(57)【要約】【課題】膵臓癌、卵巣癌、および他の癌の検出および処置の提供。【解決手段】本願は、変性ＣＤ７０に特異的に結合する抗体を使用する、卵巣癌、膵臓癌および他の癌の診断、予後、予防および処置の方法を提供する。一局面において、抗体は、未変性のＣＤ７０への結合と比較して、変性ＣＤ７０に特異的に結合するものが提供される。いくつかの実施形態において、上記抗体は、未変性のＣＤ７０への結合と比較して、固定した卵巣ＳＫ−ＯＶ−３癌細胞株もしくは膵臓ＰＡＮＣ−１癌細胞株上の変性ＣＤ７０に特異的に結合する。上記抗体は、モノクローナル抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体）であり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２００８年４月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／０４４，４５７号の利益を主張し、この米国仮特許出願の全体の開示は、本明細書中に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
ＣＤ７０は、種々の正常細胞タイプおよび悪性細胞タイプによって発現される細胞膜結合型分子および分泌型分子の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーのメンバーである。ＣＤ７０は、カルボキシル末端細胞の外側に露出され、アミノ末端が形質膜のサイトゾル側に見いだされるＩＩ型膜貫通タンパク質である（非特許文献１；非特許文献２）。ヒトＣＤ７０は、２０アミノ酸の細胞質ドメイン、１８ＡＡの膜貫通ドメイン、および２つの潜在的Ｎ結合型グリコシル化部位を有する１５５ＡＡの細胞外ドメインを含む（非特許文献１；非特許文献２）。抗ＣＤ７０抗体によって放射性同位体標識したＣＤ７０発現細胞の特異的免疫沈降は、２９ｋＤａおよび５０ｋＤａのポリペプチドを生じる（非特許文献２；非特許文献３）。ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βに対するその相動性に基づいて、トリマー構造が、ＣＤ７０に関して推定されている（非特許文献４）。
【０００３】
ＣＤ７０は、ヒトにおける正常組織上で限定した発現を有する。このことは、ＣＤ７０を癌治療についての魅力的な標的にする。しかし、ＣＤ７０発現は、ごく少数の癌（例えば、腎細胞癌、結腸癌、非ホジキンリンパ腫および多発性骨髄腫のうちの特定のタイプ）で同定された。癌細胞上でのＣＤ７０発現は、代表的には、未変性のＣＤ７０に結合する抗体を使用して（例えば、免疫組織化学によって）検出される。固定した患者サンプル上でのＣＤ７０発現の検出は、ＣＤ７０に対する十分な特異性を欠いている不十分な品質の抗体に起因して、問題があることが判明した。特に、交叉反応性およびバックグラウンド染色は、固定したサンプルにおけるＣＤ７０の検出を妨害する。本発明は、この要求および他の要求に解答する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂｏｗｍａｎら，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−６１
【非特許文献２】Ｇｏｏｄｗｉｎら，１９９３，Ｃｅｌｌ  ７３：４４７−５６
【非特許文献３】Ｈｉｎｔｚｅｎら，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７６２−７３
【非特許文献４】Ｐｅｔｓｃｈら，１９９５，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７６１−７２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ＣＤ７０に対する抗体を使用して、診断、予後判定、予防および処置するための方法、ならびに卵巣癌、膵臓癌および他の癌の処置をモニタリングするための方法を提供する。本発明は、診断、予後判定、予防および処置するための方法、ならびに肺、頭頸部癌（喉頭もしくは咽頭）、黒色腫、神経膠芽腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫）、腎細胞癌（明細胞癌および乳頭状癌を含む）、結腸直腸癌および膀胱癌の処置をモニターするための方法をさらに提供する。
【０００６】
一局面において、抗体は、未変性のＣＤ７０への結合と比較して、変性ＣＤ７０に特異的に結合するものが提供される。いくつかの実施形態において、上記抗体は、未変性のＣＤ７０への結合と比較して、固定した卵巣ＳＫ−ＯＶ−３癌細胞株もしくは膵臓ＰＡＮＣ−１癌細胞株上の変性ＣＤ７０に特異的に結合する。上記抗体は、モノクローナル抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体）であり得る。好ましくは、上記抗体は、ＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３３を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３４を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２以上の特異的結合で、ホルマリン固定したパラフィン包埋の細胞もしくは組織上の変性ＣＤ７０に結合する。特に、上記抗体の非特異的交叉反応性は、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１のものよりも、抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２のものよりも小さい。いくつかの実施形態において、上記抗体は、変性ＣＤ７０への特異的結合について、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１と、もしくは抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２と競合し得る。
【０００７】
別の局面において、診断キットは、未変性のＣＤ７０と比較して、変性ＣＤ７０に特異的に結合する抗体を含むものが提供される。関連局面において、患者の組織サンプル中のＣＤ７０の発現を検出するための方法が提供される。上記組織サンプルは、上記患者からの膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、腎臓、脳、結腸、血液もしくは皮膚に由来し得る。上記組織（ｉｓｓｕｅ）固定され、上記ＣＤ７０タンパク質は変性される。上記固定した組織サンプルは、未変性のＣＤ７０と比較して、変性ＣＤ７０  に特異的に結合する抗体と接触させられ、上記固定された組織サンプルへの上記抗体の結合は、ＣＤ７０が、上記サンプルにおいて発現されている回中を決定するために検出される。上記固定された組織サンプル上のＣＤ７０の発現は、上記患者がＣＤ７０発現癌を有する可能性を示す。いくつかの実施形態において、上記サンプルは、ホルマリンで固定され、パラフィン中に包埋される。
【０００８】
別の局面において、膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚の癌を有する患者を診断するか、予後を判定するか、上記患者の処置プロトコルを決定するか、または上記患者の処置をモニタリングするための方法が提供される。上記方法は、上記患者の膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚に由来するサンプル中の細胞におけるＣＤ７０発現を決定する工程を包含し、ここで検出可能なＣＤ７０発現の存在は、上記患者の診断、予後判定、上記患者の処置プロトコルの決定、もしくは上記患者の処置のモニタリングにおいて使用される。上記サンプルは、ホルマリン固定したパラフィン包埋サンプルであり得る。上記方法は、上記決定する工程が、ＣＤ７０の検出可能なレベルを示す場合、上記患者にＣＤ７０抗体もしくはＣＤ７０抗体薬物結合体の有効レジメンを施す工程をさらに包含し得る。
【０００９】
別の局面において、ＣＤ７０陽性癌を処置するための方法が提供される。上記方法は、ＣＤ７０に対する結合剤の有効レジメンを、ＣＤ７０の検出可能な発現を有する、膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚の癌を有する患者に施す工程を包含し、ここで上記結合剤は、抗体、抗体誘導体もしくは抗体薬物結合体である。上記抗体は、エフェクター機能を有し得る。上記患者は、外科手術、照射および／もしくはＣＤ７０に対して指向されない薬剤での化学療法による処置を以前に受けたことがあり得るが、上記癌の寛解が誘導されなかった。いくつかの実施形態において、上記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくはヒト抗体（例えば、モノクローナル抗体１Ｆ６もしくは２Ｆ２のキメラ形態もしくはヒト化形態）である。上記抗体薬物結合体は、細胞傷害性薬剤（例えば、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、もしくはＤＮＡ副溝アルキル化剤）を含み得る。上記抗体薬物結合体における上記抗体は、リンカー（例えば、細胞内条件下で切断可能なリンカー）を介して、細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤に結合体化され得る。
【００１０】
別の局面において、組み合わせ診断・薬学的キットは、診断における使用のための変性ＣＤ７０に特異的に結合する抗体および治療における使用のためのＣＤ７０の未変性の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を含む。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される；
（項目１）
未変性のＣＤ７０への結合と比較して、固定された、卵巣ＳＫ−ＯＶ−３癌細胞株もしくは膵臓ＰＡＮＣ−１癌細胞株上の変性ＣＤ７０に特異的に結合する抗体。
（項目２）
キメラ抗体もしくはヒト化抗体である、項目１に記載の抗体。
（項目３）
ＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３３を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３４を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２以上の特異的結合で、ホルマリン固定したパラフィン包埋の細胞もしくは組織上の変性ＣＤ７０に結合する、項目１に記載の抗体。
（項目４）
ＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３３を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１の、もしくはＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３４を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２の、変性ＣＤ７０への特異的結合に対して競合する、項目１に記載の抗体。
（項目５）
ＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３３を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＡＴＣＣに寄託されかつアクセッション番号ＰＴＡ−８７３４を割り当てられたハイブリドーマによって生成される抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２である、項目４に記載の抗体。
（項目６）
抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１の重鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域および抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１の軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、項目４に記載の抗体。
（項目７）
抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２の重鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域および抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２の軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、項目４に記載の抗体。
（項目８）
抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１の重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲおよび抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１の軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲを含む、項目４に記載の抗体。
（項目９）
抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２の重鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ＣＤＲおよび抗体ＳＧ−２１．５Ｄ１２の軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲを含む、項目４に記載の抗体。
（項目１０）
項目１〜９のいずれか１項に記載の抗体および膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚の癌の診断、予後もしくはモニタリングを補助することにおいて該抗体を使用するための説明書を含む、診断キット。
（項目１１）
患者の組織サンプルにおけるＣＤ７０の発現を検出するための方法であって、該方法は、
該患者から、膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚の組織サンプルを得る工程；
該組織サンプルを固定し、該組織サンプル中のＣＤ７０を変性させる工程；
該固定した組織サンプルと、項目１〜９のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；および
該固定した組織サンプルへの該抗体の結合を検出して、ＣＤ７０が該サンプルにおいて発現されているか否かを決定する工程；
を包含し、
ここで該固定した組織サンプル上のＣＤ７０の発現は、該患者がＣＤ７０発現癌を有する可能性を示す、方法。
（項目１２）
コントロール組織サンプルと比較して、前記サンプルにおけるＣＤ７０の発現に基づいて、癌を有する患者を診断する工程をさらに包含する、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
コントロール組織サンプルと比較して、ＣＤ７０の発現に基づいて、前記患者における癌の存在を予後を判定する工程をさらに包含する、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記患者のための処置プロトコルを決定する工程をさらに包含し、ここでＣＤ７０の検出可能な発現は、該処置プロトコルが、ＣＤ７０抗体もしくは抗体薬物結合体での処置を含むという指示である、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記サンプルは、ホルマリンで固定されかつパラフィン中に包埋されている、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚の癌を有する患者を診断するか、予後を判定するか、該患者の処置プロトコルを決定するか、もしくは該患者の処置をモニタリングするための方法であって、該方法は、該患者の膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは該患者の皮膚に由来するサンプル中の細胞においてＣＤ７０発現を決定する工程を包含し、ここで検出可能なＣＤ７０発現の存在は、該患者の診断、予後判定、処置プロトコルの決定もしくは処置のモニタリングにおいて使用される、方法。
（項目１７）
ＣＤ７０発現は、ホルマリン固定したパラフィン包埋サンプル中の細胞において決定される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
ＣＤ７０発現は、ＣＤ７０をコードする核酸に対するプローブへのハイブリダイゼーションによって決定される、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記決定する工程が、検出可能なレベルのＣＤ７０を示す場合に、ＣＤ７０抗体もしくはＣＤ７０抗体薬物結合体の有効なレジメンを前記患者に施す工程をさらに包含する、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
ＣＤ７０抗体が投与される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
ＣＤ７０抗体薬物結合体が投与される、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
ＣＤ７０発現は、検出可能なＣＤ７０を発現する前記サンプル中の前記細胞の割合として決定される、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
ＣＤ７０発現は、前記サンプル中の細胞の平均発現レベルとして決定される、項目１６に記載の方法。
（項目２４）
ＣＤ７０陽性癌を処置するための方法であって、該方法は、
ＣＤ７０の検出可能な発現を有する、膵臓、卵巣、肺、喉頭、咽頭、乳房、もしくは皮膚の癌を有する患者に、ＣＤ７０に対する結合剤の有効レジメンを施す工程を包含し、ここで該結合剤は、抗体、抗体誘導体、もしくは抗体薬物結合体である、方法。
（項目２５）
前記結合剤は、エフェクター機能を有する抗体である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記結合剤は、抗体薬物結合体である、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記患者は、外科手術、照射および／もしくはＣＤ７０に指向されない薬剤での化学療法による処置を受けたことがあるが、前記癌の寛解が誘導されなかった、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６もしくは２Ｆ２、またはそのキメラ形態もしくはヒト化形態である、項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体である、項目２４に記載の方法。
（項目３０）
前記抗体薬物結合体は、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、およびＤＮＡ副溝アルキル化剤からなる群より選択される細胞傷害性薬剤を含む、項目２６に記載の方法。
（項目３１）
前記抗体薬物結合体は、オーリスタチン、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ピューロマイシン、ドラスタチン、マイタンシノイド、およびビンカアルカロイドからなる群より選択される細胞傷害性薬剤を含む、項目２６に記載の方法。
（項目３２）
前記抗体薬物結合体は、抗チューブリン剤を含む、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記抗チューブリン剤は、オーリスタチン、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン、バッカチン誘導体、クリプトフィシン、マイタンシノイド、もしくはコンブレタスタチンである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記抗チューブリン剤は、ＡＦＰ、ＭＭＡＰ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、オーリスタチン  Ｅ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ−１６、カンプトテシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン  Ａ、エポチロン  Ｂ、ノコダゾール、コルヒチン、コルセミド（ｃｏｌｃｉｍｉｄ）、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモライド、マイタンシン、ＤＭ−１、もしくはエレウテロビンである、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記抗体は、リンカーを介して、細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤に結合体化される、項目２６に記載の方法。
（項目３６）
前記リンカーは、細胞内条件下で切断可能である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記切断可能なリンカーは、細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチドを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記ペプチドは、ジペプチドである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記ジペプチドは、ｖａｌ−ｃｉｔリンカーもしくはｐｈｅ−ｌｙｓリンカーである、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記切断可能なリンカーは、５．５未満のｐＨで加水分解可能である、項目３６に記載の方法。
（項目４１）
前記加水分解可能なリンカーは、ヒドラゾンリンカーである、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記切断可能なリンカーは、ジスルフィドリンカーである、項目３６に記載の方法。
（項目４３）
前記患者は膵臓癌を有し、該膵臓癌は腺癌である、項目２４に記載の方法。
（項目４４）
前記患者は卵巣癌を有し、該卵巣癌は上皮細胞の癌である、項目２４に記載の方法。
（項目４５）
前記患者はヒトである、項目２４に記載の方法。
（項目４６）
組み合わせの診断および薬学的キットであって、該キットは、診断における使用のための項目１〜９のいずれか１項に記載の抗体、および治療における使用のためのＣＤ７０の未変性の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を含む、キット。
（項目４７）
患者の組織サンプル中のＣＤ７０の発現を検出するための方法であって、該方法は、
腎臓、脳、もしくは血液の組織サンプルを得る工程；
該組織サンプルを固定し、該組織サンプル中のＣＤ７０タンパク質を変性させる工程；
該固定した組織サンプルと、項目１〜９のいずれか１項に記載の抗体とを接触させる工程；および
該固定した組織サンプルへの該抗体の結合を検出して、ＣＤ７０が該サンプル中で発現されているか否かを決定する工程；
を包含し、
ここで該固定した組織サンプルにおけるＣＤ７０の発現は、該患者がＣＤ７０発現癌を有する可能性を示す、
方法。
【００１１】
本発明の局面は、添付の図面、図、表とともに考慮れば、例示的実施形態の以下の詳細な説明を参照することによってもっともよく理解される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、７８６−Ｏ、２９３Ｆ：ＣＤ７０形質転換細胞および２９３Ｆ非トランスフェクト細胞からのタンパク質抽出物中の変性ＣＤ７０を検出するための、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１およびＳＧ−２１．５Ｄ１２を使用するタンパク質抽出物のウェスタンブロットを示す。
【図２】図２は、上記ＳＧ２１．１Ｃ１抗体を使用する、ホルマリン固定したパラフィン包埋の（ＦＦＰＥ）膵臓細胞株ＰＡＮＣ−１上のＣＤ７０タンパク質発現を示す。
【図３】図３は、ＳＧ２１．１Ｃ１抗体を使用する、卵巣細胞株Ｏｖｃａｒ−３、ＳＫ−ＯＶ−３、Ｃａ−Ｏｖ−３およびＴＯＶ−２１ＧにおけるＣＤ７０タンパク質発現を示す。
【図４】図４は、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＳＧ−２１．５Ｄ１２によって検出される膵臓腫瘍サンプル中のＣＤ７０タンパク質発現  対  コントロールｍＩｇＧによって検出される膵臓腫瘍サンプル中のＣＤ７０タンパク質発現を示す。
【図５】図５は、色素原ファストレッド（濃い色）を使用して、上記ＳＧ−２１．１Ｃ１抗体によって検出される正常膵臓細胞もしくは膵臓腫瘍細胞上のＣＤ７０タンパク質発現を示す。
【図６】図６は、膵臓癌細胞におけるＣＤ７０タンパク質発現の評価を示す。ｘ軸は、ＣＤ７０染色強度を示し、ｙ軸は、ＣＤ７０陽性である面積の割合を示す。
【図７】図７は、卵巣腫瘍におけるＣＤ７０タンパク質発現の評価を示す。ｘ軸は、ＣＤ７０染色強度を示し、ｙ軸は、ＣＤ７０陽性である面積の割合を示す。
【図８】図８は、卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ−３に対する種々のヒト化１Ｆ６抗体薬物結合体のインビトロ細胞傷害性活性の評価を示す。
【図９−１】図９Ａ〜Ｃは、以下の細胞株上でのヒト化１Ｆ６抗体薬物結合体のインビトロ細胞傷害性活性の評価を示す：（Ａ）ＣＤ７０トランスフェクトした膵臓細胞株であるＨＰＡＦＩＩ。（Ｂ）ＣＤ７０トランスフェクトしたＰＡＮＣ−１膵臓細胞株。（Ｃ）ＣＤ７０トランスフェクトしたＭｉａＰａＣａ−２細胞株。
【図９−２】図９Ａ〜Ｃは、以下の細胞株上でのヒト化１Ｆ６抗体薬物結合体のインビトロ細胞傷害性活性の評価を示す：（Ａ）ＣＤ７０トランスフェクトした膵臓細胞株であるＨＰＡＦＩＩ。（Ｂ）ＣＤ７０トランスフェクトしたＰＡＮＣ−１膵臓細胞株。（Ｃ）ＣＤ７０トランスフェクトしたＭｉａＰａＣａ−２細胞株。
【図１０】図１０は、ヌードマウス中のＣＤ７０トランスフェクトしたＭｉａＰａＣａ膵臓癌（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｕｍｏｒ）に対するヒト化１Ｆ６抗体薬物結合体のインビボ効力の評価を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（定義）
別段示されない限り、以下の用語および語句は、本明細書で使用される場合、以下の意味を有することが意図される。
【００１４】
用語「抗体」とは、（ａ）特異的抗原（例えば、ＣＤ７０）に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む免疫グロブリンポリペプチドおよび免疫グロブリンポリペプチドの免疫学的に活性な部分（すなわち、免疫グロブリンファミリーのポリペプチドもしくはそのフラグメント）、または（ｂ）上記抗原（例えば、ＣＤ７０）に免疫特異的に結合するこのような免疫グロブリンポリペプチドもしくはフラグメントの保存的に置換された誘導体をいう。抗体は、一般に、例えば、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８）に記載されている。状況から別段明らかでなければ、抗体への言及はまた、以下により詳細に記載される抗体誘導体もしくは薬物結合体を含む。
【００１５】
「抗体誘導体」とは、上記で定義されるように、上記抗体と通常は結合していない異種分子の共有結合によって（例えば、異種ポリペプチドの付着によって、またはグリコシル化、脱グリコシル化、アセチル化、もしくはリン酸化によってなど）改変される抗体を意味する。
【００１６】
用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物細胞もしくは原核生物細胞クローン、またはファージクローンを含む単一細胞株から得られ、上記ものクローナル抗体が生成される方法に由来しない抗体をいう。従って、用語「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を介して生成される抗体に限定されない。
【００１７】
「抗原」とは、抗体が特異的に結合する実体である。
【００１８】
用語「阻害する」もしくは「〜の阻害」とは、測定可能な量まで低下させること、または完全に妨げることを意味する。
【００１９】
用語「薬剤（因子）（ａｇｅｎｔ）」とは、エレメント、化合物、もしくは分子実体（例えば、薬学的化合物、治療用化合物、もしくは薬理学的化合物を含む）を意味する。薬剤は、天然もしくは合成のもの、またはこれらの組み合わせであり得る。「治療剤」とは、単独で、もしくは別の薬剤（例えば、あるプロドラッグとの組み合わせでのプロドラッグ変換酵素）との組み合わせのいずれかで、癌細胞に対して治療的（例えば、有益な）効果を発揮する薬剤である。代表的には、本明細書に記載される方法および組成物に従って有用な治療剤は、細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果を発揮するものである、
「細胞傷害性効果」とは、細胞に対する薬剤の効果に言及して、上記細胞の死滅させることを意味する。
【００２０】
「細胞増殖抑制効果」とは、細胞増殖の阻害を意味する。
【００２１】
「細胞傷害性薬剤」とは、細胞に対して細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果を有し、それによって、それぞれ、細胞集団内の細胞の増殖を除去するもしくは阻害する薬剤を意味する。
【００２２】
用語「除去する（ｄｅｐｌｅｔｅ）」とは、ＣＤ７０発現細胞に対するＣＤ７０抗体の効果の状況において、上記ＣＤ７０発現細胞の数の減少もしくはその排出をいう。
【００２３】
用語「機能的」とは、本明細書に記載される方法に従って使用されるべき抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体の状況において、上記抗体もしくはその誘導体は、（１）ＣＤ７０に結合し得ること、および／または（２）単独で、もしくは細胞傷害性薬剤に結合体化される場合に、ＣＤ７０発現細胞の増殖を除去もしくは阻害することを示す。
【００２４】
用語「予防」とは、（ａ）上記ＣＤ７０発現癌、またはその臨床的症状もしくは診断的症状のうちの１つ以上の発生もしくは開始をブロックするために、（ｂ）上記ＣＤ７０発現癌の開始の重篤度を阻害するために、あるいは（ｃ）上記ＣＤ７０発現癌の開始の可能性を低下させるために、ＣＤ７０発現癌の臨床的症状もしくは診断的症状の発生の前に、被験体へ抗ＣＤ７０抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）もしくはＡＤＣ誘導体を投与すること（例えば、膵臓癌もしくは卵巣癌の損を有するかまたはそれらを獲得するリスクの高い個体へ投与すること）に言及する。
【００２５】
用語「処置」もしくは「処置する」とは、上記疾患の臨床的症状もしくは診断的症状の低下もしくは排除によって、任意の臨床ステージにおいて上記ＣＤ７０発現癌の上記臨床的症状もしくは診断的症状の開始の後に、上記被験体へ抗ＣＤ７０抗体、抗体薬物結合体もしくはＡＤＣ誘導体を投与することによって明示されるように、患者におけるＣＤ７０発現癌の進行を遅らせるか、停止させるか、もしくは逆転させることに言及する。処置は、例えば、症状の重篤度、症状の回数、もしくは再発の頻度の低下を含み得る。
【００２６】
用語「薬学的に受容可能な」とは、連邦政府もしくは州政府の当局により承認されていること、または米国局方、もしくは動物およびより具体的にはヒトにおける使用について他の一般に認識されている局方に列挙されていることを意味する。用語「薬学的に適合性の成分」とは、ＣＤ７０抗体と一緒に投与される、薬学的に受容可能な希釈剤、アジュバント、賦形剤、もしくはビヒクルをいう。
【００２７】
用語「有効量」とは、薬剤の投与の状況において、患者におけるＣＤ７０発現膵臓癌もしくはＣＤ７０発現卵巣癌の出現を阻害するに十分であるか、または上記癌の１つ以上の臨床的症状もしくは診断的症状を改善するに十分な薬剤の量をいう。薬剤の有効量は、「有効レジメン」において本明細書に記載される方法に従って投与される。用語「有効レジメン」とは、ＣＤ７０発現癌の処置を達成するに適切な上記薬剤の量と投与頻度との組み合わせをいう。
【００２８】
用語「患者」とは、診断的処置、予防的処置、もしくは治療的処置を受けるヒトおよび他の哺乳動物被験体を含む。
【００２９】
略語「ＡＦＰ」とは、ジメチルバリン−バリン−ドライソロイシン（ｄｏｌａｉｓｏｌｅｕｉｎｅ）−ドラプロリン（ｄｏｌａｐｒｏｉｎｅ）−フェニルアラニン−ｐ−フェニレンジアミンをいう。
【００３０】
略語「ＭＭＡＥ」とは、モノメチルオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）Ｅをいう。
【００３１】
略語「ＡＥＢ」とは、オーリスタチン  Ｅとパラアセチル安息香酸とを反応させることによって生成されるエステルをいう。
【００３２】
略語「ＡＥＶＢ」とは、オーリスタチン  Ｅとベンゾイル吉草酸とを反応させることによって生成されるエステルをいう。
【００３３】
略語「ＭＭＡＦ」とは、ドバリン（ｄｏｖａｌｉｎｅ）−バリン−ドライソロイシン−ドラプロリン−フェニルアラニンをいう。
【００３４】
略語「ｆｋ」および「ｐｈｅ−ｌｙｓ」とは、ジペプチドフェニルアラニン−リジンをいう。
【００３５】
略語「ｖｃ」および「ｖａｌ−ｃｉｔ」とは、ジペプチドバリン−シトルリンをいう。
【００３６】
治療剤は、代表的には、望ましくない夾雑物が実質的に混じっていない。このことは、薬剤が、代表的には、少なくとも約５０％  ｗ／ｗ（重量／重量）純度、ならびに妨害するタンパク質および夾雑物を実質的に含まないことを意味する。ときおり、上記薬剤は、少なくとも約８０％  ｗ／ｗ、およびより好ましくは、少なくとも９０％  ｗ／ｗもしくは約９５％  ｗ／ｗの純度である。しかし、従来のタンパク質精製技術を使用すると、少なくとも９９％  純度  ｗ／ｗの均質なペプチドが得られ得る。
【００３７】
（詳細な説明）
Ｉ．概論
本発明は、ＣＤ７０に対する抗体を使用して、卵巣癌および膵臓癌を診断、予後判定、予防および処置するための方法、ならびに上記卵巣癌および膵臓癌の処置をモニタリングするための方法を提供する。本発明は、肺癌、頭頸部癌（喉頭もしくは咽頭）、黒色腫、神経膠芽腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫）、腎細胞癌（明細胞癌および乳頭状癌を含む）、結腸直腸癌および膀胱癌の診断、予後判定、予防および上記癌の処置のモニタリングのための方法をさらに提供する。上記方法は、ＣＤ７０が特定の癌において上昇したレベルで発現されることを示す、実施例で示される結果に対して一部基づく。上記上昇した発現は、変性ＣＤ７０に特異的に結合する抗体を使用して、卵巣癌組織および膵臓癌組織からのホルマリン固定したパラフィン包埋の（ＦＦＰＥ）サンプル中で検出される。さらに、ＣＤ７０の上昇した発現はまた、ＣＤ７０の変性細胞外ドメインに対する抗体を使用して、他の癌組織からのホルマリン固定したパラフィン包埋の（ＦＦＰＥ）サンプル中で検出される。
【００３８】
本発明の実施は、機構の理解に依存しないが、特に、卵巣組織および膵臓組織、ならびに他の癌のＦＦＰＥサンプル中でＣＤ７０を検出することにおける成功が、一般に、未変性のＣＤ７０と比較して、このようなサンプル中の変性ＣＤ７０に優先的に結合する抗体の使用にあると考えられる。膵臓癌および卵巣癌、ならびに／もしくはそのレベルにおける検出可能なＣＤ７０の頻度は、ＣＤ７０が以前に結合していたいくつかの他の癌組織と同程度に高くはないが、正常組織と比較して、癌組織に対して非常に特異的である。従って、ＣＤ７０が検出可能である卵巣癌もしくは膵臓癌を有する患者において、ＣＤ７０は、毒性を癌組織に選択的に指向するための特に有用な標的を表す。同様に、他の癌（例えば、肺癌、頭頸部（喉頭もしくは咽頭）癌、黒色腫、神経膠芽腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫）、腎細胞癌（明細胞癌および乳頭状癌を含む）、結腸直腸癌および膀胱癌）を有する患者において、本発明は、このような患者に由来する固定したサンプル中のＣＤ７０発現を検出する容易な方法を提供する。
【００３９】
（ＩＩ．ＣＤ７０に対する抗体）
以下の説明は、最初に、卵巣癌および膵臓癌におけるＣＤ７０の検出および上記癌の処置に適用可能なＣＤ７０に対する抗体の特性を考慮し、次いで、上記それぞれの適用のための抗体の好ましい特性に焦点を当てる。
【００４０】
（Ａ．一般的なＣＤ７０に対する抗体）
抗ＣＤ７０抗体としては、モノクローナル抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト定常領域およびマウス可変領域を有する）、ヒト化抗体、貼り合わせ（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体、もしくはヒト抗体；一本鎖抗体などが挙げられる。上記免疫グロブリン分子は、任意のタイプまたはクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）もしくはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のものであり得る。
【００４１】
抗ＣＤ７０抗体は、抗原結合抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ鎖、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬドメインもしくはＶＨドメインを含むフラグメント（ラクダ、ラマなどに由来するナノボディー（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ）もしくはフラグメント、またはＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメント、または前出の上記抗体のうちのいずれかのＣＤ７０結合フラグメントが挙げられる）であり得る。抗原結合抗体フラグメント（一本鎖抗体を含む）は、上記可変領域単独、もしくは以下の全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメイン。また、抗原結合フラグメントは、可変領域と、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメインとの任意の組み合わせを含み得る。代表的には、上記抗体は、ヒト、齧歯類（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ科の動物（ｃａｍｅｌｉｄ）、ウマもしくはニワトリである。
【００４２】
上記抗体は、１種特異的（ｍｏｎｏ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、２種特異的（ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、３種特異的（ｔｒｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、もしくはより多くの複数種特異的（ｍｕｌｔｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）なものであり得る。複数種特異的抗体は、ＣＤ７０の異なるエピトープに対して特異的であってもよいし、ＣＤ７０および異種タンパク質の両方に対して特異的であってもよい（例えば、ＷＯ  ９３／１７７１５；ＷＯ  ９２／０８８０２；ＷＯ  ９１／００３６０；ＷＯ  ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；および同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照のこと）。本明細書で記載される方法を実施するために有用な複数種特異的抗体（２種特異的抗体および３種特異的抗体を含む）は、ＣＤ７０および第２の細胞表面レセプターもしくはレセプター複合体（例えば、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、腫瘍組織適合タンパク質、レクチン（Ｃ型、Ｓ型、もしくはＩ型）、または補体制御タンパク質）の両方に免疫特異的に結合する抗体である。
【００４３】
抗ＣＤ７０抗体はまた、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍ、もしくは１０−１５ＭのＣＤ７０に対するそれらの結合親和性に関して記載され得る。
【００４４】
抗ＣＤ７０抗体は、キメラ抗体であり得る。キメラ抗体は、上記抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子（例えば、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体）である。キメラ抗体を生成するための方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：１２０２；Ｏｉら，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓら，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６，３９７号を参照のこと）。
【００４５】
抗ＣＤ７０抗体はまた、貼り合わせ抗体を含むヒト化抗体であり得る。ヒト化抗体は、所望の抗原を結合し、非ヒト種に由来する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域および定常領域を有する抗体分子である。しばしば、ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換されて、抗原結合を改変するか、または好ましくは改善する。これらフレームワーク置換は、当該分野で周知の方法によって（例えば、上記ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用をモデリングして、抗原結合によって重要なフレームワーク残基を同定すること、および配列比較して、特定の位置における通常でないフレームワーク残基を同定することによって）同定される（例えば、Ｑｕｅｅｎら，米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｂｍａｎｎら，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３を参照のこと）。抗体は、種々の当該分野で公知の技術（例えば、ＣＤＲグラフティング（ｇｒａｆｔｉｎｇ）（ＥＰ  ０  ２３９  ４００；ＷＯ  ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；および同第５，５８５，０８９号）、貼り合わせもしくは張り替え（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ  ０  ５９２  １０６；ＥＰ  ０  ５１９  ５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａら，１９９４，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３）、および鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）（これら参考文献の全ては、本明細書に参考として援用される）を使用して、ヒト化され得る。
【００４６】
抗ＣＤ７０抗体はまた、ヒト抗体であり得る。ヒト抗体は、種々の当該分野で公知の方法（例えば、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ法（前出を参照のこと）によって作製され得る。例えば、米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ＷＯ  ９８／４６６４５、ＷＯ  ９８／５０４３３、ＷＯ  ９８／２４８９３、ＷＯ  ９８／１６６５４、ＷＯ  ９６／３４０９６、ＷＯ  ９６／３３７３５、およびＷＯ  ９１／１０７４１もまた参照のこと。さらに、選択されたエピトープをんんしきするヒト抗体は、選択された非ヒトモノクローナル抗体（例えば、マウス抗体）が、同じエピトープを認識する完全にヒト抗体の選択をガイドするために使用される「ガイドされた選択」と言われる技術を使用して、生成され得る（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓら，１９９４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２：８９９−９０３を参照のこと）。ヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスを使用して生成され得る。上記抗原に対して指向されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して、免疫したトランスジェニックマウスから得られ得る。ヒト抗体を生成するための技術の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生成するためのこの技術ならびにこのような抗体を生成するためのプロトコルの詳細な議論については、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ  ９８／２４８９３；ＷＯ  ９２／０１０４７；ＷＯ  ９６／３４０９６；ＷＯ  ９６／３３７３５；欧州特許第０  ５９８，８７７号；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；および同第５，９３９，５９８号を参照のこと。
【００４７】
抗体は、公知の方法（例えば、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイのような技術を使用する、競合的イムノアッセイシステムおよび非競合的イムノアッセイシステム）によって、ＣＤ７０への特異的結合についてアッセイされ得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，編，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第４版．１９９９）；Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９を参照のこと）。
【００４８】
さらに、ＣＤ７０に対する抗体の結合親和性および抗体ＣＤ７０相互作用のｏｆｆ−ｒａｔｅは、競合的結合アッセイによって決定され得る。競合的結合アッセイの一例は、漸増量の非標識ＣＤ７０の存在下での標識ＣＤ７０（例えば、３Ｈもしくは１２５Ｉ）と上記目的の抗体とのインキュベーションおよび上記標識ＣＤ７０に結合した上記抗体の検出を含むラジオイムノアッセイである。次いで、ＣＤ７０に対する上記抗体に親和性および上記結合ｏｆｆ−ｒａｔｅは、スキャッチャードプロット分析によるデータから決定され得る。第２の抗体との競合はまた、ラジオイムノアッセイを使用して決定され得る。この場合、ＣＤ７０は、漸増量の非標識の第２の抗体の存在下で、標識化合物（例えば、３Ｈもしくは１２５Ｉ）に結合体化した上記目的の抗体とインキュベートされる。あるいは、ＣＤ７０に対する抗体の結合親和性、ならびに抗体−ＣＤ７０相互作用のｏｎ−ｒａｔｅおよびｏｆｆ−ｒａｔｅは、表面プラスモン共鳴によって決定され得る。
【００４９】
抗体は、抗体のタイプに従って、標準的手順によってＣＤ７０タンパク質の抗原含有フラグメントから作製され得る（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５，（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．，ＮＹ，１９８８）；Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）およびＷＯ  ９０／０７８６１；Ｄｏｗｅｒら，ＷＯ  ９１／１７２７１ならびにＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，ＷＯ  ９２／０１０４７（これらの各々は、全ての目的で参考として援用される）を参照のこと）。例として、モノクローナル抗体は、広く種々の技術（例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、およびファージディスプレイ技術、もしくはこれらの組み合わせの使用を含む）を使用して、調製され得る。ハイブリドーマ技術は、一般に、例えば、Ｈａｒｌｏｗら，前出およびＨａｍｍｅｒｌｉｎｇら，Ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，ｐｐ．５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）において議論されている。上記抗ＣＤ７０抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例としては、例えば、Ｂｒｉｉｎｎａｎら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０；Ａｍｅｓら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃら，１９９７，Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎら，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開番号ＷＯ
９０／０２８０９；ＷＯ  ９１／１０７３７；ＷＯ  ９２／０１０４７；ＷＯ  ９２／１８６１９；ＷＯ  ９３／１１２３６；ＷＯ  ９５／１５９８２；ＷＯ  ９５／２０４０１；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第；５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらの開示は、本明細書に参考として援用される）において開示されるものが挙げられる。
【００５０】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントを生成するための技術はまた、一般に、当該分野で公知である。例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを生成するため）もしくはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生成するため）のような酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解性切断によって生成され得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え生成する技術はまた、例えば、ＷＯ  ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９；およびＳａｗａｉら，１９９５，ＡＪＲＩ  ３４：２６−３４；ならびにＢｅｔｔｅｒら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３（これらの開示は、本明細書に参考として援用される）で開示されている方法を使用して、使用され得る。
【００５１】
一本鎖Ｆｖおよび抗体を生成するために使用され得る技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８；Ｓｈｕら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：７９９５−７９９９；ならびにＳｋｅｒｒａら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０に記載されるものが挙げられる。
【００５２】
本発明の方法において有用な抗ＣＤ７０抗体およびその誘導体はまた、組換え発現技術によって生成され得る。ＣＤ７０に結合し、そして／またはＣＤ７０発現細胞の増殖を除去するかもしくは阻害する抗体もしくはその誘導体の組換え発現は、上記抗体もしくはその誘導体をコードする核酸を含む発現ベクターの構築を要する。いったんこのようなタンパク質をコードする核酸が得られたら、上記タンパク質分子を生成するためのベクターは、当該分野で周知の技術を使用して、組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，第３版，２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，第２版，１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第４版，１９９９）；およびＧｌｉｃｋ  ＆  Ｐａｓｔｅｒｎａｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ（ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，第２版，１９９８）に記載されるもののような標準的な技術は、組換え核酸方法、、核酸合成、細胞培養、導入遺伝子組み込み、および組換えタンパク質発現のために使用され得る。
【００５３】
例えば、抗ＣＤ７０抗体の組換え発現については、発現ベクターは、プロモーターに作動可能に連結された、上記抗体の重鎖もしくは軽鎖、または重鎖可変ドメインもしくは軽鎖可変ドメインをコードし得る。発現ベクターは、例えば、上記抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、ＷＯ  ８６／０５８０７；ＷＯ  ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと）、そして上記抗体の可変ドメインは、重鎖全体もしくは軽鎖全体の発現のためのこのようなベクターにクローニングされ得る。上記発現ベクターは、公地の技術によって宿主細胞に移入され、上記トランスフェクトされた細胞は、次いで、上記抗ＣＤ７０抗体を生成するために培養され得る。代表的には、二本鎖抗体の発現については、上記重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、免疫グロブリン分子全体の発現のために、上記宿主細胞において同時に発現され得る。
【００５４】
種々の原核生物および真核生物の宿主−発現ベクター系は、抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体を発現するために利用され得る。代表的には、真核生物細胞（特に、全組換え抗ＣＤ７０抗体分子のための）は、上記組換えタンパク質の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルスもしくはチャイニーズハムスター卵巣ＥＦ−１αプロモーターに由来する主要中間初期遺伝子プロモーターエレメント（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｅｌｅｍｅｎｔ）のようなベクターとともに、哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（例えば、ＤＧ４４もしくはＣＨＯ−Ｓ））は、抗ＣＤ７０抗体およびその誘導体の生成のための有効な発現系である（例えば、Ｆｏｅｃｋｉｎｇら，１９８６，Ｇｅｎｅ  ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅｔｔら，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２；Ａｌｌｉｓｏｎ，米国特許第５，８８８，８０９号を参照のこと）。
【００５５】
他の宿主発現系としては、細菌細胞におけるプラスミドベースの発現系（例えば、Ｒｕｔｈｅｒら，１９８３，ＥＭＢＯ  １，２：１７９１；Ｉｎｏｕｙｅ  ＆  Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ＆  Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９を参照のこと）；昆虫系（例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞におけるＡｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）発現ベクターの使用）；および哺乳動物細胞におけるウイルスベースの発現系（例えば、アデノウイルスベースの系）（例えば、Ｌｏｇａｎ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３５５−３５９；Ｂｉｔｔｎｅｒら，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４を参照のこと）が挙げられる。
【００５６】
（Ｂ．ＣＤ７０を検出するための抗体）
検出法において使用するためのＣＤ７０に対する抗体の選択は、ＣＤ７０が、変性ＣＤ７０もしくは未変性のＣＤ７０（細胞上で発現されるように）の検出を要する技術によって検出されるか否かに依存する。標的ＣＤ７０が変性されるウェスタンブロッティングもしくは免疫組織化学的検出のような方法において、変性形態のＣＤ７０（例えば、ヒトもしくはカニクイザルＣＤ７０）に結合する抗体を使用することが好ましい。代表的には、このような抗体は、上記未変性の形態（すなわち、天然で存在するままのＣＤ７０もしくは変性条件（例えば、溶媒、界面活性剤もしくは高温（例えば、５０℃より高い）に曝されることなく単離された場合）よりも変性形態に優先的に結合する。このような抗体は、細胞外部分に由来する変性ＣＤ７０免疫原（例えば、ヒトもしくはカニクイザルのＣＤ７０）、もしくはその免疫原性フラグメントを使用して惹起され得る。変性は、ＳＤＳ（例えば、０．５％）での上記免疫原の処理および必要に応じて最大８０℃までの加熱によってもたらされ得る。変性はまた、免疫原を精製するために使用されるＳＤＳゲルから上記免疫原を溶出することによって、単純にもたらされ得る。あるいは、変性ＣＤ７０に優先的に結合する抗体は、免疫原としてのＣＤ７０の細胞外ドメインから合成ペプチドを使用して生成され得る。いくつかのこのようなペプチドは、短すぎて、上記未変性ペプチドの対応するセグメントのコンホメーションを保持できない。合成ペプチドは、免疫原として使用するために変性され得るが、通常は、変性を要するわけではない。
【００５７】
これらおよび他の方法によって生成される抗体は、未変性のＣＤ７０と比較して、変性ＣＤ７０への優先的な結合についてスクリーニングされる。変性ＣＤ７０抗原および未変性のＣＤ７０抗原は、同じアッセイによって、もしくは異なるアッセイによって、アッセイされ得る。特に、後者のアプローチが使用される場合、上記スクリーニングは、未変性のＣＤ７０を結合することが公知のコントロール抗体（例えば、以下の治療用抗体（例えば、ヒト化１Ｆ６もしくは２Ｆ２；米国特許出願公開第２００６−０２３３７９４号および同第２００６−００８３７３６号、ならびに国際特許公開ＷＯ  ０６／１１３９０９を参照のこと））で行われ得る。抗体が、上記コントロール抗体の結合比と比較して、未変性のＣＤ７０より、変性ＣＤ７０に対する結合比がより高い場合、上記抗体は、変性ＣＤ７０に優先的に結合する。
【００５８】
膵臓癌および卵巣癌においてＣＤ７０の検出するための好ましい抗体は、ホルマリンで固定されかつパラフィン中に包埋された（ＦＦＰＥ）膵臓癌標本もしくは卵巣癌標本上のＣＤ７０に優先的に結合するものである。これら抗体は、未処理の膵臓癌細胞もしくは卵巣癌細胞上の未変性のＣＤ７０抗原と比較して、上記ＦＦＰＥ処理によって露出されたＣＤ７０上のエピトープを優先的に認識する。このような抗体は、ＦＦＰＥ特異的抗ＣＤ７０抗体といわれる。このような抗体は、未変性のＣＤ７０に対する検出可能な特異的結合を欠いている。好ましくは、上記抗体の特異的結合は、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＳＧ−２１．５Ｄ１２と同等以上である。特に、上記抗体は、好ましくは、特異的結合条件下でウェスタンブロットもしくは固定細胞の染色によって決定される場合、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＳＧ−２１．５Ｄ１２と比較して、他の細胞タンパク質に対して同等以下の検出可能な交叉反応性を有する。
【００５９】
他の癌におけるＣＤ７０の検出のための好ましい抗体（実施例において以下に記載される）は、ホルマリンで固定されかつパラフィン中に包埋された（ＦＦＰＥ）これら癌標本におけるＣＤ７０に特異的に結合するものである。これら抗体は、未変性のＣＤ７０抗原または未処理の膵臓癌細胞もしくは卵巣癌細胞と比較して、上記ＦＦＰＥ処理によって露出したＣＤ７０上のエピトープを優先的に認識する。このような抗体は、未変性のＣＤ７０に対する検出可能な特異的結合を欠いている。好ましくは、上記抗体の特異的結合は、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＳＧ−２１．５Ｄ１２の同等以上である。特に、上記抗体は、好ましくは、抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１もしくはＳＧ−２１．５Ｄ１２と比較すると、特定の結合条件下で、ウェスタンブロットもしくは固定細胞の染色によって決定される場合、他の細胞タンパク質に対して同等以下の検出可能な交叉反応性を有する。
【００６０】
いくつかの例示的なＦＦＰＥ特異的抗ＣＤ７０抗体は、ｍＡｂ  ＳＧ−２１．１Ｃ１（ＳＧ−２１．１Ｃ１−Ｂ３ともいわれる）およびｍＡｂ  ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３（ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３ともいわれる）である。他の好ましい抗体は、変性ＣＤ７０への特異的結合について、ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３もしくはＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３と競合する。他の好ましい抗体は、ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３の重鎖に由来する３つのＣＤＲを含む重鎖、およびＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３の軽鎖に由来する３つのＣＤＲを含む軽鎖を含む。他の好ましい抗体は、ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３の重鎖に由来する３つのＣＤＲを含む重鎖、およびＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３の軽鎖に由来する３つのＣＤＲを含む軽鎖を含む。他の好ましい抗体は、上記ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３の成熟重鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域、および上記ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３の成熟軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域を含む。他の好ましい抗体は、上記ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３の重鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域、および上記ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３の成熟軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域を含む。
【００６１】
（Ｃ．治療的適用のためのＣＤ７０に対する抗体）
治療的適用のために使用される抗体は、膵臓癌細胞もしくは卵巣癌細胞の上の未変性のＣＤ７０抗原の細胞外ドメインに特異的に結合する。治療的適用に使用される抗体はまた、肺、頭頸部（喉頭もしくは咽頭）、黒色腫、神経膠芽腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫）、腎細胞癌（明細胞癌および乳頭状癌を含む）、結腸直腸癌および膀胱癌上の未変性のＣＤ７０抗原の細胞外ドメインに特異的に結合し得る。上記抗体は、そのリガンドであるＣＤ２７に対するＣＤ７０結合に関して、作動的、非作動的もしくは拮抗的であり得る。本発明の実施は、機構の理解に依存しないが、上記抗体は、ＣＤ７０への結合および細胞内へインターなライズされる結果として、もしくは細胞の外側に蓄積されるＣＤ７０への結合によって、細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果を発揮し得ると考えられる。いずれにしても、上記細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果は、上記抗体を、細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤に結合体化することによって、促進され得る。ＣＤ７０へ結合した抗体によって、上記細胞の外側から発揮される上記細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果は、抗体の定常（ｃｏｎｓｔａｎｔ）（エフェクター）機能によって、さらに、もしくは代わりに促進され得る。上記抗体定常ドメインは、種々のＩｇエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）および／もしくは抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）における上記抗体の関与）を媒介する。必要に応じて、ＣＤ７０−結合剤の上記エフェクター機能は、ＷＯ２００６／１１３９０９に記載されるいくつかのアプローチによって増大させられ得る。上記抗体によって発揮される細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果はまた、ＣＤ７０とそのリガンドであるＣＤ２７との相互作用をブロックすることによって促進され得る。
【００６２】
好ましい抗ＣＤ７０抗体は、ＷＯ  ２００４／０７３６５６および公開米国出願第２００６−０２３３７９４号およびＷＯ２００６／１１３９０９において記載されるように、ｍＡｂ  １Ｆ６もしくは２Ｆ２、またはそのキメラ形態もしくはヒト化形態である。好ましい重鎖成熟可変領域は、配列番号１の配列を有し、好ましい軽鎖成熟可変領域は、配列番号２の配列を有する。
【００６３】
他の有用な抗体は、配列番号１および配列番号２に対して、それぞれ、少なくとも９０％および好ましくは、少なくとも９５％もしくは９９％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域を含む。可変領域フレームワークが結合に必要とされる残基に関するガイダンスは、ＷＯ２００６／１１３９０９によって提供される。他の有用な抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体は、例えば、イムノアッセイによって決定される場合、ＣＤ７０へのｍＡｂ  １Ｆ６もしくは２Ｆ２の結合を競合的に阻害し得る。競合的阻害は、抗体が、少なくとも２倍過剰および好ましくは、５倍過剰で存在する場合に、少なくとも５０％、より代表的には、少なくとも６０％、さらにより代表的には、少なくとも７０％、および最も代表的には、少なくとも７５％だけ、ＣＤ７０への１Ｆ６もしくは２Ｆ２の結合を阻害するか、または上記抗体が、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％だけＣＤ７０への１Ｆ６もしくは２Ｆ２の結合を競合的に阻害することを意味する。
【００６４】
他の好ましい抗体は、１Ｆ６の重鎖可変領域に由来する３つのＣＤＲを含む重鎖、および１Ｆ６の軽鎖可変領域に由来する３つのＣＤＲを含む軽鎖を含む。他の好ましい抗体は、上記２Ｆ２の成熟重鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域、および上記２Ｆ２の軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域を含む。他の好ましい抗体は、上記１Ｆ６の成熟重鎖可変領域に対して少なくとも９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域、および上記１Ｆ６の成熟軽鎖可変領域に対して少なくとも９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域を含む。他の好ましい抗体は、上記２Ｆ２の成熟重鎖可変領域（配列番号３）に対して少なくとも９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域、および上記２Ｆ２の成熟軽鎖可変領域（配列番号４）に対して少なくとも９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域を含む。
【００６５】
多くの他のＣＤ７０に対する抗体は、例えば、米国特許出願公開第２００５−０１９１２９９号；および国際公開番号ＷＯ  ０７／０３８６３７に記載される。ＣＤ７０の細胞外ドメインに結合する他の抗体は、以下に記載されるように、単独でか、または誘導体および／もしくは結合体としてかのいずれで適切であるかについて、スクリーニングされ得る。スクリーニングは、標識抗体を使用して、ＣＤ７０を発現する細胞へのインターナリゼーションを評価し得る。スクリーニングはまた、細胞傷害性を評価し得る。さらなるスクリーニングは、膵臓癌もしくは卵巣癌および他の癌の動物モデルで行われ得る。例えば、ＳＫＯＶ−３卵巣癌細胞株、ＡＮ３ＣＡ子宮内膜癌細胞株、ＴＯＶ２１Ｇ卵巣癌細胞が、使用され得る。また、ＰＡＮＣ１膵臓癌細胞株およびＭｉａＰａｃａ２膵臓癌細胞株が、使用され得る。
【００６６】
抗ＣＤ７０抗体の誘導体はまた、本発明の方法の実施において使用され得る。代表的な改変としては、例えば、グリコシル化、脱グリコシル化、アセチル化、ｐｅｇ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞リガンドもしくは他のタンパク質への連結などが挙げられる。多くの化学的改変のうちのいずれかは、例えば、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、もしくはツニカマイシンの存在下での代謝的合成によって行われ得る。さらに、上記誘導体は、１もしくは数個の伝統的ではないアミノ酸を含み得る。
【００６７】
上記抗体誘導体は、マルチマー（例えば、ダイマー）であり得、上記マルチマーは、１種以上のモノマーを含み、ここで各モノマーは、（ｉ）抗ＣＤ７０抗体の抗原結合領域もしくはこれに由来するポリペプチド領域（例えば、１もしくは数個のアミノ酸の置換によって）、および（ｉｉ）マルチマー化（例えば、ダイマー化）ポリペプチド領域を含み、その結果、上記抗体誘導体は、ＣＤ７０に特異的に結合するマルチマー（例えば、ホモダイマー）を形成する。代表的には、抗ＣＤ７０抗体の抗原結合領域もしくはこれに由来するポリペプチド領域は、異種タンパク質と組換え融合されるかまたは化学的に融合され、ここで上記異種タンパク質は、ダイマー化ドメインもしくはマルチマー化ドメインを含む。ＣＤ７０発現癌を処置もしくは予防する目的で被験体に上記抗体誘導体を投与する前に、上記誘導体は、ホモダイマーもしくはヘテロダイマーの形成を可能にする条件に供される。ヘテロダイマーは、同一のダイマー化ドメインを含み得るが、異なるＣＤ７０抗原結合領域、異なるダイマー化ドメイン以外は同一のＣＤ７０抗原結合領域、もしくは異なるＣＤ７０抗原結合領域およびダイマー化ドメインを含み得る。
【００６８】
抗ＣＤ７０抗体誘導体は、抗ＣＤ７０抗体を２次抗体に結合体化するｋとおによって形成され得る（「抗体ヘテロ結合体」）（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号を参照のこと）。本発明の方法を実施するために有用なヘテロ結合体は、ＣＤ７０二結合する抗体（例えば、上記モノクローナル抗体１Ｆ６もしくは２Ｆ２のＣＤＲおよび／もしくは重鎖を有する抗体）、および表面レセプターもしくはレセプター複合体（例えば、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦレセプタースーパ^ファミリーメンバー、インテグリン、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、主要組織適合性タンパク質、レクチン（Ｃ型、Ｓ型もしくはＩ型）、もしくは補体制御タンパク質）に結合する抗体を含む。
【００６９】
ＣＤ７０に対する抗体およびそれらの誘導体は、細胞傷害性部分もしくは細胞増殖抑制部分に結合体化されて、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）を形成し得る。抗体もしくは抗体誘導体への結合体化に特に適した部分は、化学療法剤、プロドラッグ変換酵素、放射活性同位体もしくは放射活性化合物、または毒素である。例えば、抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体は、細胞傷害性薬剤（例えば、化学療法剤）、もしくは毒素（例えば、細胞増殖抑制もしくは細胞破壊薬剤（例えば、アブリン、リシン  Ａ、シュードモナス外毒素、もしくはジフテリア毒素））に結合体化され得る。
【００７０】
上記抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体は、プロドラッグ変換酵素に結合体化され得る。上記プロドラッグ変換酵素は、上記抗体もしくはその誘導体に組換え的に融合され得るか、または公知の方法を使用して、それらに化学的に結合体化され得る。例示的なプロドラッグ変換酵素は、カルボキシペプチダーゼ  Ｇ２、β−グルクロニダーゼ、ペニシリン−Ｖ−アミダーゼ、ペニシリン−Ｇ−アミダーゼ、β−ラクタマーゼ、β−グルコシダーゼ、ニトロレダクターゼ、およびカルボキシペプチダーゼ  Ａである。
【００７１】
治療剤をタンパク質（および特に、抗体）に結合体化するための技術は、周知である（例えば、Ａｒｎｏｎら，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，第２版．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐｉｎｃｈｅｒａら編，１９８５）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｂａｌｄｗｉｎら編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８５）；およびＴｈｏｒｐｅら，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８を参照のこと。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ  ８９／１２６２４もまた参照のこと）。
【００７２】
上記治療剤は、上記抗体から（例えば、加水分解によって、抗体分解によって、または切断剤によって）切断されなければその活性を減少する様式で結合体化され得る。このような治療剤は、上記抗体もしくはその誘導体に、上記ＣＤ７０発現癌細胞の細胞内環境中での切断に感受性であるが、その細胞外環境に対しては実質的に感受性でない切断可能なリンカーで結合され、その結果、上記結合体は、上記ＣＤ７０発現癌細胞によって（例えば、ｐＨ感受性もしくはプロテアーゼ感受性によって、エンドソーム中に、ライソゾーム環境中に、もしくはカベオラ環境中に）インターナリゼーションされる場合に、上記抗体もしくはその誘導体から切断される。
【００７３】
代表的には、上記ＡＤＣは、上記治療剤と上記抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体との間のリンカー領域を含む。前出で述べたように、代表的には、上記リンカーは、細胞内環境下で切断可能であり、その結果、上記リンカーの切断は、細胞内環境中で（例えば、ライソゾームもしくはエンドソームもしくはカベオラ内で）、上記抗体から上記治療剤を放出する。上記リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼもしくはプロテアーゼ酵素（ライソゾームプロテアーゼもしくはエンドソームプロテアーゼを含む）によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。代表的には、上記ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長もしくは少なくとも３アミノ酸長である。切断剤としては、カテプシンＢおよびカテプシンＤ、ならびにプラスミンが挙げられ得る（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３を参照のこと）。ＣＤ７０発現細胞に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーは、最も代表的である。例えば、チオール依存性プロテアーゼであるカテプシン−Ｂ（これは、癌組織において高く発現される）によって切断可能なペプチジルリンカーが、使用され得る（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕもしくはＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙペプチドを含むリンカー）。他のこのようなリンカーは、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号に記載されている。特定の実施形態において、上記細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ−ＣｉｔリンカーもしくはＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む（例えば、米国特許第６，２１４，３４５号（これは、上記Ｖａｌ−Ｃｉｔリンカーを有するドキソルビシンの合成を記載する）を参照のこと）。上記治療剤の細胞内タンパク質分解性放出を使用する１つの利点は、上記薬剤が、代表的には、結合体化される場合に減弱され、そして上記結合体の血清安定性が、代表的には、高いことである。
【００７４】
上記切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性であり得、すなわち、特定のｐＨ値における加水分解に対して感受性であり得る。代表的には、上記ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、ライソゾーム中で加水分解可能な酸不安定性のリンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド（ａｃｏｎｉｔｉｃ  ａｍｉｄｅ）、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）が使用され得る（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；同第５，８２４，８０５号；同第５，６２２，９２９号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅら，１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１を参照のこと）。このようなリンカーは、中性ｐＨ条件下（例えば、血液中の条件）で比較的安定であるが、ｐＨ５．５もしくは５．０未満（上記ライソゾームの近似のｐＨ）では不安定である。特定の実施形態において、上記加水分解可能なリンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して上記治療剤に結合したチオエーテル（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照のこと））である。
【００７５】
他のリンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。ジスルフィドリンカーとしては、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）を使用して形成され得るもの、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴが挙げられる（例えば、Ｔｈｏｒｐｅら，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋら，Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ編，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７を参照のこと。米国特許第４，８８０，９３５号もまた、参照のこと）。
【００７６】
上記リンカーはまた、マロネートリンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎら，１９９５，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕら，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９−１３０４）、もしくは３’−Ｎ−アミドアナログ（Ｌａｕら，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１３０５−１２）であり得る。
【００７７】
上記リンカーはまた、薬物ユニットに直接結合される切断不能なリンカー（例えば、マレイミド−アルキレン−もしくはマレイミド−アリールリンカーであり得る。活性な薬物−リンカーは、上記抗体の分解によって放出される。
【００７８】
代表的には、上記リンカーは、上記細胞外環境に対して実質的に感受性でなく、このことは、上記ＡＤＣのサンプル中の上記リンカーのうちのわずか約２０％、代表的には、わずか約１５％、より代表的には、わずか約１０％、およびさらにより代表的には、わずか約５％、わずか約３％、もしくはわずか約１％が、細胞外環境に（例えば、血漿中に）上記ＡＤＣもしくはＡＤＣ誘導体が存在する場合に、切断されることを意味する。リンカーが上記細胞外環境に対して実質的に感受性でないか否かは、例えば、独立して、（ａ）上記ＡＤＣもしくはＡＤＣ誘導体（「ＡＤＣサンプル」）および（ｂ）等モル量の非結合体化抗体もしくは治療剤（「コントロール」サンプル）の両方を、所定の時間（例えば、２時間、４時間、８時間、１６時間、もしくは２４時間）にわたって、血漿とインキュベートし、次いで、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定される場合、上記ＡＤＣサンプル中に存在する非結合体化抗体もしくは治療剤と、コントロールサンプル中に存在する非結合体化抗体もしくは治療剤とを比較することによって、決定される。
【００７９】
上記リンカーはまた、細胞のインターナリゼーションを促進し得る。上記リンカーは、上記治療剤に結合体化された場合に（すなわち、上で記載される上記ＡＤＣもしくはＡＤＣ誘導体の上記リンカー−治療剤部分の環境において）、細胞のインターナリゼーションを促進し得る。あるいは、上記リンカーは、上記治療剤および上記抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体の両方に結合体化される場合に（すなわち、本明細書に記載される上記ＡＤＣもしくはＡＤＣ誘導体の環境において）細胞のインターナリゼーションを促進し得る。
【００８０】
本発明の組成物とともに使用され得る種々のリンカーは、ＷＯ  ２００４−０１０９５７に記載され、以下の形態を有する：
【００８１】
【化１】
2014218502.tif 000002
ここで：
−Ａ−は、ストレッチャーユニット（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ  ｕｎｉｔ）であり；
ａは、０もしくは１であり；
各−Ｗ−は、独立してアミノ酸ユニットであり；
ｗは、独立して、０〜１２の範囲に及ぶ整数であり；
−Ｙ−は、スペーサーユニットであり；そして
ｙは、０、１もしくは２である。
【００８２】
代表的なリンカーは、式（Ｉａ）および（Ｉｂ；以下を参照のこと）の角括弧内に示され、ここでＡ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上記で定義されるとおりであり、Ｒ１は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；そしてｒは、１〜１０の範囲の整数である。Ａｂは、抗体である。
【００８３】
【化２】
2014218502.tif 000003
上記アミノ酸ユニット（−Ｗ−）は、存在する場合、上記ストレッチャーユニット（−Ａ−）を、上記スペーサーユニットが存在する場合には上記スペーサーユニット（−Ｙ−）に連結し、そして上記ストレッチャーユニットを、上記スペーサーユニットが存在しない場合には上記細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤（薬物ユニット；Ｄ）に連結する。
【００８４】
存在する場合、−Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドもしくはドデカペプチドユニットである。ｗは、２〜１２の範囲の整数である。
【００８５】
上記スペーサーユニット（−Ｙ−）は、存在する場合、アミノ酸ユニットを上記薬物ユニットに連結する。スペーサーユニットは、２つの一般的タイプのものである：自壊型（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）および非自壊型（ｎｏｎ  ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ。非自壊型スペーサーユニットは、上記スペーサーユニットのうちの一部もしくは全てが、上記抗ＣＤ７０抗体−リンカー−薬物結合体もしくは薬物−リンカー化合物からのアミノ酸ユニットの酵素的切断後に、上記薬物ユニットに結合されたままであるものである。非自壊型スペーサーユニットの例としては、（グリシン−グリシン）スペーサーユニットおよびグリシンスペーサーユニットが挙げられる。グリシン−グリシンスペーサーユニットもしくはグリシンスペーサーユニットを含む抗ＣＤ７０抗体−リンカー−薬物結合体が、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼ、もしくはリンパ球関連プロテアーゼを介して酵素的切断を受ける場合、グリシン−グリシン−薬物部分もしくはグリシン−薬物部分は、Ａｂ−Ａａ−Ｗｗ−から切断される。上記薬物を遊離するために、独立した加水分解反応が、結合した上記グリシン−薬物ユニットを切断するために上記標的細胞内で起こるべきである。
【００８６】
あるいは、自壊型スペーサーユニットを含む抗ＣＤ７０抗体薬物結合体は、上記薬物（Ｄ）を、別個の加水分解工程の必要性なしに遊離し得る。これら実施形態において、−Ｙ−は、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）基の窒素原子を介して−Ｗｗ−に連結され、カーボネート、カルバメートもしくはエーテル基を介して−Ｄに直接つなげられるＰＡＢユニットである。自壊型スペーサーの他の例としては、上記ＰＡＢ基に電子的に等価な芳香族化合物（例えば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（例えば、Ｈａｙら，１９９９，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７を参照のこと）およびオルトもしくはパラ−アミノベンジルアセタール）が挙げられる。スペーサーが使用され得、これは、アミド結合加水分解の際に容易な環化を受ける（例えば、置換されたおよび置換されていない４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら，１９９５，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍら，１９７２，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙら，１９９０，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７））。グリシンのα位で置換されたアミン含有薬物（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら，１９８４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）の排出はまた、上記抗ＣＤ７０抗体−リンカー−薬物結合体に適用され得る自壊型スペーサーストラテジーの例である。あるいは、上記スペーサーユニットは、分枝状ビス（ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）ユニットであり、これは、さらなる薬物を組み込むために使用され得る。
【００８７】
細胞傷害性薬剤の有用なクラスとしては、例えば、アントラサイクリン、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製インヒビター、化学療法感作剤（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ）などが挙げられる。
【００８８】
細胞傷害性薬剤の有用なクラスの例としては、オーリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【００８９】
適切な細胞傷害性薬剤としては、例えば、オーリスタチン（例えば、オーリスタチン  Ｅ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ）、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エンジインおよびレキシトロプシン（ｌｅｘｉｔｒｏｐｓｉｎ））、デュオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ビンカアルカロイド、ドキソルビシン、モルホリノ−ドキソルビシン、およびシアノモルホリノ−ドキソルビシンが挙げられる。
【００９０】
上記細胞傷害性薬剤は、化学療法剤（例えば、ドキソルビシン、パクリタキセル、メルファラン、ビンカアルカロイド、メトトレキサート、マイトマイシン  Ｃもしくはエトポシド）であり得る。さらに、強力な薬剤（例えば、ＣＣ−１０６５アナログ、カリチアマイシン、マイタンシン、ドラスタチン  １０のアナログ、リゾキシン、およびパリトキシン）は、上記抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体に連結され得る。
【００９１】
例示的な実施形態において、上記細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤は、オーリスタチン  Ｅもしくはその誘導体であり得る。代表的には、上記オーリスタチン  Ｅ誘導体は、例えば、オーリスタチン  Ｅとケト酸との間で形成されたエステルである。例えば、オーリスタチン  Ｅは、パラアセチル安息香酸もしくはベンゾイル吉草酸と反応させられて、それぞれ、ＡＥＢおよびＡＥＶＢを形成し得る。他の代表的なオーリスタチンとしては、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥが挙げられる。上記オーリスタチン  Ｅおよびその誘導体の合成および構造は、例えば、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号および同第２００６−００７４００８号に記載される。
【００９２】
上記細胞傷害性薬剤は、ＤＮＡ副溝結合剤であり得る（例えば、米国特許第６，１３０，２３７号を参照のこと）。例えば、上記副溝結合剤は、ＣＢＩ化合物もしくはエンジイン（例えば、カリチアマイシン）であり得る。
【００９３】
上記ＡＤＣもしくはＡＤＣ誘導体は、抗チューブリン剤を含み得る。抗チューブリン剤の例としては、タキサン（例えば、タキソール（登録商標）（パクリタキセル）、タキソテール（登録商標）（ドセタキセル））、Ｔ６７（Ｔｕｌａｒｉｋ）、ビンカ・アルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）、およびオーリスタチン（例えば、オーリスタチン  Ｅ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ）が挙げられるが、これらに限定されない（例示的オーリスタチンは、以下の式ＩＩＩ〜ＸＩＩＩに示される）。他の適切な抗チューブリン剤としては、例えば、バッカチン誘導体、タキサンアナログ（例えば、エポチロン  Ａおよびエポチロン  Ｂ）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルセミド（ｃｏｌｃｉｍｉｄ）、エストラムスチン、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｓｉｎ）、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモライド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、およびエレウテロビンが挙げられる。
【００９４】
【化３】
2014218502.tif 000004
【００９５】
【化４】
2014218502.tif 000005
【００９６】
【化５】
2014218502.tif 000006
上記細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド（抗チューブリン剤の別のグループ）であり得る。例えば、上記マイタンシノイドは、マイタンシンもそくはマイタンシン含有薬物リンカー（例えば、ＤＭ−１もしくはＤＭ−４（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｃｈａｒｉら，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１もまた参照のこと）である。
【００９７】
ＣＤ７０への他の結合剤は、抗体の代わりとして使用され得る。このようなＣＤ７０標的化部分は、ＣＤ７０に結合し、細胞傷害性薬剤に結合体化された場合にＣＤ７０発現細胞の増殖を除去もしくは阻害する抗体由来の１つ以上のＣＤＲを含み得る。代表的には、上記タンパク質は、マルチマー、最も代表的には、ダイマーである。
【００９８】
他のＣＤ７０標的化部分は、ＣＤ７０に結合するＣＤ２７およびその改変体もしくはフラグメントを含み得る。ＣＤ７０標的化部分は、ＣＤ７０に特異的に結合するペプチド、リガンドおよび他の分子をさらに含み得る。
【００９９】
本明細書に記載される方法において有用な他のＣＤ７０標的化部分は、タンパク質−タンパク質相互作用についてのスクリーニングに適した任意の方法を使用して、同定され得る。代表的には、タンパク質は、これらがＣＤ７０に特異的に結合する能力、次いで、細胞傷害性薬剤もしくは細胞増殖抑制剤に結合体化した場合に、これらが活性化リンパ球もしくはＣＤ７０発現癌細胞に対して細胞増殖抑制効果もしくは細胞傷害性効果を発揮する能力によって最初に同定される。使用され得る方法はとしては、λｇｔ１１ライブラリーを抗体でプローブする技術に類似の様式で、発現ライブラリーを標識ＣＤ７０でプローブすることを包含する、「相互作用クローニング」技術が挙げられる（例えば、Ｂｌａｎａｒ  ａｎｄ  Ｒｕｔｔｅｒ，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１０１４−１０１８を参照のこと）。別の方法は、ツーハイブリッド系（Ｃｈｉｅｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：９５７８−９５８２）であり、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から市販されている。
【０１００】
いったんＣＤ７０結合タンパク質が同定されると、それが（単独で、あるいはマルチマー化されるか、またはダイマー化ドメインもしくはマルチマー化ドメインに融合されるか、または細胞傷害性部分もしくは細胞増殖抑制部分に結合体化される場合に）ＣＤ７０発現癌細胞に対して細胞増殖抑制効果もしくは細胞傷害性効果（細胞傷害性薬剤に結合体化される場合）を発揮する能力は、抗体についてのものに類似の様式で決定される。
【０１０１】
（ＩＩＩ．ＣＤ７０の検出）
診断的適用についてアッセイされるべきサンプルは、外科的手順（例えば、生検）によって得られ得る。ＣＤ７０は、代表的には、イムノアッセイ（癌（例えば、膵臓癌もしくは卵巣癌）に由来することが既知のもしくは由来すると疑われる細胞を含むサンプルが、抗体と接触させられる）によって検出される。接触後に、上記標本中における上記細胞への上記抗体の結合事象の存在もしくは非存在が、決定される。上記結合は、この標本中の癌細胞上で発現される抗原の存在もしくは非存在に関連する。一般に、上記サンプルは、検出可能なシグナルを生じ得る、上記抗ＣＤ７０抗体の標識された特異的結合パートナーと接触させられ得る。あるいは、上記抗ＣＤ７０抗体自体が、標識され得る。標識のタイプの例としては、酵素標識、放射性同位体標識、非放射活性標識、蛍光標識、毒素標識、および化学発光標識が挙げられる。上記標識からのシグナルの検出は、上記サンプル中のＣＤ７０に特異的に結合した上記抗体の存在を示す。
【０１０２】
上記アッセイが行われる上記サンプルは、固定されるかもしくは凍結されて、組織学的切片化が可能にされ得る。好ましくは、上記切り出された組織サンプルは、アルデヒド固定剤（例えば、ホルムアルデヒド、パラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド）；もしくは重金属固定剤（例えば、塩化第２水銀）中で固定される。より好ましくは、上記切り出された組織サンプルは、上記抗体とのインキュベーションの前に、ホルマリン中で固定され、パラフィンワックス中に包埋される。ホルマリン固定したパラフィン包埋の（ＦＦＰＥ）標本により提供される利点は、組織切片中の細胞の詳細および構造的形態的な詳細が保存されることである（例えば、Ｆｏｘら，１９８５，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３３：８４５−８５３を参照のこと）。必要に応じて、ＦＦＰＥ標本は、クエン酸、ＥＤＴＡ、酵素消化もしくは熱で処理されて、エピトープへの接近性を増大し得る（例えば、Ｓｈｉら，１９９１，Ｊ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３９：７４１−７４８を参照のこと）。
【０１０３】
あるいは、タンパク質画分が、既知のもしくは疑いのある膵臓癌もしくは卵巣癌に由来する細胞から単離され得、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、免疫沈降などによって分析され得る。別のバリエーションにおいて、細胞は、ＦＡＣＳ分析によって、好ましくは、別の膵臓細胞マーカーもしくは卵巣細胞マーカーと組み合わせて、ＣＤ７０の発現のために分析され得る。
【０１０４】
さらなるバリエーションにおいて、ｍＲＮＡは、膵臓癌もしくは卵巣癌であることが既知もしくは疑われている細胞から抽出され得る。次いで、上記ｍＲＮＡもしくはこれに由来する核酸（例えば、ｃＤＮＡ）は、ＣＤ７０をコードするＤＮＡに結合する核酸プローブへのハイブリダイゼーションによって分析され得る。
【０１０５】
別のババリエーションにおいて、膵臓癌もしくは卵巣癌は、標識抗ＣＤ７０抗体を患者に投与し、インビボ画像化によって上記抗体を検出することによって、インビボで検出され得る。
【０１０６】
組織サンプルにおけるＣＤ７０の検出は、定性的もしくは定量的またはその両方であり得る。定性的検出は、ＣＤ７０発現の存在もしくは非存在を検出することを意味する。定量的表現（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｅｘｐｒｅｓｄｓｉｏｎ）は、ＣＤ７０の発現の発現レベルを決定することを意味する。問題となっている膵臓組織サンプルもしくは卵巣組織サンプル中のＣＤ７０存在および／もしくはレベルは、１つ以上の標準物質に対して決定され得る（しかし、必ずしも必要ではない）。上記標準物質は、歴史的に（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｌｙ）もしくは一時的に決定され得る。上記標準物質は、例えば、異なる被験体由来の癌でないことが既知の膵臓サンプルもしくは卵巣サンプル、ＣＤ７０を発現しないことが既知の上記患者もしくは他の被験体のいずれかに由来する組織、または膵臓細胞株もしくは卵巣細胞株であり得る。上記標準物質はまた、関連しない抗体（例えば、細菌抗原に対して惹起された抗体）と接触させた分析中の上記患者サンプルであり得る。ＣＤ７０は、非癌性の膵臓組織もしくは卵巣組織では、いかなる顕著な程度にも発現されないので、このような非癌性組織は、ゼロ（バックグラウンド）発現標準物質として使用され得る。
【０１０７】
ＣＤ７０への抗ＣＤ７０抗体の結合からの、（使用される場合）標準物質と比較した検出可能なシグナルの存在は、上記組織サンプル中のＣＤ７０の存在を示し、検出可能な結合のレベルは、ＣＤ７０の発現のレベルの表示を提供する。組織切片に対して行われるアッセイにおいて、上記発現レベルは、ＣＤ７０の検出可能な発現を示す上記サンプルの表面積のパーセンテージとして表され得る。あるいは、もしくはさらに、上記発現レベル（強度）は、上記サンプル中の全体の発現の尺度もしくは上記サンプル中でＣＤ７０を発現する細胞の尺度として使用され得る。
【０１０８】
（ＩＶ．診断、予後測定、設計および処置のモニタリング）
膵臓組織もしくは卵巣組織のサンプル中のＣＤ７０の発現の検出は、上記サンプルが癌性であることを示す。同様に、他の患者サンプル中のＣＤ７０の発現の検出は、上記患者が、肺、頭頸部（喉頭もしくは咽頭）、黒色腫、神経膠芽腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫）、腎細胞癌（明細胞癌もしくは乳頭状癌を含む）、結腸直腸癌もしくは膀胱癌を有することを示す。治療的適用に使用される抗体は、未変性のＣＤ７０抗原の細胞外ドメインに特異的に結合する。
【０１０９】
ＣＤ７０の存在および／もしくはレベルによって提供される癌の表示は、診断の手段（例えば、医師による内診（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）もしくは検死（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）、Ｘ線、ＣＴスキャン（コンピューター断層撮影法）、ＰＥＴスキャン（陽電子放射断層撮影法）、ＰＥＴ／ＣＴスキャン、超音波、ＭＲＩ（磁気共鳴画像法）、内視鏡検査法、ＥＲＣＰ（内視鏡的逆行性胆管膵管造影）、組織学的検査および全体の診断時に達する組織培養と組み合わされ得る。
【０１１０】
上記医師におそらく最も大きく関連するもののうち、ＣＤ７０の存在およびレベルは、上記患者のための処置プロトコルを設計するための、特に、ＣＤ７０に対する抗体、誘導体、ＡＤＣもしくは他の結合剤を患者に投与するための有用な情報を提供する。正常な膵臓組織もしくは卵巣組織における検出可能なＣＤ７０発現は本質的に存在しないので、癌中のこのレセプターの存在は、治療的処置の標的を提供する。ＣＤ７０発現のレベルが高くなるほど、および／もしくはＣＤ７０を発現する腫瘍のパーセンテージが高くなるほど、処置はより有効になるようである。処置後のＣＤ７０の継続した分析は、上記処置が有効であるか否かをモニタリングする手段（上記処置が有効であるＣＤ７０陽性シグナルのレベルの低下（すなわち、ＣＤ７０陽性癌細胞の存在の代用として））を提供する。
【０１１１】
（Ｖ．処置に反応しやすい患者）
上記方法による処置に反応しやすい患者は、通常、上記のように、癌の他の徴候もしくは症状が付随する、彼らの膵臓組織、卵巣組織もしくは他の組織においてＣＤ７０の検出可能なレベルを有する。膵臓癌および卵巣癌の両方の種々のサブタイプおよびステージは、以下により詳細に記載されるように存在する。ときおり、本発明の方法によって処置される患者は、他のタイプの処置（例えば、外科手術、化学療法および／もしくは照射）を以前に受けたが、上記癌の増殖の退縮もしくはさらに緩慢化を誘導しなかったことがある。いくらかのこのような患者において、上記癌は、１種以上のこのような治療による処置に不応性である。
【０１１２】
膵臓癌のリスクのあるいくらかの患者はまた、上記疾患の徴候および症状が現れる前に予防的に処置され得る。このような個体としては、これら疾患を経験したことがある親族を有する者、およびそのリスクが遺伝的マーカーもしくは生化学的マーカーの分析によって決定される者が挙げられる。
【０１１３】
（Ａ．膵臓癌患者）
膵臓癌は、膵臓の腺内の悪性腫瘍である。膵臓癌患者のうちのほぼ９０％は、５５歳より高齢である。この癌が見いだされる時点での平均年齢は、７２歳である。膵臓癌のリスク因子としては、以下が挙げられる：年齢、男性性、アフリカの民族、喫煙、肉食が高い食事、肥満、糖尿病、慢性膵炎（関連しているが、偶然であるとは知られていない）、特定の農薬、色素、およびガソリンに関する化学物質への職業被爆、家族歴、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染、歯肉炎もしくは歯周病（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｖｏｎ  Ｈｏｆｆら，  ｅｄ．，  Ｍａｉｎｅ；２００５．）。膵臓癌のうちのわずか１０〜１５％が、遺伝性であると考えられる。膵臓癌に関連しているいくつかの遺伝的マーカーは、ＰＮＣＡ１遺伝子、ＰＡＬＬＤ遺伝子もしくはＢＲＣＡ２遺伝子における変異が挙げられ得る（例えば、Ｂａｎｋｅら，２０００，Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．８４：６７７−６９０；Ｍｅｃｋｌｅｒら，２００１，Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈ．２５：１０４７−１０５３；Ｐｏｇｕｅ−Ｇｅｉｌｅら，２００６，ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ．３：ｅ５１６；Ｍｕｒｐｈｙら，２００２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：３７８９−３７９３を参照のこと）。
【０１１４】
しかし、現在認識されているリスク分類中の全ての患者が、膵臓癌を発症するわけではない。多くの膵臓癌は、「散発性に」（すなわち、家族歴のない患者において）生じる。
【０１１５】
膵臓癌に罹患している個体は、病理学報告において得られた、上記腫瘍の組織学に従って認識され得る。組織学は、臨床的処置、管理、および予後の多くの局面を示す。上記腫瘍が、上記膵臓の外分泌腺もしくは内分泌腺から始まるか否かに基づいて、膵臓癌の２つの主要なタイプがある。上記膵臓の外分泌腺から形成される腫瘍は、遙かに一般的である。膵臓腫瘍のうちの約９５％は、腺癌である。その残りの５％は、外分泌性の膵臓の他の腫瘍（例えば、漿液性嚢胞腺腫、腺房細胞癌、および膵臓神経内分泌腫瘍（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｕｍｏｒ）（例えば、インスリノーマ）を含む。
【０１１６】
内分泌腫瘍はまた、島細胞腫瘍といわれ、いくつかのサブタイプに分けられる。大部分は良性であるが、いくつかは癌性である。癌の特別なタイプ（膨大部癌（ａｍｐｕｌｌａｒｙ  ｃａｎｃｅｒ））が起こり得る。ここの場所で、肝臓からの胆管および膵管が小腸へ注ぐ。このタイプの癌は、しばしば、皮膚および眼の黄疸形成のような徴候を引き起こすので、大部分の膵臓癌より初期の段階で通常は見いだされる。成功裏の処置の見込みは、膨大部癌に罹患している患者についてはより良好である。
【０１１７】
膵臓癌ステージ分類（ｓｔａｇｉｎｇ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）基準に従って行われ得る。上記癌のステージは、ローマ数字Ｉ〜ＩＶを使用して表示され、ステージＩＶは、上記癌が拡がりかつより重篤であることを示す。具体的には、ステージＩの膵臓癌は、特定のｐｒｏｓｃｒｉｂｅｄ  感受性領域に拡がっておらず、局施与リンパ節にも遠位への転移も伴っていなかった腫瘍を含む。ステージＩＩは、十二指腸、胆管、もしくは「膵周囲」組織へと拡がっているが、局所リンパ節にも遠位への転移も伴っていない腫瘍を含む。ステージＩＩＩはの癌は、これら領域へ拡がった可能性も広がっていない可能性もあり、局所リンパ節が巻き込まれたが、遠位への転移は明らかに示されていない腫瘍を含む。ステージＩＶＡは、胃、脾臓、大腸もしくは隣り合う大血管へと拡がり、局所リンパ節が巻き込まれたが、遠位への転移は明らかに示されていない腫瘍を含む。ステージＩＶＢは、任意の種の膵臓腫瘍であって、任意の種のリンパ節状態および遠位への転移が明らかになったものを含む。言及されはしたが、この膵臓癌ステージ分類システムは、その純粋な形態で使用されることは稀である。なぜなら、上記ステージは、患者の予後にも処置選択肢にも完全には適合しないからである。代替手段は、３ステージ分類である（潜在的に切除可能、局所的に進行および転移性）。これは、放射線医学的所見に基づく。他の予後判定因子がまた、考慮される。顕微鏡下で上記細胞がどの程度異常に見えるかを示す癌のグレードは、ときおり、Ｇ１からＧ４までのスケールで位置づけられる。Ｇ１の癌は、大部分が正常細胞のように見え、最もよい見通しを有する。外科手術した患者については、上記切除の程度、すなわち、上記腫瘍の全てが除去されるか否かはまた、見通しに関して重要である。これは、ときおり、Ｒ０からＲ２までのスケールに位置づけられる。Ｒ０は、認められ得る腫瘍の全てが除去されたものを示し、Ｒ２は、認められ得るいくらかの腫瘍が除去されていない可能性があるものを示す。
【０１１８】
初期の膵臓癌症状は、非特異的かつ変動する。一般的な症状としては、代表的には、背部に放散し、前屈みになる（膵体部もしくは膵尾部の癌において認められる）ことによって緩和される上腹部の疼痛、食欲の喪失、顕著な体重減少および胆管閉塞に関する無痛の黄疸（膵頭部の癌）が挙げられる。しかし、これら症状のうちの全ては、複数の他の原因を有し得、膵臓癌に限定されない。
【０１１９】
（Ｂ．卵巣癌患者）
卵巣癌は、卵巣において始まる癌である。卵巣癌は、通常は、50歳より上の女性において起こるが、より若い女性にも罹患し得る。その原因は未知である。ドイツ・ポーランド・ロシア系ユダヤ人（Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  Ｊｅｗｉｓｈ）の女性のような特定の集団は、より高いリスクがあり、しばしば、一般集団より若い年齢でより高いリスクがある。乳癌の履歴、または卵巣癌、乳癌、もしくは他の関連する癌の家族歴（特に、若い年齢での場合）を有する患者は、上昇したリスクを有し得る。子宮癌、結腸がんもしくは他の胃腸癌の強い家族歴は、遺伝性非ポリポーシス結腸直腸癌として公知の症候群（ＨＮＰＣＣ（Ｌｙｎｃｈ  ＩＩ症候群としても公知））の存在を示し得る。これは、卵巣癌の発症に対して高いリスクを付与する。細胞遺伝学研究およびヘテロ接合性調査がないこと（ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）は、いくらかの遺伝子もしくは染色体領域が、卵巣癌開始および進行に関与していることを示唆する（例えば、Ｐｅｊｏｖｉｃら，１９９２，Ｇｅｎｅｓ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ，４：５８−６８；Ｔｅｓｔａら，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５４：２７７８−２７８４：Ｙａｎｇ−Ｆｅｎｇら，１９９３，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５４：５４６−５５１を参照のこと）。卵巣癌に関するリスクの遺伝的マーカーとしては、ＢＲＣＡ１遺伝子もしくはＢＲＣＡ２遺伝子における変異（Ｆｕｔｒｅａｌら，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６：１２０−１２２）が挙げられるが、これらに限定されない。卵巣癌に関する強い遺伝的リスクを有する患者は、子供をもうけ終わった後に予防的卵巣摘出術の使用を考慮し得る。現在認識されているリスク分類における全ての女性が、卵巣癌を発症するわけではない。卵巣癌の大部分は、散発的に生じる。
【０１２０】
卵巣癌に罹患している個体は、上記腫瘍の履歴に従って認識され、病理報告において得られ得る。組織学は、臨床的処置、管理、および予後の多くの局面を必然的に決定し得る。上記腫瘍が始まる細胞の種類および上記腫瘍が良性であるか癌性であるかに基づいて、卵巣癌には３つの主要なタイプがある。胚細胞腫瘍は、卵を生じる細胞から始まる。間質腫瘍は、卵巣を一緒に保持しかつ女性ホルモンであるエストロゲンおよびプロゲステロンを生成する結合組織細胞から始まる。上皮腫瘍は、卵巣の外表面を覆う細胞から始まる。大部分の卵巣癌は、上皮腫瘍であり、腫瘍の少数が、胚細胞もしくは間質細胞から生じる。
【０１２１】
卵巣癌は、しばしば、原発性であるが、身体の他の箇所の原発性癌からの、転移の結果である2次性でもあり得る。例えば、乳癌から、もしくは胃腸癌から（この場合、上記卵
巣癌は、クルーケンベルク癌である）。表面の上皮−間質腫瘍は、腹腔の内層に始まり得、この場合、上記卵巣癌は、原発性腹膜癌に続発するが、処置は、基本的には、このタイプの原発性卵巣癌と同じである。
【０１２２】
卵巣癌において、上記癌ステージは以下の通りである：ステージＩは、１つもしくは両方の卵巣に限局される；ステージＩＩは、骨盤に拡がるかもしくは着床（ｉｍｐｌａｎｔｓ；骨盤腔内への浸潤を生じているという意味だと思うのですが）を伴う；ステージＩＩＩは、骨盤の範囲を超えた顕微鏡的な腹腔転移を伴う；または骨盤に限定されるが、小腸もしくは大網（ｏｍｅｎｔｕｍ）への拡がりを伴う；およびステージＩＶは、遠位への転移（例えば、肝臓中、もしくは腹腔の外へ）を伴う。
【０１２３】
初期卵巣癌は、頻繁に無症候性であるか、またはごく軽度の症状を生じるに過ぎない。これは、上記患者によって無視されてしまうこともある。なぜなら、上記症状は、漠然としたものもしくは非特異的であるかのいずれかであるからである。症状としては、ｃａｎ
ｉｎｃｌｕｄｅ  腫脹、骨盤痛もしくは腹痛、食べることに関する問題もしくはすぐに満腹感を感じる問題、泌尿器系の症状（例えば、切迫した感覚もしくは頻尿の感覚が挙げられ得る（例えば、Ｓｍｉｔｈら，２００５，Ｃａｎｃｅｒ  １０４（７）：１３９８−１４０７；Ｔｈｅ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｒｅｌｅａｓｅｄ  ｂｙ
ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  ｔｈｅ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ
ｏｆ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔｓ  ｏｎ  Ｊｕｎｅ  １２，２００７を参照のこと）。この癌を示す患者のうちの６０％より多くは、上記卵巣を超えて既に拡がっている場合、既にステージＩＩＩもしくはステージＩＶの癌を有する可能性がある。
【０１２４】
（Ｃ．他の癌患者）
上記方法による処置に反応しやすい他の患者は、通常、肺、頭頸部（喉頭もしくは咽頭）、黒色腫、神経膠芽腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性リンパ腫）、腎細胞癌（明細胞癌および乳頭状癌を含む）、結腸直腸癌もしくは膀胱癌のサンプルにおいて検出可能なレベルのＣＤ７０を有する。このような患者は、癌の他の徴候もしくは症状が付随し得る。ときおり、本発明の方法によって処置される患者は、以前に他のタイプの処置（例えば、外科手術、化学療法および／もしくは照射）を受けたことがあるが、癌の退縮も癌の増殖の緩徐化も誘導されなかったことがある。いくらかのこのような患者において、上記癌は、１種以上のこのような治療による処置に不応性である。
【０１２５】
癌のリスクのあるいくらかの患者はまた、上記疾患の徴候および症状が現される前に予防的に処置され得る。このような個体としては、これら疾患を経験したことがある親族を有する個体、および遺伝的マーカーもしくは生化学的マーカーの分析によりリスクが決定される患者が挙げられる。
【０１２６】
（ＶＩ．処置方法）
本発明は、上記抗体、誘導体およびＡＤＣ、ならびに本明細書で開示される他の抗ＣＤ７０結合剤（まとめて薬剤）による、膵臓癌もしくは卵巣癌の処置もしくは予防のための方法を提供する。上記組成物は、患者に投与され得る。
【０１２７】
種々の送達系が、上記薬剤を投与するために使用され得る。上記送達系としては、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻内経路、硬膜外経路、および経口経路が挙げられる。上記薬剤は、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮もしくは粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介する吸収によって、投与され得、他の生物学的に活性な薬剤（例えば、化学療法剤）と一緒に投与され得る。投与は、全身的であってもよいし、局所的であってもよい。
【０１２８】
上記薬剤は、注射によって、カテーテルによって、坐剤によって、もしくは移植物（上記移植物は、多孔性、非多孔性もしくはゲル様物質（膜（例えば、ｓｉａｌａｓｔｉｃ膜）もしくは繊維を含む）である）によって、投与され得る。
【０１２９】
あるいは、上記薬剤は、制御放出系において送達され得る。例えば、ポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８９，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照のこと）。あるいは、ポリマー物質が使用され得る（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ  ＆  Ｗｉｓｅ編，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ，１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ  ＆  Ｂａｌｌ編，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ＆  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照のこと。Ｌｅｖｙら，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５もまた参照のこと）。他の制御放出系は、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，前出において議論されている。
【０１３０】
上記薬剤は、治療上有効なもしくは予防上有効な量の上記薬剤および１種以上の薬学的に適合性の成分を含む薬学的組成物として、投与され得る。例えば、上記薬学的組成物は、代表的には、１種以上の薬学的キャリア（例えば、滅菌液体（例えば、水および油（石油起源、動物起源、植物起源もしくは合成起源のもの（例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ごま油など）））を含む。水は、上記薬学的組成物が静脈内に投与される場合には、より代表的なキャリアである。生理食塩水溶液および水性デキストロースおよび振り背ロール溶液はまた、特に、注射用溶液のために、液体キャリアとして使用され得る。適切な薬学的賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。上記組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝化剤（例えば、アミノ酸）および／または可溶化剤もしくは安定化剤（例えば、非イオン性界面活性剤（例えば、ｔｗｅｅｎ）もしくは糖（例えば、スクロース、トレハロースなど））を含み得る。これら組成物は、液剤、懸濁物、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物などの形態をとり得る。上記組成物は、伝統的な結合剤およびキャリア（例えば、トリグリセリド）とともに、坐剤として処方され得る。経口処方物は、標準的なキャリア（例えば、製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど）を含み得る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。このような組成物は、治療上有効な量の核酸もしくはタンパク質を、代表的には、精製された形態において、上記患者への適切な投与のための形態を提供するように、適切な量のキャリアと一緒に含む。上記処方物は、投与様式に対応する。
【０１３１】
代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、上記医薬はまた、可溶化剤、および注射部位における疼痛を緩和するための局所麻酔剤（例えば、リグノカイン）を含み得る。一般に、上記成分は、別個に、もしくは単位投与形態において一緒に混合されているかいずれかで、例えば、凍結乾燥粉末もしくは密閉式の気密容器（例えば、活性薬剤の量を示すアンプルもしくはサシェ）中の濃縮物として供給される。上記医薬は、注入によって投与されるべきである場合、滅菌の製薬グレードの水もしくは生理食塩水を含む注入ボトルで分与され得る。上記医薬が注射によって投与される場合、注射用滅菌水もしくは生理食塩水のアンプルは、上記成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。
【０１３２】
膵臓癌もしくは卵巣癌の処置もしくは予防において有効な上記薬剤の量は、標準的な臨床技術によって決定され得る。さらに、インビトロアッセイは、必要に応じて、至適投与範囲を同定するのを補助するために使用され得る。上記処方物において使用されるべき正確な用量はまた、投与経路、および膵臓癌もしくは卵巣癌のステージに依存し、上記医師の判断および各患者の環境に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ試験系もしくは動物モデル試験系から得られる用量応答曲線から外挿され得る。用量は、細胞培養物において決定される場合、ＩＣ５０（すなわち、症状の最大半値阻害（ｈａｌｆ−ｍａｘｉｍａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）を達成する上記試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて処方され得る。
【０１３３】
例えば、上記薬剤の毒性および治療効力は、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するために標準的な薬学的手順によって、細胞培養物もしくは実験動物において決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。大きな治療指数を示す薬剤が好ましい。薬剤が毒性副作用を示す場合、上記標的を罹患組織部位に向ける送達系は、非ＣＤ７０発現細胞に対する潜在的損傷を最小限にするために使用され得、それによって、副作用を低下し得る。
【０１３４】
一般に、ＣＤ７０発現癌を有する患者に投与される抗体、誘導体もしくはＡＤＣの投与量は、代表的には、上記被験体の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。より代表的には、被験体に投与される上記投与量は、上記被験体の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、さらにより代表的には、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、もしくは上記被験体の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである。一般に、ヒト抗体は、外来タンパク質に対する免疫応答に起因して、他の種に由来する抗体より長い、ヒト身体内での半減期を有する。従って、ヒト化抗体、キメラ抗体もしくはヒト抗体を含むＡＤＣのより低い投与量およびより低い頻度の投与は、しばしば可能である。
【０１３５】
ＣＤ７０に対する抗体、誘導体およびＡＤＣはまた、膵臓癌もしくは卵巣癌の処置もしくは予防のために、１種以上の他の治療剤と組み合わせて投与され得る。例えば、組み合わせ治療は、第２の細胞増殖抑制剤もしくは細胞傷害性薬剤（例えば、結合体化されていない細胞増殖抑制剤もしくは細胞傷害性薬剤（例えば、癌の処置のために従来から使用されているもの））を含み得る。組み合わせ治療はまた、例えば、ＣＤ７０発現癌細胞の表面上のＣＤ７０以外のレセプターもしくはレセプター複合体を標的とする薬剤の投与を含み得る。代表的には、このような抗体もしくはリガンドは、ＣＤ７０発現癌細胞上の細胞表面レセプターに結合し、細胞増殖抑制シグナルもしくは細胞傷害性シグナルを上記ＣＤ７０発現癌細胞に送達することによって、上記抗ＣＤ７０抗体の上記細胞傷害性効果もしくは細胞増殖抑制効果を増強する。
【０１３６】
上記薬剤とともに投与され得る他の薬物は、増殖因子インヒビター、もしくは抗脈管形成因子を含み得る。例えば、エルロチニブといわれる薬物（表皮増殖因子レセプターチロシンインヒビター）は、進行した膵臓癌を処置するために使用され得る（Ｂａｒｅｓｃｈｉｎｏら，２００７，Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ．Ｓｕｐｐｌ  ６：３５−４１）。このような組み合わせ投与は、疾患パラメーター（例えば、書状の重篤度、症状の数、もしくは再発の頻度）に対して相加効果もしくは相乗効果を有し得る。
【０１３７】
本発明の方法は、他の処置手段（例えば、外科手術、照射、標的化治療、免疫療法、増殖因子インヒビターの使用、もしくは抗脈管形成因子）と組み合わされ得る。
【０１３８】
外科手術は、好ましい処置であり、頻繁には、その組織学を介して異なる診断のための組織標本を得るために必要である。改善された生存は、上記疾患のより正確なステージ決定および腹部における腫瘍の積極的外科的切除のより高い比率にある。外科手術のタイプは、診断時にどの程度広く癌が存在するか（癌のステージ）、ならびに癌の予測されるタイプおよびグレードに依存する。
【０１３９】
膵臓の腺癌に罹患している患者については、外科医は、Ｗｈｉｐｐｌｅ法（膵頭十二指腸切除術ともいわれる）を行い得る。この手順において、膵島、およびときおり、膵体は、胃および小腸の一部、胆嚢、総胆管の一部、ならびにいくつかのその近辺のリンパ節とともに除去される（例えば、Ｍｉｃｈａｌｓｋｉら，２００７，Ｎａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．Ｏｎｃｏｌ．４（９）：５２６−３５を参照のこと）。膵臓の内分泌腫瘍（島細胞腫瘍）に罹患している患者については、外科手術は、現実味のある選択肢である（例えば、Ａｋｅｒｓｔｒoｍ  ａｎｄ  Ｈｅｌｌｍａｎ，２００７，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２１（１）：８７−１０９を参照のこと）。
【０１４０】
卵巣癌患者において、外科医は、一方の卵巣（片側の卵巣摘出術）もしくは両方の卵巣（両側の卵巣摘出術）、卵管（卵管摘出術）および子宮（子宮摘出術）を除去し得る。いくつかの非常に初期の腫瘍（例えば、ステージＩにおけるもの）については、特に、それらの受精能力を温存することを望んでいる若い女性において、関与している卵巣および卵管のみ（「片側付属器切除術」、ＵＳＯ）が除去される。進行した悪性腫瘍において、完全な切除が可能でない場合、できる限り多くの腫瘍が除去される（腫瘍減量術（ｄｅｂｕｌｋｉｎｇ  ｓｕｒｇｅｒｙ））。このタイプの外科手術が成功裏である場合、予後は、大きな腫瘍塊（直径１ｃｍより大きい）が残ったままである患者と比較して、改善される。最小限に侵襲性の外科手術的技術は、外科手術のより少ない合併症を伴う非常に大きな（１０ｃｍより大きな）腫瘍の安全な除去を容易にし得る（例えば、Ｅｈｒｌｉｃｈら，２００７，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．４２（５）：８９０−３を参照のこと）。
【０１４１】
化学療法とは、癌細胞を死滅させるために抗癌剤もしくは細胞傷害性薬物の使用に言及する。化学療法は、外科手術の前もしくは後に、上記患者に与えられ得る。上記腫瘍の組織学に依存して、いくつかの種類の腫瘍（特に、奇形腫）は、化学療法に対して感受性ではない。薬物（例えば、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル（ｆｌｏｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、シスプラチンもしくはマイトマイシン  Ｃ）での静脈内化学療法は、膵臓癌を処置するために使用され得る。静脈内化学療法（例えば、ゲムシタビン、トポテカン、ドキソルビシン、リポソーム性ドキソルビシン、カルボプラチン、パクリタキセル）は、卵巣癌を処置するために使用され得る。部分的に静脈内で、部分的に腹腔内である化学療法はまた、メジアン生存時間を改善し得る（Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｂｏｏｋ（第３版）．編．Ｐｅｒｒｙ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００１；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｌｌｉａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．（第２版）  Ｄｅｒｅｋ  Ｄｏｙｌｅら  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ．１９９９を参照のこと）。
【０１４２】
放射線療法は、正常細胞に対して可能な限り害にならないように行うと同時に、癌細胞を死滅させるかもしくは縮小するための、高エネルギー線（例えば、ｘ線）での処置である。照射は、外科手術の前もしくは後に上記患者に与えられ得る。放射線療法はまた、拡がらなかったが、外科手術によって除去できない膵臓癌を処置するために使用され得る。放射線療法は、上記卵巣の癌を処置するためにそれほどしばしば使用されないが、適切であれば、ときおり使用され得る。放射線療法と化学療法の組み合わせは、患者の腫瘍が拡がりすぎて、外科手術によって除去できない患者のために使用され得る。
【０１４３】
抗ＣＤ７０抗体、誘導体もしくはＡＤＣは、外科手術、化学療法もしくは放射線療法の処置を現在受けている患者に投与され得る。あるいは、患者は、少なくとも１時間および最大数ヶ月まで抗ＣＤ７０抗体、誘導体もしくはＡＤＣの投与の前もしくは後に（例えば、少なくとも1時間、5時間、１２時間、１日、１週間、１ヶ月、もしくは３ヶ月だけ上記ＡＤＣもしくはＡＤＣ誘導体の投与の前もしくは後）、外科手術、化学療法もしくは放射線療法を受け得る。
【０１４４】
（ＶＩＩ．キット）
本発明は、上記検出法とともに使用するための診断キットを提供する。上記キットは、代表的には、上記の検出に有用な変性ＣＤ７０に特異的に結合する抗体もしくはそのフラグメントを含む。１つ以上のさらなる容器が、上記アッセイにおいて使用されるべき要素（例えば、試薬もしくは緩衝液）を封入し得る。このようなキットはまた、もしくは代わりに、抗体結合の直接的検出もしくは間接的検出に適したレポーター基を含む検出試薬を含み得る。
【０１４５】
本発明は、膵臓癌および卵巣癌を処置するための薬学的キットをさらに提供する。代表的には、このようなキットは、本明細書に記載されるように、治療用組成物として処方される試薬を含み、キットでの分配に適した種々の形態のうちのいずれかであり得る。このような形態は、上記薬剤（例えば、抗ＣＤ７０抗体、誘導体もしくはＡＤＣ）を提供するための液体、散剤、錠剤、懸濁物などの処方物を含み得る。上記キットはまた、注射、上記凍結乾燥抗体、誘導体もしくはＡＤＣの再構成もしくは希釈用の薬学的に受容可能な希釈剤（例えば、滅菌水）を含み得る。
【０１４６】
本発明は、診断および治療のための組み合わされたキットをさらに提供する。このようなキットは、代表的には、固定組織切片での検出において使用するための未変性のＣＤ７０より変性ＣＤ７０に優先的に結合する少なくとも１つの抗体、および処置における使用のために変性ＣＤ７０よりよくない場合にも、未変性のＣＤ７０に少なくとも結合する異なる抗体を含む。
【０１４７】
キットはまた、代表的には、表示（ｌａｂｅｌ）、または本明細書に記載される検出および／もしくは処置の方法において使用するための説明書を含む。上記表示もしくは説明書は、キットの製造、輸送、販売もしくは使用の間の任意のときに、キットに添付されるか、別の方法で付随する任意の書面もしくは記録された資料をいう。これは、医薬もしくは生物学的製品の上記製造、使用もしくは販売を監督する政府機関によって指示された形態における通達であり得る。その通達は、ヒト投与のための製造、使用もしくは販売の機関による承認を示す。上記表示もしくは説明書はまた、広告リーフレットおよび小冊子、パッケージング資料、説明書、オーディオカセットもしくはビデオカセット、コンピューターディスク、ならびに上記薬学的キット上に直接印刷された書面を包含し得る。
【０１４８】
本発明は、以下の実施例にさらに記載され、これは、本発明の範囲を限定するとは意図されない。以下の実施例において記載される細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）もしくはＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ（ＤＭＳＺ）によって特定される条件に従って、培養して維持した。細胞培養試薬を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ、もしくは他の供給業者から得た。
【実施例】
【０１４９】
（実施例１：モノクローナル抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３およびＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３の調製）
モノクローナル抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３およびＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３は、免疫原（ＣＤ７０の変性細胞外ドメイン（ＣＤ７０−ＥＣＤ））で数回チャレンジしたマウスから除去した脾臓もしくはリンパ節に由来するＢ細胞を使用して生成した。次いで、これらＢ細胞を、骨髄腫腫瘍細胞と融合して、ハイブリドーマを生成した。多数のモノクローナル抗体を、このようにして、これらハイブリドーマから生成した。上記ハイブリドーマを希釈して、クローン化および増殖を確実にした。
【０１５０】
上記種々のクローンに由来する抗体を、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＣＤ７０を発現する固定した２９３Ｆ細胞および変性Ｌ５４０ｃｙ細胞（これは、ＣＤ７０を発現する）を使用して、Ｆｌａｇ−ＣＤ７０もしくはディファレンシャルＦＭＡＴスクリーン（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用する試験（例えば、ＥＬＩＳＡ）で上記変性ＣＤ７０抗原に結合する能力について試験した。トランスフェクトしていない２９３Ｆ細胞およびＬ５４０ｃｙ細胞を、陰性コントロールとして使用した（いくつかのＬ５４０ｃｙ細胞は、ＣＤ７０について陽性であった）。
【０１５１】
その結果は、１００個より多いハイブリドーマが、変性ＣＤ７０に結合するそれらの能力について試験陽性であることを示した。２つの陽性ハイブリドーマに由来する抗体であるＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３（「１Ｃ１」）およびＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３（「５Ｄ１２」）を、免疫組織化学のために選択した。
【０１５２】
（実施例２：ホルマリン固定したパラフィン包埋の（ＦＦＰＥ）サンプルの調製）
ホルマリン固定したパラフィン包埋の組織を、Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，第２版．１９８０，Ｓｈｅｅｈａｎ，Ｄ．Ｃ．ａｎｄ  Ｈｒａｐｃｈａｋ，Ｂ．Ｂ．，編（Ｂａｔｔｅｌｌｅ  Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）．第３章，ｐｐ．５９−７８）において固定され、記載されるように、標準的な方法に従って調製した。
【０１５３】
ＦＦＰＥによる細胞の調製は、上記組織調製のものに類似であった。簡潔には、細胞を、固定の１日前に約１５，０００細胞／ウェルにおいて適切な培養培地中にプレートした。上記細胞を、以下のように固定した：上記細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、室温において45分間、１０％  ホルマリンで固定した。その後、上記細胞を、ＰＢＳで２回洗浄し、次いで、室温において１５分間、ＰＢＳ＋０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で透過性にした。次いで、上記細胞を、ＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ＋０．０２％  アジ化ナトリウム中に４℃で保存した。ＦＭＡＴスクリーニングの前に、上記ＰＢＳ＋アジ化物を除去し、上記プレートを、室温において３０分間、ＰＢＳ＋５％  ヤギ血清でブロックした。
【０１５４】
（実施例３：免疫組織化学のための組織マイクロアレイの調製）
ＦＦＰＥ組織切片の組織マイクロアレイを、ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ、ＴｒｉＳｔａｒもしくはＣｙｂｒｄｉを含む商業的供給源から得た。組織マイクロアレイはまた、Ｙａｌｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍｉｃｒｏａｓｓａｙ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．０、および最新版に従って調製される。
【０１５５】
（実施例４．ＦＦＰＥサンプルについての免疫組織化学試薬としてのモノクローナル抗体ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３およびＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３の開発）
（Ａ．ＣＤ７０クローンの免疫組織化学試験）
カニクイザルＣＤ７０をコードする発現構築物を、全長カニクイザルＣＤ７０遺伝子を発現ベクターへとクローニングすることによって作製した。この構築物を、２９３Ｆ細胞にトランスフェクトした。これら２９３Ｆ：ＣＤ７０トランスフェクト細胞を、１Ｃ１抗体および５Ｄ１２抗体での染色の陽性コントロールとして供した。上記親２９３Ｆ細胞株を、陰性コントロールとして供した。組織染色については、ＣＤ７０を発現する７８６−Ｏ細胞を、陽性コントロールとして供した。
【０１５６】
上記細胞および組織を固定し、実施例２に記載される手順に従って、パラフィンワックス中に包埋した。ＩＨＣ染色および抗原回復（ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｔｒｉｅｖａｌ）を、Ｖｉｓｉｏｎ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ  Ｂｏｎｄ−ｍａｘＴＭ  システム（現在のＬｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して行った。抗原回復を、ＥＤＴＡ回復法を使用して４０分間行った。あるいは、抗原回復を、９９〜１００℃の温度において１時間にわたってＴｒｉｌｏｇｙ抗原回復システム（Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｑｕｅ，Ｈｏｔ  Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＡＲ）を使用して行った。
【０１５７】
上記１Ｃ１一次抗体もしくは上記５Ｄ１２一次抗体の両方は、全て固定した２９３Ｆ：ＣＤ７０トランスフェクト細胞を強く染色したのに対して、上記親２９３細胞においては、染色は検出されなかった。上記結果はまた、上記７８６−Ｏ細胞（腎細胞癌）において強い染色を示したのに対して、バックグラウンド染色は、Ｒａｍｏｓ異種移植片コントロールにおいて検出された。
【０１５８】
上記１Ｃ１クローンをさらにサブクローニングし、サブクローン１Ｃ１−Ｂ３（ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３）を選択した。同様に、５Ｄ１２をさらにサブクローニングし、サブクローン５Ｄ１２−Ｃ３（ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３）を選択した。これら２つのサブクローンを精製し、一次抗体として使用して、７８６−Ｏ異種移植片サンプルおよびＲａｍｏｓ異種移植片サンプルを染色した。その結果は、１Ｃ１−Ｂ３および５Ｄ１２−Ｃ３のサブクローニングおよび精製が、上記Ｒａｍｏｓ異種移植片におけるバックグラウンド染色を除去することを示した。
【０１５９】
上記抗ＣＤ７０抗体を生成するハイブリドーマを、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９にあるＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託した。上記細胞株を、ＳＧ−２１．１Ｃ１．Ｂ３と称し、これは、上記抗体１Ｃ１を生成し、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−８７３３を有する。これを、２００７年１０月２４日にＡＴＣＣに寄託した；上記細胞株を、ＳＧ−２１．５Ｄ１２．Ｃ３と称し、上記抗体５Ｄ１２を生成し、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−８７３４を有する。これを、２００７年１０月２４日にＡＴＣＣに寄託した。
【０１６０】
（Ｂ．２Ｂ３抗体と比較した、ＳＧ−２１抗体１Ｃ１および５Ｄ１２でのウェスタンブロッティング）
ＳＧ−２１抗体である１Ｃ１抗体および５Ｄ１２抗体が、細胞溶解物および組織溶解物においてＣＤ７０を検出するか否かを決定するために、ウェスタンブロット実験を行った。別のＣＤ７０結合抗体２Ｂ３もまた、比較のために使用した。膜調製物を、７８６−Ｏ細胞、２９３Ｆ：ｃｙｎｏＣＤ７０（カニクイザルＣＤ７０を発現する）細胞、および陰性コントロールとしての２９３Ｆ細胞から調製した。膜抽出物を調製するために、細胞を低張性緩衝液中で溶解し、４℃において１０，０００×ｇで１０分間遠心分離して、細片を除去した。次いで、その上清を、４℃において１００，０００×ｇで３０分間にわたって遠心分離して、上記膜画分をペレット化した。上記膜画分（ペレット）を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび５ｍＭ  ＥＤＴＡ中の０．５％  ＮＰ４０中に溶解した。全てのサンプル調製を、プロテアーゼインヒビターの存在下で行って、ＣＤ７０をインタクトなまま保った。上記タンパク質の量を、ＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、５７０ｎｍで測定した。ＣＤ７０  ＥＣＤ（ＣＤ７０の細胞外ドメイン）およびＦｌａｇタグ化ＣＤ７０−ＥＣＤもまた、表充填機方法によって調製した。上記タンパク質サンプルを、９０℃において３分間変性し、氷上で３分間冷却した。上記サンプルを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して分離し、次いで、検出するためにニトロセルロース膜に転写した。４つの同一のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルおよび膜を調製した。上記膜を、１％  ＢＳＡ含有ＰＢＳおよび０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（ポリソルベート）含有２％  無脂肪乳でブロックした。次いで、各一次抗体を、０．５μｇ／ｍｌで上記溶液に添加し、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ含有ＰＢＳ中で、室温において４時間インキュベートした。上記膜を洗浄し、２次抗体−酵素結合体（これは上記一次抗体を認識した）を添加し、室温において４５分間インキュベートした。上記膜を洗浄し、化学発光基質とインキュベートして、ＣＤ７０を検出した。
【０１６１】
図１を参照すると、上記結果は、ＳＧ−２１抗体である１Ｃ１抗体および５Ｄ１２抗体が、上記７８６−Ｏトランスフェクト体および上記２９３Ｆ：ＣＤ７０トランスフェクト体においてＣＤ７０を検出するが、陰性コントロール２９３Ｆ細胞においては検出しないことを示した。顕著には、上記検出されたバンドは、上記７８６−Ｏトランスフェクト体および２９３Ｆ：ＣＤ７０トランスフェクト体において同一サイズであった。ＳＧ−２１抗体２Ｂ３は、７８６−Ｏサンプルおよび２９３：ｃｙｎｏＣＤ７０サンプルにおいてＣＤ７０を検出しなかったが、ＣＤ７０ＥＣＤおよびｆｌａｇ−ＣＤ７０−ＥＣＤを検出した。上記結果は、１Ｃ１抗体および５Ｄ１２抗体が、上記サンプル中でＣＤ７０を検出することを示した。
【０１６２】
（Ｃ．ＳＧ２１．１Ｃ１抗体を使用する、腫瘍細胞株および非腫瘍細胞株におけるＣＤ７０発現）
組織マイクロアレイを、商業的供給源から得たか、もしくは以下の癌のサンプルを含んで特別に作製した：乳癌、卵巣癌、中皮腫、骨肉腫、前立腺癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、退形成性星状細胞腫（Ａｎａｐｌａｓｔｉｃ  Ａｓｔｒｏｃｙｔｏｎｍａ）、子宮癌、胎児癌（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ）、類表皮癌、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非Ｔ非Ｂ全組織球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫、ＮＨＬ濾胞性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、赤白血病、結腸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ＲＣＣ明細胞型、ＲＣＣ乳頭状型、黒色腫、膵臓癌および膀胱癌。以下の細胞もしくは細胞株もまた、使用した：エプスタイン−バーウイルスをトランスフェクトしたＢリンパ芽球細胞株（ＥＢＶ−ＬＣＬ）、正常ヒト乳腺上皮細胞（ＨＭＥＣ）、正常ヒト血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、正常血管単球（ＰＢＭＣ）、正常ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）、正常ヒト腎臓内皮細胞（ＨＲＥＣ）、正常ヒト肺微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ−Ｌ）、正常ヒトｅｎｄｏ−乳児皮膚毛細管内皮細胞(ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏ−ｎｅｏｎａｔａｌ  ｄｅｒｍａｌ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ)（ＨＭＶＥＣ−ｎｅｏ）および正常ヒト肺動脈内皮細胞（ＨＰＡＥＣ）。
【０１６３】
上記組織マイクロアレイを、上記のプロトコルを使用して、ＳＧ２１．１Ｃ１抗体で免疫染色した。染色を、以下の細胞株において観察した：卵巣癌細胞株ＳＫ−ＯＶ−３；神経膠芽腫細胞株ＧＭＳ−１０；多発性骨髄腫細胞株ＬＢ、ＬＰ−１、ＡＭＯ−１、Ｉ−３１０（ＭＭ．１Ｒ）、Ｃ２Ｅ３（ＭＭ．１Ｓ）、ＭＯＬＰ−８、ＪＪＮ−３およびＬ３６３；ホジキンリンパ腫細胞株ＫＭＨ２、ＨＳ４４５、ＲＰＭＩ−１６６６、Ｌ２４８およびＨＤ−Ｍ−ＹＺ；ＥＢＶ−ＬＣＬ  ＷＩＬ２−Ｓ、ＦａｒａｇｅおよびＩＭ−９；ＮＨＬ、卵胞細胞株ＷＳＵ−ＮＨＬ；ＲＣＣ明細胞型細胞株Ｃａｋｉ−１、Ｃａｋｉ−２、７８６−Ｏおよび７６９−Ｐ；ＲＣＣ乳頭型細胞株ＣＡＬ５４、Ａ４９８；ＲＣＣ  ＳＫ−ＲＣ−６およびＳＫ−ＲＣ−７；黒色腫細胞株Ａ３７５ＭおよびＡ３７５ＳＭ、膵臓癌細胞株ＰＡＮＣ−１ならびに膀胱癌Ｔ２４。同定しなかったいくつかの細胞株の染色は、弱かったかもしくは混合していた。いくつかの細胞株は、細胞質染色を有する。膵臓細胞株および卵巣細胞株の染色については、それぞれ、図２および図３を参照のこと。
【０１６４】
（Ｄ．１Ｃ１抗体および５Ｄ１２抗体の比較染色）
１Ｃ１抗体および５Ｄ１２抗体を、正常カニクイザル、正常ヒト胸腺、腎臓および骨格筋組織ならびに膵臓腫瘍組織に由来する２９３Ｆ細胞株、２９３Ｆ−ｃｙｎｏＣＦ０細胞株、ＲＣＣ  Ｃａｋｉ−１、正常扁桃、骨格筋、膀胱、リンパ組織（リンパ節、胸腺、脾臓）を染色することによって比較した。上記免疫染色プロトコルは、上記のとおりであった。
【０１６５】
その結果は、１Ｃ１および５Ｄ１２は、２９３Ｆ細胞株および２９３−ｃｙｎｏ  ＣＤ７０細胞株（データは示さず）；ＲＣＣ  Ｃａｋｉ−１およびカニクイザル扁桃組織（データは示さず）；正常カニクイザルに由来するリンパ組織（リンパ節、胸腺、脾臓）（データは示さず）および膵臓腫瘍組織を同様に染色することを示した（図４を参照のこと）。１Ｃ１および５Ｄ１２のうちのいくらかの示差的染色は、正常ヒトおよびサル骨格筋組織、ならびに正常サル膀胱組織において観察された。ここで５Ｄ１２は、上記組織を染色したが、１Ｃ１は染色しなかった。示差的染色はまた、正常ヒト胸腺および腎臓組織において観察された。ここで５Ｄ１２は、細胞質を染色した。
【０１６６】
（実施例５：１Ｃ１抗体での、正常結腸組織および結腸直腸癌、ならびに正常膵臓組織および膵臓癌組織におけるＣＤ７０発現）
異なる癌タイプに由来する腫瘍組織の全パネルを評価する前に、ＣＤ７０発現を、最初に、結腸癌および膵臓癌においてアッセイした。上記免疫染色プロトコルを、実施例４に記載されるとおりであった。これら研究に使用される色素原は、ファストレッドであった。
【０１６７】
その結果は、正常結腸組織において、ごく稀なリンパ球が、ＣＤ７０について陽性染色されることを示した。他の細胞は、ＣＤ７０について陰性であった。結腸癌組織の一例において、上記腫瘍細胞は、陽性染色された。結腸組織の第２のサンプルにおいて、上記腫瘍細胞は陰性であったが、上記間質は陽性であった。同様に、正常膵臓組織において、上記染色は、ＣＤ７０について陰性であった。膵臓癌組織の一例において、腫瘍細胞は陽性であり、第２のサンプルにおいて、腫瘍細胞は陰性であったが、上記間質は陽性であった（図５を参照のこと）。
【０１６８】
（実施例６：ＳＧ２１．１Ｃ１抗体での腫瘍組織におけるＣＤ７０発現）
腫瘍組織を、以下の腫瘍タイプから得た：ホジキンリンパ腫、腎臓、リンパ腫、多発性骨髄腫、膵臓、喉頭／咽頭、卵巣、結腸および乳房。上記正常組織および腫瘍組織を、実施例３に記載される組織アレイプロトコルに従って調製し、上記免疫染色プロトコルは、実施例４Ａに記載されるとおりであった。１Ｃ１抗体を、一次抗体として使用した。免疫組織化学（ＩＨＣ）発現を、関与した腫瘍の染色強度およびパーセンテージに基づいて評価した。染色強度を、１から４までランク付けした。１は、最小限の染色；２は、軽度の染色；３は、中程度の染色および４は、強い染色を示す。関与した腫瘍のパーセンテージをまた、１から４までランク付けした。１は、０〜５％；２は、５〜２５％；３は、２５〜７５％および４は、７５％〜１００％を示す。上記測定は定性的であった。ホジキンリンパ腫については、ＣＤ７０陽性細胞のＩＨＣ発現は、Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ細胞評価に基づいてアッセイした。Ｒｅｅｄ−Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ細胞は、起源が未知の、通常は多核の大きな細胞であり、その存在は、ホジキンリンパ腫の特徴である一般的な組織構造である。
【０１６９】
ホジキンリンパ腫腫瘍組織を、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の最高のパーセンテージ（９７％もしくは３３／３４）を有した。腎臓腫瘍は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の２番目に最高のパーセンテージ（７０％もしくは１４／２０）を有した。リンパ球は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＤ７０陽性腫瘍細胞の３番目に最高のパーセンテージ（６１％もしくは７２／１１９）を有した。多発性骨髄腫は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の４番目に最高のパーセンテージ（４２％もしくは１３／３１）を有した。膵臓癌は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の５番目に最高のパーセンテージ（２５％もしくは３５／１４０）を有した。
【０１７０】
図６は、ＣＤ７０について陽性シグナルを与える、１４０個の膵臓サンプルのうちの３５個の腫瘍染色の染色強度のグラフおよび％を示す。上記図は、上記染色強度と腫瘍染色のパーセンテージとの間の複雑な関係を示す。すなわち、いくつかの腫瘍は、低い強度以外では細胞染色の高いパーセンテージを有するが、他は、高い強度以外では細胞染色の低いパーセンテージを有し、他は、中間の染色強度および％細胞染色を示す。喉頭／咽頭癌は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の６番目に最高のパーセンテージ（２２％もしくは１８／８２）を有した。卵巣癌は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の７番目に最高のパーセンテージ（１５％もしくは３７／２４１）を有した。
【０１７１】
図７は、２４１個のＣＤ７０染色卵巣癌のうちの３７個についての腫瘍染色の染色強度およびパーセントを示す。染色強度と細胞染色のパーセンテージとの間にはいくらかの関連が存在した。結腸直腸癌は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の７番目に最高のパーセンテージ（９％もしくは１７／１９４）を有した。乳癌は、全ての腫瘍中の細胞に対してＣＦ７０陽性腫瘍細胞の最低のパーセンテージ（２％もしくは５／２０４）を有した。
【０１７２】
まとめるために、ＣＤ７０陽性腫瘍／全腫瘍に基づいて、染色強度（細胞標的発現）、ＣＤ７０陽性腫瘍関与のパーセンテージ（腫瘍標的発現）、上記腫瘍タイプの一般的指標ランク付けは、以下のとおりである：ホジキン＞腎臓＞リンパ腫＞多発性骨髄腫＞膵臓＞喉頭／咽頭＞卵巣＞結腸直腸＞乳房。上記腫瘍組織全ての結果は、表１に示される。
【０１７３】
【表１】
2014218502.tif 000007
（実施例７：ｈ１Ｆ６−薬物結合体は、卵巣癌細胞株において効力を示す）
これら新しい癌に対する代表的な細胞株に対する既知の抗ＣＤ７０抗体薬物結合体の効力を確認するために、ＳＫＯＶ−３細胞を調製し、他の細胞株について以前に一般的に記載されるように試験した（国際特許公開ＷＯ  ２００６−１１３９０９を参照のこと）。上記細胞を、以下の抗ＣＤ７０抗体薬物結合体とともにインキュベートした：ｈ１Ｆ６−ｖｃ−ＭＭＡＦ（４）、ｈ１Ｆ６ｖｃ−ＭＭＡＥ（４）、１Ｆ６ｍｃ−ＭＭＡＦ（４）、もしくはｈ１Ｆ６ｍｃ−ＭＭＡＦ（８）または遊離ＭＭＡＦ（上記薬物リンカーの詳細については、明細書、ならびに米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号および同第２００６−０２３３７９４号を参照のこと。各結合体の後に続く括弧中の数字は、１抗体あたりの平均薬物負荷を示す）。上記ＳＫＯＶ−３細胞を、９６時間にわたって、示された濃度の結合体とインキュベートした。これら研究のために、生存性を、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏを使用して決定した。
【０１７４】
【表２】
2014218502.tif 000008
図８を参照すると、全ての４種の抗ＣＤ７０  ＡＤＣは、この卵巣癌細胞株に対して活性であった。表２を参照すると、そのＩＣ５０が示される。これらＩＣ５０は、他のＣＤ７０発現癌細胞株について報告されたものと一致している。これら結果は、この癌細胞株上のＣＤ７０に結合した抗ＣＤ７０  ＡＤＣが、インターナリゼーションされ、上記オーリスタチンペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）を放出することを確認する。
【０１７５】
（実施例８：ｈ１Ｆ６−薬物結合体は、ＣＤ７０トランスフェクト膵臓癌細胞株において効力を示す）
代表的な細胞株に対する既知の抗ＣＤ７０抗体薬物結合体の効力を確認するために、膵臓細胞株ＨＰＡＦＩＩ、ＰＡＮＣ−１およびＭｉａＰａＣａ−２を、改変カニクイザルＣＤ７０コード核酸でトランスフェクトした。ＭｉａＰａＣａ−２細胞は、検出可能なレベルのＣＤ７０タンパク質を発現しない。ｈ１Ｆ６は、これらトランスフェクトされた細胞株によって発現される未変性のＣＤ７０タンパク質に結合する。上記トランスフェクトされた細胞株によって発現されるによるＣＤ７０の発現を、ＦＡＣＳ分析（データは示さず）によって確認した。ｈ１Ｆ６  ｍｃ−ＭＭＡＦ（４）（ＳＧＮ−７５）の活性を、他の細胞株について以前に一般的に記載されるように、トランスフェクトした膵臓細胞株に対して試験した（実施例７および国際特許公開ＷＯ  ２００６−１１３９０９を参照のこと）（上記結合体の後ろに続く括弧中の数字は、１抗体あたりの平均薬物負荷を示す）。図９Ａ〜Ｃを参照すると、上記細胞を、９６時間にわたって、示された濃度の結合体とインキュベートした。図９Ａを参照すると、上記トランスフェクトされたＨＰＡＦＩＩ細胞に対する結合体の活性を示す。細胞生存性を、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏを使用して決定した。
図９Ｂおよび図９Ｃを参照すると、トランスフェクトしたＰＡＮＣ−１およびＭｉａＰＡＣａ−２トランスフェクト細胞株に対する上記結合体の活性を示す。これら研究のために、細胞生存性を、以前に記載されるように、レザスリン（ｒｅｚａｓｕｒｉｎ）を用いて決定した。Ｐｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏの上記ＰＡＮＣ−１活性。上記結合体は、全てのこれら細胞株に対してインビトロで細胞傷害性活性を示した。
【０１７６】
（実施例９：ｈ１Ｆ６−薬物結合体は、膵臓癌の異種移植片モデルにおいて効力を示す）
ヌード（ｎｕ／ｎｕ）雌性マウス（７匹動物／群）に、ＣＤ７０トランスフェクトＭｉａＰａＣａ腫瘍塊（実施例８に記載されるように調製した）を、トロカールを介して右側腹部へと移植した。ＳＧＮ−７５もしくくは非結合コントロールＡＤＣ（３ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの投与を、腫瘍が１００ｍｍ３に達したときに開始した（ｑ４ｄ×４ｉｐ）。腫瘍容積をモニタリングし、腫瘍容積が１０００ｍｍ３に達したときに、動物を安楽死させた。図１０を参照すると、データを、２通りでプロットした：Ａ．メジアン腫瘍容積プロットを、１匹以上の動物を安楽死させるまで核群に対して継続した。Ｂ．Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線は、各群における個々の動物について腫瘍が８００ｍｍ３に達する時間を示す。ＳＧＮ−７５での処置は、異種移植片モデルにおいて有効であった。
【０１７７】
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態にまで範囲が限定されない。本明細書に記載されるものに加えて、本発明の種々の改変は、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。文脈から別段明らかでない限り、任意の工程、要素、実施形態、本発明の特徴もしくは局面は、任意の他のものと組み合わせて使用されうる。本願において言及される全ての特許の包袋、および科学刊行物、アクセッション番号などは、個々に示されるかのように、同程度にまで、全ての目的でそれらの全体が本明細書に参考として援用される。
【０１７８】
【数１】
2014218502.tif 000009
【０１７９】
【数２】
2014218502.tif 000010
【０１８０】
【数３】
2014218502.tif 000011
【図２】
2014218502.tif 000012
【図３】
2014218502.tif 000013
【図１】
2014218502.tif 000014
【図４】
2014218502.tif 000015
【図５】
2014218502.tif 000016
【図６】
2014218502.tif 000017
【図７】
2014218502.tif 000018
【図８】
2014218502.tif 000019
【図９−１】
2014218502.tif 000020
【図９−２】
2014218502.tif 000021
【図１０】
2014218502.tif 000022
【配列表】
2014218502000001.app
【外国語明細書】
2014218502000001.pdf