(57)【要約】【課題】複数の項目について容易に分析を行うことができる分析チップを提供する。【解決手段】本発明に係る分析チップ（３００）は、第１のチップ（１００）と、当該第１のチップに接続される第２のチップ（２００）とを備え、上記第１のチップは、検体注入部（１）および接続部（５）を有しており、上記第２のチップは、導入路（７）および試薬保持部（８）を有している。【選択図】図１
2014232023.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のチップと、当該第１のチップに接続される２つ以上の第２のチップとを備えており、
上記第１のチップは、検体が注入される検体注入部、および、上記第２のチップが接続される接続部を有しており、
上記検体注入部は、検体を注入するための検体注入孔を有しており、
上記第２のチップは、当該第２のチップが上記接続部に接続された場合に上記検体注入部へと注入された検体を当該第２のチップへ導入する導入路、および、上記検体に含まれている分析対象となる成分と反応する試薬を保持できるとともに上記導入路と連結されている試薬保持部を有していることを特徴とする分析チップ。
【請求項２】
上記検体注入部の周囲には、上記検体を保持する検体保持チャンバーが備えられており、
上記検体保持チャンバーには上記検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分を分離する分離部が備えられており、
上記第２のチップは、上記導入路および上記試薬保持部と連結されている混合流路と、当該混合流路に連結されており、上記分離部を通過した検体に含まれている分析対象となる成分を検出する検出部とを有していることを特徴とする請求項１に記載の分析チップ。
【請求項３】
上記導入路には、検体を保持する検体保持チャンバーが備えられており、
上記検体保持チャンバーには、上記検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分を分離する分離部が備えられており、
上記第２のチップは、上記導入路および上記試薬保持部と連結されている混合流路と、当該混合流路に連結されており、上記分離部を通過した検体に含まれている分析対象となる成分を検出する検出部とを有していることを特徴とする請求項１に記載の分析チップ。
【請求項４】
上記検体注入部の周囲には、上記検体を保持する検体保持チャンバーが備えられており、
上記検体保持チャンバーには、上記検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分を分離する分離部が備えられており、
上記第１のチップは、上記第２のチップが接続された場合に上記試薬保持部と連結される混合流路と、上記混合流路に連結されており、上記分離部を通過した検体に含まれている分析対象となる成分を検出する検出部とを有していることを特徴とする請求項１に記載の分析チップ。
【請求項５】
上記混合流路は折れ線状の形状を有していることを特徴とする請求項２〜４のいずれか１項に記載の分析チップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は検体を分析するための分析チップに関する。
【背景技術】
【０００２】
医療や生化学等の分野においては、例えば血液、尿、唾液等に含まれている成分の濃度を測定し、疾患の診断等に利用することが広く行われている。上記のような血液、尿、唾液等の検体を分析するために、種々の分析用器具が用いられている。これらの分析用器具は、例えば、微細な流路構造を有しており、毛細管力を利用して検体を送液することができる。また上記分析用器具としては、毛細管力に加え、遠心力を利用して送液を行う分析用器具が知られており、例えば、特許文献１〜４に記載の技術が挙げられる。
【０００３】
特許文献１には、螺旋状の混合用通路を備えているマイクロ流体混合装置および該装置の使用法が記載されている。上記マイクロ流体混合装置では、混合用通路に供給された２種類以上の流体を、遠心力を利用することによって混合する。
【０００４】
特許文献２には、計量室から受容室に流体を供給するための毛細管連結手段を有する、生物学的試料を遠心分離するための回転装置が記載されている。特許文献２には、上記回転装置において、流体の分析に必要な試薬を含んでいる複数のキュベットが配置されていてもよいことが記載されている。
【０００５】
特許文献３には、回転により、検体成分の分離および秤量、試薬試料の秤量、秤量した検体成分と試薬試料との混合、混合試料の光学測定セルへの移送、を行う検体分析チップが記載されている。また、特許文献３には、上記検体分析チップが複数の光学測定セルを備えていてもよいことが記載されている。
【０００６】
また、特許文献４には、検体の注入口を有する第１のチャンバーと、ＨＤＬ−コレステロール以外のコレステロール成分を凝集させる試薬を保持した第２のチャンバーとを備えたＨＤＬ−コレステロール分析用ディスクが記載されている。当該ディスクにおいては、第１及び第２のチャンバー間は逆Ｕ字状の流路によって連結されている。なお、特許文献４には、上記ディスクが、複数の独立した検液分析部を有していてもよいことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００６−５２７０８４号公報（２００６年１１月３０日公表）
【特許文献２】特許第３０６１４１４号公報（２０００年４月２８日登録）
【特許文献３】特開２００７−２４８５１号公報（２００７年２月１日公開）
【特許文献４】特許第４６４５２１１号公報（２０１０年１２月１７日登録）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、上述のような従来技術は、ユーザ（例えば、医療従事者（医師、看護師、検査技師等））が複数の分析項目を選択して容易に分析を行うことができないという問題がある。
【０００９】
まず、特許文献１に記載のマイクロ流体混合装置は、あくまで遠心力を利用して流体を混合するための装置である。つまり、上記マイクロ流体混合装置は、上記流体の性質を測定するための構成を備えていない。なお、特許文献１には、上記マイクロ流体混合装置の使用法として、混合された流体の性質を測定することによって混合の程度および／または反応の程度をモニターするステップも含むことができることが記載されている。しかしながら、実際に流体の性質を測定するためには、上記マイクロ流体混合装置に加えて、さらに測定のための装置を用意する必要がある。そして、流体の性質について複数の項目を分析するためには、上記測定のための装置を複数用意する必要がある。
【００１０】
また、特許文献２〜４に記載の技術は、複数の項目について分析するための構成を備えているものの、必要な分析項目をユーザが適宜選択することができない。
【００１１】
具体的には、特許文献２に記載の回転装置は複数のキュベットを備え得る。しかしながら、上記回転装置では、検体を注入すると全てのキュベットに検体が分配され得る構成となっている。従って、場合によっては不要な項目について分析が行われることになる。そのため、不要なキュベットにまで検体が分配され得ることを考慮すれば、余分な量の検体を回転装置に注入する必要がある。
【００１２】
特許文献３に記載の検体分析チップは、複数の光学測定セルを備え得る。各セルは独立した試薬導入口を有しているので、ユーザが各セルに異なる試薬を充填することはできる。しかしながら、特許文献２に記載の技術と同様に、検体を注入すると全てのセルに検体が分配され得る構成となっているため、不要な項目について分析が行われ得る。
【００１３】
特許文献４に記載の分析ディスクは、複数の検液分析部を備え得る。また、各検液分析部は独立した注入口および試薬チャンバーを備え得る。上記分析ディスクでは、注入口が各検液分析部に設けられているので、不要な項目について分析が行われることはない。しかしながら、各注入口に検体を注入しなければならないので、分析が煩雑になる。
【００１４】
本発明は、上記従来の問題点に鑑みてなされたものであって、その目的はユーザが複数の分析項目を選択して容易に分析を行うことができる分析チップを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記の課題を解決するために、本発明の一態様に係る分析チップは、第１のチップと、当該第１のチップに接続される２つ以上の第２のチップとを備えており、上記第１のチップは、検体が注入される検体注入部、および、上記第２のチップが接続される接続部を有しており、上記検体注入部は、検体を注入するための検体注入孔を有しており、上記第２のチップは、当該第２のチップが上記接続部に接続された場合に上記検体注入部へと注入された検体を第２のチップへ導入する導入路、および、上記検体に含まれている分析対象となる成分と反応する試薬を保持できるとともに上記導入路と連結している試薬保持部を有していることを特徴としている。
【発明の効果】
【００１６】
上記構成によれば、検体注入部を有する第１のチップに、試薬保持部を有する複数の第２のチップが接続される。そして、検体注入孔から検体注入部へ注入された検体は、分析チップを回転させることにより、遠心力によって導入路を介して第２のチップに到達する。そして、第２のチップにおいて、当該試薬保持部に保持されている試薬と検体に含まれている分析対象となる成分との反応を検出することによって分析を行うことができる。ここで、上記複数の第２のチップには、それぞれ異なる試薬を保持させることができる。よって、第１のチップと第２のチップが一体となった１つの分析チップによって複数の項目について同時に分析を行うことができる。
【００１７】
また、上記構成によれば、ユーザは、分析したい項目に応じた試薬を保持されている第２のチップを選択し、第１のチップに接続することができる。よって、ユーザは、第２のチップを選択することで、容易に分析項目を選択することができる。また、必要な項目についてのみ分析を行うことができ、不要な項目について分析が行われることがないので、検体を余分に注入する必要がない。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施形態１に係る分析チップを示す図であり、（ａ）は第１のチップおよび第２のチップの平面図であり、（ｂ）は第１のチップの側面図である。
【図２】本発明の実施形態１に係る分析チップを示す平面図である。
【図３】本発明の実施形態２に係る分析チップを示す図であり、（ａ）は第１のチップおよび第２のチップの平面図であり、（ｂ）は第１のチップの側面図である。
【図４】本発明の実施形態２に係る分析チップを示す平面図である。
【図５】本発明の実施形態３に係る分析チップにおける第１のチップを示す図であり、（ａ）は平面図であり、（ｂ）は側面図である。
【図６】本発明の実施形態３に係る分析チップにおける第２のチップを示す図であり、（ａ）は平面図であり、（ｂ）は側面図である。
【図７】本発明の実施形態３に係る分析チップを示す平面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施の形態について、図面を参照しながら詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されない。なお、同一の機能および作用を示す部材については同一の符号を付し、説明を省略する。また、図面中のｘ軸、ｙ軸、ｚ軸は、それぞれの図面における３次元空間における方向を規定している。本明細書では、範囲を示す「Ａ〜Ｂ」はＡ以上Ｂ以下であることを意味する。
【００２０】
なお、本明細書において「検体」とは、分析対象となる成分を含み得る試料を指す。検体の例としては、血液、尿、唾液等が挙げられるが、特に限定されない。また、本明細書において、分析対象となる成分を「分析対象成分」と称し、分析対象成分以外の成分を「非分析対象成分」と称する場合もある。換言すれば、「非分析対象成分」は、分析の対象とならない不要な成分である。
【００２１】
〔実施形態１〕
＜分析チップ３００＞
図１の（ａ）は、本発明の実施形態１に係る分析チップ３００の平面図である。分析チップ３００は、第１のチップ１００と、第１のチップ１００に接続される２つ以上の第２のチップ２００とを備えている。図１では、便宜上、１つの第２のチップ２００のみを示している。図１の（ｂ）は、第１のチップ１００の側面図である。つまり図１の（ｂ）は、図１の（ａ）の第１のチップ１００をｙ軸方向から見た図である。
【００２２】
＜第１のチップ１００＞
第１のチップ１００は、検体注入部１および接続部５を備えている。本実施形態において、第１のチップ１００は、さらに検体保持チャンバー４および分離部５を備えている。第１のチップ１００の形状および大きさは特に限定されない。例えば図１のｚ軸方向から見た第１のチップ１００の形状が円形であってもよく、三角形であってもよく、四角形であってもよい。例えば、第１のチップ１００がｚ軸方向から見て円形である場合、第１のチップ１００の直径は６０ｍｍ以上１２０ｍｍ以下であってもよい。また、第１のチップ１００の厚み（図１のｚ軸方向における長さ）は１ｍｍ以上５ｍｍ以下であってもよい。
【００２３】
（検体注入部１）
検体注入部１は検体が注入される空間である。検体注入部１は検体注入孔２を有しており、検体注入孔２から検体注入部１へ検体が注入される。
【００２４】
検体注入部１における検体注入孔２の位置は特に限定されず、例えば検体注入部１上面に形成されていてもよい。すなわち、例えば検体注入部１において、図１の（ａ）のｚ軸方向における紙面手前側に検体注入孔２が設けられていてもよい。また、第１のチップ１００において後述の回転機構装着部６が設けられている面とは反対側の面に検体注入孔２が設けられていてもよい。また、検体注入孔２は、例えば第１のチップ１００を回転させた場合の回転軸上に形成されていてもよい。上記構成によれば、検体注入孔２から注入された検体は、分析チップ３００を回転させることにより、回転軸から遠心力が働く方向へ送液される。例えば、図１に示すように第１のチップ１００が円盤状である場合（換言すれば、第１のチップ１００が図１のｚ軸方向から見て円形である場合）、回転軸は当該円の中心であることが好ましい。この場合、分析チップ３００を回転させると、検体注入孔２から注入された検体は、円の中心から外周方向へ送液される。
【００２５】
（接続部５）
接続部５には、後述する第２のチップ２００が接続される。接続部５を介して第２のチップ２００を第１のチップ１００に接続すれば、分析チップ３００を回転させることにより、遠心力によって第２のチップ２００へ検体を送液することができる。
【００２６】
接続部５の形状は特に限定されないが、第２のチップ２００が嵌合する形状であることが好ましい。上記構成によれば、第２のチップ２００がより確実に固定されるため、分析チップ３００の回転によって遠心力が働いた場合であっても、安定した送液を行うことができる。
【００２７】
接続部５は、検体注入孔２を中心として、検体注入部１の周囲に配置されることが好ましい。上記構成によれば、検体注入孔２を回転軸として分析チップ３００を回転させることにより、遠心力によって第２のチップ２００へ検体をより効率的に送液することができる。なお、検体注入部１の周囲に後述の検体保持チャンバー４が備えられている場合、検体保持チャンバー４の周囲に接続部５が設けられていることが好ましい。
【００２８】
接続部５は、第１のチップ１００において２つ以上形成されていればよい。上記構成によれば、第１のチップ１００に対して、２つ以上の第２のチップ２００を接続することができ、一度に複数の項目について分析を行うことができる。
【００２９】
（検体保持チャンバー４）
また、第１のチップ１００は、検体保持チャンバー４を備えていてもよい。検体保持チャンバー４は、検体注入部１へ注入された検体が貯蔵される空間である。
【００３０】
本実施形態において、検体保持チャンバー４は検体注入部１の周囲に備えられている。つまり、検体保持チャンバー４は、検体注入孔２を中心として、検体注入部１の外周を囲むように設けられている。本実施形態においては、検体保持チャンバー４において、第２のチップへと送液される途中の検体が保持される。
【００３１】
（分離部３）
検体保持チャンバー４には、分離部３が備えられていてもよい。分離部３は、検体注入部１から検体保持チャンバー４に到達した検体から、非分析対象成分を分離する。上記構成によれば、非分析対象成分が分離された検体と試薬とを混合することができ、分析対象成分と試薬とをより効率よく反応させることができるので、より精度よく分析を行うことができる。
【００３２】
分離部３は、例えば、濾過材であってもよい。濾過材は、例えば、濾紙、メンブレン、ガラス繊維、ガラス繊維濾紙、微多孔性材料または高分子材料によって形成されていてもよい。分離部３は例えば、血液から血球を分離する血球分離フィルタであってもよい。
【００３３】
（回転機構装着部６）
分析チップ３００は、検体注入部１の中心を回転軸として回転させることによって、検体を送液する。よって、分析チップ３００は回転機構装着部６を備えていることが好ましい。なお、検体注入部１の中心とは、例えば図１の（ａ）のｚ軸方向から見て検体注入部１が円である場合、当該円の中心を指す。また、回転機構装着部６も回転軸上にあることが好ましい。つまり、図１の（ｂ）に示されているように、回転機構装着部６は、検体注入部１の中心と同軸上にあることが好ましい。
【００３４】
回転機構装着部６の形状は特に限定されず、図１の（ｂ）に示されているように凹部として形成されていてもよく、凸部として形成されていてもよい。回転機構装着部６の形状は、回転機構の形状に応じて適宜決定されればよい。
【００３５】
回転機構の例としては、モータによって回転するターンテーブル等が挙げられる。回転機構の回転速度を変えることにより、分析チップ３００に働く遠心力の強さを変えることができる。
【００３６】
＜第２のチップ２００＞
第２のチップ２００は、導入路７および試薬保持部８を備えている。本実施形態において、第２のチップ２００は、さらに混合流路１２、検出部１３、定量部９および排出部１０を備えている。
【００３７】
第２のチップ２００の形状は、特に限定されず、例えば、三角形または四角形であってもよく、扇形であってもよい。また、第２のチップ２００の厚み（図１のｚ軸方向における長さ）は０．５ｍｍ以上２．５ｍｍ以下であってもよい。なお、当該第２のチップの厚みは後述の導入路等の深さにより適宜選択可能である。
【００３８】
なお、第１のチップ１００に接続される第２のチップ２００は同一の形状を有していてもよい。上記構成によれば、チップの製造コストを低減することができる。また、第２のチップ２００が同一の形状を有しており、且つ、第１のチップ１００が有する複数の接続部５が同一の形状を有している場合、第２のチップ２００をいずれの接続部５にも接続することができるので、容易に測定を行うことができる。
【００３９】
また、分析チップ３００を回転させる場合には、使用する第２のチップ２００の数および形状等に応じて、第２のチップ２００を接続する接続部５の場所を適宜選択することによって、容易に回転のバランスをとることができる。
【００４０】
なお、第２のチップ２００に備えられた後述の各部材（導入路７、混合流路１２、検出部１３、定量部９および排出部１０、ならびに各部材を連結する流路等）の内部（壁面）には、親水性を高める処理が施されていることが好ましい。上記構成によれば、より円滑に検体を送液することができる。親水性を高める処理の例としては、界面活性剤を含む材料の塗布、プラズマによる処理、ＵＶ照射による処理、光触媒材料の塗布による処理等を用いることができる。
【００４１】
また、上記各部材（導入路７、混合流路１２、検出部１３、定量部９および排出部１０、ならびに各部材を連結する流路等）の深さ（図１のｚ軸方向の長さ）は１０μｍ以上５００μｍ以下であることが好ましい。上記構成によれば、毛細管力によって効率よく検体を送液することができる。ただし、検出部１３および排出部１０は、第２のチップ２００の厚みおよび必要とされる光学的検出感度に応じて深さを変更されてもよい。
【００４２】
（導入路７）
第２のチップ２００は、第２のチップ２００が接続部５に接続された場合に、検体注入部１へと注入された検体を第２のチップ２００へ導入する導入路７を有している。
【００４３】
導入路７は、図１に示すように、先端が鋭利な形状をしていてもよい。上記構成によれば、第１のチップ１００において予め検体を導出する孔が設けられていない場合であっても、接続部５を介して第２のチップ２００を第１のチップ１００へと接続するとともに、導入路７を第１のチップ１００へと突き刺すことによって、第１のチップ１００と第２のチップ２００とを連通させることができる。上記構成によれば、第２のチップ２００を第１のチップ１００へと接続させた場合にのみ、検体が第２のチップ２００へと導出される。よって、使用しない導出孔へ検体が分配されることはない。鋭利な先端を有する導入路としては、例えば注射針を用いることができる。
【００４４】
本実施形態では、接続部５を介して第２のチップ２００を第１のチップ１００へと接続した場合、導入路７は検体保持チャンバー４と連結される。上記構成によれば、分析チップ３００を回転させた場合に、検体保持チャンバー４に保持された検体は、遠心力によって導入路７を介して第２のチップ２００へと送液される。
【００４５】
（試薬保持部８）
第２のチップ２００は、導入路７と連結されている試薬保持部８を有している。試薬保持部８は、検体に含まれている分析対象成分と反応する試薬を保持することができる空間である。
【００４６】
ここで、検体は導入路７を通過した後、試薬保持部８に到達する構成であってもよい。換言すれば、試薬保持部８は導入路７の下流に位置していてもよい。さらに換言すれば、第１のチップ１００と第２のチップ２００とを接続した場合に、分析チップ３００の回転軸から外周に向かって（遠心力が働く方向へ）、導入路７、試薬保持部８の順番に並んでいてもよい。上記構成によれば、導入路７を通過した検体は、続いて試薬保持部８を通過することにより、試薬と混合される。
【００４７】
また、図１に示すように、導入路７と試薬保持部８とはそれぞれ別の流路を備え、当該それぞれの流路が共通の混合流路１２へと連結されていてもよい。本明細書においては、上記のような状態についても、導入路７から混合流路１２への流路と試薬保持部８から混合流路への流路とは連結されているため、「導入路７と試薬保持部８とが連結されている」状態であるとする。上記構成によれば、導入路７を通過した検体と試薬保持部８から流出した試薬とが混合流路１２において混合される。
【００４８】
なお、図１においては１つの第２のチップ２００につき１つの試薬保持部８が備えられているが、第２のチップ２００は複数の試薬保持部８を備えていてもよい。上記構成によれば、複数の試薬保持部８のそれぞれに異なる試薬を保持させることによって、検体と複数の種類の試薬との混合を多段階で行うことができる。この場合、複数の試薬保持部８は、混合流路１２の途中に設けられていてもよい。
【００４９】
上記試薬は液体であってもよく、固体であってもよい。試薬は、試薬保持部８に充填されていてもよいし、試薬保持部８の内壁に塗布されていてもよい。
【００５０】
試薬が液体である場合は、図１に示すように、導入路７と試薬保持部８とがそれぞれ別の流路を備え、当該それぞれの流路が共通の混合流路１２へと連結されている構成であることが好ましい。上記構成によれば、分析チップを回転させた場合に遠心力によって検体と試薬とが混合流路１２へと到達し、混合される。
【００５１】
また、試薬が液体である場合、試薬保持部８の出口（混合流路１２へと連結される側）には、バルブが備えられていることが好ましい。例えば、試薬保持部８の出口の内壁に疎水性を高める処理を施してバルブとしてもよいし、試薬保持部８の出口の断面積（検体が流れる方向に垂直な断面の面積）を小さくすることによってバルブとしてもよい。疎水性を高める処理としては、疎水性樹脂材料の塗布、フッ素系の疎水剤の塗布、フッ素系ガスによる表面処理等を用いることができる。上記構成によれば、遠心力が働いていない場合には試薬を試薬保持部８に留めることができ、一定以上の力をかける（例えば、一定以上の回転数の回転をかける）ことによって、試薬を試薬保持部８から混合流路１２へと送液することができる。
【００５２】
試薬が固体である場合、上述のように、検体が導入路７を通過後、試薬保持部８に到達する構成であることが好ましい。上記構成によれば、検体が試薬保持部８を通過することによって試薬と混合される。
【００５３】
試薬の種類は特に限定されず、分析項目に応じて適宜決定されればよい。例えば、グルコースを分析する場合、試薬としてはグルコースオキシダーゼ（glucose oxidase）、４−アミノアンチピリン（4-aminoantipyrine：略称4-AA）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリンナトリウム塩２水和物（N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl-3-methylaniline, sodium salt, dihydrate：略称TOOS)）、ペルオキシダーゼ（peroxidase）等が挙げられる。また、尿酸を分析する場合、試薬としてはウリカーゼ（uricase）、４−アミノアンチピリン（4-aminoantipyrine：略称4-AA）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリンナトリウム塩２水和物（N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl-3-methylaniline, sodium salt, dihydrate：略称TOOS)）、ペルオキシダーゼ（peroxidase）等が挙げられる。
【００５４】
ユーザは、分析項目に応じた試薬が予め充填されている第２のチップを選択して、第１のチップへと接続することができる。または、チップ使用時に分析項目に応じた試薬を充填した第２のチップを選択して、第１のチップへと接続することができる。つまり、本発明に係る分析チップを用いれば、ユーザは分析項目をカスタマイズすることができる。さらに、本発明に係る分析チップによれば、不要な項目について分析が行われることがない。つまり、必要十分な分析を行うことができる。
【００５５】
（混合流路１２）
導入路７と試薬保持部８とは、共通の混合流路１２へと連結されていてもよい。上記構成によれば、導入路７を通過した検体と試薬保持部８から流出した試薬とを混合流路１２において混合することができる。本明細書において「導入路と試薬保持部とが混合流路に連結されている」とは、上述のように、導入路と混合流路とが試薬保持部を介して連結されている状態、および、導入路と試薬保持部とがそれぞれ別の流路を備え、当該それぞれの流路が共通の混合流路へと連結されている状態を包含する。
【００５６】
混合流路１２の形状は特に限定されず、直線状であってもよく、曲線状であってもよく、折れ線状であってもよい。中でも混合流路１２は、折れ線状であることが好ましい。上記構成によれば、分析チップを回転させる場合に検体と試薬との混合のための特殊な回転制御を行わなくても、効率的、且つ、均一に検体と試薬とを混合することができる。よって、短時間で精度の高い検査を行うことが可能となる。
【００５７】
上記混合流路の方向と、上記混合流路がなす折れ線の頂点における接線とがなす角度は０°以上３０°以下であってもよい。換言すれば、図１のαで示される角度が０°以上３０°であってもよい。さらに、換言すれば、折れ曲がった流路がなしている角のうち、小さいほうの角度が０°以上３０°以下であってもよい。また、別の例では、折れ線の頂点および分析チップの回転中心を通る直線に対する垂線であって折れ線の頂点における垂線と、折れ線とがなす角度が０°以上３０°以下であってもよい。
【００５８】
上記構成によれば、分析チップを回転させた場合に、より効率的、且つ、均一に検体と試薬とを混合することができる。よって、短時間で、より精度の高い分析を行うことが可能となる。
【００５９】
また、混合流路１２には、上述の親水性を高める処理が施されていることが好ましい。上記構成によれば、より円滑に検体と試薬とを混合することができる。
【００６０】
（検出部１３）
混合流路１２は、導入路７および試薬保持部８と連結されている一端とは反対側の端部において、分離部３を通過した検体に含まれる分析対象成分を検出する検出部１３に連結されていてもよい。上記構成によれば、混合流路１２を介して試薬と混合された検体を検出部へと送液することができ、検出部１３において試薬と分析対象成分との反応を検出することができる。
【００６１】
検出部１３の構成は、特に限定されず、上記分析対象成分と上記試薬との組み合わせによって適宜決定されればよい。例えば、検出部１３は、試薬と混合された検体が蓄積される空間であってもよく、当該空間に試薬と混合された検体が吸収される多孔体やメンブレン等が配置されていてもよい。ユーザは、検出部１３に到達した試薬と分析対象成分との反応による呈色、発光、電気化学的変化等を目視または検出装置によって検出することによって、上記分析対象成分の濃度の測定等の分析を行うことができる。例えば、分析対象成分がグルコースであって、試薬がグルコースオキシダーゼ（glucose oxidase）、４−アミノアンチピリン（4-aminoantipyrine：略称4-AA）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリンナトリウム塩２水和物（N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl-3-methylaniline, sodium salt, dihydrate：略称TOOS)）、ペルオキシダーゼ（peroxidase）である場合、４−ＡＡとＴＯＯＳとの酸化縮合反応によって生じる生成物の555nmでの吸光度を検出することによって、分析を行うことができる。
【００６２】
第２のチップ２００において、導入路７および試薬保持部８、混合流路１２、ならびに検出部１３は、第２のチップ２００を第１のチップ１００に接続した場合に、分析チップ３００の回転軸から外周へ向かって（換言すれば、遠心力が働く方向へ）、上記順番で並んでいることが好ましい。上記構成によれば、分析チップ３００を回転させた場合に、遠心力によって検体および試薬を検出部１３へと円滑に導くことができる。
【００６３】
なお、検出部１３には、大気開放された空気孔１１が連結されていてもよい。上記構成によれば、遠心力に加えて毛細管力によって、検体および試薬を混合流路１２から検出部１３へと送液することができる。
【００６４】
（定量部９）
導入路７には、検出に必要な検体を定量する定量部９が備えられていてもよい。定量部９は、例えば、所定の容量に規定された空間である。上記構成によれば、分析チップ３００を回転させた場合に、導入路７を通過して混合流路１２へと送液される検体を一定の量とすることができる。つまり、必要な量の検体のみを検出部１３へと送液することができる。
【００６５】
また、上記構成によれば、それぞれの第２のチップ２００において、異なる容量の定量部９を備えることができる。従って、それぞれの第２のチップ２００において、分析項目に応じて異なる量の検体を定量し、分析することもできる。
【００６６】
なお、第２のチップ２００は複数の定量部９を備えていてもよい。上記構成によれば、検体の定量を多段階で行うことができる。また、検体の定量および希釈を繰り返すことによって、分析項目に応じて検体中の分析対象成分の濃度を低減させることができる。この場合、複数の定量部９は、混合流路１２の途中に設けられていてもよい。また、複数の定量部９のそれぞれに、後述の排出部１０が連結されていてもよい。
【００６７】
定量部９の出口（混合流路１２と連結されている側）にはバルブが備えられていることが好ましい。バルブの例としては、上述の試薬保持部におけるバルブと同様のバルブを使用することができる。上記構成によれば、一定以上の力をかける（例えば、一定以上の回転数の回転をかける）ことによって、検体を定量部９から混合流路１２へと送液することができる。
【００６８】
（排出部１０）
定量部９には、余分な量の検体を蓄積する空間である排出部１０が連結されていてもよい。上記構成によれば、排出部１０には、所定の容量に規定されている定量部９から溢れた検体（つまり、余分な量の検体）が排出される。よって、分析チップを回転させた場合に、遠心力によって、定量部９から混合流路１２へと一定量の検体が送液されるとともに、余分な量の検体を排出部１０に蓄積することができる。
【００６９】
なお、定量部９と排出部１０とは流路によって接続されていてもよく、当該流路には、上述の親水性を高める処理が施されていてもよい。上記構成によれば、より円滑に余分な量の検体を定量部９から排出することができる。
【００７０】
排出部１０には、大気開放された空気孔が連結されていてもよい。上記構成によれば、遠心力に加えて毛細管力によって、余分な量の検体を効率的に排出部１０へと送液することができる。
【００７１】
なお、図１では、検出部１３と排出部１０とは共通の空気孔１１に連結されているが、検出部１３および排出部１０はそれぞれ異なる空気孔に連結されていてもよい。
【００７２】
＜分析チップ３００による分析方法＞
図２は、本発明の実施形態１に係る分析チップ３００を示す図である。図２を参照して、以下に分析チップ３００を用いた分析方法を説明する。ここで、第２のチップ２００ａはこれから第１のチップ１００へと接続される第２のチップを表しており、第２のチップ２００ｂは、既に第１のチップ１００へと接続されている第２のチップを表している。
【００７３】
分析を行う場合、まず、第２のチップ２００ａを、第２のチップ２００ｂに示すように第１のチップ１００へと接続する。本実施形態では、検体保持チャンバー４に設けられた接続部（図示せず）に、第２のチップを接続する。これにより、第２のチップの導入路７が検体保持チャンバー４と接続される。ここで、図２に示すように、導入路７の先端が鋭利な形状となっていれば、検体保持チャンバー４に導入路７を突き刺すことによって、第１のチップ１００と第２のチップ２００とを連通させることができる。なお、図２では、第２のチップが６つ接続される構成となっているが、第１のチップ１００に接続される第２のチップの数は特に限定されるものではない。また、回転機構装着部６には、回転機構（図示せず）を装着させる。
【００７４】
そして、検体注入孔２から検体注入部１へ検体を注入する。その後、回転機構によって分析チップ３００を回転させる。分析チップ３００を回転させることで、検体は遠心力によって検体保持チャンバー４へと移動する。検体が検体保持チャンバー４に備えられた分離部３を通過することによって、非分析対象成分が検体から分離される。非分析対象成分が分離された検体は、接続部５に接続された導入路７を介して第２のチップへと送液される。
【００７５】
導入路７に定量部９が備えられている場合は、定量部９において、検出に必要な検体が定量される。そして、検出に必要な量の検体は混合流路１２へ、余分な量の検体は排出部１０へと送液される。また、試薬保持部８からは試薬が混合流路１２へと導入される。検体と試薬とは混合流路１２中で混合される。混合された検体と試薬とは検出部１３へと到達する。検出部１３において、分析対象成分と試薬との反応を検出することによって分析を行うことができる。
【００７６】
分析チップ３００を用いた分析方法によれば、ユーザが必要な試薬が充填された第２のチップを選択し、第１のチップへと接続することができるので、不要な項目について分析が行われることがない。また、検体注入部１に検体を注入することにより、複数の第２のチップへと検体を一度に送液することができる。つまり、複数の項目について分析する場合も、第１のチップへと複数回検体を注入する必要はない。よって、ユーザは容易に必要な項目について分析を行うことができる。
【００７７】
また、分析チップ３００によれば、１回の検体の注入によって必要十分な分析が可能になる。そのため、必要以上の検体を採取する操作が不要となり、ユーザに加えて、被験者（例えば患者）の手間や負担も軽減される。
【００７８】
〔実施形態２〕
本発明の他の実施形態について、図３〜図４に基づいて説明すれば、以下のとおりである。
【００７９】
図３の（ａ）は、本発明の実施形態２に係る分析チップ３００の平面図である。分析チップ３００は、第１のチップ１００と、第１のチップ１００に接続される２つ以上の第２のチップ２００とを備えている。図３では、便宜上、１つの第２のチップ２００のみを示している。図３の（ｂ）は、第１のチップ１００の側面図である。つまり図３の（ｂ）は、図３の（ａ）の第１のチップ１００をｙ軸方向から見た図である。なお、以下の説明において、実施形態１と共通する項目については、実施形態１における説明を適宜援用することができる。
【００８０】
＜分析チップ３００＞
実施形態１に係る分析チップでは、検体保持チャンバー４および分離部３は第１のチップに設けられていた。これに対し、本実施形態に係る分析チップでは、検体保持チャンバー４および分離部３は第２のチップに設けられている。また、実施形態１に係る分析チップでは、検体保持チャンバー４に接続部５が設けられていたが、本実施形態に係る分析チップでは、検体注入部１に接続部５が設けられている。本実施形態では、これらの点が実施形態１と異なる。
【００８１】
具体的には、本実施形態では、第２のチップ２００において、導入路７には、検体を保持する検体保持チャンバー４が備えられており、検体保持チャンバー４には、上記検体に含まれている非分析対象成分を分離する分離部３が備えられている。上記構成によれば、非分析対象成分の分離、検体と試薬との混合、および分析対象成分の検出を第２のチップにおいて容易に行うことができる。また、上記構成によれば、それぞれの第２のチップにおいて、異なる構成の分離部を備えることができる。従って、それぞれの第２のチップにおいて、分析項目に応じて異なる成分を分離し、分析を行うこともできる。
【００８２】
＜分析チップ３００による分析方法＞
図４は、本発明の実施形態２に係る分析チップ３００を示す図である。図４を参照して、以下に分析チップ３００を用いた分析方法を説明する。ここで、第２のチップ２００ａはこれから第１のチップ１００へと接続される第２のチップを表しており、第２のチップ２００ｂは、既に第１のチップ１００へと接続されている第２のチップを表している。
【００８３】
分析を行う場合、まず、第２のチップ２００ａを、第２のチップ２００ｂに示すように第１のチップ１００へと接続する。本実施形態においては、検体注入部１に設けられた接続部（図示せず）に、第２のチップを接続する。これにより、第２のチップの導入路７が検体注入部１と接続される。
【００８４】
検体を検体注入部１へと注入し、分析チップ３００を回転させると、検体は導入路７を介して第２のチップへと送液される。第２のチップにおいて、検体保持チャンバー４に備えられた分離部３によって、検体に含まれている非分析対象成分が分離される。ここで、定量部９および排出部１０が備えられている場合、必要な量の検体が混合流路１２へと到達し、余分な量の検体は排出部１０へと送液される。非分析対象成分が分離された検体は混合流路１２中で試薬保持部８に保持されていた試薬と混合され、検出部１３へ到達する。検出部１３において、分析対象成分と試薬との反応を検出することによって分析を行うことができる。
【００８５】
〔実施形態３〕
本発明の他の実施形態について、図５〜図７に基づいて説明すれば、以下のとおりである。
【００８６】
図５の（ａ）は、本発明の実施形態３に係る第１のチップ１００の平面図である。図５の（ｂ）は、第１のチップ１００の側面図である。つまり図５の（ｂ）は、図５の（ａ）の第１のチップ１００をｙ軸方向から見た図である。また、図６の（ａ）は、本発明の実施形態３に係る第２のチップ２００の平面図である。図６の（ｂ）は、第２のチップ２００の側面図である。つまり図６の（ｂ）は、図６の（ａ）の第２のチップ２００をｙ軸方向から見た図である。本実施形態においても、分析チップ３００は、第１のチップ１００と、第１のチップ１００に接続される２つ以上の第２のチップ２００とを備えている。なお、以下の説明において、実施形態１と共通する項目については、実施形態１における説明を適宜援用することができる。
【００８７】
＜分析チップ３００＞
実施形態１に係る分析チップでは、混合流路および検出部は第２のチップに設けられていた。また、実施形態１においては、第２のチップが定量部、排出部および空気孔を備えていてもよかった。これに対し、本実施形態に係る分析チップでは、混合流路および検出部は第１のチップに設けられている。また、必要に応じて、定量部、排出部および空気孔も第１のチップに設けられる。さらに、実施形態１に係る分析チップでは、検体保持チャンバー４に接続部５が設けられていたが、本実施形態に係る分析チップでは、第１のチップ１００の外周部分に接続部５が設けられている。本実施形態では、これらの点が実施形態１と異なる。
【００８８】
具体的には、本実施形態では、第１のチップ１００は、第２のチップ２００が接続された場合に試薬保持部８と連結される混合流路１２と、混合流路１２に連結されており、分離部３を通過した検体に含まれている分析対象成分を検出する検出部１３とを有している。上記構成によれば、検体からの非分析対象成分の分離、検体と試薬との混合、および分析対象成分の検出を第１のチップにおいて容易に行うことができる。
【００８９】
また、本実施形態では、第２のチップ２００は、試薬保持部８と導入路１４ａとを有しており、さらに試薬保持部８を通過した検体および試薬を混合流路１２へと送液する導出路１４ｂを有している。上記構成によれば、ユーザは第２のチップを選択することによって、分析項目に応じて試薬のみを容易に選択することができる。なお、導入路１４ａは実施形態１および２における導入路７に対応する部材である。
【００９０】
さらに、本実施形態では、第１のチップ１００において、検体保持チャンバー４が定量部９に連結されており、定量部９が排出部１０に連結されていてもよい。上記構成によれば、非分析対象成分の分離、検体と試薬との混合、および分析対象成分の検出に加えて、検体の定量も第１のチップにおいて容易に行うことができる。
【００９１】
なお、第１のチップ１００が複数の定量部９を備えていてもよい。上記構成によれば実施形態１において第２のチップ２００が複数の定量部９を備えている場合と同様に、検体の定量および希釈を多段階で行うことができる。
【００９２】
＜分析チップ３００による分析方法＞
図７は、本発明の実施形態３に係る分析チップ３００を示す図である。図７を参照して、以下に分析チップ３００を用いた分析方法を説明する。ここで、第２のチップ２００ａはこれから第１のチップ１００へと接続される第２のチップを表しており、第２のチップ２００ｂは、既に第１のチップ１００へと接続されている第２のチップを表している。
【００９３】
分析を行う場合、まず、第２のチップ２００ａを、第２のチップ２００ｂに示すように第１のチップ１００へと接続する。本実施形態では、第１のチップ１００の外周部分に設けられた接続部（図示せず）から、第２のチップを接続する。これにより、第２のチップの導入路１４ａが定量部９と接続され、導出路１４ｂが混合流路１２と接続される。ここで、第１のチップ１００が定量部９を備えていない構成である場合、導入路１４ａは、検体保持チャンバー４と接続されてもよい。
【００９４】
検体を検体注入部１へと注入し、分析チップ３００を回転させると、検体保持チャンバー４に備えられた分離部３によって、検体に含まれている非分析対象成分が分離される。ここで、定量部９および排出部１０が備えられている場合、必要な量の検体が第２のチップへと到達し、余分な量の検体は排出部１０へと送液される。その後、検体は、導入路１４ａを通過して、試薬保持部８にて試薬と混合され、導出路１４ｂから混合流路１２へと送液される。混合流路１２中で検体と試薬保持部８に保持されていた試薬とが混合され、検出部１３へ到達する。検出部１３において、分析対象成分と試薬との反応を検出することによって分析を行うことができる。
【００９５】
〔まとめ〕
本発明の態様１に係る分析チップは、第１のチップと、当該第１のチップに接続される２つ以上の第２のチップとを備えており、上記第１のチップは、検体が注入される検体注入部、および、上記第２のチップが接続される接続部を有しており、上記検体注入部は、検体を注入するための検体注入孔を有しており、上記第２のチップは、当該第２のチップが上記接続部に接続された場合に上記検体注入部へと注入された検体を第２のチップへ導入する導入路、および、上記検体に含まれている分析対象となる成分と反応する試薬を保持できるとともに上記導入路と連結されている試薬保持部を有している。
【００９６】
上記構成によれば、検体注入孔を有する第１のチップに、試薬保持部を有する複数の第２のチップが接続される。そして、検体注入孔から検体注入部へ注入された検体は、分析チップを回転させることにより、遠心力によって導入路を介して第２のチップに到達する。そして、第２のチップにおいて、当該試薬保持部に保持されている試薬と分析対象成分との反応を検出することによって分析を行うことができる。ここで、上記複数の第２のチップには、それぞれ異なる試薬を保持させることができる。よって、第１のチップと第２のチップが一体となった１つの分析チップによって複数の項目について同時に分析を行うことができる。
【００９７】
また、上記構成によれば、ユーザは、分析したい項目に応じた試薬が保持されている第２のチップを選択し、第１のチップに接続することができる。よって、ユーザは、第２のチップを選択することで、容易に分析項目を選択することができる。また、必要な項目についてのみ分析を行うことができ、不要な項目について分析が行われることがないので、検体を余分に注入する必要がない。
【００９８】
本発明の態様２に係る分析チップでは、上記態様１において、上記検体注入部の周囲には、上記検体を保持する検体保持チャンバーが備えられており、上記検体保持チャンバーには上記検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分を分離する分離部が備えられており、上記第２のチップは、上記導入路および上記試薬保持部と連結されている混合流路と、当該混合流路に連結されており、上記分離部を通過した検体に含まれている分析対象となる成分を検出する検出部とを有していてもよい。
【００９９】
上記構成によれば、第１のチップにおいて、検体保持チャンバーに備えられた分離部によって検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分が分離される。分析対象となる成分以外の成分が分離された検体は第２のチップにおいて混合流路中で試薬保持部に保持された試薬と混合され、検出部へ到達する。よって、分析対象となる成分以外の成分の分離、検体と試薬との混合、および分析対象となる成分の検出を容易に行うことができる。
【０１００】
本発明の態様３に係る分析チップでは、上記態様２において、上記導入路には、分析に必要な検体を定量する定量部が備えられており、上記定量部は余分な量の検体を蓄積する排出部に連結されていてもよい。
【０１０１】
上記構成によれば、検出部において、一定の量の検体について分析を行うことができる。また、上記構成によれば、それぞれの第２のチップにおいて、異なる容量の定量部を備えることができる。従って、それぞれの第２のチップにおいて、分析項目に応じて異なる量の検体を定量し、分析することもできる。
【０１０２】
本発明の態様４に係る分析チップでは、上記態様１において、上記導入路には、検体を保持する検体保持チャンバーが備えられており、上記検体保持チャンバーには、上記検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分を分離する分離部が備えられており、上記第２のチップは、上記導入路および上記試薬保持部と連結されている混合流路と、当該混合流路に連結されており、上記分離部を通過した検体に含まれている分析対象となる成分を検出する検出部とを有していてもよい。
【０１０３】
上記構成によれば、検体が第１のチップに注入されると、第２のチップにおいて、検体保持チャンバーに備えられた分離部によって、検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分が分離される。分析対象となる成分以外の成分が分離された検体は混合流路中で試薬保持部に保持された試薬と混合され、検出部へ到達する。よって、分析対象となる成分以外の成分の分離、検体と試薬との混合、および分析対象となる成分の検出を第２のチップにおいて容易に行うことができる。
【０１０４】
また、上記構成によれば、それぞれの第２のチップにおいて、異なる構成の分離部を備えることができる。従って、それぞれの第２のチップにおいて、分析項目に応じて異なる成分を分離することもできる。
【０１０５】
本発明の態様５に係る分析チップでは、上記態様４において、上記検体保持チャンバーは、分析に必要な検体を定量する定量部に連結されており、上記定量部は余分な量の検体を蓄積する排出部に連結されていてもよい。
【０１０６】
上記構成によれば、検出部において、一定の量の検体について分析を行うことができる。
【０１０７】
本発明の態様６に係る分析チップでは、上記態様１において、上記検体注入部の周囲には、上記検体を保持する検体保持チャンバーが備えられており、上記検体保持チャンバーには上記検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分を分離する分離部が備えられており、上記第１のチップは、上記第２のチップが接続された場合に上記試薬保持部と連結される混合流路と、上記混合流路に連結されており、上記分離部を通過した検体に含まれている分析対象となる成分を検出する検出部とを有していてもよい。
【０１０８】
上記構成によれば、第１のチップにおいて、検体保持チャンバーに備えられた分離部によって検体に含まれている分析対象となる成分以外の成分が分離される。試薬保持部を有する第２のチップを第１のチップに接続すると、分析対象となる成分以外の成分が分離された検体は混合流路中で試薬保持部に保持された試薬と混合され、検出部へ到達する。よって、分析対象となる成分以外の成分の分離、検体と試薬との混合、および分析対象となる成分の検出を第２のチップにおいて容易に行うことができる。
【０１０９】
本発明の態様７に係る分析チップでは、上記態様６において、上記検体保持チャンバーは、分析に必要な検体を定量する定量部に連結されており、上記定量部は余分な量の検体を蓄積する排出部に連結されていてもよい。
【０１１０】
上記構成によれば、検出部において、一定の量の検体について分析を行うことができる。
【０１１１】
本発明の態様８に係る分析チップでは、上記態様２から７において、上記混合流路は折れ線状の形状を有していてもよい。
【０１１２】
上記構成によれば、分析チップを回転させる場合に検体と試薬との混合のための特殊な回転制御を行う必要がなく、効率的、且つ、均一に検体と試薬とを混合することができる。よって、短時間で精度の高い検査を行うことが可能となる。
【０１１３】
本発明の態様９に係る分析チップでは、上記態様８において、上記混合流路の方向と、上記混合流路がなす折れ線の頂点における接線とがなす角度が０°以上３０°以下であってもよい。
【０１１４】
上記構成によれば、分析チップを回転させた場合に、より効率的、且つ、均一に検体と試薬とを混合することができる。よって、短時間で精度の高い分析を行うことが可能となる。
【０１１５】
本発明の態様１０に係る分析チップでは、上記態様２から９において、上記検出部は、大気開放された空気孔に連結されていてもよい。
【０１１６】
上記構成によれば、遠心力に加え、毛細管力によって、検体と試薬とを混合流路中で効率よく進めることができる。
【０１１７】
本発明の態様１１に係る分析チップでは、上記態様３、５または７において、上記排出部は、大気開放された空気孔に連結されていてもよい。
【０１１８】
上記構成によれば、遠心力に加え、毛細管力によって、不要な検体を効率よく排出部に導くことができる。
【０１１９】
本発明の態様１２に係る分析チップでは、上記態様１〜１１において、上記２つ以上の第２のチップは同一の形状を有していてもよい。
【０１２０】
上記構成によれば、チップの製造コストを低減することができる。また、第２のチップをいずれの接続部にも接続することができるので、容易に測定を行うことができる。
【０１２１】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。さらに、各実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を組み合わせることにより、新しい技術的特徴を形成することができる。
【産業上の利用可能性】
【０１２２】
本発明は、例えば医療や生化学等の分野において、検体に含まれている成分を分析するための分析チップに利用することができる。
【符号の説明】
【０１２３】
１  検体注入部
２  検体注入孔
３  分離部
４  検体保持チャンバー
５  接続部
６  回転機構装着部
７  導入路
８  試薬保持部
９  定量部
１０  排出部
１１  空気孔
１２  混合流路
１３  検出部
１４ａ  導入路
１４ｂ  導出路
１００  第１のチップ
２００  第２のチップ
３００  分析チップ
【図１】
2014232023.tif 000003
【図２】
2014232023.tif 000004
【図３】
2014232023.tif 000005
【図４】
2014232023.tif 000006
【図５】
2014232023.tif 000007
【図６】
2014232023.tif 000008
【図７】
2014232023.tif 000009