７のＭＡｄＣＡＭ−１との相互作用の量を、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、および９９．９％減少させる。
【００５４】
抗体の断片または類似体は、本明細書の解説にしたがって、そして当該技術分野に周知
の技術を用いて、一般の当業者によって、容易に調製可能である。断片または類似体のアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界近傍に存在する。公共のまたは私有の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）配列データベースに、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを比較することによって、構造ドメインおよび機能ドメインを同定することも可能である。コンピュータ比較法を用いて、既知の構造および／または機能を持つ他のタンパク質に存在する配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンホメーションドメインを同定してもよい。既知の三次元構造にフォールディングするタンパク質配列を同定する方法が知られる。例えばＢｏｗｉｅら，  １９９１，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４を参照されたい。
【００５５】
「ＣＤＲ移植抗体」は、特定の種またはアイソタイプの抗体由来の１以上のＣＤＲ、および同じまたは異なる種またはアイソタイプの別の抗体のフレームワークを含む抗体である。
【００５６】
「多重特異性抗体」は、１以上の抗原上の１より多いエピトープを認識する抗体である。このタイプの抗体のサブクラスは、同じまたは異なる抗原上の２つの別個のエピトープを認識する「二重特異性抗体」である。
【００５７】
抗原結合タンパク質は、１ナノモル以下の解離定数で抗原に結合する場合、抗原（例えばヒト・アルファ４ベータ７）に「特異的に結合する」。本明細書において、抗原結合タンパク質は、第一のヘテロ二量体インテグリンに結合するが、第一のインテグリンと１つの鎖を共有する他のインテグリンに結合しない場合、「ヘテロ二量体特異的」である。例えば、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的である抗体は、アルファ４ベータ７に結合するが、アルファ４ベータ１またはアルファＥベータ７には結合しないであろう。
【００５８】
インテグリンは、これらを発現している細胞（単数または複数）の活性化状態に応じて、そして特定の金属イオンの存在または非存在に応じて、異なるコンホメーションに適応することが知られている。「活性」コンホメーションにあるインテグリンは、「不活性」コンホメーションにある同じインテグリンよりもより高いアフィニティで同族リガンドに結合する。抗原結合タンパク質は、活性コンホメーションにある場合のみ、不活性コンホメーションにある場合のみ、あるいは両方のまたはどちらかのコンホメーションにある場合のみに、インテグリンに結合することも可能である。例えば、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質は、二価陽イオン、マンガン２＋（Ｍｎ２＋）の存在下または非存在下でアルファ４ベータ７に結合可能であり、抗原結合タンパク質が活性および不活性アルファ４ベータ７の両方に結合することが示される。
【００５９】
「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、または「抗原結合部位」は、抗原と相互作用し、そして抗原に対する抗原結合タンパク質の特異性およびアフィニティに寄与するアミノ酸残基（または他の部分）を含有する抗原結合タンパク質の部分である。抗原に特異的に結合する抗体に関しては、ＣＤＲドメインの少なくとも１つの少なくとも部分を含むであろう。
【００６０】
「エピトープ」は、抗原結合タンパク質によって（例えば抗体によって）結合される分子の部分である。エピトープは、分子の非隣接部分を含んでもよい（例えばポリペプチドでは、ポリペプチドの一次配列においては隣接しないが、ポリペプチドの三次構造および四次構造の背景においては、互いに、抗原結合タンパク質によって結合されるのに十分に近い、アミノ酸残基）。
【００６１】
２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列の「同一性パーセント」は、デフォルト・パラメータを用い、ＧＡＰコンピュータ・プログラム（ＧＣＧウィスコンシン
・パッケージ、バージョン１０．３（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、カリフォルニア州サンディエゴ）の一部）を用いて、配列を比較することによって決定される。
【００６２】
用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書全体を通じて交換可能に用いられ、そしてＤＮＡ分子（例えばｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えばｍＲＮＡ）、ヌクレオチド類似体（例えばペプチド核酸および非天然存在ヌクレオチド類似体）を用いて生成されるＤＮＡまたはＲＮＡの類似体、およびそれらのハイブリッドを含む。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であることも可能である。１つの態様において、本発明の核酸分子は、本発明の抗体、あるいはその断片、誘導体、突然変異タンパク質、または変異体をコードする、隣接オープンリーディングフレームを含む。
【００６３】
２つの一本鎖ポリヌクレオチドが、ギャップを導入することなく、そしていずれの配列の５’端または３’端にも、対形成しないヌクレオチドを伴わずに、一方のポリヌクレオチド中のすべてのヌクレオチドが、他方のポリヌクレオチド中の相補的ヌクレオチドと向かい側にあるように、逆平行配向で整列可能であるならば、互いに「相補体」である。ポリヌクレオチドは、中程度にストリンジェントな条件下で、２つのポリヌクレオチドが互いにハイブリダイズ可能であるならば、別のポリヌクレオチドに「相補的」である。したがって、ポリヌクレオチドは、別のポリヌクレオチドの相補体であることなく、該ポリヌクレオチドに相補的であることも可能である。
【００６４】
「ベクター」は、連結された別の核酸を、細胞内に導入するために使用可能な核酸である。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、その内部にさらなる核酸セグメントを連結可能な、直鎖または環状二重鎖ＤＮＡ分子を指す。別のタイプのベクターはウイルスベクター（例えば複製不全レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）であり、ここで、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内に導入可能である。特定のベクターは、導入された宿主細胞において、自律的に複製可能である（例えば細菌複製起点を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。宿主細胞内への導入に際して、宿主細胞のゲノム内に他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）を組み込んで、そしてそれによって宿主ゲノムと一緒に複製させる。「発現ベクター」は、選択したポリヌクレオチドの発現を指示することも可能なベクターの種類である。
【００６５】
ヌクレオチド配列は、制御配列が該ヌクレオチド配列の発現（例えば発現のレベル、時期、または位置）に影響を及ぼすならば、該制御配列に「機能可能であるように連結されて」いる。「制御配列」は、機能可能であるように連結されている核酸の発現（例えば発現のレベル、時期、または位置）に影響を及ぼす核酸である。制御配列は、例えば、制御される核酸に対して直接、または１以上の他の分子（例えば制御配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を通じて、その効果を発揮する。制御配列の例には、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現調節要素（例えばポリアデニル化シグナル）が含まれる。制御配列のさらなる例は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，  １９９０，  Ｇｅｎｅ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  カリフォルニア州サンディエゴ、およびＢａｒｏｎら，  １９９５，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２３：３６０５−０６に記載される。
【００６６】
「宿主細胞」は、核酸、例えば本発明の核酸を発現するために使用可能な細胞である。宿主細胞は、原核生物、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）であってもよいし、または真核生物、例えば単細胞真核生物（例えば酵母（ｙｅａｓｔ）または他の真菌）、植物細胞（例えばタバコ（ｔｏｂａｃｃｏ）またはトマト（ｔｏｍａｔｏ）植物細胞）、動物細胞（例えばヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、または昆虫細胞）
またはハイブリドーマであってもよい。宿主細胞の例には、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら，  １９８１，  Ｃｅｌｌ  ２３：１７５を参照されたい）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯなどのその誘導体および血清不含培地中で増殖する関連細胞株（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら，  １９９８，  Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８：３１を参照されたい）またはＤＨＦＲが欠損しているＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１（Ｕｒｌａｕｂら，  １９８０，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−２０を参照されたい）、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、アフリカミドリザル（Ａｆｒｉｃａｎ  ｇｒｅｅｎ  ｍｏｎｋｅｙ）腎臓細胞株ＣＶ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）由来のＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株（ＭｃＭａｈａｎら，  １９９１，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：２８２１を参照されたい）、ヒト胚性腎細胞、例えば２９３、２９３  ＥＢＮＡまたはＭＳＲ
２９３、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常二倍体細胞、初代組織のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養由来の細胞株、初代外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはＪｕｒｋａｔ細胞が含まれる。典型的には、宿主細胞は、その後、宿主細胞で発現可能なポリペプチドをコードする核酸で形質転換またはトランスフェクションされることが可能な、培養細胞である。句「組換え宿主細胞」を用いて、発現しようとする核酸で形質転換されているかまたはトランスフェクションされている宿主細胞を示すことも可能である。宿主細胞はまた、核酸を含むが、機能可能であるように核酸と連結されるように、制御配列が宿主細胞に導入されない限り、所望のレベルで該核酸を発現しない、細胞であってもよい。用語、宿主細胞は、特定の対象の細胞だけでなく、こうした細胞の子孫または潜在的な子孫も指すことが理解される。例えば、突然変異または環境的影響によって、続く世代で特定の修飾が起こりうるため、こうした子孫は、実際、親細胞と同一でない可能性もあるが、なお、本明細書において、この用語の範囲内に含まれる。
【００６７】
抗原結合タンパク質
１つの側面において、本発明は、アルファ４ベータ７、例えばヒト・アルファ４ベータ７に結合する、抗原結合タンパク質（例えば抗体、抗体断片、抗体誘導体、抗体突然変異タンパク質、および抗体変異体）を提供する。
【００６８】
本発明にしたがった抗原結合タンパク質には、アルファ４ベータ７の生物学的活性を阻害する抗原結合タンパク質が含まれる。こうした生物学的活性の例には、ＭＡｄＣＡＭ−１へのアルファ４ベータ７の結合、ならびにアルファ４ベータ７を発現している細胞およびＭＡｄＣＡＭ−１を発現しているものの間の接着が含まれる。他の生物学的活性には、輸送またはホーミングなど、アルファ４ベータ７がｉｎ  ｖｉｖｏで仲介するものが含まれ；特に、アルファ４ベータ７は、腸へのリンパ球の輸送に関与し、炎症状態の腸においてＭＡｄＣＡＭ−１発現が増加すると、アルファ４ベータ７を発現しているリンパ球の腸への補充が増進されて、腸において、異常なリンパ球活性化が炎症反応および組織損傷を増大させる。
【００６９】
異なる抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７の異なるドメインまたはエピトープに結合するか、あるいは異なる作用機構によって作用することも可能である。例には、限定されるわけではないが、アルファ４ベータ７がＭＡｄＣＡＭ−１に結合する能力に干渉するか、またはアルファ４ベータ７を発現している細胞およびＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞の間の接着などの細胞相互作用を阻害する、抗原結合タンパク質が含まれる。作用部位は、例えば、細胞内（例えば細胞内シグナル伝達カスケードに干渉することによる）または細胞外であることも可能である。抗原結合タンパク質は、本発明における使用を見出すために、アルファ４ベータ７が誘導する活性を完全に阻害する必要はなく；むしろ、アルファ４ベータ７の特定の活性を減少させる抗原結合タンパク質もまた、使用のた
めに意図される。（特定の疾患を治療する際のアルファ４ベータ７結合性抗原結合タンパク質の特定の作用機構の本明細書の考察は、例示のみであり、そして本明細書に提示する方法は、それに束縛されない）。
【００７０】
本発明の範囲内の抗アルファ４ベータ７抗体の他の誘導体には、抗アルファ４ベータ７抗体ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合した異種ポリペプチドを含む組換え融合タンパク質の発現によるなどの、他のタンパク質またはポリペプチドとの抗アルファ４ベータ７抗体またはその断片の共有または凝集コンジュゲートが含まれる。例えば、コンジュゲート化されるペプチドは、異種シグナル（またはリーダー）ポリペプチド、例えば酵母アルファ因子リーダー、またはエピトープタグなどのペプチドであってもよい。抗原結合タンパク質を含有する融合タンパク質は、抗原結合タンパク質の精製または同定を促進するために付加されるペプチド（例えばポリＨｉｓ）を含んでもよい。また、抗原結合タンパク質を、Ｈｏｐｐら，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４，  １９８８、および米国特許第５，０１１，９１２号に記載されるような、ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチド、Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号６２）に連結してもよい。ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドは、非常に抗原性であり、そして特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって可逆的に結合されるエピトープを提供し、発現された組換えタンパク質の迅速なアッセイおよび容易な精製を可能にする。ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドが所定のポリペプチドに融合される融合タンパク質を調製するのに有用な試薬が、商業的に入手可能である（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）。
【００７１】
１以上の抗原結合タンパク質を含有するオリゴマーをアルファ４ベータ７アンタゴニストとして使用してもよい。オリゴマーは、共有結合したまたは非共有結合した、二量体、三量体、またはより高次のオリゴマーの形であることも可能である。２以上の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーが使用のために意図され、一例がホモ二量体である。他のオリゴマーには、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ四量体、ヘテロ四量体等が含まれる。
【００７２】
１つの態様は、抗原結合タンパク質に融合したペプチド部分間の共有相互作用または非共有相互作用を介して連結された、多数の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーに向けられる。こうしたペプチドは、ペプチド・リンカー（スペーサー）、またはオリゴマー化を促進する特性を有するペプチドであってもよい。以下により詳細に記載するように、ロイシンジッパー、および抗体由来の特定のポリペプチドが、それに付着した抗原結合タンパク質のオリゴマー化を促進可能なペプチドの中にある。
【００７３】
特定の態様において、オリゴマーは、２〜４の抗原結合タンパク質を含む。オリゴマーの抗原結合タンパク質は、上述の型のいずれか、例えば変異体または断片などの、いかなる型であってもよい。好ましくは、オリゴマーは、アルファ４ベータ７結合活性を有する、抗原結合タンパク質を含む。
【００７４】
１つの態様において、免疫グロブリン由来のポリペプチドを用いて、オリゴマーを調製する。抗体由来ポリペプチドの多様な部分（Ｆｃドメインを含む）に融合した特定の異種ポリペプチドを含む、融合タンパク質の調製は、例えばＡｓｈｋｅｎａｚｉら，  １９９１，  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：１０５３５；  Ｂｙｒｎら，  １９９０，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：６７７；およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら，  １９９２  “Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中，  補遺４，
１０．１９．１−１０．１９．１１ページによって記載されてきている。
【００７５】
本発明の１つの態様は、抗アルファ４ベータ７抗体のアルファ４ベータ７結合断片を、抗体のＦｃ領域に融合させることによって生成される２つの融合タンパク質を含む二量体に向けられる。二量体は、例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子融合体を、適切な発現ベクター内に挿入し、組換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞において、遺伝子融合体を発現させ、そして発現された融合タンパク質を抗体分子とそっくりに集合させて、その際、Ｆｃ部分間に鎖間ジスルフィド結合が形成されるのを可能にして、二量体を生じることによって、作製可能である。
【００７６】
用語「Ｆｃポリペプチド」には、本明細書において、抗体のＦｃ領域由来のポリペプチドの天然型および突然変異タンパク質型が含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有する、こうしたポリペプチドの一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）型もまた含まれる。Ｆｃ部分を含む融合タンパク質（およびそこから形成されるオリゴマー）は、プロテインＡまたはプロテインＧカラム上のアフィニティクロマトグラフィーによって精製が容易であるという利点を提供する。
【００７７】
１つの適切なＦｃポリペプチドは、ＰＣＴ出願ＷＯ  ９３／１０１５１（本明細書に援用される）に記載される、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域から天然Ｃ末端に渡る一本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびＢａｕｍら，  １９９４，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １３：３９９２−４００１に記載されるＦｃ突然変異タンパク質である。この突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化し、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化していることを除けば、ＷＯ  ９３／１０１５１に示される天然Ｆｃ配列のものと同一である。該突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対し、減少したアフィニティを示す。
【００７８】
他の態様において、抗アルファ４ベータ７抗体の重鎖および／または軽鎖の可変部分を、抗体重鎖および／または軽鎖の可変部分に対して置換してもよい。
【００７９】
あるいは、オリゴマーは、ペプチド・リンカー（スペーサー・ペプチド）を含むかまたは含まない、多数の抗原結合タンパク質を含む融合タンパク質である。適切なペプチド・リンカーの中には、米国特許第４，７５１，１８０号および第４，９３５，２３３号に記載されるものがある。
【００８０】
オリゴマー性抗原結合タンパク質を調製するための別の方法は、ロイシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、該ドメインが見られるタンパク質のオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、元来、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質で同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１７５９）、そして以来、多様な異なるタンパク質で発見されてきた。既知のロイシンジッパーの中には、二量体化または三量体化する天然存在ペプチドおよびその誘導体がある。可溶性オリゴマー性タンパク質を産生するのに適したロイシンジッパードメインの例が、本明細書に援用される、ＰＣＴ出願ＷＯ  ９４／１０３０８に記載され、そして肺界面活性タンパク質Ｄ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーが、Ｈｏｐｐｅら，  １９９４，
ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３４４：１９１に記載される。融合された異種タンパク質の安定な三量体化を可能にする、修飾ロイシンジッパーの使用が、Ｆａｎｓｌｏｗら，  １９９４，  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６：２６７−７８に記載される。１つのアプローチにおいて、ロイシンジッパーペプチドに融合した抗アルファ４ベータ７抗体断片または誘導体を含む組換え融合タンパク質を、適切な宿主細胞において発現させて、そして形成される可溶性オリゴマー性抗アルファ４ベータ７抗体断片または誘導体を、培養上清から回収する。
【００８１】
１つの側面において、本発明は、ＭＡｄＣＡＭ−１へのアルファ４ベータ７の結合に干渉する抗原結合タンパク質を提供する。アルファ４ベータ７、あるいはその断片、変異体または誘導体に対して、こうした抗原結合タンパク質を作製し、そしてＭＡｄＣＡＭ−１へのアルファ４ベータ７の結合に干渉する能力に関して、慣用的なアッセイでスクリーニングしてもよい。適切なアッセイの例は、アルファ４ベータ７を発現している細胞へのＭＡｄＣＡＭ−１（すなわち可溶性ＭＡｄＣＡＭ−１）の結合を阻害する能力に関して、抗原結合タンパク質を試験するアッセイ、あるいはＭＡｄＣＡＭ−１およびアルファ４ベータ７の相互作用（すなわちＭＡｄＣＡＭ−１またはＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞への、アルファ４ベータ７を発現している細胞の接着）から生じる生物学的または細胞性反応を減少させる能力に関して、抗原結合タンパク質を試験するアッセイである。抗原結合タンパク質を試験する、さらなるアッセイには、アルファ４ベータ７ポリペプチドへの既知の抗原結合タンパク質の結合に対して、アルファ４ベータ７ポリペプチドへの抗原結合タンパク質の結合を、定性的にまたは定量的に比較するものが含まれ、そのいくつかの例を本明細書に開示する。
【００８２】
別の側面において、本発明は、種選択性を示す抗原結合タンパク質を提供する。１つの態様において、抗原結合タンパク質は、１又はそれより多くの哺乳動物アルファ４ベータ７に、例えばヒト・アルファ４ベータ７に、そしてマウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ（ｇｅｒｂｉｌ）、ネコ、ウサギ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、および非ヒト霊長類アルファ４ベータ７の１又はそれより多くに結合する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、１以上の霊長類アルファ４ベータ７に、例えば、ヒト・アルファ４ベータ７に、そしてカニクイザル、マーモセット（ｍａｒｍｏｓｅｔ）、アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ）、タマリンおよびチンパンジー・アルファ４ベータ７の１又はそれより多くに結合する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、ヒト、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル、タマリンまたはチンパンジー・アルファ４ベータ７に特異的に結合する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、および非ヒト霊長類アルファ４ベータ７の１又はそれより多くに結合しない。別の態様において、抗原結合タンパク質は、マーモセットなどの新世界ザル種には結合しない。
【００８３】
別の態様において、抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７以外の天然存在タンパク質のいずれにも特異的結合を示さない。別の態様において、抗原結合タンパク質は、哺乳動物アルファ４ベータ７以外の天然存在タンパク質のいずれにも特異的結合を示さない。別の態様において、抗原結合タンパク質は、霊長類アルファ４ベータ７以外の天然存在タンパク質のいずれにも特異的結合を示さない。別の態様において、抗原結合タンパク質は、ヒト・アルファ４ベータ７以外の天然存在タンパク質のいずれにも特異的結合を示さない。別の態様において、抗原結合タンパク質は、少なくとも１つの非ヒト霊長類、例えばカニクイザル、およびヒト・アルファ４ベータ７に特異的に結合する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、非ヒト霊長類、カニクイザル、およびヒト・アルファ４ベータ７に、類似の結合アフィニティで、特異的に結合する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、非ヒト霊長類、カニクイザル、およびヒト・アルファ４ベータ７の活性を遮断する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、本明細書に記載するようなアッセイにおいて、非ヒト霊長類、カニクイザル、およびヒト・アルファ４ベータ７に対して、類似のＩＣ５０またはＥＣ５０を有する。
【００８４】
当該技術分野に周知の方法を用いて、そして本明細書の解説にしたがって、アルファ４ベータ７に対する抗原結合タンパク質の選択性を測定してもよい。例えば、ウェスタンブロット、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡを用いて、選択性を測定してもよい。
【００８５】
別の側面において、本発明は、以下の特性：ヒトおよび非ヒト霊長類アルファ４ベータ７の両方に結合する特性、アルファ４ベータ７へのＭＡｄＣＡＭ−１の結合を阻害する特性、ＭＡｄＣＡＭ−１へのアルファ４ベータ７を発現している細胞の接着を阻害する特性、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞へのアルファ４ベータ７を発現している細胞の接着を阻害する特性、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞を含む組織へのアルファ４ベータ７を発現している細胞の輸送を阻害する特性、アルファ４ベータ７の活性型および不活性型の両方に結合する特性、細胞表面に発現されるアルファ４ベータ７の比較的わずかな下方制御を引き起こす特性の１以上を有する、アルファ４ベータ７結合性抗原結合タンパク質（例えば、抗アルファ４ベータ７抗体）を提供する。
【００８６】
慣用的技術によって、本発明の抗原結合タンパク質の抗原結合断片を産生してもよい。こうした断片の例には、限定されるわけではないが、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片が含まれる。遺伝子操作技術によって産生される抗体断片および誘導体もまた意図される。
【００８７】
さらなる態様には、キメラ抗体、例えば非ヒト（例えばネズミ）モノクローナル抗体のヒト化型が含まれる。既知の技術によって、こうしたヒト化抗体を調製してもよく、そしてこうした抗体は、ヒトに投与された際、免疫原性が減少しているという利点を提供する。１つの態様において、ヒト化モノクローナル抗体は、ネズミ抗体の可変ドメイン（あるいはその抗原結合部位のすべてまたは一部）およびヒト抗体由来の定常ドメインを含む。あるいは、ヒト化抗体断片は、ネズミモノクローナル抗体の抗原結合部位およびヒト抗体由来の可変ドメイン断片（抗原結合部位を欠く）を含んでもよい。キメラ抗体およびさらに操作されたモノクローナル抗体の産生法には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，  １９８８，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３，  Ｌｉｕら，  １９８７，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８４：３４３９，  Ｌａｒｒｉｃｋら，  １９８９，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：９３４，  およびＷｉｎｔｅｒら，  １９９３，  ＴＩＰＳ  １４：１３９に記載されるものが含まれる。１つの態様において、キメラ抗体はＣＤＲ移植抗体である。抗体をヒト化するための技術は、例えば米国特許出願第１０／１９４，９７５号（２００３年２月２７日公開）、米国特許第５，８６９，６１９号、第５，２２５，５３９号、第５，８２１，３３７号、第５，８５９，２０５号、Ｐａｄｌａｎら，  １９９５，  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ９：１３３−３９，  およびＴａｍｕｒａら，  ２０００，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４：１４３２−４１に論じられる。
【００８８】
非ヒト動物において、ヒト抗体または部分的ヒト抗体を生成するための方法が開発されてきている。例えば、１以上の内因性免疫グロブリン遺伝子が、多様な手段によって不活性化されたマウスが用意されてきている。ヒト免疫グロブリン遺伝子が該マウスに導入され、不活性化されたマウス遺伝子が置換されている。該動物において産生される抗体は、動物に導入されたヒト遺伝物質にコードされるヒト免疫グロブリンポリペプチド鎖を取り込む。１つの態様において、アルファ４ベータ７ポリペプチドに対して向けられる抗体がトランスジェニックマウスなどの非ヒト動物において生成されるように、該動物をアルファ４ベータ７ポリペプチドで免疫する。適切な免疫原の一例は、アルファ４ベータ７の部分を含むポリペプチドなどの可溶性ヒト・アルファ４ベータ７、または他の免疫原性断片アルファ４ベータ７である。適切な免疫原の別の例は、高レベルのアルファ４ベータ７を発現している細胞、または該細胞に由来する細胞膜調製物である。
【００８９】
ヒト抗体または部分的ヒト抗体の産生用のトランスジェニック動物の産生および使用のための技術の例が、米国特許第５，８１４，３１８号、第５，５６９，８２５号、および第５，５４５，８０６号、Ｄａｖｉｓら，  ２００３，  “Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ
ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，”
Ｌｏ監修  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ中，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＪ：１９１−２００，  Ｋｅ
ｌｌｅｒｍａｎｎら，  ２００２，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １３：５９３−９７，  Ｒｕｓｓｅｌら，  ２０００，  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．  ６８：１８２０−２６，  Ｇａｌｌｏら，  ２０００，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎ．  ３０：５３４−４０，  Ｄａｖｉｓら，  １９９９，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ
Ｒｅｖ．  １８：４２１−２５，  Ｇｒｅｅｎ，  １９９９，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ２３１：１１−２３，  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，  １９９８，  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ３１：３３−４２，  Ｇｒｅｅｎら，  １９９８，
Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １８８：４８３−９５，  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ａ，  １９９８，  Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｒｕｇｓ．  ７：６０７−１４，  Ｔｓｕｄａら，  １９９７，  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．  ４２：４１３−２１，  Ｍｅｎｄｅｚら，  １９９７，  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．  １５：１４６−５６，  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，  １９９４，  Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ．  ４：７６１−６３，  Ａｒｂｏｎｅｓら，
１９９４，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  １：２４７−６０，  Ｇｒｅｅｎら，  １９９４，
Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．  ７：１３−２１，  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，  １９９３，  Ｎａｔｕｒｅ．  ３６２：２５５−５８，  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，  １９９３，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ９０：２５５１−５５．  Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら  １９９３，  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：６４７−６５６，  Ｃｈｏｉら，  １９９３，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−２３，  Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，  １９９６，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−５１，
Ｈａｒｄｉｎｇら，  １９９５，  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，  Ｌｏｎｂｅｒｇら，  １９９４，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−５９，  Ｌｏｎｂｅｒｇ，  １９９４，  “Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ中  １１３：４９−１０１，  Ｌｏｎｂｅｒｇら，  １９９５，  Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５−９３，  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  １９９６，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８２６，  Ｔａｙｌｏｒら，
１９９２，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−９５，  Ｔａｙｌｏｒら，  １９９４，  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：５７９−９１，  Ｔｏｍｉｚｕｋａら，  １９９７，  Ｎａｔ  Ｇｅｎ  １６：１３３−４３，  Ｔｏｍｉｚｕｋａら，  ２０００，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：  ７２２−２７，  Ｔｕａｉｌｌｏｎら，  １９９３，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：３７２０−２４，  およびＴｕａｉｌｌｏｎら，  １９９４，  Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：２９１２−２０に記載される。これらの例および他の例はまた、米国特許出願公報２００７−００９８７１５、２００７年５月３日公開に論じられる。
【００９０】
別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７に結合するモノクローナル抗体を提供する。当該技術分野に知られる技術いずれかを用いて、例えば、免疫スケジュールの完了後に、トランスジェニック動物から採取した脾臓細胞を不死化することによって、モノクローナル抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる技術いずれかを用いて、例えば、骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを産生することによって、脾臓細胞を不死化してもよい。ハイブリドーマを産生する融合法で使用するための骨髄腫細胞は、好ましくは、非抗体産生性であり、高い融合効率を有し、そして所望の融合細胞（ハイブリドーマ）のみの増殖を支持する特定の選択培地中で増殖することが不可能であるようにする酵素不全を有する。マウス融合体で使用するのに適した細胞株の例には、Ｓｐ−２０、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、ＮＳ１／１．Ａｇ  ４  １、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ  １．７およびＳ１９４／５ＸＸ０  Ｂｕｌが含まれ；ラット融合体で使用する細胞株の例には、Ｒ２１０．ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ  １．２．３、ＩＲ９８３Ｆおよび４Ｂ２１０が含まれる。細胞融合に有用な他の細胞株は、Ｕ−２６６、ＧＭ１５００−ＧＲＧ２、ＬＩＣＲ−
ＬＯＮ−ＨＭｙ２およびＵＣ７２９−６である。
【００９１】
１つの態様において、動物（例えばヒト免疫グロブリン配列を有するトランスジェニック動物）をアルファ４ベータ７免疫原で免疫し；免疫動物から脾臓細胞を採取し；採取した脾臓細胞を骨髄腫細胞株と融合させ、それによってハイブリドーマ細胞を生成し；ハイブリドーマ細胞からハイブリドーマ細胞株を樹立し、そしてアルファ４ベータ７ポリペプチドに結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定することによって、ハイブリドーマ細胞株を産生する。こうしたハイブリドーマ細胞株、およびこれらに産生される抗アルファ４ベータ７モノクローナル抗体が、本発明に含まれる。
【００９２】
当該技術分野に知られるいかなる技術を用いて、ハイブリドーマ細胞株に分泌されるモノクローナル抗体を精製してもよい。ハイブリドーマまたはｍＡｂをさらにスクリーニングして、アルファ４ベータ７が誘導する活性を遮断する能力などの、特定の特性を持つｍＡｂを同定してもよい。こうしたスクリーニングの例を以下の実施例に提供する。
【００９３】
また、遺伝子免疫と称されるプロセスを用いて、モノクローナル抗体を産生してもよい。例えば、ウイルスベクター（アデノウイルスベクターなど）内に、関心対象の抗原をコードする核酸を取り込んでもよい。次いで、生じたベクターを用いて、適切な宿主動物（例えば、非肥満糖尿病またはＮＯＤマウス）において、関心対象の抗原に対する免疫応答を発展させる。この技術は、Ｒｉｔｔｅｒら，  Ｂｉｏｄｒｕｇｓ１６（１）：３−１０（２００２）に実質的に記載され、該文献の開示は本明細書に援用される。
【００９４】
抗体結合部位の中央の相補性決定領域（ＣＤＲ）の分子進化もまた、増加したアフィニティを持つ抗体、例えばＳｃｈｉｅｒら，  １９９６，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６３：５５１に記載されるように、ｃ−ｅｒｂＢ−２に対して増加したアフィニティを有する抗体を単離するのに用いられてきている。したがって、こうした技術は、アルファ４ベータ７に対する抗体を調製する際に有用である。
【００９５】
アルファ４ベータ７に対して向けられる抗原結合タンパク質は、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかで、アルファ４ベータ７ポリペプチドまたはアルファ４ベータ７を発現する細胞の存在を検出するアッセイにおいて使用可能である。抗原結合タンパク質はまた、イムノアフィニティクロマトグラフィーによってアルファ４ベータ７タンパク質を精製する際にも使用可能である。さらに、ＭＡｄＣＡＭ−１およびアルファ４ベータ７の相互作用を遮断可能な抗原結合タンパク質を用いて、こうした相互作用から生じる生物学的活性を阻害してもよい。遮断性抗原結合タンパク質は、本発明の方法において使用可能である。アルファ４ベータ７アンタゴニストとして機能するこうした抗原結合タンパク質は、限定されるわけではないが、炎症状態を含む、アルファ４ベータ７が誘導する状態のいずれかを治療する際に使用可能である。１つの態様において、こうした状態を治療する際に、トランスジェニックマウスの免疫を伴う方法によって生成されるヒト抗アルファ４ベータ７モノクローナル抗体を使用する。
【００９６】
抗原結合タンパク質を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法で使用するか、またはｉｎ  ｖｉｖｏで投与して、アルファ４ベータ７が誘導する生物学的活性を阻害してもよい。このようにして、その例が本明細書に提供される、アルファ４ベータ７、およびＭＡｄＣＡＭ−１とのその相互作用によって引き起こされるかまたは悪化させられる（直接または間接的に）障害を、治療してもよい。１つの態様において、本発明は、アルファ４ベータ７が誘導する生物学的活性を減少させるのに有効な量で、その必要がある哺乳動物に、アルファ４ベータ７遮断性抗原結合タンパク質をｉｎ  ｖｉｖｏ投与する工程を含む療法を提供する。
【００９７】
本発明の抗原結合タンパク質には、アルファ４ベータ７の生物学的活性を阻害する、部
分的ヒトおよび完全ヒト・モノクローナル抗体が含まれる。１つの態様は、ヒト・アルファ４ベータ７のＭＡｄＣＡＭ−１との相互作用を少なくとも部分的に遮断する、ヒト・モノクローナル抗体に向けられる。１つの態様において、アルファ４ベータ７免疫原でトランスジェニックマウスを免疫することによって、抗体を生成する。別の態様において、免疫原は、ヒト・アルファ４ベータ７ポリペプチド（例えばアルファ４ベータ７を発現するよう形質転換またはトランスフェクションされた細胞、あるいはアルファ４ベータ７を天然に発現する細胞）である。こうした免疫マウスから得られるハイブリドーマ細胞株であって、アルファ４ベータ７に結合するモノクローナル抗体を分泌する、前記ハイブリドーマ細胞株もまた、本明細書に提供する。
【００９８】
ヒト抗体、部分的ヒト抗体、またはヒト化抗体は、多くの適用、特にヒト被験体への抗体の投与を伴うものに適切であろうが、特定の適用には、他のタイプの抗原結合タンパク質が適切であろう。本発明の非ヒト抗体は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ロバ、または非ヒト霊長類（サル（例えばカニクイザルまたはアカゲザル）または類人猿（例えばチンパンジー）など）などの抗体産生動物いずれに由来してもよい。本発明の非ヒト抗体を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび細胞培養に基づく適用、あるいは本発明の抗体に対する免疫応答が起こらないか、重要でないか、防止可能であるか、それに関する懸念がないか、またはそれが望ましい、他の適用いずれかにおいて、使用してもよい。１つの態様において、本発明の非ヒト抗体を、非ヒト被験体に投与する。別の態様において、非ヒト抗体は、非ヒト被験体において、免疫応答を誘発しない。別の態様において、非ヒト抗体は、非ヒト被験体と同じ種由来であり、例えば本発明のマウス抗体をマウスに投与する。特定の種由来の抗体を、例えば、その種の動物を所望の免疫原（例えばアルファ４ベータ７を発現している細胞、または可溶性アルファ４ベータ７ポリペプチド）で免疫するか、またはその種の抗体を生成するための人工的系（例えば特定の種の抗体を生成するための細菌またはファージ・ディスプレイに基づく系）を用いることによって、あるいは例えば抗体の定常領域を他の種由来の定常領域で置換することにより１つの種由来の抗体を別の種由来の抗体に変換することによって、あるいは他の種由来の抗体の配列により緊密に似るように抗体の１以上のアミノ酸残基を置換することによって、作製してもよい。１つの態様において、抗体は、２以上の異なる種由来の抗体に由来するアミノ酸配列を含むキメラ抗体である。
【００９９】
いくつかの慣用的技術のいずれによって、抗原結合タンパク質を調製してもよい。例えば、当該技術分野に知られる技術いずれかを用いて、天然に該タンパク質を発現する細胞から精製してもよいし（例えば抗体を産生するハイブリドーマから抗体を精製してもよい）、または組換え発現系で産生してもよい。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：  Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，  Ｋｅｎｎｅｔら（監修），  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク（１９８０）；ならびにＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ（監修），  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８８）を参照されたい。
【０１００】
当該技術分野に知られるいかなる発現系を用いて、本発明の組換えポリペプチドを作製してもよい。一般的に、所望のポリペプチドをコードするＤＮＡを含む組換え発現ベクターで、宿主細胞を形質転換する。使用可能な宿主細胞の中には、原核生物、酵母またはより高次の真核細胞がある。原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば大腸菌またはバチルス（ｂａｃｉｌｌｉ）が含まれる。より高次の真核細胞には、昆虫細胞および哺乳動物起源の樹立細胞株が含まれる。適切な哺乳動物宿主細胞株の例には、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら，  １９８１，  Ｃｅｌｌ  ２３：１７５）、Ｌ細胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴ
ＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、およびＭｃＭａｈａｎら，  １９９１，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：２８２１に記載されるような、アフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）由来のＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株が含まれる。細菌、真菌、酵母、および哺乳動物細胞宿主で使用するための適切なクローニングおよび発現ベクターが、Ｐｏｕｗｅｌｓら（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  ニューヨーク，  １９８５）に記載される。
【０１０１】
ポリペプチドの発現を促進する条件下で形質転換細胞を培養し、そして慣用的なタンパク質精製法によってポリペプチドを回収してもよい。１つのこうした精製法には、例えば結合したアルファ４ベータ７のすべてまたは一部（例えば細胞外ドメイン）を有するマトリックス上での、アフィニティクロマトグラフィーの使用が含まれる。本明細書において使用が意図されるポリペプチドには、混入する内因性物質を実質的に含まない、実質的に均質な組換え哺乳動物抗アルファ４ベータ７抗体ポリペプチドが含まれる。
【０１０２】
当該技術分野に知られる任意の手段によって、ポリペプチドのアミノ酸配列を確認してもよく、そしてこれは配列表中、本明細書に開示される配列に同一であってもよいし、またはプロセシングの結果、１以上のアミノ酸残基がこれらの配列と異なってもよい。例えば、実質的に均質なポリペプチドのすべてまたは一部で、軽鎖または重鎖（または関連する一本鎖分子）いずれかから、Ｃ末端アミノ酸が、タンパク質分解的プロセシングまたは培養中に生じる他のプロセシング、例えばＣ末端Ｌｙｓ残基のプロセシングによって、除去されてもよい。あるいは、１より多いＣ末端アミノ酸残基、例えば２つのＣ末端アミノ酸、または３つ、４つまたは５つのＣ末端アミノ酸が除去される。例えば、Ｃ末端を、開示されるような抗体重鎖のアミド化プロリンまで一部切除してもよい。同様に、Ｎ末端アミノ酸は存在しなくてもよく、例えば１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端アミノ酸が存在しなくてもよい。
【０１０３】
あるいは、またはさらに、アミノ酸残基は、翻訳後修飾を経てもよく、例えば、限定されるわけではないが、グルタミン（特に、Ｎ末端のグルタミン）を環化するかまたはピログルタミン酸に変換してもよいし；さらにまたはあるいは、アミノ酸は脱アミド化、異性化、糖化および／または酸化を経てもよい。本発明のポリペプチドは、グリコシル化、例えば当該技術分野に周知の部位でのＮ連結またはＯ連結グリコシル化を含む、さらなる翻訳後修飾を経てもよい。先に記載するように、こうした改変を防止するかまたは最小限にするため、あるいはこうしたプロセシングが有益な場合は、これらを促進するため、ポリペプチドのアミノ酸配列中に変化を作製してもよい。
【０１０４】
実質的に均質なポリペプチドの調製物は、特定の型（単数または複数）のプロセシングを経ているポリペプチドを約１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％含んでもよい。実質的に均質なポリペプチドの調製物は、プロセシングされたポリペプチドの特定の型（単数または複数）をある程度（５０％かそれ未満）、大部分（５０％より多いが９０％未満）または実質的にすべて（９０％より多く）、含んでもよい。さらに、こうした調製物は、プロセシングに関連する修飾の１より多いタイプを多様なレベルで有するポリペプチドを含んでもよく、例えばポリペプチドのＣ末端リジン（例えば配列番号７２中のＣ末端リジン）が、ある程度、大部分、または実質的にすべて除去されていてもよく、そしてＮ末端アミノ酸（例えば表１および／または２あるいはコンセンサス配列中に示す任意のポリペプチド）のある程度、大部分または実質的にすべてがピログルタミン酸に変換されていてもよい。
【０１０５】
いくつかの既知の技術のいずれによって、抗原結合タンパク質を調製し、そして所望の
特性に関してスクリーニングしてもよい。特定の技術は、関心対象の抗原結合タンパク質（例えば抗アルファ４ベータ７抗体）のポリペプチド鎖（またはその一部）をコードする核酸を単離し、そして組換えＤＮＡ技術を通じて核酸を操作することを伴う。核酸を、関心対象の別の核酸に融合させるか、または改変して（例えば突然変異誘発または他の慣用的技術によって）、例えば、１以上のアミノ酸残基を付加するか、欠失させるか、または置換してもよい。
【０１０６】
１つの側面において、本発明は、本発明の抗アルファ４ベータ７抗体の抗原結合断片を提供する。こうした断片は、完全に抗体由来配列からなってもよいし、またはさらなる配列を含んでもよい。抗原結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびドメイン抗体が含まれる。他の例が、Ｌｕｎｄｅら，  ２００２，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ３０：５００−０６に提供される。
【０１０７】
アミノ酸架橋（短いペプチド・リンカー）を介して、重鎖および軽鎖可変ドメイン（Ｆｖ領域）断片を連結して、単一ポリペプチド鎖を生じることによって、一本鎖抗体を形成してもよい。こうした一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変ドメイン・ポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡ間に、ペプチド・リンカーをコードするＤＮＡを融合させることによって、調製されてきている。２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーの長さに応じて、生じるポリペプチドは、それ自体、折り畳まれて、抗原結合性単量体を形成することも可能であるし、または多量体（例えば二量体、三量体、または四量体）を形成することも可能である（Ｋｏｒｔｔら，  １９９７，  Ｐｒｏｔ．  Ｅｎｇ．  １０：４２３；  Ｋｏｒｔｔら，  ２００１，  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｅｎｇ．  １８：９５−１０８）。異なるＶＬおよびＶＨを含むポリペプチドを組み合わせることによって、異なるエピトープに結合する多量体ｓｃＦｖを形成することも可能である（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍら，  ２００１，  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｅｎｇ．  １８：３１−４０）。一本鎖抗体産生のために開発された技術には、米国特許第４，９４６，７７８号；  Ｂｉｒｄ，  １９８８，
Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３；  Ｈｕｓｔｏｎら，  １９８８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９；  Ｗａｒｄら，  １９８９，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４，  ｄｅ  Ｇｒａａｆら，  ２００２，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  １７８：３７９−８７に記載されるものが含まれる。
【０１０８】
本発明の抗原結合タンパク質（例えば抗体、抗体断片、および抗体誘導体）は、当該技術分野に知られる定常領域いずれを含んでもよい。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域、例えばヒト・カッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域であってもよい。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはミュー型重鎖定常領域、例えばヒト・アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはミュー型重鎖定常領域であってもよい。１つの態様において、軽鎖または重鎖定常領域は、天然存在定常領域の断片、誘導体、変異体、または突然変異タンパク質である。
【０１０９】
関心対象の抗体から、異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を得るための技術、すなわちサブクラス・スイッチングが知られる。したがって、例えば、ＩｇＭ抗体からＩｇＧ抗体を得ることも可能であり、そして逆も可能である。こうした技術は、所定の抗体（親抗体）の抗原結合特性を所持するが、親抗体のものと異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスと関連する生物学的特性もまた示す、新規抗体の調製を可能にする。組換えＤＮＡ技術を使用してもよい。特定の抗体ポリペプチドをコードする、クローニングされたＤＮＡ、例えば所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡを、こうした方法において使用してもよい。Ｌａｎｔｔｏら，  ２００２，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．１７８：３０３−１６もまた参照されたい。さらに、ＩｇＧ４が望まし
い場合、本明細書に援用される、Ｂｌｏｏｍら，  １９９７，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：４０７に記載されるようなヒンジ領域中の点突然変異（ＣＰＳＣＰ→ＣＰＰＣＰ）を導入して、ＩｇＧ４抗体における不均一性を導きうる、Ｈ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を軽減することが望ましい可能性もまたある。
【０１１０】
さらに、異なる特性（すなわち結合する抗原に対する多様なアフィニティ）を有する抗原結合タンパク質を得るための技術もまた知られる。鎖シャッフリングと呼ばれる１つのこうした技術は、糸状バクテリオファージの表面上に免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーをディスプレイすることを伴い、しばしばファージ・ディスプレイと呼ばれる。鎖シャッフリングは、Ｍａｒｋｓら，  １９９２，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
１０：７７９に記載されるように、ハプテン  ２−フェニルオキサゾール−５−オンに対する高アフィニティ抗体を調製するのに用いられてきている。
【０１１１】
別の態様において、本発明はアルファ４ベータ７からの低い解離定数を有する抗原結合タンパク質を提供する。１つの態様において、抗原結合タンパク質は、１００ｐＭ以下のＫｄを有する。別の態様において、Ｋｄは１０ｐＭ以下であり；別の態様において、５ｐＭ以下であり、または１ｐＭ以下である。別の態様において、Ｋｄは、本明細書において実施例に記載する抗体と実質的に同じである。別の態様において、抗原結合タンパク質は、本明細書において実施例に記載する抗体と実質的に同じＫｄで、アルファ４ベータ７に結合する。
【０１１２】
別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７の活性、例えばＭＡｄＣＡＭ−１への結合（または接着）、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞への結合、またはアルファ４ベータ７を発現している細胞およびＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞間の接着を提供する。１つの態様において、抗原結合タンパク質は、１０００ｐＭ以下のＩＣ５０を有する。別の態様において、ＩＣ５０は５００ｐＭ以下であり；別の態様において、ＩＣ５０は１００ｐＭ以下である。別の態様において、ＩＣ５０は、本明細書において実施例に記載する抗体のものと実質的に同じである。別の態様において、抗原結合タンパク質は、本明細書において実施例に記載する抗体と実質的に同じＩＣ５０で、アルファ４ベータ７の活性を阻害する。
【０１１３】
１つの態様において、本発明の抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７（またはアルファ４ベータ７を発現している細胞）に対して１０００ｐＭ以下の見かけのアフィニティを有する。他の態様において、抗原結合性タンパク質は、５００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、または１５ｐＭ以下の見かけのアフィニティを示す。別の態様において、抗原結合タンパク質は、本明細書において実施例に記載する抗体のものと実質的に同じ見かけのアフィニティを示す。別の態様において、抗原結合タンパク質は、本明細書において実施例に記載する抗体のものと実質的に同じ見かけのアフィニティを有する。
【０１１４】
別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７の活性型および不活性型の両方に結合する抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７の一方の型にのみ、または優先的に一方の型に結合する。例えば、抗原結合タンパク質は、Ｍｎ２＋の存在下または非存在下でアルファ４ベータ７に結合可能である（すなわち、抗原結合タンパク質は活性型および不活性型の両方に結合する）。あるいは、抗原結合タンパク質は、Ｍｎ２＋の存在下でのみまたはＭｎ２＋の非存在下でのみ、アルファ４ベータ７に結合可能であるか、あるいは別の条件下より１つのこうした条件下で、より高いアフィニティで結合可能であり、アルファ４ベータ７の特定の型への優先的な結合が示される。
【０１１５】
別の態様において、本発明は、アルファ４ベータ７への結合に関して、本明細書に開示する抗体と競合する抗原結合タンパク質を提供する。当該技術分野に周知の方法によって、例えば蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）技術または他の類似のアッセイを用いて観察されるような、アルファ４ベータ７を発現している細胞への結合における競合によって、接着アッセイ（すなわちアルファ４ベータ７を発現している細胞およびＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞間）などのアッセイにおける競合によって、または本明細書に記載する別のアッセイにおける競合によって、こうした競合能を決定してもよい。１つの側面において、アルファ４ベータ７への結合に関して、本明細書に開示する抗体と競合する抗原結合タンパク質は、該抗体と同じエピトープまたは重複する（または隣接する）エピトープに結合する。別の側面において、アルファ４ベータ７への結合に関して、本明細書に開示する抗体と競合する抗原結合タンパク質は、アルファ４ベータ７の活性を阻害する。
【０１１６】
別の側面において、本発明は、細胞表面上に発現されたヒト・アルファ４ベータ７に結合し、そしてこうして結合した際、細胞表面上のアルファ４ベータ７の量の有意な減少を引き起こすことなく、ＭＡｄＣＡＭ−１とのアルファ４ベータ７の相互作用を阻害する、抗原結合タンパク質を提供する。細胞表面上および／または細胞内部のアルファ４ベータ７の量を測定するかまたは概算するためのいかなる方法を用いてもよい。１つの態様において、本発明は、細胞表面上に発現されたアルファ４ベータ７に結合し、そしてこうして結合した際、細胞表面からのアルファ４ベータ７の内在化速度を有意に増加させることなく、ＭＡｄＣＡＭ−１とアルファ４ベータ７の相互作用を阻害する、抗原結合タンパク質を提供する。他の態様において、アルファ４ベータ７を発現している細胞への抗原結合タンパク質の結合は、細胞表面アルファ４ベータ７の約７５％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、１％、または０．１％未満の内在化を引き起こす。
【０１１７】
別の側面において、本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで（例えばヒト被験体に投与した際）、少なくとも１日の半減期を有する抗原結合タンパク質を提供する。１つの態様において、抗原結合タンパク質は、少なくとも３日の半減期を有する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、４日以上の半減期を有する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、８日以上の半減期を有する。別の態様において、非誘導体化または非修飾抗原結合タンパク質に比較した際、抗原結合タンパク質が、より長い半減期を有するように、抗原結合タンパク質を誘導体化するかまたは修飾する。別の態様において、抗原結合タンパク質は、本明細書に援用される、２０００年２月２４日公開のＷＯ  ００／０９５６０に記載されるような、血清半減期を増加させる１以上の点突然変異を含有する。
【０１１８】
本発明は、多重特異性抗原結合タンパク質、例えば、二重特異性抗原結合タンパク質、例えば、２つの異なる抗原結合部位または領域を介して、アルファ４ベータ７の２つの異なるエピトープに、またはアルファ４ベータ７のエピトープおよび別の分子のエピトープに結合する、抗原結合タンパク質をさらに提供する。さらに、本明細書に開示するような二重特異性抗原結合タンパク質は、他の刊行物に言及して、本明細書に記載するものを含めて、本明細書に記載する抗体の１つ由来のアルファ４ベータ７結合部位および本明細書に記載する別の抗体由来の第二のアルファ４ベータ７結合領域を含むことも可能である。あるいは、二重特異性抗原結合タンパク質は、本明細書に記載する抗体の１つに由来する抗原結合部位、および当該技術分野に知られる別のアルファ４ベータ７抗体由来、あるいは既知の方法または本明細書に記載する方法によって調製される抗体由来の第二の抗原結合部位を含んでもよい。
【０１１９】
二重特異性抗体を調製する多くの方法が当該技術分野に知られ、そして２００１年４月２０日出願の米国特許出願０９／８３９，６３２（本明細書に援用される）に論じられる。こうした方法には、Ｍｉｌｓｔｅｉｎら，  １９８３，  Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３
７、および他のもの（米国特許第４，４７４，８９３号、米国特許第６，１０６，８３３号）に記載されるようなハイブリッド−ハイブリドーマの使用、ならびに抗体断片の化学的カップリングの使用（Ｂｒｅｎｎａｎら，１９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１；  Ｇｌｅｎｎｉｅら，１９８７，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３９：２３６７；米国特許第６，０１０，９０２号）が含まれる。さらに、例えばロイシンジッパー部分（すなわち、優先的にヘテロ二量体を形成する、ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のもの；  Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，  １９９２，  Ｊ．  Ｉｍｍｎｏｌ．  １４８：１５４７）または米国特許第５，５８２，９９６号に記載されるような、他の錠前および鍵の相互作用ドメイン構造を用いることによって、組換え手段を介して、二重特異性抗体を産生可能である。さらなる有用な技術には、Ｋｏｒｔｔら、１９９７、上記；米国特許第５，９５９，０８３号；および米国特許第５，８０７，７０６号に記載されるものが含まれる。
【０１２０】
別の側面において、本発明の抗原結合タンパク質は、抗体の誘導体を含む。誘導体化抗体は、特定の使用における半減期増加など、抗体に望ましい特性を与える分子または物質いずれかを含んでもよい。誘導体化抗体は、例えば、検出可能（または標識）部分（例えば放射性、比色、抗原性または酵素性分子、検出可能ビーズ（磁気ビーズまたは電子密度が高い（ｅｌｅｃｔｒｏｄｅｎｓｅ）（例えば金）ビーズなど）、または別の分子に結合する分子（例えばビオチンまたはストレプトアビジン））、療法または診断部分（例えば放射性、細胞傷害性、または薬学的活性部分）、あるいは特定の使用（例えばヒト被験体などの被験体への投与、あるいは他のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ使用）のための抗体の適合性を増加させる分子を含むことも可能である。抗体を誘導体化するのに使用可能な分子の例には、アルブミン（例えばヒト血清アルブミン）およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。当該技術分野に周知の技術を用いて、抗体のアルブミン連結誘導体およびＰＥＧ化誘導体を調製することも可能である。１つの態様において、抗体をトランスサイレチン（ＴＴＲ）またはＴＴＲ変異体にコンジュゲート化するかまたは別の方式で連結させる。ＴＴＲまたはＴＴＲ変異体を、例えば、デキストラン、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン（ｐｙｕｒｒｏｌｉｄｏｎｅ））、ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコール・ホモポリマー、酸化ポリプロピレン／酸化エチレン・コポリマー、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリビニルアルコールからなる群より選択される化学薬品で化学的に修飾してもよい。米国特許出願第２００３０１９５１５４号。
【０１２１】
別の側面において、本発明は、本発明の抗原結合タンパク質を用いて、アルファ４ベータ７に結合する分子に関してスクリーニングする方法を提供する。いかなる適切なスクリーニング技術を用いてもよい。１つの態様において、本発明の抗原結合タンパク質が結合するアルファ４ベータ７分子またはその断片を、本発明の抗原結合タンパク質および別の分子と接触させ、ここで、他の分子が、アルファ４ベータ７への抗原結合タンパク質の結合を減少させるならば、該分子はアルファ４ベータ７に結合する。適切な方法いずれか、例えばＥＬＩＳＡを用いて、抗原結合タンパク質の結合を検出してもよい。アルファ４ベータ７への抗原結合タンパク質の結合の検出は、上に論じるように、抗原結合タンパク質を検出可能に標識することによって、単純化可能である。別の態様において、アルファ４ベータ７結合性分子をさらに分析して、アルファ４ベータ７活性化および／またはシグナル伝達を該分子が阻害するかどうかを決定する。
【０１２２】
核酸
１つの側面において、本発明は、単離核酸分子を提供する。該核酸は、例えば、抗原結合タンパク質のすべてまたは一部、例えば本発明の抗体の一方または両方の鎖、あるいはその断片、誘導体、突然変異タンパク質、または変異体をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを同定するか、分析するか、突然変異させるかまたは増幅するための、ハイブリダイゼーション・プローブ、ＰＣＲプライマーまたは
配列決定プライマーとして使用するのに十分なポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドの発現を阻害するためのアンチセンス核酸、および前述のものの相補配列を含む。核酸はいかなる長さであってもよい。これらは、例えば、長さ５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、７５０、１，０００、１，５００、３，０００、５，０００またはそれより長いヌクレオチドであってもよく、そして／または１以上のさらなる配列、例えば制御配列を含んでもよく、そして／またはより大きい核酸、例えばベクターの一部であってもよい。核酸は、一本鎖または二本鎖であってもよく、そしてＲＮＡおよび／またはＤＮＡヌクレオチド、ならびにその人工的変異体（例えばペプチド核酸）を含んでもよい。
【０１２３】
抗体ポリペプチド（例えば重鎖または軽鎖、可変ドメインのみ、または全長）をコードする核酸を、アルファ４ベータ７で免疫されているマウスのＢ細胞から単離してもよい。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの慣用法によって、核酸を単離してもよい。
【０１２４】
本発明は、特定のハイブリダイゼーション条件下で、他の核酸にハイブリダイズする核酸をさらに提供する。核酸をハイブリダイズさせるための方法は当該技術分野に周知である。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ニューヨーク（１９８９），  ６．３．１−６．３．６を参照されたい。本明細書に定義するように、中程度にストリンジェントなハイブリダーゼション条件は、５ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を含有する前洗浄溶液、約５０％ホルムアミド、６ｘＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液、および５５℃のハイブリダイゼーション温度（または４２℃のハイブリダイゼーション温度を伴う、約５０％ホルムアミドを含有するものなどの他の同様のハイブリダイゼーション溶液）、ならびに約６０℃、０．５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中の洗浄条件を使用する。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、６ｘＳＳＣ、４５℃でハイブリダイズさせ、その後、０．１ｘＳＳＣ、０．２％ＳＤＳ中、６８℃での１以上の洗浄が続く。さらに、当業者は、少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９８または９９％互いに同一であるヌクレオチド配列を含む核酸が、典型的には互いにハイブリダイズしたままであるように、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを増加させるかまたは減少させるように、ハイブリダイゼーション条件および／または洗浄条件を操作することも可能である。ハイブリダイゼーション条件の選択に影響を及ぼす基本的なパラメータおよび適切な条件を考案するための指針が、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  およびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８９，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー，  第９章および第１１章；ならびにＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  １９９５，  Ａｕｓｕｂｅｌら監修，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  セクション２．１０および６．３−６．４）に示され、そして例えばＤＮＡの長さおよび／または塩基組成に基づいて、一般の当業者が容易に決定可能である。
【０１２５】
核酸内の突然変異によって変化を導入し、それによってコードするポリペプチド（例えば抗原結合タンパク質）のアミノ酸配列の変化を導くことも可能である。当該技術分野に知られるいかなる技術を用いて、突然変異を導入してもよい。１つの態様において、例えば部位特異的突然変異誘発プロトコルを用いて、１以上の特定のアミノ酸残基を変化させる。別の態様において、例えばランダム突然変異誘発プロトコルを用いて、１以上のランダムに選択された残基を変化させる。どのように作製されても、突然変異体ポリペプチドを発現させ、そして所望の特性（例えば、アルファ４ベータ７への結合、またはＭＡｄＣ
ＡＭなどのアドレシンへのアルファ４ベータ７の結合の遮断）に関してスクリーニングしてもよい。
【０１２６】
コードするポリペプチドの生物学的活性を有意に改変することなく、核酸内に突然変異を導入することも可能である。例えば、非必須アミノ酸残基でのアミノ酸置換を導くヌクレオチド置換を行ってもよい。１つの態様において、アミノ酸残基の１以上の欠失または置換を含むアミノ酸配列をコードするように、ヌクレオチド配列、あるいはその所望の断片、変異体、または誘導体を突然変異させる。別の態様において、突然変異誘発は、１以上のアミノ酸残基に隣接してアミノ酸を挿入する。あるいは、コードするポリペプチドの生物学的活性（例えば、アルファ４ベータ７の結合、ＭＡｄＣＡＭなどのアドレシンへのアルファ４ベータ７の結合の阻害など）を選択的に変化させる１以上の突然変異を核酸に導入してもよい。例えば、突然変異は、定量的にまたは定性的に、生物学的活性を変化させうる。定量的変化の例には、活性の増加、減少、または排除が含まれる。定性的変化の例には、抗原結合タンパク質の抗原特異性を変化させることが含まれる。
【０１２７】
別の側面において、本発明は、本発明の核酸配列の検出のため、プライマーまたはハイブリダイゼーション・プローブとして使用するのに適した核酸分子を提供する。本発明の核酸分子は、本発明の全長ポリペプチドをコードする核酸配列の一部のみを含んでもよく、例えば、プローブまたはプライマーとして使用可能な断片、あるいは本発明のポリペプチドの活性部分（例えばアルファ４ベータ７結合部分）をコードする断片を含んでもよい。
【０１２８】
本発明の核酸の配列に基づくプローブを用いて、核酸または類似の核酸、例えば本発明のポリペプチドをコードする転写物を検出してもよい。プローブは、標識基、例えば放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子を含んでもよい。こうしたプローブを用いて、ポリペプチドを発現する細胞を同定してもよい。
【０１２９】
別の側面において、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする核酸またはその一部を含むベクターを提供する。ベクターの例には、限定されるわけではないが、プラスミド、ウイルスベクター、非エピソーム哺乳動物ベクターおよび発現ベクター、例えば組換え発現ベクターが含まれる。
【０１３０】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適した型で、本発明の核酸を含むことも可能である。組換え発現ベクターには、発現に用いようとする宿主細胞に基づいて選択される、発現させようとする核酸配列に機能可能であるように連結された、１以上の制御配列が含まれる。制御配列には、宿主細胞の多くのタイプにおいて、ヌクレオチド配列の恒常的発現を導くもの（例えばＳＶ４０初期遺伝子エンハンサー、ラウス肉腫ウイルスプロモーターおよびサイトメガロウイルスプロモーター）、特定の宿主細胞においてのみ、ヌクレオチド配列の発現を導くもの（例えば組織特異的制御配列、その全体が本明細書に援用される、Ｖｏｓｓら，  １９８６，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．  １１：２８７，  Ｍａｎｉａｔｉｓら，  １９８７，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３６：１２３７を参照されたい）、および特定の処理または条件に応答して、ヌクレオチド配列の誘導可能な発現を導くもの（例えば、哺乳動物細胞におけるメタロチオネインプロモーター、ならびに原核系および真核系の両方における、ｔｅｔ応答性および／またはストレプトマイシン応答性プロモーター（同文献を参照されたい））が含まれる。当業者は、発現ベクターの設計は、形質転換しようとする宿主細胞の選択、タンパク質の所望の発現レベル等の要因に応じうることを認識するであろう。本発明の発現ベクターを宿主細胞内に導入して、それによって本明細書に記載するような核酸にコードされる、融合タンパク質またはペプチドを含む、タンパク質またはペプチドを産生してもよい。
【０１３１】
別の側面において、本発明は、本発明の組換え発現ベクターが導入されている宿主細胞を提供する。宿主細胞は、いかなる原核細胞（例えば大腸菌）または真核細胞（例えば、酵母、昆虫、または哺乳動物細胞（例えばＣＨＯ細胞））であってもよい。慣用的な形質転換またはトランスフェクション技術を介して、原核または真核細胞内にベクターＤＮＡを導入してもよい。哺乳動物細胞の安定トランスフェクションのため、用いる発現ベクターおよびトランスフェクション技術に応じて、少ない割合の細胞のみが、ゲノム内に外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）ＤＮＡを組み込みうることが知られる。これらの組込み体を同定し、そして選択するため、選択可能マーカー（例えば抗生物質に対する耐性に関するもの）をコードする遺伝子を、一般的に、関心対象の遺伝子とともに、宿主細胞内に導入する。好ましい選択可能マーカーには、Ｇ４１８、ハイグロマイシンおよびメトトレキセートなどの薬剤に対する耐性を与えるものが含まれる。導入された核酸で安定にトランスフェクションされた細胞を、他の方法の中でも、薬剤選択によって、同定してもよい（例えば選択可能マーカー遺伝子を取り込んだ細胞は生き残り、一方、他の細胞は死ぬであろう）。
【０１３２】
適応症
１つの側面において、本発明は被験体を治療する方法を提供する。該方法は、例えば、被験体に対して、一般的に健康によい効果を有することも可能であり、例えば被験体の予期される寿命を増加させることも可能である。あるいは、該方法は、例えば、疾患、障害、状態、または疾病（「状態」）を治療するか、防止するか、治癒させるか、軽減するか、または改善する（「治療する」）ことも可能である。本発明にしたがって治療すべき状態の中には、アルファ４ベータ７の不適切な発現または活性によって特徴付けられる状態がある。こうした状態には、細胞の不適切な輸送、例えばＭＡｄＣＡＭ−１を発現する細胞を含む胃腸管または他の組織への白血球（例えばリンパ球または単球）の輸送に関連するもの（ＭＡｄＣＡＭ−１を発現する細胞への白血球の結合の結果として）が含まれる。適宜治療可能な疾患には、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清陰性関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的またはコラーゲン性大腸炎、好酸球性胃腸炎、あるいは直腸結腸切除術および回腸肛門吻合術後に生じる嚢炎が含まれる。本発明にしたがって治療可能なさらなる状態には、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息および移植片対宿主病が含まれる。
【０１３３】
抗原結合タンパク質の療法および投与
本明細書に提供する特定の方法は、被験体にアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質を投与し、それによって、特定の状態において役割を果たす、アルファ４ベータ７が誘導する生物学的応答を減少させる工程を含む。特定の態様において、本発明の方法は、例えば、被験体への投与を介して、またはｅｘ  ｖｉｖｏ法において、アルファ４ベータ７抗原結合タンパク質と、内因性アルファ４ベータ７を接触させることを伴う。
【０１３４】
用語「治療」は、障害の少なくとも１つの症状または他の側面の軽減または予防、あるいは疾患重症度の減少等を含む。抗原結合タンパク質は、実行可能な療法剤を構成するために、完全な治癒を達成するか、あるいは疾患のすべての症状または徴候を根絶する必要はない。関連分野で認識されるように、療法剤として使用される薬剤は、所定の疾患状態の重症度を減少させることも可能であるが、有用な療法剤と見なされるために、疾患のすべての徴候を無効にする必要はない。同様に、予防的に投与される治療は、発展しうる予防剤を構成するために、状態の開始を防止する際に完全に有効である必要はない。単に疾患の影響を減少させる（例えば、症状の数または重症度を減少させることによって、あるいは別の治療の有効性を増加させることによって、あるいは別の有益な効果を生じることによって）か、あるいは疾患が被験体で生じるかまたは悪化する可能性を減少させれば十分である。本発明の１つの態様は、特定の障害の重症度を反映する指標のベースラインを
超えた、持続する改善を誘導するのに十分な量および時間、患者にアルファ４ベータ７アンタゴニストを投与する工程を含む方法に向けられる。
【０１３５】
関連分野で理解されるように、本発明の分子を含む薬学的組成物を、適応症に適した方式で、被験体に投与する。限定されるわけではないが、非経口、局所、または吸入によるものを含む、いかなる適切な技術によって、薬学的組成物を投与してもよい。注射する場合、薬学的組成物を、例えば、動脈内、静脈内、筋内、病巣内、腹腔内または皮下経路を介して、ボーラス注射によって、あるいは連続注入によって、投与してもよい。局在化投与、例えば疾患または傷害部位での投与が意図され、経皮送達および移植物からの持続放出も意図される。吸入による送達には、例えば、鼻または経口吸入、ネブライザーの使用、エアロゾル型でのアンタゴニストの吸入等が含まれる。他の代替物には、点眼剤；丸剤、シロップ、ロゼンジまたはチューインガムを含む経口調製物；ならびにローション、ジェル、スプレー、および軟膏などの局所調製物が含まれる。
【０１３６】
ｅｘ  ｖｉｖｏ法での抗原結合タンパク質の使用もまた意図される。例えば、患者の血液または他の体液を、ｅｘ  ｖｉｖｏで、アルファ４ベータ７に結合する抗原結合タンパク質と接触させてもよい。抗原結合タンパク質を適切な不溶性マトリックスまたは固体支持体材料に結合させてもよい。
【０１３７】
好適には、抗原結合タンパク質を、生理学的に許容されうるキャリアー、賦形剤または希釈剤などの１以上のさらなる構成要素を含む組成物の形で投与する。場合によって、組成物はさらに、１以上の生理学的活性剤、例えば第二の炎症または免疫阻害物質、抗血管形成物質、鎮痛性物質等を含み、その非排他的な例を本明細書に提供する。多様な特定の態様において、組成物は、アルファ４ベータ７結合性抗原結合タンパク質に加えて、１、２、３、４、５、または６つの生理学的活性剤を含む。
【０１３８】
１つの態様において、薬学的組成物は、本発明の抗原結合タンパク質を、緩衝剤、アスコルビン酸などの酸化防止剤、低分子量ポリペプチド（１０アミノ酸未満を有するものなど）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストリンなどの炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、グルタチオン、安定化剤、ならびに賦形剤からなる群より選択される１以上の物質とともに、含む。中性緩衝生理食塩水または同種血清アルブミンと混合された生理食塩水が、適切な希釈剤の例である。適切な産業標準にしたがって、ベンジルアルコールなどの保存剤もまた添加してもよい。組成物は、適切な賦形剤溶液（例えばスクロース）を希釈剤として用いた凍結乾燥物として配合されてもよい。適切な構成要素は、使用する投薬量および濃度でレシピエントに非毒性である。薬学的配合物に使用可能な構成要素のさらなる例が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１６版（１９８０）および第２０版（２０００），  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  ペンシルバニア州イーストンに提示される。
【０１３９】
開業医が使用するためのキットには、本発明のアルファ４ベータ７阻害物質、および本明細書に論じる状態いずれかを治療する際に使用するためのラベルまたは他の使用説明書が含まれる。１つの態様において、キットには、１以上のアルファ４ベータ７結合性抗原結合タンパク質の無菌調製物が含まれ、該調製物は、上に開示するような組成物の形であってもよく、そして１以上のバイアル中にあってもよい。
【０１４０】
投薬量および投与頻度は、投与経路、使用する特定の抗原結合タンパク質、治療しようとする疾患の性質および重症度、状態が急性または慢性であるか、ならびに被験体のサイズおよび全身状態などの要因に応じて、多様でありうる。関連技術において知られる方法によって、例えば用量の段階的増大研究を伴いうる臨床試験において、適切な投薬量を決
定してもよい。
【０１４１】
本発明のアルファ４ベータ７阻害物質を、例えば１回または１回より多く、例えばある期間に渡って定期的な間隔で、投与してもよい。特定の態様において、抗原結合タンパク質を、少なくとも１ヶ月以上、例えば１ヶ月、２ヶ月、または３ヶ月、あるいは無期限にさえ、投与する。慢性状態を治療するためには、一般的に、長期治療が最も有効である。しかし、急性状態を治療するためには、より短い期間、例えば１〜６週間の投与で十分である可能性もある。一般的に、患者が、選択した単数または複数の指標に関して、ベースラインを超えた、医学的に適切な度合いの改善を示すまで、抗原結合タンパク質を投与する。
【０１４２】
本発明の特定の態様は、１日あたり被験体の体重ｋｇあたり約１ｎｇ（「１ｎｇ／ｋｇ／日」）〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは、約５００ｎｇ／ｋｇ／日〜約５ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは、約５μｇ／ｋｇ／日〜約２ｍｇ／ｋｇ／日の抗原結合タンパク質の投薬量で、抗原結合タンパク質を被験体に投与することを伴う。さらなる態様において、抗原結合タンパク質を、週あたり１回、週あたり２回、または週あたり３回以上、成人に投与して、アルファ４ベータ７が仲介する疾患、状態または障害、例えば本明細書に開示する医学的障害を治療する。注射した場合、成人用量あたりの抗原結合タンパク質の有効量は、１〜２０ｍｇ／ｍ２の範囲であってもよく、そして好ましくは約５〜１２ｍｇ／ｍ２である。あるいは、一定の用量を投与してもよく；量は５〜１００ｍｇ／用量の範囲であってもよい。一定用量の１つの範囲は、用量あたり約２０〜３０ｍｇである。本発明の１つの態様において、２５ｍｇ／用量の一定用量を注射によって反復投与する。注射以外の投与経路を用いる場合、標準的医療行為にしたがって、用量を適切に調整する。療法措置の一例は、約２０〜３０ｍｇの抗原結合タンパク質の用量を、少なくとも３週間の期間に渡って、週あたり１〜３回注射することを伴うが、望ましい度合いの改善を誘導するには、より長い期間に渡る治療が必要である可能性もある。小児被験体（４〜１７歳）に関しては、１つの例示的な適切な措置は、週あたり２または３回投与される、最大用量２５ｍｇまでの抗原結合タンパク質の０．４ｍｇ／ｋｇの皮下注射を伴う。
【０１４３】
本明細書に提供する方法の特定の態様は、週あたり１回または２回の、０．５ｍｇ〜１０ｍｇ、好ましくは３〜５ｍｇの抗原結合タンパク質の皮下注射を伴う。別の態様は、週あたり１回の３ｍｇ以上の抗原結合タンパク質の肺投与（例えばネブライザーによる）に向けられる。
【０１４４】
本明細書に提供する療法措置の例は、アルファ４ベータ７が役割を果たす状態を治療するため、週１回、１．５〜３ｍｇの用量の、抗原結合タンパク質の皮下注射を含む。こうした状態の例を本明細書に提供し、そしてこうした状態には、例えば、先に記載するようなリウマチ性状態、ならびにアルファ４ベータ７発現細胞の過剰なまたは不適切な輸送が役割を果たす他の状態（本明細書に記載する；例えば炎症性腸疾患、膵炎など）が含まれる。望ましい結果が達成されるまで、例えば被験体の症状が鎮まるまで、抗原結合タンパク質の毎週の投与を続ける。必要に応じて治療を再開してもよいし、あるいは維持用量を投与してもよい。
【０１４５】
本明細書に提供する療法措置の他の例は、被験体の体重キログラムあたり、本発明のアルファ４ベータ７阻害剤の１、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、または２０ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）の用量の皮下または静脈内投与を含む。用量を１回、または特定の間隔で１回より多く、例えば１日１回、週３回、週２回、週１回、月３回、月２回、月１回、２ヶ月ごとに１回、３ヶ月ごとに１回、６ヶ月ごとに１回、または年１回、被験体に投与してもよい。治療期間、および治療の用量および／または頻度に対するいかなる変化も、被験体の特定の必要性を満たすため、治療経過中に改変するかまたは変化
させてもよい。
【０１４６】
別の態様において、治療中の障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、好ましくは持続する改善を誘導するのに十分な量および期間、抗原結合タンパク質を被験体に投与する。治療の量および期間が十分であるかどうかを決定するため、被験体の疾病、疾患または状態の度合いを反映する多様な指標を評価してもよい。こうした指標には、例えば疾患重症度、症状、または問題の障害の徴候の臨床的に認識される指標が含まれる。１つの態様において、被験体が、２〜４週間離れた少なくとも２回の機会に、改善を示すならば、改善は持続していると見なされる。改善の度合いは、一般的に、医師によって決定され、医師は、徴候、症状、生検、または他の試験結果に基づいて、この決定を行うことも可能であり、そしてまた、所定の疾患に関して開発された、生活の質アンケートなど、被験体に行われるアンケートも使用してもよい。
【０１４７】
アルファ４ベータ７発現および／またはアルファ４ベータ７活性化、およびまたはその結合パートナーＭＡｄＣＡＭ−１の改変は、例えば、胃腸系の炎症状態を含む、いくつかの障害と関連する。所定の障害を持つ被験体をスクリーニングして、アルファ４ベータ７またはＭＡｄＣＡＭ−１発現および／または活性化が改変されている個体を同定し、それによって、アルファ４ベータ７結合性抗原結合タンパク質を用いた治療から最も利益を得る可能性がある被験体を同定してもよい。したがって、本明細書に提供する治療法は、場合によって、被験体のアルファ４ベータ７またはＭＡｄＣＡＭ−１活性化または発現レベルを測定する第一の工程を含む。アルファ４ベータ７および／またはＭＡｄＣＡＭ−１発現および／または活性化が正常より高く上昇している被験体に、抗原結合タンパク質を投与してもよい。
【０１４８】
抗原結合タンパク質での治療前、治療中および／または治療後に、アルファ４ベータ７またはＭＡｄＣＡＭ−１活性の被験体のレベルを監視して、あるとすればアルファ４ベータ７またはＭＡｄＣＡＭ−１活性の変化を検出してもよい。いくつかの障害に関して、アルファ４ベータ７および／またはＭＡｄＣＡＭ−１活性上昇の発生率は、疾患の病期または疾患の特定の型などの要因に応じて、多様でありうる。例えば被験体血液または組織試料における、こうした活性を測定するため、既知の技術を使用してもよい。適切な技術いずれかを用いて、アルファ４ベータ７またはＭＡｄＣＡＭ−１活性を測定してもよい。
【０１４９】
本発明の方法および組成物の特定の態様は、抗原結合タンパク質および１以上のさらなるアルファ４ベータ７アンタゴニスト、例えば２以上の本発明の抗原結合タンパク質、または本発明の抗原結合タンパク質および１以上の他のアルファ４ベータ７アンタゴニストの使用を伴う。さらなる態様において、抗原結合タンパク質を単独で、または患者が罹患している状態を治療するのに有用な他の剤と組み合わせて、投与する。こうした剤の例には、タンパク質性薬剤および非タンパク質性薬剤の両方が含まれる。多数の療法剤を共投与する場合、投薬量は、関連技術分野に認識されるように、適宜、調整可能である。「共投与（Co-administration)」および併用療法は、同時の投与に限定されず、患者に少なくとも１つの他の療法剤を投与することを伴う治療の経過中、抗原結合タンパク質を少なくとも１回投与する治療措置もまた含まれる。
【０１５０】
抗原結合タンパク質と共投与してもよい他の剤の例は、治療しようとする特定の状態にしたがって選択される、他の抗原結合タンパク質または療法ポリペプチドである。あるいは、上に論じる特定の状態の１つを治療する際に有用な非タンパク質性薬剤を、アルファ４ベータ７アンタゴニストと共投与してもよい。
【０１５１】
併用療法
別の側面において、本発明は、アルファ４ベータ７阻害性抗原結合タンパク質および１
以上の他の治療で、被験体を治療する方法を提供する。１つの態様において、こうした併用療法は、例えば腫瘍の多数の部位または分子ターゲットを攻撃することによって、相乗効果または付加的効果を達成する。本発明と関連して使用可能な併用療法のタイプには、単一の疾患関連経路、ターゲット細胞における多数の経路、およびターゲット組織内の多数の細胞種における多数のノードを阻害するかまたは活性化する（適切なように）ことが含まれる。
【０１５２】
別の態様において、併用療法は、被験体に、本明細書記載の２、３、４、５、６、またはそれより多いアルファ４ベータ７アゴニストまたはアンタゴニストを投与する工程を含む。別の態様において、方法は、アルファ４ベータ７が仲介するシグナル伝達を、一緒に阻害するかまたは活性化する（直接または間接的に）、２以上の治療を被験体に投与する工程を含む。こうした方法の例には、２以上のアルファ４ベータ７阻害性抗原結合タンパク質の併用、アルファ４ベータ７阻害性抗原結合タンパク質および抗炎症特性を有する１以上の他の療法部分（例えば非ステロイド性抗炎症剤、ステロイド、および／または免疫調節剤）の併用、またはアルファ４ベータ７阻害性抗原結合タンパク質および１以上の他の治療（例えば手術、超音波、または炎症を減少させるのに有効な治療）の併用が含まれる。アルファ４ベータ７阻害剤と併用可能な有用な剤には、例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎、例えばアミノサリチル酸（例えばメサラミン）、コルチコステロイド（プレジソン（ｐｒｅｄｉｓｏｎｅ）を含む）、抗生物質、例えばメトロニダゾールまたはシプロフロキサシン（または例えば瘻孔に罹患した患者を治療するために有用な他の抗生物質）、および免疫抑制剤、例えばアザチオプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、タクロリムスおよびシクロスポリンが含まれる。こうした剤の併用はまた、本発明のアルファ４ベータ７阻害剤とともに使用することも予期される。こうした剤（単数または複数）を経口または別の任意の経路によって、例えば座薬または浣腸によって投与してもよい。
【０１５３】
さらに、１以上の抗アルファ４ベータ７抗体または抗体誘導体を、１以上の分子または他の治療と併用してもよく、ここで、他の分子（単数または複数）および／または治療（単数または複数）は、直接、アルファ４ベータ７に結合せず、また影響を及ぼさないが、治療中の状態を治療するかまたは防止するために、その併用が有効である。例えば、アルファ４イータ７阻害剤を、プロバイオティクス療法、あるいは正常腸フロラを回復するかまたは維持するのに用いられる他の療法と併用してもよい。１つの態様において、１以上の分子（単数または複数）および／または治療（単数または複数）は、療法の経過中に、１以上の他の分子（単数または複数）または治療（単数または複数）によって引き起こされる状態、例えば吐き気、疲労、脱毛症、悪液質、不眠症などの状態、を治療するかまたは防止する。分子および／または他の治療を併用するすべての場合で、有効である、いかなる順序で、いかなる長さの期間に渡って、例えば同時に、連続して、または交互に、個々の分子（単数または複数）および／または治療（単数または複数）を投与してもよい。１つの態様において、治療法は、第二の治療経過が始まる前に、１つの分子または他の治療での第一の治療経過を完了することを含む。第一の治療経過終了および第二の治療経過開始の間の時間の長さは、全療法経過が有効であることを可能にするいかなる長さであってもよく、例えば秒、分、時間、日、週、月、または年でさえあってもよい。
【０１５４】
別の態様において、方法は、本明細書記載の１以上のアルファ４ベータ７アンタゴニストおよび１以上の他の治療（例えば療法または苦痛軽減治療）を投与する工程を含む。方法が１より多い治療を被験体に投与する工程を含む場合、投与の順序、時期、回数、濃度、および体積は、治療の医学的必要性および限界によってのみ限定され、すなわち、２つの治療を、例えば同時に、連続して、交互に、またはいかなる他の措置にしたがって、被験体に投与してもよいことが理解されるものとする。
【０１５５】
実際の実施例および予言的実施例の両方の以下の実施例を、本発明の特定の態様または特徴を例示する目的のために提供し、そして該実施例は、本発明の範囲を限定しない。
【実施例】
【０１５６】
実施例１：抗体の調製
ＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ  ＸＧ２カッパラムダ（ｋｌ）およびＸＧ４ｋｌマウス（それぞれ、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４を発現するトランスジェニックマウス、ならびにヒト・カッパおよびラムダ軽鎖を発現するトランスジェニックマウス；  Ａｂｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州フレモント）を、一過性トランスフェクションされたヒト胚性腎（ＨＥＫ）２９３細胞（２９３−ａ４ｂ７）または安定トランスフェクションされたチャイニーズ・ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＣＨＯ−ａ４ｂ７）いずれかの、ヒト・アルファ４ベータ７を発現している細胞で免疫することによって、ヒト・アルファ４ベータ７に対するモノクローナル抗体を創出した。アルファ４ベータ７トランスフェクション細胞をそれぞれの親対照細胞に比較する、蛍光活性化細胞分取装置（ＦＡＣＳ）分析によって、血清力価を監視した。いずれかの免疫キャンペーン由来の過免疫動物を屠殺し、そして脾臓およびリンパ節組織をハイブリドーマ融合に供した。
【０１５７】
一連のアッセイを用いて、アルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗体を同定した。ハイブリドーマ上清をまず、偽トランスフェクション細胞に比較した際の、アルファ４ベータ７トランスフェクション細胞への結合に関して、蛍光分析微量アッセイ技術（ＦＭＡＴＴＭ  Ａｐｐｌｅｒａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州フォスターシティ；ハイスループット・スクリーニング細胞性検出系）によってスクリーニングした。アルファ４ベータ７への結合に関して陽性と同定された上清（ＣＨＯ−ａ４ｂ７細胞免疫キャンペーン由来の１００１の陽性結合上清、および２９３−ａ４ｂ７細胞免疫キャンペーン由来の１１４３の陽性結合上清）を、記載される（Ｅｒｌｅ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  （１９９４）  １５３：５１７）のと類似の方式で、ＭＡｄＣＡＭ−１−ＦｃへのＨＵＴ７８細胞接着を阻害する能力に関して評価した。本アッセイにおいて、ＣＨＯ−ａ４ｂ７キャンペーン由来の６０の上清および２９３−ａ４ｂ７キャンペーン由来の１７４の上清が、９０％を超える阻害（ｎ＝２）を示し、そしてこれらをさらなる特異性および強度分析に供した。
【０１５８】
アルファ４ベータ７でトランスフェクションした２９３細胞、アルファ４ベータ１でトランスフェクションした２９３細胞、およびアルファＥベータ７でトランスフェクションした２９３細胞を調製し、そして阻害アッセイで同定されたハイブリドーマ上清とともに、ＦＡＣＳ分析に用いた。このインテグリンのアルファ４サブユニットに対する抗体はまた、アルファ４ベータ１トランスフェクション細胞にもまた結合するであろうし、そしてベータ７鎖に結合する抗体は、アルファＥベータ７トランスフェクション細胞に結合するであろうため、アルファ４ベータ７トランスフェクション細胞への結合のみを示した上清をヘテロ二量体特異的と分類した。ＦＡＣＳ分析によって、カニクイザル・アルファ４ベータ７トランスフェクション２９３細胞への結合活性に関してもまた、ハイブリドーマ上清を分析した。ＣＨＯ−ａ４ｂ７キャンペーン由来の７つの株および２９３−ａ４ｂ７キャンペーン由来の２５の株を、サブクローニングおよびさらなる分析のために選択した。
【０１５９】
実施例２：抗体の分析
得た抗体分泌細胞をクローニングし、そして抗体がコードする核酸を単離し、そして配列決定した。部位特異的突然変異誘発を用いて、１以上のアミノ酸残基が単離配列と異なる変異体を調製した。抗体および変異体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を以下の表１および２に示す。ＣＤＲおよびＦＲ領域の境界は、本明細書において、先に論じたように、以下に示すものとは異なっている可能性もあることが認識される。
【０１６０】
表１：軽鎖の配列分析
【０１６１】
【表１−１】
2014140372.tif 000002
【０１６２】
【表１−２】
2014140372.tif 000003
【０１６３】
【表１−３】
2014140372.tif 000004
【０１６４】
表２：重鎖の配列分析
【０１６５】
【表２−１】
2014140372.tif 000005
【０１６６】
【表２−２】
2014140372.tif 000006
【０１６７】
【表２−３】
2014140372.tif 000007
【０１６８】
抗体のアミノ酸配列を、類似性に関してさらに分析した。カッパ軽鎖は３つの群に分類され、そして各群に関してコンセンサス配列を生じた。ラムダ軽鎖を持つ抗体が３つあり、このうち、コンセンサス配列を生じうる関連配列群を形成するのに十分な類似性を互いに持つものはなかった。創出した変異体のうち２つは、ラムダ鎖が異なっていた。重鎖を４つの群に分類し、単一の重鎖を五番目の群に分類し、そして群１〜４に関してコンセンサス配列を生じた。これらの結果を以下の表３（ａ）および３（ｂ）に示し；コンセンサス配列を配列表に示す。括弧内の数字は、配列表中の配列番号を示す。
【０１６９】
表３（ａ）：対応する重鎖を伴う、カッパ軽鎖による抗体の分類
【０１７０】
【表３−１】
2014140372.tif 000008
【０１７１】
表３（ｂ）：対応する重鎖を伴う、ラムダ軽鎖による抗体の分類
【０１７２】
【表３−２】
2014140372.tif 000009
【０１７３】
コンセンサス配列内のＣＤＲ境界（先に論じたように、変化しうる）は以下の通りであった：カッパ群１  ＣＤＲ１  ２４〜３５、ＣＤＲ２  ５１〜５７、ＣＤＲ３  ９０〜９９；カッパ群２  ＣＤＲ１  ２４〜３４、ＣＤＲ２  ５１〜５６、ＣＤＲ３  ８９〜９７；カッパ群３  ＣＤＲ１  ２４〜３４、ＣＤＲ２  ５０〜５６、ＣＤＲ３  ８９〜９７；重鎖群１  ＣＤＲ１  ３１〜３５、ＣＤＲ２  ５０〜６６、ＣＤＲ３  ９９〜１１０；重鎖群２  ＣＤＲ１  ３１〜３５、ＣＤＲ２  ５０〜６６、ＣＤＲ３  ９９〜１０７；重鎖群３  ＣＤＲ１  ３１〜３５、ＣＤＲ２  ５０〜６６、ＣＤＲ３  ９９〜１１４；および重鎖群４  ＣＤＲ１  ３１〜３５、ＣＤＲ２  ５０〜６６、ＣＤＲ３  ９９〜１１４。
【０１７４】
実施例３：機能アッセイ
本実施例は、抗体を特徴付けるために用いた多様なアッセイを記載する。
【０１７５】
ＨＵＴ７８接着アッセイ
リン酸緩衝液ｐＨ９．０で希釈した２０μＧ／ｍＬ  ＭＡｄＣＡＭ−１（またはコーティング対照としての類似の濃度のヒトＩｇＧ１）で４℃で一晩、９６ウェルプレートをコーティングすることによって、コーティングプレート（例えばＣｏｓｔａｒ（登録商標）３３６８  ９６ウェルプレート；  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、マサチューセッツ州ローウェル）を調製する。コーティングを取り除き、そして１００μＬの３％ＢＳＡ／ＰＢＳでプレートをブロッキングし、室温で１時間以上インキュベーションする。ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）でプレートを３回洗浄する。
【０１７６】
集密まで増殖させたＨＵＴ７８細胞（インデューサー／ヘルパー表現型を持つ成熟Ｔ細胞株の特徴を示すヒトＴ細胞リンパ腫細胞株；  ＡＴＣＣ  ＴＩＢ  １６１）をペレットにし、そしてＨＢＳＳ中で３回洗浄し、次いで、適切な濃度でＨＢＳＳに再懸濁して、５０μＬ中〜３０，０００細胞を得る。
【０１７７】
試験しようとする抗体を最終濃度の２倍に希釈し、そして次いで、１％ＢＳＡと１ｍＭ
Ｍｎ２＋を含有する、カルシウム不含、マグネシウム不含のＨＢＳＳ中、１：４で滴定する。５０μＬの抗体力価または対照を、ＶＥＥ底プレートの各ウェルに添加し、その後、５０μＬのＨＵＴ７８細胞を添加する。細胞および抗体を４℃で３０分間インキュベーションし、次いで、コーティングしたプレートに添加し、そして３７℃で４０分間インキュベーションする。洗浄間でＨＢＳＳを振り落とす（ｆｌｉｃｋ）ことによって、コーティングしたプレート上の細胞を室温で３回、ＨＢＳＳで洗浄する。接着細胞を−２０℃で凍結融解し、その後、１００μＬのＣｙＱｕａｎｔ（登録商標）色素／溶解緩衝液（ハイスループットスクリーニング、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（登録商標）で有用な蛍光に基づく細胞定量化アッセイで用いる緩衝液、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を添加する。例えばＴｅｃａｎ  ＧＥＮｉｏｓＰｒｏ、多重標識マイクロプレート読み取り装置（Ｔｅｃａｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ．  スイス・メネドルフ）を用いて、４８５ｎｍ励起および５３０ｎｍ
発光で、各ウェルからの蛍光シグナルを定量化する。
【０１７８】
ヒトＣＤ４＋細胞接着アッセイ
プレートを、ヒトＭＡｄＣＡＭ−１−ＦｃまたはヒトＩｇＧ（２０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ９．０、１３０ｍＭ  ＮａＣｌ中、３μＧ／ｍｌ）、１００μＬ／ウェルで４℃で一晩コーティングし、次いで、２００μＬ／ウェルのブロッキング試薬（ＰＢＳ中の３％ウシ胎児血清アルブミン（ａｌｂｕｍｅｎ））で、室温で少なくとも２時間、ブロッキングする。次いで、接着緩衝液（３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｇ／ｍｌヒトＩｇＧ）でプレートを３回洗浄する。
【０１７９】
試験しようとする抗体の連続希釈を調製し、そしてプレートに添加する（３５μＬ／ウェル）；単離ＣＤ４＋  Ｔ細胞（２５０，０００細胞／３５μＬ／ウェル）を添加し、そしてプレートを４℃で２時間インキュベーションする。接着緩衝液で３回洗浄した後、プレートを−２０℃で一晩凍結させる。検出試薬（１００μＬ／ウェルのＣｙＱＵＡＮＴ（登録商標）試薬；  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を添加し、そしてプレートを３７℃で４５分間インキュベーションする。４８５ｎｍ励起および５３０ｎｍ発光で蛍光を読み取ることによって、結果を決定する。
【０１８０】
ヒトＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−メモリーＴ細胞に結合する際のＥＣ５０
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ；例えば２％ＦＢＳを含むリン酸緩衝生理食塩水中の、新鮮なものまたは凍結融解したもの）を、１％ＢＳＡを含み、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２を含むまたは含まない（実験に応じる；  Ｍｎ２＋はＭＡｄＣＡＭ−１結合に必要である）ＨＥＰＥＳ緩衝液（３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋１４０ｎＭ  ＮａＣｌ）中で洗浄し、そして再懸濁し、そして９６ウェルプレート内にプレーティングする（１０６細胞／ウェル）。細胞を１０μＧ／ｍｌのヒトＩｇＧと氷上で３０分間インキュベーションして、非特異的結合をブロッキングする。次いで、細胞を９６ウェルプレート中のビオチン化抗アルファ４ベータ７抗体の連続希釈と氷上で１時間インキュベーションし、その後、１：１００希釈のストレプトアビジン−フィコエリトリン（ＰＥ；  Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、ペンシルバニア州ウェストグローブ）、４μＬ  ＣＤ３−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５およびＣＤ４５ＲＡ−フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）を添加して、最終体積１００μＬにし、そして氷上でさらに１時間インキュベーションする。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝液（対応して、ＭｎＣｌ２を含むまたは含まない）で２回洗浄し、そして次いで、２００μＬ  ＨＥＰＥＳ緩衝液＋０．５％パラホルムアルデヒド（やはり、対応して、ＭｎＣｌ２を含むまたは含まない）中で固定した。蛍光活性化細胞分取装置（ＦＡＣＳ）、例えばＢＤＴＭ  ＬＳＲ  ＩＩベンチトップ・フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）を用いて、陽性アルファ４ベータ７抗体結合性ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−メモリーＴ細胞の割合を決定する。ＥＣ５０を、ＣＤ４ＣＤ４５ＲＡ−メモリー細胞上のアルファ４ベータ７部位の５０％にアルファ４ベータ７抗体が結合する、アルファ４ベータ７の濃度として定義する。
【０１８１】
ヒトＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−メモリーＴ細胞へのＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃ結合のブロッキングにおけるＩＣ５０
ＰＢＭＣ（先に記載する通り、新鮮または凍結）を洗浄し、そして１％ＢＳＡおよび１ｍＭ  ＭｎＣｌを含むＨＥＰＥＳ緩衝液（３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋１４０ｎＭ  ＮａＣｌ）中、最終濃度１０７細胞／ｍｌに再懸濁する。先に記載するように細胞をブロッキングし；ブロッキング後、細胞を、９６ウェルプレート中、抗アルファ４ベータ７抗体（または適切な対照）の連続希釈と氷上で３０分間インキュベーションし、そして次いで、０．
３μＧ／ｍｌビオチン化ＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃタンパク質とさらに１時間インキュベーションする。
【０１８２】
１ｍＭ  ＭｎＣｌを含むＨＥＰＥＳ緩衝液中で２回洗浄した後、細胞を、先に記載するように、最終体積１００μＬ中、１：１００希釈のストレプトアビジン−ＰＥ、４μＬのＣＤ３−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５およびＣＤ４５ＲＡ−ＦＩＴＣで処理する。氷上で１時間インキュベーションした後、１ｍＭ  ＭｎＣｌを含むＨＥＰＥＳ緩衝液で細胞を２回洗浄し、そして次いで、０．５％パラホルムアルデヒドを加えた２００μＬ緩衝液中で固定する。先に記載するように、蛍光活性化細胞分取装置（ＦＡＣＳ）分析によって、陽性ＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃ結合ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−メモリーＴ細胞の割合を決定する。ＩＣ５０を、ＣＤ４ＣＤ４５ＲＡ−メモリー細胞上のアルファ４ベータ７へのＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃ結合が５０％阻害される、アルファ４ベータ７抗体の濃度として定義する。
【０１８３】
活性化Ｔ細胞に対するレチノイン酸によるアルファ４ベータ７誘導
レチノイン酸（１０００ｎＭ）の存在下または非存在下で、抗ＣＤ３（プレート結合、５μＧ／ｍｌ）、ヒトＩＬ−２（２０ｎｇ／ｍｌ）によって、単離ヒトＰＢＭＣを７日間活性化する。活性化された細胞を染色緩衝液（０．５％ＢＳＡおよび１ｍＭ  ＭｎＣｌを加えたＰＢＳ）で２回洗浄し、そして１００μＧ／ｍｌヒトＩｇと３０分間インキュベーションして、非特異的結合をブロッキングする。細胞をまず、抗アルファ４ベータ７抗体の連続希釈中で、氷上で３０分間、インキュベーションし、そして次いで、１μＧ／ｍｌビオチン化ＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃでさらに３０分間染色する。染色緩衝液で２回洗浄した後、細胞をストレプトアビジン−ＰＥ（１：１０００）で３０分間染色する。蛍光活性化細胞分取によって、例えばＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）を用いて細胞を分析する。この方式で調製した細胞は、競合アッセイなどのさらなる実験のために使用可能である。
【０１８４】
競合アッセイ
また、実質的にＦｉｓｃｅｌｌａら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１：３０２−３０７；  ２００３に実質的に記載されるような、蛍光分析微量アッセイ技術またはＦＭＡＴによって、アルファ４ベータ７を発現している細胞への結合に際して、他の抗アルファ４ベータ７および／またはベータ７抗体と競合する能力に関して、アルファ４ベータ７抗体を調べた。簡潔には、例えばアルファ４をコードする核酸およびベータ７を発現する核酸で、細胞を一過性同時トランスフェクションすることによって、高レベルのアルファ４ベータ７を発現している細胞を調製する。安定トランスフェクションに適した細胞およびプロトコルを用いて、類似の方式で、安定細胞株を調製する。トランスフェクトされた細胞を、例えばＦＡＣＳによって、アルファ４に対する抗体、ベータ７に対する抗体、および／またはリガンド（すなわちＭＡｄＣＡＭ−１、例えばＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃ融合タンパク質）を用いて、スクリーニングする。細胞はいくつかの周期の分取および選択を経て、再現性がある上昇したレベルのアルファ４ベータ７発現を伴うクローン性細胞株を得てもよい。
【０１８５】
Ｓ２５０Ｎ突然変異体への結合
ＡＣＴ−１結合に非常に重要であることが知られる（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５９：１４９７，  １９９７）、ベータ７鎖中のＳ２５０Ｎ点突然変異体を認識する能力に関してもまた、抗体を評価した。高レベルのアルファ４ベータ７を発現している細胞の調製に関して、先に記載するのと類似の方式で、ベータ鎖中にＳ２５０Ｎ突然変異を有するアルファ４ベータ７を一過性同時発現する２９３細胞（参照）を調製する。
【０１８６】
簡潔には、プロフィール用に、総数１ｘ１０６トランスフェクション細胞を、細胞解離
溶液を用いて収集し、そして１０００ｒｐｍで５分間回転させて落とす。次いで、０．５ｍｌブロッキング緩衝液（１％ヤギ血清／ＰＢＳ）で細胞を振盪しながら４℃で３０分から１時間ブロッキングする。ＭＡｄＣＡＭ−１−Ｆｃ染色のため、細胞を振盪しながらＭｎ２＋緩衝液（３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋１％ヤギ血清中、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）中、４℃で１時間インキュベーションする。１０００ｒｐｍ／５分で細胞を回転させて落とし、そして０．５ｍｌの新鮮なブロッキング緩衝液を、１０μＧ／ｍｌの一次抗体とともに添加し、その後、振盪しながら４℃で３０分から１時間インキュベーションする。４ｍｌの冷ＰＢＳ（各洗浄で）で２回洗浄し、０．５ｍｌブロッキング緩衝液中、二次抗体（すなわちヤギ抗ＩｇＧ−フィコエリトリン・コンジュゲート化抗体；  Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１：２５０希釈または０．１μＧ／１０６細胞）を、４℃で２０〜３０分間インキュベーションする。細胞を最後に１回、４ｍｌの冷ＰＢＳで洗浄し、次いでプロフィール用に、０．５ｍｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁する。
【０１８７】
一塩基多型（ＳＮＰ）への結合
α４サブユニットのＳＮＰ分析のため、異なる民族群を代表する９０人の個体（１８０の一倍体ゲノム）からα４遺伝子エクソン１〜２８をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅し、そして続いて配列決定した。α４遺伝子のコード領域中の３つの候補ＳＮＰが同定され、そして３つのうちの１つはアミノ酸変化（Ａｒｇ８７８Ｇｌｎ）を生じた。同様に、β７サブユニットＳＮＰ分析のため、異なる民族群を代表する９０人の個体（１８０の一倍体ゲノム）からβ７遺伝子エクソン２〜１５のコード領域をＰＣＲ増幅し、そして続いて配列決定した。３つのＳＮＰが同定され、そしてそのうちの２つはアミノ酸変化を生じた。社内ＳＮＰ分析データをＮＣＢＩデータベース（ＮＣＢＩ：全米バイオテクノロジー情報センター、米国衛生研究所（ＮＩＨ）の国立医学図書館（ＮＬＭ）の一部門）中の情報と比較した。α４サブユニット中のＧｌｎ８７８Ａｒｇを生じるＡ／Ｇ突然変異のみが高頻度で生じ、社内ＳＮＰおよび公的データベースの両方で、それぞれ、２０％または３０％生じる。もう一方のＳＮＰは低頻度で生じる。この情報を以下の表４に要約する。
【０１８８】
表４：ヒト・ベータ７およびアルファ４におけるＳＮＰ頻度
【０１８９】
【表４】
2014140372.tif 000010
【０１９０】
アルファ４およびベータ７両方の細胞外ドメインにおけるアミノ酸改変ＳＮＰ（ａ４ｂ７（Ｅ９７Ｖ）；  ａ４ｂ７（Ｒ２１３Ｓ）；  ａ４ｂ７（Ｇ６２９Ｓ；  ａ４（Ｖ８２４Ａ）ｂ７；  ａ４（Ｑ８７８Ｒ）ｂ７）に相当する点突然変異構築物を生成した。各点突然変異構築物を、野生型パートナー発現構築物とともに、２９３細胞にトランスフェクションした。トランスフェクション２９３細胞をまず、１μＧ／ｍｌのヒトＩｇＧまたは
抗アルファ４ベータ７抗体で染色し、ＰＢＳで洗浄し、そしてフィコエリトリン・コンジュゲート化二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧで染色した。ＰＢＳで染色した後、蛍光活性化細胞分取によって、例えばＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）を用いて細胞を分析した。各抗体染色に関する蛍光染色強度（幾何平均）を以下の表５に示す。
【０１９１】
表５：  ＳＮＰへの結合
【０１９２】
【表５】
2014140372.tif 000011
【０１９３】
これらの結果は、試験したすべての抗体が、アルファ４ベータ７の既知のＳＮＰに結合することを示した。
【０１９４】
いくつかの異なるアッセイにおける多様なアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗体の活性を以下の表６において比較する。
【０１９５】
表６：アルファ４ベータ７に対する抗体の特性
【０１９６】
【表６】
2014140372.tif 000012
【０１９７】
Ｓｏｌｅｒらは、ベドリズマブとして知られるヒト化抗アルファ４ベータ７抗体の結合特異性を報告した（Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３３０：８６４；  ２００９）。この抗体は、メモリーＣＤ４＋  Ｔリンパ球に対して、０．０４２μｇ／ｍｌ
（４２ｎｇ／ｍｌ）のＥＣ５０を有すると報告された。ベドリズマブはまた、０．０３４μｇ／ｍｌ（３４ｎｇ／ｍｌ）のＩＣ５０で、アルファ４ベータ７ｈｉメモリーＴ細胞への可溶性ＭＡｄＣＡＭ−１の結合を阻害した。対照的に、表６に示す抗体の多くは、メモリーＴ細胞（すなわちＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞）に対して、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＥＣ５０を有し、そしてこれらはすべて、３５ｎｇ／ｍｌ未満のＥＣ５０を有した（また、本アッセイにおいて、すべて、０．１ｎｇ／ｍｌより大きいＥＣ５０を有した）。さらに、表６に示す抗体のいくつかは、ＭＡｄＣＡＭ競合アッセイにおいて、１０ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を示し、そして多くは、３０ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０を示した（また、本アッセイにおいて、すべて０．１ｎｇ／ｍｌより大きいＩＣ５０を示した）。Ｓｏｌｅｒらは、ベドリズマブがアルファ４ベータ７のＳ２５０Ｎ突然変異体に結合する能力にはまったく言及していないが、ベドリズマブが由来するネズミ抗体ＡＣＴ−１は、Ｓ２５０Ｎ突然変異体に結合不能であることが知られ（Ｔｉｄｓｗｅｌｌら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ
１５９：１４９７；  １９９７）、そしてＳｏｌｅｒらによれば、ベドリズマブおよびＡＣＴ−１は同じ抗原特異性を示す。したがって、表６に示す抗体のいくつかとは対照的に、ベドリズマブもまたＳ２５０Ｎ突然変異体に結合しない。
【０１９８】
実施例４：さらなる分析
前述の機能アッセイにおいて異なる特性を持つ、いくつかの代表的な抗体を、以下に記載するようなさらなる分析のために選択した。
【０１９９】
ヒトａ４ｂ７に対する結合アフィニティ
ヒト抗アルファ４ベータ７抗体の細胞結合アフィニティを測定するため、溶液相中の結合事象を測定する動力学排除アッセイを用いて、平衡解離定数、Ｋｄを計算してもよい。ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）技術（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、アイダホ州ボイズ）を、実質的に、以前、Ｘｉｅら  Ｊ．  Ｉｍｍ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３０４：１（２００５）およびＲａｔｈａｎａｓｗａｍｉら  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３７３：５２（２００８）に記載されるように、用いた。簡潔には、ヒト・アルファ４ベータ７を発現しているＨＵＴ７８細胞を、３つ中１つで、〜５０６細胞／ｍＬから〜４００細胞／ｍＬで滴定し、そして次いで２または３０ｐＭのｍＡｂ  ２Ｆ１２または１８Ａ１１、および１７Ｃ８に関しては３０または５００ｐＭの最終濃度で、４℃で１８時間、平衡化した。平衡時に上清中に留まる未結合抗体を、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）技術によって、ヤギ抗ヒトＦｃであらかじめコーティングしたＰＭＭＡビーズ上に上清を通過させることによって測定し、そしてヤギ抗ヒト（Ｈ＋Ｌ）Ｃｙ５で検出した（実質的に、Ｒａｔｈａｎａｓｗａｍｉら  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎ：１００４（２００５）に記載される通り）。ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）ソフトウェアを用いて、所定の曲線をすべて同時に単一のＫｄ値に適合させる、「ｎ曲線分析」によって平衡解離定数（Ｋｄ）を得る（Ｒａｔｈａｎｓｗａｍｉら  ２００５およびＸｉｅら、上記）。
【０２００】
表７：抗体の結合アフィニティ
【０２０１】
【表７】
2014140372.tif 000013
【０２０２】
これらの抗体は、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）アッセイにおいて、０．０５ｐＭより高いが、８０ｐＭ未満、１５ｐＭ未満、または５ｐＭ未満のＫｄを示す。
【０２０３】
ＰＫ／ＰＤ特性
雄カニクイザルにおいて、３つの完全ヒト抗アルファ４ベータ７抗体の単回用量薬力学（ＰＫ）および薬物動態学（ＰＤ）研究によって、以下の静脈内（ＩＶ；  ５ｍｇ／ｋｇ）または皮下（ＳＣ；  ０．５または５ｍｇ／ｋｇ）投与を行った。類似の初期ＰＫ曝露（Ｃ０；  時間ゼロにおける濃度）および５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ後の中枢循環内での分布を観察した。ＳＣ投与後、Ｃｍａｘ（血清中の最大濃度）およびＡＵＣ（濃度−時間曲線下の面積）は、３つの抗体すべてに関して、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ用量範囲内で、用量比例性を示した。試験した３つの抗体に関して、ＳＣ後の絶対生物学的利用能は、４４〜６８％の範囲であった。
【０２０４】
抗体処理前および後のＴ細胞上の未結合（ｆｒｅｅ）アルファ４ベータ７を、ＰＥコンジュゲート化抗アルファ４ベータ７抗体２７Ｇ８によって定量化した。抗体処理前および処理後、試験しようとする抗体１０ｍｇ／ｍｌの存在下で、ＰＥコンジュゲート化抗アルファ４ベータ７抗体２７Ｇ８で染色することによって、バックグラウンドレベルを調節した。各抗体の処理前と比較した、未結合アルファ４ベータ７部位の割合によって、飽和度を決定した。ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ９９−ＡＰＣおよびＣＤ２８−ＦＩＴＣを用いて、未刺激、中枢メモリーおよびエフェクターメモリー細胞を区別した。未刺激Ｔ細胞上のアルファ４ベータ７の部分的飽和を示したが、これは、カニクイザルメモリー細胞集団においては、多様性があり、そしてアッセイ感度が限定されているためであった。１８Ａ１１処理に関しては、３つ投薬群すべては第１日〜第１４日まで飽和したままであった。第２９日、３つの群はすべて、被覆を喪失した。２Ｆ１２および１７Ｃ８処理はどちらも、低投薬量（０．５ｍｇ／ｋｇ）群で、第１４日にターゲット被覆の喪失が観察された。
【０２０５】
未結合アルファ４ベータ７検出に加えて、１０ｍｇ／ｍｌ抗体の非存在下または存在下で、ＰＥコンジュゲート化抗ヒト抗体Ａ３５での染色によってもまた、ターゲット飽和を検出した。１０ｍｇ／ｍｌ抗アルファ４ベータ７抗体での試料のプレインキュベーション後、抗ヒト抗体での染色で、総アルファ４ベータ７部位を概算した。各試料に関して、抗アルファ４ベータ７抗体によって占められる総アルファ４ベータ７部位の割合によって、ターゲット飽和を決定した。３つの完全ヒト抗アルファ４ベータ７抗体は、５ｍｇ／ｋｇ
ＩＶ後１４日以内に、８１〜１００％の平均で維持されるアルファ４ベータ７飽和を示した。
【０２０６】
血清抗アルファ４ベータ７抗体濃度、および直接Ｅｍａｘモデルを用いた対応するアルファ４ベータ７受容体飽和データに対してＰＫ／ＰＤモデリングを行った。モデルで概算されるＰＤパラメータは、９２％のＥｍａｘ（最大アルファ４ベータ７受容体飽和）、５２ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０（Ｅｍａｘの５０％に到達する抗アルファ４ベータ７抗体濃度）、および１８％のＥ０（最初のアルファ４ベータ７受容体飽和）であった。３つの抗体はすべて、カニクイザルにおいて、〜３から５日の平均ｔ１／２の、飽和アルファ４ベータ７受容体に対する強力なｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＤ効果を示した。
SEQUENCE LISTING
<110>  AMGEN INC.
<120>  ALPHA4BETA7 HETERODIMER-SPECIFIC  ANTIBODIES
<130>  140237
<150>  US 61/306,829
<151>  2010-02-25
<150>  US 61/162,154
<151>  2009-03-20
<160>  72    
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Met Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  2
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  2
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Thr Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Tyr Trp Pro Pro 
85                  90                  95      
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys 
100                 105             
<210>  3
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Cys Cys Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Phe 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 
100                 105         
<210>  4
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Phe Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  5
<211>  111
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  5
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 
1               5                   10                  15      
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 
20                  25                  30          
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ile Leu Asp Ile Thr Gly Leu Gln 
65                  70                  75                  80  
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 
85                  90                  95      
Ser Ala Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
100                 105                 110     
<210>  6
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ile Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Met Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  7
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Phe Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Ser Phe Pro Gly 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  8
<211>  106
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  8
Glu Ile Val Met Met Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Asn 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asp Trp Pro Thr 
85                  90                  95      
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105     
<210>  9
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  10
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  10
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 
20                  25                  30          
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
65                  70                  75                  80  
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro 
85                  90                  95      
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Ala Ile Lys 
100                 105             
<210>  11
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  11
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Asn 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Pro 
85                  90                  95      
Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
100                 105             
<210>  12
<211>  110
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  12
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Glu Ala Pro Arg Gln 
1               5                   10                  15      
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn 
20                  25                  30          
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Leu Phe Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Tyr His Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 
65                  70                  75                  80  
Ser Glu Asp Glu Thr Asp Tyr Tyr Cys Thr Ala Trp Asp Asp Ser Leu 
85                  90                  95      
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
100                 105                 110 
<210>  13
<211>  106
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  13
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asp Asn 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Thr 
85                  90                  95      
Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys 
100                 105     
<210>  14
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
20                  25                  30          
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Cys 
85                  90                  95      
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  15
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr 
20                  25                  30          
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Asn Leu Pro Ile 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  16
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  16
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asp Tyr 
20                  25                  30          
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Asp Thr Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ile Leu Pro Tyr 
85                  90                  95      
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Asp Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  17
<211>  106
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  17
Glu Val Met Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Cys Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Thr 
85                  90                  95      
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105     
<210>  18
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  18
Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Val Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro 
85                  90                  95      
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105             
<210>  19
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  19
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Phe Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Gly Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Ala Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Asp Trp Pro Pro 
85                  90                  95      
Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105             
<210>  20
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  20
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Gly Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Thr Ser Ser 
20                  25                  30          
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ser Pro Ser Gln Ser Pro Arg Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
65                  70                  75                  80  
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro 
85                  90                  95      
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105             
<210>  21
<211>  108
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  21
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 
20                  25                  30          
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Pro 
85                  90                  95      
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Thr Val Glu Ile Lys 
100                 105             
<210>  22
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  23
<211>  106
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  23
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 
1               5                   10                  15      
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala 
20                  25                  30          
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 
35                  40                  45              
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 
50                  55                  60                  
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 
65                  70                  75                  80  
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 
85                  90                  95      
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
100                 105     
<210>  24
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Val Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  25
<211>  110
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  25
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Arg Gln 
1               5                   10                  15      
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn 
20                  25                  30          
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Leu Phe Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Tyr His Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 
65                  70                  75                  80  
Ser Ala Asp Glu Thr Asp Tyr Tyr Cys Thr Ala Trp Asp Asp Ser Leu 
85                  90                  95      
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
100                 105                 110 
<210>  26
<211>  110
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  26
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ala Pro Arg Gln 
1               5                   10                  15      
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn 
20                  25                  30          
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Leu Phe Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Tyr His Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 
65                  70                  75                  80  
Ser Ala Asp Glu Thr Asp Tyr Tyr Cys Thr Ala Trp Asp Asp Ser Leu 
85                  90                  95      
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 
100                 105                 110 
<210>  27
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
20                  25                  30          
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Ser 
85                  90                  95      
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  28
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Trp 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  29
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Asn Asp Leu 
20                  25                  30          
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Gly Phe Asp Pro Ala Glu Gly Lys Ile Ile Ser Ala Gln Lys Phe 
50                  55                  60                  
Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Asp Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Thr Leu Asp Phe Ser Ser Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Leu Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  30
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  30
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Tyr Ser Ser Gly Trp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Arg 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  31
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
20                  25                  30          
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu His Trp Asn Tyr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Met Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  32
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  32
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Val Thr Asp Leu 
20                  25                  30          
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 
50                  55                  60                  
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Thr Thr Glu Ser Ser Ser Ala Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Leu Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  33
<211>  121
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  33
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Val Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg His Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Arg Ser Ser Ala Trp Asp Glu Ala Phe Asp Ile Trp Gly 
100                 105                 110         
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
115                 120     
<210>  34
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Asn Asp Leu 
20                  25                  30          
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Gly Phe Asp Pro Ala Glu Gly Lys Ile Ile Ser Ala Gln Lys Phe 
50                  55                  60                  
Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Asp Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Thr Leu Asp Phe Ser Ser Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Leu Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  35
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  35
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Thr Gly Ser Ala Met Tyr Asp Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Phe Ser Ser Gly Trp Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  36
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  36
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  37
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Asp Leu 
20                  25                  30          
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Gly Phe Asp Pro Gln Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 
50                  55                  60                  
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Thr Gly Ser Ser Ser Ser Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Leu Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  38
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  38
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu His Ser Ser Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg 
100                 105                 110         
Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  39
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  39
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Met Tyr Ser Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Arg 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  40
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  40
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ile Gly Ser Ala Ile His Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Tyr Ser Ser Gly Trp Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  41
<211>  125
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
20                  25                  30          
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Asp Trp Asn Tyr Ala Asp Tyr Tyr Gly Met 
100                 105                 110         
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
115                 120                 125 
<210>  42
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Arg Val Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  43
<211>  123
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  43
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 
20                  25                  30          
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Ile Ile Tyr Pro Tyr Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 
50                  55                  60                  
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Phe Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Ser His Arg Leu Trp Leu Gly Glu Phe Pro Gly Pro Leu Asn Ile 
100                 105                 110         
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
115                 120             
<210>  44
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  44
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Val Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Arg Ser Ser Gly Leu Val Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  45
<211>  123
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  45
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Glu 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr 
20                  25                  30          
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Leu Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Ile Ile Asp Pro Asn Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 
50                  55                  60                  
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile His Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Thr His Arg Leu Trp Leu Gly Thr Leu Pro Gly Gly Phe Tyr Ile 
100                 105                 110         
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
115                 120             
<210>  46
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  46
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Glu Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Phe Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly His 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  47
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  47
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Cys Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp Tyr Ser Ser Gly Trp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  48
<211>  124
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  48
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
20                  25                  30          
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Lys Ala Pro Tyr Ser Ser Ser Trp Ala Leu Gly Leu Gly Met Asp 
100                 105                 110         
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
115                 120                 
<210>  49
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  49
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Thr Gly Ser Thr Leu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Asp Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Thr Arg Glu Tyr Ser Ser Gly Trp Phe Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  50
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ile His Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Tyr Ser Ser Gly Trp Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  51
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  51
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ala Ile His Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asp His Ser Ser Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  52
<211>  120
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  52
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Ala Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Tyr Ser Ser Gly Trp Phe Phe Phe Glu Ser Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210>  53
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Asn Asp Leu 
20                  25                  30          
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Gly Phe Asp Pro Ala Glu Gly Lys Ile Ile Ser Ala Gln Lys Phe 
50                  55                  60                  
Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Leu Asp Phe Ser Ser Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Leu Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  54
<211>  125
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Arg 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
20                  25                  30          
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Asp Trp Asn Tyr Ala Asp Tyr Tyr Gly Met 
100                 105                 110         
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
115                 120                 125 
<210>  55
<211>  109
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Light chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (2)..(2)
<223>  X can be Val, Leu or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (3)..(3)
<223>  X can be Met or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (4)..(4)
<223>  X can be Met or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (5)..(5)
<223>  X can be Met or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (9)..(9)
<223>  X can be Ala or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (13)..(13)
<223>  X can be Leu or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (14)..(14)
<223>  X can be Phe or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (18)..(18)
<223>  X can be Gly, Arg or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (21)..(21)
<223>  X can be Val or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (28)..(28)
<223>  X can be Thr or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (30)..(30)
<223>  X can be thr, Asn or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (30)..(30)
<223>  X can be Thr, Asn or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (31)..(31)
<223>  X can be Thr, Asp or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (32)..(32)
<223>  X can be Asn, Asp or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (33)..(33)
<223>  X can be Tyr or none
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (35)..(35)
<223>  X can be Val or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (40)..(40)
<223>  X can be Ser or Lys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (42)..(42)
<223>  X can be Ser or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (44)..(44)
<223>  X can be Ser, Pro or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (50)..(50)
<223>  X can be Phe or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (54)..(54)
<223>  X can be Thr, Ala or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (61)..(61)
<223>  X can be Ala or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (71)..(71)
<223>  X can be Glu or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (78)..(78)
<223>  X can be Ser or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (80)..(80)
<223>  X can be Gln or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (81)..(81)
<223>  X can be Pro or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (88)..(88)
<223>  X can be Phe, Cys or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (93)..(93)
<223>  X can be His, Asn or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (94)..(94)
<223>  X can be Asp, Asn, Tyr or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (95)..(95)
<223>  X can be Trp or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (97)..(97)
<223>  X can be Pro or none
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (98)..(98)
<223>  X can be Val, Leu or none
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (99)..(99)
<223>  X can be Thr or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (102)..(102)
<223>  X can be Gln or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (105)..(105)
<223>  X can be Arg, Thr or Lys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (106)..(106)
<223>  X can be Leu or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (107)..(107)
<223>  X can be Glu or Ala
<400>  55
Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Ser Pro Xaa Thr Leu Ser Xaa Xaa Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Xaa Ala Thr Xaa Ser Cys Arg Ala Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Xaa 
20                  25                  30          
Xaa Leu Xaa Trp Tyr Gln Gln Xaa Pro Xaa Gln Xaa Pro Arg Leu Leu 
35                  40                  45              
Ile Xaa Gly Ala Ser Xaa Arg Ala Thr Gly Ile Pro Xaa Arg Phe Ser 
50                  55                  60                  
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Thr Ile Ser Xaa Leu Xaa 
65                  70                  75                  80  
Xaa Glu Asp Phe Ala Val Tyr Xaa Cys Gln Gln Tyr Xaa Xaa Xaa Pro 
85                  90                  95      
Xaa Xaa Xaa Phe Gly Xaa Gly Thr Xaa Xaa Xaa Ile Lys 
100                 105                 
<210>  56
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Light chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (11)..(11)
<223>  X can be Val or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (12)..(12)
<223>  X can be Ser or Phe
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (15)..(15)
<223>  X can be Val or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (28)..(28)
<223>  X can be Asp or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (29)..(29)
<223>  X can be Ile or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (30)..(30)
<223>  X can be Ser, Ile, Asn or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (31)..(31)
<223>  X can be Ser or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (32)..(32)
<223>  X can be Trp or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (38)..(38)
<223>  X can be Arg or Gln
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (42)..(42)
<223>  X can be Lys, Met or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (43)..(43)
<223>  X can be Ala or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (45)..(45)
<223>  X can be Lys or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (46)..(46)
<223>  X can be Val or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (49)..(49)
<223>  X can be Tyr or Phe
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (50)..(50)
<223>  X can be Ser, Ala or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (51)..(51)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (53)..(53)
<223>  X can be Ser, Ile, Asn or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (55)..(55)
<223>  X can be Gln or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (56)..(56)
<223>  X can be Ser or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (60)..(60)
<223>  X can be Ser or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (65)..(65)
<223>  X can be Ser or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (72)..(72)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (76)..(76)
<223>  X can be Ser or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (83)..(83)
<223>  X can be Phe or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (85)..(85)
<223>  X can be Thr or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (87)..(87)
<223>  X can be Tyr or Cys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (90)..(90)
<223>  X can be Gln or Lys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (91)..(91)
<223>  X can be Ala, Val or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (92)..(92)
<223>  X can be Asp or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (94)..(94)
<223>  X can be Phe or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (96)..(96)
<223>  X can be Trp, Gly or Phe
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (100)..(100)
<223>  X can be Gln, Arg or Pro
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (103)..(103)
<223>  X can be Lys or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (105)..(105)
<223>  X can be Glu or Asp
<400>  56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Xaa Xaa Ala Ser Xaa Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Xaa Lys Pro Gly Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Leu Ile 
35                  40                  45              
Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Leu Xaa Xaa Gly Val Pro Xaa Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Xaa Gly Ser Gly Thr Asp Phe Xaa Leu Thr Ile Xaa Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Xaa Ala Xaa Tyr Xaa Cys Gln Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Pro Xaa 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Xaa Val Xaa Ile Lys 
100                 105         
<210>  57
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Light chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (2)..(2)
<223>  X can be Ile or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (22)..(22)
<223>  X can be Ser or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (30)..(30)
<223>  X can be Ser, Asn or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (31)..(31)
<223>  X can be Asn, Thr or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (43)..(43)
<223>  X can be Ala or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (51)..(51)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (56)..(56)
<223>  X can be Thr or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (76)..(76)
<223>  X can be Asn or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (77)..(77)
<223>  X can be Gly or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (87)..(87)
<223>  X can be Phe or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (91)..(91)
<223>  X can be Phe or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (93)..(93)
<223>  X can be Asn or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (96)..(96)
<223>  X can be Cys, Ser, Ile or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (97)..(97)
<223>  X can be Ser or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (103)..(103)
<223>  X can be Lys, Arg or Asp
<400>  57
Asp Xaa Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Xaa Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Xaa Xaa Tyr 
20                  25                  30          
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Asp Xaa Ser Asn Leu Glu Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Xaa Xaa Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Xaa Cys Gln Gln Xaa Asp Xaa Leu Pro Xaa 
85                  90                  95      
Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Xaa Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210>  58
<211>  121
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Heavy chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (10)..(10)
<223>  X can be Gly or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (13)..(13)
<223>  X can be Lys or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (23)..(23)
<223>  X can be Thr, Val or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (30)..(30)
<223>  X can be Ser, Arg or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (32)..(32)
<223>  X can be Tyr or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (40)..(40)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (48)..(48)
<223>  X can be Val, Ile or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (53)..(53)
<223>  X can be Ser, Arg or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (54)..(54)
<223>  X can be Ser, Thr, Val or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (57)..(57)
<223>  X can be Ala, Thr or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (58)..(58)
<223>  X can be thr, Val, Met, Ile, Leu or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (59)..(59)
<223>  X can be Tyr or His
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (60)..(60)
<223>  X can be Tyr, Ser, Asp or Cys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (73)..(73)
<223>  X can be Asp, Val or His
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (75)..(75)
<223>  X can be Ala or Pro
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (76)..(76)
<223>  X can be Lys or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (83)..(83)
<223>  X can be Met or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (84)..(84)
<223>  X can be Asp, Asn or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (89)..(89)
<223>  X can be Glu or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (91)..(91)
<223>  X can be Thr or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (94)..(94)
<223>  X can be Phe or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (97)..(97)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (99)..(99)
<223>  X can be Glu or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (100)..(100)
<223>  X can be His, Tyr, Phe or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (103)..(103)
<223>  X can be Gly or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (104)..(104)
<223>  X can be Tyr, Trp or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (105)..(105)
<223>  X can be Asp or none
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (106)..(106)
<223>  X can be Trp, Ala, Phe, Tyr, Ser, Val or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (107)..(107)
<223>  X can be Tyr, Phe, Ser or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (109)..(109)
<223>  X can be Asp or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (110)..(110)
<223>  X can be Leu, Tyr, Ser or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (113)..(113)
<223>  X can be Arg, Gln or His
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (115)..(115)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (116)..(116)
<223>  X can be Leu or Met
<400>  58
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Xaa Leu Val Xaa Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Phe Thr Phe Xaa Asp Xaa 
20                  25                  30          
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Xaa Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Xaa 
35                  40                  45              
Ser Tyr Ile Ser Xaa Xaa Gly Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Xaa Asn Xaa Xaa Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Xaa Xaa Ser Leu Arg Ala Xaa Asp Xaa Ala Val Xaa Tyr Cys 
85                  90                  95      
Xaa Arg Xaa Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Gly 
100                 105                 110         
Xaa Gly Xaa Xaa Val Thr Val Ser Ser 
115                 120     
<210>  59
<211>  118
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Heavy chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (29)..(29)
<223>  X can be Leu or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (30)..(30)
<223>  X can be Asn, Thr or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (34)..(34)
<223>  X can be Met or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (54)..(54)
<223>  X can be Ala or Gln
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (55)..(55)
<223>  X can be Glu or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (57)..(57)
<223>  X can be Lys or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (58)..(58)
<223>  X can be Ile or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (60)..(60)
<223>  X can be Ser or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (66)..(66)
<223>  X can be Asp or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (72)..(72)
<223>  X can be Asp, Arg or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (77)..(77)
<223>  X can be Asp or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (79)..(79)
<223>  X can be Ala or Val
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (84)..(84)
<223>  X can be Ser or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (87)..(87)
<223>  X can be Arg or Lys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (91)..(91)
<223>  X can be Ser or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (97)..(97)
<223>  X can be Ala or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (98)..(98)
<223>  X can be Thr or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (99)..(99)
<223>  X can be Leu, Glu or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (100)..(100)
<223>  X can be Asp or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (101)..(101)
<223>  X can be Phe or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (103)..(103)
<223>  X can be Ser or Ala
<400>  59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Xaa Xaa Asp Leu 
20                  25                  30          
Ser Xaa His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Gly Phe Asp Pro Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Ile Xaa Ala Gln Lys Phe 
50                  55                  60                  
Gln Xaa Arg Val Thr Met Thr Xaa Asp Thr Ser Thr Xaa Thr Xaa Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Xaa Ser Leu Xaa Ser Glu Asp Xaa Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 
100                 105                 110         
Leu Val Thr Val Ser Ser 
115             
<210>  60
<211>  125
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Heavy chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (13)..(13)
<223>  X can be Gln or Lys
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (16)..(16)
<223>  X can be Gly or Arg
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (89)..(89)
<223>  X can be Glu or Asp
<400>  60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Xaa Pro Gly Xaa 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
20                  25                  30          
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Xaa Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Glu Gly Gly Tyr Asp Trp Asn Tyr Ala Asp Tyr Tyr Gly Met 
100                 105                 110         
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
115                 120                 125 
<210>  61
<211>  123
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Heavy chain consensus
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (13)..(13)
<223>  X can be Lys or Glu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (28)..(28)
<223>  X can be Ser or Ile
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (31)..(31)
<223>  X can be Gly or Ser
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (35)..(35)
<223>  X can be Gly or Ala
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (40)..(40)
<223>  X can be Met or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (52)..(52)
<223>  X can be Tyr or Asp
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (54)..(54)
<223>  X can be Tyr or Asn
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (77)..(77)
<223>  X can be Asn or His
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (94)..(94)
<223>  X can be Phe or Tyr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (98)..(98)
<223>  X can be Ser or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (105)..(105)
<223>  X can be Glu or Thr
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (106)..(106)
<223>  X can be Phe or Leu
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (109)..(109)
<223>  X can be Pro or Gly
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (110)..(110)
<223>  X can be Leu or Phe
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<222>  (111)..(111)
<223>  X can be Asn or Tyr
<400>  61
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Xaa Pro Gly Glu 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Xaa Phe Thr Xaa Tyr 
20                  25                  30          
Trp Ile Xaa Trp Val Arg Gln Xaa Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Ile Ile Xaa Pro Xaa Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 
50                  55                  60                  
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Xaa Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Xaa Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Xaa His Arg Leu Trp Leu Gly Xaa Xaa Pro Gly Xaa Xaa Xaa Ile 
100                 105                 110         
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
115                 120             
<210>  62
<211>  8
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  FLAG (registered trademark) Peptide
<400>  62
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
1               5               
<210>  63
<211>  321
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  63
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc       60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca acagaaacca      120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccaatt tggaaagtgg ggtcccatca      180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct      240
gaagattttg caaattacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtggac gttcggccaa      300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                                321
<210>  64
<211>  354
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  64
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc       60
tcctgcaagg tttccggata caccctcagt gatttatcca tccactgggt gcgacaggct      120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctc aagatggtga aacaatctac      180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac      240
atggagctga gcagcctgaa atctgaggac acggccgtgt attactgcgc aacggggagc      300
agctcgtcct ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc tagt            354
<210>  65
<211>  324
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  65
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctcccgggga aagagccacc       60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcaacttag tctggtatca gcagaaacct      120
ggccaggctc ccaggctcct catttatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc      180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct      240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcaa tatgatgact ggcctccgct cactttcggc      300
ggagggacca cggtggagat caaa                                             324
<210>  66
<211>  360
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  66
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc       60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct      120
ccagggaagg ggctggagtg gctttcatac attagtaata gtggtagtgc catgtactac      180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaggaa ctcactgtat      240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt actactgtgc gagagagtat      300
agcagtggct ggttcttctt tgagtcctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctctagt      360
<210>  67
<211>  321
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  67
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtttgcat ctgtaggaga cagagtcacc       60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca      120
gggaaagccc ctaatctcct gatctatggt gcatccagtt tacaaaatgg ggtcccatta      180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct      240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtggac gttcggccaa      300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                                321
<210>  68
<211>  354
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  68
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc       60
tcctgcaagg tttccggata caccgtcact gatttatcca tgcactgggt gcgacaggct      120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctc aagatggtga aacaatctac      180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac      240
atggagctga gaagcctgag atctgaggac acggccgtat attactgtac aacagaaagc      300
agctcggcct ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc tagt            354
<210>  69
<211>  324
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  69
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct       60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag      120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac      180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag      240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag      300
agcttcaaca ggggagagtg ttga                                             324
<210>  70
<211>  107
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  70
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
1               5                   10                  15      
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
20                  25                  30          
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
35                  40                  45              
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
50                  55                  60                  
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
65                  70                  75                  80  
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
85                  90                  95      
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
100                 105         
<210>  71
<211>  981
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
<400>  71
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag       60
agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg      120
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca      180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc      240
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc      300
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc      360
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc      420
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc      480
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt      540
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc      600
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg      660
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac      720
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg      780
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac      840
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac      900
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc      960
tccctgtctc cgggtaaatg a                                                981
<210>  72
<211>  326
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  72
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
1               5                   10                  15      
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
20                  25                  30          
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
35                  40                  45              
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
50                  55                  60                  
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 
65                  70                  75                  80  
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
85                  90                  95      
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
100                 105                 110         
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 
115                 120                 125             
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 
130                 135                 140                 
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 
145                 150                 155                 160 
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 
165                 170                 175     
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 
180                 185                 190         
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 
195                 200                 205             
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 
210                 215                 220                 
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 
225                 230                 235                 240 
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 
245                 250                 255     
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 
260                 265                 270         
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 
275                 280                 285             
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 
290                 295                 300                 
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 
305                 310                 315                 320 
Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
325     
【手続補正書】
【提出日】平成26年4月4日(2014.4.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３２由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号４由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する、単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項２】
軽鎖可変領域が配列番号４に少なくとも９０％同一であり、そして重鎖可変領域が配列番号３２に少なくとも９０％同一である、請求項１のヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項３】
軽鎖可変領域が配列番号４を含み、そして重鎖可変領域が配列番号３２を含み、ここにおいて、Ｎ末端のアミノ酸がピログルタミン酸に変換されている、請求項２のヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項４】
さらに軽鎖定常領域および重鎖定常領域を含む、請求項１〜３のいずれか１項の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項５】
軽鎖定常領域がカッパ型軽鎖定常領域であり；
そして重鎖定常領域が：
ａ’）ＩｇＤ抗体由来の定常領域；
ｂ’）ＩｇＥ抗体由来の定常領域；
ｃ’）ＩｇＭ抗体由来の定常領域；
ｄ’）ＩｇＧ１抗体由来の定常領域；
ｅ’）ＩｇＧ２抗体由来の定常領域；
ｆ’）ＩｇＧ３抗体由来の定常領域；
ｇ’）ＩｇＧ４抗体由来の定常領域；および
ｈ’）ヒンジ領域中に、Ｈ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を軽減させる、少なくとも１つの突然変異を有する、ＩｇＧ４抗体由来の定常領域；
からなる群より選択される、請求項４の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項６】
軽鎖定常領域が：
ａ）配列番号７０を含むポリペプチド；
ｂ）配列番号７０に少なくとも９０％同一であるポリペプチド；
ｃ）１以上の翻訳後修飾を取り込む、ａ）のポリペプチド；ならびに
ｄ）１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸が取り除かれている、配列番号７０に示すようなアミノ酸配列を有するポリペプチド
からなる群より選択され、
そして重鎖定常領域が：
ａ’）配列番号７２を含むポリペプチド；
ｂ’）配列番号７２に少なくとも９０％同一であるポリペプチド；
ｃ’）１以上の翻訳後修飾を取り込む、ａ’）のポリペプチド；ならびに
ｄ’）１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸が取り除かれている、配列番号７２に示すようなアミノ酸配列を有するポリペプチド
からなる群より選択される、請求項４の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項７】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質であって、ここにおいて、重鎖可変領域は配列番号３２をコードする核酸によってコードされ、そして、軽鎖可変領域は配列番号４をコードする核酸によってコードされる、前記単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項８】
重鎖可変領域をコードする核酸が配列番号６８を含み、軽鎖可変領域をコードする核酸が配列番号６７を含む、請求項７の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項９】
さらに軽鎖定常領域および重鎖定常領域を含む、ここにおいて、軽鎖定常領域は配列番号７０をコードする核酸によってコードされ、そして、重鎖定常領域は配列番号７２をコードする核酸によってコードされる、請求項７又は８の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１０】
重鎖定常領域が配列番号６９を含む核酸によってコードされ、そして、軽鎖定常領域が配列番号７１を含む核酸によってコードされる、請求項９の単離されたアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項のタンパク質、および生理学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーを含む、組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項のタンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項１３】
請求項１２の核酸を含むベクター。
【請求項１４】
請求項１３のベクターでトランスフェクションまたは形質転換されている、単離された宿主細胞。
【請求項１５】
発現を促進する条件下で請求項１４の宿主細胞を培養し、そして培地からタンパク質を回収することを含む、抗原結合タンパク質を産生するための方法。
【請求項１６】
アルファ４ベータ７の少なくとも１つの活性を阻害するインビトロの方法であって、アルファ４ベータ７を発現している細胞と、請求項１〜１０のいずれか１項記載のタンパク質とを、ＭＡｄＣＡＭ−１への細胞の接着が部分的にまたは完全に阻害されるように、接触させることを含む、前記方法。
【請求項１７】
アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現する細胞を含む組織に輸送されるのを阻害するインビトロの方法であって、アルファ４ベータ７を発現している細胞と、請求項１〜１０のいずれか１項記載のアルファ４ベータ７ヘテロ二量体特異的抗原結合タンパク質とを、ＭＡｄＣＡＭ−１への細胞の接着が部分的にまたは完全に阻害されるように、接触させることを含む、前記方法。
【請求項１８】
アルファ４ベータ７を発現している細胞が、ＭＡｄＣＡＭ−１を発現している細胞を含む組織に不適切に輸送されることによって特徴付けられる状態に罹患している個体を治療するための、請求項１１の組成物。
【請求項１９】
状態が炎症性腸疾患である、請求項１８の組成物。
【請求項２０】
状態が、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清陰性関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的またはコラーゲン性大腸炎、好酸球性胃腸炎、ならびに直腸結腸切除術および回腸肛門吻合術後に生じる嚢炎からなる群より選択される、請求項１９の組成物。
【請求項２１】
状態が、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息および移植片対宿主病からなる群より選択される、請求項１８の組成物。