(57)【要約】      （修正有）【課題】アポリポプロテインＢ分泌抑制作用を示す新規化合物を提供する。【解決手段】式（１）：2014101341.tif 000008で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2014101341.tif 000004
で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするアポリポプロテインＢ１００分泌抑制剤。
【請求項２】
式（１）：
【化２】
2014101341.tif 000005
で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする脂質異常症予防・治療剤。
【請求項３】
式（１）：
【化３】
2014101341.tif 000006
で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする高コレステロール血症予防・治療剤。
【請求項４】
式（１）：
【化４】
2014101341.tif 000007
で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする動脈硬化予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非常に簡便な方法かつ食品でも応用可能な合成方法によって得られるレスベラトロール２量体を有効成分とするアポリポプロテインＢ１００（ＡｐｏＢ１００）分泌抑制剤、脂質異常症予防・治療剤、高コレステロール血症予防・治療剤および動脈硬化予防剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在の社会生活においては、過剰なストレスや食物摂取、運動不足が蔓延している。これらが原因となるメタボリックシンドロームが大きな社会問題になっている。メタボリックシンドロームとは、内蔵脂肪型肥満に加えて高血糖、高血圧、脂質異常のうち二つ以上を併せ持った状態であり、動脈硬化のリスクが高くなる。
【０００３】
脂質異常症とは、血液中に含まれる脂質が過剰もくしは不足している状態を指し、これまで高脂血症と呼ばれていた疾患である。脂質異常症が発症すると、血中の低比重リポタンパク（ＬＤＬ）コレステロール濃度の増加（高コレステロール血症）、高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール濃度の低下（低コレステロール血症）、中性脂肪などの脂質の増加（高トリグリセリド血症）により、動脈硬化のリスクが高くなることが知られている。
【０００４】
食物中もしくは生体内で合成された脂肪酸は血流に乗って肝臓に達する。肝臓では脂肪酸からトリグリセリドが合成される。肝臓で発現する血漿タンパク質であるアポリポプロテインは合成されたトリグリセリドやコレステロールなどを可溶化して末梢組織に運搬する機能を有している。特にアポリポプロテインＢ１００（ＡｐｏＢ１００）は超低比重リポタンパク（ＶＬＤＬ）やＬＤＬ、カイロミクロンといったリポタンパク質の構成成分であり、リポタンパク質粒子の構造維持あるいはＬＤＬ受容体との結合に重要な役割を果たしている（非特許文献１）。
【０００５】
一方、血漿中のＡｐｏＢ１００量の増加は、アテローム性動脈硬化症や高コレステロール血症（非特許文献２）、心筋梗塞（非特許文献３）、および血栓症（非特許文献４）などの疾患リスクの増加と関係していることも報告されている。
【０００６】
以上のことから、肝臓からのＡｐｏＢ１００の分泌を抑制することによって脂質異常症およびそれに伴う動脈硬化を予防・改善することが可能となると考えられている。
【０００７】
このような現状から、ＡｐｏＢ１００の過剰分泌の抑制作用に着目した先行技術は報告されている。たとえば、共益トリエン酸、その塩、および誘導体を有効成分とするＡｐｏＢ１００分泌抑制剤（特許文献１）、紫蘇エタノール抽出物を有効成分とするＡｐｏＢ１００分泌抑制剤（特許文献２）、クロロフィル関連化合物を有効成分とするＡｐｏＢ１００分泌抑制剤（特許文献３）などが知られている。また、化学修飾ｓｉＲＮＡによるＡｐｏＢ１００分泌抑制剤（特許文献４）なども知られている。
【０００８】
しかし、特許文献１ではα−リノレン酸を添加した場合と比較してＡｐｏＢ１００の分泌が抑制されているだけである。また、機能性成分は血中のタンパク質との非特異的な相互作用によって有効性が減衰するといわれているが、特許文献２および特許文献３では低濃度のウシ血清アルブミン（ＦＢＳ）を使用した場合の活性であり、生体内での有効性は疑問点がある。また、特許文献４に記載される化学修飾ｓｉＲＮＡでは使用範囲が限定される。
【０００９】
以上のようにＡｐｏＢ１００分泌抑制剤はいくつか提案されているものの、更なるＡｐｏＢ１００分泌抑制作用に優れた新規素材の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００２−２６５９８５号公報
【特許文献２】特開２００８−１００９２８号公報
【特許文献３】特開２００８−１０５９６６号公報
【特許文献４】特開２０１１−１５５９１４号公報
【特許文献５】特開２０１１−２５１９１４号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】日本臨床,５９（２）ｐ１０９−１１３（２００１）
【非特許文献２】Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ,３２２,ｐ１４９４−１４９９（１９９０）
【非特許文献３】Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ,３６,ｐ２０−２３（１９９０）
【非特許文献４】Ｐｃｄｉａｔｒｉｃｓ,９９,１９９７,ｐ．ｅ１１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ところで、本発明者らはこれまでレスベラトロールを始めとする機能性素材の高機能化について様々に検討しており、その一例として、レスベラトロールを高温高圧下で加熱処理することにより、多数の新規なレスベラトロール２量体の合成に成功している（特許文献５）。これらの新規なレスベラトロール２量体の合成方法はいずれも簡便であることのみならず、食品にも応用可能な合成方法である点で優れたものであるが、新規なレスベラトロール２量体についての機能性についてはまだ十分に検討できていなかった。そこで、本発明者らは、これらの新規なレスベラトロール２量体の機能性について検討したところ、特定のレスベラトロール２量体がアポリポプロテインＢ１００（ＡｐｏＢ１００）分泌抑制作用を有していることを見出すことに成功し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
したがって、本発明は、ＡｐｏＢ１００分泌抑制作用を示す新規レスベラトロール２量体を有効成分とする新たなＡｐｏＢ１００分泌抑制剤を提供することを目的とする。また、本発明は、前記ＡｐｏＢ１００分泌抑制作用に関連する脂質異常症予防・治療剤、高コレステロール血症予防・治療剤および動脈硬化予防剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の要旨は、
〔１〕式（１）：
【００１５】
【化１】
2014101341.tif 000002
【００１６】
で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とするアポリポプロテインＢ１００分泌抑制剤、
〔２〕前記式（１）で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする脂質異常症予防・治療剤、
〔３〕前記式（１）で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする高コレステロール血症予防・治療剤、
〔４〕前記式（１）で示されるレスベラトロール２量体、その薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする動脈硬化予防剤
に関する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤は、アテローム性動脈硬化症や高コレステロール血症、心筋梗塞、および血栓症などの疾患リスクの増加に関連するＡｐｏＢ１００の過剰な分泌を抑制する作用を有していることから、新規なＡｐｏＢ１００分泌抑制剤として有用である。
また、本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤は、新規な脂質異常症予防・治療剤、高コレステロール血症予防・治療剤および動脈硬化予防剤としても有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は実施例１で行ったＨＰＬＣのクロマトグラムを示す。Ｒ３は新規レスベラトロール２量体であるＵＨＡ４００２に該当する。
【図２】図２は実施例２で行った細胞培養液中のＡｐｏＢ１００量を、ＤＭＳＯを使用したときのＡｐｏＢ１００量を１００とした相対値で比較した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において、「アポリポプロテインＢ１００（ＡｐｏＢ１００）分泌抑制剤」とは、肝細胞からのアポリポプロテインＢ１００の分泌を抑制することができる薬剤をいう。本明細書中での「ＡｐｏＢ１００」は特に規定がないかぎりアポリポプロテインＢ１００を指す。前記ＡｐｏＢ１００分泌抑制作用は，具体的には、後述の実施例に記載の方法により測定することができる。
また、「脂質異常症予防・治療剤」とは、血中のトリグリセリド濃度の上昇を抑制または低下することが出来る薬剤をいう。
また、「高コレステロール血症予防・治療剤」とは、血中のコレステロール濃度の上昇を抑制または低下することが出来る薬剤をいう。
また、「動脈硬化予防剤」とは、血中のトリグリセリド濃度およびコレステロール濃度の上昇を抑制または低下することにより動脈硬化を予防できる薬剤をいう。
【００２０】
本発明では、ＡｐｏＢ１００分泌抑制剤、脂質異常症予防・治療剤，高コレステロール血症予防・改善剤および動脈硬化予防剤の構成は同じであるため、これらをまとめて、本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等と略する。
【００２１】
本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等は、式（１）：
【００２２】
【化２】
2014101341.tif 000003
【００２３】
で示されるレスベラトロール２量体、これらの薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする。
【００２４】
前記レスベラトロール２量体において、炭素−炭素２重結合は、トランスまたはシスであってよく、シス体とトランス体との混合物を含む。
【００２５】
前記レスベラトロール２量体の薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩またはそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。
【００２６】
本発明で使用する前記式（１）で示されるレスベラトロール２量体、これらの薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物（以下、新規レスベラトロール２量体と略する。）は、レスベラトロールを原料として、金属塩の存在下で加熱処理して得ることができる。
以下に、前記新規レスベラトロール２量体の製造方法について具体的に説明する。
【００２７】
前記製造方法では、前駆体としてレスベラトロールを用いる。レスベラトロールにはトランス体とシス体の構造異性体が存在するが、加熱や紫外線によってトランス体とシス体の変換が一部生じる。したがって、レスベラトロールとしては、トランス体でもシス体でも、あるいはトランス体とシス体の混合物であってもよい。レスベラトロールは、ブドウ果皮・茎・葉、ピーナッツの渋皮、メリンジョ、イタドリなどから抽出した天然由来のものもしくはその精製品であっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来のレスベラトロールを用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、後述のように所望の生成反応が進み最終的に本発明で用いる新規レスベラトロール２量体が得られるから、レスベラトロール以外の成分を含む混合物も使用できる。また、レスベラトロールには、塩の誘導体もあるが、前記製造方法では、これらの誘導体も原料として使用することができる。
ただし、新規レスベラトロール２量体の回収率の観点からは、レスベラトロール換算で１重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。
前記レスベラトロールとしては、ブドウ果皮・茎・葉、ピーナッツの渋皮、メリンジョ、イタドリ等の原料からの抽出物、凍結乾燥品等を使用してもよい。
【００２８】
本発明では、レスベラトロールを適切な溶媒に溶解させる。この際、溶媒が水のみであれば、レスベラトロールの溶解度が著しく低いために、水と有機溶媒の混合液や、有機溶媒のみに溶解させればよい。水と有機溶媒の配合比や、有機溶媒の種類については特に制限はなく、レスベラトロールが十分に溶解すれば良い。中でも、メタノールやエタノールのみの溶媒や、水とメタノール、水とエタノール等の混合液を使用することが、安全性やコスト面から好ましい。新規レスベラトロール２量体を含む反応後組成物に対して最終的な精製を十分に適用せずにその組成物を食品に使用する場合には、安全性や法規面から溶媒としてエタノールや含水エタノールを使用することが望ましい。
【００２９】
前記のようにして得られるレスベラトロールを含有する溶液中のレスベラトロールの濃度について特に制限はないが、その濃度が高いほど、溶媒使用量が少ない等のメリットもあるため、レスベラトロールの濃度は各々の溶媒に対しレスベラトロールがそれぞれ飽和する濃度近くが好ましい。
また、レスベラトロールは前記溶液中において生成反応前に完全に溶解していなくともよい。
【００３０】
次に、前記レスベラトロールを含有する溶液（以下、レスベラトロール含有溶液）のｐＨを８以上に調整することが好ましい。調整方法として、例えば、レスベラトロール含有溶液を調製した後にｐＨ調整剤を添加してｐＨを調整しても良いし、前記溶液の調製時に前もって溶媒のｐＨを調整しておいても良い。レスベラトロール含有溶液の反応開始時のｐＨは８．０以上であれば、効率的に後述の反応が進むので好ましく、ｐＨ１３．０を越えると反応と同時に、他の反応や目的化合物の分解も一方で生じるために最終的な新規レスベラトロール２量体の回収量が低下する。したがって、反応開始時のｐＨは８以上１３未満が望ましい。
【００３１】
本発明では、前記レスベラトロール含有溶液中に金属塩を添加する。前記金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているものが安全性の面で好ましい。例えば、食品に添加することが認められているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩等が挙げられる。
また、前記金属塩の混合物としては、例えば、ミネラルプレミックス（田辺製薬株式会社、グルコン酸亜鉛、クエン酸鉄アンモニウム、乳酸カルシウム、グルコン酸銅、リン酸マグネシウムを主成分としたミネラル混合物）のように金属塩を数種類含む物質が挙げられる。また、複数の金属塩を含む混合物として、ミネラルウォーターも挙げることができる。
なお、前記金属塩の含有量としては、新規レスベラトロール２量体を生成可能な量であればよく、特に限定はない。
【００３２】
次に、金属塩存在下で、レスベラトロール含有溶液を加熱処理する。この加熱処理により、新規レスベラトロール２量体の生成反応を行う。生成反応を効率的に進ませるために、レスベラトロール含有溶液の加熱温度は１１０℃以上に調整することが好ましい。また、使用する溶媒の沸点から考え、加圧加熱が望ましい。例えば、開放容器にレスベラトロール含有溶液を入れ、溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加熱する、密閉容器にレスベラトロール含有溶液を入れて前記容器を加熱する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加熱する等、少なくとも部分的に溶液温度が１１０℃以上に達するように加熱することが好ましい。回収効率面から、溶液温度が均一に１１０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜１２０分の加熱時間が望ましい。また、加熱は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。複数回に分けて加熱する場合、蒸発した溶媒を補うために溶媒を新たに追加して行うことが好ましい。
【００３３】
前記加熱処理による新規レスベラトロール２量体の生成反応の終了は、例えば、ＨＰＬＣによる成分分析により新規レスベラトロール２量体の生成量を確認して判断すればよい。
【００３４】
得られる反応液中には、本発明で用いる新規レスベラトロール２量体が含有されている。
また、安全な原料のみを用いた工程で新規レスベラトロール２量体を製造した場合には、新規レスベラトロール２量体を含む混合物の状態で食品、医薬品または医薬部外品に使用することが可能である。例えば、天然由来のレスベラトロールを含水エタノール溶媒に溶解し、ミネラルウォーターやミネラルプレミックスを添加して加熱処理した場合には、得られる反応液を食品原料の一つとして使用することが可能である。
【００３５】
また、風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記反応液を濃縮して新規レスベラトロール２量体の濃度を高める、あるいは前記反応液を精製し新規レスベラトロール２量体の純品を得ることができる。濃縮、精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等を用いた溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出して新規レスベラトロール２量体を濃縮できる。また、カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。
【００３６】
また、前記反応液から新規レスベラトロール２量体を分離して回収する場合には、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を用いてもよい。
【００３７】
前記濃縮物や精製物を、必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒除去することで、粉末状の新規レスベラトロール２量体を得ることができる。
【００３８】
また、得られた新規レスベラトロール２量体は、必要に応じて、当該分野で公知の方法により、レスベラトロール２量体の塩としてもよい。
【００３９】
前記の新規レスベラトロール２量体は、レスベラトロールよりも優れたＡｐｏＢ１００分泌抑制作用を有する。
したがって、本発明は、前記の新規レスベラトロール２量体を有効成分として含有するＡｐｏＢ１００分泌抑制剤、さらにはＡｐｏＢ１００分泌抑制に関連する疾患の予防・治療剤、例えば、脂質異常症予防・治療剤、高コレステロール血症予防・治療剤、動脈硬化予防剤などを提供することができる。
【００４０】
本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等は、前記の新規レスベラトロール２量体のみを含有していてもよいが、新規レスベラトロール２量体をエタノール又はエタノール含有水溶液等の溶媒に溶解した液剤としたり、公知の方法で乳剤、懸濁剤としたりしてもよい。本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等中の新規レスベラトロール２量体の含有量は、０．００１重量％以上であればよい。
【００４１】
本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等の投与量としては、患者の性別、年齢、生理的状態、病態（肥満の進み具合等）、製剤形態、投与経路、投与回数、薬剤における有効成分濃度等に応じて広い範囲から適宜選択できるが、例えば、成人１日当たり、新規レスベラトロール２量体の含有量が０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度であればよい。投与は、例えば、１日当たり１回又は数回に分けてもよい。
【００４２】
本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等は、医薬品として製剤化してもよい。この製剤形態としては特に限定されず、例えば、注射剤、坐剤、点眼剤、軟膏剤、エアゾール剤等の非経口剤、錠剤、被覆錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、トローチ剤、チュアブル錠、シロップ剤等の経口剤等が挙げられる。製剤化の際には、薬学的に許容される担体、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、希釈剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤等が用いられる。
【００４３】
担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、マルトース、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、イノシトール、デキストラン、ソルビトール、アルブミン、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００４４】
滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール及びこれらの混合物等が挙げられる。
結合剤としては、例えば、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、水、エタノール、リン酸カリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００４５】
崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００４６】
希釈剤としては、例えば、水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類及びこれらの混合物等が挙げられる。
安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００４７】
等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ホウ酸、ブドウ糖、グリセリン及びこれらの混合物等が挙げられる。
ｐＨ調整剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００４８】
さらに本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等は、増量剤、可溶化剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、抗酸化剤、細菌抑制剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を含んでいてもよい。
【００４９】
また、本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等を食品の形態に製剤化してもよい。食品としては特に限定されず、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子、機能性食品、健康食品、健康志向食品等が挙げられる。保存性、携帯性、摂取の容易さ等を考慮すると、菓子類が好ましく、菓子類の中でも、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット、チューイングガム等が好ましい。
【００５０】
本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等を食品の形態に製剤化する場合、新規レスベラトロール２量体の該食品における含有量は、通常０．００１〜２０重量％程度である。
【００５１】
また、本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等を医薬部外品の形態に製剤化してもよい。医薬部外品としては特に限定されないが、例えば、ドリンク剤等の栄養補助医薬部外品が好ましい。この場合、有効成分である新規レスベラトロール２量体の医薬部外品における含有量は、通常０．００１〜３０重量％程度である。
【００５２】
また、本発明のＡｐｏＢ１００分泌抑制剤等は、ヒトに対してだけでなく、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤又は飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。
【００５３】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。ここでは、ヒドロキシスチルベン類としてトランス−レスベラトロールを用いた反応を示すが他のヒドロキシスチルベン類でも同様の反応で化合物が得られる。
【実施例】
【００５４】
（実施例１：ＵＨＡ４００２の生成および単離・精製）
トランス−レスベラトロール（東京化成）７００ｍｇをエタノール１４ｍＬに溶解し、２．５％ＮａＨＣＯ3水溶液を１４ｍＬ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブ（三洋電機（株）、「ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ」、以下同じ）にて１３０℃、２０分間加熱した。次いで、１回目のオートクレーブ処理にて得られた反応溶液に、エタノール１４ｍＬと５．０％ＮａＨＣＯ3水溶液を１４ｍＬ加え、再度、オートクレーブにて１３０℃、２０分間加熱した。得られた反応溶液のうち１ｍＬを取り出し、メタノールにて５０ｍＬにメスアップし、このうちの１０μＬをＨＰＬＣにより分析した。その結果を図１に示す。
【００５５】
ＨＰＬＣ分析は以下条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）Ｃ−３０−ＵＧ−５」（４．６ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）
移動相：Ａ・・・Ｈ2Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）），  Ｂ・・・アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
注入：１０μＬ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：８０％Ａ／２０％Ｂから２０％Ａ／８０％Ｂまで３０分間、２０％Ａ／８０％Ｂから１００％Ｂまで５分間、１００％Ｂで１０分間（全て直線）
【００５６】
図１に示すように、反応後溶液のクロマトグラムでは、複数のピークが確認され、原料であるレスベラトロールのピークとは相違しているＲ１〜Ｒ５のピークのうち、Ｒ３のピークに含まれる化合物をＵＨＡ４００２と命名した。
【００５７】
Ｒ３のピークに含まれるＵＨＡ４００２を分取ＨＰＬＣにより精製し、常法により乾燥したところ、褐色粉末状の物質となった。
【００５８】
なお、ＵＨＡ４００２の分子量を高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（高速原子衝撃質量分析）にてそれぞれ測定したところ、４３９．４８０３であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
理論値Ｃ28Ｈ23Ｏ5（Ｍ＋Ｈ）+ ：４３９．４７９２
分子式Ｃ28Ｈ22Ｏ5
【００５９】
次に、前記ＵＨＡ４００２を核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよび各種２次元ＮＭＲデータの解析から、前記ＵＨＡ４００２が前記式（１）で表される構造を有することを確認した。
【００６０】
（実施例２  ＡｐｏＢ１００の定量）
ＡｐｏＢ１００分泌量を評価するために、ＨｅｐＧ２細胞（ヒト由来肝臓癌細胞）を用いて評価を行った。
【００６１】
試料にはレスベラトロール、ＵＨＡ４００２の２種類を用いた。各試料をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、和光純薬工業（株）社製）６ｍＭの濃度で溶解させて試験に使用した。
【００６２】
培養は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ：バイオロジカル・インダストリーズ社製）、１％アンチバイオティック−アンチマイコティック（ギブコ（ＧＩＢＣＯ）社製）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製）を用いていった。試験に使用する細胞は定法に従って調製した。つまり、細胞培養用２４ｗｅｌｌディッシュ（日本ＢＤ社製）にＨｅｐＧ２細胞を１×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍＬで１ｍＬ播種して３７℃、５％ＣＯ2条件下で７２時間培養し、１００％コンフルエントしたものを使用した。
【００６３】
試験は以下のように行った。培養した細胞に各試料を５μＬ（終濃度３０μＭ）添加して２４時間処理した。溶媒であるＤＭＳＯのみを０．５％添加したものをコントロールとした。２４時間の培養後、ＤＭＳＯで２００ｍＭに調整したオレイン酸を５μＬ（終濃度１ｍＭ）添加してさらに２４時間培養した。培養終了後，培養液を回収してＡｐｏＢ１００の定量に使用した。
【００６４】
ＡｐｏＢ１００の定量はＥＬＩＳＡ法にて行った。方法は，ＰＢＳ（−）で１０μｇ／ｍＬに調整したＡｎｔｉ−ＡｐｏＢポリクローナル抗体（Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ社製）を９６ｗｅｌｌプレート（ＮＵＮＣ社製）に５０μＬずつ添加して４℃で１２時間静置した。１２時間後、ＰＢＳ（−）３００μＬで３回洗浄して，ＰＢＳ（−）で２０％に調整したイムノブロックを３００μＬ添加して２時間静置した。２時間後、ＰＢＳ（−）３００μＬで３回洗浄して細胞培養液５０μＬを添加して１時間静置した。ＰＢＳ（−）３００μＬで３回洗浄して、１０ｍＭＨＥＰＥＳ／１５０ｍＭＮａＣｌ／０．１％ＢＳＡで１０μｇ／ｍＬに調整したＡｎｔｉ−ＡｐｏＢ  ＨＲＰコンジュゲート抗体（Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ社製）を５０μＬ添加して１時間静置した。１時間後，ＰＢＳ（−）３００μＬで５回洗浄してＴＭＢ溶液（ＢｉｏＲａｄ社製）を５０μＬ添加した。反応後、０．５Ｍ  Ｈ2ＳＯ4を２５μＬ添加して４５０ｎｍの吸光度を測定した。コントロールの吸光度を１００％として相対値で比較した。これらの結果を図２に示した。
【００６５】
図２の結果より、ＵＨＡ４００２においてコントロール及びレスベラトロールと比較し、ＡｐｏＢ１００量が有意に低かったことから、優れたＡｐｏＢ１００分泌抑制作用が確認された。
【００６６】
このようにＵＨＡ４００２は、優れたＡｐｏＢ１００分泌抑制作用を有することから、ＡｐｏＢ１００分泌抑制として有効であることがわかる。また、前記ＡｐｏＢ１００分泌抑制作用に関連する疾患予防・治療剤、具体的には、脂質異常症の予防・治療剤、高コレステロール血症予防・治療剤または動脈硬化予防剤としても有効であることもわかる。
【図１】
2014101341.tif 000009
【図２】
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