(57)【要約】【課題】炎症性のサイトカインの分泌を抑制することにより、生体内の免疫調節系の乱れを改善する作用を有し、アトピー性皮膚炎やリュウマチ、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、花粉症などの種々のアレルギー疾患の予防や治療に有用であるアレルギー改善剤、及び該アレルギー改善剤を含有する飲食品、飼料、医薬等のアレルギー改善用製品を提供することを課題とする。【解決手段】O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucose、または、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseで表される構造式を有するガラクトオリゴ糖を有効成分として含有することを特徴とするアレルギー改善剤。本発明のアレルギー改善剤は、乳糖を原料としているため、簡便且つ経済的に容易に製造することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucose、または、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseで表される構造式を有する ガラクトオリゴ糖を有効成分とするアレルギー改善剤。
【請求項２】
前記ガラクトオリゴ糖が哺乳類の乳に由来することを特徴とする請求項１記載のアレルギー改善剤。
【請求項３】
前記ガラクトオリゴ糖が牛乳由来であることを特徴とする請求項１乃至２記載のアレルギー改善剤。
【請求項４】
請求項１乃至３に記載のいずれかに記載のアレルギー改善剤を含むことを特徴とするアレルギー改善用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料又はアレルギー改善用医薬品。
【請求項５】
請求項１乃至３に記載のいずれかに記載のアレルギー改善剤を経口摂取することによるアレルギーの改善方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー改善作用に優れ、代謝性の炎症を抑制し、炎症性のサイトカインの分泌を抑制することにより、生体内の免疫調節系の乱れを改善する作用を有し、アトピー性皮膚炎やリュウマチ、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、花粉症などの種々のアレルギー疾患の予防や治療に有用で、安定性及び安全性に優れたアレルギー改善剤に関する。本発明は、さらにアレルギー改善剤を含有する、アレルギー改善用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料又はアレルギー改善用医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、我が国を含む先進諸国において、アトピー性皮膚炎や花粉症などの種々のアレルギー疾患が増加しており、大きな社会問題となっている。アトピー性皮膚炎をはじめとするアレルギー疾患の発症には、遺伝的要因と環境要因の両方が関与しており、近年のアレルギー疾患患者数の増加には、大気汚染やライフスタイルの変化、食生活の変化などの環境要因の影響が大きいと考えられている。また、アレルギー疾患の発生機序は複雑であり、未だ解明されていない部分も多いが、免疫調節系の乱れにその原因があることが徐々にわかってきている。免疫調節にはヘルパーT細胞が重要な働きをするが、このヘルパーT細胞にはTh1細胞とTh2細胞の2種類があり、それぞれがサイトカインの産生を通して細胞性免疫と液性免疫を制御している。Th1細胞とTh2細胞は、それぞれの生産するサイトカインによって互いの活性化を抑制し、バランスを保っているが（Th1/Th2バランス）、なんらかの原因でTh2細胞の誘導が強くなるとアレルギー疾患を発症する。この場合、活性酸素を産生するNADPHオキシダーゼのサブユニット（P40phoxなど）や炎症性サイトカインを分泌するマクロファージなどの炎症性マーカー（F4/80など）が上昇することにより、生体内での炎症性のサイトカインの分泌が促進し、アレルギー症状を誘導すると考えられている。したがって、NADPHオキシダーゼやマクロファージなどの炎症性マーカーの上昇を抑制して、炎症性のサイトカインの分泌を抑制することにより、アレルギー疾患を改善することが可能である。
【０００３】
アレルギー疾患に対する医薬として、抗ヒスタミン薬、ステロイド剤などが知られている。しかし、これらの医薬品を用いた場合、耳鳴り、頭痛、食欲不振などの副作用を伴うことがある。また、これらの物質は安全性及びコストなどの面から、現在のところ飲食品に添加することができない状況にある。さらに、少量のアレルゲンを長期間投与して徐々に反応を弱める減感作療法、アレルゲンとの接触を避けるための食事療法などがあるが、これらには、長期に渡る治療の必要性やQOLが低下するなどの問題があるため、手軽な方法として、経口摂取することで、アレルギー疾患の予防または治療効果が期待できるような飲食品や飼料の開発が望まれている。
【０００４】
アレルギー症状を改善する食品成分として、難消化性オリゴ糖やフラボノイド類、多価不飽和脂肪酸などが知られている。難消化性オリゴ糖は、ビフィズス菌を主体とする腸内フローラの状態を正常に保つ上で有効であるとされており、難消化性オリゴ糖であるラフィノースの摂取によりTh1環境が誘導されると共に全身免疫系のTh2応答が抑制されることが知られている。また、酸性キシロオリゴ糖による炎症性サイトカインの抑制効果も認められており、オリゴ糖の摂取は様々な側面からアレルギー抑制に効果を示すと考えられている。さらに、Gal - (Gal)n- Glc (n = 1〜3、β-1, 4結合)の一般式で表されるガラクトオリゴ糖（４’-ガラクトシルラクトース）には、IgEの産生抑制を介したアレルギー改善作用があることが報告されている。しかしながら、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucose、または、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseで表される構造式を有する ガラクトオリゴ糖に炎症性サイトカインの分泌抑制を介したアレルギー改善作用があることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−１９７３３１
【特許文献２】特開２００１−２８８０９３
【特許文献３】特開２００７−２３０１８
【特許文献４】特開昭６２−７９７９１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】British Journal of Nutrition, 88, 421-426, 2002
【非特許文献２】Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 56, 54-59, 2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、アレルギー改善作用に優れ、代謝性の炎症を抑制し、炎症性のサイトカインの分泌を抑制することにより、生体内の免疫調節系の乱れを改善する作用を有し、アトピー性皮膚炎やリュウマチ、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、花粉症などの種々のアレルギー疾患の予防や治療に有用で、安定性及び安全性に優れたアレルギー改善剤を配合したアレルギー改善化用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料又はアレルギー改善用医薬品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記の課題を解決するため鋭意検討を進めたところ、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucose、または、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseで表される構造式を有する ガラクトオリゴ糖に炎症性サイトカインの分泌抑制を介したアレルギー改善作用があることを見出した。
すなわち本発明は、以下の様態を含むものである。
（１）O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucose、または、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseで表される構造式を有する ガラクトオリゴ糖を有効成分とするアレルギー改善剤。
（２）前記ガラクトオリゴ糖が哺乳類の乳に由来することを特徴とする（１）記載のアレルギー改善剤。
（３）前記ガラクトオリゴ糖が牛乳由来であることを特徴とする（１）乃至（２）記載のアレルギー改善剤。
（４）（１）乃至（３）のいずれかに記載のアレルギー改善剤を含むことを特徴とするアレルギー改善用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料又はアレルギー改善用医薬品。
（５）（１）乃至（３）のいずれかに記載のアレルギー改善剤を経口摂取することによるアレルギーの改善方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のアレルギー改善剤は、代謝性の炎症を抑制し、炎症性のサイトカインの分泌を抑制することにより、生体内の免疫調節系の乱れを改善する作用が顕著であり、アトピー性皮膚炎やリュウマチ、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、花粉症などの種々のアレルギー疾患の予防や治療に有用である。また、本発明のアレルギー改善剤は、乳糖を原料としているため、簡便且つ経済的に容易に製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明のアレルギー改善剤の有効成分であるO -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucose、または、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseで表される構造式を有する ガラクトオリゴ糖は、例えば、乳糖を２０％〜４０％含有する溶液に、スミラクトＬＬなどの市販のβ−ガラクトシダーゼを数時間反応させた後、減圧濃縮して未反応の乳糖を除去し、得られた溶液を活性炭カラムに通して、吸着したガラクトオリゴ糖を２０％エタノールで溶出することによって得ることができる。また、特許文献４に記載されているように、アスペルギルス属やペニシリウム属、トリコデルマ属に属する乳糖資化性菌を乳糖含量が約３％でｐＨ６の培地で前培養することにより増殖させ、増殖させた該乳糖資化性菌を乳糖含量が約１３％でｐＨ４から９の本培養培地で本培養した後、減圧濃縮して該培養液から未反応の乳糖を除去し、さらにβ−ガラクトシダーゼを作用させて培養液中に残存する未反応の乳糖を分解して得られた溶液を活性炭カラムに通して、吸着したガラクトオリゴ糖を２０％エタノールで溶出することによって得ることができる。なお、この場合、本培養は、２０から４０℃、好ましくは３０℃前後で５から１５日間振とう培養すると収率を一層高めることができる。
また、上記のように調製したガラクトオリゴ糖は、逆浸透膜（ＲＯ）膜等で濃縮することや、凍結乾燥等により乾燥することも可能である。
【００１１】
本発明における乳糖は、ウシやヤギ、ヒツジ、ヒト等の哺乳類の乳から調製した乳糖や、その凝集物、粉末、あるいは精製した乳糖をいい、これを用いてβ−ガラクトシダーゼと反応させる場合や、本培養する場合は水溶液の状態で使用する。
【００１２】
本発明のガラクトオリゴ糖は、そのままアレルギー改善剤として使用してもよいが、必要に応じて、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に製剤化して用いることも出来る。また、さらに逆浸透膜（ＲＯ）膜処理等により得られたガラクトオリゴ糖についても、そのままアレルギー改善剤として使用することも可能であり、そのまま乾燥しても使用できる。また、常法に従い、製剤化して用いることもできる。
さらに、これらを製剤化した後に、これを栄養剤やヨーグルト、飲料、ウエハース等の飲食品、栄養組成物、飼料及び医薬品に配合することも可能である。
【００１３】
本発明のアレルギー改善用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料及びアレルギー改善用医薬品とは、このガラクトオリゴ糖のみを含む場合の他に、安定剤や糖類、脂質、フレーバー、ビタミン、ミネラル、フラボノイド、ポリフェノール等、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる原材料等を含有することができる。また、本発明の有効成分であるガラクトオリゴ糖に加えて、他のアレルギー改善作用を示す成分、例えば、ラフィノースや酸性キシロオリゴ糖等とともに使用することも可能である。
また、そのようなアレルギー改善用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料又はアレルギー改善用医薬品を原材料として、他の飲食品等に通常含まれる原材料等を配合して調製することも可能である。
【００１４】
アレルギー改善用飲食品、アレルギー改善用栄養組成物、アレルギー改善用飼料及びアレルギー改善用医薬品におけるガラクトオリゴ糖の配合量は、特に制限はないが、成人一人一日あたり本発明のガラクトオリゴ糖を５０ｍｇ以上経口摂取させるためには、飲食品、飼料及び医薬の形態にもよるが、全質量に対して一般に０．０１〜１０％（重量/重量）、好ましくは０．１〜５％（重量/重量）含有していることが好ましい。
【００１５】
本発明のアレルギー改善剤は、上記の有効成分に適当な助剤を添加して任意の形態に製剤化して、経口投与が可能なアレルギー改善用組成物とすることができる。製剤化に際して、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤又は賦形剤を用いることができる。賦形剤としては、例えばショ糖、乳糖、デンプン、結晶性セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシルメチルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組み合わせて加えることができる。
【００１６】
以下に実施例、試験例を示し、本発明について詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１７】
２０％乳糖水溶液５０００ｍｌに市販のβ−ガラクトシダーゼ（商品名：スミラクトＬＬ、新日本化学工業（株））を３単位／ｍｌになるように添加して、４０℃（ｐＨ５．０）で３時間反応させた。この溶液を減圧濃縮して乳糖を析出させて除去して、活性炭カラム（１５ｃｍ×３０ｃｍ）に通液してガラクトオリゴ糖を吸着させた後、５％エタノール３０００ｍｌを通液して、残存している乳糖を除去した。次に、２０％エタノール３０００ｍｌを通液して、得られた溶出画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥して本発明の有効成分であるガラクトオリゴ糖の粉末（実施例品１）２０５ｇを得た。このガラクトオリゴ糖粉末には、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucoseが８５％、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseが１２％含まれていた。
このようにして得られたガラクトオリゴ糖は、そのまま本発明のアレルギー改善剤として使用可能である。
【実施例２】
【００１８】
ペニシリウム・ロックフォルティ（Penicillium roqueforti）IFO 4135株を前培養培地（乳糖２．９％、リン酸水素二カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．０５％、硝酸ナトリウム０．２％、塩化カリウム０．０５％、硫酸鉄０．００１％）１００ｍｌに接種し、３０℃で５日間培養した。得られた前培養液１００ｍｌを、本培養培地（乳糖１３％、リン酸水素二カリウム０．０９％、硫酸マグネシウム七水和物０．０４％、硝酸ナトリウム０．１７％、塩化カリウム０．０４％、硫酸鉄０．００１％）５０００ｍｌに接種し、３０℃で１０日間振とう培養した。この培養液を遠心分離して菌体を除去した後、減圧濃縮して培養液中の乳糖を析出させて除去した。その溶液を活性炭カラム（１５ｃｍ×３０ｃｍ）に通液してガラクトオリゴ糖を吸着させた後、５％エタノール３０００ｍｌを通液して、残存している乳糖を除去した。次に、２０％エタノール３０００ｍｌを通液して、得られた溶出画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥して本発明の有効成分であるガラクトオリゴ糖の粉末（実施例品２）５０ｇを得た。このガラクトオリゴ糖粉末には、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 6) -  O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 4) - D - glucoseが９０％、O -β- D - galactopyranosyl - (1 → 4) -  [O - β - D - galactopyranosyl - (1 → 6)] - D - glucoseが９％含まれていた。
このようにして得られたガラクトオリゴ糖は、そのまま本発明のアレルギー改善剤として使用可能である。
【００１９】
［試験例１］
(動物実験)
実施例品１、２のガラクトオリゴ糖を使用して、アレルギー改善作用について評価した。実験には４週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを使用した。マウスの右耳介内側に０．３％ＴＮＣＢ溶液を１０μｌ塗布して感作させた。１週間後、２から３日おきに０．３％ＴＮＣＢ溶液１０μｌをマウスの右耳介内側に塗布した。その間、マウスを、生理食塩水を投与する群（Ａ群）、実施例品１のガラクトオリゴ糖をマウス体重１ｋｇあたり５０ｍｇ投与する群（Ｂ群）、実施例品２のガラクトオリゴ糖をマウス体重１ｋｇあたり５０ｍｇ投与する群（Ｃ群）の３試験群（各群８匹ずつ）にわけ、実施例品１、２を、それぞれ生理食塩水に懸濁して、Ｂ、Ｃ群に２週間経口投与した。試験終了時に、マウスの右耳を摘出して重量を測定するとともに、炎症性マーカー（F4/80、P40phox）のmRNAの発現量をリアルタイムPCR法で測定した。その結果を表１に示す。
【００２０】
【表１】
2014101305.tif 000002
【００２１】
この結果、２週間投与後の右耳の重量や炎症性マーカー（F4/80、P40phox）のmRNAの発現量は、実施例品１、２のガラクトオリゴ糖をマウス体重１ｋgあたり、それぞれ５０ｍｇ以上経口投与した群では、対照群に比べ、有意に低下していた。この結果から、本発明のガラクトオリゴ糖にはアレルギー改善作用があることがわかった。また、この作用は、本発明のガラクトオリゴ糖をラット体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ以上投与した場合に認められることが明らかとなった。
【実施例３】
【００２２】
（アレルギー改善用錠剤の調製）
表２に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明のアレルギー改善用錠剤を製造した。
【００２３】
【表２】
2014101305.tif 000003
【実施例４】
【００２４】
（アレルギー改善用液状栄養組成物の調製）
実施例品２のガラクトオリゴ糖５０ｇを４，９５０ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで３０分間撹拌混合して実施例品２のガラクトオリゴ糖含量５０ｇ／５ｋｇのガラクトオリゴ糖溶液を得た。このガラクトオリゴ糖溶液５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１７．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機 (第１種圧力容器、ＴＹＰＥ: ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製)で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明のアレルギー改善用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。
【実施例５】
【００２５】
（アレルギー改善用飲料の調製）
脱脂粉乳３００ｇを４０９ｇの脱イオン水に溶解した後、実施例品１のガラクトオリゴ糖１ｇを溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明のアレルギー改善用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。
【実施例６】
【００２６】
（イヌ用アレルギー改善飼料の調製）
実施例品２のガラクトオリゴ糖２ｋｇを９８ｋｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３，６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合して実施例品２のガラクトオリゴ糖含量２ｇ／１００ｇのガラクトオリゴ糖溶液を得た。このガラクトオリゴ糖溶液１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明のイヌ用アレルギー改善飼料１００ｋｇを製造した。