(57)【要約】      （修正有）【課題】優れたＡβ凝集阻害作用を有し、医薬として有用な新たな化合物の提供。【解決手段】次式（１）で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列のアミノ末端のα−アミノ基とカルボキシル末端のカルボキシル基がペプチド結合で連結された環状ペプチド又はその塩。X-Leu-Val-Y1-Y2（１）（式（１）中、ＸはLys、Arg、His、Ala、Gly、Ser又はThrを示し、Ｙ1及びＹ2は同一又は異なって、式（２）で表わされる。）2014141445.tif 000008（式（２）中、Ａｒ1は、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示す。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（１）で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列のアミノ末端のα−アミノ基とカルボキシル末端のカルボキシル基がペプチド結合で連結された環状ペプチド又はその塩。
X-Leu-Val-Y1-Y2          （１）
（式（１）中、ＸはLys、Arg、His、Ala、Gly、Ser又はThrを示し、Ｙ1及びＹ2は同一又は異なって、式（２）
【化１】
2014141445.tif 000006
（式（２）中、Ａｒ1は、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示し；Ｒ1は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示し；ｎは０〜２の整数を示す。）で表される基を示す。）
【請求項２】
Ｘが、Lys又はAlaである請求項１記載の環状ペプチド又はその塩。
【請求項３】
Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族炭化水素基が、炭素数６〜１４の芳香族炭化水素基である請求項１又は２記載の環状ペプチド又はその塩。
【請求項４】
Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族複素環式基が、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１〜３個含む総炭素数２〜９の芳香族複素環式基である請求項１〜３のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
【請求項５】
Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族炭化水素基が、フェニル基、ナフチル基、ハロゲノフェニル基、ヒドロキシフェニル基、アミノフェニル基、Ｃ1-6アルキル−フェニル基、Ｃ3-8シクロアルキル−フェニル基、Ｃ1-4ハロアルキル−フェニル基、Ｃ1-4アルコキシ−フェニル基、ビフェニル基、ヒドロキシビフェニル基、ピリミジニル−フェニル基及びピリジル−フェニル基から選ばれる基である請求項１〜４のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
【請求項６】
Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族複素環式基が、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、インドリル基及びピリジル基から選ばれる基である請求項１〜５のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
【請求項７】
式（２）で表される基が、式（２ａ）、（２ｂ）又は（２ｃ）
【化２】
2014141445.tif 000007
（式（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）中、Ｒ1及びＡｒ1は前記と同じ）
で表される基である請求項１〜６のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩を有効成分とする、アミロイドβペプチド凝集阻害剤。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩を含有する医薬。
【請求項１０】
アルツハイマー病予防治療薬である請求項９記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環状ペプチド及びこれを含有するアルツハイマー病等のアミロイド沈着が関与する疾患の予防又は治療用医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は神経細胞の変性、脱落と共に老人斑の形成と神経原線維変化の病理学的特徴を有する神経変性疾患である。アルツハイマー病は記憶、認識、思考、判断等が進行的に損失する認知症状を引き起こし、最終的に死に至らせる。
脳内に沈着した老人斑を構成する主たる蛋白質はアミロイドβペプチド（Ａβ）であり、３９−４３個のアミノ酸から成る。Ａβは細胞毒性を示し、これによりアルツハイマー病が引き起こされると考えられている（非特許文献１）。細胞から分泌されるＡβは主に４０個或いは４２個のアミノ酸から成るポリペプチドであり、特に４２個から成るＡβはより凝集性が強く早期に脳内に沈着すること、及び細胞毒性が強いことが知られている（非特許文献２）。従って、Ａβの凝集を阻害する薬剤は、アルツハイマー病予防治療薬として期待されている。
【０００３】
Ａβの部分配列であるL-[Lys-Leu-Val-Phe-Phe]は、Ａβに対して凝集阻害活性を有することが知られている（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】J. Hardy, D. J. Selkoe, Science 2002, 297, 353.
【非特許文献２】J. Biol. Chem., 1995, Vol. 270, p7013
【非特許文献３】J. Biol. Chem., 1996, Vol. 271, p8545
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、前記ペンタペプチドのＡβ凝集阻害活性は極めて弱く、天然型アミノ酸からなるため、代謝安定性の低さが懸念される。
従って、本発明の課題は、優れたＡβ凝集阻害作用を有し、医薬として有用な新たな化合物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者は、前記ペンタペプチドに着目し、種々の検討を行った結果、全く意外にも、前記ペンタペプチドを環化した環状ペプチドが鎖状ペプチドに比べて顕著に優れたＡβ凝集阻害活性を有し、その一部のアミノ酸を他のアミノ酸に置換した環状ペプチドはさらに優れたＡβ凝集阻害活性を有し、アルツハイマー病等のアミロイド沈着に起因する種々の疾患の予防治療薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の［１］〜［10］を提供するものである。
【０００８】
［１］次式（１）で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列のアミノ末端のα−アミノ基とカルボキシル末端のカルボキシル基がペプチド結合で連結された環状ペプチド又はその塩。
【０００９】
X-Leu-Val-Y1-Y2          （１）
【００１０】
（式（１）中、ＸはLys、Arg、His、Ala、Gly、Ser又はThrを示し、Ｙ1及びＹ2は同一又
は異なって、式（２）
【００１１】
【化１】
2014141445.tif 000002
【００１２】
（式（２）中、Ａｒ1は、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示し；Ｒ1は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示し；ｎは０〜２の整数を示す。）で表される基を示す。）
［２］Ｘが、Lys又はAlaである［１］記載の環状ペプチド又はその塩。
［３］Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族炭化水素基が、炭素数６〜１４の芳香族炭化水素基である［１］又は［２］記載の環状ペプチド又はその塩。
［４］Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族複素環式基が、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１〜３個含む総炭素数２〜９の芳香族複素環式基である［１］〜［３］のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
［５］Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族炭化水素基が、フェニル基、ナフチル基及びビフェニル基から選ばれる基である［１］〜［４］のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
［６］Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族複素環式基が、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基及びインドリル基から選ばれる基である［１］〜［５］のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
［７］式（２）で表される基が、式（２ａ）、（２ｂ）又は（２ｃ）
【００１３】
【化２】
2014141445.tif 000003
【００１４】
（式（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）中、Ｒ1及びＡｒ1は前記と同じ）
で表される基である［１］〜［６］のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩。
［８］［１］〜［７］のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩を有効成分とする、アミロイドβペプチド凝集阻害剤。
［９］［１］〜［７］のいずれかに記載の環状ペプチド又はその塩を含有する医薬。
［10］アルツハイマー病予防治療薬である［９］記載の医薬。
【発明の効果】
【００１５】
式（１）で表される環状ペプチド又はその塩は、極めて優れたＡβ凝集阻害活性を有し、アミロイドの沈着に起因する疾患、例えばアルツハイマー病、ダウン症等の予防治療用医薬として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の環状ペプチドは、前記式（１）で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列のアミノ末端のα−アミノ基とカルボキシル末端のカルボキシル基がペプチド結合で連結された環状ペプチドである。
本発明の環状ペプチドは、式（１）中のＹ1及びＹ2の両方が芳香族アミノ酸残基である点に特徴がある。
【００１７】
式（１）中、ＸはLys、Arg、His、Ala、Gly、Ser又はThrを示すが、Lys又はAlaが好ましい。
【００１８】
式（１）中、Ｙ1及びＹ2は、同一又は異なって、前記式（２）で表される基を示す。式（２）中、Ａｒ1は、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示す。また、Ｒ1は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基（ここで、芳香族炭化水素基及び芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい）を示す。
【００１９】
Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族炭化水素基としては、炭素数６〜１４の芳香族炭化水素基が挙げられ、炭素数６〜１２の芳香族炭化水素基が好ましい。芳香族炭化水素基の具体例としては、フェニル基、インデニル基、ナフチル基、ビフェニル基等が挙げられ、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基がより好ましい。なお、Ａｒ1とＲ1の芳香族炭化水素基は、同一でも異なっていてもよい。
【００２０】
Ａｒ1及びＲ1で示される芳香族複素環式基としては、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１〜３個有する芳香族複素環式基が挙げられ、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１〜３個有し総炭素数２〜９の芳香族複素環式基が好ましい。芳香族複素環式基の具体例としては、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアジニル基、ピリジル基、ピリミジニル基、インドリル基、ベンズイミダゾリル基等が挙げられ、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、インドリル基が好ましく、イミダゾリル基、ピリジル基がさらに好ましい。なお、Ａｒ1とＲ1の芳香族複素環式基は、同一でも異なっていてもよい。
【００２１】
前記芳香族炭化水素基及び前記芳香族複素環式基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基及びアミノ基から選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい。ここで、アルキル基としては炭素数１〜６のアルキル基が挙げられ、炭素数１〜４のアルキル基が好ましい。当該アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。シクロアルキル基としては、炭素数３〜８のシクロアルキル基が挙げられ、炭素数３〜８のシクロアルキル基とは炭素及び水素からなる炭素数が３〜８個の一価の環状の飽和炭化水素基を意味し、炭素数３〜６のシクロアルキル基が好ましい。当該シクロアルキル基の具体例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基が挙げられる。ハロアルキル基としては、１個以上のハロゲン原子で任意の水素が置換された炭素数１〜６のアルキル基を意味し、炭素数１〜４のハロアルキル基が好ましい。当該ハロアルキル基の具体例としては、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、ジクロロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基又は２，２，２−トリクロロエチル基が挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。アルコキシ基としては、炭素数１〜６のアルコキシ基が挙げられ、炭素数１〜４のアルコキシ基が好ましい。当該アルコキシ基の具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基等が挙げられる。芳香族炭化水素基としては、炭素数６〜１４の芳香族炭化水素基が挙げられ、炭素数６〜１２の芳香族炭化水素基が好ましい。芳香族炭化水素基の具体例としては、フェニル基、インデニル基、ナフチル基、ビフェニル基等が挙げられ、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基がより好ましい。芳香族複素環式基としては、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１〜３個有する芳香族複素環式基が挙げられ、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１〜３個有し総炭素数２〜９の芳香族複素環式基が好ましい。芳香族複素環式基の具体例としては、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアジニル基、ピリジル基、ピリミジニル基、インドリル基、ベンズイミダゾリル基等が挙げられ、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、インドリル基が好ましく、イミダゾリル基、ピリジル基がさらに好ましい。これらの置換基は、前記芳香族炭化水素基又は芳香族複素環式基上に１〜５個あってもよいが、１又は２個が好ましい。
【００２２】
Ｒ1及びＡｒ1の芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基の好ましい具体例としては、フェニル基、ナフチル基、４−フルオロフェニル基等のハロゲノフェニル基、ヒドロキシフェニル基、アミノフェニル基、Ｃ1-6アルキル−フェニル基、Ｃ3-8シクロアルキル−フェニル基、Ｃ1-4ハロアルキル−フェニル基、Ｃ1-4アルコキシ−フェニル基、ビフェニル−４−イル基、ビフェニル−３−イル基、ビフェニル−２−イル基等のビフェニル基、３’−ヒドロキシビフェニル基等のヒドロキシビフェニル基、ピリジル−フェニル基、ピリミジニル−フェニル基、ピリジル基、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、インドリル基が挙げられる。
【００２３】
Ｒ1で示されるアルキル基としては炭素数１〜６のアルキル基が挙げられ、炭素数１〜４のアルキル基が好ましい。当該アルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。シクロアルキル基としては、炭素数３〜８のシクロアルキル基が挙げられ、炭素数３〜６のシクロアルキル基が好ましく、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基が挙げられる。ハロアルキル基としては、炭素数１〜６のハロアルキル基が挙げられ、炭素数１〜４のハロアルキル基が好ましく、例えば、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、ジクロロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、２，２，２-トリフルオロエチル基又は２，２，２-トリクロロエチル基が挙げられる。アルコキシ基としては炭素数１〜６のアルコキシ基が挙げられ、例えばメトキシ基、エトキシ基、イソプロピルオキシ基が挙げられる。
【００２４】
Ｒ1としては、水素原子、前記芳香族炭化水素基又は前記芳香族複素環式基がより好ま
しい。
【００２５】
式（２）中のｎは０〜２の整数を示すが、１がより好ましい。
【００２６】
式（２）で表される基の好ましい例として、次の式（２ａ）、（２ｂ）又は（２ｃ）
【００２７】
【化３】
2014141445.tif 000004
【００２８】
（式（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）中、Ｒ1及びＡｒ1は前記と同じ）
で表される基を挙げることができる。ここで、式（２ｂ）、（２ｃ）のＲ1としては、水素原子、前記芳香族炭化水素基又は前記芳香族複素環式基が好ましい。Ｒ1及びＡｒ1の芳香族炭化水素基、芳香族複素環式基の具体例としては、フェニル基、ナフチル基、４−フルオロフェニル基等のハロゲノフェニル基、ヒドロキシフェニル基、アミノフェニル基、Ｃ1-6アルキル−フェニル基、Ｃ3-8シクロアルキル−フェニル基、Ｃ1-4ハロアルキル−フェニル基、Ｃ1-4アルコキシ−フェニル基、ビフェニル−４−イル基、ビフェニル−３−イル基、ビフェニル−２−イル基等のビフェニル基、３’−ヒドロキシビフェニル基等のヒドロキシビフェニル基、ピリジル基、イミダゾリル基、ピリジル−フェニル基、ピリミジニル−フェニル基が挙げられる。
【００２９】
また、式（１）の環状ペプチドにおいて、さらに好ましい態様としては、式（１ａ）で表されるアミノ酸配列からなり、該アミノ酸配列のアミノ末端のα−アミノ基とカルボキシル末端のカルボキシル基がペプチド結合で連結された環状ペプチドである。
【００３０】
X-Leu-Val-Y1-Phe      （１ａ）
【００３１】
（式（１ａ）中、Ｘ及びＹ1は、前記と同じ）
式（１ａ）において、ＸはLys又はAlaが好ましく、Ｙ1は前記の式（２ａ）、（２ｂ）
又は（２ｃ）であるのが好ましい。
【００３２】
式（１）中の各アミノ酸残基は、Ｌ体でもＤ体でもよく、代謝安定性の点からＤ体が好ましい。また、式（１）の環状ペプチドの塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、炭酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩等の有機酸塩等の酸付加塩が挙げられる。
【００３３】
式（１）の環状ペプチドの好ましい具体例を挙げる。以下の式において、Ｐｈはフェニル基、Ｆ−Ｐｈはフルオロフェニル基、ｂｉ−Ｐｈはビフェニル基、Ｐｙはピリジル基、Ｐｈｅｔｈはフェニルエチル基、Ｎａｌはナフチルアラニル基を示す。
cyclo-L-[Lys-Leu-Val-Phe-Phe]                           （配列番号１）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-Phe-Phe]                           （配列番号１）
cyclo-D-[Ala-Leu-Val-Phe-Phe]                           （配列番号２）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-Phe(βPh)-Phe]                     （配列番号３）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(β,β-FPh)Ala-Phe]                （配列番号４）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(β,β-Py)Ala-Phe]                 （配列番号５）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-bi-Ph)Ala-Phe]                  （配列番号６）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(3-bi-Ph)Ala-Phe]                  （配列番号７）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(2-bi-Ph)Ala-Phe]                  （配列番号８）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(1-Nal)-Phe]                       （配列番号９）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(β-Py)Ala-Phe]                    （配列番号10）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(2-Py)-Ph)Ala-Phe]              （配列番号11）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(Ph)Gly-Phe]                       （配列番号12）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(Pheth)Gly-Phe]                    （配列番号13）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-OH)Phe-Phe]                     （配列番号14）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-NH2)Phe-Phe]                     （配列番号15）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(2-Py)-Ph)Ala-Phe]              （配列番号20）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(3-Py)-Ph)Ala-Phe]               （配列番号21）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(4-Py)-Ph)Ala-Phe]               （配列番号22）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(5-pyrimidine)-Ph)Ala-Phe]       （配列番号23）
cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(3-hydroxyphenyl)-Ph)Ala-Phe]    （配列番号24）
【００３４】
本発明の環状ペプチド（１）は、通常の有機合成化学的ペプチド合成法によって製造することができる。有機合成化学的ペプチド合成法は、一般的な官能基の保護、カルボキシル基の活性化、ペプチド結合の形成、保護基の脱保護の手段によって行われる。
【００３５】
本発明の環状ペプチド又はその塩は、後記実施例に示すように強力なＡβ凝集阻害活性を有し、代謝安定性が高いため、Ａβ凝集阻害剤として、またヒトを含む動物のアミロイド沈着、Ａβ凝集が関与する疾患、例えばアルツハイマー病、ダウン症等の予防治療薬として有用である。
【００３６】
本発明の環状ペプチドを人体用の医薬として使用する場合、投与量は成人１日当たり１mg〜１ｇ、好ましくは１０mgから３００mgの範囲である。
【００３７】
本発明の環状ペプチドを含有する医薬組成物は投与法に応じ適当な製剤を選択し、薬学的に許容される担体を用いて各種製剤の調製法にて調製できる。本発明環状ペプチドを主剤とする医薬組成物の剤形としては例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤や、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性ないし水性の懸濁液等を経口用製剤として例示できる。
【００３８】
注射剤としては製剤中に安定剤、防腐剤、溶解補助剤を使用することもあり、これらの補助剤を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によって固形製剤として用時調製の製剤としてもよい。また一回投与量を一の容器に収納してもよく、また多投与量を一の容器に収納してもよい。
【００３９】
また外用製剤として液剤、懸濁液、乳濁液、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、スプレー、貼付剤等を例示できる。
【００４０】
固形製剤としては本発明環状ペプチドとともに薬学上許容されている添加物を含み、例えば充填剤類や増量剤類、結合剤類、崩壊剤類、溶解促進剤類、湿潤剤類、潤滑剤類等を必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。
液体製剤としては溶液、懸濁液、乳液剤等を挙げることができるが添加剤として懸濁化剤、乳化剤等を含むこともある。
【実施例】
【００４１】
以下、本発明を実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明の範囲は下記実施例に限定されることはない。
【００４２】
製造例１
反応容器に２−ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（４００mg）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（２３２．４mg，０．６mmol）、１，２−ｄｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈａｎｅ（３mL）およびＮ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（４２０μＬ，２．４mmol）を順次加え、１時間反応させた。ＤＭＦで洗浄後、ｍｅｔｈａｎｏｌ（４００μＬ）およびＮ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（２７８μＬ，１．５mmol）を加え、２０分間振盪した。ＤＭＦ、ＤＭＦ−Ｈ2Ｏ（１：１）およびｍｅｔｈａｎｏｌで十分洗浄した後、真空ポンプで樹脂を乾燥させ、ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ処理により切断されたＦｍｏｃ発光団量からアミノ酸の置換率を求めた（０．３３mmol）。
得られたＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｏ−ｒｅｓｉｎ（０．０３４mmol）に対し、Ｎ，Ｎ’−Ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（１３．２μＬ，０．０８５mmol）および１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ（１３．０mg，０．０８５mmol）存在下、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．０８５mmol）を縮合し、続いて２０％ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦによるＦｍｏｃ基除去を行った。本サイクルを繰り返し、保護ペプチド樹脂を構築した。得られた保護ペプチド樹脂全量に対しｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｓｉｌａｎｅ−Ｈ2Ｏ−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（２．５：２．５：９５）中で６０分間撹拌し、濃縮、Ｅｔ2Ｏによる再沈殿を経て白色固体を得た（５．８ｍｇ）。この粗ペプチドをＯ−（７−ａｚａｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ  ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＨＡＴＵ，５．０mg，１．３μmol）およびＮ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（４．６μＬ，２．６μmol）存在下、ＤＭＦ（１３mL）中で１５時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出・ｂｒｉｎｅ洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣に対し２０％ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（２mL）を加え、室温で５時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出・ｂｒｉｎｅ洗浄し、硫酸ナトリウムによる乾燥後、濃縮した。得られた残渣をｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｓｃａｌｅ  ＨＰＬＣ（０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ−ＣＨ3ＣＮ  ｓｙｓｔｅｍ）により精製し、凍結乾燥を経て白色無晶形の化合物１(cyclo-L-[Lys-Leu-Val-Phe-Phe])を得た（０．３１mg）。
収率：１．４％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：６３４．３；Ｍ＋Ｈfound：６３５．１；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２４．１min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm）、０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１
％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４３】
製造例２（化合物２：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-Phe-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：５．２％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：６３４．３；Ｍ＋Ｈfound：６３５．４；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２４．１min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４４】
製造例３（化合物３：cyclo-D-[Ala-Leu-Val-Phe-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：１．３％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：５７７．３；Ｍ＋Ｈfound：５７８．２；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２７．１min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４５】
製造例４（化合物４：cyclo-D-[Lys-Ala-Val-Phe-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：１．８％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：５９２．３；Ｍ＋Ｈfound：５９３．１；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２１．４min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４６】
製造例５（化合物５：cyclo-D-[Lys-Leu-Ala-Phe-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：２．５％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：６０６．４；Ｍ＋Ｈfound：６０７．１；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２１．５min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４７】
製造例６（化合物６：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-Ala-Phe]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：０．４％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：５５８．４；Ｍ＋Ｈfound：５５８．７；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝１９．８min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％  ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４８】
製造例７（化合物７：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-Phe-Ala]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：２．２％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：５５８．４；Ｍ＋Ｈfound：５５８．７；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２０．９min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００４９】
製造例８（化合物８：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-Phe(βPh)-Phe]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：１０．９％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１０．４；Ｍ＋Ｈfound：７１１．４；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２５．８min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５０】
製造例９（化合物９：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-bi-Ph)Ala-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：１．９％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１０．４；Ｍ＋Ｈfound：７１１．３；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２７．０min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５１】
製造例１０（化合物１０：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(3-bi-Ph)Ala-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：２．７％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１０．４；Ｍ＋Ｈfound：７１１．３；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２６．９min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５２】
製造例１１（化合物１１：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(2-bi-Ph)Ala-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：３．０％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１０．４；Ｍ＋Ｈfound：７１１．２；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２６．５min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５３】
製造例１２（化合物１２：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(1-Nal)-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：２１％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：６８４．４；Ｍ＋Ｎａfound：７０７．５；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２５．９min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５４】
製造例１３（化合物１３：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(2-Py)-Ph)Ala-Phe])
化合物１と類似の方法により合成した。収率：２．２％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１１．４；Ｍ＋Ｈfound：７１２．１；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝１９．９min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５５】
製造例１４（化合物１４：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(3-Py)-Ph)Ala-Phe]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：１．３％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１１．４；Ｍ＋Ｈfound：７１２．１；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝１９．８min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５６】
製造例１５（化合物１５：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(4-Py)-Ph)Ala-Phe]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：２．２％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１１．４；Ｍ＋Ｈfound：７１２．３；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝１９．７min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５７】
製造例１６（化合物１６：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(5-pyrimidine)-Ph)Ala-Phe]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：０．４％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７１２．４；Ｍ＋Ｈfound：７１３．６；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２２．５min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５８】
製造例１７（化合物１７：cyclo-D-[Lys-Leu-Val-(4-(3-phenol)-Ph)Ala-Phe]）
化合物１と類似の方法により合成した。収率：１．６％；ＭＡＬＤＩ−ＭＳ（ＴＯＦ）：Ｍcalc：７２６．４；Ｍ＋Ｈfound：７２７．５；逆相ＯＤＳカラムおける保持時間＝２４．０min（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＭ（４．６×１５０mm），０−１００％ＣＨ3ＣＮ  ｉｎ  ０．１％  ａｑｕｅｏｕｓ  ＴＦＡ）
【００５９】
試験例１（Ａβ凝集阻害試験）
ＡβのＯ−アシルイソペプチド（１０μＭ）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（pH７．４，５０μＬ）中に、凝集阻害ペプチド溶液（ＤＭＳＯ溶液）を加え（阻害剤終濃度３０μＭ，１％ＤＭＳＯ）、３７℃で任意の時間インキュベート後、反応液の一部（１０μＬ）を、チオフラビンＴ溶液（５０μＭチオフラビンＴ，１０μＬ）と５０mM  ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨバッファー（pH８．５，３９６μＬ）の混合溶液に加え、直ちに混合しチオフラビンＴの蛍光強度を測定した。蛍光強度測定において励起波長として４４０nm、蛍光波長として４８０nmを用いた。
【００６０】
得られた結果を、コントロールに用いたＤＭＳＯ溶液の活性を１００としたときの凝集阻害比として表１に示した。
【００６１】
【表１】
2014141445.tif 000005
【００６２】
その結果、化合物１、２、３及び８〜１７が鎖状化合物に比べて強いＡβ凝集阻害活性を示すことがわかった。特に化合物８〜１２のＡβ凝集阻害活性は顕著に高かった。
【配列表】
2014141445000001.app