(57)【要約】      （修正有）【課題】薬剤耐性菌に対して効果を発揮する抗菌剤及び該抗菌剤を用いた耐性菌感染症の治療方法の提供。【解決手段】苔から単離精製された大環状ポリフェノールであるリカルディンをリード化合物とするリカルディン誘導体及びそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分として含む、抗菌剤。なお、４ヶのベンゼン環をアルキレン鎖，エーテル結合又は直接結合で結んで大環状を形成しているリカルディン骨格は例えば４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸メチルを出発原料として合成できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体及びそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分として含む、抗菌剤。
【化１】
2014205657.tif 000058
［式（Ｉ）中、Ａは酸素原子又は直接結合を示し、Ｗは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子であり、Ｘは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子であり、Ｙは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子であり、Ｚは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子である。上部二環部と下部二環部は二つのエチレン鎖で連結されており、連結部分は２，３，４位の何れかから２’’’，３’’’，４’’’位の何れかで連結し、２’ ，３’ ，４’位の何れかから２’’，３’’，４’’位のいずれかで連結している］
【請求項２】
Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺの置換基の少なくとも１つは、少なくとも１つのヒドロキシ基を置換基として含む、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
菌体の細胞膜に障害を与えることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗菌剤。
【請求項４】
一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記の構造式の化合物１〜１５の中から、１又は複数選択されるものである請求項１に記載の抗菌剤。
【化２】
2014205657.tif 000059
【化３】
2014205657.tif 000060
【化４】
2014205657.tif 000061
【化５】
2014205657.tif 000062
【化６】
2014205657.tif 000063
【化７】
2014205657.tif 000064
【化８】
2014205657.tif 000065
【化９】
2014205657.tif 000066
【化１０】
2014205657.tif 000067
【化１１】
2014205657.tif 000068
【化１２】
2014205657.tif 000069
【化１３】
2014205657.tif 000070
【化１４】
2014205657.tif 000071
【化１５】
2014205657.tif 000072
【化１６】
2014205657.tif 000073
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載の抗菌剤を有効成分とする、感染症治療のための医薬。
【請求項６】
前記感染症がVRE及び／又はMRSAである請求項５に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤耐性菌に対して優れた効果を発揮する抗菌剤及び該抗菌剤を用いた耐性菌感染症の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ペニシリン、セファロスポリンなどに耐性の細菌が現れ、多耐性およびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus; MRSA）感染は医療現場において重大な問題を招いている。MRSAの治療及び予防には、代表的な薬剤として、バンコマイシン、テイコプラニン、アルベカシン、リネゾリド等が用いられている。特にバンコマイシンのようなグリコペプチド抗生物質は、耐性菌が少ない抗菌薬として、MRSAの治療に汎用されていた。
【０００３】
1996年のバンコマイシン低度耐性黄色ブドウ球菌（VISA）の発見をはじめ、現在までにバンコマイシン耐性腸球菌（VRE）やバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（VRSA）の出現が報告されていることから、その使用には十分な注意が必要とされている。そのため、薬剤耐性菌に対しても十分な効果を示す、新規化合物の開発が望まれている。しかし、いまだに有効な物質が現われていないのが現状である。
【０００４】
このような現状を踏まえて、種々の耐性菌に有効な新規化合物を合成する努力が試みられている他、安全性が比較的高く環境への影響も少ないとされている天然由来の化合物についても新たな抗菌作用を見出すべく調査研究が行われている。例えば、天然由来の化合物として緑茶ポリフェノール類を利用した抗菌剤がすでに知られており、βラクタム耐性セラチア菌に対する抗菌作用を発揮するものや（特許文献１）、分化細胞や組織の保存液としての利用を意図したもの（特許文献２）などが報告されている。
【０００５】
安全性の面などにおいてその利点が注目される天然由来化合物ではあるが、抽出方法が複雑であり、また、天然物由来の特性に基づく複雑な光学活性な構造を有する化合物が大半であるなど、その安定供給の面からも多くの課題を抱えていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００３−８１８４５
【特許文献２】特開２０１０−１２４８２１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明者らは、天然由来化合物であって、薬剤耐性菌に対して効果を示す化合物を含む抗菌剤の開発に鋭意努力を行った結果、苔由来天然ポリフェノールの一種であるリカルディン誘導体に優れた抗菌作用を見出し、本発明を完成させた。
従って、本発明は、苔由来のポリフェノールの一種であるリカルディン誘導体を含んでなる、薬剤耐性菌に対する抗菌剤、及び、これを含む医薬又は医薬組成物の提供を目的とする。
また、本発明は、上記医薬又は医薬組成物を患者等に投与する、薬剤耐性菌による感染症の治療方法の提供を目的とする。
さらに、本発明は、上記抗菌剤を使用した医療現場等における殺菌方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
これまで、本発明の化合物のような大環状ポリフェノール類が薬剤耐性菌に抗菌活性を示したという報告は皆無であったところ、発明者らは、苔から単離精製された大環状ポリフェノール、リカルディンをリード化合物として、種々の誘導体を合成すると共に、それらの抗菌活性を調べ、多くの合成化合物が抗MRSA（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus；メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）活性を示すと共に、VRE（Vancomycin-resistant Enterococcus；バンコマイシン耐性陽球菌）に対しても優れた抗菌活性を有することを見出した。
【０００９】
【化１】
2014205657.tif 000002
［式（Ｉ）中、Ａは酸素原子又は直接結合を示し、Ｗは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子であり、Ｘは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子であり、Ｙは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子であり、Ｚは、ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子である。上部二環部と下部二環部は二つのエチレン鎖で連結されており、連結部分は２，３，４位の何れかから２’’’，３’’’，４’’’位の何れかで連結し、２’ ，３’ ，４’位の何れかから２’’，３’’，４’’位のいずれかで連結している］
【００１０】
また、本発明は、上記抗菌剤を含む、薬剤耐性菌（例えば、MRSA、VREなど）による感染症の治療のための医薬又は医薬組成物である。
さらに、上記抗菌剤を使用した医療現場等における殺菌方法、あるいは、殺菌用具である。
また、上記医薬又は医薬組成物を患者等に投与することによる、薬剤耐性菌による感染症の治療方法である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の抗菌剤は、菌体の細胞膜に障害を与えることで、MRSA及びVREに対して優れた抗菌活性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】黄色ブドウ球菌の細胞膜に対する化合物１４の影響を調べた結果である。化合物１４、CCCP（カルボニルシアニド−ｍ−クロロフェニルヒドラゾン）又はDMSOを添加した場合における、細胞内へのEtBr（臭化エチジウム）の移行量を測定した。
【図２】黄色ブドウ球菌の細胞膜に対する化合物１４の影響を調べた結果である。予めEtBrを取り込ませた黄色ブドウ球菌に、化合物１４を、2.5mg/ml、5.0 mg/ml、10 mg/ml添加した場合における、細胞内から細胞外へのEtBrの流出量を測定した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の実施態様の１つは、一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体及びそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分として含む、抗菌剤である。
一般式（Ｉ）において、Ａは酸素原子又は直接結合を示し、好ましくは酸素原子である。Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺは、各ベンゼン環上の同一又は異なる１〜４個の置換基で、各々、独立して水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子である。Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つの置換基には、少なくとも１つの位置にヒドロキシ基が含まれ、好ましくは、Ｗ、Ｘ、Ｙ及びＺの置換基の少なくとも２つは、少なくとも１つのヒドロキシ基を置換基として含む。また、上部二環部と下部二環部は二つのエチレン鎖で連結されており、連結部分は２，３，４位の何れかから２’’’、３’’’、４’’’位の何れかで連結し、２’、３’、４’位の何れかから２’’、３’’、４’’位のいずれかで連結している。好ましくは、４位と２’’’位、３’位と４’’位間での連結である。
また、一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体に、異性体が含まれる場合でも、純粋な形態の任意の異性体、あるいは、異性体の混合物を用いることも可能である。
【００１４】
一般式（Ｉ）で表される化合物としては、限定はしないが、例えば、次の構造式で示されるものが挙げられる。
【化２】
2014205657.tif 000003
【００１５】
【化３】
2014205657.tif 000004
【００１６】
【化４】
2014205657.tif 000005
【００１７】
【化５】
2014205657.tif 000006
【００１８】
【化６】
2014205657.tif 000007
【００１９】
【化７】
2014205657.tif 000008
【００２０】
【化８】
2014205657.tif 000009
【００２１】
【化９】
2014205657.tif 000010
【００２２】
【化１０】
2014205657.tif 000011
【００２３】
【化１１】
2014205657.tif 000012
【００２４】
【化１２】
2014205657.tif 000013
【００２５】
【化１３】
2014205657.tif 000014
【００２６】
【化１４】
2014205657.tif 000015
【００２７】
【化１５】
2014205657.tif 000016
【００２８】
【化１６】
2014205657.tif 000017
【００２９】
本発明の一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体は、公知の文献又は通常の化学的合成方法を用いて得ることができる。例えば、Bioorg Med Chem., 2008;16(8):4272-4285に記載された合成方法により合成することができる。
また、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、式（Ｉ）中、Ａは直接結合を示し、Ｗは素原子、Ｘはヒドロキシ基、Ｙはヒドロキシ基、Ｚは水素原子であり、上部二環部と下部二環部は二つのエチレン鎖で連結されており、連結部分は３位と２’’’位、３’位と４’’位で連結している化合物（１５）は、以下の方法により製造することができる（スキーム１）。
【化１７】
2014205657.tif 000018
【００３０】
すなわち、化合物（１５）：
【化１８】
2014205657.tif 000019
で表される化合物は、以下の（Ａ）：
【化１９】
2014205657.tif 000020
で表される化合物と、トリフルオロメタンスルホン酸無水物を反応（I工程）されることにより合成することができる以下の（Ｂ）：
【化２０】
2014205657.tif 000021
で表される化合物と４−メトキシ−２−メチルフェニルボロン酸とを反応（II工程）させることにより合成することができる以下の（Ｃ）：
【化２１】
2014205657.tif 000022
を臭素化（III工程）することにより合成することができる以下の（Ｄ）：
【化２２】
2014205657.tif 000023
で表される化合物と、トリフェニルホスフィンを反応（IV工程）されることにより合成することができる以下の（Ｅ）：
【化２３】
2014205657.tif 000024
で表される化合物と、３’−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−［１，１’−ビフェニル］−３−カルバルデヒドを反応（V工程）されることにより合成することができる以下の（Ｆ）：
【化２４】
2014205657.tif 000025
で表される化合物を還元（VI工程）することにより合成することができる以下の（Ｇ）：
【化２５】
2014205657.tif 000026
で表される化合物をリチウムアルミニウムヒドリドで還元後酸処理（VII工程）するにより合成することができる以下の（Ｈ）：
【化２６】
2014205657.tif 000027
表される化合物をトリフェニルホスフィン臭化水素酸塩と反応（VIII工程）させることにより合成することができる以下の（I）：
【化２７】
2014205657.tif 000028
で表される化合物を分子内でwittig反応（IX工程）されることにより合成することができる以下の（J）：
【化２８】
2014205657.tif 000029
で表される化合物を還元（X工程）することにより合成することができる以下の（K）：
【化２９】
2014205657.tif 000030
で表される化合物に三臭化ホウ素を反応（XI工程）させることにより合成することができる。
【００３１】
I工程の反応は、ジクロロメタンやクロロホルム、テトラヒドロフランやジエチルエーテル、ヘキサン等の溶媒中塩基として例えばトリエチルアミン、ピリジン等の有機塩基を用いることができる。反応温度としては−１００℃から１００℃にて、好適には−４０℃から６０℃にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは２〜２４時間である。
II工程の反応は、ジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯおよびそれらの有機溶媒と水との混合溶媒等の溶媒中テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム存在下、塩基として、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等の無機塩基存在下で実施することができる。反応温度としては６０℃から２００℃にて、好適には８０℃から１５０℃にて実施することができる。反応時間は通常６〜４８時間、好ましくは１２〜３６時間である。
III工程の反応は、四塩化炭素中、臭素化剤として、ＮＢＳや臭素を用い、ラジカル開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル存在下実施する事ができる。反応温度としては室温から１５０℃にて、好適には還流温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
【００３２】
IV工程の反応は、トルエン、キシレン、アセトニトリル中、トリフェニルホスフィンを用い、実施する事ができる。反応温度としては室温から２００℃にて、好適には還流温度にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
V工程の反応は、ジクロロメタンやクロロホルム、テトラヒドロフラン等の溶媒中塩基として例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ｔ−ブトキシドカリウム等の金属塩基存在下、１８−クラウン−６の存在下または非存在下にて実施することができる。反応温度としては−４０℃から１００℃にて、好適には０℃から６０℃にて実施する事ができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜３６時間である。
VI工程の反応は、パラジウム担持活性炭、白金担持活性炭、酸化白金、ロジウム担持アルミナ等の金属触媒存在下、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、有機塩基として、トリエチルアミン、ピリジンの存在下水素圧１ｋｇｆ／ｃｍ２から５ｋｇｆ／ｃｍ２で実施することができる。反応温度としては０℃から１００℃にて、好適には室温から８０℃にて実施することができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは３〜２４時間である。
VII工程の反応は、テトラヒドロフランやジエチルエーテル、ジオキサン等の溶媒中リチウムアルミニウムヒドリドを用いて還元反応を行ったあと、塩酸酸処理することにより実施することができる。還元反応の反応温度としては−４０℃から１００℃にて、好適には０℃から６０℃にて実施することができる。反応時間は通常１〜２４時間、好ましくは２〜１２時間である。酸処理反応の反応温度としては０℃から１００℃にて、好適には室温から６０℃にて実施することができる。反応時間は通常１〜２４時間、好ましくは２〜１２時間である。
【００３３】
VIII工程の反応は、トルエン、キシレン、アセトニトリル中、トリフェニルホスフィン・臭化水素酸塩を用い、実施することができる。反応温度としては室温から２００℃にて、好適には還流温度にて実施することができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜２４時間である。
IX工程の反応は、ジクロロメタンやクロロホルム、テトラヒドロフランや等の溶媒中塩基として例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ｔ−ブトキシドカリウム等の金属塩基存在下、１８−クラウン−６の存在下または非存在下にて実施することができる。反応温度としては−４０℃から１００℃にて、好適には０℃から６０℃にて実施することができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは１２〜３６時間である。
X工程の反応は、パラジウム担持活性炭、白金担持活性炭、酸化白金、ロジウム担持アルミナ等の金属触媒存在下、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、有機塩基として、トリエチルアミン、ピリジンの存在下または非存在下、水素圧１ｋｇｆ／ｃｍ２から５ｋｇｆ／ｃｍ２で実施することができる。反応温度としては０℃から１００℃にて、好適には室温から８０℃にて実施することができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは３〜２４時間である。
XI工程の反応はジクロロメタンやクロロホルム等の溶媒中三臭化ホウ素や三塩化ホウ素を用いて実施することができる。反応温度としては−１００℃から６０℃にて、好適には−８０℃から０℃にて実施することができる。反応時間は通常１〜４８時間、好ましくは２〜２４時間である。
【００３４】
本発明の好ましい態様によれば、一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体及びそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物含む、抗菌剤が提供される。本発明の抗菌剤は、多剤耐性菌、特に、MRSA（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）、VRE（バンコマイシン耐性陽球菌）に効果を発揮する。
【００３５】
本発明の医薬は、有効成分である一般式（Ｉ）で表される化合物及びそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物自体を投与してもよいが、一般的には、有効成分である上記物質と１又は２以上の製剤用添加物（担体など）とを含む医薬組成物の形態で投与することが望ましい。本発明の医薬の有効成分としては、上記の物質の２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３６】
医薬組成物の種類は特に限定されず、剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、一般式（Ｉ）で表される化合物を水や他の適当な溶媒に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水或いはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。経口投与用又は非経口投与用の任意の製剤形態で提供される。例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。また、高分子などで被覆した徐放製剤を脳内に直接投与することも可能である。
【００３７】
医薬組成物の製造に用いられる製剤用添加物の種類、有効成分に対する製剤用添加物の割合、又は医薬組成物の製造方法は、組成物の形態に応じて当業者が適宜選択することが可能である。製剤用添加物としては無機又は有機物質、あるいは固体又は液体の物質を用いることができ、一般的には、有効成分重量に対して1重量％から90重量％の間で配合することができる。具体的には、その様な物質の例として乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等が挙げられる。
【００３８】
経口投与用の固形製剤を製造するには、有効成分と賦形剤成分例えば乳糖、澱粉、結晶セルロース、乳酸カルシウム、無水ケイ酸などと混合して散剤とするか、さらに必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなどの崩壊剤などを加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とする。錠剤を製造するには、これらの散剤及び顆粒剤をそのまま或いはステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒又は錠剤はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸− メタクリル酸メチルポリマーなどの腸溶剤基剤で被覆して腸溶剤製剤、或いはエチルセルロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造するには、散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填するか、有効成分をそのまま或いはグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オリーブ油などに溶解した後ゼラチン膜で被覆し軟カプセルとすることができる。
【００３９】
注射剤を製造するには、有効成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸、ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化剤と共に注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空凍結乾燥し、用事溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成分にレチシン、ポリソルベート８０ 、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射剤用乳剤とすることもできる。
【００４０】
直腸投与剤を製造するには、有効成分をカカオ脂、脂肪酸のトリ、ジ及びモノグリセリド、ポリエチレングリコールなどの座剤用基材と共に加湿して溶解し型に流し込んで冷却するか、有効成分をポリエチレングリコール、大豆油などに溶解した後、ゼラチン膜で被覆すればよい。
【００４１】
皮膚用外用剤を製造するには、有効成分を白色ワセリン、ミツロウ、流動パラフィン、ポリエチレングリコールなどに加えて必要ならば加湿して練合し軟膏剤とするか、ロジン、アクリル酸アルキルエステル重合体などの粘着剤と練合した後ポリアルキルなどの不織布に展延してテープ剤とする。
【００４２】
本発明の医薬又は医薬組成物の投与量及び投与回数は特に限定されず、治療対象疾患の悪化・進展の防止及び／又は治療の目的、疾患の種類、患者の体重や年齢などの条件に応じて、医師の判断により適宜選択することが可能である。一般的には、経口投与における成人一日あたりの投与量は０．０１〜１０００ｍｇ（有効成分重量）程度であり、一日１回又は数回に分けて、あるいは数日ごとに投与することができる。注射剤として用いる場合には、成人に対して一日量０．００１〜１００ｍｇ（有効成分重量）を連続投与又は間欠投与することが望ましい。
【００４３】
本発明の医薬は、植込錠及びマイクロカプセルに封入された送達システムなどの徐放性製剤として、体内から即時に除去されることを防ぎ得る担体を用いて調製することができる。例えば、エチレンビニル酢酸塩、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの、生物分解性、生物適合性ポリマーを用いることができる。このような材料は、当業者によって容易に調製することができる。また、リポソームの懸濁液も薬剤的に受容可能な担体として使用することができる。有用なリポソームは、限定はしないが、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ誘導ホスファチジルエタノール（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物として、使用に適するサイズになるように、適当なポアサイズのフィルターを通して調製され、逆相蒸発法によって精製される。
【００４４】
本発明の医薬は、医薬組成物としてキットの形態で、容器、パック中に投与の説明書と共に含めることができる。本発明に係る薬剤組成物がキットとして供給される場合、該薬剤組成物のうち異なる構成成分が別々の容器中に包装され、使用直前に混合される。このように構成成分を別々に包装するのは、活性構成成分の機能を失うことなく長期間の貯蔵を可能にするためである。
【００４５】
さらに、本発明は、本発明の医薬を用いた疾患の治療又は予防方法を提供する。
本発明の治療又は予防方法には、多剤耐性菌、特に、MRSA又はVREによる感染症の治療方法、あるいは、該感染を予防する方法が含まれる。より具体的には、一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体もしくはそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分として含む医薬を、MRSA又はVRE等に感染した対象、又は感染が予想される対象に投与することを含む該感染症の治療又は予防方法である。
ここで「治療」とは、多剤耐性菌等に感染した哺乳動物において、該感染によって引き起こされる諸症状の進行及び悪化を阻止又は緩和することを意味し、これによって該感染の諸症状等の進行及び悪化を阻止又は緩和することを目的とする治療的処置の意味として使用される。
治療の対象となる「哺乳動物」は、哺乳類に分類される任意の動物を意味し、特に限定はしないが、例えば、ヒトの他、イヌ、ネコ、ウサギなどのペット動物、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマなどの家畜動物などのことである。特に好ましい「哺乳動物」は、ヒトである。
【００４６】
本発明の抗菌剤は、液状又はゲル状の形態で使用し、医療器具や医療環境の消毒などに使用することもできる。あるいは、ウェットティッシュや患者等の体を拭くためのワイパーなどに含ませて使用してもよい。
【００４７】
次に本発明を具体例によって説明するがこれらの例によって本発明が限定されるものではない。
【実施例】
【００４８】
１．一般式（Ｉ）で表されるリカルディン誘導体
以下に示す化合物１〜化合物１４を、Bioorg Med Chem., 2008;16(8):4272-4285に記載された方法に基づいて合成を行った（化合物１〜５及び１４に関する物理化学的データは、Bioorg Med Chem., 2008;16(8):4272-4285を参照のこと）。また、化合物１５については、後述する方法によって合成を行った。
化合物１
【化３０】
2014205657.tif 000031
【００４９】
化合物２
【化３１】
2014205657.tif 000032
【００５０】
化合物３
【化３２】
2014205657.tif 000033
【００５１】
化合物４
【化３３】
2014205657.tif 000034
【００５２】
化合物５
【化３４】
2014205657.tif 000035
【００５３】
化合物６
【化３５】
2014205657.tif 000036
1H-NMR (CD3OD, 400 MHz): 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): d = 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.85 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.79-6.65 (m, 5H), 6.35 (br, 2H), 6.19 (br, 1H), 5.97 (br, 1H), 5.42 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.00-2.48 (br, 8H).
HRMS (FAB, [M＋H]+): C28H25O5, calcd for 441.1702, found 441.1711.
【００５４】
化合物７
【化３６】
2014205657.tif 000037
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d =1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.06- 6.73 (m, 8H), 6.46- 6.19 (m, 4H), 5.61 (s, 1H), 5.42- 5.36 (m, 3H), 3.06- 2.98 (m, 2H), 2.90- 2.80 (m, 4H), 2.59- 2.56 (m, 2H).
HRMS (FAB, [M＋H]+): C28H25O5, calcd for 441.1702, found 441.1695.
【００５５】
化合物８
【化３７】
2014205657.tif 000038
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d = 7.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.95-6.66 (m, 7H), 6.50-6.38 (m, 2H), 6.15 (dd, J = 6.4 Hz, 1H), 5.64 (s, 1H), 5.40 (s, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 3.08-2.52 (br, 8H).
【００５６】
化合物９
【化３８】
2014205657.tif 000039
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d = 9.20 (s, 2H), 8.76 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.66-6.64 (m, 2H), 6.60-6.56 (m, 3H), 6.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 6.21 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.92 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.00-2.23 (br, 8H)
【００５７】
化合物１０
【化３９】
2014205657.tif 000040
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d = 7.08- 6.97 (m, 3H), 6.82- 6.72 (m, 7H), 6.40 (d, 1H, J= 1.47 Hz), 6.25- 6.22 (m, 1H), 5.46- 5.43 (m, 1H), 4.99 (bs, 1H), 4.80 (bs, 1H), 3.10- 2.61 (m, 8H)
【００５８】
化合物１１
【化４０】
2014205657.tif 000041
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d = 7.26- 7.21 (m, 1H), 7.07 (d, 1H, J= 8.06 Hz), 7.00- 6.94 (m, 2H), 6.87- 6.76 (m, 4H), 6.45- 6.25 (m, 3H), 5.51 (s, 1H), 5.00 (s, 1H), 3.02- 2.63 (m, 8H)
【００５９】
化合物１２
【化４１】
2014205657.tif 000042
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d =  7.36 (t, 1H, J= 7.88 Hz), 7.09- 7.06 (m, 1H), 6.94- 6.73 (m, 8H), 6.53 (d, 1H, J= 1.83 Hz), 6.34- 6.31 (m, 1H), 5.60 (s, 1H), 5.42 (d, 1H, J= 2.20 Hz), 4.87 (s, 1H), 4.77 (s, 1H), 3.04- 2.56 (m, 8H)
【００６０】
化合物１３
【化４２】
2014205657.tif 000043
1H-NMR:(300MHz, CDCl3) :  d = 7.16 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 8.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 8.0 Hz, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.78-6.74 (m, 3H), 6.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.61 (dd, J = 8.4 Hz, 2.8 Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 7.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.19-2.91 (m, 4H), 2.12-2.67 (m, 1H), 2.49-2.41 (m, 1H), 2.34-2.23 (m, 2H).
【００６１】
化合物１４
【化４３】
2014205657.tif 000044
【００６２】
化合物１５
１．化合物（B）の合成
【化４４】
2014205657.tif 000045
100ml用ナス型フラスコ中に500mg（2.75mmol）の500mg（2.75mmol）４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸メチルを加え、10mlジクロロメタンに溶かした。0℃に冷却後0.811ml（4.95mmol）トリフルオロ酢酸無水物を加え、同温にて2.5時間撹拌した。反応液を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝3：1  v/v）にて精製し、目的化合物（B）を825mg（収率91％）得た。
【００６３】
２．化合物（C）の合成
【化４５】
2014205657.tif 000046
100ml用ナス型フラスコに、脱気したN,N-ジメチルホルムアルデヒド、439mg（1.33mmol）４−トリフルオロメチルスルホニルオキシ−３−メトキシ安息香酸メチル、307mg（1.60mmol）４−メトキシ−２−メチルフェニルホウ酸、46mg（3.99×10-2mmol）テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム、423mg(2.00mmol)リン酸カリウムを仕込んだ。Ar雰囲気下100℃で14時間撹拌した。反応液をセライトろ過し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥後濾過した。濾過物を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝7：1  v/v）にて精製し、目的化合物（C）を266mg（収率70％）得た。
【００６４】
３．化合物（D）の合成
【化４６】
2014205657.tif 000047
100ml用ナス型フラスコに、716mg（2.50mmol）２，４’−ジメトキシ−２’−メチル-［１，１’−ビフェニル］−４−カルボン酸メチル、62mg（0.375mmol）アゾビスイソブチロニトリル、四塩化炭素を仕込んだ。446mg(2.5mmol)N-ブロモスクシンイミドを四塩化炭素に溶かし滴下し、80℃で14時間還流した。反応液をsat.NaHCO3  aq.で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。MgSO4で乾燥後濾過し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝7：1  v/v）にて精製し、目的化合物（D）を819mg（収率90%）得た。
【００６５】
４．化合物（E）の合成
【化４７】
2014205657.tif 000048
50ml用ナス型フラスコに、90mg（0.247mmol）２’−ブロモメチル−２，４’−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボン酸メチルと77.7mg（0.296mmol）トリフェニルホスフィンを仕込み、3時間還流し減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（CHCl3：AcOEt＝3：1  v/v）にて精製し、目的化合物（E）を124mg（収率80%）得た。
【００６６】
５．化合物（F）の合成
【化４８】
2014205657.tif 000049
200ml用ナス型フラスコに、903mg（1.44mmol）５−メトキシ−２−（２−メトキシ−４−メトキシカルボニルフェニル）ベンジル−トリフェニルホスホニウムブロミド、104mg（0.393mmol）１８−クラウン−６、1808mg（13.1mmol）炭酸カリウム、ジクロロメタンを仕込み5分間撹拌した。反応液に、ジクロロメタンに332mg（1.31mmol）３’−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−［１，１’−ビフェニル］３−カルボクスアルデヒドを溶かしたものを加え、Ar雰囲気下40℃で16時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。残留物を減圧濃縮し、クロマトレックスカラムクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝3：1  v/v）にて精製し、目的化合物（F）を651mg（収率95%）得た。
【００６７】
６．化合物（G）の合成
【化４９】
2014205657.tif 000050
耐圧容器に、651mg（1.25mmol）２’−（２−３’−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）ビニル）−２，４’−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボン酸メチルを100ml酢酸エチルに溶かし、10%トリエチルアミンを加えた。10%パラジウム炭素を加え、水素圧0.4MPaで接触還元を4時間行った。不溶物を濾過し、濾液を濃縮しクロマトレックスクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝3：1  v/v）にて精製し、目的化合物（G）を439mg（収率67%）得た。
【００６８】
７．化合物（H）の合成
【化５０】
2014205657.tif 000051
二口ナス型フラスコに63.7mg（1.68mmol）リチウムアルミニウムヒドリドを入れ、Ar雰囲気下でテトラヒドロフランを溶かし0℃で撹拌した。同温で反応液に、テトラヒドロフランに439mg(0.838mmol）２’−（２−（３’−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）エチル）−２，４’−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボン酸メチルを溶かしたものを滴下し3時間撹拌した。反応液に0℃で、1.68ml水、3.36ml 1mol/L HCl aq.、5.04ml水の順で滴下し、2ml/mol  HCl  15mlを加え3時間撹拌した。セライト濾過し、減圧濃縮をし、酢酸エチルで抽出した。残留物をNa2SO4で乾燥し、化合物(H)を400mg（収率100%over）得た。
【００６９】
８．化合物（I）の合成
【化５１】
2014205657.tif 000052
400mg（0.838mmol）３’−（２−（４’−（ヒドロキシメチル）−２’，４−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）エチル）−［１，１’−ビフェニル］３−カルボクスアルデヒド、353mg(0.922mmol)トリフェニルホスフィン臭化水素をアセトニトリルに溶かし、82℃で1晩 還流した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝1：1  v/v）にて精製した後、シリカゲルクロマトグラフィー（CHCl3：EtOH＝10：1  v/v）で再び精製し、目的化合物(I)を735mg（収率100%）得た。
【００７０】
９．化合物（J）の合成
【化５２】
2014205657.tif 000053
300ml用ナス型フラスコに29.7mg（0.531mmol）ナトリウムメトキシド、73mlジクロロメタンを加え、300ml用ナス型フラスコに177mlジクロロメタン、217mg（0.266mmol）ホスホニウム塩βを混ぜ合わせたものを50mlシリンジで注入し、１１時間撹拌した。反応液を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝15：1  v/v）にて精製し、目的化合物（J）を64mg（収率56％）得た。
【００７１】
１０．化合物（K）の合成
【化５３】
2014205657.tif 000054
耐圧反応管中に128mg（0.295mmol）化合物（J）、13mg 10%パラジウム炭素、90ml 酢酸エチル、10ml メタノール入れ、水素圧0.4MPaで接触還元を行った。セライト濾過でパラジウムを除いて、濾液を濃縮し目的化合物（K）を112mg（収率87％）得た。
【００７２】
１１．化合物１５の合成
【化５４】
2014205657.tif 000055
二口ナス型フラスコに、10ml脱水ジクロロメタン、112mg（0.257mmol）化合物（K）を入れ、-78℃で2.57ml（2.57mmol）1mol/L  三臭化ホウ素ジクロロメタン溶液を滴下し、一晩撹拌した。反応液を20ml 水に滴下して酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせsat.NaHCO3  aq.で洗浄した。MgSO4で脱水した後に濾過し、減圧濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ-Hexane：AcOEt＝1：1  v/v）にて精製し、目的化合物（L）を83mg（収率79％）得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 7.36-7.29 (m, 3H), 7.22 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.18-7.15 (m, 2H), 7.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91-6.89 (m, 2H), 6.81 (dd, J = 8.0 Hz, 2.8 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 7.6 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.57 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.77 (s, 1H), 3.14-2.86 (m, 5H), 2.82-2.62 (m, 3H).
HRMS (FAB, [M＋H]+): C28H25O2, calcd for 393.1855, found 393.1844.,   m.p. 108℃
【００７３】
２．抗菌活性実験例
各合成化合物について、抗菌活性を確認した。対照として、既存の抗菌薬、シプロフロキサシン及びノルフロキサシンを用いた。
抗菌活性は，国際標準基準（Clinical Laboratory Standards Institute：CLSI）のブロス希釈技術（broth dilution techniques）に基づいて行った。96穴のマイクロプレートを用い，0.85 % NaClを含むミューラーヒントン寒天培地(Mueller-Hinton broth) (Difco製)に，上記各菌株を約105 CFU/100 mLの濃度となるように殖菌し，35 ℃で24時間インキュベートしたときの最小阻止濃度（MIC）（生育が認められない最小濃度）で示した。測定は３回行った。
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）およびバンコマイシン耐性腸球菌（VRE）に対する本発明の化合物の抗菌活性を確認した。本試験例のMIC測定に用いた菌のうち、MRSAの臨床菌（OM481菌株及びOM584菌株）は，岡山大学病院（日本）から提供を受けた。バンコマイシン抵抗腸球菌（VRE）であるNCTC 12201菌株及びFN-1菌株は，国立感染症研究所（日本）より提供を受けた。
結果を表1及び表２に示す。
【００７４】
【表１】
2014205657.tif 000056
【００７５】
【表２】
2014205657.tif 000057
【００７６】
３．細菌細胞膜障害
黄色ブドウ球菌Ｎ３１５株に対して、細胞膜に対する障害（以降、膜障害）を与えるかどうかを調べた。対数増殖期後期まで生育させた黄色ブドウ球菌細胞の懸濁液に対して、10 μg/mlのEtBrを添加した。その後、2.5 μg/mlの化合物１４を添加した。その結果、EtBrが細胞内に流入したことによる蛍光強度の増大が観察された（図１）。EtBrは細胞内に取り込まれると細胞内のDNAと結合して蛍光強度（Fluorescence intensity）が増大するため、化合物１４を加えることによって起きた蛍光強度の上昇は、エチジウムが細胞内に移行したことを意味する。従って、化合物１４が桜黄色ブドウ球菌の細胞膜に障害を与え、障害部位からEtBrが細胞内に流入したと考えられる。
細胞内外で形成されているH+勾配を消失させるCCCPを添加した。CCCPの添加により、H+勾配を駆動力としている輸送タンパク質が輸送活性を発揮できなくなり、化合物１４を添加した場合と同様に、EtBrの細胞内量が増大した。
なお、DMSOはネガティブコントロールとして使用した。
【００７７】
次に対数増殖期後期まで生育させた黄色ブドウ球菌細胞の細胞内に、強制的にEtBrを蓄積させた細胞に対して化合物１４を作用させた。その結果、EtBrの蛍光強度が減少した（図２）。これは細胞内からの濃度勾配に従ったEtBrの流出が起こっていることを意味する。
以上のことから、化合物１４は、黄色ブドウ球菌の細胞膜に何らかの障害を与える結果、EtBrが濃度勾配に従って流入あるいは流出する状態になったことが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
本発明は、メシチリン耐性やバンコマイシン耐性菌に対して優れた抗菌活性を示す抗菌剤を提供する。従って、本発明は、医療現場おける深刻な問題とされている耐性菌による感染症の治療薬を提供するものであり、感染症の治療予防等に大いに貢献するものである。
【図１】
2014205657.tif 000074
【図２】
2014205657.tif 000075