(57)【要約】【課題】製造コストを下げることができ、未利用のローヤルゼリータンパク質を利用可能な、インスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法を提供する。【解決手段】ローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することにより製造される。ローヤルゼリータンパク質としては、例えば、ローヤルゼリー、ローヤルゼリーから水溶性タンパク質を抽出した水溶性ローヤルゼリータンパク質、ローヤルゼリーをアルコールで抽出したアルコール変性ローヤルゼリータンパク質を利用することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによるローヤルゼリータンパク質分解物を有効成分とするインスリン分泌促進剤。
【請求項２】
水溶性ローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とするインスリン分泌促進剤の製造方法。
【請求項３】
アルコール変性したローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とするインスリン分泌促進剤の製造方法。
【請求項４】
酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによるローヤルゼリータンパク質分解物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤。
【請求項５】
水溶性ローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とする血糖値上昇抑制剤の製造方法。
【請求項６】
アルコール変性したローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とする血糖値上昇抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
病気にかかる前に日常の食事により病気を予防することは、健康な生活を送る上で非常に重要である。従来、生活習慣病、慢性疾患などの老化に伴う現象に対応するものとして、ローヤルゼリーが配合されたサプリメントや食品などがある。
【０００３】
ローヤルゼリーは、若い働き蜂の大顎腺および下咽頭腺から分泌される乳白色のクリーム状物質であり、全ての若い幼虫の食餌として、また、将来女王蜂になる蜂の唯一の食餌として分泌される物質である。ローヤルゼリーは、抗アレルギー作用、マウスにおけるＤＮＡ損傷抑制作用を有することが報告されており、また、その栄養学的役割や薬理学的役割についても研究が行われている。
【０００４】
ローヤルゼリーは、およそ６６％の水分、１４％のタンパク質、１２％の炭水化物を含む物質である。ローヤルゼリーは、その有効成分がデセン酸であると言われており、ローヤルゼリーをドリンクに配合するときには、タンパク質が沈殿することから、タンパク質を除去した上清（上澄み液）を使用している。また、除去されたタンパク質の一部は、ローヤルゼリー由来のタンパク質として上市されている。
【０００５】
既存の技術として、ローヤルゼリーをペプシン及びパンクレアチンで分解して得られる分子量５００〜３，０００のペプチドを含有することを特徴とする血糖値上昇抑制剤が報告されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００６】
また、ローヤルゼリーに含まれるタンパク質は、抗菌作用や抗アレルギー作用を有することが報告されている。ローヤルゼリーのインスリン作用については、脂肪酸であるローヤルゼリーに含まれるデセン酸がその本体として報告されている（例えば、非特許文献１または２参照）。
【０００７】
なお、高血糖は生活習慣病のひとつで、血糖値を高い状態で放置しておくと、糖尿病になり、血液がどろどろになる。また、神経障害、網膜症、腎症、脳梗塞、狭心症、糖尿病性壊疽などの合併症を引き起こすこともある。厚生労働省の平成２０年調査によると、糖尿病の総患者数は２３７万人であり、平成１９年の「国民健康・栄養調査の概要」によると、糖尿病予備軍は２２１０万人にもなる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第３６９１６８５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】奥田拓道、亀田健治、森本千恵、「ミツバチ科学」、19(1), 9-14 (1998).
【非特許文献２】Kramer KJ, Tager HS, ChildsCN,"Insulin-like hypoglycemic and immunological activities in honeybeeroyal Jelly.", 23,293-295 (1977).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
特許文献１では、酸性プロテアーゼのペプシンとアルカリ性プロテアーゼのパンクレアチンとを組み合わせて使用するため、製造工程上、酸性溶液およびアルカリ性溶液を使用する。それにより塩ができ、その処理工程を必要とするため、製造コストがかさむという課題があった。また、ローヤルゼリーをドリンクに配合したときに除去されたタンパク質は、一部は上市されているが、大部分は利用されていないという課題があった。このため、未利用のタンパク質の有効な利用方法が模索されていた。
【００１１】
本発明は、このような課題に着目してなされたもので、製造コストを下げることができ、未利用のローヤルゼリータンパク質を利用可能な、インスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を達成するために、本発明に係るインスリン分泌促進剤は、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによるローヤルゼリータンパク質分解物を有効成分とすることを特徴とする。
本発明に係るインスリン分泌促進剤の製造方法は、水溶性ローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とする。他の本発明に係るインスリン分泌促進剤の製造方法は、アルコール変性したローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とする。
【００１３】
本発明に係る血糖値上昇抑制剤は、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによるローヤルゼリータンパク質分解物を有効成分とすることを特徴とする。
本発明に係る血糖値上昇抑制剤の製造方法は、水溶性ローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とする。他の本発明に係る血糖値上昇抑制剤の製造方法は、アルコール変性したローヤルゼリータンパク質を酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせによりプロテアーゼ処理することを特徴とする。
【００１４】
本発明に係るインスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法において、ローヤルゼリータンパク質としては、例えば、ローヤルゼリー、ローヤルゼリーから水溶性タンパク質を抽出した水溶性ローヤルゼリータンパク質、ローヤルゼリーをアルコールで抽出したアルコール変性ローヤルゼリータンパク質を利用することができるが、これらには限らない。ローヤルゼリータンパク質分解物は、ローヤルゼリータンパク質をプロテアーゼ処理することにより製造される。プロテアーゼ処理で使用するプロテアーゼは、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒなどの酸性プロテアーゼ、ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ａｓｐｅｒｈｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｐｉｇ  ｐａｎｃｒｅａｓなどの中性プロテアーゼを利用することができるが、これらには限らない。
【００１５】
本発明に係るインスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法では、プロテアーゼとして、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼまたはそれらの２種以上の組み合わせを使用するため、酸性溶液およびアルカリ性溶液を使用する場合と異なり、製造工程上、塩ができず、塩の処理工程を必要としない。このため、塩の処理工程に要する製造コストを下げることができる。
【００１６】
本発明に係るインスリン分泌促進剤または血糖値上昇抑制剤の投与形態は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口投与または、例えば静脈内、腹膜内もしくは皮下投与などの非経口投与をあげることができる。これらのうち、静脈内投与または経口投与が好ましい。
【００１７】
投与する剤形としては、錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、浸剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤、液剤、エリキシル剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等があげられる。経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトール、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、パラオキシ安息香酸メチル等のパラオキシ安息香酸誘導体、安息香酸ナトリウム等の保存剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミントなどのフレーバー類などの担体を使用して製造できる。
【００１８】
また、経口投与に適当な、例えば錠剤、散剤および顆粒剤などは、乳糖、白糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末などの植物末、パインデックスなどの賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油などの滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液などの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いて製造できる。
【００１９】
非経口投与に適当な注射剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体などを用いて注射用の溶液を調製する。また、これら非経口剤においても、前述の防腐剤、保存剤、界面活性剤等が使用できる。
【００２０】
本発明に係るインスリン分泌促進剤または血糖値上昇抑制剤の投与量および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度により異なるが、含有するローヤルゼリータンパク質分解物の量として、通常経口の場合、成人一人当り１ｍｇ〜５０ｇ、好ましくは５ｍｇ〜２０ｇを一日一回ないし数回投与する。静脈内投与などの非経口投与の場合、成人一人当り０．１ｍｇ〜５０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜１０ｇを一日一回ないし数回投与する。また、動物に投与する場合、動物の年齢、種類、症状の性質もしくは重篤度により異なるが、特に制限はなく、体重１ｋｇ当たり、０．１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜１ｇを一日一回ないし数回投与する。また、静脈内投与などの非経口投与の場合、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜１ｇを一日一回ないし数回投与する。しかしながら、これら投与量および投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動する。
【００２１】
本発明に係るインスリン分泌促進剤または血糖値上昇抑制剤は、飲食品または飼料に添加されてもよく、このような飲食品または飼料は、ローヤルゼリータンパク質分解物を飲食品または飼料の原料に添加し、一般の飲食品または飼料の製造方法で製造することができる。その飲食品または飼料は、一般の飲食品または飼料と同様、成形・造粒することができる。成形・造粒方法としては流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成形造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒などの造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング、などのコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法などの膨化方法、押出造粒機やエキストルーダーなどの押出方法などがあげられる。
【００２２】
本発明に係るインスリン分泌促進剤または血糖値上昇抑制剤を飲食品または飼料に添加する場合、ローヤルゼリータンパク質分解物の飲食品または飼料中の含有量としては、含有して得られる飲食品または飼料がインスリン分泌促進作用または血糖上昇抑制作用を示す濃度であれば特に制限はないが、含有する飲食品または飼料に対して０．００１〜１００質量％が好ましく、０．０１〜１００質量％がより好ましく、０．１〜１００質量％がさらに好ましい。
【００２３】
本発明に係るインスリン分泌促進剤または血糖値上昇抑制剤を添加する具体的な飲食品としては、ジュース類、清涼飲料水、スープ類、茶類、乳酸菌飲料、発酵乳、冷菓、バター、チーズ、ヨーグルト、加工乳、脱脂粉乳等の乳製品、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の畜肉製品、魚肉錬り製品、だし巻き、卵豆腐等の卵製品、クッキー、ゼリー、スナック菓子、チューイングガム等の菓子類、パン類、麺類、漬け物類、薫製品、干物、佃煮、調味料等があげられる。飲食品の形態としては、例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等があげられる。
【００２４】
本発明に係るインスリン分泌促進剤または血糖値上昇抑制剤を添加した飲食品または飼料には、必要に応じて一般に飲食品または飼料に用いられる添加物、例えば、甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色料、漂白料、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物などの添加物を添加してもよい。
【００２５】
本発明では、未利用のローヤルゼリータンパク質を利用して、インスリン分泌促進作用および血糖値上昇抑制作用を有する新しい健康食品素材を得ることができる。これにより、ローヤルゼリーからデセン酸などの脂溶性物質を除去した後に残るローヤルゼリータンパク質を、有効活用することができる。ローヤルゼリータンパク質分解物には、インスリン分泌促進作用、血糖上昇抑制作用のほか、糖尿病改善作用、糖尿病予防作用、成長促進作用、母乳中のインスリン増加作用なども期待できる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明によれば、製造コストを下げることができ、未利用のローヤルゼリータンパク質を利用可能な、インスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明の実施の形態のローヤルゼリータンパク質分解物を、３５日間強制経口投与した後の、マウスの血中グルコース濃度の変化を示すグラフである。
【図２】本発明の実施の形態のローヤルゼリータンパク質分解物を、３５日間自由摂取させた後の、マウスの血中インスリン濃度の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の実施の形態のインスリン分泌促進剤、血糖値上昇抑制剤およびそれらの製造方法について、実施例に基づいて説明する。なお、以下の実施例では、ローヤルゼリータンパク質およびローヤルゼリータンパク質分解物の代表的な作り方を示すが、本発明においてはこの作り方に限られない。
【実施例１】
【００２９】
［アルコール変性したローヤルゼリータンパク質、および、アルコール変性したローヤルゼリータンパク質分解物の製造方法］
ローヤルゼリー（１００ｇ）を同量のエタノールで処理し、その残渣を６０％エタノールで、室温下で２回洗浄した。この残渣はアルコール変性したローヤルゼリータンパク質であり、これを凍結乾燥した結果、その成分組成は、タンパク質（８０〜８１％）、炭水化物（１４〜１５％）および少量の脂質であった。
【００３０】
得られたアルコール変性したローヤルゼリータンパク質をろ過した後、乾燥残渣（１２．５ｇ）を水（８７．５ｇ）に懸濁し、適正ｐＨに調整した。その後、プロテアーゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ由来プロテアーゼ０．２５ｇ）を加え、至適温度５０℃に温度を維持し、５時間タンパク質分解を行った。次に、８０℃の温度で３０分間、酵素失活を行った。酵素反応液をセライトでろ過をした後、ろ液を凍結乾燥した。こうして、アルコール変性したローヤルゼリータンパク質分解物が得られた。なお、その収量は、８．３ｇであった。また、ローヤルゼリータンパク質分解物は、主要成分が酵素分解物（平均分子量８７９）であり、少量の脂質（０．９％）、ミネラル（３．９％）および水分（３％）を含んでいた。
【実施例２】
【００３１】
［水溶性ローヤルゼリータンパク質、および、水溶性ローヤルゼリータンパク質のタンパク質分解物の製造方法］
アルコール変性ローヤルゼリータンパク質以外の原料として、水溶性ローヤルゼリータンパク質の製造方法を、以下に示す。ローヤルゼリー（５０ｇ）に精製水（２００ｇ）を加えて、室温にて３０分間攪拌した。その後、１０，０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離を行い、上清（１回目）を回収後、沈殿物にさらに精製水（２００ｇ）を加えて同様の操作を行い、上清（２回目）を回収した。回収した各上清を凍結乾燥し、水溶性ローヤルゼリータンパク質１５．５ｇを得た。なお、水溶性成分の収率は８７％であった。
【００３２】
実施例１で示したアルコール変性したローヤルゼリータンパク質からアルコール変性したローヤルゼリータンパク質分解物を製造する方法と同様にして、水溶性ローヤルゼリータンパク質から、水溶性ローヤルゼリータンパク質のタンパク質分解物を製造した。
【実施例３】
【００３３】
［ローヤルゼリータンパク質分解物のＫＫ−Ａｙの強制経口投与実験］
実施例１で製造したアルコール変性したローヤルゼリータンパク質分解物の水溶液を、糖尿病マウス（日本エスエルシー株式会社製「ｋｋ−Ａｙマウス」）に、強制的に３５日間経口投与した。また、対照群として、グアバ葉抽出物（備前化成社製）を、別の糖尿病マウスに、強制的に３５日間経口投与した。これらの投与量は、３５０ｍｇ／ｋｇ体重で、濃度は、０．３ｍＬ／３０ｇ体重である。マウスは、室温２５±１℃、湿度５５％±５％、明暗周期１２時間の条件下でプラスチックケージに入れて飼育し、試験開始前に１週間訓化させた。
【００３４】
空腹時を避けて、尾静脈から７日ごとに採血を行った。飼料（日本クレア社製「ＣＥ−２」）および水は、自由摂取とした。また、水投与群をコントロール群（対照群）とした。血中グルコース値の測定は、マウスの尾静脈血液を用いて、グルコース検出器およびグルコース試験紙で行った。データの統計解析は、一元配置分散分析および多重比較検定（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｅｓｔ）により行い、有意水準は０．０５とした。
【００３５】
図１に、強制投与終了後（３５日間経過後）の、各群の血中グルコース値の時間変化を示す。各々の実験結果は、１群５〜８匹のマウスの平均値を示す。グラフ中の垂直線は、平均に対する標準誤差を示す。図１に示すように、ローヤルゼリータンパク質分解物投与群およびグアバ葉抽出物投与群（ポジティブコントロール）は、コントロール群に比べて、有意に血中グルコース濃度（血糖値）を抑制していることが確認された。
【実施例４】
【００３６】
［ローヤルゼリータンパク質分解物のＫＫ−Ａｙの自由摂取実験］
実施例１で製造したアルコール変性したローヤルゼリータンパク質分解物の水溶液を、０．１８ｗ／ｗ％（３５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整）で粉末飼料（日本クレア社製「ＣＥ−２」）に混合し、糖尿病マウス（日本エスエルシー株式会社製「ｋｋ−Ａｙマウス」）に３５日間自由摂取させた。また、対照群として、グアバ葉抽出物（備前化成社製）を、同じ割合で粉末飼料に混合し、別の糖尿病マウスに３５日間自由摂取させた。また、コントロール群（対照群）として、何も混合しない粉末飼料を与えた。
【００３７】
空腹時を避けて、尾静脈から７日ごとに採血を行った。血中インスリン値の測定は、マウスインスリンエライザキットで行った。その他の実験条件は、実施例３の強制経口投与実験と同じとした。
【００３８】
図２に、自由摂取終了後（３５日間経過後）の、各群の血中グルコース値の時間変化を示す。各々の実験結果は、１群６匹のマウスの平均値を示す。グラフ中の垂直線は、平均に対する標準誤差を示す。図２に示すように、ローヤルゼリータンパク質分解物投与群は、コントロール群に比べて有意に血中インスリン濃度を増強していることが確認された。
【００３９】
図２に示すように、ＩＩ型糖尿病マウスにローヤルゼリータンパク質分解物を自由摂取させたときに血中インスリン濃度が上昇したこと、および、図１に示すように、強制経口投与したときに血中グルコース濃度が抑制されたことを考え合わせると、ローヤルゼリータンパク質分解物は、血中インスリン濃度が低下した糖尿病患者への応用だけではなく、糖尿病を予防する食品素材としての応用が期待できるといえる。
【図１】
2014062052.tif 000003
【図２】
2014062052.tif 000004