(57)【要約】【課題】  実用レベルで高病原性トリインフルエンザウイルスによる感染や感染死を予防できる、高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤、及び、高病原性トリインフルエンザウイルスの感染予防方法を提供すること。【解決方法】  補酵素Ｑを有効成分として含有する高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤。高病原性トリインフルエンザウイルスに感染する少なくとも５日前から投与されるのが好ましく、高病原性トリインフルエンザの流行時又は流行が予想される時期において少なくとも７日間以上連続投与されるのが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
補酵素Ｑを有効成分として含有する高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤。
【請求項２】
高病原性トリインフルエンザウイルスに感染する少なくとも５日前から投与されることを特徴とする請求項１に記載の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤。
【請求項３】
補酵素Ｑが、微生物によって生産されるものである請求項１又は２記載の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤。
【請求項４】
高病原性トリインフルエンザの流行時又は流行が予想される時期において少なくとも７日間以上連続投与される請求項１〜３のいずれか１項に記載の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤。
【請求項５】
高病原性トリインフルエンザが、Ｈ５Ｎ１亜型高病原性トリインフルエンザウイルスによるものである請求項１〜４のいずれか１項に記載の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤を含有する家禽用飼料。
【請求項７】
飼料中の補酵素Ｑの含有量が１０〜１００ｐｐｍである請求項６記載の家禽用飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補酵素Ｑを有効成分として含む、トリインフルエンザによる感染予防剤、及び、高病原性トリインフルエンザウイルス感染の予防方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザの原因であるインフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルス科に属し、蛋白質とリン脂質からなるエンベロープを有し遺伝子としてＲＮＡを有するＲＮＡウイルスで、核蛋白質及びマトリックス蛋白質の抗原性により、Ａ、Ｂ、Ｃ型に分類される。ヒトインフルエンザウイルスでは、Ａ、Ｂ、Ｃ全ての型の存在が知られているが、ヒト以外のほとんどの脊椎動物ではＡ型のみが知られている。Ａ型のインフルエンザウイルスは、さらに、エンベロープから突出している生物学的に重要な２つの蛋白質である血球凝集素（ヘマグルチン；Ｈ）とノイラミナーゼ（Ｎ）のアミノ酸配列もしくは抗原性の違いにより亜型に分類される。例えばＡ型インフルエンザウイルスには、１６種のＨ、９種のＮが確認されている。
【０００３】
鳥類におけるインフルエンザは、一般的に“トリインフルエンザ”と呼ばれ、Ａ型インフルエンザウイルスが原因である。トリインフルエンザは、高病原性トリインフルエンザ、低病原性トリインフルエンザとその他のトリインフルエンザに分類される。高病原性トリインフルエンザは、Ａ型インフルエンザウイルスの感染による、鶏、あひる、うずら、きじ、だちょう、ほろほろ鳥又は七面鳥の疾病のうち、国際獣疫事務局が作成した診断基準により高病原性と判定されたものをいう。高病原性トリインフルエンザの原因となるウイルスのＨ亜型は、Ｈ５又はＨ７が主で、他のものはほとんど知られていない。
【０００４】
高病原性トリインフルエンザは、その伝染力の強さ、高致死性を示す病性等から、家禽産業に及ぼす影響は甚大であるだけでなく、国あるいは地域ごとに家禽やその生産物等に厳しい移動制限が課され、国際流通にも大きな影響を及ぼすこととなることから、国際的にも最も警戒すべき家畜の伝染性疾病の一つとして、その制圧と感染拡大防止が図られている。
【０００５】
高病原性トリインフルエンザで最も代表的なＨ５Ｎ１亜型は、“トリインフルエンザ（Ｈ５Ｎ１）”と表記され、鳥類だけでなく、ブタ、ネコ、トラ、およびフェレットに対しても感染性を示すとされている。トリインフルエンザの症状には、急性呼吸症状、飼料摂取の低下、産卵数の低下、死亡が含まれるが、特に高病原性トリインフルエンザは鶏などの家禽類に感染した場合、７５％以上の致死率であり、肉用鶏および採卵鶏を飼育する養鶏産業に大きな被害を与えている。さらに、Ｈ５Ｎ１亜型トリインフルエンザウイルスはまれにヒトにも感染することが知られており、近い将来、ヒトに感染しやすく変異したトリインフルエンザウイルスが「新型インフルエンザ」としてヒトで大流行することが懸念されている。
【０００６】
家禽類における高病原性トリインフルエンザの防御は、人及び車両の立ち入りを制限したり、外部の動物との接触を防ぐ防護ネットを利用するなどウイルスが鶏舎内に持ち込まれる経路を遮断したり、水、飼料及び鶏舎の衛生管理により、そのリスクを低減することが基本とされる。また、日本における高病原性トリインフルエンザの防疫措置の基本は摘発淘汰であるが、高病原性トリインフルエンザが多発している場合、摘発淘汰では経済的損失が大きい。清浄化が困難な場合は、その発生被害をできるだけ小さくする目的で予防的にワクチン使用する場合もある。しかしワクチンは、一定期間、発症と死亡を防ぐことが可能で、ウイルスの増殖及び排泄ウイルス量を減少させる効果はあるが、感染及び排泄を完全に阻止することはできない。それに加えてトリインフルエンザウイルスはＲＮＡウイルスであるため変異が激しく、原理的にも、ワクチンを作製することで一定期間発症と死亡を防ぐことはできても、ウイルスが変異を起こし、ワクチン作製時とは異なるエピトープに変わると、もはやそのワクチンでは効果が期待できなくなるという欠点がある。したがって、汎用的にトリインフルエンザウイルスによる感染や感染による死亡（感染死）を予防する予防剤が求められている。
【０００７】
ノイラミニダーゼ阻害活性を有するインフルエンザ薬にはインフルエンザウイルスの増殖抑制効果があり、具体的には、ザナミビル（商品名:リレンザ）、オセルタミビル（商品名:タミフル）などが知られている。しかし、これら薬剤にはウイルス感染後の症状を緩和する効果はあるが、感染そのものを抑制する活性は知られていない。また、タミフルなどの場合、耐性ウイルスの存在も知られており、新たな薬剤が求められている。
【０００８】
一方、ヒバ油あるいはヒノキチオールを添加あるいは含浸させた家畜敷料を用いて高病原性トリインフルエンザを予防する方法（特許文献１）や、漢方組成物を用いて高病原性トリインフルエンザを予防する方法（特許文献２）などが報告されているものの、いずれも実用レベルで家禽の高病原性トリインフルエンザを、実際に予防したり、ましてや感染死を予防できるというものではない。石灰で高病原性トリインフルエンザを予防できるという報告もあるが（非特許文献１）、これは鶏舎などの生活環境改善用の消毒剤として石灰を使用し、家禽の糞や鶏舎周りの消毒に用いるというもので、事前に家禽に石灰を給与して、高病原性トリインフルエンザを予防するというものではない。
【０００９】
グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される一種以上の化合物やその薬学的に許容される塩を含有する、インフルエンザウイルス感染の予防または治療のための医薬組成物が報告されている（特許文献３）。この医薬組成物に含有させる酸化防止剤のひとつとして、コエンザイムＱ１０ (補酵素Ｑ１０) が例示されているが、実際に確認されているのは、グルタチオン、グルタチオンジスルフィドやそれらとアスコルベート−２−ホスフェート、及びＮ−アセチル−Ｌ−システインなどの組み合わせのvitroでの抗ウイルス作用である。このように、実際に、トリインフルエンザ、特に高病原性トリインフルエンザ感染による死亡を実用レベルで予防する効果が確認された感染死予防剤の報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００６−１５８３６１
【特許文献２】特開２０１１−２０７８９５
【特許文献３】特表２００１−５１１７７０
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】肥料、１１４号、ｐ．７２，２００９年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本願発明は、実用レベルで高病原性トリインフルエンザウイルスによる感染や感染死を予防できる、高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤、及び、高病原性トリインフルエンザウイルスの感染予防方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは上記課題を解決すべく、鋭意、研究を重ねた結果、補酵素Ｑ自体が、驚くべきことに、高病原性トリインフルエンザウイルスによる感染死を予防できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は、補酵素Ｑを有効成分として含有する高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤は、補酵素Ｑを有効成分として含有する。本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤の有効成分である補酵素Ｑは、下記式（１）で表される酸化型補酵素Ｑ；
【００１６】
【化１】
2014028777.tif 000002
【００１７】
及び、下記式（２）で表される還元型補酵素Ｑ；
【００１８】
【化２】
2014028777.tif 000003
【００１９】
のいずれでもよく、その混合物でもよく、その場合の混合割合も制限されない。効果の点からは、還元型補酵素Ｑ又は還元型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑを使用するのが好ましいこともあるが、経済的観点からは、酸化型補酵素Ｑが好ましく使用される。
【００２０】
本発明で使用する補酵素Ｑは、動植物中に広く存在することが知られている。本発明においては、上記式で表される補酵素Ｑのうち、ｎが６〜１１のいずれかであるもの、あるいはそれらの混合物であることが望ましく、特にｎが１０である補酵素Ｑ１０が好ましい。
【００２１】
本発明において使用される補酵素Ｑは、化学合成品、発酵品、天然物からの抽出品等、形態を問わず使用することができるが、微生物によって産出されるものが好ましい。また、補酵素Ｑを含有する微生物（細菌、酵母等）そのもの、あるいはその粗精製物でもよく、また、これらから補酵素Ｑを精製したものでもよく、精製の程度も制限されない。
【００２２】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤を用いる場合、当該高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤は、経口的に直接、家禽に投与しても良いし、飼料に混ぜて与えても良い。またいわゆる、上記経口剤として使用する以外に、吸入剤や皮膚に直接塗布する形態であっても良い。経口剤としては、例えば粉末剤であってもよく、結合剤を加えて顆粒剤としても良い。また、粉末剤や顆粒剤を打錠した錠剤やチュアブル錠としても良いし、粉末や顆粒状態あるいは溶液状態のものをカプセルに充填してカプセル剤としても構わない。投与の簡便性からは、高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤として補酵素Ｑを飼料に混ぜる方法が好ましい。飼料への補酵素Ｑの添加方法については、特に制限されるものではない。高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤として補酵素Ｑそのものを直接飼料に添加混合してもよく、また、必要に応じて補酵素Ｑを添加した飼料添加物やプレミックスを高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤として、飼料に添加して補酵素Ｑ含有飼料としても良い。
【００２３】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤を飼料に添加混合するための、飼料の原料は、特に制限されることがなく、家禽用飼料に一般に用いられている原料が使用される。そのような原料の具体例として、例えば、穀類（とうもろこし、マイロ、大麦、小麦等）、糟糠類（ふすま等）、植物性油粕類（大豆油粕、菜種油粕等）、動物性飼料（魚粉、骨肉粉等）、食塩、オリゴ糖類、ケイ酸、各種ビタミン類、ミネラル類（炭酸カルシウム、第２リン酸カルシウム等）、アミノ酸類及び有機酸類等が挙げられる。またこれら原料があらかじめ混合された市販の混合飼料を用いることもできる。
【００２４】
また、高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤として、補酵素Ｑを含有する飼料添加物やプレミックスを使用する場合、当該飼料添加物やプレミックスには、生菌剤（例えば、エンテロコッカス類、バチルス類、ビフィズス菌類）、抗酸化剤（例えば、エトキシン、ジブチルヒドキシトルエン等）、防かび剤（例えば、プロピオン酸、プロピオン酸カルシウム等）、粘結剤（例えば、アルギン酸ナトリウム、カゼインナトリウム、カルボキシメチルセルロース等）、乳化剤（例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等）、アミノ酸（例えば、ＤＬ−アラニン、Ｌ−アルギニン、塩酸Ｌ−リジン等）、ビタミン（例えば、Ｌ−アスコルビン酸、β−カロチン、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール等）、ミネラル（例えば、塩化カリウム、クエン酸鉄、酸化マグネシウム等）、色素（例えばアスタキサンチン、カンタキサンチン等）、酵素（例えばアミラーゼ、フィターゼ、リパーゼ等）、有機酸（ギ酸、酢酸、乳酸等）が含まれていてもよい。
【００２５】
さらに、本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤には、上記補酵素Ｑの他に薬剤学的に許容される他の製剤素材を、常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが挙げられる。
【００２６】
上記酸化防止剤としては特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などが挙げられる。
【００２７】
上記吸収促進剤としては特に限定されず、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。
【００２８】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤には、抗酸化物質あるいは抗酸化酵素を共に含有させる事ができる。このような抗酸化物質としては特に限定はされないが、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピロロキノリンキノン、ピクノジェノール、フラバジェノール、又はセレンなどが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。また、抗酸化酵素としては、特に限定はされないが、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、又はアスコルビン酸ペルオキシダーゼなどが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。
【００２９】
さらに、本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤には、免疫賦活剤や抗ウイルス剤を共に含有させることもできる。そのような免疫賦活剤としては特に限定はされないが、フコイダン、β―グルカンなどの多糖類、ラクトフェリン、プロポリス、乳酸菌、ビフィズス菌などが挙げられる。また、抗ウイルス剤としては特に限定はされないが、Ｍ２イオン―チャンネル阻害剤（アマンタジンとリマンタジン）とノイラミニダーゼ阻害剤（オセルタミビルとザナミビル）などが挙げられる。
【００３０】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤を飼料に含有させる場合の、飼料中の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤の量は、対象家禽の種類、体重、週齢、供与飼料、飼育環境等によって異なるが、飼料中の補酵素Ｑ濃度として、通常０．１ｐｐｍ以上、好ましくは１ｐｐｍ以上であり、より好ましくは１〜５００ｐｐｍ、さらに好ましくは１０〜１００ｐｐｍである。
【００３１】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤を投与対象の家禽に摂取させる時期及び摂取期間は、補酵素Ｑの摂取量や摂取の目的、対象家禽の種類、体重、月齢、供与飼料、飼育環境等によって異なるが、対象となるウイルスに感染する少なくとも５日前から投与されることが好ましく、対象となるウイルスに感染する少なくとも７日前から投与されるのがより好ましい。また、感染後も継続して投与されるのがより好ましく、少なくとも感染後２日、より好ましくは感染後５日以上、より好ましくは７日以上引き続き投与されるのが効果的である。トータルの投与期間は少なくとも５日間以上が好ましく、より好ましくは７日間以上、より好ましくは９日以上、より好ましくは１２日以上、より好ましくは１４日間以上、さらに好ましくは１ヶ月以上である。実際には、対象となる高病原性トリインフルエンザの流行時又は流行が予想される時期に継続して投与されるのが好ましい。ここでいう継続して投与とは、連日（毎日）、隔日、又は、連日と隔日の組み合わせのいずれでも良いが、連続して毎日１回以上投与されるのが好ましく、連続して７日間以上投与されるのがより好ましい。
【００３２】
本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤を家禽に投与することで、高病原性トリインフルエンザウイルスの感染を予防することが出来る。また、感染した場合でもその発症を予防または症状を緩和することが出来、結果として高病原性トリインフルエンザウイルスの感染による家禽の死亡、すなわち感染死を予防または低減することが出来る。なお本発明の高病原性トリインフルエンザウイルス感染予防剤は、後述の実施例で示すように、Ｈ５Ｎ１型の高病原性トリインフルエンザウイルスに対しても確実に効果を示す。以下に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこの実施例のみに限定されるものではない。
【実施例】
【００３３】
補酵素Ｑを用いた高病原性トリインフルエンザウイルス感染の予防効果について、以下の実施例で示す。
（予備実験）
（１）試験方法
以下の方法で、鶏への高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルス感染量を定める試験を行った。本試験に用いる鶏としては、白色レグホンの１０日齢のヒナを用いた。それぞれ鶏５羽ずつの３つ試験群に、高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルス量を、１０4ＴＣＩＤ50、１０5ＴＣＩＤ50、１０6ＴＣＩＤ50の３段階の感染量で経鼻感染させ、鶏がウイルス感染後５日目以内に確実に死亡するウイルス量を調べた。なお、高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルスを鶏に感染させる試験は、高病原性トリインフルエンザウイルスを取り扱うことが可能な、ＢＳＬ３施設を用いて実施した。
（２）試験結果
１０4ＴＣＩＤ50のウイルス量でもウイルス感染後５日目で大半が死亡したが、より確実な条件として、鶏が１００％死亡した１０5ＴＣＩＤ50を以下の実施例におけるウイルス感染量として採用した。
【実施例１】
【００３４】
（１）試験方法
本試験に用いる鶏としては、白色レグホンの３日齢のヒナを用いた。鶏を４６羽又は４９羽ずつ４つの試験郡に分け、それぞれの試験群において、さらに４つのゲージに分け、３つのケージには１５羽ずつ、４つめのケージのみ４羽又は１羽を収容して飼育した。これらの試験群のうち、３つの試験群を補酵素Ｑ１０投与群とし、ウイルス感染の２週間前から、補酵素Ｑ１０を、それぞれ２５０ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、１０ｐｐｍの濃度となるよう基礎飼料に混合して投与した。具体的には、粉末補酵素Ｑ１０純品（酸化型補酵素Ｑ１０、株式会社カネカ製）を、脱脂米糠に倍散してクランブル状としたものを、上記濃度となるよう、基礎飼料に混合した。一方、１試験群は対照群として試験期間中基礎飼料のみを給与した。全試験群の鶏に対し、高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルスを、上記予備実験で採用したウイルス感染量（１０5ＴＣＩＤ50）で経鼻感染させた。なお、高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルスを鶏に経鼻感染させる工程から、鶏を高病原性トリインフルエンザウイルス取り扱い可能な、ＢＳＬ３施設に移し、ウイルス感染後も補酵素Ｑ１０投与群については補酵素Ｑ１０を含有する飼料を供与した。ウイルス感染後、毎日死亡数を計測し、感染後５日目まで飼育したのち、全鶏の殺処分を行った。結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
2014028777.tif 000004
【００３６】
（２）試験結果
表１にあるとおり、ウイルス感染２日目で、対照群では総死亡率５５%であるのに対し、補酵素Ｑ１０投与群では、総死亡率は０〜２％であった。ウイルス感染５日目では、対照群で総死亡率９６％であるのに対し、補酵素Ｑ１０を１０ｐｐｍ投与した群では８２％、５０ｐｐｍ投与群では６７％、２５０ｐｐｍ投与群では６５％と、投与した補酵素Ｑ１０の量に応じて死亡率の低下が確認された。
【実施例２】
【００３７】
（１）試験方法
本試験に用いる鶏としては、白色レグホンの３日齢のヒナを用いた。鶏を２０羽ずつ４つの試験郡に分け、それぞれの試験群において、さらに５羽ずつ、４つのゲージに収容して飼育した。これらの試験群のうち、２つの試験群を補酵素Ｑ１０投与群とし、ウイルス感染の２週間前から補酵素Ｑ１０を、それぞれ５０ｐｐｍ、１０ｐｐｍの濃度となるよう基礎飼料に混合して投与した。具体的には、粉末補酵素Ｑ１０純品（酸化型補酵素Ｑ１０、株式会社カネカ製）を脱脂米糠に倍散してクランブル状としたものを、上記濃度となるよう基礎飼料に混合した。一方、１試験群は対照群として試験期間中基礎飼料のみを給与した。全試験群の鶏に対し、高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルスを、上記予備実験で採用したウイルス感染量（１０5ＴＣＩＤ50）で経鼻感染させた。なお、高病原性トリインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルスを鶏に経鼻感染させる工程から、鶏を高病原性トリインフルエンザウイルス取り扱い可能な、ＢＳＬ３施設に移し、ウイルス感染後も補酵素Ｑ１０投与群については補酵素Ｑ１０を含有する飼料を供与した。ウイルス感染後、毎日死亡数を計測し、感染後１０日目まで飼育し、全鶏の殺処分を行った。結果を表２に示す。
【００３８】
【表２】
2014028777.tif 000005
【００３９】
（２）試験結果
表２にあるとおり、ウイルス感染２日目で、対照群では総死亡率８５％であるのに対し、補酵素Ｑ１０投与群では、１０ｐｐｍ投与群、５０ｐｐｍ投与群ともに０％であった。ウイルス感染３日目で、対照区では総死亡率が１００％に達したのに対し、補酵素Ｑ１０投与群では、１０ｐｐｍ投与群で１０％、５０ｐｐｍ投与群では依然０％であり、ウイルス感染１０日目でも１０ｐｐｍ投与群で７０％、５０ｐｐｍ投与群では５０％と、かなり死亡数を抑えることが可能であることがわかった。
【００４０】
補酵素Ｑ１０投与群で生存していた鶏を、殺処分後病理解剖し、肺から切片を作製し、病変の有無を確認した結果、病変は認められなかった。
【００４１】
このように補酵素Ｑ１０を高病原性トリインフルエンザウイルスの感染より前に投与することにより、トリインフルエンザによる感染や発症を予防し、感染死の低減が図れることがわかった。