(57)【要約】  【課題】  バックグラウンドノイズを低減して検査対象の目的微生物（特定微生物）数を計測することが可能な微生物等の検査方法及び検査装置を提供する。  【解決手段】  特定微生物と結合する蛍光標識抗体と、膜透過性の核酸染色色素を、試料に添加し、蛍光サイトメトリー法により特定微生物数を計測する。好ましくは、磁気ビーズによる濃縮と蛍光フローサイトメトリー法を用い、膜透過性の核酸染色色素、蛍光標識抗体の順に添加し、両者の蛍光を発したものを特定微生物として計測する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料に、膜透過性の核酸染色色素と、検査対象の目的微生物等の抗原と結合する蛍光標識抗体を添加し、蛍光サイトメトリー法を用いて前記膜透過性の核酸染色色素による蛍光と前記蛍光標識抗体の標識色素による蛍光の両方を発したものを前記目的微生物等として計数することを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項２】
請求項１において、
前記試料に、さらに膜不透過性の核酸染色色素を添加し、前記膜透過性の核酸染色色素による蛍光と前記蛍光標識抗体の標識色素による蛍光の二つの蛍光を発したものを前記目的微生物等の生微生物等として計数することを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項３】
請求項１または２において、
前記試料は、磁気ビーズを用いて前記目的微生物を濃縮したものであり、前記蛍光サイトメトリー法はフローサイトメトリー法であることを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項４】
請求項１において、
前記蛍光標識抗体を添加する前に、前記膜透過性の核酸染色色素を添加することを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項５】
請求項２において、
前記蛍光標識抗体を添加する前に、前記膜透過性の核酸染色色素と前記膜不透過性の核酸染色色素を添加することを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項６】
請求項３において、
前記蛍光標識抗体を添加する前に、前記膜透過性の核酸染色色素を添加することを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項７】
請求項６において、
前記膜透過性の核酸染色色素の添加時に、ｐＨが7.0〜7.6であることを特徴とする微生物等の検査方法。
【請求項８】
検体液が保持される検体容器、膜透過性の核酸染色色素が保持される膜透過染色容器、目的微生物の抗原と結合する蛍光標識抗体が保持される標識抗体染色容器、微生物検出用流路、前記検体容器と前記膜透過染色容器、前記膜透過染色容器と前記標識抗体染色容器、および前記標識抗体染色容器と前記微生物検出用流路をそれぞれ接続する流路を備えた微生物検査カセットと、
前記微生物検査カセットが装着され、前記微生物検査カセットを移動させるステージと、
前記微生物検査カセットと接続され、前記検体液を前記検体容器から前記膜透過染色容器に搬送し、前記膜透過染色容器から混合液を前記標識抗体染色容器に搬送し、前記標識抗体染色容器から混合液を検出液として前記微生物検出用流路に搬送する圧力を供給する圧力供給装置と、
前記微生物検出用流路に励起光を照射する光源、前記微生物検出用流路を流れる検出液からの蛍光を検出して電気信号に変換する光検出器を有する検出装置と、を有することを特徴とする微生物等の検査装置。
【請求項９】
蛍光色素と混合した検体液に励起光を照射して蛍光を検出することにより前記検体液に含まれる微生物等を電気信号として検出する微生物等の検査装置に用いられる微生物検査カセットであって、
検体液が保持される検体容器と、
膜透過性の核酸染色色素が保持される膜透過染色容器と、
目的微生物の抗原と結合する蛍光標識抗体が保持される標識抗体染色容器と、
前記励起光が照射される微生物検出用流路と、
前記検体容器と前記膜透過染色容器、前記膜透過染色容器と前記標識抗体染色容器、及び前記標識抗体染色容器と前記微生物検出用流路をそれぞれ接続する流路とを備えたことを特徴とする微生物検査カセット。
【請求項１０】
請求項９において、
前記膜透過性の核酸染色色素と前記蛍光標識抗体がそれぞれ前記膜透過染色容器と前記標識抗体染色容器に設けられたガラス管内に保持されていることを特徴とする微生物検査カセット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物等の検査方法及び検査装置に係り、特に、検査対象における特定微生物等の検査に好適な微生物等の検査方法及び検査装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、試料中の大腸菌Ｏ−１５７などの目的微生物を、前培養を行うことなく迅速に検出するため、磁気ビーズに目的微生物と特異的に反応する抗体を結合し、その磁気ビーズを試料中に加えることで夾雑物が多く含まれている試料中から目的微生物のみを磁気ビーズに吸着させ、その磁気ビーズ−微生物結合体に対して蛍光色素で標識した抗体を反応させ、その磁気ビーズ−微生物−蛍光標識抗体の複合体を蛍光フローサイトメトリー法で検出する方法が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００２−  １８１８２３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
特許文献１においては、フローサイトメトリー法による検出の際に夾雑物が入り込まないようにするため、磁気ビーズに非特異的に吸着した目的外の微生物（夾雑物）を、蛍光標識抗体を添加する前に洗い流している。また、特許文献１では、夾雑物を洗い流したサンプルに蛍光標識抗体を添加して反応させた後に、再度、サンプルの洗浄を行うようにしている。
【０００５】
しかしながら、サンプルの洗浄を行っても、夾雑物を完全に取り除くことができないし、また、未反応の蛍光標識抗体を完全に取り除くこともできない。このため、検出感度の向上には限度があると考えられる。特許文献１では、試料中に１０００個／ｍＬの菌数がある場合までは測定可能としているが、食品衛生法の衛生基準として、たとえば黄色ブドウ球菌は、１００個／ｍＬ以下であることが必要である。
【０００６】
このためサンプルの洗浄性能によらず、特定微生物（検査対象の目的微生物）の検出感度を向上できるようにすることが望まれる。
【０００７】
本発明の目的は、バックグラウンドノイズを低減して特定微生物数を計測することが可能な微生物等の検査方法及び検査装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、特定微生物と結合する蛍光標識抗体と、膜透過性の核酸染色色素を、試料に添加し、蛍光サイトメトリー法により特定微生物数を計測することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、バックグラウンドノイズを低減して特定微生物数を計測することが可能となる。
【００１０】
上記した以外の課題、構成及び効果は、以下の実施形態の説明により明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の一実施例である特定微生物等の検査方法を示すフロー図である。
【図２】本発明の一実施例における特定生微生物を判別するアルゴリズムを示す図である。
【図３】膜透過性の蛍光色素による染色時のｐHの影響を示す図である。
【図４】本発明の一実施例である微生物等の検査装置の概略構成を示す図である。
【図５Ａ】本発明の実施例の微生物等の検査装置に用いられる微生物検査カセットにおける微生物検出用流路を含む断面例を示す図である。
【図５Ｂ】本発明の実施例の微生物等の検査装置に用いられる微生物検査カセットにおける微生物検出用流路を含む分解構造例を示す図である。
【図６】本発明の実施例の微生物等の検査装置を用いた分析工程の一例を説明する図である。
【図７】本発明の実施例の微生物等の検査装置に用いられる微生物検査カセットの概略構成の一例を示す図である。
【図８】本発明の実施例の微生物等の検査装置に用いられる微生物検査カセットの概略構成の他の例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、図面を参照して、本発明の実施の形態を説明する。なお、本発明は、特定微生物（検出対象の微生物）の検査の他に特定細胞（検出対象の細胞）の検査にも同様に適用可能であり、従って、本明細書及び特許請求の範囲において、「特定微生物等」とは「特定微生物及び／又は特定細胞」を意味する。そして、説明を簡単に説明するために、「特定微生物等」を単に「特定微生物」と表記する場合がある。
【００１３】
先ず、本発明に至った経緯について説明する。
【００１４】
本発明では、蛍光フローサイトメトリー法を用いて特定微生物を検出するために、特定微生物の抗原と結合する蛍光標識抗体を用いている。蛍光フローサイトメトリー法において、微生物数の計測を正確に行うためには、バックグラウンドノイズを低減する必要がある。特許文献１に記載のように、磁気ビーズ濃縮法を組合せ、サンプルを洗浄することにより、バックグラウンドノイズを低減して特定微生物を検出することが可能になるはずである。しかしながら、サンプルを洗浄しても検出感度の向上には限界がある。すなわち、特許文献１では、サンプルの洗浄により、検出の際に夾雑物が入り込むのを可能な限り低減するものであるが、洗浄しても除去しきれないものが存在する。したがって、磁気ビーズ法と蛍光フローサイトメトリー法を組み合わせた手法のみでは、特定微生物の検出に求められる測定感度を実現することが困難な場合がある。
【００１５】
そこで、本発明は、特定微生物以外の夾雑物が入り込んでも、検出の際に特定微生物と夾雑物を判別して検出すれば良いという新たな発想のもとに、特定微生物を検出するようにしたものである。具体的には、本発明は、特定微生物の抗原と結合する蛍光標識抗体に加えて、膜透過性の核酸染色色素（膜透過性で核酸結合により蛍光量が増幅する蛍光色素）を用いて、蛍光サイトメトリー法による検出の際に、特定微生物と夾雑物を区別して検出するようにしたものである（詳細は図２を用いて説明する。）。
【００１６】
これにより、特定微生物以外の微生物（夾雑微生物）や蛍光色素由来のバックグラウンドノイズを低減することが可能となり、特定微生物数の計測をより正確に行うことが可能となる。
【００１７】
本発明は、原理的には、特定微生物と結合する蛍光標識抗体と、膜透過性の核酸染色色素を用いれば良く、磁気ビーズによる濃縮は必須ではないが、磁気ビーズによる濃縮と組み合わせることによりバックグラウンドノイズをより低減することができる。また、本発明は、原理的には、蛍光イメージングサイトメトリー法でも適用可能であるが、蛍光フローサイトメトリー法がより好適である。
【００１８】
また、特定微生物には、生微生物と死微生物があるが、本発明では、核酸染色色素としてさらに膜不透過性の核酸染色色素（膜不透過性で核酸結合により蛍光量が増幅する蛍光色素）を用いることにより特定生微生物数を判別して計数することが可能である。以下に説明する実施例では、主に、特定生微生物数を判別して計数する特定生微生物の検査方法を説明する。
【００１９】
（Ａ）バックグラウンドノイズ低減の方法  
図１に本発明の一実施例である特定微生物等の検査方法の手順（蛍光色素の添加手順）を示す。本実施例は、２種類の核酸染色色素を用いて特定微生物の核酸を蛍光染色した後、蛍光色素で標識した抗体を添加し、特定微生物の抗原と結合させることで、特定微生物のみを選別できるようにしたものである。特定微生物の核酸を蛍光染色する工程としては、好ましくは、pHを7.0〜7.5に調整する。
【００２０】
まず、食品を滅菌水に懸濁して作製した試料（検体）に磁気ビーズを添加し、特定微生物を磁気ビーズに吸着させることで、特定微生物のみを濃縮分離する。磁気ビーズを用いた微生物の濃縮分離は、特許文献１にも記載されているように公知の技術であるので、詳細な説明は省略する。
【００２１】
次に、２種類の核酸染色色素を添加し、検体中の微生物（特定微生物及び特定微生物以外の微生物）を蛍光染色する。具体的には、膜透過性の核酸染色色素と、膜不透過性の核酸染色色素を使用する。膜透過性の核酸染色色素は、生菌（生微生物）と死菌（死微生物）いずれも染色する。一方、膜不透過性の核酸染色色素は、細胞膜が損傷している死菌のみを染色する。このように、膜透過性と膜不透過性の核酸染色色素を使用することで、生菌と死菌の判別をすることができる。
【００２２】
次に、蛍光色素で標識した抗体(以下、蛍光標識抗体)を添加する。この抗体は、ターゲットとする特定微生物の抗原と特異的に結合するものであれば、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよい。これにより、蛍光標識抗体は特定微生物にのみ結合する。なお、蛍光標識抗体も公知の技術であるので詳細な説明は省略する。
【００２３】
最後に、検体に励起光を照射して、蛍光染色された特定微生物の蛍光検出を行う。
【００２４】
次に図２を用いて、図１の検査手順による、バックグラウンドノイズを低減して特定微生物（特定生微生物）を判別して計測するアルゴリズムを説明する。
【００２５】
ターゲットとする特定生微生物には、蛍光標識抗体（A）が特異的に結合し、さらに膜透過性の核酸染色色素（B）が入り込み、特定生微生物の細胞膜内部の核酸が染色され、特定生微生物は計２種類の染色色素により染まる（蛍光標識抗体（A）は特定微生物に結合するものであり核酸染色のように特定微生物を染色色素が直接染色するものではないが、本明細書では「染色」として説明する。）。特定死微生物には、さらに細胞膜の損傷箇所から膜不透過性の核酸染色色素（C）が入り込み、特定死微生物は計３種類の染色色素により染まる。
【００２６】
一方で、濃縮分離工程の磁気分離をくぐり抜けて混入した特定生微生物以外の夾雑生微生物は、膜透過性の核酸染色色素（B）にのみ染色される。また、濃縮分離工程の磁気分離をくぐり抜けて混入した夾雑死微生物は、膜透過性の核酸染色色素（B）と膜不透過性の核酸染色色素（C）にのみ染色される。従って、蛍光標識抗体（A）の標識有無により、特定生微生物と夾雑微生物（夾雑生微生物と夾雑死微生物）との判別が可能となる。
【００２７】
特定生微生物と特定死微生物とは、膜不透過性の核酸染色色素（C）由来の蛍光の有無で判別が可能である。
【００２８】
蛍光色素（A）〜（C）はそれぞれ単独で自家蛍光を有する。このため、特定微生物に結合していない蛍光標識抗体（A）や微生物を染色していない核酸染色色素（B）(C)は特定生微生物（特定死微生物）の計測においては夾雑物となりバッググラウンドノイズの原因となる。本実施例では、特定生微生物は、蛍光標識抗体（A）と膜透過性の核酸染色色素（B）由来の蛍光を同時に発する（特定死微生物はさらに膜不透過性の核酸染色色素（C）由来の蛍光を同時に発する）ので、特定生微生物（特定死微生物）と蛍光色素（A）〜（C）との判別が可能となる。
【００２９】
このように、染色メカニズムの異なる蛍光色素、すなわち蛍光標識抗体と膜透過性の核酸染色色素を組み合わせる（必要に応じて膜不透過性の核酸染色色素も組み合わせる）ことで、特定生微生物のみ特異的に検出することができる。
【００３０】
なお、染色メカニズムの異なる蛍光色素を使用するにあたり、膜透過性の核酸染色色素を先に添加することが好ましい。膜透過性の核酸染色色素は、細胞膜の膜蛋白質を介して細胞膜を透過する。蛍光標識抗体を先に添加した場合、蛍光標識抗体が細胞膜の膜蛋白質の一部の抗原と結合するため、膜透過性の核酸染色色素が細胞膜を透過しづらくなる。よって、蛍光標識抗体より前に膜透過性の核酸染色色素を添加することが好ましい。
【００３１】
図３に膜透過性の核酸染色色素の染色率が、ｐＨに依って変化する様子を示す。図３は、市販のペットボトル飲料にE.aerogenes（エンテロバクター・アエロゲネス：大腸菌群の１種）を加え、膜透過性の核酸染色色素としてシアニン系青色蛍光色素を用いてE.aerogenesを染色したときの染色率を示している。また、各条件ともに室温にて２回実験を行っている。
【００３２】
市販のペットボトル飲料の初期pH＝6.5からpHを上げていくと、pH＝7.1の中性時に最も検出率（＝染色率）が良好となった（一般的に中性領域と言われるpH＝6.8〜7.2を中性として扱っている。）。染色率はpH＝7.1の時に平均で62％となり、pH＝6.5の時の2倍近くまで向上していることから、pHが検出率に大きく影響していることがわかる。
【００３３】
また、図３に示す結果では、一般的に中性として取り扱われているpH＝6.8でも検出率が悪くなっている。このことから、中性領域でもアルカリ側（pH＝7.0〜7.2）が好ましいと言える。さらに、本発明者等は、図３に示すように、pH＝7.6においても染色率が50％以上となることを確認している。
【００３４】
すなわち、膜透過性の核酸染色色素の染色時のpHは、中性領域のアルカリ側（pH＝7.0〜7.2）が最も好ましいと言えるが、染色率が50％以上となるpH＝7.0〜7.6が少なくとも実施可能なpH範囲と言える。なお、市販のペットボトル飲料には通常、酸化防止剤としてビタミンCが添加されているため、ｐＨは弱酸性寄りである。ｐＨの調整には、食品添加物として無害な炭酸水素ナトリウム等を用いることができる。このようなｐＨ調整により蛍光標識抗体の標識由来の発光の有無と膜透過性の核酸染色色素由来の発光の有無の組み合わせ（必要に応じて膜不透過性の核酸染色色素由来の発光の有無も含めた組み合わせ）に基づきより正確に特定生微生物数の計測を行うことができる。
【００３５】
そして、本実施例によれば、磁気ビーズと蛍光フローサイトメトリー法を組み合わせた特定生微生物の検査法において、夾雑微生物や蛍光色素由来のバックグラウンドノイズを低減することが可能となり、特定生微生物数計測をより正確に行うことができる。
【００３６】
（Ｂ）微生物検査装置の全体構成例  
以下に、微生物検査カセットを用いた蛍光フローサイトメトリー法による微生物等の検査方法及び検査装置に本発明を適用した実施例を詳細に説明する。本実施例では、蛍光標識抗体による特定微生物等の染色を行う容器の上流に、膜透過性の核酸染色色素による染色を行う容器を備えることを特徴とする。
【００３７】
図４に、本発明の一実施例に係る微生物検査装置１の構成図を示す。微生物検査装置１は、基本的には、微生物検査カセット１０と、圧力供給装置１４と、Ｘ−Ｙ可動ステージ（ホルダー）１２５と、検出装置１１と、システム装置１８と、出力装置１９で構成されている。
【００３８】
微生物検査カセット１０は、検体や試薬を内部に保持し、微生物計測に必要な工程を行うための機構を内部に備える。圧力供給装置１４は、微生物計測に必要な工程を行うために、微生物検査カセット１０と連結したチップ連結管１４４１〜１４４４を介して、微生物検査カセット１０内の検体や搬送を制御する。Ｘ−Ｙ可動ステージ（ホルダー）１２５は、微生物検査カセット１０を保持し、微生物検査カセット１０の位置を調整する。検出装置１１は、微生物検査カセット１０内の微生物に励起光を照射し、微生物からの散乱光及び蛍光を電気信号に変換する。これらの詳細については後述する。
【００３９】
微生物検査装置１に連結したシステム装置１８は、圧力供給装置１４に対する制御信号の出力と、検出装置１１から入力される電気信号に対する信号処理を実行する。電気信号の処理により得られた計測結果は、システム装置１８に接続された出力装置１９に表示される。
【００４０】
圧力供給装置１４は、レギュレータ１４１１付のエアポンプ１４１を有する。エアポンプ１４１と微生物検査カセット１０の各通気口１５９１〜１５９４（図７）は、チップ連結管１４４１〜１４４４によって接続されている。チップ連結管１４４１〜１４４４には、バルブ１４２１〜１４２４がそれぞれ設けられている。バルブ１４２１〜１４２４を開閉することにより、微生物検査カセット１０の容器に所定の圧力の気体を供給し、又は、微生物検査カセット１０の容器を大気開放する。この圧力の制御により、微生物検査カセット１０内における検体や試薬の搬送を実現する。この圧力制御による微生物検査カセット１０内における検体や試薬の搬送は、特開２００８−１５７８２９号公報に詳述されている。
【００４１】
微生物検査カセット１０は、基本的には、検体容器１５１と、膜透過染色容器１５２と、標識抗体染色容器１５５と、微生物検出部１７と、検出液廃棄容器１５６と、溶液用流路１５７１〜１５７４（図７）と、通気用流路１５８１〜１５８４（図７）とで構成されている。検体容器１５１は検体１５１１を保持する。膜透過染色容器１５２は、検体中の微生物を染色するための膜透過性の核酸染色色素１５２１を保持し、検体と膜透過性の核酸染色色素を混合して反応させる。なお、膜透過染色容器１５２には、必要に応じて検体中の死微生物を染色するための膜不透過性の核酸染色色素を併せて保持し、検体と膜透過性の核酸染色色素及び膜不透過性の核酸染色色素を混合して反応させるようにしても良い。また、膜不透過性の核酸染色色素を用いる場合、膜不透過染色容器を別に設けるようにしても良い。標識抗体染色容器１５５は、検体中の特定微生物のみに結合する蛍光標識抗体１５２２を保持し、検体と蛍光標識抗体を混合して反応させる。微生物検出部１７は、励起光源１１１１、１１１２からの励起光１１３を照射し、微生物を観測するための微生物検出用流路１７３を内部に備えている。検出液廃棄容器１５６には、微生物検出用流路１７３を通過した検出液が廃棄される。溶液用流路１５７１〜１５７４は、検体容器１５１、膜透過染色容器１５２、標識抗体染色容器１５５、微生物検出用流路１７３を連結し、検体１５１１や検出液が流動する。通気用流路１５８１〜１５８４は、検体１５１１や検出液を気圧により流動させるため圧力供給装置１４と各容器を接続する。
【００４２】
検出装置１１は、励起光源１１１１、１１１２と、散乱光検出部と、蛍光検出部１２０１〜１２０３とで構成される。このうち、散乱光検出部は、微生物検出用流路１７３を通過する微生物からの散乱光１２４を検出するための散乱光検出器１２３と、励起光源１１２からの励起光１１３が散乱光検出器１２３に直接入射することを防ぐための遮光板１２２とから構成される。一方、蛍光検出部は、微生物検出用流路１７３を通過する微生物からの蛍光１２１を集光し、平行光にする対物レンズ１１４と、励起光１１３を微生物検出部１７の方向に反射する一方で蛍光１２１は透過するダイクロイックミラー１１２と、平行光を集光させるための集光レンズ１１８１、１１８２と、迷光をカットするための空間フィルタとして用いるピンホール１１９と、蛍光１２１の一部波長を反射し、残りの波長を透過するダイクロックミラー１１５１、１１５２と、蛍光１２１の一部波長を通過するバンドパスフィルタ１１７１〜１１７３と、バンドパスフィルタ１１７１〜１１７３を通過した光を検出する光検出器１２０１〜１２０３とで構成される。なお、照射部及び検出部は、互いの焦点が重なるように配置され、測定時には微生物検出用流路１７３を焦点の位置に調整できるように構成されている。
【００４３】
検出装置１１は、励起光源１１１２から出力された励起光１１３を微生物検出用流路１７３に照射し、微生物検出用流路１７３から生じる散乱光の光量と微生物検出部１７から生じる蛍光の光量をそれぞれ検出することにより、Ｘ−Ｙステージ１２５の可動位置と各光量との関係をプロファイルとして取得する。また、検出装置１１は、取得されたプロファイルに基づいてＸ−Ｙ可動ステージ１２５を可動制御し、微生物検査カセット１０（具体的には、微生物検出用流路１７３）を検出に適した位置に合わせる。即ち、散乱光検出部で検出される散乱光の光量が最大となる微生物検出用流路の位置を励起光の光軸と一致させ、蛍光検出部で検出される蛍光量が最大となる微生物検出用流路の位置に励起光の焦点を一致させる。この位置合わせについては特開２０１０−２５６２７８号公報に詳述されている。位置合わせについては、他の方法、例えば、特開２００９−２８１７５３号公報に記載の方法を用いても良い。この場合、微生物検査カセットに位置合わせ用試薬等の保持容器や溶液用流路、通気用流路等を設ける。
【００４４】
なお、本実施例では励起光源は２つであるが、蛍光色素の種類に応じて励起光源の数量を変更する場合がある。また、本実施例では蛍光検出部は３つであるが、蛍光色素の種類に応じて蛍光検出部の数量を変更する場合がある。
【００４５】
（Ｃ）微生物検査カセットの微生物検出部の構造例  
図５Ａ及び図５Ｂを用い、微生物検査カセット１０のうち微生物検出部１７の構造を説明する。図５Ａは、微生物検査カセット１０の本体１５と微生物検出部１７の接合部の断面図を示す。図５Ｂは、微生物検出部１７の分解斜視図を示す。
【００４６】
なお、本体１５と微生物検出部１７はそれぞれ別工程で作製され、それぞれを接合する。まず、微生物検出部１７の製造方法を説明する。微生物検出部１７はカバー部材１７１と流路部材１７２からなり、両者は共に薄い平板からなる。流路部材１７２には溝１７３１が形成されており、この溝１７３１の両端には貫通孔１７４１、１７５１が形成されている。溝１７３１が形成された面が張り合わせ面となるように、カバー部材１７１と流路
部材１７２を張り合わせる。この貼り合わせにより微生物検出部１７が形成される。流路部材１７２の溝１７３１とカバー部材１７１によって微生物検出用流路１７３が構成される。流路部材１７２の貫通孔１７４１、１７５１によって、微生物検出用流路入口１７４と微生物検出用流路出口１７５が構成される。
【００４７】
一方、本体１５に形成された標識抗体染色容器−微生物検出用流路間流路１５７３は、その下端にて流路方向を変更し、本体１５の表面に開口を形成している。同様に、微生物検出用流路−検出液廃棄容器間流路１５７４は、その上端にて流路方向を変更し、本体１５の表面に開口を形成している。標識抗体染色容器−微生物検出用流路間流路１５７３の開口は、微生物検出用流路入口１７４に接続され、微生物検出用流路−検出液廃棄容器間流路１５７４の開口は、微生物検出用流路出口１７５に接続されている。
【００４８】
本体１５には検出用窓枠部１６１が形成されている。検出用窓枠部１６１は、貫通孔、又は、貫通溝である。検出用窓枠部１６１は、標識抗体染色容器−微生物検出用流路間流路１５７３の開口と微生物検出用流路−検出液廃棄容器間流路１５７４の開口の間に形成されている。製造された微生物検出部１７は、前述したように、本体１５に装着される。図５Ａに示すように、本体１５の検出用窓枠部１６１の上に微生物検出用流路１７３が配置されるように、微生物検出部１７を装着する。
【００４９】
本実施例の場合、微生物検出用流路１７３の背後に、本体１５の貫通孔又は貫通溝である検出用窓枠部１６１が設けられる。従って、励起光１１３は、微生物検出部１７のみを照射し、本体１５を照射しない。このため、背景光の増加の原因となる本体１５からの反射光や自家蛍光は発生しない。微生物検出用流路１７３を通過した励起光１１３が、本体１５に照射されないためには、検出用窓枠部１６１を構成する貫通孔の断面は、励起光１１３の放射方向に沿って増加することが好ましい。
【００５０】
カバー部材１７１の厚さは、例えば０．０１μｍ〜１ｍｍとする。流路部材１７２の厚さは、例えば０．０１μｍ〜１ｍｍとする。微生物検出用流路１７３の断面形状は、例えば正方形、長方形、台形に形成する。微生物検出用流路１７３の断面寸法は、大きいほど圧力損失は小さくなるが、微生物を一個ずつ流すためには小さいほうが良い。微生物検出用流路１７３の断面の一辺は、例えば１μｍ〜１ｍｍが好ましく、長さは例えば０．０１ｍｍ〜１０ｍｍが好ましい。微生物検出用流路１７３に照射する励起光１１３の光軸は、微生物検出用流路１７３の方向ベクトルに対して垂直になる。
【００５１】
微生物検出部１７を構成する材料について説明する。微生物検査カセット１０はディスポーザブルである。すなわち、使用後、微生物検出部１７は本体１５と共に廃棄する。そのため、微生物検出部１７に用いる材料は、安価でなければならない。微生物検出部１７に用いる材料は、蛍光計測に好適なように、光学特性に優れている必要がある。すなわち、自家蛍光が低く、光透過性、面精度、屈折率などに優れていることが望ましい。微生物からの蛍光の検出を阻害しないためには、微生物検出部１７自身が発生する自家蛍光量が、微生物からの蛍光量に比べて十分小さいことが好ましい。
【００５２】
微生物検出部１７の表面に、曲面、凹凸等が存在すると、表面における光の屈折、又は、乱反射により微生物計測用流路１７３に照射される励起光１１３の光量が変動する。そのため、検出される蛍光量も変動し、計測精度が低下する。そのため、微生物検出部１７の表面は、所望の平面度を有する必要がある。微生物検出部１７は、凹凸が０．１ｍｍ以下の平面度を有することが好ましい。
【００５３】
このような条件を考慮すると、微生物検出部１７に用いる材料には、ガラス、石英、ポリメタクリル酸メチルエステル（ＰＭＭＡ）、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリエチレンテレフタラート、ポリカーボネイト等が考えられる。微生物検出部１７は、これらの物質から選択された１種類以上の物質から形成される。
【００５４】
カバー部材１７１は単なる平板であるが、流路部材１７２は平板に溝及び貫通孔を形成したものである。従って、流路部材１７２は、微細加工が容易で、且つ、加工費が安価な材料によって形成される。ガラス、及び、石英は、光学特性が優れているが、微細加工が容易でない。すなわち、微細加工を行うと、加工費が高くなる。
【００５５】
そこで、この形態例の場合、カバー部材１７１をガラス又は石英によって構成し、流路部材１７２をポリメタクリル酸メチルエステル、ポリジメチルシロキサン、シクロオレフィンポリマー、ポリエチレンテレフタラート、ポリカーボネイトによって構成する。なお好ましくは、流路部材１７２をポリジメチルシロキサンによって構成する。この場合、カバー部材１７１と流路部材１７２の接合には、ポリジメチルシロキサンの自己接着性を利用する。
【００５６】
微生物検出部１７の自家蛍光量は、材料ばかりでなく、微生物検出部の厚さ寸法にも依存する。自家蛍光量を少なくするには、微生物検出部の厚さ寸法を小さくすれば良い。微生物検出部１７の厚さが小さいほど、微生物検出部１７から発生する自家蛍光量は少なくなる。しかしながら、カバー部材１７１及び流路部材１７２の厚さ寸法を小さくすると、製造が困難になり、平面度が悪化する。必要な平面度を保ち、微生物の蛍光の検出を阻害しないように自家蛍光量を抑制するには、これらの部品の厚さ寸法は、所定の範囲に制限するする必要がある。
【００５７】
ガラス、石英、ポリジメチルシロキサンの自家蛍光量はほぼ同等である。そこで、カバー部材１７１をガラス又は石英によって製造する場合、その厚さは、例えば０．０５ｍｍ以上１ｍｍ以下が好ましい。流路部材１７２を、ポリジメチルシロキサンによって製造する場合、その厚さは例えば０．１ｍｍ以上１ｍｍ以下が好ましい。
【００５８】
また、カバー部材１７１及び流路部材１７２を、シクロオレフィンポリマー、ポリメタクリル酸メチルエステル、ポリエチレンテレフタラート、又は、ポリカーボネイトによって製造しても良い。この場合、ガラス、又は、石英によってカバー部材１７１を製造し、ポリジメチルシロキサンによって流路部材１７２を製造する場合より、単位体積当たりの自家蛍光量が約３倍以上増加する。そのため、カバー部材１７１及び流路部材１７２の厚さは例えば０．０１ｍｍ以上０．３ｍｍ以下が好ましい。
【００５９】
（Ｄ）計測方法（検査方法）例  
以下、上述の微生物検査装置１を用いて、食品由来の検体中の特定生微生物数（例えば大腸菌Ｏ−１５７など）を計測する場合の実施例を説明する。図６に、微生物検査カセット１０を用いた特定生微生物数計測の工程をフローチャートで示す。また、図７に、微生物検査カセット１０の平面図を示す。
【００６０】
微生物検査カセット１０は、上述したように、検容器１５１と、膜透過染色容器１５２と、標識抗体染色容器１５５と、微生物検出部１７と、検出液廃棄容器１５６と、溶液用流路１５７１〜１５７４と、通気用流路１５８１〜１５８４とを備える。また、図７に示すように、検体中に含まれる食品残渣を取り除くためのフィルタである食品残渣除去部１６０を検体容器１５１の下流に備えている。また、圧力供給装置１４と各通気用流路１５８１〜１５８４とを接続する通気口１５９１〜１５９４が設けられている。
【００６１】
溶液用流路１５７１〜１５７４、通気口１５９１〜１５９４及び通気用流路１５８１〜１５８４は連結する容器の名称から、検体容器−膜透過染色容器間流路１５７１、膜透過染色容器−標識抗体染色容器間流路１５７２、標識抗体染色容器−微生物検出用流路間流路１５７３、微生物検出用流路−検出液廃棄容器間流路１５７４、検体容器通気口１５９１、膜透過染色容器通気口１５９２、標識抗体染色容器通気口１５９３、検出液廃棄容器通気口１５９４、検体容器通気流路１５８１、膜透過染色容器通気流路１５８２、標識抗体染色容器通気流路１５８３、検出液廃棄容器通気流路１５８４とする。
【００６２】
検体容器１５１１と、食品残渣除去部１６０と、膜透過染色容器１５２と、標識抗体染色容器１５５と、微生物検出用流路１７３と、検出液廃棄容器１５６は、溶液用流路１５７１〜１５７４により直列に連結されている。
【００６３】
まず、検査する食品に対し質量比９倍の滅菌水を加え、ストマッキング処理を行って作製した検体に磁気ビーズを添加し、特定微生物を磁気ビーズに吸着させることで、特定微生物のみを濃縮分離する（Ｓ９００）。磁気ビーズを用いた微生物の濃縮分離は、特許文献１にも記載されているように、公知技術であり詳細な説明を省略する。また磁気ビーズによる濃縮を自動で行う自動機もありそれを用いることもできる。食品残渣の影響を低減するため、微生物検査装置１の前処理工程として、磁気ビーズによる特定微生物の濃縮分離を行うことが好ましい。
【００６４】
次に、磁気ビーズで濃縮分離した検体１５１１を、検査前に通気口１５９１から検体容器１５１に注入する（Ｓ９０１）。
【００６５】
検体容器１５１の体積は、検体１５１１の体積より大きい。膜透過染色容器１５２の体積は、検体１５１１と膜透過性の核酸染色色素１５２１の合計体積より大きい。標識抗体染色容器１５５の体積は、検体１５１１と膜透過性の核酸染色色素１５２１と蛍光標識抗体１５２２の合計体積より大きい。また、検体容器−膜透過染色容器間流路１５７１の最高点は、検体容器１５１中の検体１５１１の水位より高くなるように形成される。これと同様に、膜透過染色容器−標識抗体染色容器間流路１５７２の最高点は、検体１５１１と膜透過性の核酸染色色素１５２１の混合液の水位より高くなるように形成される。さらに、標識抗体染色容器−微生物検出用流路間流路１５７３の最高点は、検体１５１１、膜透過性の核酸染色色素１５２１、蛍光標識抗体１５２２からなる検出液の水位より高くなるように形成される。
【００６６】
本実施例では、膜透過染色容器１５２に膜不透過性の核酸染色色素も併せて保持し、死菌と生菌の判別ができるようにしている。すなわち、本実施例では、膜透過染色容器１５２には、膜不透過性の核酸染色色素（死微生物を染色するための死微生物色素）が１種以上と膜透過性の核酸染色色素（全微生物を染色するための全微生物色素）が１種以上の混合液が保持されている。死微生物色素には、例えば、死微生物用シアニン系蛍光色素（濃度：０．０１μＭ〜１０μＭ）、ＰＩ（プロピディウムイオダイド）（濃度：０．１ｍｇ/ｍｌ〜２０ｍｇ/ｍｌ）、ＥＢ（エチジウムイオダイド）（濃度：０．１ｍｇ/ｍｌ〜２０ｍｇ/ｍｌ）を使用し、全微生物色素には、例えば、全微生物用シアニン系蛍光色素（濃度：０．０１μＭ〜１０μＭ）、ＬＤＳ７５１（濃度：０．１ｍｇ/ｍｌ〜２０ｍｇ/ｍｌ）、ＤＡＰＩ（４'、６−ヂアミジン−２'−フェニルインドール）（濃度：０．１ｍｇ/ｍｌ〜２０ｍｇ/ｍｌ）、ＨＯＥＣＨＳＴ３３２５８（濃度：０．１ｍｇ/ｍｌ〜２０ｍｇ/ｍｌ）、ＨＯＥＣＨＳＴ３４５８０（濃度：０．１ｍｇ/ｍｌ〜２０ｍｇ/ｍｌ）などを使用する。ここでは、死微生物色素として死微生物用シアニン系橙蛍光色素を使用し、全微生物色素としてＬＤＳ７５１を使用する。
【００６７】
蛍光標識抗体は、ターゲットとする特定微生物の抗原と特異的に結合するモノクローナル抗体乃至ポリクローナル抗体に対して、上述した全微生物色素を標識したものであり、特に限定されるものではない。但し、膜透過染色容器に保持されている全微生物色素とは異なるものが用いられる。ここでは、全微生物用シアニン系青蛍光色素を使用する。
【００６８】
色素溶媒にはＤＭＳＯ（ジメチルスルオキシド）、エタノール類、水などを使用する。なお、濃度の単位のＭはmol/Lの意味である。
【００６９】
微生物検査カセット１０を用いた生微生物数測定は、図６に示すように、微生物検査カセット１０を微生物検査装置(分析装置)１にセットした状態で開始される（Ｓ９０２）。この測定工程は、微生物検査カセット１０の位置合わせを行う位置あわせ工程（Ｓ９０７）と、検体中の特定生微生物に膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体を添加して染色する前処理工程（Ｓ９０３〜Ｓ９０６）と、特定生微生物数を実際に測定する計測工程（Ｓ９０８）とで構成される。
【００７０】
位置あわせ工程（Ｓ９０７）と前処理工程（Ｓ９０３〜Ｓ９０６）は独立した工程であるため並列して行い、両工程が終了した段階で計測工程（Ｓ９０８）を行う。続いて、各工程における各液体の移動について説明する。
【００７１】
前処理工程では、まず、検体１５１１が膜透過染色容器１５２に移動される（Ｓ９０３）。通気口１５９１を介して検体容器１５１に対して圧力供給装置１４の圧力を加える。これにより、検体容器１５１内の気圧を上げる。同時に、膜透過染色通気口１５９２を介して膜透過染色容器１５２の内圧を大気圧に開放する。気圧差により、検体１５１１は、膜透過染色容器１５２に入り、膜透過性の核酸染色色素１５２１（本実施例では膜不透過性の核酸染色色素も含む混合液）と混合される。混合には、バブリングを使用する（Ｓ９０４）。検体１５１１中の死微生物は、死微生物色素（ここでは死微生物用シアニン系橙色蛍光色素を使用する。）と全微生物色素（ここではＬＤＳ７５１を使用する。）により染色され、一方、検体１５１１中の生微生物は全微生物色素のみにより染色される。
【００７２】
なお検体１５１１が食品残渣除去部１６０を経て、膜透過染色容器１５２へ流動する際に、検体１５１１中の食品残渣は、食品残渣除去部１６０により検体１５１１から取り除かれる。
【００７３】
検体１５１１と膜透過性の核酸染色色素１５２１の混合液の水位は、膜透過染色容器１５２と標識抗体染色容器１５５を連結する膜透過染色容器−標識抗体染色容器間流路１５７２の最高点を越えず、さらに膜透過染色容器１５２中に入っている空気は、膜透過染色容器通気口１５９２を介して外部に放出される。膜透過染色容器１５２の気圧は大気圧と等しいため、混合液は標識抗体染色容器１５５に押し出されず、混合液を必要な時間中、膜透過染色容器１５２に保持することができる。保持する時間は、１０〜３０分程度である。
【００７４】
このとき、混合液の標識抗体染色容器１５５への流入を防ぐ目的で、各通気口１５９３〜１５９４に対して圧力供給装置１４からの圧力を加え、検体容器１５１の気圧より低い範囲まで標識抗体染色容器１５５と検出液廃液容器１５６の気圧を上げても良い。
【００７５】
次に、検体１５１１、膜透過性の核酸染色色素１５２１から成る混合液を、標識抗体染色容器１５５に移動させる（Ｓ９０５）。通気口１５９２を介して膜透過染色容器１５２に対して圧力供給装置１４の圧力を加える。これにより、膜透過染色容器１５２内の気圧を上げる。同時に、通気口１５９３を介して標識抗体染色容器１５５の内圧を大気圧に開放する。気圧差により、混合液は、標識抗体染色容器１５５に入り、蛍光標識抗体１５２２と混合される。混合には、バブリングを使用する（Ｓ９０６）。検体１５１１中の特定微生物のみ、蛍光標識抗体（ここでは全微生物用シアニン系青色蛍光色素を使用する。）により染色される。染色時間は、例えば５〜２０分である。なお、染色中は、微生物検査カセット１０の温度を一定に保つことにより、温度変化による染色の影響を小さくすることが望ましい。
【００７６】
上述の前処理工程と並行して、微生物検査カセット１０の位置あわせが実行される（Ｓ９０７）。
【００７７】
以上の動作が終了すると、検体１５１１と膜透過性の核酸染色色素１５２１と蛍光標識抗体１５２２から成る検出液が微生物検出用流路１７３に移動され、検体中の特定生微生物が蛍光フローサイトメトリー法により計測される。（Ｓ９０８）。図４に示す検査装置の場合、紙面垂直方向より、励起光１１３が照射される。このため、微生物を染色した色素からの蛍光と、微生物による散乱光が生じる。図２を用いて説明したように、特定生微生物については全微生物色素（一つは蛍光標識抗体の標識色素）の２色の蛍光を発し、特定死微生物については全微生物色素（一つは蛍光標識抗体の標識色素）の２色と死微生物色素の１色の蛍光を発する。検出装置１１では、全微生物色素（一つは蛍光標識抗体の標識色素）の２色の蛍光を発したものを特定生微生物として計数し、全微生物色素（一つは蛍光標識抗体の標識色素）の２色と死微生物色素の１色の蛍光を発したものを特定死微生物として計数する。このため、特定生微生物と特定死微生物とを判別して計数することが可能になる。また、散乱光の光量は微生物の大きさにより変わるため、微生物の大きさの判別も可能になる。
【００７８】
図８は酸化剤と染色液を容器内に図７とは別の方法により保持する微生物検査カセットの図を示す。内部の各容器及び流路の構成は、上述の図７と同等である。膜透過染色容器１５２にはホルダー１５２１Ｈに保持されたガラス管１５２１Ｇを配置し、ガラス管１５２１Ｇ内に膜透過性の核酸染色色素（死菌と生菌を判別して測定する場合には膜不透過性の核酸染色色素との混合液）をガラス管内の毛細管現象で保持している。組み立て順は、ガラス管１５２１Ｇをホルダー１５２１Ｈに保持し、ガラス管１５２１Ｇに膜透過性の核酸染色色素を充填し、ホルダー１５２１Ｈをカセットの膜透過染色容器１５２に挿入して完成となる。ガラス管１５２１Ｇの上端位置は膜透過染色容器１５２内の検体液の水位以下に配置することにより、検体液が膜透過染色容器１５２内に流入したときにガラス管は検体液の水面下に位置することになり、ガラス管内の毛細管現象が失われ、ガラス管内の膜透過性の核酸染色色素が検体に染み出る。検体液中に染み出た膜透過性の核酸染色色素はバブリングにより混合され、検体液中の菌を染色する。このように、ガラス管を検体液の水位以下に配置することにより、ガラス管内の膜透過性の核酸染色色素を容易に検体内へ染み出すことが出来る。
【００７９】
また、標識抗体染色容器１５５にはホルダー１５２２Ｈに保持されたガラス管１５２２Ｇを配置し、ガラス管１５２２Ｇ内に蛍光標識抗体をガラス管内の毛細管現象で保持している。組み立て順は、ガラス管１５２２Ｇをホルダー１５２２Ｈに保持し、ガラス管１５２２Ｇに蛍光標識抗体を充填し、ホルダー１５２２Ｈをカセットの標識抗体染色容器１５５に挿入して完成となる。ガラス管１５２Ｇの上端位置は標識抗体染色容器１５５内の検体液（混合液）の水位以下に配置することにより、検体液と膜透過性の核酸染色色素の混合液が標識抗体染色容器１５５内に流入したときにガラス管は混合液の水面下に位置することになり、ガラス管内の毛細管現象が失われ、ガラス管内の蛍光標識抗体が検体液（混合液）に染み出る。混合液中に染み出た蛍光標識抗体はバブリングにより混合され、検体中の特定微生物に結合する。このように、ガラス管を混合液の水位以下に配置することにより、ガラス管内の蛍光標識抗体を容易に混合液内へ染み出すことが出来る。
【００８０】
なお、ガラス管は内径０．６ｍｍ、長さ８ｍｍとしたが、内径０．１〜３ｍｍ、長さ１〜３０ｍｍとしても、同様の効果が得られる。
【００８１】
なお、本実施例では微生物検査カセットに膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体を微生物検査カセット組み立て時に内包した例であるが、微生物検査カセットに膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体を内包する場所が設けていれば、微生物検査カセット組み立て時には膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体を内包せず、検査直前に膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体を手作業または自動機にて充填しても本実施例と同様の効果が得られる。
【００８２】
また、本実施例では膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体をガラス管に保持した例であるが、ガラス管の代わりに親水性海綿体構造でも同様の効果が得られる。特に、ガラス焼結体やメラミンスポンジが適している。
【００８３】
なお、上述の実施例では、蛍光サイトメトリー法として蛍光フローサイトメトリー法を用いているが、蛍光イメージングサイトメトリー法にも本発明は適用可能である。蛍光イメージングサイトメトリー法では、例えば、磁気ビーズによる濃縮分離を行った検体に膜透過性の核酸染色色素（死菌と生菌を判別して測定する場合には膜不透過性の核酸染色色素との混合液）を添加して、所定時間（例えば１０分）保持した後、蛍光標識抗体を添加し、所定時間（例えば３０分）保持して検出液を作成する。この検出液をフィルタに保持して励起光を照射し、微生物の蛍光発光を画像取得して光点を計数することにより微生物を検出する。蛍光イメージングサイトメトリー法においても蛍光色素由来のバックグラウンドノイズを低減して特定生微生物数計測をより正確に行うことが可能となる。
【００８４】
なお、本発明は上記した実施例に限定されるものではなく、様々な変形例が含まれる。例えば、上記した実施例は本発明を分かりやすく説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されるものではない。また、ある実施例の構成の一部を他の実施例の構成に置き換えることが可能であり、また、ある実施例の構成に他の実施例の構成を加えることも可能である。また、各実施例の構成の一部について、他の構成の追加，削除，置換をすることが可能である。
【００８５】
例えば、微生物検査カセットについては、検体容器１５１に検体を注入する前に、検体と膜透過性の核酸染色色素と蛍光標識抗体を混合しておけば、膜透過染色容器１５２や標識抗体染色容器１５５それに付随する溶液用流路等を削除できる。
【符号の説明】
【００８６】
１…微生物検査装置、１０…微生物検査カセット、１１…検出装置、１４…圧力供給装置、１７…微生物検出部、１８…システム装置、１９…出力装置、１１１１…短波長励起光源、１１１２…長波長励起光源、１１１３…励起光合成用ダイクロイックミラー、１１２…ダイクロイックミラー、１１３…励起光、１１４…対物レンズ、１１９…ピンホール、１２０…光検出器、１２１…蛍光、１２４…散乱光、１２５…Ｘ−Ｙ可動ステージ、１４１…エアポンプ、１４１１…レギュレータ、１５１…検体容器、１５１１…検体、１５２…膜透過染色容器、１５２１…膜透過性の核酸染色色素、１５２１Ｈ…ホルダー、１５２１Ｇ…ガラス管、１５５…標識抗体染色容器、１５２２…蛍光標識抗体、１５２２Ｈ…ホルダー、１５２２Ｇ…ガラス管、１５６…検出液廃棄容器、１５７１〜１５７４…溶液用流路、１５８１〜１５８４…通気用流路、１６１…検出用窓部、１７３…微生物検出用流路、１１５１…短波長蛍光分離用ダイクロイックミラー、１１５２…中波長蛍光分離用ダイクロイックミラー、１１７１…短波長バンドパスフィルタ、１１７２…中波長バンドパスフィルタ、１１７３…長波長バンドパスフィルタ、１１８１、１１８２…集光レンズ、１２０１…短波長用光検出器、１２０２…中波長用光検出器、１２０３…長波長用光検出器。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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