(57)【要約】【課題】凝集促進効果に優れるラテックス凝集反応用凝集促進剤、標的物質の検出方法および標的物質の検出に用いるためのキットの提供。【解決手段】スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤。
【請求項２】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位が、親水性である請求項１に記載のラテックス凝集反応用凝集促進剤。
【請求項３】
スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位が、下記式（２）で表されるものである請求項１または２に記載のラテックス凝集反応用凝集促進剤。
【化１】
2014153102.tif 000013
〔式（２）中、Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ2は、基−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、基＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子または炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ1が結合している炭素原子と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、Ｒ3は、直接結合または炭素数１〜２４の２価の有機基を示し、Ｒ4は、炭素数１〜１０の有機基を示す。〕
【請求項４】
重合体が、更に疎水性繰り返し単位を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載のラテックス凝集反応用凝集促進剤。
【請求項５】
疎水性繰り返し単位が、スチレン類、（メタ）アクリレート類および（メタ）アクリルアミド類から選ばれる１種以上の単量体に由来する繰り返し単位である請求項４に記載のラテックス凝集反応用凝集促進剤。
【請求項６】
重合体のＨＬＢ値が、１０〜２２である請求項１〜５のいずれか１項に記載のラテックス凝集反応用凝集促進剤。
【請求項７】
ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出方法であって、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体の存在下で、標的物質に対する抗原または抗体が固定化された粒子と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合することを特徴とする検出方法。
【請求項８】
ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤を少なくとも備えることを特徴とするキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラテックス凝集反応用凝集促進剤、標的物質の検出方法および標的物質の検出に用いるためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
標的物質である抗原（抗体）と、これに対する抗体（抗原）との間で生じる凝集反応を利用した免疫ラテックス凝集測定法が、臨床検査、生化学研究等の領域において広く活用されているが、この測定法は、他の測定方法（酵素増幅法、化学発光測定法等）と比較して検出感度不足が指摘されることがある。
【０００３】
そのため、ラテックス凝集反応の凝集促進剤が提案されている。このような凝集促進剤として、ポリエチレングリコール、多価アルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、サッカロース、デキストラン、ポリアミノ酸、アルギン酸、アミノエタンスルホン酸誘導体、アミノプロパンスルン酸誘導体等の水溶性高分子が用いられている（特許文献１〜４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２６６９７０号公報
【特許文献２】特開平８−２７８３０８号公報
【特許文献３】特開２００３−２９４７５３号公報
【特許文献４】特開２００６−１０５９１０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明が解決しようとする課題は、凝集促進効果に優れるラテックス凝集反応用凝集促進剤、標的物質の検出方法および標的物質の検出に用いるためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、本発明者らは、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体が、ラテックス凝集反応の凝集促進効果に優れることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤を提供するものである。
【０００８】
また、本発明は、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出方法であって、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体の存在下で、標的物質に対する抗原または抗体が固定化された粒子と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合することを特徴とする検出方法を提供するものである。
【０００９】
更に、本発明は、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットであって、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤を少なくとも備えることを特徴とするキットを提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤は、ラテックス凝集反応の凝集促進効果に優れる。
また、本発明の標的物質の検出方法及び標的物質の検出に用いるためのキットは、高い検出感度を有する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
〔ラテックス凝集反応用凝集促進剤〕
本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤は、スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位（以下、繰り返し単位（Ａ）とも称する）を有する重合体を含有するものである。
【００１２】
＜繰り返し単位（Ａ）＞
上記繰り返し単位（Ａ）としては親水性を示すものが好ましい。ここで、本明細書において、親水性とは、水との親和力が強い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万〜１０万程度のもの）が、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して１ｇ以上溶解する場合にはその繰り返し単位は親水性である。
また、上記繰り返し単位（Ａ）としては、親水疎水の尺度を示すＨｙｄｒｏｐｈｉｌｅ−Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  Ｂａｌａｎｃｅ(ＨＬＢ値)が１０以上のものが好ましい。高い親水性を得る場合には、ＨＬＢ値は１５以上がより好ましく、２０〜４０がさらに好ましく、２０〜３０が特に好ましい。
また、本明細書において、ＨＬＢ値は、化合物の有機性の値と無機性の値の比率から算出されるもの（小田式）を意味し、「Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｗｉｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎ  Ｄｉａｇｒａｍ」[１９９８年、ＮＩＨＯＮ  ＥＭＵＬＳＩＯＮ  ＣＯ．，ＬＴＤ]に記載の計算方法により算出できる。例えば、後述する実施例に記載のＮ−１−１の共重合体に含まれる繰り返し単位（Ａ）のＨＬＢ値は、（６０×１＋１４０×１＋１００×３）／（２０×１０＋４０×１＋（−１０）×３）×１０＝２３．８である。
【００１３】
また、繰り返し単位（Ａ）は特に限定されないが、ノニオン性のものが好ましい。
また、繰り返し単位（Ａ）は、スルフィニル基の他に、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、スルホ基、チオール基、リン酸基、アルデヒド基等の親水性基を有していてもよい。また、斯かる親水性基の位置および個数は任意であるが、その位置は好ましくは重合体の側鎖である。一方、スルフィニル基以外の親水性基の個数としては、適度な親水性を得る観点から、繰り返し単位１個中に、０〜１２個が好ましく、０〜１０個がより好ましく、０〜５個が更に好ましく、０〜３個が更に好ましく、１〜３個が更に好ましく、２または３個が特に好ましい。また、上記親水性基の中でも、適度な親水性を得る観点から、ヒドロキシ基が好ましい。なお、本発明の効果が失われない範囲で、重合体に含まれる複数のスルフィニル基の一部がスルフィド基やスルホニル基となっていてもよい。
【００１４】
また、上記繰り返し単位（Ａ）の好適な具体例としては、下記式（１）で表される構造を側鎖中に少なくとも１つ含む繰り返し単位が挙げられる。式（１）で表される構造を側鎖中に有する繰り返し単位となるポリマー種としては公知のものを用いることができ、中でも（メタ）アクリレート系のポリマー種、（メタ）アクリルアミド系のポリマー種、スチレン系のポリマー種等が好ましい。より具体的には、下記式（２）で表される繰り返し単位が挙げられる。
【００１５】
【化１】
2014153102.tif 000002
【００１６】
〔式（１）中、Ｒ3は、直接結合または炭素数１〜２４の２価の有機基を示し、Ｒ4は、炭素数１〜１０の有機基を示す。〕
【００１７】
【化２】
2014153102.tif 000003
【００１８】
〔式（２）中、Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ2は、基−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、基＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子または炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ1が結合している炭素原子と結合する位置を示す）またはフェニレン基を示し、Ｒ3およびＲ4は前記と同義である。〕
ここで、式（１）および（２）中の各記号について詳細に説明する。
【００１９】
Ｒ1は、水素原子またはメチル基を示すが、メチル基が好ましい。
【００２０】
また、Ｒ2は、基−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、基＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−またはフェニレン基を示す。斯かるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【００２１】
また、上記Ｒ5で示される有機基の炭素数は、好ましくは１〜１０であり、より好ましくは２〜８であり、更に好ましくは２〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基および芳香族炭化水素基を包含する概念である。
【００２２】
上記Ｒ5における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基等のアルキル基が挙げられる。
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００２３】
上述のようなＲ2の中でも、凝集促進効果の観点から、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、フェニレン基が好ましく、基＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。
【００２４】
Ｒ3は、直接結合または炭素数１〜２４の２価の有機基を示す。斯かる直接結合としては、単結合が挙げられる。
【００２５】
斯様なＲ3の中でも、炭素数１〜２４の２価の有機基が好ましい。斯かる２価の有機基の炭素数は、好ましくは２〜１８であり、より好ましくは２〜１０であり、更に好ましくは２〜９であり、特に好ましくは３〜６である。
【００２６】
上記２価の有機基としては、２価の炭化水素基が挙げられる。２価の炭化水素基は、好ましくは２価の脂肪族炭化水素基であり、直鎖状でも分岐状でもよい。具体的には、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基、ヘプタン−１，７−ジイル基、オクタン−１，８−ジイル基等のアルカンジイル基が挙げられる。
【００２７】
また、上記２価の炭化水素基は、置換基を有していてもよく、炭素−炭素結合間にエーテル結合を含んでいてもよい。
上記２価の炭化水素基が有していてもよい置換基としては、前記親水性基が挙げられる。該置換基の個数は、好ましくは１〜５であり、より好ましくは１〜３であり、更に好ましくは１または２である。
また、上記２価の炭化水素基が含んでいてもよいエーテル結合の個数としては、０〜５が好ましく、０〜３がより好ましい。
【００２８】
また、２価の有機基の好適な具体例としては、下記式（３）で表される連結基、炭素数１〜２４のアルカンジイル基が挙げられ、より好ましくは式（３）で表される連結基である。
【００２９】
【化３】
2014153102.tif 000004
【００３０】
〔式（３）中、Ｒ6は、単結合、基−Ｒ8−Ｏ−（Ｒ8は、炭素数１〜４のアルカンジイル基を示す）または下記式（４）で表される連結基を示し、Ｒ7は、炭素数１〜４のアルカンジイル基を示し、ｎは１または２を示し、＊＊は、式（１）、（２）中のイオウ原子と結合する位置を示す。〕
【００３１】
【化４】
2014153102.tif 000005
【００３２】
〔式（４）中、Ｒ9は、炭素数１〜４のアルカンジイル基を示し、Ｒ10は、炭素数２または３のアルカンジイル基を示し、ｍ1は１または２を示し、ｍ2は１〜３の整数を示す。〕
【００３３】
上記Ｒ6としては、単結合、基−Ｒ8−Ｏ−が好ましく、単結合が特に好ましい。
【００３４】
また、上記Ｒ7、Ｒ8およびＲ9で示されるアルカンジイル基の炭素数は１〜４であるが、１または２が好ましい。
また、上記アルカンジイル基は直鎖状でも分岐でもよく、前述のアルカンジイル基と同様のものが挙げられる。
【００３５】
また、上記Ｒ10で示されるアルカンジイル基の炭素数は、好ましくは２である。また、該アルカンジイル基としては、Ｒ7で示されるものと同様のものが挙げられる。なお、ｍ2が２または３の場合、ｍ2個のＲ10は同一であっても異なっていてもよい。
また、ｎおよびｍ1としては１が好ましく、ｍ2としては１または２が好ましい。
【００３６】
また、Ｒ4は、炭素数１〜１０の有機基を示す。斯かる有機基としては、Ｒ5で示されるものと同様のものが挙げられる。また、Ｒ4が炭化水素基である場合、斯かる炭化水素基は置換基を有していてもよく、該置換基およびその個数としては、前記２価の炭化水素基が有していてもよいものと同様のものが挙げられる。また、親水性の観点から、Ｒ4としては、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基等の環構造を含まないものが好ましい。
【００３７】
上述のようなＲ4の好適な具体例としては、前記親水性基を有する炭素数１〜１０の有機基が挙げられ、より好ましくは下記式（５）で表される１価の基、炭素数１〜１０のアルキル基であり、更に好ましくは式（５）で表される１価の基である。
【００３８】
【化５】
2014153102.tif 000006
【００３９】
〔式（５）中、ｋ1は、１〜４の整数を示し、ｋ2は、０〜４の整数を示し、＊＊＊は、式（１）、（２）中のイオウ原子と結合する位置を示す。〕
【００４０】
式（５）中、ｋ1としては、１または２が好ましい。また、ｋ2としては、０〜２の整数が好ましく、０または１がより好ましい。
【００４１】
また、繰り返し単位（Ａ）の合計含有量の下限としては、水溶性の付与、凝集促進効果の観点から、全繰り返し単位中、１０モル％以上が好ましく、２０モル％以上がより好ましく、３０モル％以上が更に好ましく、４０モル％以上が更に好ましい。
一方、上限としては、重合体とラテックス粒子の疎水−疎水相互作用の観点から、全繰り返し単位中、９９モル％以下が好ましく、９０モル％以下がより好ましく、８５モル％以下が更に好ましく、８０モル％以下が更に好ましく、７０モル％以下が更に好ましい。
なお、繰り返し単位（Ａ）の含有量は13Ｃ−ＮＭＲ等により測定可能である。
【００４２】
＜繰り返し単位（Ｂ）＞
また、本発明で用いる重合体としては、更に疎水性繰り返し単位（以下、繰り返し単位（Ｂ）とも称する）を有するものが好ましい。ここで、疎水性とは、水との親和性が低い性質を持つことを意味する。具体的には、１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万〜１０万程度のもの）が、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して溶解する量が１ｇ未満である場合にはその繰り返し単位は疎水性である。
また、上記繰り返し単位（Ｂ）のＨＬＢ値としては、高い疎水性を得る場合には、２０未満が好ましく、１５未満がより好ましく、０．１以上１０未満が更に好ましく、０．１〜５が特に好ましい。
【００４３】
繰り返し単位（Ｂ）としては、疎水性を示す公知のものが挙げられ、特に限定されないが、重合体とラテックス粒子の疎水−疎水相互作用の観点から、スチレン類、（メタ）アクリレート類および（メタ）アクリルアミド類から選ばれる１種以上の単量体に由来するものが好ましく、スチレン類に由来するものがより好ましい。
【００４４】
上記スチレン類に由来する繰り返し単位としては、下記式（６）で表される繰り返し単位が好ましい。
【００４５】
【化６】
2014153102.tif 000007
【００４６】
〔式（６）中、Ｒ11は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ12は、炭素数１〜１０の有機基を示し、ｐは０〜５の整数を示す。〕
【００４７】
式（６）中、Ｒ12で示される有機基としては、Ｒ5で示されるものと同様のものが挙げられるが、その炭素数は、好ましくは１〜６であり、より好ましくは１〜３である。また、親水性基がないものが好ましい。なお、斯かる有機基は、炭素数１〜３のアルコキシ基等が置換していてもよい。また、ｐが２〜５の整数の場合、ｐ個のＲ12は同一であっても異なっていてもよい。
【００４８】
また、ｐは０〜５の整数を示すが、０〜３が好ましく、０がより好ましい。
【００４９】
スチレン類に由来する繰り返し単位の具体例としては、スチレン、４−メチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、２，４，６−トリメチルスチレン、４−エチルスチレン、４−イソプロピルスチレン、４−ｔｅｒｔ−ブチルスチレン、α―メチルスチレン等に由来する繰り返し単位が挙げられる。
【００５０】
また、上記（メタ）アクリレート類としては、例えば、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸イソブチル、（メタ）アクリル酸２−エチルヘキシル等の（メタ）アクリル酸Ｃ1-10アルキル；（メタ）アクリル酸シクロヘキシル等の（メタ）アクリル酸Ｃ6-10シクロアルキル；（メタ）アクリル酸１−メトキシエチル、（メタ）アクリル酸２−メトキシエチル等の（メタ）アクリル酸Ｃ1-10アルコキシＣ1-10アルキル；（メタ）アクリル酸１−アダマンチル、（メタ）アクリル酸１−メチル−（１−アダマンチルエチル）、（メタ）アクリル酸トリシクロ[５．２．１．０2,6]デカン−８−イル等の炭素数８〜１６の橋かけ環炭化水素基を有する（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。また、これら（メタ）アクリレート類において、上記Ｃ1-10アルキル基としてはＣ1-8アルキル基が好ましく、上記Ｃ6-10シクロアルキル基としてはＣ6-8シクロアルキル基が好ましく、上記Ｃ1-10アルコキシ基としてはＣ1-6アルコキシ基が好ましく、炭素数８〜１６の橋かけ環炭化水素基としては、炭素数８〜１２の橋かけ環炭化水素基が好ましい。
【００５１】
また、上記（メタ）アクリルアミド類としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジＣ1-10アルキル（メタ）アクリルアミド；Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド等のＮ−Ｃ1-10アルキル（メタ）アクリルアミド；Ｎ−（１，１−ジメチル−２−アセチルエチル）（メタ）アクリルアミド等のＮ−Ｃ2-10アルカノイルＣ1-10アルキル（メタ）アクリルアミドの他、（メタ）アクリロイルピペリジン等が挙げられる。また、これら（メタ）アクリルアミド類において、上記Ｃ1-10アルキル基としては、Ｃ3-10アルキル基が好ましく、上記Ｃ2-10アルカノイル基としては、Ｃ2-6アルカノイル基が好ましい。
【００５２】
また、繰り返し単位（Ｂ）の合計含有量の下限としては、重合体とラテックス粒子の疎水−疎水相互作用の観点から、全繰り返し単位中、１モル％以上が好ましく、１０モル％以上がより好ましく、１５モル％以上が更に好ましく、２０モル％以上が更に好ましく、３０モル％以上が更に好ましい。
一方、上限としては、水溶性の付与、凝集促進効果の観点から、全繰り返し単位中、９０モル％以下が好ましく、８０モル％以下がより好ましく、７０モル％以下が更に好ましく、６０モル％以下が更に好ましい。
なお、繰り返し単位（Ｂ）の含有量は、繰り返し単位（Ａ）の含有量と同様にして測定すればよい。
【００５３】
また、重合体に含まれる繰り返し単位（Ａ）と繰り返し単位（Ｂ）とのモル比〔（Ａ）：（Ｂ）〕としては、凝集促進効果の観点から、１０：１〜１０：３０が好ましく、１０：２〜１０：２０がより好ましく、１０：３〜１０：１５が更に好ましい。
【００５４】
また、本発明で用いる重合体は、前記繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）以外の親水性繰り返し単位（Ｃ）を有していてもよい。斯様な親水性繰り返し単位（Ｃ）としては、アニオン性の単量体（アニオン性モノマー）、カチオン性の単量体（カチオン性モノマー）、またはノニオン性の単量体（ノニオン性モノマー）に由来するものが挙げられ、これらを１種または２種以上含んでいてもよい。
【００５５】
上記アニオン性モノマーとしては、ビニル安息香酸、（メタ）アクリル酸等の不飽和カルボン酸モノマー；スチレンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、イソプレンスルホン酸等の不飽和スルホン酸モノマーが挙げられる。
【００５６】
また、カチオン性モノマーとしては、アリルアミン、アミノスチレン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド塩化メチル４級塩等の１〜４級アミノ基と不飽和結合を有するものが挙げられる。
【００５７】
また、ノニオン性モノマーとしては、（メタ）アクリル酸ヒドロキシエチル、（メタ）アクリル酸グリセリル、（メタ）アクリル酸ポリオキシエチレン等のヒドロキシ基を有する不飽和カルボン酸エステルモノマー；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド等のヒドロキシ基を有する（メタ）アクリルアミドモノマーが挙げられる。
【００５８】
上記繰り返し単位（Ｃ）の合計含有量としては、全繰り返し単位中、０〜４９モル％が好ましく、０〜２０モル％がより好ましく、０〜１０モル％が更に好ましく、０〜１モル％が特に好ましい。
【００５９】
また、本発明で用いる重合体が共重合体である場合、その繰り返し単位の配列の態様は特に限定されず、共重合体は、ブロック共重合体、グラフト共重合体、ランダム共重合体、交互共重合体のいずれであってもよい。
【００６０】
また、本発明で用いる重合体の数平均分子量（Ｍn）としては、５０００〜１００万が好ましく、７０００〜２０万がより好ましく、１万〜１５万が特に好ましい。数平均分子量を５０００以上とすることにより、凝集促進効果が向上し、一方、１００万以下とすることにより、粘度が抑制され取扱いが容易になる。
また、本発明で用いる重合体の重量平均分子量（Ｍw）としては、５０００〜５００万が好ましく、７０００〜１００万がより好ましく、７０００〜２０万が更に好ましい。
また、分子量分布（Ｍw／Ｍn）としては、１．０〜５．０が好ましく、１．０〜４．０がより好ましく、１．０〜３．０が更に好ましく、１．５〜２．５が特に好ましい。
なお、上記数平均分子量および重量平均分子量は、後述する実施例に記載の方法に従い測定すればよい。
【００６１】
また、本発明で用いる重合体としては、凝集促進効果の観点から、水溶性のものが好ましい。ここで、本明細書において、水溶性とは、１質量％のポリマー固形分となるように重合体を水（２５℃）に添加・混合したときに、目視で透明となることをいう。
また、本発明で用いる重合体としては、ノニオン性のものが好ましい。
【００６２】
また、本発明で用いる重合体としては、水溶性の付与、凝集促進効果の観点から、ＨＬＢ値が１０〜２２の範囲であるものが好ましい。
【００６３】
次に、本発明で用いる重合体の製造方法について説明する。
本発明で用いる重合体は、（１）公知の重合体の側鎖中にスルフィド基を導入し、斯かるスルフィド基をスルフィニル基に変換すること、（２）重合させたときに側鎖となる部分にスルフィド基を有するモノマーを、重合または他のモノマーと共重合させ、得られた（共）重合体のスルフィド基をスルフィニル基に変換すること、（３）或いは重合させたときに側鎖となる部分にスルフィニル基を有するモノマーを、重合または他のモノマーと共重合させること等により製造できる。
上記製造方法を、下記共重合体（Ｎ−１）の製造方法を例に挙げて具体的に説明する。
すなわち、工程１−Ａ−１および工程１−Ａ−２により、或いは工程１−Ｂまたは工程１−Ｃにより、共重合体（Ｓ−１）を得、これを用いて共重合体（Ｇ−１）を経て共重合体（Ｎ−１）を得る。
【００６４】
【化７】
2014153102.tif 000008
【００６５】
【化８】
2014153102.tif 000009
【００６６】
（式中の各記号は前記と同義である。）
【００６７】
＜工程１−Ａ−１＞
工程１−Ａ−１は、化合物（Ａ−１−１）と化合物（Ｂ−１）とを重合開始剤の存在下で重合させ、共重合体（Ｍ−１）を得る工程である。
化合物（Ａ−１−１）としては、例えば、（メタ）アクリル酸等が挙げられ、これらは１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
また、化合物（Ｂ−１）としては、前記スチレン類が挙げられ、その合計使用量としては、化合物（Ａ−１−１）に対し、０．００１〜１．５モル当量が好ましい。
【００６８】
また、上記重合開始剤としては、例えば、２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）、ジメチル２，２'−アゾビス（２−メチルプロピオネート）、２，２'−アゾビス（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニトリル等のアゾ系開始剤；ジ(３，５，５−トリメチルヘキサノイル)パーオキサイド、過酸化ベンゾイル等の過酸化物が挙げられ、これら重合開始剤は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
重合開始剤の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）に対し、通常０．０００２〜０．２質量倍程度である。
【００６９】
また、工程１−Ａ−１には溶媒、連鎖移動剤を使用してもよい。溶媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド系溶媒；ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル、γ−ブチロラクトン等のエステル系溶媒；トルエン、ベンゼン等の芳香族系溶媒；１、４−ジオキサン、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒が挙げられ、これら溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。これら溶媒の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）に対し、通常０．５〜１５質量倍程度である。
また、上記連鎖移動剤としては、メルカプトエタノール、チオグリセロール、ｔｅｒｔ−ドデシルメルカプタン等が挙げられる。
【００７０】
また、工程１−Ａ−１の反応時間は特に限定されないが、通常０．５〜２４時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常０〜１２０℃程度である。
【００７１】
＜工程１−Ａ−２＞
工程１−Ａ−２は、工程１−Ａ−１で得た共重合体（Ｍ−１）の−Ｒ2を、化合物（Ｃ−１）のグリシジル基またはオキセタニル基に対し開環付加させ、共重合体（Ｓ−１）を得る工程である。
工程１−Ａ−２で用いる化合物（Ｃ−１）としては、エチレングリコールジグリシジルエーテル、プロピレングリコールジグリシジルエーテル等が挙げられ、その合計使用量としては、共重合体（Ｍ−１）中の化合物（Ａ−１−１）に由来する繰り返し単位に対し、１．５〜１０モル当量が好ましい。
【００７２】
また、工程１−Ａ−２は、触媒存在下で行うのが好ましい。触媒としては、テトラブチルアンモニウムブロマイド等の四級アンモニウム塩；テトラブチルホスホニウムブロマイド、テトラブチルホスホニウムクロライド等の四級ホスホニウム塩が挙げられ、これら触媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
上記触媒の合計使用量は、共重合体（Ｍ−１）中の化合物（Ａ−１−１）に由来する繰り返し単位に対し、通常０．０１〜０．２モル当量程度である。
また、工程１−Ａ−２で好適に使用される溶媒としては、工程１−Ａ−１と同様のものが挙げられる。
【００７３】
また、工程１−Ａ−２の反応時間は特に限定されないが、通常１〜２４時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常４０〜２００℃程度である。
【００７４】
＜工程１−Ｂおよび工程１−Ｃ＞
工程１−Ｂおよび工程１−Ｃは、化合物（Ａ−１−２）または化合物（Ａ−１−３）と、化合物（Ｂ−１）とを重合開始剤の存在下で重合させ、共重合体（Ｓ−１）を得る工程である。
化合物（Ａ−１−２）としては、例えば、グリシジル（メタ）アクリレート、オキセタニル（メタ）アクリレートが挙げられ、化合物（Ａ−１−３）としては、ビニルベンジルグリシジルエーテル、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレートグリシジルエーテル等が挙げられる。なお、これらは１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
工程１−Ｂおよび工程１−Ｃは、上記工程１−Ａ−１と同様にして行えばよい。
【００７５】
＜工程２＞
工程２は、工程１−Ａ−２、工程１−Ｂまたは工程１−Ｃで得た共重合体（Ｓ−１）のグリシジル基またはオキセタニル基に対し、−ＳＲ4を開環付加させ、共重合体（Ｇ−１）を得る工程である。
工程２で用いるＲ4ＳＨで表される化合物としては、チオグリセロール、メルカプトエタノールが挙げられるが、親水性向上の観点から、チオグリセロールが好ましい。
上記化合物の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）、（Ａ−１−２）または（Ａ−１−３）に由来する繰り返し単位に対し、通常０．１〜２０モル当量であり、好ましくは１〜１０モル当量である。
【００７６】
また、工程２は、触媒存在下で行うのが好ましい。触媒としては、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン等の塩基性触媒が挙げられ、これら触媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
上記触媒の合計使用量は、化合物（Ａ−１−１）、（Ａ−１−２）または（Ａ−１−３）に由来する繰り返し単位に対し、通常０．０１〜４０モル当量である。
【００７７】
また、工程２は、溶媒存在下で行うのが好ましい。溶媒としては、工程１で使用できる溶媒の他、エタノール、メタノール等のアルコール系溶媒、またはこれらの混合溶媒が挙げられ、その合計使用量は、共重合体（Ｓ−１）に対し、通常０．５〜２０質量倍程度である。
【００７８】
また、工程２の反応時間は特に限定されないが、通常１〜８時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常４０〜１００℃程度である。
【００７９】
なお、工程２を工程１−Ｂまたは工程１−Ｃの前に実施し、その後工程１−Ｂまたは工程１−Ｃの重合を実施してもよい。
【００８０】
＜工程３＞
工程３は、酸化剤を用いて、工程２で得た共重合体（Ｇ−１）のスルフィド基をスルフィニル基に変換し、共重合体（Ｎ−１）を得る工程である。なお、本発明の効果が失われない範囲で、共重合体中に含まれる複数のスルフィニル基の一部がスルフィド基やスルホニル基となってもよい。
【００８１】
上記酸化剤は、有機酸化剤と無機酸化剤とに大別され、有機酸化剤としては、例えば、過酢酸、過安息香酸、メタクロロ過安息香酸等が挙げられる。一方、無機酸化剤としては、例えば、過酸化水素、クロム酸、過マンガン酸塩等が挙げられる。なお、これら酸化剤は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。
また、酸化剤の使用量は、化合物（Ａ−１−１）、（Ａ−１−２）または（Ａ−１−３）に由来する繰り返し単位に対し、通常１．０〜１０．０モル当量程度である。
【００８２】
工程３は、溶媒存在下で行うのが好ましい。斯かる溶媒としては、水；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等のアミド系溶媒；メタノール、エタノール等のアルコール系溶媒等が挙げられ、これら溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できるが、水、アルコール系溶媒が好ましい。
上記溶媒の合計使用量は、共重合体（Ｇ−１）に対し、通常１〜２０質量倍程度である。
【００８３】
また、工程３の反応時間は特に限定されないが、通常１〜２４時間程度であり、反応温度は、溶媒の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常２５〜７０℃程度である。
【００８４】
なお、前記各工程において、各反応生成物の単離は、必要に応じて、ろ過、洗浄、乾燥、再結晶、再沈殿、透析、遠心分離、各種溶媒による抽出、中和、クロマトグラフィー等の通常の手段を適宜組み合わせて行えばよい。
【００８５】
そして、後記実施例に示すように、上記のようにして得られるスルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を、標的物質に対する抗原または抗体が固定化された粒子と標的物質を含む可能性のある検体とが存在する反応系に含有せしめることによって、ラテックス凝集反応が促進され、標的物質の検出感度が向上するため、標的物質が低濃度であるような場合であっても測定の再現性および精度を満足させることができる。
したがって、上記重合体は、ラテックス凝集反応用凝集促進剤（ラテックス凝集測定用増感剤）として有用である。また、上記重合体は、ラテックス凝集反応の凝集促進方法に使用することができる。
そして、斯かる重合体は、ラテックス凝集反応用凝集促進剤としてそのまま使用してもよく、ラテックス凝集反応用凝集促進剤を製造するための素材として使用することもできる。また、本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤は、溶媒への溶解性が良好なため取扱いが容易であり、経時劣化しにくく保存安定性にも優れる。
なお、本明細書において、ラテックス凝集反応とは、抗体（または抗原）が結合したラテックス粒子と、標的物質である抗原（または抗体）とが結合し、２粒子以上の凝集体を形成することをいう。
【００８６】
また、本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤中の上記重合体の含有量は、０．００１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましく、０．０１〜５質量％が更に好ましい。斯様な低濃度であっても優れた凝集促進効果を奏する。
【００８７】
また、本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤を使用するときの測定反応系に対する重合体の濃度は、好ましくは０．０１〜２０質量％であり、より好ましくは０．０１〜５質量％である。斯様な低濃度であっても優れた凝集促進効果を奏する。
なお、ここで上記測定反応系とは、粒子と検体を混合しラテックス凝集反応を光学的に測定する系のことをいう。
【００８８】
本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤は上記重合体の他に、溶剤を含んでいてもよく、溶剤としては、水性媒体が挙げられる。水性媒体としては、水の他、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩衝液、アンモニア緩衝液等の各種緩衝液が挙げられ、これらを１種または２種以上含んでいてもよい。
また、本発明のラテックス凝集反応用凝集促進剤は、上記重合体と溶剤の他に、ｐＨ緩衝剤、界面活性剤、ブロッキング剤等を含んでいてもよい。該ブロッキング剤としては、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）等の生体由来の水溶性ポリマーや化学合成した水溶性ポリマー等が挙げられる。
【００８９】
〔標的物質の検出方法〕
本発明のラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出方法は、上記スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体の存在下で、標的物質に対する抗原または抗体が固定化された粒子と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合することを特徴とするものである。本検出方法は、常法の免疫ラテックス凝集測定と同様にして行えばよい。
【００９０】
また、上記検体としては、通常、血清や血漿、尿、唾液等の各種生物学的液体サンプル、糞便や食品の検体粉砕物等が挙げられる。測定サンプルとして、ｐＨ緩衝液、タンパク質、アミノ酸等で検体を希釈した検体希釈液を用いてよい。
また、斯かる検体中に含まれる標的物質は、通常、レセプター、酵素、血中タンパク、感染症関連抗原、微生物、ウイルス、ホルモン、環境関係物質（例えば、環境ホルモン等）等の抗原や、これら抗原に対する抗体等であり、該抗体は、特定の抗原に対する結合性を有すればよく、抗体のフラグメントも含まれる。
【００９１】
また、本検出方法で用いる標的物質に対する抗原または抗体としては上記抗原や抗体と同様のものが挙げられるが、これら抗原または抗体は粒子に固定化されたものである。
上記粒子は、免疫ラテックス凝集測定に使用されるもの（ラテックス粒子）であれば特に限定されないが、ポリマー粒子が挙げられる。斯かるポリマー粒子を構成するモノマーとしては、例えば、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロプル（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリロイルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドのメチルクロライド４級塩、ダイアセトンアクリルアミド、Ｎ−ビニルアセトアミド等の（メタ）アクリルアミド化合物；（メタ）アクリル酸メトキシエチル、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロピル、（メタ）アクリル酸ラウリル、（メタ）アクリル酸シクロヘキシル、（メタ）アクリル酸イソボルニル、（メタ）アクリル酸ベンジル、グリセロール（メタ）クリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等の（メタ）アクリレート化合物；アクロレイン等の不飽和アルデヒド化合物；（メタ）アクリル酸、イタコン酸、無水マレイン酸、クロトン酸等の不飽和カルボン酸化合物または不飽和無水カルボン酸化合物；スチレンスルホン酸、イソプレンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸等の不飽和スルホン酸化合物；スチレン、アミノスチレン等のスチレン化合物の他、アリルアミン、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン等が挙げられる。
斯様なポリマー粒子の中でも、スチレン化合物と不飽和カルボン酸化合物との共重合体であるものが好ましく、スチレンと、アクリル酸、メタクリル酸及びイタコン酸から選ばれる不飽和カルボン酸化合物との共重合体であるものがより好ましい。
【００９２】
また、上記粒子の平均粒子径は、好ましくは０．０１〜１μｍである。
また、標的物質に対する抗原または抗体の粒子への固定化は、疎水−疎水相互作用による物理吸着、水溶性カルボジイミド系縮合剤を用いた化学的結合等の常法に従って行えばよい。
また、上記粒子は、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）等の生体由来の水溶性ポリマーや化学合成した水溶性ポリマー等のブロッキング剤がコーティングされていてもよい。該コーティングは、上記ブロッキング剤を含む溶液中に粒子を分散させた後、遠心分離を行い、上澄み液を除去し再度粒子を水または緩衝液により再分散させる等の常法に従って行えばよい。
【００９３】
また、上記粒子と検体との混合は、ｐＨ４．０〜１０の範囲で行うのが好ましい。また、混合温度は通常２５〜４５℃の範囲であり、混合時間は通常１〜２０分である。
また、斯かる粒子と検体との混合は、上記スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体の存在下で行われるものであるが、斯かる重合体とともに溶剤を使用するのが好ましい。溶剤としては、水性媒体として例示したものの他、エタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；酢酸エチル、酢酸ブチル等の酢酸エステル；ジメチルホルムアミド等のアミド；ジメチルスルホキシド等のスルホキシドが挙げられ、これらのうち１種を単独でまたは２種以上を組み合わせてもよい。溶剤を使用する場合、上記重合体の使用量としては、溶剤１００質量部に対し、０．０１〜２０質量部が好ましく、０．０１〜５質量部がより好ましい。
【００９４】
そして、上記粒子と検体との混合の結果として生じる凝集反応を光学的に検出することで、検体中の標的物質が検出され、更に標的物質の濃度も測定できる。凝集反応の光学的な検出は、散乱光強度、透過光強度、吸光度等を検出できる光学機器を用いて常法に従い行えばよい。
【００９５】
〔標的物質の検出に用いるためのキット〕
本発明のラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットは、上記スルフィニル基を側鎖に有する繰り返し単位を有する重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤を少なくとも備えることを特徴とするものである。
本発明のキットとしては、上記ラテックス凝集反応用凝集促進剤（第１試薬とも称する）に加えて、上記標的物質に対する抗原または抗体が固定化された粒子を含む試薬（第２試薬とも称する）を更に備えるものが好ましい。
上記第２試薬は、上記標的物質に対する抗原または抗体が固定化された粒子の他に、溶剤を含んでいてもよい。該溶剤としては、各種緩衝液等の上記水性媒体が挙げられる。
また、本発明のキットは、上記第１試薬及び第２試薬の他に、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体は、測定しうる標的物質が含まれていない血清、生理食塩水のほか、溶剤でもよい。該溶剤としては、各種緩衝液等の上記水性媒体が挙げられる。
【００９６】
本発明のキットは、通常のラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットと同様にして、本発明の標的物質の検出方法に使用できる。また、常法に従い標的物質の濃度も測定できる。
【実施例】
【００９７】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００９８】
実施例における各分析条件は以下に示すとおりである。
＜分子量測定＞
重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）は、東ソー社製  ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍカラムを用い、流量：０．５ミリリットル／分、溶出溶媒：ＮＭＰ溶媒（Ｈ3ＰＯ4：０．０１６Ｍ、ＬｉＢｒ：０．０３０Ｍ）、カラム温度：４０℃の分析条件で、ポリスチレンを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した。
＜ＮＭＲスペクトル＞
13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、溶媒および内部標準物質としてｄ６−ＤＭＳＯを用いて、ＢＲＵＫＥＲ製モデルＡＶＡＮＣＥ５００（５００ＭＨｚ）により測定した。
【００９９】
実施例１  共重合体（Ｎ−１−１）の合成
以下の合成経路に従い、共重合体（Ｎ−１−１）を得た。
【０１００】
【化９】
2014153102.tif 000010
【０１０１】
グリシジルメタクリレート１１３ｇおよびスチレン１１３ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）６．８ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４７５ｇとを混合しフラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、６時間重合させ、その後室温に冷却した。この溶液をメタノールによる再沈殿で精製し、減圧乾燥することで共重合体（Ｓ−１−１）を得た。
得られた共重合体（Ｓ−１−１）において、グリシジルメタクリレートに由来する繰り返し単位の含有量は４８モル％であり、スチレンに由来する繰り返し単位の含有量は５２モル％であった。なお、これら含有量は13Ｃ−ＮＭＲにより測定した。
【０１０２】
次いで、得られた共重合体（Ｓ−１−１）１０ｇおよびチオグリセロール３２．１ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド９５ｇとを混合してフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、触媒としてトリエチルアミン１２０ｇを添加した後４時間反応させ、その後室温に冷却した。この溶液を水による再沈殿で精製し、凍結乾燥することで共重合体（Ｇ−１−１）を得た。
次いで、得られた共重合体（Ｇ−１−１）１０ｇを８５．５ｇの水に分散させ、フラスコへ入れた。これに、３０％過酸化水素水溶液を４．５ｇ添加し、室温で１８時間反応させた。得られた水溶液を透析することで、共重合体（Ｎ−１−１）を得た（収率：１３％）。この共重合体（Ｎ−１−１）と水を混合し、濃度を１質量％に調整したところ、共重合体（Ｎ−１−１）は水に溶解していた。
また、得られた共重合体（Ｎ−１−１）の数平均分子量は１９０００であり、重量平均分子量は３００００であり、分子量分布は１．５９であった。
共重合体（Ｎ−１−１）の構造は13Ｃ−ＮＭＲで確認した。
【０１０３】
実施例２  共重合体（Ｎ−１−２）の合成
上記実施例１と同様の合成経路で共重合体（Ｎ−１−２）を得た。
グリシジルメタクリレート１７０ｇおよびスチレン５６．８ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）６．８ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４７５ｇとを混合しフラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、６時間重合させ、その後室温に冷却した。この溶液をメタノールによる再沈殿で精製し、減圧乾燥することで共重合体（Ｓ−１−２）を得た。
得られた共重合体（Ｓ−１−２）において、グリシジルメタクリレートに由来する繰り返し単位の含有量は６７モル％であり、スチレンに由来する繰り返し単位の含有量は３３モル％であった。なお、これら含有量は実施例１と同様にして測定した。
【０１０４】
次いで、得られた共重合体（Ｓ−１−２）１０ｇおよびチオグリセロール４４．７ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド９５ｇとを混合してフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、触媒としてトリエチルアミン１６７ｇを添加した後４時間反応させ、その後室温に冷却した。この溶液を水による再沈殿で精製し、凍結乾燥することで共重合体（Ｇ−１−２）を得た。
【０１０５】
次いで、得られた共重合体（Ｇ−１−２）１０ｇを８４．４ｇの水に分散させ、フラスコへ入れた。これに、３０％過酸化水素水溶液を５．６ｇ添加し、室温で１８時間反応させた。得られた水溶液を透析することで、共重合体（Ｎ−１−２）を得た（収率：１８％）。この共重合体（Ｎ−１−２）と水を混合し、濃度を１質量％に調整したところ、共重合体（Ｎ−１−２）は水に溶解していた。
また、得られた共重合体（Ｎ−１−２）の数平均分子量は３１０００であり、重量平均分子量は５６０００であり、分子量分布は１．８１であった。
共重合体（Ｎ−１−２）の構造は13Ｃ−ＮＭＲで確認した。
【０１０６】
実施例３  共重合体（Ｎ−１−３）の合成
上記実施例１と同様の合成経路で共重合体（Ｎ−１−３）を得た。
グリシジルメタクリレート１７０ｇおよびスチレン５６．８ｇと、重合開始剤として２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）２．２７ｇと、酢酸エチル４５０ｇとを混合しフラスコに入れた。これに窒素を吹き込み、７０℃まで昇温し、８時間重合させ、その後室温に冷却した。この溶液をメタノールによる再沈殿で精製し、減圧乾燥することで共重合体（Ｓ−１−３）を得た。
得られた共重合体（Ｓ−１−３）において、グリシジルメタクリレートに由来する繰り返し単位の含有量は６７モル％であり、スチレンに由来する繰り返し単位の含有量は３３モル％であった。なお、これら含有量は実施例１と同様にして測定した。
【０１０７】
次いで、得られた共重合体（Ｓ−１−３）１０ｇおよびチオグリセロール４４．７ｇと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド９５ｇとを混合してフラスコに入れた。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、触媒としてトリエチルアミン１６７ｇを添加した後４時間反応させ、その後室温に冷却した。この溶液を水による再沈殿で精製し、凍結乾燥することで共重合体（Ｇ−１−３）を得た。
【０１０８】
次いで、得られた共重合体（Ｇ−１−３）１０ｇを８４．４ｇの水に分散させ、フラスコへ入れた。これに、３０％過酸化水素水溶液を５．６ｇ添加し、室温で１８時間反応させた。得られた水溶液を透析することで、共重合体（Ｎ−１−３）を得た（収率：１５％）。この共重合体（Ｎ−１−３）と水を混合し、濃度を１質量％に調整したところ、共重合体（Ｎ−１−３）は水に溶解していた。
また、得られた共重合体（Ｎ−１−３）の数平均分子量は３３０００であり、重量平均分子量は６００００であり、分子量分布は１．８２であった。
共重合体（Ｎ−１−３）の構造は13Ｃ−ＮＭＲで確認した。
【０１０９】
上記実施例１〜３で得た共重合体（Ｎ−１−１）〜（Ｎ−１−３）のＨＬＢ値（小田式）を以下の表１に示す。なお、共重合体（Ｎ−１−１）〜（Ｎ−１−３）が有する繰り返し単位（Ａ）からなるホモポリマーを合成し、１ｇを純水１００ｇに添加したところ常温（２５℃）で溶解した。また、共重合体（Ｎ−１−１）〜（Ｎ−１−３）が有する繰り返し単位（Ｂ）からなるホモポリマーを合成し、１ｇを純水１００ｇに添加したところ常温（２５℃）で溶解しきらなかった。
【０１１０】
【表１】
2014153102.tif 000011
【０１１１】
試験例
（１）  第１試薬の調製
０．１質量％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）含有１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に、共重合体Ｎ−１−１、Ｎ−１−２またはＮ−１−３を、最終濃度が表２に示す濃度となるようにそれぞれ添加し、これを試験Ｎｏ．２〜７の「第１試薬」として供した。なお、試験Ｎｏ．１では、０．１質量％ＢＳＡ含有１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を「第１試薬」として供した。
（２）  第２試薬の調製
免疫診断用ラテックス粒子（品番：Ｇ０３０５（平均粒子径：０．３１μｍ、表面ＣＯＯＨ基の含有量：０．２１ｍｍｏｌ／ｇ−ＬＴｘ、ＪＳＲ株式会社製））の１０質量％水溶液１ｍＬと、ＨＥＰＥＳ緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．５）９ｍＬとを混合し（粒子の濃度＝１質量％）、これに１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（同仁化学社製）を、最終濃度が０．０５質量％となるように添加した。更に、この粒子分散液に、抗ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）抗体（ウサギ）の１０ｍｇ／ｍＬ水溶液を０．５ｍＬ加えて室温で３時間攪拌し、抗体を粒子の表面に固定化させた。
その後、この粒子分散液に１質量％ＢＳＡ水溶液を０．５ｍＬ加え、室温で１０時間回転攪拌し、これを１５，０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離し、粒子を沈殿として回収した。
次いで、ＨＥＰＥＳ緩衝液（０．０５Ｍ、ｐＨ７．５）１０ｍＬに上記粒子を再懸濁させ、超音波で１０分間分散させた。この再懸濁および分散の操作をもう一度繰り返した後、粒子分散液に０．０２質量％ＢＳＡ含有１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を２００ｍＬ加えて粒子固形分が０．０５質量％となるように調整し、超音波で１０分間分散させ、０．８μｍディスクフィルターに通した。
これら一連の操作により、ＢＳＡがブロッキング剤としてコーティングされた抗体固定化ラテックス粒子の分散液を得た。この分散液を試験Ｎｏ．１〜７の「第２試薬」として供した。
（３）  ラテックス凝集反応用凝集促進剤の評価
免疫ラテックス凝集測定においては、日立７１８０型自動分析装置を使用し、波長５７０ｎｍおよび測定温度３７℃にて、３μＬの検体（標的物質（ＣＲＰ抗原）の生理食塩水希釈液）と上記（１）で調製した第１試薬１５０μＬとをセルに加えて均一攪拌した後、５分間保持した。
その後、上記（２）で調製した第２試薬１５０μＬをセルに加えて均一攪拌した後、５０秒経過時の吸光度と２００秒経過時の吸光度との差を計測した。結果を表２に示す。
【０１１２】
【表２】
2014153102.tif 000012
【０１１３】
以上の結果から、実施例１〜３で得られた共重合体を含有するラテックス凝集反応用凝集促進剤を用いれば、低い抗原濃度でも標的物質を検出できることがわかる。