(57)【要約】【課題】防腐剤や安定化剤等を用いなくても、卵黄抗体の活性を維持しつつ長期にわたり常温で保存できる高保存性抗体溶液、その製造方法、及び、抗体の保存方を提供する。【解決手段】卵黄抗体と、水と、１〜２５質量％のエタノールとを混合し、滅菌処理を施す。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵黄抗体と、水と、１〜２５質量％のエタノールとを含有し、滅菌処理が施されていることを特徴とする高保存性抗体溶液。
【請求項２】
前記滅菌処理が、フィルター滅菌である請求項１記載の高保存性抗体溶液。
【請求項３】
香料を含有している請求項１又は２記載の高保存性抗体溶液。
【請求項４】
緩衝剤を含有している請求項１、２又は３記載の高保存性抗体溶液。
【請求項５】
請求項１、２、３又は４記載の高保存性抗体溶液が充填されてなることを特徴とするスプレー。
【請求項６】
卵黄抗体を水性溶媒に溶解して抗体溶液を調製する工程と、
前記抗体溶液をフィルター滅菌する工程と、
フィルター滅菌が施される前又は後の抗体溶液に、１〜２５質量％の濃度となるようにエタノールを加える工程と、を有することを特徴とする高保存性抗体溶液の製造方法。
【請求項７】
卵黄抗体を水性溶媒に溶解して抗体溶液を調製する工程と、
前記抗体溶液をフィルター滅菌する工程と、
フィルター滅菌が施される前又は後の抗体溶液に、１〜２５質量％の濃度となるようにエタノールを加える工程と、
前記抗体溶液を滅菌済みの密閉容器内に収容する工程と、を有することを特徴とする抗体の保存方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、防腐剤や安定化剤等を用いなくても、卵黄抗体の活性を維持しつつ長期にわたり常温で保存できる高保存性抗体溶液、その製造方法、及び、抗体の保存方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、マスクに抗菌性や抗ウイルス性等を付与するために、細菌やウイルスに由来する抗原に対する抗体が担持されたマスクが知られているが（特許文献１）、より手軽にマスクに抗菌性や抗ウイルス性等を付与できるように、マスクに抗体溶液を吹き付けるためのスプレーも知られている。このようなスプレーでは、使用時に粉末状の抗体を水道水等に溶解して抗体溶液を調製し、当該抗体溶液をマスクに向けて噴霧するように構成されている。しかし、粉末状の抗体を用いると、使用の度に水道水等に溶解する必要があるため作業が煩雑となり、使いやすさの点から、予め調製された抗体溶液が充填されているスプレーが求められている。
【０００３】
ところで、抗原抗体反応には、抗体の可変領域等の立体構造が重要であるため、抗体を保存するに際しては、このような立体構造が壊れないように注意を要する。しかし、抗体の立体構造は、温度、化学物質等の影響を受けやすく、とりわけ液体中において活性を維持した状態で抗体を長期間保存することは困難である。このため、液体中の抗体を安定化する様々な方法が検討されている。このような安定化方法としては、例えば、特許文献２には、ＩｇＭ試薬溶液にウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加する方法が提案されており、また、抗体溶液にポリエチレングリコールを添加する方法も知られている。更に、抗体溶液の腐敗を防止するために、通常、抗体溶液にはアジ化ナトリウム等の防腐剤も添加されている。このような抗体溶液は、通常４℃程度の低温で保存される。
【０００４】
また、マスクに抗菌性や抗ウイルス性を付与するための抗体としては、卵黄抗体（ＩｇＹ：immunoglobulin yolk）が用いられることが多い。卵黄抗体は、鳥類の血液中のＩｇＧが卵黄中に移行したものであり、特定の抗原でニワトリ等の鳥類を免疫すると、卵黄からその抗原に特異的な抗体を得ることができる。このように鳥類の卵から抗体を調製する方法には、抗体を大量に調製できること、採血が不要なこと、大量飼育が容易であること、卵黄からの精製は比較的簡単であること等の利点がある。しかし、卵黄抗体は哺乳類のＩｇＧとは物理的化学的な性状が異なることが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１６９１０５号公報
【特許文献２】特開平９−１２７１１４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで本発明は、防腐剤や安定化剤等を用いなくても、卵黄抗体の活性を維持しつつ長期にわたり常温で保存できる高保存性抗体溶液、その製造方法、及び、抗体の保存方法を提供すべく図ったものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、所定濃度になるようにエタノールを添加し、かつ、滅菌処理を施すことにより、安定化剤や防腐剤等を用いなくとも、卵黄抗体を水溶液中において安定な状態で長期にわたり保存できることを見出した。本発明は、この知見に基づき完成するに至ったものである。
【０００８】
すなわち本発明に係る高保存性抗体溶液は、卵黄抗体と、水と、１〜２５質量％のエタノールとを含有し、滅菌処理が施されていることを特徴とする。
【０００９】
このようなものであれば、滅菌処理が施されているので、調製直後は細菌等の混入は抑えられており、また、調製してから時間が経過して若干の細菌等が混入しても、エタノールにより細菌等の繁殖を抑えることができる。
【００１０】
前記滅菌処理としては、例えば、フィルター滅菌が好適に用いられる。
【００１１】
本発明に係る高保存性抗体溶液は、香料や緩衝剤等を含有していてもよい。
【００１２】
本発明に係る高保存性抗体溶液は、マスク等に抗菌性や抗ウイルス性を付与するためのスプレー用充填液として好適に用いられる。すなわち本発明に係る高保存性抗体溶液が充填されてなるスプレーもまた、本発明の一つである。
【００１３】
また、本発明に係る高保存性抗体溶液の製造方法もまた、本発明の一つである。すなわち本発明に係る高保存性抗体溶液の製造方法は、卵黄抗体を水性溶媒に溶解して抗体溶液を調製する工程と、前記抗体溶液をフィルター滅菌する工程と、フィルター滅菌が施される前又は後の抗体溶液に、１〜２５質量％の濃度となるようにエタノールを加える工程と、を有することを特徴とする。
【００１４】
更に、本発明に係る抗体の保存方法もまた、本発明の一つである。すなわち本発明に係る抗体の保存方法は、卵黄抗体を水性溶媒に溶解して抗体溶液を調製する工程と、前記抗体溶液をフィルター滅菌する工程と、フィルター滅菌が施される前又は後の抗体溶液に、１〜２５質量％の濃度となるようにエタノールを加える工程と、前記抗体溶液を滅菌済みの密閉容器内に充填する工程と、を有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
このような構成を有する本発明によれば、防腐剤や安定化剤等を用いなくても、卵黄抗体を液体中において活性を維持しつつ長期にわたり常温で保存することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】エタノール濃度を変えた抗コナヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの各抗体溶液の抗体価維持率の経時変化を示すグラフである。
【図２】エタノール濃度を変えた抗ヤケヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの各抗体溶液の抗体価維持率の経時変化を示すグラフである。
【図３】エタノール濃度を変えた抗コナヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの各抗体溶液の１週間保存後の様子を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下に本発明を詳述する。
【００１８】
本発明に係る高保存性抗体溶液は、卵黄抗体と、水と、１〜２５質量％のエタノールとを含有し、滅菌処理が施されているものである。
【００１９】
前記卵黄抗体としては特に限定されないが、例えば、アレルゲン、ウイルス、細菌、カビ等に由来する抗原に対して結合能を有するものである。前記アレルゲンとしては、例えば、ダニアレルゲン、花粉、ネコアレルゲン等が挙げられる。前記ウイルスとしては、例えば、インフルエンザウイルス、コロナウイルス（ＳＡＲＳウイルス）、アデノウイルス、ライノウイルス等が挙げられる。前記細菌としては、例えば、黄色ブドウ球菌や表皮ブドウ球菌等のブドウ球菌属、ミクロコッカス属、炭疽菌、セレウス菌、枯草菌、アクネ菌等のグラム陽性菌；緑膿菌、セラチア菌、セパシア菌、肺炎球菌、レジオネラ菌、結核菌等のグラム陰性菌等が挙げられる。前記カビとしては、例えば、アスペルギルス、ペニシリウス、クラドスポリウム等が挙げられる。
【００２０】
前記卵黄抗体を産生する鳥類としては特に限定されず、例えば、ニワトリ、ウズラ、アヒル、ダチョウ、ガチョウ、エミュー、七面鳥等が挙げられる。なかでも大量飼育が容易であり、安定かつ安価に卵黄抗体を産生できること等からニワトリが好適に用いられる。
【００２１】
前記鳥類への免疫は、常法に従い行えばよく、目的の抗原を、必要に応じて適宜アジュバントと共に、鳥類に筋肉注射や皮下注射等の方法により接種する。前記アジュバントとしては、フロイントの完全アジュバント、フロイントの不完全アジュバント等を用いることができる。抗原やアジュバントの接種量、接種時期、接種回数は、目的の抗体が鳥類の体内で産生され、卵黄中に移行し所望の量が蓄積されるように適宜決定すればよい。また、卵黄中の抗体価を高めるために、追加免疫してもよい。
【００２２】
卵黄から抗体を精製する方法としては、公知の方法を用いることができ、例えば、超遠心分離法、有機溶剤脱脂による分離法、リポタンパク質凝集剤（ポリエチレングリコール、デキストラン硫酸ナトリウム、ポリアクリル酸樹脂、食品増粘安定剤等）を用いる方法、硫安沈澱等の塩析、限外濾過等の濾過、エタノールと超臨界炭酸ガス抽出を併用する脱脂法等が挙げられる。
【００２３】
本発明で用いられる卵黄抗体は、目的の抗原に対する結合能を有していれば特に限定されず、完全な状態の抗体以外に、抗体の分解物であるＦ（ａｂ′）２、Ｆａｂ′、Ｆａｂ等であってもよい。これらは単独で用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。また、複数種類の抗原に対する抗体を併用してもよい。
【００２４】
本発明に係る高保存性抗体溶液における卵黄抗体の濃度は、卵黄抗体として凍結乾燥品を用いた場合、１μｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬであることが好ましく、より好ましくは８μｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬである。１μｇ／ｍＬ未満であると、充分な量の卵黄抗体をマスク等へ吹き付けることが難しく、２０ｍｇ／ｍＬを超えると、卵黄抗体の凝集等が起こることがある。
【００２５】
本発明で用いられる水としては特に限定されず、水道水であってもよいが、脱イオン水や超純水等が好適に用いられる。
【００２６】
本発明に係る高保存性抗体溶液は、１〜２５質量％のエタノールを含有している。エタノール濃度が１質量％未満であると、充分な保存性を得るためには精度の高い滅菌処理が必要となり、エタノール濃度が２５質量％を超えると、保存中に抗体が変性し活性が低下してしまう。当該エタノール濃度の、好ましい下限は５質量％であり、より好ましい下限は１０質量％である。また、好ましい上限は２０質量％であり、より好ましい上限は１５質量％である。
【００２７】
本発明に係る高保存性抗体溶液は、必要に応じて香料や緩衝剤等を含有してもよい。前記香料としては、例えば、メントール、Ｄ−リモネン、デシルアルデヒド、メントン、プレゴン、オイゲノール、シンナムアルデヒド、ベンズアルデヒド、ペパーミント油、レモン油、オレンジ油等が挙げられる。前記緩衝剤としては一般的にタンパク質に用いられるものであれば特に限定されず、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液、グッドの緩衝液等の緩衝液を調製するためのものが挙げられる。
【００２８】
本発明に係る高保存性抗体溶液のｐＨとしては特に限定されないが、中性付近（例えば、ｐＨ６〜８）であればよい。
【００２９】
本発明に係る高保存性抗体溶液には、滅菌処理を施すことが必要である。当該滅菌処理としては抗体活性を低下させない方法であれば特に限定されないが、フィルター滅菌が好適に用いられる。フィルター滅菌を用いれば、粗精製品である卵黄抗体を用いた場合、滅菌とともに卵黄抗体の精製を行うことも可能となる。
【００３０】
前記フィルター滅菌に用いるフィルターとしては、孔径が０．５０μｍ以下のものが好ましく、より好ましくは孔径が０．２５μｍ以下のものである。孔径が０．５０〜０．２５μｍであると、一部の細菌は通過可能であるが、本発明に係る高保存性抗体溶液はエタノールを含有しているので、腐敗は起こらない。フィルターの孔径が０．２５μｍ以下であれば、略完全に細菌を除去することができる。
【００３１】
本発明に係る高保存性抗体溶液を製造するには、まず、卵黄抗体を水（脱イオン水、超純水等）や緩衝液等の水性溶媒に溶解して抗体溶液を調製し、次いで、抗体溶液をフィルター滅菌する。抗体溶液へのエタノールの添加はフィルター滅菌が施される前であってもよく、後であってもよい。
【００３２】
得られた高保存性抗体溶液を滅菌済みの密閉容器内に収容すれば、長期間安定して保存することができる。また、前記密閉容器としてスプレー容器を用いれば、マスク等に抗体溶液を吹き付けて抗菌性や抗ウイルス性等を付与するためのスプレーとして用いることができる。
【００３３】
また、得られた高保存性抗体溶液を用いてエアゾール製品を構成してもよい。この場合、滅菌済みの密閉容器内に高保存性抗体溶液とともに充填する噴射剤としては、液体中の抗体活性を低下させないために、窒素ガスを用いることが望ましい。また、前記密閉容器内にメチルパラベン等の防腐剤を入れても良い。防腐剤としてメチルパラベンを用いることで、エアゾール化に伴う爆発の心配がない。
【実施例】
【００３４】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【００３５】
以下のようにして調製した抗体溶液を用いて、その抗体価の経時変化を観察した。
【００３６】
＜被試験抗体＞
被試験抗体として、コナヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲン又はヤケヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンにより免疫したニワトリに産生させたＩｇＹを、硫安沈澱により粗精製し、これを凍結乾燥してなる粉末状の抗体を用いた。
【００３７】
＜抗体溶液の調製＞
ＰＢＳ（−）に上記の各ＩｇＹ粉末を１０ｍｇ／ｍＬ濃度になるよう溶解して、完全に溶解させた後、孔径０．４５μｍのフィルターを用いて滅菌を行った。並行して、脱イオン水に９５％エタノールを１０、２０、４０、６０、８０質量％の濃度になるように加えて、濃度の異なるエタノール水溶液を調製した。各濃度のエタノール水溶液と滅菌済みＩｇＹ水溶液とを１：１で混合した後、得られた抗体溶液を１．０ｍＬずつスクリューキャップチューブに分注し、３７℃で遮光して静置保存した。
【００３８】
＜抗体価（力価）の測定＞
各抗体溶液を１週間保存後及び３４週間保存後(加速試験)にサンプリングして、各抗体溶液中のＩｇＹの抗体価の維持率を、各アレルゲン固相化プレートを用いてＥＬＩＳＡにより測定した。なお、０週目（試験開始時）及び１週間保存後の各抗体溶液は、サンプリング後−３０℃で凍結保存し、３４週間保存後の各抗体溶液とともに抗体価の測定に供した。
【００３９】
得られた結果は、抗コナヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの抗体価を下記表１及び図１のグラフに示し、抗ヤケヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの抗体価を下記表２及び図２のグラフに示す。また、各エタノール濃度の抗コナヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの抗体溶液を１週間保存した後の様子を図３の写真に示す。
【００４０】
【表１】
2014218496.tif 000003
【００４１】
【表２】
2014218496.tif 000004
【００４２】
なお、表１及び表２中、「−」と記載されている箇所は、測定不能であったことを示す。
【００４３】
＜結果＞
抗コナヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの抗体溶液では、表１及び図１に示すように、エタノール濃度が５質量％、１０質量％、２０質量％及び２５質量％である場合は、１週間保存後でも抗体価が９０％前後維持されており、３４週間保存後でも抗体価が４０％前後も維持されていた。一方、エタノール濃度が３０質量％の抗体溶液の抗体価維持率は１週間保存後には約５０％にまで低下し、３４週間保存後には約２０％にまで低下した。更に、エタノール濃度が４０質量％の抗体溶液の抗体価維持率は１週間保存後で約２０％にまで低下した。また、図３に示すように、１週間保存後において、エタノール濃度が３０質量％及び４０質量％の抗体溶液は白濁しているのに対して、エタノール濃度が５質量％、１０質量％及び２０質量％の抗体溶液では白濁は認められなかった。なお、エタノール濃度が４０質量％の抗体溶液は、エタノール水溶液の混合直後から白濁した。
【００４４】
また、抗ヤケヒョウヒダニ虫体由来粗精製アレルゲンＩｇＹの抗体溶液では、表２及び図２に示すように、エタノール濃度が５質量％、１０質量％、２０質量％及び２５質量％である場合は、１週間保存後では抗体価はほとんど低下しておらず、３４週間保存後でも抗体価は約４０％以上も維持されていた。一方、エタノール濃度が３０質量％の抗体溶液の抗体価維持率は１週間保存後には約５０％にまで低下し、３４週間保存後には約２０％にまで低下した。更に、エタノール濃度が４０質量％の抗体溶液の抗体価維持率は１週間保存後には約２５％にまで低下した。
【図１】
2014218496.tif 000005
【図２】
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【図３】
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