(57)【要約】【課題】本発明は、ある態様において、癌である又はその疑いのある患者において、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌を検出し、かつ、部位を特定する方法を提供する。【解決手段】当該方法は、以下のステップ：（ａ）リン脂質エーテル類似体を被験者に投与する；（ｂ）癌があると疑われる当該被験者の器官が、周囲領域よりも高いレベルの当該類似体を保持するかかどうか測定する、を含み、ここで、より高い保持領域は癌の検出及び位置を示す。他の態様において、本発明は、被験者の癌の治療方法を提供する。本発明は、リン脂質エーテル類似体を含む分子の有効量の投与を含む。【選択図】図１
2014210803.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌である又はその疑いのある被験者において、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌を検出し、かつ、部位を特定する方法であって、以下のステップ：
リン脂質エーテル類似体を前記被験者に投与する；
前記被験者の癌があると疑われる器官が、周囲領域よりも高いレベルの当該類似体を保持するかかどうか測定する；
を含み、ここで、より高い保持領域は前記癌の検出及び位置を示す前記方法。
【請求項２】
前記リン脂質類似体が、以下の：
【化１】
2014210803.tif 000016
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【化２】
2014210803.tif 000017
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｘが、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リン脂質エーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素が放射性同位体の形態である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
被験者の癌の治療方法であって、以下のステップ：
リン脂質エーテル類似体を含む有効量の分子を前記被験者に投与する、
を含む、前記方法。
【請求項６】
前記癌が、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌、神経こう腫、乳癌、すい臓癌、癌肉腫、及びＰｒｏｓｔｒａｔｅ癌からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記リン脂質類似体が、以下の：
【化３】
2014210803.tif 000018
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【化４】
2014210803.tif 000019
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
Ｘが、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記リン脂質のエーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素が放射性同位体の形態である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
癌の治療用医薬組成物の製造のためのリン脂質エーテル類似体の使用。
【請求項１１】
前記リン脂質類似体が、以下の：
【化５】
2014210803.tif 000020
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【化６】
2014210803.tif 000021
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
Ｘが、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記リン脂質のエーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素が放射性同位体の形態である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１４】
被験者において、新生組織形成から、炎症、腺腫、過形成を識別する方法であって、以下のステップ：
リン脂質エーテル類似体を前記被験者に投与する；及び
前記被験者の炎症、腺腫、過形成又は新生組織形成の疑いのある器官が、周囲領域より高いレベルの当該類似体を保持するかどうか測定する；
を含み、ここで、より高い保持領域は新生組織形成の検出及び位置を示し、かつ、より低い保持領域は当該腺腫、過形成又は炎症を有する疑いのある器官の存在を示す前記方法。
【請求項１５】
前記リン脂質類似体が、以下の：
【化７】
2014210803.tif 000022
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【化８】
2014210803.tif 000023
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ｘが、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記リン脂質のエーテルが、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素が放射性同位体の形態である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）を有する組織サンプル中の新生組織形成を検出する方法であって、以下のステップ：
前記組織サンプル中のＰＬＤ蛋白質活性レベル又はＰＬＤｍＲＮＡレベルを定量化する；及び
前記組織サンプルが周囲の組織領域より低い蛋白質活性レベルであるかどうか測定する、ここでより低い活性領域は新生組織形成の検出及び位置を示す；又は
前記組織サンプルが周囲の組織領域より低いｍＲＮＡレベルであるかどうか測定する、ここでより低いｍＲＮＡレベル領域は新生組織形成の検出及び位置を示す；
を含む前記方法。
【請求項１９】
ＰＬＤ蛋白質活性又はｍＲＮＡレベルが、前記組織サンプルと前記ＰＬＥ類似体との接触により定量化され、ここで当該ＰＬＥ類似体が、以下の：
【化９】
2014210803.tif 000024
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【化１０】
2014210803.tif 000025
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される、請求項１８に記載の新生組織形成の検出方法。
【請求項２０】
Ｘが、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＰＬＥの類似体が、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素が放射性同位体の形態である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
ＰＬＤを有する組織サンプルをスクリーニングする方法により選択される抗腫瘍薬であって、当該スクリーニング法が、以下のステップ：
前記ＰＬＤ蛋白質活性レベル又はＰＬＤｍＲＮＡレベルを定量化するステップ、
を含み、ここで周囲の組織領域と比較して低減されたＰＬＤ蛋白質活性又は低減されたｍＲＮＡのレベルが新生組織形成を示す、前記抗腫瘍薬。
【請求項２３】
ＰＬＤ蛋白質活性又は前記ｍＲＮＡレベルが、前記組織サンプルと前記ＰＬＥ類似体との接触により定量化され、ここで当該ＰＬＥ類似体が、以下の：
【化１１】
2014210803.tif 000026
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【化１２】
2014210803.tif 000027
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される、請求項２２に記載の抗腫瘍薬。
【請求項２４】
Ｘが、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される、請求項２３に記載の抗腫瘍薬。
【請求項２５】
前記ＰＬＥの類似体が、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素が放射性同位体の形態である、請求項２３に記載の抗腫瘍薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００４年３月２日に出願された米国仮出願番号第６０／５２１，１６６号からの優先権の利益を主張し、そしてその内容全体を本願明細書中に援用する。
【背景技術】
【０００２】
技術背景
本発明は、腫瘍の画像診断に一般的に関し、かつ、リン脂質類似体を用いた画像診断に特に関する。
【０００３】
癌の早期発見は現代の画像技術の主要目的の内の１つである、というのは、限局性ステージにおける疑わしい腫瘍の同定は、成功的治療及び癌組織の除去の機会を著しく改善するからである。それ故、様々な技術及びモダリティを使用する多くの画像化戦略が、できるだけ早く正確な診断を行う際の医師を補助するために計画される。
【０００４】
不運なことに、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）及びＭＲＩ（磁気共鳴影像法）の如き慣習的な画像技術は、疑わしい病巣の最終的な診断を提供するために、その能力において限界がある、というのは、組織の密度及び形態における相違を観察することができるに過ぎないからである。より侵襲的な及び費用のかかる生検手技が、確定診断を提供するためにしばしば必要とされる。対照的に、陽電子放出型断層撮影法（ＰＥＴ）及び単光子放出断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）の如き核医学技術は、特に着目の器官又は領域について機能的又は生物化学的情報を提供し得る。しかしながら、これらの核医学技術の成功は、適した放射性医薬品の取り込み及び検出に大部分を依存する。言い換えると、選択的取り込みは、標的組織に対する高度の特異性を有する放射性医薬品の開発に依存する。不運なことに、これまでのところ、腫瘍学の適用のために開発された腫瘍−局在物質は、適用が限られている。
【０００５】
例えば、これらの先行技術の化合物の内の１つである６７Ｇａ  ガリウム  シトレートは、当初、腫瘍組織中に蓄積するその能力について同定された。不運なことに、６７Ｇａ  ガリウム  シトレートは、非炎症性病巣、並びに様々な他の非癌性病巣により取り込まれ、そして許容し得ない量の放射活性が、肝臓及び脾臓組織中にも蓄積され得る。これらの臓器中の放射性医薬品の迅速な集積は、周辺病巣の画像に重大な緩衝を及ぼし、患者に安全に与えられ得る用量にも悪影響を与える。
【０００６】
代替的アプローチは、腫瘍特異的抗原に直接作用する放射標識モノクローナル抗体（Ｍａｂｓ）の開発である。しかしながら、これらのモノクローナル抗体は、それらが産生される特定の腫瘍組織に対してのみ特異的であり、それ故、一般的に新生物組織中に局在しないだろう。さらに、画像診断のためのＭａｂｓの使用は、抗原発現、低い腫瘍取り込み、非特異性結合、及び免疫原性副作用を含む更なる問題を導く。
【０００７】
これらの問題に応えるようと試みるにあたり、本願発明者等は、最近、有用な腫瘍特異性を示す一連の新規化合物を同定し開発した。例えば、米国特許第４，９２５，６４９号、同第４，９６５，３９１号、同第５，０８７，７２１号、同第５，３４７，０３０号、及び同第６，４１７，３８４号を参照のこと、これらの全てを引用により本願明細書中に援用する。これらの放射性ヨウ化リン脂質エーテル類似体は、悪性腫瘍細胞の特異な生物化学的性質、すなわち、対応する通常組織と比較して当該腫瘍細胞膜中の天然由来のエーテル脂質の高濃度をうまく利用すると信じられる。作用の正確なメカニズムは完全に理解されたわけではないけれども、一般的な仮説としては、当該リン脂質エーテル類似体は腫瘍膜に取り込まれる。従って、これらの化合物は、腫瘍組織に局在し、そして診断、及び／又は治療の適用のために所定の場所に留保する。
【０００８】
上記特許中に記載される放射標識されたリン脂質エーテル類似体の選択的保持は、様々なげっ歯目及び動物の腫瘍異種移植片において例証され、そしてヒト疾患によりそっくりな模倣と思われる自然発生の腫瘍モデルにおいては例証されない。不運なことに、これらの試験から得られたデータは、血液から放射性薬剤化合物の非常に早い一掃、及び非標的組織による所望しない蓄積を例証する。上記のように、非標的組織の取り込みは、高いバックグラウンド活性を作り出すことにより、又は注入された放射活性に対する放射感受性組織の過度の放射を引き起こすことにより、放射性画像診断の効果を低減させる。
【０００９】
従って、非標的組織からの素早い一掃、並びに延長された血漿中の半減期を示し、一方、新生物組織に対する特異性及び親和力をさらに保持する放射性医薬物について、本分野における重要な必要性の余地がある。そのような物質は、原発腫瘍及び転移の非侵襲性画像において支援するだけでなく、悪性腫瘍の部位特異的撲滅のための細胞毒性薬用担体として、特に最も頻繁に診断された癌形成に関するものとして役立つべきである。放射性医薬物質が悪性腫瘍に対して選択的であり、腺腫及び過形成を含む前癌状態の組織に対してはそうではないことが、さらに所望される。
【００１０】
結腸直腸癌の約１４７，０００人の新患が米国内で毎年診断される。このように、結腸直腸癌は、第４の最も一般的な癌であり、１年あたり６０，０００人の死亡を計上する１。治療は、癌のステージに主に依存するが、手術、放射線療法、化学療法、及び／又は高周波又は細胞アブレーションを含み得る。しかしながら、結腸直腸癌患者についての所定の検証において、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、大腸腫瘍マーカー、及び反復結腸内視鏡の測定は、患者の５０％以上における再発を検出できない。それ故、再発病の検出のための更なる方法の開発必要性がある。
【００１１】
さらに、ＣＴスキャン及びＲＦアブレーションを使用する治療及び診断の間、ＣＴスキャンからの機能的情報は、入手困難である。機能強化されたらせんＣＴと対比して、当該腫瘍血管増生はある程度評価され得るが、生存腫瘍細胞がＲＦ損傷の中に残留するかどうか、正確に測定する方法がない。さらに、ＲＦにより作り出された熱損傷は、ＣＴスキャン処置後６ヶ月に渡って、通常その周囲の炎症縁を有する。ＰＥＴスキャンは、その後、アブレーション後の患者に使用されるが、炎症縁周囲のＲＦ熱損傷は、生存腫瘍細胞の非存在部分でさえ、通常、増大された取り込みを示す。これは、再発性腫瘍の早期発見のための感受性及び特異性を低減する。
【００１２】
よって、悪性腫瘍細胞に対して選択性があり、及び無期限に保持されるＮＭ４０４の如き物質が好ましく、腫瘍細胞選択的ではなく、並びに感染部位及び異常増殖（バレット食道）に向かうＦＤＧは好ましくない。さらに、１２４Ｉを含むＮＭ４０４のごとき化合物であって、４日間の物理的半減期を有し及び世界中のどこにでも出荷され得る当該化合物は、１１０分間の半減期を有し、それ故、製造地から２００マイル以内のみの限定販路であろうＦＤＧと比較して好ましい。さらに、長期保持（代謝されない）を被るＮ４０４の如き化合物は、１３１Ｉの如き適当な放射性同位体と結合するとき、顕著な治療可能性を有し得がちであるので、好ましい。さらに、様々なヨウ素同位体で標識され及び拡張された汎用性（診断及び治療、並びに動物実験研究のための道具）を有するＮＭ４０４の如き化合物は、ＰＥＴスキャン用の１８Ｆ又は低感受性レベルではあるが磁気共鳴画像用の１９Ｆ（安定）に限定されるＦＤＧと比較して好まれる。その腫瘍標的能力にかかわらず、ＦＤＧは、腫瘍細胞における素早い代謝に起因し、治療用可能性を有さない。その結果、他の化合物が、ＲＦ後の局所再発を調査するために必要とされる。さらに、もし当該腫瘍が、当該局所腫瘍の発育及び再発のいずれかにより転移するならば、ハイブリッド画像診断法（ＰＥＴ及びＣＴの組み合わせ）であって、処置後、個々のＣＴ及びＰＥＴスキャンを置き換えることが非常に望まれる。
【００１３】
さらに、化学療法が治療形態の場合でさえ、化学療法に対する反応の改良されたモニタリングが必要不可欠である。それ故、患者を長期治療の毒性にさらすことなく、医師が効果の無い化学療法の投与計画の使用を素早く中止することを可能とするような、化学療法に対する反応を試験するための初期マーカーの開発が、望まれる。外部照射療法（Ｅｘｔｅｒｎａｌ  Ｂｅａｍ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ）が組織学的に類似する腫瘍を有する患者のための代替治療の場合、腫瘍は治癒目的の体外照射療法（ＸＲＴ）と劇的に異なる反応を有し得る。術前放射線療法で治療された直腸癌を有する患者において完全消失となり者もいれば、一方、組織学的に類似するもの（光学顕微鏡レベルで）を有する患者において、治療に対する応答不良となり疾病が再発する者もいるだろう。放射線療法に対する反応が、最終的な腫瘍制御、及び多くの消化管癌、肺癌、頭頸部癌、及び婦人科癌を含む多くの癌に対する生存の予測因子となる。反応の前兆となる、大抵の反応キャラクタリゼーション法は、治療完了後に実施される。治療内の臨床評価は治療を調整するにあたり有用である１４一方、多くの場合、実際の治療の間、腫瘍反応を予測する正確な方法はない。そのような試験であって、特に腫瘍部位及び組織像の広範囲に適用されるものは、明らかに非常に有用であり及び所望されるだろう。他の治療及び診断方法は、治療に対する反応を予測することを企図する分子アッセイを含み、最近の取り組みは、治療に対する反応又は反応の欠如と相関する遺伝的変化を同定するためのＤＮＡマイクロアレイの使用を含む。これらは治験用途であり、日常的な臨床用途中にはない。
【００１４】
さらに他の診断及び治療方法は、ＸＲＴ治療の間の反応を予測するための画像診断法の使用を含む。ＦＤＧを使用する治療内ＰＥＴスキャンは活発な調査の下にあり、ここで放射線治療を通じて、原発腫瘍の中途における当該同位体の取り込みは、前治療の取り込みと比較される。いくつかの遡及的試験は、治療の間における継続した強い取り込みを有する患者は、その腫瘍が治療の間において非常に少ないＦＤＧである患者よりも低い腫瘍制御成果を有することを提示する。しかしながら、様々な癌に対するさらに効果的なスクリーニング、診断、及び治療方法が、非常に望まれる。
【００１５】
他のよく観察される腫瘍は、原発性脳腫瘍と最も共通するタイプである悪性神経こう腫を含む。外科的処置、放射線療法、及び化学療法での積極的治療にかかわらず、これらの腫瘍を持つ大抵の患者で、診断後生き残るのは２年未満である。神経放射線学及び磁気共鳴影像法（ＭＲＩ）における最近の進歩は、これらの腫瘍の初期診断及び治療に重大な衝撃を与える。しかしながら、大抵の悪性神経こう腫は湿潤性成分を有し、そしてそれは現在の画像技術により浮腫性頭脳組織と識別される。治療が最も困難であり及び局所再発の原因となるのは、しばしば当該腫瘍のこの成分である。疑いようも無く、侵襲的神経こう腫細胞のより良い視覚化が、重大な治療上の措置として所望される。
【００１６】
同様にすい臓癌は、主要な悪性腫瘍の全ての中で、存命の最も低い可能性を有する致命的な疾患である。それは、米国内の癌死亡の、及び米国内の新たに診断された癌の５番目の主要原因であり、１年当たり２％がすい臓癌に起因する。しかしながら、それは、全癌死亡の５％の割合を占める最も高い致命的な疾患の内の１つである。Ｍｉｌｌｅｒ  ＢＡ，ｅｔ  ａｌ．ＮＩＨ  Ｐｕｂ．Ｎｏ．９６−４１０４．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．１９９６。これは、切除不能癌を有する患者の内、５年間生きる人はいない事実を示す。さらに、外科的切除は治療としての僅かな期待を与えるけれども、切除後５年間生き残る者はたった２０％である。Ｇｅｅｒ  ＲＪ，Ｂｒｅｎｎａｎ  ＭＦ．Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  １９９３；１６５：６８−７２；Ｙｅｏ  ＣＪ，Ｃａｍｅｒｏｎ  ＪＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｓｕｒｇ  １９９７．１８−ＦＤＧを有するＰＥＴスキャンは、様々な他の原発性癌を画像化するに際し保証を示すけれども、特に転移性疾患を評価する際の、すい臓癌を有する患者に対するＣＴスキャンの画像化能力に関して改善するためには、能力が限られているように思われる。Ｋａｓｐｅｒｋ  ＲＫ，Ｒｉｅｓｅｎｅｒ  ＫＰ，ｅｔ  ａｌ．，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  ２００１；２５：１１３４−１１３９；Ｓｅｎｄｌｅｒ  Ａ，Ａｖｒｉｌ，Ｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  ２０００；２４：１１２１−１１２９。それ故、潜在性転移すい臓癌を有する患者を正確に画像化する方法の必要性が残る。
【００１７】
肝細胞癌は、世界的に最も一般的な固形臓器の悪性腫瘍であり、肝炎又はアルコール依存症による慢性の肝臓損傷のその病因に起因する。発生率は、北米の１００，０００人当たり２．１人〜中国の高発生地域における１００，０００人当たり８０人と顕著に異なる。肝硬変を有する患者におけるＨＣＣになる危険性は、年当たり１〜６％である。切除が唯一の治療用選択肢であるけれども、弱い肝臓の保有、あるいは切除不可能又は転移性疾患に起因して、患者の僅か１０〜３０％のみが提示期間での外科的処置の候補となる。この疾患の悪性の性質を証明するように、５年間の生存率は、治療的切除後、僅か１５〜３５％のみである。Ｔｒｅｉｂｅｒ  Ｇ．Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００１）１９：３１１−３２３。
【００１８】
今日、乳癌は、米国で女性について主要な健康上の懸念である。米国だけで２１６，０００人ちかくが、２００４年に乳癌と診断され、これらの４０，０００人は死の危険性があることが予想された。局所的、局地的、及び遠隔の転移拡散の正確な評価は、疾患治療及び管理にとって必要不可欠である。リンパ節転移を含む、局所的又は遠隔乳癌転移の検出及び／又は特徴付けを可能とする断層画像診断法の開発は、この疾患の管理において重要な利点を示すだろう。マンモグラフィーは、乳癌の早期発見のための最適な現在のスクリーニング法であるけれども、リンパ節周辺への組織学的確認及び局地的拡散は、生検により評価される。９９ｍＴｃ−Ｓｅｓｔａｍｉｂｉ及び１８Ｆ−ＦＤＧ  ＰＥＴスキャンでのシンチグラフィースキャンを含む、さらに洗練された画像方法は、現在、広範に検査されるが、主に予測できない特異度に起因する治療計画に重要な影響を及ぼさない。Ｗａｈｌ  ＲＬ．Ｑｕａｒｔ  Ｊ  ｏｆ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ（１９９８）４２：１−７。しかしながら、ＰＥＴスキャンの役割は、化学療法に対する腫瘍反応を測定する際の有効性を示唆することである。Ｓｍｉｔｈ  ＩＣ，Ｗｅｌｃｈ  ＡＥ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ｏｆ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２０００）１８：１６７６−１６８８；Ｓｃｈｅｌｌｉｎｇ  Ｍ，Ａｖｒｉｌ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ｏｆ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２０００）１８：１６８９−１６９５。放射線療法は、電離放射線に対する浸潤性乳管癌を含む多くの固形上皮腫瘍の感受性に主に起因する、乳癌治療における確立した役割を有する。ＤｅＶｉｔａ  Ｖ，Ｈｅｌｌｍａｎ  Ｓ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  Ｓ．Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第６版．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（ＰＡ）：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００２，１６６７−１６８０ページ。乳癌における放射線についての最も一般的な適用は、腫瘍摘出手術又は乳腺切除手術の後の補助療法としてのものである。
【００１９】
これに関連して、放射線療法は、これらの組織中の微細な沈着物を殺菌することにより局所的及び局地的な再発を劇的に低減することを示す。化学療法は、患者が転移性疾患を有するとき又は潜在性転移の危険性を有するとみなされるときに提案される。この後者の適用において、補助化学療法剤の投与における試験は、補助的な化学療法又はホルモン療法を受ける患者における生存の改善を確固たるものとする。放射線は、固形臓器及び骨における転移の痛みや体積効果を低減する良い効果を有する苦痛緩和剤の設定にも使用される。多くの患者は、多因子的な理由から、根治治療後に再発する。放射線及び化学療法に対する獲得耐性は、疑いようもなく一次治療後、再発の一因となる。
【００２０】
さらに、放射線の使用は、一般的に遅れて生ずる及び用量を制限する特異的毒性に関連する。もし放射線の過量が使用されたならば、繊維症、神経損傷、及び軟組織の壊死が重度となり得る。腕のリンパ水腫は、乳癌患者にとって最も一般的及び重篤な毒性であり、かつ、腋下切開（診断目的で行われる）と脇の下への補助放射線療法との組み合わせに起因する。主として、各特定の腫瘍型に特異的な受容体又は分子を標的にされる新たな抗がん剤と対照的に、様々な異なる腫瘍型に適用可能な共通機構に依存する新たな化合物が、非常に望まれる。
【００２１】
それ故、高い感受性及び特異性のいずれをも得られる、非侵襲性乳癌の画像技術についての急を要する臨床的必要性の余地がある。さらに、原発腫瘍及び転移性腫瘍の双方に同時にヨウ素１３１の用量をデリバリーする可能性は、重要な付加利益である。
【００２２】
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、米国内の癌死の主な原因である。適切に選択された患者における外科的切除は、長期生存の最も良い機会を提供し、治癒し得る。それ故、局所的、局地的、及び遠隔転移拡散の正確な術前評価は、最適な管理のための重大な意味をもつ。縦隔リンパ節の状態の評価は必要不可欠であり、なぜならば、ＮＳＣＬＣを有する全患者の内の半分近くに生ずるリンパ節転移は、治癒に対するおそらく最も頻繁な障害となるからである。正確な病状は、患者を不必要な病的状態、非治癒外科手術からも救う。
【００２３】
ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンでの画像化は、特にＣＴ画像化と比較したときの改良された感度に起因して、すぐに、ＮＳＣＬＣを画像化する最も基準となる検査となる。しかしながら、これは、大抵の一般診療において有用ではない高価な画像検査である。それ故、感受性、特異性があり、大抵の患者とって容易に利用可能である手段を使用する画像技術の必要性の余地がある。
【００２４】
１８Ｆ−ＦＤＧを有するポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）スキャンは、画像技術としてかなりの関心を集める。最近の研究は、ＮＳＣＬＣの状態に対する標準的アプローチ（ＣＴ、超音波、骨のスキャンなど）の能力と、縦隔リンパ節及び遠隔部位の転移を検出するためのＰＥＴスキャンを予め比較する。Ｐｉｅｔｅｒｍａｎ  ＲＭ，ｖａｎＰｕｔｔｅｎ  ＪＷＧ，Ｍｅｕｚｚｅｌａａｒ  ＪＪ，Ｍｏｏｙａａｒｔ  ＥＬ，Ｖａｌｂｕｒｇ  Ｗ，Ｋｏｅｔｅｒ  ＧＨ，Ｆｉｄｌｅｒ  Ｖ，Ｐｒｉｕｍ  Ｊ，Ｇｒｏｅｎ  ＨＪＭ．Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｓｔａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  Ｐｏｓｉｔｒｏｎ−Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４３：２５４−２６１，２０００。
【００２５】
縦隔関与が病理組織的に確認され、及び遠隔転移が他の画像試験により確認された。縦隔転移を検出するためのＰＥＴの感受性及び特異性は、それぞれ９１％及び８６％であり、遠隔転移の検出については、それぞれ８２％及び９３％である。比較として縦隔関与のＣＴスキャンについての感受性及び特異性は、それぞれ７５％及び６６％である。他の試験は、画像化とＦＤＧ−ＰＥＴ、ＣＴ、及び組織学的結果と比較した。リンパ節（５４人の患者において、ｎ＝１６８）の状態についてのＰＥＴの総合的な、感受性、特異性、及び正確性は、９６％、９３％、及び９４％であり、比較としてＣＴでは６８％、６５％、及び６％であった。Ｇｕｐｔａ  ＮＣ，Ｇｒａｅｂｅｒ  ＧＭ，Ｂｉｓｈｏｐ  ＨＡ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｗｉｔｈ  ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ  ｉｎ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ（＜１ｃｍ），ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ（１〜３ｃｍ），ａｎｄ  ｌａｒｇｅ（＞３ｃｍ）ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｌｅｓｉｏｎｓ．Ｃｈｅｓｔ  １１７（３）：７７３−７７８，２０００。
【００２６】
しかしながら、ＰＥＴスキャンの限界は、費用、限られた利用、１ｃｍ未満の病巣を検出するのはできないこと、及び特異性の欠如を、特に炎症又は肉芽腫疾患を有する患者において含む。Ｓｔｏｋｋｅｌ  ＭＰ，Ｂａｋｋｅｒ  ＰＦ，Ｈｅｉｎｅ  Ｒ，Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ  ＮＪ，Ｌａｍｍｅｒｓ  ＪＷ，  Ｖａｎ  Ｒｉｊｋ  ＰＰ．Ｓｔａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅｓ  ｗｉｔｈ  ＦＤＧ  ｄｕａｌ  ｈｅａｄｅｄ  ＰＥＴ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０（１１）：１００１−１００７，１９９９；Ｋａｐｕｃｏ  ＬＯ，Ｍｅｌｔｚｅｒ  ＣＣ，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ  ＤＷ，Ｋｅｅｎａｎ  ＲＪ，Ｌｕｋｅｔｉｃｈ  ＪＤ．Ｆｌｕｏｒｉｎｅ−１８−ｆｌｕｏｒｏ−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３９（７）：１２６７−１２６９，１９９８。
【００２７】
ＣＴスキャンの如き慣習的解剖学的画像技術は、治療後の腫瘍の縮小にも関わらず、処置後の生存を予見するのも弱さがある。進行疾患に対するシスプラチンに基づく化学／放射線療法の併用療法又は放射線療法のみで処置を受けている５６人のＮＳＣＬＣの患者に関する最近の研究において、慣習的ＣＴ画像化による反応は、生存に相関しなかった。ＭａｃＭａｎｕｓ  ＭＰ，Ｈｉｃｋｓ  ＲＪ，Ｗａｄａ  Ｍ，Ｈｏｆｆ  Ａ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ  Ｊ，Ｗｉｒｔｈ  Ａ，Ｒｉｓｃｈｉｎ  Ｄ，Ｂａｌｌ  ＤＬ．Ｅａｒｌｙ  Ｆ−１８  ＦＤＧ−ＰＥＴ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｒａｄｉｃａｌ  ｃｈｅｍｏｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｓｔｒｏｎｇｌｙ  ｗｉｔｈ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｏｃ  ＡＳＣＯ  １９：４８３ａ，２０００。しかしながら、ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンによる反応は、生存と強固に相関した（ｐ＝０．０００６）。続くＰＥＴスキャンの日からの生存は、ＰＥＴにおける完全消失を有する２４人の患者について、１及び２年でそれぞれ８４％及び８４％だったが、しかしそうでなかった３２人の患者では、４３％及び３１％に過ぎなかった（ｐ＝０．０１０）。これらの結果は、他の筆者により最近報告された類似の所見を裏付ける。Ｐａｔｚ  ＥＦ  Ｊｒ．Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  Ｊ，Ｈｅｒｎｄｏｎ  Ｊ．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｔｈｏｒａｃｉｃ  ＦＤＧ  ＰＥＴ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｏｅｎｔｇｅｎｏｌｏｇｙ  １７４（３）：７６９−７７４，２０００；Ｖａｎｓｔｅｅｎｋｉｓｔｅ  ＪＦ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔｓ  ＳＧ，Ｄｕｐｏｎｔ  ＰＪ，ＤｅＬｅｙｎ  ＰＲ，Ｖｅｒｂｅｋｅｎ  ＥＫ，Ｄｅｎｅｆｆｅ  ＧＪ，Ｍｏｒｔｅｌｍａｎｓ  ＬＡ，Ｄｅｍｅｄｔｓ  ＭＧ．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ  ｕｐｔａｋｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｎ  （１８）Ｆ−ｆｌｕｏｒｏ−２−ｄｅｏｘｙ−ｇｌｕｃｏｓｅ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｓｃａｎ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ：Ａｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  １２５  ｃａｓｅｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １７（１０）：３２０１−３２０６，１９９９；Ａｈｕｊａ  Ｖ，Ｃｏｌｅｍａｎ  ＲＥ，Ｈｅｒｎｄｏｎ  Ｊ，Ｐａｔｚ  ＥＦＪｒ．Ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｆｌｕｏｒｏｄｅｘｏｙｇｌｕｃｏｓｅ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  ８３（５）：９１８−９２４，１９９８。
【００２８】
それ故、ＮＳＣＬＣを有する患者における初期の転移性疾患を正確に同定し得、場合により処置し得る、容易に入手可能な放射性医薬品は、ステージ及び治療に対する応答に関して、患者治療に重要な影響を有する。ＰＥＴ撮像法はこの領域内に有効性を有するけれども、費用及び近づきにくいことが、実用化を厳しく制限する。比較的安価で及び広範に入手可能な画像化装置を使用して、非侵襲的に全身を審査し得る腫瘍特異的機能に基づく、正確な機能的画像化技術の必要性が残る。
【発明の概要】
【００２９】
本発明の概要
本発明は、様々な癌の検出及び治療のための方法及び技術を広く提供する。ある好ましい態様において、本発明は、癌である又はその疑いのある患者において、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌を検出し、かつ、部位を特定する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）リン脂質エーテル類似体を当該被験者に投与する；
（ｂ）当該被験者の癌があると疑われる器官が、周囲領域よりも高いレベルの当該類似体を保持するかかどうか測定する、を含み、ここで、より高い保持領域は癌の検出及び位置を示す。
【００３０】
この方法において、当該リン脂質類似体は、以下の：
【化１】
2014210803.tif 000003
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【００３１】
【化２】
2014210803.tif 000004
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される。
【００３２】
この方法において、Ｘは、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される。
【００３３】
好ましくは、この方法において、当該リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素は放射性同位体の形態である。
【００３４】
他の態様において、本発明は被験者の癌の治療方法を提供する。当該方法は、上記のように、リン脂質エーテル類似体を含む有効量の分子を当該被験者に投与することを含む。
この方法において、当該癌は、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌、神経こう腫、乳癌、すい臓癌、癌肉腫、及びＰｒｏｓｔｒａｔｅ癌からなる群より選択される。
【００３５】
本発明は、癌の治療用医薬組成物の製造のためのリン脂質エーテル類似体の使用をも企図する。これらのリン脂質類似体は、上記の群から選択される。
【００３６】
さらに、本発明の他の態様は、被験者において、新生組織形成と、炎症、腺腫、過形成を識別する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）リン脂質エーテル類似体を当該被験者に投与する；及び
（ｂ）当該被験者の炎症、腺腫、過形成又は新生組織形成の疑いのある器官が、周囲領域より高いレベルの当該類似体を保持するかどうか測定する；
を含む。当該被験者がより高い保持領域を有するとき、それは新生組織形成の検出及び位置を示し、及び、当該被験者がより低い保持領域を有するとき、それは当該腺腫、過形成又は炎症を有する疑いのある器官の存在を示す。
【００３７】
本発明の他の態様は、ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）を有する組織サンプル中の新生組織形成を検出する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）当該組織サンプル中のＰＬＤ蛋白質活性レベル又はＰＬＤｍＲＮＡレベルを定量化する；及び
（ｂ）当該組織サンプルが周囲の組織領域より低い蛋白質活性レベルであるかどうか測定する、ここでより低い活性領域は新生組織形成の検出及び位置を示す、又は
（ｃ）当該組織サンプルが周囲の組織領域より低いｍＲＮＡレベルであるかどうか測定する、ここでより低いｍＲＮＡレベル領域は新生組織形成の検出及び位置を示す、
を含む。
【００３８】
この方法において、当該ＰＬＤ蛋白質活性又はｍＲＮＡレベルは、当該組織サンプルと当該ＰＬＥ類似体との接触により定量化され、ここで当該ＰＬＥ類似体は、上記のような類似体である。
【００３９】
さらに、本発明の他の態様は、以下のステップ：
（ａ）ＰＬＤ蛋白質活性レベル又はＰＬＤｍＲＮＡレベルを定量化するステップであって、ここで周囲の組織領域と比較して低減されたＰＬＤ蛋白質活性又は低減されたｍＲＮＡのレベルが、新生組織形成を示す、
を含む、ＰＬＤを有する組織サンプルをスクリーニングする方法により選択される抗腫瘍薬を提供する。当該ＰＬＤ蛋白質活性又はｍＲＮＡレベルが、当該組織サンプルとＰＬＥ類似体との接触により定量化され、ここで当該ＰＬＥ類似体は、上記の通りである。
【００４０】
本発明の他の対象及び利点は、詳細な説明、本明細書に添付する図面、請求項から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、ＰＬＥ腫瘍細胞の画像化仮説である。
【図２】図２は、１ｍＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ３２４の静脈内投与後、１、２、及び６日で得た患者０３の前胸部のシンチグラフィーである。取り込みは、時間とともに増大する腫瘍対バックグラウンドの比での、左舌の肺癌（Ｔ）に見られる。
【図３】図３は、ＰＬＥ類似体の構造である。
【図３Ａ】図３Ａは、ＮＭ４０４類似体である。
【図４】図４は、静脈内投与後のＳＣＩＤマウスＡ５４９肺腫瘍モデルにおけるＮＭ３２４及びＮＭ４０４の比較である。ＮＭ３２４活性の大部分は腸内に見られ、及び当該腫瘍内（大腿部に移植された）には見られない、一方、ＮＭ４０４は、各大腿部内に腫瘍が同定されたことに留意する。
【図４Ａ】図４Ａは、外科的に除去された原発腫瘍部位（脚）を有するコペンハーゲンラットにおける、ダニングＲ３３２７転移性前立腺腫瘍のシンチグラフィーによるＮＭ４０４の画像である。２つのリンパ節腫瘍が、死後に確認された。
【図５】図５は、皮下注入されたマウスモデルにおけるＣＴ２６腫瘍の成長パターンを示す。
【図６】図６は、摘出されたＣＴ−２６腫瘍（Ｔ）並びに左及び右リンパ節（ＬＮ）のデジタル写真（Ａ）、バイオスキャン画像（Ｂ）、及び腫瘍内の放射活性の相関関係を示す融合された写真／バイオスキャン画像（Ｃ）である。
【図７】図７は、ＣＴ−２６腫瘍（矢印）のサイズ及び配置を示す、図６の生存マウスのマイクロＣＴ画像である。表示された３Ｄ−表面、及びプレーナ  スライス画像（Ａ、Ｂ）、並びに冠状（Ｃ）及び軸方向（Ｄ）のスライス（厚さ４０μｍ）である。
【図８】図８は、正常な（左）及びＲＦ−剥離された（右）ＣＴ−２６腫瘍の組織切片（Ｈ＆Ｅ）である。剥離された部分は、完全に膜を失い、かつ、濃縮が現れる。
【図９】図９は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４の注入後４日目のｃ−ｍｙｃすい臓腫瘍マウスの融合された生体内バイオスキャン／デジタル写真画像（Ａ）、及びデジタル写真ン（Ｃ）と比較のための摘出腫瘍の生体外画像（Ｂ）である。色は、図１０と同様の範囲である。
【図１０】図１０は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４の投与後４日目のｃ−ｍｙｃすい臓腫瘍マウスのバイオスキャン画像である。生体内画像（Ａ）と並んで、大きな（２ｃｍ）すい臓腫瘍（Ｔ）の存在を示す解剖されたマウス（Ｂ）のデジタル画像である。３つの腫瘍を摘出し、残った死体をスキャンした（Ｃ）。当該摘出された腫瘍をスキャンし（Ｄ）、比較としてデジタル写真（Ｅ）を並べた。カラースケールは、０（黒）〜４０（白）ｃｐｍの範囲である。
【図１１】図１１は、すい臓腫瘍を有するマウスのマイクロＣＴの軸方向のスキャンである。２つの大きな腫瘍（Ｔ）が、パネルＡにおける当該軸方向の画像中に容易にみられる。Ｂにおける異なるマウスの画像は、脾臓に近接したすい臓腫瘍（矢印）を描く。マウスにおいて、当該すい臓は普遍的な組織である。当該摘出された脾臓及び付着腫瘍のデジタル写真を、比較として図１１Ｃに示す。
【図１２】図１２は、病気の対照ラット脳（Ａ）のバイオスキャン画像（１２５Ｉ−ＮＭ４０４の静脈内注入後４日目）であり、そして同様のバイオスキャン画像を、正常な脳組織におけるＮＭ４０４の低いバックグラウンドを示す摘出されたラットの脳の対応するデジタル写真の上に重ね焼きした。
【図１３】図１３は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４の静脈内注入後４日目のラット脳を有する摘出されたＣ６−神経こう腫のデジタル写真（Ａ）及び対応するバイオスキャン画像（Ｂ）である。位置及び大きさを接合した、融合されたバイオスキャン画像及び写真（Ｃ）は、腫瘍中のＮＭ４０４の非常に強い局在を示す。当該腫瘍の存在は、Ｄ中のＨ＆Ｅ染色されたサンプルにおいて、組織学的に確認された。
【図１４】図１４は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４の注入後１０日目のＴＧＦα肝臓癌を有するマウスの冠状マイクロＣＴスキャン（左）及び背部バイオスキャン画像（右）である。肝臓は、ＩＴＧ、肝細胞選択的ＣＴ造影剤で、マイクロＣＴ画像上、強化された（腫瘍＝Ｔ）。
【図１５】図１５は、ＮＭ４０４の注入後７日目の摘出されたＣＴ−２６腫瘍を有するマウス肝臓の写真（左）及びバイオスキャン画像（右）である。肝臓腫瘍の関与は広範囲に及んだ。腫瘍移植は、このスキャンの１５日前に実施された。摘出され解剖された腫瘍（Ｔ）及び正常な関与しない肝臓（Ｌ）のバイオスキャン画像（Ｃ）及び写真（Ｄ）である。
【図１６】図１６は、複数のＣＴ２６腫瘍の存在を示す図１５に表されたのと同じマウスのマイクロＣＴである。肝臓を、ＩＴＧ、肝細胞選択的造影剤を使用して強化した。これらの画像を、腫瘍細胞移植後１０日目、かつ、上記バイオスキャン画像に先立ち５日で得た（腫瘍は矢印により示され、胆嚢＝ＧＢである。）。
【図１７】図１７は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４（１５μＣｉ）の静脈投与後、様々な時で、自然発生の右腋下乳腺腫瘍（直径１０ｍｍ）を有するＭｉｎマウスのＮＭ４０４バイオスキャン画像である。冠状マイクロＣＴ画像（非コントラスト促進）を、解剖学的比較として示す（左のパネル、Ｔ＝腫瘍）。
【図１８】図１８は、摘出された左及び右の腹部の乳腺の、カルミン染色写真（Ａ、Ｃ）及びバイオスキャン画像（Ｂ、Ｄ）である。当該左の乳腺のバイオスキャン画像（Ｂ）において容易に検出されるパネルＡにおける２ｍｍの腫瘍（Ｔ）に留意する。リンパ節（Ａにおける小さな矢印）は、ＮＭ４０４の非取り込みを示す。右の乳腺（Ｃ、Ｄ）中に、視覚的に腫瘍は検出されなかった。結腸の写真（Ｅ）及びバイオスキャン画像（Ｆ）は、腺腫性ポリープ（矢印）におけるＮＭ４０４の非取り込みを示す。
【図１９】図１９は、図１８のＭｉｎマウスのマイクロＣＴスキャンである。パネルＡは、大きな左腋下乳腺腫瘍を示す低密度表面画像三次元化である。パネルＢは、腫瘍栄養血管の場所を示す補助のための血液プールＣＴ造影剤ＢＰ１０を投与後、高密度表面画像三次元化である。パネルＣは、冠状ＣＴ画像、及び完全栄養血管の配置を示す高密度表面画像三次元化の合成である。位置づけとして、パネルＣでは下からであり、一方、パネルＡ及びＢは、上からの眺望である。
【図２０】図２０は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４（１５μＣｉ）の静脈投与後、様々な時で、自然発生の右腋下乳腺腺癌（直径１０ｍｍ）を有するＭｉｎマウスのＮＭ４０４バイオスキャン画像である。冠状マイクロＣＴ画像（非コントラスト促進）を、解剖学的比較として示す（左のパネル、Ｔ＝腫瘍）。
【図２１】図２１は、ＮＭ４０４投与後８日目のＦＶＢｘＢ６Ｍｉｎマウス由来の摘出された乳腺（Ａ）及び結腸（Ｅ）のバイオスキャン画像である。Ｂ及びＤは、それぞれ同じ摘出された組織の対応するデジタル写真である。カルミン染色拡大写真（Ｃ）は過形成（矢印）の存在を示すが、バイオスキャン画像（Ａ）において対応する限局性活動はない。バイオスキャン画像（Ａ）における腫瘍取り込みは、（Ｂ）におけるより大きな腺癌に対応する。摘出された結腸の写真（Ｄ）及びバイオスキャン画像（Ｅ）は、腺腫性ポリープ（矢印）中のＮＭ４０４の取り込みの無いことを示す。
【図２２】図２２は、図２１に示されるＭｉｎマウスのマイクロＣＴスキャンである。パネルＡは、大きな左腋下乳腺腫瘍を示す低密度表面画像三次元化である。パネルＢは、腫瘍栄養血管の場所を示す補助のための血液プールＣＴ造影剤ＢＰ１０を投与後、高密度表面画像三次元化である。パネルＣは、冠状ＣＴ画像、及び完全栄養血管の配置を示す高密度表面画像三次元化の合成である。位置づけとして、パネルＣでは下からであり、一方、パネルＡ及びＢは、上からの眺望である。
【図２３】図２３は、Ａ５４９肺ＣＡ微少転移細胞（＜直径１ｍｍ）を含む、摘出されたＳＣＩＤマウスの肺における１２５Ｉ−ＮＭ４０４（Ａ＆Ｂ）及びＮＭ３２４（Ｃ＆Ｄ）取り込みの比較を示す。
【図２４】図２４は、ＰＬＥの酵素代謝である。
【図２５】図２５は、ＥＮＵ処理されたＭｉｎ／＋マウスの最初に腫瘍となるまでの時間である。最初に乳腺腫瘍となるまでの時間を、ＥＮＵ後の日にちとして表した。雌のＭｉｎ／＋マウスを、ＥＮＵで処理し、乳腺腫瘍の存在について、週に２回検査した。ＥＮＵ処理後最初の腫瘍までの時間は、Ｂ６Ｍｉｎ／＋（ｎ＝４５）（四角形）、ＢＲＢ６Ｍｉｎ／＋（ｎ＝１８）（三角形）、ＦＶＢＢ６Ｍｉｎ／＋（ｎ＝１８）（ひし形）について、５日の間隔でプロットされる。
【図２６】１２５Ｉ−ＮＭ４０４投与後、１日後（Ａ）及び７日後（Ｂ）のうつ伏せのＦＶＢｘＢ６ｍｉｎマウスのバイオスキャン画像は、大きな腋下乳腺腫瘍を示す。注入後１０日目の摘出された乳腺（Ｃ）のバイオスキャン画像は、生体内スキャンにおいて可視ではなかった大きな１０ｍｍの腺癌、及び小さな隣接する２ｍｍの腫瘍における、ＮＭ４０４の取り込みを示す。
【図２７】図２７は、大きな腋下乳腺腫瘍を示す図２６に示されるような、同様のＦＶＢｘＢ６ｍｉｎマウスのマイクロＣＴ画像を示す。冠状及び軸方向のスライスは、Ａ及びＢに示され、一方、３Ｄ−表面（ｇｏｌｄ）及び冠状スライスは、後面像（Ｃ）及び前面像（Ｄ）において同時に表示される。
【図２８】図２８は、１２５Ｉ−ＮＭ４０４投与後の明白なＳＣＣ１及び６の腫瘍の緩解を示す。
【図２９】１３１Ｉ−ＮＭ４０４注入後４日目及び１１日目の被験者１のガンマカメラの画像（左パネル）は、双方のＮＳＣＬＣ腫瘍（矢印）において、当該物質の非常に強く長期の保持を示す。軸方向のＣＴスキャン（右パネル）は、左肺における局所性３ｃｍの病変（Ａ）並びに右肺の大きな浸潤性塊（Ｂ）（矢印）の大きさ及び配置を示す。
【図３０】図３０は、１３１Ｉ−ＮＭ４０４の静脈内投与後、患者２の前面及び後面の全身平面的核医学画像（左パネル）である。軸方向（Ａ）及び冠状（Ｂ）ＣＴスキャン（右パネル）は、大きな６ｃｍのＮＳＣＬＣの位置（矢印）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
Ｉ．本発明の概要
本発明の概要
本方法を記載する前に、当該発明は、変化するものとして、特に方法論、プロトコール、細胞系、及び記載の試薬に限定するものではないことが理解される。本明細書において使用される専門用語は、特定の態様のみを記載するためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるであろう本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されたい。
【００４３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に明らかな指示のあるときを除いて、複数形を含むことに留意しなければならない。それ故、例えば、「ａ  ｃｅｌｌ」は、そのような細胞群、及び当業者に知られるそれらと等価なものの複数などを含む。同様に、「ａ」（又は「ａｎ」）、「１又は複数」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書において同義的に使用される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」も同義的に使用され得ることに留意すべきである。
【００４４】
別段の定義がなければ、本明細書中に使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明の属する分野におけるいわゆる当業者の内の１人により一般的に理解される通りの同じ意味を有する。本明細書中の記載と類似の又は等価の方法及び材料が、本発明の実施又は試験において使用され得るけれども、当該好ましい方法及び材料は、ここに記載され得る。本明細書中に言及される全ての刊行物の全内容を、本発明に関連して使用され得る当該刊行物中に報告される薬品、細胞系、ベクター、動物、器具、統計的分析、及び方法論の記載及び開示のために本願明細書中に援用する。本発明が先行発明によるそのような開示を予期するとして権利を与えられないことを、承認すると解釈されるものは本願においてない。
【００４５】
本明細書中に定義するとき、用語「異性体」は、光学異性体及び類似体、構造異性体及び類似体、配座異性体及び類似体などを非制限的に含む。ある態様において、本発明は、図３Ａの坑腫瘍化合物の異なる光学異性体の使用を含む。本発明における有用な抗腫瘍化合物が少なくとも１つのキラル中心を含むことは、本分野の当業者により理解されるだろう。従って、本発明の方法において使用される当該化合物は、光学活性体又はラセミ体で存在し、そして単離され得る。化合物によっては多形も示し得る。
【００４６】
本発明は、本願の明細書及び特許請求の範囲に記載される腫瘍関連状態の処置に有用な特性を有するラセミ体、光学活性体、多形体又は立体異性体、あるいはそれらの混合物の使用を含み得ることが理解される。ある態様において、当該抗腫瘍化合物は、純粋（Ｒ）−異性体を含み得る。他の態様において、当該抗腫瘍化合物は、純粋（Ｓ）−異性体を含み得る。他の態様において、当該化合物は、当該（Ｒ）及び（Ｓ）異性体の混合物を含み得る。光学活性体の作成の仕方は、本分野においてよく知られている（例えば、当該ラセミ体の分割による、再結晶技術による、光学活性出発物質からの合成による、キラル合成による、又はキラル安定層を使用するクロマトグラフ分離による方法である。）。
【００４７】
本発明は、例えば、クエン酸、及び塩酸といった、有機酸及び無機酸でアミノ−置換された化合物の医薬として許容される塩の使用を含む。本発明は、本明細書中に記載される当該化合物のアミノ置換基のＮ−酸化物も含む。医薬として許容される塩は、無機塩基、例えば水酸化ナトリウムでの処理によりフェノール化合物からも作成され得る。さらに、当該フェノール化合物のエステルは、脂肪酸及び芳香族カルボン酸、例えば、酢酸及び安息香酸エステルで作られ得る。本明細書中に使用されるとき、用語「医薬として許容される塩」は、主剤から配合される化合物であって、実質的に当該主剤と同等の医薬効果を得る当該化合物をいう。
【００４８】
本発明は、抗腫瘍化合物の誘導体を利用する方法をさらに含む。当該用語「誘導体」は、エーテル誘導体、酸誘導体、アミド誘導体、エステル誘導体などを非制限的に含む。さらに、本発明は、抗腫瘍化合物の水和物を利用する方法をさらに含む。当該用語「水和物」は、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物などを非制限的に含む。
【００４９】
本発明は、抗腫瘍化合物の代謝体を利用する方法をさらに含む。当該用語「代謝体」は、代謝作用又は代謝過程より他の薬物から製造される薬物を意味する。
【００５０】
本明細書中に使用されるとき、「接触する」は、本発明において使用される抗腫瘍化合物が、試験管、フラスコ、組織培養、チップ、アレイ、プレート、マイクロプレート、キャピラリーなどの中の受容体を有するサンプルの中に誘導され、そして、当該抗腫瘍物質が受容体へ結合できるのに十分な温度及び時間で培養されることを意味する。当該サンプルを当該抗腫瘍化合物又は他の特異的結合成分と接触するための方法は、本分野の当業者に知られ、実施されるアッセイ・プロトコール型に依存して選択され得る。培養方法は、標準的でもあり、本分野における当業者に知られる。
【００５１】
他の態様において、当該用語「接触する」は、本発明において使用される抗腫瘍化合物が、処置を受けている患者の中に誘導されることを意味し、当該化合物は、生体内での接触を生じ得る。
【００５２】
本明細書中に使用されるとき、用語「処置」は、予防、並びに障害の弛張熱治療を含む。本明細書中に使用されるとき、用語「低減」、「抑制」、及び「阻害」は、低下又は減少の一般的に理解される意味である。本明細書中に使用されるとき、「進行」は、重篤度の範囲が増大すること、前進する、成長する、又は悪くなることを意味する。本明細書中に使用されるとき、用語「再発」は、回復後再度疾患となることを意味する。
【００５３】
本明細書中に使用されるとき、用語「投与」は、患者、組織、器官又は細胞に、抗腫瘍リン脂質エーテル化合物の接触をもたらすことをいう。本明細書中に使用されるとき、投与は、生体外すなわち試験管内で、又は生体内すなわち生命体、例えば人間の細胞及び組織内で実施され得る。ある態様において、本発明は、本発明において有用な化合物を、患者又は被験者に投与することを含む。本明細書中、等価に使用される「患者」又は「被験者」は、哺乳類、好ましくは人間であって、以下の：（１）リン脂質エーテル化合物を使用する抗腫瘍薬物の投与により治療可能又は処置可能な障害を有する者、又は（２）リン脂質エーテル化合物を使用する抗腫瘍化合物を投与することにより予防可能な、障害の影響を受けやすい者、のいずれかの者であることをいう。
【００５４】
本明細書中に使用される「医薬組成物」は、治療有効量の抗腫瘍化合物、並びに好適な希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、及び補助剤であり、まとめて「医薬として許容される担体」を意味する。本明細書中に使用されるとき、用語「有効量」及び「治療有効量」は、毒性、刺激、アレルギー反応の如き過度の逆に作用する副作用なしに、所望の治療応答を産生するのに十分な活性治療薬の量をいう。当該特定の「有効量」は、明らかに、処置される特定の症状、当該患者の体調、処置される動物の型、当該処置期間、併用療法の特質（もしあれば）、並びに使用される特定の配合及び当該化合物又はその誘導体の構造の如き要因によって変化する。この場合、もし、以下の：（ａ）疾患（例えば、すい臓癌、乳癌）の予防；及び（ｂ）そのような疾患の拮抗状態又は安定状態、の１以上の結果となるならば、量が治療有効量とみなされるだろう。当該最適な有効量は、ありきたりの実験を使用して、当業者の内の1人により容易に測定され得る。
【００５５】
医薬組成物は、液剤又は凍結乾燥剤、さもなければ乾燥剤であり、そして、様々な緩衝剤内容（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）の希釈剤、ｐＨ及びイオン強度、表面への吸収を阻害するためのアルブミン又はゼラチンの如き添加剤、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート）２０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、増量剤又は等張化剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリエチレングリコールの如きポリマーの蛋白質への共有結合、金属イオンとの複合体、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなどの如きポリマー化合物の特定の製剤の中へ又は上への、あるいは、リポソーム、マイクロエマルション、ミセル、単層又は多重層媒体、赤血球ゴースト、又はスフェロプラスの上への当該材料の取り込み、を含む。そのような組成物は、体調、溶解度、安定性、生体内放出比、生体内一掃比に影響を与えるだろう。制御又は持続放出組成物は、親油性貯蔵所（例えば、脂肪酸、ろう、油）中に薬剤を含む。
【００５６】
ポリマー（例えば、ポロキサマー又はポロキサミン）で被膜された特定の組成物の投与方法も本発明に含まれる。当該組成物の他の態様は、局所的、非経口、肺、経鼻、及び経口を含む、投与の様々な経路のために、微粒子型保護被膜、プロテアーゼ阻害剤又は透過促進剤を含む。ある態様において、当該医薬組成物は、非経口、癌周囲、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、頭蓋骨内、及び腫瘍内で投与される。
【００５７】
さらに、本明細書中に使用されるとき、「医薬として許容される担体」は、当業者によく知られ、及び０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍのリン酸緩衝液又は０．９％の生理食塩水を非制限的に含む。さらに、そのような医薬として許容される担体は、水溶液又は非水溶液、溶液、懸濁液、及び乳濁液であり得る。非水溶液の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油の如き植物油、及びオレイン酸エチルの如き注入可能な有機エステルである。水性担体は、生理食塩水、及び緩衝化媒体を含む、水、アルコール／水の溶液、乳濁液又は懸濁液を含む。
【００５８】
非経口媒体は、食塩水、リンガー・デキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンガー液、及び固定油を含む。静脈内媒体は、流動体及び栄養補給、リンガー・デキストロースに基づくものの如き電解質補給などを含む。防腐剤及び他の添加剤は、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、照合剤、希ガスなどの如きものも存在し得る。
【００５９】
本発明による投与可能な制御又は持続放出組成物は、親油性貯蔵所（例えば、脂肪酸、ろう、油）中の製剤を含む。ポリマー（例えば、ポロキサマー又はポロキサミン）で被膜される特定の組成物、及び組織特異的受容体、リガンド又は抗原に対する抗体と共役される、又は組織特異的受容体のリガンドと共役される当該化合物も、本発明に包含される。
【００６０】
本発明に従おける投与される当該組成物の他の態様は、非経口、肺、経鼻、及び経口を含む、投与の様々な経路のために、微粒子型保護被膜、プロテアーゼ阻害剤又は透過促進剤を含む。
【００６１】
ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、又はポリプロリンの如き水溶性高分子の共有結合により修飾される化合物は、対応する非修飾化合物よりも、静脈注入後に血中において実質的により長い半減期を示すことが知られる（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１；Ｎｅｗｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２；及びＫａｔｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７）。そのような修飾は、当該化合物の水溶液中の溶解度を増大させ、凝集を除去し、当該化合物の物理的及び化学的安定性を促進し、そして当該化合物の免疫原性及び反応性を非常に低減し得る。結果として、所望の生体内生物学的活性は、それほど頻繁ではないが外転する、そのようなポリマー化合物の投与により、又は当該非修飾化合物との投与よりも少ない投与量において、達成され得る。
【００６２】
さらに本発明における他の方法において、医薬組成物は、制御放出系においてデリバリーされ得る。例えば、当該剤は、静脈内注入、移植可能な浸透圧ポンプ、経皮貼付、リポソーム、又は他の投与形式を使用して投与され得る。ある態様において、ポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ，  ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと。）。他の態様において、ポリマー材料が使用され得る。さらに他の態様において、制御放出系は、治療標的、例えば、肝臓に近接して置かれ得、それ故、当該全身性投与量のごく少量しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ，２，１１５〜１３８ページ（１９８４）を参照のこと。）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））の概説により議論される。
【００６３】
当該医薬製剤は、当該抗腫瘍化合物のみを含み得、または医薬として許容される担体をさらに含み得、そしてタブレット剤、粉末剤、カプセル剤、ペレット剤、液剤、懸濁液、エリキシリル剤、乳濁液、ゲル、クリーム、肛門及び尿道座薬を含む座薬の如き固形又は液体状態となり得る。医薬として許容される担体は、ガム、澱粉、糖、セルロース系材料、及びそれらの混合物を含む。当該抗腫瘍化合物を含む当該医薬製剤は、例えば、ペレットの皮下移植により患者に投与され得る。さらなる態様において、ペレットは、一定期間にわたり抗腫瘍化合物の制御放出を提供する。当該製剤は、液体製剤の静脈内注入、動脈内注入、又は筋肉内注入、液体又は固形製剤の経口投与、又は局所適応によっても投与され得る。投与は、肛門坐薬又は尿道坐薬によっても達成され得る。
【００６４】
本発明により投与可能な当該医薬製剤は、溶解、混合、造粒、又はタブレット形成方法により製造され得る。経口投与について、当該抗腫瘍化合物又は塩、エステル、Ｎ−酸化物などの如きそれらの生理学的に許容される誘導体は、媒体、安定剤、又は不活性希釈剤の如き添加剤と、この目的のために慣習的に混合され、そして慣習的方法により、タブレット剤、被膜タブレット剤、硬又は柔ゼラチンカプセル、溶液、アルコール溶液、油性溶液の如き、投与に好適な形に転換される。好適な不活性媒体の例は、アカシア、澱粉、ゼラチンの如き結合剤、澱粉、ジャガイモ澱粉、アルギン酸の如き崩壊剤、又はステアリン酸又はステアリン酸マグネシウムの如き滑剤との組み合わせによるラクトース、スクロース、又は澱粉の如き慣習的なタブレット基剤である。
【００６５】
好適な油性媒体又は溶液は、ひまわり油又は魚肝油の如き植物油又は動物油である。製剤は、乾燥及び湿潤顆粒の双方として成立する。非経口投与（皮下、静脈内、動脈内、または筋肉内注入）のために、当該抗腫瘍化合物又は塩、エステル、Ｎ−酸化物などの如きそれらの生理学的に許容される誘導体は、溶液、懸濁液、又は放出剤に転換され、所望により、本目的のために慣習的で好適な薬物、例えば、可溶化剤又は他の補助剤とともに転換される。その例は、水及び油、界面活性剤及び他の医薬として許容される補助剤の添加を有する又は有しないような滅菌液である。例証となる油は、石油、動物油、植物油又は合成起源油のいずれかであり、例えば、ピーナッツ油、大豆油又は鉱油である。一般的に、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールの如き、水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連砂糖水、及びグリコールは、液体担体、特に注入可能な溶液を好む。
【００６６】
活性成分を含む当該医薬組成物の製剤は、本分野においてよく知られる。そのような組成物は、鼻咽頭へデリバリーされるエアロゾルとして、あるいは、溶液又は懸濁液のいずれかとして注入可能なように作られ得る；しかしながら、注入前の液体である、溶液、又は懸濁液のために好適な固形もまた作られ得る。当該製剤は、乳化もされ得る。当該活性医薬成分は、医薬として許容され、当該活性成分と相性の良い賦形剤としばしば混合される。例えば、好適な賦形剤は、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、又はそれらのいずれかの組み合わせである。
【００６７】
さらに、当該組成物は、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤の如き、当該活性成分の効果を促進する少量の補助剤を含み得る。
【００６８】
活性成分は、不活性化された医薬として許容される塩の剤形として当該組成物中に配合され得る。医薬として許容される塩は、当該酸付加塩を含み、それは、例えば、塩酸又はリン酸の如き無機酸、又は酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの如き有機酸と配合される。遊離のカルボキシル基から配合される塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第２鉄の如き無機塩基、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノ・エタノール、ヒスチジン、プロカインなどの如き有機塩基にも由来し得る。
【００６９】
例えば、クリーム、ゲル、滴などを使用する体表面への局所的投与として、抗腫瘍化合物、あるいは、塩、エステル、Ｎ−酸化物などの如きそれらの生理学的に許容される誘導体は、生理学的に許容される希釈剤中に、医薬担体を有し又は有さず、溶液、懸濁剤、又は乳化剤として作られ、そして適用される。
【００７０】
本発明における他の方法において、当該活性化合物は、媒体中に、特にリポソーム中にデリバリーされ得る（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）；Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．，３５３〜３６５ページ（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ｉｂｉｄ．，３１７〜３２７ページを参照のこと。）。
【００７１】
薬物中に使用するために、当該抗腫瘍化合物の塩は、医薬として許容される塩であり得る。しかしながら、他の塩は、本発明における当該化合物又はそれらの医薬として許容される塩の製造において有用となり得る。当該化合物の好適な医薬として許容される塩は、例えば、本発明における化合物の溶液を医薬として許容される酸の溶液で混合することにより形成される酸付加塩を含む、ここで当該医薬として許容される酸の溶液は、例えば、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸である。
【００７２】
一般的に、ＮＭ４０４は、いくつかの腫瘍治療法の治療反応を測定するための有望な新腫瘍選択的診断用造影剤である。第２世代リン脂質エーテル類似体である放射性ヨウ化ＮＭ４０４は、１０／１０異種移植腫瘍モデルにおいて、及びより最近では他の１４／１４自然発生のげっ歯類腫瘍モデルにおいて顕著な腫瘍選択性を示す。このアプローチの有力な仮説は、腫瘍細胞の膜における代謝性ホスホリパーゼ酵素の欠如に起因して、リン脂質エーテル類似体が代謝され除去されないせいで腫瘍細胞の膜に独占的に捕捉されるというものである。それ故、正常細胞由来のリン脂質エーテル対明らかに生存腫瘍細胞由来のものの示唆クリアランスの比が、この概念の根拠を形成する。様々な腫瘍モデルにおいて得られた結果は、ＮＭ４０４が生存腫瘍細胞により隔離され、選択的に保持され、そして、リンパ節に見られる病巣を含む解剖学的位置にもかかわらず、一次病巣及び転移病巣の双方に局在することを示す。ＦＤＧとは異なり、この剤は、感染部位に局在しない。ＦＤＧ以上のＮＭ４０４の他の利点は、ＮＭ４０４は、悪性腫瘍により選択され、そして無制限に保持される一方、ＦＤＧは、腫瘍細胞選択的ではなく、感染部位及び過形成（バレット食道）へ向かう。
【００７３】
さらに、１２４Ｉは４日間の物理的半減期を有するので、世界中のどこにでも出荷され得るが、一方、１１０分の半減期であるＦＤＧは、製造地の２００マイル以内の限定流通となる。ＮＭ４０４は長期の残存（代謝されない）に耐え、そしてそれ故、１３１Ｉのような適切な放射性同位体と結合されるとき重要な治療可能性を提供するが、一方、ＦＤＧは治療可能性を有さない。ＮＭ４０４は様々なヨウ素同位体で標識され得、汎用性（診断、及び治療、並びに実験動物研究用道具）を広げ、一方、ＦＤＧは、ＰＥＴスキャン用の１８Ｆ、又は非常に低い感受性レベルにもかかわらず、磁気共鳴映像法用の潜在的に１９Ｆ（安定）に限定される。その腫瘍標的能力にもかかわらず、腫瘍細胞内のその素早い代謝作用に起因して、治療のための潜在性はない。ＮＭ４０４は、様々な治療方法のために局所的腫瘍応答を正確に予測するだけでなく、治療量以下の原発腫瘍処置の場合における遠隔転移病巣の検出をも可能とする潜在性を提供する。
【００７４】
ＩＩ．本発明
本発明は、様々な癌の検出及び治療のための方法及び技術を広く提供する。ある好ましい態様において、本発明は、癌である又はその疑いのある患者において、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌を検出し、かつ、部位を特定する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）リン脂質エーテル類似体を当該被験者に投与する；
（ｂ）当該被験者の癌があると疑われる器官が、周囲領域よりも高いレベルの当該類似体を保持するかかどうか測定する、を含み、ここで、より高い保持領域は癌の検出及び位置を示す。
【００７５】
この方法において、当該リン脂質類似体は、以下の：
【化３】
2014210803.tif 000005
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体からなる群より選択され；ｎは、１６〜３０の整数であり；及びＹは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３を含む群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝又は
【００７６】
【化４】
2014210803.tif 000006
｛式中、Ｘは、ヨウ素の放射性同位体であり；ｎは、１６〜３０の整数であり；Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、及びＯＲからなる群より選択され；及びＺは、ＮＨ２、ＮＲ２、及びＮＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒは、アルキル又はアリールアルキル置換基である。｝
から選択される。
【００７７】
この方法において、Ｘは、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉからなるヨウ素の放射性同位体の群より選択される。
【００７８】
好ましくは、この方法において、当該リン脂質エーテルは、１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル  ホスホコリン、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−１，３−プロパンジオール−３−ホスホコリン、又は、１−Ｏ−［１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシル］−２−Ｏ−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンであり、ここでヨウ素は放射性同位体の形態である。
【００７９】
様々なリン脂質エーテル及び当該リン脂質エーテル化合物の関連する製造方法及び使用は、米国特許第４，９２５，６４９号；同第４，９６５，３９１号；同第５，０８７，７２１号；同第５，３４７，０３０号；同第６，２５５，５１９号及び同第６，４１７，３８４号に記載され、それらの全内容を本願明細書中に援用する。
【００８０】
他の態様において、本発明は被験者の癌の治療方法を提供する。当該方法は、上記のように、リン脂質エーテル類似体を含む有効量の分子を前記被験者に投与することを含む。
この方法において、当該癌は、肺癌、副腎癌、黒色腫、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮下癌、腸癌、肝細胞癌、網膜芽腫、子宮けい癌、神経こう腫、乳癌、すい臓癌、癌肉腫、及びＰｒｏｓｔｒａｔｅ癌からなる群より選択される。
【００８１】
本発明は、癌の当該治療用医薬組成物の製造のためのリン脂質エーテル類似体の使用をも企図する。これらのリン脂質の類似体は、上記の群から選択される。
【００８２】
さらに、本発明の他の態様は、被験者において、新生組織形成と、炎症、腺腫、過形成を識別する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）リン脂質エーテル類似体を当該被験者に投与する；及び
（ｂ）炎症、腺腫、過形成又は新生組織形成の疑いのある当該被験者の器官が、周囲領域より高いレベルの当該類似体を保持するかどうか測定する；
を含む。当該被験者がより高い保持領域を有するとき、それは新生組織形成の検出及び位置を示し、及び、当該被験者がより低い保持領域を有するとき、それは当該腺腫、過形成又は炎症を有する疑いのある器官の存在を示す。
【００８３】
本発明の他の態様は、ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）を有する組織サンプル中の新生組織形成を検出する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）当該組織サンプル中のＰＬＤ蛋白質活性レベル又はＰＬＤｍＲＮＡレベルを定量化する；及び
（ｂ）当該組織サンプルが周囲の組織領域より低い蛋白質活性レベルであるかどうか測定する、ここでより低い活性領域は新生組織形成の検出及び位置を示す、又は
（ｃ）当該組織サンプルが周囲の組織領域より低いｍＲＮＡレベルであるかどうか測定する、ここでより低いｍＲＮＡレベル領域は新生組織形成の検出及び位置を示す、
を含む。
【００８４】
この方法において、当該ＰＬＤ蛋白質活性又はｍＲＮＡレベルは、当該組織サンプルと当該ＰＬＥ類似体との接触により定量化され、ここで当該ＰＬＥ類似体は、上記のような類似体である。
【００８５】
さらに、本発明の他の態様は、以下のステップ：
（ａ）ＰＬＤ蛋白質活性レベル又はＰＬＤｍＲＮＡレベルを定量化するステップであって、ここで周囲の組織領域と比較して低減されたＰＬＤ蛋白質活性又は低減されたｍＲＮＡのレベルが、新生組織形成を示す、
を含むＰＬＤを有する組織サンプルをスクリーニングする方法により選択される抗腫瘍薬を提供する。当該ＰＬＤ蛋白質活性又はｍＲＮＡレベルが、当該組織サンプルとＰＬＥ類似体との接触により定量化され、ここで当該ＰＬＥ類似体は、上記の通りである。
【００８６】
以下の章は、いくつかのリン脂質エーテル化合物にのみ関連する使用及び方法を議論するが、しかしながら、そのような使用は、例示的なものであり、本発明の範囲を狭くみなすべきではない。
【００８７】
例えば、ＮＭ４０４リン脂質エーテルは、腫瘍性組織に対して著しい特異性を実証するが、しかし、多くの実験的腫瘍モデルにおける前癌組織についてはそうではない。ＮＭ４０４の高い腫瘍対バックグラウンドの親和力及び腫瘍選択性は、ＮＭ４０４が治療における腫瘍画像化について、１８Ｆ−ＦＤＧ  ＰＥＴスキャンよりも潜在的に優れているかもしれないこと提示する。当該ＮＭ４０４の腫瘍特異性の正確なメカニズムは、調査中であり、そして現在のところ、１８Ｆ−ＦＤＧ取り込みのためのグルコースの利用メカニズムと同様に記載されない。腫瘍性組織におけるＮＭ４０４の取り込みがその組織の生存に依存するのか、又はこの取り込み現象は、組織の生存とは独立して、膜又はマトリクス成分に関連するのかは、はっきりと確立されていない。もしこの取り込み及び特異性が腫瘍の生存に関連するならば、放射線により滅菌されたばかりの腫瘍内へのＮＭ４０４の取り込みは、存在しないか僅かとなり、一方、放射線耐性の腫瘍は連続した取り込みが見られることになるだろう。最近、発明者等は、ヌードマウスにおける放射線感受性及び放射線耐性の双方の扁平上皮癌（ＳＣＣ１及び６）において、ＮＭ４０４が取り込まれ、及び消え去ることを示した。そのような試験は、放射線療法で治療される患者を管理するのに非常に有益となるだろう、というのは、処置後のＮＭ４０４の局在の無いことを明確に示す患者は治癒を示すだろうし、一方、耐性腫瘍（ＮＭ４０４の継続取り込み）を有する患者は、他の非放射線療法選択の余地（外科、化学療法）などを提案され得るからである。
【００８８】
感受性がよく、より入手可能な画像試験の開発へのあるアプローチは、所望の標的組織に放射性医薬品プローブを選択的にデリバリーすることを可能とする担体分子を設計することである。本発明者等のアプローチは、高度な組織又は腫瘍選択性を示す分子の固有の生物化学的又は薬理学的特性を十分に利用している。
【００８９】
Ｓｎｙｄｅｒ及び共働者１６，１７は、様々な動物及び人間の腫瘍細胞は、正常な組織よりも当該細胞膜におけるより高い濃度の自然発生的なエーテル脂質を含むことを観察した。彼は、腫瘍中のエーテル脂質の蓄積は、重要な代謝酵素の欠如に起因するこれらの脂質を代謝するための腫瘍細胞の弱い能力の結果であることを提案した。本発明者等は、潜在的な腫瘍選択的造影剤として、多くの放射性ヨウ化リン脂質エーテル（ＰＬＥ）類似体を合成することにより、この観察を十分利用した。これらのＰＬＥ類似体のいくつかは、局在するための著しいそして明らかに普遍的な能力を示し、そして広範囲の自然発生的及び移植されたラット、マウス及びヒト腫瘍モデル（２４／２４）により選択的に保持された。
【００９０】
本発明者等の有力な仮説（図１）は、リン脂質エーテルが、代謝及び除去されないために、生存腫瘍細胞膜に捕捉されることを示す。放射性ヨウ化リン脂質エーテル投与後の腫瘍の摘出は、そのままの当該薬剤のみの存在を示し、一方、尿及び糞の分析は、代謝産物のみを示した。それ故、この概念の根拠を形成するものは、正常細胞対腫瘍細胞に由来するリン脂質エーテルの異なる示唆クリアランス比である。
【００９１】
２４を超える移植片及び自然発生的腫瘍モデルにおいて得られた中間集計は、ＮＭ４０４が腫瘍内に選択的に取り込まれ、そして長期保持を受けることを一般的に示す。当該薬剤は肝臓内において、ある程度代謝されるので、本発明者等は、高い肝臓のバックグラウンド放射活性レベルに起因して、肝臓腫瘍モデルにおける早期化合物評価を避けた。さらに、ＮＭ４０４はその前身より低い肝臓のバックグラウンドレベルを有するので、本発明者等は、ＨＣＣを有する患者の画像化は問題がある事実を考慮して、肝臓腫瘍中の評価を拡張した。多数の患者は潜在的な肝硬変を有し、そしてそれ故、断面画像上のＨＣＣから再生結節を識別するのは困難である。さらに、ＦＤＧでのＰＥＴスキャンを評価する予備調査は、当該疾患を検出するに際し、たった２０〜５０％の感受性のみを示す。Ｖｅｒｈｏｅｆ  Ｃ，Ｖａｌｋｅｍａ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｖｅｒ（２００２）２２：５１−５６。
【００９２】
さらに、ＰＥＴ−ＦＤＧは、脳の診断的スクリーニングにおいて有用ではない。同様に、ＦＤＧは、肝細胞による高い自然な取り込みに起因して、肝臓内の疾患を評価するのに有用ではない。
【００９３】
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を示し、及び例証目的のみである。これらの実施例は、本発明の範囲を狭くみなすべきではない。
【実施例】
【００９４】
ＩＩＩ．実施例
Ａ．実施例Ｉ：合成、放射性同位体標識法、及びＮＭ４０４の製造
本発明の合成アプローチは、アルキル鎖伸長のためのトシル酸アルキル又はハロゲン化物と共にグリニャール試薬の銅触媒によるクロスカップリング反応（下記スキーム参照のこと。）に基づいた。当該合成をｐ−ヨードベンジル  アルコール  １から出発し、トリメチルシリル  ブロマイドとの反応により、ｐ−ヨードベンジル  ブロマイド  ２に転換した。ｐ−ヨードベンジル  ブロマイド  ２を、触媒としてＬｉ２ＣｕＣｌ４存在下において、さらにグリニャール試薬  ３とカップリングした。当該第１カップリング生成物  ４の脱保護の後、得られた１２−（ｐ−ヨードフェニル）ドデカノール  ５を、トシレート  ６に転換した。次のステップにおいて、トシレート  ６を、６個の炭素原子を含むグリニャール試薬  ７とカップリングし、そして、当該鎖伸長過程を終了した。８のＴＨＰ脱保護により１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデカノール  ９を得た。そして当該スキームに示されるような２ステップ方法により１０（ＮＭ−４０４）に転換した。
【００９５】
【化５】
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【００９６】
さらに、以下の方法により、もしヨウ素ならば、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉを含む、いずれかの同位体でＮＭ４０４を標識化する高速高収率合成方法を実施した。
【００９７】
第１、アルミニウム加熱ブロック装置を１４５°まで事前に加熱し、そして、曲がった１．５インチ１８ゲージの使い捨て注射針、及びゴムの隔膜を頂点に取り付けた５ｍｌの使い捨て注射筒を使用して、コンデンサーを製造した。
【００９８】
第２、当該ＨＰＬＣシステムを起動し、当該容器をろ過された脱気溶液（ヘキサン／イソプロパノール／水の４０：５２：８）で満たした。当該システムを平衡化し、その後、当該ポンプ、検出器、チャート式記録計、及びコンピューター積算器の如き付属のシステムの系統的点検をした。
【００９９】
第３、底にグラスウールプラグを使用し、シリンジを２．５ｍＬの粒状炭で満たし、他のグラスウールプラグを追加し、そして頂点に隔膜を挿入して、３ｍｌの使い捨てシリンジ炭トラップを製造した。当該炭トラップを当該コンデンサーの頂点と接続し、チオ硫酸ナトリウム・トラップを通して空気を放出した。
【０１００】
第４、硫酸アンモニウムの５ｍｇを、２ｍｌのホウケイ酸ガラスのｖバイアル中の２０μＬの脱イオン水に添加し、その後、当該バイアルに、２０μｌの無水エタノール中の非標識ＮＭ４０４の２０μｇを添加した。当該バイアルを穏やかに回転し又は軽く叩いて混合を確実にし、そして６ホウケイ酸ガラスビーズ（３ｍｍ）も当該バイアルに加えた。次いで、当該バイアルを、テフロン（登録商標）被膜されたブチルラバー隔膜、及びアルミニウム・クリンプキャップで封をした。当該隔膜に１８ゲージ針で穴を開け、そして所望の量の水性１３１ヨウ化ナトリウム（０．１ＮのＮａＯＨ中、典型的には１５μｌ中５ｍＣｉ）を、当該隔膜を通してハミルトン・マイクロシリンジを経由して添加した。当該バイアルを、再度穏やかに回転し又は軽く叩いて混合を確実とした。当該バイアルを、ドーズキャリブレータで分析した。
【０１０１】
第５、当該活性炭トラップシリンジを、反応バイアル中に挿入し、そして当該反応バイアルを加熱ブロック（砂が半分まで入っている）の中に十分に降ろした。当該反応バイアルを、当該溶媒の大部分が蒸留され、そして濃縮器内で濃縮される間、１４５℃で４０分間加熱した。空気の流れ（４×２５ｍｌ）を、２５ｍｌシリンジで当該バイアルにゆっくり注入した。当該反応バイアルの温度を、１５５℃に増大し、そして加熱をさらに３０分間続けた。当該反応バイアルを、当該ブロック・ヒーターから除去し、そして当該濃縮器／トラップ集合を、接続を断ち及び処分し、そしてバイアルを室温まで冷やしておいた。
【０１０２】
第６、無水エタノールの０．５ｍｌを、当該反応バイアル中に添加した。当該バイアルを穏やかに回転し、当該ドーズキャリブレータ中で分析した。
【０１０３】
第７、粗標識化製造混合物の放射性ＴＬＣ分析を、シリカゲル（クロロホルム／メタノール／水（６５／３５／４））上で実施した。
【０１０４】
第８、アンバーライトＩＲＡ４００-ＯＨ樹脂カラムを、５ｍｌのａｂｓ中における１．０ｇの樹脂をアルコールに３０分間予め浸すことより準備した。エタノールを移し、そして当該樹脂を、２つの追加５ｍｌ部分のエタノールで洗浄した。当該湿潤樹脂を、底にガラスウール・プラグを有し並びにＡｃｒｏｄｉｓｃフィルター及び１方活栓を取り付けた３ｍｌの使い捨てシリンジバレル中に添加した。当該放射性ヨウ化生成物のエタノール溶液を、当該樹脂カラムを通して徐々に溶出した。
【０１０５】
第９、隔膜を挿入し、そして当該溶液を、窒素の流れで吹き飛ばした。窒素流を開始する前に、当該バイアルの出口に活性炭シリンジを装着した。一旦乾燥し、５０μｌのエタノールを使用して希釈し、そして３００μｌのｖバイアルに内容を移した。当該元のバイアルを、５０μｌのエタノールで２度洗浄し、そして当該ｖバイアル中に移した。
【０１０６】
第１０、ＨＰＬＣポンプを安定させ、そして、１．０ｍｌ／分の溶液流を確保した。当該反応混合物を、１．０ｍｌ／分で、ヘキサン／イソプロパン／水（４０：５２：８）により溶出されるパーキンエルマーのカートリッジ・シリカゲル（４．３×３３ｍｍ、３μｍシリカ）上のＨＰＬＣにより精製した。ピーク検出を、２３０及び２５４でのＵＶ、及び放射活性により実施した。いったん、当該適切な頂点を滅菌バイアル中に回収し、放射性ＴＬＣ分析のための僅かなサンプルを除去し、そして当該残存溶液を窒素流で蒸発し、乾燥残留物として当該所望の化合物を得た。非活性度を必要に応じて計算した。
【０１０７】
第１１、ポリソルベート２０を、０．１μｌ／１．０μｇＮＭ−４０４の比率で、無水エタノール中の５％ポリソルベート２０の原液から当該フラスコに添加した。ポリソルベート２０は、ＮＭ４０４での人間及び動物実験の双方に現在使用されるＴｗｅｅｎ２０の医薬品グレードである。当該溶液を、１０分間、＜３０℃で、回転式蒸発により除去した。当該残留物を、滅菌水中に混合することで溶解し、２％のポリソルベート２０溶液を得た。当該配合生成物を、滅菌０．２μｍのＰａｌｌ−Ｇｅｌｍａｎ  Ａｃｒｏｄｉｓｃフィルター（１３ｍｍ）を通し、他の滅菌０．２μｍのフィルターで通気される乾燥し滅菌したマルチドーズバイアル（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ−Ｓｔｉｅｒ）に入れた。１００μｌの生成物溶液をＱＣ分析のためにバイアル中に分けた。
【０１０８】
第１２、放射活性を、当該ドーズキャリブレータで測定し、品質管理試験（滅菌、無発熱原性）を実施した。
【０１０９】
全ての非標識ＮＭ４０４を、研究間の潜在的な合成の相違を最小化するために、厳しい毒性試験を受けたばかりの最初の貯蔵バッチから取り出した。ＮＭ４０４の放射性ヨウ素化を、発明者等１９により開発されたピバル酸の溶解における同位体交換反応により、又は本明細書中に記載の新たな方法により実施し、そして発明者等２２により記載される標準方法における注入の準備をした。この方法を、ＮＭ４０４の前身であるＮＭ３２４での初期臨床試験用の滅菌材料の製造のために効果的に使用し、１２５Ｉ及び１３１Ｉで標識されたＮＭ４０４を製造するために４０回超使用した。一般的に、精製及びＨＰＬＣによる厳しい質量定量化の後、放射性医薬品を、無水エタノール（５０〜５００μｌ）及びポリソルベート２０（化合物の０．１μｌ／μｇ）中に溶解した。当該エタノールを、真空下除去し、そして当該残留物を、滅菌水に溶解し、２〜３％以下のポリソルベート２０を含む最終溶液を得た。滅菌を、滅菌０．２μｍのフィルターユニットを通したろ過により実施した。最終放射化学的純度は、動物に使用する前に９７％超でなければならない。最終的な特異活性の定量化及び計算を、知られた質量標準を使用するＨＰＬＣ分析により実施し、放射性活性（１２５Ｉ）の定量化を、減衰懸念を避けるための希釈及びＰＥ  Ｗａｌｌａｃ  ガンマ・カウンターにおいて計算することにより実施した。１３１Ｉを含む高エネルギー同位体の定量を、これらの同位体のための設定で作られたドーズキャリブレータで実施した。放射性ヨウ素化ＮＭ４０４の１００μｇあたりの１ｍＣｉの特異的活性を、典型的に達成した。注入量は、通常、１匹のマウスあたり、およそ１００μｌである。
組織分布データを、組織グラムあたり注入される用量（＋ＳＥＭ）パーセントとして示し、そして、発明者ら２２により確立され刊行された方法により全組織が計量されるときの組織あたりの注入される用量パーセントとしても示した。各時点において、腫瘍対組織の比を、組織基準のグラムあたりの注入用量のパーセントに基づいて計算した。
【０１１０】
一般的組織分布分析
生体内分布試験を、発明者等２７により開発された標準方法における雌のマウスにおいて実施した。放射性ヨウ素化されたＮＭ４０４（１００μｌ中５μＣｉ）を、尾静脈注射経由で投与した。所定の時点において、動物（３／時点）を、ペントバルビタール麻酔中に、放血により安楽死させた。血液、血漿、副腎、膀胱、骨髄、脂肪、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、脾臓、卵巣、皮膚、甲状腺、及び腫瘍を含む総１６組織を、摘出し、洗浄し、そして異質な組織が無いように解剖した。大きな組織を細分化し、そしてそっくり同じ組織サンプルは、重さを量られ、同位体計測用プラスチックチューブ内に置かれるだろう。注入部位及び残骸の放射活性をも、同様に計測した。これらの標準方法は、適切な動物の世話及び放射線安全認可の下、本発明者等の研究所において多数年にわたり利用される。組織分布図を、注入された用量／ｇのパーセント、％ｋｇ用量、及び注入された用量／器官＋ＳＥＭ基準のパーセントに基づいて減衰補正される組織放射活性濃度を作成するコピュータープログラムにより作成した。各時点において、腫瘍対組織の比を、組織基準のグラムあたりの注入された用量パーセントに基づいて計算した。全ての治療上の処方計画のための比較ＴＤ図を確立するために、対照ＴＤ試験（３マウス／時点、１５総マウス）を、４、７、１４、２１、及び２８日で最も多くのＮＭ４０４注入される腫瘍を有するマウスに関して実施した。
【０１１１】
一般的画像プロトコール
尾静脈注入経由で１２５Ｉ−ＮＭ４０４（１０μＣｉ）を受け、そしてその後の所定の時点での動物を、麻酔（ペントバルビタールナトリウム麻酔、０．０６ｍｇ／ｇ  ｂｗ）し、そして、マウス画像化のために改良されたＢｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００放射性ＴＬＣスキャナー（１ｍｍの高解像度コリメータ／レーンあたり１分の補足時間／１ｍｍのレーン増大）を使用して、核医学検査を受けさせた。データを、ＢｉｏｓｃａｎのＷｉｎｓｃａｎ  ２Ｄソフトウェアを使用して、定量し与えられた。いったん摘出されると、対照及び治療された腫瘍も、全身性の放射性各種減衰を除去することにより、より厳密なＲＯＩ分析を受けるために、当該Ｂｉｏｓｃａｎユニットにおいて生体外でスキャンした。動物（ペントバルビタールナトリウム麻酔、０．０６ｍｇ／ｇ  ｂｗ）は、中分解能取得パラメータを使用するマイクロＣＴスキャン（Ｉｍｔｅｋ  マイクロＣＡＴ  Ｉ、３９０ステップ取得／４３Ｋｖｐ／４１０マイクロＡ）を受けた。データセットを、ＡＭＩＲＡ  ３Ｄ視覚化ソフトウェアで３次元的に再構築し、そして視覚化した。当該ソフトウェアは、ＲＯＩ密度分析、及び便利な画面上測定を可能とする。
【０１１２】
Ｂ．実施例ＩＩ：第１世代のＰＬＥ類似体を有する前臨床試験
リン脂質エーテルは、発明者等１９により開発された同位体交換法を使用して、ヨード放射性同位体元素で容易に標識され得る。各分子に加える放射性ヨウ素は安易な生体内脱ヨード化に対して安定となるために、当該ヨードフェニルリン脂質エーテル類似体は特異的にデザインされる。２０超の放射性標識化ＰＬＥ化合物を合成し、そして生体外及び生体内で試験した２０〜２２。これらの２つ、すなわちＮＭ２９４及びＮＭ３２４［１２−（３−ヨードフェニル）−ドデシル−ホスホコリン］は、動物の腫瘍局在性試験において最も見込みのあることを当初示した。ヨウ素−１２５で標識される、これらの原型化合物は、以下の動物腫瘍モデルにおいて、時間とともに腫瘍内に選択的に局在した；当該動物腫瘍モデルは、１）Ｗａｌｋｅｒ２５６癌肉腫を有するＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット；２）乳腺腫瘍を有するＬｅｗｉｓラット；３）Ｄｕｎｎｉｎｇ  Ｒ３３２７前立腺腫瘍を有するコペンハーゲンラット；４）Ｖｘ２腫瘍を有するラビット；及び５）ヒト乳房腫瘍（ＨＴ３９）、小細胞肺腫瘍（ＮＣｌ−６９）、大腸腫瘍（ＬＳ１７４Ｔ）、卵巣腫瘍（ＨＴＢ７７ＩＰ３）、及び黒色腫腫瘍を有する胸腺欠損マウスである。これらの薬剤の最適な腫瘍局在は、１〜数日間である。
【０１１３】
ＰＬＥ類似体を有する機構研究
ＮＭ３２４及びＮＭ４０４は、ミルテホシン（ヘキサデシルホスホコリン）に似た構造であり、欧州において最も広範囲に研究される抗腫瘍エーテル脂質である。ミルテホシン及びいくつかの他の抗腫瘍リン脂質エーテル類似体の抗腫瘍特性は、前立腺、膀胱、及び奇形の癌、マウス及びヒトの白血病、並びに結腸、卵巣、脳、及び乳癌を含む広範な腫瘍細胞系において実証される２３。多くの抗癌剤と対照的に、これらのリン脂質エーテル類似体は、ＤＮＡに直接的に結合せず、そして変異原性ではない。作用の正確な抗増殖性機構は立証されていないけれども、それらは、明らかにいくつかの腫瘍細胞部位で作用する。これらの化合物は、輸送、サイトカイン生成の促進、アポトーシス誘導、そして様々な重要な脂質代謝及び大部分が細胞膜に局在する細胞シグナル酵素の障害を含む様々な細胞効果に関連する。細胞内への取り込み方法に関して議論はあるけれども、報告書の大半は、これらのエーテル脂質が直接的に、それらが蓄積する細胞膜内に吸収されるという考えを支持する。広く受け入れられる信念は、これらの薬剤が、膜のリン脂質代謝を摂動することにより作用するということである；しかしながら、これらの薬剤での細胞分布研究は、均質化及び細胞下分画手順の間、自然発生的な細胞区画の再分配により制限される。本発明者等が使用したトレイサー画像化剤（数μｇ）と対照的に、抗腫瘍効果は、一般的に過度な１日あたり３００〜１０００ｍｇを超える投与量でしか見られない。
【０１１４】
形式的な代謝作用試験を、ＮＭ４０４の前身であるＮＭ３２４を含むいくつかのＰＬＥ類似体で実施した。これらの研究において、各剤を、ＰＬＥ代謝作用に関連する酵素のための基質としての機能を果たすそれらの能力を測定するために試験した。図２４に示されるように、３つの主な酵素経路は、ＰＬＥの代謝作用に関係する。Ｏ−アルキル  グリセロール  モノオキシゲナーゼ（ＡＧＭＯ）は、長鎖脂肪アルコールか、その後対応する脂肪酸のいずれかを形成するためのＣ−１でアルキルエーテルの連結の開裂に関与する。反対に、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）及びＤ（ＰＬＤ）は、グリセロール又はホスファチジン酸の生成物を、それぞれ生じさせる。ミクロソームＡＧＭＯ酵素の生成を使用するとき、ＮＭ３２４は、［３Ｈ］−リソ−ＰＡＦ（血小板活性化因子）と比較したとき、この酵素の基質ではなく、広範囲に代謝された。同様に、ＮＭ３２４を、セレウス菌から単離されるＰＬＣの基質として分析し、１−パルミトイル−２−［３Ｈ］−パルミトイル−Ｌ−３−ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）と比較して加水分解せず、そしてそれは顕著な加水分解を受けた。
【０１１５】
最後に、いくつかのＰＬＥ類似体が、ＰＬＤ分析に供された。キャベツから単離されたＰＬＤは、キャベツ型が、ホスファチジルエタノール型生成物、さらに、当該酵素反応がエタノールの存在下で実施されるときホスファチジン酸を得るという点において、哺乳類のＰＬＤと同類である。これらの分析条件に供されるいくつかのＰＬＥ類似体は、ＰＬＤとの相互作用可能性を誘導する、ホスファチジルエタノール付加化合物を生じる。
【０１１６】
いくつかのＮＭ４０４前駆体を、Ｗａｌｋｅｒ腫瘍細胞、ラット筋肉（Ｈ９ｃ２）、及びラット肝細胞を含む様々な細胞系における生体外代謝試験にも供した。これらの試験において、代謝の程度を、様々な時間で培養後に形成される放射性標識生成物に基づいて測定し、当該結果を、細胞数又は細胞蛋白質量に対して標準化した。続いて、培養培地及び細胞懸濁液の脂質抽出物は、Ｗａｌｋｅｒ腫瘍細胞におけるＰＬＥ代謝産物の産生がほとんどないことを立証した、一方、４８時間超の期間試験された筋肉細胞、及び肝細胞の双方において、代謝産物の顕著な生成が見られた。これらの結果は、全類似体に関して完成される生体内の生体内分布と密接な関連がある。いくつかの試験が完成させているけれども、腫瘍細胞において放射性標識されたＰＬＥ類似体の取り込み及び保持における、代謝的捕獲の役割はうまく定義されず、そして現在のところ、研究の活動領域として残っている。
【０１１７】
ＮＭ３２４の臨床評価
いくつかの有望な第１世代ＰＬＥ類似体の内、ＮＭ３２４はより容易に合成され、それ故、初期臨床試験のための主要化合物として選択した。５人の肺癌患者から得られた画像は腫瘍を検出したけれども、高い肝臓の放射活性が画像を複雑にした（図２）。
【０１１８】
第２世代ＰＬＥ類似体
肝臓の取り込みを低減し、そしてプラズマ相を長引かせるために、ＮＭ３２４の９つの構造類似体を合成し、そして、Ｄｕｎｎｉｎｇ  Ｒ３３２７前立腺腫瘍を有するコペンハーゲンラットにおける初期の画像分析のために１２５Ｉで放射性標識した。この初期スクリーンに基づいて、ＮＭ３４７、ＮＭ４０４［１８−（４−ヨードフェニル）−オクタデシルホスホコリン］、及びＮＭ４１２（図３）を、動物腫瘍細胞において、さらに画像化及び細胞内分布分析に供するために選択した。
【０１１９】
さらに動物モデルにおけるＮＭ４０４及びＮＭ４１２を有する最近の画像化試験は、様々な腫瘍を視覚化することにおいて当該双方共にＮＭ３２４より優れていることを示した。重要なことに、ＮＭ４０４又はＮＭ４１２のいずれかの静脈投与後の転移性前立腺腫瘍モデルにおいて、リンパ節転移を明らかに描写した。最も重要なことは、当該トレーサーは、関与しないリンパ節により保持されなかったことである２４（図４Ａ）。前立腺モデルにおいて実施されるけれども、この結果は乳癌に特に関し、ここでリンパ転移はそのような重要な予後指標である。ヒトＡ５４９  ＮＳＣＬＣ腫瘍を有するＳＣＩＤマウスにおいて実施される予備試験は、有望であり、そして、ＮＭ４０４が肝臓によるＮＭ３２４の高い初回通過の一掃問題を克服することを実証した。ＮＭ４０４は、ＮＭ３２４と比較して最小限の肝臓及び腎臓の取り込みに関して、特に遅延像において著しく優れた、腫瘍の視覚化を示す（図４）。組織生体内分布研究は、当該腫瘍に残留する高レベルの放射活性をさらに確認した。画像化の結果は、ＮＭ４０４及びＮＭ４１２で似ていたけれども、ラットにおいて得られた線量測定データから、ＮＭ４１２と比較してＮＭ４０４の方がより低い腎臓の用量であることが明らかとなり、それ故、ＮＭ４０４を更なる研究のために選択した。前立腺及びＡ５４９肺癌を有するＳＣＩＤマウス腫瘍モデルにおけるＮＭ３２４とＮＭ４０４との比較生体内分布データは、高度腫瘍組織対正常な組織の比、及びＮＭ４０４の注入量の２５％超の腫瘍取り込みを明らかとした。
【０１２０】
広範な腫瘍モデルにおける取り込みの特徴を測定することを目的としたマウスモデルにおいて実施される動物の画像化試験の概略を、表１に示す。Ｂ６ＡＰＣＭｉｎ／＋マウスにおける予備段階の結果は、ＮＭ４０４は腺腫性ポリープにより取り込まれず、しかしこのモデルにおける乳腺腺癌により取り込まれ保持されることを示し、それ故、悪性腫瘍細胞に対する可能性のある特異性を示す。これらの試験は、非侵襲的に特徴付けられる腫瘍に対するＮＭ４０４の潜在性を測定することを目的とする。ＮＭ４０４は、研究された全腺癌モデルにおいて優位な腫瘍取り込み及び保持を表示する。
【０１２１】
【表１】
2014210803.tif 000008
【０１２２】
ＣＴ２６マウス腫瘍モデルの関連性
発明者等は、マウスの側面に皮下ＣＴ２６細胞の接種を有するマウス（ＢＡＬＢ／ｃマウス）モデルにおける腫瘍応答の前兆として、ＮＭ４０４を検討した。当該ＣＴ２６細胞系は、僅かな分化型マウス腺腫であり、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレタンの直腸注入により誘導されるものである。当該細胞系は、生体外で育てやすく、脈管構造（尾静脈注入、転移モデル）又は皮膚（図５）又は肝臓２５、２６に注入したとき、予想可能な成長パターンを得る。当該細胞系は結腸直腸癌に由来するので、このマウスモデルはこれらの研究として高く臨床的に関連する。
【０１２３】
ＣＴ２６腫瘍におけるＮＭ４０４を有する予備的画像結果
ＮＭ４０４が皮下ＣＴ２６移植片に局在することを示すための予備試験において、２匹の動物を１２５Ｉ−ＮＭ４０４（１０μＣｉ）で注入（尾静脈）し、その後、注入後１、４、及び７日後に、改良バイオスキャンＡＲ２０００放射性ＴＬＣスキャナー（高解像度１ｍｍコリメータ、並びに２−Ｄ取得及び分析ソフトウェアを装備）で画像化した。７日目において、当該動物を安楽死させ、当該腫瘍を除去し、写真を撮り、そして生体外でバイオスキャンによりスキャンした（図６）。生体外スキャンは、ヨウ素−１２５に関連する深刻な組織減弱作用に起因して本発明者等の研究所において標準的なプロトコールである。各動物は、安楽死及び当該腫瘍の解剖の前に、７日目において、マイクロＣＴスキャンをも受けた（図７）。病巣のホットスポットは、生体外バイオスキャン画像における全腫瘍と視覚的に相関する（図６）。リンパ節が視覚化されるけれども、腫瘍細胞の浸潤を示すそれらと放射活性を関連付けるものはなかった。図６及び７における主な腫瘍を腺癌として組織学的に分類した。本発明者等は、マイクロＣＴにより広範な皮下腫瘍をスキャンし、そして全ては、直径３００ミクロン未満まで、非常に容易に検出可能である。
【０１２４】
皮下マウスＣＴ２６腫瘍の初期ＲＦ除去は成功し、そして、Ｈ＆Ｅ着色で処理された部分において、細胞膜の欠如により示されるような重篤な細胞損傷の結果をもたらした（図８）。
【０１２５】
Ｃ．実施例ＩＩＩ：非小細胞肺癌
画像化及び生体内分布の試験を、ヒトＮＳＣＬＣ腺癌Ａ５４９細胞系（腺腫は、最も頻繁に起こるヒト肺癌組織型である。）を有するＳＣＩＤ（重症免疫不全変異株）マウスにおいて、実施した。予備試験は、５匹の動物を発育させ、当該新たな薬剤ＮＭ４０４がＮＭ３２４化合物の限界を克服することを示した結果をもたらした。ＮＭ３２４をよく取り込む腫瘍もあるが、肝臓による高い初回通過の一掃により障害となる。しかしながら、ＮＭ４０４は、最小限の肝臓及び腎臓の取り込みに関して、特に遅延像において著しく優れた、腫瘍の視覚化を示す。さらに組織生体内分布研究は、当該腫瘍に残留する高レベルの放射活性をさらに確認した。ＳＣＩＤマウス−ヒトＮＳＣＬＣモデルにおけるＮＭ３２４とＮＭ４０４画像の比較を図４に示す。ＮＭ４０４の肝臓、腎臓、及び腸の活性の比較的少ないことは、優れた腫瘍視覚化と一体となったことに留意する。画像化の結果は、ＮＭ４０４及びＮＭ４１２で似ていたけれども、ラットにおいて得られた最近の線量測定データから、ＮＭ４１２と比較してＮＭ４０４の方がより低い腎臓の用量であることが明らかとなり、それ故、ＮＭ４０４を更なる研究のために選択した。
【０１２６】
いくつかの腫瘍モデルにおける原型薬剤である１２５Ｉ−ＮＭ３２４の広範な生体内分布データは、以前に蓄積されている。Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ，Ｓｃｈｗｅｎｄｎｅｒ  ＳＷ，Ｍｅｙｅｒ  ＫＬ，Ｈａｒａｄａｈｉｒａ  Ｔ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ．Ｔｕｍｏｒ  Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３１（３）：３３２−３３６，１９９０；Ｐｌｏｔｚｋｅ  ＫＰ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｏｌｋｅｎ  ＮＭ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  Ｓ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ．Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ  ａｎａｌｏｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３４（５）：７８７−７９２，１９９３；Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｂｒｏｗｎ  ＲＳ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｅｔｈｅｉｒ  ＳＰ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｔｗｏ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３７（９）：１５４０−１５４５，１９９６。
【０１２７】
８：１を超える腫瘍対血液の比が、注入後の遅延時で見られた。例えば、ラット乳腺腫瘍モデルにおいて、腫瘍対正常組織の比は、８：６の腫瘍対血液の比、及び２０：１の腫瘍対筋肉の比となり９６時間で最大に達した。Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｂｒｏｗｎ  ＲＳ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｅｔｈｅｉｒ  ＳＰ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｔｗｏ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３７（９）：１５４０−１５４５，１９９６。
【０１２８】
さらに、ＰＬＥに関連する放射活性の生体内分布は、マイクロ・オートラジオグラフィー試験により示されるように腫瘍における異質成分である、ここで当該オートラジオグラフィー試験は、ＰＬＥ放射活性が、中央の壊死領域よりもむしろ外側の領域に局在する生存腫瘍細胞中に独占的に残存することを示す。Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｂｒｏｗｎ  ＲＳ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＪ，Ｗａｈｌ  ＲＬ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｅｔｈｅｉｒ  ＳＰ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｔｗｏ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３７（９）：１５４０−１５４５，１９９６。
【０１２９】
ＳＣＩＤマウスにおけるＮＭ３２４とＮＭ４０４との比較生体内分布データは、今までのところ、前立腺及びＡ５４９肺癌腫瘍モデルにおいてのみ実施される。これらの試験は、高い腫瘍対正常な組織の比、及びＮＭ４０４の注入量の２５％超の腫瘍取り込みを明らかとした、それ故、さらに自然発生腫瘍モデル及びヒトにおいてＰＬＥ類似体の生体内分布を研究する我々の望みを支持する。
【０１３０】
ＮＭ３２４に対するＮＭ４０４の比較感受性に取り組むさらなる試験を、ＳＣＩＤマウスＡ５４９肺癌モデルにおいて実施した。各動物の肺を、各薬剤の同量の投与後１０日で摘出し、解像度を上げるために１時間の間、生体外で画像化した。図２３に示される低解像度及び高増幅画像は、ＮＭ４０４で画像化される、及びＮＭ３２４におけるほとんど取り込まれない又は全く取り込まれない動物の双方の肺において病巣の放射活性の存在を明らかとした。続いて、病理学的分析は、全４動物における小さなＡ５４９のミクロ転移（直径１ｍｍ未満）の存在を確証した。ＮＭ４０４マウスの計数率は、対応するＮＭ３２４の２．５倍超であり、再度、ＮＭ３２４を越えるＮＭ４０４の優位性を示した。
【０１３１】
腫瘍標的戦略は時間をかけて選択的な腫瘍保持に関係するようであることを理由として、１８Ｆ又は９９ｍＴｃの如き比較的短命の核種は、今日、標識として実用的ではないようである。しかしながら、ヨウ素の放射性同位体で独占的に標識されるモノクローナル抗体の早期使用と同様に、ヨウ素−１２４の如き他の標識でＰＬＥ類似体を標識することが、将来可能となるかもしれない、ここで、物理的半減期は、ＰＬＥの腫瘍取り込みと滞留速度に釣り合う。事実、腫瘍選択的ＰＥＴ剤としての１２４Ｉで標識されたＮＭ４０４の有用性は、我々のマイクロＰＥＴ取得のための予備計画に供される。この計画の目的は、ＮＭ４０４をヨウ素−１２４、４日間の物理的半減期を有する比較的新しい陽電子同位体で標識することの実現可能性、及び小動物モデルにおける腫瘍のＰＥＴ画像化に有用であることを評価することである。ＰＥＴ画像化が伝統的ガンマカメラ画像化と比較して得られる、解像度の向上及び３次元機能に加えて、このアプローチは、グルコースの利用より、腫瘍細胞へのその取り込みが異なる生物化学的機構経由で生ずるフッ素−１８ＦＤＧの使用を褒めるだろう。
【０１３２】
上記議論のように、現在有用なトレイサー（例えば、６７Ｇａ及び１８Ｆ−ＦＤＧ）の利用は、炎症と腫瘍を識別する特異性の欠如により制限される。しかしながら、ＰＬＥ剤を有する予備的試験は、臨床的に重要な制限を克服することにおいて期待を与える、ここで、ラットにおけるカラギーナン誘導肉芽腫は、バックグラウンド活性を超えて視覚化できず、そして組織保持を示さなかった。Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ，Ｓｃｈｗｅｎｄｎｅｒ  ＳＷ，Ｍｅｙｅｒ  ＫＬ，Ｈａｒａｄａｈｉｒａ  Ｔ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ．Ｔｕｍｏｒ  Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３１（３）：３３２−３３６，１９９０。しかしながら、それらの研究において対照として利用されるクエン酸ガリウムは、肉芽腫において非常に濃縮される。そのような発見は、潜在的に有用な腫瘍選択画像化造影剤としてＰＬＥ類似体の剤を有する本発明者等の研究を拡張することをさらに正当化する。
【０１３３】
人体試験
動物における非常に有望な薬物動態及び画像データに基づいて、本発明者等は、臨床の場に放射性標識されたリン脂質エーテルの試験を提案することを奨励された。非標識ＮＭ４０４を、バッファローにあるニューヨーク州立大学（ＳＵＮＹ）の毒物学的研究センターで実施された研究におけるラット及びラビットにおける急性毒性効果として最初に評価した。これらの急性毒性効果研究において、３．２ｍｇ／ｋｇ（＞最も多い予想されるヒトの用量の１５０倍）の用量レベルで、毒性効果は見られなかった。さらに、血小板活性特性は、この高い用量レベルで立証されなかった。
【０１３４】
放射性薬物研究委員会（ＲＤＲＣ）による人間の投与のための放射標識された剤の承認を得るために、非標識ＮＭ３２４を、５人の正常な疾患の無い人間に投与した。これらの被験者は、症状、臨床検査、生命徴候、及び連続血液化学による毒性の証拠は無かった。
【０１３５】
実現可能な予備的実験として、４人の肺癌患者を、１３１Ｉ標識されたＮＭ３２４を有するＲＤＲＣの承認の下、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ  ＶＡ病院で試験した。肺腫瘍は、肺癌を有する全３人の患者（ＮＳＣＬＣを有する２人、及び小細胞肺癌を有する１人）においてはっきりと視覚化された、詳細は下記に示す。様々な時点における、腫瘍の取り込み程度は、１＋（バックグラウンドを超えてかろうじて認知できる）〜３＋（極めて強い取り込み、正常の構造より非常に優れている）に変化した。これらの初期検査に選択された患者は、比較的大きな癌を有する者であったことに留意すべきである。腫瘍の病気分類問題が存在する患者を研究することは、このステージにおいて意図していなかった。
【０１３６】
病歴
患者０１は、５５歳高齢女性であり、右の肋骨内に侵食している右中葉肺腫瘤、組織学的には、肺癌起源の可能性となるムチン産生腺癌を有した。６時間での初期１３１Ｉ−ＮＭ３２４シンチグラフ画像は、右側面の中肺において取り込みの病巣を示した。シンチグラフ試験とは関係ない理由から、当該患者は、さらなる画像化立会いのための６時間を過ぎても病院に戻ってこなかった。
【０１３７】
患者０２は、６２歳高齢男性であり、大きな（９×７×７．５ｃｍ）、大動脈肺動脈窓及び左門から広がる分葉状縦隔腫瘤を有した。組織型は、小細胞未分化（燕麦細胞）癌であった。１３１Ｉ−ＮＭ３２４シンチグラフ画像は、左上肺野における取り込みの病巣を明らかにし、そしてそれは、正常なバックグラウンド活性と比較して時間とともに強度において増大した。
【０１３８】
患者０３は、７４歳高齢男性であり、前もって放射線治療で５ヶ月間処置された肺上葉ＮＳＣＬＣ（腺癌）を有した。疾患は、左小舌（２．５×２×３ｃｍ腫瘤）、下部胸椎（およそＴ８）、及び肝臓の右葉において再発した。１３１Ｉ−ＮＭ３２４シンチグラフィーは、肺腫瘤及び胸椎病変における明確な取り込みをよく示し、そしてそれは、時間の経過とともにバックグラウンドに対する標的の比が増大すること（図２）を実証した。肝臓転移における取り込みは、正常な肝臓のバックグラウンドの上に決定できなかった。
【０１３９】
これらの試験は、放射標識したＰＬＥ類似体の臨床的有望性を早期に垣間見ることを提供した。１３１Ｉは画像化目的のために次善の剤であるけれども、全３つの肺癌における取り込みは、明らかに描写された。予想通り、先の動物生体内分布実験に基づいて、当該腫瘍における活性は、患者０２及び０３において明らかに実証されたように、時間の経過とともに増大した。患者０３において、腫瘍対正常組織の比は、２日目の２．７４から７日目の４．２３に増大した。患者０１は、６時間を過ぎても、その後の画像化立会いに戻らなかった。当該増大する標的対バックグラウンドの比は、腫瘍視覚化の機構が、血流異常又は血管過剰増生だけに基づくものではないという強い証拠を構成する。実際には、９９ｍＴｃヒト血清アルブミンを使用する動物実験は、これを確認した１。
【０１４０】
ＮＭ４０４を使用する非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者を評価する臨床試験
ＮＭ４０４は、移植片及び自然発生のげっ歯類モデルの２５／２５において、選択的及び持続的腫瘍貯留性を示すけれども、医師は、人間において似たような腫瘍の取り込み及び貯留特性を示すかどうか測定するためにステージ４のヒト小細胞肺癌の患者における薬剤の臨床評価を最近開始したＩＮＤを後援した。今まで、進行したＮＳＣＬＣを有する２人の患者を、＜１３１Ｉ−ＮＭ４０４の１ｍＣｉの注入後に画像化した。血液及び尿サンプルを、所定時間に回収し、そして投与後いくつかの時点でガンマ画像化を実施した。両患者において、ＮＭ４０４の有効な腫瘍取り込み及び保持が、図２９及び３０に見られるように、原発肺腫瘍において実証された。第１世代前身であるＮＭ３２４における前記に見られる高い肝臓取り込み値と比較して、ＮＭ４０４による場合、肝臓及び腹部の活性は非常に低く、このことは、すい臓癌、直腸癌、及び前立腺癌を含む他の腹部癌においてこの剤を評価する実現可能性を提示する。
【０１４１】
材料及び方法
ヨウ素−１３１で標識されたＮＭ４０４（１ｍＣｉ／２０μｇ）の静脈注入後、進行したＮＳＣＬＣを有する患者を、ＧＥ  Ｍａｘｘｕｓ  ｄｕａｌ  Ｈｅａｄ  ＳＰＥＣＴスキャナーに関して、３、６、２４、４８、９６時間、並びに７及び１１日でスキャンした。血液及び尿サンプルを、臨床的血液、腎臓、及び肝臓の生物分析のために回収した。
【０１４２】
結果
初期の定性的画像化結果は、ヨウ素−１３１で標識されるＮＭ４０４は、注入後２４時間で両側肺腫瘤内に明らかに局在し、１１日間を過ぎてもこれらの腫瘍内に選択的に保持されることを示す。さらに、肝臓、並びに膀胱、腎臓、及び腸を含むより低い異常領域におけるバックグラウンド放射活性は、その前身であるＮＭ３２４で先に観察されたよりも非常に低い。当該患者において副作用は観察されなかった。
【０１４３】
結論
これらの予備的所見が提示するには、げっ歯類モデルにおいて以前見られたように、ＮＭ４０４は、ヒトＮＳＣＬＣにおける似たような腫瘍取り込み及び保持特性を示す。
【０１４４】
この点について、たった２人の患者に基づいているけれども、ＮＭ４０４が、ヒト非小細胞肺癌中に局在し、そして選択的及び持続的な腫瘍貯保持を受けるように見える。
【０１４５】
患者１
５５歳高齢男性であり、両側３ｃｍの左葉及び浸潤性右葉のＮＳＣＬＣ、及び脳転移、及び小さな右副腎腫瘤を有していた。彼は、多くの標準的及び実験的治療計画に参加していた。画像を図２９に示す。
【０１４６】
患者２
７０歳高齢男性であり、６ｃｍの上葉非小細胞腫瘤、５ｍｍの肝臓腫瘤、腸骨転移及び非常に小さい脳転移を有していると最近診断された。彼は、当該ＮＭ４０４試験を開始する前の週に、当該腸骨及び脳転移に対して低用量のカルボプラチン／タクソール化学療法及び緩和的放射線治療を最近完了していた。画像を図３０に示す。
【０１４７】
Ｄ．実施例ＩＶ：マウスすい臓腺癌モデル
発明者等は、混合された腺房／腺管表現型を有する浸潤性腫瘍を産生することで知られるｃ−ｍｙｃマウスすい臓腺癌モデルにおいて、第２世代のＰＬＥ類似体であるＮＭ４０４の腫瘍親和性をも試験した。
【０１４８】
材料及び方法
癌遺伝子としてよく知られるｃ−ｍｙｃ又はｋ−ｒａｓのいずれかを内因する２つのマウス系統が、ウィスコンシン大学で開発された。Ｓａｎｄｇｒｅｎ  ＥＰ，Ｑｕａｉｆｅ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９９１；８８：９３−９７；Ｇｒｉｐｐｏ  ＰＪ．Ｎｏｗｌｉｎ  ＰＳ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．６３（９）：２０１６−９，２００３。
【０１４９】
ｃ−ｍｙｃの発現は、すい臓腺房細胞を対象とされる、なぜならば、すい臓のみで発現されるエラスターゼ・プロモーターと連結するからである。これらのｅｌａ−１−ｍｙｃ内因性マウスは、腺房及び腺管の新生組織形成が発達し、それは、誕生から２〜７ヶ月以内の死亡をもたらす。誕生から１ヶ月までは、当該すい臓は、厚くなりそして安定するように見える。それ故、誕生後１〜３ヶ月のマウスは、すい臓癌の研究のための優れたモデルとして役立つ。大抵のヒトすい臓新生組織形成は腺管形態であり、Ｓａｎｄｇｒｅｎ博士の導入遺伝子標的戦略は、すい臓腺管上皮に対して特異的な腫瘍の発達を目的とされる。
【０１５０】
当該ｃ−ｍｙｃモデルは、混合された腺房／腺管表現型を有する浸潤性腫瘍を産生する。ｋ−ｒａｓモデルの生物学は、非常に異なる。当該ｋ−ｒａｓ腫瘍は、新組織形成の特徴を有することを意味する、「癌腫  ｉｎ  ｓｉｔｕ」として分類されるが、しかしそれらは侵略せず、そして一般的に小さいままである（＜２ｍｍ）。それらの細胞的外見は初期のヒト腫瘍と似ており、よって、組織学的展望より、それらはヒト疾患のより適切なモデルである。さらに、それらは、非常に初期のヒト疾患に似ている。ｃ−ｍｙｃマウスの大きな、及びより発達した腫瘍に対する当該ｋ−ｒａｓ腫瘍の「初期」発生を検出するための能力は、人間における初期の（おそらく治癒できる）病巣を同定することに対して、非常に重要なステップとなるだろう。ｋ−ｒａｓ変異がヒトすい臓腺癌の９０％超の原因となるという事実は、新たな腫瘍造影剤の評価のためのこのモデルの妥当性に対するさらなる支持を導く。
【０１５１】
画像化試験
ＮＭ４０４がマウス・すい臓腫瘍において局在するかどうか測定するために、６匹のｃ−ｍｙｃ内因性マウスが、Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ−２０００放射性ＴＬＣスキャナー（マウス画像化のために本発明者等の研究所において改良されたもの）で、１２５Ｉ−ＮＭ４０４の尾静脈注入後（１５μＣｉ／２０ｇｂｗ）、２〜２１日間、スキャンされた。当該最終日において、マウスは、マイクロＣＴスキャン（４２ｋｖｐ、４１０μＡ、３９０ステップ、マイクロＣＡＴ−Ｉ、ＩｍＴｅｋ、Ｉｎｃ．，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ）も受けた。ヨウ素−１２５の低エネルギーに関連する組織的減衰を避けるために、麻酔されたマウスの生体内画像化の後、当該すい臓腫瘍を摘出し、そして同じスキャナー（高解像度１ｍｍコリメータ、及び２−Ｄ取得及び分析ソフトウェアを装備した）で生体外スキャンした。犠牲になった際、組織を摘出し、重量を測定し、そしてガンマ計数器で放射活性を定量した。
【０１５２】
結果及び考察
初期画像化は、ｃ−ｍｙｃモデルにおけるＮＭ４０４が直径５〜１２ｍｍの範囲にある全腺癌において著しい取り込み及び持続的保持（＞２１日）を示すことをもたらす。先の細胞培養及び生体内動物モデル試験において観察されたように、ＮＭ４０４は明らかに代謝され、そして正常細胞から除去されるが、しかし、腫瘍細胞膜において代謝的に捕捉される。他の腫瘍モデルにおける先のオートラジオグラフィー実験は、正常な組織又は壊死組織ではなく、生存腫瘍細胞のみが、ＮＭ４０４を蓄積することができることを提示した。本発明者等は、マウスにおけるどこにでもある種類のすい臓にもかかわらず、マイクロＣＴで生きているマウスにおけるすい臓の腫瘍をも検出できた（図１１）。すい臓の腫瘍を有する動物の数は少ないけれども（ｎ＝６）、予備的な、バックグラウンドに対するＮＭ４０４腫瘍のデータは有望に思える。
【０１５３】
結論
ＮＭ４０４は、この研究において実験された、自然発生的すい臓腺癌中に選択的及び持続的な貯留を示した、それ故、さらにこの剤の腫瘍選択性を拡張した。
【０１５４】
Ｅ．実施例Ｖ：ラット神経こう腫モデル
材料及び方法
ウィスコンシン大学のＲｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｅｒガイドラインに従って、全動物を飼育し処理した。ラットＣ６神経こう腫細胞を、１０％加熱不活性化ＦＢＳ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンＧ、１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン、及び０．０１ＭのＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で補充したＤＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｕｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）中で増殖させた。先に記載（参照）のように頭蓋骨内腫瘍の移植を実施した。簡潔にいうと、１×１０６個のＣ６細胞を、５ｍｌの１．２％メチルセルロース中に再懸濁し、そして、麻酔された雌のＷｉｓｔａｒラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）の前頭葉中に注入した。偽手術された動物は、腫瘍細胞なしのメチルセルロースの等量の頭蓋骨内注入を受けた。
【０１５５】
画像化実験
移植後１０日目、頭蓋骨内腫瘍の存在を、ＭＲＩで確かめた。簡潔にいうと、麻酔されたラット（６）は、腹腔内に２ｍｌのガドジアミド（Ｇｄ，オムニスキャン  ２８７ｍｇ／ｍｌ，Ｎｙｃｏｍｅｄ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を受け、１０分後、ＧＥフェイズド・アレイ先端コイルを使用して画像化した。各ラットの全脳を覆うＴ１−ｗｅｉｇｈｔｅｄ（ＴＲ＝５００ｍｓ，ＴＥ＝１６．５ｍｓ）マルチスライス・シークエンスを、ＮＭ４０４注入に対して、様々な大きさの腫瘍を有する腫瘍保有ラットと偽手術ラットを選択するために検査した。
【０１５６】
ＮＭ４０４［１８−（４−ヨードフェニル）−オクタデシルホスホコリン］（図３Ａ、１００ｍｇ）を、ピバル酸中におけるＮａ１２５Ｉでの同位体交換を経由して、１２５Ｉで放射性ヨウ化した。Ｗｅｉｃｈｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｒａｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ．１９８６，３７：９０７−９１３。ＨＰＬＣ精製後、４匹の腫瘍保有、及び３匹の偽手術ラットへの尾静脈注入（５〜２０μＣｉ／２００ｇラット）に先立ち、ＮＭ４０４を、水性２％ポリソルベート２０溶液中に溶解した。ＮＭ４０４注入後、１（ｎ＝１）、２（ｎ＝１）、及び４日目（ｎ＝２）に、動物を安楽死（ＣＯ２）させ、そして脳を摘出し、改良Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００  放射性ＴＬＣスキャナー（２分間で１ｍｍ増大の取得／レーン、１ｍｍ高解像度コリメータ）で画像化した。さらに、正常な脳、血液、腎臓、肝臓、脾臓、甲状腺、及び腫瘍組織の重量を測定し、そしてガンマ計数器で放射活性をカウントした。次いで、放射活性の組織分布を、脳組織学と対応させた。
【０１５７】
結果及び考察
ＮＭ４０４による初期画像化結果は、直径３〜５ｍｍの範囲に渡る全神経こう腫内に著しい取り込み及び持続的保持を示した。正常な脳組織内の放射活性は、偽手術の対照動物において最小量となり（図１２）、一方、ＮＭ４０４は、神経こう腫内で著しく濃縮された（図１３）。Ｃ６保有ラットにおける腫瘍対脳の比率（注入された用量／ｇの％）は、２４、４８、及び９６時間で、それぞれ１０．５、１２．２、及び６．７だった。先の細胞培養及び生体内動物モデル試験において観察された通り、ＮＭ４０４は、明らかに代謝され、そして正常な細胞から除去されるが、しかし、腫瘍細胞膜において、代謝的に捕捉される。他の腫瘍モデルにおける先のオートラジオグラフィー実験は、正常な組織又は壊死組織ではなく、生存腫瘍細胞のみが、ＮＭ４０４を蓄積することができることを提示した。興味深いことには、直径数ｍｍと測定される小さな腫瘍でさえ、ＮＭ４０４投与後に検出された。これらの予備所見は、ＮＭ４０４は小さな浸潤性腫瘍病巣の視覚化にも有用かもしれないことを提示する。
【０１５８】
結論
先に実験された全腫瘍モデルにおける場合の通り、ＮＭ４０４は、この試験において評価されたラットＣ６神経こう腫により選択的及び持続的保持を示した。
【０１５９】
Ｆ．実施例ＶＩ：マウス肝臓腫瘍
１４超の移植片及び自然発生の腫瘍モデルにおいて得られた予備的結果は、例外なくＮＭ４０４が腫瘍内における選択的取り込み及び持続的保持を受けることを示した。さらに、ＮＭ４０４が、その前身よりも低い肝臓バックグラウンド値を得ることを理由として、本発明者等は、ＨＣＣで患者を画像化することは問題であるという事実を踏まえて、肝臓内の評価を拡張した。多くの患者は肝硬変を内在しており、それ故、断面画像においてＨＣＣから再生結節を識別することは困難である。さらに、ＦＤＧでのＰＥＴスキャンを評価する予備実験は、当該疾患を検出することにおいて、たった２０〜５０％の検出感度しか示さなかった。Ｖｅｒｈｏｅｆ  Ｃ，Ｖａｌｋｅｍａ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｖｅｒ（２００２）２２：５１−５６。
【０１６０】
材料及び方法
内因性マウスＨＣＣモデル。ＴＧＦα遺伝子を過剰発現する内因性マウスにおける自然発生の肝細胞癌の進行は、広範囲にわたり評価され、この疾患の研究のための非常に有望な動物モデルである。Ｌｅｅ  ＧＨ，Ｍｅｒｌｏｎｏ  Ｇ，Ｆａｕｓｔｏ  Ｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９２）５２：５１６２−５１７０。ＴＧＦαは、上皮細胞のマイトジェンであり、ＥＧＦ受容体と結合する；ＴＧＦαの非制御発現は、腫瘍形成をもたらす。ジンク誘導型メタロチオニン１（ＭＴ１）プロモーターの制御下、導入遺伝子ＴＧＦαを発現している雄のＣＤ１マウスにおいて、７５〜８０％が、生後１２ヶ月後、ＨＣＣを進行する。しかしながら、化学的発癌物質である、アルキル化剤ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）を使用して、生後１５日で腫瘍成長を誘導するとき、生後６ヶ月までに９０％のマウスがＨＣＣを進行する。組織学的実験において、これらの腫瘍は、確かなパターンのよく分化された肝細胞癌からなる。当該腫瘍は自然発生的に生ずるので、本発明者等は、前臨床試験のための好適なモデルとしてこれらの動物を利用する。
【０１６１】
ＣＴ２６結腸腺癌移植片モデル
自然発生のＨＣＣモデルに加えて、ＮＭ４０４をも、移植片結腸腺癌腫瘍モデルにおいて評価し、一方、ＣＴ２６細胞（５×１０５細胞数／５０μｌ）を、病巣である肝臓腫瘍の形成のために雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの肝実質の中に直接、前もって注入した。
【０１６２】
画像化試験
ＮＭ４０４（図３Ａ、１００μｇ）を、ピバル酸の溶解中の同位体交換を経由して１２５Ｉで放射性ヨウ化した。Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔ  Ｉｓｏｔ（１９８６）３７（８）：９０７−９１３。ＨＰＬＣ精製後、水性２％ポリソルベート２０溶液中に溶解し、その後、３匹のＴＧＦα内因性マウス、あるいは３匹のＣＴ２６腫瘍保有マウスの中へ、尾静脈注入（１５μＣｉ／２０ｇマウス）した。マウスを麻酔し、注入後２１日目まで、改良Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００放射性ＴＬＣスキャナー（２分間取得で１ｍｍ増大／レーン、及び１ｍｍ高解像度コリメータ）でスキャンし、そして解剖学的相関のためのＩｍＴｅｋ  マイクロＣＴスキャナー（３９０ステップ）でもスキャンした。マイクロＣＴ画像を、Ａｍｉｒａソフトウェアを使用して表示した。犠牲になったとき、腫瘍保有肝臓を、はじめに摘出し、生体外でスキャンした。次いで、腫瘍を摘出し、重さを量り、生体外でスキャンし、そして放射活性を定量した。病変サンプルを、組織学的分類のために提出した。
【０１６３】
結果及び考察
ＮＭ４０４での最初の画像化結果（図１４、１５）は、肝臓内の自然発生的及び移植された癌腫の双方において、著しい取り込み（＞２０％  用量／ｇ）及び持続的保持を示した。ＮＭ４０４の腫瘍保持は、これらの動物において、当該所定の実験の終点である２１日間持続した。コントラスト強化マイクロＣＴ画像は、全肝臓腫瘍の存在及び正確な位置を確かにした（図１４、１６）。脂質抽出及び続いて腫瘍組織のＨＰＬＣ分析は、放射活性は親化合物とさらに関連することを示した。予備的細胞培養及び生体内動物モデル試験において観察されたとおり、ＮＭ４０４は、明らかに、正常細胞から代謝され除去されるが、しかし腫瘍細胞の膜中に代謝的に捕捉される。
【０１６４】
結論
事前に試験された全腫瘍モデルにおける場合のように、ＮＭ４０４は、この試験において評価された自然発生及び移植片マウスの肝臓腫瘍モデルの双方により、選択的及び持続的保持を示した。
【０１６５】
Ｇ．実施例ＶＩＩ：ＡｐｃＭｉｎ／＋自然発生の乳癌モデル
材料及び方法
ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスモデル：このモデルは、ＡｐｃのＭｉｎ対立遺伝子を有するマウス（ＡｐｃＭｉｎ／＋マウス）からなる。このモデルは、雌のＡｐｃＭｉｎ／＋マウスは乳腺過形成、及び乳癌、及び腸腺腫を進行する性質があるという、移植片モデルを超える特別の利点を提供する。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ遺伝的背景に関して、非処置の雌の約５％は、生後１００日まで乳腺腫瘍を進行するだろう。Ｍｏｓｅｒ  ＡＲ  Ｄｏｖｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９３）９０：８９７７−８１。乳腺病変の発生及び多様性は、直接作用アルキル化剤である、エチルニトロソウレア（ＥＮＵ）の単回投与により増大させられる。ＥＮＵでの処理は、Ｂ６ＡｐｃＭｉｎ／＋雌の９０％において３つの乳腺扁平上皮癌（ＳＣＣ）の平均を進行させることをもたらすが、しかし処理後６０日以内の過形成病変はほとんどない。
【０１６６】
ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスは、Ａｐｃ（大腸腺腫様ポリポーシス）遺伝子の１塩基対変換を有する。当該ＡＰＣ／Ａｐｃ遺伝子は、いくつかの潜在性機能ドメインを有する巨大蛋白質をコードする。Ｇｒｏｄｅｎ，Ｊ．，Ｔｈｌｉｖｅｒｉｓ，Ａ．，Ｓａｍｏｗｉｔｚ，Ｗ．，Ｃａｒｓｏｎ，Ｍ．，Ｇｅｌｂｅｒｔ，Ｌ．，Ａｌｂｅｒｔｓｅｎ，Ｈ．，Ｊｏｓｌｙｎ，Ｇ．，Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｊ．，Ｓｐｉｒｉｏ，Ｌ．，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｍ．ａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ  ｇｅｎｅ．Ｃｅｌｌ，（１９９１）６６，５８９−６００；Ｋｉｎｚｌｅｒ，Ｋ．Ｗ．，Ｎｉｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｃ．，Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，Ｂ．，Ｂｒｙａｎ，Ｔ．Ｍ．，Ｌｅｖｙ，Ｄ．Ｂ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｋ．Ｊ．，Ｐｒｅｉｓｉｎｇｅｒ，Ａ．Ｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｓ．Ｒ．，Ｈｅｄｇｅ，Ｐ．，Ｍａｒｋｈａｍ，Ａ．ａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｇｅｎｅ  ｌｏｃａｔｅｄ  ａｔ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ５ｑ２１  ｔｈａｔ  ｉｓ  ｍｕｔａｔｅｄ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９１）２５１，１３６６−７０。
【０１６７】
マウス及びヒトのＡＰＣ蛋白質は、９０％同一であり、そして全潜在性機能ドメインが保存される。ＡＰＣはβカテニン値を調節する。βカテニンは、細胞内で多様な役割を担い、当該役割は、Ｅカドヘリンの安定化、並びに、ＬＥＦ及び転写因子のＴＣＦファミリーを通じての転写調節を含む。Ａｂｅｒｌｅ，Ｈ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｈ．ａｎｄ  Ｋｅｍｌｅｒ，Ｒ．Ｃａｄｈｅｒｉｎ−Ｃａｔｅｎｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｍｐｌｉｘｃａｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ｃａｄｈｅｒｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（１９９６）６１，５１４−５２３；Ｈｕｂｅｒ，Ｏ．，Ｋｏｒｎ，Ｒ．，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，Ｊ．，Ｏｈｓｕｇｉ，Ｍ．，Ｈｅｒｒｍａｎｎ，Ｂ．Ｇ．ａｎｄ  Ｋｅｍｌｅｒ，Ｒ．Ｎｕｃｌｅａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＬＥＦ−１．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，（１９９６）５９，３−１０；Ｂｅｈｒｅｎｓ，Ｊ．，Ｖｏｎｋｒｉｅｓ，Ｊ．Ｐ．，Ｋｕｈｌ，Ｍ．，Ｂｒｕｈｎ，Ｌ．，Ｗｅｄｌｉｃｈ，Ｄ．，Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ，Ｒ．ａｎｄ  Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ，Ｗ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｅｔａ−Ｃａｔｅｎｉｎ  Ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｌｅｆ−１．Ｎａｔｕｒｅ，（１９９６）３８２，６３８−６４２。
【０１６８】
当該β−カテニン値の調節は、ＡＰＣ、ａｘｉｎ（アキシン）又はｃｏｎｄｕｃｔｉｎ、及びグリコーゲン・シンターゼ・キナーゼ  ３β（ＧＳＫ３β）とβカテニンとの相互作用に関係する。
【表２】
2014210803.tif 000009
【０１６９】
この相互作用は、βカテニンのリン酸化反応をもたらし、それは、ユビキチン−プロテアソーム経路による分解のための標的となる。
【表３】
2014210803.tif 000010
【０１７０】
ＡＰＣにおける大抵の生殖細胞系列及び体細胞変異は、βカテニン結合部位のいくつか又は全てを欠失する蛋白質をもたらす２６、２８、２９。Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＡＰＣ  ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，（１９９５）５，６６−７１；Ｎａｇａｓｅ，Ｈ．ａｎｄ  Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｙ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＰＣ（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ）ｇｅｎｅ．Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ．（１９９３）２，４２５−３４；Ｂｅｒｏｕｄ，Ｃ．ａｎｄ  Ｓｏｕｓｓｉ，Ｔ．ＡＰＣ  ｇｅｎｅ：ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ａｎｄ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，（１９９６）２４，１２１−４。
【０１７１】
ＡＰＣの２つの領域がこの相互作用のために要求され、Ｍｉｎ対立遺伝子によりコードされる当該短縮蛋白質は、これらの領域の双方を欠失する；Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＡＰＣ  ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，（１９９５）５，６６−７１；Ｓｕ，Ｌ．Ｋ．，Ｋｉｎｚｌｅｒ，Ｋ．Ｗ．，Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，Ｂ．，ｐｒｅｉｓｉｎｄｅｒ，Ａ．Ｃ．，Ｍｏｓｅｒ，Ａ．Ｒ．，Ｌｕｏｎｇｏ，Ｃ．，Ｇｏｕｌｄ，Ｋ．Ａ．ａｎｄ  Ｄｏｖｅ，Ｗ．Ｆ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ｈｏｍｏｌｏｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＰＣ  ｇｅｎｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９２）２５６，６６８−７０。
【０１７２】
ＡＰＣは、核小体からのβカテニンの輸送においての役割も有する。それ故、ＡＰＣ機能を失うと、βカテニンは、細胞質及び核小体内に蓄積し、場合により、標的遺伝子の転写及びＥ−カドヘリンを通ずる細胞間相互作用の双方に影響を与えるだろう。ＡＰＣ変異は、腸腫瘍及び他の上皮腫瘍を含むヒトにおけるいくつかの腫瘍型において頻繁に起こる。ＡＰＣ遺伝子座での異型接合性の損失又はβカテニンの増大値は、乳癌の２５％超に見られる。Ｆｕｒｕｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｔａｄａ，Ｍ．，Ｙａｍａｄａ，Ｈ．，Ｋａｔａｏｋａ，Ａ．，Ｆｕｒｕｕｃｈｉ，Ｎ．，Ｈａｍａｄａ，Ｊ．，Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｍ．，Ｔｏｄｏ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍｏｒｉｕｃｈｉ，Ｔ．原発性乳癌におけるＡＰＣ遺伝子の体細胞変異、Ｓｏｍａｔｉｃ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＰＣ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．（２０００）１５６：１９９７−２００５；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｍ．，Ｂｏｒｇ，Ａ．，Ｎｉｌｂｅｒｔ，Ｍ．，ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ,Ｔ.ヒト乳癌における大腸腺腫様ポリポーシス（ＡＰＣ）／βカテニンのシグナル伝達の関与、Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ（ＡＰＣ）／ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．（２０００）３６：２４２−２４８。それ故、これらのマウスに見られるような病変の当該型は、ヒトの乳癌と分子的及び組織学的に似ているだろう。
【０１７３】
遺伝的背景は、偶発的事件、潜伏時間、及び進行する乳腺の病変の型に影響を与え得る。例えば、ＦＶＢｘＢ６ＡｐｃＭｉｎ／＋雌マウスは、マウス１匹あたり平均０．２乳腺腫瘍を患うが、しかし、処置後１２０日内に、マウス１匹あたり４過形成を患う。ＢＡＬＢ／ｘＢ６ＡｐｃＭｉｎ／＋は、マウス１匹あたり平均１．８乳腺腫瘍及び平均０．６過形成を患う。Ｍｏｓｅｒ  ＡＲ，Ｈｅｇｇｅ  ＬＦ，Ｃａｒｄｉｆｆ  ＲＤ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１）６１：３４８０−３４８５。ＦＶＢｘＢ６及びＢＡＬＢｘＢ６ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスは、乳腺ＳＣＣと腺癌（ＡＣ）の両方を患う。
【０１７４】
ＦＶＢｘＢ６ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスにおける過形成病変は、肺胞過形成か扁平上皮結節のいずれかとして分類できる。Ｍｏｓｅｒ  Ａ．Ｒ．，Ｈｅｇｇｅ  Ｌ．Ｆ．，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．Ｄ．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒｓ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａｓ  ｉｎ  ＡｐｃＭｉｎ／＋ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１）６１：３４８０−３４８５。肺胞過形成は腺腫の前駆体であり、そして扁平上皮結節はＳＣＣの前駆病変である。それ故、遺伝的背景の操作により、過形成及び癌腫の多型を患うマウスが、同じ動物内でしばしば産生され得る。当該肺胞過形成は、ヒトの胸由来のサンプル中に一般的にみられる異型の小葉（Ａ型）に似ている。Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．Ｄ．ａｎｄ  Ｗｅｌｌｉｎｇｓ，Ｓ．Ｒ．ヒト及びマウスの乳腺の比較病理学、Ｔｈｅ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｍａｍｍａｒｙ  ｇｌａｎｄｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍａｍｍａｒｙ  Ｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．（１９９９）４：１０５−２２。これらの異型の小葉は、乳癌を有する女性において、乳癌病巣内、又は対側乳房内に多く見られる。ＳＣＣは、乳腺腫瘍の頻繁な型ではない一方、ＡＣはヒト乳腺腫瘍の普通型のようである。さらに、ＡＰＣ経路における変更を伴った腫瘍は、ヒトの乳癌において一般的である。ＡＰＣ遺伝子座での異型接合性の損失又はβカテニンの増大値は、乳癌の２５％超に見られる。Ｆｕｒｕｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｔａｄａ，Ｍ．，Ｙａｍａｄａ，Ｈ．，Ｋａｔａｏｋａ，Ａ．，Ｆｕｒｕｕｃｈｉ，Ｎ．，Ｈａｍａｄａ，Ｊ．，Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｍ．，Ｔｏｄｏ，ａｎｄ  Ｍｏｒｉｕｃｈｉ，Ｔ．  原発性乳癌におけるＡＰＣ遺伝子の体細胞変異、Ｓｏｍａｔｉｃ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＰＣ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．（２０００）１５６：１９９７−２００５．３５；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｍ．，Ｂｏｒｇ，Ａ．，Ｎｉｌｂｅｒｔ，Ｍ．，ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ,Ｔ.  ヒト乳癌における大腸腺腫様ポリポーシス（ＡＰＣ）／βカテニンのシグナル伝達の関与、Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ  ｃｏｌｉ（ＡＰＣ）／ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．（２０００）３６：２４２−２４８。それ故、これらのマウスに見られるような病変の当該型は、ヒトの乳癌と分子的及び組織学的に似ているだろう。このモデルの独自の観点及び長所は、しばしば同様の動物の範囲内で、乳腺過形成及び乳癌の多型を患うマウスを産生する能力である。このように、我々は、同様の動物の範囲内で、過形成及び腫瘍の多型におけるＮＭ４０４の取り込み及び保持を試験し得る。
【０１７５】
マウスのポリオーマウイルスの感染は、乳腺腫瘍を含む多くの腫瘍型の発現を導く。マウス乳腺腫瘍ウイルスＬＴＲ（ＭＭＴＶ）の制御下、ポリオーマ・ミドルＴ抗原（ＰｙＶＴ）を発現する内因性マウスは、素早く、乳腺異形成及び腫瘍を患う。Ａｍｙ  Ｍｏｓｅｒ；Ｇｕｙ，Ｃ．Ｔ．，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．Ｊ．ポリオーマウイルス・ミドルＴ癌遺伝子の発現による乳腺腫瘍の誘導：転移性疾患のための内因性マウスモデル、Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒ  ｂｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓ  ｍｉｄｄｌｅ  Ｔ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ：ａ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＆  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．（１９９２）１２：９５４−６１。
【０１７６】
上皮内癌の兆候は、早ければ生後３週間で見ることができ、早ければ生後５週間までに乳腺腫瘍を１００％発症する。当該腫瘍は、主として、ＡＣ及び／又は腺棘細胞腫として分類される。当該マウスは、主な腫瘍が出現する５０日以内に、肺において多発性転移病巣を患う。Ｌｉｆｓｔｅｄ，Ｔ．，Ｌｅ  Ｖｏｙｅｒ，Ｔ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍ．，Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．，Ｋｌｅｉｎ−Ｓｚａｎｔｏ，ＡＡ．，Ｂｕｅｔｏｗ，Ｋ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ，Ｋ．Ｗ．開始及び転移進行の乳腺腫瘍世代の遺伝的修飾因子を有する近交系マウス系の同定、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｂｒｅｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｈａｒｂｏｒｉｎｇ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ  ｏｆ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒ  ａｇｅ  ｏｆ  ｏｎｓｅｔ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，Ｉｎｔ  Ｊ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．（１９９８）７７：６４０−４。それ故、これらのマウスは、転移性乳癌の短時間モデルを提供する。ＡＰＣＭｉｎ／＋マウスと同様に、遺伝的背景は、腫瘍の発現及び転移の拡散の経時変化に影響を与える。Ｌｉｆｓｔｅｄ，Ｔ．，Ｌｅ  Ｖｏｙｅｒ，Ｔ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍ．，Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．，Ｋｌｅｉｎ−Ｓｚａｎｔｏ，ＡＡ．，Ｂｕｅｔｏｗ，Ｋ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ，Ｋ．Ｗ．開始及び転移進行の乳腺腫瘍世代の遺伝的修飾因子を有する近交系マウス系の同定、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｂｒｅｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｈａｒｂｏｒｉｎｇ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ  ｏｆ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒ  ａｇｅ  ｏｆ  ｏｎｓｅｔ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，Ｉｎｔ  Ｊ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．（１９９８）７７：６４０−４。このように、本発明者等は、腫瘍発現の短い経過を伴うマウスを産生するための交配種を使用する。ＰｙＶＴは、ＳＲＣキナーゼファミリーの一員である、ホスファチジルイノシトール−３’’キナーゼ、当該ＳＨＣアダプター蛋白質、及び蛋白質ホスファターゼ２Ａと関連し得る。Ｄａｎｋｏｒｔ，Ｄ．Ｌ．ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．Ｊ．乳癌転移のトランスジェニック・モデル、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ＆  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．（１９９６）８３：７１−８８。ＳＲＣファミリーキナーゼの活性化は、ヒト乳房の腫瘍において、頻繁に観察される。Ａｍｙ  Ｍｏｓｅｒ；Ｍｕｔｈｕｓｗａｍｙ，Ｓ．Ｋ．ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．Ｊ．乳腺腫瘍発生におけるチロシンキナーゼのＳｒｃファミリーの活性化、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｒｃ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｍａｍｍａｒｙ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ，Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９４）６４：１１１−２３。
【０１７７】
画像試験
ＮＭ４０４（図３Ａ、１００μｇ）を、ピバル酸中、同位体交換を経由して、１２５Ｉで放射線ヨウ化した。ＨＰＬＣ精製後、水性２％ｔｗｅｅｎ−２０溶液中に溶解させ、その後、６匹の雌ＡＰＣＭＩＮ／＋マウスに、尾静脈注入（１５μＣｉ／２０ｇマウス）した。マウスを麻酔し、そして注入後５０日に渡り、改良Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００放射性ＴＬＣスキャナー（２分間取得で１ｍｍ増大／レーン、及び１ｍｍ高解像度コリメータ）でスキャンし、そして解剖学的比較のためにＩｍＴｅｋマイクロＣＴスキャナー（３９０ステップ）でもスキャンした。マイクロＣＴ画像を、Ａｍｉｒａソフトウェアを使用して表示した。犠牲としたとき、乳腺又は摘出した腫瘍を生体外で画像化し、病変を摘出し重さを量り、そして放射活性を定量した。病変サンプルを、組織学的分類に供した。もし必要ならば、長期作用ＣＴ血液プール造影剤（ＢＰ１０）であって、本発明者等の研究所内で開発され長期マイクロＣＴ取得時間に好適な当該造影剤を、静脈内注入し、その後血管視覚化を補助するためＣＴスキャンした（図１９）。Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ（２０００）２１６：８６５−８７１。
【０１７８】
結果及び考察
このモデルは、同じマウス中に、過形成乳腺病変、乳癌、及び腸腺腫が発現する点で独特である。初期画像は、ＮＭ４０４（図１７、１８）が著しい取り込み（＞２０％用量／ｇ）をみせ、そして直径２〜１５ｍｍの範囲の全自然発生乳癌中の長期保持という結果をもたらす。腫瘍の局在は素早く見えるけれども、バックグラウンドの放射活性は、体内一掃期間、肝臓及び腸内に数日持続する。放射活性糞尿のＨＰＬＣ分析は、代謝体の存在及び親のＮＭ４０４の非存在を示した。ＮＭ４０４の腫瘍貯留性は、所定の試験の終点となる５０日間持続した。しかしながら、ＮＭ４０４は、これらのマウス内に頻繁に見つかる腸腺腫性ポリープ内に局在しなかった（図１８）。マイクロＣＴ画像は、全乳腺腫瘍の存在及び正確な位置を確証した（図１９）。脂質抽出及び続く腫瘍組織のＨＰＬＣ分析は、放射活性が親化合物にさらに関連することを示した。以前の細胞培養試験において観察されたように、ＮＭ４０４は、正常な細胞から代謝され、そして除去されるが、腫瘍細胞膜中に代謝的に捕捉されるようである。
【０１７９】
結論
ＮＭ４０４は、今まで試験されたヒト及び動物の移植片腫瘍モデルにおいて、著しい腫瘍親和力を表示する。さらに、この自然発生腫瘍モデル中の乳腺腫瘍による選択的及び長期保持を表示する一方、関連する腸腺腫性ポリープ中には局在しなかった。
【０１８０】
Ｈ．実施例ＶＩＩＩ：ＡｐｃＭｉｎ／＋内因性乳腺腺癌モデルにおける過形成対新組織形成の選択性
材料及び方法
ＡｐｃＭｉｎ／マウスモデル：このモデルは、ＡｐｃのＭｉｎ対立遺伝子を保有するマウス（ＡｐｃＭｉｎ／マウス）からなる。このモデルは、雌ＡｐｃＭｉｎ／マウスが乳腺過形成及び乳腺腺癌及び腸腺腫を発現する性質を有する点において、移植片モデルを超える特異的な利点を提供する。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ遺伝的背景に関して、未処置の雌の約５％は、生後１００日までに乳腺腫瘍を発現するだろう。Ｍｏｓｅｒ  ＡＲ，Ｄｏｖｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９３）９０：８９７７−８１。当該発生率及び当該乳腺病変の多様性は、直接作用するアルカリ化剤であるエチルニトロソウレア（ＥＮＵ）の単回投与により増大され得る。ＥＮＵでの処理は、Ｂ６ＡｐｃＭｉｎ／＋雌の９０％に平均３の乳腺扁平上皮癌（ＳＣＣ）発現をもたらすが、処置後６０日以内に過形成の病変をほぼ発現しない。
【０１８１】
遺伝的背景は、当該事件、潜伏、及び発現する乳腺病変の型に影響を与え得る。例えば、ＦＶＢｘＢ６ＡｐｃＭｉｎ／雌マウスは、マウス１匹あたり平均０．２の乳腺腫瘍を発現するが、しかし処置の１２０日内でマウス１匹あたり４過形成を発現する。ＢＡＬＢ／ｘＢ６ＡｐｃＭｉｎ／＋は、マウス１匹あたり平均１．８の乳腺腫瘍、及び０．６の過形成を発現する。Ｍｏｓｅｒ  ＡＲ，Ｈｅｇｇｅ  ＬＦ，Ｃａｒｄｉｆｆ  ＲＤ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１）６１：３４８０−３４８５。ＦＶＢｘＢ６、及びＢＡＬＢ／ｘＢ６  ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスは、乳腺ＳＣＣ及び腺癌（ＡＣ）の双方を発現する。
【０１８２】
画像試験
ＮＭ４０４（図３Ａ、１００μｇ）を、ピバル酸中、同位体交換を経由して、１２５Ｉで放射線ヨウ化した。ＨＰＬＣ精製後、水性２％ｔｗｅｅｎ−２０溶液中に溶解させ、その後、６匹の雌ＡＰＣＭＩＮ／＋マウスに、尾静脈注入（１５μＣｉ／２０ｇマウス）した。マウスを麻酔し、そして注入後３０日に渡り、改良Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００放射性ＴＬＣスキャナー（２分間取得で１ｍｍ増大／レーン、及び１ｍｍ高解像度コリメータ）でスキャンし、そして解剖学的比較のためにＩｍＴｅｋマイクロＣＴスキャナー（３９０ステップ）でもスキャンした。マイクロＣＴ画像を、Ａｍｉｒａソフトウェアを使用して表示した。犠牲としたとき、乳腺又は摘出した腫瘍を生体外で画像化し、病変を摘出し重さを量り、そして放射活性を定量した。病変サンプルを、組織学的分類に供した。もし必要ならば、長期作用ＣＴ血液プール造影剤（ＢＰ２０）であって、本発明者等の研究所内で開発され長期マイクロＣＴ取得時間に好適な当該造影剤を、静脈内注入し、その後血管視覚化を補助するためＣＴスキャンした（図２２）。Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ（２０００）２１６：８６５−８７１。
【０１８３】
結果及び考察
このモデルは、同じマウス中に、過形成乳腺病変、乳癌、及び腸腺腫が発現する点で独特である。初期画像は、ＮＭ４０４（図２０、２１）が著しい取り込み（＞２０％用量／ｇ）をみせ、そして直径２〜１５ｍｍの範囲の全自然発生乳癌中の長期保持という結果をもたらす。腫瘍の局在は素早く見えるけれども、バックグラウンドの放射活性は、体内一掃期間、肝臓及び腸内に数日持続する。放射活性糞尿のＨＰＬＣ分析は、代謝体の存在及び親のＮＭ４０４の非存在を示した。ＮＭ４０４の腫瘍貯留性は、所定の試験の終点となる＞２１日間持続した。しかしながら、ＮＭ４０４は、病巣肺胞の過形成又はこれらのマウス内に頻繁に見つかる腸腺腫性ポリープ内のどちらにも局在しなかった（図２１）。マイクロＣＴ画像は、全乳腺腫瘍の存在及び正確な位置を確証した（図２２）。ＮＭ４０４は、正常な細胞から代謝され、そして除去されるが、腫瘍細胞膜中に代謝的に捕捉されるようである。
【０１８４】
結論
ＮＭ４０４は、今まで試験された２０／２０のヒト及び動物の移植片腫瘍モデルにおいて、著しい腫瘍親和力を表示する。さらに、この自然発生腫瘍モデル中の乳腺腺癌及び扁平上皮腺癌による選択的及び長期保持を表示する一方、関連する病巣の肺胞過形成又は腸腺腫性ポリープ中には局在せず、それ故、悪性腫瘍細胞選択的のようである。
【０１８５】
実施例ＩＸ：ＮＭ４０４の選択的貯留機構
序論
ＮＭ４０４の如きリン脂質エーテル類似体は、長時間、多く型の腫瘍細胞中に選択的に保持される。本発明者等は、ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）蛋白質の活性を評価するための酵素的分析及び定量的ＰＣＲの双方を使用して、腫瘍細胞中のＮＭ４０４の選択的保持の機構を評価しようとした。腫瘍細胞中のＰＬＤの低減レベルがＮＭ４０４を代謝し排泄する能力の低減をもたらすと、本発明者等は仮定した。
【０１８６】
方法
ｈｅｐａ−１（肝臓癌）、ＣＴ２６（結腸直腸腺癌）、及びＴＳ／Ａ（乳腺腺癌）を含むマウス腫瘍細胞株の単細胞浮遊液を、２つの分析法で分析した：（１）Ａｍｐｌｅｘ（登録商標）Ｒｅｄアッセイであって、蛍光性マイクロプレートリーダーを使用してＰＬＤ蛋白質活性を評価する、商業的に入手可能なキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用する当該アッセイ、及び（２）ＰＬＤのｍＲＮＡのレベルを測定するための定量的ＰＣＲである。腫瘍細胞株を、正常な肝臓組織と比較した、ここで当該正常な肝臓組織は、ＮＭ４０４のより高いレベルの取り込み及び除去を示し、そしてそれ故、おそらく他の正常な組織よりもより低いＰＬＤレベルを有する。Ａｍｐｌｅｘ（登録商標）Ｒｅｄアッセイについて、全蛋白質を、清浄液（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００）を使用して抽出し、ＰＬＤの量を、標準陽性対照と比較した。ＰＣＲについて、ｍＲＮＡを精製し、逆転写酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してｃＤＮＡに転換した。リアルタイムＰＣＲのためのｃＤＮＡの増幅の条件は：（９４℃、３０秒；６５℃、３０秒；及び７２℃、３０秒）で５０サイクル（ｉＣｙｃｌｅｒ、ｉＱｍｉｘ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を含んだ。ＰＬＤ１のプライマー、（センス）５’−ＴＣＴＧＧＴＴＴＣＡＣＣＣＣＧＴＣＡＧＡＡ−３’、（アンチセンス）５’−ＴＴＧＣＴＣＡＴＡＴＣＴＧＣＧＧＣＧＡＴ−３’を使用した。生成物を、１μｇ〜１０−７μｇまで希釈した標準ｃＤＮＡ（ＧＡＰＤＨ、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）と比較した。全アッセイを２重に実施した。
【０１８７】
結果
ＰＬＤを表３に示されるように定量した。ＰＬＤ蛋白質活性及びｍＲＮＡレベルの双方は、全細胞系において正常な肝臓組織（ｐ＜０．０５、Ｔ−検定）より著しく低かった。
結論
低減ＰＬＤ蛋白質活性及びＰＬＤのｍＲＮＡの低減を、マウス腫瘍細胞株において観察した。それ故、ＮＭ４０４の選択的保持機構は、ＰＬＤによるＮＭ４０４の分解における低減に起因し得る。腫瘍における低減ＰＬＤ活性は、抗腫瘍物質の潜在的な分子標的として有用となり得る。
【０１８８】
【表４】
2014210803.tif 000011
【０１８９】
Ｊ．実施例Ｘ：内因性マウス乳腺腫瘍モデルにおける治療上の特質
ＮＭ４０４治療試験としてのモデル
長期生存は画像試験にとって必須ではないけれども、治療試験を提案するために有利である。画像試験のために使用されるモデルは、通常当該動物の死を導く付随的腸腫瘍を患う。マウス１匹あたりの発現する腫瘍の数を増大するため、及び当該腫瘍を有するマウスの寿命を増大することを望んで腸腫瘍を低減するため、Ｍｏｓｅｒ博士は、最近、雄のＢ６Ｍｉｎ／＋マウスと雌のＣ５７ＢＲ／ｃｄｊ（ＢＲ）マウスを交配させた。当該得られたＢＲＢ６  Ｆ１  Ｍｉｎ／＋雌マウスは、平均５近いＢ６Ｍｉｎ／＋マウス（Ｐ＝０．０１６）よりも著しく多くの乳腺腫瘍を発現した。腫瘍を有するマウスの数、及び最初の腫瘍までの時間は、これらの２つの株間（Ｐ＝１、及びＰ＝０．０６のそれぞれ）で異ならない（図２５）。ＢＲＢ６  Ｆ１マウスの増大した乳腺腫瘍数は、一部においては、当該Ｂ６Ｍｉｎ／＋マウス（Ｐ＝２×１０−７）と比較した交配種ＢＲＢ６  Ｆ１  Ｍｉｎ／マウスの著しく長い生存期間に起因し得る。
【０１９０】
Ｂ６及びＢＲＢ６  Ｆ１  Ｍｉｎ／＋マウスは、乳腺表現型に関連して非常に似ていたが、腸腫瘍に対する感受性においては著しく異なっていた。当該Ｂ６及びＢＲ株は、当該マウスがＥＮＵ処置後短期間に多くの腫瘍を発現するように、Ｍｉｎ誘導の乳腺腫瘍形成に対する感受性の高い背景を有するとみなされ得る。しかしながら、当該ＢＲ株は、腸腫瘍の発現に影響を与える修飾遺伝子座における優性抵抗性対立遺伝子を有し、そしてそれは提案した治療試験に関連することを示し得る。これらの株の比較を表２に示す。
【０１９１】
【表５】
2014210803.tif 000012
【０１９２】
ＭｉｎマウスにおけるＮＭ４０４での予備画像結果
ＮＭ４０４が、内因性ＦＶＢｘＢ６  ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスの乳癌に局在することを示すための予備実験において、２匹の動物を、１２５Ｉ−ＮＭ４０４（１５μＣｉ）で注入（尾静脈、静脈内投与）し、改良Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００放射性ＴＬＣスキャナー（高解像度１ｍｍコリメータ、及び２−Ｄ取得及び分析ソフトウェアを装備）で、注入後１、４、及び７日後、画像化した（図２７Ａ、Ｂ）。各動物を、１０日目にマイクロＣＴスキャンに供し（図２７）、その後、安楽死させ、解剖し、乳腺及び関連腫瘍を除去した。病変スポットは、生体外Ｂｉｏｓｃａｎ画像に関する全腫瘍と、視覚的に相互に関連付けられた（図２７Ｃ）。リンパ節は可視的であるけれども、放射活性はそれらと関連せず、腫瘍細胞浸潤の欠如を示唆した。図２７Ｃにおける主たる腫瘍を、腺癌として組織学的に分類した。双方のマウスにおいて４つの乳腺腫瘍が存在し、そして全てが、摘出乳腺の生体外Ｂｉｏｓｃａｎ画像において、容易に検出可能であった。
【０１９３】
ＮＭ４０４の放射線治療の可能性
１２５Ｉで標識されたＮＭ４０４の「画像化」物質（１５〜２０μＣｉ／２０ｇマウス）での一連の最近のマウス腫瘍の取り込み及び保持試験の間、いくつかの明白な治療反応が観察される（未発表の結果）。ＡｐｃＭｉｎ／＋マウスの乳腺腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長は、ＮＭ４０４の単回静脈注射の後に、静的なままであることに一般的に留意すべきである。これらの動物の内、注入後８日目あたりに、より大きな乳腺腫瘍上の毛を全て失うものもいる。さらに、これらのマウスは、腸腫瘍も得、そして通常、腸内出血による重症貧血に苦しみ、そして足の血色を悪く（白く）する。Ｍｏｓｅｒ博士は、これらのマウスの足は、ＮＭ４０４の単回注入後５日目あたりに、ピンク色に戻ることを言及した。
これらの動物の結果としての解剖に関して、予想された２０匹又は通常この歳で見つかる腸腫瘍を有するものの内、たとえあったとしても、ほんのわずかであるが、実際に生き残っていたことに留意した。当該「白からピンクの足」の現象を、別々に観察もしたが、しかし、より活動的な、ＮＭ４０４投与後１２日で解剖されるマウス腸腺癌モデルは、予想された腸腫瘍の全部ではないが多くは消え去ったことを再度示した。双方の腸モデルにおいて、ＮＭ４０４を受け入れた動物は、処置されなかった共に生まれたものよりも容易に長生きした。これらの偶然一致した発見を、各６匹以上のマウスを含む２つの別の年齢の合った群において再確認した。１２５Ｉ−ＮＭ４０４でのこれらの観察は、特にヨウ素−１３１で標識したときの放射線治療の適用可能性を示唆する。この提案された乳腺腫瘍モデルにおける要点をまとめる定量的な腫瘍取り込み及び保持試験は、その真の放射線治療の可能性を予測するために、この物質についての広範囲な線量測定を開始するために十分なデータも提供するだろう。
【０１９４】
同位体の選択
その６０日の物理的半減期、及び低エネルギー２８ＫｅＶ光子放出に起因して、ヨウ素−１２５はマウス及びラットの画像化試験に好適である。ヨウ素−１２５は、同様に医療特性を利用可能とし、及び目下、永続的な前立腺近接照射療法の移植片において使用される。ある画像化試験において、２匹のヌードマウスを、対立する脇腹に、皮下扁平上皮細胞の１及び６の腫瘍細胞移植片で各々植菌した。ＳＣＣ１及び６を使用した、なぜならば１つは他と比べて放射感受性であるからである。１４日後、平均腫瘍サイズ（総計４）が直径０．５ｃｍに達するとき、当該マウスの内、１匹は、１２５Ｉで標識されたＮＭ４０４の２０μＣｉを受け入れ、そして他のマウスは、等量の非標識ＮＭ４０４を受け入れた。当該標識化合物のみを受け入れたマウスを、双方の腫瘍が我々の動物使用プロトコールにおいて定義される限界サイズ制限に達することに起因して、注入後２０日で、安楽死させる必要があった。１２５Ｉ−ＮＭ４０４マウスにおける双方の腫瘍は、数週間の経過により、劇的に及び予想外に退行した（図２８）。事実、このマウスの腫瘍は決して限界サイズに届かず、そして当該マウスを、組織学的区分を集めるために、９０日後実際に安楽死させた。このとき、当該腫瘍の中心は壊死状態であり、一方、周囲の縁はわずかに生存しているようだった。組織学的試験は、壊死した中心部及び生存する縁を裏付けた。血液供給因子がそのような観察結果の一因となり得るが、一方、１２５Ｉからの光子放出が、当該腫瘍の「外皮」の不十分な投与を生ずる当該腫瘍周辺部で、僅かな電子平衡をもたらすことも可能である。この電子平衡問題は放射線腫瘍学において重要である。光子は、それらのエネルギーにより決定される有限距離を移動し、その後、組織と接触し、そして生物学的効果を働かせる。高すぎるエネルギーを有する光子は、当該腫瘍小結節周辺の不十分な投与をもたらし得、それは、光子が当該結節を出発し、遠くまで移動し（当該腫瘍の外）、その後それらの線量が溜まるにつれて生ずる。これは１２５Ｉに関する問題となり得たが、しかしながら、当該低エネルギーは、非常な局所堆積を保証する。複雑なモンテカルロ計算は、そのような推定値を精緻化するが、しかし、最適な同位体を決定する最も良い方法は実験であり、というのは、正確に形に表すことのできない役割を有する多くの要因があるからである（組織分布の詳細、多くの経路など）。１２５Ｉの１つの利点は、全光子が低エネルギーであり、当該腫瘍を囲む正常組織の非常に限定された照射を保証することである。
【０１９５】
ヨウ素−１３１は、甲状腺癌の治療において優れた効果を伴い使用される。１３１Ｉの非常に安全な投与は、高分化型の甲状腺癌の無症状の堆積を制御でき、そして当該高分化型甲状腺癌は、正常な甲状腺がそうであるように、非常によくヨウ素を濃縮する。この能動的取り込み過程は、正常組織への投与限界量を補助する。ヨウ素−１３１は、ベータ及びいくつかのガンマ放射の双方を有するが、しかし、主要な組織線量は、当該ベータ放射に起因する。本発明者等は、甲状腺癌の治療的成功に基づいて、低悪性度のリンパ腫患者におけるＢｅｘｘａｒ（ヨウ素−１３１標識抗体系薬剤）に伴い得られた結果を加味して、１３１Ｉ標識されたＮＭ４０４を選択した。当該主なベータ放射、及び普通は低エネルギーのガンマ照射は、腫瘍小結節自体の中で薬剤均質性を最適化する。さらに、より短い半減期（８日間）は、１２５Ｉの６０日間の半減期と比較して、より臨床的に適切な線量強度を提供する。これらの因子は、本発明者等がこの剤の当該抗腫瘍効果を最もよく評価することを許可するだろう。１３１Ｉの可能性のある不利点は、より高エネルギーのガンマ照射を有すること、さらに、１２５Ｉで生ずるであろう放射線量よりも多くの線量で、組織の近接周辺に実際に照射し得るだろうことである。本願明細書中に提案される内因性モデル中の腫瘍は、乳腺の末梢に位置し、そしてそれ故、当該動物の全体的健康に対する差し迫った脅威を意味すべきでない。臓器毒性は当該試験の評価項目の内の１つでもあるので、当該周囲組織及び主な臓器機構（髄質、肝臓、腎臓、腸、脳など）の反応を評価する。組織分布のデータ及び標識されたＮＭ４０４の実際の線量測定は、その最適な治療可能性を決定するだろう。異なる同位体が、治療法の設定において互いに補完するだろうことがあり得る。
【０１９６】
本願明細書中に記載される実施例及び態様は例証目的のみとしてのものであること、それらを踏まえた様々な改良又は変化は当業者により示唆されるだろうこと、そしてそれらは本明細書の本質及び範囲、及び添付の特許請求の範囲の範囲に含まれるだろうことが理解される。本明細書中に引用される刊行物、特許、及び特許出願の全てを、参照することにより本願明細書中に援用する。
【０１９７】
【表６】
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【表７】
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【表８】
2014210803.tif 000015
【０１９８】
「ＤＩＡＰＥＵＴＩＣ」は、Ｃｅｌｌｅｃｔａｒ，ＬＬＣの登録商標である。
【図１】
2014210803.tif 000028
【図３】
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【図５】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図４】
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【図４Ａ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
2014210803.tif 000050
【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年8月18日(2014.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン脂質エーテル類似体を含む、癌の治療のための医薬組成物であって、前記リン脂質エーテル類似体が、131Ｉで標識された１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン、又は125Ｉで標識された１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリンであり、そして前記癌が、肺癌、副腎癌、肝臓癌、皮下癌、網膜芽腫、子宮けい癌、扁平上皮癌、黒色腫、結腸直腸癌、卵巣癌、腸癌、神経こう腫、及びすい臓癌からなる群より選択される、医薬組成物。
【請求項２】
前記リン脂質エーテル類似体が125Ｉで標識された１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記リン脂質エーテル類似体が131Ｉで標識された１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記医薬組成物が、ヒト被験者に投与された場合、該対象において５〜２０μＣｉ／２００ｇ体重のリン脂質エーテル類似体をもたらす量を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物が、ヒト被験者に投与された場合、該対象において１５〜２０μＣｉ／２０ｇ体重のリン脂質エーテル類似体をもたらす量を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2014210803000001.pdf