(57)【要約】【課題】天然物からの抽出物を有効成分とし、経口摂取によっても有効な、血糖降下剤を提供する。【解決手段】パッションフルーツ種子抽出物を、血糖降下剤の有効成分とする。パッションフルーツ種子抽出物としては、パッションフルーツ種子から極性溶媒で抽出された抽出物であることが好ましい。また、その種子抽出物が、そのパッションフルーツ種子由来のピセアタンノールを固形分中０．０００５〜３０質量％含有し、その種子抽出物由来のスキルプシンＢを固形分中０．０００１〜２０質量％含有するものであることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
パッションフルーツ種子抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血糖降下剤。
【請求項２】
前記パッションフルーツ種子抽出物は、パッションフルーツ種子から極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項１記載の血糖降下剤。
【請求項３】
前記パッションフルーツ種子抽出物は、該パッションフルーツ種子由来のピセアタンノールを固形分中０．０００５〜３０質量％含有し、該パッションフルーツ種子由来のスキルプシンＢを固形分中０．０００１〜２０質量％含有するものである、請求項１又は２記載の血糖降下剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パッションフルーツ種子抽出物を有効成分として含有する血糖降下剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血糖値の高い状態が慢性的に続くと、血中の糖がタンパク質に結合するなどしてその生体機能を障害し、糖尿病やそれにともなう各種合併症にみられるように、腎症、白内障、網膜症、神経障害、下肢壊疽、皮膚症状、血管障害、動脈硬化、心筋梗塞、脳梗塞などを引き起こす。さらに、免疫力が低下するために感染症にも罹りやすくなる。いったん症状が発症すると治癒が困難になるため、症状のない段階で血糖値をコントロールすることが肝要である。
【０００３】
一般に、血糖値のコントロールにはインスリンの自己注射が広く行われているが、注射による苦痛や、投与管理の煩わしさも、患者には負担である。また、インシュリンショックや急激な血糖降下などによる弊害もともなう。
【０００４】
これに対して、天然物の抽出物により血糖値の上昇を抑えるという試みもある。これによれば、インスリンほどの効果は期待しないものの、副作用なく日常的に摂取することにより、食事等により影響を受ける血糖値の状態を、患者に負担なく改善できる可能性がある。また、これをインスリン療法と組み合わせてよりよい効果が得られるという可能性もある。例えば、下記特許文献１には血糖降下作用を有するセンブリ粗エキスの製造法、下記特許文献２にはカラスウリ属植物果実の水性抽出物を含むことを特徴とする血糖降下用内服剤、下記特許文献３にはセンダン科植物、ゴーヤー茶又はこれらの抽出物を含有することを特徴とする血糖値低下剤、下記特許文献４には経口低血糖作用を有するバウヒニア・フォルティフィカタの抽出物、などが開示されている。
【０００５】
一方、本出願人は、パッションフルーツの種子抽出物を有効成分とする、コラーゲン産生促進剤やメラニン生成抑制剤の発明を開示している（下記特許文献５〜７）。しかしながら、血糖降下作用については知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平６−２４７８６７号公報
【特許文献２】特開平８−２７０１４号公報
【特許文献３】特開２００８−１２０７０１号公報
【特許文献４】特開２０１２−１０２１４４号公報
【特許文献５】特開２００９−１０２２９８号公報
【特許文献６】特開２００９−１０２２９９号公報
【特許文献７】特開２０１０−３０９１１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
血糖降下剤の新たな有効成分を提供できれば治療や処置の選択の幅が広がる。また、有効成分が天然物からの抽出物であれば、副作用のリスクも少ないと考えられるので、望ましい。
【０００８】
そこで本発明の目的は、天然物からの抽出物を有効成分とし、経口摂取によっても有効な、血糖降下剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のとおりである。
【００１０】
［１］パッションフルーツ種子抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血糖降下剤。
［２］前記パッションフルーツ種子抽出物は、パッションフルーツ種子から極性溶媒で抽出された抽出物である、上記［１］記載の血糖降下剤。
［３］前記パッションフルーツ種子抽出物は、該パッションフルーツ種子由来のピセアタンノールを固形分中０．０００５〜３０質量％含有し、該パッションフルーツ種子由来のスキルプシンＢを固形分中０．０００１〜２０質量％含有するものである、上記［１］又は［２］記載の血糖降下剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の血糖降下剤によれば、その有効成分であるパッションフルーツ種子抽出物が血糖降下の作用効果を有する。よって、本発明の血糖降下剤を日常的に摂取することにより、食事等による血糖値の上昇を、患者に負担を与えることなく抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験例１及び試験例２における動物実験の試験スケジュールの概要を示す説明図である。
【図２】試験例１の血糖降下試験における血糖推移の結果を示す図表である。
【図３】試験例２の腹腔内ブドウ糖負荷時の血糖降下試験における血糖推移の結果を示す図表である。
【図４】試験例３のヒト糖負荷試験における血糖推移の結果を示す図表である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
パッションフルーツ種子としては、パッシフローラ（Passiflora）属に属し、その実が食用である、例えばPassiflora edulis、Passiflora alata、Passiflora ligularis、Passiflora mollissima、Passiflora quadrangularis等に由来するものが挙げられる。このうちPassiflora edulisは、別名クダモノトケイソウ(果物時計草)とよばれ、その実は甘酸っぱく果物として実をそのまま食したり、その果汁をジュースにして飲んだり、ゼリー、ケーキ等の飲食品に配合して、風味付けに用いられたりされている。パッションフルーツの種子は硬いが小粒で、ジュースなどにする場合には果実から取り除かれることもあるが、ジャムやピューレなどでは種を含む果肉がそのまま用いられている。このような食経験からも裏付けられるように、パッションフルーツの種子は、安全性には問題がないものである。
【００１４】
パッションフルーツ種子抽出物の調製方法は特に限定されず、例えば、種子をそのまま、あるいは乾燥、細断、破砕、磨砕等の処理を施したうえで、種々の溶媒を用いて抽出する方法が挙げられる。抽出温度は適宜設定することができる。また、上記種子は、抽出効率をよくするため、適宜、酸又はアルカリ分解、酵素分解等の化学的処理を施してから抽出することもできる。
【００１５】
抽出溶媒としては、極性溶媒が好ましく、例えば水（熱水）、エタノール等の炭素数５以下の低級アルコール、酢酸エチル等の炭素数５以下の低級アルキルエステル、アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、クロロアセトン等のケトン系溶媒、グリセリン等のトリオール化合物、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等のジオール化合物などが挙げられる。これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いてもよく、これらの溶媒を種子に順次接触させて抽出したものを合わせて種子抽出物としてもよい。これらの中で、含水エタノール、含水アセトン、又は含水１，３−ブチレングリコールは、下記のピセアタンノールやスキルプシンＢを効率よく抽出することができるので好ましい。
【００１６】
上記抽出溶媒により調製されるパッションフルーツ種子抽出物には、下記化学式（１）で表されるピセアタンノール（Ｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌ）や下記化学式（２）で表されるスキルプシンＢ（Ｓｃｉｒｐｕｓｉｎ Ｂ）が含まれている。パッションフルーツ種子抽出物の品質は、これらピセアタンノールやスキルプシンＢの含有濃度を基準にすることが好ましい。
【００１７】
【化１】
2014172841.tif 000002
【００１８】
なお、上記化学式（１）には、２個のフェニル基がトランス型のアルケン基で連結した構造を示すが、上記化学式（１）において、２個のフェニル基がシス型のアルケン基で連結した構造であってもよい。
【００１９】
【化２】
2014172841.tif 000003
【００２０】
また、上記化学式（２）では、ピセアタンノールの２量体の構造を有し、２個のフェニル基がトランス型のアルケン基で連結した構造のピセアタンノール構造を包含する構造を示すが、上記ピセアタンノールと同様に、上記化学式（２）において、２個のフェニル基がシス型のアルケン基で連結した構造のピセアタンノール構造を包含する構造であってもよい。
【００２１】
具体的には、上記抽出溶媒で抽出して得られる一次抽出物中には、抽出の条件によっても異なるが、通常固形分中０．５μｇ〜３０ｍｇ／１００ｍｇ、より典型的には３μｇ〜１０ｍｇ／１００ｍｇの含有濃度でピセアタンノールが含まれる。また、通常固形分中０．１μｇ〜２０ｍｇ／１００ｍｇ、より典型的には１μｇ〜７ｍｇ／１００ｍｇの含有濃度でスキルプシンＢが含まれる。
【００２２】
ピセアタンノールは、質量分析装置によるマススペクトル測定によってネガティブイオンモードのシグナルとしてｍ／ｚ２４３を呈する化合物として同定でき、また、例えば下記条件でＨＰＬＣにかけたときの保持時間が１９〜２２分に溶出される化合物である。ＨＰＬＣ溶出ピーク下面積を、予め濃度既知の標準品による検量線にあてはめることなどにより定量できる。
【００２３】
［ＨＰＬＣ条件］
・  カラム：Mightysil RP-18 GP250-10  径10mm、長さ250mm（関東化学株式会社製）
・  カラム温度：40℃
・  溶出条件：流速3ml/min、0％メタノール→30％メタノール（10min）
・  ＵＶ検出：280nm
【００２４】
スキルプシンＢは、質量分析装置によるマススペクトル測定によってネガティブイオンモードのシグナルとしてｍ／ｚ４８５を呈する化合物として同定でき、また、例えば下記条件でＨＰＬＣにかけたときの保持時間が１０〜１５分に溶出される化合物である。ＨＰＬＣ溶出ピーク下面積を、予め濃度既知の標準品による検量線にあてはめることなどにより定量できる。
【００２５】
［ＨＰＬＣ条件］
・カラム：ODS-3  径4.6mm、長さ150mm（ジーエルサイエンス株式会社製）
・カラム温度：45℃
・溶出条件：流速0.75ml/min、15％アセトニトリル（0min）→40％アセトニトリル（20min）→45％アセトニトリル（25min）
・ＵＶ検出：280nm
【００２６】
パッションフルーツの種子抽出物は、上記パッションフルーツ種子の一次抽出物を、そのまま、濃縮して、又は溶媒の一部除去して、液体のまま用いてもよく、そのまま又はデキストリン等の賦形剤を添加したうえ、凍結乾燥又は噴霧乾燥により粉末化して用いることもできる。抽出物中に含まれる不溶物は、パッションフルーツの種子抽出物中に残存せしめてもよく、適宜、濾過などで除いてもよい。除去した不溶物は、これをさらに粉砕し、微細粒子状などにして、もとの抽出物に戻して、パッションフルーツの種子抽出物としてもよい。
【００２７】
パッションフルーツ種子抽出物は、また、上記パッションフルーツ種子の一次抽出物のみならず、これをイオン交換・サイズ排除カラムクロマト、ＨＰＬＣ、ゲルろ過、膜分離等により、ピセアタンノール及び／又はスキルプシンＢを指標にして、分画、精製して用いることもできる。ただし、後述する実施例で示すように、パッションフルーツ種子抽出物中のピセアタンノール以外の成分も血糖降下の作用効果に寄与することが示唆されることから、パッションフルーツ種子抽出物中のピセアタンノール及び／又はスキルプシンＢの含有濃度としては、そのパッションフルーツ種子由来のピセアタンノールを固形分中０．０００５〜３０質量％含有し、そのパッションフルーツ種子由来のスキルプシンＢを固形分中０．０００1〜２０質量％含有することが好ましく、ピセアタンノールを固形分中０．００５〜２５質量％含有し、スキルプシンＢを固形分中０．００１〜１５質量％含有することがより好ましく、ピセアタンノールを固形分中０．０５〜２０質量％含有し、スキルプシンＢを固形分中０．０１〜１０質量％含有することが最も好ましい。
【００２８】
本発明の血糖降下剤は、上記に説明したパッションフルーツ種子抽出物を、血糖降下のための有効成分として含有する。その有効成分以外の他の成分を配合することに特に制限はなく、必要に応じて、薬学的に許容される基材や担体を添加して、公知の製剤方法によって、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、液剤、粉末、顆粒、カプセル剤、ゼリー状剤等の形態にして、これを経口剤として利用することができる。また、軟膏剤、クリーム剤、ジェル、パック、化粧水、化粧料等の形態にして、これを皮膚外用剤として利用することができる。更にまた、乳蛋白、大豆蛋白等の蛋白質、植物性油脂等の脂質、砂糖、デキストリン等の糖質、ビタミン類、ミネラル類、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などの食用素材を配合してもよい。あるいは、動物飼料用の原料である、大豆粕、ホワイトフィッシュミール等の蛋白源、大豆油等の脂肪源、アルファルファミール等の繊維源、小麦、トウモロコシ、フスマ、胚芽、酵母、脱脂米糠、マイロ等の炭水化物源、ビタミンＡ、Ｄ３、Ｅ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ１２、パントテン酸カルシウム、ナイアシン、葉酸、塩化コリン等のビタミン類、ＣａＣＯ３、ＮａＣｌ、ＦｅＳＯ４、ＭｎＣＯ３、ＣｏＳＯ４・７Ｈ２Ｏ等のミネラル類などを配合してもよい。
【００２９】
本発明の血糖降下剤においては、その投与形態に特に制限はなく、例えば経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、経皮投与、経鼻投与、吸引等が挙げられる。なかでも摂取者の負担の軽減や服用のし易さの観点からは、経口投与の形態が好ましい。
【００３０】
本発明の血糖降下剤において、上記有効成分であるパッションフルーツ種子抽出物の含有量は、各製剤形態とした場合に、その製品が使用される量と有効投与量との関係を勘案して適宜定めればよく、特に制限されるものではないが、通常、固形状の製品の場合には、パッションフルーツ種子抽出物の固形分換算で０．０００７〜１００質量％含有させることが好ましく、０．００７〜１００質量％含有させることがより好ましい。また、液状又はゼリー状の製品の場合には、パッションフルーツ種子抽出物の固形分換算で０．０００１７〜１００質量％含有させることが好ましく、０．００１７〜１００質量％含有させることがより好ましい。
【００３１】
本発明の血糖降下剤は、例えば食事等により血糖値が上昇すると予想される場合などに、その食前、食中、又は食後に適宜摂取することにより、それによる血糖値の上昇を抑制することができる。また、慢性的に血糖値が高い症状に対しては、好ましくは１週間以上、より好ましくは１ヶ月以上にわたり継続的に摂取して、その改善につなげることができる。なお、本発明の血糖降下剤は、ヒトだけでなくペット等の動物にも適用できる。
【００３２】
本発明の血糖降下剤の投与量としては、特に制限はないが、典型的に経口摂取する場合には、パッションフルーツ種子抽出物の固形分換算で成人１日当りおよそ４１６μｇ〜２５ｇである。また、ピセアタンノール換算では、成人１日当りおよそ１２５μｇ〜２５０ｍｇである。また、スキルプシンＢ換算では、成人１日当りおよそ１２５〜２５０ｍｇである。
【実施例】
【００３３】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００３４】
＜調製例１＞（パッションフルーツ種子抽出物）
パッションフルーツ種子を焙煎して粉砕し、これに８０％含水エタノール（８０ｖ／ｖ％エタノール＋２０ｖ／ｖ％水）を加えて混合、攪拌した後、８３ｍｅｓｈフィルター（目開き１８０μｍ）で濾過することで固液分離した。得られた抽出液をエバポレータで濃縮して、スプレードライによって粉末化した。表１には、この粉末状のパッションフルーツ種子抽出物の一般成分分析の結果を示す。また、表２には、フォーリン・チオカルト（Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ）法にてポリフェノール類化合物の含有濃度を求めた結果と、ＨＰＬC分析によりピセアタンノール及びスキルプシンＢの含有濃度を求めた結果を示す。なお、ポリフェノール類化合物の含有濃度は、そのすべてをエピカテキン（ＥＣ）あるいは没食子酸（ＧＡ）に換算した値で表わした。
【００３５】
【表１】
2014172841.tif 000004
【００３６】
【表２】
2014172841.tif 000005
【００３７】
＜試験例１＞（経口単回投与による血糖降下試験）
（実験動物）
実験動物として日本チャールス・リバー株式会社から入手した自然発症ＩＩ型糖尿病モデルマウス（オスｄｂ／ｄｂ）を使用した。このマウスは摂食抑制ホルモンであるレプチンの受容体が欠損しており、糖尿病の症状を自然発症するマウスである。マウス週齢は、試験開始時に１１週齢となるように試験スケジュールを調整した。
【００３８】
（試験スケジュール）
飼育環境にマウスを馴らすため、被検物質の投与開始前に２週間の馴化期間を設けた。この期間中、マウスを、室温２１．９〜２４．５℃で昼夜の明暗管理のもと、飼料として「Ｄ０８１１１５０９」（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）を自由摂取させて飼育した。馴化期間終了後、マウスを体重、血糖値がほぼ均一になるように群分けし（１群：８匹）、被検物質の経口単回投与による血糖降下試験を行なった。続けてその試験日の５日後には、同様の群分けに従って、後述する試験例２における腹腔内ブドウ糖負荷時の血糖降下試験を行なった。図１には、試験スケジュールの概要を示す。
【００３９】
（被検物質及び試験群）
被検物質の投与は以下の試験群の通りとした。
・第１群：０．５質量％カルボキシキシメチルセルロース（ＣＭＣ）含有水（０．５％ＣＭＣ溶媒）を調製し、それを５ｍＬ／ｋｇ体重の投与量で経口投与した。
・第２群：０．５％ＣＭＣ溶媒中に調製例１のパッションフルーツ種子抽出物を２１．１ｍｇ／ｍＬの濃度で含むものを調製し、それをピセアタンノール換算の投与量で１０ｍｇ／ｋｇ体重となるように経口投与した。
・第３群：０．５％ＣＭＣ溶媒中に調製例１のパッションフルーツ種子抽出物を１０５．４ｍｇ／ｍＬの濃度で含むものを調製し、それをピセアタンノール換算の投与量で５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように経口投与した。
・第４群：０．５％ＣＭＣ溶媒中に調製例１のピセアタンノールを１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含むものを調製し、それをピセアタンノール換算の投与量で５０ｍｇ／ｋｇ体重となるように経口投与した。
【００４０】
（採血及び血糖値測定）
被検物質を強制経口投与し、その後マウスは絶食とした。投与直前と１、２、３、及び４時間後にマウスの尾部位から全血を採取し、その全血中の血糖値を血糖自己測定器（商品名「フリースタイル フリーダム」、ニプロ株式会社）にて測定した。図２には、血糖値推移を、投与直前の値からの差により示す。
【００４１】
（結果）
図２に示されるように、０．５％ＣＭＣ溶媒のみを投与した第１群に比べ、パッションフルーツ種子抽出物を投与した第２群及び第３群において、血糖値の低下傾向が認められた。特に第２群においては、ピセアタンノール自体を投与した第４群と比較して、その投与量が１／５であるにも関わらず、血糖値の低下傾向は同程度であり、また第３群においては、ピセアタンノール自体を投与した第４群と比較して、その投与量が同じであるにも関わらず、血糖値の低下傾向においてより優れていた。よって、パッションフルーツ種子抽出物中のピセアタンノール以外の成分も血糖降下の作用効果に寄与していることが示唆された。
【００４２】
＜試験例２＞（腹腔内ブドウ糖負荷時における経口単回投与による血糖降下試験）
試験例１に供した実験動物について、続けてその試験日の５日後には、同様の被検物質及び投与群に従って、腹腔内ブドウ糖負荷時の血糖降下試験を行なった。
【００４３】
（採血及び血糖値測定）
試験前日より約１６時間絶食し、被検物質を強制経口投与、その１時間後に２ｇ／ｋｇ体重の投与量でブドウ糖を腹腔内投与し、その後マウスは絶食とした。投与直前と０．５、１、１．５、２、３時間後にマウスの尾部位から採血し、その血漿中の血糖値をグルコース濃度測定用試薬キット（商品名「ラボアッセイ（ＴＭ）グルコース」、和光純薬工業株式会社）にて測定した。結果を図３に示す。
【００４４】
（結果）
図３に示されるように、０．５％ＣＭＣ溶媒のみを投与した第１群に比べ、パッションフルーツ種子抽出物を投与した第２群及び第３群において、血糖値の低下傾向が認められた。特に糖負荷による初期の最高血糖値の上昇が有意に抑えられた。
【００４５】
＜試験例３＞（ヒト糖負荷試験）
３人のヒト被験者にブドウ糖負荷時における経口単回投与による血糖降下試験を行なった。試験は、被検物質として調製例１のパッションフルーツ種子抽出物をピセアタンノール換算で３０ｍｇ／包となるようにオブラートで包んで水とともに摂取する場合と、あるいは何も摂取しない場合とについて、各試験を同一の被験者において日を改めて行なった。
【００４６】
被験者には前日夜９時までに夕食を済ませ当日の朝は絶食とした。また、水分の摂取は可、激しい運動は不可とした。部屋で１５分以上安静にしてから指先から採血し、その全血中の血糖値を血糖自己測定器（商品名「グルコカード」、株式会社アークレイ）にて測定した。血糖値測定は２回の平均値とし、２回の測定値が５ｍｇ／ｄＬ以上離れた場合には５ｍｇ／ｄＬ以内になるまで測定した。その測定後にパッションフルーツ種子抽出物を経口摂取してもらい（被摂取の試験のときにはなにも摂取しない）、更にその５分後にブドウ糖液（日医工株式会社）を５０ｇブドウ糖／３００ｍＬ水に調製したものを経口摂取してもらった。ブドウ糖摂取後、３０、６０、９０、１２０分後に上記と同様に血糖値を測定した。３人の結果を平均し、その結果を図４に示す。
【００４７】
図４に示されるように、パッションフルーツ種子抽出物を摂取した場合において、パッションフルーツ種子抽出物を摂取しない場合に比べ、血糖値の低下傾向が認められた。
【００４８】
＜製造例１＞  
［錠剤］
下記配合（１錠当り）にて、調製例１のパッションフルーツ種子抽出物を含有する錠剤を製造した。
【００４９】
（配合）
パッションフルーツ種子抽出物  （調製例１）      １５０．０ｍｇ
結晶セルロース                                    ５０．０ｍｇ
澱粉分解物                                        ３５．６ｍｇ
グァーガム                                          ０．９ｍｇ
ステアリン酸カルシウム                              ７．５ｍｇ
二酸化ケイ素                                        ６．０ｍｇ
合計                                            ２５０．０ｍｇ
【００５０】
この錠剤は、経口的に摂取するのに適した錠剤であった。
【図１】
2014172841.tif 000006
【図２】
2014172841.tif 000007
【図３】
2014172841.tif 000008
【図４】
2014172841.tif 000009