(57)【要約】【課題】グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）の分泌を促進する作用が高い、ＧＬＰ−１分泌促進剤を提供する。【解決手段】本発明のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤は、カフェオイル基で置換されたキナ酸を有効成分とするグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤であって、前記カフェオイル基で置換されたキナ酸として、トリカフェオイルキナ酸を用いたものである。本発明のグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤は、糖尿病及び肥満の予防及び改善に利用することができ、医薬品及び飲食品に好適に用いることができる。【選択図】図１
2014177427.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カフェオイル基で置換されたキナ酸を有効成分とするグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤であって、前記カフェオイル基で置換されたキナ酸として、トリカフェオイルキナ酸を用いたグルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管に散在するＬ細胞から分泌されるホルモンであるグルカゴン様ペプチド−１（以下「ＧＬＰ−１」ともいう）は、摂食に応答して、インスリンの分泌を促進し、満腹中枢を刺激し、消化管の蠕動運動を抑制することなどが確認されている。これらのＧＬＰ−１の作用はいずれも、摂食による急激な血糖値の上昇を抑制する効果に関連すると考えられており、糖尿病の治療へのＧＬＰ−１の利用について研究がなされている。更に、ＧＬＰ−１は、胃排出を遅らせ、末梢のグルコース処理を高めるほか、体重を減少させることなどが確認されている。このため、ＧＬＰ−１は抗肥満薬としても注目され、研究が進められている。
【０００３】
したがって、ＧＬＰ−１を糖尿病治療や抗肥満用途に利用するための開発が期待されている。しかしＧＬＰ−１は体内での安定性が非常に低い。このため、ＧＬＰ−１の投与法及び投与経路の至適化や、体内での安定性が高い機能的アナログの探索などが求められている。
【０００４】
そこで、ＧＬＰ−１を直接投与するのではなく、消化管でＧＬＰ−１の分泌を促進させる成分について研究が進められている。特に、天然由来の成分は安全性が高いとして、注目されている。これまでに、ＧＬＰ−１の分泌を促進させる天然由来の成分が複数報告されており、その中には、カフェオイル基で置換されたキナ酸（以下置換キナ酸ともいう）も含まれる。非特許文献１には、モノカフェオイルキナ酸であるクロロゲン酸がＧＬＰ−１の分泌を促進する作用を示したことが記載されている。非特許文献２には、３，５−ジカフェオイルキナ酸がＧＬＰ−１の分泌を促進する作用を示したことが記載されている。
【０００５】
また、ポリフェノールとしてモノカフェオイルキナ酸やジカフェオイルキナ酸を含む甘藷の茎及び／又は葉（以下単に茎葉ともいう）の加工物も、ＧＬＰ−１の分泌を促進する作用を有することが知られている（特許文献１参照）。甘藷茎葉は、モノカフェオイルキナ酸やジカフェオイルキナ酸に加え、トリカフェオイルキナ酸も含有することが知られている（特許文献２参照）。
【０００６】
しかしながら、これまでにトリカフェオイルキナ酸自体のＧＬＰ−１分泌促進作用については報告されていない。また、前記の非特許文献１及び２で報告されたモノカフェオイルキナ酸及びジカフェオイルキナ酸のＧＬＰ−１分泌促進作用は高いものではない。特許文献１に記載された甘藷茎葉加工物のＧＬＰ−１分泌促進作用についても、十分に高いとはいえない。また、特許文献２の表５によれば、甘藷茎葉におけるトリカフェオイルキナ酸の含有量は、クロロゲン酸及びジカフェオイルキナ酸の含有量の合計量に比べ、この合計量の１／２０〜１／５０程度と圧倒的に少ない。更に、甘藷茎葉には、クロロゲン酸などのポリフェノール類のほかにも、ミネラルやビタミン類の栄養成分も豊富に含まれる。したがって、特許文献１に記載された甘藷茎葉加工物のＧＬＰ−１分泌促進作用は、特定の成分によるＧＬＰ−１分泌促進作用を示唆するものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１２−０２０９９３号公報
【特許文献２】特開２００５−２７８５９６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Eamon Rafferty, Alastair R. Wylie, Chris T. Elliott, Olivier P. Chevallier, David J. Grieve, Brian D. Green "In Vitro and In Vivo Effects of Natural Putative Secretagogues of Glucagon-Like Peptide-1 (GLP-1)" Sci. Pharm. 2011; 79: 615-621
【非特許文献２】Ghazi Mohamed Eisa Hussein, Hisashi Matsuda, Seikou Nakamura, Makoto Hamao, Toshihito Akiyama, Kouhei Tamura and Masayuki Yoshikawa "Mate Tea (Ilex paraguariensis) Promotes Satiety and Body Weight Lowering in Mice: Involvement of Glucagon-Like Peptide-1" Biol. Pharm. Bull. 34(12) 1849-1855 (2011)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明は、ＧＬＰ−１の分泌を促進する作用が高い、ＧＬＰ−１分泌促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、驚くべきことに、トリカフェオイルキナ酸が、他の置換キナ酸に比べて顕著に高いＧＬＰ−１の分泌促進作用を有することを見いだし、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、カフェオイル基で置換されたキナ酸を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤であって、前記カフェオイル基で置換されたキナ酸として、トリカフェオイルキナ酸を用いたＧＬＰ−１分泌促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、ＧＬＰ−１の分泌を促進する作用が高い、ＧＬＰ−１分泌促進剤が提供される。このＧＬＰ−１分泌促進剤は、糖尿病及び肥満の予防及び改善に利用することができ、医薬品及び飲食品に好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例及び比較例で用いた各種の試験物質によるＧＬＰ−１分泌量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明をその好ましい実施形態に基づき説明する。
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、カフェオイル基で置換されたキナ酸（以下、単に置換キナ酸ともいう）を有効成分とする。キナ酸の構造は、以下の式（１）で表され、カフェオイル基の構造は、以下の式（２）で表される。
【００１４】
【化１】
2014177427.tif 000003
【００１５】
【化２】
2014177427.tif 000004
【００１６】
カフェオイル基で置換されたキナ酸は、具体的には、キナ酸の４つのヒドロキシル基を構成する水素原子のうち、１又は２以上がカフェオイル基で置換されたキナ酸である。置換キナ酸としては、キナ酸の１つのヒドロキシル基の水素原子がカフェオイル基で置換された１置換体であるモノカフェオイルキナ酸、２つのヒドロキシル基の水素原子がそれぞれカフェオイル基で置換された２置換体であるジカフェオイルキナ酸、３つのヒドロキシル基の水素原子がそれぞれカフェオイル基で置換された３置換体であるトリカフェオイルキナ酸、４つのヒドロキシル基の水素原子がそれぞれカフェオイル基で置換された４置換体であるテトラカフェオイルキナ酸が挙げられる。
【００１７】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、置換キナ酸として、トリカフェオイルキナ酸を用いたことを特徴とする。上述したとおり、トリカフェオイルキナ酸は他の置換キナ酸に比べて、ＧＬＰ−１の分泌促進作用が顕著に高い。
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、置換キナ酸として、トリカフェオイルキナ酸のみを用いることが、ＧＬＰ−１の分泌を一層促進させる観点から好ましい。しかしトリカフェオイルキナ酸を製造する過程で、ごく少量のモノカフェオイルキナ酸、ジカフェオイル酸及びテトラカフェオイル酸が意図せず不可避的に混入することや、除去しきれないモノカフェオイルキナ酸、ジカフェオイル酸及びテトラカフェオイルキナ酸が少量残存することは許容される。
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤に含まれるモノカフェオイルキナ酸、ジカフェオイル酸、テトラカフェオイルキナ酸の含有量及びトリカフェオイル酸の含有量は、例えば特開２００５−２７８５９６号公報に記載の高速液体クロマトグラフィーなどを用いて測定することができる。
【００１８】
モノカフェオイルキナ酸としては、クロロゲン酸などが挙げられる。ジカフェオイルキナ酸としては、３，４−ジカフェオイルキナ酸、４，５−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸などが挙げられる。テトラカフェオイルキナ酸としては、１，３，４，５−テトラカフェオイルキナ酸が挙げられる。トリカフェオイルキナ酸としては、３，４，５−トリカフェオイルキナ酸のほか、１，４，５−トリカフェオイルキナ酸が挙げられる。例えば３，４，５−トリカフェオイルキナ酸の構造は下記式（３）で表される。
【００１９】
【化３】
2014177427.tif 000005
【００２０】
３，４，５−トリカフェオイルキナ酸は、甘藷などの植物の茎葉に含有されるため、それらから精製することができる。また、合成によっても得ることができる。例えば、甘藷の茎葉から３，４，５−トリカフェオイルキナ酸を精製する方法としては、特開２００５−２９８３８２号公報に記載された方法などが挙げられる。
【００２１】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、これまでに述べた成分以外のその他の成分を含有することができる。前記のその他の成分としては、例えば、種々の賦形剤、結合剤、滑沢剤、安定剤、希釈剤、増量剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料などを挙げることができる。その他の成分の含有量は、ＧＬＰ−１分泌促進剤の用途や剤形、求められるＧＬＰ−１分泌促進効果のレベル等によって適宜設定され得る。
【００２２】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、医薬品、医薬部外品、特定保健用食品、栄養補助食品、その他の飲食品などの各製品として、あるいはこれらの各製品に配合して用いることができる。これらの各製品における本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の配合量は、配合される製品の種類又は剤形、投与又は摂取の対象者の年齢、性別、体重又は状態、投与又は摂取の方法、時期又は時間などに応じて適宜設定され得る。
【００２３】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤を投与又は摂取する経路としては、例えば、経口による投与又は摂取のほか、経腸投与などの非経口の投与又は摂取が挙げられる。本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の剤形としては、ハードカプセルやソフトカプセルのようなカプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、飴剤、噴霧剤、注射剤、坐剤などのほか、溶液、懸濁液又は乳液のような液剤などを挙げることができる。本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤あるいはその配合製品を経口により投与又は摂取する場合、剤形などに応じて、そのまま投与又は摂取しても良いし、水などに溶かして摂取しても良い。
【００２４】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤の投与又は摂取の量は、投与又は摂取の方法、期間、投与又は摂取の対象者の年齢、性別、体重などに応じて適宜設定されうる。ＧＬＰ−１分泌促進剤を投与又は摂取する時期は、食前、食間及び食後のいずれでもよく、１日数回に分けて投与してもよい。
【００２５】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤は、糖尿病及び肥満の予防及び改善に利用できる。また、ＧＬＰ−１分泌の増大によって改善される任意の症状の予防及び治療にも利用できる。また、本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤はトリカフェオイルキナ酸の抗酸化作用、抗エイズ作用、抗腫瘍作用、抗高血圧作用などを利用して、抗酸化剤、抗エイズ剤、抗腫瘍剤、抗高血圧剤などとしても使用することができる。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。しかし本発明の範囲はかかる実施例に限定されない。
【００２７】
〔実施例１〕
試験物質として、３，４，５−トリカフェオイルキナ酸を用いた。
【００２８】
〔比較例１〕
試験物質として、３，４−ジカフェオイルキナ酸を用いた。
【００２９】
〔比較例２〕
試験物質として、４，５−ジカフェオイルキナ酸を用いた。
【００３０】
〔比較例３〕
試験物質として、３，５−ジカフェオイルキナ酸を用いた。この比較例は、非特許文献２に相当する。
【００３１】
〔比較例４〕
甘藷（品種：すいおう）の茎葉粉末（株式会社東洋新薬製、商品名「すいおう（甘藷若葉末）」）を量りとりフラスコ内で粉末をスパチュラで攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、常温の６０容量％含水エタノールに懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温にて充分浸漬した。このとき、遮光はしなかった。フラスコの内容物を吸引ろ過した。ろ液を回収し、減圧濃縮（水温４０℃）した後、凍結乾燥し、粉末を得た。得られた粉末（以下、甘藷茎葉の抽出物ともいう）を試験物質として用いた。
【００３２】
〔比較例５〕
試験物質として、グルタミンを用いた。この比較例は、陽性コントロールである。
【００３３】
〔比較例６〕
試験物質を用いないブランクとした。この比較例は、陰性コントロールである。
【００３４】
＜ＧＬＰ−１分泌試験＞
マウス大腸由来のGLP-1産生細胞株ＧＬＵＴａｇ細胞を用いた。細胞は10% FBS含有DMEM（Dulbecco's modified eagle's medium, high glucose、SIGMA）を用い、CO2インキュベーター内で培養した。この細胞を24 ウエルプレートへ播種し、80%コンフルエントになるまで培養した。試験物質添加前に各ウエルの培地を除去し、120 mM NaCl, 5mM KCl, 2mM CaCl2, 1mM MgCl2, 22mM NaHCO3 0.5%ウシ血清アルブミンを含む緩衝液に交換して1時間 CO2インキュベーター内で保持した。その後、各ウエル中の緩衝液を除去し、細胞を同緩衝液で洗浄した。その後、細胞を、試験物質を所定の濃度（実施例１及び比較例１ないし３及び５では１０ｍＭ、比較例４では１０ｍｇ／ｍｌ）で溶解又は懸濁させた同緩衝液中で2時間培養した。2時間後、培養上清を個別のチューブに回収し、800×g、4 ℃ で5分間遠心して得られた上清を凍結保存した。上清中のGLP-1濃度を市販のELISA kit（ミリポア社製）を用い、キット添付のプロトコールに従い測定した。得られたＧＬＰ−１濃度（ｐＭ）をＧＬＰ−１産生細胞株ＧＬＵＴａｇからのＧＬＰ−１分泌量とした。
【００３５】
実施例１及び比較例１ないし５の試験物質を用いて前記の試験を行った結果を、比較例６のブランクの結果と共に、図１に示す。図１中のａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅは、Turkey-Kramer testを用いた各群間の比較により、異なるアルファベットで表記された処理群の間に有意差があることを示す（Ｐ＜0.05）。
【００３６】
図１の実施例１と比較例５及び６との比較から明らかなように、３，４，５−トリカフェオイルキナ酸は、ＧＬＰ−１分泌量が陰性コントロールの約１６倍、陽性コントロールであるグルタミンの約４倍という、非常に高いＧＬＰ−１分泌促進活性を示した。また実施例１と比較例４との比較から明らかなように、甘藷茎葉の抽出物のＧＬＰ−１分泌促進活性は、３，４，５−トリカフェオイルキナ酸に比べて有意に低かった。また実施例１と比較例１ないし３との比較から明らかなように、各種のジカフェオイルキナ酸のＧＬＰ−１分泌促進活性は、３，４，５−トリカフェオイルキナ酸よりも大幅に低いものであった。
以上より、トリカフェオイルキナ酸が、他の置換キナ酸及び甘藷茎葉の加工物に比べて、高いＧＬＰ−１の分泌促進活性を有することは明らかである。
【図１】
2014177427.tif 000006