(57)【要約】      （修正有）【課題】血小板を、血液中の他の成分から高い精度で分離できる細胞分離方法を提供する。【解決手段】細胞分離容器４を用いて血小板を含む細胞懸濁液１０から血小板と他の成分を分離する方法であって、前記細胞分離容器４内に前記細胞懸濁液１０を平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで送り込み、前記細胞分離容器４内で細胞懸濁液１０に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記細胞懸濁液１０のうち血小板以外の成分は細胞分離容器４内で捕捉し、前記血小板は細胞分離容器４を通過させることで、前記細胞懸濁液１０から前記血小板と前記他の成分を分離する方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞分離容器を用いて血小板を含む細胞懸濁液から血小板と他の成分を分離する方法であって、
前記細胞分離容器内に前記細胞懸濁液を平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで送り込み、前記細胞懸濁液に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記細胞懸濁液のうち血小板以外の成分は前記細胞分離容器内で捕捉し、前記血小板は前記細胞分離容器を通過させて前記血小板と前記他の成分を分離する方法。
【請求項２】
細胞分離容器を用いて血小板を含む細胞懸濁液から血小板と他の成分を分離する方法であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第１基板の上に複数の棒状電極が間隔をあけて配列される櫛歯状の第１電極と、
前記第１電極と噛み合うように複数の棒状電極が間隔をあけて前記第１基板の上に配置される櫛歯状の第２電極と、
前記第１基板と前記第２基板の間に配置され前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に交流電圧を印加する電源部と、を備え、
前記流入口から前記細胞分離容器内に前記細胞懸濁液を平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで送り込み、前記電源部から前記第１電極と前記第２電極の間に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記細胞懸濁液のうち血小板以外の成分は前記第１電極と前記第２電極とで捕捉し、前記血小板は前記第１電極と前記第２電極を通過させて、前記細胞懸濁液から前記血小板と前記他の成分を分離する方法。
【請求項３】
細胞分離容器を用いて血小板を含む細胞懸濁液から血小板と他の成分を分離する方法であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板の上に間隔をあけて複数の棒状電極が配列される第１電極と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第２基板の前記第１基板側に配置され平板状の第２電極と、
前記第１電極と前記第２電極の間に配置され前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に交流電圧を印加する電源部と、を備え、
前記流入口から前記細胞分離容器内に平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで前記細胞懸濁液を搬入し、かつ、前記電源部から第１電極と第２電極の間に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記赤血球と前記白血球を前記第１電極と前記第２電極で捕捉し、前記血小板のみ前記第１電極と前記第２電極を通過させることで、前記細胞懸濁液から前記血小板と前記他の成分を分離する方法。
【請求項４】
前記第１電極と前記第２電極の前記流路側に絶縁層が積層される請求項２〜３の分離方法。
【請求項５】
前記第１電極と前記第２電極が透明導電膜である請求項２〜４の分離方法。
【請求項６】
血小板を含む細胞懸濁液を血小板とそれ以外の成分に分離する細胞分離容器と、
前記細胞分離容器に平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで前記細胞懸濁液を輸送するポンプと、
を備える細胞分離装置であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第１基板の上に複数の棒状電極が間隔をあけて配列される櫛歯状の第１電極と、
前記第１電極と噛み合うように複数の棒状電極が間隔をあけて前記第１基板の上に配置される櫛歯状の第２電極と、
前記第１基板と前記第２基板の間に配置され、前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加する電源部とを備える細胞分離装置。
【請求項７】
血小板を含む細胞懸濁液を血小板とそれ以外の成分に分離する細胞分離容器と、
前記細胞分離容器に平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで前記細胞懸濁液を輸送するポンプと、
を備える細胞分離装置であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板の上に間隔をあけて複数の棒状電極が配列される第１電極と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第２基板の前記第１基板側に配置され平板状の第２電極と、
前記第１基板と前記第２基板の間に配置され、前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加する電源部とを備える細胞分離装置。
【請求項８】
前記細胞懸濁液を一定の温度に保する温度制御手段を備える請求項７〜８の細胞分離装置。
【請求項９】
前記第１電極と前記第２電極が透明導電膜である請求項６〜８の細胞分離装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は誘電泳動を用いた細胞分離方法に関し、特に血小板を分離する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の高齢化社会の進展による寝たきり高齢者の増加および糖尿病などの生活習慣病患者の増加に伴って、難治性皮膚潰瘍の疾患が増加傾向にある。この疾患は、日常的動作を妨げ、生活の質を低下させるとして社会的な問題となっており、その効果的な治療が求められている。
【０００３】
そこで現在、血液中において多量の細胞成長因子を含むとされる血小板を分離濃縮し、多血小板血漿（ＰＲＰ：Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｒｉｃｈ  Ｐｌａｓｍａ）として調製して、創傷部へ注入することで皮膚組織の再生を図るというＰＲＰ療法への注目が高まっている。この治療方法は、患者自身の血液を使用するため拒絶反応がない、調製が容易であるといった長所が挙げられる。なお、ＰＲＰの一般的な調製は、遠心分離機を用いて血液を分離して行う（例えば特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平０５−１９２６０７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、上記手法ではＰＲＰ中に、血液中の赤血球、白血球などが混在してしまう。そのため、上記手法で調製されたＰＲＰを用いて治療を行うと、副作用が発現する可能性がある。よって、ＰＲＰ調製において血小板と、赤血球や白血球などの血液中の他の成分とを高い精度で分離する方法の開発は急務の課題となっている。
【０００６】
そこで本発明は、血液中に含まれる血小板と他の成分とを高い精度で分離する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の課題を解決するため本発明の細胞分離方法は、
細胞分離容器を用いて血小板を含む細胞懸濁液から血小板と他の成分を分離する方法であって、
前記細胞分離容器内に前記細胞懸濁液を平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで送り込み、前記細胞懸濁液に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記細胞懸濁液のうち血小板以外の成分は前記細胞分離容器内で捕捉し、前記血小板は前記細胞分離容器を通過させて前記血小板と前記他の成分を分離する方法を提供する。
【０００８】
本発明の第２態様によれば、
細胞分離容器を用いて血小板を含む細胞懸濁液から血小板と他の成分を分離する方法であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第１基板の上に複数の棒状電極が間隔をあけて配列される櫛歯状の第１電極と、
前記第１電極と噛み合うように複数の棒状電極が間隔をあけて前記第１基板の上に配置される櫛歯状の第２電極と、
前記第１基板と前記第２基板の間に配置され前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に交流電圧を印加する電源部と、を備え、
前記流入口から前記細胞分離容器内に前記細胞懸濁液を平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで送り込み、かつ、前記電源部から前記第１電極と前記第２電極の間に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記細胞懸濁液のうち血小板以外の成分を前記第１電極と前記第２電極とで捕捉し、前記血小板のみ前記第１電極と前記第２電極を通過させて、前記細胞懸濁液から前記血小板と前記他の成分を分離する方法を提供する。
【０００９】
本発明の第３態様によれば、
細胞分離容器を用いて血小板を含む細胞懸濁液から血小板と他の成分を分離する方法であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板の上に間隔をあけて複数の棒状電極が配列される第１電極と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第２基板の前記第１基板側に配置され平板状の第２電極と、
前記第１電極と前記第２電極の間に配置され前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に交流電圧を印加する電源部と、を備え、
前記流入口から前記細胞分離容器内に平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで前記細胞懸濁液を搬入し、かつ、前記電源部から第１電極と第２電極の間に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加することで、前記赤血球と前記白血球を前記第１電極と前記第２電極で捕捉し、前記血小板のみ前記第１電極と前記第２電極を通過させて、前記細胞懸濁液から前記血小板と前記他の成分を分離する方法を提供する。
【００１０】
本発明の第４態様によれば、
前記第１電極と前記第２電極の前記流路側に絶縁層が積層された血小板と他の成分を分離する方法を提供する。
【００１１】
本発明の第５態様によれば、
前記第１電極と前記第２電極が透明導電膜である血小板と他の成分を分離する方法を提供する。
【００１２】
本発明の第６態様によれば、
血小板を含む細胞懸濁液を血小板とそれ以外の成分に分離する細胞分離容器と、
前記細胞分離容器に平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで前記細胞懸濁液を輸送するポンプと、
を備える細胞分離装置であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第１基板の上に複数の棒状電極が間隔をあけて配列される櫛歯状の第１電極と、
前記第１電極と噛み合うように複数の棒状電極が間隔をあけて前記第１基板の上に配置される櫛歯状の第２電極と、
前記第１基板と前記第２基板の間に配置され、前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加する電源部とを備える細胞分離装置を提供する。
【００１３】
本発明の第７態様によれば、
血小板を含む細胞懸濁液を血小板とそれ以外の成分に分離する細胞分離容器と、
前記細胞分離容器に平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで前記細胞懸濁液を輸送するポンプと、
を備える細胞分離装置であって、
前記細胞分離容器は、
第１基板と、
前記第１基板の上に間隔をあけて複数の棒状電極が配列される第１電極と、
前記第１基板と対向して配置される第２基板と、
前記第２基板の前記第１基板側に配置され平板状の第２電極と、
前記第１基板と前記第２基板の間に配置され、前記細胞懸濁液が流れる流路と、
前記流路と接続し前記流路に前記細胞懸濁液を搬入する流入口と、
前記流路と接続し前記流路から前記細胞懸濁液を搬出する流出口と、
前記第１電極と前記第２電極に２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加する電源部とを備える細胞分離装置を提供する。
【００１４】
本発明の第８態様によれば、
前記細胞懸濁液を一定の温度に保存する温度制御手段を備える細胞分離装置を提供する。
【００１５】
本発明の第９態様によれば、
前記第１電極と前記第２電極が透明導電膜である細胞分離装置を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明にかかる血小板の分離方法は、２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍの電圧と、１５０ｋＨｚ〜７５０ｋＨｚの周波数を印加した細胞分離容器内に、血小板と血液中の他の成分を含む細胞懸濁液を平均流速２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで送る方法である。このため、血小板以外の成分は細胞分離容器内で捕捉されるが、血小板は、細胞分離容器では捕捉されず、細胞分離容器の外に押し出される。従って、細胞懸濁液から血小板を高い精度で分離することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は細胞分離装置の概念図である。
【図２】図２は細胞分離容器の斜視図である。
【図３】図３は図２のＡ−Ａ’断面における断面図である。
【図４】図４は第１電極と第２電極の平面図である。
【図５】図５は細胞懸濁液を細胞分離容器に送り込んだときの細胞分離容器の断面図である。
【図６】図６は第２の実施態様の細胞分離容器の断面図である。
【図７】図７は第３の実施態様の細胞分離容器の断面図である。
【図８】図８は第４の実施態様の細胞分離容器の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、図面を参照して本発明の実施例にかかる細胞分離方法をさらに説明する。本明細書において参照する各図は、本発明の理解を容易にするため、一部の構成要素を誇張して表すなど模式的に表しているものがある。このため、構成要素間の寸法や比率などは実物と異なっている場合がある。また、本発明の実施例に記載した部材や部分の寸法、材質、形状、その相対位置などは、とくに特定的な記載のない限りは、この発明の範囲をそれらのみに限定する趣旨のものではなく、単なる説明例にすぎない。
【００１９】
（実施の態様１）
本発明の第１態様の細胞分離方法は、細胞分離装置１を使用する。図１に示すように、細胞分離装置１は、細胞懸濁液１０を収容する収容容器２と、高周波電源３を備えた細胞分離容器４と、上記細胞分離容器４から流出した細胞懸濁液１０を回収する回収容器５と、上記各容器を接続するチューブ６と、上記チューブ６内に送りをかけるポンプ７と、上記細胞分離容器４内で細胞が分離されているかどうかを観察する顕微鏡Ｋとを備えている。
【００２０】
収容容器２は、分離すべき複数の種類の細胞を含んだ細胞懸濁液１０を収容している。細胞懸濁液１０は、赤血球１０a、白血球１０ｂ、血漿１０ｃ、および血小板１０ｄを含んでいる。
【００２１】
図２に示すように、細胞分離容器４は、流入口４ａと流出口４ｂが設けられた直方体の容器であり、流入口４ａと流出口４ｂは細胞分離容器４の上側に配置されている。
【００２２】
図３に示すように、細胞分離容器４は、第１基板４０と、上記第１基板４０と対向する第２基板４１と、第１基板４０の流路４５側に交互に配置される第１電極４２、第２電極４３と、第１基板４０と第２基板４１の周縁部に配置され、上記第１基板４０と第２基板４１を連結する絶縁層４４と、第１基板４０、第２基板４１および絶縁層４４の間に配置され懸濁細胞液１０が通過する流路４５とを備えている。なお、第１電極４２から第２電極４３までの距離は、４０μｍ〜８０μｍであり、流路４５の高さは、５０μｍ〜５００μｍである。また、第１電極４２と第２電極４３は、細胞分離容器４の外側に配置された高周波電源３と接続されている。
【００２３】
図４に示すように、第１電極４２と第２電極４３は、複数の棒状電極４００、４０１がそれぞれ間隔を空けて平行に配列された櫛歯状電極からなる。なお、第１電極４２と第２電極４３は、上記棒状電極４００、４０１が交互に噛み合わされるように、第１基板４０の平面内に配置されている。
【００２４】
なお、第１基板４０と第２基板４１はガラス、アクリル樹脂等の透明基板で構成され、第１電極４２と第２電極４３は透明導電膜（ＦＴＯ、ＩＴＯ（スズドープ酸化インジウム）、酸化スズ、ＰＥＤＯＴ等）で構成されている。第１基板４０などが上記のように構成されると、顕微鏡Ｋから流路４５を通過する細胞懸濁液１０を観察することができる。なお、絶縁層４４はＰＤＭＳ等のシリコーンゴムで構成されている。
【００２５】
高周波電源３は、第１電極４２と第２電極４３の間に接続され、発生させる高周波電圧の大きさおよび周波数が調節可能になっている。高周波電源３により第１電極４２と第２電極４３に高周波電圧を印加すると、第１電極４２の棒状電極４００から発生した電界が、第２電極４３の棒状電極４０１まで伝搬して広がるようになっている。
【００２６】
図５に示すように、上記電界中において、赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃには棒状電極４００、４０１に近接する方向に誘電泳動が作用し、血小板１０ｄには棒状電極４００、４０１から離れる方向の誘電泳動力が作用する。このとき、赤血球１０ａ、白血球１０ｂ、および血漿１０ｃに働く誘電泳動力と重力および細胞懸濁液１０の流れによる力は釣り合い、血小板１０ｄに働く誘電泳動力と重力および細胞懸濁液１０の流れによる力については、細胞懸濁液１０の流れによる力が誘電泳動力と重力を足し合わせた力よりも大きくなるように、高周波電圧の大きさが設定されている。
【００２７】
回収容器５は、血小板１０ｄとそれ以外の細胞を分離するための容器であり、血小板回収容器５aと血球細胞回収容器５ｂからなる。血小板回収容器５aは、細胞分離容器４で分離された血小板１０ｄを回収する容器であり、血球細胞回収容器５ｂは、赤血球１０a、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃを回収する容器である。チューブ６は、収容容器２から分離容器４の流入口４ａへ、また、分離容器４の流出口４ｂからバルブＶを介して各回収容器５へ接続されている。
【００２８】
ポンプ７は、チューブ６内および分離容器４内において細胞懸濁液１０が層流を形成しながら流動するように、流量が調節されている。ポンプ７を作動させると、収容容器２内から分離容器４内へ流入した細胞懸濁液１０が分離容器４内を該水平方向に向かって流動し、分離容器４の出口４ｂから流出した細胞懸濁液１０は、バルブＶによって血小板回収容器５aか、血球細胞回収容器５ｂ内に回収されるようになっている。
【００２９】
顕微鏡Ｋは、第２基板４１を通して流路内に流れている細胞懸濁液１０を観察するためのものであり、光学顕微鏡などからなる。また、顕微鏡Ｋの焦点は流路４５に流れる細胞懸濁液１０に合わせられている。これにより、第２電極４１に血小板１０ｄ以外の細胞が捕捉されているか否かを観察できるようになっている。
【００３０】
図示しないが、細胞分離装置１は温度制御手段を備えていることが好ましい。温度制御手段とは、血小板回収容器５a、血球細胞回収容器５b、細胞懸濁液１０の温度を４℃〜３７℃の範囲で一定に保つための手段であり、具体的には、容器や分離装置周辺に設置する熱交換パイプに冷水又は温水が循型する温度制御装置などが挙げられる。このように、細胞分離装置１が温度制御手段を備えると、細胞の生存範囲で温度を低下，上昇することができるので，細胞に損傷を与えることなく分離することができる。
【００３１】
このように構成された細胞分離装置１の動作および作用について、以下に説明する。
【００３２】
本実施形態に係る細胞分離装置１を用いて細胞懸濁液内１０の血小板１０ｄとそれ以外の成分（赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃ）を分離するには、第１電極４２と第２電極４３に高周波電圧を印加した状態で細胞懸濁液１０を収容容器２から回収容器５へ向けて流動させる。このとき、第１電極４２と第２電極４３に印加する電圧は２０Ｖｐｐ／ｍｍ〜４０Ｖｐｐ／ｍｍ、周波数は１５０Ｈｚ〜７５０Ｈｚである。また、細胞懸濁液１０を流動させる量は、平均流速で２００ｍｍ／ｍｉｎ〜４００ｍｍ／ｍｉｎである。
【００３３】
上記のように設定すると、赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃは、第１電極４２と第２電極４３の近傍に近付いたとき、細胞懸濁液１０の流れに抗する方向の誘電泳動力によって第１電極４２と第２電極４３の上に留まる。一方、血小板１０ｄは、第１電極４２と第２電極４３に引き寄せられつつ、重力と細胞懸濁液１０の流れによって第１電極４２と第２電極４３を通過して血小板回収容器５ａ内に回収される。血小板１０ｄの回収が完了したら、細胞懸濁液１０を回収する血球細胞回収容器５ｂに切り替え、高周波電圧の印加を解除する。そうすると、それまで第１電極４２と第２電極４３の電極に留まっていた赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃは、誘電泳動力が失われ流れに沿って流動し、血球細胞回収容器５ｂ内に回収される。
【００３４】
（実施の態様２）
以下で、本発明の第２態様について説明する。第２態様の基本的な構成は、第１態様と同様であるので、異なる部分についてのみ説明する。図６に示すように、第２態様で使用される細胞分離容器４は、第１基板４０と、上記第１基板４０と対向する第２基板４１と、第１基板４０の流路４５側に交互に配置される第１電極４２および第２電極４３と、第１基板４０と第１電極４２および第２電極４３の間に配置される絶縁層４４と、絶縁層４４の中に配置され懸濁細胞液１０が通過する流路４５とを備えている。すなわち、第２態様の細胞分離容器４は、第１電極４２と第２電極４３の上に絶縁層４４が積層されている点で、第１態様の細胞分離容器４と大きく異なる。
【００３５】
このように細胞分離容器４が構成されていると、第１電極４２と第２電極４３の間に電圧をかけた場合に、赤血球１０ａと白血球１０ｂ、血漿１０ｃが第１電極４２や第２電極４３に引き寄せられても、第１電極４２や第２電極４３は絶縁層４４によって覆われているため、赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃは、第１電極４２や第２電極４３から電気的に絶縁される。そのため、赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃが電気的な衝撃を受けることが防止することができる。これにより、赤血球１０ａ、白血球１０ｂ、および血漿１０ｃの損傷を防止しつつ、血小板１０ｄと、赤血球１０ａ、白血球１０ｂおよび血漿１０ｃの分離を高い精度で行うことができる。
【００３６】
（実施の態様３）
以下で、本発明の第３態様について説明する。第３態様の基本的な構成は、第１態様と同様であるので、異なる部分についてのみ説明する。図７に示すように、第３態様で使用される細胞分離容器４は、第１基板４０と、上記第１基板４０の流路４５側に複数の棒状電極が間隔をあけて配列される櫛歯状の第１電極４２と、上記第１基板４０と対向する第２基板４１と、第２基板４１の流路４５側に配置され平板状の第２電極と４３と、第１基板４０と第２基板４１の周縁部に配置され、上記第１基板４０と第２基板４１を連結する絶縁層４４と、第１基板４０と第２基板４１の間に配置され懸濁細胞液１０が通過する流路４５と、を備えている。すなわち、第３態様の細胞分離容器４は、第２電極４３が第２基板上４１に配置されること、および第２電極４３の形状が平板状である点において異なる。
【００３７】
（実施の態様４）
以下で、本発明の第４態様について説明する。第４態様の基本的な構成は、第３態様と同様であるので、異なる部分についてのみ説明する。図８に示すように、第３態様で使用される細胞分離容器４は、第１基板４０と、上記第１基板４０と対向する第２基板４１と、上記第１基板４０の流路４５側に複数の棒状電極が間隔をあけて配列される櫛歯状の第１電極４２と、第２基板４１の流路４５側に配置され平板状の第２電極と４３と、第１基板４０と第１電極４２および第２電極４３の間に配置される絶縁層４４と、絶縁層４４の中に配置され懸濁細胞液１０が通過する流路４５とを備えている。すなわち、第４態様の細胞分離容器４は、第１電極４２と第２電極４３の上に絶縁層４４が積層されている点で、第３態様の細胞分離容器４と大きく異なる。
（実施例１）
【００３８】
＜細胞分離容器の作成＞
細胞分離容器の作成は、以下の手順で行う。
（１） 第１基板としてスライドガラスを用意する。
（２） スライドガラスの上にＩＴＯ薄膜を形成する。
（３） レーザーエッチングを用いて、棒状のＩＴＯ薄膜が複数配列された櫛状の第１電極を得る。
（４） 第２基板としスライドガラスを用意する。
（５） スライドガラスの上にＩＴＯ薄膜を形成し、平板状の第２電極を得る。
（６） 上記のスライドガラスについて、ＩＴＯが形成された面を対向させる。
（７） 上記ガラスの間にシリコンシートを挟み、スライドガラスを貼着する。
【００３９】
なお、状電極の幅は２０μｍ、棒状電極の電極間距離は８０μｍ、ＩＴＯ薄膜付ガラスとＩＴＯ薄膜付ガラスの距離は５００μｍとした。また、シリコンシートの厚みは５００μｍとし、容器内部の容量は、内部容量は３０ｍｍ３とした。
【００４０】
＜細胞懸濁液の作成＞
細胞懸濁液は、血液を遠心分離した血液細胞懸濁液または多血小板血漿を低導電性等張液ＬＣＢ（ＨＥＰＥＳ：１０ｍＭ，ＣａＣｌ２：０．１  ｍＭ，Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ：５９ｍＭ，Ｓｕｃｒｏｓｅ：２３６ｍＭ）で希釈して調製した。
【００４１】
＜血小板分離工程＞
第１電極と第２電極に２０Ｖppの電圧と、１５０ｋＨｚの周波数を印加した。次に、平均流速４００ｍｍ／ｍｉｎの速さで細胞懸濁液を細胞分離容器に注入し、細胞分離装置から出てきた溶液を採取した。そして、細胞分離装置に細胞懸濁液を通す前後で細胞懸濁液に含まれる血小板の割合を比較し評価した。その結果を表１に示す。
（実施例２〜実施例４）
第１電極と第２電極に印加する周波数を２５０ｋＨｚ、５００ｋＨｚ、７５０ｋＨｚとしたこと以外は、実施例１と同様の方法で行った。その結果を表１に示す。
【表１】
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【符号の説明】
【００４２】
１      細胞分離装置
２      収容容器
３      高周波電源細胞分離容器
４      細胞分離容器
４ａ    流入口
４ｂ    流出口
５      回収容器
５ａ    血小板回収容器
５ｂ    血球細胞回収容器
６      チューブ
７      ポンプ
１０    細胞懸濁液
１０ａ  赤血球
１０ｂ  白血球
１０ｃ  血小板
４０    第１基板
４１    第２基板
４２    第１電極
４３    第２電極
４４    絶縁層
４５    流路
４００  棒状電極
４０１  棒状電極
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2014180231.tif 000009
【図７】
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【図８】
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