(57)【要約】【課題】  体外に取り出した血液、リンパ液、腹水、その他の体液中に存在する癌細胞を検出、測定または採取するための新たな試薬および新たな癌細胞の検出、測定または採取方法を提供する。【解決手段】  ロイコシジン類を含む癌細胞を検出、測定または採取するための試薬および哺乳動物の体外に取り出した、白血球と癌細胞を含む体液を、ロイコシジン類と接触させて白血球を膨張または崩壊させ、さらに所望により癌細胞を取得することを特徴とする癌細胞を検出、測定または採取する方法。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ロイコシジン類を含む、癌細胞を検出、測定または採取するための試薬。
【請求項２】
ロイコシジン類が、ロイコシジン、Ｐａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ型ロイコシジン、γ−ヘモリジン、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、Ｈｌｇ１、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＳ−ＰＶ、Ｈｌｇ２またはＩＫＲＳＴもしくはＡＲＲＴＴで示されるアミノ酸配列を有するペプチドもしくはその改変体もしくはこれらの誘導体である請求項１に記載の試薬。
【請求項３】
癌細胞が、胃癌、大腸癌、膵臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、脳腫瘍、乳癌、卵巣癌、骨肉腫、メラノーマ、肝臓癌、食道癌、膀胱癌、結腸直腸癌または肺癌由来の癌細胞である請求項１または２に記載の試薬。
【請求項４】
哺乳動物の体外に取り出した、白血球と癌細胞を含む体液を、ロイコシジン類と接触させて白血球を膨張または崩壊させ、さらに所望により癌細胞を取得することを特徴とする癌細胞を検出、測定または採取する方法。
【請求項５】
体液が、血液、リンパ液または腹水である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ロイコシジン類が、ロイコシジン、Ｐａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ型ロイコシジン、γ−ヘモリジン、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、Ｈｌｇ１、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＳ−ＰＶ、Ｈｌｇ２またはＩＫＲＳＴもしくはＡＲＲＴＴで示されるアミノ酸配列を有するペプチドもしくはその改変体もしくはこれらの誘導体である請求項４または５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体外に取り出した血液、リンパ液、腹水、その他の体液中に存在する癌細胞を検出、測定または採取するための試薬および癌細胞の検出、測定または採取方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
代表的な悪性疾患である癌は死因の上位を占め、医学的診断または治療技術の進歩にも関わらず、いまだ診断または治療方法が十分には確立したとは言い難い。
癌治療を困難なものとしている理由の一つに、癌の微小転移が挙げられる。すなわち腫瘍細胞は、初期癌を含む様々な癌の患者の体液中に微少転移として認められる。固形癌の大部分を外科的切除や化学療法、あるいは放射線照射により摘出、退縮しえても、癌細胞レベルでわずかな残存があれば再発を引き起こす可能性があるため、体液中に存在する微小転移の有無が診断、治療上きわめて重要な要件となる。
【０００３】
癌微小転移は人体組織中にとどまった状態で存在する場合もあるが、血液中の循環癌細胞や腹水中の浮遊癌細胞などのように、癌主病巣から離れ、組織に生着しておらず体液中に存在する場合がある（遊離癌細胞）。この遊離癌細胞は通常であれば免疫機構によって排除されるが、癌の病勢と免疫応答のバランスにより排除されなかった場合、親和性のある組織に生着し転移病巣を形成すると考えられている。よって、組織に生着する前に検出し治療できれば癌の転移を食い止められる可能性がある。
【０００４】
一方、遊離癌細胞は、癌の発生後、比較的早期から血中に存在することが示されており、癌早期診断への応用のための研究も盛んになされている。また、癌全体の病勢をよく示すため、治療効果判定の優れた指標として利用できると期待されている。さらに、この遊離癌細胞は、分子生物学的に解析することにより癌の転移または浸潤のメカニズムを解明するための非常に適した試料であると考えられている。よって、遊離癌細胞の正確な検出、測定と採取は、癌の早期診断、治療効果判定および将来の画期的な癌治療法開発などに極めて重要な意義を有している。
【０００５】
遊離癌細胞を検出、測定または採取する方法として、細胞表面抗原に対する抗体により細胞を蛍光染色し分別する方法（非特許文献１）、細胞表面抗原に対する抗体により細胞を標識しレーザー光で細胞を分別するフローサイトメトリー（非特許文献２）、マイクロチップを用いる方法（非特許文献３）、癌細胞の大きさに合わせた透過膜でろ過する方法（非特許文献４）などが挙げられる。しかし、いずれの方法も感度、特異度が低いため遊離癌細胞の採取率は低く、もともとごく少数しか存在しない遊離癌細胞の全てを採取できているわけではない。また、専用の機器が必要であるなどコストが高く、一般診療に利用するには解決すべき問題点が多く存在する。
また、医学研究においては、前述の方法で検出、測定または採取された癌細胞は多くの場合何らかの変性をきたしており、癌細胞が元々持っていた性質が変化していると推測されるため、検出、測定または採取した癌細胞をそのままさらなる研究に用いたとしても、臨床応用に直結する成果は得られにくい。検出された癌細胞の性質が変化している理由は、前述の方法はいずれも癌細胞を検出するために癌細胞に何らかの修飾を施しているからであると考えられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｃｏｈｅｎ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２６（１９），３２１３−３２２１，２００８
【非特許文献２】Ｈｅ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０４（２８），１１７６０−１１７６５，２００７
【非特許文献３】Ｎａｇｒａｔｈ，Ｎａｔｕｒｅ，４５０（７１７３），１２３５−１２３９，２００７
【非特許文献４】Ｖｏｎａ，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，１５６（１），５７−６３，２０００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は体外に取り出した血液、リンパ液、腹水、その他の体液中に存在する癌細胞を検出、測定または採取するための新たな試薬および新たな癌細胞の検出、測定または採取方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
血液、リンパ液、腹水を含む体液中に存在する有核細胞を検討すると、通常は、白血球が圧倒的大多数を占め、遊離癌細胞は全く存在しないか、存在したとしてもごく少数である（Ｉｔｏ，ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ，１２，３４６，２０１２，ｏｎｌｉｎｅ）。よって、体液中の正常白血球を標識または除去すれば、遊離癌細胞をより修飾の少ない状態で採取することが可能であり、本発明者らはさらに鋭意研究をして、優れた癌細胞の正確且つ簡便な検出、測定および採取方法ならびにそのための試薬を完成した。
【０００９】
即ち本発明は、以下の各発明を包含する。
（１）ロイコシジン類を含む、癌細胞を検出、測定または採取するための試薬、
（２）ロイコシジン類が、ロイコシジン、Ｐａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ型ロイコシジン、γ−ヘモリジン、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、Ｈｌｇ１、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＳ−ＰＶ、Ｈｌｇ２またはＩＫＲＳＴもしくはＡＲＲＴＴで示されるアミノ酸配列を有するペプチドもしくはその改変体もしくはこれらの誘導体である（１）に記載の試薬、
（３）癌細胞が、胃癌、大腸癌、膵臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、脳腫瘍、乳癌、卵巣癌、骨肉腫、メラノーマ、肝臓癌、食道癌、膀胱癌、結腸直腸癌または肺癌由来の癌細胞である（１）または（２）に記載の試薬、
（４）哺乳動物の体外に取り出した、白血球と癌細胞を含む体液を、ロイコシジン類と接触させて白血球を膨張または崩壊させ、さらに所望により癌細胞を取得することを特徴とする癌細胞を検出、測定または採取する方法、
（５）体液が、血液、リンパ液または腹水である（４）に記載の方法および
（６）ロイコシジン類が、ロイコシジン、Ｐａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ型ロイコシジン、γ−ヘモリジン、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、Ｈｌｇ１、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＳ−ＰＶ、Ｈｌｇ２またはＩＫＲＳＴもしくはＡＲＲＴＴで示されるアミノ酸配列を有するペプチドもしくはその改変体もしくはこれらの誘導体である（４）または（５）に記載の方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、哺乳動物の体液から有利に癌細胞の検出、測定または採取をすることができる。
体液中から、循環癌細胞を検出することにより、癌の早期診断、治療法選択、治療効果判定および予後予測に有用な情報を得ることができると考えられる。また、遊離癌細胞を顕微鏡観察下で例えばマイクロマニピュレーター等の細胞分取器を用いて直接個別に遊離癌細胞を取得し細胞機能を解析することにより、真に病的意義のある、転移形成能をもつ細胞を検出し、癌の転移または浸潤機能を解明する重要な知見が得られると考えられる。また、分子標的治療薬開発に重要な情報が得られることも期待される。このように、遊離癌細胞の検出、測定または採取は、癌の研究または治療に画期的な進歩をもたらすことができる有用性がある。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】マイクロマニピュレーターの全体像を模式化した図を示す。
【図２】顕微鏡接続モニター画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に、発明を実施するための好ましい形態を記載する。
【００１３】
特定の細菌は、それぞれ特性を持った細菌性毒素を産生することが知られているが、黄色ブドウ球菌、連鎖球菌、緑膿菌などは、細胞融解毒素を産生する。
【００１４】
本発明に用いられる黄色ブドウ球菌が産生する細胞融解毒素として例示されるロイコシジン類としては、ロイコシジンやＰａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ型ロイコシジン（ＰＶ−ロイコシジン）、γ-ヘモリジンが挙げられ、さらに細胞融解毒素としてこれら上記したロイコシジンやＰａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ型ロイコシジン（ＰＶ−ロイコシジン）、γ−ヘモリジンを構成するタンパク質のＦ成分（ＬｕｋＦ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、Ｈｌｇ１）、Ｓ成分（ＬｕｋＳ、ＬｕｋＳ−ＰＶ、Ｈｌｇ２）などのサブユニットが挙げられ、さらに加えてこれらタンパク質サブユニットを構成する同様の細胞融解作用を有する、例えば「ＩＫＲＳＴ」、「ＡＲＲＴＴ」などの活性部分アミノ酸配列を含むペプチドおよびその改変体が細胞融解毒素として挙げられる（Ｋａｎｅｋｏ，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｎｏｇｅｉｋａｇａｋｕ  Ｋａｉｓｈｉ  Ｖｏｌ．７３，Ｎｏ２，ｐｐ．１０９−１１５，１９９９）。
【００１５】
とりわけ、ロイコシジンを構成する２成分タンパク質Ｆ成分、Ｓ成分のうち、Ｓ成分（ＬｕｋＳ）が白血球細胞膜表面に特異的に結合し、タンパク質Ｆ成分（ＬｕｋＦ）との協調作用により白血球細胞膜に膜孔を形成し、白血球以外の有核細胞（癌細胞）はロイコシジンによる影響を受けない。また、遺伝子操作により各々の白血球標識あるいは崩壊作用を得るために必須ではない領域に標識に必要なアミノ酸配列を導入した改変ロイコシジン類成分を用いても細胞に対する活性および特異性は維持され、本発明のロイコシジン類として用いることもできる。改変ロイコシジンを得るための上記遺伝子操作は、細胞融解毒素作用を保持する限りどのような遺伝子操作であってもよく、そのための手段は従来十分に確立されているので本発明においてもそれらに従ってもよい。
【００１６】
上記した、ロイコシジン、ＰＶ−ロイコシジン、γ-ヘモリジン、ＬｕｋＦ、ＬｕｋＦ−ＰＶ、Ｈｌｇ１、ＬｕｋＳ、ＬｕｋＳ−ＰＶ、Ｈｌｇ２、「ＩＫＲＳＴ」、「ＡＲＲＴＴ」などの活性部分アミノ酸配列を含むペプチドの誘導体もロイコシジン類に含まれる。
【００１７】
本発明により検出、測定または採取される癌細胞としては、血液循環癌細胞が有利な対象であり、胃癌、大腸癌、膵臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、脳腫瘍、乳癌、卵巣癌、骨肉腫、メラノーマ、肝臓癌、食道癌、膀胱癌、結腸直腸癌または肺癌などの各種腫瘍由来の癌細胞が挙げられ、本発明により、これらを非常に高精度且つ簡便に無変化状態で検出、測定または採取することができる。
【００１８】
本発明において、検出、測定または採取される癌細胞の存在する体液は特に限定されないが、例えば、血液、リンパ液または腹水が挙げられる。以下に、最も好ましい実施形態を述べる。
【００１９】
検出、測定または採取にあたっては、例えばヒト静脈から採血した血液を、比重遠心分離などの分離手段で処理し正常白血球（リンパ球、単球、好中球など）含有成分を赤血球、血小板および血漿から分離する。分離手段は、従来十分に確立されているので本発明においてもそれらに従ってもよい。癌細胞は正常白血球と近い比重を有しているため、もし血液中に癌細胞が含まれていれば、この手段によって正常白血球と共に存在した状態で赤血球、血小板および血漿から分離される。
【００２０】
分離した白血球含有成分を、必要により滅菌水、食塩水、緩衝液など水性溶媒に懸濁させる。癌細胞が存在すれば、懸濁液に白血球と共に懸濁されている。例えば上記した水性溶媒にＦおよびＳ成分を好ましくは等量ずつ溶解して作製したロイコシジン類を懸濁液に白血球と癌細胞の総細胞数１０５あたり０．５〜１０ピコモルの割合になるように室温で添加する。添加後３分〜０．５時間反応させた後に顕微鏡モニターやデンシトメーターなど光学的測定手段で観察し癌細胞を検出または測定する。光学的測定手段は従来十分に確立されているので本発明においてもそれらに従ってもよい。ロイコシジン類の添加量に相関して、添加後５〜３０分でロイコシジン類が正常白血球に膜孔を形成し、細胞が膨張または崩壊するのに対して、癌細胞は影響を受けない。したがって、癌細胞は無修飾の状態で検出または測定することができる。また、膨張した白血球や崩壊した白血球と癌細胞が共存していてもマイクロマニピュレーターを用いることによって癌細胞のみを採取することが可能である。
【００２１】
所望により、例えば緑色蛍光タンパクなどの容易に識別できる色素化合物をあらかじめロイコシジンに結合させることにより、微量のロイコシジン添加量で白血球を識別できる。上記の操作によって膨張させた白血球は、さらに続いて例えば、タンパク質Ｆ成分およびＳ成分をそれぞれ白血球と癌細胞の総細胞数１０５あたり２〜３ピコモル以上のロイコシジンを添加した場合は崩壊させることもできる。また白血球以外の癌細胞は影響を受けないことから、ロイコシジンで白血球を標識あるいは崩壊させることにより、体液中の遊離癌細胞を無修飾の状態で検出または測定することが可能である。また、膨張した白血球がすべて崩壊した場合もマイクロマニピュレーターを用いることによって容易に癌細胞のみを採取することが可能である。マイクロマニピュレーターを用いることにより、膨張した白血球や崩壊した白血球と癌細胞が共存していても、無修飾の状態の癌細胞を１個単位で取得する直接的な方法である点が優れている。
【００２２】
さらに、マイクロマニピュレーターを用いて吸引採取した細胞を、リン酸緩衝生理食塩水５００μＬで希釈、洗浄し、例えば、１０００Ｇで５分間遠心分離し凝集させることも可能である。
【００２３】
ロイコシジン類は白血球以外の癌細胞に影響与えないと言う事実から、ロイコシジン類によって白血球を膨張または崩壊させ比重遠心分離の方法で膨張または崩壊した白血球を除去することにより、体液中の遊離癌細胞を無修飾の状態で選別し、検出することが可能である。具体的には、ロイコシジン反応後のサンプルにリン酸緩衝生理食塩水を加えて総量３ｍｌとなるように希釈し、別容器にあらかじめ準備した等量（３ｍｌ）のモノ・ポリ分離溶液（ＤＳ  ＰＨＡＲＭＡ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ製）の上に静かに重層する。遠心分離機（日立工機製、モデルＣＦ１６ＲＸ）を用いて、４００Ｇ、２０分間で遠心分離後、崩壊した白血球分解産物、膨張した白血球は密度が低いため血漿成分層に含まれる。細胞層を採取すれば癌細胞が得られる。密度勾配遠心分離媒体（試薬）は安価であり、遠心機とともに一般に普及しており、経済性と簡便性を両立し、かつ効果的な方法である。
【００２４】
比重遠心分離を行わなくとも、癌細胞、崩壊した白血球分解産物、膨張した白血球、ロイコシジンを含むサンプルに、リン酸緩衝生理食塩水を加えて総量が１ｍｌ程度になるよう希釈、洗浄し、１０００Ｇで５分間、通常の方法で遠心することで癌細胞を凝縮可能である。崩壊した白血球分解産物や、膨張した白血球は密度が低いため希釈・洗浄の過程である程度は除去可能である。さらに、遠心を加えることにより密度の高い癌細胞のみが凝縮する。この工程を２回繰り返すことにより、癌細胞を純度が高い状態で取得できる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
参考例１：ロイコシジン類の調製
ロイコシジン類の製造は文献Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，５７（１２），２１９８−２１９９，１９９３に記載の方法に準じて行った。即ち、スタフィロコッカス アウレウスＡＴＣＣ３１８８９株の培養液を遠心分離して得た上澄み液１Ｌに３倍量の蒸留水を加えて希釈した。これにヒドロキシアパタイト末（粒径 １４６〜１６９μｍ、和光純薬株式会社製）を加え、４℃で１時間撹拌してロイコシジン類を吸着させた。ヒドロキシアパタイト末を分離し、ガラス製カラムに詰めて、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．８）で洗浄した後、０．８Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．８）で溶出し、ロイコシジン類を含む溶出液を３０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に対して透析した。
透析液をＴＳＫゲルＳＰ−５ＰＷカラム（東ソー製）に供し、０〜０．８ＭのＮａＣｌ濃度勾配でＬｕｋＦ、ＬｕｋＳ各成分を順次溶出、精製した。
【００２７】
実施例１：血液サンプルの処理と癌細胞の検出
（１）実験方法
健常人から採血した血液３．５ｍｌを、あらかじめモノ・ポリ分離溶液（ＤＳ  ＰＨＡＲＭＡ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ製）を３．０ｍＬ加えた１５ｍＬ遠沈管に重層し、遠心分離機（日立工機製、モデルＣＦ１６ＲＸ）を用いて比重遠心分離を行い（４００Ｇ：２０分間）、得られた正常白血球を、単核球であるリンパ球・単球と、多核球である好中球に分けて別々に採取した。それぞれの細胞はリン酸緩衝生理食塩水で遠心洗浄し、同溶剤に細胞数が１００００個／ｍｌになるように懸濁した。一方、培養癌細胞であるＭＫＮ４５（胃低分化型腺癌）、ＫＡＴＯIII（胃印環細胞癌）、ＣＷ−２（大腸癌）およびＰＫ−４５Ｐ（膵臓癌）を用いた。いずれの細胞もリン酸緩衝生理食塩水を加えて細胞数が１００００個／ｍｌになるように調整した。正常白血球である単核球サンプル・多核球サンプルと、４種類の培養癌細胞サンプルを１対１の個数比で混合した計８種類の試験サンプルをホールスライドグラス（松波硝子工業株式会社製）に移し、参考例１で得たロイコシジンタンパク質のＦ成分（ＬｕｋＦ）およびＳ成分（ＬｕｋＳ）の等重量混合物をそれぞれ白血球および癌細胞の総細胞数１０５あたり２、３または５ピコモルの各濃度になるように添加して室温で反応させた。添加後３０分反応させた後に、サンプル溶液が保持されやすいようにくぼみを有したホールスライドを用いて、顕微鏡（オリンパス製）に接続したモニターで非固定状態の生浮遊細胞を検出した。
【００２８】
（２）結果
ロイコシジン類の濃度が総細胞数１０５あたり２ピコモルのときの顕微鏡接続モニター画像を図２に示した。
ロイコシジン類の濃度が総細胞数１０５あたり２ピコモルの場合は、白血球（単核球、多核球）はおよそ２倍径に膨張するにとどまり、崩壊まで至らないものが圧倒的に多く、崩壊した白血球がわずかに検出された。癌細胞は同条件で影響や変化を受けず、膨張または崩壊した白血球と識別可能であった。
ロイコシジン類の濃度が総細胞数１０５あたり３ピコモルの場合は、膨張にとどまり、崩壊まで至らない白血球も観察されたが、崩壊した白血球の割合が増大した。癌細胞は同条件で影響や変化を受けず、膨張または崩壊した白血球と識別可能であった。
ロイコシジン類の濃度が総細胞数１０５あたり５ピコモルの場合は、膨張にとどまり、崩壊まで至らない白血球も観察されたが、崩壊した白血球の割合がさらに増大した。癌細胞は同条件で影響や変化を受けず、膨張または崩壊した白血球と識別可能であった。
以上より、正常白血球（単核球、多核球）はロイコシジン類の添加量に相関して、添加後３０分で膨張または崩壊したのに対して、癌細胞は同条件で影響や変化を受けなかった。なお、反応時間を３０分から５分に短縮しても、実質的に同じ結果が得られた。
【００２９】
実施例２：癌細胞の測定および採取
（１）実験方法
実施例１に続いて、マイクロマニピュレーター（成茂科学器械研究所製、三次元ジョイスティック油圧マイクロマニピュレーター、懸架式、品番ＭＭＯ−２０２ＮＤ）、マニピュレーター（粗動用、品番ＭＮ−４）および空圧マイクロインジェクター（品番ＩＭ−１１−２）を操作し、目的の細胞を１個ずつ吸引採取した。
（２）結果
顕微鏡モニター観察下でマイクロマニピュレーターを用いて癌細胞を無修飾の状態で取得することができた。また、複数のサンプルにおいて安定して１０個以上の癌細胞を個別に吸引採取することができた。さらに、顕微鏡接続モニター化で確認可能な細胞に関しての収率は１００％であった。
【００３０】
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明の癌細胞を検出、測定または採取するための試薬および癌細胞を検出、測定または採取する方法により、癌細胞を無修飾の状態で得ることが可能であるため、検出、測定または採取し、癌の診断や治療他臨床に有用である。また採取した癌細胞をそのままさらなる研究に用いて、より高度な臨床応用に直結する成果を得ることができ、癌医学の発展に大いに期待される。
【図１】
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【図２】
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