(57)【要約】【課題】アミロイドの沈着部位への特異的集積性が向上した化合物を提供する。【解決手段】本発明は、所定の一般式で表されるスチリルピリジン誘導体化合物又はその塩、及び、これらを含む医薬組成物である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される化合物又はその塩。
【化１】
2014218455.tif 000007
〔式中、ｎが３以上５以下の整数であり、Ｘ１がフッ素原子である。〕
【請求項２】
前記一般式（１）中、Ｘ１が放射性フッ素原子である、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
請求項１又は２記載の化合物又はその塩を含む、医薬組成物。
【請求項４】
請求項１又は２記載の化合物又はその塩を含み、アミロイドを画像化するために用いられる、アミロイド画像化剤。
【請求項５】
下記一般式（２）で表される化合物又はその塩。
【化２】
2014218455.tif 000008
〔式中、ｎが３以上５以下の整数であり、Ｒ１が、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、水素がハロゲンで置換されていてもよい炭素数１０以下のアルキルスルホン酸エステル基、又は、置換基を有してもよい芳香族スルホン酸エステル基である。〕
【請求項６】
請求項５記載の化合物又はその塩に、フッ化物イオンを反応させて、請求項１又は２に記載の化合物又はその塩を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スチリルピリジン誘導体化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、アミロイドに高い親和性を有する化合物をマーカーとして用い、脳内アミロイドをインビボで検出する試みがなされている。
【０００３】
このようなアミロイド親和性化合物として、特許文献１に記載されるチオフラビン誘導体、特許文献２に記載されるスチルベン誘導体、特許文献３〜５に記載されるイミダゾピリジン誘導体、特許文献６に記載されるＤＤＮＰ誘導体（２‐（１，１‐ジシアノプロペン‐２‐イル）‐６‐ジメチルアミノナフタレン）が知られている。
【０００４】
また、［１８Ｆ］フロルベタベン（［１８Ｆ］ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ）や［１８Ｆ］フロベタピル（［１８Ｆ］ｆｌｏｂｅｔａｐｉｒ）は、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）用の脳アミロイドイメージングのトレーサーとしての有用性が期待されている（非特許文献１、２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００４−５０６７２３号公報
【特許文献２】特表２００５−５０４０５５号公報
【特許文献３】特表２００５−５０４０５５号公報
【特許文献４】国際公開２００７／０６３９４６パンフレット
【特許文献５】国際公開２０１０／１２８５９５パンフレット
【特許文献６】特表２００２−５２３３８３号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｒｏｗｅ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７（２），１２９−１３５，２００８
【非特許文献２】Ｃｈｏｉ，ＳＲ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ，５０（１１），１８８７−１８９４，２００９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、アミロイド沈着の鑑別を精度よく行うためには、アミロイドの沈着部位への特異的集積性が向上した化合物の開発が期待される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記事情に鑑み、本発明者らは、アミロイドの沈着部位への特異的集積性の高い化合物を新たに見出した。
【０００９】
本発明の一側面によれば、下記一般式（１）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１０】
【化１】
2014218455.tif 000002
【００１１】
〔式中、ｎが３以上５以下の整数であり、Ｘ１がフッ素原子である。〕
【００１２】
また、本発明の別の側面によれば、上記の化合物又はその塩を含む、医薬組成物が提供される。
【００１３】
また、本発明の別の側面によれば、上記の化合物又はその塩を含み、アミロイドを画像化するために用いられる、アミロイド画像化剤が提供される。
【００１４】
また、本発明の別の側面によれば、下記一般式（２）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１５】
【化２】
2014218455.tif 000003
【００１６】
〔式中、ｎが３以上５以下の整数であり、Ｒ１が、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、水素がハロゲンで置換されていてもよい炭素数１０以下のアルキルスルホン酸エステル基、又は、置換基を有してもよい芳香族スルホン酸エステル基である。〕
【００１７】
また、本発明の別の側面によれば、上記一般式（２）で表される化合物又はその塩に、フッ化物イオンを反応させて、上記一般式（１）に記載の化合物又はその塩を製造する方法が提供される。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、アミロイドの沈着部位への特異的集積性が向上した化合物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾールの合成スキームを示す図である。
【図２】アルツハイマー患者脳切片を示す図である。（ａ）が（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾールを投与した脳切片のオートラジオグラフィーであり、（ｂ）が［１８Ｆ］フロベタビル（［１８Ｆ］ｆｌｏｒｂｅｔａｐｉｒ）を投与した脳切片のオートラジオグラフィーであり、（ｃ）が［１８Ｆ］フロルベタベン（［１８Ｆ］ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ）を投与した脳切片のオートラジオグラフィーであり、（ｄ）が抗アミロイド抗体を用いた脳切片の免疫染色である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（スチリルピリジン誘導体化合物）
本発明において、「アミロイドへの特異的集積性が向上した」とは、例えば、トレーサー化合物の灰白質に対する集積量と白質に対する集積量との比率（灰白質への集積量／白質への集積量）が向上したことをいう。アミロイドは灰白質に沈着する。一方、白質は、灰白質に隣接するが、アミロイドは沈着せず、白質への集積は、トレーサー化合物の非特異的集積性を示す。そこで、トレーサー化合物の、灰白質に対する集積量と白質に対する集積量とを対比することにより、アミロイドへの特異的集積性の指標とすることができる。
【００２１】
本発明に係る化合物は、具体的には、以下の化合物が挙げられる。
・（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール（（Ｅ）‐２‐（２‐（２‐（２‐フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）‐９‐（１Ｈ‐１，２，３，‐トリアゾール‐１‐イル）スチリルピリジン）〔上記一般式（１）中、Ｘ１がフッ素原子であり、ｎが３の整数の化合物である。以下、「ＡＢＣ１１５」と略記することもある。〕。
・（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐（２‐フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール〔上記一般式（１）中、Ｘ１がフッ素原子であり、ｎが４の整数の化合物である。〕。
・（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐（２‐（２‐フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール〔上記一般式（１）中、Ｘ１がフッ素原子であり、ｎが５の整数の化合物である。〕。
【００２２】
これら本発明に係る化合物は、塩を形成していてもよく、かかる塩が製薬学的に許容される塩において本発明に包含される。
【００２３】
本発明において「塩」には、無機若しくは有機の酸、又は、無機若しくは有機の塩基から誘導されるものが挙げられる。具体的には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸、硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ｐ‐トルエンスルホン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、マロン酸塩、ナフタレン‐２‐スルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、アミン塩及びアンモニウム塩等が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００２４】
前述のとおり、上記一般式（１）中ｎは、３以上５以下の整数であるが、好ましくは３以上４以下の整数であり、３の整数がより好ましい。
【００２５】
本発明のスチリルピリジン誘導体化合物は、例えば、下記スキーム１に示す合成経路により合成することができる。
【００２６】
【化３】
2014218455.tif 000004
【００２７】
２‐ハロゲン化ニコチンアルデヒド（化合物ａ）、及び、トリエチレングリコール（スキーム１中、ｎが３の整数、Ｒ２が水素原子を示す場合）、テトラエチレングリコール（スキーム１中、ｎが４の整数、Ｒ２が水素原子を示す場合）、ペンタエチレングリコール（スキーム１中、ｎが５の整数、Ｒ２が水素原子を示す場合）、又はこれらの化合物のヒドロキシ基の一つを保護した化合物（スキーム１中、ｎが３以上５以下の整数であり、Ｒ２がヒドロキシ基の保護基を示す場合）を混合し、炭酸カリウム等の塩基存在下に加熱することにより、化合物ａのピリジン環の２位にポリエチレングリコールを導入し、化合物ｂを得る。ここで、スキーム１中、化合物ａのＸ２は塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子が好ましく、塩素原子又は臭素原子がより好ましい。また、ヒドロキシ基の保護基としては、Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｐ．１７−２４５（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；４版）に記載の適当な保護基を用いることができる。
【００２８】
次いで、テトラヒドロフランなどの有機溶媒中、水素化ナトリウムなどの塩基存在下、化合物ｂのアルデヒド基に４‐アジドベンジルホスホン酸ジエチルを作用させるウィティッヒ反応により、スチリルピリジン骨格を形成する（化合物ｃ）。ここで、４‐アジドベンジルホスホン酸ジエチルは、例えば、４‐アミノベンジルホスホン酸ジエチルを溶媒中、塩酸及び亜硝酸カリウムによりジアゾ化し、更にアジ化ナトリウムを作用させることで合成することができる。
【００２９】
次いで、銅触媒下、化合物ｂのアジド基にトリメチルシリルアセチレンを反応させて、トリアゾール環を形成する。その後、テトラブチルアンモニウムフルオリドによりトリメチルシリル基を除去する。
【００３０】
その後、スキーム１中Ｒ２としてヒドロキシ基の保護基が導入されている場合はこれを除去して、化合物ｄを得た後、化合物ｄのヒドロキシ基をスルホン酸エステル化し、上記一般式（２）で表される化合物（スキーム１中、化合物ｅ）を得る。前述のとおり一般式（２）中Ｒ１は、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、水素がハロゲンで置換されていてもよい炭素数１０以下のアルキルスルホン酸エステル基、又は、置換基を有してもよい芳香族スルホン酸エステル基であるが、好ましくは、水素がハロゲンで置換されていてもよい炭素数１０以下のアルキルスルホン酸エステル基、又は、置換基を有してもよい芳香族スルホン酸エステル基であり、より好ましくは、置換基を有してもよい芳香族スルホン酸エステル基である。
【００３１】
「炭素数１０以下のアルキルスルホン酸エステル基」としては、メタンスルホン酸エステル基などが挙げられる。「水素がハロゲンで置換されていてもよい炭素数１０以下のアルキルスルホン酸エステル基」としては、トリフルオロメタンスルホン酸エステル基などが挙げられる。「芳香族スルホン酸エステル基」としては、ベンゼンスルホン酸エステル基、４‐メチルベンゼンスルホン酸エステル基、又は、４‐ニトロベンゼンスルホン酸エステル基が挙げられる。中でも、４‐メチルベンゼンスルホン酸エステル基が好ましい。
【００３２】
最後に、アセトニトリルなどの非プロトン性溶媒中、塩基存在下に、上記一般式（２）で表される化合物にフッ化物イオンを反応させて、上記一般式（１）で表される、本発明のスチリルピリジン誘導体化合物（スキーム１中、化合物ｆ）を得る。また、化合物ｄのヒドロキシ基に三フッ化Ｎ，Ｎ‐ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）などのフッ素化試薬を反応させて、本発明に係る化合物（化合物ｆ）を合成することもできる。
【００３３】
（放射性フッ素標識スチリルピリジン誘導体化合物）
上記一般式（１）中、Ｘ１はフッ素原子であるが、好ましい態様において、Ｘ１は放射性フッ素原子であり、具体的には、１８Ｆであることがより好ましい。１８Ｆで標識された化合物を投与することで、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）により、非侵襲的に生体の脳内アミロイドを検出することができる。
【００３４】
前述のとおり、本発明において、「アミロイドへの特異的集積性が向上した」とは、例えば、トレーサー化合物の灰白質に対する集積量と白質に対する集積量との比率（灰白質への集積量／白質への集積量）が向上したことをいうが、トレーサー化合物が放射性フッ素標識されている場合は、オートラジオグラフィーなどの放射能検出により得られた画像において、灰白質と白質とのコントラスト比を確認することで、アミロイドへの特異的集積性を調べることができる。灰白質と白質とのコントラスト比が高いほど、アミロイドへの特異的集積性が向上し、アミロイド沈着の鑑別が容易になる。
【００３５】
より具体的には、本発明の放射性フッ素標識化合物は、以下に示す放射性フッ素標識化合物であることが好ましい。
・（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール（（Ｅ）‐２‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）‐９‐（１Ｈ‐１，２，３，‐トリアゾール‐１‐イル）スチリルピリジン）〔上記一般式（１）中、Ｘ１が１８Ｆであり、ｎが３の整数の化合物である。以下、「［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５」と略記することもある。〕。
・（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール〔上記一般式（１）中、Ｘ１が１８Ｆであり、ｎが４の整数の化合物である。〕。
・（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール〔上記一般式（１）中、Ｘ１が１８Ｆであり、ｎが５の整数の化合物である。〕。
【００３６】
本発明に係る化合物として、上記一般式（１）中、Ｘ１が放射性フッ素原子である放射性化合物を採用する場合は、上記説明した一般式（２）で表される化合物（スキーム１中の化合物ｅ）又はその塩を標識前駆体として用いることができる。塩としては、上記例示した塩を採用することができる。一般式（２）中、Ｒ１としては前述のもの（スキーム１中の化合物ｅのＲ１として使用できるもの）を採用することができる。または、一般式（２）中、ｎは３又は４の整数が好ましく、３の整数がより好ましい。
【００３７】
（放射性フッ素標識スチリルピリジン誘導体化合物の製造）
本発明に係る放射性フッ素標識スチリルピリジン誘導体化合物は、その標識前駆体である、一般式（２）で表される化合物又はその塩に対し、放射性フッ化物イオンを反応させることで、合成することができる。放射性フッ化物イオンとしては［１８Ｆ］フッ化物イオンが好ましい。［１８Ｆ］フッ化物イオンは、［１８Ｏ］水にサイクロトロンで加速した陽子を照射して１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆの核反応を発生させることにより、製造することができる。製造した［１８Ｆ］フッ化物イオンは、［１８Ｆ］フッ化物イオンを含むターゲット水を陰イオン交換樹脂に吸着させ、炭酸カリウム水溶液で［１８Ｆ］フッ化物イオン樹脂から溶離することによって［１８Ｆ］フッ素カリウムとして調製されることが好ましい。また、一般式（２）で表される化合物又はその塩の放射性フッ素標識反応は、上記調製した［１８Ｆ］フッ素カリウムを用い、クリプトフィックス２２２（商品名）などの相間移動触媒、及び、炭酸カリウムなどの塩基存在下で実行することが好ましい。
【００３８】
（医薬組成物）
本発明において、「医薬組成物」とは、上記一般式（１）で表される化合物又はその塩を生体内への投与に適した形態で含む処方物と定義することができる。この医薬組成物には、本発明に係る化合物を有効成分とし、薬理学的に許容される担体、希釈剤、エマルジョン、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、着色剤、安定化剤等の追加成分を含んでいても良い。本発明の医薬組成物は、経口投与又は非経口投与の投与方法に使用することができる。
【００３９】
本発明において「放射性医薬組成物」とは、上記定義される「医薬組成物」のうち、上記一般式（１）中Ｘが１８Ｆである化合物又はその塩を有効成分として含有するものと定義することができる。この放射性医薬組成物の剤形は、非経口投与の投与方法に使用できるものが好ましく、静脈内投与、動脈内投与、局所投与、腹腔又は胸腔への投与、皮下投与、筋肉内投与、舌下投与、経皮投与又は直腸内投与等に使用できる注射剤がより好ましい。このような注射剤は、本発明に係る放射性スチリルピリジン誘導体化合物を水、生理食塩液、又は、リンゲル液等に溶解させることで調製することができる。
【００４０】
本発明の放射性医薬組成物中の放射性スチリルピリジン誘導体化合物の濃度は、放射性分解に対する安定性を確保できる濃度であればよい。
【００４１】
本発明の放射性フッ素標識スチリルピリジン誘導体化合物又はその塩、及びこれを含む放射性医薬組成物は、ヒトを始めとする哺乳類動物に投与し、ＰＥＴ装置を用いて撮像することで、生体の脳内アミロイド（脳内アミロイドβタンパク、Ａβ）を非侵襲的に検出し、画像化するための画像化剤として使用することができる。この本発明の画像化剤は、アミロイド（灰白質）への特異的集積性が向上した化合物を含むため、アルツハイマー病の診断及び予防に有用である。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。また、以下の実施例に記載した化合物の合成例において、各ステップは、必要に応じて複数回繰り返し行い、他の合成において中間体等として用いる際に必要な量を確保した。
【００４３】
実施例で使用する装置は、以下のものを使用した。
ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）。１Ｈ−ＮＭＲの測定条件は、共鳴周波数５００ＭＨｚとした。
バイオイメージングアナライザー：ＢＡＳ−２５００、富士写真フィルム株式会社製
シングルチャネルアナライザー：ＳＰ−２０、応用光研工業株式会社製
【００４４】
また、実施例の統計処理に関しては、データを平均値±標準偏差で表した。
【００４５】
実施例で使用する略語は、断りの無い限り以下のとおり定義した。
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
［１８Ｆ］ＡＶ１：［１８Ｆ］フロルベタベン（［１８Ｆ］Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ、ｔｒａｎｓ‐４‐（Ｎ‐メチルアミノ）‐４’‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）スチルベン）
［１８Ｆ］ＡＶ４５：［１８Ｆ］フロベタピル（［１８Ｆ］Ｆｌｏｂｅｔａｐｉｒ、（Ｅ）‐４‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐Ｎ‐メチルベンゼンアミン）
【００４６】
（実施例１）
（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール（以下、「ＡＢＣ１１５」）の合成
【００４７】
図１に示すスキームに従って、ＡＢＣ１１５を合成した。
【００４８】
［ステップ１］２‐（２‐（２‐（ｔ‐ブチルジフェニルシロキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（化合物１の合成）
水素化ナトリウム（６０％流動パラフィンに分散、和光純薬社製）（３４９ｍｇ、８．７４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）に懸濁し、氷冷下、トリエチレングリコール（２．９２ｍＬ、２１．８ｍｍｏｌ）とｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルクロロシラン（２ｇ、７．２８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２０ｍＬ）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で３時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液（約１０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた酢酸エチル層は飽和食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１体積比）にて精製を行い、化合物１（２．１１ｇ、５．４３ｍｍｏｌ、収率７５％））を得た。
【００４９】
化合物１の１Ｈ‐ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：７．６９−７．６８（ｍ，４Ｈ），７．４４−７．３６（ｍ，６Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．７３−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６６−３．６０（ｍ，８Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ）。
【００５０】
［ステップ２］２‐（２‐（２‐（２‐（ｔ‐ブチルジフェニルシロキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ニコチンアルデヒド（化合物２）の合成
２‐ブロモニコチンアルデヒド（１０００ｍｇ、５．３８ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）に溶解した後、炭酸カリウム（２．２３ｇ、１６．１ｍｍｏｌ）と化合物１（２．０９ｇ、５．３８ｍｍｏｌ）を加えたのち、マイクロウェーブ（３００Ｗ）を用いて１８０℃に加熱した。３時間加熱したのち、飽和塩化アンモニウム水溶液（約１０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた酢酸エチル層は飽和食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１体積比）にて精製を行い、化合物２（４０８ｍｇ、０．８２７ｍｍｏｌ、収率１５％）を得た。
【００５１】
化合物２の１Ｈ‐ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：９．９３（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６８−７．６７（ｍ，４Ｈ），７．４２−７．３５（ｍ，６Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６９−３．６６（ｍ，４Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｓ，９Ｈ）。
【００５２】
［ステップ３］４‐アジドベンジルホスホン酸ジエチル（化合物３）の合成
４‐アミノベンジルホスホン酸ジエチル（１．０ｇ、４．１１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１２．５ｍＬ）に溶解したのち、氷冷下、６ｍｏｌ／Ｌの塩酸（５ｍＬ）を加え、５分間撹拌した。反応液に、亜硝酸カリウム（３９２ｍｇ、４．６０ｍｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）に溶解して加え、３０分撹拌した後、アジ化ナトリウム（２．１４ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）を加えた。３０分撹拌したのち、室温に昇温してさらに１時間撹拌した。反応終了後、水（約３０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた酢酸エチル層は水で１回、飽和食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝１／１体積比）にて精製を行い、化合物３（１．０ｇ、３．８０ｍｍｏｌ、収率９２％）を得た。
【００５３】
化合物３の１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：７．２９−７．２６（ｍ，２Ｈ），６．９８−６．９６（ｍ，２Ｈ），４．０６−３．９８（ｍ，４Ｈ），３．１３−３．０９（ｍ，２Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）。
【００５４】
［ステップ４］（Ｅ）‐４‐（２‐（２‐（２‐（ｔ‐ブチルジフェニルシロキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシピリジン‐３‐イル）ビニル）フェニルアザイド（化合物４）の合成
水素化ナトリウム（６０％流動パラフィンに分散、和光純薬社製）（８２．５ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４ｍＬ）に懸濁し、氷冷下、化合物３（２２２ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）と化合物２（４０７ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（４ｍＬ）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で２時間したのち、飽和塩化アンモニウム水溶液（約１０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた酢酸エチル層は飽和食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１体積比）にて精製を行い、化合物４（３４８ｍｇ、０．５７２ｍｍｏｌ、化合物２からの収率６８％）を得た。
【００５５】
化合物４の１Ｈ‐ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：８．１７（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄｄ，Ｊ＝２．５，８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８−７．６７（ｍ，４Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４２−７．３５（ｍ，６Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｂｒｓ，４Ｈ），３．６１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｓ，９Ｈ）。
【００５６】
［ステップ５］（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐ヒドロキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール（化合物５）の合成
化合物４（３４８ｍｇ、０．５７２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（３．０ｍＬ）に溶解し、トリメチルシリルアセチレン（０．１５７ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を加えた後、硫酸銅５水和物（２８．６ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間加熱攪拌した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、水（５ｍＬ）を加えて析出した固形物をろ別し、水でよく洗浄した。得られた固形物を減圧乾燥させ粗結晶（４０４ｍｇ）を得た。この粗結晶（４０４ｍｇ）をテトラヒドロフラン（３．０ｍＬ）に懸濁し、テトラブチルアンモニウムフルオリドの１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液（１．７ｍＬ）を加えた。加熱還流下で２時間攪拌したのち、反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液（約１０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで３回抽出した．合わせた酢酸エチル層は水で１回，飽和食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル／メタノール＝９５／５体積比）にて精製を行い、化合物５（１５２ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ、収率７０％）を得た。
【００５７】
化合物５の１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：８．２２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７４−３．７０（ｍ，６Ｈ），３．６３（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｂｒｓ，１Ｈ）。
【００５８】
［ステップ６］ＡＢＣ１１５の合成
化合物５（５２ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解し、−１０℃まで冷却したのち，三フッ化Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ硫黄（３５．６μＬ、０．１９７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌したのち、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水を加え、酢酸エチルで３回抽出を行った。合わせた酢酸エチル層を、水及び飽和食塩水で洗浄したのち、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）にて精製を行いＡＢＣ１１５（５．８ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、収率１１％）を得た。
【００５９】
ＡＢＣ１１５の１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：８．２２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｍ，３Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７７−３．７２（ｍ，５Ｈ）。
【００６０】
（実施例２）ＡＢＣ１１５の標識前駆体（化合物６）の合成
化合物５（１００ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３．０ｍＬ）に溶解し、１，４‐ジアザビシクロオクタン（８４．８ｍｇ、０．７５６ｍｍｐｏｌ），ｐ−トルエンスルホニルクロリド（７２．１ｍｇ、０．３７８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応終了後、飽和塩化アンモニウム水溶液と水を加え、酢酸エチルで３回抽出を行った。合わせた酢酸エチル層を、水及び飽和食塩水で洗浄したのち、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝１／１体積比）にて精製を行い、（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐（ｐ‐トルエンスルホニルオキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール（化合物６）（１３５ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、収率９７％）を得た。
【００６１】
化合物６の１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム）：８．２２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），４．１６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７０（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６６−３．６１（ｍ，４Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）。
【００６２】
（実施例３）（Ｅ）‐１‐（２‐（６‐（２‐（２‐（２‐［１８Ｆ］フルオロエトキシ）エトキシ）ピリジン‐３‐イル）ビニル）‐フェニル‐１Ｈ‐１，２，３‐トリアゾール（以下、「［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５」）の合成
［１８Ｆ］フッ化物イオン含有［１８Ｏ］水（２０９０ＭＢｑ、合成開始時補正値）を、Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｌｉｇｈｔ  ＱＭＡ（商品名、日本ウォーターズ株式会社製）に通液し、［１８Ｆ］フッ化物イオンを吸着捕集した。次いで、該カラムに炭酸カリウム水溶液（４２．４μｍｏｌ／Ｌ、０．３ｍＬ）及びクリプトフィックス２２２（商品名、メルク社製）（１４ｍｇ、３７．２μｍｏｌ）のアセトニトリル（０．７ｍＬ）溶液を通液して、［１８Ｆ］フッ化物イオンを溶出した。これをアルゴンガスの通気下１１０℃に加熱して水を蒸発させた後、アセトニトリル（０．３ｍＬ×２）を加えて共沸させ乾固させた。ここに上記実施例２にて合成した化合物６（５ｍｇ、１２．５μｍｏｌ）を溶解したアセトニトリル溶液（０．３ｍＬ）を加え、１１０℃で１０分加熱した。反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１．０ｍＬ）を加え、下記の条件のＨＰＬＣに付してＡＢＣ１１５と保持時間が同じ画分を分取した。
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ（商品名、資生堂社製、サイズ：１０ｍｍφ×２５０ｍｍ）
移動相：０．１体積％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル（体積比）＝２０／８０から０／１００へ２０分かけてグラジエント
流速：３．０ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波：２６０ｎｍ）
【００６３】
当該画分に水（１０ｍＬ）を添加した液を逆相カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ１８  Ｌｉｇｈｔ，Ｗａｔｅｒｓ社製）に通液し、を当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水（１ｍＬ）で洗浄した後、あらかじめ１質量％アスコルビン酸水溶液（１ｍＬ）を加えたバイアルに，ジエチルエーテル（１ｍＬ）を通液して［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５を溶出させたのち，ジエチルエーテルを留去することで，［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５の１質量％アスコルビン酸水溶液を得た。得られた放射能は７３３ＭＢｑ（合成開始後７８分）であった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９９．４％であった。
＜ＴＬＣ分析条件＞
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：酢酸エチル／メタノール／ジエチルアミン＝１００：４：１
ＲＩ検出器：Ｒｉｔａ  Ｓｔａｒ、ｒａｙｔｅｓｔ社製
【００６４】
（実施例４）脳内移行性及びクリアランスの評価
［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５のラットにおける脳内移行性及びクリアランスについて評価した。
実施例３で合成した［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５、及び、非特許文献２記載の方法で合成した［１８Ｆ］ＡＶ４５を０．５質量％のアスコルビン酸と１０ｖｏｌ％のエタノールを含む生理食塩液に溶解した液をそれぞれ調製し、試料溶液とした（放射能濃度共に９２．５ＭＢｑ／ｍＬ）。この試料溶液を、無麻酔下で尾静脈より雄性のＷｉｓｔａｒ系ラット（８週齢）に投与した（投与量：０．２ｍＬ、投与した放射能：１８．５ＭＢｑ相当）。投与後２分（ｎ＝５）、６０分（ｎ＝２）に無麻酔下で断頭し、臓器の摘出、臓器重量及び臓器放射能量の測定を行った。放射能測定はシングルチャネルアナライザーを用いて実施した。投与放射能量に対する各臓器の放射能分布率を計算し求め、［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５の体内放射能分布を求めた。
【００６５】
表１に、投与後２分、６０分の脳への放射能取り込みを％投与量／ｇ（％ＩＤ／ｇ）で示す。また、クリアランス比は、投与後２分における脳への放射能取り込み（％ＩＤ／ｇ）と投与後６０分における脳への放射能取り込み（％ＩＤ／ｇ）との比（２分／６０分）を示す。
【００６６】
【表１】
2014218455.tif 000005
【００６７】
表１に示すように、［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５は、投与後２分点において、高い放射能集積が認められ、６０分後には、脳から排出されることが確認された。
【００６８】
（実施例５）オートラジオグラフィーによるアルツハイマー患者脳切片への化合物結合性評価
本発明に係る化合物がアルツハイマー患者脳内のアミロイドを描出し得るかを評価するため、下記の実験を行った。
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社（米国）より市販されているＡＤ患者脳組織（Ｆｒｏｎｔａｌ  ｌｏｂｅ）を５μｍに薄切することで本実験に使用するＡＤ患者脳切片を作製し、使用時まで−２０℃下で保存した。脳切片を−２０℃から室温へ戻し、１０分間乾燥させた後、ＰＢＳに１５分間、５分間、５分間ずつ浸漬し、次に１質量％ＢＳＡ含有ＰＢＳに３０分間浸漬することで親水化を行った。実施例３で合成した［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５、非特許文献１記載の方法で合成した［１８Ｆ］ＡＶ１又は非特許文献２記載の方法で合成した［１８Ｆ］ＡＶ４５を含む１質量％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（放射能濃度３０ｋＢｑ／ｍＬ）をそれぞれ調製し、親水化した脳切片を室温下で３０分間浸漬した。その後、１質量％ＢＳＡ含有ＰＢＳ、ＰＢＳ、ＰＢＳの各溶液について５分間ずつ浸漬し、脳切片の洗浄を行った。洗浄後の脳切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート上で１６時間露光させ、バイオイメージングアナライザーを用いてオートラジオグラム画像解析を行った。
隣接切片を用いて抗アミロイド抗体によるアミロイド沈着部位の免疫染色を行った。抗アミロイド抗体にＡｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄβ（Ｎ）（８２Ｅ１）Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ  ＭｏＡｂ（株式会社免疫生物研究所）を用い、二次抗体にはＡｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）Ｇｏａｔ  ＩｇＧ  Ｆａｂ’―ＨＲＰ（株式会社免疫生物研究所）を用いた。二次抗体に結合するＨＲＰに対してＤＡＢ＋（３、３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド）・基質キット（Ｄａｋｏ）を適用することで、アミロイド沈着部位を検出した。
【００６９】
脳切片のオートラジオグラムを図２（ａ）〜（ｃ）に示す。図２（ａ）が［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５を使用したものであり、図２（ｂ）が［１８Ｆ］ＡＶ４５を使用したものであり、図２（ｃ）が［１８Ｆ］ＡＶ１を使用したものである。また、図２（ｄ）には、本実験で使用した脳切片の免疫染色の結果を示す。図２で示すように、本実験に使用したアルツハイマー患者脳凍結切片の灰白質部分には、免疫染色によってアミロイドの沈着が確認でき、いずれのオートラジオグラム上でも、免疫染色によって確認したアミロイド沈着部位への化合物の結合が確認できた。
【００７０】
図２（ａ）〜（ｃ）で示すオートグラムの灰白質及び白質における、［１８Ｆ］ＡＢＣ１１５、［１８Ｆ］ＡＶ４５及び［１８Ｆ］ＡＶ１の集積のコントラスト比を表２に示す。表２には、各脳切片について、灰白質の関心領域を４か所、白質の関心領域を２か所とり、１平方ミリメートルあたりの光輝尽発光（ｐｈｏｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ：ＰＳＬ）値の平均値を、灰白質及び白質それぞれについて求めた。表２には、灰白質のＰＳＬ値の平均値／白質のＰＳＬ値の平均値をコントラスト比として示した。
【００７１】
【表２】
2014218455.tif 000006
【００７２】
表２で示すように、［１８Ｆ］ＡＢＣ１１１５は、［１８Ｆ］ＡＶ４５及び［１８Ｆ］ＡＶ１の何れに対しても、アミロイドの沈着部位（灰白質）と白質とのコントラスト比の向上が認められた。
【図１】
2014218455.tif 000009
【図２】
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