(57)【要約】【課題】脂質代謝酵素阻害剤の乳癌治療剤としての有効性を評価するための技術の提供。【解決手段】乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価する方法を提供する。この方法によれば、乳癌が高いＥＲ発現を示し、脂質代謝異常を伴うＥＲ発現陽性クラスに分類される場合には、該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性が高いと評価できる。逆に、乳癌が低いＥＲ発現を示し、ＥＲ発現陰性クラスに分類される場合には、必ずしも脂質代謝異常を伴うとはいえないことから、該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性は高くないと評価できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価する方法。
【請求項２】
エストロゲンレセプターの発現が高い場合に前記有効性が高いと評価し、エストロゲンレセプターの発現が低い場合に前記有効性が低いと評価する請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記有効性を、乳癌に存在する炭素数３４及び不飽和結合数０のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：０））の量に対する炭素数３４及び不飽和結合数１のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：１））の量の比に基づいて評価する請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記乳癌が、人由来の臨床試料又は実験動物由来の実験試料である請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記脂質合成酵素阻害剤が、ステアリン酸ＣｏＡ脱飽和酵素（stearoyl-CoA desaturase-1）又はリゾホスファチジルコリンアセチル転移酵素（lysophosphatidylcholine acyltransferase）の阻害剤である請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
患者由来の乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価するための被験者を前記患者中から選択する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳癌治療剤の有効性評価方法及び被験者選択方法に関する。より詳しくは、乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として乳癌治療剤の有効性を評価するための方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
乳癌患者から生検により採取あるいは手術により切除された臨床試料の検査のため、分子の可視化技術が用いられている。例えば、乳癌のクラス分類のため、ＥＲ（Estrogen Receptor）及びＨＥＲ２（Human Epidermal growth factor Receptor type 2）などの受容体を免疫組織学的に染色することが行われている（非特許文献１，２参照）。また、蛍光in situハイブリダイゼーションにより、ｍｙｃやＨＥＲ２などの癌原遺伝子の増幅産物を検出することも行われている（非特許文献３）。
【０００３】
乳癌のクラス分類の一つの方法として、遺伝子発現解析により乳癌を「Luminal A」、「Luminal B」、「HER2-enriched」、「Basal like」の４クラスに分類する方法が採用されている。「Luminal A」及び「Luminal B」は、乳管上皮細胞（luminal cells）に発現する遺伝子が発現している乳癌であり、乳癌全体の６０％程度を占める。「Luminal A」は、ＥＲ（Estrogen Receptor）関連遺伝子の発現が高度であり、ＨＥＲ２（Human Epidermal growth factor Receptor type 2）の発現と、Ki-67などの増殖関連遺伝子の発現が低いクラスである。一方、「Luminal B」は、ＥＲ関連遺伝子の発現が低く、ＨＥＲ２関連遺伝子の発現はまちまちであり、増殖関連遺伝子の発現が高度なクラスである。このクラス分類は、癌の生物学的特性や治療反応性と関連するため、ＥＲ発現の強度による乳癌のクラス分類は臨床上重要である。
【０００４】
乳癌に関しては、近年、脂質代謝の活性化が発癌に関与していることが報告され（非特許文献４参照）、乳癌細胞においてホスファチジルコリンの分解増加による脂質代謝異常が生じていることが確認されている（非特許文献５参照）。
【０００５】
本発明に関連して、近年、組織試料上の生体分子を２次元に可視化できるイメージング質量分析（Imaging Mass Spectrometry: IMS）装置が開発されている（非特許文献６参照）。ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳ（Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization-IMS）では、２次元のレーザ走査によって、組織試料上の生体分子をその位置情報を保持したままイオン化できる。イオン化された生体分子は、飛行時間型質量分析計によって分析され、質量対電荷比に従って同定される。これにより、ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳでは、組織試料上の生体分子の分布を、測定ポイント間のシグナル強度の相対値によってイメージ化できる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】"American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer." J Clin Oncol, 2007, Vol.25, No.1, p.118-145.
【非特許文献２】"American Society of Clinical Oncology/College Of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer." J Clin Oncol, 2010, Vol.28, No.16, p.2784-2795.
【非特許文献３】"ERBB2 amplification in breast cancer analyzed by fluorescence in situ hybridization." Proc Natl Acad Sci U S A, 1992, Vol.89, No.12, p. 5321-5325.
【非特許文献４】"Fatty acid synthase and the lipogenic phenotype in cancer pathogenesis." Nat Rev Cancer, 2007, Vol.7, No.10, p.763-777.
【非特許文献５】"Metabolic markers of breast cancer: enhanced choline metabolism and reduced choline-ether-phospholipid synthesis." Cancer Res, 2002, Vol.62, No.7, p.1966-1970.
【非特許文献６】"MALDI imaging mass spectrometry: molecular snapshots of biochemical systems." Nat Methods, 2007, Vol.4, No.10, p.828-833.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述のように乳癌の発癌には脂質代謝異常が関与しているため、乳癌の治療及び予防のために脂質代謝酵素を標的とした創薬が有効と考えられる。そこで、本発明は、脂質代謝酵素阻害剤の乳癌治療剤としての有効性を評価するための技術を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、乳癌患者から提供された乳腺組織におけるホスファチジルコリンの分布を検討した結果、特定の分子種のホスファチジルコリンが乳癌中に多く存在していることを見い出した。ホスファチジルコリンは、グリセリンを中心骨格として２つの脂肪酸とリン酸が結合し、さらにリン酸にコリンが結合した構造を有する。ホスファチジルコリン中に結合する脂肪酸の炭素数及び不飽和結合数は、分子種に応じてそれぞれ異なり得るが、乳癌には特定の炭素数及び不飽和結合数の分子種が豊富に存在することが明らかになった。
【０００９】
具体的には、乳癌は、炭素数３２、不飽和結合数１のホスファチジルコリン（ＰＣ（３２：１））、炭素数３４、不飽和結合数１のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：１））、炭素数３６、不飽和結合数１のホスファチジルコリン（ＰＣ（３６：１））及び炭素数３４、不飽和結合数０のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：０））を蓄積する傾向があった（後述する実施例１，２参照）。
【００１０】
また、乳癌には、ＳＦＡ−ＰＣ（Saturated Fatty Acid-PC）に比してＭＵＦＡ−ＰＣ（Mono Unsaturated Fatty Acid-PC）が蓄積している傾向があり、特定の炭素数のＳＦＡ−ＰＣに対するＭＵＦＡ−ＰＣの比が有意に高かった。具体的には、乳癌では、炭素数３６のＳＦＡ−ＰＣに対するＭＵＦＡ−ＰＣの比（ＰＣ（３６：１）／ＰＣ（３６：０））が正常組織に対して有意に高かった。
【００１１】
乳癌では、ＭＵＦＡ−ＰＣの生成に関与する酵素であるＳＣＤ１（Stearoyl-CoA Desaturase-1）が強発現しており、特に、高いＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比を示した乳癌領域では該比とＳＣＤ１発現量との相関が認められた（後述する実施例３参照）。
【００１２】
さらに、特定のクラスの乳癌では、炭素数３４のＳＦＡ−ＰＣに対するＭＵＦＡ−ＰＣの比が有意に高いことが明らかとなった。
【００１３】
具体的には、ＰＣ（３４：０）に対するＰＣ（３４：１）の存在量の比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））が、ＥＲ（Estrogen Receptor）発現陽性に分類される乳癌では、ＥＲ陰性に分類される乳癌に比して有意に高かった（後述する実施例４参照）。
【００１４】
以上の知見に基づき、本発明は、以下の技術を提供する。
【００１５】
すなわち、一側面において、本発明は、乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価する方法を提供する。本発明において、ＥＲ発現陽性クラスに分類される乳癌では、有意に高いＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が認められ、顕著な脂質代謝異常が生じていることが確認された。従って、この方法によれば、乳癌が高いＥＲ発現を示し、脂質代謝異常を伴うことが明らかとなったＥＲ発現陽性クラスに分類される場合には、該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性が高いと評価できる。逆に、乳癌が低いＥＲ発現を示し、ＥＲ発現陰性クラスに分類される場合には、必ずしも脂質代謝異常を伴うとはいえないことから、該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性は高くないと評価できる。
この評価方法では、脂質合成酵素阻害剤の有効性の指標として、乳癌のＥＲ発現の強度に加えて、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を用いてもよい。ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が大きいほど、乳癌に存する脂質代謝異常が高度であり、脂質合成酵素阻害剤が有効に作用し得るものと評価される。
この評価方法において、前記乳癌は、人由来の臨床試料又は実験動物由来の実験試料であってよい。また、前記脂質合成酵素阻害剤は、ステアリン酸ＣｏＡ脱飽和酵素（stearoyl-CoA desaturase-1）又はリゾホスファチジルコリンアセチル転移酵素（lysophosphatidylcholine acyltransferase）の阻害剤であってよい。
【００１６】
また、本発明は、患者由来の乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価するための被験者を前記患者中から選択する方法を提供する。この選択方法によれば、高いＥＲ発現を示し、高度な脂質代謝異常を伴う乳癌を有する患者を選択することが可能であり、脂質合成酵素阻害剤の乳癌治療剤としての有効性を試験するための被験者集団を効果的に形成できる。
【００１７】
さらに、他の一側面において、本発明は、乳腺組織に存在する、炭素数３４及び不飽和結合数０のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：０））の量に対する炭素数３４及び不飽和結合数１のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：１））の量の比を指標として該乳腺組織中の乳癌を検出する方法を提供する。
この検出方法は、具体的には、前記乳腺組織に存在する、ＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３４：０）をイメージング質量分析装置により検出する手順と、前記比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））を算出する手順と、前記乳腺組織における該比の値の分布を示す画像を生成する手順と、該画像において前記比が大きい領域を乳癌と判定する手順と、を含む。
この検出方法は、ＰＣ（３４：０）及び（ＰＣ（３４：１）を乳癌マーカとして使用するものであり、この方法によれば、生成された画像中において、乳腺組織中の乳癌を、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が大きい領域として検出することが可能である。
【００１８】
同時に、本発明は、乳腺組織に存在する、ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）をイメージング質量分析装置により検出する手順と、ＰＣ（３４：０）の量に対するＰＣ（３４：１）の量の比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））を算出する手順と、前記乳腺組織における該比の値の分布を示す画像を生成する手順と、を含む乳癌の可視化方法を提供する。
この可視化方法によれば、生成された画像中において、乳腺組織中の乳癌を、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が大きい領域として可視化することが可能である。
【００１９】
また、本発明は、乳腺組織に存在する、ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）を検出する手順と、ＰＣ（３４：０）の量に対するＰＣ（３４：１）の量の比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））を算出する手順と、該比に基づいて前記乳腺組織中の乳癌の有無を判定する手順と、を含む乳癌の診断方法を提供する。
この診断方法によれば、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が一定値よりも高い場合に、乳腺組織中に乳癌が存在すると診断できる。
【００２０】
さらに、本発明は、乳癌に存在する、ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）を検出する手順と、ＰＣ（３４：０）の量に対するＰＣ（３４：１）の量の比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））を算出する手順と、該比に基づいて前記乳癌のクラスを決定する手順と、を含む乳癌のクラス分類方法を提供する。
このクラス分類方法によれば、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が一定値よりも高い場合に、乳癌がＥＲ発現陽性クラスであると決定できる。
【００２１】
また、本発明は、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の患者に対する有効性を評価するための方法であって、前記患者の乳癌に存在する、ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）を検出する手順と、ＰＣ（３４：０）の量に対するＰＣ（３４：１）の量の比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））を算出する手順と、該比に基づいて前記有効性の程度を判定する手順と、を含む方法をも提供する。
この評価方法において、前記脂質合成酵素阻害剤は、例えば、ステアリン酸ＣｏＡ脱飽和酵素（stearoyl-CoA desaturase-1）又はリゾホスファチジルコリンアセチル転移酵素（lysophosphatidylcholine acyltransferase）の阻害剤とできる。
乳癌では脂質代謝の活性化が生じており、脂質合成酵素阻害剤が乳癌治療に有効となり得る。乳癌においてＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の増加による脂質代謝異常が確認されれば、当該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性が高いと判定できる。
【００２２】
本発明において、「臨床試料」あるいは「実験試料」とは、生体（ヒトを含む動物）から分離された臓器、臓器片あるいは組織を意味し、例えば生検により採取された臓器等あるいは手術により切除された臓器等を指す。人由来の臓器等を特に臨床試料と称し、実験動物由来の臓器等を特に実験試料と称するものとする。
【発明の効果】
【００２３】
本発明により、脂質代謝酵素阻害剤の乳癌治療剤としての有効性を評価するための技術が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳによる乳癌を含む乳腺組織中のＰＣの検出像を示す図面代用写真である（実施例１）。（ａ）はＨＥ染色像、（ｂ）はＰＣ（３２：１）の検出像、（ｃ）はＰＣ（３６：０）の検出像を示す。
【図２】各標本の乳癌組織及び正常組織のＰＣ（３２：１）（ａ）及びＰＣ（３６：０）（ｂ）のシグナル強度を示すグラフである（実施例１）。
【図３】各標本の乳癌組織及び正常組織のＰＣ（３４：１）（ａ）、ＰＣ（３６：１）（ｂ）、ＰＣ（３２：０）（ｃ）及びＰＣ（３４：０）（ｄ）のシグナル強度を示すグラフである（実施例２）。
【図４】乳癌を含む乳腺組織におけるＳＣＤ１の発現を評価した結果を示す（実施例３）。（ａ）はヘマトキシリン・エオジンによる染色像、（ｂ）はＳＣＤ１の免疫染色像を示す図面代用写真である。（ｃ）は、各標本の乳癌組織及び正常組織のＳＣＤ１染色強度を示すグラフである。
【図５】各標本の乳癌組織及び正常組織のＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比を示すグラフ（ａ）と、ＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比とＳＣＤ１発現量との相関を示すグラフ及び表（ｂ）である。
【図６】ＥＲ発現陽性群と陰性群の乳癌組織及び正常組織のＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比を示すグラフである（実施例４）。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【００２６】
１．乳癌治療剤の有効性の評価方法
（１）第１の乳癌治療剤の有効性評価方法
乳癌に関しては、近年、脂質代謝の活性化が発癌に関与していることが報告されている（非特許文献４参照）。本発明においても、乳癌に特定の分子種のホスファチジルコリンが蓄積し、特にＭＵＦＡ−ＰＣの蓄積傾向が認められている（後述する実施例１，２参照）。
【００２７】
従って、脂質合成酵素、特にＭＵＦＡ−ＰＣの生成に関与する酵素は、乳癌の治療剤又は予防剤の標的となり得る。以下に示すように、ＭＵＦＡ−ＰＣの合成には、ステアリン酸ＣｏＡ脱飽和酵素（stearoyl-CoA desaturase-1: SCD1）とリゾホスファチジルコリンアシル転移酵素（lysophosphatidylcholine acyltransferase: LPCAT）が関与している。ＳＣＤ１はＳＦＡをＭＵＦＡに変換する酵素であり、ＬＰＣＡＴはリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）とＭＵＦＡからＭＵＦＡ−ＰＣを合成する酵素である。
【００２８】
【化１】
2014149243.tif 000002
【００２９】
ＳＣＤ１及びＬＰＣＡＴの阻害剤は、乳癌の治療又は予防のための薬剤として有望と考えられるが、従来、特定の患者の乳癌で実際に脂質代謝異常が生じているか否かを確認する方法が存在せず、該患者における薬剤の有効性を評価したり、該患者への薬剤の適用の可否を判定したりするための評価系が存在しなかった。
【００３０】
そこで、本発明は、乳癌治療剤の有効性評価方法の第１の方法として、乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価する方法を提供する。
【００３１】
本発明において、ＥＲ発現陽性クラスに分類される乳癌では、有意に高いＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が認められ、顕著な脂質代謝異常が生じていることが確認された（後述する実施例４参照）。従って、この方法によれば、乳癌が高いＥＲ発現を示し、脂質代謝異常を伴うことが明らかとなったＥＲ発現陽性クラスに分類される場合には、該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性が高いと評価できる。逆に、乳癌が低いＥＲ発現を示し、ＥＲ発現陰性クラスに分類される場合には、必ずしも脂質代謝異常を伴うとはいえないことから、該乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性は高くないと評価できる。
【００３２】
乳癌のＥＲ発現強度は、従来公知の手法によって測定できる。例えば、公表されたガイドライン（Guidelines of the American Society of Clinical Oncology and the College of American pathologists）に従って、発現の陽性及び陰性を判定できる。具体的には、組織切片の免疫染色により乳癌細胞の１０％以上が染色される検体をＥＲ陽性と判定する。また、免疫組織化学的手法による判定は、例えば、Ａｌｌｒｅｄスコア分類及びＪ−ｓｃｏｒｅ分類などの公知の基準を用いて行ってもよい。Ａｌｌｒｅｄスコア分類は，染色された細胞の占有率と染色強度を判定し、これら２つの値を合計して８段階に分類したもので、３以上を陽性と判定する。Ｊ−ｓｃｏｒｅ分類は、陽性細胞の比率のみによる評価法で、１％、１０％で陽性率を区分し、１０％以上の腫瘍細胞が陽性の場合を陽性と判定する。
【００３３】
また、乳癌のＥＲ発現強度の測定手法として、免疫学的測定（EIA）法及びリガンドバインディングアッセイ（LBA）法なども採用できる。測定精度の観点から、免疫組織染色による上記測定手法が最も好ましい。
【００３４】
乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性が高いと判断された場合には、乳癌の治療のため、当該乳癌患者への脂質合成酵素阻害剤の適用が可能と判定される。一方、乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性が低いと判断された場合、前記適用を不可とすることで、効果の低い薬剤治療の排除や副作用の回避が可能となる。
【００３５】
この評価方法では、脂質合成酵素阻害剤の有効性の指標として、乳癌のＥＲ発現の強度に加えて、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を用いてもよい。ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が大きいほど、乳癌に高度な脂質代謝異常が存し、脂質合成酵素阻害剤が有効に作用し得るものと評価される。
【００３６】
ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）の検出とＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の算出は、次に説明する乳癌検出方法と同様のＭＡＬＤＩ−ＩＭＳを用いた手順によって行うことができる。この他、乳癌あるいはこれを含む乳腺組織からＰＣを抽出し、クロマトグラフィーによってＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）の検出を行って、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出するなどの方法も採用できる。
【００３７】
［治験集団の形成］
本評価方法は、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の有効性を評価する治験を行う場合に、被験者集団を効果的に形成するために利用できる。従来、患者の乳癌で実際に脂質代謝異常が生じているか否かを確認することは難しく、当該患者に脂質合成酵素阻害剤を投与した際の薬効を正しく評価することができなかった。本評価方法によれば、患者由来の乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、高いＥＲ発現を示し、高度な脂質代謝異常を伴う乳癌を有する患者を選択できるため、脂質合成酵素阻害剤の薬効を正確に評価可能な被験者を選択することが可能となる。
【００３８】
（２）第２の乳癌治療剤の有効性評価方法
本発明では次の知見が得られている。すなわち、乳癌において、ＳＣＤ１の強発現が確認されるとともに、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比（例えば、ＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比）の正常組織に対する増加が確認された（後述する実施例３参照）。この知見から、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比が高い乳癌組織に対しては、ＳＣＤ１阻害剤などの脂質合成酵素阻害剤が有効に作用する可能性が示唆される。
【００３９】
従って、乳癌組織中のＰＣ（３６：１）及びＰＣ（３４：１）などを含むＭＵＦＡ−ＰＣの量と、ＰＣ（３６：０）及びＰＣ（３４：０）などを含むＳＦＡ−ＰＣの量を測定し、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比を算出することで、該比の大小によって乳癌に対する脂質合成酵素阻害剤の有効性の程度を判定できる。
【００４０】
本発明に係る乳癌治療剤の有効性の評価方法の第２の方法は、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の患者に対する有効性を評価するための方法である。この評価方法は、患者の乳癌に存在する、ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）を検出する手順と、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出する手順と、該比に基づいて前記有効性の程度を判定する手順と、を含む。
【００４１】
ＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣの検出とＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比の算出は、次に説明する乳癌検出方法と同様のＭＡＬＤＩ−ＩＭＳを用いた手順によって行うことができる。この他、乳癌あるいはこれを含む乳腺組織からＰＣを抽出し、クロマトグラフィーによってＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣの検出を行って、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比を算出するなどの方法も採用できる。
【００４２】
また、有効性の判定は、例えばＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に関して一定の閾値を設定し、この閾値を超えている乳癌であれば有効性が高いとすればよい。このような判定は装置又はソフトウェアにより自動で行ってもよく、あるいはＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の数値に基づいて試験者が自身で行ってもよい。有効性が高いとされた場合にのみ、患者に脂質合成酵素阻害剤を投与することで、効果的な治療が可能となる。
【００４３】
閾値の設定は、乳癌及び正常の乳腺組織について予め取得されたＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に基づいて決定すればよく、閾値は装置又はソフトウェアに保持記憶させておくこともできる。
【００４４】
［治療効果判定］
また、本評価方法は、患者に脂質合成酵素阻害剤を投与する前後に、患者から乳癌をバイオプシーし、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比を算出することによって、脂質合成酵素阻害剤が有効に作用しているかどうかを調べるためにも応用できる。例えば、脂質合成酵素阻害剤の投与前に採取した乳癌組織のＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比に対して、投与前に採取した組織の該比が低下していた場合、薬剤が有効に作用したことを確認できる。併せて、次に説明する検出方法によって乳癌のサイズを検出することで、薬剤の治療効果を評価できる。
【００４５】
ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比がＥＲ発現陽性の乳癌で高かったことから、本評価方法は、特に、ＥＲ発現陽性のクラスに属する乳癌に対する薬剤の有効性評価への応用が期待できる。
【００４６】
［抗癌剤のスクリーニング］
さらに、本評価方法は、乳癌治療剤の候補物質を患者に投与する前後に、生検材料中のＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比を調べることで、乳癌治療剤のスクリーニングにも応用が可能である。例えば、候補物質の投与前に採取した乳癌組織のＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比に対して、投与前に採取した組織の該比が低下していた場合、候補物質が脂質代謝経路を介した抗癌作用を有するものと推定できる。併せて、次に説明する検出方法によって乳癌のサイズを検出することで、候補物質の抗癌作用を確認することもできる。
【００４７】
ＰＣは、細胞膜の主な構成成分であるため、ＰＣ合成を標的とした抗癌剤は、正常細胞の機能にも障害をあたえるおそれがある。しかし、本発明において、乳癌に特定の炭素数及び不飽和結合数のＰＣが蓄積していることが明らかなったことから、この特定のＰＣの合成を標的としたスクリーニングを行えば、正常細胞への副作用を抑制可能な抗癌剤が得られると考えられる。特に、ＰＣ（３４：１）を蓄積するＥＲ発現陽性クラスに属する乳癌に対しては、特異性の高い抗癌剤が得られる可能性がある。
【００４８】
２．乳癌検出方法
本発明に係る乳癌検出方法は、乳腺組織に存在する、特定の脂肪酸炭素数及び特定の脂肪酸不飽和結合数を有するホスファチジルコリン（ＰＣ）を検出することを特徴とする。ＰＣは、グリセリンを中心骨格として２つの脂肪酸とリン酸が結合し、さらにリン酸にコリンが結合した構造を有する。生体膜のＰＣの脂肪酸は、主なものでパルミチン酸（１６：０）、ステアリン酸（１８：０）、オレイン酸（１８：１）、リノール酸（１８：２）、リノレン酸（１８：３）などが知られている。ここで（Ｍ：Ｎ）の表記において、Ｍは各脂肪酸の炭素数、Ｎは不飽和結合数を表す。このうち、本発明に係る乳癌検出方法では、炭素数３４及び不飽和結合数０のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：０））の量に対する炭素数３４及び不飽和結合数１のホスファチジルコリン（ＰＣ（３４：１））の量の比を指標として該乳腺組織中の乳癌を検出する。
【００４９】
［検出手順］
具体的には、まず、乳腺組織に存在する、ＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３４：０）をイメージング質量分析装置（ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳ）により検出する。
【００５０】
検出手順で用いる乳腺組織は、生体から分離された乳腺又はその一部であって、乳癌の患者又は乳癌が疑われる被験者から生検により採取された乳腺組織あるいは手術により切除された乳腺組織とされる。ただし、イメージング質量分析装置による解析が可能な限りにおいて、生体内に存在したままの乳腺又はその一部を用いてもよい。
【００５１】
生体から分離された乳腺を用いる場合の検出手順の具体例を説明すると、まず、乳腺の凍結切片を作成し、ＩＴＯコートされたスライドガラス上にマウントする。次いで、蒸着装置を用い、常法に従って、ＩＴＯコートされたスライドガラスにマウントされた試料の表面にマトリックス層を形成する。ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳを用いて、２次元のレーザ走査によって組織上の生体分子をその位置情報を保持したままイオン化し、生体分子のマススペクトルを取得する。
【００５２】
装置に付属のソフトウェア又は市販のソフトフェアを用いて取得されたマススペクトルを解析し、生体分子のなかから、脂肪酸の炭素数及び不飽和結合数が異なるホスファチジルコリン分子種を検出する。ホスファチジルコリン分子種の同定は、質量対電荷比に従って、公知のデータベース（例えば、（http://www.lipidmaps.org/data/structure/LMSDSearch.php）を参照して行うことができる。
【００５３】
［算出手順］
次に、ホスファチジルコリン分子種のうちＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３４：０）のスペクトル強度（組織中の存在量に対応）から、ＰＣ（３４：０）の量に対するＰＣ（３４：１）の量の比（ＰＣ（３４：１）／ＰＣ（３４：０））を算出する。この算出手順も、装置に付属のソフトウェア又は市販のソフトフェアを用いて行うことができる。
【００５４】
［画像生成手順］
続いて、組織切片上のＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３４：０）の位置情報と、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の値とから、乳腺組織におけるＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の分布を示す画像を生成する。画像の生成は、乳腺組織の測定ポイント間でＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の相対値をとり、各測定ポイントの相対値をその大きさと位置情報に基づき２次元的に多色表示することにより行う。この画像生成手順も、装置に付属のソフトウェア又は市販のソフトフェアを用いて行うことができる。なお、画像は、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の相対値を多色表示したもの（いわゆるヒートマップ）に限定されず、図形等などによって相対値の大小が認識可能に表示されたものであればよい。
【００５５】
［判定手順］
本発明者らは、ＰＣ（３４：０）：ＰＣ（３４：１）比が、乳癌組織（特にＥＲ発現陽性に分類される乳癌組織）で有意に高いことを見い出している（後述する実施例４参照）。従って、生成された画像では、乳腺組織中の乳癌を、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が大きい領域として可視化することができる（乳癌の可視化方法）。
【００５６】
すなわち、判定手順においては、生成された画像中のＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が大きい領域の検出によって乳癌の判定を行うことが可能である。乳癌の可視化及び乳癌の判定は、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に関して一定の閾値を設定し、画像において閾値を超えている領域を乳癌とすればよい。このような判定は装置又はソフトウェアにより自動で行ってもよく、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比が多色表示された画像を視認した使用者が自身で行ってもよい。
【００５７】
閾値の設定は、正常組織及び乳癌組織について予め取得されたＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に基づいて決定すればよく、閾値は装置又はソフトウェアに保持記憶させておくこともできる。
【００５８】
以上のように、本発明に係る乳癌検出方法は、ＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３４：０）、あるいは両者の存在量比を乳癌マーカとして使用することで、乳腺組織中の乳癌を検出することを可能としたものである。
【００５９】
３．乳癌診断方法
本発明に係る乳癌診断方法は、乳腺組織に存在するＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）を検出する手順と、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出する手順と、該比に基づいて前記乳腺組織中の乳癌の有無を判定する手順と、を含む。
【００６０】
本発明者らは、ＰＣ（３４：０）：ＰＣ（３４：１）比が、乳癌組織（特にＥＲ発現陽性に分類される乳癌組織）で有意に高いことを見い出している（後述する実施例４参照）。従って、算出されたＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の大小によって、乳腺組織中の乳癌の有無を判定することが可能である。
【００６１】
ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）の検出とＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の算出は、上述した乳癌検出方法と同様のＭＡＬＤＩ−ＩＭＳを用いた手順によって行うことができる。この他、乳腺組織からＰＣを抽出し、クロマトグラフィーによってＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）の検出を行って、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出するなどの方法も採用できる。
【００６２】
乳癌の有無の判定は、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に関して一定の閾値を設定し、この閾値を超えている乳腺組織を乳癌ありとすればよい。このような判定は装置又はソフトウェアにより自動で行ってもよく、あるいはＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の数値に基づいて試験者が自身で行ってもよい。
【００６３】
閾値の設定は、乳癌及び正常の乳腺組織について予め取得されたＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に基づいて決定すればよく、閾値は装置又はソフトウェアに保持記憶させておくこともできる。
【００６４】
４．乳癌のクラス分類方法
本発明に係る乳癌のクラス分類方法は、乳癌に存在するＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）を検出する手順と、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出する手順と、該比に基づいて前記乳癌のクラスを決定する手順と、を含む。
【００６５】
乳癌のクラス分類の一つの方法として、遺伝子発現解析により乳癌を「Luminal A」、「Luminal B」、「HER2-enriched」、「Basal like」の４クラスに分類する方法が採用されている。「Luminal A」及び「Luminal B」は、乳管上皮細胞（luminal cells）に発現する遺伝子が発現している乳癌であり、乳癌全体の６０％程度を占める。「Luminal A」は、ＥＲ（Estrogen Receptor）関連遺伝子の発現が高度であり、ＨＥＲ２（Human Epidermal growth factor Receptor type 2）の発現と、Ki-67などの増殖関連遺伝子の発現が低いクラスである。一方、「Luminal B」は、ＥＲ関連遺伝子の発現が低く、ＨＥＲ２関連遺伝子の発現はまちまちであり、増殖関連遺伝子の発現が高度なクラスである。このクラス分類は、癌の生物学的特性や治療反応性と関連するため、ＥＲ発現の強度による乳癌のクラス分類は臨床上重要である。
【００６６】
本発明者らは、ＰＣ（３４：０）：ＰＣ（３４：１）比が、ＥＲ発現陽性に分類される乳癌で有意に高いことを見い出している（後述する実施例４参照）。従って、乳癌中のＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３４：０）の量を測定し、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出することで、該比の大小によって乳癌をＥＲ発現陽性クラスあるいは陰性クラスのいずれかに分類できる。
【００６７】
ＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）の検出とＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の算出は、上述した乳癌検出方法と同様のＭＡＬＤＩ−ＩＭＳを用いた手順によって行うことができる。この他、乳癌あるいはこれを含む乳腺組織からＰＣを抽出し、クロマトグラフィーによってＰＣ（３４：０）及びＰＣ（３４：１）の検出を行って、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を算出するなどの方法も採用できる。
【００６８】
また、クラス判定は、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に関して一定の閾値を設定し、この閾値を超えている乳癌をＥＲ発現陽性クラスとすればよい。このような判定は装置又はソフトウェアにより自動で行ってもよく、あるいはＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の数値に基づいて試験者が自身で行ってもよい。
【００６９】
閾値の設定は、ＥＲ発現陽性クラス及び陰性クラスの乳癌について予め取得されたＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比に基づいて決定すればよく、閾値は装置又はソフトウェアに保持記憶させておくこともできる。
【実施例】
【００７０】
＜実施例１：ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳによる乳癌を含む乳腺組織中のＰＣのイメージング＞
２９人の乳癌患者から乳腺組織の提供を得た。乳腺組織の凍結切片を作成し、ＩＴＯコートされたスライドガラス上にマウントし、ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳによる分析のための標本とした。また、連続切片をヘマトキシリン・エオジン染色による観察のための標本とした。ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳによる分析後の標本についてもヘマトキシリン・エオジンで染色し、観察を行った。
【００７１】
蒸着装置（RK27-4069、島津製作所）を用い、常法に従って、ＩＴＯコートされたスライドガラスにマウントされた試料の表面にマトリックス層を形成した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ型装置（Ultraflex II TOF/TOF、ブルカー・ダルトニクス）を用いて、ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳによる分析を行った。ＰＣはレーザ照射によりイオン化され、カリウムがついた状態（ＰＣ＋Ｋ）で検出される。ソフトウェア（FlexImaging 2.1、ブルカー・ダルトニクス）により、マススペクトルの取得及び解析、分子同定並びに画像構築を行った。分子同定には、公開されたデータベース（http://www.lipidmaps.org/data/structure/LMSDSearch.php）の情報を利用した。
【００７２】
ヘマトキシリン・エオジンによる染色像を図１ａに示す。図中赤色の点線で囲まれた領域は乳癌組織を示し、黄色の点線で囲まれた領域は正常な、乳管周囲の間質組織を示す。乳癌細胞は、細胞質に富み、エオジン好性である。乳癌細胞の核は、通常の単一型を示すか、しばしば複数の顕著な核小体を含む高度な多型を示す。
【００７３】
図１ｂ、ｃ及び図２ａ、ｂに、ＭＡＬＤＩ−ＩＭＳによるＰＣ（３２：１）及びＰＣ（３６：０）の検出結果を示す。図１ｂは、ＰＣ（３２：１）のシグナル強度の分布像を示す。図２ａは、乳癌組織及び正常組織の複数の測定ポイントで得られたＰＣ（３２：１）のシグナル強度の平均値を算出し、各標本についてプロットしたグラフである。ＰＣ（３２：１）は、赤色の点線で囲まれた乳癌組織で強いシグナルを呈す一方、黄色の点線で囲まれた正常組織ではシグナルを呈さず、乳癌組織に偏在する傾向を示した（図１ｂ参照）。ＰＣ（３２：１）は、乳癌組織に有意に多く蓄積する傾向が認められた（図２ａ参照）。
【００７４】
図１ｃは、ＰＣ（３６：０）のシグナル強度の分布像を示す。また、図２ｂは、各標本の乳癌組織及び正常組織のそれぞれについて、複数の測定ポイントで得られたＰＣ（３６：１）のシグナル強度の平均値をプロットしたグラフである。ＰＣ（３６：０）は、乳癌組織及び正常組織でほぼ同程度のシグナル強度を呈し（図１ｃ参照）、乳癌組織及び正常組織との間で有意な蓄積量の差はみられなかった（図２ｂ参照）。
【００７５】
＜実施例２：乳癌組織に存在するＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣの存在量の測定＞
実施例１では、乳癌組織にＭＵＦＡ−ＰＣであるＰＣ（３２：１）が蓄積し、ＳＦＡ−ＰＣであるＰＣ（３６：０）が蓄積しない傾向が認められた。このことから、本実施例では、他のＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣについても乳腺組織における存在量の評価を行った。
【００７６】
実施例１記載の方法によって、各標本について、乳癌組織及び正常組織の複数の測定ポイントでＰＣ（３４：１）、ＰＣ（３６：１）、ＰＣ（３２：０）及びＰＣ（３４：０）のシグナル強度を測定した。シグナル強度の平均値を算出し、プロットしたグラフを図３ａ〜ｄに示す。図３ａはＰＣ（３４：１）、ｂはＰＣ（３６：１）、ｃはＰＣ（３２：０）、ｄはＰＣ（３４：０）の結果を示す。
【００７７】
ＭＵＦＡ−ＰＣであるＰＣ（３４：１）及びＰＣ（３６：１）は、乳癌組織に有意に多く蓄積する傾向が認められた（図３ａ，ｂ参照）。ＳＦＡ−ＰＣについては、ＰＣ（３４：０）は乳癌組織に有意に多く蓄積する傾向を示したものの（図３ｄ参照）、ＰＣ（３２：０）は乳癌組織への蓄積を示さなかった（図３ｃ参照）。
【００７８】
＜実施例３：ＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣの存在量比と乳癌の性状との相関解析１＞
［ＳＣＤ１の免疫染色］
乳腺組織を定法に従ってホルマリン固定し、パラフィン包埋した後、切片を作成し、スライドガラス上にマウントした。抗ＳＣＤ１マウスモノクローナル抗体（ジーンテックス）を用い、通常の免疫組織学的手法を用いて、乳腺組織中のＳＣＤ１を染色した。ＳＣＤ１発現陽性の細胞数を、イメージ解析ソフトウェア（Image J, NIH）を用いて評価した。
【００７９】
図４に、ヘマトキシリン・エオジンによる染色像（ａ）と、ＳＣＤ１の免疫染色像（ｂ）を示す。また、（ｃ）に、乳癌組織及び正常組織の複数の測定ポイントで得られたＳＣＤ１の染色強度の平均値を算出し、各標本についてプロットしたグラフを示す。赤色の点線で囲まれた乳癌組織でＳＣＤ１の強い発現が確認された。
【００８０】
［ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比とＳＣＤ１発現量との相関解析］
実施例１，２では、乳癌組織に、ＳＦＡ−ＰＣに比してＭＵＦＡ−ＰＣがより多く蓄積する傾向が明らかとなった。このことから、次に、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比（ＭＵＦＡ−ＰＣ／ＳＦＡ−ＰＣ）とＳＣＤ１発現量との相関を解析した。
【００８１】
各標本の乳癌組織及び正常組織の複数の測定ポイントで、ＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣのシグナル強度から、ＰＣ（３２：１）：ＰＣ（３２：０）比、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比及びＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比を算出し、その平均値を得た。先に得られたＳＣＤ１の染色強度の平均値と、ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比との相関を解析した。
【００８２】
その結果、ＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比がＳＣＤ１の発現量と有意な相関を示すことが明らかとなった。図５ａに、各標本の乳癌組織及び正常組織のＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比の平均値をプロットしたグラフを示す。また、図５ｂに、ＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比とＳＣＤ１発現量との相関を示す。図５ｂ上段は、横軸にＳＣＤ１発現量、縦軸にＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比をとり、各標本の平均値をプロットしたグラフである。赤色のプロットが乳癌組織、青色のプロットが正常組織を示す。また、図５ｂ下段は、同グラフを、ＳＣＤ１発現量の大小及びＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比の大小によって４領域に分割し、各領域にプロットされた標本数を示したマトリクスである。
【００８３】
実施例１，２においてＰＣ（３６：１）が乳癌組織に有意に多く蓄積し、ＰＣ（３６：０）は蓄積しない傾向が認められている（図３ｂ，図２ｂ参照）。これらの結果に一致して、ＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比は、乳癌組織で有意に大きかった（図５ａ参照）。さらに、乳癌組織がＳＣＤ１を強発現し、特に大きなＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比を示す癌領域では該比とＳＣＤ１発現量とが相関することが明らかとなった（図５ｂ参照）。
【００８４】
なお、ＰＣ（３２：１）：ＰＣ（３２：０）比及びＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比は、ＳＣＤ１発現量との相関を示さなかった。
【００８５】
＜実施例４：ＭＵＦＡ−ＰＣ及びＳＦＡ−ＰＣの存在量比と乳癌の性状との相関解析２＞
［乳癌マーカの発現解析］
乳癌患者の臨床検査情報を参照し、各検体の乳癌マーカの発現情報を得た。ＥＲ発現に関しては、免疫染色により乳癌細胞の１０％以上が染色される検体をＥＲ陽性と判定した。ＨＥＲ２発現に関しては、公表されたガイドライン（Guidelines of the American Society of Clinical Oncology and the College of American pathologists）に従って、陽性及び陰性を判定した。Ｋｉ６７に関しては、文献（Ki-67 as a prognostic marker according to breast cancer subtype and a predictor of recurrence time in primary breast cancer. Exp Ther Med, 2010, Vol. 1, No.5, p.747-754）記載のＫｉ６７インデックスに基づき、強発現群（Ｋｉ６７インデックス＞２０）と弱発現群（同＜２０）に分けた。
【００８６】
［ＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比と乳癌マーカ発現との相関解析］
実施例３で得られたＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比と、各乳癌マーカの発現量との相関を解析した。
【００８７】
その結果、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比がＥＲ発現量と相関することが明らかとなった。図６に、標本をＥＲ陽性群とＥＲ陰性群とに分けて、乳癌組織及び正常組織のＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比の平均値をプロットしたグラフを示す。図６ａは、ＰＣ（３２：１）：ＰＣ（３２：０）比、ｂはＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比、ｃはＰＣ（３６：１）：ＰＣ（３６：０）比である。ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比は、ＥＲを強発現する乳癌組織で有意に大きかった（図６ｂ参照）。
【００８８】
また、図６ｄには、標本をＥＲ陽性群とＥＲ陰性群とに分けてＳＣＤ１の発現強度の平均値をプロットしたグラフを示す。ＥＲ陽性群とＥＲ陰性群は、ＳＣＤ１の発現量の有意差を示していない。ＥＲ陽性乳癌は、特に高いＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比を示すことから高度な脂質代謝異常が生じていることが明らかであり、ＥＲ陽性乳癌には、脂質合成酵素阻害剤が特に有効に作用するものと考えられる。このようなＥＲ陽性乳癌における顕著な脂質代謝異常は、ＳＣＤ１発現を指標としては検出できないものであった。このことは、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比の検出が、乳癌における脂質代謝異常あるいは乳癌そのものを検出するために格別の有効性を有することを示している。
【００８９】
なお、ＰＣ（３４：１）：ＰＣ（３４：０）比とＥＲ以外に、相関を示すＭＵＦＡ−ＰＣ：ＳＦＡ−ＰＣ比と乳癌マーカはみつからなかった。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
発癌に脂質代謝異常が関与することから、脂質代謝酵素を創薬の標的として癌の治療薬の開発が進められている。本発明に係る評価方法によれば、乳癌のエストロゲンレセプターの発現の強度を指標として、乳癌治療剤としての脂質合成酵素阻害剤の前記乳癌に対する有効性を評価できる。このため、本発明は、脂質合成酵素阻害剤に関し、乳癌患者に対する適用の可否を判定したり、乳癌患者における治験を行ったりするために特に有用である。
【図１】
2014149243.tif 000003
【図２】
2014149243.tif 000004
【図３】
2014149243.tif 000005
【図４】
2014149243.tif 000006
【図５】
2014149243.tif 000007
【図６】
2014149243.tif 000008