(57)【要約】      （修正有）【課題】ゲル化の過程において、形成されるゲルマトリクスの内部に細胞又は他の生体材料を供給するのに十分な時間を確保できる遅効性自己ゲル化アルギネートシステムの提供。【解決手段】可溶性のアルギネートを含む水溶液中に不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物であって、前記不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が８５％より多いＧを有し、更にオリゴマーあたりのモノマーの平均数が１５〜２０である単離されたＧブロックオリゴマーを含む分散物。前記不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、例えば、（ｉ）アルギネート、ゲル化イオン及び水以外の極性溶媒を用いてアルギネートゲルを作る工程、（ｉｉ）アルギネート中に存在したゲルからナトリウム又は他のイオンを洗い流す工程、（ｉｉｉ）ゲルを乾燥して溶媒を除く工程、及び（ｉｖ）乾燥したゲルから粒子を作る工程を含む方法により生成することができる分散物。【選択図】図１
2014205059.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物であって、分散物は、非ゲル化カチオンの添加なしで１分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示し、そして
（ａ）不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、８５％より多いＧを有しさらにオリゴマーあたり１５モノマーから２０モノマーの間のモノマーの平均数を有する単離されたＧブロックオリゴマーを含むか、または
（ｂ）不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、以下の２つの方法（ｉ）−（ｉｖ）または方法（ｉ）−（ｖ）の何れか、
（ｉ）アルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の極性溶媒を用いてアルギネートゲルを作る工程、
（ｉｉ）アルギネート中に存在したゲルからナトリウムまたは他のイオンを洗い流す工程、
（ｉｉｉ）ゲルを乾燥して溶媒を除く工程、そして
（ｉｖ）乾燥したゲルから粒子を作る工程、
または
（ｉ）アルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の溶媒を組み合わせてアルギネート−ゲル化イオン複合体の沈殿を形成する工程、
（ｉｉ）沈殿を集める工程、
（ｉｉｉ）アルギネート中に存在したゲルからナトリウムまたは他のイオンを洗い流す工程、
（ｉｖ）沈殿を乾燥して溶媒を除く工程、そして
（ｖ）乾燥した沈殿から粒子を作る工程
からなる方法により生成されることを特徴とする可溶性のアルギネートを含む水溶液中に不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物。
【請求項２】
分散物が、非ゲル化カチオンの添加なしで５分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示す請求項１の分散物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遅効性ゲル化プロセスを有するアルギネートシステム、およびこのシステムを製造かつ使用する組成物、装置、キットおよび方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルギネートは、生理学的に関連のある温度で発達し硬化できる熱安定性ゲルを形成するユニークな能力を有する親水性の海洋性バイオポリマーである。アルギネートは、１−４グリコシド結合β−Ｄ−マンニュロン酸（Ｍ）残基およびα−Ｌ−グルロン酸（Ｇ）残基の非分枝二元コポリマーの群である。２つのウロン酸モノマーの相対的量およびそれらのポリマー鎖中の配列は、アルギネートの発生源に応じて広く変化する。アルギネートは、海洋性の褐藻例えばＬａｍｉｎａｒｉａ  ｈｙｐｅｒｂｏｒｅａ、Ｍａｃｒｏｃｙｓｔｉｓ  ｐｙｒｉｆｅｒａ，Ｌｅｓｓｏｎｉａ  ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓおよびＡｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄａｓｕｍの構造ポリマーである。アルギネートは、また或る細菌例えばＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ  ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉおよびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓにより生成される（特許文献１）。
【０００３】
アルギネートゲルは、２つの異なるアルギネートポリマーのそれぞれからのＧ残基の負に電荷した基とイオン結合を形成し、それにより２つのポリマーを架橋する。多数のアルギネートポリマー中の複数の架橋結合の形成は、アルギネートゲル構造であるマトリックスを生ずる。
【０００４】
アルギネートゲルは、ヒドロゲルであり、すなわち溶解することなく多量の水を含む架橋したアルギネートポリマーである。バイオポリマーゲル、例えばアルギネートヒドロゲルは組織工学および他の生物医学的用途にとり魅力的な基材である。このような性質および生理学的条件下でゲルを形成する能力のために、アルギネートは、内包的な目的に、そして生体構造の材料として広く使用されそして研究されている。アルギネートビーズ中の細胞の捕捉は、普通に使用される技術である。また、アルギネートは、組織工学的用途を含む他のタイプの生体構造物に、そして神経再生のための足場（スカホールド）として有用な材料であることが示されている。
【０００５】
アルギネートヒドロゲルを製造する種々の方法が存在する。最も普通な方法は、透析／拡散法であり、それではアルギネート溶液は、外側の貯槽からのゲル化イオンの拡散によりゲル化される。この方法は、アルギネートゲルビーズを作るときそして食品の製造時に、最もよく使用される。アルギネートミクロビーズの製造は、ゲル網状構造へのゲル化イオンの拡散により制限される早いプロセスである。このプロセスは、ミクロビーズ中の細胞の捕捉に最も好適であるが、他の形状または構造の製造には役立たない。より大きなサイズのゲル構造の製造には、拡散ゲル化システムは、可能性を制限されるものと思われる。これは、早いゲル化プロセスがゲル構造の成形を可能にする時間を制限するからである。
【０００６】
ゲル化プロセスにおける遅効性は、ゲル形成前に、本体への溶液の注入を可能にする、および／またはゲルマトリックス中へ細胞または他の生体材料を混合するのに使用できる。そのため、別の方法が、他のタイプの生体適合性のアルギネートゲル構造の製造に開発されている。ゲル化速度は、ゲル化イオンが形成するゲルの内側で、より遅く放出される内部ゲル化システムを用いることによって、遅くできる。これは、ゲルの内部硬化とよばれる。通常、内部ゲル化システムにおいて、制限された溶解度を有するカルシウム塩または複合Ｃａ２＋イオンを、カルシウムイオンが徐々に放出されるアルギネート溶液と混合する。硫酸カルシウムが、組織工学のためのアルギネートに基づく細胞伝達に使用されている。カルシウムの放出およびゲル化反応の仕組みは、またｐＨに依存する溶解度をもつカルシウム塩の使用、および徐々に働く酸例えばＤ−グルコノ−δ−ラクトン（ＧＤＬ）の添加によりコントロールできる。ｐＨが変化すると、カルシウムイオンが放出される。また、カルシウム含有リポソームが、コントロール可能なアルギネートゲル化システムとして使用されている。内部ゲル化に基づくアルギネートゲルシステムは、カルシウムイオンがアルギネート溶液中へ拡散されてカルシウム飽和ゲルを生ずる場合、拡散システムとは反対に、ゲル化イオンの供給が、より限定かつ制限される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】ＷＯ０４０１１６２８Ａ１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
アルギネートゲル構造を製造する種々の最近の方法は、壁に直面している。いくつかのやり方のみが、制限されたサイズおよび形状のゲルを作るのに役立つに過ぎない。用途に応じ、ゲル化反応の仕組みのコントロールを伴う問題が存在する。或る場合には、望ましくない物質がゲル中に存在する。それは、このような物質が、化学的にコントロールされたゲル化のメカニズムの残渣および副生物であるからである。また或る場合には、非生理学的ｐＨがゲル化に要求され、このような条件は、このような方法を用いるのに制限となる。そのため、他のゲル化システムおよび形成が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、アルギネート溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物に関し、その分散物は、非ゲル化カチオンの添加なしに１分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より小さいストレージモジュラスを示す。
【００１０】
本発明は、さらに、アルギネートゲルを製造するキットに関する。キットは、可溶性のアルギネートを含む第１の容器、および不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む第２の容器からなる。
本発明は、さらに、アルギネートゲルを製造する組成物に関する。その組成物は、直ぐに溶けるアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む。
【００１１】
本発明は、さらに、遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を処理する方法に関する。その方法は、可溶性のアルギネートの溶液中に不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物を形成し、そして分散物を処理し、それによりアルギネートゲルマトリックスを形成することを含む。
【００１２】
本発明は、さらに、遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を個体へ供給する方法に関する。その方法は、可溶性のアルギネートの溶液中に不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物を形成し、そして分散物を個体へ供給し、それによりアルギネートゲルマトリックスを個体中に形成することを含む。
【００１３】
本発明は、さらに、組織バルキング（ｂｕｌｋｉｎｇ）材料としての使用、血管塞栓法における使用、術後癒着形成への使用、創傷治療法における使用、糖尿病の治療における使用および関節炎の治療における使用のために、遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を個体へ供給する方法に関する。
【００１４】
本発明は、さらに、移植可能なアルギネートゲルを用いる方法に関する。その方法は、遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を供給することにより遅効性自己ゲル化アルギネートを形成し、ゲルを形成後、移植可能なアルギネートゲルを個体へ移植することを含む。
【００１５】
本発明は、さらに、移植可能な装置の製法に関する。
本発明は、さらに、均質なアルギネートゲルコーティングを含む移植可能な装置、およびそれを被覆する方法に関する。
本発明は、個体の身体中に軟骨細胞を含む遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を供給することにより、または個体の身体中に軟骨細胞を含む生体適合性マトリックスを移植することにより、骨関節炎から生ずる骨軟骨欠陥を満たすまたは修復する方法に関する。
【００１６】
本発明は、さらに、個体の身体中にインスリン生成細胞または多細胞凝集物を含む遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を供給することにより、或いは個体の身体中にインスリン生成細胞または多細胞凝集物を含む生体適合性マトリックスを移植することにより、糖尿病を治療する方法に関する。
【００１７】
本発明は、さらに、遅効性自己ゲル化アルギネート分散物中へ膵島または細胞凝集物または組織を組み込むことにより、単離後並びにストレージ中および輸送中、膵島または他の細胞凝集物または組織の生存性を改善する方法に関する。
本発明は、さらに、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子およびその製法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】処方３，１７および１９におけるゲル構造の発達を示す。図において、時間は２つの成分の混合開始において零である。
【図２】異なるＮａＣｌ濃度の存在または不存在の下、２．０％カルシウムＧ−ブロック粒子および２．０％ＰＲＯＮＯＶＡ  ＬＶＧアルギネート溶液から作られた処方物に関する時間の関数としてのストレージモジュラスを示す。
【図３】混合物の一部として、または混合１時間後外部へ適用された（ゲルの上に置かれた）かの何れかで、異なる０．９ＮａＣｌ濃度の存在または不存在の下、２．０％カルシウムＧ−ブロック粒子および２．０％ＰＲＯＮＯＶＡ  ＬＶＧアルギネート溶液から作られた処方物に関する時間の関数としてのストレージモジュラスを示す。
【図４】異なる塩化ナトリウム濃度の存在または不存在の下、２．５％カルシウムＶＬＶＧ粒子（バッチ、Ｊ１０１−００５）および２．５％ＰＲＯＮＯＶＡ  ＬＶＧ（ＦＰ−４０８−０２）アルギネート溶液から作られた処方物に関する時間の関数としてのストレージモジュラスを示す。１つのテストでは、ＭＥＭ細胞培養培地（０．９％ＮａＣｌを含む）を、混合４０分後に外部へ適用された（ゲルの上に置かれた）。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
「遅効性自己ゲル化システム」とする別のアルギネートゲル化システムが提供される。これらのシステムは、多数の生物医学的用途および他の用途で使用され、特にゲル化の遅効性が、高度のゲル化の前に材料が伝達されるように或る期間望ましいまたは必要なときに使用される。システムは、高度の生体適合性を有するアルギネートおよびゲル化イオンを含む。システムは、かなりの時間維持できるゲル化時間の遅効性をもたらす。その上、システムは、他の源からの非ゲル化カチオンの添加によって、ゲル化を開始または加速する能力を得ることができる。
【００２０】
遅効性自己ゲル化アルギネートゲルの技術は、処方物のゲル化性のコントロール、特にゲル化の開始のコントロールをより厳密にする。本発明のアルギネートシステムは、生物医学的な方法で有用であり、さらに生物医学的装置における設置および他の生体適合のための用途（ゲル化性の精密なコントロール、特にゲル化の開始における時間の遅効性、および／またはゲル化の完了の半減期および／またはゲル化の完了のための時間のコントロールを要する）に有用である。ゲル化プロセスの開始、持続および完了の改善されたコントロールは、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）および生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）の医学用装置を含むがこれらに限定されない生物医学の用途を含む精密なコントロールを要する用途について組成および性質を最適にするのに使用される。医学的用途の例は、医薬またはペプチドの伝達装置の提供；組織工学のための細胞、蛋白、多細胞凝集物または検出可能な標識化合物の供給；および並びに組織または器官における欠陥の被覆および付着および修復を含むが、これらに限定されない。これらの組成物とともに使用されるかまたは形成される移植可能な装置の例は、装置のコーティング、心臓ペースメーカー、カテーテル、移植可能な補装具、組織バルキングインプラント、食道逆流阻止インプラント、尿道逆流阻止インプラント、尿失禁阻止インプラント、乳房インプラント、顎インプラント、頬インプラント、歯科インプラント、胸インプラント、および形成されたアルギネートマトリックスインプラント例えば内包された細胞を有するかまたは有しない固体装置またはマイクロカプセルを含む。
【００２１】
システムは、２つの成分、すなわち可溶性のアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む。成分が、溶媒の存在下組み合わされてアルギネート溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物を形成するとき、アルギネートゲルの形成は、極めて遅効性し、分散物は１分以上後、最終ゲルのストレージモジュラスの１０％以下を示す。いくつかの態様では、分散物は、極めて長い期間、例えば２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、４５分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分またはそれ以上後、追加の非ゲル化カチオンの不存在下で最終ゲルのストレージモジュラスの１０％以下を示す。粒子のゲル化イオンは、これらの種々の時間内で最終ゲルのストレージモジュラスの１０％以下のゲルを生成するのに十分な量で、不溶性の粒子から解離しない。最終ゲルのストレージモジュラスの１０％以下のゲル形成における遅効性は、使用者に、ゲルが形成される前に分散物を操作し作業できる顕著な時間をあたえる。この遅効性は、より早いゲル化時間が材料の使用の困難さを増す用途に、システムを特に有用にする。
【００２２】
本明細書で使用されるとき、用語「不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子」において使用される記号「／」は、そこで言われる粒子がアルギネート分子とゲル化イオンとの両者からなることを示すのを意味するものである。
本明細書で使用されるとき、用語「ストレージモジュラス」は、用語「Ｇ′」、「弾性」および「弾性率（計数）」と同じ意味で使用される。当業者は、周知の測定技術により容易にストレージモジュラスを測定できる。本明細書で使用されるとき、「最終ゲルのストレージモジュラス」について本明細書で使用されている用語「最終ゲル」は、時間が経過してもストレージモジュラスがそれ以上増大しない点で形成されるゲルについて意味し、そのゲルは、溶液中のナトリウムイオンの最終の濃度を１７ｍＭ以上に上げるか、または０．９％の最終濃度に達するかの何れか大きい方の十分な量で、塩化ナトリウム塩の添加により２０℃でアルギネート溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物から形成される。
【００２３】
いくつかの態様では、ゲル形成の速度は、分散物への非ゲル化カチオンの添加により加速できる。この添加は、不溶性の粒子からゲル化イオンを外し、それにより分散物中のそれらの利用可能性を増大させて、分散物中の可溶性のアルギネートからアルギネートポリマーを含む架橋結合を形成させる非ゲル化カチオンをもたらすことになる。
【００２４】
遅効性自己ゲル化処方物に関するゲル化の開始およびコントロールは、処方物中の不溶性粒子に使用されるアルギネートのタイプに強く依存する。特に、ゲル化イオンが、アルギネート溶液のアルギネートと架橋結合を形成できるように、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子から解離できる程度は、遅効性自己ゲル化アルギネート処方物の開始に関する遅効性時間に直接影響する。遅効性自己ゲル化は、分散物を製造するのに使用される不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、短いオリゴマー性Ｇブロックから、または５０％以上の比較的高いＧ含量（「高Ｇアルギネート」）を有するアルギネートから製造されるとき、達成できる。その上、遅効性自己ゲル化は、分散物を製造するのに使用される不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、原料の製造時に遅い攪拌／混合速度を有するプロセスで製造されるとき、またはこのような不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が原料の製造時に非水性の極性溶媒を用いるプロセスで製造されたとき、達成できる。ゲル化カチオンが分散物中の遊離のイオンとして利用できるようになる速度は、ゲル化の速度をコントロールする。そのため、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が非ゲル化イオンの存在下ゲル化イオンを維持するか、または非ゲル化イオンの存在下ゲル化イオンを交換する程度は、分散物のゲル化の速度を決定する。
【００２５】
システムの可溶性のアルギネートゲルおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、いくつかの態様において、攪拌により、または好適な混合装置を用いることにより混合される。処方物のゲル化反応の仕組みは、溶液中の可溶性アルギネートの濃度対分散物中の不溶性アルギネート粒子の濃度；ゲル化イオン対アルギネートの相対的含量；非ゲル化イオンまたは多の炭水化物の存在；温度；不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子のサイズ；ゲル化中に存在またはゲル中に捕捉される細胞、多細胞凝集物、組織または他の生体材料の含量；（不純物の存在）および使用されるアルギネートのタイプ、並びに不溶性のアルギネート粒子の製法およびアルギネート原料の製造後の処理を調節することによって、さらにコントロールできる。このアルギネートシステムは、それゆえ、それぞれの特定の用途へ広く適合できる。形成されるゲル内に細胞、多細胞凝集物、組織または他の生体材料を捕捉するために、溶媒、アルギネート溶液または分散物は、捕捉されるべき材料と予め混合される。
【００２６】
分散物は、アルギネートゲルマトリックスが望まれる部位へ液体／スラリーとして個体内に供給される。可溶性のアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が溶媒の存在下混合された後、分散物は、それが非ゲル化イオンの存在を含む生理学的条件と接触するようになる個体内に供給される。分散物のゲル化は進み、そしてアルギネートゲルが、その場で硬化する。
【００２７】
本明細書で使用するとき、用語「遅効性自己ゲル化」は、可溶性のアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が溶媒の存在下混合されたとき、非常に制限されたやり方で生ずるゲル化プロセスをいうのに使用される。「遅効性自己ゲル化アルギネート」は、追加の非ゲル化カチオンなしで、１分より長い後に、最終ゲルのストレージモジュラスの１０％以下を示す溶媒中の可溶性のアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含むかまたはそれにより形成されるアルギネートの分散物またはゲルである。いくつかの遅効性自己ゲル化アルギネートでは、分散物は、極めて長い期間、例えば２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、４５分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分またはそれ以上の後で、追加の非ゲル化カチオンなしで、最終のゲルのストレージモジュラスの１０％以下を示す。
【００２８】
システムで使用される成分は、いくつかの形の任意のもので使用前に保管される。例えば、可溶性のアルギネートは、溶液中に維持されるか、または粉末として保管される。いくつかの態様では、可溶性のアルギネートは、粉末として保管され、それは、それが凍結乾燥されたときのように、直ぐ溶解する。同様に、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、分散物としてまたは粉末として保管される。
【００２９】
本明細書で記載された性質を有する分散物を製造するための成分を含むキットおよび組成物が提供される。その上、このような分散物を製造するのに有用な不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、分散物を使用する方法およびこのような分散物から形成されるゲルを作る方法として提供される。これらの方法は、いくつかの医学および製法に適合され、そして遅効性自己ゲル化技術から作られたゲルにより被覆されたゲルおよび装置も提供される。
【００３０】
いくつかの態様では、可溶性のアルギネートを含む水溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、２分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、３分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、４分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、５分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、１０分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、１５分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、２０分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、３０分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、４０分後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンなしで、６０分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より低い。
【００３１】
いくつかの態様では、分散物は、上記の遅効性自己ゲル化を示すが、非ゲル化カチオンを添加すると、いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加１分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加２分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加３分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加４分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加５分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加１０分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加１５分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加２０分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加後３０分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加後４５分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加６０分以上後の最終ゲルのストレージモジュラスが１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加９０分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加１２０分以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加３時間以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加４時間以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加５時間以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。いくつかの態様では、分散物は、追加の非ゲル化カチオンの添加６時間以上後に最終ゲルのストレージモジュラスの１０％より高い。
【００３２】
いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの２０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの３０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの４０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの５０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの６０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの７０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの８０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの９０％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの９５％以上を示す。いくつかの態様では、分散物は、上記の種々の態様を記述するのに記載されたような非ゲル化カチオンの添加後の時間制限内で、最終のゲルのストレージモジュラスの９９％以上を示す。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、「非ゲル化カチオンの添加」は、分散物の非ゲル化イオンの全濃度を少なくとも０．０１％上昇させるのに十分な濃度で非ゲル化イオンを添加することを示すことを意味する。いくつかの態様では、非ゲル化カチオンの添加は、分散物の非ゲル化イオンの全濃度を少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１．０％またはそれ以上上昇させるのに十分な濃度に上げる。遅効性自己ゲル分散物のゲル化を促進させるのに添加される非ゲル化カチオンの例は、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、Ｋ＋、Ｆｅ＋および／またはＨ＋（すなわち種々の酸）を含む。いくつかの態様では、添加される非ゲル化カチオンは、溶液から分散物中へ添加かつ混合される添加物として提供される。いくつかの態様では、添加される非ゲル化カチオンは、分散物が生理学的空所中へ分散されるとき提供される非ゲル化カチオンの量によって提供される。
【００３４】
いくつかの態様では、可溶性のアルギネート中で使用されるアルギネートポリマーまたはこれらの組み合わせは、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子におけるものと同じかまたは異なる。
溶媒の量に対する、分散物中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネートと可溶性のアルギネートとの両者のアルギネートの濃度は、ゲル化時間、孔度、安定性および生分解性、ゲルの強度およびゲルの弾性に影響し、そして特定の性質を有するゲルは、可溶性のアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子対溶媒の特定の比を用いることによって製造される。一般に、アルギネートの濃度が低ければ低いほど（可溶性のアルギネート対不溶性のアルギネートの所定の比について）、ゲルはより生分解性になる。いくつかの態様では、約０．５％、０．７５％、１％、１．２５％、１．５％、２％、２．５％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％またはそれ以上のアルギネート（可溶性のアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネート）が使用できる。
【００３５】
分散物中の可溶性のアルギネート対不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネートの相対的濃度は、ゲル化時間、孔のサイズ、ゲルの強度およびゲルの弾性、並びに安定性および生分解性に影響し、そして特定の性質を有するゲルは、可溶性のアルギネート対不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の特定の比を用いて製造できる。いくつかの態様では、可溶性のアルギネートの濃度は、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネートの濃度にほぼ等しい（１：１）。いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネートの濃度は、可溶性アルギネートのそれの２倍である（２：１）。いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネートの濃度は、可溶性アルギネートのそれの半分である（１：２）。いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の形のアルギネート対可溶性のアルギネートの濃度は、１−．７である（１：．７）。一般に、ゲル化イオンがより少なく存在すればするほど、ゲルはより大きく生分解性になる。システム中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオンの濃度は、ゲルの網状構造が架橋性イオンにより飽和されないことに応じて、より低い安定性およびより高い生分解性を有するゲルが生ずる。遅効性自己ゲル化は、より低い濃度のゲル化イオンを有するゲルの製造が、生分解の用途に特に好適なゲルの生成を可能にする。いくつかの好ましい態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子対可溶性のアルギネート中のアルギネート比は、５：１，４：１，３：１、２：１、１：２、１：３、１：４または１：５である。
【００３６】
アルギネートポリマー中のＧモノマーおよびＭモノマーの相対的量は、孔のサイズ、安定性および生分解性、ゲルの強度およびゲルの弾性に影響する。アルギネートポリマーでは、ＭおよびＧの全量が大きく変化し、配列構造の相対的量も、大きく変化し（Ｇブロック、ＭブロックおよびＭＧ交互配列）、そしてポリマー鎖の配列の長さも変化する。一般に、使用されるアルギネートポリマー中のＭ含量に対するＧ含量が少なければ少ないほど、ゲルの生分解性は大きくなる。高いＧ含量を有するゲルは、一般に、より小さい孔のサイズおよびより低いゲルの強度を有する高いＭアルギネートを有するゲルに比べて、より大きな孔のサイズおよびより強いゲルの強度を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、５０％より多いα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、６０％より多いα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、６０−８０％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、６５−７５％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、７０％より多いα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、７０％のα−Ｌ−グルロン酸、または６０％のα−Ｌ−グルロン酸、または５０％より少ないα−Ｌ−グルロン酸、または６０−８０％のα−Ｌ−グルロン酸、または６５−７５％のα−Ｌ−グルロン酸を含まない。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、７０％のα−Ｌ−グルロン酸、または６０％のα−Ｌ−グルロン酸、または５０％より少ないα−Ｌ−グルロン酸、または６０−８０％のα−Ｌ−グルロン酸、または６５−７５％のα−Ｌ−グルロン酸を含まず、その場合、アルギネートの平均ＭＷは２−２０ｋＤであり、いくつかの態様では、２−１０ｋＤであり、いくつかの態様では、２−５ｋＤであり、いくつかの態様では、３−５ｋＤであり、そしていくつかの態様では、アルギネートポリマーは１０−２５モノマーを含むか、または主として１５−１９モノマーを有するオリゴマーまたは平均１６−１８モノマーを有するオリゴマーを含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも８５％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも８８％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも８９％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９０％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９１％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では��アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９２％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９３％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９４％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９５％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９６％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９７％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも９８％のα−Ｌ−グルロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、少なくとも８５％から少なくとも９９％のα−Ｌ−グルロン酸を含み、２−２０ｋＤの分子量を有し、いくつかの態様では、３−５ｋＤを有する。いくつかのこれらの態様では、アルギネートポリマーは１０−２５モノマーを含む。いくつかの態様では、アルギネートポリマーは、主として１５−１９モノマーを含む。いくつかの態様では、アルギネートポリマーは、平均１６−１８モノマーを有するオリゴマーを含む。アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、５０％より多いＣ−５エピマーβ−Ｄ−マンニュロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、６０％より多いＣ−５エピマーβ−Ｄ−マンニュロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、６０−８０％のＣ−５エピマーβ−Ｄ−マンニュロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、６５−７５％のＣ−５エピマーβ−Ｄ−マンニュロン酸を含む。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーの１つ以上は、７０％より多いＣ−５エピマーβ−Ｄ−マンニュロン酸を含む。ウロンブロックを製造する方法は、ＵＳ６１２１４４１に開示されており、それは本明細書において参考として引用される。Ｇブロックアルギネートポリマーおよびアルギネートゲルの性質の調節剤としてのそれらの用途は、ＵＳ６４０７２２６に示されており、それは本明細書において参考として引用される。いくつかの好ましい態様は、３０％Ｇ、３５％Ｇ、４０％Ｇ、４５％Ｇ、５０％Ｇ、５５％Ｇ、６０％Ｇ、６５％Ｇ、７０％Ｇ、７５％Ｇ、８０％Ｇまたは８５％Ｇである。いくつかの好ましい態様では、８５％より多いＧである。
【００３７】
アルギネートポリマーの平均分子量は、ゲル化時間、孔のサイズ、ゲルの強度およびゲルの弾性に影響する。アルギネートポリマーは、２ｋＤから１０００ｋＤにおよぶ平均分子量を有する。アルギネートの平均分子量は、ゲルの形成および最終のゲルの性質に影響する。一般に、使用されるアルギネートの分子量が低ければ低いほど、ゲルは生分解されやすい。可溶性のアルギネート成分に使用されるアルギネートポリマーまたはそれらの組み合わせは、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子で使用されるポリマーまたはそれらの組み合わせと同じかまたは異なる。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、５−３５０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−１００ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、５０−５００ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、１００−１０００ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−５０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−４０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−３０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−２０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−１５ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−１０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、２−５ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、３−１５ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、３−１０ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートマトリックスのアルギネートポリマーは、３−５ｋＤの平均分子量を有する。いくつかの態様では、アルギネートオリゴマーのモノマーの平均数は、１５−２０、１６−１９、１７−１８、５，６，７、８，９，１０、１１、１２，１３、１４，１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２である。
【００３８】
いくつかの態様では、ゲルは、高度の生分解性を有するものとされる。従って、アルギネートの少ない、ゲル化イオンの少ない、Ｇ含量が低いそして分子量が低いアルギネートを有するゲルは、高度の生分解性を有するゲルを生成するために、本明細書で述べられたこれらのパラメーターの１つ以上の低い限界を用いて製造される。
アルギネートは、２０℃で測定された１％溶液で２５−１０００ｍＰａｓの粘度を有し、そしていくつかの態様では、好ましくは５０−１０００ｍＰａｓ（１％溶液、２０℃）を有する。
【００３９】
いくつかの態様では、アルギネートは滅菌されている。いくつかの態様では、アルギネートは、滅菌された超高純度アルギネートである。いくつかの態様では、滅菌されたアルギネートは、滅菌フィルターを用いて製造される。
本発明で使用されるアルギネートは、医療の移植用途に使用されるとき、超高純度であることが望ましく、例えば４００ｅｕ／ｇ以下のエンドトキシン含量を有し、いくつかの態様では、２００ｅｕ／ｇ以下、そしていくつかの態様では、５０ｅｕ／ｇ以下のエンドトキシンを含む。いくつかの態様では、アルギネートは＜５０ｅｕ／ｇのレベルのエンドトキシンを有する。
【００４０】
いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の製法が、化学量論的量（１００％飽和）のゲル化イオンを有する生成物をもたらすのが好ましい。このような化学量論的塩の使用は、遅効性自己ゲル化アルギネートシステムにおいて、より大きな再生産性をもたらす。いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の製法が、化学量論的量より少ない（＜１００％飽和）の該ゲル化イオンを有する生成物をもたらすのが好ましい。このような化学量論より少ない塩の使用は、遅効性自己ゲル化アルギネートシステムに生分解性をもたらす。
【００４１】
いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を製造するのに使用されるアルギネートは、約６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９９％のＧ含量を有するＧブロックオリゴマーである。ＧブロックアルギネートのＭＷは、一般に、１０ｋＤ以下であり、それは５７単位のＤＰｎに相当し、そして典型的な例では、１７のＤＰｎに相当する約３ｋＤのＭＷを有する。
【００４２】
いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、標準の高Ｇアルギネートの粒子そしていくつかの態様では、Ｃａの粒子であり、それは数分の遅効性を生ずる。いくつかの態様では、これらのアルギネートは、典型的な例では、５０−３５０ｋＤ（２８６−２０００単位）のＭＷを有する。
いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、標準の高ＭアルギネートまたはＭＧアルギネートの粒子である。
【００４３】
Ｇブロックアルギネートオリゴマーは、オリゴマーあたり平均約１７Ｇモノマーを含むオリゴマーの単離されたフラクションをいい、その大多数はオリゴマーあたり１５−１９モノマーである。これらのフラクションは、天然の高Ｇアルギネートを処理し、そして種々の手段例えば分別によりＧブロックアルギネートを分離することにより生成される。
いくつかの態様では、アルギネートは超高純度アルギネートである。超高純度アルギネートは、例えばＬａｍｉｎａｒｉａ  ｈｙｐｅｒｂｏｒｅａのような海藻の種々の源から工業的に生成される。市販のアルギン酸のカルシウム塩は、一般に、カルシウムが、成分を一緒に簡単に混合および練合することにより、固相のアルギン酸へ添加されるプロセスで製造される。市販されているアルギン酸のカルシウム塩の例は、Ｐｒｏｔａｗｅｌｄ（ＦＭＣ  ＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒから）およびＫｅｌｓｅｔ（ＩＳＰ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから）である。
【００４４】
いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、アルギネートおよび／またはＧブロックオリゴマーおよびゲル化イオンを使用してアルギネートゲルを作り、そしてアルギネートおよび／またはＧブロックオリゴマー中に存在したナトリウムまたは他のイオンを洗い流し、ゲルを乾燥して水を除き、そして乾燥したゲルから粒子を作ることによりアルギネートおよび／またはＧブロックオリゴマーを用いて製造される。いくつかの態様では、アルギネートおよび／またはＧブロックオリゴマーを用いて作られた不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、化学量論的な塩である。アルギネートおよび／またはＧブロックオリゴマーを用いて作られた不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、好ましくは、高い純度およびゲル化イオン（例えばカルシウムまたはストロンチウム、バリウム、亜鉛、鉄、マンガン、銅、鉛、コバルト、ニッケルまたはこれらの組み合わせ）の特定かつ一定のしかも一般に均一な含量を有し、ゲルの形成速度およびゲルの強度は、より精密な予測可能性で得ることができる。アルギン酸の不溶性のアルカリ土類塩例えばアルギン酸カルシウムまたはアルギン酸ストロンチウム（使用されるゲル化イオンに応じて）またはアルギン酸の不溶性の遷移金属塩（例えば、銅、ニッケル、亜鉛、鉛、鉄、マンガンまたはコバルトというゲル化イオンを用いたもの）は、溶液から沈殿によりアルカリ土類イオンの周知かつ予定された含量によって製造できる。いくつかの態様では、アルギン酸ナトリウムの溶液は、アルギネートおよび／またはＧブロックオリゴマーを使用して製造される。随意に、ナトリウム塩例えば炭酸ナトリウムは、アルギン酸ナトリウム溶液に含まれる。不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子に関する望ましいゲル化イオンを含む塩、例えばカルシウム塩またはストロンチウム塩例えば塩化カルシウムまたは塩化ストロンチウムが使用されて溶液を作る。アルギン酸ナトリウム溶液は、好ましくは徐々に、ゲル化イオン溶液と混合される。好ましくは、混合された溶液は、混合プロセスの間連続して攪拌される。不溶性のアルギネート粒子例えばアルギン酸カルシウムまたはアルギン酸ストロンチウム（使用されるゲル化イオンに応じて）は、混合された溶液から沈殿する。沈殿した不溶性のアルギネートは、次に溶液から取り出されそして精製された水により繰り返し洗浄されて（例えば２−１０回）、すべての可溶性のイオンを除く。可溶性イオンの除去は、例えば精製された水の電導度に比べて精製水中の不溶性のアルギネートの電導度をテストすることにより確認される。洗浄後、不溶性のアルギネートは例えば真空により乾燥される。乾燥されたアルギネートは、挽かれそしていくつかの態様では、粒子のサイズについて選択される。
【００４５】
いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、非水性溶媒を用いて製造されて、アルギネート溶液を生成し、それからゲルが形成されそして粒子が生成される。すなわち、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、アルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の溶媒を用いてアルギネートゲルを作り、アルギネート中に存在したゲルからのナトリウムまたは他のイオンを洗い流し、ゲルを乾燥して溶媒を除き、そして乾燥したゲルから粒子を作ることによって、アルギネートを用いて生成される。乾燥されたアルギネートは、挽かれそしていくつかの態様では、粒子のサイズについて選ばれる。非水溶媒の例は、極性溶媒例えばアルコールであり、それらはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどを含む。いくつかの態様では、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、化学量論的塩である。不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、好ましくは、高い純度を有し、さらにゲル化イオン（例えばカルシウムまたはストロンチウム、バリウム、亜鉛、鉄、マンガン、銅、鉛、コバルト、ニッケルまたはこれらの組み合わせ）の特定かつ一定のしかも一般に均一な含量を有し、ゲルの形成速度およびゲルの強度は、より精密な予測可能性で得ることができる。アルギン酸の不溶性のアルカリ土類塩例えばアルギン酸カルシウムまたはアルギン酸ストロンチウム（使用されるゲル化イオンに応じて）またはアルギン酸の不溶性の遷移金属塩（例えば、銅、ニッケル、亜鉛、鉛、鉄、マンガンまたはコバルトというゲル化イオンを用いたもの）は、溶液から沈殿によりアルカリ土類イオンの周知かつ予定された含量によって製造できる。いくつかの態様では、市販のアルギン酸ナトリウムは、まず非水溶媒を用いてアルギン酸ナトリウム溶液を作るのに使用される。非水溶媒の例は、極性溶媒例えばアルコールであり、それらはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどを含む。随意に、ナトリウム塩例えば炭酸ナトリウムが、アルギン酸ナトリウム溶液中に含まれる。不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子のために所望のゲル化イオンを含む塩、例えばカルシウム塩またはストロンチウム塩例えば塩化カルシウムまたは塩化ストロンチウムが、溶液を作るのに使用される。アルギン酸ナトリウムの非水溶液は、好ましくは徐々に、ゲル化イオン非水溶液と混合される。好ましくは、混合された非水溶液は、混合プロセス中連続して攪拌される。不溶性のアルギネート粒子、例えばアルギン酸カルシウムまたはアルギン酸ストロンチウム（使用されるゲル化イオンに応じて）は、混合した溶液から沈殿する。沈殿した不溶性のアルギネートを次に溶液から除き、そして精製された水により繰り返し洗浄されて（例えば２−１０回）、すべての可溶性のイオンを除く。可溶性イオンの除去は、例えば精製された水の電導度に比べて精製水中の不溶性のアルギネートの電導度をテストすることにより確認される。洗浄後、不溶性のアルギネートは例えば真空により乾燥される。乾燥されたアルギネートは、挽かれそしていくつかの態様では、粒子のサイズについて選択される。
【００４６】
いくつかの態様では、アルギネートマトリックスは、ゲルマトリックスが形成された後、ポリカチオン性ポリマー例えばポリアミノ酸またはキトサンにより被覆できる。いくつかの態様では、ポリリジンが、ポリカチオン性ポリマーに含まれる。いくつかの態様では、ポリリジンは、他の部分へ結合し、それゆえ、ポリリジンはゲルへの部分の会合を助けるのに使用される。ポリカチオン性ポリマーを用いてゲルへ結合される部分の例は、例えば医薬、ペプチド、造影用試薬、受容体結合リガンドまたは他の検出可能な標識化合物を含む。いくつかの特定の例は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ），表皮成長因子（ＥＧＦ）、芽球分化成長因子（ＴＧＦ）および骨形態発生蛋白（ＢＭＰ）を含む。医薬は、癌化学療法剤例えばタキソール、シスプラチンおよび／または他の白金含有誘導体を含む。炭水化物ポリマーは、ヒアルロナン、キトサン、ヘパリン、ラミナリン、フコイダン、硫酸コンドロイチンを含む。いくつかの態様では、使用されるアルギネートは、変性アルギネートポリマー例えば化学変性アルギネートであり、１つ以上のポリマーが異なるアルギネートポリマーへ結合している。このような変性アルギネートポリマーの例は、ＵＳ６６４２３６３に開示されており、それは本明細書で参考として引用される。
【００４７】
いくつかの態様では、アルギネートポリマーは、非アルギネート部分、例えば医薬、ペプチド、造影用試薬、受容体結合リガンドまたは他の検出可能な標識化合物を含む。態様の１つでは、アルギネートポリマーは、ＲＤＧペプチド（Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ）、放射性部分（例えば１３１Ｉ）、放射線不透性物質を含む。アルギネートポリマーへ結合する部分の他の例は、医薬、ペプチド、造影用試薬、受容体結合リガンドまたは他の検出可能な標識化合物を含む。いくつかの特定の例は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ），表皮成長因子（ＥＧＦ）、芽球分化成長因子（ＴＧＦ）および骨形態発生蛋白（ＢＭＰ）を含む。医薬は、癌化学療法剤例えばタキソール、シスプラチンおよび／または他の白金含有誘導体を含む。炭水化物ポリマーは、ヒアルロナン、キトサン、ヘパリン、ラミナリン、フコイダン、硫酸コンドロイチンを含む。
【００４８】
いくつかの態様では、アルギネートは、１つ以上の細胞接着配列を含む少なくとも１つのペプチドへ共有結合で結合できる。例えば、変性アルギネートは、ＵＳ６６４２３６３に開示されており、それは本明細書で参考として引用される。いくつかの態様では、ペプチド結合アルギネートは、非変性アルギネートと混合される。ペプチド結合アルギネートは、例えば細胞を不動化して細胞の増殖および細胞の分化を促進させる。ペプチド結合アルギネートは、また他のペプチド結合多糖および／または非変性多糖と組み合わせて使用できる。
【００４９】
本明細書で参考として引用されるＵＳ４９８８６２１、４７９２５２５、５９６５９９７、４８７９２３７、４７８９７３４および６６４２３６３は、細胞接着配列ペプチドの多くの例を開示している。好適なペプチドは、約１０以下のアミノ酸を有するペプチドを含むが、これらに限定されない。いくつかの態様では、細胞付着ペプチドは、ＲＧＤ、ＩＧＳＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、ＩＫＶＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＲＥＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＤＧＥＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、ＧＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＬＤＶ，ＲＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＰＤＳＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＲＹＶＶＬＰＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、ＬＧＴＩＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、ＬＡＧ，ＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、ＲＧＤＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ＨＨＬＧＧＡＬＱＡＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、ＶＴＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）、ＳＤＧＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）、ＧＲＥＤＶＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）、ＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）、ＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）、ＧＧＧＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、ＧＧＧＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）およびＦＴＬＣＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含む。いくつかの態様では、細胞付着ペプチドは、ＲＧＤ、ＩＧＳＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、ＩＫＶＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＲＥＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＤＧＥＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、ＧＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＬＤＶ，ＲＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＰＤＳＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＲＹＶＶＬＰＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、ＬＧＴＩＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、ＬＡＧ，ＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、ＲＧＤＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ＨＨＬＧＧＡＬＱＡＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、ＶＴＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）、ＳＤＧＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）、ＧＲＥＤＶＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）、ＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）、ＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）、ＧＧＧＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、ＧＧＧＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）およびＦＴＬＣＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）を含み、さらに追加のアミノ酸例えばＮまたはＣ末端の１−１０Ｇ残基を含む１−１０の追加のアミノ酸を含む。例えば、好適なペプチドは、式（Ｘａａ）ｎ−ＳＥＱ−（Ｘａａ）ｎ（式中、Ｘａａは独立してそれぞれ任意のアミノ酸であり、ｎは０−７であり、そしてＳＥＱはＲＧＤ、ＩＧＳＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、ＩＫＶＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＲＥＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＤＧＥＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、ＧＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＬＤＶ，ＲＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＰＤＳＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＲＹＶＶＬＰＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、ＬＧＴＩＰＧ（���ＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、ＬＡＧ，ＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、ＲＧＤＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ＨＨＬＧＧＡＬＱＡＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、ＶＴＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）、ＳＤＧＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）、ＧＲＥＤＶＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）、ＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）、ＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）、ＧＧＧＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、ＧＧＧＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）およびＦＴＬＣＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）からなる群から選ばれるペプチド配列であり、そしてアミノ酸の合計数は２２より少なく、好ましくは２０より少なく、好ましくは１８より少なく、好ましくは１６より少なく、好ましくは１４より少なく、好ましくは１２より少なく、好ましくは１０より少ない）を有する。いくつかの態様では、細胞付着ペプチドは、ＲＧＤ、ＩＧＳＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、ＩＫＶＡＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＲＥＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＤＧＥＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＶＧＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、ＧＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＬＤＶ，ＲＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＰＤＳＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＲＹＶＶＬＰＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、ＬＧＴＩＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、ＬＡＧ，ＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、ＲＧＤＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ＨＨＬＧＧＡＬＱＡＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、ＶＴＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）、ＳＤＧＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）、ＧＲＥＤＶＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）、ＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）、ＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＶＡＰＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）、ＧＧＧＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、ＧＧＧＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）およびＦＴＬＣＦＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）からなる。細胞接着または他の細胞相互作用のための生物学的に活性な分子は、ＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ｂ−ＦＧＦ、ＦＧＦ、ＴＧＦ、ＴＧＦ−βまたはプロテオグリカンを含む。ＲＧＤを含む細胞付着ペプチドは、いくつかの態様では、長さが３，４，５，６，７，８，９または１０アミノ酸である。その例は、ＧＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＬＤＶ，ＲＧＤＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＬＡＧ，ＲＧＤＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、ＲＧＤＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）、ＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＧＧＧＧＲＧＤＳＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）およびＧＧＧＧＲＧＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）を含むが、これらに限定されない。ＲＧＤを含む好適な細胞接着ペプチドは、ＮＯＶＡＴＡＣＨ  ＲＧＤ（ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ、ＦＭＣ  ＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ、Ｏｓｌｏ、ノルウエイ）および本明細書で参考として引用されるＵＳ６６４２３６３に開示されているものを含むが、これらに限定されない。ペプチド合成サービスは、多数の企業により利用でき、Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ���米国を含む。アルギネート骨格へのペプチドの結合の化学的手法は、ＵＳ６６４２３６３に開示されている。
【００５０】
本明細書で使用されるとき、用語「ＲＧＤ変性アルギネート」は、ＲＧＤを含むペプチドへ共有結合で結合しているアルギネートをいう。好適なＲＧＤペプチド結合アルギネートは、ＮＯＶＡＴＡＣＨ  ＲＧＤ（ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ、ＦＭＣ  ＢｉｏＰｏｌｙｍｅｒ、Ｏｓｌｏ、ノルウエイ）および本明細書で参考として引用されるＵＳ６６４２３６３に開示されているものを含むが、これらに限定されない。
【００５１】
可溶性のアルギネートは、例えばＮａ＋アルギネート、Ｋ＋アルギネート、ＰＥＧアルギネート（ポリエチレングリコールアルギネート）、ＮＨ４アルギネートまたはこれらの組み合わせのような塩である。
いくつかの態様では、可溶性のアルギネートは、凍結乾燥されるか、またはそれ以外の方法で乾燥される。凍結乾燥された可溶性アルギネートは、「直ぐに可溶」である。「直ぐに可溶な」アルギネートは、１分より早く、好ましくは３０秒より早く、より好ましくは１５秒より早く水に可溶である。「容易に可溶な」アルギネートは、溶液になるのに、１分より遅くそして通常数分かかる。
【００５２】
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子に使用されるゲル化イオンは、ゲル化反応の仕組み、ゲルの強度および弾性に影響する。ゲル化イオンは、また細胞の成長に影響する。不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子に使用されるゲル化イオンは、Ｃａ＋＋、Ｓｒ＋＋、Ｂａ＋＋、Ｚｎ＋＋、Ｆｅ＋＋、Ｍｎ＋＋、Ｃｕ＋＋、Ｐｂ、Ｃｏ、Ｎｉまたはこれらの組み合わせである。
【００５３】
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン複合体は粒子である。この粒子は、一般に、Ｌ／Ｄ比に基づいて繊維ではない（粒子の形状は、最大の寸法（Ｌ）と最少の寸法（Ｄ）とにより特徴づけられる）。非繊維状Ｌ／Ｄは、１０より小さく、好ましくは５より小さく、より好ましくは２より小さい。１０以上のＬ／Ｄは、切り刻んだ繊維である。不溶性のアルギネートゲル化イオンは、分散物としてまたは乾燥した形で保管できる。もし前者であれば、分散物は、可溶性のアルギネートを含む溶液または直ぐに可溶なアルギネートと混合されて、可溶性のアルギネートを含む溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物を形成する。もし不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が乾燥した形であるならば、それらは、乾いた直ぐに可溶なアルギネートと混合され、そして次に溶液と混合されて、可溶性のアルギネートを含む溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物を形成するか、または乾いた不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子は、可溶性のアルギネートを含む溶液と混合されて、可溶性のアルギネートを含む溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物を形成する。
【００５４】
分散物を形成するために成分を混合するとき行う攪拌により、溶液内に固体の粒子が供給される。生成した分散物は、スラリーの形であり、それは、型または空所内に遅効性自己ゲルを注ぐ、注入するなどされて、その型または空所の形状を形成する。
可溶性のアルギネートを含む溶液中の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の分散物が形成されると、それは遅効性自己ゲル化が生じてアルギネートゲルを形成する箇所へもたらされる。いくつかの態様では、分散物は、生体内の箇所へ送られる。いくつかの態様では、分散物は、個体の身体の箇所へ供給される。いくつかの態様では、分散物は、型または他の容器または表面へ供給される。
【００５５】
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子に使用されるゲル化イオンの濃度は、ゲル化反応の仕組み、ゲルの強度および弾性に影響する。ゲル化イオンの濃度が高ければ高いほど、ゲルの強度は強くなる。ゲルの強度は、ゲルがゲル化イオンにより飽和されたときに最高になる。逆に、ゲル化イオンの濃度が低ければ低いほど、ゲルの強度は弱くなり、そして生分解性の程度は高くなる。
【００５６】
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子の粒子サイズは、ゲル化反応の仕組みとゲルの最終の性質とに影響する。粒子のサイズが小さくなればなるほど、ゲル形成の完了が早くなる。大きな粒子のサイズは、強いゲルを生成する。粒子のサイズは、例えば粒子が一般にすべて予定のサイズ範囲内にあるように、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を種々の異なるサイズフィルターに通すことによって、コントロールできる。いくつかの態様では、粒子は、＜２５μｍ、２５−４５μｍ、４５−７５μｍ、７５−１２５μｍまたは＞１２５μｍである。いくつかの態様では、粒子は、＜１２５μｍ、＜１３５μｍ、＜１４５μｍ、＜１５５μｍ、＜１６５μｍまたは＜１７５μｍである。
【００５７】
使用される溶媒は、例えば水、塩水、糖溶液、細胞培養溶液、医薬の溶液のような溶液、蛋白または核酸の溶液、懸濁物例えば細胞懸濁物、リポソームまたは造影用試薬の懸濁物である。溶媒は、非ゲル化イオンの添加なしでゲル化を促進するのに十分な利用可能な非ゲル化カチオンを含んではならない。すなわち、溶媒は、本明細書で規定された時間内で最終のゲルの１０％より大きいストレージモジュラスへゲル形成を生じさせるのに十分な速度で、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子からゲル化カチオンの置換を開始できる非ゲル化カチオンを含んではならない。従って、例えば、溶媒中の任意の非ゲル化カチオンは、非ゲル化カチオンが存在している間利用できないように、対イオンまたは他の分子と会合しなければならない。アルギン酸ナトリウムの溶液中のナトリウムは、ナトリウムイオンの数がアルギネートの対イオン分子中に存在する負のイオン性電荷の数に等しい程度に、利用されない。塩例えば塩化ナトリウムの添加による利用可能なナトリウムイオンの数の増加（その場合、ナトリウムイオンは、それがアルギン酸ナトリウム中のアルギネート対イオンと会合するのと同じ程度に塩素の対イオンと会合しない）は、もし存在が十分であるならば、すなわちもし十分な塩が添加されるならば、利用可能な非ゲル化ナトリウムカチオンの存在により、ゲル化を促進する。分散物に使用される可溶性のアルギネート溶液を作るのに使用される溶媒は、分散物により形成されるゲルが、非ゲル化イオンの添加なしに所定の時間内に最終のゲルのストレージモジュラスの１０％より多いストレージモジュラスを有しないように、不十分な量の非ゲル化イオンを含まねばならない。
【００５８】
形成されるヒドロゲルは、医薬、核酸分子、細胞、多細胞凝集物、組織、蛋白、酵素、リポソーム、造影用試薬または生物学的に活性な材料を含むことができる。生物学的に活性な材料は、ヒアルロネートおよびキトサンである。造影用試薬は、タンタルおよびガドリニウムを含む。蛋白のいくつかの特定の例は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ），表皮成長因子（ＥＧＦ）、芽球分化成長因子（ＴＧＦ）および骨形態発生蛋白（ＢＭＰ）を含む。医薬は、癌化学療法剤例えばタキソール、シスプラチンおよび／または他の白金含有誘導体を含む。炭水化物ポリマーは、ヒアルロナン、キトサン、ヘパリン、ラミナリン、フコイダン、硫酸コンドロイチンを含む。
【００５９】
ゲル中に使用できる細胞は、非組み換え細胞および組み換え細胞を含む。細胞がアルギネートマトリックス内に内包されるいくつかの態様では、内包された細胞は、哺乳動物の細胞、好ましくはヒトの細胞である。内包された細胞が非増殖性細胞であるいくつかの態様では、非増殖性細胞は、膵島、肝臓細胞、神経細胞、腎皮質細胞、血管内皮細胞、甲状腺および上皮小体の細胞、副腎細胞、胸腺細胞、卵巣細胞および軟骨細胞からなる群から選ばれる。内包された細胞が増殖性細胞であるいくつかの態様では、増殖性細胞は、幹細胞、プロジェニター細胞、特定の器官の増殖性細胞、繊維芽細胞およびケラチノサイトまたは確立された細胞システム例えば２９３、ＭＤＣＫおよびＣ２Ｃ１２細胞システムから由来する細胞である。いくつかの態様では、内包された細胞は、細胞が維持されたとき発現される１つ以上の蛋白をエンコードする発現ベクターを含む。いくつかの態様では、蛋白は、サイトカイン、成長因子、インスリンまたは血管新生阻害剤例えばアンジオスタチンまたはエンドスタチン、他の治療用蛋白または他の治療用分子例えば医薬である。約６０−７０ｋＤより低い低ＭＷの蛋白は、ゲル網状構造の孔度のために、特に良好な使用可能な物質である。いくつかの態様では、細胞は、多細胞凝集物または組織として存在する。
【００６０】
遅効性自己ゲル化アルギネートについて多くの用途がある。いくつかの態様では、遅効性自己ゲル化アルギネートは、食品に使用される。遅効性自己ゲル化アルギネートは、他の食品成分との液体／スラリーの混合物として製造されそして容器に入れられる食品に特に有用である。容器は、好ましくは、型であり、そこで、ゲル／食品は硬化して、型の形状をもった固体または半固体を形成する。キャンディー、可食性の装飾、プディングおよび他の成型された食品が製造できる。ゲル化は、非ゲル化カチオンの添加により開始される。
【００６１】
いくつかの態様では、遅効性自己ゲル化アルギネートは、生医学の用途に使用される。生体適合性遅効性自己ゲル化アルギネートは、局所的に適用される。生体適合性遅効性自己ゲル化アルギネートは、ゲルのマトリックスが、空所そのものへ適合することが望まれる生医学の用途に特に有用であり、その場合、マトリックスが望まれる箇所中へ遅効性自己ゲル化アルギネートが分散物として送られる。分散物は、液体／スラリーの形で空所を満たし、そして生理学的非ゲル化カチオンと相互作用して硬化して、空所内に固体を形成する。別に、分散物は、局所的に送られ、そこでそれは硬化前に拡げられる。いくつかの態様では、遅効性自己ゲル化アルギネートは、型中に送られる液体／スラリーの混合物を製造することによって特定の形状を持つように製造されたマトリックスの製造に使用され、その型では、それは硬化して成型された形状をもつ固体を形成する、および／または組織または器官の置換物として有用な内包された細胞をもつマトリックスを製造する。ゲル化は、非ゲル化カチオンの添加により開始する。
【００６２】
コントロール可能かつ生体適合可能なそして特にその場のゲル形成移植の目的のためのアルギネート遅効性自己ゲル化システムが提供され、それは、他のシステムと関連する時間の束縛なしに、使用および操作を容易にする遅効性自己ゲル化を有する。身体の内側または外側で注入または他のやり方で適用されるのに容易に使用できる溶液が提供され、それは、いくつかの場合では、非ゲル化カチオンの添加および／または生理学的な非ゲル化カチオンへの暴露により、硬化して固体ゲルマトリックスを形成する。可溶性のアルギネート、溶媒およびゲル化イオン源（ゲル化イオンが不溶性の粒子のゲル網状構造内で結合する）を混合することによって、ゲル形成材料は、液体として供給され、そして望ましいパターンおよび時間の枠で硬化する。溶液は、予定された時間で硬化し、そしてゲルを形成するか、またはゲル化は、非ゲル化カチオンの添加またはその源への暴露により加速される。形成は、ｐＨの変化および毒性の成分の存在が排除されるので、生体適合性である。生物学的ｐＨからの顕著な外れは、不必要である。
【００６３】
いくつかの態様では、遅効性自己ゲル化アルギネートは、生医学の用途、例えば組織バルキング例えば逆流の問題の治療（すなわち、尿失禁、尿道逆流、または食道逆流の問題の治療）、塞栓形成例えば良性または悪性の腫瘍の治療、術後の方法としての抗癒着治療、および創傷の治療に用いられる。細胞または他の生体材料がゲル化システム中へ混合され、それにより細胞または組織を支持するバイオ人工細胞外マトリックスを生成するため、現在の技術は、生体外または生体内の組織構造物を含むいくつかの用途に使用される。いくつかの用途により、生体適合性固体デポーが移植され、それは活性成分例えば蛋白および医薬を時間をかけて放出する。
【００６４】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、それがアクセスするのに遠い箇所に導入されそして液状スラリーとして送られて他のタイプのインプラントに比べてより完全に適合することができる点で、組織バルキング材料として特に有用である。分散物は、身体中の他の組織または器官を置換し支持するのに十分な量で供給され、その場でゲルが形成すると、他の組織または器官を維持、支持する構造を提供する。遅効性自己ゲル化アルギネートは、それを組織バルキングの用途へ十分に適するようにする成分を含む。例えば、ゲル化剤としてのストロンチウムの使用は、細胞の過剰成長および望まない組織の形成を阻害するゲルを生ずる。遅効性自己ゲル化アルギネートは、カテーテルなどにおけるゲル化なしに、移植を可能にするのに十分な時間操作できる。
【００６５】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、カテーテル中のゲル化により複数のカテーテルを使用かつ配置しなければならないことが特に望まれない心臓の応用に特に良く適している。遅効性自己ゲル化は、使用者に分散物を適切に配置し伝達する時間をあたえる。
遅効性自己ゲル化アルギネートは、塞栓形成のプロセスに特に有用である。その場合、それは、アクセスするのに遠い血管へ導入されそして液体スラリーとして供給されて、血管の内部に完全に適合しそして他のタイプの閉止具例えば縫合糸に比べてそれをより完全かつ有効に塞ぐことができる。分散物は、その場でのゲルの形成時に、循環を止めるのに十分な量で供給される。遅効性自己ゲル化アルギネートは、塞栓形成の用途にそれを特に適したものにする成分を含むことができる。例えば、成分は、比較的早い硬化と高い強度について選ぶことができる。塞栓形成の用途に使用される遅効性自己ゲル化アルギネートは、その存在と場所とをモニターする造影用試薬を含むことができる。
【００６６】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、それが液状スラリーとして手術の侵襲の領域全体へ導入されて、特に切断箇所そのものまたはその付近で暴露された表面を完全にカバーする点で、術後の操作として抗癒着治療に特に有用である。遅効性自己ゲル化アルギネートは、それを抗癒着の用途に良く適するようにする成分を含むことができる。例えば、ゲル化剤としてのストロンチウムの使用は、細胞の過剰成長および望まない組織形成を阻害するゲルを生ずる。
【００６７】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、それが液状スラリーとして創傷の領域へ導入されて、暴露された表面を完全にカバーする点で、創傷の治療に特に有用である。さらに、遅効性自己ゲル化アルギネートは、例えば液状のスラリーとして創傷の箇所を通って内部に供給できる。分散物は、内部の空所を満たすのに十分な量で供給され、その場でゲルが形成すると、そのゲルは任意の内部の創傷をふさぎ、そして内部の出血による血液の損失を防ぐ。遅効性自己ゲル化アルギネートは、それを創傷の治療の用途に良く適するようにする成分を含むことができる。例えば、血液凝固成分および防腐組成物および抗生物質を含むことができる。
【００６８】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、生体内および生体外で、組織構成物を生成するのに特に有用である。細胞または他の生体材料は、ゲル化システム中に混合され、それにより細胞または組織を支持するバイオ人工細胞外マトリックスを生ずる。分散物は、液状スラリーとして、組織／細胞が治療効果を達成するように機能する箇所に、その場で導入される。組織構成物の例は、骨、軟骨、結合組織、筋肉、肝臓、心臓、膵臓および皮膚を含む。この例は、糖尿病の治療のためのインスリン分泌細胞を含むもの、欠陥のある関節の修復のための軟骨を含む処方物、およびパーキンソン病を治療するための細胞である。このような細胞は、液状スラリー中に配合され、そしてゲルの形成によりそれらが排出しそして生体適合性のアルギネートマトリックス内で機能する箇所中に送られる。ゲルは、また宿主免疫系に対して捕捉した細胞を保護する免疫バリヤーとして使用できる。遅効性自己ゲル化アルギネートは、また生体外で細胞を内包するのに使用され、それによりゲルはその目的とする用途に適合する形状に形成できる。いくつかの態様では、遅効性自己ゲル化アルギネートは、皮膚細胞のような細胞を内包するのに使用され、そして例えば皮膚の移植または大きな面積の創傷の治癒の必要のある火傷をおった患者および他のものを治療するような人工皮膚を製造する。いくつかの態様では、遅効性自己ゲル化アルギネートは、細胞を内包しそして移植できるマトリックスを形成するのに使用される。
【００６９】
糖尿病の治療は、可溶性のアルギネートの溶液中で不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子およびインスリン生成細胞を含む分散物を作り、そしてその分散物を生体適合性マトリックスが形成される個体の身体の箇所に送ることにより、インスリン生成細胞を含む生体適合性マトリックスの製造を含む。個体の身体内の箇所は、空所または個体内に移植された構造物である。分散物は、個体の身体中に移植される生体適合性マトリックスが形成される型、構造物または容器中に送られる。マトリックス中の細胞により生成されるインスリンは、細胞により分泌され、そしてマトリックスから個体の身体中に放出され、それは糖尿病の症状を緩和するように働く。いくつかの態様では、インスリン生成細胞は、膵島細胞である。いくつかの態様では、インスリン生成細胞は、インスリンを発現、分泌するように生成された組み換え細胞である。
【００７０】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、移植可能な装置のような被覆された装置を製造するのに特に有用である。いくつかの態様では、装置は、ステント、心臓ペースメーカー、カテーテル、移植可能な補鉄具、手術用ねじ、手術用ワイヤー、組織バルキングインプラント、食道逆流阻止インプラント、尿失禁阻止インプラント、尿道逆流阻止インプラント、表面の外部に付着されるおよび／またはアルギネートマトリックスにより内包される細胞を保持するのに好適な容器例えば固体の装置またはマクロカプセル、乳房インプラント、顎インプラント、頬インプラント、胸部インプラント、臀部インプラントおよび歯科インプラントからなる群から選ばれる。遅効性自己ゲル化アルギネートを用いるコーティングは、形状のいかんにかかわらず、有効なコーティングを生成する。ゲル化イオンとしてのストロンチウムの使用は、移植物の上の細胞の過剰成長を阻害するのに特に有用である。
【００７１】
遅効性自己ゲル化アルギネートは、移植できるマトリックスの製造に有用である。このようなマトリックスは、それが硬化して成型した形状を有する固体を形成する型中に送られる液体／スラリーの混合物を製造することによって、特定の形状をもって製造できる。移植のために製造されたマトリックスは、生物学的に活性な剤および／または細胞を含むことができる。ゲルは、製造されそして手術により移植され、局所的に適用され、または外部の開口をへて器官中に適用される。
【００７２】
いくつかの態様によれば、アルギネートゲルを生成するキットが提供される。このキットは、可溶性のアルギネートを含む第１の容器、そして不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む第２の容器からなる。それぞれの容器は、一体化した容器システムの別々の容器コンパートメントであってもよい。
いくつかの態様では、キットは、溶液の形の可溶性のアルギネートを含む。いくつかの態様では、キットは、溶媒のない可溶性のアルギネートを含む。いくつかの態様では、キットは、溶媒を含む追加の容器を含む。
【００７３】
いくつかの態様では、キットは、粉末の形の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む。いくつかの態様では、分散物の形の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む。
いくつかの態様では、キットは、医薬、ペプチド、蛋白、細胞、検出可能な標識化合物または造影用試薬を含む追加の容器を含む。いくつかの態様では、キットは、可溶性のアルギネート溶液または粉末を含む容器、および／または不溶性のアルギネート／ゲル化イオンの粉末または分散物を含む容器に含まれる医薬、ペプチド、蛋白、細胞、検出可能な標識化合物または造影用試薬を含む。
【００７４】
いくつかの態様によれば、ゲルを製造する組成物が提供される。組成物は、直ぐに可溶なアルギネートおよび不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む。組成物は、さらに医薬、ペプチド、蛋白、細胞、検出可能な標識化合物または造影用試薬を含む。組成物は、キット中の成分であってもよい。このようなキットは、さらに溶媒を有する容器を含むことができる。
キットは、好ましくは使用のための説明書を含む。
いくつかの態様では、キットは混合用具を含む。混合用具は、容器または容器システムの一部として一体化できる。いくつかの態様では、混合用具は、混合を助けるために、１つの容器から異なる容器への分散物の通過を可能にするバルブシステムを含むことができる。
【００７５】
いくつかの態様では、キットは供給装置を含む。供給装置は、混合用具および／または分散物を含むように適合された容器と連絡するアプリケーターである。いくつかの態様では、供給装置は、カテーテルからなる。いくつかの態様では、供給装置は注射器からなる。
【実施例】
【００７６】
（実施例１）
（高Ｇ含量カルシウム（ＣａＧ）アルギネート粒子を有する組成物のゲル化性能）
４つの異なる処方物（表１）を作り、そしてほぼ等しい条件下で測定した。ゲルの硬化は、２つの接続された注射器を用いて、成分を混合直後、Ｂｏｈｌｉｎ  ＣＶＯ  １２０  ＨＲレオメーター（鋸刃のプレートを使用した測定システム、２０℃、ギャップ１ｍｍ、周波数１．０Ｈｚ，歪み０．００５）を用いて測定された（４ｍＬのサンプル、２０秒で混合、混合の開始約１分後測定を開始）。時間は混合の開始時を零とする。ゲル化プロセスは、高い含量のマンニュロン酸で作られたアルギン酸カルシウム粒子を用いたとき、混合のほぼ直後開始した（表１の処方物１および３並びに処方物３、図１）。高いＭの不溶性のアルギネート粒子（ＣａＭ）は、約５０％より少ないグルロン酸を含んだアルギネートを使用した。対照的に、高い含量のグルロン酸を有するアルギン酸カルシウム粒子を含む本発明の組成物を用いたとき、ゲル化前の顕著な最初の遅効時間が観察された（図１参照、処方物１７，１９および２１、不溶性の高いＧアルギネート粒子ＣａＧは、長いＧブロックを有する約７０％のグルロン酸を含んだアルギネートを使用した）。Ｇブロックの長さは、参考文献であるＯ．Ｓｋａｕｇｕｒｕｄ、Ａ．Ｈａｇｅｎ，Ｂ．Ｂｏｒｇｅｒｓｅｎ、およびＭ．Ｄｏｒｎｉｓｈ、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｌｇｉｎａｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｉｔｏｓａｎ  ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｅｎｇ．Ｒｅｖ．１６：２３−４０，１９９９により測定される。処方物１，３および１０は、比較例であり、そして処方物１７，１９および２１は本発明の例である。
【００７７】
【表１】
2014205059.tif 000003
【００７８】
図１に示される弾性モジュラス（Ｇ′）に関するデータは、以下の二重動力学式
Ｇ′＝Ａ（１−ｆｅｘｐ（−ｋ１（ｔ−ｃ））−（１−ｆ）ｅｘｐ（−ｋ２（ｔ−ｃ）））
（式中、Ａは最終のゲルの強度であり、ｆは相対寄与因子であり、ｋ１およびｋ２は速度定数であり、ｃは遅効定数（＝遅効時間）であり、そしてｔは混合後の時間である）。全ゲル化半減時間および最終のゲルの強度は、適応されるデータから得られた（表２）。適応される式は、処方物１７および１９に関する観察されたデータにより示される曲線（遅効）の最初の部分を記述するのに使用できなかった。適応された曲線から計算されたデータ（最終のゲルの強度およびゲル化時間）は、表２に示される。遅効性自己ゲル化時間（ｃ）は、適応された式が零に達する時間に等しい。データから、ＣａＭ処方物に比べて、同様な弾性モジュラス（半減時間）に達するために、処方物１９（ＣａＧ処方物）が約５分の追加の時間を要したことが分かる。最終の弾性モジュラスは、このより高い濃度のＣａＧ処方物について、より高かった。濃度以外は等しい条件下で、ＣａＧ粒子は、ＣａＭ粒子に比べて約２分から２０分にゲル化半減期を遅くした（処方物３および１７の比較）。ゲル化速度がＣａＧ粒子を含む処方物について遅いことは、アルギネート溶液中の高Ｇ含量の可溶性のアルギン酸ナトリウムを用いる遅効性自己ゲル化組成物をテストすることによって確認された（処方物２１）。
【００７９】
【表２】
2014205059.tif 000004
【００８０】
ＣａＧ粒子を含む組成物について分かっているゲル化時間は、改善された性質を有する特定の処方物の応用を発展する可能性をもっている。不溶性のアルギネート粒子を用いる他のゲル化処方物は、数時間のゲル化の開始時の遅効性、および少なくとも１日または数日のゲル化の開始前の遅効性を示す。処方物のゲル化の急速な開始は、処方物へのナトリウムイオンの添加により始まる。ゲル化は、生理学的レベルのナトリウムの存在で急速に始まる。例えば、注入された遅効性自己ゲル化溶液は、組織への注入後、または遅効性自己ゲル化処方物へ生理学的レベルのナトリウムおよびカルシウムを含む細胞培養培地を添加することによって、ゲルの形成が直ぐに開始される。
低分子量Ｇブロックアルギネートを用いて作られた不溶性のアルギネート粒子は、実施例２および３に示される。
【００８１】
（実施例２）
（化学量論的量のカルシウム（１００％飽和）を有するアルギン酸カルシウム、および高グルロン酸含量を有するアルギン酸ナトリウムオリゴマーの製造）
７５ｇのアルギネートオリゴマー（バッチＦＰ−７０２−０１、グルロン酸含量７３％、４０００ｇ／モル重量）を４．５Ｌの精製水に溶解した。４５０ｍＬの精製水に溶解した２０７ｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏからなるカルシウム溶液を、攪拌を連続しつつ、アルギネート溶液に注意深く添加した。細かい沈殿が生じた。沈殿は３０−４０分間放置された。沈殿を次に、懸濁物の電導度が０．１ｍＳ／ｃｍより低くなるまで、精製水により洗った。生成物を最後に凍結乾燥し、挽きそして分別した。
【００８２】
（実施例３）
（化学量論的量のカルシウム（１００％飽和）を有するアルギン酸カルシウム、および溶液中のＧ含量＞８５％を有するアルギン酸ナトリウムオリゴマーの製造）
１５１．８ｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏおよび３３０ｍＬの精製水からなるカルシウム溶液を、溶液中のアルギネートオリゴマー（Ｇ含量＞８５％、ｐＨ７、平均ＤＰｎ  １６、５％の乾燥物）１Ｌへ注意深く添加した。細かい沈殿が生じ、それを一晩放置した。生成物を、懸濁物中の電導度が＜０．１ｍＳ／ｃｍに達するまで、精製水により洗った。沈殿した生成物を凍結乾燥により乾燥し、ビーティングバットにより砕き、そして分別した。
【００８３】
（実施例４）
（化学量論的量のカルシウム（１００％飽和）を有するアルギン酸カルシウム、およびアルコール中に懸濁された高グルロン酸含量を有するアルギン酸ナトリウムの製造）
１０ｇのＰＲＯＮＯＶＡ  ＶＬＶＧアルギン酸ナトリウム、バッチＢＰ０７０９−０２（６８％グルロン酸含量３００００ｇ／モル重量）を４２０ｍＬのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）中に懸濁した。２７．６ｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏおよび２４０ｍＬの精製水からなるカルシウム溶液を該溶液へ注意深く添加した。懸濁物を、それが６５％ＩＰＡにより洗われる前に一晩攪拌しつつ放置した。生成物を乾燥カップボード中で一晩乾燥し、ビーティングバットにより砕きそして分別した。
【００８４】
（実施例５）
（化学量論的量のカルシウム（１００％飽和）を有するアルギン酸カルシウム、およびアルコール中に懸濁された高マンニュロン酸含量を有するアルギネートの製造）
６０ｇのＰＲＯＮＯＶＡ  ＬＶＭ（５４％のマンニュロン酸含量、２０７００ｇ／モル重量）を１３８６ｍＬのＩＰＡに懸濁した。１６５．６ｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏおよび２４０ｍＬの精製水からなるカルシウム溶液を該溶液へ注意深く添加した。懸濁物を攪拌しつつ一晩放置した。沈殿を３つの部分に分けられ、それらは個々に、水、６５％ＩＰＡおよび１００％ＩＰＡにより洗った。３つの部分を〜６６時間乾燥カップボード中で乾燥しそしてビーティングバットにより砕いた。
【００８５】
（実施例６）
（種々のＤＰｎ、ＧおよびＭの含量を有する異なるタイプのアルギン酸ナトリウムから製造された生成物のさらなる例）
【００８６】
【表３】
2014205059.tif 000005
【００８７】
表３において、Ｇ含量は、存在するＧの％をいい、Ｍ含量は、存在するＭの％をいい、そして平均ＤＰｎは、オリゴマーあたりのモノマーの数に相当する。
【００８８】
（実施例７）
（カルシウムＧブロック粒子を有する遅効性自己ゲル）
この実施例では、異なる遅効性自己ゲル処方物が、ほぼ等しい条件下で作られそして測定された。ゲル形成におけるカルシウム源として、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘにより製造されたカルシウムＧブロックアルギネート（バッチ、ＢＵ−０７１１−０１、４５−７５μｍ）を使用した。処方物中、２．５％のカルシウムＧブロックアルギネート分散物は、２．５％のＰＲＯＮＯＶＡ  ＬＶＧアルギン酸ナトリウム（バッチ、ＦＰ−２０６−０１）の溶液と混合された。３つの異なる処方物が、添加された塩化ナトリウムとともに、またはなしで作られて、添加された場合、混合後の最終の塩化ナトリウムの濃度が、０．４５％または０．９％になるようなアルギン酸ナトリウム溶液となった。ゲルの硬化は、実施例１で記載したようにＢｏｈｌｉｎ  ＣＶＯ  １２０  ＨＲレオメーターを用いて測定された。２つの接続した注射器を用いることによる混合直後（３ｍＬのサンプル、約２０秒間混合、混合開始１分後測定を開始）、処方物をレオメーターにかけた。時間は、混合の開始を零にし、データは図２に示される。ゲル化プロセスは塩化ナトリウムの存在下１分より短く開始されたが、ナトリウムの不存在ではレオメーターのデータによりゲル化は約５時間まで証明されなかった。その後、ストレージモジュラスにおいて非常に小さい変化のみが見られ、それは或る程度の構造の形成を示した。しかし、時間とともに（遅効性）、この処方物は、またナトリウムを添加された処方物に匹敵する最終の弾性値を有するゲルを生成した。
【００８９】
ゲル形成に対するナトリウムの作用は、また、測定が開始された１時間後、ゲルの表面に０．９％の塩化ナトリウム溶液を添加することによって、さらにテストされた（図３）。明らかに、塩化ナトリウムイオンの添加は、急速なゲル化の開始および早いゲル形成を生じた。
【００９０】
（実施例８）
（ＰＲＯＮＯＶＡ  ＶＬＶＧアルギネートから作られたカルシウム粒子を有する遅効性自己ゲル処方物）
この実施例では、異なる遅効性自己ゲル化処方物が、ほぼ等しい条件下で作られそして測定された。ゲル処方物中のカルシウム源として、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ（バッチ、Ｊ１０１−００５）により製造された特に処理されたアルギン酸カルシウムを使用した。処方物中、２．５％のカルシウムＶＬＶＧアルギネート分散物は、２．５％のＰＲＯＮＯＶＡ  ＬＶＧアルギン酸ナトリウム（バッチ、ＦＰ−４０８−０２）の溶液と混合された。２つの異なる処方物が、添加された塩化ナトリウムとともに、またはなしで作られて、添加された場合、混合後の最終の塩化ナトリウムの濃度が０．９％になるようなアルギン酸ナトリウム溶液を得た。ゲルの硬化は、実施例１で記載したようにＢｏｈｌｉｎ  ＣＶＯ  １２０  ＨＲレオメーターを用いて測定された。２つの接続した注射器を用いることによる混合直後（３ｍＬのサンプル、約２０秒間混合、混合開始１分後測定を開始）、処方物をレオメーターにかけた。時間は、混合の開始を零にし、データは図４に示される。ゲル化プロセスは塩化ナトリウムの存在下直ぐ開始されたが、ナトリウムの不存在では測定が行われている間（９時間以上）ゲル化は、レオメーターにより証明されなかった。いくらかのゲル化が、１日以上の後に生じたようであった。ゲルの形成に対するナトリウムの作用は、また、測定が開始された１時間後、アルギネート溶液にＭＥＭ培地溶液（０．９％の塩化ナトリウムを含む）を添加することによって、さらにテストされた（図３）。明らかに、塩化ナトリウムイオンの添加は、培地の添加直後ゲルの形成を開始させた。
【００９１】
（実施例９）
（コントロールされた放出システム）
医薬または他の治療用分子の伝達のためのコントロールされた放出システムにおけるアルギネートの有用性が立証された。本実施例で立証されるゲルの生成物のタイプは、また、同様に使用できそして異なる処方物で有利である。１つの例は、生分解性ゲルの使用であり、すなわち、治療期間を制限するために低い濃度のゲル化イオンを使用する。癌患者の治療では、医薬または放射性アイソトープを含む空所を埋めるゲルが、疾患の反復を防ぐために手術中に適用される。活性成分が放出されるかまたは放射性活性が崩壊した後、ゲルが溶解しそして身体から排出されることが望ましい。遅効性自己ゲル化アルギネートのコントロールされた伝達処方物は、もちろん、またいかなる手術の操作なしに身体に直接注入され、そしてゲル／アルギネート溶液は、また口腔の医薬伝達に使用できる。口腔の使用では、アルギネートは、抗逆流治療として処方物中で現在周知である。それゆえ、アルギネートの遅効性自己ゲル化処方物が同様な用途をもつことは可能である。
【００９２】
（実施例１０）
（組織工学の用途）
本発明によるアルギネートゲル内に細胞を捕捉することは、種々の疾患の治療のために移植可能な「バイオファクトリー」分泌活性物質を生成するのに使用できる。しかし、アルギネートゲル内への細胞の捕捉は、また組織工学の用途に使用できる。組織工学には、三次元の構造物内またはその上の細胞の成長が求められ、そのためこのような用途のための良好な生体材料が必要とされる。架橋イオンの時間遅延の自己放出は、ゲル化イオンアルギネート懸濁物が、ゲル化が生ずる前に複雑な幾何学的構造に成型されるのを可能にする。生体外の条件下で、このようなアルギネート構造物は、組織または人工器官の発達の成長物質として使用できる。細胞は、ゲルの表面が細胞のための成長基質であるため、アルギネートゲルのビーズの表面で成長する。アルギネートゲル上の細胞の成長は、使用されるアルギネートおよびゲル化イオンに依存することが分かっている。本発明の遅効性自己ゲル化処方物は、アルギネートのシートまたは他の成形されたゲル構造物の内側または表面で成長する細胞の複数の層を生ずるのに使用できる。その上、アルギネートゲルは、シトレート、ホスフェートまたは他のゲル化イオンキレート剤との処理により、後で除くことができる。これは、組織または器官の構築に、いくつかの細胞の層を組み合わせる可能性をあたえる。ゲル構造物の内側または表面のいくつかのタイプの細胞は、もしこれが構造物の発達に望ましいならば、組み合わせることができる。
【００９３】
神経再生は、組織工学内のアルギネートの使用の興味のある例である。遅効性自己ゲル化アルギネートによる人工神経導管の充満は、神経の再生のための改善された指標および生体適合性を有する構造物の形成に好適である。このシステムは、他の技術に比べて、成型プロセスおよび構造物の性質に、より良いフレキシビリティーおよびより良いコントロールをあたえる。
【００９４】
注入可能なアルギネート／細胞懸濁システムは、また、たとえ手術の介入がなくても、欠陥または損傷をうけた組織箇所へ伝達できる。このような用途では、それがゲルになる前に、材料を成形するための或る作業時間を有することが必須である。しかし、ゲル化速度は、また、ゲル／溶液を適用することによる長期間の患者の待機時間または問題を避けるように、かなり早いことが望まれる。遅効性自己ゲル化システムは、本明細書に示されそして従来述べられているように、種々のゲル化時間−曲線および種々の強度および安定性の性質を有するように適合される。この可変性は、そのため、注入操作のそれぞれのタイプへ適合するように使用される。１つの例として、軟骨の欠陥の修復は、遅効性自己ゲル化アルギネート構造物を使用する可能性を有する。アルギネートは、軟骨の組織工学に使用される有用な生体材料であることが分かっており、そしてアルギネートが軟骨発生を刺激することも知られている。そのため、軟骨細胞または他の細胞を有するかまたは有しない遅効性自己ゲル化アルギネート溶液は、関節の欠陥の治療で直接注入される。骨関節炎の患者は、「関節液治療」により既に今日治療されており、そして２つの製品が市場に出ており、ナトリウムヒアルロネート（Ｈｙａｌｇａｎ）およびヒランＧ−Ｆ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ）があり、それらは関節液にその粘度をあたえる物質であるヒアルロン酸を補給することにより、潤滑液として働くと考えられている。痛みの緩和は、いくらかの人々では６−１３ヶ月続く。治療は、緩和から中程度の膝の骨関節炎にかかった人たちに最も有効であることが示されている。しかし、ヒアルロン酸が身体中で分解されることが知られているため、生分解性の低いかつ生体適合性の良好なアルギネートのような他のバイオポリマーの使用は、利点をもたらす。
【００９５】
アルギネートヒドロゲルは、スポンジまたは繊維のような生体適合性の構造物を作るために、凍結乾燥されるか、または水が処理される他のやり方で一部または完全に除かれる。遅効性自己ゲル化アルギネートシステムを用いる本発明の技術の使用は、また組織工学または他の用途に有用な生体適合性のスポンジまたは他の構造物の製造において１つの工程として使用できる。
【００９６】
遅効性自己ゲル化アルギネート処方物は、ステントまたは移植物または他の移植装置のコーティングで使用できる。アルギネート処方物のタイプに応じて、コーティング層は、いくらか生体適合性に作られ、そして宿主細胞の内への延びまたは装置に添加された細胞の成長に多少の支持をあたえる。
【００９７】
（実施例１１）
（組織バルキング）
アルギネートは、尿道の括約筋に近い粘膜下組織へ伝達されて、膀胱の尿失禁の治療のためのバルキングを提供し、そしてその方法は、クリニックにおいて既に行われている。他の例は、食道と胃との間の結合部にアルギネート処方物を伝達して、胃−食道逆流障害の治療の助けにする。アルギネートの高度の適合性は、補綴のやり方で注入可能な溶液として使用することを、他の材料の魅力的な代替とする。
【００９８】
遅効性自己ゲル化アルギネートシステムに基づく処方物は、予め規定された体積を満たす目的で、予定された硬化時間を有する注入可能な溶液またはペーストを生成するのに使用できる。前述したように、ゲル処方物は、いくらか生分解性を有し、バルキング処方物に望ましい性質をあたえる。
【００９９】
（実施例１２）
（血管の塞栓形成）
血管内閉塞を形成する方法は、以下の症状例えば動静脈奇形、動脈瘤、腫瘍への過剰の血液供給、多量の血管の出血のコントロールのような症状、および症状を緩和するために塞栓形成を要する他の症状を治療するのに使用できる。いくつかの塞栓性システムは、血液または他の体液と接触すると、固化または沈殿し始めるポリマーの溶液の使用を含む。しかし、このようなシステムは、固体ポリマーの形成または沈殿を生じさせるのに必要な時間の遅延のために、身体の望ましくない部分へ移動するポリマーの溶液の問題により都合の悪いことになる。これらのポリマー溶液システムにおける移動は、溶液が「早い流れ」の領域、例えば血管系へ注入されるとき、特に問題になる。ポリマー溶液システムから形成される繊維も、他の問題、例えば十分に閉塞しない、余りに堅いがもろい、または生体適合性がないなどによって、不都合になりがちである。ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）の粒子またはビーズまたはゼラチンの使用は、塞栓形成に有用であることが分かっており、そして現在クリニックで使用されている。
【０１００】
アルギネートに基づく処方物は、また塞栓形成の操作に使用されることを提案されてきている。血管内閉塞が、アルギネート液体および塩化カルシウム溶液の注入をコントロールして、閉塞を目指す血管系内の箇所に接しそして重合することにより、アルギン酸カルシウムを用いて誘導されることが示唆されている。このようなシステムに比べて、本発明の遅効性自己ゲル化アルギネート処方物の使用は、利点を有する。治療は、一回の注入で行うことができ、そして遅効性自己硬化処方物の強度は、システムのより良いコントロールにより調節できる。特に、遅効性自己ゲル化アルギネート処方物は、ゲル化前の時間および生分解性をコントロールする必要があるときに、有用である。
【０１０１】
（実施例１３）
（抗癒着処方物）
癒着の形成は、手術、トラウマ、感染などに帰因する。癒着は、腹部の手術後にしばしば起こり、そして腸閉塞、不妊および痛みを生ずる主な臨床上の問題を生ずる。癒着を予防または減少させるための試みは、ほとんど成功していなかったが、種々のバイオポリマーを用いる最近開発された機械的なバリヤーは、癒着の予防に臨床的な進歩を示している。
アルギネートに基づく処方物は、また、抗癒着バリヤーとして提案されている。抗癒着バリヤーは、本発明の遅効性自己ゲル化アルギネートを使用することによって製造される。溶液／ゲル処方物は、使用直前に混合され、そして好適な生分解性をもって製造される。このようなタイプの処方物は、また他のポリマー、医薬または他の支持化合物を含むことができる。追加のポリマーが使用されて、ゲルの性質、特にゲル構造物と組織との間の接着を増す性質を改善する。
【０１０２】
（実施例１４）
（創傷治癒処方物）
アルギネートのドレッシングは、滲出性の創傷を治療するのに通常使用される。創傷治癒用の現在のアルギネート製品は、柔らかな不織の繊維またはパッドからなる。アルギネートは、それら自体の重量より何倍も吸収し、そして創傷内にゲルを形成して、空のスペースを満たしそして湿気のある環境を維持する。アルギネートが、より未知のメカニズムにより創傷治癒のプロセスに影響することが示唆されており、そしてアルギネート創傷ドレッシング内に存在するカルシウムが、或る細胞への影響により創傷治癒プロセスに影響するものとされている。
遅効性自己ゲル化アルギネート構造物は、治癒プロセス中組織の表面の三次元の表面に合致することができる。他のなかで、よりコントロール可能かつ規定されたカルシウム含量を有する処方物が、再吸収性を有する構造物とともに、達成できる。
【０１０３】
（実施例１５）
（心臓組織バルキング処方物）
遅効性自己ゲル化アルギネートシステムは、遅効性自己ゲル分散物を心臓のスペースへ導入して血流および能率を改善することにより行われる組織バルキング操作に有用である。いくつかの個体、例えば心筋梗塞に関連する虚血による心臓組織の損失または心臓の疾患にかかっているものでは、易感染性の心臓の血流および能率は、その場でゲルとなる遅効性自己ゲル分散物を導入することによって改善できる。カテーテルが個体の身体に入れられ、カテーテルの一端は、針または他の穿刺装置を含んで、その内部から心臓を刺す。遅効性自己ゲル化アルギネートを次に伝達し、そして生理学的ナトリウムの存在または追加のナトリウムの導入は、遅効性自己ゲル化を促進して、ゲルが心臓中に形成される。遅効性自己ゲル化技術の遅効性自己ゲル化性は、カテーテルを適切に配置し、そしてカテーテルの閉塞を生じそしてさらなるカテーテル操作を必要とするゲル化前に、或る程度コントロールしつつ、分散物を伝達する時間をもつことができる。遅効性自己ゲル化性は、或る程度のコントロールおよび時間枠を与えて、より時間に厳密を要しない操作を可能にすることにより、顕著な利点をもたらす。
【０１０４】
［付記］
［付記１］
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物であって、分散物は、非ゲル化カチオンの添加なしで１分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示し、そして
（ａ）不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、８５％より多いＧを有しさらにオリゴマーあたり１５モノマーから２０モノマーの間のモノマーの平均数を有する単離されたＧブロックオリゴマーを含むか、または
（ｂ）不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、以下の２つの方法（ｉ）−（ｉｖ）または方法（ｉ）−（ｖ）の何れか、
（ｉ）アルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の極性溶媒を用いてアルギネートゲルを作る工程、
（ｉｉ）アルギネート中に存在したゲルからナトリウムまたは他のイオンを洗い流す工程、
（ｉｉｉ）ゲルを乾燥して溶媒を除く工程、そして
（ｉｖ）乾燥したゲルから粒子を作る工程、
または
（ｉ）アルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の溶媒を組み合わせてアルギネート−ゲル化イオン複合体の沈殿を形成する工程、
（ｉｉ）沈殿を集める工程、
（ｉｉｉ）アルギネート中に存在したゲルからナトリウムまたは他のイオンを洗い流す工程、
（ｉｖ）沈殿を乾燥して溶媒を除く工程、そして
（ｖ）乾燥した沈殿から粒子を作る工程
からなる方法により生成されることを特徴とする可溶性のアルギネートを含む水溶液中に不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物。
［付記２］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加なしで５分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示す付記１の分散物。
［付記３］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加なしで２０分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示す付記１の分散物。
［付記４］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加なしで４５分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示す付記１の分散物。
［付記５］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加なしで６０分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示す付記１の分散物。
［付記６］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後５時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記７］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後５時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの２５％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記８］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後５時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの５０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記９］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後５時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの７５％より上のストレージモジュラスを示す請求項１−５の何れか１つの項の分散物。
［付記１０］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後５時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの９０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１１］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１２］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの２５％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１３］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの５０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１４］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの７５％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１５］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの９０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１６］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１７］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの２５％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１８］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの５０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記１９］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの７５％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記２０］
分散物が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの９０％より上のストレージモジュラスを示す付記１−５の何れか１つの分散物。
［付記２１］
非ゲル化カチオンの添加が、非ゲル化カチオンの最終濃度を１７ｍＭ以上上げるのに十分であるか、または約０．９％の最終濃度を達成するのに十分である付記６−２０の何れか１つの分散物。
［付記２２］
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、８５％より多いＧを有しさらにオリゴマーあたり１５モノマーから２０モノマーの間のモノマーの平均数を有する単離されたＧブロックオリゴマーを含む付記１−２１の何れか１つの分散物。
［付記２３］
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、アルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の極性溶媒を用いてアルギネートゲルを作る工程、アルギネート中に存在したゲルからナトリウムまたは他のイオンを洗い流す工程、ゲルを乾燥して溶媒を除く工程、そして
乾燥したゲルから粒子を作る工程からなる方法；またはアルギネート、ゲル化イオンおよび水以外の溶媒を組み合わせてアルギネート−ゲル化イオン複合体の沈殿を形成する工程、沈殿を集める工程、アルギネート中に存在したナトリウムまたは他のイオンを洗い流す工程、沈殿を乾燥して溶媒を除く工程、そして乾燥した沈殿から粒子を作る工程からなる方法により生成される不溶性のアルギネートを含む付記１−２１の何れか１つの分散物。
［付記２４］
極性溶媒がアルコールである付記２３の分散物。
［付記２５］
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子がカルシウムを含む付記１−２４の何れか１つの分散物。
［付記２６］
不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子が、１７５ミクロンより小さい付記１−２５の何れか１つの分散物。
［付記２７］
（ａ）不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む容器、および（ｂ）可溶性のアルギネートを含む容器からなることを特徴とする付記１−２５の何れか１つの分散物を作るキット。
［付記２８］
直ぐに可溶なアルギネートと不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子とを含むことを特徴とする付記１−２５の何れか１つの分散物を作る組成物。
［付記２９］
（ｉ）可溶性のアルギネートを含む溶液と不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子とを混合するか、または（ｉｉ）直ぐに可溶なアルギネート、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子および溶媒を混合することにより、付記１−２５の何れか１つの分散物を形成することを含むことを特徴とする遅効性自己ゲル化アルギネート分散物を供給する方法。
［付記３０］
（ａ）（ｉ）可溶性のアルギネートを含む溶液と不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子とを混合するか、または（ｉｉ）直ぐに可溶なアルギネート、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子および溶媒を混合し、（ｂ）分散物と非ゲル化カチオンとを組み合わせるか、または分散物を非ゲル化カチオンに曝すことにより、付記１−２５の何れか１つの分散物を形成することを特徴とするアルギネートゲルを製造する方法。
［付記３１］
（ａ）（ｉ）可溶性のアルギネートを含む溶液と不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子とを混合するか、または（ｉｉ）直ぐに可溶なアルギネート、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子および溶媒を混合し、（ｂ）分散物を個体の身体の箇所へ供給し、アルギネートがその箇所で形成することにより、付記１−２５の何れか１つの分散物を形成することを特徴とする個体においてその場でアルギネートゲルを作る方法。
［付記３２］
（ａ）アルギネートまたはその塩を非水性の極性溶媒に溶解してアルギネート溶液を生成する工程、
（ｂ）ゲル化イオン塩をアルギネート溶液に添加しそしてｐＨを中性に調節する工程、そして以下の２つの工程（ｃ）−（ｆ）の何れか、
（ｃ）沈殿した不溶性のアルギネートを集める工程、
（ｄ）沈殿した不溶性のアルギネートを洗浄する工程、
（ｅ）洗浄された不溶性のアルギネートを乾燥する工程、
（ｆ）該乾燥不溶性アルギネートの粒子を形成する工程、
または
（ｃ）添加されたゲル化イオン塩を有するアルギネート溶液を、ゲルが形成されるのに十分な時間維持する工程、
（ｄ）ゲルを洗浄する工程、
（ｅ）ゲルを乾燥する工程、
（ｆ）該乾燥不溶性アルギネートの粒子を形成する工程
を行うことを特徴とする不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を製造する方法。
［付記３３］
８５％以上のＧからなるアルギネートを溶解する工程、
ゲル化イオン塩を水中に溶解しそしてｐＨを中性に調節する工程、
アルギネート溶液と塩化カルシウム溶液とを連続的な攪拌の下組み合わせる工程、
沈殿した不溶性のアルギネートを集め、そしてそれを水により、電導度が精製水のそれと同様なレベルへ低下するまで洗浄する工程、
洗浄した不溶性のアルギネートを乾燥する工程、
該乾燥不溶性アルギネートの粒子を形成する工程
を含むことを特徴とする不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を製造する方法。
［付記３４］
アルギネートが、約２−１０ｋＤの平均分子量を有するオリゴマーである付記３３の方法。
［付記３５］
アルギネートが、１５モノマーと１９モノマーとの間のモノマーの平均数を有するオリゴマーである付記３３の方法。
［付記３６］
粒子が粉砕により形成される付記３２−３５の何れか１つの方法。
［付記３７］
ゲル化イオンがカルシウムまたはストロンチウムである付記３２−３６の何れか１つの方法。
［付記３８］
粒子が１７５ミクロンより小さい付記３２−３７の何れか１つの方法。
［付記３９］
アルギネートが超高純度アルギネートである付記３２−３８の何れか１つの方法。
［付記４０］
付記３９の方法により製造されたことを特徴とする超高純度の不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子。
［付記４１］
付記３２−４０の何れか１つの方法により製造されたことを特徴とする不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子。
［付記４２］
（ａ）可溶性のアルギネートを含む水溶液中で不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子を含む分散物を形成し、ここで（ｉ）可溶性のアルギネートを含む溶液と不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子とを混合するか、または（ｉｉ）直ぐに可溶なアルギネート、不溶性のアルギネート／ゲル化イオン粒子および溶媒を混合することにより、分散物が、非ゲル化カチオンの添加なしに１分後に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より下のストレージモジュラスを示す、
（ｂ）分散物が非ゲル化カチオンの添加後５時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを示すのに十分な量で、分散物へ非ゲル化カチオンを添加する
ことを含むことを特徴とするアルギネートゲルを製造する方法。
［付記４３］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記４４］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後３０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記４５］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの１０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記４６］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの５０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記４７］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後３０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの５０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記４８］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの５０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記４９］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後１時間以内に最終ゲルストレージモジュラスの９０％より上のストレージモジュラスを分散物が示すのに十分である付記４２の方法。
［付記５０］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後３０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの９０％より上のストレージモジュラスを示すのに十分である付記４２の方法。
［付記５１］
分散物へ添加される非ゲル化カチオンの量が、非ゲル化カチオンの添加後１０分以内に最終ゲルストレージモジュラスの９０％より上のストレージモジュラスを示すのに十分である付記４２の方法。
【図１】
2014205059.tif 000006
【図２】
2014205059.tif 000007
【図３】
2014205059.tif 000008
【図４】
2014205059.tif 000009