(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳動物において、先天性の免疫賦活応答を誘発又は増強し、必要に応じて、適応性の免疫賦活応答を誘発または増強するｍＲＮＡを含む免疫賦活組成物の提供。【解決手段】（ａ）カチオン性又はポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、カチオン性又はポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分と、（ｂ）少なくとも１個の治療的に活性な、タンパク質、抗原及び／又は抗体をコードする、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとからなる免疫賦活組成物。アジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡは好ましくは、短いＲＮＡオリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡを含むコーディングＲＮＡ、免疫賦活性のＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、又はリボスイッチ、リボザイム若しくはアプタマーから選択される免疫賦活組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡからなる、アジュバント成分と
（ｂ）少なくとも１個の治療的に活性な、タンパク質、抗原および／または抗体をコードする、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと
を含んでおり、
哺乳動物において、先天性の免疫応答を誘発するか、増強することができ、必要に応じて適応性の免疫応答を誘発するか、増強することができる、免疫賦活組成物。
【請求項２】
前記アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡが、短いＲＮＡオリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡを含むコーディングＲＮＡ、免疫賦活性のＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、またはリボスイッチ、リボザイムもしくはアプタマーから選択される、請求項１に記載の免疫賦活組成物。
【請求項３】
前記アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡがｍＲＮＡである、請求項１または２に記載の免疫賦活組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと前記アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとが、互いに同一である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１個のｍＲＮＡと前記アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとが、互いに異なる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物。
【請求項６】
前記アジュバント成分中の前記ｍ（ＲＮＡ）と前記カチオン性またはポリカチオン性の化合物とのＮ／Ｐの比は、約０．１〜１０であり、
該約０．１〜１０は、約０．３〜４、約０．５〜２、約０．７〜２、および約０．７〜１５を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物。
【請求項７】
前記アジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡと、前記成分（ｂ）の前記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとのモル比が、約１：１のモル比を含む約０．００１：１〜約１：０．００１のモル比から選択され得る、請求項１〜６のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡおよび／または前記アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡが、ＧＣによって安定化されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物。
【請求項９】
前記ＧＣによって安定化されたＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量が、ネイティブなＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量と比較して増加しており、
該ＧＣによって安定化された修飾された（ｍ）ＲＮＡのコードされたアミノ酸配列が、該ネイティブな修飾された（ｍ）ＲＮＡのコードされたアミノ酸配列と比較して変化していない、請求項８に記載の免疫賦活組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物であって、
前記カチオン性またはポリカチオン性の化合物が、
プロタミン、ヌクレオリン、スペルミンまたはスペルミジン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、塩基性ポリペプチド、ポリアルギニン、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰｓ）、キメラのＣＰＰｓ（トランスポータンを含む）またはＭＰＧペプチド、ＨＩＶに結合するペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔに由来するペプチド、オリゴアルギニン、ペネトラチンファミリーのメンバー（ペネトラチンを含む）、アンテナペディアに由来するペプチド（特に、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａのアンテナペディアに由来するペプチド）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、抗菌剤に由来するＣＰＰｓ（ブホリン−２（Ｂｕｆｏｒｉｎ−２）を含む）、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴに由来するペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０、プロリンに富むペプチド、Ｌ−オリゴマー、アルギニンに富むペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアルギニン、ヒストン、ＶＰ２２に由来するペプチドまたはＶＰ２２の類似体ペプチド、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質の伝達ドメイン（ＰＴＤｓを含む）、ＰｐＴ６２０、プロリンに富むペプチド、アルギニンに富むペプチド、リジンに富むペプチド、Ｐｅｐ−１、およびカルシトニンペプチドなどから選択されるか、
全体的な式：（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘを有するタンパク質またはペプチドであって、
ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５であり、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＯｒｎの全体的な含有量が該オリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも５０％を表すという条件で、ｌ、ｍ、ｎまたはｏは、互いに独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５から選択される任意の数であり得、
Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎ以外のネイティブな（＝天然に存在する）またはネイティブでない、任意のアミノ酸から選択され得、
Ｘａａの全体的な含有量が該オリゴペプチドの全アミノ酸の５０％を超えないという条件で、ｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、または８から選択される任意の数であり得るタンパク質またはペプチドから選択されるか、
Ａｒｇ７、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ７、Ｈ３Ｒ９、Ｒ９Ｈ３、Ｈ３Ｒ９Ｈ３、ＹＳＳＲ９ＳＳＹ、（ＲＫＨ）４、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒを含む、オリゴアルギニンから選択されるか、
カチオン性の多糖類（キトサンを含む）、ポリブレン、カチオン性のポリマー、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、カチオン性の脂質、ＤＯＴＭＡ：［１−（２，３−シオレイルオキシ）プロピル）］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド、ＤＭＲＩＥ、ジ−Ｃ１４−アミジン、ＤＯＴＩＭ、ＳＡＩＮＴ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ＢＧＴＣ、ＣＴＡＰ、ＤＯＰＣ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＰＥ（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＤＡＢ、ＤＯＩＣ、ＤＭＥＰＣ、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）、ＤＩＭＲＩ：ジミリストオキシプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロマイド、ＤＯＴＡＰ：ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン、ＤＣ−６−１４：Ｏ，Ｏ−ジテトラデカノイル−Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセチル）ジエタノールアミンクロライド、ＣＬＩＰ１：ｒａｃ−［（２，３−ジオクタデシルオキシプロピル）（２−ヒドロキシエチル）］−ジメチルアンモニウムクロライド、ＣＬＩＰ６：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシメチルオキシ）エチル］トリメチルアンモニウム、ＣＬＩＰ９：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシスクシニルオキシ）エチル］−トリメチルアンモニウム、オリゴフェクタミンから選択されるか、
カチオン性またはポリカチオン性のポリマー（（β−アミノ酸のポリマーまたは逆転されたポリアミドのような）修飾されたポリアミノ酸を含む）、修飾されたポリエチレン（ＰＶＰ（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロマイド））を含む）、修飾されたアクリレート（ｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））を含む）、修飾されたアミドアミン（ｐＡＭＡＭ（ポリ（アミドアミン））を含む）、修飾されたポリベータアミノエステル（ＰＢＡＥ）（ジアミン末端が修飾された１，４ブタンジオールジアクリレート−コ−５−アミノ−１−ペンタノールポリマーを含む）、デンドリマー（ポリプロピルアミンのデンドリマーまたはｐＡＭＡＭを基礎とするデンドリマーを含む）、ポリイミン（ＰＥＩ：ポリ（エチレンイミン）、ポリ（プロピレンイミン）を含む）、ポリアリルアミン、糖の骨格を基礎とするポリマー（シクロデキストリンを基礎とするポリマー、デキストランを基礎とするポリマー、キトサンを含む）、シランの骨格を基礎とするポリマー（ＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳのコポリマーを含む）、（上記にて規定したようなカチオン性のポリマーから選択される）１個以上のカチオン性のブロックの組合せからなるブロックポリマー、および１個以上の親水性または疎水性のブロック（ポリエチレングリコールを含む）の組合せからなるブロックポリマーから選択される、
免疫賦活組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物であって、
前記少なくとも１つの遊離のｍＲＮＡが、腫瘍抗原または癌疾患において発現される変異抗原から選択される抗原をコードしており、
該腫瘍抗原は、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰ  ＨＰＧ１、アルファ５ベータ１−インテグリン、アルファ５ベータ６−インテグリン、アルファ−メチルアシル−コエンザイムＡ  ラセマーゼ、ＡＲＴ−４、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬ−２、ＢＩＮＧ−４、ＣＡ  １５−３／ＣＡ  ２７−２９、ＣＡ  １９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ−８、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＥ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、コアクトシン様タンパク質、コラーゲンＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ−２、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ−Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ−１０／ＭＡＧＥ−Ｂ１、DAM-6/MAGE-B2、ＥＧＦＲ/Ｈｅｒ１、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＺＨ２、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｆｒａ−１、Ｇ２５０/CAIX、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ−２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ/ErbB2、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、未成熟なラミニン受容体、カリクレイン−２、カリクレイン−４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＭ-ＨＮ-1、ＬＡＧＥ−１、Livin、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、マトリックスタンパク質２２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ−抗原、ＭＲＰ−３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、ＮＳＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＯＡ１、ＯＦＡ−ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＳ−９、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐ１５、ｐ１５、ｐ１９０  マイナー  ｂｃｒ−ａｂｌ、ｐ５３、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ−１−キナーゼ、Ｐｉｎ１、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、プロステイン、プロテイナーゼ−３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ−１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、Ｓ��ＲＴ−３、ＳＣＣ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０、ＳＳＸ−４、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＥＡＰ、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＴＡ−９０、ＴＡＧ−７２、ＴＡＲＰ、ＴＧＦｂ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＴＧＭ−４、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、ＷＴ１を含み、
該癌疾患において発現される変異抗原は、アルファ−アクチニン−４／ｍ、ＡＲＴＣ１／ｍ、ｂｃｒ／ａｂｌ、ベータ−カテニン／ｍ、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡＳＰ−５／ｍ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ−１／ｍ、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＦＮ１／ｍ、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、Ｋ−Ｒａｓ／ｍ、ＬＤＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＲＴ２／ｍ、ＭＥ１／ｍ、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３／ｍ、ミオシン  クラスＩ／ｍ、ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、Ｎ−Ｒａｓ／ｍ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ−９／ｍ、ｐ５３／ｍ、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ、ＰＲＤＸ５／ｍ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＳＩＲＴ２／ｍ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＴＰＩ／ｍを含む、免疫賦活組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物であって、
前記少なくとも１つの遊離のｍＲＮＡが、
（ａ）
・ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）＝ＫＬＫ３（カリクレイン−３）、
・ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、
・ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、
・ＳＴＥＡＰ（前立腺の６回膜貫通型の上皮抗原）
の抗原の群における少なくとも１個、２個、３個または４個の（異なる）抗原をコードしているか、
（ｂ）
・ｈＴＥＲＴ、
・ＷＴ１、
・ＭＡＧＥ−Ａ２、
・５Ｔ４、
・ＭＡＧＥ−Ａ３、
・ＭＵＣ１、
・Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、
・ＮＹ−ＥＳＯ−１、
・ＣＥＡ、
・サバイビン、
・ＭＡＧＥ−Ｃ１、および／または
・ＭＡＧＥ−Ｃ２、
の抗原の群における少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個または１２個の（異なる）抗原をコードしており、
これらの抗原の任意の組合せが可能である、免疫賦活組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物、および必要に応じて薬学的に受容可能な担体、アジュバント、および／またはビヒクルを含んでいる、薬学的組成物。
【請求項１４】
ワクチンである、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項にて規定した免疫賦活組成物を調製するための方法であって、
請求項１〜１２にて規定した、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとカチオン性またはポリカチオン性の化合物とを特定の比にて混合することによって、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡからなる、アジュバント成分を調製する工程（ａ）と、
請求項１〜１２のいずれか１項にて規定した少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを、工程（ａ）にて調製されたアジュバント成分に特定の比にて添加することによって、本発明の免疫賦活組成物を調製する工程（ｂ）と
を包含しており、
該少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、請求項１〜１２のいずれか１項にて規定した少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体をコードするをコードしている、方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物、あるいは、
請求項１〜１２のいずれか１項にて規定した、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分、および少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体をコードする少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの、
癌疾患、腫瘍疾患、自己免疫疾患、感染性疾患（ウイルス、細菌または原性動物の感染性疾患を含む）またはアレルギーもしくはアレルギー性疾患から選択される疾患または障害のいずれかを、予防、治療、および／または寛解するための薬学的組成物を調製するための、使用。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫賦活組成物、および／または請求項１３または１４に記載の薬学的組成物を備えており、必要に応じて、該免疫賦活組成物および／または該薬学的組成物の投与および用量に関する情報を有する技術的説明書を備えている、キット。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、（ａ）アジュバント成分と（ｂ）少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとを含んでいる免疫賦活組成物に関する。アジュバント成分は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、この（ｍ）ＲＮＡからなる。少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、少なくとも１個の治療効果のある、タンパク質、抗原、アレルゲンおよび／または抗体をコードしている。免疫賦活組成物は、哺乳動物において、先天性の免疫応答および必要に応じて適応性の免疫応答を誘発するか、増強することが可能である。本発明の免疫賦活組成物は、薬学的組成物またはワクチンであり得る。さらに、本発明は、本発明の免疫賦活組成物を調製するための方法に関する。また、本発明は、種々の疾患を治療するための、（薬学的組成物またはワクチンを調製するための）本発明の免疫賦活組成物またはその成分の使用に関する。最後に、本発明は、本発明の免疫賦活組成物、その成分および／または薬学的組成物もしくはワクチンを備えているキットに関する。
【０００２】
先天性免疫系および／または適応免疫系の誘導および／または増強は、数多の疾患の治療および予防に重要な役割を果たしている。このような目的のために、免疫系は、通常、例えば、免疫賦活剤またはアジュバントを投与することによって調節される。しかしながら、ヒトなどの脊椎動物の免疫系は非常に複雑であり、精密に調節されている。免疫系は、緻密でダイナミックなネットワークの中で相互作用する多種多様なタンパク質、細胞、臓器、および組織からなる。免疫系は、通常、これらの臓器の感染を、特異性が増加する多層防御によって防いでいる。防御の１つの層は、物理的なまたは化学的なバリアーを含んでおり、少なくともいくつかの病原体および抗原が先天的に（ａ  ｐｒｉｏｒｉ）除去されることを可能にする。防御のさらなる層は、先天性免疫系および適応免疫系を含んでいる。
【０００３】
免疫系の一部としての先天性免疫系は、ほとんどの生物における宿主防御において優勢なシステムであり、液性のバリアーおよび化学的なバリアー（例えば、炎症、補体系および細胞のバリアーが挙げられる。）のようなバリアーを含んでいる。先天性免疫系は、典型的に、少数の受容体（パターン認識受容体と呼ばれる。）に基づいている。これらの受容体は、外来性の生物（ウイルス、細菌、真菌類および寄生虫など）を宿主の細胞から区別する保存された分子パターンを認識する。このような病原体と関連する分子パターンとしては、ウイルスの核酸、細菌の成分および真菌類の壁、ならびに鞭毛タンパク質などが挙げられる。
【０００４】
詳細に研究されたパターン認識受容体の第１のファミリーは、トール様受容体（ＴＬＲ）のファミリーであった。ＴＬＲは、膜貫通タンパク質であり、細胞外環境のリガンドまたはエンドソームのルーメンのリガンドを認識する。リガンドに結合した後、ＴＬＲは、細胞質のアダプタータンパク質を介してシグナルを伝達して、宿主の防御応答を誘導し、抗微生物ペプチド、炎症誘発性のケモカインおよびサイトカイン、ならびに抗ウイルス性サイトカインなどの産生を引き起こす（例えば、Ｍｅｙｌａｎ，  Ｅ．，  Ｊ．  Ｔｓｃｈｏｐｐ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）．  “Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｏｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．”  Ｎａｔｕｒｅ  ４４２（７０９８）：  ３９−４４参照）。今日では、少なくとも１０個のメンバーのトール様受容体（ＴＬＲｓ１〜１０）がヒトにて同定されており、１３個のメンバーのトール様受容体（ＴＬＲｓ１〜１３）がマウスにて同定されている。ヒトにおけるこれらのトール様受容体（ＴＬＲｓ）としては、ＴＬＲ１−ＴＬＲ２（公知リガンド：トリアシルリポペプチド）、ＴＬＲ１−ＴＬＲ６（公知リガンド：ジアシルリポペプチド）、ＴＬＲ２（公知ペプチド：ペプチドグリカン）、ＴＬＲ３（公知ペプチド：ｄｓＲＮＡ）、ＴＬＲ４（公知リガンド：グラム陰性細菌のＬＰＳ（リポ多糖類））、ＴＬＲ５（公知リガンド：細菌のフラゲリン）、ＴＬＲ７／８（公知リガンド：イミダゾキノリン、グアノシンの類似体およびｓｓＲＮＡ）、ＴＬＲ９（公知リガンド：細菌、ウイルスおよび原虫のＣｐＧ  ＤＮＡ、マラリア色素（ｍａｌａｒｉａ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｈｅｍｏｚｏｉｎ）（ヘモグロビンの消化産物）、およびＴＬＲ１０が挙げられる。病原性微生物を認識した後、ＴＬＲｓが典型的に細胞内シグナル経路を始動させて、炎症性のサイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１２）、１型インターフェロン（ＩＦＮβおよび複数のＩＦＮα）、およびケモカインが誘導されることになる（Ｋａｗａｉ，  Ｔ．  ａｎｄ  Ｓ．  Ａｋｉｒａ  （２００６）．  「ＴＬＲ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．」  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ  １３（５）：
８１６−２５）。
【０００５】
脊椎動物のより複雑な免疫応答の一部としての免疫系は、時が経つにつれて、特定の病原体または抗原をより効率よく認識するように適応する。この適応のプロセスによって、免疫記憶が作り出され、これらの病原体に将来遭遇する際のより効果的な防御が可能になる。適応免疫、すなわち獲得免疫のこのプロセスは、ワクチン接種の戦略のための基礎となる。上述した先天性免疫系とは対照的に、適応免疫系は抗原特異的であり、抗原提示と呼ばれるプロセスの間に、特異的な「自己」抗原または特異的な「非自己」抗原の認識を必要とする。さらに、包括的な方法で病原体を認識して応答する先天性免疫系の細胞とは異なり、適応免疫系は、宿主に対して長時間持続する免疫または防御的な免疫をもたらす。このため、適応免疫系は、特異的な病原体、病原体に感染した細胞または抗原に対してより調整された応答を可能にする。これらの調整された応答を開始する能力は、所謂「記憶細胞」によって体内にて維持される。抗原または病原体が体内に１回よりも多く侵入または感染した場合、これらの特異的な記憶細胞が、この抗原または病原体を素早く排除するために用いられる。このように、適応免疫系は、より強力な免疫応答を可能にするだけでなく、免疫記憶も可能にし、異なる免疫応答が特定の疾患に対して有利になることを可能にする。例えば、感染性疾患の場合、各病原体が特徴的な抗原によって「記憶」される。癌疾患の場合、腫瘍抗原または自己抗原が、適応免疫系によって認識され、中和され得る。
【０００６】
脊椎動物における適応免疫系の主要な成分としては、細胞レベルでのリンパ球および分子レベルでの抗体が主に挙げられる。適応免疫系の細胞成分としてのリンパ球としては、Ｂ細胞およびＴ細胞が挙げられる。Ｂ細胞およびＴ細胞は、骨髄における造血幹細胞に由来する。Ｂ細胞は体液性応答に関与する一方、Ｔ細胞は細胞性免疫応答に関与する。Ｂ細胞およびＴ細胞の両方は、特異的な標的を認識する受容体分子を保有している。Ｔ細胞は、抗原（例えば、病原体の小さい断片）がプロセスされ、主要組織適合抗原複合体（ＨＭＣ）と呼ばれる「自己」の受容体と組み合わせて提示された後のみに、「非自己」の標的（病原となる標的の構造など）を認識する。対照的に、Ｂ細胞の抗原特異的な受容体は、Ｂ細胞表面上の抗体分子であり、Ｂ細胞の表面上の抗体が特異的な外来の抗原に結合したときに、病原体を認識する。この抗原と抗体との複合体は、Ｂ細胞によって取り込まれ、タンパク質分解によってペプチドへと処理される。次いで、Ｂ細胞は、その表面のＭＨＣクラスＩＩ分子にこれらの抗原のペプチドを提示する。ＭＨＣと抗原との組合せは、適合するヘルパーＴ細胞を誘引する。このヘルパーＴ細胞はリンホカインを放出し、Ｂ細胞を活性化する。活性化されたＢ細胞が分裂を開始し、その子孫は、この抗原を認識する抗体のコピーを何百万も分泌する。これらの抗体は血漿およびリンパ液にて循環し、抗原を発現する病原体または腫瘍細胞に結合する。そして、補体活性化によって破壊されるか、貪食細胞によって取り込まれ破壊されるように、これらの病原体または腫瘍細胞をマークする。適応免疫系の細胞成分のように、細胞傷害性のＴ細胞（ＣＤ８＋）もまた、ＣＴＬ応答を形成し得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）は、ＭＨＣタイプＩ分子によって結合された、内因性の病原体および自己抗原からのペプチドを認識することができる。ＣＤ８＋−Ｔ細胞は、この細胞内にて細胞傷害性のタンパク質を放出することによって、殺傷機能を実行する。
【０００７】
このように、免疫系の基本的なメカニズムの両方（すなわち、先天性免疫系および適応免疫系）は、数多の疾患の治療的な処置および予防のための標的となり得る。先行技術において現在公知の適切な方法は、先天性の免疫応答を誘発するためにアジュバントを利用するか、または適応性の免疫応答を誘起するための、抗原、病原体もしくは免疫原を利用するかのどちらかであるか、あるいは、稀な場合において、その両方である。
【０００８】
特に、適応性の免疫応答は、細胞または宿主生物に、上述した特異的な外来の抗原を投与することによって誘発され得る。この特異的な外来の抗原は、ペプチドの抗原またはタンパク質の抗原のどちらかの形態であるか、あるいは、抗原は、核酸（例えば、ｃＤＮＡまたはメッセンジャーＲＮＡ）によってコードされていることがある。効果的な適応性の免疫応答を誘発するには、先天性免疫系のさらなる非特異的な刺激が有利である（例えば、抗原に特異的なシグナルに並列な非特異的な刺激を与える場合）。並列である非特異的な刺激は、免疫系を活性化の状態へと変化させ、これによって、適応性の免疫応答を向上させる。このような非特異的な免疫応答を与えることが可能な化合物は、通常、「アジュバント」と呼ばれる。多くの化合物および組成物が、先行技術においてアジュバントとして提案されており、例えば、フロイントアジュバント、金属酸化物（例えば、ミョウバン（水酸化アルミニウム）、無機のキレートまたはその塩、種々のパラフィン様のオイル、合成樹脂、アルギナート、ムコイド、多糖類の化合物、カゼイナート、ならびに、血液および／または血餅から単離された化合物（例えば、フィブリンの誘導体）である。これらのアジュバントは、典型的に、活性化されるべき結果に依存して、他の化合物（例えば、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、または他の治療的に活性な化合物）と組み合わせて用いられることがある。
【０００９】
しかし、特定の治療に適した遊離のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子、ｃＤＮＡまたは核酸は、一般に、特異的な抗原または任意の他の治療的に活性なタンパク質をコードし得、典型的に、免疫賦活性の性質をあまり示さないか、免疫賦活性の性質を示さないこともある。にもかかわらず、ペプチドまたはタンパク質（核酸と結合するタンパク質、またはプロタミンなど）と複合体化された場合、このような免疫賦活性の性質が、ｍＲＮＡ分子、ｃＤＮＡまたは核酸に付与されることがある。これに関連して、ｍＲＮＡ分子または核酸は、ｍＲＮＡ分子または核酸とペプチドまたはタンパク質との間に複合体が形成されるように、製剤化され得る。ｍＲＮＡ分子または核酸とペプチドまたはタンパク質の間に、種々の複合体が形成されてもよい。中性のｐＨにて通常は陰性に荷電する核酸が、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質と結合した場合、特に、強力な（アジュバント）複合体が生成し得る。
【００１０】
しかし、ワクチン接種法においてｍＲＮＡ分子または核酸分子を用いる場合、適応性の免疫応答を誘導するためには、またはコードされた一般的なタンパク質（例えば、治療的に活性なタンパク質またはペプチドの場合）を発現するためには、ｍＲＮＡまたは核酸分子のインビボでの翻訳が依然として最も重要かつ不可欠な要因となっている。このため、ｍＲＮＡを効率よく翻訳するためには、（カチオン性の）ペプチドまたはタンパク質とｍＲＮＡまたは核酸分子との複合体を細胞にトランスフェクションした後に、複合体化されたｍＲＮＡ分子または核酸分子がこの複合体から放出されなければならない。残念なことに、これは、ほとんどの場合に起こることではない。より典型的には、ｍＲＮＡ分子または核酸をカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化することによって、一般に、ポリカチオン性の化合物とｍＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子または核酸分子とが強力に結合するので、核酸の翻訳が抑制されることさえもあるか、または少なくとも翻訳の割合が大幅に低減されることさえもある。したがって、これらの化合物を受け取る先天性免疫系に関して、良好な免疫を賦活する性質を有する組成物を取得することは困難である。また、このような処方物を用いる場合、ｍＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子または核酸分子の効率的な翻訳を同時に保障することが困難である。
【００１１】
上述した問題点を回避する１つの可能性は、アジュバントとｍＲＮＡとを別々の処方物にて投与することかもしれない。しかし、これによって、投与はより一層複雑なものとなってしまう。最適な免疫応答を実現するには、アジュバントと抗原をコードするｍＲＮＡとを同一の細胞に入れることが好ましい。さらに、コードするｍＲＮＡによって抗原が発現される同一の細胞においてアジュバントが先天性の免疫応答を誘導する場合、アジュバントは、適応性の免疫応答の誘導を有利に支持する。
【００１２】
上記問題点を回避する別の可能性は、裸の（ｎａｋｅｄ）ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、または核酸を排他的に投与することであるかもしれない。このようなアプローチは、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは核酸をインビボにて効率よく翻訳するために有利であるが、上述したアジュバントによって誘発される先天性免疫系の有利な活性化を台無しにしてしまう。
【００１３】
このように、これらのアプローチは、実際、納得のいくものでなく、投与したｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは核酸の良好な翻訳によって同時に進行する先天性の免疫応答を引き起こさない。したがって、効率的に免疫を賦活する組成物または方法の提供が、従来技術においていまだ必要とされている。このような組成物または方法は、先天性の免疫応答を誘導可能であり、必要に応じて適応性の免疫応答を誘導可能である。投与の効果は、複合体のパートナーとの複合体の形成に起因したｍＲＮＡの非効率的な翻訳によって低減されることなく、ｍＲＮＡに免疫を賦活する性質が与えられる。すなわち、本発明の課題は、哺乳動物において、先天性の免疫賦活応答を誘発または増強し、必要に応じて、適応性の免疫賦活応答を誘発または増強することを可能にし、これによって、効率的なアジュバントの性質（免疫を賦活する性質）および投与されるｍＲＮＡの効率的な翻訳を保障する、方法および免疫賦活組成物を提供することである。
【００１４】
この課題は、本発明の主題によって、好ましくは本書に添付した特許請求の範囲によって解決される。特に、本発明は、以下の免疫賦活組成物によって上記課題を解決する。この免疫賦活組成物は、（ａ）アジュバント成分および（ｂ）少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを含んでいる。（ａ）アジュバント成分は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、またはカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡからなるものである。（ｂ）少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、少なくとも１個の、治療的に活性なタンパク質、抗原、アレルゲン、および／または抗体をコードしている。この免疫賦活組成物は、哺乳動物において、先天性の免疫応答を誘発または増強することができ、必要に応じて、適応性の免疫応答を誘発または増強することができる。
【００１５】
本発明に関連して、哺乳動物は、任意の哺乳動物から選択され得るが、好ましくは、例えば限定されないが、ヤギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ロバ、サル、エイプ、齧歯類（マウス、ハムスター、ウサギ）、および特にヒトを含む群より選択される哺乳動物から選択される。
【００１６】
本発明の免疫賦活組成物の主な利点は、少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質をコードする少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの翻訳がアジュバント成分（特に、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとカチオン性またはポリカチオン性の化合物との複合体の形成）によって阻害されずに、先天性の免疫応答および必要に応じて適応性の免疫応答が、哺乳動物にて効率的に誘発され得ることである。これは、特に、アジュバント成分が複合体化のためのカチオン性またはポリカチオン性の化合物を用いることによって形成されたことによって、ＲＮＡとカチオン性化合物との間に強力な複合体が典型的に形成され、このような複合体が複合体化したＲＮＡをほとんど放出しない、という事実に起因する。したがって、１つの処方物にて一緒になったアジュバント成分と遊離のｍＲＮＡとを投与することによって、遊離のｍＲＮＡのインビボでのトランスフェクションおよび発現を顕著に改善することがもたらされるにもかかわらず、遊離のｍＲＮＡはカチオン性化合物によってもはや妨害されない。本発明者らは、驚くべきことに、同一の１つの処方物自体を２つの別々の工程にて調製した場合、免疫賦活組成物の両方の性質（すなわち、効率的に免疫を賦活する性質、および効率的なｍＲＮＡの翻訳）をこの同一の１つの処方物にて実現し得るということを発見した。本発明に係る溶液は、本発明者らのこの驚くべき発見を利用している。この溶液は、アジュバント成分のカチオン性化合物と複合体を形成することによって遊離のｍＲＮＡが損失されることなく、アジュバント成分を任意の遊離のｍＲＮＡと混合することを可能にするので、より一層説得力がある。この溶液は、複合体化されたｍＲＮＡおよび遊離のｍＲＮＡとの間に平衡反応を引き起こすことなく、かなりの時間保存され得る。すなわち、結合していたＲＮＡが複合体から放出され、そして、アジュバント成分のカチオン性化合物が遊離のｍＲＮＡに結合することを引き起こし得る、形成されたアジュバント成分の解離が起こらない。
【００１７】
第１の成分として、本発明の免疫賦活組成物（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）は、いわゆる「アジュバント成分」を含んでいる。このアジュバント成分は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、または、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡからなる。
【００１８】
いわゆる「アジュバント成分」は、第１の工程に従って、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡをカチオン性またはポリカチオン性の化合物と特定の比で複合体化して、安定な複合体を形成することによって調製される。これに関連して、（ｍ）ＲＮＡを複合体化した後に、アジュバント成分中に、遊離のカチオン性またはポリカチオン性の化合物が存在しないか、残留していても無視できるほど少量であることが重要である。よって、アジュバント成分中の（ｍ）ＲＮＡおよびカチオン性またはポリカチオン性の化合物の比は、（ｍ）ＲＮＡが完全に複合体化され、組成物中に、遊離のカチオン性またはポリカチオン性の化合物が存在しないか、無視できるほど少量で残留しているという範囲で典型的に選択される。好ましくは、アジュバント成分の比（すなわち、（ｍ）ＲＮＡとカチオン性またはポリカチオン性の化合物との比）は、約６：１（ｗ／ｗ）〜約０．２５：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、より好ましくは約５：１（ｗ／ｗ）〜約０．５：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、さらに好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）〜約１：１（ｗ／ｗ）または約３：１（ｗ／ｗ）〜約１：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、最も好ましくは、約３：１（ｗ／ｗ）〜約２：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択される。
【００１９】
さらに、アジュバント成分中の（ｍ）ＲＮＡとカチオン性またはポリカチオン性の化合物との比は、完全なＲＮＡ複合体の窒素／リン酸の比（Ｎ／Ｐの比）に基づいて計算してもよい。例えば、ＲＮＡが塩基の統計的な分布を示す場合、１μｇのＲＮＡは典型的に約３ｎｍｏｌのリン酸残基を含んでいる。さらに、１μｇのペプチドは、分子量および塩基性アミノ酸の数に依存して、典型的に約ｘｎｍｏｌの窒素残基を含んでいる。（Ａｒｇ）９（分子量１４２４ｇ／ｍｏｌ、９個の窒素原子）について模範的に計算した場合、１μｇの（Ａｒｇ）９は約７００ｐｍｏｌの（Ａｒｇ）９を含んでいるため、７００×９＝６３００ｐｍｏｌの塩基性アミノ酸＝６．３ｎｍｏｌの窒素原子となる。ＲＮＡ：（Ａｒｇ）９が質量比で約１：１である場合、Ｎ／Ｐの比は約２と計算され得る。プロタミン（サケ由来のプロタミンを用いた場合、分子量約４２５０ｇ／ｍｏｌ、２１個の窒素原子）について約２：１の質量比で２μｇのＲＮＡを用いて模範的に計算する場合、２μｇのＲＮＡについて６ｎｍｏｌのリン酸が計算される。そして、１μｇのプロタミンは約２３５ｐｍｏｌのプロタミン分子を含んでいるため、２３５×２１＝４９３５ｐｍｏｌの塩基性の窒素原子＝４．９ｎｍｏｌの窒素原子となる。ＲＮＡとプロタミンとの質量比が約２：１である場合、Ｎ／Ｐの比は約０．８１と計算され得る。ＲＮＡとプロタミンとの質量比が約８：１である場合、Ｎ／Ｐの比は約０．２と計算され得る。本発明に関連して、複合体中のＲＮＡ：ペプチドの比に関して、Ｎ／Ｐの比は、約０．１〜１０の範囲であることが好ましく、約０．３〜４の範囲であることがより好ましく、約０．５〜２または０．７〜２の範囲であることが最も好ましく、約０．７〜１．５の範囲であることが最も好ましい。
【００２０】
本発明に関連して、カチオン性またはポリカチオン性の化合物は、複合体化させて、核酸（特に、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ）を安定化させることに適した任意のカチオン性またはポリカチオン性の化合物から選択されることが好ましい。このような複合体化は、例えば、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡをカチオン性またはポリカチオン性の化合物と会合させることによって実施される。このようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物自体は、任意のアジュバント性質を示す必要はない。なぜなら、好ましくは、アジュバント性質（特に、先天性の免疫応答を誘導できること）は、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとカチオン性またはポリカチオン性の化合物との複合体化によってもたらされるからである。少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとカチオン性またはポリカチオン性の化合物とが複合体化したとき、アジュバント成分が形成される。成分Ｐ２として特に好ましいカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質は、プロタミン、ヌクレオリン（ｎｕｃｌｅｏｌｉｎｅ）、スペルミンまたはスペルミジン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、塩基性ポリペプチド、ポリアルギニン、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰｓ）、キメラのＣＰＰｓ（トランスポータン（Ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ）など）またはＭＰＧペプチド、ＨＩＶに結合するペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔに由来するペプチド、オリゴアルギニン、ペネトラチン（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ）ファミリーのメンバー（例えば、ペネトラチン）、アンテナペディアに由来するペプチド（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉｓに由来するペプチド）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、など、抗菌剤に由来するＣＰＰｓ（例えば、ブホリン−２（Ｂｕｆｏｒｉｎ−２））、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴに由来するペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０、プロリンに富むペプチド、Ｌ−オリゴマー、アルギニンに富むペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアルギニン、ヒストン、ＶＰ２２に由来するペプチドまたはＶＰ２２の類似体ペプチド、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質の伝達ドメイン（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎｓ）（ＰＴＤｓ）、ＰｐＴ６２０、プロリンに富むペプチド、アルギニンに富むペプチド、リジンに富むペプチド、Ｐｅｐ−１、カルシトニンペプチドなどから選択され得る。さらに、好ましいカチオン性またはポリカチオン性のタンパク質またはペプチドは、以下の全体的な式：（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘを有する以下のタンパク質またはペプチドから選択され得る。ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５である。Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＯｒｎの全体的な含有量が上記オリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも５０％を表すという条件で、ｌ、ｍ、ｎまたはｏは、互いに独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５から選択される任意の数であり得る。Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎ以外のネイティブな（＝天然���存在する）またはネイティブでない、任意のアミノ酸から選択され得る。Ｘａａの全体的な含有量が上記オリゴペプチドの全アミノ酸の５０％を超えないという条件で、ｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、または８から選択される任意の数であり得る。これに関連して、特に好ましいオリゴアルギニンは、例えば、Ａｒｇ７、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ７、Ｈ３Ｒ９、Ｒ９Ｈ３、Ｈ３Ｒ９Ｈ３、ＹＳＳＲ９ＳＳＹ、（ＲＫＨ）４、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒなどである。上述したアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを複合体化するために用いることができるさらに好ましいカチオン性またはポリカチオン性の化合物としては、カチオン性の多糖類（例えば、キトサン）、ポリブレン、カチオン性のポリマー（例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ））、カチオン性の脂質（ＤＯＴＭＡ：［１−（２，３−シオレイルオキシ（ｓｉｏｌｅｙｌｏｘｙ））プロピル）］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド、ＤＭＲＩＥ、ジ−Ｃ１４−アミジン、ＤＯＴＩＭ、ＳＡＩＮＴ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ＢＧＴＣ、ＣＴＡＰ、ＤＯＰＣ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＰＥ：ジオレイルホスファチジルエタノールアミン、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＤＡＢ、ＤＯＩＣ、ＤＭＥＰＣ、ＤＯＧＳ：ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン、ＤＩＭＲＩ：ジミリストオキシプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロマイド、ＤＯＴＡＰ：ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン、ＤＣ−６−１４：Ｏ，Ｏ−ジテトラデカノイル−Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセチル）ジエタノールアミンクロライド、ＣＬＩＰ１：ｒａｃ−［（２，３−ジオクタデシルオキシプロピル）（２−ヒドロキシエチル）］−ジメチルアンモニウムクロライド、ＣＬＩＰ６：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシメチルオキシ）エチル］トリメチルアンモニウム、ＣＬＩＰ９：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシスクシニルオキシ）エチル］−トリメチルアンモニウム、オリゴフェクタミン）、あるいはカチオン性またはポリカチオン性のポリマー（例えば、修飾されたポリアミノ酸（β−アミノ酸のポリマーまたは逆転されたポリアミド（ｒｅｖｅｒｓｅｄ  ｐｏｌｙａｍｉｄｅｓ）など）、修飾されたポリエチレン（ＰＶＰ（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロマイド））など）、修飾されたアクリレート（ｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））など）、修飾されたアミドアミン（ｐＡＭＡＭ（ポリ（アミドアミン））など）、修飾されたポリベータアミノエステル（ＰＢＡＥ）（ジアミン末端が修飾された１，４ブタンジオールジアクリレート−コ−５−アミノ−１−ペンタノールポリマーなど）、デンドリマー（ポリプロピルアミンのデンドリマーまたはｐＡＭＡＭを基礎とするデンドリマーなど）、ポリイミン（ＰＥＩ：ポリ（エチレンイミン）、ポリ（プロピレンイミン）など）、ポリアリルアミン、糖の骨格を基礎とするポリマー（シクロデキストリンを基礎とするポリマー、デキストランを基礎とするポリマー、キトサンなど）、シランの骨格を基礎とするポリマー（ＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳのコポリマーなど）１個以���のカチオン性のブロック（例えば、上述したようなカチオン性のポリマーから選択されるもの）の組合せからなるブロックポリマー、１個以上の親水性または疎水性のブロック（ポリエチレングリコールなど）の組合せからなるブロックポリマーなどが挙げられ得る。好ましくは、本発明の免疫賦活組成物の修飾された（ｍ）ＲＮＡをカチオン性またはポリカチオン性の化合物と会合するか、複合体化することによって、この（ｍ）ＲＮＡにアジュバントの性質が提供される。そして、複合体化によって、アジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡに安定効果が付与される。修飾された（ｍ）ＲＮＡを安定化するための手法は、一般的に、ＥＰ−Ａ−１０８３２３２に記載されている（この開示は、その全体が参考として本発明に援用される。）。カチオン性またはポリカチオン性の化合物として特に好ましいものは、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン、スペルミジン、上述したオリゴアルギニン（Ａｒｇ７、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ７、Ｈ３Ｒ９、Ｒ９Ｈ３、Ｈ３Ｒ９Ｈ３、ＹＳＳＲ９ＳＳＹ、（ＲＫＨ）４、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒなど）などからなる群より選択される化合物である。
【００２１】
本発明に関連して、本発明の免疫賦活組成物の「アジュバント成分」の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、任意のＲＮＡであり得、好ましくは、短いＲＮＡオリゴヌクレオチド、コーディングＲＮＡ、免疫賦活性のＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、またはリボスイッチ、リボザイムもしくはアプタマーであり得るが、これらに限定されない。さらに、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、一本鎖ＲＮＡであってもよいし、二本鎖ＲＮＡであってもよい（この二本鎖ＲＮＡは、２つの一本鎖ＲＮＡ（分子）の非共有結合に起因して、ＲＮＡ（分子）としてみなされ得る。）。あるいは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、部分的に二本鎖のＲＮＡであってもよいし、部分的に一本鎖のＲＮＡであってもよい。このような部分的に二本鎖のＲＮＡおよび部分的に一本鎖のＲＮＡは、少なくとも部分的に自己相補的である（これらの部分的に二本鎖のＲＮＡ分子または部分的に一本鎖のＲＮＡ分子の両方は、典型的に、より長い一本鎖ＲＮＡ分子およびより短い一本鎖ＲＮＡ分子によって形成されるか、長さがほぼ等しい２つの一本鎖ＲＮＡ分子によって形成される。ここで、一方の一本鎖ＲＮＡ分子が他方の一本鎖ＲＮＡ分子に対して部分的に相補的であり、これらの一本鎖ＲＮＡの両方がこの領域にて二本鎖ＲＮＡ分子を形成する（すなわち、部分的に二本鎖のＲＮＡまたは部分的に一本鎖のＲＮＡ））。好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、一本鎖ＲＮＡであり得る。さらに、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、環状ＲＮＡであってもよいし、直鎖状ＲＮＡであってもよく、好ましくは直鎖状ＲＮＡであり得る。さらに好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、（直鎖状の）一本鎖ＲＮＡであり得る。アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、リボソーマルＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、またはウイルスのＲＮＡであり得、好ましくはｍＲＮＡであり得る。本発明は、これらのＲＮＡの全てが、単独でまたは組み合わされて、本発明の組成物の「アジュバント成分」の一部となることを可能にする。本発明に関連して、ｍＲＮＡは典型的に、いくつかの構造要素から構成されたＲＮＡである。構造要素としては、任意の５’−ＵＴＲ領域、上流に位置したリボソーマル結合領域、このリボソーマル領域に続くコード領域、任意の３’−ＵＴＲ領域（任意の３’−ＵＴＲ領域に続いてポリＡテール（および／またはポリＣテール）があり得る。）が挙げられる。ｍＲＮＡは、モノシストロニックなＲＮＡであってもよいし、ジシストロニックなＲＮＡであってもよいし、シストロニックなＲＮＡでさえもあってもよい。すなわち、ＲＮＡは、１個、２個、またはそれ以上のタンパク質またはペプチドのコーディング配列を保有している。モノシストロニックなＲＮＡ、ジシストロニックなＲＮＡまたはマルチシストロニックなｍＲＮＡにおけるこのようなコーディング配列は、例えば本明細書にて規定されるような少なくとも１個のＩＲＥＳ配列によって分離されていてもよい。
【００２２】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、約５〜約２０，０００個、または１００〜約２０，０００個のヌクレオチドの長さ、好ましくは約２５０〜約２０，０００個のヌクレオチドの長さ、より好ましくは約５００〜約１０，０００個のヌクレオチドの長さ、さらに好ましくは約５００〜約５，０００個のヌクレオチドの長さ、最も好ましくは約１００〜１０，０００個のヌクレオチドの長さまたは約１００〜５，０００個のヌクレオチドの長さを含んでいる。
【００２３】
第１の実施形態によれば、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、短いＲＮＡオリゴヌクレオチドであり得る。本発明に関連して、短いＲＮＡオリゴヌクレオチドは、上記にて規定したような任意のＲＮＡを含み得る。好ましくは、短いＲＮＡオリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のＲＮＡオリゴヌクレオチドであり得、より好ましくは、一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドであり得る。さらに好ましくは、短いＲＮＡオリゴヌクレオチドは、直鎖状の一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドであり得る。また、好ましくは、本明細書にて用いられるような短いＲＮＡオリゴヌクレオチドは、一般に、ＲＮＡ分子に関して上記にて規定したような長さを含み得、より好ましくは、５〜１００個のヌクレオチドの長さ、５〜５０個のヌクレオチドの長さ、３０の５個のヌクレオチドの長さ、さらに好ましくは２０〜１００個のヌクレオチドの長さ、２０〜８０個のヌクレオチドの長さ、または６０の２０個のヌクレオチドの長さを含み得る。
【００２４】
第２の実施形態によれば、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、免疫賦活性のＲＮＡ（すなわち、（先天性）免疫応答を誘発するか、増加させる、免疫賦活性のＲＮＡに由来するＲＮＡ）であり得る。好ましくは、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、一本鎖、二本鎖、部分的に二本鎖、または部分的に一本鎖のＲＮＡであり得、より好ましくは、一本鎖ＲＮＡであり得、および／あるいは環状または直鎖状のＲＮＡであり得、より好ましくは直鎖状ＲＮＡであり得る。より好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、（直鎖状の）一本鎖ＲＮＡであり得る。さらに好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、（（直鎖状の）一本鎖の）メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり得る。また、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、上記にて規定した短いＲＮＡオリゴヌクレオチドとして生じてもよい。さらに、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、天然に見出されるか、合成的に調製され、先天性の免疫応答を誘導することができる、任意のクラスのＲＮＡ分子から選択されてもよい。これに関連して、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分が、典型的に、先天性の免疫応答を誘発する一方で、本発明の免疫賦活組成物の遊離のｍＲＮＡが適応性の免疫応答を誘発し得ることが好ましい。これは、特に、この遊離のｍＲＮＡが、適応性の免疫応答を誘発することが可能な本明細書に記載したような抗原またはアレルゲン、あるいは任意のさらなる分子をコードする場合に当てはまる。特に、先天性の免疫応答を誘導することが可能なこれらのクラスのＲＮＡ分子は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲｓ）のリガンドから選択され得る。このように、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の免疫賦活性のＲＮＡは、免疫を賦活することが知られている任意のＲＮＡ配列を含んでいてもよい。このようなＲＮＡ配列としては、限定されないが、ＴＬＲｓのリガンドを表すおよび／またはコードするＲＮＡ配列、ＲＮＡの細胞内受容体のためのリガンドを表すおよび／またはコードするＲＮＡ配列（ＲＩＧ−ＩまたはＭＤＡ−５など）、あるいは他の任意の免疫賦活性のＲＮＡ配列が挙げられる（例えば、Ｍｅｙｌａｎ，  Ｅ．，  Ｔｓｃｈｏｐｐ，  Ｊ．  （２００６）．  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＲＮＡ  ｈｅｌｉｃａｓｅｓ：  ｔｗｏ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ｗａｙｓ  ｔｏ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ２２，  ５６１−５６９参照）。ＴＬＲｓは、好ましくは、ヒトのファミリーのメンバーであるＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０、またはマウスのファミリーのメンバーであるＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３から選択され、より好ましくは、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８から選択される。
【００２５】
典型的に、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして用いられる免疫賦活性のＲＮＡは、一般に、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分のＲＮＡのＲＮＡ分子に個いて、上記にて規定したような長さを含んでいてもよい。好ましくは、このＲＮＡは、１０００〜５０００個のヌクレオチドの長さ、５００〜５０００個のヌクレオチドの長さ、５〜５０００個のヌクレオチドの長さ、または５〜１０００個のヌクレオチドの長さ、５〜５００個のヌクレオチドの長さ、５〜２５０個のヌクレオチドの長さ、５〜１００個のヌクレオチドの長さ、５〜５０個のヌクレオチドの長さ、または５〜３０個のヌクレオチドの長さを有していてもよい。
【００２６】
このような免疫賦活性の配列は、例えば、式（Ｉ）：ＧｌＸｍＧｎの核酸を含んでいてもよい。
【００２７】
Ｇはグアノシン、ウラシル、あるいはグアノシンまたはウラシルの類似体である。
【００２８】
Ｘは、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシンまたは前述のヌクレオチドの類似体である。
【００２９】
ｌは１〜４０の整数である。ｌ＝１の場合、Ｇはグアノシンまたはその類似体である。ｌ＞１の場合、上記ヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシンまたはその類似体である。
【００３０】
ｍは、整数であり、少なくとも３である。ｍ＝３の場合、Ｘはウラシルまたはその類似体である。ｍ＞３の場合、少なくとも３個の連続したウラシルまたはウラシルの類似体が存在する。
【００３１】
ｎは１〜４０の整数である。ｎ＝１の場合、Ｇはグアノシンまたはその類似体である。ｎ＞１の場合、上記ヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシンまたはその類似体である。
【００３２】
また、このような免疫賦活性の配列は、例えば、式（ＩＩ）：ＣｌＸｍＣｎの核酸を含んでいてもよい。
【００３３】
Ｃは、シトシン、ウラシルあるいはシトシンまたはウラシルの類似体である。
【００３４】
Ｘは、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシンまたは前述のヌクレオチドの類似体である。
【００３５】
ｌは１〜４０の整数である。ｌ＝１の場合、Ｃはシトシンまたはその類似体である。ｌ＞１の場合、上記ヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシンまたはその類似体である。
【００３６】
ｍは整数であり、少なくとも３である。ｍ＝３の場合、Ｘはウラシルまたはその類似体である。ｍ＞３の場合、少なくとも３個の連続したウラシルまたはウラシルの類似体が存在する。
【００３７】
ｎは１〜４０の整数である。ｎ＝１の場合、Ｃはシトシンまたはその類似体である。ｎ＞１の場合、上記ヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシンまたはその類似体である。
【００３８】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡのために用いられ得る式（Ｉ）または（ＩＩ）の核酸は、典型的に、比較的短い核酸分子であり、典型的に、およそ５〜１００個のヌクレオチドの長さ（しかし、特定の実施形態については、１００個のヌクレオチドよりも長い（例えば最大２００個のヌクレオチドである）ことがあり得る。）、５〜９０個のヌクレオチドの長さまたは５〜８０個のヌクレオチドの長さ、好ましくはおよそ５〜７０個のヌクレオチドの長さ、より好ましくはおよそ８〜６０個のヌクレオチドの長さ、より好ましくはおよそ１５〜６０個のヌクレオチドの長さ、より好ましくは２０〜６０個のヌクレオチドの長さ、最も好ましくは３０〜６０個のヌクレオチドの長さを有している。本発明の核酸が例えば１００個のヌクレオチドという最大の長さを有している場合、ｍは典型的に９８以下となる。式（Ｉ）の核酸におけるヌクレオチドＧの数は、ｌまたはｎによって決定される。ｌおよびｎは、互いに独立して、それぞれ１〜４０の整数である。ｌまたはｎ＝１の場合、Ｇはグアノシンまたはその類似体である。ｌまたはｎ＞１の場合、上記ヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシンまたはその類似体である。例えば、如何なる限定を意図することなく、ｌまたはｎ＝４の場合、ＧｌまたはＧｎは、例えば、ＧＵＧＵ、ＧＧＵＵ、ＵＧＵＧ、ＵＵＧＧ、ＧＵＵＧ、ＧＧＧＵ、ＧＧＵＧ、ＧＵＧＧ、ＵＧＧＧまたはＧＧＧＧなどであり得、ｌまたはｎ＝５の場合、ＧｌまたはＧｎは、例えば、ＧＧＧＵＵ、ＧＧＵＧＵ、ＧＵＧＧＵ、ＵＧＧＧＵ、ＵＧＧＵＧ、ＵＧＵＧＧ、ＵＵＧＧＧ、ＧＵＧＵＧ、ＧＧＧＧＵ、ＧＧＧＵＧ、ＧＧＵＧＧ、ＧＵＧＧＧ、ＵＧＧＧＧ、またはＧＧＧＧＧなどであり得る。本発明に係る式（Ｉ）の核酸におけるＸｍに隣接したヌクレオチドは、ウラシルでないことが好ましい。同様に、本発明に係る式（ＩＩ）の核酸におけるヌクレオチドＣの数は、ｌまたはｎによって決定される。ｌおよびｎは、互いに独立して、それぞれ１〜４０の整数である。ｌまたはｎ＝１の場合、Ｃはシトシンまたはその類似体である。ｌまたはｎ＞１の場合、上記ヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシンまたはその類似体である。例えば、如何なる限定を意図することなく、ｌまたはｎ＝４の場合、ＣｌまたはＣｎは、例えば、ＣＵＣＵ、ＣＣＵＵ、ＵＣＵＣ、ＵＵＣＣ、ＣＵＵＣ、ＣＣＣＵ、ＣＣＵＣ、ＣＵＣＣ、ＵＣＣＣまたはＣＣＣＣなどであり得、ｌまたはｎ＝５の場合、ＣｌまたはＣｎは、例えば、ＣＣＣＵＵ、ＣＣＵＣＵ、ＣＵＣＣＵ、ＵＣＣＣＵ、ＵＣＣＵＣ、ＵＣＵＣＣ、ＵＵＣＣＣ、ＣＵＣＵＣ、ＣＣＣＣＵ、ＣＣＣＵＣ、ＣＣＵＣＣ、ＣＵＣＣＣ、ＵＣＣＣＣ、またはＣＣＣＣＣなどであり得る。本発明に係る式（ＩＩ）の核酸におけるＸｍに隣接したヌクレオチドは、ウラシルでないことが好ましい。好ましくは、式（Ｉ）に関し、ｌまたはｎ＞１の場合、ヌクレオチドの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または１００％でさえもが、上記にて規定したようなグアノシンまたはその類似体である。フランキング配列Ｇｌおよび／またはＧｎにおける１００％までの残りのヌクレオチド（グアノシンがヌクレオチドの１００％未満を構成している場合）は、上記にて規定したようなウラシルまたはその類似体である。また、ｌおよびｎは、互いに独立して、それぞれ２〜３０の整数であることが好ましく、２〜２０の整数であることがより好ましく、２〜１５の整数であることがさらに好ましい。ｌまたはｎの下限値は必要に応じて変更することができ、少なくとも１であり、少なくとも２であることが好ましく、少なくとも３、４、５、６、７、８、９または１０であることがより好ましい。この規定は、式（ＩＩ）にも同様に適用される。
【００３９】
特に好ましい実施形態によれば、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡのために用いられ得る、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）の何れかに係る核酸は、以下の配列のいずれかからなる配列から選択され得るか、または以下の配列のいずれかを含んでいる配列から選択され得る。
【００４０】
【数１】
2014196306.tif 000002
【００４１】
【数２】
2014196306.tif 000003
【００４２】
【数３】
2014196306.tif 000004
【００４３】
これに関連して、本願における用語「同一性」は、配列を参照配列と比較し、配列と参照配列とを比較することによって決定された同一性を示すパーセンテージを意味する。例えば、２つの核酸配列の同一性を示すパーセンテージを決定するためには、まず、これらの配列に対するその後の比較を行うことが可能になるように、これらの配列を互いに関連させて並べることができる（アライメント（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ））。これを行うために、例えば、第１の核酸配列の配列内にギャップを導入することができ、そして、ヌクレオチドを、第２の核酸配列の対応する位置と比較することができる。第１の核酸配列における位置を占めるヌクレオチドが、第２の配列における位置を占めるヌクレオチドと同一である場合、これらの２つの配列はこの位置において同一である。２つの配列間の同一性を示すパーセンテージは、同一な位置の数を配列によって除した関数である。例えば、特定の核酸を規定された長さを有する参照核酸と比較することについて、具体的な配列同一性を考えた場合、この同一性を示すパーセンテージは参照核酸に対して相対的に示される。それ故、例えば、ある核酸配列が１００ヌクレオチドの長さを有する参照核酸配列と５０％の配列同一性を有することを考えた場合、この核酸配列は、５０ヌクレオチドの長さを有する参照核酸配列の区分と完全に同一である５０ヌクレオチドの長さを有する核酸配列を表すことができる。しかしながら、これは、１００ヌクレオチドの長さを有する核酸配列が５０％の同一性を有していると表すこともできる。つまり、この場合、この核酸は、全長にわたって参照核酸配列と５０％同一である。また、この核酸配列は、２００ヌクレオチドの長さを有する核酸配列であってもよく、この場合、このような核酸配列は、１００ヌクレオチドの長さを有する核酸配列の区分において、１００ヌクレオチドの長さを有する参照核酸配列と完全に同一である。他の核酸配列も、当然に、これらの基準を同様に満たす。
【００４４】
２つの配列の同一性を示すパーセンテージの決定は、数学的なアルゴリズムを用いて実施することができる。２つの配列を比較するために用いることができる数学的なアルゴリズムの好ましいが非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３），  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，  ９０：５８７３−５８７７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＮＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれており、このプログラムを用いれば、本発明の配列と所望の同一性を有する配列を同定することができる。上述したようなギャップが導入されたアライメントを取得するためには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７），  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，  ２５：３３８９−３４０２に記載されたような「Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ」プログラムを用いることができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを用いる場合、特定のプログラム（例えばＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを用いることができる。さらに、配列は、ギャップを空けるペナルティーが−１２（ギャップの１番目の０に関する。）であり、ギャップを拡張するペナルティーが−４（ギャップにおけるさらなる連続した各ゼロに関する。）であるデフォルトの（ＢＬＯＳＵＭ６２）のマトリクス（値−４〜＋１１）を用いる、「ジェネティックコンピューティンググループ（Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）」からのＧＡＰ（グローバルアライメントプログラム）のバージョン９を用いて整列させることができる。アライメントの後、同一性を示すパーセンテージは、一致の数を、請求された配列における核酸のパーセンテージとして表すことによって計算される。２つの核酸配列の同一性を示すパーセンテージを決定するための記載した方法は、アミノ酸配列に対しても適切なプログラムを用いて同様に適用することができる。
【００４５】
さらに、上述した免疫賦活性の配列は、例えば、式（ＩＩＩ）：（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａの核酸（分子）を含んでいてもよい。
【００４６】
Ｇは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、あるいはグアノシン（グアニン）もしくはウリジン（ウラシル）の類似体であり、グアノシン（グアニン）またはその類似体であることが好ましい。
【００４７】
Ｘは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、またはこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体であり、ウリジン（ウラシル）またはその類似体であることが好ましい。
【００４８】
Ｎは、約４〜５０個の核酸の長さ、好ましくは約４〜４０個の核酸の長さ、より好ましくは約４〜３０個または４〜２０個の核酸の長さを有する核酸配列である。各Ｎは、独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体から選択される。
【００４９】
ａは、１〜２０の整数であり、１〜１５の整数であることが好ましく、１〜１０の整数であることが最も好ましい。
【００５０】
ｌは、１〜４０の整数である。ｌ＝１の場合、Ｇはグアノシン（グアニン）またはその類似体である。ｌ＞１の場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がグアノシン（グアニン）またはその類似体である。
【００５１】
ｍは整数であり、少なくとも３である。ｍ＝３の場合、Ｘはウリジン（ウラシル）またはその類似体である。ｍ＞３の場合、少なくとも３個の連続したウリジン（ウラシル）またはウリジン（ウラシル）の類似体が存在している。
【００５２】
ｎは１〜４０の整数である。ｎ＝１の場合、Ｇはグアノシン（グアニン）またはその類似体である。ｎ＞１の場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がグアノシン（グアニン）またはその類似体である。
【００５３】
ｕ、ｖは、互いに独立して、０〜５０の整数であり得る。好ましくは、ｕ＝０の場合、ｖ≧１であり得るか、ｖ＝０の場合、ｕ≧１であり得る。
【００５４】
式（ＩＩＩ）に係る免疫賦活性の配列は、少なくとも５０個のヌクレオチドの長さを有しており、少なくとも１００個のヌクレオチドの長さを有していることが好ましく、少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さを有していることがより好ましく、少なくとも２００個のヌクレオチドの長さを有していることがさらに好ましく、少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有していることが最も好ましい。
【００５５】
本発明に係る式（ＩＩＩ）の構造（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａは、コア構造として要素ＧｌＸｍＧｎを含んでおり、さらに、境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖを含んでいる。このＧｌＸｍＧｎは上記にて規定したようなものであることが好ましい。ここで、全体的な要素ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖは、整数ａによって決定されるように繰り返し存在し得る（すなわち、少なくとも１回、存在し得る）。本発明者らが驚くべき発見をしたように、式（ＩＩＩ）に係る分子（すなわち、上記にて規定したような構造（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａを有する分子）は、コア構造ＧｌＸｍＧｎ自体の投与と比べて増加された患者における先天性の免疫応答を引き起こす。この先天性の免疫応答の増加は、特に、ＩＦＮαの放出の増加によって示される。さらに、上記コア構造ＧｌＸｍＧｎを含んでいる分子は、式（ＩＩＩ）にて規定されたような反復性の要素Ｎｕおよび／またはＮｖによってこのコア構造ＧｌＸｍＧｎが隣接された場合、細菌生物にて顕著に良好な収率で増幅され得る。この分子設計は、核酸の具体的な大きさが典型的に制限されてしまう従来公知の固相合成法の代わりに、インビトロの転写法を用いることによって、上記にて規定された式（ＩＩＩ）の構造（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａに係る分子を調製する場合に、特に有利である。
【００５６】
式（ＩＩＩ）のコア構造ＧｌＸｍＧｎは、以下にてより詳細に規定される。式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）におけるＧは、ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドであるか、あるいはヌクレオシドを含んでいる。ここで、ヌクレオチド（ヌクレオシド）は、グアノシン（グアニン）もしくはウリジン（ウラシル）またはその類似体であり、グアノシン（グアニン）またはその類似体であることがより好ましい。これに関連して、グアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）ヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体は、天然に存在するヌクレオチド（ヌクレオシド）であるグアノシン（グアニン）およびウリジン（ウラシル）のネイティブに存在しないバリアントとして規定される。したがって、典型的に、グアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）の類似体は、ネイティブに存在しない官能基または成分によって化学的に誘導体化されたヌクレオチド（ヌクレオシド）である。ネイティブに存在しない官能基または成分は、天然に存在するグアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチドに付加されるか、該ヌクレオチドを修飾するか、該ヌクレオチドから除去されることが好ましい。あるいは、ネイティブに存在しない官能基または成分は、天然に存在するグアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチドの天然に存在する官能基または成分と置換される。したがって、天然に存在するグアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチドの各官能基または各成分（すなわち、オリゴヌクレオチドの骨格を形成する、塩基の成分、糖（リボース）の成分、任意の天然に存在する官能性の側鎖、および／またはリン酸の成分）は、修飾されてもよいし、このヌクレオチドから除去されてもよい。リン酸部分は、例えば、ホスホラミダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅｓ）、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、メチルホスホネートによって置換されてもよいが、本発明に関連して、天然に存在するホスホジエステル骨格がそれでも好ましい。さらに、糖（リボース）の成分は、デオキシリボース（ｄｅｓｏｘｙｒｉｂｏｓｅ）から選択され、特に、核酸が上記にて規定したようなＲＮＡであり、この場合、糖（リボース）の成分はデオキシリボース（ｄｅｓｏｘｙｒｉｂｏｓｅ）から選択される。
【００５７】
したがって、グアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）の類似体としては、如何なる限定を意図することなく、アセチル化、メチル化、ヒドロキシル化などによって化学的に変更された任意の天然に存在するまたは天然に存在しないグアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）が挙げられる。グアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）の類似体としては、例えば、１−メチル−グアノシン（グアニン）、２−メチル−グアノシン（グアニン）、２，２−ジメチル−グアノシン（グアニン）、７−メチル−グアノシン（グアニン）、ジヒドロ−ウリジン（ウラシル）、４−チオ−ウリジン（ウラシル）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、５−（カルボキシ−ヒドロキシルメチル）−ウリジン（ウラシル）、５−フルオロ−ウリジン（ウラシル）、５−ブロモ−ウリジン（ウラシル）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、Ｎ−ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッドメチルエステル、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メトキシアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、５’−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メトキシ−ウリジン（ウラシル）、ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッドメチルエステル、ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッド（ｖ）が挙げられる。このような類似体の調製は、米国特許第４，３７３，０７１号明細書、米国特許第４，４０１，７９６号明細書、米国特許第４，４１５，７３２号明細書、米国特許第４，４５８，０６６号明細書、米国特許第４，５００，７０７号明細書、米国特許第４，６６８，７７７号明細書、米国特許第４，９７３，６７９号明細書、米国特許第５，０４７，５２４号明細書、米国特許第５，１３２，４１８号明細書、米国特許第５，１５３，３１９号明細書、米国特許第５，２６２，５３０号明細書、および米国特許第５，７００，６４２号明細書から、当業者に公知である（なお、これらの開示は、その全体が、参考として本明細書に援用される。）。上述したような類似体の場合、式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）の免疫原性を増加させ、および／または導入されたさらなる修飾を妨害しない、類似体が特に優先される。少なくとも１個のグアノシン（グアニン）またはウリジン（ウラシル）あるいはそれらの類似体は、コア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎに存在し得る。必要に応じて、コア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチドの少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもが、天然に存在するグアノシン（グアニン）、天然に存在するウリジン（ウラシル）、および／またはそれらの類似体であり、および／または本明細書にて規定したようなそれらの類似体の性質を示す。好ましくは、コア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎは、天然に存在するグアノシン（グアニン）および／または天然に存在するウリジン（ウラシル）の類似体をとにかく少なくとも１個含んでいる。最も好ましくは、これらのコア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）の全ては類似体であり、これらの類似体は、同じ種類のヌクレオチド（ヌクレオシド）について同一の類似体であり得ることが最も好ましい（例えば、全てのグアノシン（グアニン）のヌクレオチドが１−メチル−グアノシン（グアニン）として提供される。）。あるいは、これらのコア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）の全ては、異なっていてもよい（例えば、少なくとも２個の異なるグアノシンの類似体が、天然に存在するグアノシンのヌクレオチドと置換されている。）。
【００５８】
式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）におけるコア構造の要素Ｇ（Ｇｌおよび／またはＧｎ）のヌクレオチド（ヌクレオシド）の数は、ｌおよびｎによって決定される。ｌおよびｎは、互いに独立して、それぞれ１〜１００、１〜９０、１〜８０、１〜７０、１〜６０、好ましくは１〜５０、さらに好ましくは１〜４０、さらにより好ましくは１〜３０の整数である。これらの範囲の下限値は１であり得るが、また、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０またはそれ以上であってもよい。好ましくは、それぞれの整数に関し、ｌおよび／またはｎ＝１の場合、はグアノシン（グアニン）またはその類似体であり、ｌまたはｎ＞０の場合、コア構造の要素Ｇ（Ｇｌおよび／またはＧｎ）のヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもがグアノシン（グアニン）またはその類似体である。例えば、如何なる限定を意図することなく、ｌまたはｎ＝４の場合、Ｇｌおよび／またはＧｎは、例えば、ＧＵＧＵ、ＧＧＵＵ、ＵＧＵＧ、ＵＵＧＧ、ＧＵＵＧ、ＧＧＧＵ、ＧＧＵＧ、ＧＵＧＧ、ＵＧＧＧまたはＧＧＧＧなどであり得る。ｌまたはｎ＝５の場合、Ｇｌおよび／またはＧｎは、例えば、ＧＧＧＵＵ、ＧＧＵＧＵ、ＧＵＧＧＵ、ＵＧＧＧＵ、ＵＧＧＵＧ、ＵＧＵＧＧ、ＵＵＧＧＧ、ＧＵＧＵＧ、ＧＧＧＧＵ、ＧＧＧＵＧ、ＧＧＵＧＧ、ＧＵＧＧＧ、ＵＧＧＧＧ、またはＧＧＧＧＧなどであり得る。式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）におけるＸｍに直接的に隣接したコア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、ウリジン（ウラシル）またはその類似体でないことが好ましい。式（ＩＩＩ）の核酸分子におけるＸｍに直接的に隣接したコア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、少なくとも１個のグアノシン（グアニン）またはその類似体であることが好ましく、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、または１９個、あるいは２０個以上ものグアノシン（グアニン）またはその類似体のストレッチ（stretch）であることがより好ましい。さらに、式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）においてＮ（例えば、Ｎｕおよび／またはＮｖ（あるいは以下にて規定するＮｗ１またはＮｗ２））に直接的に隣接したコア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチドは、ウリジン（ウラシル）またはその類似体でないことが好ましい。式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）においてＮ（例えば、Ｎｕおよび／またはＮｖ（あるいは以下にて規定するＮｗ１またはＮｗ２））に直接的に隣接したコア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチド（ヌクレシド）は、少なくとも１個のグアノシン（グアニン）またはその類似体であることがより好ましく、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３��１４、１５、１６、１７、１８、または１９個、あるいは２０個以上ものグアノシン（グアニン）またはその類似体のストレッチであることがより好ましい。
【００５９】
式（ＩＩＩ）（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ））に関し、同様に、ｌまたはｎ＞１の場合、コア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０、または１００％でさえもが、上記にて規定したようなグアノシン（グアニン）またはその類似体であることが好ましい。コア構造の要素Ｇｌおよび／またはＧｎにおける１００％までの残りのヌクレオチド（ヌクレオシド）（グアノシン（グアニン）が、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の１００％未満を構成している場合）は、上記にて規定したようなウリジン（ウラシル）またはその類似体であり得る。
【００６０】
また、式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）におけるＸ（特にＸｍ）もコア構造の要素であり、ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドであるか、ヌクレオシドを含んでいる。ここで、このヌクレオチド（ヌクレオシド）は、典型的に、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、またはそれらの類似体から選択され、ウリジン（ウラシル）またはその類似体から選択されることが好ましい。これに関連して、ヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体は、天然に存在するヌクレオチド（ヌクレオシド）のネイティブに存在しないバリアントとして規定される。したがって、類似体は、ネイティブに存在しない官能基によって化学的に誘導体化されたヌクレオチド（ヌクレオシド）である。ネイティブに存在しない官能基は、天然に存在するヌクレオチド（ヌクレオシド）に付加されるか、該ヌクレオチドから除去されることが好ましく、あるいは、ヌクレオチド（ヌクレオシド）の天然に存在する官能基と置換される。したがって、天然に存在するヌクレオチドの各成分（すなわち、オリゴヌクレオチドの骨格を形成する、塩基の成分、糖（リボースまたはデオキシリボース）の成分、および／またはリン酸の成分）は、修飾され得る。リン酸部分は、例えば、ホスホラミダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅｓ）、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、メチルホスホネートによって置換されてもよいが、天然に存在するホスホジエステル骨格がそれでも好ましい。免疫賦活性の配列が少なくとも１個の類似体をとにかく含んでいる場合、全ての「Ｘ」のヌクレオチドの好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％が、本明細書にて規定したような類似体の性質を示し得る。コア構造の要素“Ｘｍ”内の特定のタイプのヌクレオチドを置換する類似体は、同一であってもよいし（例えば、コア構造の要素“Ｘｍ”に存在する全てのシチジン（シトシン）のヌクレオチド（ヌクレオシド）は、特定のシチジン（シトシン）の類似体（例えば２−チオ−シチジン（シトシン）によって形成される。）、特定のヌクレオチド（ヌクレオシド）について異なっていてもよい（例えば、少なくとも２個の異なるシチジン（シトシン）の類似体が、コア構造の要素“Ｘｍ”内に含まれる。）。
【００６１】
グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）の類似体としては、如何なる限定を意図しないが、アセチル化、メチル化、ヒドロキシル化などによって化学的に変更された任意の天然に存在するまたは天然に存在しないグアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）またはシチジン（シトシン）が挙げられる。グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）の類似体としては、１−メチル−アデノシン（アデニン）、２−メチル−アデノシン（アデニン）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（アデニン）、Ｎ６−メチル−アデノシン（アデニン）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（アデニン）、２−チオ−シチジン（シトシン）、３−メチル−シチジン（シトシン）、４−アセチル−シチジン（シトシン）、２，６−ジアミノプリン、１−メチル−グアノシン（グアニン）、２−メチル−グアノシン（グアニン）、２，２−ジメチル−グアノシン（グアニン）、７−メチル−グアノシン（グアニン）、イノシン、１−メチル−イノシン、ジヒドロ−ウリジン（ウラシル）、４−チオ−ウリジン（ウラシル）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）−ウリジン（ウラシル）、５−フルオロ−ウリジン（ウラシル）、５−ブロモ−ウリジン（ウラシル）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、Ｎ−ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッドメチルエステル、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メトキシアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、５’−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メトキシ−ウリジン（ウラシル）、ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッドメチルエステル、ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッド（ｖ）、ケオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、ベータ−Ｄ−マンノシル−ケオシン、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、およびイノシンが挙げられる。このような類似体の調製は、米国特許第４，３７３，０７１号明細書、米国特許第４，４０１，７９６号明細書、米国特許第４，４１５，７３２号明細書、米国特許第４，４５８，０６６号明細書、米国特許第４，５００，７０７号明細書、米国特許第４，６６８，７７７号明細書、米国特許第４，９７３，６７９号明細書、米国特許第５，０４７，５２４号明細書、米国特許第５，１３２，４１８号明細書、米国特許第５，１５３，３１９号明細書、米国特許第５，２６２，５３０号明細書、および米国特許第５，７００，６４２号明細書から、当業者に公知である。上述したような類似体の場合、式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）の免疫原性を増加させ、および／または導入されたさらなる修飾を妨害しない、類似体が特に優先される。
【００６２】
式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）におけるコア構造の要素Ｘの数は、ｍによって決定される。ｍは整数であり、典型的には、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、またはそれ以上でさえもある。ｍ＝３の場合、Ｘはウリジン（ウラシル）またはその類似体であり、ｍ＞３の場合、少なくとも３またはそれ以上の直接的に連続したウリジン（ウラシル）またはその類似体が、上記式（ＩＩＩ）の要素Ｘ（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の要素Ｘ）に存在する。少なくとも３またはそれ以上の直接的に連続したウリジン（ウラシル）のこのような配列は、本願に関連して、「単調なウリジン（ウラシル）の配列」と称する。単調なウリジン（ウラシル）の配列は、典型的に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９または１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００個のウリジン（ウラシル）（または必要に応じて、上記にて規定したようなウリジン（ウラシル）の類似体）の長さを有している。このような単調なウリジン（ウラシル）の配列は、式（ＩＩＩ）の核酸分子（ならびに式（Ｉ）および（ＩＩ）の核酸分子）のコア構造の要素Ｘにおいて少なくとも１回存在している。それ故、少なくとも３個またはそれ以上のウリジン（ウラシル）またはその類似体を有する単調なウリジン（ウラシル）の配列が、例えば１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上存在することが可能である。この場合、単調なウリジン（ウラシル）の配列は、少なくとも１個、好ましくは２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のグアノシン（グアニン）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはそれらの類似体によってコア構造の要素Ｘにおいて中断されてもよい。例えば、ｍ＝３の場合、ＸｍはＵＵＵである。ｍ＝４の場合、Ｘｍは例えば如何なる限定を意図することなく、ＵＵＵＡ、ＵＵＵＧ、ＵＵＵＣ、ＵＵＵＵ、ＡＵＵＵ、ＧＵＵＵまたはＣＵＵＵなどであり得る。Ｎ＝１０の場合、Ｘｍは例えば如何なる限定を意図することなく、ＵＵＵＡＡＵＵＵＵＣ、ＵＵＵＵＧＵＵＵＵＡ、ＵＵＵＧＵＵＵＧＵＵ、ＵＵＧＵＵＵＵＧＵＵ、ＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵなどであり得る。式（ＩＩＩ）の核酸分子のＧｌまたはＧｎに隣接したＸｍのヌクレオチドは、ウリジン（ウラシル）またはその類似体を含んでいることが好ましい。ｍ＞３の場合、Ｘｍのヌクレオチドの少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもが、上記にて規定したようなウリジン（ウラシル）またはその類似体である。１００％までのＸｍの残りのヌクレオチドは（配列Ｘｍにおいて、ウリジン（ウラシル）が１００％未満である場合）、上記にて規定したような、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはそれらの類似体である。
【００６３】
また、上記式（ＩＩＩ）に係る免疫賦活性の配列も、境界を成す要素（ｂｏｒｄｅｒｉｎｇ  ｅｌｅｍｅｎｔ）Ｎを含んでいる。境界を成す要素Ｎは、典型的に、約４〜５０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さ、好ましくは約４〜４０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さ、より好ましくは約４〜３０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さ、さらに好ましくは約４〜２０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さを有する核酸配列であるが、これらの範囲の下限値は、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上であってもよい。好ましくは、各Ｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）および／またはそれらの類似体から選択される。換言すれば、本発明に係る式（ＩＩＩ）の核酸分子における境界を成す要素Ｎは、従来技術において利用可能な任意の（無作為的な）配列から構成されていてもよく、各Ｎは独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）および／またはこれらのヌクレオチドの類似体から選択されるか、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）のホモポリマーから選択される。どちらの場合においても、このような配列は、上記の定義に照らして、約４〜５０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さ、好ましくは約４〜４０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さ、より好ましくは約４〜３０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さ、さらに好ましくは約４〜３０個または４〜２０個のヌクレオチド（ヌクレオシド）の長さを有している。
【００６４】
具体的な実施形態によれば、Ｎは上記規定の範囲内の核酸配列であり得る。この核酸配列は、典型的には、直接隣接する位置に上記にて規定したような２個以下の同一なヌクレオチド（ヌクレオシド）を含んでいる。換言すれば、この核酸配列は、アデノシン（アデニン）、シチジン（シトシン）、ウリジン（ウラシル）および／またはグアノシン（グアニン）および／またはそれらの類似体から選択される、２個よりも多くの同一なヌクレオチド（ヌクレオシド）のストレッチを含んでいない（すなわち、「ａａ」、「ｃｃ」、「ｕｕ」、「ｇｇ」および／またはそれらの類似体のストレッチを含んでいる。）。この配列は、このような領域を含んでいないことが好ましい（すなわち、直接隣接する位置に上記にて規定したような同一のヌクレオチド（ヌクレオシド）を含んでいない。）。さらにまたは代替的に、Ｎは上記規定の範囲内の核酸配列であって、この核酸配列は、典型的に、アデノシン（アデニン）またはその類似体、ウリジン（ウラシル）またはその類似体、シチジン（シトシン）またはその類似体、グアノシン（グアニン）またはその類似体を以下の含有量で含んでいてもよい。アデノシン（アデニン）またはその類似体の含有量は、約０〜５０％、５〜４５％または１０〜４０％であることが好ましく、約１５〜３５％であることがより好ましく、約２０〜３０％であることがさらにより好ましく、約２５％であることが最も好ましい。ウリジン（ウラシル）またはその類似体の含有量は、約０〜５０％、５〜４５％または１０〜４０％であることが好ましく、約１５〜３５％であることがより好ましく、約２０〜３０％であることがさらにより好ましく、約２５％であることが最も好ましい。シチジン（シトシン）またはその類似体の含有量は、約０〜５０％、５〜４５％または１０〜４０％であることが好ましく、約１５〜３５％であることがより好ましく、約２０〜３０％であることがさらにより好ましく、約２５％であることが最も好ましい。グアノシン（グアニン）またはその類似体の含有量は、約０〜５０％、５〜４５％または１０〜４０％であることが好ましく、約１５〜３５％であることがより好ましく、約２０〜３０％であることがさらにより好ましく、約２５％であることが最も好ましい。最も好ましくは、Ｎは上記規定の範囲内の核酸配列であって、この核酸配列は典型的に、アデノシン（アデニン）、グアノシン（グアニン）、シチジン（シトシン）、およびウリジン（ウラシル）をそれぞれ約２５％の含有量で含んでいてもよい。Ｎのこのような配列の例としては、例えば、ａｇｃｕ、ａｇｕｃ、ａｕｇｃ、ａｃｇｕ、ｇｃｕａ、ｇｃａｕ、ｇａｃｕ、ｇｕｃａ、ｃｕａｇ、ｃａｕｇ、ｃａｇｕ、ｃｇａｕ、ｕａｇｃ、ｕａｃｇ、ｕｃｇａ、ｕｃａｇ、ａｇｃｕｇｃｕａ、ｇｃａｕｃａｕｇ、ｃａｇｕｕｃｇａなどが挙げられる。
【００６５】
式（ＩＩＩ）の核酸分子における境界を成す要素Ｎの数（すなわち、その繰返し）は、整数ｕおよび／またはｖによって決定される。このため、式（ＩＩＩ）の核酸分子におけるＮは、（反復性の）境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖとして存在し得る。ｕおよび／またはｖは、互いに独立して、０または１〜１００であり、０または１〜５０であることがより好ましく、０または１〜４０であることがさらにより好ましく、０または１〜３０であることが最も好ましく、例えば、０または１〜５、１０、２０、２５、または３０であるか、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５または２５〜３０である。より好ましくは、（反復性の）境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖは、式（ＩＩＩ）において、少なくとも１個存在し得る。すなわち、ｕまたはｖのどちらか一方が０ではない。より好ましくは、（反復性の）境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖは、式（ＩＩＩ）において両方とも存在する。さらにより好ましくは、（反復性の）境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖの両方は、式（ＩＩＩ）において、上記規定にて存在し得る。
【００６６】
さらに、要素ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖに関するコア構造の要素と境界を成す要素との組合せは、上記にて規定したような式（ＩＩＩ）（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａの免疫賦活性の配列に準じて反復性の要素として存在し得る。式（ＩＩＩ）（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａに係る組み合わされた要素の反復の数は、整数ａによって決定される。ａは、約１〜１００、１〜５０、１〜２０の整数であることが好ましく、約１〜１５の整数であることがより好ましく、約１〜１０の整数であることが最も好ましい。これに関連して、反復性の要素ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖは互いに等しくてもよいし、異なっていてもよい。
【００６７】
特に好ましい実施形態によれば、上記にて規定したような式（ＩＩＩ）（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａの免疫賦活性の配列は、上記にて規定したような配列番号１〜８０に示す以下の配列の少なくとも１個から選択されることが好ましいコア構造ＧｌＸｍＧｎを含んでいる。
【００６８】
さらに、本明細書にて規定したような免疫賦活性の配列は、例えば、式（ＩＩＩａ）の核酸（分子）：（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａも含み得る。
【００６９】
Ｃは、シチジン（シトシン）、ウリジン（ウラシル）またはシチジン（シトシン）もしくはウリジン（ウラシル）の類似体であり、シチジン（シトシン）またはその類似体であることが好ましい。
【００７０】
Ｘは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）あるいは前述のヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体であり、ウリジン（ウラシル）またはその類似体であることが好ましい。
【００７１】
Ｎはそれぞれ、約４〜５０の長さの核酸、好ましくは約４〜４０の長さの核酸、より好ましくは約４〜３０または４〜２０の長さの核酸を互いに独立して有する核酸配列である。各Ｎは、独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体から選択される。
【００７２】
ａは、１〜２０の整数であり、１〜１５の整数であることが好ましく、１〜１０の整数であることが最も好ましい。
【００７３】
ｌは、１〜４０の整数である。ｌ＝１の場合、Ｃは、シチジン（シトシン）またはその類似体である。ｌ＞１の場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％が、シチジン（シトシン）またはその類似体である。
【００７４】
ｍは整数であり、少なくとも３である。ｍ＝３の場合、Ｘはウリジン（ウラシル）またはその類似体である。ｍ＞３の場合、少なくとも３個の連続したウリジン（ウラシル）またはウリジン（ウラシル）の類似体が存在している。
【００７５】
ｎは１〜４０の整数である。ｎ＝１の場合、Ｃはシチジン（シトシン）またはその類似体である。ｎ＞１の場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がシチジン（シトシン）またはその類似体である。
【００７６】
ｕ、ｖは、互いに独立して、０〜５０の整数であり得る。好ましくは、ｕ＝０の場合、ｖ≧１であり得るか、ｖ＝０の場合、ｕ≧１であり得る。
【００７７】
式（ＩＩＩａ）の核酸分子は、少なくとも５０個のヌクレオチドの長さを有しており、少なくとも１００個のヌクレオチドの長さを有していることが好ましく、少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さを有していることがより好ましく、少なくとも２００個のヌクレオチドの長さを有していることがさらに好ましく、少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有していることが最も好ましい。
【００７８】
式（ＩＩＩａ）に関し、要素Ｎ（すなわち、ＮｕおよびＮｖ）および要素Ｘ（Ｘｍ）、特に上記にて規定したようなコア構造に対して与えられた上記規定のいずれか、ならびに整数ａ、整数ｌ、整数ｍ、整数ｎ、整数ｕ、および整数ｖに対して与えられた上記規定のいずれかは、式（ＩＩＩａ）の要素に対応して同様に適用される。なお、式（ＩＩＩａ）において、コア構造はＣｌＸｍＣｎによって規定されている。境界を成す要素ＮｕおよびＮｖの定義は、ＮｕおよびＮｖに対して与えられた上記定義と同一である。
【００７９】
より特別に、式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるＣは、ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドであるか、あるいはヌクレオシドを含んでいる。このヌクレオチド（ヌクレオシド）は、典型的に、シチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）あるいはそれらの類似体である。これに関連して、シチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチドの類似体は、天然に存在するシチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチドのネイティブに存在しないバリアントとして規定される。よって、シチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）の類似体は、ネイティブに存在しない官能基によって化学的に誘導体化されたヌクレオチド（ヌクレオシド）である。ネイティブに存在しない官能基は、天然に存在するシチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチド（ヌクレオシド）に付加されるか、該ヌクレオチド（ヌクレオシド）から除去されることが好ましく、あるいはシチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチド（ヌクレオシド）の天然に存在する官能基と置換される。したがって、天然に存在するシチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）のヌクレオチドの各成分（すなわち、オリゴヌクレオチドの骨格を形成する、塩基の成分、糖（リボース）の成分、および／またはリン酸の成分）は、修飾され得る。リン酸部分は、例えば、ホスホラミダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅｓ）、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、メチルホスホネートによって置換されてもよいが、天然に存在するホスホジエステル骨格がそれでも好ましい。
【００８０】
したがって、シチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）の類似体としては、如何なる限定を意図しないが、アセチル化、メチル化、ヒドロキシル化などによって化学的に変更された任意の天然に存在するまたは天然に存在しないシチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）が挙げられる。シチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）の類似体としては、例えば、２−チオ−シチジン（シトシン）、３−メチル−シチジン（シトシン）、４−アセチル−シチジン（シトシン）、ジヒドロ−ウリジン（ウラシル）、４−チオ−ウリジン（ウラシル）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、５−（カルボキシ−ヒドロキシルメチル）−ウリジン（ウラシル）、５−フルオロ−ウリジン（ウラシル）、５−ブロモ−ウリジン（ウラシル）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、Ｎ−ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッドメチルエステル、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メトキシアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ウラシル）、５’−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ウラシル）、５−メトキシ−ウリジン（ウラシル）、ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッドメチルエステル、ウリジン（ウラシル）−５−オキシアセチックアシッド（ｖ）が挙げられる。このような類似体の調製は、米国特許第４，３７３，０７１号明細書、米国特許第４，４０１，７９６号明細書、米国特許第４，４１５，７３２号明細書、米国特許第４，４５８，０６６号明細書、米国特許第４，５００，７０７号明細書、米国特許第４，６６８，７７７号明細書、米国特許第４，９７３，６７９号明細書、米国特許第５，０４７，５２４号明細書、米国特許第５，１３２，４１８号明細書、米国特許第５，１５３，３１９号明細書、米国特許第５，２６２，５３０号明細書、および米国特許第５，７００，６４２号明細書から、当業者に公知である（なお、これらの開示は、その全体が、参考として本明細書に援用される。）。上述したようなヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体の場合、式（ＩＩＩａ）の核酸分子の免疫原性を増加させ、および／または導入されたさらなる修飾を妨害しない、類似体が特に優先される。少なくとも１個の、シチジン（シトシン）またはウリジン（ウラシル）あるいはそれらの類似体は、コア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎに存在し得る。必要に応じて、コア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｌのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもが、天然に存在するシチジン（シトシン）、天然に存在するウリジン（ウラシル）、および／またはそれらの類似体であり、および／または本明細書にて規定したようなそれらの類似体の性質を示す。好ましくは、コア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎは、天然に存在するシチジン（シトシン）および／または天然に存在するウリジン（ウラシル）の類似体をとにかく少なくとも１個含んでいる。最も好ましくは、これらのコア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）の全ては類似体であり、これらの類似体は、同じ種類のヌクレオチド（ヌクレオシド）について同一の類似体であり得ることが最も好ましい（例えば、全てのシチジン（シトシン）のヌクレオチドが２−チオ−シチジン（シトシン）として提供される。）。あるいは、これらのコア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）の全ては、異なっていてもよい（例えば、少なくとも２個の異なるシチジン（シトシン）の類似体が、天然に存在するシチジン（シトシン）のヌクレオチドと置換されている。）。
【００８１】
式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるコア構造の要素Ｃ（Ｃｌおよび／またはＣｎ）のヌクレオチド（ヌクレオシド）の数は、ｌおよびｎによって決定される。ｌおよびｎは、互いに独立して、それぞれ１〜９０、１〜８０、１〜７０、１〜６０であり、１〜５０であることが好ましく、１〜４０であることがより好ましく、１〜３０であることがより一層好ましい。これらの範囲の下限値は、１であってもよいが、１の代わりに２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれ以上であってもよい。より好ましくは、各整数に関し、ｌおよび／またはｎ＝１の場合、Ｃはシチジン（シトシン）またはその類似体であり、ｌまたはｎ＞１の場合、コア構造の要素Ｃ（Ｃｌおよび／またはＣｎ）のヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもが、シチジン（シトシン）またはその類似体である。例えば、如何なる限定を意図することなく、ｌまたはｎ＝４の場合、Ｃｌおよび／またはＣｎは、例えば、ＣＵＣＵ、ＣＣＵＵ、ＵＣＵＣ、ＵＵＣＣ、ＣＵＵＣ、ＣＣＣＵ、ＣＣＵＣ、ＣＵＣＣ、ＵＣＣＣまたはＣＣＣＣなどであり得る。ｌまたはｎ＝５の場合、Ｃｌおよび／またはＣｎは、例えば、ＣＣＣＵＵ、ＣＣＵＣＵ、ＣＵＣＣＵ、ＵＣＣＣＵ、ＵＣＣＵＣ、ＵＣＵＣＣ、ＵＵＣＣＣ、ＣＵＣＵＣ、ＣＣＣＣＵ、ＣＣＣＵＣ、ＣＣＵＣＣ、ＣＵＣＣＣ、ＵＣＣＣＣ、またはＣＣＣＣＣなどであり得る。式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるＸｍに直接的に隣接するコア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、ウリジン（ウラシル）またはその類似体でないことが好ましい。より好ましくは、式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるＸｍに直接的に隣接するコア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、少なくとも１個のシチジン（シトシン）またはその類似体であり、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、または１９個、あるいは２０個以上ものシチジン（シトシン）またはその類似体のストレッチであることがより好ましい。さらに、式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるＮ（例えば、Ｎｕおよび／またはＮｖ（あるいは、以下にて規定するようなＮｗ１またはＮｗ２）に直接的に隣接するコア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、ウリジン（ウラシル）またはその類似体でないことが好ましい。より好ましくは、式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるＮ（例えば、Ｎｕおよび／またはＮｖ（あるいは、以下にて規定するようなＮｗ１またはＮｗ２）に直接的に隣接するコア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、少なくとも１個のシチジン（シトシン）またはその類似体であり、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、または１９個、あるいは２０個以上ものシチジン（シトシン）またはその類似体のストレッチであることがより好ましい。同様に、式（ＩＩＩａ）に関し、ｌまたはｎ＞１の場合、コア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎのヌクレオチドの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもが、上記にて規定したようなシチジン（シトシン）またはその類似体であることが好ましい。コア構造の要素Ｃｌおよび／またはＣｎにおいて１００％までの残りのヌクレオチド（ヌクレオシド）は（シチジン（シトシン）が、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の１００％未満を構成している場合）、上記にて規定したようなウリジン（ウラシル）またはその類似体であってもよい。
【００８２】
式（ＩＩＩａ）に係る免疫賦活性の配列におけるさらなるコア構造の要素としてのＸ（特にＸｍ）は、式（ＩＩＩ）に関して上記にて規定したようなものであることが好ましい。式（ＩＩＩａ）の核酸分子におけるコア構造の要素Ｘの数は、ｍによって決定される。ｍは整数であり、典型的に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、またはそれ以上である。ｍ＝３の場合、Ｘはウリジン（ウラシル）またはその類似体である。ｍ＞３の場合、少なくとも３またはそれ以上の直接的に連続したウリジン（ウラシル）またはその類似体が、上記式（ＩＩＩａ）の要素Ｘに存在する。少なくとも３またはそれ以上の直接的に連続したウリジン（ウラシル）のこのような配列は、本願に関連して、「単調なウリジン（ウラシル）の配列」と称する。単調なウリジン（ウラシル）の配列は、典型的に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９または１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００個のウリジン（ウラシル）（または必要に応じて、上記にて規定したようなウリジン（ウラシル）の類似体）の長さを有している。このような単調なウリジン（ウラシル）の配列は、式（ＩＩＩａ）の核酸分子のコア構造の要素Ｘにおいて少なくとも１回存在している。それ故、少なくとも３個またはそれ以上のウリジン（ウラシル）またはその類似体を有する単調なウリジン（ウラシル）の配列が、例えば１、２、３、４、５個、またはそれ以上存在することが可能である。この場合、単調なウリジン（ウラシル）の配列は、少なくとも１個、好ましくは２、３、４、５個、またはそれ以上のグアノシン（グアニン）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはそれらの類似体によってコア構造の要素Ｘにおいて中断されてもよい。例えば、ｍ＝３の場合、ＸｍはＵＵＵである。ｍ＝４の場合、Ｘｍは、例えば、如何なる限定を意図することなく、ＵＵＵＡ、ＵＵＵＧ、ＵＵＵＣ、ＵＵＵＵ、ＡＵＵＵ、ＧＵＵＵまたはＣＵＵＵなどであり得る。Ｎ＝１０の場合、Ｘｍは、例えば如何なる限定を意図することなく、ＵＵＵＡＡＵＵＵＵＣ、ＵＵＵＵＧＵＵＵＵＡ、ＵＵＵＧＵＵＵＧＵＵ、ＵＵＧＵＵＵＵＧＵＵ、ＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵなどであり得る。式（ＩＩＩａ）の核酸分子のＣｌまたはＣｎに隣接するＸｍのヌクレオチド（ヌクレオシド）は、ウリジンまたはその類似体を含んでいることが好ましい。ｍ＞３の場合、典型的に、Ｘｍのヌクレオチドの少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％でさえもが、上記にて規定したようなウリジン（ウラシル）またはその類似体である。１００％までのＸｍの残りのヌクレオチドは（配列Ｘｍにおいて、ウリジン（ウラシル）が１００％未満である場合）、上記にて規定したような、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはそれらの類似体であり得る。
【００８３】
同様に、上記式（ＩＩＩａ）に係る免疫賦活性の配列も、境界を成す要素Ｎ（特に、Ｎｕおよび／またはＮｖ）を含んでいる。境界を成す要素Ｎ（特に、Ｎｕおよび／またはＮｖ）および整数ｘおよびｙは、上記にて規定したようなものである。
【００８４】
要素ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖは、上記にて規定したような式（ＩＩＩａ）（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａの免疫賦活性の配列に係る反復性の要素として存在し得る。式（ＩＩＩａ）（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａに係るこの要素の反復の数は、整数ａによって決定される。ａは、約１〜１００、１〜５０、１〜２０の整数であることが好ましく、約１〜１５の整数であることがより好ましく、約１〜１０の整数であることが最も好ましい。これに関連して、反復性の要素ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖは互いに等しくてもよいし、異なっていてもよい。
【００８５】
特に好ましい実施形態によれば、式（ＩＩＩａ））（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａの免疫賦活性の配列は、コア構造ＣｌＸｍＣｎを含んでいる。コア構造ＣｌＸｍＣｎは、上記にて規定したような配列番号８１〜８３で示される以下の配列の少なくとも１個から選択されることが好ましい。
【００８６】
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列（特に、１個の反復性の要素ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ（またはＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ））は、式（ＩＩＩ）に関して一般的に規定されたような、一本鎖、二本鎖、または部分的に二本鎖などであってもよい。
【００８７】
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列が一本鎖の核酸分子である場合、この配列は、典型的に、その全長にわたって一本鎖である。
【００８８】
同様に、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列が二本鎖の核酸分子である場合、この配列は、典型的に、その全長にわたって二本鎖である。
【００８９】
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列が、部分的に二本鎖の核酸分子である場合、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかの核酸分子の核酸配列は、コア構造ＧｌＸｍＧｎ（またはＣｌＸｍＣｎ）の外側の領域にて一本鎖であり、かつこのコア構造の内側にて二本鎖であり得る。コア構造ＧｌＸｍＧｎ（またはＣｌＸｍＣｎ）は、上記にて規定した配列番号１〜８３の配列の少なくとも１個から選択されることが好ましい。より一層好ましくは、式（ＩＩＩ）（または式（ＩＩＩａ））の（どちらか）のコア構造ＧｌＸｍＧｎ（コア構造ＣｌＸｍＣｎ）は、コア構造のこのような領域において二本鎖であり得、ウリジン（ウラシル）のストレッチが、全長のウリジン（ウラシル）のストレッチにわたって存在するか、全長のウリジン（ウラシル）のストレッチの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％にわたって存在することが最も好ましい。
【００９０】
代替的にまたはさらに、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列が、部分的に二本鎖の核酸分子である場合、上記にて規定されたような式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）に係る免疫賦活性の配列の（コア構造ＧｌＸｍＧｎ以外の）他の部分は、二本鎖であり得る。例えば、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかの核酸分子の核酸配列は、コア構造ＧｌＸｍＧｎ（またはＣｌＸｍＣｎ）の外側の領域（例えば、境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖ）にて二本鎖であり得、このコア構造の領域にて一本鎖であり得る。このコア構造ＧｌＸｍＧｎ（またはＣｌＸｍＣｎ）は、上記にて規定した配列番号１〜８３の配列の少なくとも１個から選択されることが好ましい。例えば、境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖの少なくとも１個が二本鎖であり得る一方、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかの残りの要素（例えば、コア構造ＧｌＸｍＧｎおよび／または他の要素）は一本鎖のままであり得る。
【００９１】
代替的にまたはさらに、式（ＩＩＩ）に係る免疫賦活性の配列は、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る一本鎖の核酸分子と、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）のどちらかに係る（部分的に）二本鎖の核酸分子との混合物から選択されてもよい。この混合物において、上記一本鎖の核酸分子と上記（部分的に）二本鎖の核酸分子とは、約１：１０〜１０：１の比であることが好ましく、１：３〜３：１の比であることがより好ましい。
【００９２】
とりわけ特に好ましい実施形態によれば、式（ＩＩＩ）に係る免疫賦活性の配列は、例えば以下の配列のいずれかから選択され得る。
【００９３】
【数４】
2014196306.tif 000005
【００９４】
【数５】
2014196306.tif 000006
【００９５】
とりわけ特に好ましい別の実施形態によれば、式（ＩＩＩａ）に係る免疫賦活性の配列は、例えば以下の配列のいずれかから選択され得る。
【００９６】
【数６】
2014196306.tif 000007
【００９７】
好ましい１実施形態によれば、上記にて規定したような式（ＩＩＩ）（または（ＩＩＩａ））に係る免疫賦活性の配列は、ポリ（Ｘ）配列（修飾要素）によって修飾されていてもよい。このような免疫賦活性の配列は、例えば、式（ＩＶ）：ポリ（ＩＶ）ｓ（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａポリ（ＩＶ）ｔに係る核酸分子を含んでいてもよい。
【００９８】
式（ＩＶ）の核酸分子は、同様に、少なくとも５０個のヌクレオチドの長さを有しており、少なくとも１００個のヌクレオチドの長さを有していることが好ましく、少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さを有していることがより好ましく、少なくとも２００個のヌクレオチドの長さを有していることがさらに好ましく、少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有していることが最も好ましい。
【００９９】
式（ＩＶ）に係る免疫賦活性の配列において、要素Ｇ、要素Ｘ、および要素Ｎ（特に、コア構造ＧｌＸｍＧｎ、要素Ｎｕおよび要素Ｎｖ）、ならびに整数ａ、整数ｌ、整数ｍ、整数ｎ、整数ｕ、および整数ｖは、式（ＩＩＩ）に関して上記にて規定したようなものである。本発明に関連して、式（ＩＶ）に係る免疫賦活性の配列の修飾要素ポリ（ＩＶ）（特に、ポリ（ＩＶ）ｓおよび／またはポリ（ＩＶ）ｔ）は、典型的に、一本鎖、二本鎖、または部分的に二本鎖の核酸配列（例えば、上記にて規定したような一般的なＤＮＡまたはＲＮＡの配列）である。好ましくは、修飾要素ポリ（ＩＶ）（特に、ポリ（ＩＶ）ｓおよび／またはポリ（ＩＶ）ｔ）は、核酸分子のホモポリマーのストレッチである。Ｘは、式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）に係る免疫賦活性の配列のＸに関して上記にて規定したように、任意のヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドであり得るか、ヌクレオシドを含んでいる。好ましくは、Ｘは、それぞれのポリ（ＩＶ）（特に、ポリ（ＩＶ）ｓおよび／またはポリ（ＩＶ）ｔ）について独立して、ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドから選択され得るか、ヌクレオシドを含んでいる。このヌクレオチド（ヌクレオシド）は、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、イノシン、またはこれらのヌクレオチドの類似体から選択される。このヌクレオチド（ヌクレオシド）は、例えば、シチジン（シトシン）の一本鎖のストレッチ（ポリ（Ｃ））、グアノシン（グアニン）の一本鎖のストレッチ（ポリ（Ｇ））、アデノシン（アデニン）の一本鎖のストレッチ（ポリ（Ａ））、ウリジン（ウラシル）の一本鎖のストレッチ（ポリ（Ｕ））、イノシンの一本鎖のストレッチ（ポリ（ＩＩＩ））などから選択される。あるいは、このヌクレオチド（ヌクレオシド）は、イノシンとシチジン（シトシン（ｃｙｔｏｉｎｅｓ））とのホモポリマーの二本鎖のストレッチ（ポリ（ＩＩＩ：Ｃ））、アデノシン（アデニン）とウリジン（ウラシル）とのホモポリマーの二本鎖のストレッチ（ポリ（Ａ：Ｕ））などから選択される。ホモポリマーの配列（特に、ポリ（ＩＩＩ：Ｃ）および／またはポリ（Ａ：Ｕ））は、その鎖の何れかを介して（例えば、ポリＣ、ポリＩ、ポリＡまたはポリＵの配列のいずれｋを用いて）、式（ＩＶ）に係る核酸分子の配列（Ｎｕ  ＧｌＸｍＧｎ  Ｎｖ）ａに連結されてもよい。式（ＩＶ）の免疫賦活性の配列の修飾要素ポリ（ＩＶ）（特に、ポリ（ＩＶ）ｓおよび／またはポリ（ＩＶ）ｔ）の長さは、整数ｓおよび／または整数ｔによって決定される。ｓおよび／またはｔは、互いに独立して、約５〜１００の整数であり得、好ましくは約５〜７０の整数であり得、より好ましくは約５〜５０の整数であり得、より一層好ましくは約５〜３０の整数であり得、最も好ましくは約５〜２０の整数であり得る。
【０１００】
特に好ましい実施形態によれば、上記にて規定したような式（ＩＶ）に係る核酸分子は、例えば、式（ＩＶａ）：ポリ（Ｘ）（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａに係る核酸分子、または式（ＩＶｂ）：ポリ（Ｘ）（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａポリ（Ｘ）に係る核酸分子を具体的に含んでいてもよい。
【０１０１】
同様に、式（ＩＶａ）または（ＩＶｂ）のこれらの核酸分子のいずれかは、少なくとも５０ヌクレオチドの長さを有しており、少なくとも１００個のヌクレオチドの長さを有していることが好ましく、少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さを有していることがより好ましく、少なくとも２００個のヌクレオチドの長さを有していることがさらに好ましく、少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有していることが最も好ましい。同様に、他の定義の全ては、上述した式（ＩＶ）または（ＩＩＩ）について説明したように適用する。同様に、上述した式（ＩＶ）、（ＩＶａ）、および（ＶＩｂ）は、式（ＩＩＩｂ）に係る式（すなわち、コア構造ＣｌＸｍＣｎを導入すること）に基づいて規定されてもよい。
【０１０２】
より好ましくは、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列におけるポリ（Ｘ）は、上記にて規定されたようなポリ（ＩＶ）から選択され得、より好ましくはポリ（Ｉ：Ｃ）および／またはポリ（Ａ：Ｕ）から選択され得る。これらの修飾要素ポリ（Ｘ）（特に、ポリ（Ｉ：Ｃ）および／またはポリ（Ａ：Ｕ））は、その鎖のいずれかを介して（例えば、ポリＣ、ポリＧ、ポリＩ、ポリＡ、またはポリＵの配列のいずれかを用いて）、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）に係る配列に連結され得る。
【０１０３】
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）に関して上記にて規定したのと同様に、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列は、上記にて規定したような一本鎖、二本鎖、または部分的に二本鎖の核酸分子であり得る。
【０１０４】
式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）に係る免疫賦活性の配列が一本鎖の核酸分子である場合、この配列は典型的にその全長にわたって一本鎖である。
【０１０５】
同様に、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列が二本鎖の核酸分子である場合、この配列は典型的にその全長にわたって二本鎖である。
【０１０６】
式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列が部分的に二本鎖の核酸配列である場合、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかの核酸分子の核酸配列は、コア構造ＧｌＸｍＧｎの外側の領域にて一本鎖であり得、このコア構造の領域にて二本鎖であり得る。このコア構造ＧｌＸｍＧｎは上記にて規定した配列番号１〜８０または配列番号８１〜８３の配列の少なくとも１個から選択されることが好ましい。式（ＩＩＩ）（または式（ＩＩＩａ））のどちらかのコア構造ＧｌＸｍＧｎ（コア構造ＣｌＸｍＣｎ）は、コア構造のこのような領域において二本鎖であり得、ウリジン（ウラシル）のストレッチが、全長のウリジン（ウラシル）のストレッチにわたって存在するか、全長のウリジン（ウラシル）のストレッチの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％にわたって存在することが最も好ましい。
【０１０７】
代替的にまたはさらに、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列が部分的に二本鎖の核酸分子である場合、上記にて規定したような式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列の（コア構造ＧｌＸｍＧｎ以外の）他の部分は二本鎖であり得る。例えば、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかの核酸分子の核酸配列は、コア構造ＧｌＸｍＧｎの外側の領域にて二本鎖であり得、例えば、このコア構造の領域にて一本鎖であり得る。上記コア構造ＧｌＸｍＧｎの外側の領域は、例えば、境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖ、ならびに／あるいは修飾要素ポリ（Ｘ）である。修飾要素ポリ（Ｘ）は、例えばポリ（Ｘ）ｓおよびまたはポリ（Ｘ）ｔ（例えばポリ（Ｉ：Ｃ）またはポリ（Ａ：Ｕ）の配列など）である。コア構造ＧｌＸｍＧｎは、上記にて規定した配列番号１〜８３の配列の少なくとも１個から選択されることが好ましい。例えば、境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖの少なくとも１個、ならびに／あるいは修飾要素ポリ（ＩＶ）（例えば、ポリ（ＩＶ）ｓおよびまたはポリ（ＩＶ）ｔ）の少なくとも１個は二本鎖であり得る一方、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかの残りの要素（例えば、コア構造ＧｌＸｍＧｎおよび／または他の要素）は一本鎖のままであり得る。
【０１０８】
代替的にまたはさらに、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／（ＩＶｂ）のいずれかに係る一本鎖の核酸配列と、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／（ＩＶｂ）のどちらかに係る（部分的に）二本鎖の核酸分子との混合物において、この一本鎖の核酸分子とこの（部分的に）二本鎖の核酸分子とは、約１：１０〜１０：１の比であることが好ましく、１：３〜３：１の比であることがより好ましい。
【０１０９】
特に好ましい実施形態によれば、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）および／または（ＩＶｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列は、例えば、以下の配列のいずれかから選択され得る。
【０１１０】
【数７】
2014196306.tif 000008
【０１１１】
また、上記にて規定したような式（ＩＩＩ）（または（ＩＩＩａ））に係る免疫賦活性の配列が、ステムまたはステムループの挿入によって修飾され、例えば、式（Ｖａ）：（Ｎｕステム１ＧｌＸｍＧｎステム２Ｎｖ）ａに係る核酸分子または式（Ｖｂ）：（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａステム１Ｎｗ１ステム２Ｎｗ２に係る核酸分子が得られてもよい。
【０１１２】
式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかの核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドの長さを有しており、少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さを有していることがより好ましく、少なくとも２００個のヌクレオチドの長さを有していることがさらに好ましく、少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有していることが最も好ましい。同様に、式（Ｖａ）および（Ｖｂ）は、式（ＩＩＩｂ）に基づいて（すなわち、コア構造ＣｌＸｍＣｎを導入することによって）規定されてよい。
【０１１３】
特に、式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかの免疫賦活性の配列は、上記にて規定したような式（ＩＩＩ）のバリアントを表す。式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のいずれかに係る核酸において、コア構造ＧｌＸｍＧｎと境界を形成する、境界を成す要素Ｎ（すなわち、Ｎｕおよび／またはＮｖ）は、少なくとも１個のステム構造またはステムループ構造によってさらに増加される。少なくとも１個のステム構造またはステムループ構造は、１個のステムループの要素であるステム１およびステム２からなることが好ましい。上記にて規定したような式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列において、要素Ｇ、要素Ｘ、および要素Ｎ（特にコア構造ＧｌＸｍＧｎ）、ならびに整数ａ、整数ｌ、整数ｍ、整数ｎ、整数ｕ、および整数ｖは、上記にて規定したようなものである。整数ａは１であることがより好ましい。必要に応じて、ｕおよび／またはｖは０であり得る。さらに、ステムループの要素に隣接する要素Ｎｗ１およびＮｗ２は、さらなる境界を成す要素を表しており、境界を成す要素Ｎｕおよび／またはＮｖについて上述したように規定される。特に、一般的な境界を成す要素Ｎは、上記式（ＩＩＩ）におけるＮについて上述したようなものであり、整数ｗ１およびｗ２は、互いに独立して、式（ＩＩＩ）における整数ｕおよび／またはｖについて上述したように規定される。
【０１１４】
これに関連して、ステム構造またはステムループ構造は、一本鎖ＤＮＡ（またはより一般的にＲＮＡ）において生じ得る、分子内の塩基対形成である。また、この構造は、ヘアピンまたはヘアピンループとしても知られている。この構造は、同一分子の２つの領域（例えば、ステムループの要素であるステム１およびステム２（通常、核酸配列内の回文配列の要素である。））が、互いに塩基対を形成して、対を形成していないループ（を生じさせる二重螺旋）をもたらす。対を形成していないループは、ステム１またはステム２のどちらかの配列と同一または相同でないか、ほとんど同一または相同でない核酸の領域を表し、これらのステムループの要素のいずれかと塩基対を形成することができない。生じたロリポップ形状の構造は、多くのＲＮＡの二次構造の主要な構成要素である。それ故、ステムループ構造の形成は、螺旋およびループの領域の安定性に依存し、最も重要な必要条件は、典型的に、それ自身が折り畳まれて、対を形成した二重螺旋を形成することができる配列が存在することである。対を形成したステムループの要素の安定性は、長さ、含まれるミスマッチまたはバルジの数（特に長い螺旋では、少数のミスマッチが典型的に許容される。）、および対を形成した領域の塩基の組成によって、決定される。例えば、グアノシン（グアニン）とシチジン（シトシン）との間の対形成は、このような配列においてより好ましいことがある。なぜなら、グアノシン（グアニン）およびシチジン（シトシン）は３つの水素結合を有しており、２つの水素結合しか有していないアデノシン（アデニン）とウリジン（ウラシル）との対形成と比べて安定であるからである。それ故、ＲＮＡでは、２つの水素結合を特徴とするグアノシン（グアニン）とウリジン（ウラシル）との対形成が好ましいことがある。また、上述したループの安定性は、ステムループ構造の形成に影響を与える。長さが３塩基未満である「ループ」（すなわち、ステムループの要素であるステム１およびステム２を含んでいないループのみ）は立体的により好ましくない。しかし、ステム（すなわち、（規定された）ループを示さないが、ステム１とステム２との間の対を形成していない単なる領域を示す構成）もまた、含まれてもよい。本発明に関連して、最適なループの長さは、約４〜１００個の塩基の長さである傾向があり、より好ましくは４〜５０個の塩基の長さである傾向があり、さらに好ましくは４〜３０個または４〜２０個の塩基の長さである傾向がある。
【０１１５】
よって、式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のいずれかに係る免疫賦活性の配列に関連して、ステムループの要素であるステム１およびステム２は、典型的に、１個のステム構造またはステムループ構造の部分を表す。ステム構造またはステムループ構造は、ステムループの要素であるステム１およびステム２によって形成されてもよい。ループは、これらのステムループの要素の間に位置する配列によって形成されてもよい。ステムまたはステムループは、塩基対が形成された領域にて螺旋の形態を有していてもよい。ステムループの要素であるステム１およびステム２はそれぞれ、上記にて規定したような核酸であることが好ましく、ＲＮＡであることがより好ましく、一本鎖ＲＮＡであることが最も好ましい。ステム１および／またはステム２のいずれかのためのヌクレオチド（ヌクレオシド）として、コア構造の要素Ｘについて上記にて規定したようなヌクレオチド（ヌクレオシド）または類似体のいずれかを用いてもよい。さらに、ステムループの要素であるステム１は、ステムループの要素であるステム２の回文配列を示す。したがって、両方の配列は、互いに塩基対を形成できることが好ましい。このように、両方の配列は、ステムまたはステムループのための基礎を一緒に形成する。
【０１１６】
したがって、ステムループの要素であるステム１またはステム２が互いに回文構造を有しているのであれば（すなわち、一方の配列が逆から読んだ他方の（相補的な）配列と等しいか、この一方の配列が、逆から読んだ場合に、この他方の配列に対して少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％の同一性または相同性を示すのであれば）、ステムループの要素であるステム１またはステム２は、任意の核酸配列からの選択された対であってもよい。
【０１１７】
このような回文の配列のステム１およびステム２は、それぞれ、約５〜５０個の核酸の長さを有する核酸配列によって形成されてもよく、約５〜４０個の核酸の長さを有する核酸配列によって形成されることが好ましく、約５〜３０個の核酸の長さを有する核酸配列によって形成されることが最も好ましい。なお、この核酸は、上記にて規定したようなアデノシン（アデニン）、グアノシン（グアニン）、シチジン（シトシン）、ウリジン（ウラシル）、チミジン（チミン）またはそれらの類似体から選択される。
【０１１８】
ステムループの要素であるステム１およびステム２に関する典型的な配列としては、例えば、以下の（ａ）〜（ｊ）の配列が挙げられ得る。
【０１１９】
【数８】
2014196306.tif 000009
【０１２０】
第１の代替的な実施形態によれば、コア構造ＧｌＸｍＧｎは、ステムループ構造内に配置されてもよい（すなわち、コア構造ＧｌＸｍＧｎは、ステムループの要素であるステム１とステム２との間に配置されてもよい）。そして、その結果、ループが形成されることが好ましい。このような核酸分子は、上記にて規定したような組成Ｎｕ  ステム１  ＧｌＸｍＧｎ  ステム２  Ｎｖ）ａを有する式（Ｖａ）に類似している。ｕおよび／またはｖ＝０であり、ａ＝１の場合、式（Ｖａ）は、特定の核酸分子「ステム１ＧｌＸｍＧｎステム２」をもたらし得る。このような特定の核酸も、本発明に組み込まれる。
【０１２１】
別の代替的な実施形態によれば、コア構造ＧｌＸｍＧｎは、ステムループ構造の外側に位置されていてもよい。同様に、ステムループの要素であるステム１およびステム２は、所定の配列（好ましくは、境界を成す要素Ｎ（例えばＮｗ１またはＮｗ２））によって、互いに分離されていてもよい。その結果、ステムループの要素であるステム１およびステム２の塩基対形成の際に、ループ構造が形成されてもよい。さらに、コア構造ＧｌＸｍＧｎに隣接したステムループの要素１および／または１は、さらなる境界を成す要素（例えば、Ｎｗ１またはＮｗ２）によってコア構造ＧｌＸｍＧｎから分離されてもよい。本発明によれば、このような核酸は、上記にて規定したような組成（Ｎｕ  ＧｌＸｍＧｎ  Ｎｖ）ａ  ステム１  Ｎｗ１  ステム２  Ｎｗ２を有する式（Ｖｂ）に類似している。
【０１２２】
式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列は、一本鎖であってもよいし、部分的に二本鎖であってもよい。式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列が一本鎖の核酸分子である場合、この配列は、典型的に、その全長にわたって一本鎖である。式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列が部分的に二本鎖の核酸分子である場合、式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかの核酸分子は、ステムループの要素であるステム１およびステム２の領域、およびコア構造ＧｌＸｍＧｎまたは他の要素（例えば、Ｎｗ１またはＮｗ２）のどちらかによって形成されたループの領域にて一本鎖であり得ることが好ましい。その結果、ステムループの要素であるステム１およびステム２の外側に位置する要素、ならびにコア構造ＧｌＸｍＧｎまたは他の要素（例えば、Ｎｗ１またはＮｗ２）のどちらかによって形成されたループの領域の外側に位置する要素は、互いに独立して、一本鎖または二本鎖であり得る。これの代わりにまたはこれに加えて、式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかに係る一本鎖または部分的に二本鎖の核酸分子と、式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかに係る（部分的に）二本鎖の核酸分子との混合物において、この一本鎖または部分的に二本鎖の核酸分子とこの（部分的に）二本鎖の核酸分子とは、約１：１０〜１０：１の比であることが好ましく、１：３〜３：１の比であることがより好ましい。
【０１２３】
とりわけ特に好ましい実施形態によれば、式（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のどちらかに係る免疫賦活性の配列は、それぞれ、例えば、以下の配列のいずれかから選択さされ得る。
【０１２４】
【数９】
2014196306.tif 000010
【０１２５】
上記にて規定したような式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）における免疫賦活性配列は、典型的に核酸であり、ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれの形態であってもよい。免疫賦活性配列は、好ましくは、特に限定されないが、環状または線状のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡは、２本の一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡが非共有で結合したＤＮＡまたはＲＮＡでありうる。免疫賦活性配列は、特に二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡでありうる。二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡは、典型的に、１本の長い一本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ分子と、少なくとも１個の短い一本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ分子とによって形成されるか、あるいは少なくとも２本のほぼ同じ長さの一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ分子によって形成される。このうち、１本以上の一本鎖ＤＮＡまたは一本鎖ＲＮＡ分子は、１本以上の他の一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ分子と一部分において相補的であり、そのためこの領域において二本鎖ＲＮＡを形成する。例えば、（部分的に）二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡの領域と組み合わせられた（部分的に）一本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡである。好ましくは、上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）における核酸分子は、一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡの形態であってもよく、より好ましくは、部分的に二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）における免疫賦活性配列は、一本鎖の核酸と二本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡとの組合せの形態であることがさらに好ましい。
【０１２６】
上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）における免疫賦活性配列が部分的に二本鎖の核酸分子である場合には、このような上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）による（部分的に二本鎖の）免疫賦活性配列は、一本鎖ＲＮＡのためのＰＡＭＰ（ｐａｔｈｏｇｅｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎ）受容体（ＴＬＲ−７およびＴＬＲ−８）および二本鎖ＲＮＡのためのＰＡＭＰ−受容体（ＴＬＲ−３、ＲＩＧ−ＩおよびＭＤＡ−５）を扱うことによって、治療対象の患者の先天性免疫を積極的に刺激することができるため、特に有利である。受容体ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−７およびＴＬＲ−８は、エンドソーム内に位置しており、エンドソームにより取り込まれたＲＮＡによって活性化される。これと比較して、ＲＩＧ−ＩおよびＭＤＡ−５は細胞質内の受容体であり、細胞質内に直接取り込まれたＲＮＡまたはエンドソームから放出（エンドソーム放出またはエンドソーム脱出）されたＲＮＡによって活性化される。したがって、上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）における部分的に二本鎖の任意の免疫賦活性配列も、異なる免疫賦活化のシグナルカスケードを活性化させることができ、先天性の免疫応答を引き起こし、あるいはこの応答を顕著に向上させることができる。
【０１２７】
上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）における核酸分子のいずれもが、あらゆる公知の方法を用いて調製される。公知の方法は、合成法、例えば固相法、およびインビトロ転写反応などのインビトロ法など、を含む。免疫賦活性配列の調製のために、インビトロ転写が使用されることが好ましい。驚くべきことに、本発明の発明者らによって、上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のいずれもの核酸分子が、これらの５’−リン酸によるインビトロ転写によって調製された場合に、合成法によって調製された式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のいずれもの核酸分子と比較して、先天性免疫系をより強く刺激することが分かった。このような先天性免疫系の刺激は、特に限定されないが、受容体ＲＩＧ−１の活性化に寄与される。したがって、上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）のいずれもの核酸分子であって、インビトロ転写反応によって調製されたものが、特に好ましい。
【０１２８】
さらに、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして使用されうるＲＮＡ分子（の種類）は、免疫応答を引き起こすことができる他の任意のＲＮＡをも含み得る。特に限定されないが、このような免疫賦活性のＲＮＡは、リボソーマルＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）およびウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）を含み得る。
【０１２９】
第３の実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、ｓｉＲＮＡであってもよい。ｓｉＲＮＡは、特に、ＲＮＡ干渉の現象に関連する所定のＲＮＡである。免疫学においては、ＲＮＡ干渉の現象に注目が集っている。近年、菌界、ならびに植物および動物界の両方において発生する、ＲＮＡを基礎とした防御機構が発見されてきている。この防御機構は、「ゲノムにおける免疫系」として作用する。このシステムは、当初、様々な種において互いに独立して記述され、最初に線虫（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）で記述され、その後プロセスの根本的なメカニズムが同一であることを同定することが可能になった：植物のＲＮＡ仲介型ウイルス耐性、植物のＰＴＧＳ（転写後遺伝子抑制：posttranscriptional gene silencing）、および真核生物におけるＲＮＡ干渉は、結果的に共通の方法に基づくものである。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のインビトロ技術は、遺伝子発現の遺伝子特異的な抑制を引き起こす、二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）に基づいている（（Ｚａｍｏｒｅ（２００１）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９：７４６−７５０；Ｓｈａｒｐ（２００１）ＧｅｎｅｓＤｅｖ．５：４８５−４９０：Ｈａｎｎｏｎ（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  ４１：２４４−２５１））。長いｄｓＲＮＡの哺乳動物細胞へのトランスフェクションでは、タンパク質キナーゼＲおよびＲｎａｓｅＬの活性化が、非特異的な効果を引き起こす。非特異的な効果は、例えば、インターフェロン応答（Ｓｔａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６７：２２７−２６４；Ｈｅ  ａｎｄ  Ｋａｔｚｅ（２００２）Ｖｉｒａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：９５−１１９）などである。最近、インビボにおいて、ｄｓＲＮＡ分子もまた使用されている（ＭｃＣａｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：３８−３９；Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：２４３−２４７）。このように、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡに使用されるｓｉＲＮＡは、免疫賦活性のＲＮＡであってもよい。そしてｓｉＲＮＡは、典型的に、約８〜３０個のヌクレオチド、好ましくは１７〜２５個のヌクレオチド、より好ましくは２０〜２５個、最も好ましくは２１〜２３個のヌクレオチドの（一本鎖または）二本鎖、好ましくは二本鎖のＲＮＡ配列を含む。原則として、上述したようなＲＮＡ配列のコード領域に生じる１７〜２９個の塩基、好ましくは１９〜２５個の塩基、最も好ましくは２１〜２３個の塩基の長さを有する全ての断片は、上述したｓｉＲＮＡのための標的配列として働くことができる。同様に、ｓｉＲＮＡはまた、タンパク質の、好ましくは（先天性または適応性）免疫応答の誘導を負に制御する制御タンパク質の、標的塩基配列に対して方向づけられてもよい。この塩基配列は、コード領域内になく、例えば、特にＲＮＡにおける５’側の非コード領域内にある、制御機能を有するＲＮＡの標的非コード領域である。したがって、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして使用される、ｓｉＲＮＡの標的配列は、上述したタンパク質の塩基配列における翻訳領域および／もしくは非翻訳領域内、ならびに／またはその制御エレメントの領域内に存在することができる。上述したｓｉＲＮＡの標的配列はまた、非翻訳配列と翻訳配列とをまたぐ領域に存在することもできる。特に、標的配列は、ＲＮＡにおけるコード領域の最初にあるトリプレットの上流の少なくとも１個のヌクレオチドを含むことができる。
【０１３０】
第４の実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、アンチセンスＲＮＡであってもよい。本発明に関し、アンチセンスＲＮＡは、好ましくは、ＤＮＡ鎖における、テンプレートではなく、コードされていない鎖が転写された（一本鎖）ＲＮＡ分子である。したがって、（好ましくは）（全長の）アンチセンスｍＲＮＡ配列は、センス（メッセンジャー）ＲＮＡと相補的である。上述したようなアンチセンスＲＮＡは、典型的に、センスＲＮＡ分子とアンチセンスＲＮＡ分子との二重鎖を形成する。そのため、コード鎖の転写を抑制することができる。本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして使用されるアンチセンスＲＮＡは、塩基配列に対して方向づけられることができる。この塩基配列は、例えば、タンパク質またはペプチドをコードする（自然発生的な）ｍＲＮＡ配列またはゲノム配列である。この配列は、この目的に適しているあらゆるタンパク質またはペプチドの配列から選択されてもよい。好ましくは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして、ここに使用されるアンチセンスＲＮＡは、上述したような、ＲＮＡ分子として一般的な長さによって構成される。より好ましくは１０００〜５０００、５００〜５０００、５〜５０００、または５〜１０００、５〜５００、５〜２５０、５〜１００、５〜５０もしくは５〜３０個のヌクレオチドの長さである。
【０１３１】
第５の実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、コーディングＲＮＡでありうる。コーディングＲＮＡは、上述したような任意のＲＮＡでありうる。好ましくは、コーディングＲＮＡは、一本鎖または二本鎖ＲＮＡであってもよく、より好ましくは一本鎖ＲＮＡであり、および／または環状もしくは線状ＲＮＡであってもよく、より好ましくは線状ＲＮＡでありうる。さらに好ましくは、コーディングＲＮＡは、（線状の）一本鎖ＲＮＡでありうる。最も好ましくは、コーディングＲＮＡは、（（線状の）一本鎖）メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）でありうる。本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして使用されるコーディングＲＮＡは、さらにタンパク質またはペプチドをコードしていてもよい。タンパク質またはペプチドは、特に限定されないが、例えば治療的に活性型のタンパク質もしくはペプチドから選択され、抗原、自己免疫性抗原もしくはさらなる抗原から選択され、アレルゲンから選択され、抗体から選択され、免疫賦活性タンパク質もしくはペプチドから選択され、抗原特異的なＴ細胞受容体から選択され、または特別の（治療的な）適用に適している他のあらゆるタンパク質もしくはペプチドから選択される。抗原は、例えば腫瘍抗原、病原性抗原（例えば上述した病原性タンパク質から選択されるか、あるいは動物性抗原、ウイルス性抗原、原生動物抗原、細菌性抗原、アレルギー性抗原から選択される）などである。以上において、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして使用されるコーディングＲＮＡが、細胞、組織または生物の中に輸送されてもよく、その後に上述したタンパク質が、この細胞、組織または生物内において発現されてもよい。
【０１３２】
ａ）治療的に活性なタンパク質
本明細書では、免疫賦活組成物のアジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個によってコードされた治療的に活性なタンパク質は、自然に生じた組み換えたんぱく質または当業者に公知の単離されたタンパク質の何れから選択されてもよい。治療的に活性なタンパク質は、それらに限定されずに、細胞内のシグナル伝達を刺激する、または阻害するたんぱく質、例えば、サイトカイン、抗体などを含んでもよい。それゆえ、治療的に活性なタンパク質は、位置が保存された４個のシステイン残基（ＣＣＣＣ）を有し、保存されたモティーフシークエンスであるＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）を含む、サイトカインファミリーのクラスＩのサイトカインを含んでもよい。上記Ｘは、保存されていないアミノ酸である。サイトカインファミリーのクラスＩのサイトカインは、例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−５といったＧＭ−ＣＳＦサブファミリー、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２といったＩＬ−６サブファミリー、または、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５といったＩＬ−２サブファミリー、または、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０といったサイトカイン類を含んでもよい。治療的に活性なタンパク質は、また、位置が保存された４個のシステイン残基（ＣＣＣＣ）を有するが、保存されたモティーフシークエンスであるＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）を含まない、サイトカインファミリーのクラスＩＩのサイトカインを含んでもよい。サイトカインファミリーのクラスＩＩのサイトカインは、例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γなどを含んでもよい。治療的に活性なタンパク質は、さらに、例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子のファミリーのサイトカイン、または、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＲ５、ＣＸＲ４などのＧ−タンパク質と反応し、膜透過型の７個のへリックスを含むケモカインファミリーのサイトカイン、または、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＣＤ４０、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、Ｆａｓといったサイトカインに特異的な受容体を含んでもよい。
【０１３３】
免疫賦活組成物のアジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個によってコードされた治療的に活性なタンパク質は、また、以下に示すタンパク質の何れから選択されてもよい：０ＡＴＬ３、０ＦＣ３、０ＰＡ３、０ＰＤ２、４−１ＢＢＬ、５Ｔ４、６Ｃｋｉｎｅ、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、Ａ２Ｍ、ＡＡ、ＡＡＡＳ、ＡＡＣＴ、ＡＡＳＳ、ＡＢＡＴ、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＢ１、ＡＢＣＢ１１、ＡＢＣＢ２、ＡＢＣＢ４、ＡＢＣＢ７、ＡＢＣＣ２、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ８、ＡＢＣＤ１、ＡＢＣＤ３、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、ＡＢＬ１、ＡＢＯ、ＡＢＲ  ＡＣＡＡ１、ＡＣＡＣＡ、ＡＣＡＤＬ、ＡＣＡＤＭ、ＡＣＡＤＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＡＣＡＴ１、ＡＣＣＰＮ、ＡＣＥ、ＡＣＨＥ、ＡＣＨＭ３、ＡＣＨＭ１、ＡＣＬＳ、ＡＣＰＩ、ＡＣＴＡ１、ＡＣＴＣ、ＡＣＴＮ４、ＡＣＶＲＬ１、ＡＤ２、ＡＤＡ、ＡＤＡＭＴＳ１３、ＡＤＡＭＴＳ２、ＡＤＦＮ、ＡＤＨ１Ｂ、ＡＤＨ１Ｃ、ＡＤＬＤＨ３Ａ２、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＤＳＬ、ＡＥＺ、ＡＦＡ、ＡＦＤ１、ＡＦＰ、ＡＧＡ、ＡＧＬ、ＡＧＭＸ２、ＡＧＰＳ、ＡＧＳ１、ＡＧＴ、ＡＧＴＲ１、ＡＧＸＴ、ＡＨ０２、ＡＨＣＹ、ＡＨＤＳ、ＡＨＨＲ、ＡＨＳＧ、ＡＩＣ、ＡＩＥＤ、ＡＩＨ２、ＡＩＨ３、ＡＩＭ−２、ＡＩＰＬ１、ＡＩＲＥ、ＡＫ１、ＡＬＡＤ、ＡＬＡＳ２、ＡＬＢ、ＨＰＧ１、ＡＬＤＨ２、ＡＬＤＨ３Ａ２、ＡＬＤＨ４Ａ１、ＡＬＤＨ５Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＤＯＡ、ＡＬＤＯＢ、ＡＬＭＳ１、ＡＬＰＬ、ＡＬＰＰ、ＡＬＳ２、ＡＬＸ４、ＡＭＡＣＲ、ＡＭＢＰ、ＡＭＣＤ、ＡＭＣＤ１、ＡＭＣＮ、ＡＭＥＬＸ、ＡＭＥＬＹ、ＡＭＧＬ、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＭＰＤ３、ＡＭＰＤ１、ＡＭＴ、ＡＮＣ、ＡＮＣＲ、ＡＮＫ１、ＡＮＯＰ１、ＡＯＭ、ＡＰ０Ａ４、ＡＰ０Ｃ２、ＡＰ０Ｃ３、ＡＰ３Ｂ１、ＡＰＣ、ａＰＫＣ、ＡＰＯＡ２、ＡＰＯＡ１、ＡＰＯＢ、ＡＰＯＣ３、ＡＰＯＣ２、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＨ、ＡＰＰ、ＡＰＲＴ、ＡＰＳ１、ＡＱＰ２、ＡＲ、ＡＲＡＦ１、ＡＲＧ１、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＡＲＭＥＴ、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＳＣ２、ＡＲＳＥ、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、ＡＲＴＳ、ＡＲＶＤ１、ＡＲＸ、ＡＳ、ＡＳＡＨ、ＡＳＡＴ、ＡＳＤ１、ＡＳＬ、ＡＳＭＤ、ＡＳＭＴ、ＡＳＮＳ、ＡＳＰＡ、ＡＳＳ、ＡＳＳＰ２、ＡＳＳＰ５、ＡＳＳＰ６、ＡＴ３、ＡＴＤ、ＡＴＨＳ、ＡＴＭ、ＡＴＰ２Ａ１、ＡＴＰ２Ａ２、ＡＴＰ２Ｃ１、ＡＴＰ６Ｂ１、ＡＴＰ７Ａ、ＡＴＰ７Ｂ、ＡＴＰ８Ｂ１、ＡＴＰＳＫ２、ＡＴＲＸ、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＡＵＴＳ１、ＡＶＭＤ、ＡＶＰ、ＡＶＰＲ２、ＡＶＳＤ１、ＡＸＩＮ１、ＡＸＩＮ２、ＡＺＦ２、Ｂ２Ｍ、Ｂ４ＧＡＬＴ７、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ−１、ＢＡＸ、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３、ＢＢＳ４、ＢＣＡ２２５、ＢＣＡＡ、ＢＣＨ、ＢＣＨＥ、ＢＣＫＤＨＡ、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＣＬ１０、ＢＣＬ２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ５、ＢＣＬ６、ＢＣＰＭ、ＢＣＲ、ＢＣＲ／ＡＢＬ、ＢＤＣ、ＢＤＥ、ＢＤＭＦ、ＢＤＭＲ、ＢＥＳＴ１、ベータ−カテニン／ｍ、ＢＦ、ＢＦＨＤ、ＢＦＩＣ、ＢＦＬＳ、ＢＦＳＰ２、ＢＧＬＡＰ、ＢＧＮ、ＢＨＤ、ＢＨＲ１、ＢＩＮＧ−４、ＢＩＲＣ５、ＢＪＳ、ＢＬＭ、ＢＬＭＨ、ＢＬＮＫ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＧＭ、ＢＲＡＦ、ＢＲ���Ａ１、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＢＲＣＤ２、ＢＲＣＤ１、ＢＲＤＴ、ＢＳＣＬ、ＢＳＣＬ２、ＢＴＡＡ、ＢＴＤ、ＢＴＫ、ＢＵＢ１、ＢＷＳ、ＢＺＸ、Ｃ０Ｌ２Ａ１、Ｃ０Ｌ６Ａ１、Ｃ１ＮＨ、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＧ、Ｃ１Ｓ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ４Ｂ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ７ｏｒｆ２、Ｃ８Ａ、Ｃ８Ｂ、Ｃ９、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３／ＣＡ  ２７−２９、ＣＡ１９５、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ２、ＣＡ２４２、ＣＡ５０、ＣＡＢＹＲ、ＣＡＣＤ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｓ、ＣＡＣＮＢ２、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＧＥ、ＣＡ１、ＣＡＬＢ３、ＣＡＬＣＡ、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＭ、ＣＡＬＲ、ＣＡＭ４３、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＰＮ３、ＣＡＲＤ１５、ＣＡＳＰ−５／ｍ、ＣＡＳＰ−８、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＡＳＲ、ＣＡＴ、ＣＡＴＭ、ＣＡＶ３、ＣＢ１、ＣＢＢＭ、ＣＢＳ、ＣＣＡ１、ＣＣＡＬ２、ＣＣＡＬ１、ＣＣＡＴ、ＣＣＬ−１、ＣＣＬ−１１、ＣＣＬ−１２、ＣＣＬ−１３、ＣＣＬ−１４、ＣＣＬ−１５、ＣＣＬ−１６、ＣＣＬ−１７、ＣＣＬ−１８、ＣＣＬ−１９、ＣＣＬ−２、ＣＣＬ−２０、ＣＣＬ−２１、ＣＣＬ−２２、ＣＣＬ−２３、ＣＣＬ−２４、ＣＣＬ−２５、ＣＣＬ−２７、ＣＣＬ−３、ＣＣＬ−４、ＣＣＬ−５、ＣＣＬ−７、ＣＣＬ−８、ＣＣＭ１、ＣＣＮＢ１、ＣＣＮＤ１、ＣＣＯ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＣＴ、ＣＣＶ、ＣＣＺＳ、ＣＤ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２７Ｌ、ｃＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤＡＮ１、ＣＤＡＮ２、ＣＤＡＮ３、ＣＤＣ２７、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＣ２Ｌ１、ＣＤＨ１、ＣＤＫ４、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＬ１、ＣＤＰＤ１、ＣＤＲ１、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＣＲ、ＣＥＣＲ９、ＣＥＰＡ、ＣＥＴＰ、ＣＦＮＳ、ＣＦＴＲ、ＣＧＦ１、ＣＨＡＣ、ＣＨＥＤ２、ＣＨＥＤ１、ＣＨＥＫ２、ＣＨＭ、ＣＨＭＬ、ＣＨＲ３９Ｃ、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＥ、ＣＨＳ、ＣＨＳ１、ＣＨＳＴ６、ＣＨＸ１０、ＣＩＡＳ１、ＣＩＤＸ、ＣＫＮ１、ＣＬＡ２、ＣＬＡ３、ＣＬＡ１、ＣＬＣＡ２、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮＫＢ、ＣＬＤＮ１６、ＣＬＰ、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ４、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、Ｃ１ＱＧ、Ｃ１Ｒ、ＣＬＳ、ＣＭＣＷＴＤ、ＣＭＤＪ、ＣＭＤ１Ａ、ＣＭＤ１Ｂ、ＣＭＨ２、ＭＨ３、ＣＭＨ６、ＣＭＫＢＲ２、ＣＭＫＢＲ５、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＭＭ、ＣＭＴ２Ｂ、ＣＭＴ２Ｄ、ＣＭＴ４Ａ、ＣＭＴ１Ａ、ＣＭＴＸ２、ＣＭＴＸ３、Ｃ−ＭＹＣ、ＣＮＡ１、ＣＮＤ、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＢ３、ＣＮＳＮ、ＣＮＴＦ、ＣＯＡ−１／ｍ、ＣＯＣＨ、ＣＯＤ２、ＣＯＤ１、ＣＯＨ１、ＣＯＬ１０Ａ、ＣＯＬ２Ａ２、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１７Ａ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ３Ａ��、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ４Ａ６、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＯＬ７Ａ１、ＣＯＬ８Ａ２、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＯＬ９Ａ３、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ２３Ａ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬＱ、ＣＯＭＰ、ＣＯＭＴ、ＣＯＲＤ５、ＣＯＲＤ１、ＣＯＸ１０、ＣＯＸ−２、ＣＰ、ＣＰＢ２、ＣＰＯ、ＣＰＰ、ＣＰＳ１、ＣＰＴ２、ＣＰＴ１Ａ、ＣＰＸ、ＣＲＡＴ、ＣＲＢ１、ＣＲＢＭ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＨ、ＣＲＨＢＰ、ＣＲＳ、ＣＲＶ、ＣＲＸ、ＣＲＹＡＢ、ＣＲＹＢＡ１、ＣＲＹＢＢ２、ＣＲＹＧＡ、ＣＲＹＧＣ、ＣＲＹＧＤ、ＣＳＡ、ＣＳＥ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＴ３、ＣＳＴＢ、ＣＴ、ＣＴ７、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、ＣＴＡＡ１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＥＮ、ＣＴＨ、ＣＴＨＭ、ＣＴＬＡ４、ＣＴＭ、ＣＴＮＮＢ１、ＣＴＮＳ、ＣＴＰＡ、ＣＴＳＢ、ＣＴＳＣ、ＣＴＳＫ、ＣＴＳＬ、ＣＴＳ１、ＣＵＢＮ、ＣＶＤ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＹＢ５、ＣＹＢＡ、ＣＹＢＢ、ＣＹＢＢ５、、ＣＹＦＲＡ  ２１−１、ＣＹＬＤ、ＣＹＬＤ１、ＣＹＭＤ、ＣＹＰ１１Ｂ１、ＣＹＰ１１Ｂ２、ＣＹＰ１７、ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１９、ＣＹＰ１９Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＰ２１Ａ２、ＣＹＰ２７Ａ１、ＣＹＰ２７Ｂ１、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｄ７Ｐ１、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ７Ｂ１、ＣＹＰＢ１、ＣＹＰ１１Ｂ１、ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＲＡＡ、Ｄ４０、ＤＡＤｌ、ＤＡＭ、ＤＡＭ−１０／ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＤＡＭ−６／ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＤＡＸ１、ＤＡＺ、ＤＢＡ、ＤＢＨ、ＤＢＩ、ＤＢＴ、ＤＣＣ、ＤＣ−ＣＫ１、ＤＣＫ、ＤＣＲ、ＤＣＸ、ＤＤＢ  １、ＤＤＢ２、ＤＤＩＴ３、ＤＤＵ、ＤＥＣＲ１、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＤＥＭ、ＤＥＳ、ＤＦ、ＤＦＮ２、ＤＦＮ４、ＤＦＮ６、ＤＦＮＡ４、ＤＦＮＡ５、ＤＦＮＢ５、ＤＧＣＲ、ＤＨＣＲ７、ＤＨＦＲ、ＤＨＯＦ、ＤＨＳ、ＤＩＡ１、ＤＩＡＰＨ２、ＤＩＡＰＨ１、ＤＩＨ１、ＤＩＯ１、ＤＩＳＣＩ、ＤＫＣ１、ＤＬＡＴ、ＤＬＤ、ＤＬＬ３、ＤＬＸ３、ＤＭＢＴ１、ＤＭＤ、ＤＭ１、ＤＭＰＫ、ＤＭＷＤ、ＤＮＡＩ１、ＤＮＡＳＥ１、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＤＰＥＰ１、ＤＰＹＤ、ＤＰＹＳ、ＤＲＤ２、ＤＲＤ４、ＤＲＰＬＡ、ＤＳＣＲ１、ＤＳＧ１、ＤＳＰ、ＤＳＰＰ、ＤＳＳ、ＤＴＤＰ２、ＤＴＲ、ＤＵＲＳ１、ＤＷＳ、ＤＹＳ、ＤＹＳＦ、ＤＹＴ２、ＤＹＴ３、ＤＹＴ４、ＤＹＴ２、ＤＹＴ１、ＤＹＸ１、ＥＢＡＦ、ＥＢＭ、ＥＢＮＡ、ＥＢＰ、ＥＢＲ３、ＥＢＳ１、ＥＣＡ１、ＥＣＢ２、ＥＣＥ１、ＥＣＧＦ１、ＥＣＴ、ＥＤ２、ＥＤ４、ＥＤＡ、ＥＤＡＲ、ＥＣＡ１、ＥＤＮ３、ＥＤＮＲＢ、ＥＥＣ１、ＥＥＦ１Ａ１Ｌ１４、ＥＥＧＶ１、ＥＦＥＭＰ１、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ／Ｈｅｒ１、ＥＧＩ、ＥＧＲ２、ＥＩＦ２ＡＫ３、ｅＩＦ４Ｇ、ＥＫＶ、Ｅｌ  ＩＳ、ＥＬＡ２、ＥＬＦ２、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＬＫ１、ＥＬ��、ＥＬＯＮＧ、ＥＭＤ、ＥＭＬ１、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＭＸ２、ＥＮＡ−７８、ＥＮＡＭ、ＥＮＤ３、ＥＮＧ、ＥＮＯ１、ＥＮＰＰ１、ＥＮＵＲ２、ＥＮＵＲ１、ＥＯＳ、ＥＰ３００、ＥＰＢ４１、ＥＰＢ４２、ＥＰＣＡＭ、ＥＰＤ、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈｒｉｎＡ２、ＥｐｈｒｉｎＡ３、ＥＰＨＸ１、ＥＰＭ２Ａ、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＥＰＸ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＣＣ２  ＥＲＣＣ３、ＥＲＣＣ４、ＥＲＣＣ５、ＥＲＣＣ６、ＥＲＶＲ、ＥＳＲ１、ＥＴＦＡ、ＥＴＦＢ、ＥＴＦＤＨ、ＥＴＭ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＴＶ１、ＥＶＣ、ＥＶＲ２、ＥＶＲ１、ＥＷＳＲ１、ＥＸＴ２、ＥＸＴ３、ＥＸＴ１、ＥＹＡ１、ＥＹＣＬ２、ＥＹＣＬ３、ＥＹＣＬ１、ＥＺＨ２、Ｆ１０、Ｆ１１、Ｆ１２、Ｆ１３Ａ１、Ｆ１３Ｂ、Ｆ２、Ｆ５、Ｆ５Ｆ８Ｄ、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ８Ｃ、Ｆ９、ＦＡＢＰ２、ＦＡＣＬ６、ＦＡＨ、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＦ、ＦａｓＬ、ＦＢＮ２、ＦＢＮ１、ＦＢＰ１、ＦＣＧ３ＲＡ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＨＬ、ＦＣＭＤ、ＦＣＰ１、ＦＤＰＳＬ５、ＦＥＣＨ、ＦＥＯ、ＦＥＯＭ１、ＦＥＳ、ＦＧＡ、ＦＧＢ、ＦＧＤ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ５、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＧ、ＦＧＳ１、ＦＨ、ＦＩＣ１、ＦＩＨ、Ｆ２、ＦＫＢＰ６、ＦＬＮＡ、ＦＬＴ４、ＦＭＯ３、ＦＭＯ４、ＦＭＲ２、ＦＭＲ１、ＦＮ、ＦＮ１／ｍ、ＦＯＸＣ１、ＦＯＸＥ１、ＦＯＸＬ２、ＦＯＸＯ１Ａ、ＦＰＤＭＭ、ＦＰＦ、Ｆｒａ−１、ＦＲＡＸＦ、ＦＲＤＡ、ＦＳＨＢ、ＦＳＨＭＤ１Ａ、ＦＳＨＲ、ＦＴＨ１、ＦＴＨＬ１７、ＦＴＬ、ＦＴＺＦ１、ＦＵＣＡ１、ＦＵＴ２、ＦＵＴ６、ＦＵＴ１、ＦＹ、Ｇ２５０、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、Ｇ６ＰＣ、Ｇ６ＰＤ、Ｇ６ＰＴ１、Ｇ６ＰＴ２、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＥ、ＧＡＬＫ１、ＧＡＬＮＳ、ＧＡＬＴ、ＧＡＭＴ、ＧＡＮ、ＧＡＳＴ、ＧＡＳＴＲＩＮ１７、ＧＡＴＡ３、ＧＡＴＡ、ＧＢＡ、ＧＢＥ、ＧＣ、ＧＣＤＨ、ＧＣＧＲ、ＧＣＨ１、ＧＣＫ、ＧＣＰ−２、ＧＣＳ１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＣＳＨ、ＧＣＳＬ、ＧＣＹ、ＧＤＥＰ、ＧＤＦ５、ＧＤＩ１、ＧＤＮＦ、ＧＤＸＹ、ＧＦＡＰ、ＧＦＮＤ、ＧＧＣＸ、ＧＧＴ１、ＧＨ２、ＧＨ１、ＧＨＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳ、Ｇ
ＩＦ、ＧＩＮＧＦ、ＧＩＰ、ＧＪＡ３、ＧＪＡ８、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ６、ＧＪＢ１、ＧＫ、ＧＬＡ、ＧＬＢ、ＧＬＢ１、ＧＬＣ３Ｂ、ＧＬＣ１Ｂ、ＧＬＣ１Ｃ、ＧＬＤＣ、ＧＬＩ３、ＧＬＰ１、ＧＬＲＡ１、ＧＬＵＤ１、ＧＭ１  （ｆｕｃ−ＧＭ１）、ＧＭ２Ａ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭＰＲ、ＧＮＡＩ２、ＧＮＡＳ、ＧＮＡＴ１、ＧＮＢ３、ＧＮＥ、ＧＮＰＴＡ、ＧＮＲＨ、ＧＮＲＨ１、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＳ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰ１ＢＡ、ＧＰ１ＢＢ、ＧＰ９、ＧＰＣ３、ＧＰＤ２、ＧＰＤＳ１、ＧＰＩ、ＧＰ１ＢＡ、ＧＰＮ１ＬＷ、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＧＰＳＣ、ＧＰＸ１、ＧＲＨＰＲ、ＧＲＫ１、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＧＲＰＲ、ＧＳＥ、ＧＳＭ１、ＧＳＮ、ＧＳＲ、ＧＳＳ、ＧＴＤ、ＧＴＳ、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＧＵＬＯＰ、ＧＵＳＢ、ＧＵＳＭ、ＧＵＳＴ、ＧＹＰＡ、ＧＹＰＣ、ＧＹＳ１、ＧＹＳ２、Ｈ０ＫＰＰ２、Ｈ０ＭＧ２、ＨＡＤＨＡ、ＨＡＤＨＢ、ＨＡＧＥ、ＨＡＧＨ、ＨＡＬ、ＨＡＳＴ−２、ＨＢ  １、ＨＢＡ２、ＨＢＡ１、ＨＢＢ、ＨＢＢＰ１、ＨＢＤ、ＨＢＥ１、ＨＢＧ２、ＨＢＧ１、ＨＢＨＲ、ＨＢＰ１、ＨＢＱ１、ＨＢＺ、ＨＢＺＰ、ＨＣＡ、ＨＣＣ−１、ＨＣＣ−４、ＨＣＦ２、ＨＣＧ、ＨＣＬ２、ＨＣＬ１、ＨＣＲ、ＨＣＶＳ、ＨＤ、ＨＰＮ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ２／ＮＥＵ、ＨＥＲ３、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＥＳＸ１、ＨＥＸＡ、ＨＥＸＢ、ＨＦ１、ＨＦＥ、ＨＦ１、ＨＧＤ、ＨＨＣ２、ＨＨＣ３、ＨＨＧ、ＨＫ１  ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＬＡ−ＤＰＢ１  ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＣＳ、ＨＬＸＢ９、ＨＭＢＳ、ＨＭＧＡ２、ＨＭＧＣＬ、ＨＭＩ、ＨＭＮ２、ＨＭＯＸ１、ＨＭＳ１  ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＨＮＤ、ＨＮＥ、ＨＮＦ４Ａ、ＨＯＡＣ、ＨＯＭＥＯＢＯＸ  ＮＫＸ  ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＯＸＡ１  ＨＯＸＤ１３、ＨＰ、ＨＰＣ１、ＨＰＤ、ＨＰＥ２、ＨＰＥ１、ＨＰＦＨ、ＨＰＦＨ２、ＨＰＲＴ１、ＨＰＳ１、ＨＰＴ、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＲ、ＨＲＡＳ、ＨＲＤ、ＨＲＧ、ＨＲＰＴ２、ＨＲＰＴ１、ＨＲＸ、ＨＳＤ１１Ｂ２、ＨＳＤ１７Ｂ３、ＨＳＤ１７Ｂ４、ＨＳＤ３Ｂ２、ＨＳＤ３Ｂ３、ＨＳＮ１、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＰＧ２、ＨＳＴ−２、ＨＴＣ２、ＨＴＣ１、ｈＴＥＲＴ、ＨＴＮ３、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＶＢＳ６、ＨＶＢＳ１、ＨＶＥＣ、ＨＶ１Ｓ、ＨＹＡＬ１、ＨＹＲ、Ｉ−３０９、ＩＡＢ、ＩＢＧＣ１、ＩＢＭ２、ＩＣＡＭ１、ＩＣＡＭ３、ｉＣＥ、ＩＣＨＱ、ＩＣＲ５、ＩＣＲ１、ＩＣＳ１、ＩＤＤＭ２、ＩＤＤＭ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＦ、ＩＦＮａ／ｂ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＧＡＤ１、ＩＧＥＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＧＦ２Ｒ、ＩＧＦ１、ＩＧＨ、ＩＧＨＣ、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＭ、ＩＧＨＲ、ＩＧＫＣ、ＩＨＧ１、ＩＨＨ、ＩＫＢＫＧ、ＩＬ１、ＩＬ−１  ＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ−１１、ＩＬ１２、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１３、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ１８、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ６、ＩＬ−７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ−８、ＩＬ−９、未成熟なラミニン受容体、ＩＭＭＰ２Ｌ、ＩＮＤＸ、ＩＮＦＧＲ１、ＩＮＦＧＲ２、ＩＮＦα、ＩＦＮ、ＩＮＦγ、ＩＮＳ、ＩＮＳＲ、ＩＮＶＳ、ＩＰ−１０、ＩＰ２、ＩＰＦ１、ＩＰ１、ＩＲＦ６、ＩＲＳ１、ＩＳＣＷ、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡ７、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＩＨ１、ＩＴＭ２Ｂ、ＩＶ、ＩＶＤ、ＪＡＧ１、ＪＡＫ３、ＪＢＳ、ＪＢＴＳ１、ＪＭＳ、ＪＰＤ、ＫＡＬ１、ＫＡＬ２、ＫＡＬＩ、ＫＬＫ２、ＫＬＫ４、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＥ２、ＫＣＮＥ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ１、ＫＣＳ、ＫＥＲＡ、ＫＦＭ、ＫＦＳ、ＫＦＳＤ、ＫＨＫ、ｋｉ−６７、ＫＩＡＡ００２０、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＩＦ１Ｂ、ＫＩＴ、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＬＫ３、ＫＬＫＢ１、ＫＭ−ＨＮ−１、ＫＭＳ、ＫＮＧ、ＫＮＯ、Ｋ−ＲＡＳ／ｍ、ＫＲＡＳ２、ＫＲＥＶ１、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１０、ＫＲＴ１２、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ１４Ｌ１、ＫＲＴ１４Ｌ２、ＫＲＴ１４Ｌ３、ＫＲＴ１６、ＫＲＴ１６Ｌ１、ＫＲＴ１６Ｌ２、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴ３、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ６  Ａ、ＫＲＴ６Ｂ、ＫＲＴ９、ＫＲＴＨＢ１、ＫＲＴＨＢ６、ＫＲＴ１、ＫＳＡ、ＫＳＳ、ＫＷＥ、ＫＹＮＵ、Ｌ０Ｈ１９ＣＲ１、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＬＡＬＬ、ＬＡＭＡ２、ＬＡＭＡ３、ＬＡＭＢ３、ＬＡＭＢ１、ＬＡＭＣ２、ＬＡＭＰ２、ＬＡＰ、ＬＣＡ５、ＬＣＡＴ、ＬＣＣＳ、ＬＣＣＳ  １、ＬＣＦＳ２、ＬＣＳ１、ＬＣＴ、ＬＤＨＡ、ＬＤＨＢ、ＬＤＨＣ、ＬＤＬＲ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＬＥＰ、ＬＥＷＩＳＹ、ＬＧＣＲ、ＬＧＧＦ−ＰＢＰ、ＬＧＩ１、ＬＧＭＤ２Ｈ、ＬＧＭＤ１Ａ、ＬＧＭＤ１Ｂ、ＬＨＢ、ＬＨＣＧＲ、ＬＨＯＮ、ＬＨＲＨ、ＬＨＸ３、ＬＩＦ、ＬＩＧ１、ＬＩＭＭ、ＬＩＭＰ２、ＬＩＰＡ、ＬＩＰＡ、ＬＩＰＢ、ＬＩＰＣ、ＬＩＶＩＮ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＭＡＮ１、ＬＭＮＡ、ＬＭＸ１Ｂ、ＬＯＬＲ、ＬＯＲ、ＬＯＸ、ＬＰＡ、ＬＰＬ、ＬＰＰ、ＬＱＴ４、ＬＲＰ５、ＬＲＳ  １、ＬＳＦＣ、ＬＴ−  β  、ＬＴＢＰ２、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＹＬ１、ＸＣＬ１、ＬＹＺ、Ｍ３４４、ＭＡ５０、ＭＡＡ、ＭＡＤＨ４、ＭＡＦＤ２、ＭＡＦＤ１、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥＢ１、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、ＭＧＢ１、ＭＧＢ２、ＭＡＮ２Ａ１、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＮＢＢ、ＭＡＯＡ、ＭＡＯＢ、ＭＡＰＫ８ＩＰ１、ＭＡＰＴ、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ２／ｍ、ＭＡＴ１Ａ、ＭＢＬ２、ＭＢＰ、ＭＢＳ１、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣＣ、ＭＣＣＣ２、ＭＣＣＣ１、ＭＣＤＲ１、ＭＣ��２、ＭＣＫＤ、ＭＣＬ１、ＭＣ１Ｒ、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＰ、ＭＣＯＲ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＭＣＰＨ２、ＭＣＰＨ１、ＭＣＳ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＤＢ、ＭＤＣＲ、ＭＤＭ２、ＭＤＲＶ、ＭＤＳ  １、ＭＥ１、ＭＥ１／ｍ、ＭＥ２、ＭＥ２０、ＭＥ３、ＭＥＡＸ、ＭＥＢ、ＭＥＣ  ＣＣＬ−２８、ＭＥＣＰ２、ＭＥＦＶ、ＭＥＬＡＮＡ、ＭＥＬＡＳ、ＭＥＮ１  ＭＳＬＮ、ＭＥＴ、ＭＦ４、ＭＧ５０、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＧＡＴ２、ＭＧＡＴ５、ＭＧＣ１
ＭＧＣＲ、ＭＧＣＴ、ＭＧＩ、ＭＧＰ、ＭＨＣ２ＴＡ、ＭＨＳ２、ＭＨＳ４、ＭＩＣ２、ＭＩＣ５、ＭＩＤＩ、ＭＩＦ、ＭＩＰ、ＭＩＰ−５／ＨＣＣ−２、ＭＩＴＦ、ＭＪＤ、ＭＫＩ６７、ＭＫＫＳ、ＭＫＳ１、ＭＬＨ１、ＭＬＬ、ＭＬＬＴ２、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ７、ＭＬＬＴ１、ＭＬＳ、ＭＬＹＣＤ、ＭＭＡ１ａ、ＭＭＰ  １１、ＭＭＶＰ１、ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ−Ａｎｔｉｇｅｎ、ＭＮＧ１、ＭＮ１、ＭＯＣ３１、ＭＯＣＳ２、ＭＯＣＳ１、ＭＯＧ、ＭＯＲＣ、ＭＯＳ、ＭＯＶ１８、ＭＰＤ１、ＭＰＥ、ＭＰＦＤ、ＭＰＩ、ＭＰＩＦ−１、ＭＰＬ、ＭＰＯ、ＭＰＳ３Ｃ、ＭＰＺ、ＭＲＥ１１Ａ、ＭＲＯＳ、ＭＲＰ１、ＭＲＰ２、ＭＲＰ３、ＭＲＳＤ、ＭＲＸ１４、ＭＲＸ２、ＭＲＸ２０、ＭＲＸ３、ＭＲＸ４０、ＭＲＸＡ、ＭＲＸ１、ＭＳ、ＭＳ４Ａ２、ＭＳＤ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＳＳ、ＭＳＳＥ、ＭＳＸ２、ＭＳＸ１、ＭＴＡＴＰ６、ＭＴＣ０３、ＭＴＣＯ１、ＭＴＣＹＢ、ＭＴＨＦＲ、ＭＴＭ１、ＭＴＭＲ２、ＭＴＮＤ２、ＭＴＮＤ４、ＭＴＮＤ５、ＭＴＮＤ６、ＭＴＮＤ１、ＭＴＰ、ＭＴＲ、ＭＴＲＮＲ２、ＭＴＲＮＲ１、ＭＴＲＲ、ＭＴＴＥ、ＭＴＴＧ、ＭＴＴＩ、ＭＴＴＫ、ＭＴＴＬ２、ＭＴＴＬ１、ＭＴＴＮ、ＭＴＴＰ、ＭＴＴＳ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３、ＭＵＭ−３／ｍ、ＭＵＴ、ｍｕｔａｎｔ  ｐ２１  ｒａｓ、ＭＵＴＹＨ、ＭＶＫ、ＭＸ２、ＭＸＩ１、ＭＹ０５Ａ、ＭＹＢ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ２、ＭＹＨ６、ＭＹＨ７、ＭＹＬ２、ＭＹＬ３、ＭＹＭＹ、ＭＹＯ１５Ａ、ＭＹＯ１Ｇ、ＭＹＯ５Ａ、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯＣ、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ、ＭＹＰ２、ＭＹＰ１、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＡＭＳＤ、ＮＡＰＢ、ＮＡＴ２、ＮＡＴ、ＮＢＩＡ１、ＮＢＳ１、ＮＣＡＭ、ＮＣＦ２、ＮＣＦ１、ＮＤＮ  、ＮＤＰ、ＮＤＵＦＳ４、ＮＤＵＦＳ７、ＮＤＵＦＳ８、ＮＤＵＦＶ１、ＮＤＵＦＶ２、ＮＥＢ、ＮＥＦＨ、ＮＥＭ１、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＥＵ１、ＮＥＵＲＯＤ１、ＮＦ２、ＮＦ１、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＨＳ、ＮＫＳ１、ＮＫＸ２Ｅ、ＮＭ、ＮＭＥ１、ＮＭＰ２２、ＮＭＴＣ、ＮＯＤＡＬ、ＮＯＧ、ＮＯＳ３、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ１、ＮＰ、ＮＰＣ２、ＮＰＣ１、ＮＰＨＬ２、ＮＰＨＰ１、ＮＰＨＳ２、ＮＰＨＳ１、ＮＰＭ／ＡＬＫ、ＮＰＰＡ、ＮＱＯ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲＡＳ、ＮＲＡＳ／ｍ、ＮＲＬ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＴＮ、ＮＳＥ、ＮＳＸ、ＮＴＲＫ１、ＮＵＭＡ１、ＮＸＦ２、ＮＹ−ＣＯ１、ＮＹ−ＥＳＯ１、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＮＹ−ＬＵ−１２、ＡＬＤＯＡ、ＮＹＳ２、ＮＹＳ４、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＮＹＳ１、ＮＹＸ、ＯＡ３、ＯＡ１、ＯＡＰ、ＯＡＳＤ、ＯＡＴ、ＯＣＡ１、ＯＣＡ２、ＯＣＤ１、ＯＣＲＬ、ＯＣＲＬ１、ＯＣＴ、ＯＤＤＤ、ＯＤＴ１、ＯＦＣ１、ＯＦＤ１、ＯＧＤＨ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＰＡ２、ＯＰＡ１、ＯＰＤ１、ＯＰＥＭ、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＰＮ１ＬＷ、ＯＰＮ１ＭＷ、ＯＰＮ１ＳＷ、ＯＰＰＧ、ＯＰＴＢ１、ＴＴＤ、ＯＲＭ１、ＯＲＰ１、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、ＯＳＭ
ＬＩＦ、ＯＴＣ、ＯＴＯＦ、ＯＴＳＣ１、ＯＸＣＴ１、ＯＹＴＥＳ１、Ｐ１５、Ｐ１９０  ＭＩＮＯＲ  ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ３、Ｐ１６、Ｐ４０、Ｐ４ＨＢ、Ｐ−５０１、Ｐ５３、Ｐ５３／ｍ、Ｐ９７、ＰＡＢＰＮ１、ＰＡＦＡＨ１Ｂ１、ＰＡＦＡＨ１Ｐ１、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＧＥ−５、ＰＡＨ、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＫ３、ＰＡＰ、ＰＡＰＰＡ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＡＸ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ６、ＰＡＸ７、ＰＡＸ８、ＰＡＸ９、ＰＢＣＡ、ＰＢＣＲＡ１、ＰＢＴ、ＰＢＸ１、ＰＢＸＰ１、ＰＣ、ＰＣＢＤ、ＰＣＣＡ、ＰＣＣＢ、ＰＣＫ２、ＰＣＫ１、ＰＣＬＤ、ＰＣＯＳ１、ＰＣＳＫ１、ＰＤＢ１、ＰＤＣＮ、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥＦ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲＬ、ＰＤＨＡ１、ＰＤＲ、ＰＤＸ１、ＰＥＣＡＭ１、ＰＥＥ１、ＰＥＯ１、ＰＥＰＤ、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ７、ＰＥＸ１、ＰＦ４、ＰＦＢＩ、ＰＦＣ、ＰＦＫＦＢ１、ＰＦＫＭ、ＰＧＡＭ２、ＰＧＤ、ＰＧＫ１、ＰＧＫ１Ｐ１、ＰＧＬ２、ＰＧＲ、ＰＧＳ、ＰＨＡ２Ａ、ＰＨＢ、ＰＨＥＸ、ＰＨＧＤＨ、ＰＨＫＡ２、ＰＨＫＡ１、ＰＨＫＢ、ＰＨＫＧ２、ＰＨＰ、ＰＨＹＨ、ＰＩ、ＰＩ３、ＰＩＧＡ、ＰＩＭ１−ＫＩＮＡＳＥ、ＰＩＮ１、ＰＩＰ５Ｋ１Ｂ、ＰＩＴＸ２、ＰＩＴＸ３、ＰＫＤ２、ＰＫＤ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤＴＳ、ＰＫＨＤ１、ＰＫＬＲ、ＰＫＰ１、ＰＫＵ１、ＰＬＡ２Ｇ２Ａ、ＰＬＡ２Ｇ７、ＰＬＡＴ、ＰＬＥＣ１、ＰＬＧ、ＰＬＩ、ＰＬＯＤ、ＰＬＰ１、ＰＭＥＬ１７、ＰＭＬ、ＰＭＬ／ＲＡＲα、ＰＭＭ２、ＰＭＰ２２、ＰＭＳ２、ＰＭＳ１、ＰＮＫＤ、ＰＮＬＩＰ、ＰＯＦ１、ＰＯＬＡ、ＰＯＬＨ、ＰＯＭＣ、ＰＯＮ２、ＰＯＮ１、ＰＯＲＣ、ＰＯＴＥ、ＰＯＵ１Ｆ１、ＰＯＵ３Ｆ４、ＰＯＵ４Ｆ３、ＰＯＵ１Ｆ１、ＰＰＡＣ、ＰＰＡＲＧ、
ＰＰＣＤ、ＰＰＧＢ、ＰＰＨ１、ＰＰＫＢ、ＰＰＭＸ、ＰＰＯＸ、ＰＰＰ１Ｒ３Ａ、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＰＴ１、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＢ、ＰＲＢ３、ＰＲＣＡ１、ＰＲＣＣ、ＰＲＤ、ＰＲＤＸ５／ｍ、ＰＲＦ１、ＰＲＧ４、ＰＲＫＡＲ１Ａ、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＤＣ、ＰＲＫＷＮＫ４、ＰＲＮＰ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＤＨ、ＰＲＯＭ１、ＰＲＯＰ１、ＰＲＯＳ１、ＰＲＳＴ、ＰＲＰ８、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＨ２、ＰＲＰＳ２、ＰＲＰＳ１、ＰＲＳ、ＰＲＳＳ７、ＰＲＳＳ１、ＰＲＴＮ３、ＰＲＸ、ＰＳＡ、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＳＥＮ２、ＰＳＥＮ１、ＰＳＧ１、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＳＯＲＳ１、ＰＴＣ、ＰＴＣＨ、ＰＴＣＨ１、ＰＴＣＨ２、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ１、ＰＴＨ、ＰＴＨＲ１、ＰＴＬＡＨ、ＰＴＯＳ１、ＰＴＰＮ１２、ＰＴＰＮＩ  ｌ、ＰＴＰＲＫ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＰＴＳ、ＰＵＪＯ、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ１、ＰＷＣＲ、ＰＸＥ、ＰＸＭＰ３、ＰＸＲ１、ＰＹＧＬ、ＰＹＧＭ、ＱＤＰＲ、ＲＡＢ２７Ａ、ＲＡＤ５４Ｂ、ＲＡＤ５４Ｌ、ＲＡＧ２、ＲＡＧＥ、ＲＡＧＥ−１、ＲＡＧ１、ＲＡＰ１、ＲＡＲＡ、ＲＡＳＡ１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＢ１、ＲＢＰ４、ＲＢＰ４、ＲＢＳ、ＲＣＡ１、ＲＣＡＳ１、ＲＣＣＰ２、ＲＣＤ１、ＲＣＶ１、ＲＤＨ５、ＲＤＰＡ、ＲＤＳ、ＲＥＣＱＬ２、ＲＥＣＱＬ３、ＲＥＣＱＬ４、ＲＥＧ１Ａ、ＲＥＨＯＢＥ、ＲＥＮ、ＲＥＮＢＰ、ＲＥＮＳ１、ＲＥＴ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＲＧＲ、ＲＨＡＧ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＨＤ、ＲＨＯ、Ｒｉｐ−１、ＲＬＢＰ１、ＲＬＮ２、ＲＬＮ１、ＲＬＳ、ＲＭＤ１、ＲＭＲＰ、ＲＯＭ１、ＲＯＲ２、ＲＰ、ＲＰ１、ＲＰ１４、ＲＰ１７、ＲＰ２、ＲＰ６、ＲＰ９、ＲＰＤ１、ＲＰＥ６５、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＲＰ１、ＲＰ１０、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２、ＲＰＳ４Ｘ、ＲＰＳ４Ｙ、ＲＰＳ６ＫＡ３、ＲＲＡＳ２、ＲＳ１、ＲＳＮ、ＲＳＳ、ＲＵ１、ＲＵ２、ＲＵＮＸ２、ＲＵＮＸｌ、ＲＷＳ、ＲＹＲ１、Ｓ−１００、ＳＡＡ１、ＳＡＣＳ、ＳＡＧ、ＳＡＧＥ、ＳＡＬＬ１、ＳＡＲＤＨ、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２
、ＳＡＲＴ３、ＳＡＳ、ＳＡＸ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ４、ＳＣＡ５、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１、ＳＣＣ、ＳＣＣＤ、ＳＣＦ、ＳＣＬＣ１、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｇ、ＳＣＯ２、ＳＣＰ１、ＳＣＺＤ２、ＳＣＺＤ３、ＳＣＺＤ４、ＳＣＺＤ６、ＳＣＺＤ１、ＳＤＦ−１ａ／ｂ、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＤ、ＳＤＹＳ、ＳＥＤＬ、ＳＥＲＰＥＮＡ７、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＡ６、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＳＥＲＰＩＮＤ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＥＲＰＩＮＧ１、ＳＥＲＰＩＮＩ１、ＳＦＴＰＡ１、ＳＦＴＰＢ、ＳＦＴＰＣ、ＳＦＴＰＤ、ＳＧＣＡ、ＳＧＣＢ、ＳＧＣＤ、ＳＧＣＥ、ＳＧＭ１、ＳＧＳＨ、ＳＧＹ−１、ＳＨ２Ｄ１Ａ、ＳＨＢＧ、ＳＨＦＭ２、ＳＨＦＭ３、ＳＨＦＭ１、ＳＨＨ、ＳＨＯＸ、ＳＩ、ＳＩＡＬ、ＳＩＡＬＹＬ  ＬＥＷＩＳＸ  、ＳＩＡＳＤ、Ｓ１１、ＳＩＭ１、ＳＩＲＴ２／ｍ、ＳＩＸ３、ＳＪＳ１、ＳＫＰ２、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ１Ｌ、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ７Ａ９、ＳＬＣ１１Ａ１、ＳＬＯＳ、ＳＭＡ、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＬ、ＳＭＡＲＣＢ１、ＳＭＡＸ２、ＳＭＣＲ、ＳＭＣＹ、ＳＭ１、ＳＭＮ２、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ２、ＳＯＤ３、ＳＯＤ１、ＳＯＳ１、ＳＯＳＴ、ＳＯＸ９、ＳＯＸ１０、Ｓｐ１７、ＳＰＡＮＸＣ、ＳＰＧ２３、ＳＰＧ３Ａ、ＳＰＧ４、ＳＰＧ５Ａ、ＳＰＧ５Ｂ、ＳＰＧ６、ＳＰＧ７、ＳＰＩＮＫ１、ＳＰＩＮＫ５、ＳＰＰＫ、ＳＰＰＭ、ＳＰＳＭＡ、ＳＰＴＡ１、ＳＰＴＢ、ＳＰＴＬＣ１、ＳＲＣ、ＳＲＤ５Ａ２、ＳＲＰＸ、ＳＲＳ、ＳＲＹ、ＳＳｈＣＧ、ＳＳＴＲ２、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２  （ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０／ＳＳＸ２）、ＳＳＸ４、ＳＴ８、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＡＲ、ＳＴＡＲＰ１、ＳＴＡＴＨ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＫ２、ＳＴＫ１１、ＳＴｎ／  ＫＬＨ、ＳＴＯ、ＳＴＯＭ、ＳＴＳ、ＳＵＯＸ、ＳＵＲＦ１、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＣＰ１、ＳＹＭ１、ＳＹＮ１、ＳＹＮＳ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＣＳＴＤ１、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＧ７２、ＴＡＦ７Ｌ、ＴＡＦ１、ＴＡＧＥ、ＴＡＧ−７２、ＴＡＬＩ、ＴＡＭ、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＶＲ１、ＴＡＲＣ、ＴＡＲＰ、ＴＡＴ、ＴＡＺ、ＴＢＰ、ＴＢＸ２２、ＴＢＸ３、ＴＢＸ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＢＸＡＳ１、ＴＣＡＰ、ＴＣＦ２、ＴＣＦ１、ＴＣＩＲＧ１、ＴＣＬ２、ＴＣＬ４、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＮ２、ＴＣＯＦ１、ＴＣＲ、ＴＣＲＡ、ＴＤＤ、ＴＤＦＡ、ＴＤＲＤ１、ＴＥＣＫ、ＴＥＣＴＡ、ＴＥＫ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＥＬＡＢ１、ＴＥＸ１５、ＴＦ、ＴＦＡＰ２Ｂ、ＴＦＥ３、ＴＦＲ２、ＴＧ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦ−β、ＴＧＦＢ��、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲＥ、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＧＩＦ、ＴＧＭ−４、ＴＧＭ１、ＴＨ、ＴＨＡＳ、ＴＨＢＤ、ＴＨＣ、ＴＨＣ２、ＴＨＭ、ＴＨＰＯ、ＴＨＲＡ、ＴＨＲＢ、ＴＩＭＭ８Ａ、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３、ＴＩＭＰ１、ＴＩＴＦ１、ＴＫＣＲ、ＴＫＴ、ＴＬＰ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＸ１、ＴＭ４ＳＦ１、ＴＭ４ＳＦ２、ＴＭＣ１、ＴＭＤ、ＴＭＩＰ、ＴＮＤＭ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＴＮＮＩ３、ＴＮＮＴ２、ＴＯＣ、ＴＯＰ２Ａ、ＴＯＰ１、ＴＰ５３、ＴＰ６３、ＴＰＡ、ＴＰＢＧ、ＴＰＩ、ＴＰＩ／ｍ、ＴＰＩ１、ＴＰＭ３、ＴＰＭ１、ＴＰＭＴ、ＴＰＯ、ＴＰＳ、ＴＰＴＡ、ＴＲＡ、ＴＲＡＧ３、ＴＲＡＰＰＣ２、ＴＲＣ８、ＴＲＥＨ、ＴＲＧ、ＴＲＨ、ＴＲＩＭ３２、ＴＲＩＭ３７、ＴＲＰ１、ＴＲＰ２、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、Ｔｒｐ−ｐ８、ＴＲＰＳ１、ＴＳ、ＴＳＣ２、ＴＳＣ３、ＴＳＣ１、ＴＳＧ１０１、ＴＳＨＢ、ＴＳＨＲ、ＴＳＰ−１８０、ＴＳＴ、ＴＴＧＡ２Ｂ、ＴＴＮ、ＴＴＰＡ、ＴＴＲ、ＴＵ  Ｍ２−ＰＫ、ＴＵＬＰ１、ＴＷＩＳＴ、ＴＹＨ、ＴＹＲ、ＴＹＲＯＢＰ、ＴＹＲＯＢＰ、ＴＹＲＰ１、ＴＹＳ、ＵＢＥ２Ａ、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＥ１、ＵＣＨＬ１、ＵＦＳ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＬＲ、ＵＭＰＫ、ＵＭＰＳ、ＵＯＸ、ＵＰＡ、ＵＱＣＲＣ１、ＵＲＯ５、ＵＲＯＤ、ＵＰＫ１Ｂ、ＵＲＯＳ、ＵＳＨ２Ａ、ＵＳＨ３Ａ、ＵＳＨ１Ａ、ＵＳＨ１Ｃ、ＵＳＰ９Ｙ、ＵＶ２４、ＶＢＣＨ、ＶＣＦ、ＶＤＩ、ＶＤＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、ＶＨＬ、ＶＩＭ、ＶＭＤ２、ＶＭＤ１、ＶＭＧＬＯＭ、ＶＮＥＺ、ＶＮＦ、ＶＰ、ＶＲＮＩ、ＶＷＦ、ＶＷＳ、ＷＡＳ、ＷＢＳ２、ＷＦＳ２、ＷＦＳ１、ＷＨＣＲ、ＷＨＮ、ＷＩＳＰ３、ＷＭＳ、ＷＲＮ、ＷＳ２Ａ、ＷＳ２Ｂ、ＷＳＮ、ＷＳＳ、ＷＴ２、ＷＴ３、ＷＴ１、ＷＴＳ、ＷＷＳ、ＸＡＧＥ、ＸＤＨ、ＸＩＣ、ＸＩＳＴ、ＸＫ、ＸＭ、ＸＰＡ、ＸＰＣ、ＸＲＣＣ９、ＸＳ、ＺＡＰ７０、ＺＦＨＸ１Ｂ、ＺＦＸ、ＺＦＹ、ＺＩＣ２、ＺＩＣ３、ＺＮＦ１４５、ＺＮＦ２６１、ＺＮＦ３５、ＺＮＦ４１、ＺＮＦ６、ＺＮＦ１９８、ＺＷＳ１。
【０１３４】
治療的に活性なタンパク質は、さらに、アポト−シス性の因子、またはアポトーシスに関連するタンパク質から選択されてもよい。このようなアポト−シス性の因子、またはアポトーシスに関連するタンパク質としては、例えば、ＡＩＦ、Ａｐａｆ（例えば、Ａｐａｆ−１、Ａｐａｆ−２、Ａｐａｆ−３）、ｏｄｅｒＡＰＯ−２（Ｌ）、ＡＰＯ−３（Ｌ）、アポパイン（Ａｐｏｐａｉｎ）、Ｂａｄ、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ｘＳ、ｂｉｋ、ＣＡＤ、カルパイン（Ｃａｌｐａｉｎ）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ−１、カスパーゼ−２、カスパーゼ−３、カスパーゼ−４、カスパーゼ−５、カスパーゼ−６、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、カスパーゼ−１０、カスパーゼ−１１）、ｃｅｄ−３、ｃｅｄ−９、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ｃｒｍＡ、シトクロムＣ、ＣｄＲ１、ＤｃＲ１、ＤＤ、ＤＥＤ、ＤＩＳＣ、ＤＮＡ−ＰＫＣＳ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＦＡＤＤ／ＭＯＲＴ−１、ＦＡＫ、Ｆａｓ（Ｆａｓ−リガンドＣＤ９５／ｆａｓ（受容体））、ＦＬＩＣＥ／ＭＡＣＨ、ＦＬＩＰ、フォドリン（ｆｏｄｒｉｎ）、ｆｏｓ、Ｇ−アクチン、Ｇａｓ−２、ゲルゾリン、グランザイムＡ／Ｂ、ＩＣＡＤ、ＩＣＥ、ＪＮＫ、ラミンＡ／Ｂ、ＭＡＰ、ＭＣＬ−１、Ｍｄｍ−２、ＭＥＫＫ−１、ＭＯＲＴ−１、ＮＥＤＤ、ＮＦ−ｋａｐｐａＢ、ＮｕＭａ、ｐ５３、ＰＡＫ−２、ＰＡＲＰ、パーフォリン、ＰＩＴＳＬＲＥ、ＰＫＣｄｅｌｔａ、ｐＲｂ、プレセニリン、ｐｒＩＣＥ、ＲＡＩＤＤ、Ｒａｓ、ＲＩＰ、スフィンゴミエリナーゼ、単純ヘルペス（ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ）に由来するチミジンキナーゼ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、トランスグルタミナーゼなどが挙げられる。
【０１３５】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされ得る治療的に活性なタンパク質は、アジュバントタンパク質であることも可能である。これに関連して、アジュバントタンパク質は、本明細書にて規定されるような、先天性免疫の応答を引き出すことが可能なタンパク質の何れであってもよいものとして理解されることが好ましい。上記のような先天性の免疫応答は、パターン認識受容体（例えば、トール様受容体（ＴＬＲ）のファミリーから選択される受容体など）の活性化を含む。トール様受容体（ＴＬＲ）のファミリーとしては、例えば、ヒトのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０から選択されるトール様受容体、またはマウスのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３から選択されるトール様受容体が挙げられる。好ましくは、先天性の免疫応答は、上述にて規定されたように、哺乳動物内にて引き出される。さらに、好ましくは、上記アジュバントタンパク質は、ヒトのアジュバントタンパク質から、または、病原性のアジュバントタンパク質から、特に、細菌性のアジュバントタンパク質から選択される。加えて、アジュバント効果に関与する、ヒトのタンパク質をコードするｍＲＮＡが、同様に使用されてもよい。
【０１３６】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個によってコードされてもよい、ヒトのアジュバントタンパク質は、典型的に、（例えば、外因性のＴＬＲリガンドがＴＬＲに結合する反応といった）先天性の免疫応答を誘発することができる任意のヒトのタンパク質を含んでいる。より好ましくは、本発明の免疫賦活組成物である、修飾された（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個によってコードされた、ヒトのアジュバントタンパク質は、（ｉ）先天性の免疫応答を誘導する、もしくは、増強するサイトカイン、（ｉｉ）マクロファージから放出されるサイトカイン、（ｉｉｉ）補体システムの成分、（ｉｖ）パターン認識受容体（ＴＬＲおよびＩＬ−１Ｒ１が挙げられる。）のシグナル伝達のネットワークの成分であるタンパク質、（ｖ）シグナル伝達物質、（ｖｉ）活性化された転写因子、（ｖｉｉ）誘導された標的遺伝子、（ｖｉｉｉ）コスティミュラトリー分子（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、（ｉｘ）タンパク質のドメイン、（ｘ）細胞表面のタンパク質または（ｘｉ）ヒトのアジュバントタンパク質、あるいは（ｘｉｉ）上述したヒトのアジュバントタンパク質のいずれかの任意の種のホモログからなる群より選択される。（ｉ）先天性の免疫応答を誘導する、もしくは、増強するサイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１ＣＣＬ２１、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−αが挙げられる。（ｉｉ）マクロファージから放出されるサイトカインとしては、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−αが挙げられる。（ｉｉｉ）補体システムの成分としては、Ｃ１ｑ、ＭＢＬ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２ｂ、Ｂｂ、Ｄ、ＭＡＳＰ−１、ＭＡＳＰ−２、Ｃ４ｂ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、ＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ１ｑＲ、Ｃ１ＩＮＨ、Ｃ４ｂｐ、ＭＣＰ、ＤＡＦ、Ｈ、Ｉ、ＰおよびＣＤ５９が挙げられる。（ｉｖ）パターン認識受容体（ＴＬＲおよびＩＬ−１Ｒ１が挙げられる。）のシグナル伝達のネットワークの成分であるタンパク質に関し、この成分は、このパターン認識受容体のリガンドであり、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、β−デフェンシン、熱ショックタンパク質、ｇｐ９６、フィブリノゲン、ファイブロネクチンのタイプＩＩＩリピートエクストラドメインＡが挙げられる。熱ショックタンパク質は、例えば、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７５およびＨＳＰ９０である。パターン認識受容体としては、ＩＬ−１ＲＩ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１が挙げられる。（ｖ）シグナル伝達物質としては、Ｓｍａｌｌ−ＧＴＰａｓｅｓのシグナル伝達の成分（ＲｈｏＡ、Ｒａｓ、Ｒａｃ１、Ｃｄｃ４２など）、ＰＩＰのシグナル伝達の成分（ＰＩ３Ｋ、Ｓｒｃ−キナーゼなど）、ＭｙＤ８８に依存するシグナル伝達の成分の（ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、など）、ＭｙＤ８８に依存しないシグナル伝達の成分（ＴＣＡＭ１、ＴＩＣＡＭ２など）が挙げられる。（ｖｉ）活性化された転写因子としては、例えば、ＮＦ−ｋＢ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃが挙げられる。（ｖｉｉ）誘導された標的遺伝子としては、例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、βデフェンシン、ＩＬ−６、ＩＦＮγ、ＩＦＮαおよびＩＦＮβが挙げられる。（ｖｉｉｉ）コスティミュラトリー分子としては、ＣＤ２８またはＣＤ４０−リガンドまたはＰＤ１が挙げられる。（ｉｘ）タンパク質のドメインとしては、ＬＡＭＰが挙げられる。（ｘｉ）ヒトのアジュバントタンパク質としては、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ｔｒｉｆ、ｆｌｔ−３リガンド、チモペンチン、Ｇｐ９６またはファイブロネクチンが挙げられる。
【０１３７】
本発明の免疫賦活組成物の、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、病原性のアジュバントタンパク質は、一般に、自然免疫の応答（哺乳動物内にて）を引き出すことが可能な、病原性（アジュバント）のタンパク質の何れも含む。上記タンパク質は、より好ましくは、細菌、原生動物、ウイルス、真菌類、または、動物などから導かれる病原性（アジュバント）のタンパク質から選択される。上記タンパク質は、さらに好ましくは、限定されないが、細菌タンパク質、原生動物タンパク質（例えば、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉのタンパク質様のプロフィリン）、ウイルスタンパク質、真菌類タンパク質、または、動物タンパク質などなどからグループから選択される病原性アジュバントタンパク質から選択される。
【０１３８】
これに関連して、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、細菌の（アジュバント）タンパク質は、先天性の免疫応答（好ましくは哺乳動物内にて）を誘発することができるか、またはアジュバント特性を示す、任意の細菌のタンパク質を含んでいてもよい。より好ましくは、このような細菌の（アジュバント）タンパク質は、細菌の熱ショックタンパク質、すなわちシャペロン（Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ１００が挙げられる。）；グラム陰性細菌に由来するＯｍｐＡ（外膜タンパク質）；細菌のポリン（ＯｍｐＡが挙げられる。）；細菌の毒素；フェノールに溶解することができるモジュリン；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉに由来する、好中球を活性化するタンパク質；サーファクタントプロテインＤ；Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉに由来する外表面タンパク質Ａのリポタンパク質、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来するＡｇ３８（３８ｋＤａの抗原）；細菌の線毛に由来するタンパク質；Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅのエンテロトキシンＣＴ、グラム陰性細菌からの線毛に由来するピリン、およびサーファクタントプロテインＡなど、あるいは上述した細菌の（アジュバント）タンパク質のいずれかの任意のホモログからなるグループから選択される。上記細菌の毒素としては、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの百日咳毒素（ＰＴ）、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓからの百日咳アデニレートシクラーゼの毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ  ｔｏｘｉｎ）のＣｙａＡおよびＣｙａＣ、百日咳毒素からのＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇの変異体、テタヌス毒素、コレラ毒素（ＣＴ）、コレラ毒素のＢサブユニット、コレラ毒素からのＣＴＫ６３の変異体、ＣＴからのＣＴＥ１１２Ｋの変異体、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉの熱不安定性エンテロトキシン（ＬＴ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉの熱不安定性エンテロトキシンに由来する、毒性が低減したＢサブユニット（ＬＴＢ）（ＬＴＫ６３、ＬＴＲ７２が挙げられる。）が挙げられる。
【０１３９】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、細菌の（アジュバント）タンパク質は、細菌のアジュバントタンパク質から選択されてもよく、限定されないが、細菌のフラジェリンからなる群より選択されることがより好ましい。細菌のフラジェリンとしては、生物に由来するフラジェリンが挙げられる。この生物としては、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｑｕｉｆｅｘ、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｐｕｌｉｎａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｗｏｌｉｎｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａを含む。上記フラジェリンとしては、限定されないが、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ、Ａｑｕｉｆｅｘ  ｐｙｒｏｐｈｉｌｕｓ、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ  ｓｔｒａｉｎ  Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｃｌｏｎｅ  １、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ
ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｏｇｕｉｎｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ  ｃｅｃｉｃｏｌａ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｂｏｎｇｏｒｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓｅｒｐｕｌｉｎａ  ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｂｏｙｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｈａｇｅｄｅｎｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｗｏｌｉｎｅｌｌａ  ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ  および  Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａが挙げられる。
【０１４０】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、細菌のフラジェリンは、アクセッション番号にて参照される以下の各配列のいずれかを含む群から選択される配列を含むことがさらに好ましい。
【０１４１】
【表１】
2014196306.tif 000011
【０１４２】
2014196306.tif 000012
【０１４３】
2014196306.tif 000013
【０１４４】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、原生動物のタンパク質は、アジュバント特性を示す任意の原生動物のタンパク質から選択されてもよい。この原生動物のタンパク質は、限定されないが、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉに由来するＴｃ５２、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇｏｎｄｉｉに由来するＰＦＴＧ  、原生動物の熱ショックタンパク質、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｓｐｐ．に由来するＬｅＩＦ  、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉに由来するプロフィリン用タンパク質などからなる群より選択されることがより好ましい。
【０１４５】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、ウイルスのタンパク質は、アジュバント特性を示す任意のウイルスのタンパク質から選択されてもよい。このウイルスのタンパク質は、限定されないが、呼吸器合胞体ウイルスの融合糖タンパク質（Ｆタンパク質）、ＭＭＴウイルスに由来するエンベロープのタンパク質、マウス白血病ウイルスのタンパク質、野生型の麻疹ウイルスのヘマグルチニンタンパク質などから選択されることがより好ましい。
【０１４６】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、真菌類のタンパク質は、アジュバント特性を示す真菌類のタンパク質の何れもから選択されてもよく、また、より好ましくは、限定されないが、真菌類の免疫調節タンパク質（ＦＩＰ；ＬＺ−８）などからなるグループから選択されてもよい。
【０１４７】
最後に、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされてもよい、病原性のアジュバントタンパク質は、アジュバント特性を示す任意の病原性のアジュバントタンパク質から選択されてもよい。病原性のアジュバントタンパク質は、限定されないが、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ＯｓｐＡなどからなるグループから選択されることがより好ましい。
【０１４８】
ｂ）抗原
代替的に、免疫賦活性のアジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個が、抗原をコードしてもよい。本発明によれば、用語「抗原」は、免疫系によって認識され、適応性の免疫応答の一部としての抗体（または抗原に特異的なＴ細胞）の形成などによって、抗原特異的な免疫応答を引き起こすことができる物質をいう。これに関連して、適応性の免疫応答の第１のステップは、抗原提示細胞による、ナイーブな抗原に特異的なＴ細胞の活性化である。この活性化は、ナイーブＴ細胞が常に通過する、リンパ組織や器官において生じる。抗原提示細胞として機能することができる３つの細胞タイプは、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞である。上記細胞のそれぞれは、免疫の各応答を引き出すことにおいて、互いに異なる機能を有している。食作用およびマクロピノサイトーシスによって抗原が取り込まれた樹状細胞の組織は、リンパ組織の局部へ進入するための感染によって刺激され、成熟した樹状細胞に分化する。マクロファージは、細菌のような、粒子状の抗原を摂取し、感染因子によって誘導されて、ＭＨＣのクラスＩＩの分子を発現する。Ｂ細胞の受容体を介して、可溶性のタンパク質抗原を取り込み、結合するＢ細胞の新規な能力は、Ｔ細胞を誘導するために重要であってもよい。ＭＨＣの分子上への抗原の発現によって、Ｔ細胞の活性化を導き、Ｔ細胞の増殖およびアームドエフェクターＴ細胞への分化を誘導する。エフェクターＴ細胞の最も重要な機能は、ＣＤ８の細胞毒性のＴ細胞による感染された細胞の死と、細胞媒介性免疫を共に作動させるＴＨＩによるマクロファージの活性化と、抗体の異なる各クラスを生成するために、ＴＨ２およびＴＨ１の各細胞の双方によるＢ細胞の活性化であり、それゆえ、ヒトの免疫の応答を作動させる。Ｔ細胞は、直接的には、抗原を認識して結合しないが、代わりに、例えば、病原性のタンパク質抗原の短いペプチド断片を認識する、Ｔ細胞受容体によって抗原を認識する。病原性のタンパク質抗原は、他の細胞の表面上のＭＨＣ分子に結合されている。
【０１４９】
Ｔ細胞は、互いに異なるエフェクター機能を有する、２つの大きな各クラスに分けられる。この２つの各クラスは、細胞表面のタンパク質であるＣＤ４とＣＤ８との発現により識別される。Ｔ細胞のそれら２つのタイプは、認識するＭＨＣ分子のクラスについて異なっている。本体の組織上の構造および発現のパターンにおいて異なる、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩであるＭＨＣ分子の２つの各クラスが存在している。Ｔ細胞のＣＤ４は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合し、Ｔ細胞のＣＤ８は、ＭＨＣクラスＩ分子に結合している。ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩは、それらを認識するＴ細胞の異なるエフェクター機能を反映する、細胞間において異なる分布を有している。ＭＨＣクラスＩ分子は、病原、通常はウイルスから、Ｔ細胞のＣＤ８にペプチドを提供して、上記Ｔ細胞を、それが特異的に認識した細胞の何れも細胞死に至る特殊化された、細胞毒性Ｔ細胞に分化させる。全ての細胞において、ＭＨＣクラスＩ分子を発現するが、構造性の発現のレベルは、１つの細胞タイプから次の細胞タイプとにおいて異なる。ウイルス由来の病原性ペプチドは、ＭＨＣクラスＩの分子により表されるだけではなく、腫瘍抗原様の自己抗原も、ＭＨＣクラスＩの分子により表される。ＭＨＣ分子は、サイトゾル内にて分解されたタンパク質からのペプチドに結合し、小胞体内に伝送される。それゆえ、ウイルスまたは他のサイトゾルの病原体により感染された細胞の表面上のＭＨＣクラスＩの分子は、それら病原体からのペプチドを表示している。ＭＨＣクラスＩとペプチドとの複合体を認識する、ＣＤ８のＴ細胞は、外来のペプチドを表示する何れの細胞を細胞死するように特異化されており、よって、ウイルスまたは他のサイトゾルの病原体により感染された細胞本体を除去する。ＭＨＣクラスＩＩを認識する、ＣＤ４のＴ細胞（ＣＤ４ヘルパーＴ細胞）の主機能は、免疫系の他のエフェクター細胞を活性化することである。それゆえ、ＭＨＣクラスＩＩの分子は、通常、Ｂリンパ球、樹状細胞、マクロファージ、免疫系の関係する細胞上に見出されるが、他の組織細胞上には見出されない。例えば、マクロファージは、血管内に留まる病原体を死するように活性化される。Ｂ細胞は、外来の分子に対してイムノグロブリンを分泌するように活性化される。ＭＨＣクラスＩＩの分子は、小胞体内のペプチドに結合することが阻止されるので、エンドゾーム内で分解されたタンパク質由来のペプチドと結合する。マクロファージの小胞システムに入った病原体由来のペプチドを、または、免疫の樹状細胞により取り込まれた抗原由来のペプチドを、または、Ｂ細胞のイムノグロブリン受容体を捕獲することができる。マクロファージおよび樹状細胞の小胞内に多数蓄積された病原体は、ＴＨ１細胞の分化を刺激する傾向がある。一方、細胞外の抗原は、ＴＨ２細胞の生成を刺激する傾向にある。ＴＨ１細胞は、マクロファージの殺菌能を活性化し、細胞外の毒性の病原体を食細胞によって取り込むために、非常に有効な、ＩｇＧ抗体を生成させるようにＢ細胞を誘導する。一方、ＴＨ２細胞は、ＩｇＭを分泌するようにナイーブＢ細胞を活性化することのよって、体液性の応答を開始し、ＩｇＡ、ＩｇＥ  （マウスおよ���ヒト）と同様に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３（マウス）、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４  （ヒト）といった弱い毒性の抗体の生成を誘導する。
【０１５０】
本発明に関連して、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされた抗原は、一般に、上述した規定の範囲内の、より好ましくは、例えば、腫瘍抗原、アレルギー抗原、自己免疫自己抗原、病原性の抗原など、タンパク質やペプチドの抗原の何れも含む。本発明によれば、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個によってコードされた抗原は、上記細胞の外部にて生成された抗原であってもよく、ホスト生命体（例えば、ヒト）自身から導かれたもの（例えば、非自己抗原）ではなく、むしろ、ホスト生命体の外側のホストセルから導かれた抗原である。上記抗原としては、ウイルス性抗原、細菌性抗原、真菌性抗原、原生動物性抗原、動物性抗原（好ましくは、本明細書にて開示されたような動物または生命体から選択された）、および、アレルギー性抗原などである。アレルギー性抗原は、一般に、ヒトおよび他のソースの何れかから導かれてもよい、ヒトにアレルギーを起こす抗原である。その上、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個によってコードされたような抗原は、細胞内、組織内または体内にて生成された、例えば、タンパク質の分泌、上記タンパク質の分解、代謝などによる、抗原であってよい。上記のような抗原は、ホスト生命体（例えば、ヒト）自身から導かれた抗原を含む。上記抗原は、例えば、腫瘍抗原、自己抗原、または、自己免疫の自己抗原などの自己抗原を含むが、上記にて規定されたような（非自己の）抗原も含む。上記抗原としては、ホスト生命体の外部のホストセルから、元々、導き出されたものであるが、体内、組織内、細胞内にて、例えば、（プロテアーゼによる）分解、代謝などによって、断片化または分解されたものである。病原性の抗原は、特に、赤血球凝集素（ＨＡ）、ニューロアミダーゼ（ＮＡ）、マトリクスタンパク質１（Ｍ１）、イオンチャネルタンパク質Ｍ２（Ｍ２）、核タンパク質（ＮＰ）などを含む、インフルエンザ由来の抗原、または、例えば、Ｆ−タンパク質、Ｇ−タンパク質などを含むアール・エスウイルス由来の抗原である。
【０１５１】
さらに、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされたような抗原は、本明細書にて指摘されたような上記抗原、特にタンパク質抗原またはペプチド抗原の断片を含む。本発明の流れ内にある、上記抗原の断片は、好ましくは、約６個〜約２０個の長さ、またはそれ以上の長さのアミノ酸を有する断片を含む。上記断片は、例えば、ＭＨＣクラスＩの分子により処理され、表され、好ましくは、約８個から約１０個の、例えば、８個、９個、または１０個（または、１１個、１２個の長さのアミノ酸であっても）の長さのアミノ酸を有する。または、上記断片は、例えば、ＭＨＣクラスＩＩの分子により処理され、表され、好ましくは、約１３個またはそれ以上の長さ、例えば、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個またはそれ以上の長さのアミノ酸を有する。それら断片は、上記アミノ酸配列の何れの部分から選択されてもよい。それら断片は、一般に、ペプチド断片とＭＨＣの分子とからなる複合体の形態にて、Ｔ細胞によって認識される。つまり、上記断片は、それらのナイーブな形態では、一般に、認識されない。
【０１５２】
本明細書にて規定された抗原の断片は、また、それら抗原のエピトープを含んでもよい。エピトープ（「抗原決定基」とも呼ばれる）は、一般に、本明細書にて規定されたような、（ナイーブ）タンパク質またはペプチドの抗原の外側表面上に位置された断片であり、好ましくは、５個〜１５個の長さのアミノ酸、より好ましくは、５個〜１２個の長さのアミノ酸、さらに好ましくは、６個〜９個の長さのアミノ酸を有し、それらのナイーブな形態にて抗体によって認識されるものであってもよい。
【０１５３】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされたような抗原の１クラスは、腫瘍抗原を含む。「腫瘍抗原」は、好ましくは、（腫瘍）細胞の表面上に位置される。腫瘍抗原は、また、通常の細胞と比較して、腫瘍細胞において過剰発現される、タンパク質から選択されてもよい。さらに、腫瘍抗原は、また、それ自身（元々、それ自身ではない）ではない（ではなかった）、悪化したが、上記腫瘍と想定されるものと関連する、細胞内にて発現された抗原を含む。腫瘍が提供するベッセル、または、それを形成（再形成）するものと結合される抗原も、また、本明細書において含まれる。上記抗原は、特に、例えば、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦといった成長因子である血管新生に関連するものである。腫瘍に結合される抗原は、さらに、細胞または組織、特に、腫瘍を埋め込む細胞または組織由来の抗原を含む。さらに、ある物質（通常は、タンパク質またはペプチド）が、癌病を患った（告知された、または告知されていない）患者において発現され、上記物質は、上記患者の体液中で濃度が増加するものである。上記物質は、また、「腫瘍抗原」として参照されるが、物質を誘導する免疫系の厳格な意味において、抗原ではない。腫瘍抗原のクラスは、さらに、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡｓ）と腫瘍関連抗原（ＴＡＡｓ）に分けられる。ＴＳＡｓは、腫瘍細胞のみから発現され、通常の「健康な」細胞からは発現されない。ＴＳＡｓは、一般に、腫瘍に特異的な突然変異から結果として生じる。ＴＡＡｓは、より一般的なものであり、通常、腫瘍および健康細胞の双方により発現される。ＴＡＡｓの抗原は、認識され。抗原が表す細胞は、細胞毒性のＴ細胞によって破壊され得る。さらに加えて、腫瘍抗原は、また、例えば、変異した受容体の形態にて、腫瘍の表面上に生じることがある。この場合、それらは、抗体によって認識され得る。
【０１５４】
本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされたような腫瘍抗原の各例は、下記の表１および表２に示されている。これらの各表は、上記腫瘍抗原と関連する癌疾患に対する、特異的な（タンパク質）抗原（例えば、腫瘍抗原）を図示している。本発明によれば、「癌疾患」および「腫瘍疾患」の用語は、本明細書において、同義語として使用される。
【０１５５】
【表２】
2014196306.tif 000014
【０１５６】
2014196306.tif 000015
【０１５７】
2014196306.tif 000016
【０１５８】
2014196306.tif 000017
【０１５９】
2014196306.tif 000018
【０１６０】
2014196306.tif 000019
【０１６１】
2014196306.tif 000020
【０１６２】
【表３】
2014196306.tif 000021
【０１６３】
2014196306.tif 000022
【０１６４】
本発明に係る好ましい実施形態において、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている腫瘍抗原は、以下に示すものからなる群より選択される：５Ｔ４，７０７−ＡＰ，９Ｄ７，ＡＦＰ，ＡｌｂＺＩＰ  ＨＰＧ１，アルファ−５−ベータ−インテグリン，アルファ−５−ベータ−６−インテグリン，アルファ−アクチニン−４／ｍ，アルファ−メチルアシル−コエンザイムＡ
ラセマーゼ，ＡＲＴ−４，ＡＲＴＣ１／ｍ，Ｂ７Ｈ４，ＢＡＧＥ−１，ＢＣＬ−２，ｂｃｒ／ａｂｌ，ベータ−カテニン／ｍ，ＢＩＮＧ−４，ＢＲＣＡ１／ｍ，ＢＲＣＡ２／ｍ，ＣＡ  １５−３／ＣＡ  ２７−２９，ＣＡ  １９−９，ＣＡ７２−４，ＣＡ１２５，カルレティキュリン，ＣＡＭＥＬ，ＣＡＳＰ−８／ｍ，カテプシンＢ，カテプシンＬ，ＣＤ１９，ＣＤ２０，ＣＤ２２，ＣＤ２５，ＣＤＥ３０，ＣＤ３３，ＣＤ４，ＣＤ５２，ＣＤ５５，ＣＤ５６，ＣＤ８０，ＣＤＣ２７／ｍ，ＣＤＫ４／ｍ，ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ，ＣＥＡ，ＣＬＣＡ２，ＣＭＬ２８，ＣＭＬ６６，ＣＯＡ−１／ｍ，コアクトシン様タンパク質，コラージュ  ＸＸＩＩＩ，ＣＯＸ−２，ＣＴ−９／ＢＲＤ６，Ｃｔｅｎ，サイクリンＢ１，サイクリンＤ１，ｃｙｐ−Ｂ，ＣＹＰＢ１，ＤＡＭ−１０，ＤＡＭ−６，ＤＥＫ−ＣＡＮ，ＥＦＴＵＤ２／ｍ，ＥＧＦＲ，ＥＬＦ２／ｍ，ＥＭＭＰＲＩＮ，ＥｐＣａｍ，ＥｐｈＡ２，ＥｐｈＡ３，ＥｒｂＢ３，ＥＴＶ６−ＡＭＬ１，ＥＺＨ２，ＦＧＦ−５，ＦＮ，Ｆｒａｕ−１，Ｇ２５０，ＧＡＧＥ−１，ＧＡＧＥ−２，ＧＡＧＥ−３，ＧＡＧＥ−４，ＧＡＧＥ−５，ＧＡＧＥ−６，ＧＡＧＥ７ｂ，ＧＡＧＥ−８，ＧＤＥＰ，ＧｎＴ−Ｖ，ｇｐ１００，ＧＰＣ３，ＧＰＮＭＢ／ｍ，ＨＡＧＥ，ＨＡＳＴ−２，ヘプシン，Ｈｅｒ２／ｎｅｕ，ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ，ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７Ｉ，ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ，ＨＬＡ−Ａ２／ｍ，ＨＮＥ，ホメオボックスＮＫＸ３．１，ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１，ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５，ＨＰＶ−Ｅ６，ＨＰＶ−Ｅ７，ＨＳＰ７０−２Ｍ，ＨＳＴ−２，ｈＴＥＲＴ，ｉＣＥ，ＩＧＦ−１Ｒ，ＩＬ−１３Ｒａ２，ＩＬ−２Ｒ，ＩＬ−５，未成熟なラミニン受容体，カリクレイン−２，カリクレイン−４，Ｋｉ６７，ＫＩＡＡ０２０５，ＫＩＡＡ０２０５／ｍ，ＫＫ−ＬＣ−１，Ｋ−Ｒａｓ／ｍ，ＬＡＧＥ−Ａ１，ＬＤＬＲ−ＦＵＴ，ＭＡＧＥ−Ａ１，ＭＡＧＥ−Ａ２，ＭＡＧＥ−Ａ３，ＭＡＧＥ−Ａ４，ＭＡＧＥ−Ａ６，ＭＡＧＥ−Ａ９，ＭＡＧＥ−Ａ１０，ＭＡＧＥ−Ａ１２，ＭＡＧＥ−Ｂ１，ＭＡＧＥ−Ｂ２，ＭＡＧＥ−Ｂ３，ＭＡＧＥ−Ｂ４，ＭＡＧＥ−Ｂ５，ＭＡＧＥ−Ｂ６，ＭＡＧＥ−Ｂ１０，ＭＡＧＥ−Ｂ１６，ＭＡＧＥ−Ｂ１７，ＭＡＧＥ−Ｃ１，ＭＡＧＥ−Ｃ２，ＭＡＧＥ−Ｃ３，ＭＡＧＥ−Ｄ１，ＭＡＧＥ−Ｄ２，ＭＡＧＥ−Ｄ４，ＭＡＧＥ−Ｅ１，ＭＡＧＥ−Ｅ２，ＭＡＧＥ−Ｆ１，ＭＡＧＥ−Ｈ１，ＭＡＧＥＬ２，マンマグロビンＡ（ｍａｍｍａｇｌｏｂｉｎ  Ａ），ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ，ＭＡＲＴ−２，ＭＡＲＴ−２／ｍ，マトリックスタンパク質２２，ＭＣ１Ｒ，Ｍ−ＣＳＦ，ＭＥ１／ｍ，メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ），ＭＧ５０／ＰＸＤＮ，ＭＭＰ１１，ＭＮ／ＣＡ
ＩＸ−抗原，ＭＲＰ−３，ＭＵＣ−１，ＭＵＣ−２，ＭＵＭ−１／ｍ，ＭＵＭ−２／ｍ，ＭＵＭ−３／ｍ，ミオシン  クラスＩ／ｍ，ＮＡ８８−Ａ，Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ，Ｎｅｏ−ＰＡＰ，Ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ，ＮＦＹＣ／ｍ，ＮＧＥＰ，ＮＭＰ２２，ＮＰＭ／ＡＬＫ，Ｎ−Ｒａｓ／ｍ，ＮＳＥ，ＮＹ−ＥＳＯ−１，ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ，ＯＡ１，ＯＦＡ−ｉＬＲＰ，ＯＧＴ，ＯＧＴ／ｍ，ＯＳ−９，ＯＳ−９／ｍ，オステオカルシン，オステオポンチン，ｐ１５，ｐ１９０  マイナー  ｂｃｒ−ａｂｌ，ｐ５３，ｐ５３／ｍ，ＰＡＧＥ−４，ＰＡＩ−１，ＰＡＩ−２，ＰＡＲＴ−１，ＰＡＴＥ，ＰＤＥＦ，Ｐｉｍ−１−キナーゼ，Ｐｉｎ−１，Ｐｍｌ／ＰＡＲａｌｐｈａ，ＰＯＴＥ，ＰＲＡＭＥ，ＰＲＤＸ５／ｍ，プロステイン（ｐｒｏｓｔｅｉｎ），プロテイナーゼ−３，ＰＳＡ，ＰＳＣＡ，ＰＳＧＲ，ＰＳＭ，ＰＳＭＡ，ＰＴＰＲＫ／ｍ，ＲＡＧＥ−１，ＲＢＡＦ６００／ｍ，ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８，ＲＵ１，ＲＵ２，Ｓ−１００，ＳＡＧＥ，ＳＡＲＴ−１，ＳＡＲＴ−２，ＳＡＲＴ−３，ＳＣＣ，ＳＩＲＴ２／ｍ，Ｓｐ１７，ＳＳＸ−１，ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０，ＳＳＸ−４，ＳＴＡＭＰ−１，ＳＴＥＡＰ，サバイビン，サバイビン−２Ｂ，ＳＹＴ−ＳＳＸ−１，ＳＹＴ−ＳＳＸ−２，ＴＡ−９０，ＴＡＧ−７２，ＴＡＲＰ，ＴＥＬ−ＡＭＬ１，ＴＧＦｂｅｔａ，ＴＧＦｂｅｔａＲＩＩ，ＴＧＭ−４，ＴＰＩ／ｍ，ＴＲＡＧ−３，ＴＲＧ，ＴＲＰ−１，ＴＲＰ−２／６ｂ，ＴＲＰ／ＩＮＴ２，ＴＲＰ−ｐ８，チロシナーゼ，ＵＰＡ，ＶＥＧＦ，ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１，およびＷＴ１。
【０１６５】
より好ましい実施形態において、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによりコードされている腫瘍抗原は、以下に示すものからなる群より選択される：ＭＡＧＥ−Ａ１（例えば受入番号Ｍ７７４８１によるＭＡＧＥ−Ａ１），ＭＡＧＥ−Ａ２，ＭＡＧＥ−Ａ３，ＭＡＧＥ−Ａ６（例えば受入番号ＮＭ＿００５３６３によるＭＡＧＥ−Ａ６），ＭＡＧＥ−Ｃ１，ＭＡＧＥ−Ｃ２，メラン−Ａ（例えば受入番号ＮＭ＿００５５１１によるメラン−Ａ），ＧＰ１００（例えば受入番号Ｍ７７３４８によるＧＰ１００），チロシナーゼ（例えば受入番号ＮＭ＿０００３７２によるチロシナーゼ），サバイビン（例えば受入番号ＡＦ０７７３５０によるサバイビン），ＣＥＡ（例えば受入番号ＮＭ＿００４３６３によるＣＥＡ），Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（例えば受入番号Ｍ１１７３０によるＨｅｒ−２／ｎｅｕ），ＷＴ１（例えば受入番号ＮＭ＿０００３７８によるＷＴ１），ＰＲＡＭＥ（例えば受入番号ＮＭ＿００６１１５によるＰＲＡＭＥ），ＥＧＦＲＩ（上皮成長因子受容体１）（例えば受入番号ＡＦ２８８７３８によるＥＧＦＲＩ（上皮成長因子受容体１）），ＭＵＣ１，ムチン−１（例えば受入番号ＮＭ＿００２４５６によるムチン−１），ＳＥＣ６１Ｇ（例えば受入番号ＮＭ＿０１４３０２によるＳＥＣ６１Ｇ），ｈＴＥＲＴ（例えば受入番号ＮＭ＿１９８２５３のｈＴＥＲＴ），５Ｔ４（例えば受入番号ＮＭ＿００６６７０による５Ｔ４），ＮＹ−Ｅｓｏ−１（例えば受入番号ＮＭ＿００１３２７によるＮＹ−Ｅｓｏ１），ＴＲＰ−２（例えば受入番号ＮＭ＿００１９２２によるＴＲＰ−２），ＳＴＥＡＰ，ＰＣＡ，ＰＳＡ，ＰＳＭＡ等。
【０１６６】
さらに好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによりコードされている腫瘍抗原は、抗原の混合物の形態であってもよい。この抗原の混合物とは例えば、活性型の（免疫賦活性の）組成物または複数の部分を含むキット（好ましくはそれぞれの抗原がキットにおける１つの部分に含まれている）である。この混合物は、前立腺癌（ＰＣａ）、好ましくは腫瘍免疫賦活薬および／またはホルモン−不応性前立腺癌、ならびにこれらに関連する疾患または障害の治療のために、（適応性の）免疫応答を誘発するための混合物であることが好ましい。この目的のため、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、好ましくは少なくとも１個のＲＮＡであり、より好ましくは少なくとも１個のｍＲＮＡである。この（ｍ）ＲＮＡは、以下の抗原の群における少なくとも１個、好ましくは２個、３個またはちょうど４個の（好ましくは異なる）抗原をコードしていてもよい：
・ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）＝ＫＬＫ３（カリクレイン−３）、
・ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、
・ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、
・ＳＴＥＡＰ（前立腺の６回膜貫通型の上皮抗原）。
【０１６７】
他のさらにより好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによりコードされている腫瘍抗原は、抗原の混合物の形態であってもよい。この抗原の混合物は例えば、活性型の（免疫賦活性の）組成物または複数の部分を含むキット（好ましくはそれぞれの抗原がキットにおける１つの部分に含まれている）である。この混合物は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、好ましくは３つの主要なサブタイプの扁平細胞肺癌、腺癌および大細胞型肺癌から選択される非小細胞肺癌、またはこれらに関連する障害の治療のために、（適応性の）免疫応答を誘発するための混合物であることが好ましい。この目的のため、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、好ましくは少なくとも１個のｍＲＮＡである。この（ｍ）ＲＮＡは、以下の抗原の群における少なくとも１個、好ましくは２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個または１２個の（好ましくは異なる）抗原をコードしていてもよい：
・ｈＴＥＲＴ、
・ＷＴ１、
・ＭＡＧＥ−Ａ２、
・５Ｔ４、
・ＭＡＧＥ−Ａ３、
・ＭＵＣ１、
・Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、
・ＮＹ−ＥＳＯ−１、
・ＣＥＡ、
・サバイビン、
・ＭＡＧＥ−Ｃ１、および／または
・ＭＡＧＥ−Ｃ２、
これらの抗原の任意の組合せであっても可能である。
【０１６８】
さらにより好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによりコードされている腫瘍抗原は、抗原の混合物の形態であってもよい。この混合物は、例えば活性型の（免疫賦活性の）組成物または複数の部分を含むキット（好ましくはそれぞれの抗原がキットにおける１つの部分に含まれている）である。この混合物は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、好ましくは３つの主要なサブタイプの扁平細胞肺癌、腺癌および大細胞型肺癌から選択される非小細胞肺癌、またはこれらに関連する障害の治療のために、（適応性の）免疫応答を誘発するための混合物であることが好ましい。この目的のため、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、好ましくは少なくとも１個のＲＮＡであり、より好ましくは少なくとも１個のｍＲＮＡである。この（ｍ）ＲＮＡは、少なくとも２個の（好ましくは異なる）抗原をコードしていてもよく、
ａ）これらの少なくとも２個の抗原における、少なくとも１個、好ましくは２個、３個、４個、５個、またはさらに６個は、以下から選択される：
・５Ｔ４
・ＮＹ−ＥＳＯ−１、
・ＭＡＧＥ−Ａ２、
・ＭＡＧＥ−Ａ３、
・ＭＡＧＥ−Ｃ１、および／または
・ＭＡＧＥ−Ｃ２、ならびに、
ｂ）さらなる抗原は、本明細書中に明示される少なくとも１個の抗原、好ましくは本明細書中に記載されている抗原の組合せ、群、または部分群から選択される。例えば、このさらなる抗原は、例えば以下から選択される：
・ｈＴＥＲＴ、
・ＷＴ１、
・ＭＡＧＥ−Ａ２、
・５Ｔ４、
・ＭＡＧＥ−Ａ３、
・ＭＵＣ１、
・Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、
・ＮＹ−ＥＳＯ−１、
・ＣＥＡ、
・サバイビン、
・ＭＡＧＥ−Ｃ１、および／または
・ＭＡＧＥ−Ｃ２。
【０１６９】
上述した実施形態において、上に明示したタンパク質のそれぞれ、例えば本明細書中に明示されている治療的に活性型のタンパク質、抗体、抗原等は、１個の（モノシストロニック）ＲＮＡ、好ましくは１個の（モノシストロニック）ｍＲＮＡによりコードされていてもよい。言い換えれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、少なくとも２個の（モノシストロニック）ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡにより構成されていてもよい。これらの少なくとも２個の（モノシストロニック）ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡは、例えばただ１個の（好ましくは異なる）タンパク質をコードしていてもよい。このタンパク質は、例えば抗原であり、好ましくは上述した抗原の組合せのうちの１個から選択される抗原である。
【０１７０】
他の特に好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、（少なくとも）１個のバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡにより構成されてもよい。すなわちこの（ｍ）ＲＮＡは、例えば少なくとも２個の（好ましくは異なる）タンパク質についての２個またはより多くのコード配列を有する、（少なくとも）１個のＲＮＡである。このタンパク質は、例えば抗原であり、好ましくは上述した抗原の組合せのうちの１個から選択される抗原である。（少なくとも）１個のバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡにおける、これらのコード配列は、例えば少なくとも２個の（好ましくは異なる）タンパク質（例えば抗原）についてのコード配列であり、以下に示すように、少なくとも１個のＩＲＥＳ（internal ribosomal entry site）配列によって分断されていてもよい。このように、用語「少なくとも２個の（好ましくは異なる）タンパク質をコードする」は、これらに限定されないが、（少なくとも）１個の（バイもしくはマルチシストロニック）ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡが、例えば２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個もしくは１２個またはより多くの（好ましくは異なる）タンパク質をコードしていてもよいことを意味する。このタンパク質は、例えば上述した抗原の群における抗原、またはこれらの断片もしくは変異体、治療的に活性型のタンパク質、抗体、免疫賦活性タンパク質等である。より好ましくは、これらに限定されないが、（少なくとも）１個の（バイもしくはマルチシストロニック）ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡは、例えば少なくとも２個、３個、４個、５個、もしくは６個、またはより多くの（好ましくは異なる）タンパク質をコードしていてもよい。このタンパク質は、例えば上述した抗原の部分群における抗原、または上述した定義に含まれるこれらの断片もしくは変異体である。これに関連して、ここに明示されるようないわゆるＩＲＥＳ（internal ribosomal entry site）配列は、単独でリボソーム結合部位として機能することができる。また、ＩＲＥＳ配列は、ここに記載されるようなバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡの提供にも役に立つことができる。このバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡは、単独で、または相互にリボソームによって翻訳される、いくつかのタンパク質をコードする。本発明において使用することができるＩＲＥＳ配列の例としては、ピコルナウイルス（例えばＦＭＤＶ）、ペスチウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ブタコレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白斑ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはコオロギ麻痺性ウイルス（ＣｒＰＶ）由来のＩＲＥＳ配列である。
【０１７１】
さらなるより好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、本明細書に記載される少なくとも１個のモノシストロニックＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡと、本明細書に記載される少なくとも１個のバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡとの混合物により構成されていてもよい。この少なくとも１個のモノシストロニックＲＮＡ、および／または少なくとも１個のバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡは、異なるタンパク質をコードしていることが好ましい。このタンパク質は、例えば抗原、またはこれらの断片もしくは変異体、好ましくは上述した抗原の群もしくは部分群の１個から選択される抗原であり、より好ましくは上述した組合せのうちの１個である。しかしながら、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡが、全体として、本明細書に記載されている少なくとも２個の（好ましくは異なる）タンパク質、例えば抗原を提供するのであれば、この少なくとも１個のモノシストロニックＲＮＡおよびこの少なくとも１個のバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡはまた、好ましくは本明細書に記載されているタンパク質と（部分的に）同一のタンパク質をコードしていてもよい。本明細書に記載されているタンパク質は、例えば上述した抗原の群または部分群のうちの１個から選択される抗原であり、好ましくは上述した組合せのうちの１個におけるタンパク質である。このような実施形態は、例えば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡにおける１個または数個を、医薬組成物として、これを必要とする患者に、時間をずらして、例えば時間依存的に投与する際に、有利でありうる。本発明におけるこの医薬組成物の成分、特に、少なくとも２個の（好ましくは異なる）タンパク質をコードしている、異なる混合型のＲＮＡは、例えば複数の部分の組成物からなるキット（の異なる複数の部分）に含まれていてもよい。また、この混合型のＲＮＡは、例えば本発明による異なる医薬組成物の成分として、分割されて投与されてもよい。
【０１７２】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている、他のさらなる抗原の種類は、アレルギーの抗原を含む。このアレルギーの抗原は、異なったソース由来の抗原から選択されてもよい。異なったソースとは、例えば、動物、植物、真菌類、細菌等である。これに関連してアレルゲンは、例えば草、花粉、カビ、薬物、または 多数の環境誘因等を含む。アレルギー抗原は、一般的に、例えば核酸およびその断片、タンパク質またはペプチドおよびこれらの断片、炭水化物、多糖、糖、脂質、リン脂質等の異なる種類の化合物に属する。本発明に関連する特別な点は、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている抗原であり、すなわち、タンパク質もしくはペプチドの抗原およびこれらの断片もしくはエピトープ、または核酸およびこれらの断片であり、特にこれらのタンパク質もしくはペプチドの抗原またはこれらの断片もしくはエピトープをコードする、核酸およびこれらの断片である。
【０１７３】
特に好ましくは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている動物由来の抗原とは、特にこれらに限定されないが、ダニ（例えばイエダニ）、蚊、ハチ（例えばミツバチ、マルハナバチ）、ゴキブリ、マダニ、ガ（例えばカイコガ）、ミジ、バグ（ｂｕｇ）、ノミ、スズメバチ、毛虫、ショウジョウバエ、トノサマバッタ、バッタ、アリ、アブラムシ等の昆虫由来、エビ、カニ、クリール、ロブスター、クルマエビ（ｐｒａｗｎ）、ザリガニ、クルマエビ（ｓｃａｍｐｉ）等の甲殻類由来、アヒル、ガチョウ、カモメ、七面鳥、ダチョウ、ニワトリ等の鳥類由来、ウナギ、ニシン、コイ、タイ、タラ、オヒョウ、ナマズ、ベルーガ、サケ、ヒラメ、サバ、コウイカ、パーチ等の魚類由来、ホタテガイ、タコ、アワビ、カタツムリ、エゾバイ、ヤリイカ、ハマグリ、イガイ類等の軟体動物由来、クモ由来、雌ウシ、ウサギ、ヒツジ、ライオン、ジャガー、ヒョウ、ラット、ブタ、バッファロー、イヌ、ロリス、ハムスター、モルモット、ダマジカ、ウマ、ネコ、ハツカネズミ、オセロット、サーバルキャット等の哺乳動物由来、クモもしくはシミなどの節足動物由来、線虫等の虫由来、旋毛虫種もしくはカイチュウ由来、カエル等の両生類由来、またはホヤ由来、などの抗原を含み得る。
【０１７４】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている植物由来の抗原とは、特にこれらに限定されないが、キウイ、パイナップル、パラミツ、パパイア、レモン、オレンジ、マンダリン、メロン、シャロンフルーツ、イチゴ、レイシ、リンゴ、チェリーパラダイスアップル（ｃｈｅｒｒｙ  ｐａｒａｄｉｓｅ  ａｐｐｌｅ）、マンゴー、パッションフルーツ、プラム、アプリコット、ネクタリン、セイヨウナシ、パッションフルーツ、ラズベリー、ブドウ等のフルーツ由来、ニンニク、タマネギ、リーキ、大豆、セロリ、カリフラワー、カブ、パプリカ、ヒヨコマメ、ウイキョウ、ズッキーニ、キュウリ、ニンジン、ヤム、マメ、エンドウ豆、オリーブ、トマト、ジャガイモ、レンズマメ、レタス、アボカド、パセリ、西洋わさび、チリモヤ、ビート、カボチャ、ホウレンソウ等の野菜由来、カラシナ、コリアンダー、サフラン、コショウ、アニスの果実等の香辛料由来、カラスムギ、ソバ、オオムギ、イネ、コムギ、トウモロコシ、アブラナ、ゴマ等の作物由来、カシュー、クルミ、バターナット、ピスタシオ、アーモンド、ハシバミの実、ピーナッツ、ブラジルナット、ペカン、クリ等のナッツ由来、ハンノキ、シデ、シーダー、カバノキ、ハシバミ、ブナノキ、トリネコ、イボタノキ、オーク、プラタナス、ヒノキ、ヤシ等の樹木由来、ブタクサ、カーネーション、レンギョウ、ヒマワリ、ルピナス、カモミール、ライラック、トケイソウ等の花由来、シバムギ、コモンベント、スズメノチャヒキ、バミューダグラス、ハルガヤ、ドクムギ等の草由来、またはアヘン、ケシ、ピレトリウム、オオバコ、タバコ、アスパラガス、ヨモギ、コショウソウ等の他の植物由来などの抗原を含み得る。
【０１７５】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている真菌類由来の抗原とは、特にこれらに限定されないが、例えばアルテルニア属（Alternia sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、 ビューベリア属（Beauveria sp.）、カンジダ属（Candida sp.）、クラドスポリウム属（Cladosporium sp.）、エンドチア属（Endothiasp.）、カルキュラリア属（Curcularia sp.）、エンベリシア属（Embellisia sp.）、エピコッカム属（Epicoccum sp.）、フザリウム属（Fusarium sp.）、マラセジア属（Malassezia sp.）、ペニシリウム属（Penicillum sp.）、プレオスポラ属（Pleospora sp.）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）等由来の抗原を含み得る。
【０１７６】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされている細菌由来の抗原とは、特にこれらに限定されないが、例えばバチルス・テタニ（Bacillus tetani）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ストレプトマイセス・グリセウス（Streptomyces griseus）等由来の抗原を含み得る。
【０１７７】
ｃ）抗体
さらなる実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、抗体をコードしていてもよい。本発明によれば、この抗体は、あらゆる抗体から選択されてもよい。あらゆる抗体とは、例えば、組み換えられて産生されたあらゆる抗体、もしくは自然発生的なあらゆる抗体、公知であって、特に治療的な目的、診断上の目的もしくは科学的な目的に適している抗体、または特異的な癌疾患に関連して同定された抗体である。本明細書中、用語「抗体」は、その広い意味において用いられ、特にモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、および遮断抗体または中和抗体を含む）、ならびにポリエピトピック特異性を有する抗体種を包含する。本発明によれば、「抗体」は、一般的にあらゆる公知の抗体（例えばＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ）を含む。公知の抗体とは、例えば自然発生的な抗体、宿主生物内において免疫化により産生された抗体、自然発生的な抗体または宿主生物内において免疫化により産生された抗体から、単離されかつ同定された抗体、および公知の生体分子法によって組換えにより生産された抗体であり、また同様に、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、細胞内抗体、すなわち細胞内で発現される抗体および特異的なセルコンパートメントに任意に局在する抗体、ならびに上述した抗体の断片および変異体である。一般的に、抗体は、軽鎖と重鎖とからなり、軽鎖と重鎖とはどちらも可変ドメインおよび定常ドメインを有する。軽鎖は、Ｎ末可変ドメイン、ＶＬ、およびＣ末定常ドメイン、ＣＬからなる。その一方、ＩｇＧ抗体の重鎖は、例えば、Ｎ末可変ドメイン、ＶＨ、ならびに３つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３により構成されている。単鎖の抗体は、同様に、本発明の改変された（ｍ）ＲＮＡにおけるＲＮＡ、好ましくは一本鎖ＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡによりコードされていてもよい。
【０１７８】
第１の代替物によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、ポリクローナル抗体をコードしていてもよい。これに関し、用語「ポリクローナル抗体」は、典型的に、特異的な抗原もしくは免疫原または宿主生物の免疫化により生成されたタンパク質のエピトープ、を対象とする抗体の混合物を意味する。宿主生物とは例えば、動物である。動物は、例えばヤギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ロバ、サル、エイプ、げっ歯類およびウサギを含む。げっ歯類とは例えばマウス、ハムスターである。ポリクローナル抗体は、一般的に同一でなく、そのため通常同じ抗原における異なるエピトープまたは領域を認識する。したがって、このような場合には、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして、典型的に異なるＲＮＡｓの混合物（組成物）が、使用され得る。それぞれのＲＮＡは、特異的な抗原または免疫原もしくはタンパク質のエピトープを対象とする特異的な（モノクローナル）抗体をコードする。
【０１７９】
さらなる代替物によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、モノクローナル抗体をコードしていてもよい。本明細書中、用語「モノクローナル抗体」は、典型的に、実質的に均一な抗体の集合物から得られる抗体をさす。抗体が実質的に均一とは、すなわち、この集合物を構成する個々の抗体は、微量に存在する可能性のある自然発生的な変異体を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、単一の抗原部位を対象とする。さらに、従来型の（ポリクローナル）抗体の調製物は、典型的に、異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含んでいるが、この従来型の（ポリクローナル）抗体の調製物と比較して、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原における単一の決定基を対象とする。例えば、上述したモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法により作製されてもよいし、組換えＤＮＡ法により作製されてもよい。このハイブリドーマ法は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に最初に記載されている。また、組換えＤＮＡ法は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載されている。「モノクローナル抗体」はまた、ファージライブラリーから単離されてもよい。ファージライブラリーは、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技術を使用して生成される。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎによれば、所定の免疫原（抗原）がマウスなどの宿主に注入されると、一定期間後に、この免疫原に応答して産生されたＢ細胞リンパ球が回収される。Ｂ細胞は、マウスから得られた骨髄腫細胞と組み合わされ、培地中に導入される。これにより、Ｂ細胞が骨髄腫細胞と融合し、ハイブリドーマが生産される。これらの融合細胞（ハイブリドーマ）は、その後マイクロタイタープレートの分離したウェル内に置かれた後、成長してモノクローナル抗体を生産する。これらのモノクローナル抗体は、いずれのモノクローナル抗体が所定の抗原を検出するのに適しているかを決定するため、試験される。選抜された後、モノクローナル抗体は、細胞培養液中で生育させることができる。あるいは、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマをマウスに注入することによって生育させることができる。しかし、本発明の目的のためには、これらのモノクローナル抗体のペプチド配列がシークエンスされなければならない。公知の方法によって調製されうる、これらの抗体をコードするＲＮＡ配列は、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして、使用されうる。
【０１８０】
ヒトにおける治療的な目的のため、マウスの抗体などの、非ヒトモノクローナル抗体または非ヒトポリクローナル抗体もまた、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされていてもよい。しかしながら、このような抗体は、一般的にヒトの体内において、上述した非ヒト抗体を対象とするヒト抗体の産生により免疫応答を誘導するため、典型的に使用が制限される。そのため、特有の非ヒト抗体は、ヒトに対して一度のみ投与することができる。この問題を解決するために、キメラ抗体、ヒト化された非ヒト抗体、およびヒト抗体が、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされることもまた、想定される。「キメラ」抗体は、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされうる。この「キメラ」抗体は、好ましくは上述した抗体の定常ドメインが、他の生物由来の抗体の配列によって置き換えられている。他の生物由来の抗体の配列とは、好ましくはヒトの配列である。「ヒト化された」（非ヒト）抗体もまた、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされうる。この「ヒト化された」（非ヒト）抗体は、抗体における上述した定常ドメインおよび可変ドメイン（超可変ドメインを除く）が、ヒトの配列によって置き換えられた抗体である。他の代替物によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、ヒト抗体をコードしていてもよい。ヒト抗体とは、すなわち、ヒトの配列のみを有する抗体である。このようなヒト抗体は、ヒト組織から単離することができる。あるいは、ヒト抗体は、免疫化された非ヒト宿主生物であって、ヒトＩｇＧ遺伝子座が遺伝子導入されている非ヒト宿主生物から単離することができる。そして、公知の方法により、ＲＮＡ配列を準備することができる。また、ヒト抗体は、ファージディスプレイの使用によって提供されうる。
【０１８１】
さらに、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、二重特異性抗体をコードしていてもよい。本発明に関し、「二重特異性」抗体は、好ましくは、例えば、エフェクター分子を補強する目的のため、２つの異なるＦａ／ｂ-ドメインによって、エフェクターとそれぞれのターゲットとの間のアダプターとして働く抗体である。エフェクター分子とは、例えば毒素、薬物、サイトカイン等である。標的とするエフェクター細胞とは、例えばＣＴＬ、ＮＫ細胞、マクロファージ、顆粒球等である（レビューを参照：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  Ｒ．Ｅ．，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ，２００５，２６（１）：１−９）。ここに記載される二重特異性抗体は、一般的に、２つの異なるＦａ／ｂ−ドメインによって、例えば２つの異なる抗原、免疫原、エピトープ、薬物、細胞（もしくは細胞上の受容体）、または上述したような他の分子（もしくは構造）を認識するよう構成される。以上により、二重特異性は、抗体における抗原結合領域が２つの異なるエピトープに対して特異的であることを意味する。そのため、異なる抗原、免疫原またはエピトープ等は、互いに接近して保持されうるので、これが、場合により、これらの２つの成分を直接的に相互作用させる。例えば、エフェクター細胞およびターゲット細胞などの異なる細胞が、二重特異性抗体を介して連結されうる。これらの抗体または断片が、本発明に包含されるが、限定されない。この抗体または断片は、一方の手においてここに記載される可溶性の抗原に結合し、そして他方の手において腫瘍細胞の表面にある抗原または受容体に結合する。
【０１８２】
本発明によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡはまた、細胞内抗体をコードしていてもよい。これらの細胞内抗体は、上述したような抗体であってもよい。これらの抗体が細胞内で発現される抗体である場合、すなわち細胞における特定の領域に位置する核酸によりコードされ、かつそこで発現もされる場合、このような抗体を細胞内抗体と称する。
【０１８３】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされる抗体は、好ましくは全長の抗体を含んでいてもよい。全長の抗体とは、すなわち、上述したような全長の重鎖および全長の軽鎖により構成されている抗体である。しかしながら、抗体の断片、変異体または付加体等の、抗体の派生物もまた、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされていてもよい。
【０１８４】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡはまた、抗体の断片をコードしていてもよい。この抗体の断片は、上述した（全長の）抗体における、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｃｂ、ｐＦｃ’、ＦｄおよびＦｖ断片から選択されてもよい。一般的に、抗体の断片は公知である。例えば、Ｆａｂ（「断片、抗原結合性」）断片は、重鎖と軽鎖とのそれぞれにおける１つの定常ドメインと１つの可変ドメインとにより構成される。この２つの可変ドメインは、特異的な抗原上のエピトープに結合する。この２つの鎖は、ジスルフィド結合を介して連結される。ｓｃＦＶ（「単鎖の可変断片」）断片は、例えば、典型的に軽鎖および重鎖における可変ドメインにより構成される。このドメインは、人工的なリンケージ、一般的には１５−２５個のグリシン、プロリンおよび／またはセリン残基により構成されるペプチドなどのポリペプチドリンケージによって結合されている。
【０１８５】
第２の成分として、本発明に係る免疫賦活組成物は、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを備える。この遊離のｍＲＮＡは、本明細書に記載の少なくとも１個の治療的に活性型のタンパク質もしくはペプチド、本明細書に記載の少なくとも１個の抗原、本明細書に記載の少なくとも１個のアレルゲン、本明細書に記載の少なくとも１個の抗体、本明細書に記載の少なくとも１個の抗原特異的Ｔ細胞受容体、または本明細書に記載の、特定の（治療的な）用途に適している少なくとも１個の他のタンパク質もしくはペプチドをコードする。抗原としては、例えば、腫瘍抗原、病原性抗原（例えば、上述したような病原性タンパク質から、または動物性抗原、ウイルス抗原、原生動物の抗原、細菌性抗原、アレルギー性抗原から選択される）、自己免疫抗原、またはさらなる抗原等である。この第２の成分は、本発明に係る免疫賦活組成物を形成させるため、上述の調製された「アジュバント成分」に（本発明に係る免疫賦活組成物の調製における第２工程において）添加される。添加するより前に、この少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、複合体でなく、かつ好ましくはアジュバント成分の添加時に任意の検出可能な、または重要な複合体形成反応をも受けない。これは、カチオン性化合物またはポリカチオン性化合物が、上述したアジュバント成分内の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡに強く結合しているためである。言い換えれば、治療的に活性なタンパク質をコードする少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡが、この「アジュバント成分」に添加されるときに、この少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと複合体を形成しうる、好ましくは非遊離のまたは実質的に非遊離のカチオン性またはポリカチオン性化合物が全く存在しない。したがって、本発明の組成物におけるこの少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、インビボにおいて効率よく翻訳されることができる。
【０１８６】
少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分であり、メッセンジャーＲＮＡである。このメッセンジャーＲＮＡは、本明細書に記載の少なくとも１個の治療的に活性型のタンパク質もしくはペプチド、本明細書に記載の少なくとも１個の抗原、本明細書に記載の少なくとも１個のアレルゲン、本明細書に記載の少なくとも１個の抗体、本明細書に記載の少なくとも１個の抗原特異的Ｔ細胞受容体、または本明細書に記載の、特定の（治療的な）用途に適している少なくとも１個の他のタンパク質もしくはペプチドをコードする。抗原としては、例えば、腫瘍抗原、病原性抗原（例えば、上述したような病原性タンパク質から、または動物性抗原、ウイルス抗原、原生動物の抗原、細菌性抗原、アレルギー性抗原から選択される）、自己免疫抗原、またはさらなる抗原等である。これに関し、ｍＲＮＡは、アジュバント成分においてＲＮＡとして上述したように一般的に、いくつかの構造要素によって構成される。構造要素は、例えば、任意の５’−ＵＴＲ領域、上流に位置するリボソーム結合部位に続くコード領域、任意の３’−ＵＴＲ領域、３’−ＵＴＲ領域に続いてもよいポリＡテール（および／またはポリＣテール）である。少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、モノ、ジ、またはマルチシストロニックＲＮＡ、すなわち１個、２個またはより多くのタンパク質のコード配列を有するＲＮＡ、として生じてもよい。ジ、またはマルチシストロニックｍＲＮＡにおけるコード配列は、例えば上述したような少なくとも１個のＩＲＥＳ配列によって分断されていてもよい。
【０１８７】
本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質をコードしていてもよい。本発明に関し、治療的に活性型のタンパク質は、好ましくは治療的な目的に適している任意のタンパク質またはペプチドであってもよく、より好ましくは、従来技術における当業者に知られているあらゆる組換えられたタンパク質または単離されたタンパク質から選択されてもよく、さらに好ましくは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分について上述したあらゆる治療的に活性型のタンパク質から選択されてもよい。上述した治療的に活性型のタンパク質は、これらに限定されないが、例えば細胞内のシグナル伝達を促進または阻害することが可能なタンパク質（例えばサイトカイン、抗体等）、アポトーシス因子またはアポトーシスに関連するタンパク質、アジュバントタンパク質（例えばヒトアジュバントタンパク質もしくは病原性アジュバントタンパク質、特に細菌性アジュバントタンパク質等から選択される）を含む。
【０１８８】
本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、さらに少なくとも１個の抗体または抗体の断片をコードしていてもよい。これに関し、本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分について上述したような、任意の抗体または抗体の断片をコードしていてもよい。
【０１８９】
最後に、本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡはまた、上述したような少なくとも１個の抗原をコードしていてもよい。これに関し、（腫瘍）抗原または一般に用語「抗原」は、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分について上述したように定義される。（腫瘍）抗原または一般に用語「抗原」は、典型的に免疫系によって認識され、例えば適応的免疫反応の一端として抗体を形成することにより、抗原特異的な免疫応答を引き起こすことができる物質をさす。好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分について上述した任意の抗原をコードしていてもよい。より好ましい実施形態によれば、この抗原は、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分について上述したような腫瘍抗原から選択されてもよい。腫瘍抗原とは、例えば、上述したような腫瘍特異的抗原（ＴＳＡｓ）および腫瘍関連抗原（ＴＡＡｓ）などである。
【０１９０】
本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡと同一であってもよいし、異なっていてもよい。遊離のｍＲＮＡは、治療に特有の要求に依存する。より好ましくは、本発明に係る免疫賦活組成物の第２の成分として提供される、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡと同一である。
【０１９１】
第１の成分と第２の成分との、本発明に係る免疫賦活組成物における比は、特別の治療における特有の要求に基づいて選択されてもよい。第１の成分は、すなわち、カチオン性化合物もしくはポリカチオン性化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含む、またはこの（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分である。第２の成分は、すなわち少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡである。特別な治療とは、例えば癌治療等である。典型的に、本発明に係る免疫賦活組成物における、アジュバント成分と少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとの比（アジュバント成分：遊離のｍＲＮＡ）は、このアジュバント成分によって、先天性免疫系の有意な刺激が誘発されるように選択される。並行して、この比は、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの有意な量がインビボにおいて提供され、発現されるタンパク質の効率的な翻訳および濃度をインビボにおいて導くように選択される。発現されるタンパク質とは、上述したように、例えば少なくとも１個の抗体、抗原および／または治療的に活性型のタンパク質等である。好ましくは、本発明に係る免疫賦活組成物における、アジュバント成分：遊離のｍＲＮＡの比は、約５：１（ｗ／ｗ）〜約１：１０（ｗ／ｗ）の範囲から選択される。より好ましくは、約４：１（ｗ／ｗ）〜約１：８（ｗ／ｗ）の範囲から選択される。さらに好ましくは、約３：１（ｗ／ｗ）〜約１：５（ｗ／ｗ）または１：３（ｗ／ｗ）の範囲から選択される。最も好ましくは、本発明に係る免疫賦活組成物におけるアジュバント成分：遊離のｍＲＮＡの比は、約１：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択される。
【０１９２】
これに加えて、またはこれに代えて、第１の成分と第２の成分との比は、全ＲＮＡ複合体における窒素／りん酸の比（Ｎ／Ｐ−比）に基づいて算出されてもよい。第１の成分は、すなわち、カチオン性化合物もしくはポリカチオン性化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含む、またはこの（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分である。第２の成分は、すなわち少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡである。本発明に関し、複合体におけるＲＮＡ：ペプチドの比を考慮すれば、Ｎ／Ｐ−比は、好ましくは約０．１〜１０の範囲内であり、好ましくは約０．３〜４の範囲内であり、より好ましくは約０．５〜２または０．７〜２の範囲内である。最も好ましくは、約０．７〜１．５の範囲内である。
【０１９３】
これに加えて、またはこれに代えて、本発明に係る免疫賦活組成物における第１の成分と第２の成分との比はまた、両方のＲＮＡｓにおける互いのモル比に基づいて選択されてもよい。両方のＲＮＡｓは、すなわちカチオン性化合物またはポリカチオン性化合物と複合体化されている、アジュバント成分における（ｍ）ＲＮＡと、第２の成分における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとである。第１の成分は、すなわち、カチオン性化合物もしくはポリカチオン性化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含む、またはこの（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分である。第２の成分は、すなわち少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡである。典型的に、第２の成分における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する、アジュバント成分における（ｍ）ＲＮＡのモル比は、このモル比が上述した（ｗ／ｗ）および／またはＮ／Ｐの定義を満たすように、選択されてもよい。より好ましくは、第２の成分における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する、アジュバント成分における（ｍ）ＲＮＡのモル比は、例えば、約０．００１：１、０．０１：１、０．１：１、０．２：１、０．３：１、０．４：１、０．５：１、０．６：１、０．７：１、０．８：１、０．９：１、１：１、１：０．９、１：０．８、１：０．７、１：０．６、１：０．５、１：０．４、１：０．３、１：０．２、１：０．１、１：０．０１、１：０．００１等のモル比から選択されてもよい。また、モル比は、上述した値のうちの任意の２つによりなる任意の範囲から選択されてもよい。この範囲は、例えば約０．００１：１〜１：０．００１から選択される範囲であり、約０．０１：１〜１：０．００１、０．１：１〜１：０．００１、０．２：１〜１：０．００１、０．３：１〜１：０．００１、０．４：１〜１：０．００１、０．５：１〜１：０．００１、０．６：１〜１：０．００１、０．７：１〜１：０．００１、０．８：１〜１：０．００１、０．９：１〜１：０．００１、１：１〜１：０．００１、１：０．９〜１：０．００１、１：０．８〜１：０．００１、１：０．７〜１：０．００１、１：０．６〜１：０．００１、１：０．５〜１：０．００１、１：０．４〜１：０．００１、１：０．３〜１：０．００１、１：０．２〜１：０．００１、１：０．１〜１：０．００１、１：０．０１〜１：０．００１の範囲、もしくは約０．０１：１〜１：０．０１、０．１：１〜１：０．０１、０．２：１〜１：０．０１、０．３：１〜１：０．０１、０．４：１〜１：０．０１、０．５：１〜１：０．０１、０．６：１〜１：０．０１、０．７：１〜１：０．０１、０．８：１〜１：０．０１、０．９：１〜１：０．０１、１：１〜１：０．０１、１：０．９〜１：０．０１、１：０．８〜１：０．０１、１：０．７〜１：０．０１、１：０．６〜１：０．０１、１：０．５〜１：０．０１、１：０．４〜１：０．０１、１：０．３〜１：０．０１、１：０．２〜１：０．０１、１：０．１〜１：０．０１、１：０．０１〜１：０．０１の範囲を含み、または約０．００１：１〜１：０．０１、０．００１：１〜１：０．１、０．００１：１〜１：０．２、０．００１：１〜１：０．３、０．００１：１〜１：０．４、０．００１：１〜１：０．５、０．００１：１〜１：０．６、０．００１：１〜１：０．７、０．００１：１〜１：０．８、０．００１：１〜１：０．９、０．００１：１〜１：１、０．００１〜０．９：１、０．００１〜０．８：１、０．００１〜０．７：１、０．００１〜０．６：１、０．００１〜０．５：１、０．００１〜０．４：１、０．００１〜０．３：１、０．００１〜０．２：１、０．００１〜０．１：１の範囲、もしくは約０．０１：１〜１：０．０１、０．０１：１〜１：０．１、０．０１：１〜１：０．２、０．０１：１〜１：０．３、０．０１：１〜１：０．４、０．０１：１〜１：０．５、０．０１：１〜１：０．６、０．０１：１〜１：０．７、０．０１：１〜１：０．８、０．０１：１〜１：０．９、０．０１：１〜１：１、０．００１〜０．９：１、０．００１〜０．８：１、０．００１〜０．７：１、０．００１〜０．６：１、０．００１〜０．５：１、０．００１〜０．４：１、０．００１〜０．３：１、０．００１〜０．２：１、０．００１〜０．１：１の範囲を含む。
【０１９４】
さらにより好ましくは、第２の成分における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する、アジュバント成分における（ｍ）ＲＮＡのモル比は、例えば約０．０１：１〜１：０．０１の範囲から選択されてもよい。より好ましくは、第２の成分における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する、アジュバント成分における（ｍ）ＲＮＡのモル比は、例えば約１：１のモル比から選択されてもよい。（ｗ／ｗ）および／またはＮ／Ｐ比に関する、上述した定義のいずれをも適用することもまた、可能である。
【０１９５】
本発明によれば、上述したような本発明に係る免疫賦活組成物が含む、アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、タンパク質（例えば治療的に活性なタンパク質、抗体および／または抗原）をコードしており、上述したタンパク質の断片および／または変異体をコードしていてもよい。ここで、この断片および／または変異体は、上述したタンパク質の１つと、タンパク質をコードする（コーディング）核酸配列の全長にわたって、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有していてもよい。本発明に関し、このようなタンパク質の断片は、これらのタンパク質の先端が切り取られたもの、すなわち、オリジナルの（ネイティブな）タンパク質のアミノ酸配列と比較して、Ｎ末、Ｃ末および／または内部で連続して切り取られたアミノ酸配列、として理解されるべきである。特に、抗原エピトープを含む断片が好ましい。これに関し、断片およびエピトープは、特に抗原について上述したようなものが好ましい。
【０１９６】
本発明に関して「変異体」は、上述したようなタンパク質をさす。例えば「変異体」は、上述したような治療的に活性型のタンパク質、アジュバントタンパク質、抗原または抗体（またはこれらをコードするｍＲＮＡもしくは（ｍ）ＲＮＡ配列）をさす。例えば治療的に活性型のタンパク質、抗体および／または抗原等をコードしている、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡの核酸配列、または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの核酸配列は、交換される。したがって、治療的に活性型のタンパク質、アジュバントタンパク質、抗原または抗体は、１箇所またはもっと多くの変異において、オリジナル配列とは異なるアミノ酸配列を有して生成される。変異は、例えば１個またはより多くのアミノ酸が置換され、挿入され、および／または欠失されるような変異である。好ましくは、この断片および／または変異体は、全長のネイティブなタンパク質（例えば、治療的に活性型のタンパク質、抗原または抗体）と比較して、同一の生物学的機能または特異的な活性を有する。この「生物学的機能」は、例えば、（例えば特別な抗原における）特異的結合能、（例えば治療的に活性型のタンパク質における）これらのタンパク質の触媒活性などを含む。これに関し、本明細書に記載のような抗体における、用語「生物学的機能」はまた、抗原の中性化、補体活性化またはオプソニン化を含む。したがって、抗体は、典型的に、細胞表面上、または遊離の抗原上の両方のネイティブなエピトープを認識する。上述したような抗体は、抗原提示細胞と相互作用し、異なる防御メカニズムを開始させることができる。一方では、抗体は、標的細胞内において、細胞の自殺（アポトーシス）を引き起こすシグナル伝達メカニズムを開始させることができる。他方では、体内の免疫系における他の成分またはエフェクター細胞が認識して攻撃することができるように、細胞を標識することができる。この攻撃メカニズムは、抗体依存性補体仲介型細胞毒性（ＣＭＣ）および抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）として参照される。ＡＤＣＣでは、抗体標識された細胞と交戦する免疫細胞が、抗体を認識し、直接作用することにより、あるいは他の種類の細胞が加入することにより、標的細胞を死に導く。ＣＭＣは、通常、いくつかの抗体が互いに密接に近接したときに、異なる補体タンパク質のカスケードが活性化されるプロセスであり、結果として細胞溶解させるか、またはエフェクター細胞機能のためにこの位置に他の免疫細胞を引き付ける。抗原の中性化では、抗体は抗原に結合し、これを中性化することができる。このような中性化反応は、次々に、一般に抗体の障害を導く。そのため、抗体は、１つの抗原にのみ結合することができ、あるいは二重特異性抗体の場合には、２つの抗原にのみ結合することができる。特に、ＳｃＦｖ抗体断片は、抗体の定常ドメインの機能性を含まないため、中性化反応に有用である。補体活性化によって、抗体におけるＦｃ部位から独立している抗体の結合を介して、補体タンパク質の複合システムが活性化されうる。この補体カスケードにより、最終的に、細胞を溶解させ、かつ炎症性環境を生成させるという結果となる。オプソニン化では、病原体または他の非細胞分子が、抗体の定常ドメインに結合することにより、食細胞によってアクセス可能にされる。あるいは、外来性として認識される細胞は、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を介して溶解されうる。特に、ＮＫ細胞は、活性化Ｆｃ受容体による溶解機能を示すことができる。
【０１９７】
２つの配列の同一性を示すパーセンテージを決定するために、特に本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、これらの配列を互いに実質的に比較するために整列させることができる。その結果、例として、例えば第１の配列（例えば（ｍ）ＲＮＡまたはｍＲＮＡ）の配列にギャップを挿入することができ、かつ第２の配列（例えば（ｍ）ＲＮＡまたはｍＲＮＡ）における対応する位置の成分を比較することができる。もし第１の配列（例えば（ｍ）ＲＮＡまたはｍＲＮＡ）内の位置が、第２の配列（例えば（ｍ）ＲＮＡまたはｍＲＮＡ）内の位置の場合と同一の成分によって占められている場合、この２つの配列はこの位置において同一である。２つの（ｍ）ＲＮＡ（またはｍＲＮＡ）配列の同一性を示すパーセンテージは、同一の位置の数を位置の全数で割ったものである。同様の方法が、ＤＮＡ配列またはコードされるアミノ酸配列にも当然適用される。
【０１９８】
２つの配列の同一性を示すパーセンテージは、数学的アルゴリズムを用いて決定することができる。２つの配列とは、例えば本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、あるいはこれらがコードするアミノ酸配列である。好ましくは、限定されないが、使用することができる数学的アルゴリズムの例は、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，９０：５８７３−５８７７  ｏｒ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２５：３３８９−３４０２に記載のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴまたはＮＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における、少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、もしくは本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、の配列（またはそのコーディング領域）と、確かな程度において同一の配列は、これらのプログラムによって同定することができる。
【０１９９】
アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに相当するＲＮＡ配列であって、生理学的な、すなわちネイティブで非修飾の配列と比較して同類置換を有するアミノ酸配列をコードしているＲＮＡ配列は、特に用語「変異体」に該当する。同じ種類を起源とするコード化アミノ酸が相互に交換される置換を、同類置換と称する。特にこれらは、コード化アミノ酸、コード化脂肪族側鎖、陽性もしくは陰性に帯電した側鎖、側鎖もしくはコード化アミノ酸における芳香族官能基、例えば水酸基を有する側鎖などの水素結合中に入ることができる側鎖、である。これは、例えば極性の側鎖を有するアミノ酸は、同様に極性の側鎖を有する他のアミノ酸により置き換えられ、あるいは例えば、疎水性の側鎖によって特徴付けられるアミノ酸は、同様に疎水性の側鎖を有する他のアミノ酸により置換されることを意味する（例えばセリン（スレオニン）がスレオニン（セリン）により、もしくはロイシン（イソロイシン）がイソロイシン（ロイシン）により）。特に、三次元構造の変化が起こらない位置、または結合領域もしくは触媒ドメインに影響しない位置の配列においては、挿入および置換が可能である。挿入または欠失による三次元構造の変化は、例えばＣＤスペクトル（円二色性スペクトル）（Ｕｒｒｙ，１９８５，Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ  ａｎｄ  ＯＲＤ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｉｎ：Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を用いて容易に決定することができる。
【０２００】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、に相当するＲＮＡ配列は、上述したようなアミノ酸配列をコードしており、モノ、ジ、もしくはマルチシストロニックＲＮＡとして存在してもよい。すなわち、１個、２個またはより多くの上述したようなタンパク質のコード配列を有するＲＮＡである。タンパク質は、例えば上述したように、治療的に活性型のタンパク質、アジュバントタンパク質、（タンパク質）抗原または抗体である。上述した定義に含まれる、アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、に相当するＲＮＡ配列が、少なくとも１個の上述したようなタンパク質（例えば２個、３個もしくはより多くの、上述したような治療的に活性型のタンパク質、アジュバントタンパク質、抗原もしくは抗体）をコードする場合には、これらのタンパク質のそれぞれは、上述したタンパク質のうち、同じタンパク質または（好ましくは）異なるタンパク質から選択されてもよい。どのような場合でも、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、に相当するＲＮＡ配列にコードされるそれぞれのタンパク質は、独立して選択されてもよい。
【０２０１】
他の特に好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物は、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとして、またはアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして、少なくとも１個の上述したようなバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡ配列を含んでいてもよい。これらの上述したようなバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡ配列における、それぞれのコード配列は、少なくとも１個のいわゆるＩＲＥＳ（internal ribosomal entry site）配列によって分断されていてもよい。これに関し、ＩＲＥＳ配列は、単独のリボソーム結合部位として機能することができるが、同時に、上述したようなバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡを提供するのに役立つことができる。このバイもしくはマルチシストロニックＲＮＡは、互いに独立してリボソームにより翻訳されるいくつかのタンパク質をコードしている。本発明において用いることができるＩＲＥＳ配列の例は、ピコルナウイルス（例えばＦＭＤＶ）、ペスチウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、古典的なブタコレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはコオロギ麻痺性ウイルス（ｃｒｉｃｋｅｔ  ｐａｒａｌｙｓｉｓ  ｖｉｒｕｓｅｓ）（ＣｒＰＶ）由来のＩＲＥＳ配列である。
【０２０２】
特に好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物はまた、アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡとして、および／または少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとして、異なるＲＮＡ配列の混合物を含んでいてもよい。このうち、この混合物は、例えば上述したようなタンパク質をコードする少なくとも１個のモノシストロニックｍＲＮＡ、および／または上述したような同一のもしくは異なるタンパク質をコードする、少なくとも１個のバイもしくはマルチシストロニックｍＲＮＡを含む。タンパク質は、例えば上述したような治療的に活性型のタンパク質、アジュバントタンパク質、抗原および／または抗体である。
【０２０３】
他の特別な実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、「安定化ＲＮＡ」、好ましくは安定化ｍＲＮＡとして、すなわち、インビボでの様々なアプローチによる（例えば、エキソ−またはエンド−ヌクレアーゼによる）分解に対して特に耐性を有するＲＮＡとして、供給されてもよい。ｍＲＮＡまたはＲＮＡのインビボにおける一般的な不安定性および（迅速な）分解が、ＲＮＡベースの組成物の適用において深刻な問題として表されうることは、この分野において公知である。このＲＮＡの不安定性は、典型的にＲＮＡ分解酵素、「ＲＮＡａｓｅｓ」（リボヌクレアーゼ）によるものであり、このようなリボヌクレアーゼの混入がしばしば溶液中のＲＮＡを完全に分解しうる。したがって、細胞の細胞質内でのＲＮＡの自然分解は、実に見事に制御されている。そして、ＲＮａｓｅの混入は通常、上述した組成物の使用に先立ち、特別な処理、特にピロ炭酸ジエチル（ＤＥＰＣ）を用いた処理、によって排除されうる。自然分解については、多くのメカニズムが従来から知られており、同様に利用することができる。例えば、インビボにおいて、末端の構造は、ｍＲＮＡにとって典型的に極めて重要である。一例として、自然発生的なｍＲＮＡｓの５’末端は、通常いわば「キャップ構造」と称される（修飾されたグアノシンヌクレオチド）。そして３’末端は、典型的に最大２００個のアデノシンヌクレオチドからなる配列（いわゆるポリＡテール）である。
【０２０４】
したがって、特に好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、特にｍＲＮＡとして供給される場合には、いわゆる「５’キャップ」構造を付与されることによって、ＲＮａｓｅｓによる分解に対して安定化されることができる。この点に関して、「５’キャップ」構造として、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）ＡまたはＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇが特に好ましく用いられる。しかしながら、このような修飾は、特に上述したように、上述したような少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡの５’末端に既に導入されていない場合にのみ、導入される。または、このような修飾は、この修飾が、上述したような少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡの免疫原性の特性を妨害しない場合にのみ導入される。
【０２０５】
他の特に好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、好ましくはこのＲＮＡがｍＲＮＡの形態である場合には、その３’末端にポリＡテールを含んでいてもよい。ポリＡテールは、典型的には約１０〜２００個のアデノシンヌクレオチドからなり、好ましくは約１０〜１００個のアデノシンヌクレオチドからなり、より好ましくは約２０〜１００個のアデノシンヌクレオチドからなり、さらに好ましくは約４０〜８０個のアデノシンヌクレオチドからなる。
【０２０６】
さらに好ましい実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、特にこのＲＮＡがｍＲＮＡの形態である場合には、その３’末端にポリＣテールを含んでいてもよい。ポリＣテールは、典型的には約１０〜２００個のシトシンヌクレオチドからなり、好ましくは約１０〜１００個のシトシンヌクレオチドからなり、より好ましくは約２０〜７０個のシトシンヌクレオチドからなり、さらに好ましくは約２０〜６０個または１０〜４０個のシトシンヌクレオチドからなる。
【０２０７】
他の実施形態によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、さらにＧＣ修飾されていてもよく、また他の形態に修飾されていてもよい。ＲＮＡのいくつかの修飾は、ＲＮＡの種類に依存して、一般的にＲＮＡにより適したものであってもよい。あるいは、例えば、ＧＣ修飾された（ｍ）ＲＮＡもしくはｍＲＮＡ配列の場合には、ＲＮＡのいくつかの修飾は、コーディングＲＮＡ、好ましくは上述したような（ｍ）ＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡ、により適したものであってもよい。本明細書に記載のような、このようなさらなる修飾は、上述した（ｍ）ＲＮＡおよび／またはｍＲＮＡを安定化させるものであることが好ましい。
【０２０８】
特別な一実施形態によれば、このような安定化ＲＮＡは、ここに記載されるＲＮＡ配列のコーディング領域におけるＧ／Ｃ含有量を変化させることによって調製されてもよい。ここに記載されるＲＮＡ配列とは、例えば、アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、に相当するＲＮＡ配列である。
【０２０９】
本発明における特に好ましい実施形態では、アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、のコーディング領域のＧ／Ｃ含有量は、これに相当する非修飾ＲＮＡ（以下「ネイティブなＲＮＡ」という。）のコーディング領域のＧ／Ｃ含有量と比較して、変化しており、好ましくは増加している。これに関して、アジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに相当する、Ｇ／Ｃが増加したＲＮＡ配列にコードされたアミノ酸配列は、これに相当するネイティブなＲＮＡと比較して、好ましくは変化していない。ＧＣ配列におけるこのような変化は、以下においてＧＣ安定化（ＧＣによる安定化）と称することもある。
【０２１０】
本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡのＧ／Ｃ安定化は、任意のＲＮＡの翻訳される領域における配列も、そのＲＮＡの効率的な翻訳に重要であるという事実に基づいている。したがって、様々なヌクレオチドの配列が重要である。特に、Ｇ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含有量が増加している配列は、Ａ（アデノシン）／Ｕ（ウラシル）含有量が増加している配列より安定である。したがって、本発明によれば、本発明に係る免疫賦活組成物のアジュバント成分における少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡのコドン、または本発明に係る免疫賦活組成物における少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡのコドンは、先端が切り取られたアミノ酸配列を保持したまま、増加した量のＧ／Ｃヌクレオチドを含むように、ネイティブなＲＮＡ配列と比較して変化している。いくつかのコドンが１つの同一のアミノ酸をコードしている（いわゆる遺伝暗号の退化）という点に関しては、安定性にとって有利なコドンが決定されてもよい（いわゆる選択的なコドン使用頻度）。
【０２１１】
本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡによってコードされるアミノ酸、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡによってコードされるアミノ酸に依存するが、ＲＮＡ配列のＧ／Ｃ修飾に関しては、ネイティブな配列と比較して種々の可能性がある。ＧまたはＣのヌクレオチドのみを有するコドンによってコードされるアミノ酸の場合、コドンのＧ／Ｃ修飾は必然的にない。よって、プロリン（ＣＣＣまたはＣＣＧ）、アルギニン（ＣＧＣまたはＣＧＧ）、アラニン（ＧＣＣまたはＧＣＧ）、およびグリシン（ＧＧＣまたはＧＧＧ）に関するコドンは、ＡまたはＵが存在しないために、Ｇ／Ｃ修飾を必要としない。
【０２１２】
対照的に、Ａおよび／またはＵのヌクレオチドを有するコドンは、同じアミノ酸をコードするが、Ａおよび／またはＵを含まない他のコドンへの置換によってＧ／Ｃ修飾され得る。これらの例として：
プロリンに関するコドンは、ＣＣＵまたはＣＣＡからＣＣＣまたはＣＣＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
アルギニンに関するコドンは、ＣＧＵ、ＣＧＡ、ＡＧＡまたはＡＧＧから、ＣＧＣまたはＣＧＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
アラニンに関するコドンは、ＧＣＵまたはＧＣＡからＧＣＣまたはＧＣＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
グリシンに関するコドンは、ＧＧＵまたはＧＧＡからＧＧＣまたはＧＧＧへＧ／Ｃ修飾され得る、が挙げられる。
【０２１３】
別の例では、ＡまたはＵのヌクレオチドをコドンから除くことができるが、また一方、より少ない量のＡおよび／またはＵヌクレオチドを含有するコドンを用いることによって、ＡおよびＵの含有量を低減させることができる。これらの例として：
フェニルアラニンに関するコドンは、ＵＵＵからＵＵＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
ロイシンに関するコドンは、ＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵまたはＣＵＡから、ＣＵＣまたはＣＵＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
セリンに関するコドンは、ＵＣＵ、ＵＣＡまたはＡＧＵから、ＵＣＣ、ＵＣＧまたはＡＧＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
チロシンに関するコドンは、ＵＡＵからＵＡＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
システインに関するコドンは、ＵＧＵからＵＧＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
ヒスチジンに関するコドンは、ＣＡＵからＣＡＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
グルタミンに関するコドンは、ＣＡＡからＣＡＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
イソロイシンに関するコドンは、ＡＵＵまたはＡＵＡからＡＵＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
スレオニンに関するコドンは、ＡＣＵまたはＡＣＡからＡＣＣまたはＡＣＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
アスパラギンに関するコドンは、ＡＡＵからＡＡＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
リシンに関するコドンは、ＡＡＡからＡＡＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
バリンに関するコドンは、ＧＵＵまたはＧＵＡからＧＵＣまたはＧＵＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
アスパラギン酸に関するコドンは、ＧＡＵからＧＡＣへＧ／Ｃ修飾され得る；
グルタミン酸に関するコドンは、ＧＡＡからＧＡＧへＧ／Ｃ修飾され得る；
停止コドンＵＡＡは、ＵＡＧまたはＵＧＡへＧ／Ｃ修飾され得る、が挙げられる。
【０２１４】
一方、メチオニン（ＡＵＧ）およびトリプトファン（ＵＧＧ）に関するコドンについては、配列修飾の可能性はない。
【０２１５】
上述した置換は、個々にか、またはすべての可能な組み合わせにおいて用いることが可能である。それにより、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡのＧ／Ｃ含有量を、特定のネイティブなＲＮＡ（すなわち、修飾されていない配列）と比較して増加させる。よって、例えば、ネイティブな配列に存在するスレオニンに関するすべてのコドンが、ＡＣＣ（またはＡＣＧ）へＧ／Ｃ修飾され得る。しかしながら、例えば、上記置換が起こり得る組み合わせとしては：
修飾されていない配列（ネイティブなＲＮＡ）においてスレオニンをコードするすべてのコドンからＡＣＣ（またはＡＣＧ）への置換、および
本来セリンをコードするすべてのコドンからＵＣＣ（または、ＵＣＧもしくはＡＧＣ）への置換；
元の配列においてイソロイシンをコードするすべてのコドンからＡＵＣへの置換、
本来リシンをコードするすべてのコドンからＡＡＧへの置換、および
本来チロシンをコードするすべてのコドンからＵＡＣへの置換；
元の配列においてバリンをコードするすべてのコドンからＧＵＣ（またはＧＵＧ）への置換、
本来グルタミン酸をコードするすべてのコドンからＧＡＧへの置換、
本来アラニンをコードするすべてのコドンからＧＣＣ（またはＧＣＧ）への置換、および
本来アルギニンをコードするすべてのコドンからＣＧＣ（またはＣＧＧ）への置換；
元の配列においてバリンをコードするすべてのコドンからＧＵＣ（またはＧＵＧ）への置換、
本来グルタミン酸をコードするすべてのコドンからＧＡＧへの置換、
本来アラニンをコードするすべてのコドンからＧＣＣ（またはＧＣＧ）への置換、
本来グリシンをコードするすべてのコドンからＧＧＣ（またはＧＧＧ）への置換、および
本来アスパラギンをコードするすべてのコドンからＡＡＣへの置換；
元の配列においてバリンをコードするすべてのコドンからＧＵＣ（またはＧＵＧ）への置換、
本来フェニルアラニンをコードするすべてのコドンからＵＵＧへの置換、
本来システインをコードするすべてのコドンからＵＧＣへの置換、
本来ロイシンをコードするすべてのコドンからＣＵＧ（またはＣＵＣ）への置換、
本来グルタミンをコードするすべてのコドンからＣＡＧへの置換、および
本来プロリンをコードするすべてのコドンからＣＣＣ（またはＣＣＧ）への置換；などを用いることが好ましい。
【０２１６】
アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対応するＲＮＡ配列のコード領域のＧ／Ｃ含有量は、タンパク質をコードするネイティブなＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量と比較して、少なくとも７％よりも多いことが好ましく、少なくとも１５％よりも多いことがより好ましく、少なくとも２０％よりも多いことが特に好ましい。特定の実施形態によれば、タンパク質をコードする領域、またはネイティブなＲＮＡ配列の全長配列において置換可能なコドンの少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９５％またはそれ以上の１００％が置換され、それにより、上記配列のＧ／Ｃ含有量を増加させる。
【０２１７】
これに関して、ネイティブなＲＮＡのＧ／Ｃ含有量を、特にタンパク質をコードする領域において、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡのＧ／Ｃ含有量ほどに、最大限（すなわち、ネイティブなＲＮＡの置換可能なコドンの１００％）まで増加させることが特に好ましい。
【０２１８】
また、本発明によると、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡのさらに好ましい修飾は、細胞内にｔＲＮＡが存在するとき、翻訳効率が異なる頻度で測定されることを見出したことに基づく。よって、いわゆる“レアコドン”がネイティブなＲＮＡ配列中に高い含有量で存在する場合、対応するＧ／Ｃ安定化させたＲＮＡ配列か、またはネイティブなＲＮＡ配列は、相対的に“頻繁に”ｔＲＮＡをコードするコドンが存在する場合に比べて明らかに低い割合で翻訳され得る。
【０２１９】
本発明によれば、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡにおいて（タンパク質をコードする）領域は、対応する各ネイティブなＲＮＡの領域と比較して、細胞内で相対的にまれにｔＲＮＡをコードするネイティブな配列の少なくとも１個のコドンが、細胞内で相対的に頻繁であり、かつ、相対的にまれなｔＲＮＡと同じアミノ酸を運搬するｔＲＮＡをコードするコドンと交換されるように、ＧＣ安定化されることが好ましい。この修飾によって、ネイティブなＲＮＡ配列は、頻繁に生じるｔＲＮＡを取得可能なコドンが挿入されるようにＧＣ安定化される。言い換えると、本発明によれば、この修飾によって、細胞内で相対的にまれにｔＲＮＡをコードするネイティブな配列に含まれるすべてのコドンが、それぞれの場合において、細胞内で相対的に頻繁であり、かつ、相対的にまれにｔＲＮＡと同じアミノ酸を運搬するｔＲＮＡをコードするコドンと交換され得る。
【０２２０】
どのｔＲＮＡが細胞において相対的に頻繁に現れるか、また、それとは反対に、どのｔＲＮＡが相対的にまれであるかは、当業者に知られている；例えば、Ａｋａｓｈｉ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｄｅｖ．  ２００１，  １  １  （６）：  ６６０−６６６を参照すればよい。最も頻繁に現れる特定のアミノ酸ｔＲＮＡのために用いるコドン（例えば、（ヒト）細胞において最も頻繁に現れるｔＲＮＡを用いる、グリシンコドン）が特に好ましい。
【０２２１】
本発明によれば、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のＲＮＡのＧＣ安定化されたＲＮＡ配列において、経時的に増加される（特に、最大化される）Ｇ／Ｃ含有量を、ネイティブなＲＮＡのコード領域にコードされるタンパク質のアミノ酸配列を修飾することのない“頻繁な”コドンと関連づけることが特に好ましい。この好ましい実施形態では、特に効率的に翻訳され、また、ＧＣ安定化された、アジュバント成分の本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡのＲＮＡ配列を提供することができる。
【０２２２】
本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに必須の（および／または可能な）ＧＣ修飾の決定は、上述したように（増加されたＧ／Ｃ含有量；ｔＲＮＡの交換）、国際公開第０２／０９８４４３号パンフレット（その公開内容は、本発明の全体に包含される）において説明されるように、コンピュータプログラムを用いて行なうことができる。このコンピュータプログラムによって、上述した所望される任意の符号化ＲＮＡのヌクレオチド配列は、最大限のＧ／Ｃ含有量が得られるように、遺伝コードの補助か、または天然の遺伝コードの変性によってＧＣ安定化され得る。細胞内に可能な限り頻繁に現れるｔＲＮＡをコードするコドンの利用との組合せにおいて、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の少なくとも１個のｍＲＮＡのＧＣ安定化されたＲＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列は、それらのネイティブなＲＮＡ配列と比較して、さらに修飾されないことが好ましい。代替的に、また、元の配列と比較して、Ｇ／Ｃ含有量のみか、またはコドン使用量のみを修飾することが可能である。また、ビジュアルベーシック６．０（使用される開発環境：サービルパック３を含むマイクロソフトビジュアルスタジオエンタープライズ６．０）におけるソースコードは、国際公開第０２／０９８４４３号パンフレットに記載される。
【０２２３】
別の特定の実施形態によれば、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、安定化されたＲＮＡとして提供され得る。すなわち、本明細書において記載されるように、この（これらの）ＲＮＡ配列のリン酸骨格を修飾することによって、インビボにおける分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して実質的に耐性があるＲＮＡとして提供され得る。この関係において好ましく用いられ得るヌクレオチドとしては、リン酸骨格が修飾されたホスホロチオエート、好ましくは硫黄原子によって置換されたリン酸骨格に含有される少なくとも１個のリン酸酸素を含む。本明細書において記載されるように、安定化されたＲＮＡ配列は、例えば：非イオン性リン酸類似体（例えば、アルキルホスホネートおよびアリールホスホネートなど）、またはホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステルをさらに含んでいてもよい。ここで、非イオン性リン酸類似体は、負荷されたホスホネート酸素がアルキル基またはアリール基によって置換され、ホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステルは、負荷された酸素の残りがアルキル化された形態において存在する。より詳細には、リン酸部分は、好ましくは、例えば、ホスホラミダイト、ホスオロチオエート、ペプチドヌクレオチド、メチルホスホン酸などによって置換され得る。
【０２２４】
別の実施形態によれば、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、さらに、それらのＲＮＡ配列中のリボースまたは塩基部分の修飾を含む修飾されたヌクレオチドを導入することによって修飾（および好ましくは安定化）され得る。一般的に、本明細書に記載されるように、ＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、任意のネイティブな（天然に存在する）ヌクレオチドを含めばよい。当該ヌクレオチドとしては、例えば、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、および／もしくはシトシンか、またはその類似体が挙げられる。本明細書において、ヌクレオチド類似体は、天然に存在するヌクレオチドのネイティブに存在しないバリアントとして規定される。従って、類似体は、ネイティブに存在いない官能基を有する化学的に誘導体化されたヌクレオチドであり、天然に存在するヌクレオチドに付加されるか、もしくは天然に存在するヌクレオチドから除かれることが好ましく、またはヌクレオチドの天然に存在する官能基を置換する。従って、天然に存在するヌクレオチドの各成分は修飾され得る。すなわち、ＲＮＡ配列の骨格を形成する塩基成分、糖（リボース）成分、および／またはリン酸成分が修飾され得る。グアノシン、ウラシル、アデノシン、およびシトシンの類似体としては、天然に存在するか、もしくは天然に存在しない任意のグアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジンまたはシトシンが化学的に改変された（例えば、アセチル化、メチル化、ヒドロキシル化などによって）ものが挙げられるが、これらに限定されない。そのような類似体としては、１−メチル−アデノシン、１−メチル−グアノシン、１−メチル−イノシン、２，２−ジメチル−グアノシン、２，６−ジアミノプリン、２’−アミノ−２’−デオキシアデノシン、２’−アミノ−２’−デオキシシチジン、２’−アミノ−２’−デオキシグアノシン、２’−アミノ−２’−デオキシウリジン、２−アミノ−６−クロロプリンリボシド、２−アミノプリン−リボシド、２’−アラアデノシン、２’−アラシチジン、２’−アラウリジン、２’−アジド−２’−デオキシアデノシン、２’−アジド−２’−デオキシシチジン、２’−アジド−２’−デオキシグアノシン、２’−アジド−２’−デオキシウリジン、２−クロロアデノシン、２’−フルオロ−２’−デオキシアデノシン、２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン、２’−フルオロ−２’−デオキシグアノシン、２’−フルオロ−２’−デオキシウリジン、２’−フルオロチミジン、２−メチル−アデノシン、２−メチル−グアノシン、２−メチル−チオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシアデノシン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシシチジン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシグアノシン、２’−Ｏ−メチル−２’−デオキシウリジン、２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチルイノシン、２’−Ｏ−メチルシュードウリジン、２−チオシチジン、２−チオ−シトシン、３−メチル−シトシン、４−アセチル−シトシン、４−チオウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）−ウラシル、５，６−ジヒドロウリジン、５−アミノアリルシチジン、５−アミノアリル−デオキシ−ウリジン、５−ブロモウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−カルボキシメチルアモノメチル−ウラシル、５−クロロ−アラ−シトシン、５−フルオロ−ウリジン、５−ヨードウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン、５−メトキシ−ウリジン、５−メチル−２−チオ−ウリジン、６−アザシチジン、６−アザウリジン、６−クロロ−７−デンザ−グアノシン、６−クロロプリンリボシド、６−メルカプト−グアノシン、６−メチル−メルカプトプリン−リボシド、７−デンザ−２’−デオキシ−グアノシン、７−デンザアデノシン、７−メチル−グアノシン、８−アザアデノシン、８−ブロモ−アデノシン、８−ブロモ−グアノシン、８−メルカプト−グアノシン、８−オキソグアノシン、ベンズイミダゾール−リボシド、ベータ−Ｄ−マンノシル−キュエオシン、ジヒドロ−ウラシル、イノシン、Ｎ１−メチルアデノシン、Ｎ６−（［６−アミノヘキシル］カルバモイルメチル）−アデノシン、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン、Ｎ６−メチル−アデノシン、Ｎ７−メチル−キサントシン、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ピューロマイシン、キュエオシン、ウラシル−５−オキシ酢酸、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ワイブトキシン、キサントシン、およびキシロ−アデノシンが挙げられる。上記類似体の製法については、例えば、米国特許第４，３７３，０７１号明細書、米国特許第４，４０１，７９６号明細書、米国特許第４，４１５，７３２号明細書、米国特許第４，４５８，０６６号明細書、米国特許第４，５００，７０７号明細書、米国特許第４，６６８，７７７号明細書、米国特許第４，９７３，６７９号明細書、米国特許第５，０４７，５２４号明細書、米国特許第５，１３２，４１８号明細書、米国特許第５，１５３，３１９号明細書、米国特許第５，２６２，５３０号明細書、および米国特許第５，７００，６４２号明細書によって当業者に知られている。上述のような類似体の場合、本明細書に規定されるようなＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の免疫原性を増強させて、および／または、導入されるＲＮＡのさらなる修飾に干渉しない当該ＲＮＡ配列の類似体を、本発明に従って作製することが特に好ましい。
【０２２５】
本明細書に記載される本発明の免疫賦活組成物のＲＮＡ配列（好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、骨格修飾を含み得る。本発明に関連のある骨格修飾は、ＲＮＡ中に含まれるヌクレオチド骨格のリン酸が化学的に修飾される修飾である。上記骨格修飾としては、メチルホスホン酸、ホスホロアミド酸、およびホスホロチオエート（例えば、シチジン−５’−Ｏ−（１−チオリン酸））からなる群からの修飾が典型的に挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２６】
また、本明細書に記載される本発明の免疫賦活組成物のＲＮＡ配列（好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、付加的にか、または代替的に、糖修飾を含んでいてもよい。本発明に関連のある糖修飾としては、ヌクレオチドの化学的な糖修飾が存在しており、典型的には、２’−デオキシ−２’−フルオロ−オリゴリボヌクレオチド（２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、２’−フルオロ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸）、２’−デオキシ−２’−デアミンオリゴリボヌクレオチド（２’−アミノ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、２’−アミノ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸）、２’−Ｏ−アルキルオリゴリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−Ｃアルキルオリゴリボヌクレオチド（２’−Ｏ−メチルシチジン−５’−三リン酸、２’−メチルウリジン−５’−三リン酸）、２’−Ｃ−アルキルオリゴリボヌクレオチド、およびそれらの異性体である（２’−アラシチジン−５’−三リン酸２’−アラウリジン−５’−三リン酸）、またはアジド三リン酸（２’−アジド−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、２’−アジド−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸）からなる群から選択される糖修飾が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２７】
また、本明細書に記載される本発明の免疫賦活組成物のＲＮＡ配列（好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、付加的にか、または代替的に、少なくとも１個の塩基修飾を含んでいてもよい。それは、改変されていない（すなわち、天然の（＝ネイティブな））ＲＮＡ配列と比較して、ＲＮＡ配列（好ましくは、アジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ）によってコードされるタンパク質の発現量を著しく増加させるために好適である。この場合における著しいとは、ネイティブなＲＮＡにおける発現量と比較して、タンパク質の発現量における少なくとも２０％の増加を意味し、好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％または６０％の増加、より好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％またはそれ以上の１００％の増加、最も好ましくは少なくとも１５０％、２００％またはそれ以上の３００％の増加を意味する。本発明に関して、塩基修飾を有するヌクレオチドは、好ましくは、２−アミノ−６−クロロプリンリボシド−５’−三リン酸、２−アミノアデノシン−５’−三リン酸、２−チオシチジン−５’−三リン酸、２−チオウリジン−５’−三リン酸、４−チオウリジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルシチジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモウリジン−５’−三リン酸、５−ヨードシチジン−５’−三リン酸、５−ヨードウリジン−５’−三リン酸、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、５−メチルウリジン−５’−三リン酸、６−アザシチジン−５’−三リン酸、６−アザウリジン−５’−三リン酸、６−クロロプリンリボシド−５’−三リン酸、７−デアザアデノシン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、８−アザアデノシン−５’−三リン酸、８−アジドアデノシン−５’−三リン酸、ベンズイミダゾール−リボシド−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルグアノシン−５’−三リン酸、Ｎ６−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｏ６−メチルグアノシン−５’−三リン酸、シュードウリジン−５’−三リン酸、またはピューロマイシン−５’−三リン酸、キサントシン−５’−三リン酸からなる塩基修飾されたヌクレオチドの群から選択されることが好ましい。特に、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、およびシュードウリジン−５’−三リン酸からなる塩基修飾されたヌクレオチドの群から選択される塩基修飾のためのヌクレオチドが提供されることが好ましい。
【０２２８】
特に、具体的な実施形態によれば、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、修飾されていない、すなわちネイティブなＲＮＡ配列に対して、上述のような（修飾された）ヌクレオチドから選択される（修飾された）ヌクレオチドを０．１％〜１００％の間で含む。ここで、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）のネイティブに存在する修飾されていない０．１％〜１００％のＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ（および／またはＴＴＰ）ヌクレオチドか、または対応するＤＮＡ鋳型のネイティブに存在する修飾されていない０．１％〜１００％のＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ（および／またはＴＴＰ）ヌクレオチドが、それぞれ上述のような対応する修飾されたヌクレオチドによって修飾され得ることが好ましく、より好ましくは、それぞれ修飾されていないＲＮＡのネイティブに存在する修飾されていないＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ（および／またはＴＴＰ）ヌクレオチドの０．１％〜２０％の間、１０％〜３０％の間、２０％〜４０％の間、３０％〜５０％の間、４０％〜６０％の間、５０％〜７０％の間、６０％〜８０％の間、７０％〜９０％の間、もしくは８０％〜１００％の間であり、または少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、およびより好ましくは少なくとも９０％、ならびに最も好ましくは１００％が修飾され得る。
【０２２９】
本発明のさらに好ましい実施形態では、本明細書に記載の（任意によりすでにＧＣ安定化された）ＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）のリボソーム結合部位周囲におけるＡ／Ｕ含有量を、特定のネイティブなＲＮＡ配列のリボソーム結合部位周囲におけるＡ／Ｕ含有量と比較して増加させる。この修飾（リボソーム結合部位周辺におけるＡ／Ｕ含有量の増加）は、ＲＮＡ配列に対するリボソーム結合効率を増加させる。リボソーム結合部位（コザック配列：ＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号：１２２）、開始コドンを形成するＡＵＧ）に対する効果的な次々のリボソーム結合は、本明細書において規定されるようなＲＮＡ配列の効率的な翻訳作用を有する。
【０２３０】
本発明のさらなる実施形態によれば、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、潜在的に不安定な配列因子に関してさらに修飾されていてもよい。特に、本明細書に記載のＲＮＡ配列のコード領域、ならびに／または、５’および／もしくは３’非翻訳領域は、不安定な配列因子（好ましくは、特定のネイティブなＲＮＡに比べて修飾されていない、本明細書において規定されるようなＲＮＡ配列のコード化されたアミノ酸配列）を含まないように、特定のネイティブなＲＮＡ配列と比べてさらに修飾されていてもよい。例えば、真核細胞のＲＮＡの配列中に不安定な配列因子（destabilizing sequence elements：ＤＳＥ）が存在することが知られており、当該配列因子はタンパク質結合を示し、また、インビボにおけるＲＮＡの酵素的分解を調節する。そのため、任意によりタンパク質をコードする領域において、本明細書に記載のＲＮＡ配列のより一層の安定化のために、不安定でない配列因子か、もしくは実質的に不安定でない配列因子が当該領域に含まれるように、ネイティブなＲＮＡの対応する領域と比較して１つ以上の上記さらなる修飾が行なわれ得る。また、本発明によれば、非翻訳領域（３’−および／または５’−ＵＴＲ）に存在するＤＳＥを、本発明に記載のＲＮＡ配列から（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡから、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡから）、上記さらなる修飾によって除くことができる。
【０２３１】
そのような不安定な配列は、例えば、ＡＵが豊富な配列（AU-rich sequences：ＡＵＲＥＳ）であり、多数の不安定なＲＮＡの３’−ＵＴＲ区画に存在する（Caput et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 83: 1670 to 1674）。そのため、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、修飾されたＲＮＡが上記不安定な配列を含まないように、ネイティブなのＲＮＡと比較して（さらに）修飾されることが好ましい。また、これは起こり得るエンドヌクレアーゼ（例えば、配列ＧＡＡＣＡＡＧ）によって認識されるそれらの配列モチーフに該当し、トランスフェリン受容体をコードする遺伝子のＵＴＲセグメントに含まれる（Binder et al., EMBO J. 1994, 13: 1969 to 1980）。また、これらの配列モチーフは、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）において、本発明に従って取り除かれることが好ましい。
【０２３２】
また、本発明によれば、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、上記で規定されるような少なくとも１個のＩＲＥＳ、ならびに／または、少なくとも１個の５’および／もしくは３’安定化配列におけるさらに修飾された形態において、上記で規定されるような少なくとも１個の（ビ−またはマルチシストロンの）ＲＮＡに位置づけられる。これにより、例えば、リボソーム結合を増強するか、またはコードされる様々なタンパク質（例えば、上記で規定されるような抗体、薬学的に活性なタンパク質、もしくは抗原）を発現することが可能である。
【０２３３】
本発明によれば、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、少なくとも１個の５’および／もしくは３’安定化配列を有し得ることがさらに好ましい。５’および／もしくは３’非翻訳領域内のこれら安定化配列は、本明細書に記載されるように、細胞基質においてＲＮＡの半減期を増加させる作用を有する。これら安定化配列は、ウイルス、細菌および真核生物に見られるネイティブに存在する配列と１００％相同な配列を有し得る。ただし、当該安定化配列は、部分的に合成であるか、または完全に合成であってもよい。βグロビン遺伝子（例えば、ヒトまたはアフリカツメガエル）の非翻訳領域（untranslated sequences：ＵＴＲ）は、本発明において、本明細書に記載のさらに安定化されたＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）を利用することが可能な安定化配列の一例として説明され得る。安定化配列の別の例では、一般式（Ｃ／Ｕ）ＣＣＡＮｘＣＣＣ（Ｕ／Ａ）ＰｙｘＵＣ（Ｃ／Ｕ）ＣＣ（配列番号：１２３）を有する。これは、グロビン、（Ｉ）−コラーゲン、１５−リポキシゲナーゼ、またはチロシンヒドロキシラーゼをコードする非常に安定なＲＮＡの３’ＵＴＲを含む（Holcik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94: 2410 to 2414を参照すればよい）。言うまでもなく、上記安定化配列は、それぞれにか、または別の安定化配列との組合せにおいて、および当業者に知られる他の安定化配列との組合せにおいて用いることが可能である。よって、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、グロビンＵＴＲ（非翻訳領域）−安定化ＲＮＡとして存在することが好ましい。
【０２３４】
上記修飾はいずれかも、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）に適用され得る。さらに、当該ＲＮＡ配列は、本発明との関連において用いられるような任意のＲＮＡに適用されてもよいし、また、適当か、もしくは必要であれば、任意の組合せにおいて（これら修飾の組合せがそれぞれの修飾されたＲＮＡにおいて互いに干渉しないという条件で）互いに結合されてもよい。当業者は、適宜選択可能である。
【０２３５】
本発明によれば、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、当該分野において鋳型として利用可能な天然か、もしくは合成の任意のＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列（すなわち、任意の適切な（デスオキシ）リボ核酸）によって生成され得る。そのような天然か、もしくは合成のＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列は、合成か、もしくは天然に存在する任意の供給源から取得され得る。当該供給源は当業者に利用可能であり、例えば、タンパク質もしくはペプチドライブラリ由来であり得るか、または核酸ライブラリ（ｃＤＮＡライブラリ）から転写され得るか、または任意の生体組織もしくは死亡組織（例えば、ヒト、動物もしくは細菌原から得られた試料からの）から取得され得る。代替的に、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、当業者に知られる方法によって（例えば、固相合成か、または核酸配列（特に、ＲＮＡ配列）を生成するための任意の他の適切な方法によって）、合成的に生成され得る。さらに、これら配列におけるヌクレオチドもしくは塩基の置換、付加または欠失は、本明細書に記載のＲＮＡ生成のためのＤＮＡ基質を用いてか、または公知の部位特異的突然変異技術によってか、またはオリゴヌクレオチド連結方法によって行なわれることが好ましい（例えば、Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd ed., Cold Spring Harbor, NY, 2001を参照すればよい）。また、本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の修飾を、当業者に知られるさらなる方法によって、ＲＮＡに取り入れることができる。好ましい方法としては、例えば、（自動もしくは半自動の）オリゴヌクレオチド合成装置を用いた合成方法、生化学的方法（例えば、インビトロにおける転写方法など）などが挙げられる。本発明に関しては、（比較的短い）配列（一般的に、５０ヌクレオチドから１００ヌクレオチドまでの長さを超えない）の場合に、（自動または半自動の）オリゴヌクレオチド合成装置を用いた合成方法、およびインビトロにおける転写方法を好適に用いることができる。しかし、たとえ長い塩基修飾されたＲＮＡ分子であっても、様々な合成フラグメントを共有結合的に結合することによって、合成的に合成され得る。
【０２３６】
上述したように、本発明の免疫賦活組成物は、（ａ）アジュバント成分と、（ｂ）少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡとを含んでいる。別の実施形態によれば、本発明の免疫賦活組成物は、追加のアジュバント（すなわち、本発明の免疫賦活組成物において、上述したアジュバント成分に対してさらに含有されるアジュバント）を含み得る。本明細書において、アジュバントは、本発明に係る免疫賦活組成物の投与を補助し、必要に応じて輸送するために適している任意の化合物として理解され得る。さらに、上記アジュバントは、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと結合することなく、先天性免疫系の免疫応答（すなわち、非特異的な免疫応答）を開始し得るか、または増加させ得る。言い換えると、本発明の免疫賦活組成物は、投与されるときに上述したようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含むか、または当該（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分によって、通常、先天性の免疫応答を引き起こす。しかし、この先天性の免疫応答は、以下に示されるように、追加のアジュバントを付加することによって増強され得る。そのような追加のアジュバントは、当業者に知られており、本例（すなわち、哺乳動物における先天性の免疫応答の誘発を支持する場合）に適している、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの複合体形成を防ぐための上述のようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物以外のアジュバントから選択すればよい。好ましくは、当該アジュバントは以下の群から選択され得る。すなわち、キトサン、ＴＤＭ、ＭＤＰ、ムラミルジペプチド、プルロニック、ミョウバン溶液、水酸化アルミニウム、ＡＤＪＵＭＥＲ（登録商標）（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類からのグルカン；アルガムリン；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）；タンパク質吸着が高い水酸化アルミニウムゲル；低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦもしくはＳＰＴ（スクアランのエマルジョン（５％）、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２％）、プルロニックＬ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ（登録商標）（プロパンジアミン）；ＢＡＹ  Ｒ１００５（登録商標）（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシル−ドデカノイル−アミドハイドロ酢酸）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ（登録商標）（１−アルファ，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰＴＭ（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラホロ毒素、コレラ−トキシン−Ａ１−タンパク質−Ａ−Ｄ−フラグメント融合タンパク質、コレラトキシンのサブユニットＢ；ＣＲＬ１００５（ブロックコポリマーＰ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ガンマイヌリン；ゲルブアジュバント（すなわち：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（���１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウム塩化物（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛−Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８）；ＧＭ−ＣＳＦの混合物）；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニン−Ｄ−イソグルタミン酸−Ｌ−アラニン−グリセロールジパルミチン酸）；ＤＲＶｓ（脱水−再水和小胞から調製した免疫リポソーム）；インターフェロン−ガンマ；インターロイキン−１ベータ；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ  ７．０．３．（登録商標）；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ（登録商標）（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント（大腸菌不安定エンテロトキシン−プロトキシン）；任意の組成物の小球体および微粒子；ＭＦ５９（登録商標）；（スクアレンと水とのエマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ５１（登録商標）（精製された不完全フロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ７２０（登録商標）（代謝可能なオイルアジュバント（メタボリサブルオイルアジュバント））；ＭＰＬ（登録商標）（３−Ｑ−デサシル−４’−モノホスホリルリピドＡ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシホスホリルオキシ））−エチルアミド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ（登録商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−アラニン−Ｄ−グルタミン−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（登録商標）およびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（登録商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−スレオニン−Ｄ−イソグルタミン−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ）；ナノ粒子または任意の組成物のナノ粒子；ＮＩＳＶｓ（非イオン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮ（登録商標）（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；微粒子／ナノ粒子）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｌ１２１（登録商標）；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリル酸）；ＰＯＤＤＳ（登録商標）（プロテイノイド微粒子）；ポリエチレンカルバミン酸誘導体；ポリ−ｒＡ：ポリ−ｒＵ（ポリアデニル酸とポリウリジル酸との複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）；渦巻き型（cochleates）のタンパク質（アヴァンティ極性脂質、アラバスター社、アラバマ）；ＳＴＩＭＵＬＯＮ（登録商標）（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａ  サポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−ｏｔｅｃ−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１（登録商標）（“シンテックスアジュバント製剤”）；センダイタンパ��質リポソームおよびセンダイ含有脂質基質；Ｓｐａｎ−８５（ソルビタントリオレイン酸）；スペコル（Ｍａｒｃｏｌ５２、Ｓｐａｎ８５、およびＴｗｅｅｎ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサン、および２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシン塩酸塩）；Ｔｈｅｒａｍｉｄ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニン−Ｄ−イソグルタミン酸−Ｌ−アラニン−ジパルミトキシプロピルアミド）；テロニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（登録商標）または［スレオニン１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰｓまたは細菌様粒子）；ウォルター−リードリポソーム（水酸化アルミニウムにおいて吸着されるリピドＡを含有するリポソーム）、およびリポペプチド（Ｐａｍ３Ｃｙｓ、特に、アルミニウム塩（Ａｄｊｕ−ｐｈｏｓ、アルハイドロゲル、リハイドロゲルなど）が挙げられる）；エマルジョン（ＣＦＡ、ＳＡＦ、ＩＦＡ、ＭＦ５９、プロバックス、タイターマックス、モンタニド、バックスフェクチンが挙げられる）；コポリマー（オプティバックス（ＣＲＬ１００５）、Ｌ１２１、ポロキサマー４０１０などが挙げられる）；リポソーム（ステルス、渦巻き型（例えば、ＢＩＯＲＡＬ）が挙げられる）；植物性アジュバント（ＱＳ２１、Ｑｕｉｌ  Ａ、イスコマトリクス、ＩＳＣＯＭが挙げられる）；同時刺激に適したアジュバント（トマチン、バイオポリマー（例えば、ＰＬＧ、ＰＭＭ、イヌリン）が挙げられる）；細菌由来アジュバント（ロムルチド、ＤＥＴＯＸ、ＭＰＬ、ＣＷＳ、マンノース、ＣｐＧ核酸配列、ＣｐＧ７９０９、ヒトＴＬＲ  １−１０のリガンド、マウスＴＬＲ  １−１３のリガンド、ＩＳＳ−１０１８、ＩＣ３１、イミダゾキノリン、アンプリゲン、Ｒｉｂｉ５２９、ＩＭＯｘｉｎｅ、ＩＲＩＶｓ、ＶＬＰｓ、コレラトキシン、熱不安定性トキシン、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、フラゲリン、ＧＰＩアンカー、ＬＮＦＰＩＩＩ／Ｌｅｗｉｓ  Ｘ、抗菌ペプチド、ＵＣ−１Ｖ１５０、ＲＳＶ融合ペプチド、ｃｄｉＧＭＰが挙げられる）；ならびに、アンタゴニストとして好ましいアジュバント（例えば、ＣＧＲＰ神経ペプチド）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、好ましいアジュバントとしては、脂質修飾された核酸から選択されるか、または上述した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）および／または（Ｖｂ）の任意の免疫賦活性配列から選択されてもよい。
【０２３７】
また、さらなる実施形態によれば、本発明は、上述のような本発明の免疫賦活組成物、および必要に応じて薬学的に受容可能な担体、および／またはビヒクルを含んでいる薬学的組成物を提供する。
【０２３８】
第１の成分として、本発明の薬学的組成物は、上記で規定されるような本発明の免疫賦活組成物、すなわち、（ａ）カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含むか、または当該（ｍ）ＲＮＡからなるアジュバント成分、ならびに、（ｂ）少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質、抗原、および／または抗体をコードする少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを含む。ここで、免疫賦活組成物は、哺乳動物における先天性の免疫応答、および必要に応じて適応性の免疫応答を誘発するか、または増強させることが可能である。したがって、本発明の薬学的組成物は、治療を受ける患者の免疫系の先天性の免疫応答および必要に応じて適応性の免疫応答を典型的に補助する。
【０２３９】
さらに、本発明の薬学的組成物は、薬学的に受容可能な担体および／またはビヒクルを含んでいてもよい。本発明に関して、薬学的に受容可能な担体は、通常、本発明の薬学的組成物の液体主成分または非液体主成分を含む。本発明の薬学的組成物が液体の形態において提供される場合、典型的に、担体はピロゲンが含まれていない水、等張食塩水、または緩衝（水）溶液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩などの緩衝溶液）であり得る。特に、本発明の薬学的組成物の注入に関しては、ナトリウム塩、好ましくは５０ｍＭのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは少なくとも０．０１ｍＭのカルシウム塩、および必要に応じてカリウム塩、好ましくは少なくとも３ｍＭのカリウム塩を含有している水または好ましくはバッファー、より好ましくは水性バッファーが用いられ得る。好ましい実施形態によれば、ナトリウム塩、カルシウム塩および必要に応じてカリウム塩は、それらのハロゲン化物の形態（例えば、塩化物、ヨウ化物、または臭化物）において、それらの水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、または硫酸塩などの形態において存在し得る。ナトリウム塩の例としては、例えば、ＮａＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＳＯ４が挙げられ、任意のカリウム塩の例としては、例えば、ＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢｒ、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＳＯ４が挙げられ、また、カルシウム塩の例としては、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＩ２、ＣａＢｒ２、ＣａＣＯ３、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＯＨ）２が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、上述した陽イオンの有機アニオンをバッファー中に含んでいてもよい。さらに好ましい実施形態によれば、上述のような注入目的のために好ましいバッファーとしては、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、および必要に応じて塩化カリウム（ＫＣｌ）から選択される塩を含み得、さらにアニオンを塩化物に追加的に存在してもよい。また、ＣａＣｌ２は、ＫＣｌのような別の塩と置き換えられてもよい。典型的に、注入バッファー中の塩は、少なくとも５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、少なくとも３ｍＭの塩化カリウム、および少なくとも０．０１ｍＭの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）の濃度において存在する。注入バッファーは、特定の基準培地に対して高張、等張もしくは低張であり得る。すなわち、当該バッファーは、特定の基準培地に対して高い、同一、もしくは低い塩含有量を有し得る。ここでは、浸透作用または他の濃縮作用に起因する細胞の損傷を引き起こさない上述した塩濃度が用いられることが好ましい。基準培地は、例えば、“インビボ”における方法において見られる液体である。当該液体としては、血液、リンパ液、細胞基質液、または他の体液（すなわち、“インビトロ”における方法において基準培地として用いられ得る、一般的なバッファーまたは液体などの液体）などが挙げられる。上記一般的なバッファーまたは液体は当業者に知られている。リンガー溶液または乳酸リンガー溶液が液体主成分として特に好ましい。
【０２４０】
また一方、１つ以上の適合性のある固体賦形剤もしくは液体賦形剤か、希釈液か、または封入化合物を本発明の薬学的組成物のためにさらに用いてもよく、それは、治療を受ける患者への投与に好ましい。本明細書において用いられる“適合性のある”という用語は、本発明の薬学的組成物の成分が本明細書に記載のＲＮＡ配列（好ましくは、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化される本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）と、通常の使用環境下で本発明の薬学的組成物の薬学的有効性を大幅に低減させ得る相互作用を生じない方法において混合することができることを意味する。言うまでもなく、薬学的に受容可能な担体、賦形剤および希釈液は、十分に高純度であり、かつ、治療を受ける患者への投与に好ましい薬学的組成物を作製する上で十分に毒性が低い。薬学的に受容可能な担体、賦形剤、または薬学的組成物の成分として利用され得る化合物のいくつかの例としては、糖（例えば、ラクトース、グルコース、およびスクロースなど）；スターチ（例えば、コーンスターチまたはポテトスターチなど）；セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなど）；強化されたトラガント；麦芽；ゼラチン；獣脂；固形流動促進剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウムなど）；植物油（例えば、ラッカセイ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コール油、およびカカオ油など）；多価アルコール（例えば、ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなど）；アルギン酸が挙げられる。
【０２４１】
本発明の薬学的組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸的に、経鼻的に、頬側に、経膣的に、または埋め込み容器によって投与され得る。本明細書において用いられる「非経口的」という用語には、皮下の、静脈内の、筋肉内の、関節内の、滑液内の、胸骨内の、髄腔内の、肝臓内の、病巣内の、脳内の、経皮内の、皮内の、肺内の、腹腔内の、心臓内の、動脈内の、および舌下の注入か、または点滴技術を含む。
【０２４２】
好ましくは、本発明の薬学的組成物は、非経口注入によって投与され得、より好ましくは皮下の、静脈内の、筋肉内の、関節内の、滑液内の、胸骨内の、髄腔内の、肝臓内の、病巣内の、脳内の、経皮内の、皮内の、肺内の、腹腔内の、心臓内の、動脈内の、および舌下の注入か、または点滴技術によって投与され得る。本発明の薬学的組成物の無菌注入可能な形態は、水性か、または油性の懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、好ましい分散剤または潤滑剤、および懸濁化剤を用いて、当該分野において知られる技術に従って調製すればよい。また、無菌注入可能な製剤は、非経口的に受容可能な無毒性の希釈剤もしくは溶剤（例えば、１，３−ブタンジオールのように）中の無菌注入可能な溶液か、または懸濁液であり得る。受容可能なビヒクルおよび受容可能な溶剤は、共通して、水、リンガー溶液および生理食塩水である。加えて、無菌の不揮発性油が、溶剤または懸濁化媒体として従来用いられている。このために、任意の無菌性不揮発性油として、例えば、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを用いることができる。脂肪酸（オレイン酸およびそのグリセリド誘導体など）は、薬学的に受容可能な天然油脂（オリーブ油またはヒマシ油など）として、特にそれらのポリオキシエチル化された形態において、注入可能な製剤に有用である。また、これら油脂の溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤または分散剤（カルボキシメチルセルロースか、またはエマルジョンおよび懸濁化剤を含む薬学的に受容可能な投与形態の製剤において一般的に使用される類似の分散剤など）を含んでいてもよい。また、一般的に用いられる他の界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓ、および他の乳化剤など）か、または薬学的に受容可能な固体、液体もしくは他の投与形態において通常用いられる生体利用効率賦活薬が、本発明の薬学的組成物の製剤のために用いられ得る。
【０２４３】
また、上述のような本発明の薬学的組成物は、経口的に受容可能な任意の投与形態において、経口的に投与されてもよい。経口的に受容可能な任意の投与形態としては、カプセル、タブレット、水性懸濁液または溶液が挙げられるが、これらに限定されない。経口使用のためのタブレットの場合、通常使用される担体としては、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。また、平滑剤（ステアリン酸マグネシウムなど）が典型的に付加される。カプセル形態における経口投与に関して、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁液が必要である場合、活性成分（すなわち、上述のような本発明の薬学的組成物の一部を形成する、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）を、エマルジョン化剤および懸濁化剤と組み合わせる。また、必要に応じて、ある種の甘味料、香料または着色料を付加してもよい。
【０２４４】
また、本発明の薬学的組成物は、特に、治療対象として局所的投与によって直ちに到達可能な領域または器官を含む場合に（例えば、皮膚または他の到達可能な任意の上皮組織の疾患など）、局所的に投与され得る。好ましい局所製剤は、これらの領域または器官それぞれのために容易に調製される。局所的投与のために、本発明の薬学的組成物は、１つ以上の担体中に懸濁されたか、もしくは溶解された本発明の免疫賦活組成物（特に、上述したその成分）を含有する適切な軟膏剤に調製されてもよい。局所的投与のための担体としては、鉱物油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、および水が挙げられるが、これらに限定されない。代替的に、本発明の薬学的組成物を、適切なローションまたはクリームに調製することができる。本発明に関して、好ましい担体としては、鉱物油、ソルビタンモノステアリン酸、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノイル、ベンジルアルコール、および水が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４５】
本発明の薬学的組成物は、典型的に、本発明の薬学的組成物の成分を“安全かつ有効な量”で含んでいる。本発明の薬学的組成物は、特に、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の薬学的組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを“安全かつ有効な量”で含んでいる。本明細書に用いられるとき、“安全かつ有効な量”とは、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの量であって、本明細書に記載の疾患または障害のポジティブな変化を著しくもたらすに十分な量を意味する。また一方、それと同時に、“安全かつ有効な量”は、深刻な副作用を免れるほど十分に少なく、すなわち、利点とリスクとの理にかなった関係が許容される。これらの制限の決定は、通常、実用にかなった医学判断の範囲内にある。本明細書において、本発明の薬学的組成物（好ましくは、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化される本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の“安全かつ有効な量”の成分は、治療される特定の状態、ならびに、治療を受ける患者の年齢および健康状態、体重、一般健康、性別、食事制限、投与時間、排泄量、複合薬、本明細書に規定される特定の（ｍ）ＲＮＡまたはｍＲＮＡの活性、病状の重さ、治療の継続期間、付随する治療の種類、担当する医師の知識および経験の範囲内で用いられる薬学的に受容可能な特定の担体の種類、および同様の因子との関連において、さらに変えられてもよい。
【０２４６】
特定の実施形態によれば、本発明の薬学的組成物はワクチンとして提供され得る。そのような本発明のワクチンは、本発明の薬学的組成物のように通常構成され、また、好ましくは、治療を受ける患者の免疫系の先天性の免疫応答を少なくとも補助する。また、付加的に、本発明のワクチンは適応性の免疫応答を顕在化させ得る。好ましくは、（カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された本発明の免疫賦活組成物のアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または、好ましくは）本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡが、上述した任意の抗原（または抗体）をコードする場合に、適応性の免疫応答が誘発される。
【０２４７】
また、本発明のワクチンは、本発明の薬学的組成物に関して上記で規定したような、薬学的に受容可能な担体、アジュバント、および／またはビヒクルを含み得る。本発明のワクチンの特定の場合、薬学的に受容可能な担体の選択は、本発明のワクチンが投与される方法によって概ね決定される。本発明のワクチンは、例えば、全身的にか、または局所的に投与することが可能である。全身投与のための通常の経路としては、例えば、経皮内経路、経口経路、非経口経路（皮下注入、静脈内注入、筋肉内注入、関節内注入、皮内注入、および腹腔内注入が挙げられる）、および／または経鼻投与経路が挙げられる。局所投与のための通常の経路としては、例えば、局所投与経路を含むが、皮内注入、経皮注入、皮下注入、もしくは筋肉内注入か、または病巣内注入、脳内注入、肺内注入、心臓内注入、および舌下注入もまた含む。より好ましくは、ワクチンは皮内経路、皮下経路または筋肉内経路で投与され得る。よって、本発明のワクチンは、液体（またはときに固体）の形態に調製される。本発明のワクチンの好ましい投与量は、動物モデルによる定期実験によって決定することができる。上記モデルとしては、ウサギ、ヒツジ、マウス、ラット、イヌおよび非ヒト霊長類動物が挙げられるが、これに限定されない。注入のために好ましい単位投与形態としては、水の無菌溶液、生理食塩水またはそれらの混合物が挙げられる。そのような溶液のｐＨは、約７．４に調節すべきである。注入のために好ましい担体としては、ハイドロゲル、制御放出もしくは遅延放出のための装置、ポリ乳酸およびコラーゲン基質が挙げられる。局所投与のための薬学的に受容可能な好ましい担体としては、ローション、クリームおよびゲルなどにおける使用に好ましい担体が挙げられる。本発明のワクチンが経口的に投与される場合、タブレットおよびカプセルなどが好ましい単位投与形態である。経口投与に使用され得る単位投与形態の製剤に関する薬学的に受容可能な担体は、従来技術において公知である。当該担体の選択は、本発明の目的にとって重要でなく、当業者が困難なく作製可能である二次的考察（味、費用および貯蔵可能性）に従って決定すればよい。
【０２４８】
本発明のワクチンは、当該ワクチンの免疫原性をさらに増強させるために、１つ以上の補助物質をさらに含んでいてもよい。これによって、上述のような、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化された本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、および／または本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ、ならびに必要に応じて本発明のワクチンに含まれていてもよい補助物質の相乗作用は、好適に得られる。様々な種類の補助物質に応じて、多様な機構がこの観点における考察に加えられる。例えば、樹状細胞（dendritic cells：ＤＣｓ）（例えば、リポ多糖類、ＴＮＦ−アルファまたはＣＤ４０リガンド）の熟成は、好ましい補助物質の第１クラスを形成する。一般に、“危険シグナル”（ＬＰＳ、ＧＰ９６など）、またはサイトカイン（ＧＭ−ＣＦＳなど）のように免疫系に影響を与える任意の物質を補助物質として使用することが可能である。それは、本発明に係る免疫を賦活するアジュバントによって産生された免疫応答を、対象をしぼった方法において増強し、および／または影響を与えることができる。特に好ましい補助物質としては、サイトカイン（モノカイン、リンホカイン、インターロイキンまたはケモカイン）があり、これは、先天性の免疫応答（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＮＦ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＮＦ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＴ−ベータ、またはＴＮＦ−アルファ、成長因子（ｈＧＨなど））をさらに促進する。
【０２４９】
本発明のワクチンに含まれ得るさらなる添加物としては、乳化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）など）、潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）、着色料、味付加物質、薬学的な担体、タブレット形成物質、安定化剤、抗酸化剤、保存料が挙げられる。
【０２５０】
また、本発明のワクチンは、さらなる任意の化合物を追加的に含んでいてもよく、それは、ヒトＴｏｌｌ様受容体であるＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０との（リガンドとしての）結合親和力に起因するか、またはマウスのＴｏｌｌ様受容体であるＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、またはＴＬＲ１３との（リガンドとしての）結合親和力に起因する免疫賦活であると知られる。
【０２５１】
本明細書において、本発明のワクチンに付加され得る別のクラスの化合物としては、ＣｐＧ核酸（特に、ＣｐＧ−ＲＮＡまたはＣｐＧ−ＤＮＡ）であり得る。ＣｐＧ−ＲＮＡまたはＣｐＧ−ＤＮＡは、一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＤＮＡ）、二本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｄｓＣｐＧ−ＤＮＡ）、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＲＮＡ）、または二本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｄｓＣｐＧ−ＲＮＡ）であり得る。ＣｐＧ核酸は、ＣｐＧ−ＲＮＡの形態であることが好ましく、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡの形態であることがより好ましい。ＣｐＧ核酸は、少なくとも１個以上の（分裂促進的な）シトシン／グアニンジヌクレオチド配列（ＣｐＧモチーフ）を含むことが好ましい。第一の好ましい代替例によれば、これらの配列に含まれる少なくとも１個のＣｐＧモチーフ、すなわち、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）およびＧ（グアニン）は、メチル化されていない。これら配列に必要に応じて含まれるさらなるシトシンまたはグアニンのすべてが、メチル化されていてもよいし、メチル化されていなくてもよい。しかし、さらに好ましい代替例によれば、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）およびＧ（グアニン）は、メチル化された形態において存在し得る。
【０２５２】
本発明のさらに好ましい目的によれば、本発明の免疫賦活組成物（好ましくは、本発明の免疫賦活組成物の成分（すなわち、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ））は、薬学的組成物またはワクチンの製剤のために使用されてもよく、好ましくは本明細書にてすべて規定されるように、本明細書にて規定された疾患および障害のいずれかの予防、治療、および／または寛解のために使用され得る。
【０２５３】
したがって、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物または本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、例えば、癌疾患または腫瘍疾患の予防、治療、および／または寛解（これらのための薬の調製）のために用いられ得る。当該疾患としては、メラノーマ、悪性のメラノーマ、大腸がん、リンパ腫、肉腫、芽細胞腫、腎がん、胃腸腫瘍、グリア細胞腫、前立腺腫瘍、膀胱がん、直腸腫瘍、胃がん、食道がん、膵臓がん、肝臓がん、乳腫瘍（mammary carcinomas）（＝乳がん（breast cancer））、子宮がん、子宮頸がん、急性骨髄性白血病（acute myeloid leukaemia：ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（acute lymphoid leukaemia：ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（chronic myeloid leukaemia：ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（chronic lymphocyticleukaemia ：ＣＬＬ）、肝細胞がん、様々なウイルス腫瘍（例えば、パピローマウイル
ス誘導細胞がん（例えば、頸癌（cervical carcinoma）＝子宮頸癌（cervical cancer））、腺がん、ヘルペスウイルス誘導腫瘍（例えば、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘導Ｂ細胞リンパ腫）、肝炎Ｂ誘発腫瘍（幹細胞腫瘍）、ＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−２誘導リンパ腫）、聴神経腫瘍、肺がん（lung carcinomas= lung cancer = bronchial carcinom）、小細胞肺がん、咽頭がん、肛門がん、グリア芽細胞腫、直腸がん、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、基底細胞腫、脳腫瘍転移、髄芽細胞腫、膣がん、膵臓がん、精巣がん、ホジキン症候群、髄膜腫、シュネーベルガー病、脳下垂体腫瘍、菌状息肉腫、カルチノイド、神経鞘腫、棘細胞がん、バーキットリンパ腫、喉頭がん、腎臓がん、胸腺腫、体細胞腫、骨がん、非ホジキンリンパ腫、尿道がん、ＣＵＰ症候群、頭頸部腫瘍、乏突起神経膠腫、外陰部癌、腸がん、結腸がん、食道腫瘍（oesophageal carcinoma）（＝食道がん（oesophageal cancer））、いぼの発達、小腸の腫瘍、頭蓋咽頭腫、卵巣腫瘍、生殖器腫瘍、卵巣がん（ovarian cancer）（＝卵巣腫瘍（ovarian carcinoma））、膵腫瘍（pancreatic carcinoma）（＝膵がん（pancreatic cancer））、子宮内膜がん、肝臓腫瘍転移、陰茎がん、舌がん、胆嚢がん、白血病、形質細胞腫、瞼腫瘍、前立腺がん（prostate cancer）（前立腺腫瘍（prostate tumors））などから選択されることが好ましい。
【０２５４】
さらに、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物、または本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、例えば、感染性疾患（好ましくは（ウイルス、細菌、または原性動物性の）感染性疾患）の予防、治療、および／または寛解（これらのための薬の調製）のために用いられ得る。上記感染性疾患は、好ましくは（ウイルス性の、細菌性の、または原性動物性の）感染性疾患であり、典型的には、インフルエンザ、マラリア、ＳＡＲＳ、黄熱病、ＡＩＤＳ、ライム病、リーシュマニア症、炭疽菌、髄膜炎、ウイルス性の感染性疾患（ＡＩＤＳ、尖圭コンジローマ、中空いぼ、デング熱、三日熱、エボラウイルス、感冒、初夏髄膜脳炎（early summer meningoencephalitis：ＦＳＭＥ）、インフルエンザ、帯状疱疹、肝炎、単純ヘルペスＩ型、単純ヘルペスＩＩ型、帯状疱疹、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、マールブルグウイルス、麻疹、口蹄疫、単核球症、流行性耳下腺炎、ノーウォークウイルス感染、パイフェル腺熱、天然痘、ポリオ（小児歩行困難）、偽性クループ、伝染性紅斑、いぼ、西ナイル熱、水痘、巨細胞ウイルス（cytomegalic virus：ＣＭＶ）など）、細菌性の感染性疾患（流産（前立腺炎症）、炭疽菌、虫垂炎、ボレリア症、ボツリヌス中毒、カンピロバクター、トラコーマクラミジア（尿道の炎症、結膜炎）、コレラ、ジフテリア、鼠径肉芽腫、喉頭蓋炎、チフス熱、ガス壊疽、淋病、野兎病、ヘリコバクターピロリ、百日咳、鼠径リンパ肉芽腫、頭蓋骨骨髄炎、レジオネラ症、ハンセン病、リステリア症、肺炎、髄膜炎、細菌性髄膜炎、炭疽菌、中耳炎、マイコプラズマ・ホミニス、新生児敗血症（絨毛膜羊膜炎）、壊疽性口内炎、パラチフス、ペスト、ライター症候群、ロッキー山紅斑熱、サルモネラパラチフス、サルモネラチフス、猩紅熱、梅毒、破傷風、トリッパー、ツツガムシ病、結核症、チフス、腟炎（vaginitis）（腟炎（colpitis））、軟性下疳など）、ならびに、寄生虫、原虫または真菌類によって引き起こされる感染性疾患（アメーバ症、ビルハルツ住血吸虫症、シャーガス病、エキノコックス、魚類条虫類、魚類中毒症（シガテラ）、キツネのサナダムシ、足部白癬、イヌ足部白癬、カンジダ症、酵母菌斑点、疥癬、皮膚リーシュマニア症、ランブル鞭毛虫症（ジアルジア症）、シラミ、マラリア、顕微鏡検査、回旋糸状虫症（眼オンコセルカ症）、真菌病、ウシのサナダムシ、住血吸虫症、ブタのサナダムシ、トキソプラズマ症、トリコモナス症、トリパノソーマ感染性疾患（睡眠病）、内臓リーシュマニア症、オムツ皮膚炎、または微小サナダムシなど）から選択される。
【０２５５】
同様に、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物、または本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、例えば、自己免疫疾患の予防、治療、および／または寛解（これらのための薬の調製）のために用いられ得る。自己免疫疾患は、それぞれの疾患の主要な臨床病理学的な特徴に応じて、全身性および臓器特異的か、または局所的な自己免疫疾患の多岐に分類することができる。自己免疫疾患は、全身性症候群または局所性症候群のカテゴリーに分類される。全身性症候群としては、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus：ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、強皮症、慢性関節リウマチおよび多発性筋炎が挙げられる。局所性症候群は、内分泌学的（１型糖尿病、橋本甲状腺炎、アジソン病など）、皮膚科学的（尋常性天疱瘡）、血液学的（自己免疫溶血性貧血）、神経性（多発性硬化症）の症状か、または実質的に制限された質量の任意の体組織に関連し得る症状であり得る。治療する自己免疫疾患は、Ｉ型自己免疫疾患、ＩＩ型自己免疫疾患、ＩＩＩ型自己免疫疾患、またはＩＶ型自己免疫疾患からなる群から選択すればよい。当該疾患としては、例えば、多発性硬化症（multiplesclerosis：ＭＳ）、慢性関節リウマチ、糖尿病、Ｉ型糖尿病（Diabetes mellitus Type1）、慢性多発性関節炎、バセドウ病、慢性肝炎の自己免疫形態、潰瘍性大腸炎、Ｉ型アレルギー疾患、ＩＩ型アレルギー疾患、ＩＩＩ型アレルギー疾患、ＩＶ型アレルギー疾患、線維筋痛症、脱毛、ベヒテレフ病、クローン病、重症筋無力症、神経性皮膚炎、リウマチ性多発筋痛症、進行性全身性硬化症（progressive systemic sclerosis：ＰＳＳ）、ライター症候群、関節リウマチ、乾癬、血管炎など、またはＩＩ型糖尿病が挙げられる。これまでに、免疫系が自己抗原に対してどのように免疫応答を誘発するかについて的確な形態が明らかにされていないが、病因に関しては様々な研究成果がある。その結果、自己応答は、Ｔ細胞バイパスに起因し得る。正常な免疫系では、Ｔ細胞によるＢ細胞の活性が必要であり、それによってＢ細胞は多数の抗体を産生することができる。このＴ細胞の要件は、過度の抗原を産生する生物による感染など、まれに感染させることによるものであり得、それは、非特異的な方法においてＴ細胞受容体のβ−サブユニットと直接結合することによって、Ｂ細胞か、または同様にＴ細胞のポリクローナル活性を開始することが可能である。別の説明では、分子擬態からの自己免疫疾患を推論する。外来性の抗原はある種のホスト抗原と構造類似性を共有し得、それにより、この抗原（自己抗原に擬態する）に対して産生される任意の抗体は、理論上、ホスト抗原と結合し、抗原応答を増幅させ得る。分子擬態の最も顕著な形態がグループＡベータ−溶血性連鎖球菌中に観察される。それは、ヒトの心筋と抗原を共有し、心臓に対するリウマチ熱の発現が観察される。
【０２５６】
さらに、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物もしくは本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、アレルギーまたはアレルギー性疾患（すなわちアレルギーと関連する疾患）の予防、治療、および／または寛解（のための薬剤の調製）に使用され得る。アレルギーは、外来の抗原またはアレルゲン（例えば、上述のように規定されるアレルギー抗原）に対する後天性の異常な免疫過敏性と典型的に関与する状態である。このようなアレルギー抗原またはアレルゲンは、異なる発生源（例えば、動物、植物、真菌、細菌など）に由来する上述のように規定されるアレルギー抗原から選択され得る。これに関連するアレルゲンとしては、例えば、草、花粉、かび、薬物または多くの環境要因などが挙げられる。アレルギーは、一般的に、これらの抗原またはアレルゲンに対して局所性または全身性の炎症性反応を生じ、これらのアレルゲンに対する身体における免疫を誘導する。理論に縛られることなく、様々な異なる疾患の機序が、アレルギーの発生に関与していることについて支持されている。P. GellおよびR. Coombsによる分類表によれば、用語「アレルギー」は、古典的なＩｇＥ機序によって引き起こされるＩ型の過敏性に限定される。Ｉ型の過敏性は、ＩｇＥによる肥満細胞および好塩基球の過剰な活性化によって特徴付けられる。この過剰な活性化は、穏やかな鼻水から、生命に関わるアナフィラキシー性のショックおよび死までの症状を引き起こし得る全身性の炎症反応を生じる。アレルギーのよく知られている種類としては、理論に縛られることなく、アレルギー性の喘息（鼻粘膜の腫脹を生じる）、アレルギー性の結膜炎（結膜の発赤およびそう痒を生じる）、アレルギー性の鼻炎（「花粉症」）、アナフィラキシー、皮膚脈管炎、皮膚炎（湿疹）、蕁麻疹（皮疹）、好酸球増加症、虫刺されに対する呼吸器系のアレルギー、皮膚のアレルギー（様々な発疹（例えば湿疹、皮疹（蕁麻疹）、および（接触性の）結膜炎）が挙げられ、これらを生じる）、食物アレルギー、医薬品に対するアレルギーなどが挙げられる。本発明に関して、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物または本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡは、好ましくは特定の免疫応答を引き起こす免疫反応を脱感作することによって、そのようなアレルギー性の障害または疾患の治療に使用され得る。そのような脱感作は、本発明の免疫賦活組成物のＲＮＡ、好ましくは遊離のｍＲＮＡの少なくとも１個によってコードされているアレルゲンまたはアレルギー抗原の有効量を投与してわずかな免疫反応を誘導することによって、実施され得る。それから、アレルゲンまたはアレルギー抗原の量は、治療される患者の免疫系が特定の量のアレルゲンまたはアレルギー抗原を許容するまで、以降の��与において段階的に増やされ得る。
【０２５７】
さらに、上記と関連して、本発明はまた、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物または本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡの、本明細書に記載の疾患または障害の予防、治療、および／または寛解のための、使用に関する。また、本発明は、本発明の免疫賦活組成物、本発明の薬学的組成物または本発明のワクチン、あるいは、本発明の免疫賦活組成物の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡと一緒になった、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物と複合体化された、本発明の免疫賦活組成物に含まれるアジュバント成分の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡの、予防接種のための使用、または接種物としてのこれらの成分の使用を特に包含している。本発明の特に好ましい一実施形態によれば、上述の疾患もしくは障害の予防、治療および／または寛解のための方法、または上述の疾患を予防する予防接種方法は、これらを必要としている（上述の疾患のいずれかに罹患しているか、またはこれらの症状を示している）患者（特にヒト）に対して、上述した薬学的組成物を、好ましくは「安全かつ有効な量」で本発明の薬学的組成物について上述したような上記処方物の１つにて、投与する工程を典型的に包含している。上記投与の形態は、本発明の薬学的組成物の薬学的またはワクチンに関して上述されている通りであり得る。
【０２５８】
また、本発明は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、あるいは少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの調製のためのインビトロ転写の方法に関する。当該方法は、以下のステップ：
ａ）いずれのＲＮＡも上記に規定される通りであるカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の本発明の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡにとっての鋳型としての（デオキシ）リボ核酸の調製／準備と；
ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、適切なバッファー、ヌクレオチド混合物、化学修飾されているヌクレオシドおよび天然に存在するヌクレオシドを有している１個以上のヌクレオチドを必要に応じて含んでいるヌクレオチド混合物、ならびに必要に応じてＲＮａｓｅ阻害剤を含んでいるインビトロ転写培地への、上記（デオキシ）リボ核酸の添加と；
ｃ）上記インビトロ転写培地における上記（デオキシ）リボ核酸のインキュベーションおよび（デオキシ）リボ核酸のインビトロ転写と；
ｄ）必要に応じて、組み込まれなかったヌクレオチドの、上記インビトロ転写培地からの精製および除去とを包含している。上記（ｍ）ＲＮＡおよび遊離のｍＲＮＡは、上述の通りである。１個以上の上記ヌクレオチドは、１個以上の天然に存在するヌクレオシドＡ、Ｇ、Ｕおよび／またはＣにとっての（部分的または完全な）代替物としての、上述ように規定される化学修飾されているヌクレオシドから選択される化学修飾されているヌクレオシド、ならびに天然に存在するヌクレオシドＡ、Ｇ、Ｕおよび／またはＣのすべてが置き換えられているのではない場合に必要に応じて天然に存在するヌクレオシドＡ、Ｇ、Ｕおよび／またはＣを有している。
【０２５９】
本発明のインビトロ転写方法のステップａ）に記載の（デオキシ）リボ核酸は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の本発明の（ｍ）ＲＮＡ、または少なくとも１個の治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの調製のための鋳型として使用され得る、上述の任意の核酸であり得る。この目的のために、典型的にＤＮＡ配列が使用される（例えばゲノムＤＮＡもしくはこれらの断片またはプラスミド、またはＲＮＡ配列（これらに対応する）（例えば、ｍＲＮＡ配列、好ましくは直鎖状の形態））。上記インビトロ転写反応は、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位を有しているプラスミドを用いて一般的に実施され得る。この目的のために、当該分野に公知のベクター（例えば、市販のベクター（上記を参照のこと））が使用され得る。例えば、好ましいものとして、クローニング部位の上流および／または下流にＳＰ６またはＴ７もしくはＴ３結合部位を有しているこれらのベクターが挙げられる。したがって、使用され得る（デオキシ）リボ核酸配列は、選択されるＲＮＡポリメラーゼに依存して、所望の通りに後ほど転写され得る。上述のようなタンパク質（例えば、治療的に活性なタンパク質、抗原または抗体）をコードしている、インビトロ転写のために使用される（デオキシ）リボ核酸は、例えば使用されるベクターの多重クローニング部位を介して、典型的にベクターにクローニングされている。転写の前に、プラスミドは、上述のような免疫賦活要素の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または上述の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの後の３’末端が適切な制限酵素を用いて配置される部位において制限酵素を用いて典型的に切断され、断片が精製される。これは、後の上述のような免疫賦活要素の少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または上述の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡがベクターの配列を含んでいることを防止し、特定の長さが入手され得る。
【０２６０】
また代替的に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、転写の鋳型としての（デオキシ）リボ核酸を調製することが可能である。この目的のために、ＰＣＲに使用されるプライマーの１個はＲＮＡポリメラーゼ結合部位の配列を典型的に含んでいる。プライマーの５’末端が、約１０〜５０個のヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは約１０〜３０個のヌクレオチドまたはそれ以上、最も好ましくは約２０個のヌクレオチドの長さを有していることがさらに好ましい。
【０２６１】
インビトロ転写反応の前に、（デオキシ）リボ核酸（例えば、特定のＤＮＡまたはＲＮＡの鋳型）は、高い収量を確保するために、典型的に精製されており、かつＲＮａｓｅを含んでいない。精製は当該分野に公知の任意の手法（例えば、塩化セシウム勾配またはイオン交換法）によって実施され得る。
【０２６２】
本発明のインビトロ転写方法の方法ステップｂ）によれば、（デオキシ）リボ核酸はインビトロ転写培地に加えられる。適切なインビトロ転写培地は、第１に、ステップａ）の下に調製されるような（デオキシ）リボ核酸を、例えば、約０．１〜約１０μｇ、好ましくは約１〜約５μｇ、より好ましくは約２．５μｇ、最も好ましくは約１μｇ含んでいる。適切なインビトロ転写培地は、還元剤（例えば、ＤＴＴ、より好ましくは約１〜約２０μｌの５０ｍＭのＤＴＴ、より一層好ましくは約５μｌの５０ｍＭのＤＴＴ）を必要に応じてさらに含んでいる。インビトロ転写培地は、ヌクレオチド（ＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰ）（例えば、ヌクレオチド混合物）をさらに含んでいる。本発明の場合、ヌクレオチドは、上述のような化学修飾されているヌクレオチドを好ましく含んでいる。そのような（化学修飾されている）ヌクレオチドは、天然に存在しているヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰの１個以上にとっての代替物、ならびに天然に存在しているヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰのすべてが置き換えられるのではない場合に必要に応じて、天然に存在しているヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰとしての役割を果たし得る。ヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰは、典型的にヌクレオチドごとに約０．１〜１０ｍＭ、好ましくはヌクレオチドごとに約０．１〜１ｍＭ、好ましくは合計して約４ｍＭの濃度として、ヌクレオチド混合物に典型的に存在している。上述（ヌクレオチドごとに約０．１〜１０ｍＭ、好ましくはヌクレオチドごとに約０．１〜１ｍＭ、好ましくは合計して約４ｍＭ）のような（化学）修飾されているヌクレオチドは、ネイティブなヌクレオチドが上述のような化学修飾されているヌクレオシドを含んでいる（複数の）（修飾されている）ヌクレオチドによって完全に置き換えられるような量として典型的に加えられる。しかし、上述のような修飾されているヌクレオチドの１個以上、および特定のヌクレオチドの代わりに天然に存在しているヌクレオチドの１個以上の混合物を使用可能である。すなわち、上述の化学修飾されているヌクレオチドの１個以上が、天然に存在しているヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰにとっての代替物として存在し得、付加的に天然に存在しているヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰが、天然に存在しているヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ、ＵＭＰおよび／またはＣＭＰのすべてが置き換えられているのではない場合に必要に応じて、含まれ得る。したがって、インビトロ転写培地に対する所望の塩基の選択的な添加によって、転写された本発明の、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡにおける所望のヌクレオチド修飾の含有量（すなわち出現率および量）が制御され得る。同様に、適切なインビトロ転写培地は、典型的に約１０〜５００Ｕ、好ましくは約２５〜２５０Ｕ、より好ましくは約５０〜１５０Ｕ、最も好ましくは約１００Ｕの、ＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７−ＲＮＡポリメラーゼ（例えば、T7-Opti mRNA Kit、CureVac、Tubingen、Germany）、Ｔ３−ＲＮＡポリメラーゼまたはＳＰ６）を含んでいる。インビトロ転写培地は、転写された（ｍ）ＲＮＡの分解を避けるために、ＲＮａｓｅがない状態にさらに維持される。したがって、適切なインビトロ転写培地は、必要に応じてＲＮａｓｅ阻害剤をさらに含んでいる。
【０２６３】
本発明のインビトロ転写方法のステップｃ）において、ステップｂ）の（デオキシ）リボ核酸は、典型的に約３０〜１２０分間、好ましくは約４０〜９０分間、最も好ましくは約６０分間にわたって、約３０〜４５℃、好ましくは約３７〜４２℃において、インビトロ転写培地においてインキュベートされ、転写される。インキュベーション温度は、使用されるＲＮＡポリメラーゼによって決定される（例えば、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼの場合に約３７℃である）。転写によって得られた核酸は、いずれのＲＮＡも本明細書に上述されている、好ましくはカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡである。
【０２６４】
上述の方法ステップｃ）にしたがったインキュベーションに続いて、反応物の精製が本発明に係るインビトロ転写方法のステップｄ）において実施され得る。この目的のために、当該分野に公知の任意の適切な方法が使用され得る（例えば、クロマトグラフィー精製手法（例えば、親和性クロマトグラフィー、ゲルろ過など））。精製によって、組み込まれなかった（すなわち過剰の）ヌクレオチドがインビトロ転写培地から除去され得る。精製には当該分野に公知の任意の適切な方法（例えば、クロマトグラフィー精製手法（例えば、親和性クロマトグラフィー、ゲルろ過など））が使用され得る。このような精製によって、本明細書に規定されているＲＮＡ配列（すなわちカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の不要なものが除去されている転写されたＲＮＡが入手され得る。例えば、転写されたＲＮＡを含んでいる反応混合物は、転写の後に、当該反応混合物にいまだに含まれているＤＮＡ鋳型を除去するためにＤＮａｓｅを用いて典型的に消化され得る。転写されたＲＮＡは、その後または代替的に、ＬｉＣｌを用いて沈降され得る。それから、転写されたＲＮＡの精製は、イオン対逆相（ＩＰ  ＲＰ）−ＨＰＬＣによって実施され得る。これは、より長い断片およびより短い断片をお互いから効率的に除去することを特に可能にする。これに関連して、精製は予備的な規模におけるＲＮＡの精製方法によって好ましく行われる。当該精製方法は、本明細書に規定されているＲＮＡ（特にカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）が、固相として多孔質の逆相を用いたＨＰＬＣ（PURE Messenger）によって精製される点において特徴付けられる。例えば、本発明のインビトロ転写方法のステップｄ）における精製に関して、逆相はＨＰＬＣ精製のための固相として採用され得る。逆相を用いたクロマトグラフィーに関して、非極性の化合物は固相としての役割を典型的に果たし、アセトニトリルおよび／またはメタノールを用いたバッファーの形態として一般的に採用される極性溶媒（例えば水）は、溶出のための移動相としての役割を典型的に果たす。好ましくは、多孔質の逆相は、８．０±２μｍ、好ましくは±１μｍ、より好ましくは＋／−０．５μｍの粒径を有している。逆相の物質はビーズの形態であり得る。精製は、必要に応じてビーズの形態としての、この粒径を有している多孔質の逆相を用いた、特に良好な分離結果が得られる特に好ましい様式において実施され得る。採用される逆相は多孔質であることが好ましい。これは、Azarani A.およびHecker K.Hによって説明されているような多孔質ではない固定の逆相の場合、本明細書に規定のＲＮＡ（特にカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ��の精製が可能であったとしても非常な困難をともなわずには達成し得ないほどに、非常に高い圧力が蓄積されるためである。逆相は、２００Å〜５０００Åの孔径、特に３００Å〜４０００Åの孔径を好ましく有している。逆相にとって特に好ましい孔径は、２００Å〜４００Å、８００Å〜１２００Åおよび３５００Å〜４５００Åである。これらの孔径を有している逆相を用いれば、方法ステップｄ）における本明細書に規定のＲＮＡの精製に関して特に良好な結果が達成される。逆相に関する材料は、ポリスチレン−ジビニルベンゼンであることが好ましく、アルキル化されていないポリスチレン−ジビニルベンゼンが特に採用され得る。ポリスチレン−ジビニルベンゼンを用いた固相はそれ自体が公知である。方法ステップｄ）における精製に関して、それ自体が公知であり、ＨＰＬＣにすでに採用されており、購入可能であるポリスチレン−ジビニルベンゼンが使用され得る。特に、アルキル化されていない多孔質のポリスチレン−ジビニルベンゼン（特に８．０±０．５μｍの粒径および２５０Å〜３００Å、９００Å〜１１００Å、または３５００Å〜４５００Åの孔径を有しているもの）は、方法ステップｄ）における精製のために非常に好ましく使用される。上述の利点は、逆相のためのこの材料を用いた特に好ましい様式において達成され得る。ＨＰＬＣ精製は、イオン対法、負に荷電しているＲＮＡに対する対イオンとして移動相に加えられる正の電荷を有しているイオンによって実施され得る。逆相の系の非極性の固相によって抑制される親油特性を有しているイオン対は、この様式において形成される。実際に、イオン対法にとっての厳密な条件は、それぞれの分離の問題点について経験的に解決される必要がある。対イオン、その濃度および溶液の濃度は、分離の結果に大きな影響をもたらす。好ましい様式において、アルキルアンモニウム塩（例えば、トリエチルアンモニウムアセテート）および／またはテトラアルキルアンモニウム化合物（例えば、テトラブチルアンモニウム）が、移動相に加えられる。好ましくは、０．１Ｍのトリエチルアンモニウムアセテートが加えられ、ｐＨが約７に調整される。移動相の選択は、所望の分離の性質に依存する。これは、特定の分離のために見出される移動相（例えば従来技術から公知であり得る移動相など）が十分な成功の見込みをともなって他の問題点に対して容易に振り替え得ないことを意味する。理想の溶出条件、特に使用される移動相は、経験的な試験によってそれぞれの分離の問題点に関して決定される必要がある。水性溶媒および有機溶媒の混合物は、ＨＰＬＣ法による本明細書に規定のＲＮＡ（特にカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の溶出のための移動相として採用され得る。これに関連して、特に約７（例えば、６．５〜７．５（例えば７．０））のｐＨを有しているバッファーが水性溶媒として使用される場合に、上述のように、イオン対法において本明細書に規定のＲＮＡに対する対イオンとしての役割も果たす、好ましくはト���エチルアンモニウムアセテートのバッファー、特に好ましくは０．１Ｍのトリエチルアンモニウムアセテートのバッファーが使用されることが好ましい。移動相に採用される有機溶媒は、アセトニトリル、メタノールまたはこれらの２つの混合物、特に好ましくはアセトニトリルであり得る。上述のようなＨＰＬＣ法を用いた方法ステップｃ）における、本明細書に規定のＲＮＡの精製（特にカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの精製）は、これらの有機溶媒を用いた特に好ましい様式において実施される。移動相は、０．１Ｍのトリメチルアンモニウムアセテート（ｐＨ７）およびアセトニトリルの混合物であることが特に好ましい。同様に、移動相が、移動相を基準にして５．０容量％〜２０．０容量％の有機溶媒を含んでおり、１００容量％になる残余部が水性溶媒である場合が特に好ましいことは明らかである。本発明に係る方法は、移動相が、移動相を基準にして９．５容量％〜１４．５容量％の有機溶媒を含んでおり、１００容量％になる残余部が水性溶媒である場合が極めて好ましい。続いて、本明細書に規定のＲＮＡの溶出（特にカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）は、定組成的にか、または勾配分離によって実施され得る。定組成分離の場合、本明細書に規定のＲＮＡの溶出は、一定に維持されている単一の溶出剤またはいくつかの溶出剤の混合物を用いて実施され、詳細について上述されている溶媒が溶出剤として採用され得る。
【０２６５】
また、本発明は、上述のような本発明の免疫賦活組成物もしくはその成分、上述のような本発明の薬学的組成物または本発明のワクチンを用いたトランスフェクションし、必要に応じてそれらを投与する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
（ａ）血液細胞、プロフェッショナル（professional）抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）の回収；ならびに
（ｂ）上記血液細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）の、本発明の免疫賦活組成物もしくはその成分、本発明の薬学的組成物または本発明のワクチンを用いたトランスフェクション
を包含している。
【０２６６】
本発明に関連して、「血液細胞」は、全血、血清または他の入手源（例えば、プロフェッショナルＡＰＣの小集団のみが存在している脾臓またはリンパ節）に由来する赤血球、顆粒球、単核球（ＰＢＭＣ）および／または血小板の混合物、またはこれらの実質的に純粋な集団に富化されているものを意味すると、本発明にしたがって好ましく理解される。好ましくは本発明における血液細胞は、それらが十分に分化しているプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）の小集団を典型的に含んでいる。本発明にしたがって使用されるとき、好ましくは、血液細胞は、新鮮な血液細胞（すなわち血液細胞の回収からトランスフェクションまでが非常に短い期間（例えば、１２時間未満、好ましくは６時間未満、特に好ましくは２時間、極めて好ましくは１時間未満）である）であり得る。しかし、本発明にしたがって使用されるとき、血液細胞はまた、必要になる前に血液を採取することによって得られる（続いて使用まで保存される）血液細胞であり得る。
【０２６７】
血液細胞は、例えば、標準的な方法によって動物またはヒトの患者から回収され得る。したがって、全血は適切な血管に穿刺することによって容易に入手され得る。血清は血液の固形成分を凝固させることによって公知の手法において得られる。ＰＢＭＣは血液細胞の富化されている部分集団の一例として説明され得る。Boyum（Nature 204, 793-794, 1964; Scan. J. Lab. Clin. Invest. Suppl. 97, 1967）によって最初に説明されている方法によって通常に単離される。これは、個体からの採血、ならびに密度勾配遠心分離のために例えばFicollおよびジアトリゾン酸ナトリウムを慣例的に含んでいる、１．０７７ｇ／ｍｌ（２５℃）の溶液に血液を加えることによって一般的になされる。室温における慎重な遠心分離の間に、ＰＢＭＣはFicoll／血液の界面に集まり、赤血球および残りの白血球は沈殿される。ＰＢＭＣを有している界面が回収され、適切なバッファー（例えば、滅菌ＰＢＳ）を用いて一般的に洗浄される。ＰＢＭＣは、水性溶液（例えば、塩化アンモニウムの水性溶液）を用いた短い等張処理に好ましく供される。最後にＰＢＭＣはバッファー（例えば、ＰＢＳ（滅菌））を用いて１回以上にわたってさらに洗浄される。得られた細胞は、それから必要に応じて、さらなる使用まで適切な条件（一般的に−７０℃）に保存される。
【０２６８】
好ましい一実施形態によれば、トランスフェクションの直前の血液細胞は、新鮮な血液細胞（すなわちステップ（ａ）における血液細胞の回収（特に採血）からステップ（ｂ）に係るトランスフェクションまでが短い期間である（例えば、１２時間未満、好ましくは６時間未満、特に好ましくは２時間未満、極めて好ましくは１時間未満））である。
【０２６９】
本発明に鑑みて、トランスフェクションし、必要に応じて投与する上述の本発明の方法に使用されるとき、樹状細胞（ＤＣ）は、典型的に、ナイーブＴ細胞の刺激能を典型的に有している強力な抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。それらは、すべての組織、特に外部との接点を与える組織に広く分布している白血球の系を含んでいる。ＤＣは、異なる組織に由来するサブセットが特異な形態、表現系および機能を有すると示されている点において、異種の造血系の系統を有している。ナイーブＴ細胞の増殖の刺激能は、これらの様々なＤＣサブセットの間に共有されていることが明らかである。いわゆる骨髄およびリンパから生成されたＤＣのサブセットが特異的な刺激機能または寛容原機能のそれぞれを果たすことが示唆されている。ＤＣは、骨髄の前駆体に由来しており、抹消組織内に移動する前の未成熟な前駆体として血液中を循環している。異なる組織内において、ＤＣは分化し、抗原の取込みおよびプロセシング、ならびに主要組織適合性（ＭＨＣ）分子が結合している細胞表面における続くそれらの提示に関して活性になる。適切な刺激によって、ＤＣは、さらなる成熟を受け、Ｔ細胞に抗原を提示し、免疫応答を誘導する二次リンパ組織に移動する。ＤＣは、抗がん宿主応答における重要な役割および腫瘍ワクチンにおける生物学的な免疫賦活剤として有望な用途、ならびに寛容および自己免疫の免疫学における関与のために、科学的および臨床的な関心をますます受けている。しかし、樹状細胞（ＤＣ）はまた、免疫応答がないこと、またはより低いことが必要とされるか、または想定される場合に、本発明に鑑みて使用され得る。上述のような樹状細胞（ＤＣ）は、上述のような異なる組織、または血液（特に上述のような血液サンプル）から単離され得る。
【０２７０】
本発明に係る薬学的組成物またはワクチンをトランスフェクションし、必要に応じて投与する本発明の方法に使用される血液細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）は、本発明の薬学的組成物を用いて処置される実際の患者に由来すること（自家細胞）が好ましい。したがって、本発明に係る薬学的組成物またはワクチンは、自家の血液細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）を含んでいることが好ましい。
【０２７１】
血液細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）のトランスフェクションは、好ましくはさらなるトランスフェクション試薬を用いずに本発明の組成物の投与のみによって、通常の方法（例えば、エレクトロポレーションまたは化学的な方法（例えば、リポフェクション））によって実施され得る。
【０２７２】
ステップ（ｂ）に係るインビトロ転写に使用される、本明細書に規定されるようなＲＮＡ、特にカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、または治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をぞれぞれがコードしている少なくとも１個のｍＲＮＡは、当該分野において公知の方法（特に化学合成、特に好ましくは上述の分子生物学的手法）によって調製される。
【０２７３】
上述のように、トランスフェクションし、必要に応じて投与する本発明の方法に使用される血液細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）を、本明細書に規定されるようなＲＮＡ、特に本発明の免疫賦活組成物もしくはその成分、または本発明の薬学的組成物またはワクチンを用いてトランスフェクトする必要があり得る。さらにそのようなトランスフェクトされた細胞の、患者、生組織および／または個体のインビボに対する投与、特に自家細胞の場合における宿主個体への再移植が、同様に想定され得、上述の方法の任意のステップｃ）として実施され得る。これに関連して、個体（または生体）は、ヒトおよび動物（ブタ（pig）、ヤギ、ウシ、ブタ（swine）、イヌ、ネコ、ロバ、サル（monkey）、エイプ（ape）またはげっ歯類（マウス、ハムスターおよびウサギが挙げられる）が挙げられる）を包含している群から選択される哺乳動物を典型的に意味しているが、これらに限定されない。さらに、上述のような生組織は、これらの個体に好ましく由来する。それらの生組織および／または個体に対する、トランスフェクトされた細胞の投与は、任意の適切な投与径路（例えば、全身性）を介して起こり得る。当該投与径路としては、例えば、皮内、経皮、経口、非経口の径路（上述のような皮下注射、筋肉内注射もしくは静脈注射、局所径路および／または鼻腔内径路が挙げられる）が挙げられる。
【０２７４】
また他の実施形態によれば、本発明は本発明の免疫賦活組成物を調製する方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
ａ）好ましくは上述のような少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを特定の比率において、上述のようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物と混合することによって、上述のようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、または当該（ｍ）ＲＮＡからなる「免疫賦活成分」を調製するステップ；ならびに
ｂ）ステップａ）にしたがって調製された免疫賦活成分に、上述のような治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを特定の比率において添加することによって、本発明の免疫賦活組成物を調製するステップ
を包含している。
【０２７５】
いわゆる「免疫賦活成分」は、免疫賦活成分の（ｍ）ＲＮＡの少なくとも１個を、好ましくは安定な複合体を形成するための特定の比率において、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化させることによって調製する、本発明の方法のステップａ）にしたがって調製される。上述のように、遊離のカチオン性またはポリカチオン性の化合物が、上記（ｍ）ＲＮＡを複合体化した後に、残っていないか、または無視し得る程度の微量しか残っていないことが重要である。したがって、免疫賦活成分における上記（ｍ）ＲＮＡおよび上記カチオン性またはポリカチオン性の化合物の比率は、上記（ｍ）ＲＮＡが完全に複合体化されており、遊離のカチオン性またはポリカチオン性の化合物が、上記成分に残っていないか、または無視し得る程度の微量しか残っていないように、典型的に選択される。上記免疫賦活成分の比率（すなわち上記カチオン性またはポリカチオン性の化合物に対する上記（ｍ）ＲＮＡの比率）は、約６：１（ｗ／ｗ）から約０．２５：１（ｗ／ｗ）、より好ましくは約５：１（ｗ／ｗ）から約０．５：１（ｗ／ｗ）、より一層好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）から約１：１（ｗ／ｗ）または約３：１（ｗ／ｗ）から約１：１（ｗ／ｗ）、最も好ましくは約２：１（ｗ／ｗ）の範囲である。
【０２７６】
付加的または代替的に、第１の成分（すなわちカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、または当該（ｍ）ＲＮＡからなる免疫賦活成分）および第２の成分（すなわち少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の比率は、全体のＲＮＡ複合体の窒素／リン酸比（Ｎ／Ｐ−比）に基づいて算出され得る。本発明に鑑みて、Ｎ／Ｐ−比は、複合体におけるＲＮＡ：ペプチドの比率に関して、約０．１−１０の範囲、好ましくは約０．３−４の範囲、最も好ましくは約０．５−２または約０．７−２の範囲、最も好ましくは約０．７−０．５の範囲にある。
【０２７７】
また、付加的または代替的に、第１の成分（すなわちカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいるか、または当該（ｍ）ＲＮＡからなる免疫賦活成分）および第２の成分（すなわち少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の比率は、本発明の免疫賦活組成物において、両方のＲＮＡ（すなわちカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている免疫賦活成分の上記（ｍ）ＲＮＡおよび上記第２の成分の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の互いのモル比に基づいて選択され得る。上記第２の成分の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する上記免疫賦活成分の上記（ｍ）ＲＮＡのモル比は、当該モル比が上記（ｗ／ｗ）および／またはＮ／Ｐの規定を満たすように、典型的に選択され得る。上記第２の成分の少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する上記免疫賦活成分の上記（ｍ）ＲＮＡのモル比は、上述のモル比（例えば、約０．００１：１、０．０１：１、０．１：１、０．２：１、０．３：１、０．４：１０．５：１、０．６：１、０．７：１０．８：１、０．９：１、１：１、１：０．９、１：．０．８、１：０．７、１：０．６、１：０．５、１：０．４、１：０．３、１：０．２、１：０．１、１：０．０１、１：０．００１など）または上述の値の任意の２つによって形成される任意の範囲（例えば、約０．００１：１から１：０．００１、０．０１：１から１：０．００１、０．１：１から：０．００１、１：１から１：０．００１、０．００１：１から１：０．０１、０．００１：１から１：０．１、０．００１：１から１：１、０．０１：１から１：０．０１、０．１：１から１：０．１、１：１から選択される範囲）から選択される。
【０２７８】
より一層好ましくは、上記第２の成分の上記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する上記免疫賦活成分の上記（ｍ）ＲＮＡのモル比は、例えば、約０．０１：１から１：０．０１の範囲から選択され得る。最も好ましくは、上記第２の成分の上記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡに対する上記免疫賦活成分の上記（ｍ）ＲＮＡのモル比は、例えば、約１：１のモル比から選択され得る。この特定の実施形態において、（ｗ／ｗ）および／またはＮ／Ｐ比に関する任意の上述の規定がまた適用され得る。
【０２７９】
本発明の方法に関して、カチオン性またはポリカチオン性の化合物は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と核酸を会合させることによる複合体化およびこれによって核酸、特に（ｍ）ＲＮＡを安定化に適切な、上述のようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物から好ましく選択される。上述のようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物と本発明の免疫賦活組成物の修飾されている（ｍ）ＲＮＡを会合させるか、または複合体化させることは、上記（ｍ）ＲＮＡに対する免疫賦活特性を与え、複合体化による免疫賦活成分の上記（ｍ）ＲＮＡの安定化作用をもたらす。修飾されている（ｍ）ＲＮＡを安定化させる手法は、一般的にEP-A-1083232に記載されており、当該文献の開示事項はその全体が参照によって本発明に援用されるが、当該分野に公知の任意の適切な手法によって実施され得る。
【０２８０】
上述の調製する本発明の方法のステップｂ）によれば、本発明の免疫賦活組成物は、特定の比率において上記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡを、ステップａ）にしたがって調製された上記免疫賦活成分に加えることによって得られる。ここで、上記少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡは、上記治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をコードしている。さらに上述のように、免疫賦活成分（カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡを含んでいる）および第２の成分（少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡ）の、本発明の免疫賦活組成物における比率は、特定の療法（例えば、がん療法または抗腫瘍療法、遺伝子療法、抗アレルギー療法（脱感作）、予防的または治療的なワクチン接種など）の特定の必要性にしたがって選択され得る。本発明の免疫賦活組成物の上記免疫賦活成分および上記第２の成分の比率は、免疫系の有意な刺激が上記免疫賦活成分によって誘発されるように典型的に選択される。同時に、上記比率は、少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡの有意な量が、インビボにおいて発現されるタンパク質の効率的な翻訳をインビボにおいて誘導することを与え得るように選択される。本発明の免疫賦活組成物における免疫賦活成分：遊離のｍＲＮＡの比率は、上述の範囲（例えば、約５：１（ｗ／ｗ）から約１：１０（ｗ／ｗ）、より好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）から約１：８（ｗ／ｗ）、より一層好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）から約１：５（ｗ／ｗ）または１：３（ｗ／ｗ）の範囲）から選択されることが好ましく、最も好ましくは本発明の免疫賦活組成物における免疫賦活成分：遊離のｍＲＮＡの比率は、約１：１（ｗ／ｗ）の比率から選択される。
【０２８１】
必要に応じて、さらなる成分が、１以上のさらなるステップにおいて本発明の免疫賦活組成物に加えられ得る。
【０２８２】
また、最後の実施形態によれば、本発明は、キット、特に、単独の成分もしくは組合せの成分としての本発明の免疫賦活組成物もしくはその成分、および／または本発明の薬学的組成物もしくはワクチン、ならびに必要に応じてこれらの成分の投与および用量に関する情報をともなっている技術的な取扱説明書を含んでいる部分のキットを提供する。すなわち当該免疫賦活組成物またはその成分は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも１個の（ｍ）ＲＮＡ、ならびに治療的に活性なタンパク質、抗原および／または抗体の少なくとも１個をそれぞれコードしている少なくとも１個の遊離のｍＲＮＡである。そのようなキット、好ましくは部分のキットは、上述の応用または用途のいずれかに適用され得る。
【０２８３】
〔図面〕
以下の図面は、本発明をさらに例証するものと意図されている。それらは、本発明の対象をそれらに限定するとは意図されない。
【０２８４】
図１は、ルシフェラーゼをコードしているｍＲＮＡの皮内注射後におけるルシフェラーゼのインビボ発現の結果を示している。ここで、ルシフェラーゼをコードしている遊離のｍＲＮＡ（Ｐｐ  Ｌｕｃ）の１０μｇを、プロタミンと複合体化されているＬａｃＺ−ｍＲＮＡ（ｗｔ  ＬａｃＺ）（１：２および１：１）との組合せのあり、またはなしにおいて含んでいる組成物が、調製され、耳介の皮下に注射された。図に示されているように、ＬａｃＺ−ｍＲＮＡ：プロタミン複合体（１：１または２：１のそれぞれの比率に調合されている）は、ルシフェラーゼの発現に対して負の影響を有していなかった。すなわち、遊離のプロタミンは、溶液に存在していないか、または非常に微量だけ存在しており、翻訳に対する負の影響を有していなかった。したがって、プロタミンおよびｐｐＬｕｃ  ｍＲＮＡの間における複合体形成は考えられず、すでに形成されているＬａｃＺ：プロタミン複合体の安定性を示している。
【０２８５】
図２は、治療を目的とするＥ．Ｇ７−ＯＶＡモデルにおけるワクチン接種反応の結果を示している。試験のために、３０００００のＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍細胞がＣ５７  ＢＬ／６マウスに移植され、マウスは、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているＣＧリッチの２０μｇのｍＲＮＡを含んでいる本発明の免疫賦活組成物を用いて、２週間のうちに８回にわたってワクチン接種された。第１の試験において、３：１の比率においてその全体が複合体化されているＲＮＡ、または複合体化されているＲＮＡが１：１、１：４および１：８（ｗ／ｗ）の比率において遊離のＲＮＡと混合されたＲＮＡのいずれかが使用された。図２に示されているように、遊離のＲＮＡおよびプロタミンの単独は、バッファー対照（ラクトリンゲル溶液）と比べて、腫瘍の成長に対して何の作用も示さなかった。意外にも、３：１（ＲＮＡ：プロタミン）の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡを用いたワクチン接種は、腫瘍の成長を有意に抑えた。遊離のＲＮＡの添加は腫瘍の応答をより一層増強する。１：８（例えば、１：４または１：１でさえ）を超える比率が特に有利なことが証明されている。
【０２８６】
図３は、図２における試験と類似の治療を目的とするワクチン接種の反応の結果を示している。この第２の試験のために、改善されたプロトコルにしたがった、３：１の比率においてその全体が複合体化されているＲＮＡ、または複合体化されているＲＮＡが３：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１）の比率において遊離のＲＮＡと混合されたＲＮＡのいずれかが使用された。図３に示されているように、複合体化されているＲＮＡおよび遊離のＲＮＡの、特に上述のような比率における組合せは、腫瘍に対する向上した防御を導く。
【０２８７】
図４は、図３に係る試験の統計的（数学的）解析を示している。図４は、各グループ間における差異が有意であることを特に示している。統計的（数学的）解析は、GraphPad Prismソフトウェアを用いて実施され、ｐ値はマンホイットニー検定を用いて決定された。解析は図３に示されている結果を強調している。
【０２８８】
図５は、ｍＲＮＡ（ＣＡＰ−ＣｇＯｖａ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０）を用いたｈＰＢＭＣの、免疫賦活性の検出および刺激の結果を示している。この試験のために、２×１０５のｈＰＢＭＣが、９６ウェルプレートのウェルごとに２００μｌの培地に播種され、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしている１０μｇのｍＲＮＡを含んでい
る本発明の組成物の５０μｌが加えられて、３７℃において一晩中にわたってサイトカインの放出を刺激した。複合体化されているＲＮＡおよび遊離のＲＮＡを含んでいる組成物を用いたｈＰＢＭＣにおけるサイトカイン（ＴＮＦαおよびＩＬ−１６）の分泌は、ＥＬＩＳＡ検出における有意な上昇を示し、良好な免疫賦活特性を示している。
【０２８９】
図６は、インビボにおける液性免疫の誘導の結果を示している。ここで、Ｃ５７  ＢＬ／６マウスは、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているＣＧリッチのｍＲＮＡ（ＣＡＰ−ＣｇＯｖａ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０）、および「無関係」な対照ＲＮＡ（ｐＢ−Ｌｕｃ  ＲＮＡ）のそれぞれ１６μｇを用いて、８回にわたってワクチン接種された。図６に示されているように、複合体化されているＲＮＡの遊離のＲＮＡとの組合せ（特に１：１の比率）は、複合体化されているＲＮＡを用いたワクチン接種と比べて高い液性免疫応答を導く。
【０２９０】
図７は、配列番号１２０に係るｍＲＮＡ配列を示している。当該ｍＲＮＡ配列は、１３６５ヌクレオチドの長さを有し、「ＣＡＰ−ＣｇＯｖａ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０」と名づけられた。ｍＲＮＡ配列ＣＡＰ−ＣｇＯｖａ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０は、以下の配列要素：
より良好なコドンの利用および安定性のためのＣＧ最適化配列、
ｍｕａｇ（変異体化αグロブリンの３’ＵＴＲ）、
３’末端における７０×アデノシン（ポリＡテイル）、
３’末端における３０×シトシン（ポリＣテイル）
を含んでいた。
ＯＲＦは斜字体として示されており、ｍｕａｇ（変異体化αグロブリンの３’ＵＴＲ）は破線を用いて示されており、ポリＡテイルは１本線を用いて下線が付されており、ポリＣテイルは二重線を用いて下線が付されている。
【０２９１】
図８は、配列番号１２１に係るｍＲＮＡ配列を示している。当該ｍＲＮＡ配列は、１８１６ヌクレオチドの長さを有し、「Ｔ７ＴＳ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−Ａ７０」と名づけられた。全ｍＲＮＡ配列のうちコーディング配列（ＣＤＳ）は斜字体を用いて示されており、ポリＡテイルは１本線を用いて下線が付されている。
【０２９２】
図９は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼ発現の統計的解析を示している。統計的解析はGraphPad Prismソフトウェアを用いて実施され、ｐ値はマンホイットニー検定を用いて決定された。図９における結果は示している。本発明に係る複合体化されているＲＮＡ（２：１（５０％）＋遊離（５０％））は、裸のＲＮＡ、および４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡと比べて、同様な発現を示す。図に示されているように、関連するグループ間における差異は有意ではなかった（ｎｓ）。したがって免疫賦活は本発明の複合体化されているＲＮＡを用いて効率的に提供され得る。ここで、発現レベルは、裸のＲＮＡ、および４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡと比べて維持されている（図１０も参照のこと）。
【０２９３】
図１０は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＩＬ−１２の誘導の統計的解析を示している。統計的解析はGraphPad Prismソフトウェアを用いて実施され、ｐ値はマンホイットニー検定を用いて決定された。結果は、本発明の複合体化されているＲＮＡ（２：１（５０％）＋遊離（５０％））と、同量のＲＮＡ、およびプロタミンを含んでいるグループ（４：１（１００％））との間における差異が有意であることを示している。したがって、免疫賦活が本発明の複合体化されているＲＮＡを用いて効率的に提供され得る。ここで、発現レベルは、裸のＲＮＡ、および４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡと比べて、維持されている。
【０２９４】
図１１は、インフルエンザ抗原ヘマグルチニン（ＨＡ）に対するＩｇＧ２ａ抗体の誘導を示している。したがって、示されているように、マウスは、裸であるか、またはプロタミン塩酸塩（Ｐｒｏｔ  Ｖａｌ）もしくはプロタミン硫酸塩（Ｐｒｏｔ  Ｌｅｏ）を用いて調合されている、ヘマグルチニン（ＨＡ）をコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡを用いてワクチン接種された。図１１に示されているように、複合体化されているＲＮＡと遊離のＲＮＡとの組合せは、全体的に複合体化されているＲＮＡを用いたワクチン接種と比べて高い液性免疫応答を導く。裸のＲＮＡと比べて、複合体化されているＲＮＡはＩｇＧ２ａ抗体のより高い力価を導き、これはＴｈ１誘導性応答の指標である。プロタミン塩酸塩（プロタミン  バレアント（Valeant））を用いたＲＮＡの複合体は、プロタミン硫酸塩を用いた複合体よりも強い作用を有している。
【０２９５】
図１２は、免疫後の１５週間にわたる、インフルエンザ抗原ＨＡに対するＩｇＧ２ａ特異的抗体の誘導を示している。したがって、マウスは、裸であるか、またはプロタミンを用いて複合体化されている（２：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１）（ｗ／ｗ））、ヘマグルチニン（ＨＡ）をコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡを用いて２回にわたってワクチン接種され、ＩｇＧ２ａ抗体は示されている時点において測定された。免疫後の異なる時点に由来する血清はＥＬＩＳＡによって分析された。ＩｇＧ２ａサブタイプのヘマグルチニン特異的抗体の力価が、バッファー（８０％  ＲｉＬａ）、裸のＲＮＡまたは複合体化されているＲＮＡを用いて処理されたグループに関してプロットされている。
【０２９６】
図１３は、ＨＡＩアッセイによるインフルエンザ抗原ＨＡに対する抗体の誘導を示している。したがって、マウスは、裸であるか、またはプロタミンを用いて複合体化されている（２：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１）（ｗ／ｗ））、ヘマグルチニン（ＨＡ）をコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡを用いて２回にわたってワクチン接種され、ＨＡＩアッセイは示されている時点において実施された。
【０２９７】
図１４は、インフルエンザウイルスに由来する病原性抗原ヘマグルチニンＨＡをコードしているｍＲＮＡ配列を示している。
【０２９８】
〔実施例〕
以下の実施例は本発明をさらに例証するものと意図される。それらは本発明の対象をそれらに限定するものと意図されない。
【０２９９】
（実施例１−Ｐｐルシフェラーゼ（Photinus pyralis）をコードしているｍＲＮＡ構築物の調製）
以下の試験のために、本明細書に使用されるようなＰｐルシフェラーゼ配列をコードしているそれぞれのｍＲＮＡに対応しており、Ｐｐルシフェラーゼ（Photinus pyralis）をコードしているＤＮＡ配列が調製され、続くトランスフェクションおよびワクチン接種の試験のために使用された。したがって、ネイティブなＰｐルシフェラーゼをコードしているｍＲＮＡに対応するＤＮＡ配列は、ポリＡタグ（Ａ７０）を用いて修飾されて、配列番号１２１になる（図８を参照のこと）。最終的な構築物は、１８１６ヌクレオチドの長さを有しており、「Ｔ７ＴＳ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−Ａ７０」と名づけられた。
【０３００】
（実施例２−Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているｍＲＮＡ構築物の調製）
以下の試験のために、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしており、それぞれのｍＲＮＡ配列に対応するさらなるＤＮＡ配列が、調製され、続くトランスフェクションおよびワクチン接種の試験のために使用された。したがって、ネイティブなGallus gallusのオボアルブミンをコードしているｍＲＮＡに対応するＤＮＡ配列は、より良好なコドンの利用および安定化のためにＧＣ最適化された。それから、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているｍＲＮＡに対応するＤＮＡ配列は、ポリＡタグおよびポリＣタグ（Ａ７０−Ｃ３０）を用いて修飾されているＲＮＡｃｔｉｖｅ構築物に移された。最終的な構築物は、１３６５ヌクレオチドの長さを有しており、「ＣＡＰ−ＧｃＯｖａ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０」と名づけられた。当該構築物は、以下の配列要素：
より良好なコドンの利用および安定性のためのＣＧ最適化配列、
ｍｕａｇ（変異体化αグロブリンの３’ＵＴＲ）、
３’末端における７０×アデノシン（ポリＡテイル）、
３’末端における３０×シトシン（ポリＣテイル）
を含んでいた。対応するｍＲＮＡ配列は図７に示されている（配列番号１２０を参照のこと）。
【０３０１】
（実施例３−インビトロ転写試験）
組換えプラスミドＤＮＡは直線化され、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを用いてインビトロ転写された。ＤＮＡの鋳型はそれから、ＤＮＡｓｅＩ消化によって分解された。ＲＮＡはＬｉＣｌ沈殿によって回収され、ＨＰＬＣ抽出（PUREMessger（登録商標）、CureVac Gmbh、Tubingen、Germany）によってさらに精製された。
【０３０２】
（実施例４−本発明の組成物の製造）
以下の試験に使用されるｍＲＮＡは、指示されている比率（１：１−１：４）（ｗ／ｗ）においてｍＲＮＡに対するプロタミンの添加によってプロタミンと複合体化されている。１０分間にわたるインキュベーションの後に遊離のＲＮＡが加えられた。
【０３０３】
（実施例５−ルシフェラーゼをコードしているｍＲＮＡの皮内注射後におけるルシフェラーゼのインビボ発現）
本試験において、容易に調製されたｍＲＮＡ：プロタミン複合体および／または遊離のＲＮＡを含んでいる組成物の、翻訳に対する影響が試験された。したがって、プロタミンと複合体化されているＬａｃＺ−ｍＲＮＡとの組合せ（２：１および１：１）のあり、またはなしの、ルシフェラーゼ（Ｐｐ  Ｌｕｃ）をコードしている１０μｇの遊離のｍＲＮＡを含んでいる組成物が調製され、耳介の皮内に注射された。
【０３０４】
ＰｐルシフェラーゼをコードしているｍＲＮＡは上述のように調製された。投与される組成物は、さらには複合体化されていないＲＮＡ、２：１の濃度におけるｌａｃＺ−ｍＲＮＡ：プロタミンまたは１：１の濃度におけるｌａｃＺ−ｍＲＮＡ：プロタミンのいずれかを含んでいた。対照として、Ｐｐルシフェラーゼ（Photinus pyralis）を含んでいない組成物が投与された。プロタミンが対照として使用された。これらの組成物を調製するために。ｌａｃＺ−ｍＲＮＡが第１の成分として、異なる量および比率（２：１および１：１（ｗ／ｗ））のプロタミンとともに第１のステップにおいて調合された。遊離Ｐｐ  Ｌｕｃ  ｍＲＮＡがそれから１０分後に組成物に加えられた。
【０３０５】
２４時間後に耳介が取り去られ、液体窒素において凍結された。均質化のために、サンプルは３０ｓ−１において３０分間にわたってTissueLyserに入れられた。それから８００μｌの溶解バッファー（２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５−７．８）；２ｍＭのＥＤＴＡ；１０％（ｗ／ｖ）のグリセロール；１％（ｗ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００；２ｍＭのＤＴＴ；１ｍＭのＰＭＳＦ）が加えられ、サンプルは３０ｓ−１において６分間にわたってTissueLyserにふたたび入れられた。サンプルは１３５００ｒｐｍおよび４℃において１分間にわたって遠心分離された。上清が取り出され、ルシフェラーゼ測定まで−８０℃に保存された。上清はルシフェリンバッファー（２５ｍＭのグリシルグリシン、１５ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのＡＴＰ、６２．５μＭのルシフェリン）と混合され、発光が照度計（Lumat LB 9507；Berthold Technology、Bad Wildbad、Germany）を用いて測定された。
【０３０６】
結果として（図１を参照のこと）、ＬａｃＺ−ｍＲＮＡ：プロタミン複合体（１：１または２：１の比率にそれぞれ調合されている）は、ルシフェラーゼの発現に影響を与えなかった。つまり、遊離のプロタミンが溶液に存在していないか、または非常に微量だけ存在し、翻訳に対する負の影響を示さなかった。したがって、プロタミンおよびｐｐＬｕｃ
ｍＲＮＡの間における複合体形成は考えられず、すでに形成されているＬａｃＺ：プロタミン複合体の安定性を示している。
【０３０７】
（実施例６−治療を目的としたＥ．Ｇ７−ＯＶＡ−モデルにおけるワクチン接種）
一般的な方法：
３０００００のＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍細胞がＣ５７  ＢＬ／６マウスに移植される。３週間後に、マウスは、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物を用いて、３週間のうちに８回にわたってワクチン接種された。腫瘍の大きさは、腫瘍細胞の移植から１８日後に測定された。
【０３０８】
Ａ）第１の試験
３０００００のＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍細胞がＣ５７  ＢＬ／６マウスに移植された。マウスは、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡをそれぞれ含んでいる本発明の組成物を用いて、２週間のうちに８回にわたってワクチン接種された。この試験のために、３：１の比率においてプロタミンと全体的に複合体化されているＲＮＡ、または複合体化されているＲＮＡが１：１、１：４および１：８の比率（ｗ／ｗ）において遊離のＲＮＡと混合されたＲＮＡのいずれかが使用された。
【０３０９】
結果は図２に示されている。図２に示されているように、遊離のＲＮＡおよびプロタミンの単独は、バッファー対照（ラクトリンゲル溶液）と比べて、腫瘍の成長に対する何の作用も示さない。意外にも、３：１（ＲＮＡ：プロタミン）の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡを用いたワクチン接種は、腫瘍の成長を有意に抑える。遊離のＲＮＡの添加は腫瘍の応答をより一層増強する。１：８（例えば、１：４または１：１でさえ）を超える比率が特に有利なことが証明されている。
【０３１０】
Ｂ）第２の試験
３０００００のＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍細胞がＣ５７  ＢＬ／６マウスに移植された。マウスは、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡをそれぞれ含んでいる本発明の組成物を用いて、３週間のうちに８回にわたってワクチン接種された。この第２の試験のために、改善されたプロトコルにしたがった、３：１の比率においてその全体が複合体化されているＲＮＡ、または複合体化されているＲＮＡが３：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１）の比率において遊離のＲＮＡと混合されたＲＮＡのいずれかが使用された。
【０３１１】
この試験の結果は図３に示されている。図３に示されているように、複合体化されているＲＮＡおよび遊離のＲＮＡの、特に上述のような比率における組合せは、腫瘍に対する向上した防御を導く。
【０３１２】
統計的（数学的）解析は、GraphPad Prismソフトウェアを用いて実施された。ｐ値はマンホイットニー検定を用いて決定された（図４を参照のこと）。
【０３１３】
（実施例７−ｍＲＮＡを用いたｈＰＢＭＣの、免疫賦活特性の検出および刺激）
この試験のためにｈＰＢＭＣは、Ficoll上における遠心分離（２０００ｒｐｍにおいて２０分間にわたって）によって単離され、続いてＰＢＳにおいて２回にわたって洗浄された。それからｈＰＢＭＣは、ＦＣＳ、１０％ＤＭＳＯにおいて５×１０７／ｍｌの密度に再懸濁された。１ｍｌの分取物が凍結され、−８０℃に保存された。
【０３１４】
試験の前に、ｈＰＢＭＣはＰＢＳにおける再懸濁によって解凍し、ＰＢＳにおいて２回にわたって洗浄された。それからｈＰＢＭＣは、１％のグルタミン、１％のPen/StrepのX-Vivo 15において１×１０６／ｍｌの密度に再懸濁された。９６ウェルプレートにおけるウェルごとに２×１０５のｈＰＢＭＣを播種した後に、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしている８μｇのｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物の５０μｌが加えられて、３７℃において一晩中にわたってサイトカインの放出を刺激した。
【０３１５】
したがって、ヒトＰＢＭＣは、プロタミン（３：１）＋５０％の遊離のＲＮＡ（ＲＮＡ：プロタミン３：１＋遊離のＲＮＡ（１：１）（ｗ／ｗ）のように調合されている）と複合体化されている、Gallus gallusのオボアルブミン（ＯＶＡ）をコードしているＲＮＡとともに、２０時間にわたってインキュベートされた。サイトカイン（ＴＮＦαおよびＩＬ６）の分泌は、標準的なＥＬＩＳＡを用いた上清において測定され、検出された。
【０３１６】
ＴＮＦαおよびＩＬ６の定量化（ＥＬＩＳＡ）のために、Maxisorbプレートは捕捉抗体（１μｇ／ｍｌ）を用いて一晩中において（４℃）被覆され、続いて１％のＢＳＡを用いて１時間にわたって室温（ＲＴ）においてブロッキングされた。０．０５％のＴｗｅｅｎを用いて３回にわたって洗浄した後に、１５〜１００μｌのブロッキングバッファーを用いて調整されている、５０μｌ（ＴＮＦα）または５０μｌ（ＩＬ−６）のｈＰＢＭＣの上清がウェルに加えられた。結合は２時間にわたって（室温）続けられた。それからプレートは洗浄され、１００μｌのストレプトアビジンを抱合したホースラディッシュペルオキシダーゼが加えられた。３０分間にわたるインキュベーションおよび洗浄の後に、比色分析基質（ＴＭＢ、Perbio Science）が加えられた。吸光度は、TecanのＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて４５０ｎｍにおいて測定された。すべてのインキュベーションは室温において実施され、洗浄ステップはＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０（０．０５％、ｖ／ｖ）を用いた少なくとも３ステップを含んでいる。
【０３１７】
ストレプト−ＨＲＰ（１／１０００希釈）およびビオチン化された検出抗体（０．５μｇ／ｍｌ）の、１００μｌ／ウェルの混合物が加えられた。１時間にわたる室温におけるインキュベーションの後に、０．０５％のＴｗｅｅｎを用いた３回の洗浄を行った。最後に、Amplex Red HRP基質（５０μＭ）および０．０１４％のＨ２Ｏの１００μｌ／ウェルが加えられた。蛍光はSpectramax Geminiプレートリーダー（Ｅｘ５４０ｎｍ、Ｅｍ５９０、カットオフ５９０ｎｍ）において測定された。
【０３１８】
結果は図５に示されている。図５に示されているように、複合体化されている遊離のＲＮＡを含んでいる組成物は、ｈＰＢＭＣにおけるＴＮＦαおよびＩＬ−６の有意な分泌によって反映されている免疫賦活特性を示す。
【０３１９】
（実施例８−液性免疫応答の誘導）
Ｃ５７  ＢＬ／６マウスは、Gallus gallusのオボアルブミンをコードしているＣＧリッチのｍＲＮＡ、および「無関係」な対照ＲＮＡ（ｐＢ−Ｌｕｃ  ＲＮＡ）のそれぞれ１６μｇを用いて、８回にわたってワクチン接種された。したがって、ＲＮＡは、２：１の比率においてプロタミンを用いて全体的に調合されたか、またはその比率が改善されたプロトコルにしたがって（２：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１））調合された。最後にワクチン接種してから２週間後に、血液サンプルは回収され、オボアルブミン特異的な抗体の発現が測定された。
【０３２０】
抗原特異的な抗体の検出のために、MaxiSorbプレート（Nalgen Nunc international）は抗原（オボアルブミン、組み換えタンパク質）を用いて被覆された。１×ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎおよび１％のＢＳＡを用いたブロッキングの後に、プレートはマウスの血清を用いて、４時間にわたって室温においてインキュベートされた。続いて、ビオチンが結合している二次抗体が加えられた。洗浄した後に、プレートはホースラディッシュペルオキシダーゼとともにインキュベートされ、酵素活性が基質（２，２’−アジノ−ビス（３−エチル−ベンズチアゾリン−６−スルホネート））の転換を測定（ＯＤ４５０ｎｍ）することによって決定された。吸光度はTecanのＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて４５０ｎｍにおいて測定された。
【０３２１】
結果は図６に示されている。図６に示されているように、複合体化されているＲＮＡの遊離のＲＮＡとの組合せは、全体的に複合体化されているＲＮＡを用いたワクチン接種と比べて、高い液性免疫応答を導く。
【０３２２】
（実施例９−Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現の統計的解析）
この試験のために、プロタミンを用いた異なる製剤計画の、ルシフェラーゼの翻訳に対する影響が調べられた。グループごとに２匹のマウスが、
（１）５０％の遊離のＲＮＡと組み合わせてプロタミンが複合体化されている（２：１）５０％のＬｕｃ−ＲＮＡを含んでいる組成物、
（２）４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＬｕｃ−ＲＮＡを含んでいる組成物、
（３）１００％の遊離のＲＮＡ、または
（４）対照としてのラクトリンガーバッファー
を用いて４つの異なる部位の皮内に注射を受けた。
すべてのサンプルは、ルシフェラーゼをコードしている１０μｇのｍＲＮＡ（Ｌｕｃ−ＲＮＡ（すなわち配列番号１２１に係る上述の構築物「Ｔ７ＴＳ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−Ａ７０」））を５０μｌのラクトリンガーバッファーにおいて含んでいた。また、第１および第２のグループは同量のプロタミンを含んでいたが、それらは異なる製剤として調合された。グループ（１）の組成物は本発明にしたがって調製された。
【０３２３】
結果は図９に示されている。図９はＢａｌｂ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現の統計的解析を示している。統計的解析はGraphPad Prismソフトウェアを用いて実施され、ｐ値はマンホイットニー検定を用いて決定された。図９における結果は、本発明にしたがって複合体化されているＲＮＡ（２：１（５０％）＋遊離（５０％）、グループ（１））が、裸のＲＮＡおよび４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡ（グループ（２）および（３））と比べて、同等の発現を示すことを示している。図に示されているように、関連のあるグループ間における差異は有意ではない（ｎｓ）。したがって、免疫賦活が本発明の免疫賦活組成物を用いて効率的に提供され得る（図１０も参照のこと）。ここで、発現レベルは、裸のＲＮＡおよび４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡと匹敵する程度に維持されている。
【０３２４】
（実施例１０−Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＩＬ−１２の統計的解析）
この試験のために、以下の組成：
（１）プロタミンと複合体化されている２０μｇのＬｕｃ−ＲＮＡ（２：１）（ｗ／ｗ）および２０μｇの遊離Ｌｕｃ−ＲＮＡを含んでいる２：１（５０％）＋遊離（５０％）（すなわち本発明の免疫賦活組成物）、
（２）プロタミンと複合体化されている４０μｇのＬｕｃ−ＲＮＡ（４：１）（ｗ／ｗ）を含んでいる４：１（１００％）、
（３）４０μｇの遊離Ｌｕｃ−ＲＮＡ、
（４）１０μｇのプロタミン、ならびに
（５）８００μｌのＲｉＬａ（すべてのサンプルは８００μｌの最終容積までラクトリンガーバッファーに溶解された）
においてルシフェラーゼ（Ｌｕｃ−ＲＮＡ（すなわち配列番号１２１に係る上述の構築物「Ｔ７ＴＳ−Ｐｐｌｕｃ（ｗｔ）−Ａ７０」））をコードしている４０μｇのｍＲＮＡがＢａｌｂ／ｃマウス（１グループごとに４匹のマウス）の尾静脈に静脈注射された。４時間後に、眼窩後静脈の穿刺によって血液が採取され、血清がサイトカイン（ＩＬ−１２）ＥＬＩＳＡに使用された。ＥＬＩＳＡは実施例７に記載の通りに実施された。
【０３２５】
結果が図１０に示されている。図１０は実施例１０に係るＢａｌｂ／ｃマウスにおけるＩＬ−１２の誘導の統計解析を示している。統計的解析はGraphPad Prismソフトウェアを用いて実施され、ｐ値はマンホイットニー検定を用いて決定された。結果は、本発明の免疫賦活組成物（２：１（５０％）＋遊離（５０％））と同量のＲＮＡおよびプロタミンを含んでいるグループ４：１（１００％）との間の差異が実際に有意であることを示している。したがって、免疫賦活は本発明の免疫賦活組成物を用いて効率的に提供され得る（図９も参照のこと）。ここで、発現レベルは、裸のＲＮＡおよび４：１の比率においてプロタミンと複合体化されているＲＮＡと匹敵する程度に維持されている。
【０３２６】
（実施例１１−ウイルス抗原に対する液性免疫応答の誘導）
ワクチン接種：
Ｂａｌｂ／ｃマウスは、インフルエンザＡ／Puerto Rico（ＰＲ８）のヘマグルチニン（ＨＡ）をコードしているＧＣリッチの２０μｇのｍＲＮＡ、または注入バッファー（８０％ラクトリンガー液）を用いて２回にわたってワクチン接種された。したがって、ＲＮＡは、２：１の比率においてプロタミンと全体的に調合されたか、またはその比率が本発明にしたがって２：１のＲＮＡ：プロタミン；遊離のＲＮＡ（１：１）（ｗ／ｗ）であった。製剤に関して異なる２つのプロタミン（プロタミン塩酸塩（プロタミンバレアント）およびプロタミン硫酸塩（プロタミンＬＥＯ））が試験された。
【０３２７】
特異的抗体の検出：
最後のワクチン接種後の異なる時点において血液サンプルは回収され、ヘマグルチニン特異的抗体の発現がＥＬＩＳＡ（図１１および１２）またはヘマグルチニン阻害アッセイ（ＨＡＩ）（図１３）によって決定された。
【０３２８】
ＥＬＩＳＡによる抗原特異的抗体の検出：
ＥＬＩＳＡによる抗原特異的抗体の検出のために、MaxiSrobプレート（Nalgene Nunc international）は抗原（不活化ＰＲＢ）を用いて被覆された。１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎおよび１％のＢＳＡを用いたブロッキングの後に、プレートはマウスの血清を用いて４時間にわたって室温においてインキュベートされた。続いてビオチンが結合した二次抗体が加えられた。洗浄の後に、プレートはホースラディッシュペルオキシダーゼを用いてインキュベートされ、酵素活性は基質（２，２’−アジノ−ビス（３−エチル−ベンズチアゾリン−６−スルホン酸））の転換を測定（ＯＤ４０５ｎｍ）することによって決定された。吸光度はTecanのＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて４０５ｎｍにおいて測定された。免疫後の２週間において得られた血清の解析の結果は図１１に示されている。図１１に示されているように、遊離のＲＮＡと複合体化されているＲＮＡは、全体的に複合体化されているＲＮＡを用いたワクチン接種と比べて、高い液性免疫応答を導く。裸のＲＮＡと比べて、複合体化されているＲＮＡはより高いＩｇＧ２ａ抗体の力価を導き、これはＴｈ１誘導応答の指標である。
【０３２９】
プロタミン塩酸塩（プロタミンバレアント）とのＲＮＡの複合体化はプロタミン硫酸塩との複合体化より高い作用を有している。
【０３３０】
図１２において免疫後の異なる時点から得られた血清はＥＬＩＳＡによって分析された。ＩｇＧ２ａサブタイプのヘマグルチニン特異的抗体の力価は、バッファー（８０％のＲｉＬａ）、裸のＨＡのｍＲＮＡまたは複合体化されているＨＡのｍＲＮＡを用いて処理されているグループに関してプロットされている。複合体化は、改善されたプロトコルにしたがってプロタミンを用いてなされた（２：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１）（ｗ／ｗ））。
【０３３１】
ＨＡＩアッセイによる抗原特異的抗体の検出：
また、免疫されたマウスの血清はＨＡＩアッセイによって分析された。ＨＡＩアッセイにおいてウイルス性のヘマグルチニンの相互作用を阻害することによってウイルスを中和する抗体および宿主細胞上におけるシアル酸が検出された。
【０３３２】
血清は１０分間にわたって５６℃においてインキュベートされて、補体およびＨＡＩ阻害剤を破壊した。血清は、２０分間にわたってカオリンとともにインキュベートされ、３０分間にわたってトリの赤血球に前吸着されて、赤血球の凝集に影響する非特異的な因子を除去した。前処理した血清サンプルは、Ｕ字の底の９６ウェルプレートに対して、二組の段階希釈として加えられた。ＰＢＳに入れた４赤血球凝結ユニットの不活化ＰＲ８を含んでいる２５μｌおよび０．５％のトリ赤血球の５０μｌが、それから加えられ、４５分間にわたって室温においてインキュベートされた。指標のＨＡＩ力価は、赤血球の凝集を完全に阻害した最も高い血清希釈の逆数と規定された。免疫後の異なる時点から得られた血清は、バッファー（８０％のＲｉＬａ）、裸のＨＡのＲＮＡまたは複合体化されているＨＡのｍＲＮＡを用いて処理されたグループに関して、プロットされている。複合体化は、プロタミンバレアントおよび改善されたプロトコルを用いてなされた（２：１のＲＮＡ：プロタミン＋遊離のＲＮＡ（１：１）（ｗ／ｗ））。４０の力価がインフルエンザ感染の場合に感染防御性であると想定される。複合体化されているＨＡのＲＮＡを用いて免疫されたマウスは、持続的に４０を超えるＨＡＩ力価を示しており、裸のＨＡのＲＮＡは、感染防御性の４０の力価より低い力価を平均して示した。
【図面の簡単な説明】
【０３３３】
【図１】図１は、ルシフェラーゼをコードしているｍＲＮＡの皮内注射後におけるルシフェラーゼのインビボ発現の結果を示す図である。
【図２】図２は、治療を目的とするＥ．Ｇ７−ＯＶＡモデルにおけるワクチン接種反応の結果を示す図である。
【図３】図３は、図２における試験と類似の治療を目的とするワクチン接種の反応の結果を示す図である。
【図４】図４は、図３に係る試験の統計的（数学的）解析を示す図である。
【図５】図５は、ｍＲＮＡ（ＣＡＰ−ＣｇＯｖａ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０）を用いたｈＰＢＭＣの、免疫賦活性の検出および刺激の結果を示す図である。
【図６】図６は、インビボにおける液性免疫の誘導の結果を示す図である。
【図７】図７は、配列番号１２０に係るｍＲＮＡ配列を示す図である。
【図８】図８は、配列番号１２１に係るｍＲＮＡ配列を示すしている。
【図９】図９は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼ発現の統計的解析を示す図である。
【図１０】図１０は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＩＬ−１２の誘導の統計的解析を示す図である。
【図１１】図１１は、インフルエンザ抗原ヘマグルチニン（ＨＡ）に対するＩｇＧ２ａ抗体の誘導を示す図である。
【図１２】図１２は、免疫後の１５週間にわたる、インフルエンザ抗原ＨＡに対するＩｇＧ２ａ特異的抗体の誘導を示す図である。
【図１３】図１３は、ＨＡＩアッセイによるインフルエンザ抗原ＨＡに対する抗体の誘導を示す図である。
【図１４】図１４は、インフルエンザウイルスに由来する病原性抗原ヘマグルチニンＨＡをコードしているｍＲＮＡ配列を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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