(57)【要約】      （修正有）【課題】アルファ−４インテグリンおよび／またはアルファ−９インテグリンの発現が関与する液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害するための新規な方法の提供。【解決手段】抗アルファ−４インテグリンおよび／または抗アルファ−９インテグリン活性を有する式IIの化合物、または約１０ｋＤａ〜６０ｋＤａの分子量を有するように、ポリアルキレンオキシドポリマーが繰り返し単位の量で存在するコンジュゲートを含む組成物。2014210790.tif 000219【選択図】図１
2014210790.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量の式ＩＩ
【化１】
2014210790.tif 000205
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、およびＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択される）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、もしくはエステルを投与するステップを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項２】
式ＩＩの化合物が、
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−１，１，１−トリフルオロメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−アリルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルブチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）−プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（３−クロロ−Ｎ−エチルプロピルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（３−クロロ−Ｎ−メチルプロピル−スルホンアミド）−２−（ジ
エチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−３，３，３−トリフルオロプロピルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルプロピルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）−プロパン酸；および
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−２−メチルプロピルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）−フェニル）プロパン酸
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
治療有効量の式ＩＶの化合物
【化２】
2014210790.tif 000206
（式中、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、またはヘテロアリールであり、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ９およびＲ１０は、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲ９およびＲ１０はそのペンダントである窒素原子と一緒になって、複素環を形成する）、またはその薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグを投与するステップを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項４】
式ＩＶの化合物が、
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（トリフルオロアセチル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロメチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；および
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル
からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
治療有効量の式Ｂの化合物
【化３】
2014210790.tif 000207
（式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニルおよび低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ３は、各々独立に、Ｈまたは低級アルキルであり、あるいはＲ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成する）および薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項６】
式Ｂの化合物が、
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェ
ニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）シルクロプロピルメチル−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−プロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アリルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−ブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，６−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，３−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−（２−トリ
スフルオロエチル）−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
および薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
治療有効量の式Ｘの化合物
【化４】
2014210790.tif 000208
（式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨであり、
Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成する）および薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項８】
治療有効量の式ＸＶの化合物
【化５】
2014210790.tif 000209
（式中、各Ｘは、独立に、フルオロ、クロロまたはブロモであり、
ｐは、０または１〜３の整数であり、
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨである）および薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項９】
治療有効量の下記の式ＸＶＩＩＩのコンジュゲート
【化６】
2014210790.tif 000210
（式中、
Ｂは、分枝アームハブ分子に共有結合しているポリアルキレンオキシドポリマーであり、ｑは、約２〜約１００であり、
Ａは、出現するごとに独立に、式ＸＩＸの化合物、または薬学的に許容されるその塩である
【化７】
2014210790.tif 000211
（式中、
Ｊは、
ａ）式（ａ）の基
【化８】
2014210790.tif 000212
（式中、Ｒ３１は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ３１は、−Ｈ、Ｒ３１’、−ＮＨ２、−ＮＨＲ３１’または−Ｎ（Ｒ３１’）２、−ＮＣ３〜Ｃ６環式、−ＯＲ３１’、−ＳＲ３１’であり、各Ｒ３１’は、独立に、任意選択で置換されている直鎖状または分岐状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリールであり、
Ｒ３２は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ３２は、−Ｈ、−ＮＯ２、ハロアルキルまたは基−Ｎ（ＭＲ４１）Ｒ４２であり、Ｍは、共有結合、−Ｃ（Ｏ）−または−ＳＯ２−であり、Ｒ４１は、Ｒ４１’、Ｎ（Ｒ４１’）２、または−ＯＲ４１’であり、
各Ｒ４１’は、独立に、水素、任意選択で置換されている直鎖状または分岐状Ｃ１〜Ｃ６
アルキル、任意選択で置換されているシクロアルキル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されている複素環式または任意選択で置換されているヘテロアリールであり、任意選択の置換は、ハロゲン化物、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または−ＯＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４２は、水素またはＲ４１’である）、ならびに
ｂ）式（ｂ）の基
【化９】
2014210790.tif 000213
（式中、Ｒは、ポリマー部分への共有結合、アミノ、ヒドロキシル、置換アミノ、アルキル、アルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、チオール、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオおよび置換アルキルからなる群から選択され、各アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルは、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、いずれの場合にも、ポリマー部分は、ポリマー部分を共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ１に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２および任意選択で置換されている−ＣＨ２−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択される）から選択され、
Ｔは、
ａ）式（ｃ）の基
【化１０】
2014210790.tif 000214
（式中、Ｙは、−Ｏ−および−ＮＲ１−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｗは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合および−ＮＲ２Ｒ３からなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、リンカーをさらに任意選択で含むポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、
ｍは、０、１または２に等しい整数であり、
ｎは、０、１または２に等しい整数である）、ならびに
ｂ）式（ｄ）の基
【化１１】
2014210790.tif 000215
（式中、Ｇは、０〜３個の窒素を含有する任意選択で置換されているアリールまたは任意選択で置換されているヘテロアリールの５員環または６員環であり、前記アリールまたはヘテロアリールは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合を任意選択でさらに含み、
Ｒ６は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ６は、−Ｈ、アルキル、置換アルキル、または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ１７であり、Ｒ１７は、−ＯＨ、−ＯＲ１８、または−ＮＨＲ１８であり、Ｒ１８は、アルキル、置換アルキル、アリールまたは置換アリールである）から選択され、
Ｒ５５は、アミノ、置換アミノ、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルコキシ、置換シクロアルコキシ、アリールオキシおよび置換アリールオキシ、および−ＯＨからなる群から選択され、
ただし、
Ａ．  Ｒ、Ａｒ１、Ａｒ２、およびＴの少なくとも１つは、ポリマー部分への共有結合を含有し、
Ｂ．  Ｒがポリマー部分に共有結合をしているとき、ｎは１であり、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−ではなく、
Ｃ．  Ｘが−Ｏ−または−ＮＲ１−であるとき、ｍは２であり、
Ｄ．  式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートは、約１０〜６０ｋＤａの分子量を有する））
を投与することを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項１０】
治療有効量の下記の式ＸＸＩＩのコンジュゲート
【化１２】
2014210790.tif 000216
（式中、ｘ、ｙ、およびｚの総計が約１００〜１３６０であるように、ｘ、ｙ、およびｚ
が独立に整数である）を投与することを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項１１】
式ＸＸＩＩのコンジュゲートが約４０〜４５ｋＤａの分子量を有するように、ｘ、ｙ、およびｚが独立に整数である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
治療有効量の下記の式ＸＸＩＩＩのコンジュゲート
【化１３】
2014210790.tif 000217
（式中、ｎの総計が約１００〜１３６０であるように、各ｎが独立に整数である）を投与することを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項１３】
式ＸＸＩＩＩのコンジュゲートが４０〜４５ｋＤａの分子量を有するように、各ｎが独立に整数である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
治療有効量の下記の式ＸＸＩＶのコンジュゲート
【化１４】
2014210790.tif 000218
（式中、ｎの総計が約１００〜１３６０であるように、各ｎが独立に整数である）を投与することを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。
【請求項１５】
式ＸＸＩＶのコンジュゲートが４０〜４５ｋＤａの分子量を有するように、各ｎが独立に整数である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記悪性病変が、血液学的悪性病変である、請求項１、３、５、７から１０、１２、および１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記血液学的悪性病変が、白血病または多発性骨髄腫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記白血病が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１、３、５、７から１０、１２、および１４のいずれか一項に記載の治療有効量の化合物もしくはコンジュゲート、または薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体、ビヒクル、または希釈剤とを含む医薬組成物であって、それを必要としている患者において液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害するための医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１、３、５、７から１０、１２および１４のいずれか一項に記載の化合物もしくはコンジュゲートと、化学療法剤、免疫療法、および／または放射線療法とを投与することを含む、腫瘍増殖、悪性病変および／または転移性進行および／または転移の発生を阻害するための併用療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、アルファ−４インテグリンおよび／またはアルファ−９インテグリンの発現が関与する液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害するための、抗アルファ−４インテグリンおよび／または抗アルファ−９インテグリン活性を有する化合物の使用方法に関する。液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生の阻害のための医薬組成物および併用療法もまた提供する。
【背景技術】
【０００２】
固形腫瘍は臓器中で発生する一方、液性腫瘍は癌となった血液細胞からなる。腫瘍は、正常細胞には見出されないパターンでタンパク質を発現する。腫瘍または悪性細胞によって示されるタンパク質のパターンは、疾患の段階を反映することがある（すなわち、初期または転移性疾患）。悪性病変が進行すると、細胞はそれらが生じた組織から、よりいっそう異なる傾向がある。癌が進行し、より未分化となると、癌の進行を決定するために使用される病期分類スキームに関わらず、細胞は転移する可能性が高くなり、かつ／または従来の療法による治療ではより効果がなくなる。白血病および骨髄腫は、最も一般的な血液癌の１つである。
【０００３】
インテグリンは、細胞接着、免疫細胞移動および活性化に関与する細胞表面糖タンパク質のファミリーである。アルファ−４インテグリンは、好中球を除いた全ての循環白血球に発現し、ベータ−１（β１）またはベータ−７（β７）インテグリンサブユニットと共にヘテロ二量体受容体を形成する。アルファ−４ベータ−１（α４β１）インテグリンおよびアルファ−４ベータ−７（α４β７）インテグリンの両方は、血管内皮に亘り白血球の移動において役割を果たし（Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、Ｃｅｌｌ、１９９４、７６：３０１〜１４；Ｂｕｔｃｈｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９６、２７２：６０〜６）、実質内の細胞活性化および生存に寄与する（Ｄａｍｌｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９３；１５１：２３６８〜７９；Ｋｏｏｐｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９４、１５２：３７６０〜７；Ｌｅｕｓｓｉｎｋら、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．、２００２、１０３：１３１〜１３６）。アルファ−４ベータ−１インテグリンは、リンパ球、単球、マクロファージ、肥満細胞、好塩基球、および好酸球上に恒常的に発現する。
【０００４】
アルファ−４ベータ−１（最晩期抗原−４、ＶＬＡ−４としても知られている）は、血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）に結合する（Ｌｏｂｂら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９４、９４：１７２２〜８）が、これは、慢性炎症の多くの部位において血管内皮によって発現される（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａら、１９９３、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１：７６７〜８０４；Ｐｏｓｔｉｇｏら、１９９３、Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４４：７２３〜３５）。アルファ−４ベータ−１インテグリンは、フィブロネクチンおよび他の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分を含めた他のリガンドを有する。
【０００５】
アルファ−４ベータ−７インテグリンは、粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭＡｄＣＡＭ−１）と相互作用し、消化管へのリンパ球のホーミングを媒介する（Ｆａｒｓｔａｄら、１９９７、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．、１５０：１８７〜９９；Ｉｓｓｅｋｕｔｚ、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：４１７８〜８４）。アルファユニットは、アルファ−４セット内の結合作用において最も重要である。したがって、抗アルファ−４インテグリン剤は、アルファ−４ベータ−１およびアルファ−４ベータ−７の混合阻害剤であるにも関わらず活性を有し得る。さらに、アルファ−４インテグリンが媒介する細胞接着の破壊は薬物過敏性を回復させることが見出された。メルファランなどの化学療法剤を伴う抗アルファ−４治療は、単剤治療よりも骨髄腫に対してより有効である。アルファ−４とＶ
ＣＡＭ−１またはフィブロネクチンとの相互作用は、フルダラビンへの耐性を促進する。アルファ−４ベータ−１−フィブロネクチン相互作用は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞系の化学療法耐性を促進する。
【０００６】
白血病、骨髄腫、および黒色腫などの多くの血液学的腫瘍は、アルファ−４インテグリン陽性であり得る。したがって、これらの腫瘍の増殖および生存は、アルファ−４インテグリンとの相互作用によって決まる。転移性腫瘍は、ＶＣＡＭ−１を発現する。抗アルファ−４処理は、骨の破壊を減少させ、骨髄区画において骨髄腫細胞のアポトーシスを増加させることが分かっている。ＶＣＡＭ−１またはフィブロネクチンとのアルファ−４の相互作用は、患者由来の慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）細胞の生存を促進する。アルファ−４ベータ−１−フィブロネクチン相互作用は、インビトロでＡＭＬ細胞系の生存を促進することが分かっている。
【０００７】
アルファ−９インテグリンは、リンパ管、顆粒球、破骨細胞および血管形成の発生において役割を果たす。アルファ−９は、恐らくＶＥＧＦＣおよび／またはＶＥＧＦＡ結合（血管増殖および血管形成を媒介する）を介して、リンパ管増殖において役割を果たす。アルファ−９インテグリンはまた、顆粒球、破骨細胞の発生、および好中球に影響を及ぼす。アルファ−９は、細胞移動をインビトロで加速することが示されている。
【０００８】
アルファ−９ノックアウトマウスでは、好中球に対して特異的な劇的欠陥が存在する。Ｋｉｒ４．２のノックダウンは、微小血管内皮細胞のアルファ−９が媒介する細胞移動を阻害する。さらに、アルファ−９欠損骨髄細胞中ではＧ−ＣＳＦが誘発するコロニー形成が減少する。したがって、癌の治療において抗アルファ−９剤を使用することには強い意味がある。
【０００９】
アルファ−９インテグリンの中で、アルファ−９ベータ−１は、アルファ−４ベータ−１と最も密接に類似している。アルファ−９ベータ−１は、増殖因子受容体、例えば、ＶＥＧＦＣ（リンパ脈管新生）およびＶＥＧＦＡ（血管増殖メディエーター）を認識する。アルファ−９ベータ−１インテグリンは、微小血管内皮細胞上で発現し、トロンボスポンジン−１と相互作用する。この相互作用は、血管形成の調節に関与する。アルファ−９ベータ−１は、ＶＥＧＦ−ＣおよびＤに直接結合し、リンパ脈管新生の一因となる。したがって、病原性の血管形成およびリンパ脈管新生の阻害のための有望な薬物治療標的としてのインテグリンアルファ−９ベータ−１。
【００１０】
アルファ−９インテグリンは、固形腫瘍に関して活性を有することが示されている。例えば、Ｂａｓｏｒａらは、一部の結腸癌中のヒト結腸上皮細胞においてアルファ−９ベータ−１インテグリンが発現することを報告している（Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．１９９８年３月２日；７５（５）：７３８）。Ｈａｋｋｉｎｅｎらは、口腔白板症、扁平苔癬および扁平上皮細胞癌腫におけるアルファ−９インテグリンの発現を報告している（Ｏｒａｌ  Ｄｉｓ．１９９９年７月；５（３）：２１０〜７）。Ｔｏｍｃｚｕｋらは、ＡＤＡＭ２および３のディスインテグリンドメインへの細胞接着における複数のベータ−１インテグリンの活性について報告している。（Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２００３年１０月１５日；２９０（１）：６８〜８１）。Ｃｈｅｎらは、アルファ−９ベータ−１を欠損しているマウスは好中球の発生および数が劇的に減少することを示した。（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２００６、１７１３７８００）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかし、単独でまたは他の薬剤と合わせて使用することができる、液性腫瘍の増殖および転移を阻害する新規な薬剤、組成物、ならびにこれらの薬剤および組成物の使用方法が
求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、液性腫瘍を治療し、かつ／または液性腫瘍の増殖および転移を阻害するための新規な方法、組成物、および併用療法を提供する。方法、組成物および併用療法は、好ましくはアルファ−４および／またはアルファ−９を発現している白血病および骨髄腫などの血液の癌の治療に対して行われる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】抗ＶＬＡ−４処理が、血液中の循環ＩｇＧ２ｂレベルおよびＩｇＧ２ｂ陽性骨髄腫細胞を減少させたことを示す。０日目に腫瘍細胞を注射された動物に、抗ＶＬＡ−４抗体ＰＳ／２（ラットＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇで４日目、５日目、６日目、９日目、１２日目、１５日目、および１８日目に投与した。２１日目にそれに続いて評価を行った。Ａ）ｍＩｇＧ２ｂの循環レベルを、対照およびＰＳ／２処理動物においてｍｇ／ｍＬとして表した（疾患を有さない群はＮ＝８、非処理対照群は１４、アイソタイプ対照群は１０、およびＰＳ／２処理群は１３）。血漿ＩｇＧ２ｂレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。Ｂ）Ａに記載した処理群からの全血中のＩｇＧ２ｂ陽性骨髄腫細胞は、標準的細胞系マーカーを使用して総リンパ球集団をゲートし、次いで細胞内ＩｇＧ２ｂで染色して、ＦＡＣＳ分析によって同定した。系統陰性ＩｇＧ２ｂ骨髄腫陽性細胞は、総リンパ球数の割合として表す。
【図２】抗ＶＬＡ−４処理が、脾臓および骨髄中のＩｇＧ２ｂ陽性骨髄腫細胞数を減少させたことを示す。Ａ）脾臓中の腫瘍量を決定するために、脾細胞を臓器の半分から単離し、計数した。次いで、図１に記載したように、細胞を細胞系マーカーおよびＩｇＧ２ｂによって染色した。腫瘍量は、系統陰性ＩｇＧ２ｂ陽性細胞の割合を、脾臓内にあると計算される総細胞数で乗じることによって決定した。Ｂ）単一の脛骨／腓骨の対から骨髄細胞を単離し、計数し、記載したように細胞系マーカーで染色した。脾臓について記載したのと同様に腫瘍量を計算した。
【図３】抗ＶＬＡ−４処理が、骨梁中の骨破壊性病変を減少させたことを示す。２７日目にマウスを屠殺し、右後肢を回収し、組織学的検査を行った。切片をヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ−Ｅ）で染色し、カメラを備えたＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ−４０Ｆ４顕微鏡を使用して検査した。パネルＡおよびＢ：より低倍率（Ｈ−Ｅ×４０）；パネルＣおよびＤ：より高倍率（Ｈ−Ｅ×２００）。残存骨梁／総面積の組織形態計測的分析（Ｅ）および骨髄腫と骨との間の境界面における破骨細胞数（Ｆ）。非処理および抗アルファ−４抗体処理５ＴＧＭ１／ｌｕｃ担持マウスの脛骨の組織学的像。（Ａ、Ｃ）非処理群において、髄腔は、５ＴＧＭ１／ｌｕｃ骨髄腫細胞で占められ、骨梁は見出されなかった。（Ｂ、Ｄ）正常な髄成分および骨梁は、抗アルファ−４Ａｂ処理群においてまだ観察された。データは平均±ＳＥＭである（ｎ＝５）。＊非腫瘍（ＮＴＢ）マウスと有意差がある。＊＊非処理５ＴＧＭ１／ｌｕｃ担持マウスと有意差がある。
【図４】抗ＶＬＡ−４および抗ＶＣＡＭ−１が、ＴＲＡＰ陽性多核破骨細胞の形成を阻害したことを示す。５ＴＧＭ１骨髄腫細胞および初代マウス骨髄細胞の共培養物中の、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ陽性（ＴＲＡＰ＋）多核破骨細胞形成に対する、ＶＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４の中和抗体の阻害作用。懸濁液中の５ＴＧＭ１細胞（１×１０３）と初代マウス髄細胞（１×１０６）との混合物を、４８−ウェルプレート中で接種し、１０μｇ／ｍＬの抗ＶＣＡＭ−１Ａｂ、抗ＶＬＡ−４Ａｂ、抗ＩＣＡＭ−１Ａｂもしくは対照ＩｇＧを伴って、または伴わずに培養した。培養の６日後、培養物を固定し、ＴＲＡＰ＋多核破骨細胞の数を決定した。データは平均±ＳＥとして表す（ｎ＝４）。＊ＩｇＧ対照と有意差がある（ｐ＜０．０１）。
【図５】メルファランと組み合わせた抗ＶＬＡ−４療法処理が、骨中の循環ＩｇＧ２ｂレベルおよび５ＧＴＭ１／ｌｕｃ腫瘍量を減少させたことを示す。２００μｌのＰＢＳ懸濁液中の１００万個の５ＴＧＭ１／ｌｕｃ細胞を、６〜８週齢のｂｇ／ｎｄ／ｘｉｄ雌性マウスに尾静脈を通して接種した。各群は８〜１０匹のマウスを有し、実験は２度行った（群毎にｎ＝８〜１０匹×２＝１６〜２０匹）。データは、２つの別々の実験の平均±ＳＥＭである。抗アルファ−４抗体（ＰＳ／２、ラット抗マウス抗アルファ−４インテグリン抗体）を、メルファラン（１００μｇ、腹腔内、週１回、ＳＩＧＭＡ）と合わせ、または合わせず、２００μｇ／マウス（腹腔内、毎日、１４〜１６日目）で、その後８０μｇ／マウス（腹腔内、週２回、実験の終わりまで）で投与した。ラットＩｇＧは、対照の役割を果たした。Ａ）ｍＩｇＧ２ｂの循環レベルは、群に亘ってｍｇ／ｍＬとして表し、ＥＬＩＳＡによって決定した。Ｂ）ルシフェラーゼ活性を測定し、骨中の５ＴＧＭ１／ｌｕｃ腫瘍量を評価した。＊対照ＩｇＧと有意差がある。＊＊抗アルファ−４Ａｂまたはメルファラン単独と有意差がある。
【図６】薬物耐性がα４サブユニットの発現の増加と関連することを示す。この実験は、α４発現のレベルと８２２６骨髄腫細胞系中の薬物耐性との相関関係を示した。Ａ４発現はフローサイトメトリーによって測定し、薬物耐性はＭＴＴ細胞毒性分析によって測定した。耐性値は、各々、８２２６／Ｓに対するＬＰＡＭまたはドキソルビシンのＩＣ５０用量として報告する。棒は、３つの異なる実験のＳＤである。（Ａ）８２２６／ＬＲ５は、５×１０−５ｍｍｏｌ／Ｌのメルファラン（ＬＰＡＭ：Ｌ−フェニルアラニンナイトロジェンマスタード）中で保持し、ＬＲ５ｏｏｄは、薬物の外に２０週間保持した。８２２６／ＬＲ５のα４発現レベルおよびメルファラン耐性レベルは、８２２６／Ｓより高いことが見出された（＊ｐ＜０．０５）。ＬＲ５ｏｏｄのα４発現レベルおよびメルファラン耐性は、８２２６／Ｓ親系のそれらと等しいことが見出された。（Ｂ）８２２６／ＤＯＸ６は、６×１０−８ｍｏｌ／Ｌのドキソルビシン中に保持し、ＤＯＸ６ｏｏｄは、薬物の外に２０週間保持した。８２２６／ＤＯＸ６のα４発現レベルおよびドキソルビシン耐性レベルは、８２２６／Ｓより高いことが見出された（ｐ＜０．０５）。ＤＯＸ６ｏｏｄのα４発現およびドキソルビシン耐性は、８２２６／Ｓ親系のそれらと等しいことが見出された。
【図７】式ＸＸＩＩのコンジュゲートとモルモットリンパ球との結合を例示するグラフを示す。
【図８】式ＸＸＩＩのコンジュゲートの受容体発現のダウンレギュレーションを例示するグラフを示す。
【図９】ＭＯＬＴ−４細胞上のアルファ−４およびベータ−１発現を例示するグラフを示す。
【図１０】ＭＯＬＴ−４細胞とのＶＣＡＭ−１／Ｆｅ結合を例示するグラフを示す。
【図１１】式ＸＸＩＩのコンジュゲートによるＭＯＬＴ−４細胞へのＶＣＡＭ−１／Ｆｅ結合の阻害を例示するグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
［定義および頭字語］
この詳細な記載に従って、下記の略語および定義を適用する。本明細書において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、および「ｔｈｅ」には、文脈によって明らかにそれ以外のことを指示しない限り複数の指示対象が含まれることに留意しなくてはならない。したがって、例えば、「投与量」への言及には、当業者には公知の１種または複数の投与量およびその同等物への言及が含まれる。
【００１５】
本明細書において議論されている公開資料は、本出願の出願日の前のそれらの開示のためのみに提供する。本明細書におけるいかなる物も、先行発明によって本発明がこのような公開資料に先行する権利がないということを承認するものとは解釈されない。さらに、提供した公開資料の日付は、独立して確認する必要があり得る実際の公開資料の日付とは異なることがある。
【００１６】
「対象」または「患者」という用語は、本明細書において使用する場合、哺乳動物が含
まれることを意図する。哺乳動物は、イヌ、ネコ、霊長類、ウシ、ヒツジ、ブタ、ラクダ科、ヤギ、げっ歯類、またはウマでよい。好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。
【００１７】
「効力」という用語は、本明細書において使用する場合、特定の治療計画の有効性を意味する。効力は、液性腫瘍増殖の阻害、腫瘍量の縮小、例えば放射線学的画像診断によって評価する転移病変の縮小、腫瘍増殖の遅延、および検出可能な腫瘍関連抗原の欠損などの特性（しかし、これらに限定されない）に基づいて測定することができる。腫瘍進行を評価する更なる方法は、本明細書において議論されており、治療および診断を行う医療専門家には公知であろう。
【００１８】
「組成物」という用語および「本発明の組成物」という語句には、本明細書に開示されているような任意の化合物（複数可）および／またはコンジュゲート（複数可）が含まれることを意図する。
【００１９】
「薬学的に許容される担体」および「薬学的に許容される添加剤」という語句は、担体としてのみ作用するように意図された製剤の部分を形成することにおいて使用される任意の化合物（複数可）を意味することを意図する。薬学的に許容される担体または添加剤は、一般に安全で無毒性であり、生物学的またはその他の点で望ましくないものではない。薬学的に許容される担体または添加剤には、本明細書において使用する場合、１種および複数両方のこのような担体または添加剤が含まれる。
【００２０】
「薬学的に許容される塩」は、生物学的有効性および本発明の化合物の特性を保持し、生物学的またはその他の点で望ましくないものではない塩を意味する。多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれと同様の基の存在によって、酸性塩および／または塩基性塩を形成することができる。
【００２１】
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機塩基から調製することができる。無機塩基由来の塩には、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウム塩が含まれる。有機塩基由来の塩には、それだけに限らないが、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、２置換シクロアルキルアミン、３置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、２置換シクロアルケニルアミン、３置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環式アミン、ジ複素環式アミン、トリ複素環式アミン、混合されたジ−およびトリ−アミン（アミン上の置換基の少なくとも２つは異なり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環式などからなる群から選択される）などの、第一級、第二級、および第三級アミンの塩が含まれる。２個または３個の置換基が、アミノ窒素と一緒になって複素環式基またはヘテロアリール基を形成するアミンがまた含まれる。
【００２２】
適切なアミンの例には、ほんの一例として、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエルチアミン、トリ（イソ−プロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン
、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジンなどが含まれる。他のカルボン酸誘導体は、本発明の実施に際して有用であろうことを理解すべきである（例えば、カルボキサミド、低級アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミドなどを含めたカルボン酸アミド）。
【００２３】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸から調製し得る。無機酸由来の塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。有機酸由来の塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、サリチル酸などが含まれる。
【００２４】
「薬学的に許容されるカチオン」という用語は、薬学的に許容される塩のカチオンを意味する。
【００２５】
本明細書において定義される全ての置換基において、それら自体にさらなる置換基を伴う置換基を定義することによって得られるポリマー（例えば、それ自体が置換アリール基で置換されている置換アリール基を置換基として有する置換アリールなど）は、本明細書において包含されることは意図されないことが理解される。このような場合には、このような置換基の最大数は３である。すなわち、上記の定義の各々は、例えば、置換アリール基は、−置換アリール−（置換アリール）−（置換アリール）に限定されるという限定によって制約される。
【００２６】
インテグリンは、コラーゲン、フィブロネクチン、およびラミニンなどの大部分の細胞外マトリックスタンパク質を結合するための、動物細胞上の主要な受容体である類似の膜貫通リンカータンパク質の大きなファミリーである。インテグリンは、α鎖およびβ鎖からなるヘテロ二量体である。現在までに、９種の異なるαサブユニットおよび１４種の異なるβサブユニットからなる２０種の異なるインテグリンヘテロ二量体が同定されてきた。「α４インテグリン」という用語は、βサブユニットのいずれかと組み合わせたα４サブユニットを含有するヘテロ二量体である酵素連結型細胞表面受容体のクラスを意味する。ＶＬＡ−４は、α４インテグリンの一例であり、α４およびβ１サブユニットのヘテロ二量体であり、またα４β１インテグリンとも称される。
【００２７】
「プロドラッグ」とは、対象に投与されたときに、本発明の化合物、またはその活性代謝物もしくは残渣を直接的または間接的に提供することができる、本発明の化合物の任意の薬学的に許容される誘導体を意味する。特に好ましい誘導体およびプロドラッグは、本発明の化合物が対象に投与されたときにこのような化合物のバイオアベイラビリティーを増加させ（例えば、経口投与された化合物が血液中により容易に吸収されることを可能にすることによって）、または親種と比較して生物学的区画（例えば、脳またはリンパ系）への親化合物の送達を増強するものである。プロドラッグには、本発明の化合物のエステル形態が含まれる。エステルプロドラッグの例には、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、アクリル酸エステル、およびエチルコハク酸エステル誘導体が含まれる。プロドラッグの総括は、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズの第１４巻、およびＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７（これらの両方とも参照により本明細書中に組み込まれている）に提供されている。
【００２８】
「治療する」、および「治療」などという用語は、本明細書において所望の薬理学的および生理学的効果を得ることを一般に意味するために使用される。さらに具体的には、一般に液性腫瘍および／または転移性疾患を有する対象を治療するために使用される本明細書に記載されている組成物は、治療有効量で提供されて、下記の任意の１つまたは複数を達成する。腫瘍増殖の阻害、腫瘍量の縮小、転移病変の減少、治療が開始された後の新しい転移病変の発生の阻害、または検出可能な疾患がないような腫瘍の縮小（例えば、放射線学的画像診断、体液分析、細胞遺伝学、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション、免疫細胞化学、コロニーアッセイ、マルチパラメータフローサイトメトリー、またはポリメラーゼ連鎖反応によって評価すると）。「治療」という用語は、本明細書において使用する場合、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含する。
【００２９】
「治療有効量」とは、哺乳動物に投与したときに腫瘍に対して有効であるのに十分な、本明細書において開示されている薬剤、試薬、化合物、組成物、または試薬の組合せの量を意味する。
【００３０】
「腫瘍」という用語は、良性および悪性両方の増殖または癌を含めることを意味する。したがって、「癌」という用語は、特に明記しない限り、良性および悪性両方の増殖を含めることができる。「液性腫瘍」とは、白血病または骨癌などの液体および／または軟部組織腫瘍を意味する。
【００３１】
「転移性疾患」、「転移」、および「転移病変」という用語は、原発腫瘍に対して遠い部位に移動した細胞の群を意味する。
【００３２】
下記の頭字語は関連する用語のために一般に使用され、当技術分野において公知である。
α４β１        アルファ−４ベータ−１
α４β１        アルファ−４ベータ−７
ＡＢＤＩＣ      ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダカルバジン、ロムスチン、およびプレドニゾン
ＡＬＬ          急性リンパ球性白血病
ＡＭＬ          急性骨髄性白血病
ＣＬＬ          慢性リンパ球性白血病
ＣＭＬ          慢性骨髄性白血病
ＭＧＵＳ        意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症
ＭＭ            多発性骨髄腫
ＰＢＭＣ        末梢血単球細胞
ＳＭＭ          くすぶり型多発性骨髄腫
ＶＣＡＭ−１    血管細胞接着分子１（ＣＤ１０６およびＩＮＣＡＭ−１１０としても知られている）
ＶＬＡ−４      最晩期抗原４（アルファ−４ベータ−１、α４β１インテグリン、ＶＬＡ−４ａ、およびＣＤ４９ｄとしても知られている）
【００３３】
〔疾患〕
本発明の一態様では、本明細書において開示されている方法および組成物を使用して、悪性病変の進行を阻害または遅延することができる。これらの悪性病変は、好ましくは液性腫瘍である。液性腫瘍には、それだけに限らないが、骨髄腫および白血病を含めてもよい。本発明の別の態様は、この方法および組成物を使用して、転移または転移性進行を阻害または防止することである。
【００３４】
したがって、本発明の一態様は、本発明の組成物で液性腫瘍または転移性疾患を治療することである。本明細書において意図する組成物は、アルファ−４および／またはアルファ−９インテグリンを標的にすることができる。これらの組成物は、単独で、互いに組み合わせて、または化学療法、手術、放射線療法、温熱療法、免疫療法、ホルモン療法、生物学的療法（例えば、細胞破壊、サイトカイン、免疫療法、インターフェロン、インターロイキン−２、癌ワクチン療法、および移入療法をもたらす免疫エフェクター機序）などの他の癌治療と組み合わせて使用してもよい。組成物はまた、それだけに限らないが、悪心および疼痛を含めた癌治療と関連する有害な副作用のために他の公知の療法と組み合わせて使用してもよい。
【００３５】
［治療］
癌という用語は、多数のサブセットからなる各臓器の各癌を伴う悪性病変の集合を包含する。典型的には癌診断時に、「癌」は実際に、多様な遺伝的、生化学的、免疫学的、および生物学的特性を有する細胞の複数の亜集団からなる。
【００３６】
本発明の組成物および方法によって治療される癌のタイプは、アルファ−４インテグリンおよび／もしくはアルファ−９インテグリン、またはそれらのリガンド（例えば、アルファ−４インテグリンのリガンドには、ＶＣＡＭ−１および／またはＭａｄＣＡＭ−１が含まれる）を示すものである。好ましい癌には、それだけに限らないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および多発性骨髄腫（ＭＭ）を含めた血液学的悪性病変が含まれる。白血病は、リンパ芽球性または骨髄性のことがある。リンパ芽球性（またはリンパ球性）白血病は、リンパ球に影響を及ぼす。骨髄性白血病は、骨髄球に影響を及ぼす。
【００３７】
リンパ球性新生物疾患は、血清タンパク質電気泳動試験または末梢血フローサイトメトリーにおいて測定される過剰産生された抗体を測定することによって検出可能な、単一のＢ細胞クローンの大量の増殖によって特徴付け得る。このような増殖は、「モノクローナル」であると言われ、このようなＢ細胞の群によって産生されたモノクローナル抗体は、アミロイドーシスおよびループスなどの疾病をもたらすことがあり、または根底にある悪性病変の徴候であることがある。クローン性の概念は、例えばリンパ腫様皮膚病変の診断において、悪性病変と密接に関連している。免疫Ｂ細胞の特定のクローンの増殖を、通常臨床医は癌の顕著な特徴である無制限な細胞増殖の証拠として解釈する。リンパ性白血病（またはリンパ球性白血病）は、リンパ組織に影響を及ぼす白血病の１タイプである。これらの白血病は通常、クローン（新生物の）リンパ系集団が成熟することを止めた成熟段階によって分けられる（すなわち、急性リンパ芽球性白血病または慢性リンパ芽球性白血病）。
【００３８】
急性リンパ球性白血病としても知られている急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は、白血球の白血病の一形態である。悪性の未熟白血球が連続的に増加し、骨髄中で過剰産生される。その結果、正常細胞が骨髄から出されて、他の臓器に転移する。「急性」とは、治療せずにいると数週間から数ヵ月で致死的となることがある、循環リンパ球の未分化の未熟状態、および疾患の急速な進行を意味する。
【００３９】
慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ；慢性リンパ性白血病としても知られている）は、Ｂ細胞に影響を及ぼす。Ｂ細胞は通常、骨髄中で生じ、リンパ節中で発達する。ＣＬＬでは、Ｂ細胞のＤＮＡが損傷され、そのため細胞はもはや感染症と戦わなくなる。しかし、Ｂ細胞は増殖を続け、健康な血液細胞を押し出す。したがって、ＣＬＬは、Ｂ細胞の異常新生物増殖として特徴付けられる。
【００４０】
大部分の人は、高い白血球数を示す定期の血液検査の結果として、症状を伴わずに診断される。しかし、それが進行すると、ＣＬＬは、リンパ節、脾臓、および肝臓の腫大、結局は貧血および感染症をもたらす。初期のＣＬＬは治療を受けず、後期のＣＬＬは、化学療法およびモノクローナル抗体で治療される。生存期間は５年から２５年超まで異なる。
【００４１】
急性骨髄球性白血病としても知られている急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、骨髄に蓄積し、正常な血液細胞の産生を妨げる、異常細胞の急速な増殖によって特徴付けられる白血球の骨髄細胞系の癌である。ＡＭＬの症状は、正常な骨髄が白血病細胞で置き換えれ、これによって赤血球、血小板、および正常な白血球が減少することからもたらされる。これらの症状には、疲労、息切れ、あざおよび出血しやすいこと、ならびに感染症の危険性の増加が含まれる。急性白血病として、ＡＭＬは急速に進行し、治療せずにいると典型的には数週間または数カ月内で致死的となる。
【００４２】
急性骨髄性白血病は、潜在的に治癒できる疾患であるが、現在の療法では少数の患者が治癒するのみである。ＡＭＬは最初に、寛解を誘発することを目的とする化学療法で治療する。患者の中では、造血幹細胞移植をさらに受けることがある。
【００４３】
慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）は、骨髄中の主に骨髄性細胞が増加した無秩序な増殖、および血液中のこれらの細胞の蓄積によって特徴付けられる白血病の一形態である。ＣＭＬは、成熟した顆粒球（好中球、好酸球、および好塩基球）ならびにそれらの前駆体の増殖をもたらすクローン性骨髄幹細胞障害である。歴史的に、それは、化学療法、インターフェロンおよび骨髄移植で治療されてきた。
【００４４】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、典型的には骨髄で発生し、骨格が関与する形質細胞の悪性増殖である。ＭＭは、特定の関与部位および血漿タンパク質の形成の異常に起因する臨床的特徴を表す。この状態は、骨および場合によっては骨外部位の触診可能な膨張をもたらす、様々な骨（特に、頭蓋骨）の髄中の異常または悪性形質細胞の多数のびまん性病巣もしくは結節性の蓄積によって通常特徴付けられる。放射線検査によって、骨病変は、特徴的な「打ち抜き」の外観を有し得る。
【００４５】
骨髄腫に関与する細胞は典型的には、異常タンパク質、ならびに／または血清および尿中の異常なタンパク質レベルを生じさせる。ＭＭは典型的には、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）からくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）に発達する。これらの状態の症状には、高カルシウム血症、腎不全、疲労、貧血、骨痛、特発性骨折、感染症の頻度もしくは期間の増加、または異常な尿の色もしくは匂いが含まれることがある。「Ｍスパイク」とは、免疫電気泳動における電気泳動ゲル上の細いバンド、または異常な円弧として典型的には可視化される単クローン性ピークを意味する。それは、単一の共通の細胞から生じたクローン細胞によって産生された相同免疫グロブリン、例えば、単一のクラスおよびサブクラスの重鎖、ならびに単一のタイプの軽鎖によって特徴付けられる単クローン性免疫グロブリンの増殖を表す（Ｍタンパク質、単クローン性タンパク質とも、より広範にはパラプロテインとも称される）。
【００４６】
［転移性疾患］
患者が液性腫瘍であると診断されると、１つの大きな懸念は、腫瘍が進行して、局所リンパ節および遠隔臓器に広がっているかどうかである。大部分の癌死亡は、従来の癌治療に対して耐性がある転移からもたらされる。転移は、最初の腫瘍ではない体の別の領域に生じることがあり、それによって手術、放射線照射、薬物、および／または生物療法による完全な根絶を不可能に近いものとしている。したがって、本明細書において開示されている方法、併用療法、および化合物による治療のために意図されているのは、転移性癌の治療である。
【００４７】
癌は典型的には１つの場所でのみ増殖を始める。癌が進行すると、癌は患者において遠位の位置に移動することがある。いくつかのインテグリンサブユニット（すなわち、アルファ−２、アルファ−４およびベータ−３）は、正常な前立腺組織および正常なメラニン形成細胞と比較して、転移において発現が増加することが見出された。Ｈａｒｔｓｔｅｉｎら、１９９７、Ｏｐｈｔｈａｌ．Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．、１３（４）：２２７〜３８。
【００４８】
全ての腫瘍において転移の形成には本質的なステップがある。これらのステップには、下記が含まれる。
（１）悪性形質転換後、新生物が存在している臓器／組織環境によって支持される新生細胞の進行性増殖。
（２）直径１〜２ｍｍ超にさらに増殖するための腫瘍の血管新生または血管形成。
（３）細胞が増加した運動性または原発病変から離れる能力を有する粘着性分子の発現のダウンレギュレーション。
（４）単一の腫瘍細胞または細胞集合体の剥離および塞栓形成（これらの細胞の大部分は急速に破壊される）。
（５）腫瘍細胞が剥離および塞栓形成ステップを生き残ると、それらの細胞は血管の内腔内で増殖を続けなければならない。次いで、細胞は、浸潤の間に作用しているのと同様の機序によって、臓器実質へと血管外遊出し続ける。
（６）適当な細胞表面受容体を有する腫瘍細胞は、パラクリン増殖因子に反応し、それ故に臓器実質中で増殖することがある。
（７）宿主防御の腫瘍細胞逃避（特異的および非特異的免疫反応の両方）。
（８）転移が直径１〜２ｍｍ超に増殖するために、転移は、血管網を発達させなければならない。
【００４９】
したがって、原発腫瘍がこれらのステップを通して進行する十分な時間が与えられる場合、それは原発腫瘍から遠い部位または部位（複数）に転移するであろう。開示されている方法および療法は、転移性過程においてこれらのステップの１つまたは複数を阻害または防止する。腫瘍転移の機序および病理学のさらなる詳細については、Ｉｓａｉａｈ  Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ」、ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ
＆  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＯＮＣＯＬＯＧＹ  １３５〜１５２（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、第５版、１９９７）を参照されたい。
【００５０】
したがって、本発明の一態様は、抗アルファ−４インテグリンおよび／もしくは抗アルファ−９インテグリン活性を有し、またはアルファ−４インテグリンおよび／もしくはアルファ−９インテグリンのリガンドを標的にする化合物およびコンジュゲートを使用した方法、ならびにそれらを含む組成物を提供する。これらの組成物は、単独で、または転移を防止し、もしくは転移病変の進行を阻害する他の薬剤もしくは癌治療と組み合わせて使用することができる。したがって、組成物および方法を使用して、アルファ−４インテグリンおよび／もしくはアルファ−９インテグリン、またはそのリガンドを示す任意の原発腫瘍の任意の転移を治療することができる。
【００５１】
［アルファ−４インテグリンおよび／またはアルファ−９インテグリンに選択的に結合する化合物およびコンジュゲート］
アルファ−４インテグリンおよび／またはアルファ−９インテグリンに結合し、それらを阻害する能力を有する様々な組成物を、本発明の実施において使用することができる。多くのこのような組成物が同定および特性決定されてきているが、特定の組成物を下記に記載する。好ましくは、これらの組成物には、下記に例示する式の化合物、相同体および
誘導体およびコンジュゲートが含まれる。これらの組成物の組合せもまた有用であり得ることもまた意図される。
【００５２】
一態様によれば、利用することができる化合物は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、もしくはエステルであり、
【化１】
2014210790.tif 000003
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、およびＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択される。
【００５３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、メチルまたはトリフルオロメチルである。また他の実施形態では、Ｒ１は、メチルである。
【００５４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。また他の実施形態では、Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルである。別の実施形態では、Ｒ２は、メチルまたはエチルであり、さらに別の実施形態では、Ｒ２は、イソプロピルである。
【００５５】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は、シクロペンチルである。
【００５６】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルである。他の実施形態では、Ｒ２は、アリルである。
【００５７】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ２〜Ｃ４アルキニルである。他の実施形態では、Ｒ２は、プロパルギルである。
【００５８】
上記の式Ｉの化合物の例には、表１に記載したＲ１およびＲ２基を有するものが含まれる（その薬学的に許容される塩、またはエステルを含めた）。
【００５９】
【表１】
2014210790.tif 000004
【００６０】
別の態様では、利用することができる化合物は、式ＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩、もしくはエステルであり、
【化２】
2014210790.tif 000005
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、およびＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択される。
【００６１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、メチルまたはトリフルオロメチルである。また他の実施形態では、Ｒ１は、メチルである。
【００６２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。また他の実施形態では、Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルである。別の実施形態では、Ｒ２は、メチルまたはエチル
であり、さらに別の実施形態では、Ｒ２は、イソプロピルである。
【００６３】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は、シクロペンチルである。
【００６４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルである。他の実施形態では、Ｒ２は、アリルである。
【００６５】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ２〜Ｃ４アルキニルである。他の実施形態では、Ｒ２は、プロパルギルである。
【００６６】
上記の式ＩＩの化合物の例には、表２に記載したＲ１およびＲ２基を有するものが含まれる（その薬学的に許容される塩、またはエステルを含めた）。
【００６７】
【表２】
2014210790.tif 000006
【００６８】
フェニル環上のピロリジニルカルボニルオキシ基のオルトおよびメタ置換もまた、上記の式ＩＩの範囲内である。
【００６９】
さらに別の態様では、利用することができる化合物には、特に下記、
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−１，１，１−トリフルオロメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）
フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−アリルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルブチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）−プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（３−クロロ−Ｎ−エチルプロピルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（３−クロロ−Ｎ−メチルプロピル−スルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−３，３，３−トリフルオロプロピルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルプロピルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）−プロパン酸；および
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−２−メチルプロピルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）−フェニル）プロパン酸；
およびその薬学的に許容される塩またはエステルが含まれる。
【００７０】
上記の式ＩおよびＩＩに関して本明細書および特許請求の範囲において使用される下記の用語は、下記で示す意味を有する。
【００７１】
「アルキル」とは、１〜４個の炭素原子、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する一価の直鎖状および分岐状ヒドロカルビル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔ−ブチルなどの基によって例示される。
【００７２】
「アルケニル」とは、２〜４個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子の、少なくとも１部位、好ましくは１部位のビニル（＞Ｃ＝Ｃ＜）不飽和を有する、直鎖状または分岐状の一価ヒドロカルビル基を意味する。このようなアルケニル基の例には、ビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペン−１−イル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）、ｎ−ブテン−２−イル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）などが含まれる。この用語内に含まれるのは、シスおよびトランス異性体またはこれらの異性体の混合物であ
る。
【００７３】
「アルキニル」とは、２〜４個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子の、少なくとも１部位、好ましくは１部位のアセチレン−Ｃ≡Ｃ−不飽和を有する、直鎖状または分岐状の一価ヒドロカルビル基を意味する。このようなアルキニル基の例には、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ｎ−プロピン−１−イル（−ＣＨ≡ＣＨＣＨ３）などが含まれる。
【００７４】
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味し、好ましくはフルオロまたはクロロである。
【００７５】
「ハロアルキル」とは、１〜５個のハロ基を有するアルキル基を意味する。好ましくは、このような基は、１〜３個のハロ基および１〜２個の炭素原子を有する。例示的なハロアルキル基には、ハロメチル（例えば、フルオロメチル）、ジハロメチル（例えば、ジフルオロメチル）、トリハロメチル（例えば、トリフルオロメチル）、ハロエチル（例えば、２−クロロエト−１−イル）、トリハロエチル（例えば、２，２，２−トリフルオロエト−１−イル）、ハロプロピル（例えば、３−クロロプロプ−１−イル）およびトリハロプロピル（例えば、３，３，３−．トリフルオロプロプ−１−イル）が含まれる。
【００７６】
［化合物の調製］
上記の式ＩおよびＩＩの化合物は、下記の一般法および手順を使用して容易に利用可能な出発物質から調製することができる。典型的または好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が所与の場合、他の処理条件もまた、特に明記しない限り使用することができることを理解されたい。最適な反応条件は、使用する特定の反応物または溶媒によって変化し得るが、このような条件は、通常の最適化手順によって当業者が決定することができる。
【００７７】
さらに、当業者であれば明らかであろうように、従来の保護基は、特定の官能基が望ましくない反応を起こすことを防止するのに必要であり得る。様々な官能基のための適切な保護基、ならびに特定の官能基を保護および脱保護するための適切な条件は、当技術分野で周知である。例えば、多数の保護基は、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＧ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１、およびそこに引用されている参考文献に記載されている。
【００７８】
さらに、上記の式ＩおよびＩＩの化合物は、典型的には１つまたは複数のキラル中心を含有する。したがって必要に応じて、このような化合物は、純粋な立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして、または立体異性体が濃縮された混合物として、調製または単離することができる。全てのこのような立体異性体（および濃縮された混合物）は、他に示さない限り上記の式ＩおよびＩＩの範囲内に含まれる。純粋な立体異性体（または濃縮された混合物）は、例えば、当技術分野において周知の光学活性な出発物質または立体選択的試薬を使用して調製し得る。代わりに、このような化合物のラセミ混合物は、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割剤などを使用して分離することができる。
【００７９】
上記の式ＩおよびＩＩの大部分の化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ  ｖ．１０．０を使用して命名した（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｏｆｔ、１００Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｐａｒｋ  Ｄｒｉｖｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ０２１４０から入手可能）。
【００８０】
一実施形態では、上記の式ＩおよびＩＩの化合物は、スキーム１において下記で説明す
るように調製することができ、ここでは例示的な目的のみのために、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、イソプロピルである。
【化３】
2014210790.tif 000007
式中、Ｐｇは、ベンジル、ｔ−ブチルなどのカルボキシル保護基である。
【００８１】
スキーム１は、Ｒ２がアルキルまたはシクロアルキルである化合物の調製において特に有用である。
【００８２】
スキーム１において、出発物質の５−アミノピリミジン中間体である化合物１．１は、米国特許第７，０２６，３２８Ｂ１号に詳細が記載されており、例示のみの目的で、このスキームにおいて好ましい４−置換フェニルアラニン誘導体として示される。当然ながら、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は、同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【００８３】
具体的には、スキーム１において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２で還元することによって相当する５−ニトロ−ピリミジンから調製する）を、従来の還元的アミノ化条件下で僅かに過剰なＣ１〜Ｃ４アルデヒドまたはケトン（スキーム１においてアセトンとして例示されている）と反応させる。スキーム１において、化合物１．１の５−アミノ基は、中間体イミンを形成し（図示せず）、それはＰｔＯ２などの適切な触媒上でシアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素などの従来の還元剤によって、相当するアミン（化合物１．２）へとインサイチュで還元される。反応は、テトラヒドロフラン、塩化メチレンなどの適切な不活性希釈剤中で行われる。反応が実質的に完了するまで、反応を約０℃〜約３０℃で維持し、これは典型的には約０．５〜１６時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．２を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００８４】
相当するアルキルスルホニルアミド基（化合物１．３）への化合物１．２中のアミン基の変換は、従来の方法を介して進行する。例えば、一方法では、化合物１．２を、生じた
酸を除去するために、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドなどの僅かに過剰なハロゲン化アルカンスルホニルと接触させる。反応は好ましくは、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなどの適切な不活性溶媒中で行われる。反応は好ましくは約−５°〜−３０℃で行われ、反応が実質的に完了するまで続けられ、これは典型的には０．５〜１６時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．３を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００８５】
ハロゲン化アルキルスルホニルは、公知の化合物、または合成の従来の手順によって調製することができる化合物である。このような化合物は典型的には、三塩化リンおよび五塩化リンを使用して、相当するスルホン酸から、すなわち、式Ｒ１−ＳＯ３Ｈ（Ｒ１は、上記定義の通りである）の化合物から調製される。反応は一般に、無溶媒でまたはジクロロメタンなどの不活性溶媒中で０℃〜約８０℃の範囲の温度にて、約１〜約４８時間スルホン酸と約２〜５モル当量の三塩化リンまたは五塩化リンとを接触させることによって行われ、スルホニルクロリドが得られる。代わりに、スルホニルクロリドは、従来の反応条件下でチオールを塩素（Ｃｌ２）および水で処理することによって、相当するチオール化合物から、すなわち、式Ｒ１−ＳＨの化合物（Ｒ１は、上記定義の通りである）から調製することができる。
【００８６】
上記の式ＩおよびＩＩにおいて使用するためのスルホニルクロリドの例には、それだけに限らないが、メタンスルホニルクロリド、エタンスルホニルクロリド、２−プロパンスルホニルクロリド、１−ブタンスルホニルクロリド、トリフルオロメタンスルホニルクロリド、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニルクロリドなどが含まれる。
【００８７】
次いで、化合物１．３のカルボキシル保護基を、従来の条件によって除去し、化合物１．４である式Ｉの化合物を得る。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、パラジウム／炭素触媒の存在下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中で高い水素圧力下にて水素と接触させることによって除去することができる。反応が完了すると、化合物１．４を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができる。
【００８８】
別の実施形態では、上記の式ＩおよびＩＩの化合物は、スキーム２において下記で説明するように調製することができる。
【化４】
2014210790.tif 000008
式中、Ｒ１およびＲ２は、本明細書に定義されている通りであり、Ｐｇは、カルボキシル保護基であり、Ｘはハロである。
【００８９】
スキーム２において、出発物質の５−アミノピリミジン中間体である化合物１．１は、米国特許第７，０２６，３２８Ｂ１号に詳細が記載されており、例示のみの目的で、このスキームにおいて好ましい４−置換フェニルアラニン誘導体として示される。当然ながら、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は、同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【００９０】
具体的には、スキーム２において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２による還元によって相当する５−ニトロ−ピリミジンから調製する）を、生じた酸を除去するために、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドなどの僅かに過剰なＲ１−ハロゲン化スルホニルと反応させる。反応は好ましくは、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロロメタン、クロロホルムなどの適切な不活性溶媒中で行われる。反応は好ましくは約−５°〜３０℃で行われ、反応が実質的に完了するまで続けられ、これは典型的には０．５〜１６時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．５を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００９１】
化合物１．５からの単一のＲ１ＳＯ２−基の選択的除去は、従来の条件下で進行する。例えば、メタノール、エタノール、または水などのプロトン性溶媒中で、任意選択でＴＨＦなど、例えば、メタノール／テトラヒドロフランの１：１混合物、または水／テトラヒドロフランの１：１混合物の存在下で、化合物１．５と塩基との反応によって化合物１．
６が得られる。反応混合物は、炭酸カリウム、炭酸ナトリウムなどの過剰な適切な塩基を含み、反応を好ましくは２０°〜６０℃などの高温に維持する。実質的に完了するまで反応を続け、これは典型的には２４〜１４４時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．６を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００９２】
化合物１．６と過剰なハロゲン化アルキル、硫酸ジアルキル、ハロゲン化アルケニル、ハロゲン化アルキニル、またはハロゲン化シクロアルキル（すなわち、Ｘ−Ｒ２−「ハロゲン化合物」）との反応は、従来の条件下で進行し、化合物１．７が得られる。反応は典型的には、アセトン、クロロホルム、塩化メチレンなどの不活性希釈剤中、炭酸カリウム、トリエチルアミンなどの塩基の存在下で、化合物１．６を約１．１〜２０当量のハロゲン化合物と接触させることによって行われ、反応の間に生じた酸を除去する。反応は好ましくは約２０°〜６０℃で行われ、反応が実質的に完了するまで続けられ、これは典型的には０．１〜１６時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．６を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００９３】
次いで、化合物１．７のカルボキシル保護基は、従来の条件によって除去され、化合物１．８である式Ｉの化合物が得られる。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、パラジウム／炭素触媒の存在下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中で高い水素圧力下にて水素と接触させることによって除去することができる。反応が完了すると、化合物１．８を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができる。
【００９４】
さらに別の実施形態では、上記の式ＩおよびＩＩの化合物は、スキーム３において下記で説明するように調製することができる。
【化５】
2014210790.tif 000009
式中、Ｒ１は、上記定義の通りであり、Ｐｇは、ベンジル、ｔ−ブチルなどのカルボキシル保護基であり、Ｒ２’は、ヨード基に結合しているＣＨ２部分を有するアルキル、アルケニル、アルキニル、またはフェニルアルキレン基である。
【００９５】
スキーム３において、出発物質の５−アミノピリミジン中間体である化合物１．１は、米国特許第７，０２６，３２８Ｂ１号に詳細が記載されており、例示のみの目的で、このスキームにおいて好ましい４−置換フェニルアラニン誘導体として示される。当然ながら、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は、同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【００９６】
具体的には、スキーム３において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２による還元によって相当する５−ニトロ−ピリミジンから調製）を、従来の方法によって相当するトリフルオロアセトアミド（化合物１．８）に変換する。例えば、僅かに過剰な無水トリフルオロ酢酸を、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ピリジンなどの適切な不活性希釈剤中で化合物１．１と合わせる。反応が実質的に完了するまで反応を約０℃〜約３０℃で維持し、これは典型的には約０．５〜２４時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．８を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００９７】
相当するＮ（Ｒ２’），Ｎ−トリフルオロアセトアミド−ピリミジン（化合物１．９）への化合物１．８の変換は、従来の技術によって再び進行する。例えば、過剰なハロゲン化物（Ｒ２’−Ｉ）を、ＤＭＦなどの適切な不活性希釈剤中、炭酸カリウムなどの過剰な適切な塩基の存在下で、化合物１．８と合わせる。一実施形態では、概ね２当量のＲ２’−Ｉおよび炭酸カリウムを用いる。シール容器中周囲条件下で反応を維持し、反応が実質
的に完了するまで続けられ、これは典型的には２０〜７２時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．９を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００９８】
次いで、トリフルオロアセチル基を除去し、相当するアミン（化合物１．１０）を得る。この実施形態では、トリフルオロアセチル基は、アミン保護基として作用する。上記のように、この反応は、例えば、水とプロトン性溶媒（メタノールなど）との混合物中で、化合物１．９を大幅に過剰な炭酸カリウムなどの適切な塩基と接触させることによって従来通りに進行する。４０°〜６０℃などの高温で反応が行われ、反応が実質的に完了するまで続ける。反応が完了すると、化合物１．１０を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【００９９】
次に、相当するアルキルスルホニルアミド基（化合物１．１１）への化合物１．１０中のアミン基の変換は、従来の方法によって進行する。例えば、一方法では、生じた酸を除去するために、化合物１．１０を、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で僅かに過剰なハロゲン化アルキルスルホニルと接触させる。反応は好ましくは、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなど適切な不活性溶媒中で行われる。反応は好ましくは約０°〜３０℃で行われ、反応が実質的に完了するまで続けられ、これは典型的には２〜４８時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物１．１１を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１００】
化合物１．１１のカルボキシル保護基は、従来の条件によって除去し、化合物１．１２（式Ｉの化合物）を得ることができる。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、パラジウム／炭素触媒の存在下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中で高い水素圧力下にて水素と接触させることによって除去することができる。反応が完了すると、化合物１．１２を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができる。
【０１０１】
本発明にはまた、上記の式ＩおよびＩＩの化合物のエステルが含まれる。エステルの調製は、スキーム１（化合物１．３）、スキーム２（化合物１．７）、およびスキーム３（化合物１．１１）などの上記の様々なスキームにおいて例示されている。さらに、実施例１は、（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレートの調製について記載し、実施例４は、（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチル−スルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレートの調製について記載している。上記の式ＩおよびＩＩの酸のエステルはまた、当技術分野で周知の方法によって酸から調製することができる。例えば、アミノ酸メチルエステルは、ＢｒｅｎｎｅｒおよびＨｕｂｅｒ、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ１９５３、３６、１１０９の方法を使用して調製することができる。
【０１０２】
上記で一覧表示した化合物、ならびに上記の式ＩおよびＩＩの化合物、ならびにこれらの化合物を調製するための手順および反応条件のさらなる説明はまた、その内容全体が参照により組み込まれている２００７年２月２６日に出願されたＰｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ  
Ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｈｉｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＶＬＡ−４と言う表題のＷＯ２００７／１０１１６５に記載されている。
【０１０３】
別の態様では、利用することができる化合物は、式ＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグであり、
【化６】
2014210790.tif 000010
式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、ヘテロアリール、および−ＮＲ５Ｒ６からなる群から選択され、Ｒ５およびＲ６は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群から独立に選択され、またはＲ５およびＲ６はそのペンダントである窒素原子と一緒になって、複素環を形成し、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、およびＣ２〜Ｃ４アルキニルからなる群から選択され、
Ｒ３およびＲ４は、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲ３およびＲ４はそのペンダントである窒素原子と一緒になって結合し、複素環を形成する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ４基は、フェニル環のパラ位にある。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、結合して複素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、結合してピロリジニル環を形成する。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２は、エチルである。
【０１０７】
また他の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、結合して複素環を形成し、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。また他の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、結合してピロリジニル環を形成し、Ｒ２は、エチルである。
【０１０８】
上記の式ＩＩＩの化合物の例には、表３に記載したＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４基を有するものが含まれる。
【０１０９】
【表３】
2014210790.tif 000011
【０１１０】
別の態様では、利用することができる化合物は、式ＩＶの化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグであり、
【化７】
2014210790.tif 000012
式中、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、またはヘテロアリールであり、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ９およびＲ１０は、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、あるいはＲ９およびＲ１０はそのペンダントである窒素原子と一緒になって、複素環を形成する。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０基は、フェニル環のパラ位にある。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は、結合して複素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は、結合してピロリジニル環を形成する。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ８は、エチルである。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ７は、イソプロピルおよびｔ−ブチルからなる群から選択される。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキルである。他の実施形態では、Ｒ７は、トリフルオロメチルである。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、ヘテロアリールである。他の実施形態では、Ｒ７は、フラン−２−イル、フラン−３−イル、チエン−２−イル、およびチエン−３−イルからなる群から選択される。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は、結合して複素環を形成する、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ７は、ヘテロアリールである。他の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０はペンダント窒素と一緒になって、ピロリジン環を形成し、Ｒ８は、エチルであり、Ｒ７は、ヘテロアリールである。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は、結合して複素環を形成する、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ７は、アルキルである。他の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０はペンダント窒素と一緒になって、ピロリジン環を形成し、Ｒ８は、エチルであり、Ｒ７は、アルキルである。
【０１１９】
本発明は、表４に記載するＲ７、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０基を有する上記の式ＩＶの化合物をさらに提供する。
【０１２０】
【表４】
2014210790.tif 000013
【０１２１】
さらに別の態様では、利用することができる化合物は、式Ｖの化合物、またはその薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグであり、
【化８】
2014210790.tif 000014
式中、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立に、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、またはＲ１１およびＲ１２はそのペンダントである窒素原子と一緒になって、複素環を形成し、
Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ１４およびＲ１５は、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲ１４およびＲ１５はそのペンダントである窒素原子と一緒になって、複素環を形成する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５基は、フェニル環のパラ位にある。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１４およびＲ１５は、結合して複素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ１４およびＲ１５は、結合してピロリジニル環を形成する。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１３は、エチルである。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１およびＲ１２は、独立に、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、エチルであり、Ｒ１２は、イソプロピルである。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１およびＲ１２は、そのペンダントである窒素原子と一緒になって結合して複素環を形成する。他の実施形態では、複素環は、ピペリジン−１−イルおよび３−チアピロリジン−１−イルからなる群から選択される。
【０１２７】
また他の実施形態では、Ｒ１４およびＲ１５は、結合して複素環を形成する、Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ１１およびＲ１２は、そのペンダントである窒素原子と一緒になって結合して複素環を形成する。
【０１２８】
本発明は、表５に記載するＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５基を有する上記の式Ｖの化合物をさらに提供する。
【０１２９】
【表５】
2014210790.tif 000015
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本発明は、パラ位においてフェニル環に結合しているそれらの各々の式において、カルバミル置換基を有する上記の式ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物を提供する。
【化９】
2014210790.tif 000016
また他の実施形態では、表３、４、および５における化合物は、パラ位において結合しているカルバミル置換基を有する。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本発明はまた、オルトまたはメタ位において結合しているカルバミル置換基を有する、表３、４、および５におけるものを含めた上記の式ＩＩＩ、Ｉ
Ｖ、およびＶの化合物を提供する。
【０１３２】
さらに別の態様では、利用することができる化合物には、下記
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（トリフルオロアセチル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）
アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロメチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；および
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
またはその薬学的に許容される塩、エステル、もしくはプロドラッグが含まれる。
【０１３３】
上記の式ＩＩＩ〜Ｖに関して本明細書および特許請求の範囲において使用される下記の用語は、下記で示す意味を有する。
【０１３４】
「アルキル」とは、好ましくは１〜４個の炭素原子、さらに好ましくは１〜３個の炭素原子を有する直鎖状、分岐状および環状アルキル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、およびメチレン−シクロプロピルなどの基によって例示される。
【０１３５】
「アルケニル」とは、２〜４個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１部位のアルケニル不飽和を有する直鎖状および分岐状アルケニル基を意味する。このようなアルケニル基の例には、ビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペン−１−イル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）、ｎ−ブテン−２−イル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）などが含まれる。この用語内に含まれるのは、シスおよびトランス異性体またはこれらの異性体の混合物である。
【０１３６】
「アルキニル」とは、２〜４個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１部位のアルキニル不飽和を有する直鎖状および分岐状アルキニル基を意味する。このようなアルキニル基の例には、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ｎ−プロピン−１−イル（−ＣＨ≡ＣＨＣＨ３）などが含まれる。
【０１３７】
「アリール」または「Ａｒ」とは、単一の環（例えば、フェニル）または複数の縮合環（例えば、ナフチルもしくはアントリル）を有する６〜１４個の炭素原子の一価の芳香族炭素環基を意味し、この縮合環は、芳香族（例えば、２−ベンゾオキサゾリノン、２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イルなど）であっても、なくてもよく、ただし、結合点は、芳香族炭素原子において存在する。好ましいアリールには、フェニルおよびナフチルが含まれる。
【０１３８】
「置換アリール」とは、ヒドロキシル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、チオール、チオアルキル、置換チオアルキル、チオアリール、置換チオアリール、チオヘテロアリール、置換チオヘテロアリール、チオシクロアルキル、置換チオシクロアルキル、チオ複素環式、置換チオ複素環式、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、置換複素環式、ヘテロアリールオキシ、置換ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、置換ヘテロシクリルオキシ、アミノスルホニル（ＮＨ２−ＳＯ２−）、および置換アミノスルホニルからなる群から選択される１〜３個の置換基、好ましくは１〜２個の置換基で置換されているアリール基を意味する。
【０１３９】
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味し、好ましくはフルオロまたはクロロである。
【０１４０】
「ハロアルキル」とは、１〜５個のハロ基を有するアルキル基を意味する。好ましくは、このような基は、１〜３個のハロ基および１〜２個の炭素原子を有する。特に好ましいハロアルキル基には、トリハロメチル（例えば、トリフルオロメチル）およびトリハロエチル（例えば、２，２，２−トリフルオロエト−１−イル）が含まれる。
【０１４１】
「ヘテロアリール」とは、環中の２〜１０個の炭素原子、ならびに酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子の、芳香族炭素環基を意味する。このようなヘテ
ロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジルもしくはフリル）、または複数の縮合環（縮合環は、アリールもしくはヘテロアリールでよい）を有することができる。このようなヘテロアリールの例には、例えば、フラン−２−イル、フラン−３−イル、チエン−２−イル、チエン−３−イル、ピロール−２−イル、ピロール−３−イル、ピリジル（２−、３−、および４−ピリジル）などが含まれる。一実施形態では、ヘテロアリールの硫黄および／または窒素原子は、任意選択で酸化されている（すなわち、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−、および／またはＮ−オキシド）。
【０１４２】
「複素環」または「複素環式」とは、環中の１〜１０個の炭素原子、および窒素、硫黄もしくは酸素から選択される１〜４個のヘテロ原子の、単一の環または複数の縮合環を有する飽和または不飽和の非ヘテロ芳香族基を意味し、縮合環系中、環の１つまたは複数は、アリールまたはヘテロアリールでよい。一実施形態では、複素環の硫黄および／または窒素原子は、任意選択で酸化されている（すなわち、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−、および／またはＮ−オキシド）。
【０１４３】
［化合物の調製］
上記の式ＩＩＩ〜Ｖの化合物は、下記の一般法および手順を使用して容易に利用可能な出発物質から調製することができる。典型的または好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が所与である場合、特に明記しない限り他の処理条件もまた使用することができることを理解されたい。最適な反応条件は、使用する特定の反応物または溶媒によって変化し得るが、このような条件は、通常の最適化手順によって当業者が決定することができる。
【０１４４】
さらに、当業者であれば明らかであろうように、従来の保護基は、特定の官能基が望ましくない反応を起こすことを防止するのに必要であり得る。様々な官能基のための適切な保護基、ならびに特定の官能基を保護および脱保護するための適切な条件は、当技術分野で周知である。例えば、多数の保護基は、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＧ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１、およびそこに引用されている参考文献に記載されている。
【０１４５】
さらに、上記の式ＩＩＩ〜Ｖの化合物は、典型的には１つまたは複数のキラル中心を含有する。したがって必要に応じて、このような化合物は、純粋な立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして、または立体異性体が濃縮された混合物として、調製または単離することができる。全てのこのような立体異性体（および濃縮された混合物）は、他に示さない限り上記の式ＩＩＩ〜Ｖの範囲内に含まれる。純粋な立体異性体（または濃縮された混合物）は、例えば、当技術分野において周知の光学活性な出発物質または立体選択的試薬を使用して調製し得る。代わりに、このような化合物のラセミ混合物は、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割剤などを使用して分離することができる。
【０１４６】
一実施形態では、上記の式ＩＩＩ〜Ｖの化合物は、スキーム４において下記で説明するように調製することができる。
【化１０】
2014210790.tif 000017
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、上記定義の通りであり、Ｐｇは、ベンジル、ｔ−ブチルなどのカルボキシル保護基である。
【０１４７】
スキーム４において、出発物質の５−アミノピリミジン中間体である化合物４．１は、その内容全体が参照により本明細書中に組み込まれているＷＯ０３／０９９８０９に詳細が記載されており、例示のみの目的で、このスキームにおいて４−置換フェニルアラニン誘導体として示される。当然ながら、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は、同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【０１４８】
具体的には、スキーム４において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物４．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２による還元によって相当する５−ニトロ−ピリミジンから調製する）を、従来の方法によって相当するトリフルオロアセトアミド（化合物４．２）に変換する。例えば、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ピリジンなどの適切な不活性希釈剤中で、僅かに過剰な無水トリフルオロ酢酸を、化合物４．１と合わせる。反応が実質的に完了するまで反応を約０℃〜約３０℃維持し、これは典型的には約０．５〜２４時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物４．２を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１４９】
相当するＮ（Ｒ２），Ｎ−トリフルオロアセトアミドピリミジン（化合物４．３）への化合物４．２の変換は、従来の技術によって再び進行する。例えば、過剰なハロゲン化物（Ｒ２−Ｉ）を、ＤＭＦなどの適切な不活性希釈剤中で炭酸カリウムなどの過剰の適切な塩基の存在下で化合物４．２と合わせる。好ましい実施形態では、概ね２当量のＲ２−Ｉ
および炭酸カリウムを用いる。シール容器中で周囲条件下にて反応を維持し、反応が実質的に完了するまで続けられ、これは典型的には２０〜７２時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物４．３を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１５０】
化合物４．３のカルボキシル保護基は、従来の条件によって除去することができ、式ＩＩＩの化合物が得られる（図示せず）。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、パラジウム／炭素触媒の存在下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中で高い水素圧力下にて水素と接触させることによって除去することができる。
【０１５１】
代わりに、トリフルオロアセチル基を除去して、相当するアミン（化合物４．４）を得ることができる。この実施形態では、トリフルオロアセチル基は、アミン保護基として作用する。上記のように、この反応は、例えば、水およびプロトン性溶媒（メタノールなど）の混合物中で、化合物４．３を炭酸カリウムなどの大幅に過剰な適切な塩基と接触させることによって従来通りに進行する。４０°〜６０℃などの高温で反応が行われ、反応が実質的に完了するまで続ける。反応が完了すると、化合物４．４を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１５２】
スキーム４において、化合物４．４を使用して、尿素誘導体（Ｒ１＝−ＮＲ５Ｒ６である）またはアシルアミノ誘導体（Ｒ１は、窒素原子を介してではなくカルボニル基に結合しているＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキルまたはヘテロアリールである）を調製することができる。第１の実施形態では、尿素誘導体は、アミドクロリド（化合物４．７）を最初に調製するなど従来の方法によって調製される。この化合物は、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウムなどの適切な塩基の存在下で、化合物４．４を過剰なホスゲンと接触させることによって調製される。反応が完了すると、化合物４．７を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができるが、好ましくは精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１５３】
次いで、アミドクロリド（化合物４．７）を、従来の条件下で適切なアミン（Ｒ５Ｒ６ＮＨ）と反応させることによって、相当する尿素誘導体（化合物４．８）に変換する。好ましくは、等モル量または過剰なアミンを、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなどの適切な溶媒中で化合物４．７と接触させる。反応が完了すると、化合物４．８を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１５４】
化合物４．８のカルボキシル保護基は、従来の条件によって除去することができ、化合物４．９である式ＩＩＩの化合物が得られる。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、パラジウム／炭素触媒の存在下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中で高い水素圧力下にて水素と接触させることによって除去することができる。反応が完了すると、化合物４．９を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができる。
【０１５５】
第２の実施形態では、アシルアミノ誘導体（化合物４．５）は、生じた酸を除去するために、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で、化
合物４．４を僅かに過剰なハロゲン化アシルと接触させることによって調製される。反応は好ましくは、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなどの適切な不活性溶媒中で行われる。反応は好ましくは約０°〜３０℃で行われ、反応が実質的に完了するまで続けられ、これは典型的には２〜４８時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物４．５を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０１５６】
化合物４．５のカルボキシル保護基は、従来の条件によって除去することができ、化合物４．６である式ＩＩＩの化合物が得られる。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、パラジウム／炭素触媒の存在下で、典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中、高い水素圧力下で水素と接触させることによって除去することができる。反応が完了すると、化合物４．６を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができる。
【０１５７】
上記で一覧表示した化合物および上記の式ＩＩＩ〜Ｖの化合物、ならびにこれらの化合物を調製するための手順および反応条件のさらなる記載はまた、その内容全体が参照により組み込まれている２００６年９月２８日に出願されたＰｙｒｉｍｉｄｉｎｙｌ  Ａｍｉｄｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｈｉｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＶＬＡ−４という表題の米国特許出願公開第２００７／０１４２４１６Ａ１号に記載されている。
【０１５８】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式Ｂの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１１】
2014210790.tif 000018
式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニルおよび低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ３は、各々独立に、Ｈまたは低級アルキルであり、あるいはＲ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成する。
【０１５９】
上記の式Ｂの化合物、ならびにこれらの化合物を調製するための手順および反応条件のさらなる記載は、本明細書の下記、ならびにその内容全体が参照により組み込まれている２００４年７月１５日に公開されたＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｗｈｉｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ
Ｂｙ  Ａｌｐｈａ４Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓという表題の米国特許出願公開第２００４／０１３８２４３号、およびその内容全体が参照により組み込まれている２００４年７月２２日に公開されたＨｅｔｅｒｏａｒｙｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｗｈｉｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｙ  Ａｌｐｈａ４Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓという表題の米国特許出願公開第２００４／０１４２９５４号に記載されている。
【０１６０】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＶＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１２】
2014210790.tif 000019
式中、各Ｘは、独立に、フルオロ、クロロまたはブロモであり、
ｐは、０〜３の整数であり、
Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリル、２，５−ジヒドピロール−１−イル、ピペリジニル、または１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−１−イルを形成し、
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される。
【０１６１】
好ましい実施形態では、Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成する。
【０１６２】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＶＩＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１３】
2014210790.tif 000020
式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成する。
【０１６３】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＶＩＩＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１４】
2014210790.tif 000021
式中、各Ｘは、独立に、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０または１であり、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｒ’であり、Ｒ’は、水素、メチルまたは−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロ
リジニル、またはピペリジニル基を形成する。
【０１６４】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＩＸの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１５】
2014210790.tif 000022
式中、各Ｘは、独立に、フルオロ、クロロまたはブロモであり、
ｐは、０〜３の整数であり、
Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリル、２，５−ジヒドピロール−１−イル、ピペリジニル、または１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルを形成し、
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【０１６５】
好ましい実施形態では、Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成し、Ｒ２は、プロパルギルである。
【０１６６】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式Ｘの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１６】
2014210790.tif 000023
式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、低級アルキニルであり、
Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、またはピペリジニル基を形成する。
【０１６７】
式Ｘの化合物において、好ましくはＲ２は、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨである。
【０１６８】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１７】
2014210790.tif 000024
式中、各Ｘは、独立に、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０または１であり、
Ｒ２は、低級アルキニルであり、
Ｒ１およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリ
ジニル、またはピペリジニル基を形成する。
【０１６９】
上記の式ＶＩ〜ＸＩの範囲内のＮ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボミルオキシ−フェニルアラニン化合物には、下記のような表６に記載されているものが含まれる。
【０１７０】
【表６】
2014210790.tif 000025
【０１７１】
上記の式ＶＩ〜ＸＩの範囲内の特定の化合物には、下記の化合物が含まれる。下記で使用されているように、これらの化合物は、フェニルアラニン誘導体に基づいて命名されるが、代わりに、これらの化合物は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノ
スルホニルフェニル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボミルオキシフェニルアラニン誘導体または２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−ｐ−カルバモイルオキシ−フェニル）プロピオン酸誘導体に基づいて命名することができた。
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェ
ニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
および薬学的に許容されるその塩。
【０１７２】
上記の式ＶＩ〜ＸＩに関して本明細書および特許請求の範囲において使用される下記の用語は、下記に示す意味を有する。
【０１７３】
「低級アルキル」とは、直鎖および分岐鎖アルキル基を含めた、１〜５個の炭素原子を有する一価のアルキル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、イソ−プロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどの基によって例示される。
【０１７４】
「低級アルキレン」という用語は、直鎖および分岐鎖アルキレン基を含めた、１〜４個の炭素原子の二価のアルキレン基を意味する。この用語は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基によって例示される。
【０１７５】
「低級アルケニル」という用語は、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１部位のみのアルケニル不飽和（すなわち、＞Ｃ＝Ｃ＜）を有するアルケニル基を意味する。この用語は、アリル、エテニル、プロペニル、ブテニルなどの基によって例示される。
【０１７６】
「低級アルキニル」という用語は、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１部位のみのアルキニル不飽和（すなわち、−Ｃ≡Ｃ−）を有するアルキニル基を意味する。この用語は、アセチル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）、３−ブチニル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ３）などの基によって例示される。
【０１７７】
「低級シクロアルキル」という用語は、例示として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含めた、単一の環式環を有する３〜６個の炭素原子の環状アルキル基を意味する。
【０１７８】
「低級アルキレンシクロアルキル」という用語は、本明細書に定義されているような低級アルキレン−低級シクロアルキルからなる基を意味する。このような基は、メチレンシクロプロピル（−ＣＨ２−シクロプロピル）、エチレンシクロプロピルなどによって例示される。
【０１７９】
［化合物の調製］
上記の式ＶＩ〜ＸＩの化合物は、下記のスキームＣおよび実施例１７〜３５に記載の方法および手順を使用して、利用可能な出発物質から容易に調製することができる。これらの方法および手順は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフ
ェニル−イリミジン−４−イル］−ｐ−カルボミルオキシ−フェニルアラニン化合物を調製するための特定の反応プロトコールを要約する。実施例１７〜３５および方法において例示されていない範囲内の化合物は、市販または当技術分野で周知の出発物質の適当な置換によって容易に調製される。
【０１８０】
上記の式ＶＩ〜ＸＩの化合物を調製するための他の手順および反応条件は、下記に記載の実施例１７〜３５に記載されている。さらに、上記の式ＶＩ〜ＸＩの特定の態様において有用な化合物を調製するための他の手順は、その開示内容の全体が参照により本明細書に組み込まれている２００２年１２月１０日に発行された米国特許第６，４９２，３７２号に開示されている。
【０１８１】
上記の式ＶＩ〜ＸＩの化合物、ならびにこれらの化合物を調製するための手順および反応条件のさらなる記載は、その内容全体が参照により組み込まれている２００４年７月１５日に公開されたＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｗｈｉｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｙ  Ａｌｐｈａ４Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓという表題の米国特許出願公開第２００４／０１３８２４３号に記載されている。
【０１８２】
さらに別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＩＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１８】
2014210790.tif 000026
式中、各Ｘは、独立に、フルオロ、クロロまたはブロモであり、
ｐは、０または１〜３の整数であり、
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される。
【０１８３】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＩＩＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化１９】
2014210790.tif 000027
式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され，
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される。
【０１８４】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＩＶの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化２０】
2014210790.tif 000028
式中、各Ｘは、独立に、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０または１であり、
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｒ’であり、Ｒ’は、水素、メチルまたは−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択される。
【０１８５】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＶの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化２１】
2014210790.tif 000029
式中、各Ｘは、独立に、フルオロ、クロロまたはブロモであり、
ｐは、０または１〜３の整数であり、
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【０１８６】
式ＸＶの化合物では、好ましくはＲ２は、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨである。
【０１８７】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＶＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化２２】
2014210790.tif 000030
式中、各Ｘは、フルオロおよびクロロからなる群から独立に選択され，
ｍは、１または２に等しい整数であり、
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【０１８８】
別の態様では、利用することができる化合物は、下記の式ＸＶＩＩの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化２３】
2014210790.tif 000031
式中、各Ｘは、独立に、フルオロまたはクロロであり、
ｎは、０または１であり、
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【０１８９】
上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩの範囲内のＮ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボミルオキシフェニルアラニン化合物には、下記のように表７において記載されているものが含まれる。
【０１９０】
【表７】
2014210790.tif 000032
【０１９１】
上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩの範囲内の特定の化合物には、下記が含まれる。下記で使用するように、これらの化合物はプロピオン酸誘導体に基づいて命名されるが、代わりに、これらの化合物は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボミルオキシ−フェニルアラニン誘導体に基づいて命名することができた。
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）シルクロプロピルメチル−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェ
ニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−プロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アリルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソボチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−ブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，６−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，３−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−（２−トリスフルオロエチル）−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
および薬学的に許容されるその塩。
【０１９２】
上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩに関して本明細書および特許請求の範囲において使用される下記の用語は、下記で示す意味を有する。
【０１９３】
「低級アルキル」とは、直鎖および分岐鎖アルキル基を含めた、１〜５個の炭素原子を有する一価のアルキル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、イソ−プロピル、ｎ
−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどの基によって例示される。「低級アルキル」は、クロロ、フルオロ、ブロモなどのハロゲンで任意選択で置換されていてもよい。
【０１９４】
「低級アルキレン」という用語は、直鎖および分岐鎖アルキレン基を含めた、１〜４個の炭素原子の二価のアルキレン基を意味する。この用語は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基によって例示される。
【０１９５】
「低級アルキニル」という用語は、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１部位のみのアルキニル不飽和（すなわち、−Ｃ≡Ｃ）を有するアルキニル基を意味する。この用語は、アセチル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）、３−ブチニル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ３）などの基によって例示される。
【０１９６】
「低級シクロアルキル」という用語は、例示として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含めた、単一の環式環を有する３〜６個の炭素原子の環状アルキル基を意味する。
【０１９７】
「低級アルキレンシクロアルキル」という用語は、本明細書に定義されているような低級アルキレン−低級シクロアルキルからなる群を意味する。このような基は、メチレンシクロプロピル（−ＣＨ２−シクロプロピル）、エチレンシクロプロピルなどによって例示される。
【０１９８】
［化合物の調製］
上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩの化合物は、下記の実施例３６〜６４に記載の方法および手順を使用して、容易に利用可能な出発物質から調製することができる。これらの方法および手順は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニル−イリミジン−４−イル］−ｐ−カルボミルオキシ−フェニルアラニン化合物を調製するための特定の反応プロトコールを概説する。実施例３６〜６４および方法内に例示していない範囲内の化合物は、市販または当技術分野で周知の出発物質の適当な置換によって容易に調製される。
【０１９９】
上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩの化合物を調製するための他の手順および反応条件は、下記に記載の実施例３６〜６４に記載されている。さらに、上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩの特定の態様において有用な化合物を調製するための他の手順は、その開示内容の全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，４９２，３７２号に開示されている。
【０２００】
上記の式ＸＩＩ〜ＸＶＩＩの化合物、ならびにこれらの化合物を調製するための手順および反応条件のさらなる記載は、その内容全体が参照により組み込まれている２００４年７月２２日に公開されたＨｅｔｅｒｏａｒｙｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｗｈｉｃｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｙ  Ａｌｐｈａ４Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓという表題の米国特許出願公開第２００４／０１４２９５４号に記載されている。
【０２０１】
さらに別の態様では、利用することができる組成物は、下記の式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートであり、
【化２４】
2014210790.tif 000033
式中、
Ｂは、分枝アームハブ分子に任意選択で共有結合している生体適合性ポリマー部分であり、
ｑは、約２〜約１００であり、
Ａは、出現するごとに独立に、式ＸＩＸの化合物、または薬学的に許容されるその塩であり、
【化２５】
2014210790.tif 000034
式中、
Ｊは、
ａ）式（ａ）の基
【化２６】
2014210790.tif 000035
（式中、Ｒ３１は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ３１は、−Ｈ、Ｒ３１’、−ＮＨ２、−ＮＨＲ３１’または−Ｎ（Ｒ３１’）２、−ＮＣ３〜Ｃ６環式、−ＯＲ３１’、−ＳＲ３１’であり、各Ｒ３１’は、独立に、任意選択で置換されている直鎖状または分岐状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリールであり、
Ｒ３２は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ３２は、−Ｈ、−ＮＯ２、ハロアルキルまたは基−Ｎ（ＭＲ４１）Ｒ４２であり、Ｍは、共有結合、−Ｃ（Ｏ）−または−ＳＯ２−であり、Ｒ４１は、Ｒ４１’、Ｎ（Ｒ４１’）２、または−ＯＲ４１’であり、
各Ｒ４１’は、独立に、水素、任意選択で置換されている直鎖状または分岐状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されているシクロアルキル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されている複素環式または任意選択で置換されているヘテロアリールであり、任意選択の置換は、ハロゲン化物、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または−ＯＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４２は、水素またはＲ４１’である）、ならびに
ｂ）式（ｂ）の基
【化２７】
2014210790.tif 000036
（式中、Ｒは、ポリマー部分への共有結合、アミノ、ヒドロキシル、置換アミノ、アルキル、アルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、チオール、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオおよび置換アルキルからなる群から選択され、各アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルは、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、いずれの場合にも、ポリマー部分は、ポリマー部分を共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ１に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２および任意選択で置換されている−ＣＨ２−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択される）から選択され、
Ｔは、
ａ）式（ｃ）の基
【化２８】
2014210790.tif 000037
（式中、Ｙは、−Ｏ−および−ＮＲ１−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｗは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合および−ＮＲ２Ｒ３からなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、リンカーをさらに任意選択で含むポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、
ｍは、０、１または２に等しい整数であり、
ｎは、０、１または２に等しい整数である）、ならびに
ｂ）式（ｄ）の基
【化２９】
2014210790.tif 000038
（式中、Ｇは、０〜３個の窒素を含有する任意選択で置換されているアリールまたは任意選択で置換されているヘテロアリールの５員環または６員環であり、前記アリールまたはヘテロアリールは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合を任意選択でさらに含み、
Ｒ６は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ６は、−Ｈ、アルキル、置換アルキル、または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ１７であり、Ｒ１７は、−ＯＨ、−ＯＲ１８、または−ＮＨＲ１８であり、Ｒ１８は、アルキル、置換アルキル、アリールまたは置換アリールである）から選択され、
Ｒ５５は、アミノ、置換アミノ、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルコキシ、置換シクロアルコキシ、アリールオキシおよび置換アリールオキシ、および−ＯＨからなる群から選択され、
ただし、
Ａ．  Ｒ、Ａｒ１、Ａｒ２、およびＴの少なくとも１つは、ポリマー部分への共有結合を含有し、
Ｂ．  Ｒがポリマー部分に共有結合をしているとき、ｎは１であり、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−ではなく、
Ｃ．  Ｘが−Ｏ−または−ＮＲ１−であるとき、ｍは２であり、
Ｄ．  式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートは、１００，０００以下の分子量を有する。
【０２０２】
好ましくは、式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートは、約１０〜６０ｋＤａ、さらに好ましくは約４０〜４５ｋＤａの分子量を有する。
【０２０３】
好ましい一実施形態では、Ｂは、ポリアルキレンオキシドポリマーである。ポリアルキレンオキシドは、［−Ｏ−アルキレン−］繰り返し単位であり、アルキレンは、二価の直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ４アルキルである。任意の１つのポリマーにおいて、ポリアルキレンオキシド繰り返し単位は、同じでも異なっていてもよい。ポリアルキレンオキシドポリマーは、分枝アームハブ分子に共有結合している。コンジュゲートが約１０ｋＤａ〜６０ｋＤａの分子量を有するように、ポリアルキレンオキシドポリマーは、繰り返し単位の量で存在する。
【０２０４】
好ましい一実施形態では、Ｒ、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｗおよび−ＮＲ２Ｒ３の１つのみは、ポリマー部分への共有結合を含有する。
【０２０５】
別の好ましい実施形態では、ポリマー部分は、−ＮＲ２Ｒ３基に結合している。
【０２０６】
さらに別の好ましい実施形態では、ｑは、２〜約２０、さらに好ましくは２〜約８の整数である。
【０２０７】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩａのもの、および薬学的に許容されるその塩が含まれ、
【化３０】
2014210790.tif 000039
式中、
Ｂは、二価、三価、四価もしくはより高い原子価の生体適合性ポリマー部分であり、または官能基連結によって、もしくは分枝アームハブ分子によって、もしくは両方によって共有結合している任意選択で複数の生体適合性ポリマーであり、二価、三価、四価もしくはより高い原子価のポリマー部分を形成し、
ｑは、２〜約２０であり、
Ａは、出現するごとに独立に、式ＸＩＸａの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化３１】
2014210790.tif 000040
式中、
Ｒは、ポリマー部分への共有結合、アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルからなる群から選択され、各アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルは、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、いずれの場合にも、ポリマー部分は、ポリマー部分を共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２および任意選択で置換されている−ＣＨ２−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｙは、−Ｏ−および−ＮＲ１−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｗは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合および−ＮＲ２Ｒ３からなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、任意選択でリンカーを介してポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、
ｍは、０、１または２に等しい整数であり、
ｎは、０、１または２に等しい整数であり、
ただし、
Ａ．  Ｒ、Ａｒ２、Ｗおよび−ＮＲ２Ｒ３の少なくとも１つは、ポリマー部分への共有結合を含有し、
Ｂ．  Ｒがポリマー部分に共有結合をしているとき、ｎは１であり、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−ではなく、
Ｃ．  Ｘが−Ｏ−または−ＮＲ１−であるとき、ｍは２であり、
Ｄ．  式ＸＶＩＩＩａのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２０８】
好ましくは、式ＸＶＩＩＩａのコンジュゲートは、約１０〜６０ｋＤａ、さらに好ましくは約４０〜４５ｋＤａの分子量を有する。
【０２０９】
好ましい一実施形態では、Ｂは、ポリアルキレンオキシドポリマーである。ポリアルキレンオキシドは、［−Ｏ−アルキレン−］繰り返し単位であり、アルキレンは、二価の直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ４アルキルである。任意の１つのポリマーにおいて、ポリアルキレンオキシド繰り返し単位は、同じでも異なっていてもよい。ポリアルキレンオキシドポリマーは、分枝アームハブ分子に共有結合している。コンジュゲートが約１０ｋＤａ〜６０ｋＤａの分子量を有するように、ポリアルキレンオキシドポリマーは、繰り返し単位の量で存在する。
【０２１０】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｂのものが含まれ、
【化３２】
2014210790.tif 000041
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｂの化合物であり、
【化３３】
2014210790.tif 000042
ｑは、２〜約２０であり、
Ｂは、上記定義の通りであり、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｙは、−Ｏ−および−ＮＲ１−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｗは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合および−ＮＲ２Ｒ３からなる
群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、リンカーをさらに任意選択で含むポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、
ただし、Ａｒ２、Ｗおよび−ＮＲ２Ｒ３の少なくとも１つは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分に共有結合をしており、
さらにただし、式ＸＶＩＩＩｂのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１１】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｃのものが含まれ、
【化３４】
2014210790.tif 000043
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｃの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化３５】
2014210790.tif 000044
ｑは、２〜約２０であり、
Ｂは、上記定義の通りであり、
Ｒは、ポリマー部分への共有結合、アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルからなる群から選択され、各アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルは、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、いずれの場合にも、ポリマー部分は、ポリマー部分を共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｙは、−Ｏ−および−ＮＲ１−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｗは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合および−ＮＲ２Ｒ３からなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、リンカーをさらに任意選択で含むポリマー部分に任意選択で共有結合をしており
、
ｎは、０、１または２に等しい整数であり、
ただし、Ｒ、Ａｒ２、Ｗおよび−ＮＲ２Ｒ３の少なくとも１つは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分に共有結合をしており、
さらにただし、式ＸＶＩＩＩｃのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１２】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｄのものが含まれ、
【化３６】
2014210790.tif 000045
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｄの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化３７】
2014210790.tif 000046
ｑは、２〜約２０であり、
Ｂは、上記定義の通りであり、
Ｒは、ポリマー部分への共有結合、アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルからなる群から選択され、各アミノ、置換アミノ、アルキルおよび置換アルキルは、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、いずれの場合にも、ポリマー部分は、ポリマー部分を共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、リンカーをさらに任意選択で含むポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、
ｎは、０、１または２に等しい整数であり、
ただし、Ｒ、Ａｒ２、および−ＮＲ２Ｒ３の少なくとも１つは、リンカーを任意選択で含むポリマー共有結合をしており、
さらにただし、式ＸＶＩＩＩｄのコンジュゲートは、１００，０００以下の分子量を有する。
【０２１３】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｅのものが含まれ、
【化３８】
2014210790.tif 000047
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｅの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化３９】
2014210790.tif 000048
ｑは、２〜約２０であり、
Ｂは、上記定義の通りであり、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールの各々は、ポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、ポリマー部分は、ポリマー部分をＡｒ２に共有結合させるリンカーを任意選択で含み、
Ｒ２およびＲ３は、水素、アルキル、置換アルキルからなる群から独立に選択され、かつＲ２およびＲ３は、それに結合している窒素原子と一緒になって、複素環または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、複素環式および置換複素環式の各々は、リンカーをさらに任意選択で含むポリマー部分に任意選択で共有結合をしており、
ただし、Ａｒ２および−ＮＲ２Ｒ３の少なくとも１つは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分に共有結合をしており、
さらにただし、式ＸＶＩＩＩｅのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１４】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｆのものが含まれ、
【化４０】
2014210790.tif 000049
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｆの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化４１】
2014210790.tif 000050
ｑは、２〜約２０であり、
Ｂは、上記定義の通りであり、
Ｒ４は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分に共有結合をしており、
Ｒ５は、アルキルおよび置換アルキルからなる群から選択され、
Ａｒ３は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｘは、−ＮＲ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２および任意選択で置換されている−ＣＨ２−からなる群から選択され、Ｒ１は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
ｍは、０、１または２に等しい整数であり、
ｎは、０、１または２に等しい整数であり、
ただし、
Ａ．  Ｒがポリマー部分に共有結合をしているとき、ｎは１であり、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−ではなく、
Ｂ．  Ｘが−Ｏ−または−ＮＲ１−であるとき、ｍは２であり、
Ｃ．  式ＸＶＩＩＩｆのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１５】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｇのものが含まれ、
【化４２】
2014210790.tif 000051
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｇの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化４３】
2014210790.tif 000052
ｑは、２〜約２０であり、
Ｂは、上記定義の通りであり、
Ｒ４は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分に共有結合をしており、
Ｒ５は、アルキルおよび置換アルキルからなる群から選択され、
Ａｒ３は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
ｎは、０、１または２に等しい整数であり、
ただし、式ＸＶＩＩＩｇのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１６】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｈのものが含まれ、
【化４４】
2014210790.tif 000053
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｈの化合物、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化４５】
2014210790.tif 000054
ｑは、２〜約２０であり、
Ｒ４は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分に共有結合をしており、
Ａｒ３は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
ただし、式ＸＶＩＩＩｈのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１７】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｉのものが含まれ、
【化４６】
2014210790.tif 000055
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩であり、
【化４７】
2014210790.tif 000056
ｑは、２〜約２０であり、
ただし、式ＸＶＩＩＩｉのコンジュゲートは、６０，０００以下の分子量を有する。
【０２１８】
好ましい式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートには、下記の式ＸＶＩＩＩｊのものが含まれ、
【化４８】
2014210790.tif 000057
式中、各Ａは、独立に、下記の式ＸＩＸｊの化合物、または薬学的に許容されるその塩であり、
【化４９】
2014210790.tif 000058
ｑは、約２〜約２０であり、
ただし、式ＸＶＩＩＩｊのコンジュゲートは、１００，０００以下の分子量を有する。
【０２１９】
好ましくは、式ＸＩＸａ〜ＸＩＸｅ中のＡｒ１および式ＸＩＸｆ〜ＸＩＸｈ中のＡｒ３は、
フェニル、
４−メチルフェニル、
４−ｔ−ブチルフェニル、
２，４，６−トリメチルフェニル、
２−フルオロフェニル、
３−フルオロフェニル、
４−フルオロフェニル、
２，４−ジフルオロフェニル、
３，４−ジフルオロフェニル、
３，５−ジフルオロフェニル、
２−クロロフェニル、
３−クロロフェニル、
４−クロロフェニル、
３，４−ジクロロフェニル、
３，５−ジクロロフェニル、
３−クロロ−４−フルオロフェニル、
４−ブロモフェニル、
２−メトキシフェニル、
３−メトキシフェニル、
４−メトキシフェニル、
３，４−ジメトキシフェニル、
４−ｔ−ブトキシフェニル、
４−（３’−ジメチルアミノ−ｎ−プロポキシ）−フェニル、
２−カルボキシフェニル、
２−（メトキシカルボニル）フェニル、
４−（Ｈ２ＮＣ（Ｏ）−）フェニル、
４−（Ｈ２ＮＣ（Ｓ）−）フェニル、
４−シアノフェニル、
４−トリフルオロメチルフェニル、
４−トリフルオロメトキシフェニル、
３，５−ジ−（トリフルオロメチル）フェニル、
４−ニトロフェニル、
４−アミノフェニル、
４−（ＣＨ３Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）フェニル、
４−（フェニルＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）フェニル、
４−アミジノフェニル、
４−メチルアミジノフェニル、
４−［ＣＨ３ＳＣ（＝ＮＨ）−］フェニル、
４−クロロ−３−［Ｈ２ＮＳ（Ｏ）２−］フェニル、
１−ナフチル、
２−ナフチル、
ピリジン−２−イル、
ピリジン−３−イル、
ピリジン−４−イル、
ピリミジン−２−イル、
キノリン−８−イル、
２−（トリフルオロアセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−７−イ
ル、
２−チエニル、
５−クロロ−２−チエニル、
２，５−ジクロロ−４−チエニル、
１−Ｎ−メチルイミダゾール−４−イル、
１−Ｎ−メチルピラゾール−３−イル、
１−Ｎ−メチルピラゾール−４−イル、
１−Ｎ−ブチルピラゾール−４−イル、
１−Ｎ−メチル−３−メチル−５−クロロピラゾール−４−イル、
１−Ｎ−メチル−５−メチル−３−クロロピラゾール−４−イル、
２−チアゾリルおよび
５−メチル−１，３，４−チアジアゾール−２−イル
からなる群から独立に選択される。
【０２２０】
好ましくは、Ａが式ＸＩＸａ、ＸＩＸｂ、ＸＩＸｃ、ＸＩＸｄ、およびＸＩＸｅであり、Ａｒ１がポリマー部分に結合しているとき、Ａｒ１は、式：
−Ａｒ１−Ｚ−（ＣＨ２ＣＨＲ７Ｏ）ｐＲ８であり、
式中、
Ａｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、および置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｚは、共有結合、１〜４０個の原子の連結基、−Ｏ−、および−ＮＲ９−からなる群から選択され、Ｒ９は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択され、
Ｒ８は、−（Ｌ）ｗ−Ａ（ｐが約３００超であるとき）および（Ｌ）−Ｂ−（Ａ）ｑ−１からなる群から選択され、Ａは、上記の式ＸＩＸａ〜ＸＩＸｈのいずれかによって表され、Ｌは、１〜４０個の原子の連結基であり、ｗは、０または１であり、
ｐは、約２００〜１３６０の整数である。
【０２２１】
Ａが式ＸＩＸａまたはＸＩＸｆであり、Ｒがポリマー部分に結合していないとき、下記の式の置換基
【化５０】
2014210790.tif 000059
（式中、Ｒ５、Ｘ、ｍおよびｎは、上記定義の通りである）は、好ましくはアゼチジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリノ、チオモルホリニル、ピロリジニル、４−ヒドロキシピロリジニル、４−オキソピロリジニル、４−フルオロピロリジニル、４，４−ジフルオロピロリジニル、４−（チオモルホリン−４−イルＣ（Ｏ）Ｏ−）ピロリジニル、４−［ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２Ｏ−］ピロリジニル、３−フェニルピロリジニル、３−チオフェニルピロリジニル、４−アミノ−ピロリジニル、３−メトキシピロリジニル、４，４−ジメチルピロリジニル、４−Ｎ−Ｃｂｚ−ピペラジニル、４−［ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２−］ピペラジニル、５，５−ジメチルチアゾリンジン−４−イル、１，１−ジオキソ−チアゾリジニル、１，１−ジオキソ−５，５−ジメチルチアゾリジン−２−イルおよび１，１−ジオキソチオモルホリニルからなる群から選択される。
【０２２２】
好ましくは、Ａが式ＸＩＸａであり、式の置換基
【化５１】
2014210790.tif 000060
がポリマー部分に結合しているとき、好ましくは置換基は、式
【化５２】
2014210790.tif 000061
であり、式中、
ｍは、０、１または２に等しい整数であり、
Ｚは、共有結合、１〜４０個の原子の連結基、−Ｏ−、−ＮＲ９−からなる群から選択され、Ｒ９は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択され、
ｐは、０〜約１３６０の整数であり、
Ｒ８は、−Ｂ−（Ａ）ｑ−１、およびＡ（ｐが約３００超であるとき）からなる群から選択され、Ａは、上記の式ＸＩＸａ〜ＸＩＸｈのいずれかによって表される。
【０２２３】
Ａが式ＸＩＸａ、ＸＩＸｂ、ＸＩＸｃ、ＸＩＸｄ、ＸＩＸｅであり、Ａｒ２がポリマー部分に結合していないとき、好ましくはＡｒ２は、フェニル、置換フェニル、２−ピリジニル、３−ピリジニル、４−ピリジニル、および４−ピリジン−２−オニルからなる群から選択される。
【０２２４】
Ａが式ＸＩＸａ、ＸＩＸｂ、ＸＩＸｃ、ＸＩＸｄ、ＸＩＸｅであり、Ａｒ２がポリマー部分に結合しているとき、Ａｒ２は、好ましくは式
【化５３】
2014210790.tif 000062
によって表され、式中、Ａｒ２は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｚは、共有結合、１〜４０個の原子の連結基、−Ｏ−、−ＮＲ９−、アミド、カルバメートおよび尿素からなる群から選択され、Ｒ９は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択され、
ｐは、０〜約１３６０の整数であり、
Ｒ８は、−Ｂ−（Ａ）ｑ−１、およびＡ（ｐが約３００超であるとき）からなる群から選択され、Ａは、上記の式ＸＩＸａ〜ＸＩＸｈのいずれかによって表される。
【０２２５】
好ましい一実施形態では、−ＹＣ（Ｏ）Ｗは、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｒ３である。
【０２２６】
Ａが式ＸＩＸａ、ＸＩＸｂ、またはＸＩＸｃであり、−ＹＣ（Ｏ）Ｗが−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｒ３であり、Ｒ２とＲ３のどちらもポリマー部分に結合していないとき、好ましくは−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｒ３は、
（ＣＨ３）２ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、
（ピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（ピペリジン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（１−メチルピペリジン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−ホルミルオキシピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−エトキシカルボニルピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−カルボキシルピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（３−ヒドロキシメチルピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−ヒドロキシメチルピペリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−フェニル−１−Ｂｏｃ−ピペリジン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−ピペリドン−１−イルエチレンケタール）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（ピペラジン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（１−Ｂｏｃ−ピペラジン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−メチルホモピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−フェニルピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（ピリジン−２−イル）ピペラジン−１］−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（４−トリフルオロメチルピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（ピリミジン−２−イル）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−アセチルピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（フェニル−Ｃ（Ｏ）−）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（ピリジン−４’−イル−Ｃ（Ｏ）−）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（フェニル−ＮＨＣ（Ｏ）−）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−（フェニル−ＮＨＣ（Ｓ）−）ピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−メタンスルホニルピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（４−トリフルオロメタンスルホニルピペラジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（モルホリン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（チオモルホリン−４−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（チオモルホリン−４’−イルスルホン）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（ピロリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（２−メチルピロリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（メトキシカルボニル）ピロリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチル）（ＣＨ３）ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−トルエン−４−スルホニルアミノ）エチル）（ＣＨ３）Ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（モルホリン−４−イル）エチル）（ＣＨ３）ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（ヒドロキシ）エチル）（ＣＨ３）ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、
ビス（２−（ヒドロキシ）エチル）ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、
（２−（ホルミルオキシ）エチル）（ＣＨ３）ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、
（ＣＨ３ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２）ＨＮＣ（Ｏ）Ｏ−、および
２−（フェニルＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−）エチル−］ＨＮＣ（Ｏ）Ｏ−
からなる群から選択される。
【０２２７】
Ａが式ＸＩＸａ、ＸＩＸｂ、またはＸＩＸｃであり、−ＹＣ（Ｏ）Ｗが−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｒ３であり、Ｒ２および／またはＲ３がポリマー部分に結合しているとき、ポリマー部分は、好ましくは式：
−Ｚ’−（ＣＨ２ＣＨＲ７Ｏ）ｐＲ８
によって表され、
Ｚは、共有結合、１〜４０個の原子の連結基、−Ｏ−、−ＮＲ９−、アミド、カルバメートおよび尿素からなる群から選択され、Ｒ９は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択され、
ｐは、０〜約１３６０の整数であり、
Ｒ８は、−Ｂ−（Ａ）ｑ−１、およびＡ（ｐが約３００超であるとき）からなる群から選択され、Ａは、上記の式ＸＩＸａ〜ＸＩＸｈのいずれかによって表される。
【０２２８】
式ＸＩＸｉおよびＸＩＸｊの化合物において、
【化５４】
2014210790.tif 000063
の基は、式
【化５５】
2014210790.tif 000064
であることが好ましく、
式中、Ｒ６６は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ６６は、水素、または直鎖状もしくは分岐状Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ７７は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ７７は、水素、ハ
ロゲン、または直鎖状もしくは分岐状Ｃ１〜Ｃ６アルコキシであり、Ｒ８８は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合であり、あるいはＲ８８は、水素、または直鎖状もしくは分岐状Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。好ましくは、Ｒ６６、Ｒ７７、およびＲ８８の１つは、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合である。
【０２２９】
式ＸＩＸｉの好ましい化合物はまた、式ＸＩＸｉ〜ａのもの、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化５６】
2014210790.tif 000065
式中、
Ａｒ１は、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、複素環式、置換複素環式、ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ６は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合である。
【０２３０】
式ＸＩＸｉ〜ａの好ましい化合物には、Ａｒ１が少なくとも１個の窒素原子を有するフェニル、または５員もしくは６員のヘテロアリール基であるものが含まれ、それらの各々は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ニトロ、トリフルオロメチル、アミノ、モノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６アシルアミノ、またはアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アシルで任意選択で置換されている。Ａｒ１は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、アミノ、モノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アシル、Ｃ２〜Ｃ６アシルアミノ、またはアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アシルで任意選択で置換されているピリジルである。式ＸＩＸｉ〜ａの特に好ましい化合物には、Ａｒ１がＣ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、アミノ、またはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノで任意選択で置換されているピリジルであるものが含まれる。
【０２３１】
式ＸＩＸｊの好ましい化合物はまた、式ＸＩＸｊ〜ａのもの、および薬学的に許容されるその塩であり、
【化５７】
2014210790.tif 000066
式中、
Ｒ６は、リンカーを任意選択で含むポリマー部分への共有結合である。
【０２３２】
式ＸＩＸｊ〜ａの好ましい化合物には、Ｒ３１がアミノまたはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノであるものが含まれ、Ｒ３２は、−Ｈ、−ＮＯ２またはハロアルキルであり、さらに好ましくはトリフルオロメチルメチルである。
【０２３３】
式ＸＩＸｊ〜ａのまた他の好ましい化合物は、
Ｒ３１が、アミノまたはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノであり、
Ｒ３２が、−Ｎ（ＭＲ４１）Ｒ４２であり、Ｍが、−ＳＯ２−または−ＣＯ−であり、
Ｒ４１が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、またはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノで任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、あるいは少なくとも１個の窒素を含有するフェニル、または５員もしくは６員のヘテロアリール（それらの各々は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、アミノ、ニトロ、トリフルオロメチル、またはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノで任意選択で置換されている）であり、
Ｒ４２が、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであるものである。
【０２３４】
式ＸＩＸｊ〜ａのさらに好ましい化合物には、
式ＸＩＸｊ〜ａ中のＲ４１基が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、またはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノで任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ４アルキル、あるいはピリジルまたはピリミジニル（それらの各々は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、アミノ、またはモノもしくはジ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノで任意選択で置換されている）であり、
Ｒ４２が、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであるものが含まれる。
【０２３５】
一例では、式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートは二価であり、式ＸＸによって表され、
【化５８】
2014210790.tif 000067
式中、各Ａは、独立に、上記定義の通りであり、Ｂ’は、−Ｚ’−（ＣＨ２ＣＨＲ７Ｏ）ｐ−Ｚ’−であり、各Ｚ’は、独立に、共有結合または連結基であり、Ｒ７は、水素また
はメチルであり、ｐは、約１００〜１３６０の整数である。好ましくは、ｐは、約１０〜６０ｋＤａ、さらに好ましくは約４０〜４５ｋＤａの分子量を有するコンジュゲートを提供する。
【０２３６】
別の例では、式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートは、三価から十価であり、好ましくは式ＸＸＩによって表され、
【化５９】
2014210790.tif 000068
式中、各Ａは、独立に、上記定義の通りであり、ｔは、３〜１０の整数である。好ましくは、ｔは、約１０〜６０ｋＤａ、さらに好ましくは約４０〜４５ｋＤａの分子量を有するコンジュゲートを提供する。
【０２３７】
さらなる態様において、利用することができる化合物は、下記の式ＸＸＩＩのコンジュゲートであり、
【化６０】
2014210790.tif 000069
式中、ｘ、ｙ、およびｚの総計が約１００〜１３６０であるように、ｘ、ｙ、およびｚは、独立に整数である。
【０２３８】
一実施形態では、十分な数の［−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−］繰り返し単位があり、式ＸＸＩＩのコンジュゲートが約１０〜６０ｋＤａ、好ましくは約４０〜４５ｋＤａの分子量を有するように、ｘ、ｙ、およびｚは、独立に整数である。
【０２３９】
上記の式ＸＶＩＩＩ〜ＸＸＩＩに関して本明細書および特許請求の範囲において使用される下記の用語は、下記で示す意味を有する。
【０２４０】
「アルキル」とは、１〜５個の炭素原子、さらに好ましくは１〜３個の炭素原子を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどの基によって例示される。
【０２４１】
「置換アルキル」とは、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、スピロシクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、および置換複素環式からなる群から選択される１〜３個、好ましくは１〜２個の置換基を有するアルキル基を意味する。
【０２４２】
「アルキレン」とは、直鎖または分岐状の１〜５個、さらに好ましくは１〜３個の炭素原子を好ましくは有する二価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。この用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）などの基によって例示される。
【０２４３】
「アルコキシ」とは、基「アルキル−Ｏ−」を意味し、例示として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシなどが含まれる。
【０２４４】
「置換アルコキシ」とは、基「置換アルキル−Ｏ−」を意味する。
【０２４５】
「アシル」とは、基Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）−シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、複素環式−Ｃ（Ｏ）−、および置換複素環式−Ｃ（Ｏ）−を意味し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式は、本明細書に定義されている通りである。
【０２４６】
「アミノアシル」とは、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１０を意味し、各Ｒ１０は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、置換複素環式からなる群から独立に選択され、各Ｒ１０は結合して、窒素原子と一緒になって、複素環式または置換複素環を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式は、本明細書に定義されている通りである。
【０２４７】
「アシルオキシ」とは、基アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、複素環式−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、および置換複素環式−Ｃ（Ｏ）Ｏ−を意味し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式は、本明細書に定義されている通りである。
【０２４８】
「アルケニル」とは、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１〜２部位のアルケニル不飽和を有するアルケニル基を
意味する。このような基は、ビニル、アリル、ブタ−３−エン−１−イルなどによって例示される。
【０２４９】
「置換アルケニル」とは、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、および置換複素環式からなる群から選択される１〜３個の置換基、好ましくは１〜２個の置換基を有するアルケニル基を意味し、ただし、任意のヒドロキシル置換は、ビニル（不飽和）炭素原子に結合していない。
【０２５０】
「アルキニル」とは、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１部位、好ましくは１〜２部位のアルキニル不飽和を有するアルキニル基を意味する。
【０２５１】
「置換アルキニル」とは、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、および置換複素環式からなる群から選択される１〜３個の置換基、好ましくは１〜２個の置換基を有するアルキニル基を意味する。
【０２５２】
「アミノ」とは基−ＮＨ２を意味する。
【０２５３】
「シアノ」とは、基−ＣＮを意味する。
【０２５４】
「置換アミノ」とは、基−ＮＲ’Ｒ”を意味し、Ｒ’およびＲ”は、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、置換複素環式からなる群から独立に選択され、Ｒ’およびＲ”はそれに結合している窒素と一緒になって結合し、複素環式または置換複素環基を形成し、ただし、Ｒ’およびＲ”は、両方とも水素ではない。Ｒ’が水素であり、Ｒ”がアルキルであるとき、置換アミノ基は、本明細書においてアルキルアミノと称されることがある。Ｒ’およびＲ”がアルキルであるとき、置換アミノ基は本明細書においてジアルキルアミノと称されることがある。一置換アミノに言及するとき、それは、Ｒ’またはＲ”は水素であるが、両方とも水素ではないことを意味する。二置換アミノに言及するとき、Ｒ’とＲ”のどちらも水素でないことを意味する。
【０２５５】
「ニトロ」とは、基−ＮＯ２を意味する。
【０２５６】
「アリール」または「Ａｒ」とは、単一の環（例えば、フェニル）または複数の縮合環（例えば、ナフチルもしくはアントリル）を有する６〜１４個の炭素原子の一価の芳香族炭素環基を意味し、この縮合環は、芳香族（例えば、２−ベンゾオキサゾリノン、２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イルなど）でよく、またはそうでなくてもよく、ただし、結合点は、芳香族炭素原子において存在する。好ましいアリールには、フェニルおよびナフチルが含まれる。
【０２５７】
「置換アリール」とは、ヒドロキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、ア
リールオキシ、置換アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、チオール、チオアルキル、置換チオアルキル、チオアリール、置換チオアリール、チオヘテロアリール、置換チオヘテロアリール、チオシクロアルキル、置換チオシクロアルキル、チオ複素環式、置換チオ複素環式、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、置換複素環式、ヘテロアリールオキシ、置換ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、置換ヘテロシクリルオキシ、アミノスルホニル（ＮＨ２−ＳＯ２−）、および置換アミノスルホニルからなる群から選択される１〜３個の置換基、好ましくは１〜２個の置換基で置換されているアリール基を意味する。
【０２５８】
「アリールオキシ」とは、例示として、フェノキシ、ナフトキシなどが含まれる、基アリール−Ｏ−を意味する。
【０２５９】
「置換アリールオキシ」とは、置換アリール−Ｏ−基を意味する。
【０２６０】
「カルボキシル」とは、−ＣＯＯＨまたはその塩を意味する。
【０２６１】
「カルボキシルエステル」とは、基−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、および−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリールを意味し、アルキル、置換アルキル、アリールおよび置換アリールは、本明細書に定義されている通りである。
【０２６２】
「シクロアルキル」とは、例示として、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどを含めた、単一または複数の環式環を有する３〜１０個の炭素原子の環状アルキル基を意味する。
【０２６３】
「シクロアルケニル」とは、単一または複数の環式環を有し、かつ少なくとも１個、好ましくは１〜２個の内部部位のエチレンまたはビニル（＞Ｃ＝Ｃ＜）不飽和をさらに有する、４〜１０個の炭素原子の環状アルケニル基を意味する。
【０２６４】
「置換シクロアルキル」および「置換シクロアルケニル」とは、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、および置換複素環式からなる群から選択される１〜５個の置換基を有するシクロアルキルまたはシクロアルケニル基を意味する。
【０２６５】
「シクロアルコキシ」とは、−Ｏ−シクロアルキル基を意味する。
【０２６６】
「置換シクロアルコキシ」とは、−Ｏ−置換シクロアルキル基を意味する。
【０２６７】
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味し、好ましくはフルオロまたはクロロである。
【０２６８】
「ヒドロキシ」とは、基−ＯＨを意味する。
【０２６９】
「ヘテロアリール」とは、環中に１〜１０個の炭素原子、ならびに酸素、窒素および硫黄からなる群から選択される１〜４個のヘテロ原子の芳香族基を意味する。このようなヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジニルもしくはフリル）または複数の縮合環（例えば、インドリジニルもしくはベンゾチエニル）を有することができ、縮合環は、芳
香族でよく、またはそうでなくてもよく、かつ／あるいはヘテロ原子を含有し、ただし、結合点は、芳香族ヘテロアリール基の原子を介している。好ましいヘテロアリールには、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、およびフラニルが含まれる。
【０２７０】
「置換ヘテロアリール」とは、置換アリールについて定義した置換基と同じ群から選択される１〜３個の置換基で置換されているヘテロアリール基を意味する。
【０２７１】
「ヘテロアリールオキシ」とは、基−Ｏ−ヘテロアリールを意味し、「置換ヘテロアリールオキシ」とは、基−Ｏ−置換ヘテロアリールを意味する。
【０２７２】
「複素環」または「複素環式」または「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」とは、環中に１〜１０個の炭素原子、および窒素、硫黄もしくは酸素からなる群から選択される１〜４個のヘテロ原子の、単一の環または複数の縮合環を有する飽和または不飽和基を意味し、縮合環系において、１つまたは複数の環は、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールでよく、ただし、結合点は、複素環を介している。
【０２７３】
「置換複素環式」または「置換ヘテロシクロアルキル」または「置換ヘテロシクリル」とは、置換シクロアルキルについて定義したのと同じ置換基の１〜３個で置換されているヘテロシクリル基を意味する。
【０２７４】
ヘテロシクリルおよびヘテロアリールの例には、それだけに限らないが、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも称される）、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニルなどが含まれる。
【０２７５】
「ポリアルキレンオキシド」は、［−Ｏ−アルキレン−］繰り返し単位であり、アルキレンは、二価の直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ４アルキルである。任意の１つのポリマーにおいて、ポリアルキレンオキシド繰り返し単位は、同じでも異なっていてもよい。
【０２７６】
「チオール」とは、基−ＳＨを意味する。
【０２７７】
「チオアルキル」または「アルキルチオエーテル」または「チオアルコキシ」とは、基−Ｓ−アルキルを意味する。
【０２７８】
「置換チオアルキル」または「置換アルキルチオエーテル」または「置換チオアルコキシ」とは、基−Ｓ−置換アルキルを意味する。
【０２７９】
「チオアリール」とは、基−Ｓ−アリールを意味し、アリールは上記で定義されている。
【０２８０】
「置換チオアリール」とは、基−Ｓ−置換アリールを意味し、置換アリールは上記で定義されている。
【０２８１】
「チオヘテロアリール」とは、基−Ｓ−ヘテロアリールを意味し、ヘテロアリールは、上記定義の通りである。
【０２８２】
「置換チオヘテロアリール」とは、基−Ｓ−置換ヘテロアリールを意味し、置換チオヘテロアリールは上記で定義されている。
【０２８３】
「チオ複素環式」とは、基−Ｓ−複素環式を意味し、「置換チオ複素環式」とは、基−Ｓ−置換複素環式を意味し、複素環式および置換複素環式。
【０２８４】
「ヘテロシクリルオキシ」とは、基ヘテロシクリル−Ｏ−を意味し、「置換ヘテロシクリル−Ｏ−」とは、基置換ヘテロシクリル−Ｏ−を意味し、ヘテロシクリルおよび置換ヘテロシクリルは、上記定義の通りである。
【０２８５】
「チオシクロアルキル」とは、基−Ｓ−シクロアルキルを意味し、「置換チオシクロアルキル」とは、基−Ｓ−置換シクロアルキルを意味し、シクロアルキルおよび置換シクロアルキルは、上記定義の通りである。
【０２８６】
コンジュゲートに関して使用されているように、「化合物」および「活性化合物」という用語は、式ＸＶＩＩＩおよびＸＸ〜ＸＸＩＩのコンジュゲートのＶＬＡ−４アンタゴニスト部分を、ならびにまたは（それはポリマーへのコンジュゲート化の前に存在するため）ＶＬＡ−４アンタゴニストを意味するために使用される。
【０２８７】
「リンカー」、「連結基」または「１〜４０個の原子のリンカー」という用語は、（１）ポリマーを活性化合物に共有結合させ、かつ／または（２）ポリマーのポリアルキレンオキシド部分を互いに共有結合させる基または基（複数）を意味する。任意の特定のコンジュゲート内で、ポリマーのポリアルキレンオキシド部分を一緒に連結するリンカー、およびポリマーを活性化合物に結合させるリンカーは、同一でも異なってもよい（すなわち、同一または異なる化学構造を有してもよい）。
【０２８８】
ポリマーのポリアルキレンオキシド部分を互いに共有結合させるリンカーはまた、「分枝アームハブ」、または「分枝アームハブ分子」と称される。分枝アームハブは、３個以上のポリアルキレンオキシド鎖をそれらに共有結合させる分子であり、活性化合物とのコンジュゲーションのための三価もしくはより高い原子価のポリマー部分を提供する。このようなハブ分子の非限定的例は、グリセロール（１，２，３−プロパントリオール）、ペンタエリチトール、リシン、１，２，４−ベンゼントリオール、（そのピラノース形態の）グルコース、エチレンジアミン四酢酸、アミノ酸、３−または４−アミノサリチル酸、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン、グルコサミン、およびシアル酸である。
【０２８９】
連結基が１つまたは複数を有し得る代表的な官能基連結は、アミド（−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−）、エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）、カルバメート（−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−）、チオカルバメート（−ＯＣＮＲ３−）、尿素（−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−）、チオ尿素（−ＮＲ３Ｃ（Ｓ）ＮＲ３−）、アミノ基（−ＮＲ３−）、カルボニル基（−Ｃ（Ｏ）−）、アルコキシ基（−Ｏ−アルキレン−）などである。リンカーは、その原子の内容において同種または異種でよい（例えば、炭素原子のみを含有するリンカー、またはリンカー上に存在する炭素原子および１種もしくは複数のヘテロ原子を含有するリンカー）。好ましくは、リンカーは、１〜２５個の炭素原子、ならびに酸素、ＮＲ３、硫黄、−Ｓ（Ｏ）−および−Ｓ（Ｏ）２−（Ｒ３は、水素、アルキルまたは置換アルキルである）から選択される０〜１５個のヘテロ原子を含有する。リンカーはまた、キラルまたはアキラル、直鎖状、分岐状または環状でよい。
【０２９０】
リンカー内の官能基連結または結合の間に介在して、リンカーは、それだけに限らないが、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、置換複素環式、およびこれらの組合せから選択されるスペーサーを含めたスペーサー基をさらに含有する。スペーサーは、その原子の内容において同種または異種でよい（例えば、炭素原子のみを含有するスペーサー、またはスペーサー上に存在する炭素原子および１個もしくは複数のヘテロ原子を含有するスペーサー）。好ましくは、スペーサーは、１〜２５個の炭素原子、ならびに酸素、ＮＲ３、硫黄、−Ｓ（Ｏ）−および−Ｓ（Ｏ）２−（Ｒ３は、上記定義の通りである）から選択される０〜１５個のヘテロ原子を含有する。スペーサーはまた、キラルまたはアキラル、直鎖状、分岐状または環状でよい。
【０２９１】
スペーサーの非限定的例は、直鎖状または分岐状アルキレン鎖、フェニレン、ビフェニレンなどの環であり、これらの全ては、活性化合物および１つまたは複数のポリアルキレンオキシド部分と連結を形成することができる１個または複数の官能基を有することができる。多官能リンカー−スペーサー基の特定の一例は、Ｃ４アルキレン鎖上で置換されている２個のアミノ基を介して活性化合物のいずれかを２個のポリマー部分に連結し得るリシンである。他の非限定的例には、各々連結形成のために利用可能な２個および３個の官能基を有するｐ−アミノ安息香酸および３，５−ジアミノ安息香酸が含まれる。他のこのような多官能連結およびスペーサー基は、当業者は容易に認識することができる。
【０２９２】
「ポリマー」および「ポリマー部分」という用語は、式ＸＩＸの複数のＶＬＡ−４アンタゴニストにカップリングすることができる、生体適合性、水溶性、実質的に非免疫原性のポリマーを意味する。好ましくはポリマーは、非イオン性および生体適合性（使用する分子量および投与量で毒性がないことによって測定する）である。この用語はまた、３個以上のポリマーが上記のように分枝アームハブ分子に連結している分子を包含する。
【０２９３】
適切なポリマーの例には、それだけに限らないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡｍ）、ポリジメチルアクリルアミド（ＰＤＡＡｍ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、デキストラン、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）（ＰＧＡ）、スチレン無水マレイン酸（ＳＭＡ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリジビニルエーテル無水マレイン酸（ＤＩＶＥＭＡ）などのポリオキシアルキレンポリマーが含まれる（Ｋａｍｅｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ２５：３２５９〜３２６６、２００４；Ｔｈａｎｏｕ，Ｍ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ４（６）：７０１〜７０９、２００３；Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｉｌ
Ｆａｒｍａｃｏ  ５４：４９７〜５１６、１９９９）。
【０２９４】
好ましいポリマーは、ポリオキシアルキレンポリマーである。「ポリオキシアルキレンポリマー」とは、１つまたは複数のさらなるポリアキレンオキシドに任意選択で共有結合している少なくとも１つのポリアルキレンオキシド部分を含む巨大分子を意味し、ここではポリアルキレンオキシドは、同一または異なる。非限定的例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリイソプロピレングリコール（ＰＩＰＧ）、ＰＥＧ−ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＰＰＧ、ＰＰＧ−ＰＩＰＧなどが含まれる。ポリオキシアルキレンの定義内にまた含まれるのは、ポリアルキレンオキシド部分がリンカーによって互いに任意選択で連結している巨大分子である。実例は、ＰＥＧ−リンカー−ＰＥＧ、ＰＥＧ−リンカー−ＰＩＰＧなどである。さらなる具体例には、市販のポリ［ジ（エチレングリコール）アジペート、ポリ［ジ（エチレングリコール）フタレートジオールなどが含まれる。他の例は、オキシアルキレン、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびポリオキシエチレン化ポリオールユニットのブロックコポリマーである。
【０２９５】
その末端の少なくとも１つで、ポリマーは、従来の化学技術を使用して、任意選択でリンカーを介して式ＸＩＸの非ポリマー置換化合物に共有結合しており、ポリマーの式ＸＩＸの非ポリマー置換化合物への共有結合が実現される。
【０２９６】
リンカーが用いられるとき、リンカーは、ポリマー末端の少なくとも１つに共有結合しており、これは次には、式ＸＩＸの他の非ポリマー置換化合物に共有結合している。このような連結をもたらす反応化学は、当技術分野で周知である。このような反応化学は、リンカー上の相補的官能基、式ＸＩＸの非ポリマー置換化合物およびポリマーの使用を伴う。好ましくは、リンカー上の相補的官能基は、結合のためにポリマー上で利用可能であるか、または結合のためにポリマー上に導入することができる官能基に関連して選択される。また、このような相補的官能基は、当技術分野で周知である。例えば、適切な周知の活性化剤の存在下での、リンカーまたはポリマーのカルボン酸と、ポリマーまたはリンカーの第一級もしくは第二級アミンとの反応によって、ポリマー部分をリンカーに共有結合させているアミド結合の形成がもたらされる。リンカーまたはポリマー基のアミン基と、ポリマーまたはリンカーのハロゲン化スルホニルとの間の反応によって、ポリマー部分をリンカーに共有結合させているスルホンアミド結合の形成がもたらされる。リンカーまたはポリマーのアルコールまたはフェノール基と、ポリマーまたはリンカーのハロゲン化アルキルまたはハロゲン化アリールとの反応は、ポリマー基をリンカーに共有結合させているエーテル結合の形成をもたらす。
【０２９７】
当然ながら、式ＸＩＸの非ポリマー置換化合物上で適当な置換基が見出される場合、式ＸＩＸの非ポリマー置換化合物へのポリマーの直接の連結が可能であるので、任意選択のリンカーの必要がないことがあると理解される。
【０２９８】
下記の表８は、多数の相補的反応性基、およびそれらの間の反応によって形成されるこのように得られた結合を例示する。当業者は適当な溶媒および反応条件を選択し、これらの連結に影響を与えることができる。
【０２９９】
【表８】
2014210790.tif 000070
【０３００】
好ましいリンカーには、例示として、下記−Ｏ−、−ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−アルキレン−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−、−アルキレン−ＮＲ３−、−アルキレン−Ｏ−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレン−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン、−ＮＲ３−アルキレン−、−Ｏ−アルキレン−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−アルキレン
−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−アルキレン−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３−アルキレン−、アルキレン−Ｏ−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−アルキレン−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレンオキシ−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレンオキシ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレンオキシ、−ＮＲ３−アルキレンオキシ−、−Ｏ−アルキレンオキシ−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−アルキレンオキシ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレンオキシ−、−アルキレンオキシ−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレンオキシ−（式中、Ｒ３は、上記定義の通りである）および、
【化６１】
2014210790.tif 000071
（式中、
【化６２】
2014210790.tif 000072
は、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式および置換複素環式からなる群から選択され、ＤおよびＥは、結合、−Ｏ−、ＣＯ、−ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−アルキレン−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−、−アルキレン−ＮＲ３−、−アルキレン−Ｏ−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−、アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレン−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−ＮＲ３−アルキレン−、−Ｏ−アルキレン−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−アルキレン−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレンオキシ−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレンオキシ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレンオキシ、−ＮＲ３−アルキレンオキシ−、−Ｏ−アルキレンオキシ−、−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−アルキレンオキシ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレンオキシ−、−アルキレンオキシ−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレンオキシ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−アルキレン−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３−アルキレン−、アルキレン−Ｏ−アルキレン−、−アルキレン−ＮＲ３Ｃ（Ｏ）−アルキレン−、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−アルキレン−からなる群から独立に選択され、Ｒ３は、上記定義の通りである）が含まれる。
【０３０１】
上記のリンカー中の好ましいアルキレン基には、Ｃ１〜Ｃ１５アルキレン基、さらに好ましくはＣ１〜Ｃ６アルキレン基、最も好ましくはＣ１〜Ｃ３アルキレン基が含まれる。好ましい複素環基には、ピペラジニル、ピペリジニル、ホモピペラジニル、ホモピペリジニル、ピロリジニル、およびイミダゾリジニルが含まれる。好ましいアルコキシ基は、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）１〜１５である。
【０３０２】
「オキシアルキレン」という用語は、−ＯＣＨ２ＣＨＲｄ−を意味し、Ｒｄは、アルキルである。重合オキシアルキレンは、ポリオキシアルキレン、ポリアルキレンオキシドまたはポリアルキレングリコールと称され、その非限定的例には、ＰＥＧ、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリイソプロピレングリコールなどが含まれる。
【０３０３】
このようなポリマーは、好ましくは上記のようなアルキル、アリール、置換アルキル、置換アリールおよび分枝アームハブ分子から選択される置換基で任意選択でモノキャップ
されている。このようなポリマーに含まれるのは、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅｓ（登録商標）などの当技術分野において公知のジアミノキャップされたポリオキシアルキレンポリマーである。またさらに、このようなポリマーは、市販のポリ［ジ（エチレングリコール）アジペート、ポリ［ジ（エチレングリコール）フタレートジオールなどの１つまたは複数の非オキシアルキレンユニットを任意選択で含有することができる。また含まれるものは、オキシアルキレン、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびポリオキシエチレン化ポリオールユニットのブロックコポリマーである。
【０３０４】
ＰＥＧなどのポリオキシアルキレンは、水溶性ろう様固体として通常提供される。一般に、ポリマーの分子量が増加すると、その粘度および凝固点もまた増加する。市販の調製物は通常、構成物であるポリマーの「平均分子量」によって特性決定される。
【０３０５】
典型的には、式ＸＶＩＩＩおよびＸＸ〜ＸＸＩＩのコンジュゲート中の単一または複数のポリマー部分から得たポリマーの総量の平均分子量は、約１００〜１００，０００、好ましくは約１０，０００〜６０，０００、好ましくは約２０，０００〜６０，０００、さらに好ましくは約３０，０００〜約５０，０００、さらに好ましくは約４０，０００〜４５，０００である。
【０３０６】
このタイプのポリマーが多分散系であることは当業者には明らかである。多分散性とは、ポリマー分子は、同一のタイプのものでさえ、異なるサイズ（直鎖状または分岐状ポリマーについては鎖長）となるという事実を意味する。したがって、平均分子量は、平均する方法によって決定される。分子量の可変性の通常の測定法である多分散性インデックスは、重量平均分子量と数平均分子量の比である。それは、ポリマーのバッチ中の個々の分子量の分布を示す。数平均分子量は、ポリマーの分子量を決定する一方法である。数平均分子量は、個々のポリマーの分子量の一般平均である。それは、ｎ個のポリマー分子の分子量を測定し、重量を合計し、ｎで割ることによって決定する。ポリマーの数平均分子量は、浸透圧測定、末端基滴定、および束一性によって決定することができる。
【０３０７】
重量平均分子量は、光散乱、小角中性子散乱（ＳＡＮＳ）、Ｘ線散乱、および沈降速度によって決定することができる。重量平均と数平均の比は、多分散性インデックスと呼ばれる。分散性がないポリマーの理論的試料は、１の多分散性インデックスを有する。本発明のための多分散性インデックスの好ましい範囲は、約１．１０〜約１．０５である。より好ましいのは、約１．０５から商業的に可能な合成の上限までの範囲（現在までに、約１．０２である）である。
【０３０８】
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡｍ）、ポリジメチルアクリルアミド（ＰＤＡＡｍ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、デキストラン、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）（ＰＧＡ）、スチレン無水マレイン酸（ＳＭＡ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリジビニルエーテル無水マレイン酸（ＤＩＶＥＭＡ）などの他の適切なポリマーは、当技術分野で周知であり、約１００〜１００，０００、好ましくは約１０，０００〜８０，０００、さらに好ましくは約２０，０００〜約７０，０００の分子量を有する。
【０３０９】
［化合物の調製］
式ＸＶＩＩＩおよびＸＸ〜ＸＸＩＩのコンジュゲートは、下記の一般法および手順を使用して利用可能な出発物質から容易に調製することができる。典型的または好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が所与の場合、特に明記しない限り他の処理条件もまた使用することができることを理解されたい。最適な反応条件は、使用する特定の反応物または溶媒によって変化し得るが、このような条件は、通常の最適化手順によって当業者が決定することができる。
【０３１０】
さらに、当業者であれば明らかであろうように、従来の保護基は、特定の官能基が望ましくない反応を起こすことを防止するのに必要であり得る。様々な官能基のための適切な保護基、ならびに特定の官能基を保護および脱保護するための適切な条件は、当技術分野で周知である。例えば、多数の保護基は、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＧ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１、およびそこに引用されている参考文献に記載されている。
【０３１１】
さらに、化合物は典型的には、１つまたは複数のキラル中心を含有する。したがって必要に応じて、このような化合物は、純粋な立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして、または立体異性体が濃縮された混合物として、調製または単離することができる。全てのこのような立体異性体（および濃縮された混合物）は、他に示さない限り含まれる。純粋な立体異性体（または濃縮された混合物）は、例えば、当技術分野において周知の光学活性な出発物質または立体選択的試薬を使用して調製し得る。代わりに、このような化合物のラセミ混合物は、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割剤などを使用して分離することができる。
【０３１２】
式ＸＶＩＩＩおよびＸＸ〜ＸＸＩＩのコンジュゲートは、式ＸＩＸの２個〜約２０個の置換基を含有するポリマー部分／任意選択の分枝アームハブ分子を好ましくは含む。
【化６３】
2014210790.tif 000073
【０３１３】
具体的には、ポリマー部分は、共有結合を介してＡｒ１置換基、Ｊ置換基、Ａｒ２置換基および／またはＴ置換基に結合していることがあり、ポリマー部分は、直接結合しているか、またはリンカーを介して結合している。次には、ポリマー部分は、分枝アームハブ分子に任意選択で結合してもよい。
【０３１４】
その最も単純な形態で、この化合物は、両方の末端に結合している式ＸＩＸの２個の置換基を有する単一のポリマー部分を含む二価の構造である。カルボニル連結基によって式ＸＩＸの化合物に連結しているＰＥＧ由来のポリマー部分を使用した代表的な場合（式ＸＩＸの化合物は、
【化６４】
2014210790.tif 000074
によって表される）、このように得られたコンジュゲートは、下記の式によって表すこと
ができ、
【化６５】
2014210790.tif 000075
式中、ｐは、好ましくは約１００〜１３６０の整数である。
【０３１５】
四価の形態の一例では、コンジュゲートは、４つのポリマー部分を含む。代表的な場合、各ポリマー部分の一方の末端は、共通の分枝アームハブ分子に結合しており、一方他の末端は、任意選択でリンカーを介して式ＸＩＸの化合物に結合している。またさらに再び例示の目的のために、各ポリマー部分は、ＰＥＧ由来であり、共通の分枝アームハブ分子は、ペンタエリトリトールである。この例示において、ＰＥＧ部分の他の末端は、式ＸＩＸの化合物にカルボニル連結基を介して連結しており、式ＸＩＸの化合物は、
【化６６】
2014210790.tif 000076
によって表され、このように得られたコンジュゲートは、下記の式によって表すことができ、
【化６７】
2014210790.tif 000077
式中、４つのｐの総計は、好ましくは約１００〜１３６０の整数である。
【０３１６】
式ＸＶＩＩＩのコンジュゲートを形成するための合成プロトコールは、ポリマー部分上の官能基と、連結基または直接式ＸＩＸの化合物との反応を伴い、それによってポリマー部分を式ＸＩＸの化合物に共有結合させる。
【０３１７】
最初に、式ＸＩＸｂ〜ＸＩＸｈの非ＰＥＧ置換化合物は当技術分野で周知であり、これらだけに限定されないが、米国特許第６，４８９，３００号および同第６，４３６，９０
４号（これらの両方とも全内容が参照により本明細書中に組み込まれている）を含めたいくつかの発行された特許において例示されている。式ＸＩＸの化合物の非ポリマー変異体には、Ａｒ１、Ｒ、Ａｒ２およびＴ部分の１つまたは複数上に相補的官能基、または相補的官能基に誘導体化することができる基を有するものが含まれる。例示の目的のために、Ａｒ２部分上に相補的官能基（−ＯＨ）を有する化合物（例えば、チロシン）は、直接またはリンカーを介した分子へのポリマー部分の付加のための適切な出発点として下記で記載される。
【０３１８】
このような化合物は、下記のスキーム５において例示されているように、複素環式アミノ酸１を適当なアリールスルホニルクロリドと最初にカップリングすることによって調製することができる。
【化６８】
2014210790.tif 000078
式中、Ｒ、Ａｒ１、Ｘ、ｍおよびｎは、上記定義の通りである。
【０３１９】
具体的には、上記のスキーム５において、複素環アミノ酸１を、ジクロロメタンなどの適切な不活性希釈剤中、化学量論的同等物または過剰な量（好ましくは、約１．１〜約２当量）のハロゲン化アリールスルホニル２と合わせる。一般に、反応が実質的に完了するまで約−７０℃〜約４０℃の範囲の温度で反応が行われ、これは典型的には１〜２４時間以内で起こる。好ましくは、適切な塩基の存在下で反応が行われ、反応の間に生じた酸を除去する。適切な塩基には、例示として、第三級アミン（トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチル−モルホリンなど）が含まれる。代わりに、反応は、水酸化ナトリウムの水溶液、ｐＨ７．４に緩衝化したホスフェート水溶液などのアルカリ水溶液を使用してショッテン−バウマン型条件下で行うことができる。このように得られた生成物３は、クロマトグラフィー、濾過、蒸発、結晶化などの従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、次のステップにおいて精製および／または単離せずに使用する。
【０３２０】
上記の反応において用いられる複素環アミノ酸１は、公知の化合物、または従来の合成手順によって公知の化合物から調製することができる化合物である。この反応において使用するために適したアミノ酸の例には、それだけに限らないが、Ｌ−プロリン、ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシル−Ｌ−プロリン、ｃｉｓ−４−ヒドロキシル−Ｌ−プロリン、ｔｒａｎｓ−３−フェニル−Ｌ−プロリン、ｃｉｓ−３−フェニル−Ｌ−プロリン、Ｌ−（２−メチル）プロリン、Ｌ−ピペコリン酸、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸、Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸、Ｌ−（５，５−ジメチル）チアゾリジン−４−カルボン酸、Ｌ−チアモルホリン−３−カルボン酸が含まれる。必要に応じて、アミノ酸１の相当するカルボン酸エステル（メチルエステル、エチルエステル、ｔ−ブチルエステルなど）は、アリールスルホニルクロリドと共に上記の反応において用いることができる。従来の試薬および条件、すなわち、メタノール／水などの不活性希釈剤中のアルカリ金属水酸化物による処理を使用した、エステル基のカルボン酸へのそれに続く加水分解によって、次いでＮ
−スルホニルアミノ酸３が得られる。
【０３２１】
同様に、上記の反応において用いられるアリールスルホニルクロリド２は、公知の化合物、または従来の合成手順によって公知の化合物から調製することができる化合物である。このような化合物は典型的には、三塩化リンおよび五塩化リンを使用して、相当するスルホン酸から、すなわち、式Ａｒ１ＳＯ３Ｈの化合物（Ａｒ１は、上記定義の通りである）から調製される。この反応は一般に、無溶媒でまたはジクロロメタンなどの不活性溶媒中で約０℃〜約８０℃の範囲の温度にて約１〜約４８時間、スルホン酸を、約２〜５モル当量の三塩化リンおよび五塩化リンと接触させることによって行われ、スルホニルクロリドが得られる。代わりに、アリールスルホニルクロリド２は、従来の反応条件下でチオールを塩素（Ｃｌ２）および水で処理することによって、相当するチオール化合物から、すなわち、Ａｒ１−ＳＨの化合物（Ａｒ１は、本明細書に定義されている通りである）から調製することができる。
【０３２２】
代わりに、上記の反応において用いられるアリールスルホニルクロリド２は、Ｃｌ−ＳＯ３Ｈを使用して、置換ベンゼンまたはヘテロシクロアルキル基のクロロスルホニル化によって調製し得る。
【０３２３】
アリールスルホニルクロリドの例には、ベンゼンスルホニルクロリド、１−ナフタレンスルホニルクロリド、２−ナフタレンスルホニルクロリド、ｐ−トルエンスルホニルクロリド、ｏ−トルエンスルホニルクロリド、４−アセトアミドベンゼンスルホニルクロリド、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゼンスルホニルクロリド、４−ブロモベンゼンスルホニルクロリド、２−カルボキシベンゼンスルホニルクロリド、４−シアノベンゼンスルホニルクロリド、３，４−ジクロロベンゼンスルホニルクロリド、３，５−ジクロロベンゼンスルホニルクロリド、３，４−ジメトキシベンゼンスルホニルクロリド、３，５−ジトリフルオロメチルベンゼンスルホニルクロリド、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリド、４−メトキシベンゼンスルホニルクロリド、２−メトキシカルボニルベンゼンスルホニルクロリド、４−メチルアミド−ベンゼンスルホニルクロリド、４−ニトロベンゼンスルホニルクロリド、４−トリフルオロメチル−ベンゼンスルホニルクロリド、４−トリフルオロメトキシベンゼンスルホニルクロリド、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホニルクロリド、２−チオフェンスルホニルクロリド、５−クロロ−２−チオフェンスルホニルクロリド、２，５−ジクロロ−４−チオフェンスルホニルクロリド、２−チアゾールスルホニルクロリド、２−メチル−４−チアゾールスルホニルクロリド、１−メチル−４−イミダゾールスルホニルクロリド、１−メチル−４−ピラゾールスルホニルクロリド、５−クロロ−１，３−ジメチル−４−ピラゾールスルホニルクロリド、３−ピリジンスルホニルクロリド、２−ピリミジンスルホニルクロリドなどが含まれるが、これらには限定されない。必要に応じて、スルホニルフルオリド、スルホニルブロミドまたはスルホン酸無水物は、上記の反応においてスルホニルクロリドの代わりに使用して、Ｎ−スルホニルアミノ酸３を形成し得る。
【０３２４】
次いで、Ｎ−アリールスルホニルアミノ酸３を、下記のスキーム６に示されているように市販のチロシンエステルにカップリングする。
【化６９】
2014210790.tif 000079
式中、Ｒ、Ａｒ１、Ｘ、ｍおよびｎは、上記定義の通りであり、Ｒａは、水素またはアルキルであるが、好ましくは、ｔ−ブチルなどのアルキル基であり、Ｚは、アリール環上の任意選択の置換を表し、ｏは、０、１または２である。
【０３２５】
このカップリング反応は典型的には、カルボジイミド、ＢＯＰ試薬（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスホネート）などの周知のカップリング試薬を使用して行われる。適切なカルボジイミドには、例示として、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）などが含まれる。必要に応じて、例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、３４（４８）、７６８５（１９９３）に記載されているものを含めてカルボジイミドカップリング試薬のポリマー担持形態をまた使用してもよい。さらに、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールなどの周知のカップリング促進剤を使用して、カップリング反応を促進してもよい。
【０３２６】
このカップリング反応は、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの不活性希釈剤中で、Ｎ−スルホニルアミノ酸３と、約１〜約２当量のカップリング試薬、および少なくとも１当量、好ましくは約１〜約１．２当量のチロシン誘導体４とを接触させることによって典型的には行われる。一般に、この反応は、約０℃〜約３７℃の範囲の温度で約１２〜約２４時間行われる。反応が完了すると、化合物５を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収する。
【０３２７】
代わりに、Ｎ−スルホニルアミノ酸３は、酸ハロゲン化物に変換し、次いでそれを化合物４とカップリングし、化合物５を得ることができる。酸ハロゲン化物は、従来の条件下で化合物３を、無機酸ハロゲン化物（塩化チオニル、三塩化リン、三臭化リンまたは五塩化リンなど）と、または好ましくは塩化オキサリルと接触させることによって調製することができる。一般に、この反応は、無溶媒で、またはジクロロメタンもしくは四塩化炭素などの不活性溶媒中で約０℃〜約８０℃の範囲の温度にて約１〜約４８時間、約１〜５モル当量の無機酸ハロゲン化物または塩化オキサリルを使用して行われる。ＤＭＦなどの触媒をまた、この反応において使用してもよい。
【０３２８】
次いで、Ｎ−スルホニルアミノ酸３の酸ハロゲン化物は、ジクロロメタンなどの不活性希釈剤中で約−７０℃〜約４０℃の範囲の温度にて約１〜約２４時間、少なくとも１当量、好ましくは約１．１〜約１．５当量のチロシン誘導体４と接触させる。好ましくは、この反応は、適切な塩基の存在下で行われ、反応の間に生じた酸を除去する。適切な塩基には、例示として、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリンなどの第三級アミンが含まれる。代わりに、反応は、水酸化ナトリウムなどのアルカリ水溶液を使用してショッテン−バウマン型条件下で行うことができる。反応が完了すると
、化合物５を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収する。
【０３２９】
代わりに化合物５は、下記のスキーム７において示されているように、最初にジアミノ酸誘導体を形成させ、次いでジアミノ酸をハロゲン化アリールスルホニル２にカップリングすることによって調製することができる。
【化７０】
2014210790.tif 000080
式中、Ｒ、Ｒａ、Ａｒ１、Ｘ、Ｚ、ｍ、ｎおよびｏは、上記定義の通りである。
【０３３０】
ジアミノ酸６は、上記のような従来のアミノ酸カップリング技術および試薬（カルボジイミド、ＢＯＰ試薬など）を使用して、アミノ酸１をアミノ酸４とカップリングすることによって容易に調製できる。次いで、ジアミノ酸６は、スルホニルクロリド２を使用して、かつ上記の合成手順を使用してスルホン化することができ、化合物７が得られる。
【０３３１】
上記の反応において用いられるチロシン誘導体４は、公知の化合物、または従来の合成手順によって公知の化合物から調製することができる化合物である。例えば、上記の反応において使用するのに適したチロシン誘導体４には、それだけに限らないが、Ｌ−チロシンメチルエステル、Ｌ−チロシンｔ−ブチルエステル、Ｌ−３，５−ジヨードチロシンメチルエステル、Ｌ−３−ヨードチロシンメチルエステル、β−（４−ヒドロキシ−ナフト−１−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステル、β−（６−ヒドロキシ−ナフト−２−イル）−Ｌ−アラニンメチルエステルなどが含まれる。必要に応じて、当然ながら、上記の化合物の他のエステルまたはアミドをまた用いてもよい。
【０３３２】
Ｎ−アリールスルホニル−複素環アミノ酸−チロシン誘導体７を出発点として使用して、下記のスキーム８〜１８に示されるカップリング反応によってＡｒ２基においてポリマー部分を結合することができるが、このカップリング反応は、ポリマー部分をどのように導入できるかを示す一例に過ぎない。スキーム８〜１８において、ＰＥＧを例示的な目的のみのためにポリマー部分として使用する。他の適切なポリマーをＰＥＧの代わりに使用することができ、当業者であれば下記の反応スキームを修正してこのような他のポリマーを組み込むことを容易にできることが理解される。場合によっては、ＰＥＧ部分は、フェノキシ基に直接導入することができ、他の場合、ＰＥＧ部分は、リンカー部分を介した連結によって導入することができる。
【０３３３】
具体的には、スキーム８は、下記を例示し、
【化７１】
2014210790.tif 000081
式中、Ａｒ１、Ｒ、Ｒａ、ｍ、ｎ、ｏ、Ｘ、およびＺは、上記定義の通りであり、Ｐｇは、Ｒａカルボキシル保護基と比較して好ましくは直交的に除去可能なＣＢＺ、Ｂｏｃなどのアミン保護基であり、ｐは、好ましくは約１００〜１３６０の整数である。
【０３３４】
具体的には、スキーム８において、上記のように調製された化合物７は、塩化メチレン、クロロホルムなどの適切な溶媒中で好ましくは不活性雰囲気下で、少なくとも一当量の、好ましくは過剰な４−ニトロフェニルクロロホルメート８と合わせる。反応は、約−４０°〜約０℃の温度にて適切な塩基の存在下で好ましくは行われ、生じた酸を除去する。適切な塩基には、例示として、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどが含まれる。中間体混合カーボネート（図示せず）の形成後、少なくとも概ね等モル量のＮ−Ｐｇピペラジン８ａを、反応溶液に加える。この反応を室温で約１〜２４時間続ける。反応が完了すると、化合物９を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、次の反応において精製および／
または単離をせずに使用する。
【０３３５】
保護基の従来の除去によって、遊離ピペラジン誘導体１０が得られる。用いられる封鎖基に従って除去を行う。例えば、トリフルオロメチルカルボニル保護基は、炭酸カリウムの水溶液によって容易に除去される。さらに、様々な官能基のための適切な保護基、ならびに特定の官能基を保護および脱保護するための適切な条件は、当技術分野で周知である。例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＧ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい。
【０３３６】
次いで、遊離ピペラジン誘導体１０を、塩化メチレン、クロロホルムなどの適切な不活性希釈剤中で好ましくは不活性雰囲気下で、α，ω−ジクロロホルメートポリオキシエチレン化合物１１と合わせる。典型的には、クロロホルメート成分毎に少なくとも２当量、好ましくは約２．５〜１０当量の化合物１０を、化合物１１と組み合わせて用いる。反応は、触媒量のＤＭＡＰおよび塩基の存在下で任意選択で行われ、反応の間に生じた酸を除去する。反応は実質的に完了するまで周囲条件下で続けられ、これは典型的には４〜２４時間以内に起こる。Ｒａがアルキルであるとき、エステル誘導体のそれに続く加水分解によって、遊離カルボキシル基またはその塩を得る。このように得られた二量体１２を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などの従来の手順によって回収する。
【０３３７】
α，ω−ジクロロホルメートポリオキシエチレン（化合物１１）は、塩化メチレン、クロロホルムなどの適切な不活性溶媒中で、典型的には少なくとも２〜約２０当量の過剰なホスゲンとの反応によって、市販のポリオキシエチレンから容易に調製される。反応が実質的に完了するまで不活性雰囲気下で周囲条件にて反応は好ましくは行われ、これは典型的には約２〜２４時間以内に起こる。その後、このように得られたα，ω−ジクロロホルメートポリオキシエチレン（化合物１１）を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などの従来の手順によって回収する。
【０３３８】
ピペラジン誘導体２８の形成までのこの反応スキームの具体例は、下記のスキーム９に例示されている。
【化７２】
2014210790.tif 000082
【０３３９】
具体的には、市販の３−ピリジンスルホン酸２１は、当技術分野で周知の条件を使用してＰＯＣｌ３／ＰＣｌ５と接触させることによって、従来の条件下で相当するスルホニルクロリド２２に変換される。スルホニルクロリド２２と市販のＳ−５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸２３とのカップリングは、従来の条件下、好ましくはリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）の存在下で過剰なスルホニルクロリドを使用して行われる。反応が実質的に完了するまで反応は好ましくは約−１０〜２０℃の温度で行われ、これは典型的には０．５〜５時間以内で起こる。このように得られた生成物２４を、クロマトグラフィー、濾過、蒸発、結晶化などの従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、次のステップにおいて精製および／または単離せずに使用する。
【０３４０】
Ｎ−ピリジニルスルホニル−５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸化合物２３は、次に従来のアミノ酸カップリング条件を使用してｔ−ブチルチロシンにカップリングする。具体的には、このカップリング反応は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびＮ−メチルモルホリンなどの周知のカップリング試薬を使用して行い、カップリング反応を促進させる。
【０３４１】
このカップリング反応は、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの不活性希釈剤中で、Ｎ−スルホニルアミノ酸２３と、約１〜約２当量のカップリング試薬および少なくとも１当量、好ましくは約１〜約１．２当量のチロシンｔ−ブチルエステルとを接触させることによって典型的には行われる。一般に、この反応は、約０℃〜約２２℃の範囲の温度で約１２〜約２４時間行われる。反応が完了すると、化合物２４を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３４２】
別々に、モノ−Ｎ−Ｂｏｃ−ピペラジン２５は、上記の態様でホスゲンとの反応によって、相当するカルバミルクロリド２６に変換される。反応が完了すると、化合物２６を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３４３】
化合物２７を提供する化合物２４と化合物２６とのカップリングは、従来の条件下でジクロロメタンなどの不活性希釈剤中で触媒量のＤＭＡＰと共に、好ましくは塩基の存在下で進行し、生じた酸を除去する。反応は、約−２０〜約２２℃の温度で約２〜約２４時間で行われる。反応が完了すると、化合物２７を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３４４】
アミノＢｏｃ保護基およびｔ−ブチルエステル両方の除去は、トリフルオロ酢酸の存在下で進行し、化合物２８が得られ、それを、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができる。
【０３４５】
下記のスキーム１０は、カップリング後にカルボキシル保護基のそれとは異なってピペラジン保護基を除去することができるように、フェニルアラニン化合物上に見出されるカルボキシル保護基に対してアミン基の１つ上で直交的に保護されたピペラジン化合物の調製を例示する。望ましくない副反応を避けるために、このように得られた化合物上のそれに続く反応がカルボキシル保護基を必要とする場合、このような直交的保護が必要である。
【化７３】
2014210790.tif 000083
【０３４６】
具体的には、スキーム１０において、化合物２４は、上記の態様で調製される。Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ピペラジン２５は、トリエチルアミンなどの適切なアミンの存在下で過剰な無水トリフルオロ酢酸と接触することによって、従来通りにＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｎ’−トリフルオロメチル−カルボニルピペラジン２９に変換され、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中で、反応の間に生じた酸を除去する。一般に、この反応は、約−２０℃〜約２２℃の範囲の温度で約１〜約２４時間行われる。反応が完了すると、化合物２９を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、好ましくは、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３４７】
次には、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｎ’−トリフルオロメチル−カルボニルピペラジン２９上のｔ−Ｂｏｃ保護基の除去は、周囲条件下で塩化メチレン、ＥｔＯＡｃ、ＥｔＯ２などの不活性溶媒を泡立てる気体のＨＣｌを使用して従来の条件下で進行し、Ｎ’−トリフルオロメチルカルボニルピペラジン３０の塩酸塩が得られる。一般に、この反応は、約−２０℃
〜約２２℃の範囲の温度で約０．５〜約４時間行われる。反応が完了すると、化合物３０を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、好ましくは、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３４８】
Ｎ−カルバミルクロリド誘導体３１へのＮ’−トリフルオロメチルカルボニルピペラジン３０の変換は、上記の態様でホスゲンと接触させることによって従来通りに進行する。反応が完了すると、化合物３１を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、好ましくは、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３４９】
化合物３１および２４は上記のものと同様の条件下でカップリングし、化合物３２が得られ、これは、ピペラジン基のアミノ部分およびフェニルアラニン基のカルボキシル部分で直交的に保護される。トリフルオロメチルカルボニルアミノ保護基の選択的除去は、炭酸カリウムの水溶液を使用して従来の条件下で進行し、化合物３３が得られる。
【０３５０】
下記のスキーム１１は、式ＸＩＸの化合物を共有結合させる前のポリマー部分の修飾を例示する。例示的な目的のみのために、ポリマー部分は、ペンタエリトリトールに結合している四価のＰＥＧである。スキーム１１は、ポリマー部分の長さを従来の化学反応によって容易に調節し、最適な長さを実現できることを例示する。
【化７４】
2014210790.tif 000084
スキーム１１において、４個のｒおよびｓの総計は、好ましくは約１００〜１３６０の整数である。
【０３５１】
具体的には、市販のテトラペグ化ペンタエリトリトール（化合物３４）（例えば、概ね２０ｋＤの総分子量を有し、Ｓｕｎ  Ｂｉｏ、Ｏｒｉｎｄａ、ＣＡ、ＵＳＡから入手可能な化合物（カタログ番号Ｐ４０Ｈ−２０））を、塩化メチレン、クロロホルムなどの適切な不活性溶媒中で、典型的には少なくとも４〜約４０当量の過剰なホスゲンと反応させる。反応が実質的に完了するまで反応は好ましくは不活性雰囲気下で周囲条件にて行われ、これは典型的には約２〜２４時間以内に起こる。その後、このように得られたテトラクロロホルメートポリオキシエチレン、化合物３５を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などの従来の手順によって回収し、あるいは次の反応段階において精製および／または単離をせずに使用する。
【０３５２】
次いで、テトラクロロホルメート（化合物３５）を、従来の条件下でジクロロメタンなどの不活性希釈剤中、任意選択で触媒量のＤＭＡＰおよび塩基の存在下で、過剰（典型的には、クロロホルメート成分毎に２．５〜１０当量）なα，ω−ジアミノポリオキシエチレン化合物（例えば、概ね６ｋＤの分子量を有し、カタログ番号Ｐ２ＡＭ−６としてＳｕｎ  Ｂｉｏから入手可能な化合物）と合わせ、生じた酸を除去する。反応は、約−２０〜約２２℃の温度で、約２〜約２４時間または反応が実質的に完了するまで典型的には行わ
れる。完了すると、化合物３６を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３５３】
Ｓｕｎ  Ｂｉｏからの特定のテトラペグ化ペンタエリトリトールおよびＳｕｎ  Ｂｉｏからのジアミンが用いられるとき、このように得られた生成物である化合物３６は、概ね４５ｋＤの分子量を有する。α，ω−ジアミノポリオキシエチレンは、商品名Ｊｅｆｆａｍｉｎｅｓ（登録商標）で市販であり、典型的には１０，０００以上までの分子量を有する。
【０３５４】
モノ−アミノ保護α，ω−ジアミノポリオキシエチレンは、架橋および環化を最小化するためにスキーム１１において使用してもよいことが理解される。反応が完了すると、モノ−アミノ保護基を、当技術分野で周知の従来の手段によって除去する。
【０３５５】
スキーム１２は、ポリマー置換を実現するための誘導体化のための第２の経路を例示する。このスキームにおいて、ピペラジン基のアミノ部分を、α，ω−ジカルボン酸ポリマーのインサイチュで形成された活性化カルボキシル基に対する相補的官能基として用いる。再び例示のみの目的で、α，ω−ジカルボン酸ポリマーは、α，ω−ジカルボン酸ポリオキシエチレンである。この実施形態では、ジカルボキシル−ＰＥＧ化合物は、式ＨＯＯＣＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＯＣＨ２ＣＯＯＨで表され、ｐは、上記定義の通りであり、ＰＥＧ基へのこのように得られたリンカーは、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−で表される。
【化７５】
2014210790.tif 000085
【０３５６】
具体的には、スキーム１２において、上記のように調製した過剰な化合物３３（例えば、カルボキシル基毎に２．５〜１０当量の化合物３３）を、ジカルボキシル−ＰＥＧ化合物に加え、それを、トリエチルアミンなどの適切なアミンの存在下で少なくとも２当量、好ましくは過剰なＨＡＴＵ［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，
３，３，−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］と接触させることによって、インサイチュで活性化エステル（図示せず）に変換する。ジカルボキシル−ＰＥＧ化合物の化合物３３へのカップリングは、約０〜約２２℃の温度で約２〜約２４時間好ましくは進行する。反応が完了すると、化合物３９を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３５７】
過剰なギ酸によるｔ−ブチルカルボキシル保護基の従来の除去によって、式ＸＶＩＩＩＡの化合物が得られる。
【０３５８】
スキーム１３は、化合物Ａへのポリマー付加を実現するための誘導体化のためのまた別の経路を例示する。このスキームにおいて、ピペラジン基のアミノ部分を、α，ω−ジオールを含むポリマーのインサイチュで形成されたクロロホルメートに対する相補的官能基として用いる。再び例示の目的のために、α，ω−ジオールを含むポリマーは、式ＨＯＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＯＨで表されるＰＥＧであり、ｐは、上記定義の通りであり、このように得られたリンカーは、−Ｃ（Ｏ）−で表される。
【化７６】
2014210790.tif 000086
【０３５９】
具体的には、スキーム１３において、市販のジヒドロキシＰＥＧ４２のヒドロキシル基は、ジクロロメタン中のトルエン（Ｆｌｕｋａ）中のホスゲンとの反応によって、相当するクロロホルメート３７に変換される。生成物を蒸発によって単離し、次のステップにおいてそれ以上精製することなく用いる。
【０３６０】
過剰な化合物３３（例えば、クロロホルメート成分当たり２．５〜１０当量の化合物３３）を、トリエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で上記のように調製したジクロロホルメート（化合物４３）と接触させ、生じた酸を除去する。ジクロロホルメート−ＰＥＧ
化合物の化合物３３へのカップリングは、好ましくは約０〜約２２℃の温度で約２〜約４時間進行する。反応が完了すると、化合物４４を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３６１】
過剰なギ酸によるｔ−ブチルカルボキシル保護基の従来の除去によって、式ＸＶＩＩＩの化合物が得られる。
【０３６２】
スキーム１２および１３において示される反応は、ジカルボン酸（スキーム１２）またはジクロロホルメート（スキーム１３）の両端で同時に行われ、それによってホモマーの二価またはより多価のコンジュゲートのワンポット合成が実現する。しかし、これらの反応は、保護基の使用によって順次に行うことができることが理解される。
【０３６３】
ジカルボン酸の場合、カルボキシル基の１つは保護することができ、一方他方はピペラジンのアミノ基へのカップリングを受ける。完了すると、保護基は除去され、次いで同一または好ましくは異なる化合物Ａと反応させ、ヘテロ二価構造を得ることができる。またさらに、ヘテロ三価、ヘテロ四価およびより多価のヘテロ構造は、カルボキシル官能基上の直交的保護基を使用することによって調製することができる。ジオールの場合（スキーム１３）、ヒドロキシル基の１つを保護することができ、一方他方はホスゲンとの反応を受け、ピペラジンのアミノ基へのそれに続く付加のためのクロロホルメートが形成される。完了すると、保護基は除去され、次いでホスゲン、それに続いて同一または好ましくは異なる化合物Ａと反応させ、ヘテロ二価構造を得ることができる。またさらに、ヘテロ三価、ヘテロ四価およびヘテロのより多価の構造は、アルコール官能基上の直交的保護基の使用によって調製することができる。
【０３６４】
スキーム１４は、それに続くポリマー付加のために有用なＮ−カルバミルクロリドおよびイソシアネート中間体の合成を例示する。このスキームにおいて、ピペラジン基のアミノ部分は、それに続くポリマー付加のために誘導体化される。
【化７７】
2014210790.tif 000087
【０３６５】
具体的には、スキーム１４において、相当するＮ−カルバミルクロリド（化合物３３ａ）への化合物３３のピペラジン基のアミノ部分の変換は、炭酸水素ナトリウムなどの適切な塩基の存在下で過剰なホスゲンと接触させることによって進行し、反応の間に生じた酸を除去する。反応が完了すると、化合物３３ａを、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などの従来の方法によって回収することができ、あるいは代わりに、好ましくは次に精製および／または単離せずに用いる（スキーム１５において例示する）。
【０３６６】
代わりに、化合物３３のピペラジン基のアミノ部分は、ピリジン（溶媒として作用することもできる）などの塩基の存在下で、少なくとも一当量の、好ましくは過剰な４−ニトロベンゾイルクロリドと反応させることによって、相当するアミド（化合物４５）に変換することができ、反応の間に生じた酸を除去する。反応は、好ましくは約０〜約２２℃の温度で約１〜約２４時間進行する。反応が完了すると、化合物４５を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３６７】
フェニル基のパラ−ニトロ置換基のそれに続く還元によって、化合物４６中のアミン置換基が得られる。還元は、水素雰囲気下にて典型的には高圧力で、メタノールなどの適切
な希釈剤中で、パラジウム／炭素を使用して従来通りに行われる。反応は実質的に完了するまで進行し、これは典型的には約２４〜約７２時間以内に起こる。反応の間に、さらなる触媒を必要に応じて加え、反応の完了に影響を与える。反応が完了すると、化合物４６を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３６８】
相当するイソシアネート４７への化合物４６のフェニル基のパラ−アミノ置換基の変換は、炭酸水素ナトリウムなどの適切な塩基の存在下で過剰なホスゲンとの反応によって起こり、生じた酸を除去する。反応は実質的に完了するまで進行し、これは典型的には約０℃〜約２２℃で約０．５〜約５時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物４７を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３６９】
スキーム１５は、ポリマー置換を実現するための誘導体化のためのまたさらなる経路を例示する。このスキームにおいて、化合物３３ａのピペラジン基のカルバミルクロリド部分を、相補的官能基として用いて、カルバメートまたは尿素結合を形成する。例示的な目的のみのために、用いられるポリマーは、ＰＥＧのα，ω−ジオールまたはジアミンであり、式ＨＱＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＱＨで表され、Ｑは、ＮＨまたはＯである。
【化７８】
2014210790.tif 000088
【０３７０】
具体的には、スキーム１５において、過剰な（例えば、各ＨＱ部分毎に２．５〜１０当量のカルバミルクロリド）化合物３３ａを、好ましくはトリエチルアミンおよび／または触媒量の４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの適切な塩基の存在下でジクロロメタンなどの不活性溶媒中で、適切なジヒドロキシ−またはジアミノ−ＰＥＧ化合物と接触させる。反応は実質的に完了するまで進行し、これは典型的には約４〜約４８時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物４８を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３７１】
Ｑがヒドロキシル基であるとき、生成物は、ＰＥＧ基とＶＬＡ−４アンタゴニストとを−Ｃ（Ｏ）−で表されるリンカーを介して共有結合するカルバメート官能基を含有する。Ｑがアミノ基であるとき、生成物は、ＰＥＧ基とＶＬＡ−４アンタゴニストとを−Ｃ（Ｏ）−で表されるリンカーを介して共有結合する尿素官能基を含有する。ｔ−ブチルカルボキシル保護基は、過剰なギ酸によって従来通りに除去することができる。
【０３７２】
スキーム１６は、ポリマー置換を実現するための誘導体化のためのまた別の経路を例示する。このスキームにおいて、化合物４７のイソシアネートを相補的官能基として用いて、カルバメートまたは尿素結合を形成する。例示的な目的のみのために、用いられるポリマーは、ＰＥＧのα，ω−ジオールまたはジアミンであり、式ＨＱＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＱＨ（Ｑは、ＮＨまたはＯである）によって表される。
【化７９】
2014210790.tif 000089
【０３７３】
具体的には、スキーム１６において、過剰なイソシアネート４７（例えば、各ＨＱ部分毎に２．５〜１０当量のイソシアネート４７）を、ジクロロメタンまたはトルエンなどの適切な不活性希釈剤中で適切なジヒドロキシ−またはジアミノ−ＰＥＧ化合物と接触させ
る。反応を、好ましくは約０°〜約１０５℃の温度で実質的に完了するまで維持し、これは典型的には約１〜約２４時間以内に起こる。反応が完了すると、化合物４９を、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めた従来の方法によって回収し、あるいは代わりに、精製および／または単離せずに次のステップにおいて用いる。
【０３７４】
Ｑがヒドロキシル基であるとき、このように得られた生成物は、ＰＥＧ基とＶＬＡ−４アンタゴニストとを−Ｃ（Ｏ）−連結基を介して共有結合するカルバメート官能基を含有する。Ｑがアミノ基であるとき、このように得られた生成物は、ＰＥＧ基とＶＬＡ−４アンタゴニストとを−Ｃ（Ｏ）−連結基を介して共有結合する尿素官能基を含有する。
【０３７５】
過剰なギ酸によるｔ−ブチルカルボキシル保護基の従来の除去によって、式ＸＶＩＩＩのモノ−ＰＥＧ化合物４７が得られる。
【０３７６】
スキーム１５および１６において示される反応は、（二量体形成のために）ポリマーの両端で同時に行われ、それによってホモマーの二価またはより多価のコンジュゲートのワンポット合成を可能にする。しかし、これらの反応は、保護基の使用によって順次に行うことができることが理解される。
【０３７７】
ジアミンの場合は、アミン基の１個は保護することができる一方、他方は化合物３３ａのカルバミルクロリドまたは化合物４７のイソシアネートとのカップリングを受ける。完了すると、保護基は除去され、次いで同一または好ましくは異なる化合物Ａと反応して、ヘテロ二価構造を得ることができる。またさらに、ヘテロ三価、ヘテロ四価およびより多価のヘテロ構造は、アミン官能基の１つまたは複数上の直交保護基を使用することによって調製することができる。
【０３７８】
ジオールの場合、ヒドロキシル基の１個は保護することができ、一方他方は化合物３３ａのカルバミルクロリドまたは化合物４７のイソシアネートとのカップリングを受ける。完了すると、保護基は除去され、次いで同一または好ましくは異なる化合物Ａと反応させ、ヘテロ二価構造を得ることができる。またさらに、ヘテロ三価、ヘテロ四価およびより多価のヘテロ構造は、ヒドロキシル官能基の１つまたは複数上の直交的保護基を使用することによって調製することができる。
【０３７９】
上記のスキーム５〜１６において、分子の他の部分上に位置するアミン部分を上記の態様で用いて、ポリマー基を分子に共有結合することができる。例えば、Ａｒ１上、複素環アミノ酸上、またはＡｒ２上に位置するアミンは、同様に誘導体化され、ＰＥＧ置換を得ることができる。アミン部分は、合成の間にこれらの置換基中に含まれ、必要に応じて適切に保護することができる。代わりに、アミン前駆体を用いることができる。例えば、スキーム１４に示されているように、ニトロ基の還元によって、相当するアミンが得られる。同様に、シアノ基の還元によって、Ｈ２ＮＣＨ２−基が得られる。ニトロおよびシアノ置換Ａｒ１基は、アミノ置換Ａｒ１基と同様に米国特許第６，４８９，３００号において提供されている。
【０３８０】
さらに、アミノ置換は、複素環アミノ酸官能基中に組み込まれ、次いで誘導体化され、ポリマー部分を含むことができる。例えば、複素環アミノ酸官能基は、米国特許第６，４８９，３００号に示されている２−カルボキシルピペラジンでよい。代わりに、市販の３−または４−ヒドロキシプロリンは、相当するケトンに酸化され、次いでシアノ水素化ホウ素ナトリウムの存在下でアンモニアで還元的アミノ化をされて、相当するアミン部分を形成することができる。またさらに、４−シアノプロリンは還元されて、式−ＣＨ２ＮＨ２の置換アルキル基を得ることができ、それはアミンを介して誘導体化することができる。
【０３８１】
またさらに、アミン部分は、Ａｒ２官能基中に組み込むことができる。好ましくは、アミン部分は、Ａｒ２に結合しているニトロまたはシアノ基などのアミン前駆体として存在する。
【０３８２】
上記のスキーム５〜１６において、カルボキシルまたはヒドロキシル基が、式ＸＩＸのＶＬＡ−４アンタゴニスト（ポリマー置換基を有さない）上にあり、アミン基がポリマー部分の一部であることがあるように、アミンと相補的官能基との反応は逆行することがある。このような場合には、下記のスキーム１７に例示されているように、好ましくはポリマー部分を終結させるアミン基、は、ホスゲンおよびＥｔ３Ｎを使用してイソシアネートに変換され、ヒドロキシル基と反応し、カルバメートを形成することができる。
【化８０】
2014210790.tif 000090
【０３８３】
具体的には、米国特許第６，４８９，３００号に記載されている過剰な化合物５０を、上記の態様で接触させて、相当するカルバメート５１を得る。好ましくは、各イソシアネート部分毎に、約２．５〜１０当量の化合物５０を用いる。次いで、上記のような脱保護によって、相当する二酸を得る（図示せず）。
【０３８４】
代わりに、スキーム１７において、ヒドロキシル官能基は、ホスゲンと反応して、クロロカルボニルオキシ誘導体を得ることができ、それはジアミン化合物のアミン基と反応して、カルバメートが得られる。
【０３８５】
例えばＡｒ１部分上のカルボキシル官能基は、上記のスキーム１２に記載した態様で、ジまたはより多価のアミノポリマーとの反応によって相当するアミドに変換することができる。代わりに、下記のスキーム１８は、Ａｒ１部分上の相当するシアノ基からのアミン官能基の生成の一方法を例示する。
【化８１】
2014210790.tif 000091
【０３８６】
具体的には、スキーム１８において、米国特許第６，４８９，３００号に記載されている公知の化合物５２は、従来の条件下でｔ−ブチル保護されて、シアノ化合物５３が得られ、それは従来の条件下で水素付加されて、アミノメチル化合物５４が得られる。化合物５４のアミノメチル基は、上記に例示したスキーム５〜１８のいずれかの１つにおいて、そこへのポリマー部分のカップリングのために利用可能である。
【０３８７】
下記のスキーム１９は、上記に例示したスキーム５〜１８のいずれか１つにおいて、そこへのポリマー部分のカップリングに有用な３−アミノピロリジニル誘導体の代替合成を例示する。
【化８２】
2014210790.tif 000092
【０３８８】
従来の方法を使用して、市販のｃｉｓ−４−ヒドロキシＬ−プロリン５７を、数時間還流させながらメタノール性塩化水素で処理し、続いて蒸発させ、このように生じたメチルエステル塩酸塩を、ピリジン中の過剰な塩化トシルで室温にて２日間処理し、生成物５８を得る。弱酸性水溶液を使用してピリジンを中和させ、ＥｔＯＡｃなどの有機溶媒で生成物を抽出することによって化合物５８を単離する。生成物５８は、結晶化、フラッシュクロマトグラフィーによって精製してもよく、またはさらに好ましくはそれに続くステップにおいて精製せずに使用する。
【０３８９】
ＤＭＦ中の５８と過剰なアジ化ナトリウムの飽和溶液との室温での１５日間の反応によって、化合物５９が得られる。化合物５９を、水による反応混合物の希釈、それに続くＥｔＯＡｃなどの有機溶媒による抽出によって単離する。生成物５９を、結晶化、フラッシュクロマトグラフィーによって精製してもよく、またはさらに好ましくはそれに続くステ
ップにおいて精製せずに使用する。
【０３９０】
化合物５９を、水およびメタノールの混合物中の水酸化ナトリウムで処理し、このようにしてメチルエステルを加水分解し、カルボン酸を生じさせ、それを酸性化、およびＥｔＯＡｃなどの有機溶媒による抽出によって単離する。カルボン酸を、ＤＭＦ中のＬ−チロシンｔ−ブチルエステル［Ｈ−Ｔｙｒ（Ｈ）−ＯｔＢｕ］、ＥＤＡＣ、ＨＯＢｔ、およびＥｔ３Ｎで処理し、ジペプチドを生じさせ、それを水による希釈およびＥｔＯＡｃなどの有機溶媒による抽出によって単離する。ジペプチドを、ＤＣＭ中のＣｌＣＯＮＭｅ２、Ｅｔ３Ｎ、およびＤＭＡＰで還流させながら２４時間処理し、カルバメート６０を生じさせ、それをＥｔＯＡｃによる希釈、弱酸性水溶液および塩基による連続的洗浄、次いで蒸発によって単離する。化合物６０を、フラッシュクロマトグラフィーによって厳密に精製する。
【０３９１】
最後に、化合物６１は、水素雰囲気下にてＰｄ／Ｃ触媒と共に６０のメタノール溶液を振盪することによって調製される。生成物６１を、濾過および蒸発による触媒の除去によって単離する。
【０３９２】
式ＸＩＸの化合物とポリマー（分枝アームハブ分子に任意選択で結合している）とをカップリングさせるための他の方法は、当技術分野で周知である。
【０３９３】
式ＸＩＸの化合物へのコンジュゲーションに適した他のポリマーには、これらだけに限定されないが、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡｍ）、ポリジメチルアクリルアミド（ＰＤＡＡｍ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、デキストラン、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）（ＰＧＡ）、スチレン無水マレイン酸（ＳＭＡ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリジビニルエーテル無水マレイン酸（ＤＩＶＥＭＡ）が含まれる。例示として、ＰＶＰ、ＰＡＡｍおよびＰＤＡＡｍは、ラジカル重合の間のコモノマーの導入によって官能化し得る。ＰＶＡおよびデキストランは各々、コンジュゲーションに適した第一級ヒドロキシル（ＯＨ）基を含有する。これらの生体高分子の合成方法およびそれらを生体物質にコンジュゲーションするための方法は、当技術分野で周知である（例えば、これらの全ては本明細書においてその全体が組み込まれている、米国特許出願公開第２００４００４３０３０号；米国特許第５，１７７，０５９号；米国特許第６，７１６，８２１号；米国特許第５，８２４，７０１号；米国特許第６，６６４，３３１号；米国特許第５，８８０，１３１号；Ｋａｍｅｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ２５：３２５９〜３２６６、２００４；Ｔｈａｎｏｕ，Ｍ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ
Ｄｒｕｇｓ４（６）：７０１〜７０９、２００３；Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｉｌ  Ｆａｒｍａｃｏ５４：４９７〜５１６、１９９９を参照されたい）。
【０３９４】
［ポリマーコンジュゲートの医薬製剤］
医薬品として用いられるとき、コンジュゲートは、医薬組成物の形態で通常投与される。これらのコンジュゲートは、経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋内、舌下、眼、または吸入（経鼻または経口吸入による投与を含めた）を含めた種々の経路によって投与することができる。好ましい投与経路には、皮下、静脈内、および筋内が含まれる。このような組成物は、製薬技術において周知の態様で調製され、少なくとも１種のコンジュゲートを含む。
【０３９５】
本発明はまた、α４β７阻害剤である別々の化合物と組み合わせた本発明によるコンジュゲート、例えば、式Ｉのコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。このような組成物はまた、薬学的に許容される担体または添加剤を含み、本明細書において他の場所で議論するように投与し得る。
【０３９６】
コンジュゲートは、広範な投与量範囲に亘り有効であり、一般に医薬有効量で投与される。しかし、実際に投与されるコンジュゲートの量は、治療される状態、選択した投与経路、投与する実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重篤度などを含めた関連する状況を考慮して、医師によって決定されることは理解されるであろう。
【０３９７】
［ポリマーコンジュゲート］
コンジュゲートに関して記載したように、化合物は、ポリマーコンジュゲートとして製剤され、投与される。ポリマーコンジュゲートは、改良された溶解度およびインビボ安定性など、非コンジュゲート化化合物より利点を提供すると予測されている。
【０３９８】
したがって、単一のポリマー分子を、化合物とのコンジュゲートのために用い得るが、複数のポリマー分子もまた、典型的には担体を介して結合することができることもまた意図されている。さらに、コンジュゲートされたポリマーは、最終用途に応じて任意の他の基、部分、または他のコンジュゲートされた種を利用し得ることが認識される。一例として、いくつかの用途においては、ポリマーを官能化し、それを反応性にし、式ＸＩＸの化合物にコンジュゲートし、全体的なコンジュゲートされた材料の様々な特性または特徴を増強することができるようにすることは有利であり得る。したがって、ポリマーは、その意図した目的についてのコンジュゲートされた化合物の効力を妨げない、任意の官能基、反復基、連結、または他の構成物の構造を含有し得る。
【０３９９】
これらの望ましい特性を達成するために有用に用いられる例示的なポリマーは、上記、および参照によりその全体が本明細書に組み込まれている（Ｚｈｅｎｇらに対する）ＷＯ０１／５４６９０に記載されている。ポリマーは、化合物にカップリングし（好ましくは、リンカー部分を介して）、ヒト酵素によって有意に切断可能ではない安定的な結合を形成し得る。一般に、結合が「有意に」切断可能ではないのには、それだけに限らないが、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含めた当技術分野で標準的な技術によって測定すると、ポリマーおよびポリマーが連結している化合物を連結する結合の約２０％以下が２４時間の期間内に切断されることを必要とする。
【０４００】
一般に、化合物は、ポリマーに結合した少なくとも約２種の式ＸＩＸの化合物を含有する。最終的な量は、反応の程度を最大化し、一方生成物の非特異的修飾を最小化し、同時に最適な活性を維持するであろう化学反応を定義し、一方同時に化合物の半減期を最適化することの間の釣り合いである。好ましくは、化合物の生物活性の少なくとも約５０％が保持され、最も好ましくは１００％が保持される。
【０４０１】
上で述べたように、一実施形態では、Ｃ２〜Ｃ４アルキルポリアルキレングリコール、好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のポリアルキレングリコール残基、またはこのようなグリコールのポリ（オキシ）アルキレングリコール残基は、対象とするポリマー系に有利に組み込まれる。したがって、化合物が結合しているポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のホモポリマーでよく、またはポリオキシエチル化ポリオールであり、ただし全ての場合において、ポリマーは室温にて水中で可溶性である。このようなポリマーの非限定的例には、ポリアルキレンオキシドホモポリマー（ＰＥＧまたはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化グリコール、そのコポリマーおよびそのブロックコポリマーなど）が含まれるが、ただし、ブロックコポリマーの水溶性は維持される。
【０４０２】
ポリオキシエチル化ポリオールの例には、それだけに限らないが、ポリオキシエチル化グリセロール、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、また
は同様のものが含まれる。ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば、モノ−、ジ−、およびトリグリセリドの、動物およびヒトにおいて天然の同一の骨格である。したがって、この分岐は、必ずしも体内で異質な物質として見られない。
【０４０３】
上記の一覧は、単に例示的なものであり、本明細書に記載されている質を有する全てのポリマー材料が意図されていることを、当業者であれば認識するであろう。ポリマーは任意の特定の分子量を有する必要はないが、分子量は、約１００〜１００，０００、好ましくは約１０，０００〜８０，０００、好ましくは約１０，０００〜６０，０００、さらに好ましくは約２０，０００〜約６０，０００、さらに好ましくは約４０，０００〜４５，０００であることが好ましい。特に、腎臓中の濾過による生成物の減少を防止するのに２０，０００以上のサイズが最も有効である。
【０４０４】
ＰＥＧ誘導体とは、ポリエチレングリコール自体中で見出される末端ヒドロキシル基の１つまたは両方が修飾されているポリエチレングリコールポリマーを意味する。適切な修飾の例には、１つまたは両方のヒドロキシル基（複数可）を、低分子量リガンドで、または別の巨大分子もしくはポリマーで保護されていても、または保護されていなくてもよい代わりの官能基で置き換えることが含まれる。ポリエチレングリコール中の末端ヒドロキシル基の修飾は、ポリエチレングリコールと相補的反応性官能基（ポリエチレングリコール中のヒドロキシル基との反応を起こすことができる官能基を含めた）を含む化合物とを反応させることによって達成し得る。化合物のＰＥＧ誘導体は、連結基によってそこに共有結合している１個または複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）置換基を含有し得る。
【０４０５】
上記の式ＸＶＩＩＩおよびＸＸ〜ＸＸＩＩのコンジュゲート、ならびにこれらの化合物を調製するための手順および反応条件のさらなる記載は、その内容全体が参照により組み込まれている２００６年１月２６日に公開されたＭｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ＶＬＡ−４  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｍｏｉｅｔｉｅｓという表題のＷＯ２００６／０１００５４に記載されている。
【０４０６】
［併用療法］
本明細書に開示されているような組成物は、併用療法において利用し得る。癌のために多くの治療が存在する。特定の癌治療または癌を治療するために使用される療法様式の組合せは、癌のタイプ、その段階、患者（例えば、体重、性別、年齢、健康、前の癌など）、および療法において患者がどこにいるか（例えば、最初の治療、急性転化、最初の治療に対して効果がない、癌の再発、または数カ月または数年前の最初の癌の治療によって恐らく誘発された第２の癌）によって著しく決まる。したがって、医師は頻繁に、疾患と戦っている患者のニーズおよび生活の質についての患者自身の決断に最も適するであろう種々の治療法を合わせなくてはならない。治療には、手術、放射線療法、化学療法、生物学的療法（例えば、サイトカイン、免疫療法、およびインターフェロン）、ホルモン療法、ならびに温熱療法が含まれてもよい。
【０４０７】
従来の化学療法は、ホルモン療法（例えば、抗エストロゲン剤、アロマターゼ阻害剤、性腺刺激ホルモン放出ホルモン類似体、および抗アンドロゲン）、抗腫瘍アルキル化剤（例えば、マスタード、ニトロソ尿素、テトラジン、およびアジリジン）、シスプラチンおよびその類似体、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、葉酸代謝拮抗剤、５−フルオロピリミジン、シタラビン、アザシチジン、ゲムシタビン、６−チプリン、およびヒドロキシ尿素）、トポイソメラーゼ相互作用剤、微小管阻害剤（例えば、ビンカアルカロイド、タキサン、およびエストラムスチン）、分化剤（例えば、レチノイド、ビタミンＤ３、極性−無極性化合物、ブチレートおよびフェニルアセテート、細胞毒性薬、サイトカイン、およびこれらの組合せ）、ならびに他の化学療法剤（フルダラビン、２−クロロデオキ
シアデノシン、２’−デオキシコホルマイシン、ホモハリントニン（ＨＨＴ）、スラミン、ブレオマイシン、およびＬ−アスパラギナーゼなど）にさらに分類されることができる。
【０４０８】
本発明の組成物は、化学療法剤と併せて投与し得る。例えば、本発明の化合物は、癌が白血病および骨髄腫などのアルファ−４陽性腫瘍によって特徴付けられているときは、急性化学療法と共に投与し得る。化学療法の薬剤には、それだけに限らないが、メルファラン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、イダルビシン、またはカルムスチンを含めてもよい。
【０４０９】
本発明の組成物は、液性腫瘍の癌の治療において利用される１種または複数の療法、活性剤、または治療と共に投与し得る。したがって、本発明の組成物は、例えば、メルファラン、シクロホスファミド、ニトロソウレアウなどを含めたアルキル化剤と共に投与し得る。本発明の組成物は、例えば、ＡｖａｓｔｉｎおよびＶＥＧＦトラップを含めた抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤と共に投与し得る。本発明の組成物は、例えば、ゾレドロン酸を含めたビスホスホネートと共に投与し得る。本発明の組成物は、インターフェロンα剤と共に投与し得る。本発明の組成物は、テムシロリムスと共に投与し得る。本発明の組成物は、例えば、リツキシマブを含めた抗ＣＤ２０剤と共に投与し得る。本発明の組成物は、クラリスロマイシンと共に投与し得る。本発明の組成物は、自己由来および同種間の両方の幹細胞移植と共に投与し得る。本発明の組成物は、例えば、ボリノスタットを含めたヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤と共に投与し得る。
【０４１０】
本発明の組成物は、ｖｅｌｃａｄｅ、ｒｅｖｌｉｍｉｄ、デキサメタオンス、タリオドミド、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの任意の単一のまたは複数の組合せと共に投与し得る。特定の実施形態では、本発明の組成物は、ｖｅｌｃａｄｅおよびｄｏｘｉｌと併せて投与し得る。他の実施形態では、本発明の組成物はまた、ｒｅｖｌｉｍｉｄおよびデキサメタゾンと併せて投与し得る。
【０４１１】
併用療法において利用されるとき、本発明の組成物は、液性腫瘍の癌の治療において利用される療法、活性剤、または治療の１つまたは複数と共に利用されてもよい。
【０４１２】
本発明の薬剤とこれらの他の療法または治療法との合わせた使用は、同時でもよく、または本発明の薬剤が他の療法または治療法の前または後に投与し得るように、２種の治療は分けてもよい。
【０４１３】
［癌の治療に関連した状態を改善するための併用療法］
癌細胞は正常細胞より速く増殖し、そのため化学療法および放射線照射の影響をより受けやすいため、癌治療では放射線照射または化学療法を使用して癌細胞を害することが多い。しかし、放射線照射および化学療法またはよりさらに新規な癌治療法のいくつかで患者を治療することは、患者に対して不利な副作用を伴う。
【０４１４】
したがって、本発明の一態様は、患者を治療するために使用される治療法の組合せによって生じる悪影響を改善する化合物および組成物の使用を意図する。例えば、薬物は、これらに限定されないが、悪心、嘔吐、粘膜炎および他の口腔合併症、膀胱炎、肺毒性、心毒性、脱毛、ならびに性腺機能不全などの有害な作用を治療するであろう抗癌治療と併せて患者に投与することができる。したがって、本明細書において議論されている試薬および併用療法は、これらの有害な作用を改善する薬物療法とさらに合わせ、かつ任意の従来の癌治療法と組み合わせることができる。癌治療の有害な作用を改善する方法に関する詳細については、一般にＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ  ＆  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＯＮＣＯＬＯＧＹ（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、第５版、１９９７）を
参照されたい。
【０４１５】
［医薬製剤および組成物の投与方法］
一般に、本発明の組成物は、これらの化合物のための許容される投与方法のいずれかによって治療有効量で投与される。組成物は、それだけに限らないが、経口、非経口（例えば、皮下、硬膜下、静脈内、筋内、くも膜下腔内、腹腔内、脳内、動脈内、または病変内投与経路）、局所、鼻腔内、局部（例えば、外科的用途または外科的坐薬）、直腸、および肺（例えば、エアゾール、吸入、または粉末）を含めた種々の経路によって投与することができる。したがって、これらの化合物は、注射可能および経口組成物の両方として有効である。組成物は、注入またはボーラス注入によって連続投与することができる。
【０４１６】
好ましくは、組成物は、非経口経路によって投与される。さらに好ましくは、組成物は、静脈内、皮下、および筋内経路によって投与される。このような組成物は、製薬技術における周知の態様で調製される。
【０４１７】
例えば、ペグ化コンジュゲートは、皮下、硬膜下、静脈内、筋内、くも膜下腔内、腹腔内、脳内、動脈内、または病変内経路を含めた注射可能な経路によって投与し得る。コンジュゲートは、注入またはボーラス注入によって連続投与することができる。このような組成物は、製薬技術において周知の態様で調製される。注射用製剤として投与されるペグ化化合物については、用量は、体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは体重１キログラム当たり約０．０２ｍｇ〜約１５ｍｇ、さらに好ましくは体重１キログラム当たり約０．０５ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲でよい。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得た用量反応曲線から推定することができる。典型的には、臨床医は、投与量が所望の効果を達成する量に達するまで化合物を投与するであろう。
【０４１８】
本発明の組成物は、投与間隔をおいて投与し得る。これらの間隔は、１日１回、週１回、２週間毎に１回、月１回、または他に必要に応じてでよい。臨床医であれば、投与をどのように投与間隔と適合するように適応させるかを知っているであろう。
【０４１９】
本発明の組成物、すなわち活性成分の実際の量は、腫瘍および／または悪性病変の重症度、対象の年齢および相対的な健康、使用される化合物の効力、経路および投与形態、ならびに他の要因などのいくつかの要因によって決まるであろう。
【０４２０】
このような組成物の毒性および治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養物または実験動物において標準的な医薬手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療係数であり、それは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療係数を示す化合物が好ましい。
【０４２１】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータは、ヒトにおいて使用するための一連の投与量の製剤に使用することができる。このような化合物の投与量は、好ましくは毒性が殆どないまたはないＥＤ５０を含めた循環濃度の範囲内にある。投与量は、用いる剤形および利用する投与経路によってこの範囲内で変化し得る。本発明の方法において使用される任意の組成物について、治療有効用量は、最初は細胞培養アッセイから推定することができる。細胞培養物において決定すると、用量はＩＣ５０（すなわち、症状の最大半減阻害を達成する試験化合物の濃度）を含めた循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて製剤し得る。このような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定し得る。
【０４２２】
患者に投与される医薬組成物の量は、何が投与されるか、投与の目的（予防または療法など）、患者の状態、投与の態様などによって変化するであろう。治療への用途において、組成物は、疾患およびその合併症の症状を治す、または少なくとも部分的に抑えるのに十分な量で、疾患を既に患っている患者に投与される。これを達成するのに適した量は、「治療有効用量」と定義される。この使用のために有効な量は、治療される疾患状態、ならびに炎症の重症度、患者の年齢、体重および全身状態などの要因によって担当する臨床医の判断により決まるであろう。
【０４２３】
患者に投与される組成物は、本明細書に記載されている医薬組成物の形態である。これらの組成物は、従来の無菌法によって無菌化してもよく、または無菌濾過してもよい。このように得られた水溶液は、そのまま使用するためパッケージングし、または凍結乾燥してもよく、凍結乾燥した調製物は、投与の前に無菌の水性担体と合わせる。化合物調製品のｐＨは、典型的には３〜１１、さらに好ましくは５〜９、最も好ましくは７〜８であろう。特定の上記の添加剤、担体、または安定剤の使用は、医薬塩の形成をもたらすことが理解される。
【０４２４】
活性組成物は、広範な投与量範囲に亘り有効であり、一般に医薬有効量または治療有効量で投与される。本発明の化合物の療法上の投与量は、例えば、治療が行われるための特定の使用、化合物の投与の態様、患者の健康および状態、ならびに処方する医師の判断によって変化するであろう。例えば、静脈内投与のために、用量は、体重１キログラム当たり約０．０１ｍｇ〜約２０ｍｇ、好ましくは体重１キログラム当たり約０．０２ｍｇ〜約１５ｍｇ、さらに好ましくは体重１キログラム当たり約０．０５ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲でよい。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得た用量反応曲線から推定することができる。典型的には、臨床医は、投与量が所望の効果を達成する量に達するまで化合物を投与するであろう。
【０４２５】
投与は、最大耐用量内で連続的または定期的に行い得る。投与は必要に応じて、例えば、１時間に１回、２時間に１回、６時間に１回、１２時間に１回、毎日、毎週、２週間毎、３週間毎、または毎月行い得る。投与は、例えば、週毎または単一もしくは二回分の１日用量で行い得る。
【０４２６】
医薬品として用いられるとき、本発明の組成物は、医薬組成物の形態で通常投与される。本発明にはまた、１種または複数の薬学的に許容される担体または添加剤に伴って、活性成分として上記の本発明の組成物の１種または複数を含有する医薬組成物が含まれる。用いられる添加剤は、典型的にはヒト対象または他の哺乳動物への投与に適したものである。本発明の組成物の作製において、活性成分を、通常添加剤と混合し、添加剤で希釈し、あるいはカプセル、袋、紙または他の容器の形態でよい担体中に封入する。添加剤が希釈剤の役割を果たすとき、それは活性成分のためのビヒクル、担体または媒体として作用する固体、半固体、または液体材料でよい。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、エアゾール剤（固体としてまたは液体媒体中）、例えば、１０重量％までの活性化合物を含有する軟膏剤、軟質および硬質ゼラチンカプセル剤、坐薬、無菌注射剤、ならびに無菌包装された散剤の形態でよい。
【０４２７】
製剤の調製において、他の成分と合わせる前に、活性組成物を粉砕して、適当な粒径を得ることが必要であることがある。活性組成物が実質的に不溶性である場合、それは通常２００メッシュ未満の粒径に粉砕される。活性組成物が実質的に水溶性である場合、粒径は通常粉砕によって調節され、製剤において実質的に均一な分布、例えば約４０メッシュを実現する。
【０４２８】
適切な添加剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが含まれる。製剤にはさらに滑沢剤（タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油など）；湿潤剤；乳化剤および懸濁化剤；保存料（メチル−およびプロピルヒドロキシ−ベンゾエートなど）；甘味剤；ならびに香味剤を含むことができる。本発明の組成物は、当技術分野において公知の手順を用いることによって、患者への投与後に活性成分の急速、持続または遅延放出を実現するように製剤することができる。
【０４２９】
医薬製剤およびその単位剤形中の活性組成物の量は、特定の用途、態様または導入、特定の組成物の効力、および所望の濃度によって広範に変化し、または調節し得る。「単位剤形」という用語は、ヒト対象および他の哺乳動物のための単位投与量として適した物理的な個別単位を意味し、各ユニットは、適切な医薬添加剤と併せて所望の治療効果を生じさせるように計算した所定の量の活性剤を含有する。好ましくは、組成物は、無菌生理食塩水などの適切な不活性担体中で非経口投与のために製剤される。投与される用量は、投与経路によって決定されるであろう。好ましい投与経路には、非経口または静脈内投与が含まれる。
【０４３０】
例示として、錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を医薬添加剤と混合し、本発明の化合物の均一な混合物を含有する固体予備製剤組成物を形成する。これらの予備製剤組成物を均一であると言及するとき、組成物が錠剤、丸剤およびカプセル剤などの等しく有効な単位剤形に容易に細分し得るように、活性成分が組成物に亘り均一に分散していることを意味する。次いで、この固体予備製剤を、上記のタイプの単位剤形に細分する。
【０４３１】
経口剤形のための１日当たりの投与量には、例えば、１日当たり１０ｍｇ〜約２９００ｍｇの本発明の活性成分が含まれてもよい。好ましくは、経口剤形は、１日当たり約５０ｍｇ〜約１２００ｍｇの活性成分を含有し得る。
【０４３２】
本発明の錠剤または丸剤は、コーティングされ、または別の方法で配合され、持続性作用の利点を可能にする剤形を提供し得る。例えば、錠剤または丸剤は、内側の投与成分および外側の投与成分を含むことができ、後者は前者の上の覆いの形態である。２つの成分は、腸溶層によって分離することができ、胃内での崩壊に抵抗し、内側の成分が十二指腸中を損なわれずに通過し、または放出が遅延することを可能にする役目を果たす。種々の材料をこのような腸溶層またはコーティングのために使用することができ、このような材料には、いくつかのポリマー酸、ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物が含まれる。
【０４３３】
経口投与または注射による投与のための本発明の組成物を組み込み得る液体形態には、水溶液、適切に風味をつけたシロップ剤、水性または油懸濁剤、および食用油（トウモロコシ油、綿実油、ゴマ油、ヤシ油、または落花生油など）を有する風味をつけた乳剤、ならびにエリキシル剤および同様の医薬ビヒクルが含まれる。
【０４３４】
吸入または吹送のための組成物には、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒中の溶液および懸濁液、またはその混合物、および粉末が含まれる。液体または固体組成物は、本明細書に記載されているような適切な薬学的に許容される添加剤を含有し得る。組成物は、局所または全身作用のために経口または経鼻呼吸経路によって投与し得る。好ましくは薬学的に許容される溶媒中の組成物は、不活性ガスの使用によって噴霧し得る。噴霧された溶液剤は、噴霧装置から直接吸入してもよく、または噴霧装置をフェースマスクテン
ト、もしくは間欠的陽圧呼吸機械に結合してもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、製剤を適当な態様で送達する装置から、好ましくは経口または経鼻で投与し得る。
【０４３５】
本発明の組成物は、持続放出形態で投与することができる。持続放出調製物の適切な例には、タンパク質を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、造形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７〜２７７（１９８１）およびＬａｎｇｅｒ、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８〜１０５（１９８２）によって記載されたようなポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ２２：５４７〜５５６、１９８３）、非分解性エチレン−酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒら、上記）、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（すなわち、乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注射可能なミクロスフィア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が含まれる。
【０４３６】
本発明の組成物は、活性成分の持続放出を可能にするような態様で製剤することができる持続放出形態、例えば、蓄積注射、埋込調製物、または浸透圧ポンプで投与することができる。持続放出製剤のための埋込物は、当技術分野において周知である。埋込物は、生分解性または非生分解性ポリマーを有するミクロスフィア、スラブ（が含まれるがこれに限定されるものではない）として製剤してもよい。例えば、乳酸および／またはグリコール酸のポリマーは、宿主がよく我慢できる侵食性ポリマーを形成する。埋込物は、活性剤の局所濃度が体の他の部分と比べてその部位において増加するように、タンパク質沈着の部位（例えば、神経変性障害と関連するアミロイド沈着形成の部位）に近接して置かれる。
【０４３７】
下記の製剤例は、本発明の医薬組成物を例示する。
【０４３８】
［製剤例１］
皮下製剤は、下記のように調製し得る。
【０４３９】
【表９】
2014210790.tif 000093
【０４４０】
［製剤例２］
下記の成分を含有する硬質ゼラチンカプセルを調製する。
【０４４１】
【表１０】
2014210790.tif 000094
上記の成分を混合し、３４０ｍｇの量で硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【０４４２】
［製剤例３］
錠剤調製物は、下記の成分を使用して調製する。
【０４４３】
【表１１】
2014210790.tif 000095
成分をブレンドし、圧縮して、各々が２４０ｍｇの重量の錠剤を形成する。
【０４４４】
［製剤例４］
各々が３０ｍｇの活性成分を含有する錠剤を、下記のように調製する。
【０４４５】
【表１２】
2014210790.tif 000096
活性成分、デンプンおよびセルロースをＮｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通過させ、完全に混合する。ポリビニルピロリドンの溶液を生成した粉末と混合し、それを次いで１６メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通過させる。このようにして生じた顆粒を５０℃〜６０℃で乾燥させ、１６メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通過させる。従前にＮｏ．３０メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通過させたデンプングリコール酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを、次いで顆粒に加え、混合後、それを錠剤成形機上で圧縮し、各々が１２０ｍｇの重量の錠剤を得る。
【０４４６】
［製剤例５］
各々が４０ｍｇの医薬を含有するカプセル剤は、下記のように作製する。
【０４４７】
【表１３】
2014210790.tif 000097
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムをブレンドし、Ｎｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通過させ、１５０ｍｇの量で硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【０４４８】
［製剤例６］
各々が２５ｍｇの活性成分を含有する坐薬は、下記のように作製する。
【０４４９】
【表１４】
2014210790.tif 000098
活性成分は、Ｎｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通過させ、必要な最小の熱を使用して事前に溶解した飽和脂肪酸グリセリドに懸濁させる。次いで、混合物を名目上の２．０ｇの容量の坐剤型に注ぎ、冷却させる。
【０４５０】
［製剤例７］
５．０ｍｌの用量毎に各々が５０ｍｇの医薬を含有する懸濁剤は、下記のように作製する。
【０４５１】
【表１５】
2014210790.tif 000099
活性成分、スクロースおよびキサンタンガムをブレンドし、Ｎｏ．１０メッシュＵ．Ｓ．ふるいを通過させ、次いで事前に作製した微結晶性セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの水溶液と混合する。安息香酸ナトリウム、香料、および染料をいくらかの水で希釈し、撹拌しながら加える。次いで、十分な水を加え、必要とする体積とする。
【０４５２】
［製剤例８］
静脈内製剤は、下記のように調製し得る。
【０４５３】
【表１６】
2014210790.tif 000100
【０４５４】
本発明において使用するための他の適切な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第１７版（１９８５）に見出すことができる。
【０４５５】
上で述べたように、本明細書に記載されている組成物は、上記の種々の薬物送達システムにおける使用に適している。さらに、投与した組成物のインビボの血清半減期を増加させるために、組成物をカプセル化し、リポソームの内腔中に導入し、コロイドとして調製してもよく、または他の従来の技術を使用してもよく、これによって化合物の血清半減期の増加が実現する。例えば、Ｓｚｏｋａら、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号および同第４，８３７，０２８号（それらの各々は参照により本明細書中に組み込まれている）に記載されているように、リポソームを調製するために種々の方法が利用可能である。
【０４５６】
［効力］
液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生の阻害における本発明の組成物の効力は、アッセイし得る。液性腫瘍増殖を阻害し、液性腫瘍量を減少させ、転移病変の減少に影響を与え、治療が始まった後に新規な転移病変の発生を阻害し、または検出可能な疾患がないように腫瘍を減少させるそれらの能力について組成物をアッセイする。白血病または骨髄腫などの液性腫瘍および悪性疾患の存在は、放射線学的画像診断、体液分析、細胞遺伝学、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション、免疫細胞化学、コロニーアッセイ、マルチパラメータフローサイトメトリー、またはポリメラーゼ連鎖反応、ならびに当技術分野において公知の他のアッセイ法によって評価し得る。
【０４５７】
例えば、ヒト腫瘍細胞系は、免疫組織化学（ＩＨＣ）およびフローサイトメトリーによって、アルファ−４およびアルファ−９の発現についてスクリーニングし得る。アルファ−４およびアルファ−９の官能性は、インビトロ結合アッセイによって確認し得る。ヒト腫瘍細胞における細胞毒性または細胞増殖の誘発は、チミジン取込みによって評価し得る。腫瘍の増殖に対する好ましいまたは好ましくない効果の評価は、例えば、３Ｈ−チミジン取込みアッセイを使用して行い得る。
【実施例】
【０４５８】
下記の合成および生物学的例は、本発明を例示するために提示し、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されない。特に明記しない限り、全ての温度は摂氏温度である。下記の実施例において、下記の略語は、下記の意味を有する。略語が定義されていない場合、それはその一般に受け入れられている意味を有する。
Å＝オングストローム
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＡＵＣ＝曲線下面積
ｂｒ  ｓまたはｂｓ＝幅広い一重線
ｂｄ＝幅広い二重線
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ｄ＝二重線
ｄｄ＝二重線の二重線
ｄｑ＝四重線の二重線
ｄｓｅｘｔｅｔ＝六重線の二重線
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ＝４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンエチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＣ５０＝集団の５０パーセントについて所望の反応が存在する投与量
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エタノール
Ｅｔ３Ｎ＝トリエチルアミン
ＥＭ＝発光波長（ｎｍ）
ＥＸ＝励起波長（ｎｍ）
Ｄｑ．＝当量
ＦＡＣＳ＝蛍光活性化細胞選別機
ＦＩＴＣ＝イソチオシアン酸フルオレセイン
ｇ＝グラム
Ｈｃｔ＝ヘマトクリット値、または血液試料体積中での遠心分離によって得た濃厚赤血球の測定値
ＨＢまたはＨｂ＝ヘモグロビン
ＨＢＳＳ＝ハンクス平衡塩溶液
ＨＥＰＥＳ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
ｈｒまたはｈ＝時間
ＩＣ５０＝酵素のインビトロでの５０％阻害に必要な阻害剤の濃度
ＩｇＧ  Ｆｃ＝免疫グロブリンの結合ドメイン
ｉｎ．＝インチ
ｉ．ｐ．＝腹腔内
ｉ−ＰｒＯＨ＝イソ−プロパノール
ｋＤａ＝キロダルトン
ｋｇ＝キログラム
Ｌ＝リットル
ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量分析
ｍ＝多重線（ＮＭＲデータと共に使用するとき）
ｍ２＝平方メートル
Ｍ＝モル
ｍｂａｒ＝ミリバール
ｍｇ＝ミリグラム
ＭＨｚ＝メガヘルツ
ｍｉｎ．＝分
ＭＣＨ＝平均赤血球ヘモグロビン量；Ｈｂ／ＲＢＣ
ＭＣＨＣ＝割合として示された平均赤血球ヘモグロビン数；ＨＢ／Ｈｃｔ
ＭＣＶ＝平均血球体積；赤血球の平均体積、従来通りに立方マイクロメートル／赤血球で表す。
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｇ＝ミリグラム
ｍＬ＝ミリリットル
ｍｍ＝ミリメートル
ｍＭ＝ミリモル
ｍｏｌ＝モル
ｍｍｏｌ＝ミリモル
ｍＯｓｍ＝ミリオスモル
ｍｐｋ＝ミリグラム／キログラム
ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ｍ／ｚまたはＭ／Ｚ＝質量電荷比
Ｎ＝ノルマル
ｎｇ＝ナノグラム
ｎｍ＝ナノメートル
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水
ＰＢＳ＋＋＝カルシウムおよびマグネシウムを含むＰＢＳ
ｐｐｍ＝百万分率
ｐｓｉ＝ポンド／平方インチ
ｐ．ｏ．＝経口的、経口胃管栄養法を含めて文字通りに「口によって」
ｑ＝四重線
ｑ．ｓ．＝十分量
Ｒｆ＝未透過係数（物質が移動する距離／溶媒先端が移動する距離の比）
ｒｐｍ＝毎分回転数
ｒｔまたはＲＴ＝室温
Ｒｔ＝保持時間
ｓ＝一重線
ｓａｔ．＝飽和
ｔ＝三重線
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣまたはｔｌｃ＝薄層クロマトグラフィー
Ｔｓ＝トシル
ＵＶ＝紫外線
Ｖｔ＝総体積
ＷＢＣ＝白血球
ｗｔ／ｗｔ＝重量対重量比
ｗ／ｖ＝重量対体積比
μｇ＝マイクログラム
μＬ＝マイクロリットル
μｍ＝ミクロン
μＭ＝マイクロモル
【０４５９】
（実施例１）
［（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸の調製］
実施例１にて使用した合成プロトコールを、以下に示すスキームＡに要約する。
【化８３】
2014210790.tif 000101
スキームＡにおいて、５−ニトロピルミジン化合物１から、化合物４を３ポットで順次調製した。スキームＡの合成プロトコールは、以下の１つまたは複数により、この化合物の調製を著しく平易にする。
【０４６０】
１）実質的に加速されたニトロ基還元ステップ、
２）同一溶媒および同一触媒を用いて同一フラスコ中で実施されるため、操作の数が減り、酸素感受性生成物の空気への暴露が最少化される、簡素化された還元／還元的アミノ化の連鎖、
３）還元的アミノ化ステップの条件が、ビス−イソプロピルアミノピリミジン副生成物の生成を最少化し、これにより化合物３のクロマトグラフィーによる精製の必要を無くす、４）対応するＬ−酒石酸塩を摩砕することにより、モノ−イソプロピルアミノピリミジン中間体（化合物２）を精製できる条件が記載される（化合物２のこの別個の精製の必要もまた、還元的アミノ化ステップを改良することによって不要となったが）、および
５）ＭＴＢＥ−ヘキサンまたはＭＴＢＥ−シクロヘキサンからの結晶化による化合物３の別個の精製条件が確立された。
【０４６１】
スキームＡの反応ステップにおいて、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ７５Ｌを用い、８００ｇのＫＰ−Ｓｉｌシリカカートリッジ（３２〜６３μＭ、６０オングストローム、５００〜５５０ｍ２／ｇ）を用いて、フラッシュクロマトグラフィーを実施した。Ｒｆは、順相で、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ（２５４）、厚さ２５０μＭのプレートを用いる分析薄層クロマトグラフィーについて報告する。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３００ＭＨｚ分光計（１Ｈスペクトルでは３００ＭＨｚ、１３Ｃスペクトルでは７５ＭＨｚ）で得た。分析ＨＰＬＣは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ、３μｍ、Ｃ−１８、３０×４．６ｍｍカラムを有する、Ａｇｉｌｅｎｔ
１１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣで実施した。検出器は２１０ｎｍでのＵＶであった。溶媒は、０．１％ＴＦＡを含む水、および０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルであった。標準流量は１．５ｍＬ／分であり、標準的方法はＭ１と名づけ、２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで２．３３分で変化する溶媒濃度勾配を有した。別の方法はＭ２と名づけ、２ｍＬ／分の流量、および２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで１．７５
分で変化する濃度勾配を有した。方法Ｍ１５は、１．５ｍＬ／分の流量を有し、溶媒組成は２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで１０分で変化し、７０％で２分間保持し、次いで９５％まで１分で上昇させ、９５％で２分間保持した。ＬＣ／ＭＳは、エレクトロスプレーイオン化（化学イオン化と特に指示しない限り）を具備する、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣ／Ｓｅｒｉｅｓ  １１００ＭＳＤで実施した。カラムおよび条件は独立したＨＰＬＣに一致させた。
【０４６２】
［ステップ１：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（イソプロピルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（２）の調製］
【化８４】
2014210790.tif 000102
ニトロピリミジン−カルバメート１（１００ｇ、１８９ｍｍｏｌ）およびＰｔＯ２（６．３３ｇ、２７．８５ｍｍｏｌ）を湿潤ＴＨＦ（５％Ｈ２Ｏ）３６０ｍＬに懸濁させた。混合物を水素（６０ｐｓｉ）下室温で撹拌した。３時間後、ＴＬＣ（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）は、ニトロ基の還元が完結していることを示した（ＥｔＯＡｃを用いるシリカ上でのＴＬＣ分析は、アミノピリミジンに対してＲｆ＝０．２（筋状）、および出発ニトロピリミジン−カルバメートに対してＲｆ＝０．８６を示した）。これに関して、この２ステッププロセスにおける両ステップにＰｔＯ２を使用することにより、１ポット反応が可能になり、ニトロ基の還元速度が劇的に加速されるという付加的な特徴を有する。いずれにしても、アミノピリミジン生成物は酸化される傾向があるので、空気／酸素に対する暴露は最少化するように注意が払われるべきである。
【０４６３】
エタノール（２００ｍＬ）、アセトン（２１ｍＬ、１．５当量）、および氷酢酸（３．０ｍＬ、０．２８当量）を、水素化フラスコ中のアミノピリミジン溶液に加えた。排気およびパージした後、フラスコをＨ２（６０ｐｓｉ）で加圧した。還元的アミノ化を、終夜進行させた。ＥｔＯＡｃを溶離液として用いるシリカ上でのＴＬＣは、イソプロピルアミノ−ピリミジンに対してＲｆ＝０．４１（筋状）、および出発アミノピリミジン−カルバメートに対してＲｆ＝０．１１を示した。ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳのいずれも、ビス−イソプロピルアミノピリミジンを実質的に生成せずに、完全に反応していることを確証した。必要な場合、反応の進行を監視するための別の手段として、ＨＰＬＣを使用することができる。粗製の反応溶液をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で希釈し、塩基性アルミナ（４００ｍＬ）のパッドを通して濾過した。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２００ｍＬ）でアルミナを洗浄し、合わせた有機溶液を真空で濃縮した。フラスコにＮ２を仕込んだ。粘稠性油を無水トルエン（７００ｍＬ）に再度溶解し、濃縮した。フラスコに窒素を仕込んだ後、更にトルエン４００ｍＬを用いて共沸除去することにより、生成物を再度乾燥させた。粘稠性赤みがかった茶褐色油を得た。
【０４６４】
ＬＣ／ＭＳにより明白に示されるように、ビス−イソプロピルアミノピリミジンカルバメート不純物をクロマトグラフィーにより除去する必要があった先行技術に比べて、この手順を用いると非常に少量のビス−イソプロピルアミノピリミジンカルバメート不純物しか生成しなかった。
【０４６５】
モノ−イソプロピルアミノピリミジン２の型通りの精製ステップが必要である場合、ＴＨＦ／エーテルから（Ｌ）−酒石酸塩として沈殿させ、摩砕することができる。小規模での実施例は以下の通り：（５．０９ｇ、収率９９．６％）Ｌ−酒石酸（１．４２ｇ）を熱ＴＨＦ（４５ｍＬ）に溶解した。熱酒石酸溶液を、ゴム状のイソプロピルアミノ−ピリミジン２（５．１ｇ）に加えた。均一になるまで混合物を振盪し、加温した。溶液は、ピンク−紫色から黄褐色に変化した。溶液を真空で濃縮して、黄褐色ゴム状物を得た。エーテル（約１５０ｍＬ）を加え、その際に油状化が見られた。エーテル混合物を真空で濃縮した。アセトン（約２０ｍＬ）、次いでエーテル（約２００ｍＬ）を加え、ゴム状油の生成が再度見られた。混合物に３回目の濃縮をした。塩化メチレン（５〜１０ｍＬ）を、続いてエーテル（約８０ｍＬ）を加えた。明るいオレンジ−ピンク色上澄みの下に、黄褐色沈殿物が生成していることが観察された。混合物を濾過した。沈殿物をエーテル（５０ｍＬ）で、次いでアセトンとエーテル（１：１）との混合物（約６０ｍＬ）で再度濯いだ。沈殿物を終夜真空乾燥させて、クリーム色固体（４．９ｇ、収率７６％）を得た。固体の酒石酸塩の少量のアリコートを、ｉ−ＰｒＯＨおよびＥｔＯＨに溶解し、塩基性アルミナの小さなプラグに通して、遊離塩基を得た。遊離塩基のアリコートを、ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳによって分析した。残りの塩は、ＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）と１ＮのＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）との混合物に懸濁させた。混合し、多少のバブリングにより、溶解した固体および遊離塩基アミンを有機層に抽出した。水層をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）でもう一度抽出し、有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４（約１５０ｇ）で乾燥させた。乾燥させた有機溶液を、塩基性アルミナ（約１００ｇ）のプラグに通して、薄ピンク色溶液を得、これを真空で濃縮して、黄褐色／ピンク色ゴム状物（３．２８ｇ、出発ニトロカルバメートから収率６４％）を得た。
【０４６６】
モノ−イソプロピルアミノピリミジンカルバメート２と塩を生成させる試みの中で、いくつかの他の酸を調査した。ｐ−トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸は油を生じた。固体の塩はＨＣｌおよびＨ３ＰＯ４を用いて生成できたが、酒石酸を用いると最も好ましい溶解特性が得られると思われた。ＨＣｌおよびリン酸の塩は、ＣＨ２Ｃｌ２、ｉ−ＰｒＯＨ、およびアセトンに容易に溶解するように見えたが、他方、酒石酸塩は、ＣＨ２Ｃｌ２にほぼ不溶であり、他の溶媒には部分的にのみ溶解するように見えた。
【０４６７】
［ステップ２：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（３）の調製］
【化８５】
2014210790.tif 000103
ステップ１からのイソプロピルアミノピリミジンカルバメート２（１８９ｍｍｏｌと仮定）をピリジン（６８０ｍＬ）に溶解し、溶液をＮ２下０℃に冷却した。メタンスルホニルクロリド（４４ｍＬ、３．０当量）を、冷却したイソプロピルアミノピリミジンカルバメートのピリジン溶液に、２０分間かけてシリンジポンプにより加えた。氷浴を除去し、溶液を室温に加温した。溶液を６時間撹拌した。少量のアリコートを取り出し、小規模の後処理を実施した（ＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＫＨ２ＰＯ４、ブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させた）。ＴＬＣによる分析は、反応が完結し、概ね清浄であることを示した（残留ピリジンによるベースラインスポット以外に１スポットだけ）。大量の反応
溶液を濃縮した。留出物６５０ｍＬを集めた際、血赤色油をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で希釈した。有機溶液を５％ＫＨ２ＰＯ４（１Ｌおよび７５０ｍＬ）、０．２Ｎクエン酸（１Ｌ）、およびブライン（１Ｌ）で洗浄した。有機溶液をＭｇＳＯ４（１５０ｇ）で乾燥させた。乾燥させた有機溶液をシリカゲル（１Ｌ）のパッドに通して濾過して、緑−黒色溶液を得た。フラスコおよびシリカゲルをＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）で濯いで、有機溶液の全容量を３．５Ｌとした。溶液を塩基性アルミナ（３００ｍＬ）のパッドに通して濾過して、深緑色溶液を得た。溶液を真空で濃縮した。赤みがかったゴム状物（１５０ｇ）を得た。
【０４６８】
フラスコを窒素でフラッシュし、密栓し、冷蔵庫に入れると、赤−茶褐色固体が生成した。ＬＣ／ＭＳは許容される純度を示したが、ＴＬＣ分析は、明赤色のベースラインスポットと共に、２つから３つの非常に弱い不純物を示した。ピリジンの臭気はまだ存在していた。赤−茶褐色固体をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）、およびエーテル（８００ｍＬ）の混合物に溶解した。溶液をシリカゲル（１Ｌ）のパッドに通して濾過／溶離し、シリカをエーテル（３Ｌ）で濯いだ。ほとんどの着色したベースライン不純物はシリカゲル上に保持された。溶液を濃縮して、赤色油を得、これを乾燥させてピンク色泡沫状固体（１００ｇ）とし、これをＬＣ／ＭＳにより分析すると純度９４．７％であった。次いで物質を、ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２およびエーテル（１：１、４Ｌ）、エーテル（４Ｌ）、エーテル：ＴＨＦ（１：１、４Ｌ）、ならびに５％Ｅｔ３Ｎおよび２％ＥｔＯＨを含むＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で溶離させるシリカゲル（２Ｌ）上でのクロマトグラフィーにかけた。ＣＨ２Ｃｌ２：エーテル溶離液は赤色油の混合フラクション（１２．４ｇ、フラクションＡ）を与え、エーテル溶離液は黄褐色油（１３ｇ、フラクションＢ）を与え、それは概ね純粋であった。大部分の物質はカラム上に残り、所望の生成物がカラム上で結晶化したことが分かった。エーテル：ＴＨＦ、およびＥｔＯＡｃ（５％Ｅｔ３Ｎおよび２％ＥｔＯＨを含む）での溶離は、生成物を再度溶解させ、濃縮したプラグ（フラクションＣ）中で溶離した。フラクションＡおよびフラクションＢを合わせ、共に濃縮した。フラクションＣは、別に濃縮した。濃縮および乾燥させた際、どちらのフラクションでも結晶が生成した。更なる調査により、固体は、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、シクロヘキサン、エーテル−ヘキサン（１：１）、ＭＴＢＥ−ヘキサン、またはシクロヘキサン−ヘキサンから再結晶できることを見出した。ＡおよびＢを合わせたフラクションならびにフラクションＣは、各々ＭＴＢＥ−ヘキサンから再結晶して、ｔｅｒｔ−ブチルエステル３を白色固体として（全体で５７．７５ｇ、純度＞９９％）、および赤色の濾液／母液を得た。母液を濃縮して、赤色油（２４ｇ）を得た。母液油は、Ｂｉｏｔａｇｅ７５上でクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２中４％ＴＨＦ（１２Ｌ）を用いて溶離させて、高濃度化したフラクションを得、次いで濃縮し、再結晶して、更に精製ｔｅｒｔ−ブチルエステル１４ｇを得た。
【０４６９】
方法Ｍ２によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝１．９７分を与え、所望の生成物に対して［Ｍ＋１］＋でＭ／Ｚ＝６１９であった。
【０４７０】
方法Ｍ１５によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝６．０９分を与え、所望の生成物に対して［Ｍ＋１］＋でＭ／Ｚ＝６１９であった。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ, ppm: 0.88 (d, j = 6 Hz, 1.4H), 1.04 (d, j = 6 Hz, 2H), 1.20 (m, 10H), 1.37 (s, 4.8H), 1.39 (s, 4.8H), 1.93 (AA'BB', 4H), 2.80 (s, 1.7H), 2.9 (s, 1.6H), 3.18 (m, 2.4H), 3.4-3.7 (m 見かけ上2つの三重線の重複, 8.3H), 4.40 (六重線, j = 6 Hz, 1.1H), 4.8 (六重線, 1H), 5.64 (d, j = 6.5 Hz, 0.5H), 5.70 (d, j = 6.5 Hz, 0.5H), 7.03 (m, 2H), 7.18 (見かけ上dd, 2H), 7.80 (d, j = 4 Hz, 1H).
１Ｈ  ＮＭＲは回転異性体を示す。
【０４７１】
更なる塩基はほとんどまたは全く無しでＴＨＦ中にて、メタンスルホニルクロリドによ
る処理を行うと想定される。塩基を使用する場合、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基を使用するべきである。
【０４７２】
［ステップ３：（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチル−スルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（４）の調製］
【化８６】
2014210790.tif 000104
ステップ２からのｔ−ブチルエステル（５７．７５ｇ、０．０９３ｍｏｌ）のギ酸（１．５Ｌ）溶液を、５０℃に終夜加熱し、次いで真空で濃縮した。別法として、この反応はまた、７０℃または８０℃で、６０〜９０分間でも実施できる。
【０４７３】
水（約１００ｍＬ）を粗製の生成物に加え、混合物を濃縮乾固した。残渣を高真空下に乾燥させた。粗製の生成物を１．０ＮのＨＣｌ（２５０ｍＬおよび２００ｍＬ）から２回溶解して濃縮した。生成物を熱ＴＨＦに２回溶解し、濃縮乾固して、泡沫状固体を得た。泡沫状固体を高真空下６５℃で２時間乾燥させた。この固体をフラスコからこすり取り、真空乾燥器で終夜乾燥させて（６０℃、２８ｉｎ．Ｈｇ）、（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸−５の塩酸塩（５０．９ｇ、純度９８．３％）を得た。
【０４７４】
方法Ｍ１５によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝１．９６分、Ｍ／Ｚ＝５６３を与えた。
【０４７５】
方法Ｍ２によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝１．４３分、Ｍ／Ｚ＝５６３を与えた。
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ, ppm: 0.80 (d, j = 6 Hz, 1.4H), 1.02 (d, j = 6 Hz, 1.6H), 1.23 (m, 9.2H), 1.80-2.0 (AA'BB' + m, 5.2H), 2.99 (d, 3.2H), 3.2-3.45 (m,
4.5H), 3.45-3.8 (m, 7.6H), 4.40 (六重線, 1H), 4.90 (m, 3H), 7.00 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.60 (d, 0.25H), 7.75 (d, 1H), 7.83 (d, 0.25H).
13C NMR (CD3OD, 75 MHz) δ, ppm: 6.5, 14.7, 14.8,15.4, 15.5, 19.4, 20.0, 20.2,
29.91, 30.44, 33.95, 34.15, 41.03, 41.08, (41.71, 41.99, 42.28, 42.6, 42.8, 43.1 - 溶媒ピーク), 47.21, 47.36, 50.01, 50.42, 62.43, 102.11, 102.23, 116.78, 124.9, 125.19, 128.54, 129.01, 138.49, 139.02, 145.53, 145.60, 145.78, 148.68, 156.77, 156.86, 166.91, 167.07.
【０４７６】
（実施例２）
［（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（７）の調製］
【化８７】
2014210790.tif 000105
［ステップ１：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（６）の１ポット還元／還元的エチル化］
【化８８】
2014210790.tif 000106
ニトロ−カルバメート（化合物５、１０．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍＬ）中でスラリー化し、水（１ｍＬ、３容量％）を加えた。溶液を撹拌し、アダムス触媒（０．３６０ｇ、６モル％）を加え、排気（５０ｍｍＨｇ）および乾燥窒素を用いる再充填（１０ｐｓｉ）の３サイクルにより溶液を脱酸素化した。最後に、反応容器を水素で加圧（６０ｐｓｉ）し、反応混合物を９０分間激しく撹拌した。必要であるかまたは所望される場合、水素化反応の進行はＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール（９５：５）を用いて溶離）により監視できる。ニトロカルバメートのＲｆは０．９５、第１級アミン＝０．１６である。
【０４７７】
水素を乾燥窒素に置き換えた（排気および窒素を用いる再充填の３サイクル）。エタノール（２５ｍＬ）、酢酸（０．３ｍＬ）およびアセトアルデヒド（１．２ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加え、揮発性アセトアルデヒドの損失を最少化するように低圧（約１５０ｍｍＨｇ）で容器をある程度排気し、窒素を用いて再充填（１０ｐｓｉ）し、反応混合物を５０分間激しく撹拌した。この時間の最後に、２回のある程度の排気と水素による再加圧によって、窒素を水素（６０ｐｓｉ）に置き換えた。混合物を更に４５分間撹拌した。還元的アミノ化の進行はＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール（９５：５）を用いて溶離）により監視できる。第１級アミンのＲｆ＝０．１６、第２級アミン−０．３２、および第３級アミン＝０．４３。プロセスの最後に、排気および窒素を用いる再充填の３サイクルによって水素を除き、セライトのベッド上で触媒を濾別し、メタノールを用いて濯ぎ、濾液をストリップして乾燥させて、琥珀色油（１１．９ｇ）を得た。生成物は酸素に弱く、その結果、かなり暗色化し、ＴＬＣで低Ｒｆの物質が現れた。全ての取扱いは適切な事前の対策をもってなされるべきである。
【０４７８】
反応生成物を、水酸化アンモニウム０．３％を含むジクロロメタン：メタノールの混合物（９７：３）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。Ｎ−エチル生成物を含むフラクションを合わせて、化合物６（７．９ｇ）を琥珀色油として得た（純度９８．５％、収率７３％）。粗製生成物の純度は、多くの目的にとって、特に予想される次の反応の生成物が結晶性であると知られている場合、適切であると思われる。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.60 (s, 1H), 7.17 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.05 (d, J=8.4Hz, 2H), 5.75 (d, J=7.5Hz, 1H), 4.84 (q, J=6.6Hz, 1H), 3.64-3.46 (m, 8H), 3.19 (d, J=6.3Hz, 2H), 2.86 (q, J=7.2Hz, 2H), 1.94 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.20-1.11 (m, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 171.7, 157.7, 157.5, 153.1, 150.3, 145.8, 133.7, 130.2, 121.5, 117.4, 81.8, 54.7, 46.4, 46.3, 42.4, 41.7, 37.4, 28.0, 25.8, 24.9, 15.5, 13.5.
MS (m/z): 527.3 [M+1].
【０４７９】
［ステップ２および３：（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸７］
実施例１のステップ２および３の手順に従って、化合物６を対応する（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸７に変換し、これを以下の通り特性評価した。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.17 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.26-7.23 (m, 2H), 7.00-6.98 (d, 2H), 4.85-4.82 (m, 1H), 3.58-3.51 (m, 6H), 3.43-3.39 (m, 3H), 2.96-2.84 (m, 3H), 2.01-1.91 (m, 4H), 1.29-0.97 (m, 9H);
13C-NMR, CDCl3, (δ):175.6, 165.7, 157.2, 155.2, 152.0, 151.8, 151.7, 151.3, 136.0, 135.9, 131.5, 123.0, 110.5, 56.7, 43.8, 39.4, 39.2, 37.4, 26.7, 25.8, 14.4, 13.3; および
MS: M(+H) 549
【０４８０】
（実施例３）
［（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（８）の調製］
【化８９】
2014210790.tif 000107
実施例１の手順に従い、アセトン（実施例１）またはアセトアルデヒド（実施例２）の代わりにシクロペンタノンを用い、（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸８を調製し、以下の通り特性評価した。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.74-7.71 (d, 1H), 7.28-7.24 (m, 2H), 7.04-7.00 (m, 2H), 5.00-4.95 (m, 1H), 4.37-4.27 (m, 1H), 3.60-3.37 (m, 9H), 3.00-2.97 (d, 3H), 2.03-1.78 (m, 6H), 1.67-1.40 (m, 6H), 1.31-1.23 (m, 6H);
13C-NMR, CDCl3, (δ): 173.6, 173.4, 163.1, 155.1, 152.4, 152.0, 145.3, 144.7, 135.5, 135.1, 131.6, 131.4, 123.2, 109.6, 109.4, 62.5, 62.3, 56.7, 56.5, 48.1, 40.3, 40.1, 36.8, 36.4, 31.2, 30.5, 26.7, 25.8, 23.2, 23.1, 12.7; および
MS: M(+H) 589.
【０４８１】
（実施例４）
［（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（１３）の調製］
実施例４において使用した合成プロトコールを、以下に示すスキームＢに要約する。
【化９０】
2014210790.tif 000108
【０４８２】
［ステップ１：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（メチルスルホニル）−メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（１０）］
アミノピリミジン（２．０ｇ、４．０ｍｍｏｌ−化合物９）（化合物１の還元により調製）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびトリエチルアミン（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を氷浴中で冷却した。メタンスルホニルクロリド（１．１ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１８時間かけて室温に加温した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。溶液を０．２Ｎクエン酸、水、飽和ＮａＨＣＯ３、およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗製の生成物を茶褐色泡状物として得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（２：３酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、ジ−スルホニル化物２．２ｇ（７３％）を黄色泡状物として得た（化合物１０）。
【０４８３】
［ステップ２：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（メチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（１１）］
化合物１０（２．２ｇ、３．４ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解した。１．０ＭのＫ２ＣＯ３（１０ｍＬ）を加え、反応混合物を４０℃で９６
時間加熱した。反応混合物を２ＮのＨＣｌを用いてｐＨ３に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、生成物１．６８ｇ（８６％）をベージュ色泡状物として得た（化合物１１）。粗製物を精製せずに使用した。
【０４８４】
［ステップ３：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−プロプ−２−イニル）メチル−スルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（１２）］
化合物１１（０．２０ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．０７３ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、およびアセトン（３ｍＬ）を、密封管に仕込み、室温で１時間撹拌した。プロパルギルクロリド（０．２６ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封し、４８時間加熱還流させた。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。溶液を水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗製の生成物をオレンジ色フィルムとして得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１：１酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、化合物１２（０．１１ｇ、５１％）を透明フィルムとして得た。
ＭＳ（ｍ／ｚ）６１５、（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４８５】
［ステップ４：（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（１３）］
ギ酸（２ｍＬ）をｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ）に加え、４０℃で終夜撹拌した。ギ酸を減圧下に除去して、化合物１３を定量的収率で得、以下の通り特性評価した。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.13 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.26-7.24 (d, 2H), 7.02-6.99 (d, 2H), 4.59-4.44 (m, 1H), 4.04-3.79 (m, 1H), 3.64-3.53 (m, 6H), 3.45-3.39 (t, 3H), 3.08-2.84 (m, 4H), 2.84-1.89 (m, 4H)1.22-1.17 (t, 6H);
13C-NMR, CDCl3, (δ): 165.3, 155.3, 151.8, 136.1, 131.5, 123.0, 76.1, 76.0, 56.8, 49.9, 48.1, 43.8, 41.2, 40.2, 37.4, 26.7, 25.9, 13.3; および
MS:M(+H) 559.
【０４８６】
（実施例５）
［（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（１４）の調製］
【化９１】
2014210790.tif 000109
実施例４の手順に従い、プロパルギルクロリドの代わりに硫酸ジメチルを用いて、標題化合物を調製し、以下の通り特性評価した。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.14 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.26-7.23 (d, 2H), 7.01-6.98 (d, 2H), 4.84-4.81 (m, 1H), 3.60-3.53 (m, 6H), 3.43-3.38 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.00-1.91 (m, 4H), 1.22-1.18 (t, 6H);
13C-NMR, CDCl3, (δ):175.5, 165.4, 160.7, 156.3, 155.3, 151.8, 149.1, 136.0, 131.6, 123.0, 113.4, 56.9, 43.9, 38.8, 38.1, 37.4, 26.7, 25.8, 13.2; および
MS:M(+H) 535.
【０４８７】
［実施例６〜１６の一般的方法］Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ７５Ｌを用い、ＫＰ−Ｓｉｌシリカカートリッジ８００ｇ（３２〜６３μＭ、６０Å、５００〜５５０ｍ２／ｇ）を用いて、フラッシュクロマトグラフィーを実施した。Ｒｆは、順相で、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ（２５４）、厚さ２５０μＭのプレートを用いる分析ＴＬＣについて報告する。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３００ＭＨｚ分光計（１Ｈスペクトルでは３００ＭＨｚ、１３Ｃスペクトルでは７５ＭＨｚ）で得た。分析ＨＰＬＣは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ、３μｍ、Ｃ−１８、３０×４．６ｍｍカラムを有する、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣで実施した。検出器は２１０ｎｍでのＵＶであった。溶媒は、０．１％ＴＦＡを含む水、および０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルであった。標準流量は１．５ｍＬ／分であり、標準的方法において、溶媒濃度勾配は２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで２．３３分で変化した。第二の別の方法は、２ｍＬ／分の流量、および２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで１．７５分で変化する濃度勾配を有した。第三の方法は、１．５ｍＬ／分の流量を有し、溶媒組成は２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで１０分で変化し、７０％で２分間保持し、次いで９５％まで１分で上昇させ、９５％で２分間保持した。ＬＣ／ＭＳは、エレクトロスプレーイオン化（化学イオン化と特に指示しない限り）を具備する、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣ／Ｓｅｒｉｅｓ  １１００ＭＳＤで実施した。カラムおよび条件は独立したＨＰＬＣに一致させた。
【０４８８】
アミドの１Ｈ  ＮＭＲは、典型的に回転異性体を示し、多少のピークの統合が部分的プロトン値で報告されている。
【０４８９】
（実施例６）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化９２】
2014210790.tif 000110
［ステップ１：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル２の調製］
【化９３】
2014210790.tif 000111
ニトロピリミジン−カルバメート１（１６０．２５ｇ、０．３０３５ｍｏｌ、ＷＯ０３／０９９８０９においてと同様に調製した）および５％Ｐｄ／Ｃ（１５ｇ、Ｈ２Ｏと５０／５０重量／重量、Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｅ１０１Ｒ／Ｗ）のＴＨＦ−水溶液（１ＬのＴＨＦおよび５０ｍＬのＨ２Ｏ）中混合物を、６０ｐｓｉの水素下室温で撹拌した。２２時間後、ＴＬＣ（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）は、生成物へ１００％転化していることを示した。反応混合物をセライトパッド（２００ｍＬ）を通して濾過した。水素化フラスコおよびセライトパッドを調製したての無水ＴＨＦ（５００ｍＬ）で濯いで、緑色濾液溶液を得た。濾液を真空で濃縮して、粗製の生成物を緑色がかった黒色ゴム状油として得た。回転蒸発器にＮ２を通じ、調製したての無水ＴＨＦ（６００ｍＬ）を加えた。溶液を真空で濃縮し、窒素を通じた。（調製したての無水ＴＨＦに溶解し、濃縮するプロセスを更に２回繰り返して、残留水分を共沸除去した。）この物質は空気に弱いと考えられるため、直ちにステップ２に使用する。所望の生成物として［Ｍ＋１］＋に関してｍ／ｚ＝４９９．５。
【０４９０】
［ステップ２：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル３の調製］
【化９４】
2014210790.tif 000112
ステップ１からの粗製アミノピリミジンカルバメート２を無水ＴＨＦ（６００ｍＬ）に溶解した。溶液を窒素下０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸無水物（４５．５ｍＬ、１．５１ｇ／ｍＬ、３２７．３ｍｍｏｌ）を、４５分間かけてシリンジポンプを通し、冷却したアミン溶液にゆっくり加えた。溶液を室温に加温し、終夜撹拌した。ＴＬＣ（ヘキサン中４０％ＥｔＯＡｃ、シリカゲル）は、反応が実質的に完結していることを示した。ＬＣ／ＭＳ分析により反応を確認し、出発物は全く示さなかった。反応物を酢酸エチル（１．４Ｌ）で希釈し、水（４００ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７００ｍＬ、０℃）との混合物で洗浄した。有機溶液をブライン（７００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（１０５ｇ）で乾燥させて、黄褐色−茶褐色溶液を得た。乾燥させた溶液をシリカゲル（４００ｍＬ）のパッドを通して濾過して、緑色がかった灰色溶液を得た。（黄褐色の不純物がシリカゲル上に残った。）シリカゲルをＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で濯いだ。濾液溶液を真空で
濃縮し、フラスコを窒素下で脱気して、酸素への曝露を最小限にした。無水トルエン（６００ｍＬ）を加えた。溶液を真空で濃縮し、無水トルエン（４００ｍＬ）から２回共沸して、緑色−黒色ゴム状油を得た。フラスコをＮ２下で脱気した。［Ｍ＋１］＋に関してｍ／ｚ＝５９５．５であるこの粗製の生成物を、ステップ３に使用した。
【０４９１】
［ステップ３：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル４の調製。］
【化９５】
2014210790.tif 000113
ステップ２からの粗製トリフルオロアセトアミドピリミジンカルバメート３をＤＭＦ（３５０ｍＬ）に溶解した。固体の無水炭酸カリウム（７９．６ｇ、５７５．７ｍｍｏｌ、乳鉢および乳棒で微粉末に粉砕化し、次いで２８ｉｎ．のＨｇ真空下１１０℃で終夜真空乾燥器に置いた）を加えた。ヨウ化エチル（４６．５ｍＬ、８９．８ｇ、５７５．７ｍｍｏｌ）を室温で素早く加えた。反応フラスコを密栓し、スラリー液を激しく撹拌した。室温で２０時間撹拌した後、反応物をサンプリングした（ＴＬＣ、ＬＣ／ＭＳ）。反応物を更に１８時間撹拌して、確実に反応を完結させた。再度反応物をサンプリングし、後処理を小規模に行い、この時点でＴＬＣ分析は、出発物質が消費されていることを示した。反応物を酢酸エチル２．７Ｌで希釈し、激しく撹拌した。スラリー液をＷｈａｔｍａｎ  ＃１濾紙を通して濾過して、固体のＫ２ＣＯ３を除去した。有機溶液を６Ｌの分液漏斗に仕込んだ。水（２．５Ｌ）を加え、激しく混合した。層分離が遅かったので、ブライン（２００ｍＬ）を加えて乳化を破壊した。有機層を、更に水１Ｌ、次いでブライン２Ｌで洗浄した。
【０４９２】
有機層をＭｇＳＯ４（５０ｇ）およびＮａ２ＳＯ４（２００ｇ）で乾燥させた。乾燥させた有機溶液をシリカゲル（７００ｍＬ）のプラグを通して濾過して、濃黄緑色−黄褐色の曇った溶液を得た。（紫／赤色のベースライン不純物を除去した。）シリカゲルをＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）で濯いだ。有機溶液を濃縮して、濃黄緑色固体（１９４．３ｇ、１０３％粗製物）を得た。ヘキサン（３００ｍＬ）を加えた。フラスコの器壁を金属スパチュラでこすって固体生成物を剥がし、磁気撹拌子をフラスコに加えた。混合物を３０分間ゆっくり撹拌し、固体の塊まりをほぐし、次いで細かなスラリー液になるまで３０分間急速に撹拌した。スラリー液をＷｈａｔｍａｎ  ＃１濾紙を通して濾過し、沈殿物をヘキサン（１．２Ｌ）で濯いで、白色固体（１４１ｇ、収率７４％、ＬＣ／ＭＳによる純度９２％）を得た。濾液を濃縮して、緑色−黄褐色ゴム状物（３３．３ｇ）を得、これはＴＬＣ分析によると多少の所望の生成物を含んでいる。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ, ppm: 7.80 (見かけ上d, 1H), 7.18 (見かけ上d, AA'XX', 2H), 7.03 (見かけ上dd, AA'XX', 2H), 5.00 (見かけ上d, 1H), 4.80 (見かけ上dq, 1H), 3.95 (見かけ上2つの六重線, 1H), 3.4-3.7 (m, 8.5H), 3.0-3.3 (m, 3H), 2.78 (六
重線, 0.7H), 1.93 (AA'BB', 4H), 1.38 (見かけ上d, 9H), 1.24-1.05 (m, 9H).
１Ｈ  ＮＭＲは、ほとんどのピークのダブリングにより明らかなように回転異性体を示す。
13C NMR (CDCl3, 75 MHz) δ, ppm: 166.5, 166.3, 155.6, 152.7, 150.9, 146.0, 145.9, 128.7, 128.3, 125.44, 125.39, 117.18, 77.66, (72.82, 72.28, 71.97 - CDCl3), 50.23, 49.74, 41.72, 41.64, 40.16, 39.90, 37.28, 32.60, 32.44, 23.24, 23.17, 21.05, 20.23, 8.50, 8.47, 7.32.
【０４９３】
［ステップ４：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル５の調製。］
【化９６】
2014210790.tif 000114
トリフルオロアセトアミド４（１４０ｇ）をメタノール（１．６Ｌ）中に懸濁／溶解した。炭酸カリウム水溶液（７％Ｋ２ＣＯ３）（４８０ｍＬ）を加えた。（トリフルオロアセトアミドが一部沈殿し、ゲルを形成した。）反応フラスコを５５℃の水浴中へ下げた。溶液をＴＬＣで監視しながら５５℃で９時間かけて混合した。１．２Ｌのメタノールが回収されるまで、反応物を真空で十分に注意しながら濃縮した。溶液を水（２００ｍＬ）およびブライン（６００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で抽出して、オレンジ色溶液を得た。ＥｔＯＡｃ層を水（１Ｌ）で、次いでブライン（４００ｍＬ）で洗浄した。水層／洗液の３つの各部分を単一のＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で連続する順番で逆抽出して、鮮やかな黄色溶液を得た。有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４（１２６ｇ）で乾燥させた。乾燥させた有機溶液を塩基性アルミナ（３００ｍＬ）のパッドを通して濾過し、真空で濃縮して、茶褐色ゴム状物を得た。トルエン６００ｍＬから共沸した後に、赤みがかった固体（１１７．１ｇ）を得た。
【０４９４】
［ステップ５：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル６の調製。］
【化９７】
2014210790.tif 000115
アミノ−ピリミジン５（１１７．１ｇ、２２２．２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１．５Ｌ）に溶解した。ヒューニッヒ塩基、ジイソプロピルエチルアミン（１１５ｍＬ、３当量、６６６．６ｍｍｏｌ）を加えた。溶液をＮ２下０℃に冷却した。反応フラスコに均圧添加漏斗を装備し、添加漏斗に３−フロイルクロリド（３２ｇ、ＹａｍａｍｏｔｏおよびＭａ
ｒｕｏｋａ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９８１年、１０３巻、６１３３〜６１３６頁）のＴＨＦ（９０ｍＬ）溶液を仕込んだ。フロイルクロリド溶液を冷却したアミン溶液に２時間かけてゆっくり加えた。反応物をゆっくり室温に戻し、３６時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で希釈し、０．２Ｎクエン酸で２回（１．２Ｌおよび１．０Ｌ）、ブラインで１回（１．８Ｌ）、および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で１回（１．３Ｌ）洗浄した。鮮やかなオレンジ−ピンク色有機溶液をＮａ２ＳＯ４（２５０ｇ）およびＭｇＳＯ４（５１ｇ）で乾燥させた。乾燥させた溶液をシリカゲル（１Ｌ）のパッドを通して濾過し、フラスコおよびシリカをＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で濯いだ。溶液を真空で濃縮した。蒸発工程中に、白色固体が結晶化した。溶液を完全に濃縮した時点で、オレンジ色、ピンク色および白色の固体を得た。エーテル（４００ｍＬ）およびヘキサン（５００ｍＬ）を加えた。スラリー液を完全に混合し、Ｗｈａｔｍａｎ  ＃１濾紙を通して濾過して、桃色−ピンク色固体および鮮やかな赤色濾液を得た。沈殿物をヘキサン（５００ｍＬ）、エーテル（８００ｍＬ）、および再度ヘキサン（４００ｍＬ）で濯いで、薄桃色−オレンジ色固体を得た。濾液および濯ぎ液を合わせ、濃縮し、後で使用するために取り置いた。固体を２８ｉｎ．Ｈｇの真空（４９Ｔｏｒｒ）下で２日間６０℃にて真空乾燥器中で乾燥させて、１００．０ｇを得た。ＬＣ／ＭＳは、固体は純度９２％であることを示していた。粗製エステル６を、ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｌ）を充填したスラリー状のシリカゲル２Ｌ（１ｋｇ）上でクロマトグラフィーにかけた。桃色の生成物エステルをＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）に溶解し、シリカカラム２Ｌに適用した。カラムをＣＨ２Ｃｌ２（３Ｌ）、ヘキサン中５０％ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）、およびヘキサン中７５％ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で溶離した。数分以内に、所望の生成物エステルが複数のＥｔＯＡｃ−ヘキサンフラクションから結晶化し始めた。ＴＬＣにより純粋であることが示されたフラクションを濃縮して、白色固体（８２．５ｇ、ＬＣ／ＭＳによる純度＞９９％）を得た。この純粋な物質は、最終の脱保護化工程に使用した。ＴＬＣにより混入されていることが示されたフラクションを、元の濾液／ヘキサンおよびエーテル濯ぎ液からの残渣と合わせた。この物質を上述の方法と同様にフラッシュクロマトグラフィーにかけて、わずかに桃色固体が得られた（１３．２ｇ、［Ｍ＋１］＋に関してｍ／ｚ＝６２１．５）。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ, ppm: 7.58 (見かけ上d, 1H), 7.35-6.90 (見かけ上ABがABXと重複, 6H), 6.45 (見かけ上d, 1H), 5.25 (見かけ上d, 1H), 4.85 (見かけ上dq, 1H), 4.05 (見かけ上八重線, 1H), 3.7-3.4 (m, 8H), 3.0-3.3 (m, 2.5H), 2.90 (六重線, 0.5H), 1.93 (AA'BB', 4H), 1.38 (見かけ上d, 9H), 1.24-1.05 (m, 9H).
１Ｈ  ＮＭＲは、ほとんどのピークのダブリングにより明らかなように回転異性体を示す。
【０４９５】
［ステップ６．Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製。］
ステップ５からのｔ−ブチルエステル６（８２．５ｇ、１３２．７ｍｍｏｌ）に、ギ酸（２Ｌ）を加えた。得られた溶液を５０℃に終夜加熱した。ＴＬＣによる分析で反応が完結していることを確認し、溶液を真空で濃縮した。水（約２００ｍＬ）を粗製の生成物に加え、混合物を濃縮乾固した。更に水１５０ｍＬを加え、粗製の生成物を再度真空で濃縮した。粗製の白色固体生成物をｉＰｒＯＨから濃縮し、無水ＴＨＦから２回濃縮し、次いで４５℃および３５〜４０ｍｂａｒ（２６〜３０Ｔｏｒｒ）で回転蒸発器を用いて終夜乾燥させて、白色固体９０ｇを得た。ＬＣ／ＭＳは、粗製の生成物が純度９７．７％であることを示した。
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ, ppm: 7.65 (s, 0.55H), 7.45 (s, 0.45H), 7.38 (m, 2H), 7.25(d, 1.3H), 7.18 (d, 1H), 7.05 (d, 1.2H), 6.90 (d, 1H), 6.55 (s, 0.55H), 6.22 (広幅 s, 0.45H), 4.9-4.8 残存溶媒ピークが試料ピークと重複, 4.10 (見かけ上七
重線, 1.1H), 3.7 (m, 3.3H), 3.58 (m, 7H), 3.45-2.9 (m, 6H), 2.78 (見かけ上六重線, 0.7H), 1.90 (AA'BB', 4.5H), 1.85 (m, 3.16H), 1.23-1.0 (m, 10.3H).
13C NMR (CD3OD, 75 MHz) δ, ppm: 169.6, 169.2, 160.8, 153.9, 153.6 148.8, 145.8, 145.2, 145.1, 140.7, 140.5, 138.0, 137.9, 130.3, 130.2, 124.7, 124.6, 116.5, 116.4, 116.2, 116.1, 106.9, 106.6, 105.1, 105.0, 62.4, 50.7, 50.1, 41.0, 37.9, 37.2, 30.5, 20.2, 20.0, 19.4, 6.9, 6.8, 6.1, 5.9.
【０４９６】
以下の実施例７〜１２は、実施例６と同様の方法で調製した。
【０４９７】
（実施例７）
［（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボキシロイルオキシ）フェニル）プロパン酸の調製］
【化９８】
2014210790.tif 000116
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ1.03 (1.5 H, t, J = 7.2 Hz), 1.10-1.28 (7.5H, m), 1.98 (4H, m), 2.67-2.85 (0.5 H, m), 2.90-3.05 (0.5 H, m), 3.05-3.38 (2H, m, CD3OD
と重複), 3.41 (2H, m), 3.58 (6H, m), 3.90-4.11 (1H, m), 4.85-4.90 (1H, CD3ODと重複), 7.02 (2H, m), 7.26 (2H, m), 7.66 (1H, d, J = 8.7 Hz)
HPLC/ MS: MH+ = 567.1
【０４９８】
（実施例８）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化９９】
2014210790.tif 000117
1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.09-1.17 (3H, m), 1.23-1.26 (3H, m), 1.47 (12H, m),
1.87-1.99 (4H, m), 2.80 (0.4H, br s), 3.10 (1.6H, m), 3.20 (1H, m), 3.44 (2H, t, J = 6.0 Hz), 3.54 (2H, t, J = 6.0 Hz), 3.88-4.15 (3H, m), 4.80-4.85 (1H, m), 6.48 (0.6H, br s), 6.75 (0.4H, s), 6.69-7.08 (5H, m), 7.41 (1H, s), 7.50 (1H, s),
7.78 (0.4 H, br s), 7.85 (0.6H, br s)
HPLC/ MS: MH+ = 637.2
【化１００】
2014210790.tif 000118
1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 0.90 (3H, t, J = 6.9 Hz), 1.10-1.30 (6H, m), 1.85-1.94 (4H, m), 2.85-3.24 (2.4H, m), 3.35 (8.6H, m), 4.00-4.15 (1H, m), 4.55 (0.4H, br s), 4.73 (0.6H, br s), 5.85 (0.6H, d, J = 5.7 Hz), 5.87 (0.4H, br s), 6.60-7.12 (5.4H, m), 7.39 (1H, m), 7.60-7.68 (1.6H, m)
HPLC/ MS: MH+ = 581.2
【０４９９】
（実施例９）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化１０１】
2014210790.tif 000119
1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.07-1.27 (9H, m), 1.40 (9H, s), 1.90 (4H, m), 3.05-3.24 (3H, m), 3.43-3.64 (8H, m), 4.73-4.95 (1H, m), 5.22 (1H, m), 6.95-7.14 (7H,
m), 7.41 (0.4H, s), 7.50 (0.6H, s)
HPLC/ MS: MH+ = 637.2
【化１０２】
2014210790.tif 000120
1H NMR (300MHz, CDCl3), δ 0.70-1.4 (9H, m), 1.81-2.08 (4H, m), 2.62-4.10 (12H
, m), 4.95 (1H, br s), 6.90-8.07 (8H, m)
HPLC/ MS: MH+=581.2
【０５００】
（実施例１０）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化１０３】
2014210790.tif 000121
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.15-1.28 (9H, m), 1.37 (3.6H, s), 1.42 (5.4H, s), 1.93-2.05 (4H, m), 2.85-3.15 (2 H, m), 3.19-3.35 (1 H, m), 3.45-3.75 (8H, m), 3.90-4.15 (1H, m), 4.76-4.85 (0.4H, m), 4.90-5.00 (0.6H, m), 5.15-5.22 (1 H, m), 6.20-6.40 (2H, m), 6.91-7.18 (4H, m), 7.39 (1 H, s), 7.58 (0.4H, s), 7.65 (0.6H, s)
HPLC/ MS: MH+ = 621.3
【化１０４】
2014210790.tif 000122
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 0.84-1.25 (9H, m), 1.85-1.92 (4H, m), 2.70-2.81 (0.5H, m), 2.92-3.30 (2.5 H, m, CD3ODと重複), 3.30-3.38 (2H, m), 3.45-3.59 (6H, m),
4.04-4.12 (1 H, m), 4.80-4.89 (1 H, CD3ODと重複), 6.18 (1H, m), 6.58 (0.5H, br s), 6.78 (0.5H, br s), 6.83 (1H, d, J = 8.1 Hz), 6.92 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.06 (1 H, d, J = 8.1 Hz), 7.19 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.38 (0.5H, br s), 7.44 (0.5H, s), 7.47 (0.5H, br s), 7.48 (0.5H, s)
HPLC/ MS: MH+ = 565.2
【０５０１】
（実施例１１）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化１０５】
2014210790.tif 000123
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.04-1.11 (18H, m), 1.40 (4.5H, s), 1.42 (4.5H, s),
1.96 (4H, m), 2.46-2.59 (0.5H, m), 2.72-2.85 (0.5H, m), 3.00-3.32 (2H, m), 3.45-3.62 (8H, m), 3.82-4.15 (1H, m), 4.82-4.93 (1H, m), 5.05 (0.5H, d, J = 7.2Hz), 5.15 (0.5H, d, J = 7.2Hz), 7.08-7.18 (4H, m), 7.67 (1H, s)
HPLC/ MS: MH+ = 611.3
【化１０６】
2014210790.tif 000124
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 0.86-1.20 (18H, m), 1.87 (4H, m), 2.32-2.45 (0.5H, m), 2.56-2.68 (0.6H, m), 3.05-3.20 (2H, m), 3.29-3.38 (2H, m), 3.43-3.52 (6H, m), 3.8-3.99 (1H, m), 4.75-4.82 (1H, CD3ODと重複), 6.90 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.15 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.43 (1H, s)
HPLC/ MS: MH+ = 555.2
【０５０２】
（実施例１２）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化１０７】
2014210790.tif 000125
1H NMR (300MHz, CDCl3) δ 0.90-1.21 (15H, m), 1.38 (9H, s), 1.92 (4H, m), 2.28
-2.50 (1H, m), 2.80-3.16 (3H, m), 3.41-3.70 (8H, m), 3.80-3.95 (1H, m), 4.71-4.85 (1H, m), 5.05-5.11 (1H, m), 7.00-7.08 (2H, m), 7.08-7.16 (2H, m), 7.65 (1H, d,
J = 5.0 Hz)
HPLC/ MS: MH+ = 597.3
【化１０８】
2014210790.tif 000126
1H NMR (300MHz, CD3OD) δ 0.80-0.98 (9H, m), 1.15-1.19 (6H, m), 1.88 (4H, m), 2.20-2.42 (1H, m), 2.65-2.83 (1H, m), 3.08-3.25 (2H, m), 3.26-3.59 (8H, m), 3.88-3.97 (1H, m), 4.70-5.05 (1H, CD3ODと重複), 6.92 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.17 (2H, m), 7.63 (1H, d, J = 5.0Hz)
HPLC/ MS: MH+ = 541.3
【０５０３】
（実施例１３）
［ピリミジニル尿素を調製するための一般的方法。］
【化１０９】
2014210790.tif 000127
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．４３６ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（０．３５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（０．７ｍＬ）に溶解した。溶液を０℃に冷却し、１０分間激しく撹拌した。１０分後、撹拌を止め、非混和層を分離させた。ホスゲン（０．５２ｍＬ、４．９７ｍｍｏｌ）を、注射器を通して底部層に加えた。反応混合物をＮ２下３時間撹拌した。完結後、有機層を分離し、室温で真空にて濃縮した。ＥｔＯＡｃに再度溶解し、脱イオン水で洗浄し、２回逆抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮した。粗製の油を精製せずに次のステップに使用した。
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８９．０。
【化１１０】
2014210790.tif 000128
粗製のカルバミルクロリド（１当量）およびアミン（５当量）をＴＨＦ（０．２Ｍ）に溶解し、Ｎ２下終夜撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチルに再度溶解した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮した。生成物をＨＰＬＣにより精製した。生成物を４０℃で溶媒としてＨＣＯＯＨを用いて終夜処理した。減圧下に溶媒を除去し、生成物を得た。
【０５０４】
実施例１４〜１６を実施例１３に従って調製した。
【０５０５】
（実施例１４）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化１１１】
2014210790.tif 000129
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.01 (3 H, t, J = 7 Hz), 1.22 (6 H, t, J = 7 Hz), 1.36 (4 H, m), 1.49 (2 H, m), 1.95 (4 H, m), 3.10-3.66 (16 H, m), 4.86-4.92 (1 H,
m), 6.75 (1 H, d, J = 7.2 Hz), 7.25 (2 H, d, J = 8.4 Hz), 7.14(2 H, d, J = 8.4 Hz), 7.64 (1 H, s).
HPLC/MS: MH+ = 582.3
【０５０６】
（実施例１５）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製］
【化１１２】
2014210790.tif 000130
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.01 (9 H, br s), 1.21 (9 H, m), 1.90-1.99 (4 H, m), 2.98 (2 H, m), 3.15 (3 H, m), 3.33 (1 H, m), 3.45 (2 H, m), 3.52-3.60 (6 H, m), 3.76 (1 H, m), 4.91-4.97 (1 H, br s), 6.64 (1 H, br s), 7.04 (2 H, d, J = 8 Hz), 7.14 (2 H, d, J = 8 Hz), 7.66 (1 H, s).
HPLC/MS: MH+ = 584.4
【０５０７】
（実施例１６）
［Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
【化１１３】
2014210790.tif 000131
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.03 (3 H, t, J = 6.6 Hz), 1.21 (6 H, t, J = 6.6 Hz), 1.90-1.99 (4 H, m), 2.84 (2 H, t, J = 6 Hz), 3.09-3.63 (14 H, m), 4.06-4.14 (2 H, q, J = 7.8 Hz), 4.91-4.97 (1 H, m), 6.64 (1 H, d, J = 7 Hz), 7.04 (2 H, d, J = 8.4 Hz), 7.13 (2 H, d, J = 8.4 Hz), 7.75 (1 H, s).
HPLC/MS: MH+ = 586.2
【０５０８】
上記式ＶＩ〜ＸＩの化合物は、スキームＣに例証した通りに、および以下の方法に記載した通りに調製できる。
【化１１４】
2014210790.tif 000132
【０５０９】
（実施例１７）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
【０５１０】
ステップ１：２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２）の調製。
Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９５１年、１５６５頁）の手順に従い、５−ニトロウラシル（１）をオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）およびＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（ＰｈＮＭｅ２）で処理して、化合物２を得た。化合物２は、Ｃｉｔｙ  Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ（Ｗｅｓｔ  Ｈａｖｅｎ、ＣＴ）から入手することもできる。
【０５１１】
ステップ２：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−Ｌ−チロシンｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）の調製。
Ｌ−チロシンｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｈ−Ｔｙｒ（ＯＨ）−ＯｔＢｕ）（３０．６ｇ、０．１２９ｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）溶液に、−１０℃で２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２５ｇ、０．１２９ｍｏｌ）を、添加の間温度が５℃を超えないように維持しながら加えた。添加が完結して直ぐに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＥｔｉＰｒ２Ｎ）（３３．７ｍＬ、０．１９４ｍｏｌ）を滴下添加した。−１０℃で１時間撹拌した後、ジエチルアミン（Ｅｔ２ＮＨ）（６６．７３ｍＬ、０．６４５ｍｏｌ）をゆっくり加え、次いで反応混合物を室温に終夜加温した。反応混合物をジエチルエーテル（５００ｍＬ）で希釈し、有機層を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、および１０％Ｋ２ＣＯ３（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮して、黄色残渣を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、化合物３（３７．３９ｇ、６７％）を黄色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．２１（シリカゲル上２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５１２】
ステップ３：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（４）の調製。
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−Ｌ−チロシンｔｅｒｔ−ブチルエステル（３７．３９ｇ、０．０８７ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（１０．５９ｇ、０．０８７ｍｏｌ）を加えた。５分後、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（１８．１９ｍＬ、０．１３１ｍｏｌ）を滴下添加した。１−ピロリジンカルバモイルクロリド（１４．４２ｍＬ、０．１３１ｍｏｌ）を滴下添加し、反応物を終夜加熱還流（４０℃）させた。反応混合物を真空で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に溶解した。有機相を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１５０ｍＬ）、ブライン（１×１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮して、化合物４（４３．０７ｇ、９４％）を黄色固体として得た。Ｒｆ＝０．５（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５１３】
ステップ４：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−アミノピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（５）の調製。
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（４３．０７ｇ、０．０８１ｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（４．３ｇ、１０重量％Ｐｄ）のＥｔＯＨ（２００ｍＬ）混合物を、ＴＬＣ（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）が生成物に１００％転化したことを示すまで（４８時間）、４５ｐｓｉの水素下で振盪した。次いでセライトプラグを通して反応混合物を濾過し、真空で濃縮して、化合物５（４０．２９ｇ、１００％）を紫色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．１１（シリカゲル上６：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５１４】
ステップ５：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）アミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（６）の調製。
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−アミノピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチ
ルエステル（４０．２９ｇ、０．０８１ｍｏｌ）のピリジン（１６０ｍＬ）溶液を、ドライアイス／ＣＨ３ＣＮ浴で−２０℃に冷却した。混合物を３０分間撹拌し、次いで４−クロロベンゼンスルホニルクロリド（１７．０６ｇ、０．０８１ｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応物を−２０℃から−１５℃で４時間撹拌し、次いで室温に終夜加温した。反応物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈し、有機相を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１５０ｍＬ）、ブライン（１×１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮して、茶褐色残渣を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、化合物６（４３．４９ｇ、８０％）を黄色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．３５（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５１５】
ステップ６：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（７）の調製。
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）アミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（４２．９２ｇ、０．０６４ｍｏｌ）のアセトン（Ｍｅ２ＣＯ）（６００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１２．７５ｇ、０．０９６ｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。次いでヨードエタン（ＥｔＩ）（７．７３ｍＬ、０．０９６ｍｏｌ）をゆっくり加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に溶解した。有機相を水（２×３００ｍＬ）、ブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上２：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物７（３７．３６ｇ、８５％）を白色固体として得た。Ｒｆ＝０．５３（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５１６】
ステップ７：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン塩酸塩（８）の調製。
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（３６．２１ｇ、０．０５２ｍｏｌ）のギ酸（５００ｍＬ）溶液を７０℃に２時間加熱し、次いで真空で濃縮した。残渣をギ酸（５００ｍＬ）に再度溶解し、７０℃で２時間再度加熱した。溶液を８０％の容量に減らし、次いで１．０ＮのＨＣｌ（５２ｍＬ、０．０５２ｍｏｌ）少なくとも１当量で、続いて蒸留水（１００ｍＬ）で処理した。得られた不均一混合物を真空で濃縮した。蒸留水（１００ｍＬ）を加え、不均一混合物を真空で濃縮した。後段を２回繰り返して、湿潤した白色生成物を得た。これを４０℃で高真空下に（７日間）置くことにより乾燥させて、化合物８（３２．８ｇ、９３％）を流動性の白色固体として得た。Ｒｆ＝０．２５（７／３のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ、逆相）。
1H NMR (CD3OD) δ 8.22 (bs, 1H), 7.82-7.79 (m, 1H), 7.64-7.60 (m, 2H), 7.36-7.33 (m, 1H), 7.22-7.13 (m, 2H), 7.07-6.98 (m, 2H), 4.91-4.90 (m, 1H), 4.80-4.79 (m, 1H), 4.12-4.10 (m, 1H), 3.87-3.75 (m, 1H), 3.55-3.53 (m, 4H), 3.41-3.40 (m, 3H), 3.26-3.19 (m, 2H), 2.03 (bs, 1H), 1.97-1.89 (m, 3H), 1.27-1.15 (m, 6H), 1.10-1.05 (t, 1.5H), 0.97-0.92 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) δ 175.8, 175.7, 166.5, 162.7, 162.2, 155.8, 155.7, 155.7, 152.6, 148.1, 147.7, 142.0, 138.5, 136.2, 132.6, 132.3, 131.9, 131.7, 123.7, 111.8,
111.5, 62.3, 57.8, 44.9, 38.7, 38.0, 27.4, 26.6, 15.3, 14.9, 14.7, 14.0, 13.9
【０５１７】
（実施例１８）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１７におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−クロロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 8.17 (bs, 1H), 7.90-7.87 (m, 2H), 7.40-7.34 (m, 2H), 7.20-7.16 (m, 1H), 7.08-7.00 (m, 3H), 5.52-5.51 (m, 1H), 4.96-4.93 (m, 2H), 5.78-5.70 (m, 1H), 3.85-3.75 (m, 1H), 3.59-3.53 (m, 4H), 4.47-4.43 (m, 2H), 3.44-3.24 (m, 2H), 2.02-1.94 (m, 3H), 1.24-1.16 (m, 6H), 1.10-1.05 (t, 1.5H), 0.99-0.94 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) δ 133.0, 132.9, 132.5, 132.2, 123.7, 123.6, 118.6, 57.1, 44.3, 38.3, 27.3, 26.6, 14.7, 14.1
MS m/z 629.5 (MH+)
【０５１８】
（実施例１９）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１８におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。ヨウ化エチルの代わりに硫酸ジメチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 8.16 (bs, 1H), 7.89-7.88 (m, 1H), 7.39-7.35 (m, 3H), 7.20-7.13 (m, 1H), 7.05-7.00 (m, 2H), 4.85-4.84 (m, 1H), 4.14-4.12 (m, 1H), 3.59-3.54 (m, 5H), 3.45-3.44 (m, 2H), 3.45-3.33 (m, 3H), 3.13-3.12 (m, 1H), 3.02-3.01 (m, 1H), 2.04-1.95 (m, 4H), 1.29-1.18 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) δ 176.5, 169.8, 166.9, 166.4, 156.2, 152.7, 151.8, 150.4, 136.8, 133.3, 133.2, 132.5, 123.7, 118.8, 118.5, 57.8, 57.1, 48.3, 44.5, 41.0, 38.8, 27.5, 26.7, 14.1
MS m/z 615.2 (MH+)
【０５１９】
（実施例２０）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１７におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。ヨウ化エチルの代わりに硫酸ジメチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 8.20 (bs, 1H), 7.83-7.80 (m, 2H), 7.67-7.64 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 1H), 7.21-7.18 (m, 1H), 7.10-7.03 (m, 2H), 4.88-4.87 (m, 1H), 4.13-4.10 (m, 1H), 3.55-3.45 (m, 6H), 3.42-3.40 (m, 2H), 3.24-3.23 (m, 2H), 3.11-3.10 (m, 1H), 3.02-3.01 (m, 1H), 2.04-2.03 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 3H), 1.28-1.18 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) δ 176.0, 166.4, 161.8, 155.9, 155.4, 152.6, 146.5, 142.2, 137.6, 137.4, 136.4, 132.5, 131.9, 123.7, 114.6, 62.4, 58.1, 57.7, 45.0, 40.8, 38.6, 38.3, 27.4, 26.6, 15.3, 13.9
【０５２０】
（実施例２１）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１９におけるステップ１、２、４、５、６および７を同様に行った。１−ピロリ
ジンカルボニルクロリドの代わりに１−ピペリジンカルボニルクロリドを用いて、ステップ３を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 8.16 (bs, 1H), 7.90-7.88 (m, 2H), 7.40-7.35 (m, 2H), 7.21-7.20 (m, 1H), 7.14-7.13 (m, 1H), 7.02-7.01 (m, 2H), 5.51 (bs, 1H), 4.83-4.77 (m, 1H), 3.64-3.53 (m, 6H), 3.34-3.33 (m, 2H), 3.20-3.17 (m, 1H), 3.12-3.11 (m, 2H), 3.02-3.01 (m, 1H), 1.68-1.65 (m, 6H), 1.19-1.17 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) δ 185.0, 169.7, 166.3, 152.7, 136.6, 135.0, 133.2, 133.0, 132.5, 131.8, 126.3, 123.6, 121.7, 118.6, 118.3, 57.6, 54.5, 46.9, 44.3, 39.6, 38.7, 27.6, 25.9, 14.0
【０５２１】
（実施例２２）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１８におけるステップ１、２、４、５、６および７を同様に行った。１−ピロリジンカルボニルクロリドの代わりに１−ピペリジンカルボニルクロリドを用いて、ステップ３を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 8.17 (bs, 1H), 7.91-7.85 (m, 2H), 7.39-7.31 (m, 3H), 7.20-7.16 (m, 1H), 7.05-6.97 (m, 2H), 4.88-4.69 (m, 2H), 4.71-4.69 (m, 1H), 3.80-3.75 (m, 1H), 3.62-3.39 (m, 6H), 3.34-3.32 (m, 2H), 3.30-3.16 (m, 3H), 1.68-1.65 (m, 4H), 1.23-1.17 (m, 6H), 1.10-1.05 (t, 1.5H), 0.99-0.94 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) δ 199.9, 187.6, 183.1, 176.2, 169.7, 166.3, 163.0, 162.7, 153.9, 152.9, 136.5, 133.1, 133.0, 132.7, 132.4, 123.8, 118.8, 118.4, 111.1, 110.6,
102.8, 79.4, 57.3, 55.4, 44.4, 38.9, 38.4, 27.7, 26.1, 15.1, 14.8, 14.3, 14.2
【０５２２】
（実施例２３）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１８におけるステップ１、２、４、５、６および７を同様に行った。以下の手順に従い、ステップ３を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 7.92-7.86 (m, 2H), 7.41-7.32 (m, 3H), 7.22 (d, 1H), 7.04-6.91 (m, 3H), 4.29-3.98 (m, 4H), 3.88-3.72 (m, 1H), 3.69-3.37 (m, 4H), 2.40-2.24 (m, 2H), 1.28-1.11 (m, 6H), 1.10-1.00 (t, 1.5H), 1.01-0.89 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) δ 174.2, 169.7, 166.4, 163.2, 162.8, 157.0, 153.3, 153.2, 152.4, 144.3, 143.8, 136.1, 135.6, 135.5, 133.2, 133.1, 132.5, 132.2, 123.7, 118.9,
118.6, 112.9, 112.6, 57.5, 38.1, 37.7, 17.4, 14.7, 14.5, 13.8, 13.7
MS m/z 615 (MH+)
【０５２３】
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステルの代替調製。
化合物３（２４．９ｇ、０．０５７８ｍｏｌ）および４−ニトロフェニルクロロホルメート（１１．７ｇ、０．０５７８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）撹拌溶液に、−１５℃で、反応混合物の温度が−１０℃を越えないような速度で、トリエチルアミン（２４．２ｍＬ、０．１７３ｍｏｌ）を加えた。２０分間撹拌した後、アゼチジン（３．３０ｇ、０．０５７８ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応混合物を室温に加温し、終夜撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）およびヘキサン（１００ｍＬ）で希釈し、次いで１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液で、水相に黄色（４−ニトロフェノール）が見えなくなるまで繰り返し抽出した。有機層をブライン（７５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾
過し、蒸発させて、Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル２８．５ｇ（９６％）を黄色固体として得、これを精製せずに使用した。Ｒｆ＝０．１７（シリカゲル上２：５のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５２４】
（実施例２４）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２３におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。ヨウ化エチルの代わりに硫酸ジメチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 7.95-7.76 (m, 2H), 7.44-7.11 (m, 4H), 7.01-6.83 (m, 3H), 4.30-3.93 (m, 4H), 3.66-3.41 (m, 4H), 3.14-2.92 (m, 3H), 2.42-2.21 (m, 2H), 1.32-1.01 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) δ 152.3, 136.3, 133.4, 133.2, 132.4, 123.6, 118.8, 118.5, 38.2, 17.4, 13.8
MS m/z 601 (MH+)
【０５２５】
（実施例２５）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２４におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 7.83 (d, 2H), 7.67 (d, 2H), 7.36-7.18 (m, 2H), 7.06-6.86 (m,
3H), 4.29-3.97 (m, 4H), 3.66-3.34 (m, 5H), 3.15-2.95 (m, 4H), 2.41-2.22 (m, 2H)1.26-1.06 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) δ157.2, 153.0, 152.5, 142.9, 142.5, 136.4, 132.5, 132.1, 132.0, 123.8, 57.9, 52.2, 40.7, 38.0, 17.4, 13.6
MS m/z 617 (MH+)
【０５２６】
（実施例２６）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２３におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 7.86-7.76 (m, 2H), 7.70-7.60 (m, 2H), 7.32 (bd, 1H), 7.21 (bd, 1H), 7.03-6.97 (m, 2H), 6.90 (bs, 1H), 4.29-4.00 (m, 4H), 3.89-3.72 (m, 1H), 3.70-3.36 (m, 5H), 3.28-3.10 (m, 2H), 2.42-2.24 (m, 2H), 1.28-1.13 (m, 6H), 1.11-1.02 (t, 1.5H), 1.01-0.90 (t, 1.5H)
MS m/z 631 (MH+)
【０５２７】
（実施例２７）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１９におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオ
ロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.16 (bs, 6H), 1.93 (bs, 4H), 2.50-3.75 (m, 13H), 4.83 (bs, 1H), 6.60-7.40 (m, 7H), 7.60 (bs, 1H), 7.77 (m, 1H), 9.41 (bs, 1H)
【０５２８】
（実施例２８）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１８におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CDCl3) δ 0.91 (t, J = 6.9, 1.8H), 1.12 (m, 7.2H), 1.92 (bs, 4H), 2.50-4.00 (m, 13H), 4.78 (m, 0.6H), 4.88 (m, 0.4H), 6.55 (d, J = 6.9, 0.4H), 6.77 (d, J = 6.3, 0.6H), 6.80-7.38 (m, 6H), 7.51 (s, 0.4H), 7.58 (s, 0.6H), 7.74 (m, 1H), 9.33 (m, 1H)
【０５２９】
（実施例２９）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２７におけるステップ１、２、４、５、６および７を同様に行った。実施例２３におけるステップ３を同様に行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.14 (t, J =6.6, 6H), 2.32 (m, 2H), 2.50-3.80 (m, 9H), 4.13 (m, 4H), 4.62 (m, 0.6H), 4.81 (m, 0.4H), 5.81 (bd, 0.6H), 5.90 (bd, 0.4H), 6.90-7.40 (m, 7H), 7.77 (m, 1H)
MS m/z 619.2 (MH+)
【０５３０】
（実施例３０）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２８におけるステップ１、２、４、５、６および７を同様に行った。実施例２３におけるステップ３を同様に行った。
1H NMR (CDCl3) δ 0.89 (t, J =6.7, 1.8H), 1.16 (m, 7.2H), 2.28 (m, 2H), 3.00-4.00 (m, 8H), 4.09 (bs, 4H), 4.79 (m, 0.6H), 4.88 (m, 0.4H), 6.80-7.30 (m, 7H), 7.57 (s, 0.4H), 7.62 (s, 0.6H), 7.75 (m, 1H), 11.9 (bs, 1H)
MS m/z 633.2 (MH+)
【０５３１】
（実施例３１）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１８におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。ヨウ化エチルの代わりにプロパルギルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.18 (m, 6H), 1.93 (bs, 4H), 2.37 (s, 1H), 3.00-3.70 (m, 10H), 3.80 (d, J =21.3, 0.6H), 3.98 (d, J = 18.3, 0.4H), 4.51 (m, 1H), 4.88 (m, 1H), 6.75-7.35 (m, 7H), 7.58 (s, 0.6H), 7.63 (s, 0.4H), 7.86 (m, 2H), 9.71 (bs, 1H)
【０５３２】
（実施例３２）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２７におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにプロパルギルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.17 (m, 6H), 1.94 (m, 4H), 2.40 (m, 1H), 3.00-3.75 (m, 10H), 3.99 (d, J =18.0, 0.6H), 4.18 (d, J = 18.0, 0.4H), 4.50 (m, 1H), 4.90 (m, 1H),
6.75-7.35 (m, 7H), 7.81 (m, 2H), 10.0 (bs, 1H)
【０５３３】
（実施例３３）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例３２におけるステップ１、２、４、５、６および７を同様に行った。実施例２３におけるステップ３を同様に行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.18 (m, 6H), 2.34 (m, 3H), 3.00-3.75 (m, 6H), 3.80-4.25 (m,
5H), 4.47 (m, 1H), 4.89 (m, 1H), 6.75-7.35 (m, 7H), 7.79 (m, 2H), 10.3 (bs, 1H)
MS m/z 643.2 (MH+)
【０５３４】
（実施例３４）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例２３におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。ヨウ化エチルの代わりにプロパルギルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.25 (m, 6H), 2.28 (m, 3H), 3.00-3.75 (m, 6H), 3.80-4.25 (m,
5H), 4.47 (m, 1H), 4.89 (m, 1H), 6.75-7.35 (m, 7H), 7.57 (s, 0.6H), 7.62 (s, 0.4H), 7.79 (m, 2H), 10.6 (bs, 1H)
MS m/z 625.2 (MH+)
【０５３５】
（実施例３５）
［Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製］
実施例１７におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。ヨウ化エチルの代わりにプロパルギルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) δ 8.13 (s, 1H), 7.86-7.82 (m, 2H), 7.62-7.58 (m, 2H), 7.32-7.28 (m, 2H), 7.19-7.17 (m, 1H), 7.04-6.98 (m, 2H), 4.83-4.5 (m, 2H), 4.12-3.82 (m,
1H), 3.63-3.37 (m, 8H), 3.27-3.08 (m, 2H), 2.72 (bs, 1H), 2.04-1.86 (m, 4H), 1.24-1.07 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) δ 177.2, 176.5, 162.7, 156.7, 155.7, 154.5, 153.2, 142.6, 140.3, 137.4, 137.3, 133.1, 132.9, 132.8, 132.7, 132.2, 132.1, 124.3, 111.3, 80.5, 80.3, 77.7, 58.2, 57.7, 44.9, 43.4, 28.1, 27.3, 14.8, 14.7
MS m/z 655 (MH+)
【０５３６】
（実施例３６）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
一般的。Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ７５Ｌを用い、ＫＰ−Ｓｉｌシリカカートリッ
ジ８００ｇ（３２〜６３μＭ、６０オングストローム、５００〜５５０ｍ２／ｇ）を用いて、フラッシュクロマトグラフィーを行った。順相ではＥＭ  ＳｃｉｅｎｃｅシリカゲルＦ（２５４）２５０μＭ薄板を用い、逆相ではＷｈａｔｍａｎ  ＭＫＣ１８Ｆ  ２００μＭ薄板を用いて、分析薄層クロマトグラフィーとしてＲｆを報告する。
【０５３７】
［ステップ１：２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジンの調製。］
Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９５１年、１５６５頁）の手順に従い、５−ニトロウラシルをオキシ塩化リンおよびＮ，Ｎ−ジメチルアニリンで処理して、標題化合物を得、これはＣｉｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｗｅｓｔ  Ｈａｖｅｎ、ＣＴ）から入手することもできる。
【０５３８】
［ステップ２：２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸、ｔ−ブチルエステルの調製。］
２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸（３０．６ｇ、０．１２９ｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）溶液に、＋１０℃で２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２５ｇ、０．１２９ｍｏｌ）を、添加の間温度が５℃を越えないように維持しながら加えた。添加が完結して直ぐに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３３．７ｍＬ、０．１９４ｍｏｌ）を滴下添加した。＋１０℃で１時間撹拌した後、ジエチルアミン（６６．７３ｍＬ、０．６４５ｍｏｌ）をゆっくり加え、次いで反応混合物を室温に終夜加温した。反応混合物をジエチルエーテル（５００ｍＬ）で希釈し、有機層を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、および１０％Ｋ２ＣＯ３（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮して、黄色残渣を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、標題化合物３７．３９ｇ（６７％）を黄色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．２１（シリカゲル上２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５３９】
［ステップ３：２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製。］
２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３１．８０ｇ、０．０７４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（９．００ｇ、０．０７４ｍｏｌ）を加えた。５分後、トリエチルアミン（１０．２３ｍＬ、０．０７４ｍｏｌ）を滴下添加した。Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバミルクロリド（１３．８３ｍＬ、０．１１０ｍｏｌ）を滴下添加し、反応物を終夜加熱還流させた。反応混合物を真空で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）に溶解した。有機相を０．５Ｍクエン酸（３×２５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×２５０ｍＬ）、ブライン（１×２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮して、標題化合物３７．０ｇ（９９％）を白色固体として得た。
【０５４０】
［ステップ４：２−（２−ジエチルアミノ−５−アミノピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製。］
２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイル−オキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３７．０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（３．８ｇ、１０重量％Ｐｄ）のＥｔＯＨ（２５０ｍＬ）混合物を、ＴＬＣ（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）が生成物に１００％転化したことを示すまで（４８時間）、６０ｐｓｉの水素下で振盪した。次いでセライトプラグを通して反応混合物を濾過し、真空で濃縮して、標題化合物３２．０ｇ（９２％）を紫色泡状物として得た。
【０５４１】
［ステップ５：２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製。］
２−（２−ジエチルアミノ−５−アミノピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシ−フェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３２．０ｇ、０．０６７ｍｏｌ）のピリジン（１２０ｍＬ）溶液を、ドライアイス／ＣＨ３ＣＮ浴で−２０℃に冷却した。混合物を３０分間撹拌し、次いでｐ−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（１３．１８ｇ、０．０６７ｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応物を−２０℃で４．５時間撹拌し、次いで３−ジメチルアミノプロピルアミン（８．５２ｍＬ、０．０６７ｍｏｌ）を加え、次いで混合物を室温に終夜加温した。反応物を真空で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）に溶解し、有機相を０．５Ｍクエン酸（３×９００ｍＬ）、水（１×９００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×９００ｍＬ）、ブライン（１×９００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮して、茶褐色残渣を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、標題化合物３３．０４ｇ（７７％）を黄色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．５４（シリカゲル上３：２のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０５４２】
［ステップ６：２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製。］
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチル−カルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３３．０４ｇ、０．０５２ｍｏｌ）のアセトン（５１０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（８．６９ｇ、０．０６３ｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。次いで硫酸ジメチル（５．９５ｍＬ、０．０６３ｍｏｌ）をゆっくり加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）に溶解した。有機相を水（２×４００ｍＬ）、ブライン（２×４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上２：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、標題化合物２８．６９ｇ（８５％）を白色固体として得た。
【０５４３】
［ステップ７：２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸塩酸塩の調製。］
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（２８．６９ｇ、０．０４４ｍｏｌ）のギ酸（５００ｍＬ）溶液を７０℃に２時間加熱し、次いで真空で濃縮した。残渣をギ酸（５００ｍＬ）に再度溶解し、次いで７０℃で２時間再度加熱し、次いで真空で再度濃縮した。残渣をギ酸（５００ｍＬ）に再度溶解し、次いで７０℃で１時間再度加熱した。溶液を９０％の容量に減らし、次いで１．０ＭのＨＣｌ（４４ｍＬ、０．０４４ｍｏｌ）および蒸留水（４９０ｍＬ）で処理した。得られた均一溶液を真空で濃縮し、次いで蒸留水（１００ｍＬ）を加え、均一溶液を１４日間凍結乾燥させて、標題化合物２６．７６ｇ（９６％）を白色固体として得た。
1H NMR (CD3OD) d 7.96-7.92 (m, 2H), 7.45-7.25 (m, 4H), 7.06-6.95 (m, 3H), 5.00-4.93 (m, 1H), 3.55-3.40 (m, 5H), 3.34-3.20 (m,, 2H), 3.15-3.05 (m, 5H), 3.07-3.00 (m, 3H), 1.22 (bs, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 171.6, 168.3, 154.5, 144.4, 137.9, 135.1, 135.0, 134.1, 125.5, 120.6, 120.3, 39.6, 39.2, 39.1, 15.2
MS m/z 589 (MH+)
【０５４４】
（実施例３７）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 7.88-7.85 (m, 2H), 7.72-7.69 (m, 2H), 7.39-7.25 (m, 2H), 7.14-6.92 (m, 3H), 5.00-4.85 (m, 1H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.37-3.28 (m, 6H), 3.15-3.07 (m, 6H), 3.01 (bs, 3H), 1.22 (bs, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 208.6, 145.3, 134.9, 128.8, 124.9, 124.5, 124.4, 116.3, 50.2, 30.4, 30.0, 6.0
MS m/z 605 (MH+)
【０５４５】
（実施例３８）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）
メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 7.84-7.77 (m, 1H), 7.67 (bs, 1H), 7.58-7.53 (m, 1H), 7.37-7.34 (m, 1H), 7.22-7.18 (m, 1H), 7.08-7.02 (m, 3H), 4.83-4.76 (m, 1H), 3.55-3.54 (m, 4H), 3.35-3.33 (m, 1H), 3.23-3.12 (m, 6H), 3.03-2.99 (m, 3H), 1.19 (bs, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 178.3, 177.8, 163.2, 162.6, 159.3, 159.1, 155.9, 155.7, 154.3, 153.0, 152.5, 152.4, 138.4, 138.1, 134.0, 129.5, 125.3, 122.4, 122.2, 121.7, 121.4, 115.3, 59.3, 46.0, 42.4, 41.9, 40.4, 39.9, 39.2, 39.1, 15.76
MS m/z 607.2 (MH+)
【０５４６】
（実施例３９）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジクロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.00-7.98 (m, 1H), 7.83-7.74 (m, 2H), 7.37-7.34 (m, 1H), 7.21-7.20 (m, 1H), 7.10-7.02 (m, 3H), 4.85-4.83 (m, 1H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.35-3.33 (m, 1H), 3.21-3.12 (m, 6H), 3.04-2.99 (m, 6H), 1.19 (bs, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 176.4, 166.2, 161.7, 161.2, 158.0, 157.8, 152.8, 151.5, 150.5, 140.2, 139.8, 139.5, 136.8, 135.8, 133.9, 132.6, 132.0, 129.8, 123.8, 113.7, 113.4, 57.8, 44.6, 40.8, 40.4, 38.7, 38.3, 37.7, 37.5, 14.1
MS m/z 639.1 (MH+)
【０５４７】
（実施例４０）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオ
ロベンゼンスルホニルクロリドの代わりにベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.14 (bs, 1H), (7.85-7.84 (m, 1H), 7.8-7.78 (m, 1H), 7.69-7.66 (m, 2H), 7.40-7.37 (m, 1H), 7.21-7.195 (m, 1H), 7.04-7.03 (m, 2H), 7.95-7.90 (m, 1H), 5.52 (bs, 1H), 3.54-3.53 (m, 2H), 3.36-3.33 (m, 6H), 3.13-3.12 (m, 3H), 3.01-3.00 (m, 3H), 1.20-1.17 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 165.9, 152.8, 136.7, 135.8, 132.6, 131.6, 130.2, 123.8, 44.7, 37.5, 14.0
MS m/z 571.2 (MH+)
【０５４８】
（実施例４１）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２−フルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.31 (bs, 1H), 7.94-7.85 (m, 2H), 7.57-7.44 (m, 3H), 7.34-7.30 (m, 1H), 7.15-7.12 (m, 2H), 5.00-4.85 (1H), 3.63-3.62 (m, 4H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 4H), 3.29-3.22 (m, 4H), 3.11-3.10 (m, 2H), 1.28 (bs, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 176.5, 166.4, 163.1, 160.4, 159.7, 157.7, 152.8, 151.5, 150.7, 138.5, 138.3, 136.7, 133.7, 132.5, 132.2, 127.1, 123.7, 119.9, 119.6, 113.4, 57.8, 44.6, 40.6, 39.0, 38.4, 37.7, 37.5, 14.1
【０５４９】
（実施例４２）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３−フルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.15-8.12 (bs, 1H), 7.72-7.68 (m, 1H), 7.63-7.60 (m, 1H), 7.53-7.52 (m, 1H), 7.38-7.35 (m, 1H), 7.21-7.20 (m, 1H), 7.10-6.99 (m, 3H), 4.87-4.86 (m, 1H), 3.54-3.53 (m, 4H), 3.35-3.34 (m, 3H), 3.15-3.12 (m, 4H), 3.05-3.00 (m, 4H), 1.20 (bs, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 166.1, 153.1, 136.9, 134.1, 132.8, 126.5, 124.1, 123.2, 122.9, 117.7, 117.4, 103.4, 45.0, 38.0, 14.3
MS m/z 589.2 (MH+)
【０５５０】
（実施例４３）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２および３を同様に行った。その後、以下の手順に従い、ステップ４および６をワンポットで行った。その後、実施例３６におけるステップ５および７を同様に行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.20-8.16 (m, 1H), 7.95-7.84 (m, 2H), 7.36-7.25 (m, 3H), 7.24-7.15 (m, 3H), 7.07-6.98 (m, 3H), 5.07-5.05 (m, 1H), 4.90-4.86 (m, 1H), 4.65-4.62 (m, 1H), 4.49-4.41 (m, 1H), 3.63-3.56 (m, 3H), 3.38-3.31 (m, 2H), 3.27-3.11 (m, 2H), 3.00-2.99 (m, 3H), 1.27-1.21 (m, 6H), 1.05-0.99 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 175.8, 175.5, 169.6, 166.3, 165.9, 163.5, 163.4, 157.7, 153.0, 152.9, 152.3, 138.1, 136.4, 136.1, 133.1, 133.0, 133.0, 132.9, 132.7, 132.3, 123.8, 118.8, 118.7, 118.5, 118.4, 107.5, 57.6, 57.2, 54.7, 44.7, 38.7, 38.1, 37.6, 37.5, 23.0, 22.9, 22.2, 22.0, 14.1, 14.0
【０５５１】
［２−（２−ジエチルアミノ−５−イソプロピルアミノピリミジン−４−イル）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルを調製するための代替ワンポット手順］
２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（５．０ｇ、０．０１０ｍｏｌ）、氷酢酸（１０滴）、アセトン（２．１９ｍＬ、０．０３０ｍｏｌ）、および酸化白金（０．２５０ｇ、５重量％）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）混合物を、ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）が生成物に１００％転化したことを示すまで（２０時間）、４５ｐｓｉ水素で水素化した。次いでセライトプラグを通して反応混合物を濾過し、真空で濃縮して、茶褐色残渣を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（４：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、９（３．５４ｇ、７０％）を紫色泡状物として得た。
【０５５２】
（実施例４４）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d 0.89 (t, J = 7.2, 1.8H), 1.06 (t, J = 7.1, 1.2H), 1.10-1.30 (m, 6H), 2.97 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 3.10-3.90 (m, 8H), 4.82 (q, J = 5.4, 0.6H), 4.91 (q, J = 6.1, 0.4H), 6.80-7.45 (m, 8H), 7.77 (m, 2H), 12.44 (bs, 1H)
MS m/z 603.3 (MH+)
【０５５３】
（実施例４５）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例４３におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.20-8.19 (m, 1H), 7.84-7.78 (m, 1H), 7.70-7.64 (m, 1H), 7.54-7.48 (m, 1H), 7.39-7.31 (m, 1H), 7.20-7.17 (m, 1H), 7.05-6.96 (m, 2H), 4.91-4.89 (m, 1H), 4.70-4.68 (m, 1H), 4.48-4.41 (m, 2H), 3.60-3.58 (m, 3H), 3.34-3.33 (m, 1H), 3.27-3.20 (m, 1H), 3.09-3.08 (m, 2H), 2.98-2.97 (m, 2H), 1.28-1.19 (m, 6H), 1.06-0.98 (m, 6H), 0.83-0.81 (m, 1H)
13C NMR (CD3OD) d 177.6, 177.2, 167.9, 164.9, 164.8, 159.2, 159.1, 155.7, 154.5, 154.4, 152.4, 152.3, 140.4, 140.3, 137.8, 134.3, 133.9, 129.3, 129.2, 125.4, 122.6, 122.5, 122.4, 122.2, 121.5, 121.2, 109.1, 59.5, 59.1, 56.7, 56.6, 46.4, 46.3, 39.6, 39.3, 39.2, 24.7, 24.5, 23.9, 23.6, 15.7, 15.6
【０５５４】
（実施例４６）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例４３におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオ
ロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.18-8.17 (m, 1H), 7.85-7.78 (m, 1H), 7.62-7.58 (m, 1H), 7.38-7.35 (m, 1H), 7.34-7.24 (m, 1H), 7.17-7.16 (m, 1H), 7.10-7.05 (m, 2H), 7.04-6.98 (m, 2H), 4.98-4.87 (m, 1H), 4.73-4.68 (m, 1H), 4.55-4.38 (m, 2H), 3.70-3.52 (m, 3H), 3.40-3.30 (m, 1H), 3.28-3.18 (m, 1H), 3.17-3.08 (m, 2H), 3.05-2.98 (m, 2H), 1.25-1.20 (m, 6H), 1.04-0.96 (m, 6H), 0.80-0.77 (m, 1H)
13C NMR (CD3OD) d 175.7, 175.5, 166.2, 165.8, 169.6, 163.5, 163.4, 157.6, 152.9, 152.8, 138.0, 136.3, 136.1, 133.1, 133.0, 132.9, 132.7, 132.2, 123.8, 118.8, 118.6, 118.5, 118.5, 118.3, 107.5, 57.6, 57.2, 54.7, 44.6, 38.6, 38.1, 37.6, 37.5, 22.9, 22.8, 22.2, 21.9, 14.1, 13.9
【０５５５】
（実施例４７）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例４４におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.15-8.14 (m, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.73-7.62 (m, 1H), 7.60-7.49 (m, 1H), 7.30-7.18 (m, 1H), 7.16-7.00 (m, 2H), 5.58-5.50 (m, 1H), 4.90-4.83 (m, 1H), 5.78-5.70 (m, 1H), 3.85-3.75 (m, 1H), 3.65-3.54 (m, 3H), 3.40-3.23 (m, 5H), 3.18-3.10 (m, 3H), 3.05-2.98 (m, 3H), 1.25-1.15 (m, 3H), 1.18-1.05 (t, 1.5H), 1.02-1.00 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) d 165.8, 152.7, 145.7, 136.4, 136.3, 132.5, 132.2, 127.5, 123.6, 120.7, 120.4, 81.4, 57.0, 44.3, 38.5, 38.1, 37.4, 14.9, 14.6, 14.1, 14.0
MS m/z 621.5 (MH+)
【０５５６】
（実施例４８）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例４４におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.15-8.14 (m, 1H), 7.84-7.79 (m, 1H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.37-7.33 (m, 1H), 7.22-7.18 (m, 1H), 7.14-7.13 (m, 1H), 7.06-7.00 (m, 3H), 4.80-4.75 (m, 1H), 4.18-4.10 (m, 1H), 3.65-3.30 (m, 3H), 3.28-3.20 (m, 3H), 3.18-3.08 (m, 2H), 3.03-2.98 (m, 2H), 2.05-2.04 (m, 1H), 1.30-1.16 (m, 9H), 1.10-1.08 (t, 1.5H), 0.99-0.95 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) d 176.2, 176.1, 166.7, 162.7, 162.3, 157.6, 152.9, 142.0, 138.8, 136.5, 132.8, 132.5, 132.0, 131.8, 123.8, 111.7, 111.4, 57.9, 57.8, 44.9, 38.9, 38.3, 37.8, 37.7, 15.1, 14.9, 14.3, 14.2
MS m/z 619.4 (MH+)
【０５５７】
（実施例４９）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）シクロプロピルメチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイル−オキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチ
ルおよび炭酸カリウムの代わりにブロモメチルシクロプロパンおよび炭酸セシウムを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d -0.2-0.2 (m, 2.4H), 0.2-0.45 (m, 1.6H), 0.54 (m, 0.6H), 0.85 (m, 0.4H), 1.00-1.40 (m, 6H), 2.80-3.80 (m, 14H), 4.79 (q, J = 5.5, 0.6H), 4.91 (q, J = 6.3, 0.4H), 6.70-7.40 (m, 8H), 7.77 (m, 2H), 10.26 (bs, 1H)
MS m/z 629.2 (MH+)
【０５５８】
（実施例５０）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，５−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 7.68-7.67 (m, 1H), 7.67-7.56 (m, 2H), 7.42-7.40 (m, 2H), 7.31-7.30 (m, 1H), 7.26-7.23 (m, 2H), 5.20-4.90 (m, 1H), 4.35-4.33 (m, 1H), 3.78-3.74 (m, 4H), 3.57-3.54 (2H), 3.38-3.33 (m, 2H), 3.26-3.21 (m, 2H), 2.41-2.39 (m, 2H), 2.26-2.25 (m, 2H), 1.50-1.38 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 162.5, 162.3, 159.2, 159.0, 148.0, 146.1, 132.2, 127.8, 127.7, 127.6, 118.9, 109.1, 109.0, 108.7, 108.6, 106.2, 105.8, 52.5, 39.6, 34.1, 32.9, 9.5
【０５５９】
（実施例５１）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例５０におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) d 7.45-7.43 (m, 1H), 7.42-7.18 (m, 2H), 7.21-7.16 (m, 2H), 7.07-7.06 (m, 1H), 7.04-6.97 (m, 2H), 5.51 (bs, 1H), 4.86-4.82 (m, 1H), 4.72-4.66 (m, 1H), 3.84-3.77 (m, 1H), 3.59-3.50 (m, 3H), 3.34-3.31 (m, 2H), 3.12-3.10 (m, 3H), 2.99-2.96 (m, 3H), 1.22-1.14 (m, 9H), 1.10-1.05 (t, 1.5H), 0.97-0.95 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) d 159.9, 150.9, 150.1, 134.0, 130.0, 129.7, 121.2, 107.9, 86.7, 42.0, 41.9, 36.3, 35.2, 35.1, 12.8, 12.5, 11.9, 11.8,
【０５６０】
（実施例５２）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.16-8.11 (m, 1H), 7.59-7.56 (m, 2H), 7.48-7.45 (m, 2H), 7.26-7.24 (m, 3H), 5.21-5.16 (m, 1H), 3.79-3.77 (m, 4H), 3.57-3.54 (m, 3H), 3.48-3.46 (m, 2H), 3.44-3.34 (m, 3H), 3.22-3.21 (m, 3H), 1.45-1.44 (m, 6H)
13C NMR (CDCl) d 180.2, 170.3, 166.6, 150.3, 129.0, 128.9, 128.7, 125.9, 125.4, 117.5, 117.4, 116.5, 114.8, 107.7, 107.4, 95.5, 90.8, 68.0, 65.1, 55.7, 50.8, 37.6, 36.4, 31.9, 31.7, 31.6, 13.2, 9.4, 8.3, 7.8
【０５６１】
（実施例５３）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例５２におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.15 (bs, 1H), 7.91-7.76 (m, 1H), 7.32-7.30 (m, 2H), 7.20-7.19 (m, 2H), 7.04-7.00 (m, 2H), 4.84-4.83 (m, 1H), 4.74-4.67 (m, 1H), 4.14-4.07 (m, 1H), 3.92-3.82 (m, 1H), 3.51-3.49 (m, 3H), 3.34-3.31 (m, 3H), 3.12-2.99 (m, 2H), 2.98-2.97 (m, 2H), 2.03-2.02 (m, 1H), 1.26-1.17 (m, 6H), 1.10-1.06 (t, 1.5H),
1.03-0.98 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) d 173.6, 173.3, 171.4, 167.7, 164.3, 161.2, 159.9, 159.3, 157.1, 156.7, 155.2, 152.4, 151.0, 150.3, 134.0, 133.3, 133.1, 132.9, 130.0, 123.2, 122.9, 122.8, 121.3, 121.2, 112.0, 111.8, 111.6, 111.5, 107.7, 107.2, 106.0, 105.9, 105.6, 105.2, 60.0, 54.8, 42.0, 36.5, 35.9, 35.3, 35.1, 19.3, 13.0, 12.9, 12.7, 11.9, 11.8
【０５６２】
（実施例５４）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，５−ジクロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 7.84-7.82 (m, 1H), 7.76-7.75 (m, 3H), 7.34-7.32 (m, 1H), 7.19-7.10 (m, 1H), 7.03-7.00 (m, 2H), 5.50 (bs, 1H), 4.83-4.82 (m, 1H), 4.74-7.73 (m, 1H), 3.55-3.38 (m, 4H), 3.34-3.32 (m, 2H), 3.15-3.11 (m, 4H), 3.02-2.99 (m, 3H), 1.18-1.15 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 157.1, 155.2, 150.1, 149.7, 140.1, 135.9, 134.3, 132.9, 130.0, 129.9, 126.0, 121.2, 110.7, 55.2, 54.8, 42.0, 38.5, 38.1, 36.5, 35.9, 35.2, 35.1, 11.9
MS m/z 639.1 (MH+)
【０５６３】
（実施例５５）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例５４におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.15 (bs, 1H), 7.84-7.84-7.79 (m, 1H), 7.76-7.74 (m, 2H), 7.33-7.30 (m, 1H), 7.22-7.11 (m, 2H), 7.04-6.98 (m, 1H), 5.51 (bs, 1H), 4.86-4.82 (m, 1H), 4.72-4.67 (m, 1H), 3.77-3.75 (m, 1H), 3.60-3.50 (m, 3H), 3.34-3.29 (m, 2H), 3.27-3.22 (m, 2H), 3.12-3.11 (m, 2H), 2.99-2.98 (m, 2H), 1.23-1.14 (m, 6H), 1.10-1.05 (t, 1.5H), 0.99-0.94 (t, 1.5H)
13C NMR (CD3OD) d 173.6, 173.4, 163.7, 159.9, 159.3, 157.3, 156.8, 155.2, 155.1, 152.1, 150.8, 150.2, 141.4, 141.2, 135.9, 134.0, 132.7, 130.0, 129.7, 125.8, 125.7, 121.3, 121.2, 107.9, 107.4, 54.8, 54.7, 42.0, 36.4, 35.8, 35.3, 35.1, 12.8, 12.5, 11.9, 11.8
MS m/z 653.2 (MH+)
【０５６４】
（実施例５６）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−プロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化１−プロピルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d 0.75 (m, 3H), 1.00-1.50 (m, 8H), 3.00 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 3.20-3.70 (m, 8H), 4.79 (q, J = 6.3, 0.6H), 4.91 (q, J = 6.6, 0.4H), 5.73 (bs, 0.6H), 5.92 (bs, 0.4H), 6.90-7.45 (m, 7H), 7.76 (m, 2H)
MS m/z 617.2 (MH+)
【０５６５】
（実施例５７）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アリルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにアリルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d 1.20 (m, 6H), 2.98 (s, 3H), 3.06 (s, 3H), 3.10-4.30 (m, 8H), 4.75- 4.95 (m, 1H), 5.07 (m, 2H), 5.48 (m, 0.6H), 5.67 (m, 0.4H), 6.90-7.45 (m, 8H), 7.76 (m, 2H), 11.07 (bs, 1H)
MS m/z 615.2 (MH+)
【０５６６】
（実施例５８）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソボチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化イソブチルを用いて、ステップ６を行った。
ＭＳ  ｍ／ｚ  ６３１．２（ＭＨ＋）
【０５６７】
（実施例５９）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−ブチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにヨウ化１−ブチルを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d 0.82 (q, J = 7.1, 3H), 1.05-1.40 (m, 10H), 3.01 (s, 3H), 3.10
(s, 3H), 3.15-3.80 (m, 8H), 4.75 (q, J = 6.3, 0.6H), 4.91 (q, J = 5.9, 0.4H), 5.79 (d, J = 5.4, 0.6H), 5.91 (d, J = 6.6, 0.4H), 7.00-7.40 (m, 7H), 7.77 (m, 2H)
【０５６８】
（実施例６０）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，６−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。
1H NMR (CD3OD) d 8.38-8.37 (m, 1H), 7.99-7.95 (m, 1H), 7.55-7.54 (m, 2H), 7.50-7.42 (m, 2H), 7.27-7.22 (m, 2H), 5.08-5.06 (m, 1H), 3.76-3.74 (m, 4H), 3.59-3.54 (m, 3H), 3.49-3.42 (m, 4H), 3.36-3.34 (m, 2H), 3.23-3.21 (m, 2H), 1.40 (bs, 6H
)
13C NMR (CD3OD) d 161.4, 159.2, 155.8, 153.1, 148.1, 147.1, 133.6, 132.0, 127.8, 119.0, 111.1, 110.8, 110.7, 108.5, 105.8, 94.8, 86.4, 66.7, 54.0, 52.8, 39.7,
35.8, 34.2, 33.7, 32.9, 32.8, 9.4
【０５６９】
（実施例６１）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，３−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、６および７を同様に行った。４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，３−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて、ステップ５を行った。以下の手順により、２，３−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを調製した。
1H NMR (CD3OD) d 8.32 (bs, 1H), 7.90-7.80 (m, 2H), 7.59-7.48 (m, 3H), 7.27-7.23 (m, 2H), 5.09-5.08 (m, 1H), 3.77-3.70 (m, 4H), 3.60-3.51 (m, 3H), 3.50-3.42 (m, 2H), 3.39-3.31n (m, 3H), 3.32-3.18 (m, 2H), 1.43-1.41 (m, 6H)
13C NMR (CD3OD) d 170.4, 160.8, 158.1, 156.1, 153.0, 151.6, 150.5, 148.9, 148.2, 147.3, 147.2, 143.9, 143.5, 142.6, 141.1, 140.9, 131.8, 127.7, 125.1, 123.8, 120.8, 120.6, 119.2, 40.5, 35.7, 33.4, 32.9, 32.7, 9.0
【０５７０】
［２，３−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドの調製。］
２つのフラスコを用いて以下の手順を行った。最初のフラスコ中、２，３−ジフルオロアニリン（２．０ｇ、０．０１５ｍｏｌ）を濃ＨＣｌ（１５．９ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を氷／ＮａＣｌ浴を用いて−５℃に冷却した。亜硝酸ナトリウム（１．１８ｇ、０．０１７ｍｏｌ）の蒸留水（１３．６ｍＬ）溶液を、０℃を超えない温度を維持しながら、撹拌しながら少しずつ加え、混合物を１０分間撹拌した。第２のフラスコ中、塩化チオニル（５．０８ｍＬ、０．０６９ｍｏｌ）を、氷／ＮａＣｌ浴を用いて予め−５℃に冷却しておいた蒸留水（３０．６ｍＬ）に滴下添加した。得られた溶液を室温に加温し、次いでＣｕ（Ｉ）Ｃｌ（０．０８ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を加え、次いで反応混合物を−５℃に再度冷却した。冷却し撹拌し続けながら、最初のフラスコの内容物を、第２のフラスコの内容物に２ｍＬずつ加え、混合物を３０分間撹拌し、その間沈殿物が生成した。沈殿物を濾取し、冷水で濯ぎ、真空下に貯蔵して、１０（３．２５ｇ、９８％）を白色固体として得た。
【０５７１】
（実施例６２）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにプロパルギルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d 1.15 (m, 6H), 2.27 (d, J = 2.1, 1H), 2.97 (s, 3H), 3.06 (s, 3H), 3.10-3.70 (m, 6H), 3.75 (dd, J =17.7, 2.0, 0.6H), 3.95 (dd, J = 18.1, 2.0, 0.4H), 4.51 (dd, J =19.5, 2.2, 0.6H), 4.54 (dd, J = 18.1, 2.2, 0.4H), 4.79 (q, J = 5.9, 0.6H), 4.88 (q, J = 6.6, 0.4H), 6.42 (bd, 0.4H), 6.65 (bs, 0.6H), 6.85-7.30 (m, 6H), 7.52 (s, 0.6H), 7.56 (s, 0.4H), 7.85 (m, 2H), 8.20 (bs, 1H)
MS m/z 613.2 (MH+)
【０５７２】
（実施例６３）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシ
フェニル）プロピオン酸の調製］
実施例５２におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルの代わりにプロパルギルブロミドを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) d 1.16 (q, J = 7.5, 6H), 2.27 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 3.09 (s, 3H), 3.10-3.70 (m, 6H), 4.04 (dd, J =17.7, 2.4, 0.6H), 4.24 (dd, J = 17.9, 2.2, 0.4H), 4.47 (m, 1H), 4.81 (q, J = 5.9, 0.6H), 4.89 (q, J = 6.3, 0.4H), 6.27 (d, J
= 7.5, 0.4H), 6.41 (d, J = 5.7, 0.6H), 6.90-7.10 (m, 4H), 7.16 (d, J = 8.3, 1H), 7.28 (d, J = 8.3, 1H), 7.55 (bs, 1H), 7.66 (s, 0.6H), 7.67 (s, 0.4H), 7.81 (m,
1H)
【０５７３】
（実施例６４）
［２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイル−オキシフェニル）プロピオン酸の調製］
実施例３６におけるステップ１、２、３、４、５および７を同様に行った。硫酸ジメチルおよび炭酸カリウムの代わりに２，２，２−トリフルオロエチルトリフレートおよび炭酸セシウムを用いて、ステップ６を行った。
1H NMR (CDCl3) δ 1.14 (m, 6H), 2.98 (s, 3H), 3.06 (s, 3H), 3.10-4.20 (m, 8H),
4.80 (q, J = 5.9, 0.6H), 4.87 (q, J = 6.2, 0.4H), 6.09 (d, J = 5.9, 0.4H), 6.18
(bd, 0.6H), 6.80-7.50 (m, 7H), 7.55 (bs, 1H), 7.77 (m, 2H);
MS m/z 657.2 (MH+)
【０５７４】
［実施例６５〜１０４の一般的方法］：Ｇｅｍｉｎｉ  ２０００またはＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ３００分光計を用いて、プロトン（１Ｈ）およびカーボン（１３Ｃ）核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）を得た。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）プロトンの存在は、３．６ｐｐｍでの大きくブロードな一重項により検出できる。このシグナルの積分は、ＰＥＧ部分の大きさに依存して変化できる。コンジュゲートしたＶＬＡ−４拮抗薬の存在は、コンジュゲートの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルでも検出できる。薄層クロマトグラフィーは、シリカ６０Ｆ２５４（ＥＭＤ１５３４１−１）の事前塗布シートまたは事前塗布ＭＫＣ１８Ｆシリカ６０Å（Ｗｈａｔｍａｎ  ４８０３−１１０）上で行った。質量分析は、陽イオン単一４倍モードでＡｇｉｌｅｎｔ質量分析（ＬＣ／ＭＳＤ  ＶＬ）を用いて行った。
【０５７５】
［ＰＥＧ生成物およびＰＥＧコンジュゲートのためのＨＰＬＣ方法］：
分取逆相ＨＰＬＣは、２１０ｎｍでセットしたＶａｒｉａｎ  ＵＶ検出器を装備したＶａｒｉａｎ  Ｐｒｅｐ  Ｓｔａｒ（モデルＳＤ−１）モジュールを用いて行った。方法Ａ：２０ｍＬ／分で１００分内に３５〜５０％ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡの濃度勾配を通常用いる、Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、３００Å孔径カラム（２５０ｍｍ×２１．２ｍｍ）上での逆相ＨＰＬＣを用いて、ＰＥＧ生成物およびＰＥＧコンジュゲートの試料を精製した。方法Ｂ：６０ｍＬ／分で１００分内に３５〜５０％ＡＣＮ＋０．１％ＴＦＡの濃度勾配を通常用いる、Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、３００Å孔径カラム（２５０ｍｍ×５０ｍｍ）上での逆相ＨＰＬＣを用いて、ＰＥＧ生成物およびコンジュゲートの試料を精製した。
【０５７６】
［方法Ｃ］：１．５ｍＬ／分の流速で０．１％ＴＦＡを含む４０〜５０％ＡＣＮの濃度勾配を用いる、Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  ３００Å孔径、３．５μ  Ｃ１８カラム（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ）を装備し、ならびに２１０ｎｍでセットされたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００可変波長検出器およびＳｅｄｅｘ７５蒸発光散乱検出器（４０℃、ゲイン＝５）と連結させた、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  １１００  Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙシステムを用いる逆相分析ＨＰＬＣにより、ＰＥＧ生成物およびコンジュゲートの純度を確認した。
【０５７７】
［ＰＥＧ試薬］：日本油脂株式会社（恵比寿ガーデンプレイスタワー、２０−３恵比寿４丁目、渋谷区、東京、１５０−６０１９）またはＮｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１５０  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｒｏａｄ、Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ、ＣＡ９４０７０）より、以下の通りにＰＥＧ出発物を入手した：３０ｋＤａのＰＥＧジアミン（日本油脂カタログＳｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＤＥ−３００ＰＡ）、５ｋＤａのＢｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステル（Ｎｅｋｔａｒカタログ４Ｍ５３０Ｈ０２）、２０ｋＤａのテトラ−アミン（日本油脂カタログＳｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＰＴＥ−２００ＰＡ）、４０ｋＤａの４−アームＰＥＧアルコール（日本油脂カタログＳｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＰＴＥ−４００００）、４０ｋＤａの３−アームＰＥＧアルコール（日本油脂カタログＳｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＧＬ−４００）。
【０５７８】
（実施例６５）
【化１１５】
2014210790.tif 000133
水酸化ナトリウム（１０ｇ、０．２５ｍ）を水（３００ｍｌ）に溶解する。この溶液に４−ニトロフェニルアラニン（５０．３ｇ、０．２２ｍ）を加え、完全に溶解するまで撹拌する。得られた溶液に炭酸ナトリウム（２８．８ｇ、０．２６ｍ）を加え、撹拌懸濁液を氷浴中で＋８℃に冷却する。クロロギ酸ベンジル（４４．７ｇ、０．２６ｍ）を激しく撹拌しながら、＋６℃から＋９℃の範囲に内温を維持しながら滴下添加する。混合物を＋６℃で更に１時間撹拌し、分液漏斗に移し、エーテル（２×１５０ｍｌ）で洗浄する。水相を大きな三角フラスコ（２Ｌ）に仕込み、希薄ＨＣｌ水溶液を用いてｐＨ＝２に注意深く酸性化し、酢酸エチル（４×５００ｍｌ）で抽出する。合わせた抽出物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶液を濾過し、濾液を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（５００ｍｌ）で希釈する。結晶物を濾別し、冷溶媒で濯ぎ、空気乾燥させて、Ｃｂｚ−４−ニトロフェニルアラニン７５ｇ（収率９９．５％）を得る。
1H-NMR, DMSO-d6, (δ): 12.85 (bs, 1H), 8.12 (d, 2H, J=9Hz), 7.52 (d, 2H, J=9Hz), 7.30 (m, 5H), 4.95 (s, 2H), 4.28 (m, 1H), 3.32 (bs, 1H), 3.10 (m, 2H).13C-NMR
(δ): 173.1, 156.3, 146.6, 137.3, 130.8, 128.5, 128.0, 127.8, 123.5, 65.6, 55.1, 36.6.
MS (m/z): 367.1 [M+23].
【０５７９】
Ｃｂｚ−４−ニトロフェニルアラニン（７５ｇ、０．２２ｍ）をジオキサン（３００ｍｌ）に溶解する。得られた撹拌溶液をドライアイス浴中で−２０℃（内温）に冷却する。液化イソブチレン（およそ２９０ｍｌ）を加え、続いて濃硫酸（３５ｍｌ）を等量に３分割し、３０分間隔で加える。酸の添加は極めて大きな発熱工程であり、相当程度の重合を伴う。効率的な機械撹拌がこの段階で重要である。得られた混合物を２０時間撹拌し、周囲温度に加温し、次いで飽和炭酸ナトリウム水溶液（２Ｌ）に注意深く注ぎ入れ、酢酸エチル（６００ｍｌ）で希釈する。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（２×２００ｍｌ）で抽出する。合わせた抽出物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶液を濾過し、蒸発乾固させる。残渣を酢酸エチル／ヘキサン混合物（５００ｍｌ、１：１）に溶解し、シリカゲルのプラグ（約２×２ｉｎ）を通して濾過する。シリカを更なる量の同一溶媒（合計２Ｌ）で濯ぎ、濾液を蒸発させて、完全に保護された４−ニトロフェニルアラニン７３ｇ（２ステップ後８３％）を粘稠性油として得る。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.12 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.36 (m, 7H), 5.35 (m, 1H), 5.10 (
m, 2H), 4.57 (m, 1H), 3.31 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 169.7, 155.3, 146.9, 143.9, 136.0, 130.2, 128.4, 128.2, 128.0, 123.3, 82.9, 66.9, 54.7, 38.2, 31.4, 27.8, 13.9.
MS (m/z): 423.1 [M+23].
【０５８０】
保護化４−ニトロフェニルアラニン（７３ｇ、０．１８ｍ）をエタノール（５００ｍｌ）に溶解し、酸化白金触媒（１．５ｇ）を加える。得られた溶液を水素雰囲気（５０〜６０ｐｓｉ）中周囲温度で、更なる水素吸収が無くなるまで（３時間）激しく撹拌する。触媒を濾別し、濾液を蒸発乾固させ、残渣を酢酸エチル（２００ｍｌ）に溶解し、酢酸エチル−ヘキサン混合物（３：２、２Ｌ）を用いるシリカゲルのプラグ（２×２ｉｎ）を通して濾過し、シリカを濯ぐ。濾液を濃縮しておよそ２００ｍｌにし、ヘキサン（５００ｍｌ）を加える。結晶性生成物を濾別し、冷溶媒で濯ぎ、空気乾燥させる。収率−５６ｇ、８４％。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.30 (bs, 5H), 6.92 (d, 2H, J=8.1Hz), 6.58 (d, 2H, J=8.1Hz), 5.21 (m, 1H), 5.10 (d, 2H, J=2.1Hz), 4.46 (m, 1H), 3.59 (bs, 2H), 2.97 (s, 2H, J=5.4Hz), 1.42 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.6, 145.1, 136.3, 130.2, 128.3, 127.9, 125.6, 115.0, 81.9, 66.6, 55.2, 37.4, 27.8
MS (m/z): 393.1 [M+23].
【０５８１】
（実施例６６）
【化１１６】
2014210790.tif 000134
実施例６５の生成物である４−アミノフェニルアラニン（２０ｇ、０．０５４ｍ）をエタノール（２００ｍｌ）に溶解し、ヒューニッヒ塩基（２１ｇ、０．１６２ｍ、３当量）および２−クロロ−３−ニトロピリジン（１０．３ｇ、０．６５ｍ、１．２当量）で処理した。得られた溶液を窒素雰囲気下に撹拌し、２４時間加熱還流させた。ＬＣ分析は少量の未反応アミンの存在を示した。更に少量のクロロニトロピリジン（１．１ｇ、０．１３当量）を加え、更に２４時間還流を続けた。反応混合物を冷却し、蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル（６００ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を水（１×２００ｍｌ）、希薄クエン酸水溶液（０．２Ｎ、２×２００ｍｌ）、ブライン（１×２００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾別し、濾液を蒸発させて、深紅色油３７ｇを得、これは過剰のクロロニトロピリジンで汚染された期待する生成物を含んでいた。酢酸エチル：ヘキサン（３：１７）混合物で溶離するフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ
７５Ｌシステム）により、不純な生成物を精製した。純粋な生成物を含むフラクションを合わせ、蒸発させて、深紅色粘稠性油２６ｇ（９９％）を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 10.10 (s, 1H), 8.49 (m, 2H), 7.57 (d, 2H, J=9Hz), 7.35 (bs, 5H), 7.19 (d, 2H, J=9Hz), 6.84 (m, 1H), 5.30 (m, 1H), 5.13 (d, 2H, J=3Hz), 4.57 (m, 1H), 3.11 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.4, 155.5, 155.1, 150.0, 136.7, 136.3, 135.4, 132.4, 129.9, 128.5, 128.3, 128.0, 127.9, 122.2, 113.7, 82.2, 66.7, 55.1, 37.7, 27.8, 20.9.
MS (m/z): 493.1 [M+1], 515.1 [M+23].
【０５８２】
赤色のニトロ化合物（２６ｇ、０．０５４ｍ）をＴＨＦ（３５０ｍｌ）に溶解し、酸化白金触媒（１．３５ｇ）を加えた。得られた混合物を水素雰囲気（５０〜６０ｐｓｉ）下、水素吸収が無くなるまで（２時間）激しく撹拌した。触媒を濾別し、濾液を蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶解し、結晶化が始まるまでヘキサン（５０ｍｌ）で希釈した。混合物を酢酸エチル／ヘキサン（１：１）混合物（３００ｍｌ）で更に希釈し、冷蔵庫中で３時間放置した。結晶性固体を濾別し、冷溶媒で濯ぎ、空気乾燥させて、生成物２３ｇ、９４％を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.81 (dd, 1H, J1=1.5Hz, J2=4.8Hz), 7.33 (bs, 5H), 7.17 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.03 (d, 2H, J=8.4Hz), 6.96 (dd, 1H, J1=1.5Hz, J2=7.5Hz), 6.75 (dd, 1H, J1=5.0Hz, J2=7.7Hz), 6.22 (s, 1H), 5.31 (m, 1H), 5.09 (bs, 2H), 4.50 (m,
1H), 3.41 (bs, 2H), 3.02 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.6, 155.6, 145.5, 140.21, 138.8, 136.3, 130.8, 129.9,
128.5, 128.3, 127.9, 123.4, 118.2, 117.0, 82.0, 66.6, 55.2, 37.4, 27.9.
MS (m/z): 407.1 [M-56], 463.1 [M+1], 485.1 [M+23].
【０５８３】
アミノピリジン（１９ｇ、０．０４１ｍ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に懸濁させ、ＣＤＩ（１２ｇ、０．０７４ｍ、１．８当量）を加えた。得られた混合物を周囲温度で２０時間撹拌した。反応混合物を飽和炭酸水素塩水溶液（２×１００ｍｌ）、ブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾別し、濾液を蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル（熱、３００ｍｌ）に溶解し、結晶化させた。結晶性生成物を濾別し、冷酢酸エチルで濯ぎ、空気乾燥させて、イミダゾロン１９．９ｇ、８１％を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 10.63 (s, 1H), 8.06 (d, 1H, J=3Hz), 7.66 (d, 2H, J=9Hz), 7.32 (m, 8H), 7.05 (m, 1H), 5.36 (m, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.59 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.4, 155.6, 154.3, 143.8, 141.0, 136.2, 135.8, 131.8, 130.2, 128.3, 128.0, 125.9, 122.2, 118.3, 116.0, 82.4, 66.8, 55.0, 37.7, 27.8.
MS (m/z): 433.1 [M-56], 489.2 [M+1], 511.2 [M+23].
【０５８４】
（実施例６７）
【化１１７】
2014210790.tif 000135
実施例６６の生成物（４．０ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍｌ）溶液に、粉砕した炭酸カリウム（１．５８ｇ、１１．４７ｍｍｏｌ）を加え、続いてブロモ酢酸メチル（１．０ｍｌ、１１．４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素下室温で終夜撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶解した。有機相をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗製物をカラムクロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）により精製して、標題化合物４．５ｇ（１００％）を白色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．４２（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。
MS m/z=561, (M+H)+.
1H NMR (CDCl3) δ 8.10-8.08 (d, 1H), δ7.67-7.65 (d, 2H), δ 7.37-7.30 (m, 7H), δ 7.20-7.17 (m, 1H), δ 7.10-7.05 (m, 1H), δ 5.30-5.27 (d, 1H), δ 5.11 (s, 2H), δ 4.58-4.55 (q, 1H), δ 3.81 (s, 3H), δ 3.16-3.14 (d, 2H), δ 1.42 (s, 9H).
【０５８５】
（実施例６８）
【化１１８】
2014210790.tif 000136
実施例６７の生成物（２．２５ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍｌ）溶液をＤｅｇｕｓｓａ  Ｐｄ／Ｃ触媒（１１３ｍｇ）と共に、Ｈ２（５５ｐｓｉ）下で終夜置いた。セライトを通して反応混合物を濾過し、真空で濃縮して、標題化合物１．６５ｇ（９７％）を茶褐色油として得た。Ｒｆ＝０．３２（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。
MS m/z=449, (M+Na)+.
1H NMR (CDCl3) δ 8.11-8.09 (d, 1H), δ7.68-7.65 (d, 2H), δ 7.41-7.38 (d, 2H), δ 7.20-7.17 (m, 1H), δ 7.10-7.06 (m, 1H), δ 4.73 (s, 2H), δ 3.81 (s, 3H), δ 3.67-3.62 (m, 1H), δ 3.16-3.09 (m, 1H), δ 2.91-2.84 (m, 1H), δ 1.46 (s, 9H).
【０５８６】
（実施例６９）
【化１１９】
2014210790.tif 000137
ピリジン−３−スルホン酸（１２５ｇ、０．７８ｍ）を、機械撹拌機、還流冷却管、温度計および窒素注入口を装備した１Ｌの三口フラスコに仕込んだ。次に、５塩化リン（２５０ｇ、１．１９ｍ、１．５当量）を加え、続いて直ちにオキシ塩化リン（３３０ｍｌ、３．８ｍ、４．５当量）を加えた。フラスコ内容物を最初に周囲温度で３０分間撹拌し、次いで穏やかに還流するまで（内部温度およそ１１０℃）更に１時間かけてゆっくり加温し、この温度でおよそ３．５時間維持し、次いで更に１２時間かけて周囲温度まで再度冷却した。この時間中気体発生が観察された。揮発物を減圧下に（１２ｍｍＨｇ／４０℃で）ストリップし、黄色半固体残渣をＤＣＭ（１Ｌ）で希釈した。スラリー液を、ｐＨ＝７に維持しながら、撹拌した氷冷飽和炭酸水素塩水溶液にゆっくり注ぎ入れた。気体の発生が観察された。有機層を分離し、水層をＤＣＭで逆抽出した。合わせた抽出物を冷飽和炭
酸水素塩水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。固体を濾別し、濾液を蒸発させて、ピリジン−３−スルホニルクロリドを淡黄色油状液として得た、１２３ｇ（純度９３％、理論の８８％）。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 9.26 (d, 1H), 8.98 (dd, 1H), 8.34 (m, 1H), 7.62 (m, 1H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 155.3, 147.4, 140.9, 134.6, 124.2.
MS (m/z): 178.0 [M+1].
【０５８７】
Ｌ−ペニシラミン（１５０ｇ、１．０ｍ）を、撹拌しながらイオン交換水（１５００ｍｌ）に溶解し、氷浴中＋８℃に冷却し、ホルマリン（１５０ｍｌ、３７％水溶液）で処理した。反応混合物を＋８℃で２時間撹拌し、次いで冷却浴を除去し、１２時間撹拌を続けた。透明溶液を減圧下に（１４ｍｍＨｇ／５０°）濃縮して白色残渣を得た。固体を再度懸濁させ、次いで熱ＭｅＯＨ（２５００ｍｌ）に溶解し、周囲温度で１２時間放置した。白色のフワフワした沈殿物を濾別し、冷メタノールで濯いだ。濾液を濃縮し、再度結晶化させた。採取した沈殿物を最初のクロップと合わせ、真空乾燥器中４５ｍｍＨｇにて５５℃で２４時間乾燥させた。（Ｒ）−５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸の収量は１３８ｇ（純度＞９９％、理論の８６％）であった。
1H-NMR, DMSO-d6, (δ): 4.25 (d, 1H), 4.05 (d, 1H), 3.33 (s, 1H), 1.57 (s, 3H),
1.19 (s, 3H).
13C-NMR, DMSO-d6, (δ): 170.8, 74.4, 57.6, 51.8, 28.9, 27.9.
MS (m/z): 162.3 [M+1].
【０５８８】
機械撹拌機および温度計を装備した４Ｌ反応器中で、イオン交換水（２Ｌ）中リン酸二水素カリウム（４３ｇ、０．３１ｍ）およびリン酸水素二カリウム（１８８．７ｇ、１．０８ｍ）から、緩衝溶液を調製した。（Ｒ）−５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸（１０７ｇ、０．６７５ｍ）を加え、完全に溶解するまで撹拌した。溶液を氷浴中＋８℃に冷却した。別途調製したピリジン−３−スルホニルクロリド（１２４ｇ、０．６９５ｍ）のＤＣＭ（１２５ｍｌ）溶液を、激しく撹拌しながら１時間かけて反応器に滴下添加した。反応混合物のｐＨを監視し、４時間後ｐＨ＝５であることが分かり、固体の炭酸水素塩を加えることによりｐＨ＝６に合わせた。混合物を１８時間かけて周囲温度に加温した。希薄硫酸水溶液でｐＨを２に合わせ、１時間撹拌し、沈殿した黄色固体を濾別し、水で濯いで中性にした。固体のケーキを２Ｌ三角フラスコに移し、５分間時々撹拌しながらＤＣＭ（５００ｍｌ）に懸濁させ、再度濾別した。濾過ケーキをＤＣＭで洗浄し、空気乾燥させた。標題化合物である（Ｒ）−５，５−ジメチル−３−（ピリジン−３−イルスルホニル）チアゾリジン−４−カルボン酸の収量は、１４８．９ｇ（純度９８％、理論の７３％）であった。
1H-NMR, DMSO-d6, (δ): 9.05 (d, 1H), 8.89 (m, 1H), 8.32 (m, 1H), 7.69 (m, 1H),
4.68 (q, 2H), 4.14 (s, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
13C-NMR, DMSO-d6, (δ): 170.0, 154.3, 147.9, 135.8, 134.1, 124.8, 72.6, 54.3, 50.2, 29.4, 25.0.
MS (m/z): 303.2 [M+1].
【０５８９】
（実施例７０）
【化１２０】
2014210790.tif 000138
実施例６８の生成物（１．６５ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３５ｍｌ）溶液に、実施例６９の生成物（１．０６ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．７５ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（５．３ｍｌ）を加えた。均一の茶褐色溶液を窒素下７２時間撹拌した。有機反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチル（４０ｍｌ）に溶解し、１ＮのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３、およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、３（２．６７ｇ、９７％）をオレンジ色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．３６（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。
MS m/z=711, (M+H)+.
1H NMR (CDCl3) δ 9.09-9.08 (d, 1H), δ8.86-8.84 (m, 1H), δ 8.18-8.15 (m, 1H), δ 8.07-8.05 (m, 1H), δ 7.66-7.63 (d, 2H), δ 7.52-7.48 (m, 1H), δ 7.41-7.38
(d, 2H), δ 7.19-7.16 (m, 1H), δ 7.08-7.04 (m, 1H), δ 6.93-6.90 (d, 1H), δ 4.83-4.76 (q, 1H), δ 4.71 (s, 2H), δ 4.62-4.59 (d, 1H), δ 4.49-4.46 (d, 1H), 
δ 3.91 (s, 1H), δ 3.80 (s, 3H), δ 3.22-3.08 (m, 2H), δ 1.46 (s, 9H), δ 1.20-1.17 (d, 6H).
【０５９０】
（実施例７１）
【化１２１】
2014210790.tif 000139
実施例７０の生成物（２．６７ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２ｍｌ）溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２４５ｍｇ、５．９７ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を窒素下室温で終夜撹拌した。完了時、反応混合物を真空で濃縮し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ）に溶解し、１ＭのＨＣｌ溶液でｐＨ４に酸性化した。所望の生成物が白色固体として沈殿し、濾過し、Ｈ２Ｏで濯いで、標題化合物１．８７ｇ（７２％）を得た。
MS m/z=697, (M+H)+.
1H NMR (CD3OD) δ 9.02 (s, 1H), δ 9.80 (s, 1H), δ 8.47-8.44 (d, 1H), δ8.21-8.19 (d, 1H), δ 7.98-7.96 (d, 1H), δ 7.63-7.59 (m, 3H), δ 7.52-7.48 (m, 3H), δ 7.17-7.13 (m, 1H), δ 4.75 (s, 2H), δ 4.72-4.61 (m, 3H), δ 4.14 (s, 1H), δ
3.22-3.16 (m, 2H), δ 1.45 (s, 9H), δ 1.25-1.19 (d, 6H).
13C NMR (CD3OD) δ 169.9, 169.5, 168.9, 153.1, 152.8, 147.5, 142.8, 140.2, 136.6, 135.8, 134.0, 131.7, 129.9, 126.0, 124.2, 123.9, 117.8, 114.9, 81.8, 72.6, 5
4.1, 49.9, 41.3, 36.4, 28.5, 26.6, 23.4.
【０５９１】
（実施例７２）
【化１２２】
2014210790.tif 000140
実施例６６の生成物（５２ｇ、０．１０６ｍ）をＭｅＯＨ（４５０ｍｌ）にスラリー化し、水素化触媒（８．７ｇ、５％Ｐｄ／Ｃ、Ｄｅｇｕｓｓａ）を加え、更なる吸収が無くなるまで（約２時間）、混合物を水素雰囲気下（６０ｐｓｉ）に撹拌した。ＴＨＦ（１５０ｍｌ）を加えて沈殿した固体を溶解し、セライトのプラグを通して溶液を濾過し、ＤＣＭを用いてフィルターを濯いだ。濾液を蒸発乾固させ、ＤＣＭ（３００ｍｌ）に再度溶解し、再度ストリップした。この操作を２回繰り返した。泡沫状固体を高真空下に３時間保持した。標題化合物の収量は３８．３ｇ（理論の１０１％）であった。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.08 (m, 1H), 7.56 (AB q, 4H), 7.37 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 173.8, 154.6, 143.9, 141.0, 137.4, 131.5, 130.2, 126.1, 122.3, 118.0, 116.1, 81.4, 56.0, 40.6, 27.9.
MS (m/z): 299.3 [M-56], 355.4 [M+1], 377.4 [M+23].
【０５９２】
（実施例７３）
【化１２３】
2014210790.tif 000141
実施例７２の生成物（３８．３ｇ、０．１０６ｍと仮定）をＤＣＭ（５００ｍｌ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（２７ｇ、３０ｍｌ、０．２６６ｍ、２．５当量）、ＨＯＢｔ（１７．３ｇ、０．１２８ｍ、１．２当量）、および実施例６９の生成物（３３．８ｇ、０．１１２ｍ、１．０６当量）で順次処理した。得られた非均一溶液を氷浴中で＋４℃に冷却し、ＥＤＣ（２２．５ｇ、０．１１７ｍ、１．１当量）で一度に処理した。反応混合物を撹拌し、次の４時間をかけて、次いで更に１８時間周囲温度に加温した。溶媒をストリップし、残渣を酢酸エチル（１．２Ｌ）に溶解し、飽和炭酸水素塩水溶液（２×２５０ｍｌ）、水（２５０ｍｌ）、ブライン（３００ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発乾固させて、薄オレンジ色粘稠性油７６ｇ（＞＞１００％
）を得た。粗製の生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ７５Ｌ、酢酸エチル／メタノール（３％）混合物中）により精製した。純粋な生成物を含むフラクションを合わせ、蒸発させて、標題化合物５４ｇ（収率８３％）を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 10.37 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.87 (m, 1H), 8.19 (m, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.56 (AB q, 4H), 7.52 (m, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.06 (m, 2H), 4.83 (m, 1H), 4.58 (AB a, 2H), 3.96 (s, 1H), 3.19 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.22 (s, 3H), 1.18 (s, 3H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 169.7, 167.6, 153.9, 148.4, 143.8, 140.9, 135.8, 135.6, 132.9, 131.9, 130.2, 125.9, 123.8, 122.1, 118.0, 115.9, 82.8, 73.6, 60.3, 54.8, 53.7, 50.6, 37.8, 29.1, 27.8, 23.9, 14.1.
MS (m/z): 583.3[M-56], 639.4 [M+1], 661.3 [M+23].
【０５９３】
（実施例７４）
【化１２４】
2014210790.tif 000142
氷冷したトリフルオロ酪酸エチル（１５ｇ、８９ｍｍｏｌ）およびギ酸エチル（３６ｍＬ、４４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、Ｎ２下ＴＨＦ中１ＭのＫＯｔＢｕ溶液（１０７ｍｍｏｌ、１０７ｍＬ）を２５分かけて加えた。１５分後、氷浴を除去し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次いで更にギ酸エチル（１８ｍＬ、２２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を終夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を冷エーテル（１００ｍＬ）と冷水（３００ｍＬ）との間で分配した。濃ＨＣｌを用いて水相のｐＨを２に合わせた。生成物をジクロロメタン（１×１００ｍＬ、４５×７５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、濃縮して、標題化合物を濃厚油として得、これは放置すると固化した、１０．２ｇ（５８．５％）。
ＭＳ（ｍ／ｚ）＝１９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９４】
（実施例７５）
【化１２５】
2014210790.tif 000143
実施例７４の生成物（１０ｇ、５１ｍｍｏｌ）およびジエチルグアニジンスルフェート（８．３ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）溶液に、Ｎ２下ＥｔＯＨ中ＮａＯＥｔの２１％溶液（２０．７ｍＬ、５５．５ｍｍｏｌ）を１０分間かけて加えた。次いで反応混合物を５時間加熱還流させた。不均一溶液を冷却し、冷水（１００ｍＬ）に注ぎ入れて、均一溶液を得た。濃ＨＣｌおよび１ＮのＨＣｌを用いて溶液のｐＨをおよそ３．５に合わせた。固体が溶液から沈殿し、これを濾取した。薄黄褐色固体を水で洗浄し、空気乾燥させて、標題化合物２．９ｇ（２３％）を得た。
MS (m/z) = 250 (M + H)+.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.65 (br s, 1H), 3.55 (q, 4H), 3.30 (q, 2H), 1.25 (t, 6H).
【０５９５】
（実施例７６）
【化１２６】
2014210790.tif 000144
実施例７５の生成物（２．０ｇ、８．０２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１．５ｍＬ、８．８３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（．９８ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（３０ｍＬ）をフラスコに仕込んだ。混合物を０℃に冷却し、無水トリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ、８．８３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物は均一になり、０℃で３時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機相を０．２Ｎクエン酸で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、標題化合物２．８７ｇ（９４％）を茶褐色固体として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.28 (s, 1H), 3.65-3.52 (m, 4H), 3.29-3.19 (q, 2H),
1.22-1.17 (t, 6H).
【０５９６】
（実施例７７）
【化１２７】
2014210790.tif 000145
実施例７６の生成物（１．３ｇ、３．５ｍｍｏｌ）、Ｈ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＯ２）ＯｔＢｕ（１．１ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．９ｍＬ、５．３ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１４ｍＬ）溶液を、Ｎ２下終夜加熱還流させた。翌日更にＨ−Ｐｈｅ（ｐ−ＮＯ２）ＯｔＢｕ（０．８ｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、３日間還流を続けた。次いで反応混合物を冷却し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、有機部分を０．５ＮのＫＨＳＯ４（３×５０ｍＬ）、水（１×５０ｍＬ）、ブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、濃縮して、茶褐色がかったゴム状物を得た。粗製物をフラッシュクロマトグラフィー（５：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、標題化合物６４０ｍｇ（３８％）を金色ゴム状物として得た。ＴＬＣ：３：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．３０
MS (m/z) = 498 (M+H)+
1H NMR, (300 MHz, CDCl3) δ 8.19 (d, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.25 (d, 2H), 5.19 (br
d, 1H), 4.95 (q, 1H), 3.70 - 3.50 (m, 4 H), 3.45 - 3.25 (m, 2 H), 3.10 (q, 2H),
1.40 (s, 9 H), 1.05 (t, 6 H).
【０５９７】
（実施例７８）
【化１２８】
2014210790.tif 000146
実施例７７の生成物（６３５ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を無水ＥｔＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、これにＰｄ／Ｃ（１０重量％、３５ｍｇ）を加えた。反応物を水素化（４５ｐｓｉのＨ２）に２．５時間供し、その時点でＰｄ／Ｃ（１０重量％、５０ｍｇ）を加え、反応混合物を再度水素化（４５ｐｓｉのＨ２）に終夜供した。セライトのパッドを通して反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物４５２ｍｇ（７６％）を得た。
MS (m/z) = 468 (M+H)+
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.75 (s, 1 H), 6.90 (d, 2 H), 6.60 (d, 2 H), 5.05 (br d, 1 H), 4.80 (q, 1 H), 3.70 - 3.45 (m, 6 H), 3.10 - 2.90 (m, 4 H), 1.40 (s, 9 H), 1.15 (t, 6H).
【０５９８】
（実施例７９）
【化１２９】
2014210790.tif 000147
実施例７８の生成物（５９８ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）、２−クロロ−３−ニトロピリジン（２４３ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．６７ｍＬ、３．８３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液を、Ｎ２下加熱還流させた。翌日反応物を冷却し、更に２−クロロ−３−ニトロピリジン（４０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．１１ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１日間加熱還流させた。次いで反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解した。有機相を水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水洗液をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機抽出物を０．２Ｎクエン酸（３×２０ｍＬ）、水（１×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×２０ｍＬ）、ブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、ストリップして、オレンジ色ゴム状物を得た。４：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィー（Ｒｆ＝０．１４）により粗製の生成物を精製して、標題化合物６１０ｍｇ（８１％）を赤色油として得た。
MS (m/z) = 590 (M+H)+
1H NMR (300 MHz , CDCl3) δ 10.10 (s, 1H), 8.55 (d, 1H), 8.50 (m, 1H), 7.79 (s, 1 H), 7.75 (d, 2H), 7.15 (d, 2H), 6.80 (q, 1H), 5.10 (br d, 1 H), 4.90 (m, 1 H), 3.70 - 3.45 (m, 4 H), 3.25 (m, 2H), 3.10 (q, 2 H), 1.40 (s, 9H), 1.10 (t, 6 H).
【０５９９】
（実施例８０）
【化１３０】
2014210790.tif 000148
実施例７９の生成物（６１０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）の無水ＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０重量％、６０ｍｇ）を加えた。混合物を水素化（４５ｐｓｉのＨ２）に終夜供した。翌日、セライトを通して反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物５００ｍｇ（８７％）を得た。
MS (m/z) = 560 (M+H)+
1H NMR (300 MHz , CDCl3) δ 7.85 (d, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.20 (d, 2H), 7.05 (d,
2H), 7.00 (d, 1 H), 7.75 (m, 1 H), 6.20 (br s 1 H), 5.15 (br s, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.75 - 3.45 (m, 4 H), 3.40 (br s, 2H), 3.15 (m, 2H), 3.05 (q, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.15 (t, 6 H).
【０６００】
（実施例８１）
【化１３１】
2014210790.tif 000149
実施例８０の生成物（１４１ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（６２ｍｇ、０．３７８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）溶液を終夜撹拌した。翌日、更にＣＤＩ（３０ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を更に１日撹拌した。次いで反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に溶解し、有機部分を０．２Ｎクエン酸（３×５ｍＬ）、水（１×５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×５ｍＬ）、ブライン（１×５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、濃縮して、標題化合物６９ｍｇ（４７％）を泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
MS (m/z) = 586 (M+H)+
1H NMR (300 MHz , CDCl3) δ 8.20 (br s, 1 H), 8.05 (d, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.65
(d, 2 H), 7.90 (m, 3 H), 7.05 (m, 1 H), 5.15 (br d, 1H), 4.95 (m, 1H), 3.70 - 3.45 (m, 4 H), 3.25 (app d, 2 H), 3.10 (q, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.15 (t, 6 H).
【０６０１】
（実施例８２）
【化１３２】
2014210790.tif 000150
４，６−ジクロロ−５−アミノピリミジン（５．０ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３０ｍＬ）溶液に、Ｎａ２Ｓ・９Ｈ２Ｏ（７．４ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。次いで水（４０ｍＬ）を混合物に加え、溶液を減圧下に蒸発させておよそ６ｍＬにした。この溶液に濃ＨＣｌ（０．５ｍＬ）および水を加えると、生成物が沈殿した。溶液を濾過し、オレンジ色固体を水で洗浄し、乾燥させて、標題化合物４．３ｇ（８６％）を得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 5.84 (2 H, s), 7.79 (1 H, s), 14.37 (1H, br s)
MS(m/z): MH+ = 162.
【０６０２】
（実施例８３）
【化１３３】
2014210790.tif 000151
濃ＮＨ４ＯＨ（４ｍＬ）に溶解した実施例８２の生成物（４．３ｇ、２６ｍｍｏｌ）に、ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）を加えた。この溶液に、ラネーニッケル（過剰）を少しずつ加えた。反応物を室温で終夜撹拌し、次いで８０℃で２時間加熱した。セライトを通して混合物を濾過し、濾液を濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーにより粗製の生成物を精製して、標題化合物１．６ｇ（４７％）を黄色固体として得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 5.90 (2 H, s), 8.20 (2 H, s)
MS(m/z) MH+ = 130.
【０６０３】
（実施例８４）
【化１３４】
2014210790.tif 000152
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびＨＯＡｃ（０．５ｍＬ）中の実施例８３の生成物（０．５１ｇ、３．９ｍｍｏｌ）に、ＣＨ３ＣＨＯ（０．５２ｍＬ、９．２ｍｍｏｌ）を加えた。次いでＮａＢＨ３ＣＮ（５９０ｍｇ、９．２ｍｍｏｌ）を一度に加えた。反応物を室温で終夜撹拌し、更にＨＯＡｃ、ＣＨ３ＣＨＯ、およびＮａＢＨ３ＣＮを加えた。反応物を終夜撹拌し、濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃおよび飽和ＮａＨＣＯ３に溶解した。分離した水層をＥｔＯＡｃで逆抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮して残渣を得た。残渣をＭｅＯＨに溶解し、上述の通りにＨＯＡｃ、ＣＨ３ＣＨＯおよびＮａＢＨ３ＣＮで処理した。上記した手順を行った後、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカ上でのフラッシュクロ
マトグラフィーにより粗製の生成物を精製して、標題化合物０．３５ｇ（５７％）を黄色油として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.35 (3 H, q, J = 12 Hz), 3.29 (2 H, m), 4.21 (1H, bs), 8.04 (1 H, s), 8.36 (1H, s)
MS(m/z): MH+ = 158.
【０６０４】
（実施例８５）
【化１３５】
2014210790.tif 000153
ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した実施例８４の生成物（７０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）に、ＴＥＡ（９３μＬ）およびイソニコチノイルクロリド（０．１２ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３との間で分配した。分離した水層をＥｔＯＡｃで逆抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮して、標題化合物６７ｍｇ（５７％）を得、これを更には精製せずに使用した。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.26 (3 H), 3.65-3.69 (1 H), 4.21 (1H), 7.17 (2 H),
8.43 (1H), 8.54 (2 H), 8.86 (1 H) 注意: 全てのピークの幅広さが示すように、1H NMRは回転異性体の証拠を示す
MS(m/z): MH+ = 263.
【０６０５】
（実施例８６）
【化１３６】
2014210790.tif 000154
実施例８５の生成物（０．１１ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）および実施例７２の生成物（０．１３５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）のＩＰＡ（２．５ｍｌ）溶液に、ＤＩＥＡ（０．３５ｍｌ、１．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を封管中１３０℃で２日間撹拌した。粗製の混合物を濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨの溶媒濃度勾配でフラッシュカラムクロマトグラフィーにより油を精製して、標題化合物を油として得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.16 (1.2 H, m), 1.26-1.31 (1.8 H, m), 1.50-1.53 (9
H, d, J = 9 Hz), 3.0 (1 H, m), 3.2 (0.8 H, m), 3.36 (1.2 H, m), 4.12-4.18 (1.2 H, m), 4.96-5.10 (.8 H, m), 5.80-5.95 (1 H, m), 6.93-6.96 (1 H, m), 7.07 (1 H, m), 7.31-7.45 (5 H, m), 7.66-7.75 (3 H, m), 8.06 (1 H, m), 8.44-8.51 (2 H, m); HPLC/MS: 1.29分の単一ピーク, MH+= 581.
【０６０６】
（実施例８７）
【化１３７】
2014210790.tif 000155
ＭｅＯＨ（７ｍＬ）中の２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２．０ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）に、Ｎ２下０℃でＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、２５ｍＬ）を滴下添加した。添加完結後、反応混合物を０℃で１５分間撹拌した。次いでジエチルアミン（５ｍＬ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃとＨ２Ｏとの間で分配した。有機層を乾燥させ、濃縮して残渣を得、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるシリカ上でのフラッシュクロマトグラフィーによりこれを精製して、標題化合物を灰白色固体として得た（１．１ｇ、４．９ｍｍｏｌ、収率４７％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.26 (6H, t, J = 6.6 Hz), 3.70 (4 H, m), 4.08 (3 H,
s), 9.01 (1H, s)
HPLC/MS: MH+ = 227.
【０６０７】
（実施例８８）
【化１３８】
2014210790.tif 000156
ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（１：１、２０ｍＬ）中の実施例８７の生成物（１．１ｇ、４．９ｍｍｏｌ）に、パール振盪器中Ｐｄ／Ｃ（５％Ｄｅｇｕｓｓａ、０．５ｇ）およびＨ２（５０ｐｓｉ）で終夜還元した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下に濃縮して、標題化合物を固体として得た（０．８５ｇ、４．３ｍｍｏｌ、収率８８．５％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.18 (6H, t, J = 6.9 Hz), 3.03 (2 H, br), 3.57 (6H,
t, J = 6.9 Hz), 3.96 (3H, s), 7.71 (1H, s)
HPLC/MS: MH+ = 197.
【０６０８】
（実施例８９）
【化１３９】
2014210790.tif 000157
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）およびＴＥＡ（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）中の実施例８８の生成物（０．８５ｇ、４．３ｍｍｏｌ）に、イソニコチニルクロリドＨＣｌ塩（１．１３ｇ、６．３ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、ＴＬＣは出発物を示さなかった。混合物をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３との間で抽出した。水層をＥｔＯＡｃで２回洗浄した。合
わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮して、標題化合物を茶褐色固体として得た（１．３ｇ、４．３ｍｍｏｌ、収率１００％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.20 (6H, t, J = 6.9 Hz), 3.60 (4 H, q, J = 6.9 Hz), 3.96 (3 H, s), 7.72 (2H, d, J = 6.0 Hz), 7.75 (1H, bs), 8.80 (2H, d, J = 6.0 Hz), 8.89 (1H, s)
HPLC/MS: MH+ = 302.
【０６０９】
（実施例９０）
【化１４０】
2014210790.tif 000158
ＴＨＦ（１ｍＬ）中の実施例８９の生成物（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）に、ＫＯｔＢｕ（ＴＨＦ中１Ｍ、０．５ｍＬ）を、続いてＥｔＩ（４０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。ＴＬＣは、出発物が消失していることを示した。混合物をＥｔＯＡｃとＨ２Ｏとの間で分配した。水層をＥｔＯＡｃで洗浄した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。乾燥させ、濃縮して、標題化合物（９０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、８３％）を得、これを更には精製せずに使用した。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.10 (9H, m), 3.47 (5 H, m), 3.92 (1 H, m), 7.14 (2H, d, J = 6.0 Hz), 7.78 (1H, bs), 8.44 (2H, d, J = 6.0 Hz)
HPLC/MS: MH+ = 330.
【０６１０】
（実施例９１）
【化１４１】
2014210790.tif 000159
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の実施例９０の生成物（２００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）に、ＥｔＳＮａ（６６ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃で１時間加熱した。ＬＣ／ＭＳは、出発物がまだ存在していることを示した。更にＮａＳＥｔ（６６ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を更に２時間加熱した。ＬＣ／ＭＳは、生成物のみを示した。ＤＭＦを減圧下に除去し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）を、続いて濃ＨＣｌ（０．１３２ｍＬ）を加えた。溶媒を蒸発させると残渣が得られた。ＥｔＯＨに溶解し、濾過した。濾液を濃縮して、標題化合物（１９０ｍｇ、１００％）を得、これを更には精製せずに使用した。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.24 (9H, m), 3.60 (4 H, m), 3.60-4.00 (2 H, br), 8.12 (3H, d, J = 5.7 Hz), 8.92 (2H, d, J = 5.7 Hz)
HPLC/MS: MH+ = 316.
【０６１１】
（実施例９２）
【化１４２】
2014210790.tif 000160
ＰＯＣｌ３（３ｍＬ）中の実施例９１の生成物（７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）に、室温でジエチルアニリン（３０μＬ）を加えた。反応混合物を１００℃に３０分間加熱した。次いで濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃとＨ２Ｏとの間で分配した。有機層をＨ２Ｏで２回洗浄した。次いで乾燥させ、濃縮して、標題化合物（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、６８％）を得、更には精製せずに次の反応に使用した。
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝３３４
【０６１２】
（実施例９３）
【化１４３】
2014210790.tif 000161
実施例９２の生成物（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）および実施例７２の生成物（６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＩＰＡ（０．７５ｍｌ）溶液に、ＤＩＥＡ（０．１５ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を封管中１３０℃で７日間撹拌した。粗製の混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣおよびシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製して、灰白色固体（１０ｍｇ）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.10-1.30 (9H, m), 1.48 (4.5H, s), 1.51 (4.5H, s), 2.80-3.38 (3H, m), 3.53 (4H, m), 4.05-4.30 (1H, m), 4.83 (0.5H, m), 4.96 (0.5H, m), 5.15-5.50 (1H, m), 6.95-7.10 (2H, m), 7.25-7.50 (5H, m), 7.69 (0.5H, d, J = 8.4 Hz), 7.76 (0.5H, d, J = 8.4 Hz), 8.08 (1H, d, J = 5.1 Hz), 8.51 (2H, m), 8.83 (0.5H, br), 8.95 (0.5H, br);
HPLC/MS: MH+ = 652.
【０６１３】
（実施例９４）
【化１４４】
2014210790.tif 000162
化合物２５（２０ｇ、０．１１ｍｏｌ）をＮ２下ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）に溶解した。反応混合物を０℃に冷却した。トリエチルアミン（１８．１２ｍＬ、０．１３ｍｏｌ）を加え、続いて無水トリフルオロ酢酸（１８．１４ｍＬ、０．１３ｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応物を室温に終夜加温した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解した。有機相をＨ２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、２９（２９．７ｇ、９６％）を黄色固体として得た。
1H NMR (CDCl3) δ 3.64-3.60 (m, 2H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.49-3.45 (m, 4H), 1.44 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3) δ 155.7 (JC-F=36 Hz), 154.3, 116.4 (JC-F=288 Hz), 80.8, 45.7,
43.3, 28.3.
【０６１４】
化合物２９（２９．２６ｇ、０．１０ｍｏｌ）を、４ＮのＨＣＬのジオキサン溶液（２００ｍＬ）を含む５００ｍＬフラスコに０℃で少しずつ加えた。反応物を氷浴中４時間撹拌し、その際ＴＬＣ（３：１ヘキサン：酢酸エチル）は１００％生成物に転化していることを示した。反応混合物を真空で濃縮し、エチルエーテル（５００ｍＬ）で処理した。生成物を濾過し、乾燥させて、３０（２２．５ｇ、９９％）を白色のモノ塩酸塩として得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 3.82-3.79 (m, 4H), 3.53 (s, 1H), 3.18-3.16 (m, 4H).
13C NMR (DMSO-d6) δ 154.3 (JC-F=35 Hz), 115.9 (JC-F=289 Hz), 66.1, 42.0, 41.9, 41.5.
【０６１５】
２５０ｍＬのフラスコに、３０（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）、および飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）を仕込んだ。反応混合物を０℃で１５分間激
しく撹拌した。撹拌を止め、層を分離させた。２．０Ｍホスゲンのトルエン溶液（９ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、温度を０℃に維持しながらこれを３０分間激しく撹拌した。層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、真空で再度濃縮して、３１（１．０ｇ、９２％）を白色固体として得た。
MS (m/z) 245, (M+H)+.
1H NMR (CDCl3) δ 3.80-3.68 (m, 8H).
13C NMR (CDCl3) δ 155.9 (JC-F=37 Hz), 148.7 (JC-F=12 Hz), 116.3 (JC-F=289 Hz), 48.3, 47.8, 45.7, 45.3, 45.1, 42.9, 42.7.
【０６１６】
２５ｍＬのフラスコに、２４（５．９７ｇ、０．０１１ｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．３４ｇ、０．０１１ｍｏｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（２２ｍＬ）を仕込んだ。トリエチルアミン（２．４ｍＬ、０．０１７ｍｏｌ）を、続いて３１（４．２ｇ、０．０１７ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２０時間加熱還流させた。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、ピンク色泡状物９．３ｇを得た。粗製物をフラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサンから７５％酢酸エチル／ヘキサンの濃度勾配）により精製して、３２（６．１ｇ、７６％）を薄ピンク色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．１４（１：１ヘキサン：酢酸エチル）。
MS (m/z) 730, (M+H)+.
1H NMR (CDCl3) δ 9.08-9.07 (m, 1H), 8.87-8.85 (m, 1H), 8.16-8.14 (m, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.25-7.22 (d, 2H), 7.03-7.00 (d, 2H), 6.91-6.88 (d, 1H), 4.78-4.70 (q, 1H), 4.60-4.44 (dd, 2H), 3.88 (s, 1H), 3.75-3.60 (m, 8H), 3.09-3.06 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.18 (s, 3H), 1.16 (s, 3H).
【０６１７】
ＭｅＯＨ（９０ｍＬ）に溶解した３２（６．１１ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（５．７９ｇ、４２ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１０ｍＬ）溶液を加えた。反応物を室温で１５分間撹拌し、次いで真空で濃縮した。残渣を濾過し、多量のＨ２Ｏで洗浄して、３３（４．６５ｇ、８８％）を白色固体として得た。Ｒｆ＝０．０８（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。
MS (m/z) 634, (M+H)+.
1H NMR (CDCl3) δ 9.09-9.08 (m, 1H), 8.87-8.85 (m, 1H), 8.16-8.14 (m, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.23-7.20 (d, 2H), 7.03-7.00 (d, 2H), 6.91-6.88 (d, 1H), 4.78-4.70 (q, 1H), 4.59-4.46 (dd, 2H), 3.89 (s, 1H), 3.65-3.50 (m, 4H), 3.09-3.06 (m, 2H), 2.92-2.88 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.19 (s, 3H), 1.17 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3) δ 170.1, 167.9, 154.5, 153.9, 150.7, 148.8, 136.0, 133.4, 133.2, 130.6, 124.1, 121.9, 83.0, 73.9, 55.0, 53.7, 50.7, 46.0, 45.7, 45.0, 37.9, 29.3, 28.0, 24.0.
【０６１８】
２５０ｍＬのフラスコに、３３（２．５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）、および飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）を仕込んだ。反応混合物を０℃で１５分間激しく撹拌した。撹拌を止め、層を分離させた。２．０Ｍホスゲンのトルエン溶液（７．９ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を反応混合物に素早く加え、温度を０℃に維持しながらこれを６０分間激しく撹拌した。層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を０．２Ｎクエン酸、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、白色泡状物２．８ｇ（１００％）を得た。１００％酢酸エチルで溶離するシリカプラグを通して粗製物を精製して、４０（２．２ｇ、７８％）を白色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．４３（３：１酢酸エチル：ヘキサン）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.09-9.08 (m, 1H), 8.87-8.85 (m, 1H), 8.16-8.14 (d, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.25-7.22 (d, 2H), 7.03-7.01 (d, 2H), 6.90-6.88 (d, 1H), 4.78-4.
70 (q, 1H), 4.60-4.45 (dd, 2H), 3.88 (s, 1H), 3.79-3.65 (m, 8H), 3.10-3.07 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.18 (s, 3H), 1.17 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3) δ 169.9, 167.9, 154.1, 153.6, 150.2, 148.5, 136.1, 133.8, 130.6, 124.2, 121.7, 82.9, 73.7, 54.8, 53.8, 50.6, 48.3, 45.8, 37.7, 29.2, 27.9, 23.9.
【０６１９】
（実施例９５）
［Ａ．カルバメート連結ビス−ＰＥＧコンジュゲートｔ−ブチルエステルの合成］
【化１４５】
2014210790.tif 000163
ＷＯ９２／１６５５５を修飾した方法を元にカルバメート連結コンジュゲートを調製し、これは参照により本明細書に援用される。それゆえ、６ｋＤａのＰＥＧ−ジオール（５００ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）を最少量のＣＨ２Ｃｌ２（０．１ｍＬ）に溶解した。これに２．０Ｍホスゲンのトルエン溶液（０．６ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いで真空で濃縮して、６ｋＤａのＰＥＧビス−クロロホルメート５００ｍｇ（１００％）を白色固体として得た。
【０６２０】
３３（２１１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）溶液（実施例９４参照）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解した６ｋＤａのＰＥＧビス−クロロホルメート（５００ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）に加えた。トリエチルアミン（１１μＬ、０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した。２％架橋ポリスチレンスルホン酸樹脂（４１０ｍｇ）を加え、反応容器を２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、白色固体５００ｍｇ（８７％）を得た。一部の物質（２４６ｍｇ）をＨＰＬＣにより精製して、６ｋＤａのＰＥＧビス−コンジュゲートｔ−ブチルエステル１５６ｍｇを白色固体として得た。ＨＰＬＣは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝９．６
５５分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.07 (bs, 2H), 8.86-8.84 (m, 2H), 8.18-8.15 (d, 2H), 7.53-7.48 (m, 2H), 7.22-7.19 (d, 4H), 7.03-6.99 (d, 4H), 6.86-6.83 (d, 2H), 4.73-4.70 (m, 2H) 4.58-4.44 (dd, 4H), 4.27-4.24 (m, 4H), 3.62 (bs, 621H), 3.40-3.37 (m, 6H), 3.07-3.05 (m, 4H), 1.41 (s, 18H), 1.20-1.16 (d, 12H).
【０６２１】
［Ｂ．カルバメート連結ビス−ＰＥＧコンジュゲートの合成］
精製した６ｋＤａのカルバメート連結ビス−ＰＥＧコンジュゲートｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）をギ酸（５ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱した。反応物を真空で濃縮した。残渣を水に溶解し、真空で濃縮し、水に再度溶解し、凍結乾燥させて、６ｋＤａのカルバメート連結ビス−ＰＥＧコンジュゲートカルボン酸１００ｍｇ（１００％）を白色粉体として得た。ＨＰＬＣは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝７．６３分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.06 (bs, 2H), 8.84-8.83 (m, 2H), 8.17-8.14 (d, 2H), 7.53-7.49 (m, 2H), 7.24-7.21 (d, 4H), 7.02-6.99 (d, 4H), 6.94-6.92 (d, 2H), 4.81-4.79 (m, 2H), 4.57-4.48 (dd, 4H), 4.28-4.25 (m, 4H) 3.64 (bs, 621H), 3.41-3.38 (m, 6H), 3.23-3.08 (m, 4H), 1.23-1.18 (d, 12H).
【０６２２】
（実施例９６）
［Ａ．カルバメート連結オクタ−ＰＥＧコンジュゲートｔ−ブチルエステルの合成］
【化１４６】
2014210790.tif 000164
上記実施例９５に使用した手順に従い、オクタ−ペグ化ハブ分子を用いることにより、標題化合物を調製した。
【０６２３】
（実施例９７）
【化１４７】
2014210790.tif 000165
ニトロ−フェニルエステル（１０１）
【化１４８】
2014210790.tif 000166
１００（１００ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェノール（２４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．７ｍＬ）溶液を氷浴中冷却した。ＥＤＣ（３３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（０．７ｍＬ）懸濁液を加え、反応物を０℃で４時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、０．２Ｎクエン酸で洗浄した。有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、１０１（９０ｍｇ、９６％）を得、これを直ちに使用した。
1H NMR (CDCl3) δ 9.07 (bs, 1H), 8.84-8.83 (d, 1H), 8.28-8.25 (d, 2H), 8.16-8.14 (d, 1H), 8.09-8.07 (d, 1H), 7.65-7.63 (d, 2H), 7.51-7.47 (dd, 1H), 7.41-7.39 (d, 2H), 7.36-7.35 (d, 2H), 7.12-7.07 (m, 1H), 6.95-6.92 (d, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.82-4.76 (m, 1H), 4.62-4.45 (dd, 2H), 3.91 (s, 1H), 3.18-3.12 (m, 2H), 1.44 (s,
9H), 1.18-1.16 (d, 6H).
【化１４９】
2014210790.tif 000167
【０６２４】
［４０ｋＤａのＢｏｃ−保護化ＰＥＧジアミン］
３０ｋＤａのＰＥＧジアミン（１ｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）および５ｋＤａのＢｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステル（０．６７ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（０．１１６ｍＬ、０．６７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、粗製の生成物を得た。ＨＰＬＣ方法Ｂに従い残渣を精製して、４０ｋＤａのＢｏｃ−保護化ＰＥＧジアミン０．４６ｇを白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、生成物が純度＞９６％であると判定した（保持時間＝７．６分）。
1H NMR (CDCl3) δ 6.75 (bs, 2H), 5.15 (bs, 2H)3.64 (s, 2940H, PEG), 3.33-3.31 (m, 10H), 2.47-2.43 (m, 4H), 1.44 (s, 18H).
【化１５０】
2014210790.tif 000168
【０６２５】
［４０ｋＤａのＰＥＧジアミン］
４０ｋＤａのＢｏｃ−保護化ＰＥＧジアミン（０．２ｇ、０．００５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（４ｍＬ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、粗製の４０ｋＤａのＰＥＧジアミン２００ｍｇ（１００％）をベージュ色残渣として得た。ＨＰＬＣ方
法Ｃは、生成物が純度＞９６％であると判定した（保持時間＝６．５分）。
1H NMR (CDCl3) δ 7.85 (bs, 1H), 6.75 (bs, 1H), 3.64 (s, 2432H, PEG), 3.34-3.32 (m, 10H), 2.47-2.45 (m, 4H).
【０６２６】
［ｔ−ブチルエステル（１０２）］
４０ｋＤａのＰＥＧジアミン（０．２ｇ、０．００５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（１７μＬ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、続いて化合物１０１（０．０８２ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。更にジイソプロピルエチルアミン（１７μＬ）を加え、反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、粗製物１０２（３００ｍｇ、１５０％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、生成物が純度＞７０％であると判定した（保持時間＝８．９分）。粗製の生成物をそのまま使用した。
【０６２７】
［コンジュゲート１０３］
１０２（０．３ｇ、０．００７ｍｍｏｌ）をギ酸（５ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱した。反応物を真空で濃縮し、ＨＰＬＣ方法Ａに従い精製して、１０３（０．１４ｇ、６８％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝７．３分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.05 (bs, 2H), 8.82-8.81 (m, 2H), 8.17-8.14 (d, 2H), 8.05-8.04 (d, 2H), 7.65-7.58 (m, 4H), 7.54-7.48 (m, 2H), 7.41-7.34 (d, 4H), 7.10-7.05 (m, 2H) 6.95-6.93 (d, 2H), 4.90 (m, 2H), 4.63-4.49 (m, 6H), 3.64 (bs, 3042H, PEG), 3.35-3.29 (m, 6H), 3.22 (m, 5H), 2.45-2.41 (t, 4H), 1.79-1.74 (m, 4H), 1.29-1.27 (d, 12H).
【０６２８】
（実施例９８）
【化１５１】
2014210790.tif 000169
ポリマーの合成：
【化１５２】
2014210790.tif 000170
【０６２９】
［４０ｋＤａのＢｏｃ−保護化ＰＥＧテトラ−アミン］
２０ｋＤａのＰＥＧテトラ−アミン（０．５ｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）および５ｋＤａのＢｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステル（１ｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（０．０８７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した。２％架橋ポリスチレンスルホン酸樹脂（１．１７ｇ）を加え、反応容器を２時間撹拌した。混合物を濾過し、真空で濃縮して、粗製の生成物１．４ｇをベージュ色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｂに従い残渣を精製して、４０ｋＤａのＢｏｃ−保護化ＰＥＧテトラ−アミン０．４４ｇ（４４％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、生成物が純度＞９６％であると判定した（保持時間＝８．４分）。
1H NMR (CDCl3) δ 6.75 (bs, 1H), 5.15 (bs, 1H), 3.64 (s, 2970H, PEG), 3.33-3.29 (m, 15H), 2.46-2.42 (t, 8H), 1.79-1.75 (m, 8H), 1.44 (s, 36 H).
【０６３０】
［４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−アミン］
４０ｋＤａのＢｏｃ−保護化ＰＥＧテトラ−アミン（０．１ｇ、０．００２５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（４ｍＬ）に溶解し、室温で１．５時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−アミン１２０ｍｇを透明残渣として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、生成物が純度＞９６％であると判定した（保持時間＝６．２分）。
1H NMR (CDCl3) δ 7.39 (bs, 1H), 6.75 (bs, 1H), 4.49-4.48 (m, 4H), 3.64 (s, 3253H, PEG), 3.35-3.33 (m, 15H), 2.49-2.46 (m, 8H), 1.80-1.75 (m, 8H).
【０６３１】
［ｔ−ブチルエステル（１０４）］
４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−アミン（０．１ｇ、０．００２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（９μＬ、０．０５ｍｍｏｌ）を加え、続いて化合物１０１（８２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。更にジイソプロピルエチルアミン（９μＬ）を加え、反応物を室温で４８時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、粗製物１０４（１１０ｍｇ）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、生成物が純度＞８０％であると判定した（保持時間＝１０．９分）。
【０６３２】
［コンジュゲート１０５］
１０４（０．１ｇ、０．００２４ｍｍｏｌ）をギ酸（５ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱した。反応物を真空で濃縮し、ＨＰＬＣ方法Ａに従い精製して、１０５（０．０５ｇ、４８％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝７．６分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.06 (bs, 4H), 8.83-8.82 (m, 4H), 8.20-8.17 (d, 4H), 8.05-8.03 (d, 4H), 7.63-7.61 (m, 8H), 7.53-7.49 (m, 4H), 7.42-7.33 (m, 8H), 7.09-7.05 (m, 4H) 6.70 (m, 4H), 4.84 (m, 4H), 4.62-4.50 (m, 12H), 3.64 (bs, 2357H, PEG), 3.36-3.29 (m, 12H), 2.46-2.42 (t, 8H), 1.79-1.74 (m, 8H), 1.30-1.25 (m, 24H).
【０６３３】
（実施例９９）
【化１５３】
2014210790.tif 000171
【０６３４】
［ｔ−ブチルエステル（１０６）］
４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−アミン（３７ｍｇ、０．０００９２５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．５ｍｇ、０．００３７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（３μＬ、０．０１９ｍｍｏｌ）を加え、続いて４０（２６ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を加えた。更にトリエチルアミン（３μＬ）を加え、反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、粗製物１０６（３４ｍｇ）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、生成物が純度＞８０％であると判定した（保持時間＝１０．９分）。
【０６３５】
［コンジュゲート１０７］
１０６（３４ｍｇ、０．０００８ｍｍｏｌ）をギ酸（４ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱した。反応物を真空で濃縮し、ＨＰＬＣ方法Ａに従い精製して、１０７（１７ｍｇ、５０％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝７．６分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.06 (bs, 4H), 8.86 (bs, 4H), 8.17-8.15 (d, 4H), 7.52 (d, 4H), 7.26-7.23 (d, 8H), 7.02-6.99 (d, 8H), 6.72 (m, 4H), 5.69 (m, 4H), 4.80 (m, 4H), 4.60-4.47 (dd, 8H), 3.64 (bs, 1602H, PEG), 3.36-3.30 (dd, 8H), 3.16 (m, 8H), 2.46-2.42 (t, 8H), 1.24 (bs 24H).
【０６３６】
（実施例１００）
【化１５４】
2014210790.tif 000172
【０６３７】
［４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−クロロホルメート］
４０ｋＤａの４−アームＰＥＧアルコール（０．２ｇ、０．００５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）に溶解した。これに２．０Ｍホスゲンのトルエン溶液（０．１５ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−クロロホルメート２００ｍｇを白色固体として得た。
【０６３８】
［ｔ−ブチルエステル（１０８）］
４０ｋＤａのＰＥＧテトラ−クロロホルメート（０．２ｇ、０．００５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解した。これに３３（６３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、続いてトリエチルアミン（３．５μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で７２時間撹拌した。反応物を真空で濃縮して、１０８（２７０ｍｇ）を白色固体として得た。
【０６３９】
［コンジュゲート１０９］
１０８（０．２６ｇ、０．００６ｍｍｏｌ）をギ酸（５ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱した。反応物を真空で濃縮し、ＨＰＬＣ方法Ａに従い精製して、１０９（０．１０５ｇ、４２％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝８．３分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.06 (bs, 4H), 8.85-8.84 (m, 4H), 8.17-8.14 (d, 4H), 7.53-7.49 (m, 4H), 7.26-7.22 (d, 8H), 7.01-6.98 (d, 8H), 4.81-4.78 (m, 4H), 4.59-4.46 (dd, 8H), 4.28-4.35 (m, 8H), 3.64 (bs, 3872H, PEG), 3.15-3.13 (m, 8H), 1.24-1.19 (m, 24H).
【０６４０】
（実施例１０１）
【化１５５】
2014210790.tif 000173
［ｔ−ブチルエステル（１１１）］
４０ｋＤａの３−アームＰＥＧアルコール（０．２５ｇ、０．００６２５ｍｍｏｌ）、１１０（０．０４ｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（０．０２５ｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５ｍＬ）からの共沸蒸留により乾燥させた。容量の半量を留去（２．５ｍＬ）し、混合物を室温に冷却した。ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）を加えて、反応物を均一にした。ジエチルアゾジカルボキシレート（０．０１５ｍＬ、０．０９４ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応物を４８時間撹拌した。ＨＰＬＣ方法Ｃは、出発のＰＥＧアルコールが完全に消失していることを示した。反応物を真空で濃縮して、
ｔ−ブチルエステル１１１を白色固体として得た。
【０６４１】
［コンジュゲート１１２］
１１１（０．２ｇ、０．００５ｍｍｏｌ）をギ酸（３ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱した。反応物を真空で濃縮し、ＨＰＬＣ方法Ａに従い精製して、１１２（０．１ｇ、４８％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９９％であると判定した（保持時間＝８．１分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.08 (bs, 3H), 8.84 (bs, 3H), 8.18-8.16 (d, 3H), 8.02-8.00 (d, 3H), 7.67-7.61 (m, 6H), 7.47-7.38 (m, 9H), 7.08-7.04 (m, 3H), 6.91 (m, 3H), 4.88 (m, 3H), 4.62-4.49 (dd, 6H), 4.13 (m, 6H), 3.64 (bs, 5919H PEG), 3.23 (m, 6H), 1.25-1.24 (d, 18H).
【０６４２】
以下のコンジュゲートを合成するために同様の方法を使用した：
【０６４３】
（実施例１０２）
【化１５６】
2014210790.tif 000174
１１２と同様の方法を用いて、４０ｋＤａの４−アームＰＥＧアルコールを１１０にカップリングさせ、脱保護して、最終生成物を得た。ＨＰＬＣ方法Ａに従い生成物を精製した。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９５％であると判定した（保持時間＝７．５〜８．１分）。
1H NMR (CDCl3) δ 9.08 (bs, 4H), 8.84 (bs, 4H), 8.18-8.16 (d, 4H), 8.02-8.00 (d, 4H), 7.67-7.61 (m, 8H), 7.47-7.38 (m, 12H), 7.08-7.04 (m, 4H), 6.91 (m, 4H), 4.88 (m, 4H), 4.62-4.49 (dd, 8H), 4.13 (m, 8H), 3.64 (bs, 10101H PEG), 3.23 (m, 8H), 1.25-1.24 (d, 24H).
【０６４４】
（実施例１０３）
【化１５７】
2014210790.tif 000175
式中、それぞれのｎは独立して、ｎの総計が約１００から１３６０となるような整数である。実施形態において、それぞれのｎは独立して、１１５のコンジュゲートが約４０〜４５ｋＤａの分子量を有する、充分な量の［−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−］繰り返し単位があるような整数である。
１１２と同様の方法を用いて、４０ｋＤａの３−アームＰＥＧアルコールをｔ−ブチルエステル１１４（下記に示す）にカップリングさせ、脱保護して、最終生成物を得た。ＨＰＬＣ方法Ａに従い生成物を精製した。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９５％であると判定した（保持時間＝７．３分）。
1H NMR (CDCl3) δ 8.66 (bs, 3H), 8.44 (bs, 3H), 8.04-8.02 (d, 3H), 7.75- 7.30 (m, 24H), 7.10-7.06 (m, 3H), 6.93 (s, 3H), 5.60-5.50 (m, 3H), 4.15 (m, 6H), 3.66
(bs, 4270H PEG), 3.00 (m, 3H), 3.40-3.20 (m, 6H), 1.27 (d, 9H).
【化１５８】
2014210790.tif 000176
【０６４５】
（実施例１０４）
【化１５９】
2014210790.tif 000177
【０６４６】
［ｔ−ブチルエステル（１１７）］
４０ｋＤａの３−アームＰＥＧアルコール（０．００６２５ｍｍｏｌ）、１１６（０．０５６ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（０．０９４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５ｍＬ）からの共沸蒸留により乾燥させる。容量の半量を留去（２．５ｍＬ）し、混合物を室温に冷却する。ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）を加えて、反応物を均一にする。ジエチルアゾジカルボキシレート（０．０９４ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応物を４８時間撹拌する。反応物を真空で濃縮して、ｔ−ブチルエステル１１１を得る。
【０６４７】
［コンジュゲート１１８］
１１８（０．００５ｍｍｏｌ）をギ酸（３ｍＬ）に溶解し、４０℃で２４時間加熱する。反応物を真空で濃縮し、ＨＰＬＣ方法Ａに従い精製して、１１２を得る。
【０６４８】
実施例６５〜１０４およびスキーム５〜１９ならびに本明細書に記載したＤおよびＥに従い、表９および１０における以下のコンジュゲートを調製する。
【０６４９】
【表１７Ａ】
2014210790.tif 000178
【表１７Ｂ】
2014210790.tif 000179
【化１６０】
2014210790.tif 000180
式中、それぞれの構造において、全てのｐの合計は１００から１３６０である。
【０６５０】
【表１８Ａ】
2014210790.tif 000181
【表１８Ｂ】
2014210790.tif 000182
【化１６１】
2014210790.tif 000183
【化１６２】
2014210790.tif 000184
【０６５１】
（実施例１０５）
【化１６３】
2014210790.tif 000185
水酸化ナトリウム（１０ｇ、０．２５ｍ）を水（３００ｍｌ）に溶解する。この溶液に４−ニトロフェニルアラニン（５０．３ｇ、０．２２ｍ）を加え、完全に溶解するまで撹拌する。得られた溶液に炭酸ナトリウム（２８．８ｇ、０．２６ｍ）を加え、撹拌懸濁液を氷浴中で＋８℃に冷却する。クロロギ酸ベンジル（４４．７ｇ、０．２６ｍ）を激しく撹拌しながら、＋６℃から＋９℃の範囲に内温を維持しながら滴下添加する。混合物を＋６℃で更に１時間撹拌し、分液漏斗に移し、エーテル（２×１５０ｍｌ）で洗浄する。水相を大きな三角フラスコ（２Ｌ）に仕込み、希薄ＨＣｌ水溶液を用いてｐＨ＝２に注意深く酸性化し、酢酸エチル（４×５００ｍｌ）で抽出する。合わせた抽出物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。溶液を濾過し、濾液を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（１５０ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（５００ｍｌ）で希釈する。結晶物を濾別し、冷溶媒で濯ぎ、空気乾燥させて、Ｃｂｚ−４−ニトロフェニルアラニン７５ｇ（収率９９．５％）を得る。
1H-NMR, DMSO-d6, (δ): 12.85 (bs, 1H), 8.12 (d, 2H, J=9Hz), 7.52 (d, 2H, J=9Hz), 7.30 (m, 5H), 4.95 (s, 2H), 4.28 (m, 1H), 3.32 (bs, 1H), 3.10 (m, 2H).
13C-NMR (δ): 173.1, 156.3, 146.6, 137.3, 130.8, 128.5, 128.0, 127.8, 123.5, 65.6, 55.1, 36.6.
MS (m/z): 367.1 [M+23].
【０６５２】
Ｃｂｚ−４−ニトロフェニルアラニン（７５ｇ、０．２２ｍ）をジオキサン（３００ｍｌ）に溶解する。得られた撹拌溶液をドライアイス浴中で−２０℃（内温）に冷却する。液化イソブチレン（およそ２９０ｍｌ）を加え、続いて濃硫酸（３５ｍｌ）を等量に３分割し、３０分間隔で加える。酸の添加は極めて大きな発熱工程であり、相当程度の重合を伴う。効率的な機械撹拌がこの段階で重要である。得られた混合物を２０時間撹拌し、周囲温度に加温し、次いで飽和炭酸ナトリウム水溶液（２Ｌ）に注意深く注ぎ入れ、酢酸エチル（６００ｍｌ）で希釈する。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（２×２００ｍｌ）で抽出する。合わせた抽出物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶液を濾過し
、蒸発乾固させる。残渣を酢酸エチル／ヘキサン混合物（５００ｍｌ、１：１）に溶解し、シリカゲルのプラグ（約２×２ｉｎ）を通して濾過する。シリカを更なる量の同一溶媒（合計２Ｌ）で濯ぎ、濾液を蒸発させて、完全に保護化された４−ニトロフェニルアラニン７３ｇ（２ステップ後８３％）を粘稠性油として得る。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.12 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.36 (m, 7H), 5.35 (m, 1H), 5.10 (m, 2H), 4.57 (m, 1H), 3.31 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 169.7, 155.3, 146.9, 143.9, 136.0, 130.2, 128.4, 128.2, 128.0, 123.3, 82.9, 66.9, 54.7, 38.2, 31.4, 27.8, 13.9.
MS (m/z): 423.1 [M+23].
【０６５３】
保護化４−ニトロフェニルアラニン（７３ｇ、０．１８ｍ）をエタノール（５００ｍｌ）に溶解し、酸化白金触媒（１．５ｇ）を加える。得られた溶液を水素雰囲気（５０〜６０ｐｓｉ）下周囲温度で、更なる水素吸収が無くなるまで（３時間）激しく撹拌する。触媒を濾別し、濾液を蒸発乾固させ、残渣を酢酸エチル（２００ｍｌ）に溶解し、酢酸エチル−ヘキサン混合物（３：２、２Ｌ）を用いるシリカゲルのプラグ（２×２ｉｎ）を通して濾過し、シリカを濯ぐ。濾液を濃縮しておよそ２００ｍｌにし、ヘキサン（５００ｍｌ）を加える。結晶性生成物を濾別し、冷溶媒で濯ぎ、空気乾燥させる。収率−５６ｇ、８４％。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.30 (bs, 5H), 6.92 (d, 2H, J=8.1Hz), 6.58 (d, 2H, J=8.1Hz), 5.21 (m, 1H), 5.10 (d, 2H, J=2.1Hz), 4.46 (m, 1H), 3.59 (bs, 2H), 2.97 (s, 2H, J=5.4Hz), 1.42 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.6, 145.1, 136.3, 130.2, 128.3, 127.9, 125.6, 115.0, 81.9, 66.6, 55.2, 37.4, 27.8
MS (m/z): 393.1 [M+23].
【０６５４】
（実施例１０６）
【化１６４】
2014210790.tif 000186
実施例１０５の生成物である４−アミノフェニルアラニン（２０ｇ、０．０５４ｍ）をエタノール（２００ｍｌ）に溶解し、ヒューニッヒ塩基（２１ｇ、０．１６２ｍ、３当量）および２−クロロ−３−ニトロピリジン（１０．３ｇ、０．６５ｍ、１．２当量）で処理した。得られた溶液を窒素雰囲気下に撹拌し、２４時間加熱還流させた。ＬＣ分析は少量の未反応アミンの存在を示した。更に少量のクロロニトロピリジン（１．１ｇ、０．１３当量）を加え、更に２４時間還流を続けた。反応混合物を冷却し、蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル（６００ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を水（１×２００ｍｌ）、希薄クエン酸水溶液（０．２Ｎ、２×２００ｍｌ）、ブライン（１×２００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾別し、濾液を蒸発させて、深紅色油３７ｇを得、これは過剰のクロロニトロピリジンで汚染された期待する生成物を含んでいた。酢酸エチル：ヘキサン（３：１７）混合物で溶離するフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ７５Ｌシステム）により、不純な生成物を精製した。純粋な生成物を含むフラクションを合わせ、蒸発させて、深紅色粘稠性油２６ｇ（９９％）を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 10.10 (s, 1H), 8.49 (m, 2H), 7.57 (d, 2H, J=9Hz), 7.35 (bs, 5H), 7.19 (d, 2H, J=9Hz), 6.84 (m, 1H), 5.30 (m, 1H), 5.13 (d, 2H, J=3Hz), 4.57 (m, 1H), 3.11 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.4, 155.5, 155.1, 150.0, 136.7, 136.3, 135.4, 132.4, 129.9, 128.5, 128.3, 128.0, 127.9, 122.2, 113.7, 82.2, 66.7, 55.1, 37.7, 27.8, 20.9.
MS (m/z): 493.1 [M+1], 515.1 [M+23].
【０６５５】
赤色のニトロ化合物（２６ｇ、０．０５４ｍ）をＴＨＦ（３５０ｍｌ）に溶解し、酸化白金触媒（１．３５ｇ）を加えた。得られた混合物を水素雰囲気（５０〜６０ｐｓｉ）下、水素吸収が無くなるまで（２時間）激しく撹拌した。触媒を濾別し、濾液を蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶解し、結晶化が始まるまでヘキサン（５０ｍｌ）で希釈した。混合物を酢酸エチル／ヘキサン（１：１）混合物（３００ｍｌ）で更に希釈し、冷蔵庫中で３時間放置した。結晶性固体を濾別し、冷溶媒で濯ぎ、空気乾燥させて、生成物２３ｇ、９４％を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 7.81 (dd, 1H, J1=1.5Hz, J2=4.8Hz), 7.33 (bs, 5H), 7.17 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.03 (d, 2H, J=8.4Hz), 6.96 (dd, 1H, J1=1.5Hz, J2=7.5Hz), 6.75 (dd, 1H, J1=5.0Hz, J2=7.7Hz), 6.22 (s, 1H), 5.31 (m, 1H), 5.09 (bs, 2H), 4.50 (m,
1H), 3.41 (bs, 2H), 3.02 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.6, 155.6, 145.5, 140.21, 138.8, 136.3, 130.8, 129.9,
128.5, 128.3, 127.9, 123.4, 118.2, 117.0, 82.0, 66.6, 55.2, 37.4, 27.9.
MS (m/z): 407.1 [M-56], 463.1 [M+1], 485.1 [M+23].
【０６５６】
アミノピリジン（１９ｇ、０．０４１ｍ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に懸濁させ、ＣＤＩ（１２ｇ、０．０７４ｍ、１．８当量）を加えた。得られた混合物を周囲温度で２０時間撹拌した。反応混合物を飽和炭酸水素塩水溶液（２×１００ｍｌ）、ブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾別し、濾液を蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル（熱、３００ｍｌ）に溶解し、結晶化させた。結晶性生成物を濾別し、冷酢酸エチルで濯ぎ、空気乾燥させて、イミダゾロン１９．９ｇ、８１％を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 10.63 (s, 1H), 8.06 (d, 1H, J=3Hz), 7.66 (d, 2H, J=9Hz), 7.32 (m, 8H), 7.05 (m, 1H), 5.36 (m, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.59 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 170.4, 155.6, 154.3, 143.8, 141.0, 136.2, 135.8, 131.8, 130.2, 128.3, 128.0, 125.9, 122.2, 118.3, 116.0, 82.4, 66.8, 55.0, 37.7, 27.8.
MS (m/z): 433.1 [M-56], 489.2 [M+1], 511.2 [M+23].
【０６５７】
（実施例１０７）
【化１６５】
2014210790.tif 000187
ピリジン−３−スルホン酸（１２５ｇ、０．７８ｍ）を、機械撹拌機、還流冷却管、温度計および窒素注入口を装備した１Ｌの三口フラスコに仕込んだ。次に、５塩化リン（２５０ｇ、１．１９ｍ、１．５当量）を加え、続いて直ちにオキシ塩化リン（３３０ｍｌ、
３．８ｍ、４．５当量）を加えた。フラスコ内容物を最初に周囲温度で３０分間撹拌し、次いで穏やかに還流するまで（内部温度およそ１１０℃）更に１時間かけてゆっくり加温し、この温度でおよそ３．５時間維持し、次いで更に１２時間かけて周囲温度まで再度冷却した。この時間中気体発生が観察された。揮発物を減圧下に（１２ｍｍＨｇ／４０℃で）ストリップし、黄色半固体残渣をＤＣＭ（１Ｌ）で希釈した。スラリー液を、ｐＨ＝７に維持しながら、撹拌した氷冷飽和炭酸水素塩水溶液にゆっくり注ぎ入れた。気体の発生が観察された。有機層を分離し、水層をＤＣＭで逆抽出した。合わせた抽出物を冷飽和炭酸水素塩水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。固体を濾別し、濾液を蒸発させて、ピリジン−３−スルホニルクロリドを淡黄色油状液として得た、１２３ｇ（純度９３％、理論の８８％）。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 9.26 (d, 1H), 8.98 (dd, 1H), 8.34 (m, 1H), 7.62 (m, 1H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 155.3, 147.4, 140.9, 134.6, 124.2.
MS (m/z): 178.0 [M+1].
【０６５８】
Ｌ−ペニシラミン（１５０ｇ、１．０ｍ）を、撹拌しながらイオン交換水（１５００ｍｌ）に溶解し、氷浴中＋８℃に冷却し、ホルマリン（１５０ｍｌ、３７％水溶液）で処理した。反応混合物を＋８℃で２時間撹拌し、次いで冷却浴を除去し、１２時間撹拌を続けた。透明溶液を減圧下に（１４ｍｍＨｇ／５０°）濃縮して白色残渣を得た。固体を再度懸濁させ、次いで熱ＭｅＯＨ（２５００ｍｌ）に溶解し、周囲温度で１２時間放置した。白色のフワフワした沈殿物を濾別し、冷メタノールで濯いだ。濾液を濃縮し、再度結晶化させた。採取した沈殿物を最初のクロップと合わせ、真空乾燥器中４５ｍｍＨｇにて５５℃で２４時間乾燥させた。（Ｒ）−５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸の収量は１３８ｇ（純度＞９９％、理論の８６％）であった。
1H-NMR, DMSO-d6, (δ): 4.25 (d, 1H), 4.05 (d, 1H), 3.33 (s, 1H), 1.57 (s, 3H),
1.19 (s, 3H).
13C-NMR, DMSO-d6, (δ): 170.8, 74.4, 57.6, 51.8, 28.9, 27.9.
MS (m/z): 162.3 [M+1].
【０６５９】
機械撹拌機および温度計を装備した４Ｌの反応器中で、イオン交換水（２Ｌ）中リン酸二水素カリウム（４３ｇ、０．３１ｍ）およびリン酸水素二カリウム（１８８．７ｇ、１．０８ｍ）から、緩衝溶液を調製した。（Ｒ）−５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸（１０７ｇ、０．６７５ｍ）を加え、完全に溶解するまで撹拌した。溶液を氷浴中＋８℃に冷却した。別途調製したピリジン−３−スルホニルクロリド（１２４ｇ、０．６９５ｍ）のＤＣＭ（１２５ｍｌ）溶液を、激しく撹拌しながら１時間かけて反応器に滴下添加した。反応混合物のｐＨを監視し、４時間後ｐＨ＝５であることが分かり、固体の炭酸水素塩を加えることによりｐＨ＝６に合わせた。混合物を１８時間かけて周囲温度に加温した。希薄硫酸水溶液でｐＨを２に合わせ、１時間撹拌し、沈殿した黄色固体を濾別し、水で濯いで中性にした。固体のケーキを２Ｌ三角フラスコに移し、５分間時々撹拌しながらＤＣＭ（５００ｍｌ）に懸濁させ、再度濾別した。濾過ケーキをＤＣＭで洗浄し、空気乾燥させた。標題化合物である（Ｒ）−５，５−ジメチル−３−（ピリジン−３−イルスルホニル）チアゾリジン−４−カルボン酸の収量は、１４８．９ｇ（純度９８％、理論の７３％）であった。
1H-NMR, DMSO-d6, (δ): 9.05 (d, 1H), 8.89 (m, 1H), 8.32 (m, 1H), 7.69 (m, 1H),
4.68 (q, 2H), 4.14 (s, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
13C-NMR, DMSO-d6, (δ): 170.0, 154.3, 147.9, 135.8, 134.1, 124.8, 72.6, 54.3, 50.2, 29.4, 25.0.
MS (m/z): 303.2 [M+1].
【０６６０】
（実施例１０８）
【化１６６】
2014210790.tif 000188
実施例１０６の生成物（５２ｇ、０．１０６ｍ）をＭｅＯＨ（４５０ｍｌ）にスラリー化し、水素化触媒（８．７ｇ、５％Ｐｄ／Ｃ、Ｄｅｇｕｓｓａ）を加え、更なる吸収が無くなるまで（約２時間）、混合物を水素雰囲気下（６０ｐｓｉ）に撹拌した。ＴＨＦ（１５０ｍｌ）を加えて沈殿した固体を溶解し、セライトのプラグを通して溶液を濾過し、ＤＣＭを用いてフィルターを濯いだ。濾液を蒸発乾固させ、ＤＣＭ（３００ｍｌ）に再度溶解し、再度ストリップした。この操作を２回繰り返した。泡沫状固体を高真空下に３時間保持した。標題化合物の収量は３８．３ｇ（理論の１０１％）であった。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 8.08 (m, 1H), 7.56 (AB q, 4H), 7.37 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.49 (s, 9H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 173.8, 154.6, 143.9, 141.0, 137.4, 131.5, 130.2, 126.1, 122.3, 118.0, 116.1, 81.4, 56.0, 40.6, 27.9.
MS (m/z): 299.3 [M-56], 355.4 [M+1], 377.4 [M+23].
【０６６１】
（実施例１０９）
【化１６７】
2014210790.tif 000189
実施例１０８の生成物（３８．３ｇ、０．１０６ｍと仮定）をＤＣＭ（５００ｍｌ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（２７ｇ、３０ｍｌ、０．２６６ｍ、２．５当量）、ＨＯＢｔ（１７．３ｇ、０．１２８ｍ、１．２当量）、および実施例１０７の生成物（３３．８ｇ、０．１１２ｍ、１．０６当量）で順次処理した。得られた非均一溶液を氷浴中で＋４℃に冷却し、ＥＤＣ（２２．５ｇ、０．１１７ｍ、１．１当量）で一度に処理した。反応混合物を撹拌し、次の４時間をかけて、次いで更に１８時間周囲温度に加温した。溶媒をストリップし、残渣を酢酸エチル（１．２Ｌ）に溶解し、飽和炭酸水素塩水溶液（２×２５０ｍｌ）、水（２５０ｍｌ）、ブライン（３００ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶液を濾過し、蒸発乾固させて、薄オレンジ色粘稠性油７６ｇ（＞＞１００％）を得た。粗製の生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ７５Ｌ、酢酸エチル／メタノール（３％）混合物中）により精製した。純粋な
生成物を含むフラクションを合わせ、蒸発させて、標題化合物５４ｇ（収率８３％）を得た。
1H-NMR, CDCl3, (δ): 10.37 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.87 (m, 1H), 8.19 (m, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.56 (AB q, 4H), 7.52 (m, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.06 (m, 2H), 4.83 (m, 1H), 4.58 (AB a, 2H), 3.96 (s, 1H), 3.19 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.22 (s, 3H), 1.18 (s, 3H).
13C-NMR, CDCl3, (δ): 169.7, 167.6, 153.9, 148.4, 143.8, 140.9, 135.8, 135.6, 132.9, 131.9, 130.2, 125.9, 123.8, 122.1, 118.0, 115.9, 82.8, 73.6, 60.3, 54.8, 53.7, 50.6, 37.8, 29.1, 27.8, 23.9, 14.1.
MS (m/z): 583.3[M-56], 639.4 [M+1], 661.3 [M+23].
【０６６２】
（実施例１１０）
【化１６８】
2014210790.tif 000190
式中、それぞれのｎは独立して、ｎの総計が約１００から１３６０となるような整数である。実施形態において、それぞれのｎは独立して、１２０のコンジュゲートが約４０〜４５ｋＤａの分子量を有する、充分な量の［−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−］繰り返し単位があるような整数である。
１１２と同様の方法を用いて、４０ｋＤａの３−アームＰＥＧアルコールをｔ−ブチルエステル１１９（下記に示す）にカップリングさせ、脱保護して、最終生成物を得た。ＨＰＬＣ方法Ａに従い生成物を精製した。ＨＰＬＣ方法Ｃは、コンジュゲートが純度＞９５％であると判定した（保持時間＝７．３分）。1H NMR (CDCl3) δ 8.66 (bs, 3H), 8.44 (bs, 3H), 8.04-8.02 (d, 3H), 7.75- 7.30 (m, 24H), 7.10-7.06 (m, 3H), 6.93 (s, 3H), 5.60-5.50 (m, 3H), 4.15 (m, 6H), 3.66 (bs, 4270H PEG), 3.00 (m, 3H), 3.40-3.20 (m, 6H), 1.27 (d, 9H).
【化１６９】
2014210790.tif 000191
【０６６３】
（実施例Ａ）
液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する本発明の化合物の効力は、アッセイし得る。液性腫瘍増殖を阻害し、液性腫瘍量を減少させ、転移病変の減少に影響を与え、治療が始まった後に新規な転移病変の発生を阻害し、または検出可能な疾患がないように腫瘍を減少させるそれらの能力について化合物をアッセイする。白血病または骨髄腫などの液性腫瘍および悪性疾患の存在は、放射線学的画像診断、体液分析、細胞遺伝学、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション、免疫細胞化学、コロニーアッセイ、マルチパラメータフローサイトメトリー、またはポリメラーゼ連鎖反応、ならびに当技術分野において公知の他のアッセイ法によって評価し得る。
【０６６４】
例えば、ヒト腫瘍細胞系は、免疫組織化学（ＩＨＣ）およびフローサイトメトリーによって、アルファ−４およびアルファ−９の発現についてスクリーニングし得る。アルファ−４およびアルファ−９の官能性は、インビトロ結合アッセイによって確認し得る。ヒト腫瘍細胞における細胞毒性または細胞増殖の誘発は、チミジン取込みによって評価し得る。腫瘍の増殖に対する好ましいまたは好ましくない効果の評価は、例えば、３Ｈ−チミジン取込みアッセイを使用して行い得る。
【０６６５】
（実施例Ｂ）
下記で例示したような式Ａのコンジュゲートは、α４インテグリンの選択的および強力な小分子阻害剤（α４β１に対する選択性はα４β７を上回る）と、約４５ｋＤの３本のアームのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）との持続性コンジュゲートである。式Ａのコンジュゲートの小分子阻害剤部分は、第三級アリールスルホンアミド基を含有する。
【化１７０】
2014210790.tif 000192
式中、ｘ、ｙ、およびｚの総計が約１００〜１３６０であるように、ｘ、ｙ、およびｚは、独立に整数である。好ましくは、十分な数の［−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−］繰り返し単位があり、式Ａのコンジュゲートが約４０〜４５ｋＤａの分子量を有するように、ｘ、ｙ、およびｚは、独立に整数である。
【０６６６】
式Ａのコンジュゲートは、α４β１インテグリンへの結合に対して特異的である。ＦＮ捕捉、ＦＮが媒介する接着、ＶＣＡＭ−１が媒介する接着の阻害、およびα４β１インテグリンの小分子阻害剤に対する多価競合を評価する４つの異なるα４β１インテグリンアッセイにおける試験によって、各々０．０５、０．２、０．５および１６．５ｎＭのＥＤ／ＥＣ５０値を得た。式Ａのコンジュゲート活性は、多様な範囲のインテグリンサブセット：α４β７（ＭａｄＣＡＭ−１接着の阻害として測定）、αＬβ２（ＩＣＡＭ接着の阻害として測定）、α５β１（ＦＮ接着の阻害として測定）およびα９β１（多価競合において測定して、α４に最も密接な関係があるインテグリン）に亘り特異性を評価するために選択された４つの非α４β１依存性インテグリンアッセイにおいて検査した。これらのアッセイにおいて、各々３８ｎＭ、＞１μＭ、＞１μＭ、および５１ｎＭのＥＤ／ＥＣ５０値を得た。アッセイフォーマットの差異によってＥＤ／ＥＣ５０値を直接比較することは困難である一方、これらの値は、密接な関係があるα４β７およびα９β１インテグリンよりもα４β１インテグリンについて式Ａのコンジュゲートの選択性を示し、他の非α４インテグリンへの交差反応性を示さない。
【０６６７】
多価競合アッセイにおいて測定した式Ａのコンジュゲートの効力は、１００％ラット、イヌまたはヒト血清の存在下で有意に変化しなかった。したがって、このコンジュゲートは、有意な程度まで血清タンパク質に結合しない。種に亘る式Ａのコンジュゲートの結合を、ラット、モルモット、イヌ、カニクイザル、アカゲザル、およびヒトリンパ球を使用して、蛍光活性化細胞選別アッセイ（ＦＡＣＳアッセイ）において試験した。式Ａのコンジュゲートは、０．０００４〜０．００３μｇ／ｍＬのＥＣ５０範囲（ヒトＥＤ５０＝０．００８μｇ／ｍＬ）で全ての種においてα４β１インテグリンについて同様の効力を有した。式Ａのコンジュゲートの二次薬理活性を、酵素のインビトロスクリーン、放射性リガンド結合、および細胞アッセイにおいて１μＭで試験し、その選択性を特性決定し、可能性のある毒性標的を同定した。式Ａのコンジュゲートは、これらのアッセイにおいて活性を示さなかった。
【０６６８】
腫瘍学において、α４インテグリンを遮断するための式Ａのコンジュゲートの使用は、
血管形成／リンパ脈管新生と関連する腫瘍、転移、およびまたは細胞接着が媒介する薬物耐性を阻害することによって、直接の抗腫瘍活性をもたらし得る。腫瘍転移の裏付けの決定的事象は、血管形成およびリンパ脈管新生である（Ｈｗａｎｇ  Ｒ，Ｖａｒｎｅｒら、Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ２００４；１８（５）：９９１〜１００６、ｖｉｉ）。α４β１のアンタゴニスト（しかし、他のインテグリンのアンタゴニストではない）は、インビトロおよびインビボでの内皮への単球の接着、ならびに腫瘍組織へのそれらの血管外遊走を遮断した（Ｊｉｎ  Ｈら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６年２月１５日；６６（４）：２１４６〜５２）。これらのアンタゴニストは、インビボで血管形成の単球刺激、腫瘍のマクロファージコロニー形成、および腫瘍血管形成を防止した。これらの研究は、腫瘍のマクロファージコロニー形成およびそれに続く腫瘍血管形成の抑制におけるインテグリンα４β１のアンタゴニストの有用性を示す。式Ａのコンジュゲートを、血管形成をインビボで阻害するその能力について、マウス角膜マイクロポケット血管形成アッセイにおいて評価した。マウス角膜マイクロポケット血管形成アッセイにおいて、式Ａのコンジュゲートの存在下での角膜の血管新生における用量依存的阻害を観察した。これらの結果を、上記の実施例Ｅにおいてさらに詳細に議論する。
【０６６９】
腫瘍学において有益な式Ａのコンジュゲートのさらなる活性には、転移の阻害、および腫瘍の反応と無関係である骨髄腫における骨合併症に対する好ましい効果が含まれる。多発性骨髄腫細胞における転移は、破骨細胞によって骨の破壊をもたらす相互作用である骨髄ストローマ細胞上のＶＣＡＭ−１への骨髄腫細胞上のα４β１インテグリンの結合によって少なくとも部分的に起こると考えられている（Ｍｉｃｈｉｇａｍｉ  Ｔら、Ｂｌｏｏｄ２０００；９６（５）：１９５３〜６０）。マウスにおける前臨床試験において、α４抗体は、多発性骨髄腫、骨髄腫細胞の骨髄への転移、および結果として生じる骨破壊性骨溶解の発生を抑制した。
【０６７０】
別々の研究において、Ｍｏｒｉは、抗アルファ−４Ａｂの予防的投与が、骨および脾臓において５ＴＧＭ１／ｌｕｃ腫瘍量を減少させたことを示した（Ｍｏｒｉ  Ｙら、Ｂｌｏｏｄ２００４；１０４（７）：２１４９〜５４）。抗体処理マウスの骨梁中の骨破壊性病変の減少もまた注目されたが、これはＶＬＡ−４接着相互作用もまた、骨髄腫細胞の破骨細胞形成活性の一因となったことを示す。この効果はまたインビトロで観察され、骨髄腫細胞の初代骨髄ストローマ細胞との共培養は、破骨細胞刺激をもたらした。ＶＬＡ−４またはＶＣＡＭ−１への中和抗体は、刺激を阻害した。
【０６７１】
インテグリンは、細胞毒性を有する化学療法から血液悪性腫瘍の細胞を保護することにおいて役割を果たす（ｄｅ  ｌａ  Ｆｕｅｎｔｅ  ＭＴら、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ２００２；７１（３）：４９５〜５０２Ｐａａｖｏｎｅｎ  Ｔら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ１９９４；５８（２０：２９８〜３０２）。したがって、式Ａのコンジュゲートは、α４β１インテグリンの過剰発現からもたらされる細胞接着が媒介する薬物耐性（ＣＡＭ−ＤＲ）を克服するのに有用である（Ｍａｔｓｕｎａｇａ  Ｔら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ２００３；９（９）：１１５８〜６５）。最近の報告において、白血病細胞α４インテグリンの発現は、恐らくストローマ細胞上のマトリックス分子であるフィブロネクチンへのα４インテグリンの結合のためである、化学療法耐性、残存病変の残留、および急性骨髄性白血病を有する患者における予後不良と関連する（Ｍａｔｓｕｎａｇａ  Ｔら、Ｎａｔ
Ｍｅｄ  ２００３；９（９）：１１５８〜６５）。この報告はまた、α４抗体が白血病のマウスモデルにおいてＡｒａＣへの耐性を防止したことを示した。ａ４インテグリンとフィブロネクチンとの間の相互作用の破壊は、薬物感受性表現型の逆転をもたらす（ｄｅ
ｌａ  Ｆｕｅｎｔｅ  ＭＴら、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ２００２；７１（３）：４９５〜５０２、Ｐａａｖｏｎｅｎ  Ｔら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ１９９４；５８（２０：２９８〜３０２）。
【０６７２】
療法パラダイムにおいて、Ｍｏｒｉは、転移性骨髄腫が確立した後のメルファランへの抗ＶＬＡ−４Ａｂの添加が、メルファラン療法単独と比較してＩｇＧ２ａレベルおよび腫瘍量の有意な減少をもたらしたことを示した（Ｍｏｒｉ  Ｙら、Ｂｌｏｏｄ２００４；１０４（７）：２１４９〜５４）。しかし、抗体のみの療法上の投与は、骨中の腫瘍量を実質的に減少させなかった。
【０６７３】
最先端の化学療法剤に当初反応した患者は、最終的に薬物耐性を発生させ、結局ただ無反応性となる結果となることが多い。多発性骨髄腫についての治療の失敗の主要因子は、メルファランまたはドキソルビシンなどの標準治療の化学療法剤に対する薬物耐性の発生である（Ｄａｍｉａｎｏ  ＪＳら、Ｂｌｏｏｄ１９９９；９３（５）：１６５８〜６７）。Ｄａｍｉａｎｏ（１９９９）は、α４発現のレベルと８２２６骨髄腫細胞系における薬物耐性の間の相関関係を示した。（Ｄａｍｉａｎｏ  ＪＳら、Ｂｌｏｏｄ１９９９；９３（５）：１６５８〜６７；Ｄａｍｉａｎｏ  ＪＳら、Ｃｕｒｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ
Ｔａｒｇｅｔｓ２００２；２（１）：３７〜４３）８２２６ヒト黒色腫細胞系を利用したインビトロ研究によって、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析によって決定すると、ドキソルビシンまたはメルファランへの獲得した耐性がα４発現の増加と関連したことを確認した。式Ａのコンジュゲートは、α４β１インテグリンの過剰発現からもたらされる細胞接着が媒介する薬物耐性（ＣＡＭ−ＤＲ）を克服するのに有用であり得る。
【０６７４】
【表１９】
2014210790.tif 000193
【０６７５】
要約すれば、血管形成／リンパ脈管新生、腫瘍転移およびＣＡＭ−ＤＲにおけるα４インテグリンの役割に関する文献のエビデンスは、血管形成および腫瘍量のモデルにおける式Ａのコンジュゲートの直接の前臨床試験と共に、腫瘍学における式Ａのコンジュゲートの役割を支持する。
【０６７６】
（実施例Ｃ）
式Ａのコンジュゲートの単回用量の血漿ＰＫプロファイルは、Ｃ５７／Ｂｌ６マウス、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット、Ｈａｒｔｌｅｙモルモット、ビーグル犬およびヨークシャーブタにおいて特性決定した。これらの種における１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇでのＰＫデータの要約を、表１２に示す。
【０６７７】
静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与の後に、式Ａのコンジュゲートは、評価した種の各々に亘って、増加する用量と共に増加する曝露を示す。一般に、ＡＵＣは、予想を上回る態様で増加したが、これは用量が関連する式Ａのコンジュゲートの消失半減期の延長
からもたらされる。式ＡのコンジュゲートのＳＣ  ＰＫ挙動は、投与した式Ａのコンジュゲートの量が増加すると、半減期およびバイオアベイラビリティーを増加させることによって定義した。ＳＣ投与と同様に、式Ａのコンジュゲートは、非線形挙動を示したが、これは明らかにラットおよびイヌにおけるＩＶ投与の後のその消失の飽和からもたらされる。式ＡのコンジュゲートのＩＶ  ＰＫ挙動は、投与した式Ａのコンジュゲートの量が増加すると、全身クリアランスを減少させ、見掛けの分布容積および半減期を増加させることによって定義した。この現象はＳＣおよびＩＶ投与両方に続いて観察されたので、式Ａのコンジュゲートで観察された半減期は、注射の部位からのコンジュゲートの吸収に依存していないようである。
【０６７８】
【表２０】
2014210790.tif 000194
【０６７９】
ラットおよびイヌへの反復投与の後に、式Ａのコンジュゲートの曝露および最大血漿濃度は、増加する用量と共に増加したが、予想を上回る態様であった（表１３および表１４を参照されたい）。この観察された蓄積は、式Ａのコンジュゲート１３７２３５の半減期と一致する（表１３および表１４を参照されたい）。トラフレベル濃度に基づいて、式Ａ
のコンジュゲートについてラットでは６週目と１２週目の間に、イヌでは４週目と６週目の間に定常状態に達したようであった。式Ａのコンジュゲートの曝露においてイヌでは性差は観察されなかったが、ＡＵＣおよびＣｍａｘ値は、雄性ラットと比べると雌性ラットにおいてより高かった。
【０６８０】
【表２１】
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【０６８１】
【表２２】
2014210790.tif 000196
【０６８２】
式Ａのコンジュゲートの代謝安定性を、肝ミクロソーム調製物および肝細胞を含めたいくつかのインビトロ代謝系において評価した。しかし、式Ａのコンジュゲートは、典型的な薬物代謝系による生体内変化の同定可能な経路を伴わずに安定的であることが見出された。
【０６８３】
１４Ｃ−同等物の排泄は、１４Ｃ−式ＡのコンジュゲートのＳＣおよびＩＶ投与の両方の後に、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて決定した。式Ａのコンジュゲート由来の１４Ｃ−同等物の排泄の主要な経路は、尿を介してであった。糞便中に検出された１４Ｃ−同等物は、胆嚢摘除が原因であるようであった。さらに、用量の大部分は、投与経路に関わらず、１４Ｃ−式Ａのコンジュゲートの投与後最初の２４時間以内に排泄された（表１５）。しかし、６７２時間までに、投与された用量の概ね２２％は、１４Ｃ−式ＡのコンジュゲートのＳＣ投与後死骸と関連した。
【０６８４】
【表２３】
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【０６８５】
［ヒト相当用量］
ヒト相当用量（ＨＥＤ）は、ラットおよびイヌの３カ月反復投与毒性研究についてＮＯＡＥＬ決定から決定した。ＦＤＡ  ＣＤＥＲ指針に従って（米食品医薬品局、医薬品評価研究センター、Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ。２００５年７月）。ＨＥＤを決定する上で使用したＮＯＡＥＬは、１００ｍｇ／ｋｇラットの１つの早期の屠殺、ならびに１００ｍｇ／ｋｇイヌで観察された臨床的症状（やせた体の状態および膨張、皮膚の肥厚、および投与部位のかさぶた）に基づいている。
ＨＥＤを決定するための式は、以下の通りであった。
ＨＥＤ＝ＮＯＡＥＬ用量＊（ＢＷ試験種／ＢＷヒト）（０．３３）
式中、（ＢＷ試験種／ＢＷヒト）（０．３３）は、標準的変換係数である。
【０６８６】
【表２４】
2014210790.tif 000198
【０６８７】
（実施例Ｄ）
下記のインビトロ研究の目的は、式Ａのコンジュゲートの効力および結合特性、そのリガンド特異性、種特異性、ならびにα４インテグリン受容体発現を制御するその能力を評価することであった。
【０６８８】
式Ａのコンジュゲートの効力は、α４β１依存性リガンド相互作用を測定するための４
つのアッセイを使用して決定した（表１７）。最も厳重な効力アッセイは、多価高親和性のα４β１試薬（２７／１−６９３０２）の結合と競合する式Ａのコンジュゲートの能力を検査した。この試薬は、高親和性および選択性でα４β１インテグリンに結合する小分子（ＥＬＮ６９３０２）の複数のコピーを保有する。試薬の担体部分は、関連のないマウス抗体２７／１である。試薬２７／１−ＥＬＮ６９３０２の特異性は、抗体によるα４への結合の阻害によって事前に示された（２１／６およびＧＧ５／３）。２７／１−ＥＬＮ６９３０２試薬の結合を防止することができる化合物は、α４β１と直接相互作用すると考えられる。このアッセイにおいて、３ロットの式ＡのコンジュゲートについてのＥＣ５０値は、比較可能であった（１３．８〜２１．６ｎＭ）。
【０６８９】
式Ａのコンジュゲートの効力をまた、２種の生理的に関連する基質である血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）およびフィブロネクチン（ＦＮ）を使用して、α４β１依存性細胞接着アッセイにおいて評価した。これらのアッセイにおいて、式Ａのコンジュゲートは、各々０．５ｎＭおよび０．２ｎＭのＥＤ５０で、ＶＣＡＭ−１およびＦＮでコーティングしたプレートへのＪｕｒｋａｔ  ＴＭ細胞（ヒトリンパ球性細胞系）の接着を遮断する。
【０６９０】
第４の効力アッセイは、式Ａのコンジュゲートがリンパ球によってヒト血清ＦＮの捕捉を阻害する能力を測定した（ＥＤ５０＝０．０５ｎＭ）。
【０６９１】
【表２５】
2014210790.tif 000199
【０６９２】
多価競合アッセイにおいて測定した式Ａのコンジュゲートの効力は、血清の存在下で有意に変化しなかった。したがって、コンジュゲートは有意な程度まで血清タンパク質に結合しないと推定される（表１８）。
【０６９３】
【表２６】
2014210790.tif 000200
【０６９４】
式Ａのコンジュゲート活性を４つの非α４β１依存性インテグリンアッセイにおいて検査し、多様な範囲のインテグリンサブセットに亘って特異性を評価した（表１９）。これらのアッセイには、下記が含まれる。１）β１特異性を評価するための粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭａｄＣＡＭ）へのα４β７依存性接着；２）インテグリンの非α４、非β１クラスを評価するための細胞接着分子（ＩＣＡＭ）へのαＬβ２（ＬＦＡ−１）依存性接着；３）同様であるがより広範な官能性を有するインテグリンを評価するためのＦＮへのα５β１依存性接着；および４）α９β１−発現細胞上の多価競合アッセイによって測定するとα４の効力と最も密接な関係があるインテグリンであるα９β１インテグリン。
【０６９５】
式Ａのコンジュゲートは、αＬβ２（ＬＦＡ−１）およびα５β１インテグリンに対して測定可能な活性を有さなかった。それは、α４β７インテグリンよりα４β１について概ね１００倍の選択性を示した。α４β７が媒介する接着のＥＣ５０である３８ｎＭに対して（表１９）、α４β１が媒介する接着のＥＣ５０は、０．２〜０．５ｎＭであった（表１７）。関連するインテグリンであるα９β１についての式Ａのコンジュゲートの効力は、α４β１の効力の３倍以内であった（平均ＭＶ競合ＥＣ５０＝１６．５ｎＭに対してＥＣ５０α９β１＝５１ｎＭ）。α４とα９との間の類似性および重複リガンドに基づいてこれは予想外ではない。
【０６９６】
【表２７】
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【０６９７】
式Ａのコンジュゲートがラット、モルモット、イヌ、サル、およびヒトのリンパ球に結
合することを示すために、アッセイを開発し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（ＡＧＰ−３−ビオチン）に対するビオチン化抗体を使用して、式Ａのコンジュゲートの結合を直接検出した。バックグラウンド結合を、α４β１に高親和性で結合する小分子であるＥＬＮ４３８４８６との競合によって決定した。ラット、モルモット、イヌ、サル（アカゲザルおよびカニクイザル）およびヒトの全血試料からの初代リンパ球を、過剰なＥＬＮ４３８４８６を有する、または有さない増加する濃度の式Ａのコンジュゲートと共にインキュベートした。結合は、全ての種について同様であった（表２０）。モルモットリンパ球への式Ａのコンジュゲートの結合の一例を、図７において例示する。
【０６９８】
【表２８】
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【０６９９】
式Ａのコンジュゲートの結合は、α４β１のダウンレギュレーションを誘発する
式Ａのコンジュゲートによる処理によるα４β１発現を評価するために、細胞に結合した式Ａのコンジュゲートを検出する抗ＰＥＧ抗体ＡＧＰ−３によるアッセイを開発した。効力研究の間にモルモットに投与された１０ｍｇ／ｋｇ用量の式Ａのコンジュゲートは、ビヒクル処理ＥＡＥ動物からのリンパ球上の発現レベルと比較して、リンパ球上の受容体発現の減少を誘発した。
【０７００】
要約すれば、この一連のインビトロ研究は、式Ａのコンジュゲートが低いｎＭ親和性でα４β１インテグリンに結合することを示した。結合は、ヒト、イヌ、またはラットからの血清の存在下で有意に変化しなかった。式Ａのコンジュゲートは、他のインテグリンよりもα４β１インテグリンに対して選択的であるが、それはα９β１との交差反応性を示す（α４とα９との間の類似性に基づいて予想される）。式Ａのコンジュゲートは、ラット、モルモット、イヌ、カニクイザルおよびアカゲザル、およびヒトリンパ球に結合する。式Ａのコンジュゲートによる処理は、モルモットリンパ球上のα４β１インテグリン受容体レベルをダウンレギュレートする。
【０７０１】
（実施例Ｅ）
［マウス角膜マイクロポケットアッセイ］
式Ａのコンジュゲートの小分子の活性は、炎症誘発性リンパ球の中枢神経系への輸送を阻害すると考えられる。さらに、インテグリンアルファ−４ベータ−１は、血管形成過程において関係付けられてきた。ＶＣＡＭ−１へのアルファ−４ベータ−１結合は、内皮細胞と周皮細胞（血管平滑筋細胞と共に１種の壁細胞）との間の密接な細胞接着を促進し、この相互作用は血管形成のために必要であることが示されている（Ｂ  Ｇａｒｍｙ−Ｓｕｓｉｎｉら、Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１１５巻、第６号、１５４２〜１５５１）。インテグリンアルファ−４ベータ−１は、増殖しているが静止期の内皮細胞によって発現されるが、一方そのリガンドＶＣＡＭ−１は、増殖しているが静止期ではない壁細胞によって発現される。このインテグリン−リガンド対のアンタゴニストは、増殖している内皮への壁細胞の接着をインビトロおよびインビボで遮断し、それによって血管新生を阻害する（Ｇａｒｍｙ−Ｓｕｓｉｎｉ）。アルファ−４ベータ−１およびＶＣＡＭ−
１相互作用の強力な阻害剤として、式Ａのコンジュゲートは、血管新生および血管形成を阻害する。
【０７０２】
５５匹のＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＮＣ）雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、研究のために利用可能であった。ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）ハイドロンペレットを投与した全部で４０匹のマウスを研究に供し、群毎に８匹とし、３匹の動物はハイドロン埋込中ＶＥＧＦを投与しなかった対照群とした。１日目（２００７年１０月９日）に、ハイドロンペレットを、マウスの一方の目に切開した角膜ポケット中に埋め込んだ。２００ｎｇ／動物のＶＥＧＦを含有するペレットを、群２〜６に埋め込んだ。埋込手術の直前にマウスを９０ｍｇ／ｋｇペントバルビタール（ＩＰ）で麻酔した。ペレット埋込は、Ｋｅｎｙｏｎらによって記載されている方法を適応したものとして試験施設が記載されているＰｉｅｄｍｏｎｔのＳＯＰに従って行った（ＢＭ  Ｋｅｎｙｏｎ、ＥＥ  Ｖｏｅｓｔ、ＣＣ  Ｃｈｅｎ、Ｅ  Ｆｌｙｎｎ、Ｊ  Ｆｏｌｋｍａｎ、ＲＪ  Ｄ’Ａｍａｔｏ、１９９６、Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ，  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第３７巻、第８号、１６２５〜１６３２）。
【０７０３】
１日目にペレットを角膜縁から概ね１ｍｍに埋め込んだ。ＶＥＧＦを有しないペレットを、群１マウス（ｎ＝３）に埋め込み、負の対照（血管新生がない）とした。これらの動物に、２日目および５日目に皮下（ＳＣ）投与によってビヒクル（ＰＢＳ）を投与した。群２は、ＶＥＧＦで処理された負の対照としての役割を果たし（ＶＥＧＦを埋め込まれ、２日目および５日目にＳＣ投与によってビヒクル（ＰＢＳ）を投与された（ｎ＝８））、この群は１００％血管新生を有すると考えられた。群３は、正の処理対照としての役割を果たした（ＶＥＧＦを埋め込まれ、２日目から開始して毎日６日間腹腔内（ＩＰ）投与によって与えられる抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体であるベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を投与された）（Ａｖａｓｔｉｎをクリニック内で静脈内に投与する。ＩＰは、マウスについての許容される投与経路である）。群４、５、および６（群毎にｎ＝８）に、ＶＥＧＦを埋め込み、２日目および５日目に各々３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、および３０ｍｇ／ｋｇの式ＡのコンジュゲートをＳＣ投与した。
【０７０４】
研究に亘って体重を毎日量った。８日目に血管新生測定を行った。８日目に、全てのマウスの埋込が行われた目の角膜を、熟練技術者によって検査した。細隙灯を使用して目の角膜を検査し、接眼レチクルを使用して測定を行った。血管増殖の周径またはクロックアワー（ＣＨ）と同様に、角膜縁から上方に伸びた最も長い血管の血管長（ＶＬ）を測定した。血管新生面積を、式（面積（ｍｍ２）＝πＶＬ×ＣＨ×０．２）を使用して計算した。血管長、クロックアワー、および計算した血管新生面積を報告することに加えて、ＶＥＧＦで処理された負の対照（群２）と比較した血管新生割合を報告した。群２、および１日目からの変化割合としての平均体重の最下点（最も低い群平均体重）と比較したＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ−Ｄｕｎｎによる統計的有意性。
【０７０５】
【表２９】
2014210790.tif 000203
【０７０６】
研究の１日目に６週齢の１４．０〜１７．８グラムの範囲の体重の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから発送し、Ｐｉｅｄｍｏｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにおいてケージ毎に４匹で無作為に収容した。実験の開始の前にマウスを７日間順応させ、研究に亘って食物および水を自由に与えた。
【０７０７】
マウスは、角膜中に血管形成サイトカインとしてＶＥＧＦを有する血管形成のモデルとして首尾よく使用された（ＢＭ  Ｋｅｎｙｏｎ、ＥＥ  Ｖｏｅｓｔ、ＣＣ  Ｃｈｅｎ、Ｅ
Ｆｌｙｎｎ、Ｊ  Ｆｏｌｋｍａｎ、ＲＪ  Ｄ’Ａｍａｔｏ、１９９６、Ａ  ｍｏｄｅｌ
ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第３７巻、第８号、１６２５〜１６３２）。角膜マイクロポケットアッセイは、インビボでの血管形成の定量的で再現性のある評価として報告されている（ＭＳ  Ｒｏｇｅｒｓ、ＡＥ  Ｂｉｒｓｎｅｒ、ＲＪ  Ｄ’Ａｍａｔｏ、２００７、Ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ  ｍｉｃｒｏｐｏｃｋｅｔ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓｓａｙ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２巻、第１０号、２５４５〜２５５０）。アッセイにおいて血管は通常無血管組織上で増殖し、変動源が排除され、血管拡張を血管形成と間違える可能性が排除されるため、それは背景の血管の測定が不必要であるという利点を有する（ＭＳ  Ｒｏｇｅｒｓ、ＡＥ  Ｂｉｒｓｎｅｒ、ＲＪ  Ｄ’Ａｍａｔｏ、２００７、Ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ  ｍｉｃｒｏｐｏｃｋｅｔ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓｓａｙ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２巻、第１０号、２５４５〜２５５０）。マウスをケージに入れた順番に群に割り当てた。正式な無作為化または割当手順を使用しなかった。研究番号、群番号、および動物番号を使用して、各ケージを特定した。動物は、消えないインキを使用して尾の付け根に入れ墨した個々のマークによって特定した。
【０７０８】
１×ＰＢＳビヒクルおよび式Ａのコンジュゲートの投与溶液（０．６ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬおよび６ｍｇ／ｍＬ）を調製した。投与溶液は、５０ｍｇ／ｍＬのストック溶液から調製した。０．６〜６ｍｇ／ｍＬの投与溶液は、冷蔵温度で２週間安定的である。５０ｍｇ／ｍＬの溶液は、冷蔵温度で１年間安定的である。
【０７０９】
マウスに、Ｔｅｒｕｍｏ２７ゲージ針（０．５インチ）による項部領域のＳＣ注射によって２日目および５日目に式Ａのコンジュゲートおよびビヒクル（ＰＢＳ）を投与した。ＳＣ注射は、クリニックにおいて所定の投与経路である。３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートの用量レベルは、以前のラットおよびイヌ研究からのＮＯＡＥＬに基づいた（１３２−００１−０６、１３２−００２−０６）。低用量の３ｍｇ／ｋｇは、モルモットＥＡＥモデルにおいて効力を示す最も低い用量である。動物に最近の体重に基づいて、５ｍＬ／ｋｇの５０ｍｇ／ｍＬおよびＰＢＳ溶液を投与した。
【０７１０】
ベバシズマブを投与されたマウスに、Ｔｅｒｕｍｏ２７ゲージ針（０．５インチ）によるＩＰ注射によって２日目から開始して毎日６日間投与した。ＳＣ注射は、クリニックにおいて所定の投与経路である。ベバシズマブは、食塩水中に希釈した。１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブの用量レベルは、アッセイ開発の間に最適な抗血管新生活性を示すものとして決定した。
【０７１１】
非処理群と式Ａのコンジュゲートおよびベバシズマブ群との間で体重の有意な変化はなかったが、これは本明細書で報告する結果が、コンジュゲートの投与からもたらされる毒性によって影響を受けなかったことを支持する。１日目に動物にＶＥＧＦペレット（２００ｎｇ／ペレット）を埋め込み、新生血管の変化を８日目に測定した。埋込の一日以内に新規な血管が見られ、継続した増殖が埋込後１週間にピークとなることが報告された（ＭＳ  Ｒｏｇｅｒｓ、ＡＥ  Ｂｉｒｓｎｅｒ、ＲＪ  Ｄ’Ａｍａｔｏ、２００７、Ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ  ｍｉｃｒｏｐｏｃｋｅｔ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓｓａｙ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２巻、第１０号、２５４５〜２５５０）。動物に２日目および５日目（したがって、血管が増殖を始めると考えられる時間フレーム内）に式Ａのコンジュゲートを投与した。
【０７１２】
角膜中の血管形成の報告されたパラメータは、血管増殖の周径（クロックアワー、ＣＨ）、血管長（ＶＬ）、および血管新生面積（ｍｍ２）の測定であった。最後のパラメータについてＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ  Ｄｕｎｎ検定を行い、統計的有意差を決定した。血管新生面積における有意な減少が、ＶＥＧＦで処理された負の対照群（群２）、および最も高い用量の式Ａのコンジュゲート（群６）（３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲート）の間でｐ＜０．０５で見られた。統計的有意性が、０．００１のｐ値でベバシズマブ群および群２の間でまた観察された。ＶＥＧＦで処理された負の対照群（群２）と比較した式Ａのコンジュゲートで処理された群の血管新生面積割合は、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの群について８１％、５７％、および４６％であった。ＶＥＧＦで処理された負の対照群（群２）の血管新生面積についての平均は１．３ｍｍ２であり、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、および３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートについて、血管新生面積についての平均は、各々１．１ｍｍ２、０．７ｍｍ２、および０．６ｍｍ２であった。平均の標準誤差は、０．０６〜０．１３ｍｍ２の範囲であり、これらの群の間で一貫していた。ＶＥＧＦ治療に対して直接の効果を有するベバシズマブは、０％血管新生を有した。これらの結果は、式Ａのコンジュゲートが、ＶＥＧＦで処理された角膜の血管新生について用量依存的な阻害を示したことを示す。
【０７１３】
３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートの群において、ペレット位置が「血管に近すぎる」（正確な測定を妨げる）ため、１匹の動物をデータ分析から除外したことが留意された。したがって、３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートの群の結果は、７匹の動物に基づいた。
【０７１４】
Ｒｏｇｅｒｓらは、１６０〜１８０ｎｇまでのＶＥＧＦ用量が、概ね１．２ｍｍ２までのほぼ線形の用量反応曲線を生じさせ、より高い用量のＶＥＧＦが、血管面積の増加を僅かのみ生じさせることを報告した（２００７、Ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ  ｍｉ
ｃｒｏｐｏｃｋｅｔ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓｓａｙ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２巻、第１０号、２５４５〜２５５０）。ＶＥＧＦで処理された負の対照群（群２）が１．３ｍｍ２の血管新生面積を有したため、これはこの研究に見られる結果と一致する。彼らはまた、血管面積の５０％超を阻害する血管形成阻害剤が、埋め込まれた腫瘍モデルにおいて有効である可能性がある一方、２５％未満の阻害を示すものは殆ど有効でないことを報告する。この研究において阻害剤がベバシズマブなどのペレット中の増殖因子の経路を直接標的にしない限り、血管形成阻害剤が８０％超の阻害を有することはまれである。３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートは、ＶＥＧＦで処理された負の対照の４６％である血管新生面積（５４％阻害と等しい）を有したが、これは式Ａのコンジュゲートが埋め込まれた腫瘍モデルにおいて有効であることを示唆する。
【０７１５】
要約すれば、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートの皮下投与は、角膜におけるＶＥＧＦの埋込に続いて角膜の血管新生面積の用量依存的な減少をもたらした。ＶＥＧＦを埋め込み、ＰＢＳビヒクルを投与された対照動物（１００％の血管新生）と比較した血管新生のパーセントは、各々８１％、５７％、および４６％であった。３０ｍｇ／ｋｇでの血管新生の阻害は、ｐ＜０．０５で有意であった。
【０７１６】
式Ａのコンジュゲートのアルファ−４インテグリンへの結合は、内皮基層、血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）およびフィブロネクチン（ＦＮ）へのリンパ球接着を遮断することが示された。α４インテグリンの遮断は、内皮を通り、かつ実質細胞中へのリンパ球の輸送を防止する。マウス、ラット、およびモルモットの実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）ならびにＭＳの動物モデルにおいて式Ａのコンジュゲートが効力を示すのは、この機序による。角膜マイクロポケットアッセイからの結果は、式Ａのコンジュゲートが、血管形成を含めた他のアルファ−４インテグリンが媒介する過程を遮断するのに効果的であることを支持する。
【０７１７】
（実施例Ｆ）
組み合わせた式ＡのコンジュゲートおよびトポテカンによるＭＯＬＴ−４ヒト白血病モデルの腫瘍増殖遅延の決定
式Ａのコンジュゲートの活性は、炎症誘発性リンパ球の中枢神経系への輸送を阻害すると考えられている。ａ４インテグリンを遮断するための式Ａのコンジュゲートの使用は、腫瘍細胞がａ４インテグリンを発現しているとき直接の抗腫瘍活性、ならびに／または転移、血管形成およびリンパ脈管新生、および細胞接着が媒介する薬物耐性（ＣＡＭ−ＤＲ）の逆転の阻害をもたらす。アルファ−４β１またはα４β７インテグリンは、様々な段階の腫瘍発生、侵襲性および内転移において、骨髄腫、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、および黒色腫細胞上で発現する。（Ａｌｂｅｌｄａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ１９９０  １９９０；５０（２０）６７５７〜６４；Ｃｓａｎａｋｙ
Ｇら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ１９９７；２２（３）：４０８〜１５；Ｄｒｉｌｌｅｎｂｕｒｇ  Ｐら、Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ１９９７；１５０（３）９１９〜２７；Ｐａａｖｏｎｅｎ  Ｔら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ１９９４；５８（２）：２９８〜３０２；およびＭｏｌｌｅｒ  Ｐら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ１９９２；６（４）：２５６〜６４を参照されたい）。
【０７１８】
この研究の目的は、単独でまたは通常の化学療法剤と組み合わせて投与したときに、式Ａのコンジュゲートが腫瘍増殖に影響を及ぼす能力を評価することであった。研究に使用可能である１８０匹（１８０）の雌性ＨＲＬＮ  ＣＢ．１７ＳＣＩＤマウスの内、９０匹を登録した。異種移植は、Ｐｉｅｄｍｏｎｔにおいて保持され、ＳＣＩＤマウス中に連続的に皮下に埋め込まれたＭＯＬＴ−４ヒト白血病細胞系から開始した。腫瘍埋込の日に、各ＳＣＩＤマウスに右側腹部の皮下に１ｍｍ３のＭＯＬＴ−４腫瘍断片を埋め込み、平均サイズが８０〜１２０ｍｇの標的範囲に近づくと腫瘍の増殖をモニターした。効力の分析
のために、標的腫瘍のサイズが標的範囲に達したときにペアマッチによって動物を選別し、９群に登録した（ｎ＝１０）。１日目に、群平均腫瘍容積は１１７ｍｍ３であり、個々の腫瘍のサイズは１０８〜１２６ｍｍ３の範囲であり、式Ａのコンジュゲートおよびトポテカン処理を開始した。腫瘍容積は、式を使用して計算した。
腫瘍容積（ｍｍ３）＝（ｗ２×ｌ）÷２
式中、ｗ＝ＭＯＬＴ−４腫瘍の幅およびｌ＝長さ（ｍｍ）である。カリパスを腫瘍の縁に置いた（腫瘍はマウスの側腹部上で増殖する）。１ｍｇは１ｍｍ３の腫瘍容積と同等であるという仮定の下に、腫瘍重量は推定し得る。
【０７１９】
マウスの体重および腫瘍のサイズは、研究の期間中カリパスを使用して毎週２回測定した。群１マウスは対照群としての役割を果たし、ＰＢＳを投与された。群２および３はトポテカン治療単独療法群としての役割を果たし、各々１２ｍｇ／ｋｇおよび６ｍｇ／ｋｇのトポテカンを投与された。群４および５は式Ａのコンジュゲート単独療法処理群としての役割を果たし、各々１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの式Ａのコンジュゲートを投与された。群６〜７は、併用療法として、トポテカンを１２ｍｇ／ｋｇ、ならびに式Ａのコンジュゲートを１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ、各々両方投与された。群８〜９は、併用療法として、トポテカンを６ｍｇ／ｋｇ、ならびに式Ａのコンジュゲートを１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ、各々両方投与された。用量を同じ日に投与したとき、トポテカンを最初に、続いて式Ａのコンジュゲートを１０〜１５分内に投与した。１日目に開始して、研究の終わりまで式Ａのコンジュゲートを週に１回ＳＣ投与した。トポテカンを４日毎全部で３回の用量をＩＰ投与した。
【０７２０】
ラットにおける式Ａのコンジュゲートについての最大耐用量は、３００ｍｇ／ｋｇ／週である。１００ｍｇ／ｋｇ／週を、マウスにおいて適当な高用量として同定した。１０ｍｇ／ｋｇ／週の低い用量は、マウス、ラットおよびモルモットＥＡＥモデルにおいて効果的であることが示された。
【０７２１】
１２ｍｇ／ｋｇのトポテカンの用量レベルは、Ｐｉｅｄｍｏｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＣｅｎｔｅｒからのＭＯＬＴ−４細胞系における最大耐用量として決定した。最大の生物学的効果はＭＴＤより非常に低い用量で起こることがあるため、本発明者らは、１／２最大耐用量を含めた（１／２ＭＴＤ＝６ｍｇ／ｋｇ）（Ｍａｒｘ，ＧＭら、Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃ２００２；２０（６）：１４４６〜１４４８を参照されたい）。さらに、式Ａのコンジュゲートと組み合わせた１／２ＭＴＤのトポテカン用量を含めて、薬物の増加する効果を強力に示し得る。
【０７２２】
カリパスを使用して腫瘍を週２回測定した。その腫瘍が２ｇｍのエンドポイントのサイズに達したとき、または６０日目の研究の終わりに、どちらが先になろうとも、各動物を安楽死させた。各マウスについてのエンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）を式より計算した。
ＴＴＥ（日）＝［ｌｏｇ１０（エンドポイント体積、ｍｍ３）−ｂ］／ｍ
式中、ｂは、切片であり、ｍは、対数変換した腫瘍増殖データセットの線形回帰から得た線の勾配である。データセットは、研究エンドポイント体積を超えた最初の観察、およびエンドポイント体積の達成直前の３回の連続した観察からなる。エンドポイントに達しない動物は、研究の最後の日と等しいＴＴＥ値を割り当てる。事故による（ＮＴＲａ）または原因不明の理由による（ＮＴＲｕ）ＮＴＲ（非処理関連）死として分類された動物は、ＴＴＥの計算（および全てのさらなる分析）から除外する。ＴＲ（処理関連）死またはＮＴＲｍ（転移による非処理関連死）として分類された動物に、死の日と等しいＴＴＥ値を割り当てる。
【０７２３】
治療成果を、対照群と比較した処理群におけるエンドポイントまでの時間中央値（ＴＴ
Ｅ）の増加として定義される腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）によって評価した。
ＴＧＤ＝Ｔ−Ｃ
日、または対照群のＴＴＥ中央値の割合として表され、
％ＴＧＤ＝［（Ｔ−Ｃ）／Ｃ］×１００
式中、
Ｔ＝処理群についてのＴＴＥ中央値
Ｃ＝対照群（群１）についてのＴＴＥ中央値である。
【０７２４】
治療は、動物において腫瘍の部分的退行（ＰＲ）または完全な退行（ＣＲ）をもたらし得る。ＰＲ反応において、腫瘍容積は、研究の過程において３回の連続した測定についてその１日目の体積の５０％以下であり、これらの３回の測定の１つまたは複数については１３．５ｍｍ３と等しいかまたはこれを超える。ＣＲ反応において、腫瘍容積は、研究の過程において３回の連続した測定について１３．５ｍｍ３未満である。研究の終わりにＣＲを伴う動物は、腫瘍がない生存動物（ＴＦＳ）としてさらに分類する。退行反応をモニターし、記録した。
【０７２５】
動物は、研究の最初の５日間は毎日、次いで週に２回秤量した。任意の有害な治療に関連する副作用の明白な徴候についてマウスを頻繁に観察し、毒性の臨床的症状を観察したときに記録した。許容される毒性とは、研究の間の２０％未満の群平均体重減少、および１０匹の処理動物中で１件以下の治療に関連する（ＴＲ）死として定義する。より大きな毒性をもたらす任意の投与計画は、最大耐用量（ＭＴＤ）を超えると考えられる。臨床的症状および／または死体解剖から明らかなように治療の副作用に起因する場合、死はＴＲとして分類し、または投与期間の間もしくは最後の投与の１０日以内の原因不明の理由による場合はＴＲとしてまた評価してもよい。死が治療の副作用に関連していたという証拠がない場合、死はＮＴＲとして分類する。
【０７２６】
Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）３．０３のためのＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を、全ての図表による表示および統計的分析のために使用した。ログランク検定を使用して、処理群または対照群のＴＴＥ値の間の差異の有意性を分析した。有意性Ｐ＝０．０５で統計的両側分析を行った。中央値の腫瘍増殖曲線は、時間の関数としての群の中央値の腫瘍容積を示す。動物が腫瘍のサイズによって研究から離脱したとき、その動物について記録した最後の腫瘍容積は、引き続く時点での群中央値の腫瘍容積を計算するために使用したデータに含めた。群中の動物の５０％が研究を離脱した後、曲線を打ち切る。誤差棒によって示される１つの平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を有する平均腫瘍増殖曲線を同様にプロットした。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ図を作成し、時間の関数としての研究に残っている動物の割合を示した。これらの図は、ログランク検定と同一のデータセットを使用した。
【０７２７】
【表３０】
2014210790.tif 000204
【０７２８】
ＳＣＩＤマウスヒト白血病モデルは、新規な化学療法の薬剤、新規な薬物の組合せおよび新規な治療戦略を評価するための有用な手段であった（Ｔｅｉｃｈｅｒ  ＢＡ．Ｔｕｍｏｒ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００２）。ＭＯＬＴ−４ヒト白血病細胞系を、そのα４発現および官能性を示すこの異種移植片効力研究を基にしたＦＡＣＳ分析データについて同定した。１８０匹（１８０）の雌性ＨＲＬＮ  ＣＢ．１７ＳＣＩＤマウスは、腫瘍埋込の日に概ね４週齢であった。実験の開始前マウスを少なくとも７日間順応させ、研究に亘って食物および水を自由に与えた。研究の１日目に、効力の分析のために、動物を腫瘍サイズによって９つの群に選別した（ｎ＝１０）。群平均腫瘍容積は１０７ｍｍ３であり、個々の腫瘍サイズは１０８〜１２６ｍｍ３の範囲であった。
【０７２９】
１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ用量についての投与濃度は、各々２ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬであった。用量は、Ｅｌａｎの「Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  ｆｏｒｍｕｌａ  Ａ」によって製剤し
た。
【０７３０】
マウスに、１日目（登録の日）から開始して項部領域の２３ゲージ針（１〜１．５インチ）によるＳＣ注射によって、式Ａのコンジュゲートおよびビヒクル（ＰＢＳ）を週１回投与した。最近の体重に基づいて動物に２ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬを５ｍＬ／ｋｇで、ならびにＰＢＳ溶液を投与した。
【０７３１】
トポテカンを投与されるマウスは、２３ゲージ針（１〜１．５インチ）によるＩＰ注射によって１日目に開始して３サイクル４日毎に投与された。ＳＣ注射は、クリニックにおいて所定の投与経路である。トポテカンをＤ５Ｗ中に希釈した。
【０７３２】
さらなる研究を行い、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞系ＭＯＬＴ−４のα４β１が媒介する結合相互作用をインビトロで中断する式Ａのコンジュゲートの能力を評価した。ＭＯＬＴ−４上の機能的α４β１の発現を、ＦＡＣＳ分析によって確認した。ＶＣＡＭ−１／Ｆｃは、ＭＯＬＴ−４にα４依存性様式で結合し、式Ａのコンジュゲートは、０．１２ｎＭのＥＣ５０で結合を完全に遮断した。従前の研究は、多発性骨髄腫細胞系がα４インテグリンを発現することを示した（Ｕｃｈｉｙａｍａ  Ｈら、Ｂｌｏｏｄ１９９２；８０（９）：２３０６〜１４）。
【０７３３】
ＭＯＬＴ−４（ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞系）は、Ｐｉｅｄｍｏｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒから得た。細胞系は、研究１３２−０３０−ｍＯＮＣでマウスに埋め込まれた原発腫瘍から調製した。ＭＯＬＴ−４増殖培地は、３７℃、５％ＣＯ２で１０％熱不活性化ＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．０７５％炭酸水素ナトリウム、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、０．２５μｇ／ｍｌのアンホテリシンＢ（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ）およびペニシリン−ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地として調製した。
【０７３４】
ＭＯＬＴ−４細胞を集め、アッセイ緩衝液で一度洗浄した。次いで、細胞を、１０μｇ／ｍｌの２１／６（α４特異的マウス抗体）もしくはＡＩＩＢ２（β１特異的マウス抗体）、または緩衝液単独と共に室温で３０分間インキュベートした。細胞をアッセイ緩衝液で２度洗浄した後、それらを、ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）−ＰＥと共に１：１５０で氷上暗中３０分間インキュベートした。アッセイ緩衝液で一度洗浄した後、細胞をＰＢＳ＋＋／２％ＦＢＳ／１％パラホルムアルデヒド中で固定し、ＦＡＣＳ分析のために氷上で保存した（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）。
【０７３５】
ＭＯＬＴ−４細胞を集め、アッセイ緩衝液で一度洗浄した。次いで、細胞を、２０μｇ／ｍｌの２１／６（２×）、または６μｇ／ｍｌで開始する様々な濃度の式Ａ−５のコンジュゲート（２×）、またはアッセイ緩衝液と共に室温で１５分間プレインキュベートした。組換え可溶性ヒトＶＣＡＭ−１／Ｆｃを２０μｇ／ｍｌで加え、室温で３０分間インキュベートした。次に、細胞をアッセイ緩衝液で２度洗浄し、次いでマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）−ＰＥと共に１：１００で氷上暗中３０分間インキュベートした。アッセイ緩衝液で一度洗浄した後、細胞をＰＢＳ＋＋／２％ＦＢＳ／１％パラホルムアルデヒド中で固定し、ＦＡＣＳ分析（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）のために氷上で保存した。
【０７３６】
［ＭＯＬＴ−４細胞上のα４およびβ１発現］
ＭＯＬＴ−４細胞上のα４およびβ１発現を、各々α４およびβ１インテグリンサブユニットを標的とする２種のインハウスのマウス抗体である２１／６およびＡＩＩＢ２で評価した。図９に示すように、ＭＯＬＴ−４細胞は、α４およびβ１インテグリンサブユニットの両方を発現する。
【０７３７】
［ＭＯＬＴ−４細胞へのＶＣＡＭ−１／Ｆｃ結合］
ＭＯＬＴ−４がヒトＶＣＡＭ−１／ＦＣに結合する能力を、フローサイトメトリー分析によって測定する結合アッセイにおいて評価した。ＶＣＡＭ−１／Ｆｃ結合は、ヒトＦｃ部分への抗体によって検出した。図１０に示すように２１／６の飽和濃度による完全な阻害によって示されるように、組換え可溶性ＶＣＡＭ−１／Ｆｃは、α４依存性様式でＭＯＬＴ−４細胞に結合する。図１１に示すように、式Ａ−５のコンジュゲートは、０．１２ｎＭのＩＣ５０で用量反応様式にてＭＯＬＴ−４細胞へのＶＣＡＭ−１／Ｆｃ結合を阻害した。
【０７３８】
ヒト急性リンパ芽球性白血病ＭＯＬＴ−４細胞は、機能的α４β１を発現し、式Ａのコンジュゲートは、これらの細胞へのヒトＶＣＡＭ−１／Ｆｃ結合をインビトロで阻害することをデータは示す。
【０７３９】
本発明を下記の実施例に関連して詳細に説明してきたが、本発明の趣旨から逸脱することなく様々な改変を行うことができ、当業者には容易に公知であることが理解される。
【図１】
2014210790.tif 000220
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2014210790.tif 000229
【図１１】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年7月2日(2014.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量の式ＩＩ
【化１】
2014210790.tif 000231
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、およびＣ３〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択される）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、もしくはエステルを投与するステップを含む、液性腫瘍増殖、その悪性病変および／またはその転移の発生を阻害する方法。