(57)【要約】【課題】体外診断による検体中の標的物質を検出するときのノイズを低減する効果に優れたブロッキング剤、標的物質に対する抗原または抗体が固定化された担体、これを含む体外診断用試薬およびキット、並びに標的物質の検出方法の提供。【解決手段】スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するブロッキング剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するブロッキング剤。
【請求項２】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位が、親水性である請求項１に記載のブロッキング剤。
【請求項３】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位が、下記式（２）で表されるものである請求項１または２に記載のブロッキング剤。
【化１】
2014153140.tif 000014
〔式（２）中、Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ2は、基−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、基＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子または炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ1が結合している炭素原子と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、Ｒ3は、直接結合または炭素数１〜２４の２価の有機基を示し、Ｒ4は、炭素数１〜１０の有機基を示す。〕
【請求項４】
重合体が、更に疎水性繰り返し単位を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載のブロッキング剤。
【請求項５】
疎水性繰り返し単位が、スチレン類、（メタ）アクリレート類および（メタ）アクリルアミド類から選ばれる１種以上の単量体に由来する繰り返し単位である請求項４に記載のブロッキング剤。
【請求項６】
重合体のＨＬＢ値が、１０〜２２である請求項１〜５のいずれか１項に記載のブロッキング剤。
【請求項７】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体で一部または全部がコーティングされていることを特徴とする標的物質に対する抗原または抗体が固定化された担体。
【請求項８】
担体がラテックス粒子である請求項７に記載の固定化された担体。
【請求項９】
請求項７または８に記載の固定化された担体を含有することを特徴とする体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるための試薬。
【請求項１０】
ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのものである請求項９に記載の試薬。
【請求項１１】
請求項９または１０に記載の試薬を少なくとも備えることを特徴とする体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるためのキット。
【請求項１２】
体外診断による検体中の標的物質の検出方法であって、請求項７または８に記載の固定化された担体と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合することを特徴とする検出方法。
【請求項１３】
ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出方法である請求項１２に記載の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はブロッキング剤、標的物質に対する抗原または抗体が固定化された担体、これを含む体外診断用試薬およびキット、並びに標的物質の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
標的物質である抗原（抗体）と、これに対する抗体（抗原）との間で生じる凝集反応を利用した免疫ラテックス凝集測定法が、体外診断による検体中の標的物質の検出方法として、臨床検査、生化学研究等の領域において広く活用されているが、標的物質である抗原や血清中の異物等が粒子表面に直接吸着し、これらが原因で意図しないラテックス粒子の凝集が検出されてしまい正確な測定の妨げになるという問題がある。
【０００３】
そのため、斯様なノイズを低減することを目的として、通常、アルブミン、カゼイン、ゼラチン等の生物由来物質がブロッキング剤として粒子に予めコーティングされている。
しかしながら、このようなブロッキング処理を施してもノイズが生じることがあり、これら生体由来のブロッキング剤を用いる場合、ＢＳＥに代表される生物汚染の問題もある。
【０００４】
そのため、ポリオキシエチレンを有するポリマー（特許文献１および２）、ポリオキシエチレン／ペンタエチレンヘキサミンブロック共重合体（特許文献３および４）等の化学合成によるブロッキング剤が開発されているが、特許文献１および２に記載のブロッキング剤はノイズ低減効果が不十分であり、特許文献３および４に記載のブロッキング剤は製造に先立ち煩雑な精製が必要であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−２８７８０２号公報
【特許文献２】特許第３４０７３９７号公報
【特許文献３】特開２００６−２２６９８２号公報
【特許文献４】国際公開第２００５／０１０５２９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、体外診断による検体中の標的物質を検出するときのノイズを低減する効果に優れたブロッキング剤、標的物質に対する抗原または抗体が固定化され更に上記ブロッキング剤がコーティングされている担体、これを含む体外診断用試薬およびキット、並びに標的物質の検出方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで、本発明者らは、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体が、体外診断による検体中の標的物質を検出するときのノイズを低減する効果に優れることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するブロッキング剤を提供するものである。
【０００９】
また、本発明は、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体で一部または全部がコーティングされていることを特徴とする標的物質に対する抗原または抗体が固定化された担体（以下、単に「固定化された担体」とも称する）を提供するものである。
【００１０】
更に、本発明は、上記固定化された担体を含有することを特徴とする体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるための試薬を提供するものである。
【００１１】
更に、本発明は、上記試薬を少なくとも備えることを特徴とする体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットを提供するものである。
【００１２】
更に、本発明は、体外診断による検体中の標的物質の検出方法であって、上記固定化された担体と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合することを特徴とする検出方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のブロッキング剤は、体外診断による検体中の標的物質を検出するときのノイズを低減する効果に優れる。
また、本発明の担体、試薬、キットおよび検出方法によれば、正確且つ簡便に、体外診断による検体中の標的物質を検出することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
〔ブロッキング剤〕
本発明のブロッキング剤は、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位（以下、繰り返し単位（Ａ）とも称する）を有する重合体を含有するものである。
【００１５】
＜繰り返し単位（Ａ）＞
上記繰り返し単位（Ａ）としては親水性を示すものが好ましい。ここで、本明細書において、親水性とは、水との親和力が強い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万〜１０万程度のもの）が、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ以上溶解する場合にはその繰り返し単位は親水性である。
また、上記繰り返し単位（Ａ）としては、親水疎水の尺度を示すＨｙｄｒｏｐｈｉｌｅ−Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  Ｂａｌａｎｃｅ(ＨＬＢ値)が１０以上のものが好ましい。高い親水性を得る場合には、ＨＬＢ値は１５以上がより好ましく、２０〜４０がさらに好ましく、２０〜３０が特に好ましい。
また、本明細書において、ＨＬＢ値は、化合物の有機性の値と無機性の値の比率から算出されるもの（小田式）を意味し、「Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｗｉｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ  Ｄｉａｇｒａｍ」[１９９８年、ＮＩＨＯＮ  ＥＭＵＬＳＩＯＮ  ＣＯ．，ＬＴＤ]に記載の計算方法により算出できる。例えば、後述する実施例に記載のＮ−１−１の共重合体に含まれる繰り返し単位（Ａ）のＨＬＢ値は、（６０×１＋１４０×１＋１００×３）／（２０×１０＋４０×１＋（−１０）×３）×１０＝２３．８である。
【００１６】
また、繰り返し単位（Ａ）は特に限定されないが、ノニオン性のものが好ましい。
また、繰り返し単位（Ａ）は、スルフィニル基の他に、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、スルホ基、チオール基、リン酸基、アルデヒド基等の親水性基を有していてもよい。また、斯かる親水性基の位置および個数は任意であるが、その位置は好ましくは重合体の側鎖である。一方、スルフィニル基以外の親水性基の個数としては、適度な親水性を得る観点から、繰り返し単位１個中に、０〜１２個が好ましく、０〜１０個がより好ましく、０〜５個が更に好ましく、０〜３個が更に好ましく、１〜３個が更に好ましく、２または３個が特に好ましい。また、上記親水性基の中でも、適度な親水性を得る観点から、ヒドロキシ基が好ましい。なお、本発明の効果が失われない範囲で、重合体に含まれる複数のスルフィニル基の一部がスルフィド基やスルホニル基となっていてもよい。
【００１７】
また、上記繰り返し単位（Ａ）の好適な具体例としては、下記式（１）で表される構造を側鎖中に少なくとも１つ含む繰り返し単位が挙げられる。式（１）で表される構造を側鎖中に有する繰り返し単位となるポリマー種としては公知のものを用いることができ、中でも（メタ）アクリレート系のポリマー種、（メタ）アクリルアミド系のポリマー種、スチレン系のポリマー種等が好ましい。より具体的には、下記式（２）で表される繰り返し単位が挙げられる。
【００１８】
【化１】
2014153140.tif 000002
【００１９】
〔式（１）中、Ｒ3は、直接結合または炭素数１〜２４の２価の有機基を示し、Ｒ4は、炭素数１〜１０の有機基を示す。〕
【００２０】
【化２】
2014153140.tif 000003
【００２１】
〔式（２）中、Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ2は、基−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、基＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子または炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ1が結合している炭素原子と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、Ｒ3およびＲ4は前記と同義である。〕
ここで、式（１）および（２）中の各記号について詳細に説明する。
【００２２】
Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示すが、メチル基が好ましい。
【００２３】
また、Ｒ2は、基−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、基＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−またはフェニレン基を示す。斯かるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【００２４】
また、上記Ｒ5で示される有機基の炭素数は、好ましくは１〜１０であり、より好ましくは２〜８であり、更に好ましくは２〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基および芳香族炭化水素基を包含する概念である。
【００２５】
上記Ｒ5における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基等のアルキル基が挙げられる。
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００２６】
上述のようなＲ2の中でも、ブロッキング効果の観点から、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、フェニレン基が好ましく、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。
【００２７】
Ｒ3は、直接結合または炭素数１〜２４の２価の有機基を示す。斯かる直接結合としては、単結合が挙げられる。
【００２８】
斯様なＲ3の中でも、炭素数１〜２４の２価の有機基が好ましい。斯かる２価の有機基の炭素数は、好ましくは２〜１８であり、より好ましくは２〜１０であり、更に好ましくは２〜９であり、特に好ましくは３〜６である。
【００２９】
上記２価の有機基としては、２価の炭化水素基が挙げられる。２価の炭化水素基は、好ましくは２価の脂肪族炭化水素基であり、直鎖状でも分岐状でもよい。具体的には、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基、ヘプタン−１，７−ジイル基、オクタン−１，８−ジイル基等のアルカンジイル基が挙げられる。
【００３０】
また、上記２価の炭化水素基は、置換基を有していてもよく、炭素−炭素結合間にエーテル結合を含んでいてもよい。
上記２価の炭化水素基が有していてもよい置換基としては、前記親水性基が挙げられる。該置換基の個数は、好ましくは１〜５であり、より好ましくは１〜３であり、更に好ましくは１または２である。
また、上記２価の炭化水素基が含んでいてもよいエーテル結合の個数としては、０〜５が好ましく、０〜３がより好ましい。
【００３１】
また、２価の有機基の好適な具体例としては、下記式（３）で表される連結基、炭素数１〜２４のアルカンジイル基が挙げられ、より好ましくは式（３）で表される連結基である。
【００３２】
【化３】
2014153140.tif 000004
【００３３】
〔式（３）中、Ｒ6は、単結合、基−Ｒ8−Ｏ−（Ｒ8は、炭素数１〜４のアルカンジイル基を示す）または下記式（４）で表される連結基を示し、Ｒ7は、炭素数１〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは１または２を示し、＊＊は、式（１）、（２）中のイオウ原子と結合する位置を示す。〕
【００３４】
【化４】
2014153140.tif 000005
【００３５】
〔式（４）中、Ｒ9は、炭素数１〜４のアルカンジイル基を示し、Ｒ10は、炭素数２または３のアルカンジイル基を示し、ｍ1は１または２を示し、ｍ2は１〜３の整数を示す。〕
【００３６】
上記Ｒ6としては、単結合、基−Ｒ8−Ｏ−が好ましく、単結合が特に好ましい。
【００３７】
また、上記Ｒ7、Ｒ8およびＲ9で示されるアルカンジイル基の炭素数は１〜４であるが、１または２が好ましい。
また、上記アルカンジイル基は直鎖状でも分岐でもよく、前述のアルカンジイル基と同様のものが挙げられる。
【００３８】
また、上記Ｒ10で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２である。また、該アルカンジイル基としては、Ｒ7で示されるものと同様のものが挙げられる。なお、ｍ2が２または３の場合、ｍ2個のＲ10は同一であっても異なっていてもよい。
また、ｎおよびｍ1としては１が好ましく、ｍ2としては１または２が好ましい。
【００３９】
また、Ｒ4は、炭素数１〜１０の有機基を示す。斯かる有機基としては、Ｒ5で示されるものと同様のものが挙げられる。また、Ｒ4が炭化水素基である場合、斯かる炭化水素基は置換基を有していてもよく、該置換基およびその個数としては、前記２価の炭化水素基が有していてもよいものと同様のものが挙げられる。また、親水性の観点から、Ｒ4としては、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基等の環構造を含まないものが好ましい。
【００４０】
上述のようなＲ4の好適な具体例としては、前記親水性基を有する炭素数１〜１０の有機基が挙げられ、より好ましくは下記式（５）で表される１価の基、炭素数１〜１０のアルキル基であり、更に好ましくは式（５）で表される１価の基である。
【００４１】
【化５】
2014153140.tif 000006
【００４２】
〔式（５）中、ｋ1は、１〜４の整数を示し、ｋ2は、０〜４の整数を示し、＊＊＊は、式（１）、（２）中のイオウ原子と結合する位置を示す。〕
【００４３】
式（５）中、ｋ1としては、１または２が好ましい。また、ｋ2としては、０〜２の整数が好ましく、０または１がより好ましい。
【００４４】
また、繰り返し単位（Ａ）の合計含有量の下限としては、水溶性の付与、ブロッキング効果の観点から、全繰り返し単位中、１０モル％以上が好ましく、２０モル％以上がより好ましく、３０モル％以上が更に好ましく、４０モル％以上が更に好ましい。
一方、上限としては、担体との吸着の観点から、全繰り返し単位中、９９モル％以下が好ましく、９０モル％以下がより好ましく、８５モル％以下が更に好ましく、８０モル％以下が更に好ましく、７０モル％以下が更に好ましい。
なお、繰り返し単位（Ａ）の含有量は13Ｃ−ＮＭＲ等により測定可能である。
【００４５】
＜繰り返し単位（Ｂ）＞
また、本発明で用いる重合体としては、更に疎水性繰り返し単位（以下、繰り返し単位（Ｂ）とも称する）を有するものが好ましい。ここで、疎水性とは、水との親和性が低い性質を持つことを意味する。具体的には、１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万〜１０万程度のもの）が、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して溶解する量が１ｇ未満である場合にはその繰り返し単位は疎水性である。
また、上記繰り返し単位（Ｂ）のＨＬＢ値としては、高い疎水性を得る場合には、２０未満が好ましく、１５未満がより好ましく、０．１以上１０未満が更に好ましく、０．１〜５が特に好ましい。
【００４６】
繰り返し単位（Ｂ）としては、疎水性を示す公知のものが挙げられ、特に限定されないが、担体との吸着の観点から、スチレン類、（メタ）アクリレート類および（メタ）アクリルアミド類から選ばれる１種以上の単量体に由来するものが好ましく、スチレン類に由来するものがより好ましい。
【００４７】
上記スチレン類に由来する繰り返し単位としては、下記式（６）で表される繰り返し単位が好ましい。
【００４８】
【化６】
2014153140.tif 000007
【００４９】
〔式（６）中、Ｒ11は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ12は、炭素数１〜１０の有機基を示し、ｐは０〜５の整数を示す。〕
【００５０】
式（６）中、Ｒ12で示される有機基としては、Ｒ5で示されるものと同様のものが挙げられるが、その炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜３である。また、親水性基がないものが好ましい。なお、斯かる有機基は、炭素数１〜３のアルコキシ基等が置換していてもよい。また、ｐが２〜５の整数の場合、ｐ個のＲ12は同一であっても異なっていてもよい。
【００５１】
また、ｐは０〜５の整数を示すが、０〜３が好ましく、０がより好ましい。
【００５２】
スチレン類に由来する繰り返し単位の具体例としては、スチレン、４−メチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、２，４，６−トリメチルスチレン、４−エチルスチレン、４−イソプロピルスチレン、４−ｔｅｒｔ−ブチルスチレン、α―メチルスチレン等に由来する繰り返し単位が挙げられる。
【００５３】
また、上記（メタ）アクリレート類としては、例えば、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸イソブチル、（メタ）アクリル酸２−エチルヘキシル等の（メタ）アクリル酸Ｃ1-10アルキル；（メタ）アクリル酸シクロヘキシル等の（メタ）アクリル酸Ｃ6-10シクロアルキル；（メタ）アクリル酸１−メトキシエチル、（メタ）アクリル酸２−メトキシエチル等の（メタ）アクリル酸Ｃ1-10アルコキシＣ1-10アルキル；（メタ）アクリル酸１−アダマンチル、（メタ）アクリル酸１−メチル−（１−アダマンチルエチル）、（メタ）アクリル酸トリシクロ[５．２．１．０2,6]デカン−８−イル等の炭素数８〜１６の橋かけ環炭化水素基を有する（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。また、これら（メタ）アクリレート類において、上記Ｃ1-10アルキル基としてはＣ1-8アルキル基が好ましく、上記Ｃ6-10シクロアルキル基としてはＣ6-8シクロアルキル基が好ましく、上記Ｃ1-10アルコキシ基としてはＣ1-6アルコキシ基が好ましく、炭素数８〜１６の橋かけ環炭化水素基としては、炭素数８〜１２の橋かけ環炭化水素基が好ましい。
【００５４】
また、上記（メタ）アクリルアミド類としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジＣ1-10アルキル（メタ）アクリルアミド；Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド等のＮ−Ｃ1-10アルキル（メタ）アクリルアミド；Ｎ−（１，１−ジメチル−２−アセチルエチル）（メタ）アクリルアミド等のＮ−Ｃ2-10アルカノイルＣ1-10アルキル（メタ）アクリルアミドの他、（メタ）アクリロイルピペリジン等が挙げられる。また、これら（メタ）アクリルアミド類において、上記Ｃ1-10アルキル基としては、Ｃ3-10アルキル基が好ましく、上記Ｃ2-10アルカノイル基としては、Ｃ2-6アルカノイル基が好ましい。
【００５５】
また、繰り返し単位（Ｂ）の合計含有量の下限としては、担体との吸着の観点から、全繰り返し単位中、１モル％以上が好ましく、１０モル％以上がより好ましく、１５モル％以上が更に好ましく、２０モル％以上が更に好ましく、３０モル％以上が更に好ましい。
一方、上限としては、水溶性の付与の観点から、全繰り返し単位中、９０モル％以下が好ましく、８０モル％以下がより好ましく、７０モル％以下が更に好ましく、６０モル％以下が更に好ましい。
なお、繰り返し単位（Ｂ）の含有量は、繰り返し単位（Ａ）の含有量と同様にして測定すればよい。
【００５６】
また、重合体に含まれる繰り返し単位（Ａ）と繰り返し単位（Ｂ）とのモル比〔（Ａ）：（Ｂ）〕としては、ブロッキング効果の観点から、１０：１〜１０：３０が好ましく、１０：２〜１０：２０がより好ましく、１０：３〜１０：１５が更に好ましい。
【００５７】
また、本発明で用いる重合体は、前記繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）以外の親水性繰り返し単位（Ｃ）を有していてもよい。斯様な親水性繰り返し単位（Ｃ）としては、アニオン性の単量体（アニオン性モノマー）、カチオン性の単量体（カチオン性モノマー）、またはノニオン性の単量体（ノニオン性モノマー）に由来するものが挙げられ、これらを１種または２種以上含んでいてもよい。
【００５８】
上記アニオン性モノマーとしては、ビニル安息香酸、（メタ）アクリル酸等の不飽和カルボン酸モノマー；スチレンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、イソプレンスルホン酸等の不飽和スルホン酸モノマーが挙げられる。
【００５９】
また、カチオン性モノマーとしては、アリルアミン、アミノスチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド塩化メチル４級塩等の１〜４級アミノ基と不飽和結合を有するものが挙げられる。
【００６０】
また、ノニオン性モノマーとしては、（メタ）アクリル酸ヒドロキシエチル、（メタ）アクリル酸グリセリル、（メタ）アクリル酸ポリオキシエチレン等のヒドロキシ基を有する不飽和カルボン酸エステルモノマー；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド等のヒドロキシ基を有する（メタ）アクリルアミドモノマーが挙げられる。
【００６１】
上記繰り返し単位（Ｃ）の合計含有量としては、全繰り返し単位中、０〜４９モル％が好ましく、０〜２０モル％がより好ましく、０〜１０モル％が更に好ましく、０〜１モル％が特に好ましい。
【００６２】
また、本発明で用いる重合体が共重合体である場合、その繰り返し単位の配列の態様は特に限定されず、共重合体は、ブロック共重合体、グラフト共重合体、ランダム共重合体、交互共重合体のいずれであってもよい。
【００６３】
また、本発明で用いる重合体の数平均分子量（Ｍn）としては、５０００〜１００万が好ましく、７０００〜２０万がより好ましく、１万〜１５万が特に好ましい。数平均分子量を５０００以上とすることにより、ブロッキング効果が向上し、一方、１００万以下とすることにより、粘度が抑制され取扱いが容易になる。
また、本発明で用いる重合体の重量平均分子量（Ｍw）としては、５０００〜５００万が好ましく、７０００〜１００万がより好ましく、７０００〜２０万が更に好ましい。
また、分子量分布（Ｍw／Ｍn）としては、１．０〜５．０が好ましく、１．０〜４．０がより好ましく、１．０〜３．０が更に好ましく、１．５〜２．５が特に好ましい。
なお、上記数平均分子量および重量平均分子量は、後述する実施例に記載の方法に従い測定すればよい。
【００６４】
また、本発明で用いる重合体としては、ブロッキング効果の観点から、水溶性のものが好ましい。ここで、本明細書において、水溶性とは、１質量％のポリマー固形分となるように重合体を水（２５℃）に添加・混合したときに、目視で透明となることをいう。
また、本発明で用いる重合体としては、ノニオン性のものが好ましい。
【００６５】
また、本発明で用いる重合体としては、水溶性の付与、ブロッキング効果の観点から、ＨＬＢ値が１０〜２２の範囲であるものが好ましい。
【００６６】
次に、本発明で用いる重合体の製造方法について説明する。
本発明で用いる重合体は、（１）公知の重合体の側鎖中にスルフィド基を導入し、斯かるスルフィド基をスルフィニル基に変換すること、（２）重合させたときに側鎖となる部分にスルフィド基を有するモノマーを、重合または他のモノマーと共重合させ、得られた（共）重合体のスルフィド基をスルフィニル基に変換すること、（３）或いは重合させたときに側鎖となる部分にスルフィニル基を有するモノマーを、重合または他のモノマーと共重合させること等により製造できる。
上記製造方法を、下記共重合体（Ｎ−１）の製造方法を例に挙げて具体的に説明する。
すなわち、工程１−Ａ−１および工程１−Ａ−２により、或いは工程１−Ｂまたは工程１−Ｃにより、共重合体（Ｓ−１）を得、これを用いて共重合体（Ｇ−１）を経て共重合体（Ｎ−１）を得る。
【００６７】
【化７】
2014153140.tif 000008
【００６８】
【化８】
2014153140.tif 000009
【００６９】
（式中の各記号は前記と同義である。）
【００７０】
＜工程１−Ａ−１＞
工程１−Ａ−１は、化合物（Ａ−１−１）と化合物（Ｂ−１）とを重合開始剤の存在下で重合させ、共重合体（Ｍ−１）を得る工程である。
化合物（Ａ−１−１）としては、例えば、（メタ）アクリル酸等が挙げられ、これらは１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
また、化合物（Ｂ−１）としては、前記スチレン類が挙げられ、その合計使用量としては、化合物（Ａ−１−１）に対し、０．００１〜１．５モル当量が好ましい。
【００７１】
また、上記重合開始剤としては、例えば、２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）、ジメチル２，２'−アゾビス（２−メチルプロピオネート）、２，２'−アゾビス（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニトリル等のアゾ系開始剤；ジ(３，５，５−トリメチルヘキサノイル)パーオキサイド、過酸化ベンゾイル等の過酸化物が挙げられ、これら重合開始剤は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
重合開始剤の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）に対し、通常０．０００２〜０．２質量倍程度である。
【００７２】
また、工程１−Ａ−１には溶媒、連鎖移動剤を使用してもよい。溶媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド系溶媒；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル、γ−ブチロラクトン等のエステル系溶媒；トルエン、ベンゼン等の芳香族系溶媒；１、４−ジオキサン、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒が挙げられ、これら溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。これら溶媒の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）に対し、通常０．５〜１５質量倍程度である。
また、上記連鎖移動剤としては、メルカプトエタノール、チオグリセロール、ｔｅｒｔ−ドデシルメルカプタン等が挙げられる。
【００７３】
また、工程１−Ａ−１の反応時間は特に限定されないが、通常０．５〜２４時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常０〜１２０℃程度である。
【００７４】
＜工程１−Ａ−２＞
工程１−Ａ−２は、工程１−Ａ−１で得た共重合体（Ｍ−１）の−Ｒ2を、化合物（Ｃ−１）のグリシジル基またはオキセタニル基に対し開環付加させ、共重合体（Ｓ−１）を得る工程である。
工程１−Ａ−２で用いる化合物（Ｃ−１）としては、エチレングリコールジグリシジルエーテル、プロピレングリコールジグリシジルエーテル等が挙げられ、その合計使用量としては、共重合体（Ｍ−１）中の化合物（Ａ−１−１）に由来する繰り返し単位に対し、１．５〜１０モル当量が好ましい。
【００７５】
また、工程１−Ａ−２は、触媒存在下で行うのが好ましい。触媒としては、テトラブチルアンモニウムブロマイド等の四級アンモニウム塩；テトラブチルホスホニウムブロマイド、テトラブチルホスホニウムクロライド等の四級ホスホニウム塩が挙げられ、これら触媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
上記触媒の合計使用量は、共重合体（Ｍ−１）中の化合物（Ａ−１−１）に由来する繰り返し単位に対し、通常０．０１〜０．２モル当量程度である。
また、工程１−Ａ−２で好適に使用される溶媒としては、工程１−Ａ−１と同様のものが挙げられる。
【００７６】
また、工程１−Ａ−２の反応時間は特に限定されないが、通常１〜２４時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常４０〜２００℃程度である。
【００７７】
＜工程１−Ｂおよび工程１−Ｃ＞
工程１−Ｂおよび工程１−Ｃは、化合物（Ａ−１−２）または化合物（Ａ−１−３）と、化合物（Ｂ−１）とを重合開始剤の存在下で重合させ、共重合体（Ｓ−１）を得る工程である。
化合物（Ａ−１−２）としては、例えば、グリシジル（メタ）アクリレート、オキセタニル（メタ）アクリレートが挙げられ、化合物（Ａ−１−３）としては、ビニルベンジルグリシジルエーテル、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレートグリシジルエーテル等が挙げられる。なお、これらは１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
工程１−Ｂおよび工程１−Ｃは、上記工程１−Ａ−１と同様にして行えばよい。
【００７８】
＜工程２＞
工程２は、工程１−Ａ−２、工程１−Ｂまたは工程１−Ｃで得た共重合体（Ｓ−１）のグリシジル基またはオキセタニル基に対し、−ＳＲ4を開環付加させ、共重合体（Ｇ−１）を得る工程である。
工程２で用いるＲ4ＳＨで表される化合物としては、チオグリセロール、メルカプトエタノールが挙げられるが、親水性向上の観点から、チオグリセロールが好ましい。
上記化合物の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）、（Ａ−１−２）または（Ａ−１−３）に由来する繰り返し単位に対し、通常０．１〜２０モル当量であり、好ましくは１〜１０モル当量である。
【００７９】
また、工程２は、触媒存在下で行うのが好ましい。触媒としては、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン等の塩基性触媒が挙げられ、これら触媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
上記触媒の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）、（Ａ−１−２）または（Ａ−１−３）に由来する繰り返し単位に対し、通常０．０１〜４０モル当量である。
【００８０】
また、工程２は、溶媒存在下で行うのが好ましい。溶媒としては、工程１で使用できる溶媒の他、エタノール、メタノール等のアルコール系溶媒、またはこれらの混合溶媒が挙げられ、その合計使用量は、共重合体（Ｓ−１）に対し、通常０．５〜２０質量倍程度である。
【００８１】
また、工程２の反応時間は特に限定されないが、通常１〜８時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常４０〜１００℃程度である。
【００８２】
なお、工程２を工程１−Ｂまたは工程１−Ｃの前に実施し、その後工程１−Ｂまたは工程１−Ｃの重合を実施してもよい。
【００８３】
＜工程３＞
工程３は、酸化剤を用いて、工程２で得た共重合体（Ｇ−１）のスルフィド基をスルフィニル基に変換し、共重合体（Ｎ−１）を得る工程である。なお、本発明の効果が失われない範囲で、共重合体中に含まれる複数のスルフィニル基の一部がスルフィド基やスルホニル基となってもよい。
【００８４】
上記酸化剤は、有機酸化剤と無機酸化剤とに大別され、有機酸化剤としては、例えば、過酢酸、過安息香酸、メタクロロ過安息香酸等が挙げられる。一方、無機酸化剤としては、例えば、過酸化水素、クロム酸、過マンガン酸塩等が挙げられる。なお、これら酸化剤は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
また、酸化剤の使用量は、化合物（Ａ−１−１）、（Ａ−１−２）または（Ａ−１−３）に由来する繰り返し単位に対し、通常１．０〜１０．０モル当量程度である。
【００８５】
工程３は、溶媒存在下で行うのが好ましい。斯かる溶媒としては、水；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等のアミド系溶媒；メタノール、エタノール等のアルコール系溶媒等が挙げられ、これら溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できるが、水、アルコール系溶媒が好ましい。
上記溶媒の合計使用量は、共重合体（Ｇ−１）に対し、通常１〜２０質量倍程度である。
【００８６】
また、工程３の反応時間は特に限定されないが、通常１〜２４時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常２５〜７０℃程度である。
【００８７】
なお、前記各工程において、各反応生成物の単離は、必要に応じて、ろ過、洗浄、乾燥、再結晶、再沈殿、透析、遠心分離、各種溶媒による抽出、中和、クロマトグラフィー等の通常の手段を適宜組み合わせて行えばよい。
【００８８】
そして、後記実施例に示すように、上記のようにして得られるスルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体で、検体中の標的物質に対する抗原または抗体が固定化された担体をコーティングすることによって、担体に対する非特異吸着によるノイズが著しく低減される。また、増感剤が引き起こすノイズも低減可能である。
したがって、上記重合体は、ブロッキング剤として有用であり、ブロッキング方法に使用することができる。
そして、斯かる重合体は、ブロッキング剤としてそのまま使用してもよく、ブロッキング剤を製造するための素材として使用することもできる。また、本発明のブロッキング剤は、溶媒への溶解性が良好なため取扱いが容易であり、経時劣化しにくく保存安定性にも優れる。
【００８９】
ここで、本明細書において、ブロッキングとは、体外診断において、検体中の標的物質と該標的物質に対する抗原または抗体との抗原抗体反応以外に起因する非特異的な吸着を防止すること、また上記非特異的な吸着による担体の凝集の発生を防ぐことをいう。なお、検体中の標的物質が標的物質に対する抗原または抗体を介さずに担体に吸着すると測定値の異常が発生することがあり、それを防ぐことも含む。
上記体外診断としては、ラテックス凝集法、ＥＬＩＳＡ法、化学発光法、免疫比濁法（ＴＩＡ）法、放射免疫測定（ＲＩＡ）、イムノクロマトグラフィー等による診断が挙げられるが、本発明のブロッキング剤は、ラテックス凝集法における上記非特異的な吸着による担体の凝集の防止に特に有用である。
なお、ラテックス凝集とは、抗体（または抗原）が結合したラテックス粒子と、検体中の標的物質である抗原（または抗体）とが結合し、２粒子以上の凝集体を形成することをいう。
また、検体としては、通常、血清や血漿、尿、唾液等の各種生物学的液体サンプル、糞便や食品の検体粉砕物等が挙げられる。測定サンプルとして、ｐＨ緩衝液、タンパク質、アミノ酸等で検体を希釈した検体希釈液を用いてよい。また、斯かる検体に含まれる標的物質は、通常、レセプター、酵素、血中タンパク、感染症関連抗原、微生物、ウイルス、ホルモン、環境関係物質（例えば、環境ホルモン等）等の抗原や、これら抗原に対する抗体等であり、該抗体は、特定の抗原に対する結合性を有すればよく、抗体のフラグメントも含まれる。
【００９０】
また、本発明のブロッキング剤中、上記重合体の含有量としては、０．０１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。斯様な低濃度であっても優れたブロッキング効果を奏する。
【００９１】
本発明のブロッキング剤は上記重合体の他に溶剤、本発明の重合体以外のブロッキング剤を含んでいてもよく、これらのうち１種を単独でまたは２種以上を組み合わせてもよい。
上記溶剤としては、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；酢酸エチル、酢酸ブチル等の酢酸エステル；ジメチルホルムアミド等のアミド；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド等が挙げられる。また、上記ブロッキング剤は、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）等の生体由来の水溶性ポリマー、化学合成により得られた水溶性ポリマーのいずれでもよい。
【００９２】
〔固定化された担体〕
本発明の標的物質に対する抗原または抗体が固定化された担体は、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体で一部または全部がコーティングされていることを特徴とするものである。
上記担体は特に限定されないが、ラテックス粒子、金ナノ粒子、ＥＬＩＳＡ用プレート、イムノクロマトグラフィー用メンブレン等が挙げられる。この中でも、ラテックス粒子が好ましい。本発明の固定化された担体は、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に特に有用である。
上記ラテックス粒子としては、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロプル（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリロイルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドのメチルクロライド４級塩、ダイアセトンアクリルアミド、Ｎ−ビニルアセトアミド等の（メタ）アクリルアミド化合物；（メタ）アクリル酸メトキシエチル、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロピル、（メタ）アクリル酸ラウリル、（メタ）アクリル酸シクロヘキシル、（メタ）アクリル酸イソボルニル、（メタ）アクリル酸ベンジル、グリセロール（メタ）クリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等の（メタ）アクリレート化合物；アクロレイン等の不飽和アルデヒド化合物；（メタ）アクリル酸、イタコン酸、無水マレイン酸、クロトン酸等の不飽和カルボン酸化合物または不飽和無水カルボン酸化合物；スチレンスルホン酸、イソプレンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸等の不飽和スルホン酸化合物；スチレン、アミノスチレン等のスチレン化合物の他、アリルアミン、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン等のモノマーから誘導されるポリマーの粒子が挙げられる。斯様なポリマー粒子の中でも、スチレン化合物と不飽和カルボン酸化合物との共重合体であるものが好ましく、スチレンと、アクリル酸、メタクリル酸及びイタコン酸から選ばれる不飽和カルボン酸化合物との共重合体であるものがより好ましい。
また、上記担体の平均粒子径は、好ましくは０．０１〜１μｍである。
【００９３】
また、上記標的物質に対する抗原または抗体としては、上記抗原や抗体と同様のものが挙げられる。
【００９４】
また、標的物質に対する抗原または抗体を担体に固定化する方法は、疎水−疎水相互作用による物理吸着、水溶性カルボジイミド系縮合剤を用いた化学的結合等の常法に従って両者を接触させればよい。
具体的な方法としては、（１）本発明で用いる重合体を含有する溶液に担体を接触させ、分散媒を残したまま溶液中で上記重合体を担体表面に物理吸着させる方法、（２）本発明で用いる重合体を含有する溶液に担体を接触させた後、分散媒を除去し、上記重合体の乾燥膜を担体表面に形成させる方法等が挙げられる。さらに具体的には、本発明で用いる重合体を含む溶液中に担体を分散させた後、遠心分離を行い、上澄み液を除去し再度担体を水または緩衝液により再分散させることが挙げられる。
【００９５】
また、上記重合体は、担体１００質量部に対し、０．０１〜１０００質量部使用するのが好ましく、０．１〜５００質量部使用するのがより好ましい。
また、コーティングするときの上記重合体の溶液中の濃度としては、０．０１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。斯様な低濃度であっても優れたブロッキング効果を奏する。
【００９６】
〔試薬〕
本発明の体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるための試薬は、上記固定化された担体を含有することを特徴とするものである。本発明の試薬中、本発明の固定化された担体の含有量は、０．００１〜２０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。
本発明の試薬は上記固定化された担体の他に、溶剤、本発明の重合体以外のブロッキング剤を含んでいてもよく、これらのうち１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて含んでいてもよい。本発明の重合体以外のブロッキング剤は上記と同様であるが、溶剤は、上記本発明のブロッキング剤に含まれていてもよい溶剤の他、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩衝液、アンモニア緩衝液等の各種緩衝液が挙げられる。
なお、本発明の試薬はラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に特に有用である。
【００９７】
〔キット〕
本発明の体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットは、上記試薬を少なくとも備えることを特徴とするものである。
本発明のキットとしては、上記本発明の固定化された担体を含有する試薬（第２試薬とも称する）に加えて、アルブミンを含有する反応緩衝液（第１試薬とも称する）を更に備えるものが好ましい。
上記アルブミンとしては血清アルブミン等が挙げられ、プロテアーゼ処理されていてもよい。第１試薬中のアルブミンの含有量は、通常、０．００１〜５質量％である。
上記第１試薬は、溶剤、ラテックス凝集測定用増感剤を含んでいてもよい。該溶剤としては水性媒体が挙げられる。該水性媒体としては、上記各種緩衝液が挙げられる。
また、上記ラテックス凝集測定用増感剤としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
また、本発明のキットは、上記第１試薬及び第２試薬の他に、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体は、測定しうる標的物質が含まれていない血清、生理食塩水のほか、溶剤でもよい。該溶剤としては、上記水性媒体が挙げられる。
【００９８】
本発明のキットは、通常の体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットと同様にして、本発明の標的物質の検出方法に使用できる。また、常法に従い標的物質の濃度も測定できる。特に、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に有用である。
【００９９】
〔標的物質の検出方法〕
本発明の体外診断による検体中の標的物質の検出方法は、上記固定化された担体と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合することを特徴とするものである。
【０１００】
また、上記担体と検体との混合は、ｐＨ４．０〜１０の範囲で行うのが好ましい。また、混合温度は通常２５〜４５℃の範囲であり、混合時間は通常１〜２０分である。
また、本検出方法は、溶剤を使用するのが好ましい。溶剤は本発明の試薬が含有していてもよいものと同様である。
また、本発明の固定化された担体の濃度としては、反応系中、好ましくは０．００１〜５質量％、より好ましくは０．０１〜１質量％である。
【０１０１】
そして、上記担体と検体との混合の結果として生じる凝集反応を光学的に検出することで、検体中の標的物質が検出され、更に標的物質の濃度も測定できる。凝集反応の光学的な検出は、散乱光強度、透過光強度、吸光度等を検出できる光学機器を用いて常法に従い行えばよい。
【実施例】
【０１０２】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【０１０３】
実施例における各分析条件は以下に示すとおりである。
＜分子量測定＞
重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）は、東ソー社製  ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍカラムを用い、流量：０．５ミリリットル／分、溶出溶媒：ＮＭＰ溶媒（Ｈ3ＰＯ4：０．０１６Ｍ、ＬｉＢｒ：０．０３０Ｍ）、カラム温度：４０℃の分析条件で、ポリスチレンを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した。
＜ＮＭＲスペクトル＞
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、溶媒および内部標準物質としてｄ６−ＤＭＳＯを用いて、ＢＲＵＫＥＲ製モデルＡＶＡＮＣＥ５００（５００ＭＨｚ）により測定した。
【０１０４】
実施例１  共重合体（Ｎ−１−１）の合成
以下の合成経路に従い、共重合体（Ｎ−１−１）を得た。
【０１０５】
【化９】
2014153140.tif 000010
【０１０６】
グリシジルメタクリレート１１３ｇおよびスチレン１１３ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）６．８ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４７５ｇとを混合しフラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、６時間重合させ、その後室温に冷却した。この溶液をメタノールによる再沈殿で精製し、減圧乾燥することで共重合体（Ｓ−１−１）を得た。
得られた共重合体（Ｓ−１−１）において、グリシジルメタクリレートに由来する繰り返し単位の含有量は４８モル％であり、スチレンに由来する繰り返し単位の含有量は５２モル％であった。なお、これら含有量は13Ｃ−ＮＭＲにより測定した。
【０１０７】
次いで、得られた共重合体（Ｓ−１−１）１０ｇおよびチオグリセロール３２．１ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド９５ｇとを混合してフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、触媒としてトリエチルアミン１２０ｇを添加した後４時間反応させ、その後室温に冷却した。この溶液を水による再沈殿で精製し、凍結乾燥することで共重合体（Ｇ−１−１）を得た。
次いで、得られた共重合体（Ｇ−１−１）１０ｇを８５．５ｇの水に分散させ、フラスコへ入れた。これに、３０％過酸化水素水溶液を４．５ｇ添加し、室温で１８時間反応させた。得られた水溶液を透析することで、共重合体（Ｎ−１−１）を得た（収率：１３％）。この共重合体（Ｎ−１−１）と水を混合し、濃度を１質量％に調整したところ、共重合体（Ｎ−１−１）は水に溶解していた。
また、得られた共重合体（Ｎ−１−１）の数平均分子量は１９０００であり、重量平均分子量は３００００であり、分子量分布は１．５９であった。
共重合体（Ｎ−１−１）の構造は13Ｃ−ＮＭＲで確認した。
【０１０８】
実施例２  共重合体（Ｎ−１−２）の合成
上記実施例１と同様の合成経路で共重合体（Ｎ−１−２）を得た。
グリシジルメタクリレート１７０ｇおよびスチレン５６．８ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）６．８ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４７５ｇとを混合しフラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、６時間重合させ、その後室温に冷却した。この溶液をメタノールによる再沈殿で精製し、減圧乾燥することで共重合体（Ｓ−１−２）を得た。
得られた共重合体（Ｓ−１−２）において、グリシジルメタクリレートに由来する繰り返し単位の含有量は６７モル％であり、スチレンに由来する繰り返し単位の含有量は３３モル％であった。なお、これら含有量は実施例１と同様にして測定した。
【０１０９】
次いで、得られた共重合体（Ｓ−１−２）１０ｇおよびチオグリセロール４４．７ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド９５ｇとを混合してフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、触媒としてトリエチルアミン１６７ｇを添加した後４時間反応させ、その後室温に冷却した。この溶液を水による再沈殿で精製し、凍結乾燥することで共重合体（Ｇ−１−２）を得た。
【０１１０】
次いで、得られた共重合体（Ｇ−１−２）１０ｇを８４．４ｇの水に分散させ、フラスコへ入れた。これに、３０％過酸化水素水溶液を５．６ｇ添加し、室温で１８時間反応させた。得られた水溶液を透析することで、共重合体（Ｎ−１−２）を得た（収率：１８％）。この共重合体（Ｎ−１−２）と水を混合し、濃度を１質量％に調整したところ、共重合体（Ｎ−１−２）は水に溶解していた。
また、得られた共重合体（Ｎ−１−２）の数平均分子量は３１０００であり、重量平均分子量は５６０００であり、分子量分布は１．８１であった。
共重合体（Ｎ−１−２）の構造は13Ｃ−ＮＭＲで確認した。
【０１１１】
実施例３  共重合体（Ｎ−１−３）の合成
上記実施例１と同様の合成経路で共重合体（Ｎ−１−３）を得た。
グリシジルメタクリレート１７０ｇおよびスチレン５６．８ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）２．２７ｇと、酢酸エチル４５０ｇとを混合しフラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、８時間重合させ、その後室温に冷却した。この溶液をメタノールによる再沈殿で精製し、減圧乾燥することで共重合体（Ｓ−１−３）を得た。
得られた共重合体（Ｓ−１−３）において、グリシジルメタクリレートに由来する繰り返し単位の含有量は６７モル％であり、スチレンに由来する繰り返し単位の含有量は３３モル％であった。なお、これら含有量は実施例１と同様にして測定した。
【０１１２】
次いで、得られた共重合体（Ｓ−１−３）１０ｇおよびチオグリセロール４４．７ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド９５ｇとを混合してフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、触媒としてトリエチルアミン１６７ｇを添加した後４時間反応させ、その後室温に冷却した。この溶液を水による再沈殿で精製し、凍結乾燥することで共重合体（Ｇ−１−３）を得た。
【０１１３】
次いで、得られた共重合体（Ｇ−１−３）１０ｇを８４．４ｇの水に分散させ、フラスコへ入れた。これに、３０％過酸化水素水溶液を５．６ｇ添加し、室温で１８時間反応させた。得られた水溶液を透析することで、共重合体（Ｎ−１−３）を得た（収率：１５％）。この共重合体（Ｎ−１−３）と水を混合し、濃度を１質量％に調整したところ、共重合体（Ｎ−１−３）は水に溶解していた。
また、得られた共重合体（Ｎ−１−３）の数平均分子量は３３０００であり、重量平均分子量は６００００であり、分子量分布は１．８２であった。
共重合体（Ｎ−１−３）の構造は13Ｃ−ＮＭＲで確認した。
【０１１４】
上記実施例１〜３で得た共重合体（Ｎ−１−１）〜（Ｎ−１−３）のＨＬＢ値（小田式）を以下の表１に示す。なお、共重合体（Ｎ−１−１）〜（Ｎ−１−３）が有する繰り返し単位（Ａ）からなるホモポリマーを合成し、１ｇを純水１００ｇに添加したところ常温（２５℃）で溶解した。また、共重合体（Ｎ−１−１）〜（Ｎ−１−３）が有する繰り返し単位（Ｂ）からなるホモポリマーを合成し、１ｇを純水１００ｇに添加したところ常温（２５℃）で溶解しきらなかった。
【０１１５】
【表１】
2014153140.tif 000011
【０１１６】
実施例４  標的物質検出用試薬の調製（１）
免疫診断用ラテックス粒子（品番：Ｇ０３０５（平均粒子径：０．３１μｍ、表面ＣＯＯＨ基の含有量：０．２１ｍｍｏｌ／ｇ−ＬＴｘ、ＪＳＲ株式会社製））の１０質量％水溶液１ｍＬと、ＨＥＰＥＳ緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．５）９ｍＬとを混合し（粒子の濃度＝１質量％）、これに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（同仁化学社製）を、最終濃度が０．０５質量％となるように添加した。更に、この粒子分散液に、抗ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）抗体（ウサギ）の１０ｍｇ／ｍＬ水溶液を０．５ｍＬ加えて室温で３時間攪拌し、抗体を粒子の表面に固定化させた。
その後、この粒子分散液に共重合体（Ｎ−１−１）の０．５質量％水溶液を０．５ｍＬ加え、室温で１０時間ゆっくり回転攪拌し、これを１５，０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離し、粒子を沈殿として回収した。
次いで、ＨＥＰＥＳ緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．５）１０ｍＬに上記粒子を再懸濁させ、超音波で１０分間分散させた。この再懸濁および分散の操作をもう一度繰り返した後、粒子分散液に０．０２質量％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）含有１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を２００ｍＬ加えて粒子固形分が０．０５質量％となるように調整し、超音波で１０分間分散させ、０．８μｍディスクフィルターに通した。
これら一連の操作により、共重合体（Ｎ−１−１）でコーティングされた抗体固定化ラテックス粒子の分散液（第２試薬）を得た。
【０１１７】
実施例５  標的物質検出用試薬の調製（２）
実施例４において、共重合体（Ｎ−１−１）の代わりに共重合体（Ｎ−１−２）を用いた以外は実施例４と同様の操作で抗体固定化ラテックス粒子の分散液を得た。
【０１１８】
実施例６  標的物質検出用試薬の調製（３）
実施例４において、共重合体（Ｎ−１−１）の代わりに共重合体（Ｎ−１−３）を用いた以外は実施例４と同様の操作で抗体固定化ラテックス粒子の分散液を得た。
【０１１９】
比較例１
実施例４において、共重合体（Ｎ−１−１）の０．５質量％水溶液の添加を行わなかった以外は実施例４と同様の操作で抗体固定化ラテックス粒子の分散液を得た。
【０１２０】
比較例２
実施例４において、共重合体（Ｎ−１−１）の代わりに牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いた以外は実施例４と同様の操作で抗体固定化ラテックス粒子の分散液を得た。
【０１２１】
試験例１  ブロッキング効果評価試験（１）
プラスチック製の透明セルに、３μＬの生理食塩水と１５０μＬの第１試薬（０．１質量％牛血清アルブミン水溶液と１．０質量％ポリビニルアルコール（分子量２万）を含有する１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５））を加えて均一攪拌した後、５分間保持した。
次いで、実施例４〜６及び比較例１〜２で調製した分散液（第２試薬）１５０μＬをそれぞれセルに加えて均一攪拌した後、５０秒経過時の吸光度と２００秒経過時の吸光度との差を、日立７１８０型自動分析装置（使用波長５７０ｎｍおよび測定温度３７℃）を用いて計測した。結果を表２に示す。
【０１２２】
【表２】
2014153140.tif 000012
【０１２３】
試験例２  ブロッキング効果評価試験（２）
まず、生理食塩水の代わりに、濃度が異なりかつ濃度既知である５種のＣＲＰ抗原生理食塩水溶液をそれぞれ用いた以外は試験例１と同様にして吸光度の差を計測し、得られた吸光度の差とＣＲＰ抗原濃度の関係から検量線を作成した。
次に、生理食塩水の代わりに、あらかじめ別法で濃度が正確に測定されている（これら濃度をそれぞれ抗原濃度Ｘとする）５０人分のＣＲＰ濃度既知の検体をそれぞれ用いた以外は試験例１と同様にして吸光度の差を計測し、得られた吸光度の差から上記で作成した検量線を使用してＣＲＰ抗原濃度を算出した（これら算出抗原濃度をそれぞれ抗原濃度Ｙとする）。
そして、各ＣＲＰ抗原濃度ＸをＸ軸に、各ＣＲＰ抗原濃度ＹをＹ軸にそれぞれプロットし、この関数について相関係数Ｒ2を求めた。結果を表３に示す。
なお、相関係数Ｒ2の値が１に近いほど、検体に含まれている成分が原因となる過剰な凝集の影響が少なくブロッキング効果が優れていることを意味する。
【０１２４】
【表３】
2014153140.tif 000013
【０１２５】
試験例１および２の結果から、本発明のブロッキング剤は、優れたノイズ低減効果を有することがわかる。