(57)【要約】【課題】炎症を軽減又は抑制できる作用を有し、且つ安全性の高い医薬品又は医薬部外品等を提供する。【解決手段】メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする抗炎症剤。
【請求項２】
メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とするプロスタグランジン産生抑制剤。
【請求項３】
メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする炎症性サイトカイン産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症反応は種々の化学的メディエーターによって誘起された後、白血球が集簇し、組織内へ浸潤し、更に浸潤細胞から各種のサイトカインや脂質メディエーターが放出されて、血管拡張、血管透過性亢進、白血球遊走、結合組織増殖などの組織反応が、発痛、発熱、発赤、腫脹等の不快な状態をもたらすことがある。
【０００３】
皮膚に炎症を起こす一因として、紫外線（特にＵＶＢ）の皮膚内への透過が挙げられる。紫外線による炎症が生じた場合、皮膚内で細胞膜に存在するアラキドン酸が遊離し、シクロオキシゲナーゼ系を介し各種のプロスタグランジン類が生成される。
【０００４】
一方、メチルヘスペリジンは、ヘスペリジンをメチル化し、水に可溶化したものであり、毛細血管の強化、出血予防、血圧調整などの生理作用を有し、また、黄色着色剤、酸化防止剤等として、食品、医薬品、化粧品などに利用されている。我が国では、医薬品添加物及び食品添加物にも指定されている。
引用文献１には、メチルヘスペリジンを経口摂取した場合に皮膚の紫外線に対する抵抗力を高めることが記載されている。
しかしながら、メチルヘスペリジンアグリコンに、抗炎症作用があることはこれまで知られていない。また、メチルヘスペリジンの体内動態についての報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−１０５７１４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、炎症を軽減又は抑制できる作用を有し、且つ安全性の高い医薬品又は医薬部外品等を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、抗炎症作用を有する素材について検討したところ、メチルヘスペリジンアグリコンに、特に紫外線暴露による炎症を有意に抑制させる作用があることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち本発明は、以下の１）〜３）に係るものである。
１）メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする抗炎症剤。
２）メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とするプロスタグランジン産生抑制剤。
３）メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする炎症性サイトカイン産生抑制剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、優れた抗炎症作用を有することから、抗炎症効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、化粧料、及び飲食品、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＵＶＢ誘導プロスタグランジン産生抑制効果を測定した結果を示す図である。
【図２】ＩＬ−１誘導プロスタグランジン産生抑制効果を測定した結果を示す図である。
【図３】炎症性サイトカイン発現抑制効果を測定した結果を示す図である。
【図４】メチルヘスペリジンアグリコンの経口摂取によるＵＶＢ誘導紅斑抑制効果を測定した結果を示す図である。
【図５】メチルヘスペリジンアグリコンの経口摂取によるＵＶＢ誘導表皮肥厚抑制効果を測定した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書において、「アグリコン」とは、配糖体の、糖とＯ−グリコシド結合、Ｓ−グリコシド結合を介して結合している非糖部分全体を意味する。
【００１２】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為を含まない、すなわちヒトを手術、治療又は診断する方法を含まない概念である。
【００１３】
本発明の有効成分としてのメチルヘスペリジンアグリコンは、メチルヘスペリジンを塩酸等の酸で加水分解したものである。斯かるメチルヘスペリジンアグリコンには、主にフラバノン型化合物（Ａ）及びカルコン型化合物（Ｂ）が含まれることが知られており（崎浴、日本化學雑誌、７９、６、７３３−７４０（１９５８））、その構成成分として、例えば以下に示す構造のものが挙げられる。
【００１４】
【化１】
2014101328.tif 000002
【００１５】
【化２】
2014101328.tif 000003
【００１６】
（式中、Ｒは水素原子もしくはメチル基を表す。）
【００１７】
本発明において用いられるメチルヘスペリジンアグリコンは、上記で示したカルコン型化合物（Ａ）とフラバノン型化合物（Ｂ）の両方を含むものでも良いし、また、それぞれの片方のみを含むものでも良い。特にカルコン体に強い作用が認められるため、カルコン体を多く含むものが好ましい。
【００１８】
メチルヘスペリジンアグリコンは、既知の方法、例えば、柑橘類の果皮などから製造されたヘスペリジンを水酸化ナトリウム水溶液に溶かし、そのアルカリ溶液に対応量のジメチル硫酸を作用させ、反応液を硫酸で中和し、ｎ−ブチルアルコールで抽出し、溶媒を留去したのち、イソプロピルアルコールで再結晶することによりメチルヘスペリジンを製造して（崎浴、日本化學雑誌、７９、７３３−６（１９５８））、それを塩酸等で加水分解することで製造できるが、その製造法はこれに限るものではない。
また、市販品（例えば、医薬品添加物、食品添加物、及び化粧品原料として流通しているもの、又は、「メチルヘスペリジン」（東京化成工業社）、「ヘスペリジンメチルカルコン」（Ｓｉｇｍａ社）等）を購入して、それらを酸加水分解して製造したアグリコンを使用することもできる。
【００１９】
後記実施例に示す通りメチルヘスペリジンアグリコンは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ評価系において、メチルヘスペリジンが有さない優れた抗炎症作用、プロスタグランジン産生抑制作用、又は炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する。
【００２０】
ここで、プロスタグランジン（ＰＧ）は、炎症性メディエーターの１つとして知られ、他の種々の炎症性メディエーターと協働することによって炎症反応を制御している。外傷や病原体の感染により組織が損傷を受けると、細胞膜にあるリン脂質はアラキドン酸に変換され、そこにシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）が作用してプロスタグランジンが生成される。プロスタグランジンは、炎症性サイトカイン等の因子とともに、血管拡張、血管透過性亢進、痛覚感作、白血球遊走を引き起こし、発痛、発熱、発赤、腫れ等の炎症症状をもたらす。そのためプロスタグランジンの産生や炎症性サイトカインを抑制することにより、炎症反応を改善することができる。
【００２１】
特に、プロスタグランジンＥ2（ＰＧＥ2）及びプロスタグランジンＦ2α（ＰＧＦ2α）は、それらの産生を介して、ブラジキニンの発痛作用や血管透過性亢進作用や、ブラジキニンやヒスタミンによる炎症性滲出が増強される。よって、プロスタグランジンＥ2やプロスタグランジンＦ2αの産生を抑制することによって、炎症性メディエーター（ブラジキニンやヒスタミン等）や炎症性サイトカインの作用を抑えることで、炎症反応を抑制することができる。
【００２２】
従って、上記メチルヘスペリジンアグリコンは、炎症の抑制、例えば紫外線暴露によって誘発される皮膚の炎症を軽減又は抑制するための医薬品、医薬部外品、化粧品、食品、又は飼料として、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤として有用である。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００２３】
また、当該食品には、炎症の抑制、例えば紫外線暴露によって誘発される皮膚の炎症を軽減又は抑制をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品が包含される。
【００２４】
すなわち、上記メチルヘスペリジンアグリコンは、抗炎症剤、プロスタグランジン産生抑制剤、又は炎症性サイトカイン産生抑制剤として使用することができ、更にこれらの剤を製造するために使用することができる。
【００２５】
上記医薬品（医薬部外品も含む）の剤型は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、静脈内注射剤、筋肉注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、湿布剤、バップ剤、軟膏、ローション、クリーム、チンキ剤、リニメント剤、懸濁液、ローション、バップ、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル又はオイル剤、口腔用製剤（歯磨剤、液状歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム、口腔用軟膏、うがい用錠剤、トローチ、のど飴等）等のいずれかでもよい。投与形態も経口投与（内用）、非経口投与（外用、注射）のいずれであってもよい。
【００２６】
このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、当該剤を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤、浸透圧調整剤、流動性促進剤、吸収助剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定化剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、湿潤剤、増粘剤、光沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、固着剤、香料、被膜剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２７】
上記製剤中の経口投与における上記メチルヘスペリジンアグリコンの含有量は、一般的に好ましくは０．１質量％以上、より好ましくは１質量％以上である。そして、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下である。また、好ましくは０．１〜９５質量％、より好ましくは１〜９０質量％である。
【００２８】
上記製剤中の非経口投与における上記メチルヘスペリジンアグリコンの含有量は、一般的に好ましくは０．００００１質量％以上、より好ましくは０．０００１質量％以上である。そして、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下である。また、好ましくは０．００００１〜１０質量％、より好ましくは０．０００１〜１質量％である。
【００２９】
上記医薬品等の投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、非経口投与の場合成人１人当たり、上記メチルヘスペリジンアグリコンとして、１日あたり好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ以上、特に好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ以上である。そして好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ以下、特に好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ以下である。また好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは０．１〜２０ｍｇ／ｋｇである。また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。
【００３０】
上記化粧料（医薬部外品も含む）は、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料等とすることができ、使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供することができる。このような種々の剤型の化粧料は、上記メチルヘスペリジンアグリコンと、皮膚化粧料に配合され得る、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤（例えば、抗炎症剤、殺菌剤、酸化防止剤、ビタミン類、脂肪代謝促進作用又は脱共役蛋白質発現促進作用が知られている薬物或いは天然物）、香料、樹脂、防菌防黴剤、植物抽出物、アルコール類等を適宜組み合わせることにより調製することができる。
【００３１】
当該化粧料の全量中の上記メチルヘスペリジンアグリコンは、通常好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、更に好ましくは０．０１質量％以上である。そして好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下、更に好ましくは５質量％以下である。また好ましくは０．０００１〜２０質量％、より好ましくは０．００１〜１０質量％、更に好ましくは０．０１〜５質量％である。
【００３２】
上記メチルヘスペリジンアグリコンを含有する上記食品の形態としては、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、更には、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）の栄養補給用組成物が挙げられる。
【００３３】
種々の形態の食品は、上記メチルヘスペリジンアグリコンを単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、本発明以外の有効成分等を適宜組み合わせて調製することができる。
【００３４】
また、飼料としては、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等の飼料等が挙げられ、上記食品と同様の形態に調製できる。
【００３５】
当該食品又は飼料中における上記メチルヘスペリジンアグリコンの含有量は、一般的に好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上である。そして、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下である。また、好ましくは０．０００１〜１０質量％、より好ましくは０．００１〜１質量％である。
【００３６】
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする炎症剤。
＜２＞メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とするプロスタグランジン産生抑制剤。
＜３＞メチルヘスペリジンアグリコンを有効成分とする炎症性サイトカイン産生抑制剤。
＜４＞紫外線暴露により誘発される炎症を軽減又は抑制する＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の剤。
＜５＞抗炎症剤を製造するための、メチルヘスペリジンアグリコンの使用。
＜６＞プロスタグランジン産生抑制剤を製造するための、メチルヘスペリジンアグリコンの使用。
＜７＞炎症性サイトカイン産生抑制剤を製造するための、メチルヘスペリジンアグリコンの使用。
＜８＞抗炎症に使用するための、メチルヘスペリジンアグリコン。
＜９＞プロスタグランジン産生抑制に使用するための、メチルヘスペリジンアグリコン。
＜１０＞炎症性サイトカイン産生抑制に使用するための、メチルヘスペリジンアグリコン。
＜１１＞非治療的使用である、＜８＞〜＜１０＞のいずれかに記載の使用。
＜１２＞メチルヘスペリジンアグリコンを、ヒト若しくは動物に投与する抗炎症方法。
＜１３＞メチルヘスペリジンアグリコンを、ヒト若しくは動物に投与するプロスタグランジン産生抑制方法。
＜１４＞メチルヘスペリジンアグリコンを、ヒト若しくは動物に投与する炎症性サイトカイン産生抑制方法。
＜１５＞非治療的方法である、＜１２＞〜＜１４＞のいずれかに記載の方法。
＜１６＞紫外線暴露により誘発される炎症を軽減又は抑制する＜１２＞〜＜１５＞のいずれかに記載の方法。
【実施例】
【００３７】
〔メチルヘスペリジンアグリコンの調製〕
食添メチルヘスペリジン（アルプス薬品工業）５．００ｇを５０％ＥｔＯＨ溶液２５０ｍＬに溶解させた後に、濃塩酸１５ｍＬを加え、８４℃で加熱還流を１６時間行った。室温に冷却後、水酸化ナトリウムで中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ4で乾燥させて、ろ過、濃縮を経て、粗生成物（メチルヘスペリジンアグリコン）３．３２ｇを得た。展開溶媒をヘキサン−酢酸エチル（１：１）としたＴＬＣ上で、メチルヘスペリジンアグリコンの生成を確認した。
【００３８】
〔メチルヘスペリジンアグリコンのＵＶＢ誘導プロスタグランジン産生抑制効果〕
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）（ＫＵＲＡＢＯ）を１２ｗｅｌｌプレートに播種し、サブコンフルエントになったところで増殖因子を含まない（−）培地に換え、翌日に試験を行った。この培地を、メチルヘスペリジン（ＭＨＥＳ）又はメチルヘスペリジンアグリコンの最終濃度が１６．５μｇ／ｍＬ（約５０μＭ）になるように調製した（−）培地に交換し、２時間前処理を行った。この培地をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に置き換え、ＵＶＢ（２０ｍＪ；１ｍＷ／ｃｍ2の線量で２０秒間）を照射、再度検体を含む培地に交換し、２４時間後に細胞上清を回収した。細胞上清中に含まれるプロスタグランジン量を、ＰＧＥ2  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ）又はＰＧＦ2α  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ）にて定量した。その結果を図１に示す。
【００３９】
図１の結果より、ＵＶＢ刺激によりＰＧＥ2及びＰＧＦ2αの産生が誘導され、メチルヘスペリジンアグリコンのみでＰＧＥ2及びＰＧＦ2αの産生抑制作用が認められた。このことからメチルヘスペリジンには抗炎症作用は認められず、メチルヘスペリジンアグリコンのみに抗炎症作用を有することが明らかとなった。
【００４０】
〔メチルヘスペリジンアグリコンのＩＬ−１β誘導プロスタグランジン産生抑制効果〕
正常ヒト新生児包皮皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）（ＫＵＲＡＢＯ）を１２ｗｅｌｌプレートに播種し、サブコンフルエントになったところで増殖因子を含まない（−）培地に換え、翌日に試験を行った。この培地を、メチルヘスペリジンアグリコンの最終濃度が３．３、６．６、１６．５μｇ／ｍＬ（約１０、２０、５０μＭ）になるように調製した（−）培地に交換し、１６時間前処理を行った。その後、ＩＬ−１βを最終濃度が１ｎｇ／ｍＬになるように添加し、２４時間後に細胞上清を回収した。細胞上清中に含まれるＰＧＥ2量を、ＰＧＥ2  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ）にて定量した。その結果を図２に示す。
【００４１】
図２に結果より、ＩＬ−１β刺激によりＰＧＥ2及びＰＧＦ2αの産生が誘導され、この誘導はメチルヘスペリジンアグリコンにより濃度依存的に抑制することが認められた。このことからメチルヘスペリジンアグリコンは炎症性サイトカイン刺激によるプロスタグランジン産生についても抑制効果があることが示された。
【００４２】
〔メチルヘスペリジンアグリコンの炎症性サイトカイン発現抑制効果〕
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）（ＫＵＲＡＢＯ）を１２ｗｅｌｌプレートに播種し、サブコンフルエントになったところで増殖因子を含まない（−）培地に換え、翌日に試験を行った。この培地を、メチルヘスペリジンアグリコンの最終濃度が３．３、６．６、１６．５μｇ／ｍＬ（約１０、２０、５０μＭ）になるように調製した（−）培地に交換し、２時間前処理を行った。培地をＰＢＳに置き換え、ＵＶＢ（２０ｍＪ；１ｍＷ／ｃｍ2の線量で２０秒間）を照射、再度検体を含む培地に交換し、８時間後に細胞を回収した。細胞からＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてＲＮＡ抽出を行い、細胞抽出ＲＮＡ５００μｇをＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によりｃＤＮＡ合成し、Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  ２０ｎｇ相当量をｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＰＣＲに供した。目的の遺伝子を特異的に検出するＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）プローブはＩＬ１Ｂ（Ｈｓ０１５５５４１０＿ｍ１）、ＩＬ６（Ｈｓ００９８５６３９＿ｍ１）、ＴＮＦ（Ｈｓ００１７４１２８＿ｍ１）を用いた。目的遺伝子発現量は内部標準遺伝子ＲＰＬＰ０（Ｈｓ９９９９９９０２＿ｍ１）の発現量で補正した。解析には７５００  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。その結果を図３に示す。
【００４３】
図３の結果より、ＵＶＢ刺激によりＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦαの発現亢進が認められ、その発現はメチルヘスペリジンアグリコンアグリコンにより濃度依存的に抑制された。このことからメチルヘスペリジンアグリコンアグリコンは炎症性サイトカイン発現抑制効果も有することが明らかとなった。
【００４４】
〔メチルヘスペリジンアグリコン経口摂取によるＵＶＢ誘導紅斑抑制効果〕
７週齢のＨＲ−１ヘアレスマウス（♀）（日本ＳＬＣ）を１週間予備飼育後、平均体重が均等になるように群分けし（各群ｎ＝１０）、自由摂食・自由飲水、温度２３±１℃、明期１２時間（７：００〜１９：００）、３〜４匹／ケージの条件化にて飼育した。９週齢より、メチルヘスペリジンアグリコン投与群は、メチルヘスペリジンアグリコン５２ｍｇ／ｋｇ体重を、エマルジョン形態で毎日２週間、胃ゾンデを用いて強制経口投与した。コントロール群は、メチルヘスペリジンアグリコンを除いたものをエマルジョンとし、同様に経口投与した。投与開始２週間後に、マウス背部に未照射部位（１ｃｍ×１．５ｃｍ）及び、照射部位（１ｃｍ×１．５ｃｍ）を設定し、ペントバルビタール（商品名：ソムノペンチル（共立製薬））麻酔下にて、照射部位にＵＶＢを１ｍＷ／ｃｍ2の線量で４０秒間（４０ｍＪ）照射した。ＵＶＢ照射４８時間後に、分光式色差計ＳＥ−６０００（日本電色工業）を用いて皮膚色（ａ＊値）を測定した。麻酔は、吸入麻酔装置４００  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ  Ｕｎｉｔ（Ｕｎｉｖｅｎｔｏｒ）を用いて、イソフルラン（商品名：フォーレン（アボットジャパン））０．８〜１．２％をマウスに吸入させた。未照射部位、照射部位をそれぞれ５回以上測定し、その平均値を皮膚色の値とした。その結果を図４に示す。
【００４５】
図４の結果より、メチルヘスペリジンアグリコン投与群は、非投与群に対して、ＵＶＢ照射によるａ＊値の上昇が抑制された。すなわち、メチルヘスペリジンアグリコンは紫外線による皮膚炎症を抑制することが明らかになった。
【００４６】
〔メチルヘスペリジンアグリコン経口摂取によるＵＶＢ誘導表皮肥厚抑制効果〕
７週齢のＨＲ−１ヘアレスマウス（♀）（日本ＳＬＣ）を１週間予備飼育後、平均体重が均等になるように群分けし（各群ｎ＝１０）、自由摂食・自由飲水、温度２３±１℃、明期１２時間（７：００〜１９：００）、３〜４匹／ケージの条件化にて飼育した。９週齢より、メチルヘスペリジンアグリコン投与群は、メチルヘスペリジンアグリコン５２ｍｇ／ｋｇ体重を、エマルジョン形態で毎日２週間、胃ゾンデを用いて強制経口投与した。コントロール群は、メチルヘスペリジンアグリコンを除いたものをエマルジョンとし、同様に経口投与した。投与開始２週間後に、マウス背部に未照射部位（１ｃｍ×１．５ｃｍ）及び、照射部位（１ｃｍ×１．５ｃｍ）を設定し、ペントバルビタール（商品名：ソムノペンチル（共立製薬））麻酔下にて、照射部位にＵＶＢを１ｍＷ／ｃｍ2の線量で４０秒間（４０ｍＪ）照射した。ＵＶＢ照射４８時間後に解剖を行い、皮膚をホルマリン固定し、病理組織標本（ＨＥ染色）を作製した（（株）組織化学研究所に依頼）。各標本５箇所の表皮厚を測定し、その平均値を個体の表皮厚とした。その結果を図５に示す。
【００４７】
（結果）
図５の結果より、メチルヘスペリジンアグリコン投与群は、非投与群に対して、ＵＶＢ照射による表皮厚の増加が抑制された。
【図１】
2014101328.tif 000004
【図２】
2014101328.tif 000005
【図３】
2014101328.tif 000006
【図４】
2014101328.tif 000007
【図５】
2014101328.tif 000008