(57)【要約】【課題】セサミノールの脂質代謝に対する作用およびその作用機序を明らかにし、セサミノールを利用して脂質代謝やそれに関わる分子の挙動を制御すること【解決手段】セサミノールに血中中性脂肪量を低下させる作用があること、並びにその作用機序として肝臓におけるApoB100遺伝子及びMTP遺伝子の発現抑制が考えられることを見出した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
セサミノールを有効成分とする、血中中性脂肪量を低下させるための組成物。
【請求項２】
セサミノールを有効成分とする、ApoB100遺伝子またはMTP遺伝子の発現を低下させるための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セサミノールを有効成分とする血中中性脂肪量を低下させるための組成物、および当該血中中性脂肪量の低下に関連する分子の発現を制御するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
昨今の生活習慣病患者（脂質異常症、肥満、糖尿病、高血圧）の増加を受けて、食生活や運動習慣などの見直しが緊急の課題となっている。「日本人の食事摂取基準（2010年版）」（非特許文献１）においても、生活習慣病の１次予防を目的として、摂取する脂質の「目標量」が設定されている。生活習慣病は脂質代謝の異常を伴う心筋梗塞や脳血栓など動脈硬化症に至ることが多く、脂質代謝の中心臓器である肝臓で薬理作用を発揮する成分の検索・開発が盛んに行われており、特に食品と同様に長期間服用しても安全な成分が求められている。
【０００３】
こうした要求を満たす素材の一つにゴマがある。ゴマは食品以外に、様々な生理活性を有する成分を含有する事から、肝臓や腎臓等に有効な生薬としても用いられてきた。ゴマに含有される生理活性成分のなかでも、特にポリフェノールの一種であるリグナン類は抗酸化作用をはじめとする多彩な活性を有する。
【０００４】
こうしたゴマに含有されるリグナン類に属するものにセサミノール(図１)があり、その多くは配糖体（セサミノールトリグルコシド）の形で存在している。摂取されたセサミノールトリグルコシドは腸内細菌のβ‐グルコシダーゼによって分解され、セサミノールとして腸管から吸収される。また、その生理作用として動脈硬化予防作用などが報告（非特許文献２）されていることから脂質代謝に対する改善作用も期待される。また、同じリグナン類に属するセサミンはセサミノールと似た構造を持ち、すでに脂質代謝改善作用があることが報告（特許文献１）されている。
【０００５】
しかしながら、セサミノールの脂質代謝に対する作用及びその機序については明らかにはされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第2006/070856号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】日本人の食事摂取基準2010年版（厚生労働省「日本人の食事摂取基準」策定検討会編）
【非特許文献２】大澤  俊彦「[酸化ストレス  フリーラジカル医学生物学の最前線]  酸化ストレスの基礎  抗酸化防御機構・抗酸化剤  酸化ストレス予防と食品機能」医学のあゆみ別冊酸化ストレスVer.2、ｐ.204〜207(2006)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明は、セサミノールの脂質代謝に対する作用およびその作用機序を明らかにすることを目的とする。さらなる本発明の目的は、明らかにされたセサミノールの脂質代謝に対する作用およびその作用機序に基づき、セサミノールを利用して脂質代謝やそれに関わる分子の挙動を制御することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、セサミノールに血中中性脂肪量を低下させる作用があること、及びその作用機序として肝臓におけるApoB100遺伝子並びにMTP遺伝子の発現抑制が考えられることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
従って、本発明は、セサミノールを有効成分とする、血中中性脂肪量を低下させるための組成物を提供する。また、本発明は、セサミノールを有効成分とする、ApoB100遺伝子またはMTP遺伝子の発現を低下させるための組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、セサミノールの血中中性脂肪量に対する作用、及びその作用機序が明らかとなった。そして、セサミノールを有効成分とする、血中中性脂肪量を低下させるための組成物およびApoB100遺伝子またはMTP遺伝子の発現を低下させるための組成物が提供された。本発明により、生活習慣病などを改善するための安全性の高い新たな医薬や食品を提供することが可能となった。さらに、研究目的で、中性脂肪量を低下させたり、あるいはApoB100遺伝子やMTP遺伝子の発現を低下させるための新たな試薬を提供することも可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】セサミノールの構造図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、セサミノールを有効成分とする、血中中性脂肪量を低下させるための組成物を提供する。本発明における「セサミノール」は、図１に示す構造を有する化合物であり、ゴマに含まれる成分として知られている。本発明におけるセサミノールには、糖が結合した形態（配糖体）も含まれる。また、本発明における「中性脂肪」とは、典型的にはトリグリセリドである。
【００１４】
本発明において、このセサミノールが、脂質代謝関連遺伝子であるApoB100遺伝子およびMTP遺伝子の発現を低下させる作用を有することが見出された。従って、本発明は、セサミノールを有効成分とする、ApoB100遺伝子またはMTP遺伝子の発現を低下させるための組成物を提供する。本発明における「ApoB100遺伝子」の典型的な塩基配列及びアミノ酸配列は、National  Center  for Biotechnology  Information（NCBI）のデータベース上でNM_000384の登録番号で開示されており、「MTP遺伝子」の典型的な塩基配列及びアミノ酸配列は、National  Center  for Biotechnology  Information（NCBI）のデータベース上でNM_000253の登録番号で開示されている。
【００１５】
本発明の組成物は、医薬組成物（医薬品、医薬部外品など）、飲食品、あるいは研究目的（例えば、in  vivo実験やin  vitro実験などの目的）に用いられる試薬の形態であり得る。
【００１６】
本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、有効成分としてセサミノールを含有するものであればその剤形は特に限定されない。本発明の医薬組成物は、公知の製剤学的方法により種々の剤形で製剤化することができる。例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、丸剤、細粒剤、微粒剤、チュアブル剤、トローチ剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、ペースト剤、エアゾール剤、注射剤、坐剤などとして、経口的または非経口的に使用することができる。
【００１７】
本発明の医薬組成物は、好ましくは、経口投与剤である。経口投与剤としては、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、丸剤、細粒剤、微粒剤、チュアブル剤、トローチ剤などの内服固形製剤やドリンク剤などの内服液剤が挙げられる。
【００１８】
本発明の医薬組成物を経口投与剤として提供するに際しては、本発明の効果を損なわない質的及び量的範囲で、他の有効成分や公知の添加剤を配合することができる。このようなものとしては、生薬、天然物、賦形剤、pH調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、界面活性剤、可塑剤、香料が挙げられる。
【００１９】
本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合には、血中中性脂肪量の低下またはApoB100遺伝子若しくはMTP遺伝子の発現の低下に有効な1種もしくは2種以上の他の成分を配合することができる。また、血中中性脂肪量の低下またはApoB100遺伝子若しくはMTP遺伝子の発現の低下に有効な他の医薬組成物と併用してもよい。
【００２０】
本発明の組成物を飲食品として用いる場合、当該飲食品は、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、病者用食品、あるいは食品添加物であり得る。飲食品の具体例としては、ドリンク類、スープ類、乳飲料、清涼飲料水、茶飲料、アルコール飲料、ゼリー状飲料、機能性飲料等の液状食品；食用油、ドレッシング、マヨネーズ、マーガリンなどの油分を含む製品；飯類、麺類、パン類等の炭水化物含有食品；ハム、ソーセージ等の畜産加工食品；かまぼこ、干物、塩辛等の水産加工食品；漬物等の野菜加工食品；ゼリー、ヨーグルト等の半固形状食品；みそ、発酵飲料等の発酵食品；洋菓子類、和菓子類、キャンディー類、ガム類、グミ、冷菓、氷菓等の各種菓子類；カレー、あんかけ、中華スープ等のレトルト製品；インスタントスープ，インスタントみそ汁等のインスタント食品や電子レンジ対応食品等が挙げられる。さらには、粉末、穎粒、錠剤、カプセル剤、液状、ペースト状またはゼリー状に調製された健康飲食品も挙げられる。
【００２１】
本発明における飲食品の製造は、当該技術分野に公知の製造技術により実施することができる。当該飲食品においては、血中中性脂肪量の低下またはApoB100遺伝子若しくはMTP遺伝子の発現の低下に有効な1種もしくは2種以上の成分を配合してもよい。また、血中中性脂肪量の低下またはApoB100遺伝子若しくはMTP遺伝子の発現の低下以外の機能を発揮する他の成分あるいは他の機能性食品と組み合わせることによって、多機能性の飲食品としてもよい。
【００２２】
本発明の組成物の有効成分としてのセサミノールの投与量または摂取量は、通常、成人ではセサミノールとして、1日当たり、1mg〜10gであり、1回でまたは複数回に分けて投与または摂取される。投与量または摂取量は、投与ルート、年齢、性別、症状の重症度などにより適宜増減することも可能である。本発明は、このように、本発明の組成物を対象に投与もしくは摂取させることを特徴とする、対象における血中中性脂肪量を低下させる方法、およびApoB100遺伝子若しくはMTP遺伝子の発現を低下させる方法をも提供するものである。
【００２３】
本発明の組成物の製品（医薬品、医薬部外品、飲食品、試薬など）またはその説明書は、血中中性脂肪量の低下またはApoB100遺伝子若しくはMTP遺伝子の発現の低下のために用いられる旨の表示を付したものであり得る。ここで「製品または説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装などに表示を付したこと、あるいは製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、その他の印刷物などに表示を付したことを意味する。
【実施例】
【００２４】
以下に試験例を挙げ、本発明をさらに具体的に説明する。
【００２５】
[試験例１]
in  vitro評価系として、セミコンフルエントになったHepG2細胞を、前培養として0.5mM  オレイン酸、1%BSA-DMEM培地で24時間培養した。その後、1%BSA-DMEM培地を基準培地として対照(0.1%  DMSO)、低用量(0.1%  DMSO、10μM  試験化合物)、高用量(0.1%  DMSO、30μM  試験化合物)に調整した培地で24時間培養後、細胞及び培地を回収して分析に供した。
【００２６】
実験培地の細胞毒性については、水溶性テトラゾリウム法（Cell  Counting  Kit-8、（株）同人化学研究所）を用いて評価した。培地へのApoB100分泌量は、ELISA法（Human  Apolipoprtein  B  Kit、ALerCHEK  Inc.）により測定した。データは細胞タンパク質あたりの数値で示し、細胞タンパク量はBradford法（BCA  Protein  Assay  Kit、Pierce  Inc.）により測定した。
【００２７】
各試験培地に[14C]酢酸を18.5kBq添加し、24時間培養した後に細胞と培地を回収し、分析に供した。細胞および培地の脂質は、Bligh  and  Dyer法に従い抽出・濃縮し、薄層クロマトグラフィーにより脂質を分画した。展開した薄層上の放射線強度をバイオイメージングアナライザ（BAS1000、富士写真フィルム社）を用いて検出し、液体シンチレーションカウンター（WALLAC  1440TM、Pharmacia、Finland）でカウントした脂質抽出液の放射活性に換算した。
【００２８】
HepG細胞からの総RNA抽出は、RNeasy  Micro  kit(Qiagen社）を用いて行った。cDNAは、TaqMan  Reverse  Transcription試薬(Applied  Biosystems社）を用いて調製した。ｍRNA発現量の定量は、ABI  Prism  7000(Applied  Biosystems社）を用いてリアルタイムRT-PCR法によって行った。FAS(Fatty  acid  synthase）、CPT2(Carnitine  palmitoyltransferase  2）、ApoA1(Apolipoprotein  A1)、ApoB(Apolipoprotein  B100)、MTP(Microsomal  triglyceride  transfer  protein）の増幅プライマー及び検出用TaqManプローブは、Applied  Biosystems社のAssay  on  Demand（FAS:Hs00188012_m1、CPT2:Hs00264677_m1、ApoA1:Hs00163641_m1、ApoB:Hs00181142_m1、MTP:Hs00165177_m1）を使用した。また内部標準として18S  ribosomal  RNA（Hs99999901_s1）を使用し、各遺伝子の発現量は内部標準との比を算出後、対照群の平均値を100とした相対量で示した。実験によって得られたデータは、studentのt検定およびTukeyのHSD検定を用いて有意差検定を行った。
【００２９】
その結果、表１に示すとおり、培地中に添加したセサミノール (10μM、30μM)は、HepG2細胞の増殖に影響を及ぼさなかった。
【００３０】
【表１】
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【００３１】
表２に示すとおり、培地中に添加したセサミノールがHepG2細胞の培地へのApoB100分泌に及ぼす影響は、用量依存的抑制作用が認められ30μM添加で有意であった。
【００３２】
【表２】
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【００３３】
ApoB100分泌抑制作用が認められたセサミノールについて、細胞内新規脂質合成に及ぼす影響を検討したところ、培地中への30μM添加による顕著な影響は認められなかった（表３）。
【００３４】
【表３】
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【００３５】
また同じサンプルを用いて細胞内脂質代謝関連mRNA発現に及ぼす影響について検討したところ、培地中への30μM添加による有意な影響は認められなかったが、MTPについては顕著な低下が認められた（表４）。
【００３６】
【表４】
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【００３７】
以上からセサミノールはHepG2細胞からのApoB100分泌やMTP遺伝子発現を抑制する一方、HepG2の増殖や細胞内脂質合成及び代謝には影響を及ぼさない事が客観的に明らかとなった。
【００３８】
[試験例２]
in  vivo評価系として、肥満・糖尿病モデルマウスであるdb/dbマウス(6週齢オス、1群6匹)を用いて、セサミノール含有エキス3%添加食（AIN93G組成、7%  コーン油）を4週間摂食させ、病態発症に及ぼす改善効果を検討した（表５）。
【００３９】
【表５】
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【００４０】
また対照群としてC57BL/6マウスを用いた。食餌は午後7時から翌9時の間与え、体重および摂食量は飼育期間中、毎日測定した。本飼育最終日に9時間絶食させた後、終体重を測定し、バルビツール酸Na麻酔下において心臓採血により屠殺を行い、血液、肝臓、脂肪組織を摘出し分析に供した。
【００４１】
血液は30分間の室温静置後、遠心分離 (3,000rpm、15分、4℃)し、血清を得た。血清トリグリセリド濃度は、トリグリセライド  E-テストワコー(和光純薬工業株式会社)を用いて測定した。血清コレステロール濃度は、コレステロール  E-テストワコー(和光純薬工業株式会社)を用いて測定した。血清リン脂質濃度は、リン脂質  C-テストワコー(和光純薬工業株式会社)を用いて測定した。血清グルコース濃度は、グルコースCII-テストワコー(和光純薬工業株式会社)を用いて測定した。
【００４２】
肝臓総脂質はFolchらの方法により抽出・濃縮した。肝臓トリグリセリド濃度はFletcherらの方法により測定した。肝臓コレステロール濃度は、コレステロール  E-テストワコー(和光純薬工業株式会社)を用いて測定した。肝臓リン脂質濃度はRouserらの方法により測定した。実験によって得られたデータは、studentのt検定およびTukeyのHSD検定を用いて有意差検定を行った。
【００４３】
その結果、C57BLマウスに比べdb/dbマウスでは、初体重、終体重、体重増加量および摂食量が有意に増加し、肝臓重量の増加傾向と脂肪組織重量の有意な増加が認められた（表６）。
【００４４】
【表６】
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【００４５】
しかしながらセサミノール摂取の影響は、いずれに於いても認められなかった。
【００４６】
C57BLマウスに比べdb/dbマウスでは、血中におけるコレステロール濃度、トリグリセリド濃度、リン脂質濃度およびグルコース濃度が有意に増加し、セサミノール摂取によりコレステロール濃度、トリグリセリド濃度、リン脂質濃度が有意に低下した（表７）。
【００４７】
【表７】
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【００４８】
肝臓トリグリセリド濃度は、C57BLマウスに比べdb/dbマウスで有意に増加したが、セサミノール摂取の影響は認められなかった（表８）。肝臓コレステロール濃度は、C57BLマウスに比べdb/dbマウスで差は認められなかったが、セサミノール摂取により有意に低下した（表８）。肝臓リン脂質濃度は、C57BLマウスに比べdb/dbマウスで有意に低下したが、セサミノール摂取により有意に増加した（表８）。
【００４９】
【表８】
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【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明により、セサミノールの血中中性脂肪低下作用およびその作用機序が明らかとなった。本成果を基に、セサミノールを有効成分とする、医薬品、医薬部外品、あるいは特定保健用食品などの製品開発が可能となり、生活習慣病などの改善に貢献することが期待される。
【図１】
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