(57)【要約】【課題】経皮ワクチン用に特に適する経皮吸収剤用リポソーム担体を提供すること【解決手段】アルコール抵抗性の高いリポソームによって、経皮吸収剤用担体に適するリポソームを提供することができた。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルコール中で安定なリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
【請求項２】
２０％エタノール含有PBS中で２時間反応させたときのカルボキシフルオレセン（CF）の放出度が５０％以下であるリポソームからなる請求項１記載の経皮吸収剤用担体。
【請求項３】
相転移温度５０℃以上のリン脂質を少なくとも５０モル％以上配合して形成したリポソームからなる請求項１または２に記載の経皮吸収剤用担体。
【請求項４】
リン脂質がジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）、及びポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）から選ばれた一種以上である請求項１〜３のいずれかに記載のリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
【請求項５】
水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）、及びジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
【請求項６】
水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）：コレステロール（Ｃｈｏｌ）のモル比が１：１〜４：１であることを特徴とする請求項５に記載のリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
【請求項７】
リポソームが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡＥ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）のいずれかである経皮吸収剤用担体。
【請求項８】
平均粒径が０．６〜１μｍである、請求項１〜７のいずれかに記載の経皮吸収剤用担体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の経皮吸収剤用担体を含む経皮ワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経皮吸収剤において吸収性を向上させるために有用なリポソームに関する。特に、本発明は、経皮ワクチンの担体として優れた有用性を有するリポソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
経皮ワクチンなどの経皮吸収性の投与剤は、非侵襲性であるために高い有用性を有する。しかし、表皮から浸透させる必要性があるため皮膚浸透性の高い担体の開発が必要である。
【０００３】
経皮ワクチンは、その投与の労力が低く安全であり、高い免疫応答が誘導できるため、家畜の感染症予防において期待される技術であるが、開発する上で、ワクチン抗原を表皮から浸透させる技術が重要となる。
しかしながら、ワクチン抗原を表皮から浸透させ、皮膚の免疫相当細胞（樹状細胞）であるランゲルハンス細胞にデリバリーする実用的技術の開発はまだなされていない。
【０００４】
免疫担当細胞に抗原を送達させる上で、リポソームは優れたデリバリーシステムとして機能する。本発明者等は、これまで、家畜に対するリポソームワクチンの開発研究を行い、アジュバントとして有用なホスファチジルコリン等リン脂質を含むリポソームを提供してきた（特許文献１〜３等、非特許文献１〜３等）。しかし、これらは経口、経鼻、あるいは眼内投与などの粘膜投与のためのものであり、経皮投与に適するリポソームの研究開発はなされていない。
【０００５】
一方、化粧料用リポソームにつき、ホスファチジルコリンとホスファチジン酸を含有するリポソームを開示し、該リポソームに関して、膜構造が柔軟で皮膚吸収性が高いと記載されている従来技術（特許文献４）があるが、これは経皮ワクチンへの応用は検討されていない。
また、インフルエンザワクチンにつき、経皮投与のための製剤であって、リポソームを用いることを記載する文献もあるが（特許文献５）、ここでは、用いるリポソームについて具体的に検討・開示はされてはいない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−１１１５４０号公報
【特許文献２】ＷＯ２００７／０９１５８０号公報
【特許文献３】特開２００９−２８６７３０号公報
【特許文献４】特開２００９−２６９８７１号公報
【特許文献５】特開２００１−１５１６９８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】J. Vet. Med. Sci., 59(12), 1109-1114 (1997)
【非特許文献２】Development and Comparative Immunology 28, 29-38(2004)
【非特許文献３】Biomaterials 31, 943-951(2010)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、表皮透過性に優れ、高い免疫応答を誘導できる、経皮吸収剤担体として最適なリポソームを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、粘膜投与のために従来本発明者等が開発してきたリポソームを経皮投与に応用するために鋭意検討を行った。
経皮投与のためには、リポソームが表皮透過性に優れていることが不可欠である。
すなわち、非侵襲性の経皮投与のためには皮膚バリア通過が必須であるが、表皮には細胞内脂質があるので、脂質であるリポソームは通過しがたい。
そこで、経皮投与剤は表皮透過のためにアルコールに分散して投与することになるが、本発明者等は、アルコールは油を溶かすので、経皮吸収剤用リポソームには所定以上のアルコール安定性が必要であることを見出した。
【００１０】
さらに本発明者は、経皮吸収剤に適するアルコールに安定で且つ表皮に浸み込むリポソーム組成を鋭意検討した結果、相転移温度が高いリン脂質を組み合わせて配合することで、リポソーム膜に一定の硬さと一定の流動性を与えることができ、アルコール安定性に優れたリポソームを提供できることを見出し、本発明に至った。
【００１１】
より具体的には、このような相転移温度が高くアルコール安定性であるリン脂質として、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＳ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ、ＨｅＰＣ、及びＰＥＧ−ＰＥを選び、組み合わせて用い配合することで、経皮投与に最適なリポソームを構成することができた。
なお、本願明細書では以下の略号を用いる。
ＤＰＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン（dipalmitoylphosphatidylcholine）
ＤＰＰＳ：ジパルミトイルホスファチジルセリン（dipalmitoylphosphatidylserine）
ＤＳＰＣ：ジステアロイルホスファチジルコリン（distearoylphosphatidylcholine）
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ（ＰＥＧ−ＰＥと同じ）：ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（polyethylen glycol(PEG) and stearic acid(SA)-conjugated distearoylphosphatidylethanolamine）
ＨｅＰＣ：水素添加卵黄レシチン
Ｃｈｏｌ：コレステロール（cholesterol）
ＤＭＰＣ：ジミリスチルホスファチジルコリン（dimiristylphosphatidylcholine）
【００１２】
また、これらの化合物の相転移温度は以下のとおりである。
ＤＰＰＣ：４１〜４２℃
ＤＰＰＳ：６５℃
ＤＳＰＣ：５４〜５８℃
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ（ＰＥＧ−ＰＥ）：６５〜７０℃
ＨｅＰＣ：５０〜５６℃
Ｃｈｏｌ：なし
ＤＭＰＣ：２３〜２４℃
【００１３】
そして、さらに、本発明のリポソームを用いて皮膚吸収剤を調製し皮膚に塗布して経皮免疫を検討した結果、意外にも粘膜免疫が誘導できることが分かった。
【００１４】
さらに、本発明者は、上記リポソームの粒径とアルコール安定性、免疫誘導性との関係も検討し、アルコール安定性及び免疫誘導性のために最適な粒径があることも見出した。
【００１５】
より具体的に、本発明は、以下に関するものである。
〔１〕アルコール中で安定なリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
〔２〕２０％エタノール含有PBS中で２時間反応させたときのカルボキシフルオレセン（CF）の放出度が５０％以下であるリポソームからなる上記〔１〕記載の経皮吸収剤用担体。
〔３〕相転移温度５０℃以上のリン脂質を少なくとも５０％以上配合して形成したリポソームからなる上記〔１〕または〔２〕に記載の経皮吸収剤用担体。
〔４〕リン脂質がジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）、及びポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）から選ばれた一種以上である上記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
〔５〕水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）、及びジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）を含むことを特徴とする上記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
〔６〕水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）：コレステロール（Ｃｈｏｌ）のモル比が１：１〜４：１であることを特徴とする請求項５に記載のリポソームからなる経皮吸収剤用担体。
〔７〕リポソームが、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡＥ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）のいずれかである経皮吸収剤用担体。
〔８〕平均粒径が０．６〜１μｍである、上記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の経皮吸収剤用担体。
〔９〕上記〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の経皮吸収剤用担体を含む経皮ワクチン。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の経皮吸収剤用リポソーム担体は、特に経皮ワクチンに用いることによって、家畜感染症の防除に対して有用である。本発明は、家畜の感染症に対する新たな予防法、治療法に応用できるので、より安全な畜産製品生産のために活用することができる。
また、既存のワクチン抗原を使用することで、既存の注射ワクチンを経皮ワクチンとすることができる。このことは、ワクチンの開発コストを抑えた形で経皮ワクチンを応用できる可能性を示している。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】経皮免疫による免疫誘導（血清IgG）を示す図である。
【図２】経皮免疫による免疫誘導（血清IgA）を示す図である。
【図３】経皮免疫による腸管抗体の誘導（４２日目）を示す図である。
【図４】２０％エタノール安定リポソーム経皮免疫後の抗体産生（血清抗OVA-IｇG）を示す図である。
【図５】２０％エタノール安定リポソーム経皮免疫後の抗体産生（血清抗OVA-IｇA）を示す図である。
【図６】２０％エタノール安定リポソーム経皮免疫後の抗体産生（腸管抗OVA-IｇG）示す図である。
【図７】２０％エタノール安定リポソーム経皮免疫後の抗体産生（腸管抗OVA-IｇA）示す図である。
【図８】２０％エタノール抵抗性リポソーム経皮ワクチンによる免疫誘導（アジュバント比較：血清IgG）
【図９】２０％エタノール抵抗性リポソーム経皮ワクチンによる免疫誘導（アジュバント比較：血清IgA）
【図１０】２０％エタノール抵抗性リポソーム経皮ワクチンによる免疫誘導（アジュバント比較：IgGサブクラス、Day４２）
【図１１】２０％エタノール抵抗性リポソーム経皮ワクチンによる免疫誘導（アジュバント比較：腸管IgA）
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下には、本発明について詳細に説明するが、本発明は以下に限定されるものではない。
前記したように、本発明は、リポソームをアルコール安定性にすることによって、経皮吸収用担体に適することを見出したものであるが、本発明では、リポソームのアルコール安定性を示す指標として、２０％エタノール含有PBS中で２時間反応させたときのカルボキシフルオレセン（CF）の放出度を用いた（以下単に「CF放出度」ということがある。）。CF放出度は、例えば、８０％であっても経皮吸収用担体に用いることができるが、リポソーム膜が壊れ抗原等の封入剤がリークしてしまい皮膚を通過する封入剤が減少する可能性が高くなるので効率的ではない。よって、本発明において好ましいCF放出度は、約５０％以下であり、より好ましくは約３０％以下、さらに好ましくは約２０％以下である。
【００１９】
このようなアルコール安定性のリポソームは、リン脂質として、相転移温度の高いものを配合することで達成できる。相転移温度が高いリン脂質を組み合わせて配合することで、リポソーム膜に一定の硬さと一定の流動性を与えることができるからである。
リポソームは、相転移温度が５０℃以上のリン脂質を少なくとも５０モル％以上配合して形成するのが好ましい。ここで、リポソームを相転移温度が５０℃以上のリン脂質を少なくとも５０モル％以上配合して形成するとは、相転移温度が５０℃以上のリン脂質を選び、それを少なくとも５０モル％以上配合してリポソームを形成すれば良いのであって、５０モル％を超えなければ相転移温度が５０℃以上のリン脂質や他の脂質（コレステロールなど）を含んでも良いことを示す。相転移温度５０℃以上のリン脂質が８０モル％以上であればさらに好ましく、逆に５０モル％以下程度になるとアルコール安定性が低下し好ましくない。
相転移温度が５０℃以上のリン脂質としては、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）、及びポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）が挙げられる。特に水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）が安価で入手しやすいので好ましい。
【００２０】
リポソームにはリン脂質以外のコレステロール（Ｃｈｏｌ）を配合することができるが、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）にコレステロール（Ｃｈｏｌ）を配合するときは、水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）：コレステロール（Ｃｈｏｌ）のモル比が１：１〜４：１であることがより好ましい。
【００２１】
具体的な配合例として、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）；水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）；水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡＥ）；水素添加卵黄レシチン（ＨｅＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）などが挙げられる。
ここで、例えば、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）／コレステロール（Ｃｈｏｌ）／ポリエチレングリコール-ステアリン酸-共役ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡ）は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＳ、コレステロール、及びＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＳＡを組み合わせて配合することを示す。
【００２２】
また、経皮吸収用担体として用いるリポソームの平均粒径は０．６〜１μｍ程度が好ましい。この平均粒径は、リポソームを通過させるエクストルーダーの孔径によって示される値である。
【００２３】
本発明のリポソームは、経皮ワクチン用の担体として好適に用いることができる。その際、経皮用ワクチンには、リポソーム以外にアジュバントをさらに配合して用いても良い。用いうるアジュバントとして、ポリI:C、ＭＰＬ、イミダゾキノリン誘導体、ＴＤＭ等の病原体関連分子パターン（Toll like receptors、NOD-like receptors、RIG-I-like receptors、C-type lectin receptlrs 等）のアゴニストの他、サポニン、α-ガラクシトシルセラミド（αGalCer）、スクアレン、ADP-リボシル化外毒素、サイトカイン、ケモカインなどが挙げられるが、サポニン、αGalCer、ＭＰＬが好ましく、特にαGalCerが好ましい。
【００２４】
以下に実施例によって、本発明で、アルコール抵抗性のリポソームを構築し、その経皮吸収剤としての至適粒径、有用性を確認したことを具体的に示す。さらに、経皮ワクチンに用いるアジュバントの種類も変えて適性を試験した。
【実施例１】
【００２５】
＜アルコール抵抗性リポソームの作出＞
本発明者は、本発明者等が家畜に対するワクチンの粘膜投与のために開発研究してきたホスファチジルコリン等リン脂質を含むリポソームの組成（特許文献１〜３参照）を参考にしながら、以下の組成のリポソームについてアルコール抵抗性を検討した。
#1.DPPC:DPPS:Chol:DSPE‐PEG‐SA=1:1:2:0.2（モル比）
#2.DSPC:Chol:DSPE‐PEG‐SA=7:2:0.2（モル比）
#3.DSPC:DPPS:Chol:DSPE‐PEG‐SA=7:3:2:0.2（モル比）
#4.DSPC:DPPS:Chol:DSPE‐PEG‐SA=1:1:2:0.2（モル比）
#5.DMPC:DPPS:Chol:DSPE‐PEG‐SA=1:1:2:0.2（モル比）
#6.DSPC:DPPS:Chol=1:1:2（モル比）
【００２６】
カルボキシフルオレセイン (CF) を封入したリポソームは以下に示す薄膜法によって作製した。リン脂質およびコレステロールを１０ｍモル濃度になるように溶媒 (クロロホルム/メタノール混合液)に溶解して、リン脂質およびコレステロールがそれぞれ♯1〜♯６に示された割合 (モル比) になるよう混合してガラス容器へ入れる。ロータリーエバポレーターによってガラス容器中の溶媒を留去することによって容器側面へ脂質膜を付着させる。ここへ0.05M濃度のCF水溶液を添加し、振とう機で撹拌することにより脂質膜を容器から剥がし、CFを封入した各リポソームを得た。
CFを封入した各リポームを０％、２％、５％、１０％ならびに２０％エタノール含有ＰＢＳ（phosphate buffer saline）に懸濁させ、室温で３０分、１時間ならびに２時間反応させた。各反応時間におけるＣＦの放出量を測定し、アルコール抵抗性リポソームの脂質組成や組成比を検討した。
【００２７】
結果は表１に示すとおりである。
【表１】
2014193817.tif 000002
♯１〜♯６組成に用いられるDPPC、DSPC、DPPS、DPSE-PEG-SA、及びDMPCの相転移温度はそれぞれ４１〜４２℃、５４〜５８℃、６５℃、６５〜７０℃、及び２３〜２４℃であり、Ｃｈｏｌには相転移温度はみられない。♯１〜♯６組成において、相転移温度が５０℃以上であるリン脂質の割合は、それぞれ♯１で２８．６モル％、♯２で８０．０モル％、♯３で８６．３モル％  ♯４で５２．４モル％、♯５で２８．６モル％、♯６で５０．０モル％であり、相転移温度が５０℃以上であるリン脂質の割合が高くなるほど、アルコール抵抗性が高くなり、５０℃以上であるリン脂質の割合が５０モル％を下回るときアルコール抵抗性が低く（CFリーク率（％）が高く）なることが分かった。なお、表１において、−は試験を行っていないことを示す。
【００２８】
＜抗体産生の確認＞
表１の結果から最もアルコール抵抗性の高かった♯３のリポソームを用いて、経皮投与による免疫誘導能の確認をした。その際、♯３のリポソームにmonophosphoryl lipid A(MPL)をアジュバントとして使用した（２μｇMPL／マウス）。  この実験では、抗体産生に対するリポソーム粒径（１μｍ、０．６μｍ）の影響も同時に確認した。
【００２９】
経皮免疫は、モデル抗原として卵白アルブミン（ＯＶＡ）を１００μｇ／マウスで用い、０日、１４日、２８日後の血清ＩｇＧ、血清ＩｇＡ、及び42日目の腸管抗体の誘導を測り、それぞれ図１、図２、及び図３に示した。
免疫誘導能の確認は以下の方法で実施した。
OVAを封入したリポソームをCF封入リポソームと同様の方法で作製した。これを20%エタノール含有PBS中へ分散させ、OVA量が１００μｇ／マウスになるようマウス背部へ塗布することにより免疫した。免疫は14日間隔で計3回実施した。免疫開始前 (day 0) および開始後14日毎 (Day 14、Day 28、Day42) に血液を採取し、それぞれの時点におけるOVAに特異的な血清中IgGおよびIgA抗体価をELISA法によって測定した。またDay 42の時点で採取した小腸をPBS中で懸濁し、その上澄み液中のOVA特異的IgGおよびIgA抗体価を腸管抗体としてELISA法によって測定した。
その際、OVAを対照として用いた。
【００３０】
図１〜図３の結果から、OVA封入リポソームは、粒径０．６μｍでも1μｍでも、血清ＩｇＧ、血清ＩｇＡ、腸管ＩｇＧ、及び腸管ＩｇＡのいずれにおいても、OVAに対して、有意に優れた免疫特性を示したことが分かった。
これらの結果から、相転移温度が高くアルコール抵抗性の高いリポソームを用いれば、経皮的に免疫誘導をできることが分かった。特にCF放出度が２０％以下であり、相転移温度が５０℃以上であるリン脂質を８０モル％以上含む♯３を用いたときに、高い経皮免疫誘導が得られることが分かった。
【実施例２】
【００３１】
他の実施例として、安価で入手しやすいＨｅＰＣ（水素添加卵黄レシチン）をリポソームの材料として用いるリポソームにつき、アルコール抵抗性、免疫誘導性を確認した。
リポソーム組成以外は、実施例１に準じて実験を行った。なお、ＨｅＰＣ（水素添加卵黄レシチン）の相転移温度は５０〜５６℃、DPPSの相転移温度は６５℃である。また、実施例１と同様にmonophosphoryl lipid A(MPL)をアジュバントとして使用した（２μｇMPL／マウス）。
【００３２】
＜アルコール抵抗性＞  
実施例２におけるリポソームの組成と、そのアルコール抵抗性は以下の表２に示すとおりである。
【表２】
2014193817.tif 000003
【００３３】
＜免疫誘導の確認＞
表２から特にアルコール抵抗性の高い♯１、３及び５の組成を選び、経皮免疫誘導を行った。結果を図４〜図７に示す。図４〜図７において♯１、３及び５はそれぞれgroup３、２、及び１として示されている。特にＣＦ放出度２０％以下という高いアルコール抵抗性のリポソームで、高い経皮免疫誘導が示されている。
【００３４】
以上の実施例１及び実施例２の結果から、アルコール抵抗性が高く、相転移温度の高いリポソームを用いることで、経皮免疫に有用なリポソームが得られることが分かった。
【実施例３】
【００３５】
＜アジュバントの種類＞
本発明の経皮リポソームについて、アジュバントとして最適な物質を選定するために、アジュバントを変更した試験を行った。
実施例１の♯３のリポソームを用いて、アジュバントとして、サポニン、MPL、αGalCerを用いた以外は実施例１に準じて経皮免疫試験も行った。
結果を図８〜図１１に示す。
図８〜１１の結果から分かるように、サポニン、MPL、αGalCerのいずれでも、血清ＩｇＧ、血清ＩｇＡ、及び腸管ＩｇＡのいずれについても、対照（アジュバンドなし）に比して有意の差がある免疫特性が得られており、特に、αGalCerが最も好ましいことが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明の経皮吸収剤用担体は、特に経皮ワクチン用として用いることで家畜感染症の防除に対して有用である。本発明は、家畜の感染症に対する新たな予防法、治療法に応用できるので、より安全な畜産製品生産のために活用することができる。
また、既存のワクチン抗原を使用することで、既存の注射ワクチンを経皮ワクチンとすることができる。このことは、ワクチンの開発コストを抑えた形で経皮ワクチンを応用できる可能性を示している。
【図１】
2014193817.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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