(57)【要約】      （修正有）【課題】急性肺損傷、好ましくは急性呼吸促迫症候群の予防および／または治療のための、ペプチド性または非ペプチド性アンジオテンシン−（１−７）（Ａｎｇ−（１−７））レセプターアゴニストを提供する。【解決手段】７個の特定のアミノ酸配列を含むペプチド性アゴニスト、または非ペプチド性アゴニストであるＭａｓレセプターアゴニストに関する。更にペプチド性アゴニストが、外因性または内因性ＮｏｒＡｎｇ−（１−７）ペプチドであるか、外因性または内因性ＡｎｇＩＶペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体であるレセプターアゴニストを提供。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における急性肺損傷の予防および／または治療において使用するためのＡｎｇ−（１−７）レセプターアゴニスト。
【請求項２】
前記レセプターアゴニストがＭａｓレセプターアゴニストである、請求項１記載のレセプターアゴニスト。
【請求項３】
前記レセプターアゴニストがペプチド性または非ペプチド性アゴニストである、請求項１または２記載のレセプターアゴニスト。
【請求項４】
前記ペプチド性アゴニストが、配列番号１記載のアミノ酸配列を含む外因性または内因性Ａｎｇ−（１−７）ペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である、請求項３記載のレセプターアゴニスト。
【請求項５】
前記ペプチド性アゴニストが、配列番号２、配列番号３または配列番号４記載のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項３記載のレセプターアゴニスト。
【請求項６】
前記ペプチド性アゴニストが、配列番号５記載のアミノ酸配列を含む外因性または内因性ＮｏｒＡｎｇ−（１−７）ペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である、請求項３記載のレセプターアゴニスト。
【請求項７】
前記ペプチド性アゴニストが、配列番号６記載のアミノ酸配列を含む外因性または内因性ＡｎｇＩＶペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である、請求項３記載のレセプターアゴニスト。
【請求項８】
前記ペプチド性アゴニストが、配列番号７記載のアミノ酸配列を含む外因性または内因性ＡｎｇＩＩＩペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である、請求項３記載のレセプターアゴニスト。
【請求項９】
非ペプチド性アゴニストが、１−（ｐ−チエニルベンジル）イミダゾール化合物の群から選択され、好ましくはＡｖｅ０９９１である、請求項３記載のレセプターアゴニスト。
【請求項１０】
急性肺損傷が急性呼吸促迫症候群である、請求項１〜９のいずれか記載のレセプターアゴニスト。
【請求項１１】
急性肺損傷が肺内または肺外肺損傷に関連する、請求項１〜１０記載のレセプターアゴニスト。
【請求項１２】
肺内肺損傷が、吸入性外傷、誤嚥性外傷、中毒性肺水腫、肺感染、好ましくは肺炎、肺挫傷、および塞栓症からなる群より選択される、請求項１１記載のレセプターアゴニスト。
【請求項１３】
肺外肺傷害が、敗血症、多発性外傷、ショック、火傷、急性膵炎、薬物中毒、アルコール依存症、慢性肺疾病、大量輸血、播種性血管内凝固症候群、紅斑、および自己免疫性肺疾病からなる群より選択される疾患に関連する、請求項１１記載のレセプターアゴニスト。
【請求項１４】
被験体が、哺乳動物、好ましくはヒト、最も好ましくは成人ヒトである、請求項１〜１３のいずれか記載のレセプターアゴニスト。
【請求項１５】
被験体における急性肺損傷の予防および／または治療において使用するための請求項１〜１４のいずれか記載のＡｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性肺損傷、好ましくは急性呼吸促迫症候群の予防および／または治療のための、ペプチド性または非ペプチド性アンジオテンシン−（１−７）（Ａｎｇ−（１−７））レセプターアゴニスト、好ましくはＭａｓレセプターアゴニストに関する。
【０００２】
発明の背景
８６．２／１００，０００人／年の年齢調整罹患率および約４３％の全死亡率を有する、急性肺損傷（ＡＬＩ）およびその最も重篤な形態である急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）は、依然として集中治療における死亡の主要な原因である（１、２）。前記疾病の病理学的な特徴としては、びまん性肺胞毛細血管損傷、および強い炎症応答に関連した肺透過性亢進が挙げられる（３、４）。これらの変化は、急性発症、重度の低酸素血症およびタンパク質性肺水腫によって特徴付けられる臨床症状の基礎をなす。グルココルチコイド、ケトコナゾール、リソフィリン、アルプロスタジル、吸入ＮＯまたは補充サーファクタントを使用するなどの、種々の治療方針の可能性を探索するための多数の大規模多施設臨床試験にも関わらず（５−７）、治療的薬理学的介入はこれまでＡＬＩ／ＡＲＤＳの臨床転帰を改善できなかった。これまでに、ＡＲＤＳ患者の生存のための唯一の明白な改善は、以前に使用された高い１回換気量と比較して低い１回換気量での最小限の侵襲的な換気方針の実施によって達成された（８）。
【０００３】
近年の実験研究において、Imaiおよび共同研究者は、１個のアミノ酸の切断によってＡｎｇＩＩをＡｎｇ−（１−７）へ変換するアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）が、酸誤嚥または敗血症によって誘発される重度の急性肺損傷からマウスを防御することを実証することができた（９）。著者らは、この所見を、ＡＣＥ２がＡｎｇＩＩ濃度を減少させ、従って、ＡｎｇＩＩ １型レセプター（ＡＴ１）の活性化を低下させるという事実に起因すると考えた。この考えは、種々の形態の実験的な急性肺損傷の処置のためのＡＴ１レセプター遮断剤またはＡＣＥ阻害剤の効力を実証する一連の研究のきっかけとなった（１０−１３）。
【０００４】
しかしながら重要なことには、ＡＣＥ２によるＡｎｇＩＩの切断産物であるＡｎｇ−（１−７）はアンジオテンシン経路の不活性な不要産物ではなく、活性な生物学的機能を発揮し得る。Ａｎｇ−（１−７）は、Ｇタンパク質共役レセプターＭａｓ（１４）および潜在的に他のレセプターに結合し、Ａｎｇ−（１−７）はＡＴ１ａレセプターの生理的アンタゴニストであるようである（１５）。従って、Ａｎｇ−（１−７）のそのレセプター（群）への結合は、ＡＬＩ／ＡＲＤＳの病態に対する、以前に実証された有益なアンジオテンシン経路への介入効果に決定的に寄与し得る。
【０００５】
特許US 6,235,766は、Ａｇｎ−（１−７）レセプターの非ペプチド性アゴニストに関し、特に、Ａｎｇ−（１−７）レセプターに対して顕著な作用を有し、そしてエフェクターホルモンＡｎｇ−（１−７）の生物学的作用を模倣する、１−（ｐ−チエニルベンジル）イミダゾールを開示する。
【０００６】
国際特許出願WO 2006/128266は、生殖系の機能の制御に関する、ＭａｓレセプターとＡｎｇ−（１−７）またはその類似体との相互作用に関する。
【０００７】
国際特許出願WO 2007/000036は、アポトーシス活性モデュレーターとしてのペプチド性または非ペプチド性Ｍａｓレセプターアゴニストおよびアンタゴニストの使用に関する。
【０００８】
国際特許出願WO 2007/121546は、代謝症候群またはその合併症の臨床徴候に関連する代謝活性をモデュレーションするためのペプチド性または非ペプチド性Ｍａｓレセプターアゴニストの使用に関する。
【０００９】
本発明者らは、Ａｎｇ−（１−７）または関連アゴニストが、ＡＬＩ／ＡＲＤＳの処置のための新規の有望な方針を示し得ると推測した。従って、本発明の目的は、ＡＬＩ／ＡＲＤＳの原因となる病態生理学的事象における薬理学的介入のための手段および方法を提供することである。
【００１０】
発明の要約
本発明の目的は、被験体における急性肺損傷の予防および／または治療に使用するためのＡｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストによって解決される。
【００１１】
本発明の目的は、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストを使用する、被験体における急性肺損傷の予防および／または治療のための方法によって解決される。
【００１２】
本発明の目的は、被験体における急性肺損傷の予防および／または治療のための医薬組成物の調製のためのＡｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストの使用によってさらに解決される。
【００１３】
本発明の目的は、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストを被験体に投与することによる、急性肺損傷の予防および／または治療の方法によってさらに解決される。
【００１４】
１つの実施態様において、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストはＭａｓレセプターアゴニストである。
【００１５】
１つの実施態様において、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストは、ＭａｓレセプターまたはＭａｓレセプターに関連するレセプターと相互作用する。
【００１６】
１つの実施態様において、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストは、Ｍａｓレセプターと物理的に相互作用するレセプターを刺激する。
【００１７】
１つの実施態様において、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストは、Ｍａｓレセプターと共通の薬理学的類似性を有するレセプターを刺激する。
【００１８】
１つの実施態様において、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストは、Ａｎｇ−（１−７）ペプチドと共通の構造的類似性を有するＡｎｇＩＩ代謝物である。
【００１９】
１つの実施態様において、レセプターアゴニストはペプチド性または非ペプチド性アゴニストである。
【００２０】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号１記載のアミノ酸配列Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile5-His6-Pro7を含む外因性または内因性Ａｎｇ−（１−７）ペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００２１】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、Ａｎｇ−（１−７）ペプチドの誘導体または類似体であり、前記誘導体または類似体は、アミノ酸の置換、欠失または挿入を含む。好ましくは、前記誘導体または類似体は、保存されたまたはより良好なアゴニスト特性を有する。
【００２２】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、Ａｎｇ−（１−７）ペプチドの誘導体または類似体であり、前記誘導体または類似体は、配列番号２記載のアミノ酸配列Asp1-Arg2-Val3-Ser4-Ile5-His6-Pro7、配列番号３記載のAsp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile5-His6-Cys7、または配列番号４記載のAsp1-Arg2-Val3-Ser4-Ile5-His6-Cys7を含む。
【００２３】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号２、配列番号３または配列番号４記載のアミノ酸配列を含むペプチドである。
【００２４】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号５記載のアミノ酸配列Asp1-Arg2-NorLeu3-Tyr4-Ile5-His6-Pro7を含む外因性または内因性ＮｏｒＬｅｕ３−Ａｎｇ−（１−７）ペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００２５】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号６記載のアミノ酸配列Val1-Tyr2-Ile3-His4-Pro5-Phe6を含む外因性または内因性ＡｎｇＩＶペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００２６】
１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号７記載のアミノ酸配列Arg1-Val2-Tyr3-Ile4-His5-Pro6-Phe7を含む外因性または内因性ＡｎｇＩＩＩペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００２７】
１つの実施態様において、非ペプチド性アゴニストは、１−（ｐ−チエニルベンジル）イミダゾール化合物の群から選択され、そして好ましくはＡｖｅ０９９１（すなわち、５−ホルミル−４−メトキシ−２−フェニル−１−［［４−［２−（エチルアミノカルボニルスルホンアミド）−５−イソブチル−３−チエニル］フェニル］メチル］−イミダゾール）である。
【００２８】
１つの実施態様において、急性肺損傷は急性呼吸促迫症候群である。
【００２９】
１つの実施態様において、急性肺損傷は、肺内（直接的）または肺外（間接的）肺損傷に関連する。
【００３０】
１つの実施態様において、肺内肺損傷は、吸入性外傷、誤嚥性外傷、中毒性肺水腫、肺感染、好ましくは肺炎、肺挫傷、および塞栓症からなる群より選択される。
【００３１】
１つの実施態様において、肺外肺傷害は、敗血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多発性外傷、ショック、火傷、急性膵炎、薬物中毒、アルコール依存症、慢性肺疾病、大量輸血、播種性血管内凝固症候群、紅斑、および自己免疫性肺疾病からなる群より選択される疾患に関連する。
【００３２】
１つの実施態様において、被験体は、哺乳動物、好ましくはヒト、最も好ましくは成人ヒトである。
【００３３】
本発明の目的は、被験体における急性肺損傷の予防および／または治療において使用するためのＡｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストを含む医薬組成物によってさらに解決される。
【００３４】
本発明の目的は、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストを含む医薬組成物を使用する被験体における急性肺損傷の予防および／または治療のための方法によってさらに解決される。
【００３５】
医薬組成物の１つの実施態様において、Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストはＭａｓレセプターアゴニストである。
【００３６】
医薬組成物の１つの実施態様において、レセプターアゴニストはペプチド性または非ペプチド性アゴニストである。
【００３７】
医薬組成物の１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号１記載のアミノ酸配列を含むＡｎｇ−（１−７）ペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００３８】
医薬組成物の１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号２、配列番号３、または配列番号４記載のアミノ酸配列を含むペプチドである。
【００３９】
医薬組成物の１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号５記載のアミノ酸配列を含むペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００４０】
医薬組成物の１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号６記載のアミノ酸配列を含むＡｎｇＩＶペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００４１】
医薬組成物の１つの実施態様において、ペプチド性アゴニストは、配列番号７記載のアミノ酸配列を含むＡｎｇＩＩＩペプチドであるか、あるいはその誘導体または類似体である。
【００４２】
医薬組成物の１つの実施態様において、非ペプチド性アゴニストは、１−（ｐ−チエニルベンジル）イミダゾール化合物の群から選択され、そして好ましくは、Ａｖｅ０９９１（すなわち、５−ホルミル−４−メトキシ−２−フェニル−１−［［４−［２−（エチルアミノカルボニルスルホンアミド）−５−イソブチル−３−チエニル］フェニル］メチル］イミダゾール）である。
【００４３】
医薬組成物の１つの実施態様において、急性肺損傷は急性呼吸促迫症候群である。
【００４４】
医薬組成物の１つの実施態様において、急性肺損傷は、肺内（直接的）または肺外（間接的）肺損傷に関連する。
【００４５】
医薬組成物の１つの実施態様において、肺内肺損傷は、吸入性外傷、誤嚥性外傷、中毒性肺水腫、肺感染、好ましくは肺炎、肺挫傷、および塞栓症からなる群より選択される。
【００４６】
医薬組成物の１つの実施態様において、肺外肺傷害は、敗血症、多発性外傷、ショック、火傷、急性膵炎、薬物中毒、アルコール依存症、慢性肺疾病、大量輸血、播種性血管内凝固症候群、紅斑、および自己免疫性肺疾病からなる群より選択される疾患に関連する。
【００４７】
医薬組成物の１つの実施態様において、被験体は哺乳動物、好ましくはヒト、最も好ましくは成人ヒトである。
【００４８】
１つの実施態様において、医薬組成物は、非経口投与または経腸投与用に、好ましくは吸入、注入または注射の経路による非経口投与用に製剤化される。経口、筋肉内、静脈内、皮下、局所、経皮、直腸、膣内、肺内、鼻腔内、口腔内、または舌下投与用に製剤化された医薬組成物も考えられる。
【００４９】
１つの実施態様において、医薬組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、スプレー剤、エアゾール剤、リポソーム組成物、軟膏、坐剤、インプラント、プラスター、または遅延放出製剤として製剤化される。
【００５０】
１つの実施態様において、医薬組成物は、１つ以上の薬理学的に不活性で薬学的に許容される賦形剤、例えばポリマー担体、崩壊剤、潤滑剤、溶剤、または膨潤剤をさらに含む。
【００５１】
「レセプターアゴニスト」という用語は、レセプターを活性化することのできる、すなわちレセプター応答を誘発することのできる物質をいう。「Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニスト」という用語は、Ａｎｇ−（１−７）によっても活性化されるレセプターを活性化することのできる物質をいう。「Ｍａｓレセプターアゴニスト」という用語はＧタンパク質共役Ｍａｓレセプターを活性化することのできる物質をいう。適切なレセプター応答として、レセプターの下流にある直接的または間接的（Ｍａｓと物理的に相互作用するレセプターに因り）Ｇタンパク質媒介シグナル伝達カスケードが開始され、結果として、例えばアラキドン酸の放出、ＰＧＩ２の形成、ＮＯの形成、および／またはｃＧＭＰの生成が起こる。
【００５２】
Ａｎｇ−（１−７）のシグナル伝達はＡ７７９（[D-Ala7-Ang-(1-7); Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile5-His6-D-Ala7、配列番号８）および／またはD-Pro7-Ang-(1-7) (Asp1-Arg2-Val3-Tyr4-Ile5-His6-D-Pro7、配列番号９）によって遮断されるので、Ａｎｇ−（１−７）アゴニストのさらなる特徴は、Ａ７７９および／またはD-Pro7-Ang-(1-7)によるその効果の阻害である。さらなる非競合的または競合的な阻害剤も考えられる。
【００５３】
「ペプチド性アゴニスト」という用語は、１つ以上のペプチド結合を含む化合物をいう。この用語は、純粋なペプチド構造、すなわち２つ以上のアミノ酸から構成されるペプチドからなる化合物、並びに、ペプチド性および非ペプチド性構造を含む化合物を包含する。
【００５４】
「非ペプチド性アゴニスト」という用語は、ペプチド結合を含まない化合物をいう。好ましくは、このような化合物は低分子量、すなわち小分子である。
【００５５】
「誘導体」という用語は、構造の改変によって、例えば１つの原子もしくは原子群または官能基を別の原子もしくは原子群または官能基を用いて置換することによって別の化合物とは異なる化合物を意味する。
【００５６】
「類似体」という用語は、構造または機能が別の化合物と類似している化合物を意味する。
【００５７】
「外因性Ａｎｇ−（１−７）」という用語は、処置しようとする被験体の体外において産生され、そして外部から取り込まれる、Ａｎｇ−（１−７）を意味する。しかしながら、これは、Ａｎｇ−（１−７）が、例えば処置しようとしないトランスジェニック動物において産生されることも包含する。一般に考えられるのは、生合成または従来の研究室での合成、例えば固相合成によって産生されるＡｎｇ−（１−７）である。
【００５８】
「内因性Ａｎｇ−（１−７）」という用語は、Ａｎｇ−（１−７）が処置しようとする被験体の体内で内因的に産生されることを意味する。Ａｎｇ−（１−７）の（増加した）内因性産生は、例えば、ＡＣＥ２を薬理学的に活性化することによる、ＡＴ１ａレセプターを遮断することによる、またはＡＰＡによるＡｎｇＩＩからＡｎｇＩＩＩへの分解を阻害することによる、ＡｎｇＩＩからの生成の刺激の結果であり得る。同様に、内因性Ａｎｇ−（１−７）の産生を、ＮＥＰによるＡｎｇＩからの生成を刺激することによって増加させることができる。（増加した）内因性産生はまた、例えば、ＡＣＥ２、または直接的にＡｎｇ−（１−７）もしくはその前駆体の１つを生成する構築物を過剰発現させることによる、遺伝子治療介入の結果であり得る。内因的に産生されたＡｎｇ−（１−７）の濃度上昇はまた、例えば、Ａｎｇ−（１−７）をＡｎｇ−（１−５）に分解するＡＣＥの薬理学的阻害によるＡｎｇ−（１−７）の分解減少から生じ得る。
【００５９】
組換えまたは過剰発現ＡＣＥ２は、ＡｎｇＩＩからの変換を刺激することによって、直接的にＡｎｇ−（１−７）の濃度を上昇させる。ＡＣＥ阻害剤はＡｎｇ−（１−５）へのＡｎｇ−（１−７）の分解を減少させ、一方、ＡＴ１ａレセプター遮断剤は、ＡＣＥ２基質利用能を増加させることによってＡｎｇ−（１−７）レベルを増加させる。
【００６０】
さらに考えられるのは、Ａｎｇ−（１−７）ペプチド配列または化学構造を含む分子、例えばペプチドまたはタンパク質である。
【００６１】
「急性肺損傷」（ＡＬＩ）および「急性呼吸促迫症候群」（ＡＲＤＳ）は、敗血症、肺炎、外傷および／または誤嚥によって最も頻繁に引き起こされる肺の炎症疾患である。炎症は肺に局所的に限定され肺炎症は、全身性炎症プロセスの一部であり得る。ＡＬＩおよびＡＲＤＳは、低酸素血症、および左房圧の上昇がない状況における胸部Ｘ線上でのびまん性浸潤によって特徴付けられる。ＡＬＩおよびＡＲＤＳは低酸素血症の程度のみが異なっており、ＡＬＩは、吸入酸素分画に対する動脈血中酸素分圧の比（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）が３００未満、ＡＲＤＳはＰａＯ２／ＦｉＯ２が２００未満として定義される（１６）。診断は、臨床症状、ＡＢＧ（動脈血ガス分析）および画像解析による。処置は、肺保護性の低１回換気量の人工換気、支持療法、および根本原因の処置を用いる。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１（Ａ）】図１は、オレイン酸により誘発された急性肺損傷における、肺ＭＰＯ活性（図１（Ａ））、湿重量と乾燥重量の比（図１（Ｂ））、平均動脈圧（図１（Ｃ））、および肺血管抵抗（図１（Ｄ））に及ぼすＡｎｇ−（１−７）および非ペプチド性Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストＡＶＥ０９９１の効果を示す。全てのデータが、各々ｎ＝６の動物からの平均±ＳＥＭである；＊ｐ＜０．０５ｖｓ対照；#ｐ＜０．０５ｖｓＯＡ。
【図１（Ｂ）】図１は、オレイン酸により誘発された急性肺損傷における、肺ＭＰＯ活性（図１（Ａ））、湿重量と乾燥重量の比（図１（Ｂ））、平均動脈圧（図１（Ｃ））、および肺血管抵抗（図１（Ｄ））に及ぼすＡｎｇ−（１−７）および非ペプチド性Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストＡＶＥ０９９１の効果を示す。全てのデータが、各々ｎ＝６の動物からの平均±ＳＥＭである；＊ｐ＜０．０５ｖｓ対照；#ｐ＜０．０５ｖｓＯＡ。
【図１（Ｃ）】図１は、オレイン酸により誘発された急性肺損傷における、肺ＭＰＯ活性（図１（Ａ））、湿重量と乾燥重量の比（図１（Ｂ））、平均動脈圧（図１（Ｃ））、および肺血管抵抗（図１（Ｄ））に及ぼすＡｎｇ−（１−７）および非ペプチド性Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストＡＶＥ０９９１の効果を示す。全てのデータが、各々ｎ＝６の動物からの平均±ＳＥＭである；＊ｐ＜０．０５ｖｓ対照；#ｐ＜０．０５ｖｓＯＡ。
【図１（Ｄ）】図１は、オレイン酸により誘発された急性肺損傷における、肺ＭＰＯ活性（図１（Ａ））、湿重量と乾燥重量の比（図１（Ｂ））、平均動脈圧（図１（Ｃ））、および肺血管抵抗（図１（Ｄ））に及ぼすＡｎｇ−（１−７）および非ペプチド性Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストＡＶＥ０９９１の効果を示す。全てのデータが、各々ｎ＝６の動物からの平均±ＳＥＭである；＊ｐ＜０．０５ｖｓ対照；#ｐ＜０．０５ｖｓＯＡ。
【００６３】
実施例
動物。実験を、体重（ｂｗ）が３３０〜３６０ｇの雌Sprague-Dawleyラット（Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Germany）を用いて行なった。動物は、実験動物の管理と使用に関する指針（Institute of Laboratory Animal Resources, 7th edition 1996）に従って管理した。研究は、地方の実験動物管理使用委員会によって認可された。
【００６４】
外科的準備および血行動態モニタリング。ラットに、以前に記載されているように（１７）、メデトミジン（０．５mg/kg bw、ドミトール（登録商標）、Dr. E. Graeub AG、Basel、Switzerland）、フェンタニル（０．０５mg/kg bw、JanssenCilag、Neuss、Germany）およびミダゾラム（５mg/kg bw、ドルミカム（登録商標）、Roche、Basel、Switzerland）を腹腔内注射することによって麻酔をかけた。気管切開術後、気管にカニューレを挿入し、８０呼吸／分で６ml/kg bwの１回換気量で換気を確立した（Advanced Animal Respirator, TSE Systems GmbH, Bad Homburg, Germany）。カテーテル（内径０．５８mm；Sims Portex Ltd., Hythe, United Kingdom）を、以前に記載のように（１８）、動脈圧（ＡＰ）、補液および薬物送達をモニタリングするために、左頸動脈および右内頸静脈に導入した。超音波血流計プローブ（Transonic（登録商標）、Transonic Systems Inc., Ithaca, UY）を、心拍出量（ＣＯ）の連続的モニタリングのために、冠動脈分岐から遠位の上行大動脈の周囲に配置した。正中開胸術後、肺動脈圧（ＰＡＰ）の測定のために、カテーテルを右心室を介して肺動脈に導入した。ＡＰ、ＰＡＰおよびＣＯをソフトウェアパッケージDasyLab 32（DasyLab, Moenchengladbach, Germany）によって連続的に記録した。肺血管抵抗（ＰＶＲ）を、２mmHgの一定した左心房圧の仮定の下で、流速に対する動静脈圧の差として計算した。
【００６５】
実験群およびプロトコール。ラットを各６匹の動物の４つの群に無作為に割り当てた。第１群（対照）の動物は全く薬理学的介入を受けなかった。第２群（ＯＡ）においては、いかなる処置も行わず、０．２mg/kgのオレイン酸（Sigma, Munich, Germany）を３０分間かけて静脈内注入することによってＡＬＩを誘発した。第３群（ＯＡ＋Ａｎｇ−（１−７））においては、ＡＬＩを第ＩＩ群のように誘発させ、そして５pmol/kg/分でＡｎｇ−（１−７）の注入を、ＡＬＩ誘発直後に開始した。第４群（ＯＡ＋ＡＶＥ０９９１）においては、ＡＬＩを第ＩＩ群のように誘発させ、そして５００pmol/kg/分でＡＶＥ０９９１の注入をＡＬＩ誘発直後に開始した。ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性のみを測定した各々ｎ＝６の２つの追加の群において、Ａｎｇ−（１−７）レセプター遮断剤のＡ７７９（１０pmol/kg/分）の注入を、単独で（第５群）またはＡｎｇ−（１−７）と組み合わせて（５pmol/kg/分；第６群）、ＡＬＩの誘発直後に開始した。
【００６６】
外科的準備および少なくとも１５分間におよぶ血行動態安定化後、基線の血行動態を記録し、そして動脈血ガスを分析した（RapidLab 348; Chiron Diagnostics GmbH, Fernwald, Germany）。取り出した血液量を、ヒドロキシエチルデンプン（６％ヒドロキシエチルデンプン200/0.6; Fresenius, Bad Homburg, Germany）によって置換した。基線記録後直ちに、第ＩＩ群〜第ＶＩ群においては０．２mg/kgのオレイン酸を、または第Ｉ群においては等容量の０．９％ＮａＣｌを３０分間かけて静脈内に注入した。全群において、合計４時間まで６０分間間隔で測定を繰り返し、４時間後の時点で動物を放血によって殺滅した。in situにおける右主気管支の結紮後、肺を切り出し、そして以下に記載するように湿重量と乾燥重量の比およびミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の決定のために処理した。
【００６７】
肺水分および炎症応答の評価。肺含水量の決定のために、湿重量と乾燥重量の比を、マイクロ波乾燥技法を使用して測定した（１８）。炎症細胞の補充を、以前に記載のように肺ホモジネート中のＭＰＯ活性を測定して分析した（１９）。簡潔に述べると、ＭＰＯ活性を、３，３’−５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）に基づいた分光光アッセイによって決定し、適切な標準曲線と比較し、そして肺組織１ｇあたりの単位（Ｕ/ｇ）として表した。
【００６８】
統計学的分析。全てのデータを平均±ＳＥＭとして提示する。データは群間での差異についてのクラスカル・ウォリス検定によって試験した。統計学的有意をＰ＜０．０５と推定した。
【００６９】
結果。オレイン酸は、ＭＰＯ活性（図１（Ａ））、肺の湿重量と乾燥重量の比（図１（Ｂ））、および肺血管抵抗（図１（Ｄ））の増加によって特徴付けられるようにＡＬＩを誘発したが、一方、全身性動脈圧は対照と比較して４時間後に減少した（図１（Ｃ））。Ａｎｇ−（１−７）は、Ａｎｇ−（１−７）の注入が、肺の湿重量と乾燥重量の比、ＭＰＯ活性および肺血管抵抗においてＯＡ誘発変化を消失させたという事実によって示されるように、ＯＡ誘発ＡＬＩの発症を完全に予防した。Ａｎｇ−（１−７）の防御作用は、明らかに全身血管におけるその記載された血管拡張作用に起因するのではなかった。なぜなら、Ａｎｇ−（１−７）の注入は、ＯＡの注入されたラットにおいて全身性低血圧を減弱させたからである。非ペプチド性Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストであるＡＶＥ０９９１は、ＯＡ誘発ＡＬＩを同じように減弱させた。第４群および第５群における追加のＭＰＯ分析は、Ａ７７９によるＭａｓレセプターの遮断がＯＡ誘発ＡＬＩを悪化させ、そしてＡｎｇ−（１−７）の注入の救出作用を遮断することを示す。
【００７０】
結論。本所見は、Ａｎｇ−（１−７）または非ペプチド性Ａｎｇ−（１−７）レセプターアゴニストの注入が、オレイン酸誘発ＡＬＩ実験モデルにおける肺水腫および肺炎症を完全に予防することを示す。この防御作用は、Ｇタンパク質共役レセプターＭａｓを介して媒介される。なぜなら、その防御作用はＡ７７９によるＭａｓの遮断後に消失するからである。内因的に形成されたＡｎｇ−（１−７）は、ＡＬＩに対して内在的な防御機序として作用し、ＡＬＩはＡ７７９によるＭａｓの遮断後に悪化する。
【００７１】
【表１】
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【図１（Ａ）】
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【図１（Ｂ）】
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【図１（Ｃ）】
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【図１（Ｄ）】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年1月10日(2014.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドを含む、急性肺損傷の予防及び／又は治療のための医薬組成物。
【請求項２】
急性肺損傷が肺内または肺外肺損傷に関連する、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
肺内肺損傷が、吸入性外傷、誤嚥性外傷、中毒性肺水腫、肺感染、好ましくは肺炎、肺
挫傷、および塞栓症からなる群より選択される、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
肺外肺傷害が、敗血症、多発性外傷、ショック、火傷、急性膵炎、薬物中毒、アルコー
ル依存症、慢性肺疾病、大量輸血、播種性血管内凝固症候群、紅斑、および自己免疫性肺
疾病からなる群より選択される疾患に関連する、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項５】
被験体が、哺乳動物、好ましくはヒト、最も好ましくは成人ヒトである、請求項１〜４のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項６】
経口、筋肉内、静脈内、皮下、局所、経皮、直腸、膣内、肺内、鼻腔内、口腔内、または舌下投与用に製剤化された、請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項７】
経口投与用に製剤化された、請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項８】
静脈内投与用に製剤化された、請求項１〜７のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項９】
錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、スプレー剤、エアゾール剤、リポソーム組成物、軟膏、坐剤、インプラント、プラスター、または遅延放出製剤として製剤化された、請求項１〜８のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ポリマー担体、崩壊剤、潤滑剤、溶剤、または膨潤剤から選択される１つ以上の薬理学的に不活性で薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2014074048000001.pdf