(57)【要約】      （修正有）【課題】天然物由来で生体安全性にすぐれ、皮膚を若々しく健全な状態に保持し、又は改善し得る美肌効果及び美白効果を有するとともに、紫外線などの外的環境因子から皮膚を保護する有効成分を配合した化粧料を提供する。【解決手段】バラ科バラ属のダマスクバラ（Rosa damascena）から得られ、抗酸化作用、抗炎症作用及び美白作用を有する抽出物を有効成分とする化粧料であって、肌の老化（シワ、タルミ等）の予防及び改善効果、肌のハリ、ツヤの向上効果、外的要因（紫外線や化学物質）による酸化ダメージ及び炎症から肌を保護する効果、並びにシミ、ソバカス、肝斑等を予防及び改善する効果を奏する化粧料。【選択図】図１
2014240375.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バラ科バラ属の植物であるダマスクバラ（Rosa damascena）の溶媒抽出物を有効成分として含有する化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バラ科バラ属の植物から得られ、すぐれた皮膚生理活性及び生体安全性を有する化粧料配合成分並びにかかる成分を配合してなる美白用及び美肌用化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の老化は、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活化、ホルモン分泌の低下、細胞外マトリックス成分の量的低下などの内的要因と、太陽光（紫外線）や排気ガス等により誘発される活性酸素による細胞・組織の損傷、又は炎症などの外的要因とが複雑に絡み合って生ずる現象である。
【０００３】
例えば、紫外線や、排ガスなどに含まれる化学物質（窒素化合物や硫黄化合物等）は、皮膚に酸化ダメージを与えて生体成分を変質させ、その結果、皮膚内に抗原を発生させる要因となる。このことから、化学物質や紫外線などの外的要因は、抗原による皮膚の炎症やアレルギーの発症の要因となる。
【０００４】
また、皮膚老化の外的要因である活性酸素は皮膚細胞に直接傷害を及ぼすばかりでなく、細胞外マトリックス成分のコラーゲンを変性又は架橋させてシワの形成や皮膚の弾力性の低下をもたらし、さらにはメラニン色素の異常沈着を誘発してシミ、ソバカス、肝斑などを生じさせるなど、肌に様々なダメージを与える。
【０００５】
この皮膚の老化を防ぎ、皮膚を健全、かつ、若々しい状態に保持するため、従来、種々の活性成分の使用が提案され、それら活性成分（美肌成分、美白成分等）を配合した化粧品が上市されている。例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、スーパーオキシドジスムターゼ（Superoxide dismutase；以下ＳＯＤと略記）などの抗酸化剤；グリチルリチン酸などの抗炎症剤；各種紫外線吸収剤；α−ヒドロキシカルボン酸、胎盤抽出液、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸などの細胞賦活成分；コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックス成分；尿素などの保湿剤がそれである。また、皮膚のシミ、ソバカス、肝斑等の色素沈着の発生を抑制する物質としては、アルブチン、コウジ酸などが知られており、美白剤の有効成分として広く使用されている。しかし、上記抗酸化剤、保湿剤、美白剤等は、皮膚安全性の点で問題があり、皮膚安全性にすぐれた化粧料配合成分が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、かかる従来技術の問題点に鑑みて、皮膚安全性の観点から天然物由来の新たな美肌成分及び美白成分を見出すべく鋭意研究を行った。その結果、バラ科バラ属に属するダマスクバラの溶媒抽出物が、すぐれた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用及び美白作用を有し、これにより、当該抽出物を配合することですぐれた美肌効果及び美白効果を奏し、かつ、皮膚安全性にすぐれた化粧料の提供が可能になることを見出した。
【０００７】
従来、バラ科バラ属に属するバラの抽出物を化粧料に利用することについては特許文献１、２に開示され、また、ダマスクバラの抽出物を抗菌剤又は消臭剤として利用可能であることについては特許文献３に開示され、さらに、ダマスクバラの水蒸気蒸留物（精油など）を化粧料に利用することについては、特許文献４、５に開示されている。
【０００８】
【特許文献１】特開平０３−２７９０５７号公報
【特許文献２】特開平０７−３０９７７０号公報
【特許文献３】特開２００１−３１６２７７号公報
【特許文献４】特開２００４−１７５６７８号公報
【特許文献５】特開２００６−０５６９０２号公報
【０００９】
しかし、ダマスクバラの溶媒抽出物がすぐれた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用及び美白作用を有し、それらの相乗効果により、シワ、タルミ等の皮膚老化を改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、肌の紫外線ダメージの予防及び改善効果を有することについては知られていなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、バラ科バラ属のダマスクバラの溶媒抽出物を有効成分とする化粧料である。
なお、本明細書において化粧料なる文言は、所謂化粧料のほかに医薬部外品までも含む広義で用いる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、バラ科バラ属の植物であるダマスクバラの溶媒抽出物を有効成分とする化粧料であって、抗酸化作用（細胞内カタラーゼ活性亢進作用、ペルオキシレドキシンの発現亢進、過酸化脂質抑制作用、ＤＰＰＨラジカル消去作用）、抗炎症作用（脱顆粒抑制作用、プロスタグランジンＥ２（以下「ＰＥＧ２」と称する）生成抑制作用、インターロイキン１βの発現抑制）、表皮細胞のエネルギー代謝促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼの活性抑制作用、及び美白作用を有し、それらの相乗効果により、シワ、タルミ等の皮膚老化を改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、紫外線等の外的要因による肌のダメージ（酸化ダメージ及び炎症ダメージ）の予防及び改善効果を奏する化粧料を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、本発明に係るダマスクバラの抽出物の細胞内カタラーゼ活性亢進効果を示す図である。
【図２】図２は、本発明に係るダマスクバラの抽出物の過酸化脂質抑制効果を示す図である。
【図３】図３は、本発明に係るダマスクバラの抽出物のＤＰＰＨラジカル消去効果を示す図である。
【図４】図４は、本発明に係るダマスクバラの抽出物の脱顆粒抑制効果を示す図である。
【図５】図５は、本発明に係るダマスクバラの抽出物のプロスタグランジンＥ２の生成抑制効果を示す図である。
【図６】図６は、本発明に係るダマスクバラの抽出物のチロシナーゼ活性抑制効果を示す図である。
【図７】図７は、本発明に係るダマスクバラの抽出物のペルオキシレドキシン発現亢進効果を示す図である。
【図８】図８は、本発明に係るダマスクバラ抽出物のセリンペプチダーゼインヒビター発現亢進効果を示す図である。
【図９】図９は、本発明に係るダマスクバラ抽出物のアシルＣｏＡオキシダーゼ発現亢進効果を示す図である。
【図１０】図１０は、本発明に係るダマスクバラ抽出物のインターロイキン１β（ＩＬ−１β）発現抑制効果を示す図である。
【図１１】図１１は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ストロメライシン）の発現抑制効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明で用いる抽出素材は、バラ科バラ属のダマスクバラ（Rosa damascena）であって、ダマスクバラであれば、どのような品種（交配種、亜種も含む）であってよい。
【００１４】
本発明に用いる素材は、ダマスクバラの全草、葉、花部、茎、種子、実、根等、いずれを用いても良いが、全草、或いは花部の使用が好ましい。
【００１５】
抽出物の調製は、まず、ダマスクバラ（例えば、全草、花部等）を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、そのまま又は乾燥した上、必要に応じて細切又は粉砕し、抽出溶媒と接触させて抽出を行う。抽出は、浸漬法等の常法に従って抽出溶媒と接触させることで行うことが可能であるが、浸漬法以外にも超臨界抽出法を用いることも可能である。
【００１６】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。
【００１７】
それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物の抗酸化作用、抗炎症作用、表皮細胞のエネルギー代謝促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼの活性抑制作用、及び美白作用、さらには、皮膚刺激性の観点から、又化粧料への幅広い適用が可能であるという点からも、本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類などの親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類（特にエタノール）、又は多価アルコール（特に、１，３−ブチレングリコール）の単独使用、或いは、水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒、又は水と多価アルコール類（特に１，３−ブチレングリコール，グリセリン）との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水単独、又は水と１，３−ブチレングリコールの混合溶媒が特に好ましい。
【００１８】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１０〜２０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：１０〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１０〜２０：１の範囲とすることが好ましい。
【００１９】
また、ダマスクバラの乾燥部位（例えば、全草又は花部）と抽出溶媒との重量比は好ましくは１：１〜１：５０の範囲であり、より好ましくは、１：５〜１：３５の範囲である。
【００２０】
抽出物の調製に際して、そのｐＨに特に限定はないが、一般には３〜９の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。
【００２１】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水もしくは１，３−ブチレングリコール、又は水と１，３−ブチレングリコールとの混液を溶媒とする場合であれば、抽出温度は好ましくは０℃〜８０℃の範囲であり、より好ましく０℃〜２０℃の範囲であり、又抽出時間は好ましくは１〜１６８時間（１時間〜１週間）であり、より好ましくは１〜１２０時間（１時間〜５日間）の範囲である。
【００２２】
なお、本発明の抽出処理に先立って、又は抽出処理と並行して、必要に応じてダマスクバラに加水分解処理を施してもよい。これによって、ダマスクバラの抽出物の保存安定性等を改善して、化粧料配合剤としての抽出物をより有効に利用できる可能性がある。
【００２３】
抽出物に酵素加水分解処理を施す場合、酵素としては、アクチナーゼ、パパイン、ペプシンなどの蛋白分解酵素、グルコアミラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼなどの澱粉分解酵素、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼなどの繊維素分解酵素、及びリパーゼなどの脂肪分解酵素のいずれかの酵素群から選ばれた１種又は２種以上を用いてもよいが、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた１種又は２種以上の酵素を組み合わせて用いることがより好ましい。
【００２４】
酵素の添加量は、例えば、ダマスクバラの全草、又は花部であれば、その固形分に対して、合計で０．０１〜１０重量％の範囲とすることが好ましく、より好ましくは０．１〜２．０重量％の範囲である。
【００２５】
上述のように調製した抽出物は、一般にはｐＨを３〜８に調製した上で、これをそのままの状態で化粧料配合剤として使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、抽出物はスプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。
【００２６】
また、上述のように調製した抽出物は、保存安定性等を高めるために、一定時間冷蔵保存した上で、上清を化粧料配合剤として使用しても良い。
【００２７】
以上のようにして得られる本発明の抽出物には、様々な有効成分が含まれており、例えば、液体クロマトグラフィー（株式会社日立ハイテクノロジーズ社製；LaChrom ELITE）の測定により、有機酸として、没食子酸、クロロゲン酸、カフェ酸が含まれていることを確認した。
【００２８】
本発明のダマスクバラの抽出物を含む化粧料（医薬部外品も含む）としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パックなどの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉などのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディシャンプー、毛髪用シャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、育毛剤、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。
【００２９】
本発明の化粧料におけるダマスクバラの抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．２重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に０．００２〜１０．０重量％、好ましくは０．０２〜７．０重量％の範囲である。
【００３０】
本発明の化粧料には、必須成分のダマスクバラの抽出物のほかに、通常化粧料に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、乳化剤又は乳化助剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、その他の生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明のダマスクバラの抽出物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて化粧料に配合することも何ら差し支えない。  
【００３１】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００３２】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
【００３３】
乳化剤乃至乳化助剤としては、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀など）等を配合することもできる。
【００３４】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００３５】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００３６】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物等がある。
【００３７】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。
【００３８】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００３９】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）、ムラサキシキブ抽出物、シャクヤク抽出物、シラン根（白及）抽出物等がある。
【００４０】
美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、４−ＨＰＢ（ロドデノール、４−(４−ヒドロキシフェニル）−４−ブタノール））、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００４１】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシドなどのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）などが挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００４２】
生理活性成分としては、美白成分として、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が上げられ、抗老化成分として、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（水ナス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、アロエ抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物等がある。
【００４３】
次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００４４】
製造例１．ダマスクバラの花の抽出物溶液の調製
バラ科バラ属のダマスクローズの花弁を乾燥し、乾燥物１５gに精製水を２２５ｇ添加し４℃で浸漬した後、１,３−ブチレングリコールを２２５g添加した。これを４℃で抽出を行った後ろ過し、褐色透明のダマスクローズ花抽出物溶液３８２ｇを得た（固形分濃度０．９４％）。
【００４５】
製造例２．ダマスクバラの全草の抽出物溶液の調製
バラ科バラ属のダマスクローズの全草を乾燥し、乾燥物１５gに精製水を２２５ｇ添加し４℃で浸漬した後、１,３−ブチレングリコールを２２５g添加した。これを４℃で抽出を行った後ろ過し、褐色透明のダマスクローズ全草抽出物溶液３４６ｇを得た（固形分濃度０．６９％）。
【００４６】
処方例１．化粧水
［Ａ成分］    部
オリーブ油    １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール    ５．０
ブチルパラベン    ０．１
［Ｂ成分］    部
製造例１の抽出物溶液    ５．０
エタノール    ５．０
グリセリン    ５．０
１，３−ブチレングリコール    ５．０
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。
【００４７】
処方例２．化粧水
処方例１のＢ成分に含まれる製造例１の抽出物溶液に代えて、製造例２の抽出物溶液５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００４８】
処方例３．乳液
［Ａ成分］    部
流動パラフィン    ６．０
ヘキサラン    ４．０
ホホバ油    １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート    ２．０
大豆レシチン    １．５
［Ｂ成分］    部
製造例１の抽出物溶液    ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド    ２．０
水酸化カリウム    ０．５
グリセリン    ３．０
１，３−ブチレングリコール    ２．０
カルボキシメチルセルロース    ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム    ０．０１
精製水    全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 
適量 
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００４９】
処方例４．乳液
処方例３のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例３と同様にして乳液を得た。
【００５０】
処方例５．乳液
［Ａ成分］    部
流動パラフィン    ６．０
ヘキサラン     ４．０
ホホバ油    １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート    ２．０
大豆レシチン    １．５
［Ｂ成分］    部
製造例１の抽出物溶液    ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド    ２．０
水酸化カリウム    ０．５
アルブチン    ３．０
グリセリン    ３．０
１，３−ブチレングリコール    ２．０
カルボキシメチルセルロース    ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム    ０．０１
精製水   全量が１００部となる量 
【００５１】
処方例６．ローション
［成分］    部
製造例２の抽出物溶液    １０．０
エタノール    １０．０
グリセリン    ３．０
１、３−ブチレングリコール    ２．０
メチルパラベン    ０．２
クエン酸    ０．１
クエン酸ナトリウム    ０．３
カルボキシビニルポリマー    ０．１
香料    適量
水酸化カリウム    適量
精製水    全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００５２】
処方例７．エッセンス
［成分］    部
エタノール    ２．０
グリセリン    ５．０
１，３−ブチレングリコール    ５．０
メチルパラベン    ０．１
ヒアルロン酸    ０．１
製造例１の抽出物溶液    ５．０
クエン酸    ０．３
クエン酸ナトリウム    ０．６
精製水    全量が１００部となる量
精製水にヒアルロン酸を溶解させた後、残りの原料を順次加えて攪拌溶解させ、透明のエッセンスを得た。
【００５３】
処方例８．エッセンス
処方例７の成分中製造例１の抽出物溶液に代えて製造例２の抽出物溶液５．０部を用いるほかは処方例７と同様にしてエッセンスを得た。
【００５４】
実施例９．リキッドファンデーション
［Ａ成分］    部
ステアリン酸    ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール    ２．０
セトステアリルアルコール    ０．２
液状ラノリン    ２．０
流動パラフィン    ３．０
ミリスチン酸イソプロピル    ８．５
プロピルパラベン    ０．０５
［Ｂ成分］    部
製造例１の抽出物溶液    ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム    ０．２
ベントナイト    ０．５
プロピレングリコール    ４．０
トリエタノールアミン    １．１
メチルパラベン    ０．１
精製水    全量が１００部となる量
［Ｃ成分］    部
酸化チタン    ８．０
タルク    ４．０
着色顔料    適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
【００５５】
処方例１０．ボディシャンプー
［Ａ成分］    部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム    ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）    ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド    ３．０
メチルパラベン    ０．１
［Ｂ成分］    部
製造例２の抽出物溶液    ５．０
１，３−ブチレングリコール    ２．０
精製水    全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
【００５６】
試験例１．表皮細胞内カタラーゼ活性亢進効果試験
本発明に係る製造例１の抽出物の表皮細胞内カタラーゼ活性亢進効果をカタラーゼの基質である過酸化水素の消去能により評価した。
＜実験方法＞
（イ）培養細胞からのカタラーゼ活性測定用試験液（粗酵素液）の調整
正常ヒト表皮角化細胞を増殖添加剤含有ＨｕＭｅｄｉａ-ＫＧ２（登録商標）（クラボウ社製）にて１．２×１０５個/ｍＬに調製し、６穴マイクロプレートに１ｍＬを播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間培養後、さらに、製造例１の抽出物溶液を含む培養液（試料溶液）を添加して４８時間培養した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ０．５％，１．０％となるように調製した２種の濃度のものを使用した。また、製造例１の抽出物溶液に代えて５０％１，３−ブチレングリコールを含んだ培養液を追添加した試験区をcontrol区として設定した。ここで、コントロール（control）区の１，３−ブチレングリコールの濃度は、追添加する培養液の全量に対して溶液として終濃度が１％となるように調製した。４８時間後、それぞれの試験区の細胞培養上清を除去し０．１％トリトン(Triton)Ｘ−１００を含むトリス-塩酸緩衝液(pH7.8)を用いて細胞を破砕した。それぞれの細胞破砕液の蛋白質量を測定し、すべての細胞破砕液の蛋白質含量が一定になるように希釈調整したものを試料の粗酵素液とした。
（ロ）カタラーゼ活性の測定
基質として２０ｍＭ過酸化水素を含むトリス−塩酸緩衝液(pH7.8)３ｍＬに対し、各粗酵素液１００μＬを添加し、直ちに２４０ｎｍにおける吸光度（Ｖ０）を測定した。室温で２０分静置後、同様に２４０ｎｍにおける吸光度（Ｖ１）を測定し、２０分間の２４０ｎｍにおける吸光度の変化量から算出した値（Ｖ０−Ｖ１）をカタラーゼによる過酸化水素消去量とした。また、カタラーゼ活性の測定が正常に機能しているかを確認するために、粗酵素液の代わりに陽性対照としてカタラーゼ(終濃度５０u/mL)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
【００５７】
試験例１の表皮細胞内カタラーゼ活性亢進効果の結果を図１に示す。図1に示す通り、コントロールでは全く過酸化水素の消去が認められなかったのに対して、本発明に係る製造例１のダマスクバラの抽出物は濃度依存的に格段にすぐれた過酸化水素消去能を示した。このように、本発明に係る製造例１のダマスクバラの抽出物は、表皮細胞内のカタラーゼ活性を亢進する効果を奏することが確認された。また、陽性対照であるカタラーゼも過酸化水素の消去を示したことから、カタラーゼ活性の測定が正常に行われたことも確認された。
【００５８】
試験例２．過酸化脂質生成抑制効果試験
＜実験方法＞
０．５Ｍリノール酸エタノール１．０ｍＬ、０．２Ｍリン酸緩衝液(pH7.0)１０ｍＬおよびエタノール９．０ｍＬを混合し、充分撹拌した。この混合液に製造例１の抽出物溶液５．０ｍＬを加えて充分撹拌し、試料溶液を調製した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ０．５％，１．０％となるように調製した２種の濃度のものを使用した。この試料溶液の調製直後のものと４０℃の恒温槽中て４日間放置したものに対して、それぞれ０．１ｍＬ、７５％エタノール４．７ｍＬ、３０％チオシアン酸アンモニウム溶液０．１ｍＬ、及び０．０２Ｍ塩化第一鉄の３.５％塩酸溶液０．１ｍＬを加えて充分に混合撹拌したのち、３分後の波長５００ｎｍにおける吸光度を測定した。また。コントロールとして１，３−ブチレングリコールの１％水溶液についても同様の試験を行い、本試験系での過酸化脂質生成量を、コントロールを１００とした場合の相対値で表した。
【００５９】
試験例２の結果を図２に示す。図２に示す通り、本発明の製造例１のダマスクバラの抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれた過酸化脂質生成抑制効果を奏することが明らかとなった。
【００６０】
試験例３．ＤＰＰＨラジカル捕捉試験
＜実験方法＞
ＤＰＰＨ２．４部をエタノール２０部に溶解し、これに精製水２０部を加えてＤＰＰＨ溶液を調製した。このＤＰＰＨ溶液２４部に対して、１８ｖ/ｖ％エタノール溶液を１９．２部、２Ｍ酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)を４．８部加えて、ＤＰＰＨ添加溶液として調製した。また、抽出液そのものの色調が試験に及ぼす影響を差し引くため、ＤＰＰＨ溶液の代わりに５０ｖ/ｖ％エタノール溶液を用いて、１８ｖ/ｖ％エタノール溶液と２Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液を混合した液を対照液とした。次に、製造例１の抽出物溶液を精製水で希釈して試料溶液を調製した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ０．５％，１．０％となるように調製した２種の濃度のものを使用した。この試料溶液とＤＰＰＨ添加溶液又は対照液とを１：３の割合で混合し、室温で１０分静置後、各試験溶液をＤＰＰＨ添加溶液と混合した場合の５５０ｎｍにおける吸光度と、同じく各試験溶液を対照液と混合した場合の５５０ｎｍにおける吸光度との差を測定し、ＤＰＰＨラジカルの残存量を確認した。また、同時にコントロールとして製造例１の抽出物溶液の代わりに、５０％１，３-ブチレングリコール水溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られる ＤＰＰＨラジカル残存率に対する各試料添加時のＤＰＰＨラジカル残存率の相対値を求めた。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として水溶性ビタミンＥ(終濃度２５μＭ)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
【００６１】
試験例３の結果を図３に示す。図３に示す通り、本発明の製造例１のダマスクバラの抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたＤＰＰＨラジカル消去効果を奏することが明らかとなった。また、陽性対照である水溶性ビタミンＥもＤＰＰＨラジカル消去効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００６２】
試験例４．脱顆粒抑制効果試験
本発明に係るダマスクバラの抽出物の抗炎症効果を細胞の脱顆粒抑制試験により評価した。ここで、皮膚細胞は、外的要因（紫外線や化学物質）の影響を受けると抗原が発生し、この抗原が抗塩基球やマスト細胞の脱顆粒（ヒスタミン、セロトニン及び好酸球遊走因子等の放出）に関与していることが知られている。この脱顆粒は皮膚の炎症やアレルギーの発症に関与することも知られていることから、本発明においては抗炎症効果を抗塩基球の脱顆粒抑制試験により評価した。
【００６３】
＜実験方法＞
ラット好塩基球白血病細胞(RBL-2H3)を、１０％ＮＣＳ含有イーグル最少必須培地に懸濁して９６穴プレートに１×１０５個ずつ播種し、３７℃で２４時間培養した。コンフルエントになった細胞をリリーシング緩衝液(releasing buffer) [117mM NaCl,5.4mM KCl,2.0mM CaCl,0.8mM MgSO,5.6mM
D-グルコース,25mM HEPES(2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]エタンスルフォン酸),1mg/mL
BSA/pH7.7]の200μL/ウェル(well)を用いて洗浄した後、リリーシング緩衝液に製造例１の抽出物溶液を添加した試料溶液を調製した。この試料溶液をそれぞれウェルに添加し、さらに脱顆粒を誘導するため、２００μg／ｍＬの化合物４８／８０(compound48/80)/リリーシング緩衝液の１００μＬをさらに添加して、３７℃で１時間インキュベートした。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）が１．０％となるように調製した濃度のものを使用した。また、比較のため、製造例１の抽出物溶液の代わりに５０％１，３−ブチレングリコール水溶液を含むリリーシング緩衝液を添加した試験区を二つ設け、一方の試験区(ブランク)にはリリーシング緩衝液のみを、他方の試験区(コントロール)には上記と同様の脱顆粒用の化合物48/80/リリーシング緩衝液溶液をそれぞれ１００μＬ添加して、３７℃で１時間インキュベートした。さらに、脱顆粒抑制効果を有することが公知の甜茶エキス(溶液として終濃度が５％に調製されたエキス)を陽性対照とした。脱顆粒誘導後、細胞外に遊離したβ−ヘキソサミニダーゼの酵素活性を測定するために細胞上清５０μＬを別の９６穴マイクロプレートに分取した。β−ヘキソサミニダーゼ活性の測定は次のように行った。すなわち、別プレートに取った各細胞上清５０μＬに基質として５ｍＭ p−ニトロフェニル−２−アセタミド-2-デオキシ-β-グルコピラノシド(p-Nitrophenyl-2-acetamide-2-deoxy-β-D-glucopyranoside)を５０μＬ加え、３７℃のＣＯ２インキュベーター内で３０分間反応させた。その後１００μＬの０．２Ｍグリシン緩衝液 (glycinebuffer)(pH10.7)を加えて反応を停止し、吸光プレートリーダー(BIO RAD社製：Model 680)で４１５ｎｍの吸光度を測定し、β−ヘキソサミニダーゼ活性の指標とした。
【００６４】
試験例４の結果を図４に示す。図４に示す通り、本発明の製造例１に係るダマスクバラの抽出物は、抗塩基球の脱顆粒を顕著に抑制することが明らかとなった。また、陽性対照である甜茶エキスも同様の効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００６５】
試験例５．プロスタグランジンＥ２（以下「ＰＧＥ２」と称する）生成抑制効果試験
本発明に係るダマスクバラの抽出物の抗炎症効果をＰＥＧ２の生成抑制試験により評価した。ここで、ＰＧＥ２は、皮膚の炎症を惹起する炎症性のケミカルメディエーターであって、紫外線や化学物質等の外的要因によりダメージを受けた皮膚細胞内で分泌される物質である。よって、本発明においては、このＰＧＥ２の生成抑制効果試験により、抗炎症効果を評価した。
【００６６】
＜実験方法＞
ウサキ角膜由来細胞(SIRC)を、１０％ＦＢＳ含有イーグル最少必須培地に懸濁して９６穴プレートに５．０×１０３個ずつ播種し、３７℃で３日間培養した後、その培養液に製造例１の抽出物溶液（試料溶液）を添加して、さらに２４時間培養した。ここで、製造例１の抽出物溶液は、上記培養液全量に対する溶液としての終濃度が０．２％又は０．５％の濃度となるように添加した。また、試料溶液の代わりに５０％１，３-ブチレングリコール水溶液を添加し２４時間培養したものコントロールとした。次に培養器の底面から１００ｍＪ／ｃｍ２の紫外線Ｂ波を照射し、さらに２日間培養後、培養上清に分泌されたＰＧＥ２の量を、ＰＧＥ２測定キット(カイマンケイミカル社製)を用いて測定した。また、試料溶液の代わりに陽性対照としてインドメタシン１０μＭを用いた場合のＰＧＥ２の量も同様に測定した。また、試料溶液の代わりに５０％１，３-ブチレングリコール水溶液を添加し２４時間培養後、紫外線を照射しない対照区についてもＰＧＥ２の量を測定した。
【００６７】
試験例５の結果を図５に示す。図５に示す通り、本発明の製造例１に係るダマスクバラの抽出物は、紫外線（ＵＶ）照射により促進されるＰＧＥ２の生成を顕著に抑制し、当該抑制効果は濃度依存的であることが明らかとなった。また、陽性対照であるインドメタシンも同様の効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００６８】
試験例６．チロシナーゼ活性抑制試験
＜実験方法＞
マックイルベイン緩衝液(pH6.8)を用いて１２５Ｕ／ｍＬのチロシナーゼ酵素液を調製した。次に、製造例１の抽出物溶液を精製水により調製した試料溶液を９６ウェルマイクロプレートに１００μＬ/ウェルずつ添加した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ０．５％，１．０％となるように調製した２種の濃度のものを使用した。次に、０．０３％Ｌ−チロシン溶液を同じく１００μＬ/ウェルずつ添加し、十分に混合した。これに上記チロシナーゼ酵素液を１００μＬ/ウェルずつ添加して十分に混合し、室温で１０分間静置した。そして、波長４９０ｎｍにおける反応溶液の吸光値を測定した。また、製造例１の抽出物溶液の代わりに５０％１，３−ブチレングリコール水溶液を用いて同様に操作したものをコントロールとし、チロシナーゼ活性率を、コントロールの吸光値を１００としたときの相対値により求めた。 
【００６９】
試験例６の結果を図６に示す。図６に示すように、本発明１に係る製造例１のダマスクバラの抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。
【００７０】
試験例７．Ｂ１６メラノーマ細胞を用いたチロシナーゼ活性抑制効果試験
本発明に係る製造例１のダマスクバラの抽出物のチロシナーゼ活性抑制効果をさらに細胞を用いて評価した。
【００７１】
＜実験方法＞
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞を、９６穴マイクロプレートに４×１０３個/穴播種し、１０％ＦＢＳ含有RPMI中、３７℃、５％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した後、製造例１の抽出物溶液を１０％ＦＢＳ含有イーグルＭＥＭにより希釈した試料溶液を追添加し、同条件で２日間培養した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例１の抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ０．５％，１．０％となるように調製した２種の濃度のものを使用した。培養終了後、培養液を除去し、０．３ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液を添加するか、又は、界面活性剤 (Triton X-100)と５ｍＭのＬドーパ溶液を添加して３７℃で反応を行った後、マイクロプレートリーダー(Model 680、バイオラッド社製)を用い、波長５７０−６３０ｎｍで ＭＴＴ値を、波長４９０ｎｍでドーパ値をそれぞれ測定した。なお、比較のため、製造例１の抽出物溶液に代えて、５０％１，３−ブチレングリコール水溶液１％添加の場合(対照)及びコウジ酸の添加の場合(陽性対照) についても同様の試験を行った。本発明においてはチロシナーゼ活性率及びＭＴＴ活性率を、それぞれコントロールの値を１００としたときの相対値で求めた。
【００７２】
試験例７の結果を表１に示す。
［表１］
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表１に示すように、本発明１に係る製造例１のダマスクバラの抽出物は、細胞に対する刺激性を有することなく、かつ、濃度依存的に格段にすぐれた細胞内チロシナーゼ活性抑制効果を示すことが明らかとなった。また、陽性対照であるコウジ酸も同様の効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００７３】
試験例８．正常ヒト表皮細胞の遺伝子発現評価試験
本試験においては、本発明に係るダマスクバラ抽出物による、正常ヒト表皮細胞の遺伝子発現に与える影響について評価するため、以下の通り試験を行った。
［試験方法］
正常ヒト表皮細胞を増殖添加剤含有HuMediaKG2［クラボウ社製］にて６×１０５個／ｍＬに調製し、φ６ｃｍシャーレに１ｍＬを播種して、５％ＣＯ２、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間培養後、さらに、製造例１のダマスクバラ抽出物を含んだ培養液（培養液全量に対して溶液として終濃度が１．０％となるように当該抽出物を添加したもの）を添加して培養した。また、比較対照として、製造例１のダマスクバラ抽出物に代えて、５０％１,３−ブチレングリコール溶液のみを含んだ培養液（培養液全量に対する５０％１,３−ブチレングリコールの終濃度を１．０％に調整したもの）を添加した試験区（コントロール区）を設定した。２４時間培養後、それぞれの試験区の細胞をＴｒｉｚｏｌ試薬（Invitrogen社製）１ｍＬで回収した。回収した細胞に対してクロロホルム（和光純薬工業社製）２００μＬ添加して撹拌混合し遠心分離機（TOMY社製/MX-160）で１５，０００rpm、４℃の条件下で１５分間遠心分離した後、水層のみを４００μＬ分取した。回収した水層にイソプロパノール（和光純薬工業社製）５００μＬを添加して撹拌混合し、１５，０００ｒｐｍ、４℃の条件下で１５分間遠心分離してtotalＲＮＡの沈殿物を得た。totalＲＮＡに７５％エタノールを１ｍＬ添加して撹拌して洗浄し、１５，０００ｒｐｍ、４℃条件下で１５分間遠心分離して沈殿を回収した。回収したtotal ＲＮＡを所定のキット（PrimeScript RT reagent Kit
with gDNA Eraser  (Perfect Real Time)（タカラバイオ社製））を用いて逆転写反応し、ｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡをサンプルとして、Thermal Cycler Dice（登録商標）Real Time System
Single（タカラバイオ社製）、及びＳＹＢＲ（登録商標）Premix Ex TaqTM II(Perfect
Real Time)［タカラバイオ社製］を用いて、各種遺伝子の発現と、内部標準物質Ｇ３ＰＤＨ遺伝子の発現の検出を行った。ここで、Ｇ３ＰＤＨ（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）は、ハウスキーピング遺伝子（多くの組織や細胞中に共通して一定量発現する遺伝子であって、常に発現され，細胞の維持，増殖に不可欠な遺伝子である）の一つであり、発現量が常に一定とされていることから、ＰＣＲの実験では内部標準として用いられるものである。試験結果は、Ｇ３ＰＤＨ遺伝子の発現量を一定とした場合の、それぞれの試験区での各遺伝子の発現量を比較した。本試験系においては、コントロール区のそれぞれの遺伝子の発現量を１００としたときの他の試験区でのその遺伝子の発現量の相対値を求めた。試験例８の結果を、図７〜図１１に示す。
【００７４】
図７に示すように、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、生体細胞内において過酸化水素を消去する酵素（ペルオキシレドキシン）の発現を顕著に亢進することが明らかとなった。これにより、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、表皮細胞の酸化ダメージを抑制することができる。
【００７５】
図８に示すように、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、セリンペプチダーゼインヒビターの発現を顕著に亢進することが明らかとなった。ここで、セリンペプチダーゼは、表皮細胞の細胞膜に存在するＰＡＲ−２という蛋白質を部分分解して活性化することでメラノサイトからのメラニン顆粒の受け渡しを促進することが知られている。従って、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、セリンペプチダーゼの働きを阻害するセリンペプチダーゼインヒビターの発現を亢進することで、細胞間でのメラニン顆粒の受け渡しを抑制し、これにより、皮膚の色素沈着を抑制することができる。
【００７６】
図９に示すように、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、アシルＣｏＡオキシダーゼの発現を顕著に亢進することが明らかとなった。ここで、アシルＣｏＡオキシダーゼは、ペルオキシソームにおけるβ酸化による脂質代謝に重要な酵素であり、脂質からのエネルギー代謝に重要な役割を担っていることが知られている。従って、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、アシルＣｏＡオキシダーゼの発現を顕著に亢進することから、表皮細胞のエネルギー代謝を亢進し、皮膚の老化を抑制することができる。
【００７７】
図１０に示すように、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、炎症性サイトカインの一つであるインターロイキン１β（ＩＬ−１β）の発現を顕著に抑制することが明らかとなった。さらに、図１１に示すように、インターロイキン１βや酸化ストレスなどの刺激により活性化され、細胞外マトリックスであるプロテオグリカンやフィブロネクチンを分解する酵素（マトリックスメタロプロテイナーゼ、別名：ストロメライシン）の発現も顕著に抑制することが明らかとなった。従って、本発明に係る製造例１のダマスクバラ抽出物は、肌の炎症ダメージの予防及び改善、並びにそれらのダメージから細胞マトリックスを保護し、肌のハリの低下やシワの発生を抑えることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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