(57)【要約】 【課題】  強度と抗アレルギー作用に優れたＭ細胞及びこのＭ細胞からなる人工皮膚シートを提供する。【解決手段】    Ｍ細胞中に含まれていたＧＰ２が細胞間のタイトジャンクションに移動し、またＭ細胞中にガレクチン−９が発現している。またＭ細胞表面でＧＰ２とガレクチン−９は共存の構造体を形成する。【選択図】    図１
2014083009.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌やウィルスの取り込みを行うＭ細胞（Microfold  cell）であって、このＭ細胞の表面にはＧＰ２とガレクチン−９が発現し、これらＧＰ２とガレクチン−９とが共存構造体を形成していることを特徴とするＭ細胞。
【請求項２】
Ｍ細胞（Microfold  cell）からなる人工皮膚シートであって、前記Ｍ細胞中に含まれていたＧＰ２が細胞間のタイトジャンクションに移動し、またＭ細胞中にガレクチン−９が発現していることを特徴とする人工皮膚シート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は細胞間接着能と抗アレルギー作用に優れたＭ細胞及び人工皮膚シートに関する。
【背景技術】
【０００２】
重い火傷、事故による皮膚の損傷、皮膚がんなどの主要の切除後、口唇・口蓋裂などに従来から人工皮膚が使用され、一般的な人工皮膚は牛や豚の真皮や腱からとったコラーゲンを主成分としている。
使い方は、傷口をきれいに洗浄した後に不要な組織を取り除き、人工皮膚を糸などで貼り付け、軽く圧迫して固定する。すると、皮下組織から毛細血管や細胞の元になる繊維芽細胞が人工皮膚のスポンジの中に入り込み、２〜３週間で元の皮膚に近い状態になる。
【０００３】
上記の従来の人工皮膚の問題点は、貼り付けた部分から発汗や発毛が殆んどなく、感触も劣り、黒ずむ場合があるので、頭皮などの場合は残った髪を移植したり、かつらが必要になる点である。
【０００４】
非特許文献１には、重症熱傷の治療として同種皮膚（他人の皮膚）、人工皮膚及び代用皮膚が現在用いられており、人工皮膚の一例として細胞を増殖させる培養皮膚が例示されている。
また、培養細胞からなる人工皮膚としては、３Ｔ３−Ｊ２細胞を使うことで良好な培養環境を作り出すことが従来から行われている。
【０００５】
一方人工皮膚とは直接関係しないが、特許文献１には、ＧＰ２がＭ細胞（Microfold  cell）、特にヒトＭ細胞に特異的に発現しており、このＧＰ２をＭ細胞のマーカ細胞として使用することが提案されている。
ここで、Ｍ細胞はパイエル板を覆う濾胞被蓋上皮の吸収上皮細胞間に散在し、微繊毛を有さない膜状で、細菌やウィルスを取り込む。またＧＰ２はＭ細胞において特異的に発現する糖タンパク質で、エンドサイトーシスレセプターとして腸内微生物を取り込むとの報告がなされている。
【０００６】
同じく、人工皮膚とは直接関係しないが、特許文献２には、ガレクチン−９が
免疫細胞に作用し、免疫を抑制する方向に制御し過剰な炎症を抑える機能を有していることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−１４１９９５号公報
【特許文献２】ＷＯ２０１２／０７７８１１
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】重症熱傷症例とスキンバンク・皮膚培養  人工臓器３７巻１号  ２００８年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
非特許文献１では人工皮膚の種類を紹介しているが、アトピー性皮膚炎に有効な人工皮膚を提案するには至っていない。
アトピー性皮膚炎は以下の４つの原因が重なって起こっているとされる。即ち（１）炎症を起こしやすい体質。（２）皮膚自体が薄くアレルゲンが侵入しやすい。（３）アレルゲンに反応してヒスタミンを異常に分泌する。（４）グロブリン免疫抗体が異常に分泌する。
上記の原因のうち（２）の原因は皮膚自体を丈夫で厚くすることで解消することができる。
即ち、アトピー性皮膚炎は皮膚からアレルゲンが侵入することで症状が悪化することが多数報告されている。逆に、アトピー性皮膚炎の体質であっても、皮膚が丈夫であればアレルゲンが皮膚から侵入することがないので、アトピー性皮膚炎の症状も出ないことが多い。
皮膚の最外層にはバリヤとして機能する角質層があるが、アトピー性皮膚炎の患者はＥＰＡとヒアルロン酸の分泌が少なく角質層が薄くなって大量のアレルゲンが皮膚から侵入し、症状が悪化してしまう。
即ち、従来の人工皮膚は細胞間の結合が弱く、また表面に付着したアレルゲン、皮膚内に侵入したアレルゲンを除去することができないという課題がある。
【００１０】
一方、特許文献１では、ＧＰ２がＭ細胞に特異的に発現していることまでは解明しているが、これを人工皮膚の改良に結び付けるまでには至っていない。
同様に特許文献２では、ガレクチン−９が免疫細胞に作用し、免疫を抑制する方向に制御し過剰な炎症を抑える機能までは解明しているが、これを人工皮膚の改良に結び付けるまでには至っていない。
また、何れの文献もＧＰ２とガレクチン−９の関連性については何ら言及されていない。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者はＭ細胞中のＧＰ２をタイトジャンクションに移動させることでシート形成能が発揮され、同時にＭ細胞はアレルゲンや細菌と結合するガレクチン−９を発現するという知見を得、これに基づき本発明を成したものである。
【００１２】
更に本発明者はＧＰ２とガレクチン−９の関連性について検証し、ＧＰ２とガレクチン−９とが共存することで新たな構造体が形成され、この構造体に起因して細菌（アレルゲン）がＭ細胞に取り込まれやすくなる知見を得、これに基づき本発明を成したものである。
【００１３】
ここで、タイトジャンクションとは、角質層の下の顆粒層を構成する細胞間を結合している部位を指し、タイトジャンクションが弱いと細胞から水分が漏れたり、シート状などの形状を維持できない。
即ち、本発明に係る人工皮膚シートは、Ｍ細胞から構成されている。前記Ｍ細胞中に含まれていたＧＰ２の一部が細胞間のタイトジャンクションに移動しており、またＭ細胞中にガレクチン−９が発現している。
【００１４】
ここで、前記Ｍ細胞は、例えばＣａＣｏ−２細胞から抽出することができる。尚、ＣａＣｏ−２細胞以外にも、盲腸リンパ濾胞、大腸リンパ濾胞などに存在するＭ細胞でもよい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明に係る人工皮膚シートでは、タイトジャンクションの部位にＧＰ２が存在することで、細胞同士の結合が強固になり、シート状の形態を形成することができ、しかもアレルゲンがタイトジャンクションから細胞内に侵入しにくくなる。
【００１６】
また本発明に係る人工皮膚シートを構成するＭ細胞はガレクチン−９を発現する。このガレクチン−９はＧＰ２と特殊な構造体を形成し、Ｍ細胞表面に接近した細菌やアレルゲンなどの異物を捕らえ、細胞内に取り込み、細胞内を通過する過程において異物にガレクチン−９が付着する。
さらに、Ｍ細胞を通過したガレクチン−９結合細菌やアレルゲンは免疫細胞である樹状細胞（ＤＣ細胞）に貧食されるが、ガレクチン−９の免疫抑制作用により、過剰な免疫反応を抑えることが可能となる。
またガレクチン−９は肥満細胞を安定化させ、肥満細胞がヒスタミンを過剰に放出することを抑制し炎症を抑える。
【００１７】
したがって、本発明に係る人工皮膚シートは、皮膚としての物理的特性、即ちシート状をなすとともに強度的にも優れ、また細菌やアレルゲンに対する抵抗性が高い。皮膚は外部環境との境界部であるため、常に環境にいる細菌などからの感染にされている。特に皮膚損傷である火傷やアトピー性皮膚炎の治療には感染に対する配慮が必要である。このＭ細胞を用いることにより抗生物質やステロイド剤などを使用しない治療が可能となる。
【００１８】
本発明に係る人工皮膚シートは、単一の細胞（Ｍ細胞）から構成されているため、人口皮膚シートの大きさを自由に変えることができ、大人や子供或いは治療箇所の大きさに応じて自由に設定することができる。
【００１９】
また、本発明に係る人工皮膚シートを構成するＭ細胞は、１年以上冷凍保存して、再度培養を開始した場合でも、ＧＰ２及びガレクチン−９の産生能力が劣化していないことが確認されている。
したがって、予め、このＭ細胞を冷凍し、必要なときに培養し、大きさ自由な細胞シートを供給することができる。このＭ細胞はすべてのヒトに対する使用可能性を有している。
【００２０】
また非特許文献１にも記載されているように培養皮膚は免疫の拒絶反応が起きない。また、ガレクチン−９は免疫を抑制する機能があるので、さらに有益である。更に免疫研究において、この細胞シートを上下二つの培養環境を構成できるTranswell（登録商標） のフィルターの上に培養し、免疫反応の解析に有用な培養環境を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】（ａ）は本発明に係る人工皮膚シートを構成する細胞とＧＰ２の発現との関係を経時的に示した蛍光顕微鏡写真（ＬＴβＲ抗体での刺激なし）（ｂ）は本発明に係る人工皮膚シートを構成する細胞とガレクチン−９の発現との関係を経時的に示した蛍光顕微鏡写真（ＬＴβＲ抗体での刺激なし）
【図２】Ｍ細胞にＬＴβＲ抗体を作用させた場合の共焦点顕微鏡で観察した写真
【図３】細胞間電気抵抗測定法（ＴＥＥＲ）を用いて細胞間の結合度合いを測定した結果を表すグラフ
【図４】（ａ）はＴＥＥＲの実験と並行して行ったＧＰ２のｍＲＮＡの測定結果を示すグラフ（ｂ）はsiＲＮＡを加えた細胞のＴＥＥＲの測定結果を示すグラフ
【図５】（ａ）はフローサイトメータを用いて本発明に係る人工皮膚シートを構成する細胞の大きさを測定した結果を表す図（ｂ）縦軸はガラクチン−９を濃厚な赤色蛍光（ＡＬＥＸＡ.647）で染め、横軸はＧＰ２を緑色蛍光（ＡＬＥＸＡ.488）で染めた場合の、蛍光の強さを示す図（ｃ）は（ｂ）の結果を示したテーブル
【図６】本発明に係る人工皮膚シートを構成する細胞内に異物（ビーズ）が取り込まれる様子を示す顕微鏡写真
【図７】培養中の状態を示した写真
【図８】Ｍ細胞を通過してきた細菌にガラクチン−９が結合しているかを調べた結果を示す顕微鏡写真
【図９】ガラクチン−９と細菌との結合を直接試験管内で行った結果を示す顕微鏡写真
【図１０】細菌（C.jejuni 81-176）の接着数を示した図
【図１１】細菌（C.jejuni (cj3443)）の接着数を示した図
【図１２】細菌（Ty21a）の接着数を示した図
【図１３】Ｍ細胞に侵入した細菌毎の数を示す図
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
実施例としてはＭ細胞を含む細胞としてＣａＣｏ−２細胞を選定し、このＣａＣｏ−２細胞をサイトカイン受容体（ＬＴβＲ）の抗体で刺激した。この刺激を継続することでＧＰ２の発現が継続した。またこの継続的な細胞刺激によりウィルスや細菌を取り込む能力のある細胞が現れた。
【００２３】
上記ウィルスや細菌を取り込む能力のある細胞を特異的に選択するため、蛍光物質を発現するウィルスを培養細胞に感染させた。貪食能を有する性質によりウィルスに感染した細胞に蛍光が発現するので、この蛍光を発する細胞をセルソータで分取した。
ＧＰ２を発現する細胞（Ｍ細胞）が９９．９％になるまで、以上の操作を繰り返した。
【００２４】
図１（ａ）及び（ｂ）はＬＴβＲ抗体での刺激なしの状態で、ＧＰ２とガレクチン−９の発現を経時的に観察した結果を示す顕微鏡写真であり、図において「１ｄａｙ」はＭ細胞が完全なシートを形成した当日を意味し、他の日付けは「１ｄａｙ」を基準にした経過日を示す。
【００２５】
図２はＭ細胞にＬＴβＲ抗体を作用させ、共焦点顕微鏡で観察した写真で、左上はＧＰ２及びガレクチン−９のいずれも染色しないで個々の細胞を青色で染色した状態、右上はＧＰ２を白色の蛍光で発光させた状態、左下はガレクチン−９を赤色の蛍光で発光させた状態、右下はＧＰ２とガレクチン−９の同時に発光させた状態を示している。
右上の写真及び左下の写真からＧＰ２が細胞間のタイトジャンクションに集まっていることが分かる。
【００２６】
図３は、細胞間電気抵抗測定法（ＴＥＥＲ）を用いて細胞間の結合度合いを測定した結果を表すグラフであり、横軸は細胞が一面のシート状になった日を１とし、それ以降の経過日数を数字で表している。
ＬＴβＲ抗体は２日毎に新しいものと交換し、その時点で電気抵抗を測定した。Ｍ細胞は電気抵抗の測定が可能な培養容器（Transwell）で培養し、抗体を培養容器の上部に２０μｌ加えたもの、抗体を培養容器の上下部に２０μｌ加えたもの、抗体を培養容器の下部に２０μｌ加えたもの、２０％血清培養溶液のみ、無血清培養溶液のみの場合に分けて実験した。
その結果、２０％血清培養溶液のみまたは無血清培養溶液のみとした場合には、抵抗値は殆ど変化せず、ＬＴβＲ抗体を添加した場合には、添加を下部にしたものが大幅に抵抗値が上昇し、更に抵抗値の上昇が継続したことが分かる。このデータからもＧＰ２がタイトジャンクションに移動していることが分かる。
【００２７】
図４（ａ）はＴＥＥＲの実験と並行して行ったＧＰ２のｍＲＮＡの測定結果を示すグラフ、（ｂ）はsiＲＮＡを加えた細胞のＴＥＥＲを測定結果のグラフであり、図４（ａ）からはＧＰ２のｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）が培養経過に従って徐々に低下し細胞がシート状になった時点（青の矢印）で検出できなくなるが、ＬＴβＲ抗体をＤａｙ１から加えると、再びＧＰ２のｍＲＮＡ（黄色のバー）が検出された。
【００２８】
図４（ｂ）はＬＴβＲ抗体を培養容器に添加した場合、ＬＴβＲ抗体とsiＲＮＡを添加した場合、２０％血清培養溶液のみの場合のＴＥＥＲの実験結果を示し、siＲＮＡによってｍＲＮＡが抑制され、ＧＰ２タンパク質の合成が少なくなっている。そしてＧＰ２タンパク質の合成が少なくなると、ＴＥＥＲ値が下がり結合力が低下していることが分かる。
【００２９】
尚、ガレクチン−９については、図１（ｂ）からも時間の経過と共に細胞内での発現量が増加（強い緑色）していることが観察される。
【００３０】
図５（ａ）〜（ｃ）は図１に示した細胞を７日目まで培養を継続し、形成された細胞シートを酵素処理で細胞間結合を分解し、その後ＧＰ２抗体及びガレクチン−９抗体を用いて、免疫染色を実施し、フローサイトメトリーを用いて１個の細胞内に発現しているタンパク質（ＧＰ２とガレクチン−９）の量を測定したものである。
【００３１】
図５（ａ）は電気抵抗などで細胞の大きさを測定したものであり、この図からフローサイトメトリーによる測定は均一な大きさの細胞を対象として測定したことが分かる。
【００３２】
図５（ｂ）の縦軸（Ｙ軸）はガラクチン−９を濃厚な赤色蛍光（ＡＬＥＸＡ.647）で染め、横軸（Ｘ軸）はＧＰ２を緑色蛍光（ＡＬＥＸＡ.488）で染めた場合の蛍光の強さを示し、図５（ｃ）は図５（ｂ）の測定結果を機器のソフトウェアで自動計算したものである。
【００３３】
図５（ｃ）において、「ＡＬＥＸＡ.647  ＰＯＳ  ０．５％」はガラクチン−９のみ染色された細胞の割合が０．５％であることを表し、「ＤＢＬ.  ＰＯＳ  ９９．５％」は２色が同時に検出される細胞の割合が９９．５％であることを表し、「ＤＢＬ.  ＮＥＧ  ０％」両方の色に染色されない細胞の割合が０％であることを表し、「ＡＬＥＸＡ.488  ＰＯＳ  ０．０％」はＧＰ２のみ染色された細胞の割合が０％であることを表す。
【００３４】
図５に示した結果から、本発明に係る人工皮膚を構成するＭ細胞は、その大きさが均一で、９９．５％の細胞がＧＰ２とガラクチン−９を発現し、０．５％細胞がガラクチン−９のみを発現することが分かる。
【００３５】
図６は本発明に係る人工皮膚の上面に直径１μｍのポリスチレンビーズを加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件で２０時間培養した顕微鏡写真である。
この写真から多くのビーズ（異物）が細胞内に取り込まれる様子が分かる。したがって、刺激によりガラクチン−９の産生が増加していると推察される。
【００３６】
図７は本発明に係る人工皮膚の培養からシート形成に至るまでを示す写真である。このうち左上、左下、及び右上の写真が培養容器に人工皮膚シートが浮遊している状態を上から撮影したものであり、右下の写真はボールペンをスケールの代わりにして人工皮膚シートの大きさを示した写真である。
【００３７】
上記の培養は、先ずＭ細胞の濃度を４×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌに調整し、培養容器の１５０ｃｍ２に対し１５ｍｌの割合で細胞溶液を加え、当初４日目に培養溶液を新しい溶液を交換し、次の４日目に再度培養溶液を交換する。この時点で細胞がプラスチック面いっぱいに増えていることを確認する。
もし増えていない場合には、培養日数を追加し、細胞がプラスチック面いっぱいになるまで培養を続ける。
【００３８】
Ｍ細胞が培養容器全面に広がった時点で、培養溶液を血清成分がない培養液に交換し、抗ＬＴβＲ抗体を１５０μｌ培養溶液に添加する。この抗ＬＴβＲ抗体の刺激により、細胞内のＧＰ２が細胞間接着部（タイトジャンクション）に移動し、細胞同士の結合が強固になる。その結果、大面積の細胞シートを形成することができる。
【００３９】
図８は細胞シートを構成するＭ細胞中のガラクチン−９の細菌に対する結合を調べた結果を示す写真であり。
８１−１７６ＤＫはヒトに下痢を起させる病原菌であり、多くのガラクトースを産生し、鞭毛にもガラクチン−９が結合する成分が存在する。
Ｃｊ3443  capsule（−）は８１−１７６ＤＫと同じ細菌であるが、構造欠陥のため少ししかガラクトースを発現しない。
Ty21ａはサルモネラ菌の一種であり、細胞表面にガラクトースを発現しない。
【００４０】
図８からＭ細胞の表面もしくは細胞内にはガラクトースを産生する細菌と結合するガラクチン−９が発現していることがわかる。
【００４１】
図９はガラクチン−９と細菌との結合を直接試験管内で行った結果を示す顕微鏡写真であり、この結果から、ガラクチン−９は細菌の種類により結合能力が異なっていることがわかる。
【００４２】
図１０〜図１２は細菌の接着数を培養法を用いて検出した図であり、各図において、上段左側の図は組換えＧＰ２を固定乾燥した市販プレート(GA GENERIC ASSAYS GmbH; Germany)に組換えガラクチン−９（Ｒ＆Ｄ;ＵＳＡ）を20ul(100μｇ/ｍｌ)添加して乾燥させたものであり、上段右側の図はガレクチン−９のみを固定したものであり、下段左側の図はＧＰ２のみを固定したものであり、下段右側の図は何れも固定しない場合を示す。
【００４３】
図１０は、C.jejuni 81-176（キャンピロバクター  ジェジュニー  菌番号；81-176）をそれぞれのプレートに５０００００個添加し、そのうち何個接着したかを示す。プラスチックプレートにＧＰ２とガラクチン−９を固定した場合（上段左側）には４００個の細菌が接着し、ガラクチン−９のみを固定した場合（上段右側）には４０個の細菌が接着し、ＧＰ２のみを固定した場合（下段左側）には、１０個の細菌が接着し、いずれも固定しない場合（下段右側）は細菌の接着は０個であった。
【００４４】
図１１は、C.jejuni (cj3443)（キャンピロバクター  ジェジュニー  菌番号；cj3443）をそれぞれのプレートに６０００００個添加し、そのうち何個接着したかを示す。プラスチックプレートにＧＰ２とガラクチン−９を固定した場合（上段左側）には２０個の細菌が接着し、ガラクチン−９のみを固定した場合（上段右側）には２０個の細菌が接着し、ＧＰ２のみを固定した場合（下段左側）と、いずれも固定しない場合（下段右側）は細菌の接着は０個であった。
【００４５】
図１２は、Ty21a（サルモネラ  菌番号；Ty21a）をそれぞれのプレートに５０００００個添加し、そのうち何個接着したかを示す。プラスチックプレートにＧＰ２とガラクチン−９を固定した場合（上段左側）には１０個の細菌が接着し、ガラクチン−９のみを固定した場合（上段右側）と、ＧＰ２のみを固定した場合（下段左側）と、いずれも固定しない場合（下段右側）はいずれも細菌の接着は０個であった。
【００４６】
図１０〜図１２から、細菌の種類により接着する数が異なり、ガラクチン−９またはＧＰ２の単独をプレートに固定するよりもガラクチン−９とＧＰ２とが共存することでより多くの細菌を取り込めることが分かる。
【００４７】
また図１３は上記の細菌のＭ細胞内への侵入数（１時間）を示しており、Ｍ細胞内へ侵入した細菌はガラクチン−９が結合したままで、細胞外に排出される
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明に係る人工皮膚は、アトピー性皮膚炎、重症な火傷、交通事故など多くの症状に利用することができ、しかもＭ細胞を冷凍保存することで、必要なときに培養して拒絶反応のない人工皮膚を得ることができる。
【図１】
2014083009.tif 000003
【図２】
2014083009.tif 000004
【図３】
2014083009.tif 000005
【図４】
2014083009.tif 000006
【図５】
2014083009.tif 000007
【図６】
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【図７】
2014083009.tif 000009
【図８】
2014083009.tif 000010
【図９】
2014083009.tif 000011
【図１０】
2014083009.tif 000012
【図１１】
2014083009.tif 000013
【図１２】
2014083009.tif 000014
【図１３】
2014083009.tif 000015
【手続補正書】
【提出日】平成24年11月2日(2012.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
重い火傷、事故による皮膚の損傷、皮膚がんなどの腫瘍の切除後、口唇・口蓋裂などに従来から人工皮膚が使用され、一般的な人工皮膚は牛や豚の真皮や腱からとったコラーゲンを主成分としている。
使い方は、傷口をきれいに洗浄した後に不要な組織を取り除き、人工皮膚を糸などで貼り付け、軽く圧迫して固定する。すると、皮下組織から毛細血管や細胞の元になる繊維芽細胞が人工皮膚のスポンジの中に入り込み、２〜３週間で元の皮膚に近い状態になる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
図８は細胞シートを構成するＭ細胞中のガラクチン−９の細菌に対する結合を調べた結果を示す写真である。
８１−１７６ＤＫはヒトに下痢を起させる病原菌であり、多くのガラクトースを産生し、鞭毛にもガラクチン−９が結合する成分が存在する。
Ｃｊ3443  capsule（−）は８１−１７６ＤＫと同じ細菌であるが、構造欠陥のため少ししかガラクトースを発現しない。
Ty21ａはサルモネラ菌の一種であり、細胞表面にガラクトースを発現しない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
また図１３は上記の細菌のＭ細胞内への侵入数（１時間）を示しており、Ｍ細胞内へ侵入した細菌はガラクチン−９が結合したままで、細胞外に排出される。
【手続補正書】
【提出日】平成24年12月12日(2012.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｍ細胞（Microfold  cell）からなる人工皮膚シートであって、前記Ｍ細胞中に含まれていたＧＰ２が細胞間のタイトジャンクションに移動し、またＭ細胞中にガレクチン−９が発現していることを特徴とする人工皮膚シート。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は細胞間接着能と抗アレルギー作用に優れた人工皮膚シートに関する。