(57)【要約】【課題】被験試料中の腸管出血性大腸菌を培養法で検出できる検出培地を提供する。【解決手段】本発明に係る腸管出血性大腸菌を検出する検出培地は、大腸菌を検出するための基礎培地に、検出剤として少量の白糖およびｐＨ指示薬並びにガラクトシド誘導体の酵素発色基質を添加して大腸菌とその他の腸内細菌科細菌を判別し、選択剤として亜テルル酸塩、ノボビオシンならびに胆汁酸塩および／またはラウリル硫酸塩を添加して腸管出血性大腸菌とその他の大腸菌を判別することによる、腸管出血性大腸菌の検出培地およびそれを用いた検出方法である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
白糖、ラムノース、ｐＨ指示薬、酵素発色基質および亜テルル酸塩を含有する培地であって、酵素発色基質がガラクトシド誘導体であることを特徴とする、腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項２】
さらに、胆汁酸塩および／またはラウリル硫酸ナトリウム、並びにノボビオシンを含有することを特徴とする、請求項１記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項３】
前記ｐＨ指示薬が、フェノールレッド、ニュートラルレッド、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、ブロモフェノールレッド、クロロフェノールレッドより選ばれるｐＨ指示薬である、請求項１または２記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項４】
前記ｐＨ指示薬が、ニュートラルレッドである、請求項１または２記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項５】
前記ガラクトシド誘導体が、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、４−メチル−ウムベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド、６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドより選ばれる酵素発色基質である、請求項１〜４のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項６】
前記ガラクトシド誘導体が、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドである、請求項１〜４のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項７】
前記白糖の濃度が、１−２６ｇ／Ｌである、請求項１〜６のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項８】
前記白糖の濃度が、１−１８ｇ／Ｌである、請求項１〜６のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項９】
前記白糖の濃度が、１−６ｇ／Ｌである、請求項１〜６のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項１０】
培地１，０００ｍＬあたり、ペプトン５−１５ｇ、酵母エキス２−５ｇ、塩化ナトリウム０．１−１０ｇ、胆汁酸塩０．１−２ｇ、白糖１−２６ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド０．０５−０．５ｇ、ラムノース０．１−８ｇ、亜テルル酸カリウム０．５−５ｍｇ、ノボビオシン０．０５−１ｍｇ、ニュートラルレッド０．００１−０．０１ｇ、寒天１０−２０ｇを含有する、腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項１１】
培地１，０００ｍＬあたり、ペプトン５−１５ｇ、酵母エキス２−５ｇ、塩化ナトリウム０．１−１０ｇ、胆汁酸塩０．１−２ｇ、白糖１−１８ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド０．０５−０．５ｇ、ラムノース０．１−８ｇ、亜テルル酸カリウム０．５−５ｍｇ、ノボビオシン０．０５−１ｍｇ、ニュートラルレッド０．００１−０．０１ｇ、寒天１０−２０ｇを含有する、腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項１２】
培地１，０００ｍＬあたり、ペプトン５−１５ｇ、酵母エキス２−５ｇ、塩化ナトリウム０．１−１０ｇ、胆汁酸塩０．１−２ｇ、白糖１−６ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド０．０５−０．５ｇ、ラムノース０．１−８ｇ、亜テルル酸カリウム０．５−５ｍｇ、ノボビオシン０．０５−１ｍｇ、ニュートラルレッド０．００１−０．０１ｇ、寒天１０−２０ｇを含有する、腸管出血性大腸菌の検出培地。
【請求項１３】
被験試料から腸管出血性大腸菌を検出する方法において、請求項１〜１２のいずれかに記載の検出培地を用いて試料を培養する工程を少なくとも含む、腸管出血性大腸菌の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食中毒菌である腸管出血性大腸菌を検出できる培地に関するものである。また、本発明は、前記培地を用いた、被検試料からの腸管出血性大腸菌の検出方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、腸管出血性大腸菌による食中毒が世界各国で報告されており、国内においても腸管出血性大腸菌による食中毒の発生が認められる。この腸管出血性大腸菌は一般の大腸菌と異なり、下痢症や溶血性尿毒症性症候群に関わるベロ毒素を産生する特徴がある。そのため、腸管出血性大腸菌による食中毒は大きな社会問題となってきており、その原因究明と予防対策の確立が急務となっている。
【０００３】
本毒素を産生する腸管出血性大腸菌の多くは血清型がＯ１５７であるが、Ｏ１５７の他に本毒素を産生する多数の種類の血清型の腸管出血性大腸菌が知られており、国内ではＯ２６、Ｏ１１１、Ｏ１０３、Ｏ１２１、Ｏ１４５等の血清型が下痢患者から検出されている。
【０００４】
これらの血清型の異なる腸管出血性大腸菌を同一の方法で検出するため、変異型を含めたベロ毒素遺伝子を標的とし、オリゴヌクレオチドを用いて検出する方法が開示されている（特許文献１および特許文献２）。また、ベロ毒素を抗原抗体反応によって検出する方法も開示されている（特許文献３）。しかし、これらの検査方法は通常の微生物検査とは異なり、特別な装置や設備を必要とする。
【０００５】
一方、直接培養法により腸管出血性大腸菌を検出する方法として、酸化還元色素および糖を含む培地で培養する検査方法が開示されている（特許文献４）。しかしながら、この培地を用いた培養方法では、検出出来る腸管出血性大腸菌の血清型が限られており、腸管出血性大腸菌とその他の大腸菌との区別が十分に行なえない。
【０００６】
そこで、腸管出血性大腸菌を明確に検出できる培地、すなわち、他の類似菌等の発育を抑制するか、発育してもコロニーの色調や形状が異なる培地の開発が待たれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平１１−３３２５９９号公報
【特許文献２】特開２００１−９５５７６号公報
【特許文献３】特開２００３−２８４５８８号公報
【特許文献４】特開２０１０−７５１７９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
食中毒の原因菌が腸管出血性大腸菌であるか否かにより、その治療法や予後が異なる。そのため、ベロ毒素の産生の有無を遺伝子検査等で調べる、腸管出血性大腸菌の検出法が実施されている。しかし、これらの検査を行うためには特別な装置や設備を必要とする。  
【０００９】
また、腸管出血性大腸菌が有する酵素の発色基質を添加する培養法では、全ての腸管出血性大腸菌を類似細菌と判別するためには複数の培地を用い、それらを組み合わせる必要がある。それゆえ、比較的簡便な培養法を用い、広い範囲の腸管出血性大腸菌を検出することが出来る方法、すなわち培地が必要とされる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
大腸菌とその他の腸内細菌科細菌が有している酵素は類似しているため、酵素活性を利用する培養法によってこれらを判別することは困難である。すなわち、大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌はガラクトシダーゼを有しており、その発色基質であるガラクトシド誘導体を培地中に添加したとき、その発育に伴い、発色基質が分解したときの色調を呈する。
【００１１】
例えば、発色基質であるガラクトシド誘導体として５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドを選択して培地中に添加したとき、その発育に伴い、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドが分解してコロニーが緑色を呈する。
【００１２】
また、白糖およびｐＨ指示薬を培地中に添加したとき、大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌が白糖を分解することにより生じる酸により、ｐＨ指示薬の色が酸性側の色に変色する。
【００１３】
例えば、ｐＨ指示薬としてニュートラルレッドを選択して培地中に添加したとき、その発育に伴い、白糖が分解して生じる酸によりコロニーが赤色を呈する。
【００１４】
それゆえ、発色基質であるガラクトシド誘導体の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド並びに白糖およびｐＨ指示薬のニュートラルレッドを添加した培地で大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌を培養すると、ともにコロニーが紫色を呈することとなる。
【００１５】
しかしながら、白糖の添加量を減ずることにより、その量にしたがって大腸菌のコロニーの呈色が紫色から緑色に変化する反面、その他の腸内細菌科細菌のコロニーの呈色は紫色のままであった。
【００１６】
すなわち、培地中に５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド並びに白糖およびニュートラルレッドを添加するとき、白糖の添加量を少なくすることにより、大腸菌とその他の腸内細菌科細菌を判別することが可能となった。
【００１７】
次に、腸管出血性大腸菌とその他の大腸菌を判別する方法であるが、培地中に亜テルル酸カリウムを添加しても腸管出血性大腸菌は発育する反面、その他の大腸菌は発育が抑制された。それゆえ、培地中に亜テルル酸カリウムを添加することにより、腸管出血性大腸菌とその他の大腸菌を判別することが可能となる。
【００１８】
これらの結果より、発色基質であるガラクトシド誘導体の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド並びに減じた量の白糖およびｐＨ指示薬のニュートラルレッドを添加した培地中に、さらに亜テルル酸カリウムを添加した培地を用いることにより、腸管出血性大腸菌を判別することが可能となる。
【００１９】
すなわち、本発明は以下の構成からなる。
（１）白糖、ラムノース、ｐＨ指示薬、酵素発色基質および亜テルル酸塩を含有する培地であって、酵素発色基質がガラクトシド誘導体であることを特徴とする、腸管出血性大腸菌の検出培地。
（２）さらに、胆汁酸塩および／またはラウリル硫酸ナトリウム、並びにノボビオシンを含有することを特徴とする、（１）記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（３）前記ｐＨ指示薬が、フェノールレッド、ニュートラルレッド、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、ブロモフェノールレッド、クロロフェノールレッドより選ばれるｐＨ指示薬である、（１）または（２）記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（４）前記ｐＨ指示薬が、ニュートラルレッドである、（１）または（２）記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（５）前記ガラクトシド誘導体が、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、４−メチル−ウムベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド、６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドより選ばれる酵素発色基質である、（１）〜（４）のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（６）前記ガラクトシド誘導体が、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドである、（１）〜（４）のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（７）前記白糖の濃度が、１−２６ｇ／Ｌである、（１）〜（６）のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（８）前記白糖の濃度が、１−１８ｇ／Ｌである、（１）〜（６）のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（９）前記白糖の濃度が、１−６ｇ／Ｌである、（１）〜（６）のいずれかに記載の腸管出血性大腸菌の検出培地。
（１０）培地１，０００ｍＬあたり、ペプトン５−１５ｇ、酵母エキス２−５ｇ、塩化ナトリウム０．１−１０ｇ、胆汁酸塩０．１−２ｇ、白糖１−２６ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド０．０５−０．５ｇ、ラムノース０．１−８ｇ、亜テルル酸カリウム０．５−５ｍｇ、ノボビオシン０．０５−１ｍｇ、ニュートラルレッド０．００１−０．０１ｇ、寒天１０−２０ｇを含有する、腸管出血性大腸菌の検出培地。
（１１）培地１，０００ｍＬあたり、ペプトン５−１５ｇ、酵母エキス２−５ｇ、塩化ナトリウム０．１−１０ｇ、胆汁酸塩０．１−２ｇ、白糖１−１８ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド０．０５−０．５ｇ、ラムノース０．１−８ｇ、亜テルル酸カリウム０．５−５ｍｇ、ノボビオシン０．０５−１ｍｇ、ニュートラルレッド０．００１−０．０１ｇ、寒天１０−２０ｇを含有する、腸管出血性大腸菌の検出培地。
（１２）培地１，０００ｍＬあたり、ペプトン５−１５ｇ、酵母エキス２−５ｇ、塩化ナトリウム０．１−１０ｇ、胆汁酸塩０．１−２ｇ、白糖１−６ｇ、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド０．０５−０．５ｇ、ラムノース０．１−８ｇ、亜テルル酸カリウム０．５−５ｍｇ、ノボビオシン０．０５−１ｍｇ、ニュートラルレッド０．００１−０．０１ｇ、寒天１０−２０ｇを含有する、腸管出血性大腸菌の検出培地。
（１３）被験試料から腸管出血性大腸菌を検出する方法において、（１）〜（１２）のいずれかに記載の検出培地を用いて試料を培養する工程を少なくとも含む、腸管出血性大腸菌の検出方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明を実施することにより、被検試料中に含まれる、食中毒菌として重要な腸管出血性大腸菌を、一種類の培地を用いて検出することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
細菌の増殖を支持するための栄養素および塩濃度、ならびに平板培地とするためのゲル化剤を含む基礎培地に、細菌を鑑別するための白糖およびｐＨ指示薬並びに酵素発色基質のガラクトシド誘導体、検出対象外の細菌の増殖を抑制する亜テルル酸塩、ノボビオシン、ならびに胆汁酸塩および／またはクエン酸ナトリウムを加えることにより、腸管出血性大腸菌を検出することが出来る。
【００２２】
本発明を、一例としてｐＨ指示薬にニュートラルレッドを、ガラクトシド誘導体に５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドを、発育抑制剤に亜テルル酸カリウムを用い、白糖の濃度を６ｇ／Ｌの条件で説明するが、本例に限定されることはない。
【００２３】
ガラクトシダーゼ酵素を有している大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌を、０．１ｇ／Ｌの５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドを添加した培地で培養すると、その発育に伴い、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドが分解して、コロニーが緑色を呈する。
【００２４】
また、大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌を、６ｇ／Ｌの白糖および５ｍｇ／Ｌのニュートラルレッドを添加した培地で培養すると、その発育に伴い、白糖が分解されて酸が生じることによりｐＨが低下し、コロニーが赤色を呈する。
【００２５】
しかし、これらを組み合わせて添加した培地、すなわち、６ｇ／Ｌの白糖および５ｍｇ／Ｌのニュートラルレッド並びに０．１ｇ／Ｌの５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドを添加した培地で大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌を培養すると、大腸菌のコロニーは、白糖およびニュートラルレッドを添加しなかったときと同様に緑色〜青緑色を呈するが、その他の腸内細菌科細菌のコロニーは、緑色と赤色の中間色の紫色を呈した。
【００２６】
このことから、白糖およびニュートラルレッド並びに５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドを添加した培地において、白糖の濃度を低濃度にすることにより、大腸菌とその他の腸内細菌科細菌を判別することが可能であることが解った。
【００２７】
また、培地中に亜テルル酸カリウムを０．００１ｇ／Ｌ添加すると、腸管出血性大腸菌は発育する反面、その他の大腸菌の発育が抑制された。このことから、亜テルル酸カリウムを添加した培地において、腸管出血性大腸菌とその他の大腸菌を判別することが可能であることが解った。
【００２８】
すなわち、６ｇ／Ｌの白糖、５ｍｇ／Ｌのニュートラルレッド、０．１ｇ／Ｌの５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、および０．００１ｇ／Ｌの亜テルル酸カリウムを添加した培地を用いることにより、発育してそのコロニーが緑色〜青緑色を呈色したものについて、腸管出血性大腸菌と判断出来る。
【００２９】
なお、培地に添加するｐＨ指示薬を、ニュートラルレッドからフェノールレッド、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、ブロモフェノールレッド、またはクロロフェノールレッドに変更しても、細菌の発育に伴う培地の酸性化を色の変化で捉える機序は同じであるから、同等の結果が得られる。
【００３０】
また、培地に添加する発色基質であるガラクトシド誘導体を、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドから３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、４−メチル−ウムベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシド、６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド、または５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドに変更しても、細菌の発育に伴う酵素活性を色の変化で捉える機序は同じであるから、同等の結果が得られる。
【実施例１】
【００３１】
対象細菌を鑑別するための白糖および薬剤の濃度の確認
１．白糖の濃度の違いによる発育コロニーの呈色
白糖の濃度の違いによる白糖の分解性の違いを調べるために、以下の組成の培地に白糖を添加し、白糖の濃度が１、２、６、１０、１４、１８、２２、２６、および３０ｇ／Ｌとなるように培地を調製した。試験菌として大腸菌およびその他の腸内細菌科細菌を用い、ハートインフュージョンブイヨン培地で１夜培養してその１白金耳を各培地に塗抹接種し、３７℃１８時間培養した後のコロニーの呈色を確認した。
【００３２】
培地の組成（培地１Ｌあたり）
ペプトン    １０ｇ
塩化ナトリウム    ５ｇ
５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド    ０．１ｇ
ニュートラルレッド    ０．０３ｇ
寒天    １５ｇ
ｐＨ    ７．２±０．２
【００３３】
コロニーの呈色について表１に示すが、白糖濃度が２６ｇ／Ｌで大腸菌が全て青紫色を呈し、その他の腸内細菌科細菌は桃色または紫色を呈したため、大腸菌の判別が可能となる。また、白糖濃度を１８ｇ／Ｌまで下げると大腸菌が全て青緑色を呈し、その他の腸内細菌科細菌は桃色または紫色を呈したため、より大腸菌の判別が可能となる。さらに、白糖濃度を６ｇ／Ｌまで下げると大腸菌が青緑色〜緑色を呈し、その他の腸内細菌科細菌は桃色または紫色を呈したため、さらに大腸菌の判別が可能となる。それゆえ、白糖濃度が、好ましくは２６ｇ／Ｌ以下、より好ましくは１８ｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは６ｇ／Ｌ以下の場合に、発育したコロニーの呈色の違いにより、大腸菌とその他の腸内細菌科細菌を判別することが可能であった。
【００３４】
【表１】
2014128264.tif 000002
【００３５】
２．亜テルル酸カリウムの濃度の違いによる腸管出血性大腸菌およびその他の大腸菌の発育抑制効果
亜テルル酸カリウムの濃度の違いによる腸管出血性大腸菌およびその他の大腸菌の発育抑制効果を調べるために、実施例１の１．で示した組成の培地に亜テルル酸カリウムを添加し、亜テルル酸カリウムの濃度が０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、および１．４ｍｇ／Ｌとなるように培地を調製した。試験菌として腸管出血性大腸菌およびその他の大腸菌を用い、ハートインフュージョンブイヨン培地で１夜培養してその１白金耳を各培地に塗抹接種し、３７℃１８時間培養した後のコロニーの呈色を確認した。
【００３６】
腸管出血性大腸菌の発育について表２に、その他の大腸菌の発育について表３に示すが、０．２〜１．０ｍｇ／Ｌの濃度の亜テルル酸カリウムを添加した培地で全ての腸管出血性大腸菌の発育が認められたが、０．８ｍｇ／Ｌの濃度の亜テルル酸カリウムを添加した培地で９０％を超えるその他の大腸菌の発育を抑制することが出来た。
【００３７】
【表２】
2014128264.tif 000003
【００３８】
【表３】
2014128264.tif 000004
【実施例２】
【００３９】
腸管出血性大腸菌検出培地を用いた細菌の培養
実施例１の結果を基に、表４に示す組成の培地を用いて、種々の細菌を培養し、腸管出血性大腸菌の検出の可否を調べた。なお、試験菌は、ハートインフュージョンブイヨン培地で１夜培養してその１白金耳を各培地に塗抹接種し、３７℃１８時間培養した後のコロニーの発育およびその呈色を確認した。
【００４０】
【表４】
2014128264.tif 000005
【００４１】
腸管出血性大腸菌およびその他の細菌のコロニーの発育およびその呈色を、各々表５および表６に示すが、腸管出血性大腸菌の他の大腸菌２例（ＥＫＮ４６４およびＥＫＮ６８８）を除き、コロニーの発育およびその呈色により、腸管出血性大腸菌およびその他の細菌を判別することが可能であった。
【００４２】
【表５】
2014128264.tif 000006
【００４３】
【表６】
2014128264.tif 000007
【実施例３】
【００４４】
培地の処方中のｐＨ指示薬および発色基質の検討
実施例２の培地の処方中のｐＨ指示薬のニュートラルレッドをフェノールレッド、ブロモクレゾールパープル、ブロモチモールブルー、ブロモフェノールレッドまたはクロロフェノールレッドに、および発色基質の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（Ｘ−ｇａｌ）を３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（Ｙ−ｇａｌ）、４−メチル−ウムベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド（ＭＵＧ）、ｐ−ニトロフェニール−β−Ｄ−ガラクトシド（ＰＮＰＧ）、６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（Ｓａｌ−ｇａｌ）または５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−Ｄ−ガラクトシド（ｍｅｇｅｎｔａ−ｇａｌ）に置き換えて、種々のｐＨ指示薬および発色基質を培地の処方として用いたときの腸管出血性大腸菌の検出能を検討した。
【００４５】
表４に示す組成の中、ｐＨ指示薬および発色基質を置き換えて作製した培地を用いて、種々の細菌を培養し、腸管出血性大腸菌の検出の可否を調べた。この時のｐＨ指示薬および発色基質の濃度は、実施例２のニュートラルレッドおよび５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドと同量の、各々０．００５ｇ／Ｌおよび０．１ｇ／Ｌとした。なお、試験菌は、ハートインフュージョンブイヨン培地で１夜培養してその１白金耳を各培地に塗抹接種し、３７℃１８時間培養した後のコロニーの発育およびその呈色を確認した。
【００４６】
腸管出血性大腸菌およびその他の細菌のコロニーの発育およびその呈色を、ｐＨ指示薬として用いたニュートラルレッド（表７−１）、フェノールレッド（表７−２）、ブロモクレゾールパープル（表７−３）、ブロモチモールブルー（表７−４）、ブロモフェノールレッド（表７−５）およびクロロフェノールレッド（表７−６）に分けて示すが、発色基質として５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−Ｄ−ガラクトシドを用いたとき、並びにｐＨ指示薬としてフェノールレッドまたはクロロフェノールレッドおよび発色基質としてｐ−ニトロフェニール−β−Ｄ−ガラクトシドを用いたときのＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ等を除き、コロニーの発育およびその呈色により、腸管出血性大腸菌およびその他の細菌を判別することが可能であった。
【００４７】
【表７−１】
2014128264.tif 000008
【００４８】
【表７−２】
2014128264.tif 000009
【００４９】
【表７−３】
2014128264.tif 000010
【００５０】
【表７−４】
2014128264.tif 000011
【００５１】
【表７−５】
2014128264.tif 000012
【００５２】
【表７−６】
2014128264.tif 000013
【００５３】
すなわち、本願発明の培地を用いることにより、腸管出血性大腸菌を、その他の細菌と判別して検出することが可能となった。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
従来、腸管出血性大腸菌の検出には、血清型毎に特異的な培地が使用されてきた。すなわち、腸管出血性大腸菌を検出するためには複数の培地を用いる必要があった。
【００５５】
しかし、本願発明の培地では、１枚の平板培地を用いることにより腸内出血性大腸菌の存在を容易に判断できる。それゆえ、食品工業分野においては、原材料や製品中の腸管出血性大腸菌の有無を検証するための工程において、接種培地数を減らすことによる培養スペースや作業を簡便化でき、汚染品の排除や製品の出荷を速やかに行うことが可能となり、食品流通の経済性に大きく貢献できる。
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また、医療分野においては、糞便や嘔吐物を被検試料として用いることにより、腸管出血性大腸菌による食中毒患者の早期診断が可能となり、早い段階より有効な治療法の選択に寄与できる。